## Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology
Journal Homepage : http://jurnal.unpad.ac.id/ijpst/

## UNPAD

## In Silico Study of Aglycon Curculigoside A and Its Derivatives as α -Amilase Inhibitors
Nursamsiar 1 *, Maya M. Mangande 1 , Akbar Awaluddin 1 , Syamsu Nur 1 dan Aiyi Asnawi 2 1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, South Sulawesi - Indonesia
2 Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung, West Java - Indonesia
Submitted 09 August 2019; Revised 24 January 2020; Accepted 27 January 2020; Published 03 February 2020 *Corresponding author: n.siar@yahoo.co.id

## Abstract
α-amilase is an enzyme that catalyzes the hydrolysis of starch polysaccharides into oligosaccharides to then produce glucose. Inhibitions of the α-amylase enzyme is an effective strategy in modulating blood sugar levels in diabetes. The aglycon curculigoside A has similar structure to chalcon which is able to inhibit the α-amilase enzyme for the treatment of type 2 diabetes. The aim of this study was to determine the interaction of the curculigoside A aglycone compound and its derivatives with the α-amylase enzyme by using the molecular docking simulation method. It was carried out by using AutoDock 4.2 and α-amilase protein (PDB ID: 1B2Y) as macro molecule. The molecular docking results showed that the aglycone curculigoside A and its derivatives able to interacted into the active site of the α-amylase enzyme. Three best ligands according to the simulation and prediction tests were compound 10, compound 23, and compound 41 has formed hydrogen bonding to Asp197, Glu233 and  Asp300  residues  with  free  bonding  energy  of  -7.29,  -7.22,  dan  -7.84  kcal/mol,  respectively. In conclusion, three best ligands has the same pattern of hydrogen bonds to the native ligand AC1 (6-methyl-5-(4,5,6-trihydroxy-3-hydroxymethyl-cyclohex-2-enylamino)-tetrahydro-pyran-2,3,4-triol) via amino acids redisues of α-amylase that play a role in the substrate by hydrolysis process.
Keywords: aglycon curculigoside A, α-amylase, diabetes, docking

## Studi In Silico Aglikon Kurkuligosida A dan Turunannya sebagai Inhibitor α -Amilase

## Abstrak
α-amilase  merupakan  enzim  yang  mengkatalisis  hidrolisis  polisakarida  pati  menjadi  oligosakarida untuk kemudian dicerna lebih lanjut menghasilkan glukosa. Penghambatan enzim α-amilase menjadi strategi yang efektif dalam memodulasi kadar gula darah penderita diabetes. Aglikon kurkuligosida A memiliki struktur yang mirip dengan kalkon yang mampu menghambat enzim α- amilase untuk pengobatan diabetes tipe 2. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan interaksi antara senyawa aglikon kurkuligosida A dan turunannya terhadap enzim α-amilase menggunakan metode simulasi penambatan molekul. Simulasi penambatan molekul dilakukan dengan menggunakan program AutoDock 4.2 dan protein α- amilase (PDB ID: 1B2Y) sebagai makromolekul. Hasil penambatan molekul menunjukkan semua senyawa dapat berinteraksi dengan sisi aktif enzim α- amilase. Tiga interaksi terbaik ditunjukkan oleh senyawa 10, senyawa 23 dan 41 dengan nilai energi bebas ikatan berturut-turut adalah –7,29; –7,22;  dan    –7,84    kkal/mol.    Ketiga  senyawa  terbaik  memiliki  interaksi  dengan  sisi  aktif  enzim α-amilase dengan residu asam amino penting yaitu Asp197, Glu233, dan Asp300 yang berperan dalam proses hidrolisis substrat polimerik seperti pati. Semua senyawa turunan aglikon kurkuligosida A yang diuji juga memiliki pola pengikatan yang mirip dengan interaksi ligan alami AC1 (6-metil-5-(4,5,6- trihidroksi-3-hidroksimetil-siklohex-2-enilamino)-tetrahidro-pyran-2,3,4-triol)  dengan  residu  asam amino penting pada enzim α-amilase.
Kata Kunci: aglikon kurkuligosida A, α-amilase, diabetes, penambatan molekul

