## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BINTANG LAUT Linckia
laevigata YANG DIPEROLEH DARI TELUK MANADO
Reynander Kurnia Runtuwene 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Gayatri Citraningtyas 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Linckia  laevigata is  one  of  the  starfish  species  in  the  class  of  Asteroids,  which  have  the antibacterial potential. Linckia laevigata itself is often found in the tropics where Manado Bay is located within these areas. This study aims to determine the antibacterial activity of the starfish Linckia laevigata extract obtained from Manado bay against Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria. Samples were  extracted    by  maceration  and  fractionated  using  ethanol,  methanol,  chloroform  and  n-hexane. Antibacterial  activity  was  performed    by  agar  diffusion  method  (Kirby  and  Bauer).  The  results  showed that  the  crude  extract  of  ethanol,  chloroform, n -hexane  and  methanol  fraction  effectively  inhibited  the growth  of Staphylococcus  aureus and Escherichia coli bacteria,  extract  and  fraction  were  categorized weak based on Davis and Stout criteria.
Keywords : Linckia laevigata Starfish, Antibacterial activity, Staphylococcus aureus , Escherichia coli

## ABSTRAK
Linckia laevigata merupakan salah satu spesies bintang laut yang berada dalam kelas Asteroida yang berpotensi sebagai antibakteri. Linckia laevigata sendiri sering ditemukan di daerah tropis di mana Teluk Manado berada dalam kawasan tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk menetukan adanya aktivitas antibakteri dari ekstrak bintang laut Linckia laevigata yang diperoleh dari teluk Manado terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli. Sampel  diekstraksi  secara  maserasi  dan  fraksinasi menggunakan  etanol,  metanol,  kloroform  dan  n-heksan.  Aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode difusi  agar  (Kirby  dan  Bauer).  Hasil  Penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi Kloroform, fraksi n-heksan dan fraksi methanol efektif menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, ekstrak dan fraksi dikategorikan lemah berdasarkan kriteria Davis dan Stout.
Kata Kunci : Bintang Laut Linckia laevigata, Aktivitas antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Mikroba  patogen  merupakan  salah satu  penyebab  penyakit  pada  manusia  dan makhluk  hidup  lainnya.  Banyak  usaha  yang telah dilakukan untuk mengantisipasi pengaruh  mikroba  patogen  tersebut  yaitu dengan  menemukan  senyawa  kimia  yang dapat menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri (Juariah, 2014). Antibakteri  diperlukan  untuk  mengobati infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri. Contoh  beberapa  bakteri yang  dapat menyebabkan infeksi diantaranya Staphylococus  aureus dan Escherchia  coli . Ciri  khas  infeksi  yang  disebabkan  oleh S. aureus adalah  radang  supuratif  (bernanah) pada  jaringan  lokal  dan  cenderung  menjadi abses. S.  aureus dikenal  sebagai  bakteri yang  paling  sering  mengkontaminasi  luka pasca bedah sehingga menimbulkan komplikasi (DeLeo et al ., 2009).
Escherichia  coli merupakan  bakteri patogen penyebab infeksi paling sering pada manusia.  Infeksi  ekstraintestinal  termasuk infeksi  saluran  kemih  yang  terjadi  ketika saluran  terhambat  atau  secara  spontan disebabkan  oleh  UPEC  ( Uropathogenic  E. coli ). Infeksi serius lainnya adalah kolesistitis,  peritonitis,  infeksi  luka  pasca operasi,  dan  sepsis.  Dalam  infeksi  saluran kemih  akut, E.  coli merupakan  organisme penyebab  70-80%  pada  kasus  kronik,  40- 50%  penyebab  infeksi  persisten  (Kayser et al ., 2005).
Untuk  menghindari  adanya  cemaran dari  bakteri  patogen  perlu  adanya  senyawa antibakteri  yang  sifatnya  alami  serta  dapat digunakan  oleh  manusia.  Salah  satu  hasil perairan  yang  dapat  dijadikan  senyawa
antibakteri  yang  bersifat  alami  adalah bintang laut (Juariah, 2014).
Bintang  laut  merupakan  salah  satu spesies dari kelas Asteroidea dan merupakan kelompok  dari  Echinodermata.  Bintang  laut memiliki  komponen  bioaktif  yang  terdiri dari  alkaloid,  steroid,  flavonoid,  saponin, yang memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri,  antifungi  (Agustina,  2012). Linckia  laevigata merupakan  salah  satu spesies bintang laut yang berada dalam kelas Asteroida yang berpotensi sebagai antibakteri. Linckia  laevigata sendiri  sering ditemukan  di  daerah  tropis  (Fitriana,  2010) di  mana  Teluk  Manado  berada  dalam kawasan tersebut.
Melihat Komponen bioaktifnya serta lokasi  penyebaranya  maka  peneliti  tertarik untuk melakukan penelitian aktivitas antibakteri dari bintang laut Linckia laevigata yang terdapat di Teluk Manado.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  masker,  gunting,  sarung tangan, pisau,  snorkel,  fins, tabung oksigen, Erlenmeyer(Pyrex),  gelas  ukur  (Pyrex), gelas  kimia(Pyrex),  tabung  reaksi,  rak tabung  reaksi,  pipet  tetes,  bunsen, micro tubes ,  cawan  petri,  timbangan  analitik (Kern),  corong  pisah,  kertas  saring,  batang pengaduk ,  rotary  evaporator (Steroglass), pinset , inkubator incucell (N-Biotek), autoklaf  (Autoclaf  KT-30s),  pipet  tetes, mikropipet, Laminar  air  flow (Clean Bench),  kertas  label,  cakram  (paper  disc), tissue, aluminium foil , mistar berskala,vial,pot  salep  dan  kamera  (Canon).
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  Bintang Laut Linckia laevigata , bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli , aquades,  etanol,  metanol,  kloroform,  n- heksan,  siprofloksasin paper  disc , Nutrien Agar ,.

