## PERBEDAAN KADAR KALSIUM PADA SERUM LIPEMIK DENGAN DAN TANPA PENAMBAHAN FLOKULAN GAMMA-SIKLODEKSTRIN INKUBASI SUHU 23 °C
Rosenadia Fitri Andafi Niranata 1 , Sistiyono 2 , Budi Setiawan 3
Poltekkes Kemenkes Yogyakrta email: rniranata@gmail.com

## ABSTRAK
Serum lipemik merupakan serum berwarna keruh yang secara prinsip disebabkan oleh partikel besar lipoprotein seperti cylomicrons , VLDL (Verry Low Density Lipoprotein) maupun trigliserida. Serum lipemik  umumnya  dapat  dikenali  ketika  kadar  trigliserida  di  atas  300  mg/dl.  Kekeruhan  tersebut mengganggu absorbansi atau penghamburan cahaya pada berbagai pemeriksaan spektrofotometri. Gangguan  ini  dapat  diatasi  dengan  flokulasi  menggunakan  gamma-siklodekstrin.  Tujuan  dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan kadar kalsium pada serum lipemik dengan dan tanpa  penambahan  flokulan  gamma-siklodekstrin  inkubasi  suhu  23  °C.  Penelitian  ini  merupakan penelitian  kuantitatif  dengan  metode  pra-eksperimen  dan  desain  penelitian One-Group  Pretest- Posttest  Design .  Bahan  pemeriksaan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  serum  lipemik sejumlah  20,  dengan  kadar  >300  mg/dl.  Hasil  penelitian  dianalisis  secara  deskriptif  dan  statistik dengan  uji  parametrik  menggunakan Paired  Sample  T-Test. Rerata  selisih  kadar  kalsium  dalam serum lipemik degan dan tanpa penambahan gamma-siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C adalah 5,47 mg/dl (30%). Hasil uji Paired Sample T-Test menunjukkan signifikan sebesar 0,000 (<0,05). Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa ada perbedaan kadar kalsium dalam serum lipemik dengan dan tanpa penambahan gamma-siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C.
Kata kunci : Kalsium, Gamma-siklodekstrin, Serum Lipemik, Flokulan.

## THE DIFFERENCE OF CALCIUM LEVEL IN LIPEMIC SERUM WITH AND WITHOUT ADDITION OF FLOCCULANT GAMMA- CYCLODEXTRIN IN 23 °C INCUBATION
Rosenadia Fitri Andafi Niranata 1 , Sistiyono 2 , Budi Setiawan 3 , Poltekkes Kemenkes Yogyakrta email: rniranata@gmail.com

## ABSTRACT
Lipemic serum is a turbid serum which principally caused by large particles of lipoproteins such as chylomicrons  or  VLDL  (Verry  Low  Density  Lipoprotein),  and  triglyceride.  Thus,  it  is  usually recognized when triglyceride concentrations are above 300 mg/dl. The turbidity interferes in various spectrophotometric assays by light scattering or absorption. These interferences can be removed by flocculation using gamma-cyclodextrin which incubation at 23 °C. The aims of this research were to study the differences of calcium level in lipemic serum with and without addition of flocculant gamma-cyclodextrin with 23 °C incubation. This study was a quantitative research which using pre- experiment  method  and  One-Group  Pretest-Posttest  Design.  The  specimen  in  this  study  were  20 lipemic serum, which has triglyceride concentrations above 300 mg/dl. The results of the study were analyzed  descriptively  and  statistically  with  parametric  tests  using  Paired  Sample  T-Test.  The average difference calcium level in lipemic serum with and without addition of gamma-cyclodextrin with  23  °C  incubation  was  5.47  mg/dl  (30%).  The  results  of  Paired  Sample  T-Test  showed significant 0.000 (<0.05). From these results, it can be concluded that there are differences calcium levels in lipemic serum with and without the addition of gamma-cyclodextrin with 23 °C incubation.
