## JASD
Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau, 8(1) April 2023, pp.13-20 ISSN 2503-4766 (Print) | ISSN 2597-8837 (Online) | DOI 10.33087/akuakultur.v8i1.152 Publisher by : Program Studi Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Batanghari
Performa Pertumbuhan dan Ekspresi Gen Hormon Pertumbuhan Sidat ( Anguilla bicolor bicolor ) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Growth Performance and Growth Hormone Gene Expression of Eel (Anguilla bicolor bicolor) Elver Fed with Diet Containing Chromium Picolinate
* Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro Santoso, Rudy Wijaya, Purnama Sukardi, Kasprijo Program Studi Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Jenderal Soedirman, Jln. Dr. Soeparno Komplek GOR Soesilo Sudarman, Karangwangkal, Purwokerto 53122
*e-mail penulis korespondensi : dewi.nugrayani@unsoed.ac.id
Abstract. Nutritional modulation is expected to positively influence eel growth rate and growth-related gene expression. One of nutritional modulation is the supplementation of feed with chromium picolinate, which has been reported  to be able to increase fish growth. The purpose of this study was to analyze the effect of chromium picolinate administration on the growth rate and the  expression  of  growth  hormone  encoding  gene  of  eel  (Anguilla  bicolor  bicolor),  in  stadia  elver.  This  experiment  used  an experimental  method  with  a  completely  randomized  design  (RBD)  with  4  treatments  and  9  fish  replicates,  namely  without chromium picolinate (P0), with chromium picolinate 1 mg/kg feed (P1), 2 mg/kg feed (P2), and 3 mg/kg feed (P3). The initia l weight of the elver ranged from 11-16 g with an average of 13.20 ± 1.16 g and the rearing time was 40 days. Eel growth was analyzed based on absolute and daily growth rates. Observation of growth hormone (GH) gene expression levels was carried out using the realtime RT-PCR method. The results showed that the administration of chromium picolinate did not significantly increase the growth rate of eels. The expression level of the gene for growth hormone in eels that were fed 2 and 3 mg/kg of feed was higher than the level of gene expression in eels that were fed without chromium picolinate. The results indicated that the growth hormone expression level did not strongly relate to the growth rate the elver eel.
Keywords: growth performance, growth hormone gene, realtime RT-PCR, Anguilla bicolor bicolor
Abstrak . Modulasi  nutrisi diharapkan  mempengaruhi  secara positif pertumbuhan  sidat  dan ekspresi  gen terkait.  Salah satunya adalah  suplementasi  pakan  dengan  kromium  pikolinat,  yang  dilaporkan  mampu  meningkatkan  pertumbuhan  ikan.  Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis pengaruh pemberian kromium pikolinat pada pertumbuhan dan ekspresi gen pengkode hormon  pertumbuhan  sidat  ( Anguilla  bicolor  bicolor )  stadia  elver.  Percobaan  ini  menggunakan  metode  eksperimental  dengan Rancangan Acak Lengkap (RAK) dengan 4 perlakuan dan 9 ulangan ikan yaitu tanpa kromium pikolinat (P0), dengan kromium pikolinat 1 mg/kg pakan (P1), 2 mg/kg pakan (P2), dan 3 mg/kg pakan (P3). Berat awal elver berkisar 11-16 g dengan rata-rata 13,20 ± 1,16 g dan waktu pemeliharaan adalah 40 hari. Pertumbuhan sidat dianalisis berdasarkan laju pertumbuhan mutlak dan harian.  Pengamatan  tingkat  ekspresi  gen  growth  hormone  (GH)  dilakukan  menggunakan  metode    realtime  RT-PCR.  Hasil menunjukkan pemberian kromium pikolinat secara tidak signifikan meningkatkan laju pertumbuhan sidat. Tingkat ekspresi gen hormon pertumbuhan sidat yang diberi 2 dan 3 mg/kg pakan lebih tinggi dibandingkan tingkat ekspresi gen tersebut pada sidat yang  tidak  diberi  kromium  pikolinat.  Hasil  penelitian  mengindikasikan  tingkat  ekspresi  hormon  pertumbuhan  tampak  tidak terkait dengan laju pertumbuhan elver sidat.
Kata kunci : Pertumbuhan, gen hormon pertumbuhan, RT-PCR realtime, Anguilla bicolor bicolor

## PENDAHULUAN
Sidat Anguilla  bicolor  bicolor adalah  salah  satu  jenis  ikan  yang  memiliki  nilai  jual  dan  permintaan  yang tinggi di pasar internasional. Hal ini menjadikan sidat ( Anguilla bicolor bicolor ) dikembangkan menjadi komoditas perikanan  budidaya.  Spesies  ikan ini  masih  berada  di level  kedua  domestikasi, di  mana  benih  yang  dibudidayakan berasal dari hasil tangkapan dari alam (Teletchea & Fontaine, 2014). Daerah yang menjadi sumber benih sidat antara lain  adalah  perairan  selatan  Jawa  (Fahmi  &  Hirnawati,  2010;  Rahman  Saleh et  al. ,  2022).  Kondisi  ini  membuat ketersediaan benih tidak dapat dijamin baik kualitas, kuantitas, maupun keberlangsungannya (Setijanto et al ., 2014). Untuk mengatasi hal tersebut maka aspek biologi reproduksi sidat telah dipelajari, salah satunya oleh  (Rachmawati et  al .,  2017).  Seiring  dengan  penelitian  aspek  reproduksi,  upaya  domestikasi  sidat  masih  terus  dilakukan  melalui studi tentang aspek yang lain. Sebagai contoh, studi tentang tingkat infeksi parasit pada sidat yang di tangkap dari perairan  selatan  Jawa  Tengah  (Setyawan et  al .,  2015;  Syakuri et  al .,  2014)  Aspek  lain  yang  perlu  dikaji  adalah modulasi nutrisi untuk meningkatkan laju pertumbuhan sidat.
