## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI RESISTEN MERKURI DARI MUARA SUNGAI SARIO YANG DAPAT DIGUNAKAN UNTUK DETOKSIFIKASI LIMBAH MERKURI
Fatimawali 1) , Fatmawaty Badaruddin 2) , Irawan Yusuf 2)
1) Dosen Fakultas  Kedokteran Unsrat Manado dan Mahasiswa Program Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin Makassar
2) Dosen Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin Makassar

## ABSTRAK
Merkuri adalah logam berat yang bersifat sangat toksik, mempunyai afinitas terhadap gugus thiol protein.    Keberadaan  merkuri    dilingkungan,  karena  secara  alamiah  maupun  karena  aktifitas antrofogenik.  Di  Kabupaten  Bolaang  Mongondow  terdapat  beberapa  penambang  emas  rakyat yang menggunakan merkuri untuk mengekstrak emas dari batuan atau ore dan membuang limbah merkuri  secara  bebas  ke  lingkungan  dan  terbawa  air  hujan  sampai  kepada  perairan.    Sedimen perairan yang terkontaminasi merkuri dapat ditumbuhi bakteri resisten merkuri.  Bakteri resisten merkuri anorhanik dapat digunakan untuk bioremediasi perairan, karena bakteri tersebut mampu mereduksi  merkuri  anorganik  menjadi  logam  merkuri  yang  mudah  menguap  dan  kurangtoksik. Dan  merupakan  sumber  pencemaran  merkuri.    Bakteri  resisten  merkuri  mempunyai  operon mer yang  biasanya  terkandung  dalam  plasmid.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri resisten  merkuri  anorganik,  dan  menganalisis  kemampuannya  dalam  mereduksi  HgCl 2 dalam media nutrient broth.  Bakteri resisten merkuri tinggi, dilakukan analisis Gen 16S rRNAnya untuk mengetahuis  pesiesnya.    Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  A1.1.1  merupakan  bakteri spesies Klebsiella  pneumoniae, mampu  mereduksi  HgCl 2 75%  dalam  waktu  1  jam,  92%  dalam waktu 12 jam dan 99,4%  dalam waktu 24 jam
Kata Kunci: bakteri, detoksifikasi,  HgCl 2 , Klebsiella pneumoniae

## ISOLATION  AND  IDENTIFICATION OF MERCURY-RESISTANT BACTERIUM FROM SARIO RIVER ESTUARY THAT CAN BE USED TO DETOXIFY INORGANIC MERCURY WASTES

## ABSTRACT
Mercury  (Hg)  is  well  known  for  its  high  toxicity  and  strong  affinity  toward  the  thiol  group  of proteins. When Hg released into the environment in substantial quantities through natural events and anthropogenic activities . In District of Bolaang Mongondow, many miners who are a source of mercury pollution of aquatic environments to which they use to extract gold from the rock or ore. Waters sediment contaminated with mercury, can be overgrown with microorganism such as bacteria that are resistant to mercury.  Mercury-resistant bacteria can be used for bioremediation of waters due to the ability of these bacteria to reduce toxic inorganic mercury into mercury metal which  is  volatile  and  less  toxic.  Mercury-resistant  bacteria  has  mer  Operon  which  usually contained in the plasmid.  The aim of this study was the selection of bacterial strains resistant to inorganic  mercury,  as  well  as  to  show  their  capacity  to  reduce  mercury    in  pure  culture  media Nutrient Broth. Twelve isolate bacteria was selected for its capacity to reduce mercury HgCl 2 in culture  media  nutrient  broth.  The  one  bacterial  strains  belong  to  the  spesies Klebsiella pneumoniae .  Inoculated  in  pure  culture,  these  strain  showed  a  mercury  reduction  of  75%  in  1 hour, 92% in 12 hours, and  99,4% in 24 hours.
Keywords : bacteria , detoxification, HgCl 2 , Klebsiella pneumoniae