Keyword : Calsium, Gamma-siklodekstrin, Lipemic Serum, Flocculant.
GAMMA-SIKLODEKSTRIN INKUBASI SUHU 23 °C

## PENDAHULUAN
Jenis kesalahan pra-analitik sangatlah dipengaruhi oleh kualitas bahan pemeriksaan  yang  akan  dianalisis  [3]. Salah  satu  bahan  pemeriksaan  yang digunakan dalam pemeriksaan laboratorium  adalah  serum.  Pemeriksaan laboratorium  klinik  yang  menggunakan bahan  pemeriksaan  berupa  serum  salah satunya adalah pemeriksaan kadar kalsium.  Rentang  rujukan  untuk  kalsium serum adalah 9 sampai 11 mg/dl [13].
Pemeriksaan  kalsium  dilakukan dengan  metode  fotometri  menggunakan arsenazo III. Kalsium dengan arsenazo III pada pH netral akan membentuk kompleks berwarna  biru  yang  intensitas  warnanya sebanding dengan konsentrasi dari kalsium. Gangguan yang disebabkan oleh magnesium dieliminasi dengan penambahan 8-hydroxyquinoline-5- sulfonic  acid [6].  Salah  satu  faktor  yang mengganggu semua pengukuran fotometrik melalui penyerapan dan penghamburan  cahayanya  adalah  serum lipemik [5].
Lipemia  dapat  menyebabkan  nilai tinggi  palsu  pada  pemeriksaan  total kalsium  yang  dilakukan  menggunakan alat  ukur  otomatis.  Sampel  darah  yang sangat lipemik mungkin memiliki rentang nilai  kalsium  hingga  setinggi  20  mg/dl atau  lebih  sebagai  akibat  dari  gangguan yang  disebabkan  oleh  kekeruhan  [7]. Serum lipemik pada prinsipnya disebabkan oleh partikel besar lipoprotein seperti chylomicrons atau Very  Low Density Lipoprotein (VLDL) dan komponen  lipid  utama  yaitu  trigliserida [10]. Serum  lipemik  dapat  ditangani dengan  beberapa  cara,  yaitu  melalui pendinginan  selama  12  sampai  16  jam, namun  cara  tersebut  tidak  dianjurkan karena akan menunda waktu pemeriksaan [13].  Selain  itu,  metode  lain  yang  dapat dilakukan  adalah  ekstraksi  menggunakan pelarut organik seperti eter dan kloroform
untuk  menghilangkan  lipid  pada  serum manusia.  Penggunaan  pelarut  organik sudah  jarang  dipakai  karena  bahan  ini bersifat karsinogenik yang membahayakan  teknisi  laboratorium  dan lingkungan  [4].  Alternatif  penghilangan lipid  yang  popular  di  laboratorium  klinis adalah dengan menggunakan ultrasentrifugasi  [14].  Walaupun  metode ultrasentrifugasi  ini  efektif,  akan  tetapi membutuhkan  alat  tambahan  yang  cukup mahal [12].
Siklodekstrin  merupakan  senyawa alami  yang  tidak  berbahaya  dan  efektif untuk  mengatasi  gangguan  partikel  lipid dalam serum lipemik. Berdasarkan jumlah glukosa yang menyusunnya, siklodekstrin dibedakan  atas  alfa-siklodekstrin  (6  unit glukosa), beta-siklodestrin (7 unit glukosa) dan gamma-siklodekstrin (8 unit glukosa) [9]. Gamma-siklodekstrin memiliki  kemampuan  untuk  membentuk kompleks  inklusi  dengan  molekul  yang ditahan dalam rongga molekul siklodekstrin  [17].  Gamma-siklodekstrin memiliki  rongga  yang  lebih  besar sehingga dapat menerima banyak molekul dibandingkan  dengan  alfa-siklodekstrin dan beta-siklodekstrin [2].
