## AKTIVITAS ANTIRADIKAL BEBAS SENYAWA TURUNAN CALKON DAN TURUNAN BENZOTIAZEPIN

## Sulismayati, Jasril, Christine Jose, Rahmiwati Hilma
Universitas Riau Universitas Muhammadiyah Riau Email: sis.adam2007@gmail.com

## ABSTRAK
Senyawa calkon merupakan flavonoid rantai terbuka dengan cincin aromatik yang dihubungkan oleh tiga atom karbon dengan system α, β karbonil keton tidak jenuh. Calkobn juga merupakan senyawa antara untuk membuat senyawa lain salah satunya adalah benzotiazepin. Benzotiazepin adalah  senyawa  heterosiklik  yang  mengandung  nitrogen  dan  sulfur.  Hasil  uji  aktivitas  anti radikal bebas dari senyawa calkon Y 1 dan senyawa benzotiazepin Bt 1 memperlihatkan aktivitas yang sangat lemah, ditandai dengan nilai IC 50 yang lebih besar dari 1000 ppm jika dibandingkan dengan standar yang digunakan yaitu vitamin C dengan nilai IC 50 33,539 ppm. Hal ini mungkin disebabkan  karena  tidak  adanya  substituen  ataupun  gugus  yang  dapat  menyumbangkan  proton pada  kedua  senyawa  hasil  sintesis  sehingga  menyebabkan  kedua  senyawa  tersebut  tidak  aktif sebagai antiradical bebas.
Kata kunci : calkon, benzotiazepin, uji antiradikal bebas

## 1. PENDAHULUAN
Antioksidan adalah senyawa kimia  yang dapat  memperlambat  atau  menghambat terjadinya  proses  oksidasi  yang  disebabkan oleh  radikal  bebas.  Radikal  bebas  adalah molekul  yang kehilangan elektron, sehingga molekul tersebut menjadi tidak stabil. Untuk mengembalikan kestabilan molekul diperlukan elektron dari molekul antioksidan seperti elektron dari polifenol (Esmaeili dan Sonboli, 2010). Senyawa polifenol  berperan penting  pada  stabilisasi  lipid  terhadap peroksidasi dan menghambat oksidasi enzim.
Calkon  merupakan  salah  satu  senyawa alam  yang  mempunyai  aktivitas  biologis beragam.  Sejumlah  senyawa  calkon  telah dilaporkan  mempunyai  aktivitas  antibakteri. Aktivitas antibakteri ini dihubungkan dengan  adanya  gugus  keton  α  dan  β  tak jenuh
dalam sistem C-karbonil
(Nowakowska,  2007).  Selain  berpotensi sebagai  antibakteri,  senyawa  calkobn  juga
memiliki  aktivitas  lain  seperti  antioksidan, anti  inflamasi,  anti  tuberkulosis,  antifungi, anti  malaria  dan  anti  kanker  (Prasad et  al , 2006). Keberadaan senyawa calkobn dialam relatif  sedikit  begitu  juga  dengan  variasi strukturnya, sehingga menyulitkan mengisolasi senyawa calkon dari tumbuhan. Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  didapatkan suatu  solusi  yang  dapat  meminimalisir segala kekurangan dalam proses isolasi yaitu dengan mensintesis senyawa calkobn tersebut dialam (Alam, 2004).
Pengembangan  penggunaan  senyawa calkon  dilakukan  dengan  memodifikasi substituen  pada  kerangka  dasarnya  melalui sintesis  kimia.  Modifikasi  substituen  pada kerangka  dasar  senyawa-senyawa  kimia bertujuan  untuk  meningkatkan  aktivitas farmakologi dan atau mengurangi efek yang tidak  diinginkan  pada  suatu  senyawa kandidat  obat.  Turunan  senyawa  calkobn dapat disintesis secara luas melalui kondensasi  Claisen-Schmidt  dari  suatu
aldehid  aromatik  dengan  keton  aromatik dalam  kondisi  asam  atau  basa  (Bag et  al. , 2009;  Power et  al. ,  1998;  Claisen et  al., 1881).  Rateb  dan  Zohdi  (2009)  telah berhasil mensintesis senyawa calkobn dengan  metoda  gerus  menggunakan  katalis NaOH  dan  mendapatkan  hasil  dengan jumlah rendemen diatas 80%.
