https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Didemnum molle Yang Diperoleh Dari Pamtai Parentek Kabupaten Minahasa
Rizal Musafa Medica 1* , Adithya Yudistira 2 , Yuanita Amalia Hariyanto 3 , Imam Jayanto 4
1,2,3,4 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: rizalmdca@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L A B S T R A C T
Diterima : 24 April 2024
Disetujui : 16 Juni 2024 Dipublikasikan : 16 Juni 2024 Hal. 557 - 563
Didemnum  molle is  one  of  the  tunicates  marine  biota  whose  habitat  can  be  found  in Indonesian  coral  reef  waters.  This  marine  animal  is  green  which  indicates  the  content  of secondary  metabolites  as  a  form  of  self-defense.  Secondary  metabolite  compounds  in Didemnum  molle have  the  potential  to  have  antioxidant  effects  that  can  fight  free  radicals. This study aims to determine the antioxidant activity of Didemnum molle ethanol extract with DPPH  method  and  calculation  of  percent  inhibition  value.  Extraction  of  samples  using  the maceration method to obtain concentrated extracts then made 5 concentration series, namely 20, 40, 60, 80, and 100 ppm and calculated the absorbance with a UV-Vis spectrophotometer at  a  wavelength  of  517  nm.  The  calculation  results  showed  47.94%  (20  ppm),  58.75%  (40 ppm),  60.45%  (60  ppm),  63.15%  (80  ppm),  and  70.74%  (100  ppm).  These  values  indicate that  all  concentration  series  have  antioxidant  activity  but  are  effective  as  antioxidants  at concentrations  of  40  ppm,  60  ppm,  80  ppm,  and  100  ppm  because  they  have  a  percent inhibition above 50%.
Keywords: Didemnum molle, Antioxidant, DPPH, Parentek Beach, Minahasa Regency.

## A B S T R A K
DOI: 10.35799/pha.13.2024.55153
Didemnum  molle termasuk  salah  satu  biota  laut  jenis  tunikata  yang  habitatnya  dapat ditemukan  di  perairan  terumbu  karang  Indonesia.  Hewan  laut  ini  berwarna  hijau  yang menandakan adanya kandungan metabolit sekunder sebagai bentuk pertahanan diri. Senyawa metabolit sekunder yang ada didalam Didemnum molle berpotensi memiliki efek antioksidan yang  dapat  melawan  radikal  bebas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol Didemnum  molle dengan  metode  DPPH  dan  perhitungan  nilai persen  inhibisi.  Ekstraksi  sampel  menggunakan  metode  maserasi  sampai  mendapatkan ekstrak  pekat  kemudian  dibuat  5  seri  konsentrasi  yaitu  20,  40,  60,  80,  dan  100  ppm  dan dihitung absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Hasil  perhitungan  menunjukan  47,94%  (20  ppm),  58,75%  (40  ppm),  60,45%  (60  ppm), 63,15%  (80  ppm),  dan  70,74%  (100  ppm).  Nilai  tersebut  menunjukkan  bahwa  semua  seri konsentrasi  memiliki  aktivitas  antioksidan  tetapi  yang efektif  sebagai  antioksidan  ada  pada konsentrasi 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, dan 100 ppm karena memiliki persen inhibisi diatas 50%.
Kata Kunci: Didemnum molle , Antioksidan, DPPH, Pantai Parentek, Kabupaten Minahasa

