Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.12 No.2, November 2022
Efektivitas antibakteri ekstrak daun sisik naga (Drymoglossum piloselloides) terhadap bakteri MethicilinRresistant Staphylococcus aureus (MRSA) dan Eschericia coli
Putri Nadia Indah Kurniasari 1 , Roeswandono W 2 , Freshinta Jellia Wibisono 3 , Ady Kurnianto 4
1234 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Wijaya Kusuma Surabaya Email : atmajaros@uwks.ac.id

## Abstract
The  purpose  of  this  research  aimed  to  determine  the  antibacterial  effectiveness  of  the methanolic extract of dragon scales leaves ( Drymoglossum piloselloides ) against MRSA (Methicilin- resistant Staphylococcus aureus ) and Eschericia coli bacteria in vitro using the diffusion method. This research used a population of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus and Eschericia coli bacteria. The  sample  to  be  used  is  dragon  scale  leaf  methanol  extract.  The  method  in  this  research  used experimentally  with  6  treatments,  namely  dragon  scale  leaf  methanol  extract  with  concentrations  of 45%, 55%, 65%, 75%, negative control (methanol) and positive control (chloramphenicol antibiotics). Data collection in this study was carried out by recording the diameter of the inhibition zone using a caliper  (mm).  The  data  obtained  from  the  diameter  of  the  inhibition  zone  of  75%  extract  variation resulted in an inhibition zone of 17.02 mm (in MRSA) and 8.47 mm (in E.coli ). Chloramphenicol was found  to  be  resistant  to  MRSA,  but  sensitive  to E.coli .  Data  analysis  used  ANOVA  test  which statistically  showed  that  there  was  a  significant  difference  (P<0.05)  in  the diameter  of  the inhibition zone of the dragon scale leaf methanol extract against MRSA bacteria and there was a very significant difference (P<0.01) in the diameter Inhibition zone of dragon scale leaf methanol extract against E. coli bacteria.
Keywords:  Dragon  scale  leaf,  inhibition  zone  diameter,  Escherichia  coli,  Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Indonesia memiliki keanekaragaman hayati  yang  besar  dengan  menempati  urutan ketiga  terbesar  di  dunia  setelah  Brazil  dan Zaire.  Di  Indonesia  terdapat  sejumlah  3.689 spesies tanaman obat namun hanya 283 spesies obat  tradisional  yang  digunakan.  Salah  satu tumbuhan  obat  yang  digunakan  di  Indonesia adalah  tumbuhan  epifit.  Salah  satu  epifit  yang digunakan  sebagai  obat  yaitu  paku  sisik  naga ( Drymoglossum piloselloides ) (Bali dan Wehantouw, 2014). Menurut Ren et al., (2003) dalam Yuliastuti et al., (2014) Daun sisik naga merupakan  salah  satu  tanaman  herbal  yang mampu digunakan untuk pengobatan antikanker, antioksidan kuat, dan antiperadangan. Daun sisik naga juga berperan sebagai antibakteri karena mengandung minyak atsiri,  sterol  atau  triterpen,  flavonoid,  fenol, tanin, dan gula (Haninah et al ., 2014).
Penelitian yang dilakukan oleh Heriyati et al (2016)  yaitu  ekstrak  daun  sisik  naga
memiliki  efek  toksisitas  bakteriostatis  pada bakteri Staphylococcus  aureus .  Senyawa antibakteri  dapat  bersifat  bakteriostatik  dan bakteriosida.  Toksisitas  bersifat  bakteriostatik apabila  efek  yang  ditimbulkan  hanya  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  secara terbatas. Toksisitas bersifat bakteriosida apabila  efeknya  secara  total  dapat  membunuh bakteri. Penggunaan ekstrak daun sisik naga 0,5 -  2,5%  dengan  cara  maserasi  menggunakan metanol  96%,  kemudian  difraksinasi  dengan etil  asetat  dapat  memberikan  efek  antibakteri terhadap  bakteri Staphylococcus  epidermidis dan Escherichia coli dengan zona hambat 9,08, 11,25  dan  13,16  mm  untuk S.  epidermidis , sedangkan  pada E.  coli dengan  konsentrasi yang  sama  menghasilkan  zona  hambat  8,83, 10,08  dan  11,08  mm  (Rahmawati,  2015). Berdasarkan  pernyataan  di  atas,  maka  peneliti ingin melakukan penelitian mengenai Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Sisik Naga  ( Drymoglossum  piloselloides )  Terhadap
Received : 5 September 2022 Accepted : 10 Oktober 2022 Published : 1 November 2022
Bakteri Methicilin-resistant  Staphylococcus aureus (MRSA) dan E. coli .

## METODE PENELITIAN
Jenis  peneltian  yang  digunakan  adalah penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan enam  perlakuan.  Keenam  perlakuan  pada penelitian ini yaitu : ekstrak metanol daun sisik naga  dengan  konsentrasi  45%,  55%,  65%  dan 75%,  kontrol  negatif  dengan  pemberian metanol  dan kontrol  positif  dengan pemberian antibiotik kloramfenikol 30 µg untuk menganalisa  efektivitas  antibakteri  ekstrak metanol daun sisik naga terhadap bakteri biakan klinis Methicilin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) dan Eschericia coli.
Penelitian  ini  dilakukan  pada  tanggal  14 Juni  2021  di  Laboratorium  Mikrobiologi Universitas  Muhammadiyah  Sidoarjo.  Sample daun  sisik  naga  diperoleh  dari  daerah Bondowoso, kemudian di ekstrak di Universitas  Airlangga  Surabaya  dan  uji Fitokimia dilakukan secara kuantitatif di Balai Penelitian Konsultasi Industri (BPKI).

