Efek  minuman  cokelat  ( Theobroma  cacao  L. )  terhadap  peningkatan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin tikus putih anemia
Arisanty Nur Setia Restuti * , Adhiningsih Yulianti, Dewi Lindawati

## ABSTRACT
Background : Anemia is a condition when the body do not have enough healthy red blood cells. Laboratory sign of anemia is decreases of erythrocytes and haemoglobin (Hb) level. Anemia can be caused by deficiency of nutritional intake. Objectives : The purpose of this study was to determine changes in  the number of erythrocytes and  Hb levels of anemia rats which were intervened with chocolate drinks.
Methods  : The  design  of  this  study  was  an  experiment  with  a  pretest-posttest  control  group  design.  The  samples  in  this research were 21 male wistar rats. Rats were induced by NaNO 2 25mg/gBB for 18 days, then followed by an intervention of chocolate drink 4.3ml / day for 14 days. The results will be tested using one way ANOVA test and paired T-Test.
Results : The results of this study showed that there were significant differences in the number of erythrocytes and Hb levels between groups before the intervention (p = 0.00) and (p = 0.011), so also after the intervention there is significant differences in the number of erythrocytes and Hb levels between groups (p = 0.00) and (p = 0.01).Paired T-Test results showed that there were significant differences in the number of erythrocytes and Hb levels before and after the study in the intervention  group given chocolate drink (p = 0.00) and (p = 0.02).
Conclusion : Chocolate drinks have an effect on increasing the number of erythrocytes and Hb levels in anemia rats.
Keywords: anemia; chocolate; erythrocytes number; hemoglobin

## ABSTRAK
Latar Belakang : Anemia lebih dikenal sebagai penyakit kurang darah yang ditandai dengan berkurangnya jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin (Hb) hingga dibawah normal. Anemia dapat disebabkan oleh defisiensi asupan gizi dari makanan. Tujuan : Penelitian ini ingin mengetahui perubahan jumlah eritrosit dan kadar Hb tikus anemia yang diintervensi minuman cokelat.
Metode  : Desain  penelitian  ini  adalah  eksperimen  dengan  pretest-posttest  control  group  design.  Jumlah  sampel  yang digunakan  yaitu  21  ekor  tikus  putih  jantan  galur  wistar  yang  terdiri  dari  3  kelompok.  Kelompok  kontrol  negatif  adalah kelompok  tikus  normal,  sedangkan  kelompok  kontrol  positif  adalah  kelompok  tikus  anemia,  sedangkan  kelompok  perlakuan adalah  kelompok  tikus  anemia  yang  diintervensi  minuman  cokelat  4,3ml/hari  selama  14  hari.  Induksi  menggunakan  NaNO 2 25mg/gBB selama 18 hari supaya tikus menjadi anemia. Hasil penelitian akan di uji beda antar kelompok  menggunakan uji one way ANOVA sedangakan uji beda sebelum dan setelah perlakuan dalam kelompok menggunakan uji paired T-Test. Hasil  : Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  terdapat  perbedaan  signifikan  jumlah  eritrosit  dan  kadar  Hb  antar  kelompok perlakuan sebelum intervensi (p=0,00) dan (p=0,011) hal ini menunjukkan bahwa pada tikus yang diinduksi sudah mengalami anemia,  begitu  juga  setelah  intervensi  ditemukan  perbedaan  yang  signifikan  jumlah  eritrosit  dan  kadar  Hb  antar  kelompok perlakuan (p=0,00) dan (p=0,01).
Hasil  uji  paired  T-  Test  menunjukkan  terdapat  perbedaan  signifikan  jumlah  eritrosit  dan  kadar  Hb  sebelum  dan  setelah penelitian pada kelompok perlakuan yang diberi intervensi minuman cokelat (p=0,00) dan (p=0,02).
Kesimpulan : Minuman cokelat berefek terhadap peningkatan jumlah eritrosit dan kadar Hb tikus anemia.
