https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923
Uji Aktivitas Antiosidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa
Shalomyta Militia Monangin 1* , Adithya Yudistira 2 , Erladys M. Rumondor 3
1,2,3 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: shalomytamonangin2525@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L   A B S T R A C T
Diterima pada 4 April 2024
Disetujui pada 26 Mei 2024 Dipublikasikan pada 30 Juni 2024
Hal. 580 - 585
Aaptos aaptos sponge is a marine organism that has the ability to produce bioactive compounds with  high  potential  as  a  source  of  natural  antioxidants.  Antioxidants  are  compounds  that  can neutralize free radicals so that they do not disrupting to the body's metabolism processes. This study  aims  to  determine  the  antioxidant  activity  of Aaptos  aaptos sponge.  This  research  is  a laboratory  experiment  testing  the  ethanol  extract  of Aaptos  aaptos sponge  using  DPPH  ( 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl ) method. The results of data analysis of % inhibition values are 54,04% (2,5 ppm), 56,46% (5 ppm), 59,52% (10 ppm), 76,92 % (15 ppm), dan 78,25% (20 ppm). The highest antioxidant activity was achieved at a concentration of 20 ppm with a % inhibition value of  78,25%.  The  conclution  is Aaptos  aaptos sponge  sample  obtained  from  Parentek  Beach, Minahasa Regency has antioxidant activity and is effective as an antioxidant.
Keywords:  Aaptos aaptos, Antioxidant, DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl), Parentek Beach, Minahasa Regency

## A B S T R A K
DOI: 10.35799/pha.13.2024.55063
Spons Aaptos aaptos merupakan biota laut yang memiliki kemampuan menghasilkan senyawa bioaktif yang berpotensi tinggi sebagai sumber antioksidan alami. Antioksidan adalah senyawa yang dapat menetralkan radikal bebas sehingga tidak mengganggu metabolisme tubuh. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  spons Aaptos  aaptos .  Penelitian  ini merupakan eksperimental laboratorium dengan pengujian terhadap ekstrak etanol spons Aaptos aaptos menggunakan metode DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ). Hasil analisis data nilai % inhibisi adalah 54,04% (2,5 ppm), 56,46% (5 ppm), 59,52% (10 ppm), 76,92 % (15 ppm), dan 78,25% (20 ppm). Aktivitas antioksidan tertinggi dicapai pada konsentrasi 20 ppm dengan nilai %  inhibisi  sebesar  78,25%.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  sampel  spons Aaptos  aaptos yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas antioksidan dan efektif sebagai antioksidan.
Kata  Kunci:  Aaptos  aaptos,  Antioksidan,  DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl),  Pantai Parentek, Kabupaten Minahasa

## PENDAHULUAN
Perairan indonesia memiliki biota laut sebagai salah satu sumber daya alam yang mempunyai potensi yang sangat besar dalam menghasilkan senyawa-senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai bahan baku obat. Indonesia memiliki keanekaragaman hayati laut yang dapat memberi peluang untuk dimanfaatkan dalam bidang kesehatan (Arsita, 2015).
Antioksidan merupakan senyawa yang mampu menghambat proses oksidasi yang diinduksi oleh radikal bebas, yang merupakan molekul atau atom yang tidak berpasangan dan memiliki sifat tidak stabil. Senyawa antioksidan berperan dalam menetralisir radikal bebas dengan prinsip transfer elektron  untuk  mengurangi  reaksi  oksidasi  yang  berlebihan  akibat  adanya  radikal  bebas  tersebut, sehingga tidak mengganggu metabolisme tubuh (Leibo dkk, 2016).
Spons  merupakan  salah  satu  biota  laut  sebagai  organisme  penyusun  terumbu  karang  dan diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa  aktif  potensial  sebagai  sumber  bahan  obat.  Spons Aaptos aaptos memiliki  potensi  untuk  menghasilkan  metabolit  sekunder  antara  lain  peptida,  terpenoid, steroid, alkaloid, dan senyawa hidrogen yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan, anti bakteri, anti jamur dan anti kanker (Manggelea dkk, 2015).
Penelitian tentang potensi aktivitas antioksidan serta penggunaannya telah dilakukan secara luas  untuk  menemukan  antioksidan  alami  sebagai  obat  pencegahan.  Hal  ini  dikarenakan  jumlah antioksidan dalam tubuh yang tidak mencukupi untuk mencegah kerusakan oksidatif, serta banyaknya antioksidan  sintetis  yang  bersifat  karsinogenik  (Onthoni  dkk,  2023).  Kebutuhan  tubuh  terhadap antioksidan diperlukan sebagai pencegahan radikal bebas yang mengganggu metabolisme tubuh dan terjadinya kerusakan sel.  Menurut penelitian yang dilakukan  Salikode 2023) Uji Aktivitas Ekstrak Spons Aaptos aaptos yang dari Pantai Selatan Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
Metode  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl )  merupakan  metode  yang  digunakan  pada pengujian aktivitas antioksidan dalam penelitian ini. Menurut Syahrudin dkk (2022) metode DPPH memiliki  sensitivitas  terhadap  berbagai  senyawa  antioksidan,  paling  sederhana,  mudah  digunakan semua orang sehingga penyiapan larutan DPPH dan pengukuran absorbansi dapat dilakukan dengan cepat, serta hasilnya akurat.
Berdasarkan hal tersebut maka dilakukan penelitian uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Aaptos aaptos yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa dengan menggunakan metode DPPH.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Oktober  2023  -  Desember  2023  di  Laboratorium Farmasi  Lanjut  Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  dan Laboratorium Hama dan Penyakit Tumbuhan Fakultas Pertanian Universitas Sam Ratulangi Manado, Sulawesi Utara.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah scuba diving , underwater camera , cool box , zipper  lock  bag ,  pisau,  spidol  permanen, sarung  tangan,  masker,  telenan,  kertas  label,  tisu  kering, wadah  botol  600  mL,  timbangan  analitik,  spatula,  pipet,  labu  ukur  10  mL  ( pyrex ),  kertas  saring, erlenmeyer, tabung reaksi dan rak tabung reaksi, corong, aluminium foil, spektrofotometer UV-Vis, vortex, dan rotary evaporator .
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu spons Aaptos aaptos sebagai sampel yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa, Etanol 95%, aquades, dan DPPH ( 1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl ).

