Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) 2019; 5 (2): 183 – 188 ISSN : 2442-8744 (electronic) http://jurnal.untad.ac.id/jurnal/index.php/Galenika/index DOI: 10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13934
Ekstrak Etanol Daun Kacang Panjang  ( Vigna unguiculata (L.) Walp):

## Kajian Morfometri Insula Pankreatika Model Tikus Diabetes
( Ethanol  Extract  of  Some  Cowpea  (Vigna  unguiculata  (L.)  Walp)  Leaves:  Morphometry Study of Pancreatic Islet of Diabetic Rat Model )
Puput  Octaviani  Solehah 1 ,  Fikhta  Agnesya  Tarusu 1 ,  Joni  Tandi 1 ,  Niluh  Puspita  Dewi 1 , Gabriella Bamba Ratih Lintin 2 , Yuli Fitriana 3 , David Pakaya 3
1 Program Studi Ilmu Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Pelita Mas, Palu, 94118
2 Departemen Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tadulako, Palu, 94118
3 Departemen Histologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tadulako, Palu, 94118
Article Info: Received: 01 August 2019 in revised form: 02 September 2019 Accepted: 10 October 2019
Available Online: 14 October 2019

## ABSTRACT
Diabetes  is  characterized  by  an  increasing  of  blood  levels  and  progressive changes  in  the  structure of  pancreatic  islet  of  pancreas.  Natural  ingredients that contain antioxidants such as  some cowpea  leaves can  be an alternative treatment  for  diabetes.  This  study  aims  to  examine  the  effect  of  ethanol extract  of  some  cowepea  leaves  ( Vigna  unguiculata (L.)  Walp)  on morphometry  (perimeter  and  diameter)  of  pancreatic  islet  of  diabetic  rat models.  The  type  of  research  is  quasi-experimental  with  posttest  group design. Samples were 30 male wistar rats, age 8 weeks, BW 250-300 grams, that induced by single dose of STZ 40 mg/kg BW. Rats were divided into 5 groups.  Group  A:  normal  control,  Group  B:  negative  control,  Group  C: positive  control,  Group  D:  DM  rats  with  100mg/Kg  BW  extract  therapy, Group E:  DM  rats  with  200mg/Kg  BW  extract  therapy,  Group  F:  DM  rats with  extract therapy  300mg/Kg  BW.  Blood  sugar  levels  were  measured  on days  7,  14  and  21.  Pancreatic  tissue  was  prepared  with  5μm  thickness  and stained  with  Hematoxylin  Eosin.  The  sample  was  observed  under  400x magnification  microscope.  The  observation  uses  Image  J  software  to measure  the  perimeter  and  diameter  of  the  pancreatic  insula.  Data  were analyzed  by  non-parametric  Kruskal  Wallis  and  post  hoct  Mann  Whitney statistical  tests.  Blood  glucose  level  was  obtained  on  21st  day  with  the highest mean in group B (246.8±156.3) and lowest in group A (67.2 ±7.85), perimeter  of  pancreatic  islet  was  significantly  different  (p=0.026),  the diameter  is  significantly  different  (p  =0.046).  Ethanol  extract  of  some cowpea  ( Vigna  unguiculata (L.)  Walp)  leaves  with  dose  of  300mg/kgBB helps  to  restore  the  blood  and  morphometry  of  pancreatic  islet  model  of diabetic rats.
Keywords :
Vigna unguiculata (L.) Walp Diabetes
Morphometry Pancreatic islet

## Corresponding Author:
David Pakaya Departemen Histologi Fakultas Kedokteran
Universitas Tadulako Palu 94118 Indonesia email: davidpakaya@ymail.com
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.

## How to cite (APA 6th Style):
Solehah, P. O., Tarusu, F. A., Tandi, J., Dewi, N. P., Lintin, G. B. R., Fitriana, Y., & Pakaya, D. (2019). Ekstrak etanol daun kacang panjang ( Vigna unguiculata (L.) Walp): Kajian morfometri Insula Pankreatika model tikus diabetes. Jurnal Farmasi Galenika :Galenika Journal of Pharmacy, 5 (2), 183-188. doi:10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13934

