220 Jurnal Agrotek Tropika 3(2):220-225, 2015 J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol.  3,    No. 2:  220  –  225,    Mei  2015
ISOLASI DAN KARAKTERISASI PENYEBAB PENYAKIT BUSUK BUAH PADA TANAMAN NANAS ( Ananas comosus [L.] Merr.)
Tiya  Oviana,  Titik  Nur Aeny  &  Joko  Prasetyo
Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung Jln. Prof. Soemantri Brodjonegoro, No. 1, Bandar Lampung 35145 E-mail: tiyaovi@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Nanas ( Ananas comosus L. Merr.) merupakan salah satu komoditas hortikultura yang mendominasi perdagangan buah tropika dunia.  Indonesia merupakan negara yang menempati posisi ketiga sebagai negara penghasil nanas olahan dan segar setelah Thailand dan Filipina.  Salah satu kendala dalam peningkatan produksi nanas adalah adanya penyakit busuk buah ( fruit collapse ) yang disebabkan oleh bakteri patogen. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi penyebab penyakit busuk buah nanas dari perkebunan PT Nusantara Tropical Farm (NTF) dan mengetahui identitas patogen tersebut.  Pelaksanaan penelitian ini terdiri dari dua tahap, yaitu tahap pertama berupa isolasi dari jaringan buah dan crown nanas yang sakit untuk mendapat isolat-isolat murni. Tahap kedua adalah karakterisasi yang dilakukan melalui uji morfologi,biokimia, dan patogenisitas untuk mengetahui karakteristik isolat patogen yang diperoleh.  Dari hasil isolasi diketahui bahwa penyebab penyakit busuk buah nanas yang ada di PT  NTF adalah bakteri.  Isolat bakteri tersebut merupakan bakteri Gram negatif, bersifat soft rot, anaerob fakultatif dan virulen.  Gejala  penyakit antara lain berupa busuk buah, pada daun terbentuk garis-garis berwarna coklat dan melepuh.  Berdasarkan gejala yang khas pada daun tanaman sakit serta hasil karakterisasi isolat bakteri, diduga bahwa penyebab penyakit busuk buah pada tanaman nanas di perkebunan PT NTF adalah bakteri Erwinia chrysanthemi.
Kata kunci: Erwinia chrysanthemi , fruit collapse , isolasi, karakterisasi bakteri, penyakit busuk buah nanas.

## PENDAHULUAN
Nanas  ( Ananas  comosus L.  Merr.)  merupakan salah satu komoditas hortikultura yang sangat potensial untuk  dikembangkan  karena  sangat  mendominasi perdagangan  buah  tropika  dunia.    Produksi  nanas  di seluruh dunia mencapai 20% dari produksi buah tropika dunia.    Indonesia  merupakan  negara  yang  menempati posisi ketiga sebagai negara penghasil nanas olahan dan segar  setelah  Thailand  dan  Filipina  (Tim  Karya  Tani Mandiri, 2010).  Berdasarkan data produksi nanas tahun 2011 (Pusat Data dan Sistem Informasi Pertanian, 2013), terdapat lima provinsi sebagai sentra produksi nanas di Indonesia,  yaitu Lampung (dengan kontribusi 32,80% terhadap produksi nanas nasional), Jawa Barat (20,45%), Sumatera  Utara  (11,89%),  Riau  (7,10%)  dan  Jawa Tengah (6,03%).  Dari data sebaran produksi nanas di lima kabupaten di Provinsi Lampung pada tahun 2011, kabupaten  dengan  produksi  nanas  terbesar  adalah Kabupaten Lampung Tengah dengan  produksi 50.420 ton  atau  99,78%  dari  total  produksi  nanas  Provinsi Lampung.  Kabupaten penghasil nanas terbesar lainnya adalah  Lampung  Barat  dengan  29  ton  (0,06%  )  dan Kabupaten Lampung Selatan dengan 19 ton (0,04% dari total produksi nanas Provinsi Lampung).