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  untuk  menguji  aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ), dan ekstrak etanol spons Aaptos aaptos sebagai sampel yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa.

## Prosedur Penelitian Preparasi Sampel
Sampel spons Aaptos aaptos yang telah diambil dibersihkan lalu dipotong kecil-kecil di atas telenan menggunakan pisau dan sampel dimasukan ke dalam wadah botol 600 mL kemudian diisi dengan etanol 95% sebanyak 200 mL.

## Ekstraksi ekstrak etanol spons Aaptos aaptos
Ekstrak sampel spons Aaptos aaptos dimaserasi menggunakan pelarut etanol 95% sebanyak 200 mL dengan melakukan remaserasi sebanyak 3 kali selama 24 jam. Sampel kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat. Hasil filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator dalam proses evaporasi pada suhu 40 o C sehingga menghasilkan ekstrak kental spons Aaptos aaptos dan kemudian ditimbang.

## Pembuatan Larutan Ekstrak Spons Aaptos aaptos
Pembuatan larutan ekstrak 100 ppm dilakukan dengan melarutkan 10 mg ekstrak etanol spons Aaptos aaptos kedalam 100 mL etanol 95% dalam labu ukur lalu divortex hingga homogen, kemudian dilakukan pengenceran menjadi 5 seri konsentrasi yakni 2,5 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, dan 20 ppm dihitung menggunakan rumus pengenceran:

## Pembuatan Larutan DPPH
Larutan DPPH dibuat dengan cara ditimbang sebanyak 4 mg DPPH dan dilarutkan dalam 100 mL  etanol  95%  dalam  tabung  reaksi  kemudian  divortex.  Larutan  didiamkan  selama  30  menit  lalu disimpan dalam wadah tertutup rapat dan ditutup menggunakan alumunium voil .

## Pembuatan Larutan Kontrol DPPH
Larutan kontrol  DPPH dibuat dengan mencampurkan 2 mL larutan DPPH  dan 2  ml etanol 95% kemudian divortex dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37 o C, dan setelah itu diukur nilai absorbansi menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  dilakukan  dengan mencampurkan 2 mL larutan DPPH dan 2 ml larutan sampel ekstrak etanol spons Aaptos aaptos yang terdiri dari 5 seri konsentrasi yaitu 2,5 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, dan 20 ppm kemudian divortex dan  diinkubasi  dalam  suhu  ruangan  37 o C  selama  30  menit  sampai  terjadi  perubahan  warna  dari aktivitas  larutan  DPPH  dan  larutan  ekstrak.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  3  kali pengulangan pada masing-masing konsentrasi sampel.

