Efek Perbedaan Waktu Ekuilibrasi Sebelum Pembekuan terhadap Kualitas Spermatozoa Kambing Sapera Menggunakan
Tris Kuning Telur
Difference Time Effect of Equilibration Before Freezing on The Quality of Spermatozoa Sapera Goats using Egg Yellow Tris
Danu Prayogo 1* , Suherni Susilowati 2 , Ragil Angga Prastiya 2 , Erma Safitri 2 , Bodhi Agustono 3
1 Bachelor of Veterinary Medicine, 2 Department of Veterinary Reproduction, 3 Department of Animal Husbandry, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Airlangga, UNAIR C-Campus Mulyorejo, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia, 60115 . * Corresponding author : danu.prayogo-2016@fkh.unair.ac.id

## Abstrak
Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui  pengaruh  efek  perbedaan  waktu  ekuilibrasi  pada  motilitas, viabilitas,  abnormalitas,  dan  membran  plasma  utuh  spermatozoa  kambing  Sapera  sebelum  pembekuan. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan tiga perlakuan, yaitu waktu ekuilibrasi P1 (1 jam), P2 (3 jam), dan P3 (4 jam), masing-masing enam kali ulangan. Hasil motilitas menggunakan analisis stastitik One Way Anova dilanjutkan dengan Uji Duncan adalah (P1) 71,50±3,94, (P2) 66,00±2,60, dan (P3) 60,33±2,42. Hasil viabilitas adalah (P1) 83,00±6,16, (P2) 75,17±4,70, dan (P3) 69,00±3,40. Hasil abnormalitas yaitu (P1) 2,50±0,55, (P2) 3,33±1,18, dan (P3) 6,50±2,88. Sedangkan hasil dari membran plasma utuh adalah (P1) 79.50±8.50, (P2) 72.67±5,28, dan (P3) 65.67±3,78. Kesimpulan penelitian menunjukan bahwa hasilnya secara signifikan berbeda nyata (p<0,05) antara waktu ekuilibrasi dan kualitas spermatozoa kambing Sapera sebelum  pembekuan.  Presentasi  tertinggi  dari  motilitas,  viabilitas  dan  membran  plasma  utuh  pada  waktu ekuilibrasi 1 jam, sedangkan presentasi abnormalitas terendah pada waktu ekuilibrasi 1 jam.
Kata kunci: ekuilibrasi, kambing sapera, kualitas spermatozoa

## Abstract
This study aimed to examine the effect of time differences on motility, viability, abnormality, and intact plasma membrane of spermatozoa of Sapera goats before freezing. This study used a Completely Randomized Design (CRD) with three settings, namely the equilibration time P1 (1 h), P2 (3 h), and P3 (4 h), each of six replications. The results of motility using One Way Anova statistical analysis through the Duncan Test were (P1) 71.50 ± 3.94, (P2) 66.00 ± 2.60, and (P3) 60.33 ± 2.42. The results of viability was (P1) 83.00 ± 6.16, (P2) 75.17 ± 4.70, and (P3) 69.00 ± 3.40. Abnormal results was (P1) 2.50 ± 0.55, (P2) 3.33 ± 1.18, and (P3) 6.50 ± 2.88. While the results of intact plasma membranes were (P1) 79.50 ± 8.50, (P2) 72.67 ± 5.28, and (P3) 65.67  ±  3.78.  The  conclusion  of  the  study  showed  significant  significant  results  (p<0,05)  between  the equilibration  time  and  spermatozoa  quality  of  Sapera  goats  before  freezing.  The  highest  presentation  of motility,  viability  and  overall  plasma  membrane  was  at  an  equilibration  time  of  1  h,  while  the  lowest abnormality presentation was at equilibration time of 1 h.
Keywords: equilibration, sapera goats, spermatozoa quality
Received: 12 February 2021
Revised: 20 March 2022 Accepted: 12 October 2022

## PENDAHULUAN
Kambing  Sapera  merupakan  salah  satu kambing yang ada di indonesia merupakan hasil dari  persilangan  antara  kambing  Saanen  jantan dan  betina  Peranakan  Etawah  (PE).  Kambing
Sapera  adalah  kambing  perah  yang  memiliki prokduktifitas  dan  kualitas  susu  yang  baik (Praharani et  al .,  2013).  Persilangan  antara  dua jenis kambing antara PE dan Saanen menghasilkan  spesies  kambing  Sapera  yang memiliki sifat mudah beradaptasi terhadap iklim
di  Indonesia  serta  memiliki  postur  tubuh  yang cukup besar dan mampu memproduksi susu yang tinggi (Batubara et al ., 2016).
