Volume 7, No 1, Januari – Juni 2024 e-ISSN: 2598-7453 DOI:10.31539/bioedusains.v7i1.9967

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI ASAM LAKTAT DARI HASIL
FERMENTASI LIMBAH ORGANIK KULIT BUAH ( ECO-ENZYME )
Linda Syafitri Siagian 1 , Kartika Manalu 2 , Rizki Amelia Nasution 3 ,
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2,3
lindasyafitrisiagian01@gmail.com 1

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah isolasi dan identifikasi berdasarkan ciriciri morfologi bakteri  asam  laktat  pada  hasil  fermentasi  limbah  orgnaik  dari  kulit  buah.  Isolasi Bakteri Asam Laktat dilakukan dengan metode cawan cebar pada media de Man, Rogosa  and Sharpe Agar  (MRSA). Kultur dinkubasi  pada suhu 37 o C  selama 48 jam.  Koloni  yang  tumbuh  diamati  ciri-ciri  morfologi  dan  dilakukan  pewarnaan Gram  bakteri.  Hasil  penelitian  menunjukkan,  isolasi  BAL  dari  ekoenzim  pada media de Man, Ragosa and Sharpe Agar (MRSA) diperoleh 10 isolat bakteri yaitu E-BAL 01, E-BAL 02, E-BAL O3, E-BAL 04, E-BAL 05, E-BAL 06, E-BAL 07, E-BAL08, E-BAL 09 dan E-BAL 10, dan 10 isolat memiliki karakteristik sebagai Gram  positif  dengan  bentuk  sel  Basil.  Simpulan,  ditemukan  10  isolat  dengan karakteristik  yang  mendukung  media  MRSA  adalah  isolat  Bakteri  Asam  Laktat dengan genus Lactobacillus . Hal ini diperkuat dari hasil uji biokimia yaitu bersifat tidak  bergerak,  tidak  menghasilkan  enzim  katalase  dan  tidak  mempunyai kemampuan memproduksi gas.
Kata Kunci : Bakteri Asam Laktat (BAL), Ekoenzim, Kulit Buah

## ABSTRACK
The  aim  of  this  research  is  the  isolation  and  identification  based  on  the morphological  characteristics  of  lactic  acid  bacteria  in  the  fermentation  of organic waste from fruit peels. Isolation of Lactic Acid Bacteria was carried out using  the  spread  plate  method  on  de  Man,  Rogosa,  and  Sharpe  Agar  (MRSA) media.  The  culture  was  incubated  at  37  °C  for  48  hours.  The  growing  colonies were  observed  for  morphological  characteristics,  and  bacterial  Gram  staining was  carried  out.  The  results  of  the  research  showed  that  10  bacterial  isolates were  obtained  from  the  isolation  of  BAL  from  ecoenzymes  on  de  Man,  Ragosa, and Sharpe Agar (MRSA) media, namely E-BAL 01, E-BAL 02, E-BAL O3, E-BAL 04, E-BAL 05, E-BAL 06, E-BAL 07, E-BAL 08, E-BAL 09, and E-BAL 10, and 10 isolates  were  characterized  as  Gram-positive  with  a  bacillary  cell  form.  In conclusion,  10  isolates  were  found  with  characteristics  that  supported  MRSA media, namely isolates of lactic acid bacteria of  the genus Lactobacillus. This is confirmed by the results of biochemical tests, namely that it is immobile, does not produce the catalase enzyme, and does not have the ability to produce gas.
Keywords : Lactic Acid Bacteria (LAB), Ecoenzymes, Fruit Skin

## PENDAHULUAN
Dalam  kehidupan  sehari-hari,  buah-buahan  merupakan  kebutuhan  yang penting  bagi  manusia.  Pada  umumnya,  masyarakat  hanya  memanfaatkan  daging buahnya  saja  sebagai  jus,  selai,  salad,  dan  sirup.  Sejauh  ini  pemanfaatan  kulit buah sangat jarang ditemukan dan kulit buah-buahan tersebut hanya dibuang dan menjadi  sampah.  Bila  sampah  dibuang  secara  sembarangan  atau  ditumpuk  tanpa ada pengelolaan yang baik, maka akan menimbulkan berbagai dampak kesehatan yang  serius.  Sampah  merupakan  material  sisa  yang  sudah  tidak  dipakai,  tidak disenangi  atau  sesuatu  yang  harus  dibuang, yang  umumnya  berasal  dari  kegiatan yang  dilakukan  oleh  manusia  (Marjenah  et  al.,  2017).  Salah  satu  langkah  untuk memanfaatkan  dan  mengolah  limbah  organik  adalah  dengan  mengkonversinya menjadi Eco-enzyme . Eco-enzyme merupakan  larutan  zat organik  kompleks  yang diproduksi  dari  proses  fermentasi  sisaorganik,  gula,  dan  air.  Cairan Eco-enzyme ini  berwarna  coklat  gelap  dan  memiliki  aroma  yang  asam  atau  segar  yang kuat (Hemalatha & Visantini, 2016).
Eco-enzyme yang  terbuat  dari  bahan  organik  (ampas)  memiliki  jenis mikroorganisme  yang  beraneka  ragam  seperti  bakteri  dan  cendawan  (Khamir). Penelitian Murdiana et al. (2022), melaporkan bahwa untuk proses fermentasinya memerlukan  waktu  selama  3  bulan  dengan  fermentasi  pada  bulan  pertama menghasilkan  alkohol,  bulan  ke-2  menghasilkan  asam  asetat  dan  bulan  ke-3 menghasilkan  enzyme  sehingga  panen  akan  dilakukan  pada  bulan  ke-3  dengan cara  menyaring  hasil  fermentasi  tersebut  dengan  kain.  Beberapa  literature mengatakan bahwa bakteri yang ada dalam ampas eco-enzyme yaitu Bakteri Asam Laktat.  Bakteri  Asam  Laktat  dapat  ditemukan  pada  lingkungan  yang  kaya  akan karbohidrat,  selain  itu  bakteri  juga  dapat  ditemukan  pada  berbagai  jenis fermentasi makanan, sayuran dan buah-buahan, seperti buah durian, manga, kako, nanas, dan pisang (Ibrahim, 2007 Dalam Yuliana & Handayani, 2022).
Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  merupakan  mikroba  yang  penting  dalam teknologi fermentasi  pangan karena mempunyai  kemampuan  untuk  memperbaiki cita  rasa,  tekstur  dan  aroma  produk  akhir  yang  secara  organoleptik  dan  kualitas lebih  dapat  diterima  oleh  konsumen.  Selain  itu,  BAL  juga  mempunyai kemampuan  sebagai  antimikrobia  baik  itu  anti  bakteri  maupun  antibiotik (Puspawati, 2008). Dalam penelitian Manik et al. (2021), juga berpendapat bahwa bakteri  asam  laktat  yang  terdapat  dalam Eco-enzyme memiliki  peran  penting dalam menurunkan  angka kuman pada telapak tangan.  Bakteri asam laktat sangat berpotensi  sebagai agensia probiotik  yang dapat  digunakan  sebagai kultur starter dalam  proses  fermentasi.  Sampai  saat  ini  penggunaan  BAL  tidak  hanya  sebagai mikroba  yang  berperan  pada  proses  fermentasi  pangan,  namun  juga  dapat digunakan  sebagai  pangan  fungsional  seperti  pengembangan  produk  probiotik (Puspawati,  2008).  BAL  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen  dan menurunkan  pH  lingkungannya  dengan  mengeksresikan  senyawa  asam  organik, alkohol, bakteriosin, diasetil, dan CO2 (Usmiati & Risfaberi, 2012).
Dalam  mengoptimalkan  ketersediaan  BAL  maka  perlu  dilakukan penelitian  ekstensif  untuk  mengeksplorasi  BAL  dari  berbagai  buah-buahan. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Nyanga  et  al.  (2007),  mengisolasi  bakteri Lactobacillus  agilis dan Lactobacillus  plantarum dari  buah  bidara  ( Ziziphus mauritiana ),  dimana strain tertentu L. agilis dan L.  plantarum telah  dilaporkan memiliki  efek  probiotik.  Sehubungan  dengan  itu, dilaporkan  dalam  penelitian
Yanti  (2022),  bahwa  Bakteri  Asam  Laktat  telah  banyak diisolasi dari berbagai macam  buah-buahan,  antara  lain  sirsak,  manggis,  jambu  nasi-nasi, salak,  dan pisang barangan.
Ketersediaan  isolat  BAL  yang  diisolasi  dari  sumber  dalam  negeri  masih sangat  terbatas,  sehingga  diperlukan  eksplorasi  untuk  meningkatkan  keragaman isolat  bakteri  asam  laktat.  Berdasarkan  uraian  di  atas  perlunya  dilakukan  isolasi dan  identifikasi  bakteri asam  laktat  pada Eco-enzyme dari  limbah  organik  untuk mengetahui  jenis  BAL  yang  terdapat  di  dalamnya,  hasil  penelitian  yang  didapat diharapkan dapat digunakan sebagai upaya untuk memperkaya isolat bakteri asam laktat lokal Indonesia serta memberikan informasi mengenai jenis BAL pada Eco- enzyme dari limbah organik kulit buah.

## METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Pembuatan  ekoenzim  dan  pengambilam  sampel  dilakukan  di  perumahan Lestari yang beralamat di Jl. Pulo Brayan Darat, Kec. Medan Timur, Kota Medan, Sumatera  Utara.  Selanjutnya  untuk  isolasi  dan  identifikasi  direncanakan  akan dilaksanakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA  Universitas  Sumatera  Utara yang  beralamat  di  jalan Dr.  T.  Mansyur  No.  9.  Padang  Bulan,  Kec.  Medan, Sumatera Utara.

## Metode Pengumpulan Data
Data  diperoleh  melalui  pengambilan  sampel  kulit  buah  diambil  dari penjual jus yang berlokasi di Jl. Bilal Ujung, Gang Lestari dengan masing-masing jenis buah yang dibutuhkan sebanyak 300 gram. Adapun kulit buah yang diambil adalah  Jeruk,  Mangga, Terong  Belanda,  Alpukat  dan  Belimbing  dengan  masing- masing  kulit  buah  ditimbang  sebanyak  60gram.  Masing-masing  kulit  buah dipotong  kecil-kecil  menggunakan  pisau.  Dibutuhkan  gula  merah  sebanyak  100 gram  yang  telah  dihaluskan  yang  mana  sesuai  dengan  Rida  Jelita  (2022)  dalam penelitiannya.

## Analisis Data
Analisis data pada penelitian ini dilakukan secara deskriptif, yaitu dengan memberikan  penjelasan  atau  penggambaran  dari  jenis-jenis  bakteri  asam  laktat yang  terdapat  pada Eco-enzyme kulit  buah  yang  sudah  terfementasi.  meliputi tampilan  data  dalam  table  Pengamatan  Morfologi  Koloni  Bakteri  Asam  Laktat (BAL),  Hasil  Uji Biokimia  BAL  Ekoenzim  dan  Uji  Nilai  OD  (OD600  nm) Pertumbuhan BAL.

