Aktivitas penghambatan isolat bakteri asam laktat , Rinto et al.

## AKTIVITAS PENGHAMBATAN ISOLAT BAKTERI ASAM LAKTAT IKAN NILA DAN TONGKOL TERHADAP BAKTERI MERUGIKAN PRODUK PERIKANAN
Inhibitor Activity of Lactic Acid Bacteria Isolates  from Tilapia and Frigate Tuna for Harmful Bacteria in Fisheries Products
Rinto*, Ade Dwi Sasanti, Kusumawati Fitria
Program Studi Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Pertanian, Universitas Sriwijaya Diterima 26 Januari 2012/Disetujui 6 Agustus 2012
Abstract
Lactic acid bacteria were known has a potential for biopreservative and maintaining the safety of food products. The purpose of this research was to obtain lactic acid bacteria that capable to inhibit harmful bacteria in fisheries products. The stages of the methods were isolation of lactic acid bacteria from the digestive tract tilapia and frigate tuna with MRS agar + CaCO 3 , antibacterial test against Bacillus subtilis, Morganella morganii , and Escherichia coli using agar well diffusion method and test the alleged strengthening lactic acid bacteria. The results showed that there were two isolates of lactic acid bacteria (N 1 10 4 2 and T 1 10 5 1 ) that have the greatest inhibitory for harmful bacteria tested.
Key words: antibacterial, biopreservative, inhibitor harmful bacteria, lactic acid  bacteria

## Abstrak
Bakteri asam laktat diketahui berfungsi sebagai biopreservatif dan dapat menjaga keamanan produk pangan. Tujuan penelitian ini adalah untuk memperoleh bakteri asam laktat yang mempunyai kemampuan menghambat  bakteri  yang  merugikan  pada  produk  perikanan.  Tahapan  metode  yang  dilakukan  adalah isolasi bakteri asam laktat dari pencernaan ikan nila dan ikan tongkol dengan media MRS agar dan CaCO3, uji penghambatan bakteri terhadap Bacillus subtillis , Morganella morganii (bakteri pembentuk histamin), dan Escherichia  coli dengan  metode  difusi  sumur  agar  dan  uji  penguatan  dugaan  bakteri  asam  laktat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat dua isolat bakteri asam laktat yaitu N 1 10 4 2 dan T 1 10 5 1 yang mempunyai penghambatan terbesar terhadap bakteri merugikan yang diuji.
Kata kunci: antibakteri, bakteri asam laktat, biopreservatif, penghambat bakteri merugikan
* Korespondensi:  Taman  Darmaga  Permai  II  Blok  B2 No. 34 Kec. Ciampea Bogor Telp. +62858320730 e-mail: rinto_thi@yahoo.co.id / rinto.unsri@gmail.com

## PENDAHULUAN
Bakteri  asam  laktat  (BAL)  merupakan golongan  bakteri  Gram-positif,  katalase negatif, tidak berendospora, berbentuk bulat atau batang, menghasilkan asam laktat sebagai produk  akhir  utama  selama  fermentasi karbohidrat.  Bakteri  asam  laktat  juga menghasilkan  berbagai  metabolit  sekunder seperti  hidrogen  peroksida  dan  bakteriosin serta  dapat  menurunkan  pH  subtrat/media yang  mampu  menghambat  pertumbuhan
bakteri lain (Chen dan Hoover 2003). Bakteri asam laktat pada berbagai produk pangan  dapat  digunakan  dalam  menekan pertumbuhan  beberapa  bakteri  pembusuk dan  patogen  untuk  meningkatkan  umur simpan  dan  keamanan  pangan.  Larsen et al .  (1993)  menyatakan  bahwa Lactobacillus acidophilus TK9201  mampu  menghambat bakteri Streptococcus, Listeria monocytogenes, Bacillus  subtilis dan Staphylococcus  aureus, selain  itu Lactobacillus  fermentum,  L. plantarum,  L.  brevis, dan L.  casei dari  susu mampu  menghambat  bakteri Escherichia coli,  Klebsiella,  Proteus,  Pseudomonas ,  dan
Aktivitas penghambatan isolat bakteri asam laktat , Rinto et al..
