JBP Vol. 18, No. 3, December 2016— Ni Putu Puniari Eka Putri

## PENGARUH TANAH DAN AIR LAUT TERHADAP KUALITAS DNA DARI OTOT PSOAS JENAZAH MELALUI METODE STR
EFFECT OF SOIL AND SEA WATER TO QUALITY OF PSOAS MUSCLE DNA CORPSE WITH STR METHOD
Ni Putu Puniari Eka Putri 1* , Ahmad Yudianto 1**
1 Program Studi S2 Ilmu Forensik, Sekolah Pascasarjana, Universitas Airlangga, Surabaya e-mail: * puniariekaputri@yahoo.com, ** yudi4n6sby@yahoo.co.id

## Abstrak
DNA  merupakan  materi  genetik  yang  berfungsi  untuk  mengatur  aktifitas biologis  seluruh bentuk  kehidupan.  Jaringan  otot  psoas  jenazah  merupakan salah  satu  sumber DNA  yang  dapat digunakan  sebagai  barang  bukti  dalam  bidang  forensik.  Jenazah  bisa  ditemukan  diberbagai tempat  seperti  terkubur  di  dalam  tanah  dan  tenggelam  di  dalam  air.  Hal  ini  disebabkan  oleh pelaku  tindak  kriminal  yang  ingin  menghilangkan  jejak  atau  barang  bukti  dengan  mengubur jenazah  di  dalam  tanah  maupun  menenggelamkan  jenazah  di  dalam  air.  Biasanya  kondisi jaringan otot psoas  jenazah  sebagai barang bukti di TKP (tempat kejadian perkara) ditemukan sudah  terpapar  oleh  media  tanah  dan  air  dalam  lama  waktu  tertentu,  sehingga  dapat mempengaruhi  hasil  ekstraksi  dan  analisis  DNA.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  media  tanah dan air laut  terhadap kualitas  DNA dari jaringan otot psoas   jenazah dengan  lama  waktu  paparan  yaitu  hari  ke-1,  7,  dan  20  hari  terhadap  lokus  STR  D13S317  dan D18S51. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa kualitas DNA dari jaringan otot psoas jenazah pada  media  tanah  yang  dikubur  dan  air  laut  yang  ditenggelamkan  dalam  lama  waktu  paparan hari ke-1, hari ke-7, dan hari ke-20 masih dapat diekstraksi, namun terjadi penurunan kadar dan kemurnian DNA secara signifikan.
Kata kunci: air laut, kualitas DNA, STR, tanah.

## Abstract
DNA is the genetic material that serves to regulate the biological activity all of forms in life. Psoas muscle tissue corpse is one source of DNA that can be used as evidence in the forensic field.  The  bodies  can  be found  everywhere, such  as  buried  in  the  soil    and  drown  in  the  water. This is caused by criminals who want to eliminate any traces or evidence to bury the corpse in the soil  or  drown  in  the  water  bodies.  Usually  the  psoas  muscle  tissue  condition  of  the  bodies  as evidence in a crime scene were found to have been exposed by the soil and water media in a long time,  so  it  can  affect  the  results  of  DNA  extraction  and  DNA  analysis.  This  study  aimed  to determine the effects of soil and sea water media on the quality of the DNA from the bodies with the psoas muscle tissue long exposure time day  1, day  7, and day 20  of the STR loci D13S317 and D18S51. These results indicate that the quality of the DNA of muscle tissue psoas bodies in media soil burial and sea water in a submerged long exposure time day 1, day 7, and day 20 still can be extracted, but decreased levels and DNA purity significantly.
. Keywords: DNA quality, sea water, soil, STR.
1. PENDAHULUAN
Kasus  kematian  seseorang  sering terjadi  akhir-akhir  ini  dan  telah  menjadi fenomena yang tidak lazim lagi dikalangan masyarakat  luas. Jenazah  bisa  ditemukan diberbagai  tempat  seperti  terkubur  di  dalam tanah  dan  tenggelam  di  dalam  air.  Hal  ini disebabkan  oleh  pelaku  tindak  kriminal  yang ingin  menghilangkan  jejak  atau  barang  bukti dengan  mengubur  jenazah  di  dalam  tanah maupun  menenggelamkan  jenazah  di  dalam air  (Laupa,  2013).  Selama  proses  identifikasi muncul  beberapa  pertanyaan  seperti  kapan, dimana  dan  bagaimana  jenazah  tersebut  bisa meninggal akan mampu terjawab (Slone et al., 2004).  Hal  ini  akan  berkaitan  dengan keterangan/alasan  pelaku  pembunuhan  yang terjadi  di  TKP  (tempat  kejadian  perkara), karena  penentuan  waktu  kematian  sangat penting untuk menentukan situasi terakhir dari jenazah  tersebut  (Isfandiari,  2009;  Miller and Naples, 2002).
Beberapa metode telah dikembangkan untuk mengungkapkan misteri kasus penemuan  jenazah.  Salah  satunya  adalah dengan  pengujian  DNA  forensik  (Kreeger et al., 2003).  Semua  bahan  biologis  tubuh  dapat digunakan  sebagai  sumber  DNA  misalnya darah,  saliva  (bagian  epitel  mukosa  mulut), urine,  sperma,  kulit,  rambut,  gigi,  tulang  dan organ lunak/kuat lainnya (Raven and Johnson, 2002).  Pada  penelitian  ini  menggunakan jaringan  otot  psoas  jenazah,  karena  jenazah yang membusuk dapat diambil bahan biologisnya berupa jaringan dari tubuh jenazah tersebut.
Fadillah  (2009),  menyatakan  DNA dapat diperoleh dari inti sel yang disebut DNA kromosomal  dan  dari  mitokondria  yang disebut mtDNA yang sifatnya tidak berkorelasi  dengan  DNA  inti.  Pada  penelitian ini  digunakan  pola  polimorfisme  DNA  inti, karena  sangat  banyak  dimanfaatkan  sebagai penentuan identitas individu yaitu
menggunakan Short  Tandem  Repeats (STR). Short  Tandem  Repeats (STR)  merupakan suatu uncoding  region yang  terdapat  pada DNA  inti  dan  terdiri  dari  2-7  urutan nukleotida yang tersusun berulang. Ukuran fragmen STR biasanya tidak lebih dari 500bp, oleh  karena  itu  STR  dapat  diamplifikasi
dengan  menggunakan  jumlah  DNA  templat yang  relatif  sedikit  serta  dapat  digunakan untuk  menganalisa  sampel  DNA  yang  sudah terdegradasi,  dengan  menggunakan  13-20 lokus STR identitas seseorang dapat ditentukan  (Butler,  2006).  Dipilihnya  kedua buah  lokus  STR:  D13S317  dan  D18S51 tersebut, karena memiliki variasi pasangan alel yang  tinggi  dan  kemampuan  identifikasi individu  yang  cukup  baik  (Budowle et  al., 2000).
Pada  penelitian  ini  menggunakan perbedaan  kurun  waktu  pada  hari  ke-1,  hari ke-7  dan  hari  ke-20.  Pemilihan  perbedaan kurun  waktu  tersebut,  karena  pada  hari  ke-1 adalah  awal  dimulainya  proses  identifikasi  di TKP (Sampurna, 2000). Pada hari ke-7 adalah batas  waktu  paling  lambat  (maksimal)  bagi penyidik/kepolisian  (Polri)  dalam  melakukan proses identifikasi di TKP setelah dilaksanakan pemeriksaan pendahuluan. Ini sesuai  dengan  Peraturan  Kepala  Kepolisisan Negara  Republik  Indonesia  Nomor  14  Tahun 2012  tentang  Manajemen  Penyidikan  Tindak Pidana  (Nugroho,  2013).  Kurun  waktu  pada hari  ke-20  merupakan  masa  penahanan tersangka berdasarkan kegiatan penyidik yang sudah  dilakukan,  namun  apabila  perkara belum  memuat  berkas-berkas  secara  lengkap, maka  dapat  diperpanjang  untuk  proses penyidikan  di  TKP  paling  lama  40  hari  atas izin jaksa penuntut umum (Marpaung, 2009).
Pemecahan  suatu  kasus  kejahatan akan menyertakan proses penyidikan didalamnya,  dimana  observasi  terhadap  bukti fisik  dan  interpretasi  dari  hasil  analisis (pengujian)  barang  bukti  merupakan  alat utama  dalam  penyidikan  tersebut  (Anderson, 2000). Pada penelitian ini menggunakan DNA untuk  mengungkapkan  kasus  kematian  dari jenazah yang membusuk. Pembusukan (dekomposisi)  pada  jenazah  dipengaruhi  oleh kedua  media  yaitu  air  dan  tanah.  Penggunaan media  air  dan  tanah  sangat  berpengaruh  pada proses  pembusukan  jenazah  (Gennard,  2007). Penelitian ini menggunakan media air laut dan tanah  regosol  yang  mempengaruhi  proses pembusukan jenazah. Media air laut dan tanah regosol merupakan media yang selalu menjadi obyek utama setiap kasus di Indonesia, seperti jatuhnya pesawat udara AirAsia di tengah laut
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Kalimantan  dan  pembunuhan  Angelin  yang terkubur dalam tanah di Sanur, Bali.
