e-ISSN : 2615-109X
Degenerasi Dan Nekrosis Pada Hati Mencit Diabetes yang Diberi Ekstrak Kulit Buah Rambai ( Baccaurea motleyana Muell. Arg)
Degeneration and Necrosis in the Liver of Diabetes Mice which is Extracted from Rambai Fruit Skin (Baccaurea motleyana Muell. Arg )
Ria Ceriana* 1 , Nova Zarmi Putri 2
1,2 Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Ubudiyah Indonesia, Jalan Alue Naga, Banda Aceh, Indonesia
*Korespondensi Penulis: cherry4n4@yahoo.com

## Abstrak
Diabetes melitus (DM) merupakan penyakit gangguan metabolik menahun akibat penurunan fungsi  pankreas.  Salah  satu  bagian  tumbuhan  yang  diketahui  unutk  menurunkan  kadar  gula darah  yaitu  kulit  buah  rambai.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  keamanan  dalam penggunaan tumbuhan sebagai obat herbal agar tidak menimbulkan efek berbahaya yang tidak diinginkan,  maka  perlu  dilakukan  uji  toksisitas  pada  hati  mencit  dengan  mengamati degenerasi  dan  nekrosis.  Rancangan  penelitian  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  ialah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan    6  perlakuan  dan  4  ulangan.  Perlakuan  terdiri kontrol negatif (akuades), kontrol positif (Glibenklamid), dan ekstrak etanol kulit buah rambai dengan  dosis  bertingkat  200  mg/kgBB,  400  mg/kgBB,  800  mg/kgBB,  1600  mg/kgBB  yang diberikan  secara  oral.  Data  dianalisis  menggunakan  analisis  varians  (ANAVA)  dan  apabila perlakuan  berpengaruh  maka  diuji  lanjut  menggunakan  uji  jarak  berganda  Duncan  dengan taraf  kepercayaan  5%.  Hasil  pengamatan  menunjukkan  pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah rambai  berpengaruh  nyata  terhadap  kerusakan  pada  sel-sel  hati mencit  diabetes.   Kerusakan yang disebabkan degenerasi dan nekrosis pada sel hati.  Dosis aman ekstrak etanol kulit buah rambai  ialah  1600  mg/kg  BB  yang  dapat  dijadikan  obat  antidiabetes  dikarenakan  rerata  sel degenerasi dan nekrosis sel hati lebih rendah dibandingkan kontrol positif  (glibenklamid).
Kata Kunci:  Diabetes melitus, Baccaurea motleyana , hati, degenerasi, nekrosis

## Abstract
Diabetes mellitus (DM) is a chronic metabolic disorder due to decreased pancreatic function. One  part  of  the  plant  that  is  known  to  reduce  blood  sugar  levels  was  rambai  peel.  The purpose of this study was to determine the safety in using plants as herbal medicines so as not to  cause  undesirable  harmful  effects,  it  is  necessary  to  do  a  toxicity  test  on  mice  liver  by observing  degeneration  and  necrosis.  The  study  design  used  in  this  study  was  a  completely randomized  design  (CRD)  with  6  treatments  and  4  replications.  Treatment  consisted  of negative control (aquadest), positive control (Glibenclamide), and ethanol extract of rambai peel  with  a  multilevel  dose  of  200  mg  /  kgBw,  400  mg  /  kgBw,  800  mg  /  kgBw,  1600  mg  / kgBw  given  orally.  Data  were  analyzed  using  analysis  of  variance  (ANOVA)  and  if  the treatment  had  an  effect  it  was  tested  further  using  Duncan's  multiple  distance  test  with  a
e-ISSN : 2615-109X
confidence  level  of  5%.  The  results  showed  that  the  administration  of  peel  rambai  ethanol extract  significantly  affected  damage  to  the  liver  cells  of  diabetic  mice.  Damage  caused  by degeneration and necrosis in liver cells. The safe dose of ethanol extract of rambai fruit skin is 1600 mg / kg body weight which can be used as an antidiabetic drug because the mean cell degeneration and necrosis of liver cells was lower than positive control (glibenclamide).
