Vol. 8, No. 1, Mei 2017 Hal: 51-61
RESPONS IKAN ZEBRA EKOR HITAM ( Dascyllus melanurus )

## TERHADAP PENGGUNAAN ANAESTESI MINYAK CENGKEH SEBAGAI ALAT BANTU PENANGKAPAN PADA SKALA LABORATORIUM
Response of Zebra Fish Blacktail (Dascyllus melanurus) on the use of Clove Oil Anesthesia as a Tool for Catching in Laboratory Scale
Oleh:
Sri Wahyuni Rahim 1*
1 Jurusan Perikanan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Hasanuddin
* Korespondensi: yunirahim@yahoo.co.id
Diterima: 04 Desember 2015;  Disetujui: 18 November 2016

## ABSTRACT
The  process  of  catching  fish  using  an  anesthetic  technique  is  inseparable  from  the  use  of synthetic chemicals (cyanide) that negatively impact the target fish, non-target and on coral reefs. One  way  to  reduce  the  negative  impact  of  cyanide  is  to  look  for  another  alternative  that  are environmental  friendly.  One  alternative  is  clove  oil.  The  objectives  of  study  are  to  determine  the optimal  concentration  of  clove  oil  on  the  induction  and  recovery  time  of  zebra  fish  blacktail (Dascyllus melanurus). Samples used were captured without using cyanide.  A tank with dimension 30  x  40  x  50  m  filled  with  sea  water  was  mixed  with  different  concentrations  of  clove  oil.  The experiment was repeated three times. Observation of the behavior was performed to determine the induction  and  recovery  time.  The  results  showed  the  longest  induction  time  were  observed  in concentration of 20 ppm with an average time of 321.33 seconds and the fastest time of induction was  recognized  in  concentration  of  60  ppm  with  an  average  time  of  28.33  seconds.  Longest recovery time was at a concentration of 20 ppm with an average time of 188.33 seconds and the fastest  recovery  time  was  at  a  concentration  of  40  ppm  with  an  average  time  of  80.67  seconds. Clove oil concentration of 40 ppm was most effective in fishing with induction time ranged from 40- 48 seconds, and recovery time ranges from 72-91 seconds.
Keywords: clove oil, induction time, recovery time, zebra fish blacktail

## ABSTRAK
Proses  penangkapan  ikan  dengan  menggunakan  teknik  pembiusan  tidak  terlepas  dari penggunaan  bahan  kimia  sintetik  (sianida)  yang  berdampak  negatif  terhadap  ikan  target,  non- target serta pada terumbu karang. Salah satu cara untuk mengurangi dampak negatif dari sianida adalah dengan mencari alternatif lain yang ramah lingkungan. Salah satu alternatif yang digunakan adalah  minyak  cengkeh.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  konsentrasi  optimal  minyak cengkeh  terhadap  waktu  induksi  dan  waktu  pulih  ikan  zebra  blacktail  ( Dascyllus  melanurus ). Sampel yang digunakan  ditangkap tanpa mengggunakan sianida.  Akuarium berukuran 30 x 40 x 50  m  diisi  dengan  air  laut.  Kemudian  dimasukkan  beberapa  konsentrasi  minyak  cengkeh  yang berbeda  (20,  30,  40,  50  dan  60  ppm).  Pengamatan  terhadap  tingkah  laku  dilakukan  untuk menentukan  waktu  induksi  dan  waktu  pulih.  Hasil  penelitian  menunjukkan  waktu  induksi  terlama terdapat pada konsentrasi 20 ppm dengan waktu rata-rata 321,33 detik dan waktu induksi tercepat terdapat  pada  konsentrasi  60  ppm  dengan  waktu  rata-rata  28,33  detik.  Waktu  pulih  terlama terdapat  pada  konsentrasi  20  ppm  dengan  waktu  rata-rata  188,33  detik  dan  waktu  pulih  tercepat
terdapat pada konsentrasi 40 ppm dengan waktu rata-rata 80,67 detik. Penelitian ini menunjukkan bahwa  konsentrasi  minyak  cengkeh  40  ppm  merupakan  konsentrasi  yang  paling  efektif  dalam proses penangkapan ikan zebra blacktail ( Dascyllus melanurus ) dengan waktu induksi berkisar 40 – 48 detik dan waktu pulih berkisar 72 – 91 detik.
Kata kunci: minyak cengkeh, waktu Induksi, waktu pulih, ikan zebra blacktail

## PENDAHULUAN
Berdasarkan wawancara dengan nelayan pada  saat  survei  pendahuluan,  pembiusan merupakan  salah  satu  cara  penangkapan  ikan yang  sering  dilakukan  oleh  nelayan  di  perairan Makassar, khususnya ikan-ikan yang hidup pa- da  ekosistem  terumbu  karang.  Setelah  dibius, ikan  akan  keluar  dari  tempat  persembunyian- nya  (terumbu  karang),  sehingga  memudahkan nelayan dalam proses penangkapan.
Dalam proses pembiusan, nelayan umumnya  menggunakan  potassium  sianida sebagai  bahan  anestesinya.  Namun  penggu- naan  sianida  dalam  proses  penangkapan  ikan hias  berdampak  negatif  terhadap  ikan  target dan  ikan  non-target  serta  berdampak  pada kerusakan  terumbu  karang  yang  sangat  hebat. Rubec et  al (2001)  menyatakan  bahwa  ikan yang  dipaparkan  sianida  akan  mengalami sesak  napas  meskipun  telah  dipindahkan  pada air  laut  yang  bersih.  Selain  itu,  penangkapan menggunakan  sianida  telah  terbukti  merusak ekosistem terumbu karang.  Pemaparan sianida pada  karang  selama  10  menit  mengalami kematian  dalam  waktu  7  hari,  sedangkan  pada konsentrasi  yang  rendah  telah  menyebabkan zooxanthellae  yang  bersimbiosis  dalam  karang lepas  dan  kapasitas  fotosintesis  menjadi terganggu,  yang  dapat  mengakibatkan  karang akan  mati  selama  periode  waktu  yang  lebih lama  (Jones  dan  Steven,  1997;  Jones et  al . 1999  dan  Cervino et  al .  2003).        Oleh  karena itu,  perlu  dicari  alternatif  obat  bius  pengganti sianida  yang  ramah  lingkungan  untuk  mem- bantu  penangkapan  ikan-ikan  karang.    Salah satu  alternatif  yang  dapat  dicoba  untuk  di- gunakan  adalah  minyak  cengkeh.    Minyak cengkeh  yang  berasal  dari  tanaman  cengkeh mengandung  eugenol  (senyawa  oksigenatid hidrokarbon)  dan  merupakan  salah  satu  zat anastetik.  Minyak  cengkeh  mempunyai  bebe- rapa kelebihan antara lain harganya relatif lebih murah,  mudah  dalam  penggunaannya,  dapat bekerja meskipun dalam konsentrasi yang lebih rendah,  alami,  dan  yang  lebih  penting  lagi mudah  diperoleh  karena  cengkeh  merupakan komoditas lokal yang cukup tinggi di Indonesia.
