Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)

## Antioxidant Activity of Tahongai Leaves ( Klenhovia hospital L.)

## Infusa Using DPPH Method

## Uji Aktivitas Antioksidan Infusa Daun Tahongai
( Klenhovia hospital L.) Menggunakan Metode DPPH
Nurillahi Febria Leswana 1, Sister Sianturi 2
1,2 Program Studi S-1 Farmasi STIKES Dirgahayu Samarinda, Indonesia Email: nfleswana@gmail.com

## Abstract
Tahongai plant (Kleinhovia hospita Linn.) is a plant that grows naturally on the edge of Indonesian rivers, especially in East Kalimantan. Tahongai plants are used as medicine by the Dayak people in Kalimantan, namely that empirically the use of tahongai plants is effective as a medicine that can treat various diseases such as jaundice, hypertension, diabetes, and cholesterol by drinking the boiled water. The active substances contained in tahongai leaves are saponins, flavonoids, and alkaloids are expected to have antioxidant activity. The purpose of this study was to measure the antioxidant activity of tahongai leaf infusa. The extraction method used in this study was infusa while the radical specimen used was DPPH with Vitamin C as the comparison. Phytochemical screening was also carried out on tahongai leaf infusa extract positively containing flavonoids, tannins, saponins and phenols. Based on the results of the DPPH radical scavenging analysis of Tahongai leaf infusion, the IC 50 value was 139.51 mg/L with the medium antioxidant activity. Keywords:
Infusa, Kleinhovia hospita Linn, Antioxidant, Tahongai leaves, DPPH

## Abstrak
Tanaman Tahongai ( Kleinhovia hospita Linn.) merupakan suatu tanaman yang tumbuh alami di pinggiran aliran sungai Indonesia, khususnya di Kalimantan Timur. Tanaman tahongai dijadikan obat oleh suku Dayak di Kalimantan yaitu secara empiris penggunaan tanaman tahongai berkhasiat sebagai obat yang mampu  mengobati  berbagai  penyakit  seperti  penyakit  kuning,  hipertensi, diabetes, dan kolesterol dengan cara meminum air rebusannya. Zat aktif yang terkandung  dalam  daun  tahongai  seperti  saponin,  flavonoid,  dan  alkaloid diharapkan  memiliki  aktivitas  antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah mengetahui aktivitas antioksidan dari infusa daun tahongai. Metode ekstraksi yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  infusa  sedangkan  spesi  radikal yang  digunakan  adalah  DPPH  dengan  pembandingan  Vitamin  C.  Skrining fitokimia  juga  dilakukan  pada  ekstrak  infusa  daun  tahongai  positif mengandung  flavonoid,  tannin,  saponin  dan  fenol.  Berdasarkan  hasil  uji peredaman  radikal  DPPH  dari  infusa  daun  Tahongai  menunjukkan  nilai  IC 50 sebesar 139,51 mg/L dengan aktivitas antioksidan sedang. Kata Kunci:
Infusa, Kleinhovia hospita Linn, Antioksidan, Daun Tahongai, DPPH

## PENDAHULUAN
Kalimantan  Timur  memiliki  sumber  daya  alam keanekaragam hayati yang dapat dimanfaatkan dalam berbagai produk pangan
dan  non  pangan.  Salah  satu  diantara keanekaragaman  hayati  hasil  hutan  non  kayu adalah  daun  tanaman  tahongai  ( Kleinhovia hospita L)  [1].  Tanaman  tahongai  ( Kleinhovia

## Article Info
Article history Received date: 2023-10-23 Revised date: 2024-05-20 Accepted date: 2024-07-09
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
hospita Linn.) tumbuh alami di pinggiran aliran sungai  Indonesia,  khususnya  di  Kalimantan Timur. Sejak lama, tanaman tahongai dijadikan obat  oleh  suku  Dayak  di  Kalimantan.  Suku Dayak  percaya  bahwa  secara  empiris penggunaan  tanaman  tahongai  berkhasiat sebagai  obat  yang  mampu  mengobati berbagai  penyakit  seperti  penyakit  kuning, hipertensi,  diabetes,  dan  kolesterol  dengan cara  meminum  air  rebusannya  [2].  Metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  daun tahongai  yaitu  saponin,  flavonoid,  dan alkaloid.  Kandungan  flavonoid  dan  saponin tanaman  tahongai  diharapkan  memiliki aktivitas  antioksidan.  Antioksidan  alami merupakan senyawa antioksidan yang terdapat  secara  alami  dalam  tubuh  sebagai mekanisme  pertahanan  tubuh  normal  maupun berasal  dari  asupan  luar  tubuh.  Salah  satu sumber senyawa antioksidan adalah tanaman dengan  kandungan  senyawa  polifenol  yang tinggi  yang  dapat  menangkal  radikal  bebas [3].