Penelitian  tentang  DNA  forensik sudah  banyak  dilakukan  di  daerah  tropis, namun penelitian tentang pemeriksaan kualitas DNA  dari  jaringan  otot  psoas  jenazah  pada media tanah regosol dan air laut masih jarang dan  perlu  dilakukan.  Penelitian  ini  nantinya akan memberikan informasi untuk kepentingan  forensik,  yaitu  dapat  mengetahui pengaruh  media  air  dan  tanah  terhadap  hasil uji  kualitas  DNA  dari  jaringan  otot  psoas jenazah  yang  mengalami  pembusukan  di dalam tanah regosol dan di dalam air laut.

## 2. DNA ( Deoxyribonucleic Acid )
Semua  organisme,  baik  prokariot  dan eukariot tersusun atas sel. Sel merupakan unit struktural dan fungsional dari organisme yang ditemukan  pertama  kali  oleh  peneliti  Inggris bernama  Robert  Hooke.  Sel  eukariot  jauh lebih  kompleks  daripada  prokariot,  karena  sel eukariot  memiliki  membran  dan  organel tertentu  yang  tidak  dimiliki  sel  prokariot.  Di dalam sebuah sel juga terdapat materi genetik, tepatnya terletak pada inti sel dan mitokondria pada  hewan  atau  kloroplas  pada  tumbuhan. Materi genetik dapat berupa Deoxyribonucleic Acid (DNA)  atau Ribonucleic  Acid (RNA) (Campbell et al., 2002).
Deoxyribonucleic  Acid (DNA)  adalah asam  nukleat  yang  membawa  informasi genetik  dari  generasi  ke  generasi  selanjutnya. Deoxyribonucleic Acid (DNA) diisolir pertama  kali  tahun  1869  oleh  peneliti  Jerman bernama  Friedrich  Miescher,  yang  pada  awal penamaannya  disebut  nuklein  karena  terdapat di  dalam  nukleus.  Pada  perkembangan selanjutnya,  tahun  1880,  Fischer  menemukan adanya basa purin dan pirimidin yang terdapat dalam asam nukleat. Dilatarbelakangi penemuan  Fischer,  tahun  1910,  Kossel menemukan  adenin  dan  guanin  pada  purin serta sitosin dan timin pada pirimidin. Seiring dengan  berjalannya  waktu,  penemuan  yang berhubungan dengan DNA semakin berkembang, seperti tahun 1910 ditemukannya 5 gula karbon ribose pada molekul DNA oleh Levine.  Tahun  1947,  Chargaff  menyatakan bahwa  molekul  DNA  terdiri  dari  bagian  yang sama dari basa purin dan pirimidin, adenin dan timin  serta  sitosin  dan  guanin  terdapat  dalam
jumlah  yang  sama.  Tahun  1953,  Watson  dan Crick  menemukan  bahwa  DNA  berbentuk double  helix dan  menunjukkan  berbagai aktifitas  dari  molekul  DNA  (Campbell et  al., 2002; Suryo, 2005; Suryo, 2011).
Letak  DNA  terdapat  pada  nukleus, mitokondria  pada  hewan  dan  terdapat  juga pada  kloroplas  tumbuhan.  Ada  beberapa perbedaan  antara  DNA  tersebut,  yaitu:  DNA nukleus  yang  disebut juga DNA  kromosomal, berbentuk benang lurus (linear) tidak bercabang  dan  berasosiasi  sangat  erat  dengan protein  histon,  sedangkan  DNA  mitokondria serta  kloroplas  berbentuk  melingkar  (sirkular) dan  tidak  berasosiasi  dengan  protein  histon. Deoxyribonucleic  Acid (DNA)  mitokondria dan  kloroplas  memiliki  ciri  khas,  yaitu  hanya mewariskan  sifat-sifat  yang  berasal  dari  ibu, sedangkan  DNA  nukleus  memiliki  pola pewarisan  sifat  dari  kedua  orang  tua  (Raven and Johnson,  2002;  Klug and Cummings, 2003).  Ukuran  molekul  DNA  setiap  spesies berbeda satu dengan lainnya. Pada mitokondria  molekul  DNA  berukuran  5µ  dan molekul DNA pada bakteri berukuran 1,4mm. Molekul  DNA  pada  sel  yang  berinti  sejati berukuran  sekitar  50-60µ  menurut  Solari, sedangkan  menurut  Cairus  sekitar  500µ  dan 1,6-1,8mm  menurut  Huberman  dan  Riggs (Suryo, 2005).
Menurut Suryo (2011), molekul DNA berbentuk double  helix yang  terdiri  atas susunan  kimia  yang  terdiri  atas  tiga  macam molekul,  yaitu:  gula  pentosa  yang  dikenal sebagai  deoksiribosa,  asam  fosfat  dan  basa nitrogen  yang  terdiri  atas  basa  purin  dan pirimidin. Menurut Lewis (2003), purin terdiri atas  adenin  (A)  dan  guanin  (G),  sedangkan pirimidin  dibedakan  menjadi  timin  (T)  dan sitosin  (S).  Adenin  hanya  akan  berpasangan dengan  timin  dan  guanin  hanya  berpasangan dengan sitosin. Adenin dan timin dihubungkan oleh  dua  atom  hidrogen,  sedangkan  guanin dan  sitosin  dihubungkan  dengan  tiga  atom hidrogen.
Tes  DNA  dilakukan  dengan  cara mengambil  DNA  dari  kromosom  sel  tubuh (autosom)  yang  mengandung  STR  ( short tandem repeats ). STR inilah yang bersifat unik karena berbeda pada setiap orang. Perbedaannya  terletak  pada  urutan  pasang basa  yang  dihasilkan  dan  urutan  pengulangan
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
STR.  Pola  STR  ini  diwariskan  dari  orang  tua (Dauber et al., 2003; Di Lonardo et al., 2004). Aplikasi  teknik  ini  misalnya  pada  tes  DNA untuk  paternitas  (pembuktian  anak  kandung), yaitu  tes  DNA  untuk  membuktikan  apakah seorang  anak  benar-benar  adalah  anak kandung  dari  sepasang  suami  dan  isteri.  Cara memeriksa  tes  DNA  dilakukan  dengan  cara mengambil  STR  dari  anak  (Dauber et  al., 2012).
Fenomena pembuktian kebenaran hubungan  antara  orang  tua  dan  anak  akhir- akhir  ini  sering  terjadi  di  masyarakat. Beberapa kasus yang memerlukan pembuktian paternitas diantaranya tentang ragu ayah, hasil buah  perselingkuhan,  kasus  bayi  tertukar,  dan anak  dari  kasus  pemerkosaan  (Junitha,  2012). Pada  setiap  kasus  tersebut  membutuhkan kepastian  dari  orang  tua  si  anak.  Hal  tersebut dapat  dibuktikan  melalui  tes  paternitas,  yaitu dengan  tes  DNA  sehingga  dapat  memberikan bukti  yang  akurat  hubungan  biologis  antara orangtua dan anak (Ma et al ., 2006).
Di  laboratorium  akan  dianalisa  urutan untaian  STR  ini  apakah  urutannya  sama dengan  seseorang  yang  dijadikan  pola  dari seorang anak. Urutan tidak hanya satu-satunya karena  pemeriksaan  seorang  anak  ditemukan bahwa  pada  kromosom  nomor  tiga  memiliki urutan kode AGACT dengan pengulangan dua kali.  Bila  ayah  atau  ibu  yang  mengaku  orang tua  kandungnya  juga  memiliki  pengulangan sama pada nomor kromosom yang sama, maka dapat  disimpulkan  antara  dua  orang  itu memiliki  hubungan  keluarga  (Goodwin et  al., 2004).  Seseorang  dapat  dikatakan  memiliki hubungan  darah  jika  memiliki  urutan  dan pengulangan  setidaknya  pada  16  STR  yang sama  dengan  keluarga  kandungnya,  maka kedua  orang  yang  dicek  memiliki  ikatan saudara  kandung  atau  hubungan  darah  yang dekat.  Jumlah  ini  cukup  kecil  dibandingkan dengan  keseluruhan  ikatan  spiral  DNA  dalam tubuh kita yang berjumlah miliaran (Krenke et al., 2002).

## 2.1. Ekstraksi DNA
Ekstraksi  DNA  merupakan  suatu kegiatan  untuk  memisahkan  DNA  dari kandungan  lain  dari  sebuah  sampel  sehingga didapatkan DNA murni. DNA yang diekstraksi  dapat  bersumber  dari  darah,
sperma,  tulang,  gigi,  rambut,  air  liur,  urine, feses, atau kuku (Butler, 2005). Ada beberapa metode ekstraksi DNA yang umum digunakan,  namun  prinsip  dasar  dari  semua metode  tersebut  sama  yakni  memisahkan protein  serta  materi-materi  lainnya  dari molekul  DNA.  Selain  itu  langkah-langkah dasar  pada  ekstraksi  DNA  adalah,  pertama pelisisan  sel  untuk  melepas  molekul  DNA, kedua  memisahkan  molekul  DNA  dari  materi seluler  lainnya,  ketiga  pengisolasian  DNA sehingga  memungkinkan  untuk  dilakukan amplifikasi Polymerase Chain Reaction (PCR) (Butler et al., 2003; Lapian, 2008).
Beberapa  metode  yang  umum  dalam ekstraksi  DNA  terutama  pada  laboratorium forensik  diantaranya  adalah  metode fenol- kloroform ,  metode chelex dan  metode  FTA ( Flitzco/Flinder Technology Agreement ) (Mullen et  al., 2009).  Prosedur  dari  tiap metode  juga  bisa  bervariasi  tergantung  dari mana sumber DNA akan diekstraksi. Misalnya,  sampel  darah  dapat  diperlakukan berbeda  dengan  sampel  noda  darah  atau sampel tulang (Butler and Hill, 2012).
