## TOKSISITAS SENYAWA ANALOG KALKON 3’-METOKSIASETOFENON MENGGUNAKAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST ( BSLT)
Kurniati 1 , Yuharmen 2 , Adel Zamri 2
1. Mahasiswa Program S1 Kimia FMIPA-Universitas Riau 2. Dosen Jurusan Kimia FMIPA-Universitas Riau Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau Kampus Binawidya, Pekanbaru, 28293, Indonesia E-mail: adel.zamri@lecturer.unri..ac.id

## ABSTRAK
Senyawa kalkon  merupakan prekursor dari flavonoid  yang penting sebagai antioksidan.  Kalkon  memiliki berbagai bioaktivitas  seperti  antikanker,  antimikroba,  antijamur,  antitumor  dan  anti-inflmasi.  Pada  penelitian  ini  dilakukan sintesis  senyawa  ( E )-1-(3’-metoksifenil)-3-(3-nitrofenil)prop-2en-1-on  dengan  metode  iradiasi  gelombang  mikro dan menggunakan katalis basa KOH. Senyawa yang dihasilkan diuji kemurniannya dengan KLT, uji titik leleh dan analisis HPLC serta telah dikarakterisasi dengan spektroskopi UV, FTIR, 1 H-NMR dan MS serta diuji toksisitasnya dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Senyawa ini menunjukkan aktivitas toksisitas yang kurang baik dengan nilai LC 50 >200 µg/mL.
Kata kunci : kalkon, microwave dan sintesis.

## 1. PENDAHULUAN
Perkembangan  yang  menarik  dibidang farmakologis  dari  bahan  alam  adalah  senyawa kalkon  yang  merupakan  golongan  penting  dari flavonoid  (Choudhary et  al .,  2011).  Senyawa kalkon merupakan prekursor dari flavonoid yang penting  sebagai  antioksidan  (Espinoza et  al ., 2012).  Kalkon  memiliki  berbagai  bioaktivitas seperti  antikanker,  antioksidan,  dan antimikroba (Sharma  and  Joshi,  2012).  Selain  itu  juga sebagai  antijamur,  antitumor  dan  anti-inflmasi (Chen et  al .,  2013).  Aktivitas  biologis  kalkon, selain  disebabkan  oleh  gugus  karbonil  α,  β  tak jenuh,  juga  dipengaruhi  oleh  subtituen  yang terikat  pada  kedua  cincin  aromatiknya  (Kamble et al ., 2011), seperti halogen, hidroksi, metoksi, nitro,  maupun  metil  (Rahmadhona,  2014; Brahmana,  2014;  Handayani,  2014;  Sofiana, 2014, Tillah, 2014 & Perdana, 2012).
Keberadaan  senyawa  kalkon  yang  memiliki aktivitas  biologis  di  alam  sangat  terbatas dibandingkan dengan senyawa flavonoid lainnya, selain itu juga variasi strukturnya relatif sedikit,  sehingga  untuk  mengisolasinya  terdapat kesulitan,  seperti  membutuhkan  biaya  yang banyak  dan  waktu  yang  lama.  Solusi  untuk mengatasi  kekurangan  tersebut  yaitu  dengan cara  sintesis.  Senyawa  turunan  kalkon  dapat disintesis  melalui  kondensasi  aldol  atau  lebih
spesifik  melalui  kondensasi  Claisen-Schmidt dari  suatu  keton  aromatik  dengan  aldehid aromatik.
Penelitian  ini  mensintesis  senyawa  kalkon dengan  menggunakan  bahan  baku  aldehid aromatik  yaitu  senyawa  3-nitrobenzaldehid dengan  suatu  turunan  keton  aromatik  3- metoksiasetofenon.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah microwave Samsung  ME109F,  alat pengukur  titik  leleh Fisher  Johns (SMP  11- Stuart  ),  lampu  UV  254/366  nm  (Camag  ), HPLC  (Shimadzu  LC  Solution  jenis  kolom Shim-pack VP-ODS  dengan  panjang  dan diameternya yaitu 150x4,6
mm), spektrofotometer  UV  (Genesys  10SUV-VIS v4.0022L9N175013),  spektrofotometer  FTIR (Shimadzu,  IR  Prestige-21),  spektroskopi 1 H- NMR  (Agilent  500  mHz),  spektroskopi  Massa (MS  Waters  LCT  premier  XE  mode  positif), peralatan  sintesis  dan  uji  toksisitas  yang  umum digunakan di Laboratorium Sintesis Organik.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah:  3-metoksiasetofenon (Merck),  4-nitrobenzaldehida  (Merck),  kalium hidroksida,  asam  klorida,  plat  KLT  GF 254 ,
akuades,  indikator  universal,  telur  udang ( Artemia  salina Leach),  air  laut,  etilasetat,  n- heksana, metanol, etanol absolut, kloroform dan dimetilsulfoksida (DMSO).
Rancangan Penelitian
Sintesis  senyawa  kalkon  dilakukan  dalam satu  tahap  reaksi  melalui  kondensasi  Claisen- Schimdt dengan menggunakan senyawa awal 4- nitrobenzaldehid  dan  3-metoksi  asetofenon dengan  katalis  basa  (KOH)  seperti  terlihat  pada skema reaksi berikut:
Gambar 1 . Sintesis senyawa kalkon

