Journal Syifa Sciences and Clinical Research
Volume 6 Nomor 1, 2024
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v6i1.20384

## Penyembuhan Luka Bakar Gel Enzim Bromelin Secara In Vivo
Nur Ain Thomas 1 , Muhammad Taupik 2 , Fika Nuzul Ramadhani 3* , Ariani H.
Hutuba 4 , Dizky Ramadani Putri Papeo 5 1,2,3,4,5 Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: fikaramadhani@ung.ac.id

## ABSTRAK
Bromelain adalah enzim proteolitik atau protease (proteolitik alami) yang ditemukan dalam jaringan termasuk batang, buah dan daun nanas ( Ananas comosus var. comosus) dan spesies tumbuhan  lain  dari  famili  Bromeliaceae.  Bromelain  dikenal  sebagai  agen  deb  riding  yang efisien  karena  bermanfaat  dalam  perawatan  luka  bakar  dan  regenerasi  jaringan.  Tujuan penelitian ini  adalah  untuk    mengetahui  efektifitas  enzim bromelin  untuk  luka bakar  pada kelinci ( Oryctolagus cuniculus ). Penelitian ini diawali dengan optimasi sediaan basis carbopol 940 dengan variasi konsentrasi Formula 1 (F1) 0,5%, Formula 2 (F2) 1% dan Formula 3 (F3) 1,5%. Evaluasi sediaan gel meliputi uji organoleptik, uji homogenitas, uji pH, uji viskositas, uji daya  lekat  dan  uji  daya  sebar.  Hasil  evaluasi  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  basis  pada Formula  1  (F1)  0,5%  memenuhi  syarat  sediaan  gel.  Formula  1  (F1)  0,5%  kemudian dikombinasikan dengan  variasi  konsentrasi bromelin  yaitu  Formula  1A (0,1%),  Formula 1B (0,5%) dan Formula 1C (1%). Sediaan gel di evaluasi kembali meliputi  uji organoleptik, uji homogenitas,  uji  pH,  uji  viskositas,  uji  daya lekat,  uji daya  sebar,  uji  iritasi  dan  uji in  vivo . Pengujian efektivitas secara in vivo dan uji iritasi dilakukan pada 5 kelompok perlakuan yaitu kelompok kontrol positif (Bioplacenton®), Formula 1A (0,1%), Formula 1B (0,5%), Formula 1C (1%)  dan  kelompok  tanpa  perlakuan  kemudian  diamati  selama  15  hari.  Data  pengamatan diolah  menggunakan  uji One  Way ANOVA.  Berdasarkan  hasil  penelitian,  pada  uji  iritasi Formula 1A (0,1%), Formula 1B (0,5%) dan Formula 1C (1%) tidak menimbulkan iritasi pada kulit.  Pada  uji in  vivo Formula  1C  (1%)  menunjukkan    pemulihan  yang  paling  cepat dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, hal ini terlihat dari penurunan diameter luka dan pengamatan visual dimana luka sudah mulai tertutup sempurna pada pengamatan hari ke-15.
Kata Kunci: Enzim Bromelin, Gel, Luka Bakar
Diterima: 11-09-2023 Disetujui: 19-12-2023 Online: 15-01-2024

## ABSTRACT
Bromelain is a proteolytic enzyme or natural protease found in tissues, including the stem, fruit, and leaves of pineapple (Ananas comosus var. comosus) and other plant species of the Bromeliaceae family. Bromelain is known as an efficient debdriding agent because it is beneficial in  burn healing and tissue regeneration. This research aims to determine the effectiveness of bromelain enzyme for burns wounds in  rabbits  (Oryctolagus  cuniculus).  This  research  began  with  the  optimization  of  carbopol  940  base preparations with variations in concentration, namely Formula 1 (F1) for 0,5%, Formula 2 (F2) for 1%, and  Formula  3  (F3)  for  1,5%.  The  evaluation  of  the  gel  formulation  includes  an  organoleptic  test, homogeneity test, pH test, viscosity test, adhesive force test, and spreadability test. The evaluation result indicates  the  base  concentration  in  Formula  1  (F1)  at  0,5%  has  met  the  requirements  for  a  gel
preparation. Formula 1 (F1) for 0,5, then combined with varying concentration of bromelain, namely Formula 1A (0,1%), Formula 1B (0,5%), and Formula 1C (1%). The gel formulation wa re-evaluated, including an organoleptic test, homogeneity test, pH test, viscosity test, adhesion test, spreadability test, irritation test, and in vivo test. In vivo effectiveness testing and irritation testing were conducted on five treatment groups, namely a positive control group (Bioplacenton®), Formula 1A (0,1%), Formula 1B (0,5%), Formula 1C (1%), and a group without treatment, then observed for 15 days. The observation data were processed using the One Way ANOVA test. Based on the results of the irritation test, Formula 1A (0,1%). Formula 1B (0,5%) and Formula 1C (1%) did not cause skin irritation. In the in vivo test, Formula 1C (1%) indicated the fastest recovery compared to other treatment groups, as evidenced by the decrease in wound diameter and visual observation, where the wound had started to close completely on day 15 of observation.