Salah  satu  usaha  menunjang  peningkatan populasi kambing Sapera di Indonesia diperlukannya peningkatkan produktivitas kambing  Sapera,  hal  itu  bisa  dilakukan  melalui program  pengembangan,  perbaikan  efisiensi reproduksi,  perbaikan  ternak  serta  tatalaksana pemeliharaan dan perawatan. Program pengembangan  dapat  dilaksanakan  melalui persilangan  maupun  seleksi,  Salah  satu  cara pendekatan tersebut melalui teknologi inseminasi buatan  (IB).  Leboeuf et  al. (2000)  menyatakan bahwa kualitas semen beku yang digunakan untuk Inseminasi  buatan  dipengaruhi  oleh  proses pembekuan.  Masalah  yang  sering  timbul  pada proses  pembekuan  adalah  pengaruh cold  shock yang dapat merusak membran plasma spermaotozoa, sehingga berakibat pada kematian spermatozoa  pada  saat  pembekuan  serta  terjadi pembentukan  kristal-kristal  es  (Afrilia,  2016). Proses  ini  dilakukan  sebelum  semen  dibekukan yaitu  pada  suhu  5 o C  selama  selang  waktu  1 sampai  4  jam.  Waktu  ekuilibrasi  mempunyai waktu  yang  berbeda  pada  setiap  jenis,  individu, dan bangsa pejantan lainnya (kartina 2014).
Penelitiaan  ini  bertujuan  untuk  mengetahui efek  waktu  ekuilibrasi  terhadap  kualitas  semen kambing Sapera yang melipui motilitas, abnormalitas,  viabilitas  dan  membran  plasma utuh  spermatozoa  serta  berguna  untuk  bahan informasi  dalam  pembekuan  semen  kambing Sapera.

## METODE PENELITIAN
Penelitian menggunakan satu ekor kambing Sapera milik bumi kesilir farm yang berumur 1,5 tahun dan penelitian ini dilaksanakan pada bulan desember tahun 2019 sampai januari tahun 2020. Penampungan  semen  menggunakan  vagina buatan.  Pemeriksaan  kualitas  semen  kambing Sapera  dilakukan  di  Laboratorium  Universitas Airlangga di PSDKU Banyuwangi.
Pemeriksaan kualitas spermatozoa dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis, pemeriksaan makroskopis meliputi volume, bau,
warna, pH, dan konsistensi sedangkan pemeriksaan  mikroskopis  meliputi  motilitas, parameter pengamatan motilitas dilakukan dengan  spermatozoa  diamati  menggunakan mikroskop dengan membandingkan secara visual atau  subjektif  jumlah  dari  spermatozoa  yang bergerak  progresif  dengan  spermatozoa  yang tidak  bergerak  secara  progesif  dan  dinyatakan dalam bentuk persen.
Viabilitas  merupakan  hidup  dan  mati spermatozoa yang dapat dilihat menggunakan zat warna eosin nigrosin dengan ditandai penyerapan warna  karena  disebabkan  rusaknya  membrane plasma. Sehingga tidak berfungsinya dengan baik menyebabkan  kepala  spermatozoa  terwarnai sedangkan  spermatozoa  yang  hidup  berwarna transparan atau tidak terwarnai.
Abnormalitas  merupakan  penyimpangan bentuk  morfologi  spermatozoa  dari  bentuk normalnya.  Abnormalitas  dibedakan  menjadi  2 yakni  abnormalitas  primer  dan  abnormalitas sekunder.  Abnormalitas  primer  ditandai  dengan ukuran kepala macrochepalic atau microchepali, ekor ganda, kepala rangkap, ekor putus dan ekor melingkar.  Sedangkan  abnormalitas  skunder dengan ditandai kepala tanpa ekor, bagian tengah melipat.
