## Penapisan antibakteri pada Bakteri Simbion Sinularia sp terhadap
Escherichia coli
Ary Giri Dwi Kartika
Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura, Email: ary.giridwi@gmail.com

## ABSTRAK
Beberapa studi yang telah dilakukan menunjukkan bahwa invertebrata (termasuk karang lunak) memiliki metabolit sekunder dengan konsentrasi yang rendah (10- 6%  dari  berat  basa  invertebrata).  Oleh  karena  itu  dibutuhkan  cara  yang  lebih konservatif dalam pemanfaatan metabolit sekunder untuk menjaga keseimbangan  ekosistem.Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengisolasi bakterisimbion Sinularia sp  dan  melakukan  penapisan  aktivitas  antibakteri terhadap Escherichia  coli .  Isolasi  bakteri  simbion  Sinularia  sp  dilakukan dengan menggunakan  metode  pengenceran  dan  sebar  ( spread ).  Purifikasi  bakteri menggunakan  metode  streak,  kemudian,  uji  antibakteri  dilakukan  dengan menggunakan  metode  overlay  dan  difusi  agar.  Sebanyak  5  isolat  bakteri didapatkan  dari  hasil  isoasi  sampel.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan sebanyak 4 isolat (Isolat L2.2, L2.3, L2.4, dan L2.5) memiliki aktivitas antibakteri terhadap  bakteri Escherichia  coli. Isolat  L2.5  memiliki  diameter  zona  hambat terbesar yaitu sebesar 2,207 ± 0,401 cm.
Kata Kunci: Sinularia sp, Antibakteri, Escherichia coli , Gili Labak .
Skrinning Antibacterial from Sinularia sp Symbiont Bacteria Againts Escherichia coli

## ABSTRACT
Several  studies  have  shown  that  invertebrates  (including  soft  corals)  contain secondary  metabolites  in  low  concentration  (10-6%  by  wet  weight  of invertebrate). Therefore a more conservative approach is needed in the utilization of  secondary  metabolites  to  maintain the  balance  of  ecosystems. The  purposes of this study was to isolate the bacterium Sinularia sp and to screen antibacterial activity against Escherichia coli. Isolation of the bacteria symbione of Sinularia sp was  performed  by  dilution  method  and  spread.  Purification  of  bacteria  was performed  by  streak  metho  then,  antibacterial  test  was  done  by  using  overlay method and agar disk-diffusion. A total of 5 bacterial isolates were obtained from the  result  of  the  isoation  of  the  sample.  The  result  of  antibacterial  activity  test showed  4  isolates  (Isolates  L2.2,  L2.3,  L2.4,  and  L2.5)  had  antibacterial  activity against Escherichia coli. Isolates L2.5 has the largest inhibitory zone diameter of 2.207 ± 0.401 cm.
Keywords: Sinularia sp, Antibactery, Escherichia coli, Gili Labak.

## PENDAHULUAN
Karang lunak termasuk kedalam filum Cnidaria, Kelas Anthozoa dan Subkelas Octocoralia. Alcyonacea adalah salah  satu  ordo  dari  filum  Cnidaria yang  terdiri  dari  ratusan  jenis  yang beragam dan salah satu diantaranya  adalah  jenis Sinularia
sp. Sinularia sp  adalah  salah  satu karang  lunak  yang  mendominasi tersebar  di  wilayah  Indopasifik. Selanjutnya  ditambahkan  bahwa tingginya  metabolit  sekunder  pada jaringan karang Lunak Alcyonacean berperan penting dalam keberhasilan evolusi organisme
tersebut.  (Sammarco  and  Coll,
1992). Pemanfaatan invertebrata sebagai  sumber  senyawa  bioaktif dapat mengancam ekosistem terumbu karang. Hal ini dikarenakan invertebrata (termasuk karang lunak) memiliki metabolit sekunder dengan konsentrasi yang  rendah  (10 -6 %  dari  berat basa invertebrata) (Prokosh et al,
2002 ). Oleh karena itu dibutuhkan cara yang lebih konservatif  dalam  pemanfaatan metabolit sekunder untuk menjaga keseimbangan ekosistem.  Salah  satunya  adalah dengan memanfaatkan mikroorganisme yang bersimbiosis dengan
invertebrata.  Beberapa  penelitian mengemukakan bahwa bahan alami bioaktif  dari  invertebrata  laut  sama persis  dengan  metabolit  sekunder yang dihasilkan oleh mikroorganismenya termasuk bakteri.  Oleh  karena  itu,  pencarian metabolit sekunder dengan beranekaragam aktivitas dari bakteri simbion karang lunak menjadi  bahan  yang  menarik  untuk dikaji.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah mengisolasi
bakterisimbion Sinularia sp  dan melakukan  penapisan  aktivitas antibakteri  terhadap Escherichia coli

