## PENGARUH  PEMBERIAN  EKSTRAK BUAH MENGKUDU TERHADAP HISTOPATOLOGI TESTIS TIKUS PUTIH SETELAH MENGHIRUP ASAP ROKOK
Endah Rita Sulistya Dewi Jurusan Pendidikan Biologi IKIP PGRI Semarang

## INFLUENCE GIVING OF EXTRACT FRUIT MENGKUDU TO HISTOPATOLOGI TESTIS WHITE MOUSE FOLLOWING AN INHALATION CIGARETTE SMOKE

## ABSTRACT
This  Research  to  know  influence  giving  of  extract  fruit  Mengkudu (Morinda citrifolia) to  histopatologi  of  white  mouse (Rattus  norvegicus) testis  following  an inhalation  cigarette  smoke and  to  know    how  much  is    giving  of  extract  fruit  of Mengkudu  more having an effect on in an optimal fashion for the minimization of to  damage  of  testicle  seminiferus  tubulus  white  mouse  given  by  wistar  galur cigarette smoke treatmen.
Eksperiment  design  in  this  research  use  completely  random  design  (RAL)  by  four treatment that is (A) mouse + cigarette smoke + 0 ml / fruit extract day of Mengkudu as control; (B) mouse + cigarette smoke + 0,9 ml / fruit extract day of Mengkudu; ( C) mouse + cigarette smoke  + 1,8 ml / fruit extract day of  Mengkudu; (D). mouse +  cigarette  smoke  +  2,7  ml  /  fruit  extract  day  of  Mengkudu,  by  four  replication. Para-meter  the  measured  white  mouse  testis  seminiferus  tubulus  histopatologi. Research executed by UNNES in January 2011 until March 2011.
Result of research indicate that treatment of fruit extract of mengkudu give influence which signifikan ( p< 0,05) to white mouse testis seminiferus tubulus histopatologi of wistar galur. Usage of fruit extract of Mengkudu dose 1,8 ml / day optimal dose in  minimization  damage  of  white  mouse  testis  seminiferus  tubulus,  following  an inhalation cigarette smoke.
From  result  of  the  research  can  be  concluded  that  usage of  fruit  extract of   Meng- kudu can  minimization damage of white  mouse testis seminiferus tubulus given  by cigarette  smoke  treatmen.  But  antioksidan  with  excessive  dose  can  turn  into  pro- oksidan so that earn damage watering down  effect of free radical.
Keywords : fruit extract of mengkudu, testis, histopatologi, cigarette smoke

## . ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  buah Mengkudu (Morinda  citrifolia) terhadap  histopatologi  testis  Tikus  putih  ( Rattus norvegicus) setelah  menghirup  asap  rokok  dan  untuk  mengetahui  pada  dosis  bera- pakah pemberian ekstrak buah Mengkudu lebih berpengaruh secara optimal  untuk
meminimalkan kerusakan tubulus seminiferus testis tikus putih galur wistar yang di- beri asap rokok.
Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah  rancangan  acak  lengkap    (RAL) dengan  empat  perlakuan  yaitu  (A)  tikus  +  asap  rokok  +  0  ml/hari  ekstrak  buah mengkudu  sebagai  kontrol;  (B)  tikus  +  asap  rokok  +  0,9  ml/hari  ekstrak  buah mengkudu; (C) tikus + asap rokok + 1,8 ml/hari ekstrak buah mengkudu; (D). tikus +  asap  rokok  +  2,7  ml/hari  ekstrak  buah  mengkudu,  dengan  empat  kali  ulangan. Parameter  yang  diukur  adalah  histopatologi  tubulus  seminiferus  testis    tikus  putih. Penelitian dilaksanakan  di UNNES pada bulan Januari 2011 sampai Maret 2011.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  ekstrak  buah  mengkudu  mem- berikan  pengaruh  yang  signifikan  (p<  0,05)  terhadap  histopatologi  tubulus  semini- ferus testis tikus putih galur wistar.  Ekstrak buah mengkudu pada dosis 1,8 ml/hari adalah  dosis  optimal  dalam  meminimalkan  kerusakan  tubulus  seminiferus  testis tikus putih galur wistar setelah menghirup asap rokok.
Dari  hasil  penelitian  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  penggunaan  ekstrak  buah mengkudu  dapat  meminimalkan  kerusakan  tubulus  seminiferus  testis  tikus  putih galur wistar yang diberi asap rokok. Tetapi,  antioksidan dengan dosis berlebih dapat berubah  menjadi  prooksidan  sehingga  dapat  memperparah  kerusakan  akibat  dari radikal bebas.
Kata kunci : ekstrak buah mengkudu, testis, histopatologi, asap rokok.

