ISSN-p : 1410-590x ISSN-e : 2614-0063

## Skrining Jamur Tanah Penghasil L-asparaginase dan Aktivitas Antibakterinya Terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Screening of L-asparaginase Producing Soil Fungi and Antibacterial Activity Against Escherichia coli and Staphylococcus aureus
Indah Kurniawati 1 , Purwanto 2,3 , Indah Purwantini 2,3 1 Magister Ilmu Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
2 Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada 3 Pusat Riset Tumbuhan Dan Bahan Alam, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
Corresponding author: Indah Purwantini: Email: indahp@ugm.ac.id Submitted: 24-02-2023 Revised: 09-03-2023 Accepted: 09-03-2023
ABSTRAK Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  beriklim  tropis  yang  memiliki  kelembaban  tinggi sehingga memungkinkan untuk tumbuhnya berbagai tanaman dan mikroorganisme yang baik. Salah satu mikroorganisme yang dapat tumbuh dengan baik di Indonesia adalah jamur. Mikroorganisme ini merupakan produsen yang sangat baik dari enzim hidrolitik, biofuel, asam organik, polisakarida, dan metabolit sekunder  yang dapat dikembangkan sebagai obat  antibiotik, obat  antikanker, agen hipokolesterolemia, imunosupresan, dan lain-lain. Sebanyak 12 jamur berhasil diisolasi dari tanah di Bantul, Merapi dan Gunung kidul. Hasil uji menunjukkan bahwa 7 isolat jamur menghasilkan enzim L-asparaginase  yaitu  PB1,  PB2,  PRB1,  PB4,  PB3,  PRGK2  dan  PGK1,  sedangkan  4  isolat  jamur menunjukkan aktivitas  antibakteri  dengan zona hambat terbesar adalah  isolat  jamur CM sebesar 4,649  mm  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan  sebesar  13,681  mm  terhadap  bakteri Escherichia coli. Kata kunci: jamur; tanah; L-asparaginase; antibakteri
ABSTRACT
Indonesia is one of the countries with a tropical climate that has high humidity which allows for the growth of various plants and microorganisms. One of the microorganisms that can grow well in  Indonesia  and  very  beneficial  to  humans  is  fungi.  Fungi  are  excellent  producers  of  hydrolytic enzymes,  biofuels,  organic  acids,  polysaccharides,  and  secondary  metabolites  which  can  be developed as antibiotics, anticancer drugs, hypocholesterolemic agents, immunosuppressants, and others.  A  total  of  12  fungi  were  isolated  from  the  soil  in  Bantul,  Merapi,  and  Gunung  Kidul.  The screening results showed that 7 fungal isolates (PB1, PB2, PRB1, PB4, PB3, PRGK2, and PGK1) can produced  the  L-asparaginase  enzyme,    while  4  fungal  isolates  (PB3,  CM,  CGK,  and  CB)  showed antibacterial  activity.    CM  isolate  the  most  active  fungus,  exhibited  its  ability  to  inhibit  bacterial growth with diameter clear zone 4.649 mm against Staphylococcus aureus and a 13.681 mm against Escherichia coli.
Keywords: fungi; soil; L-asparaginase; antibacterial

## PENDAHULUAN
Jamur  adalah  mikroorganisme  yang tumbuh baik di negara tropis seperti Indonesia yang  merupakan  penghasil  produk  alami  yang penting  untuk  kesehatan  seperti  enzim hidrolitik,  biofuel,  asam  organik,  polisakarida, dan metabolit sekunder seperti antibiotik, obat antikanker, agen hipokolesterolemia, imunosupresan,  dan  lain-lain  (Sanchez,  2017). Di  antara  metabolit  tersebut,  metabolit  yang selama  ini  dijadikan  sebagai  obat  antikanker adalah  L-asparaginase  (L-ASNase).  Enzim  ini
efektif dalam pengobatan leukemia limfoblastik akut  yang  merupakan  subtipe  yang  paling umum dan menyumbang 75% sampai 80% dari semua  kasus  leukemia  pada  masa  anak-anak. Produk  terapeutik  ini  mengkatalisis  konversi asam  amino  L-asparagin  menjadi  aspartat  dan amonia,  suatu  reaksi  yang  mana  L-ASNase memberikan
aktivitas
antineoplastiknya (Batool dkk, 2016).