Streptococcus (Saranya  dan  Hemashenpagam
2011). Rinto et al. (2006) menyatakan bahwa bakteri  asam  laktat  ( Pediococcus  acidilactici F-11) diketahui mampu menghambat bakteri pembusuk  dan  pembentuk  histamin,  yaitu Morganella morganii.
Bakteri  asam  laktat  selama  ini  banyak diisolasi  dari  produk-produk  fermentasi, namun  keberadaan  bakteri  asam  laktat  juga dapat ditemui pada saluran pencernaan ikan. Rinto (2010) menyebutkan bahwa pada ikan kembung  segar  terdapat  bakteri  asam  laktat sebanyak 5,20x10 3 CFU/g. Penelitian Feliatra et al . (2004) menunjukkan bahwa pada ikan kerapu  macan  terdapat  beberapa  bakteri asam  laktat,  diantaranya  yaitu Lactococcus sp., Carnoacterium sp., Eubacterium sp., Lactobacillus sp., dan Bifidobacterium sp.
Ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) merupakan  ikan  air  tawar  yang  diminati oleh  berbagai  kalangan  serta  termasuk salah  satu  produk  ekspor  Indonesia.  Proses berkembangnya bakteri pembusuk pada ikan nila  menjadi  salah  satu  faktor    penyebab utama  cepatnya  kemunduran  mutu  ikan, oleh  karena  itu  perlu  dikaji  penghambatan terhadap bakteri pembusuk pada ikan.
Ikan  tongkol  merupakan  salah  satu golongan ikan schombroid yang memungkinkan terbentuknya  histamin  ( Schombroid  poisoning ). Histamin terbentuk akibat adanya perombakan histidin  menjadi  histamin  oleh  beberapa bakteri  yang  mempunyai  enzim  histidin dekarboksilase,  diantaranya  adalah M.
morganii. Histamin menyebabkan alergi pada sebagian  orang.  Pengkajian  penghambatan bakteri  pembentuk  histamin  diperlukan untuk menekan terbentuknya histamin pada ikan-ikan  schombroid  seperti  tongkol,  tuna dan cakalang (Yuko et al. 2012). Beberapa  bakteri  yang  tergolong merugikan  pada  produk  perikanan  adalah B.  subtilis , M.  morganii (bakteri  pembentuk histamin) dan E. coli. Dilihat dari pentingnya peranan  bakteri  asam  laktat  dalam  menjaga kesegaran  dan  keamanan  produk  perikanan dari  bakteri-bakteri  yang  merugikan,  maka
dilakukan  isolasi  bakteri  asam  laktat  dari saluran  pencernaan  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus ) dan tongkol ( Auxis tharzard ). Tujuan penelitian ini adalah untuk memperoleh isolat BAL  dari  pencernaan  ikan  nila  dan  tongkol yang  mampu  menghambat  bakteri  yang merugikan  pada  produk  perikanan  yaitu B. subtilis, M. morganii dan E. coli.

## MATERIAL DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan antara lain sampel  ikan  nila  dan  ikan  tongkol  (sebagai sampel untuk diisolasi), media MRS broth ( de Mann Rogosa Sharpe ) (Oxoid), NB ( Nutrient Broth )  (Oxoid), agar  bacteriological (Oxoid), CaCO 3 ,  akuades,  akuabides,  alkohol  70%, NaCl,  larutan  kristal  violet,  Lugol’s  Iodine, alkohol 96%, safranin, H 2 O 2 3%, sodium azida (NaN 3 ), gliserol, kultur murni B. subtilis dari Laboratorium  Biologi  FMIPA  Universitas Sriwijaya, M.  morganii dan E.  coli non patogenik  dari  Laboratorium  Mikrobiologi Pusat  Antar  Universitas  (PAU)  Universitas Gadjah Mada.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi cawan petri, jarum ose, bunsen, magnetic  stirrer ,  pipet  mikro,  inkubator, autoclave ,  neraca  analitik,  mikroskop, mixer vortex , refrigerator, sentrifuge, tabung mikro (Eppendorf), dan jangka sorong.

## Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan beberapa tahapan,  yaitu  isolasi  BAL  dari  pencernaan ikan  nila  dan  tongkol,  uji  pendukung bakteri asam laktat dan pengujian BAL yang mempunyai aktivitas penghambatan terhadap B. subtilis, M. morganii dan E. coli

## Isolasi Bakteri Asam Laktat (BAL)
Sampel  ikan  bagian  saluran  pencernaan nila  dan  tongkol  diambil  sebanyak  1  g dimasukkan  dalam  akuades  steril  sebanyak 9  mL,  lalu  dihomogenkan  menggunakan mixer vortex selama 1-2 menit. Pengenceran dilakukan dengan mengambil sebanyak 1 mL
Aktivitas penghambatan isolat bakteri asam laktat , Rinto et al.
larutan dari tabung reaksi ke satu kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  kedua yang  diberi  9  mL  akuades,  dan  seterusnya sampai  pada  tabung  reaksi  kelima,  sehingga diperoleh  seri  pengenceran  10 1 sampai  10 5
(v/v). Sebanyak 1 mL larutan pencernaan ikan dipindahkan untuk ditumbuhkan pada 15 mL MRS  agar  +  CaCO 3 1%  yang  ditambahkan dengan sodium azida 10 ppm, lalu diinkubasi pada suhu 35 °C selama 24 jam. Bakteri asam laktat  yang  menghasilkan  asam  laktat  pada media  MRS-CaCO 3 1%  membentuk  koloni dengan zona jernih di sekitar koloni. Beberapa koloni  yang  mempunyai  bentuk  dan  luasan zona jernih yang berbeda dimurnikan dengan metode  gores  kuadran  pada  15  mL  MRS agar, selanjutnya diinkubasi pada suhu 35 °C selama 24 jam. Satu koloni yang diperkirakan murni,  kemudian  dikultur  pada  9  mL  MRS agar miring untuk penyimpanan.

## Uji Pendukung Bakteri Asam Laktat (BAL)
Isolat-isolat  bakteri  terpilih  dilakukan uji pendukung sebelum dilakukan pengujian antagonis  terhadap B.  subtilis,  M.  morganii dan E.  coli .  Pengujian  ini  dilakukan  sebagai uji  pendukung  bahwa  isolat-isolat  bakteri terpilih  merupakan  bakteri  asam  laktat yaitu  berdasarkan  sifat-sifat  umum  bakteri asam  laktat.  Sifat-sifat  umum  bakteri  asam laktat  itu  antara  lain  berbentuk  batang  atau bulat,  Gram-positif,  katalase  negatif  dan mampu  menghasilkan  asam  laktat  pada media pertumbuhannya, untuk itu dilakukan serangkaian  pengujian  guna  menentukan apakah  bakteri  dari  isolat  terpilih  termasuk golongan  bakteri  asam  laktat  atau  tidak dengan  melalui  serangkaian  pengujian meliputi pewarnaan Gram, morfologi koloni bakteri,  dan  uji  katalase  (Kandler  dan  Weiss 1986).