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Modulasi nutrisi dilaporkan sudah mulai dilakukan untuk meningkatkan pertumbuhan sidat. Upaya modulasi nutrisi  sidat  antara  lain  dilakukan  dengan  menggunakan  pakan  terfermentasi  (Soeprijanto et  al .,  2018)  dan penambahan  minyak  ikan  pada  pakan  komersial  (Mukti et  al .,  2014).  Selain  itu,  modulasi  pakan  sidat  juga  dapat dilakukan  dengan  menggunakan  beberapa  jenis  kromium,  termasuk  kromium  pikolinat  yang  sudah  diujikan  pada beberapa  jenis  ikan  (Cui et  al .,  2022).  Penggunaan  kromium  pikolinat  sebanyak  2,6  mg/kg  pakan  meningkatkan retensi protein dan lemak lele dumbo, Clarias sp. (Aryansyah et al ., 2007). Penambahan kromium-ragi pada pakan ikan  kerapu  cantang  berpengaruh  nyata  terhadap  pertumbuhan  bobot  harian,  pertumbuhan  panjang  harian,  dan konversi pemberian pakan (Lobo et al ., 2022).  Penggunaan kromium pikolinat dengan dosis sekitar 1 mg/kg pakan mampu meningkatkan pertumbuhan nila merah (Li et al ., 2018; Mehrim, 2012; Rakhmawati et al ., 2018). Juvenile Blunt  Snout  Bream , Megalobrama  amblycephala menunjukkan  laju  pertumbuhan  yang  meningkat  setelah  diberi kromium  pikolinat  0,8  mg/kg  pakan  (Ren et  al .,  2018).  Penggunaan  kromium  pikolinat  juga  telah  dilakukan  pada Mirror Carp Cyprinus carpio (Ahmed et al ., 2012), Labeo rohita (Giri et al ., 2014), Ctenopharyngodon idellus (Liu et al ., 2010), dan ikan baung Hemibagrus nemurus Blkr  (Sari et al ., 2019) . Hasil penelitian tersebut menunjukkan penambahan  kromium  pikolinat  dapat  meningkatkan  pemanfaatan  karbohidrat  dan  lemak  sebagai  sumber  energi sehingga  protein  pakan  dapat  dihemat  untuk  sintesis  protein  tubuh  yang  selanjutnya  akan  meningkatkan pertumbuhan ikan.
Aspek pertumbuhan berkaitan erat dengan ekspresi gen Growth Hormone (GH) atau Hormon Pertumbuhan. Pada beberapa ikan teleost, peningkatan ekspresi GH telah terbukti berkaitan dengan peningkatan laju pertumbuhan. Peningkatan  laju  pertumbuhan  tersebut  disebabkan  karena  GH  mempengaruhi  nafsu  makan  dan  efisiensi  konversi pakan    (Jönsson  &  Björnsson,  2002).    Pemberian hormon  pertumbuhan  rekombinan  dilaporkan  meningkatkan  laju pertumbuhan gurami (Fitriadi et al. , 2014). Kajian tentang hormon pertumbuhan pada sidat masih sangat jarang dan terbatas pada sidat Jepang ( Anguilla japonica ) dan sidat Eropa ( Anguilla anguilla ). Karakteristik molekular protein hormon  pertumbuhan  telah  dideskripsikan  dari Anguilla  japonica (Yamaguchi et  al. ,  1987).  Ekspresi  gen  hormon pertumbuhan pada sidat tersebut telah diamati pada saat perkembangan larva dan ekspresinya terdeteksi mulai 6 hari setelah menetas (Ozaki et al ., 2006).  Selain itu tingkat ekspresi gen hormon pertumbuhan juga telah dipelajari pada perkembangan  larva  sidat  Eropa  ( Anguilla  anguilla )  dan  dilaporkan  berkaitan  dengan  temperatur  pemeliharaan (Politis et  al .,  2017).  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  kromium  pikolinat  pada pertumbuhan dan ekspresi gen pengkode hormon pertumbuhan sidat ( Anguilla bicolor bicolor ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan 4 perlakuan dan 9 ulangan individu ikan. Perlakuan diterapkan selama 40 hari dan meliputi:
P0: Pakan kontrol tanpa penambahan kromium pikolinat P1: Pakan yang diberi kromium pikolinat 1 mg/kg pakan. P2: Pakan yang diberi kromium pikolinat 2 mg/kg pakan. P3: Pakan yang diberi kromium pikolinat 3 mg/kg pakan.
Penentuan dosis ditentukan berdasarkan penelitian sebelumnya (Li et al ., 2018; Mehrim, 2012; Rakhmawati et al ., 2018; Ren et al ., 2018).  Penelitian  dilakukan pada bulan Juli hingga Agustus 2018. Penelitian ini dilakukan di Purwosari,  Kecamatan  Baturraden,  Kabupaten  Banyumas  untuk  pemeliharaan  sidat  dan  pengamatan  pertumbuhan. Pengamatan indeks hepatosomatik (IHS) dan indeks viscerosomatik (IVS) serta ekstraksi RNA dari sampel hipofisa dilakukan  di  Laboratorium  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Jenderal  Soedirman,  Purwokerto. Analisis ekskresi gen GH dilakukan di Laboratorium Riset Universitas Jenderal Soedirman.

