## UJI DAYA ANALGETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOLIK DAUN SINGKONG (Manihot utilissima Pohl.) PADA MENCIT GALUR SWISS

## ANALGESIC AND ANTIINFLAMMATORY ACTIVITY OF CASSAVA LEAF
(Manihot utilissima Pohl.) ETHANOLIC EXTRACT IN MICE
1 Paulina Maya Octasari * , 2 Daniar Kusuma Wardani, 3 Elisabeth Lionida Sari 1,2,3 Prodi D3 Farmasi, Politeknik Katolik Mangunwijaya Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel : Submitted: 2022-09-21
Accepted : 2022-12-28 Publish Online : 2022- 12-29 Latar  belakang: Flavonoid  merupakan  senyawa  yang  dapat  berfungsi  sebagai analgetik  dan  antiinflamasi.  Daun  singkong  diketahui  mengandung  flavonoid dengan kandungan utama rutin.  Kandungan flavonoid rutin pada ekstrak etanolik daun  singkong  sebesar  4,987%  sehingga  memiliki  potensi  untuk  dikembangkan sebagai obat tradisional. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya analgetik dan antiinflamasi ekstrak etanolik daun singkong (EEDS) dan pengaruh variasi dosis EEDS terhadap daya analgetik dan antiinflamasi. Metode: Penelitian ini  merupakan  penelitian  eksperimental  acak  lengkap  pola  searah  pada  mencit berumur  2-3  bulan  dan  berat  badan  20-30gram.  Metode  pengujian  analgesik menggunakan  metode  geliat  dengan  penginduksi  asam  asetat  1%,  sedangkan pengujian  antiinflamasi  menggunakan  metode  pengukuran  tebal  edema  dengan penginduksi karagenin 1%.  Hasil persen proteksi, perubahan persen proteksi, dan persentase  daya  antiinflamasi  dianalisis  secara  statistik. Hasil: Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  EEDS  berwarna  hijau  kehitaman,  rasa  pahit,  susut pengeringan  7%,  rendemen  12,31  %b/b  dan  positif  mengandung  flavonoid. Simpulan: Dosis  EEDS  yang  semakin  besar  memberikan  daya  analgesik  yang semakin tinggi akan tetapi memberikan daya antiinflamasi yang semakin rendah.

## Kata Kunci:
Daun singkong,
analgesik, antiinflamasi Keywords: Cassava leaves, analgesic, antiinflammatory

## Abstract
Background: Flavonoids are compounds that can function as analgesics and anti- inflammatory.  Cassava  leaves  are  known  to  contain  flavonoids  with  the  main content of rutin. The routine flavonoid content in the ethanolic extract of cassava leaves  is  4.987%  so  that  it  has  the  potential  to  be  developed  as  traditional medicine.  Objective:  This  study  aimed  to  determine  the  analgesic  and  anti- inflammatory properties of cassava leaf ethanolic extract (EEDS) and the effect of varying doses of EEDS on analgesic and anti-inflammatory properties. Methods: This study was a completely randomized experimental study with a unidirectional pattern  in  mice  aged  2-3  months  and  weighing  20-30  grams.  Analgesic  testing method used the stretching method with 1% acetic acid as the induction, while the anti-inflammatory  test  used  the  edema  thickness  measurement  method  with  1% carrageenin induction. The results of the percentage of protection, the change in the percentage of protection, and the percentage of anti-inflammatory power were statistically analyzed. Results: The results showed that EEDS was green-black in color, bitter in taste, 7% drying loss, 12.31% w/w yield and positive for flavonoids. Conclusion: The higher the dose of EEDS, the higher the analgesic power but the lower the anti-inflammatory power
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022

