p-ISSN         : 2087-9423
http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnalikt
e-ISSN         : 2620-309X

## IDENTIFIKASI MIKROALGA LAUT DARI TAMBRAUW, PAPUA BARAT

## IDENTIFICATION OF MARINE MICROALGAE FROM TAMBRAUW, WEST PAPUA
Debora Christin Purbani 1* , Wiwik Ambarwati 2 , Aradea Bujana Kusuma 2 dan Nurlaila Ervina Herliany 2
1 Bidang Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi-LIPI, Cibinong, 16911
2 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Bengkulu, Bengkulu, 38371 *E-mail: deborachristin22@gmail.com

## ABSTRACT
Tambrauw as one of the regencies in West Papua, is well known as a megabiodiversity area, including marine  microalgae  that  have  an  important  role  in  the  food  chain  system  in  the  water.  On  the  other hand  the  diversity  of  marine  microalgae  in  this  area  has  not  been  studied  much.  This  study  was conducted  to  identify  marine  microalgae  from  Tambrauw  based  on  morphology  and  molecular approach.  Marine  microalgae  were  isolated  from  natural  sources  in  Tambrauw,  purified  and cultivated under standard conditions. Fourteen cultures of marine microalgae were selected based on growth,  diversity  of  morphology  and  homogeneity. The  morphological  characteristics  were  observed using light microscopy and the phylogenetic relationships of each strain were defined according to the 18S  rRNA  sequence  analysis  in  the  eukaryotic  group  and  16S  rRNA  in  the  prokaryotic  microalgae group.  The  resultant  sequences  were  compared  with  those  available  on  the  NCBI  website  database through  the  BLAST  bioinformatic  tool.  The  results  showed  high  similarity  with  known  nucleotide sequence  identified  as  Monoraphidium  neglectum  (99%),  Chlorella  sorokiniana  (99%),  Oocystis heteromucosa  (99%),  Ettlia  texensis  (99%),  Dilabifilum  arthopyreniae  (98%),  Auxenochlorella protothecoides  (99%),  Trichosarcina  polymorpha  (98%),  Scenedesmus  vacuolatus  (99%),  Chlorella kessleri  (99%),  Coelastrella oocystiformis  (99%),  dan  Foliisarcina  bertiogensis  (99%). This  study  is the  basic  information  in  revealing  the  diversity  patterns  of  microalgae,  which  are  very  important  to obtain new genetic resources for industrial purposes as well as for taxonomic studies.
Keywords: algae , InaCC, microscopy, phylogeny, sequence analysis

## ABSTRAK
Tambrauw  merupakan  salah  satu  Kabupaten  di  Papua  Barat,  dikenal  sebagai  daerah  mega- biodiversitas,  termasuk  mikroalga  laut  yang  memiliki  peran  penting  dalam  sistem  rantai  makanan  di perairan. Namun di sisi lain keanekaragaman mikroalga laut di daerah ini masih belum banyak diteliti. Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengisolasi  dan  mengidentifikasi  mikroalga  laut  dari  Tambrauw berdasarkan  pendekatan  morfologi  dan  molekular.  Mikroalga  laut  diisolasi  dari  sumber  alami  di Tambrauw,  dimurnikan  dan  dikultur  di  bawah  kondisi  standar.  Empat  belas  kultur  mikroalga  laut dipilih  berdasarkan  pertumbuhan,  keragaman  morfologi  dan  homogenitas.  Karakteristik  morfologi diamati dalam kondisi kultur menggunakan mikroskop cahaya dan hubungan filogenetik dari masing- masing  strain  didefinisikan  sesuai  dengan  analisis  sekuen  18S  rRNA  pada  kelompok  mikroalga eukariot  dan  16S  rRNA  pada  kelompok  mikroalga  prokariot.  Sekuen  yang  dihasilkan  dibandingkan dengan database yang tersedia di situs web NCBI melalui alat bioinformatika BLAST. Hasil penelitian menunjukkan  similaritas  yang  tinggi  dengan  identitas  urutan  nukleotida  yang  dikenal,  sebagai Monoraphidium neglectum (99%), Chlorella sorokiniana (99%), Oocystis heteromucosa (99%), Ettlia texensis (99%), Dilabifilum  arthopyreniae (98%), Auxenochlorella  protothecoides (99%), Trichosarcina  polymorpha (98%), Scenedesmus  vacuolatus (99%), Chlorella  kessleri (99%), Coelastrella  oocystiformis (99%),  dan Foliisarcina  bertiogensis (99%).  Studi  ini  menjadi  informasi dasar  dalam  mengungkap  pola  keanekaragaman  mikroalga,  yang  sangat  penting  untuk  mendapatkan sumber daya baru genetik untuk kepentingan industri serta studi taksonomi.
Kata kunci: alga, analisis sekuen, filogeni, InaCC, mikroskopik

## I. PENDAHULUAN
Tambrauw merupakan  Kabupaten pemekaran  di  Papua  Barat  sejak  tahun  2008 dengan  luas  11.373,96  km 2 .  Pemerintah daerah memiliki komitmen untuk membangun  Tambrauw  berdasarkan  prinsip- prinsip  konservasi.  Kabupaten  konservasi secara  sederhana  dapat  dimaknai  sebagai wilayah administratif pemerintah yang melaksanakan kegiatan pembangunan berdasarkan  pada  kriteria  tertentu  yakni pemanfaatan sumberdaya berkelanjutan, perlindungan  sistem  penyangga  kehidupan, dan  pengawetan  keanekaragaman  hayati  dan ekosistemnya  secara  berkelanjutan  (Fatem, 2015). Kegiatan  yang dapat dilakukan dalam mewujudkannya  antara  lain  adalah  dengan melakukan  eksplorasi,  inventarisasi,  dan monitoring keanekaragaman hayati yang ada, diantaranya mikroalga laut di Tambrauw.
Mikroalga  laut  merupakan  mikro- organisme uniselular atau multiselular sederhana yang mampu memenuhi kebutuhan  energi  secara  mandiri  dengan melakukan  fotosintesis.  Secara  ekologis, organisme  ini  menjadi  dasar  dari  jaring makanan di laut dan berkontribusi setidaknya 30%  dalam  fiksasi  CO 2 di  seluruh  dunia, yang sangat berdampak pada siklus biogeokimia  global  (Platt et  al .,  2003). Secara  ekonomi,  beragam  mikro-alga  laut digunakan  atau  memiliki  potensi  untuk digunakan  sebagai  nutrasetikal,  produksi obat-obatan  (Borowitzka,  1995),  kosmetik (Kim et  al., 2008), bioremediasi  (Cardinale,
2011;  El-Sheekh et  al .,  2012),  dan biofuel (Waltz, 2009).