Calkon  juga  merupakan  senyawa  antara untuk  membuat  senyawa  lain  salah  satunya adalah  benzotiazepin.  Benzotiazepin  adalah senyawa  heterosiklik  yang  mengandung nitrogen dan sulfur (Vyawahare et al , 2010) merupakan  senyawa  yang  penting  dalam obat  dan  penelitian  farmasi.  Sejumlah turunan benzotiazepin dilaporkan mempunyai  aktivitas  biologi  yang  menarik seperti  anti  konvulsan  (Sarro et  al ,  1995), anti  depresi  (Vyawahare et  al ,  2010),  anti kanker  (Sharma et  al ,  1997),  anti  fungal (Anshu et  al ,  2007),  anti  HIV  (Giuliano, 1999) dan anti mikroba (Nikalje, 2011). Hal inilah  yang  menarik  banyak  peneliti  untuk mengembangkannya.
Senyawa antioksidan saat ini bermanfaat dalam berbagai bidang seperti dalam bidang pangan, industri tekstil, minyak bumi, bahan pewarna  dan  lain-lain. Riset tentang pengembangan senyawa
berkhasiat
antioksidan  telah  banyak  dikembangkan baik  senyawa  alam  maupun  senyawa sintetis. Keberadaan senyawa calkon di alam relatif  kecil,  maka  sulit  memperolehnya melalui isolasi dari bahan alam. Oleh karena itu,  sintesis  diharapkan  dapat  mengatasi masalah  ini  dengan  menghasilkan  berbagai analog  calkon  dan  benzotiazepin  yang strukturnya  lebih  bervariasi.  Hal  ini  sangat membantu  dalam  uji  aktivitasnya  sebagai antioksidan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  Uji aktivitas  antiradikal  bebas  dari  senyawa calkon dab benzotiazepin hasil sintesis yang dilakukan  dengan  metoda  DPPH.  Manfaat
dari  penelitian  ini  yaitu  untuk  aplikasi  dan pengembangan ilmu pengetahuan. Penelitian ini  diaplikasikan  dalam  kandidat  molekul obat  calkon  dan  benzotiazepin  sebagai antioksidan.

## 2. METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat untuk  uji  antioksidan  seperti  plat  uji, microplate  reader ,  serta  peralatan  gelas yang  umum  digunakan  di  laboratorium kimia.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan, n - heksana,  etilasetat,  metanol,  etanol  absolut, aquadest  dingin,  NaOH  (Merck). 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)  (Sigma) dan asam askorbat.
Sampel  yang digunakan adalah senyawa calkon (E) -1,3-di(naftalen-1-il)prop-2pen-1- on  dan  senyawa  turunan  benzotiazepin (E) - 2,4-di(naftalen-1-il)-2,3-dihidrobenzo (1,4)tiazepin hasil reaksi sintesis, yang telah disintesis  dan  dikarakterisasi  dari  penelitian sebelumnya
Gambar 1. Senyawa Y 1 dan Senyawa Bt 1

## Analisis total aktivitas antiradikal bebas dengan uji DPPH
Uji  aktivitas  antiradical  bebas  dilakukan menggunakan mikroplate  reader (plate terdiri  dari  baris  A-H  masing-masing berjumlah  12  sumur) dengan  metoda  DPPH (Zhang et al .,  2006)  pada  panjang gelombang 520 nm .
Sampel sebanyak 2 mg dilarutkan dalam 2  ml  MeOH,  dalam  hal  ini  konsentrasi
sampel  adalah  1000  mg/ml.  Baris  A dimasukkan  sampel  sebanyak  100  µL. Sebanyak  50  µL  MeOH  dimasukkan  pada masing-masing  sumur  B-F.  Baris  A  dipipet sebanyak 50 µL dan dimasukkan ke baris B, baris B dipipet 50 µL dimasukkan ke baris C dan dilakukan sampai baris F, baris F dipipet 50  µL  lalu  dibuang,  sehingga  didapatkan konsentrasi  1000  mg/ml,  500  mg/ml,  250 mg/ml,  125  mg/ml,  62,5  mg/ml,  31,25 mg/ml.  Sedangkan  pada  baris  G-H  diisi dengan metanol 50 µL, khusus pada baris H diisi hanya sumur 1-6. Baris A-G ditambahkan DPPH sebanyak 80 µL dengan konsentrasi  40  mg/ml,  kemudian  diinkubasi selama 30 menit.
Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas diukur sebagai  penurunan absorbansi  DPPH dengan mikroplate Aktivitas  penangkapan radikal  bebas  diukur  sebagai  penurunan absorbansi DPPH dengan mikroplate reader
dan  olah  data.  Kontrol  positif  yang digunakan sebagai pembanding yaitu vitamin  C.  Nilai  %  hambatan  dihitung dengan rumus:

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  dari  penelitian  yang  telah dilakukan,  diperoleh  hasil  Uji  aktivitas antiradical  bebas  senyawa  Y 1 dan  Bt 1 dilakukan menggunakan metode
DPPH.  Vitamin  C  digunakan  sebagai standar.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan senyawa  hasil  sintesis  Y 1 dan  Bt 1 dapat dilihat pada tabel 1
Tabel 1. Hasil Uji Aktiviras Antioksidan
Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi %Hambatan IC 50 (ppm) Y 1 1000 0,215833 11,1797 > 1000 500 0,308 5,1440 250 0,307 5,5555 125 0,314333 2,5377 62,5 0,321333 -0,3429 31,25 0,318 1,0288 Bt 1 1000 0,221833 8,7105 > 1000 500 0,227167 6,5157 250 0,237167 2,4005 125 0,2395 1,4403 62,5 0,2405 1,0288 31,25 0,260833 - 7,3388 Vitamin C 100 0,0205 91,5637 33,539 50 0,035833 85,2537 25 0,1045 56,9958 12,5 0,1655 31,893 6,25 0,199167 18,0384 3,25 0,212167 12,6886

## Uji antioksidan
Pada  penelitian  ini  uji  antioksidan terhadap  senyawa  Y 1 dan  Bt 1 dilakukan dengan  metode  DPPH  ( Zhang  et  al.,  2006 ) pada  panjang  gelombang  520  nm.  Analisis ini dinyatakan dengan IC 50 sebagai indikator kemampuan  hambatan  sebesar  50%  sampel
uji  dengan  menggunakan  vitamin  C  sebagai kontrol positif.
Hasil  uji  antioksidan  dari  senyawa  Y 1
dan Bt 1 memperlihatkan aktivitas antioksidan  yang  lemah,  ditandai  dengan nilai  IC 50 yang  lebih  besar  dari  1000  ppm jika  dibandingkan  dengan  standar  yang
digunakan yaitu vitamin C dengan nilai IC 50 33,539  ppm.  Hal  ini  mungkin  disebabkan karena  tidak  adanya  substituen  ataupun gugus  yang  dapat  menyumbangkan  proton pada  kedua  senyawa  hasil  sintesis  sehingga menyebabkan  kedua  senyawa  tersebut  tidak aktif sebagai antioksidan.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan,  maka  dapat  diambil kesimpulan diantaranya sebagai berikut.
1. Kedua senyawa calkon dan benzotiazepin tidak aktif sebagai antioksidan.
2. Tidak  adanya  substituen  ataupun  gugus yang dapat menyumbangkan proton pada kedua senyawa hasil  sintesis  menyebabkan  kedua senyawa tidak aktif sebagai antioksidan.

## Saran
1. Agar  diperoleh  hasil  yang  lebih  baik pada  penelitian-penelitian  selanjutnya, maka  penulis  menyarankan  hal-hal sebagai berikut.
2. Perlu  dilakukan  pengujian  aktivitas biologi  lainnya,  agar  senyawa  yang telah  disintesis  diketahui  pemanfaatan dan kegunaannya lebih lanjut.