## PENDAHULUAN
Rasa nyeri merupakan respon sensoris pada tubuh yang menandakan kerusakan jaringan. Kerusakan jaringan terjadi karena adanya rangsangan mekanik, kimia atau fisik (kalor  dan  listrik)  sehingga  dapat  menimbulkan  rasa  nyeri.  Timbulnya  rasa  nyeri berfungsi untuk melindungi serta memberikan tanda bahaya tentang adanya gangguan di dalam tubuh (Rahmatia et al., 2018). Nyeri (dolor) juga merupakan salah satu gejala dari kondisi  inflamasi  yang  terjadi  di  dalam  tubuh.  Inflamasi  disebabkan  karena  pelepasan mediator kimiawi dari jaringan yang rusak sehingga menyebabkan leukosit melepaskan enzim lisosom. Pada jalur siklooksigenase (COX), terjadi metabolisme asam arakidonat sehingga menghasilkan prostaglandin yang merupakan mediator inflamasi di dalam tubuh (Riansyah et al., 2016).
Pilihan obat analgetik dan antiinflamasi telah banyak beredar, namun masyarakat cenderung  kembali  ke  alam  ( back  to  nature )  yaitu  dengan  memanfaatkan  tanaman sebagai pengobatan herbal untuk berbagai penyakit (Anshory et al., 2018). World Health Organization (WHO)  merekomendasikan  penggunaan  tanaman  obat  dalam  menjaga kesehatan  masyarakat,  pencegahan,  dan  pengobatan  penyakit  (Siahaan  dan  Aryastami, 2018).  Penggunaan  tanaman  sebagai  obat  telah  banyak  dilakukan  oleh  masyarakat Indonesia secara turun – temurun. Salah satu tanaman yang dikembangkan sebagai obat adalah tanaman singkong ( Manihot utilissima Pohl) (Rikomah et al., 2017).
Tanaman singkong sering digunakan sebagai obat rematik, asam urat, peradangan, nyeri  haid,  dan  luka  bakar  akibat  panas  (Rikomah  et  al.,  2017).  Daun  pada  tanaman singkong  memiliki  kandungan  senyawa  saponin,  vitamin  C,  triterpenoid,  tanin  dan flavonoid (Nurdiana, 2013). Senyawa flavonoid pada daun singkong memiliki aktivitas sebagai antioksidan. Aktivitas antioksidan daun singkong dengan nilai IC50 yaitu sebesar 92.10 mg/L yang tergolong antioksidan kuat (Hasim et al , 2016) dan mengandung total flavonoid  877,7  mg/100  g (Linn  et  al .,  2018).  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang dapat mencegah kerusakan jaringan oleh radikal bebas. Radikal bebas pada tubuh yang terjadi reaksi secara terus – menerus dapat menyebabkan kerusakan protein, membran, dan jaringan. Penangkapan radikal bebas dapat mengurangi nyeri dan peradangan pada tubuh (Nadler, 2007).
Senyawa flavonoid juga berfungsi menghambat enzim siklooksigenase sehingga dapat  mengurangi  produksi  prostaglandin  oleh  asam  arakidonat  sehingga  juga  dapat mengurangi  rasa  nyeri  (Syamsul  et  al.,  2016).  Ekstrak  daun  singkong  dengan  dosis terkecil 100 mg/KgBB tikus  memiliki daya analgetik  paling besar yaitu 75,4%  (Yusuf dan  Okechukwu,  2013).  Aktivitas  antiinflamasi  erat  hubungannya  dengan  aktivitas antioksidan.  Antioksidan  ini  dapat  mencegah  terjadinya  stress  oksidatif  yang mempengaruhi kestabilan sel darah merah sehingga dapat mencegah kerusakan membran
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
sel  (Hasim  et  al.,  2016).  Berdasarkan  latar  belakang,  maka  perlu  dilakukan  pengujian daya analgesik dan antiinflamasi EEDS terhadap mencit jantan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan rancangan  acak pola satu arah. Penelitian dilakukan melalui 3 tahapan, yaitu (1) tahap pembuatan ekstrak etanolik daun singkong (EEDS); (2) pengujian kandungan flavonoid; (3) pengujian daya analgesik dan antiinflamasi EEDS.
1. Tahap pembuatan EEDS
a. Pembuatan serbuk simplisia daun singkong Daun  singkong  yang  digunakan  merupakan  daun  singkong  segar  dan  berwarna hijau dengan ketentuan daun berada di posisi 5-7 dari pucuk tanaman dan dipanen saat pagi hari. Daun singkong yang telah disortasi basah, kemudian dipotong dan dioven pada suhu 45 – 50 0 C hingga simplisia kering. Daun yang kering tersebut dihaluskan  dengan  menggunakan  blender  sampai  menjadi  serbuk,  kemudian diayak dengan ayakan mesh 100 (Solikhah et al ., 2019). Serbuk yang dihasilkan dilakukan kontrol kualitas meliputi organolpetis, rendemen, susut pengeringan.
b. Ekstraksi daun singkong Serbuk simplisia daun singkong di ekstraksi secara re maserasi selama 2x24 jam, dengan menggunakan pelarut etanol 70%.  Larutan di shaker selama 1 jam setiap pagi dan sore. Filtrate yang dihasilkan dievaporasi di atas waterbath pada suhu 45 –  50 0 C  sampai  didapatkan  ekstrak  kental.  Ekstrak  yang  dihasilkan  dilakukan kontrol kualitas meliputi organolpetis, rendemen, susut pengeringan.
2. Tahap pengujian kandungan flavonoid EEDS Pengujian  flavonoid  dilakukan  dengan  uji  Shinoda.  EEDS  diukur  sebanyak  1  mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 1 mL etanol, 0,1 gram logam Mg dan 5 tetes HCl pekat. Reaksi positif apabila larutan terbentuk warna kuning jingga sampai merah, maka positif mengandung flavonoid (Markham, 1988)
3. Tahap pengujian daya analgesik dan antiinflamasi EEDS
a. Tahap pengujian daya analgesik EEDS
Sebanyak  25  mencit  galur  Swiss  yang  telah  diadaptasi  selama  7  hari  diberi senyawa uji secara per oral sesuai dengan kelompok perlakuan. Kelompok kontrol negatif (I)  merupakan mencit yang diberikan larutan CMC Na 0,5%. Kelompok kontrol  positif  (II)  merupakan  mencit  yang  diberi  larutan  Ibuprofen  3  mg/mL dengan dosis 52 mg/kgBB. Kelompok EEDS merupakan kelompok mencit yang diberi  3  variasi  dosis  EEDS  (III-V),  yaitu  70,  140,  dan  280  mg/kgBB  mencit. Setelah 30 menit, seluruh mencit diinduksi dengan larutan asam asetat 1% secara intraperitoneal. Pengamatan dilakukan dengan menghitung jumlah geliat selama 5 menit dengan selang waktu 15 menit dalam kurun waktu 120 menit.
b. Tahap pengujian antiinflamasi EEDS
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
Sebanyak 25 mencit galur Swiss yang telah diadaptasi selama 7 hari, diukur tebal kaki kiri mencit (C 0 ). Sebanyak 0,05 ml karagenin 1% diberikan secara intraplantar pada kaki kiri, kemudian  1  jam  setelah  penginduksi,  mencit  dibagi  menjadi  5  kelompok  perlakuan. Kelompok kontrol negatif (I) merupakan mencit yang diberikan larutan CMC Na 0,5%. Kelompok  kontrol  positif  (II)  merupakan  mencit  yang  diberi  larutan  Na  Diklofenak  7 mg/kgBB.  Kelompok  EEDS  merupakan  kelompok  mencit  yang  diberi  3  variasi  dosis EEDS (III-V), yaitu 35, 70, dan 140 mg/kgBB mencit.
Penurunan ketebalan edema yang terjadi dicatat sebagai edema telapak kaki mencit pada waktu tertentu (Ct). Pengukuran dilakukan setiap interval waktu 1 jam selama 5 jam.
4. Analisis Data
a. Pengujian daya analgesik EEDS
Analisis  data  pada  uji  daya  analgesik  dilakukan  dengan  menghitung  %  proteksi  geliat terhadap kontrol negatif yang dihitung dengan persamaan 1.
% proteksi geliat = (P - [ (P/K) x 100] )% (1)
Keterangan :
P  = jumlah rata- rata kumulatif geliat hewan uji setelah pemberian senyawa uji K = jumlah rata-rata kumulatif geliat hewan uji kontrol negatif
Hasil  data  %  proteksi  geliat  tersebut  kemudian  dianalisis  secara  statistik.  Uji dilanjutkan dengan pengukuran perubahan % proteksi geliat menggunakan hasil %  proteksi  geliat  terhadap  kontrol  positif  yang  dihitung  menggunakan  rumus persamaan 2.
Perubahan % proteksi geliat = [ (A-B) / B ] x 100 (2)
Keterangan : A = rata – rata % proteksi geliat pada tiap kelompok perlakuan B = rata-rata proteksi geliat pada kontrol positif