Kelompok  organisme  ini  sangat heterogen dengan karakteristik yang berbeda- beda,  diantaranya  perbedaan  pada  tipe jaringan  sel,  ukuran  sel,  morfologi  sel (umumnya  uniseluler),  dan  warna  sel (Mercer  and  Armenta,  2011).  Karakter morfologi  ini  biasa  digunakan  oleh  peneliti untuk  menentukan  nama  jenis  spesies mikroalga.  Namun,  karakterisasi  secara konvensional  ini  memiliki  kemungkinan
bahwa mikroalga yang memiliki fenotif sama teridentifikasi  menjadi  spesies  yang  sama, padahal keduanya belum tentu secara genetik memiliki kesamaan. Oleh sebab itu, diperlukan karakterisasi dan identifikasi lebih lanjut menggunakan analisis molekuler.
Identifikasi berbasis molekular dengan analisis sekuensing dianggap memiliki  tingkat  sensitivitas  dan  spesifisitas yang tinggi. Penggunaan  sekuen  DNA  dapat mengatasi kelemahan  dari data  morfologi  yang diketahui  memiliki  ke-terbatasan  karakter  dan cenderung  dipengaruhi    lingkungan.    Karakter dari  penanda   molekuler   berupa   sekuen  DNA dapat    di  ambil  dari  inti  sel,    kloroplas    dan mitokondria  (Suparman,  2012).  Penanda genetik  yang  banyak  digunakan  untuk  studi filogeni  dan  taksonomi  mikroalga  prokariot adalah  16s  rRNA  (Janda  and  Abbott,  2007; Galhano et  al., 2011).  Sementara  18s  rRNA menjadi  penanda  molekular  paling  penting dalam  analisis  filogenetik  molekular  dan studi skrining biodiversitas mikroalga khususnya  kelompok  eukariot  (Meyer et  al ., 2010).  Hal  ini  karena  keduanya  memiliki beberapa  urutan  nukleotida  (basa)  yang conserved (tidak berubah dari satu organisme ke organisme yang lain) dan beberapa urutan yang  bervariasi  pada  organisme  eukariotik dan prokariotik, serta menunjukan divergensi sekuen  kurang  dari  1%  diantara symbiont clades (Erwin  and  Thacker,  2008;  Rivas et al ., 2004).
Suharno  dan  Lantang  (2012)  telah mengamati secara morfologi bahwa mikroalga  yang  ditemukan  di  Perairan  Laut Manokwari  dan  Sorong,  Papua  Barat didominasi  jenis Diatoma sp., Euglena sp., Lyngbya sp., Navicula sp., Proboschia sp., Spirogyra sp., Nitzschia sp., Bakteriastrum sp., Peridinium sp.,  dan Rhisosolenia sp.. Mikroalga dari kelompok Bacillariophy ceae, Cyanophyceae, Dinophyceae, dan Chrysophyceae  juga  ditemukan  di  perairan luar  Teluk  Wondama,  Papua  Barat  (Alianto et al ., 2019).  Sujarta et al . (2011) juga telah mengidentifikasi  21  marga  mikroalga  secara morfologi  di  Teluk  Tanah  Merah,  Jayapura.
Namun,  ekplorasi  dan  identifikasi  mikroalga laut  di  Tambrauw  sampai  saat  ini  belum dilakukan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi dan  mengidentifikasi  mikro-alga laut  dari  Tambrauw  berdasarkan  pendekatan morfologi dan  molekular. Manfaat penelitian ini diharapkan dapat menjadi informasi dasar dalam  me-ngungkap  pola  keanekaragaman serta  potensi  mikroalga  yang  ada  di Tambrauw, Papua Barat.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1. Pengambilan dan Pengayaan Sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  di wilayah laut  Tambrauw yaitu  Distrik Sausapor ( S : 00°30'18,42'' E : 132°04'51,25''), secara simple  random  sampling .  Metode yang  digunakan  adalah  pengapusan,  koleksi biomassa,  koleksi  batuan  kecil  atau  pasir, koleksi  sedimen,  membilas  hewan  air  dan koleksi  air  sampel  secara  langsung.  Sampel kemudian  diperkaya  dalam corning  tubes dengan  medium  IMK  untuk  air  laut  dengan komposisi  200mg  NaNO 3 ,  1.4mg  Na 2 HPO 4 , 5mg  K 2 HPO 4 ,  2.68mg  NH 4 Cl,  5.2mg  Fe- EDTA,  0.332mg  Mn-EDTA,  37.2mg  Na 2 - EDTA,  0.023mg  ZnSO 4 •  7H 2 O,  0.014mg CoSO 4 •7H 2 O,  0.0073mg  Na 2 MoO 4 •2H 2 O, 0.0025mg  CuSO 4 •5H 2 O,  0.0017mg  H 2 SeO 3 , 0.180mg  MnCl 2 •4H 2 O, 0.2mg Thiamin•HCl, 0.0015mg  Biotin,  0.0015mg  Vitamin  B12 dan satu liter air laut (Anderson, 2005).

## 2.2.      Isolasi Mikroalga
Isolasi  dilakukan  dengan  metode capillary micro-pipetting di bawah mikroskop cahaya (Olympus CKX41). Silicon  slant dihubungkan  dengan  ujung pasteur  pipette .  Media  dituangkan  ke  dalam flat  bottom 24 wellplates masing-masing sebanyak 1ml. Sampel diteteskan pada object glass , keberadaan dan ke-ragaman mikroalga diamati di bawah mikroskop cahaya. Mikroalga  target  (sel  tunggal)  kemudian ditentukan  dan  disedot  menggunakan  ujung runcing pasteur pipette , lalu ditiupkan dalam
sumuran  24 wellplates yang  telah  berisi media. Pengenceran berseri dilakukan sampai mendapatkan  isolat  tunggal  (Purbani,  2019). Unit  karakter  yang  digunakan  adalah morfologi  yang  meliputi  bentuk  sel,  ukuran sel,  bentuk  kloroplas,  tipe  reproduksi,  dan struktur  khusus  (bintik  mata)  (Abdullah  dan Sembiring, 2009).

## 2.3.      Identifikasi Morfologi
Isolat  mikroalga  yang  tumbuh  dari proses  isolasi  selanjutnya  diseleksi  dan diidentifikasi  secara  morfologi.  Mikroalga diteteskan  pada object  glass kemudian ditutup  dengan cover  glass dan  diamati dibawah  mikroskop  cahaya  Olympus  BX5 yang  telah  dihubungkan  dengan  kamera Olympus  DP26  dan personal  computer dengan  aplikasi CellSens  Standart dimulai dari  perbesaran  kecil  hingga  perbesaran  100 kali.  Bentuk  atau  arsitektur  sel  diamati dengan  mengamati  karakter  morfologi  yaitu bulat, memanjang, tidak beraturan, berkoloni atau  tunggal,  dan  berlendir  atau  tidak. Karakter  morfologi  masing-masing  isolat mikroalga kemudian dianalisis secara deskriptif  menggunakan  buku  identifikasi mikroalga  (Barsanti  and  Gualtieri,  2014; Tomas,
1997).
