dibutuhkan sebagai pakan tambahan untuk ikan  herbivora.  Tempat  asuhan  bagi  bibit ikan,  udang,  moluska  dan  biota  lain. Kandungan  CaCO   dibutuhkan  sebagai 3 bahan  additive  bagi  ikan  herbivora  dan manusia.

## Daftar Pustaka
Buckland, S.T., D.R. Anderson, K.P. Burham, and  J.L.  Laake  1993. Distance sampling  estimating  abundance  of biological  population. First  ed.
Chapman and Hall Ltd., London. 3570 pp.
Bosse, A.W.V.   1928.   Liste des algues du Siboga  Rhodophyceae  traisimi partieGigartinales et Rhodymeniales.
Siboga Expeditie LIXd : 200-533.
Braga,   J. C. and   Riding 2005. Calcarious algae. In :  Selley,  R.,  Cooks,  L  R.  M. and Plimer, I. J. R. (eds) Encyclopedia of Geology. Amsterdam; Elsevier, 428- 436.
Connel, Y. H. 1974. Seaweeds in the coral reef communities. In : Richard, N. and Mariscal  (eds.).  Field  experiment  in marine ecology . Academy Press, New york. 67-78.
Cordero, J. R. A. 1977. Studies on Philiphine marine    red  algae,  Smithsonian Institution  United  State  National Museum. Series IV: 258 pp.
Dawson,  E.Y.  1966. Marine  botany .  An Introduction  Smithsonian  Institution United States National Museum. Holt, Rinehart and winston, Inc.,  New York. 284 pp.
Erich,    S.  K.  and  G.  Pierre  1999.  Micro- enviromental  control  on  biominerali- zation: superficial processes of apatite and calcite precipitation in Quaternary s o i l   R o u s s i l l o n ,   F r a n c e . Sedimentology. 46(3). 463-476.
Hillis-Colinvaux,  L.  1980.  Ecology  and taxonomy  of  Halimeda;  Primary producer  of  coral  reefs.  In:  Blaxter, Russel  and  Yonge  (eds.)    Marine Biology.  Academic  Press,  London. XVII: 2-84.
Klumpp,  D.W.  and  A.  D.  Mckinnon  1992. Cummunity  structure,  biomss  and p r o d u c t i v i t y   o f   e p i l i t h i c   a l g a l communities  on  the  Graet  Barrier Reef:  dynamics  at  different  spatial scales. Mar.  Ecol.  Prog.  Ser. Vol.86: 77-89.
Kongwe,  J.  2006.  Calcarious  Algae  of  A Troical  Lagoon;  Primary  Productivity, Calcification and Carbonat Production. Departement  of  Botany,  Stockholm
University, Sweden. 48 pp.
Matsuura,  K.,    O.  Sumadhiharga  and  K. Tsukamoto    2006.  Field  Guide  to Lombok  Island. 393- 449. Odum,  H.T.,  and  E.P.Odum  1955.Trophic strukture and productivity of windward coral  reef  community  on  Eniwetoll Atoll. Ecol. Monogr .25 : 281-320.
Ramos,  R.  J.,  M.  P.  Travassos  and    G.  R.
L e i t e   2 0 1 0 .   C h a r a k t e r i z a t i o n M a c r o f a u n a   A s s o c i a t e d   w i t h
A r t i c u l a t e d   C a l c a r i o u s   a l g a e
( C o r a l l i n a c e a e ,   R h o d o p h y t a ) Occurring In A Hydrodynamic Gradient on  The  Espirito  Santo  State  Coast, Brasilian  Journal  Of  Oceanography , 58(4)275-285.
Round,   F.E. 1980. The ecology of algae. Cambridge University Press., London.
325pp.
Wilson, S., C. Blake, J.A. Berges and C. A.
Maggs  2004.  Nothern  Ireland. Elsevier, Bio. Cons. 120: 283-293.
Wray,  J.  I.  1977.  Calcarious  algae.
Developments  in  Palaentology  and Stratigraphy.  Amsterdam: Elsevier ,
Vol. 4, 185 pp.
Respon Pemberian Hormon 2,4-D dan BAPterhadap Pertumbuhan Subkultur Kalus Kedelai ( Glycine max (L.) Merrill) secara In Vitro
1) 1)
Kiki Ayuningrum, Iman Budisantoso  dan Kamsinah
1) Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jl. Dr. Suparno, Karangwangkal, Purwokerto,53122. Alamat korespondensi : kikiayuningrum@gmail.com

## Abstract
The purpose of this study was to evaluate the response of administration of a combination of 2,4- D and BAP on the growth of soybean callus subculture and determine the combination of 2,4-D and BAP most good for the growth of soybean callus subculture.The study design used completely randomized design (CRD) with a pattern factorials. The factor one e.i 2,4-D consists of 4 levels, namely: 0, 5, 10, and 15 ppm. A factor of 2 e.iBAP consists of 4 levels, namely: 0, 2, 4, dan6 ppm. Every combination treatment repeated three times.Parameters measured include the percentage is growing callus, type of callus, dry weight and wet weight of soybean callus.The results showed that administration of the hormone 2,4-D and BAP can spur the growth of soybean callus subculture, the combination of BAP 2 ppm and 10 ppm of 2,4-D is the best combination for a percentage of callus and growing callus types, whereas the wet weight and the weight dried callus is not driven by a combination of the hormone 2,4-D and BAP.
Keywords : 2,4-D,BAP, calliculture, soybean.

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  respon  pemberian  kombinasi  2,4-D  dan  BAP terhadap pertumbuhan subkultur kalus kedelai dan menentukan kombinasi 2,4-D dan BAP yang  paling baik  untuk  pertumbuhan  subkultur  kalus  kedelai.  Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan pola faktorial. Faktor yang dicobakan terdiri atas: 2,4-D dengan 4 taraf yaitu: 0, 5, 10, dan 15 ppm,BAPdengan 4 taraf yaitu: 0, 2, 4, dan 6 ppm. Tiap perlakuan diulang 3 kali. Parameter yang diukur meliputi presentase tumbuh kalus, tipe kalus, berat kering serta berat basah kalus kedelai.Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian hormon 2,4-D dan BAP dapat memacu pertumbuhan subkultur kalus kedelai, kombinasi BAP 2 ppm dan 2,4-D 10 ppm merupakan kombinasi terbaik untuk prosentase kalus dan tipe kalus yang tumbuh, sedangkan pada berat basah dan berat kering kalus tidak dipacu oleh kombinasi pemberian hormon 2,4-D dan BAP.
Kata kunci : 2,4-D, BAP, kultur kalus, kedelai.