## b. Pengujian daya antiinflamasi EEDS
Data yang diperoleh dari uji daya antiinflamasi adalah data selisih dari ketebalan telapak kaki mencit sebelum dan sesudah diinduksi karagenin 1% sebanyak 0,05 ml. Perhitungan dapat dilakukan dengan persamaan (3).
Cu = Ct – Co (3) Keterangan : Cu :Ketebalan edema kaki mencit Ct : Ketebalan telapak kaki mencit setelah diinduksi dengan karagenin 1%   pada waktu tertentu
Co : Ketebalan awal telapak kaki mencit sebelum diinduksi karagenin 1%
Data kuantitatif penelitian berupa Area Under Curve (AUC) dari kurva ketebalan edema rata-rata terhadap waktu. Nilai AUC yaitu luas daerah rata-rata dibawah kurva  yang  merupakan  hubungan  ketebalan  edema  rata-rata  tiap  satuan  waktu yang dapat dihitung dengan persamaan (4).
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
AUC o - x = ( c1−co 2 x t1 − to) + ( c2−c1 2 x t2 − t1) + ( cn−(cn−1) 2 x tn − tn − 1) (4) Keterangan : AUC o–x : Area Under Curve dari ketebalan edema telapak kaki mencit Cn - Cn-1 : Besarnya tebal edema
Persen Daya Antiinflamasi (penghambat ketebalan edema) dihitung berdasarkan persen penurunan edema menggunakan persamaan (5).
% Daya Antiinflamasi = AUCk−AUCu AUCk 𝑥 100% (5) Keterangan :
AUCk : Rata-rata AUC ketebalan edema kaki mencit untuk kontrol negatif AUCu :Rata-rata AUC ketebalan edema kaki mencit untuk kelompok perlakuan pada tiap individu (Kusmita et al., 2011)
Analisis data menggunakan One Way Anova dilanjutkan dengan Post Hoc. DAya analgesik  dan  antiinflamasi  ditunjukkan  dengan  nilai  signifikansi  dengan  taraf kepercayaan 95%.

## HASIL PENELITIAN

## 1. Pembuatan EEDS
Hasil determinasi tanaman singkong menunjukkan bahwa tanaman yang digunakan benar  merupakan  spesies Manihot  utilissima  P ohl.  Proses  ekstraksi  dilakukan  melalui pembuatan  serbuk  simplisia  hingga  menghasilkan  ekstrak  kental  daun  singkong.  Uji organoleptis serbuk simplisia dan ekstrak kental daun singkong dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji organoleptis serbuk simplisia dan ekstrak kental daun singkong
Jenis simplisia Rendemen (%b/b) Susut pengeringan Parameter Bentuk Bau Rasa Warna Serbuk 38,12 4,7 Serbuk Daun singkong Pahit Hijau Ekstrak 12,31 7,0 Ekstrak kental Tidak berbau Pahit Hijau kehitaman
Perbandingan hasil organoleptis serbuk simplisia dan ekstrak kental daun singkong dapat dilihat pada gambar 1.
(a) Serbuk simplisia daun singkong
(b) EEDS
Gambar 1. Hasil organoleptis serubuk simplisia dan ekstrak kental daun singkong
(Dokumentasi pribadi, 2020)

## 2. Pengujian kandungan flavonoid EEDS
Hasil  ekstrak  menunjukkan  bahwa  terdapat  kandungan  flavonoid.  Pengujian dilakukan  melalui  uji  Shinoda  yang  menghasilkan  warna  jingga  pada  ekstrak  setelah penambahan  serbuk  Mg  dan  HCl  pekat  kedalam  EEDS.  Hasil  pengujian  pada  EEDS menunjukkan warna jingga.
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022

## 3. Pengujian daya analgesik dan antiinflamasi
a. Pengujian daya analgesik
Respon jumlah geliat dihitung selama 5 menit dengan jarak waktu pengamatan 15 menit  setiap pengamatan setelah induksi  asam  asetat diberikan. Hasil rata  – rata geliat mencit dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2. Rata – rata Jumlah Respon Geliat Terhadap Waktu
No. Perlakuan Jumlah geliat pada menit ke- Rata - rata Geliat 15 30 45 60 75 90 105 120 1. KN 64.2 58.4 53.2 46.8 41.2 34.8 27 19.6 43.2 2. KP 20.2 16.2 12.8 10.6 7.4 4.8 3.2 2 9.7 3. EEDS1 49.4 45.8 40.6 34.6 30 24.6 18.8 9.6 31.7 4. EEDS2 51.2 46.6 41.4 34.8 30.6 26.4 19.2 10.6 32.6 5. EEDS3 50 47.2 41.6 37.6 32.4 27.8 21.6 11.2 33.7
Data  penurunan  respon  geliat  yang  telah  diperoleh  kemudian  dilanjutkan  untuk perhitungan % proteksi dan perubahan % proteksi. Data jumlah kumulatif geliat dan % proteksi,  selanjutnya  dilakukan  analisis  statistika  untuk  mengetahui  adanya  perbedaan antar  kelompok.  Hasil  menunjukkan  bahwa  data  penelitian  terdistribusi  normal  dan homogen dengan metode Shapiro-Wilk (p=0,435).
Uji  dilanjutkan  menggunakan  uji  hipotesis One-way ANOVA  dan  dilanjutkan dengan  analisis Post  Hoc  Test .  Hasil  dari  uji  LSD  ( Least  Significant  Difference ) menunjukan  adanya  perbedaan  pada  masing  –  masing  kelompok  perlakuan.  Hasil  Uji statistik % proteksi geliat dapat dilihat pada tabel 3.