Buah  nanas    banyak  dikonsumsi  ka rena mengandung berbagai vitamin seperti vitamin B1, B2, B3, B5, B6 dan vitamin C.  Buah nanas dapat dikonsumsi langsung  ataupun  dalam  bentuk  lain  seperti cocktail , jus, dan selai. Menurut Sunarjono (2000) daun nanas dapat diolah menjadi serat (benang) sebagai bahan baku pakaian, buah nanas mengandung enzim bromelain yang bersifat memecah  protein sehingga  digunakan sebagai pelunak daging dan kulit nanas dapat digunakan sebagai bahan pakan ternak dan pupuk organik.  Di dalam usaha peningkatan produksi nanas, masih ditemukan berbagai kendala,  antara  lain  adalah    serangan  organisme pengganggu  tanaman  (OPT)  khususnya  patogen  atau organisme  penyebab  penyakit.    Salah  satu  penyakit berbahaya pada tanaman nanas di berbagai negara yaitu penyakit  busuk  buah  yang  disebabkan  oleh  bakteri (Sunarjono, 2000).
Gejala penyakit pada buah berupa pembusukan, permukaan kulit buah mengeluarkan banyak cairan dan pada bagian tertentu dari permukaan kulit buah keluar gelembung  gas.   Adanya  penyakit  busuk  buah  nanas yang  disebabkan  oleh  bakteri  dikhawatirkan  dapat menurunkan kualitas buah.  Selain itu bakteri tidak hanya menginfeksi buah tetapi juga menginfeksi crown nanas sehingga berpengaruh terhadap ketersediaan bibit nanas.
Apabila penyakit berkembang dalam skala luas, petani maupun  perusahaan  penghasil  nanas  akan  mengalami kerugian yang besar.
Di  Malaysia  sejak    tahun  1972  penyakit  busuk buah  nanas  disebabkan  oleh Erwinia  chrysanthemi (Semangun,  2007).    Pada  Desember  tahun  2003, E. chrysanthemi juga  ditemukan  menginfeksi  tanaman nanas  di  Hawai  sedangkan  di  Espirito  Santo,  Brazil penyakit busuk buah pada  tanaman nanas disebabkan oleh  bakteri Klebsiella sp.    yang  berasosiasi  dengan tiga jenis ragi yaitu Candida sp., Saccharomyces sp., dan Kloeckera sp. (Korres dkk., 2010).  Penyakit busuk buah bakteri ternyata juga ditemukan pada nanas yang ditanam  di  areal  perkebunan  PT  Nusantara  Tropical Farm (NTF) yang terletak di Kabupaten Lampung Timur Provinsi  Lampung.    Penyakit  tersebut  menunjukkan gejala berupa  buah yang mengalami busuk  basah dan pada bagian yang busuk tersebut mengeluarkan bau tidak sedap  (anyir).    Daging  buah  yang  terinfeksi  menjadi lunak dan mengeluarkan banyak cairan (eksudat) yang disertai  dengan  gelembung  udara.    Penyakit  dengan geja la  seperti  itu  belum  pernah  dilaporkan keberadaannya  di  daerah-daerah  penghasil  nanas sehingga  belum  diketahui  penyebabnya.    Oleh  karena itu  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkarakterisasi penyebab penyakit busuk  buah pada tanaman nanas di perkebunan PT Nusantara Tropical Farm (NTF).