Penelitian-penelitian  sebelumnya  telah menunjukkan  efektivitas  minyak cengkeh  untuk digunakan  sebagai  bahan  bius  dalam  proses transportasi  dan  penanganan  ikan  dibanding
obat  bius  yang  lain,  seperti  yang  telah  dilapor- kan  pada  rainbow  trout  ( Oncorhynchus  mykiss Walbaum  (Keene et  al .  1998),  ikan  karang Pomacentrus  amboinensis Bleeker  (Munday and  Wilson  1997),  channel  catfish  ( Ictalurus punctatus Rafinesque)  (Waterstrat  1999),  dan ikan  baronang  (rabbitfish/ Siganus  lineatus ) (Soto  dan  Burhanuddin  1995).  Namun,  masih sangat  sedikit  penelitian  yang  dilakukan  untuk tujuan penangkapan.
Ikan  zebra  blacktail  ( Dascyllus  mela- nurus )  merupakan  salah  satu  jenis  ikan  hias yang  hidup  pada  ekosistem  terumbu  karang dan merupakan salah satu ikan yang ditangkap oleh  nelayan  menggunakan  bius  sianida  untuk ikan  hias  dalam  akuarium  air  laut  (hasil wawancara  dengan  nelayan).    Hal  inilah  yang mendasari  digunakannya  ikan  zebra  blacktail sebagai  sampel  ikan  hias  air  laut  pada percobaan  ini.    Berkaitan  dengan  penggunaan minyak cengkeh terhadap respons tingkah laku ikan  zebra  blacktail  ( Dascyllus  melanurus ), maka  dipandang  perlu  untuk  mengamati  waktu induksi  dan  waktu  pulih  ikan  zebra  blacktail ( Dascyllus melanurus ) pada konsentrasi minyak cengkeh yang berbeda. Penelitian  ini  bertujuan untuk  menganalisis konsentrasi optimal  minyak cengkeh  terhadap  waktu  induksi  dan  waktu pulih  ikan  zebra  blacktail  ( Dascyllus  mela- nurus ).

## METODE
Penelitian  dilakukan  pada  Bulan  Juli – Agustus 2014.  Lokasi penelitian pada Hatcheri Fakultas  Ilmu  Kelautan  dan  Perikanan,  Uni- versitas  Hasanuddin  di    Pulau  Barrang  Lompo, Makassar, Sulawesi Selatan.
Penelitian  ini  menggunakan  hewan  uji ikan  zebra  blacktail  ( Dascyllus  melanurus )  se- banyak  18  ekor  (15  ekor  ikan  untuk  ekspe- rimen,  3  ekor  ikan  merupakan  ikan  kontrol). Ikan  ini  merupakan  salah  satu  ikan  hias  yang sering bersembunyi di terumbu karang.  Dalam penangkapan  ikan  ini,  nelayan  umumnya menggunakan  sianida.  Namun,  dalam  pe- nangkapan  ikan  untuk  sampel  penelitian  ini tidak  menggunakan  sianida  dalam  penang- kapannya.    Oleh  karena  itu,  nelayan  dipantau dalam  proses  penangkapannya.    Ukuran    ikan berkisar  8-10  cm.  Sebelum  eksperimen  dila-
kukan,  ikan  sampel  dikumpulkan  di  dalam  bak penampungan selama 1 (satu) minggu.  Hal ini dimaksudkan agar supaya sampel ikan tersebut dapat  melakukan  proses  aklimatisasi    Ikan sampel  diberi  pakan  alami  2  (dua)  kali  sehari selama  proses  aklimatisasi.  Proses  penyi- ponan    dilakukan  sebelum  pemberian  pakan, hal  ini  bertujuan  agar  sisa  pakan  dan  sisa  me- tabolisme  yang  ada  tidak  mengganggu  ke- hidupan  ikan.    Bak  penampungan  yang  digu- nakan  diberi  aerasi  dan  sirkulasi  air  sepanjang waktu yang berasal dari perairan Pulau Barrang Lompo (suhu 29 o C; pH 7,8; Salinitas 30 mg/L). Hewan  uji  dipuasakan  selama  8-10  jam sebelum  eksperimen  dilakukan  agar  supaya ikan tidak mengalami  muntah pada saat proses anaestesi.
Penelitian  menggunakan  2  akuarium kaca yang berukuran 30 x 40 x 50 m yang diisi air laut dengan volume 50  liter, ketebalan kaca 1  mm,  yang  masing-masing  dilengkapi  dengan aerator.  Satu  akuarium  untuk  eksperimen induksi  dan  satu  akuarium  untuk  pemulihan. Akuarium diisi dengan air laut yang berasal dari perairan  Barrang  Lompo.    Kualitas  air  pada saat  eksperimen  yaitu  suhu  29 o C;  pH  7,8; Salinitas 30 mg/L..
Kadar  eugenol  dalam  minyak  cengkeh adalah 83,058 % (dianalisis dengan mengguna- kan metode kromatografi ion HPLC).   Sebelum eksperimen, minyak cengkeh dilarutkan terlebih dahulu di dalam 95 % ethanol dengan ratio 1 : 8 (Cho  and  Heath  2000).  Kemudian  larutan  ter- sebut disemprotkan ke dalam akuarium dengan konsentrasi  yang  berbeda  (20,  30,  40,  50,  60 ppm)  berdasarkan  hasil  penelitian  sebelumnya (Griffiths  2000;  Cunha  2006;  Rahim et  al . 2013).
Pengamatan respons ikan dengan mengamati  tingkah  laku  ikan  sebelum  dan setelah    pemaparan  minyak  cengkeh  menggu- nakan video  camera.    Pengamatan  yang  dila- kukan  meliputi  gerakan  ikan  sebelum  dipa- parkan  minyak cengkeh, tahapan-tahapan ting- kah  laku  ikan  setelah  dipaparkan  minyak cengkeh  dan  tahapan  pulih  setelah  ikan dipindahkan  ke  akuarium  pulih  (Tabel  1). Kemudian  membandingkan  gerakan-gerakan (tingkah  laku)  ikan  perlakuan  (ikan  yang dipaparkan  minyak  cengkeh  dengan  beberapa konsentrasi) dengan ikan kontrol untuk mengamati  ada  tidaknya  perbedaan  tingkah laku  pada  ikan  sampel.    Setiap  perlakuan konsentrasi  menggunakan  ikan  eksperimen yang berbeda.
Selajutnya  dilakukan  pengamatan  terha- dap  waktu  induksi  dan  waktu  pulih.    Penelitian ini  menggunakan  disain  eksperimen  Ran-
cangan  Acak  Lengkap  (RAL)  untuk  mengamati waktu  induksi  dan  waktu  pulih.    Rancangan  ini terdiri  dari  5 perlakuan konsentrasi (20,  30,  40, 50  dan  60  ppm)  dengan  3  kali  pengulangan berdasarkan  hasil  penelitian  Griffiths  (2000), Cunha  (2006)  dan  Rahim et  al .  (2013).    Dua akuarium  yang  digunakan,  masing-masing mengamati  waktu  induksi  (yang  dihitung  mulai pada  saat  ikan  disemprotkan  dengan  minyak cengkeh  sampai  ikan  mengalami  pingsan)  dan waktu  pulih  (yang  dihitung  sesaat  setelah pingsan sampai ikan kembali pulih) dengan ciri- ciri seperti pada Tabel 1.  Ada dua buah Digital Video Camera yang diletakkan pada kedua sisi akuarium  untuk  mengamati  respons  tingkah laku  ikan,  waktu  induksi  dan  waktu  pulih  ikan. Akuarium diisi dengan air laut sebanyak 50 liter kemudian dimasukkan ikan sampel kedalamnya lalu  diamati  gerakan-gerakan  ikan  sebelum dipaparkan  minyak  cengkeh  (kontrol).    Setelah itu,  ikan  sampel  disemprot  dengan  minyak cengkeh  pada  konsentrasi  yang  berbeda,  yaitu 20,  30,  40,  50,  dan  60  ppm.  Gerakan-gerakan ikan  diamati  mulai  dari  tahapan  terpengaruh sampai  ikan  mengalami  tahapan  pingsan. Kemudian  waktu  mencapai  setiap  tahapan dihitung.    Setelah  mencapai  tahapan  pingsan, ikan  kemudian  diangkat  lalu  dipindahkan  ke akuarium  pulih,  yaitu  akuarium  yang  berisi  air laut  yang  tidak  terkontaminasi  dengan  minyak cengkeh.      Dalam  proses  pemulihan,  gerakan- gerakan  ikan  diamati  sampai  ikan  tersebut bergerak  dengan  normal  kembali  (tahapan pulih)  dan  waktu  mencapai  tahapan  pulih dihitung.    Selanjutnya  efektivitas  minyak  ceng- keh  dianalisis  berdasarkan  Marking  and  Meyer (1985).