Copyright © 2024 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Enzyme Bromelain, Gel, Burn Wounds
Received: 2023 -09-11 Accepted: 2023 -12-19 Online: 2024 -01-15

## 1. Pendahuluan
Luka bakar merupakan suatu kerusakan yang terjadi pada jaringan yang disebabkan  oleh  kontak  seseorang  dengan  sumber  yang  panas,  seperti  air,  api, bahan  kimia,  listrik  dan  radiasi  yang  disengaja  ataupun  tidak  disengaja. Kerusakan  jaringan  akibat  luka  bakar  dapat  menyebabkan  terjadinya  berbagai macam perubahan secara molekuler, salah satunya adalah munculnya berbagai radikal  bebas  yang  akan  berpengaruh  dalam  proses  penyembuhan.  Perbedaan tingkat kerusakan jaringan yang terjadi akan memungkinkan munculnya bekas luka ( scar ) bahkan kecacatan, yang dapat mengganggu baik fungsi maupun dari segi kosmetik dan pada akhirnya dapat menurunkan kualitas hidup seseorang[1]. Tujuan pengobatan luka bakar adalah meningkatkan proses penyembuhan luka bakar termasuk proliferasi, granulasi, epitelisasi, dan kolagenasi. Salah satu penanganan  luka  bakar  yang  umum  dilakukan  adalah  pengaplikasian  sediaan topikal berupa gel. Gel merupakan sediaan dengan sistem semi padat yang terdiri dari  suatu  dispersi  yang  tersusun  baik  dari  partikel  anorganik  yang  kecil  atau molekul  organik  yang  besar  dan  saling  diserapi  cairan  [2].  Gel  sangat  ideal digunakan  sebagai  penutup  luka  karena  terasa  dingin  di  permukaan  luka, menurunkan rasa sakit, dan meningkatkan penerimaan konsumen [3]. Carbopol merupakan basis gel yang sering digunakan dalam sediaan gel,
carbopol  juga  termasuk  kedalam  basis  gel  hidrofilik.  Keuntungan gel  hidrofilik adalah  daya  sebarnya  pada  kulit  baik,  efek  dingin  yang  ditimbulkan  akibat lambatnya  penguapan  air  pada  kulit,  tidak  menyumbat  pori-pori  kulit,  mudah dicuci  dengan  air,  dan  memungkinkan  pemakaian  pada  bagian  tubuh  yang berambut dan pelepasan obatnya baik (Voight, 1995) [4]. Selain itu, bahan carbopol 940 dipilih karena menurut Dirjen POM (1983) [5], tidak ditemui iritasi primer, sensitivitas, ataupun reaksi alergi pada pemakaian luar.
Pada penyembuhan luka bakar, bromelin dikenal sebagai agen debriding yang  efisien  dalam  perawatan  luka  bakar  dan  regenerasi  jaringan.  Bromelin mengandung campuran berbagai endopeptidase tiol dan komponen lain seperti fosfatase, glukosidase, peroksidase, selulase, eskarase, dan beberapa penghambat protease. Studi in vitro dan in vivo menunjukkan bahwa bromelin menunjukkan
berbagai  aktivitas  fibrinolitik,  antiedematous,  antitrombotik,  dan  anti-inflamasi [6][7].
Bromelain  merupakan  ekstrak  herbal  mentah  nanas  yang  kaya  akan papain dan sistein protease dengan aktivitas proteolitik tinggi dan stabilitas yang baik pada suhu tinggi. Bromelain digunakan dalam banyak aplikasi terapeutik, termasuk  penghambatan  agregasi  trombosit,  trauma  bedah,  meningkatkan penyerapan  pengiriman  obat,  fibrinolitik,  anti-inflamasi,  antikanker,  dan debridement penyembuhan luka [8].
Berdasarkan uraian di atas, diketahui bahwa enzim bromelin bermanfaat dalam membantu proses penyembuhan luka bakar. Maka dari itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efektivitas penyembuhan luka bakar menggunakan sediaan gel bromelin dengan carbopol 940 secara in vivo untuk mengetahui apakah terdapat efek penyembuhan luka bakar menggunakan zat aktif enzim bromelin dengan basis gel carbopol 940 . 2.  Metode Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  murni  laboratorium untuk menguji efektivitas gel carbopol 940 untuk penyembuhan luka bakar pada kelinci ( Oryctolagus cuniculus ).

## Alat dan Bahan
Carbopol 940, DMDM Hydantoin (Buana Chem), Bromelin (Xi’an Pincredit Bio-Tech Co., Ltd), gliserin (Buana Chem), gel Bioplacenton®, propilenglikol (The Dow Chemical Company), triethanolamine (TEA) dan Veet ®. Batang pengaduk, gelas ukur (pyrex) , gelas kimia (pyrex) , kaca preparat, mortir dan stemper , pipet tetes , spatula, pH meter, stopwatch , timbangan analitik (Chyo) dan wadah gel..

## Optimasi Basis Gel
Penelitian ini diawali dengan optimasi basis carbopol 940 dengan beberapa variasi  konsentrasi carbopol 940 yang berbeda yaitu Formula 1 (0,5%), Formula 2 (1%),  dan Formula 3  (1,5%).  Optimasi  basis  gel  carbopol 940  dilakukan dengan menimbang carbopol 940 kemudian didiamkan dalam aquadest selama 1x24 jam. Selanjutnya  dimasukkan  TEA  kemudian  digerus  hingga  berbentuk  massa  gel. Setelah itu ditambahkan propilenglikol, gliserin dan DMDM hydantoin kemudian dilakukan evaluasi terhadap basis berupa uji organoleptik, uji viskositas, uji pH, uji daya lekat, uji daya sebar dan homogenitas.