## 1. Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan penyakit tidak menular yang paling umum terjadi  secara  global.  International  Diabetes Federation  (IDF)  memperkirakan  1  dari  11 orang dewasa usia 20–79 tahun menderita diabetes. Indonesia menempati peringkat ke-6  di  dunia  dengan  jumlah  penderita 10,3 miliar dan diprediksi akan mengalami peningkatan  pada  tahun  2045  sebanyak 16,7  miliar. 1 Diabetes mellitus merupakan penyakit gangguan metabolik menahun akibat pankreas tidak cukup memproduksi insulin atau tubuh tidak dapat menggunakan insulin yang  diproduksi  secara  efektif.  Akibatnya terjadi peningkatan konsentrasi glukosa darah (hiperglikemia).  DM  dapat  diklasifikasikan menjadi dua yaitu DM tipe 1 dan DM tipe 2. DM tipe 2 terjadi pada 90% dari semua kasus diabetes dan lebih disebabkan karena gaya hidup penderita diabetes, lingkungan dan faktor genetik. 2 Salah satu strategi terapi untuk pengobatan DM tipe 2 adalah dengan memperlambat penyerapan glukosa melalui  penghambatan  enzim  α-amilase. Penghambatan enzim ini menunda pencernaan karbohidrat  dan  memperpanjang  waktu pencernaan karbohidrat secara keseluruhan, menyebabkan  penurunan  penyerapan  laju glukosa dan akibatnya mengurangi tingkat glukosa plasma postprandial. 3 α-Amilase ( alpha-1,4glucan-4-glucanohydrolase) adalah  katalisator  yang  menghidrolisis  alfa- 1,4-glikosidik  polisakarida  pati  menjadi oligosakarida untuk kemudian dicerna lebih lanjut  menghasilkan  glukosa.  Agar  dapat diserap oleh tubuh, pati akan dihidrolisis menjadi oligosakarida sederhana. Jika terjadi aktivitas  enzim  α-amilase  dan  defisiensi insulin atau resistensi terhadap insulin, tingkat glukosa darah akan terus meningkat sehingga menyebabkan DM tipe 2. 4 Penghambatan enzim ini menunda dan memperpanjang waktu pencernaan karbohidrat secara keseluruhan, menyebabkan  penurunan  penyerapan  laju glukosa dan akibatnya mengurangi tingkat glukosa plasma postprandial. 3 Penelitian mengenai senyawa kalkon dan bis-kalkon 5 menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut
memiliki aktivitas penghambatan yang baik terhadap enzim α-amilase dengan nilai IC50 = 1,25 ± 1,05 sampai 2,40 ± 0,09 μM. Selain itu, in silico senyawa trans-kalkon berupa struktur inti bifenolik dari prekursor flavonoid diuji  aktivitas  penghambatannya  terhadap α-amilase, dapat berinteraksi dengan sisi aktif enzim  α-amilase  melalui  ikatan  hidrogen dengan residu asam amino Tyr62 dan Trp59. 6 Kurkuligosida  A  merupakan  senyawa glikosida benzilbenzoat yang termasuk dalam family  glikosida  kalkon  yang  diisolasi  dari rimpang Curculigo orchoides. 7 Susindran (2014)  melaporkan  bahwa  ekstrak  etanol rimpang Curculigo orchoides (dosis 300mg/ kg  berat  badan)  meningkatkan  aktivitas enzim seperti superoksida dismutase (SOD), mengurangi  glutathione  (GSH),  katalase (CAT),  dan  lipid  peroksida  (LPO)  pada tikus. Senyawa aglikon kurkuligosida A dan turunannya memiliki kemiripan struktur dengan senyawa kalkon. Menurut Johnson dan  Maggiora  (1990)  dalam  Qomariasih dkk (2016), senyawa yang memiliki struktur kimia yang mirip akan memiliki sifat biologis yang mirip pula dan akan cenderung mengikat protein yang sama.
Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk memodelkan interaksi antara senyawa aglikon kurkuligosida A dan turunannya dengan  enzim  α-amilase.  Metode molecular penambatan molekul digunakan dikarenakan dapat memberi gambaran awal untuk kandidat senyawa kurkuligosida A dan turunannya yang  berpotensi  sebagai  inhibitor  enzim α-amilase.

