## UJI AKTIVITAS ANTIDIABETES KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN ALPUKAT DAN RIMPANG TEMULAWAK PADA TIKUS DM TIPE-2 YANG MENGALAMI RESISTENSI INSULIN
Mamik Dwi Anggraini 1) , Yance Anas 2) , Sumantri )
1) Program Studi S1, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Universitas Wahid Hasyim
3) Fakultas Farmasi ,Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

## INTISARI
Daun  alpukat  dan  rimpang  temulawak  terbukti  mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid, triterpenoid,  dan  kurkumin,  dimana  senyawa  tersebut  berkhasiat  sebagai  antidiabetes.  Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan aktivitas antidiabetes kombinasi ekstrak etanol daun alpukat dan rimpang temulawak pada tikus DM tipe-2 yang mengalami resistensi insulin.
Penelitian ini menggunakan metode pre-test and post test control group design . Hewan uji 30  ekor  dibagi  menjadi  dua  kelompok  perlakuan.  Lima  ekor  tikus  kelompok  kontrol  diberi aquabides  1,25  mL/KgBB/hari  dan  25  ekor  tikus  dibagi  menjadi  lima  kelompok  dan  diberi insulin1,8  IU/KgBB/hari  selama  14  hari.  Kelompok  I  kontroldiabetes  CMC-Na  0,5%  12,5 mL/KgBB/hari,  kelompok  II  kontrol  positif  metformin  150  mg/KgBB/hari,  kelompok  III  ekstrak daun  alpukat,  kelompok  IV  ekstrak  rimpang  temulawak,  dan  kelompok  V  kombinasi  ekstrak. Kelompok III-V diberikan dosis yang sama, yaitu 200 mg/KgBB/hari selama 14 hari. Pemeriksaan efek  antidiabetes  dilakukan  dengan  membandingkan  nilai  GDP  tikus  sebelum  dan  setelah perlakuan.Data perbedaan GDP tikus dianalisis menggunakan ujiT-berpasangan dan uji Wilxocon, serta  data  perbandingan  penurunan  GDP  diuji  menggunakan  uji  Kruskall  Wallis  dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa adanya efek antidiabetes kombinasi ekstrak pada tikus DM  tipe-2  yang  mengalami  resistensi  insulin  sebesar  22,03%.  Efek  penurunan  kadar  GDP kombinasi  ekstrak  perbandingan  dosis  1:1  tidak  berbeda  bermakna  dengan  ekstrak  tunggal rimpang temulawak 200 mg/KgBB/hari.
Kata  kunci :  Daun  alpukat,  Rimpang  temulawak,  Uji  efek  antidiabetes,  Perbandingan  kombinasi kedua ekstrak dengan ekstrak tunggal.

## ABSTRACT
Avocado’s  leaves  and  Curcuma  xanthorrizarhizoma  contain  compounds  of  flavonoids, alcaloids,triterpenoids  and  curcumin,  where  the  compounds  are  effective  as  antidiabetic  agents. This  study  aims  to  prove  the  effect  of  antidiabetic  combination  of  extracts  on  insulin  resistence type-2 diabetic rats then to compare it with a single extract.
This  research  used  pre-test  and  post-test  control  group  design.  The  30  test  animals  were divided  into  two  treatment  groups.  Five  control  groups  of  rats  were  they  given  1,25  mL aquabides/KgBW/day,  and  25  rats  were  divided  into  five  groups  and  given  were  given  1,8  IU insulin/KgBW/day for 14 days. Group I was control of 12,5 mL CMC-Na/KgBW/day 0,5%, group II was positive control of 150 mg metformin/KgBW/day, group III was avocado’s leaves extract, group IV was extract of Curcuma xanthorriza rhizoma, and group V was combination extract. The extracts of group III-V were given the same dose, that was given 200 mg/KgBW/day for 14 days. The meansurement of antidiabetic effect was done by comparing the GDP value of rats before and after treatment. The GDP concentrations of rats were analyzed using T-paired testand Wilxocon test, whereas the comparative data of percentage GDP decrease was tested using Kruskall Wallis test then followed by Mann-Whitney test.
The  results  showed  that  the  effect  of  antidiabetic  combination  of  extract  in  insulin resistence  type-2  diabetic  rats  as  the  percentage  GDP  decrease  was  22.03%.  The  effect  of decreasing GDP concentration at the ratio of 1:1 extract did not differ significantly with the single extract of 200 mg Curcuma xanthorrizarhizoma/KgBW/day.
Keywords: Avocado’s leaves, Curcuma xanthorriza rhizoma, Antidiabetic effect test, Comparison combination of both extracts with single extract.

## PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  merupakan  suatu kumpulan  gejala  klinis  (sindromaklinis) yang  timbul  karena  adanya  peningkatan kadar glukosa darah kronis akibat kekurangan  insulin,  baik  relatif  maupun absolut  (Katzung,  2002). World  Health Organization (WHO) memprediksi kenaikan jumlah  pasien  DM  di  Indonesia,  dari    8,4 juta  pada  tahun  2000  menjadi  sekitar  21,3 juta pada tahun 2030. (Perkeni, 2011).
Indonesia  memiliki  banyak  spesies tumbuhan  berkhasiat,  diantaranya  adalah daun  alpukat  dan  rimpang  temulawak.Daun alpukat sudah dikenal dalam
duniapengobatan  memiliki  banyak  manfaat, baik  secara  empiris  maupun  ilmiah.  Salah satu  khasiat  daun  alpukat  yaitu  dapat digunakan untuk menurunkan kadar glukosa darah (Kristinawati, 2010).
Berbagai  macam  hasil  penelitian mengenai  daun  alpukat  dan  rimpang temulawak  telah  banyak  diteliti  oleh kalangan  masyarakat.  Salah  satu  yang meneliti  tentang  daun  alpukat  adalah  Antia dkk., (2005). Hasil penelitian yang dilakukan oleh Antia dkk., (2005) menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  daun alpukat (100-200) mg/KgBB mampu menurunkan kadar glukosa darah tikus putih jantan  galur  Wistar  yang  diinduksi  aloksan monohidrat.  Begitu  juga  dengan  Cahyani, (2014)  yang  telah  berhasil  meneliti  rimpang temulawak yang berkhasiat sebagai antidiabetes.  Dimana  dalam  penelitiannya, ekstrak  etanol  rimpang  temulawak  17,5 mg/KgBB ternyata efektif dalam
menurunkan kadar  glukosa darah pada tikus yang  diinduksi  aloksan  hingga  ke  dalam rentang  normal  dan  sama  efektifnya  dengan metformin.
Ditinjau  dari  data  praklinis  tentang khasiat dari masing-masing tanaman, keduanya  dapat  dikombinasikan  sebagai suatu  sediaan  obat  herbal  untuk  pengobatan alternatif  bagi  penderita  diabetes  mellitus. Kombinasi  ini  dilakukan  karena  untuk meningkatkan  efektifitas  dari  pemakaian herbal,  dimana  dalam  dosis  yang  kecil mampu  menurunkan  kadar  glukosa  darah tikus  dibandingkan  penggunaannya  dalam dosis  tunggal  dan  efeknya  setara  dengan penggunaan obat sintetik. Selain itu, dengan dilakukannya  kombinasi  herbal,  maka  efek terapi  lebih  besar  sekaligus  relatif  aman
karena  100%  menggunakan  bahan  alami tanpa penambahan bahan-bahan sintetik.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan  tanaman  yang  digunakan  pada penelitian ini yaitu daun alpukat diambil dari Jl.  Amposari  Rt  02  Rw  03  Kel.  Kedung Mundu,  Kec.  Tembalang,  Jawa  Tengah. Rimpang  temulawak  didapat  dari  desa Wonolopo,  Roworejo  Rt  03  Rw  08,  Kec. Mijen, Semarang, Jawa Tengah. Bahankimia yang  digunakan  adalah  metformin  (PT. Phapros),  aquabidest  (PT.  Ikapharmindo Putramas),  insulin  kerja  panjang  Lantus® 100 IU/mL (PT. Aventis Pharma), CMC-Na 0,5%  (PT.  Phapros),  cairan  penyari  yang digunakan adalah etanol 96% (Bratacem).
Alat  untuk  pembuatan  sediaan  uji: oven  (PT.  Autonics),  timbangan  elektrik untuk  simplisia  (PT.  Henner  R),  blender (PT.  Maspion), moisture  balance (PT. Ohaus),  seperangkat  alat  maserasi,  kertas saring, vacuum  pump , rotary  evaporator (PT.  Heidolph  germany),  botol  tempat  hasil ekstrak, dan alat-alat gelas (pirex).
Alat yang digunakan untuk perlakuan dan  pengambilan  darah:  spuit  injeksi  dan jarum  suntik  oral,  timbangan  elektrik  untuk ekstrak  (PT.  Acis),  timbangan  berat  badan tikus (PT. Daema), seperangkat alat pengambilan  darah  tikus.Alat  untuk  analisa kadar  glukosa  darah:  alat  pengukur  glukosa darah Easy  Touch®GCU dan  strip  ukur glukosa  darah  ( Easy  Touch® ).Seperangkat Notebook  dengan software MS.  Excel  dan SPSS versi 16.00 untuk analisa data.
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah tikus  putih  galur  Wistar  yang  berumur  3-4 bulan  dengan  bobot  (200-250  gram).Tikus diadaptasikan  selama  ±1  minggu  dalam kondisi  laboratorium,  diberi  pakan  standart BR2 (20g/tikus/hari) dan air ad libitum .

## Tahapan Penelitian
Identifikasi Tanaman
Daun alpukat dan rimpang temulawak  diidentifikasi  di  Fakultas  MIPA Universitas Diponegoro Semarang (UNDIP).

## Pembuatan Ekstrak Daun alpukat
Proses  pembuatan  ekstrak  daun alpukat  mengacu  kepada  proses  pembuatan ekstrak secara umum yang ada dalam Voigt, (1995).  Daun  alpukat  segar  yang  telah
disortasi  dicuci  bersih  menggunakan  air bersih  mengalir.  Daun  alpukat  sebanyak  3 kg  yang  sudah  bersih  kemudian  diangin- anginkan  dan  dikeringkan  menggunakan oven  dengan  suhu  50°C  (kadar  air  3%). Daun  alpukat  yang  sudah  kering  dihaluskan menggunakan  blender,  kemudian  diayak menggunakan ayakan 40 Mesh. Serbuk daun alpukat diuji kadar airnya menggunakan alat moisture balance .
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan metode  maserasi.  Serbuk  simplisia  daun alpukat ditimbang sebanyak 900
gram.Maserasi  dilakukan  dalam  dua  tahap.
Tahap  pertama  serbuk  simplisia  daun alpukat direndam dalam toples kaca menggunakan  6,75  liter  etanol  96%  (1:7).
Setelah tiga hari, rendaman simplisia diperas untuk  memisahkan  filtrat  dan  ampasnya, sehingga didapatkan maserat satu.
Kemudian,  dilakukan  maserasi  tahap  kedua (remaserasi) menggunakan sisa cairan penyari  sebanyak  2,25  liter  (1:3).  Setelah dua hari, filtrat dipisahkan dari ampasnya.Hasil  maserat  tahap  satu  dan  dua dicampur, kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator suhu 50ᵒC untuk mendapatkan ekstrak kental.