## PENDAHULUAN
Saat  ini  kebanyakan  masyarakat  memiliki  tingkat  konsumsi  rokok  yang  tinggi  dan meyebabkan produksi asab rokok yang tinggi pula. Asap rokok mengandung sekitar 4000 senyawa, antara lain nikotin, tar, dan 3,4 benozopiren, karbonmonoksida, kar- bondioksida, nitrogen oksida, amonia, sulfur (Abas, 2004).
Nikotin  merupakan  suatu  alkaloid  yang  sudah  lama  dikenal,  di  dalam  asap rokok  senyawa  tersebut  semakin  lama  dapat  terakumulasi  pada  dinding  pembuluh darah perokok sehingga mampu menyempitkan pembuluh darah. Sementara itu asap rokok  yang  masuk  ke  paru-paru  dapat  dengan  cepat  diabsorbsi  dari  paru-paru  ke dalam  darah  dan  efisiensinya  sama  dengan  apabila  diberikan  secara  intravena. Senyawa  ini  mencapai  otak  dalam  waktu  8  detik  setelah  inhalasi.  Nikotin  bereaksi langsung  ke  jantung  dengan  merubah  kecepatan  denyut  dan  tekanan  darah  (Jamal, 1999).
Bahan utama rokok adalah daun tembakau ( Nicotiana tabacum ) kering yang merupakan  sumber utama nikotin (Alaunir, 1992). Radikal bebas dalam asap rokok dapat menimbulkan efek terhadap sistem reproduksi antara lain menunjukkan adanya gangguan  spermatogenesis,  menghambat  sel  leydig  sehingga  menghambat  hormon testosteron  dan  kerusakan  tubulus  seminiferus  testis.  Oleh  karena  itu, aktivitas radikal bebas dapat dihambat  oleh antioksidan seperti yang terkandung dalam buah mengkudu.
Di dalam tubuh  manusia sudah terdapat enzim yang dapat menangkal radikal bebas, namun apabila jumlah radikal berlebihan bila terkena paparan rokok maka tubuh me- merlukan antioksidan dari luar untuk menangkal radikal bebas. Antioksidan ini ter- diri dari dua macam yaitu enzimatik dan non ezimatik, antioksidan  enzimatik antara lain adalah superoksid dismutase, gluthation peroksidase, dan enzim katalase. Untuk antioksidan non enzimatik dapat berupa mikronutrien yang berupa vitamin.
Buah  mengkudu  dapat  berperan  sebagai  antioksidan  tubuh  karena  mengan- dung senyawa karoten dan vitamin C. Mengkonsumsi buah mengkudu akan menam- bah  kadar  antioksidan  tubuh  sehingga  dapat  melindungi  tubuh  dari  keadaan  stress oksidatif dan akibat yang akan ditimbulkannya (Andarwulan, 1992).
Permasalahan dalam penelitian ini ialah, bagaimanakah pengaruh pemberian ekstrak buah mengkudu ( Morinda citrifolia ) terhadap histopatologi testis  tikus putih ( Rattus norvegicus ) galur wistar yang diberi paparan asap rokok.
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh pemberian ekstrak buah mengkudu ( Morinda citrifolia ) terhadap histopatologi testis tikus putih ( Rattus nor- vegicus ) galur wistar yang diberi paparan rokok.

