## AKTIVITAS ANTHELMINTIKA SECARA IN VITRO INFUSA DAUN Indigofera
tintoria L TERHADAP Haemonchus contortus
In Vitro: Anthelmintic Activity of Aqueous Leaf Extract of Indigofera tintoria L Againts Haemonchus contortus
Wahyu Setyono 1* , Kustantinah 2 , Lies Mira Yusiati 2 , Bambang Suwignyo 2 and Raden Wisnu Nurcahyo 3
1 Sekolah Vokasi Universitas Sebelas Maret Surakarta. Jl. Kolonel Sutarto 150, Jebres, Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia
2 Departemen Nutrisi dan Makanan Ternak, Fakultas Peternakan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta, Indonesia, Jl. Fauna No. 3, Bulaksumur, Yogyakarta, Indonesia
3 Departemen Parasitologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta,
Jl. Fauna 2 Bulaksumur, Yogyakarta 55281, Indonesia
*Coresponding Author: wahyu.setyono@staff.uns.ac.id

## ABSTRAK
Nematoda gastrointestinal adalah satu diantara penyebab berkurangnya efisiensi produksi pada domba dan kambing di Indonesia, terutama parasit abomasum Haemonchus contortus . Parasit ini menyebabkan penyakit Haemonchosis yang menyebabkan anemia dan berakibat fatal bagi domba dan kambing produktif. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi daya hambat tetas telur dan mortalitas cacing H. contortus dewasa dari infusa daun Indigofera tintoria L secara in  vitro .  Pengujian  infusa  daun Indigofera pada  lima  konsentrasi  yaitu  0%  sebagai  kontrol negatif,  20%,  40%,  60%  dan  80%.    Kontrol  positif  menggunakan  Albendazole  dengan konsentrasi  2  mg/ml.  Pada  konsentrasi  tertinggi  80%  infusa  daun Indigofera mampu menghambat penetasan telur sebesar 95.37% dan memiliki daya mortalitas terhadap cacing H. contortus dewasa  sebesar  68.67%.  Konsentrasi  80%  mempunyai  efek  yang  sama  jika dibandingkan dengan kontrol positif yang menggunakan Albendazole. Analisis fitokimia daun Indigofera  tintoria  L mengandung  tanin  terkondensasi  dan  berdaya  guna  sebagai bioanthelmintika terhadap cacing H. contortus . Kesimpulannya Infusa daun Indigofera tintoria L pada  tingkat  konsentrasi  80%  menunjukkan  aktivitas in  vitro anthelmintik H.  contortus dengan mengurangi penetasan telur dan motilitas cacing dewasa.
Kata kunci : Indigofera tintoria L, Infusa, Bioanthelmintika, In vitro .

## ABSTRACT
Gastrointestinal nematodes are one of the causes of reduced production efficiency in sheep and goats  in  Indonesia,  especially  the  abomasum  parasite  Haemonchus  contortus.  This  parasite causes Haemonchosis disease which causes anemia and is fatal for productive sheep and goats. This study aims to evaluate the inhibition of egg hatching and mortality of adult H. contortus worms from Indigofera tinctorial L leaf infusion in vitro. Testing of Indigofera leaf infusion at five  concentrations,  namely  0%  as  a  negative  control,  20%,  40%,  60%  and  80%.  Positive control using Albendazole with a concentration of 2 mg/ml. At the highest concentration of 80%, Indigofera leaf infusion inhibited egg hatching by 95.37% and had a mortality rate against adult  H.  contortus  worms  of  68.67%.  The  concentration  of  80%  had  the  same  effect  as  the positive control using Albendazole. Phytochemical analysis of Indigofera tinctorial L leaves contains condensed tannins and is effective as an anthelmintic against H. contortus worms. In
conclusion, Indigofera tinctorial L leaf infusion at a concentration level of 80% showed in vitro anthelmintic activity of H. contortus by reducing egg hatching and adult worm motility.
Keywords : Indigofera tintoria L , Infusa, Bioanthelmintic, In vitro.