## Alat
Alat  yang  digunakan  antara  lain:  ekstraksi maserasi,  cawan  petri,  gelas  ukur,  batang pengaduk  L, beaker  glass ,  tabung  reaksi,  rak tabung  reaksi,  mikropipet  dan  tip, bunsen,  ose bulat,  pinset,  autoklaf,  kain  saring,  jangka sorong, grinder, inkubator, timbangan analitik, botol  maserat, erlenmeyer  flask,  vortex  mixer , spuit 1 ml, dan test tube.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  antara  lain:  daun sisik naga, metanol 80%, aquades, NaCl 0,9%, Mueller  Hilton  Agar  (MHA),  Nutrient  Agar (NA), isolate klinis Methicilin-resistant Staphylococcus  aureus  (MRSA), isolate  klinis Eschericia coli, cakram disk kosong, lidi kapas steril, standar  0,5  Mc  Farland ,  gloves,  tissue, spirtus,  sabun  cuci  piring, sample  tube ,  kertas saring,  masker,  dan  antibiotika  cakram kloramfenikol 30 µg.

## Ekstraksi
Tumbuhan  sisik  naga  yang  digunakan adalah  daunnya  saja,  rantingnya  di  buang kemudian daun sisik naga di cuci hingga bersih. Setelah  bersih  daun  sisik  naga  diletakkan  di wadah tampah bambu beralaskan tissue dan di
angin  -  anginkan  hingga  kering  tanpa  terkena sinar  matahari  secara  langsung  serta  diberi silica gel untuk menghindari timbulnya jamur. Daun sisik naga diekstrak dengan menggunakan  pelarut  metanol  dan  dibuat dengan  proses  ekstraksi  cara  dingin,  yaitu maserasi (Oktavia et al ., 2017).
Daun  sisik  naga  yang  sudah  kering dihaluskan  menggunakan  grinder  hingga menjadi  simplisia  kering.  Daun  sisik  naga sebanyak  800  gram  dimasukkan  kedalam wadah  maserasi,  kemudian  ditambahkan pelarut  metanol  96%  sebanyak  3000  ml. Maserasi  dilakukan  selama  3  x  24  jam  dan setiap  1  x  24  jam  dilakukan  pengadukan. Penyaringan  dilakukan  dengan  menggunakan kertas  saring  untuk  memisahkan  filtrat  dan residunya. Ulangi proses maserasi dengan jenis dan  jumlah  pelarut  yang  sama.  Remaserasi dilakukan sebanyak tiga kali sehingga diperoleh  maserat  daun  sisik  naga  (Oktavia et al .,  2017).  Maserat  dimasukkan  ke  tabung evaporator kemudian dilakukan evaporasi pada suhu  50  -  60º  C  dengan  kecepatan  45  rpm (Damayanti dan Fitriana, 2012).
Ekstrak  cair  yang  diperoleh  diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental metanol daun sisik  naga  (Yanti et  al .,  2013).  Ekstrak  yang diperoleh  kemudian  dibuat  dalam  konsentrasi 45%,  55%,  65%  dan  75%.  Pembuatan konsentrasi  berdasarkan  perhitungan di  bawah ini (Saridewi dkk., 2017).
V1 × M1 = V2 × M2
Keterangan: M1 = konsentrasi sebelum pengenceran M2 = konsentrasi setelah pengenceran V1 = volume sebelum pengenceran V2 = volume setelah pengenceran
Masing  -  masing  konsentrasi  akan dijenuhkan ke dalam cakram dengan mengambil  sebanyak  8  ml  larutan  ekstrak, diamkan  selama  30  menit  hingga  meresap sempurna  ke  dalam  cakram  (Umarudin  dan Yuliarni., 2019). Kontrol negatif menggunakan cakram yang dijenuhkan dengan 8 ml metanol dan  kontrol  positif  menggunakan  cakram antibiotik kloramfenikol 30μg.

## Uji Fitokimia
Skrining  fitokimia  dari  hasil  ektraksi  akan dilakukan  secara  kuantitatif  oleh  BPKI.
Pengujian akan  dilakukan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) untuk mengetahui kadar senyawa fitokimia (flavonoid, fenol, saponin, tanin, minyak atsiri, sterol  atau  triterpenoid)  yang  terdapat  di  daun sisik naga.

## Isolate Bakteri
Pembiakan  bakteri  dilakukan  dengan  cara mecelupkan  lidi  kapas  steril/ cotton  swab ke dalam isolat murni Methicillin-Resistant
Staphylococcus aureus (MRSA) dan Escherichia  coli .  Kemudian  digoreskan  pada permukaan  Natrium  Agar  Plate.  Pengerjaan dilakukan  secara  aseptis  di  dekat  api  bunsen. Selanjutnya dilakukan inkubasi pada suhu 35ºC selama 24 jam (Wijayati et al ., 2014) Isolat  bakteri  MRSA  dan E.  coli yang sudah  dilakukan  peremajaan  diambil  dengan ose bulat yang sudah disterilkan menggunakan api  bunsen  dan  disuspensikan  dengan  cara dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 2  mL  larutan  NaCl  0,9%  hingga  memperoleh konsentrasi 0,5 McFarland (Fazil dkk., 2017).
Kekeruhan  suspensi  bakteri  yang  terbentuk dibaca  dengan  menggunakan McFarland densitometer.