## Pendahuluan
Tanaman  kedelai  merupakan  salah satu  tanaman  multiguna  karena  biasa digunakan  sebagai  bahan  pangan,  pakan ternak,  maupun  bahan  baku  berbagai industri  manufaktur  (pabrik)  dan  olahan. Kedelai  mengandung  kadar  protein  lebih dari  40%,  lemak  10-15%  dan  vitamin (Adisarwanto,  2005).  Kendala  utama penurunan produksi kedelai antara lainbenih yang  tersedia  berkualitas  rendah  serta pengendalian terhadap serangan hama dan p e n y a k i t   t a n a m a n   y a n g   b e l u m memadai.Salah  satu  alternatif  untuk mengatasi  kendala  tersebut  yaitu  melalui perbanyakan tanaman dengan teknik kultur invitro .  Manfaat  dari  kultur invitro yaitu menyediakan  bibit  tanaman  yang  sehat dalam  jumlah  banyak,  wakturelatif  singkat, dalam  areal  yang  sempit,  tidak  tergantung
pada  musim.  Penerapan  metode  kultur invitro merupakan  langkah  awal  untuk mendapatkan  perbaikan  kualitas  tanaman (Yusnita, 2004).
Respon  pertumbuhan  kultur invitro secara  umum  meliputi  pembentukan  kalus atau  embriosomatik,  kemudian  akan mengalami  diferensiasi  yang  akan membentuk  organ  apabila  dipacu  dengan zat  pengatur  tumbuh.  Differensiasi  dapat terjadi  melalui  dua  cara,  yaitu  diferensiasi langsung,  dimana  pembentukan  organ tanpa  melalui  pembentukan  kalus  dan diferensiasi  tak  langsung,  yaitu  terbentuk- nya  organ  didahului  dengan  pembentukan kalus  dan  organ  akan  muncul  dari  kalus tersebut (George dan Sherington, 1984).
2,4-D  merupakan  ZPT  yang  paling sering  digunakan  untuk  induksi  dan pertumbuhan  kalus  karena  efektif  untuk
tahap inisiasi khususnya pada jaringan yang belum  dewasa.  Selain  itu,  2,4-D  bersifat stabil pada suhu yang tinggi, sangat reaktif, efektif  pada  konsentrasi  yang  rendah  dan aktif  dalam  waktu  yang  lama.  2,4-D  yang digunakan  dalam  konsentrasi  yang  rendah juga  dapat  mendorong  pembelahan  sel, mendorong  pertumbuhan  tanaman  dan meningkatkan  daya  kecambah  benih (Wattimena,  2001).  Syahid  dan  Hernani (2001),  menambah-kan  bahwa  2,4-D mampu merangsang pembentukan kalus.
Penggunaan ZPT 2,4-D pada induksi kalus  embriogenik  telah  dicoba  pada beberapa jenis tanaman. Menurut Khumaida dan Handayani (2010), kemampuan induksi dan  proliferasi  kalus  embriogenik  dari eksplan kotiledon muda kedelai dipengaruhi oleh  genotipe  dan  jenis  auksin  yang digunakan,  pada  tahap  induksi  maupun proliferasi  kalus  embrio-genik  dengan menggunakan  media  MS  (vitamin  B5, sukrosa 3%, gelrite 0,2%, 5 mg/l 2,4-D dan 5 mg/l  NAA)  memberikan  respon  yang  lebih baik  dari  media  lainnya.  Setyaningrum (2011)  menambahkan  bahwa  zat  pengatur tumbuh  2,4-D  mutlak  diperlukan  untuk menginduksi  kalus.  Menurut  penelitian Widoretno et  al. (2003),  penambahan hormon  2,4-D  dengan  konsentrasi  10  ppm cukup  baik  untuk  menginduksi  kalus  dan pembentuk-an embrio somatik.
Hasil  penelitian  Gangga  (2007), kalus biji buah mahkota dewa yang ditanam pada media MS dengan penambahan 2,4-D tumbuh  optimal  pada  konsentrasi  2  ppm/l, pada  tahap  inisiasi  kalus,  eksplan  yang ditanam  pada  media  MS  yang  ditambah dengan 2 ppm 2,4-D dan 1 ppm BAP pada minggu kedua sudah mulai terbentuk kalus dan  pertumbuhan  kalus  yang  sempurna t e r j a d i   p a d a   m i n g g u   k e d e l a p a n . Penggunaan hormon 2,4-D sangat berguna untuk  menghambat  proses  morfogenesis pada  kalus  sehingga  mampu  menginisiasi pertumbuhan  kalus.  Minggu  keenam  kalus sudah dapat digunakan untuk perbanyakan dengan  cara  disubkulturkan.  Konsentrasi 2,4-D  2  ppm  dan  BAP  1  ppm  baik  untuk perbanyakan  kalus  (subkultur  kalus). Menurut  Wattimena  (2001),  pada  induksi kalus kacang tanah pada media MS dengan penambahan  2,4-D  dengan  konsentrasi  1 mg/l eksplan dapat tumbuh dengan baik.

## Materi dan Metode
Metode  penelitian  yangdigunakan adalah  metode  eksperimental  dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) dengan pola faktorial yang terdiri dari dua faktor, yaitu : BAP dengan empat 4 taraf 0; 4; 2dan6 ppm; serta2,4-D dengan 4 taraf yaitu 0;10;5;15 ppm.Tiap perlakuan diulang 3 kali. Media yang digunakan adalah media dasar MS.
Parameter  yang  diamati  dalam penelitian ini meliputi prosentase kalus yang tumbuh,  tipe  kalus  dan  berat  kering  serta berat  basah  kalus.Data  yang  diperoleh dianalisis  menggunakan  analisis  ragam (ANOVA) dengan tingkat kesalahan 1% dan 5%.Apabila menun-jukkan perbedaan yang nyata  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata Jujur  (BNJ)atau  uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT).