## BAHAN  DAN  METODE
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juli sampai dengan  Desember  2014.    Isolasi  dan  karakterisasi penyebab penyakit dilakukan di Laboratorium Penyakit Tanaman,  Jurusan  Agroteknologi  Bidang  Proteksi Tanaman,  Fakultas  Pertanian  Universitas  Lampung. Pengambilan  sampel  tanaman  sakit  dilakukan  di perkebunan PT Nusantara Tropical Farm.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah cawan petri, autoklaf, gelas preparat, erlenmeyer, tusuk gigi, gelas ukur, tabung reaksi, jarum ose, timbangan digital, bunsen, mikropipet, rotamixer , Laminar Air Flow Hood , kertas label, alumunium foil dan alat tulis.  Bahan- bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah aquades, media Potato Dextrose Agar (PDA) , Nutrient A gar (NA), yeast  extract  peptone  dextrose  agar (YPD), Tetrazolium Chlorida (TZC), media Oksidatif- Fermentatif  ,  minyak  parafin,  gliserol,  MnCl 2 .4H 2 O, KOH 3%, kristal violet, yodium, safranin, alkohol, air steril, buah atau crown nanas yang sehat, umbi kentang dan buah serta crown nanas yang mengalami penyakit busuk buah. Tahap pertama penelitian ini berupa isolasi bakteri dari jaringan buah atau crown nanas yang sakit
untuk mendapat isolat-isolat murni.  Bagian buah dan crown  yang  sakit  dipotong  kecil  berukuran  2x2  mm sebanyak ± 10 potongan.  Selanjutnya, potongan tersebut dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambah 5 cc air steril,  lalu ditutup  menggunakan alumunium  foil ,  dan dihomogenkan  mengguna kan rotamixer selama beberapa  menit.    Hasil  suspensi  tersebut  selanjutnya digoreskan  pada  media  PDA  dan  NA  menggunakan jarum ose, dan diinkubasikan pada suhu ruang selama 24-48  jam.    Beberapa  koloni  yang  tumbuh  direisolasi menggunakan  media  yang sama  tetapi  dengan  metode penggoresan  kuadran.  Tahap kedua penelitian ini adalah melakukan beberapa pengujian, antara lain:
Uji  gram  menggunakan  KOH  3%  untuk mengetahui  bakteri  yang  dibiakkan  termasuk  dalam kategori  gram  positif  atau  gram  negatif  dengan mengambil 1-2 ose  bakteri dan meletakkannya di  atas gelas preparat kemudian ditetesi KOH 3% sebanyak 1- 2  tetes  dan  dicampur-ratakan.    Setelah  itu,  tusuk  gigi steril ditempelkan pada campuran tersebut dan diangkat secara perlahan.  Apabila terbentuk benang lendir yang tidak terputus, maka bakteri yang dibiakkan merupakan bakteri  gram  negatif,  namun  apabila  tidak  terbentuk, maka  bakteri  tersebut  termasuk    bakteri  gram  positif (Ryu,  1938  dalam  Suslow  dkk.,  1982).    Untuk meyakinkan hasil uji ini maka dilakukan uji gram dengan teknik  pewarnaan  dengan  meletakkan  isolat  bakteri menggunakan jarum ose pada gelas preparat, kemudian diberi larutan kristal violet, yodium, alkohol dan safranin secara  bergantian.    Pengamatan  dilakukan  dengan menggunakan  mikroskop,  bakteri  Gram  positif  akan nampak  berwarna  ungu,  sedangkan  Gram  negatif berwarna merah (Cappuccino dan Sherman, 1983 dalam Purwohadisantoso dkk., 2009).
Uji dengan media TZC dilakukan untuk melihat pertumbuhan bakteri baik yang virulen maupun avirulen dengan  membuat  suspensi  dari  1  ose  bakteri  yang dimasukkan  ke  dalam  5  ml  air  steril  dan  diencerkan sampai  pengenceran  10 -8 ,  kemudian  sebanyak  10  ìl suspensi bakteri ditebar ke media TZC dan diinkubasi pada  suhu  28°C  selama  minimal  48  jam  dan  diamati bentuk koloninya (Kaneshiro dkk., 2008).  Bakteri yang virulen koloninya berwarna putih dengan pusat/bagian tengahnya berwarna merah.   Sebaliknya, bakteri  yang avirulen memiliki ciri koloni tidak berlendir, berwarna merah (Gunawan, 2006).
Pada  uji  pembusukan  umbi  kentang,  masing- masing  isolat  bakteri  digoreskan  menggunakan  jarum ose pada bagian tengah umbi kentang yang telah dicuci di air mengalir selama 35 menit.  Selanjutnya kentang tersebut diletakkan dalam cawan petri, kemudian diberi air steril sebanyak 1 ml dan diinkubasi selama 2-3 hari.