Metode  yang  paling  umum  dan  telah dikenal  sejak  lama  dalam  ekstraksi  DNA adalah  metode  organik  atau  metode fenol- kloroform (Sambrook and Russel,  2001). Beberapa  bahan  kimia  digunakan  dalam metode  ini  diantaranya sodium  dedosilsulfat (SDS) dan proteinase-K yang digunakan untuk menghancurkan membran sel dan protein yang menyelimuti molekul DNA di dalam kromosom.  Selanjutnya,  campuran fenol- kloroform ditambahan  untuk  memisahkan protein  dari  DNA  itu  sendiri.  Proses berikutnya adalah sentrifugasi yaitu pemisahan  molekul  DNA  dengan  molekul lainnya  dengan  memberikan  gaya  sentrifugal sehingga  molekul-molekul  akan  terpisah berdasarkan  berat  jenisnya.  Metode  ini memiliki  beberapa  kelemahan  diantaranya memakan waktu yang lama sampai mendapatkan  DNA  murni,  menggunakan banyak zat-zat kimia berbahaya, dan memerlukan  proses  pemindahan  sampel  dari satu  mikrotube  ke mikrotube lain  berkali-kali sehingga  meningkatkan  resiko  kontaminasi DNA dari zat-zat lain (Butler and Hill, 2012). Salah satu metode yang dapat menjadi alternatif  dan  tidak  mahal  adalah  metode
chelex .  Metode  ini  menggunakan  suspensi resin pengikat ion yang langsung dicampurkan ke  dalam  sampel.  Suspensi  resin  pada chelex merupakan  larutan  difinil  benzena  yang mengandung  ion  imino  diasetat  yang  dapat mengikat  ion-ion  metal  seperti  magnesium dengan mengikat magnesium, enzim penghancur  DNA  akan  tidak  aktif  sehingga molekul  DNA  akan  tetap  terlindungi  (Rudin and Crim,  2002).  Hasil  yang  didapat  dari metode  ini  merupakan  DNA single  strand, sehingga  perlu  dilanjutkan  dengan  analisis PCR. Metode ini sangat baik digunakan untuk analisis  PCR,  karena  dapat  menghilangkan inhibitor  PCR  serta  hanya  memerlukan  satu mikrotube yang kemungkinan adanya kontaminasi  sangat  kecil.  Selain  itu,  metode chelex tidak  memerlukan  sampel  dalam jumlah  besar  dan  langkah  kerja  yang  banyak dibandingkan  dengan  metode  organik  (Butler and Hill, 2012).
Flitzco atau Flinder  Technology Agreement (FTA)  merupakan  sebuah  kertas yang mengandung empat substansi kimia yang dapat melindungi molekul DNA dan mencegah  pertumbuhan  bakteri.  Sampel  yang diletakkan  pada  kertas  FTA  akan  mengalami lisis  pada  membran  sel  dan  mengering. Selanjutnya, setitik sampel dari kertas diambil dan  dimasukkan  ke  dalam mikrotube yang sudah  terisi  dengan  reagen  penjernih  khusus dari  inhibitor  PCR  (Butler and Hill,  2012).
Kertas  FTA  yang  sudah  berisi  sampel  dapat disimpan  pada  suhu  ruangan  dalam  waktu yang  cukup  lama  sampai  delapan  tahun  dan menghasilkan hasil PCR dengan kualitas yang baik (Mullen et al ., 2009).

## 2.1.1. Amplifikasi DNA
Amplifikasi  DNA  merupakan  suatu proses  perbanyakan  DNA  sehingga  dapat dianalisis secara kualitatif. Perbanyakan DNA dilakukan  dengan  teknik  PCR,  yaitu  suatu proses  enzimatis  pada  suatu  DNA  yang spesifik  yang  direplikasi  secara  berulang- ulang  sehingga  didapatkan  banyak  kopian urutan  DNA  yang  sama.  Proses  PCR mencakup proses pemanasan dan pendinginan berulang  yang  dilakukan  sampai  sekitar  30 siklus  (Stansfield et  al., 2002).  Ketika pemanasan, ikatan hidrogen pada polinukleotida  akan  terputus,  sedangkan  pada
pendinginan  DNA  akan  membentuk  kembali pasangan  basanya,  sehingga  dalam  proses anneling ketika  suhu  diturunkan  dalam  mesin PCR,  maka  primer  akan  menempel  pada template DNA untuk suhu optimalnya (Suryo, 2011).
Amplifikasi  adalah  suatu  penerapan bioteknologi untuk memperbanyak DNA pada kromosom.  DNA  dapat  diperbanyak  hingga ratusan  bahkan  ribuan  kali.  Amplifikasi  dapat dilakukan  dengan  berbagai  metode,  salah satunya  dengan  metode  PCR  ( Polymerase Chain Reaction ) yang ditemukan Karry Mullis pada  tahun  1983.  Amplifikasi  dengan  metode PCR  membutuhkan  primer.  Primer  adalah sekuen  oligonukleotida  (umumnya  10-20 nukleotida)  khusus  yang  akan  berikatan dengan  DNA  pada  daerah  yang  spesifik (Sujana, 2007).
Keberhasilan amplifikasi dengan metode  PCR  dipengaruhi  oleh  kesesuaian primer dengan bahan ekstraksi dan optimalisasi PCR. Apabila primer tidak sesuai dengan  bahan  ekstraksi  akan  menyebabkan daerah  lain  (bukan  daerah  sasaran)  yang teramplifikasi  atau  bahkan  tidak  ada  daerah yang  diamplifikasi.  Optimalisasi  PCR  juga diperlukan  untuk  menghasilkan  pita  DNA yang diinginkan. Optimalisasi ini menyangkut suhu  denaturasi  dan  penempelan  ( anneling ) DNA dalam mesin PCR (Yuwono, 2006).

## 2.2. Proses pembusukan
Pembusukan  adalah  salah  satu  tanda pasti dari kematian, proses kerusakan jaringan akibat bakteri yang berasal dari usus, terutama Clostridium welchii dan proses autolisis akibat kerja  digestif  enzim-enzim  tertentu  yang dilepaskan  sel  setelah  kematian.  Proses pembusukan  dipengaruhi  oleh  faktor  interna dan eksterna. Faktor interna yang berpengaruh antara lain umur, sebab kematian dan keadaan jenazah.  Sedangkan,  faktor  eksterna  yang berpengaruh  adalah  mikroorganisme,  suhu  di sekitar  jenazah,  kelembaban  udara  dan medium  tempat  jenazah  berada  (Wahyu, 2009).
Tanda-tanda pembusukan jenazah secara klinis yang mulai tampak pada 24  - 48 jam  kematian,  yaitu  warna  kehijauan  pada perut kanan bawah, pelebaran vena superfisial, muka  bengkak,  perut  mengembung,  skrotum
atau vulva membengkak, kulit
menggelembung  atau  melepuh,  bola  mata melunak,  lidah  dan  bola  mata  menonjol, dinding  perut  dan  dada  pecah,  kuku  dan rambut  lepas,  organ-organ  membusuk  dan hancur  (Haefner et  al., 2004).  Pertumbuhan dan  perkembangan  setiap  organisme  tentu dipengaruhi  oleh  suhu/temperatur.  Namun, pada  organisme  yang  dapat  mempertahankan suhu tubuh, pengaruh suhu/temperatur lingkungan  tidak  terlalu  besar  (Laksmita, 2013).

## 2.2.1. Pembusukan di darat
Menurut  Sykes  (2012),  pembusukan jenazah  dibagi  menjadi  lima  tahap,  yakni tahap  pertama  adalah Initial  Decay  (fresh stage), dimulai beberapa saat setelah kematian,  berlangsung  selama  24-72  jam. Tahap  kaku  mayat  dan  lebam  mayat  baru dimulai.  Perubahan-perubahan  yang  terjadi belum  nampak  secara  klinis.  Bakteri  mulai menyebar  ke  seluruh  tubuh  dan  menyebarkan enzim  digestif.  Beberapa  serangga  mulai tertarik  untuk  datang  dan  berkoloni  pada jenazah,  salah  satu  yang  muncul  pertama adalah lalat dari famili calliphoridae. Kemudian,  disusul  oleh  famili  sarcophagidae, piophilidae dan muscidae.
Tahap  kedua  adalah Putrefaction (bloat  stage), berlangsung  selama  4-10  hari pasca  kematian.  Pada  tahap  ini  terjadi pembengkakan  pada  jenazah  akibat  gas  yang dihasilkan  oleh  metabolisme  bakteri  anaerob. Gas  yang  terdiri  atas hydrogen  sulphide dan methane itu  mulai  menimbulkan  bau  busuk yang  nyata.  Perut  mengembung,  lidah  dan bola  mata  menonjol,  keluarnya  cairan  melalui lubang tubuh, warna kehijauan pada kulit yang dimulai dari abdomen adalah tanda-tanda yang terlihat pada tahap ini.
Tahap ketiga adalah
Black Putrefaction  (active  decay), berlangsung selama 10-25 hari pasca kematian. Tanda dari tahap  ini  adalah  bau  yang  sangat  menyengat dan  warna  kehitaman  pada  jenazah.  Bagian- bagian  tubuh  jenazah  terbuka  dan  semakin memudahkan  larva  lalat  untuk  masuk.  Pada tahap  ini  biasanya  larva  lalat  telah  mencapai 3 rd instar,  kemudian  mulai  meninggalkan jenazah untuk menjadi pupa.