Konsentrasi dapat dilihat menggunakan alat spektofotemeter dengan memasukan Nacl fisiologis  kedalam  kuvet  setelah  ditera  masukan semen  kedalam  kuvet  dan  diaduk  hingga homogen kemudian di tera kembali di spektofotometer  lalu  di  tunggu  hasilnya  dengan hasil  dapat  dilihat  pada  kertas  print  pada  alat, sedangkan  membran  plasma  utuh  dapat  dilihat dengan  larutan hos  test spermatozoa  yang memiliki  membran  plasma  utuh  ditandai  oleh ekor  melingkar  atau  menggembung,  sedangkan yang rusak ditandai oleh ekor yang lurus.
Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap  (RAL)  dengan  3  perlakuan  dan  6  kali pengulangan.  Semen  yang  layak  untuk  di lanjutkan  ke  proses  pengenceran  menggunakan bahan  tris  kuning  telur,  dan  dilakukan  proses ekuilibrasi  dengan  jumlah  perlakuan  3  meliputi P1  dengan  waktu  ekuilibrasi  1  jam,  P2  dengan waktu  ekuilibrasi  3  jam  dan  P3  dengan  waktu ekuilibrasi 4 jam.
Pengumpulan data di analisis menggunakan uji  Anova  dan  Duncan  dengan  variabel  data pengamatan,  motilitas,  viabilitas,  abnormalitas, dan membran plasma utuh.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil kualitas semen segar kambing Sapera terdapat  pada  Tabel  1.  Rata-rata  volume  semen kambing Sapera yang di peroleh pada penelitian ini  lebih  tinggi  dibanding  pada  penelitian kambing  Sapera  yang  berumur  2  tahun  dengan volume  0,94  ml  (Masyitoh,  2018).  kambing Saanen berumur 4 tahun dengan rata-rata volume 0,97  (Kusuma,  2019),  akan  tetapi  rata-rata volume  kambing  Sapera  lebih  rendah  dari kambing  Bligon  yang  berumur  3  tahun  dengan rata-rata  volume  1,24  ml  (Umami  dan  Bintara, 2015).  Perbedaan  volume  ini  disebabkan  oleh perbedaan  spesies,  umur,  dan  juga  di  pengaruhi oleh masing-masing individu, metode koleksi dan frekuensi dilakukan penampungan semen (Pratiwi, 2014).
Warna  semen  kambing  Sapera  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  berwarna  putih krem.  Warna  semen  normal  sesuai  dengan pendapat  Ningsih  (2007),  semen  kambing memiliki  warna  putih  hingga  kekuningan  atau krem,  hal  ini  disebabkan  karena  adanya kandungan  ribovlavin  yang  dihasilkan  oleh kelenjar vesicularis (Krisnawati, 2002). Kehadiran darah dalam air mani ditunjukkan oleh warna  merah  muda  dari  semen  dan  dapat disebabkan oleh cedera atau penyakit pada penis atau saluran reproduksi (Matshaba, 2010).
Bau  semen  yang  diperoleh  pada  penelitian ini  adalah  khas  kambing  yaitu  prengus,  hal  ini sependapat dengan teori yang menyatakan bahwa semen dalam keadaan normal memiliki bau sesuai dengan  bau  khas  tubuh  hewan  itu  sendiri,  bau busuk  atau  bau  amis  dapat  terjadi  apabila  organ reproduksi  atau  saluran  reproduksi  kambing mengalami infeksi (Wibowo, 2013).
Derajat keasaman atau pH kambing Sapera yang  di  peroleh  pada  penelitian  berkisar  antara 6,5 - 7. Hasil ini lebih rendah dari hasil kambing Saanen umur 4 tahun dengan rata-rata 7 dan lebih rendah  dari  kambing  Sapera  yang  berumur  2
tahun  yaitu  dengan  rata-rata  pH6,4  (Kusuma, 2019). pH semen kambing Sapera pada penilitian ini masih memnuhi kisaran antara pH 6-7. Derajat keasaman  atau  pH  semen  menentukan  status hidup dan mati spermatozoa, semakin rendah atau semakin  tinggi  pH  semen  dari  standar  normal dapat  menyebabkan  spermatozoa  cepat  mati (Zulyazaini et al ., 2016).
Konsistensi  semen  kambing  Sapera  yang diperoleh pada penelitian ini adalah kental. Hasil ini sesuai dengan penlitian pada kambing Sapera oleh  Masyitoh  (2018)  dan  Kusuma  (2019). Perbedaan  konsistensi  disebabkan  oleh  volume dan  konsentrasi  semen  (Aerens et  al .,  2012). Semen  yang  baik  memiliki  derajat  konsistensi yang kental melebihi kekentalan susu sedangkan semen  yang  buruk  derajat  konsistensi  hampir sama dengan air kelapa (Hafez, 2000).