Keywords: Diabetes mellitus, Baccaurea motleyana, liver, degeneration, necrosis

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan  penyakit  gangguan  metabolik  menahun  akibat penurunan fungsi pancreas. Gangguan tersebut menyebabkan terhambatnya produksi hormon insulin  atau  tubuh  tidak  dapat  menggunakan  hormon  insulin  yang  diproduksi  secara  efektif. Hal  tersebut menyebabkan  tubuh mengalami  hiperglikemia  atau  kelebihan  kadar  gula  dalam plasma  darah  (Depkes,  2014).  Penderita  DM  di  Indonesia  dan  dunia  semakin  meningkat seiring dengan perubahan gaya hidup manusia. Peningkatan jumlah penderita diabetes melitus setiap  tahunnya  serta  biaya  pengobatan  yang  mahal  terutama  apabila  disertai  dengan komplikasi klinis mendorong masyarakat untuk mencoba obat tradisional yang dapat dipakai sebagai  alternatif  pengobatan.  Obat  tradisional  telah  menjadi  warisan  turun  temurun  bagi masyarakat  Indonesia.  Oleh  sebab  itu  makin  banyak  dikembangkan  terapi  dengan menggunakan tanaman obat tradisional untuk mengobati diabetes melitus  (Ayu, dkk., 2014). Kulit buah rambai ( Baccaurea motleyana) merupakan salah satu bagian tumbuhan yang dapat  digunakan  untuk  menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada  mencit  yang  telah  dinduksi aloksan  (Ismawati,  2018).  Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji  toksisitas  pada  hati  mencit diabetes yang diberi ekstrak kulit buah rambai. Adapun tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui  keamanan  dalam  penggunaan  tumbuhan  sebagai  obat  herbal  agar  tidak menimbulkan  efek  berbahaya  bagi  tubuh.    Uji  toksisitas  pada  hati  mencit  perlu  dilakukan terutama  secara  mikroskopis  untuk  melihat  degenerasi  dan  nekrosis  sel  hati.  Hal  tersebut karena  hati  merupakan  organ  tubuh  sasaran  zat  toksik  karena  memegang  peranan  penting dalam proses metabolisme tubuh.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan    6  perlakuan  dan  4  ulangan.  Perlakuan  terdiri  kontrol  negatif
e-ISSN : 2615-109X
(akuades), kontrol positif (Glibenklamid), dan ekstrak etanol kulit buah rambai dengan dosis bertingkat  200  mg/kgBB,  400  mg/kgBB,  800  mg/kgBB,  1600  mg/kgBB  yang  diberikan secara oral.
Penelitian menggunakan 24 ekor mencit jantan ( Mus musculus ) galur Balb C berumur 2 bulan.  Jumlah  mencit  yang  digunakan  diperoleh  berdasarkan  rumus  Federer  (2010).  Bahan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  ialah  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  ( Baccaurea motleyana ),  ,  akuades,  air,  kertas  saring,  aloksan,  Glibenklamid  (PT.  Indofarma  (Persero) Tbk),  tissue,  kapas,  pakan All  Feed-4 (PT.  Cental  Proteina  Prima  Tbk),  sekam  kayu,  etanol 96%,  NaCl  Fisiologis,  larutanBouin,  alkohol  absolut,  xilol,  paraffin,  hematoksilin,  eosin, entelan, kertas label, masker, dan sarung tangan.
Cara  kerja  penelitian  ini  dimulai  dengan  aklimatisasi  24  menict  jantan  selama  7  hari. mencit  menjadi  diabetes  setelah  diinduksi  aloksan.  Selanjutnya  mencit  diberikan  perlakuan berupa  :  1)    kelompok  kontrol  negatif  yang  hanya  diberikan  akuades.  2)  kelompok  kontrol positif  mencit  diabetes  diberikan  glibenklamid  dengan  dosis  0,0195  mg/  30  kgBB).  3) Pemberian ekstrak etanol kulit buah rambai 200 mg/kgBB (P 1 ), pemberian ekstrak etanol kulit buah  rambai  400  mg/kgBB  (P 2 ),  pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  800  mg/kgBB (P 3 )  dan  mendapat  pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  1600  mg/kgBB  (P 4 ). Selanjutnya pada hari ke 15, mencit dibedah dan diambil organ hatinya. Kemudian hati dibuat preparat  dengan  pewarnaan  Hematoksilin  dan  Eosin.  Pengamatan  dilakukan  menggunakan mikroskop cahaya dengan pembesaran 10x40.