## PENDAHULUAN
Nematoda  gastrointestinal  adalah satu  diantara  penyebab  berkurangnya efisiensi produksi pada domba dan kambing di Indonesia, terutama parasit abomasum H . contortus . Parasit ini menyebabkan penyakit haemonchosis yang  berdampak anemia dan berakibat fatal bagi domba atau kambing  muda  (Mengist et  al .,  2014). Sekitar 10% dari populasi kambing di dunia dan  29%  dari  populasi  kambing  di  Asia Tenggara  terinfeksi  oleh Haemonchus contortus (McLeod, 2004). Penelitian yang telah dilakukan di  Indonesia menunjukkan bahwa  prevalensi haemonchosis pada kambing  mencapai  89.4%  (Miller et  al ., 2006)  dan  kerugian  ekonomi  yang disebabkan haemonchosis pada kambing di Indonesia  ditaksir  mencapai  4.7  juta  dolar US.  Di  negara  Kenya  kerugian  ekonomi akibat H.  contortus pada  ruminansia  kecil diperkirakan  mencapai  26  juta  US  dollar setiap tahun  (Githiori, 2004).
Kontrol parasit gastrointestinal pada ruminansia  yang  dilakukan  sejauh  ini adalah  bergantung  pada  penggunaan  obat- obatan sintetik dan komersial yang tersedia (Jackson et al ., 2012; Oliviera et al ., 2011).
Penggunaan  obat-obatan  sintetik  diketahui telah  menyebabkan  kasus  resistensi  yang telah terdeteksi  pada kambing dan domba, sehingga pengobatan menjadi tidak efektif (Martins et al., 2017; Haryuningtyas, 2008;
Gilleard et  al .,  2006;  Kaplan,  2004). Diantara  pendekatan  baru,  pengobatan alternatif dilakukan menggunakan tumbuhan berkhasiat anthelmintika (Setyono,  2014;  Setyono et  al .,  2019), karena  mampu  menyelesaikan  masalah infeksi  parasit,  mengurangi  resistensi  obat
dan  memiliki  efek  samping  terhadap lingkungan  yang  lebih  rendah  daripada pengobatan kimia (Adiwimarta et al., 2021, Alonzo-Diaz et  al .,  2011;  Adiwimarta et al .,  2010;  Ngeh et  al .,  2007;  Hoste et  al .,
2006; Barrau et al ., 2005).
Inovasi penemuan anthelmintika baru salah satunya  adalah  menggunakan  sumber hayati baru untuk mendukung keberhasilan usaha  dengan  jalan  meningkatkan  kinerja produksi  ternak.  Sumber  hayati  tumbuhan sudah banyak digunakan oleh peternak dan juga peneliti untuk membantu meningkatkan  kinerja  peternakan.  Salah satu  sumber  hayati  tumbuhan  yang  dapat menjadi alternatif baru adalah penggunaan daun Indigofera tintoria L untuk membantu usaha peternakan tersebut.
Daun Indigofera  tintoria  L mempunyai potensi yang tinggi untuk menjadi alternatif karena  sifatnya  yang  mudah  tumbuh  di seluruh wilayah di Indonesia dan memiliki potensi  sumber  pakan  ternak  ruminansia yang  unggul.  Daun Indigofera  tintoria  L diketahui  mengandung  berbagai  nutrien yang  bermanfaat  untuk  meningkatkan kinerja  ternak.  Kandungan  tanin  dalam daun Indigofera dilaporkan mampu memberikan  manfaat  sebagai  obat  cacing untuk  ternak  sehingga  selanjutnya  perlu dikaji  lagi  potensinya  sebagai  obat anthelmintika  pada  ternak  ruminansia. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi  infusa  daun Indigofera tintoria L terhadap daya hambat tetas telur dan mortalitas H. contortus dewasa.

## MATERI DAN METODE

## Persiapan infusa daun Indigofera tintoria L
Daun Indigofera  tintoria  L dikumpulkan dari  kebun  koleksi  hijauan  Fakultas Peternakan  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta.  Daun Indigofera  tintoria  L yang dipilih adalah daun tua yang memiliki kandungan  tanin  terkondensasi  (TK)  lebih tinggi dibandingkan daun muda berdasarkan analisis TK menurut (Abdulrazak dan Fujihara, 1999).