## V1  × M1 = V2 × M2

## Analisis Data
Analisis data pengujian antioksidan menggunakan metode DPPH dilakukan dengan melihat perubahan  warna  masing-masing  sampel  setelah  diinkubasi  bersama  larutan  DPPH.  Aktivitas antioksidan  diukur  dengan  nilai  absorbansi  larutan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  517  nm.  Data  absorbansi  kemudian  digunakan  untuk  menghitung  persen penangkapan radikal bebas (% inhibisi) dengan rumus sebagai berikut.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Hasil  penelitian  pengujian  aktivitas  antioksidan  sampel  spons Aaptos  aaptos dengan pengukuran  absorbansi  pada  masing-masing  konsentrasi  menunjukan  adanya  aktivitas  antiosidan. Nilai  persen  inhibisi  dihitung  berdasarkan  hasil  pengukuran  absorbansi  larutan  uji  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm.  Aktivitas  antioksidan sampel spons Aaptos aaptos dapat dilihat dari nilai persen inhibisi dalam Tabel 1 sebagai berikut.
Tabel 1. Nilai Persen Inhibisi Ekstrak Sampel Aaptos aaptos Konsentrasi (ppm) Absorbansi Sampel Rata-rata % Inhibisi I II III 2,5 0,320 0,343 0,476 0,380 54,04% 5 0,335 0,310 0,434 0,360 56,46% 10 0,261 0,328 0,414 0,334 59,52% 15 0,198 0,175 0,199 0,191 76,92% 20 0,178 0,184 0,177 0,180 78,25%

## Pembahasan
Pengujian aktivitas antioksidan pada spons Aaptos aaptos yang diambil dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa dilakukan menggunakan metode DPPH dengan mengukur aktivitas antioksidan secara kuantitatif dengan proses perendaman radikal bebas DPPH dan ekstrak etanol spons Aaptos aaptos .  Pembuatan  larutan  ekstrak  spons Aaptos  aaptos dibuat  dengan  konsentrasi  100  ppm kemudian diencerkan menjadi 5 seri konsentrasi, yaitu 2,5 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, dan 20 ppm dengan menggunakan rumus pengenceran. Menurut penelitian Aderiyanti (2022) pengujian dengan penggunaan  konsentrasi  yang  luas  memungkinkan  untuk  melihat  perbandingan  nilai  aktivitas antioksidan dari ekstrak sampel yang diuji pada berbagai konsentrasi.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  diukur  pada  panjang  gelombang  517  nm  dengan Spektrofotometer  UV-Vis.  Perubahan  senyawa  radikal  bebas  DPPH  menjadi  non-radikal  ditandai dengan  berkurangnya  warna  ungu  menjadi  warna  kuning  serta  penurunan  absorbansi  menunjukan efektifitas ekstrak sampel sebagai antioksidan. Menurut penelitian Salikode (2023) nilai absorbansi akan semakin kecil seiring peningkatan konsentrasi sampel. Semakin banyak DPPH yang terhambat akan semakin sedikit DPPH yang tersisa, maka nilai absorbansi yang diperoleh akan semakin rendah.
Berdasarkan data absorbansi spektrum UV-Vis ekstrak etanol spons Aaptos aaptos dan DPPH pada tabel 1 menunjukan bahwa terdapat hubungan antara konsentrasi ekstrak dan nilai absorbansi
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = [1 − ( 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 )] × 100 %
yaitu semakin tinggi konsentrasi ekstrak yang digunakan maka semakin rendah nilai absorbansi yang diperoleh  karena  jumlah  kadar  antioksidan  akan  meningkat  pada  konsentrasi  yang  lebih  tinggi, sehingga  kemampuan  penghambatan  DPPH  oleh  senyawa  didalam  sampel  yang  bersifat  sebagai antioksidan menjadi lebih besar. Absorbansi sampel turun disebabkan karena elektron pada DPPH menjadi berpasangan dengan elektron sampel mengakibatkan warna larutan berubah dari warna ungu pekat menjadi kuning bening, dan nilai persen inhibisi akan semakin besar seiring melihat perubahan warna yang terjadi.
Hasil  dari  penelitian  menunjukan  nilai  rata-rata  persen  inhibisi  dari  ekstrak  etanol  spons Aaptos aaptos pada 5 seri konsentrasi yaitu 54,04% (2,5 ppm); 56,46% (5 ppm); 59,52% (10 ppm); 76,92 % (15 ppm); dan 78,25% (20 ppm). Menurut Molyneux (2013) nilai standar kadar antioksidan adalah  50%.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  spons Aaptos aaptos yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi dan efektif sebagai antioksidan pada setiap konsentrasi, dimana aktivitas antioksidan tertinggi ada  pada  konsentrasi  20  ppm  dengan  nilai  78,25%.  Peningkatan  persen  inhibisi  yang  terjadi  pada ekstrak  menandakan  bahwa  semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  maka  absorbansi  sampel  akan menurun dan nilai persen inhibisi akan naik. Hal ini didukung oleh penelitian yang dilakukan oleh (Damanis dkk, 2020) yang menyatakan bahwa persentase penghambatan (persen inhibisi) terhadap aktivitas radikal bebas akan meningkat seiring meningkatnya konsentrasi. Hasil pengujian aktivitas antioksidan  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos memiliki  potensi  yang  tinggi sebagai sumber antioksidan.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Salikode  (2023)  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Spons Aaptos aaptos yang diperoleh dari Pantai Selatan Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas lebih rendah dengan nilai rata-rata persen inhibisi pada setiap konsentrasi yaitu 52,6 % (25 ppm); 72,5% (50 ppm); 82,9% (75 ppm); dan 87,4% (100 ppm). Penelitian yang dilakukan oleh Tongkali (2022) Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Spons Aaptos  aaptos dari  Teluk  Manado  Sulawesi  Utara  didapatkan nilai rata-rata dari analisis data % inhibisi yaitu 77,8% (10 ppm), 81,1% (15 ppm), 84,0% (20 ppm), dan 85,4% (25 ppm). Aktivitas tertinggi ada pada konsentrasi 25 ppm dengan nilai rata-rata % inhibisi yaitu 85,4%. Hasil dari sampel pada penelitian menunjukan bahwa sampel ini mempunyai aktivitas antioksidan  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  sampel  yang  diperoleh  dari  Pantai  Parentek Kabupaten Minahasa.
Perbedaan hasil persen inhibisi yang diperoleh disebabkan karena perbedaan konsentrasi seri larutan  sampel  dan  kandungan  senyawa  pada  spesies  yang  sama  dapat  dipengaruhi  oleh  adanya perbedaan populasi atau habitat karena terdapat perbedaan karakteristik lingkungan laut yang dapat berpengaruh terhadap kehidupan spons. Adanya faktor eksternal dan internal akan berdampak pada kadar antioksidan  pada  sampel  dan tidak menutup  kemungkinan  bahwa  akan  diperoleh  hasil  yang berbeda pada daerah yang berbeda. Faktor-faktor yang mempengaruhi kehidupan spons antara lain, yaitu ketersediaan nutrisi, temperatur, pH, topografi, kedalaman area, arus bawah laut dan adanya cemaran sehingga dapat mempengaruhi pembentukan zat aktif spons (Marzuki, 2018).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian uji aktivitas antioksidan, sampel spons Aaptos aaptos yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas antioksidan yang efektif sebagai antioksidan pada setiap konsentrasi.