## Sintesis senyawa kalkon
Sebanyak  5  mmol  3-metoksiasetofenon ditempatkan  dalam  wadah  Erlenmeyer  125  mL, kemudian  ditambahkan  5  mL  larutan  kalium hidroksida 6N. Setelah itu, sebanyak 5 mmol 4- nitrobenzaldehid  dan  5  mL  etanol  absolut ditambahkan  ke  dalam  Erlenmeyer.  Campuran ini  diiradiasi  gelombang  mikro  selama  1-12 menit  dengan  daya  180  watt.  Reaksi  dipantau melalui  uji  KLT  setiap  1  menit.  Setelah  itu, sebanyak 15 mL akuades dingin ditambahkan ke dalam  campuran  dan  pH  campuran  dinetralkan dengan  menambahkan  asam  klorida  3N. Kemudian  campuran  didiamkan.  Endapan  yang terbentuk  disaring  menggunakan  pompa  vakum dan  dicuci  dengan  akuades  dan  n-heksana dingin,  kemudian  direkristalisasi  dengan  etanol. Produk  yang  diperoleh  diuji  kemurniannya dengan uji KLT, titik leleh dan analisis HPLC.
Uji  toksisitas  dengan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Sampel sebanyak 20 mg dilarutkan dalam 2 mL  methanol  (larutan  induk,  konsentrasi  10000 µg/mL),  kemudian  dari  larutan  induk  dibuat konsentrasi  yang  berbeda  1000  µg/mL,  100 µg/mL,  10  µg/mL  1  µg/mL  dan  0,1  µg/mL dengan  cara  pengenceran  bertingkat.  Kemudian disiapkan  vial  5  mL  yang  sudah  dikalibrasi untuk masing-masing konsentrasi. Sampel dipipet  ke  dalam  masing-masing  vial  sebanyak 0,5 mL, lalu pelarut diuapkan hingga mengering. Selanjutnya,  ke  dalam  masing-masing  vial ditambahkan  50  µL  DMSO.  Sebanyak  10  ekor larva  udang  dimasukkan  ke  dalam  vial  tersebut
dan  ditambah  air  laut  hingga  batas  kalibrasi  5 mL.  Tingkat  toksisitas  diukur  dengan  cara menghitung  jumlah  larva  udang  yang  masih hidup  dalam  selang  waktu  24  jam.  Pengujian dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pengulangan dengan  perlakuan  yang  sama  untuk  masing- masing  konsentrasi.  Data  yang  diperoleh dianalisis  untuk  menentukan  nilai  LC 50 dengan metode  kurva  menggunakan  tabel  analisis probit.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Sintesis senyawa kalkon
Penelitian  ini  mensintesis  senyawa  analog kalkon  yang  diperoleh  dengan  mereaksikan senyawa  3-metoksiasetofenon  dan  senyawa aldehid aromatik
3-nitrobenzaldehid
menggunakan katalis basa KOH dengan metode iradiasi gelombang mikro. Pelarut yang digunakan  adalah  etanol  absolut  karena  lebih mudah  didapatkan  dan  tingkat  keracunannya lebih  rendah  dibandingkan  pelarut  organik lainnya.  Selain  itu,  etanol  absolut  dapat membantu  menyerap  air  hasil  samping  dari reaksi kimia yang terjadi.
Sintesis  yang  telah  dilakukan  menghasilkan senyawa kalkon dengan rumus molekul C 16 H 13 NO 4 dan  berat  molekul  sebesar  283,08. Senyawa  kalkon  berupa  padatan  berwarna kuning  dengan  berat  sebesar  0,52  g  dan rendemen  yang  dihasilkan  sebesar  36%.  Sifat fisik dari senyawa kalkon yang dihasilkan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Sifat fisika senyawa kalkon Senyawa Rumus molekul Berat molekul Warna Rendemen (%) Ttik leleh (ºC) Kalkon C 16 H 13 NO 4 283,08 Kuning 37 117-118 Analisis kemurnian senyawa kalkon dilakukan  menggunakan  KLT,  titik  leleh  dan HPLC.  Analisis  kemurnian  dengan  KLT dilakukan  menggunakan  eluen  yang  bervariasi dan  perbandingan  yang  berbeda.  Senyawa kalkon  menunjukkan  satu  noda  pada  plat  KLT. Noda  pada KLT  diamati  dengan  bantuan  lampu UV (λ 254 nm dan 366 nm). Analisis kemurnian dengan titik leleh menunjukkan bahwa senyawa tersebut  memiliki range titik  leleh  sebesar  1°C.
Analisis kemurnian senyawa kalkon menggunakan  HPLC  dilakukan  pada  panjang gelombang  224  nm  dan  365  nm  menunjukkan satu  puncak  dominan  pada  t R =16,615  menit.
Berdasarkan  data  analisis  kemurnian  tersebut menunjukkan  bahwa  senyawa  kalkon  telah murni.
Gambar  2. Struktur  dan  penomoran  senyawa kalkon
Struktur  senyawa  kalkon  yang  telah  murni dikarakterisasi  menggunakan  spektroskopi  UV, FTIR, 1 H-NMR dan MS. Spektrum UV senyawa kalkon memperlihatkan adanya serapan maksimum  pada  pada  panjang  gelombang  207 nm  yang  menunjukkan  adanya  ikatan  rangkap pada  cincin  benzen,  pada  panjang  gelombang 221  nm  menunjukkan  adanya  ikatan  rangkap pada  cincin  A  aromatik  yang  terkonjugasi dengan  gugus  karbonil  dan  pada  panjang gelombang 289 nm  menunjukkan adanya ikatan rangkap pada cincin B aromatik.
Spektrum FTIR senyawa kalkon memperlihatkan  adanya  serapan  pada  bilangan gelombang  3068,88  cm -1 yang  menunjukkan adanya  gugus  C-H  aromatik,  pada  bilangan gelombang  1527,69  cm -1 menunjukkan  adanya gugus C=C terkonjugasi, pada bilangan gelombang  1660,78  cm -1 menunjukkan  adanya
gugus  karbonil  (C=O)  dan  pada  bilangan gelombang  1284,65  cm -1 menunjukkan  adanya gugus metoksi (O-C).
Spektrum 1 H-NMR senyawa kalkon menunjukkan bahwa  jumlah proton dari senyawa tersebut sesuai dengan yang diharapkan, dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 . Spektrum 1 H-NMR senyawa kalkon Berat  molekul  kalkon  ditunjukkan  oleh spektrum massa yang dihitung sebagai C 16 H 13 NO 4 [M+H] + pada  284,  sedangkan  yang ditemukan  adalah  283,9.  Berdasarkan  puncak
ion  molekul  yang  dihasilkan  spektrum  MS  dan yang dihitung secara teoritis terlihat selisih nilai yang  dihasilkan  kecil.  Hal  ini  menunjukkan senyawa  hasil  sintesis  telah  murni  dan mempunyai  struktur  sesuai  dengan  yang diharapkan.