Kata kunci : anemia; coklat; jumlah eritrosit; hemoglobin

## PENDAHULUAN
Anemia  atau  penyakit  kurang  darah  ditandai dengan berkurangnya eritrosit hingga dibawah normal 1 . Hemoglobin  (Hb)  merupakan  komponen  eritrosit  dan protein  konjugasi  yang  berfungsi  untuk  membawa oksigen ke seluruh jaringan tubuh 2 . Anemia menyebabkan  transportasi  oksigen  terganggu  sehingga jaringan  tubuh  orang  yang  mengalami  anemia  akan mengalami kekurangan oksigen 1 .
Penderita anemia zat besi diperkirakan mencapai 30%,  dimana  prevalensi  tertinggi  berada  di  negara berkembang  seperti  di  Indonesia,  India  dan  Malaysia. Prevalensi  anemia  adalah  sekitar  8-44%,  dengan prevalensi  tertinggi  pada  laki-laki  usia  85  tahun  atau lebih 3 .  Hasil  studi  lainya  dilaporkan  bahwa  prevalensi anemia pada laki-laki adalah 27-40% dan wanita adalah 16-21% 4 . Prevalensi  anemia  di Indonesia sendiri yaitu 21,7%  dengan    penderita  anemia  berumur  5-14  tahun sebesar  26,4%  dan  18,4%  penderita  berumur  15-24
Program Studi Gizi Klinik, Jurusan Kesehatan, Politeknik Negeri Jember. Jl. Mastrip PO BOX 164 Jember, Jawa Timur 68101, Indonesia.
* Korespondensi : E-mail: arisanty@polije.ac.id
Jurnal Gizi Indonesia (The Indonesian Journal of Nutrition) Vol. 8, No. 2, Juni 2020 (79-84) Submitted: 20 Maret 2019, Accepted: 30 Januari 2020 Tersedia Online di https://ejournal.undip.ac.id/index.php/jgi/

## Jurnal Gizi Indonesia
(The Indonesian Journal of Nutrition)
tahun 5 .  Data  Survei    Kesehatan    Rumah    Tangga (SKRT)    tahun    2012    menyatakan    bahwa  prevalensi anemia    pada    balita    sebesar    40,5%,    ibu    hamil sebesar    50,5%,    ibu  nifas sebesar  45,1%,  remaja  putri usia  10-18  tahun  sebesar  57,1%  dan  usia  19-45    tahun sebesar  39,5% 6 .
Hemoglobin  yang  rendah  menunjukkan terjadinya anemia. Anemia  ditandai dengan gejala berupa  tubuh  cepat  lelah,  jantung  berdebar,  mual dan  muntah,  mata  berkunang-kunang,  rambut rontok,  perubahan  bentuk  kuku,  penurunan  sistem imun,  sering  pingsan,  sesak  nafas,  kulit  terlihat pucat,  kelopak  mata  tampak  pucat,  sakit  kepala atau  pusing.  Kadar  Hb  dapat  dipengaruhi  oleh tersedianya  oksigen  pada  tempat  tinggal,  misalnya Hb  meningkat  pada  orang  yang  tinggal  di  tempat yang  tinggi  dari  permukaan  laut.  Hb  juga dipengaruhi oleh posisi pasien (berdiri, berbaring), dan  variasi  diurnal  (tertinggi  pagi  hari) 7 .  Anemia kronis  dapat  menyebabkan  anoksia  pada  jaringan dan organ, sehingga dapat menghambat kerja organ dan produksi energi dari sel 8 . Flavonoid merupakan  senyawa  aktif    polifenol    yang berperan    sebagai    antioksidan,    yang    dapat meningkatkan  eritropoiesis    (proses    pembentukan eritrosit)    dalam    sumsum    tulang    dan    memiliki efek    immunostimulan.  Sifat    antioksidan    ini dapat   menjaga haeme   iron    tetap  dalam   bentuk ferro    yang    berhubungan    dengan    produksi methemoglobin.  Dengan    adanya    flavonoid    saat terdapat    bentuk    ferryl  Hb    diperkirakan    dapat mencegah    setengah    dari    molekul  oxyHb teroksidasi  menjadi  metHb.  Sehingga  hemoglobin tetap  dapat  menjalankan  fungsinya    untuk mengikat    oksigen    karena    tetap    terdapat    dalam bentuk  oxyHb 4 .
