## KARAKTERISTIK DAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI RIMPANG JERINGAU
( Acoruscalamus L .)TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli PADA SABUN TRANSPARAN

## CHARACTERISTIC AND ANTIBACTERIALACTIVITY OF JERINGAU (Acoruscalamus
L.)RHIZOMEESSENTIAL OIL AGAINST Staphylococcus aureus AND Escherichia coli IN

## TRANSPARENT SOAP
Dewi Fortuna Ayu *) , Bambang Sisto Nadi, dan Akhyar Ali
Jurusan Teknologi Pertanian, Fakultas Pertanian, Universitas Riau, Kampus Bina Widya Km. 12.5, Jl. Soebrantas, Simpang Baru, Panam, Pekanbaru 28293 E-mail: Fortuna_ayu2004@yahoo.com
Makalah: Diterima 13 Maret 2018; Diperbaiki 19 Agustus 2018; Disetujui 25 Agustus 2018

## ABSTRACT
Jeringau (Acoruscalamus L.) rhizomes essential oil has an antibacterial activity so that it can be used as  additives  in  transparent  soap.The  purpose  of  this  research  was  to  study  the  effect  of  jeringau  rhizome essential oil as an antibacterial of Staphylococcus aureus and Escherichia coli on quality of transparent soap. Jeringau  rhizome  was  extracted  by  steam  and  water  distillation  method  to  obtain  the  essential  oil,  then  the essential  oil  was  added  to  the  formula  of  transparent  soap  according  to  the  treatments.  The  treatments  were addition of jeringau rhizome essential oils, such as S0 (0 mL) as control; S1 (0.05 mL); S2 (0.10 mL); S3 (0.15 mL); and S4 (0.20 mL) in 100 mL of transparent soap formula. Data were statistically analyzed using analysis of variance  and  Duncan ʹ s  New  Multiple  Range  Test  at  5%.  Research  result  showed  that  addition  of  jeringau essential oils significantly affected antibacterial activity against S. aureus and E. coli, water content, total fatty acid, free fatty acid, and degree of acidity (pH). The highest quality of transparent soap in this research was S4 (0.20  mL  addition  of  jeringau  rhizome  essential  oils).  The  transparent  soap  from  this  treatment  hadan antibacterial activity which showed11.67 and 15.46 mm on inhibitory zone against S. aureus and E. coli,12.37% water content, 34.42% total fatty acid, 1.76% free fatty acid, 9.93 degree of acidity, and 0.05 value of iritation test (almost invisible).
Keywords: Essential oil, jeringau(Acoruscalamus L.), transparent soap, antibacterial

## ABSTRAK
Minyak  atsiri  rimpang  jeringau  ( Acoruscalamus L.)  memiliki  aktivitas  antibakteri  sehingga  dapat digunakan sebagai bahan tambahan dalam sabun  transparan.Tujuan penelitian ini adalah mempelajari pengaruh minyak  atsiri  rimpang  jeringau  sebagai  antibakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli terhadap  mutu sabun  transparan.Rimpang  jeringau  diekstrak  dengan  metode  distilasi  uap  dan  air  untuk  memperoleh  minyak atsiri, kemudian minyak atsiri ditambahkan pada pembuatan sabun transparan sesuai perlakuan. Perlakuan dalam penelitian  ini yaitu  penambahan  minyak  atsiri  rimpang  jeringau  SO  (0  mL)  sebagai  kontrol;  S1 (0,05  mL);  S2 (0,10 mL);  S3 (0,15 mL); dan S4 (0,20 mL) ke dalam 100 mL formulasi sabun transparan. Data dianalisis secara statistik  menggunakan  analisis  sidik  ragam  dan  Duncan ʹ s  New  Multiple  Range  Test  pada  taraf  5%.Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan minyak atsiri rimpang jeringau berpengaruh nyata terhadap aktivitas antibakteri  melawan S.  aureus dan E.  coli ,    kadar  air,  jumlah  asam  lemak,  asam  lemak  bebas,  dan  derajat keasaman  (pH).  Sabun  transparan  dengan  mutu  tertinggi  pada  penelitian  ini  adalah  S4  (penambahan  minyak atsiri  rimpang  jeringau  0,20  mL).  Sabun  transparan  dari  perlakuan  ini  mempunyai  aktivitas  antibakteri  yang diperlihatkan dengan zona hambat melawan S. Aureus sebesar15,46 mm dan E. Coli s ebesar 11,67 mm, kadar air 12,37%, jumlah asam lemak 34,42%, asam lemak bebas 1,76%, derajat keasaman 9,93, dan nilai uji iritasi 0,05 (hampir tidak tampak).
Kata kunci: jeringau ( Acoruscalamus L.), minyak atsiri, sabun transparan, antibakteri