Penyakit  degeneratif  diantaranya  seperti stroke, jantung koroner, kanker, hipertensi, dan penuaan dini yang disebabkan karena adanya radikal  bebas  [4].  Radikal  bebas  sering  kita jumpai,  baik  di  luar  tubuh  maupun  di  dalam tubuh. Sumber radikal bebas eksogen (dari luar tubuh) dapat berasal dari polusi udara, radiasi UV,  sinar-X,  asap  rokok  dan  makanan  yang mengandung pestisida. Radikal bebas dibutuhkan  tubuh  dalam  jumlah  normal  untuk kesehatan,  sementara  dalam  jumlah  berlebih akan  menyebabkan  stress  oksidatif.  Keadaan tersebut  dapat  menyebabkan  kerusakan oksidatif  mulai  dari  sel,  jaringan,  hingga  ke organ  tubuh  yang  mempercepat  terjadinya proses  penuaan  dan  munculnya  berbagai penyakit yang berbahaya bagi tubuh manusia. Oleh  sebab  itu,  antioksidan  dibutuhkan  untuk dapat  menunda  atau  menghambat  reaksi oksidasi  oleh  radikal  bebas  [5].  Senyawa antioksidan  dapat  menjadi  substansi  untuk menetralisir  radikal  bebas  dan  mencegah kerusakan yang ditimbulkan oleh radikal bebas
dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki  radikal  bebas  dan  menghambat berlangsungnya  reaksi  pembentukan  radikal bebas  [6].  Aktivitas  antioksidan  dapat ditentukan  dengan  beberapa  metode.  Salah satunya  adalah  metode  peredaman  radikal bebas DPPH [7].
Metode  pengukuran  aktivitas  antioksidan menggunakan DPPH merupakan metode yang relatif sederhana. Komponen ekstrak dicampur dengan  larutan  DPPH  lalu  absorbansinya diukur  setelah  waktu  inkubasi  yaitu  30  –  40 menit. Keuntungan metode DPPH ini yaitu dapat direaksikan dengan sampel apapun dan dapat mendeteksi  kadar  antioksidan  walaupun aktivitasnya lemah. Kelemahannya ialah DPPH mudah terdegradasi, sehingga proses pengerjaannya  haruslah  cepat  dan  hati-hati. perubahan absorbansi pada panjang gelombang  maksimum  DPPH  yang  diukur menggunakan spekrtofotometer UV-Vis sehingga  akan  diketahui  aktivitas  antoksidan yang dinyatakan dengan IC 50 [8].
Tanaman  daun  tahongai  secara  tradisional digunakan  masyarakat  dalam  bentuk  air rebusan  untuk  diminum  sebagai  obat  yang dapat  mengobati  berbagai  macam  penyakit, sehingga metode infusa dipilih sebagai metode ekstraksi  daun  tahongai  dalam  penelitian  ini. Metode  infusa  diketahui  dapat  menarik  zat aktif  atau  metabolit  sekunder  pada  tanaman, metode  pengerjaannya  relative  sederhana atau  mudah  dilakukan.  Infusa  merupakan metode  ekstraksi  menggunakan  pemanasan dengan  pelarut  air  dengan  tujuan  untuk mendapatkan  zat  aktif  yang  bersifat  polar dapat tersari dengan optimal. Zat aktif yang dimaksud seperti Polifenol dan flavonoid yang bersifat sebagai antioksidan dimana flavonoid terdapat  dalam  tanaman  kebanyakan  dalam bentuk glikosida flavonoid yang bersifat polar sehingga  penyariannya  dapat  dilakukakan dengan  air  panas  [9].  Berdasarkan  latar belakang tersebut sehingga perlu dilakukan uji aktivitas  antioksidan  terhadap  ekstrak  infusa daun tahongai dengan metode DPPH.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Nurillahi Febria Leswana and nfleswana@gmail.com

## METODE Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  timbangan  analitik, Waterbath ,  oven, alat-alat  gelas,  Spektrofotometer  UV-  Vis. Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  daun  Tahongai  (K.  hospita  L.)  yang didapatkan  dari  perkebunan  lempake  Kota Samarinda, radikal DPPH (sigma), etanol 96% (teknis), etanol 96% (pro analisis), metanol 96% (teknis),  n-heksan  (teknis),  Vitamin  C  (Pro Analisis),  reagen  dragendorf,  reagen  mayer, larutan FeCl 3 , dan aquadest.
Prosedur Kerja Pembuatan Simplisia Daun  tahongai  yang  digunakan  dalam penelitian ini diambil dari perkebunan tanaman Tahongai  di  Kelurahan  Lempake  Samarinda Kalimantan  Timur.  Daun  Tahongai  yang digunakan ialah daun yang tidak terlalu muda. Sampel  yang  telah  dikumpulkan  dilakukan penyortiran  untuk  mendapatkan  bagian  dari tanaman daun tahongai yang tidak cacat fisik, daun  kemudian  dicuci  bersih  dengan  air mengalir  untuk  menghilangkan  kotoran  yang menempel. Setelah itu sampel dipotong-potong untuk memperluas permukaan sampel sehingga lebih cepat kering tanpa pemanasan berlebih. Setelah  itu  daun  tahongai  dijemur  di  bawah sinar  matahari  dan  ditutupi  oleh  kain  hitam sebaagai  bagian  dari  tahap  pengeringan. Sampel  yang  telah  kering  merata  kemudian dihaluskan  dengan  menggunakan grinder . Simplisia  daun  Tahongai  yang  telah  halus disimpan dalam toples kaca dan kedap udara, tidak  lembab,  dan  terhindar  dari  sinar matahari langsung.