Reaksi positif ditunjukkan dengan terjadinya pembusukan pada  bagian  tengah  kentang  (Lelliot  dan  Stead,  1987 dalam Masnilah dkk., 2013).  Uji  O/F dilakukan untuk mengetahui sifat aerob atau anaerob bakteri.  Masing- masing bakteri diinokulasikan pada 5 ml media oksidatif- fermentatif  sebanyak 2 tabung reaksi untuk setiap isolat. Satu ose bakteri ditusukkan pada masing-masing media tersebut, pada tabung 1 ditutupi dengan minyak parafin sebanyak 1 ml, sedangkan pada tabung 2 tidak ditutupi dengan minyak parafin.  Setelah  diinkubasi selama 7- 14  hari  dilakukan  pengamatan  terhadap  perubahan warna  media  dari  hijau  menjadi  kuning  pada  masing- masing tabung.  Apabila terjadi perubahan warna dari hijau  menjadi  kuning  pada  kedua  media  (dengan  atau tanpa  parafin),  hal  ini  menunjukkan  bahwa  bakteri tersebut  bersifat  oksidatif    dan  fermentatif.    Jika perubahan  warna  menjadi  kuning  hanya  pada  tabung yang diberi minyak parafin maka bakteri tersebut bersifat fermentatif.    Sebaliknya  jika  terjadi  perubahan  warna kuning  hanya  pada  tabung  yang  tidak  diberi  minyak parafin,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut bersifat  oksidatif    (Lelliot  dan  Stead,  1987  dalam Masnilah dkk., 2013).
Menurut An Lee dan Pin Yu (2006) media NGM merupakan  media  yang  dikembangkan  untuk membedakan  bakteri E.  chrysanthemi penyebab penyakit busuk  buah  nanas  dari Erwinia spp.  lainnya berdasarkan produksi pigmen biru Indigoidine.  Media ini terdiri dari Nutrient Agar ditambah 1% Gliserol yang akan  menginduksi  produksi  pigmen  dan  2  mM MnCl 2 .4H 2 O yang  akan meningkatkan  pengembangan warna.    Biakan E . chrysanthemi yang  tumbuh  pada media  NGM    dicirikan  dengan  koloni  yang  berwarna coklat gelap sampai biru.
Uji  patogenisitas  dilakukan  untuk  mengetahui apakah suatu bakteri bersifat patogen atau tidak dengan cara  menginokulasikan  biakan  bakteri  tersebut  pada
tanaman inang yang sehat.  Inokulasi dilakukan dengan menyuntikkan suspensi bakteri ke buah nanas yang sehat sebanyak 10 ml.  Hasil uji patogenisitas dinyatakan positif jika  di  sekitar  area  bekas  suntikan  pada  buah  nanas ditemukan  gejala  busuk  seperti  yang  ditemukan  pada buah nanas yang mengalami penyakit busuk buah bakteri di lapang sebelumnya.

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Dari  isolasi  yang  dilakukan  dari  jaringan  buah yang  sakit  diperoleh  dua  isolat  bakteri  yang  masing- masing tampak berbeda, yaitu isolat dengan ciri koloni bakteri berwarna bening /transparan (isolat A) dan isolat yang berwarna putih susu dengan tekstur lendirnya yang pekat dan agak memadat (isolat B) (Gambar 1).  Dari sampel tanaman nanas yang lain, berhasil diisolasi bakteri dari jaringan buah sakit.  Ciri-ciri isolat tersebut antara lain koloninya berwarna putih (isolat C).  Dari jaringan crown yang sakit juga diperoleh isolat yang mempunyai ciri  yang  sama  dengan  isolat  bakteri  dari  buah  yaitu koloninya berwarna putih (isolat D) (Gambar 1).
Hasil uji karakterisasi pada masing-masing isolat bakteri  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.    Hasil  uji  gram menggunakan  KOH 3%  menunjukkan  bahwa isolat A merupakan kelompok Gram positif  (tidak terbentuknya benang lendir), sedangkan isolat B, C dan D merupakan kelompok  Gram  negatif  yang  dicirikan  dengan terbentuknya  benang  lendir  yang  tidak  terputus sepanjang  kurang  lebih  2  cm  (Gambar  2a).    Untuk meyakinkan  hasil  uji  ini,  maka  dilakukanlah  uji  gram bakteri dengan teknik pewarnaan, apabila hasil uji gram dengan  teknik pewarnaan  sama dengan  hasil uji  gram menggunakan  KOH  3%,  maka  hasil  uji  dinyatakan akurat.  Hasil uji menunjukkan isolat A berwarna ungu yang berarti bahwa isolat A   merupakan bakteri  gram positif.  Isolat bakteri  B, C dan D menunjukkan hasil
Tabel 1.  Hasil uji karakterisasi pada isolat bakteri A, B, C dan D
Pengujian Hasil Uji Isolat A Isolat B Isolat C Isolat D KOH 3% Gram positif Gram negatif Gram negatif Gram negatif Pewarnaan Gram Gram positif Gram negatif Gram negatif Gram negatif Pembusukan Umbi Kentang - + - - O/F - Oksidatif dan Fermentatif Oksidatif Oksidatif NGM - - - - TZC - Virulen Avirulen Avirulen Patogenisitas - + - -
bahwa  sel-selnya  berwarna  pink  yang  berarti  ketiga isolat tersebut merupakan bakteri gram negatif.