## PENDAHULUAN
Keberadaan  biota  laut  sangat  menarik  perhatian  manusia,  karena  kehidupannya  yang  sangat rahasia,  seperti  hubungan  antar  spesies,  tetapi  juga  karena  manfaatnya  yang  besar  bagi  kehidupan manusia  (Dewanto,  2016).  Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  kepulauan  memiliki  banyak daerah  pantai.  Salah  satunya  Pantai  Parentek  yang  berada  di  Desa  Parentek,  Kecamatan  Lembean Timur,  Kabupaten  Minahasa,  Provinsi  Sulawesi  Utara.  Secara  geografis  terletak  pada  koordinat 1°08'02"N  125°01'07"E  sebagian  penduduk  berprofesi  sebagai  nelayan  karena  hasil  laut  yang melimpah (Bernadus et. al., 2023). Dengan kondisi perairan yang baik memungkinkan biota seperti tunikata untuk hidup dan berkembang.
Tunikata  adalah  invertebrata  laut  yang  sangat  penting  untuk  sumber  produk  alami  dengan aplikasi biomedis dan farmasi. Diantara tunikata, genus Didemnum penting karena memiliki paling banyak  spesies.  Genus Didemnum mencakup  spesies Didemnum  molle,  Didemnum  chartaceum, Didemnum albopunctatum , dan Didemnum obscurum , yang terkenal dengan metabolit sekundernya yang beragam secara kimiawi. Sampai saat ini, para peneliti  telah melaporkan metabolit sekunder, biasanya  termasuk  data  bioaktivitas,  untuk  setidaknya  69  anggota  dari  genus Didemnum ,  yang mengarah pada isolasi 212 senyawa. ( Youssef et al., 2020 ). Contohnya Didemnum obscurum diuji dengan  menggunakan  teknik  DPPH,  menunjukkan  efek  antioksidan  yang  sangat  kuat  dan  ekstrak metanol dari Didemnum sp. menunjukkan aktivitas antioksidan terbaik (Gao et al., 2023)
Antioksidan  bekerja  untuk  menstabilkan  radikal  bebas  dengan  melengkapi  kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas dan menghambat terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal  bebas  (Damanis et  al., 2020).  Antioksidan  alami  merupakan  senyawa  antioksidan  yang terdapat  secara  alami  dalam  tubuh  sebagai  mekanisme  pertahanan  tubuh  normal  maupun  berasal dari asupan luar tubuh. Sedangkan antioksidan sintetik merupakan  senyawa yang disintesis secara kimia (Tristantini et al., 2016).
Penelitian Kaparang yang dilakukan pada tahun 2020  di desa Tumbak Kabupaten Minahasa Tenggara  menunjukan  adanya  aktivitas  antioksidan  oleh  sampel  ekstrak Didemnum  molle dengan seri  konsentrasi  larutan  25,  50,  75  dan  100  µg/mL  dengan  persen  inhibisi  30,48  %,  32,08  %, 33,63 %, 35,98 %.
Berdasarkan  penjelasan  diatas  mengenai potensi Didemnum  molle dan  efek  dari  antioksidan tehadap  radikal  bebas  bagi  masyarakat  serta  contoh  penelitian  yang  lebih  mendukung  membuat peneliti tertarik untuk meneliti Didemnum molle dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa dengan menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Oktober  2023  sampai  dengan  bulan  Desember  2023  di Laboratorium  Farmasi  lanjut  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  dan  Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan berupa scuba diving, telenan, pisau, spidol permanen, zipper lock bag , cool box , sarung tangan, tisu kering, botol 600 mL, labu ukur 10 mL ( pyrex ), erlenmeyer 200 mL, tabung  reaksi  dan  rak  tabung  reaksi,  corong,  spatula,  timbangan  analitik,  pipet,  spektrofotometer UV-Vis, aluminium foil , vortex , dan rotary evaporator .
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah Didemnum  molle sebagai  sampel  yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa, Etanol 95%, aquades, es batu, dan DPPH ( 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl ).

## Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimen  laboratorium  untuk  menguji  aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2-  picrylhydrazyl )  ekstrak  etanol Didemnum molle yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel Didemnum molle diambil di Perairan Desa Parentek, Kecamatan Lembean Timur, Kabupaten Minahasa dengan menggunakan peralatan selam ( scuba diving ). Sampel yang diperoleh diberi  tanda  dengan  spidol  permanen  dan  dimasukan  ke  dalam zipper  lock  bag kemudian dimasukkan  dalam cool  box, lalu  dibawa  ke  Laboratorium  Farmasi  lanjut  Program  Studi  Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Sampel Didemnum  molle yang  diambil  dibersihkan  lalu  dipotong  kecil-kecil,  kemudian sampel  dimasukan  ke  dalam  botol  600  mL.  Sampel  yang  di  dalam  botol  diisi  dengan  etanol  95% sebanyak 200 mL atau sampai terendam

## Ekstraksi
Sampel Didemnum  molle dimaserasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%  sebanyak  200  mL dengan  melakukan  remaserasi  sebanyak  3  kali  selama  24  jam.  Sampel  kemudian  disaring  untuk mendapatkan filtrat. Hasil filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator dalam proses  evaporasi  pada  suhu  40⁰C  sehingga  menghasilkan  ekstrak  kental Didemnum  molle dan kemudian ditimbang.