## Hasil dan Pembahasan

## 1.  Respon Pemberian Hormon 2,4-D dan BAP terhadap Prosentase Kalus yang Tumbuh
Hasil  analisis  varian  prosentase kalus  yang  tumbuh  menunjukkan  bahwa interaksi  2,4-D  dan  BAP  berpengaruh sangat  nyata  terhadap  persentase  kalus y a n g   t u m b u h   m e n j a d i .   M e n u r u t Setyaningrum  (2011),  hal  tersebut dikarenakan  zat  pengatur  tumbuh  yang terkandung dalam media kultur in vitro akan m e m p e n g a r u h i   p e r t u m b u h a n   d a n perkembangan  eksplan.  Selanjutnya Jonwaldinson  (2010),  semakin  tinggi konsentrasi  2,4-D  yang  diberikan  hingga 1,5mg/l  dalam  kultur  kalus,  maka pertumbuhan  kalusnya  akan  semakin meningkat.
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNJ menunjukkan bahwa kombinasi yang terbaik adalah B D meskipun tidak berbeda nyata 1 2 dengan  B D dan  B D dengan  prosentase
0 2 2 0 kalus  yang  tumbuh  pada  media  tersebut mencapai 83,33% (Tabel 1.). Hal ini sejalan dengan tipe kalus embriogenik yang tumbuh pada perlakuan B D mempunyai prosentase 1 2 yang  lebih  tinggi,  yaitu  100%,  sedangkan pada perlakuan B D  prosentase tipe kalus 0 2 embriogeniknya  hanya  mencapai  75%  dan pada perlakuan B D hanya 50%.
2 0
Tabel 1.   Uji  BNJ  Interaksi  Hormon  2,4-D  dan
BAP terhadap Prosentase Kalus yang Tumbuh No. Perlakuan Nilai rata- rata Hasil Uji BNJ 1 B D 2 2 33,33 a 2 B D 2 3 33,33 a 3 B D 3 1 33,33 a 4 B D 3 3 33,33 a 5 B D 0 0 41,67 ab 6 B D 0 1 41,67 ab 7 B D 3 2 41,67 ab 8 B D 0 3 50,00 bc 9 B D 1 0 58,33 cd 10 B D 1 1 58,33 cd 11 B D 1 3 58,33 cd 12 B D 2 1 58,33 cd 13 B D 3 0 66,67 d 14 B D 0 2 83,33 e 15 B D 1 2 83,33 e 16 B D 2 0 83,33 e
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNJ 5%
Auksin  penting  untuk  mengontrol pertumbuhan  dan  organogenesis  pada kultur in  vitro .  Bermacam  perkembangan seperti  kalus,  akar  dan  tunas  dipengaruhi oleh konsentrasi zat pengatur tumbuh yang diberikan (Staba, 1980). Pemberian hormon 2,4-D  memberikan  pengaruh  dalam merangsang  perbesaran  dan  pembelahan sel untuk membentuk kalus. Perbesaran sel ini  disebabkan  oleh  meningkatnya  daya plastisitas  dinding  sel  dan  terbentuknya enzim  selulase  yang  dapat  melarutkan selulosa  pada  dinding  sel,  sehingga menyebabkan  oksigen,  air  dan  garam mineral  mudah  terabsorpsi  melalui membran  dinding  sel  sehingga  terjadi pertumbuhan  dan  perbesaran  sel  (Wilkins, 1970). Penambahan BAP dalam media juga dapat mendukung pembentukan kalus. BAP mempunyai  sifat  mudah  ditranslokasikan, aktif merangsang pertumbuhan kalus, serta aktif  dalam  meregenerasi  kalus  maupun tunas (Wiendi et al., 1991).
1.  Respon  Pemberian  Hormon  2,4-D dan  BAP  terhadap  Tipe  Kalus  yang Terbentuk
Menurut  Fowler  (1983),  pembentu- kan  kalus  terjadi  karena  adanya  pelukaan atau  rangsang  luka  yang  diberikan  pada eksplan,  sehingga  sel-sel  pada  eksplan akan  memperbaiki  sel-sel  yang  rusak tersebut.  Awalnya  terjadi  pembentangan dinding sel dan penyerapan air, sehingga sel akan  membengkak  selanjutnya  terjadi pembelahan  sel.  Rangsang  luka  tersebut menyebabkan kesetimbangan pada dinding sel,  sebagian  protoplas  mengalir  ke  luar dinding sel sehingga mulai terbentuk kalus, pada  beberapa  perlakuan  dominasi  warna kecoklatan menutupi permukaan kalus. Hal ini dapat terjadi sebagai akibat dari tingginya kandungan senyawa fenolik yang terbentuk serta menutupi permukaan kalus. Penelitian Nisa dan Rodinah (2005) juga mendapatkan beberapa  eksplan  yang  mati  akibat pencoklatan ( browning). Pencoklatan salah satunya disebabkan oleh sintesis metabolit sekunder (senyawa fenolik). Adanya sintesis senyawa fenolik yang menutupi permukaan kalus  akan  menyebabkan  terhambatnya pertumbuhan  kalus  pada  perkembangan selanjutnya dapat mengakibatkan kematian eksplan.  Selain  itu,  pada  permukaan  kalus juga  cenderung  keras  karena  terdapat jaringan  yang  menebal.  Di  samping  itu, pertumbuh-an  kalus  yang  terjadi  memang belum mencapai tingkat yang maksimal.
Kalus  dapat  dibedakan  dalam beberapa  tipe  morfologi  yang  bervariasi sesuai  dengan  penampilan  luar  dan teksturnya. Kalus secara umum diklasifikasi- kan menjadi kalus perkembangan atau kalus embriogenik,  kalus  proliferatif  dan  kalus senescens  (Kesee et  al .,  1991 dalam Sugiyono,  1993).    Rataan  persentasenya dari seluruh tipe kalus yang terbentuk pada seluruh  perlakuan  tersaji  dalam  bentuk histogram pada gambar 1.
Gambar  1.  Histogram  rataan  tipe  kalus  yang tumbuh pada seluruh perlakuan
Ayuningrum, Kiki, dkk., Respon Pemberian Hormon 2,4-D dan BAP terhadap Pertumbuhan Subkultur Kalus Kedelai : 59 - 65
tahap inisiasi khususnya pada jaringan yang belum  dewasa.  Selain  itu,  2,4-D  bersifat stabil pada suhu yang tinggi, sangat reaktif, efektif  pada  konsentrasi  yang  rendah  dan aktif  dalam  waktu  yang  lama.  2,4-D  yang digunakan  dalam  konsentrasi  yang  rendah juga  dapat  mendorong  pembelahan  sel, mendorong  pertumbuhan  tanaman  dan meningkatkan  daya  kecambah  benih (Wattimena,  2001).  Syahid  dan  Hernani (2001),  menambah-kan  bahwa  2,4-D mampu merangsang pembentukan kalus.
Penggunaan ZPT 2,4-D pada induksi kalus  embriogenik  telah  dicoba  pada beberapa jenis tanaman. Menurut Khumaida dan Handayani (2010), kemampuan induksi dan  proliferasi  kalus  embriogenik  dari eksplan kotiledon muda kedelai dipengaruhi oleh  genotipe  dan  jenis  auksin  yang digunakan,  pada  tahap  induksi  maupun proliferasi  kalus  embrio-genik  dengan menggunakan  media  MS  (vitamin  B5, sukrosa 3%, gelrite 0,2%, 5 mg/l 2,4-D dan 5 mg/l  NAA)  memberikan  respon  yang  lebih baik  dari  media  lainnya.  Setyaningrum (2011)  menambahkan  bahwa  zat  pengatur tumbuh  2,4-D  mutlak  diperlukan  untuk menginduksi  kalus.  Menurut  penelitian Widoretno et  al. (2003),  penambahan hormon  2,4-D  dengan  konsentrasi  10  ppm cukup  baik  untuk  menginduksi  kalus  dan pembentuk-an embrio somatik.
Hasil  penelitian  Gangga  (2007), kalus biji buah mahkota dewa yang ditanam pada media MS dengan penambahan 2,4-D tumbuh  optimal  pada  konsentrasi  2  ppm/l, pada  tahap  inisiasi  kalus,  eksplan  yang ditanam  pada  media  MS  yang  ditambah dengan 2 ppm 2,4-D dan 1 ppm BAP pada minggu kedua sudah mulai terbentuk kalus dan  pertumbuhan  kalus  yang  sempurna t e r j a d i   p a d a   m i n g g u   k e d e l a p a n . Penggunaan hormon 2,4-D sangat berguna untuk  menghambat  proses  morfogenesis pada  kalus  sehingga  mampu  menginisiasi pertumbuhan  kalus.  Minggu  keenam  kalus sudah dapat digunakan untuk perbanyakan dengan  cara  disubkulturkan.  Konsentrasi 2,4-D  2  ppm  dan  BAP  1  ppm  baik  untuk perbanyakan  kalus  (subkultur  kalus). Menurut  Wattimena  (2001),  pada  induksi kalus kacang tanah pada media MS dengan penambahan  2,4-D  dengan  konsentrasi  1 mg/l eksplan dapat tumbuh dengan baik.

## Materi dan Metode
Metode  penelitian  yangdigunakan adalah  metode  eksperimental  dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) dengan pola faktorial yang terdiri dari dua faktor, yaitu : BAP dengan empat 4 taraf 0; 4; 2dan6 ppm; serta2,4-D dengan 4 taraf yaitu 0;10;5;15 ppm.Tiap perlakuan diulang 3 kali. Media yang digunakan adalah media dasar MS.
Parameter  yang  diamati  dalam penelitian ini meliputi prosentase kalus yang tumbuh,  tipe  kalus  dan  berat  kering  serta berat  basah  kalus.Data  yang  diperoleh dianalisis  menggunakan  analisis  ragam (ANOVA) dengan tingkat kesalahan 1% dan 5%.Apabila menun-jukkan perbedaan yang nyata  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata Jujur  (BNJ)atau  uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT).