Inokulasi  bakteri  pada  MHA  dilakukan dengan cara mencelupkan cotton swab steril ke dalam  suspensi  bakteri  yang  kekeruhannya telah  mencapai  standar  0,5 McFarland . Kemudian  goreskan  cotton  swab  steril  yang berisi  suspensi  bakteri  pada  permukaan  MHA dengan pola yang sesuai. Putar plate 60° sambil meratakan  suspensi  hingga  tersebar  pada seluruh  permukaan  MHA.Simpan  di  suhu ruangan selama 15 menit.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  daya  hambat  daun  sisik  naga terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia coli dilakukan  dengan  metode  difusi  cakram (Kirby-Bauer).  Suspensi  bakteri S.  aureus dan E.  coli diswab  merata  dengan  menggunakan cotton  swab steril  pada  permukaan  medium MHA  dan  dibiarkan  selama  15  menit.  Setelah itu  kertas  cakram  ukuran  6  mm  direndam dengan masing - masing ekstrak daun sisik naga dengan  berbagai  konsentrasi,  kontrol  positif antibiotik  kloramfenikol  dan  kontrol  negatif larutan metanol 80% selama 30 menit - 1 jam. Dalam  satu plate berukuran  90  mm  diisi sebanyak  4  buah  kertas  cakram.  Setiap plate akan  diisi  dengan  cakram  kontrol  positif, kontrol  negatif  dan  perlakuan.  Kertas  cakram
diambil  menggunakan  pinset  lalu  diletakkan pada  permukaan  media  MHA,  lalu  ditekan  - tekan  untuk  memastikan  kertas  cakram bersentuhan langsung dengan permukaan agar. Setiap plate diberi  label  sesuai  dengan  jenis perlakuan  yang  diberikan.  Setelah  itu plate diinkubasi  dengan  suhu  35°C.  Hasil  akan dilihat setelah 18 jam inkubasi.

## Analisa Data
Diameter zona hambat yang terbentuk pada MHA  kemudian  diukur  dengan  menggunakan jangka sorong. Kemudian dianalisis menggunakan uji ANOVA.

## HASIL
Pengujian  fitokimia  dilakukan  secara kuantitatif  pada  ekstrak  metanol  daun  sisik naga.
Tabel  1. Kandungan  Fitokimia  Daun  Sisik Naga.
No. Senyawa Kandungan % 1 Flavonoid 3,18 % 2 Tanin 4,01 % 3 Sterol 0,88 % 4 Fenol/Polifenol 2,96 % 5 Saponin 2,56 % 6 Terpenoid/Minyak Atsiri 1,03 %
Dari  tabel  1  diketahui  bahwa  kandungan zat  aktif  tertinggi  dari  ekstrak  metanol  daun sisik  naga  adalah  tanin  yaitu  sebesar  4,01% diikuti  dengan  flavonoid  sebesar  3,18%,  fenol sebesar  2,96%,  saponin  2,56%,  terpenoid 1,03% dan kandungan zat aktif terendah adalah sterol sebesar 0,88%.
Keterangan  Tabel  2  Nilai  rerata  yang diikuti  dengan  superskrip  yang  berbeda  (a,b,c dan  d)  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang nyata  (P  <  0,05)  pada  bakteri  MRSA  dan menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  sangat nyata pada bakteri Eschericia coli.
Hasil uji Anova pada tabel 2 menunjukkan adanya  pengaruh  yang  bermakna  dari  ekstrak metanol  daun  sisik  naga  terhadap  bakteri MRSA  dengan nilai  P  =  0.000,  sehingga pada penelitian  ini  H0  ditolak  dan  H1  diterima karena  ekstrak  daun  sisik  naga  memiliki efektifitas terhadap bakteri MRSA.
Berdasarkan tabel 2, hasil analisis terhadap bakteri E. coli di atas menunjukkan rerata zona hambat  yang  terjadi  bahwa  nilai  zona  hambat terbesar  terdapat  pada  K+  (Kloramfenikol 30μg) sehingga pada penelitian ini H0 ditolak dan H1 diterima karena ekstrak daun sisik naga memiliki efektifitas terhadap bakteri E. coli.
Gambar  1. Uji  Zona  Hambat  Bakteri Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus
Gambar 2. Uji Zona Hambat Bakteri
Escherichia coli Keterangan: (+): kontrol negatif metanol (-) :  kontrol positif kloramfenikol 45% : Ekstrak metanol daun sisik naga 45%
Tabel 2. Hasil Uji Zona Hambat Pada  Bakteri MRSA Dan Escherichia coli
55% : Ekstrak metanol daun sisik naga 55% 45%: Ekstrak metanol daun sisik naga 45% 55% : Ekstrak metanol daun sisik naga 55% 65%: Ekstrak metanol daun sisik naga 65% 75% : Ekstrak metanol daun sisik naga 75%
Gambar  3. Diagram  Zona  Hambat  Ekstrak Daun Sisik Naga
Pada  gambar  3  dapat  diketahui  bahwa diameter zona  hambat ekstrak  metanol  daun sisik  naga  terhadap  bakteri  MRSA  seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak maka  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk juga  semakin  luas.  Kontrol  negatif  tidak terbentuk  zona  hambat.  Diameter  zona hambat  MRSA  bertambah  luas  sebesar  8,17 mm  pada  kontrol  positif  sampai  pada  P4 diameter zona hambatnya sebesar 17,02 mm. Diameter zona hambat ekstrak metanol daun sisik naga pada bakteri E.coli seiring dengan meningkatnya  konsentrasi  ekstrak  maka diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  juga semakin luas hal ini ditunjukkan dengan lebar zona  hambat  sebesar  6,40  mm  pada  P1 sampai  P4  yaitu  sebesar  8,47  mm.  Kontrol positif  kloramfenikol  pada  bakteri E.coli membentuk  diameter  sebesar  26,46  mm, berdasarkan  CLSI  (2020)  termasuk  dalam kategori  sensitif  (ukuran  diameter  zona hambat ≥ 18), sedangkan pada kontrol negatif tidak terbentuk zona hambat.