## Parameter Uji
Variable  yang  diamati  pada  penelitian  ini  adalah  pertumbuhan  benih  ikan  sidat  yang  meliputi  laju pertumbuhan mutlak (LPM), laju pertumbuhan harian (LPH), indeks hepatosomatik (IHS) dan indeks viscerosomatik (IVS ). Analisis ekspresi gen hormon pertumbuhan diamati dari hipofisa. Adapun data pendukung pada penelitian ini antara lain kualitas air yang diukur meliputi pH, suhu, dan oksigen terlarut (DO) yang diukur pada awal, tengah dan akhir penelitian.

## Persiapan Ikan Uji
Sampel  Sidat  stadia  elver  diperoleh  dari  Kecamatan  Kesugihan,  Kabupaten  Cilacap.  Sampel  ikan  tersebut merupakan  hasil  tangkapan  dari  aliran  Sungai  Serayu.  Sampel  ikan  dibawa  ke  lokasi  pemeliharaan  di  Desa Purwosari,  Kecamatan  Baturaden,  Kabupaten  Banyumas.  Sidat  tersebut  mempunyai  berat  tubuh  berkisar  11-16  g dengan  rata-rata  13,20  ±  1,16  g.  Aklimatisasi  dilakukan  di  kolam  pemeliharaan  hingga  sidat  terbiasa  untuk mengkonsumsi pakan dasar yang digunakan.
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat

## Pemeliharaan dan Pemberian Perlakuan
Sidat stadia elver dipelihara dalam empat kolam terpal sirkular dengan diameter 2 m dan ketinggian air 40 cm dengan  kepadatan  9  ekor/kolam.  Setiap  kolam  dilengkapi  dengan  satu  titik  aerator  dan  potongan  paralon  sebagai tempat  berlindung.  Sidat  diberi  pakan  sesuai  perlakuan  secara to  satiation 2  kali  sehari,  pagi  dan  sore  hari.  Sidat dikelompokkan  menjadi  empat  kelompok  berdasarkan  kandungan  kromium  pikolinat  pada  pakan  yang  diberikan. Pakan  yang  digunakan  mengandung  kadar  protein  sebanyak  59%.  Pakan  tersebut  ditambahkan  kromium  pikolinat sesuai  dengan  dosis  yang  sudah  ditentukan.  Kromium  pikolinat  dilarutkan  dengan  100  mL  air,  kemudian ditambahkan pada 100 g pakan dan dicampur rata sampai terbentuk pakan pasta.
Kualitas  air  pemeliharaan dijaga  dengan  penyiponan dan  pergantian  25%  air  yang  dilakukan  setiap  dua  hari sekali.  Pemantauan  kualitas  air  dilakukan  pada  awal,  tengah  dan  akhir  penelitian  yang  meliputi  pH,  suhu,  dan kandungan oksigen terlarut.

## Pengukuran Laju Pertumbuhan, Indeks Hepatosomatik, dan Indeks Viscerosomatik
Laju  pertumbuhan  sidat  diamati  setelah  40  hari  pemeliharaan.  Laju  pertumbuhan  yang  meliputi  laju pertumbuhan  mutlak  (LPM)  dan  laju  pertumbuhan  harian  (LPH)  dihitung  berdasarkan  berat  sidat  sebelum  dan setelah 40 hari pemberian perlakuan mengikuti rumus yang umum digunakan. Laju pertumbuhan dihitung dari hasil pengukuran  berat  sembilan  (9)  individu  sebagai  ulangan.  Data  berat  dari  kedua  waktu  pengamatan  kemudian diurutkan, pertumbuhan dihitung di setiap tingkatan berat dan dianggap sebagai ulangan.
Laju pertumbuhan mutlak (LPM) dihitung dengan rumus yang umum digunakan (Madinawati et al. , 2011) yaitu:
LPM = Wt – Wo Keterangan  : LPM : Laju pertumbuhan mutlak (g) Wt : Berat ikan pada akhir penelitian (g) Wo : Berat ikan pada awal penelitian (g)
Laju pertumbuhan harian dihitung dengan mengacu kepada rumus (Weatherley & Gill, 1987):
LPH = Keterangan  : LPH : Laju pertumbuhan harian (g/hari) Wt : Berat ikan pada akhir penelitian (g)
Wo : Berat  pada awal penelitian (g)
t : jumlah hari pemeliharaan (hari).
Setelah  diberi  perlakuan  selama  40  hari,    empat  (4)  sidat  dari  setiap  perlakuan  diambil  untuk  pengamatan indeks hepatosomatik dan indeks viscerosomatik. Sampel dibius menggunakan  minyak cengkeh (0,1 ml/l). Setelah itu sampel ditimbang, dibunuh dengan cara memotong pangkal kepala, dan dibedah. Organ hati dan jaringan visceral diambil  dan  ditimbang  untuk  penghitungan  kedua  indeks  tersebut.  Nilai  indeks  hepatosomatik  dan  indeks viscerosomatik  dihitung berdasarkan rumus yang umum digunakan (Aslamyah et al ., 2019; Sulistyo et al ., 2000).
Keterangan : IHS : Indeks hepatosomatik (%) BH : Berat hati (gram) BT : Berat tubuh (gram) Keterangan :   IVS : Indeks visceral somatik (%) BV : Berat viceral ikan (gram) BT : Berat tubuh ikan (gram)

## Analisis ekspresi gen pengkode hormon pertumbuhan
Sampel  hipofisa  diambil  dari  4  individu  untuk  setiap  kelompok  perlakuan.  Setelah  pemotongan  kepala, sampel  hipofisa  diambil  dan  dimasukkan  ke microtube 1,5  mL  yang  sudah  diisi  500  µL RNA  Later (Ambion). Sampel hipofisa didiamkan pada temperatur ruang selama 30 menit, selanjutnya disimpan dalam refrigerator selama 24 jam setelah itu dipindahkan ke freezer (-20°C) sampai dilakukan isolasi RNA.
