PENGARUH EKSTRAK DAUN KERSEN ( Muntingiacalabura l.) TERHADAP GAMBARAN HISTOPATOLOGI HEPAR PADA MENCIT ( Mus musculus ) YANG DIINDUKSI DIET TINGGI LEMAK
Muchamad  Fadil 1 ,  Sulistyo  Mulyo  Agustini 2 ,Bragastio  Sidharta 3
Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Muhammadiyah  Malang Jl.  BendunganSutami  188  A  Malang,  65145
Email  :  Muchamadfadil73@gmail.com

## ABSTRAK
Dislipidemia merupakan faktor yang paling sering menyebabkan penyakit perlemakan hepar non alkoholik.Daun kersen  ( Muntingia  calabura  l. )mengandungantioksidanberupa  flavonoid,  saponindan  tannin  yang  dapat  menghambat  stres oksidatif.Tujuan  penelitian  iniuntukmengetahuipengaruhekstrakdaun  kersen  ( Muntingia  calabura  l. )  terhadapgambaran histopatologi hepar pada mencit yang diinduksi diet tinggi lemak. Metode yang digunakan adalah True experimental dengan post test only  control  group  design. Sampeldibagidalam5kelompok  yaitu  kelompok  kontrol  negatif  (K1),  kontrol  positif  (K2),  dan 3 kelompok perlakuan yang diberi ekstrak daun kersen ( Muntingia calabura l. )dengan dosis 1,5mg/20gBB/hari (K3), 3mg/ 20gBB/hari (K4), 6mg/20gBB/hari (K5). Data dianalisismenggunakanujionewayanova, ujipost hocbonferroni, danujiregresi linier...Hasilpenelitianmenunjukkan bahwahasiluji one way anova didapatkanpengaruh yang  bermakna (p<0,05). Hasil uji one way  anovadidapatkan perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok  kontrol positif  dengan  kelompok perlakuan  (p<0,05). Hasilujiposthoc bonferronididapatkanperbedaanbermakna (p<0,05) antara masing-masing perlakuan dengankelompokkontrol. Hasilujiregresi linier didapatkan adjusted R 2 =0,511 yang menunjukkanbahwaekstrakdaunkersenmemberikanpengaruhsebesar51%. Pada penelitian ini kelompok perlakuan ekstrak daun kersen dosis 6mg/20gBB/hari memberikan efek perbaikan gambaran histopatologi yang paling baik. Pada penelitian ini disimpulkan pemberianekstrakdaunkersen berpengaruh terhadap perbaikan gambaran  histopatologi hepar pada mencit yang diinduksi  diet tinggi  lemak
Kata kunci : perlemakanhati non alkoholik, ekstrakdaunkersen, diet tinggi lemak, antioksidan.

## ABSTRACT
Dislipidemia is the often factor that caused non alcoholic fatty liver disease. The leaves of kersen (Muntingia calabura l.) contain antioxidant  such  as  flavonoid,  saponin,  and  tannin  that  can  prevent  from  oxidative  stress.  Objective  of  this  experiment  to  find  out  the effect  ofkersen  (Muntingia  calabura  l.)  leaves  extract  on  the  liver  histopatology  in  rat  (Mus  musculus)  with  high  fat  diet.The  method  of this experiment is true experimental with post-test only control group design. The samples were divided into 5 groups there were controlnegative group  (K1),  control  positive  group  (K2),  3  groups  were  given  kersen  (Muntingia  calabura  l.)  leaves  extracts  at  dose    1,5mg/20gBB/day (K3), 3mg/20gBB/day (K4), 6mg/20gBB/day (K5). Data was analized using onewayanova test, posthocbonferroni test, and linier regression test. The one way anova test results showedthe significant different among control positive group with group of treatment  (p<0.05). Results of  post  hoc  test  was  found  significant  of  differences (p<0.05) in each  group  of  treatment and  control  group.  The  results  of  linear regression was  obtained as  adjusted  R 2 = 0,511, this  shows  the effect of kersen (Muntingia calabura l.) leaves extractwas  51%. In  this  experiment, group  of  treatment  that  given  kersen  (Muntingia  calabura  l.)  at  dose  6mg/20gBB/day  give  the  best  improvement  effect  on  the  picture  of liver  histopathology.  Conclusion  of  this  experiment  the  given  of  kersen  (Muntingia  calabura  l.)  leaves  extract  influence  on  the  picture ofliverhistopatology  inrat  (Mus  musculus)  with  high  fat  diet.
Key  Words : Non  alcoholic  fatty  liver  disease,  kersen  (Muntingia  calabura  l.)  leaves  extract,  high  fat  diet,  antioxidant