Isolat kemudian dikelompokkan berdasarkan keragaman morfologi. Isolat terpilih selanjutnya dikultivasi  dalam culture  flasks berisi  25ml medium  IMK  selama  2-4  minggu  di  bawah cahaya (12 h :12 h ) pada suhu 25ºC.

## 2.4.      Identifikasi Molekular
DNA genom diekstraksi menggunakan Genomic DNA mini kit ( Plant ) Geneaid  dari  Genetika  Science  dengan nomor GP100. Hasil produk ekstraksi  DNA kemudian diamplifikasi dengan menggunakan  primer 18S rRNA  yaitu 18SF (5’  CCA  ACC  TGG  TTG  ATC  CTG  CCA GTA 3’) dan 18SR (5’ CCT TGT TAC GAC TTC ACC TTC CTC T 3’) untuk mikroalga eukariot  (Tale et al., 2014). Primer universal 16S  rRNA  yaitu  27F Algae (5’ AGA GTT TGA  TCM  TGG  CTC  AG  3’)  dan  1510R
Algae (5’ GGG TAC CTT GTT ACG ACT T 3’)  digunakan  untuk  mikroalga  prokariot (Wilson et  al .,  1990;  Marsh  and  Nakatsu, 2014).  PCR  dilakukan  dengan  mereaksikan 12,5  µl GoTag ® Green  Master  Mix ,  10  µl Nuclease Free Water (NFW), 0,5 µl masing- masing primer, 0,5 µl DMSO, dan 1 µl DNA template.  Tahapan  PCR  untuk  mikroalga eukariot  meliputi  predenaturasi  94 o C  selama lima  menit,  diikuti  35  siklus  denaturasi  pada suhu 94 o C selama satu menit, annealing pada suhu  63 o C    selama  1  menit, extention pada suhu  72 o C  satu  menit,  kemudian  dilanjutkan dengan final  extention pada  suhu  72 o C selama  10  menit  diikut  tahap  pendinginan pada  suhu  4 o C  (Tale et  al .,  2014).  Tahapan PCR  untuk  mikroalga  prokariot  meliputi predenaturasi  94 o C  selama  lima  menit, diikuti  denaturasi  pada  suhu  94 o C  selama satu menit, annealing pada suhu 55 o C selama satu  menit, extention pada  suhu  72 o C  satu menit  30  detik,  tahap  denaturasi, annealing , dan extention dilakukan  sebanyak  31  siklus, kemudian  dilanjutkan  dengan final  extention pada suhu 72 o C selama 10 menit diikut tahap pendinginan pada suhu 4 o C (Ma et al ., 2008). Tahap selanjutnya adalah elektroforesis    untuk    mengetahui    kualitas amplifikasi      DNA    dari  produk  PCR  meng- gunakan  alat elektroforeser yaitu  Mupid Elektroforesi. Sekuensing dilakukan di Macrogen.inc Korea Selatan untuk menentukan  urutan  basa  rantai    DNA masing-masing  isolat.    Data  sekuen  yang
diperoleh  dianalisis  (edit)  secara offline dengan menggunakan ChromasPro. Identifikasi  jenis  dilakukan  berdasarkan nukleotida  hasil  sekuensing  dengan  analisis bioinformatika  BLAST    ( Basic    Local Alignment    Search    Tools )  secara online, mengacu  pada  data  Bank  Gen  pada  NCBI ( National Center for Biotechnology
Information )  pada  laman  https://blast.ncbi. nlm.nih.gov/Blast.cgi. Konstruksi filo- genetik  dilakukan  menggunakan  metode pengkelasan Neighbour-Joining (NJ) , 1000 bootstrap dengan  aplikasi Molecular Evolutionary  Genetic  Analysis (Tamura et al ., 2011).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Mikroalga yang berhasil diisolasi dari perairan  laut  Tambrauw  sebanyak  14  isolat, dipilih berdasarkan pertumbuhan, keanekaragaman  morfologi  dan  warna,  serta homogenitas. Secara morfologi isolat tersebut diduga merupakan kelompok Chlorophyta atau green algae (InaCC M107, InaCC  M108,  InaCC  M113,  InaCC  M132, InaCC  M133,  InaCC  M110,  InaCC  M116, InaCC  M115,  InaCC  M118,  InaCC  M119, InaCC  M120,  InaCC  M131,  InaCC  M135) yang  termasuk  dalam  kingdom  eukariot,  dan kelompok Cyanobacteria (InaCC  M134) yang  termasuk  dalam  kingdom  prokariot (Gambar 1).
A
B
C
Gambar 1.  Penampakan  mikroskopis  mikroalga  laut  dari  Tambrauw.  A)  InaCC  M107,  B) InaCC  M108,  C)  InaCC  M110,  D)  InaCC  M113,  E)  InaCC  M115,  F)  InaCC M116,  G)  InaCC  M118,  H)  InaCC  M119,  I)  InaCC  M120,  J)  InaCC  M131,  K) InaCC  M132,  L)  InaCC  M133,  M)  InaCC  M135,  N)  InaCC  M134.  A-M: mikroalga  hijau  kelompok Chlorophyta dengan  berbagai  bentuk  (bulan  sabit, coccoid , elips ,  dan  filament);  N:  mikroalga  biru-hijau  kelompok Cyanobacteria berbentuk  bulat,  setengah  bola  ketika  berpasangan,  dan  tidak  beraturan  ketika membentuk baeocyte.