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Sampel  hipofisa  sidat  diambil  dari  RNA  later  dengan  menggunakan  pinset  kemudian  dimasukkan  ke microtube 1,5  mL.    Sampel  total  RNA  diisolasi  menggunakan  Ambion Pure  Link  RNA  Mini-Kit sesuai  dengan petunjuk  pemakaiannya.  Sampel  dimasukkan  dalam  600  µL lysis  buffer yang  telah  ditambahkan  6  µL β- Mercaptoethanol pada microtube 1,5 mL lalu sampel dihancurkan dengan micropestle dan disentrifugasi selama 15 detik  dengan  kecepatan  12.000  rpm.  Sampel  yang  telah  disentrifugasi  dimasukkan  dalam microtube 1,5  mL sebanyak  500  µL  lalu  ditambahkan  500  µL ethanol 70%  kemudian  dihomogenkan.  Sampel  sebanyak  500  µL dipindahkan  ke  dalam spin  cartridges (ulangi  sampai  semua  larutan  dimasukkan  pada spin  cartridges )  kemudian disentrifugasi  selama  15  detik  dengan  kecepatan  12.000  rpm.  Larutan  pada  tabung  penampungan  dibuang  dan ditambahkan    600  µL wash  buffer  I kemudian  disentrifugasi  selama  15  detik  dengan  kecepatan  12.000  rpm, collective tube diganti dan ditambahkan wash buffer II sebanyak 500 µL lalu disentrifugasi kembali selama 15 detik dengan kecepatan 12.000 rpm (diulang sebanyak satu kali). Larutan yang berada pada collection tube dibuang lalu sentrifugasi  kembali. Spin  Catridge diletakkan  pada recovery  tube dan  ditambahkan RNase–Free  water sebanyak 30µL lalu diinkubasi 1 menit kemudian disentrifugasiselama 2  menit dengan kecepatan 12.000 rpm. Sampel RNA disimpan pada freezer -80 o C.
Kontaminasi DNA genomik dihilangkan menggunakan DNase I-RNAse Free sesuai petunjuk pemakaiannya ( Thermo Scientific ). Sebanyak 10 µL mix DNase treatment yang terdiri atas: RNA=2µL; 10x Reaction buffer with MgCl 2 =1µL; DNase I-RNAse  Free =2µL; Water =5µL dalam  tabung PCR 0,2  mL  diinkubasi  selama  45  menit pada suhu 37 o C. Inaktifasi DNase dilakukan dengan menambahkan 1µL 50 mM EDTA dilanjutkan dengan inkubasi pada suhu 65 o C selama 10 menit.
Tingkat ekspresi gen GH diukur dengan metode delta-delta Ct dengan gen beta actin sebagai acuan internal menggunakan one step realtime RT-PCR (Forlenza et al ., 2012). Bahan yang digunakan adalah superscript platinum one step realtime PCR kit (Invitrogen) dengan mesin Line-gene K Real-time PCR Detection System (Hangzhou Bioer Technology Co.,Ltd). Prosedur dilakukan dengan mengikuti petunjuk penggunaan. Master Mix (2x) sebanyak 5 µL; Primer forward 0,2 µL; Primer reverse 0,2 µL; Water 4,2 µL dan template ( RNA ) 0,4 µL dicampurkan dalam tabung PCR 0,2 mL sehingga memperoleh larutan sebanyak 10µL. Homogenisasi dilakukan dengan vortexing dan spinning down . Setelah itu, larutan dimasukkan pada mesin realtime PCR dengan suhu sintesis cDNA 50°C selama 5 menit, denaturasi awal  95 o C  selama  5  menit, denaturasi 95 o C  selama  30  detik, annealing Tm-2 o C  selama  30  detik, extension 72 o C selama 30 detik, dan extension tambahan 72 o C selama 5 menit serta dilakukan sebanyak 35x siklus. Pembacaan sinyal fluorosens dilakukan di setiap siklus pada akhir tahap extension . Analisis kurva melting dilakukan dari  suhu  55°C-95°C.  Selain  itu,  gen β-actin sebagai  kontrol  diamplifikasi  dengan  perlakuan  yang  sama  seperti amplifikasi  gen  GH.  Primer  untuk  gen  GH  adalah  ghAF1  (5`  GCTTTCTCAAACAGCCTGAT  3`)  dan  ghAR  (5` GCATCGTTCCTAAGGTGTAC  3`)  dengan  panjang  produk  173  bp.  Primer  untuk  gen β-actin adalah  BA-F1  (5` TGACGGACAGGTCATCACC  3`)    dan  BA-R1  (5`  CTCATCGTACTCCTGCTTGC  3`)  dengan  panjang  produk 364 bp.