## MATERIAL DAN METODE

## 1. S UBJEK P ENELITIAN
Subjek penelitiam ini adalah tikus putih  ( Rattus norvegicus ) galur wistar berjumlah 16 ekor, dengan berat 200 g s/d 250 g; umur tikus berkisar antara 2,5 dan 3 bulan.

## 2.   B AHAN
Bahan-bahan yang digunakan adalah asap rokok kretek; buah Mengkudu segar yang sudah  masak  sebagai  bahan  ekstrak  mengkudu;  pakan  tikus  berupa  BR2  (pakan ayam pedaging); aquades untuk mencuci box smoking pump dan untuk minum tikus; dan bahan untuk pembuatan preparat histopatologi testis: testis tikus, aquades, xylol, caunter staining etelan, pewarna haris, formalin, parafin, albumin dan alkohol.

## 3. A LAT Y ANG D IGUNAKAN
Alat-alat  yang  digunakan  adalah:  smoking  pump,  blender,  neraca  ohaus,  beaker glass, pipet, penyaring, pengaduk, spuit, sarung tangan, mikroskop binokuler, objek glass, deck glass, kamera, penjepit, pisau bedah dan tabung reaksi.

## 4.   P ROSEDUR P ENELITIAN
Prosedur atau langkah-langkah penelitian adaalah sebagai berikut.

## 1. Persiapan kandang
Menyiapkan  empat  kandang  tikus  yang  sudah  bersih.  Masing-masing  kandang  ber- ukuran  cukup  untuk  menampung  empat  ekor  tikus  dan  memiliki  ventilasi  yang cukup, supaya tikus tidak stress.

## a. Penentuan Dosis Mengkudu
Penentuan  dosis  mengkudu  untuk  tikus  berpedoman  pada  beberapa  hal,  yaitu  dosis yang  biasa  dikonsumsi  manusia,  dihubungkan  dengan  berat  rata-rata  manusia  dan konversi  dosis  antar  jenis  hewan.  Menurut  Wiryowidagdo  (2009)  dan  Purbaya (2008), penggunaan mengkudu tanpa penambahan air diminum untuk orang dewasa pada berbagai indikasi penyakit dengan dosis antara 100—200 ml per hari.
Dosis tersebut dikonversikan dari manusia dengan asumsi berat badan rata – rata 70 kg ke  Tikus putih ( Rattus norvegicus ) galur wistar dengan asumsi berat ba- dan rata – rata 200 g dengan nilai konversi 0,018.
b. Pemeliharaan Tikus Percobaan
Tikus dipelihara dalam kandang yang berventilasi cukup. Suhu ruangan berkisar an- tara 28 o dan 32 o C. Makanan dan minuman diberikan ad libitum (pemberian secara berlebih atau diberikan terus menerus, tidak ada takarannya kapan dan berapa) dalam bentuk pelet. Pemberian pakan berupa BR2 (pakan ayam pedaging) Untuk menjaga kesehatan tikus, setiap 1 hari dilakukan pembersihan kandang.

## c. Tahap Perlakuan

## 1).  Pemberian Asap Rokok
Pemberian  asap rokok kretek selama 30 hari menggunakan Smoking pump  alat ini berupa  kotak  fiber  glass  yang  terbagi  menjadi  tiga  ruangan,  masing–masing berukuran  26  x  12  x  12  cm.  Di  dalam  setiap  ruangan  terdapat  pipa  untuk  menga- lirkan asap rokok. Bagian lainnya yaitu pompa berfungsi menghisap rokok yang kerj anya  dibantu  oleh  adaptor.  Pemberian  asap  menggunakan  satu  batang  rokok  kretek per hari.