## Rimpang temulawak
Proses  pembuatan  ekstrak  rimpang temulawak mengacu kepada proses
pembuatan  ekstrak  secara  umum  yang  ada dalam  Voigt,  (1995).  Rimpang  temulawak segar  yang  telah  disortasi  dicuci  bersih menggunakan  air  bersih  mengalir  kemudian diangin-anginkan.Rimpangtemulawak  yang sudah  bersih  sebanyak  6  kg  kemudian  diiris tipis-tipis  dengan  ketebalan  ±1  cm  dan dikeringkan  menggunakan  oven  dengan suhu  40˚C  (kadar  air  6,8%).  Rimpang temulawak  yang  sudah  kering  dihaluskan menggunakan  blender,  kemudian  diayak menggunakan  ayakan  40  Mesh.  Serbuk rimpang  temulawak  diuji  kadar  airnya menggunakan alat moisture balance . Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan dengan  metode  maserasi.  Serbuk  simplisia rimpang  temulawak  ditimbang  sebanyak 1200  gram.Maserasi  dilakukan  dalam  dua tahap.Tahap pertama serbuk simplisia rimpang  temulawak  direndam  dalam  toples kaca  menggunakan  9  liter  etanol  96% (1:7).Setelah  tiga  hari,  rendaman  simplisia diperas  untuk  memisahkan  filtrat  dan
ampasnya,  sehingga  didapatkan  maserat satu.Kemudian,  dilakukan  maserasi  tahap kedua (remaserasi) menggunakan sisa cairan penyari  sebanyak  3  liter  (1:3).Setelah  dua hari,  filtrat  dipisahkan  dari  ampasnya.Hasil maserat  tahap  satu  dan  dua  dicampur, kemudian  diuapkan  menggunakan rotary evaporator suhu  50ᵒC  untuk  mendapatkan ekstrak kental.

## Pembuatan Sediaan Uji CMC-Na 0,5%
CMC-Na  0,5%  dibuat  dengan  cara menimbang  sebanyak  2,5  gram  serbuk CMC-Na,  kemudian  dilarutkan  dalam  500 mL  air  hangat  menggunakan  magnetik strirer. Dosis CMC-Na 0,5% yang diberikan pada tikus kelompok kontrol diabetes adalah 12,5 mL/KgBB/hari.

## Ekstrak  Etanol  Daun  Alpukat  dan Rimpang Temulawak
Dosis sediaan uji dalam penelitian ini adalah  sama,  yaitu  200  mg/KgBB/hari,  baik ekstrak  tunggal  maupun  kombinasi.  Sediaan uji  dibuat  baru  setiap  hari  sebanyak  25 mL.Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  alpukat dan  rimpang  temulawak  dilakukan  dengan cara,  menimbang  0,4  gram  ekstrak  etanol daun  alpukat,  0,4  gram  ekstrak  etanol rimpang temulawak, dan 0,4 gram kombinasi  EED  alpukat  dan  rimpang temulawak  (perbandingan  1:1).  Masing- masing  ekstrak  dimasukkan  dalam  mortir yang  berbeda  kemudian  masing-masing disuspensikan  dengan  12,5  mL  CMC-Na 0,5% sedikit demi sedikit dan diaduk hingga homogen. Masing-masing suspensi dipindahkan  ke  dalam  labu  takar  25  mL yang  berbeda  dan  ditambahkan  CMC-Na 0,5% hingga tanda batas.

## Metformin HCl
Dosis  metformin  yang  digunakan untuk  kelompok  kontrol  positif  adalah  150 mg/KgBB/hari.Dosis  ini  merupakan  hasil konversi penggunaan metformin dari manusia  terhadap  tikus.  Pembuatan  stok metformin  12  mg/mL  dilakukan  dengan menimbang  sebanyak  600,0  mg  metformin, kemudian digerus dalam mortir dan ditambahkan  25  mL  CMC-Na  0,5%,  diaduk hingga homogen. Suspensi metformin dimasukkan dalam
labu takar 50 mL.

## Pembuatan Tikus DM Tipe-2 yang Mengalami Resistensi Insulin
Menurut  penelitian  Fitriana  (2012), tikus  DM  tipe-2  yang  mengalami  resistensi insulin  dapat  dibuat  dengan  cara  pemejanan insulin eksogen 1,8 IU/KgBB/hari selama 14 hari.  Penelitian  sebelumnya  menyimpulkan bahwa  kadar  gula  darah  puasa  tikus  galur Wistar  normal  adalah  71,17±23,60  mg/dL, untuk  menghindari range terlalu lebar  maka tikus  dikatakan  mengalami  DM  tipe-2  bila kadar  gula  darah  puasa  >85  mg/dL  (Wang dkk.,  2010).  Sebanyak  30  ekor  tikus  jantan galur  Wistar  dibagi  menjadi  dua  kelompok perlakuan.  Lima  ekor  tikus  kelompok kontrol  normal  diberi  perlakuan  aquabidest (s.c) 1,25 mL/KgBB/hari selama 14 hari dan 25  ekor  tikus  diberi  perlakuan  dengan insulin  eksogen  1,8  IU/KgBB/hari  (s.c) selama 14 hari. Setelah dilakukan pemejanan selama  14  hari,  tikus  dibiarkan  selama  tiga hari  dan  selanjutnya  dilakukan  pengukuran kadar  GDP.  Tikus  yang  diinduksi  insulin eksogen  dikatakan  mengalami  DM  tipe-2 bila kadar GDP pada hari ke-17 > 85 mg/dL.