## Pengukuran pH, suhu dan oksigen terlarut
Tingkat  pH  air  diukur  menggunakan  kertas  pH  universal  test  (Galster,  1991)  dengan  ukuran  0-14 menggunakan  cara  sesuai  petunjuk.  Oksigen  terlarut  diukur  dengan  metode  titrasi  Winkler  (Ward,  2017)  dengan rumus perhitungan:
Oksigen terlarut (mg/L) = 1000/100 x p x q x8 Keterangan: P  : volume larutan Na 2 S 2 O 3 Q : normalitas larutan 8  : bobot setara larutan

## Analisis Data
Data  pertumbuhan  dan  tingkat  ekspresi  gen  dianalisis  menggunakan  analisis  varian  (Anava).    Hasil  anava dinyatakan  signifikan  jika  nilai  p<0,05.  Hasil  tersebut  kemudian  diikuti  dengan  uji  beda  nyata  terkecil  sebagai  uji lanjut.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemberian  kromium  pikolinat  melalui  pakan  tidak  signifikan  meningkatkan  pertumbuhan  sidat  ( Anguilla bicolor bicolor ) setelah pemeliharaan selama 40 hari baik laju pertumbuhan mutlak maupun laju pertumbuhan harian (Gambar  1).  Namun  demikian,  sidat  yang  diberi  kromium  pikolinat  menunjukkan  pertumbuhan  yang  cenderung lebih baik dibandingkan sidat yang tidak diberi kromium pikolinat, kecuali pada dosis 2 mg/kg pakan. Khusus untuk dosis tersebut, pertumbuhan sidat lebih rendah dibandingkan sidat yang tidak diberi kromium pikolinat.
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Hasil  penelitian  menunjukkan  sidat  yang  diberi  kromium  pikolinat  memiliki  ekspresi  gen  hormon pertumbuhan yang lebih tinggi dibandingkan sidat yang tidak diberi kromium pikolinat (Gambar 1). Khususnya, itu terjadi pada kelompok sidat yang diberi kromium pikolinat dengan dosis 2 dan 3 mg/kg pakan. Ekspresi gen hormon pertumbuhan  sidat  pada  kedua  perlakuan  tersebut  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  ekspresi  gen  tersebut  pada  sidat yang  tidak  diberi  kromium  pikolinat.  Namun  demikian,  ekspresi  hormon  pertumbuhan  pada  sidat  yang  diberi kromium  pikolinat  1  mg/kg  pakan  lebih  rendah  dibandingkan  ekspresi  gen  tersebut  pada  sidat  yang  tidak  diberi kromium  pikolinat.  Pemberian  kromium  pikolinat  tidak  mempengaruhi  indeks  hepatosomatik  dan  indeks viscerosomatik sidat (Gambar 2).
Gambar 1. Laju pertumbuhan mutlak (A) dan laju pertumbuhan harian (B) dan ekspresi gen hormon pertumbuhan sidat  ( Anguilla  bicolor  bicolor )  setelah  40  hari  diberi  pakan  yang  mengandung  kromium  pikolinat. Huruf superscript yang sama diatas batang menunjukkan tidak berbeda nyata.
Gambar 2. Indeks hepatosomatik dan indeks viscerosomatik sidat ( Anguilla bicolor bicolor ) setelah 40 hari diberi pakan yang mengandung kromium pikolinat. Huruf superscript yang sama diatas batang menunjukkan tidak berbeda nyata.
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Kisaran suhu air dalam penelitian ini adalah 24 – 29 o C. Nilai pH air berkisar 6-7, kandungan oksigen terlarut 5,2–11 mg/L. Kondisi kualitas air sesuai dengan standar baku mutu akuakultur (Boyd et al ., 2008)
Tabel 1. Nilai kualitas air pada pemeliharaan ikan sidat ( Anguilla bicolor bicolor ).
Parameter Dosis kromium pikolinat (mg/kg pakan) Baku Mutu (Boyd et al ., 2008) 0 1 2 3 Suhu ( o C) 24 – 29 24 – 29 24 – 29 24 – 29 28-30 o C pH 6 – 7 6 - 7 6 – 7 6 – 7 6,0 – 9,5 DO (mg/L) 5,2 – 7,4 5,4 – 7,6 7,5 – 9 8,3 – 11 Minimal 4,0mg/L
Hasil penelitian ini menunjukkan indikasi laju pertumbuhan yang lebih tinggi pada sidat yang diberi pakan mengandung  kromium  pikolinat.  Hasil  ini  mendukung  hasil  penelitian  sebelumnya  pada  ikan  baung.  Pemberian kromium  pikolinat  pada  ikan  tersebut  meningkatkan  laju  pertumbuhan  dengan  dosis  terbaik  sebesar  3,20  ppm/kg pakan (Sari et al ., 2019). Selain itu pengaruh positif pemberian kromium pikolinat terhadap laju pertumbuhan telah dilaporkan pada Megalobrama amblycephala (Ren et al ., 2018), Labeo rohita (Giri et al ., 2021), dan Mirror Carp ( Cyprinus carpio L (Ahmed et  al .,  2012).  Peningkatan  pertumbuhan  tersebut  dikaitkan  dengan  pengaruh  kromium pikolinat  terhadap  aktivitas  enzim  pencernaan  (Ahmed et  al .,  2012),  efisiensi  pakan  (Cui et  al .,  2022;  Giri et  al ., 2021; Li et al ., 2018; Liu et al. , 2010; Sari et al. , 2019), dan metabolisme karbohidrat (Ahmed et al ., 2012; Li et al ., 2018; Sari et al. , 2019). Hasil yang berbeda dilaporkan pada ikan nila, dimana pemberian kromium pikolinat melalui pakan tidak meningkatkan pertumbuhan namun meningkatkan berat kering karkas (Mehrim, 2012).