Analisis  data  dilakukan  dengan  meng- gunakan perangkat lunak MS Excel dan SPSS. Uji  tingkat  signifikansi  perbedaan  data  dila- kukan  dengan  menggunakan  analisis  Anova Faktor  Tunggal  yang  sebelumnya  diuji  norma- litas  data  menggunakan Kolmogorov-Smirnov Test dan Shapiro-Wilk  Test ,  dan  keseragaman varian  diuji  dengan Levene’s  Test .    Kemudian analisis  lanjut  ( Post  Hoc  Test )  dengan menggunakan Tukey  HSD  Test .      Data  yang telah  dianalisis  selanjutnya  disajikan  dalam bentuk tabel dan grafik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Respons Tingkah Laku Ikan Zebra Blactail
(Dascyllus melanurus)
Setelah  minyak  cengkeh  disemprotkan ke dalam akuarium yang telah berisi ikan Zebra blacktail,  terlihat  gerakan  renang  ikan  mulai mencapai  Tahapan  Terpengaruh  (TT)  dengan gerakan  yang  lebih  cepat  dari  gerakan  normal.
Akan  tetapi  lama  kelamaan  terlihat  gerakan ikan  mulai  melambat  dan  semakin  lambat dibandingkan gerakan renang ikan yang normal (ikan kontrol).  Kemudian sampai pada tahapan selanjutnya  yaitu  Tahapan  Keseimbangan  Ter- ganggu  (TKT),  ditandai  dengan  gerakan  ikan yang  tidak  menentu  arahnya  (oleng),  posisi tubuhnya  juga  tidak  stabil  dimana  terlihat berenang dengan posisi badan terbalik, vertikal atau  miring.  Setelah  beberapa  lama,  ikan kemudian  tidak  bergerak,    gerakan  tubuhnya secara  keseluruhan  berhenti,  dan  pada  akhir- nya  ikan  jatuh  ke  dasar  akuarium,  yang  me- rupakan  Tahapan  Pingsan  (TP).  Setelah  men- capai  TP,  ikan  kemudian  dipindahkan  ke akuarium  pemulihan  yang  berisi  air  laut  yang bersih untuk proses pemulihan.  Pada akuarium pemulihan,  terlihat  ikan  masih  belum  bergerak, kemudian  berangsur-angsur  mulai  mengge- rakkan  sirip  dan  ekornya  meskipun  masih terlihat  sangat  lemah,  dan  pada  akhirnya  ikan dapat  berenang  dengan  normal  kembali dengan  posisi  badan  yang  normal  (berenang seperti  halnya  ikan  kontrol),  yang  disebut Tahapan  Pulih  (TPl).    Waktu  yang  dibutuhkan untuk melewati tahapan-tahapan tersebut dapat dilihat pada Tabel 2 dan Gambar 1.
Berdasarkan  Tabel  2,  terlihat  bahwa waktu  induksi  terlama  terdapat  pada  kon- sentrasi  20  ppm  dengan  waktu  rata-rata  pada saat  terpengaruh  34,67  detik,  waktu  rata-rata pada  saat  keseimbangan  terganggu  121,33 detik  dan  waktu  rata-rata  pada  saat  pingsan 321,33 detik. Sedangkan waktu induksi tercepat terdapat  pada  konsentrasi  60  ppm  dengan waktu  rata-rata  pada  saat  terpengaruh  7,33 detik,  pada  saat  keseimbangan  terganggu 14,33 detik dan pada saat pingsan 28,33 detik. Waktu  yang  dibutuhkan  oleh  ikan  zebra blacktail  untuk  sampai  pada  tahapan  TT,  TKT, TP  dan  TPI  pada  setiap  konsentrasi  minyak cengkeh  (20-60  ppm)  masing-masing  adalah rata-rata  berkisar  7,33 –34,67  detik;  14,33- 121,33  detik;  28,33-321,33  detik;  dan  80,67- 188,33 detik.
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  semakin tinggi konsentrasi minyak cengkeh, waktu yang dibutuhkan  untuk  mencapai  tahapan  TT,  TKT, dan  TP  cenderung  lebih  cepat,  dimana  pada konsentrasi  20  ppm,  ikan  Zebra  blacktail membutuhkan  waktu  rata-rata  untuk  mencapai TT,  TKT  dan  TP  masing-masing  34,67  detik; 121,33 detik; dan 321,33 detik sedangkan pada konsentrasi 60 ppm hanya membutuhkan waktu masing-masing rata-rata 7,33 detik; 14,33 detik; dan 28,33 detik.
Menurut  Prasetyawati  (1994),  kondisi pingsan  adalah  kondisi  tidak  sadar  yang  di- hasilkan  oleh  proses  terkendali  dari  sistem
saraf  pusat  yang  mengakibatkan  turunnya  ke- pekaan  terhadap  rangsangan  luar  dan  ren- dahnya  respons  gerak  dari  rangsangan  ter- sebut.  Pingsan atau mati rasa pada ikan berarti sistem  saraf  yang  kurang  berfungsi.    Proses pembiusan  menurut  Wright  and  Hall  (1961) meliputi tiga tahap :
1.  Berpindahnya bahan pembius dari lingkungan  ke  dalam  muara  pernafasan organisme.
2.  Difusi  membran  di  dalam  tubuh  yang menyebabkan  terjadinya  penyerapan  bahan pembius ke dalam darah.
3.  Sirkulasi darah dan difusi jaringan menyebarkan  substansi  tersebut  ke  seluruh tubuh.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  pada detik  ke-0  setelah  paparan,  aktivitas  ikan  ter- lihat  masih  dalam  keadaan  normal.    Hal  ter- sebut  karena  eugenol  dalam  minyak  cengkeh belum  sepenuhnya  berpindah  dari  lingkungan (media  air  dalam  akuarium)  ke  dalam  alat pernafasan  pada  ikan.  Pengaruh  minyak  ceng- keh  pada  ikan  Zebra  blacktail  mulai  terlihat beberapa  saat  setelah  penyemprotan  dimana gerakan  ikan  mulai  terlihat  berenang  lebih cepat  dari  biasanya  sampai  akhirnya  gerakan- nya  mulai  melambat  (TT).    TT  ikan  Zebra blacktail  terjadi  pada  detik  ke-34,67  untuk perlakuan  konsentrasi  20  ppm;  detik  ke-32 untuk  perlakuan  30  ppm;  detik  ke-11  untuk perlakuan 40 ppm, detik ke-10 untuk perlakuan 50  ppm  dan  detik  ke-7,33  untuk  perlakuan  60 ppm.