## Uji Aktivitas Antidiabetes
Sebanyak  25  ekor  tikus  DM  tipe-2 yang memiliki kadar GDP >85 mg/dL dibagi menjadi  lima  kelompok  perlakuan  yaitu, kelompok kontrol diabetes (perlakuan CMC- Na  0,5%  12,5  mL/KgBB/hari),  kelompok kontrol  positif  (perlakuan  metformin  150 mg/KgBB/hari),  kelompok  ekstrak  etanol daun  alpukat  200  mg/KgBB/hari,  kelompok ekstrak  etanol  rimpang  temulawak  200 mg/KgBB/hari,  dan  kelompok  kombinasi EED  alpukat  dan  rimpang  temulawak  200 mg/KgBB/hari.  Sebelum  perlakuan  sediaan uji,  terlebih  dahulu  dilakukan  pengukuran kadar  GDP  (±18  jam  puasa).  Sediaan  uji diberikan  pada  tikus  DM  tipe-2  masing- masing  kelompok  perlakuan  selama  14  hari secara  peroral.  Setelah  akhir  pemberian sediaan  uji,  dilakukan  pengukuran    kadar GDP untuk melihat adanya efek antidiabetes. Efek antidiabetes dilihat dengan  cara  membandingkan  kadar  GDP sebelum dan sesudah pemberian sediaan uji.

## Pengukuran Kadar Glukosa Darah
Tikus  yang  akan  diukur  kadar glukosanya  dipuasakan  ±18  jam,  setelah  itu dicukur  bulu  pada  ekor  tikus  agar  terlihat
jelas  pembuluh  darah  venanya.  Ekor  tikus kemudian diusap dengan kapas alkohol 70%, kemudian  digores  secara  melintang  dengan scalpel hingga  terbentuk  luka  kecil.  Darah yang  digunakan  adalah  darah  pada  tetesan ke-4  (Anas  dkk.,  2015).  Darah  diteteskan pada  ujung  strip  yang  berwarna  hitam. Setelah  ±10  detik,  hasil  pembacaan  kadar glukosa  darah  akan  terlihat  dan  ditampilkan pada layar glukometer.

## Analisis Data
Data kadar GDP induksi DM tipe-2 pada tikus jantan galur Wistar yang mengalami resistensi insulin
Data  GDP  perlakuan  insulin  1,8 IU/KgBB/hari  selama  14  hari  diuji  dahulu dengan  uji  normalitas  dan  uji  homogenitas varian.  Analisa  normalitas  menggunakan Shapiro-Wilk dan data dikatakan normal bila nilai  signifikasi  >0,05,  sedangkan  analisis homogenitas  menggunakan Homogeneity  of VarianceTest dan  varian  data  dikatakan homogen  bila  nilai  signifikasi  >0,05.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  data  tidak terdistribusi normal dan data tidak homogen, sehingga  analisa  data  dilanjutkan  dengan metode statistik non parametrik, yaitu Mann- Whitney.  Adanya  perbedaan  kadar  GDP ditentukan  dari  nilai  signifikasi  <0,05 dengan taraf kepercayaan 95%.
Data Kadar GDP Uji Aktivitas

## Antidiabetes
Data  yang diperoleh dari  pengujian adalah  data  kadar  GDP  sebelum  perlakuan (hari ke-0) dan sesudah perlakuan setelah 14 hari  (hari  ke-15).  Sebelum  dilakukan  uji beda  dua  variabel  berpasangan,  data  diuji terlebih  dahulu  dengan  uji  normalitas  dan homogenitas  varian.  Hasil  uji  normalitas menggunakan  metode      shapiro  wilk menunjukkan  ada  beberapa  data  (data ekstrak etanol daun alpukat 200
mg/KgBB/hari)  yang  tidak  normal  dan  uji homogenitas  varian  menunjukkan  bahwa varian  homogen  (signifikasi  >0,05).  Data selanjutnya  dianalisa  dengan  menggunakan metode
statistik non
parametrik
menggunakan uji Wilcoxon.Taraf kepercayaan  yang  digunakan  adalah  95%.
Adanya perbedaan bermakna ditandai dengan nilai
signifikasi
<0,05.
Data  perbandingan  efek  antidiabetes kombinasi EED  alpukat dan rimpang temulawak  dengan  masing-masing ekstrak  tunggalnya  pada  tikus  DM tipe-2 yang mengalami resistensi insulin
Data yang dipakai untuk perbandingan  efek  antidiabetes  kombinasi
EED  alpukat  dan  rimpang  temulawak dengan  masing-masing  ekstrak  tunggalnya adalah  penurunan  kadar  GDP  dari  ketiga sediaan uji. Sebelum dilakukan uji beda tiga variabel, data penurunan kadar GDP masing- masing  sediaan  uji,  diuji  terlebih  dahulu dengan  uji  normalitas  dan  uji  homogenitas varian.  Hasil  uji  normalitas  dan  uji homogenitas  menunjukkan  bahwa  datanya homogen  tetapi  tidak  terdistribusi  normal, sehingga dilanjutkan dengan metode statistik non parametrik Kruskall-Wallis.Taraf kepercayaan yang digunakan adalah
95%.Setelah itu, dilanjutkan dengan uji beda dua  variabel  untuk  melihat  perbedaan masing-masing kelompok perlakuan  sediaan uji.  Uji  beda  dua  variabel  yang  digunakan adalah uji Mann-Whitney.

## H A S I L  D AN  P EM B AHA S A N
Determinasi  Daun  Alpukat  dan  Rimpang Temulawak Determinasi bagian tanaman dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mencegah terjadi kesalahan dalam pengambilan sampel,  dimana  kebenaran  bagian  tanaman dalam  penelitian  merupakan  syarat  mutlak yang  harus  dipenuhi.  Hasil  determinasi bagian tanaman menunjukkan tanaman yang digunakan    pada  penelitian  ini  adalah  benar
daun  alpukat  dan  rimpang  temulawak ( Persea americana
dan
Curcuma
xanthorrhiza ).