Konsentrasi  spermatozoa  kambing  Sapera pada  penelitian  ini  dihasilkan  dengan  rata-rata 3.778±232  menurut  Syawal  (2010)  mengatakan bahwa  kosentrasi  normal  rata-rata  konsentrasi spermatozoa  pada  kambing  yaitu  berkisar  2.000 sampai  6.000  juta  sel/ml  menandakan  bahwa konsentrasi  kambing  masih  keadaan  normal. Hasil  ini  sedikit  lebih  baik  dari  penelitian Masyitoh  (2018),  pada  penelitian  kambing Sapera.  Perbedaan  konsentrasi  semen  kambing Sapera dikarenakan faktor pakan yang diberikan dan umur. Menurut Dethan et al , (2010) gerakan massa  spermatozoa  kambing  Sapera  yang  di peroleh pada penelitian ini rata-rata adalah (+++) yang menandakan spermatozoa bergerak membentuk  gelombang  besar  dan progresif . Menurut  Muzakkir,  (2017)  spermatozoa  yang baik  memiliki  gerakan  massa  dan  motilitas dengan  daya  gerak  yang progresif ,  hal  ini  juga sesuai  dengan  pendapat  Susilawati,  (2011)  yang menyatakan  bahwa  gerakan  massa  spermatozoa yang baik apabila terlihat membentuk gelombang yang besar, banyak, gelap, dan aktif seperti awan hitam.
Presentasi  viabilitas  spermatozoa  kambing Sapera  pada  penelitian  ini  berkisar  89  -  95% dengan  rata-rata  91±2,73.  Menurut  Muzakkir et al . (2017) bahwa nilai viabilitas lebih tinggi dari motilitas,  dikarenakan  spermatozoa  yang  motil tidak bergerak progresif akan tetapi masih hidup
Tabel 1. Kualitas semen segar kambing Sapera
Kualitas Rata-rata ± SD Makroskopis Volume (ml) Bau Warna Derajat Keasaman (pH) Konsistensi Mikroskopis Motilitas (%) Viabilitas (%) Abnormalitas sekunder (%) Konsentrasi (juta/ml) Gerakan Massa 1,07±0,10 Khas kambing Krem 6,8±0,25 Kental 85±3,16 91±2,73 3,0±1,41 3.778±232 +++ Tabel 2. Rata-rata hasil ekuilibrasi spermatozoa kambing Sapera Perlakuan Motilitas Viabilitas Abnormalitas Membran Plasma Utuh P1 (1jam) 71,50 a ±3,94 83,00 a ±6,16 2,50 a ±0,55 79.50 a ±8.50 P2 (3jam) 66,00 b ±2,60 75,17 b ±4,70 3,33 a ±1,18 72.67 ab ±5,28 P3 (4jam) 60,33 c ±2,4 69,00 c ±3,40 6,50 b ±2,88 65.67 b ±3,78 Superskrip berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05).
sehingga tidak terpapar saat proses fiksasi. Hasil ini  lebih  tinggi  dari  kambing  Saanen  (Kusuma, 2019).  Hasil  ini  juga  lebih  tinggi  dari  viabilitas penelitian  Kambing  Sapera  umur  2  tahun (Masyitoh,  2018).  Viabilitas  spermatozoa  pada penelitian  ini  menandakan  baik  karna  memiliki jumlah  spermatozoa  yang  hidup  tinggi  dan spermatozoa  mati  kurang  dari  15%  (Bintara, 2011).
Presentasi  Abnormalitas  pada  penelitian  ini adalah 2-5%. Hasil ini lebih rendah dari penelitian kambing Sapera Kusuma (2019) dengan prensatsi 4,2%  dan  Saanen  rata-rata  4,3%  abnormalitas spermatozoa kambing Sapera pada penelitian ini masih  sesuai  standar  abnormalitas  kurang  dari 20%  masih  bisa  untuk  dilakukan  perlakuan (Susilowati et al ., 2010).
