DERIVATIF LIMONOID DARI Clausena excavata SEBAGAI BIOFUNGISIDA TERHADAP CENDAWAN PATOGEN TANAMAN
Muhaimin *
Program Studi Pendidikan Kimia, Jurusan PMIPA FKIP Universitas Jambi, Kampus Pinang Masak, Jambi 36361, Indonesia *e-mail : muhaimin_73@yahoo.de

## ABSTRAK
Penelitian    ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  senyawa  limonoid  dari Clausena  excavata terhadap  cendawan-cendawan  patogen  tanaman.  Penelitian  ini  meliputi  isolasi  limonoid  dari C. excavata ,  pembuatan  media  pengujian  cendawan,  pembiakan  cendawan  uji,  dan  pengujian  aktivitas anticendawan.  Aktivitas  anticendawan  senyawa  limonoid  diuji  terhadap  cendawan  patogen  tanaman menggunakan  media  PDA  (Potato  Dextrose  Agar)  pada  suhu  kamar,  dan  dilakukan  pengamatan selama 7 hari. Aktivitas anticendawan secara invitro dilakukan dengan metode sumur difusi agar dan metode  difusi agar.  Pada  penelitian ini,  satu  senyawa  limonoid telah  diisolasi  dari C. excavata yaitu Clausenolida-1-etil eter. Clausenolida-1-etil eter berupa kristal putih dengan titik leleh 168-169 o C. Uji aktivitas anticendawan Clausenolida-1-etil eter dari C. excavata terhadap beberapa cendawan patogen tanaman  menunjukkan  bahwa  pada  empat  konsentrasi  yang  berbeda  (5,  10,  15  dan  20  ppm), Clausenolida-1-etil  eter  adalah  zat  anticendawan  yang  ampuh  karena  memiliki  aktivitas  yang  kuat dalam  menghambat  pertumbuhan Fusarium  oxysporum f.sp. lycopersici dan Ganoderma  boninense . Hasil  pengujian  inkubasi  selama    7  hari  menunjukkan  bahwa  Clausenolida-1-etil  eter  5  ppm  bisa menghambat  pertumbuhan  koloni Fusarium  oxysporum f.sp. lycopersici dan Ganoderma  boninense sampai  55,5%  dan  50%.  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan  manfaat  dalam pemanfaatan tumbuhan Indonesia sebagai sumber senyawa bioaktif dan anticendawan alami.
Kata kunci  : Clausena  excavata ,  limonoid,  Clausenolida-1-etil  eter,  aktivitas  anticendawan, Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici, Ganoderma boninense

## ABSTRACT
The  purpose  of  this  study  was  to  investigate  the  activity  of  limonoid  compound  from Clausena excavata against  plant  pathogenic  fungus.  This  research  consist  of  isolation  of  limonoid  from C. excavata ,  preparation  of  testing  culture  media,  proliferation  of  fungus,  and  antifungal  activity  test. Antifungal  activity  of  limonoid  was  studied  against  plant  pathogenic  fungus  using  PDA  (Potato Dextrose  Agar)  as  testing  culture  media  at  room  temperature,  and  were  monitored  for  7  days.  The invitro  antifungal  activity  was  performed  by  agar  well  diffusion  and  agar  diffusion  methods.  In  this research, one limonoid compound had been isolated from C.excavata which is called Clausenolide-1- ethyl  ether.  The  isolated  Clausenolide-1-ethyl  ether  was  white  crystal  with  melting  point  of  168- 169 o C.  The  antifungal  activity  test  of  Clausenolide-1-ethyl  ether  from C.excavata to  several  plant pathogenic fungus showed that at four different concentrations (5, 10, 15 and 20 ppm), Clausenolide- 1-ethyl ether was a potent antifungal agent because it had a strong activity in inhibiting the Fusarium oxysporum  f.sp.  lycopersici and Ganoderma  boninense growth.  The  7  days  incubation  test  result showed that 5 ppm Clausenolide-1-ethyl ether could inhibit the Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici and Ganoderma  boninense colonies  growth  until  55,5%  and  50%,  respectively.  The  results  of  this study  are  expected  to  provide  benefits  in  utilization  of  Indonesian  plants  as  source  of  bioactive compounds and natural antifungal.
Key  words: Clausena  excavata ,  limonoid,  Clausenolide-1-ethyl  ether,  antifungal  activity, Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici, Ganoderma boninense