## PENDAHULUAN
Pelepasan logam berat ke lingkungan dapat membahayakan ekosistem dan
menyebabkan  bahaya  serius  pada  kesehatan manusia.    Merkuri  merupakan  salah  satu logam  berat  yang  paling  berbahaya  dan
berada di lingkungan dalam berbagai bentuk. Senyawa  merkuri  dalam  bentuk  Hg(II)  dapat terikat  pada  residu  sistein  protein  manusia sehingga protein akan kehilangan aktivitasnya.      Selain  Hg(II),  senyawa merkuri yang paling berbahaya bagi kesehatan  manusia  adalah  senyawa  merkuri organik,  khususnya  metil  merkuri  dan  fenil merkuri.    Senyawa  ini  sangat  reaktif  dan mempunyai  mobilitas  tinggi  dibandingkan Hg(0) dan Hg(II), juga dapat menyerang saraf manusia melalui peredaran darah (Rasmussen et al. , 2008).
Sumber  pencemaran  merkuri  dapat berasal  dari  proses  geologi  dan  biologi,  tapi tidak  sebanding  dengan  pencemaran  merkuri yang  disebabkan  oleh  aktivitas  manusia seperti:  pembakaran  batubara,  jenis-jenis produk  minyak  bumi,  penggunaan  fungisida, katalisator  merkuri  dan  penambangan  emas yang  menggunakan  merkuri  sebagai  bahan pengekstraksi emas.
Salah  satu  usaha  untuk  detoksifikasi merkuri dapat dilakukan dengan menggunakan mikroorganisme resisten merkuri  seperti  bakteri  resisten  merkuri. Detoksifikasi  merkuri  oleh  bakteri  resisten merkuri  terjadi    karena  bakteri  resisten merkuri  memiliki  gen  resisten  merkuri,
operon  mer (Silver  and  Phung,  1998). Struktur operon  mer berbeda  untuk  setiap jenis bakteri.  Umumnya struktur operon mer terdiri  dari  gen  metaloregulator  ( merR ),  gen transfor  merkuri  ( merT,  merP,  merC ),  gen merkuri  reduktase  ( merA )  dan  organo merkuri  liase  ( merB ).    Bakteri  yang  hanya memliki  gen  merkuri  reduktase  ( merA ) disebut  bakteri  resisten  merkuri  spectrum sempit.  Ada beberapa bakteri yang memiliki selain gen merA, juga gen merB maka bakteri tersebut  disebut  bakteri  resisten  merkuri spectrum  luas.  Protein  MerA  mempunyai fungsi mereduksikan ion merkuri yang toksik menjadi  logam  merkuri  Hg(O)  yang  kurang toksik dan mudah menguap pada suhu kamar, sedangkan  protein  MerB  mempunyai  fungsi mengkatalisis  pemutusan  ikatan  merkuri- karbon  sehingga  dihasilkan  senyawa  organik dan ion Hg(II) (Tamar Barkay, 2003).
Beberapa
penelitian telah mengungkap  bahwa  mikroorganisme  pada daerah  tercemar  merkuri  berperan  utama dalam  detoksifikasi  merkuri,  oleh  karena  itu mikroorganisme pada daerah tercemar
merkuri  merupakan  sumber  untuk  isolasi bakteri resisten merkuri.
Salah satu masalah di Sulawesi Utara adalah kontaminasi tanah atau air oleh logam merkuri  dari  hasil  buangan  limbah  tambang emas  rakyat  yang  menggunakan  merkuri sebagai  bahan  pengekstrak  emas.  Dalam  air dan  tanah,  logam  merkuri  akan  mengalami perubahan  spesies  menjadi  ion  merkuri  yang larut dalam air dan mencemari perairan. Oleh karena  itu    pada  penelitian  ini  telah  diisolasi bakteri  resisten  merkuri  spektrum  sempit dari  daerah  tercemar  merkuri  yaitu  daerah muara  sungai  Sario  yang  terletak  di  Manado Sulawesi Utara.

## Tujuan Penelitian
Mengisolasi  dan  mengidentifikasi bakteri  resisten  merkuri  spektrum  sempit dari muara Sungai Sario di Manado Sulawesi Utara.

## Manfaat Penelitian
Hasil  penelitian  ini  dapat  digunakan untuk  detoksifikasi  (remediasi)  limbah merkuri anorganik di lingkungan perairan.