Pembuatan Infusa Daun Tahongai Daun  tahongai  segar  yang  akan  digunakan sebanyak  75  gram  dibuat  infusa  dengan replikasi  masing-masing  sebanyak  25  gram ditambah  air  dua  kali  bobot  bahannya  yaitu 50 mL untuk membasahi daun tahongai, detelah itu ditambahkan air sebanyak 100 mL. Proses infusa  dilakukan  selama  15  menit  terhitung pada saat suhu telah mencapai 90°C dengan
sesekali  diaduk  (maksimal  sebanyak  4  kali) Infusa  yang  diperoleh  kemudian  diserkai dengan kain flanel selagi panas dan dilewati dengan  aquadest  yang  sebelumnya  telah dipanaskan hingga volemenya mencapai 100 mL.
Skrining Fitokimia Infusa Daun Tahongai [10]

## Uji Alkaloid
Sebanyak  2  mL  larutan  uji  diuapkan  diatas cawan porselin hingga diperoleh residu. Residu kemudian  dilarutkan  dengan  5  mL  HCl  2  N. Larutan  yang  didapat  di  bagi  ke  dalam  3 tabung  reaksi.  Tabung  pertama  ditambahkan dengan  asam  encer  yang  berfungsi  sebagai blanko.  Tabung  kedua  ditambahkan  3  tetes pereaksi  Dragendroff  dan  tabung  ketiga ditambahkan  3  tetes  pereaksi  Mayer. Terbentuknya  endapan  jingga  pada  tabung kedua  dan  endapan  kuning  pada  tabung ketiga menunjukkan adanya alkaloid

## Uji Saponin
Larutan  uji  sebanyak  10  mL  dalam  tabung reaksi  dikocok  vertikal  selama  10  detik kemudian  dibiarkan  selama  10  detik. Pembentukan busa setinggi 1-10 cm yang stabil selama tidak kurang dari 10 menit menunjukkan adanya  saponin.  Pada  penambahan  1  tetes HCl 2 N, busa tidak hilang.
Uji Tannin dan Polifenol Larutan  uji  sebanyak  2  mL  dibagi  kedalam  2 bagian.  Tabung  A  digunakan  sebagai  blanko dan tabung B direaksikan dengan larutan besi (III)  klorida  10%,  warna  biru  tua  atau  hitam kehijauan  menunjukkan  adanya  tanin  dan polifenol.

## Uji Flavonoid
Pemeriksaan flavonoid Larutan uji sebanyak 1 mL  dibasahkan  dengan  aseton,  ditambahkan sedikit  serbuk  halus  asam  borat  dan  serbuk halus asam oksalat, dipanaskan diatas tangas air dan dihindari pemanasan berlebihan. Sisa yang diperoleh dicampur dengan 10 mL eter P kemudian  diamati  dengan  sinar  UV  366  nm. Larutan berfluoresensi kuning intensif menunjukkan adanya flavonoid.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Nurillahi Febria Leswana and nfleswana@gmail.com

## Uji Steroid dan Triterpenoid
Larutan  Uji  sebanyak  2  mL  diuapkan  dengan cawan porselin. Residu dilarutkan dengan 0,5 mL kloroform, ditambahkan 0,5 mL asam asetat anhidrat  dan  2  mL  asam  sulfat  pekat  melalui dinding  tabung  terbentuk  cincin  kecoklatan atau  violet  pada  perbatasan  larutan menunjukkan  adanya  triterpenoid,  sedangkan bila  muncul  cincin  biru  kehijauan  menunjukkan adanya steroid Pembuatan larutan DPPH 0,05 mM 19,7  mg  DPPH  dilarutkan  dengan  etanol absolut  dalam  labu  ukur  100  mL,  kemudian dicukupkan  volumenya  dengan  etanol  absolut sampai  garis  tanda,  kemudian  dimasukkan dalam botol gelap agar terbebas dari cahaya matahari sehingga diperoleh larutan DPPH 0,5 mM  [11].  Kemudian  Sebanyak  10  mL  larutan DPPH  0,5  mM  diencerkan  menjadi  0,05  mM dengan etanol absolut dalam labu ukur 100 mL dan dicukupkan volumenya sampai garis tanda, kemudian  dimasukkan  kedalam  botol  gelap agar terhindar dari cahaya matahari. Larutan DPPH  0,05  mM  dipipet  sebanyak  4  ml digunakan sebagai blanko, kemudian dimasukkan  kedalam  kuvet  dan  diukur absorbansinya menggunakan Spektrofotometri UV-Vis Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Sebanyak  1      mL      larutan    DPPH    0,5  mM ditambahkan   4   mL etanol dikocok   homogen dan     diukur     serapannya yang diperoleh pada rentang λ 510 -520  nm dengan blanko etanol.
