## UJI AKTIVITAS ANTI BAKTERI LARUTAN DISINFEKTAN
ALAMI INFUSA DAUN SIRIH ( Piper Betle L .) TERHADAP

## Staphylococcus aureus
Submitted : 29 Oktober 2021
Edited : 6 Desember 2021 Accepted : 13 Desember 2021
Nori Wirahmi 1* , Muhammad Ichsan Triansyah 1 , Zul Amri 2 , Camelia Putri Masrijal 1
1 Prodi D3 Farmasi Universitas Bengkulu
2 BPOM di Bengkulu Email : nwirahmi@unib.ac.id

## ABSTRACT
This study is a test of the anti-bacterial activity of natural disinfectant solution of betel leaf infusion (Piper Betle L.) against staphylococcus aureus. This study aims to determine the anti- bacterial activity of betel leaf infusion disinfectant solution against staphylococcus aureus. This study used the disc diffusion method by looking at the inhibition area in the presence of a clear area around the disc. The betel leaf infusion concentration used was 60% w/v and 90% w/v . The analysis used is descriptive analysis. The results of this study indicate that betel leaf infusion with a concentration of 90% w/v is better than betel leaf infusion with a concentration of 60% w/v . Betel leaf  infusion  concentrated  90% w/v had  an  inhibition area  of  6.66  mm  and  betel  leaf  infusion concentrated 60% w/v had an inhibition area of 2.13 mm. The 90% w/v concentration of betel leaf infusion is included in the moderate anti-bacterial category and 60% w/v concentrated betel leaf infusion is in the weak category. Betel leaf infusion can be used as a natural disinfectant and is safe to use.
Keywords: Betel Leaf Infusion, Disinfectant, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Secara umum daun sirih mengandung minyak atsiri. Kandungan bahan aktif dari daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)  adalah minyak  atsiri  yang  komponen  utamanya terdiri  dari bethel  phenol,  kavikol dan turunannya  yang  berkhasiat  sebagai antibakteri. Kedua  zat tersebut  merupakan kandungan terbesar minyak atsiri yang ada dalam  daun  sirih  ( Piper  betle L.)  yaitu sekitar  60-80%.  Senyawa  ini  dapat mendenaturasi protein sel bakteri, merusak membran  sel  yang  terdiri  dari  fosfolipid, protein,  lipid,  dan  enzim-enzimnya  yang berfungsi untuk  gerakan aktivitas transpor zat-zat  yang  dibutuhkan, apabila suatu  zat aktif masuk kedalam sel melalui membran sel  maka  akan  mengikat  fosfolipid  yang
merupakan  penyusun  utama  membran sel (1) .
Komponen  utama  minyak  atsiri terdiri  dari betiephenol dan  beberapa derivatnya diantaranya eugenol ali
pyrocatechin 26,8-42,5%, sineol 2,4-4,8%, methyl eugenol 4,2-15,8%, caryophyllen 3- 9,8%, hidroksi kavikol , kavikol 7,2-16,7%, Kavibetol 2,7-6,2%, estragol , Allyl  fatigue catechol  9,6%,  carbobacol  2,25,6%, alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid  atau steroid, saponin,
terpen, fenilpropana,terpinena,  diastase  0,81,8% dan tanin 11,3%.  Fenol  memiliki  efek bakteriostatik pada  konsentrasi  0,11%, sedangkan fenol memiliki efek bakterisida pada konsentrasi 12% (2) .
Pada  saat  pandemi  saat  ini  banyak masyarakat menggunakan disinfektan untuk  pencegahan  tetapi  disinfektan  yang berada  dipasaran  memiliki  bahan-bahan yang berbahaya jika terkena jarungan kulit contohnya  seperti  iritasi  kulit.  Untuk menghindari  bahaya  dari  disinfektan tersebut  lebik  baik  kita  menggunakan disinfektan alami yang terbuat dari rebusan daun sirih atau juga disebut sebagai infusa. Infusa  adalah  sediaan  yang  dibuat  dengan cara  mengekstraksi  bahan  nabati  dengan pelarut air pada suhu 90 0 C selama 15 menit. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  anti  bakteri  pada  larutan disinfektan alami infusa daun sirih terhadap staphylococcus  aureus .  Penelitian  ini menggunakan  metode  difusi  cakram dengan  melihat  daerah  hambat  dengan adanya daerah bening di sekitaran piringan cakram.

