## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK KULIT NANAS ( Ananas comosus L)
TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus SECARA IN VITRO
Andre Manaroinsong 1) , Jemmy Abidjulu 2) , Krista V. Siagian 1)
1) Program Studi Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran
2) Fakultas MIPA, UNSRAT

## Abstract
Herbal  plants  in  Indonesia  has  been  mostly  used  as  a  traditional  medicine.  One  of  the  natural materials is pineapple plant (Ananas comosus L). Pineapple plants contain bromelain enzyme which is  trusted  as  bactericidal.  One  of  the  oral  health  problems  found  is  oral  abcess.  Abcess  is  a  local accumulation  of  pus  in  a  cavity  which  happens  because  of  pyogenic  bactery  infection.  One  of  the cautions  of  abcess  is  Staphylococcus  aureus  bactery.  The  purpose  of  this  study  to  determine  the inhibition of skin and meat of the pineapple on the growth of Staphylococcus aureus. This research is an experimental research using the post-test only control group design with modification method of Kirby-Bauer by using paper disk. Pinapple skin extract and pinapple meat can be obtained with maceration  method  with  etanol  96%  solvent.  Staphylococcus  aureus  is  taken  from  a  pure  stock  of farmacy laboratorium MIPA faculty Unsrat. Results of this study addressing the pineapple meat and skin  extracts  have  inhibitory  to  growth  of  Stapylococcus  aureus.  The  average  diameter  zone  of inhibition against Staphylococcus aureus pineapple skin of 15.06 mm and pineapple meat of 10.85 mm.  From  this  study  it  can  be  concluded  that  the  extract  of  pineapple  skin  have  inhibitory  bigger than meat pineapple but still less effective than the positive control Clindamycin. The results could be  used  as  insert  in  order  to  conduct  further  research  on  the  pineapple  in  inhibiting  bacteria Staphylococcus aureus as a cause abscesses in the oral cavity.
Keywords: pineapple (Ananas comosus L), Staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Tanaman  herbal  di  Indonesia  telah  banyak  digunakan  sebagai  obat  tradisional.  Salah  satu  bahan alami  adalah  tanaman  Nanas (Ananas  comosus  L) .  tanaman  nanas  memiliki  kandungan  enzim bromelain  yang  dipercaya  dapat  membunuh  bakteri.  Salah  satu  masalah  kesehatan  rongga  mulut yang  sering  ditemukan  adalah  abses  rongga  mulut,  abses  adalah  pengumpulan  nanas  secara  lokal dalam suatu kavitas yang terjadi karena hancurnya jaringan, biasanya disebabkan oleh infeksi bakteri piogenik.  Salah  satu  penyebab  abses  ialah  dari  infeksi  bakteri Staphylococcus  aureus. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui daya hambat kulit dan daging nanas terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus. Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  menggunakan  desain post-test  only  control  group  design dengan  menggunakan  metode  modifikasi  Kirby-Bauer menggunakan  kertas  saring.  Ekstrak  kulit  nanas  didapat  dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut etanol  96%.  Bakteri Stapylococcus  aureus diambil  dari  stok  murni  Laboratorium  farmasi  Fakultas MIPA Unsrat. Hasil penelitian ini menujukan ekstrak kulit dan daging nanas memiliki daya hambat terhadap  pertumbuhan  bakteri  Stapylococcus  aureus.  Rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  kulit nanas  terhadap Staphylococcus  aureus sebesar  15,06  mm  dan  daging  nanas  sebesar  10,85  mm. Berdasarkan penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak kulit nanas memiliki daya hambat yang lebih  besar  daripada  daging  nanas  tetapi  masih  kurang  besar  dibandingkan  dengan  kontrol  positif Clindamycin .  Hasil  penelitian  ini  dapat  dijadikan  masukkan  agar  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  nanas  dalam  menghambat  bakteri  Staphylococcus  aureus  sebagai  penyebab  abses  dalam rongga mulut.