## Hasil dan Pembahasan

## 1.  Respon Pemberian Hormon 2,4-D dan BAP terhadap Prosentase Kalus yang Tumbuh
Hasil  analisis  varian  prosentase kalus  yang  tumbuh  menunjukkan  bahwa interaksi  2,4-D  dan  BAP  berpengaruh sangat  nyata  terhadap  persentase  kalus y a n g   t u m b u h   m e n j a d i .   M e n u r u t Setyaningrum  (2011),  hal  tersebut dikarenakan  zat  pengatur  tumbuh  yang terkandung dalam media kultur in vitro akan m e m p e n g a r u h i   p e r t u m b u h a n   d a n perkembangan  eksplan.  Selanjutnya Jonwaldinson  (2010),  semakin  tinggi konsentrasi  2,4-D  yang  diberikan  hingga 1,5mg/l  dalam  kultur  kalus,  maka pertumbuhan  kalusnya  akan  semakin meningkat.
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNJ menunjukkan bahwa kombinasi yang terbaik adalah B D meskipun tidak berbeda nyata 1 2 dengan  B D dan  B D dengan  prosentase 0 2
2 0 kalus  yang  tumbuh  pada  media  tersebut mencapai 83,33% (Tabel 1.). Hal ini sejalan dengan tipe kalus embriogenik yang tumbuh pada perlakuan B D mempunyai prosentase 1 2 yang  lebih  tinggi,  yaitu  100%,  sedangkan pada perlakuan B D  prosentase tipe kalus 0 2 embriogeniknya  hanya  mencapai  75%  dan pada perlakuan B D hanya 50%.
2 0
Tabel 1.   Uji  BNJ  Interaksi  Hormon  2,4-D  dan
BAP terhadap Prosentase Kalus yang Tumbuh No. Perlakuan Nilai rata- rata Hasil Uji BNJ 1 B D 2 2 33,33 a 2 B D 2 3 33,33 a 3 B D 3 1
33,33 a
4 B D 3 3 33,33 a 5 B D 0 0 41,67 ab 6 B D 0 1 41,67 ab
7 B D 3 2 41,67 ab 8 B D 0 3 50,00 bc 9 B D 1 0 58,33 cd 10 B D 1 1 58,33 cd 11 B D 1 3 58,33 cd 12 B D 2 1
58,33 cd
13 B D 3 0 66,67 d 14 B D 0 2 83,33 e 15 B D 1 2 83,33 e 16 B D 2 0 83,33 e
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNJ 5%
Auksin  penting  untuk  mengontrol pertumbuhan  dan  organogenesis  pada kultur in  vitro .  Bermacam  perkembangan seperti  kalus,  akar  dan  tunas  dipengaruhi oleh konsentrasi zat pengatur tumbuh yang diberikan (Staba, 1980). Pemberian hormon 2,4-D  memberikan  pengaruh  dalam merangsang  perbesaran  dan  pembelahan sel untuk membentuk kalus. Perbesaran sel ini  disebabkan  oleh  meningkatnya  daya plastisitas  dinding  sel  dan  terbentuknya enzim  selulase  yang  dapat  melarutkan selulosa  pada  dinding  sel,  sehingga menyebabkan  oksigen,  air  dan  garam mineral  mudah  terabsorpsi  melalui membran  dinding  sel  sehingga  terjadi pertumbuhan  dan  perbesaran  sel  (Wilkins, 1970). Penambahan BAP dalam media juga dapat mendukung pembentukan kalus. BAP mempunyai  sifat  mudah  ditranslokasikan, aktif merangsang pertumbuhan kalus, serta aktif  dalam  meregenerasi  kalus  maupun tunas (Wiendi et al., 1991).
1.  Respon  Pemberian  Hormon  2,4-D dan  BAP  terhadap  Tipe  Kalus  yang Terbentuk
Menurut  Fowler  (1983),  pembentu- kan  kalus  terjadi  karena  adanya  pelukaan atau  rangsang  luka  yang  diberikan  pada eksplan,  sehingga  sel-sel  pada  eksplan akan  memperbaiki  sel-sel  yang  rusak tersebut.  Awalnya  terjadi  pembentangan dinding sel dan penyerapan air, sehingga sel akan  membengkak  selanjutnya  terjadi pembelahan  sel.  Rangsang  luka  tersebut menyebabkan kesetimbangan pada dinding sel,  sebagian  protoplas  mengalir  ke  luar dinding sel sehingga mulai terbentuk kalus, pada  beberapa  perlakuan  dominasi  warna kecoklatan menutupi permukaan kalus. Hal ini dapat terjadi sebagai akibat dari tingginya kandungan senyawa fenolik yang terbentuk serta menutupi permukaan kalus. Penelitian Nisa dan Rodinah (2005) juga mendapatkan beberapa  eksplan  yang  mati  akibat pencoklatan ( browning). Pencoklatan salah satunya disebabkan oleh sintesis metabolit sekunder (senyawa fenolik). Adanya sintesis senyawa fenolik yang menutupi permukaan kalus  akan  menyebabkan  terhambatnya pertumbuhan  kalus  pada  perkembangan selanjutnya dapat mengakibatkan kematian eksplan.  Selain  itu,  pada  permukaan  kalus juga  cenderung  keras  karena  terdapat jaringan  yang  menebal.  Di  samping  itu, pertumbuh-an  kalus  yang  terjadi  memang belum mencapai tingkat yang maksimal.
Kalus  dapat  dibedakan  dalam beberapa  tipe  morfologi  yang  bervariasi sesuai  dengan  penampilan  luar  dan teksturnya. Kalus secara umum diklasifikasi- kan menjadi kalus perkembangan atau kalus embriogenik,  kalus  proliferatif  dan  kalus senescens  (Kesee et  al .,  1991 dalam Sugiyono,  1993).    Rataan  persentasenya dari seluruh tipe kalus yang terbentuk pada seluruh  perlakuan  tersaji  dalam  bentuk histogram pada gambar 1.
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada subkultur  kalus  selama  3  minggu  terhadap kalus yang dihasilkan, didapatkan hasil rata- rata  prosentase  kalus  yang  tumbuh  pada seluruh perlakuan dengan tipe embriogenik sebesar  48,44%,  tipe  proliferatif  sebesar 12,50% dan tipe senescens sebesar 7,81%. Menurut Kesse et al. (1990) dalam Sugiyono (1993),  tipe  kalus  embriogenik  adalah  tipe kalus  yang  mampu  berkembang  ke  arah embriogenesis somatik atau organogenesis somatik. Tipe kalus ini dicirikan oleh adanya klorofil,  berwarna  hijau,  keras  dan  tumbuh dengan  cepat.  Kelebihan  dari  kalus embriogenik  atau  yang  biasa  disebut dengan  kalus  perkembangan  yaitu merupakan  kalus  yang  paling  baik  untuk digunakan  pada  regenerasi  kalus  (Taylor, 1993).  Perlakuan  B D   mempunyai 1 2 persentase  kalus  embriogenik  tertinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  B D dan
0 2
B D Pembentukan  kalus  embriogenik 2 0.
dipengaruhi  oleh  konsentrasi  zat  pengatur tumbuh yang ditambahkan ke dalam media (Peterson dan Smith, 1991).
2,4-D  sangat  interaktif  dalam merangsang  pembelahan  dan  perbesaran sel  dalam  proses  pembentukan  kalus embriogenik,  sehingga  sel-sel  lebih  aktif melakukan  perbesaran  dan  pembelahan dalam  membentuk  kalus  embriogenik (Salisbury  and  Ross,  1995).  Pembentukan kalus  embriogenik  pada  penelitian  ini mencapai 48,44%, persentase ini lebih tinggi dari  yang  pernah  dilaporkan  oleh  Kashefi (2008) dalam Wigyan (1994), yaitu sebesar 41,97 % pada eksplan bunga jantan pisang. Menurut  Hendaryono  (1944),  penambahan 2,4-D  2  mg/l  mampu  menginduksi  kalus embriogenik sebanyak 75%.
Selain  kalus  embriogenik,  pada penelitian  ini  didapatkan  prosentase pembentukan  kalus  proliferatif,  yaitu sebesar 12,50%. Menurut Nisa dan Rodinah (2005),  kalus  proliferatif  adalah  kalus  yang mampu  tumbuh  namun  tidak  mampu berkembang  ke  arah  embriogenesis  atau organogenesis,  tetapi  selnya  masih  aktif membelah secara terus menerus. Tipe kalus proliferatif  memiliki  sel  berukuran  sangat kecil  dan  berwarna  putih  atau  transparan. Dilihat  dari  tujuannya,  apabila  digunakan untuk  regenerasi  kalus  untuk  membentuk planlet, maka digunakan kalus embriogenik, tetapi  apabila  digunakan  untuk  subkultur lagi,  maka  kalus  yang  digunakan  adalah
kalus  proliferatif.  Persentase  kalus senescens yang didapatkan pada penelitian ini  sebesar  7,81%.  Kalus  senescens m e r u p a k a n   k a l u s   y a n g   m e m i l i k i pertumbuhan  yang  lambat  dan  tidak menunjukkan  perkembangan  dengan  ciri- ciri tidak terdapatnya klorofil, berwarna krem atau  coklat.  Terbentuknya  tipe  kalus senescens  dan  timbulnya  gejala  nekrosis sangat terkait dengan zat pengatur tumbuh yang  digunakan  (Kesse et  al., 1991 dalam Sugiyono,  1993).  Kondisi  lingkungan  pada kultur in  vitro mempengaruhi  pertumbuhan dan  perkembangan  kalus  (Righetti et  al.,
1990 dalam Prayoga et al., 1997).