## Induksi  DM  Tipe-2  pada  Tikus  yang Mengalami Resistensi Insulin
Metode  inimerupakan  metode  yang dikembangkan untuk uji antidiabetes berdasarkanpatologi  DM  tipe-2  karena resistensi  insulin.Prinsip  metode  ini  adalah memicuresistensi  reseptor  insulin  karena terjadi  hiperinsulinemia  dalam  waktu  lama sehingga  dapat  menginduksi  terjadinya  DM tipe-2.  Sebelum  diberikan  sediaan  uji,  tikus diinduksi  menggunakan  insulin  eksogen kerja  panjang  dosis  1,8  IU/KgBB/hari selama  14  hari  secara  subkutan.  Tikus  yang diinduksi insulin eksogen dikatakan mengalami  DM  tipe-2  bila  kadar  GDP pada hari  ke-17  >85  mg/dL  (Fitriana,  2012). Pengambilan  data  GDP  dilakukan  pada  hari ke-3  setelah  berakhirnya  induksi  insulin eksogen.Hal ini dilakukan untuk menghilangkan efek insulin eksogennya, dan mendapatkan data yang tepat.Insulin eksogen  yang  digunakan  termasuk  insulin kerja  panjang  ( Lantus ® )  dengan  masa  kerja 18 – 24 jam (Suherman, 2009).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa rata-rata kadar  GDP  kelompok yang diberikan  insulin  1,8  IU/KgBB/hari  selama 14  hari  adalah  103,84  mg/dL,  lebih  tinggi dari pada kadar GDP tikus kelompok kontrol (aquabides  1,25  mL/KgBB/hari)  (p<0,05). Hasil  penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa pemberian  insulin  eksogen  selama  14  hari dapat  memicu  terjadinya  DM  tipe-2  pada tikus
jantan galur Wistar.Tikus DM tipe-2 ini selanjutnya digunakan untuk uji efek antidiabetes.
Gambar  1.  Perbandingan  rata-rata  kadar  GDP  Tikus  kontrol  (aquabides  1,25  mL/KgBB/hari)  dan Kadar GDP tikus yang mendapatkan  perlakuaninsulin1,8 IU/KgBB/hari pada hari ke-17. Kadar GDP merupakan nilai rata-rata ± SEM.
Kadar  glukosa  yang  tinggi  dalam darah  tikus  diperkirakan  tidak  disebabkan karena menurunnya fungsi sel-sel β
pankreas.Akan tetapi, keadaan ini
disebabkan karena telah terjadinya resistensi insulin  di  berbagai  jaringan  perifer.  Dalam
81,8 1,200 103,84 1,997 0 50 100 150 Aquabides 1,25 mL/KgBB/hari Insulin 1,8 IU/KgBB/hari K ad ar ( m g/ d L) *) Hasil uji Mann-Whitney menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antara…
89,4± 1,077
116,8±0,490 112,6±0,400 93,2±0,753
102,8±1,319 102,6±0,748 78,8±0,753 95±0,632 74,4±1,661 80,2±2,245
0 20 40 60 80 100 120 140 CMC-Na 0,5% 12,5
mL/KgBB/hari Metformin 150 mg/KgBB/hari Ekstrak Etanol Daun Alpukat 200 mg/KgBB/hari Ekstrak Etanol Rimpang Temulawak 200 mg/KgBB/hari Kombinasi EED Alpukat dan Rimpang Temulawak 200 mg/KgBB/hari K a d a r
G DP ( m g/d L) ± SE M *) Uji Wilcoxon dan uji t berpasangan menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna…
Kadar GDP Tikus Sebelum Perlakuan
Kadar GDP Sesudah Perlakuan Selama 14 Hari
keadaan  ini,  diperkirakan  kadar  insulin dalam  darah  tinggi,  sedangkan  reseptor insulin  banyak  yang  mengalami  gangguan sehingga insulin gagal memindahkan glukosa dari ke dalam sel (Thevenod, 2008). Fitriana, (2012), menyatakan bahwa pemberian  insulin  pada  manusia  dalam jangka  waktu  yang  lama  dapat  menginduksi terjadinya DM tipe-2. Hal tersebut dibuktikan  dalam  penelitian  ini  bahwa pemberian  insulin  1,8  IU/KgBB/hari  selama 14  hari,  kadar  GDP  rata-rata  tikus  akan meningkat  drastis  menjadi  103,84  mg/dL. Sementara itu, tikus yang tidak mendapatkan perlakuan  insulin  mempunyai  kadar  GDP rata-rata sebanyak 81,8 mg/dL.
Resistensi  insulin  pada  DM  tipe-2
seringkali didahului denganterjadinya hiperinsulinemia dan gangguan pada reseptor  insulin.  Kondisi  resistensi  insulin yang  terlalu  lama  akan  menyebabkan terjadinya penurunan sekresi  insulin. Selang  beberapa  lama kemudian,  sekresi insulin  akan  menurun  secara  bertahap,  dan keadaan  ini  merupakan  hasil  akumulasi metabolit  sementara  glukosa  pada  islet pankreas, sehingga nantinya akan memperkecil  ukuran  atau  massa  sel  β pankreas  (Mahler  dan  Adler,  1999).  Jika tidak  ditangani  dengan  baik  maka  sel  β pankreas  akan  mengalami  kerusakan  secara progresif. Keadaan ini sering kali
mengakibatkan  penurunan  sekresi  insulin yang  pada  akhirnya,  penderita  DM  tipe-2 memerlukan insulin eksogen (Maeley,
2006).