3. Untuk penelitian sintesis analog calkobn naftalen  berikutnya  disarankan  agar menggunakan  asetilnaftalen  ataupun naftaldehid yang memiliki substituen.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Alam,  S.,2004.  Synthesis,  Antibacterial  and
Antifungal  of  Some  Derivates  of  2- phenyl-4-one, J.Chem.Sci .116.325- 331
Al-Mamun,  M.,  Yamaki,  K., Masumizu, T.,
Nakai,  Y.,  Saito,  K.,  Sano,  H., Tamura,  Y. 2007. Superoxide Anion Radical  Scavenging  Activities  of
Herbs  and  Pastures  in  Northern Japan  Determined  Using  Electron Spin  Resonance  Spectrometry. Int  J Biol Sci . 3:349-355
Andarwulan,  N.,  Batari,  R.,  Sandrasari,
D.A.,  Bolling,  B.,  Wijaya,  H.  2010.
Flavonoid  content  and  Antioxidant Activity of Vegetables from Indonesia. Food  Chemistry .  121:
1231–1235
Ameta, K.L., Nitu,S., Rathore and Kumar,B. 2012.  Synthesis  and  in  vitro  anti breast  cancer  activity  of  some  novel
1,5-benzothiazepine derivates, J.Serb.Chem.Soc .76, 1-17
Anshu,  D.,  Singh,  R.,  Khaturia,  S.,  2007.
Efficient microwave enhance solvent free  synthesis  of  potent  antifungal agents  Fluorinated  benzotiazepines fused β-lactam derivative, Cheminform . 38(36).236-239 Arora,  V.,  Arora,  P.,  Lamba,  H.S.,2012. Synthesis and Evaluation of Chalcone  Derivatives  of  2-acetyl naphthalene  for  Antifungal  and Antibacterial Activity . Der Pharmacia Lettre , 4 (2):554-557
Bag,  S.,  Ramar,  S.,  degani,  M.S.,  2009, “Synthesis and Biological Evaluation of  α,β-Unsaturated  Ketone  as Potential  Antifungal  Agen”,  Med Chem. Res., 18, 309-316 Claisen,  L.,  Claparede,  A.,  Schmidt,  J.G, 1881,  “Condensation  of  Aromatic Aldehydes  and  Aliphatic  Aldehydes or  Ketones  in  The  Presence  of Aqueous Base”, Ber, 14:2460, 1459.
Esmaeili, M.A., Sonboli, A. 2010. “Antioxidant, Free Radical Scavenging  Activities  of  Salvia brachyantha and Its Protective Effect Against  Oxidative  Cardiac  Cell
Injury”.
Food and Chemical Toxicology (48): 846–853 Giuliano,  G.,  Luana,  R.,  Valeria,  A.,  1999, “Synthesis
of new 1,4-
benzotiazepines  tricyclic  derivative with  structural  analogue  with  TIBO and  their  screening  for  anti-HIV
activity”, Eur.  Journal  of  Medicinal Chemistry . 34(9), 701-709.
Gritter,  R.J.,  1991,  J.M  Bobbit,  A.E Schwarting,  Pengantar  kromatografi, ITB, Bandung.
Ketaren,  S.  1986. Minyak  dan  Lemak Pangan . Universitas Indonesia Press.
Jakarta Krishnaiah, D., Sarbatly, R., Nithyanandam,
R. 2010. A Review of the Antioxidant  Potential  of  Medicinal Plant  Species. Food  and  Bioproduct Processing . 157:17-34 Mistry, K. M., Desai, K.R.,2005, Microwave
Assisted Rapid and Efficient Synthesis & Pharmacological Evaluation  of  1,5-Benzothiazepine, J. Saudi Chem. Soc., 9(2), 381-386
Moon  JK,  Shibamoto  T.  2009.  Antioxidant Assays for Plant and Food
Component. Journal  of  Agricultural and Food Chemistry . 57: 1655-1666
Nam, N.H., Hong, D.H., You, Y.J., Kim, Y.,
Bang,  S.C.,  Kim,  H.M.,  Ahn, B.Z.,2004, “Synthesis and Cytotoxicity of 2,5- Dihydroxychalcones  and  Related Compounds”,  Arch  Pharm  Res, 27(6), 581-588. Nikalje, A.G., Mane, R.A.,  Ingle DB, 2006, Synthesis of New 1,5- Benzotiazepines as Potent Antimicrobial agents, Ind. J.Het.Chem , 15(3), 309-310
Nikalje,  A.P.,  Vyawahare,  D.,2011,  Facile green  Synthesis  of  2,4-substituted- 2,3-dihydro-1,5-benzotiazepine derivative  as  novel  anticonvulsant and Chentral Nervous System (CNS) depressant agents, African Journal of Pure  and  applied  chemistry ,  Vol 5(12), 422-428
Nowakowska, Z., 2007, “A Review of Anti-
infective and Anti-inflammatory
Chalcone”,  European  Journal  of
Medicinal Chemistry, 42, 125-137
Palleros, D.R. (2004).”Solvent free synthesis of  chalcones”. J.  Chem.  Ed , 81 ,
1345-1347.