## PENDAHULUAN
Minyak atsiri merupakan campuran kompleks bahan alami dari metabolit sekunder yang bersifat  volatil,  diisolasi  dari  tanaman  melalui distilasi  uap  atau  air,  dan  menggunakan  tekanan (Kalemba  dan  Kunicka,  2003;  Calo et  al., 2015). Minyak  ini  dapat  diekstraksi  dari  berbagai  bagian tanaman seperti daun, buah, bunga, biji, batang, kulit
kayu,  dan  rimpang.  Banyak  tanaman  di  Indonesia yang  merupakan  sumber  penghasil  minyak  atsiri diantaranya  sereh,  cengkeh,  kenanga,  cendana,  dan jeringau.
Jeringau  ( Acoruscalamus L.)  merupakan tanaman  liar  yang  tumbuh  di  daerah  rawa,    sawah, ataupun  ditanam  sebagai  tanaman  hias  pekarangan dan  memiliki  aroma  yang  kuat  pada  daun  dan rimpangnya  (Yanti et  al. ,  2014).  Selama  ini
*Penulis Korespodensi
Tersedia online http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnaltin Nomor DOI: 10.24961/j.tek.ind.pert.2018.28.2.210
masyarakat  hanya  menggunakan  rimpang  jeringau sebagai  bahan  obat  tradisional,  misalnya  dibuat dengan  cara  ditumbuk  bersama  rimpang  bangle untuk  tapal bayi  (dioleskan  di  perut)  dan  digunakan sebagai  pilis  (dioleskan  pada  dahi)  bagi  ibu-ibu setelah melahirkan.  Menurut Sihite (2009), ekstraksi rimpang jeringau dengan metode distilasi uap dan air selama 6 jam  menghasilkan rendemen  minyak  atsiri jeringau sebesar 0,23%.
Kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada minyak atsiri jeringau adalah β-asarone,  -asarone, dan shyobunone (Kumar et  al., 2016;  Efendi  dan Widjanarko, 2014).  Penelitian Kasture et al. (2015) menunjukkan  bahwa  isolasi  minyak  atsiri  rimpang jeringau  dari  berbagai  varietas  jeringau  di  India mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Bacillus subtilis , Bacillus megaterium , Staphylococcus aureus ,  dan Escherichia  coli dengan  konsentrasi daya  hambat  minimum  sebesar  0,05%.  Yanti et al. (2014)  menambahkan  bahwa  pengujian  ekstrak etanol  dan  air  minyak  atsiri  dari  rimpang  jeringau menunjukkan  aktivitas  penghambatan  terhadap pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E.  coli .  Menurut Rita et al. (2017), nilai konsentrasi hambat minimum minyak  atsiri  rimpang  jeringau  terhadap E.  coli dan S. aureus masing-masing sebesar 4 dan 0,4% dengan zona hambat berturut-turut  6,67 dan 8,83 mm.
Bakteri S.  aureus merupakan  bakteri  Gram positif yang bersifat patogen pada manusia penyebab berbagai infeksi kulit dan jaringan lunak, mulai dari yang  jinak  seperti  impetigo  dan  selulit  sederhana hingga  berbahaya  yang  memerlukan  penanganan segera.Umumnya bakteri patogen S. aureus diisolasi dari  situs  terinfeksi  bedah,  abses  kulit,  dan  selulitis yang  bernanah  (Tong et  al., 2015),    sedangkan E. coli terutama Enterohemorrhagic  E.  Coli O157:  H7 merupakan  bakteri  Gram  negatif  yang  bersifat patogen  bawaan  makanan  karena  menghasilkan racun Shiga dan menyebabkan kolitis hemoragik dan sindrom uremik sisa hemolitik yang berbahaya pada manusia  (Lim et  al., 2013).  Baik  bakteri S.  aureus maupun E.  coli dapat  mengkontaminasi  melalui kontak  pada  kulit  dan  tangan  sehingga  masuk  ke dalam  tubuh  manusia.  Minyak  atsiri  rimpang jeringau  yang  telah  terbukti  memiliki  aktivitas antibakteri  melawan  bakteri S.  aureus dan E.  Coli (Kasture et al., 2015; Yanti et  al ., 2014; Rita et al. , 2017)  berpotensi  untuk  ditambahkan  dalam  suatu sediaan berhubungan langsung dengan kulit sehingga  dapat  mencegah  terjadinya  infeksi.  Salah satu  sediaan  yang  sering  digunakan  adalah  sabun padat.
Sabun padat transparan adalah sabun mandi berbentuk batangan dengan tampilan transparan serta menghasilkan  busa  lebih  lembut  dikulit,  dan penampakannya  lebih  berkilau  jika  dibandingkan dengan  jenis  sabun  lainnya  (Hambali et  al. ,  2004). Dalam  rangka  meningkatkan  daya  guna  rimpang jeringau  sebagai  salah  satu  sumber  alam  Indonesia yang  belum  termanfaatkan  sekaligus  sebagai  upaya
penyediaan  senyawa  antibakteri  alami  yang  aman bagi  tubuh,  maka  minyak  atsiri  dari  rimpang jeringau  dapat  ditambahkan  dalam  sediaan  sabun mandi  transparan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mempelajari  pengaruh  penambahan  minyak  atsiri rimpang  jeringau  ( Acorus  calamus L.)  sebagai antibakteri  melawan S.  aureus dan E.  coli terhadap mutu sabun transparan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan utama yang  digunakan pada penelitian  ini  berupa  rimpang  jeringau  yang diperoleh  dari  daerah  Pangean,  Kabupaten  Kuantan Singingi, Provinsi Riau. Bahan lain yang digunakan adalah  minyak  goreng  curah,  asam  stearat,  gliserin, etanol  96%,  sukrosa,  dietanolamida  (DEA),  NaCl, bakteri uji S. Aureus ATCC-25329 dan E. coli 0157 yang  diisolasi  di  Laboraturium  Teknologi  Hasil Ternak  Fakultas  Peternakan  Universitas  Andalas Padang, nutrient  agar , nutrient  broth ,  indikator phenolphthalein, indikator metil jingga, NaOH 30%, NaOH  0,1  N,  H 2 SO 4 20%,  kertas  lakmus,  heksana, HCl 0,1 N, KOH 0,1 N, kertas cakram ukuran 6 mm, dan alumunium foil .
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini berupa  seperangkat alat distilasi,  sentrifus, hot plate stirrer , magnetic  stirrer ,  cetakan  sabun,  timbangan analitik,  autoklaf,  cawan  porselen,  desikator,  oven, corong pisah, laminar  air flow , inkubator, erlenmeyer, pH meter, jangka sorong, pipet volume, pump pipet, jarum ose, lampu bunsen, penangas air, peralatan titrasi,  dan spatula.

## Metode Penelitian
Penelitian dilaksanakan dengan menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  yang terdiri  dari  lima  perlakuan,  yaitu  S0  (tanpa penambahan  minyak  atsiri),  S1  (penambahan minyak  atsiri  rimpang  jeringau  0,05  mL),  S2 (penambahan  minyak  atsiri  rimpang  jeringau  0,1 mL),  S3  (penambahan  minyak  atsiri  rimpang jeringau  0,15  mL),  dan  S4  (penambahan  minyak atsiri  rimpang  jeringau  0,20  mL)  dalam  100  mL formulasi  sabun  transparan.  Perlakuan  diulang sebanyak  4  kali.  Formulasi  sabun  padat  transparan mengacu  pada  penelitian  Hambali et  al. (2004) dengan  modifikasi  penambahan  minyak  atsiri rimpang jeringau seperti diperlihatkan Tabel 1.

## Penyulingan Minyak Atsiri Jeringau
Penyulingan minyak atsiri rimpang jeringau mengacu  pada  Sihite  (2009).  Sebanyak  750  g rimpang jeringau yang sudah dicuci, dipotong kecil- kecil  (dirajang)  dengan  ketebalan  2-4  mm.  Hasil rajangan  kemudian  dikering  anginkan.  Rimpang yang  sudah  kering  dimasukkan  dalam  ketel penyulingan yang telah diisi air, lalu disuling dengan menggunakan  penyulingan  uap  dan  air  sampai  uap air dan minyak atsiri keluar.
Proses penyulingan dilakukan selama 6 jam pada  suhu  100°C.  Campuran  minyak  atsiri  dan  air kemudian  ditampung  pada  bak  penampung  cairan. Hasil penyulingan dipisahkan dari  air  menggunakan sentrifus. Minyak atsiri kemudian disimpan didalam botol  bertutup  rapat  pada  suhu  5°C  dan  terlindung dari cahaya matahari.
Tabel 1. Formulasi sabun padat transparan
Bahan Perlakuan S0 S1 S2 S3 S4 Minyak atsiri (mL) 0 0,05 0,10 0,15 0,20 Minyak goreng curah(mL) 20 20 20 20 20 Asam stearat (g) 7 7 7 7 7 NaOH 30% (mL) 20,3 20,3 20,3 20,3 20,3 Gliserin (mL) 13 13 13 13 13 Etanol (mL) 15 15 15 15 15 Larutan sukrosa (mL) 17 17 17 17 17 NaCl (g) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 DEA (mL) 3 3 3 3 3 Air (mL) 4,5 4,5 4,5 4,5 4,5