Penelitian  Sharma,  dkk  (1990) menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  pada pemeriksaan  serum  lipemik  dengan penambahan alfa-sikodekstrin dan metode ultrasentrifugasi  [14].  Penelitian  Roberts dan  Cotten  (2013),  menyatakan  bahwa 78% bahan pemeriksaan dengan penambahan flokulan siklodekstrin menunjukkan  tingkat  lipemik  yang  lebih rendah dibanding dengan metode ultrasentrifugasi  karena  penghilangan lipid penggangu lebih maksimal [12].
Penelitian Putri (2016), yang berjudul  “ Perbedaan    Kadar  Glukosa pada  Serum  Lipemik  dengan  dan  Tanpa Penambahan Flokulan
Gamma-
Siklodekstrin ”, menunjukkan serum lipemik  terlihat  lebih  jernih  setelah ditambahkan
flokkulan
gamma- siklodekstrin. Terdapat variabel
pengganggu pada penelitian tersebut yaitu suhu  [11].  Flokulasi  dapat  dipengaruhi oleh suhu [8]. Penelitian Ammary (1995), menunjukkan  bahwa  indeks  flokulasi optimum  menggunakan  polimer  kationik (CFTL)  terjadi  pada  suhu  23  °C  pada berbagai variasi pH, konsentrasi flokulan, suspensi kaolin  clay dan  kecepatan pengadukan [1].
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengkaji  ulang  penelitian  sebelumnya dengan  mengendalikan  suhu  inkubasi selama  flokulasi  menggunakan  flokulan gamma-siklodekstrin,  dengan  demikian pengggunaan  gamma-siklodekstrin  yang diinkubasi  pada  suhu  23  °C  dapat digunakan sebagai alternatif dalam penanganan serum lipemik pada pemeriksaan kalsium.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian kuantitatif dengan pendekatan pra- eksperimen.  Desain  penelitian  yang digunakan  adalah One-Group  Pretest-
Posttest Design [15]. Penelitian dilakukan di  Laboratorium  Kimia  Klinik  Analis Kesehatan Politeknik
Kesehatan
Kementerian Kesehatan Yogyakarta pada bulan Maret hingga April 2017.
Jumlah  bahan  pemeriksaan  dalam penelitian ini sebanyak 20 serum lipemik, yang  diperoleh  dari  RSUP  Dr.  Sardjito. Serum  lipemik  yang  digunakan  adalah serum  lipemik  dengan  kadar  trigliserida >300  mg/dl,  serta  tidak  hemolisis  dan ikterik.  Serum  lipemik  yang  terkumpul dibagi menjadi 2 bagian. Bagian pertama, serum tanpa penambahan flokulan gamma-siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C digunakan  sebagai  kelompok  kontrol. Kemudian serum tersebut diperiksa kadar kalsiumnya. Bagian kedua, serum dengan penambahn flokulan gamma-siklodekstrin inkubasi  suhu  23 °C  digunakan  sebagai kelompok  eksperimen.  Serum  tersebut kemudian  ditambah  larutan  flokulan
gamma-siklodekstrin dengan perbandingan  2  :  1,  dengan  konsentrasi larutan  gamma-siklodekstrin  200  mg/ml (20%).  Selanjutnya  diinkubasi  selama  5 menit  pada  suhu  23  °C  dan  dipusingkan selama  5  menit  dengan  kecepatan  3000 rpm. Memisahkan supernatan yang jernih dan  kemudian  diperiksa  kadar  kalsium serum  tersebut.  Kadar  yang  diperoleh kemudian  dikoreksi  dengan  dikalikan pengenceran  sebanyak  1,5  kali  untuk mendapatkan kadar kalsium yang sebenarnya.