Selain  itu,  jamur  juga  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  menjanjikan  sebagai  sumber penemuan antibiotik baru.
Antibiotik
merupakan jenis utama agen antimikroba yang digunakan  untuk  melawan  bakteri,  seperti membunuh atau menghambat bakteri pathogen (Marie  dan  Chisholm-Burns,  2019).  Bakteri patogen merupakan bakteri yang menyebabkan penyakit infeksi, seperti: Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli.  S.aureus merupakan bakteri gram positif penyebab terjadinya infeksi Methicillin-Resistant  Staphylococcus  aureus (MRSA)  dan  merupakan  patogen  utama  yang terus meningkat di negara berkembang seperti Indonesia  (Susanti  dkk.,  2020);  sedangkan E. coli merupakan  bakteri  gram  negatif  yang merupakan  penyebab  resistensi  di  Indonesia (Lestari  dkk.,  2007).  Pada  penelitian  ini dilakukan skrining jamur tanah untuk mengetahui aktivitas  dalam  menghasilkan  L-ASN  dan  sebagai antibakteri.

## METODOLOGI
Bahan
Sampel  tanah,  agar  bakteri,  Czapekdox, Potato Dextrose Agar (PDA) (Himedia), akuades (H 2 O)  (Fakultas  Farmasi  UGM),  antibiotika (kloramfenikol)  (Tokyo  Chemical  Industry), etanol  96%  (Brachem), Nutrient  agar (NA), Nutrient  Broth (NB)  Oxoid), Staphylococcus aureus ATCC  25923, Escherichia  coli ATCC 25922, Larutan NaCl 0,9%.
Alat Autoklaf,  batang  pengaduk,  Bunsen, cawan  petri,  Erlenmeyer,  kapas,  kasa,  kulkas, Laminar  Air  Flow ,  mikropipet,  neraca  analitik, ose,  pipet  ukur,  tabung  reaksi, spreader , pelubang gabus dan seperangkat gelas umum.

## Jalannya Penelitian
Pengumpulan Sampel Sampel  diambil  dari  Pleret,  Srumbung, Segoroyoso RT 04 (Bantul);  Baturan,  Kepurun, Manisrenggo (Merapi); dan Karangsari,
Nglanggran,  Patuk  (Gunung  Kidul).  Secara spesifik, tanah diambil dari sekitar kandang sapi dengan kedalaman sekitar 5-10 cm.
Preparasi sampel
Sebanyak 1 g sampel tanah disuspensikan dalam 10 mL larutan salin steril (larutan NaCl 0,9%) dan dilakukan pengenceran sebanyak  tiga  kali  (10 -3 ).  Diambil  100  µL suspensi  pengenceran  10 -2 dan  10 -3 kemudian diinokulasikan ke permukaan media PDA dalam petri dish secara spread method dan diinkubasi
dalam  inkubator  pada  suhu  25 o C  selama  3-5 hari.
Skrining dan Pemurnian galur jamur penghasil L-ASNase Jamur yang tumbuh di permukaan media PDA  dan  menjadikan  media  pertumbuhan  uji (media  +  asparagin  +  fenol  merah)  menjadi berwarna  merah  diambil  secara  aseptis  dan dipindahkan  ke  dalam petri  dish lain  dengan media yang sama dan diinkubasi pada suhu 25 o C selama 2-3 hari. Untuk memastikan galur jamur penghasil L-ASNase yang diperoleh, jamur yang tumbuh menjadi koloni tunggal pada tahap ini diinokulasikan  kembali  pada  media  Agar  yang mengandung  L-asparagin  dan  indikator  fenol merah.