Pembuatan  infusa  dilakukan  mengikuti metode  Ferreira  et  al.  (2013)  dengan modifikasi  level  konsentrasi  infusa  daun. Cara  pembuatan  infusa  yaitu  dengan memanaskan  daun Indigofera  tintoria  L yang  telah  dipotong  ±1  cm  dengan menambahkan  akuades  pada  suhu  90 o C selama  15  menit  sambil  sesekali  diaduk, sehingga diperoleh konsentrasi infusa 20%, 40%, 60% dan 80% (b/v).

## Penghambat  Penetasan  Telur  (Egg
Hatch Inhibiting/EHI)
Studi  EHI  secara in  vitro dilakukan menurut  Coles  et  al.  (1992)  dan  jumlah telur  dihitung  menurut  metode World Association  for  the  Advancement  of Veterinary Parasitologi (W.A.A.V.P) (Coles et  al., 1992).  Sampel  telur  diambil dari  cacing H.  contortus betina  yang dikoleksi dari abomasum domba ekor tipis yang  dipotong  di  rumah  potong  hewan  di Kabupaten  Sleman,  Yogyakarta.  Domba yang dipilih adalah domba dengan infestasi >1500 telur cacing per gram feses (EPG).
Sebanyak 18 tabung reaksi disiapkan yang dibagi  menjadi  6  kelompok  dengan  3 ulangan  pada  masing-masing  kelompok. Selanjutnya,  3  ml  NaCl  0.9%  dituang  ke dalam kelompok A sebagai kontrol negatif. Secara berurutan, kelompok B, C, D dan E diisi  infusa  sebanyak  3  ml  dengan  kadar konsentrasi  20%,  40%,  60%  dan  80%, sedangkan  kelompok  F  menggunakan Albendazole  (Wormzol-B,  Medion)  2
mg/ml  sebagai  kontrol  positif.  Tiga  ekor cacing H.  contortus betina  dewasa dimasukkan  ke  dalam  masing-masing tabung  reaksi  selama  perlakuan  kemudian digiling  hingga  larut  ke  dalam  masing- masing  larutan.  Pengamatan  jumlah  telur cacing pada setiap ulangan dilakukan pada menit  ke-0 untuk  mengetahui jumlah telur awal pada setiap sampel dan pada jam ke- 24 sebagai data perhitungan telur terakhir. Semua  pengamatan  dilakukan  pada  suhu ruang  (25 o C-32 o C)  selama  24  jam.  Telur yang gagal menetas ditandai dengan lapisan membran telur yang padat dan tidak terlihat pergerakan larva pada cairan sel.
Tes  motilitas  cacing  dewasa  ( Adult  Worm Motility /AWM).
Cacing H. contortus dewasa yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah cacing  betina  dengan  ciri  fisik  berwarna merah putih pada tubuhnya yang panjangnya mencapai 3 cm (Jackson et al ., 2012).  Seperti  pada  Uji  EHI,  cacing H. contortus pada  uji  AWM  diperoleh  dari abomasum  domba  berekor  tipis  yang dipotong  di  RPH  Kabupaten  Sleman, Yogyakarta,  Indonesia.  Sebuah  studi in vitro infusa  daun Indigofera  tintoria  L dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruhnya terhadap  keberadaan  cacing H.  contortus betina dewasa dengan mengamati mortalitas  cacing  (%)  mengikuti  prosedur (Coles et al .,  1992)  dengan  beberapa modifikasi  (Abdulrazak  dan  Fujihara, 1999). Cacing betina dewasa dikumpulkan menggunakan loop kemudian  dibilas dengan  NaCl  0.9%  untuk  dipisahkan  dari pencemar dan disimpan dalam larutan NaCl 0.9% lainnya. Sedangkan infusa 20%, 40%, 60%  dan  80%  dituang  ke  dalam  masing- masing  cawan  petri  berdiameter  3  cm sebanyak  5  ml  untuk  masing-masing kelompok perlakuan B, C, D dan E. Semua kelompok  diulang  sebanyak  5  kali. Kemudian masing-masing cawan petri diisi 5  ekor  cacing  dan  diinkubasi  pada  suhu
ruang (25 o C-32 o C) selama 8 jam. Pengamatan  motilitas  cacing  dilakukan pada  menit  ke  15  dan  30,  dilanjutkan dengan post perlakuan 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dan
8  jam  dengan  cara  menyenggol  cacing dengan loop .  Jika  cacing  tidak  bergerak selama 10 detik, itu menunjukkan motilitas.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan  tanin  kondensasi  (TK)

## Indigofera tintoria L
Daun Indigofera  tintoria  L pada penelitian  ini  diketahui  memiliki  kadar tanin  kondensasi  (TK)  sebesar  6.59% bahan  kering  pada  daun  tua  dan  2.78% bahan  kering  pada  daun  muda.  Data penelitian menunjukkan bahwa kematangan  daun Indigofera tintoria  L pada umur tua dan muda berpengaruh nyata (P<0.05)  terhadap  peningkatan  kadar senyawa  aktif  metabolit  sekunder  pada daun Indigofera tintoria L tua. Berdasarkan hal tersebut diketahui bahwa  daun Indigofera tintoria L mengandung metabolit  sekunder  yang  salah  satunya terdeteksi  oleh  CT  pada  penelitian  ini. Hasil tersebut sesuai dengan hasil penelitian (Oliviera et al ., 2011).
