Vol.2, No.1, Februari 2018, hal. 21-26 ISSN: 2549-3698 (printed)/ 2549-3701 (online)

## Elektroforesis: Analisis Elektronika Terhadap Biokimia Genetika

## Muhammad Ridwan Harahap
Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Ar-Raniry Banda Aceh Email: ridwankimia@ar-raniry.ac.id

## Abstract
Electrophoresis is a method of separation that utilizes the electric field generated from electrodes to separate compounds having a charge of cations or anions. Electrophoresis requires separation media in the form of a stationary phase such as Agarose cells mixed with a buffer solution to maintain the acidity of the sample during the separation process. This tool strongly supports the renewal of research, especially in the field of genetic engineering technology. The result will provide a track record of separation bands of compounds.  The  speed  of  molecular  motion  depends  on  the  ratio  (ratio)  of charge  to  its mass,  and  also depends on the shape of the molecule.
Keywords : electrophoresis, electricity, technology, engineering, genetics.

## Abstrak
Elektroforesis  merupakan  suatu  metode  pemisahan  yang  memanfaatkan  medan  listrik  yang dihasilkan  dari  elektroda-elektroda  untuk  memisahkan  senyawa-senyawa  yang  memiliki  muatan  berupa kation ataupun anion. Elektroforesis membutuhkan media pemisah berupa fase diam seperti sel Agarosa yang  tercampur  larutan  buffer  untuk  menjaga  kondisi  keasaman  sampel  saat  proses  pemisahan.  Alat  ini sangat  mendukung  keterbaruan  penelitian  khususnya  dibidang  teknologi  rekayasa  genetika.  Hasilnya akan memberikan rekam jejak berupa pita-pita pemisahan senyawa. Kecepatan gerak molekul tergantung pada nisbah (rasio) muatan terhadap massanya, serta tergantung pula pada bentuk molekulnya.
Kata kunci: elektroforesis, listrik, teknologi, rekayasa, genetika.

## 1. Pendahuluan
Pasir  besi  merupakan  salah  satu  sumber  besi  yang  pemanfaatannya  masih  belum  optimal. Pemanfaatan pasir besir di Indonesia hingga saat ini masih terbatas hanya digunakan sebagai bahan tambahan pada pabrik semen.
Di  dalam  bidang  ilmu  Kimia,  pemanfaatan  energi  listrik  sangat  dibutuhkan.  Disamping energi  yang dibutuhkan, listrik juga menjadi kajian dalam metode pemisahan senyawa dengan memanfaatkan  muatan-muatan  yang  dihasilkan  dari  listrik.  Selain  sel  elektrokimia, elektroforesis  salah  satu  metode  pemisahan  yang  memanfaatkan  kajian  listrik  tersebut. Elektroforesis  merupakan  suatu  metode  pemisahan  yang  memanfaatkan  medan  listrik  yang dihasilkan dari elektroda-elektroda untuk memisahkan senyawa-senyawa yang memiliki muatan berupa  kation  ataupun  anion.  Memiliki  perbedaan  yang  cukup  jelas  dengan  sel  elektrokimia, elektroforesis  memanfaatkan  medan  listrik.  Sedangkan  elektrokimia  memanfaatkan  elektroda
untuk  melakukan  reaksi  reduksi  dan  oksidasi.  Teknik  elektroforesis  sudah  sangat  lama ditemukan  sekitar  abad  ke  19  hanya  saja  pengembangannya  secara  signifikan  dimulai  tahun 1956 oleh Hunter dan Moller melakukan penelitian tentang sifat-sifat enzim sebagai katalisator untuk melihat pengaruh kimia pada perkembangannya.
Dalam kajian teori pada elektroforesis ini tidak terlepas dari kajian medan listrik. Medan listrik yang dihasilkan berasal dari elektroda-elektroda yang diberikan energi listrik dari sumber energi  seperti  arus  listrik  searah  maupun  Arus  listrik  bolak-balik.  Hukum  Coulomb  menjadi prinsip  dasar  metode  pemisahan  elektroforesis  yaitu  gaya  pada  salah  satu  titik  muatan berbanding lurus dengan besar muatannya. Medan listrik merupakan efek yang dihasilkan oleh muatan listrik seperti elektron, ion atau proton, dalam ruangan yang ada disekitarnya.

