## UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOL AKAR KB
( Coptosapelta tomentosa
Valeton ex K.Heyne) DENGAN METODE

## Brine Shrimp Lethality Test (BSLT )
Submitted : 17 Oktober 2016 Edited : 18 November 2016
Accepted : 30 November 2016
Risa Supriningrum,  Sapri, Vici Ali Pranamala
Akademi Farmasi Samarinda Email : risa_akfar@yahoo.com
ABSTRACT
The roots of KB plants (Captosapelta tomentisa) is used empiricallyby  Dayak Kenyah community as a drug leukorrhea. Leukorrhea is one of the early symptoms of cervical cancer. Early methods to determine the LC 50 value or toxicity of anticancer KB roots have not been reported. The aim of research is to determine the value of the toxicity of KB root. Research was conducted by an experimental study. Research stages include sample processing, extraction and acute toxicity test by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). BSLT testing to determine LC 50 values with a concentration of 250 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 450 ppm and a negative control. Analysis of the data used are probit analysis method. The results showed  the presence of flavonoids, alkaloids and saponins in of the ethanol extract of KB root . The test results obtained acute toxicity LC 50 value is 299.226 mg / ml, so that the ethanol extract of roots KB potentially toxic to the larvae of Artemia salina Leach.
Keywords : KB root, Toxicity, Brine Shrimp Lethality Test, LC 50 , Probit Analysis
PENDAHULUAN Kanker  merupakan  suatu  penyakit yang menempati peringkat tertinggi sebagai penyebab  kematian  di  negara-negara berkembang.  Penyakit  ini  ditandai  dengan pertumbuhan  sel  yang  tidak  terkendali  dan menyerang  jaringan  biologis  lainnya (1) . Kanker  serviks  merupakan  salah  satu  jenis kanker  yang  tumbuh  di  dalam  leher  rahim (suatu daerah pada organ reproduksi wanita yang merupakan pintu masuk ke arah rahim yang  letaknya  antara  rahim  dan  vagina). Human  Papiloma  Virus (HPV)  merupakan penyebab  utama  kanker  serviks.  Kanker  ini dapat  menyerang  siapa  saja,  mulai  dari perempuan  berusia  20  tahun  hingga perempuan  yang  tidak  dalam  usia produktif ( 2) .  Salah  satu gejala  awal  dari kanker serviks adalah keputihan. Keputihan
yang  berbau  dan  bercampur  darah merupakan  gejala  klinis  yang  timbul  ketika kanker berkembang (3) .
Setiap  tahun  terdapat  kurang  lebih 400.000 kasus baru kanker serviks di dunia dan  sebanyak  80%  terjadi  pada  wanita  di negara  berkembang.  Kasus  kanker  serviks yang  ditemukan  di  Asia  Pasifik  sekitar 266.000  kasus  setiap  tahunnya.  Kasus  baru kanker  seviks  di  Indonesia  terdapat  40-45 kasus setiap hari dan menyebabkan kira-kira 20-25 kematian per hari (4) . Obat-obat sintetik biasanya digunakan dalam  terapi  pengobatan  kanker  serviks. Penggunaan  obat-obat  sintetik  yang  sering menimbulkan efek samping yang merugikan bagi  penderita,  menyebabkan  masyarakat mencari  alternatif  lain  yaitu dengan memanfaatkan  bahan  alam  yang  dipercaya
lebih  aman  dan  tidak  menimbulkan  efek samping.  Salah  satu  bahan  alam  yang  telah lama  digunakan  masyarakat  Dayak  Kenyah untuk pengobatan adalah akar KB. Akar KB secara  empiris  digunakan  dengan  cara direbus  dan  air  hasil  rebusan  diminum sebagai  obat  keputihan  dan  kontrasepsi. Akar  KB  merupakan  tumbuhan  baru  yang penelitian  mengenai  toksisitasnya  belum pernah  dilaporkan.  Sehingga  dilakukan penelitian awal mengenai sifat toksisitasnya untuk  mengetahui  potensinya  sebagai antikanker. Penelitian yang pernah dilakukan adalah aktivitas  antioksidan beberapa tumbuhan  obat Kalimantan Timur oleh  Herman  (2013) (5) ,  menyatakan  bahwa ekstrak  methanol tumbuhan  merung ( Captosapelta tomentosa )  memiliki  nilai IC 50 69,02 ppm.
Penelitian  tentang  uji  toksisitas akut tumbuhan  Akar  KB  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) terhadap  larva  A rtemia  salina Leach. Metode  ini  merupakan  uji  pendahuluan aktivitas  biologis  yang  sederhana  untuk menentukan toksisitas senyawa atau ekstrak secara  akut (6) .  Metode  ini  telah  terbukti memiliki korelasi dengan aktivitas antikanker.  Metode  ini  juga  mudah dikerjakan, murah, cepat dan cukup akurat (7) . Metode  BSLT  merupakan  metode  awal  uji toksisitas  untuk  mengetahui  nilai  LC 50 dari tumbuhan  baru  yang  berpotensi  sebagai antikanker.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat Bohlam  lampu  40  watt,  toples  kaca,  vial, cawan  porselin,  cawan  petri,  pipet  tetes, tangas  air,  corong Buchner ,  maserator, blender,  pengayak  mesh  60,  mikropipet ( Vitlab ),  neraca  analitik  ( Ohaus ),    botol plastik, aerator, kaca pembesar ( Joy Art MF-
60 ), alat-alat gelas sinar UV, chamber, hair dryer .
Bahan Air suling, telur larva Artemia salina Leach, garam, etanol 95%, etanol 70%, alumunium foil, kertas pH universal , soda kue, akar KB, kertas  saring,  lempeng  silika gel  60 F 254 , pereaksi  Mayer,  pereaksi  Bouchardat, pereaksi  Dragendorf,  amil  alkohol,  asam klorida 2 N, asam klorida pekat, asam asetat anhidrat,  pereaksi  besi  (III)  klorida,  serbuk magnesium, asam sulfat pekat, n-heksan, etil asetat dan asam asetat anhidrat.