Pembuatan  Larutan  uji  ekstrak  etanol  daun Tahongai (Kleinhovia hospital L.) Sebanyak  25  mg  ekstrak  daun  Tahongai dimasukkan  ke  dalam  buah  labu  ukur  25  mL. Labu  ukur  kemudian  dicukupkan  volumenya dengan  etanol  absolut  sampai  tanda  batas sehingga diperoleh larutan induk ekstrak daun Tahongai 1000 ppm. Selanjutnya larutan induk tersebut  dibuat  seri  konsentrasi  30  ppm,  60 ppm, 90 ppm dan 120 ppm, dan 150 ppm. Pengukuran  serapan  larutan  uji  dengan menggunakan Spektrofotometer UV-VIS.
Masing-masing  seri  konsentrasi  larutan  uji  di pipet  sebanyak  1  mL  kemudian  dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 3 mL larutan DPPH. Masing-masing larutan kemudian divortex  selama  30  detik  dan  didiamkan selama 30 menit, selanjutnya diukur absorbansi larutannya  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  pada  panjang  gelombang  515  nm. Seluruh pengerjaan  dilakukan dalam ruangan yang terhindar dari cahaya matahari. Pembuatan larutan pembanding vitamin C Sebanyak  25  mg  vitamin  C  dimasukkan  ke dalam  buah  labu  ukur  25  mL.  Labu  ukur kemudian  dicukupkan  volumenya  dengan etanol  absolut  sampai  tanda  batas  sehingga diperoleh  larutan  induk  vitamin  C  1000  ppm. Selanjutnya  larutan induk tersebut dibuat seri konsentrasi 30 ppm, 60 ppm, 90 ppm dan 120 ppm, dan 150 ppm.
Pengukuran  serapan  Larutan  Pembanding Vitamin  C  menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis Masing-masing seri konsentrasi larutan pembanding dipipet sebanyak 1 mL kemudian dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  3  mL  larutan  DPPH.  Masing- masing  larutan  kemudian  divortex  selama  30 detik  untuk  menghomogenkan  larutan  dan diinkubasi  selama  30  menit  dalam  keadaan gelap dan pada suhu ruang. Hal ini bertujuan untuk memberikan waktu senyawa antioksidan yang  terkandung  didalam  larutan  untuk bereaksi sempurna dengan DPPH. Selanjutnya diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.  Semua  pengerjaan dilakukan dalam ruangan yang terhindar dari cahaya matahari [11].

## Analisis Data
Uji Aktivitas Antioksidan Penentuan  nilai  persentase  inhibisi  terhadap radikal bebas dari masing- masing konsentrasi larutan  sampel  dapat  dihitung  dengan  rumus [12]:
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
% 𝑎𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑎𝑛𝑡𝑖𝑜𝑘𝑠𝑖𝑑𝑎𝑛
= !"#$%"&'#( *$'+%$,-!"#$%"&'#( #&./0, !"#$%"&'#( *$'+%$,
Setelah  diperoleh  persen  inhibisi  kemudian dilakukan  penentuan  nilai  probit  dengan menggunakan rumus sebagai berikut [11]: Probit = ( Harga probit tertinggi – Harga probit terendah )  x  ( Daya  Antioksidan  (%)  –  Probit terendah ) + Harga Probit terendah Uji antioksidan dalam penelitian ini menggunakan  IC 50 (Inhibition  concentration) untuk  menginterpretasikan  hasil  aktivitas antioksidan  dari  suatu  sampel.  Nilai  IC 50 diperoleh  melalui  beberapa  tahapan  yaitu menghitung nilai log konsentrasi dan nilai probit untuk masing-masing persentase inhibisi (daya antioksidan) radikal bebas DPPH dari ekstrak daun  Tahongai  dan  vitamin  C.  Selanjutnya menghubungkan  nilai  probit  dan  nilai  log konsentrasi  yang  diperoleh  dalam  1  grafik utuh,  dimana  nilai  log  konsentrasi  dijadikan sebagai  sumbu  X  dan  nilai  probit  digunakan sebagai  sumbu  Y.  Melalui  persamaan  regresi yang  diperoleh,  nilai  X  dapat  ditentukan setelah mengganti nilai Y=5 yang merupakan harga probit dari 50%. Selanjutnya nilai IC 50 ditentukan dengan menggunakan rumus IC 50 = A  Log  X  [11].  Kriteria  sebagai  antioksidan adalah sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50,  kuat  untuk  IC 50 bernilai  50-100,  sedang jika IC 50 bernilai 100-150, dan lemah jika IC 50 adalah 151-200.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  metode  infusa.  Simplisia kering yang diperoleh dipanaskan menggunakan  pelarut aquadest selama  15 menit terhitung saat suhu telah mencapai 90°C. Peningkatan  suhu  dapat  meningkatkan  hasil ekstraksi  karena  terjadinya  peningkatan kelarutan  senyawa  metabolit  sekunder  dalam simplisia  tanaman  [13].  Infusa  merupakan metode ekstraksi yang menggunakan aquadest sebagai  pelarut  yaitu  bertujuan  untuk
mendapatkan  zat  aktif    yang  bersifat  polar agar  dapat  tersari  dengan  optimal.  Zat  aktif yang  dimaksud  seperti  flavonoid  dan    fenol yang  memiliki  kontribusi  terhadap  aktivitas antioksidan  suatu  sampel  [14].  Metode  ini dipilih  karena  cara  ini  sangat  sederhana  dan mendekati  pembuatan  obat  tradisional  di masyarakat.  Cairan  penyari  yang  digunakan pada  metode  ini  adalah  air,  dikarenakan pelarut yang digunakan untuk obat tradisional adalah air sehingga diharapkan senyawa aktif yang  tersari  sesuai  dengan  yang  biasa dikonsumsi [15].