## HASIL PENELITIAN
Isolasi dan  Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Hasil Fermentasi  Limbah Organik Kulit Buah ( Eco-enzyme )
Isolasi  bakteri  dilakukan  dari  hasil  fermentasi  limbah  organik  kulit  buah (ekoenzim)  yang  masing-masing  terdiri  dari  kulit  Jeruk,  kulit  Mangga,  kulit Terong Belanda, kulit Alpukat dan kulit Belimbing dengan campuran air dan gula merah  dengan perbandingan  3:10:1.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  pada bulan  Januari  tahun  2024  didapatkan  10  isolat  bakteri  asam  laktat  yang  berasal
dari  hasil  fermentasi  limbah  organik  kulit  buah  ( Eco-enzyme ).  Hal  ini  ditandai dengan  tumbuhnya  bakteri  pada  media MRS-A. Media MRSA merupakan media spesifik  untuk  pertumbuhan  bakteri  asam  laktat   (Nurlaela  et  al.,  2017).  Hal  ini dikuatkan  dalam  penelitian  Sari  et  al.  (2016),  bahwa  ditemukan  isolat  bakteri tumbuh  berkoloni  di  dalam  media  MRSA.  Koloni  yang  tumbuh pada  media MRSA  merupakan  bakteri  asam  laktat  karena  media  MRSA  didesain  untuk mendukung  pertumbuhan  bakteri  asam  laktat  termasuk  genus Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus, dan Leuconostoc .
Karakterisasi  isolat  bakteri  meliputi  morfologi  koloni  yang  terdiri  dari bentuk  koloni,  tepi  koloni,  elevasi  koloni,  dan  warna  koloni  serta  morfologi  sel yang  terdiri  dari bentuk  sel  dan  pewarnaan  Gram  (Tabel  1).  Bakteri  asam  laktat dapat  tumbuh  pada  media  MRSA  karena  mengandung  beberapa komponen  yang dapat  menunjang  pertumbuhan  bakteri  tersebut.  Media  MRSA  mengandung dekstrosa,  ekstrak  daging,  ekstrak  ragi,  ammonium  sitrat,  magnesium  sulfat, pepton, natrium asetat, dikalium fosfat, tween  80  dan  mangan  sulfat.  Kandungan ammonium sitrat pada pH rendah menunjang pertumbuhan bakteri asam laktat.
Tabel 1. Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri Asam Laktat (BAL)
Kode Isolat MORFOLOGI  KOLONI MORFOLOGI  SEL Bentuk Tepi Elevasi Warna Gram  Bentuk Penataan E-BAL 01 Irregular Lobate Convex Putih Kekuningan + Basil Streptobasil E-BAL 02 Irregular Undulate Convex Putih Kekuningan + Basil Streptobasil E-BAL 03 Circular Entire Convex Putih Kekuningan + Basil Monobasil E-BAL 04 Irregular Curled Convex Putih Kekuningan + Basil Monobasil E-BAL 05 Circular Entire Convex Kuning + Basil Streptobasil E-BAL 06 Irregular Undulate Convex Putih + Basil Streptobasil E-BAL 07 Irregular Rhizoid Convex Putih Kekuningan + Basil Streptobasil E-BAL 08 Irregular Curled Convex Putih Kekuningan + Basil Streptobasil E-BAL 09 Circular Entire Convex Kuning + Basil Streptobasil E-BAL 10 Irregular Curled Convex Putih + Basil Streptobasil
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan bentuk koloni pada 10 isolat yang  telah  teridentifikasi  yaitu  berbentuk Irregular (tidak  beraturan)  sebanyak  7 isolat  dan Circular (bundar)  sebanyak  3  isolat,  sedangkan  tepi  koloni  berbentuk lobate (tidak  teratur) berjumlah  1  isolat, undulate (bergelombang)  berjumlah  2 isolat, entire (rata)  sebanyak  3  isolat, curled berjumlah  3  isolat  dan rhizoid (berakar)  berjumlah  1  isolat.  Elevasi  pada  ke 10  isolat  teridentifikasi  berbentuk convex atau  cembung  yang  berwarna  putih  berjumlah  2  isolat,  putih  kekuningan berjumlah 6 isolat dan kuning berjumlah 2 isolat.

## Uji Biokimia Bakteri Asam Laktat (BAL) Ekoenzim
Pengujian  biokimia  bakteri  dilakukan  untuk  mengidentifikasi  dan mendeterminasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi melalui sifat fisiologisnya.
Uji biokimia yang dilakukan pada ke 10 isolat BAL hasil fermentasi limbah organik kulit buah ( Eco-enzyme ) meliputi uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar), gas, H2S, uji motilitas dan uji Katalase.
Tabel 2. Hasil Uji Biokimia BAL Ekoenzim
Kode Isolat Uji TSIA Gas H2S Uji Motilitas Uji Katalase E-BAL 01 Kuning/Merah - - - - E-BAL 02 Merah/Kuning - - - - E-BAL 03 Kuning/Kuning - - - - E-BAL 04 Merah/Kuning - - - - E-BAL 05 Kuning/Merah - - - - E-BAL 06 Merah/Kuning - - - - E-BAL 07 Merah/Kuning - - - - E-BAL 08 Merah/Kuning - - - - E-BAL 09 Merah/Kuning - - - - E-BAL 10 Merah/Kuning - - - -
Keterangan: Tanda “+” (positif (terjadi perubahan)); Tanda “-“ (negatif (tidak terjadi perubahan))

## Identifikasi Bakteri Asam Laktat Ekoenzim
Berdasarkan  Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology  dari  hasil identifikasi  Setelah  dilakukan  uji  morfologi  sel  dan  uji  biokimiawi  dapat diketahui  bahwa  bakteri yang berhasil diisolasi tersebut merupakan bakteri  asam laktat dan termasuk dalam genus Lactobacillus.  Hasil  identifikasi  sampai  tingkat genus  didasarkan  atas  ciri-ciri  yang  terdapat  pada  bakteri  tersebut  yaitu mempunyai  bentuk  bulat  dan  tidak  beraturan,  bentuk selnya batang,  gram positif dengan warnanya yang ungu (violet), bersifat katalase negatif yang  berarti  bahwa bakteri  ini  tidak  menghasilkan  enzim  katalase  yang  dapat  menghidrolisis senyawa  H2O2  yang  bersifat  racun  dan  di  samping  itu  isolat  bakteri  ini juga tidak  mempunyai  kemampuan  membentuk  gas  dalam  uji  produksi  gas  dari glukosa. Berdasarkan  Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology  dari  hasil identifikasi  Setelah  dilakukan  uji  morfologi  sel  dan  uji  biokimiawi,  didapat beberapa  dugaan  spesies  dari  jenis Lactobacillus ,  yaitu Lactobacillus acetotolerans ,  dan Lactobacillus kitasatonis. Acetotolerans memiliki  ciri-ciri morfologi  dengan  bentuk  irregular,  circular,  berwarna  putih,  putih  kekuningan, margin undalate dan elevasi convex, hal ini sama dengan ciri- ciri morfologi dari kode isolat E-BAL 02 dan E-BAL 06. Lactobacillus kitasatonis memiliki ciri-ciri morfologi  dengan  bentuk  irregular,  circular,  berwarna  putih,  margin  curled  dan elevasi convex, hal ini sama dengan ciri morfologi dari kode isolat E-BAL 04, E- BAL 08, dan E-BAL 10.