Kata kunci : tanaman nanas (Ananas comosus L) , Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Buah  nanas  sangat  mudah  dijumpai  di Indonesia  khususnya  Sulawesi  Utara. buah  nanas  bahkan  menjadi  ikon  salah satu  kota  di  Sulawesi  utara  yaitu Kotamobagu.  Buah  nanas,  nenas  atau ananas (Ananas  comosus) adalah  sejenis tumbuhan  tropis  yang  berasal  dari  Brasil, Bolivia  dan  Paraguay. 1 Buahnya  dalam bahasa  inggris  disebut pineapple karena bentuknya  yang  seperti  pohon  pinus. 2 Buah  nanas  memiliki  kandungan  yang sangat  baik    bagi  kesehatan.  Menurut beberapa penelitian buah nanas mengandung  vitamin  (A  dan  C),  kalsium, fosfor,  magnesium,  besi,  natrium  dan enzim Bromelain . 1,3 Bromelain adalah Enzim  Proteolitik  yang  ditemukan  pada bagian  tangkai,  batang,  daun,  buah, maupun kulit dalam jumlah yang berbeda. 4 Saat  ini  limbah  yang  banyak dihasilkan  dari  industri  buah  nanas, umumnya  limbah  nanas  yang  berupa batang,  kulit,  daun  dan  bonggol  belum dimanfaatkan  secara  optimal,  padahal bagian  bawah  kulit  nanas  yang  biasanya ikut terbuang saat  mengupas  nanas paling banyak  mengandung  enzim Bromelain yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  diantaranya streptoccocus  mutans, escherichia coli dan vibrio cholera . 5
Selain  bakteri  streptoccocus  mutans, escherichia  coli  dan  vibrio  cholera, Bakteri  yang  juga  sering  dijumpai  pada manusia  ialah Staphylococcus  aureus . Mikroba  ini  ditemukan  di  hidung  pada 30%-50%  orang  dewasa  sehat,  di  tinja sekitar 20% dan di kulit sekitar 5%-10%. 6
Staphyloccocus  aureus juga  merupakan bakteri  penyebab  terjadinya  abses  dalam rongga  mulut. 6 Abses  merupakan  salah satu  kondisi  klinik  yang  saat  ini  sering
ditemukan,  abses  adalah  pengumpulan nanah  secara  lokal  dalam  suatu  kavitas yang  terjadi  karena  hancurnya  jaringan, biasanya  disebabkan  oleh  infeksi  bakteri piogenik. 7
Salah  satu  alternatif  yang  dapat dilakukan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ialah memanfaatkan enzim bromelain  pada  kulit  buah  nanas  yang telah terbukti dapat menghambat pertumbuhan bakteri streptoccocus mutans,  escherichia  coli  dan  vibrio cholera. 5 Oleh  karena  itu,  penulis  tertarik melakukan  penelitian  untuk  mengetahui daya  hambat  ekstrak  kulit  nanas  terhadap Staphylococcus aureus.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  bagaimana  daya  hambat  dari ekstrak  kulit  nanas (Ananas  comosus  L) terhadap
pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental laboratorium,
menggunakan rancangan eksperimen murni (true  experimental  design) dengan rancangan penelitian post test only control design. Subjek dalam penelitian ini adalah koloni  bakteri Staphylococcus  aureus yang diperoleh dari sediaan  Laboratorium Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas  Sam Ratulangi.  Ekstrak  kulit  nanas  didapat dengan  cara  mengekstraksi  kulit  nanas dengan  metode  maserasi.  Pembuatan ekstrak kulit nanas dilakukan di Laboratorium  farmasi  MIPA  Universitas Sam  Ratulangi  Manado.  Sampel  kulit nanas diperoleh dari Kotamobagu. Sampel buah  nanas  sebanyak  10  buah  dikupas kemudian  diambil  kulitnya,  dipotong