Hasil analisis statistik Anova One Way dan dilanjutkan Uji Duncan pengaruh waktu ekuilibrasi terhadap presentasi motilitas spermatozoa  kambing  Sapera  setelah  diberi perlakuan menunujukan perbedaan nyata (p<0,05) antara,  waktu  ekuilibrasi  1 jam,  3 jam, dan  4  jam  (Tabel  2).  Waktu  ekuilibrasi  adalah diamana  waktu  yang  dibutuhkan  spermatozoa untuk  beradaptasi  dengan  pengencer  agar  saat pembekuan kematian spermatozoa dapat dicegah (Apriyanti, 2012).
Penelitian  ini  yang  menunjukan  motilitas progresif  spermatozoa  waktu  ekuilibrasi  1  jam menunjukan  motilitas  yang  baik,  dan  ini  sesuai dengan  penelitian  Suryani  (2012)  pada  waktu  1 jam  pada  Domba  Merino,  dan  pada  kambing parda  alpina  (Penitente-Filho et  al., 2017),  dan kambing Jamnapari pada waktu ekuilibrasi 1 jam menghasilkan  motilitas  sebesar  83,24%  (Ranjan et al., 2015).
Penelitian  ini  menunjukan  bahwa  sudah tercapainya  keseimbangan  gliserol  untuk  masuk kedalam  membran  plasma  spermatozoa  dan mengikat  substrat  yang  terdapat  dalam  sel spermatozoa  hanya  mengandung  nutrisi  dan cadangan  energi  yang  minimal  namun  masih sanggup digunakan sampai pencairan spermatozoa  kembali.  Urutan  kedua  dengan motilitas progresif dengan nilai rata-rata sebanyak 66,00% dengan waktu ekuilibrasi 3 jam menunjukan bahwa menurunya motilitas dikarena sudah  terbentuknya  asam  laktat  sehingga menghasilkan  motilitas  progresif  yang  lebih rendah  (Suryani,  2012).  Motilitas  yang  tinggi pada  spermatozoa  juga  membutuhkan  energi yang  tinggi,  yang  dihasilkan  dari  metabolisme mitokondria  sehingga  menyebabkan  tingginya tingkat reactive  oxygen  spesies (ROS)  sehingga
viabilitas spermatozoa akan menurun (Susilowati et al., 2015).
Hasil analisis statistik Anova One Way dan dilanjutkan Uji Duncan pengaruh waktu ekuilibrasi terhadap presentasi viabilitas spermatozoa  kambing  Sapera  setelah  diberi perlakuan menunjukan perbedaan nyata (p<0,05) antara, waktu ekuilibrasi 1 jam (P1), 3 jam (P2), dan  4  jam  (P3).  Hasil  dari  penelitian  ini  yang menunjukan  viabilitas  spermatozoa  tertinggi terdapat  pada  waktu  ekuilibrasi  1  jam.  Waktu ekuilibrasi 1 jam pada penelitian ini sudah terjadi keseimbangan  elektrolit  dengan  gliserol  secara baik  dan  merata  di  dalam  sel  spermatozoa sehingga  kerusakan  selama  proses  pembekuan dapat  diminimalisir.  Membran  plasma  pada  saat kondisi seperti ini menunjukan kestabilan fungsi yang  baik  sehingga  tidak mudah  di  tembus  oleh zat  warna  pada  saat  uji  viabilitas  spermatozoa (Anggarsari, 2015). Menurut Susilowati., (2019) Penurunan  suhu  dan  durasi  penyimpanan menyebabkan  penurunan  viabilitas  spermatozoa dikarenakan  perubahan  biokimia  karena cool shock , ganguan osmotik dan kerusakan membran. Pengaruh  lama  waktu  ekuilibrasi  terhadap membran  plasma  utuh  spermatozoa  kambing Sapera  setelah  diberi  perlakuan  menunjukan perbedaan nyata (p<0,05) antara, waktu ekuilibrasi 1 jam (P1), 3 jam (P2), dan 4 jam (P3). Seperti  halnya  pada  presentasi  (viabilitas),  pada penelitian  ini  menunjukan  bahwa  keutuhan membran plasma utuh tertinggi didapatkan pada waktu ekuilibrasi 1 jam, urutan kedua pada waktu 3  jam,  dan  urutan  terendah  pada  waktu  4  jam. Keutuhan  membran  plasma  memiliki  korelasi dengan viabilitas spermatozoa, apabila membran plasma  telah  mengalami  kerusakan,  maka metabolisme spermatozoa akan terganggu sehingga  menimbulkan  spermatozoa  kehilangan motilitasnya  dan  menyebabkan  kematian  (Rizal dan  Herdis,  2008).  Menurut  Susilowati.,(2019) ROS  memiliki  peran  yang  penting  dalam fosforilasi tyrosine, oksidasi sterol, dan penembusan  kolesterol  dari  membran  plasma dalam  proses  kapasitasi  spermatozoa  dalam proses  fertilisasi  dan  lemak  dalam  membran plasma spermatozoa kambing memiliki konsentrasi  asam  lemak  tak  jenuh  yang  lebih
tinggi  di  bandingkan  ruminansia  lainya.  Karena itu,  dalam  proses  pendinginan,  lemak  dari membran plasma dapat rusak, yang mengakibatkan peroksidasi lipid.