## Uji Ketahanan Terhadap Keasaman (pH)
Tabel  3  menyajikan  hasil  pengukuran  OD600  nm  untuk  berbagai  isolat BAL pada tiga kondisi pH berbeda: pH 4.0, pH 7.0, dan pH 9.0. Data ini diambil untuk dua ulangan (U1 dan U2) untuk setiap isolat dan kondisi pH.
Tabel 3. Uji Nilai OD (OD600 nm) Pertumbuhan BAL
Kode Isolat pH 4.0 pH 7.0 pH 9.0
U1 U2 U1 U2 U1 U2 E-BAL 01 0,312 0,316 0,246 0,249 0,108 0,106 E-BAL 02 0,306 0,302 0,205 0,221 0,102 0,101 E-BAL 03 0,321 0,326 0,226 0,221 0,125 0,128 E-BAL 04 0,327 0,325 0,217 0,213 0,119 0,116 E-BAL 05 0,399 0,398 0,326 0,325 0,207 0,208 E-BAL 06 0,276 0,273 0,126 0,125 0,102 0,104 E-BAL 07 0,327 0,324 0,208 0,209 0,126 0,128 E-BAL 08 0,291 0,296 0,149 0,146 0,102 0,103 E-BAL 09 0,397 0,398 0,326 0,328 0,212 0,219 E-BAL 10 0,276 0,273 0,199 0,196 0,102 0,106
Hasil pengukuran kerapatan optik ( optical density atau OD) dari kultur cair dengan pH 4, 7 dan 9 menunjukkan  BAL dapat hidup dan berkembangbiak pada pada kisaran pH tersebut. Hal ini sejalan dengan penelitian Abdel-Rahman (2013) dalam  Okfrianti  et al.,  (2018) bahwa  bakteri  asam laktat  dapat  tumbuh di  sekitar pH 3,5 – 10,0 serta suhu 5°C - 45°C dan toleran terhadap kondisi asam.

## PEMBAHASAN
Isolasi dan  Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Hasil Fermentasi  Limbah Organik Kulit Buah ( Eco-enzyme )
Isolasi  bakteri  dilakukan  dari  hasil  fermentasi  limbah  organik  kulit  buah (ekoenzim)  yang  masing-masing  terdiri  dari  kulit  Jeruk,  kulit  Mangga,  kulit  Terong Belanda, kulit Alpukat dan kulit Belimbing dengan campuran air dan gula merah dengan perbandingan  3:10:1.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  pada  bulan  Januari  tahun 2024  didapatkan  10  isolat  bakteri  asam  laktat  yang  berasal  dari  hasil  fermentasi  limbah organik kulit buah ( Eco-enzyme ). Hal ini ditandai dengan tumbuhnya bakteri pada media MRS-A. Media MRSA merupakan media spesifik untuk pertumbuhan bakteri asam laktat (Nurlaela  et  al.,  2017).  Hal  ini  dikuatkan  dalam  penelitian  Sari  et  al.,  (2016)  bahwa ditemukan isolat bakteri tumbuh berkoloni di dalam media MRSA. Koloni yang tumbuh pada  media  MRSA  merupakan  bakteri  asam  laktat  karena  media  MRSA  didesain  untuk mendukung  pertumbuhan  bakteri  asam  laktat  termasuk  genus Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus, dan Leuconostoc .
Pewarnaan Gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling penting
0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 pH 4.0 U1 pH 4.0 U2 pH 7.0 U1 pH 7.0 U2
pH 9.0 U1 pH 9.0 U2
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10
yang digunakan untuk membedakan antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Prinsip pewarnaan Gram yaitu saat bakteri diwarnai dengan kristal violet, bakteri  Gram  positif  akan  menyerap  zat  warna  tersebut  sehingga  bewarna  ungu. Sedangkan  bakteri  Gram  negatif  akan  melepas  zat  warna  kristal  violet  setelah dicuci  dengan  alkohol  dan  kemudian  akan  menyerap  zat  warna  terakhir  yang diberikan yaitu safranin sehingga bewarna merah. Hal ini sesuai dengan pendapat Waluyo  (2008),  yang  menyatakan  bahwa bakteri  Gram  positif  memiliki  dinding sel  berupa  peptidoglikan  yang  tebal.  Saat  peluruhan  dengan  alkohol,  pori-pori dinding  sel  menyempit  karena  terjadi  dekolorisasi  sehingga  dinding  sel  tetap menahan  kristal  violet.  Bakteri  Gram  negatif  memiliki  3  lapisan  dinding  sel, sehingga  lipid  akan  tercuci  oleh  alkohol  dan  pewarnaan  kristal  violet  akan  ikut tercuci.  Bakteri  Gram  negatif  saat  diwarnai  dengan  safranin  akan  bewarna merah.
Berdasarkan  hasil  pewarnaan  Gram,  didapatkan  hasil  yaitu  semua  isolat memiliki karakter  Gram  positif.  Menurut  Wibowo  (1988)  dalam  Nasution  et  al., (2017),  bakteri  asam  laktat  merupakan  bakteri  Gram  positif  karena  tidak mengalami  dekolorisasi  dan  tetap  mengikat  warna ungu  kristal violet  pada tahap akhir  pewarnaan.  Berdasarkan  hasil pewarnaan  Gram  dapat  diamati  pula  bentuk sel  bakteri.  Bentuk  sel  bakteri  berdasarkan  hasil  pengamatan  yaitu  batang  atau basil.  Pada  penelitian  ini  juga  diperoleh  hasil  pewarnaan  keseluruhan  isolat bersifat Gram positif dengan sel berbentuk basil dengan penataan streptobasil.