Skrining aktivitas antibakteri Skrining  dilakukan  dengan  metode  uji kontak langsung atau uji antagonis fungi dengan bakteri  uji.  Potongan  isolat  fungi  dengan diameter 1 cm ditempelkan pada media Nutrient Agar yang  sebelumnya  sudah  diinokulasi dengan  bakteri  uji.  Kemudian  diinkubasi  pada suhu 37 C selama 18-24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengumpulan Sampel
Pengambilan  sampel  tanah  dilakukan pada  tiga  daerah  yang  berbeda,  yaitu  Desa Srumbung,  Kelurahan  Segoroyoso,  Kecamatan Pleret  (Bantul)  di  koordinat  Garis  lintang  - 7 o 89’27”  dan  Garis  bujur  110 o 41’55” pada tanggal  10  Oktober  2022,  Desa  Kepurun, Kecamatan Manisrenggo (Merapi) pada tanggal 12  Oktober  2022  dan  Dusun  Karangsari,  Desa Nglanggran,  Kecamatan  Patuk    di  koordinat 7 o 51’37”S  dan  110 o 30’26”E (Gunung  Kidul) pada tanggal 12 Oktober 2022.
Pengambilan  sampel  dilakukan  di kawasan  yang  dekat  dengan  kandang  sapi dengan  kedalaman  5 – 10  cm  agar  didapatkan jamur tanah yang berhabitat di daerah tersebut. Pada  kedalaman  tersebut  merupakan  lapisan tanah  horizon  O  yang  terbuat  dari  20%  bahan organik  seperti  daun  mati  dan  organisme permukaan,  ranting  dan  pohon  tumbang. Lapisan  ini  berwarna  hitam  atau  coklat tua
karena
kandungan organiknya (Balasubramanian,  2017).  Sampel  tanah  diberi kode B untuk Bantul, M untuk Merapi, GK untuk Gunung Kidul, dan R untuk tanah yang diambil disekitar rabuk, C untuk Media Czapekdox’s dan
P  untuk Potato  Dextrose  Agar (PDA).    Rabuk yang dimaksud dalam hal ini adalah lokasi tanah tempat pembuangan dan pembusukan kotoran hewan  ternak  yang  nantinya  akan  digunakan sebagai pupuk kandang.
Isolasi dan Pemurnian Fungi Tanah Suspensi  tanah  diinokulasikan  pada media  Czapekdox’s  dan  PDA  karena  media kedua tersebut merupakan media umum untuk pertumbuhan jamur. Penggunaan 2 media yang berbeda  digunakan  untuk  membedakan
pertumbuhan  dan  morfologi  jamur.  Beberapa isolat jamur yang berasal dari tanah ini, masing- masing  dapat  dibedakan  melalui  morfologi warna  miselia  dan  sporanya.  Perbedaan morfologi  warna  isolat  jamur  di  atas  dapat dilihat pada Tabel I.
Skrining  dan  Pemurnian  galur  jamur penghasil L-ASNase
Kemampuan isolat jamur dalam menghasilkan enzim L-ASNase diuji pada media yang dimodifikasi dengan penambahan
Tabel I. Morfologi warna isolat jamur tanah Isolat Jamur Gambar Morfologi Isolat Jamur Gambar Morfologi PRGK1 Warna putih, berspora merah muda PB2 Warna putih, berspora putih PRGK2 Warna putih, berspora putih PB3 Warna putih, berspora putih PGK1 Warna putih, berspora putih PB4 Warna putih, berspora putih PGK2 Warna putih, berspora abu CB Warna putih, berspora putih PRB1 Warna putih, berspora putih CGK Warna putih, berspora abu PB1 Warna putih, berspora putih CM Warna putih, berspora abu
asparagin  dan  menggunakan  fenol  merah sebagai  indikator  pH.  Fenol  merah  akan berwarna  kuning  pada  pH  asam  dan  berubah menjadi  merah  muda  pada  pH  basa.  