## Pembuatan Sabun Transparan
Bahan-bahan dasar untuk 100 mL formulasi sabun  transparan  ditimbang  sesuai  perlakuan. Sebanyak  7  g  asam  stearat  dilebur  dalam  20  mL minyak goreng curah pada suhu 70-80°C. Setelah itu larutan NaOH 30%  sebanyak  20,3  mL  ditambahkan dan  diaduk  selama  5  menit  hingga  terbentuk  stok sabun.  Setelah  terbentuk  stok  sabun,  sebanyak  13 mL  gliserin,  15  mL  etanol,  17  mL  sukrosa,  3  mL DEA,  dan  0,2  g  NaCl  ditambahkan  dan  diaduk selama  10  menit  pada  suhu  50-60°C  hingga campuran  menjadi  homogen.  Setelah  itu  minyak atsiri  jeringau  (0  mL;  0,05  mL;  0,1  mL;    0,15  mL; 0,20  mL)  dan  4,5  mL  air  ditambahkan,  kemudian diaduk  pada  suhu  40°C  hingga  homogen,  lalu dituang  dalam  cetakan  dan  didiamkan  kurang  lebih 24 jam pada suhu kamar.
Pembuatan Media Nutrient Broth untuk
Perbanyakan Bakteri
Prosedur pembuatan media untuk perbanyakan  bakteri  mengacu  pada  Bridson  (2006). Media  yang  digunakan  adalah nutrient  broth yang dibuat  dengan  menimbang  0,2  g nutrient  broth dan dilarutkan  akuades  hingga  mencapai  volume  50  mL di  dalam  erlenmeyer.  Larutan  didistribusikan  dalam tabung  reaksi  masing-masing  sebanyak  5  mL,  lalu ditutup dengan kapas dan dilapisi dengan aluminium foil. Kemudian  media  disterilkan  menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.Media ini digunakan  untuk perbanyakan  bakteri S. aureus dan E. coli .
Pembuatan Media Nutrient Agar untuk Pengujian Antibakteri
Prosedur  pembuatan  media nutrient  agar untuk  pengujian  antibakteri  mengacu  pada  Bridson
(2006). Media nutrient agar ditimbang sebanyak 10 g, dimasukkan dalam erlenmeyer kemudian dilarutkan akuades hingga mencapai volume 500 mL dan  diaduk.  Larutan  media  ditutup  dengan  plastik dan aluminium  foil serta  diaduk  menggunakan magnetic  stirrer hingga  tercampur  rata.  Setelah  itu, larutan  media  disterilisasi  menggunakan  autoklaf selama  15  menit  pada  suhu  121°C.  Larutan  media diturunkan suhunya hingga sekitar 50-60°C. Larutan media steril kemudian dituang ke dalam cawan petri masing-masing  sebanyak  15  mL.  Penuangan  media dilakukan dalam laminar air flow . Cawan petri yang berisi  mediakemudian  ditutup  dan  dibiarkan  sampai membeku.

## Perbanyakan Bakteri
Isolat S.  aureus ATCC-25329  dan E.  coli 0,157  masing-masing  diinokulasikan  sebanyak  satu ose dalam  tabung reaksi berisi  media nutrient broth 5  mL.  Kemudian  isolat  dan  media  (inokulum) diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37°C  dalam inkubator hingga diperoleh kultur aktif yang berubah warna  menjadi  keruh.  Kultur  aktif  lalu  disimpan pada suhu 37°C dan siap digunakan.