Setelah  melalui  TT,  gerakan  ikan  mulai tidak  menentu  arahnya,  posisi  badan  ikan  di dalam  air  juga  terlihat  tidak  normal,  gerakan ikan  mulai  tidak  terkendali  (berenang  dengan posisi  badan  terbalik,  vertikal  atau  miring). Tahapan  ini  merupakan  TKT,  dimana  ikan mencapai  tahapan  ini  terjadi  lebih  cepat  pada konsentrasi  yang  paling  tinggi  (60  ppm)  yaitu pada detik ke-14,33.
Tahapan  selanjutnya  adalah  pergerakan ikan  semakin  melemah,  pergerakan  sirip  dan ekor  semakin  lambat,  begitu  juga  dengan pergerakan  operculum  sangat  lambat,  ikan cenderung berada di dasar akuarium dan pada akhirnya terlihat tidak ada lagi pergerakan (TP). Ikan  mencapai  tahap  ini  paling  cepat  pada konsentrasi 60 ppm, yaitu hanya pada detik ke- 28,33,  sedangkan  waktu  terlama  pada  kon- sentrasi 20 ppm, yaitu pada detik ke-321,33.
Peningkatan  konsentrasi  minyak  ceng- keh  yang  diberikan  menyebabkan  percepatan waktu  ikan  Zebra  blacktail  mencapai  beberapa tahapan sampai akhirnya pingsan (TP).  Hal ini disebabkan  karena  semakin  tinggi  konsentrasi
Tabel  1      Tahapan  tingkah  laku  ikan  Zebra  blacktail  setelah  dipaparkan  minyak  cengkeh  yang dimodifikasi  dari  Summerfelt  and  Smith (1990),  Woolsey et al .  (2004),  Subandi  (2004) dan Rahim et al . (2013) No. Tahapan Tingkah Laku 1. Terpengaruh a.  Berenang lebih cepat dari normalnya (pada saat terkena semprotan). b.  Kemudian gerakan ikan menjadi lambat (lebih lambat dari normalnya). 2. Keseimbangan terganggu
a.  Arah pergerakan ikan sudah tidak menentu (oleng)
b.  Posisi badan ikan di dalam air sudah tidak normal (berenang dengan posisi badan terbalik, vertical atau miring). 3. Pingsan a.  Semua gerakan ikan terhenti.
b.  Ikan akan jatuh ke dasar.
4. Pulih
a.  Posisi badan ikan di dalam air kembali normal,
b.  dapat berenang secara normal kembali.
Tabel 2  Rata-rata waktu induksi dan waktu pulih  ikan zebra blacktail setelah dipaparkan minyak cengkeh beberapa konsentrasi.
Konsentrasi Minyak Cengkeh (ppm) Rata-rata Waktu Induksi (dtk) Rata-rata Waktu Pulih TPl (dtk) TT TKT TP 20 34,67 121,33 321,33 188,33 30 32 76 160,33 147,33 40 11 22,67 44,33 80,67 50 10 20,67 42,67 102,33 60 7,33 14,33 28,33 145,67
Gambar  1   Rata-rata Waktu yang Dibutuhkan oleh Ikan Zebra blacktail untuk mencapai Tahapan Terpengaruh (TT), Keseimbangan Terganggu (TKT), Pingsan (TP) dan Pulih (TPl) Setelah Paparan Minyak Cengkeh Beberapa Konsentrasi    (n = 3)
maka  semakin  cepat  proses  penyerapan  zat anaestesi (eugenol) oleh  darah yang kemudian tersebar  ke  seluruh  bagian  tubuh  ikan.    Zat tersebut  akan  menghambat  pembentukan  ase- tilkolinesterase sehingga menurunkan kerja me- diator  kimia.  Akibatnya  proses  respirasi  dan metabolisme  pada  ikan  Zebra  blacktail  me- ngalami  penurunan.    Hal  tersebut  akan  me- nyebabkan  ikan  Zebra  blacktail  pingsan. Eugenol  sebagai  zat  aktif  dari  minyak  cengkeh merupakan  senyawa  fenolat  yang  memiliki gugus  alkohol,  yang  merupakan  bahan  anti- septik  yang  dapat  melemahkan  syaraf  dan mengganggu sistem syaraf (Hart 1990).
Hal  menarik  yang  diamati  dalam  pene- litian ini adalah gerakan-gerakan ikan yang jauh
lebih  tenang  pada  setiap  tahapan-tahapan anastesi  setelah  ikan  dipaparkan  minyak cengkeh  sampai  ikan  pada  akhirnya  pingsan. Berbeda  dengan  bahan  anestesi  yang  lain, seperti  sianida,  dimana  sesaat  setelah  pe- maparan  sianida,  ikan  akan  bereaksi  lebih  ke- ras dengan gerakan yang memberontak (Kasmi 2012).    Pada  penelitian  ini  dimana  difokuskan pada  tujuan  untuk  penangkapan  ikan  di  te- rumbu  karang,  gerakan  ikan  setelah  terpapar dan  keluar  dari  celah  karang  sangat  mem- pengaruhi  proses  penangkapan.  Apabila  ikan yang  terpapar  lebih  tenang  setelah  keluar  dari celah  karang  akan  memudahkan  proses  pe- nangkapannya  sehingga  tanpa  alat  bantu penangkapan,  ikan  dapat  ditangkap  dengan mudah.  Berbeda bila gerakan ikan yang terpa-
par  lebih  keras  (memberontak,  mengelepar- gelepar)  setelah  keluar  dari  celah  karang menyebabkan  lebih  sulit  ditangkap  dengan tangan  sehingga  membutuhkan  alat  bantu  lain dalam proses penangkapannya. Hal yang sama juga  telah  dilaporkan  oleh  Munday  and  Wilson (1997)  yang  menyatakan  bahwa  ikan  yang dipaparkan  minyak  cengkeh  menunjukkan  ge- rakan  yang  lebih  tenang  dibandingkan  bahan anestesi  yang  lain,  seperti  quinaldine,  MS-222, benzocaine  dan  2-phenoxyethanol,  dimana  ba- han-bahan anestesi tersebut merupakan bahan anestesi  yang  sangat  terkenal  dan  populer yang  digunakan  secara  luas  untuk  membius ikan.  Hal yang sama juga telah dilaporkan oleh Munday  and  Wilson  (1997)  yang  menyatakan bahwa  ikan  yang  dipaparkan  minyak  cengkeh menunjukkan  gerakan  yang  lebih  tenang dibandingkan bahan anestesi yang  lain, seperti quinaldine,  MS-222,  benzocaine  dan  2-phe- noxyethanol.  Bahan-bahan  anestesi  tersebut merupakan  bahan  anestesi  yang  sangat  ter- kenal  dan  populer  yang  digunakan  secara  luas untuk membius ikan.
Setelah  pingsan,  ikan  kemudian  dipin- dahkan  ke  akuarium  pulih  dan  diamati  tingkah lakunya  dengan  kamera  video.    Pada  tahapan ini,  ikan  sedikit  demi  sedikit  mulai  melakukan pergerakan,  namun  pergerakannya  masih sangat  lambat.  Gerakan  siripnya  juga  sudah mulai  terlihat  meskipun  masih  sangat  lambat. Waktu  pulih  dihitung  mulai  pada  saat  ikan dipindahkan  ke  akuarium  pulih  sampai  ikan berenang  secara  normal  kembali  dan  hasilnya dapat dilihat pada Tabel 2 dan Gambar 1.