## Prosedur Kerja
Pengumpulan dan Pengolahan sampe l Sampel diperoleh  dari  daerah  Bengalon, Kutai  Timur,  Kalimantan  Timur.  Sampel dipanen  pagi  hari, disortasi  untuk memisahkan akar dari batang dan pengotor, kemudian  dicuci  ,  ditiriskan. Sampel dikeringkan  dengan  sinar  matahari, selanjutnya  dihaluskan  dan  diayak  dengan pengayak mesh 60 (8) .

## Pembuatan ekstrak
Sampel  yang  telah  ditimbang,  dimaserasi dengan pelarut etanol selama 24 jam. Maserat  disaring  dan  ampas  dimaserasi kembali  menggunakan jenis  dan  jumlah pelarut  yang  sama. Ekstrak  yang  diperoleh dipekatkan menggunakan  rotary  evaporator hingga kental (8) .

## Skrining Fitokimia
Dilakukan  uji  alkaloid,  tanin,  saponin, steroid  dan    triterpenoid  terhadap  ekstrak etanol  akar  kb. Uji  alkaloid  dilakukan dengan  menggunakan  pereaksi  Meyer, Bouchardat, Dragendorf. Sampel dinyatakan mengandung  alkaloid,  apabila  minimal  dua dari  tiga  uji  yang  dilakukan  memberikan hasil positif (9) .
Uji Aktivitas dengan Metode BSLT Menurut  Meyer  et  al (1982) (10) ,  metode BSLT  digunakan  untuk  mengetahui toksisitas  sampel  secara  umum  dengan
menggunakan  telur  udang Artemia  salina Leach.
Pembuatan Air laut Buatan Dilarutkan 15 g garam dalam 1 liter air suling, kemudian ditambahkan soda kue sambil diukur pH air hingga mencapai pH 8. Air laut  buatan  yang  sudah  siap  disaring menggunakan kertas saring ( 11) .

## Penetasan Larva Udang
Penetasan dilakukan dengan cara merendam 100 mg telur udang ke dalam 500 lm air laut buatan  dengan  diberi  penerangan  cahaya lampu  40  watt  agar  suhu  penetasan  tetap terjaga  25°C-31°C.  Telur  larva    dibiarkan selama  24  jam  sampai  menetas  menjadi nauplii  yang  matang  dan  siap  digunakan. Larva diambil dengan pipet dan dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi  air  laut buatan.
Penyiapan Kontrol Kontrol  negatif dibuat  dengan  tanpa menambahkan ekstrak, kemudian
ditambahkan  10  ml  air  laut  buatan  dan  10 ekor  larva  udang Artemia  salina Leach  ke dalam vial.
Persiapan Larutan sampel Ekstrak  yang  akan  diuji  dibuat  dalam konsentrasi  250  ppm,  300  ppm,  400  ppm dan 450 ppm.