## PEMBAHASAN
Uji fitokimia daun sisik naga memiliki kandungan  senyawa  methan,  flavonoid, fenol,  saponin,  minyak  atsiri  dan  sterol. Kandungan  zat  aktif  tertinggi  dari  ekstrak methanol daun sisik naga adalah tanin yaitu sebesar  4,01%  diikuti  dengan  flavonoid sebesar  3,18%,  fenol  sebesar  2,96%, saponin  2,56%,  terpenoid  1,03%  dan kandungan zat aktif terendah adalah sterol
Bakteri Perlakuan Rerata ± SD (mm) MRSA K- 0.0000 ± 0.00000a K + 8.1775 ± 0.08261b 45 % 8.7575 ± 1.57104b 55 % 12.5550 ± 1.35974c 65% 13.8200 ± 0.13491c 75% 17.0250 ± 1.85947d Escherichia coli K- 0.0000 ± 0.00000a K + 26.4650 ± 0.36189b 45 % 6.4075 ± 0.47141c 55 % 7.5200 ± 0.31948d 65% 7.9000 ± 0.20801d 75% 8.4750 ± 0.17020e
(+) (-) 45% 55% (+) (-) 66% 75% (+) (-) 45% 55%
66% 75% (+)
(-)
sebesar 0,88%. Kandungan tersebut memiliki mekanisme kerja antibakteri yang berbeda.  Hal  ini  sesuai  degan  penelitian yang  dilakukan  Arif et  al., (2018)  yang menyatakan  bahwa  hasil  uji  fitokimia  dari ekstrak  daun  sisik  naga  terdapat  senyawa fenol, flavonoid, tanin, saponin dan sterol.
Diameter  zona  hambat  rata  rata  yang terbentuk  oleh  ekstrak  metanol  daun  sisik naga terhadap bakteri MRSA dan bakteri E. coli terbentuk  akan  semakin  luas  seiring dengan  bertambahnya  konsentrasi  yang digunakan. Hal ini sesuai dengan penelitian terdahulu  yang  dilakukan  oleh  Pratiwi (2015).  Diameter  zona  hambat  yang terbentuk dikarenakan adanya zat aktif dan mekanisme  kerja  zat  tersebut  yang terkandung  di  dalam  ekstrak  daun  sisik naga.
Flavonoid  merupakan  golongan  dari senyawa  fenol  yang  mempunyai  sifat efektif  menghambat  pertumbuhan  virus, bakteri  dan  jamur  (Haninah et  al., 2014). Flavonoid menghambat pertumbuhan bakteri  dengan  cara  denaturasi  dan koagulasi protein sel bakteri (Sagita et al.,
2017).  Mekanisme  kerja  dari  flavonoid dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri yaitu  flavonoid  menyebabkan  terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel bakteri dan membentuk senyawa kompleks dengan protein  ekstraseluler  maupun  terlarut  serta dapat  pula  membentuk  kompleks  dengan dinding  sel  sehingga  dapat  merusak membran  sel  bakteri  dan  diikuti  dengan keluarnya senyawa intraseluler (Heriyati et al., 2016).  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Manimozhi et  al., (2012)  membuktikan bahwa semakin tinggi konsentrasi flavonoid  dalam  suatu  ekstrak  maka  akan semakin baik kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan bakteri.
Menurut  penelitian  yang  dilakukan oleh  Yohanes et  al 2018,  tanin  memiliki aktivitas  antibakteri  dengan  merusak komponen  membran  sel,  dinding  sel, enzim,  materi  genetik,  maupun  komponen berprotein  lainnya.  Tanin  memiliki  efek antibakteri  dengan  cara  mengikat  dinding sel mikroba dan mengganggu pembentukan
yang  dapat  menyebabkan  kerusakan  pada dinding sel. Sifat antibakteri tanin tergantung  pada  berat  molekul  dan konsentrasi  tanin  yang  digunakan.  Tanin dengan  berat  molekul  rendah  memiliki aktivitas  yang  lebih  baik  daripada  tanin dengan  berat  molekul  yang  lebih  besar tetapi semakin tinggi konsentrasi tanin yang digunakan  maka  semakin  besar  diameter zona  hambat  bakteri  yang  terbentuk (Yohanes et  al .,  2018).  Penelitian  yang dilakukan  oleh  (Maisak et  al., 2013) menyatakan bahwa tanin lebih efektif pada bakteri  Gram  positif  dibandingkan  Gram negatif.  Hal  ini  juga  yang  mempengaruhi diameter zona hambat ekstrak metanol daun sisik  naga  yang  terbentuk  oleh  bakteri MRSA  lebih  besar  dibandingan  dengan bakteri E. coli.
Mekanisme  senyawa  fenol  sebagai antibakteri pada konsentrasi rendah adalah dengan  merusak  membran  sitoplasma  dan dapat  menyebabkan  kebocoran  inti  sel. Sedangkan pada konsentrasi tinggi senyawa fenol berkoagulasi dengan protein seluler.Aktivitas  tersebut  sangat  efektif ketika  bakteri  dalam  tahap  pembelahan dimana  lapisan  fosfolipid  di  sekeliling  sel sedang  dalam  kondisi  yang  sangat  tipis sehingga  fenol  dapat  dengan  mudah merusak  isi  sel  (Haninah et  al., 2014).
Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh Bouarab-Chibane et  al., 2019  aktivitas antibakteri dari fenolik lebih baik terhadap Gram positif daripada Gram negatif. Meski demikian  fenolik  mampu  menghambat pertumbuhan E.  coli meskipun  kurang efektif.
Mekanisme saponin sebagai antibakteri dengan  cara  meningkatkan  permeabilitas membrane  sel.  Struktur  yang  berperan sebagai  antibakteri  adalah  aglikon  yang masuk  ke  dalam  lapisan  lipid  bilayer bakteri. Saponin dengan konsentrasi tinggi mampu melisiskan membran sel, sementara saponin  dengan  konsentrasi  rendah  hanya mampu  berinteraksi  dengan  membran  sel tetapi tidak sampai melisiskan sel (Yohanes et al ., 2018).
