## POLA PERTUMBUHAN DAN VARIASI GENETIK BERBASIS DNA MIKROSATELIT DARI TIGA POPULASI IKAN BARAMUNDI

## Lates calcarifer
Fitriyah Husnul Khotimah *) , Alimuddin *) # , Dinar Tri Soelistyowati *) , Sri Nuryati *) , Harton Arfah *) , Ketut Sugama **) , Gusti Ngurah Permana **) , Sari Budi Moria Sembiring **) , dan Haryanti **)
*) Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Jalan Agatis, Kampus Dramaga, Bogor 16680, Jawa Barat
**) Pusat Riset Perikanan, Organisasi Riset Kebumian dan Maritim, Badan Riset dan Inovasi Nasional, Cibinong, Jawa Barat
(Naskah diterima: 27 Desember 2022; Revisi final: 18 Januari 2023; Disetujui publikasi: 18 Januari 2023)

## ABSTRAK
Benih ikan baramundi Lates calcarifer diperoleh dari pemijahan alami dengan jumlah induk terbatas sehingga variabilitas pertumbuhan dan kelangsungan hidup antar- batch menjadi tinggi. Penelitian dilakukan untuk menganalisis pertumbuhan dan mengevaluasi variasi genetik ikan kakap putih populasi Australia, Situbondo dan Lampung hasil domestikasi dan dibudidaya di hatcheri skala rumah tangga (HSRT). Sebanyak 10 ekor ikan barramundi dari setiap populasi digunakan untuk analisis variabilitas genetik dengan dua lokus mikrosatelit, yaitu Lca21 dan Lca32. Selanjutnya, data mikrosatelit diolah menggunakan software genetic analysis in excel (GenAlEx 6.51b2). Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa pertumbuhan panjang dan bobot tubuh serta laju pertumbuhan spesifik ikan baramundi dari Australia lebih tinggi dibandingkan dari Situbondo dan Lampung ( P<0,05 ); sedangkan ikan baramundi dari Situbondo dengan Lampung adalah sama ( P>0,05 ). Jumlah alel setiap lokus ikan baramundi berkisar 2-8 alel dan heterozigositas tertinggi dimiliki oleh ikan barramundi asal Situbondo (0,85), diikuti Lampung (0,65) dan paling rendah dari Australia (0,54). Dari hasil riset  tersebut dapat disimpulkan bahwa ketiga populasi ikan baramundi hasil domestikasi dan dipeliharan dalam sistem HSRT memenuhi kelayakan untuk digunakan untuk kegiatan hibridisasi atau membentuk populasi awal (sintetis).

## KATA KUNCI: heterozigositas; ikan baramundi; mikrosatelit; pertumbuhan
ABSTRACT: Growth Patterns and Genetic Variations based on DNA Microsatellite of Three Populations of Barramundi, Lates calcarifer
Barramundi seeds, Lates calcarifer are usually sourced from natural spawning using a limited number of broodstock. Therefore, the growth and survival rate of these seeds vary greatly between batches. The research was performed to determine the growth pattern and genetic variations of barramundi seed populations produced from domesticated broodstock sourced from Australia, Situbondo, and Lampung and reared in small-scale hatcheries . Ten individuals of barramundi from each population were used for microsatellite analysis using two microsatellite loci, namely: Lca 21 and Lca 32. The resulted microsatellite data was processed using the genetic analysis available in Excel software (GenAlEx 6.51b2). The results
#Korespondensi: Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,
Institut Pertanian Bogor, Jawa Barat Email: alimuddin@apps.ipb.ac.id
showed that the growth in length and body weight as well as the specific growth rate of barramundi seeds produced from Australia broodstock were higher than that of Situbondo and Lampung (P<0.05) while the later two were similar (P>0.05). The number of microsatellite alleles ranged from 2-8 and the highest heterozygosity was obtained by barramundi seeds produced by Situbondo (0.85), followed by Lampung (0.65), dan Australia (0.54) broodstock. From the results of the research, it can be concluded that the three populations of barramundi fish, which were domesticated and reared in the HSRT system, meet the criteria for use in hybridization program or for forming a synthetic population.