Grafik  pada  Gambar  1  menggambarkan terjadinya  peningkatan  waktu  pulih  pada konsentrasi  lebih  rendah  lalu  terjadi  penurunan waktu  pulih  pada  konsentrasi  lebih  tinggi dengan  membentuk  pola  U  atau  J.  Fenomena kurva  grafik  yang  berpola  U  atau  berpola  J  ini disebut  fenomena  hermosis,  dimana  terjadi disfungsi (penurunan) pada konsentrasi rendah dan  stimulasi  pada  konsentrasi  tinggi,  ataupun sebaliknya  stimulasi  pada  konsentrasi  rendah dan  disfungsi  pada  konsentrasi  tinggi  dengan pola U terbalik (Calabrese dan Baldwin 2001).
Proses  pulih  adalah  proses  dikeluar- kannya  zat-zat  anestesi  dari  dalam  tubuh  ikan. Air diserap oleh insang dan masuk secara difusi ke  dalam  tubuh.  Oksigen  yang  terkandung dalam  air  tersebut  masuk  ke  dalam  darah  dan mengangkut  eugenol  dari  seluruh  jaringan tubuh  termasuk  otak.  Eugenol  diangkut  dan dikeluarkan  kembali  melalui  insang  (Ferreira et al .  1984).  Dalam  hal  ini,  proses  pulih  pada konsentrasi  yang  rendah  berlangsung  lama diduga  karena  zat  eugenol  yang  diserap  oleh ikan masuk sedikit-demi sedikit namun
jumlahnya  terakumulasi  ke  seluruh  tubuh termasuk  otak.  Akibatnya,  pada  proses  pulih, air  yang  mengandung  oksigen, yang  masuk  ke dalam  tubuh  membutuhkan  waktu  yang  lama pula  untuk  mengangkut  sisa-sisa  dari  zat eugenol yang terdapat dalam tubuh ikan.
Saat  konsentrasi  minyak  cengkeh  diting- katkan,  waktu  pulih  yang  dibutuhkan  menjadi cepat. Hal ini diduga karena pada saat oksigen mengangkut eugenol dari dalam tubuh ikan dan pengaruh zat anestesi mulai berkurang, bersamaan dengan itu proses metabolisme dan kebutuhan oksigen untuk respirasi juga semakin meningkat.  Kondisi ini mengakibatkan semakin  banyak  konsentrasi  minyak  cengkeh yang  akan  dikeluarkan  dari  dalam  tubuh, sehingga  semakin  cepat  pula  laju  respirasi karena  kebutuhan  oksigen  yang  juga  banyak (Wibowo  1993).  Peningkatan  laju  respirasi  dan kebutuhan oksigen inilah yang diduga membuat proses pulih semakin cepat.
Namun  pada  saat  konsentrasi  minyak cengkeh  semakin  ditingkatkan,  waktu  pulih kembali  menjadi  lebih  lama.  Hal  ini  diduga karena  efek  hermotik  dari  zat  anestetik  minyak cengkeh  tersebut.  Ketidakmampuan  toleransi metabolisme  dari  ikan  zebra  menyebabkan  pe- ngaruh disfungsi atau penurunan fungsi kerja di dalam tubuh ikan zebra. Penurunan fungsi kerja organ  menyebabkan  gangguan  pada  proses metabolisme  dan  laju  respirasi  di  dalam  tubuh (Wibowo 1993). Gangguan proses metabolisme dan  respirasi  inilah  yang  menghambat  proses pemulihan menjadi lebih lama. Menurut Chingran  (1985),  dosis  bahan  anestesi  yang berlebihan  cenderung  menjadi  racun,  mem- bahayakan  ikan  dan  dapat  menimbulkan  efek kematian  karena  mengganggu  dan  meng- hentikan aktifitas metabolisme dalam tubuh.
Pada  beberapa  kasus,  fenomena  her- motik  terjadi  karena  adanya  kemampuan toleransi  metabolisme  beberapa  spesies  pada zat-zat kimia tertentu, misalkan efek nikotin dan narkotik pada  manusia. Pengaruh zat-zat kimia tertentu  pada  umumnya  akan  meningkatkan stimulasi  kerja  metabolisme  di  dalam  tubuh. Namun pada kondisi tertentu dimana kadar zat kimia  telah  melebihi  batas  kemampuan  fungsi organ  maka  pemberian  zat  kimia  yang  terus menerus  dalam  kadar  konsentrasi  lebih  tinggi akan  mengakibatkan  efek  disfungsi  organ dalam tubuh (Calabrase dan Baldwin 2001).

## Waktu Induksi dan Waktu Pulih Ikan Zebra blacktail  (Dascyllus melanurus)
Waktu  induksi  ikan  Zebra  blacktail  ( Das- cyllus  melanurus )  dihitung  mulai  dari  akuarium
yang  berisi  ikan  tersebut  disemprotkan  minyak cengkeh  sampai  ikan  tersebut  mengalami tahapan  pingsan  (tidak  dapat  bergerak  lagi). Tahapan-tahapan  yang  diamati  sebelum  ikan terinduksi  adalah  sesaat  setelah  disemprotkan minyak  cengkeh,  ikan  memberi  respons  awal dengan  gerak  renang  yang  cepat  lalu  kece- patan  renangnya  mulai  melambat  (Tahapan Terpengaruh).  Setelah  itu,  ikan  mengalami  ge- rakan yang tak menentu arahnya dengan posisi badan  di  dalam  air  tidak  normal  (mengalami gangguan  keseimbangan).  Dalam  kondisi  ter- sebut,  terlihat  ikan  bergerak  dengan  posisi terbalik, vertikal atau miring.  Kecepatan renang ikan  juga  semakin  berkurang  pada  tahapan  ini (Tahapan Keseimbangan Terganggu) dan pada akhirnya  ikan  tidak  dapat  lagi  melakukan pergerakan  (Tahapan  Pingsan).  Waktu  pulih dihitung  mulai  pada  saat  ikan  dimasukkan  ke dalam  akuarium  pulih  sampai  gerakan  ikan mulai  pulih  kembali  yang  ditandai  dengan gerakan  ikan  yang  sama  dengan  kontrol (sebelum dipaparkan  minyak cengkeh).   Waktu induksi  dan  waktu  pulih  ikan  Zebra  blacktail ( Dascyllus  melanurus )  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Berdasarkan  Gambar  2  telah  terjadi penurunan  drastis  waktu  induksi  dari  20  ppm sampai 40 ppm yang diduga karena rendahnya konsentrasi  anestesi  yang  menyebabkan  lam- batnya  daya  impuls  asetilkolin  yang  menu- runkan kinerja organ respirasi dan metabolisme pada  ikan  zebra  sehingga  ikan  zebra  mem- butuhkan  rentan  waktu  yang  lebih  lama  untuk dapat  pingsan  pada  kisaran  konsentrasi  antara 20 ppm hingga 40 ppm.  Selain itu, sifat fisiologi ikan  zebra  yang  masih  toleran  terhadap  pe- ngaruh  minyak  cengkeh  pada  kisaran  kon- sentrasi  yang  lebih  rendah  juga  dapat  mem- pengaruhi lamanya waktu pingsan.