## Analisis Karakteristik Sabun Transparan
Pengamatan yang dilakukan terhadap sampel sabun transparan meliputi aktivitas antibakteri,  kadar  air,  jumlah  asam  lemak,  asam lemak  bebas/alkali  bebas,  pH,  dan  uji  iritasi.  Uji aktivitas  antibakteri  bertujuan  untuk  mengetahui konsentrasi minyak atsiri yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri E.coli dan S. aureu s. Pengujian ini  dilakukan  dengan  metode  difusi  menggunakan kertas  cakram.  Kertas  cakram  (diameter  6  mm) direndam dalam larutan uji pada konsentrasi 20% (4 g  sabun  disuspensikan  dalam  20  mL  air)  kemudian diletakkan  di  atas  permukaan  media nutrient  agar yang  sebelumnya  telah  disebar  0,1  mL  kultur mikroorganisme uji. Sampel kemudian diinkubasikan  selama  24  jam  pada  suhu  37°C. Diameter  daerah  hambat  yang  terdapat  di  sekitar kertas cakram diukur menggunakan jangka sorong.
Pengukuran  kadar  air  sabun  transparan dilakukan dengan cara sampel ditimbang sebanyak 2 g  dan  dimasukkan  ke  dalam  cawan  porselin  yang telah diketahui beratnya.  Sampel dipanaskan dalam oven  selama  3  jam  pada  suhu  105°C.  Kemudian sampel  didinginkan  dalam  desikator  selama  30 menit,  lalu  ditimbang.  Perlakuan  ini  diulang  sampai tercapai berat konstan (selisih penimbangan berturut- turut  kurang  dari  0,2  mg).  Kadar  air  pada  sabun transparan dihitung dengan rumus:
Kadar air (%) = W1-W2 W1 ×100% ....................        (1) Keterangan : W = Berat sampel (g)
W1   = Berat sampel+cawan petri kosong (g)
W2 = Berat sampel setelah pengeringan (g)
Penentuan  jumlah  asam  lemak  pada  sabun transparan  mengacu  pada  Qisti  (2009).    Sabun transparan  ditimbang  sebanyak  10  g,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala  250  mL  dan ditambahkan  50  mL  akuades.  Setelah  itu  3  tetes indikator metil jingga ditambahkan ke dalam larutan sabun  tersebut  dan  ditambahkan  H 2 SO 4 20% berlebih  hingga  semua  asam  lemak  terbebas  dari natrium  yang  ditunjukkan  oleh  adanya  perubahan warna  larutan  menjadi  merah.  Selanjutnya  larutan tersebut  dimasukkan  ke  dalam  corong  pemisah  dan dikocok  kurang  lebih  15  menit.  Setelah  didiamkan dan  terbentuk  2  lapisan,  maka  lapisan  bawah  yang berupa  air  segera  dikeluarkan,  kemudian  diekstrak dengan 25 mL heksana sebanyak 3 kali.
Langkah berikutnya pelarut dibilas akuades sampai  tidak  bersifat  asam,  diketahui  menggunakan kertas  pH.  Kemudian  pelarut  dengan  asam  lemak dipisahkan  dengan  cara  penyulingan.  Asam  lemak yang  diperoleh  kemudian  dimasukkan  ke  dalam cawan  porselin  yang  sebelumnya  sudah  ditimbang untuk mengetahui berat cawan kosongnya. Selanjutnya  cawan  porselin  yang  berisi  asam  lemak tersebut  dioven  pada  suhu  105°C  selama  1  jam sampai  terbebas  dari  pelarut  heksana.  Kemudian cawan  porselin  ditimbang  dan  dicatat  hasil  yang diperoleh.    Jumlah  asam  lemak  pada  sabun transparan dihitung menggunakan rumus berikut:
Jumlah asam lemak (%) = (W2-W1) W ×100% ……..   (2)
Keterangan:
W = Berat sampel (g)
W1 = Berat cawan porselin kosong (g)
W2 = Berat cawan porselin + asam lemak (g)
Penentuan  asam  lemak  bebas  dilakukan dengan  cara  sabun  transparan  ditimbang  sebanyak 2,5 g dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mL. Kemudian  alkohol  96%  ditambahkan  sebanyak  50 mL  (yang  telah  dinetralkan  dengan  NaOH  0,1  N) dan  ditambahkan  2  mL  indikator  phenolphthalein. Selanjutnya  larutan  dititrasi  dengan  NaOH  0,1  N tetes  demi  tetes  melalui  buret  sampai  timbul  warna merah  muda  yang  tahan  selama  30  detik.  Kadar asam  lemak  bebas  pada  sabun  transparan  dapat dihitung menggunakan rumus:
Asam lemak bebas (%) = V×N×BM M×1000 ×100% ...........(3)
Keterangan: V = Volume titrasi NaOH (mL)
N = Normalitas NaOH (0,1 N) BM  = Berat molekul minyak kelapa sawit (263 g/mol)
M = Berat sabun transparan (g)
Penentuan  alkali  bebas  dilakukan  dengan cara  sabun  transparan  ditimbang  sebanyak  10  g,
kemudian  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer    250 mL.  Setelah  itu  alkohol  96%  netral  ditambahkan sebanyak  25  mL  dan  dikocok  hingga  tercampur, kemudian 3 tetes indikator phenolphthalein ditambahkan.    Langkah  terakhir  yaitu  dititrasi dengan  larutan  HCl  0,1  N  hingga  warna  merah jambu hilang dan dicatat volume HCl yang dipakai. Jumlah  alkali  bebas  pada  sabun  transparan  dapat dihitung menggunakan rumus:
Alkali bebas (%) = V×N×BM M×1000 ×100%  ……….. … . (3)
Keterangan: V = Volume titrasi HCl (mL) N = Normalitas HCl (0,1 N)
BM  = Berat molekul NaOH (40 g/mol)
M = Berat sabun transparan (g)
pH  sabun  transparan  diukur  menggunakan pH meter. Alat terlebih dahulu dikalibrasi menggunakan larutan buffer pH 4 dan 9. Pengukuran pH  dilakukan  dengan  mengencerkan  1  g  sabun transparan  dengan  10  mL  akuades  di  dalam  suatu wadah,  kemudian  elektroda  dicelupkan  ke  dalam larutan  tersebut  dan  dibiarkan  bergerak  sampai angka  konstan.  Angka  yang  ditunjukkan  pH  meter merupakan pH sabun transparan.
Uji  iritasi  sabun  transparan  mengacu  pada Trifena  (2012).  Sabun  transparan  sebanyak  0,1  g dicampur dengan 5 mL air, kemudian dioleskan pada lengan bagian bawah yang telah diberi tanda dengan diameter  3  cm  dan  dibiarkan  selama  1  jam.  Gejala yang  terjadi  dapat  berupa  eritema  maupun  edema. Eritema  adalah  suatu  penyakit  yang  ditandai  oleh adanya bercak-bercak kemerahan, sedangkan  edema adalah  akumulasi  abnormal  cairan  di  dalam  ruang interstitial  (celah  di  antara  sel)  atau  jaringan  tubuh yang menimbulkan pembengkakan.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  berupa  pengukuran aktivitas  antibakteri,  kadar  air,  jumlah  asam  lemak, asam  lemak  bebas/alkali  bebas,  derajat  keasaman (pH), dan uji iritasi dianalisis secara statistik dengan menggunakan Analysis  of  Variance (ANOVA). Apabila dari hasil uji didapatkan F hitung > F tabel maka akan  dilakukan  uji  lanjut  dengan Duncan’s  New Multiple Range Test (DNMRT) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Sabun Transparan
Penyulingan  minyak  atsiri  dari  rimpang jeringau  yang  dilakukan  dengan  menggunakan metode distilasi uap dan air menghasilkan rendemen minyak  atsiri  sebesar  0,3%,  sedikit  lebih  tinggi dibandingkan  hasil  penelitian  Sihite  (2009)  sebesar 0,23%, dengan karakteristik berwarna kuning, bobot jenis  1,0710  g/mL,  dan  bilangan  asam  3,59.  Bobot jenis  minyak  atsiri  jeringau  ini  sudah  memenuhi
standar  mutu  minyak  jeringau  tipe  India  EAO  No. 101 dengan karakteristik warna kuning-coklat muda, bobot jenis 1,06-1,08 g/mL, dan bilangan asam maks 4  (Yuliani  dan  Sahutu,  2012).  Jika  dibandingkan dengan  minyak  atsiri  jenis  lain,  bobot  jenis  minyak jeringau  lebih  tinggi  dibandingkan  bobot  jenis minyak kayu putih yaitu sebesar  0,900-0,930  (SNI, 2014),  namun telah  memenuhi  bilangan  asam untuk standar  mutu  minyak  nilam  yaitu  maksimal  5,0 (SNI,  2006).  Minyak  atsiri  rimpang  jeringau  ini kemudian  ditambahkan  dalam  formulasi  sabun transparan  sesuai  perlakuan.  Hasil  pengujian aktivitas antibakteri dan mutu sabun transparan pada beberapa konsentrasi minyak atsiri jeringau diperlihatkan pada Tabel 2.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil  pengujian  menunjukkan  rata-rata diameter  zona  hambat  minyak  atsiri  rimpang jeringau  pada  sabun  transparan  yang  diukur menggunakan  kertas  cakram  berdiameter  6  mm terhadap bakteri S. aureus berkisar antara 9,54-15,46 mm  dan  bakteri E.  coli berkisar  antara  8,61-11,67 mm (Tabel 2). Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Rita et  al. (2017),  yang  mengatakan  bahwa  minyak atsiri  rimpang  jeringau  memiliki  daya  hambat  yang kuat  terhadap S.  aureus (11-14  mm)  dan  daya hambat sedang sampai kuat untuk E. coli (6-12 mm). Zona  hambat  pada  bakteri S.  aureus dan E.  coli dapat  dilihat  pada  Gambar  1  dan  2.  Kemampuan hambat  terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli disebabkan adanya senyawa antibakteri pada minyak atsiri  jeringau.  Menurut  Efendi  dan  Widjanarko (2014),  senyawa  aktif  pada  minyak  atsiri  jeringau yang paling banyak yaitu β-asarone .
Gambar  1.  Zona  hambat  minyak  atsiri  jeringau dalam sabun padat transparan terhadap S. Aureus
Gambar  2.  Zona  hambat  minyak  atsiri  jeringau dalam sabun padat transparan  terhadap E. coli
Tabel 2. Aktivitas antibakteri dan mutu sabun transparan dengan penambahan beberapa konsentrasi minyak atsiri jeringau
Parameter uji SNI Perlakuan* S0 S1 S2 S3 S4 Diameter zona hambat (mm)  S. aureus - 0,00 a 9,54 b 11,77 c 12,32 c 15,46 d  E. coli - 0,00 a 8,61 b 8,67 b 9,17 b 11,67 c Kadar air (%) Maks. 15** 13,51 d 13,04 c 12,83 bc 12,56 ab 12,37 a Jumlah asam lemak  (%) >70*** 31,23 a 32,13 ab 32,81 b 33,53 bc 34,42 c Asam lemak bebas (%) Maks. 2,5** 1,01 a 1,28 b 1,43 bc 1,58 cd 1,76 d Alkali bebas (%) Maks. 0,1** - - - - - pH 8-11*** 10,23 c 10,21 c 10,18 c 10,10 b 9,93 a Uji Iritasi  Eritema - 0,55 b 0,20 a 0,05 a 0,05 a 0,05 a  Edema - - - - - -
Ket  : Angka-angka yang diikuti oleh huruf kecil yang sama tidak berbeda nyata menurut uji  DNMRT pada taraf 5%.
*Penambahan minyak atsiri rimpang jeringan dalam 100 mL formulasi sabun transparan S0 (0 mL); S1 (0,05 mL); S2 0,10 mL); S3 (0,15 mL); S4 (0.2 mL) ** SNI (2016) *** SNI (1994) ***** SNI (1996)
Penelitian Kasture et al. (2015) menunjukkan  bahwa  senyawa β-asarone memiliki aktivitas  antibakteri  melawan  bakteri S.  aureus, dan E. coli pada konsentrasi 0,05%.  Hasil penelitian  Ali et  al .  (2013)  memperlihatkan  bahwa  minyak  atsiri jahe mampu melawan bakteri S. aureus , dan E. Coli pada  konsentrasi  25%,  sedangkan  hasil  penelitian Febriyenti et  al. (2014)  memperlihatkan  bahwa minyak  atsiri  ylang-ylang  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri uji pada konsentrasi 3,1% . Hal ini  membuktikan  bahwa  minyak  atsiri  rimpang jeringau  lebih  kuat  melawan  bakteri S.  aureus, dan E.  Coli dibandingkan  minyak  atsiri  jahe  maupun ylang-ylang.
Senyawa  antibakteri  dari  minyak  atsiri jeringau lebih sensitif dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  positif  ( S.  aureus), dibandingkan dengan Gram negatif ( E. coli) .  Hal ini karena  bakteri  Gram  negatif  memiliki  struktur dinding  sel  yang  kompleks,  kadar  lipid  yang  tinggi, dan  peptidoglikan  tunggal,  sedangkan  bakteri  Gram positif  mempunyai  struktur  dinding  sel  yang  lebih sederhana  dan  peptidoglikan  tebal.  Menurut  Brooks et  al. (2001),  bakteri  Gram  negatif  hanya  memiliki satu  lapisan  peptidoglikan.  Meskipun  lapisan peptidoglikan  pada  bakteri  Gram  negatif  lebih sedikit  dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  positif, namun dinding selnya tersusun lebih kompleks yaitu terdiri  dari  membran  luar,  lipoprotein,  dan lipopolisakarida.  Hal  serupa  diungkapkan  oleh Cherrat et  al .  (2014)  bahwa  minyak  atsiri  dari Laurus nobilis dan Myrtus communis memperlihatkan  aktivitas  antibakateri  yang  lebih tinggi  terhadap  bakteri  Gram  positif  daripada  Gram negatif.  Bakteri  Gram  positif S.  aureus kurang resistan  sedangkan  bakteri  Gram  negatif E.  coli O157:  H7 paling  resistan  terhadap  kedua  minyak atsiri tersebut.