## Gambar  2.  Tipe  kalus  yang  tumbuh  ;  a) embriogenik  b)  proliferatif  c)
senescens
Hasil  pengamatan  terhadap  kalus yang tumbuh (Gambar 2.) diantaranya, tipe kalus  embriogenik  (Gambar  2.a.)  yaitu ukuran  sel  kalus  besar,  berwarna  putih kehijauan  dan  tumbuh  cepat.  Tipe  kalus proliferatif  (Gambar  2.b.)  yaitu  ukuran  sel kalus kecil berwarna putih kekuningan. Tipe kalus  senescens  (Gambar  2.c.)  yaitu  kalus yang  terbentuk  berwarna  coklat  kehitaman dan  tidak  menunjukkan  perkembangan kalus.  Tipe  kalus  embriogenik  yang  paling banyak terbentuk yaitu pada perlakuan B D 1 2 mempunyai  persentase  yang  paling  tinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  yang lainnya.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa perlakuan  B D relatif  lebih  baik  daripada 1 2 perlakuan  lain  dalam  pembentukan  kalus embriogenik.  Tipe  kalus  proliferatif  paling banyak  terbentuk  yaitu  pada  perlakuan B D mencapai  50%,  sedangkan  tipe  kalus 1 1 senescens  paling  banyak  terbentuk  yaitu pada perlakuan B D mencapai 50%.
2 0

## 2.  Respon  Pemberian  Hormon  2,4-D
dan  BAP  terhadap  Berat  Basah  dan Berat Kering Kalus Kedelai
Analisa  varian  berat  basah kalusmenunjukkan  bahwa  pemberian  BAP maupun  kombinasi  2,4-D  dan  BAP  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  berat  basah
kalus,  tetapi  pemberian  hormon  2,4-D secara  mandiri  berpengaruh  sangat  nyata terhadap berat basah kalus yang dihasilkan. Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNT  (Tabel 2.)menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan  D 0 (kontrol)memberikan  nilai  rata-rata  berat basah  kalus  lebih  tinggi  jika  dibandingkan dengan perlakuan yang lain. Rata-rata berat basah kalus pada kontrol mencapai 0,0210 g.  Pemberian  2,4-D  dalam  media  akan menurunkan  berat  basah  kalus.  Hal  ini  di duga auksin endogen yang dimiliki eksplan cukup  tinggi  sehingga  penambahan  2,4-D justru  akan  menghambat  pertumbuhan kalus (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Tabel 2. Uji BNT Hormon 2,4-D terhadap Berat Basah Kalus Hasil Subkultur No. Perlakuan Nilai rata- rata Hasil Uji BNT 1 D 0 0,0210 b 2 D 1 0,0110 a 3 D 2 0,0107 a 4 D 3 0,0102 a
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNT  5%
Hasil analisis varian berat kering kalus menunjukkan  bahwa  interaksi  2,4-D  dan BAP  maupun  pemberian  hormon  BAP secara  mandiri  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  berat  kering  kalus  kedelai,  tetapi secara  mandiri  pemberian  hormon  2,4-D berpengaruh  sangat  nyata  terhadap  berat kering kalus yang dihasilkan.
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNT berat kering kalus menunjukkan bahwa pada perlakuan D (kontrol) memberikan nilai rata- 0 rata  berat  kering  kalus  lebih  tinggi  jika dibandingkan  dengan  perlakuan  yang  lain (Tabel 3). Rata-rata berat basah kalus pada media  tersebut  mencapai 0, 0278g.  Hal  ini diduga  konsentrasi  2,4-D  yang  diberikan terlalu tinggi. Adanya tekanan osmotik media yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan tekanan  osmotik  yang  ada  dalam  jaringan eksplan  menyebabkan  penyerapan  hara menjadi terhambat, karena penyerapan hara pada  media  tersebut  terhambat  sehingga pertumbuhan  dan  berat  kering  kalus  juga akan terhambat (Andaryani, 2010).
Tabel 3. Uji BNT 2,4-D terhadap Berat Kering Kalus Hasil Subkultur
No. Perlakuan Nilai rata-rata Hasil Uji BNT 1 D 0 0,0278 b 2 D 1 0,0186 a 3 D 2 0,0162 a 4 D 3 0,0160 a
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNT 5%
Hasil  yang  sama  didapatkan  oleh Aniel  Kumar et  al. (2010),  bahwa pembentukan kalus menjadi menurun pada media  dengan  pemberian  2,4-D  dan  NAA dalam  konsentrasi  yang  lebih  tinggi  dari  1 mg/L, namun adanya penambahan 2,4-D ke dalam media kultur sangat diperlukan untuk menghasilkan  kalus  embriogenik  (George dan  Sherrington,  1984).  Selama  masa perkembangannya,  kalus  yang  semakin lama  berada  pada  media  tanam  akan mengalami  degradasi  fisiologis  atau penurunan  tingkat  fisiologi  tanaman  akibat kekurangan  unsur  hara  atau  hormon tumbuhnya.  Konsentrasi  yang  tinggi  oleh 2,4-D  dan  tidak  adanya  penambahan sitokinin dalam media juga mampu memacu t e r j a d i n y a s e n e s e n s i y a n g   d a p a t menghambat  proses  pertumbuhan  kalus (Yusnita, 2004).
Berat  kalus  yang  berbeda  pada setiap genotipe kedelai menunjukkan bahwa setiap  genotipe  kedelai  mempunyai kemampuan  berbeda  dalam  membentuk kalus.  Hal  ini  dikarenakan  setiap  kedelai memiliki  ukuran  dan  kondisi  fisiologis jaringan  eksplan  yang  berbeda.  Menurut Fatmawati  (2008) dalam Lizawati et  al . (2012),  peningkatan  berat  kalus  terjadi karena  kalus  mengalami  pembelahan  sel h i n g g a   m e n y e b a b k a n   t e r j a d i n y a peningkatan  massa  sel.  Fitriyanti  (2006), mengatakan  bahwa  tingginya  berat  basah kalus yang diperoleh berhubungan dengan struktur  kalus  yang  diperoleh  yaitu  remah mencapai 95%. Semakin remah kalus yang d i p e r o l e h ,   s e m a k i n   c e p a t   p r o s e s pembelahan  selnya  sehingga  massa  kalus makin banyak dan beratnya meningkat.
Ayuningrum, Kiki, dkk., Respon Pemberian Hormon 2,4-D dan BAP terhadap Pertumbuhan Subkultur Kalus Kedelai : 59 - 65