## KEYWORDS: heterozygosity; barramundi; microsatellite; growth

## PENDAHULUAN
Ikan baramundi ( Lates calcarifer ) adalah komoditas budidaya bernilai ekonomis di kawasan Asia Pasifik (Windarto et al ., 2019). Ikan ini juga telah dibudidayakan oleh industri akuakultur baik dalam skala kecil maupun besar dengan teknik pemeliharaan yang relatif sederhana, pertumbuhan cepat, dan toleran terhadap fluktuasi lingkungan (Rayes et al ., 2013).
Ikan baramundi banyak diminati pembudidaya dan memiliki permintaan pasar tinggi, baik pasar domestik maupun internasional. Kebutuhan benih ikan yang tinggi menuntut panti benih ( hatchery ) untuk meningkatkan produksi benih setiap tahun untuk pengembangan budidaya ikan baramundi. Hal ini menyebabkan pemijahan alami massal dilakukan tanpa mengikuti prosedur pemuliaan sehingga variabilitas pertumbuhan dan kelangsungan hidup antar- batch tinggi (Domingos et al ., 2013). Produksi benih ikan baramundi masih didominasi oleh panti benih skala kecil atau hatchery skala rumah tangga (HSRT) yang menggunakan induk hasil seleksi dengan sifat unggul pertumbuhan asal Australia, atau induk dari perairan lokal Indonesia termasuk Situbondo dan Lampung.
Keterbatasan induk yang digunakan dalam pembenihan sebagian besar spesies budidaya mengakibatkan terjadinya inbreeding yang tinggi dan variasi genetik dari populasi turunannya menurun secara signifikan (Jenkins et al ., 2020). Inbreeding adalah persilangan pada ikan yang masih berkerabat dekat secara genetik
menyebabkan homozigositas yang tinggi, dan keturunannya cenderung bersifat resesif sehingga dapat menyebabkan penurunan produktivitas. Penurunan keragaman genetik akibat hilangnya alel-alel ( genetic drift ) dari hasil pembenihan dapat mengakibatkan penurunan sifat komersial yaitu terhambatnya laju pertumbuhan dan rendahnya ketahanan ikan terhadap infeksi penyakit dan perubahan lingkungan (Loukovitis et al ., 2015).
Informasi variasi genetik ikan baramundi yang dibudidaya masih sangat terbatas. Informasi tersebut diperlukan sebagai acuan dalam membuat skema kegiatan pemuliaan ikan baramundi. Evaluasi keragaman genetik ikan  baramundi dapat dilakukan dengan aplikasi penanda genetik mikrosatelit. Variasi genetik pada ikan baramundi menggunakan lokus mikrosatelit telah diteliti dengan lokus yang berbeda-beda baik pada populasi budidaya dan populasi liar (Yue et al., 2002; Zhu et al ., 2009; Zhu et al ., 2010; Noble et al ., 2014; Loughnan et al ., 2013; Senanan et al ., 2015; Loughnan et al ., 2019). Mikrosatelit merupakan marka molekuler yang sering digunakan untuk mempelajari variasi genetik pada ikan. Marka ini bersifat kodominan dan memiliki polimorfisme yang tinggi.
Pada penelitian ini dilakukan analisis pertumbuhan dan variasi genetik ikan baramundi yang berasal dari Australia, Situbondo, dan Lampung hasil domestikasi dan budidaya di HSRT. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan suatu kontribusi yaitu diperolehnya populasi kandidat unggul dan layak digunakan dalam kegiatan budidaya yang berkelanjutan.

## BAHAN DAN METODE

## Pemeliharaan Benih Ikan Baramundi
Benih ikan baramundi diperoleh dari Balai Perikanan Budidaya Air Payau Situbondo (populasi lokal Situbondo), Balai Besar Perikanan Budidaya Laut Lampung (populasi Australia), dan populasi lokal Lampung. Konfirmasi benih ikan baramundi tersebut bebas dari nervous necrosis virus (NNV) dilakukan menggunakan metode polymerase chain reaction (PCR). Benih ikan baramundi berukuran rata-rata panjang tubuh: 1,03 ± 0,13 cm diaklimatisasi selama 14 hari sebelum digunakan dalam penelitian. Benih selanjutnya dipelihara selama 60 hari dalam bak fiber (kapasitas 1.000 L), masing-masing populasi terdiri dari dua ulangan dengan kepadatan benih 4.000 ekor per bak. Media pemeliharaan diberi klorin 30 mg L -1 untuk memastikan tidak terdapat patogen di dalam media pemeliharaan selama 8 jam sebelum penebaran benih dilakukan. Sisa klorin dinetralkan menggunakan 10 g natrium thiosulfat, 2 jam sebelum benih ditebar. Parameter kualitas air disesuaikan dengan SNI 6145.4 yaitu pemeliharaan ikan pada suhu 29,3 ± 1,4 o C; pH 7,0-8,5, dan salinitas 32,0 ± 1,5 g L -1 . Pergantian air selama pemeliharaan dilakukan setiap pagi dan sore hari sebanyak 50% sekitar 1 jam setelah pemberian pakan.
Benih awal diberi pakan berupa nauplii Artemia (10 individu mL -1 ) dan pakan buatan secara ad satiation .  Pakan diberikan empat kali dalam sehari. Pemberian nauplii Artemia dihentikan setelah benih berukuran 1,5 cm. Pemisahan ukuran ( grading ) dilakukan setelah nampak adanya perbedaan ukuran ikan dalam satu bak pemeliharaan. Grading dilakukan untuk menyeragamkan ukuran benih ikan baramundi sehingga dapat mengurangi terjadinya kanibalisme. Benih ikan baramundi setelah berukuran 3 cm dipelihara menggunakan air mengalir dengan debit air 4 L min -1 . Penyiponan untuk membuang sisa pakan dan kotoran dilakukan 1 jam setelah pemberian pakan.