## METODOLOGI  PENELITIAN

## Alat dan bahan yang digunakan
Sarung tangan steril, tabung Durham, Skop  kecil  ,  Lampu  spiritus,  Plastik  steril, incubator,  mikroskop,  kaca  slide, jarum  Ose, CV-AAS, Laminar Air Flow, Alat-alat gelas, Timbangan  Sartorius,  Freezer.Kit  Ekstraksi Wizard  Genomic  DNA  (Promega):  EDTA , Lytic  enzyme ,  Larutan  nuclei  lysis,  Larutan RNA  ase,  Larutan  protein  precipitation, isopropanol,  etanol  70%,  Larutan  DNA rehydration.
Primer Bact-FI .5’AGAGTTTGATCMTGGCTCAG3’/Uni- B1.5’GGTTACSTTGTTACGACTT3’ (Eurogentic AIT), agarose (Vivantis),
Etidiumbromida, loading  dye (Vivantis), marker (Vivantis).

## Pengambilan Sampel
Sampel  sediment  diambil  dari  tiga titik  A1,  A2  dan  A3.  Isolat  pada  setiap  titik ke  dalam  larutan  NaCl  0,9%  yang  telah dibuffer.  Selanjutnya  diinokulasi  pada  media nutrient  broth  dengan  konsentrasi  HgCl 2 5  ,
10,  20,  dan  40  mg/l.    Diinkubasikan  pada suhu  30 o C  selama  24  jam.    Kultur  yang tumbuh  pada  media  dengan  konsentrasi merkuri tertinggi, digunakan untuk identifikasi  dan  pengujian  daya  reduksinya terhadap HgCl 2 .

## Uji Daya Reduksi Merkuri dari Bakteri Resisten Merkuri
Diambil  1  ose  Bakteri  resisten merkuri  tinggi  dari  media  agar  miring. Ditanam  dalam  media  nutrient  broth  yang mengandung 2 ppm HgCl 2 .  Diinkubasi pada suhu 37 o C  selama 1 jam, 12 jam dan 24 jam. Pada  akhir  inkubasi,  ditambahkan  H 2 SO 4 pekat  2  tetes  untuk  membunuh  bakteri  yang selanjutnya  dianalisis  kadar  merkuri  dengan metode  analisis  CVAAS  dan  dilakukan analisis blanko.

## Isolasi DNA Genomik
Isolasi  DNA  Genomik  dilakukan sesuai  metode  Wizard  Genomic  DNA (Promega).  Sampel  kultur  bakteri  diambil  1 ose  ditambah  1  ml  aquades  steril  dalam tabung  mikrosentrifus  1,5  ml,  dibiarkan semalam. Sampel disentrifus dengan kecepatan  13.000  rpm  selama  2  menit, supernatant  dibuang.    Ditambahkan  600  μl larutan lisis nuclei, dikocok dengan pipet agar sel-sel  tersuspensi.    Sampel  diinkubasi  pada suhu  80 o C  selama  5  menit  supaya  sel  lisat.
Di  bolak-balik  tabungnya  supaya  tercampur.
Sampel diinkubasi pada suhu 37 o C selama 30 menit, didinginkan pada suhu kamar.  Sampel ditambahkan 200 μl larutan protein presipitat, divortex  pada  kecepatan  tinggi  selama  20 detik  untuk  mencampur  protein  presipitat dengan sel lisat.  Sampel diinkubasi selama 5 menit,  disentrifus  pada  13.000  rpm  selama  3 menit.    Supernatan  dipindahkan  ke  dalam tabung  mikrosentrifus.  Sampel  ditambahkan 600  μl  isopropanol,  dicampur  dengan membolak-balik  tabung.    Sampel  disentrifus pada 13.000 rpm selama 2 menit, Supernatant dibuang  dan  tabung  dikeringkan  dengan membalikkan  di  atas  kertas  tissue.    Sampel ditambahkan 600 μl etanol 70% dan dikocok dengan  membolak-balikkan  tabung  beberapa kali untuk mencuci DNA.  Sampel disentrifus pada 13.000 rpm selama 2 menit,   isi tabung dituang dan dikeringkan di atas kertas tissue, dibiarkan  10-15  menit  (kering-anginkan), ditambahkan 100μl larutan DNA rehidrasi ke
dalam  tabung,  diinkubasi  pada  suhu  4 o C semalam.  DNA disimpan pada suhu 2-8 o C.

