1 / Aristiani, P., Sutyarso, Busman, H.
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL JAHE MERAH ( Zingiber officinale Roxb. Var. Rubrum) TERHADAP SPERMATOZOA EPIDIDIMIS MENCIT ( Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI SIPROTERON ASETAT
EFFECT OF RED GINGER ETHANOL EXTRACT ( Zingiber officinale Roxb . Var . Rubrum ) ON EPIDIDYMAL SPERMATOZOA IN CYPROTERONE ACETATE INDUCED MICE ( Mus musculus L.)
Pepti Aristiani*, Sutyarso, Hendri Busman
Mahasiswa Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung *e-mail: pepti.aristiani@gmail.com

## ABSTRAK
Infertilitas merupakan kondisi yang umum ditemukan di Indonesia.  Jahe merah ( Zingiber officinale Roxb. var. Rubrum)  merupakan  tumbuhan  yang  memiliki  banyak  khasiat  di  berbagai  aspek.    Jahe  merah  memiliki pengaruh  yang  baik  sebagai  antioksidan  terhadap  sel  spermatogenik  dan  parameter  sperma  pada  mencit ( Mus  musculus L.)  jantan  yang  diinduksi  siproteron  asetat.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  jahe  merah  terhadap  jumlah  ,motilitas,  morfologi,  dan  viabilitas spermatozoa.    Penelitian  ini  menggunakan  metode    Rancangan  Acak  Lengkap,  menggunakan  25  ekor mencit jantan yang dibagi dalam 5 kelompok yaitu Kontrol Normal, K- (diberikan siproteron asetat 1,17mg/ml selama 7 hari), P1, P2 dan P3 (diinduksi siproteron asetat 1,17 mg/ml selama 7 hari dan ekstrak etanol jahe merah  dengan  dosis  berturut-turut  6mg/ml,  12mg/ml,  24mg/ml  selama  28  hari).    Data  yang  di  peroleh dianalisi menggunakan Analysis of Varian ( ANOVA).  Hasil penelitian ini menunjukan bahwa ekstrak etanol jahe merah 6mg/ml, 12mg/ml, dan 24mg/ml dapat meningkatkan jumlah, motilitas, viabilitas dan menurunkan morfologi abnormal spermatozoa yang diinduksi siproteron asetat.
Kata kunci : infertilitas, jahe merah, mencit jantan, siproteron asetat, jumlah, morfologi, motilitas viabilitas.

## ABSTRACT
Infertility is a common condition that found in Indonesia. Red ginger ( Zingiber officinale Roxb. Var. Rubrum) is a plant that has many benefits in various aspects.  Red Ginger has a good effect as an antioxidant against spermatogenic cells and sperm parameters on male mice ( Mus musculus L.) induced by cyproterone acetate. This study aimed to determine the influence of red ginger ethanol extract to the quantity, motility, morphology, and  viability  of  spermatozoa.  This  study  uses  a  completely  randomized  design,  using  25  male  mice  were divided into 5 groups: Normal Control, K- (given cyproterone acetate 1,17mg / ml for 7 days), P1, P2 and P3 (cyproterone acetate induced 1.17 mg / day for 7 days and red ginger ethanol extract with successive doses of 6mg / ml, 12mg / ml, 24mg / ml for 28 days). The data analyzed using Analysis of Variants (ANOVA). The results of this study showed that the ethanol extract of red ginger 6mg / ml, 12mg / ml and 24mg / ml could increase the quantity, motility, viability and morphology lowering induced abnormal spermatozoa cyproterone acetate.
Keyword: infertility, red ginger, male mice, cyproterone acetate, quantity,  morphology, viability, motility.

## PENDAHULUAN
Kasus infertilitas pada saat ini banyak ditemukan  di  Indonesia,  infertilitas  terjadi  tidak hanya  pada  wanita,  tetapi  juga  pria.  Dari keseluruhan  angka  infertilitas,  hampir  50% terjadi pada pria.  Secara garis besar, pasangan yang  mengalami  infertilitas  akan  menjalani
proses  panjang  dari  evaluasi  dan  pengobatan, dimana proses ini dapat menjadi beban fisik dan psikologis bagi pasangan infertilitas (Hestiantoro et  al .,  2013).    Untuk  menentukan  tingkat infertilitas  pada  pria  salah  satunya  adalah melalui pemeriksaan kualitas spermatozoa.

## Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati
Penurunan kualitas spermatozoa yang dihasilkan  oleh  testis  dapat  dicegah  dengan meminimalisir produksi perooksidan atau dengan    meningkatkan  senyawa  antioksidan yang  ada  di  dalam  tubuh.    Reaktivitas  radikal bebas  dapat  diredam  dengan  mengkonsumsi makanan  atau  minuman  yang  mengandung antioksidan.    Antioksidan  berfungsi  untuk mensetabilkan radikal bebas dengan melengkapi  kekurangan  elektron  yang  dimiliki radikal bebas dan menghambat terjadinya reaksi berantai  dari  pembentukan  radikal  bebas  baru yang dapat menimbulkan stres oksidatif (Hariyatmi, 2004).
Tanaman  Jahe  ( Zingiber  officinale Rosc . ) merupakan  rempah-rempah  Indonesia  yang mudah  ditemuka  di  pasar-pasar  dan  sangat penting  dalam  kehidupan  sehari-hari,  terutama dalam  bidang  kesehatan.    Jahe  merupakan tanaman  obat  yang  kaya  akan  khasiat  bagi kesehatan,  rimpang  jahe  banyak  dicari  karena memiliki khasiat sebagai obat-obatan.
Pemanfaatan  tanaman  obat  telah  banyak dilakukan  sejak  lama  untuk  mencegah  maupun menyembuhkan penyakit. jahe memiliki senyawa  aktif  fenolik  seperti,  gingerol,  shagaol, zingeron,  ginggerdiol,  dan  zingibren  yang terbukti memiliki aktivitas antioksidan.  Jahe juga dilaporkan  memiliki  aktivitas  androgenik  karena mampu  meningkatkan  konsentrasi  hormon testosteron  dalam  serum  (Kamtchouing et  al. , 2002).    Hormon  testosteron  berfungsi  untuk mengontrol proses spermatogenesis, memelihara  sel  sertoli,  dan  berperan  dalam menentukan kualitas spermatozoa.
Penurunan kualitas spermatozoa dapat disebabkan  oleh  berbabagai  faktor,  diantaranya hormon  yang  mempengaruhi  proses  reproduksi bekerja  secara  optimal.    Hormon  testosterone berfungsi untuk mengontrol proses spermatogenesis.  Siproteron asetat adalah obat golongan  anti  androgen  yang  memiliki  efek mengganggu  proses  spermatogenesis  pada pria.    Obat  ini  merupakan  salah  satu  obat  yang digunakan  sebagai  induksi  terjadinya  infertilitas pada  pria.    Obat  ini  termasuk  golongan  agen antiandrogen  yang  biasa  dipakai  untuk  terapi hirsutisme  pada  wanita  (IAI,  2012).    Siproteron asetat  juga  dapat  dipakai  sebagai  terapi  kanker prostat  pada  pria  (British  National  Formulary, 2012).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  dengan  5  kelompok  perlakuan dengan pengulangan sebanyak 5 kali. Kelompok  pertama  digunakan  sebagai  kontrol normal,  kelompok  kedua  digunakan  sebagai kontrol  negatif  yang  diberikan  siproteron  asetat 1,17mg  selama  7  hari,  kelompok  ketiga, keempat  dan  kelima  diberikan  siproteron  asetat 1,17mg  selama  7  hari    dan  diberikan  ekstrak etanol  jahe  merah  dengan  dosis  6  mg/ml,  12 mg/ml, 24 mg/ml selama 28 hari.
Perlakuan diberikan selama 35 hari berdasarkan siklus  spermatogenik  mencit  yang  berlangsung selama  35  hari  (Rugh,1968).    Sedangkan induksi  siproteron  asetat  dilakukan  pada  hewan uji selama 7 hari (Zade et al., 2013). Pemberian ekstrak jahe merah diberikan setiap hari selama 28  hari.    Setelah  35  hari  perlakuan,  masing-
masing  hewan  coba  dikorbankan  dengan  cara dislokasi leher dan selanjutnya dibedah. Kemudian  organ  kauda  epididimis  diambil  dan diletakkan  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi NaCl  0,9%.      Selanjutnya  cauda  epididimis dimasukkan  ke  dalam  gelas  arloji  yang  berisi  1 ml  NaCl  0,9%,  kemudian  bagian  proksimal cauda  dipotong  sedikit  dengan  gunting  lalu cauda  ditekan  dengan  perlahan  hingga  cairan sekresi  keluar  dan  tersuspensi  dengan  NaCl 0,9%.    Suspensi  spermatozoa  dari  cauda epididimis yang telah diperoleh dapat digunakan untuk  pengamatan  yang  meliputi  jumlah, motilitas, viabilitas, morfologi spermatozoa.