tipis-tipis, dikeringkan dengan cara diangin-anginkan  selama  ±  3  hari  dan tidak  boleh  terkena  sinar  matahari langsung. Setelah kering kemudian diblender  sampai  terbentuk  serat  kasar. Serat  kasar  tersebut  ditimbang  sebanyak 500 gram, kemudian di masukan ke dalam labu  erlenmeyer  1  Liter  dan  ditambahkan etanol  96%  sebanyak  500  ml,  kemudian digoyang selama satu jam untuk mencapai kondisi homogen dalam shaker waterbath dengan  kecepatan  120  rpm  ( rotation  per minute). Larutan  tersebut  dimaserasi selama  24  jam  pada  suhu  kamar.  Setelah 24  jam,  larutan  difiltrasi  atau  dipisahkan dengan menggunakan penyaring Buchner. Residu penyeringan diangin-anginkan dan dilakukan  maserasi  ulang  sampai  3  kali. Hasil saringan 1-3 dicampur dan dipekatkan dengan Rotary Vacum Evaporator dengan  suhu  50ºC  sampai didapatkan ekstrak
kental dengan konsentrasi 100%. Metode pengujian yang digunakan  adalah  metode  modifikasi Kirby-Bauer  dengan  menggunakan  paper disk.  Bakteri Staphylococcus  aureus yang disimpan di media agar yang diambil dari stok  bakteri  murni  yang  diperoleh  dari laboratorium  farmasi  Fakultas  MIPA Universitas Sam Ratulangi, diambil dengan  jarum  ose  steril,  lalu  ditanamkan pada  media  agar  miring  dengan  cara menggores.  Bakteri  yang  telah  digores pada  media  agar  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37 0 C  selama  1  x  24 jam. Bakteri yang telah diinkubasi diambil koloninya  dari  media  agar  miring  dengan menggunakan  jarum  ose  steril  kemudian dimasukkan  ke  dalam  BHIB  sampai kekeruhannya sama dengan standar McFarland.  Lidi  kapas  steril  dicelupkan ke  dalam  suspensi  bakteri  hingga  basah.
Lidi  kapas  diperas  dengan  menekankan pada dinding tabung reaksi  bagian dalam, kemudian  digores  merata  pada  media MHA  sampai  permukaannya  tertutupi. Selanjutnya kertas saring pertama dicelupkan  ke  dalam  dalam  larutan ekstrak  kulit  nanas  yang  sudah  dilarutkan dengan  etanol  96%.  Kertas  saring  kedua dicelupkan  dengan  kontrol  positif  yaitu clindamycin yang sudah dilarutkan dengan akuades  dan  kertas  saring  pada  kertas saring  yang  ketiga  merupakan  kontrol negatif  dicelupkan  kedalam  etanol  96%. Selanjutnya  cawan  petri  diinkubasi  dalam inkubator  dalam  suhu  37 o selama  1x24 jam. Zona hambat yang terbentuk disekitar  paper  disk  diukur  diameter vertikal dan diameter horizontalnya dalam satuan  milimeter  (mm)  menggunakan jangka sorong.
(DV - DC) + (DH - DC)

## 2
Keterangan: D V : Diameter Vertikal
D H
: Diameter Horizontal
D C : Diameter Cakram
Gambar  1.  Pengukuran  diameter  zona hambat

## HASIL PENELITIAN
Cawan  petri  yang  telah  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37ºC  dalam inkubator diambil lalu dilihat zona hambat yang  terbentuk,  kemudian  zona  hambat tersebut  diukur  dengan  menggunakan jangka sorong dalam satuan milimeter dan dimasukan dalam Tabel pengamatan.
Gambar  2.  Zona  hambat  yang  terbentuk pada media MHA (A) Ekstrak kulit nanas (B) Ekstrak daging nanas (C)
Clindamycin  (  D)  etanol  96%  (E)  Zona hambat  ekstrak  kulit  nanas  (F)  zona hambat  ekstrak  daging  nanas  (G)  zona hambat Clindamycin
Tabel  1.  Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat bakteri Staphylococcus aureus
Diameter zona hambat (mm) Pengu langa n kulit nanas daging nanas Kontrol positif (Clindamyc in Kontro l negatif (etanol 96%) 1 15,03 10,51 26,6 0 2 15,7 11,6 30,15 0 3 14,7 10,9 29,15 0 4 16,45 10,65 28,1 0 5 13,45 10,6 29,85 0 Rerata 15,06    10,85 28,77 0
Tabel  1.  Menunjukan  bahwa  diameter rerata  zona  hambat  ekstrak  kulit  nanas sebesar  15,06  mm,  zona  hambat  kulit nanas  sebesar  10,85  mm  sedangkan diameter zona hambat Clindamycin sebesar  28,77mm  dan  kontrol  negatif etanol  96%  tidak  menunjukan  adanya zona hambat.