Terpenoid  atau  minyak  atsiri  yang bersifat lipofilik memiliki aktivitas antibakteri  dengan  cara  bereaksi  dengan porin (protein transmembran) pada membran luar dinding sel bakteri, membentuk  ikatan  polimer  yang  kuat sehingga  mengakibatkan  rusaknya  porin. Rusaknya  porin  yang  merupakan  pintu keluar masuknya senyawa akan mengurangi  permeabilitas  dinding  sel bakteri  yang  akan  mengakibatkan  sel bakteri kekurangan nutrisi, sehingga pertumbuhan  bakteri  terhambat  atau  mati. Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Heriyati et  al., (2016), bahwa  ektrak  daun  sisik  naga  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Menurut  Arif et  al., (2018),  sterol berfungsi  dalam  menjaga  stabilitas  dan permeabilitas membran sel. Diameter zona hambat yang dihasilan oleh ekstrak metanol daun sisik naga terhadap bakteri MRSA dan Escherichia  coli menandakan  bahwa senyawa  fitokimia  yang  terdapat  di  dalam ekstrak daun sisik naga dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Haninah et al 2014, yang menyatakan bahwa masing - masing kandungan senyawa fitokimia yang terdapat pada ekstrak daun sisik naga yaitu flavonoid, tanin, sterol, fenol, saponin dan terpenoid  memiliki  mekanisme  kerja  zat antibakteri yang berbeda - beda.
Penelitian  ini  digunakan  cakram  yang berukuran diameter 6 mm. Pada perlakuan kontrol  negatif  tidak  membentuk  zona hambat.  Sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  kontrol  negatif  tidak  menghambat bakteri uji. Selain menjadi kontrol negatif, metanol juga digunakan sebagai pengencer konsentrasi ekstrak. Apabila meninjau dari hasil  uji  difusi,  pelarut  tidak  ikut menghambat bakteri. Sehingga zona hambat yang terbentuk pada cakram variasi konsentrasi  ekstrak  tidak  dipengaruhi  oleh pelarut.  Hal  tersebut  sesuai  dengan Penelitian  Aprilia et  al .,  (2017)  yang menyatakan  bahwa  kontrol  negatif  yang digunakan  adalah  pelarut  yang  digunakan
untuk  membuat  seri  konsentrasi  ekstrak yaitu  metanol,  dengan  tujuan  sebagai pembanding bahwa pelarut yang digunakan sebagai pengencer konsentrasi ekstrak tidak mempengharuhi  hasil  uji  ekstrak.  Hasil zona  hambat  kontrol  negatif  terhadap bakteri uji adalah 0.00 mm sehingga dapat disimpulkan  metanol  tidak  mempengaruhi aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  yang ditandai  dengan  tidak  terbentuknya  zona bening.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian yang  dilakukan  oleh  Nopiyanti et  al .,
(2015)  yang  menyatakan  bahwa  metanol sebagai  kontrol  negatif  dimana  tidak menunjukkan
adanya aktivitas
penghambatan baik terhadap bakteri
Bacillus  subtilis , Eschericia  coli ,  dan Stapylococcus aureus .
Kepekaan  suatu  senyawa  aktif  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  MRSA dan Eschericia  coli dievaluasi  berdasarkan kriteria Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI),  yaitu  S  (sensitive),  I (Intermediate),  dan  R  (resistant).  Kontrol positif yang digunakan dalam penelitian ini adalah  antibiotik  kloramfenikol  30µg. Pemilihan antibiotik kloramfenikol sebagai kontrol positif karena kloramfenikol merupakan  antibiotik  yang  mempunyai spektrum  kerja  luas  dan  mekanisme kerjanya  menghambat  sintesis  dinding  sel bakteri (Sinurat el al ., 2019).
Diameter  zona  hambat  minimal  pada bakteri  MRSA  dan E.  coli yang  harus dicapai oleh suatu senyawa agar dikatakan sensitif  adalah  ≥18  mm  (CLSI,  2020).
Rerata diameter zona hambat yang dapat  dibentuk  oleh  kloramfenikol  dalam melawan  bakteri  MRSA  adalah  8.17  mm yang termasuk dalam kategori resistan. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi senyawa  aktif  pada  esktrak  metanol  daun sisik naga dapat menghambat pertumbuhan bakteri MRSA tetapi belum dapat memenuhi standar sensitif menurut (CLSI, 2020)  terhadap  bakteri  MRSA.  Rerata diameter zona hambat yang dapat dibentuk oleh kloramfenikol dalam melawan bakteri Eschericia  coli adalah  26.46  mm  yang
termasuk  dalam  kategori  sensitif.  Hal  ini menunjukkan  senyawa  aktif  yang  terdapat pada  ekstrak  daun  sisik  naga  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Eschericia  coli dan  memenuhi  standar sensitif  (CLSI,  2020)  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Eschericia  coli . Terbentuknya zona hambat terhadap bakteri  MRSA  menunjukkan  adanya potensi  ekstrak  daun  sisik  naga  dalam membunuh  bakteri.  Kloramfenikol  pada penelitian  ini  ditemukan  resisten  terhadap bakteri uji MRSA. Temuan tersebut sesuai dengan  studi  terdahulu  yang  menemukan bahwa  MRSA  klinis  kebal  terhadap kloramfenikol  di  India,  Cina,  Iran,  dan Nepal  (Fayyaz et  al .,  2014).  Berbeda dengan  studi  yang  dilakukan  di  Eropa, isolat klinis MRSA masih sensitif terhadap kloramfenikol  di  Yunani  dan  UK,  bahkan Asia  seperti  Jepang  dan  Korea  (Fayyaz et al .,  2014).  Sedangkan  pada  bakteri  uji Escherichia  coli ,  kloramfenikol  terbukti sensitif.  Studi  lain  di  Ethiopia  Utara menunjukkan bahwa Escherichia coli rentan dengan kloramfenikol hingga 63,2%. Data tersebut  membuktikan  bahwa  pada  studi tersebut  sebagian  bakteri Escherichia  coli yang diisolasi mengalami kekebalan terhadap kloramfenikol (Kibret and Bayeh, 2011). Sedangkan di Romania, kloramfenikol diidentifikasi sensitif terhadap Escherichia  coli hingga  72%
(Cambrea, 2014).