## 2. Prinsip Kerja Elektroforesis
Menurut  George  Stokes  besarnya  gaya  gesek pada  fluida  disebabkan  viskositas  fluida. Semakin  besar  viskositas  (kekentalan)  fluida  maka  akan  semakin  sulit  suatu  fluida  untuk mengalir  dan  juga  menunjukkan  semakin  sulit  suatu  benda  bergerak  dalam  fluida  tersebut.  Di dalam zat cair  viskositas dihasilkan oleh gaya kohesi  antara molekul  zat cair. Gaya ini disebut gaya  Stoke.  Suatu  molekul  bermuatan  Q  dalam  medan  listrik  berkekuatan  x  akan  bergerak dengan kecepatan  v karena mengalami gaya sebesar qx . Jika f merupakan koefisien gesekan (friksi),  maka  molekul  tersebut  akan  mengalami  gaya  hambat  sebesar  vf,  sehingga qx  =  vf . Maka koefisien gesekan (f) adalah sebagai berikut:
Pada  elektroforesis media  pemisahnya  berupa  gel  Agarosa  atau  lainnya  yang  memiliki  tingkat viskositas tinggi. Dengan demikian dapat dihitung laju molekulnya adalah sebagai berikut:
Laju dalam elektroforesis sangat bergantung pada kekentalan medium (n), ukuran atau bentuk (r),  dan  muatan  molekul  (q).  Kekuatan  asam  pada  medium juga  mempengaruhi  besar  muatan pada saat ionisasi berlangsung sehingga diperlukan larutan buffer untuk mengatasi masalah ini. Dan  juga  perlu  dilakukan  analisis  terhadap  kemampuan  media  untuk  memisahkan  molekul- molekul agar lebih efektif dan maksimal.
Alat  elektroforesis  terdiri  dari  medium  pemisah  yang  terhubung  dengan  dua  elektroda dan  kertas  saring.  Media  pemisah  dapat  berupa  gel  Agarosa,  pati  atau  poliakrilamida.  Media terdiri  dari  dua  bagian  yang  dihubungkan  dengan  sumbu  asbes;  satu  bagian  berisi  elektroda platina dan yang lain kontak dengan medium elektroforesis.

## 3. Komponen Elektroforesis
Elektroforesis  terdiri  dari  beberapa  komponen  utama  dalam  penggunaanya.  Yang  pertama adalah larutan elektrolit yang berfungsi sebagai pembawa komponen. Umumnya berupa larutan buffer  dengan  pH  tertentu  sesuai  dengan  karakteristik  senyawa  yang  akan  dipisahkan. Berikutnya  media  pemisah  merupakan  tempat  proses  pemisahan  terjadi.  Media  pemisah  ini berupa  kertas  (selulosa  asetat,  selulosa nitrat), gel kanji,  gel polikrilamid, busa  poliuretan atau agar-agar.  Selanjutnya  yang  paling  penting  adalah  elektroda  yang  berfungsi  sebagai penghubung  arus  listrik  dengan  media  pemisah  dan  baterai  atau  arus  listrik  sebagai  sumber energi ( source ) pada rangkaian alat.
e-ISSN  2549-3701

## Penggunaan Medium Pemisah
Keberhasilan  dari  teknik  elektroforesis  dipengaruhi  pemilihan  medium  pemisahnya.  Ada  dua medium yang sering digunakan dalam menggunakan elektroforesis. Yang pertama gel Agarosa. Merupakan  metode  standar  untuk  mengidentifikasi  serta  memurnikan  fragmen-fragmen Deoxyribo  Nucleic  Acid  (DNA) dan Ribose  Nucleic  Acid . Senyawaan  tersebut  merupakan pembawa genetika pada makhluk hidup-dilakukan pada medan listrik horizontal. Kelebihan dari gel  ini  lebih  mudah,  sederhana  dan  laju  pemisahannya  lebih  cepat  membentuk  fragmen- fragmen  dan  tidak  bersifat  toksik.  Hanya  saja  kelemahannya  gel  ini  memiliki  sensitifitas  tinggi dan  mudah  rusak  sehingga  memerlukan  ketelitian  dan  kehati-hatian  pada  proses pengerjaannya.  Yang  kedua  gel  poliakrilamida.  Gel  ini  memiliki  memiliki  resolusi  tinggi  pada hasil  pemisahannya.  Membutuhkan  tegangan  listrik  yang  tinggi  pada  pengerjaannya  dan dilakukan  pada  medan  listrik  vertical.  Persiapan  pengerjaan  membutuhkan  waktu  relatif  lama, mahal dan memiliki laju pemisahan yang lebih lambat dibandingkan gel Agarosa (Rita Elfianis)