## 2.  Metode
2.1.  Piranti lunak dan keras ChemOffice  8.0  (www.cambridgesoft. com)  dan  HyperChem  8.07  release  for Windows  (Hypercube  Inc.)  digunakan  di Laboratorium  Kimia  Komputasi,  Sekolah Farmasi  ITB,  Bandung.  Untuk  menguji interaksi ligan dan protein digunakan AutoDock 4.2 dan Discover Studio Visualizer v4.5.0.  Spesifikasi  perangkat  keras  yang digunakan adalah Windows 7, 64 bits sebagai OS;  prosesor  Intel  Core  i3-2330  2,2  Ghz, RAM 2GB 1067 MHz DDR3.

## 2.2. Ligan dan protein
Bahan-bahan yang digunakan yaitu struktur  3D  ligand  binding  domain  (LBD) enzim  α-amilase  (PDB  ID  :  1B2Y)  yang diperoleh dari basis data online Protein Data Bank  (www.pdb.org)  dan  senyawa  aglikon kurkuligosida A dan turunannya.
2.3.  Persiapan ligan
Ligan  yang  digunakan  yaitu  senyawa aglikon kurkuligosida A dan turunannya sebanyak 57 senyawa. Ligan dibangun dengan membuat struktur 2D dengan menggunakan program  ChemDraw  Ultra  8.0  dalam  paket program  ChemOffice  v.8.0  kemudian dikonversi menjadi format file *.mol dengan menggunakan Chem3D v.8.0. Struktur ligan 3D tersebut selanjutnya dioptimasi geometri dengan metode semi ampirik Austin Model 1 (AM1)  menggunakan  program  HyperChem Release  v8.07.  dan  disimpan  dalam  format file PDB.
2.4. Persiapan reseptor α-amilase Makromolekul  α-amilase  pankreas manusia  yang  berisi  6-metil-5-(4,5,6- trihidroksi-3-hidroksimetil-sikloheks-2- enilamino)-tetrahidro-piran-2,3,4-triol sebagai  ligan  alami  (PDB:  1B2Y)  diunduh dari situs protein data bank (PDB) yaitu www. rcsb.org. Struktur protein ditampilkan pada paket  program  Discover  Studio  Visualizer v4.5.  kemudian  dipisahkan  dari  molekul  air serta ligan alaminya lalu disimpan dalam format file *.pdb yang diperlakukan sebagai reseptor.
2.5. Validasi metode penambatan molekul Validasi metode penambatan molekul
dilakukan dengan penambatan molekul ulang ligan  alami  ke  dalam  sisi  aktif  reseptornya. Ukuran grid box adalah (40 x 40 x 40) poin (1 poin: 0,365 Å) dengan koordinat grid box (x,y,z) berturut-turut adalah 18,427 Å; 8,939 Å; dan 48,997 Å. Validitas parameter metode penambatan molekul dievaluasi berdasarkan nilai  RMSD  ( root mean square deviation ). Validasi metode penambatan molekul dinyatakan valid jika nilai RMSD lebih kecil dari 2,0 Å10.

## 2.6. Simulasi penambatan molekul
Senyawa  Uji  selanjutnya  ditambatkan ke dalam sisi aktif reseptor dengan grid box dan koordinat yang sama pada saat validasi parameter metode penambatan molekul. Penambatan molekul dilakukan dengan menggunakan program Autodock tools 1.5.6 dengan  format  file  *.pdbqt.  Hasil  analisis berupa energi bebas ikatan, ikatan hidrogen, dan pola pengikatan dengan residu asam amino lain pada sisi aktif reseptor.