## METODE PENELITIAN Sampel
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Bengkulu.
Sampel yang digunakan adalah bagian daun nya  saja.  Pengambilan  sampel  dilakukan pada  saat  tumbuhan  daun  sirih  hijau sempurna.
Daun  yang  telah  dipetik  dipisahkan dari zat-zat pengotor yang menempel pada dauns sirih, membuang bagian-bagian yang tidak  digunakan  agar  mendapatkan  hasil yang maksimal.Pencucian dilakukan secara singkat  di  air  yang  mengalir  bertujuan untuk  membuang  pengotor  dan  menjaga kualitas  zat  aktif  daun  sirih.Proses pemotongan  atau  perajangan  bertujuan untuk memperkecil ukuran daun sirih untuk memudahkan  dalam  proses  perebusan  dan mendapatkan zat aktif yang maksimal.
Pembuatan Akuades Steril
Pembuatan akuades steril menggunakan akuades dan carbon aktif 0,1 %  lalu  dipanaskan  selama  15  menit  pada suhu  70 0 C  lalu  disterilkan  menggunakan autoklaf selama 15 menit.
Pembuatan  Infusa  Daun  Sirih  ( Piper Betle L ).
Daun sirih yang telah di potong kecil- kecil  selanjutnya  di  masukan  kedalam beker glass yang telah berisi akuades steril lalu  direbus  pada  suhu  90 0 C  selama  15 menit  terhitung  sejak  suhu  yang  telah ditentukan.
Pengamatan  Organoleptis  Infusa  Daun Sirih ( Piper Betle L ).
Uji ini dilakukan dengan mengamati bentuk sediaan, warna dan bau.
Pengujian  pH  Infusa  Daun  Sirih  ( Piper Betle L ).
Uji  pH  dilakukan  untuk  melihat derajat keasaman dari sediaan Pengukuran pH  dilakukan  dengan  pH  meter,  dengan cara  kalibrasi  terlebih  dahulu  dengan menggunakan larutan dapar pH 4, pH 7, pH 9,  pemeriksaan  pH  dilakukan  dengan  cara mencelupkan  elektron  kedalam  5  ml sediaan.

## Pembuatan Media Agar (NA)
NA ditimbang sebanyak 8 gram lalu dimasukan  kedalam  akuades  steril  400  ml lalu  panasi  menggunakan hot  plate dan magnetic strirer setelah tercampur
sempurna selanjutnya di sterilkan
menggunakan  autoklaf  selama  15  menit pada  suhu  121 0 C.  NA  yang  telah  siap dituangkan  kedalam  cawan  petri  yang sudah disterilkan sebelumnya (3) .
Penyiapan Staphylococcus aureus

## Pembuatan Media Agar Miring
Tuangkan  NA  yang  telah  steril kedalam  tabung  reaksi  yang  telah disterilkan sebelumnya, tuangkan sebanyak
5  ml.  Kemudian  dimiringkan  dengan kemiringan  sekitar  30-45⁰.  Bagian  mulut tabung reaksi disumbat dengan kapas yang dibalut  kain  kasa  steril  lalu  diikat, kemudian ditunggu sampai media
memadat.

## Proses Peremajaan Bakteri
Staphylococcus aureus biakan murni digoreskan  menggunakan  ose  pada  media NA  miring  selanjutnya  diinkubasi  pada suhu 37⁰C selama 24 jam pada suhu 37⁰C.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Ambil  sebanyak  2  ose  bakteri  uji hasil  peremajaan  lalu  disuspensikan  ke dalam  2  mL  larutan NaCl  fisiologis di dalam tabung reaksi yang telah disterilkan lalu  dihomogenkan  dengan vortex dalam waktu 15 detik.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Infusa  Daun Sirih ( Piper Betle L ).
Pada  masing-masing  infusa  daun sirih  dengan  konsentrasi  yang  berbeda, diambil sebanyak 20 μL (mikro Liter) dan diteteskan  pada  kertas  cakram  steril,  lalu ditunggu sampai menjadi jenuh (4) . Suspensi bakteri uji diambil sebanyak 100 μL (mikro Liter), dituang secara merata pada medium Nutrient Agar (NA) menggunakan metode spread  plate .  Ditunggu  beberapa  waktu sampai  mengering,  selanjutnya  diletakkan kertas  cakram  yang  telah  dijenuhkan dengan 20 μL (mikro Liter) produk X yang mengandung  oil  pine .  Kontrol  negatif (blangko)  yang  digunakan  adalah  akuades steril sebanyak 20 μL (mikro Liter). Media yang  sudah  berisi  bakteri  uji,  konsentrasi infusa  yang  berbeda,  kontrol  negatif, kontrol  positif,  dan  cakram  yang  telah dijenuhkan  dengan  larutan  uji,  diinkubasi pada  suhu  37⁰C  dalam  waktu  1x24  jam. Diameter  Daerah  Hambat  (DDH)  yang terbentuk  di  sekitar  cakram  setelah  1x24 jam  lalu  diamati  dengan  menggunakan
jangka sorong. Pengujian dilakukan dengan tiga kali pengulangan (4) .