## Pertumbuhan dan Kelangsungan Hidup Ikan
Bobot dan panjang tubuh ikan baramundi diukur setiap 10 hari untuk menghitung laju pertumbuhan spesifik (LPS).  Nilai LPS dihitung mengacu rumus pada penelitian Laitte et al . (2021):
LPS bobot (% hari -1 ) = [(ln Wt–ln Wo)/t]  x 100 …………… (1) LPS panjang (% hari -1 ) = [(ln Pt–ln Po)/t] x 100 …………… (2) Dimana:
Wt   = Bobot akhir rata-rata ikan hari ke-t (g ekor -1 ) Wo   = Bobot awal ikan (g ekor -1 ) Pt = Panjang akhir ikan hari ke-t (cm) Po   = Panjang awal ikan (cm)
t = Hari pemeliharaan
Berdasarkan data pertumbuhan ikan baramundi dibedakan menjadi populasi besar atau terseleksi (Tumbuh Cepat/TC, Y > X + 1SD), populasi sedang (X), dan populasi kecil (Tumbuh Lambat/TL, Y < X – 1SD) pada akhir periode.
Kelangsungan hidup (sintasan) ikan baramundi dihitung pada akhir pemeliharaan, dengan menggunakan rumus:

## ………… (3)

## Variasi Genetik Populasi Ikan Baramundi
Analisis variasi genetik ikan baramundi tiga populasi hasil pemeliharaan di hatchery dilakukan menggunakan DNA mikrosatelit. Dua lokus mikrosatelit (LCA 21 dan LCA 32) digunakan pada penelitian ini (Tabel 1). Primer dan suhu annealing mengacu pada Yue et al. (2002). Pada awal diuji tiga lokus, dan terpilih dua lokus mikrosatelit setelah dilakukan penelitian pendahuluan.

## Isolasi DNA Genom
DNA genom diekstraksi dari masing- masing 10 ekor ikan baramundi dari tiap populasi (Australia, Situbondo, dan Lampung). Sebanyak 25 mg daging diambil secara aseptis dan dimasukkan ke dalam microtube steril volume 1,5 mL. DNA genom ikan baramundi diekstraksi menggunakan kit komersial ( FavorPrep TM Genomic DNA Extraction mini kit, FAVORGEN BIOTECH CORP, USA) mengikuti prosedur dalam manual. DNA genom hasil ekstraksi kemudian  dilarutkan dalam elution buffer sebanyak 20 µL, kemudian disimpan pada suhu -20° C hingga digunakan dalam amplifikasi PCR.
Konsentrasi DNA genom diukur secara kuantitatif menggunakan metode spektrofotometri pada panjang gelombang 260/280. Konsentrasi DNA awal dibuat sama sebelum digunakan untuk amplifikasi PCR.

## Amplifikasi PCR
Amplifikasi PCR membutuhkan volume reaksi sebesar 25 µL dan dilakukan menggunakan Top Taq master mix (Qiagen, Jerman). Sebanyak 3 µL DNA genom hasil ekstraksi ditambahkan ke dalam microtube yang sudah berisi 1,25 µL dari 10 pmol primer mikrosatelit forward dan reverse (Tabel 1), 12.5 µL mastermix dan 7.0 µL ddH2O. Proses amplifikasi PCR dilakukan menggunakan mesin T-personal Thermocycler (Biometra). Program amplifikasi PCR yang digunakan berupa inisiasi denaturasi pada 94°C selama dua menit, dilanjutkan dengan 35 siklus masing-masing denaturasi pada 94°C selama 30 detik, dan suhu annealing sesuai Tabel 1 selama 30 detik, dan ekstensi pada suhu 72°C selama 30 detik. Ekstensi akhir dilakukan pada suhu 72°C selama
Tabel 1. Primer dan suhu annealing untuk analisis variasi genetik menggunakan mikrosatelit terhadap tiga populasi pada ikan baramundi
Table 1. Primers and annealing temperatures used for genetic variation analysis using microsatellites on three populations of barramundi
Primer Primer Dye Motif Motif Urutan basa (5’-3’) Sequence of bases (5’-3’) Suhu annealing Annealing temperature Target Target LCA 21 FAM CA13 Fw: GTGCCACCTGCCTGACC Rv: GCCATGACTGATTGCTGAGA 55 o C 161-194 LCA 32 HEX GATA 15 Fw: TGACTCCATAAGAGGTTTGACATT Rv: CCTCTTCTTGATTTGTTGCTTTGT 50 o C 154 - 226
5 menit, dan penyimpanan sampel sementara pada suhu 4°C. Konfirmasi produk amplifikasi PCR dilakukan dengan elektroforesis pada gel agarose 1,5% (w/v) dalam 1´ bufer TBE.
Selanjutnya, amplikon PCR diseparasi menggunakan mesin Sequencer ABI Prism yang dilakukan di 1st Base Malaysia . Data skor alel kemudian digunakan untuk analisis parameter genetik yang relevan.

