Terakreditasi Nasional (Sinta 3)
SK Ditjen Risbang Kemristekdikti https://doi.org/10.35800/mthp.12.1.2024.54368 No: 225/E/KPT/2022 Available online https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmthp/index

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN KARAKTERISASI MINYAK TULANG IKAN TINDARUNG
Antioxidant Activity and Characterization of Fish Oil from Marlin Fish Bone
Irma Antasionasti *, Surya Sumantri Abdullah, Jainer Pasca Siampa , Imam Jayanto Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi * Penulis Korespondensi: irmaantasionasti07@gmail.com (Diterima 07-02-2024; Direvisi 30-04-2024; Dipublikasi 30-05-2024)

## ABSTRACT
Marlin  fish  is  one  of  the  fish  produced  in  the  waters  of  North  Sulawesi. The  process  of  processing  tindarung  fish produces fish bone waste which can be maximized for processing as fish oil. Fish oil contains essential fatty acids that  the  body  cannot  produce  naturally.  The  aim  of  this  research  was  to  determine  the  antioxidant  activity  and characteristics of  tindarung  fish  bone oil. Tindarung fish bone oil extraction was carried out  using wet rendering method. Next, antioxidant activity was tested using DPPH method. Characterization was carried out using the titration method.  Based on the results of  the antioxidant activity test, tindarung fish bone oil has an antioxidant activity of 20,958 ±  2,736 µg/mL. Apart  from that, tindarung fish bone oil has characteristics  that meet  the standards  of the International Fish  Meal  and Oil  Manufacturers  Association,  namely a density of  0.91 g/mL; peroxide value of  20 meq/kg; free fatty acids of 5.65%; and the iodine number is 7.25 mg/100 g. This shows that tindarung fish bone oil can be consumed regularly as a supplement to maintain health.

## Keywords: antioxidant activity, characterization, fish oil, marlin fish
Ikan  Tindarung  merupakan  salah  satu  ikan  yang  dihasilkan  di  perairan  Sulawesi  Utara.  Proses  pengolahan  ikan tindarung menghasilkan limbah tulang ikan yang dapat dimaksimalkan pengolahannya sebagai minyak ikan. Minyak ikan mengandung asam lemak esensial  yang tidak dapat  diproduksi  secara alami  oleh tubuh.  Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan aktivitas antioksidan dan karakteristik dari minyak tulang ikan tindarung. Ekstraksi minyak tulang  ikan  tindarung  dilakukan  dengan  menggunakan  metode wet  rendering .  Selanjutnya,  pengujian  aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  DPPH.  karakterisasi  dilakukan  menggunakan  metode  titrasi.  Berdasarkan  hasil ujiaaktivitasantioksidan, minyak tulang ikan tindarung memiliki aktivitas antioksidan sebesar 20,958 ± 2,736 µg/mL. selain itu, minyak tulang ikan tindarung memiliki karakteristik yang memenuhi standar International Fish Meal and Oil Manufacturers Association , yaitu massa jenis sebesar 0,91 g/mL; bilangan peroksida sebesar 20 meq/kg; asam lemak bebas sebesar 5,65%; dan bilangan iod sebesar 7,25 mg/100 g. Hal ini menunjukkan bahwa minyak tulang ikan tindarung dapat dikonsumsi secara teratur sebagai suplemen untuk menjaga kesehatan.
Kata kunci: aktivitas antioksidan, karakterisasi, minyak ikan, tindarung