## SARAN
Diharapkan pada penelitian selanjutnya untuk melakukan skrining fitokimia, dan penentuan nilai IC 50 pada sampel spons Aaptps aaptos serta pengujian anti kanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Aderiyanti,  R.  2022.  Studi  Perbandingan  Metode  Pengukuran  Antioksidan.  [Skripsi].  Universitas Islam Negeri Raden Intan Lampung.
Arsita, A. 2015.  Uji Efektivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol Spons Laut ( Porifera: Demospongiae ) terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Eschericia  coli . Jurnal  Universitas  Negeri Gorontalo . 2(3)
Damanis,  F.V.M.,  Wewengkang,  D.  S.,  Antasionasti,  I.  2020.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol Ascidian Herdmania Momus dengan Metode DPPH. Jurnal Pharmacon . Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, Manado. 9(3) : 464-469 Leibo, R, et al . 2016. Uji Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Total Alga Hijau Halimeda Opuntia Linnaeus Dan Halimeda Macroloba Decaisne dari Perairan Teluk Totok. J urnal Pesisir dan Laut Tropis
Manggelea, F.P,. Posangi, J., Wowor, P.M., Bara, R. 2015. Uji Efek Antibakteri Jamur Endosimbion Spons Laut Callyspongia sp . Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Eschericia coli . Jurnal e-Biomedik . 3(1) :376-380 Marzuki,  I.  2018. Eksplorasi  Spons  Indonesia: Seputar  Kepulauan  Spermonade.  Makassar:  Nas Media Pustaka
Molyneux,  P.  2013.  The  Use  of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal Science Technolgy . 26(2) : 211-219. Onthoni, M.V., Yudistira, A., Mpila, D.A,. 2023. Antioxidant Activity Test of Etanol Ectract of Alga ( Halimeda  opuntia )  Taken  from  The  Shore  of  Poopoh  Village  Minahasa  Distruct. Jurnal Pharmacon . Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, Manado. 12(3) :320-325
Salikode, J.S. 2023. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos yang Diperoleh dari Pantai Selatan Kabupaten Minahasa. [Skripsi] Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT. Manado.
Syahrudin, N., Yudistira, A,. Suoth, A. J,. 2022. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi dari Karang  Lunak Nephthea  sp .  Yang  Diperoleh  dari  Pulau  Manado  Tua. Pharmacy  Medical Journal . 5(2) :22-28
Tongkali, F,. Yudistira, A,. Suoth, E. 2022. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos dari  Teluk  Manado  Sulawesi  Utara. Jurnal  Pharmacon .  Program  Studi  Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi. 11 (1) :1279- 128