## ABSTRAK
Diabetes  melitus  ditandai  dengan  terjadi  peningkatan  kadar  glukosa  darah  dan  perubahan  progresif pada  struktur  insula  pankreatika  pankreas.  Bahan  alam  yang  mengandung  antioksidan  seperti  daun kacang  panjang  dapat  menjadi  alternatif  pengobatan  diabetes.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji efek  ekstrak  etanol  daun  kacang  panjang  ( Vigna  unguiculata (L.)  Walp)  terhadap  morfometri (perimeter  dan  diameter)  insula  pankreatika  model  tikus  diabetes.  Jenis  penelitian  ini  adalah  kuasi eksperimental  dengan  rancangan posttest  group  design .  Sampel  berupa  tikus  Wistar  jantan,  usia  8 minggu,  BB  250-300  berjumlah  30  ekor,  di  induksi  STZ  dosis  tunggal  40  mg/kgBB.  Tikus  dibagi dalam 5 kelompok. Kelompok A: kontrol normal, Kelompok B: kontrol negatif, Kelompok C: kontrol positif, Kelompok D: tikus DM dengan terapi ekstrak 100mg/Kg BB, Kelompok E: tikus DM dengan terapi  ekstrak  200mg/Kg  BB,  Kelompk  F:  tikus  DM  dengan  terapi  ekstrak  300mg/Kg  BB.  Kadar glukosa  darah  puasa  diukur  pada  hari  ke  7,  14  dan  21.  Jaringan  pankreas  dibuat  sediaan  dengan ketebalan  5µm  dan  diwarnai  dengan  Hematoxylin  Eosin.  Sampel  diamati  dengan  mikroskop perbesaran 400x. Pengamatan menggunakan perangkat lunak Image J untuk mengukur perimeter dan diameter  insula  pankreatika.  Data  dianalisis  dengan  uji  statistik  non  parametrik Kruskal  Wallis dan post  hoct  Mann  Whitney. Kadar  glukosa  darah  puasa  didapatkan  pada  hari  ke-21  rerata  paling  tinggi pada  kelompok  B  (246,8±156,3)  dan  rerata  paling  rendah  pada  kelompok  A  (67,2±7,85),  perimeter insula  pankreatika  berbeda  signifikan  (p=0,026),  diameter  berbeda  signifikan  (p=0,046).  Ekstrak etanol  daun  kacang  Panjang  ( Vigna  unguiculata (L.)  Walp)  dosis  300mg/Kg  BB  membantu memperbaiki glukosa darah dan morfometri insula pankreatika model tikus diabetes.
Kata kunci: Vigna unguiculata (L.) Walp , diabetes , morfometri, insula pankreatika.

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  ditandai  dengan  meningkatnya kadar  glukosa  darah  yang  diakibatkan  gangguan sekresi, adanya gangguan kerja insulin atau gangguan keduanya  (Tandi,  2017).  Gangguan  ini  terjadi  akibat kerusakan  pada  pankreas  sebagai  kelenjar  eksokrin dan  endokrin.  Fungsi  endokrin  dari  pankreas  adalah organ difus yang tersebar sebagai kumpulan sel yang disebut  insula  pankreatika  (pulau  Langerhans), struktur ini 4 jenis sel (α, β, δ dan γ). Kerusakan sel β menjadi  penyebab  utama  gangguan  tersebut,  yang dipengaruhi  oleh  faktor  genetik,  infeksi  dan  kuman, faktor  nutrisi,  zat  diabetogenik  dan  radikal  bebas (stress oksidatif) (Komatsu et al., 2017).
Kerusakan  sel  β  pankreas  menyebabkan  tubuh  tidak bisa  menghasilkan  insulin  sehingga  kadar  glukosa darah  meningkat  (hiperglikemia).  Jumlah  insulin yang  dihasilkan  sangat  berhubungan  dengan  jumlah sel  β.  Temuan  klinis,  biologis  dan  histologis  telah membentuk  pandangan  bahwa  adanya  hubungan perubahan struktur terhadap fungsi pankreas (Paras et al., 2014;  Bosco et  al., 2010).  Adanya  defisiensi sekresi  insulin,  yang  menyebabkan  meningkatnya kadar  glukosa  darah  berhubungan  dengan  ukuran
jaringan  insular  pankreatika  (Walvekar, et  al., 2016; Shahriah et al., 2014).
Indonesia  mempunyai  keanekaragaman  hayati  yang sebagian  diantaranya  telah  dibuktikan  mempunyai khasiat  obat.  Salah  satunya  daun  kacang  panjang ( Vigna  unguiculata (L.)  Walp),  yang  mengandung antioksidan  dan  berpotensi  sebagai  antidiabetes. Adanya  potensi  tersebut  menjadi  alternatif  dalam pengobatan  diabetes.  Penggunaan  daun  kacang Panjang  ini  diduga  mampu  meregenarasi  sel  β pankreas  sehingga  kemudian  memperbaiki  struktur insula pankreatika secara
keseluruhan (Weththasinghea et  al., 2014;  Intan et  al., 2015). Tujuan penelitian ini untuk menganalisis efek ekstrak etanol  daun  kacang  panjang  ( Vigna  unguiculata (L.) Walp)  terhadap  morfometri  insula  pankreatika pankreas model tikus diabetes.