## Analisis Data
Data pertumbuhan dianalisis ANOVA dengan bantuan program SPSS versi 20 (SPSS Inc, USA) dan diuji jarak berganda Duncan pada selang kepercayaan 95%. Ukuran alel mikrosatelit dianalisis dengan bantuan program GeneMapper versi 4.0. Ukuran pita DNA mikrosatelit diolah menggunakan
program Microsoft Excel . Parameter variabilitas genetik meliputi jumlah alel (A), heterozygote yang teramati (Ho) dan frekuensi heterozygote yang diharapkan (He), keseimbangan Hardy- Weinberg (HW), derajat inbreeding (F IS ), nilai F-statistik (F IS , F ST dan F IT ) dan variasi genetik antarindividu dalam populasi serta antara individu antarpopulasi dianalisis menggunakan AMOVA ( Analysis of Molecular Variance ) yang dianalisis menggunakan software genetic analysis in excel (GenAlEx 6.51b2) (Peakel & Smouse, 2012).

## HASIL DAN BAHASAN

## Pertumbuhan Ikan Baramundi
Pertumbuhan panjang total dan bobot tubuh benih ikan baramundi asal Australia, Situbondo, dan Lampung disajikan pada Tabel 2 dan Gambar 1. Pola pertumbuhan panjang dan bobot mulai menunjukkan perbedaan pada 10 hari akhir pemeliharaan. Ikan baramundi dari Australia secara nyata menunjukkan pertambahan panjang dan bobot yang lebih
Parameter
Parameters Populasi Population Australia Situbondo Lampung Panjang awal (cm) Initial body length (cm) 1,05 ± 0,11 a 1,05 ± 0,11 a 1,05 ± 0,11 a Panjang akhir (cm) Final body length (cm) 10,59 ± 0,98 a 8,46 ± 1,10 b 8,35 ± 1,13 b
Laju pertumbuhan spesifik panjang (% hari -1 ) Specific growth rate of body length (% day -1 )
3,82 ± 0,2 a
3,47 ± 0,07 b 3,45 ± 0,08 b Bobot awal (g) Initial body weight (g) 0,01 ± 0,00 a 0,01 ± 0,00 a 0,01 ± 0,00 a Bobot akhir (g) Final body weight (g) 14,27 ± 2,00 a 8,42 ± 2,09 b 8,19 ± 2,01 b

## Laju pertumbuhan spesifik bobot
tubuh Specific growth rate of body weight (% day -1 )
11,33 ± 0,52 a 10,74 ± 0,39 b 10,76 ± 0,35 b Sintasan (%) Survival Rate (%) 41,42 ± 2,46 a 56,26 ± 3,91 c
50,64 ± 4,15 b
Tabel 2. Laju pertumbuhan panjang dan bobot serta nilai sintasan benih tiga populasi ikan baramundi setelah pemeliharaan selama 60 hari.

## Table 2. The growth rate of length and weight and the survival rate of fingerling barramundi for 60 days of rearing
Keterangan: Nilai dengan huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05)
Note: The different superscript letters in the same column showed significant differences (P<0.05)
Gambar 1. Pola pertumbuhan panjang (A) dan bobot (B) benih ikan baramundi asal Australia, Situbondo, dan Lampung yang dipelihara selama 60 hari
Figure 1. Body length (A) and weight (B) growth pattern of the Australian, Situbondo, and Lampung populations of barramundi which were cultured for 60 days
tinggi dibandingkan dengan yang berasal dari Situbondo dan Lampung (P<0,05), sedangkan ikan baramundi dari Situbondo dan Lampung tidak memiliki perbedaan (P>0,05).  Demikian juga bobot dan laju pertumbuhan spesifik ikan baramundi populasi Australia lebih tinggi dibandingkan dengan populasi Situbondo dan Lampung (P<0,05) sedangkan pada populasi Situbondo sama dengan Lampung (P>0,05). Namun, sintasan ikan baramundi populasi Situbondo menunjukkan yang tertinggi (56,26%), sedangkan pada populasi Lampung
lebih rendah (50,64%), dan yang terendah adalah populasi Australia (41,42%).
Sebaran ukuran ikan barramundi selama pemeliharaan pada populasi Australia, Situbondo, dan Lampung disajikan dalam Tabel 3. Ikan baramundi yang berasal dari Australia memiliki tingkat keseragaman yang lebih tinggi dibandingkan dengan ikan baramundi populasi Situbondo dan Lampung.
Seperti ditampilkan pada Tabel 1, populasi ikan baramundi memiliki koefisien keberagaman ukuran individu dalam populasi
Tabel 3. Sebaran ukuran benih ikan baramundi populasi Australia, Situbondo, dan Lampung yang dipelihara selama 60 hari
Table 3. Size distribution of barramundi populations of Australia, Situbondo, and Lampung reared for 60 days
Populasi Population Koefisien keragaman panjang tubuh (%) Coefficient of variation of body length (%) Koefisien keragaman bobot tubuh (%) Coefficient of variation of body weight (%) Rataan panjang total (%) Average of total length (%) Panjang Long Sedang Medium Pendek Short Australia 9,25 14,02 11,68 ± 0,90 (18,21) 10,59 ± 0,60 (42,51) 9,50 ± 0,63 (39,28) Situbondo 13,48 24,82 9,40 ± 0,84 (11,27) 8,46 ± 0,54 (65,47) 7,52 ± 0,66 (23,26) Lampung 12,82 24,55 9,33 ± 0,96 (10,02) 8,35 ± 0,60 (61,94) 7,37 ± 0,71 (28,04)
yang berbeda. Semakin tinggi nilai coefficient of variation (CV) menunjukkan bahwa populasi memiliki keragaman yang luas atau lebih heterogen. Nilai CV panjang dan bobot tubuh ikan baramundi asal Australia lebih rendah dibandingkan CV ikan baramundi populasi Situbondo dan Lampung. Hal ini menunjukkan bahwa ikan baramundi asal Australia memiliki tingkat keseragaman yang lebih tinggi dibanding ikan baramundi asal Situbondo dan Lampung. Berdasarkan Tabel 3, nilai koefisiensi keragaman panjang pada populasi benih ikan baramundi secara umum berkisar dari 9,25%-13,48%; sedangkan pada karakter bobot berkisar antara 14,02%-24,82%.