## 3.  Hasil
Hasil  validasi  parameter  metode penambatan molekul melalui penambatan molekul ulang ligan alami (AC1) ke dalam sisi aktif resptor, Parameter metode penambatan molekul dipilih dengan jumlah run 50 dengan grid box (40 x 40 x 40) poin dan koordinat grid box (x,y,z) 18,427 Å, 8,939 Å, 48,997 Å (Tabel 1), Setelah dilakukan validasi parameter metode penambatan molekul, lalu dilakukan penambatan molekul senyawa aglikon kurkuligosida A dan turunannya pada sisi aktif enzim α-amilase. Ligan yang digunakan dalam penelitian
Tabel 1. Hasil validasi docking Ligan Alami ED (kkal/mol) Ki (nM) RMSD (Å) Residu Asam Amino
6 - M e t i l - 5 - ( 4 , 5 , 6 - T r i h i d r o k s i - 3 -
H i d r o k s i m e t i l - S i k l o h e k s - 2 - Enilamino)-Tetrahidro- Piran-2,3,4-Triol –9,14 199,58 0,73 Trp58,  Tyr62,  Asn100, His101, Asn137, Tyr151, Arg158, Asp167, Arg195, Asp197, Ala198, His201,
Glu233,  Ile235,  Thr254, Asn298, His299, Asp300,
Gly306, Arg337
adalah  57  senyawa  turunan  aglikon kurkuligosida  A  hasil  modifikasi.  Energi bebas  ikatan  (ED)  yang  diamati  merupakan energi interaksi dari ikatan ligan terhadap enzim α-amilase. Hasil penambatan molekul senyawa  uji  menunjukkan  semua  senyawa dapat  berinteraksi  dengan  sisi  aktif  reseptor yang ditandai dengan nilai energi bebas ikatan yang bernilai negatif (Tabel 2).