## METODE PENELITIAN

## Pembuatan Ekstrak Etanol Daun
Ekstrak  daun  kacang  panjang  dilakukan  dengan metode  maserasi,  simplisia  daun  kacang  panjang yang  telah  dijadikan  serbuk,  diekstraksi  dengan menggunakan pelarut etanol 96 %.

## Sampel Penelitian
Jenis  penelitian  ini  adalah  kuasi  eksperimental dengan rancangan posttest group design . Menggunakan tikus Wistar jantan, usia 8 minggu, BB 250-300  berjumlah  30  ekor,  tikus  di  induksi sterptozotosin  (STZ)  (Nacalai  3223891,  Nacalai Tesque,  Japan)  dosis  tunggal  40  mg/kgBB.  Tikus kemudian  dibagi  dalam  5  kelompok.  Kelompok  A: kontrol  normal,  Kelompok  B:  kontrol  negatif  (Tikus DM  tidak  terkontrol),  Kelompok  C:  kontrol  positif (Tikus  DM  dengan  terapi  glibenklamid  0,45 mg/kgBB),  Kelompok  D:  tikus  DM  dengan  terapi Ekstrak 100mg/KgBB, Kelompk E: tikus DM dengan terapi  Ekstrak  200mg/KgBB,  Kelompk  F:  tikus  DM dengan  terapi  Ekstrak  300mg/KgBB.  Dilakukan pengukuran  kadar  glukosa  darah  puasa  (GDP) dengan  glukometer  (Kadar  normal  50-135  mg/dl) pada hari ke 7, 14 dan 21.

## Pemeriksaan Histologi Pankreas
Pada  hari  ke-28,  tikus  dinekropsi  jaringan  pankreas, dibuat  dalam  blok  paraffin,  diiris  menggunakan mikrotom  dengan  ketebalan  5µm.  Jaringan  diwarnai dengan  Hematoxylin  Eosin  (HE).  Sampel  diamati menggunakan  mikroskop Olympus  CX-23 dengan perbesaran  400x  dengan Numerical  Aperture 1.25. Pengamatan  jaringan  menggunakan  perangkat  lunak ImageJ dengan  mengukur  perimeter  dan  diameter insula pankreatika.

## Analisis statistik
Data  setiap  kelompok  dihitung  rerata  dan  simpang bakunya.  Dianalisis  menggunakan  program  SPSS versi  23  dengan  uji  statistik  non  parametrik Kruskal Wallis dan post hoct Mann Whitney .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Umum Hewan Model dan