Penurunan  yang  tidak  terlalu  berbeda terlihat  pada  konsentrasi  40  ppm  sampai  60 ppm.  Hal ini diduga karena konsentrasi 40 ppm sampai  60  ppm  merupakan  konsentrasi  yang cukup  tinggi  dari  batas  kisaran  konsentrasi yang    dapat  ditolerir  oleh  ikan  zebra.  Konsen- trasi  yang  begitu  tinggi  membuat  proses  difusi anestesi  dalam  aliran  darah  melalui  insang terjadi  sangat  cepat,  sehingga  waktu  induksi relatif  sama  pada  beberapa  konsentrasi  yang tinggi.  Menurut  Hunn  (1970) dalam Ferreira et al. (1984),  efek  pembiusan  zat  anestesi  ter- hadap ikan ditentukan oleh kadar anestesi yang terkandung dalam jaringan otak atau sarafnya.
Hasil Uji  ANOVA  pada taraf kesalahan  5 %  (  α  =  0.05)  untuk  waktu  induksi  (pingsan) menunjukkan bahwa penggunaan minyak cengkeh yang berbeda (20, 30, 40 , 50 dan 60 ppm)  memberikan  hasil  yang  tidak  signifikan
(tidak berbeda nyata) pada Waktu Pingsan ikan Zebra  blacktail  (P>0,05).    Sedangkan  hasil  uji ANOVA  pada  taraf  kesalahan  5  %  (  α  =  0.05) terhadap  Waktu  Pulih  ikan  Zebra  blacktail menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan  dengan konsentrasi minyak cengkeh yang berbeda (20, 30, 40 , 50 dan 60 ppm) memberikan hasil yang berbeda  nyata  pada  Waktu  Pulih  ikan  Zebra blacktail (P<0,05).
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  konsen- trasi minyak cengkeh yang tinggi menyebabkan waktu  induksi  ikan  Zebra  blacktail  ( Dascyllus melanurus )  cenderung  semakin  cepat,  dimana pada konsentrasi minyak cengkeh 60 ppm ikan lebih  cepat  mencapai  tahapan  pingsan,  yaitu rata-rata  hanya  28,33  detik  sedangkan  pada konsentrasi  20  ppm,  ikan  mencapai  tahapan pingsan  setelah  waktu  rata-rata  321,33  detik. Namun,  berdasarkan  hasil  uji  statistik  tidak terjadi  perbedaan  yang  signifikan  waktu  untuk mencapai pingsan antara beberapa konsentrasi minyak  cengkeh  yang  disemprotkan.    Sebalik- nya  waktu  pulih  ikan  berdasarkan  hasil  uji  sta- tistik menunjukkan adanya perbedaan yang sig- nifikan  antara  waktu  pulih  ikan  Zebra  blacktail pada  konsentrasi  minyak  cengkeh  yang  ber- beda.
Penurunan waktu induksi pada penelitian ini  dengan  meningkatnya  konsentrasi  minyak cengkeh  mengikuti  pola  umum  yang  telah diperoleh  pada  penelitian-penelitian  sebelum- nya (Soto dan Burhanuddin 1995; Munday  and Wilson 1997; Keene et al . 1998;  Griffiths 2000; Woody et  al .  2002;  Cunha  2006;  Rahim et  al . 2013),  pada  spesies  ikan  yang  berbeda. Rahim et  al. (2013)  telah  melakukan  penelitian pada  ikan  injel  biru-kuning  dan  melaporkan bahwa  waktu  induksi  menurun  dengan  pening- katan  konsentrasi  minyak  cengkeh.    Cunha (2006)  telah  melaporkan  pada  7  jenis  ikan karang  di  daerah  tropis  bahwa  waktu  induksi dan waktu pulih ke-7 jenis ikan karang tersebut berbeda. Namun demikian, secara keseluruhan waktu induksi mempunyai kecenderungan lebih cepat  dengan  meningkatnya  konsentrasi  mi- nyak  cengkeh.  Sebaliknya  waktu  pulih  cen- derung  lebih  lama  dengan  meningkatnya  kon- sentrasi.  Hasil yang sama juga telah dilaporkan oleh  Griffiths  (2000)  pada  8  jenis  ikan  intertidal yang berbeda.
Waktu  induksi  dan  waktu  pulih  setiap jenis  ikan  yang  dipaparkan  bahan  anestesi berbeda-beda. Hal ini dipengaruhi oleh konsen- trasi  bahan  anestesi  dan  spesies.    Menurut Gunn  (2001),  ikan-ikan  dengan  ruang  insang yang  besar  lebih  efisien  dalam  menyerap bahan-bahan  anestesi.  Musim,  ukuran  tubuh, aktivitas,  kesehatan,  umur  dan  jenis  kelamin juga  mempengaruhi  kecepatan  induksi  dan
proses  pemulihannya.  Penelitian  ini  hanya menggunakan  satu  spesies  dengan  ukuran tubuh yang hampir sama sehingga faktor-faktor yang  mempengaruhi  kecepatan  induksi  dan proses pemulihan ini dapat diabaikan.
Berdasarkan  data  waktu  induksi  dan waktu  pulih  ikan  zebra,  dapat  terlihat  bahwa konsentrasi  minyak  cengkeh  40  ppm  meru- pakan  konsentrasi  yang  lebih  efektif  dalam proses penangkapan ikan untuk memingsankan ikan dengan waktu induksi berkisar 40 –48 detik (paling  kurang  dari  3  menit)  dan  waktu  pulih berkisar  72 –91  detik  (paling  kurang  dari    5 menit).    Meskipun  demikian,  pada  Tabel  2  dan Gambar  2  menunjukkan  terdapat  perbedaan waktu induksi yang tidak terlalu besar antara 40 ppm,  50  ppm  dan  60  ppm.  Namun  penentuan waktu  induksi  yang  optimal  sebaiknya  dengan mengambil konsentrasi yang paling rendah dari beberapa konsentrasi yang memiliki efek waktu pulih  yang  hampir  sama.  Dengan  kata  lain, penentuan  konsentrasi  yang  efektif  tidak terlepas  dari  pertimbangan  efisiensi  biaya. Sesuai  dengan  Marking  dan  Meyer  (1985), bahwa  zat  anestesi  yang  ideal  memiliki  waktu induksi  kurang  dari  3  menit  dan  waktu  pulih yang  relatif  singkat,  yakni  5  menit  atau  kurang. Meskipun  demikian,  penentuan  konsentrasi yang  lebih  efektif  masih  memerlukan  peng- kajian  yang  lebih  jauh  dalam  hal  perun- tukkannya.  Misalnya  untuk  digunakan  dalam penangkapan  ikan,  transportasi  ataupun  se- bagai  bahan  alternatif  ramah  lingkungan  peng- ganti  sianida.  Selain  itu,  masih  banyak  faktor yang  perlu  dikaji  lebih  lanjut,  misalnya  dalam hal  dampaknya  terhadap  ikan-ikan  non  target, ikan  target  maupun  terhadap  habitat  ikan tersebut  yakni  terumbu  karang.    Dalam  hal penggunaan  minyak  cengkeh  sebagai  alat bantu  penangkapan  bukan  hanya  dengan melihat  efektivitasnya  dalam  menginduksi  ikan, tetapi  perlu  mempertimbangkan  beberapa faktor,  seperti  bagaimana  kondisi  ikan  target setelah penangkapan, ikan non-target yang ada di terumbu karang dan karang itu sendiri.