Powers,  D.G.,  Casebier,  D.S.,  Fokas,  D., Ryan,  W.J.,  Troth,  J.R.,  Coffen,
D.L.,  1998,  “Automated  parallel synthesis of chalcone-based
screening  libraries”,  Tetrahedron
Lett, 54, 4085-4096.
Prasad,  Y.R.;  Kumar,  P.R.;  Deepti,  C.A.;
Ramana,  M.V.  (2006).  “Synthesis and  antimicrobial  activity  of  some novel  chalcones  of  2-hydroxy-1- acetonapthone and 3-acetyl
coumarin”. E-Jornal of Chemistry , 3 , 236-241.
Prokarny,  J.,  1987,  In  Autooxidation  of
Unsaturated Lipids, Academia Press,
New York.
Rateb,  N.M  and  Zohdi,  H.F,  2009,  ”Atom- Efficient, Solvent-Free, Green Synthesis of Chalcones by Grinding”, Synthesis
Communications, 39, 2789-2794 Sanjeeva, R., Cherkupally., Purnachandra, R and  Gurrala.  2008,  Synthesis  and biological study of novel methylene- bis-benzofuranyl-(1,5)- benzothiazepin,  Org.  Commun  1:4, 84-94
Sarro,  J.G.,Chimirri,A.  and  Sarro,  A,
D.,1995.  5H-(1,2,4)-oxadiazolo-(5,4- d)(1,5)-benzotiazepine as
anticonvulsant  agents  in  DBA/2 miceur. Med Chem .30.925-929 Sharma,  K.,Singh,  G.,  Yadav,  A.K.  and Prakash,  L.,1997,  Improved  method for Synthesis of new 1,5- benzotiazepines derivative as analogue of anticancer drugs. Molecules .2(2).130-135
Sharp,  J.,  I.  Gosney,  A.G  Rowley,  1989,
Practical  Organic  Chemistry:  A Student  Handbook  of  Techniques,
Chapman and Hall, London.
Sastrohamidjojo,  H.,  1991,  Dasar-dasar
Spektroskopi, Ed II, Liberty, Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. de Vincenzo, R., Scambia, G., Mancuso, S., 1995,  “Effect  of  synthetic  and naturally  occurring  chalcones  on ovarian cancer cell growth:
structureactivity
relationships”,
Anticancer Drug Des, 10, 481-490
Vyawahare,D.,Ghodke, M. and Nikalje,A.P., 2010. Green Synthesis and
Pharmacological  Screening  of  novel 1,5-benzotiazepines  as  CNS  agents, International  Journal  of  Pharmacy and Pharmaceutical Science , Vol 2
Yadaf,  J.  S.,  Srivastava,  Y.K.,  2011,
Microwave  Assisted  Rapid  and Efficient  Synthesis,  Characterization and  Pharmacological  Evaluation  os Some Novel Benzimidazole Assemble  1,5-Benzodiazepine  and 1,5-Benzothiazepine Derivatives, Sholarrs Research Library , 284-291 Yoshihara,  D.,  Fujiwara,  N.,  Suzuki,  K. 2010.  Antioxidants:  Benefits  and risks for long-term health. Maturitas . G Model MAT-5378: 5-10 Zamri, A., Eryanti, Y., Jasril. 2007. “Sintesis dan  aktivitas  antimikroba  3  analog calkon.