## Amplifikasi Gen 16S rRNA dengan Teknik PCR
Amplifikasi dilakukan dengan
menggunakan  mesin  PCR  Combi  Block (Whatman  Biometra  Germany).  Primer  yang digunakan  untuk  proses  PCR  yaitu  pasangan primer  universal Bact F1 ( forward ) dan Uni B1  ( reverse ).  Cetakan  yang  digunakan  untuk amplifikasi  gen  16S  rRNA  adalah  DNA genomik bakteri yang telah diisolasi. Amplifikasi  dengan  teknik  PCR  dilakukan dengan variasi komposisi reagen  dan kondisi reaksi PCR seperti dibawah ini.
Komposisi reagen untuk PCR 16S rRNA Untuk 1 Tabung PCR:
ddH 2 0 15,8 µl Bufer PCR 10x 2,5 µl MgCl 2 25 mM 3,0 µl dNTP 10 mM 0,5 µl Primer UniBI  30pmol/µl 1,0 µl Primer BactFI 30 pmol/µl 1,0 µl Taq DNA Pol (5U/µl) 0,2 µl Templat (pengenceran 10x) 1,0 µl Total 25,0  µl
Tabung    PCR  yang  telah  berisi  campuran reaksi  dimasukkan  ke  dalam  mesin    PCR yang diprogram sebagai berikut :
Kondisireaksi PCR gen 16S rRNA:
Denaturasiawal 94 o 3’ Denaturasi 94 o 1’  30 siklus Annealing 62 o 1’   30” Polimerisasi 72 o 1’   30” Pemantapan 72 o 10’
Elektroforesis  dan  Visualisasi  gen  16S rRNA
DNA yang telah diamplifikasi, diseparasi  dengan    elektroforesis  gel  agarosa 1%, selanjutnya dilakukan visualisasi menggunakan  pewarna  etidium  bromida  dan dideteksi  dengan  sinar  UV  pada UV- transiluminator . Hasil deteksi
didokumentasikan.

## Sekuensing gen 16S rRNA
Sekuensing dilakukan untuk menentukan  urutan  nukleotida  pada  fragmen DNA  yang  terdeteksi  dari  hasil  visualisasi
DNA  yang  teramplifikasi  dalam  proses  PCR menggunakan mesin sekuensing DNA otomatis.  Proses  sekuensing  dilakukan  di Macrogen  Korea.  Hasil  sekuensing  DNA dianalisis  menggunakan  metode  BLAST melalui  media  Online  NCBI,  untuk  mencari kesamaan  urutan  nukleotida  gen    16S  rRNA dalam  menentukan  spesies  bakteri  resisten merkuri  anorganik  yang  diisolasi  dari  lokasi tercemar merkuri.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
a. Isolasi Bakteri Resisten Merkuri Anorganik
Pada  hasil  isolasi  bakteri  resisten merkuri  anorganik  ini,  isolate  ditumbuhkan dalam  nutrient  broth  yang  mengandung HgCl 2 dengan  konsentrasi  yang  berbeda  (5, 10,  20,  40)  mg/l.  Hasil  yang  didapat  pada setiap  isolate  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Pada konsentrasi   5mg/l, diperoleh 12 isolat, 10 dan 20 mg/l diperoleh hanya 1 isolat yaitu A1.1.1, sedangkan pada konsentrasi 40 mg/l, tidak ada pertumbuhan bakteri.
Tabel 1.Hasil Isolasi Bakteri Resisten Merkuri Anorganik
KodeUji Konsentrasi HgCl 2 (mg/l) 5 10 20 40 A1.1.1 + + + - A1.1.2 + - - - A1.1.3 + - - - A1.1.4 + - - - A1.1.5 + - - - A1.2.1 + - - - A2.1.1 + - - - A3.2.1 + - - - A 3.3.1 + - - - A 3.3.2 + - - - A 3.3.4 + - - - A 3.3.4 + - - -