Pengolahan  dan  analisis  data  yaitu  data  proporsi  jumlah  sel  hati  yang  mengalami degenerasi  dan  nekrosis  terlebih  dahulu  dilakukan  uji  normalitas  dan  homogenitas  untuk membuktikan  data  dari  sampel  yang  dimiliki  berasal  dari  populasi  berdistribusi  normal  dan variasi  yang  sama.  Selanjutnya  data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  menggunakan  uji Analisis  Varian  (ANAVA)  dan  apabila  terdapat  pengaruh  yang  nyata  maka,  dilanjutkan  uji jarak berganda Duncan pada taraf 5% (Gomez dan Gomez, 1995). Analisis data menggunakan SPSS Statistik 20.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengamatan dalam penelitian ini yaitu data degenerasi dan nekrosis sel hati mencit diabetes.  Data  diperoleh  dari  pengamatan  mikroskopis  menggunakan  mikroskop  cahaya
e-ISSN : 2615-109X
binokuler.  Data  yang  diperoleh  diuji  normalitas  dan  homogenitasnya.  Hasil  uji  normalitas menunjukkan bahwa data terdistribusi normal, hal tersebut dapat dilihat dari nilai sig > 0,05.
Selanjutnya dilakukan uji homogenitas, hasil uji ini menunjukkan nilai sig > 0,05 yang memperlihatkan data berasal dari populasi yang memiliki variasi yang sama. Data selanjutnya dianalisis menggunakan uji analisis varian (ANAVA).
Tabel 1. Rataan Proporsi Jumlah Degenerasi dan Nekrosis Sel Hati Mencit Diabetes Setelah Pemberian Ekstrak Etanol Kulit Buah Rambai ( Baccaurea motleyana )
Perlakuan Rerata Jumlah Degenerasi Sel Hati ( x̄ ±SD) Rerata Jumlah Nekrosis Sel hati ( x̄ ±SD) K-  (Akuades) 0,35 a ± 0,09 0,34 a ± 0,21 K+ (Glibenklamid) 1,33 e ± 0,16 0,21 e ± 0,04 BM 200 mg/kgBB 0,50 b ± 0,09 0,25 b ± 0,09 BM 400 mg/kgBB 0,65 c ± 0,57 0,12 c ± 0,05 BM 800 mg/kgBB 0,73 cd ± 0,06 0,14 cd ± 0,08 BM 1600 mg/kgBB 0,74 d ± 0,33 0,10 d ± 0,18
Ket: a Angka-  angka  pada  kolom  yang  sama  yang  diikuti  superskrip  huruf  berbeda menunjukkan  perbedaan  nyata  pada  taraf  uji  5%  (uji  Duncan).  K-  (mencit  diabetes  + akuades;  K+  (mencit  diabetes  +  Glibenklamid);  BM  200  mg/kgBB  (mencit  diabetes  + 200  mg/kgBB);    BM  400  mg/kgBB  (mencit  diabetes  +  400  mg/kgBB);    BM  800 mg/kgBB  (mencit  diabetes  +  800  mg/kgBB);  BM  1600  mg/kgBB  (mencit  diabetes  + 1600 mg/kgBB).
Berdasarkan  hasil  ANAVA  menunjukkan  bahwa  adanya  pengaruh  perlakuan  kontrol negatif  (akuades),  kontrol  positif  (glibenklamid)  dan  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai ( Baccaurea  motleyana )  terhadap  perubahan  gambaran  mikroskopis  sel  hati  mencit  diabetes. Pengaruh perlakuan berupa degenerasi dan nekrosis. Hal ini ditunjukkan dari nilai sig < 0,05. Selanjutnya data diuji Tabel 1 menunjukkan bahwa pemberian berbagai dosis ekstrak etanol kulit  buah  rambai  menyebabkan  terjadinya  peningkatan  jumlah  sel  hati  yang  mengalami degenerasi  dan  nekrosis  secara  nyata.  Hasil  analisis  terhadap  rerata  jumlah  degenerasi  dan nekrosis sel hati menunjukkan terdapat perbedaan nyata (Sig<0,05) antar perlakuan. Semakin tinggi dosis ekstrak etanol kulit buah rambai yang diberikan maka akan meningkatkan jumlah sel yang mengalami degenerasi dan nekrosis. Kontrol negatif atau perlakuan mencit diabetes yang hanya diberi akuades menunjukkan rerata jumlah sel hati degenerasi dan nekrosis lanjut dengan uji lanjut Duncan yang dapat dilihat pada Tabel 1.
Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
Tabel 1 menunjukkan bahwa pemberian berbagai dosis ekstrak etanol kulit buah rambai menyebabkan terjadinya peningkatan jumlah sel hati yang mengalami degenerasi dan nekrosis secara  nyata.  Hasil  analisis  terhadap  rerata  jumlah  degenerasi  dan  nekrosis  sel  hati menunjukkan  terdapat  perbedaan  nyata  (Sig<0,05)  antar  perlakuan.  Semakin  tinggi  dosis ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  yang  diberikan  maka  akan  meningkatkan  jumlah  sel  yang mengalami  degenerasi  dan  nekrosis.  Kontrol  negatif  atau  perlakuan  mencit  diabetes  yang hanya diberi akuades menunjukkan rerata jumlah sel hati degenerasi dan nekrosis yang paling rendah  daripada  perlakuan  lainnya.Perlakuan  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  dosis  1600 mg/kgBB  dapat  menyebabkan  degenerasi  dan  nekrosis  pada  sel  hati.  Berikut  gambaran pengamatan sel hati yang degenerasi dan nekrosis di bawah mikroskop.
Gambar  1. Gambaran mikroskopis jaringan hati (A) Kontrol negatif, (B)  Kontrol positif, (C) BM 200 mg/kgBB, (D) BM 400 mg/kgBB, (E) BM 800 mg/kg BB, (F) BM 1600 mg/kgBB (VS: Vena Sentralis, H: Hepatosit, S: Sinusoid, D: Degenerasi, N: Nekrosis).
Pewarnaan HE; Bar: 200 µm.
Berdasarkan struktur mikroskopis mencit kontrol negatif dimana mencit diabetes hanya diberi perlakuan akuades menunjukkan sedikit sel hati yang mengalami kerusakan. Sedangkan pada  mencit  perlakuan  kontrol  positif  yang  diberi  perlakuan  Glibenklamid  banyak  sel  hati
e-ISSN : 2615-109X
yang  mengalami  degenerasi  maupun  nekrosis.  Sel  hati  yang  mengalami  degenerasi  dan nekrosis  pada  perlakuan  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  juga  mengalami  peningkatan dibandingkan kontrol negatif tetapi lebih sedikit dibandingkan kontrol positif.
Rata-rata  jumlah  sel  degenerasi  dan  nekrosis  pada  dosis  1600  mg/kgBB  paling  tinggi dibandingkan perlakuan ekstrak etanol kulit buah rambai dosis 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB dan  800  mg/kgBB.  Hal  ini  dikarenakan  semakin  tinggi  dosis  yang  diberikan  maka  tingkat toksik dalam ekstrak tersebut semakin tinggi sehingga menyebabkan lebih banyak kerusakan sel.  Namun,  perlakuan  kontrol  positif  yang  diberi  obat  Glibenklamid  dapat  menyebabkan degenerasi dan nekrosis pada sel hati lebih tinggi dibandingkan perlakuan ekstrak etanol kulit buah  rambai.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  penggunaan  ekstrak  tumbuhan  lebih  aman dibandingkan obat sintesis.
Kerusakan  yang  terjadi  pada  sel  dan  jaringan  hati  diduga  akibat  senyawa  metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol kulit buah rambai. Ekstrak kulit buah rambai mengandung saponin, fenolik, dan falvonoid. Berdasarkan laporan Sung et al ., (2017) saponin yang  terkandung  di  dalam Asparagus  cochinchinensis juga  terbukti  bersifat  toksik  pada  sel hati.  Senyawa  saponin  dapat  menggangu  permeabilitas  membran  plasma  dan  membran organel  intraseluler    pada  sel  hepatosit.  Selain  itu,  pengamatan  dengan  mikroskop  elektron menunjukkan terganggunya membran luar mitokondria pada sel hepatosit yang diberi saponin (Wassler, et  al .,  1987).  Senyawa  beracun  fenolik  yang  mungkin  terbentuk  ialah  radikal fenoksi  yang  mampu  mengikat  dan  merusak  DNA  atau  proteindi    dalam  sel  (Basha, et  al ., 2010).