Tahap keempat adalah Butyric Fermentation Stage (advance decay), berlangsung selama 20-25 hari pasca kematian. Pada tahap ini jenazah terlihat lebih kering  dari  sebelumnya.  Terjadi  fermentasi menghasilkan gas asam butirat (berbau seperti keju) yang menarik serangga dari spesies lain, seperti  kumbang  dari  famili  carcass,  trogidae dan  dermestidae.  Bila  jenazah  berada  di tempat  yang  basah  atau  lembab,  mungkin famili  kumbang  tidak  akan  muncul  dan  larva dapat bertahan lebih lama.
Tahap  kelima  adalah Dry  or  Remains Decay, berlangsung  selama  25-50  hari  pasca kematian.  Pada  tahap  ini  jenazah  menjadi sangat kering, tertinggal kulit yang mengering, rambut dan tulang, serta lalat atau larva sudah tidak tampak pada jenazah.
Kecepatan masing-masing tahap pembusukan  jenazah  sangat  bervariasi  karena dipengaruhi  oleh  banyak  faktor  seperti temperatur  udara,  iklim,  penyebab  kematian, pakaian,  obat-obatan,  kandungan  lemak  dan ukuran tubuh jenazah.

## 2.2.2. Pembusukan di air
Pembusukan pada jenazah yang berada  di  air  terjadi  lebih  lambat  daripada yang  berada  di  darat.  Berdasarkan  penelitian terhadap  hewan  coba  babi  ( Sus  scrofa )  pada bulan  Juni  –  November  di  sungai  Indiana Selatan,  proses  pembusukan  jenazah  di medium  air  dapat  dibagi  dalam  enam  tahap (Voss et  al., 2008).  Tahap  pertama  adalah Submerged  Fresh, berlangsung  selama  2-6 hari.  Tahap  rentang  waktu  antara  jenazah tenggelam di dalam air hingga jenazah terlihat mulai terapung di air.
Tahap  kedua  adalah Early  Floating, berlangsung  selama  6-8  hari.  Gas  yang diproduksi oleh bakteri-bakteri anaerob dalam tubuh  jenazah  meningkat,  sehingga  membuat jenazah  terangkat  sampai  ke  permukaan  air. Bau  busuk  yang  dihasilkan  dari  proses pembusukan  jenazah  ini  akan  menarik  bagi serangga,  seperti blow  flies untuk  datang  dan meletakkan  telur  pada  bagian  tubuh  jenazah yang tidak terendam air.
Tahap  ketiga  adalah Floating  Decay, berlangsung selama 8-24 hari.  Terjadi peningkatan  aktivitas  larva  lalat  pada  bagian jenazah  yang  tampak  di  permukaan  air,
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
menyebabkan  banyak  luka  terbuka  pada jenazah.  Kulit  jenazah  mulai  mengelupas  dan warnanya menjadi kehitaman.
Tahap keempat adalah Bloated Deterioration, berlangsung  selama  8-12  hari. Sebagian besar tubuh jenazah telah muncul ke permukaan  air.  Cairan-cairan  dalam  tubuh keluar  dari  berbagai  lubang  pada  tubuh jenazah, bahkan gas yang terbentuk pada tahap sebelumnya  mampu  membuat  bagian  perut jenazah menjadi pecah.
Tahap kelima adalah Floating
Remains, berlangsung  selama  4-20  hari. Aktivitas larva lalat famili calliphoridae mulai menurun,  disebabkan  karena  terjatuh  dan tenggelam,  atau  bermigrasi  atau  dimangsa oleh  predator  lain.  Bagian-bagian  tubuh jenazah juga telah banyak terurai.
Tahap keenam adalah Sunken Remains ,  hanya  tulang  dan  sedikit  kulit  dari jenazah  yang  tersisa  dan  bau  busuk  telah menghilang.  Kecepatan  masing-masing  tahap pembusukan  dalam  air  juga  sangat  bervariasi karena dipengaruhi oleh banyak faktor seperti temperatur  air,  kadar  garam,  konsentrasi oksigen, aquatic  organism ,  pakaian  jenasah, ukuran tubuh jenasah, tenggelam atau terapung (Wahyu, 2009).
3. METODE PENELITIAN 3.1. Rancangan penelitian
Penelitian ini dilakukan secara eksperimental  laboratorik  untuk  membuktikan ada  pengaruh  media  tanah  dan  air  laut terhadap  kualitas  DNA  dari  jaringan  otot psoas jenazah yang disimpan selama 1, 7, dan 20  hari  pada  lokus  D13S317  dan  D18S51. Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah eksperimental time  series yang  dilakukan  di laboratorium Human  Genetic  Study  Group, Institute  of  Tropical  Disease Universitas Airlangga.

## 3.2. Bahan
Bahan  penelitian  yang  digunakan  untuk penelitian  ini  antara  lain  yaitu,  jaringan  otot psoas  yang  berasal  dari  satu  jenazah  tipe  T4, yaitu jenazah yang terlantar tanpa identitas dan  tidak  memiliki  tempat  tinggal  yang tidak  tetap di  Instalasi  Kedokteran  Forensik Rumah  Sakit  Umum  Dr.  Soetomo  Surabaya.
Jenazah  tipe  T4  yang  tidak  teridentifikasi tersebut,  apabila  setelah  2x24  jam  tidak ada keluarga yang datang untuk mengambilnya,  maka  sesuai  Undang- Undang  dalam  KUHP  Pasal  133  jenazah tipe  T4  tersebut  menjadi  milik  Negara (Yudianto,  2010).  Pengambilan  sampel dilakukan secara acak ( random sampling ). Sebelum  melakukan  sampling  sampel penelitian,  sampel  harus  mendapatkan kelaikan  etik  ( ethical  clearance )  dari Rumah Sakit Umum Dr. Soetomo Surabaya.
Mengambil  sampel  jaringan  otot  psoas jenazah  menggunakan  alat,  seperti  pisau bedah,  gunting  dan  sonde  steril.  Pipa  Paralon PVC  20  mm  x  1,5  meter  yang  steril  untuk menyimpan  hasil  pengambilan  potongan jaringan  otot  psoas  jenazah  agar  sampel jenazah  segar  terlindungi  dari  hewan  atau serangga.  Pipa  paralon  dilabel  menggunakan drawing  pen permanen  untuk  memberikan label  sesuai  sampel  pada  media  air  laut maupun  tanah  regosol  berdasarkan  perbedaan waktu.
Potongan  sampel  jaringan  otot  psoas yang  telah  diambil  dari  satu  jenazah dimasukkan  ke  dalam  Pipa  Paralon  PVC  20 mm  x  1,5  meter  yang  telah  terisi  air  laut  dan tanah  regosol,  kemudian  didiamkan  selama rentang  waktu  periode  1  hari,  7  hari  dan  20 hari. Pada hari ke-1, hari ke-7 dan hari ke-20, potongan  jaringan  otot  psoas  jenazah  diambil menggunakan sonde steril kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  steril  untuk mencegah  kontaminasi.  Isolasi  DNA  dari jaringan  otot  psoas  jenazah  mulai  dilakukan setelah pengambilan sampel pada setiap waktu periodenya,  yaitu  hari  ke-1  sebanyak  6 sampel, pada hari ke-7 sebanyak 6 sampel dan pada hari ke-20 sebanyak 6 sampel.
Bahan  untuk  ekstraksi  DNA  adalah DNAzol  reagent .  Bahan  untuk  PCR  adalah PCR  Mix  (12,5µl)  yang  terdiri  dari  dNTP (ATP,  CTP,  TTP,  GTP),  MgCl 2 ,  dan  Taq Polimerase,  DW  Sigma  (DNA  atau nuclease free water ), primer : D13S317 (5’- ATTACAGAAGTCTGGGATGTGGAGGA- 3’  dan  5’-GGCAGCCCAAAAAGACAGA- 3’) dan D18S51 (5’- TTCTTGAGCCCAGAAGGTTA-3’ dan5’-
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## ATTCTACCAGCAACAACACAAATAAAC
-3’).
3.3.  Ekstraksi  DNA  dari  jaringan  otot psoas  jenazah  dengan DNAzol reagent ( Invitrogen Tech-Line sm ) Sampel  jaringan  otot  psoas  jenazah  di haluskan  dengan  mortar,  dimasukkan  ke dalam  tabung  conical  dan  dicampur  dengan DNA free  water ,  selanjutnya  dilakukan sonikasi  selama  semalam.  Cairan  yang  masih berada di tabung, dipipet ke tabung yang baru kemudian  disentrifus  (10.000  g)  selama  10 menit.  Pellet  diambil  kemudian  dicampur dengan  1ml DNAzol .  Keduanya  dicampur dengan cara vortexing lalu diinkubasi selama 5 menit  pada  suhu  kamar.  Campuran  kemudian disentrifus  (10.000  g)  selama  10  menit  pada suhu  4 0 C,  kemudian viscous  supernatant diambil  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung baru.  0,5  ml  etanol  absolut  ditambahkan, dibolak-balik, kemudian diinkubasi selama 1-3 menit,  disentrifus  (4.000  g)  selama  1-2  menit pada  suhu  4 0 C,  kemudian  supernatan  dibuang secara hati-hati agar DNA tidak ikut terbuang. Pellet  dicuci  dengan  0,8-1  ml  etanol  75% sebanyak 2 kali dan setiap kali dicuci dibolak- balik  selama-3-6  kali.  Tabung  diletakkan dengan  posisi  tegak  selama  0,5-1  menit, setelah  itu  etanol  75%  dibuang  dengan  cara pippeting atau decanting .  Pellet  kemudian dikeringkan  dengan  cara  membiarkan  tabung terbuka selama 5-15 detik sesudah etanol 75% dibuang.  Pellet  yang  berisi  DNA  tersebut kemudian  dilarutkan  dengan  larutan  NaOH  8 mM sebanyak 0,2-0,3 ml, divorteks secukupnya,  kemudian  disimpan  pada  suhu  -
20 0 C.