## Tabel 2.HasilAnalisisDayaReduksiMerkuriIsolat A1.1.1
No. Perlakuan Kadar Hg (mg/l) 0 jam      % 1 jam       % 12 jam      % 24 jam      % 1. Kontrol Media NB 0            0 0                 0 0                   0 0                   0 2. Kontrol HgCl 2 1.53      100 1.53       100 1.53         100 1.53         100 3. A1.1.1 1.53      100 0.38         25 0.12            8 0.01             0.6
b. Uji Daya Reduksi Merkuri dari Bakteri Resisten Merkuri
Menurut    Vetriani et  al .,  (2004), bakteri  resisten  merkuri tinggi mengandung operon mer yang  mengkode  flavoenzim, merkuri reduktase yang dapat  mereduksi  ion Hg 2+ menjadi  Hg 0 yang  kurang  toksik.  Pada penelitian ini telah dilakukan uji daya reduksi merkuri bakteri yang resisten merkuri  tinggi yaitu  A1.1.1.  Kultur  ditumbuhkan  dalam
media  nutrien  broth    yang  mengandung HgCl 2 2  mg/l    (Hg  1,5  mg/l)    selama  1  jam, 12  jam  dan  24  jam,  dilakukan  juga  analisis kontrol HgCl 2 dan media. Analisis dilakukan dengan    metode  analisis  CV-AAS.  Hasil analisis  menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri resisten  merkuri  anorganik  A1.1.1  dapat menurunkan  kadar  Hg    dalam  waktu  1,  12 dan  24  jam.  Hasil  pengukuran  konsentrasi merkuri terlihat pada Tabel 2.
Penurunan kadar merkuri dalam media dalam waktu  1,  12  dan  24  jam  ditunjukkan  pada
Gambar  1.
Gambar 1. Grafik Penurunan kadar merkuri (%) vs Waktu
Gambar 2. Pohon Filogenik Hasil Penjajaran Gen 16S rRNA isolat A1.1.1
c. Analisis Gen 16S rRNA Bakteri resisten Merkuri Anorganik
Hasil  isolasi  DNA  isolat  A1.1.1 diamplifikasi  menggunakan  PCR  kemudian dielektroforesis  dengan  agarose  1,5%.    Hasil menunjukkan  adanya  pita  gen  16S  rRNA pada  1500  bp.    Hasil  amplifikasi  kemudian disekuensing  pada  Macrogen  Korea.      Hasil sekuensing  gen  16S  rRNA  isolat  A1.1.1 ditunjukkan pada Gambar 2.
Urutan  nukleotida  hasil  sekuensing gen  16S  rRNA  isolat  A1.1.1,  selanjutnya dilakukan  Blast  melalui  online  NCBI.    Hasil Blast  menunjukkan  kesamaan  99%  dengan Klebsiella  pneumoniae , Klebsiella  variicola, Klebsiella  singaporensis  dan  Klebsiella oxyloca . Pohon
filogenik yang menggambarkan hubungan kekerabatan isolat
A1.1.1  dengan  Klebsiellalain  yang  ada  pada Gen Bank (Gambar 2). Terlihat Bahwa isolat A1.1.1  berkerabat  dekat  dengan Klebsiella pneumoniae galur K8, Klebsiella pneumoniae galur  JDM8, Klebsiella  pneumoniae galur R70  dan Klebsiella  pneumoniae galur DSM30104, oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa isolat A1.1.1 adalah jenis Klebsiella  pneumoniae berdasarkan  analisis Gen 16S rRNA.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Dari hasil penelitian diperoleh bahwa perairan  di  Sulawesi  Utara  yaitu  di    muara Sungai  Sario,  terdapat  bakteri  resisten merkuri    yang  dapat  mereduksi  merkuri
0 20 40 60 80 100 120 0 jam 1 jam 12 jam 24 jam Per sen tase (% ) H g Waktu…………….. Persentase (%) Hg vs waktu Kontrol Media NB Kontrol
HgCl2
A1.1.1
anorganik  HgCl 2 menjadi  Hg 0 yang  mudah menguap  sehingga  dapat  digunakan  untuk detoksifikasi limbah merkuri.
Berdasarkan  hasil  analisis  gen  16S rRNA,  bakteri  resisten  merkuri  isolat  A1.1.1 merupakan    bakteri  jenis Klebsiella pneumoniae .
Saran Dari hasil penelitian, dapat disarankan  untuk  dilakukan  analisis  lebih lanjut  terhadap  gen  yang  bertanggung  jawab terhadap  reduksi  merkuri  yaitu  gen mer A untuk  mendapatkan  enzim mer A  yang  dapat dikloning  dan  digunakan    dalam  remediasi limbah merkuri.