Uji pembusukan umbi kentang dilakukan terhadap isolat bakteri yang tergolong sebagai Gram negatif.  Dari Tabel 1 diketahui hanya isolat B yang menunjukkan hasil positif,  yaitu  terjadi  pembusukan  pada  bagian  tengah kentang  2  hari  setelah  digores  dengan  bakteri.    Pada umbi  kentang  yang  tidak  digores  dengan  bakteri (kontrol),  digores  dengan  isolat  C  dan  D  hasil  ujinya dinyatakan  negatif,  karena  tidak  terjadi  pembusukan (Gambar  2b).     Hasil  uji  oksidatif/ ferment atif menunjukkan perubahan warna dari hijau ke kuning pada media terjadi setelah 7 hari. Isolat B menunjukkan hasil positif  pada  uji  oksidatif  dan  fermentatif.    Hal  ini ditunjukkan oleh  adanya perubahan warna  media  dari hijau menjadi  kuning pada  tabung  yang  tidak ditutupi minyak parafin dan setengah bagian media yang berubah warna menjadi  kuning pada tabung yang diberi parafin. Pada  isolat  C  dan  D  perubahan  warna  kuning  hanya pada tabung yang tidak ditutupi parafin, maka bakteri C dan D bersifat oksidatif (Gambar 2c).  Berdasarkan hasil uji pembusukan umbi kentang dan uji O/F maka isolat bakteri  yang diuji  dengan  media  TZC  hanya isolat  B. Hasil  uji  menyatakan  isolat  B  bersifat  virulen.    Ciri penting yang membedakannya dengan bakteri avirulen adalah koloninya berwarna putih dengan pusat/bagian tengahnya  berwarna  merah  (Gambar  2d).
Media  NGM  merupakan  media  yang dikembangkan  untuk  membedakan  bakteri E. chrysanthemi dari spesies Erwinia lainnya.  Beberapa
strain E. chrysanthemi yang tumbuh koloninya berubah warna  menjadi  coklat  gelap  atau  biru  karena  adanya pigmen  biru  Indigoidine.    Isolat  bakteri  B  yang ditumbuhkan  pada  media  NGM  mempunyai  ciri  yang tidak berubah, yaitu tetap berwarna putih susu.  Tidak adanya  perubahan  warna  pada  koloni  bakteri  dapat disebabkan oleh sifat media NGM yang kurang stabil, yaitu  tidak  adanya  perubahan  warna  koloni  pada beberapa  strain  dari E . chrysanthemi .    Hasil  uji patogenisitas menunjukkan bahwa gejala pembusukkan hanya muncul pada buah yang diinokulasi dengan isolat bakteri  B.    Gejala  muncul  pada  2  minggu  setelah inokulasi.  Di daerah bekas injeksi, kulit buah mengalami pembusukan dan berwarna coklat, sedangkan pada buah yang diinokulasikan air steril (kontrol), isolat C dan D tidak mengalami pembusukan .
Berdasarkan ciri-ciri daun bergejala busuk yang ada  di  perkebunan  PT  Nusantara  Tropical  Farm, tanaman nanas tersebut mengalami penyakit busuk buah bakteri  yang  disebabkan  oleh E.  chrysanthemi. Menurut Kaneshiro  dkk. (2008) penyakit  ini memiliki ciri-ciri khusus yaitu adanya gejala busuk basah  pada daerah  tengah  daun  di  sekitar  meristem  apikal  diikuti dengan pembentukan garis coklat pada helai daun dan di  jaringan  mesofil  yang  selanjutnya  permukaan  daun menjadi  melepuh  (Gambar  3a).  Selain  itu,  dalam beberapa kasus, buah nanas muda juga terinfeksi bakteri secara laten, buah mengalami busuk lunak secara cepat dan  mengalami  runtuh  pada  fase  kematangan  buah (Gambar  3a).    Ciri-ciri  khusus  ini  ditemukan  pada
Gambar 1.  Isolat bakteri A, B, C dan D
Gambar 2. (a) Hasil uji gram menggunakan KOH 3%, (b) dan (c) Hasil uji pembusukan umbi kentang (kiri) dan uji O/F pada isolat bakteri B, C dan D (kanan) Hasil uji menggunakan media TZC pada isolat B, (d) Hasil uji menggunakan media TZC pada isolat B.
