15 (1) (2020) 17-27

## Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian
http://journals.usm.ac.id/index.php/jtphp
Pengaruh Lama Ekstraksi Kulit Melinjo Merah (Gnetum gnemon L.) Berbantu Gelombang Ultrasonik Terhadap Yield, Fenolik, Flavonoid, Tanin dan Aktivitas Antioksidan
Lisan Mella Rujiyanti 1  , Bambang Kunarto 2 , Ery Pratiwi 3
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Semarang, Indonesia
DOI : http://dx.doi.org/10.26623/ jtphp.v13i1.1845
Info Artikel ___________________ Sejarah Artikel: Disubmit 23 April 2020 Direvisi 27 April 2020
Disetujui 5 Mei 2020
___________________
Keywords: Antioxidant Activity; Melinjo Red Peels; Ultrasonic; Time _______________________

## Abstrak
____________________________________________________________ Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  yield,  fenolik,  flavonoid,  tanin  dan aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  kulit  melinjo  merah  dengan  berbagai  lama  ekstraksi berbantu  gelombang  ultrasonik.  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan informasi  ilmiah  kepada  masyarakat  tentang  pemanfaatan  ekstraksi  kulit  melinjo  merah berbantu gelombang ultrasonik. Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 6 perlakuan dan diulang sebanyak 3 kali, yaitu perlakuan lama  ekstraksi  10  menit  (P1),  perlakuan  lama  ekstraksi  20  menit  (P2),  perlakuan  lama ekstraksi 30 menit (P3), perlakuan lama ekstraksi 40 menit (P4), perlakuan lama ekstraksi 50 menit (P5), dan perlakuan lama ekstraksi 60 menit (P6). Data yang diperoleh dianalisis dengan  menggunakan  ANOVA,  dan  apabila  perbedaan  akibat  perlakuan  dilanjutkan dengan  uji  wilayah  ganda  Duncan  (DMRT)  pada  taraf  0,05%.  Hasil  penelitian menunjukkan  ekstraksi kulit  melinjo merah berbantu  gelombang ultrasonik berpengaruh terhadap  yield,  fenolik,  flavonoid,  tanin  dan  aktivitas  antioksidan.  Untuk  mendapatkan yield, fenolik, flavonoid, tanin dan aktivitas antioksidan terbaik adalah pada waktu 30 menit (P3) yang mneghasilkan yield sebesar 17,86%, fenolik 2,74 mg GAE/g, flavonoid 2,30 mg QE/g, tanin 2,92 mg TAE/g, dan aktivitas antioksidan sebesar 74,33%.

## Abstract
____________________________________________________________
This research aims to know yield, phenolic, flavonoids, tannins and antioxidant activity on extraction melinjo red peels of extraction times using ultrasonic-assisted extraction. The results of this research are expected to be able to provide scientific information about the utilization of extraction melinjo red peels using ultrasonic-assisted extraction. The experimental design used a randomized block design using 6 treatment and 3 times repeats, which was treatment extraction time 10 minutes (P1), treatment extraction time 20 minutes (P2), treatment extraction time 30 minutes (P3), treatment extraction time 40 minutes (P4), treatment extraction time 50 minutes (P5), and treatment extraction time 60 minutes (P6). The data obtained were analyzed using ANOVA, and if there is a difference due to the treatment continued with the test area double Duncan (DMRT) at level 0,05%. Research results showed the extraction of melinjo red peels using ultrasonic-assisted extraction effect on yield, phenolic, flavonoids, tannins and antioxidant activity. To get the yield, phenolic, flavonoids, tannins and antioxidant activity is best with a time 30 minutes (P3), extraction produced a yield 17,86%, phenolic  2,74  mg  GAE/g,  flavonoids  2,30  mg  QE/g,  tannins  2,92  mg  TAE/g,  and  antioxidant activty 74,33%.
 Alamat Korespondensi: Lisan Mella Rujiyanti, Teknologi Hasil Pertanian, Universitas Semarang. E-mail: lisanmella3@gmail.com p-ISSN 1693-9115 e-ISSN 2580-846X