Data yang diperoleh dianalisa secara deskriptif,  dihitung  rerata  selisih  dan persentase rerata selisih kadar. Kemudian diuji  statistik  menggunakan One-Sample Kolmogorov-Smirnov  Test dan Paired Sample  t-Test .  Data  tersebut  selanjutnya diuji Crosstabs untuk  melihat  ada tidaknya  hubungan  selisih  rerata  kadar dengan tingkat lipemik terhadap penambahan flokulan gamma- siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  pengamatan  selama penelitian, tingkat lipemik telah dikelompokkan  sesuai  dengan  kadar, warna  dan  kekeruhan  serum  lipemik. Serum  dengan  kadar  300-500  mg/dl  dan berwarna  putih  susu  dikelompokkan dalam tingkat  lipemik ringan. Sedangkan serum dengan kadar 800–1500 mg/dl atau lebih,  berwarna  putih  susu  dan  sangat keruh  dikelompokkan  dalam  tingkat lipemik berat.
Berdasarkan hasil penelitian, diperoleh  selisih  rerata  kadar  kalsium dengan  dan  tanpa  penambahan  flokulan gamma-siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C sebesar  5,47  mg/dl,  dengan  persentase selisih kadar sebesar 30%.
Grafik  diatas  menunjukkan  bahwa rerata  kadar  kalsium  tanpa  penambahan flokulan  gamma-siklodekstrin  inkubasi suhu 23 °C lebih tinggi yaitu sebesar 17,78 mg/dl. Hasil pemeriksaan yang diperoleh, selanjutnya  dianalisis  statistik  dengan menggunakan One-Sample  Kolmogorov- Smirnov  Test , Paired  Sample  T-Test dan Crosstabs .
Hasil uji One-Sample Kolmogorov- Smirnov Test menunjukkan data berdistribusi normal.
Nilai correlations (r)  pada  tabel  diatas menyatakan  bahwa  terdapat  hubungan yang  kuat  dan  signifikan  antara  kadar kalsium  pada  serum  lipemik  dengan  dan tanpa  penambahan  flokulan  gamma- siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C. Nilai r kuadrat  sebesar  0,533  (53,3%),  sehingga dapat  diketahui  bahwa  53,3%  penurunan kadar  dikarenakan  penambahan  flokulan gamma-siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C sisanya  46,7%  disebabkan  karena  faktor lain,  kemungkinan  faktor  lain  tersebut adalah  proses  pengenceran  yang  terjadi
akibat  penambahan  flokulan  gamma- siklodekstrin.  Selain  itu  hasil  uji Paired Sample T-test menunjukkan ada
perbedaan  yang  bermakna  antara  kadar kalsium  pada  serum  lipemik  dengan  dan tanpa  penambahan  flokulan  gamma- siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan selisih  penurunan  kadar  yang  bervariasi pada  tingkat  lipemik  ringan  dan  berat. Oleh karena itu, hasil tersebut selanjutnya dianalisa statistik menggunakan crosstabs berdasarkan tingkat lipemik serum.
Cro ssta bs Tin gka t
Lip em ik Rerata Kadar Kalsium (mg/dl) Seli sih Rer ata Kad ar (mg /dl) Pers enta se Seli sih Kad ar (%) P Pe ars on Chi - Sq uar e
Ta npa flo kul an De nga n flo kul an Rin gan 16, 76 11, 43 5,33 31 > 0, 05 0,3 33 Ber at 20, 15 14, 35 5,80 29
Hasil  Uji Crosstabs menunjukkan  tidak ada hubungan selisih rerata kadar dengan tingkat  lipemik  terhadap  penambahan flokulan  gamma-siklodekstrin  inkubasi suhu  23  °C.  Hal  ini  berarti  penambahan flokulan  gamma-siklodekstrin  inkubasi suhu 23 °C sebagai alternatif penanganan serum  lipemik  dapat  digunakan  pada kedua jenis tingkat lipemik tersebut.
Serum  lipemik  tanpa  penanganan, masih  terdapat  partikel  lipoprotein  yang menyebabkan kekeruhan. Kekeruhan tersebut mengganggu berbagai pemeriksaan  spektrofotometri  dengan menghamburkan  cahaya  atau  absorbansi.