## PENDAHULUAN
Penyakit  tanaman  yang  disebabkan oleh cendawan merupakan masalah penting  bagi  petani  di  Indonesia.  Petani mengeluarkan  dana  yang  cukup  besar setiap  tahunnya  untuk  menanggulangi tanamannya  dari  serangan  cendawan. Cendawan  ini  menyerang  bagian  apa  saja dari  tanaman  seperti  akar,  batang,  daun, buah, umbi, biji dan lain-lain. 5,8 Selama ini para  petani  dalam  membasmi  cendawan menggunakan  fungisida  sintetis  dengan berbagai macam merk yang dijual dipasaran.  Pemakaian  fungisida  sintetis secara  terus-menerus  selain  membunuh cendawan, juga dapat mempercepat timbulnya  ras-ras  patogen  yang  resisten. Selain itu, fungisida sintetis dapat menyebabkan keracunan terhadap manusia sebagai  pemakainya  dan  residunya  bisa menyebabkan pencemaran terhadap lingkungan. 2,4) Berkaitan dengan hal tersebut  telah  mendorong  para  peneliti untuk mencari alternatif dan pengembangan untuk pengendalian cendawan  patogen  tanaman  yang  bukan berasal  dari  sintetis.  Salah  satunya  berasal dari produk alami seperti tumbuh- tumbuhan.
Tumbuhan yang telah lama digunakan  sebagai  fungisida  alami  adalah tumbuhan  marga Clausena  sp yang memiliki  beberapa  jenis  spesies  tersebar dipelosok  seluruh  Indonesia.  Diantara
spesiesnya  yang  sangat  bermanfaat  dan telah  lama  dipergunakan  oleh  masyarakat secara  tradisional  untuk  pengobatan  dan fungisidal adalah Clausena anisata , Clausena excavata dan Clausena lansium . 1,3,6 Berdasarkan  hasil  skrining fitokimia,  diketahui  tiga  jenis Clausena tersebut  mengandung  komponen  metabolit sekunder  yang  dominan  adalah    kumarin, limonoid  dan  alkaloid.  Hasil  penelusuran kandungan  kimia  dari  ketiga  spesies tersebut,  sudah  berhasil  diisolasi  dan diidentifikasi  kandungan  kimia  utamanya yaitu dua senyawa  kumarin dari Clausena lansium ,  dua  senyawa  limonoid  dari Clausena  anisata dan  masing-masing  satu senyawa  kumarin  dan  limonoid  dari Clausena excavata . 6,7,9
Pengujian pendahuluan    terhadap  ekstrak  kasar  dari masing-masing asal senyawa-senyawa tersebut menunjukkan keaktifan anticendawan  terhadap  cendawan  karat ( Uredinales ). 6
Berdasarkan  kegunaannya  secara tradisional, kandungan kimia utama dan uji pendahuluan  sebagai  anticendawan  serta studi  literatur  tentang  hubungan  antara struktur  dan  golongan  keaktifan  suatu senyawa,  diperkirakan  senyawa-senyawa limonoid  dari Clausena  sp tersebut memiliki  keaktifan  sebagai  anticendawan terhadap  salah  satu  atau  lebih  cendawan- cendawan patogen tanaman dan berpeluang  besar  untuk  mendapatkan
senyawa  bioaktif  anti  cendawan  alami sebagai bahan aktif biofungisida.

## METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  tumbuhan  yang  digunakan adalah  bagian  kulit  batang  dan  kulit  akar dari Clausena excavata yang dikumpulkan dari kawasan hutan Kerinci Sebelat, Jambi. Cendawan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah : Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici , Phytophthora infestans , Colletotrichum capsici ,
Penicillium  digitatum , Rhizoctonia  solani , Sclerotium roefsi dan Ganoderma boninense .
Pelarut  yang  digunakan  untuk ekstraksi  dan  kromatografi  adalah  pelarut- pelarut p.a ( pro  analysis )  dan  pelarut- pelarut teknis yang sudah didestilasi yaitu ; n -heksan,  benzen,  dietil  eter,  metilen klorida,  aseton,  etil  asetat  dan  metanol. Larutan jenuh Ce(SO 4 ) 2 1,5% dalam H 2 SO 4
2  N  dan  reagen  Dragendorf  digunakan sebagai penampak noda. Kromatografi cair vakum  dengan  silika  gel  Merck  60  GF 254 , kromatografi  grafitasi  dengan    silika  gel Merck  60  (230  –  400  mesh),  dan  analisis kemurnian  senyawa  dengan  kromatografi lapis  tipis  pada  pelat  yang  berlapis  silika gel  Merck  60    GF 254 ,  0,25  mm  akan dilakukan sesuai prosedur standar. Pengujian aktivitas anticendawan
menggunakan  media  Potato  Dekstrosa Agar (PDA).
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  peralatan  gelas  yang biasa  digunakan  di  laboratorium  kimia organik  dan  laboratorium  mikrobiologi serta  ditunjang  dengan  peralatan  lainnya seperti  alat-alat  untuk  ekstraksi,  pengisat gasing vakum, kromatografi kolom vakum dan kromatografi kolom gravitasi. Penentuan  titik  leleh  akan  dilakukan dengan Fisher John melting point apparatus , untuk penentuan struktur kimia senyawa  yang  prospektif  sebagai  anti cendawan diperlukan spektroskopi UV-Vis dan IR.

## Prosedur Kerja

## 1. Sterilisasi alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pada percobaan  disterilkan  menurut  cara  yang sesuai untuk masing-masing alat, yaitu :
1.   Alat-alat  gelas  serta  alat-alat  lain  yang tahan  pemanasan  disterilkan  dengan autoklaf  bersuhu  121 o C  selama  15 menit.  Setelah  selesai  dikeringkan dalam lemari pengering.
2.   Media  pembiakan  cendawan  (PDA), akuades,  dan  larutan  NaOCl  1% disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121 o C selama 15 menit.
3. Pengerjaan aseptis dilakukan di laminar air flow cabinet , yang sebelumnya dibersihkan dengan larutan
NaOCl  dan  disterilkan  dengan  lampu UV  yang  dinyalakan  2  jam  sebelum lemari digunakan.

## 2. Perbanyakan Senyawa Limonoid dari

## Clausena excavata
Sebanyak  masing-masing  10  kg serbuk  kering  kulit  batang  dan  10  kg serbuk  kering  kulit  akar  dari Clausena excavata disiapkan.  Selanjutnya,  masing- masing  cuplikan  bahan  tumbuhan  tersebut dimaserasi  dengan  pelarut n -heksan  dan ampasnya  dimaserasi  dengan  metanol sebanyak  15  L  selama  3  x  24  jam. Kemudian  terhadap  ekstrak  metanol  awal tersebut dilakukan pemisahan untuk senyawa-senyawa golongan alkaloid menggunakan asam sitrat 3% dan dilanjutkan dengan ekstraksi menggunakan etil  asetat.  Bagian  residunya  dipartisi dengan  pelarut  benzen,  metilen  klorida, dan  etil  asetat.  Isolasi  senyawa  limonoid dimulai dari masing-masing ekstrak melalui  teknik-teknik  kromatografi,  yaitu kromatografi  vakum  cair,  kromatografi gravitasi,  kromatotron  dan  kromatografi tekan.  Penentuan  struktur  kimia  senyawa limonoid  menggunakan  spektroskopi  UV- Vis, IR, NMR dan MS.

## 3. Pembuatan larutan uji
Larutan  uji  (senyawa  limonoid) yang  akan  digunakan  terlebih  dahulu dipekatkan  dengan  cara  diuapkan  di  atas
penangas air dengan  suhu tidak  lebih dari 50 o C.

## 4.  Pembuatan  stok  dan  inokulum cendawan
Masing-masing cendawan dibiakkan  pada  media    PDA  pada  cawan petri    dan  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama  24  jam.  Biakan  cendawan  yang telah berumur 7 x 24 jam di simpan dengan dibiakkan  pada  media  yang  sesuai  dalam tabung  reaksi  dengan  media  agar  miring. Media  yang  digunakan  untuk  masing- masing  cendawan  diupayakan  sedemikian rupa agar tidak menurun virulensinya.