## Pembuatan Larutan Ekstrak Didemnum molle
Untuk  membuat  larutan  ekstrak  dilakukan  dengan  cara  melarutkan  10  mg  ekstrak  etanol Didemnum  molle kedalam  100  mL  etanol  95%  dalam  tabung  reaksi  kemudian  divortex  hingga homogen.  Kemudian  dibuat  5  seri  larutan  konsentrasi  20,  40,  60,  80,  dan  100  ppm  dihitung menggunakan rumus pengenceran:
𝐌𝟏 × 𝐕𝟏 = 𝐌𝟐 × 𝐕𝟐

## Pembuatan Larutan DPPH
Untuk membuat larutan DPPH ditimbang sebanyak 4 mg DPPH dan dilarutkan dalam 100 mL  etanol  95%  dalam  tabung  reaksi  kemudian  divortex  sehingga  diperoleh  larutan  dengan konsentrasi 40 ppm. Larutan didiamkan selam 30 menit lalu disimpan dalam wadah tertutup rapat dan ditutup dengan alumunium foil .

## Pembuatan Larutan Kontrol
Larutan  kontrol  dibuat  dengan  mencampur  2  ml  etanol  95%  dan  2  ml  larutan  DPPH dikocok  hingga  homogen  dan  diinkubasi  dalam  ruangan  gelap  selama  30  menit  kemudian  diukur menggunakan alat spektofotometer pada panjang gelombang 517 nm.

## Pengujian Larutan Kontrol dan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Pembuatan  larutan  uji  sampel  dibuat  dengan  memasukkan  2  mL  larutan  DPPH  kedalam masing-masing  larutan  sampel  kemudian  di  vortex  dan  di  inkubasi  selama  30  menit  pada  suhu ruangan  yaitu  37⁰C  sampai  terjadi  perubahan  warna  dari  aktivitas  DPPH.  Dilakukan  3  kali pengulangan  untuk  semua  sampel  dan  setelah  itu  diukur  nilai  absorbansinya  menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.

## Analisis Data
Analisis  pengujian  antioksidan  metode  DPPH  dilakukan  dengan  melihat  perubahan  warna masing-masing sampel setelah di inkubasi bersama DPPH. Jika semua elektron berpasangan dengan elektron pada sampel ekstrak maka akan terjadi perubahan warna sampel. Kemudian sampel di ukur nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Data absorbansi kemudian digunakan untuk menghitung persen penangkapan radikal bebas (% inhibisi) dengan rumus (Rahmayani et al. 2013), sebagai berikut :
%Inhibisi = [1 − ( 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 )] ×100%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Gambar 2. Grafik Absorbansi Ekstrak Etanol Didemnum molle 0.424 0.342 0.327 0.304 0.242 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0 20 40 60
80 100 120 Konsentrasi
Tabel 1. Hasil Nilai Persen Inhibisi Ekstrak Etanol Didemnum molle

## Konsentrasi
(ppm) Pengulangan Rata-rata %Inhibisi I II III 20 49.274% 45.763% 48.789% 47,94% 40 58.838% 56.901% 60.533% 58,75% 60 56.659% 61.259% 63.438% 60,45% 80 62.591% 61.985% 64.891% 63,15% 100 70.460% 70.823% 70.944% 70,74%