## Tabel 3. Hasil % proteksi EEDS pada mencit jantan Galur Swiss
No. Kelompok Uji Rata-rata % proteksi (X ± SE) 1. KN 0 2. KP 77,64 + 0,56 a 3. EEDS1 26,59 + 0,98 b 4. EEDS2 24,45 + 0,75 b,c 5. EEDS3 21,96 + 1,06 c
Keterangan :
X
= Mean (Rata-rata)
SE = Standard Error (SD/√n)
(a, b, c, d) = Huruf yang berbeda menunjukan adanya perbedaan yang bermakna (p<0,05)
Data % proteksi yang telah diperoleh kemudian diolah menjadi perhitungan rata- rata perubahan persen proteksi pengujian daya EEDS terhadap kontrol positif ibuprofen dosis 52 mg/kgBB. Perubahan % proteksi geliat berguna untuk mengetahui besar daya analgesik  EEDS  terhadap  ibuprofen  dosis  52  mg/kgBB.  Berikut  hasil  rata-rata  dan  uji statistik perubahan % proteksi ditunjukkan dalam bentuk Mean ± Standard Error pada tabel 4.
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
Tabel 4. Hasil perubahan % proteksi EEDS pada mencit jantan Galur Swiss
No. Kelompok Uji Rata-rata perubahan % proteksi (X ± SE) 1. KP 0 2. EEDS1 65,75 + 1,26 a 3. EEDS2 68,51 + 0,97 a,b 4. EEDS3 71,72 + 1,37 b Keterangan : X = Mean (Rata-rata)
SE = Standard Error (SD/√n)
(a, b, c)   = Huruf yang berbeda menunjukan adanya perbedaan yang bermakna (p<0,05)

## b. Pengujian daya antiinflamasi
Parameter tebal edema digunakan sebagai awal perhitungan nilai AUC dan % daya antiinflamasi EEDS. Hasil rata – rata tebal edema selama 5 jam menunjukkan bahwa pada kelompok  kontrol  negatif  (suspensi  CMC  Na  0,5%),  rata-rata  tebal  edema  mengalami kenaikan tiap jam pertama hingga ke-5. Hasil juga menunjukkan bahwa pada jam ke – 0, yaitu 1 jam setelah pemberian karagenin 1% menunjukkan adanya tebal edema optimal pada seluruh mencit. Nilai tebal edema dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Rata-rata tebal edema pada mencit jantan yang diinduksi karagenin
No  Kelompok Rata-rata tebal edema ± SD pada jam ke- (mm) sebelum 0 1 2 3 4 5 1 KN 2,57 ± 0,08 3,74± 0,35 3,87± 0,33 3,95± 0,31 3,8± 0,15 3,86± 0,13 3,91± 0,14 2 KP 3,51 ± 0,24 4,28± 0,15 4,13± 0,18 3,97± 0,20 3,82± 0,25 3,67± 0,27 3,58± 0,26 3 EEDS0 2,54 ± 0,19 3,77± 0,31 3,52± 0,28 3,31± 0,25 3,15± 0,23 2,98± 0,20 2,82± 0,22 4 EEDS1 3,17 ± 0,45 4,36± 0,44 4,25± 0,46 4,09± 0,44 3,89± 0,45 3,71± 0,43 3,55± 0,49 5 EEDS2 2,48 ± 0,34 3,84± 0,34 3,62± 0,40 3,47± 0,37 3,29± 0,37 3,10± 0,38 2,94± 0,36 Keterangan : SD = Standar Deviasi
Data  penurunan  edema  yang  diperoleh  kemudian  dilanjutkan  untuk  perhitungan nilai Area Under Curve (AUC). Hasil rata-rata AUC uji daya antiinflamasi dapat dilihat pada tabel 6.
Tabel VI. Rata-rata AUC total EEDS Kelompok Nilai AUC Total ±SD KN 6,46 ± 0,22 a KP 1,97 ± 0,16 b EEDS0 3,56 ± 0,23 c EEDS1 4,05 ± 0,17 d EEDS2 4,47 ± 0,15 d
Keterangan : huruf yang berbeda menunjukan adanya perbedaan yang bermakna (p<0,05) dengan taraf kepercayaan 95%
Nilai  AUC  total  yang  diperoleh  selanjutnya  digunakan  untuk  mengetahui persentase Daya Antiinflamasi (% DAI). Hasil rata-rata persentase Daya Antiinflamasi (% DAI) dapat dilihat pada tabel 7.
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
Tabel 7. Rata-rata persentase Daya Antiinflamasi (% DAI) EEDS
Kelompok % DAI ± SD KN 0 KP 69,48 ± 2,42 a EEDS0 44,93 ± 3,64 b EEDS1 37,34 ± 2,67 c EEDS2 30,75 ± 2,36 c
Keterangan : huruf yang berbeda menunjukan adanya perbedaan yang bermakna (p<0,05) dengan taraf kepercayaan 95%