Identifikasi molekuler dilakukan untuk  mendukung  identifikasi  morfologi  dan untuk  mengetahui  mana  jenis  isolat  hingga tingkat  spesies.  Amplifikasi  gen  18S  rRNA
dilakukan pada kelompok mikroalga eukariot dan gen 16S rRNA pada kelompok prokariot. Menurut  Duong  (2016),  mikroalga  prokariot sebagian  besar  merupakan  kelompok  dari
D E F G H I J K L M N
alga hijau biru atau Cyanobacteria/ Cyanophyta dan  mikroalga  eukariot  terdiri dari filum Glaucophyta, Chlorophyta, Chlorarachnio phyta, Euglenophyta, Rhodophyta,  Hapto  phyta,  Cryptophyta, Heterokontophyta,  dan  Dinophyta .  Sehingga amplifikasi  gen  18S  rRNA  dilakukan  pada isolat  kelompok Chlorophyta dan  gen  16S rRNA  pada  isolat  kelompok Cyanobacteria. Hasil  BLAST  dari  produk  PCR  yang ditelusuri  pada  DNA  database GenBank melalui situs National Center for
Biotechnology Information (NCBI)
menunjukan  bahwa  14  isolat  mikroalga  laut dari Tambrauw teridentifikasi sebagai Monoraphidium  neglectum (InaCC  M107), Chlorella sorokiniana (InaCC M108), Oocystis  heteromucosa (InaCC  M110), Chlorella  sorokiniana (InaCC  M113), Ettlia texensis (InaCC M115), Oocystis heteromucosa (InaCC  M116), Dilabifilum arthopyreniae (InaCC M118),
Auxenochlorella  protothe  coides (InaCC M119), Trichosarcina  polymorpha (InaCC M120), Scenedesmus  vacuolatus (InaCC M131), Chlorella  kessleri (InaCC  M132),
Chlorella kessleri (InaCC M133), Coelastrella  oocystiformis (InaCC  M135), dan Foliisarcina bertiogensis (InaCC M134). Isolat  tersebut  secara  umum  memiliki persentase homologi sebesar 98-99%
terhadap type  strain terdekatnya  (Tabel  1). Menurut  Henry et  al .,  (2000),    nilai similaritas 95–100% dapat dinyatakan sebagai  satu  spesies  yang  sama.  Konstruksi pohon  filogeni,  yang  dibuat  dengan  metode pengkelasan Neighbor-Joining dengan  1000 replikasi bootstrap pada  model Kimura  2 Parameter dan jarak evolusionernya dihitung menggunakan  metode Maximum  Composite Likelihood dengan aplikasi MEGA5 (Tamura et  al .,  2011),  diperoleh  hasil  seperti  yang ditunjukkan pada Gambar 2 dan 3.
Tabel 1. Identifikasi  mikroalga  laut  dari  Tambrauw  berdasarkan  kesamaan  urutan  gen  18S rRNA.
Kode Isolat Jumlah Nukleotida Hasil Sekuensing Query Cover Persentase Homologi InaCC M107 604 Monoraphidium neglectum SAG 48.87 (AJ300526.1) 100% 99 InaCC M108 606 Chlorella sorokiniana SAG 211-8k (X62441.2) 100% 99 InaCC M110 601 Oocystis heteromucosa SAG 1.99 (AF228689.1) 99% 98 InaCC M113 602 Chlorella sorokiniana SAG 211-8k (X62441.2) 100% 99 InaCC M115 607 Ettlia texensis SAG 79.80 (GU292343.1) 100% 99 InaCC M116 604 Oocystis heteromucosa SAG 1.99 (AF228689.1) 100% 98 InaCC M118 601 Dilabifilum arthopyreniae SAG 467-2 (KM020041.1) 100% 99 InaCC M119 599 Auxenochlorella protothecoides SAG 15.91 (LN610705.1) 99% 99 InaCC M120 601 Trichosarcina polymorpha SAG 24.93 (AM087962.1) 99% 98 InaCC M131 608 Scenedesmus vacuolatus SAG 79.80 (X56104.1) 100% 99 InaCC M132 610 Chlorella kessleri SAG 211-11g (X56105.1) 100% 99
Kode Isolat Jumlah Nukleotida Hasil Sekuensing Query Cover Persentase Homologi InaCC M133 609 Chlorella kessleri SAG 211-11g (X56105.1) 100% 99 InaCC M135 601 Coelastrella oocystiformis (AB012848.2) 99% 99 Tabel 2. Identifikasi  mikroalga  laut  dari  Tambrauw  berdasarkan  kesamaan  urutan  gen  16S rRNA. Kode Isolat Jumlah Nukleotida Hasil Sekuensing Query Cover Presentase Homologi InaCC M134 1348 Foliisarcina bertiogensis CENA333 (NR148664.1) 100% 99
Gambar 2.  Pohon filogenetik isolat mikroalga eukariot dari Tambrauw berdasarkan sekuen gen 18S rRNA.
Hasil dari analisis filogenetik menunjukan bahwa isolat yang telah teridentifikasi  termasuk  ke  dalam  delapan kelompok  yang  berbeda.  Mikroalga  dari famili Selenastraceae, Chlorellaceae, Oocystaceae, Chlorococcaceae, Kornmanniaceae,  Ulvales,  Scenedesma-ceae
dan  Xenococcaceae  ini  ditemukan  dalam perairan  laut  Tambrauw  pada  suhu  29 o C. Spesies-spesies  tersebut  memang  dapat ditemukan  pada  suhu  tersebut,  hal  ini  sesuai dengan pernyataan Munir et al . (2015) bahwa kisaran  suhu  optimal  bagi  pertumbuhan mikroalga adalah 20 o C-30 o C.
Gambar 3.  Pohon filogenetik isolat mikroalga prokariot dari Tambrauw berdasarkan sekuen gen 16S rRNA.
Berdasarkan hasil BLAST dan analisis  filogenetik  18S  rRNA  diketahui bahwa  isolat  InaCC  M107  merupakan mikroalga Monoraphidium  neglectum yang termasuk dalam famili Selenastraceae, dengan  persentase  homologi  sebesar  99%. Mikroalga ini memiliki  bentuk lebih panjang (7-100 µm )  dari  lebar  (1-5 µm ),  melengkung, secara  bertahap  meruncing  ke  arah  puncak, menyerupai  bulan  sabit.  Isolat  ini  diambil dari substrat sedimen dengan pH 6,5. Hal ini sesuai  dengan  pernyataan  Bogen et  al ., (2013)  bahwa Monoraphidium merupakan mikroalga  yang  hidup  pada  pH  5-10.  Genus Monoraphidium merupakan alga hijau uniseluler yang berdinding sel tipis, berklorofil,  namun  tidak  terdapat pyrenoid (struktur  pada  kloroplas  yang  berfungsi sebagai tempat penyimpanan cadangan makanan).  Genus Monoraphidium dapat memproduksi  4-8  autospora  setelah  dinding induk  memecah  menjadi  dua  bagian  (Ramos et  al .,  2013).    Mikroalga  jenis  ini  dapat digunakan  sebagai  indikator  perairan  yang tercemar,  karena  memiliki protective  cyste yang merupakan fase dari organisme uniseluler  yang  dilindungi  oleh  lapisan  tebal sehingga  dapat  bertahan  hidup  lebih  lama
pada  kondisi  yang  tidak  menguntungkan tanpa  mengambil  makanan  (Maresi et  al ., 2016).