## 4. Pembahasan
Penambatan molekul digunakan untuk mengetahui interaksi ligan dengan makromolekul karena kemampuan untuk memprediksi dengan tingkat akurasi tinggi dan konformasi ligan dalam situs pengikatan target yang tepat. 11 Pemilihan protein target yang  digunakan  yakni  enzim  α-amylase pankreas manusia (HPA)  dengan kode PDB 1B2Y yang tersedia pada Protein Data Bank (rcsb.pdb).  Kode  PDB  ini  dipilih  karena metode  pengukuran  menggunakan  difraksi sinar-X walaupun dengan resolusi agak rendah 3.2 Å tetapi cukup memenuhi untuk pengujian  secara  in  silico.  Struktur  enzim α-amilase dideterminasi menggunakan teknik difraksi  sinar-X  dan  enzim  ini  ditemukan terdiri dari tiga domain struktural. Domain
terbesar yaitu domain A yang membentuk paralel sentral beruntai delapan yang salah satu  ujungnya  merupakan  sisi  aktif  enzim dengan residu asam amino Asp197, Glu233, dan Asp300. 12
4.1.  Validasi metode penambatan molekul Proses validasi metode penambatan molekul dilakukan dengan cara penambatan molekul  ulang  ligan  alami  pada  sisi  aktif reseptor (PDB ID : 1B2Y). Parameter tahap validasi ini dilihat berdasarkan Root Mean Squared Deviation (RMSD).  RMSD  yang kurang  dari  2  Å  menunjukkan  parameter metode penambatan molekul yang digunakan memberikan hasil yang lebih mendekati hasil eksperimental.
Dari hasil validasi diperoleh nilai RMSD  0,73  Å  yang  berarti  parameter metode penambatan molekul yang digunakan memenuhi syarat. RMSD yang semakin kecil menunjukkan  posisi  ligan  hasil  penambatan molekul ulang yang semakin mendekati posisi ligan hasil kristalografi. 13
4.2.  Penambatan molekul senyawa Proses penambatan molekul terhadap 57  senyawa  turunan  aglikon  kurkuligosida
Gambar 1. Struktur Kurkuligosida A (a) dan Aglikon kurkuligosida A (b)
Gambar 2. Struktur enzim α-amylase (a) dan ligan alami (AC1) (b)
Tabel 2. Senyawa turunan aglikon kurkuligosida A dan nilai energi bebas ikatan ligan terhadap enzim α-amilase
No. Senyawa Subtituen ED Ki R1 R2 R3 R4 R6 R7 R8 R9 R10 (Kkal/mol) (µM) 1 Ligan Alami –9,14 0,199 2 Senyawa 1 OH H H OH OCH3 H H H OCH3 –5,55 84,96 3 Senyawa 2 H OH H OH OCH3 H H H OCH3 –6,12 32,91 4 Senyawa 3 H OH H OH H OH H OH H –6,66 13,06 5 Senyawa 4 OH H H OH H OH H OH H –6,66 13,12 6 Senyawa 5 OH H H OH OCH3 H Cl H OCH3 –5,99 40,38 7 Senyawa 6 OH H Cl OH OCH3 H Cl H OCH3 –6,26 25,96 8 Senyawa 7 OH H Cl OH OCH3 H H H OCH3 –6,30 24,17 9 Senyawa 8 OH Cl Cl OH OCH3 H Cl H OCH3 –6,81 10,28 10 Senyawa 9 OH H Cl OH OCH3 Cl Cl H OCH3 –6,46 18,41 11 Senyawa 10 OH H Cl OH OCH3 H Cl Cl OCH3 –7,29 4,57 12 Senyawa 11 OH Cl Cl OH OCH3 H H H OCH3 –6,12 32,62 13 Senyawa 12 OH H H OH OCH3 Cl Cl H OCH3 –5,91 46,66 14 Senyawa 13 OH H H OH OCH3 H Cl Cl OCH3 –6,04 37,07 15 Senyawa 14 OH