## 5. Pembuatan Media Biakan Cendawan
Media  Potato  Dekstrosa  Agar (PDA),  dapat  dibuat  sesuai  dengan komposisi  masing-masing  zatnya  sebagai berikut :
- Potatoes : 200 g
- Dekstrosa   : 20 g - Agar : 15 g
- Akuades   : 1000 ml
Media  ini  dibuat  dan  dimasukkan  ke Erlenmeyer 250 ml dan disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 o C (15 psi) selama 15 menit.
6. Pengujian Secara in vitro
Pengujian dengan Metode Sumur
1.   Media biakan pada petri dibuat dengan menuangkan  10  ml  media  steril  yang
telah  dicairkan  (suhu  45 0 C)  pada cawan  petri  steril.  Senyawa  limonoid diuji aktivitas anti cendawannya terhadap  tujuh  jenis  sampel  cendawan patogen  tanaman Fusarium  oxysporum
f.sp. lycopersici (penyebab  layu    pada
tomat), Phytophthora infestans (penyebab  hawar  daun  pada  kentang dan  tomat), Colletotrichum  capsici
(penyebab  antraknosa  pada  cabai), Penicillium digitatum (penyebab kapang kelabu ( grey mould ) pada  buah jeruk), Rhizoctonia  solani (penyebab hawar  pada  pelepah  daun  padi), Sclerotium  roefsi (penyebab  busuk pada  kacang  tanah) dan Ganoderma boninense (penyebab  busuk  pangkal batang kelapa sawit) dengan memasukkannya  sebanyak  20  µL  ke dalam  sumur  yang  telah  dibuat  pada media biakan dalam cawan petri steril, dengan menggunakan lima jenis variasi konsentrasi yaitu 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4  ppm  dan  5  ppm  yang  ditetapkan melalui  pengujian  orientasi.  Setiap pengujian dilakukan lima kali pengulangan. Adanya hambatan terhadap pertumbuhan cendawan terlihat  sebagai  daerah  atau  zona kosong  di  sekeliling  sumur.  Zona hambatan yang terbentuk diukur dengan  jangka sorong.
2.   Peubah  yang  diamati  ialah  diameter zona  hambatan  yang  terbentuk  di
sekeliling koloni cendawan, dan dinyatakan dalam 3 kategori, yaitu :
- Zona  hambatan  total,  yaitu  apabila zona  hambatan  yang  terbentuk  di sekeliling  cakram  terlihat  jernih dan luas.
- Zona hambatan parsial, yaitu apabila  pada  zona  hambatan  yang terbentuk  masih  memperlihatkan adanya koloni cendawan yang tipis.
- Zona  hambatan  nol,  yaitu  apabila tidak  ada  zona  hambatan  yang terbentuk di sekeliling cakram.
Pengamatan  dilakukan  setiap  hari hingga hari ke 7.
3.  Untuk  menguji  pengaruh  pelarut, dilakukan  pengujian  blanko  yaitu  uji aktivitas  pelarut  yang  dimasukkan dalam  sumur  yang  telah  dibuat  pada media biakan dalam cawan petri steril. Lalu  dilakukan  uji  dengan  cara  yang sama  dengan  uji  aktivitas  isolat terhadap cendawan.

## Metode Pengujian Umpan Beracun
Selain  dengan  metode  sumur, kandidat  fungisida  diuji  dengan  metode umpan  beracun.  Pengujian  dilakukan dengan  mencampur  senyawa  limonoid  ke dalam  biakan  yang  masih  cair  pada  suhu 45 o C.  Larutan  senyawa  ini  dibuat  lima macam  konsentrasi  berbeda,  setelah  itu media yang mengandung isolat uji dituangkan  secara  aseptis  ke  dalam  cawan
petri  steril.  Selanjutnya,  masing-masing patogen/  cendawan  uji  (   3  mm) dikulturkan  di  dalam  media  yang  telah mengandung  senyawa  kandidat  fungisida dengan  menggunakan  ose  steril  dan diinkubasi pada suhu 27 o C selama 24 jam, untuk P. infestans diinkubasikan pada suhu 22 o C.  Peubah yang diamati ialah pembesaran  diameter  koloni  cendawan setiap  hari,  sebagai  perlakuan  kontrol digunakan  media  biakan  tanpa  senyawa kandidat  fungisida.  Pengamatan  dilakukan selama 7 hari.