## Uji Biokimia Bakteri Asam Laktat (BAL) Ekoenzim
Menurut  Fardiaz  (1987)  dalam  Finanda  et  al.  (2021),  pengujian  pada medium Triple  Sugar  Iron  Agar (TSIA)  dapat  diketahui  terjadinya  fermentasi glukosa,  laktosa,  dan sukrosa  yang  ditandai  terbentuknya  perubahan  warna  pada media.  Warna  merah  pada  agar  menunjukkan  reaksi  basa  dan  warna  kuning menunjukkan  reaksi  asam.  Warna  merah pada  permukaan  dan  kuning  di  bagian bawah tabung menunjukkan terjadi fermentasi glukosa tetapi tidak memfermentasi  laktosa  dan  sukrosa.  Warna  kuning  pada  bagian  permukaan  dan bawah  tabung  menunjukkan  terjadinya  fermentasi  glukosa,  laktosa,  dan  sukrosa. Berdasarkan  hasil  penelitian  terdapat  9  isolat  yang  mampu  memfermentasi glukosa, dan 1 isolat  yang mampu memferementasi glukosa, laktosa dan sukrosa. Dalam  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Asmara  &  Triyanto  (2012),  isolat  bakteri asam  laktat  (BAL)  dari  genus Lactobacillus menunjukkan  reaksi  asam  pada  uji Triple  Sugar  Iron  Agar  (TSIA).  Hasil  uji  tersebut  ditandai  dengan  perubahan warna  media  menjadi  kuning  pada  bagian slant (permukaan)  dan butt (bagian bawah).
Uji  produksi  gas  dilakukan  untuk  melihat  aktivitas  metabolisme  BAL. Dari  hasil uji  didapatkan strain acuan  tidak  memproduksi  gas  yang  berarti memiliki  tipe  fermentasi homofermentatif.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Suardana  et  al.,  (2018)  hasil  uji  produksi  gas  yang  diperoleh  bersifat homofermentatif.  Menurut  Surono  (2004)  dalam  Rahmadi  (2019),  bakteri homofermentatif  tidak  mampu  menghasilkan  gas  CO₂.  Hal  ini  disebabkan  oleh ketiadaan enzim piruvat oksidase, yang berperan dalam konversi piruvat menjadi CO₂ dan diikuti dengan pembentukan H₂O₂. Karena tidak ada aktivitas enzim ini, bakteri  homofermentatif  cenderung  menghasilkan  asam  laktat  sebagai  produk akhir utama dari fermentasi, tanpa produksi gas CO₂.
Uji  produksi  H2S ke-10  isolat  yang diujikan bersifat  negatif  karena  tidak terdapat endapan berwarna hitam di dasar media  (-). Menurut Isnan et  al. (2017), pengujian  hidrogen  sulfida  (H₂S)  dilakukan  untuk  mengevaluasi  kemampuan bakteri  dalam  mengubah  asam  amino  alanin  menjadi  H₂S.  Bakteri  yang  mampu menghasilkan H₂S akan mengubah ion besi (Fe) dalam medium uji menjadi besi sulfida  (FeS),  yang  terlihat  sebagai  warna  hitam  atau  kehitaman  pada  dasar medium.  Isolat  bakteri  yang  tidak  menunjukkan  warna  hitam  atau  kehitaman berarti tidak mampu menghasilkan H₂S atau mereaksikan Fe menjadi FeS. Dalam hal ini, isolat bakteri asam laktat (BAL) tidak mampu mengubah H₂S serta tidak dapat mereaksikan Fe menjadi FeS.
Hasil  pengujian  motilitas  menunjukkan  seluruh  isolat  BAL  bersifat  non motil karena tidak memiliki flagella. Bakteri yang digolongkan bersifat non motil adalah  bakteri  yang  hanya  mampu  tumbuh  di  sepanjang  tusukan  media  tegak, sedangkan  bakteri motil  adalah  bakteri  yang  mampu  tumbuh  tidak  hanya  di sepanjang  tusukan  media  agar  tegak.  Isolat  bakteri  asam  laktat  (BAL)  diketahui bersifat non-motil, yang ditandai dengan ketidakmampuan mereka untuk  tumbuh di sekitar bekas tusukan ose dalam medium uji (Susilawati, 2016). Hal ini sejalan dengan pernyataan Fardiaz (1992) dalam Finanda et al. (2021), yang menyebutkan bahwa bakteri asam laktat memang memiliki sifat tidak bergerak atau non-motil. Uji  katalase  digunakan  untuk  mengetahui  adanya  enzim  katalase  pada isolat bakteri. Hasil uji katalase menunjukkan hasil yang negatif pada ke-10 isolat dan strain acuan,  dimana  tidak  terdapatnya  gelembung  gas  yang  terbentuk. Menurut  Wibowo (1988),  bakteri asam  laktat  merupakan  bakteri  katalase  negatif karena  tidak  menghasilkan  enzim  katalase  yang  dapat  memecah  hidrogen peroksida.

## Identifikasi Bakteri Asam Laktat Ekoenzim
Ke-10  isolat  dalam  penelitian  ini  memiliki  ciri-ciri  sebagai  berikut: berbentuk  sel  batang  dengan  susunan  berantai,  termasuk  dalam  kategori  gram positif,  dan  katalase  negatif.  Berdasarkan  ciri-ciri  ini,  isolat  tersebut  diduga termasuk dalam genus Lactobacillus . Holt et al. (1994) dalam Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology menyatakan bahwa bakteri dalam genus Lactobacillus adalah  gram  positif  dan  non-motil.  Lous  et  al.  (2011)  juga  mencatat  bahwa Lactobacillus adalah bakteri gram positif dan tidak motil. Ray (2001) dalam Bulu et  al.  (2019)  menambahkan  bahwa Lactobacillus memiliki  sel  berbentuk  batang yang  seragam  dalam  ukuran  dan  bentuk,  dengan  beberapa  spesies  yang  bisa sangat  panjang atau pendek, mayoritas spesies adalah gram  positif, dan sebagian kecil  dapat  berwarna  gram  negatif.  Sebagian  besar  spesies Lactobacillus tidak bergerak.