Isolat InaCC M108  dan  InaCC M113 secara  molekular  teridentifikasi  sebagai Chlorella  sorokiniana, sedangkan  isolat InaCC M132 dan InaCC M133 teridentifikasi sebagai Chlorella  kessleri yang  termasuk dalam famili Chlorellaceae, dengan persentase  homologi  masing-masing  sebesar 99% .  Chlorella pada  umumnya  hidup  di perairan  tawar,  laut  dan  tempat  yang  basah dengan  pH  6,7  (Cuaresma et  al .,  2009). Secara morfologi mikroalga hijau ini memiliki  bentuk  bulat  dengan  diameter  5-10 µm, setiap selnya mampu membelah diri dan menghasilkan  empat  sel  baru  yang  tidak mempunyai  flagel,  kloroplas  berbentuk mangkuk  dan  memiliki  pirenoid.  Selain sebagai  sumber  pakan  alami Chlorella juga diketahui memiliki potensi sebagai agen bio- remediasi  (Dewi  dan  Nuravivah,  2018), antimicrobial (Acurio et al ., 2018), antioksidan  (Sawant  and  Kelkar  Mane, 2018),  serta  sebagai  bahan  baku  biodiesel (Liu et  al .,  2010),  dan bioethanol (Kumar et al ., 2016).
Isolat InaCC M110 dan InaCC M116 miliki  penampakan  morfologi  sel  yang berwarna hijau, tidak beraturan dan memiliki berbagai  bentuk,  seperti  bulat  dan  lonjong dengan panjang 7-50 µm dan lebar 6-12 µm, membentuk  dua  atau  empat  koloni  yang bersebelahan  dan  dibatasi  membran,  dengan dinding  sel  pada  ujung  tebal.  Secara molekular isolat  tersebut  teridentifikasi sebagai Oocystis heteromucosa yang termasuk  ke  famili  Oocystaceae,  dengan persentase  homologi  masing-masing  sebesar 98%.  Isolat  tersebut  diambil  dari  substrat batuan.  Menurut  Bock et al , (2011) Oocystis pada  umumnya  hidup  di  sungai,  danau,  laut dan  ada  juga  yang  hidup  epifit  dengan batuan.
Isolat  InaCC  M115  merupakan  sel tunggal, berwarna hijau, bentuk bulat dengan diameter  8-15  µm,  sel  uninukleat  tidak berdinding, terdapat cincin  sel, dan  memiliki pirenoid  dengan  selubung  yang  mengelilingi matrik.  Mikroalga  tersebut  secara  molekular teridentifikasi  sebagai Ettlia  texensis yang termasuk  dalam  famili  Chlorococcaceae, dengan  persentase  homologi  sebesar  99%. Menurut  Yildirim et  al .  (2014) Ettlia adalah kandidat  yang  menarik  untuk  bahan  baku produksi  biodiesel  karena  memiliki  nilai akumulasi  lipid  yang  tinggi. Canthaxanthin yang  dimilikinya  merupakan  karotenoid bernilai  komersial  yang  banyak  digunakan untuk pewarna makanan.
Isolat
InaCC M118 memiliki penampakan  morfologi  sel  berwarna  hijau, unipolar atau perkecambahan bipolar, bentuk filamen tidak beraturan, dengan percabangan silinder yang melekat pada permukaan, dapat membelah  ke  arah  yang  berbeda,  dan memiliki  satu  kloroplas  pariental  dengan pirenoid. Secara molekular isolat ini teridentifikasi sebagai Dilabifilum arthopyreniae yang termasuk dalam kelompok Ulvales , dengan persentase homologi  sebesar  99%.  Isolat  ini  diambil pada substrat batuan di Pantai Sausapor pada temperatur  29 o C.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  (Kim et  al .,  2018),  bahwa
mikroalga jenis ini umumnya menempel pada substrat  yang  padat  seperti  batuan,  kayu, makroalga dan lamun. Sampai saat ini belum banyak kajian mengenai potensi dari mikroalga Dilabifilum, oleh  sebab  itu  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai karakterisasi dari mikroalga jenis ini.
Isolat  InaCC  M119  secara  morfologi memiliki  bentuk  seperti Chlorella pada umumnya.  Namun  secara  molekular  isolat tersebut
teridentifikasi sebagai
Auxenochlorella protothecoides yang termasuk  dalam  famili  yang  sama  dengan Chlorella yaitu Chlorellaceae, dengan persentase homologi sebesar 99%. Mikroalga jenis ini sebelumnya dikenal sebagai Chlorella  protothecoides ,  yang  merupakan alga  hijau  heterotrofik  fakultatif  di  kelas Trebouxiophyta (Gao et  al .,  2010).  Seiring dengan  adanya  perubahan  lingkungan  dan karena  kebutuhannya  akan  tiamin  untuk pertumbuhannya  sehingga  spesies Chlorella mengalami perkembangan dan  menghasilkan spesies baru (Liana, 2017). A. protothecoides memiliki  potensi  dalam  produksi  biofuel, karena  dapat  meng-hasilkan  kandungan  lipid yang  tinggi  dalam  kondisi  heterotrofik sebesar 55,2% berat kering (Gill et al ., 2013). A. protothecoides juga mampu mengeluarkan 59% dari total nitrogen, 81% dari total fosfor, dan  96%  dari  total  karbon  organik  dari limbah dengan tetap mempertahankan tingkat produktivitas  lipid  yang  tinggi  (Zhou et  al ., 2012).
Isolat  InaCC  M120  berdasarkan  hasil BLAST  dan  analisis  filogenetik  memiliki persentase  homologi  sebesar  99%  dengan Trichosarcina  polymorpha yang  termasuk dalam kelompok yang sama dengan Dilabifilum yaitu  Ulvales.  Secara  morfologi isolat  ini  merupakan  multi-seluler  sederhana yang berwarna kuning-hijau, memiliki bentuk filamen yang dapat menjadi serangkaian  sel  sarcinoid,  serta  mengandung kloroplas  pariental  dan  pirenoid  tunggal. Diperlukan  studi  lebih  lanjut  mengenai karakteristik  dari Trichosarcina, karena
kajian mengenai potensi dari mikroalga jenis ini masih belum banyak dilakukan.