## Formulasi Gel Enzim Bromelin
Dalam penelitian ini dibuat 3 formula untuk sediaan gel dengan beberapa variasi konsentrasi enzim bromelin yaitu Formula 1 (0,1%), Formula 2 (0,5%), dan Formula 3 (1%). Masing-masing formula ditambahkan enzim bromelin sebagai zat aktif  utama  dengan  konsentrasi  yang  berbeda-beda.  Hal  ini  bertujuan  untuk mengetahui aktivitas enzim bromelin berdasarkan perbedaan konsentrasi
Evaluasi Sediaan

## Uji Organoleptis
Uji organoleptis gel dilakukan dengan cara mengamati tekstur, warna, dan bau secara visual (Ulviani dkk, 2016) [9].
Uji Viskositas
Persyaratan viskositas untuk sediaan gel menurut SNI 16-4399-1996, nilai standar viskositas untuk sediaan gel adalah 6000-50000  cP  atau  6-50  Pa.S.  [10]. Uji pH
Uji pH dilakukan dengan melarutkan 1 gram sampel gel carbopol 940 ke dalam beaker glass dengan l0 ml aquades. Sediaan gel yang telah larut kemudiaan diukur  pH  dengan  cara memasukan  pH  meter  kedalam  sediaan gel,  kemudian membandingkan hasil dari pH stik dengan indikator pH. Nilai pH suatu sediaan harus sesuai dengan pH normal kulit manusia yaitu 4,5- 6,5 [11].

## Uji Daya Sebar
Uji daya sebar dilakukan dengan menimbang gel carbopol 940 0,5 gram. Meletakkan  gel  diatas  kaca  transparan,  lalu  kemudian  metutup  dengan  kaca tranparan yang lain dan memberikan beban secara bertahap (50, 100, 150, dan 200) gram,  setiap  penambahan  beban  diberikan  waktu  1  menit  dan  diukur diameternya. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pada tiap formula. Syarat daya sebar sediaan gel adalah 5-7 cm [12].

## Uji Daya Lekat
Uji daya lekat dilakukan dengan menimbang gel 0,5 gram. Meletakkan gel diatas kaca obyek yang telah ditentukan luasnya. Meletakkan gelas obyek yang lain  di  atas  gel  dan  memberikan  beban  1  kg  selama  5  menit,  setelah  itu  beban diangkat dan tarik tuas sambil stopwatch dinyalakan. Waktu dihitung saat tuas ditarik dan dihentikan ketika kaca obyek terlepas. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pada tiap formula. Syarat daya lekat sediaan gel yaitu lebih dari 1 detik  [12].

## Uji Homogenitas
Salah  satu  syarat  sediaan  gel  adalah  homogen.  Syarat  homogenitas  tidak boleh mengandung bahan kasar yang bisa diraba [13].

## Uji Iritasi
Uji iritasi kulit dilakukan menggunakan kelinci. Rambut pada punggung kelinci  diberikan  krim Veet® Hair  Removal untuk  merontokkan  bulu  kelinci kemudian kulit kelinci dibersihkan menggunakan kapas yang dibasahi aquades. Kasa di oleskan sediaan (0.5 gram), kemudian ditempelkan pada punggung kelinci dan ditutup dengan plastik tipis dan plester selama 24 jam. Setelah itu hewan uji dikembalikan  kekandangnya.  Hari  selanjutnya  pada  jam  yang  sama,  plester dibuka dan kulit hewan uji dibersihkan dengan akuades dari sisa sediaan uji yang menempel.  Gejala  yang  timbul  yang  diamati  yaitu  iritasi  primer  yang  berupa eritema dan edema selama 24 jam, 48 jam, dan 72 jam [14].

## Uji Efektivitas Secara In Vivo
Pengujian ini menggunakan sebanyak 5 ekor kelinci ( Oryctolagus cuniculus ) dengan  bobot  1,5-2,5  kg  yang  dibagi  menjadi  5  kelompok  yaitu  kelompok perlakuan formula F1A (0,1%), F1B (0,5%), F1C (1%), kelompok kontrol positif gel Bioplacenton® dan kelompok negatif tanpa perlakuan. Hewan uji diadaptasikan dalam  lingkungan  untuk  menyeragamkan  cara  hidup  dan  diberikan  pakan standar.