Pengaruh  lama  waktu  ekuilibrasi  terhadap abnormalitas  spermatozoa  kambing  Sapera setelah  diberi  perlakuan  menunjukan  bahwa waktu  ekuilibrasi  1  jam  (P1)  menunjukan perbedaan nyata dengan waktu 4 jam (P3) waktu 3  jam  (P2)  juga  menunjukan  perbedaan  nyata pada  waktu  4  jam  (P3),  sedangkan  waktu ekuilibrasi 3 jam (P2) tidak berbeda nyata dengan waktu  1  jam  (P1).  Hasil  penelitian  abnormalitas spermatozoa  terendah  terdapat  pada  perlakuan ekuilibrasi selama 1 jam dan rata-rata abnormalitas  tertinggi  terdapat  pada  waktu ekuilibrasi 4 jam. Perbedaan presentasi abnormalitas spermatozoa  pada  setiap  perlakuan dikarenakan dalam larutan pengencer keseimbangan  intraseluler  dan  ekstraseluler dengan  spermatozoa  tidak  stabil  karena  adanya penurunan suhu pada pada saat ekuilibrasi (Tuhu et al., 2013).
Perbedaan  tidak  nyata  pada  data  diatas diduga karena perbedaan waktu ekuilibrasi yang lumayan  besar,  sehingga  perbedaan  rata-rata abnormalitas  juga  sangat  besar  dan  juga  bisa disebabkan  suhu  pada  saat  ekuilibrasi.  menurut Kartina,  (2014)  menyatakan  bahwa  rataan abnormalitas  pada  kambing  Peranakan  Etawah (PE) juga  tidak  berbeda  nyata. Menurut  Solihati et  al .  (2018)  abnormalitas  spermatozoa  terjadi karena adanya suhu  dingin  dan  tekanan  osmotik yang tidak seimbang akibat dari proses metabolik yang  terus  menerus  selama  waktu  penyimpanan pada suhu 5 o C.

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  efek perbedaan waktu ekuilibrasi sehingga menghasilkan  perbedaan  kualitas  spermatozoa kambing Sapera dimana presentasi motilitas dan viabilitas  dan  membran  plasma  utuh  yang tertinggi  terdapat  pada  waktu  ekuilibrasi  1  jam, dan  presentasi  abnormalitas  yang  paling  rendah terdapat pada waktu ekuilibrasi 1 jam.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Bumi  Kesilir  Farm Banyuwangi  yang  telah  memfasilitasi  peneliti dalam penyedian kambing Sapera.

## DAFTAR PUSTAKA
Aerens, C. D., Ihsan, M. N., & Isnaini, N. (2012). Perbedaan Kuantitatif dean Kualitatif Semen Segar  pada  Berbagai  Bangsa  Sapi  Potong.
Malang. Hal: 1-10.
Anggarsari,  L.  Y.  (2015).  Pengaruh  Waktu Equilibrasi terhadap Motilitas dan Viabilitas Spermatozoa  Kambing  Boer After  Thawing dalam  Pengencer  yang  Mengandung  Lisitin Nabati  [Skripsi].  Fakultas  Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Hal: 9-14.
Afrilia,  K.  N.  (2016).  Pengaruh  Penambahan  L- Arginin dalam Pengencer Susu Skim Kuning Telur  Terhadap  Motilitas  Dan  Viabilitas Spermatozoa  Domba  Merino  Post  Thawing [Skripsi].  Fakultas  Kedokteran  Hewan
Universitas Airlangga. Hal: 2-7.