## Gambar. Rangkaian Alat Elektroforesis

## Faktor-faktor yang mempengaruhi Elektroforesis
Proses  pemisahan  dengan  elektroforesis  sangat  dipengaruhi  oleh  teknik  pengerjaan  dalam pengoperasian  alat  tersebut.  Disamping  medium  pemisah  yang  sudah  dielaskan  diatas,  ada beberapa faktor penentu lainnya yang dapat mempengaruhi proses pemisahan yaitu :
a. Sampel
Sampel  yang  akan  dipisahkan  sangat  memungkinkan  memberi  pengaruh  laju perpindahan  ditinjau  dari  muatan,  ukuran,  dan  bentuk  molekul.  Jumlah  muatan  total akan berbanding lurus dengan  laju perpindahan, konsentrasi muatan  yang bermigrasi tergantung  pada  pH.  Untuk  ukuran  molekul  apabila  yang  diperoleh  lebih  besar menyebabkan  perpindahan  molekul  menurun  dan  membutuhkan  energi  perpindahan yang cukup besar dibandingkan dengan bentuk molekul  yang berbeda dengan  ukuran yang sama.
b. Larutan Buffer
Larutan buffer berfungsi  untuk  mempertahankan  pH  di  dalam  medium  pemisah,  dan berfungsi  sebagai  media  penyedia  elektrolit  pada  proses  pergerakan  aliran  listrik. Larutan buffer harus memiliki interkasi dengan molekul  yang  dipisahkan, dan pH  yang digunakan menjadi perhatian sehingga kumpulan molekul dapat dipisahkan satu sama lain tetapi tidak mengalami perubahan struktur. Larutan penyangga harus dipilih dengan cermat,  keterkaitan  ion buffer dalam  berinteraksi  dengan  senyawa  yang  diteliti,  pH dipilih berdasarkan jenis campuran yang akan dipisahkan. Umumnya pemisahan dapat dicapai  pada  titik  isolistrik  (yaitu  titik  ketika  pH  suatu  makromolekul  bermuatan  nol akibat  bertambahnya  atau  kehilangan  muatan),  salah  satu  senyawa  yang  dipilih
sebaiknya tidak mengakibatkan perubahan kimia atau perubahan struktur molekul yang akan  diteliti. Kisaran  kekuatan  ionik  larutan buffer pada  0,05-0,15  mol/L  dan  biasanya diambil  nilai  di  antara  kedua  nilai  ekstrem.  Pada  kekuatan  ionik  yang rendah  akan terjadi  pergerakan  molekul  yang  cepat  dan  produksi  panas  yang  rendah,  akan  tetapi terjadi difusi  yang nyata. Di pihak lain, pada kekuatan ionik yang tinggi, diperoleh pita- pita  yang  tajam,  namun  akan  terjadi  produksi  panas  yang  lebih  tinggi  dan terjadi pergerakan molekul pada jarak yang pendek.
c. Medan listrik
Sumber  suatu  listik  yang  stabil  sangat  diperlukan  untuk  menghasilkan  aliran  listrik dengan  tegangan  yang  konstan.  Kekuatan  ionik  medan  listrik  pada  kisaran  2-8  V/cm sesuai pada suhu ruang. Kekuatan medan magnet yang dihasilkan jika lebih besar dari 10  V/cm,  maka  dapat  memberikan  efek  pemanasan  yang  dapat  menyebabkan  pada media  penyangga  terjadi  kehilangan  air  yang  diakibatkan  proses  penguapan.  Hal tersebut  juga  mengakibatkan  pergeseran  hasil  fragmen-fragmen.  Pemanasan merupakan  salah  satu  faktor  yang  mengakibatkan  senyawa-senyawa  terdenaturasi. Disamping  kekurangan  dengan  menggunakan  tegangan  yang  tinggi,  keuntungan elektroforesis  pada  voltase  tinggi  mengakibatkan  pemisahan  yang  sangat  cepat. Sehingga  senyawa-senyawa  dengan  berat  molekul  rendah akan  mengalami  proses difusi yang paling baik dipisahkan dalam kondisi elektroforesis tegangan tinggi.