## 3.4. Amplifikasi PCR
Amplifikasi DNA melalui PCR dilakukan  dengan  protokol  sebagai  berikut: D13S317 (Gene  Ampr.  PCR  System  9700 Thermal Cycler, Promega Corp.2001): tahap I: initial  denaturation 96 0 C  selama  2  menit; tahap  II:  siklus  1  (10  kali)  yang  terdiri  dari subsequent denaturation 94 0 C selama 1 menit, annealing 64 0 C  selama  1  menit, extension 70 0 C selama 1 menit 30 detik dan siklus 2 (20 kali)  yang  terdiri  dari denaturation 90 0 C selama  1  menit, annealing 64 0 C  selama  1 menit, extension 70 0 C  selama  1  menit  30
detik; tahap III: hold step 4 0 C. D18S51 (Gene Ampr.  PCR  System  9700  Thermal  Cycler,
Promega Corp.2001): tahap I: initial denaturation 96 0 C  selama  2  menit;  tahap  II: siklus 1 (10 kali) terdiri dari subsequent dena- turation 94 0 C selama 1 menit, annealing 64 0 C selama  1  menit, extension 70 0 C  selama  1 menit  30  detik  dan  siklus  2  (20  kali)  terdiri dari denaturation 90 0 C  selama  1  menit, annealing  64 0 C  selama  1  menit, extension 70 0 C  selama  1  menit  30  detik; tahap  III: hold step 4 0 C.

## 3.5. Elektroforesis
Dalam tahap ini dengan menggunakan
Polyacrylamid Agarose Composite Gel Electrophoresis (PAGE)  dengan  pewarnaan silver  staining. Prosedur  PAGE  (Edvotek, 2001)  dilakukan  sebagai  berikut:  agarose  gel dibuat  dari  30  ml Tris  Boric  EDTA 0,5X  dan agarose 0,15 gram, dipanaskan dalam microwave sampai jernih kemudian didinginkan  sampai  suhu  50 0 C.  Kemudian ditambah Acrylamid Bis 4,5 ml dan Temed 15 μl. Selanjutnya ditambahkan amonium persulfat 100 μl, lalu dituangkan pada cetakan ( gel  bed ),  ditunggu  sampai  dingin/membeku. Selanjutnya  DNA  hasil  PCR  12,5  μl  dengan loading 2 μl dimasukkan dan di- running pada voltase 70 volt selama 2 jam.
Prosedur Silver Staining PAGE (Edvotek,  2001)  yang  terdiri  dari: drying : (metanol  20%  +  gliserol  2%)  dalam  100  ml aquades  selama  5  menit,  fiksasi:  (etanol  10% +  gliserol  asam  asetat  5%)  dalam  100  ml aquades selama 20 menit, dicuci/ bilas dengan aquades  1x  dengan  cepat, staining :  AgNO3 0,1%  dalam  aquades  100  ml  selama  50-80 menit, developing :  (NaOH  1,5%  +  Formalin 100 μl) dalam 100 ml aquades, lalu dilihat di lampu sampai terlihat jelas.
Analisis
DNA menggunakan
ultracentrifuge (Gyrozen  Co.,  Ltd.), vortex mixer , refrigerator untuk  menyimpan  sampel , pipet  mikro  ( eppendorf    pippet )  P10,  P100, dan  P1000, Thermal    cycler    PCR  Machine (Boeco) , elektroforator  ( Mini  Run  Gel Electrophoresis System GE-100 ), UV transilluminator
(BioRad) , ice box, microwave ,    inkubator, autoclave dan kamera    digital    untuk    mengambil  foto  dari hasil  elektroforesis.
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
Enam  sampel  jaringan  otot  psoas jenazah yang homogen telah diambil DNAnya.  Kadar  dan  kemurnian  DNA  dari sampel jaringan otot psoas ditemukan berbeda antara  media  tanah  dan  air  laut  pada  lama waktu  paparan  hari  ke-1,  hari  ke-7,  dan  hari ke-20.  Dalam  penelitian  ini  diawali  dengan perlakuan  pada  sampel  jaringan  otot  psoas jenazah,  yakni  pemaparan  lama  waktu. Adapun lama waktu paparan dalam penelitian ini: hari ke-1, 7, dan 20.
Tabel  1. Kadar  dan  kemurnian  DNA  sampel jaringan otot psoas jenazah. Kode Sampel Kadar DNA (µg/ml) Kemurnian DNA Tanah hari ke-1 5411 1,11 Air Laut hari ke-1 1060,5 1,29 Tanah hari ke-7 808,5 1,01 Air Laut hari ke-7 752,5 1,15 Tanah hari ke-20 773,5 0,99 Air laut hari ke-20 703,5 1,04
Kemudian  dilanjutkan  dengan  isolasi DNA  sampel  jaringan  otot  psoas  dengan metode DNAzol .  Hasil  isolasi  DNA  sampel tersebut dilanjutkan dengan pengukuran kadar DNA  dengan  menggunakan  spektrofotometer uv-vis  pada  panjang  gelombang  260/280  nm. Hasil  pengukuran  kadar  DNA  setelah  isolasi DNA  dari  sampel  jaringan  otot  psoas  jenazah sebelum  dilakukan  amplifikasi Polymerase Chain Reaction (PCR) disajikan pada Tabel 1. Dari  Tabel  1  terlihat  adanya  penurunan  kadar dan  kemurnian  DNA  dari  jaringan  otot  psoas pada  sampel  yang  terpapar  lama  waktu  baik pada  media  tanah  maupun  air  laut.  Semakin lama  waktu  yang  dipaparkan  semakin  turun kadar dan kemurnian DNAnya, yaitu pada hari ke-1,  7,  dan  20  berturut-turut  pada  media tanah  adalah  5411 μg/ml  dan  1,11;  808,5 μg/ml  dan  1,01;  dan  773,5  μg/ml  dan  0,99. Sedangkan,  kadar  dan  kemurnian  DNAnya, yaitu rerata pada hari ke 1, 7, dan 20 berturut- turut pada media air laut adalah 1060,5 μg/ml dan  1,29;  752,5  μg/ml  dan  1,15;  dan  703,5 μg/ml  dan  1,04.  Adanya  penurunan  kadar
DNA  dalam  penelitian  ini  menunjukkan adanya  pengaruh  lama  waktu  paparan, sehingga  mengakibatkan  adanya  kerusakan struktur  DNA  tersebut. Kerusakan  DNA  yang disebabkan oleh paparan-paparan yang abnormal  contohnya  temperatur  yang  tinggi tersebut  menurut  Watson  (1986),  disebabkan oleh  rusaknya  ikatan  hidrogen  DNA  yang irreversible . Kondisi ini mengakibatkan kerusakan  pasangan  purin-primidin  pada DNA,  dimana  pasangan  purin-primidin  ini merupakan  komponen  utama  pada  struktur DNA.
Dari hasil  penelitian ini  membuktikan adanya  pengaruh  efek  lingkungan  dalam  hal ini  lama  waktu  paparan  terhadap  pengukuran kadar  DNA  yang  terkandung.  Hal  tersebut terlihat  dari  hasil  pengukuran  kadar  dan kemurnian  DNA  melalui  spektrofotometer menunjukkan penurunan kadar dan kemurnian pada sampel jaringan otot psoas yang terkubur di  dalam  tanah  dan  ditenggelamkan  di  dalam air  laut  tempat  dari  hari  ke-1,  7  sampai  hari ke-20  terdapat  adanya  penurunan.  Namun dengan  adanya  penurunan  kadar  tersebut, bukan merupakan suatu hambatan sebab kadar DNA yang tersisa masih memungkinkan untuk dilakukan  pemeriksaan DNA  profiling yakni minimal 50 ng (Notosoehardjo, 1999).
Kadar  minimal  DNA  yang  dapat digunakan pada analisis DNA pada prinsipnya tergantung pada kebutuhan dan jenis pemeriksaan yang dilakukan. Pada pemeriksaan  DNA  forensik  yang  berbasis Restriction  Fragment  Length  Polymorphism (RLFP)  misalnya,  kadar  DNA  yang  dibu- tuhkan  relatif  besar  yakni  sekitar  100  ng, masih  ‘segar’  dengan  maksud  untuk meningkatkan kemungkinan keberhasilan dalam penatalaksanaan DNA profiling . Menurut  Notosoehardjo  (1999),  kadar  DNA minimal  yang  dibutuhkan  pada  pemeriksaan DNA  forensik  masing-masing  sebesar  50  ng dan  20  ng,  sedangkan  menurut  Butler  (2001), kadar  DNA  dalam  pemeriksaan  STR  minimal 0,5-2,5  ng.  Dalam  penelitian  ini  kadar  DNA yang  didapat  dari  sampel  jaringan  otot  psoas jenazah  pada  media  tanah  antara  rentang 5411-773,5  μg/ml,  sedangkan  kadar  DNA yang  didapat  dari  sampel  jaringan  otot  psoas jenazah  pada  media  air  laut  antara  rentang 1060,5-703,5 μg/m, sehingga masih
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
mencukupi  untuk  dilakukan  pemeriksaan analisis DNA.