## Prosedur  Uji  Toksisitas  dengan  Metode BSLT
Disiapkan  vial  untuk  tiap  kelompok sesuai  tingkat  konsentrasi,  masing-masing disediakan  5  vial  dan  dilakukan  replikasi sebanyak  3  kali.  Vial  diisi  dengan  sampel dan  ditambahkan  air  laut  buatan  sebanyak 10  ml.  Sepuluh  ekor  larva Artemia  salina dipindahkan  ke  dalam  masing-masing  vial yang telah berisi senyawa uji ( 11) .
Kontrol  negatif  (blanko)  diberi perlakuan  yang  sama  seperti  larutan  uji
tetapi  tidak  ditambahkan  dengan  ekstrak. Vial-vial  tersebut  diletakkan  di  bawah penerangan.  Jumlah  larva  udang  yang  mati dalam  tiap  vial  dihitung  selama  24  jam dengan  cara  manual.  Tingkat  toksisitas ditentukan dengan menghitung jumlah larva yang  mati.  Kriteria  standar  untuk  menilai kematian  larva  udang  adalah  bila  larva udang  tidak  menunjukkan  pergerakan selama beberapa detik observasi (1) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil  Skrining  Fitokimia Ekstrak Etanol Akar KB
Golongan Hasil Alkaloid Flavonoid Tanin Saponin Steroid/Triterpennoid (+) (+) (-) (+) (-)
Keterangan:
(+) = Mengandung golongan senyawa metabolit sekunder (-) =  Tidak  mengandung  golongan    senyawa  metabolit sekunder
Dari  tabel  1  dapat  dilihat,  bahwa ekstrak  etanol  akar  KB  mengandung senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  saponin. Perubahan  warna  yang  terjadi  pada  uji alkaloid  menggunakan  pereaksi  Bouchardat dan pereaksi Dragendorf menunjukkan hasil yang  positif,  sedangkan  dengan  pereaksi Mayer  hasilnya  negatif.  Uji  flavonoid  yang dihasilkan  positif  dengan  adanya  warna jingga  yang  terdapat  pada  lapisan  amil alkohol  atau  cincin  amil  alkohol  di bagian atas.  Hasil  positif  ditunjukkan  pada identifikasi  saponin  dengan  terbentuknya buih  yang  mantap  setinggi  1  cm  selama kurang  lebih  10  menit,  buih  tidak  hilang setelah penambahan asam klorida.
Hasil Uji Toksisitas Larva Artemia salina
Leach Uji  toksisitas  dilakukan  untuk mengetahui  aktivitas  yang  terdapat  pada ekstrak akar  KB  ( Coptosapelta  tomentosa ) dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality  Test (BSLT). Tujuan  dari  uji  ini untuk  menentukan  efek  toksik  dari  ekstrak setelah  pemberian  dosis  pada  hewan  uji. Ekstrak akar  KB  dilarutkan  menggunakan air laut buatan yang merupakan media hidup larva Artemia  salina Leach,  sehingga  pada saat  pengujian  larva  dipastikan  mati dikarenakan oleh ekstrak. Hal penting yang harus diperhatikan dalam pembuatan air laut buatan yaitu pH air laut buatan tersebut. Hal ini  berguna  pada  enzim-enzim  untuk metamorfosis  artemia  yang  bekerja  secara optimum  pada  pH  8,0-9,0 (12) .  Hasil  yang diperoleh  dari  uji  toksisitas  dapat  dilihat pada table 2.
Berdasarkan  konsentrasi  larutan  uji yang  digunakan,  diperoleh  hasil  bahwa konsentrasi 450 ppm menyebabkan rata-rata kematian  larva  tertinggi,  sedangkan  pada konsentrasi  250  ppm  menyebabkan kematian  larva  terendah. Kelompok  kontrol tanpa  penambahan  ekstrak  tidak  ditemukan adanya  kematian  pada  larva.  Konsentrasi yang bervariasi pada setiap vial uji memiliki jumlah  kematian A.  salina yang  berbeda. Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  setiap konsentrasi memiliki pengaruh yang berbeda pada kematian larva A. salina . Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak maka  semakin  tinggi  pula  jumlah  kematian larva. Hal  ini  sesuai  dengan  Harborne (1994) (9) , yang menyebutkan bahwa semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  sifat toksiknya akan semakin tinggi.
Flavonoid  berperan  sebagai stomach poisoning (racun  perut)  pada  larva.
Flavonoid  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan  dan  antikanker  sehingga mempunyai  sifat  toksik  yang  kuat.
Mekanisme kerja flavonoid dalam
menghambat  pertumbuhan  larva  diduga dengan cara menghambat tranduksi sinyal ke inti melalui inhibisi protein kinase sehingga menghambat  proliferase  sel  kanker  dan menghambat  pertumbuhan  suatu  keganasan dengan  menginhibisi  reseptor  tirosin  kinase yang  berperan  dalam  meningkatkan pertumbuhan keganasan (12) .
Tabel 2. Hasil Uji Toksisitas LC 50 terhadap kematian larva Artemia salina Konsentrasi (ppm) Persen Kematia n (%) Probit Nilai LC 50 ( µg/ml) 0 (kontrol negatif) 0 - 299,23 250 43 4,82 300 50 5,00 400 60 5,25 450 63 5,33 Sumber: Hasil pengolahan data
Alkaloid  juga  berperan  sebagai stomach poisoning (racun perut). Proses ini menyebabkan  larva  mengalami  gangguan pada  saluran  cerna.  Senyawa  alkaloid  juga menghambat  reseptor  rasa  yang  berada  di permukaan mulut larva sehingga larva tidak bisa mendeteksi makanan dan akhirnya larva mati karena kelaparan 12 . Kandungan saponin juga  berpotensi  sebagai  antikanker  yang bekerja  dengan  menginduksi cell  cycle arrest dan apoptosis sel.