Dengan adanya  perubahan  warna  dari  kuning  menjadi merah  muda  menandakan  bahwa  jamur tersebut  dapat  menghasilkan  enzim  L-ASNase dimana adanya enzim tersebut dapat mengubah asparagin menjadi aspartat dan ammonia yang nantinya  akan  bereaksi  dengan  fenol  merah sehingga pH media menjadi basa. Dari 12 isolat jamur  yang  diperoleh  terdapat  tujuh  isolat jamur  yang  dapat  menghasilkan  enzim  L- ASNase yaitu isolat jamur PB1, PB2, PRB1, PB4, PB3, PRGK2 dan PGK1, seperti pada Tabel II. Penelitian  sebelumnya  menunjukkan terdapat  mikroorganisme  tanah  yang  dapat memproduksi metabolit L-ASNase. Isolasi jamur terhadap  beberapa sampel  tanah  yang diambil dari  beberapa  lokasi  yang  berbeda  di  wilayah Mekkah, Kerajaan Arab Saudi terdapat 20 isolat jamur yang ditemukan, dimana 8 isolat tersebut mampu  menghasilkan  enzim  L-ASNase  dalam jumlah yang tinggi (Baghdadi & Balobaid, 2021). Skrining jamur tanah penghasil L-ASNase juga  dilakukan  di  Brazil.  Hasil  menyatakan bahwa  dari  21  isolat  jamur  yang  diambil  dari sampel tanah  terdapat 19 jamur menunjukkan kemampuan  menghasilkan  enzim  L-ASNase. Dari  penelitian  tersebut  ditemukan  bahwa banyak  spesies  dari  genus Penicillium  sp yang mampu  menghasilkan  L-ASNase,  sedangkan genus  lain  adalah Aspergillus  sp , Fusarium  sp , Aspergillus  terreus , Aspergillus  niger ,  dan Trichoderma sp (Freitas dkk., 2021). Penelitian lain  yang  dilakukan  di  India,  menghasilkan  38 isolat  jamur  yang  diidentifikasi  sebagai Aspergillus sp, Fusarium sp, Penicillum sp, Mucor sp dan Basidiomycetes  sp (Rani  dkk,  2012). Selain  penelitian  tersebut,  di  India  juga dilakukan penelitian tentang jamur penghasil L- ASNase  yang  diisolasi  dari  sampel  tanah  dan tanaman obat oleh Priya dan Subhashini (2022). Hasil menunjukkan bahwa dari 15 isolat jamur tanah  dan 6 jamur endofit,  sebesar  67%  isolat adalah mampu menghasilkan enzim L-ASNase.

## Skrining aktivitas antibakteri
Skrining  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan  cara  melihat  adanya  zona  bening  di sekitar  isolat  jamur  yang  sebelumnya  sudah dilakukan  kultur  bakteri  pada  media.  Skrining ini  digunakan  untuk  mengetahui  adanya aktivitas  penghambatan  pertumbuhan  dari
bakteri S.  aureus dan E.  coli oleh  isolat  jamur. Dari 12 isolat jamur yang diperoleh terdapat 3 isolat jamur yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus yaitu PB3, CGK, dan CM  dan  terdapat  3  isolat  jamur  yang  memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri E. coli yaitu  CGK,  CB  dan  CM.  Hasil  skrining aktivitas antibakteri secara lengkap tersaji pada Tabel III.
Berdasarkan  kategori  Fajeriyati  (2017) dari  hasil  diatas  zona  hambat  isolat  fungi terhadap bakteri S. aureus termasuk dalam zona hambat lemah karena kurang dari 5 mm. Zona hambat  isolat  fungi  terhadap  bakteri E.  coli termasuk  dalam  zona  hambat  lemah  untuk  CB karena kurang dari 5 mm, zona hambat sedang untuk CGK karena memiliki diameter antara 5 – 10 mm, dan zona hambat kuat untuk CM karena memiliki diameter antara 10 – 20 mm. Dari hasil penelitian  tidak  terdapat    fungi  yang  memiliki zona  hambat  sangat  kuat  (lebih  dari  20  mm). Zona  hambat  terhadap  bakteri S.  aureus terbesar  adalah  isolat  jamur  CM  dengan  rata- rata diameter zona hambat sebesar 4,649 mm, sedangkan  zona  hambat  terkecil  adalah  PB3 dengan rata-rata diameter zona hambat sebesar 1,333 mm. Zona hambat terhadap bakteri E. coli terbesar  adalah  isolat  jamur  CM  dengan  rata- rata diameter zona hambat sebesar 13,681 mm, sedangkan  zona  hambat  terkecil  adalah  CB dengan rata-rata diameter zona hambat sebesar 2,498 mm. Berdasarkan kategori Marie A (2019) isolat jamur CGK dan CM merupakan antibakteri spektrum  luas  karena  menghambat  atau membunuh berbagai jenis bakteri ( E. coli dan S. aureus), sedangkan  isolat  jamur  PB3  dan  CB merupakan antibakteri spektrum sempit karena hanya membunuh spesies bakteri tertentu.