## 92 VOLUME 12 NOMOR 2 DESEMBER 2016

## PENDAHULUAN
Non alcoholic fatty liver disease (NAFLD) adalah penumpukan  lemak  di  dalam  hepatosit  yang melebihi 5% dari massahepar tanpa adanya asupan etanol  yang  berlebihan (McCance  KL,  Huether  SE, Brashers  VL,  Rote  NS,  2010). Perlemakan  hepar non  alkoholik  merupakan  keadaan  yang  paling sering  menyebabkan  penyakit  hepar  kronis  yang dimulai  dari  steatosis  sederhana,  steatohepatitis, hingga  terjadinya  sirosis  hepatis (Fatbolcu,  Hakan and Zorlu, Elcin,  2016).
Prevalensi perlemakan hepar non alkoholik di Indonesia sebesar 30,6% 3 .Prevalensi perlemakan heparsebanding  dengan  peningkatan  usia,  dengan insidensi  tertinggi  laki-laki  usia  40  sampai  dengan 65 tahun. Penyebab utama peningkatan prevalensi perlemakan  hepar  adalah  faktor  metabolik  seperti obesitas,  diabetes  melitus tipe  II, dislipidemia dan hipertensi  arterial.  NAFLD  merupakan  hasil akumulasi  dari  adanya  ‘ two  hit ’  yang  dimulai  dari akumulasi  trigliserida  sebagai  ‘ first  hit’ kemudian terjadi  stres  oksidatif  sebagai  ‘second  hit’  yang menyebabkan  terjadinya  inflamasi,  fibrosis,  dan nekrosis (Fatbolcu,  Hakan  and  Zorlu,  Elcin,  2016) Keadaan ini mendorong kebutuhan tubuh manusia akan antioksidan yang lebih banyak untuk melawan radikal  bebas,  sehingga  dibutuhkan  asupan antioksidan dari luar tubuh.
Daun Kersen merupakantanaman obat yang telah  terbukti  memiliki  beberapa  manfaat  seperti obat antinociceptive (Takahashi Y, Fukusato T, 2014). Daun  kersen  mengandung  beberapa  antioksidan seperti  flavonoid,  tanin,  dan  saponin (Surjowardojo P, Sarwiyono, Thohari I, Ridhowi A, 2014) . Flavonoid pada  daun  kelor  terbukti  mencegah  perlemakan hepar  akibat  diet  tinggi  lemak ( Das  N,  Sikder  K, Ghosh  S,  Fromenty  B,  Dey  S,  2012). Antioksidan pada  penelitian  efek  propolis  terhadap  perbaikan fungsi  hepar  menunjukkan  adanya  perbaikan, dengan  cara  mempertahankan  tingkat  intraseluler glutation  tereduksi  dan scavenging radikal bebas 8 .Berdasarkan  penjelasan  di  atas  penulis mencoba  melakukan  penelitian  terkait pengaruhekstrakdaunkersen  ( Muntingiacalabura  l. ) terhadapgambaranhistopatologi  heparpadamencit ( Mus musculus ) yang diinduksi diet tinggilemak.