Uji Antagonis BAL terhadap B. subtilis,
M.  morganii dan E. coli
Tujuan  dari  tahap  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  sebatas  mana  BAL mampu  melawan  bakteri  pembusuk,  bakteri
pembentuk  histamin  dan  bakteri  patogen. Pengkulturan  bakteri  uji  ( B.  subtilis,  M. morganii dan E.  coli )  dalam  5  mL  medium Nutrient  Broth (NB)  dilakukan  dua  hari sebelum  uji  antagonis,  yaitu  sebagai  kultur murni kemudian diinkubasi pada suhu 35 °C selama 24 jam. Bakteri asam laktat hasil seleksi diambil sebanyak 1 ose dan ditumbuhkan pada 5 mL MRS broth, diinkubasi pada suhu 35 °C selama  24  jam.  Pengujian  dilakukan  dengan metode sumur agar dengan teknik dua lapis, dimulai  dengan  menuangkan  8  mL  medium NB soft (dengan komposisi NB ditambahkan dengan 0,75% agar) yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji sebanyak 100 µL dari kultur murni,  yaitu  sebagai  lapis  pertama  dengan ketebalan ± 0,2 cm, setelah lapis pertama agak memadat,  dilanjutkan  lapis  kedua  dengan ketebalan ± 0,4 cm yaitu dengan menuangkan 16 mL medium NB soft kemudian dibiarkan memadat,  setelah  memadat  dibuat  sumuran (lubang)  dengan  4  ulangan  dan  1  kontrol menggunakan akuabides. Suspensi BAL yang disiapkan  sebelumnya  diambil  sebanyak  100 µL dan diteteskan pada 4 sumuran, selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  35  °C  selama  24  jam. Pengukuran diameter zona hambat dilakukan dengan mengukur rata-rata dari zona bening titik  terdekat  dan  titik  terjauh  kemudian dikurangi  diameter  sumuran  menggunakan jangka sorong.

## Analisis Data
Data-data  yang  diperoleh  pada  semua tahapan penelitian dianalisis secara deskriptif, yaitu  dengan  menggambarkan/menjelaskan berbagai  isolat  BAL  yang  mempunyai  daya penghambat terhadap B. subtilis, M. morganii dan E. coli.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi Bakteri Asam Laktat (BAL)
Isolasi bakteri asam laktat dilakukan dari saluran  pencernaan  ikan  nila  dan  tongkol yang diperoleh dari pasar Indralaya, Ogan Ilir Sumatera Selatan. Semua isolat bakteri asam laktat  yang  diperoleh  dari  pengenceran  10 3
(mL/mL) sampai 10 5 (mL/mL) diinokulasikan pada  media  MRS  agar  dengan  penambahan CaCO 3 .  Koloni  bakteri  asam  laktat  yang tumbuh  pada  media  MRS  agar-CaCO 3 menunjukkan  koloni  dengan  membentuk zona jernih di sekitar koloninya, yang berarti adanya  produksi  asam  laktat  oleh  bakteri tersebut.  Hasil  isolasi  bakteri  disajikan  pada Tabel 1.
Koloni  yang  memiliki  ciri-ciri  bentuk koloni  berbeda  dengan  berbagai  luasan zona  jernih  berbeda  yang  dipilih,  sehingga diperoleh  12  isolat,  yaitu  4  isolat  bakteri dari  ikan  nila  dan  8  isolat  bakteri  dari  ikan tongkol.  Data  selengkapnya  disajikan  pada Tabel  2.  Sebanyak  12  isolat  bakteri  terpilih tersebut kemudian dimurnikan menggunakan media  goresan  kuadran    ( streak  quadrant ) (Mohankumar  dan  Murugalatha 2011).