## 4. Penelitian penggunaan Elektroforesis
Purwadi (2010) melakukan penelitian tentang penggunaan elektroforesis terhadap protein whey dan  air  pemulur  pada  pembuatan  keju  Mozzarella  yang  dipengaruhi  oleh  suhu  koagulasi  dan pemuluran.  Elektroforesis  yang  digunakan  tipe SDS-Page ,  menggunakan  media  pemisah gabungan  poliakrilamida-natrium  dodesil  sulfat.  Elektroforesis  jenis  ini  memiliki  sifat  lebih sensitif  dan  lebih  akurat,  hanya  saja  membutuhkan  proses  yang  lebih  lama.  Diperoleh  hasil bahwa bahwa suhu koagulasi yang baik ialah 30 atau 35 o C,karena kedua suhu tersebut tidak berbeda  nyata,  maka  agar  lebih  efisien  sebaiknya  digunakan  suhu  30 o C.  Suhu  pemuluran semuanya  tidak  berbeda  nyata,  sehingga  agar  lebih  efisien  digunakan  suhu  terendah,  namun dengan suhu 70 o C keju yang dihasilkan kurang mulur, sehingga sebaiknya digunakan suhu 75 o C.
Kusumaningrum  et  all  (2014)  melakukan  penelitian  tentang  gerak  molekul  DNA  yang terpolarisasi  pada  elektroforesis  berdasarkan  muatan.  Penelitian  ini  melakukan  kombinasi  alat antara  prinsip  elektroforesis  dan  dielektroforesis  terintegrasi  perangkat  lunak  untuk  mengukur konsentrasinya.  Pengukuran konsentrasi  DNA  menggunakan  spektrofotometer  UV/VIS. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan desain untuk mengukur konsentrasi DNA berdasarkan gambaran  yang  dihasilkan  pada  gel  elektroforesis  menggunakan  perangkat  lunak  berbasis MatLab.  Pengukuran  konsentrasi  DNA  didasarkan  gambaran  yang  dihasilkan  pada  gel elektroforesis  lalu  dibandingkan  dengan  hasil  penghitungan  spektrofotometer  UV/VIS.  Hasil pengukuran  total  DNA  menggunakan  instrumentasi  spektrofotometer  memiliki  kecenderungan yang  sama  dengan  hasil  pengukuran  menggunakan  perangkat  lunak  berbasis  MatLab meskipun terdapat perbedaan nilai kuantitatif.
Hermanto  S.,  et  all  (2014)  melakukan  penelitian  tentang  penggunaan  metode  SDS- PAGE (Sodium  Dodecyl  Sulphate  Poly  Acrylamide  Gel  Electrophoresis )  bertujuan  untuk mengidentifikasi  sumber  gelatin  yang  digunakan  pada kapsul  keras. Hal  ini  merujuk  pada penggunaan  gelatin  sebagai  salah  satu  bahan  utama  sistem  pengiriman (delivery) obat  medis atau  farmasi.  Bahan  dasar  pembuatan  kapsul  saat  ini masih  menjadi  permasalahan
e-ISSN  2549-3701
dikarenakan  kehalalannya  masih  diragukan  karena  sebagian  besar  diperoleh  dari  bahan  tidak halal.  Kolagen  tulang  sapi  dan  lemak  babi  merupakan  salah  satu  sumber  penghasil  gelatin. Dengan  ada  penelitian  tersebut  dapat  dilakukan  pemerikasaan  terhadap  kehalalan  suatu produk  yang  memanfaatkan  metode  SDS-PAGE (Sodium  Dodecyl  Sulphate  Poly  Acrilamide Gel  Elektrophoresis ).  Tahap  awal  penelitian  dilakukan  optimasi  terhadap  standar  gelatin  sapi dan babi yang dihidrolisis dengan pepsin pada pH 4.5 dan suhu 60 o C selama 1 jam, 2 jam dan, 3  jam.  Gelatin  yang  dihasilkan  hidrolisis  selanjutnya  dianalisis  dengan  SDS-PAGE  untuk menentukan  waktu  hidrolisis  optimal.  Kemudian  identifikasi  gambaran  gelatin  hidrolisat dibandingkan berdasarkan perbedaan bobot molekulnya.
Hasil penelitian yang diperoleh kemudian diaplikasikan terhadap indikasi sumber gelatin pada  beberapa  sampel  kapsul  keras  yang  diperoleh  dari  pasaran  dan  dibandingkan  dengan kapsul keras gelatin hasil simulasi. Hasil hidrolisis optimum selama 3 jam menunjukkan adanya pita-pita spesifik pada gelatin sapi dengan bobot molekul 15 kDa; 18,5 kDa; 33 kDa dan 47 kDa serta pita spesifik pada gelatin babi dengan bobot molekul 12,8 kDa; 17,3 kDa, 23,7 kDa dan 37 kDa. Hasil  yang sama diperoleh pada kapsul keras sampel dengan  pita-pita gambaran protein yang  identik  dengan  standar  gelatin  sapi.  Hasil  analisis  yang  diperoleh  menunjukkan  ketiga sampel yang diuji diduga merupakan kapsul yang terbuat dari gelatin sapi.