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan banyak
mikroorganisme tanah yang mempunyai  aktivitas  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Isolast  jamur  yang diambil dari Taman Botani, Shah Alam, Malaysia memiliki aktivitas antibakteri terhadap Bacillus subtilis dengan nilai MIC 64 µg/mL dan terhadap E.  coli dengan  nilai  MIC  32  µg/mL  (Wibowo, 2017). Hasil penelitian Rosyadi (2022) bahwa 7 ekstrak  memiliki  aktivitas  antibakteri,  dengan persen  inhibisi  tertinggi  kode  isolat  IS-IB-T2 sebesar  66,5  ±  1,1%  dan  terendah  pada  kode isolat  IS-IB-B2  sebesar  12,2  ±  0,7%  pada konsentrasi 100 µg/mL.
Sampel  tanah  yang  diambil  dari  daerah Bantul  terdapat  6  isolat  jamur,  diantaranya
terdapat  5  isolat  jamur  tumbuh  di  media  PDA yaitu PB1, PB2, PB 3, PB, dan PRB1. Dari kelima isolat jamur semua memiliki aktivitas L-ASNase,
sedangkan  aktivitas  sebagai  antibakteri terdapat 1 isolat yaitu PB 3 terhadap bakteri S. aureus dan terdapat 1 isolat jamur yang tumbuh
Tabel II. Konfirmasi pembentukan zona merah muda oleh L-asparaginase
No Nama Gambar Media + asp Media + asp + FM Media + FM
1 PB1 2 PB2 3 PRB1 4 PB4 5 PB3 6 PRGK2 7 PGK1
Keterangan : Asp = asparagine; FM = fenol merah; media yang digunakan adalah PDA. Hasil skrining aktivitas L-ASNase dalam media Czapekdox tidak ada yang mempunyai aktivitas tersebut
di  media  Czapekdox  yaitu  CB  yang  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri E.coli.
Sampel  tanah  yang  diambil  dari  daerah Merapi terdapat 1 isolat jamur yang tumbuh di media  Czapekdox,  yaitu  CM  yang  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri S.aureus maupun E.coli. Sampel  tanah  yang diambil  dari  daerah  Gunung  Kidul  terdapat  5 isolat jamur, 1 isolat jamur yang tumbuh pada media  Czapekdox  yaitu  CGK  yang  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri S.aureus dan E.coli ,  dan  4  isolat  jamur  yang tumbuh di media PDA, yaitu PGK 1 dan PRGK2 yang  memiliki  aktivitas  L-ASNase,  PRGK1  dan PGK 2 yang tidak memiliki aktivitas. Jamur yang memiliki prospek untuk dikembangkan adalah isolat jamur PRGK2  karena  lebih  memerahkan media,  sedangkan  dalam  aktivitas  sebagai antibakteri  adalah  isolat  CM  karena  memiliki zona hambat yang lebih besar dari isolat lain.

## KESIMPULAN
Dari  sampel  tanah  di  Yogyakarta  telah berhasil  diisolasi  12  jamur,  7  diantaranya mampu  menghasilkan  enzim  L-ASNase  dan  3 isolat  jamur  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri. Jamur  dengan aktivitas antibakteri tertinggi adalah isolat CM dengan zona hambat sebesar  4,649  mm  terhadap  bakteri S.  aureus dan sebesar 13,681 mm terhadap bakteri E. coli. Isolat  jamur  PRGK2  dan  CM  mempunyai prospek untuk dikembangkan sebagai penghasil L-ASNase dan antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Baghdadi,  A.  M.,  &  Balobaid,  A.  K.  (2021). Isolation  and  Molecular  Identification  of Fungi Producing of L-asparaginase Isolated from Makkah Region Soil. World Journal of Environmental Biosciences , 10 (2), 42 – 48. Balasubramanian,  A . (2017). Characteristics  of Soil Profile. Centre for Advanced Studies in Earth  Science.  University  of  Mysore, Mysore.
Batool, T., Makky, E. A., Jalal, M., & Yusoff, M. M. (2016).  A  Comprehensive  Review  on  l- Asparaginase and Its Applications. Applied Biochemistry  and  Biotechnology , 178 (5),
900 – 923. Fajeriyati,  N.  (2017).  (Antibacterial  Activity  of Ethanol  Extract  of  Kencur  Rhizome ( Kaempferia galanga L.) in Bacillus subtilis and Escherichia  coli ). Journal  of  Current Pharmaceutical Sciences. 1(1).