## PENDAHULUAN
Tanaman melinjo ( Gnetum gnemon L.) termasuk famili Gnetaceae yang terdiri dari sekitar 30 spesies (Wazir et al ., 2011: Hou et al ., 2015). Menurut Badan Pusat Statistik Pertanian Hortikultura pada  tahun  2018  terdapat  1.164.665  tanaman  melinjo  yang  menghasilkan  buah  melinjo  sebanyak 512.135 kwintal. Menurut Kunarto dan Pratiwi (2014) untuk tanaman melinjo yang sudah dewasa mampu  menghasilkan   antara  15.000 – 20.000  biji  per  pohonnya,  yang  merupakan  sebagai  bahan baku  untuk  pembuatan tepung,  emping,  kripik ataupun produk  pangan  lainnya.  Sedangkan  untuk kulit melinjo yag berwarna merah yang berjumlah sekitar 8 ton per hektar belum banyak digunakan.
Kulit melinjo merah mempunyai potensi sebagai antioksidan alami dan dapat menggantikan antioksidan  sintetis  (BHA,  BHT,  TBHQ,  dan  PG).  Menurut  Kunarto  (2014)  kulit  melinjo  yang diekstrak  dengan  metode  maserasi  menggunakan  etanol  70%  menghasilkan  aktivitas  antioksidan sebesar  61,0875%  dan  Dewi  (2018)  kulit  melinjo  yang  diekstrak  dengan  metode  maserasi menggunakan etanol 70% juga menghasilkan aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 16,73 mg.
Akan  tetapi,  untuk  menghasilkan  antioksidan  perlu  dilakukan  ekstraksi.  Pemilihan  metode ekstraksi  sangat  penting  dilakukan  karena  hasil  ekstraksi  akan  mencerminkan  tingkat  keberhasilan metode  tersebut.  Pada  saat  ini  dikembangkan  teknik  baru  untuk  ekstraksi  padat-cair  suatu  produk yaitu dengan menggunakan bantuan gelombang ultrasonik (UAE). Menurut Nipornram et al. (2017) ultrasonic-assisted extraction menunjukkan efisiensi ekstraksi yang lebih tinggi  dari metode microwave . Menurut Wen et al . (2018) ekstraksi berbantu gelombang ultrasonik memerlukan waktu yang lebih singkat dan menghasilkan yield produk yang lebih banyak. Kelebihan metode ekstraksi ultrasonik menurut Turrini et al. (2018) yaitu dapat mengurangi volume pelarut, mempercepat proses ekstraksi dan membutuhkan energi yang rendah dibandingkan dengan ekstraksi konvensional.
Ekstraksi berbantu gelombang ultrasonik dipengaruhi oleh beberapa hal, salah satunya lama waktu.  Waktu  ekstraksi  yang  terlalu  lama  serta  melampaui  batas  optimum  dapat  menyebabkan hilangnya  senyawa-senyawa  pada  larutan  karena  terjadi  proses  oksidasi,  sedangkan  jika  waktu ekstraksi yang terlalu singkat akan menyebabkan komponen bioaktif yang terekstrak dari bahan tidak maksimal sehingga komponen bioaktif yang diperoleh akan rendah (Sekarsari et al., 2019).  Namun, sampai saat ini belum ada penelitian tentang lama waktu yang terbaik untuk ekstraksi kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan yaitu kulit melinjo merah dengan umur ±75 hari setelah berbunga yang berasal  dari  Dukuh  Lajer,  Desa  Bonagung,  Kecamatan  Penawangan,  Kabupaten  Grobogan, Purwodadi, Jawa Tengah. Etanol 70% (Merck, Indonesia), kertas Whatman No. 1, alumunium foil, AlCl 3 ,  CH 3 COOH,  aquades  (Merck,  Indonesia),  metanol,  larutan  DPPH,  reagen  folin  ciocalteau, natrium karbonat 7,5%, dietil eter, Na 2 CO 3 , asam tanat dan quecertin.
Alat yang digunakan dalam pembuatan serbuk kulit melinjo merah meliputi Food dehydrator (Maksindo, Indonesia), ayakan 30 mesh (ASTM Standart, Indonesia), neraca analitik ( Ohaus, USA), alat  ekstraksi  ultrasonik bath (Bronson  3800,  Mexico),  rotary  vacuum  evaporator  (IKA  RV-10, Germany), botol sampel, corong kaca (Pyrex, Indonesia), beaker glass (Pyrex, Indonesia), erlenmeyer (Iwaki Pyrex, Japan), gelas ukur (RRC, China), spatula, pipet volume (Pyrex, Germany), oven listrik (Memmert  UN  110),  botol  kaca  (Pyrex),  bola  hisap  (Indonesia),  labu  ukur  (RRC,  China),  botol timbang, desikator (Indonesia) dan blender.

## PROSEDUR PENELITIAN Pembuatan Serbuk Kulit Melinjo Merah
Penelitian menggunakan kulit melinjo merah yang telah diperoleh dari pohonnya dengan umur ±75 hari setelah berbunga, selanjutnya disortasi untuk memisahkan antara kulit melinjo buruk dan baik. Hasil kulit melinjo merah yang baik dibersihkan, setelah itu dikecilkan ukurannya dengan pisau stainless steel, lalu kulit melinjo merah dikeringkan dengan suhu 50° C selama 3,5 jam hingga mencapai kadar  air  <10%  menggunakan Food  dehydrator .  Kulit  melinjo  merah  yang  telah  kering  dihaluskan menggunakan  blender  selama  2  menit,  kemudian  disaring  dengan  ayakan  30  mesh  sampai mendapatkan serbuk kulit melinjo merah lolos ayak (Modifikasi dari Kunarto et al., 2019).

## Ekstraksi Kulit Melinjo Merah
Serbuk kulit melinjo merah lolos ayak yang telah didapatkan, dilakukan ekstraksi dengan UAE Bronson 3800 pada suhu 30°C selama 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 menit dengan bahan : pelarut (1:10). Setelah  itu  dilakukan  penyaringan  dengan  menggunakan  kertas  saring  Whatman  No.  1  untuk menghasilkan ekstrak kulit melinjo merah cair. Kemudian dievaporasi selama 4,5 jam dengan suhu 50° C agar mendapatkan ekstrak kulit melinjo merah kental yang selanjutnya dilakukan analisis yield, fenolik, flavonoid, tanin, dan antioksidan (Modifikasi dari Kunarto et al., 2019).