## PENDAHULUAN
Ikan tindarung merupakan ikan yang termasuk dalam tuna-like-species dan merupakan jenis ikan yang paling banyak ditemukan di perairan Sulawesi Utara. Rumalutur dkk (2022) telah berhasil melakukan ekstraksi  asam  lemak  dari  daging  ikan  tindarung  dengan  kadar  asam  dokosaheksaenoat  (DHA)  sebesar 7,10%  dan  asam  eikosapentaenoat  (EPA) sebesar  1,06%.  Oleh  karena itu, ikan  tindarung  dapat menjadi sumber omega-3. Selain daging, omega-3 dapat diekstraksi dari bagian limbah seperti tulang ikan tindarung sebagaimana minyak dari tulang ikan tuna dengan kadar DHA dan EPA secara berturut-turut 20,50% dan 3,67% (Istiqlaal, 2018) serta 19,24% dan 3,70% (Apituley dkk., 2020).
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh American  College  of  Nutrition pada  bulan  Agustus 2002,  omega-3  mampu  meredam  radikal  bebas  sebagai  antioksidan  sehingga  dapat  memberikan perlindungan  terhadap  serangan  jantung  dan  stroke  serta  mencegah  pertumbuhan  sel  tumor  dan  kanker (Akmal  dan  Roy,  2017).  Antioksidan  yang  terkandung  dalam  minyak  ikan  dipengaruhi  oleh  metode ekstraksi yang digunakan. Beberapa metode ekstraksi minyak ikan yaitu pengepresan hidrolik, ekstraksi soklet  dengan  Pamantasan,  ekstraksi  pelarut  dengan  pelarut  non  polar  (Garcia-Moreno  dkk,  2014;  De Oliveira dkk,2016), dan metode ekstraksi terbaru menggunakan ultrasound assisted extraction (Zhang dkk, 2021).  Beberapa  kondisi  ekstraksi  dapat  mempengaruhi  efisiensi  ekstraksi,  sehingga  sangat  penting
memilih metode ekstraksi yang akan digunakan. Salah satu metode ekstraksi yang dapat digunakan dalam ekstraksi tulang ikan tindarung yaitu metode wet rendering .
Selain manfaat kesehatan yang diberikan oleh kandungan omega-3 minyak ikan tindarung sebagai antioksidan,  kualitas  minyak  ikan  perlu  diperhatikan  dalam  proses  produksi.  Oleh  karena  itu,  perlu diketahui  kualitas  minyak  ikan  tindarung  yang  diperoleh.  Beberapa  parameter  yang  digunakan  untuk menentukan kualitas minyak ikan yaitu bilangan asam, bilangan peroksida, dan bilangan penyabunan (Putri dkk., 2020). Berdasarkan latar belakang diatas, maka dilakukan penelitian tentang uji aktivitas antioksidan dan karakterisasi minyak dari tulang ikan tindarung.

## METODE PENELITIAN

## Material
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  seperangkat  alat  ekstraksi,  neraca  analitik  dengan kepekaan 0,1 mg (Mettler Toledo), spektrofotometer UV-VIS  (Genesys-5), piknometer, seperangkat alat titrasi, dan alat-alat gelas (Pyrex) yang lazim digunakan di Laboratorium Kimia Analisis.
Bahan-bahan yang digunakan yaitu tulang ikan tindarung yang diperoleh dari pasar bersehati kota Manado,  Sulawesi  Utara.  Senyawa  2,2-diphenyl-1-picrylhidrazil  (DPPH)  (Sigma),  asam  asetat  glasial (Merck), kalium iodide (Merck), natrium tiosulfat (Merck), indikator kanji, indikator PP, indikator amilum, kalium hidroksida (Merck), reagen iodium bromide, etanol 96% (Merck), etanol (p.a) (Merck), n-heksan (p.a) (Merck), kloroform (p.a) (Merck), alfa tocopherol (Sigma), akuades.

## Preparasi ikan tindarung
Tulang ikan tindarung dibersihkan, kemudian dipotong-potong sehingga diperoleh ukuran yang lebih kecil untuk mempermudah proses ekstraksi.