Cokelat  ( Theobroma  cacao  L.) berpotensi besar  sebagai  pemasok  bahan  antioksidan  dengan kandungan  total  flavonoid  316,9  mg/l  yang tersusun  dari  beberapa  molekul  fenol 9,10,11 . Flavonoid  merupakan  senyawa  polifenol  yang berperan  sebagai  antioksidan,  yang  di  dalam  sel darah  dapat  bertindak  sebagai  penampung  radikal hidroksil  dan  superoksida  sehingga  melindungi lipid  membran  dan  mencegah  kerusakan  sel  darah merah 12 .  Penelitian  tentang  uji  aktivitas  senyawa flavonoid  total  dari Gynura  Segetum (Lour) terhadap peningkatan eritrosit memberikan pengaruh  nyata  terhadap  kenaikan  eritrosit,  hal tersebut  diduga  adanya  kandungan  senyawa flavonoid  dari  daun  dewa 12 .  Penelitian  lain mengenai  pemberian  biji Garcinia  kola yang
mengandung bahan aktif flavonoid dapat meningkatkan  kadar  Hb,  jumlah  eritrosit  serta hematokrit.  Akan  tetapi,  studi  tentang  minuman cokelat  ( Theobroma  cacao  L. )  dan  kaitannya dengan anemia masih sangat terbatas di  Indonesia. Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  betujuan  untuk mengetahui efek minuman cokelat terhadap jumlah eritrosit  dan  kadar  Hb  tikus  putih  ( Rattus norvegicus ) anemia 13 .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini menggunakan desain eksperimental  dengan  rancangan pretest-posttest control group design . Penelitian dilaksanakan pada bulan  September  sampai  November  2018  di Laboratorium  Biomedik  Fakultas  Kedokteran  Gigi Universitas  Jember.  Teknik  pengambilan  sampel yang  digunakan  adalah simple  random  sampling . Penelitian menggunakan  21 ekor tikus jantan, usia 2-3  bulan,  dan  berat  badan  200-300  gram.  Tikus terbagi  dalam  3  kelompok  tikus  yaitu  kelompok kontrol  negatif  yaitu  kelompok  tikus  normal  yang diberi  diet  standart  (pakan  dan  air),  kelompok kontrol  positif  yaitu  kelompok  tikus  anemia  yang diberi diet standart (pakan dan air), dan kelompok perlakuan yaitu kelompok tikus anemia yang diberi diet standart serta  di  intervensi  dengan  minuman cokelat  sebanyak  4,3  ml/ekor  selama  14  hari. Induksi anemia pada kelompok tikus kontrol positif dan  kelompok  perlakuan  menggunakan  sonde Natrium  Nitrit  (NaNO 2 )  sebanyak  25  mg/gBB selama  18  hari,  hal  ini  dilakukan  agar  tikus menjadi  anemia  .  Parameter  yang  diamati  pada penelitian ini adalah jumlah eritrosit dan kadar Hb. Pengukuran jumlah eritrosit dan kadar Hb sebelum dan  setelah  intervensi  dengan  pengambilan  darah melalui  sinus  orbitalis  mata.  Pengambilan  sampel darah  dilakukan  pada  hari  ke-18  dan  hari  ke-32 tanpa puasa.