## Uji Pendukung Bakteri Asam Laktat
Hasil  uji  pendugaan  12  isolat  disajikan pada  Tabel  3.  Hasil  pewarnaan  Gram  yang telah dilakukan menunjukkan bahwa 12 isolat terpilih  memberikan  pewarnaan  ungu,  yang berarti  termasuk  dalam  golongan  bakteri Gram-positif.  Terbentuknya  warna  ungu pada bakteri Gram-positif disebabkan lapisan peptidoglikan  dinding  sel  bakteri  yang  tebal dan  hanya  mempunyai  membran  sel  selapis, sehingga  mampu  mengikat  kristal  violet (Atlas  2001).  Bakteri    asam  laktat  termasuk dalam  golongan  bakteri  Gram-positif.  Hasil
pengamatan  morfologi  yang  telah  dilakukan pada  12  isolat  terpilih  menunjukkan  bahwa semua  bakteri  tersebut  memiliki  hasil  yang sama  yaitu  sel  berbentuk  batang.  Hasil uji  katalase  dengan  menambahkan  H 2 O 2 sebagai reagen, katalase positif menunjukkan timbulnya gelembung udara yang memberikan indikasi terbentuknya gas O 2 dari pemecahan H 2 O 2 oleh  enzim  katalase  bakteri  tersebut. Hasil  uji  katalase  yang  telah  dilakukan  pada 12 isolat terpilih menunjukkan reaksi negatif yaitu  tidak  menghasilkan  gelembung  udara. H 2 O 2 yang  diberikan  tidak  dipecah  oleh bakteri sehingga tidak menghasilkan oksigen, hal  ini  berarti  isolat  terpilih  tidak  memiliki enzim katalase yang dapat menguraikan H 2 O 2 . Bakteri  asam  laktat  merupakan  bakteri  yang tidak  mampu  memproduksi  enzim  katalase (Kivanc et al. 2011). Hasil uji pendugaan yang telah dilakukan menunjukkan  bahwa  12  isolat  terpilih,  yaitu 4  isolat  dari  saluran  pencernaan  ikan  nila
Tabel 1 Jumlah koloni bakteri asam laktat dari pencernaan ikan nila dan tongkol yang tumbuh pada media MRS agar Sampel Pengenceran ∑ Koloni ∑ Koloni BAL Isolat Bakteri Nila 10 3 TBUD 1 N 2 10 3 10 4
184 7 N 1 10 4 1 ; N 1 10 4 2 ; N 1 10 4 3 ; N 1 10 4 4 ; N 1 10 4 5 ; N 1 10 4 6 ; dan  N 1 10 4 7 10 5 66 1 N 2 10 5 Tongkol 10 3 94 5 T 1 10 3 1 ; T 1 10 3 2 ; T 1 10 3 3 ;  T 1 10 3 4 ; dan  T 2 10 3
10 4 78
2 T 2 10 4 1 dan T 2 10 4 2 10 5
60
3 T 1 10 5 1 ; T 1 10 5 2 dan   T 1 10 5 3 Tabel 2 Isolat bakteri asam laktat terpilih dari pencernaan ikan nila dan tongkol Sampel  Isolat Bakteri Keterangan Nila N 2 10 3 , N 1 10 4 1 , N 1 10 4 2 , N 2 10 5 4 isolat Tongkol T 1 10 3 1 ; T 1 10 3 2 ; T 1 10 3 3 , T 2 10 4 1 , T 2 10 4 2 , T 1 10 5 1 ; T 1 10 5 2 , T 1 10 5 3 8 isolat
Aktivitas penghambatan isolat bakteri asam laktat , Rinto et al.
dan  8  isolat  dari  saluran  pencernaan  ikan tongkol tergolong dalam bakteri asam laktat, karena memiliki sifat-sifat umum dari bakteri asam  laktat.  Beberapa  penelitian  yang  telah dilakukan menunjukkan bahwa bakteri asam laktat  ini  mendekati  genus Lactobacillus , dengan ciri-ciri sel berbentuk batang, Gram- positif dan tidak memproduksi katalase. Hasil penelitian Feliatra et al . (2004) menunjukkan bahwa Lactobacillus ,  mempunyai  bentuk  sel batang,  Gram-positif,  katalase  negatif  dan tumbuh optimum pada suhu 30-37 °C.