Tahap awal yaitu bulu pada punggung kelinci yang akan dibuat luka bakar dicukur, kemudian bagian yang menjadi target pembuatan luka bakar dibersihkan dengan kapas yang telah direndamkan dengan alkohol 70%. Setelah itu, dilakukan pembuatan luka bakar pada kulit punggung setiap kelinci menggunakan logam berdiameter 1 cm yang telah dipanaskan dalam api bunsen selama 5 menit dan
kemudian  ditempelkan  selama  7  detik  pada  kulit  punggung  kelinci  sampai terbentuk  luka  bakar  yang  ditandai  dengan  terjadi  pelupuhan  dan  kulit terkelupas.  Luka  bakar  pada  kelinci  yang  sudah  dilukai  pada  bagian punggungnya,  masing-masing diberi  perawatan  berdasarkan  kelompok kontrol yang telah ditentukan. Untuk kelompok I sebagai kontrol negatif (basis tanpa zat aktif),  pada  3  kelompok  perlakuan  dengan  3  konsentrasi  dosis  bromelin  yang berbeda  yaitu  Formula  1A  (0,1%),  Formula  1B  (0,5%)  dan  Formula  1C  (1%). Kelompok V sebagai kontrol positif (diberikan terapi Bioplacenton®). Pengamatan luka  dimulai  sejak  hari  ke-1  dengan  menggunakan  penggaris.  Perawatan  luka dilakukan  dengan  cara  pengolesan  sediaan  dua  kali,  jumlah  yang  dioleskan masing-masing 0,1 gram secara topikal, Pengolesan dilakukan setiap hari 2x sehari selama 15 hari.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengujian  dianalisis  secara  statistik menggunakan  One  Way  ANOVA  dengan  taraf  kepercayaan  95%.  Metode  One Way ANOVA digunakan untuk mengetahui adanya pengaruh variasi konsentrasi enzim bromelin terhadap penyembuhan luka bakar.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Gel  bromelin  yang  sudah  di  formulasi  dilakukan  uji  organoleptis  dan homogenitas.  Uji  organoleptis  gel  dilakukan  dengan  cara  mengamati  tekstur, warna,  dan  bau  secara  visual  [9].  Uji  homogenitas  bertujuan  untuk  melihat ketercampuran bahan-bahan dalam sediaan gel yang menunjukkan susunan yang homogen.  Tabel  1  menunjukkan  hasil  uji  organoleptik  dari  tiga  gel  bromelin meliputi warna, bau dan homogenitas. Hasil pengamatan ketiga formula tersebut menghasilkan warna keruh, berbau khas dan homogen.
Tabel 1. Hasil uji organoleptik Formula Warna Bau Homogenitas F 1 Agak keruh Khas Homogen F 2 Keruh Khas Homogen F 3 Sangat keruh Khas Homogen
Pengujian  pH  dilakukan  untuk  mengetahui  pH  sediaan  gel  bromelin masuk dalam rentang pH fisiologis kulit yaitu 4,5-6,5.  Tabel 2 menunjukkan nilai pH dari gel bromelin. Uji pH dilakukan dengan melarutkan 1 gram sampel gel ke dalam beaker glass dengan l0 ml aquades. Sediaan gel yang telah larut kemudiaan diukur  pH  dengan  cara  memasukan  pH  meter  kedalam  sediaan  gel.  Nilai  pH suatu sediaan harus sesuai dengan pH normal kulit manusia yaitu 4,5- 6,5 [11]. Hasil pengukuran pH gel bromelin menggunakan pH meter di dapatkan nilai pH yang termasuk dalam rentang pH sediaan topikal yaitu 4,5-6,5.
Tabel 2. Hasil uji pH
Formula pH F 1 6,5 F 2 6,2 F 3 6,0
Daya  sebar  gel  dimaksudkan  untuk  mengetahui  kemampuan  gel menyebar saat dioleskan pada kulit. Uji daya sebar bertujuan untuk mengetahui kemampuan penyebaran gel mudah atau tidaknya diaplikasikan pada kulit [14]. Tabel  3 menunjukkan hasil  daya  sebar  gel  bromelin.  Uji  daya  sebar  dilakukan dengan menimbang gel sebanyak 0,5 gram. Meletakkan gel diatas kaca transparan, lalu kemudian metutup dengan kaca tranparan yang lain dan memberikan beban secara bertahap (50, 100, 150, dan 200) gram, setiap penambahan beban diberikan waktu 1 menit dan diukur diameternya. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pada tiap formula. Syarat daya sebar sediaan gel adalah 5-7 cm [12].
Tabel 3. Hasil uji daya sebar Beban Luas daya sebar (cm 2 ) Formula 1 Formula 2 Formula 3 50 4 4,05 5,25 100 4,3 4,4 5,5 150 4,7 4,8 5,9 200 5 5,05 6,2
Uji  daya  lekat  bertujuan  untuk  melihat  waktu  yang  diperlukan  sediaan untuk menempel terhadap kulit. Hal ini dikaitkan dengan proses kerja obat atau zat aktif,  semakin  lama  daya  lekat  maka  semakin  lama zat  aktif  bertahan  pada permukaan kulit. Tabel 4 menunjukkan hasil uji daya lekat gel bromelin. Uji daya lekat  dilakukan  dengan  menimbang  gel  0,5  gram.  Meletakkan  gel  diatas  kaca obyek yang telah ditentukan luasnya. Meletakkan gelas obyek yang lain di atas gel dan memberikan beban 1 kg selama 5 menit, setelah itu beban diangkat dan tarik tuas  sambil  stopwatch  dinyalakan.  Waktu  dihitung  saat  tuas  ditarik  dan dihentikan ketika kaca obyek terlepas. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pada tiap formula. Syarat daya lekat sediaan gel yaitu lebih dari 1 detik [12].