## Ekstraksi minyak ikan
Proses  ekstraksi  menggunakan  metode wet  rendering .  Ekstraksi  dilakukan  terhadap  limbah  ikan, kemudian  ditambah  air  dengan  perbandingan  1:3  (limbah  :  air)  dan  direbus  pada  suhu  perlakuan  40 o C selama 60 menit, masing- masing perlakuan diulang sebanyak 3 (tiga) kali. Setelah dilakukan perebusan, lapisan  minyak  yang  terbentuk  di  lapisan  permukaan  diambil  menggunakan  pipet  kaca  dan  kemudian dimasukkan ke dalam botol kaca untuk dianalisis.
Uji aktivitas antioksidan minyak tulang ikan tindarung (Kikuzaki dkk., 2002) sebanyak 50 μL minyak ikan tulang tindarung dengan konsentrasi 20, 40, 60, 80, dan 100 µg/mL ditambah  dengan  1,0  mL  DPPH  0,4  mM,  dan  3,950  mL  etanol.  Selanjutnya,  larutan  divorteks  dan didiamkan selama 30 menit. Larutan selanjutnya diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum terhadap  blanko.  Selain  itu,  absorbansi  kontrol  yang  terdiri  atas  1,0  mL  DPPH  dan  4,0  mL  etanol  dan vitamin E sebagai pembanding juga diukur pada panjang gelombang maksimum.
Penangkapan radikal (%) = 𝐴0−𝐴1 𝐴0 𝑥 100%
Keterangan:  A o adalah  absorbansi  kontrol  (tidak  mengandung  larutan  uji.  A 1 adalah  absorbansi  dengan adanya larutan uji atau senyawa pembanding.
Karakterisasi minyak tulang ikan tindarung a. Analisis massa jenis minyak tulang ikan tindarung
Sebanyak 10 mL (V) minyak tulang ikan tindarung dimasukkan dalam piknometer kosong sampai di atas  leher,  pasang  tutupnya  hingga  sampel  dapat  mengisi  pipa  kapiler  sampai  penuh  dan  bebas  dari gelembung  udara.  Keringkan  bagian luar  piknometer  dan  timbang beratnya.  Setelah itu, menentukan berat  (m)  sampel  minyak  tulang  ikan  tindarung  (berat  terukur  dikurangi  berat  piknometer  kosong). Massa jenis minyak tulang ikan tindarug ditentukan berdasarkan persamaan berikut:
ρ = 𝒎 𝑽
b. Analisis bilangan peroksida
Minyak tulang ikan tindarung sebanyak 5 g dimasukkan dalam labu erlenmeyer, kemudian ditambahkan larutan asam asetat dan kloroform dengan perbandingan 3:2 sebanyak 30 mL. setelah itu, ditambahkan 0,5 ml larutan kalium iodide jenuh yang baru disiapkan dan dibiarkan bereaksi selama 60 detik sambil diaduk, kemudian ditambahkan 30 ml aquades dan dikocok. Selanjutnya dilakukan titrasi menggunakan 0,01  N  natrium  thiosulfate  (Na 2 S 2 O 3 )  hingga  larutan  berubah  warna  menjadi  kuning,  setelah  itu ditambahkan 0,5 ml larutan indikator kanji 1% yang akan merubah warna larutan menjadi biru. Indikator sebaiknya ditambahkan menjelang akhir titrasi. Selama titrasi kocok hingga warna biru hilang. Lakukan titrasi blanko dengan kondisi yang sama. Bilangan peroksida minyak tulang ikan tindarug ditentukan berdasarkan persamaan berikut:
Nilai peroksidasi (meq/kg) = 𝑺 𝒙 𝑴 𝒙 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒃𝒆𝒓𝒂𝒕 𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 (𝒈)
Keterangan: S = Jumlah natrium thiosulfate (mL), M= konsentrasi natrium thiosulfate (0,01 N)
c. Analisis asam lemak bebas
Minyak tulang ikan tindarung sebanyak 1 gram ditambahkan 25 ml alkohol 95%, kemudian dipanaskan selama 10 menit. Selanjutnya, 2 tetes indikator PP ditambahkan ke dalam larutan minyak tulang ikan tindarung. Setelah itu, larutan dikocok dan dititrasi dengan KOH 0,1 N sampai titik akhir titrasi yang ditandai dengan timbul warna pink yang tidak hilang dalam 10 detik. Asam lemak bebas minyak tulang ikan tindarug ditentukan berdasarkan persamaan berikut:
FFA (%) = 𝑨 𝒙 𝑵 𝒙 𝑴 𝟏𝟎𝑮
Keterangan : A = Jumlah titrasi KOH (ml), N = Normalitas KOH, G = gram minyak, M = Bobot molekul asam lemak dominan
d. Analisis bilangan iod
Bilangan iod minyak tulang ikan tindarung ditentukan berdasarkan metode SNI 7381:2008. Prosedur dilakukan oleh Unit Laboratorium Terpadu Institut Pertanian Bogor pada tanggal 19 September 2023.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas Antioksidan Minyak Tulang Ikan Tindarung
Aktivitas  antioksidan  minyak  tulang  ikan  tindarung  dianalisis  menggunakan  metode  DPPH  yang merupakan radikal bebas yang stabil. Ketika DPPH mengikat satu elektron menyebabkan perubahan warna secara stoikiometri (Akmal dan Roy, 2017). Aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dilaporkan sebagai IC 50 , yaitu konsentrasi efisien suatu antioksidan yang diperlukan untuk mengurangi konsentrasi DPPH awal sebesar  50%  (Munteanu  dan  Apetrei,  2021).  Aktivitas  antioksidan  minyak  tulang  ikan  tindarung  dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1. Aktivitas antioksidan minyak tulang ikan tindarung
Sampel Aktivitas Antioksidan DPPH (IC 50 -µg/mL ± SD) Minyak Tulang Ikan Tindarung 20,958 ± 2,736 Vitamin E 1,356 ± 0,295
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  nilai  IC 50 minyak  tulang  ikan  tindarung  tergolong  dalam  kategori antioksidan  sangat  kuat  dalam  menangkap  radikal  bebas  DPPH.  Aktivitas  antioksidan  yang  ditunjukkan oleh minyak tulang ikan tindarung lebih kecil dibandingkan aktivitas antioksidan minyak dari daging ikan tindarung yang dilaporkan oleh Rumalutur dkk (2022). Hal ini dapat dipengaruhi oleh jumlah kandungan omega  3  (DHA  dan  EPA).  Richard  dkk  (2008)  melaporkan  bahwa  DHA  dan  EPA  memberikan  efek maksimal dibandingkan asam lemak lainnya (asam stearate, asam oleat, asam linoleat, asam arakidonat) pada konsentrasi 10 µM terhadap radikal anion superoksida.