Menurut  standar  yang  dibuat  oleh Suryawiria  (1978);  Zahro  dan  Rudiana,
2013) mengenai klasifikasi aktivitas antibakteri  berdasarkan  diameter  zona hambat yang dapat diklasifikasikan sebagai berikut:  lemah  (<  5  mm),  sedang  (5  -  10 mm), kuat (10 - 20 mm) dan sangat kuat (> 20 mm).
Rerata  diameter  zona  hambat  yang dibentuk  oleh  variasi  ekstrak  daun  sisik naga  dalam  menghambat  bakteri  MRSA dengan konsentrasi 55% (P2 = 12,55 mm), 65 % (P3 = 13,8 mm) dan 75% P4 = 17,02 mm)  yang  termasuk  dalam  katagori  kuat dan  ekstrak  sisik  naga  dengan  konsentrasi 45%  (P1  =  8,75  mm)  termasuk  dalam
kategori  sedang.  Rerata  diameter  zona hambat  yang  terbentuk  oleh  penggunaan ektrak daun sisik naga dalam menghambat bakteri E.  coli ,  menggunakan  konsentrasi ekstrak  daun  sisik  naga  45%  (P1  =  6,408 mm), 55% (P2 = 7,52 mm), 65 % (P3 = 7,9 mm)  dan  75%  P4  =  8,47  mm)  yang termasuk  dalam  katagori  sedang.  Hasil pengujian antibakteri oleh variasi konsentrasi  ekstrak  daun  sisik  naga  dalam menghambat  pertumbuhan  MRSA  dan E.coli memiliki  nilai  tertinggi  pada konsentrasi  75%  dengan  rerata  sebesar 17,02  mm  dan  8,47  mm.  Aktivitas antibakteri  esktrak  daun  sisik  naga berbanding  lurus  dengan  konsentrasi  yang digunakan. Hal ini sesuai dengan pernyataan Khastini dan Setiyowati (2013), dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak tanaman  obat,  maka  akan  semakin  besar pula  kadar  bahan  aktif  yang  berfungsi sebagai
antibakteri
sehingga kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  juga  semakin  besar. Sehingga  pada  penelitian  ini  daun  sisik naga berpotensi menghambat pertumbuhan bakteri  Gram  positif  resisten  (MRSA)  dan Gram  negatif  ( Escherichia  coli ).    Pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Pratiwi (2015)  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  oleh  fraksi  metanol  daun  sisik naga  terhadap  bakteri E.  coli konsentrasi 2,5% menghasilkan diameter zona hambat rata - rata 14,16 mm dan pada penelitian ini diameter zona hambat yang dihasilkan lebih besar, hal ini terjadi karena pada penelitian Pratiwi (2015) menggunakan fraksi metanol  daun  sisik  naga,  tetapi  dengan menggunakan  ekstrak  metanol  daun  sisik naga juga dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif, yaitu Escheria coli . Menurut  standar  yang  dibuat  oleh
Suryawiria  (1978);  Zahro  dan  Rudiana, 2013) mengenai klasifikasi aktivitas antibakteri  berdasarkan  diameter  zona hambat,  maka  nilai  yang  didapatkan  pada penelitian ini termasuk dalam kategori kuat untuk melawan bakteri MRSA,  sedangkan pada  bakteri E.coli efektivitas  antibakteri yang  didapatkan  dalam  penelitian  ini
termasuk dalam kategori sedang (Zahro dan Rudiana,  2013).  Perbedaan  zona  hambat yang  terjadi  pada  bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli disebabkan karena  adanya  perbedaan  struktur  dinding sel antara kedua bakteri yang mempengaruhi  kerja  ekstrak  daun  sisik naga  sebagai  senyawa  bakteri.  Artinya ekstrak  daun  sisik  naga  baru  dapat menimbulkan  efek  jika  ekstrak  tersebut dapat  masuk  ke  dalam  sel  bakteri  yang diuji.  Struktur  dinding  sel  bakteri  Gram positif  lebih  sederhana,  yaitu  berlapis tunggal  dengan  kandungan  lipid  yang rendah  sehingga  memudahkan  bahan bioaktif  masuk  kedalam  sel  (Salni et al .,2011). Staphylococcus  aureus sebagai bakteri  gram  positif  memiliki  3  lapisan yaitu selaput sitoplasma, lapisan peptidoglikan  yang  tebal. Sementara struktur  dinding  sel  bakteri  gram  negatif lebih kompleks, berlapis tiga, yaitu lapisan luar lipoprotein, lapisan tengah liposakarida yang berperan sebagai penghalang masuknya  bahan  bioaktif  antibakteri,  dan lapisan  dalam  berupa  petidoglikan  dengan kandungan lipid tinggi (Salni et al ., 2011). Eschericia  coli sebagai  gram  negatif memiliki lapisan yang lebih kompleks dan berlapis  -  lapis  yaitu  selaput  sitoplasma, lapisan  tunggal  peptidoglikan  dan  selaput luar  yang  terdiri  dari  lipoprotein  dan lipopolisakarida. Adanya perbedaan
struktur dan komponen dinding sel tersebut yang menyebabkan Escherichia coli sebagai  gram  negatif  lebih  tidak  efektif sebagai  antibakteri  apabila  dibandingan dengan  bakteri Staphylococcus  aureus (Rahman et al ., 2012).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Haninah et al (2014) Daun sisik naga bersifat  antibakteri  yang  didapat  dari senyawa  flavonoid,  fenol,  tanin,  minyak atsiri,  sterol  atau  triterpenoid.  Kandungan senyawa pada ekstrak daun sisik naga dapat merusak  sistem  sintesa  protein,  kerusakan dinding  sel  yang  menyebabkan  lisis sehingga terjadi kerusakan dinding sel yang dapat  mengganggu  mekanisme  sintesis dinding  sel  bakteri.  Pertumbuhan  bakteri
yang  terhambat  atau  kematian  bakteri akibat  adanya  penghambatan  terhadap sintesis  protein  oleh  senyawa  -  senyawa bioaktif.  Ketahanan  bakteri  gram  negatif dan  gram  positif  terhadap  senyawa antibakteri  berbeda  -  beda.  Perbedaan kepekaan  bakteri  gram  negatif  dan  gram positif  berkaitan  dengan  struktur  dalam dinding  sel,  seperti  jumlah  peptidoglikan (adanya reseptor, pori - pori dan lipid), sifat ikatan  silang  dan  aktivitas  enzim  autolik. Komponen tersebut merupakan faktor yang menentukan  penetrasi,  pengikatan  dan aktivitas senyawa antimikroba. Mekanisme penghambatan antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri dapat berupa kerusakan dinding sel yang mengakibatkan lisis  atau  penghambatan  sintesis  dinding sel,  terjadinya  permeabilitas  membrane sitoplasma sehingga menyebabkan keluarnya bahan makanan melalui dinding sel,  denaturasi  protein  sel  dan  perusakan sistem  metabolisme  di  dalam  sel  dengan cara penghambatan kerja enzim intraseluler (Azis, 2019).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini disimpulkan  bahwa  kandungan  senyawa fitokimia  yang  terkandung  dalam  esktrak metanol  daun  sisik  naga  adalah  flavonoid, tanin, sterol, fenol, saponin dan terpenoid.