## PROSEDUR ANALISIS
Yield (Al-Juhaimi et al., 2016)
Presentase yield ekstrak dihitung sesuai rumus untuk mendapatkan yield ekstrak dengan formula yaitu berat ekstrak kental dibagi dengan berat sampel kering kemudian dikali dengan 100.
Fenolik (Margaretta et al ., 2011)
Pengujian  total  fenol  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  teori FolinCiocalteau .  Langkah pertama  yang  dilakukan  adalam  menyiapkan  sampel  sebanyak  2  mg  yang  kemudian  dilarutkan kedalam  1  mL  metanol. Larutan dicampur  dengan  5  mL  reagen Folin-ciocalteau 1:10  (w/v) dengan pelarut akuades. Kemudian ditambahkan 4 mL larutan natrium karbonat 7,5% (w/v) dengan pelarut akuades.  Dibiarkan  selama  30  menit  pada  suhu ruang dan  kemudian  diukur  serapan  pada  panjang gelombang maksimal yaitu 765 nm dengan menggunakan spektrofotometer.

## C= 𝑐𝑉 𝑚
Dengan:
C = konsentrasi total fenolik, mg GAE/g c = konsentrasi gallic acid , mg GAE/mL V  =  volume larutan ekstrak sampel dalam metanol 10 mL
m =    massa sampel ekstrak, gram
Flavonoid (Chang et al ., 2002 dan Nugroho et al ., 2013)
Metode yang digunakan yaitu dengan menggunakan pereaksi AICI 3 . Sebanyak 0,5 ml ekstrak buah peredangan konsentrasi 1000 ppm dipipet ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 1,5 ml etanol 0,1 ml AICI 3 10%, 0,1  ml CH 3 COOH IM dan 2,8 ml aqudest. Larutan dihomogenkan dan diinkubasi selama  30  menit.  Absorbansi  larutan  di  ukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 415 nm. Pengukuran absorbansi dilakuakan 3 kali ulangan.
Kuersetin digunakan sebagai standar dengan seri konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm dan 200 ppm. Kurva kalibrasi kuersetin digunakan untuk menentukan kadar senyawa total flavonoid yang tergandung dalam sampel melalui persamaan regresi dan dinyatakan dalam mg ekuivaken kuersetin ekstrak (mg QE/g ekstrak) dengan rumus perhitungan:
C =  𝑪𝟏 𝒙 𝑽 𝑴 𝒙 FP Keterangan: C : Flavonoid (mg QE/g ekstrak) M : Berat ekstrak (g) C1 : Konsentrasi kuersetin (mg/I) FP :Faktor pengenceran V : Volume ekstrak (I)
Tanin (Chanwitheesuk et al ., 2004)
Kandungan  total  tanin  ditentukan  dengan  metode  Chanwitheesuk et  al .,  (2004)  yang  sedikit dimodifikasi. Sebanyak 0,5 gr sampel diekstraksi dengan 10 mL dietil eter selama 20 jam, kemudian disaring  dan  residu  yang  diperoleh  dididihkan  dengan  100  mL  akuades  selama  2  jam,  kemudian didinginkan dan disaring. Ekstrak yang diperoleh ditambahkan dengan akuades hingga volume ekstrak 100 mL. Sebanyak 0,1 mL ekstrak d``itambahkan dengan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu dan divortex, ditambahkan  dengan  2  mL  Na 2 CO 3 dan  divortex  lagi.  Absorbansi  dibaca  pada λ 760  nm  setelah diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar. Hasil yang diperoleh diplotkan terhadap kurva standar asam tanat yang dipersiapkan dengan cara yang sama. Kandungan total tanin dinyatakan dalam mg asam tanat/kg ekstrak.