## PEMBAHASAN

## 1. Pembuatan EEDS
Pengujian determinasi tanaman dilakukan untuk mengetahui kebenaran spesies dari tanaman  yang  dipakai,  serta  untuk  menghindari  kesalahan  dalam  proses  pengumpulan bahan.  Tanaman  singkong  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari  desa Ungaran,  Kecamatan  Ungaran  Barat,  Kabupaten  Semarang,  Jawa  Tengah.  Bagian tanaman singkong yang digunakan adalah daun singkong dengan posisi 5-7 dari pucuk tanaman  karena  memiliki  kandungan  flavonoid  tertinggi,  yaitu  27,31%.  Daun  yang berada pada posisi di bawah 5 dari pucuk tanaman memiliki kandungan flavonoid sebesar 18,15%  dan  pada  posisi  di  atas  7  dari  pucuk  tanaman  memiliki  kandungan  flavonid sebesar 20% (Hasim et al., 2016).
Pembuatan simplisa daun singkong dilakukan dengan mengeringkan daun singkong yang telah dipotong – potong ke dalam oven pada suhu 45 – 50°C. Pengeringan dilakukan pada suhu <60°C karena flavonoid yang terkandung di dalam daun singkong merupakan golongan  senyawa  yang  tidak  tahan  panas  dan  mudah  teroksidasi  pada  suhu  tinggi (Maulana,  2017).  Pengeringan  di  bawah  suhu  40°C  menyebabkan  simplisia  mudah ditumbuhi  jamur  karena  memiliki  kelembapan  yang  tinggi  sedangkan  pada  suhu  lebih dari  50°C  akan  mengakibatkan  semakin  banyaknya  zat  aktif  yang  hilang  (Manalu  & Adinegoro, 2018).
Ekstraksi daun singkong dilakukan secara remaserasi dengan pelarut etanol 70%. Pada  proses  remaserasi,  terjadi  pergantian  pelarut  yang  baru  sehingga  memiliki kemampuan  mengekstrasi  lebih  tinggi.  Hasil  rendemen  remaserasi  menunjukkan persentase yang lebih tinggi, yaitu 23,33% dibandingkan maserasi yaitu 22%. Pemilihan metode  remaserasi  juga  disebabkan  karena  flavonoid  tidak  tahan  terhadap  pemanasan (Ningsih et al., 2018). Menurut Riwanti et al ., (2018), ekstraksi menggunakan etanol 70 %  mampu  menghasilkan  total  flavonoid  tertinggi  yaitu  0,1300%  dibandingkan  etanol 50%, yaitu 0,0539% dan etanol 96%, yaitu 0,1180%.
Serbuk  simplisia  daun  singkong  dan  ekstrak  kental  daun  singkong  (EEDS)  yang diperoleh dilakukan uji kontrol kualitas dan kuantitas meliputi uji organoleptis, uji susut pengeringan dan perhitungan rendemen. Hasil uji organoleptis telah menunjukkan bentuk serbuk dan ekstrak kental, serta bau khas daun singkong. Pada EEDS menunjukkan warna yang lebih pekat karena telah mengalami reaksi oksidasi akibat proses evaporasi.
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022