## Uji Ketahanan Terhadap Keasaman (pH)
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  kemampuan  isolat  BAL  hasil fermentasi limbah organik kulit buah ( Eco-enzyme ) untuk bertahan hidup pada pH 4,  7  dan  9.  Pada  penelitian  ini  didapatkan  bahwa  ke-10  isolat  BAL  yang  diuji dapat  tumbuh  pada  pH  4,  7, dan  9.  Hasil  ini  tidak  jauh  berbeda  dari  penemu- penemu  terdahulu,  salah  satunya  Nursyirwani  (2013),  mendapatkan  hasil  bakteri asam asam laktat yang diisolasi dari ikan kerapu macan bersifat resisten dan dapat hidup pada lingkungan asam.
Berdasarkan profil pertumbuhan Isolat Bakteri dengan perlakuan pH yang berbeda (4, 7, 9) tampak bahwa isolat bakteri tersebut memiliki sifat resisten yang berbeda-beda  terhadap  perlakuan  pH  yang  diberikan.  Hasil  pengukuran pertumbuhan isolat bakteri menunjukkan bahwa Isolat bakteri E-BAL 01 mampu tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Hal ini ditandai dengan tingginya nilai Optical Density (OD) yang dihasilkan. Sedangkan pada  pH  9  isolat  bakteri  tersebut  tidak  mengalami  pertumbuhan  bakteri  yang signifikan.  Profil  pertumbuhan  Isolat  Bakteri  E-BAL  02  dengan  perlakuan  pH yang  berbeda  (4,  7,  9)  menunjukkan  bahwa  Isolat  Bakteri  E-BAL  02  mampu tumbuh  baik  pada  pH  4,  7, dan  9,  dan  mencapai  nilai  optimal  pada  pH  4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan.
Profil  pertumbuhan  Isolat  Bakteri  E-BAL  03  dengan  perlakuan  pH  yang berbeda  (4,  7,  9)  menunjukkan  bahwa  Isolat  Bakteri  E-BAL  03  mampu  tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan. Profil pertumbuhan  Isolat Bakteri E-BAL 04 dengan perlakuan pH  yang berbeda (4, 7, 9) menunjukkan bahwa Isolat Bakteri E-BAL 04 mampu tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan.
Profil  pertumbuhan  Isolat  Bakteri  E-BAL  05  dengan  perlakuan  pH  yang berbeda  (4,  7,  9)  menunjukkan  bahwa  Isolat  Bakteri  E-BAL  05  mampu  tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan. Profil pertumbuhan  Isolat Bakteri E-BAL 06 dengan perlakuan pH  yang berbeda (4, 7, 9) menunjukkan bahwa Isolat Bakteri E-BAL 06 mampu tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan.
Profil  pertumbuhan  Isolat  Bakteri  E-BAL  07  dengan  perlakuan  pH  yang berbeda  (4,  7,  9)  menunjukkan  bahwa  Isolat  Bakteri  E-BAL  07  mampu  tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan. Profil pertumbuhan  Isolat Bakteri E-BAL 08 dengan perlakuan pH  yang berbeda (4, 7, 9) menunjukkan bahwa Isolat Bakteri E-BAL 08 mampu tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan.
Profil  pertumbuhan  Isolat  Bakteri  E-BAL  09  dengan  perlakuan  pH  yang berbeda  (4,  7,  9)  menunjukkan  bahwa  Isolat  Bakteri  E-BAL  09  mampu  tumbuh baik pada pH 4, 7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sedangkan pada pH 9 isolat bakteri tersebut tidak mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan. Profil pertumbuhan  Isolat Bakteri E-BAL 10 dengan perlakuan pH  yang berbeda (4, 7, 9) menunjukkan bahwa Isolat Bakteri E-BAL 10 mampu tumbuh baik pada pH  4,  7, dan 9, dan mencapai nilai optimal pada pH 4. Sama hal dengan  bakteri- bakteri  sebelumnya,  pada  pH  9  isolat  bakteri  tersebut  tidak  mengalami pertumbuhan bakteri yang signifikan.
Pemberian  perlakuan  pH  yang  berbeda  memberikan  pengaruh  dalam pertumbuhan  ke-10  isolat  bakteri.  Pernyataan  tersebut  konsisten  dengan  literatur yang  ada.  Suriani  et  al.  (2013)  mengungkapkan  bahwa  pH  medium  sangat
memengaruhi  pertumbuhan  bakteri.  pH  mempengaruhi  aktivitas  enzim,  yang merupakan  kunci  dalam  berbagai  reaksi  biokimia  yang  diperlukan  untuk pertumbuhan bakteri. Kondisi pH yang tidak optimal dapat menghambat aktivitas enzim, yang pada gilirannya dapat mengganggu proses pertumbuhan bakteri.
Bakteri asam laktat dapat tumbuh di sekitar pH 3,5 hingga 10,0 serta suhu 5  °C  hingga  45  °C  dan  toleran  terhadap  kondisi  asam,  dengan  sebagian  besar strain mampu tumbuh baik pada   pH  4,4.  (Rahman  et  al.,  2013;  Nousiainen  et  al 2004).  Pertumbuhan  isolat  bakteri  dari  E-BAL  01  -  E-BAL  10  menunjukkan bahwa  keseluruhan  isolat tahan pada pH rendah, yang mana OD ≥ 0,1 (tahan pH rendah); OD ≤ 0,1 (tidak tahan pH rendah).