## Antioksidan (Sharma dan Bhat, 2009)
Sebanyak  1  ml  larutan  sampel  atau  standar  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  lalu penambahan 7 ml methanol (sebagai blanko adalah 8 ml methanol). Suspensi kemudian ditambahkan 2 ml larutan DPPH 0,25 mM (sehingga konsentrasi akhir DPPH dalam larutan menjadi 50 µM) yang kemudian di homogenkan dengan menggunakan vortex. Rangkaian kegiatan reaksi dilakukan pada ruang gelap. Inkubasi dilakukan selama 30 menit pada suhu ruang dan kemudian diukur absorbansinya pada  panjang  gelombang  517  nm.  Kapasitas  dinyatakan  dalam  bentuk  persentase  penghambatan terhadap radikal DPPH dengan perhitungan:
Kapasitas Antioksidan (%)= ( 𝐀 𝐛𝐥𝐚𝐧𝐤𝐨 − 𝐀 𝐬𝐚𝐦𝐩𝐞𝐥 ) 𝐀 𝐛𝐥𝐚𝐧𝐤𝐨 𝐱 𝟏𝟎𝟎%
Keterangan: A blanko   =  nilai absorbansi blanko, A sampel   = nilai absorbandi larutan sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
(Yield)
Perbedaan perlakuan lama ekstaksi berbantu gelombang ultrasonik berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap yield ekstrak yang dihasilkan, dan setelah diuji lanjut DMRT pada taraf 5% menghasilkan beda nyata antar perlakuan. Yield ekstrak yang dihasilkan berkisar antara 13,83% - 17,86%. Hasil uji yield ekstrak serbuk kulit melinjo merah dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil yield ekstrak serbuk kulit melinjo merah Perlakuan Yield (%)* P1 (10 menit) P2 (20 menit) P3 (30 menit) P4 (40 menit) P5 (50 menit) P6 (60 menit)
15,20 c ± 0,04 15,63 d ± 0,07 17,86 f ± 0,07 17,55 e ± 0,06 14,00 b ± 0,05 13,83 a ± 0,01
Keterangan : angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Semakin  lama  waktu  ekstraksi  menunjukkan  semakin  meningkat yield ekstrak  yang dihasilkan. Hal ini disebabkan karena kesempatan kulit melinjo untuk kontak dengan pelarut etanol semakin lama sehingga waktu pelarut etanol menembus dinding sel dan menarik senyawa dalam bahan juga semakin lama. Waktu ekstraksi yang semakin lama memungkinkan lebih banyak waktu kontak untuk gelembung kativasi memecahkan sel sampel, sehingga meningkatkan hasil ekstrak komponen bioaktif (Wang et al., 2012). Namun setelah mencapai waktu 30 menit (P3) menunjukkan tidak terjadi peningkatkan yield ekstrak  karena  telah  melewati  titik  jenuh  larutan.  Waktu  ekstraksi  berbantu gelombang  ultrasonik  yang  terlalu  lama  dapat  mendegradasi  komponen  fenolik,  sehingga  akan dihasilkan yield yang  lebih  rendah  (Odabas  dan  Koca,  2016),  sebagaimana  terjadi  pada  penelitian Kunarto dan Sani (2018) yang menunjukkan bahwa hasil kulit Durio zibethinus Murr. yang diekstrak menggunakan etanol 70% menghasilkan yield optimum dengan waktu 20 menit dan terjadi penurunan yield pada waktu 30 menit, serta penelitian Buanasari et al., (2019) menunjukkan bahwa daun Syzygium samarangense yang diekstrak menggunakan etanol 70% menghasilkan yield tertinggi pada menit ke-30 dan  terendah  pada  menit  ke-50.  Liu et  al., (2018)  juga  menunjukkan  bahwa Phyllanthus  urinaria menghasilkan yield optimum pada 30 menit dan menurun setelah waktu 30 menit.

## Hasil Uji Fenolik
Perbedaan perlakuan lama ekstaksi berbantu gelombang ultrasonik berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap fenolik ekstrak serbuk kulit melinjo merah yang dihasilkan, dan setelah diuji lanjut DMRT pada  taraf  5%  menghasilkan  beda  nyata  antar  perlakuan.  Aktivitas  antioksidan ekstrak  yang dihasilkan berkisar antara 1,33 mg GAE/g – 2,74 mg GAE/g. Hasil uji fenolik ekstrak serbuk kulit melinjo merah dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil fenolik ekstrak serbuk kulit melinjo merah Perlakuan Fenolik (mg GAE/g) P1 (10 menit) P2 (20 menit) P3 (30 menit) P4 (40 menit) P5 (50 menit) P6 (60 menit)
1,61 c ± 0,01 1,66 d ± 0,01 2,74 f ± 0,01 1,79 e ± 0,01 1,50 b ± 0,01 1,33 a ± 0,01
Keterangan : angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Peningkatan  fenolik  terjadi  seiring  dengan  peningkatan  lama  ekstraksi,  namun  selanjutnya terjadi  penurunan  fenolik  karena  pelarut  dan  zat  terlarut  telah  mencapai  titik  kesetimbangan (Margaretta et al., 2011), sejalan dengan penelitian pada kulit Durio zibethinus Murr. (Kunarto dan Sani,
2018)  dan  daun Averrhoa  bilimbi L.  (Andriani et  al., 2019).  Waktu  ekstraksi  yang  lebih  lama memungkinkan lebih banyak waktu kontak gelembung kativasi untuk memecahkan sel, sehingga total fenolik  meningkat  (Wang et  al., 2012).  Namun  perpanjangan  waktu  ekstraksi  dapat  menyebabkan senyawa senyawa fenolik terpapar cahaya dan oksigen, akibatnya senyawa fenolik dapat teroksidasi sehingga  perolehan  fenolik  menjadi  berkurang  (Bazykina et  al., 2002).  Khoddami et  al. (2013)  juga menyatakan bahwa komponen beberapa fenolik sensitif terhadap panas dan mudah teroksidasi.