## TINJAUAN  PUSTAKA
Makanan yang digoreng dikenal luas karena aroma,  rasa  dan  tekstur  yang  dihasilkannya.  Pada saat  makanan  digoreng,  lemak  atau  minyak  panas akan diserap masuk ke dalam bahan makanan dan menggantikan  air  yang  menguap  sehingga  bahan makanan menjadi lebih lembut dan tekstur makanan menjadi renyah (Ghidurus, M., Turtoi, M., Boskou, G., Niculita, P., Stan, V., 2010) . Deep frying adalah cara memasak atau memanaskan makanan menggunakan minyak  dalam  jumlah  yang  banyak,  berulang,  dan suhu  tinggi  sekitar  150°C  –  200°C (KrishnaveniMarimuthu,  DhanalakshmiRavi,  2014) . Selama  proses deep  frying terjadi  berbagai  reaksi degradasi,  yaitu  hidrolisis,  oksidasi  termal,  dan polimerisasi minyak goreng. Indikator paling mudah untuk mengetahui minyak jelantah adalah warnanya coklat  tua  sampai  hitam,  terlalu  banyak  asap,  bau tengik,  menjadi  lebih  kental  atau  timbulnya  buih pada minyak saat digunakan (Sartika, R.A.D, 2009, Budiyanto,  Zuki  Meizul,  Hutasoit  S.  Mina,  2012). Minyak yang telah rusak dan menjadi jelantah tidak hanya  memberikan  efek  negatif  pada  tekstur,  rasa dan  gizi  makanan  yang  dihasilkan  tetapi  juga berdampak  buruk  bagi  kesehatan (Budiyanto,  Zuki Meizul, Hutasoit S.  Mina,  2012).
Non alkoholic fatty liver disease atau yang dikenal  sebagai  penyakit  perlemakan  hepar  non alkoholik (PPHNA) adalah akumulasi lipid di dalam hepatosit yang melebihi 5% dari berat hepar tanpa adanya  asupan  etanol  yang  berlebihan  (secara konvensional  didefinisikan  20g/hari)  dan  tanpa penyebab  penyakit  hepar  lain.  Perlemakan  hepar non alkoholik menjadi istilah yang sering digunakan mengacu  kepada  spektrum  luas  dari  kerusakan hepar,  dimulai  darigangguan  hepar  yang  ditandai oleh  mikrovascular  lemak  hepar  saja  disebut dengansteatosis sederhana atau bisa disertai dengan tanda-tanda  cedera  hepatosit,  infiltrasi  sel  radang campuran, dan variabel fibrosis hepar yang disebut dengansteatohepatitis  non  alkoholik  (SHNA). Steatohepatitis  non  alkoholik  dapat  menyebabkan sirosis dan karsinoma hepatoseluler.
Teori  kejadian  PPHNA  didasari  oleh  ’two hit hipotesis’. ‘First hit’berupa akumulasi trigliserida di  hepatik  disebut  dengan  steatosis,  sedangkan peningkatan  kerentanan  hepar  untuk  mengalami cedera  dimediasi  oleh  ‘second  hit’seperti  sitokin inflamasi atau adipokin, disfungsi dari mitokondria dan  stres  oksidatif  yang  dapat  menyebabkan
steatohepatitis  atau  fibrosis.  Namun,  peningkatan asam  lemak  bebas  juga  berperan  secara  langsung terhadap  kejadian  cedera  hepar,  menyebabkan modifikasi teori ini (Castilla P, Echarri R, Davalos A, Cerrato  F,  2006).
Pada kejadian obesitas dan resistensi insulin terjadi peningkatan masukan asam lemak bebas ke hepar. Asam lemak bebas ini mengalami â-oksidasi atau  esterifikasi  dengan  gliserol  membentuk trigliserida yang mengakibatkan penumpukan lemak di hepar. Namun sekarang telah dibuktikan bahwa substansi  dari  asam  lemak  bebas  secara  langsung dapat  menyebabkan  efek  toksik  dengan  cara meningkatkan  stresoksidatif  dan  aktivasi  jalur inflamasi. Oleh karena itu akumulasi trigliserida di hepar  dianggap  sebagai  mekanisme  perlindungan terhadap  efek  toksik  dari  asam  lemak  bebas  yang tidak teresterifikasi. (Castilla P, Echarri R, Davalos A, Cerrato  F,  2006)
Selanjutnya terdapat komponen tambahan mengenai ‘third hit’ yaitu mencerminkan regenerasi hepatosit  yang  tidak  adekuat.Pada  hepar  yang normal, kematian sel menstimulasi replikasi hepatosit yang  matur  menggantikan  sel-sel  yang  mati  dan menyusun kembali fungsi jaringan normal. Namun stres oksidatif merupakan patogenesis utama dalam kejadian  perlemakan  hepar,  dengan  menghambat replikasi  dari  hepatosit  yang  matur  yang menghasilkan  perluasan  sel  progenitor  hepar  (sel oval). (Castilla  P,  Echarri  R,  Davalos  A,  Cerrato  F, 2006)
Pada  kejadian  cedera  hepar  kronik, perkembangan  fibrosis  atau  sirosis  bergantung dengan kemampuan regenerasi hepatosit, dan oleh karena itu kematiansel dengan gangguan proliferasi hepatosit progenitor diusulkan sebagai ‘third hit’ di dalam  patogenesis  PPHNA.
Daun  kersen  mengandung  banyak antioksidan  seperti  tanin,  saponin,  flavonoid,  dan cathecin. Antioksidan terbanyak dalam daun kersen adalah flavonoid diikuti kadar tannin lalu saponin yang tidak terlalu banyak (Surjowardojo P, Sarwiyono, Thohari  I,  Ridhowi  A,  2014) .    Dari  penelitian didapatkan bahwa  kadar antioksidan  yang dimiliki daun  kersen  lebih  banyak  dari  pada  kadar antioksidan yang ada pada buah kersen 8 .Flavonoid memiliki peran dalam menurunkan kadar mediator proinflamasi  melalui  hambatan  terhadap nuclear- factor  kB (Anggia  S.W.J,  2015) .  Flavonoid  sebagai antioksidan  secara  langsung  yaitu  dengan
mendonorkan  ion  hidrogen  sehingga  dapat menetralisir  efek  toksik  dari  radikal  bebas.  dan mekanisme  tidak  langsung  yaitu  dengan meningkatkan  ekspresi  gen  antioksidan  endogen melalui beberapa mekanisme. Salah satu mekanisme peningkatan ekspresi gen antioksidan adalah melalui aktivasi nuclear erythroid relates factor 2 (Nrf2) sehingga terjadi peningkatan gen yang berperan dalam sintesis enzim  antioksidan  endogen  seperti  misalnya  gen SOD  (superoxide  dismutase). (Kumar  V,  Abbas AK,  Aster  JC,  2015)