Tabel 4. Hasil uji daya lekat Formula Daya Lekat (detik) F1 › 60 F2 › 60 F3 › 60
Viskositas  merupakan  tahanan  untuk  mengalir,  dimana  semakin  besar viskositasnya maka sediaan tersebut semakin kental, demikian juga sebaliknya. Uji  viskositas  bertujuan  untuk  mengetahui  konsistensi  suatu  sediaan  yang berpengaruh  pada  penggunaan  secara  topikal  [15].  Tabel  5 hasil uji  viskositas
menggunakan  menggunakan  viskometer Brookfield (Spindel  nomor  6). Berdasarkan  hasil  diatas  ketiga  formula  tersebut  masih  memenuhi  range viskositas  sediaan  gel.  Uji  viskositas  bertujuan  untuk  mengetahui  konsistensi suatu  sediaan  yang  berpengaruh  pada  penggunaan  secara  topikal  [15]. Persyaratan viskositas untuk sediaan gel menurut SNI 16-4399-1996, nilai standar viskositas untuk sediaan gel adalah 6000-50000  cP  atau  6-50  Pa.S [10].
Tabel 5. Hasil uji viskositas Viskositas (rpm) Centi poise Formula 1 Formula 2 Formula 3 12 46850 33628 25218 30 27692 16846 13816 60 14950 10362 8566 Uji Sebelum dilakukan pengujian secara in vivo untuk melihat reaksi iritasi pada kulit hewan uji terhadap gel bromelin. Tabel 6 menunjukkan hasil uji iritasi yang  dilakukan  dengan  cara  mengoleskan  sediaan  gel  pada  kulit  kelinci  dan dilihat  setelah  24  jam  kemudian  apakah  terdapat  iritasi  atau  tidak.  Pada pengamatan akhir tidak terlihat adanya tanda-tanda iritasi berupa eritema atau edema selama penggunaan sediaan gel bromelin.
Tabel 6 Hasil uji iritasi gel Formula Eritema Edema H 0 H 12 H 24 H 36 H 72 H 0 H 12 H 24 H 36 H 72 F1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 F2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 F3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
H 0 : Jam ke-0; H 12 : Jam ke-12; H 24 : Jam ke-24; H 36 : Jam ke-36; H 72 : Jam ke-72 Skala  eritema  =  0: tidak  ada  kemerahan; 1:  bercak  merah;  2: merah  merata;  3: merah, kulit menebal Skala edema = 0: tidak bengkak; 1: 2 mm; 2: 4 mm; 3: 6 mm; 4: 8 mm
Gel  bromelin  selanjutnya  diaplikasikan  pada  hewan  uji  untuk pengujian  secara in  vivo .  Penelitian  ini  dilakukan  dalam  jangka  waktu  15  hari untuk melihat efek enzim bromelin terhadap penyembuhan luka bakar derajat 2. Tabel 7 menunjukkan hasil pengukuran diameter luka bakar kelinci selama 15 hari pengamatan.  Pengukuran  ini  dilakukan  dengan  interval  3  hari  selama  15  hari dengan  memantau  perkembangan  luka  yang  diukur  menggunakan  parameter diameter luka dan pengamatan visual.
Tabel 7. Hasil pengukuran luas luka pada kelinci No.  Kelompok  Replikasi Pengamatan hari ke- 1 (cm 2 ) 3 (cm 2 ) 6 (cm 2 ) 9 (cm 2 ) 12 (cm 2 ) 15 (cm 2 ) 1 Kontrol Positif 1 1 1 0,9 0.7 0,4 0,1 2 1 1 0,8 0.6 0,3 0,1 3 1 1 0,9 0.7 0,4 0,1 Rata-rata 1,00 1,00 0,86 0,66 0,36 0,1 2 Kontrol Negatif 1 1 1 1 1 0.9 0,8 2 1 1 1 1 0,8 0,7 3 1 1 1 1 1 0,9 Rata-rata 1,00 1,00 1,00 1,00 0,90 0,80 3 F1 (0,1%) 1 1 1 1 0,9 0.8 0,6 2 1 1 1 0.8 0,7 0,4 3 1 1 1 1 0,9 0,7 Rata-rata 1,00 1,00 1,00 0,90 0,80 0,56 4 F2 (0,5%) 1 1 1 1 0.8 0,5 0,2 2 1 1 1 0.9 0,6 0,3 3 1 1 1 0.8 0,5 0,2 Rata-rata 1,00 1,00 1,00 0,83 0,53 0,23 5 F3 (1%) 1 1 1 0,8 0.5 0,2 0,0 2 1 1 0,9 0.6 0,3 0,0 3 1 1 0,7 0.4 0,2 0,0 Rata-rata 1,00 1,00 0,80 0,50 0,23 0,0
Uji efektivitas penyembuhan luka dilakukan pada hewan uji kelinci untuk mengetahui waktu penyembuhan luka pada tiap kelompok perlakuan. Hewan uji digunakan  sebanyak  5  ekor  dan  dibagi  menjadi  5  kelompok  perlakuan diantaranya  kelompok  kontrol  positif  (Bioplacenton®),  kelompok F1A  0,1%, kelompok F1B 0,5%, kelompok F1C 1% dan kelompok kontrol negatif (basis gel). Masing-masing  kelompok diuji  dengan  replikasi  3x.  Luka  bakar  dibuat  dengan menginduksikan logam berukuran 1x1 cm yang dipanaskan selama 7 menit, lalu ditempelkan ke punggung kelinci, hingga memperoleh luka bakar derajat 2.