Skrining fitokimia dilakukan terhadap simplisia daun tahongai dan infusa daun tahongai. Hasil skrining  fitokimia  ditampilkan  pada  tabel  1, yaitu  pada  infusa  daun  tahongai  positif mengandung  fenol,  flavonoid,  saponin,  tannin, dan positif mengandung alkaloid menggunakan reagen Bouchardat.
Tabel 1 . Skrining Fitokimia simplisia daun tahongai dan infusa daun tahongai Skrining Fitokimia Simplisia Daun Tahongai Infusa Daun Tahongai Alkaloida Mayer+HCl + - Dragendodd + - Bouchardat + + Fenol - + Flavonoid + + Saponin + + Tanin + + Terpenoid  dan steroid + - Sedangkan untuk simplisianya positif mengandung  alkaloida,  flavonoid,  saponin, tanin,  serta  steroid  dan  triterpenoid.  Hal tersebut sejalan dengan penelitian sebelumnya dimana  pada  ekstrak  air  daun  tahongai mengandung  metabolit  sekunder  saponin  dan triterpenoid  [15].  Hasil  infusa  yang  diperoleh pada  penelitian  ini  mengandung  alkaloid, fenol,  flavonoid,  saponin,  tannin  yang merupakan metabolit sekunder yang
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Nurillahi Febria Leswana and nfleswana@gmail.com
70 80 90 100 0 50 100 150 200 In hib is i ( % ) Konsentrasi (ppm)
bertanggung jawab pada aktivitas antioksidan suatu tanaman.
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum dilakukan  untuk  meminimalkan    kesalahan sehingga  didapatkan  akurasi  yang  baik. Penentuan  panjang  gelombang  maksimum DPPH  dilakukan  pada  rentang  panjang gelombang 510-520 nm.
Gambar 1. Panjang gelombang maksimum DPPH 0,5 mM Panjang  gelombang  maksimum  ( λ max) merupakan  panjang  gelombang  dengan intensitas  absorbsi  tertinggi.  Hasil  pengukuran panjang  gelombang  maksimum  DPPH  0,5  mM diperoleh λ max  yaitu  515  nm  dengan absorbansi  0,423  yang  ditunjukkan  pada gambar  1.  Uji  aktivitas  antioksidan  vitamin  C juga  dilakukan  pada  penelitian  ini  sebagai data  pembanding  kemampuan  penangkalan radikal bebas infusa daun tahongai terhadap DPPH. Dibuat seri konsentrasi 30 ppm, 60 ppm, 90 ppm dan 120 ppm, dan 150 ppm vitamin C yang  dicampurkan  dengan  3  mL  DPPH  0,05 mM.  Larutan  tersebut  kemudian  diinkubasi selama 30 menit ditempat yang terlindung dari cahaya.  Tujuan  dilakukan  inkubasi  di  ruang yang  terlindung  dari  cahaya  atau  tempat gelap ini adalah agar tidak ada radikal yang terbentuk  selain  radikal  bebas  DPPH  yang sengaja  ditambahkan.  Sehingga  spesi  yang terukur pada penelitian ini adalah konsentrasi DPPH  yang  tersisa  setelah  bereaksi  dengan sampel  yang  akan  diukur  kemampuan
antioksidannya. Vitamin C digunakan sebagai pembanding  karena  vitamin  C  berfungsi sebagai  antioksidan  sekunder  yang  berasal dari alam.