## METODE PENELITIAN

## Pengambilan Sampel
Sampel Sinularia sp  diambil pada  kedalaman  7  -  11  meter menggunakan Scuba diving di Perairan  Gili  Labak,  Kab.  Sumenep. Sampel  Sinularia  sp  selanjutnya dimasukkan  ke  dalam  plastik  zip lock,  kemudian  disimpan  di  dalam kontainer pendingin. selanjutnya sampel  dibawa  ke  Laboratorium Bioteknologi  Kelautan,  Universitas
Trunojoyo  Madura  guna  dilakukan isolasi bakteri.

## Isolasi Bakteri
Permukaan  sampel Sinularia sp  dibersikan  dari  pengotor  dan organisme  yang  menempel  dengan cara  menyemprotkan  air  laut  steril pada  permukaan  sampel.  Sampel kemudian dihancurkan
menggunakan mortar dan penumbuk steril,  untuk  selanjutnya  dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi air laut steril  sebanyak  9  mL  dengan demikian  didapatkan  pengenceran 10 0 .  Dari  pengenceran  10 0 tersebut diambil  sebanyak  1mL  kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  berisi 9mL air laut steril sehingga didapatkan pengenceran 10 -1 . Demikian selanjutnya dilakukan didapatkan pengenceran 10 -5. Sebanyak 100µL dari masing-
masing  seri  pengenceran  10 -3 ,  10 -4 dan  10 -5 disebar  di  atas  media  agar half strength zobell 2216E, kemudian  diinkubasi  selama  48  jam pada  suhu  kamar  (Benson,  2002). Pemurnian bakteri dilakukan dengan mengggunakan metode gores.
Penapisan Aktivitas Antibakteri Uji pendahuluan aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan  metode  over  lay (Sabdono dan Radjasa, 2006). Setiap  satu  ose  bakteri  simbion Sinularia sp  ditanam  pada  media ZoBell  2216E  laut  (dalam  satu cawan  petri  ditanam  5  -  12  titik bakteri) dan dibentuk menjadi bulatan  kecil.  Kemudian  cawan  petri diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama 2  hari.  Sedangkan  isolat  bakteri E. coli ditanam  pada  media  cair  Zobell 2216E kemudian digojog menggunakan rotary  shaker selama 2x24  jam.  Suspensi  bakteri E.  coli diambil  1  mL  (1%  dari  total  volume soft agar) dan dimasukkan ke dalam 100  mL  media  Zobell  2216E  soft agar.
Selanjutnya media Zobell 2216E  soft  agar  tersebut  dituang  ke dalam  cawan  petri  yang  berisi biakan  bakteri  simbion Sinularia sp
yang sudah diinkubasi 2 hari sebelumnya,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  ruang  selama  1-2  hari dan diamati perkembangannya. Isolat  bakteri  simbion  karang    yang aktif akan menghambat bakteri E coli dan akan terlihat dengan terbentuknya zona bening (hambat). penapisan aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  agar (Radjasa et  al ,  2007).  Sebanyak 100µL  bakteri E.  coli pada  fase  log (109  sel/mL)  disebar  diatas  media agar  zobell  2216E.  Sepuluh  kertas
cakram (6mm; Advantec, Toyo
Roshi,  Ltd,  Jepang)  yang  telah terkandung bakteri simbion Sinularia sp, diletakan pada permukaan media agar zobell 2216E yang sebelumnya telah  disebar  bakteri E.  coli .  Cawan petri kemudian diinkubasi pada suhu kamar  selama  48  jam.  aktivitas antibakteri ditunjukkan dengan adanya  zona  hambat  ( clear  zone ) disekitar kertas cakram.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri
Sebanyak  10  isolat  bakteri didapatkan dari hasil isolasi Sinularia sp. kesepuluh isolat tersebut memiliki kenampakan morfologi koloni yang berbeda-beda. Kenampakan morfologi koloni bakteri  diamati  berdasarkan  warna, bentuk, elevasi dan margin (Waluyo,
2012).     Waluyo  (2012)  menyatakan bahwa  bentuk  koloni  bakteri  yang telah  diisolasi  dari  lingkungannya akan berbeda tiap spesiesnya,  serta memiliki ciri tersendiri yang membedakannya  dengan  spesies lain.  Selanjutnya  ditambahkan  oleh Lay (1994) yang menyatakan bahwa pengamatan  tentang  karakteristik morfologi koloni bakteri perlu dilakukan, agar mempermudah dalam proses identifikasi jenis
bakteri.  Tabel  mengenai  morfologi koloni  bakteri  simbion  Sinularia  sp tersaji pada tabel 1.