## METODE  PENELITIAN
Penelitian true  experimental dengan menggunakan  metode Post  Test  Only  Control  Group Design .  Penelitian  ini  bertempat  di  Laboratorium Biomedik  FK  UMM  selama  3  minggu.  Populasi dan  sampel  dalam  penelitian  ini  adalahmencit putihjantan ( Mus musculus) dengan berat 30-40 gram danberusia  2-3  bulan  dengan  kondisi  sehat  yang ditandai dengan gerakan yang aktif dan mata jernih. Peneliti  menetapkan  kelompok  perlakuan  terdiri dari  5  kelompok  yaitu,  satu  kelompok  kontrol negative(K-),  kontrolpositif  (K+)  yaitu  hanya diinduksi minyak jelantah, perlakuan 1 induksi minyak jelantah dan ekstrak daun kersen1,5mg/20g/hr (P1), perlakuan  2  minyak  jelantah  dan  ekstrak  daun kersen3  mg/20g/hr  (P2)  dan  perlakuan  3minyak jelantah dan ekstrak daun kersen6 mg/20g/hr (P3) dengan  masing-masing  kelompok  terdapat  6  ekor mencit. Mencit diaklimatisasi selama 7 hari dengan diberikan pakan standar BR-1 ditambah air minum ad libitum. Selanjutnya,  dilakukan  pembedahan  pada mencit  untuk  diambil  heparnya  dan  dilakukan pemeriksaan histopatologi. Setelah didapatkan data, kemudian  dilakukan  analisis  dengan  uji one  way ANOVA, post hoc bonferroni, dan ujiregresi linier.