## Kadar Air
Hasil  pengujian  menunjukkan  kadar  air sabun  transparan  yang  dihasilkan  berkisar  12,37- 13,51%  (Tabel  2).  Semakin  banyak  minyak  atsiri jeringau  yang  ditambahkan  maka  kadar  air  sabun transparan  semakin  rendah.  Hal  ini  disebabkan karena  minyak  atsiri  bersifat  hidrofobik  sehingga sabun  transparan  dengan  penambahan  minyak  atsiri jeringau akan memiliki gugus hidroksil (larut dalam air)  lebih  sedikit  akibat  tergantikan  oleh  gugus hidrofobiknya  (tidak  larut  dalam  air).  Menurut Efendi  dan  Widjanarko  (2014),  minyak  atsiri jeringau  bersifat  hidrofobik  karena  minyak  atsiri jeringau  memiliki  senyawa  terpen  berantai  karbon panjang  dan  senyawa  aromatik  yang  bersifat  non polar  sehingga  semakin  banyak  minyak  atsiri jeringau  yang  ditambahkan  maka  kemampuan mengikat airnya semakin kecil.
Sabun  mandi  padat  transparan  yang ditambahkan dengan minyak atsiri jeringau memiliki kadar  air  sesuai  dengan  standar  mutu  yang  sudah ditetapkan  oleh  Badan  Standarisasi  Nasional  (2016)
yaitu maksimal 15%. Kadar air dapat mempengaruhi tingkat  kekerasan  dan  daya  guna  sabun.  Semakin banyak  air  yang  terkandung  dalam  sabun  maka tingkat  kekerasan  sabun  akan  menurun.  Banyaknya air  dalam  sabun  akan  menyebabkan  sabun  cepat habis saat digunakan karena sabun akan mudah larut dalam air.