Apriyanti, C. (2012). Pengaruh Waktu Ekuilibarsi
Terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Pesisir Pre dan Post Thawing [Tesis]. Program Studi Ilmu Ternak Universitas Andalas. Hal: 8-16.
Batubara,  A.,  Nasution,  S.,  Subandriyo,  I.,
Inounu,  B.,  Tiesnamurti,  &  Anggraeni,  A. (2016).  Kambing  Peranakan  Etawah  (PE). IAARD Press. Jakarta. Hal: 33.
Bearden,  H.  J.,  &  Fuquay,  J.  W.  (2000). Neuroendocrine  regulators  of  reproduction. Applied Animal Reproduction , 5, 35-53.
Bintara, S. (2011). Rasio spermatozoa X: Y dan kualitas  sperma  pada  kambing  kacang  dan peranakan ettawa. Sains Peternakan: Jurnal Penelitian Ilmu Peternakan , 9(2), 65-71
Dethan,  A.  A.  (2010).  Kualitas  dan  kuantitas sperma  kambing  Bligon  jantan  yang  diberi
pakan  rumput  gajah  dengan  suplementasi tepung darah. [Tesis]. Program Pascasarjana, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Hal: 21.
Hafez, E. S. E., & Hafez, B. (2000). Anatomy of male  reproduction.  In:  B.  Hafez  &  E.S.E. Hafez (eds.) Reproduction In Farm Animal. 7th  ed.  Lippincott  &  Wilkins,  Philadelphia. Pp: 3-12.
Kartina.  (2014).  Pengaruh  Lama  Ekuilibrasi
Terhadap Daya Hidup Spermatozoa
Kambing Peranakan Etawah (PE). [Skripsi]. Universitas Hasanudin. Makassar. Hal: 16.
Kusuma,  W.  A.  (2019).  Kajian  morfometri spermatozoa  kambing  saanen  dan  kambing sapera.  [Skripsi].  Universitas  Airlangga.
Hal: 17.
Krisnawati.  (2002).  Kualitas  dan  Kuantitas Semen  Segar  Kambing  Saanen  yang Dikoleksi Dari Berbagai Ejakulat. [Skripsi]. Institut Pertaninan Bogor. Bogor. Hal: 5.
Leboeuf,  B.,  Restall,  B.,  &  Salamon,  S.  (2000).
Production  and  storage  of  goat  semen  for artificial insemination. Animal Reproduction Science , 62(1-3), 113-141.
Masyitoh,  H.,  Suprayogi,  T.  W.,  Praja,  R.  N., Srianto, P., Madyawati, S. P., & Saputro, A. L. (2018). Persentase Motilitas dan
Viabilitas  Spermatozoa  Kambing  Sapera dalam  Pengencer  Tris  Kuning  Telur  dan Susu Skim Kuning Telur Before
Freezing. Jurnal Medik Veteriner , 1(3), 105- 112.
Muzakkir, D., Wahyuni, S., Akmal, M., & Sabri,
M.  (2017).  Pengaruh  Lama  Ekuilibrasi terhadap  Kualitas  Spermatozoa  Sapi  Aceh Setelah Pembekuan
Menggunakan
Pengencer  Andromed ® . Jurnal  Ilmiah
Peternakan , 5(2), 115-128.
Matshaba,  B.  (2010).  Characterization  and cryopreservation of South Africa unimproved indigenous goat semen.
Dissertation. Pp: 31.
Ningsih, Z. (2007). Proporsi spermatozoa x dan y kambing peranakan etawa dengan konsentrasi putih telur dan lama inkubasi  (Doctoral  dissertation,  Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim). Hal:
4.
Praharani, L., Adiati, U., & Budiarsana, I. G. M.
(2013).  Penampilan  pertumbuhan  anak kambing f-1 anglo nubian peranakan etawah,
f-2 sapera, dan peranakan etawah.
In Seminar  Nasional  Teknologi  Peternakan dan Veteriner , pp: 301-309.
Pratiwi,  S.  K.  (2014).  Identifikasi  Morfometri Spermatozoa  Kambing  Gembrong  Dan Domba Garut. [Skripsi]. Universitas Airlangga. Hal: 10.
Penitente-Filho, J. M., Dias, J. C. O., Oliveira, F.
A.,  Silveira,  C.  O.,  &  Torres,  C.  A.  A.