Tabel 2. Hasil pengujian bahan penelitian.
Parameter  Satuan Tanah Air Laut pH - 8,75 5,50 NaCl mg/L 314,20 1.652,93
Sampel jaringan otot psoas jenazah di tanah  regosol  pada  hari  ke-20  mengalami penurunan  kemurnian  DNA  yang  sangat signifikan yaitu 0,99, namun sampel jaringan otot psoas jenazah di air laut pada hari ke-20 tetap  stabil  memiliki  kemurnian  DNA  yang baik,  yaitu  1,04.  Contoh  hasil  uji  kemurnian DNA  sampel  pada  hari  ke-20  di  media tanah dan  air  laut  ini,  didukung  oleh  Voss et  al. (2008),  yang  menyatakan  bahwa  kemurnian DNA  dipengaruhi  oleh  mikroba,  suhu,  dan kelembaban pada proses pembusukan jenazah yang  berada  di  air  laut  terjadi  lebih  lambat daripada  proses  pembusukan  di  darat  (di dalam tanah).
Kualitas    air  dinyatakan  dengan beberapa  parameter,  seperti  parameter  fisika yaitu  suhu,  kekeruhan,  padatan  terlarut,  dan sebagainya,  parameter  kimia  yaitu  pH, oksigen  terlarut,  BOD,  kadar  logam,  dan sebagainya  dan  parameter  biologi  yaitu keberadaan plankton dan  bakteri  (Effendi, 2003).  Hal  tersebut  didukung  oleh  hasil pengujian  kandungan  pH  dan  NaCl  terhadap kedua  media  tersebut  di  Balai  Besar Laboratorium Kesehatan Surabaya menyatakan  media  air  laut  memiliki  kadar NaCl  yang  cukup  tinggi  yakni  5,50  dan
1.652,93  mg/L,  dibandingkan  media  tanah regosol  memiliki  kandungan  pH  di  atas  7,00 yakni 8,75 dan NaCl 314,20 mg/L (Tabel 2).
Gambar 1. Grafik penurunan kadar DNA dan waktu paparan.
Hal  ini  diperkuat  dengan  adanya sebuah  grafik  yang  menunjukkan  penurunan kadar  DNA  dan  waktu  paparan  pada  kedua media  secara  jelas  (Gambar  1).  Garis  biru pada  grafik  diatas  menyatakan  penurunan kadar  DNA  yang  sangat  signifikan  menurun pada  media  tanah  mulai  hari  ke-1,  hari  ke-7, sampai  hari  ke-20.  Garis  hitam  menyatakan penurunan  kadar  DNA  pada  media  air  laut mulai hari ke-1, hari ke-7, sampai hari ke-20.
Menurut  Kodoatie (1996), konsentrasi khlorida  (Cl - )  dapat  mempengaruhi  kualitas air  tanah,  dimana  berdasarkan  pembagian kualitas  air  tanah  yaitu  air  payau -garam (Brackish-salt) mengandung khlorida 1000-10000  mg/L.    Purwanto  (2003) menyatakan  kandungan  NaCl  yang  cukup tinggi tersebut yang membuat sampel jaringan otot psoas jenazah khususnya di air laut dalam lama waktu paparan pada hari ke-1, hari ke-7, dan hari ke-20, kadar dan kemurnian DNAnya tetap bagus, yaitu diatas 1,00 (Sambrook et al., 1989).  Kemurnian  DNA  menjadi  persyaratan dalam pemeriksaan Polimerase Chain Reaction (PCR)  dimana  kemurnian  DNA  1-2 (ideal 1,8-2) memungkinkan dilakukan amplifikasi (Kusumadewi dkk., 2012). Kadar DNA merupakan faktor penting
dalam  pemeriksaan  DNA  forensik  yakni berpengaruh  terhadap  keberhasilan  STR-PCR pada  sampel-sampel  DNA.  Penurunan  kadar DNA  hingga  1  ng  berpotensi  terhadap penurunan  kemampuan  deteksi  STR  hingga 95%  (Sosiawan,  2007).  Jumlah  kadar  DNA
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
yang dibutuhkan dalam analisis DNA forensik berbeda-beda  tergantung  dari  kebutuhan  dan jenis  pemeriksaan.  Pada  pemeriksaan Short Tandem  Repeat (STR)  hanya  membutuhkan konsentrasi  DNA  minimal  antara  1–25  ng. Selain  tergantung  dari  kadar  DNA  dari  bahan pemeriksaan  juga  dibutuhkan  kualitas  DNA yang  mencukupi  yaitu  DNA  yang  digunakan harus  dalam  kondisi  terdegradasi  seminimal mungkin  (Kusuma  dan  Yudianto,  2010). Apabila  DNA  dalam  kondisi  terdegradasi parah,  maka  dapat  mengakibatkan  primer tidak  dapat  menempel  pada  DNA  target  yang akan digandakan (Sosiawan, 2007).
Degradasi DNA pada jenasah dapat
disebabkan  oleh  2  faktor,  yaitu  endogenous dan  exogenous.  Faktor  endogenous  berasal pada  sel  sendiri,  yang  juga  dikenal  sebagai kerusakan  spontan.  Faktor  exogenous  berasal dari  lingkungan.  Perusakan  postmortem  pada tubuh  manusia  adalah  proses  yang  sangat kompleks,  dimulai  dengan  autolysis  dan pembusukan  serta  diikuti  oleh  penguraian aerobik  dan  bakterial  (pembusukan)  dari bahan  organik.  Faktor  lingkungan  seperti halnya kelembaban serta temperatur lingkungan  sangatlah  berpengaruh  terhadap kondisi  DNA  yang  digunakan  sebagai  bahan identifikasi DNA di bidang forensik, sebagaimana pada pemeriksaan DNA dibidang lainnya  (Sosiawan,  2007).  Pada  umumnya sampel-sampel forensik yang dilakukan pemeriksaan  DNA,  40%  sudah  mengalami degradasi  atau  kontaminasi,  sehingga  dengan analisis Short  Tandem  Repeat (STR)  yang mempunyai core  sequences kurang  1  kb ( kilobase )  sangat  efektif  dan  nilai  ke- berhasilannya  cukup  tinggi,  terutama  pada DNA  yang  mengalami  degradasi  akan terfragmented (terpotong-potong) dengan
menghasilkan  fragmen  yang  pendek-pendek (Notosoehardjo, 1999). Hasil  pemeriksaan  efek  perlakuan lama waktu paparan pada media tanah dan air laut  terhadap  DNA  dari  jaringan  otot  psoas jenazah  dalam  lokus-lokus  STR  CODIS (D13S317  dan  D18S51)  dapat  dilihat  pada Tabel 3.
Tabel  3. Hasil  deteksi  efek  perlakuan  lama waktu  paparan  pada  media  tanah dan  air  laut  terhadap  DNA  dari
jaringan  otot  psoas  jenazah  pada lokus  STR  CODIS  (D13S317  dan D18S51). Media dan Lama Waktu D13S317 D18S51 T TT T TT Tanah Hari 1 6 0 6 0 Air Laut Hari 1 6 0 6 0 Tanah Hari 7 6 0 6 0 Air Laut Hari 7 6 0 6 0 Tanah Hari 20 6 0 6 0 Air Laut Hari 20 6 0 6 0 Keterangan: T : terdeteksi TT
: tidak terdeteksi
Dari  Tabel  3,  pada  seluruh  sampel dalam penelitian ini yang dilakukan pemeriksaan  melalui  DNA profiling pada lokus  D13S317,  dan  D18S51  dari  DNA  hasil isolasi  jaringan  otot  psoas  jenazah  semua terdeteksi  dan  penampakan  pita band -nya sama  karena  sampel  homogen.  Pada  lokus D13S317  pada  hari  ke-1,  hari  ke-7,  dan  hari ke-20  semua  sampel  menunjukkan  pita band yang tipis/samar. Namun,  pada lokus D18S51 pada  hari  ke-1,  hari  ke-7,  dan  hari  ke-20 semua  sampel  menunjukkan  pita band yang tebal/jelas.
Gambar  2. Hasil  visualisasi  PCR  lokus D13S317 (169-201 bp ).
Gambar 3. Hasil visualisasi PCR lokus D18S51 (290-366 bp ).
Keterangan: H1T : Sampel hari ke-1 dalam tanah H1A : Sampel hari ke-1 dalam air laut H7T : Sampel hari ke-7 dalam tanah H7A : Sampel hari ke-7 dalam air laut
H20T : Sampel hari ke-20 dalam tanah H20A : Sampel hari ke-20 dalam air laut
M : Marker ladder 100 bp Visualisasi  hasil  PCR  dengan  PAGE pada  Gambar  2,  menunjukkan  semua  sampel terdeteksi  dengan  pita band yang  tipis/samar pada  semua  perlakuan  lama  waktu  terhadap lokus  D13S317  (rentang  antara  169  bp  -  201 bp).  Visualisasi  hasil  PCR  dengan  PAGE Gambar  3,  menunjukkan  semua  sampel terdeteksi  dengan  pita band yang  tebal/jelas pada  semua  perlakuan  lama  waktu  terhadap lokus  D18S51  (rentang  antara  290  bp  -  366 bp).