Uji Antagonis BAL terhadap B. subtilis, M. morganii dan E. coli
Metode  yang  digunakan  adalah  metode sumur agar ( agar well diffussion ) (Schillinger dan Lucke  1989).  Metode  sumur  agar  mempunyai daya  tampung  yang  lebih  besar  dibanding menggunakan  kertas  cakram  sehingga  zona hambat yang terbentuk tidak melebar. Aktivitas hambat  bakteri  asam  laktat  ditunjukkan dengan  terbentuknya  zona  bening  di  sekitar sumur (lubang) yang disebut zona hambat, ini dimungkinkan jika bakteri asam laktat mampu menghasilkan substansi antimikroba. Sumuran dibuat dengan diameter 7 mm.
Hasil uji antagonis menunjukkan bahwa dari  12  isolat  bakteri  asam  laktat  yang
menghasilkan  zona  hambat  terbaik  adalah isolat N 1 10 4 2 dan T 1 10 5 1 (Tabel 4).
Aktivitas  penghambatan  terbesar  pada
N 1 10 4 2 terhadap B. substilis sebesar 14,0 mm, terhadap M. morganii sebesar 10,5 mm, dan terhadap E.  coli sebesar  5,6  mm,  sedangkan pada  T 1 10 5 1 aktivitas  penghambat  terbesar terhadap B. substilis sebesar 12,5 mm, terhadap M. morganii sebesar 10,8 mm, dan terhadap E.  coli sebesar  9,0  mm.  Zona  jernih  sebagai hasil penghambatan isolat bakteri asam laktat terhadap bakteri uji disajikan pada Gambar 1.
Isolat N 1 10 4 2 dan T 1 10 5 1 dinyatakan sebagai isolat  terbaik  karena  mempunyai  aktivitas zona  hambat  terbesar  terhadap  ketiga  bakteri uji  dibandingkan  isolat  lainnya.  Anteneh et  al.
(2011)  menyatakan  bahwa  bakteri  asam  laktat dinyatakan  memiliki  kemampuan  unggul apabila  menghasilkan  zona  hambat  terbesar, semakin  besar  zona  hambat  yang  terbentuk maka semakin unggul pula bakteri asam laktat itu  dalam  menghambat  aktivitas  hidup  bakteri uji. Kemampuan penghambatan dimungkinkan karena  adanya  substansi  antimikroba  yaitu asam  laktat,  hidrogen  peroksida,  CO 2 maupun bakteriosin.  Sebagian  besar  penghambatan bakteri asam laktat terhadap bakteri uji/antagonis lebih  disebabkan  oleh  adanya  bakteriosin, sehingga  dalam  penelitian  ini,  bakteri
Tabel  3  Uji  pendukung  isolat  bakteri  asam laktat (BAL) terpilih Isolat Bakteri Gram Bentuk Katalase N 2 10 3 N 1 10 4 1 N 1 10 4 2 N 2 10 5 T 1 10 3 1 T 1 10 3 2 T 1 10 3 3 T 2 10 4 1 T 2 10 4 2 T 1 10 5 1 T 1 10 5 2 T 1 10 5 3 + + + + + + + + + +
+ +
Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang - - - - - - - - - - - - Tabel 4 Diameter zona hambat bakteri asam laktat terhadap bakteri uji Isolat BAL Diameter Zona Hambat (mm) B. subtilis  M. morganii E. coli N 2 10 3 N 1 10 4 1 N 1 10 4
2 N 2 10 5 T 1 10 3 1 T 1 10 3 2 T 1 10 3 3 T 2 10 4 1 T 2 10 4 2 T 1 10 5 1 T 1 10 5 2 T 1 10 5 3 13,5 - 14,0 - 13,0 - 21,0 - 15,5 12,5 14,0 17,5 10,5 - 10,5 13,0 - 8,5 - - 8,5 10,8 8,5 - 5,0 - 5,6 6,3 - - - - 1,8 9,0 1,4 -
Ket: Isolat yang dicetak tebal adalah isolat terbaik
antagonis B. subtilis, M. morganii, dan E. coli mengalami  penghambatan  pertumbuhan. Isolat  yang  tidak  membentuk  zona  hambat dimungkinkan  karena  komponen  bioaktif yang  terbentuk  tidak  mampu  melawan/ menghambat aktivitas bakteri uji (Sharaf dan Al Harbi 2011).
