Aktivitas  Antioksidan  dan  Toksisitas  Akut  Ekstrak Etanol  Buah,  Daun,  Batang  dan  Rimpang  Tanaman
Wualae ( Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith)
Mesi  Leorita,  Sandra  Aulia  Mardikasari,  Wahyuni,  Muhammad  Hajrul  Malaka,  Ari  Sartinah, Sahidin *
Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232
E-mail: sahidin02@uho.ac.id

## Abstrak
Wualae ( Etlingera  elatior (Jack)  R.M  Smith)    merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  dari  famili zingiberaceae yang  digunakan masyarakat Suku Tolaki di Provinsi Sulawesi Tenggara sebagai bumbu masak dan obat secara empiris.  Wualae diduga memiliki potensi antioksidan   karena mengandung flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi  antioksidan ekstrak etanol buah, daun, batang dan rimpang wualae terhadap radikal bebas 1,1-difenil-2-pikrihidrazil (DPPH) dan toksisitas akut terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan metode BSLT. Ekstrak diperoleh dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% selama 3x24 jam dan dipekatkan pada suhu 60 ○ C. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol buah, daun, batang dan rimpang Wualae, diperoleh hasil bahwa semua bagian tanaman Wualae memiliki potensi sebagai  antioksidan dengan afektifitas masuk dalam katagori kuat. Nilai IC 50 yang paling baik terdapat pada bagian batang (52,345 mg/L), selanjutnya  pada rimpang (58,638 mg/L), pada buah   72,518 mg/L dan pada daun 99,890 mg/L. Hasil uji toksisitas akut  menunjukkan bahwa buah, daun, batang dan rimpang Wualae bersifat sedikit toksik ( slightly toxic ) dengan nilai LC 50 masing-masing sebesar 1302.31 µg/mL, 1162.84  µg/mL, 1174.52 µg/mL dan 1074.72 µg/mL.
Kata kunci: wualae , Etlingera , antioksidan, toksisitas, obat tradisional, Sulawesi Tenggara

## 1. Pendahuluan
Peningkatan  prevalensi  penyakit  degeneratif  di Indonesia  cukup  pesat,  yang  terdiri  dari  jantung  koroner, gagal  jantung,  stroke,  gagal  ginjal  kronis,  dan  diabetes militus  [1].  Salah  satu  pemicu  terjadinya  penyakit degeneratif  adalah  radikal  bebas  yang  disebabkan  oleh atom  atau  molekul  yang  bersifat  reaktif.  Molekul  radikal dengan kereaktifan yang tinggi dapat menyebabkan sebuah reaksi  sehingga  membentuk  senyawa  abnormal  dan memulai reaksi berantai yang dapat merusak sel-sel penting dalam tubuh [2].
Reaksi radikal bebas dapat diatasi dengan penggunaan antioksidan  yang  melindungi  sel  dari  kerusakan  dengan cara  menetralkan  molekul  radikal  bebas  [3].  Saat  ini perhatian terhadap antioksidan alami dan pemanfaatannya dalam  menjaga  kesehatan  semakin  tinggi.  Tanaman merupakan  sumber  antioksidan  alami  yang  sangat potensial. Antioksidan alami terdapat pada seluruh bagian tanaman berupa  karotenoid, vitamin, flavonoid, dan fenol [4].   Tanaman Wualae atau dalam bahasa Indonesia disebut dengan kecombrang ( Etlingera elatior (Jack) R.M Smith) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  dari  famili zingiberaceae yang digunakan masyarakat Suku Tolaki di Provinsi Sulawesi Tenggara sebagai bumbu masak dan obat secara  empiris.  Hasil  penelitian  Maimulyanti  &  Prihadi (2015) diketahui bunga wualae (kecombrang) mengandung senyawa  tanin,  flavonoid,  saponin  dan  steroid,  serta  hasil
uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH menunjukkan bahwa ekstrak metanol dan etilasetat bunga Wualae memiliki nilai IC50 berturut-turut 21,14 dan 68,24 µg/ml [5]. Penelitian pada semua bagian tanaman Wualae yang  tumbuh  di  Sulawesi  Tenggara  sebagai  antioksidan belum pernah dilakukan.
Bentuk  pertanggungjawaban  ilmiah  penggunaan tanaman sebagai obat,  selain dilakukan uji aktivitas perlu dilakukan juga uji toksisitas.  Uji toksisitas sangat penting dilakukan sebagai langkah awal parameter keamanan obat sebelum menjadi produk obat yang dapat digunakan pada manusia.  Hal  ini  dikarenakan  setiap  bahan  obat  memiliki potensi bersifat toksik tergantung takarannya dalam tubuh.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  terhadap  radikal  bebas  DPPH  dan toksisitas akut terhadap larva udang ( Artemia salina Leach) menggunakan  metode  BSLT  dari  ekstrak  etanol  buah, daun, batang dan rimpang Wualae ( Etlingera elatior (Jack) R.M Smith).