Gambar 2. Grafik persentase peredaman radikal vitamin C
Besarnya  aktivitas  peredaman  radikal  bebas DPPH  ditandai  dengan  nilai  IC 50 (50% Inhibitory  Concentration ).  Grafik  persentase peredaman  (%  inhibisi)  terhadap  variasi konsentrasi  Vitamin  C  ditampilkan  pada gambar 2. Pada grafik tersebut terlihat bahwa nilai persen inhibisi semakin bertambah seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi.  Hal  ini dikarenakan semakin besar konsentrasi vitamin C maka semakin banyak partikel-partikel yang dapat  mengoksidasi  partikel-partikel  dari radikal bebas DPPH yang ada [11].
Gambar 3. Grafik nilai probit terhadap log konsentrasi infusa daun tahongai
515 nm 0,41 0,42 0,43 510 515 520 Abs or ban si Panjang Gelombang (nm) y = 0,7089x + 4,627 5 5,5 6 6,5 1,2 1,7 2,2 2,7 Ni la i P ro b it Log Konsentrasi (ppm)
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
0 10 20 30 40 50 60 0 50 100 150 200 In hib is i ( % ) Konsentrasi (ppm) y = 1,0393x + 2,7711 4,2 4,4 4,6 4,8 5 5,2 1,2 1,7 2,2 2,7 Ni la i P ro b it Log Konsentrasi (ppm)
DPPH adalah radikal bebas yang stabil pada suhu kamar dan berwarna ungu. Apabila DPPH direaksikan dengan senyawa peredam radikal bebas,  misalnya  flavonoid  maka  intensitas warna ungu akan berkurang dan bila senyawa peredam  radikal  bebas  yang  bereaksi jumlahnya  besar,  maka  DPPH  dapat  berubah warna  menjadi  kuning.  Perubahan  warna  ini dapat diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis. Gambar 3
menjelaskan  hubungan  antara  probit  dengan log  konsentrasi  vitamin  C,  memberikan  nilai persamaan  regresi  linear  yang  membentuk garis lurus yaitu y = 0,7089x + 4. Berdasarkan persamaan  regresi  linear  tersebut,  maka  nilai IC 50 yang  diperoleh  untuk  vitamin  C  adalah sebesar  3,359  ppm  yang  ditunjukkan  pada tabel  2.  Nilai  tersebut  tergolong  antioksidan sangat  kuat  dikarenakan  nilai  IC 50 yang diperoleh  dari  perhitungan  berada  dibawah 50 ppm.
Tabel 2 . Hasil uji aktivitas antioksidan Vitamin C Konsentrasi (ppm) Persen inhibisi (%) Probit IC 50 (ppm) Aktivitas Antioksidan 30 76,784 5,734
3,359 Sangat Kuat
60 79,615 5,828 90 83,012 5,950 120 85,391 6,056 150 89,921 6,276
Vitamin  C  dijadikan  pembanding  pada penelitian ini karena vitamin C merupakan zat antioksidan  alami  yang  sangat  kuat.  Uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  infusa  daun tahongai  dilakukan  dengan  membuat  variasi konsentrasi infusa yang sama dengan vitamin C yaitu  pada  konsentrasi  30  ppm,  60  ppm,  90 ppm  dan  120  ppm,  dan  150  ppm.  Grafik persentase  peredaman  (%  inhibisi)  terhadap variasi  konsentrasi  infusa  daun  tahongai ditampilkan  pada  gambar  4  yaitu  terjadi peningkatan  %  inhibisi  seiring  dengan bertambahnya konsentrasi infusa.
Gambar 4. Grafik persentase peredaman radikal infusa daun tahongai
Hal tersebut menunjukkan infusa daun tahongai mampu meredam radikal bebas dengan baik, sedangkan untuk nilai IC 50 infusa daun tahongai dihitung  dengan  menentukan  persamaan regresi linier antara hubungan nilai probit dan log  konsentrasi  infusa  daun  tahongai  yang ditunjukkan pada gambar 5.
Gambar 5. Grafik nilai probit terhadap log konsentrasi infusa daun tahongai
Persamaan regresi linear yang diperoleh yaitu y  =  1,0393x  +  2,7711.  Berdasarkan persamaan  regresi  linear  tersebut,  maka  nilai IC 50 yang diperoleh untuk infusa daun tahongai adalah  sebesar  139,514  ppm  yang ditunjukkan pada tabel 3.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Nurillahi Febria Leswana and nfleswana@gmail.com
0 20 40 60 80 100 0 50 100 150 200 % In hi bi si Konsentrasi (ppm) Infusa Daun Tahongai Vitamin C
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antioksidan ektrak infusa daun tahongai Konsentrasi (ppm) Persen inhibisi (%) Probit IC 50 (ppm) Aktivitas Antioksidan 30 25,255 4,338 139,514 Sedang 60 34,315 4,596 90 40,091 4,752 120 46,772 4,915 150 53,567 5,091
Nilai  IC 50 tersebut  tergolong  antioksidan sedang dikarenakan nilai IC 50 yang diperoleh dari  perhitungan  berada  pada  rentang  101- 150  ppm.  Nilai  IC 50 tersebut  lebih  kecil dibandingkan  penelitian  sebelumnya  yaitu ekstrak  etanol  daun  tahongai  yang  memiliki nilai  IC 50 sebesar  145,211  ppm  [16].  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  infusa  daun tahongai  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang lebih  baik  dibandingkan  ekstrak  etanolnya. Perbandingan persen inhibisi DPPH dari infusa daun  tahongai  dan  vitamin  C  dapat  dilihat pada gambar 6.