## Pembahasan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  sampel Didemnum  molle menggunakan  metode  DPPH. Menurut  Purwanti et  al (2019),  metode  DPPH  didasarkan  pada  reaksi  oksidasi-reduksi,  dimana DPPH  yang  merupakan  radikal  bebas  sintetik  dapat  larut  dalam  senyawa  polar  seperti  etanol  dan metanol. DPPH bereaksi dengan dua cara, yaitu dengan mekanisme donor atom hidrogen dan donor elektron,  dimana  senyawa  antioksidan  akan  memberikan  atom  hidrogen  atau  pasangan  elektron pada DPPH yang bersifat radikal. Hal ini akan mengurangi keberadaan radikal bebas dalam sampel.
Pengukuran dalam penelitian ini digunakan alat spektrofotometer UV-Vis untuk mendapatkan nilai absorbansi dengan panjang gelombang 517 nm. Panjang gelombang tersebut digunakan karena panjang  gelombang  517  nm  merupakan  titik  paling  akurat  untuk  melihat  nilai  absorbansi  dari sampel uji. Suatu sampel dikatakan memiliki aktivitas sebagai penangkal radikal bebas, maka akan terjadi penurunan nilai absorbasi DPPH pada panjang gelombang maksimum 517 nm.
Pengujian antioksidan dalam penelitian ini dilakukan 3 kali pengulangan dengan larutan yang berbeda  pada  setiap  konsentrasi  dan  diukur  masing  masing  absorbansi  setiap  konsentrasi pengulangan  1,  2,  dan  3  setelah  itu  diambil  nilai  rata-ratanya.  Berdasarkan  hasil  grafik  data absorbansi  semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin  rendah  konsentrasi  ini  dikarenakan  adanya kemampuan  dari  sampel  untuk  mereduksi  radikal  bebas  yang  berupa  DPPH.  Hasil  perhitungan menunjukan 47,94% (20 ppm), 58,75% (40 ppm), 60,45% (60 ppm), 63,15% (80 ppm), dan 70,74% (100  ppm).  Dapat  dilihat  semakin  rendah  absorbansi  maka  semakin  tinggi  nilai  persen  inhibisi. Konsentrasi 100 ppm menjadi nilai persen inhibisi tertinggi yaitu 70,74% dan 20 ppm menjadi yang terendah pada 47,94% semakin rendah konsentrasi semakin turun juga nilai persen inhibisi. Hal ini berarti  bahwa  semakin  banyak  sampel  dalam  tiap  konsentrasi  semakin  tinggi  juga  aktivitas penangkal radikalnya. Menurut Molyneux (2013) nilai antioksidan dikatakan efektif apabila persen inhibisi  mencapai  50%  hal  ini  berkorelasi  dengan  hasil  yang  didapat  pada  konsentrasi  40,  60,  80, dan 100 ppm yang nilai inhibisinya berada di atas 50%.
Berdasarkan hasil penelitian ekstrak Didemnum molle dan pengukuran yang diperoleh masih lebih  tinggi  dibandingkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Kaparang  N,  E.  pada  tahun  2020  yang mana hasil untuk 100 mcg/ml yang setara dengan 100 ppm yaitu 35,98%. Perbedaan hasil tersebut kemungkinan disebabkan adanya perbedaan jumlah kandungan senyawa yang ada dalam Didemnum molle , juga karena perbedaan lokasi pengambilan sampel.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  sampel  memiliki  aktivitas antioksidan dan efektif pada konsentrasi 40, 60, 80, dan 100 dengan nilai tertinggi pada konsentrasi 100 ppm sebesar 70,74% dan yang terrendah pada 20 ppm yaitu 47,94%.