Dalam penelitian menunjukkan perlakuan lama waktu paparan yakni hari ke-1, hari  ke-7,  dan  hari  ke-20  pada  lokus (D13S317, dan D18S51) semua sampel dalam visualisasi  hasil Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  dengan silver  staining PAGE  nampak pita/ band -nya terdeteksi). Namun hanya lokus D18S51  semua  sampelnya  (100%)  nampak pita/ band -nya
(terdeteksi tebal/jelas), sedangkan  lokus  D13S317  hanya  (50%)  yang nampak jelas pita/ band -nya, (terdeteksi namun tipis/samar). Hal ini menunjukkan bahwa pada pemeriksaan  DNA  bahan  jaringan  otot  psoas jenazah  melalui  deteksi  lokus  STR  (D13S317 dan  D18S51)  didapatkan  respon  deteksi  yang
berbeda  pada  berbagai  waktu  lama  paparan yang telah diberikan pada sampel jaringan otot psoas jenazah.
Disamping  kadar  DNA  sampel,  pada pemeriksaan DNA berbasis Polymerase Chain
Reaction (PCR)  juga  dibutuhkan  kualitas DNA  yang  mencukupi.  Kualitas  DNA  yang dimaksud  yakni  bahwa  DNA  yang  digunakan dalam  analisis  harus  dalam  kondisi  yang terdegradasi.  Jika  DNA  mengalami  degradasi parah  mengakibatkan  primer  tidak  dapat menempel  atau annealing pada  DNA  target yang akan digandakan (Muladno, 2002).
Menurut  Muladno  (2002),  untuk mendapatkan  hasil  visualisasi  yang  adekuat dibutuhkan kemurnian DNA yang adekuat dan kadar  DNA  yang  memadai,  sehingga  DNA dapat  digunakan  sebagai  bahan  pemeriksaan DNA  termasuk  dalam  hal  ini  adalah identifikasi dan tes paternitas. Oleh karena itu, kualitas  DNA  yang  bagus  menjadi  prasyarat fundamental  bagi  keberhasilan  reaksi  PCR secara keseluruhan. Sensitivitas PCR merupakan fungsi dari jumlah siklus dan kadar serta integritas dari DNA.
Penelitian  ini  menggunakan  sampel jaringan  otot  psoas.  Jaringan  otot  merupakan jaringan  yang  menunjukkan  kerja  mekanis dengan cara berkontraksi. Serabut-serabut otot itu  pada  hakikatnya  merupakan  sel-sel  otot. Serabut-serabut  otot  berkumpul  menjadi berkas-berkas  otot.  Beberapa  berkas  otot berkumpul  membentuk  otot  atau  daging. Bagian  tengah  dari  daging  ini  menyambung dan  kedua  ujungnya  mengecil  dan  keras, disebut  urat  atau  tendon.  Tendon  inilah  yang menempel  pada  daging  atau  otot.    Otot manusia  adalah  setengah  dari  berat  tubuh manusia  yang  mencapai  lebih  dari  600  jenis, yaitu salah satunya adalah otot psoas.
Musculus  psoas  major  merupakan otot-otot  dinding  posterior  abdomen.  Fungsi dari otot ini adalah sebagai fleksi tungkai atas terhadap  tubuh,  jika  tungkai  atas  difiksasi, maka  otot  ini  mengfleksikan  badan  terhadap tungkai  atas,  seperti  jika  waktu  duduk  dari posisi  berbaring.  Musculus  psoas  major  di ambil dengan mengiris bagian pinggul jenazah tipe  T4  pada  bagian  distantia  intercristalis setinggi  vertebra  lumbali  IV.  Jaringan  otot psoas dikubur di dalam tanah dan ditenggelamkan  di  dalam  air  laut  selama
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
maksimal 20 hari (sesuai KUHAP, lama masa penahanan  dalam  proses  penyidikan).  Dalam penelitian ini menunjukkan bahwa lingkungan berpengaruh  terhadap  kadar  DNA.  Seperti diketahui  faktor  lingkungan  seperti  halnya kelembaban  serta  temperatur  lingkungan sangatlah  berpengaruh  terhadap  kondisi  DNA yang  digunakan  sebagai  bahan  identifikasi DNA  di  bidang  forensik,  sebagaimana  pada pemeriksaan DNA di bidang lainnya.
Sejauh  ini  pemeriksaan  DNA  jenazah menggunakan  teknik  STR  banyak  digunakan di  Indonesia.  STR  lokus  yang  diperiksa  pada penelitian  ini  adalah  D13S317  dan  D18S51, karena  lokus-lokus  tersebut  memiliki  daya deskriminasi  besar  pada  populasi  Indonesia (Untoro et  al., 2009).  Adanya  perbedaan waktu  paparan  dari  kedua  media  yang digunakan  menyebabkan  penurunan  kadar DNA  dan  kemurniannya.  Sedangkan  untuk hasil  elektroforesis,  lokus  D13S317  dan D18S51  bagus  untuk  analisis  DNA  dari jaringan otot psoas jenazah.

## 5. KESIMPULAN DAN SARAN
Kualitas  DNA  dari  jaringan  otot  psoas jenazah  pada  media  tanah  dan  air  laut  yang dikubur  dan  ditenggelamkan  dalam  kurun waktu  paparan  hari  ke-1,  hari  ke-7,  dan  hari ke-20  masih  dapat  diekstraksi,  namun  terjadi penurunan  kuantitas  DNA  sejalan  dengan lama  waktu  paparan  jaringan  otot  psoas jenazah.  Terdapat  kemampuan  lokus  STR D18S51  290-366  bp  (semua  sampel)  100% masih bisa mendeteksi DNA dari jaringan otot psoas  jenazah  sampai  hari  ke-20,  sedangkan lokus  STR  D13S317  169-201  bp  hanya  50% sampel  yang  masih  bisa  mendeteksi  DNA jaringan otot psoas jenazah.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kami  sampaikan  kepada Indah  Nuraini  dan  Ida  Kumala  Sari  selaku teknisi di Laboratorium Human Genetic Study Group  Institute  of  Tropical  Diseases (ITD) Universitas Airlangga serta semua pihak yang telah membantu dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  P  D.  2000.  An  Overview  of
Forensic
Pharmacists
Practice.
Journal  of  Pharmacy  Practice. Vol. 13. pp. 179.
Budowle,  B.,  Morreti,  T.,  Baumtraks,  A., Defenbaugh,  D.,  and  Keys,  K.  2000. Population  Data  on  The  Thirteen CODIS  Core  Short  Tandem  Repeat Loci  in  Africans  Americans,  U.S Caucacians,  Hispanics,  Bahamians, Jamaicans,  and  Trinidadians. Journal Forensic Science. 44(6). 1277-1286. Butler,  J.  M.  2001. STR  Analysis  for  Human
Testing, STR Typing . Current Protocols in Human Genetic
Unit.14.8; 1-37.
Butler,  J.  M.  2003. Forensic  DNA  Typing . Academic Press: Sandiego Florida. Pp 28-30, pp 59-96.
Butler, J. M. 2005. Genetics and Genomics of STR  Marker .  2nd  ed.New  York: Elsevier Academic Press.
Butler, J. M. 2006. Genetics and Genomics of Core Short Tandem Repeat Loci Used in  Human  Identity  Testing. Journal Forensic Science. 51(2). 253-265. Butler, J. M. and Hill,R. C. 2012. Biology and Genetics of New Autosomal STR Loci Usefull  for  Forensic  DNA  Analysis. Forensic Science Review. 24(15).
Campbell, N., J. Reece and L. Mitchael. 2002. Biologi .  Jilid  Pertama.  Edisi  Kelima. Jakarta: Erlangga.
Cooper,  A.  and  Poinar,  H.  N.  2000. Ancient DNA: do it right or not at all. Science 289, 1139.
Dauber,  E.  M.,  Bar,  W.,  Klintschar,  M., Neuhuber,  F.,  Parson,  W.,  Glock,  B. 2003.  Mutation  Rate  at  23  Different Short
Tandem Repeat Loci. International  Congress  Series  1239 .
565-567.
Dauber,  E.  M.,  Kratzer,  A.,  Neuhuber,  F., Parson,  W.,  Klintschar,  M.,  Bar,  W. 2012.  Germline  Mutation  of  STR- Alleles  Include  Multi-Step  Mutations As  Define  By  Sequencing  of  Repeat of Flanking Regions. Forensic Science International Genetics. 6(3). 381-386. Di  Lonardo,  A.  M.,  Cardozo,  M.  B.,  Colica, M. V., Abovich, M. A., Echenique, C.
2004.  Genetic  Inconsistencies  In Paternity Case. International Congress Series 1261 . 488-490.
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Effendi,  H.  2003. Telaah  Kualitas  Air  Bagi Pengelolaan  Sumber  Daya  Air  dan Lingkungan. Yogyakarta: Kanisius. Fadillah. 2009. Ilmu Kedokteran Forensik dan Medikolegal . Available at: http://yasinfadillah.blogspot.com.
Opened: 01.06.2016.