## Biosfera 32 (1) Januari 2015
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada subkultur  kalus  selama  3  minggu  terhadap kalus yang dihasilkan, didapatkan hasil rata- rata  prosentase  kalus  yang  tumbuh  pada seluruh perlakuan dengan tipe embriogenik sebesar  48,44%,  tipe  proliferatif  sebesar 12,50% dan tipe senescens sebesar 7,81%. Menurut Kesse et al. (1990) dalam Sugiyono (1993),  tipe  kalus  embriogenik  adalah  tipe kalus  yang  mampu  berkembang  ke  arah embriogenesis somatik atau organogenesis somatik. Tipe kalus ini dicirikan oleh adanya klorofil,  berwarna  hijau,  keras  dan  tumbuh dengan  cepat.  Kelebihan  dari  kalus embriogenik  atau  yang  biasa  disebut dengan  kalus  perkembangan  yaitu merupakan  kalus  yang  paling  baik  untuk digunakan  pada  regenerasi  kalus  (Taylor, 1993).  Perlakuan  B D   mempunyai
1 2 persentase  kalus  embriogenik  tertinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  B D dan
0 2 B D Pembentukan  kalus  embriogenik
2 0. dipengaruhi  oleh  konsentrasi  zat  pengatur tumbuh yang ditambahkan ke dalam media (Peterson dan Smith, 1991).
2,4-D  sangat  interaktif  dalam merangsang  pembelahan  dan  perbesaran sel  dalam  proses  pembentukan  kalus embriogenik,  sehingga  sel-sel  lebih  aktif melakukan  perbesaran  dan  pembelahan dalam  membentuk  kalus  embriogenik (Salisbury  and  Ross,  1995).  Pembentukan kalus  embriogenik  pada  penelitian  ini mencapai 48,44%, persentase ini lebih tinggi dari  yang  pernah  dilaporkan  oleh  Kashefi (2008) dalam Wigyan (1994), yaitu sebesar 41,97 % pada eksplan bunga jantan pisang. Menurut  Hendaryono  (1944),  penambahan 2,4-D  2  mg/l  mampu  menginduksi  kalus embriogenik sebanyak 75%.
Selain  kalus  embriogenik,  pada penelitian  ini  didapatkan  prosentase pembentukan  kalus  proliferatif,  yaitu sebesar 12,50%. Menurut Nisa dan Rodinah (2005),  kalus  proliferatif  adalah  kalus  yang mampu  tumbuh  namun  tidak  mampu berkembang  ke  arah  embriogenesis  atau organogenesis,  tetapi  selnya  masih  aktif membelah secara terus menerus. Tipe kalus proliferatif  memiliki  sel  berukuran  sangat kecil  dan  berwarna  putih  atau  transparan.
Dilihat  dari  tujuannya,  apabila  digunakan untuk  regenerasi  kalus  untuk  membentuk planlet, maka digunakan kalus embriogenik, tetapi  apabila  digunakan  untuk  subkultur lagi,  maka  kalus  yang  digunakan  adalah
kalus  proliferatif.  Persentase  kalus senescens yang didapatkan pada penelitian ini  sebesar  7,81%.  Kalus  senescens m e r u p a k a n   k a l u s   y a n g   m e m i l i k i pertumbuhan  yang  lambat  dan  tidak menunjukkan  perkembangan  dengan  ciri- ciri tidak terdapatnya klorofil, berwarna krem atau  coklat.  Terbentuknya  tipe  kalus senescens  dan  timbulnya  gejala  nekrosis sangat terkait dengan zat pengatur tumbuh yang  digunakan  (Kesse et  al., 1991 dalam Sugiyono,  1993).  Kondisi  lingkungan  pada kultur in  vitro mempengaruhi  pertumbuhan dan  perkembangan  kalus  (Righetti et  al., 1990 dalam Prayoga et al., 1997).
Gambar  2.  Tipe  kalus  yang  tumbuh  ;  a) embriogenik  b)  proliferatif  c)
senescens
Hasil  pengamatan  terhadap  kalus yang tumbuh (Gambar 2.) diantaranya, tipe kalus  embriogenik  (Gambar  2.a.)  yaitu ukuran  sel  kalus  besar,  berwarna  putih kehijauan  dan  tumbuh  cepat.  Tipe  kalus proliferatif  (Gambar  2.b.)  yaitu  ukuran  sel kalus kecil berwarna putih kekuningan. Tipe kalus  senescens  (Gambar  2.c.)  yaitu  kalus yang  terbentuk  berwarna  coklat  kehitaman dan  tidak  menunjukkan  perkembangan kalus.  Tipe  kalus  embriogenik  yang  paling banyak terbentuk yaitu pada perlakuan B D 1 2 mempunyai  persentase  yang  paling  tinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  yang lainnya.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa perlakuan  B D relatif  lebih  baik  daripada 1 2 perlakuan  lain  dalam  pembentukan  kalus embriogenik.  Tipe  kalus  proliferatif  paling banyak  terbentuk  yaitu  pada  perlakuan B D mencapai  50%,  sedangkan  tipe  kalus 1 1 senescens  paling  banyak  terbentuk  yaitu pada perlakuan B D mencapai 50%.
2 0

## 2.  Respon  Pemberian  Hormon  2,4-D
dan  BAP  terhadap  Berat  Basah  dan

## Berat Kering Kalus Kedelai
Analisa  varian  berat  basah kalusmenunjukkan  bahwa  pemberian  BAP maupun  kombinasi  2,4-D  dan  BAP  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  berat  basah
kalus,  tetapi  pemberian  hormon  2,4-D secara  mandiri  berpengaruh  sangat  nyata terhadap berat basah kalus yang dihasilkan. Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNT  (Tabel 2.)menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan  D 0 (kontrol)memberikan  nilai  rata-rata  berat basah  kalus  lebih  tinggi  jika  dibandingkan dengan perlakuan yang lain. Rata-rata berat basah kalus pada kontrol mencapai 0,0210 g.  Pemberian  2,4-D  dalam  media  akan menurunkan  berat  basah  kalus.  Hal  ini  di duga auksin endogen yang dimiliki eksplan cukup  tinggi  sehingga  penambahan  2,4-D justru  akan  menghambat  pertumbuhan kalus (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Tabel 2. Uji BNT Hormon 2,4-D terhadap Berat Basah Kalus Hasil Subkultur No. Perlakuan Nilai rata- rata Hasil Uji BNT 1 D 0 0,0210 b 2 D 1 0,0110 a 3 D 2 0,0107 a 4 D 3 0,0102 a
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNT  5%
Hasil analisis varian berat kering kalus menunjukkan  bahwa  interaksi  2,4-D  dan BAP  maupun  pemberian  hormon  BAP secara  mandiri  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  berat  kering  kalus  kedelai,  tetapi secara  mandiri  pemberian  hormon  2,4-D berpengaruh  sangat  nyata  terhadap  berat kering kalus yang dihasilkan.
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  BNT berat kering kalus menunjukkan bahwa pada perlakuan D (kontrol) memberikan nilai rata- 0 rata  berat  kering  kalus  lebih  tinggi  jika dibandingkan  dengan  perlakuan  yang  lain (Tabel 3). Rata-rata berat basah kalus pada media  tersebut  mencapai 0, 0278g.  Hal  ini diduga  konsentrasi  2,4-D  yang  diberikan terlalu tinggi. Adanya tekanan osmotik media yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan tekanan  osmotik  yang  ada  dalam  jaringan eksplan  menyebabkan  penyerapan  hara menjadi terhambat, karena penyerapan hara pada  media  tersebut  terhambat  sehingga pertumbuhan  dan  berat  kering  kalus  juga akan terhambat (Andaryani, 2010).
Tabel 3. Uji BNT 2,4-D terhadap Berat Kering Kalus Hasil Subkultur No. Perlakuan Nilai rata-rata Hasil Uji BNT 1 D 0 0,0278 b 2 D 1 0,0186 a 3 D 2 0,0162 a 4 D 3 0,0160 a
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNT 5%
Hasil  yang  sama  didapatkan  oleh Aniel  Kumar et  al. (2010),  bahwa pembentukan kalus menjadi menurun pada media  dengan  pemberian  2,4-D  dan  NAA dalam  konsentrasi  yang  lebih  tinggi  dari  1 mg/L, namun adanya penambahan 2,4-D ke dalam media kultur sangat diperlukan untuk menghasilkan  kalus  embriogenik  (George dan  Sherrington,  1984).  Selama  masa perkembangannya,  kalus  yang  semakin lama  berada  pada  media  tanam  akan mengalami  degradasi  fisiologis  atau penurunan  tingkat  fisiologi  tanaman  akibat kekurangan  unsur  hara  atau  hormon tumbuhnya.  Konsentrasi  yang  tinggi  oleh 2,4-D  dan  tidak  adanya  penambahan sitokinin dalam media juga mampu memacu t e r j a d i n y a s e n e s e n s i y a n g   d a p a t menghambat  proses  pertumbuhan  kalus (Yusnita, 2004).
Berat  kalus  yang  berbeda  pada setiap genotipe kedelai menunjukkan bahwa setiap  genotipe  kedelai  mempunyai kemampuan  berbeda  dalam  membentuk kalus.  Hal  ini  dikarenakan  setiap  kedelai memiliki  ukuran  dan  kondisi  fisiologis jaringan  eksplan  yang  berbeda.  Menurut Fatmawati  (2008) dalam Lizawati et  al . (2012),  peningkatan  berat  kalus  terjadi karena  kalus  mengalami  pembelahan  sel h i n g g a   m e n y e b a b k a n   t e r j a d i n y a peningkatan  massa  sel.  Fitriyanti  (2006), mengatakan  bahwa  tingginya  berat  basah kalus yang diperoleh berhubungan dengan struktur  kalus  yang  diperoleh  yaitu  remah mencapai 95%. Semakin remah kalus yang d i p e r o l e h ,   s e m a k i n   c e p a t   p r o s e s pembelahan  selnya  sehingga  massa  kalus makin banyak dan beratnya meningkat.