Isolat InaCC M131 dan InaCC M135 secara fenotipik memiliki kemiripan yaitu sel berwarna  hijau,  dengan  bentuk elips dan spindle, serta  memiliki  kloroplas  yang  berisi pirenoid.  Namun  hasil  analisis  filogenetik menunjukan  bahwa  isolat  InaCC  M131 memiliki  persamaan  homologi  sebesar  99% dengan Scenedesmus  vacuolatus ,  sedangkan isolat  InaCC  M135  teridentifikasi  sebagai Coelastrella oocystiformis dengan persentase homologi sebesar 99%. Kedua jenis mikroalga tersebut termasuk dalam kelompok yang sama yaitu Scenedesma-ceae. Scenedesmus merupakan  mikroalga  yang bersifat kosmopolit dan sebagian besar hidup di  lingkungan  akuatik.  Mikroalga  jenis  ini diketahui dapat dimanfaatkan sebagai makanan tambahan dalam  bentuk protein sel tunggal,  pakan  alami  dan  pakan  ternak karena  memiliki  kandungan  gizi  yang  tinggi (Peixoto et al ., 2015). Sedangkan Coelastrella merupakan salah satu mikroalga yang  memiliki  prospek  dalam  bioteknologi mikroalga.  Hal  ini  karena Coelastrella dapat menghasilkan  karotenoid  seperti  β- carotene, lutein,  free  astaxanthin,  canthaxanthin dan phytofluene yang  sangat  berpotensi  sebagai antioksidan  dan  anti-kanker  (Iyer et  al ., 2015), serta dapat memproduksi asam  lemak yang  dapat  dijadikan  sebagai  bahan  farmasi, dan kosmetik (Dimitrova et al ., 2016).
Hasil  analisis  sekuen  gen  16S  rRNA pada  isolat  InaCC  M134  menunjukan  bahwa isolat  tersebut  memiliki  homologi  sebesar 99%  dengan Foliisarcina  bertiogensis yang termasuk  dalam  famili  Xenococcaceae. Secara  morfologi  isolat  tersebut  merupakan sel  berwarna  biru-hijau  dan  berbentuk  bulat, setengah  bola  ketika  berpasangan,  serta seperti  persegi  ketika  berkoloni  atau  tidak teratur ketika membentuk baeocyte . Foliisarcina memiliki membran pembungkus koloni  tipis,  rapat, hyaline (transparan). Menurut Alvarenga et al . (2016) Foliisarcina termasuk  dalam  kelompok  Cyanobacteria yang  memiliki  sifat-sifat  khas  yaitu  tahan
kering,  tahan  panas  dalam  air,  dan  beberapa jenis  dapat  mengikat  molekul  N 2 dari  udara jika  dalam  tanah  tidak  ada  nitrat.  Mikroalga jenis  ini  juga  dapat  tumbuh  di  lingkungan toksik  dan  di  perairan  dengan  salinitas  yang tinggi.

## IV. KESIMPULAN
Sebanyak  14  isolat  mikroalga  dari famili Selenastraceae, Chlorellaceae,
Oocystaceae,
Chlorococcaceae, Kornmanniaceae,  Ulvales,  Scenedesmaceae dan  Xenococcaceae  telah  berhasil  diisolasi dan diidentifikasi melalui pendekatan morfologi  dan  molekular  dari  perairan  laut Tambrauw. Teknik molekular perlu dilakukan  dalam  identifikasi  suatu  spesies, karena pendekatan klasik yang mengandalkan  karakter  morfologis  tidak cukup  menggambarkan  jenis  spesies  dengan sensivitas tinggi. Data molekular memberikan  hasil  yang  lebih  andal  dan wawasan baru tentang filogeni alga. Penelitian lebih lanjut mengenai karakteristik dari masing-masing isolat yang teridentifikasi  diperlukan  untuk  mengetahui potensinya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Mikroalga  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diisolasi  dan  diidentifikasi sebagai  bagian  dari  proyek  penelitian  di Pusat Penelitian Biologi-LIPI, ber-kolaborasi dengan  Ekspedisi  NKRI  Koridor  Papua Barat.  Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada I Nyoman Sumerta, M.Sc. yang telah membantu dalam proses pengambilan sampel.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  M.M.,  dan  L.  Sembiring.  2009. Deteksi, karakterisasi, dan identifikasi mikroalga  kontaminan  pada  polimer emulsi berbasis polivinil asetat (PVA). Dalam Prosiding  Seminar
Nasional  Penelitian,  Pendidikan  dan Penerapan  MIPA,  Fakultas  MIPA, Universitas  Negeri  Yogyakarta,  16 Mei 2009. Hlm.:130-136. Acurio,  L.P.,  D.M.  Salazar,  A.F.  Valencia, D.R.  Robalino,  A.C.  Barona,  F.C. Alvarez,  and  C.A.  Rodriguez.  2018. Antimicrobial  potential  of Chlorella algae  isolated  from  stacked  waters of the  Andean  Region  of  Ecuador. In IOP  Conference  Series:  Earth  and Environmental Science, Paris, France, 7-9  February  2018.  151:  1-7  pp. http://doi.org/10.1088/1755- 1315/151/1/012040 Alianto, H., dan Suhaemi. 2019. Kelimpahan dan kelompok fitoplankton di perairan luar Teluk Wondama, Provinsi  Papua  Barat. J.  Ilmu  dan Teknologi  Kelautan  Tropis ,  10(3): 683-697. http://doi.org/10.29244/jitkt.v10i3.19 561
Alvarenga,  D.O.,  J.  Rigonato,    L.H.Z. Branco,    I.S.  Melo,  and    M.F.  Fiore. 2016. Phyllonema  aviceniicola gen. Nov.,  sp.  nov.  and Foliisarcina bertiogensis gen.  nov.,  sp.  nov., epiphyllic  Cyanobacteria  associated with Avicennia  schaueriana leaves. International J. Systematic and Evolutionary  Microbiology ,  66(2): 689–700. http://doi.org/10.1099/ijsem.0.000774
Anderson,  R.A.  2005.  Algal  culturing techniques, 1 st ed.  Elsevier  Academic
Press Phycological Society of America, 53: 596p. http://doi.org/10.1017/CBO97811074
15324.004
Barsanti,  L.,  and  P.  Gualtieri.  2014.  Algal culturing. In Algae. CRC Press. Italy. 221–266 pp. http://doi.org/10.1201/b16544-7
Bock,  C.,  T.  Pröschold,  and  L.  Krienitz.
2011. Updating the
genus
Dictyosphaerium  and  description  of Mucidosphaerium gen. nov.
(Trebouxiophyceae) based on morphological  and  molecular  data. J.