## Gambar 1. Kurva penyembuhan luka
Pada  kelompok  kontrol  positif  diberikan  sediaan  gel  bioplacenton. Penggunaan gel bioplacenton didasarkan oleh kemampuan bioplacenton dalam menyembuhkan luka bakar selain itu bioplacenton juga memiliki bentuk sediaan yang sama dengan sediaan yang akan diujikan yaitu gel. Pada pengujian aktivitas penyembuhan luka bakar derajat II digunakan pembanding gel bioplacenton yang berisi Placenta extract 10%  dan Neomycin sulfate 0,5%. Ekstrak plasenta dalam obat  ini  bekerja  memicu  pembentukan  jaringan  baru  dan  untuk  mempercepat penyembuhan luka sedangkan neomycin sulfate berperan sebagai bakteriosid [16]. Hal ini sejalan dengan hasil perlakuan pada kontrol positif, dimana luka menutup dan mengering pada hari ke-3, dan mulai mengelupas pada hari ke-6, sehingga pada hari ke-9 diameter luka semakin mengecil dan pada hari ke-15 luka menutup dengan baik.
Kelompok kontrol negatif hanya menggunakan basis gel tanpa zat aktif. Kelompok  ini  merupakan  kelompok  acuan  untuk  melihat  penyembuhan  luka secara alami. Menurut Dirjen POM, carbopol 940 digunakan sebagai gelling  agent karena    tidak    ditemui  iritasi  primer,  sensitivitas,  ataupun  reaksi  alergi  pada pemakaian luar hal ini sangat cocok untuk menjaga luka bakar agar tidak iritasi selama pengobatan [5]. Berdasarkan pengamatan pada kelompok kontrol negatif, pada hari ke-6 luka baru mulai mengering, hari ke-9 luka mulai mengelupas, dan pada hari ke-12 luka masih berukuran lebih besar dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya. Pengamatan pada hari ke-15, luka mulai mengecil namun tidak memberikan  efek  yang  signifikan  seperti  kelompok  perlakuan  lainnya.  Hal  ini terjadi  karena  pada  kontrol  negatif  hanya  digunakan  basis  gel  carbopol  tanpa kandungan zat aktif apapun.
Pada  kelompok  perlakuan  dengan  konsentrasi  formula  yang  berbeda menghasilkan  penyembuhan  luka  dengan  rata-rata  luas  luka  yang  berbeda. Berdasarkan data pada  Tabel 7 pada kelompok F1 dengan konsentrasi zat aktif sebesar  0,1%  terjadi  penurunan  luka  berturut-turut  dari  hari  ke-6  luka  mulai mengering, hari ke-9 luka mulai mengelupas dan berdiameter 0,9 cm 2 , hari ke-12 luka berdiameter 0,8 cm 2 dan hari ke-15 luka hampir dinyatakan sembuh dengan diameter luka 0,56 cm 2.
Pada kelompok F2 dengan konsentrasi zat aktif sebesar 0,5% memberikan efek  yang  berbeda  terhadap  penyembuhan  luka  sengan  kelompok  F1,  dimana
0 0,5 1 1,5 0 3 6 9 1 2 1 5 L U A S L U K A (CM 2 ) LAMA PENYEMBUHAN LUKA (HARI) PE N Y E MB U HA N  L U KA B A KA R
Kontrol Positif Kontrol Negatif
F1 (0,1%) F2 (0,5%) F3 (1%)
terjadi penurunan luka berturut-turut dari hari ke-6 luka sudah kering, hari ke-9 luka  mulai mengelupas  dengan  diameter  0,83  cm 2 ,  hari  ke-12  luka  berdiameter 0,53 cm 2 dan hari ke-15 ukuran luka mengecil dengan diameter 0,23 cm 2 hasil ini menunjukkan bahwa formula F2 lebih baik dari F1.
Pada kelompok F3 dengan konsentrasi zat aktif sebesar  1% memberikan efek yang signifikan terhadap penyembuhan luka.  Menurut  Jeschke  dkk,  terjadi hemostasis  segera  setelah  cedera  dan  melibatkan  vasokonstriksi,  hal  ini  terjadi sekitar  24-48  jam  setelah  luka  bakar.  Penyembuhan  alami  dari  luka-luka  ini melibatkan proses yang dinamis dan saling tumpang tindih yang mencakup fase inflamasi, yang dilakukan oleh neutrofil dan monosit yang menuju ke bagian yang cedera  melalui  vasodilatasi  lokal.  Fase  peradangan  ini  secara  alami  berfungsi untuk menurunkan jaringan nekrotik dan memulai rangkaian sinyal diperlukan untuk perbaikan luka [20].
Pengamatan pada hari ke-3 yaitu luka sudah mulai mengering dan pada hari ke-6 luka sudah terkelupas dengan diameter 0,2 cm 2 . Pembentukan keropeng menunjukkan proses penyembuhan luka memasuki fase proliferasi tahap awal. Waktu pelepasan keropeng ( scab ) menandakan bahwa sudah terjadi pertumbuhan sel-sel baru pada kulit sehingga membantu mempercepat lepasnya keropeng dan merapatnya tepi luka. Keropeng ( scab ) terlepas karena jaringan dibawahnya sudah kering dan tepi-tepi luka mulai tertarik ketengah [18].