## One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
N P Nilai Signifikan Kesimpulan 20  >0,05 0,000 Data berdistribusi normal Paired Sample T-Test N Corre lation P Nilai Signi fikan Kesi mpula n Corre lation 2 0 0,730 <0 ,0 5 0,00 0 Hubu ngan kuat
T- Test 2 0 - <0 ,0 5 0,00 0 Ada perbe daan
Selain  itu,  lipemik  dapat  menyebabkan konsentrasi analit berkurang akibat volume air yang tergantikan  oleh komponen  lemak  dalam  serum  [16].  Hal inilah yang menyebabkan hasil pemeriksaan menjadi tidak akurat.
Berdasarkan  keterangan  tersebut, maka  diperlukan  adanya  penanganan terhadap serum lipemik sebelum dilakukan pemeriksaan. Penggunaan flokulan gamma-siklodekstrin dinilai paling  efektif  untuk  mengatasi  gangguan partikel lipid dalam serum lipemik. Hal ini diakibatkan  karena  gamma-siklodekstrin memiliki  rongga  yang  lebih  besar dibandingkan  dengan  alfa-siklodekstrin, sehingga  jumlah  lipoprotein  yang  terikat dan mengendap lebih maksimal.
Suhu  merupakan  salah  satu  faktor penentu  dari  keberhasilan  flokulasi  [18]. Sehingga selama proses flokulasi diperlukan  suhu  yang  optimum  agar partikel dapat mengendap secara maksimal. Berdasarkan penelitian
Ammary (1995), indeks flokulasi optimum  menggunakan  polimer  kationik (CFTL)  terjadi  pada  suhu  23  °C  pada berbagai variasi pH, konsentrasi flokulan, suspensi  kaolin  clay  dan  kecepatan pengadukan  [1].  Oleh  karena  itu  pada penelitian  ini  digunakan  suhu  23  °C selama  inkubasi  untuk  memaksimalkan proses flokulasi. Sehingga setelah dilakukan proses pemusingan akan diperoleh serum yang lebih jernih.
Kelemahan dari penelitian ini adalah tidak diketahuinya latar belakang penyakit pasien  yang  mungkin  dapat  menjadi penyebab  tingginya  kadar  kalsium  pada serum  lipemik.  Keterbatasan  dalam memperoleh bahan pemeriksaan menyebabkan  ketidak  seragaman  tingkat lipemik serum serta lama waktu penyimpanan masing-masing serum. Meskipun  telah  diketahui  faktor  lain penyebab penurunan kadar sebesar 46,7%, namun  besarnya  pengaruh  pengenceran tidak diketahui secara pasti karena dalam penelitian ini tidak digunakan
pembanding pengenceran berupa akuades. Selain  itu  suhu  inkubasi yang  rendah,  23 °C,  menyebabkan  proses  inkubasi  pada penelitian  ini  tidak  dapat  dilakukan  di dalam waterbath melaikan  menggunakan lemari pendingin. Disamping itu konsentrasi  gamma-siklodekstrin  yang digunakan  pada  penelitian  ini  belum diketahui  keefektifannya,  sehingga  perlu diadakan  penelitian  lebih  lanjut  dengan membandingkan  berbagai  macam  variasi konsentrasi.
Berdasarkan hasil penelitian  ini,  diketahui  bahwa  serum lipemik  tanpa  penambahan  flokulan gamma-siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C memiliki kadar kalsium yang tinggi palsu. Penambahan flokulan gamma- siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C terbukti dapat  memaksimalkan  proses  flokulasi dan mengurangi kekeruhan dalam serum. Metode ini cukup efektif, tidak berbahaya, serta  dapat  diaplikasikan  dengan  mudah untuk menangani serum lipemik, sehingga hasil pemeriksaan kadar kalsium menjadi lebih akurat.

## KESIMPULAN
1. Rerata  kadar  kalsium  pada  serum lipemik  tanpa  penambahan  flokulan gamma-siklodekstrin  inkubasi  suhu 23 °C adalah 17,78.