## DAFTAR PUSTAKA
Barkay,  T.,  and  I.  Wagner-Dobler.  2005.
Microbial Transformations of Mercury:  Potentials,  challenges,  and achievements  in  controlling  mercury toxicity in the environment. Adv. Appl. Microbiol. 57: 1-52.
Barkay,  T.,  S.M.  Miller,  A.O.  Summers. 2003.  Bacterial  Mercury  Resistance from  Atoms  to  Ecosystems. FEMS Microbiol. Rev. 27:355-384
Diner,  M.  B.  and  E.B.  Brenner.    2007. Toxicology  Mercury .    Article  Last Updated,  Department  of  Emergency Medicine, Emory University School of Medicine; clinical researcher, Emergency Medicine Research Center.
Fatimawali,  B. Kepel,  B. Fatmawaty,  Irawan Yusuf,  R.  Natsir.    2009.    Populasi Bakteri  pada  Tanah  Bekas  Buangan Limbah  Merkuri  Tambang  Emas  di Kabupaten Bolaang Mongondow: Penelitian Pendahuluan, Jurnal
Kedokteran Yarsi, Vol. 17 No.2.
Holt,  J.G.,  N.R.  Krieg,  P.H.A.  Sneath,  J.T.
Staley, S.T. Williams.  1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology ,  9 th
Edition.    USA: Williams and Wilkins.
Huang,  C.C.,  M.W.  Chen,  J.L.  Hsieh,  W.H. Lin, P.C. Chen, and L.F. Chien.  2006. Expression  of  Mercuric  Reductase from  Bacillus  Megaterium  MB1  in Eukaryotic Microalga  chlorella sp . DT: an Approach for Mercury Phytoremediation. Appl.  Microbiol.
Biotechnol. 72: 197-205.
Ijong,  F.  G.    2003.    Mikrobiologi  Dasar.
Laboratorium Mikrobiologi Hasil Perikanan,  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan UNSRAT, Manado.
Iohara,  K.,  R.  Iiyama,  K.  Nakamura,  S. Silver, M. Sakai, M. Takeshita, and K. Furukawa.  2001. The Mer operon of a mercury-resistant  Pseudoalteromonas haloplanktis strain isolated from Minamata  Bay,  Japan. Appl. Microbiol. Biotechnol. 56: 736-741.
Nofiani,  R.,  Gusrizal.    2004.    Bakteri Resistensi  Merkuri  Spektrum  Sempit dari Daerah Bekas Penambangan Emas Tanpa Izin (PETI) Mandor Kalimantan Barat. JNI , 6(2): 67-74.
Poulin,  A.  J.,  S.  Chadchain,  P.A.  Ariya,  M. Amot,  E.  Garcia,  P.G.C.  Campbell, G.J.  Zylstra,  and  T.  Barkay.    2007. Potential  for  Mercury  Reduction  by Microbes  in  the  High  Arctic. Appl. Environ. Microbiol. 73(7):2230-2238.
Rasmussen,  L.  D.,    C.  Zawadsky,  S.J. Binnerup,  G.  Oregaard,  S.J.  Sorensen, and  N.  Kroer.      2008.  Cultivation  of Hard-To-Culture  Subsurface  Mercury- Resistant  Bacteria  and  Discovery  of New merA Gene Sequences, Department of Environmental Chemistry  and  Microbiology,  National Environmental Research Institute,
University of Aarhus, Frederiksborgvej 399, 4000 Roskilde, Denmark, Institute of Biology, University of Copenhagen, Solvgade  83H,  1307  Copenhagen  K, Denmark. App.  Environ.  Microbiol. p.3795-3803, vol. 74, No.12.
Silver,  S.  and  L.T.  Phung.  1996.  Bacterial
Heavy Metal Resistance: New suprises. Annu.  Rev.  Microbiol .  50:
753-789.
Simbahan,  J.  M.,  E.  Kurth,  J.  Schelert,  A. Dillman,  E.  Moriyama,  S.  Jovanovich, and  P.  Blum.      2005.    Mercury  Hot Spring Supports Occurrence of
DomainSpecific  Forms  of  Mercuric
Reductase. Appl.  Environ.  Microbio.
71(12):8836-8845.
Vetriani, C., Y.S. Chew, S.M. Miller, J. Yagi, J.  Coombs,  R.A.  Lutz,  and  T.  Barkay. 2005.  Mercury  Adaptation  among Bacteriafrom a Deep-sea Hydrothermal
Vent. Appl.  Environ.  Microbiol .
71(1):220-226.