Uji Penetasan Telur (Egg Hatch Inhibiting/EHI) Secara In Vitro
Pengaruh  pemberian  infusa  daun Indigofera  tintoria  L terhadap  perbedaan kadar  pada  uji  daya  hambat  penetasan ditunjukkan pada Gambar 1. Setelah 24 jam inkubasi dibandingkan dengan pengamatan jumlah telur cacing awal terlihat pemberian infusa  daun Indigofera  tintoria  L pada konsentrasi  20%,  40%  dan  60%  tidak mampu menunjukkan daya tetas yang lebih baik dibandingkan kontrol negatif (P>0.05), sedangkan infusa daun
Indigofera tintoria L pada konsentrasi 80% secara  nyata  menghambat  penetasan  telur H.  contortus 95.37%  atau  lebih  tinggi dibandingkan kontrol negatif (P<0.05).
Gambar 1. Efek penghambatan in vitro infusa daun Indigofera tintoria L pada konsentrasi berbeda pada uji penetasan telur H. contortus . Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0.05)
Efikasi  infusa  daun  Indigofera  tintoria  L konsentrasi  80%  tidak  berbeda  nyata dengan  Albendazol  2  mg/ml.  Hal  ini
menunjukkan  80%  infusa  daun  Indigofera tintoria  L  tidak  mampu  menghambat penetasan  telur  H.  contortus,  namun
41.48 40.87 45.17 73.05 95.37 100 0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 Albendazole EG G H A T CH IN H IBI T IO N (% )
CONCENTRATION OF TREATMENT (%)
mampu  bersaing  dengan  obat  antelmintik komersial spektrum luas seperti Albendazole  pada  konsentrasi  2  mg/ml. Kemampuan  menghambat  penetasan  telur H.  contortus  dimungkinkan  karena  peran aksi  farmakologi  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  daun  Indigofera  tintoria L.  Tanaman  yang  mengandung  senyawa
TK  diketahui  memiliki  efek  langsung terhadap  nematoda  dan  secara  tidak langsung  meningkatkan  imunitas  inang (Oliviera  et  al.,  2011;  Sakti  et  al.,  2018). Fase telur merupakan salah satu  fase yang penting untuk dihambat, mengingat telur H. contortus  yang  dikeluarkan  melalui  feses domba akan menetas menjadi larva stadium 1 (L1s) (Jackson et al., 2012).
Gambar 2. Efek penghambatan in vitro infusa daun Indigofera tintoria L pada konsentrasi berbeda terhadap uji motilitas cacing dewasa H. contortus . Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan nyata (P<0.05).

## Uji Motilitas Cacing Dewasa (Adult Worm Motility/AWM) Secara In Vitro
Kemampuan  antelmintik  infusa  daun Indigofera  tintoria  L  terhadap  kematian cacing H. contortus betina dewasa ditunjukkan pada Gambar 2. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  pemberian  infusa  daun Indigofera  tintoria  L  konsentrasi  80% memiliki efikasi yang lebih baik dibandingkan  konsentrasi  lainnya,  bahkan kontrol negatif (P<0.05). Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  infusa  maka  semakin  efektif kemampuan  membunuh  H.  contortus  betina dewasa.  Namun  kemampuan  konsentrasi
tertinggi  80%  tidak  dapat  dibandingkan dengan  kemampuan  Albendazole  dalam membunuh H. contortus (P>0.05).