Penghitungan  jumlah  spermatozoa  dengan menggunakan  Improved  Neubeur  dibawah mikroskop  cahaya  dengan  perbesaran  100  kali. Hemositometer  diletakkan  dan  dihitung  jumlah spermatozoa  pada  kotak  atau  bidang  A,  B,  C, atau  D.    Hasil  perhitungan  jumlah  spermatozoa kemudian dimasukkan ke dalam rumus penentuan  jumlah  spermatozoa/ml  suspensi sekresi kauda epididimis: Jumlah spermatozoa = n/0,1  x  pengenceran  x  10 3 juta/ml;dimana  n  = Jumlah  spermatozoa  yang  dihitung  pada  kotak A, B, C, atau D ( Gandasoebrata dalam Maisuri, 2013).    Presentase  spermatozoa  motil  dihitung dalam satu luasan bidang pandang menggunakan mikroskop cahaya pada pembesaran 100x
dengan menaksir spermatozoa  yang  bergerak  progresif  dari keseluruhan lapang pandang dan daerah taksir, kemudian  dikali  100%.  Penilaian  dilakukan dengan  menghitung  persentase  spermatozoa yang  pergerakannya  progresif  maju  ke  depan dibandingkan  dengan  seluruh  yang  teramati (bergerak maupun tidak).
Pemeriksaan morfologi spermatozoa dilakukan dengan membuat preparat  apus  (metode  smear).    Suspensi sperma  kemudian  diwarnai  dengan  Eosin, kemudian  diamati  dibawah  mikroskop  dengan perbesana  10  x40.  Pengamatan  dilakukan terhadap 100 spermatozoa, kemudian dibandingkan antara spermatozoa normal dengan  yang  tidak  normal.    Pemeriksaan viabilitas  spermatozoa  dilakukan  dengan  cara pengecatan dengan zat warna Eosin, pengamatan  sediaan  di  bawah  mikroskop dengan  perbesaran  10  x  40  dihitung  per  100 spermatozoa.    Spermatozoa  yang  hidup  tidak berwarna,  sedangkan  yang  mati  berwarna merah,  kemudian  hasilnya  dinyatakan  dalam persentasi.    Pada  setiap  kelompok,  data  yang terkumpul  dianalisis  menggunakan  program SPSS  versi  20  dengan  menggunakan  uji One Way  Anova untuk  menguji  perbedaan  rerata pada kelompok perlakuan dan kelompok kontrol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1.  Jumlah spermatozoa
Gambar  1.  Grafik  Rerata  jumlah  spermatozoa Mencit Jantan.
30.45 ±4,70
14.1 ±3,71 29.82 ±8,18 30.96 ±7,64 38.66 ±4,71 0 10 20 30 40 50 K K- P1 P2 P3
Ju m la h S p e rm at oz oa ( % ) Perlakuan
K : Kontrol, K- : Kontrol Negatif, P1 : 6mg/ml, P2 : 12mg/ml, P3 : 24mg/ml
a c a a b
Berdasarkan  grafik  pada  gambar  1  di  atas, menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan  rerata persentase jumlah spermatozoa antara kelompok  kontrol  (-)  terhadap  kelompok  kontrol normal dan terdapat peningkatan rerata persentase jumlah spermatozoa pada kelompok P1,  P2  dan  P3    terhadap  kelompok  normal  dan kelompok  kontrol  (-)  yang  hanya  diberi siproteron asetat.

## 2. Motilitas spermatozoa
Berdasarkan grafik pada
Gambar 2,
menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan  rerata
yang signifikan persentase
motilitas
spermatozoa antara kelompok kontrol(-) terhadap  kelompok  kontrol  normal,  serta kelompok  P1  terhadap  kelompok  normal  dan terdapat  sedikit  peningkatan  rerata  persentase motilitas  spermatozoa  pada  kelompok  P2  dan P3  terhadap kelompok kontrol (-).
Gambar 2. Grafik Rerata Motilitas spermatozoa Mencit Jantan.

## 3.  Morfologi spermatozoa
Gambar  3.  Grafik  Rerata  Morfologi Abnormal Mencit Jantan.
Berdasarkan  grafik  pada  gambar  3  di  atas, menunjukkan bahwa terdapat peningkatan yang signifikan  rerata  persentase  jumlah  morfologi abnormal  spermatozoa  antara  kelompok  kontrol (-)  terhadap  kelompok  kontrol  normal,  serta pada  kelompok  P1,  P2  dan  P3  menunjukan penurunan jumlah morfologi spermatozoa terhadap kelompok K(-).