Gambar 3 Diagram diameter zona hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus
1 2 3 4 5 0 5 10 15 20 25 30 35 Pengulangan Diagram Diameter Zona Hambat kulit nanas daging nanas (Clindamycin) (etanol 96%) D G C F B A E

## PEMBAHASAN
Gambar  3  menunjukan  bahwa  ektrak kulit nanas dan daging nanas serta kontrol positif Clindamycin mempunyai  area bening  disekitar  paper  disk,  hal  ini menunjukan  bahwa  ekstrak  kulit  dan daging  nanas  yang  mengandung  enzim bromelain serta kontrol positif
Clindamycin mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel  1  menunjukan  bahwa  ekstrak kulit  nanas  mempunyai  rerata  diameter zona hambat terhadap bakteri Staphylococcus  aureus yang  lebih  besar yaitu  15,06  mm  daripada  rerata  zona hambat yang dibentuk oleh ekstrak daging nanas  10,85  mm.  Hal  ini  dikarenakan  zat aktif  yang  terdapat  pada  kulit  nanas  lebih banyak  daripada  yang  terdapat  pada daging buah nanas.
Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukan bahwa  terdapat  perbedaan  diameter  zona hambat  yang dibentuk sampel pada 5 kali pengulangan (Tabel 1). Hal ini dikarenakan  metode  paper  disk  yang digunakan  memiliki  kekurangan  yaitu tidak  bisa  mengontrol  banyaknya  ekstrak yang  terserap  pada  masing-masing  paper disk,  sehingga  membuat  hasil  diameter zona  hambat  berbeda-beda  walaupun diambil dari suspensi yang sama.
Bakteri Staphylococcus aureus merupakan  bakteri  gram  positif  yang memiliki  kandungan  lipid  yang  rendah dibandingkan dengan bakteri gram negatif.  Bakteri  gram  positif  hanya memiliki satu lapis membran peptidoglikan  yang  tebal. 8 Hal  tersebut menyebabkan bakteri Staphylococcus aureus
lebih mudah terhambat
pertumbuhannya  dibandingkan    dengan bakteri gram negatif.
Buah  nanas  mengandung  suatu  enzim yang  berperan  dalam  pemecahan  protein. Enzim  proteilitik  yang  terkandung  dalam nanas  disebut  enzim  bromelain  yang mempunyai kemampuan memecah protein sebesar  1.000  kali  beratnya. 10 Bromelain merupakan  enzim  yang  bersifat  hidrolase, yaitu  yang  bekerja  dengan  adanya  air. 10
Semakin muda buah nanas, semakin tinggi kandungan enzimnya. Kemampuan memecah  protein  enzim  bromelain,  bisa menghambat  pertumbuhan  bakteri  karena salah  satu  penyusun  membran  sel  bakteri adalah protein. 8
Kandungan  enzim  bromelain  dapat ditemukan  pada  bagian  tangkai,  batang, daun,  buah,  maupun  kulit  nanas  dalam jumlah  yang  berbeda.  Salah  satu  bagian yang  mengandung  zat  aktif  yang  paling banyak adalah di bagian bawah kulit buah nanas yang sering dibuang saat mengupas kulit buah nanas. 4
Penelitian  ini  menunjukaan  bahwa ekstrak  kulit  nanas  mempunyai  efek antibakteri  yang  lebih  besar  yaitu  sebesar 15,06  mm  daripada  ekstrak  daging  buah nanas  yang  hanya  10,85  mm  yang menurut  penggolongan  davis  dan  stout termasuk  golongan  yang  sama-sama  kuat, walaupun  zona  hambat  yang  terbentuk belum  sebanding  dengan  zona  hambat antibiotik  Clindamycin  yang  digunakan sebagai  kontrol  positif  sebesar  28,77  mm (Tabel  1)  yang  termasuk  golongan  sangat kuat  menurut  penggolongan  davis  dan stout, tetapi penelitian ini dapat menunjukan  potensi  yang  ada  di  dalam kulit buah nanas.