Data  yang  diperoleh  di  uji  normalitas menggunakan shapiro-wilk. ,  Uji one  way  ANOVA dan post  hoc bonferroni digunakan  untuk menganalisis  perbedaan  antar  kelompok  sebelum dan  sesudah  perlakuan  dan  untuk  menganalisis efek  minuman  cokelat  terhadap  perubahan  jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin antar kelompok. Uji paired  T-Test digunakan  untuk  menganalisis perbedaan  sebelum  dan  sesudah  perlakuan. Analisis  data  dilakukan  dengan SPSS  Statistics versi  22.  Penelitian  ini  sudah  mendapatkan
persetujuan  etik  dari  Komisi  Etik  Penelitian Kesehatan  Politeknik  Negeri  Jember  dengan  No 8770/PL17/LL/2018 tanggal 24 Juli 2018.

## HASIL
Jumlah  eritrosit  dan  kadar  Hb (pre  test) setelah  pemberian  NaNO 2 selama  18  hari menunjukkan  penurunan  pada  kelompok  kontrol positif dan perlakuan dibandingkan kontrol negatif. Hasil  uji  normalitas  menggunakan shapiro  wilk
menunjukkan  niai  p  >  0,05  yang  artinya    data jumlah eritrosit dan kadar Hb terdistribusi  normal. Uji  perbedaan  jumlah  eritrosit  dan  kadar  Hb  antar kelompok  menggunakan  uji  parametrik one  way ANOVA .  Hasil  uji  beda  jumlah  eritrosit pretest antar kelompok perlakuan diperoleh nilai p = 0,000 (tabel  1),  artinya  terdapat  perbedaan  yang signifikan antar kelompok perlakuan. Hasil uji one way ANOVA dilanjutkan menggunakan uji post hoc bonferroni .
Tabel 1. Perbedaan Jumlah Eritrosit Antar Kelompok Sebelum Perlakuan ( Pre Test ) Perlakuan Mean ± Standar Deviasi (juta/Ul) p value Post hoc bonferroni Kontrol negatif 8,9±0,6 a Kontrol positif 7,01±0,67 0,000* b Perlakuan (P) 6,97±0,61 b Keterangan :*uji One way ANOVA (p < 0,05) (Data Primer, 2018)
Tabel 2. Perbedaan Kadar Hb Antar Kelompok Sebelum Perlakuan ( Pre Test ) Perlakuan Mean  ± Standar Deviasi (g/dl) p value post hoc bonferroni Kontrol Negatif 16±1,06 a Kontrol Positif 13,9±1,8 0,011* b Perlakuan 14,1±1,03 b Keterangan : *uji One way ANOVA (p < 0,05) (Data Primer, 2018)
Tabel 3. Perbedaan Jumlah Eritrosit Antar Kelompok Setelah Perlakuan ( Post Test ) Perlakuan Mean  ± Standar Deviasi (Juta/Ul) p value post hoc bonferroni Kontrol Negatif 8,9 ± 0,66 a Kontrol Positif 7,3 ± 0,59 0,000* b Perlakuan 9,3 ± 0,78 a Keterangan : *uji One way ANOVA (p < 0,05) (Data Primer, 2018)
Tabel 4. Perbedaan Kadar Hb Antar Kelompok Setelah Perlakuan ( Post Test ) Perlakuan Mean ± Standar Deviasi (g/dl) p value post hoc bonferroni Kontrol Negatif 16,3 ± 0,37 a Kontrol Positif 14,56 ± 1,16 0,001* b Perlakuan 16,2 ± 0,72 a Keterangan : *uji One way ANOVA (p < 0,05) (Data Primer, 2018)
Hasil uji post hoc bonferroni jumlah eritrosit pretest didapatkan  pada  kelompok  yang  diinduksi NaNO 2 (kontrol positif dan perlakuan) menunjukkan  perbedaan  signifikan  dibandingkan kontrol  negatif.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa penginduksian  NaNO 2 sebanyak  0,8  gram  dapat menurunkan jumlah eritrosit secara signifikan pada kelompok perlakuan dan kontrol positif (tabel 1).