## Uji toksisitas
Uji  aktivitas  toksisitas  senyawa  kalkon dilakukan  dengan  menggunakan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Hasil  uji toksisitas  dari  senyawa  kalkon  pada  konsentrasi 1000,  100,  10,1  dan  0,1  µg/mL  terhadap  larva Artemia  salina Leach  yang  dianalisis  dengan metode  analisis  probit  tingkat  potensi  toksisitas senyawa kalkon dengan nilai LC 50 sebesar 6,606 x  10 6 μg/mL.  Pada  metode Brine  Shrimp
Nomor Atom
Senyawa (CK 3 )  H (ppm) 1 - 2 8,51 (s) 3 - 4 8,27 (dd) 5 7,45 (t) 6 7,93 (d) C  7,64 (m, Hα, J= 15,5 Hz) C  7,84 ( d, H β , J= 16Hz) 1’ - 2’ 7,62 (m) 3’ 3,89 (s) (OCH 3 ) 4’ 7,18 (m) 5’ 7,57 (t) 6’ 7,63 (m)
Lethality  Test (BSLT), suatu tanaman atau hasil
isolasi dianggap menunjukkan aktivitas sitotoksik  bila  mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari 1000  µg/mL,  sedangkan  untuk  senyawa  murni dianggap  menunjukkan  aktivitas  sitotoksik  bila mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari  200  µg/mL (Meyer,  1982).  Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas toksisitas, senyawa kalkon tidak positif berpotensi  sebagai  senyawa  antikanker  karena memiliki nilai LC 50 >200 µg/mL