## Variasi Genetik Ikan Baramundi
Primer mikrosatelit yang digunakan pada penelitian ini menghasilkan produk PCR yang polimorfik. Jumlah sampel per populasi, jumlah alel yang teridentifikasi (Na), heterozigositas
yang diamati (Ho) dan diharapkan (He), koefisien inbreeding (Fis) dan kesetimbangan Hardy-Weinberg disajikan dalam Tabel 4. Nilai heterozigositas yang teramati (Ho) pada ikan baramundi asal Australia lebih rendah dibandingkan heterozigositas yang diharapkan (He), atau  menunjukkan defisit heterozigot atau jumlah genotip homozigot lebih banyak dibandingkan heterozigot atau variasi genetik rendah. Jumlah homozigot yang meningkat terjadi karena inbreeding . Hal ini karena individu yang disilangkan memiliki alel yang sama (Chew et al ., 2021). Kelebihan homozigositas ini, menyebabkan defisit heterozigositas dalam populasi (Syahputra et al ., 2016). Nilai F IS positif menunjukkan defisit heterozigositas dan adanya penyimpangan dari kesetimbangan Hardy-Weinberg (HWE) pada populasi tersebut. Sebaliknya, nilai F IS negatif menunjukkan kelebihan heterozigot yang diamati dan tidak ada kejadian inbreeding .
Tabel 4. Variabilitas genetik dari dua lokus mikrosatelit pada ikan baramundi dari populasi Australia, Situbondo, dan Lampung
Table 4. Genetic variability of two microsatellite loci in the Australian, Situbondo, and Lampung barramundi population
Populasi Population Australia Situbondo Lampung Kisaran panjang alel (bp) Allele size ranged (bp) 165-197 156-197 157-190 Jumlah sampel per lokus (N) Number of samples per locus (N) 10 10 10 Jumlah alel total NA Total number of allele NA 9 13 12 Rata-rata jumlah alel per lokus NA Mean number of alleles per locus NA 4,5 6,5 6,0 Indeks fiksasi dalam populasi (FIS) Fixation index within population  (FIS) 0,067 -0,244 -0,171 Heterozigositas harapan (He) Expected heterozigosity (He) 0,565 0,690 0,565 Heterozigositas teramati (Ho) Observed heterozigosity (Ho) 0,539 0,850 0,650 Nilai p Hardy-Weinberg (HW) p-value of Hardy-Weinberg (HW) 0,018 0,784 0,774
Pola Pertumbuhan dan Variasi Genetik Berbasis DNA Mikrosatelit ...... ( Fitriyah Husnul Khotimah)
Koefisien inbreeding antarpopulasi (F IS ) berada di kisaran -0,244 hingga 0,067, dengan rata- rata -0,116 (Tabel 4). Koefisien inbreeding tertinggi pada populasi Australia (0,067). Nilai F IS positif terdeteksi pada populasi Australia, sedangkan F IS negatif terdeteksi pada populasi lokal Situbondo dan Lampung. Nilai F IS menunjukkan koefisien inbreeding dalam suatu populasi, berkisar dari -1 hingga 1. Nilai F IS positif menunjukkan terjadinya inbreeding dan nilai F IS negatif menunjukkan outbreeding dalam populasi (Imron et al ., 2011; Syahputra et al ., 2016; Chew et al ., 2021). Kondisi penyimpangan kesetimbangan HW disebabkan adanya inbreeding , jumlah populasi kecil, persilangan tidak acak, aktivitas seleksi, mutasi, migrasi, dan terjadi aliran gen (Dusheck, 2003). Ukuran populasi efektif dianggap sebagai salah satu parameter terpenting untuk evaluasi kelayakan populasi (Ackerman et al ., 2017). Sebagian besar stok sumber penangkaran yang dianalisis selama penelitian ini tampaknya terlalu kecil untuk menghindari depresi perkawinan sedarah, atau untuk pembentukan program perbaikan genetik.
Rata-rata heterozigositas yang teramati (Ho) pada ikan baramundi populasi lokal Situbondo dan Lampung lebih tinggi dari heterozigositas yang diharapkan (He). Hasil ini menunjukkan bahwa ikan baramundi populasi Situbondo dan Lampung menunjukkan variasi genetik yang tinggi. Analisis varians molekuler menunjukkan bahwa variasi genetik tertinggi adalah antarindividu antarpopulasi sebesar 67,91%. Variasi antarindividu dalam populasi memiliki nilai sebesar 21,79%, sedangkan variasi antarpopulasi sebesar 10,30% (Tabel 5).