## Pemeriksaan GDP
Pada  penelitian  ini  digunakan  30  ekor  tikus. Perlakuan  hewan  model  dilakukan  dengan  induksi STZ  kecuali  pada  kelompok  A,  hari  ke-7  pasca induksi  STZ  tikus  mengalami  peningkatan  kadar GDP  >135mg/dL  (hiperglikemia).  Tikus  yang mengalami hiperglikemia memiliki beberapa ciri fisik seperti, bulu berwarna kusam, kusut, tidak mengkilap dan  mencit  kurang  aktif  bergerak  atau  tidak  lincah. Berdasarkan pengamatan selama perawatan, botol air minum pada mencit hiperglikemia tampak lebih cepat
habis,  artinya  terjadi  peningkatan  konsumsi  air minum  (polidipsi).  Alas  kandang  mencit  tampak selalu  basah,  hal  ini  menandakan  mencit  mengalami poliuria.
Pemeriksaan  kadar  GDP  pada  hari  ke-21,  didapati dua  kelompok  memiliki  rerata  kadar  GDP  normal, kelompok A 67,2±7,85 dan kelompok E 99,2±62,89. Hal  ini  menandakan  terdapat  perbaikan  kadar  GDP pada kelompok E yang diberikan ekstrak 200mg/KgBB  dibandingkan  dengan  kelompok  terapi ekstrak  lainnya  maupun  kontrol  positif,  seperti  yang terlihat pada gambar 1.
1 2 3 0 200 400 600 Hari Pengukuran K ad ar G D P ( m g /d L ) Kelompok A Kelompok B Kelompok C Kelompok D Kelompok E Kelompok F H7
H14 H21
Gambar 1. Diagram batang nilai rerata kadar glukosa darah puasa. Kelompok A berada pada kadar normal pada 3 waktu pengkuran, kelompok yang diinduksi STZ menunjukkan peningkatan rerata kadar GDP pada hari ke- 7 dan reratanya menurun hingga hari ke-21.
Pada penelitian ini didapatkan kadar GDP pada 7 hari pasca induksi STZ meningkat sangat tinggi kemudian menurun, namun tetap pada kondisi hiperglikemia (> 135mg/dL) sampai perawatan hari ke-21. Peningkatan  kadar  GDP  secara  drastis  timbul  karena sifat  toksisitas  STZ  yang  sangat  cepat  merusak  sel  β pankreas.  Besarnya  dosis  STZ  akan  mempengaruhi tingkat  kerusakan  tersebut.  Peningkatan  kadar  GDP yang  drastis  7  hari  setelah  induksi  disebabkan  oleh efek  toksis  STZ  yang  merusak  sel  β  pankreas (Nugroho,  2006).  Ekstrak  etanol  daun  kacang Panjang  mengandung  polifenol,  vitamin  C  dan vitamin  E  yang  berfungsi  sebagai  antioksidan. Antioksidan  mampu  menghambat  reaksi  oksidasi menjadi  netral  terhadap  sel  normal,  protein,  dan lemak  sehingga  dapat  melindungi  pankreas  dari kerusakan.  Antioksida  ini  diperlukan  dalam  proses perbaikan  transfer  insulin  ke  dalam  sel,  dan regenerasi  sel-sel  pada  insula  pankreatika  utamanya sel  β  yang  rusak  akibat  radikal  bebas  (Intan et  al., 2015; Awika & Duodu ., 2016; Weththasinghea et al., 2014; Jayathilake et al., 2018).
Perimeter  insula  pankreatika  paling  kecil  didapatkan pada  kelompok  B  yang  mengalami  diabetes (707,50±63,28)  dan  mengalami  perbaikan  saat diberikan terapi standar (kelompok C) (848,77±154,63).  Pemberian  ekstrak  bunga  sepatu dosis 200mg/KgBB (kelompok E) mulai menunjukkan perubahan
rerata perimeter (885,17±119,71)  menyerupai  kelompok  C.  Pada kelompok  F  dengan  pemberian  dosis  300mg/KgBB ekstrak  bunga  sepatu  menghasilkan  perbaikan  rerata perimeter (1063,96±146,59) yang menyerupai kelompok A, yang tampak pada gambar 2.
A B C D E F 0 500 1000 1500 2000 Kelompok Perlakuan P e ri m e te r (  m ) * * # +