## HASIL DAN PEMBAHASAAN
Setelah didapatkan hasil dari
penelitian  ini  bahwa  infusa  daun  sirih dengan  konsentrasi  90% b/v lebih  baik dibandingkan  infusa  daun  sirih  dengan konsentrasi  60% b/v dalam  menghambat Staphyloccocus  aureus. Infusa  daun  sirih dengan  konsntrasi  90% b/v memiliki aktivitas  antibakteri  dengan  kategori sedang terhadap Staphyloccocus aureus sedangkan infusa daun sirih dengan konsentrasi  60% b/v antibakteri  dengan kategori lemah. Infusa daun sirih 90% b/v dan  60%  b/v  memiliki  diameter  zona hambat  yang  lebih  kecil  dibandingkan dengan kontrol positif. Pada kontrol negatif yang berisi akuades steril tidak menunjukan adanya zona hambat, hal ini berarti akuades tidak memiliki aktivitas antibakteri sebagai pelarut  uji.  Pada  infusa  daun  sirih  dengan konsentrasi 60% b/v menunjukan diameter zona  hambat  sebesar  2,13  mm  sedangkan Infusa  daun  sirih  90%  b/v  menunjukan diameter  zona  hambat  sebesar  6,66  mm. Penelitain  Djuma  (2019)  membuktikan bahwa ektrak daun sirih mampu menghambat  pertumbuhan Staphyloccocus aureus dengan  konsntrasi  15  %  b/b  25  % b/b 50 % b/b dan 75 % b/b (5) . Kandungan kimia yang terkandung dalam esktrak daun sirih memiliki peranan yang berbeda dalam menghambat pertumbuhan
bakteri.
Mengandung zat aktif kavikol yang bersifat sebagai  disinfektan  alami  dan  antijamur sehingga dapat digunakan sebagai antiseptik ,  euganol dan methyl  euganol dapat  digunakan  untuk  mengurangi  rasa sakit  gigi.  Penelitian  ini  dengan  jelas membuktikan bahwa daun sirih yang sering dimanfaatkan  oleh  masyarakat  untuk mengobati infeksi akibat bakteri Staphyloccocus  aureus seperti  bisul, mengatasi  keputihan  dan  menghentikan mimisan  memiliki  kandungan  kimia  fenol dan  beberapa  derivatnya  yang  mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphyloccocus  aureus sehingga  infusa daun  sirih  bisa  menjadi  disinfektan  alami yang  aman  untuk  pencegahan  penularan
penyakit Covid-19 khususnya  di  Provinsi
Bengkulu
Tabel 1. Hasil  Uji  Organoleptis  Infusa
Daun Sirih ( Piper Betle L .) Konsentrasi Infusa Daun Sirih (%) Pemeriksaan Pengamatan 90% Warna Cokelat Kekuningan Bau Aroma Khas Sirih Bentuk Cair 60% Warna Cokelat Kekuningan Bau Aroma Khas Sirih Bentuk Cair
Uji  ini  digunakan  untuk  melihat tampilan  fisik  infusa  dengan  cara melakukan  pengamatan  terhadap  bentuk, warna dan bau infusa. Dari hasil penelitian terlihat  tidak  ada  perbedaan  dari  sediaan infusa  90% b/v dan  60% b/v dari  tampilan fisiknya.
Tabel 2. Hasil  Uji  pH  Infusa  Daun  Sirih ( Piper Betle L .) Konsentrasi (%) pH I II III 90% 4,71  4,67  4,65 60% 4,68  4,69  4,68
Pengukuran pH pada infusa digunakan  untuk  mengetahui  aman  atau tidak nya infusa daun sirih terkena jaringan kulit pada interval pH 4,0-6,5. Pengukuran pH  dilakukan  dengan  pH  meter,  dengan cara  kalibrasi  terlebih  dahulu  dengan menggunakan larutan dapar pH 4, pH 7, pH 9. Hasil yang didapatkan dalam penelitian ini bahwa pH infusa daun sirih aman untuk digunakan  dan  aman  jika  terkena  kulit karena masih dalam interval pH kulit.
Tabel 3. Hasil Uji pH Media NA Media pH Nutrient Agar 7,48
Pengukuran  pH  pada  media  NA digunakan  untuk  mengetahui  media  yang telah  dibuat  sesuai  atau  tidak  dengan interval  media  yang  baik  7,0-7,4. Pengukuran  pH  dilakukan  dengan  pH meter, dengan cara kalibrasi terlebih dahulu dengan  menggunakan  larutan  dapar  pH  4, pH  7,  pH  9.  Hasil  yang  didapatkan  dalam penelitian  ini  bahwa  pH  media  NA  baik digunakan karena sesuai interval pH media yang baik.
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Larutan Disinfektan Alami Infusa Daun Sirih Terhadap