Hasil  uji  beda one  way  ANOVA kadar  Hb pretest antar kelompok perlakuan diperoleh nilai p 0,011  (tabel  2),  artinya  terdapat  perbedaan  yang signifikan antar kelompok perlakuan. Hasil uji one way ANOVA dilanjutkan menggunakan uji post hoc bonferroni .
Hasil  uji post  hoc  bonferroni kadar  Hb pretest adalah terdapat perbedaan signifikan antara kelompok  yang  diinduksi  NaNO 2 dibandingkan kontrol  negatif.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa penginduksian NaNO 2 0,8 gram dapat menurunkan kadar Hb secara signifikan pada kelompok kontrol positif dan perlakuan (tabel 2).
Hasil  analisis  uji  beda  jumlah  eritrosit  antar kelompok  sesudah  pemberian  minuman  cokelat diperoleh nilai p = 0,00 artinya terdapat perbedaan signifikan  jumlah  eritrosit  pada  antar  kelompok perlakuan.  Hasil  uji one  way  ANOVA dilanjutkan ke  uji post  hoc  bonferroni .  Dari  hasil  uji post  hoc bonferroni dapat  diketahui  bahwa  pemberian minuman  cokelat  memberikan  pengaruh  terhadap
peningkatan  jumlah  eritrosit  pada  kelompok perlakuan  apabila  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  positif.  Hal  tersebut  ditunjukkan  dengan jumlah  eritrosit  pada  kelompok  perlakuan  lebih tinggi  dibandingkan  kelompok  kontrol  negatif  dan kontrol positif (tabel 3).
Hasil  analisis One  Way  Anova pada  kadar  Hb sesudah  pemberian  minuman  cokelat diperoleh nilai  p  0,001  artinya  bahwa  terdapat  perbedaan kadar  Hb  antar  kelompok  perlakuan.  Hasil  uji one
way  ANOVA dilanjutkan  ke  uji post  hoc bonferroni .
Berdasarkan  hasil  dari  uji post  hoc dapat diketahui  bahwa  pemberian  minuman  cokelat memberikan  pengaruh  terhadap  peningkatan  kadar Hb pada kelompok perlakuan apabila dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  positif.  Hal  tersebut ditunjukkan  dengan  kadar  Hb  pada  kelompok perlakuan  lebih  tinggi  dibandingkan  kelompok kontrol positif (tabel 4).
Tabel 5. Perbedaan Jumlah Eritrosit Sebelum dan Sesudah Intervensi
Kelompok Pre Test (juta/Ul) Post Test (juta/Ul) p value Kontrol Negatif 8,9 ± 0,68 8,94 ± 0,66 0,941 Kontrol Positif 7,01 ± 0,67 7,3 ± 0,59 0,008* Perlakuan 6,97 ± 0,62 9,23 ± 0,77 0,000* Keterangan : uji paired T Test (* signifikan, p < 0,05) (Data Primer, 2018)
Tabel 6. Perbedaan Kadar Hb Sebelum dan Sesudah Intervensi
Kelompok Pre Test (g/dL) Post Test (g/dL) p Kontrol Negatif 16,2 ± 1,01 16,3 ± 0,37 0,688 Kontrol Positif 13,9 ± 1,78 14,6 ± 1,16 0,069 Perlakuan 14,12 ± 1,03 16,2 ± 0,72 0,002* Keterangan : uji paired T Test (* signifikan, p < 0,05) (Data Primer, 2018)
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  maka diketahui  bahwa  jumlah  eritrosit  pada  kontrol positif  dan  perlakuan  menunjukkan  perbedaan signifikan  antara  sebelum  dan  sesudah  intervensi. Seharusnya  pada  kelompok  kontrol  positif  tidak mengalami  peningkatan  jumlah  eritrosit,  hal tersebut dimungkinakan karena pada saat intervensi  induksi  NaNO2  dihentikan  sehingga menyebabkan  tikus  kembali  kepada  keadaan normal.  Meskipun  demikian,  kenaikan  jumlah eritrosit  tidak  sebanyak  pada  kelompok  perlakuan. Kelompok  perlakuan  mengalami  peningkatan jumlah  eritrosit  yang  signifikan  setelah  diberikan minuman cokelat dengan dosis 4,3 ml/ hari selama 14 hari. Jumlah eritrosit  pada kelompok perlakuan mengalami  peningkatan  sebanyak  2,258  juta/UI (tabel 5).