## SARAN
Saran untuk penelitian selanjutnya dapat dilakukan perhitungan nilai IC 50 untuk mengetahui kekuatan antioksidan dalam sampel dan skrining fitokimia terhadap sampel Didemnum molle agar dapat  mengetahui  senyawa  yang  terkandung  didalamnya.  Perlu  juga  dilakukan  pengujian antibakteri, antimikroba, maupun antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Badaring D. R, Sari S. P. M, Nurhabiba S., Wulan W, Lembang S. A. R. 2020. Uji Ekstrak Daun Maja  ( Aegle  marmelos  L .)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus . Indonesian  Journal  of  Fundamental  Sciences Vol.6,  No.1,  April 2020.
Bernadus  J.  M.  O,  Mamoto  J.  D,  Tangkudung  N.  J.  A.  2023.  Perencanaan  Pengaman  Pantai  Di Pantai Paerentek Kecamatan Lembean Timur. TEKNO (Volume 21, No. 85 Tahun 2023).
Chairunnisa  S,  Wartini  N.  M,  Suhendra  L.  2019.  Pengaruh  Suhu  dan  Waktu  Maserasi  terhadap Karakteristik Ekstrak Daun Bidara ( Ziziphus mauritiana L.) sebagai Sumber Saponin. Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri Vol. 7, No. 4, 551-560.
Dewanto  D.K,  2016.  Kepadatan  Ascidiacea  ( Didemnum  molle )  Di  Perairan  Pantai  Tasik  Ria, Sulawesi Utara.  Sekolah Tinggi Perikanan dan Kelautan (STPL) Palu. “Kauderni : Journal of Fisheries, Marine and Aquatic Science". Volume 1 Nomor 1
Damanis  F.  V.  M,  S  Wewengkang  D.  S,  Antasionasti  I.  2020.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Ascidian Herdmania  Momus Dengan  Metode  DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ). PHARMACON–Program  Studi  Farmasi,  FMIPA,  Universitas  Sam  Ratulangi,  Volume  9 Nomor 3.
Faisal  H.  2019.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Buah  Okra  ( Abelmoschus  esculentus  L. Moench )  Dengan  Metode  DPPH  ( 1,1-  difenil-2-pikrilhidrazil )  dan  Metode  ABTS  ( 2,2- azinobis-(3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic  Acid ). Regional  Development  Industry  & Health Science, Technology and Art of Life.
Gao P. Khong H, Y. Mao W. Chen X. Bao L. Wen X. Xu Y. 2023. Tunicates as Sources of High- Quality  Nutrients  and  Bioactive  Compounds  for  Food/Feed  and  Pharmaceutical Applications: A Review . Foods 12, 3684.
Handoyo  D,  L,  Y.  2020.  Pengaruh  Lama  Waktu  Maserasi  (Perendaman)  Terhadap  Kekentalan Ekstrak Daun Sirih (Piper Betle). Jurnal Farmasi Tinctura, Vol 2, No 1
Irawan  A,  2019.  Kalibrasi  Spektrofotometer  Sebagai    Penjaminan  Mutu  Hasil  Pengukuran  Dalam Kegiatan Penelitian Dan Pengujian. Indonesian Journal Of Laboratory Vol 1 (2) 2019, 1-9.
Jabir N. B,  Litaay M, Priosambodo D. 2022. Keragaman Tunikata di Pulau Pannikiang, Kabupaten Barru,  Sulawesi  Selatan.  Jurnal  Ilmu  Alam  dan  Lingkungan  13  (2),  (2022).  40  -  44. Departemen  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Hasanuddin.
Kaparang  N,  E.  2020.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Dengan  Metode  DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) Terhadap  Ekstrak  Etanol Didemnum  molle Dari  Perairan  Desa  Tumbak Kecamatan Pusomaen Kabupaten Minahasa Tenggara.
Lisnawati,  2014.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Kelor  ( Moringa  olefera  L. )  dari  Berbagai tingkat Kepolaran Pelarut. FMIPA kimia, Universitas Tadulako.
Molyneux,  P.  2013.  The  Use  of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for Estimating  Antioxidant  Activity.  Songklanakarin  Journal  Science  Technolgy.  26(2):  211- 219.
Purwanti, L., Dasuki, U, A., Imawan, A, R. 2019. Perbandingan aktivitas antioksidan dari seduhan 3 merk teh hitam (Camellia sinensis (L.) Kuntze) dengan metode seduhan berdasarkan SNI 01-1902-1995. Jurnal Ilmiah Farmasi. Farmasyifa. 2(1), 19–25.
Rahmayani U.  Pringgenies D. Djunaedi A. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Keong
Bakau ( Telescopium Telescopium ) Dengan Pelarut Yang Berbeda Terhadap Metode DPPH ( Diphenyl Picril Hidrazil ). Journal of Marine Research, vol. 2.
Shenkar,  N.  Gittenberger,  A.  Lambert,  G.  Rius,  M.  Moreira  da  Rocha,  R.  Swalla,  B.J.  Turon,  X.
(2023). Ascidiacea World Database. Didemnum molle (Herdman, 1886). Accessed through: World Register of Marine Species .
Tristantini  D.    Ismawati  A.  Pradana  B,  T.  Jonathan  J,  G.  2016.  Pengujian  Aktivitas  Antioksidan Menggunakan Metode DPPH pada Daun Tanjung (Mimusops elengi L). Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia. Program Studi Teknik Kimia, FTI, UPN “Veteran” Yogyakarta.
Youssef  D.  T.  A.,  Almagthali  H.,    Shaala  L.  A.,    Schmidt  E.  W.,  2020.  Review:  Secondary Metabolites of the Genus Didemnum: A Comprehensive Review of Chemical Diversity and Pharmacological  Properties.  Department  of  Natural  Products,  Faculty  of  Pharmacy,  King Abdulaziz University, Jeddah 21589, Saudi Arabia. Marine Drugs.