## 2. Pengujian kandungan flavonoid EEDS
Senyawa flavonoid pada EEDS akan dioksidasi membentuk kompleks dengan ion magnesium.  Flavonoid  yang  tereduksi  dengan  Mg  +  HCl  dapat  memberikan  warna merah,  kuning  atau  jingga.  Perubahan  warna  tersebut  menunjukkan  bahwa  ekstrak mengandung senyawa flavonoid yang diduga golongan flavon dan flavonon (Megawati et al ., 2020). Penambahan HCl pekat bertujuan untuk menghidrolisis flavonoid menjadi aglikonnya yaitu O-glikosil. Glikosil dapat digantikan H + dari asam karena memiliki sifat elektrofilik (Mutiara & Wildan, 2014).
3. Pengujian daya analgesik dan antiinflamasi
a. Pengujian daya analgesik
Semua mencit mengalami penurunan jumlah geliat selama 120 menit pengamatan. Hal  ini  disebabkan  adanya  respon  alami  dalam  tubuh  saat  mengalami  nyeri.  Tubuh beradaptasi dengan adanya stimulus nyeri, karena terdapat analgetik alami dalam tubuh, yaitu  senyawa  endorphin.  Hal  ini  yang  menyebabkan  tubuh  akan  meningkatkan ketahanan untuk mengatasi rasa nyeri (Wulan et al ., 2017).
Data penurunan respon geliat kemudian diubah menjadi % proteksi dan perubahan % proteksi. Persen proteksi merupakan kemampuan suatu bahan uji dalam mengurangi respon geliat mencit yang disebabkan karena induksi oleh asam asetat. Persen proteksi geliat berbanding terbalik dengan jumlah rata-rata geliat. Semakin besar jumlah rata-rata geliat, maka persen proteksi geliat yang diperoleh semakin kecil (Pujiatiningsih, 2014). Pemberian ibuprofen memberikan persen proteksi  sebesar 77.64 + 0,56.     Nilai  persen proteksi  ibuprofen  >  50%  menandakan  bahwa  ibuprofen  memiliki  daya  analgesik (Departemen Kesehatan RI, 1993). Ibuprofen bekerja dengan cara menghalangi produksi prostaglandin  sehingga  nyeri  dan  peradangan  dapat  berkurang  (Lacy,  2009).  Hasil  % proteksi  geliat  EEDS 1 sebanding  dengan  EEDS 2 sedangkan  EEDS 2 sebanding  dengan EEDS 3 yang ditunjukan adanya perbedaan tidak bermakna p>0,05. Data % proteksi yang telah diperoleh kemudian diolah menjadi perhitungan rata-rata perubahan persen proteksi pengujian daya EEDS terhadap kontrol positif ibuprofen dosis 52 mg/kgBB.
Hasil  rata  -  rata  perubahan  %  proteksi  geliat  menunjukan  bahwa  ketiga  variasi kelompok EEDS memiliki aktivitas analgesik akan tetapi tidak sebesar ibuprofen sebagai kontrol positif dalam memproteksi nyeri akibat induksi asam asetat 1%. Hal ini terlihat dari uji statistik ketiga variasi dosis yang berbeda bermakna dibandingkan ibuprofen yaitu p<0,05. Variasi dosis EEDS terlihat mampu memproteksi nyeri akibat induksi asam asetat 1%. Nilai proteksi geliat yang baik terdapat pada EEDS 1 yaitu sebesar 65,75 %, diiukuti EEDS 2 dan EEDS 3 sebesar 68,51 % dan 71,72  %. Aktivitas EEDS 1 sebanding  dengan EEDS 2 sedangkan EEDS 2 sebanding dengan EEDS 3 yang ditunjukan adanya perbedaan tidak bermakna p>0,05.
Nilai  perubahan  %  proteksi  yang  semakin  kecil  menunjukan  bahwa  pada  dosis tersebut dapat menyebabkan penurunan jumlah geliat yang lebih banyak. Hasil penelitian menunjukan  semakin  kecil  dosis  yang  diberikan  maka  efek  proteksi  geliat  yang
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
dihasilkan akan semakin besar. Penelitian ini sejalan dengan penelitian (Meilawaty, 2013, Yusuf dan Okechukwu, 2013 dan Miladiyah et al ., 2011) yang menunjukan semakin kecil dosis  ekstrak  daun  singkong  yang  diberikan  maka  efek  yang  dihasilkan  akan  semakin besar.
Skrining  fitokimia  golongan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam simplisia  dan  EEDS  adalah flavonoid,  saponin,  tanin  dan  polifenol,  monoterpenoid  dan seskuiterpen  dan  kuinon (Nurhalisa, et  al .,  2022). Kandungan  flavonoid  dalam  EEDS memiliki  kemampuan  dalam  mengatasi  rasa  nyeri  dan  dapat  menghambat  kerja  enzim siklooksigenase sehingga pembentukan prostaglandin terhambat dengan demikian akan mengurangi  rasa  nyeri  (Nafisah et  al .,  2014).  Tanaman  singkong  juga  bersifat  sebagai antioksidan. Antioksidan mampu menetralkan radikal bebas yang dilepaskan oleh fagosit sebagai  respons  terhadap  cedera  sel,  sehingga  dapat  menekan  respons  inflamasi  yang disebabkan  oleh  radikal  bebas,  yang  mengarah  pada  respons  nyeri  yang  menurun (Suryanto, 2012).
b. Pengujian daya antiinflamasi
Pengujian  antiinflamasi  dilakukan  dengan  metode  pembentukan  edema  yaitu didasari  pada  kemampuan  bahan  uji  untuk  menghambat  edema  di  telapak  kaki  mencit yang diinduksi karagenin 1% secara intraplantar. Karagenin dapat merangsang pelepasan mediator inflamasi seperti prostaglandin, bradikinin dan leukotrin tanpa merusak jaringan tempat penyuntikan (Andayani et al. , 2018). Rata-rata tebal edema terendah terdapat pada mencit dengan  pemberian  suspensi Na diklofenak dosis 7 mg/kgBB  (lihat  tabel  5). Na diklofenak menjadi acuan standar dalam melihat potensi senyawa obat dalam menekan radang  pada  hewan  uji.  Na  diklofenak  bekerja  dengan  menghambat  biosintesis prostaglandin  pada tahap  siklooksigenase  sehingga  prostaglandin  G2,  prostaglandin  H2  dan tromboksan tidak terbentuk (Priamsari & Krismonikawati, 2020). Na diklofenak dipilih sebagai kontrol  positif  karena  memiliki  daya  antiinflamasi  kuat  dibandingkan  dengan  indometasin, piroxicam, cepat  diabsorbsi  setelah  pemberian  oral  dan  mempunyai  waktu  paruh  yang  pendek sekitar 1-2 jam (Agustin & Ratih, 2015). CMC Na sebagai kontrol negatif dan suspending agent karena kerena dapat menghasilkan suspensi yang stabil, kejernihannya tinggi dan bersifat inert sehingga tidak mempengaruhi zat berkhasiat mempunyai toksisitas rendah dan mudah terdispersi di dalam air dibandingkan dengan pensuspensi lainnya (Aulia & Sinata, 2019).
Pemberian CMC Na 0,5% sebagai kontrol negatif menghasilkan edema yang paling besar sehingga  nilai  AUC  totalnya  paling  tinggi  (lihat  tabel  6).  Hal  ini  disebabkan  karena  CMC  Na tidak  memiliki  aktivitas  antiinflamasi.  Kemampuan  EEDS  dalam  memberikan  aktivitas antiinflamasi dapat dilihat dari adanya penurunan tebal edema telapak kaki mencit yang diinduksi karagenin  1%  yang  ditujukan  dengan  adanya  penurunan  rata-rata  nilai  AUC  total.  Pemberian suspensi  EEDS 1 dan  EEDS 2 memiliki  nilai  AUC  total  lebih  tinggi  dibandingkan  EEDS 0 yang ditunjukkan dengan adanya perbedaan signifikan p<0,05. Nilai AUC tersebut menyatakan bahwa suspensi EEDS 0 memiliki kemampuan menurunkan edema yang besar dari suspensi EEDS 1 dan EEDS 2 . Hal ini sesuai dengan penelitian Bokanisereme et al ., (2013) menyatakan bahwa EEDS
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
pada dosis 100, 250, dan 500mg/kgBB tikus memiliki kemampuan menurunkan edema tertinggi pada dosis terendah yaitu 100mg/kgBB tikus.
Nilai AUC berbanding terbalik dengan % DAI, semakin kecil nilai AUC maka semakin besar % DAI. Perhitungan % DAI dengan membandingkan AUC kontrol negatif (CMC Na 0,5%) terhadap  perlakuan  masing-masing  perlakuan  masing-masing  perlakuan  mencit.  Suspensi  Na diklofenak  memiliki  aktivitas  antiinflamasi  tertinggi  karena  memiliki  mekanisme  kerja menghambat  enzim  cyclooxygenase  (COX-1  dan  COX  -2)  sehingga  menghambat  pelepasan mediator radang seperti prostaglandin (Andayani et al ., 2018). Hasil % DAI pada EEDS 0 lebih tinggi  dibandingkan  EEDS 1 dan  EEDS 2 namun  lebih  rendah  dibandingkan  suspensi  Na diklofenak. Penurunan edema yang dihasilkan dikarenakan EEDS memiliki senyawa flavonoid yang  dapat  digunakan  sebagai  antiinflamasi  karena  memiliki  mekanisme  kerja  menghambat sintesis prostaglandin. Penghambatan prostaglandin dapat menghambat pembentukan inflamasi sehingga menyebabkan penurunan edema pada kaki mencit yang diinduksi karagenin (Riansyah et al., 2016). Penelitian lain juga menunjukkan bahwa flavonoid yang terkandung dalam ekstrak etanol pecut kuda dapat menurunkan kadar leukosit dan makrofag tikus yang mengalami ulkus diabetikum  pada  hari  ke-21.  Kadar  leukosit  dan  makrofag  merupakan  parameter  terjadinya inflamasi di dalam tubuh (Octasari dan Ramayani, 2021).