## Staphyloccocus aureus
Konsentrasi (%) Diameter Zona Hambat (mm) Cawan 1 Cawan 2 Cawan 3 Rata- Rata Keterangan 90% 7,05 6,65 6,27 6,66 Sedang 60% 4,05 2,34 - 2,13 Lemah Kontrol Positif 30,7 21,05 15,35 22,37 Sangat Kuat Kontrol Negatif - - - - - Keterangan : (-) = tidak ada zona hambat
Hasil  yang  didapatkan  bahwa  infusa daun  sirih  dengan  konsentrasi  90% b/v lebih baik dibandingkan infusa daun sirih dengan konsentrasi  60% b/v dalam  menghambat Staphyloccocus  aureus. Infusa  daun  sirih dengan konsntrasi 90% b/v memiliki aktivitas antibakteri dengan kategori sedang terhadap Staphyloccocus  aureus sedangkan  infusa daun  sirih  dengan  konsentrasi  60% b/v antibakteri  dengan  kategori  lemah.  Infusa daun  sirih  90% b/v dan  60% b/v memiliki diameter  zona  hambat  yang  lebih  kecil dibandingkan  dengan  kontrol  positif.  Pada kontrol  negatif  yang  berisi  aquades  steril tidak  menunjukan  adanya  zona  hambat,  hal ini  berarti akuades tidak  memiliki  aktivitas antibakteri  sebagai  pelarut  uji.  Pada  infusa daun  sirih  dengan  konsentrasi  60% b/v menunjukan diameter zona hambat sebesar 2,13 mm sedangkan Infusa daun sirih 90% b/v
menunjukan  diameter  zona  hambat  sebesar 6,66  mm.  Penyebab  perbedaan  kategori dikarenakan  perbedaan  konsentrasi  larutan infusa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka semakin baik aktivitas antibakterinya.

## SIMPULAN
Perbedaan konsentrasi  mempengaruhi uji  aktivitas  antibakterinya  semakin  tinggi konsentrasi  maka  semakin  baik  aktivitas antibakterinya.  Larutan  disinfektan  infusa daun  sirih  konsentrasi  90%  baik  dalam menghambat
Staphylococcus
aureus dibandingkan  dengan  larutan  disinfektan
infusa  daun  sirih  dengan  konsentrasi  60%. Rata-rata  daerah  hambat  untuk  konsentrasi 90% adalah 6,66 mm sedangkan konsentrasi 60% rata-rata daya hambat adalah 2,13 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Suliantari, Betty S. L. Jenie dan Maggy T. Suhartono.2012. Aktivitas Antibakteri Fraksi-fraksi Ekstrak Sirih Hijau ( Piper betleLinn ).
2. Inayatullah, S. 2012. Efek Ekstrak Daun Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus aereus .  Universitas  Islam  Negeri Jakarta.
3. Ngajow,  Mercy,  Jemmy  Abidjulu, Vanda  S.  Kamu.  2013. Pengaruh  zat Antibakteri Ekstrak Kulit Batang Matoa terhadap Bakteri Staphylococcus aureus secara In Vitro Jurnal. FMIPA UNSRAT 128-132.
4. Ningsih, Ayu Putri., 2013. “ Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Kental  Tanaman Pisang Kepok Kuning (Musa paradisiaca Linn.) terhadap Staphylococcus  aureus  danEscherichia col i”. Jurnal Biologi Universtas Andalas. 5. Djuma,  A.W.  2019. Uji  Aktivitas
Antimikroba  Ekstrak  Daun  sirih  Hijau (Piper Betle L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus . Prosiding Semnas Sanitasi . 136-142.