## REFERENSI
Aprilia N.M, Widayat W dan Ramadhan A.M., 2017. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Akar Tumbuhan Merung (Coptosapelta flavescens Korth.)
Terhadap  Bakteri  Streptococcus  mutans . Proceeding  of  the  6  th  mulawarman Pharmaceuticals  conferences.  Universitas Mulawarman Samarinda. 146 - 149.
Arif,  M.Z.,  Nik  Zainuddin,  N.A.S.,  Zakaria, I.S.,  Wan  Abdul  Wahab,  W.N.A.  and Sul’ain,  M.D.,  2018. Phytochemical Screening and Toxicological Evaluation  of  Pyrrosia  Piloselloides Extracts. International Medical Journal. 25 (3): 177 - 180.
Azis.  2019. Analisis  In  Vitro  Aktivitas Antibakteri Daun Sisik Naga (Drymoglossum  Pilosellaoides)  Terhadap Bakteri  Vibrio  Harveyi  dan  Vibrio
Parahaemolyticus . Journal of Aquaculture and Fish Health. 8 (2): 87 – 90.
Bali, F.A dan Wehantouw, F., 2014. Toksisitas dan  Karakterisasi  Gusus  Fungsi  Daun Sisik Naga (Drymoglossum pilosellides (L) Presl.) . Pharmacon. 3 (3): 335 -341.
Bouarab-Chibane, L.,  Forquet,  V.,  Lantéri,  P., Clément,  Y.,  Léonard-Akkari,  L., Oulahal, N., Degraeve, P.  and Bordes, C.,  2019. Antibacterial  Properties  of Polyphenols:  Characterization  And QSAR  (Quantitative  Structure-Activity Relationship)  Models .  Frontiers  in Microbiology. 10 (829) : 1 - 23.
Cambrea, S.C., 2014. Antibiotic  Susceptibility of Escherichia coli  Strains  Isolated  in  a Pediatric   Population from South Eastern Romania .  Journal  of  Pediatric  Infectious Diseases. 9 (3): 157 - 162.
Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute
(CLSI) .2020. M100 Performance
Standards for Antimicrobial Susceptibility
Testing 24th edition . Wayne, USA. 30 - 60.
Damayanti,  A  dan  Fitriana,  E.  A.,  2012. Pemungutan  Minyak  Atsiri  Mawar  (Rose Oil)  Dengan  Metode  Maserasi .  Jurnal Bahan Alam Terbarukan. 1 (2): 1 - 8.
Fayyaz,  M.,  Mirza,  I.A.,  Ahmed,  Z.,  Abbasi, S.A.,  Hussain,  A.  and  Ali,  S.,  2014. In Vitro  Susceptibility  of  Chloramphenicol Against
Methicillin-Resistant Staphylococcus  aureus .  Journal  of  the College of Physicians and  Surgeons Pakistan. 23 (9): 637 - 640.
Fazil, M., Suci, R.N., Allfiah, F., Alam, D.N., Angelia,  G.,  Situmeang,  B.,  Kimia,  P.S., Tinggi,  S.  dan  Kimia,  A.,  2017. Analisis Senyawa  Alkaloid  Dan  Flavonoid  Dari Ekstrak Kitolod ( Isotoma Longiflora ) Dan Uji  Uji  Aktivitasnya  Terhadap  Bakteri Penyebab  Karies  Gigi .  Jurnal  Itekimia.  2
(1): 73 - 83.
Haninah, Lestari, P. E.  dan Wahyukundari, M. A., 2014. Daya Antibakteri  Ekstrak  Daun
Sisik  Naga  (Drymoglossum  piloselloides
[L.] Presl.) terhadap Streptococcus viridans .  Artikel  Ilmiah  Hasil  Penelitian Mahasiswa.  Fakultas  Kedokteran  Gigi. Universitas Jember. 1 - 6.
Heriyati,  Khotimah,  S.  dan  Wardoy,  E.R.P.,
2016. Aktivitas Antibakteri Fraksi
Diklorometan  dan  N-Heksana  Paku  Sisik
Naga  (Drymoglossum  piloselloides  (L) Presl.)  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus  dan  Salmonella  typhi .  Jurnal Protobiont. 5 (3) : 82-88.
Khastini,  R.  O.  dan  Setiyowati  V.,  2013. Uji
Aktivitas  Ekstrak  Air  Daun  Fertil  dan Steril Sisik Naga terhadap Enteropatogenik E. coli . Prosiding Semirata  FMIPA  Universitas  Lampung. 237 - 242.