## HASIL  PENELITIAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  jumlah rerata selballoning K- = 0,75sel, K+=8,5 sel, P1 = 4,5sel,  P2  =  4sel,  dan  P3  =  2,75  sel. Hasiluji  one way  anovadidapatkan  hasil  sig=0,001  yang  berarti adapengaruh yang bermakna (p<0,05). Hasiluji post hoc didapatkanhasil antara kelompok kontrol positif dengan  perlakuan  terdapat  perbedaan  yang bermakna (p<0,05). Hasil uji regresi linier didapatkan adjusted  R 2 =  0,511  hal tersebut  bermakna  bahwa pemb erian ekstrak daun kersen memiliki pengaruh

## 94 VOLUME 12 NOMOR 2 DESEMBER 2016
terhadap gambaran histopatologi pada hepar mencit sebesar 51,1% dan 48,9% lainnya dipengaruhi oleh faktor lain yang tidak  diteliti.
Pada  penelitian  ini  kelompok  perlakuan ekstrak  daun  kersen  dosis  6mg/20gBB/hari memberikan efek perbaikan gambaran histopatologi yang  paling  baik

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  membuktikan  bahwa terdapat  pengaruh pemberian  ekstrak daun  kersen terhadap gambaran histopatologi pada hepar mencit yang diinduksi diet tinggi lemak. Hal ini mendukung penelitian tentang efek preventif dari ekstrak daun kelor  ( Moringaoleiferal .)  yang  mengalami  kerusakan hepar  akibat  diet  tinggi  lemak.  Penelitian  tersebut menggunakan  dosis  ekstrak  daun  kelor ( Moringaoleiferal .)  0,15mg/g  BB  mencit  yang  bila dikonversikan  kedalam  dosis  ekstrak  daun  kersen ( Muntingiacalabura  l. )  sama  dengan  dosis  3mg/ 20gBB 7 .  Sel  ballooning  merupakan reversible  injury yang dapat diakibatkan oleh radikal bebas sehingga antioksidan dapat menurunkan kerusakan pada sel hepar yang dikarenakan oleh radikal bebas tersebut .  Daun  kersen  sendiri  merupakan  bagian  dari tanaman  kersen  yang  mengandung  antioksidan tertinggi. Daun kersen mengandung flavonoid, tanin, dan  saponin  dapat  berperan  sebagai  antioksidan yang menurunkan kerusakan sel akibat radikal bebas (KrishnaveniMarimuthu,  DhanalakshmiRavi,  2014). Flavonoid  berperan  sebagai  antioksidan  dengan berbagai  cara  seperti  menurunkan  kadar  mediator proinflamasi  melalui  hambatan  terhadap nuclear- factor  kB, mendonorkan  ion  hidrogen  untuk menetralisir  efek  toksik  dari  radikal  bebas,  serta meningkatkan  ekspresi  gen  antioksidan  endogen melalui  mekanisme  aktivasi nuclear  erthroid  relates factor 2 (Castilla P, Echarri R, Davalos A, Cerrato F, 2006,  Anggia  S.W.J,  2015).

## KESIMPULAN
Terdapat  pengaruh  ekstrak  daun  kersen ( Muntingia  calabura  l. )  terhadap  gambaran histopatologi  hepar  pada  mencit  ( Mus  musculus ) yang  diinduksi  diet  tinggi  lemak.  Dosis  efektif ekstrak daun  kersen terhadap perbaikan gambaran histopatologi  hepar  pada  mencit  yang  diinduksi diet  tinggi  lemak  adalah  1,5mg/20grBB/hari.