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  diketahui bahwa  kadar  Hb  pada  kelompok  kontrol  negatif dan  kontrol  positif  tidak  terdapat  perbedaan signifikan  antara  sebelum  dan  sesudah  intervensi. Kelompok  perlakuan  mengalami  peningkatan kadar  Hb  yang  signifikan  setelah  diberikan minuman cokelat dengan dosis 4,3 ml/ hari selama 14  hari.  Peningkatan  kadar  Hb  pada  kelompok perlakuan sebanyak 2,11 g/dL (tabel 6).

## PEMBAHASAN
Jumlah eritrosit dan kadar Hb pada kelompok kontrol positif dan perlakuan mengalami penurunan  secara  signifikan  dibandingkan  dengan kontrol  negatif  (tabel  1  dan  2)  setelah  pemberian NaNO 2 selama  18  hari.  NaNO 2 merupakan  bahan pengawet  yang  dapat  mempengaruhi  kemampuan eritrosit  untuk  membawa  oksigen,  menyebabkan anemia  dan  membentuk  nitrosamin  yang  bersifat karsinogenik 14 .  Nitrit  yang  masuk  kedalam  tubuh dapat  mempengaruhi  kemampuan  eritrosit  dalam membawa  oksigen.  Kemampuan  eritrosit  yang berkurang  untuk  membawa  oksigen  terjadi  karena Hb dalam eritrosit berikatan dengan NO membentuk nitrosohemoglobin. Ikatan antara nitrit dan  Hb  dapat  menginduksi  pembentukan Reactive Oxygen  Spesies (ROS)  dan  menyebabkan  stres oksidatif  pada  membran  sel  eritrosit  sehingga eritrosit  mengalami  hemolisis 1 .  Nitrit  juga  bisa menyebabkan  anemia  dengan  adanya  penelitian yang menunjukkan hasil penurunan angka eritrosit daan Hb pada penggunaan nitrit secara berlebihan. Peningkatan  pembentukan  ROS  yang  berujung pada  stres  oksidatif  akan  menyebabkan  berbagai kerusakan  hepar,  yang  merupakan  target  utama dari  ROS 15 .  Stres  oksidatif  yang  terjadi  pada  sel darah  merah  mengakibatkan  kadar  eritropoietin
turun  dan  mengganggu  sintesis  Hb 16 .  Selain  itu stres  oksidatif  juga  mengakibatkan  integritas  sel darah  merah  menjadi  lemah  sehingga  sel  darah merah menjadi sangat sensitif dan mudah lisis 17 . Pemberian minuman cokelat terbukti meningkatkan jumlah eritrosit dan kadar Hb secara signifikan  pada  kelompok  perlakuan.  Hal  tersebut disebabkan  karena  minuman  cokelat  mengandung flavonoid  yang  merupakan  antioksidan  untuk melawan  ROS.  Flavonoid  yang  terkandung  dalam bubuk  cokelat  dapat  melawan  ROS  pada  tikus diabetes  melitus  yang  ditandai  dengan  penurunan kadar gula darah puasa 14 .