## Kesimpulan
B e r d a s a r k a n   p e m b a h a s a n disimpulkan  bahwa  pemberian  hormon 2,4-D  dan  BAP  dapat  memacu p e r t u m b u h a n   s u b k u l t u r   k a l u s kedelai.Kombinasi BAP 2 ppm dan 2,4-D 10  ppm  merupakan  kombinasi  terbaik untuk  prosentase  kalus  dan  tipe  kalus yang  tumbuh,  sedangkan  pada  berat basah  dan  berat  kering  kalus  tidak dipacu  oleh  kombinasi  pemberian hormon 2,4-D dan BAP.

## Daftar Pustaka
Adisarwanto,  T.  2005.  Budidaya  dengan P e m u p u k a n   y a n g   E f e k t i f   d a n Pengoptimalan  Peran  Bintil  Akar Kedelai. Jakarta : Penebar Swadaya. Andaryani,  S.  2010.  Kajian  Penggunaan Berbagai Konsentrasi BAP dan 2,4-D terhadap  Induksi  Kalus  Jarak  Pagar ( Jatropha  curcas L.)  secara In  Vitro Cell. Dev. Biol. Plant, 29 : 102-108.
Aniel  Kumar,  O.,  S.  Subba  Tata  and  T. Rupavati.  2010. In  vitro induction  of callusogenesis  in  chilli  peppers ( Capsicum  annum L . ). International Journal of Current Res , 3: 42-45.
Fitriyanti  A.  2006.  Efektivitas  Asam  2,4-D dan  Kinetin  pada  Medium  MS  dalam Induksi  Kalus  Sambiloto  dengan Eksplan  Potongan  Daun . Skripsi . Universitas NegeriSemarang.
Fowler, M.W., 1983. Commercial application and  economic  aspects  of  mass  plant cell culture, dari Mantell, S.H., Smith,
H .   ( e d . ) .   P l a n t   B i o t e c h n o l i g y. Cambridge University Press, London,
3-38.
Gangga, E., H. Asriani dan L. Novita. 2007.
Analisis  Pendahuluan  Metabolit Sekunder  dari  Kalus  Mahkota  Dewa (Phaleria  macrocarpa  (Scheff.) Boerl.). Jurnal  Ilmu  Kefarmasian Indonesia, 5 (1) : 17-22.
George,  E.  F.  and  Sherington.1984.Plant Propagationby  Tissue  Culture. England: Exegetics Limited.
Gunawan, L. W.1988. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan.  Laboratorium  Kultur Jaringan  Tumbuhan.  Bogor  :  Pusat Antar  Universitas  (PAU)  Bioteknologi IPB.
Hendaryono, D. P. S. dan A. Wijayani. 1994.
Teknik  Kultur  Jaringan,  Pengenalan dan  Petunjuk    Perbanyakan  Secara Vegetatif . Kanisius, Yogyakarta.
Jonwaldinson.  2010.  Pengaruh  2,4-D terhadap  Induksi  Embrio  Somatik pada Berbagai Tipe Eksplan Tanaman Jarak  Pagar( Jatropha  curcas L). Skripsi.UniversitasJambi.
Kashefi,  K.  2008.  Organogenesis,  Somatic Embryogenesis  and  Regeneration  of Immature  Male  Flowers  of  Banana Cultivar. University Putra Malaysia. Khumaida,  N.  dan  T,  Handayani.  2010. I n d u k s i   d a n   P r o l i f e r a s i   K a l u s Embriogenik pada Beberapa Genotipe Kedelai.  J. Agron.  Indonesia,  38  (1)  : 19-24.
Lizawati,  Neliyati  dan  R.  Desfira.  2012. Induksi  Kalus  Eksplan  Daun  Durian ( Durio  Zibethinus Murr.  Cv.  Selat Jambi) pada Beberapa Kombinasi 2,4- D  dan  BAP.  Fakultas  Agrikultur Universitas Jambi, 1 (1) : 23-34.
Nisa, C. dan Rodinah. 2005. Kultur Jaringan Beberapa Kultivar Buah Pisang ( Musa paradisiaca L.)  dengan  Pemberian C a m p u r a n   N A A  d a n   K i n e t i n , Bioscientiae, 2 (2): 23-26.
Peterson,  G  and  R.  Smith.  l991.  Effect  of abscicic  acid  and  callus  size  on regeneration  of  American  and international  rice  varieties.  Plant  Cell Rep, 10: 35-38.
Prayoga, L., Sugiyono, E. S. Purwati dan M. Dwiati.  1997.  Upaya  Mendapatkan Bibit  Tebu  ( Scharum  officinalis L.) melalui  Regenerasi  Kalus  dengan Pemberian Hormon BAP dalam Kultur K a l u s   A s e p t i s .   L a p o r a n   H a s i l Penelitian.  Tidak  Dipublikasikan. Fakultas  Biologi  Universitas  Jenderal Soedirman.
Salisbury,  F.  B.  dan  C.  W.  Ross.  1995. Fisiologi  Tumbuhan  Jilid  III.  Penerbit ITB, Bandung.
Setyaningrum,  R.  2011.  Efektivitas  2,4- Diklorofenoksi  Asetat  (2,4-D)  dan K i n e t i n   t e r h a d a p   I n d u k s i   d a n Kandungan  Klorofil  serta  Karotenoid Kalus  Alfalfa (Medicago  sativa  L.).
Abstrak Skripsi. Tidak Dipublikasikan. Departemen  Pendidikan  Nasional F a k u l t a s   M I P A   U n i v e r s i t a s Diponegoro, Semarang.
Staba, E. J. 1980. Plant Tissue Culture as a Source  of  Biochemical.  CRC  Press, Inc. Bocaraton, Florida.
Sugiyono.  1993.  Pengaruh  Hormon  2,4-D dan  BAP  terhadap  Multiplikasi  Kalus Purwoceng  ( Pimpinella  pruatjan Molken)  pada  Kultur Aseptis.  Skripsi. Tidak  Dipublikasikan.  Departemen Pendidikan  Nasional  Fakultas  Biologi Universitas Jenderal Soedirman.
Syahid, S. F dan Hernani. 2001. Pengaruh K o m p o s i s i   M e d i a   t e r h a d a p Pertumbuhan Kalus dan KadarTannin dari  Daun  Jati  Belanda  ( Guazuma ulmifolia Lamk) secara Kultur In Vitro . Jurnal Littri , 16 (1) : 1-5.
Taylor,  P.  W.  J.  1993.  Tissue  Culture  of
Sugareane  for  Crop  Improvement.
Bureau of Sugar Experiment Stations,
Queensland. Wattimena,  G.  A.  2001.  Zat  Pengatur Tumbuh Tanaman. IPB, Bogor. 64 65
Ayuningrum, Kiki, dkk., Respon Pemberian Hormon 2,4-D dan BAP terhadap Pertumbuhan Subkultur Kalus Kedelai : 59 - 65
Widoretno,  W.,  E.  L.  Arumningtyas  dan Sudarsono.  2003.  Metode  Induksi Pembentukan  Embrio  Somatik  dari Kotiledon  dan  Regenerasi  Planlet Kedelai Secara In Vitro . IPB, Bogor.
Wilkins.  1970.  The  Physiology  of  Plant Growth  and  Development.  Mc  Graw- Hill, San Fransisco.
Yusnita.2004.KulturJaringanCaraMemperb anyakTanamanSecaraEfisien.Jakarta :Agromedia Pustaka.