Dalam  penelitian  ini,  resistensi insulin  pada  tikus  jantan  galur  Wistar diinduksi  dengan  pemberian  insulin  kerja panjang (Lantus®) 1,8 IU/KgBB/hari selama 14  hari.  Induksi  DM  tipe-2  dengan menggunakan  insulin  eksogen  mempunyai beberapa  keunggulan  dibandingkan  dengan metode  lainnya,  antara  lain  waktu  yang dibutuhkan  untuk  membuat  tikus  menjadi DM  tipe-2  relatif  lebih  cepat,  bahan  yang mudah  didapat  dan  biaya  yang  lebih  murah dibanding bahan lain (Fitriana, 2012).
Uji  Aktivitas  Antidiabetes  Kombinasi EED  Alpukat  dan  Rimpang  Temulawak serta  Metformin  pada  Tikus  DM  Tipe-2 yang Mengalami Resistensi Insulin
Data yang diperoleh dari uji aktivitas antidiabetes  kombinasi  EED  alpukat  dan rimpang  temulawak  adalah  data  kadar  GDP sebelum  dan  sesudah  perlakuan  sediaan  uji, setelah 14 hari. Kombinasi EED alpukat dan rimpang  temulawak  dinyatakan  memiliki efek  antidiabetes  apabila  kadar  GDP  tikus DM  tipe-2  setelah  mendapatkan  perlakuan dengan kombinasi EED alpukat dan rimpang temulawak  lebih  rendah  dari  pada  sebelum perlakuan, dapat dilihat pada gambar  2.
Gambar  2.  Perbandingan  Kadar  GDP  Tikus  Sebelum  (hari  ke-0)  dan  Sesudah PemberianSediaanUji  (hari  ke-15).  Kadar  GDP  merupakan  nilai  rata-rata  ± SEM (n=5).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa perlakuan metformin 150 mg/KgBB/hari dan sediaan  uji  (ekstrak  etanol  daun  alpukat, ekstrak  etanol  rimpang  temulawak,  dan kombinasi  EED  alpukat  dan  rimpang
temulawak)  200  mg/KgBB/hari  selama  14 hari  terbukti  mampu  menurunkan  kadar GDP  tikus  DM  tipe-2  yang  mengalami resistensi  insulin  (p<0,05).  Sebaliknya, perlakuan CMC-Na 0,5% 12,5
mL/KgBB/hari  pada  tikus  kontrol  diabetes mengakibatkan  peningkatan  kadar  GDP (p<0,05)  (dari  89,4  mg/dL  menjadi  102,6 mg/dL).Perlakuan sediaan uji (ekstrak etanol daun  alpukat,  ekstrak  etanol  rimpang temulawak, dan kombinasi EED alpukat dan rimpang  temulawak)  200  mg/KgBB/hari selama  14  hari  dapat  menurunkan  kadar GDP tikus DM tipe-2 dari (112,6; 93,2; dan 102,8)  mg/dL  menjadi  (95;  74,4;  dan  80,2) mg/dL.  Pada  perlakuan  dengan  metformin 150  mg/KgBB/hari  kadar  GDP  tikus  DM tipe-2 dari 116,8 mg/dL menjadi 78,8 mg/dL (Gambar  2).  Oleh  karena  itu,  dapat  ditarik kesimpulan  bahwa  perlakuan  menggunakan metformin 150 mg/KgBB/hari dan perlakuan menggunakan sediaan uji 200
mg/KgBB/hari  ternyata  terbukti  memiliki efek antidiabetes pada tikus DM tipe-2 yang mengalami resistensi insulin.
Berdasarkan  penelitian  Putri  dkk., (2015),  hasil  penapisan  fitokimia  pada ekstrak  daun  alpukat  adalah  polifenolat, flavonoid,  tanin,  polifenol,  monoterpen  dan sesquiterpen,  saponin,  serta  alkaloid.  Begitu juga rimpang temulawak yang telah terbukti dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah. Dimana  kandungan  senyawa  aktif  dari rimpang  temulawak,  berdasarkan  hasil pengujian  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol rimpang  temulawak yaitu  triterpenoid, alkaloid,  fenol,  flavonoid,  tanin,  dan glikosida (Cahyani, 2014).
Senyawa  aktif  yang  dapat  berperan  sebagai antidiabetes  harus  mampu    mengurangi resistensi  insulin  dan  mencegah  kerusakan sel  β  pankreas.Misalnya  flavonoid  adalah salah  satu  senyawa  yang  mampu  memiliki peran  tersebut.Hal  tersebut  disebabkan karena  senyawa  flavonoid  berperan  sebagai
antioksidan  yang  mampu  mengikat  radikal bebas  sehingga  dapat  mengurangi  resistensi insulin  dan  mencegah  kerusakan  sel  β pankreas (Stefek, 2011). Begitu juga dengan senyawa  lain  seperti  alkaloid,  triterpenoid, dan  kurkumin.  Alkaloid  terbukti  mampu meregenerasi  sel  β  pankreas  yang  rusak (Agrawal  dkk.,  2013).  Triterpenoid  dapat mempertahankan  massa  sel  β  pankreas  (Liu dkk., 2010) dan memiliki aktivitas antidiabetes yang terkait aktivasi jalur enzim AMP-activated  protein  kinase ,  dimana enzim  ini  mengatur  translokasi  glukosa untuk  dapat  masuk  ke  dalam  sel  (Tan  dkk., 2008).  Golongan  fenol  khususnya  kurkumin dapat  menghambat  glukoneogenesis  di  hati (Kim dkk., 2009).