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil isolasi yang dilakukan, diperoleh 10 isolat Bakteri Asam Laktat  (BAL).  Setelah  identifikasi,  semua  isolat  termasuk  dalam  genus Lactobacillus . Untuk pH pertumbuhan, nilai Optical Density (OD) pada pH 4, 7, dan  9  menunjukkan  rata-rata  OD  sebesar  0,225.  Ini  menunjukkan  bahwa  isolat BAL tersebut dapat tumbuh pada rentang pH yang beragam, dengan pH 4, 7, dan 9 menunjukkan kemampuan pertumbuhan yang relatif konsisten berdasarkan nilai OD yang didapat. Nilai OD ini menunjukkan tingkat pertumbuhan bakteri dalam medium  kultur  pada  berbagai  kondisi  pH,  dan  pH  yang  berbeda  mungkin mempengaruhi aktivitas dan efisiensi pertumbuhan bakteri secara bervariasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdillah, J., Widyawati, N., & Suprihati. (2016). The Effect of Yeast Dosage and Sugar  Addition on the Quality of Grain Wheat Tape. Agric, 26 (1), 75-84. https://doi.org/10.24246/agric.2014.v26.i1.p75-84
Asmara, W., & Triyanto, A. E. T. H. W. (2012). Isolasi Bakteri Asam Laktat dari Usus  Ikan  Kerapu  Macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus )  dan  Potensinya Sebagai  Antivibrio. Ilmu  Kelautan  -  Indonesian  Journal  of  Marine Sciences, 16 (2), 70–77. https://doi.org/10.14710/ik.ijms.16.2.70-77 Barrow,  G.  I. (1993). Cowan  and  Steel Manual  for the  Identification of Medical Bacteria . Inggris: Cambridge University Press Bulu, S., Bullu, N. I., & Rupidara, A. D. N. (2019). Identifikasi Morfologi Bakteri Asam Laktat pada Nira Segar Lontar ( Borassus flabellifer Linn ). Jambura Edu Biosfer Journal, 1 (2), 47–52. https://doi.org/10.34312/jebj.v1i2.2518 Finanda,  A.,  Mukarlina,  M.,  &  Rahmawati,  R.  (2021).  Isolasi  dan  Karakterisasi Genus  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Fermentasi  Daging  Buah  Pisang  Kepok ( Musa paradisiaca L.). Jurnal Protobiont,
10 (2), 37–41.
https://jurnal.untan.ac.id/index.php/jprb/article/download/53897/75676592 748
Haryanto,  R.  (2005). Antara  Antibiotik,  Probiotik,  dan  Prebiotik .  Bandung: Asisten mobil lab. Basic Science Center ITB
Hemalatha,  M.,  &  Visantini,  P.  (2016).  Potential  Use  of Eco-enzyme for  the Treatment    of  Metal  Based  Effluent. IOP  Publishing ,  1–6. https://doi.org/10.1088/1757-899X%2F716%2F1%2F012016
Hersoelistyorini,  W.,  Sumanto,  D.,  &  Najih,  L.  (2010).  Pengaruh  Lama  Simpan pada Suhu  Ruang  Terhadap  Kadar  Protein  Dodol  Tape  Kulit  Umbi  Ubi Kayu. Jurnal Pangan dan Gizi, 1 (1), 24-34.
https://doi.org/10.26714/jpg.1.1.2010.%25p Idroes,  R.,  Khairan,  &  Fakri,  F.  (2017).  Skrining  Aktivitas  Tumbuhan  yang berpotensi sebagai bahan antimikroba di kawasan ie Jue (upflow geotermal Zone) Aceh besar. Thesis. Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh Jelita,  R.  (2022).  Produksi  Eco  Enzyme  dengan  Pemanfaatan  Limbah  Rumah Tangga untuk Menjaga Kesehatan Masyarakat di Era New Normal. Jurnal Maitreyawira, 3 (1), 5–24. https://doi.org/10.69607/jm.v3i1.49
Larasati,  D.,  Astuti,  P.  A.,  &  Maharani,  T.  E.  (2020).  Uji  Organoleptik  Produk
Eco-enzyme dari Limbah Kulit Buah (Studi Kasus di Kota Se Semarang). Seminar Nasional Edusainstek , 278–283. https://prosiding.unimus.ac.id/index.php/edusaintek/article/view/569 Latifah,  R.  N.,  &  Rahayu,  Y.  S.  (2012.).  Pemanfaatan  Sampah  Organik  sebagai Bahan  Pupuk  Cair  untuk  Pertumbuhan  Tanaman  Bayam  Merah. Lentera,
1 (3). https://ejournal.unesa.ac.id/index.php/lenterabio/article/view/416 Lous,  J.,  Ryborg,  C.  T.,  &  Thomsen,  J.  L.  (2011).  A  Systematic  Review  of  The Effect  of  Tympanostomy  Tubes  in  Children  with  Recurrent  Acute  Otitis Media. In  International Journal  of Pediatric  Otorhinolaryngology, 75 (9). https://doi.org/10.1016/j.ijporl.2011.05.009
Isnan, M.  H., & Gelgel,  K. T. P. (2017).  Isolsi dan Identifikasi Bakteri dari Susu Kambing  Peranakan  Etawa  Terindikasi  Mastitis  Klinis  di  Beberapa Kecamatan  di  Kabupaten  Banyuwangi. Buletin  Veteriner  Udayana,  9 (1), 319–325. https://doi.org/10.21531/bulvet.2017.9.1.73
Manik,  M.,  Kaban,  J.,  Silalahi,  J.,  &  Ginting,  M.  (2021).  Lactic  Acid  Bacteria (LAB) with  Probiotic  Potential  from  Dengke  Naniura. Baghdad  Science Journal, 18 (1), 35–40. https://doi.org/10.21123/bsj.2021.18.1.0035 Marjenah,  M., Kurniawan, W., Nurhiftiani,  I., Sembiring,  K.  H. M.,  &  Ediyono, R.  P.  (2017).  Pemanfaatan  Limbah  Kulit  Buah-Buahan  Sebagai  Bahan Baku  Pembuatan  Pupuk  Organik  Cair. Hut  Trop,  1 (2),  120–127. http://dx.doi.org/10.32522/ujht.v1i2.800
Muhiddin,  N.  H.,  Juli,  N.,  &  Nyoman,  P.  A.  (2001).  Peningkatan  Kandungan Protein Kulit Umbi Ubi Kayu Melalui Proses Fermentasi. Jms, 6 (1), 1–12. https://media.neliti.com/media/publications/196901-ID-peningkatan- kualitas-nutrisi-limbah-kuli.pdf
Murdiana, H. E., Yuhara, N. A., Rahmavika, T., & Danila, D. (2022). Diseminasi: Jurnal  Pengabdian  kepada  Masyarakat  Pelatihan  Pembuatan  Eco  Enzyme dari  Limbah  Organik Rumah  Tangga di Dasa Wisma  Sukun. Diseminasi,
4 (1), 55–60. https://doi.org/10.33830/diseminasiabdimas.v4i1.1531 Nasution, A. P. A., Erina, E., Darmawi, D., Darniati, D., Ismail, I., & Thasmi, C. N.  (2017).  Total  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  pada  Caecum  Puyuh ( Coturnix japonica ). Jurnal Ilmiah Mahasiswa Veteriner, 01 (4), 774–779. https://doi.org/10.21157/jim%20vet..v1i4.5470
Nazim, F., & Meera, V. (2021). Treatment of Synthetic Greywater Using 5 % and 10%  Garbage  Enzyme  Solution.  Bonfring  International  Journal  of Industrial Engineering and Management Science,
3, 111.
https://doi.org/10.9756/BIJIEMS.4733
Nurlaela,  S.,  Sunarti,  T.  C.,  &  Meryandini,  A.  (2017).  Formula  Media
Pertumbuhan Bakteri Asam Laktat Pediococcus pentosaceus Menggunakan Substrat Whey Tahu. Jurnal Sumberdaya Hayati, 2 (2), 31–