Hasil perhitungan F-statistik berupa nilai rata-rata F IT ; F ST dan F IS secara berurutan yaitu 0,321; 0,103; dan 0,243 menunjukkan tidak signifikan (Tabel 5). Nilai Fst ≥ 0 < 0,5 tidak  berbeda  nyata,  Fst  >  0,5  ≤1  berbeda nyata. Inbreeding mengakibatkan hilangnya heterozigositas di antara populasi (F ST ), di antara individu relatif terhadap subpopulasi (F IS ), serta di dalam individu relatif terhadap total populasi (F IT ) (Chew et al ., 2021).
Nilai-nilai tersebut menunjukkan level inbreeding pada tiga populasi ikan baramundi.
Tabel 5. Analysis of molecular variance ikan baramundi populasi Australia, Situbondo, dan Lampung menggunakan dua lokus mikrosatelit
Table 5. Analysis of molecular variance from Australian, Situbondo, and Lampung barramundi populations by using two microsatellite loci
Sumber keragaman Source of variation Derajat bebas Degree of freedom Jumlah kuadrat Sum of squares Komponen ragam Variance components Persentase ragam Percentage of variation Antarpopulasi Among populations 2 5,117 2,558 10,30 Antarindividu dalam populasi Among individuals within populations 27 30,650 1,135 21,79 Antarindividu antarpopulasi Among individuals in among populations 30 20,500 0,683 67,91 Total Total 59 56,267 F IS = 0,243 (23%)
F IT = 0,321 (32%) F ST = 0,103 (10%)
Nilai F IT tersebut menunjukkan tingkat keseluruhan dari inbreeding yang terjadi pada total populasi berkisar 32%, nilai F ST menunjukkan koefisien inbreeding pada subpopulasi dari total populasi sebesar 10% dan nilai F IS menunjukkan besarnya inbreeding oleh individu yang terjadi pada suatu subpopulasi sebesar 24%.  Hasil penelitian ini selaras dengan nilai F ST pada ikan kakap liar populasi Australia yaitu sebesar 0,103 (Loughnan et al ., 2019), sedangkan ikan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ikan baramundi hasil domestikasi. Indeks fiksasi (F ST ) merupakan ukuran diferensiasi genetik antarpopulasi, artinya apabila nilai F ST adalah nol maka menunjukkan tidak ada perbedaan secara genetik dari populasi-populasi yang diamati, sedangkan nilai 1,0 diartikan bahwa ada perbedaan karakter genetik (Excoffier & Lischer, 2010).
Jarak genetik antarpopulasi ikan baramundi Australia dengan populasi Lampung sebesar 0,282. Populasi Situbondo sebesar 0,224 dan jarak genetik antara populasi Situbondo dan Lampung 0,077 (Tabel 6).
Semakin kecil jarak genetik antarindividu dalam populasi, maka populasi tersebut semakin seragam. Jarak genetik antara populasi Australia dengan Situbondo dan jarak genetik antara populasi Australia dengan Lampung tergolong dalam jarak genetik sedang (0,1-0,99), sedangkan jarak genetik antara ikan baramundi populasi Situbondo dengan populasi Lampung tergolong dalam jarak genetik kecil (0,010-0,099).
Praktik budidaya ikan barramundi cenderung menyebabkan kehilangan variasi genetik secara signifikan, yaitu stok budidaya
menunjukkan jumlah alel dan variasi genetik yang lebih rendah dibandingkan ikan baramundi dari alam, tidak ada penjelasan penggunaan induk yang sesuai kaidah seleksi (Frost et al ., 2006; Yue et al ., 2009). Senanan et al ., (2015) menyatakan bahwa variasi genetik antara ikan kakap populasi budidaya di Thailand tidak terjadi perbedaan yang signifikan dibandingkan variasi genetik ikan kakap putih dari alam. Hal ini disebabkan manajemen induk berdasarkan kelompok dan berjumlah besar sesuai kaidah seleksi.