## 2). Pengambilan Data
Data yang dikumpulkan dalam penelitian ini adalah data primer hasil penelitian eks- perimental  laboratorium  yang  berupa  gambaran  histopatologi  testis.  Data  diperoleh dengan mengambil sempel histologi testis.
Berikut  adalah  tabel  tingkat  kerusakan  tubulus  seminiferus  testis  yang menggambarkan tingkat kerusakan beserta nilai variasinya.
Tabel 2. Kriteria Penilaian Derajat Kerusakan Tubulus Seminiferus Testis
Kriteria Keterangan Nilai variasi Normal Tidak terdapat perubahan histologi 0 Kerusakan ringan Kerusakan tubulus seminiferus > 0% - < 30% 1 Kerusakan sedang Kerusakan tubulus seminiferus >30% - <60% 2 Kerusakan berat Kerusakan tubulus seminiferus >60% 3

## HASIL  DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  mengenai  pengaruh  pemberian  ekstrak  buah  mengkudu   terha- dap  kerusakan  struktur  histopatologi  terstis  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur wistar  yang  diberi  asap  rokok,  diperoleh data  hasil  pengamatan  pada  setiap  kelom- pok  perlakuan  (Tabel  3).  Data  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian  merupakan  data ordinal  yaitu  gambaran  kerusakan  histologi  testis  akibat  paparan  asap  rokok  yang dibagi dalam empat kategori. Keempat kategori itu adalah kategori normal, kategori kerusakan  ringan,  kategori  kerusakan  sedang,  dan  kategori  kerusakan  berat  dengan derajat  kerusakan  terstis  yang  dijadikan  parameter  berupa  struktur  histopatologi tubulus seminiferus.
Tabel 3. Data Pengamatan pada Masing-masing Kelompok
Kelompok Normal Kerusakan Ringan Kerusakan sedang Kerusakan berat ∑ A B C D 0 0 2 2 0 0 2 1 1 2 0 1 3 2 0 0 4 4 4 4
Keterangan :
A : kelompok perlakuan I sebagai kontrol  (0 ml/hari ekstrak mengkudu) B : kelompok perlakuan II (0,9 ml/hari ekstrak mengkudu) C : kelompok perlakuan III ( 1,8 ml/hari ekstrak mengkudu) D : kelompok  perlakuan IV (2,7 ml/hari ekstrak mengkudu)
Dari Tabel 3. dapat diketahui bahwa kerusakan testis secara kualitatif pada tikus pu-
tih selama tujuh hari diberi asap rokok dan tujuh hari berikutnya diberi ekstrak buah mengkudu  dengan  dosis  pada  kelompok  A  sebagai  kontrol  sebanyak  0  ml/hari kerusakan Ringan 0, kerusakan sedang 1, kerusakan berat 3. Kelompok B sebanyak 0,9 ml/hari ekstrak buah mengkudu   kerusakan ringan 0, kerusakan sedang 2, keru- sakan berat 2. Kelompok C sebanyak 1,8 ml/hari ekstrak buah mengkudu kerusakan ringan 2, kerusakan sedang 0, kerusakan berat 0. Kelompok  D sebanyak 2,7 ml/hari ekstrak buah mengkudu kerusakan ringan 1, kerusakan sedang 1, kerusakan berat 0.
Berdasarkan  histopatologi  testis  hasil  penelitian  yang  didapat  menyatakan bahwa    kerusakan  terparah  ditunjukkan  oleh  kelompok  kontrol  (0ml/hari  ekstrak buah mengkudu) dan pengaruh tertinggi pemberian ekstrak buah mengkudu terhadap histopatologi  testis  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur  wistar  terdapat  pada kelompok C (1,8 ml/hari ekstrak buah mengkudu).
Dari  penelitian  yang  telah  dilakukan  ternyata  asap  rokok  yang  diberikan selama  tujuh hari pada kelompok kontrol menunjukkan hasil gambaran yang paling maksimal mengalami kerusakan untuk histopatologi testis, bila dibandingkan dengan kelompok  perlakuan  yang  diberikan  ekstrak  buah  mengkudu.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  pemberian  asap  rokok  mempengaruhi  penurunan    histopatologi  testis  tikus putih  dan  menyebabkan  kelainan  histopatologi  testis  tikus  putih.  Pada  kelompok D (2,7ml/hari  ekstrak  buah  mengkudu)  menunjukkan  hasil  kerusakan  tubulus seminiferus  yang  lebih  parah  jika  dibandingkan  dengan  kelompok  B  (0,9ml/hari ekstrak  buah  mengkudu)    dan  C  (1,8ml/hari  ekstrak  buah  mengkudu),  hal  ini dikarenakan  antioksidan  dengan  dosis  berlebih  dapat  berubah  menjadi  prooksidan sehingga  dapat  memperparah  kerusakan  akibat  dari  radikal  bebas.  Jadi,  dosis  yang paling  optimal  dalam  meminimalisir  kerusakan  histologi  terstis  adalah  1,8  ml/hari ekstrak buah mengkudu.