## KESIMPULAN
1. Ekstrak  kulit  nanas  memiliki  daya hambat  dalam  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus, hal ini dibuktikan dengan adanya zona bening di  sekitar  ekstrak  kulit  nanas  yang menandakan terhambatnya
pertumbuhan  bakteri  Staphylococcus aureus.
2. Ekstrak  daging  nanas  memiliki  daya hambat  dalam  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus, hal ini dibuktikan dengan adanya zona bening di  sekitar  ekstrak  daging  nanas  yang menandakan terhambatnya
pertumbuhan  bakteri  Staphylococcus aureus.
3. Ekstrak  kulit  nanas  mempunyai  zona hambat  yang  lebih  besar  dengan  rerata 15,06  mm  daripada  daging  buah  nanas 10,85 mm.

## SARAN
1. Diharapkan  penelitian  ini  sebagai sumber  informasi  kepada  masyarakat tentang  efek  antibakteri  yang  dimiliki buah nanas.
2. Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian lebih lanjut mengenai efektivitas ekstrak  kulit  nanas  terhadap  bakteri gram  positif  lainnya  maupun  bakteri gram  negatif  yang  dapat  menimbulkan masalah kesehatan gigi dan mulut.
3. Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian lebih lanjut mengenai efektivitas ekstrak  kulit  nanas  agar  dapat  menjadi obat alternatif dibidang kedokteran gigi dan  masyarakat  luas  dalam  mencegah infeksi  rongga  mulut,  karena  buah nanas  khususnya  nanas  kotamobagu merupakan  khas  dari  Sulawesi  Utara
yang  mudah  dijumpai  dan  relatif murah.
4. Diharapkan  kulit  nanas  yang  sering dibuang  sebagai  limbah  dapat  diolah menjadi  hal  yang  bermanfaat  salah satunya  sebagai  pengobatan  alternatif abses  rongga  mulut  disamping  obat- obatan yang telah ada.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Hieronymus,  Santoso  B.  Sari  Buah Nanas.    KANISUS. Yogyakarta; 2008 p.11-3
2. Juansah  J,  Dahlan  K,  Huriati  F. Peningkatan  Mutu  Sari  Buah  Nanas Dengan  Memanfaatkan  Sistem  Filtrasi Aliran Dead-End dari Membran Selulosa  Asetat.  Bogor:  IPB;  2009 Makara Sains Vol 13 No 1
3. Ellyfas  K,  Suprobowati  OD,  Djoko
SSBU.  Pengaruh  Pemberian  Ektrak Buah Nanas (Ananas Comosus (L.)Merr.)  Terhadap  Kematian  Larva Aedes  Aegypti.  Surabaya:  Poltekkes Kemenkes  Surabaya;  2012.  Analis Kesehatan Vol 01 No 02
4. Herdyastuti  N.  Isolasi  dan  Karateristik Ektrak  Kasar  Enzim  Bromelain  dari Batang  Nanas.  Surabaya:  UNS;  2006. Biocelebes Vol 7 No 1
5. Caesarita  DP,  Suryatmaja  L,  Kristina TN.  Pengaruh  Ekstrak  Buah  Nanas (Ananas  Comosus  L)  100%  Terhadap Bakteri  Staphylococcus  Aureus  Dari Pioderma. Semarang: Universitas Diponegoro; 2012
6. Elliott Tom, Worthington T, Osman H, Gill  M.  Mikrobiologi  kedokteran  & infeksi.  4thed.  Jakarta:  EGC;  2013. p.23-4,273-
7. Harty FJ, Ogston R. Kamus Kedokteran Gigi. EGC. Jakarta: 2012
8. Warsa  UC.  Kokus  Positif  Gram (stafilokokus). In: Staf Pengajar Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, editor. Buku ajar mikrobiologi  kedokteran.  Edisi  revisi. Tanggerang: Binapura
aksara
publisher. p.125-34
9. Fragiskos  DF.  Oral  surgery.  2007th edition New york: Springer; 2007
10. Ramayulis  R.  Detox  is  Easy.
Jakarta: Penebar Plus; 2014
11. Davis  &  Stout.  (1971).  Disc  Plate Method  Of  Microbiological  Antibiotic Assay.  Journal  Of  Microbiology.  Vol 22 No 4.