Gambar 2. Diagram batang nilai rerata perimeter insula pankreatika. Uji Kruskal Wallis p=0,026. Uji post hoc Mann Whitney : kelompok A vs B (p=0,117), kelompok A vs C (p=0,175), kelompok A vs D (p=0,076), kelompok A vs E (p=0,175), kelompok A vs F (p=0,327), kelompok B vs C (p=0,175), kelompok B vs D (p=0,754), kelompok B vs E (p=0,016), kelompok B vs F (p=0,014), kelompok C vs D (p=0,251), kelompok C vs E (p=0,465), kelompok C vs F (p=0,08), kelompok D vs E (p=0,076), kelompok D vs F (p=0,014), kelompok E vs F (p=0,142).
*=p<0,05 vs Kelompok B, #=p<0,05 vs Kelompok C, += p<0,05 vs Kelompok D
Diameter  insula  pankreatika  paling  kecil  didapatkan pada  kelompok  B  yang  mengalami  diabetes (159,98±14,37)  dan  mengalami  perbaikan  saat diberikan terapi standar (kelompok C) (189,45,77±46,23).  Pemberian  ekstrak  bunga  sepatu dosis 200mg/KgBB (kelompok E) mulai menunjukkan perubahan
rerata diameter (184,54±43,25)  menyerupai  kelompok  C.  Pada
kelompok  F  dengan  pemberian  dosis  300mg/KgBB ekstrak  bunga  sepatu  menghasilkan  perbaikan  rerata diameter  paling  baik  (259,11±29,03),  seperti  yang tampak pada gambar 3.
A B C D E F 0 100 200 300 400 500 Kelompok Perlakuan D ia m e te r (  m ) * #
Gambar 3. Diagram batang nilai rerata diameter insula pankreatika. Uji Kruskal Wallis p=0,046. Uji post hoc Mann Whitney : kelompok A vs B (p=0,117), kelompok A vs C (p=0,117), kelompok A vs D (p=0,076), kelompok A vs E (p=0,117), kelompok A vs F (p=0,462), kelompok B vs C (p=0,251), kelompok B vs D (p=0,917), kelompok B vs E (p=0,602), kelompok B vs F (p=0,014), kelompok C vs D (p=0,175), kelompok C vs E (p=0,917), kelompok C vs F (p=0,050), kelompok D vs E (p=0,465), kelompok D vs F (p=0,0,14), kelompok E vs F (p=0,050).
*=p<0,05 vs Kelompok B, #=p<0,05 vs Kelompok D
Gambar 4. Insula Pankretika Pankreas dengan pewarnaan HE model tikus Diabetes Melitus. Perbesaran 400 kali dan skala 100 μm. Keterangan : (A) Kelompok A, (B) Kelompok B, (C) Kelompok C, (D) Kelompok D,
(E) Kelompok E, (F) Kelompok F. Garis putih menunjukan diameter, garis kuning menunjukan perimeter.
Kerusakan  sel  β  pankreas  memicu  terjadinya hiperglikemia. Kerusakan pada sel-sel insula pankreatika  pankreas  berefek  terhadap  perubahan morfometrinya  dari  sisi  ukuran  perimeter  maupun diameter.  Akan  tetapi  saat  terjadi  hiperglikemia sebagian  kecil  siklus  sel  β  masih  dapat  terus berproliferasi  bila  dibutuhkan  sebagai  mekanisme kompensasi  tehadap  peningkatan  kebutuhan  insulin (Nesti  &  Baidlowi,  2017).  Termasuk  adanya kemampuan  plastisitas  sel  α  menjadi  sel  β  akan memperbaiki  struktur  maupun  morfometri  insula pankreatika.  Adanya  aktivitas  senyawa  aktif  yang berperan sebagai antiinflamasi dalam fraksi etil asetat pada  daun  kacang  panjang,  yaitu  flavonoid  dan alkaloid  (Zia-Ul-Haq et  al., 2013),  dapat  mencegah dan  menghentikan  kerusakan  sel  β  pankreas  lebih lanjut.  Sedangkan,  dimungkinkan  alkaloid  berperan dalam  regenerasi  sel,  dengan  memulihkan  sel  β pankreas  yang  mengalami  kerusakan  parsial  (Gupta &  Neera,  2006;  Awika  &  Duodu ., 2016;  Jayathilake et  al., 2018)  sehingga  terjadi  perbaikan  morfometri pankreas.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  kacang  Panjang  ( Vigna unguiculata (L.)  Walp)  dosis  300mg/KgBB membantu memperbaiki kadar glukosa darah dan
morfometri  insula  pankreatika  model  tikus diabetes.