Tingkat  ekspresi  gen  pengkode  hormon  pertumbuhan  dalam  penelitian  ini  secara  nyata  berkaitan  dengan pemberian  kromium  pikolinat,  khususnya  pada  dosis  2  dan  3  mg/kg  pakan.  Peningkatan  ekspresi  gen  hormone pertumbuhan  tersebut  sangat  tinggi  dan  tidak  berkorelasi  erat  dengan  laju  pertumbuhan  sidat  dalam  penelitian  ini. Hormon  ini  dikenal  tidak  hanya  berkaitan  dengan  laju  pertumbuhan  namun  juga  terkait  dengan  fungsi  lain  seperti regulasi  ionik,  kesetimbangan  osmotik,  metabolisme  makro  molekul,  reproduksi,  tingkah  laku  dan  fungsi  imun (Reinecke et  al .,  2005).  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  pemberian  kromium  pikolinat  dapat  mempengaruhi ekspresi  gen  pada  ikan,  sebagaimana  telah  dilaporkan  sebelumnya.  Pemberian  kromium  pikolinat  pada  ikan Megalobrama amblycephala dilaporkan meningkatkan ekspresi gen yang berkaitan dengan metabolisme glukosa dan metabolisme  lipid,  seperti    substrat  reseptor  insulin  1  (IRS-1),  fosfoinositida-3-kinase  (PI3K),  dan  piruvat  kinase (PK)  (Ren et  al. ,  2018).  Selain  itu,  kromium  pikolinat  pada  ikan  ini  menghambat  ekspresi  fosfoenolpiruvat karboksikinase (PEPCK), glukosa-6-fosfatase (G6Pase), dan tingkat mRNA glikogen sintase (GS) (Ren et al ., 2018). Pemberian  kromium  pikolinat  pada  sidat  dalam  penelitian  ini    cenderung  menurunkan  nilai  indek hepatosomatik dan indek viscerosomatik. Hasil ini sesuai dengan hasil penelitian penggunaan bahan yang sama pada ikan  nila,  yang  menunjukkan  penurunan  indeks  hepatosomatik  (Mehrim,  2012).  Kedua  indek  ini  menggambarkan cadangan  energi  yang  tersimpan  dalam  bentuk  jaringan  lemak  (Chellappa et  al .,  1995).  Hal  ini  berkaitan  dengan peran kromium pikolinat dalam metabolisme lipid (Bagheri et al., 2022; Ren et al ., 2018; Xi et al ., 2001).

## KESIMPULAN
Pemberian  kromium  pikolinat  pada  ikan  sidat  ( Anguilla  bicolor  bicolor )  di  penelitian  ini  tidak  signifikan meningkatkan  pertumbuhan  baik  laju  pertumbuhan  mutlak  maupun  laju  pertumbuhan  harian.  Pemberian  bahan  ini meningkatkan ekspresi gen pengkode hormon pertumbuhan sidat.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  untuk  bantuan  teknis  dari  Satrio  dan  Aldi.  Penelitian  ini  didanai  melalui  skema  Riset  Institusi dari Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat (LPPM) Universitas Jenderal Soedirman   (SK Nomor : Kept. 3715/UN23.14/PN.01.00/2018).  Terima  kasih  untuk  dukungan  fasilitas  laboratorium  dari  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed, A. R., Jha, A. N., & Davies, S. J. (2012). The Efficacy of Chromium as a Growth Enhancer for Mirror Carp ( Cyprinus  carpio L):  An  Integrated  Study  Using  Biochemical,  Genetic,  and  Histological  Responses. Biological Trace Element Research , 148 (2), 187–197. https://doi.org/10.1007/s12011-012-9354-4 Aryansyah, H., Mokoginta, I., & Jusadi, D. (2007). Growth performance of African catfish ( Clarias sp.) juvenile fed on  the  diets  containing  various  chromium  content. Jurnal  Akuakultur  Indonesia , 6 (2),  171–176. https://journal.ipb.ac.id/index.php/jai/article/view/4024
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Aslamyah,  S.,  Zainuddin,  &  Badraeni.  (2019).  Pengaruh  suplementasi  ekstrak  Lumbricussp.  dalam  pakan fermentasiterhadap kinerja pertumbuhan, komposisi kimiawi tubuh, dan indeks hepatosomatik ikan bandeng, Chanos chanos Forsskal, 1775. Jurnal Iktiologi Indonesia , 19 (2), 271–282.
Bagheri,  S.,  Gholamhosseini,  A.,  &  Banaee,  M.  (2022).  Investigation  of  Different  Nutritional  Effects  of  Dietary
Chromium in Fish: A Literature Review. Biological Trace Element Research . https://doi.org/10.1007/s12011-022-03326-z
Boyd,  C.  E.,  Lim,  C.,  Queiroz,  J.,  Salie,  K.,  de  Wet,  L.,  &  McNevin,  A.  (2008). Best  Management  Practices  for Responsible Aquaculture .
Chellappa, S., Huntingford, F. A., Strang, R. H. C., & Thomson, R. Y. (1995). Condition factor and hepatosomatic index  as  estimates  of  energy  status  in  male  three-spined  stickleback. Journal  of  Fish  Biology , 47 (5),  775– 787. https://doi.org/10.1111/j.1095-8649.1995.tb06002.x
Cui,  P.,  Cheng,  Z.,  &  Sun,  J.  (2022).  Effects  of  different  chromium  sources  on  growth  performance,  serum biochemical, hepatopancreas glycometabolism enzymes activities, IR, GLUT2 and SGLT1 gene expression of common carp ( Cyprinus carpio ). Aquaculture Research , 53 (4), 1573–1581. https://doi.org/https://doi.org/10.1111/are.15692
Fahmi,  M.  R.,  &  Hirnawati,  R. (2010). Keragaman  Ikan  Sidat Tropis  ( Anguilla sp.)  di  Perairan  Sungai  Cimandiri, Pelabuhan Ratu, Sukabumi. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur , 1–10.