Gambar 6. Perbandingan aktivitas penangkalan radikal bebas vitamin C dan infusa daun tahongai
Sampel  infusa  daun  tahongai  memiliki persentase  inhibisi  yang  lebih  kecil  jika dibandingkan  dengan  pembanding  vitamin  C. Hasil yang diperoleh sesuai dengan penelitian sebelumnya  menggunakan  ekstrak  daun tahongai [16,17], dimana aktivitas antioksidan
vitamin  C  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan ekstrak  etanol  daun  tahongai.  Hal  tersebut dikarenakan  vitamin  C  merupakan  zat antioksidan  alami  yang  sangat  kuat.  Aktivitas antioksidan  infusa  daun  tahongai  yang tergolong  sedang  tersebut  disebabkan  oleh kehadiran kandungan metabolit sekunder yang bertanggung  jawab  terhadap  kemampuan penangkalan  radikal  bebas  ekstrak  tersebut seperti  adanya  alkaloid,  fenol,  flavonoid, saponin, tannin yang dibuktikan melalui skrining fitokimia. Senyawa  fenolik  berperan  sebagai antioksidan  karena  dapat  mengikat  oksigen sehingga  oksigen  tidak  tersedia  untuk  proses oksidasi  [18].  Flavonoid  juga  merupakan senyawa  yang  berperan  sebagai  antioksidan karena  dapat  menangkap  radikal  secara langsung,  mencegah  regenerasi  radikal  dan secara  tidak  langsung  dapat  meningkatkan aktivitas  antioksidan  [19].  Senyawa  saponin memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan  karena saponin mampu meredam superoksida melalui pembentukan intermediet hiperoksida sehingga mampu mencegah kerusakan biomolekuler oleh radikal  bebas  [20].  Metabolit  sekunder tersebut dapat tertarik dari daun tahongai dan dapat teridentifikasi melalui skrining fitokimia,
sehingga mampu memberikan aktivitas antioksidan  sedang  pada  infusanya  dengan nilai IC 50 sebesar 139,51 mg/L menggunakan metode DPPH.

## SIMPULAN
Skrining fitokimia juga dilakukan pada simplisia dan ekstrak infusa daun tahongai dengan hasil positif mengandung Alkaloid, flavonoid, tannin, saponin  pada  simplisia  daun  tahongai,  dan positif  mengandung  flavonoid,  tannin,  saponin dan fenol pada ekstrak infusa daun tahongai. Berdasarkan hasil uji peredaman radikal DPPH dari  infusa  daun  Tahongai  menunjukkan  nilai IC 50 sebesar  139,51  mg/L  dengan  aktivitas antioksidan  sedang  jika  dibandingkan  vitamin C dengan nilai IC 50 sebesar 3,359 ppm yang tergolong aktivitas antioksidan sangat kuat.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Saputra,  H.  S.,  dan  Sampepana,  E.,
Pembuatan  Sirup  Dari  Ekstrak  Tahongai ( Klienhovia  hospital Linn.), Proseding Seminar  Nasional  Hasil  Riset  dan Standardisasi  Industri  VI ,  Hal.  63-70.
Balai  Riset  dan  Standardisasi  Industri Banda Aceh, 2016.
[2]    Khairul. Amry, Formulasi dan Uji Stabilitas
Fisik Sediaan Sirup Kombinasi Ekstrak Air Daun  Tahongai  (Kleinhovia  hospita  L.) dan  Rimpang  Temulawak  (Curcuma xanthorriza Roxb.), Universitas Hasanuddin, Makassar, pp. 6–7, 2014.
[3]    Tristantini, D., Ismawati, A., Pradana, B. T., Jonathan,  J.  G.,  “Pengujian  Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH pada Daun Tanjung (Mimusops elengi L)”, Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia,
2016. [4]    Sie,  J.  O.,  “Daya  Antioksidan  Ekstrak Etanol Kulit Manggis (Gracinia mangostana Linn) Hasil Pengadukan dan Refluk”, Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa ,  2013; vol. 2, no. 1.
[5]    Widiastuti,  N.,  “Pengukuran  Aktivitas Antioksidan  dengan  Metode  CUPRAC, DPPH, & FRAP Serta Kolerasinya dengan Fenol  dan  Flavonoid  pada  Enam
Tanaman”, Skripsi , FMIPA Institut
Pertanian, Bogor, 2010.