Rohmana A., et all (2016) melakukan penelitian terhadap penggunaan media pemisah berupa agar-agar komersial pada alat elektroforesis dengan sampel berupa  zat  warna remazo yang  dipengaruhi  oleh  komposisi  buffer,  ph  buffer  dan  konsentrasi  media.  Objek  penelitian merupakan  zat  warna Remazo  Brilliant  Blue  R  (RBBR),  Remazo  Red  RB  (RRRB),  Remazo Yellow FG (RYFG), Remazo Turquoise Blue G (RTBG) dan Remazo Violet 5R (RV5R) dengan beberapa variabel optimasi elektroforesis gel dipengaruhi oleh komposisi buffer, pH buffer, dan konsentrasi  media  yang  dilakukan  pada  tegangan  150  volt  selama  15  menit.  Kemudian diperoleh kondisi optimal menggunakan buffer dengan komposisi NaH2PO4.H2O + Na2HPO4. Hasil  penelitian  menunjukkan  larutan  penyangga  pada  pH    9  didapatkan  jarak  migrasi  terjauh untuk  masing-masing  zat warna  RBBR,  RYFG,  RRRB,  RTBG  dan  RV5R  secara  berturut-turut adalah  :  29,11  mm;  35,40  mm;  33,40  mm;  32,07  mm;  dan  31,07  mm.  Pada  konsentrasi  2% didapatkan jarak migrasi untuk kelima zat warna remazol paling jauh, yaitu : RBBR 29,13 mm; RYFG 34,14 mm; RRRB 31,16 mm; RTBG 30,25 mm dan RV5R 29,20mm.
Yahya  L.A.,  et  all  (2016)  melakukan  penelitian  tentang  pemanfaatan Nata  de  Coco sebagai  media  gel  elektroforesis  pada  zat  warna  Remazol  terhadap  pengaruh  pH,  waktu  dan aplikasi  pemisahan  gelatin.  Penelitian  ini  mengamati  pengaruh  pH  larutan buffer ,  waktu  dan proses  pemisahan  gelatin  kemudian  menggunakan  elektroforesis  dengan  media nata  de  coco sebagai  media  penyangganya. Nata  de  coco yang  telah  dibuat  dengan  masa  inkubasi  4  hari menghasilkan ketebalan  sekitar  0,454 cm  sehingga  umur  tersebut  digunakan  dalam  penelitian ini. Penggunaan larutan buffer terbaik adalah buffer fosfat yang terbuat dari garam–garamnya. Adapun  pengaruh  pH  dinyatakan  dengan  kekuatan  ion,  hal  ini  sebanding  dengan  semakin besar  kekuatan  ion  larutan,  maka  semakin  jauh  jarak  migrasi  Remazol.  Alokasi  waktu  pada proses elektroforesis mempengaruhi jarak migrasi Remazol. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa kondisi optimum elektroforesis gel terhadap pewarna Remazol Turquoise diperoleh dua pita pemisahan dengan jarak pita masing-masing 2 cm dan 3,6 cm.
Rachmania  R.A.,  et  all  (2017)  melakukan  penelitian  tenga  berat  molekul  terhadap enzim  Protease  buah  Nanas (Ananas  comosus  L.Merr) dan  Pepaya (Carica  papaya  L.) menggunakan  metode  SDS-PAGE.  Jenis  enzim  Protease  yaitu  Papain  dan  Bromelin  dapat menguraikan  struktur  molekul  protein  menjadi  asam  amino  sangat  dibuthkan  pada  industri makanan dan farmasi.
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui profil berat molekul enzim Bromelin dari kulit buah  Nanas (Ananas  comosus  L.  Merr) dan  Pepaya (Carica  papaya  L.) dari  getah  dengan variaetas  berbeda  menggunakan  metode  SDS-PAGE (Sodium  Dodecyl  Sulphate  Poly Acrylamide  Gel  Electrophoresis) .  Presipitasi  dilakukan  dengan  penambahan  amonium  sulfat ((NH4)2SO4) 60 % dan dialisis enzim menggunakan tabung selofan dengan ukuran pori 12.000 Dalton. Selanjutnya, berat molekul larutan enzim hasil dialisis ditentukan dengan metode SDS- PAGE.  Hasil  yang  diperoleh  dari  analisis  berat  molekul  enzim  Bromelin  varietas  Bogor  dan Subang  tidak  berbeda  yaitu  berkisar  30,654  kDa,  begitu  juga  dengan  enzim  papain  varietas California  dan  Sukma  tidak  berbeda  yaitu  berkisar  23,485  kDa.  Kesimpulan  dari  penelitian tersebut  bahwa  varietas  buah  yang  berbeda  pada  nanas  dan  pepaya  tidak  berpengaruh terhadap berat molekul enzim bromelin dan papain.