## SIMPULAN
Hasil  pengujian  toksisitas  ekstrak  akar  KB dengan  metode  BSLT  menunjukkan  nilai LC 50 yang  diperoleh  sebesar  299,23  µg/ml dengan kategori toksik terhadap larva

## DAFTAR PUSTAKA
1. Ramdhini,  N.R.  2010.  Uji  Toksisitas Terhadap  Artemia  salina  Leach.  dan Toksisitas  Akut  Komponen  Bioaktif
Pandanus  conoideus  var.  conoideus
Lam.  sebagai  Kandidat  Antikanker.
Skripsi .  Surakarta: Universitas  Sebelas Maret. Hal: 17-22
2. Rachmani, B., Shaluhiyah Z., dan Cahyo
K.  2012.  Sikap  Remaja  Perempuan Terhadap  Pencegahan  Kanker  Serviks Melalui  Vaksinasi  HPV  di  kota Semarang. Jurnal Kesehatan . Semarang: Universitas Diponegoro. Hal: 35
3. Indriyani, R.,  Indriyawati,  Y.,  dan Pratiwi, I.G.D. 2012. Hubungan Personal Hygiene  dengan  Kejadian  Keputihan pada Siswi Al-Hikmah Aeng Deke Bluto. Jurnal Kesehatan . Sumenep: Universitas Wiraraja. Hal: 69-70 4. Fitrianingsih,  H.R.  2012.  Hubungan Tingkat Pengetahuan, Sikap dan Perilaku Pemeliharaan  Organ  Reproduksi  dengan Risiko  Kejadian  Keputihan  pada  Siswi Kelas  X  SMA  Negeri  1  Wonosari Kabupaten  Klaten. Skripsi .  Surakarta: Universitas  Muhammadiyah  Surakarta. Hal: 4
5. Herman,  2013.  Aktivitas  Antioksidan Beberapa  Tumbuhan  Obat  Kalimantan Timur., Journal  Tropical Pharmacy  and Chemistry vol.2  No.2  .  Samarinda: Universitas Mulawarman. Hal: 100 - 104 6. Ajrina,  A.  2013.  Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak  Metanol  Daun
Garcinia benthami Pierre Terhadap Larva Artemia salina Leach  Dengan  Metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Laporan
Penelitian .  Jakarta:  Universitas  Islam Negeri Dan Ilmu Kesehatan. Hal: 20-21
7. Muaja  D,  Arter.,  Koleangan  S.J,  Harry., dan  Runtuwene  R.J,  Max.  2013.  Uji Toksisitas  dengan  Metode  BSLT  dan Analisis  Kandungan  Fitokimia  Ekstrak Daun  Soyogik  ( Saurauia bracteosa DC) dengan  Metode  Soxhletasi. Jurnal  Mipa Unsrat  Online. 2.  (2).  Manado: Universitas Sam Ratulangi. Hal: 116 8. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  2008. Farmakope  Herbal Indonesia  Edisi  I .  Jakarta:  Departemen Kesehatan Republik Indonesia
9. Harborne.  1987. Metode  Fitokimia . Diterjemahkan oleh Radmawinata, K dan
Soediso,  I.  Bandung:  ITB  Press.  Hal:
102-235
10.Meyer, B. N., Ferrigni, N. R., Putman, J.
E.,  Jacbsen,  L.  B.,  Nicols,  D.  E.,  and McLaughlin, J.  L.  1982. Brine  Shrimp  : A  Comvenient  general  Bioassay  For Active Plant Constituents. Plant Medica 11.Harmita  dan  Radji,  M.  2008. Analisis Hayati .  Jakarta:  Buku  Kedokteran.  Hal:
42-78
12.Reskianingsih,  A.  2014.  Uji  Toksisitas Akut  Ekstrak  Metanol  Buah Phaleria macrocarpa (Scheff)  Boerl  Terhadap
Larva Artemia  salina Leach  Dengan Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test
(BSLT). Laporan  Penelitian .  Jakarta: Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah. Hal: 14-21