## Jumlah Asam Lemak
Jumlah  asam  lemak  adalah  keseluruhan asam  lemak  baik  asam  lemak  yang  terikat  dengan natrium maupun asam lemak bebas dan lemak netral yang  tidak  tersabunkan/ unsafonified  fat )  (SNI, 1994).  Sabun  mandi  merupakan  hasil  reaksi  antara senyawa  natrium  atau  kalium  dengan  asam  lemak dari minyak nabati dan atau lemak hewani berbentuk padat,  lunak  atau  cair,  berbusa  digunakan  sebagai pembersih,  dengan  menambahkan  zat  pewangi,  dan bahan lainnya yang tidak membahayakan kesehatan, maka  SNI  sabun  mandi  padat  (1994)  mensyaratkan jumlah  asam  lemak  dalam  sabun  mandi  padat  lebih dari  70  (%).  Hal  ini  untuk  memastikan  kecukupan jumlah  asam  lemak  untuk  terjadinya  reaksi saponifikasi.  Namun,  berdasarkan  SNI  sabun  mandi padat  (2016)  tidak  mensyaratkan  adanya  ketentuan jumlah asam lemak lebih dari 70%.
Hasil pengukuran jumlah asam lemak sabun transparan  berkisar  antara  31,23-34,42%  (Tabel  2). Semakin  banyak  minyak  atsiri  jeringau  yang ditambahkan maka jumlah asam lemak dalam sabun padat transparan  semakin  tinggi. Hal ini disebabkan karena  minyak  atsiri  jeringau  mengandung  asam lemak heksadekanoat dan heptadekanoat (Efendi dan Widjanarko,  2014),  selain  asam  lemak  bebas  yang terukur dengan bilangan asam sebesar 3,59.
Selain    minyak  atsiri  rimpang    jeringau, sumber  asam  lemak  pada  sabun  transparan  berasal dari  asam  stearat  dan  minyak  goreng  sawit  yang digunakan  sebagai  bahan  baku.  Menurut  Pasaribu (2004),  asam  lemak  dominan  pada  minyak  sawit adalah  asam  palmitat  (40-46%)  dan  asam  oleat  (30- 45%). Bahan lain yang menjadi sumber asam lemak dalam  sabun  transparan  adalah  DEA.  Menurut Hambali et  al. (2004),  DEA  merupakan  surfaktan nonionik  yang  dibuat  dengan  mereaksikan  asam lemak dengan dietanolamida.
Jumlah  asam  lemak  yang  diperoleh  dari analisis  sabun  transparan  berada  dalam  kisaran 31,23-34,42%.  Rentang  nilai  ini  belum  memenuhi batas  minimum  mutu  sabun  yang  ditetapkan  oleh SNI  sabun  mandi  padat  (1994)  tetapi  tidak  untuk SNI  sabun  mandi  padat  (2016).  Hasil  penelitian Prapanta  (2014)  menunjukkan  bahwa  jumlah  asam lemak  pada  sabun  transparan  dengan  penambahan minyak  atsiri  kulit  jeruk  pontianak  dengan konsentrasi  0,025-0,1%  juga  cukup  rendah  yaitu berkisar  34,45-34,83%.  Hal  yang  sama  juga  terjadi pada  penelitian  Qisti  (2009)  yaitu  sabun  transparan yang  diberi  perlakuan  penambahan  madu  dengan konsentrasi  2,5-7,5%  memiliki  jumlah  asam  lemak berkisar  20,03-30,64%.    Rendahnya  jumlah  asam
lemak  dalam  sabun  transparan  disebabkan  karena formulasi  sabun  transparan  yang  ditambahkan beberapa  bahan  tambahan  lain  seperti  gliserin  dan alkohol  yang  dapat  meningkatkan  transparansi. Menurut  Qisti  (2009),  penambahan  alkohol  yang berfungsi sebagai pelarut dan pembentuk transparansi  akan  menyebabkan  asam  lemak  larut karena  alkohol  bersifat  non  polar,  sehingga mengurangi  jumlah  asam  lemak  dalam  sabun transparan.

## Asam Lemak Bebas/Alkali Bebas
Hasil  pengukuran  asam  lemak  bebas  sabun transparanberkisar  1,01-1,76%  (Tabel  2).  Semakin banyak  minyak  atsiri  jeringau  yang  ditambahkan maka  jumlah  asam  lemak  semakin  bertambah  dan nilai  asam  lemak  bebas  sabun  transparan  semakin tinggi.  Hal  ini  disebabkan  karena  semakin  banyak minyak  atsiri  yang  ditambahkan  maka  semakin bertambah  jumlah  asam  lemakbebas  akibat  reaksi hidrolisis  dengan  adanya  air  yang  ditambahkan selama proses pembuatan sabun transparan. Semakin tinggi  jumlah  asam  lemak  minyak  atsiri,  maka jumlah  alkali  (NaOH)  yang  ditambahkan  semakin tidak  cukup  untuk  menyabunkan  seluruh  lemak, sehingga  meningkatkan  jumlah  asam  lemak  yang tidak  ikut  bereaksi  atau  asam  lemak  bebas.    Hasil penelitian  ini  sebanding  dengan  hasil  penelitian Ismanto et  al. (2016),  dimana  penambahan  minyak gaharu  1%  dapat  meningkatkan  kadar  asam  lemak bebas  sabun  padat  aromaterapi.  Menurut  Ayu et  al. (2010),  asam  lemak  bebas  yang  tinggi  dapat mengurangi  daya  ikat  sabun  pada  kotoran,  minyak, lemak,  ataupun  keringat.  Asam  lemak  bebas  tidak mampu mengikat kotoran karena lebih bersifat polar, berbeda  dengan  minyak,  lemak  ataupun  kotoran yang bersifat non polar.
Kadar  asam  lemak  bebas  sabun  juga  dapat dipengaruhi  oleh  kadar  asam  lemak  bebas  dari minyak  yang  digunakan.  Kandungan  asam  lemak bebas  pada  minyak  kelapa  sawit  yang  digunakan yaitu  0,25%.  Kadar  asam  lemak  bebas  ini  masih memenuhi  standar  minyak  goreng  sawit  maksimal sebesar 0,3% (SNI, 2012).
Besarnya  alkali  bebas  sabun  transparan pada  penelitian  ini  tidak  terukur,  karena  jumlahnya yang sangat kecil. Hasil penelitian ini serupa dengan hasil  penelitian  Ismanto et  al. (2016),  dimana  alkali bebas  tidak  terukur  karena  semua  alkali  telah bereaksi  dengan  semua  asam  lemak  dari  minyak kelapa  murni  dan  minyak  atsiri  yang  digunakan. Kelebihan  alkali  dalam  sabun  tidak  diharapkan karena akan menyebabkan rasa panas pada kulit saat sabun  digunakan,  namun  kekurangan  alkali  juga akan  menyebabkan  kelebihan  asam  lemak  bebas karena  semakin  banyaknya  asam  lemak  yang  tidak tersabunkan oleh alkali.