## DAFTAR  PUSTAKA
McCance KL, Huether SE, Brashers VL, Rote NS, 2010, Pathophysiology; The Biologic Basis for Disease in  Adult  and  Children. 6th  ed.  USA. Fatbolcu, Hakan and Zorlu, Elcin, 2016, Nonalcoholic Fatty Liver Disease as a  Multi-Systemic Disease , World  Journal  of   Gastroenterology,  Vol.22, pp.  4079-4090.
Sutejo I.R, Dewi R, 2012, Kerusakan Sel Hati dan Peningkatan Kolesterol Serum Mencit Akibat Pemberian  Minyak  Goreng  Bekas  Pakai, Jurnal  IKESMA,  vol.8,  pp.9-16
Ratziu  V,  Bellentani  S,  Cortez-Pinto  H,  Day  C, Marchesini  G,  2010, A  position  statement  on NAFLD/NASH  based  on  the  EASL  2009 special conference , Journal of  Hepatology, vol53, pp.372–384.
Takahashi  Y,  Fukusato  T,  2014, Histopathology  of nonalcoholic  fatty  liver  disease  /  nonalcoholic steatohepatitis ,World Journal of Gastroenteroogy,vol.20,  no.42,  pp.  15539- 15548
Surjowardojo P, Sarwiyono, Thohari I, Ridhowi A, 2014, Quantitative and Qualitative Phytochemicals Analysis  of  Muntingia  calabura, Journal  of Biology,  Agriculture  and  Healthcare,  vol.4, pp.84-89
Das  N,  Sikder  K,  Ghosh  S,  Fromenty  B,  Dey  S, 2012, Moringa oleifera Lam. Leaf extract prevents early liver injury and restores antioxidant status in mice  fed  with  high-fat  diet ,  Indian  Journal  of Experimental  Biology,  vol50,  pp.  404-412 KrishnaveniMarimuthu,  DhanalakshmiRavi,  2014, Qualitative and Quantitative Study of Phytochemicals in  Muntingiacalabura  l.  and  Fruit, Department of   Biochemistry  Periyar  University,  Salem- 636011, Vol.3, Issue 6, pp. 1687-1696, ISSN 2277  –  7105
Ghidurus, M., Turtoi, M., Boskou, G., Niculita, P., Stan,  V.,  2010, Nutritional  and  health  aspects related to frying, Romanian Biotechnological Letters, vol.15,no  6.
Sartika,  R.A.D,  2009,  Pengaruh  Suhu  dan  Lama Proses  Menggoreng  ( Deep  Frying )Terhadap Pembentukan  Asam  Lemak  Trans,  Markara Sains,  vol  13,  pp23-8
Budiyanto,  Zuki  Meizul,  Hutasoit  S.  Mina,  2012, Ketahanan Minyak Goreng Kemasan dan Minyak
Curah  pada  Penggorengan  Kerupuk  Jalin , Bengkulu,  Jurnal Agroindustri, Vol.2, No.1, pp.  34-40
Juluri  R,  Vuppalanchi  R,  Olson  J,  Ünalp  A,Van NM,  Cummings  OW,  Tonascia  J,  Chalasani N,  2011, Generalizability of  the NASH CRN Histological Scoring System for Nonalcoholic Fatty Liver  Disease ,  Journal  of  Clinical Gastroenterology, vol.45, no.1, Jan., pp. 55– 58 Fan  JG,  Farrell  GC,  2009, Review;  Epidemiology  of non-alcoholic  fatty  liver  disease  in  China. Journal of   Hepatology,  vol.50,  pp.  204-210.
Dowman  JK,  Tomlinson  JW,  Newsome  PN, 2010, Review; Pathogenesis of  nonalcoholicfatty liver disease. Q  J  Med,  vol  103,  pp.  71-83.
Castilla  P,  Echarri  R,  Davalos  A,  Cerrato  F, 2006, Concentreted red grape juice exerts antioxidant, hypolipidemic, and antiinflammastory effects in both hemodiálisis patients and healthy subjects , American Journal  of  Clinical  Nutrition,  vol84,  pp.
252-62.
Anggia  S.W.J,  2015, The  effect  of   ethanol  extract  os soursop leaves to decreased levels of malondialdehyde , Journal  Majority,vol4,  no  3,pp.14-18.
Kumar V, Abbas AK, Aster JC, 2015, Robbins and Cotran Pathologic Basis of  Disease , 9 th Edition, Philadelphia,  Elsevier  Saunders,  pp.  40-41, 62.