2. Rerata  kadar  kalsium  pada  serum lipemik dengan penambahan flokulan gamma-siklodekstrin  inkubasi  suhu 23 °C adalah 12,31.
3. Selisih  rerata  kadar  kalsium  pada serum  lipemik  dengan  dan  tanpa penambahan flokulan gamma- siklodekstrin  inkubasi  suhu  23  °C adalah 5,47 mg/dl (30%).
4. Ada  perbedaan  kadar  kalsium  pada serum  lipemik  dengan  dan  tanpa penambahan flokulan gamma- siklodekstrin inkubasi suhu 23 °C.

## GAMMA-SIKLODEKSTRIN INKUBASI SUHU 23 °C

## SARAN
1. Perlunya  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  tentang  penambahan  gamma- siklodekstrin  pada  serum  lipemik dengan  variasi  konsentrasi  gamma- siklodekstrin,  penggunaan  serum lipemik  dengan  tingkat  kekeruhan lipemik yang seragam, serta penggunaan pembanding pengenceran. 2. Penggunaan flokulan gamma- siklodekstrin  inkubasi  suhu  23  °C dapat  diterapkan  bagi  pengelola manajemen laboratorium klinis sebagai  alternatif  untuk  menangani serum  lipemik  pada  pemeriksaan kadar  kalsium.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Ammary,  B.Y.  1995.  Flocculation Kinetics Using Dual Coagulants: Effects of  Temperature,  Addition  Sequence, Rapid Mixing, and Sulfate.
Retrospective
Theses and Dissertations. http://lib.dr.iastate.edu/rtd.
Diunduh pada tanggal 28 Oktober 2016.
[2]  Caligur,  V.  2008.  Cyclodextrins. BioFiles 2008, 3.3, 32 Sigma-Aldrich . http://www.sigmaaldrich.com/technic aldocuments/articles/biofiles/cyclodextr ins. Diunduh  pada  tanggal  10
November 2016.
[3]  Calmarza,  P  dan  J.  Cordero.  2011.
Lipemia interferences in Routine Clinical Biochemical Tests. Biochemia Medica Volume 21 Nomor 2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov.
Diunduh pada tanggal 10 November 2016.
[4]  Castro,  A.R.,  W.E.  Morril,  dan  V. Pope. 2000. Lipid Removal from Human
Serum Samples. Clinical and
Diagnostic Laboratory Immunology ASM
Journal Volume 7 Nomor 2.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov. Diunduh pada
tanggal 2 November 2016.
[5]  Contois, J.H. dan R.A. Nguyen. 2012. Assay Interference : A Need for Increased Understanding and Testing.
Sun Diagnostic. www.sundiagnostic.us.
Diunduh  pada  tanggal  2  November 2016.
[6]  Diasys.  2008. Manual  for  Calcium . Germany : DiaSys Diagnostic Systems.
[7] Feldman,  E.C.  dan  R.W.  Nelson.
2004. Canine and Feline Endocrinology and  Reproduction .  USA  :  Elsevier Health Sciences.
[8]  Fitzpatrick,  C.S.B.,  E.  Fradin  dan  J.
Gregory. 2004. Temperature effect on flocculation, using different
coagulants. Water Science  &  Technology Volume 50 Nomor 12 . https://www.researchgate.net/publication /8046502_
Temperature_effects_on_flocculation _using_different_coagulant. Diunduh pada tanggal 5 November 2016.
[9]  Laga, A. 2010. Produksi Siklodekstrin dari Subtrat Tapioka dengan Menggunakan Pullulanse dan CGTase secara Simultan. Jurnal Teknologi Indonesia  Volume  18  Nomor  2.
Makassar : Universitas Hasanuddin.
[10] Piyophirapong,  S.,  W.  Wongtiraporn dan K. Sribhen. 2010. Factitious Result in Clinical Chemistry Tests
Caused by Common Endogenous Interferents.