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  singkong  (EEDS)memiliki  daya  analgesik  dan  antiinflamasi  pada mencit  galur  Swiss.  Daya  analgesik  EEDS  70  mg/KgBB,  140  mg/KgBB,  dan  EEDS  280 mg/KgBB mencit berurutan adalah 26,59%;24,45%; dan 21,96%. Daya antiinflamasi EEDS 35 mg/KgBB, 70 mg/KgBB, dan EEDS 140 mg/KgBB mencit berurutan adalah  44,93%; 37,34%; dan 30,75%. Semakin besar dosis EEDS yang diberikan, daya analgesik dan antiinflamasi yang diberikan semakin rendah.
.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  terkait  uji  toksisitas  ekstrak  etanol  daun  singkong pada hewan uji secara akut, subkronis, dan kronis.

## REFERENSI
Agustin,  R.,  &  Ratih,  H.  2015.  Profil  Disolusi  Tablet  Sustained  Release  Natrium  Diklofenak dengan Menggunakan Matriks Metolose 90 SH 4000. Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 1(2), 176.
Andayani,  D.,  Suprihartini,  E.,  &  Astuti,  M.  2018.  Efek  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Krokot (Portulaca oleracea, L.) pada Udema Tikus yang di Induksi Karagenin . JPSCR : Journal of Pharmaceutical Science and Clinical Research, 3(1), 43.
Anshory, N.M., Hasan, M., dan Kuala, S., 2018. Kemampuan Analgesik Ekstrak Metanol Daun Kelor ( Moringa oleifera ) Pada Mencit ( Mus musculus ) yang Diberi Rangsangan Panas Pada Telapak Kaki,  2, 396–401.
Aulia,  N.,  &  Sinata,  N.  2019.  Uji  efek  analgetik  infusa  daun  sukun  (Artocarpus  altilis  forst) terhadap mencit putih ( Mus musculus ) jantan diinduksi asam asetata 1%. Jurnal Penelitian Farmasi Indonesia , 8(1), 32–40.
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
Bokanisereme, Yusuf, U. F., & Okechukwu, P. N. 2013. Anti-inflammatory, analgesic and anti - pyretic  activity  of  cassava  leaves  extract . Asian  Journal  of  Pharmaceutical  and  Clinical Research , 6(4), 89–92.
Departemen Kesehatan RI, 1993. Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia, dan Pengujian Klinik . Yayasan Pengembangan Obat Bahan Alami Phytomedika, Jakarta.
Hasim, Falah, S., Dewi, L.K., 2016. Effect of Boiled Cassava Leaves ( Manihot esculenta Crantz) on Total Phenolic, Flavonoid and its Antioxidant Activity. Curr. Biochem . 3, 116–127.
Lacy, C., 2009. Drug Information Handbook: A Comprehensive Resource for All Clinicians and Healthcare Professionals , 18th Edition. American PharmacistAssociation.
Linn, K.Z., Phyu, P., Phyu, C., Myint, P., Myint, P.P., 2018. Estimation of nutritive value, total phenolic content and in vitro antioxidant activity of Manihot esculenta Crantz. (Cassava) leaf. ~ 73 ~ J. Med. Plants Stud . 6, 73–78.
Manalu,  L.P.  dan  Adinegoro,  H.,  2018,  Kondisi  Proses  Pengeringan  Untuk  Menghasilkan Simplisia Temuputih Standar, Jurnal Standardisasi , Volume 18 Nomor 1, Maret 2016: Hal 62 - 68
Maulana, M. S. R. 2017. Penentuan Kadar Flavonoid Ekstrak  Etanol 70% Kulitbawang Merah (Allium  Cepa  L.) Dengan  Metode  Maserasi  Dan  MAE (Microwave  Assisted  Extraction) . Ekp , 13 (3), 1576–1580.
Megawati, S., Nur’aini, N., & Kurniasih, D. (2020). Uji Efektivitas Gel Ekstrak Etanol 96% Daun Singkong (Manihot Esculenta Crantz.) Pada Penyembuhan Luka Sayat Kelinci Jantan Galur New Zealand White. Jurnal Farmagazine , 7(1), 1.
Mutiara, E. V., & Wildan, A. 2014. Ekstraksi Flavonoid Dari Daun Pare ( Momordica Charantia L.) Berbantu Gelombang Mikro Sebagai Penurun Kadar Glukosa Secara in Vitro . Metana , 10(01), 1–11.
Markham, K.R., 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid . ITB, Bandung.
Meilawaty, Z., 2013. Efek ekstrak daun singkong ( Manihot utilissima ) terhadap ekspresi COX-2 pada monosit yang dipapar LPS E.coli (The effect of Manihot utilissima extracts on COX- 2 expression of monocytes induced by LPS E. coli). Dent. J. ( Majalah Kedokt. Gigi ) 46, 196. https://doi.org/10.20473/j.djmkg.v46.i4.p196-201