## 2. Metode

## 2.1 Preparasi dan Ekstraksi
Sampel  (buah,  daun,  batang,  dan  rimpang wualae ) masing-masing   dibersihkan, dicuci setelah itu dipotong-
potong  kecil  secara  terpisah.  Tiap  sampel  dikeringkan kemudian  dihaluskan  menggunakan  pencacah  elektrik. Tiap  serbuk  sampel  dimaserasi  menggunakan  pelarut etanol  selama  3×24  jam.  Filtrat  dari  tiap  sampel  yang diperoleh  dipekatkan  menggunakan  evaporator  hingga diperoleh ekstrak kental.

## 2.2 Identifikasi dan karakterisasi ekstrak
Identifikasi  senyawa  yang  terkandung  di  dalam ekstrak  daun,  bunga,  batang  dan  rimpang Wualae menggunakan  skrining  fitokimia,  yang  terdiri  atas pemeriksaan  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin,  dan steroid.  Karakterisasi ekstrak meliputi penetapan kadar air, kadar abu, kadar sari larut etanol dan kadar sari larut air.

## 2.3 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dengan  nilai Inhibitor  Concentration 50  (IC 50 )    dari  masing  masing sampel.  Sampel  direaksikan  dengan  larutan  DPPH kemudian  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## 2.4 Uji Sitotoksik Akut
Uji  sitotoksik  akut  dilakukan    terhadap  larva  udang Artemia salina Leach yang berumur 48 jam dengan metode BSLT.  Larutan  ekstrak  etanol  buah,  daun,  batang  dan rimpang Wualae masing-masing  dibuat  menjadi  5 konsentrasi, yaitu konsentrasi 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 62,5  ppm  dan  31,25  ppm.  Kontrol  negatif  menggunakan campuran etanol, DMSO, dan air laut. Dilakukan replikasi tiga  kali  dengan  jumlah  total  larva  udang  dalam  tiap konsentrasi  sebanyak  180  ekor.  Pengujian  dilakukan selama dua puluh empat jam, kemudian dihitung nilai LC 50 .

## 3. Hasil dan Pembahasan
Gambar 1. Tanaman wualae (a); buah wualae (b); daun (c); batang (d); dan rimpang (e)
Sampel yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari  Kelurahan  Sambeani,  Kecamatan  Abuki,  Kabupaten Konawe  Selatan  Provinsi  Sulawesi  Tenggara  Masing masing    bagian  tanaman  dibuat  serbuk  simplisia, dimaserasi  lalu  dipekatkan  sehingga  menjadi  ekstrak kental. Diperoleh nilai rendemen buah sebesar 5,1%, nilai rendemen  daun  4,4%,    nilai  rendemen  rimpang  3,5%  dan nilai rendemen batang 1,5%. Tujuan dari perhitungan nilai rendemen  adalah untuk mengetahui persentase perolehan hasil  ekstraksi  sehingga  nantinya  dapat  diketahui  jumlah simplisia  yang  dibutuhkan  untuk  membuat  sejumlah ekstrak kental yang dibutuhkan.
Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstak kental    daun,  buah,  rimbang  dan  akar  tanaman Wualae mengandung  flavonoid  (Tabel  1).  Flavonoid  merupakan senyawa polifenol mempunyai kemampuan untuk menyumbangkan  atom  hidrogen  kepada  senyawa  radikal bebas [6] .  Hal  ini  memperkuat  dugaan  semua  bagian tanaman Wualae memiliki potensi sebagai antioksidan.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol bagian tanaman