Fanida,  Z.  M.,  &  Ardiningsih,  P.  (2019).  Isolasi Dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Jamur (Fungi)  Tanah  Gambut  Pontianak. Jurnal Kimia Khatulistiwa. 7.
Freitas,  M.,  Souza,  P.,  Cardoso,  S.,  Cruvinel,  K., Abrunhosa,  L.  S.,  Ferreira  Filho,  E.  X., Inácio,  J.,  Pinho,  D.  B.,  Pessoa,  A.,  &  O. Magalhães,  P.  (2021).  Filamentous  Fungi Producing  l-Asparaginase  with  Low Glutaminase  Activity  Isolated  from Brazilian  Savanna  Soil. Pharmaceutics ,
13 (8), 1268.
Hasanin,  M.  S.  (2020).  Eco-friendly,  economic fungal universal medium from watermelon
Tabel III. Diameter zona hambat (mm) isolat jamur terhadap bakteri uji
Isolat Staphylococcus aureus Escherichia coli 1 2 3 Rata-rata 1 2 3 Rata-rata PRGK1 - - - - - - - - PRGK2 - - - - - - - - PGK1 - - - - - - - - PGK2 - - - - - - - - PRB1 - - - - - - - - PB1 - - - - - - - - PB2 - - - - - - - - PB3 2 - 2 1,333 - - - - PB4 - - - - - - - - CB - - - - 3,247 - 4,247 2,498 CGK 9,4 - - 3,133 3 4,333 11 6,111 CM 6,473  7,473 - 4,649 13,1 11,783 16,16 13,681
Keterangan : Diameter tidak termasuk diameter plug
peel  waste. Journal  of  Microbiological Methods , 9.
Lestari,  E.  S.,  Severin,  J.  A.,  Filius,  P.  M.  G., Kuntaman,  K.,  Duerink,  D.  O.,  Hadi,  U., Wahjono, H., Verbrugh, H. A., & On behalf of the  study  group  Antimicrobial  Resistance in  Indonesia:  Prevalence  and  Prevention (AMRIN). (2007). Antimicrobial resistance among  commensal  isolates  of Escherichia coli and Staphylococcus  aureus in  the Indonesian  population  inside  and  outside hospitals. European  Journal  of  Clinical Microbiology  &  Infectious  Diseases , 27 (1), 45 – 51.
Marie A & Chisholm-Burns. (2019). Pharmacotherapy  Principles  and  Practice, Fifth Edition . http://www.vlebooks.com/ vleweb/product/openreader?id=none&is bn=9781260019452
Priya,  S.  R.,  &  Subhashini,  A.  (2022). Characterization  and  Optimization  of Fungal L-Asparaginase Isolated From  Soil and  Medicinal  Plants. Journal  of  Pure  and Applied Microbiology , 16 (1), 453 – 459.
Rani,  S.  A.,  Sundaram,  L.,  &  Vasantha,  P.  B.
(2012).  isolation  and  screening  of  l- asparaginase  producing  fungi  from  soil samples. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 4 (1), 4. Rosyadi,  A.,  Triatmoko,  B.,  &  Nugraha,  A.  S.
(2022). Isolation of Estuary Soil Fungi and Screening  Antibacterial  Activity  Against Staphylococcus  aureus . Indonesian  Journal of Pharmaceutical Science and Technology ,
9 (1), 16.
Susanti,  M.  A.,  Mahardhika,  G.  S.,  Rujito,  L., Darmawan, A. B., & Anjarwati, D. U. (2020). The  Examination  of  mecA  gene  in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and inappropriate antibiotic uses of healthcare workers and communities in Banyumas. Jurnal Kedokteran  Dan  Kesehatan  Indonesia , 11 (3), 257 – 265. Wibowo, M. S ., Julianti, E., Radzali, M. D. (2017). Isolation and Antibacterial Activity of Soil- Derived Fungi From Taman Botani Negara, Shah  Alam,  Malaysia. Acta  Pharmaceutica
Indonesia, 42(1),
18-24.