(2017).  Correlation  between  sperm  motility and hypoosmotic swelling test on cryopreserved goat semen. Magistra , 27(3/4), 468-473.
Ranjan,  R.,  Goel,  A.  K.,  Ramachandran,  N., Kharche, S. D., & Jindal, S. K. (2015). Effect of egg yolk levels and equilibration periods on freezability of Jamunapari buck semen. Indian Journal of Small
Ruminants , 21(1), 32-36.
Rizal,  M.,  &  Herdis.  (2005).  Daya  Hidup Spermatozoa Epididimis Domba Garut yang Dikriopreservasi  Menggunakan  Modifikasi Pengunakan  Pengencer  Tris. Hayati ,  12(2), 61-66.
Solihati, N., Rasad, S. D., Setiawan, R., Foziah, E.  N.,  &  Wigiyanti,  E.  T.  2018.  Semen Quality  of  Post-Thawed  Local  Ram’s  in Tris-Egg  Yolk  Extender  with  Different
Glutathione  Level.  In IOP  Conference Series:  Earth  and  Environmental  Science, 119(1), 012034.
Suryani,  E.  F.  P.  (2012).  Pengaruh  Waktu Equilibrasi  Terhadap  Motilitas,  Viabilitas dan Integritas Membran Spermatozoa
Domba  Merino  dalam  Pengencer  yang Mengandung  Lesitin  Nabati.  [Skripsi]. Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Airlangga. Surabaya. Hal: 11.
Susilowati,  S.,  Hardijanto,  Suprayogi,  T.  W.,
Sardjito,  T.,  &  Hernawati,  T.  (2010). Penuntun  Praktikum  Insemnasi  Buatan. Fakultas Kedokteran Hewan.
Susilowati, S., Triana, I. N., Wurlina, W., Arimbi, A.,  Srianto,  P.,  &  Mustofa,  I.  (2019).
Addition of L-arginine in skim milk extender maintains  goat  spermatozoa  quality  in chilled temperature for five days. Veterinary World , 12(11).
Susilowati, S., Triana, I. N., & Malik, A. (2015). The  effects  of  insulin-like  growth  factor  I (IGF-I)  complex  from  seminal  plasma  on capacitation,  membrane  integrity  and  DNA fragmentation  in  goat  spermatozoa. Asian Pacific Journal of Reproduction , 4(3), 208- 211.
Susilawati,  T.  (2011).  Tingkat  keberhasilan inseminasi  buatan  dengan  kualitas  dan deposisi  semen  yang  berbeda  pada  sapi Peranakan  Ongole. Journal  of  Tropical Animal Production , 12(2), 15-24.
Syawal,  M.  (2010).  Karakteristik  Morfologi
Produksi  Kambing  Boer,  Kacang  dan Persilangan Pada Umur 0-3 Bulan
(Prasapih). Seminar Nasional Teknologi dan Veteriner. pp: 617-619.
Tuhu,  A.  D.,  Ondho,  Y.  S.,  &  Samsudewa,  D.
(2013).  Effect  of  different  water  jacket release  time  in  equilibration  process  on quality  semen  of  java  cattle  at  before
freezing and post thawing. Animal Agricultural Journal , 2(1), 466- 477.
Umami, P. L. M., & Bintara, S. (2015). Pengaruh Aras  Kuning  Kelur  Itik  Alabio  (Anas
Platyrhynchos)  Dalam  Pengencer  Tris Fruktosa Terhadap Motilitas, Viabilitas, Dan Abnormalitas  Sperma  Kambing  Bligon Sebelum Dan Sesudah Kriopreservasi. Buletin  Peternakan ,  39(3), 142-148.
Wibowo,  P.  A.,  Astuti,  T.  Y.,  &  Soediarto,  P.
(2013). Study of Total Solid (Ts) And Solid Non Fat (Snf) Of Ettawa Cross Goat Milk In One  Lactation  Period). Jurnal  Ilmiah Peternakan , 1(1), 214- 221.
Zulyazaini,  D.,  Wahyuni,  S.,  Akmal,  M.,  & Abdullah,  M.  A.  N.  (2016).  Karakteristik Semen  dan  Komposisi  Plasma  Seminalis Sapi  Aceh  yang  Dipelihara  Di  BIBD  Saree Aceh  Besar.  Fakultas  Kedokteran  Hewa Universitas  Syiah  Kuala. Agripet ,  16(2),
121-127 .
***