## Derajat Keasaman (pH)
Hasil pengukuran nilai pH sabun transparan berkisar  9,93-10,23  (Tabel  2).  Semakin  banyak
minyak atsiri jeringau yang ditambahkan maka nilai pH  sabun  transparan  semakin  rendah.  Efendi  dan Widjanarko (2014) menyatakan bahwa minyak atsiri jeringau mengandung asam heksadekanoat dan asam heptadekanoat.  Hasil  analisa  juga  menunjukkan minyak atsiri jeringau memiliki bilangan asam 3,59. Semakin  banyak  minyak  atsiri  yang  ditambahkan maka  semakin  banyak  asam  organik  dalam  sabun transparan  sehingga  pH  sabun  padat  transparan menjadi  semakin  turun.  Hasil  penelitian  ini sebanding dengan penelitian Prapanta (2014) dimana penambahan  minyak  atsiri  dari  kulit  buah  jeruk Pontianak    sebesar  0,025-0,1%  dapat  menurunkan pH  sabun  transparan,  dengan  kisaran  antara  10,79- 10,92.
Pengukuran  nilai  pH  dilakukan  untuk mengetahui sabun yang dihasilkan bersifat asam atau basa.  Pada  umumnya  sabun memiliki  sifat  basa,  hal ini  dikarenakan  bahan  dasar  penyusun  sabun  padat teresebut  yaitu  NaOH  yang  bersifat  basa  kuat.  pH yang  terlalu  rendah  dapat  meningkatkan  daya absorbsi  kulit  sehingga  menyebabkan  iritasi  pada kulit.  Nilai  pH  yang  tinggi  menyebabkan  kulit menjadi bersisik (Trifena, 2012).

## Uji Iritasi
Iritasi  ditandai  dengan  adanya  eritema  dan edema  pada  kulit.  Tingkat  eritema  ditandai  dengan adanya  reaksi  kemerahan  ataupun  adanya  luka sedangkan  tingkat  edema  ditandai  dengan  bengkak yang  ditimbulkan  di  permukaan  kulit  (Trifena, 2012).  Tabel  2  menunjukkan  rata-rata  pengujian iritasi  terhadap  panelis  berkisar  antara  0,05-0,52 (tidak  ada  eritema  sampai  sedikit  eritema). Penambahan  minyak  atsiri  jeringau  0-0,20  mL  ke dalam formulasi sabun transparan tidak berpengaruh nyata  terhadap  iritasi  yang  ditimbulkan.  Hal  ini berkaitan  dengan  minyak  atsiri  jeringau  yang  tidak mengandung  komponen  yang  dapat  menyebabkan iritasi.
Iritasi yang dialami beberapa panelis berupa eritema ringan lebih dikaitkan dengan nilai pH sabun transparan  yang  relatif  tinggi  dibandingkan  dengan pH  kulit  manusia.  Nilai  pH  yang  terlalu  tinggi mampu  menyebabkan  iritasi  dan  dehidrasi  kulit. Meskipun  pH  sabun  yang  dihasilkan  sudah memenuhi  standar  yang  ditetapkan  SNI  (1996), namun iritasi juga dapat disebabkan oleh kesensitifan  kulit  panelis  terhadap  jenis  alkali  yang digunakan  dalam  pembuatan  sabun.  Hadia  (2006) menyatakan  bahwa  sensitifitas  kulit  seseorang berbeda-beda,  tergantung  pada  hormon,  kesehatan kulit, dan sifat genetisnya.

## Rekapitulasi Hasil Perlakuan Terpilih
Sabun mandi merupakan sediaan pembersih kulit  yang  dibuat  dari  proses  saponifikasi  atau netralisasi dari lemak, minyak, wax, rosin atau asam dengan  basa  organik  atau anorganik  tanpa menimbulkan  iritasi  pada  kulit  (SNI,  2016).  Oleh karena  itu,  produk  sabun  mandi  harus  memenuhi
syarat  mutu  yang  telah  ditetapkan  oleh  Standar Nasional  Indonesia  (SNI).Nilai  kadar  air,  asam lemak  bebas/alkali  bebas,  dan  Ph  sabun  transparan pada  semua  perlakuan  telah  memenuhi  syarat  mutu sabun  mandi.  Jumlah  asam  lemak  sabun  transparan belum memenuhi standar yang telah ditetapkan oleh SNI  (1996),  tetapi  SNI  (2016)  tidak  mensyaratkan adanya ketentuan jumlah asam lemak yang lebih dari 70%.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa semakin  banyak penambahan  minyak  atsiri rimpang jeringau menunjukkan peningkatan aktivitas antibakteri  pada  sabun  transparan.    Penambahan minyak atsiri jeringau 0,20 mL pada formulasi sabun transparan  merupakan  perlakuan  terbaik  yang memberikan  zona  hambat  tertinggi  terhadap  bakteri S. aureu s 15,46 mm dan E. coli 11,67 mm, dengan karakteristik  kadar  air  12,37%,  jumlah  asam  lemak 34,42%,  asam  lemak  bebas  1,76%,  pH  9,93,  dan nilai uji iritasi eritema 0,05 (hampir tidak tampak).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Penambahan  minyak  atsiri  0,05-0,2  mL dalam  100  mL  formulasi  sabun  transparan memperlihatkan  daya  hambat  kategori  sedang-kuat terhadap  bakteri S.aureus dan E.  coli .  Semakin banyak  penambahan  minyak  atsiri  rimpang  jeringau meningkatkan  jumlah  asam  lemak,  asam  lemak bebas,  dan  pH  sabun  transparan.  Perlakuan  S4 (penambahan  minyak  atsiri  jeringau  0,20  mL)  pada sabun padat transparan merupakan perlakuan terbaik dengan  zona  hambat  terhadap  bakteri S.  aureus 15,46 mm dan E. coli 11,67 mm, kadar air 12,37%, jumlah  asam  lemak  34,42%,  asam  lemak  bebas 1,76%,  pH  9,93,  dan  nilai  uji  iritasi  eritema  0,05 (hampir tidak tampak).

## Saran
Penelitian  ini  perlu  dilanjutkan  dengan kajian  pengaruh  penambahan  minyak  atsiri  rimpang jeringau  terhadap  karakteristik  sensori  sabun  padat transparan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih diucapkan kepada Laboratorium  Teknologi  Hasil  Ternak  Fakultas Peternakan  Universitas  Andalas,  Padang  atas kesediaannya  memberikan  isolasi  bakteri  uji S. aureus ATCC-25329 dan E. coli 0157.