Phycology , 47(3): 638–652. http://doi.org/10.1111/j.1529- 8817.2011.00989.x Bogen, C., A. Al-Dilaimi, A. Albersmeier, J. Wichmann, M. Grundmann, O. Rupp, K.J.  Lauersen,  O.  Blifernez-Klassen, J.  Kalinowski,  A.  Goesmann,  J.H. Mussgnug,  and  O.  Kruse.  2013. Reconstruction of the lipid metabolism for the microalga
Monoraphidium  neglectum from  its genome sequence reveals characteristics  suitable  for  biofuel production. BMC Genomics , 14 (926): 1–18.    http://doi.org/10.1186/1471- 2164-14-926
Borowitzka,  M.A.  1995.  Microalgae  as sources  of  pharmaceuticals  and  other biologically  active  compounds. J. Applied Phycology , 7(1): 3–15. http://doi.org/10.1007/BF00003544
Cardinale,  B.J.  2011.  Biodiversity  improves
water quality through niche partitioning. Nature ,  472(7341):  86– 91.
http://doi.org/10.1038/nature09904
Cuaresma,  M.,  M.  Janssen,  C.  Vílchez,  and R.H.  Wijffels.  2009.  Productivity  of Chlorella sorokiniana in a short light- path  (SLP)  panel  photobioreactor under  high  irradiance. Biotechnology and  Bioengineering ,  104(2):  352– 359. http://doi.org/10.1002/bit.22394
Dewi, R.S, and R. Nuravivah. 2018. Potential
Of  microalgae Chlorella  vulgaris as bioremediation agents of heavy  metal Pb (Lead) on culture media. E3S Web of Conferences , 31: 5010-5014. http://doi.org/10.1051/e3sconf/20183 105010
Dimitrova,  P.,  G.  Marinova,  and  P.  Pilarski. 2016.  Preliminary  studies  on  the growth  and  biochemical  composition of  a  promising  carotenoid  producing strain Coelastrella sp. Natural  and Mathematical Science , 6(3): 139–149.
Duong,  V.T.  2016.  Isolation  and  evaluation of  microalgae  strains  from  The Northern  Territory  and  Queensland  - Australia  that  have  adapted  to accumulate triacylglycerides and protein as storage.
Thesis. Queensland, Australia: The University of Queensland. El-Sheekh, M.M., M. Ghareib, and G.A. EL-
Souod.  2012.  Biodegradation  of phenolic  and  polycyclic  aromatic compounds  by  some  algae  and Cyanobacteria. J. Bioremediation and Biodegradation , 3(1): 133-137.
http://doi.org/10.4172/2155- 6199.1000133
Fatem,  S.M.  2015.  Kabupaten  konservasi sebagai  political  action  pemerintah daerah  dalam  mendukung  konservasi sumberdaya  alam  hayati:  Studi  kasus Kabupaten  Tambrauw,  Papua  Barat.
In Prosiding Seminar Nasional Masyarakat  Biodiversitas  Indonesia,
1(6): 1403-1410. http://doi.org/10.13057/psnmbi/m010 624 Galhano,  V.,  D.  Figueiredo,  A.  Alves,  A.
Correia,  M.  Pereira,  J.  Gomes- Laranjo, F. Peixoto. 2011. Morphological, biochemical and molecular characterization of Anabaena, Aphanizomenon and Nostoc strains (Cyanobacteria, Nostocales)  isolated  from  Portuguese freshwater  habitats. Hydrobiologia , 663(1): 187-203. https://doi.org/10.1007/s10750-010- 0572-5
Gao, C., Y. Zhai, Y. Ding, and Q. Wu. 2010. Application  of  sweet  sorghum  for biodiesel  production  by  heterotrophic microalga Chlorella  protothecoides . Applied Energy , 87(3): 756–761. http://doi.org/10.1016/j.apenergy.200 9.09.006
Gill,  S.S.,  M.A.  Mehmood,  U.  Rashid,  M.
Ibrahim, A. Saqib and M.R. Tabassum,  M.  R.  2013.  Waste-water
treatment  coupled  with  biodiesel production  using  microalgae:  A  bio- refinery  approach. Pakistan  J.  Life and Social Sciences , 11(3): 179–189. Henry,  T.,  P.C.  Iwen,  and  S.H.  Hinrichs. 2000.  Identification  of Aspergillus species  using  internal  transcribed spacer  regions  1  and  2. J.  Clinical
Microbiology , 38(4): 1510–1515. Iyer, G., V. Nagle, Y.V. Gupte, S. Desai, and
M.  Iyer.  2015.  Characterization  of high carotenoid producing Coelastrella  oocystiformis and  its anti-cancer  potential. International  J. of Current  Microbiology and Applied Sciences , 4(10): 527–536.
Janda,  M.,  and  S.  Abbott.  2007.  16s  rRNA
Gene Sequencing for Bacterial Identification in the Diagnostic Laboratory: Pluses, Perils, and Pitfalls. J.  Clinical  Microbiology , 45(9): 2761-2764.
Kim,  C.,  Y.S.  Kim,  and  K.W.  Nam.  2018. New  records of  two  unknown  micro- filamentous endophytic green algae in Korea: Phaeophila  dendroides and
Dilabifilum arthropyreniae . J. Fishries and Marine Sciences
Education , 29(1): 234–241. http://doi.org/10.13000/jfmse.2017.29
.1.234
Kim,  S.K.,  Y.D.  Ravichandran,  S.B.  Khan, and  Y.T.  Kim.  2008.  Prospective  of the  cosmeceuticals  derived  from marine organisms. Biotechnology and Bioprocess  Engineering ,  13(5):  511- 523. http://doi.org/10.1007/s12257- 008-0113-5
Kumar, V.B., I.N. Pulidindi, Y. Kinel-Tahan, Y.  Yehoshua,  and  A.  Gedanken. 2016.  Evaluation  of  the  potential  of Chlorella  vulgaris for  bioethanol production. Energy  and  Fuels ,  30(4):
3161–3166.
http://doi.org/10.1021/acs.energyfuels .6b00253
Liana,  H.A.  2017.  Isolasi Chlorella sp. dengan metode CATB dan
identifikasi sekuen 18S rDNA. Skripsi.  Malang,  Indonesia:  Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi,
Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim.
Liu,  J.,  J.  Huang,  K.W.  Fan,  Y.  Jiang,  Y. Zhong,  Z.  Sun,  and  F.  Chen.  2010. Production  potential  of Chlorella zofingienesis as  a  feedstock  for biodiesel. Bioresource  Technology , 101(22): 8658–8663. http://doi.org/10.1016/j.biortech.2010 .05.082
Ma,  R.,  X.  Wu,  R.  Wang,  C.  Wang,  and  J.
Zhu, 2008. Identification and
phylogenetic  analysis  of  a  bacterium isolated  from  the  cloaca  of  Chinese alligator, 7(13): 2128–2133. http://www.academicjournals.org/AJ B Maresi,  S.R.P.,  P.  Priyanti,  dan  E.Yunita. 2016. Fitoplankton sebagai
bioindikator  saprobitas  perairan  di Situ  Bulakan  Kota  Tangerang. AL-
Kauniyah:  J.  Biologi ,  8(2):  113–122. http://doi.org/10.15408/kauniyah.v8i2 .2697
Marsh,  T.L.,  and  C.H.  Nakatsu.  2014.