Penelitian  tentang  uji  aktivitas  senyawa flavonoid  total  dari Gynura  Segetum  (Lour) memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  jumlah eritrosit 3 .  Flavonoid  merupakan  senyawa  polifenol yang  berperan  sebagai  antioksidan,  yang  di  dalam sel  darah  dapat  bertindak  sebagai  penampung radikal  hidroksil  dan  superoksida  sehingga melindungi lipid membran dan mencegah kerusakan  sel  darah.  Penelitian  lain  menyatakan bahwa ekstrak etanol meniran dapat meningkatkan jumlah eritrosit dan membuktikan ada peningkatan jumlah eritrosit pada tikus putih ( Rattus norvegicus )  strain  wistar  sebelum  dan  sesudah pemberian  air  seduhan  kelopak  bunga  rosela merah 17 .  Air  seduhan  kelopak  rosela  merah  dapat meningkatkan jumlah eritrosit karena mengandung pigmen  antosianin  (flavonoid)  yang  berperan sebagai  antioksidan.  Hasil  penelitian  tentang pemberian ekstrak daun sambung nyawa selama 10 hari  mampu  memperbaiki  kadar  Hb  dalam  darah tikus putih 17 .
Pada  kelompok  kontrol  positif  juga  terjadi peningkatan  jumlah  eritrosit  yang  signifikan meskipun  tidak  diintervensi  apapun.  Hal  ini  tidak sesuai  harapan,  peningkatan  jumlah  eritrosit  pada kelompok  kontrol  positif  dikarenakan  proses eritropoisis  sudah  terjadi.  Pembentukan  eritrosit diatur oleh suatu hormon glikoprotein yang disebut eritropoietin.  Pembentukan  eritrosit  ini  juga  dapat dipengaruhi  oleh  fatktor  lain  yaitu  protein 15 .  Akan tetapi,  kadar  Hb  pada  kelompok  kontrol  positif tidak mengalami  peningkatan  yang signifikan. Hal tersebut dikarenakan proses pembentukan Hb yang lebih  lama  dibandingkan  peningkatan  jumlah eritrosit.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian sebelumnya  dimana  pemberian  bubuk  kakao sebanyak  2,6  gram  dapat  meningkatkan  kadar  Hb pada tikus anemia secara signifikan 18 . Pada proses
hematopoesis  yang  pertama  terbentuk  adalah eritrosit yang diatur oleh hormon glikoprotein yang disebut  eritropoietin.  Sel  pertama  yang  diketahui sebagai  rangkaian  pembentukan  eritrosit  disebut proeritorblas. Sel-sel baru dari generasi pertama ini disebut sebagai basofil eritroblas sebab dapat dicat dengan warna basa. Sel-sel ini mengandung sedikit sekali  Hb.  Pada  tahap  berikutnya  baru  akan  mulai terbentuk  cukup  Hb  yang  disebut  polikromtofil eritroblas 15 .

## SIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan maka  dapat  disimpulkan  bahwa  minuman  cokelat berefek  terhadap  peningkatan  jumlah  eritrosit  dan kadar Hb tikus anemia.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Purbadewi  L,  Ulvie  YN.  Hubungan  Tingkat Pengetahuan  Tentang  Anemia  Dengan  Kejadian Anemia Pada Ibu Hamil. Jurnal Gizi. 2013;2(1).
2. Ambarwati R. Effect of Sodium Nitrite ( NaNO 2 ) to  Erithrocyte  and  Hemoglobin  Profile  in  White Rat (Rattus norvegicus). Folia Medica Indonesiana. 2012;48(1):1-5. http://journal.unair.ac.id/filerPDF/fmi0fbe2803b5f ull.pdf. [diakses: 13 Maret 2019).
3. World  Health  Organization  (WHO).  Global Prevalence of Anaemia. Geneva. 2015.
4. Sundaryono.  Uji  Aktivitas  Senyawa  Flavonoid Total  dari  Gynura  segetum  (Lour)  Terhadap Peningkatan  Eritrosit  Dan  Penurunan  Leukosit Pada  Mencit    (Mus  musculus).Jurnal  Exacta, 2011;(9)2:8-16.
5. Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Riset Kesehatan Dasar. Jakarta. 2013.
6. Li S, Tan H, Wang N, Zhang Z, Lao L, Wong C, et al. The  Role  of  Oxidative Stress and  Antioxidants in Liver Diseases. 2015;10:26087–124.
