Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
Volume 19, Nomor 1, April 2019, Hal.34-38
https://journal.unpak.ac.id/index.php/ekologia
e-ISSN: - ; p-ISSN: 1411-9447

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN FLAVONOID EKSTRAK BIJI KURMA
Siti Warnasih 1* , Diana Widiastuti 1 , Uswatun Hasanah 1 ,
Laksmi Ambarsari 2 , Purwantiningsih Sugita 3
1 Program Studi Kimia FMIPA Universitas Pakuan, Bogor 2 Departemen Biokimia FMIPA Institut Pertanian Bogor
3 Departemen Kimia FMIPA Institut Pertanian Bogor
* e-mail: siti.warnasih@unpak.ac.id
diterima: 20 Januari 2019; direvisi: 13 Februari 2019; disetujui: 02 Maret 2019

## ABSTRAK
Biji  kurma  merupakan  limbah  dari  pengolahan  buah  kurma  yang  belum  dimanfatkan secara  optimal.  Biji  kurma  mengandung  senyawa  flavonoid  yang  diketahui  dapat  berperan sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas  antioksidan  dan flavonoid ekstrak metanol yang dilakukan secara soxhletasi dan hasil fraksinasinya. Biji kurma dibuat  menjadi  simplisia,  diekstrak  dengan  soxhlet  dengan  pelarut  metanol,  kemudian  ekstrak metanol difraksinasi bertingkat secara partisi cair-cair dengan pelarut n-heksan, etil asetat, dan n-butanol. Setiap fraksi dan ekstrak ditentukan aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH dan  flavonoidnya  ditentukan  secara  spektrofotometri.  Fraksi  etil  asetat  mempunyai  aktivitas antioksidan  terkuat  dengan  nilai  IC 50 paling  rendah  yaitu  sebesar  5,74±0,05μg/mL,  diikuti ekstrak  metanol  sebesar  9,55±0,53  μg/mL,  fraksi  n-butanol  19,73±0,58  μg/mL,  dan  fraksi  n- heksan  sebesar  289,59±10,52  μg/mL,  sedangkan  nilai  IC 50 untuk  vitamin  C  sebagai  kontrol positif  adalah  sebesar  4,29±0,74  μg/mL.  Flavonoid  tertinggi  dihasilkan  dari  fraksi  etil  asetat yaitu sebesar 1484,33±161,47 mg Quersetin Equivalent (QE)/100 g, diikuti secara bertutut-turut oleh ekstrak metanol sebesar 282,84±13,72 mg QE/100 g, fraksi n-butanol sebesar 199,25±7,39 mg QE/100 g, dan fraksi n-heksan sebesar 64,92±3,17 mg QE/100 g.
Kata Kunci: antioksidan, biji kurma, DPPH, flavonoid

## ANTIOXIDANT ACTIVITIES AND FLAVONOID EXTRACT OF CURMA SEEDS

## ABSTRACT
Date  seeds  are  waste  from  palm  fruit  processing  that  has  not  been  utilized  optimally. Date seeds contain flavonoids which are known to act as antioxidants. The aim of this study was to determine the antioxidant activity and flavonoid of methanol extract which was carried out by soxhletation and its fractionation results. Date seeds are made into simplicia, soxhlet extraction with methanol, then the methanol extract is fractionated in stages by liquid-liquid partition with n-hexane,  ethyl  acetate,  and  n-butanol.  Each  fraction  and  extract  was  determined  by  its antioxidant  activity  with  the  DPPH  method  and  its  flavonoid  was  determined  by spectrophotometry. Ethyl acetate fraction has the strongest antioxidant activity with the lowest IC50  value,  that  is  equal  to  5.74  ±  0.05μg/mL,  followed  by  methanol  extract  of  9.55±0.53 μg/mL,  n-butanol  fraction 19.73±0,58  μg/mL,  and  n-hexane fraction of  289.59±10.52  μg/mL, while  the  IC50  value  for  vitamin  C  as  a  positive  control  was  4.29±0.74  μg/mL.  The  highest flavonoids were produced from ethyl acetate fractions which amounted to 1484.33 ± 161.47 mg Quercetin Equivalent (QE) / 100 g, followed respectively by methanol extract of 282.84±13.72 mg QE/100 g.
Key words: antioxidants, date seeds, DPPH, flavonoids
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup

## PENDAHULUAN
Kurma ( Phoenix dactylifera )
merupakan  sumber  makanan  yang  penting di  negara-negara  Timur  Tengah  dan  Afrika Utara.  Kurma  mengandung  karbohidrat yang tinggi sekitar 77,34-84,45%, tergantung    varietas  (Al-Farsi et  al., 2007), dan  beberapa  mineral  penting  seperti  besi, kalium,  kalsium,  magnesium,  mangan, natrium,  tembaga,  dan  seng  (Chaira et  al., 2007).  Buah  kurma  kaya  dengan  zat antioksidan  yang  dapat  membantu  dalam menurunkan resiko kanker dan meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh (Yasin et al. , 2015).
Biji  kurma  mengandung  antioksidan yang dapat menurunkan kadar radikal bebas. Kandungan  antioksidan  biji  kurma  lebih tinggi  dibanding  daging  buahnya  (Ardekani et  al .,  2010).  Adapun  kandungan  total fenoliknya  berjumlah  3102-4430 Gallic Acid  Equivallent /100g  sedangkan  dalam daging  buah  hanya  berjumlah  186-246 Gallic  Acid  Equivallent /100g.  Dalam penelitian Al-Farsi dan Lee (2008), kandungan  total  fenol  dalam  biji  kurma ditemukan  sebesar  48,64  mg/100g.  Asam fenolat  yang  terdeteksi  berupa  asam  galat, asam  p-hidroksibenzoat,  asam  ferulat,  asam m-koumarat,  dan  asam  o-koumarat  (Afiq et al., 2013 ).
Pada penelitian sebelumnya yang telah dilakukan Warnasih et al. (2019), fraksi etil asetat  dari  hasil  ekstraksi  dengan  metanol metode  maserasi  didapatkan  nilai  IC 50 sebesar  3,72±0,44μg/mL  dengan  kategori antioksidan  sangat  aktif.  Oleh  karena  itu, pada  penelitian  ini  metode  yang  dipakai pada proses ekstraksi yaitu metode Soxhletasi atau ekstraksi dengan menggunakan panas. Tujuan penelitian ini untuk menentukan aktivitas antioksidan dan flavonoid  ekstrak  metanol  yang  dilakukan secara soxhletasi dan hasil fraksinasinya.

## BAHAN DAN METODE Bahan yang digunakan
Biji  kurma  varietas  Siwa  (Mesir) diambil  dari  pabrik  sari  kurma,  CV.  Amal
Mulia  Sejahtera,  Bogor,  Jawa  Barat, Indonesia.

## Preparasi sampel
Biji  kurma  dibersihkan  dan  dicuci, dikeringkan  pada  oven  50 0 C  semalaman, dihancurkan  menjadi  serbuk  berukuran  40 mesh  dengan  menggunakan  mesin  mill. Dimasukan  ke  dalam  plastik  polietilen,  dan disimpan pada suhu 4 0 C sampai dianalisis.

## Ekstraksi-Fraksinasi
Serbuk biji kurma sebanyak 10 gram diekstrak  dengan  Soxhlet  menggunakan metanol  (1:10)  selama  ±  6  jam.  Filtrat disaring  dan  dipekatkan  dengan vaccum evaporator pada suhu  40 0 C. Ekstrak kasar metanol  kemudian  dilakukan  fraksinasi bertingkat metode partisi cair-cair, sebanyak 5  gram  ekstrak  kasar  metanol  dilarutkan dengan 50 mL  air, dan ditambahkan 50 mL n-heksan,  lalu  diekstrak  dengan  corong pemisah  sehingga  terbentuk  dua  fraksi, fraksi  bawah  sebagai  fraksi  air  dan  fraksi atas sebagai fraksi n-heksan, fraksi n-heksan dipisahkan dan ditampung pada vial I. Pada fraksi  air  ditambahkan  dengan  50  mL  etil asetat, lalu diekstrak dengan corong pemisah sehingga  terbentuk  dua  fraksi,  fraksi  bawah sebagai  fraksi  air  dan  fraksi  atas  sebagai fraksi etil asetat, fraksi etil asetat dipisahkan dan  ditampung  pada  vial  II.  Pada  fraksi  air ditambahkan  dengan  50  mL  n-butanol,  lalu diekstrak  dengan  corong  pemisah  sehingga terbentuk  dua  fraksi,  fraksi  bawah  sebagai fraksi  air  dan  fraksi  atas  sebagai  fraksi  n- butanol,  fraksi  n-butanol  dipisahkan  dan ditampung  pada  vial  III,  sedangkan  fraksi air  ditampung  pada  vial  IV.  Semua  fraksi dipekatkan dengan vaccum evaporator pada suhu 40 0 C.