Analysis  of  microbial  communities with denaturing gradient gel electrophoresis and terminal restriction fragment length polymorphism. In Methods for
General and Molecular Microbiology,
3 rd Ed. ACM Press. Washington D.C.
909–923 pp.
http://doi.org/10.1128/978155581749
7.ch41
Mercer,  P.,  and  R.E.  Armenta.  2011.
Developments  in  oil  extraction  from microalgae. European J. Lipid
Science and Technology , 113(5): 539- 547.
http://doi.org/10.1002/ejlt.201000455
Meyer,  A.,  C.  Todt,  N.  Mikkelsen,  B.  Lieb.
2010.  Fast  evolving  18S  rRNA sequences from Solenogastres (Mollusca) resist standard PCR
amplification  and  give  new  insights into mollusk substitution rate heterogeneity. BMC Evol Biol ,
10(70): 1-12.
Munir,  N.,  A.  Imtiaz,  N.  Sharif,  and  S.  Naz. 2015. Optimization of growth conditions  of  different  algal  strains and  determination  of  their  lipid contents. J.  Animal  and  Plant Sciences , 25(2): 546–553.
Peixoto,  G.,  C.  De  Matos,  and  C.  Do Nascimento.  2015.  Scenedesmaceae (Chlorophyta, Chlorophyceae) de duas áreas do Pantanal dos Marimbus (Baiano e Remanso), Chapada Diamantina,  Estado  da  Bahia,  Brasil. Hoehnea , 42(3): 549–566.
Platt,  T.,  C.  Fuentes-Yaco,  and  K.T.  Frank.
2003.  Marine  ecology:  Spring  algal bloom  and  larval  fish  survival. Nature , 423(6938): 398–399. http://doi.org/10.1038/423398b Purbani,  D.C.  2019.  Cyanobacteria  from Sorghum  bicolor- grown  fields  of Ecopark  at  Cibinong  Science  Center- Botanic  Gardens,  Indonesia. In : Sayyed  R.,  M.  Reddy,  S.  Antonius. Plant  growth  promoting  rhizobacteria (PGPR):  Prospects  for  sustainable agriculture. Springer. Singapore. 109- 116  pp.  https://doi.org/10.1007/978- 981-13-6790-8_7.
Ramos,  G.J.P.,  C.E.  de  M.  Bicudo,  A.  Góes Neto,  and    C.W.  do  N.  Moura.  2013. Monoraphidium and Ankistrodesmus (Chlorophyceae,  Chlorophyta)  from Pantanal  dos  Marimbus,  Chapada Diamantina,  Bahia  State,  Brazil.
Hoehnea , 39(3): 421–434. http://doi.org/10.1590/s2236-
89062012000300006
Rivas, R., E. Velázquez, E., Zurdo-Piñeiro, J.
L.,  Mateos,  P.  F.,  &  Molina,  E.  M. (2004). Identification of
microorganisms
by PCR
amplification  and  sequencing  of  a universal  amplified  ribosomal  region present  in  both  prokaryotes  and
eukaryotes. J. Microbiological Methods , 56(3): 413–426.
http://doi.org/10.1016/j.mimet.2003.1
1.007
Sawant,  S.S.,  and  V.  Kelkar  Mane.  2018.
Nutritional profil,
antioxidant, antimicrobial potential, and bioactives profile of Chlorella emersonii
KJ725233. Asian  J.  Pharmaceutical and  Clinical  Research ,  11(3):  220– 225.
http://doi.org/10.22159/ajpcr.2018.v1 1i3.21990
Suharno,  dan  D.  Lantang.  2012.  Status Kesuburan Perairan Laut ditinjau dari Keragaman  Plankton  di  Kawasan Kepala  Burung  ,  Papua  Barat. J. Biologi Papua , 4(2): 75–82.
Sujarta, P., H. Ohee, dan E. Rahareng. 2011.
Kajian  keragaman  plankton  dan  ikan di  perairan  teluk  tanah  merah  Distrik Depapre, Kabupaten Jayapura, Papua. J.  Biologi  Papua ,  3(2):  67–73. http://ejournal.unicen.ac.id/index.php/ JBP/article/view/47
Suparman.      2012.        Markah      Molekuler dalam      Identifikasi      dan      Analisis Kekerabatan Tumbuhan serta Implikasinya bagi Matakuliah Genetika. J.  Bioedukasi ,  1(1):  59-68.
Tale,  M.,  S.  Ghosh,  B.  Kapadnis,  and  S. Kale. 2014. Isolation and characterization  of  microalgae  for biodiesel  production  from  Nisargruna biogas  plant  effluent. Bioresource Technology , 169: 328–335. http://doi.org/10.1016/j.biortech.2014 .06.017
Tamura,  K.,  D.  Peterson,  N.  Peterson,  G. Stecher, M. Nei, and S. Kumar. 2011. MEGA5: Molecular evolutionary genetics  analysis  using  maximum likelihood,  evolutionary  distance,  and maximum parsimony
methods.
Molecular  Biology  and  Evolution ,
28 (10): 2731–2739.
http://doi.org/10.1093/molbev/msr121
Tomas, C. 1997. Identifying marine phytoplankton. In Dinoflagellates . Academic  Press.  California,  USA.
858 pp.
http://doi.org/10.1182/blood-2004-04- 1537
Waltz,  E.  2009.  Biotech’s  green  gold?.
Nature  Biotechnology ,  27(1):  15–18. http://doi.org/10.1038/nbt0109-15 Wilson,  K.H.,  R.B.  Blitchington,  and  R.C.
Greene. 1990. Amplification of bacterial  16S  ribosomal  DNA  with polymerase chain reaction. J. Clinical Microbiology , 28(9): 1942–1946.
Yildirim,  A.,  Z.  Demirel,  M.  Işleten- Hoşoǧlu,  I.H.  Akgün,  S.  Hatipoǧlu- Uslu,  and  M.  Conk-Dalay.  2014. Carotenoid and fatty acid compositions  of  an  indigenous Ettlia texensis isolate (Chlorophyceae) under  phototrophic  and  mixotrophic conditions. Applied  Biochemistry  and Biotechnology ,  172(3):  1307–1319. http://doi.org/10.1007/s12010-013- 0599-y
Zhou,  W.,  Y.  Li,  M.  Min,  B.  Hu,  H.  Zhang, X. Ma, L. Li, Y. Cheng, P. Chen, and R.  Ruan.  2012.  Growing  wastewater- born microalga Auxenochlorella protothecoides
UMN280 on concentrated  municipal  wastewater for simultaneous nutrient removal and energy  feedstock  production. Applied Energy , 98: 433–440.
http://doi.org/10.1016/j.apenergy.201
2.04.005
Received   : 03 May 2019 Reviewed  : 24 May 2019 Accepted  : 02 September 2019