Kibret, M. and Bayeh A., 2011. Antimicrobial Susceptibility  Patterns  of  E.  coli  from Clinical  Sources  in  Northeast  Ethiopia . Health Sci. 11 (1): S40 - S45.
Maisak, H., Jantrakajorn, S., Lukkana, M.  and Wongtavatchai,  J.,  2013. Antibacterial
Activity Of Tannin From Sweet Chestnut  Wood  Against  Aeromonas  And Streptococcal Pathogens Of Tilapia (Oreochromis  Niloticus) .  Thai  Journal  of Veterinary Medicine. 43 (1): 105 - 111.
Manimozhi DM, Sankaranarayanan S, Sampathkumar  G.,  2012. Evaluating  The Antibacterial  Activity  Of  Flavonoids Extracted  From  Ficus  Benghalensis . International  Journal  of  Pharmaceutical and Biological Research (IJPBR). 3 (1).
Oktavia,  S.,  Arifin,  H.  dan  Duarto,  E.,  2017. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Sisik Naga (Pyrrosia  Piloselloides (L.) M. G  Price)  Terhadap  Waktu  Pendarahan, Waktu  Pembekuan  Darah  Dan  Jumlah Trombosit  Mencit  Putih  Jantan)Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Daun  Sisik Naga  (Pyrrosia  Piloselloides  (L.)  M.  G Price)  Terhadap  Waktu  Pendarahan, Waktu  Pembekuan  Darah  Dan  Jumlah Trombosit  Mencit  Putih  Jantan .  Jurnal Farmasi Higea. 9 (1): 49 – 53.
Pratiwi S. J., 2015. Aktivitas Antibakteri Fraksi Metanol Herba Sisik Naga (Drymoglossumpiloselloides  [L.]  Presl.) Terhadap  Bakteri  Escherichia  coli  dan
Staphylococcus  epidermidis .  [Skripsi]. Program Studi Farmasi. Fakultas Kedokteran  Universitas  Tanjungpura.  6  -
10.
Rahman, D.T, Sutrisna E.
dan
Candrasari,  A.,  2012. Uji  Efek Antibakteri  Ekstrak  Etil  Asetat  Dan Kloroform  Meniran  (Phyllanthus niruri  Linn)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538  dan  Escherichia  coli  ATCC
11229 Secara In vitro . Biomedika. 4
(2): 18 – 25.
Rahmawati, T., 2015. Aktivitas Antibakteri  Fraksi  Etil  Asetat  Herba Sisik Naga (Drymoglossum Piloselloides  [L.]  Presl.)    Terhadap Bakteri Escherichia Coli Dan Staphylococcus Epidermidis. [Skripsi] Fakultas Kedokteran. Universitas  Tanjungpura  Pontianak.
11 - 13.
Sagita, D., Ichwani, M.N. dan Linuria L.,
2017. Skrining  aktifitas  antibakteri dari  ekstrak    Sisik  Naga  (Pyyrosia piloselloides  (L)  M.G.Price) .  Riset
Informasi Kesehatan. 6 (2): 115 - 116.
Salni,  Marisa,  H.,  Mukti,  R.  W.,  2011.
Isolasi  Senyawa  Antibakteri  dari
Daun Jengkol (Pithecolobium lobatum Benth) dan Penentuan Nilai KHM-nya . Jurnal Penelitian Sains. 14
(1): 39 – 41
Saridewi  M.  N  ,  Bahar  M  dan  Anisah.,
2017. Uji  Efektivitas  Antibakteri
Perasan  Jus  Buah  Nanas  (Ananas comosus)  Terhadap  Pertumbuhan Isolat Bakteri Plak Gigi di Puskesmas Kecamatan  Tanah  Abang  Periode April  2017. Biogenesis.  5  (2):  104  - 110
Sinurat  A.A.P,  Renta  P.P,  Herliany  N.E, Negara B.FS dan  Purnama D., 2019. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Metanol  Rumput  Laut  Gracilaria edulis  Terhadap  Bakteri  Aeromonas hydrophila.  Jurnal  Enggano .  4  (1): 105 - 111.
Umarudin  dan  Yuliarni  F.  F.,  2019. Uji Antimikroba Daging Buah (Carica pubescens)  Matang  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus  Metode  Kirby
Bauer Secara In Vitro . Simbiosa 8 (2): 148 - 157.
Wijayati, N., Astutiningsih, C. dan  Mulyati, S., 2014. Transformasi  Α-Pinena  Dengan Bakteri  Pseudomonas  Aeruginosa  ATCC 25923. Journal  of  Biology  &  Biology Education. 6 (1): 24 - 28.
Yanti,  L.,  Brasiska,  Y.  R.  dan  Hanafiah,  A., 2013. Antihiperglikemia  Ekstrak  Etanol Daun  Sisik  Naga  Dengan  Metode Toleransi  Glukosa .  Indonesian  Journal  of Pharmaceutical  Science  and  Technology. 2 (1): 51 - 60.
Yohanes,  Khotimah,  S.  and  Ilmiawan,  M.I., 2018. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Infusa Daun  Paku  Sisik  Naga  (Drymoglossum Piloselloides  L.)  Terhadap  Streptococcus Pyogenes .  Fakultas  Kedokteran,  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Tanjungpura. 1 – 26.
Yuliastuti,  Rahayu,  R.  dan  Efrizal.  2014. Efek Toksisitas  Akut  Ekstrak  Daun  Paku  Sisik Naga  (Drymoglossum  Piloselloides  (L.) Presl) Terhadap Nilai Darah Mencit Putih (Mus  Muscullus  L.). Jurnal  Biologi.
Universitas Andalas. 3 (4): 332 – 336.
Zahro, L. dan Agustini, R., 2013. Uji Efektifitas Antibiotik  Ekstrak  Kasar  Saponin  Jamus Tiram  Putih  Terhadap  Stapylococcuc Aureus  And  Escherichia  Coli .  UNESA Journal of Chemistry. 2 (3): 67 - 81.