## Gambar 1. Koloni Bakteri Simbion Sinularia sp yang telah diisolasi
Tabel 1 . Karakteristik Morfologi Koloni Bakteri Simbion Sinularia sp No.  Kode Warna Bentuk Margin Elevasi 1 L2.1 Putih Bening Tidak beraturan Berbelah Timbul Datar 2 L2.2 Kuning Bulat Utuh Rata 3 L2.3 Putih Kekuningan  Bulat Utuh Timbul Datar 4 L2.4 Kuning Bulat Utuh Timbul Datar 5 L2.5 Putih Susu Berbenang Berbenang  Timbul Datar Sumber: Data Primer, 2017
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri dari Bakteri Simbion Sinularia sp
No. Kode Isolat Aktivitas Antibakteri 1 L2.1 - 2 L2.2 + 3 L2.3 + 4 L2.4 + 5 L2.5 +
Sumber: Data Primer, 2017
Tabel 3. Hasil Uji Difusi Agar
No. Kode Isolat Diameter Zona Hambat (cm) 1 L2.2 0,743 ± 0,111 2 L2.3 1,643 ± 0,006 3 L2.4 1,370 ± 0,128 4 L2.5 2,207 ± 0,401

## Penapisan Aktivitas Antibakteri
Hasil  uji  overlay  menunjukkan dari 5 isolat bakteri simbion Sinularia sp terdapat 4 isloat bakteri yang
menunjukkan aktivitas antibakteri E. coli . Hal ini ditunjukkan dengan adanya zona hambat  (clear  zone)  disekitar  bakteri simbion Sinularia sp.  hasil  uji  overlay disajikan pada tabel 2.
Penapisan uji aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode  difusi  agar  dengan  kertas cakram. Hasil uji difusi agar menunjukkan isolat L2.2, L2.3, L2.4 dan L2.5 mampu menghambat pertumbuhan
E.coli . Hal ini ditunjukan dengan terbentuknya  zona  hambat  (clear  zone) disekitar  kertas  cakram.  Dari  keempat isolat  tersebut,  isolat    L2.5  memiliki diameter  zona  hambat  terbesar  yaitu
2,207  ±  0,401  cm.    Penghambatan pertumbuhan  bakteri  disebabkan  oleh beberapa  faktor,  salah  satunya  yaitu terjadinya kompetisi  antara bakteri siombion Sinularia sp  dengan E.  coli untuk  mendapatkan  ruang  dan  nutrisi yang  digunakan  untuk  pertumbuhan (Teasdale,  2009;  Iqbal,  2014).  Selain itu,  penghambatan  pertumbuhan  juga dipengaruhi oleh adanya sistem
pengeluaran  metabolit  sekunder  dalam bentuk  enzim  eksternal  atau  eksoenzim yang  berasal  dari  sel  bakteri  simbion karang.
Barrios-Gonzalez et
al. (2003) menyatakan  bahwa  produksi  metabolit sekunder oleh suatu organisme
dilakukan  ketika  nutrien  utama  tidak tersedia  atau  tersedia  dengan  terbatas.
Sehingga  metabolit  sekunder  yang diproduksi  adalah  sebagai  respon  dari lingkungan.  Metabolit sekunder memiliki fungsi sebagai pertahanan diri, mencegah  terjadinya  infeksi,  media interaksi  serta  media  dalam  proses reproduksi  (Faulker et  al ,  2000).  Data mengenai  hasil  uji  difusi  agar  disajikan pada tabel 3.