Beberapa  penelitian  mendapatkan  hasil konsentrasi  optimal  yang  sama,  seperti  Hajek et  al. (2006)  melaporkan  bahwa  konsentrasi optimal anestesi minyak cengkeh terhadap ikan mas  ( Cyprinus  carpio )  adalah  40  ppm  dengan waktu  induksi  kurang  dari  3  menit  dan  waktu pulih  kurang  dari  4  menit.    Zaikov et  al. (2008) telah  melaporkan  bahwa  konsentrasi  optimal untuk  ikan  catfish  ( Silurus  glanis  L )  adalah  40 ppm,  Inoue  (2003)  menunjukkan  bahwa konsentrasi  optimal  untuk  ikan  brycon  ( Brycon cephalus ) adalah 40 ppm.  Griffiths (2000) telah melaporkan  bahwa  secara  umum  konsentrasi yang  paling  sesuai  pada  8  spesies  ikan
intertidal  yang  diamati  di  Australia  adalah  40 mg/L  dimana  rata-rata  waktu  induksi  <  180 detik dan rata-rata waktu pulih <300 detik.
Beberapa  penelitian  lainnya,  pada  jenis ikan  yang  berbeda,  respons  terhadap  induksi bahan  anestesi  juga  akan  berbeda.  Misalnya konsentrasi optimal untuk ikan klon ( Amphiprion percula )  adalah  20  ppm  dengan  waktu  induksi 162  detik  dan  waktu  pulih  309  detik  (Ratnasari 2002).  Konsentrasi  optimal  untuk  ikan  tombak ( Esox  lucius )  adalah  60  ppm  dengan  waktu induksi sektiar 7 menit dan waktu pulih sekitar 4 menit (Zaikov et al . 2008).  Konsentrasi optimal untuk ikan trout ( Oncorhynchus mykiss ) adalah 30  ppm  (Mavadati  2011).    Keene  (1998)  telah merekomendasikan  dosis  eugenol  pada  juvenil rainbow  trout untuk  mencapai  tahapan  pingsan adalah  40 –60  ppm  selama  3–6  menit.    Cunha (2006)  telah  menyarankan  konsentrasi  20  ppm minyak  cengkeh  sebagai  pedoman  umum  keti- ka  menganastesi  ikan-ikan  karang  dan  pada spesies-spesies tertentu menggunakan konsen- trasi  yang  lebih  tinggi.    Lebih  lanjut  dinyatakan bahwa direkomendasikan  konsentrasi yang pa- ling  rendah  selama  sampling  lapangan  demi memaksimalkan  keamanan,  mengurangi  ke- matian  dan  stres  pada  ikan.    Penelitian  Walsh and  Pease  (2002)  menyatakan  bahwa  minyak cengkeh  direkomendasikan  untuk  menginduksi ikan anguillid  eels karena  minyak  cengkeh efektif, relatif lebih murah dan resiko yang kecil pada  kesehatan  manusia.    Waterstrat  (1999) telah  menyatakan  pula  bahwa  konsentrasi minyak  cengkeh  100  mg/L  efektif  pada  ikan Ictalurus  punctatus .  Akbulut et  al. (2011)  me- nyatakan  bahwa  minyak  cengkeh  dapat  digu- nakan sebagai anestesi yang efektif pada larva ikan  Russian  sturgeon  ( Acipenser  guelden- staedtii ).
Beberapa  penelitian  pada  organisme perairan telah dilakukan oleh Coyle et al. (2005) yang menyarankan konsentrasi minyak cengkeh  100  mg/L  untuk  menganestesi  udang Macrobrachium  rosenbergii .  Woody et  al.
(2002)  menyatakan  bahwa  konsentrasi  minyak cengkeh  50  mg/L  direkomendasikan  untuk menginduksi  sockeye  salmon  dengan  kisaran panjang 400 –550 mm pada temperatur 9-10 o C. Seol et  al. (2007)  juga  menyatakan  bahwa konsentrasi  minyak  cengkeh  200  mg/L  dapat menginduksi dengan cepat Octopus minor .
Hasil  penelitian  ini  dan  penelitian- penelitian  sebelumnya  telah  menunjukkan bahwa  waktu  induksi  ikan  yang  dipaparkan minyak  cengkeh  lebih  cepat  meskipun  dengan konsentrasi yang lebih rendah jika dibandingkan  dengan  bahan  anaestesi  ikan yang  telah  dikenal  dan  populer  pada  beberapa negara.   Menurut   Griffiths   (2000),  meskipun
Gambar 2 Rata-rata waktu induksi dan waktu pulih ikan zebra blacktail  setelah dipaparkan minyak cengkeh beberapa konsentras
rata-rata  waktu  induksi  dan  waktu  pulih  ikan yang  dipaparkan  minyak  cengkeh  relatif  lebih cepat, namun cukup untuk mengidentifikasi dan mencatat informasi biologi ikan.

## KESIMPULAN
Meningkatnya  konsentrasi  minyak  ceng- keh  yang  dipaparkan  pada  ikan  Zebra  blacktail menyebabkan  waktu  induksi  cenderung  lebih cepat.  Konsentrasi  optimum  minyak  cengkeh untuk  ikan  zebra  blacktail  ( Dascyllus  melanu- rus )  pada  proses  penangkapan  ikan  adalah  40 ppm dengan waktu induksi berkisar 40 –48 detik dan waktu pulih berkisar 72 –91 detik.

## SARAN
Untuk  aplikasi  minyak  cengkeh  sebagai alternatif  sianida  dalam  penangkapan,  masih dibutuhkan kajian yang lebih dalam, khususnya efek  minyak  cengkeh  terhadap  kualitas  ikan target,  organisme  non-target  dan  ekosistem terumbu  karang.    Selain  itu,    penelitian  secara langsung di lapangan masih sangat dibutuhkan untuk  membuktikan efektivitas minyak cengkeh sebagai  alat  bantu  penangkapan  ikan  di ekosistem terumbu karang.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbulut  B,  Cavdar  Y,  Cakmak  E,  Aksungur  N. 2011. Use of Clove Oil to  Anaesthetize Larvae of Russian Sturgeon ( Acipenser gueldenstaedtii ). Journal  of  Applied Ichthyology .  27: 618-621.
Calabrese EJ, Baldwin LA. 2001. The
Frequency
of U-Shaped Dose-
responsses in the Toxicological
Literature. Toxicol  Sci  Journal. 62:  330 -338.
Cervino  JM,  Hayes  RL,  Honovich  M,  Goreau TJ,  Jones  S,  Rubec  PJ.  2003. Changes  in  Zooxanthellaee  Density, Morphology,  and  Mitotic  Index  in Hermatypic  Corals  and  Anemones Exposed  to  Cyanide, Journal  of  Mar. Pollut. Bull. 46: 573 –586.
Chingran  VG,  Pullen  RSV.  1985.  A  Hatchery Manual for the Common Carp Chinese,  and  Indian  Major  Corps. ICLARM.  Studies  and  Recew  11.  78- 80.
Cho  GK,  Heath  DD.  2000.    Comparison  of Tricaine  Methanesulphonate  (MS-22) and Clove Oil Anaesthesia Effects on
Physiology of Juvenile Chinook Salmon Oncorhynchus  Tshawytscha (Walbaum). Journal  of  Aquaculture Research. 31: 357-546.