Fitriadi, M. W.,  Basuki,  F.,  &  Nugroho,  R.  A. (2014).  Pengaruh  Pemberian  Recombinant  Growth  Hormone  (Rgh) Melalui  Metode  Oral  dengan  Interval  Waktu  yang  Berbeda  Terhadap  Kelulushidupan  dan  Pertumbuhan Larva Ikan Gurame Var Bastard ( Osphronemus gouramy Lac, 1801). Journal of Aquaculture Management and Technology , 3 (2), 61–68. https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jamt/article/view/5065 Forlenza, M., Kaiser, T., Savelkoul, H. F. J., & Wiegertjes, G. F. (2012). The Use of Real-Time Quantitative PCR for  the  Analysis  of  Cytokine  mRNA  Levels. Methods  Mol  Biol. , 820 ,  7–23.  https://doi.org/10.1007/978-1- 61779-439-1
Galster, H. (1991). pH Measurement. Fundamentals, Methods, Applications, Instrumentation. Weinheim, Germany: Wiley-VCH.
Giri, A. K., Sahu, N. P., & Dash, G. (2021). Improvement in the growth status and carbohydrate utilization of Labeo rohita (Hamilton, 1822) fingerlings with dietary supplementation of chromium picolinate. Fish Physiology and Biochemistry , 47 (2), 599–616. https://doi.org/10.1007/s10695-021-00934-9
Giri, A. K., Sahu, N. P., Saharan, N., & Dash, G. (2014). Effect of dietary supplementation of chromium on growth and biochemical parameters of Labeo rohita (Hamilton) fingerlings. Indian Journal of Fisheries , 61 (2), 73–
81.
Jönsson, E., & Björnsson, B. T. (2002). Physiological functions of growth hormone in fish with special reference to its influence on behaviour. Fisheries Science , 68 (sup1), 742–748.
https://doi.org/10.2331/fishsci.68.sup1_742
Li,  H.,  Meng,  X.,  Wan,  W.,  Liu,  H.,  Sun,  M.,  Wang,  H.,  &  Wang,  J.  (2018).  Effects  of  chromium  picolinate supplementation  on  growth,  body  composition,  and  biochemical  parameters  in  Nile  tilapia Oreochromis niloticus . Fish Physiology and Biochemistry , 44 (5), 1265–1274. https://doi.org/10.1007/s10695-018-0514-0 Liu,  T.,  Wen,  H.,  Jiang,  M.,  Yuan,  D.,  Gao,  P.,  Zhao,  Y.,  Wu,  F.,  &  Liu,  W.  (2010).  Effect  of  dietary  chromium picolinate on growth performance and blood parameters in grass carp fingerling, Ctenopharyngodon idellus . Fish Physiology and Biochemistry , 36 (3), 565–572. https://doi.org/10.1007/s10695-009-9327-5 Lobo, C., Tjendanawangi, A., & Rebhung, F. (2022). Pengaruh penambahan kromium-ragi (Cr Organic) pada pakan terhadap  laju  pertumbuhan  ikan  kerapu  cantang  ( Epinephelus  fuscogutattus  lanceolatus ). Jurnal  Aquatik , 5 (2), 16–23.
Madinawati, Serdiati, N., & Yoel. (2011). Pemberian Pakan yang Berbeda terhadap Pertumbuhan dan Kelangsungan Hidup Benih Ikan Lele Dumbo ( Clarias gariepinus ). Media Litbang Sulteng , 4 (2), 83–87.
Mehrim,  A.  I.  (2012).  Effect  of  Dietary  Chromium  Picolinate  Supplementation  on  Growth  Performance,  Carcass Composition and Organs Indices of Nile Tilapia ( Oreochromis niloticus L.) Fingerlings. Journal of Fisheries and Aquatic Science , 7 (3), 224–232. https://doi.org/10.3923/jfas.2012.224.232
Mukti,  R.  C.,  Utomo,  N.  B.  P.,  &  Affandi,  R.  (2014).  Fish  oil  supplementation  in  commercial  diet  on  growth  of
Anguilla bicolor bicolor . Jurnal Akuakultur Indonesia , 13 (1), 54–60.
https://doi.org/https://doi.org/10.19027/jai.13.54-60
Ozaki, Y., Fukada, H., Tanaka, H., Kagawa, H., Ohta, H., Adachi, S., Hara, A., & Yamauchi, K. (2006). Expression of  growth  hormone  family  and  growth  hormone  receptor  during  early  development  in  the  Japanese  eel ( Anguilla  japonica ). Comparative  Biochemistry  and  Physiology  Part  B:  Biochemistry  and  Molecular Biology , 145 (1), 27–34. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.cbpb.2006.05.009
Dewi Nugrayani, Anandita Ekasanti, Hamdan Syakuri, Emyliana Listiowati, Petrus Hary Tjahja Soedibya, Sri Marnani, Marhaendro  Santoso,  Rudy  Wijaya,  Purnama  Sukardi,  Kasprijo. Performa  Pertumbuhan  dan  Ekspresi  Gen  Hormon Pertumbuhan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) Stadia Elver Yang diberi Pakan Mengandung Kromium Pikolinat
Politis,  S.  N., Mazurais,  D.,  Servili,  A.,  Zambonino-Infante, J.-L.,  Miest, J. J.,  Sorensen,  S.  R., Tomkiewicz,  J.,  & Butts, I. A. E. (2017). Temperature effects on gene expression and morphological development of European eel, Anguilla anguilla larvae. PloS One , 12 (8), e0182726. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0182726 Rachmawati, F. N., Susilo, U., & Muslih. (2017). Karakteristik reproduksi ikan sidat Anguilla bicolor McClelland , 1844 yang diinduksi GNRH-analog. Jurnal Iktiologi Indonesia , 17 (2), 155–163.