Cl H OH OCH3 H Cl H OCH3 –6,44 19,18 16 Senyawa 15 OH CF 3 Cl OH OCH3 H H H OCH3 –5,41 107,44 17 Senyawa 16 OH H H OH OCH3 CF 3 Cl H OCH3 –5,66 70,98 18 Senyawa 17 OH CF 3 H OH OCH3 H Cl H OCH3 –6,18 29,47 19 Senyawa 18 OH H Cl OH OCH3 CF 3 H H OCH3 –6,00 39,77 20 Senyawa 19 OH CF 3 Cl OH OCH3 H Cl H OCH3 –6,00 39,76 21 Senyawa 20 OH H Cl OH OCH3 CF 3 Cl H OCH3 –5,89 48,39 22 Senyawa 21 OH CF 3 NO2 OH OCH3 H H H OCH3 –6,88 9,00 23 Senyawa 22 OH H H OH OCH3 CF 3 NO2 H OCH3 –5,76 59,98 24 Senyawa 23 OH H Cl OH OCH3 CF 3 NO2 H OCH3 –7,22 5,14 25 Senyawa 24 OH CF 3 NO2 OH OCH3 H Cl H OCH3 –6,37 21,35 26 Senyawa 25 OH H NO2 OH OCH3 CF 3 NO2 H OCH3 –6,48 17,81 27 Senyawa 26 OH H NO2 OH H H NO2 H H –6,94 8,22 28 Senyawa 27 H OH NO2 OH H OH NO2 OH H –5,96 42,60 29 Senyawa 28 OH H H OH H H NO2 H H –7,11 6,14 30 Senyawa 29 OH H H OH H OH NO2 OH H –6,69 12,37 31 Senyawa 30 H OH H OH H NO2 H H H –7,13 5,96 32 Senyawa 31 H OH H OH H NO2 H NO2 H –6,95 8,08 33 Senyawa 32 H OH H OH Cl H H H H –6,80 10,32 34 Senyawa 33 H OH H OH H Cl H H H –6,93 8,29 35 Senyawa 34 H OH H OH H H Cl H H –6,94 8,15
A  dilakukan  sebanyak  50  kali  dalam  sekali penambatan molekul tiap senyawa, sehingga dihasilkan 50 pose pada ligan dengan energi bebas yang berbeda-beda untuk memperoleh interaksi yang terbaik. Turunan aglikon kurkuligosida  A  (Tabel  1)  didesain  dengan memperhatikan aspek kemudahan dalam sintesis dan Lipinski's  rule  of  five .  Hasil simulasi penambatan molekul kemudian divisualisasi menggunakan Discover Studio
Visualizer  v4.5.  Parameter  yang  dianalisis adalah  energi  bebas  ikatan  (∆G),  ikatan hidrogen, dan pola interaksi lain dengan residu  asam  amino  pada  sisi  aktif  reseptor. Pengamatan interaksi residu asam amino bertujuan  untuk  mengidentifikasi  interaksi yang terjadi antara ligan dan reseptor. Ikatan hidrogen merupakan interaksi yang dapat menstabilkan ikatan ligan dengan reseptor. Interaksi lain antara ligan yang dapat
Tabel 2. Senyawa turunan aglikon kurkuligosida A dan nilai energi bebas ikatan ligan terhadap enzim α-amilase (lanjutan)
No. Senyawa Subtituen ED Ki R1 R2 R3 R4 R6 R7 R8 R9 R10 (Kkal/mol) (µM) 36 Senyawa 35 H OH H OH H H Br H H –6,80 10,35 37 Senyawa 36 H OH H OH H H H Br H –7,08 6,44 38 Senyawa 37 H OH H OH F H H H H –6,20 28,60 39 Senyawa 38 H OH H OH H H F H H –6,32 23,17 40 Senyawa 39 H OH H OH H H NO2 H H –6,84 9,75 41 Senyawa 40 H OH H OH H H CF 3 H H –6,47 18,07 42 Senyawa 41 H OH H OH NO2 H H H H –7,84 1,78 43 Senyawa 42 H OH H OH H H C 2H5 H H –6,66 13,04 44 Senyawa 43 H OH H OH H H C(CH3)3 H H –7,27 4,71 45 Senyawa 44 H H OH H OCH3 H H H OCH3 –6,52 16,56 46 Senyawa 45 H H OH H Cl H H H H –6,15 31,08 47 Senyawa 46 H H OH H H H H Cl H –6,33 22,75 48 Senyawa 47 H H OH H H H Cl H H –6,29 