Pada  hari ke-9  luka  mulai  mengalami  fase  remodeling  dengan  diameter luka  0,5  cm 2 ,  Akhir  fase  penyembuhan  melibatkan  remodeling  luka,  di  mana kolagen  dan  elastin  disimpan  dan  terus  menerus  mengubah  fibroblas  menjadi miofibroblas. Seiring waktu, myofibroblast dan re-epitelisasi menentukan kualitas dan elastisitas luka yang diperbaiki, dan menentukan luasnya pembentukan bekas luka yang ditandai dengan  pertumbuhan jaringan fibrosa yang tidak beraturan oleh  serat-serat  kolagen.  Secara  umum,  respon  penyembuhan  yang  kompleks ditargetkan  untuk  regenerasi  bagian  dermal  dan  epidermal  dengan  tujuan memulihkan penutupan skin barrier serta elastisitas dan fungsi kulit. Namun, luka dapat  sembuh  biasanya  dengan  bekas  luka  abnormal  yang  khas  aktif,  merah, gatal, nyeri dan cacat atau disebut bekas luka hipertrofik atau keloid [17]. Fase remodeling biasanya  merupakan  fase  terlama  dari  proses  penyembuhan  luka.
Proses ini dimulai sekitar hari ke-21 hingga satu tahun. Namun, pada F3 luka telah mengalami fase maturasi pada hari ke-12 dan luka hampir menutup sempurna pada  hari  ke-15.  Hasil  yang  diperoleh,  dapat  dibandingkan  efektivitas penyembuhan  luka  yang  tercepat  terjadi  pada  kelompok  F3  (konsentrasi  1%), urutan kedua kelompok kontrol positif (Bioplacenton), urutan ketiga  kelompok F2 (konsentrasi 0,5%), urutan keempat kelompol F1 (konsentrasi 0,1%), dan urutan terakhir kelompok kontrol negatif (basis gel carbopol 940).
Bromelain  merupakan  campuran  enzim  proteolitik  yang  terdapat  pada semua jaringan nanas ( Ananas comosus ) yang dikenal sebagai agen debriding yang efisien  dalam  perawatan  luka  bakar  dan  regenerasi  jaringan.  Mekanisme penyembuhan  luka  bakar  oleh  bromelin  diawali  dengan  penyembuhan  luka  di mana protease dari bromelain menghidrolisis bekuan fibrin yang menempel pada luka.  Bromelin  juga  memperbaiki  komponen  matriks  ekstraseluler  yang  rusak seperti kolagen, elastin dan laminin melalui efek proteolisis. Hal ini menginduksi pelepasan  faktor  pertumbuhan  dan  angiogenik  dalam  matriks,  serta  aktivasi
kemokin dan sitokin bioaktif, dan memproses sel ke sel dan matriks ke molekul adhesi sel. Selain protease, bromelain mengandung enzim non-proteolitik, yang disebut Escharase, yang tidak memiliki aktivitas analitis terhadap protein normal dan  memotong  substrat  glikosaminoglikan  dan  secara  efisien  menghilangkan eschar [19].
Pada  penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Sehirli  dkk,  bromelin  juga memberikan efek penyembuhan pada luka bakar akibat korosif. Dalam penelitian ini,  bromelain  terbukti  memiliki  efek  antioksidan  dan  efek  perlindungan. Bromelain sebelumnya belum pernah diuji untuk luka bakar kimia,  hal ini bisa menjadi  agen  baru  yang  menjanjikan  untuk  mengurangi  mortalitas  dan morbiditas  terkait  radikal  bebas  [20]. Dalam  penelitian  ini,  hasil  F3  yang mengandung bromelin 1% yang tidak berbeda signifikan dibandingkan kontrol positif Bioplacenton® . Pemilihan  Bioplacenton®  sebagai  bahan  pembanding adalah  karena  Bioplacenton®  merupakan  salah  satu  sediaan  yang  umum digunakan  sebagai  pengobatan  pada  penderita  luka  bakar.  Bioplacenton® mengandung ekstrak plasenta dari sapi 10%, neomycin sulfate 0,5% dan Jelly base q.s.  ekstrak  plasenta  mengandung  stimulator  biogenik  yang  mempunyai  aksi stimulasi pada proses metabolik didalam sel. Efek stimulasi ini telah ditunjukkan dalam studi in vitro dan in vivo seperti peningkatan konsumsi oksigen didalam sel hati,  peningkatan  regenerasi  sel,  dan  penyembuhan  luka. Neomycin  sulfate merupakan  antibiotik  banyak  strain  gram  negatif  [21]. Sedangkan  menurut penelitian Bayat dkk, penggunaan bromelin pada luka bakar menyebabkan laju re-epitelisasi  yang  lebih  cepat, degradasi  jaringan  nekrotik,  pencegahan  infeksi, dan pengurangan oksidasi pada jaringan yang terkena [19]. Berdasarkan hal ini dapat  disimpulkan  bahwa  efektivitas  penyembuhan  dari  gel  bromelin  tidak berbeda  signifikan  dengan  hasil  kontrol  positif  yaitu  gel  bioplacenton  untuk penyembuhan luka bakar.
4.  Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa terdapat  efektivitas  penyembuhan  luka  bakar  dari  ketiga  konsentrasi  bromelin yaitu Formula 1A (0,1%), Formula 1B (0,5%), dan Formula 1C (1%). Formula 1C (1%) menunjukkan pemulihan yang paling cepat dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, hal ini terlihat dari penurunan diameter luka dan pengamatan visual dimana luka sudah tertutup sempurna pada pengamatan hari ke-15. Referensi
[1]  Moenadjat, Yefta. Luka Bakar: Pengetahuan untuk awam. Departemen Ilmu Bedah Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 2017.