## PEMBAHASAN
1.   Isolasi,  Pemisahan  dan  Pemurnian
Senyawa  Limonoid  dari Clausena excavata
Sebanyak  10  kg  bahan  segar tumbuhan Clausena  excavata dimaserasi dengan  metanol.  Hasil  maserasi  diperoleh ekstrak metanol pekat. Selanjutnya terhadap ekstrak metanol tersebut dilakukan  fraksinasi  dengan  pelarut n - heksan,  aseton  dan  etil  asetat.  Setelah melalui  beberapa  proses  pemisahan  dan pemurnian dari fraksi kloroform (fraksi K) diperoleh senyawa limonoid, yaitu Clausenolida-1-etil eter (60 mg).
Clausenolida-1-etil eter diisolasi dari fraksi K.II.2.  Data  lengkap  untuk  limonoid  hasil isolasi  tersebut    bisa  dilihat  pada  Tabel  1. Selanjutnya,  untuk  bentuk  kristal  dan struktur  molekul  senyawa  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Tabel  1.   Data  titik  leleh,  spektrum  UV  dan  IR  untuk  senyawa  limonoid  dari Clausena excavata
Jenis senyawa Titik Leleh ( o C) Data Infra merah (cm -1 ) Data UV (nm) Penelitian Literatur Penelitian Literatur Penelitian Litera tur Clausenolida- 1-etil eter 168-169 168-169 3448; 2992; 1725; 1710; 1656; 1625; 1604; 1573; 1526; 1480; 1397; 1325; 1275; 1222; 1161; 1114; 1085; 980; 873 3445; 2992; 1723; 1708; 1650; 1625; 1600; 1570; 1520; 1480; 1390; 1320; 1275; 1220; 1160; 1115; 1085; 985; 870 220; 235; 255; 282; 328; 343 220; 230; 250; 285; 325; 340
O O O O O O H 3 CCH 2 O
(a)                                                              (b)
Gambar  1.   (a) Kristal Clausenolida-1-etil eter, dan (b) Struktur Molekul Clausenolida-1-etil eter
Dari  data  titik  leleh,  data  spektrum UV  dan  IR  menunjukkan  bahwa  pada penelitian  ini  telah  berhasil  mengisolasi senyawa limonoid Clausena excavata. Hal ini  diperkuat  oleh  data  standar,  terbukti setelah  data  hasil  penelitian  di  atas  yaitu titik  leleh  dan  λ maks spektrum  UV  dan  IR dibandingkan dengan data literatur menunjukkan kesamaan.
2. Uji Aktivitas Anti Cendawan Patogen Tanaman
Pada  penelitian  ini,    uji  aktivitas dilakukan  terhadap  tujuh  jenis  cendawan yaitu Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici (penyebab layu  pada tomat), Phytophthora infestans (penyebab  hawar  daun  pada kentang dan tomat), Colletotrichum capsici (penyebab antraknosa pada cabai),
Penicillium  digitatum (penyebab  kapang kelabu  ( grey  mould )  pada    buah  jeruk),
Rhizoctonia  solani (penyebab  hawar  pada pelepah  daun  padi), Sclerotium  roefsi (penyebab  busuk  pada  kacang  tanah) dan
Ganoderma  boninense (penyebab  busuk pangkal  batang  kelapa  sawit).  Sebelum dilakukan  pengujian  aktivitas  senyawa limonoid  terhadap  cendawan-cendawan tersebut, pertama-tama dilakukan pengujian  orientasi  untuk  memilih  metode yang  tepat  antara  metode  umpan  beracun dan  metode  sumur  serta  penentuan  variasi konsentrasi untuk pengujian. Pada pengujian  orientasi  senyawa  yang  diuji hanya Clausenolida-1-etil eter dan konsentrasi  yang  dipakai  1,  2,  3,  4,  5,  10, 15  dan  20  ppm.  Hasilnya  menunjukkan metode  sumur  lebih  baik  karena  senyawa yang  diuji  aktivitasnya,  akan  lebih  mudah terdifusi di dalam media. Sedangkan untuk konsentrasi yang baik adalah 5, 10, 15 dan 20 ppm, karena konsentrasi lebih kecil dari 5 ppm tidak memiliki aktivitas menghambat cendawan, sedangkan konsentrasi  lebih besar dari 20 ppm sudah membahayakan  kesehatan  manusia  jika senyawa ini digunakan dilapangan.
Perlu  diketahui  pada  penelitian  ini  pelarut yang  digunakan  adalah  kloroform,  maka sebelum  dilakukan  pengujian  senyawa limonoid  terhadap  cendawan  patogen tanaman, dilakukan terlebih dulu pengujian aktivitas  pelarut.  Hal  ini  dilakukan  untuk mengetahui  apakah  pelarut  mempunyai
aktivitas  atau  tidak.  Ternyata  setelah dilakukan  pengujian kloroform tidak mempunyai aktivitas anti cendawan patogen  tanaman.  Hasil  uji  aktivitas tersebut  bisa  dilihat  pada  Gambar  2 berikut:
Fusarium oxysporum                 Phytophthora infestans Colletotrichum capsici f.sp. lycopersici ,
Penicillium digitatum
Rhizoctonia solani
Sclerotium roefsi
Ganoderma boninense
Gambar  2.   Hasil pengujian aktivitas anti cendawan, kloroform terhadap beberapa cendawan patogen tanaman (5 hari inkubasi)
Kloroform Kloroform Kloroform Kloroform Kloroform Kloroform Kloroform