tanaman nanas yang sakit di perkebunan PT Nusantara Tropical Farm.
Hasil isolasi dari jaringan buah dan crown yang sakit menunjukkan hanya biakan bakteri yang tumbuh pada  media  PDA  dan  NA.    Biakan  bakteri  tersebut selanjutnya dikarakterisasi dengan serangkaian uji.  Dari hasil dari beberapa uji terhadap salah satu isolat bakteri yang didapat yaitu isolat B yang cocok dengan karakter E . chrysanthemi diantaranya  hasil  uji  KOH  3% menujukkan isolat  B merupakan bakteri gram negatif. Hasil uji ini diperkuat dengan hasil uji gram menggunakan teknik pewarnaan yang menunjukkan hasil akhir positif yaitu sel-sel bakteri tampak berwarna merah jambu.
Dari hasil uji pembusukan umbi kentang, diketahui hanya isolat B yang hasilnya positif, yang berarti bahwa isolat B merupakan bakteri yang bersifat soft rot ditandai dengan  membusuknya  bagian  tengah  kentang  yang digoreskan  bakteri.    Bakteri  yang  bersifat soft  rot merupakan kelompok bakteri yang menyebabkan busuk lunak  pada  tanaman  dan  bersifat  patogenik. E . chrysanthemi merupakan  bakteri  patogen  dari  genus Erwinia yang bersifat soft rot (Sahilah dkk., 2008).  Uji O/F menunjukkan isolat B positif pada uji oksidatif dan fermentatif, yang berarti bahwa isolat B bersifat anaerob fakultatif,  yaitu  bakteri  dapat  hidup  pada  kondisi lingkungan  oksidatif  dan  dapat  pula  hidup  pada lingkungan fermentatif.  Menurut Kaneshiro dkk. (2008) E . chrysanthemi merupakan  bakteri  yang  tergolong dalam bakteri anaerob fakultatif. Pada uji menggunakan media TZC, diketahui isolat B bersifat virulen yaitu dapat menyebabkan penyakit.  Uji selanjutnya merupakan uji menggunakan media NGM, hasil uji menunjukkan tidak adanya perubahan warna pada koloni bakteri.  Hal ini disebabkan  oleh  sifat  media  NGM  yang  tidak  stabil. Pengujian  t erhada p  beber apa  str ain  da ri E .
chrysanthemi tidak  menunjukkan  adanya  perubahan warna pada koloni bakteri yang ditumbuhkan pada media NGM (Suharjo, Komunikasi Pribadi). Setelah dilakukan serangkaian uji berdasarkan reaksi biokimia sel bakteri, maka uji selanjutnya merupakan uji patogenisitas.  Uji ini dilakukan untuk mengetahui kemampuan bakteri yang diinokulasikan dalam menimbulkan gejala pada tanaman yang  diuji.    Hasil  inokulasi isolat  B  pada  buah  nanas sehat  yang  berumur  2-3  minggu  sebelum  panen menunjukkan pada permukaan kulit buah di sekitar area bekas  suntikan  terjadi  busuk  basah  berwarna  coklat gelap.  Selain itu ketika dibelah daging buah berongga dan berwarna coklat (Gambar 3b).

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa penyebab penyakit busuk pada buah nanas  di  perkebunan  PT  Nusantara  Tropical  Farm merupakan  bakteri  Gram  negatif,  bersifat soft  rot, anaerob fakultatif dan virulen. Berdasarkan gejala khas berupa munculnya garis coklat dan lepuhan pada daun tanaman  yang  sakit  serta  hasil  karakterisasi  yang menyatakan  bahwa  isolat  B  termasuk  Gram  negatif, bersifat soft rot , anaerob fakultatif, virulen dan bersifat patogenik, maka diduga bahwa penyebab penyakit busuk buah pada tanaman nanas di perkebunan PT Nusantara Tropical Farm adalah bakteri Erwinia chrysanthemi.