## Penentuan aktivitas antioksidan
Penentuan aktivitas antioksidan menggunakan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil)  secara  spektrofotometri  UV- Vis.  Prinsip  metode  ini  adalah  melakukan pengukuran  penangkapan  radikal  DPPH oleh  suatu  senyawa  yang  mempunyai aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan
Siti Warnasih, dkk: Aktivitas Antioksidan Dan Flavonoid Ekstrak Biji Kurma ( Phoenix Dactylifera ) .....
spektrofotometri  UV-Vis  sehingga  akan diketahui  nilai  aktivitas  peredaman  radikal bebas  yang  dinyatakan  dengan  nilai  IC 50 ( Inhibitory  Concentration) .  Semakin  rendah nilai  IC 50 menunjukan  aktivitas  antioksidan semakin baik. Digunakan standar vitamin C sebagai kontrol positif.

## Penentuan flavonoid
Sebanyak  0,5  mL  ekstrak  masing- masing  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi. Ditambahkan  dengan  0,1  mL  aluminium klorida  10%  lalu  ditambahkan  1,5  mL ethanol, dan 0,1 mL CH 3 COOK 1M 5% lalu 2,8  mL  akuades,  kocok  hingga  homogen. Diinkubasi  pada  suhu  ruang  pada  waktu inkubasi  optimum.  Diukur  serapan  pada waktu  optimum  dan  panjang  gelombang maksimum dengan standar kuersetin menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis. Dilakukan 2 kali pengulangan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Biji  kurma  yang  digunakan  dalam penelitian dibuat simplisia kering. Kadar air yang  didapatkan  yaitu  sebesar  9,10±0,47% (Warnasih et  al. ,  2019).  Berdasarkan  hasil ekstraksi  dengan  metode  Soxhlet  yang dilakukan  selama  3  x  ulangan  dari  30  gram simplisia  kering  didapatkan  sebanyak  10 gram  ekstrak  kental  metanol    (33,33%). Hasil  ini  lebih  banyak  dibandingkan penelitian  sebelumnya  yang  menggunakan metode maserasi  yaitu hanya sekitar 15,7%. Hal  ini  dikarenakan  pada  ekstraksi  dengan metode Soxhlet tidak ada proses penyaringan yang mengakibatkan banyaknya  kehilangan  sampel,  selain  itu juga  metode  Soxhlet  relatif  lebih  cepat karena  hanya  dilakukan  selama  6  jam, sedangkan pada metode maserasi diperlukan waktu lebih lama yaitu sampai 3x24 jam. Selanjutnya ekstrak kental metanol difraksinasi  dengan  metode  partisi  cair-cair menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat, n-butanol,  dan  air,  sehingga  dihasilkan  5 sampel  untuk  analisis  selanjutnya  yaitu ekstrak  metanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil asetat,  fraksi  n-butanol,  dan  fraksi  air. Tetapi  pada  perjalanannya  fraksi  air  tidak
dilakukan  pengujian  dikarenakan  adanya jamur.

## Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  kasar metanol dan fraksi hasil partisinya disajikan pada  Tabel  1.  Parameter  yang  digunakan untuk  menentukan  besarnya  kemampuan senyawa  sebagai  antioksidan  yaitu  IC 50 . Nilai  IC 50 merupakan  konsentrasi  senyawa antioksidan yang dapat menurunkan radikal DPPH  sebesar  50%.  Semakin  kecil  nilai IC 50 maka  semakin  aktif  ekstrak  sebagai senyawa  antioksidan. Nilai  IC 50 untuk ekstrak  kasar  metanol,  fraksi  n-heksan,  etil asetat,  dan  n-butanol  berturut-turut  adalah 9,55±0,53  μg/mL,  289,59±10,52  μg/mL, 5,74±0,05  μg/mL,  dan  19,73±0,58  μg/mL, sedangkan  nilai  IC 50 untuk  vitamin  C sebagai  kontrol  positif  adalah  sebesar 4,29±0,74 μg/mL.  Berdasarkan  hasil tersebut maka ekstrak kasar metanol, fraksi etil  asetat,  dan  n-butanol  dikategorikan sangat  kuat  sama  seperti  vitamin  C,  dan fraksi n-heksan dikategorikan sangat lemah. Hal  ini  sesuai  dengan  penggolongan  yang dikemukan  oleh  (Molyneux,  2004)  yang disajikan ada Tabel 2. Hasil ini juga sesuai dengan  hasil  pengolahan  data  dengan metode  analisis  sidik  ragam  (ANOVA) menggunakan SPSS bahwa ekstrak metanol,  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-butanol, dan  vitamin  C  tidak  berbeda  nyata (p>0,05), sedangkan fraksi n-heksan terdapat  perbedaan  yang  nyata(p<0,05), sehingga dengan uji lanjut Duncan didapatkan  bahwa  nilai  IC 50 ekstrak metanol,  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-butanol, dan vitamin C berada dalam satu kelompok yaitu  golongan  sangat  kuat,  sedangkan fraksi n-heksan termasuk golongan antioksidan  sangat  lemah.  Hal  ini  juga sejalan  dengan  penelitian  yang  telah dilakukan  sebelumnya,  yang  menyatakan bahwa  ekstrak  metanol,  fraksi  etil  asetat, fraksi  n-butanol  menghasilkan  IC 50 di bawah 50  μg/mL  atau termasuk golongan sangat  kuat,  sedangkan  fraksi  n-heksan menghasilkan IC 50 di atas  200 μg/mL  atau termasuk  golongan  antioksidan  sangat
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
lemah (Warnasih et al. , 2019). Berdasarkan hal  tersebut  maka  mtode  ekstraksi  biji kurma tidak berpengaruh terhadap aktivitas antioksidsan  ekstrak  dan  fraksi  biji  kurma, walaupun  jika  dibandingkan  aktivitas antioksidan  ekstrak  biji  kurma  dengan metode  Soxhletasi  lebih  tinggi  daripada yang dihasilkan dari proses ekstraksi secara maserasi.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena ekstraksi menggunakan Soxhletasi merupakan ekstraksi secara panas sehingga kemungkinan  ada  senyawa  volatile  yang bisa menguap.
Tabel 1. Aktivitas antioksidan ekstrak biji kurma
Sampel IC 50 (μg/mL) Metode Soxhletasi Metode maserasi (Warnasih et al ., 2019) Ekstrak methanol 9,55 a ±0,53 5,02 a ±0,98 Fraksi n- heksan 289,59 c ±10,52  248,42 c ±12,68 Fraksi etil asetat 5,74 a ±0,05 3,72 a ±0,44 Fraksi n- butanol 19,73 b ±0,58 6,60 a ±0,07 Vitamin C 4,29 a ±0,74 4,25 a ±0,87 *Nilai yang diikuti huruf yang berbeda menunjukkan perlakuan berbeda nyata pada uji Duncan (α = 0,05)
Tabel 2. Penggolongan antioksidan
(Molyneux, 2004)
Konsentrasi IC 50 Penggolongan IC 50 ≤ 50 µg/mL Sangat kuat 50 µg/mL< IC 50 ≤ 100 µg/mL Kuat 100 µg/mL< IC 50 ≤ 150 µg/mL Sedang 150 µg/mL< IC 50 ≤ 200 µg/mL Lemah IC 50 >200 µg/mL Sangat lemah

## Flavonoid
Penentuan  flavonoid  dalam  ekstrak biji kurma menggunakan pereaksi Alumunium  (III)  Klorida  10%  dengan kuersetin  sebagai  standar.  Hasil  penentuan flavonoid disajikan pada Tabel 3. Berdasarkan  Tabel  3  fraksi  etil  asetat mempunyai  kandungan  flavonoid  yang paling  tinggi  sebesar  1484,33±161,47  mg QE/100  gram  fraksi  dibandingkan  dengan
ekstrak  metanol  dan  fraksi-fraksi  yang lainnya.    Pada  penelitian  sebelumnya  total flavonoid  pada  ekstrak  metanol  biji  kurma diperoleh berbeda-beda tergantung varietasnya,  1211±81  mg  QE/g  varietas Deglet  Nour,  1210±63  mg  QE/g  pada varietas  Ruchdi,  1270±112  mg  QE/g  pada varietas Ftimi, dan 1450±153 mg QE/g pada varietas Kentichi (Allouche et al. , 2016).
Tabel 3. Flavonoid ekstrak biji kurma Sampel Flavonoid (mg QE/100 g) Ekstrak metanol 282,84 a ±13,72 Fraksi n-heksan 64,92 a ±3,17 Fraksi etil asetat 1484,33 b ±161,47 Fraksi n-butanol 199,25 a ±7,39
* Nilai yang diikuti huruf yang berbeda menunjukkan perlakuan berbeda nyata pada uji Duncan (α = 0,05)
Berdasarkan  hasil  pengolahan  data dengan metode analisis sidik ragam (ANOVA)  menggunakan  SPSS  bahwa ekstrak  metanol,  fraksi  n-butanol,  dan  n- heksan  terdapat  perbedaan  yang  nyata (p<0,05), sehingga dengan uji lanjut Duncan didapatkan bahwa flavonoid pada fraksi etil asetat  berada  pada  kelompok  yang  berbeda, sedangkan flavonoid ekstrak metanol, fraksi n-butanol,  dan  n-heksan  berada  pada  satu kelompok yang sama.