## Biosfera 32 (1) Januari 2015

## Kesimpulan
B e r d a s a r k a n   p e m b a h a s a n disimpulkan  bahwa  pemberian  hormon 2,4-D  dan  BAP  dapat  memacu p e r t u m b u h a n   s u b k u l t u r   k a l u s kedelai.Kombinasi BAP 2 ppm dan 2,4-D 10  ppm  merupakan  kombinasi  terbaik untuk  prosentase  kalus  dan  tipe  kalus yang  tumbuh,  sedangkan  pada  berat basah  dan  berat  kering  kalus  tidak dipacu  oleh  kombinasi  pemberian hormon 2,4-D dan BAP.

## Daftar Pustaka
Adisarwanto,  T.  2005.  Budidaya  dengan P e m u p u k a n   y a n g   E f e k t i f   d a n Pengoptimalan  Peran  Bintil  Akar Kedelai. Jakarta : Penebar Swadaya.
Andaryani,  S.  2010.  Kajian  Penggunaan Berbagai Konsentrasi BAP dan 2,4-D terhadap  Induksi  Kalus  Jarak  Pagar ( Jatropha  curcas L.)  secara In  Vitro Cell. Dev. Biol. Plant, 29 : 102-108.
Aniel  Kumar,  O.,  S.  Subba  Tata  and  T. Rupavati.  2010. In  vitro induction  of callusogenesis  in  chilli  peppers ( Capsicum  annum L . ). International Journal of Current Res , 3: 42-45.
Fitriyanti  A.  2006.  Efektivitas  Asam  2,4-D dan  Kinetin  pada  Medium  MS  dalam Induksi  Kalus  Sambiloto  dengan Eksplan  Potongan  Daun . Skripsi .
Universitas NegeriSemarang.
Fowler, M.W., 1983. Commercial application and  economic  aspects  of  mass  plant cell culture, dari Mantell, S.H., Smith,
H .   ( e d . ) .   P l a n t   B i o t e c h n o l i g y. Cambridge University Press, London, 3-38.
Gangga, E., H. Asriani dan L. Novita. 2007. Analisis  Pendahuluan  Metabolit Sekunder  dari  Kalus  Mahkota  Dewa (Phaleria  macrocarpa  (Scheff.) Boerl.). Jurnal  Ilmu  Kefarmasian Indonesia, 5 (1) : 17-22.
George,  E.  F.  and  Sherington.1984.Plant Propagationby  Tissue  Culture. England: Exegetics Limited.
Gunawan, L. W.1988. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan.  Laboratorium  Kultur Jaringan  Tumbuhan.  Bogor  :  Pusat Antar  Universitas  (PAU)  Bioteknologi IPB.
Hendaryono, D. P. S. dan A. Wijayani. 1994. Teknik  Kultur  Jaringan,  Pengenalan dan  Petunjuk    Perbanyakan  Secara Vegetatif . Kanisius, Yogyakarta.
Jonwaldinson.  2010.  Pengaruh  2,4-D terhadap  Induksi  Embrio  Somatik pada Berbagai Tipe Eksplan Tanaman Jarak  Pagar( Jatropha  curcas L). Skripsi.UniversitasJambi.
Kashefi,  K.  2008.  Organogenesis,  Somatic Embryogenesis  and  Regeneration  of Immature  Male  Flowers  of  Banana Cultivar. University Putra Malaysia.
Khumaida,  N.  dan  T,  Handayani.  2010.
I n d u k s i   d a n   P r o l i f e r a s i   K a l u s Embriogenik pada Beberapa Genotipe Kedelai.  J. Agron.  Indonesia,  38  (1)  : 19-24.
Lizawati,  Neliyati  dan  R.  Desfira.  2012. Induksi  Kalus  Eksplan  Daun  Durian ( Durio  Zibethinus Murr.  Cv.  Selat Jambi) pada Beberapa Kombinasi 2,4- D  dan  BAP.  Fakultas  Agrikultur Universitas Jambi, 1 (1) : 23-34.
Nisa, C. dan Rodinah. 2005. Kultur Jaringan Beberapa Kultivar Buah Pisang ( Musa paradisiaca L.)  dengan  Pemberian C a m p u r a n   N A A  d a n   K i n e t i n , Bioscientiae, 2 (2): 23-26.
Peterson,  G  and  R.  Smith.  l991.  Effect  of abscicic  acid  and  callus  size  on regeneration  of  American  and international  rice  varieties.  Plant  Cell Rep, 10: 35-38.
Prayoga, L., Sugiyono, E. S. Purwati dan M. Dwiati.  1997.  Upaya  Mendapatkan Bibit  Tebu  ( Scharum  officinalis L.) melalui  Regenerasi  Kalus  dengan Pemberian Hormon BAP dalam Kultur K a l u s   A s e p t i s .   L a p o r a n   H a s i l Penelitian.  Tidak  Dipublikasikan. Fakultas  Biologi  Universitas  Jenderal Soedirman.
Salisbury,  F.  B.  dan  C.  W.  Ross.  1995. Fisiologi  Tumbuhan  Jilid  III.  Penerbit ITB, Bandung.
Setyaningrum,  R.  2011.  Efektivitas  2,4- Diklorofenoksi  Asetat  (2,4-D)  dan K i n e t i n   t e r h a d a p   I n d u k s i   d a n Kandungan  Klorofil  serta  Karotenoid Kalus  Alfalfa (Medicago  sativa  L.). Abstrak Skripsi. Tidak Dipublikasikan. Departemen  Pendidikan  Nasional F a k u l t a s   M I P A   U n i v e r s i t a s Diponegoro, Semarang.
Staba, E. J. 1980. Plant Tissue Culture as a Source  of  Biochemical.  CRC  Press, Inc. Bocaraton, Florida. Sugiyono.  1993.  Pengaruh  Hormon  2,4-D dan  BAP  terhadap  Multiplikasi  Kalus Purwoceng  ( Pimpinella  pruatjan
Molken)  pada  Kultur Aseptis.  Skripsi. Tidak  Dipublikasikan.  Departemen Pendidikan  Nasional  Fakultas  Biologi Universitas Jenderal Soedirman.
Syahid, S. F dan Hernani. 2001. Pengaruh K o m p o s i s i   M e d i a   t e r h a d a p Pertumbuhan Kalus dan KadarTannin dari  Daun  Jati  Belanda  ( Guazuma ulmifolia Lamk) secara Kultur In Vitro . Jurnal Littri , 16 (1) : 1-5.
Taylor,  P.  W.  J.  1993.  Tissue  Culture  of Sugareane  for  Crop  Improvement.
Bureau of Sugar Experiment Stations, Queensland.
Wattimena,  G.  A.  2001.  Zat  Pengatur Tumbuh Tanaman. IPB, Bogor.
64
Widoretno,  W.,  E.  L.  Arumningtyas  dan Sudarsono.  2003.  Metode  Induksi Pembentukan  Embrio  Somatik  dari Kotiledon  dan  Regenerasi  Planlet Kedelai Secara In Vitro . IPB, Bogor.
Wilkins.  1970.  The  Physiology  of  Plant Growth  and  Development.  Mc  Graw- Hill, San Fransisco.
Yusnita.2004.KulturJaringanCaraMemperb anyakTanamanSecaraEfisien.Jakarta :Agromedia Pustaka.