## 4. Viabilitas Spermatozoa
Berdasarkan grafik pada Gambar 4,
menunjukkan  bahwa  terdapat  penurunan  rerata yang signifikan persentase viabilitas spermatozoa antara kelompok kontrol(-) terhadap  kelompok  kontrol  normal,  serta terdapat  sedikit  peningkatan  rerata  persentase viabilitas  spermatozoa  pada  kelompok  P1,  P2 dan P3  terhadap kelompok kontrol (-), pada P3 rerata  viabilitas  spermatozoa  lebih  banyak dibandingkan  dengan  kelompol  normal  K  yang hanya diberi pakan dan minum.
18.5
±4,73
41.76
±12,09 36.38 ±5,83 24.26 ±4,88 16.26 ±7,73 0 10 20 30 40 50 K K- P1 P2 P3 m or fol og i a b n or m al sp e rm at oz oa ( % ) perlakuan
K: kontrol, K- : Kontrol negatif, P1 : 6mg/ml, P2 :
12mg/ml, P3 : 24mg/ml b a a b b 76.7 ±6,71 31.8
±9,70
42.48 ±9,10 66.16 ± 9,48
68.52 ±11,32 0 20 40 60 80 100 K K- P1 P2
P3
m ot ili ta s sp e rm at oz oa ( % ) perlakuan
K: kontrol ,K- : kontrol negatif, P1 : 6mg/ml ,P2 :
12mg/ml, P3 : 24mg/ml a b b a a
Gambar 4. Grafik Rerata Viabilitas spermatozoa Mencit Jantan.

## PEMBAHASAN
Penurunan  jumlah,  motilitas,  viabilitas  dan meningkatnya  morfologi  abnormal  spermatozoa disebabkan  oleh  induksi  siproteron  asetat. Penggunaan siproteron  asetat  pada  pria menyebabkan adanya pengganti hormon androgen  akibat  kekurangan  androgen  yang disebabkan  oleh  efek  anti  androgen  pada siproteron
asetat. Siproteron asetat menyebabkan penurunan spermatogenesis yang disebabkan oleh efek langsungnya terhadap testis dimana siproteron asetat menghambat  ikatan  antara  testosterone  dan dehidrotestosteron dengan reseptor androgenny (Rajalakshmi, 2005).
Jahe  merah  memiliki  kandungan  aktif  yang berfungsi sebagai antioksidan diantaranya gingerol,  shogaol,  zingibrene,  gingerdiol,  dan zingerone .  Zat-zat  tersebut  mampu  mencegah kerusakan  yang  diakibatkan  oleh  radikal  bebas. Aktivitas  enzim-enzim  antioksidan  endogen seperti superoxide  dismutase,  catalase,  dan gluthtione peroxides pada jahe mampu
mencegah  terjadinya  peroksidasi  lipid  (Khaki dkk., 2009).
Jahe merah memiliki senyawa fenolik antara lain zingeron,  shagaol  dan  gingerol  yang  terdapat dalam oleoresin dan memiliki sifat oksidatif.  Zat antioksidan  yang  kuat  dan  mampu  mengurangi serta  mencegah  terbentuknya  radikal-radikal bebas,  sehingga  jahe  merah  telah  dianggap sebagai  obat  herbal  yang  aman  dengan  efek samping  yang  sangat  minimal.  Sebagai  hasil dari aktivitas antioksidannya, jahe akan memacu aktivitas  androgenik  untuk  organ  testis  sebagai hasil  dari  peningkatan  hormon  LH,  FSH,  dan testosteron (Ali dkk., 2008).
Jahe  merah  juga  memiliki  kandungan  khusus yaitu arginin yang merupakan asam amino non- esensial. Arginin merupakan prekursor dari Nitrit Oxide (NO) endogen. Arginin dipecah oleh suatu enzim  bernama Nitrit  Oxide  Synthases (NOS) menjadi citrulline dan  NO. Nitrit  Oxide yang dihasilkan  arginin  ini  mempunyai  dua  peranan penting  terhadap  spermatozoa.  Yang  pertama, meningkatkan  motilitas  spermatozoa  dengan cara  meningkatkan metabolism  rate serta  kadar kalsium  dalam  mitokondria  dan  menghasilkan ATP  lebih  banyak.  Pada  akhirnya  ATP  ini digunakan  sebagai  sumber  energi  motilitas spermatozoa.  Yang  kedua  yaitu  melindungi membran  aksonema  dari  proses  peroksidasi lipid  karena  keadaan  stres  oksidatif  (Srivastava dkk., 2006).