## Hasil Uji Flavonoid
Perbedaan perlakuan lama ekstaksi berbantu gelombang ultrasonik berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap flavonoid ekstrak serbuk kulit melinjo merah yang dihasilkan, dan setelah diuji lanjut DMRT pada  taraf  5%  menghasilkan  beda  nyata  antar  perlakuan.  Aktivitas  antioksidan ekstrak  yang dihasilkan berkisar antara 1,25 mg QE/g – 2,30 mg QE/g. Hasil uji flavonoid ekstrak serbuk kulit melinjo merah dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil flavonoid ekstrak serbuk kulit melinjo merah Perlakuan Flavonoid (mg QE/g) P1 (10 menit) P2 (20 menit) P3 (30 menit) P4 (40 menit) P5 (50 menit) P6 (60 menit)
1,38 c ± 0,01 1,42 d ± 0,02 2,30 f ± 0,02 1,51 e ± 0,02 1,32 b ± 0,01 1,25 a ± 0,02
Keterangan : angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Hasil uji flavonoid meningkat sesuai dengan peningkatan lama ekstraksi dan terjadi penurunan flavonoid karena terjadi degradasi termal (Lu et al., 2013). Senyawa flavonoid yang terekstrak semakin meningkat karena semakin lama waktu ekstraksi maka kontak antara bahan dan pelarut akan lebih lama  sehingga  senyawa  flavonoid  yang  dihasilkan  dari  ekstrak  serbuk  kulit  melinjo  merah  akan semakin  meningkat  walaupun terjadi  penurunan  setelah  memasuki  titik  jenuh  sehingga  tidak dapat menghasilkan  ekstrak  yang  lebih  banyak  lagi.  Hasil  ini  sesuai  dengan  ekstraksi  flavonoid  berbantu gelombang ultrasonik pada daun Annona muricata L. yang mengalami degradasi termal dan tidak ada pengaruh nyata setelah kondisi optimum, yaitu 20 menit (Handayani et al., 2016), dan hasil ekstraksi flavonoid  pada Dendranthema  indicum var. Aromaticum yang  juga  mengalami  degradasi  termal  dan menurun setelah kondisi optimum pada waktu 30 menit (Zhong et al., 2019).

## Hasil Uji Tanin
Perbedaan perlakuan lama ekstaksi berbantu gelombang ultrasonik berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap tanin ekstrak serbuk kulit melinjo merah yang dihasilkan, dan setelah diuji lanjut DMRT pada  taraf  5%  menghasilkan  beda  nyata  antar  perlakuan.  Aktivitas  antioksidan ekstrak  yang dihasilkan  berkisar antara  1,44  mg TAE/g – 2,92  mg  TAE/g. Hasil  uji tanin  ekstrak  serbuk  kulit melinjo merah dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil tanin ekstrak serbuk kulit melinjo merah Perlakuan Tanin mg TAE/g P1 (10 mneit) P2 (20 menit) P3 (30 menit) P4 (40 menit) P5 (50 menit) P6 (60 menit) 1,73 c ± 0,01 1,79 d ± 0,01 2,92 f ± 0,01 1,91 e ± 0,01 1,61 b ± 0,01 1,44 a ± 0,01
Keterangan : angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Semakin lama waktu ekstraksi maka senyawa tanin yang terekstrak juga akan meningkat. Pada waktu yang telah mencapai titik optimal yaitu waktu lebih dari 30 menit akan mengalami penurunan. Hal ini disebabkan karena tanin mengalami kerusakan akibat proses hidrolisis selama proses ekstraksi dan pemanasan yang berlangsung secara terus-menerus (Sukardi et al., 2007). Hasil ini sejalan dengan penelitian pada daun Averrhoa bilimbi L. (Andriani et al., 2019) dengan waktu lebih dari 20 menit tanin akan mengalami penurunan.

## Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
Perbedaan perlakuan lama ekstaksi berbantu gelombang ultrasonik berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap aktivitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah yang dihasilkan, dan setelah diuji lanjut DMRT pada taraf 5% menghasilkan beda nyata antar perlakuan. Aktivitas antioksidan ekstrak yang dihasilkan berkisar antara 65,47% - 74,33%. Hasil uji aktvitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil aktivitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah Perlakuan Aktivitas Antioksidan (%) P1 (10 menit) P2 (20 menit) P3 (30 menit) P4 (40 menit) P5 (50 menit) P6 (60 menit)
69,20 b ± 0,21 69,69 c ± 0,32 74,33 e ± 0,32 73,42 d ± 0,21 68,78 b ± 0,21
65,47 a ± 0,32
Keterangan : angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Aktivitas  antioksidan  tertinggi  dari  ekstrak  serbuk  kulit  melinjo  merah  berbantu  gelombang ultrasonik yaitu pada waktu 30 menit (P3). Hasil ini sesuai dengan kandungan flavonoid (Gambar 3) serta  fenolik  (Gambar  4)  yang  dihasilkan.  Menurut  Patel et  al., (2015)  keberadaan  senyawa  fenolik (seperti  asam  fenolik)  berpengaruh  terhadap  antioksidan.  Aktivitas  antioksidan  meningkat  seiring dengan meningkatnya yield, fenolik, flavonoid, dan tanin, namun setelah mencapai titik optimum akan menurun selaras dengan senyawa yang bersifat antioksidan yaitu fenolik, flavonoid, dan tanin. Alfianti (2012) menyatakan bahwa fenolik dan flavonoid yang tinggi mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi. Peningkatan kandungan total fenolik dan total flavonoid pada ekstrak kulit Citrus reticulata juga menunjukkan peningkatan aktivitas antioksidan yang ditandai dengan penurunan nilai IC 50 (Chen et al., 2017) dan aktivitas antioksidan ekstrak daun Averrhoa bilimbi L. (Andriani et al., 2019) meningkat seiring dengan meningkatnya total fenol, total flavonoid, dan total tanin, namun setelah mencapai titik optimum yaitu waktu 20 menit mengalami penurunan.