## KESIMPULAN
Pada  hasil  penelitian  ini,  fraksi  etil asetat  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dan kandungan flavonoid tertinggi dibandingkan ekstrak  metanol,  fraksi  n-butanol,  dan  n- heksan.  Metode  ekstraksi  Soxhletasi  yang dipakai pada penelitian ini tidak mempengaruhi  hasil  aktivitas  antioksidan dari  ekstrak  yang  dihasilkan.  Penelitian lebih  lanjut  masih  perlu  dilakukan  untuk menentukan adanya korelasi antara senyawa flavonoid,  total  fenol,  dengan  aktivitas antioksidan dari biji kurma.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Kementerian Riset  dan  Teknologi  Pendidikan  Tinggi
Siti Warnasih, dkk: Aktivitas Antioksidan Dan Flavonoid Ekstrak Biji Kurma ( Phoenix Dactylifera ) .....
Republik Indonesia atas pembiayaan penelitian  ini  melalui  hibah  Penelitian Kerjasama  Antar  Perguruan  Tinggi  (PKPT) Tahun 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Afiq,  Abdul,  M.J.,  Abdul  Rahman,  R.,  Che Man,  Y.B.,  Al  Kahtani,  H.A.  & Mansor,  T.S.T . (2013).  Date  seed and date seed oil. International Food Research Journal 20(5): 2036-2037 . Al-Farsi,  M.  A.,  &  Lee,  C.  Y.  (2008).
Optimization of phenolics and
dietary  fibre  extraction  from  date seeds. Food Chemistry , 108 (3), 977– 985.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2 007.12.009
Al-Farsi,  M.,  Alasalvar,  C.,  Al-Abid,  M., Al-Shoaily,  K., Al-Amry, M., &  Al- Rawahy,  F.  (2007).  Compositional and  functional  characteristics  of dates,  syrups,  and  their  by-products.
Food  Chemistry , 104 (3),  943–947. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2 006.12.051
Allouche,  F.M.,  Touati,  S.,  Mnafgui,  K., Gharsallah, N., El Feki, A., Allouche,  N.  (2016).  Phytochemical profile,  antioxidant,  antibacterial, antidiabetic
and anti-obesity activities of fruits and pits from date palm ( Phoenix dactylifera L.) grown in  south  of  Tunisia. Journal  of Pharmacognosy and Phytochemistry, 5(3): 15-22.
Ardekani, M. R. S., Khanavi, M.,
Hajimahmoodi, M., Jahangiri, M., & Hadjiakhoondi, A. (2010).
Comparison  of  antioxidant  activity
and  total  phenol  contents  of  some date seed varieties from Iran. Iranian Journal of Pharmaceutical Research , 9(2), 141–146.
Chaira,  N.,  Ferchichi,  A.,  Mrabet,  A.,  & Sghairoun,  M.  (2007).  Chemical composition  of  the  flesh  and  the  pit of  date  palm  fruit  and  radical scavenging  activity  of  their  extracts. Pakistan  Journal  of  Biological Sciences , 10 (13), 2202–2207. https://doi.org/10.3923/pjbs.2007.22 02.2207 Molyneux, P. (2004). The Use of the Stable Free Radical Diphenylpicryl- hydrazyl  (DPPH)  for  Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin  Journal  of  Science and Technology , 26 (December
2003),
211–219. https://doi.org/10.1287/isre.6.2.144.
Warnasih,  S.,  Widiastuti,  D.,  Hasanah,  U.,
Ambarsari,  L.,  &  Sugita,  P.  (2019). Phytochemical screening and antioxidant  activity  of  date  ( Phoenix dactylifera ) seed extracts.
International Journal of Engineering
& Technology (in review).
Yasin, B. R., El-Fawal, H. A. N., & Mousa,
S. A. (2015). Date (Phoenix dactylifera)  polyphenolics  and  other bioactive  compounds:  A  traditional islamic remedy’s potential in prevention  of  cell  damage,  cancer therapeutics and beyond.
International  Journal  of  Molecular Sciences , 16 (12), 30075–30090.
https://doi.org/10.3390/ijms1612262 10