Berdasarkan hasil penelitian diketahui bahwa infusa daun Indigofera tintoria L kadar 80% yang  mengandung  TK  dapat  menghambat penetasan  telur  dan  motilitas  cacing  H. contortus  betina  dewasa.  Hal  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  sebelumnya  yang menggunakan tanaman tradisional mengandung TK (Setyono et al., 2019; Sakti et  al.,  2018,  Vieira  et  al.,  2017,  Setyono, 2014; Nawaz  et  al.,  2014,  Ferreira  et  al., 2013, Eguale et al., 2011).

## KESIMPULAN
Infusa  daun  Indigofera  tintoria  L  pada tingkat  konsentrasi  80%  menunjukkan aktivitas in vitro anthelmintik H. contortus dengan  mengurangi  penetasan  telur  dan
motilitas  cacing  dewasa.  Infusa  daun Indigofera  tintoria  L  berpotensi  penuh sebagai bioanthelmintik terhadap cacing H. contortus.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  yang sebesar-besarnya  kepada  Laboratorium Ilmu Makanan Ternak Fakultas Peternakan Universitas Gadjah Mada dan Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran  Hewan  Universitas  Gadjah Mada yang telah mendukung penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdulrazak,  SA.,  Fujihara,  T.  1999. Animal  Nutrition:  A  Laboratory Manual (Shimane: Shimane University) 24 – 28.
Adiwimarta,  K.,  Daryatmo,  J.,  Orskov, ER.,  Mayes,  RW.,  Hartadi,  H.  2010. Utilization of Cassava leaf and Carrica papaya  leaf  as  feed  and  anthelmintic for  goat.  Proceedings  of  the  British Society  of  Animal  Science  and  the Agricultural Research Forum. 1:114.
Alonzo-Diaz,  MA.,  Torres-Acosta  JFJ., Sandoval-Castro, CA., Hoste, H. 2011. Tannins in tropical tree fodders fed to small ruminants: A friendly foe. Small Rumin. Res. 89: 164-173.
Barrau, E., Fabre, N.,  Fouraste,  I., Hoste,
H. 2005. Effect of bioactive compounds from sainfoin (Onobrychis
viciifolia  Scop.)  on  the  in  vitro  larval migration  of  Haemonchus  contortus: role  of  tannins  and  flavonol  gly- cosides. Parasitology 131: 531–538.
Coles, GC., Bauer, C., Borgsteede, FHM., Geerts,  S.,  Klei,  TR.,  Taylor,  M.A. 1992.  World  Association  for  the Advancement of Veterinary
Parasitology (W. A. A. V. P.) methods
for  the  detection  of  anthelmintic resistance  in  nematodes  of  veterinary importance.
Eguale, TD., Tadesse, M., Giday. 2011. In vitro  anthelmintic  activity  of  crude extracts  of  five  medicinal  plants against egg-hatching and larval development of Haemonchus contortus. J. Ethnopharmacol. 98: 319- 324.
Ferreia,  LE.,  Castro,  PMN.,  Changas, ACS.,  Franca,  SC.,  Beleboni,  RO. 2013. In vitro anthelmintic activity of aqueous  leaf  extract  of  Annona muricata  L  (Annonaceae)  against Haemonchus  contortus  from  sheep.
Experimental  parasitology.  134:327- 332.
Gilleard, JS. 2006. Understanding anthelmintic  resistance:  the  need  for genomics and genetics. Int. J. Parasitol. 36: 1227-1239.
Githiori, JB. 2004. Evaluation of anthelmintic properties of
ethnoveterinary  plants  preparation used  as  livestock  dewormers  by pastoralist and small holder farmers in
https://jurnal.unimor.ac.id/JTAST
Kenya. Doctoral Disertation. Departemen Biomedical  Sciences  and Veterinary Public Health, Haryuningtyas,  D.,  Artama,  WT.  2008. Analisis  Sekuen  Gen  Tubulin-  β Isotipe 1 Cacing Haemonchus contortus  Isolat  Resisten  terhadap Benzimidazole pada Domba di Indonesia. J. AgroBiogen, 4: 45–50.