Gennard,  D.,  E.  2007. Forensic  Entomology . John Wiley and Sons Ltd. England. Goodwin,  W.,  Ballard,  D.,  Simpson,  K., Thacker,  C.,  Syndercombe  Court,  D.,
Gow,  J.  2004.  Case  Study:  Paternity Testing-When  21  Loci  Are  Not Enaugh. International Congress Series 1261 . 460-462. Haefner, J. N., R. W. John R., W. M. Richard. 2004.  Pig  Decomposition  in  Lotic Aquatic Systems: The Potential Use of Algal  Growth  in  Establishing  a Postmortem Submersion Interval
(PMSI). J Forensic Sci. 49(2). Isfandiari,  B.  A.  2009. Perbedaan  Genus Larva  Lalat  Tikus  Wistar  Mati  pada Dataran  Tinggi  dan  Rendah  di Semarang .  Laporan  Akhir  Karya Tulis  Ilmiah.  Fakultas  Kedokteran Universitas Diponogoro. Semarang. Junitha,  I.  K.  2012.  Peranan  Analisis  DNA dalam Penyelesaian Masalah Sosial di Masyarakat. Orasi Ilmiah Pengukuhan Guru Besar Tetap. FMIPA: Universitas Udayana.
Klug,  W.  S.  and  Cummings  M.  R..  2003.
Genetics;  a  molecular  perspective . Upper  Saddle  River,  NJ:  Pearson Education, Inc. Kodoatie, R.K. 1996. Pengantar Hidrogeologi. Penerbit Andi: Yogyakarta.
Kreeger, L. R., S. Attorney, D. M. Weiss dan
S.  Attorney.  2003. Forensic  DNA
Fundamentals   for  the  Prosecutor Forensic  DNA  Fundamentals  for  the Prosecutor  Be  Not  Afraid. Publishing Company, Inc.
Krenke,  B.  E.,  Tereba,  A.,  Anderson,  S.  J., Buel,  E.,  Culbane,  S.,  Finis,  C.  J. 2002.  Validation  of  a  16-Locus Fluorescent Multiplex System. Journal  Forensic  Science. 47(4).  773- 785.
Kusuma,  S.  E.,  dan  Yudianto,  A.  2010.
Forensik Molekuler, dalam Buku Ajar Ilmu Kedokteran Forensik dan Medikolegal, edisi keenam, Ed. Hariadi  A,  Hoediyanto. Departemen
Ilmu Kedokteran Forensik dan Medikolegal Fakultas Kedokteran
Universitas  Airlangga,  Surabaya.  hal: 333-335 dan 359-370.
Kusumadewi,  A.,  Kusuma,  S.  E.,  dan Yudianto,  A.  2012. Analisis  DNA
Jaringan Lunak Manusia yang Terpapar  Formalin  dalam  Interval Waktu  1  Bulan  Selama  6  Bulan  pada Lokus  D13S317  dengan  Metode  STR- PCR. JBP Vol.14, No.2.
Laksmita,  Ayu  Saka.  2013.  Keberadaan Serangga  Pada  Bangkai  Mencit  (Mus musculus)  Sebagai  Hewan  Model Prediksi Lama Kematian Untuk Kepentingan Forensik.
Skripsi . FMIPA Universitas Udayana: Bali. Lapian, H. F. N. 2008. Identifikasi DNA Untuk Korban  Kecelakaan  Pesawat  Spana Air . Available at: http://mdopost.com/new/index.php?op tion=com_content&task=view&id=45 1&itemid=51. Opened: 01.06.2016. Laupa  Junus.  2013. Sains  Forensik  Pastikan Penjenasah  Tidak  Terlepas. Utusan Melayu: Jakarta. Lewis,  R.  2003. Human  Genetics:  Concepts and  Applications.  . Boston:  The McGraw-Hills Company. Inc. Ma,  H.,  Huaijie,  Z.,  Fangxia,  G.,  Shen,  C. 2006.  Paternity  Testing. Journal  of American Science. 2(4). Marpaung,  Leden.  2009. Proses  Penanganan Perkara  Pidana  (Penyelidikan  dan Penyidikan)  Edisi  Kedua,  Cetakan Kedua . Sinar Grafika: Jakarta.
Meliala,  A.,  I.  Sulhin  dan  Nurdian.  2007.
Kriminalitas. Available at: http://id.shvoong.com/tags/kriminalita s. Opened: 02.06.2016. Miller, J.  S and V.  L.  Naples.  2002. Forensic Entomology . Available at: https://www.msu.edu/~tuckeys1/VIPP_ 2005/Biology/Sessions/RKimbirauskas
/ForensicEnt_in_the_Classroom.pdf. Opened : 01.06.2016.
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Mullen,  M.  P.,  Howard,  D.  J.,  Powell,  R., Hanrahan,  J.  P.  2009.  A  Note  of  the
Use  of  FTATM  Technology  for Storage  of  Blood  Sample  for  DNA Analysis  and  Removal  of  PCH Inhibitors. Irish Journal for Agriculture  and  Food  Research,  48 . 109-113. Notosoehardjo,  I.  1999.  Penentuan  Jenis Kelamin  Berdasarkan  Pemeriksaan DNA  dan  Antropometri  Tulang. Disertasi Doktor . Surabaya: Universitas Airlangga. Nugroho,  Bangkit  Adhi.  2013.  Fungsi  Olah Tempat  Kejadian  Perkara  (TKP) Dalam Penyidikan (Studi Pada Polrestabes Semarang). Skripsi. Fakultas  Hukum,  Universitas  Negeri Semarang. Purwandianto, A. 2000. Pemanfaatan Laboratorium Forensik Untuk Kepentingan  Non-Litigasi,  Melalui Itegratif  Bahan  Ajar  Kriminalistik. Lembaga Pengabdian Kepada Masyarakat  Universitas  Indonesia: Jakarta.
Purwanto.  2003. Modul:  Penyediaan  Air Bersih. Semarang: AKL Purwokerto.
Raven,  P.  H.  and  G.  B.  Johnson.  2002.
Biology. 6th ed. New York: McGraw-
Hill Companies, Inc.
Reno,  J.,  D.  Marcus,  M.  L.  Leary  and  J.  E. Samuels. 2000. The Future of Forensic  DNA  Testing:  Justice .  U.S.
DOE Human Genome Program. Rudin, N. and Crim, K. 2002. An Introduction to  Forensic  DNA  Analysis  Second Edition. New York: CRC Press. Sambrook,  J.,  Fritsch,  E.F.,  dan  Maniatis,  T.
1989. Molecular Cloning. Cold Spring Harbor  Press.  University  of  Texas South Western Medical Centre, Texas. I.47 hlm.
Sambrook, J., Russell, D. W. 2001. Molecular
Cloning:  A  Laboratory  Manual  Third Edition.New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. Sampurna, B. 2000. Laboratorium Kriminalistik Sebagai Sarana Pembuktian  Ilmiah,  dalam  Tim  IBA Kriminalistik. Lembaga  Pengabdian
Kepada Masyarakat Universitas
Indonesia: Jakarta.
Slone,  D.  H  .,  S.  V.  Gruner.,  and J.  C.  Allen. 2004. Unpublished.  Assessing  Error In  Pmi  Prediction  Using  A  Forensic Entomological Computer Model . New York: CRC Press.
Sosiawan,  A.  2007.  Analisis  Efek  Paparan Panas  Suhu  Ekstrim  Tinggi  Terhadap DNA  yang  Berasal  dari  Tulang  dan Gigi. Disertasi. Surabaya:  Program Pascasarjana, Universitas Airlangga. Stansfield,  W.,  Raul,  C.,  and  Jaime,  C.  2002.
Biologi  Molekuler  dan  Sel. Jakarta: Erlangga.
Sujana,  A.  2007. Biologi. Jakarta:  Mega Aksara.
Suryo.  2005.  Genetika.  Universitas  Gajah Mada: Yogyakarta.
Suryo.  2011.  Genetika  Manusia . Universitas
Gajah Mada: Yogyakarta.
Sykes,  Yohan  Rush.  2012.  Dekomposisi (Pembusukan).
Available at:
http://bikintau.blogspot.co.id/2012/04/ bagaimana-proses-pembusukan-pada- mayat.html. Opened: 02.06.2016.
Untoro  E,  Atmaja  JS,  Pu  CE,  Wu  FC.  2009.
Allele  Frequency  of  CODIS  13  in Indonesian Population. Legal Medicine 11: S203-205. Voss,  S.  C.,  L.  F.  Shari.,  R.  D.  Ian.  2008.
Decomposition  and  Insect  Succession on Cadavers Inside a Vehicle Environment.  University  of  Western Australia. Forensic  Sci  Med  Pathol (4): 22-32.
Wahyu,  N.  2009.  Larva  Lalat  Pada  Bangkai Tikus  Wistar  Diletakan  Di  Darat,  Air Tawar  Dan  Air  Laut.  Laporan  Akhir
Karya Tulis Ilmiah. Fakultas Kedokteran  Universitas  Dipenogoro. Available at: http://eprints.undip.ac.id/13515/1/Nov ita_Wahyu.pdf. Opened: 01.06.2016. Watson. 1986. Molecular Biology of the Gene, 4 th ed . Cummings Publishing
Company, Inc.
Yudianto, A. 2010. Analisis DNA Tulang dan Gigi  pada  Lokus  Short  Tandem Repeat-Combined DNA Index System (STR-CODIS),  Y-Chromosome  STRs dan  Mitochondrial  DNA  (mtDNA)
© (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Akibat  Paparan  Panas  Suhu  Tinggi. Disertasi. Surabaya: Program Pascasarjana Universitas Airlangga. Yuwono,  T.  2006. Teori  dan  Aplikasi Polymerase Chain Reaction; panduan eksperimen  PCR  untuk  memecahkan masalah  biologi  terkini. Yogyakarta: Penerbit Andi.