24,64 49 Senyawa 48 H H OH H H H Br H H –6,66 13,11 50 Senyawa 49 H H OH H H H H Br H –6,57 15,39 51 Senyawa 50 H H OH H F H H H H –6,19 28,96 52 Senyawa 51 H H OH H H H F H H –6,08 34,65 53 Senyawa 52 H H OH H H H NO2 H H –6,62 13,99 54 Senyawa 53 H H OH H H H CF3 H H –5,79 56,75 55 Senyawa 54 H H OH H H H H H NO2 –7,15 5,75 56 Senyawa 55 H H OH H H H C 2H5 H H –6,44 18,87 57 Senyawa 56 H H OH H H H C(CH3)3 H H –6,75 11,28 58 Senyawa 57 H H OH H H CH3 H H H –6,24 26,56
Gambar 3. Overlay konformasi ligan copy (merah) dengan ligan alami (biru)
meningkatkan  kestabilan  konformasi  adalah interaksi elektrostatik dan interaksi van der Walls. 14 Interaksi melalui ikatan hidrogen antara ligan uji dengan residu asam amino yang sama dengan  ligan  alami  menunjukkan  kemiripan jenis interaksi dalam hal ini menggambarkan kemiripan aktivitas. 15 Semua  senyawa  uji memiliki nilai energi bebas ikatan (∆G) yang negatif.  Semakin  negatif  nilai  energi  bebas ikatan menunjukkan tingkat kestabilan yang baik antara ligan dan protein target (reseptor) sehingga ikatan yang terbentuk akan semakin kuat. 14 Berdasarkan hasil visualisasi, dapat diketahui bahwa seluruh senyawa turunan aglikon kurkuligosida A mampu berinteraksi dengan  enzim  α-amilase  pada  sisi  aktif enzim  dengan  membentuk  ikatan  dengan asam amino kunci yaitu Asp197, Glu233 dan Asp30012. Residu Asp197 bertindak sebagai nukleofilik  katalitik  dalam  reaksi  hidrolisis yang  dilakukan  oleh  enzim  α-amilase  pada substrat polimerik seperti pati makanan. Residu Asp300 sangat penting dalam mengoptimalkan orientasi substrat yang
terikat di situs aktif yang berdekatan dengan residu katalis dan menstabilkan keadaan transisi.
16 Senyawa
yang menunjukkan interaksi terbaik yaitu senyawa 10 (4-kloro- 2,5-dihidroksibenzil-3,4-dikloro-2,6- dimetoksibenzoat),  senyawa  23  (4-kloro- 2,5-dihidroksibenzil-2,6-dimetoxi-4-nitro- 3-(trifluorometil)benzoat),  dan  senyawa  41 (3,5-dihidroksibenzil-2-nitrobenzoat) dengan nilai energi bebas ikatan berturut-turut adalah –7,29; –7,22; dan –7,84 kkal/mol (Gambar 4 dan Tabel 1). Berdasarkan  Gambar  4,  bagian  dari senyawa terbaik yang paling berkontribusi dalam interaksinya dengan reseptor adalah melalui ikatan hidrogen gugus hidroksil (O– H). Selanjutnya gugus hidroksil dari cincin A berinteraksi  dengan  molekul  air  nukleofilik yang memainkan peran dalam reaksi hidrolisis substrat sehingga secara efektif menghentikan fungsinya. 16 Ketiga senyawa uji berinteraksi dengan residu asam amino yang sama dengan ligan  alami  pada  sisi  aktif  reseptor.  Ketiga senyawa ini membentuk ikatan hidrogen dengan residu Asp197, Glu233 dan Asp300.
Gambar 4. Interaksi senyawa 10, 23, 41 dan ligan alami (AC1) pada sisi aktif enzim α-amilase