Dapat dikatakan bahwa pemberian ektrak etanol jahe  merah  dapat  menurunkan  abnormalitas spermazoa, meningkatkan jumlah, motolitas dan viabilitas  spermatozoa  yang  disebabkan  oleh
67.18
±10,69 42.36
±10,85 50.42 ±10,43 63.48 ±10,81 68.52 ±5,74 0 10 20 30 40 50 60 70 80 K K- P1 P2 P3 v ia b il it a s sp er m a to zo a ( % ) perlakuan K: kontrol, K-: kontrol negatif, P1 : 6mg/ml, P2: 12mg/ml, P3: 24mg/ml a b b a a
radikal  bebas  akibat  induksi  siproteron  asetat.
Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  penelitian  Septina (2002)  bahwa,  antioksidan  pada  jahe  dapat digunakan untuk menghambat terjadinya peroksidasi  lipid.  Penghambatan  peroksidasi lipid  oleh  senyawa  antioksidan  jahe  dilakukan dengan  cara  mendonasikan  radikal  hidrogen kepada senyawa radikal bebas, sehingga radikal bebas  menjadi  lebih  stabil  dan  tidak  merusak. Akibat senyawa radikal bebas yang sudah stabil, maka kerusakan sel sertoli dan sel leydig dapat terhindari,  sehingga  proses  spermatogenesis kembali  normal  dan  konsentrasi  sperma  yang dihasilkan meningkat.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  didapatkan  dapat disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol jahe merah dapat meningkatkan jumlah, motilitas dan viabilitas spermatozoa, serta dapat menurunkan  abnormalitas  spermatozoa  mencit jantan yang diinduksi oleh siproteron asetat.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  BH,  Blunden  G.,  Tanira  MO.,  Nemmar  A. 2008. Some Phytochemical Pharmacological and Toxicological Properties  of  Ginger  ( Zingiber  officinale Roscoe):  a  review  of  recent  research. Food Chem Toxicol (46) hal 409 –420.
British  National  Formulary.  2012. Cyproterone Acetate . British Medical Association and Royal  Pharmaceutical  Society  of  Great Britain. London.
Hariyatmi. 2004. Kemampuan Vitamin E sebagai Aantioksidan  terhadap  Radikal  Bebas Pada Lanjut Usia. MIPA, 14(1). 52-60.
Hestiantoro,  A.,  Wiweko,  B.,  Pratama,  G.,  & Yusuf,  D  (Eds).  2013.  Konsensus penanganan infertilitas.
Ikatan  Apoteker  Indonesia.  2012. Informasi Spesialite Obat. Jakarta: IAI
Kamtchouing, P., Fandio, G Y M., Dimo, T.  and
Jatsa, H.B. 2002. Evaluation of
Androgenic Activity of Zingiber officinale and  Penta  diplan  drabrazzeanain  Male Rats. Juornal Andrology . 4 : 299-30
Khaki, A., Fathiazad, F. and Nouri, M. 2009. The effects of  gingger on spermatogenesis and sperm parameters of  rats. Iranian  Journal  of  Reproductive Medicine . 7 (1): 7-12.
Maisuri, RA. 2013. Pengaruh Pemberian Ekstrak Jahe  Merah  ( Zingiber  Officinale Roxb. Var  Rubrum)  dan  Zinc  (Zn)  Terhadap Jumlah, Motilitas, dan Morfologi Spermatozoa  pada  Tikus  Putih  ( Rattus norvegicus ) Jantan Dewasa Strain
Sprague  Dawley.  Medical  Journal  of Lampung University (2).
Rajalakshmi,  M.  2002.    Male  contraception: expanding  reproductive  choice.  India Institute  of  Medical  Science. Indian  J. Experimantal Biology . 43 pp 1032-1041
Rugh  ,R.  1968. The  Mouse:  Its  Reproduction and  Developmental. Burgess  Publishing Company. pp 1-23. Minneapolis.
Septina.  2002.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Dikhlorometana  dan  Air  Jahe  ( Zingiber officinale Rosc)  pada  Asam  Linoleat. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan. 9 (2): 105-110.
Srivastava,  S.,  Desai,  P.,  Coutinho,  E.  and
Govil, G. 2006. Mechanism Of Action Of Arginine On The Vitality Of Spermatozoa Is Primarily Throug Increased  Biosynthesis  Of  Nitric  Oxide. Tata Institute of Fundamental Research.India . (74) hal 954 –958.
Zade, V.S., Dabhadkar, D.K., Tharake, V.G. and Pare, S.R. 2013. Effect of Aqueous Extract  of Moringaoleifera Seed  on Sexual  Activity  of  Male  Albino  Rats. Biological Forum-An International Journal, 5(1): 129-14.