Flavonoid  juga  ikut  andil  dalam  mengakibatkan  kerusakan  pada  membran  sel. Flavonoid  menghasilkan  radikal  fenoksil  prooksidan  yang  menyebabkan  toksik  pada mitokondria,  dimana  terjadi  koleps  pada  mitokondria  (Tang  dan  Porter,  1996).  Jadi, pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  pada  mencit  diabetes  menyebabkan  kerusakan pada  organ  hati  tetapi  masih  di  bawah  batas  kontrol  positif  sehingga  masih  aman  untuk dikonsumsi pada dosis 1600 mg/kgBB.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  yang  telah  diuraikan,  maka  kesimpulan  penelitian ini ialah:
e-ISSN : 2615-109X
1. Pemberian  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  ( Baccaurea  motleyana )  berpengaruh  nyata pada struktur mikroskopis organ hati mencit diabetes
2. Perubahan struktur mikroskopis berupa degenerasi, nekrosis,
3. Perlakuan kontrol positif atau perlakuan mencit diabetes yang diberi Glibenklamid ialah perlakuan yang paling berat dalam merusak jaringan hati.
4. Dosis  aman  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat  antidiabetes  ialah  dosis  1600  mg/kgBB karena belum melebihi kerusakan akibat kontrol positif.

## SARAN
Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  uji  toksisitas  sub  kronis  dan  kronis terhadap pemberian ekstrak etanol kulit buah rambai. Selanjutnya perlu dilakukan penelitian mengenai  batas  optimum  dosis  ekstrak  etanol  kulit  buah  rambai  dalam  mempengaruhi struktur  mikroskopis  hati.  Penelitian  lanjut  yang  dapat  dilakukan  yaitu  pengujian  toksisitas pada organ lainnya seperti ginjal, otak, jantung, limpa dan lain-lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Ayu, R. D., Fatimawali dan Gayatri, C. (2014). Uji Efektivitas Penurunan Kadar Gula Darah Ekstrak  Etanol  Daun  Sendok  ( Plantago  major L.)  Pada  Tikus  Putih  Jantan  Galur Wistar ( Rattus novergicus ) Yang Diinduksi Sukrosa. Jurnal Ilmiah Farmasi. 3(2),134- 140.
Basha,  K.M.,  Rajendran,  A.,  dan  Thangavelu,  V.  (2010).  Recent  advances  in  the biodegradation of phenol: A review Asian Journal exp boil . Sci 1(2).
Departemen  Kesehatan.  (2014). Situasi  dan  Analisis  Diabetes .  Jakarta:  Pusat  Data  dan Analisis Kementerian Kesehatan RI. Hal 1-2.
Ismawati.  (2018).  Aktivitas  Antidiabetes  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Rambai  ( Baccaurea motleyana ) Pada Mencit. Skripsi . Banda Aceh: Universitas Ubudiyah Indonesia.
Federer,  W.  T.  (  2010). Experimental  Design.  Theory  and  Application .  New  Delhi,  India: Oxford and IBH Publishing.
Gomez, K.A. dan Gomez, A.A. (1995). Prosedur Statistik untuk Penelitian Pertanian Edisi II . Jakarta: UI Press.
Sung,  J.E.,  Choi,  J.Y.,  Kim,  J.E.,  Lee,  H.A.,  Yun,  W.B.,  Park,  J.J.,  Kim,  H.R.,  Song,  B.R., Kim, D.S., Lee, C.Y., Lee, H.S.,  Lim, Y., dan Hwang, D.Y. (2017). Hepatoxicity and nephotoxity  of  saponin-enrinched  extract  of Asparagus  cochinchinensis in  ICR  Mice. Lab Animal . Res, 33(2), 57-67.
e-ISSN : 2615-109X
Tang,  D.G.  and  Porter,  A.T.  (1996).  Apoptosis:  a  current  molecular  analysis. Pathol  Oncol Res , 2, 117-131.
Wassler, M., Jonasson, I., Persson, R., and  Fries, E. (1987). Differential Permeabilization of Membranes by Saponin Treatment of Isolated Rat Hepatocyte. Biochem Journal , 247, 407-15.