[2]  Allen  Jr.,  V.  Loyd.  The  Art,  Science  and  Technology  of  Pharmaceutical Compounding,  Second  Edition.  American  Pharmaceutical  Association, USA. 2002.
[3]  Boateng,  Joshua  C.,  dkk.  Wound  Healing  Dressing  and  Drug  Delivery System. Journal Of Pharmaceutical Sciences, Vol. 97, No. 8 (2008): 2892-2893.
[4]  Voight.  Buku  Ajar  Teknologi  Farmasi.  Diterjemahkan  oleh  Soendani Noeroto S., Yogjakarta: UGM Press,1995.
[5]  Dirjen  POM.  Tanaman  Obat  Keluarga  (TOGA).  Jakarta:  Direktorat Pengawasan Obat Tradisional, DepKes RI, 1983.
[6]  Kwatra,  B.,  &  Labs,  I.  a  Review  on  Potential  Properties  and  Therapeutic. 8(11), (2019): 488 – 500. https://doi.org/10.20959/wjpps201 911-14941
[7]  Pavan  R,  Sapha  J,  Shraddha,  Kumar  A.  Properties  and  Therapeutic Application of Bromelain: A Review. Biotechnology Research International. (2012):1-6.
[8]  Bayat Samaneh, dkk. Evaluation of debridement effects of bromelain-loaded sodium alginate nanoparticles incorporated into chitosan hydrogel in animal models. Iranian Journal of Basic Medical Sciences . Vol. 24, No. 10. (2021).
[9]  Ulviani,  Fina,  Yusriadi,  dan  Khildah.  Pengaruh  Gel  Ekstrak  Daun  Sirih Merah  ( Piper  crocatum Ruiz  &  Pav)  Terhadap  Penyembuhan  Luka  Bakar Pada  Kelinci  ( Oryctolagus  cuniculus ).  Galenika  Journalof  Pharmacy. 2016;3(1):49-56.
[10]  Hidayanti,  U.W.,  Jaka  F.,  Arsyik  I.,  Formulasi  Dan  Optimasi  Basis  Gel Carbopol  940  Dengan  Berbagai  Variasi  Konsentrasi.  Prosiding  Seminar Nasional Kefarmasian Ke-1. (2015): 65-75.
[11]  Draelos  ZD,  Thaman  LA,  editors.  Cosmetic  Formulation  of  Skin  Care Products. Vol. 91. New York: Taylor and Francis Grorup; 2006.
[12]  Garg,  A.,  Deepika,  A.,  Sanjay,  G.,  &  Anil,  K.S.  Spreading  of  Semisolid Formulations: An Update, 178-180, Pharmaceutical Technology, USA; 2002.
[13]  Syamsuni,    Farmasetika  Dasar  Dan  Hitungan  Farmasi,  Penerbit  Buku Kedokteran EGC, Jakarta; 2006.
[14]  Sidiq, H. B. H. F., & Apriliyanti, I. P. Evaluasi Sifat Fisik Dan Uji Iritasi Gel Ekstrak Kulit Buah Pisang ( Musa acuminata colla). JCPS (Journal of Current Pharmaceutical Sciences), 2(1) (2018): 131-135.
[15]  Wiyono,  Anang  Setyo  dan  Dian  Mustofani.  Efektivitas  Gel  Ekstrak  Kasar Bromelin  Kulit  Nanas  ( Ananus  comosus L.  Merr)  Hasil  Optimasi  Formula Pada  Tikus  yang  Dibuat  Luka  Memar.  As-Syifaa  Jurnal  Farmasi.  11,2,
(2019):112-123
[16]  Silalahi,  J.  dan  C.  Surbakti.  Burn  Wound  Healing  Activity  of  Hydrolyzed Virgin Coconut Oil. International Journal of PharmTech Research. Vol. 8, No. 1 (2015): 67-73.
[17]  Jeschke, Marc G. dkk., Burn Injury. Natura Review 6,11 (2020).
[18]  Aponno ,J.V., Paulina V.Y.Y, dan Hamidah S.S. 2014. Uji Efektivitas Sediaan Gel  Ekstrak  Etanol  Daun  Jambu  Biji  (Psidium  guajava  Linn)  Terhadap Penyembuhan  Luka  Yang  Terinfeksi  Bakteri  Staphylococcus  aureus  Pada Kelinci (Orytolagus cuniculus). Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi. Manado: Program Studi Farmasi FMIPA UNSRA.
[19]  Bayat, Samaneh, dkk. Bromelain-loaded Chitosan Nanofibers Prepared by Electrospinning Method for Burn Wound Healing in Animal Models. Life Sciences. 229 (2019): 57 – 66.
[20]  Sehirli, Ahmet Ozer dkk. Protective effect of bromelain on corrosive burn in rats. Elsevier. (2020):1-7.
[21]  Muthmaina,  Ina  dkk.,  Aktivitas  Penyembuhan  Luka  Bakar  Fraksi  Dari Ekstrak Etanol 70% Daun Pepaya ( Carica papaya L.) Pada Tikus. Farmasains. Vol. 4 No. 2 (2017): 39-46.