## SIMPULAN
Bakteri  simbion Sinularia sp yang  didapatkan  dari  isolasi  adalah sejumlah 5 isolat bakteri yang terdiri dari isolat  L2.1,  L2.2,  L2.3,  L2.4,  dan  L2.5. Hasil  uji  antibakteri  didapatkan  4  isolat (L2.2,  L2.3,  L2.4,  dan  L2.5)  bakteri simbion Sinularia sp menunjukkan aktivitas  antibakteri Es.  coli .  Isolat  L2.5 menunjukkan  diameter  zona  hambat terbesar  yaitu  sebesar    2,207  ±  0,401 cm. DAFTAR PUSTAKA Barrios-Gonzalez.2003. Microbial Secondary Metabolites Production and Strain Improvement.  Indian  Journal  of Biotechnology, 2:322-333 Benson  H  J.  2002.  Microbiological Applications A Laboratory Manual  in  General  Microbiology 8th  Edition.  New  York:  The McGraw-Hill Companies Faulkner,  D.  J.,  M.K.  Harper,  M.G. Haygood,  C.F.  Salomon,  E.W. Schmidt. 2000. Symbiotic Bacteria  in  Sponge:  Source  of Bioactive Substance. In: Fusetani, N. (Ed). Drugs from the Sea, 107-119. Iqbal,  J.  R.  Siddiqui,  N.  A.  Khan.  2014. Acanthamoeba and Bacteria Produce  Antimicrobials  to Target Their  Counterpart.  Parasites  & Vector, 7:56. Lay,  B.  W.  1994.  Analisis  Mikroba  di
Laboratorium.  PT  RajaGrafindo
Persada, Jakarta.155 hlm. Proksch,  P.,  R.A.  Edrada,  and  R  Ebel. 2002.  Drugs  from  the  Seas Current Status and Microbiological Implications. Appl.  Microbiol.  Biotechnol.  59: 125-134. Radjasa  O.  K,  A.  Sabdono,  Junaidi  and E. Zocchi. Richness
of secondary  metabolite-producing marine  bacteria  associated  with Sponge  Haliclona  sp..  Int.  J.
Pharmacol. 2007.3(3):275-9.
Sabdono,  A  &  Radjasa,  O.  K.  2006.
Anti-Bacterial  Property  of  A Coral-Associated Bacterium Bacillus sp Against coral
Pathogenic  BBD  (Black  Band Disease).  Journal  of  Coastal
Development, 9:175-182.
Sammarco,  P.W.  and  J.  C.  Coll  1990. Lack of predictability in terpenoid function: Multiple roles and integration  with  related  adaption in soft corals. J. Chem. Ecol. (16) 1: 273-289.
Teasdale,  M.  E.,  J.  Liu,  J.  Wallace,  F.
Akhlaghi,  D.  C.  Rowley.  2009. Secondary Metabolites Produced by the Marine Bacterium Halobacillus  salinus  That  Inhibit Quorum Sensing-Controlled Phenotypes  in  Gram-Negative Bacteria. Appl. Environ. Microbiol., 75 (3): 567 –572.
Waluyo,  L.  2012.  Mikrobiologi  Umum. UMM Press, Malang, 344.