Coyle  SD,  Dasgupta  S,  Tidwell  JH,  Beavers  T, Bright  LA,  Yasharian  DK.  2005. Comparative  Efficacy  of  Anesthetics for the Freshwater Prawn Macrobrachium rosenberrgii. Journal of  the  World  Aquaculture  Society . 36(3): 282-290.
Cunha  FEA,  Rosa  IL.  2006.    Anaesthetic Effects  of  Clove  Oil  on  Seven Species  of  Tropical  Reef  Teleosts.
Journal  of  Fish  Biology .  69(5):  1504- 1512.
Ferreira  JT,  Schoonbee  HJ,  Smith  GL.  1984. The Uptake of the Anesthetic Benzoncaine Hydrochloride by the Gills and  the  Skin  of  Three  Freshwater  Fish Spesies. Journal  of  Fish  Biology . 25(1).
Griffiths SP. 2000.  The Use of Clove Oil as an Anaesthetic and Method for Sampling
Intertidal Rockpool Fishes. Journal of Fish Biology . 57(6): 1453-1464.
Gunn E. 2001. Floundering in the Foiber of Fish Anaestesia . P211.
Hart  H.  1990. Kimia  Organik .  Terjemahan Seminar. Penerbit Erlangga. Jakarta.
Hajek  G,  Klyszejko  B.  2006.  The  Anesthetic Effect  of  Clove  Oil  on  Common  Carp Cyprinus  carpio  L. ACTA  Icthhyologica et piscatorial . Poland. 36 (2): 93 - 97
Inoue  LA.  2003.    Clove  Oil  As  Anaesthetic  for Juveniles of Matrinxã Brycon cephalus, Ciência Rural. Santa Maria.
Jones RJ, Steven AL. 1997. Effects of Cyanide on  Corals  in  Relation  to  Cyanide Fishing  on  Reefs, Journal  of  Mar. Freshw. Res. 48 : 517 –522.
Jones, Guldberg H. 1999. Effects of Cyanide on Coral Photosynthesis: Implications for Identifying  the  Cause  of  Coral Bleaching  and  for  Assessing  the Environmental  Effects  of cyanide fishing . Journal  of  Mar.  Ecol.  Prog. Ser. 177: 83 –91.
Keene  JL,  Noakes  DG,  Moccia  RD,  Soto  CG.
1998.  The Efficacy of Clove Oil as an
Anaesthetic for Rainbow Trout,
Oncorhynchus  mykiss (Walbaum). Journal of Aquaculture Research. 29: 89-101.
Kasmi,  M.,  2012. Status  Pemanfaatan  dan Strategi  Pengelolaan  Berkelanjutan Ikan Hias Injel Napoleon (Pomacanthus  xanthometopon)  di Perairan Sulawesi Selatan .  Disertasi Program Pascasarjana Unhas, Makassar.
Marking  LL,  Meyer  FP.  1985.  Are  Better Anesthetics  Needed  in  Fisheries?. Fisheries. 10: 2-5
Mavadati.  2011.  Comparison  of  Effect  of  Clove
Oil  and  2-Phenoxyethanol  on  Serum Biochemical Parameters in Oncorhynchus mykiss . Word Journal of Fish  and  Marine  Science .    3(4):  318- 322
Munday  PL,  Wilson  SK.  1997.  Comparative
Efficacy  of  Clove  Oil  and  Other Chemicals  in  Anaesthetization  of Pomacentrus  amboinensis ,  a  Coral Reef  Fish. Journal  Fish  Biology .  51: 931-938.
Prasetyawati  R.  1994. Studi  Penenangan  dan Pemingsanan Ikan Gurame
(Osphoronemus  gouramy  Lac.)  untuk Transportasi Hidup dalam Media Tanpa Air .  Skripsi.  Fakultas  Perikanan,  IPB. Bogor.
Rahim SW, Nessa MH, Trijuno DD, Djawad MI. 2013.      Efektivitas  Minyak  Cengkeh Sebagai  Alat  Bantu  Penangkapan  Ikan Injel  Biru  Kuning  ( Centropyge  bicolor ). Prosiding .  Seminar  Nasional  Perikanan dan  Kelautan    X,  Universitas  Gadjah Mada. Yogyakarta.
Ratnasari  D.  2002.  P engaruh  Penggunaan Minyak  Cengkeh  Terhadap  Ikan  Klon (Amphiprion  percula)  dan  Anemon Piring  (Heteractis  magnifica)  sebagai Alternatif  Pengganti  Potasium  Sianida . Skripsi,  Jurusan  Budidaya  Perairan. IPB. Bogor.
Rubec  PJ,  Cruz  F,  Pratt  V,  Oellers  R,
McCullough B, Lallo F. 2001. Cyanide-Free Net-Caught Fish for the
Marine  Aquarium  Trade, Journal  of Aquar. Sci. Conserv. 3: 37 –51
Seol  DW,  Lee  J,  Im  SY,  Park  IS.  2007.    Clove Oil  as  an  Anaesthetic  for  Common Octopus  (Octopus  minor,  Sasaki). Journal of Aquaculture Research . 38:
45-49.
Soto  CG,  Burhanuddin.  1995.  Clove  Oil  as  a
Fish Anaesthetic for Measuring Length  and  Weight  of  Rabbitfish ( Siganus lineatus ). Journal of Aquaculture. 135: 149-152.
Subandi  N.  2004. Pengembangan  Metode
Penyidikan  Ilmiah  untuk  Pembuktian
Kasus-Kasus Penangkapan Ikan dengan  Bahan  Peledak  dan  Sianida . Disertasi.    Sekolah  Pascasarjana IPB, Bogor.
Summerfelt  RC,  Smith  LS.  1990.    Anesthesia, Surgery and Related Techniques.  In: Methods for Fish Biology (ed. By C.B. Schreck  &  P.B.  Moyle). American Fisheries Society : 213-272.
WalshCT,  Pease  BC.  2002.    The  Use  of  Clove Oil  as  an  Anaesthetic  for  the Longfinned  Eel, Anguilla  reinhardtii
(Steindachner). Journal of
Aquaculture Research. 33: 627-635.
Waterstrat  PR.  1999.    Induction  and  Recovery from  Anaestesia  in  Channel  Catfish Ictalurus Punctatus
Fingerlings Exposed  to  Clove  Oil. Journal  of  the
World  Aquaculture  Society .  30(2): 250-255.
Woody CA, Nelson J,  Ramstad K. 2002.  Clove Oil  as  an  Anaesthetic  for  Adult Sockeye  Salmon  :  Field  Trials. Journal of Fish Biology . 60: 340-347.
Woolsey  J,  Holcomb  M,  Ingermann  RL.  2004. Effect  of  Temperature  on  Clove  Oil Anesthesia  in  Steelhead  Fry.    North American. Journal of Aquaculture . 66: 35-41.
Wibowo  S,  1993.    Penerapan  Teknologi Penanganan  dan  Transportasi  Ikan Hidup  di  Indonesia.  Sub  BPPL  Slipi.
Jakarta.
Wright  GJ,  Hall  LW.  1961.  Veterinary  an Anesthesia  and  Analgesia.  Baillere,
Tindal and Cox. London.
Zaikov  A,  Ilev  I,  Hubenova  T.  2008.  Induction and  Recovery  from  Anesthesia  in  Pike ( Esox  lucius )  Exposed  to  Clove  Oil.
Bulg.  Journal  of.  Agric.  Sci .  14:  165- 170.