Perbedaan  aktivitas  penghambatan bakteri asam laktat dimungkinkan berasal dari beragamnya bakteriosin yang dihasilkan oleh spesies bakteri asam laktat, seperti bakteriosin yang telah dikarakterisasi pada L. brevis yaitu brevicin  yang  mampu  menghambat  dengan baik S. aureus, bakteriosin pada L. plantarum yaitu plantaricin juga mampu menghambat S. aureus (Chen dan Hoover 2003). Nisin mampu menghambat Enterococcus, Listeria,  Staphylococcus,  Bacillus,  Clostridium dan  bakteri  asam  laktat  lain  (Meghrous et al .  1999).  Pediocin  PA-1  dapat  menghambat Carnobacterium, Enterococcus, Staphylococcus, Bacillus  cereus,  Clostridium dan  bakteri  asam laktat  lain  (Eijsink et  al. 1998).  Sakacin  A menghambat Carnobacterium,  Enterococcus, Leuconostoc, Bacillus cereus serta BAL lainnya
(Guyonnet et  al. 2000).  Bakteriosin  pada Pediococcus  acidilactici F-11  yaitu  pediosin mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri pembentuk histamin M. morganii (Rinto 2010).

## KESIMPULAN
Sebanyak  12  isolat  bakteri  asam  laktat berhasil  diperoleh  dari  sampel  saluran pencernaan  ikan  nila  dan  tongkol.  Dua isolat terbaik dari 12 isolat bakteri asam laktat mampu  menekan  pertumbuhan B.  subtilis, M.  morganii, dan E.  coli melalui  uji  antagonis
dengan metode sumur agar, yaitu isolat N 1 10 4 2
dan T 1 10 5 1 .

## DAFTAR PUSTAKA
Anteneh,  T,  Tetemke  M,  Mogessie  A.  2011. Antagonism  of  lactic  acid  bacteria against  foodborne  pathogens  during fermentation  and  storage  of  borde  and shamita, traditional Ethiopian fermented beverages. International  Food  Research
Journal 18(3): 1189-1194. Atlas  RM.  2001. Principle  of  Microbiology. Second  Edition.  Iowa:  Wm.C.  Brown Publisher. Chen H, Hoover DG. 2003. Bacteriocins and their  food  applications. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety 2: 82-100.
Eijsink  VGH,  Skeie  M,  Middelhoven  PH,
Brurberg MB, Nes IF. 1998. Comparative studies  of  class  IIa  bacteriocins  of  lactic acid bacteria. Applied and  Environmental
Microbiology 64: 3275-3281. Feliatra, Efendi I, Suryadi E.  2004.  Isolasi dan identifikasi  bakteri  probiotik  dari  ikan kerapu  macan  ( Epinephelus  fuscogattus ) dalam upaya efisiensi pakan ikan. Jurnal Natur Indonesia 6(2): 75-80. Guyonnet  D,  Fremaux  C,  Cenatiempo  Y, Berjeaud  JM.  2000.  Method  for  rapid purification of class IIa bacteriocins and comparison  of  their  activities. Applied and    Environmental  Microbiology 66: 1744-1748. Kandler O, Weiss N. 1986. Genus Lactobacillus beijerinck 1901.  In Bergey’s  Manual  of
Systematic Bacteriology 2: 1209-1234.
14,0 mm, terhadap M. morganii sebesar 10,5  mm, dan  terhadap E. coli sebesar
E.  coli sebesar  9,0  mm.  Zona  jernih  sebagai  hasil  penghambatan  isolat  bakteri asam laktat terhadap bakteri uji disajikan pada Gambar 1.