## Referensi
Bintang M. (2010). Biokimia Teknik Penelitian. Jakarta: Erlangga. Hermanto  S.  et  all.  (2015). Aplikasi  Metode  SDS-PAGE  (Sodium  Dodecyl  Sulphate  Poly  Acrylamide  Gel Electrophoresis)  untuk  Mengidentifikasi  Sumber  Asal  Gelatin  pada  Kapsul  Keras. Jurnal  Kimia Valensi: Jurnal Penelitian dan Pengembangan Ilmu Kimia, 1,(1), Hal. 26-32 Khopkar S.M. (1990). Konsep Dasar Kimia Analitik. terjemahan Saptoraharjo, Jakarta:  UI-Press. Kusumaningrum, H.P. (2014). Desain Alat Elektroforesis Untuk Optimasi Visualisasi Dan Konsentrasi DNA Menggunakan Software. Jurnal Pendidikan Fisika Indonesia, 10(2) , Hal.194-202 Pratiwi, R. (2001). Mengenal Metode Elektroforesis, Volume XXVI, Nomor 1 , Oseana. Hal 25-31 Purwadi.  (2010). Elektroforesis  Protein Whey  Dan  Air  Pemulur  Dalam  Pembuatan  Keju  Mozzarella  Hasil Percobaan Faktorial Suhu Koagulasi Dan Suhu Pemuluran. Jurnal Ilmu dan Teknologi Hasil Ternak, 5(1), Hal 23-31.
Rachmania et all. (2017). Profil Berat Molekul Enzim Protease Buah Nanas (Ananas comosus L.Merr) dan Pepaya  ( Carica  papaya  L.) Menggunakan  Metode  SDS-PAGE. Alchemy  Jurnal  Penelitian  Kimia,
13(1) , Hal. 52 – 65.
Rohmana A. et all. (2016). Penggunaan Agar-agar Komersial sebagai Media Gel Elektroforesis Pada Zat Warna  Remazol:  Pengaruh  Komposisi  Buffer,  pH  Buffer  dan  Konsentrasi  Media. JURNAL  SAINS DAN SENI ITS, 5(2) , Hal. 130 – 133. Sudjadi. (2008). Bioteknolgi Kesehatan , Yogyakarta: Kanisius. Triwibowo Yuwono. (2009). Biologi Molekular , Jakarta: Erlangga. Yahya,L.A. et all. (2016). Pemanfaatan Nata de Coco sebagai Media Gel Elektroforesis Pada Zat Warna Remazol:  Pengaruh  pH,  Waktu  dan  Aplikasi  Pemisahan  Gelatin. Jurnal  Sains  Dan  Seni  ITS, 5(2). Hal. 137-140.