## Karakteristik Minyak Tulang Ikan Tindarung
Dalam proses produksi minyak tulang ikan tindarung perlu diperhatikan standar kualitas minyak ikan yang  dihasilkan.  Kontrol  kualitas  minyak  ikan  dapat  ditentukan  dengan  menghitung  nilai  parameter oksidasi baik primer maupun sekundernya. Parameter oksidasi yang dihasilkan menunjukkan karakteristik minyak tulang ikan tindarung yang dihasilkan.
Tabel 2. Karakteristik Minyak Tulang Ikan Tindarung
Sampel Massa Jenis (g/mL) Bilangan Peroksida (meq/kg) Asam Lemak Bebas (%) Bilangan Iod (mg/100 g) Minyak Tulang Ikan Tindarung 0,91 20 5,65 7,25
Dalam menentukan produk minyak ikan tulang ikan tindarung memiliki kualitas yang baik dan aman dikonsumsi  untuk  menjaga  kesehatan,  maka  standar  mutu  minyak  ikan  yang  dihasilkan  ditetapkan berdasarkan International Fish Meal and Oil Manufacturers Association (IFOMA). Berdasarkan Tabel 2, minyak tulang ikan tindarung memiliki massa jenis 0,91 g/mL. Massa jenis minyak tulang ikan tindarung yang dihasilkan tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian Apituley dkk (2020) yaitu sebesar 0,90 g/mL pada  minyak  tulang  ikan  tuna.  Karakteristik  minyak  tulang  ikan  tindarung  meliputi  bilangan  peroksida, asam lemak bebas, dan bilangan iod. Minyak tulang ikan tindarung memiliki bilangan peroksida sebesar 20 meq/kg.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  minyak  tulang  ikan  tindarung  memiliki  bilangan  peroksida  yang tinggi.  Namun,  bilangan  peroksida  yang  dihasilkan  masih  berada  dalam  standar  yang  ditetepakan  oleh International  Fish  Meal  and  Oil  Manufacturers  Association yaitu  sebesar  3-20  meq/kg.  Nilai  bilangan peroksida yang dihasilkan minyak tulang ikan tindarung sangat berbeda dengan minyak tulang ikan tuna 1,29 mg/kg (Apituley dkk., 2020), minyak ikan belut 2,97 meg/kg (Pandiangan dkk., 2021), dan minyak ikan lele  3,91  meq/kg (Pandiangan  dkk,  2020).  Oleh  karena itu,  minyak tulang ikan  tindarung memiliki derajat kerusakan yang lebih besar sehingga dapat menurunkan kualitas minyak. Derajad kerusakan minyak disebabkan oleh proses oksidasi asam lemak dengan kandungan PUFA yang tinggi.
Berdasarkan Tabel 2, salah satu parameter yang menentukan kualitas minyak yaitu nilai asam lemak bebas. Nilai asam lemak bebas menunjukkan kandungan asam lemak yang tidak dalam bentuk trigliserida. Minyak tulang ikan tindarung memiliki asam lemak bebas sebesar 5,65%. Nilai asam lemak bebas ini lebih tinggi dibandingkan dengan nilai asam lemak bebas minyak ikan lele (Martins dkk., 2021). Tingginya nilai asam  lemak  bebas  minyak  tulang  ikan  tindarung  dapat  dipengaruhi  oleh  proses  ekstraksi  dengan menggunakan  metode wet  rendering .  Penambahan  air  dalam  proses  ekstrasi  akan  meningkatkan  laju hidrolisis. Berdasarkan IFOMA (IFOMA, 1998), kadar asam lemak bebas minyak tulang ikan tindarung masih memenuhi standar yaitu 1-7%.
Salah satu pengujian yang dapat dilakukan untuk menentukan kualitas minyak ikan yaitu bilangan iodium.  Nilai  bilangan  iodium  menggambarkan  jumlah  asam  lemak  tak  jenuh  yang  terkandung  didalam produk  minyak  ikan.  Semakin  banyak  asam  lemak  tak  jenuh  yang  dimiliki  minyak  ikan,  maka  semakin banyak ikatan rangkap dari asam lemak tak jenuh tersebut yang akan bereaksi dengan iodium. Oleh karena itu,  dapat  dikatakan  bahwa  bilangan  iod  yang  tinggi  mengindikasikan  bahwa  minyak  ikan  mengandung asam lemak tak jenuh yang banyak. Iod dalam jumlah yang besar akan terikat dalam minyak ikan  yang mengandung banyak asam lemak tak jenuh. Tabel 2 menunjukkan bahwa bilangan iodium minyak tulang ikan  tindarung  sebesar  7,25  mg/100g  yang  menunjukkan  lebih  rendah  dibandingkan  standar  bilangan iodium  menurut  SNI  01-3741-2002  yaitu  sebesar  45  -  46  mg/100g  (Kamini  dkk.,  2016).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  minyak  tulang  ikan  tindarung  memiliki  bilangan  iodium  yang  rendah.  Bilangan iodium  yang  rendah  menandakan  bahwa  kandungan  asam  lemak  tak  jenuh  dalam  minyak  tulang  ikan tindarung rendah pula.