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  diambil  kesimpulan bahwa senyawa kalkon diperoleh melalui reaksi kondensasi aldol Claisen-Schmidt menggunakan katalis  basa  (KOH)  dibawah  kondisi  iradiasi microwave .  Rendemen  yang  dihasilkan  yaitu 37%. Hasil karakterisasi menggunakan spektroskopi  UV,  FTIR, 1 H-NMR  dan  MS menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  diperoleh dari hasil penelitian adalah murni dan merupakan  senyawa  kalkon  dengan  struktur yang  diharapkan.  Senyawa  kalkon  memiliki toksisitas  dengan  nilai  LC 50 sebesar  6,606  x  10 6 μg/mL,  hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa senyawa  kalkon  tidak  positif  berpotensi  sebagai senyawa antikanker

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Brahmana,  E.M.  2014.  Sintesis,  Uji  Antibakteri dan  Uji  Toksisitas  beberapa  Analog Kalkon  Tersubstitusi  Halogen. Tesis . Universtas Riau, Pekanbaru.
Chen,  Y.H.,  Wang,  W.H.,  Lin,  Z.Y  and  Chern,
C.Y.  2013.  Evaluation  of  the  Anti- Inflammatory  Effect  of  Chalcone  and
Chalcone  Analogues  in  a  Zebrafish Model. Molecules . 18: 2052-2060.
Choudhary,  A  and  Juyal,  V.  2011.  Synthesis  of
Chalcone  and  Their  Derivatives  as
Antimicrobial Agents. International
Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science . 3 (3): 125-128.
Espinoza,  J.C.,  Rodriguez,  L.M.,  Nevarez,  G.V and  Camacho,  A.  2012.  Synthesis, Experimental and Theoretical Study of the Spectroscopic  Properties  in  (2E)-3-{3-
methoxy-4-[(3-methyl but-2-en-1- yil)oxy]phenyl}-1-(3,4,5- trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one.
Journal of Molecular Structure . 1020 : 88-
95.
Handayani,  S.,  Teruna,  H.  Y  and  Zamri,  A.
2014.  Sintesis  Analog  Kalkon  (E)-3-(2- klorofenil)-1-(4’-metoksifeil)-prop-2-en- 1-on  dan  Uji  Toksisitas  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Jurnal Indonesian Chemia Acta . 4(1): 17- 20.
Kamble,  V.M.,  Hatnapure,  G.D.,  Keche,  A.P., Birajdar,  S.,  Patil,  S.G.,  Tale,  R.H., Rodge,  A.H.,  Turkar,  S.S.  and  Gour,  K. 2011.  Sintesis  and  Biological  Evaluation of  a  Novel  Series  of  Methoxylated Chalcones  as  Antioxidant  and  Anti- microbial  agents. Journal.  Chemistry. Pharmceutical. Research . 3 (6):639-648.
Meyer,  B.N.R.,  Ferrigni,  J.E.,  Putnam,  L.B., Jacosen, D.E., Nicholas, J.L and Laughin, M.C.  1982.  Brine  Shrimp:  A  Convenient General  Bioassay  for  Active  Plant Constituens  . Journal  of  Medical  Plant Medica . 45 : 31-34.
Perdana,  F.,  Eryanti,  Y  and  Zamri,  A.  2013.
Sintesis  dan  Uji  Toksisitas  Senyawa Analog Kalkon Para. Repository
Universitas Riau.
Rahmadhona,  S.  2014.  Sintesis  dan  Uji Toksisitas  Analog  3’-Bromo  Kalkon. Repository Universitas Riau .
Sofiana,  A.,  Balatif,  N  and  Zamri,  A.  2014.
Sintesis  dan  Uji  Toksisitas  Senyawa Kalkon (E)-1-(2-hidroksifenil)-3-(4- metoksifenil)  prop  –  2  –  en  –  1  -  on.

## Repository Universitas Riau.
Tillah,  M  and  Zamri,  A.  2014.  Sintesis  dan  Uji Toksisitas  Senyawa  Kalkon  Turunan  4’- Metil  Asetofenon. Repository  Universitas Riau.