## Selain membentuk interaksi dengan residu
asam  amino  penting,  senyawa  uji  juga membentuk interaksi lain dengan residu asam amino pada sisi aktif reseptor.
Senyawa aglikon kurkuligosida A memiliki cincin aromatik berbentuk planar yang memungkinkan adanya interaksi van der Waals dan interaksi π. Sistem aromatik yang kaya elektron dan anion yang kekurangan elektron dapat membentuk interaksi π anion. Interaksi  π  anion  memainkan  peran  penting dalam stabilitas protein dan pengikatan ligan, serta interaksi ini menguntungkan secara energetik. 17-18

## 5. Simpulan
Semua senyawa turunan aglikon kurkuligosida A dapat berinteraksi dengan sisi aktif enzim α- amilase. Tiga ligan dengan interaksi  terbaik  ditunjukkan  oleh  senyawa 10, 23, dan 41 dengan nilai energi bebas ikatan berturut-turut adalah –7,29; –7,22; dan –7,84 kkal/mol. Ketiga senyawa terbaik membentuk ikatan hidrogen dengan residu asam  amino  penting  yaitu  Asp197,  Glu233 dan Asp300.

## Daftar Pustaka
1. Zheng,  Y.,  Sylvia,  H.  L.  dan  Frank,  B. H.  Global  Aetiology  and  Epidemiology of  Type  2  Diabetes  Melitus  and  Its Complications. Macmillan Publishers Limited, part of Springer Nature.  2018; 14: 88
2.  Proenca C., Freitas, Marisa., Ribeiro D., Oliveria,  E.D.F.,  Sousa,  Joana.,  Tome, Sara  M.,  Ramos,  Maria  J.,  et  al.  α- Glucosidase Inhibition by Flavonoids : an In Vitro and In Silico Structure –Activity Relationship  Study.  Journal  of  Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2017; 32 (1): 1216-1228.
3. De  Sales,  P.,  de  Souza,  P.,  Simeoni,  L., Magalhães, P., dan Silveira, D. α-Amylase Inhibitors: A Review of Raw Material and Isolated  Compounds  from  Plant  Source. Department of Pharmaceutical Sciences, School  of  Health  Sciences,  Campus Darcy  Ribeiro,  University  of  Brasília, Brasília, Brazil. J Pharm Pharmaceut Sci.
2012; 15(1): 141-183.
4. Agarwal, P. dan Gupta, R. Alpha-Amylase Inhibition Can Treat Diabetes Melitus. Research and Reviews Journal of Medical And Health Sciences. 2016; 5(4): 1-8.
5.  Bale, A., Khan, K., Salar, U., Chigurupati, S., Fasina, T., Ali, F., et al. Chalcones and Bis-Chalcones:  As  Potential  α-Amylase Inhibitors; Synthesis, In Vitro Screening, and Molecular Modelling Studies. Bioorganic  Chemistry.  2018;  79:  179– 189.
6.  Najafian,  M.,  Habibi,  A.,  Nastaran  H., Parichehreh, Y., Kazem, P. dan Bagher, L. Trans-chalcone: a novel small molecule inhibitor  of  mammalian  alpha-amylase. Springer Science+Business Media B.V: London. 2010.
7. Valls, J., Richard, T, Larronde F., Leblais, V., Muller B., Delaunay J.C., et al. Two New  Benzylbenzoate  Glucosides  from Curculigo  orchoides.  Fitoterapia.  2006; 77: 416-419.
8. P. Susindran P., Ramesh N., Anti-diabetic effect  of  Curculigo  orchioides  Gaertn extracts in alloxan induced diabetic rats, Journal  of  Pharmacy  Research.  2014; 8(7): 942-947.
9. Qomariasih  N.,  Budi  S.,  Farit,  M.A. Analisis Gerombol Simultan dan Jejaring Farmakologi antara Senyawa dengan Protein Target pada Penentuan Senyawa Aktif Jamu Anti Diabetes Tipe 2. Jurnal Jamu Indonesia. 2016; 1(2): 30-40.
10. Trott, O. dan Olson, A.J. Software News and Update AutoDock Vina: Improving the  Speed  and  Accuracy  of  Docking with  a  New  Scoring  Function,  Efficient Optimization,  and  Multithreading,  J. Comp. Chem., 2010; 31, 455–461.
11. Ferreira, L., Santos, R., Glaucius, O., dan Andricopulo, A. Molecular Docking and Structure-Based Drug Design Strategies, Molecules. 2015; 20: 13384-13421.
12. Withers,  S.  G,  Brayer,  G.  D.,  Luo,  Y. The  structure  of  human  pancreatic alpha-amylase  at  1.8  A  resolution  and comparisons  with  related  enzymes. Protein Sci. 1995; 4: 1730–1742.
13. Kontoyianni,  M.,  McClellan,  Sokol.

## Evaluation  of  Docking  Performance:
Comparative Data on Docking Algorithm. Journal  of  Medicinal  Chemistry.  2004; 47: 558-565.
14. Syahputra, G. 2014, Simulasi Docking  Senyawa  Kurkumin  dan Analognya  sebagai  Inhibitor  Enzim 12-Lipoksigenase,  Institut  Pertanian Bogor: Bogor.
15. Cosconati, S., Forli, S., Perryman, A.L., Harris  R,  Goodsell,  D.S,  dan  Olson, A.J. Virtual Screening with AutoDock: Theory and Practice, Expert Opinion on Drug Discovery, 2010; 5: 597-607.
16. Williams,  L.,  Chunmin  L.,  Stephen  G.,
dan  Brayer,  G.  Order  and  Disorder: The  Differential  Structural  Impacts  of Myricetin and Ethyl Caffeate on Human Amylase, an Anti-Diabetic Target, J. Med. Chem. 2012: 23: 1-37.
17. Schwans, J. P., Sunden, F., Jonathan, k., Lassila, Gonzalez, A., Tsai, Y., et al. Use  Of  Anion-Aromatic  Interactions Io  Position  The  General  Base  In  The Ketosteroid  Isomerase  Active  Site. PNAS. 2013; 110(28): 11308-11313.
18. Schottel, B. L., Chifotides, H. T., Dumbar, K. R. Anion π Interaction Chem Soc Rev. 2007; 37: 68-83.