## KESIMPULAN
Pertumbuhan panjang dan bobot benih ikan baramundi populasi Australia lebih tinggi dibandingkan dengan benih ikan baramundi dari populasi Situbondo dan Lampung. Sintasan tertinggi diperoleh pada populasi Situbondo. Keragaman genetik antarpopulasi ikan baramundi ketiga populasi tidak berbeda nyata dengan jarak genetik berkisar 0,077- 0,288. Variasi genetik antarpopulasi (10,3%) lebih rendah dibandingkan dengan variasi genetik antara individu intrapopulasi (21,7%) dan antarindividu antarpopulasi (67,91%).
Berdasarkan hasil penelitian tersebut, dihubungkan dalam ilmu pemuliaan menunjukkan bahwa populasi tersebut layak digunakan dalam kegiatan hibridisasi atau digunakan dalam membentuk populasi awal (sintetis) yang umumnya mempunyai tipe heterozigotas yang tinggi dan mempunyai peluang memunculkan sifat heterosis yang baik pada keturunannya.
Tabel 6. Jarak genetik antara tiga populasi ikan baramundi

## Table 6. Genetic distance between three barramundi populations
Populasi Population Australia Situbondo Lampung Australia * Situbondo 0,224 * Lampung 0,282 0,077 *

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada kepada Prof. Dr. Ir. Muhammad Zairin Junior, M.Sc (Alm.) atas bimbingan, koreksi, dan arahan selama penelitian ini dilaksanakan. Ucapan terima kasih juga diberikan kepada Pusat Pendidikan Kelautan dan Perikanan serta Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan Gondol yang telah memberikan bantuan dana, fasilitas serta tenaga pada penelitian ini.