## Korelasi Antara Fenolik, Flavonoid dan Tanin Terhadap Aktivitas Antioksidan
Pada penelitian ini, fenolik, flavonoid, dan tanin memiliki kolerasi positif terhadap aktivitas antioksidan  berdasarkan  penangkapan  radikal  DPPH.  Grafik  antara  flavonoid,  fenolik  dan  tanin dengan aktivitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah dapat dilihat pada Gambar 1, 2 dan 3.
Gambar 1. Grafik hubungan antara fenolik dengan aktivitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik
Koefisien korelasi (R 2 ) antara fenolik terhadap aktivitas antioksidan sebesar 0,6898. Menurut Apak et al. (2007) senyawa fenolik berupa flavonoid yaitu flavonol dan flavon dapat berperan sebagai antioksidan.  Aktivitas  flavonoid  sangat  bergantung terhadap jumlah dan  lokasi gugus – OH dimana dalam  hal  ini  berperan  dalam  menetralkan  radikal  bebas.  Kemampuan  flavonoid  dalam  menekan radikal  bebas  pun  berkaitan  dengan  kemampuannya  mendonorkan  elektron.  Hal  inilah  yang menyebabkan hubungan antara total fenol dengan aktivitas antioksidan.
Gambar 2. Grafik hubungan antara flavonoid dengan aktivitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik
Koefisien korelasi (R 2 ) antara flavonoid terhadap aktivitas antioksidan sebesar 0,614. Semakin tinggi  nilai fenol dan  flavonoid  maka  semakin tinggi  kemampuan antioksidan  dalam  mendonorkan elektronnya dalam hal menekan perkembangan radikal bebas. Komponen fenolik ataupun flavonoid merupakan senyawa utama dalam peranan antioksidan (Al-Farsi et al., 2007).
Gambar 3. Grafik hubungan antara tanin dengan aktivitas antioksidan ekstrak serbuk kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik
y = 5,421x + 60,544 R² = 0,6898 60 65 70 75 80 0 1 2 3 A k ti v itas an ti o k si d an (% ) Fenolik (mg GAE/g) y = 6,589x + 60,067 R² = 0,614 60 65 70 75 80 0 1 2 3 A k ti v itas an ti o k si d an (% ) Flavonoid (mg QE/g) y = 5,1253x + 60,41 R² = 0,6818 60 65 70 75 80 0 1 2 3 4 A k ti v itas A n ti o k si d an (% ) Tanin (mg TAE/g)
Koefisien korelasi (R 2 ) antara tanin dengan aktivitas antioksidan sebesar 0,6818. Hasil tersebut menunjukkan  bahwa  senyawa  tanin  yang  terdapat  dalam  ekstrak  serbuk  kulit  melinjo  merah  telah berkontribusi terhadap aktivitas antioksidan. Menurut Rafsanjani dan Putri (2015) menyatakan bahwa semakin banyak kandungan tanin maka semakin besar aktivitas antioksidannya karena tanin tersusun dari senyawa polifenolyang memiliki aktivitas penangkap radikal bebas.