## Uji  Aktivitas  Senyawa  Limonoid  dari
Clausena  excavata Terhadap  Cendawan Patogen Tanaman
Pengujian aktivitas Clausenolida-1- etil  eter  terhadap Fusarium  oxysporum f.sp. lycopersici , Phytophthora  infestans , Colletotrichum capsici , Penicillium digitatum , Rhizoctonia  solani , Sclerotium roefsi dan Ganoderma boninense dilakukan dengan mengukur jari-jari pertumbuhan  koloni  cendawan  setiap  hari sampai  hari  kelima  inkubasi.  Selanjutnya data  yang  didapat  dikonversikan  menjadi persentase  penghambatan  pertumbuhan jari-jari koloni cendawan.
Dari empat macam variasi konsentrasi  (5,  10,  15  dan  20  ppm)  yang diujikan terhadap cendawan patogen tanaman,  ternyata  Clausenolida-1-etil  eter sangat  berpotensi  sebagai  fungisida  hayati karena  mempunyai  aktivitas  yang  kuat
dalam menghambat pertumbuhan cendawan Fusarium  oxysporum f.sp. lycopersici dan Ganoderma  boninense . Hasil  uji  aktivitas  untuk  5  hari  inkubasi menunjukkan Senyawa  Clausenolida-1-etil eter dengan konsentrasi 5 ppm sudah dapat menghambat pertumbuhan koloni Fusarium  oxysporum f.sp. lycopersici dan Ganoderma boninense . Senyawa
Clausenolida-1-etil eter dengan konsentrasi 5 ppm memberikan persentase penghambatan  terhadap  pertumbuhan  jari- jari koloni cendawan Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici (=55,50%) dan Ganoderma  boninense (=50,00%).  Tetapi terhadap  cendawan  lain  daya  hambatnya kurang.  Hasil  uji  aktivitas  Senyawa Clausenolida-1-etil eter dengan konsentrasi 5 ppm  terhadap Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici dan Ganoderma  boninense dapat dilihat pada Gambar 3 berikut:
Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici

## Ganoderma boninense
Gambar  3.   Hasil  pengujian  aktivitas  anti  cendawan  Senyawa  Clausenolida-1-etil  eter  terhadap Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici dan Ganoderma boninense (5 hari inkubasi) 5 ppm
10 ppm
15 ppm 20 ppm 5 ppm 10 ppm 15 ppm 20 ppm
Persentase Penghambatan Pertumbuhan Koloni Cendawan oleh Senyawa Limonoid dari Clausena excavata serta Analisis Statistik
Selanjutnya data lengkap tentang
persentase  penghambatan  pertumbuhan jari-jari  koloni  cendawan  oleh  senyawa limonoid  dari Clausena  excavata untuk  5 kali  pengujian  (n  =  5)  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  Pengamatan  Persentase  Penghambatan  Pertumbuhan  Koloni  Cendawan  oleh
Senyawa Limonoid dari Clausena excavata Senyawa Rataan Persentase Penghambatan Pertumbuhan Jari-jari Koloni Cendawan ( r (%), n = 5) Fusarium Phytophthora Colletotrichum Penicillium Konsentrasi (ppm) Konsentrasi (ppm) Konsentrasi (ppm) Konsentrasi (ppm) 5 10 15 20 5 10 15 20 5 10 15 20 5 10 15 20 Clausenolida- 1-etil eter 55 56 56,5
55 55 58 58 58 58 58 59 60 59,5 59,5 59,5 60 61 62 61 61 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 Rata-rata 55,5 58 59,5 61 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1

## Lanjutan Tabel. 2:
Senyawa Rataan Persentase Penghambatan Pertumbuhan Jari-jari Koloni Cendawan ( r (%), n = 5) Rhizoctonia Sclerotium Ganoderma Konsentrasi (ppm) Konsentrasi (ppm) Konsentrasi (ppm) 5 10 15 20 5 10 15 20 5 10 15 20 Clausenolida -1-etil eter 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 50 50 51 50 49 52 52 53 53 52,5 55 56,5 55 55 56 56 57
59 56 57 Rata-rata 0 0 0 0 0 0 0 0 50 52,5 55,5 57
Dari  tabel  di  atas  terlihat  bahwa senyawa  Clausenolida-1-etil  eter  5  ppm paling efektif persentase
penghambatannya, karena dapat
menghambat  pertumbuhan  jari-jari  koloni cendawan Fusarium  oxysporum f.sp. lycopersici (=55,50%)  dan Ganoderma boninense (=50,00%).

## KESIMPULAN
Pada  penelitian  ini  telah  berhasil diisolasi  senyawa  limonoid  Clausenolida- 1-etil eter dari Clausena excavata .
Pada pengujian aktivitas anti cendawan senyawa Clausenolida-1-etil eter terhadap  beberapa  cendawan  patogen tanaman terlihat bahwa Clausenolida-1-etil eter  dengan  konsentrasi  5  ppm  sangat efektif persentase penghambatannya,
karena  dapat  menghambat  pertumbuhan
jari-jari koloni cendawan Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici (=55,50%) dan Ganoderma boninense (=50,00%).

## DAFTAR PUSTAKA
1. Chakraborty, A., Saha, C., Podder, G., Chowdhury,  B.K.,  and  Bhattacharyya, P., 1995 ,  Carbazole  Alkaloid  with Antimicrobial  Activity  from Clausena heptaphylla , Phytochemistry ,  38:  787- 789.
2. Gisi, U., Binder, H., and Rimbach, E., 1985 ,  Synergistic  Interactions  of Fungicides  with  Different  Modes  of Action, Trans.  Br.  Mycol.  Soc. ,  85: 299-306.
3. Heyne,  K., 1987 , Tumbuhan  Berguna Indonesia ,  Jilid  II,  Badan  Litbang Kehutanan, Jakarta.
4. Joko, P.B., 1994 , Petunjuk
Penggunaan  Pestisida ,  PT.  Penebar
Swadaya, Jakarta.
5. Moore, E., 1996 , Fundamentals of The Fungi ,  Fourth  Edition,  Prentice  Hall International, Inc., New Jersey.
6. Muhaimin dan Harizon, 2003 ,
Penelusuran  Senyawa  Bioaktif  dari beberapa  Tumbuhan Clausena  sp ., Laporan  Penelitian  -  Universitas Jambi , Jambi.
7. Ngadjui,  T.B.,  Ayafor,  J.F.,  and Sondengam,  B.L., 1989 ,  Limonoids from Clausena  anisata , J.  Nat.  Prod ., 52: 832-835.
8. Pegg,  G.F., 1987 , Fungal  Infection  of Plants ,  Cambridge  University  Press, Cambridge.
9. Wu, T.S.,  Huang, C.S.,  and Wu,  L.P., 1996 , Limonoids and Carbazole
Alkaloids from Clausena excavata and Their Biological Activity, Phytochemistry , 43: 133-135.