Mikroanatomi  tubulus  seminiferus  yang  normal  akan  menunjukkan  asosiasi sel  spermatogenik  tersusun  berlapis  sesuai  dengan  tingkat  perkembangannya  dari membran  basalis  menuju  ke  arah  lumen  tubulus  yakni  spermatogonia,  spermatosit, dan  spermatid.  Lumen  tampak  terisi  penuh  oleh  spermatozoa.  Longgarnya  susunan sel  spermatogenik  tubulus  seminiferus  testis  pada  penelitian  ini  disebabkan  oleh adanya  kerusakan  sel-sel  spermatogenik  yang  selanjutnya  akan  berdegenerasi  dan difagositosis  oleh  sel  sertoly.  Tidak  penuhnya  spermatozoa  dalam  lumen  tubulus seminiferus  terjadi  karena  berkurangnya  jumlah  spermatid  dan  adanya  gangguan spermiogenesis  sehingga  spermatid  terhambat  untuk  berdiferensiasi  menjadi  sper- matozoa.  FSH,  testosteron,  dan  LH  adalah  hormon  yang  berperan  penting  dalam spermatogenesis.
Pemberian  dan  penghirupan  asap  rokok  dapat  menyebabkan  pembentukan radikal  bebas,  apabila  radikal  bebas  tidak  dihentikan  maka akan  merusak  membran sel  mitokondria.  Dalam  hal  ini  sel  mitokondria  adalah  penghasil  ATP  yang  diper- lukan untuk konversi testosteron dalam sel leydig dalam proses spermatogenesis. Bila mitokondria terganggu atau rusak maka  proses spermatogenesis  akan  mengalami
Dewi, E. R. S. Pengaruh Ekstrak Buah Mengkudu
gangguan.  Hal  ini  sesuai  dengan  Sauriasari  (2006)  yang  menyatakan  radikal  bebas dari  pyrethroid  dapat  menyebabkan  kerusakan  membran  mitokondria  sel  Leydig, kerusakannya  berupa  membran  sel  mitokondria  yang  tidak  berpasangan.  Selain  itu juga  dikatakan  bahwa  radikal  bebas  dari  pyrethroid  mengganggu  biosintesis  testo- steron  dan  menyebabkan  menurunnya  produksi  testosteron.  Supaya  gangguan  ter- sebut tidak terjadi maka dibutuhkan penetralisir asap rokok yang berupa antioksidan dari ekstrak buah mengkudu.
Gambar 1 . Gambaran Normal Tubulus Seminiferus pada Testis Tikus putih ( Rattus norvegicus ) Galur Wistar dengan Pengecatan HE pada Perbesaran 400X
Gambar 2. Gambaran Histopatologi Kerusakan Ringan Tubulus Seminiferus pada Testis Tikus putih ( Rattus norvegicus ) Galur Wistar dengan Pengecatan HE pada Perbesaran 400X
Gambar 3 . Gambaran Histopatologi Kerusakan Sedang Tubulus Seminiferus pada Testis Tikus putih ( Rattus norvegicus ) Galur Wistar dengan Pengecatan HE pada
Perbesaran 400X
Gambar 4 . Gambaran Histopatologi Kerusakan Berat Tubulus Seminiferus pada Testis Tikus putih ( Rattus norvegicus) Galur Wistar dengan Pengecatan HE pada Perbesaran 400X
Suatu  upaya  agar  kerusakan  histopatologi  tidak  terjadi  maka  perlu  diberikan  an- tioksidan  untuk  menangkal  radikal  bebas.  Antioksidan  adalah  substansi  yang  di- perlukan tubuh untuk menetralisir radikal bebas dan mencegah kerusakan yang ditim bulkan oleh radikal bebas terhadap sel normal, protein, dan lemak dengan cara me- nyumbangkan  elektron  hidrogen  kepada  radikal  bebas  untuk  menjadi  radikal  bebas stabil yang sifatnya tidak merusak. Antioksidan yang digunakan dalam penelitian ini
adalah  ekstrak  buah  mengkudu.  Mengkudu  dapat  memperbaiki  kerusakan  histo- patologi  testis  tikus,  karena  buah  mengkudu  memiliki  kandungan  penting  bagi kesehatan  yaitu  antraquinon,  asam  askorbat,  scopoletin,  xeronine,  proxeronine  dan serotonine.
Asam  askorbat,  xeronine  dan  proxeronin berperan  aktif  dalam memperbaiki kerusakan histopatologi testis  karena dalam asam askorbat memiliki sumber vitamin C  yang  berfungsi  menangkal  radikal  bebas  dengan  cara  menetralisir  paparan  asap rokok  didalam  sitosol  karena  vitamin  C  mempunyai  kelarutan  yang  tinggi  didalam air,  sedangkan  pada  xeronine  dan  proxeronin  mampu  mengatur  fungsi  protein  di dalam sel testis sehingga mencegah kerusakan pada testis (Guven et al, 2006).