Hoste,  H.,  Jackson,  F.,  Athanasiadou,  S.,
Thamsborg,  SM.,  Hoskin,  SO.  2006. The  effects  of  tannin-rich  plants  on parasitic  nematodes  in  ruminants. Trends Parasitol. 22: 253–261.
Jackson,  F.,  Varady,  M.,  Bartley,  DJ.
2012. Managing anthelmintic
resistance  in  goats-can  we  learn lessons from sheep. Small Rumin. Res.
103: 3–9.
Kaplan,  RM.  2004.  Drug  resistance  in nematodes of veterinary importance : a status  report.  Trends  Parasitol.  20: 478–481.
Martins, AC., Bergamasco, PLF., Felippelli,  G.,  Tebaldi,  JH.,  Moraes, MFD.,  Testi,  AJP.,  Lapera,  IM., Hoppe,  EGL.  2017.  Haemonchus contortus  resistance  to  monepantel  in sheep:  fecal  egg  count  reduction  tests and randomized controlled trials. Br. J.
Nutr. 7
McLeod, RS. 2004. The economic impact of worm infections in small ruminants in Southeast Asia, India and Australia in: Worm Control for Small Ruminants in  Tropical  Asia.  ACIAR  Monograph 113: 23-33.
Mengist, Z., Abeb, N., Gungsa, G., Kumar, N. 2014. Assesment of small ruminant Haemonchus  and  its  associated  risk factors  in  and  around  Finoteselam, Ethiopia.  Journal  of  Agriculture  and Veterinary Science. 7(12): 36-41.
Miller,  JE.,  Haorohov,  DW.  2006.
Immunilogical  aspects  of  nematode parasite  control  in  sheep.  Journal  of Animal Science. 84.E124-E132.
Nawaz,  M.,  Sajid,  SM.,  Zubair,  M., Hussain, J., Abbasi, Z., Mohi-Ud-Din, A.,  Waqas,  M.  2014.  In  vitro  and  in vivo  anthelmintic  activity  of  leaves Azadirachta  indica,  Dalbergia  sisso and  Morus  alba  againts  Haemonchus contortus. Global Veterinaria. 13: 996- 1001
Ngeh, JT., Jacob, W., Mopoi, N., Sali, D. 2007.  Ethno  veterinary  medicine.  A practical  approach  to  the  treatment  of cattle diseases in Sub-Saharan African. 2nd Edition. Agromisa Foundation and CTA, Wageningen. Pp 88.
Oliveira, LMB., Bevilaqua, CML.,
Macedo, ITF., Morais, SM., Monteiro, MVB., Campello, CC., Ribeiro,
WLC.,  Batista,  EFK.  2011.  Effect  of six  tropical  tanniferous  plant  extracts on larval exsheathment of Haemonchus  contortus.  Rev.  Bras. Parasitol. Vet. 20: 1
Sakti, AA., Kustantinah., Nurcahyo, RW., Perdani,  L.,  Ekaningrum,  M.  2018. Extraction  of  condensed  tannins  from tropical  plants  as  affected  by  leaves maturity, maceration time, and centrifugal  force.  Materials  Science Forum (Yogyakarta) Switzerland:
Trans
Setyono, W., Kustantinah., Indarto, E., Dono,
ND.,  Zuprizal,  Z.  2019.  Calliandra calothyrsus and Artocarpus heterophyllus  as  anti-parasite  for Bligon  Goat.  J.  Indonesian  Trop.
Anim. Agric. 44(4): 400-407.
Setyono, W. 2014. Kontrol Parasit
Menggunakan  Hijauan  Sebagai  Agen Anthelmintika  Pada  Kambing  Bligon
Betina.  Tesis.  Fakultas  Peternakan Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.
Vieira,  TM.,  Fonseca,  LD.,  Bastos,  GA.,
Vasconcelos,  VO.,  Silva,  MLF., Morais-Costa,  F.,  Ferreira,  AVP., Duarte, ER. 2017. Control of Haemonchus contortus in sheep using basidiocarps of Agaricus blazei Murril. Vet. Res. Commun. 41: 99 – 106.