7. Camaschella  C.  Iron-deficiency  anemia.  N  Engl  J Med. 2015; 7;372(19):1832-43.
8. Yue  Y,  Wang  Y,  Li  D,  Song  Z,  Jiao  H,  Lin  H. A central role for the mammalian target of rapamycin in  LPS-induced  anorexia  in  mice.  J.  Endocrinol. 2015;1;224:37-47.
9. Mita  N.  Formulasi  Krim  dari  Kulit  Buah  Kakao (Theobroma  cacao  L.)  Berkhasiat  Antioksidan. Journal  of  Tropical  Pharmacy  and  Chemistry. 2015;30;3(1):12-21.
10. Restuti,  A.  N.  S.,  Yulianti,  A.,  Oktafa,  H., Alfafa,DN.,  Yani,  FN.,  Kurniati,  M.,  Wulandari, P.,  Analisis  Aktivitas  Antioksidan  dan  Uji
Organoleptik Minuman Cokelat (Theobroma cacao L. Prosiding Seminar Nasional INAHCO. 2019:13- 18.
https://publikasi.polije.ac.id/index.php/inahco/artic le/view/1763/1105.
11. Restuti,  A.  N.  S.,  Yulianti,  A.,  Nuraini,  N. Intervensi  Bubuk  Kakao  terhadap  Perubahan Kadar  Gula  Darah  Puasa  Tikus  Sprague  dawley Diabetes Melitus. Jurnal Riset Kesehatan. 2018;7(2):57–60.
http://ejournal.poltekkes- smg.ac.id/ojs/index.php/jrk/article/view/3646/946.
12. Mazhar  M,  Faizi  S,  Gul  A,  Kabir  N,  Simjee  SU. Effects  of  naturally  occurring  flavonoids  on ferroportin  expression  in  the  spleen  in  iron deficiency anemia in vivo. RSC Adv.
2017;7(38):23238-45.
13. Fibach E, Rachmilewitz E.  The Role of Oxidative Stress  in  Hemolytic  Anemia.  Current  Molecular
Medicine. 2008;609–19. DOI : 10.2174/156652408786241384. http://www.eurekaselect.com/67891/article (diakses 13 Maret 2019)
14. Unigwe,  C.R.  dan  P.E.  Nwakpu.  2009.  Effect  of
Ingestion of Garcinia kola Seed on Erythrocytes in Rabbits.  Continental  Journal.  Veterynary  Sciences
2009;3:7-10
15. Lin  CY,  Hsiao  WC,  Huang  CJ,  Kao  CF,  Hsu  GS. Heme  oxygenase-1  induction  by  the  ROS–JNK pathway plays a role in aluminum-induced anemia. J Inorg Biochem. 2013;1(128):221-8.
16. Yuningsih.  Keracunan  nitrat-nitrit  pada  ternak ruminansia  dan  upaya  pencegahannya.  Bogor  : Balai Besar Penelitian Veteriner. 2007
17. Zulkifli.,  Maruni,  W.D.,  Yunan,  J.,  Laksmi,  S. Jumlah  Eritrosit  Darah  Tepi  Hewan  Coba  Tikus Putih  (Rattus  norvegicus)  Strain  Wistar  Yang Diberikan  Air  Seduhan  Kelopak  Bunga  Rosela Merah  (Hibiscus  sabdariffa).  Media  Bina  Ilmiah. 2014;8(4):11-17.
https://studylibid.com/doc/142500/2-jumlah- eritrosit-darah-tepi-hewan-coba-tikus 18. Farikhah,A.,  Indriani,  F.,    Yulianti,  A.,  Restuti, ANS.  Intervensi  Bubuk  Kakao  Terhadap  Kadar Hemoglobin  Tikus  Putih  Galur  Wistar  Anemia. Prosiding  Seminar  Nasional  INAHCO.  2019:80- 91. https://publikasi.polije.ac.id/index.php/inahco/artic le/view/1771/1113.