## Analisa Keputusan
Analisa  keputusan  menggunakan  uji  de  garmo  (Sarah-dejesus,  2014)  untuk  menentukan perlakuan terbaik berdasarkan yield, fenolik, flavonoid, tanin dan aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Total nilai penentuan perlakuan terbaik Perlakuan Total nilai P1 0,259974159 P2 0,312497673 P3 1 P4 0,541286727 P5 0,160287179 P6 0
Berdasarkan  total  nilai  diatas  dapat  dilihat  bahwa  pada  P3  (30  menit)  mendapatkan  nilai tertinggi  dengan  jumlah  1  (satu),  kemudian  disusul  P4  (40  menit)  dan  yang  terakhir  yaitu  P6  (60 menit).  Dari  data  pengamatan  tersebut  menunjukkan  bahwa  semakin  lama  waktu  ekstraksi  akan menghasilkan yield, fenol, flavonoid, tanin dan aktivitas antioksidan yang tinggi dan setelah melewati batas optimum akan terjadi penurunan (Sekarsari, et al., 2019).
Berdasarkan hasil pengamatan tersebut, maka ditetapkan bahwa P3 (30 menit) merupakan perlakuan terbaik yang memiliki yield, fenolik, flavonoid, tanin dan aktivitas antioksidan tertinggi.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  pengaruh  lama  ekstraksi  serbuk  kulit  melinjo  merah  berbantu gelombang ultrasonik dapat disimpulkan bahwa:
1. Lama ekstraksi kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap uji yield, fenolik, flavonoid, tanin dan aktivitas antioksidan.
2. Lama ekstraksi kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik terbaik adalah pada waktu 30 menit (P3) dengan hasil yield sebesar 17,86%, fenolik 2,74 mg GAE/g, flavonoid 2,30 mg QE/g, tanin 2,92 mg TAE/g dan aktivitas antioksidan sebesar 74,33%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai  senyawa  lain  yang  terdapat  dalam  ekstrak serbuk kulit melinjo merah berbantu gelombang ultrasonik.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Juhaimi, F., Adiamo, O.Q., Ghafoor, K., Babiker, E.E. 2016. Optimization of ultrasonic – assisted extraction of phenolic compound from fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.) seed . CyTAJournal of Food 14(3):369- 374. DOI:10.1080/19476337.2015.1110202.
Andriani,  M.,  Permana,  I.D.G.M.  dan  Widarta,  I.W.R.  2019.  Pengaruh  Suhu  dan  Waktu  Ekstraksi  Daun Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  Terhadap  Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode  Ultrasonic- Assisted Extraction (UAE). Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan, Vol.8, No.3, 330-340. Al-Farsi, M., Alasalvar, C., Al-Abid, M., Al-Shoaily, K., Al-Amry, M. & Al-Rawahy, F. 2007. Composition and Functional Characteristics of Dates, Syrups, and Their by-Products. Food Chemistry, 104:943-947. Alfianti, U. 2012. Determination Antioxidant Activity on Water Spinach ( Ipomea Reptans Poir) Grown Ias Organic Treatement. Report. Chemistry Department, Science  and Math Faculty, Riau University (In Bahasa Indonesia). Apak,  R.,  Guclu,  K., Demirata,  B., Ozyurek,  M.,  Celik,  S., Bekttasoglu, B.,  Berker,  K. &  Ozyurt,  D.  2007.
Comparative Evaluation of Various Total Antioxidant Capacity Assays Applied to Phenolic Compounds with The CUPRAC Assay. Molecules, 1(2):1496-1547.
Badan Pusat Statistik Provinsi Jawa Tengah. 2019. Statistik Pertanian Hortikultura Provinsi Jawa Tengah 2016- 2018. Jawa Tengah : Badan Pusat Statistik.
Bazykina,  N.I.,  Nikolaevskii,  A.N.,  Fillipenko,  T.A.  2002.  Optimization of  Conditions for  The  Extraction of Natural Antioxidants from Raw Plant Materials. Pharmaceutical Chemistry Journal, 36(2):46-49. Buanasari, F.Y., Cholifah, dan Chakim A. 2019. Potensi Metode Ultrasonic-Assisted Extraction (UAE) dalam Mengekstrak Senyawa Aktif dari Bahan Alam. Jurnal Farmasi & Sains Indonesia, Vol.2, No.1. Chang, C.C., Yang, M.H., Wem, H.M., and Chern, J.C. 2002 . Estimation of Total Flavonoid Content in Propolis by Two Comlpementary Colorimetric Methods. Journal of Food and Drug Analysis, 10 (3): 178-182. Chanwitheesuk,  A.,  Teerawutgulrag  A.,  Rakariyatham,  N.  2004.  Screening  of  Antioxidant  Activity  and Antioxidant Compounds of Some Edible Plants of Thailand. Food Chemistry. 92, 491-497. Chen,  X.M.,  Tait,  A.R.,  Kitts,  D.D.  2017.  Flavonoid  Composition  of  Orange  Peel  and  Its  Association  with
Antioxidant and Anti-Inflammatory Activities. Food Chemistry, 218:15-21. DOI:10.1016/j.foodchem.2016.09.016.
Dewi, A.N. 2018. Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Kulit Buah Melinjo ( Gnetum gnemon L.) pada Mencit Jantan Galur DIDY [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Handayani, H., Sriherfyna, F.H., Yunianta. 2016. Ekstraksi Antioksidan Daun Sirsak Metode Ultrasonic Bath . Jurnal Pangan dan Agroindustri Vol. 4 No. 1 p.262-272.
Hou, C., Humphreys, A.M., Thureborn, O., Rydin, C. 2015. New insights into the evolutionary history of Gnetum (Gnetales). Taxon 64(2): 239-253. DOI:10.12705/642.12.
Khoddami, A., Wilkes, M., Roberts, T. 2013. Techniques for Analysis of Plant Phenolic Compounds Molecules 18022328.