Perbandingan Efek Antidiabetes Kombinasi  EED  Alpukat  dan  Rimpang Temulawak dengan Masing-Masing Ekstrak  Tunggalnya  pada  Tikus  DM Tipe-2 yang Mengalami Resistensi Insulin Data yang digunakan untuk perbandingan  efek  antidiabetes  kombinasi EED  alpukat  dan  rimpang  temulawak dengan  masing-masing  ekstrak  tunggalnya adalah  penurunan  kadar  GDP  dari  ke  tiga sediaan  uji.  Sediaan  uji  kemudian  dianalisis menggunakan  uji  beda  tiga  variabel.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa data homogen  tetapi  tidak  terdistribusi  normal, maka  dilanjutkan  dengan  metode  statistik non  parametrik  Kruskal  Wallis.  Didapatkan hasil  nilai  signifikasi  0,008  (p<0,05)  maka dikatakan  efek  penurunan  kadar  GDP  ada perbedaan yang bermakna. Penurunan kadar glukosa darah puasa tikus setelah mendapatkan  perlakuan  sediaan  uji    selama
14 hari dapat dilihat pada tabel I.
Tabel  I.  Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah  Puasa  Tikus  Setelah  Mendapatkan  Perlakuan Sediaan Uji  Selama 14 Hari
Kelompok Penurunan Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Setelah Mendapatkan Perlakuan Sediaan Uji  Selama 14 Hari ±SEM (mg/dL) CMC-Na 0,5% 12,5 mL/KgBB/hari - Metformin 150 mg/KgBB/hari 38±0,6215 Ekstrak Etanol Daun Alpukat 200 mg/KgBB/hari 17,6±0,516 Ekstrak Etanol Rimpang Temulawak 200 mg/KgBB/hari 18,8±1,207 Kombinasi EED Alpukat dan  Rimpang Temulawak 200 mg/KgBB/hari 22,6±1,782
Oleh  karena  itu,  untuk  melihat perbedaan
masing-masing kelompok perlakuan  dilakukan  uji  beda  dua  variabel dengan  uji  Mann-Whitney.  Uji  beda  dua variabel  yang  menggunakan  uji  Mann- Whitney  pada  perbandingan  penurunan kadar  GDP  ekstrak  etanol  daun  alpukat terhadap  ekstrak  etanol  rimpang  temulawak 200  mg/KgBB/hari,  didapatkan  hasil  nilai signifikasi  0,009  (p<0,05).  Maka  dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun alpukat dengan  ekstrak  etanol  rimpang  temulawak memiliki  efek  penurunan  kadar  GDP  yang signifikan  (efek  antidiabetesnya  lebih  poten yang  ekstrak  etanol  rimpang  temulawak). Arti  dari  p<0,05  yaitu  nilai  signifikasi  yang didapat  harus  dibawah  0,05  agar  ada perbedaan  yang  bermakna  antara  ekstrak etanol  daun  alpukat  dan  ekstrak  etanol rimpang  temulawak.  Begitu  juga  dengan perbandingan penurunan kadar GDP ekstrak etanol  daun  alpukat  terhadap  kombinasi EED  alpukat  dan  rimpang  temulawak  200 mg/KgBB/hari,  didapatkan  nilai  signifikasi yang  sama,  yaitu  0,009  (P<0,05).  Hal tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  alpukat  dan  kombinasi  EED alpukat  dan  rimpang  temulawak  memiliki efek  penurunan  kadar  GDP  yang  lebih  baik daripada ekstrak etanol daun alpukat.
Sementara  itu,  pada  perbandingan penurunan  kadar  GDP  ekstrak  etanol rimpang  temulawak  terhadap  kombinasi EED  alpukat  dan  rimpang  temulawak  200 mg/KgBB/hari, didapatkan hasil nilai signifikasi  0,463  (p>0,05).  Maka  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  rimpang temulawak dengan kombinasi ekstrak memiliki  efek  penurunan  kadar  GDP  yang sama  (tidak  berbeda  bermakna).  Arti  dari p>0,05 yaitu nilai signifikasi yang didapatkan  lebih  dari  0,05,  sehingga  tidak ada  perbedaan  efek  penurunan  kadar  GDP antara  ekstrak  etanol  rimpang  temulawak dengan kombinasi EED alpukat dan rimpang temulawak.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi  kedua  ekstrak  memiliki  efek penurunan  kadar  GDP  yang  sama  dengan ekstrak  tunggal  rimpang  temulawak.  Oleh karena  itu,  usaha  untuk  mengkombinasikan kedua ekstrak dalam formula herbal antidiabetes  tidak  diperlukan  lagi.Penelitian ini  lebih  merekomendasikan  penggunaan
ekstrak  tunggal  dalam  formula  herbal antidiabetes.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
1. Kombinasi  EED  alpukat  dan  rimpang temulawak  memiliki  efek  antidiabetes pada  tikus  DM  tipe-2  yang  mengalami resistensi insulin sebesar 22,03%.
2. Efek  penurunan  kadar  GDP  kombinasi EED  alpukat  dan  rimpang  temulawak perbandingan  dosis  1:1  tidak  berbeda bermakna dengan ekstrak etanol rimpang temulawak dosis 200
mg/KgBB/hari,  akan  tetapi  berbeda bermakna apabila dibandingkan dengan ekstrak  etanol  daun  alpukat  200 mg/KgBB/hari.