[6]     Pamungkas, J. D., Anam, K., & Kusrini, D., “Penentuan Total Kadar Fenol dari Daun Kersen  Segar,  Kering  dan  Rontok (Muntingia calabura L.) serta Uji Aktivitas Antioksidan  dengan  Metode  DPPH”. Jurnal Kimia Sains Dan Aplikasi , 2016; vol. 19, no. 1, pp. 15–20, 2016.
[7]    Megawati,  Aswad,  M.,  Yohanes  D.P., Embu,  A.,  Khadijah.  “Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Murbei (Morrus  alba  L)  Asal  Kupang,  Nusa Tenggara Timur dengan Metode DPPH”.
TECHNO: Jurnal Penelitian , 2019; vol. 08, no. 1.
[8]    Nurmiati, “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol dan Ekatrak Air dari Seledri (Aplum Graviolens  L.)”. Skripsi.  Palu  Universitas Tadulako, 2018.
[9]    Widyani, M., Ulfa, M., & Wirasisya, D. G. “Efek  Penghambatan  Radikal  Bebas Infusa dan Ekstrak Etanol Herba Pegagan (Centella  Asiatica  (L.)  Urb)  Dengan Metode DPPH”, Jurnal Pijar Mipa , 2019; vol. 14, no. 1, pp. 100- 106.
[10]   Ergina,  Nuryanti,  S.  dan  Pursitasari,  D., “Uji  Kualitatif  Senyawa  Metabolit Sekunder  Pada  Daun  Palado  (Agave Angustifolia)  Yang  Diekstraksi  Dengan Pelarut Air Dan Etanol Qualitative Test of Secondary  Metabolites  Compounds  in Palado  Leaves  (  Agave  Angustifolia  ) Extracted  With  Water  and  Ethanol”, Akademika Kimia , 204; vol. 3, no. 8, pp. 165–172.
[11]   Rizkayanti, Diah, A. W. M., & Jura, M. R., “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air dan Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  (Moringa Oleifera LAM)”. Jurnal Akademika Kimia , 2017; vol.  6, no. 2, pp. 125–131.
[12]   Yati,  J.  S.,  Sumpono,  &  Candra,  N.  I., Potensi  Aktivitas  Antioksidan  Metabolit Sekunder dari Bakteri Endofit pada Daun Moringa oleifera L. Jurnal Pendidikan Dan Ilmu Kimia , 2018; vol. 2, No. 1, pp.  82– 87.
[13]   Sulaiman  ISC,  Basri  M,  Masoumi  HRF, Chee WJ, Ashari SE, Ismail M., “Effects of temperature,  time,  and  solvent  ratio  on the extraction of phenolic compounds and the  anti-radical  activity  of  Clinacanthus nutans Lindau leaves by response surface methodology”. Chem  Cent  J ,  2017,  vol. 11, pp. 54, 2017.
[14]   Yuliani,  N.N.  dan  Dienina,  D.P.,  “Uji Aktivitas  Antioksidan  Infusa  Daun  Kelor ( Moringa oleifera Lamk) Dengan Metode DPPH”. Jurnal Info Kesehatan , 2015; vol. 14, No. 2, pp. 1060-1082.
[15]   Kuncoro,  H.,  Mutia  N.  S.,  Hifdzur,  R.  R., Risna  A.,  “Evaluasi  Parameter  Mutu
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 36-45 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Ekstrak  Air  Daun  Tahongai  ( Kleinhovia hospita Linn)”,  Pharmaceutical  Journal  of Indonesia, 2022; vol. 7, no. 2, pp. 115 –
122.
[16]   Edy, U., Supriadi, Anang, W. D, Jura, M. R.,  “Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol Daun Balaroa (Kleinhovia hospita L.) Menggunakan DPPH”, Media Eksakta , 2023; vol. 19, no. 1, pp. 83-89.
[17]   Hasanuddin, S., & Andini, C., “Uji Aktivitas Antiradikal  Bebas  Ekstrak  Daun  Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.)”. Jurnal Mandala Pharmacon  Indonesia ,  2017;  vol.  3,  no. 02, pp. 119–126.
[18]   Saputra,  S.  H.,  Kurniawati,  Nurlina,  S., “Bubuk  Instan  daru  Ekstrak  Tahongai (Kleinhovia  hospital)”. Prosiding  Seminar Nasional  Balai  Riset  dan  Standardisasi Industri Samarinda , 2017, vol. 1, pp. 352- 358.
[19]  Hardiningtyas,  S.  D.,  Purwaningsih,  S., Handharyani,  E., “ Antioxidant  Activity and  Hepatoprotective  Effect  of  Green Mangrove Leaves”, JPHPI, 2017, vol. 17, no. 1, pp. 80-91.
[20]   Hasan, H., Nur A. T., Faramita H., Fika N. R. Putri A. S. I. “Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Kulit Batang Matoa (Pometia  pinnata)  dengan  Metode  1,1- Diphenyl-2 picrylhidrazyl (DPPH)”.
Indonesian  Journal  of  Pharmaceutical
Education , 2022; vol. 2, no. 1, pp. 52-56.