Kunarto,  B.  2014.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit  Melinjo  ( Gnetum  gnemon L)  Varietas  Ketan  dan Aktivitas Antioksidannya Setelah Dienkapsulasi. Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian, 11(1):15-20. Kunarto,  B.  dan  Pratiwi,  E.  2014.  Evaluasi  Sifat  Antioksidatif  Mikroenkapsul  Ekstrak  Kulit  Melinjo  Merah ( Gnetum gnemon L.) yang Dienkapsulasi Menggunakan Gam Arab dan Maltodekstrin. Prosiding Seminar Nasional Nutrisi, Keamanan Pangan dan Produk Halal, Surakarta: 26 April 2014. Hal. 241-247.
Kunarto, B., and Sani, E.Y. 2018. Antioxidant Activity of Extract from Ultrasonic-Assisted Extraction of Durian Peels. Jurnal of Applied Food Technology 5(2) 25-29.
Kunarto, B., Sutardi, Supriyanto, dan Anwar, C. 2019. Optimasi Ekstraksi Berbantu Gelombang Ultrasonik pada Biji Melinjo Kerikil ( Gnetum gnemon L., ‘Kerikil’) Menggunakan Response Surface Methodology. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan, 8(3):104-111.
Liu, Y., She, X., Huang, J., Liu, M., and Zhan, M. 2018. Ultrasonic-exraction of Phenolic Compounds from Phyllanthus  urinaria :  Optimization  Model  and  Antioxidant  Activity. Food  Science  and  Techonoly. DOI:10.1590/1678-457.
Lu, J., Zhou, C., Rong, O., Xu, Y., Zhang, B., Li, Z. 2013. Optimization of Microwave-Assisted Extraction of Flavonoids from Cryptotaenia japonica Hassk Using Response Surface Methodology. Advandce Journal of Food Science and Technology, 5:310-317.
Margaretta, S., Handayani, S.D., Indraswati N dan Hindarso H. 2011. Ekstraksi Senyawa Phenolic Pandanus amaryllifolius Roxb . Sebagai  Antioksidan  Alami.  Vol.  10,  No.  1,  Hal:  21-30.  Fakultas  Teknik  Kimia Universitas Katolik Widya Mandala, Surabaya.
Nipornram,  S.,  Tochampa,  W.,  Rattanatraiwong,  P.,  Singanusong,  R.  2017.  Optimization  of  Low  Power Ultrasonic-Assisted  Extraction  of  Phenolic  Compounds  from  Mandarin (Citrus  Reticulata Blanco  cv. Sainampueng) Peel. Food Chemistry, doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2017.08.114 .
Nugroho, A. E., Suhardjono, D., Mulyono, S.a, dan Malik, A. 2013 . Total Flavanoid and Fenolik Contents and in  Vitro  Antyhipertention  Activity  of  Indonesia  Cashew  Leaves  anacardiumoccidentale  L.  Fakultas Farmasi. UGM. Yogyakarta.
Odabas, H.I. and  Koca, I.  2016.  Apllication of  response  surface  methodology for optimizing  the  recovery  of phenolic compounds from hazelnut skin using different extraction methods. Industrial Crops and Products 91:114-124. DOI:10.1016/j.indcrop.2016.05.033.
Patel, R., Yogesh, P., Prasant, K., and AnjukUnjadia. 2015. DPPH Free Radical Scavenging Activity of Phenolic of India. International Journal of Current Microbiology and Applied Science, 1(1):773-780. Rafsanjani,  M.K.  dan  Putri  W.D.R.  2015.  Karakterisasi  Ekstrak  Kulit  Jeruk  Bali  Menggunakan  Metode Ultrasonic Bath  (Kajian  Perbedaan  Pelarut  dan  Lama  Ekstraksi). Jurnal Pangan dan Agroindustri, Vo.3, No.4:1473-1480.
Sarah-dejesus. 2014. Perhitungan Analisis De Garmo (Perlakuan Terbaik), https://www.slideserve.com/sarah- dejesus/perhitungan-analisis-de-garmo-perlakuan-terbaik diakses pada 10 Februari 2020.
Sekarsari,  S.,  Widarta,  I.W.R.,  dan  Jambe,  A.G.D.N.A.  2019.  Pengaruh  Suhu  dan  Waktu  Ekstraksi  dengan Gelombang Ultrasonik  Terhadap  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Jambu Biji  ( Psidium  guajav L.). Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan, 8(3):267-277. Sharma, O.P and Bhat, T.K. 2009. Analytical methods DPPH antioxidant assay revisited. Food Chemistry 113: 1202 – 1205.
Sukardi, A.R., Mulyatro dan  Safera, W.  2007.  Optimasi Waktu  Ekstraksi Terhadap  Kandungan  Tanin  pada Bubuk Ekstrak Daun Jambu Biji ( Psidii folium ) dan Biaya Produksinya. Jurnal Teknologi Pertanian, 8(2):88- 94.
Turrini, F., Boggia, R., Leardi, R., Borriello, M dan Zunin, P. 2018. Optimization of the Ultrasonic-Assisted Extraction  of  Phenolic  Compounds  from Oryza  sativa L.’Violet  Nori’  and  D etermination  of  the Antioxidant Properties of its Caryopses and Leaves. Molecules 28,844.
Wang, X., Wu, Q., Qu, Y., Chen, G., Yue, W., Liang, Q. 2012. Response surface optimized ultrasonic-assisted extraction  of  flavonoids  from Sparganii  rhizoma and  evaluation  of  their  in  vitro  antioxidant  activities. Molecules 17(6):6769-6783.
Wazir, D., Ahmad, S., Muse, R., Mahmood, M., Shukor, M.Y. 2011. Antioxidant activities of different parts of Gnetum gnemon L . Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology 20(2): 234. DOI:10.1007/s13562-011-0051-
8.
Wen, C., Zhang, J., Zhang, H., Dzah, C.S., Zandile, M., Duan, Y., Ma, H., Luo, X. 2018. Advances in ultrasound assisted extraction of bioactive compounds from cash crops-A review . Ultrasonics Sonochemistry 48:538-549. DOI:10.1016/j.ultsonch. 2018.07.018.
Zhong,  L.,  Liu,  Y.,  Xiong,  B.,  Chen,  L.,  Zhang,  Y.,  and  Li,  C.  2019.  Optimization  of  Ultrasonic-Assisted Extraction  of  Total  Flavonoids  from Dendranthema  indicum var. aromaticum by  Response  Surface Methodology. Journal of Analytical Methods in Chemistry. DOI:10.1155/2019/1648782.