## DAFTAR ACUAN
Ackerman, M.W., Hand, B.K., Waples, R.K., Luikart, G., Waples, R.S., Steele, C.A., Garner, B.A., McCane, J., & Campbell, M.R. (2017). Effective number of breeders from sibship reconstruction: empirical evaluations using hatchery steelhead. Evolutionary Applications , 10 (2), 146–160. https://doi.org/10.1111/eva.12433
Chew, P.C., Christianus, A., Zuzaidy, J.M., Ina- Salwany, M.Y., Chong, C.M., & Tan, SG. (2021). Microsatellite characterization of Malaysian mahseer ( Tor spp.) for improvement of broodstock management and utilization. Animals , 11 , 2633, 1-28. https://doi.org/10.3390/ani11092633
Domingos, J.A., Smith-Keune, C., Robinson, N., Loughnan, S., Harrison, P., & Jerry, D.R. (2013). Heritability of harvest growth traits and genotype environment interactions in barramundi, Lates calcarifer (Bloch). Aquaculture , 402 , 66-75. https://doi. org/10.1016/j.aquaculture.2013.03.029
Dusheck J. (2003). Population genetics. In: Genetics, Vol. 3. New York (NY): Macmillan Reference, USA. p. 171-174
Excoffierd, L., & Lischer, H.E. (2010). Arlequin suite ver 3.5: a new series of programs to perform population genetics analyses under Linux and Windows. Molecular Ecology Resources , 10, 564–567.
Frost, L.A., Evans, B.S., & Jerry, D.R. (2006). Loss of genetic diversity due to hatchery culture practices in barramundi ( Lates calcarifer ).
Aquaculture , 261 , 1056–1064. https://doi. org/10.1016/j.aquaculture.2006.09.004
Imron, I., Sunandar, D., & Tahapari, E. (2011). Microsatellite genetic variation in cultured populations of African catfish ( Clarias gariepinus ) in Indonesia. Indonesian Aquaculture Journal , 6 (1), 1-10.  http:// dx.doi.org/10.15578/iaj.6.1.2011.1-10
Jenkins, S.F., Ishengoma, E., & Rhode, C.A. (2020). A temporal assessment of family composition and genetic diversity in a commercial cohort of Dusky Kob, Argyrosomus japonicus , across the production cycle. Aquaculture , 516 , 734640. https://doi.org/10.1016/j. aquaculture.2019.734640
Jerry, D.R. (2014). Biology and Culture of Asian Seabass . CRC Press. (p 1-314)
Laitte, M.H., Haser, T.F., Jaya, Nurdin, M.S., Azmi, F., Radona, D., Prihadi, T.H., Masriah, D., & Darsiani. (2022). Kinerja pertumbuhan dan respons fisiologis benih ikan tambra, Tor tambroides pada suhu pemeliharaan berbeda. Jurnal Riset Akuakultur , 16 (4), 211-219.  http://doi. org/10.15578/jra.16.4.2021.211-219
Loughnan, S.R., Domingos, J.A, Smith-Keune,
C, Forrester, J.P, Jerry, D.R, Beheregaray, L.B, & Robinson, N.A. (2013). Broodstock contribution after mass spawning and size grading in barramundi ( Lates calcarifer , Bloch), Aquaculture , 404–405 , 139–149.http://dx.doi.org/10.1016/j. aquaculture.2013.04.014
Loughnan, S.R., Smith-Keune, C.,
Beheregaray, L.B., Robinson, N.A., & Jerry, D.R. (2019). Population genetic structure of barramundi ( Lates calcarifer ) across the natural distribution range in Australia informs fishery management and aquaculture practices. Marine and Freshwater Research , 70 , 1533-1542. https://doi.org/10.1071/MF18330.
Loukovitis, D., Ioannidi, B., Chatziplis, D., Kotoulas, G., Magoulas, A., & Tsigenopoulos, C.S. (2015). Loss of genetic variation in Greek hatchery populations of the European sea bass ( Dicentrarchus labrax L.) as revealed by microsatellite DNA analysis. Mediterranean Marine Science, 16(1), 197-200 . http://dx.doi. org/10.12681/mms.1033
Noble, T.H., Smith-Keune, C., & Jerry, D.R.
(2014). Genetic investigation of the large- scale escape of a tropical fish, barramundi Lates calcarifer , from a sea-cage facility in northern Australia. Aquaculture Environment Interactions , 5 , 173–183. https://doi. org/10.3354/aei00106
Peakall, R. & Smouse, P.E. (2012). GenAlEx 6.5: genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research-an update. Bioinformatics , 28 , 2537-2539. https://doi.org/10.1093/ bioinformatics/bts460
Rahman, Z.A., Choay-Hoong, L., Khairuddin, R.M., Razak, S.A.B., & Othman, A.F.  (2012). Isolation and characterization of novel microsatellite loci for Asian seabass, Lates calcarifer from genome sequence survey database. Journal of Genetics , 91 , e83-e85. https://doi.org/10.1007/s12041-012-0171-5
Rayes, R.D., Sutresna, I.W., Diniarti, N., & Supii, A.I. (2013). Effect of changes in salinity on growth and review white cap fish ( Lates calcarifer Bloch). Jurnal Kelautan: Indonesian Journal of Marine Science and Technology , 6 (1), 47-56. http:// doi.org/10.21107/jk.v6i1.832.
Senanan, W., Pechsiri, J., Sonkawe, S., Na-Nakom, U., Sean-In, N., & Yashiro, R. (2015). Genetic relatedness and differentiation of hatchery populations of Asian seabass ( Lates calcarifer ) (Bloch, 1790) broodstock in Thailand inferred from microsatellite genetic markers. Aquaculture Research , 46 , 2897–2912. https:// doi.org/10.1111/are.12442
Syahputra, K., Ariyanto, D., & Hayuningtyas, E.P. (2016). Keragaman genetik ikan mas ( Cyprinus carpio ) varietas rajadanu tahan koi herpervirus generasi F0 dan F1 menggunakan tiga lokus mikrosatelit. Jurnal Riset Akuakultur , 11 (1), 59-66.  http:// dx.doi.org/10.15578/jra.11.1.2016.59-66.
Windarto, S., Hastuti, S., Subandiyono,
Nugroho, R.A., & Sarjito. (2019). Performa pertumbuhan ikan kakap putih ( Lates calcarifer Bloch, 1790) yang dibudidayakan dalam sistem keramba jarring apung (KJA). Sains Akuakultur Tropis , 3 (1), 56-60. http:// doi.org/10.14710/sat.v3i1.4195.
Yue, G.H., Li Y., Chao, T.M., Chou, R. & Orban, L. (2002). Novel microsatellites from Asian sea bass ( Lates calcarifer ) and their application to broodstock analysis. Marine Biotechnology , 4 , 503–11. https://doi. org/10.1007/s10126-002-0037-6.
Yue, G.H., Zhu, Z.Y., Lo, L.C., Wang, C.M., Lin, G., Feng, F., Pang, H.Y., Li, J., Gong, P., Liu, H.M., Tan, J., Chou, R., Lim, H., & Orban, L.
(2009). Genetic variation and population structure of Asian seabass ( Lates calcarifer ) in the Asia-Pacific region. Aquaculture,
293, 22-28. https://doi.org/10.1016/j. aquaculture.2009.03.053.
Zhu, Z.Y., Wang, C.M., Feng, F., & Yue G.H.
(2009). Isolation and characterization of 51 microsatellites from BAC clones in Asian seabass Lates calcarifer . Animal Genetics , 40 , 25–6. https://doi.org/10.1111/j.1365- 2052.2008.01797.x
Zhu, Z.Y., Wang, C.M., Lo, L.C., Lin, G., Feng,
F., Tan, J., Chou, R., Lim, H.S., Orban, L., & Yue, G.H. (2010). A standard panel of microsatellites for Asian seabass ( Lates calcarifer ). Animal Genetic , 41 , 208–212 https://doi.org/10.1111/j.1365- 2052.2009.01973.x