(a)
(b)
Gambar 1. Zona hambat (zona jernih) pada isolat (a) N 1 10 4 2
dan (b) T 1 10 5 1
Isolat  N 1 10 4 2 dan  T 1 10 5 1 dinyatakan  sebagai  isolat  terbaik  karena mempunyai  aktivitas  zona  hambat  terbesar  terhadap  ketiga  bakteri  uji dibandingkan  isolat  lainnya.  Anteneh et  al. (2011)  menyatakan  bahwa  bakteri asam laktat dinyatakan memiliki kemampuan unggul apabila menghasilkan zona hambat  terbesar,  semakin  besar  zona  hambat  yang  terbentuk  maka  semakin unggul pula bakteri asam laktat itu dalam menghambat aktivitas hidup bakteri uji.
Kemampuan  penghambatan  dimungkinkan  karena  adanya  substansi  antimikroba yaitu asam  laktat,  hidrogen peroksida,  CO 2 maupun  bakteriosin. Sebagian  besar penghambatan bakteri asam laktat terhadap bakteri uji/antagonis lebih disebabkan oleh  adanya  bakteriosin,  sehingga  dalam  penelitian  ini,  bakteri  antagonis B.
subtilis, M. morganii, dan E. coli mengalami penghambatan pertumbuhan. Isolat
yang  tidak  membentuk  zona  hambat  dimungkinkan  karena  komponen  bioaktif
Gambar 1 Zona hambat (zona jernih) pada isolat (a) N 1 10 4 2 dan (b) T 1 10 5 1 .
Aktivitas penghambatan isolat bakteri asam laktat , Rinto et al.
Kivanc M, Yilmaz M, Cakir E. 2011. Isolation and  identification  of  lactic  acid  bacteria from  boza,  and  their  microbial  activity against  several  reporter  strains. Turkish Journal of  Biology 35: 313-324.
Larsen AG, Vogensen FK, Josephsen J. 1993.
Antimicrobial  activity  of  lactic  acid bacteria  isolated  from  sour  doughs: purification  and  characterization  of bavaricin  A,  a  bacteriocin  produced  by Lactobacillus bavaricus MI401. Journal of Applied  Bacteriology 75: 113-22. Meghrous J, Lacroix C, Simard RE. 1999. The effects  on  vegetative  cells  and  spores  of 3  bacteriocins  from  lactic  acid  bacteria.
Food Microbiology 16:  105-114. Mohankumar  A,  Murugalatha  N.  2011. Characterization and antibacterial activity of  bacteriocin  producing Lactobacillus isolated  from  raw  cattle  milk  sample.
International Journal of Biology 3(3): 128- 142.
Rinto,  Rahayu  ES,  Indrati  R.  2006.  Aplikasi Pediococcus  acidilactici F-11  dalam menghambat  pembentukan  histamin selama  fermentasi  peda.  Makalah disampaikan pada Seminar Nasional dan Diseminasi  Teknologi  Pengembangan
Hasil Perikanan di Universitas Lampung tanggal 4-5 Desember 2006.
Rinto. 2010. Perubahan kandungan mikroflora akibat  penambahan  starter Pediococcus acidilactici F-11  dan  garam  selama fermentasi peda. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 13(1): 35-47.
Saranya  S,  Hemashenpagam  N.  2011.
Antagonistic  activity  and  antibiotic sensitivity  of  lactic  acid  bacteria  from fermented  dairy  products. Advances  in Applied Science Research 2(4): 528-534.
Schillinger U, Lucke FK. 1989.  Antibacterial activity  of Lactobacillus  sake isolated from  meat. Applied  and  Environmental Microbiology 55: 1901-1906.
Sharaf  EF,  Al  Harbi  RM.  2011.  Isolation, identification  and  antimicrobial  activity of  some  isolates  of  lactic  acid  bacteria. Researches Journal of Microbiology 6(12):
826-838.
Yuko  T,  Hajime  T,  Takashi  K,  Bon  K.  2012. Analysis  of  the  growth  of  histamine- producing  bacteria  and  histamine accumulation  in  fish  during  storage  at low  temperatures. Food  Control 26(1):
174-177.