## SANWACANA
Ucapan terima kasih saya sampaikan kepada staff dan karyawan PT Nusantara Tropical Farm yang telah membantu  dalam  mendapatkan  informasi  dan  bahan penelitian.
Gambar 3. (a) Gejala penyakit pada daun (kiri) dan nanas penyakit buah saat fase pematangan  buah (kanan) di PT Nusantara Tropical Farm dan (b) Gejala pada jaringan buah nanas (kanan) yang telah diinjeksi dengan suspensi bakteri isolat B (kiri).

## DAFTAR  PUSTAKA
An Lee, Y &  C.P. Yu.   2006.   A  Differential Medium for  the  Isolation  and  Rapid  Identification  of  a Plant Soft Rot Pathogen, Erwinia chrysanthemi . Journal  of  Microbiological  Methods .    64(2):
200–206.
Gunawan,  O.S.    2006.    Virulensi  dan  Ras Ralstonia solanacearum pada  Pertanaman  Kentang  di Kecamatan  Pangalengan,  Kab.  Bandung,  Jawa Barat. Jurnal Hortikultura .  16(3):  211–218.
Kaneshiro,  W.S.,    M.  Burger.,    B.G.  Vine.,   A.S.  de Silva., and A.M. Alvarez.  2008.  Characterization of Erwinia chrysanthemi from A Bacterial Heart Rot  of  Pineapple  Outbreak  in  Hawaii. Plant Disease .  92(10): 1444-1450.
Korres, A.M.N.,  J.A. Ventura.,  and P.M.B. Fernandes. 2010.    First  Report  of  Bacterium  and  Yeast Associated  with  Pineapple  Fruit  Collapse  in Espirito  Santo  State,  Brazil. Plant  Disease . 94(12): 1509.
Masnilah,  R.,   A.L. Abadi.,    T.H. Astono.,  dan  L.Q. Aini.    2013.    Karakterisasi  Bakteri  Penyebab Penyakit  Hawar  Daun  Edamame  di  Jember.
Berkala  Ilmiah  Pertanian 1(1):  10–14.
Purwohadisantoso, K.,  E. Zubaidah., dan E. Saparianti. 2009.    Isolasi  Bakteri Asam  Laktat  dari  Sayur Kubis yang Memiliki Kemampuan Penghambatan Bakteri  Patogen  ( Staphylococcus  aureus , Listeria  monocytogenes , Escherichia  coli ,  dan Salmonella  thypimurium ). Jurnal  Teknologi
Pertanian .  10 (1): 19–27.
Pusat  Data  dan  Sistem  Informasi  Pertanian.    2013.
Informasi  komoditas  hortikultura.    http:// www.deptan.go.id.    diakses  pada  tanggal  8 Januari 2014.
Sahilah, A.M.,  Rozeita, L., Umi Kalsum, M.S., and Son,
R.    2008.    Typing  of Erwinia  chrysanthemi
Isolated  from  Josapine  Pineapple  in  Malaysia Using  Antimicrobial  Susceptibility,  Plasmid Profiles,  ERIC-PCR  and  RFLP  Analysis. International  Food  Research  Journal .    15(3): 273-280.
Semangun,  H.    2007. Penyakit-penyakit  Tanaman Hortikultura di Indonesia . Edisi  ke-2.  Gadjah Mada University Press.  Yogyakarta.
Sunarjono,  H.  Hendro.    2000. Prospek  Berkebun Buah .    Penebar  Swadaya.  Depok.
Suslow,  T.V.,    M.N.  Scorth.,  and  M.  Isaka.    1982. Application  of  Rapid  Methods  for  Gram Differentiat ion  of  P lant  Pa thogenic  and Sapr ophytic  Bacteria  Without  Staining.
Phytopathology . 72(7): 917 – 918.
Tim Karya Tani Mandiri.  2010. Pedoman Bertanam Buah Nanas .  Nuansa Aulia.  Bandung.