Miladiyah,  I.,  Dayi,  F.,  Desrini,  S.,  2011.  Analgesic  activity  of  ethanolic  extract  of  Manihot esculenta Crantz leaves in mice. Universa Med . 30, 3–10.
Nadler,  B.,  2007.  Inflammation,  Free  Radicals,  Oxidative  Stress  and  Antioxidants. http://www.beverlynadler.com/html/inflammation.html.
Nafisah, M., Tukiran, Suyatno, Hidayati, N., 2014. Uji Skrining Fitokimia pada Ekstrak Heksan,
Kloroform  dan  Metanol  dari  Tanaman  Patikan  Kebo  ( Euphorbiae  hirtae ).  Prosiding Seminar Nasional Kimia Universitas Negeri Surabaya, Surabaya.
Ningsih,  A.W.,  Nurrosyidah,  I.H.,  Hisbiyah,  A.,  2018.  Pengaruh  Perbedaan  Metode  Ekstraksi
Rimpang  Kunyit  ( Curcuma  domestica )  Terhadap  Rendemen  dan  Skrining  Fitokimia. J. Pharm. Anwar Med . 2, 49–57.
Nurdiana,  A.R.,  2013.  Uji  Ekstrak  Daun  Singkong  ( Manihot  Esculenta )  Terhadap  Jumlah Neutrofil Pada Proses Penyembuhan Luka Tikus ( Rattus Norvegiccus ) 1–58.
Nurhalisa,  Z.A.,  Rahayuningsih,  R.,  dan  Suhendy,  H.,  2022.,  Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Daun Singkong ( Manihot esculenta Crantz) Terhadap SGPT, SGOT dan Indeks Organ Hati Tikus
Paulina Maya Octasari | Uji Daya Analgetik Dan Antiinflamasi ….. Jurnal Wiyata, Vol. 09 No. 02 Tahun 2022
Putih Jantan Wistar. Prosiding Seminar Nasional Diseminasi Penelitian , 28 – 35.
Octasari,  PM.,  dan  Ramayani,  SL,  2021,  Potensi  Hidrogel  Ekstrak  Etanolik  Daun  Pecut  Kuda ( Stachytarpheta Jamaicensis [L.] Vahl) Terhadap Proses Penyembuhan Ulkus Diabetikum pada Tikus Wistar. Jurnal Wiyata . 8(10), 23 – 34 Pujiatiningsih, A.S., 2014. Pemberian Ekstrak Daun Putri Malu ( Mimos Pudica Linn) secara Oral Menurunkan Kadar Gula Darah Post Prandial pada Tikus ( Rattus Norvegicus ) Jantan Galur Wistar Perdiabetesi. Tesis. Universita Udayana.
Priamsari, M. R., & Krismonikawati, R. A.2020. Uji Daya Antiinflamasi Ekstrak Etanolik Kulit Terong Belanda (Solanum Betaceum, Cav.) Pada Mencit Jantan Yang Diinduksi Karagenin .
Jurnal Ilmu Farmasi Dan Farmasi Klinik , 16(02), 86.
Riansyah, Y., Mulqie, L., & Choesrina, R. 2016. Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun
Ubi Jalar Ungu . Prosiding Penelitian SPeSIA , 630–636.
Rahmatia, A.R., Tr, T.A., Harris, A., Fahrimal, Y., 2018. 15. Potency of Methanolic Extract of
Sernai Stems ( Wedelia biflora ) as Analgesic on Mice ( Mus musculus ). J. Med. Vet . 12, 91– 96.
Rikomah, Enti, S., Elmitra, Akademi, D.G., 2017. Efek Ekstrak Etanol Daun Singkong ( Manihot Utilissima Pohl ) Sebagai Obat Alternatif Anti Rematik Terhadap Rasa Sakit Pada Mencit.
J. Ilm. Manuntung, 3, 133–138.
Riwanti,  P.,  Izazih,  F.,  Amaliyah,  2020.  Pengaruh  Perbedaan  Konsentrasi  Etanol  pada  Kadar Flavonoid Total Ekstrak Etanol 50,70 dan 96%. J. Pharm. Care Anwar Med . 2, 82–95.
Siahaan, S., Aryastami, N.K., 2018. Studi Kebijakan Pengembangan Tanaman Obat di Indonesia. Media Penelit. dan Pengemb. Kesehat . 28, 157–166.
Solikhah,  R.,  Purwantoyo,  E.,  Rudyatmi,  E.,  2019.  Aktivitas  Antioksidan  dan  Kadar  Klorofi Kultivar Singkong di Daerah Wonosobo. Life Sci . 8, 86–95.
Suryanto, E., 2012. Fitokimia Antioksidan . Putra Media Nusantara, Surabaya.
Syamsul, E., Andani, F., Budianti Soemarie, Y., AWahab Sjahranie No, J., E., 2016. Analgesic Activity Study Of Ethanolic Extract Of Callicarpa Longifolia Lamk. In Mice Uji Aktivitas Analgetik  Ekstrak  Etanolik  Daun  Kerehau  ( Callicarpa  Longifolia Lamk.)  Pada  Mencit Putih. Tradit. Med. J . 21, 2016.
Wulan,  H.,  EM,  U.R.,  Ika,  P.,  2017.  Uji  Efek  Anlgetik  Antipiretik  Ekstrak  Etanol  Alfafa
( Medicago sativa ) pada Tikus Putih 53, 1689–1699.
Yusuf, U.F., Okechukwu, P.N., 2013. Kegiatan Anti Inflamasi, Analgesik Dan Antipiretik Daun Cassava Ekstrak 6, 4–7.