38.  https://doi.org/10.29244/jsdh.2.2.31-38 Nyanga,  L.  K.,  Nout,  M.  J.  R.,  Gadaga,  T.  H.,  Theelen,  B.,  Boekhout,  T.,  &
Zwietering,  M.  H.  (2007).  Yeasts  and  Lactic  Acid  Bacteria  Microbiota From  Masau  ( Ziziphus  mauritiana )  Fruits  and  Their  Fermented  Fruit Pulp  In  Zimbabwe. International  Journal  of  Food  Microbiology,  120 (1– 2), 159–166.  https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2007.06.021
Okfrianti,  Y.,  Darwis,  D.,  &  Pravita,  A.  (2018).  Bakteri  Asam  Laktat Lactobacillus Plantarum  C410LI  dan Lactobacillus Rossiae  LS6  yang Diisolasi  dari  Lemea  Rejang  terhadap  Suhu,  pH  dan  Garam  Empedu Berpotensi sebagai Prebiotik. Jurnal Ilmu Dan Teknologi Kesehatan, 6 (1), 49–58. https://doi.org/10.32668/jitek.v6i1.108
Pebriani, T. H., S, A. A. H. W., Hanhadyanaputri, E. S., Sulistyarini, I., Cahyani, I.  M.,  Kresnawati,  Y.,  Suprijono,  A.,  &  Adhityasmara,  D.  (2022).
Pemanfaatan  Kulit  Buah  sebagai  Bahan  Baku Eco-enzyme di  Dusun Demungan. Jurnal DIMAS, 4 (2), 43–49.
https://doi.org/10.53359/dimas.v4i2.43
Puspawati,  N.  (2008).  Penggunaan  Berbagai  Jenis  Pelindung  untuk Mempertahankan  Viabilitas  Bakteri  Asam  Laktat  yang  diisolasi  dari  Air Susu    Ibu  (ASI)  pada  Prose  Pengeringan  Beku  dan  Penyimpanan. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, 21 (1), 59-65. https://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip/article/view/2463
Rahmadi,  A.  (2019).  Bakteri  Asam  Laktat  dan  Mandai  Cempedak.  Samarinda: Mulawarman University Press
Romadhon,  R.,  Subagiyo,  S.,  &  Sebastian,  M.  (2012).  Isolasi  dan  Karakterisasi
Bakteri Asam Laktat dari Usus Udang Penghasil Bakteriosin sebagai Agen Antibakteria  pada  Produk-Produk  Hasil  Perikanan. Jurnal  Saintek Perikanan, 8 (1), 59–64. https://doi.org/10.14710/presipitasi.v%25vi%25i.313-328 Salsabila,  R.  K.,  &  Winarsih,  W.  (2023).  Efektivitas  Pemberian  Ekoenzim  Kulit Buah  sebagai  Pupuk  Organik  Cair  terhadap  Pertumbuhan  Tanaman  Sawi Pakcoy ( Brassica rapa L.). Lentera Bio, 12 (1), 50–59. https://journal.unesa.ac.id/index.php/lenterabio/index50 Sari,  R.  A.,  &  Risa,  N.  P.  A.  (2012).  Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat  Genus Leuconostoc  dari  Pekasam  Ale-Ale  Hasil Formulasi Skala  Laboratorium. Jurnal Kimia, 1 (1), 14–20. https://jurnal.untan.ac.id/index.php/jkkmipa/article/view/992
Sari, R., Deslianri, L., & Apridamayanti, P. (2016). Skrining Aktivitas Antibakteri Bakteriosin  dari  Minuman  Ce  Hun  Tiau. Pharmaceutical  Sciences  and Research, 3 (2), 88–96. https://doi.org/10.7454/psr.v3i2.3272
Seniati,  S.,  Marbiah,  M.,  &  Nurhayati,  N.  (2017).  Kajian  Uji  Konfrontasi Terhadap  Bakteri Pathogen  dengan  Menggunakan  Metode  Sebar,  Metode Tuang,  dan  Metode  Gores. Jurnal  Galung  Tropika,  6 (1),  42–48. https://doi.org/10.31850/jgt.v6i1.209
Sharah,  A.,  Karnila,  R.,  &  Desmelati.  (2015).  Pembuatan  Kurva  Pertumbuhan Bakteri Asam Laktat yang di Isolasi dari Ikan Peda Kembung ( Rastrelliger sp. ). Jom, 2 (2), 1–8. https://jom.unri.ac.id/index.php/JOMFAPERIKA/article/view/6153
Srikandi, F. (1992). Mikrobiologi Pangan I . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama
Suardana,  I.  W.,  Sukoco,  H.,  &  Antara,  N.  S.  (2018).  Identifikasi  Bakteri Asam  Laktat  Isolat  18A  Secara  Fenotipik. Buletin  Veteriner  Udayana, 10 (1), 1. https://doi.org/10.24843/bulvet.2018.v10.i01.p01
Suprayogi,  D.,  Asra,  R.,  &  Mahdalia,  R.  (2022).  Analisis  Produk  Eco Enzyme dari  Kulit  Buah  Nanas  ( Ananas  comosus L.)  dan Jeruk  Berastagi  ( Citrus sinensis L.). Jurnal Redoks, 7 (1), 19–27. https://doi.org/10.31851/redoks.v7i1.8414 Suriani,  S.,  Soemarno,  &  Suharjo.  (2013).  Pengaruh  Suhu  dan  pH  terhadap l aju pertumbuhan  Lima  Isolat  Bakteri  Anggota  Genus  Pseudomonas yang  diisolasi  dari  Ekosistem  Sungai  Tercemar  Deterjen  di  sekitar Kampus  Universitas  Brawijaya. Indonesian  Journal  of  Environment  and Suistainable Development, 3 (2), 58–62. https://jpal.ub.ac.id/index.php/jpal/article/view/126
Susilawati,  S.  (2016).  Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  dari Air Cucian Beras. Riau: Universitas Riau Press
Susilowati,  A.  Y.,  Jannah,  S.  N.,  Kusumaningrum,  H.  P.,  &  Sulistiani,  S.  S. (2022).  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Susu  Kambing Sebagai  Bakteri  Antagonis Listeria  monocytogenes dan Escherichia  coli Penyebab  Foodborne  Disease. Jurnal  Teknologi  Pangan,  6 (2),  24–31. https://doi.org/10.14710/jtp.2022.29488
Sutrisno,  A.  D.,  Widjaja,  W.  P.,  &  Salam,  W.  Q.  (2020).  Pendugaan  Umur Simpan Ikan Asap Menggunakan Jenis Asap Tempurung Kelapa dan Jenis
Ikan Air Tawar. Pasundan Food Technology Journal, 7 (2). https://doi.org/10.23969/pftj.v7i2.2981
Usmiati,  S.,  &  Risfaberi.  (2012).  Pengembangan  Dadih  sebagai  Pangan Fungsional  Probiotik Asli  Sumatera  Barat. J.  Litbang Pert,  32 (1),  20–29. https://dx.doi.org/10.21082/jp3.v32n1.2013.p20-29
Waluyo,  L.  (2008). Teknik  Metode  Dasar  Dalam  Mikrobiologi .  Malang:  UMM Press.
Yanti,  N.  A.  (2022).  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Buah  Mangga  Arum  Manis ( Mangifera  indica L.  var.  Arum  manis). Bionature,  23 (2),  132. https://doi.org/10.35580/bionature.v23i2.37860
Yuliana,  S.,  &  Handayani,  D.  (2022).  Jenis-Jenis  Cendawan  dari  Ampas Ecoenzyme  dengan  Sumber  Bahan  Organik  Berbagai  Jenis  Kulit  Jeruk. Serambi Biologi, 7 (1), 120-126. https://doi.org/10.24036/srmb.v7i1.48 Zurmiati,  M.  E.,  Mahata,  M.  H.,  &  Abbas,  W.  (2014).  Aplikasi  Probiotik  untuk Ternak  Itik  The  Aplication  of  Probiotic  on  Duck. Jurnal  Peternakan
Indonesia, 16 (2), 134–144. https://doi.org/10.25077/jpi.16.2.134-144.2014