## KESIMPULAN
Aktivitas Antioksidan, Minyak Ikan, Tindarung
Minyak tulang ikan tindarung memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat yaitu 20,958 ± 2,736 µg/mL  dengan  karakteristik  yang  memenuhi  standar International  Fish  Meal  and  Oil  Manufacturers Association , yaitu massa jenis sebesar 0,91 g/mL; bilangan peroksida sebesar 20 meq/kg; asam lemak bebas sebesar 5,65%; dan bilangan iod sebesar 7,25 mg/100 g.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Universitas  Sam  Ratulangi  atas  dukungan  finansial melalui pendanaan PNBP Unsrat dengan skema  Riset Dasar Terapan Umum Unggulan Unsrat (RDTU3) dengan Kontrak No. 303/UN12.13/LT/2023.

## DAFTAR PUSTAKA
Akmal,  N.  L.  H.  B.  I.  dan  Roy,  A.,  2017.  Free  Radical  Scavenging  Activity  Of  Fish  Oil  -  An  In-Vitro  Study. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research (IJPSR) . 8(9): 3872-3875. Apituley, D. A. N., Sormin, R. B. D. dan Nanlohy, E. E. E. M., 2020. Karakteristik dan Profil Asam Lemak Minyak Ikan dari Kepala dan Tulang Ikan Tuna (Thunnus albacares). AGRITEKNO: Jurnal Teknologi Pertanian , 9(1): 10-19.
De Oiveira DA, Minozzo MG, Licodiedoff S, Waszczynskyj N., 2016. Physicochemical and sensory characterization of  refined  and  deodorized  tuna  (Thunnus  albacares)  by  product  oil  obtained  by  enzymatic  hydrolysis. Food Chem ., 207: 187–194.
García-Moreno PJ, Morales-Medina R, P´erez-G´ alvez R, Bandarra NM, Guadix A, Guadix EM., 2014. Optimisation of oil extraction from sardine (Sardina pilchardus) by hydraulic pressing. Int J Food Sci Technol ., 49(10): 2167– 2175.
IFOMA. (1998). International Fishmeal and Oil Manufactures Association. Hertfordshire. United Kingdom.
Kamini, Suptijah, P., Santoso, J., & Suseno, S. H. 2016. Ekstraksi dry rendering dan karakterisasi minyak ikan dari lemak jeroan hasil samping pengolahan salai patin siam. JPHPI . 19(3): 196–205. Martins, M. J. J., Purnamayati, L., dan Romadhan, R., 2021. Pengaruh Suhu Wet Rendering yang Berbeda terhadap Karakteristik Ekstrak Kasar Minyak Ikan Lele (Clarias sp.). agriTECH , 41(4): 335-343. Munteanu,  I.  G.  dan  Apetrei,  C.  2021.  Analytical  Methods  Used  in  Determining  Antioxidant  Activity:  Areview. International Journal of Moleculer Sciences . 22: 1-30.
Pandiangan, M., Panjaitan, D., dan Bangun, A. D., 2021. Analisis Kandungan Asam Lemak pada Minyak Ikan Belut. Jurnal Riset Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian (RETIPA) , 2(1): 102-109. Pandiangan,  M.,  Kaban,  J.,  Wirjasentono,  B.,  dan  Silalahi,  J.,  2020.  Analisis  Asam  Lemak  Omega  3  dan  6  pada Minyak Ikan Lele secara GC FID. Jurnal Riset Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian (RETIPA) , 1(1): 22-29. Putri, A. R., Rohman, A., Setyaningsih, W., dan Riyanto, S., 2020. Determination of acid, peroxide, and saponification value in patin fish oil by FTIR spectroscopy combined with chemometrics. Food Research . 4(5): 1758-1766. Richard,  D.,  Kefi,  K.,  Barbe,  U.,  Bausero,  P.,  dan  Visioli,  F.  (2008).  Polyunsaturated  fatty  acids  as  antioxidants. Pharmacological Research . 57: 451-455.
Rumalutur, C. I., Prayoga, D. K., Pani, P. M. G., Lapian, A., dan Goni, B. A., 2022. Laporan Akhir PKM: Potensi Nanoemulsi Minyak Ikan Tindarung dari Perairan Sulawesi Utara.
Zhang Y, Sun X, Liu S, Wei S, Xia Q, Ji H, Deng C, Hao J., 2021. Extraction of fish oil from fish heads using ultra- high pressure pre-treatment prior to enzymatic hydrolysis. Innov. Food Sci. Emerg. Technol. , 70: 102670.