## Saran
1. Perlu dilakukan pengembangan ekstrak rimpang  temulawak  sebagai  bahan baku  antidiabetes  atau  bahan  baku produk herbal antidiabetes.
2. Perlu dilakukan identifikasi atau elusidasi  struktur  kimia  dari  senyawa aktif flavonoid,
alkaloid, dan triterpenoid  pada  ekstrak  rimpang temulawak.
3. Perlu  dilakukan  penelitian  dengan perbandingan ekstrak rimpang temulawak 17,5 mg/KgBB/hari : ekstrak  etanol  daun  alpukat  100 mg/KgBB/hari .

## DAFTAR PUSTAKA
Agrawal,  R.,  Sethiya,  N.K.,  and  Mishra, S.H.,  2013,  Antidiabetic  Activity  of Alkaloids  of Aerva  lanata Roots  on Streptozotocin-Nicotinamide  Induced Type-II  Diabetes  in  Rats, Pharm Biol , 1-8.
Anas, Y., Fithria, R.F., Nuria, M.C., Martha, A.P.L., Nugroho, A.E., dan Astuti, P., 2015,  Aktivitas  Antidiabetes  Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanol Daun
Lenglengan  ( Leucas  lavandulifolia JE.  Smith)  Pada  Tikus  DM  Tipe-2 yang  Mengalami  Resistensi  Insulin, Kartika J. Ilm. Far , 3 (1), 28-36.
Antia, B. S., Okokon, J. E., and Okon, P. A., 2005,  Hipoglikemic  Activity  of Aqueous  Leaf  Extract  of Persea americana Mill , Resert Letter , 37 (5), 325-326.
Cahyani,  M.N.,  2014,  Pengaruh  Pemberian
Ekstrak  Etanol  Rimpang  Temulawak ( Curcuma xanthorrizha Roxb.)
Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah
Tikus  Putih (Rattus  norvegicus) Galur Wistar yang Diinduksi Aloksan, Skripsi, Universitas Tanjungpura, Pontianak. Fitriana,  M.R.,  2012,  Pengaruh  Lama Perlakuan  Human  Insulin  Terhadap
Resistensi  Reseptor  Insulin  Pada Tikus  Jantan  Galur  Wistar, Skripsi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang. Katzung,  B.G.,  2002, Farmakologi  Dasar dan  Klinik ,  Buku  II,  Edisi  VIII, Salemba Medika, Jakarta, 449-454. Kim, T., Davis, J., Zhang,  A.J., He, X., and Mathews,  A.T.,  2009, Curcumin Activates  AMPK  and  Supresses Gluconeogenic  Gene  Expression  in
Hepatoma  Cells, Biochemical  and Biophysical Research Communication , 388 , 377-82. Kristinawati,  2010,  Pengaruh  Ekstrak  Daun Alpukat ( Persea americanaMill.) Terhadap  Penurunan Kadar  Glukosa  Darah  pada  Tikus PutihJantan  dengan  Metode  Uji Toleransi Glukosa, Skripsi , UnikaWidya Mandala, Surabaya. Liu,  J.,  He,  T.,  Lu,  Q.,  Shang,  J.,  Sun,  H., and  Zhang,  L.,  2010,  Asiatic  Acid Preserves  Beta  Cell  Mass  and Metigates Hyperglycemia in Streptozocin-induced  Diabetic  Rats, Diabetes  Metab  Res  Rev. 26 (6), 54- 448.
Mahler,  R.  and  Adler,  M.,  1999.  Type-2 Diabetes Mellitus: Update on Diagnosis, Pathophysiology, and Treatment. J Clin Endocrinol Metab . 84 (4): 1165-71. Maeley, B.L., 2006, Diabetes Pathophysiology , ( http://www.healt.a m/DB/DiabetesPathophysiology.asp , diakses pada 18 September 2013).
Perkeni, 2011, Konsensus Pengendalian dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe-2 di  Indonesia ,  PB  PERKENI,  Jakarta,
1-2.
Putri,  L.W.,  Yuniarni,  U.,  dan  Hazar,  S., 2015,  Uji  Efek  Antihiperglikemia Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Daun Alpukat  dan  Biji  Alpukat  ( Persea americana  Mill) terhadap  Mencit Jantan ( Mus musculus ) Swiss Webster  yang  Diinduksi  Aloksan, Universitas Bandung. Tan,  M.J.,  Ye,  J.M.,  and  Turner,  N.,  2008, Antidiabetic Activities of Triterpenoids  Isolated  from Bitter melon Associated  with  Activation  of AMPK  Pathway, Chem  Biol , 15 (3),
263-273.
Thevenod,  F.,  2008,  Pathophysiology  of Diabetes  Melitus  Type-2:  Roles  of Obesity,  Insulin  Resistance  and  β  – cell  Dysfunction. Diabetes  19 (1):  1- 18.
Suherman, S.K., 2009, Insulin dan Antidiabetika Oral, dalam: Gunawan,
S.G.,  Setiabudi,  R.,  Nafriadi  dan Elysabeth  (Eds)., Farmakologi  dan Terapi ,  Edisi  kelima,  Balai  Penebit FKUI, Jakarta, 485-486 dan 491-492. Stefek,  M.,  2011,  Natural  Flavonoids  as Potentials  Multifungsional  Agents  in Prevention  of  Diabetic  Cataract,
Interdiscip Toxicol , 4 (2) 69-77. Steenis,  C.G.G.J.V,  1981, Flora  Untuk Sekolah  Indonesia ,  PT.  Pradnya Paramita, Jakarta.
Voigt,  R.,  1995, Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi, Edisi  V,  Gadjah  Mada University  Press,  Yogyakarta,  559- 570.
Wang,  Z.I.,  Yang,  Y.,  Xiang,  X.,  Zhu,  Y.,
Men, J. and He, M., 2010, Estimation of  the  Normal  Range  of  Blood Glucose  In  Rats, MEDILINE , 39 (2), 133-14