## DAFTAR PUSTAKA
Awika,  J.  M.,  &  Duodu,  K.  G.  (2016).  Bioactive polyphenols  and  peptides  in  cowpea  ( Vigna unguiculata )  and  their  health  promoting properties:  A  review. Journal  of  Functional Foods, 38, 686-697.
Bosco,  D.,  Armanet,  M.,  Morel,  P.,  Niclauss,  N., Sgroi,  A.,  &  Muller,  Y.  D.  (2010).  Unique Arrangement  of-  and-Cells  in  Human  Islets  of Langerhans. Diabetes . 59, 1202-1210.
Gupta, M., & Neera, S. (2006). Regeneration of beta Cells  in  Islet  of  Langerhans  of  Pancreas  of Alloxan  Diabetic  Rats  by  Acetone  Extract  of Momordica  charantia (Linn)  (bitter  gourd) Fruits. Indian  Journal  of  Experimental Biology, 45, 1055-1062.
Intan,  F.,  Aprilia,  M.,  Nur,  S.,  Razali,  D.  T.,
Armansyah.,  &  Nuzul,  A.  (2015).  Pengaruh Pemberian Kacang panjang ( Vigna
unguiculata )  Terhadap  Kadar  Glkukosa  Darah Tikus Mencit ( Mus muscullus ) Yang Diinduksi Streptozotocin. Jurnal  Medika  Veterinaria,
9 (2), 97-100. A B C
D E F
Jayathilake,  C.,  Visvanathan,  R.,  Deen,  A., Bangamuwage,  R.  Jayawardana,  B.  C.,  & Nammic,  S.,  (2018).  Cowpea:  an  overview  on its  nutritional  facts  and  health  benefits. J  Sci Food Agric.
Komatsu,  H.,  Cook,  C.,  Wang,  C.  H.,  Medrano,  L.,
Lin,  H.,  &  Kandeel,  F.  (2017).  Oxygen environment  and  islet  size  are  the  primary limiting  factors  of  isolated  pancreatic  islet survival. PLoSONE, 12 (8):e0183780.
Nesti,  D.  R.,  &  Baidlowi,  A.  (2017).  Profil  Glukosa
Darah, Lipid Dan Visualisasi Pulau Langerhans Sebagai  Imunomodulator  Insulin
Dan  Glukagon  Pada  Pankreas  Tikus  ( Rattus norvegicus )  Obesitas  Menggunakan  Teknik Imunogistokimia. Jurnal  Nasional  Teknologi
Terapan, 1 (1), 24 – 32.
Nugroho,  A.  E.  (2006).  Hewan  Percobaan  Diabetes Mellitus:  Patologi  Dan  Mekanisme  Aksi Diabetogenik. Biodiversitas, 7 (4), 378-82.
Paras,  S.,  Koko,  V.,  Gojkovic,  I.,  &  Matavuli,  M.
(2014).  Long  term  effect  of  extremely  low frequency  electromagnetic  fiel  on  islet  of pancreas structure. Biologia Serbica, 36 (1), 24-
31.
Shahriah,  S.,  Nurunnabi,  A.  S.  M.,  Begum,  G.  N., Kabir,  R.  (2014).  Histomorphometric  Changes of  Pancreatic  Islets  with  Advancing  Age  –  A Postmortem  Study  in  A  Bangladeshi  Male Population. Nepal J Med Sci, 3 (1), 63-7.
Tandi, J. (2017). Efect of Extract of Kenikir ( Cosmos caudatus Kunth.)  Leaves  to  the  Decrease  in
Blood  Glucose,  Cholestrol  and  Toward Histopatology  Pancreas  Description  in  Male with Rats ( Rattus norvegicus )
Hypercholestrolemia. J Trop Pharm , 1 (1).
Walvekar,  M.  V.,  Potphode,  N.  D.,  Desai,  S.  S.,  & Deshmukh, V. M. (2016). Histological Studies on Islets of Langerhans of Pancreas in Diabetic Mice  after  Curcumin  Administration. Int  J Pharm Clin Res . 8(9):1314-1318.
Weththasinghea,  P.,  Liyanageb,  R.,  Vidanarachchia, J.,  Pererab,  O.,  &  Jayawardanaa,  B.  (2014). Hypocholesterolemic and Hypoglycemic
Effect of Cowpea ( Vigna unguiculata L. Walp) Incorporated  Experimental  Diets  in  Wistar
Rats  ( Rattus  norvegicus ). Agriculture  and Agricultural Science Procedia, 2 , 401 – 405.
Zia-Ul-Haq,  M.,  Ahmad,  S.,  Amarowicz,  R.,  &  De Feo,  V.  (2013).  Antioxidant  Activity  of  the Extracts  of  Some  Cowpea  ( Vigna  unguiculata (L)  Walp.)  Cultivars  Commonly  Consumed  in Pakistan. Molecules, 18, 2005-2017.