## DAFTAR PUSTAKA
Yanti AH, Anisah, dan Khotimah S. 2014. Aktivitas antibakteri ekstrak rimpang jeringau ( Acorus calamus L.) terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Eschericia  coli . Journal Protobiont . 3(3): 1-5.
Ali  S,  Baharuddin  M,  dan  Sappewali  S.  2013. Pengujian  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri jahe  ( Zingiber  officinale Roscoe)  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli . Al-Kimia . 1(2):18-31.
Ayu  DF,  Ali  A,  dan  Sulaiman  R.  2010.  Evaluasi mutu sabun padat dari minyak goreng bekas makanan  jajanan  di  Kecamatan  Tampan Kota Pekanbaru dengan penambahan natrium hidroksida dan lama waktu penyabunan. Prosiding  Konferensi  dan Seminar  Nasional  XX  Badan  Kerjasama Pusat  Studi  Lingkungan  -  Seminar  Nasional Lingkungan  Hidup. Pekanbaru,  Indonesia. 14-16 Mei 2010.
[SNI]  Standarisasi  Nasional  Indonesia  3532.2016. Standar  Mutu  Sabun  Mandi  Padat .  Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
[SNI]  Standarisasi  Nasional  Indonesia  06-3532. 1994. Standar  Mutu  Sabun  Mandi  Padat . Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
[SNI]  Standarisasi  Nasional  Indonesia  06-4085. 1996. Standar  Mutu  Sabun  Cair .  Jakarta:
Badan Standarisasi Nasional. [SNI] Standarisasi Nasional Indonesia 06-
2385.2006. Standar  Mutu  Minyak  Nilam . Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
[SNI]  Standarisasi  Nasional  Indonesia  7709.2012. Standar Mutu Goreng Sawit . Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
[SNI]  Standarisasi  Nasional  Indonesia  3954.  2014. Standar  Mutu  Minyak  Kayu  Putih .  Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Bridson  EY.  2006. The  Oxoid  Manual .9 th ed.
Basingstoke: Oxoid, Ltd.
Brooks  GF,  Butel  JS,  dan  Morse  SA.  2005.
Mikrobiologi Kedokteran .Edisi ke-22.
Jakarta: Salemba Medika.
Calo  JR,  Crandall  PG,  O’Bryan  CA,  Ricke  S  C. 2015. Essential oils as antimicrobials in food systems – A review. Food Control . 54: 111– 119.
Cherrat L, Espina L, Bakkali M, Garcia-Gonzalo D, Pagan  R,  Laglaoui  A.  2014.  Chemical composition  and  antioxidant  properties  of Laurus  nobilis L.  and Myrtus  communis L. essential  oils  from  Morocco  and  evaluation of their antimicrobial activity acting alone or in combined processes for food preservation. Journal Science Food Agric . 94: 1197-1204.
Efendi  VP  dan  Widjanarko  SB.  2014.  Distilasi  dan karakterisasi minyak atsiri  rimpang jeringau ( Acorus calamus ) dengan kajian lama waktu distilasi  dan  rasio  bahan:pelarut. Jurnal Pangan dan Agroindustri . 2(2): 1-8.
Febriyenti F, Sari LI, dan Nofita R. 2014. Formulasi sabun transparan minyak ylang-ylang dan uji efektivitas terhadap bakteri penyebab jerawat. jsfk. 1(1): 61-71.
Hadia  PKR.  2006.  Komposisi  dan  evaluasi  hasil pembuatan  sabun  padat Virgin  Coconut  Oil (VCO)  dengan  sari  jeruk  nipis.  [Skripsi]. Padang: Universitas Andalas.
Hambali  E,  Bunasor  TK,  Suryani  A,  Kusumah  GA. 2004.  Aplikasi  dietanolamida  dari  asam laurat  minyak  inti  sawit  pada  pembuatan sabun  transparan. Jurnal  Teknologi  Industri Pertanian. 15(2): 46-53.
Ismanto  SD,  Neswati,  dan  Amanda  S.  2016. Pembuatan  sabun  padat  aromaterapi  dari minyak  kelapa  murni  ( Virgin  Coconut  Oil ) dengan  penambahan  minyak  gubal  gaharu ( Aquilaria  malaccensis ). Jurnal  Teknol Pertanian Andalas. 20(2): 9-19.
Kalemba D dan Kunicka A.  2003. Antibacterial and antifungal properties of essential oils. Curr.
Med. Chem. 10:813-829.
Kasture  A,  Patel  S,  Chauhan  J,  Krishnamurthy  R. 2015. In vitroantimicrobial effect of essential oil  from  leaf  and  rhizome  of  various accessions  of Acorus  calamus Linn.  and  its phytochemical screening. Eur. Journal Med.
Chem . 9(2): 1-13.
Kumar  R,  Sharma  S,  Sharma  S,  Kumari  A,  Kumar D,  Nadda  G,  Padwad  Y,  Ogra  RK,  Kumar. N. 2016. Chemical composition, cytotoxicity and insecticidal activities of Acorus calamus accessions  from  the  western  Himalayas. Ind Crop Prod. 94;520-527.
Lim  JY,  Yoon  JW,  dan  Hovde  CJ.  2013.  A  brief overview  of Escherichia  coli O157: H7  and its  plasmid  O157. Journal  Microbiol Biotechnol. 20(1): 5–14.
Prapanta  M.  2014.  Uji  efektivitas  sabun  transparan anti  jerawat  minyak    atsiri  kulit  buah  jeruk pontianak ( Citrus nobilis Lour. var. microcarpa) terhadap isolat ( Propionibacterium acnes ). Jurnal
Mahasiswa  Farmasi  Fakultas  Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. 1(1):1-12.
Qisti  R.  2009.  Sifat  kimia  sabun  transparan  dengan penambahan  madu    pada  konsentrasi  yang berbeda.  [Skripsi].Bogor:Institut  Pertanian Bogor.
Rita WS, Suirta IW, dan Utami PPP. 2017. Aktivitas antibakteri  minyak  atsiri  rimpang  jeringan terhadap  bakteri Escherichia  coli dan
Staphylococcus aureus . Cakra Kimia (Indonesiaan E-Journal of Applied
Chemistry). 5(2): 130-136.
Sihite DT. 2009. Karakteristik minyak atsiri jeringau ( Acorus calamus ). [Skripsi]. Medan: Universitas Sumatera Utara.
Trifena.  2012.  Analisis  uji in  vitro dan in  vivo ekstrak  kombinasi  kulit  manggis  ( Garcinia mangostona L.)  dan  pegangan  ( Centella asiatica L.)  sebagai  krim  antioksidan. [Tesis]. Depok: Universitas Indonesia.
Tong  SYT,  Davis  JS,  Elchenberger  E,  Holland  TL,
Fowler  VG.  2015. Staphylococcus  aureus Infections:  Epidemiology,  pathophysiology, clinical  manifestations,  and  management. Clin. Microbiol. Rev. 28 (3): 603–61.
Yuliani  S  dan  Satuhu.  2012. Panduan  Lengkap Minyak Atsiri. Jakarta: Penebar Swadaya