## wualae
Sampel Metabolit sekunder Alkaloid Flavonoid Tanin Saponin  Triterpenoid Buah Daun Batang Rimpang + + + + + + + + + + + + - +
+ + + - -
+ Keterangan:  (+) mengandung senyawa yang diuji; (-) tidak mengandung senyawa yang diuji
Semua  ekstrak  kental  dari  bagian  tanaman Wualae memenuhi syarat karakteristik non spesifik, yaitu memiliki kadar air <10% dan kadar abu <7% Kadar air yang rendah membuat  kapang  dan  jamur  tidak  mudah  tumbuh,  serta kadar  abu berada  di  bawah  ambang  batas  berarti  ekstrak tidak tercemar logam.
Tabel 1. Hasil karakterisasi ekstrak etanol bagian tanaman wualae Jenis Karakterisasi Hasil Daun Batang Rimpang Buah Organoleptis Bentuk Kental Kental Kental Kental Warna Hijau Hijau Coklat Merah Tua Bau Khas Khas Khas Khas Kadar Air 9,33 % 5,57 % 1,87 % 5,26 % Kadar Abu 0,25 % 0,41 % 3,15 % 6,28 % Kadar Sari Larut Etanol 47,23 % 48,78 % 40,65 % 61,07 % Kadar Sari Larut Air 23,68 % 23,19 % 36,62 % 41,65 %
Uji  aktivitas antioksidan rimpang, batang, daun, buah Wualae dilakukan secara in vitro dengan metode kuantitatif menggunakan  DPPH  sebagai  radikal  bebas.  Vitamin  C (asam askorbat) dipilih sebagai pembanding,  dikarenakan vitamin  C  termasuk  obat  bebas,  memiliki  harga  yang murah, terjangkau  oleh masyarakat,  dan memiliki khasiat antioksidan yang kuat.
Prinsip pengukuran aktivitas antioksidan  berdasarkan adanya  perubahan  intensitas  warna  ungu  larutan  DPPH menjadi  warna  kuning.  Perubahan  intensitas  warna  ini disebabkan  adanya  peredaman  radikal  bebas,  yakni
a b c d e
elektron tidak berpasangan pada  molekul DPPH  menjadi berpasangan  dengan  atom  hidrogen  yang  dilepaskan  oleh molekul  senyawa  sampel  sehingga  terbentuk  senyawa difenil  pikrilhidrazil  yang  menyebabkan  terjadinya perubahan  warna  DPPH.  Perubahan  warna  ini  akan memberikan perubahan absorbansi pada panjang gelombang
maksimum DPPH menggunakan spektrofotometri UV-Vis sehingga diketahui nilai aktivitas peredaman  radikal  bebas  yang  dinyatakan  dengan  nilai Inhibitory  Concentration (IC 50) [7] .  Pada  penelitian  ini pengukuran dilakukan dengan panjang gelombang 517 nm, karena  panjang  gelombang  ini  merupakan  panjang gelombang maksimum yang memberikan serapan kuat.
Hasil  uji  antioksidan  pada  semua  bagian  tanaman Wualae menunjukkan  bahwa  peredaman  radikal  DPPH meningkat  seiring  dengan  meningkatnya  konsentrasi larutan,  yang  ditandai  dengan  semakin  besarnya  nilai persen  penghambatan.  Nilai  hasil  uji  antioksidan  dapat dilihat  pada  Tabel  3.  Berdasarkan  katagori    Blois [8] , aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  etanol  setiap  bagian tanaman Wualae termasuk katagori  kuat dengan nilai IC 50 terbaik  pada  batang  sebesar  52,345  mg/L,  lalu  rimpang dengan  IC 50 58,638  mg/L,  selanjutnya  IC 50 buah    72,518 mg/L,  dan  IC 50 pada  daun    99,890  mg/L.  Aktivitas antioksidan  setiap  bagian  tanamam Wualae masih  lebih rendah    dibandingkan  dengan  vitamin  C  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 sebesar 3,787 mg/L.
Tabel  3. Aktifitas  antioksidan  bagian  tanaman wualae dan vitamin C
No. Sampel Persamaan Grafik* Nilai IC 50 (mg/L) 1. Buah y = 0,166x + 37,96 R² = 0,998 72,518 2 Daun y = 0,264x + 23,57 R² = 0,981 99,890 3 Batang y = 0,185x + 40,31 R² = 0,982 52,345 4 Rimpang y = 0,168x + 40,09 R² = 0,995 58,638 5 Vitamin C y = 3,405x + 37,10 R² = 0,986 3,787
Tanda  *  adalah  persamaan  regresi  linear  yang  diperoleh  dari grafik konsentrasi sampel (x) dan persen penghambatan (y).
Uji toksisitas akut pada tiap bagian tanaman Wualae menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Larva artemia salina yang digunakan adalah yang berumur 48 jam. Hal ini disebabkan setelah berumur  48 jam, larva udang artemia  salina sudah  dapat  mencerna  makanan karena  mulut  dan  saluran  pencernaannya  telah  terbentuk sempurna,  serta  ketahanan  tubuhnya  telah  meningkat [9 ). Data penelitian sitotoksis akut dianalisis probit menggunakan  aplikasi MiniTab  17  for  Windows dan hasilnya  dapat dilihat pada Tabel 4.
Setelah dilakukan  uji toksisitas akut, diperoleh hasil terjadi  kematian  larva Artemia  salina Leach  setelah diberikan ekstrak etanol buah, daun, batang, dan rimpang Wualae ,  sedangkan    pada  kontrol  negatif  tidak  terjadi kematian  larva Artemia salina Leach, hal ini menunjukkan bahwa  penggunaan  DMSO  sebagai  pelarut  tidak  toksik sehingga  tidak  mempengaruhi  nilai  LC 50 ekstrak  etanol masing masing bagian tanaman Wualae.
Tabel 3. Nilai LC 50 Bagian Tanaman Wualae No Sampel Konsentrasi (µg/mL) % Mortalitas LC 50 (µg/mL) 1. Buah 500 ppm 30 1302.31
250 ppm 26,6 125 ppm 23,3 62,5 ppm 16,6 31,25 ppm 6,6 2. Daun
500 ppm 30 1162.84
250 ppm 26,6 125 ppm 23,3 62,5 ppm 16,6 31,25 ppm 6,6 3. Batang
500 ppm 30 1174.52
250 ppm 26,6 125 ppm 23,3 62,5 ppm 16,6 31,25 ppm 6,6 4. Rimpang 500 ppm 36,6 1074.72
250 ppm 26,6 125 ppm 23,3 62,5 ppm 26,6 31,25 ppm 13,3 5. Kontrol negatif 0 0 0
Nilai  LC 50 ekstrak    buah,  daun,  batang  dan  rimpang Wualae >1000  µg/mL,  sehingga    menurut  katagori toksisitas Hinwood [10] masuk  katagori  sedikit  toksik ( slightly  toxic ).    Semua  bagian  tanaman Wualae dapat dijadikan alternatif bahan baku obat herbal yang berkhasiat antioksidan karena daun, buah, batang dan rimpang Wualae memiliki aktivitas sebagai antioksidan kuat, serta nilai IC 50 lebih kecil dari nilai LC 50 (<10%).
4. Kesimpulan
Semua  bagian  tanaman Wualae memiliki  aktivitas antioksidan  yang  kuat.  Efektifas  antioksidan yang  paling baik terdapat pada bagian batang Nilai IC 50 (52,345 mg/L), selanjutnya    pada  rimpang  (58,638  mg/L),  pada  buah 72,518  mg/L  dan  pada  daun  99,890  mg/L,  dan  semua ekstrak  tergolong  dalam  kategori  sedikit  toksik  ( slightly toxic )