Rahman Saleh, A., Sri, R., & Azizah. (2022). Perkembangan Penelitian dan Pemetaan Bidang Kajian Ikan Sidat di Indonesia. Jurnal Pustakawan Indonesia , 21 (2), 72–87. https://doi.org/10.29244/jpi.21.2.72-87 Rakhmawati, R., Suprayudi, M. A., Setiawati, M., Widanarni, W., Junior, M. Z., & Jusadi, D. (2018). Bioefficacy of dietary  chromium  picolinate  and  chromium  yeast  on  growth  performance  and  blood  biochemical  in  Red Tilapia, Oreochromis niloticus (Linnaeus). Aquaculture Research , 49 (2), 839–846.
https://doi.org/https://doi.org/10.1111/are.13527
Reinecke,  M.,  Bjornsson,  B.  T.,  Dickhoff,  W.  W.,  McCormick,  S.  D.,  Navarro,  I.,  Power,  D.  M.,  &  Gutierrez,  J. (2005). Growth hormone and insulin-like growth factors in fish: where we are and where to go. General and Comparative Endocrinology , 142 (1-2), 20–24. https://doi.org/10.1016/j.ygcen.2005.01.016 Ren,  M.,  Mokrani,  A.,  Liang,  H.,  Ji,  K.,  Xie,  J.,  Ge,  X.,  &  Liu,  B.  (2018).  Dietary  Chromium  Picolinate Supplementation  Affects  Growth,  Whole-Body  Composition,  and  Gene  Expression  Related  to  Glucose Metabolism and Lipogenesis in Juvenile Blunt Snout Bream , Megalobrama amblycephala . Biological Trace Element Research , 185 (1), 205–215. https://doi.org/10.1007/s12011-018-1242-0 Sari,  E.  P.,  Mokoginta,  I.,  &  Jusadi,  D.  D.  (2019). Pengaruh  Pemberian  Kromium-Ragi  dalam  Pakan  Terhadap Kinerja Pertumbuhan Ikan Baung (Hemibagrus nemurus Blkr) . 1 (Furuichi 1988), 17–23. Setijanto,  S.,  Sulistyo,  I.,  &  Eko,  B.  (2014). Penentuan  Waktu  Pengambilan  Benih  dan  Diet  Ikan  Sidat  (Anguilla bicolor Mc Clelland) di Sungai Serayu .
Setyawan,  A.  C.,  Sukenda,  S.,  &  Nuryati,  S.  (2015).  Status  Kesehatan  Ikan  Sidat  ( Anguilla Sp.)  Pada  Perairan
Umum Dan Wadah Pemeliharaan Sementara. Jurnal Riset Akuakultur , 10 (1), 69.
https://doi.org/10.15578/jra.10.1.2015.69-77
Soeprijanto,  A.,  Guntur,  G.,  &  Fakhri,  M.  (2018).  Application  of  Probiotic  and  Fermented  Feed in  the  Nursery  of
Anguilla bicolor . Jurnal Perikanan Universitas Gadjah Mada , 20 (1), 19–22.
https://doi.org/https://doi.org/10.22146/jfs.34207
Sulistyo,  I.,  Fontaine,  P.,  Rinchard,  J.,  Gardeur,  J.  N.,  Migaud,  H.,  Capdeville,  B.,  &  Kestemont,  P.  (2000).
Reproductive  cycle  and  plasma  levels  of  steroids  in  male  Eurasian  perch  Perca  fluviatilis. Aquatic  Living Resources , 13 (2), 99–106. https://doi.org/10.1016/S0990-7440(00)00146-7 Syakuri, H., Setiawan, A. C., & Ekasanti, A. (2014). . 2014. Prevalensi, Intensitas, dan Variasi Genetik Nematoda Anguillicola  yang  Menginfeksi  Sidat  ( Anguilla spp.)  di  Sekitar  Pantai  Selatan  Jawa  Tengah.  Laporan Fundamental.
Teletchea,  F.,  &  Fontaine,  P.  (2014).  Levels  of  domestication  in  fish:  Implications  for  the  sustainable  future  of aquaculture. Fish and Fisheries , 15 (2), 181–195. https://doi.org/10.1111/faf.12006 Ward,  W.  J.  (2017). Standard  Operating  Procedure  EAP023,  Version  2.5,  Collection  and  Analysis  of  Dissolved Oxygen (Winkler Method) . Washington State Department of Ecology.
https://apps.ecology.wa.gov/publications/SummaryPages/1703202.html
Weatherley, A. H., & Gill, H. S. (1987). Growth increases produced by bovine growth hormone in grass pickerel,
Esox  americanus  vermiculatus  (Le  Sueur),  and  the  underlying  dynamics  of  muscle  fiber  growth. Aquaculture , 65 (1), 55–66. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/0044-8486(87)90270-5
Xi,  G.,  Xu,  Z.,  Wu,  S.,  &  Chen,  S.  (2001).  Effect  of  Chromium  Picolinate  on  Growth  Performance,  Carcass Characteristics,  Serum  Metabolites  and  Metabolism  of  Lipid  in  Pigs. Asian-Australas  J  Anim  Sci , 14 (2), 258–262. https://doi.org/10.5713/ajas.2001.258
Yamaguchi,  K.,  Yasuda,  A.,  Kishida,  M.,  Hirano,  T.,  Sano,  H.,  &  Kawauchi,  H.  (1987).  Primary  structure  of  Eel ( Anguilla  japonica )  growth  hormone. General  and  Comparative  Endocrinology , 66 (3),  447–453. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/0016-6480(87)90256-5