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian  pengaruh ekstrak buah mengkudu terhadap histopatologi testis tikus  putih  setelah  menghirup  asap  rokok  dapat  disimpulkan,  bahwa  penggunaan ekstrak  buah  mengkudu  dapat  meminimalkan  kerusakan  tubulus  seminiferus  testis tikus  putih  galur  wistar  yang  diberi  asap  rokok.  Tetapi,  antioksidan  dengan  dosis berlebih dapat berubah menjadi prooksidan sehingga dapat memperparah kerusakan akibat dari radikal bebas.

## BIBLIOGRAFI
Abas.  2004. Kandungan  Berbahaya  Dalam  Rokok .  htt:/www.rcetre.utm.my/news. php?cod=110
Alaunir N. 1992. Penentuan kadar nikotin dalam berbagai merk rokok yang beredar di Sumatera Barat. Padang : IKIP Padang
Andarwulan, N. 1992. Kimia vitamin . Jakarta: CV. Rajawali.
Guven. 2006. Histologi fungsional . EGC.
Ganong, W. F. 2001. Fisiologi kedokteran . Jakarta. EGC
Jamal. 1999. Kebiasaan merokok, minum alkohol dan olah raga masyarakat. Medika, Jurnal Kedokteran dan Farmasi.
Mariati, A. dan W. Cristijanti. 2006. Petunjuk praktikum fisiologi hewan . Semarang: UNNES.
Sadewo, B. 2005. Tanaman obat populer . Jakarta: Agromedia Pustaka.
Sauriasari, R. 2006. Mengenal dan menangkal radikal bebas .http: rbcroad2.success. co.cc/
Syaifuddin. 2001 . Fungsi sistem tubuh manusia . Jakarta: Widya Medika
Toni, Hendri. 2006. Mengkudu khasiat dan peluang usaha. Semarang: Aneka Ilmu