## Ucapan Terima Kasih
Penulis menyampaikan terima kasih kepada Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi  RI melalui  pendanaan  Penelitian  Dasar  Unggulan  Perguruan Tinggi 2017.

## Daftar Pustaka
1. Handajani A, Roosihermiatie B, Maryani H. Faktor-Faktor yang  Berhubungan  Dengan  Pola  Kematian  pada  Penyakit Degeneratif  di  Indonesia, Buletin  Penelitian  Kesehatan , 2010, 13 (1) ;42-53
2. Badarinath  A,  Rao  K,Chetty  CS,  Ramkanth  S,  Rajan  T, Gnanaprakash K., 2010, A Review on In-vitro Antioxidant Methods:  Comparisons,  Correlations,  and  Considerations. International Journal of Pharm Tech Research , 1276-1285.
3. Ayoola  GA,  Folawewo  AD,  Adesegun  SA,  Abioro  OO, Adepoju-Bello  AA,  Coker  HAB.  Phytochemical  and antioxidant screening of some plants of Apocynaceae from South West Nigeria, African Journal of Plant Science , 2008, 2(9) ;124-128.
4. Mandal S, Yadav S, Nema R. Antioxidants: a review. J of Chem and Pharm Res, 2009, 1(1) ;102-104.
5. Maimulyanti  A,  Prihadi,  AR.  Chemical  composition, phytochemical  and  antioxidant  activity  from  extract  of
Etlingera elatior flower from Indonesia, J of Pharmacog and Phytochem , 2015, 3(6) ;233-238.
6. Pietta PG. Flavonoids as Antioxidants, J.Nat. Prod. , 2000, 63(7) ;1035–42
7. Molyneux P. The Use of The Stable Free Radical Diphenyl Picrylhydrazil (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklankarin J. Sci.Technol. , 2004, 26(2) ;211-219.
8. Blois MS. 1958. Antioxidant Determinations By The Use of a Stable Free Radical. Nature , 1958, 18(1) ;1199-1200
9. Reskianingsih.  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Buah Paleria macrocarpa (Scheff) Boerl terhadap Larva Artemia salina Leach  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT), Skripsi ,  Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah, 2014.
10. Hinwood.  Whats  Is  LD 50 and  LC 50 ?, Canadian  centre  for occupational  Health  and  Safety ,  diakses  pada  23  Agustus 2018 <http://www.ccohs.ca/oshanswers/chemicals/LD 50 . html