## Pengambilan Sampel
Sampel  diperoleh  dari  perairan  teluk Manado  menggunakan  alat  bantu  (masker, snorkel,  fins  dan  tabung  oksigen).  Sampel dibersihkan  dari  pengotor,  lalu  dipotong kecil-kecil  kemudian  langsung  direndam dengan  cara  maserasi  dengan  etanol  dan dibawa  ke  Laboratorium  Mikrobiologi Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Sam  Ratulangi.  Sampel  difoto  lalu  diberi lebel  serta  nomor  sampel.  Sebagian  dari sampel disimpan dalam vial untuk diawetkan  sebagai voucher dan  diberi  label serta  nomor  sampel,  untuk  selanjutnya dideterminasi.
Ekstraksi
Ekstrak L.  Laevigata sebanyak 253,22  g  dibuat  dengan  cara  maserasi. Sampel  dipotong  kecil-kecil  dimasukan kedalam  botol,  kemudian  direndam  dengan larutan etanol 96% sampai sampel terendam semuanya,  dan  dibiarkan  selama  1x24  jam. Sampel yang direndam disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1  kemudian ditambah dengan larutan etanol 96% sampai terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama 1x24 jam, sampel tersebut disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2  kemudian ditambah dengan larutan etanol 96% sampai terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama 1x24  jam,  sampel  tersebut  di  lalu  disaring
menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  3  dan  debris  3.  Filtrat  1,  2,  dan  3 dicampur  menjadi  satu  kemudian  disaring, lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering  dan  ditimbang menggunakan timbangan analitik dan didapatkan  ekstrak  kasar  etanol  sampel sebanyak  9,7049  g.  Selanjutnya  ekstrak kasar  etanol  sampel  digunakan  untuk fraksinasi dan uji aktivitas antibakteri.

## Fraksinasi
Ekstrak  kasar  etanol L.  laevigata sebanyak 5,01 g dimasukan dalam Erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan  dengan metanol  80%  sebanyak  100  mL.  Setelah larut,  dimasukan  kedalam  corong  pisah  dan ditambahkan pelarut n-heksan sebanyak 100 mL  setelah  itu  dikocok  dalam  corong  pisah sampai homogen. Dibiarkan sampai terbentuk  lapisan  MeOH  dan  heksan. Masing-masing  lapisan  di  tampung  dalam wadah  yang  berbeda.  Lapisan  heksan selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering,  lalu ditimbang dan ini dinamakan fraksi heksan.
Selanjutnya lapisan MeOH ditambahkan  dengan  air  sebanyak  100  mL dipartisi dengan pelarut kloroform sebanyak 200  mL  dalam  corong  pisah,  setelah  itu dikocok berungkali hingga homogen. Dibiarkan  sampai  terbentuk  dua  lapisan yaitu lapisan MeOH dan kloroform. Masing- masing  lapisan  ditampung  dalam  wadah yang  berbeda.  Lapisan  kloroform  dalam wadah selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering  lalu  ditimbang.  Ini  dinamakan  fraksi kloroform.  Lapisan  MeOH  yang  ditampung pada wadah yang lain kemudian dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga
kering  lalu  ditimbang  berat  sampel.  Ini dinamakan  fraksi  MeOH.  Ketiga  fraksi tersebut digunakan dalam pengujian antibakteri.
Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antibakteri ini distrerilkan  terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu  121 ºC  selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  diatas  api  langsung  dan  media disterilkan  diautoklaf  pada  suhu  121  ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).
Pembuatan Media Cair B1.
Nutrient  Broth 0,26  g  dan  aquades sebanyak  20  mL  diaduk  sampai  rata kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu  diautoklaf  pada  suhu 121  ºC  selama  15  menit.  Dipipet  1  mL media cair B1, kemudian dimasukkan dalam tabung  reaksi  dan  tutup  dengan aluminium foil .  Media  cair  B1  siap  digunakan  sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).
Pembuatan Media Agar B1
Nutient  agar 2,8  g  dan  aquades sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu  diautoklaf  pada  suhu 121 ºC selama 15 menit, Media agar B1 siap digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media cair B1 yang sudah disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing- masing  bakteri  yang  sudah  dikultur  ( S. aureus dan E.  coli )  sebanyak  100  µL  ke dalam  tabung  reaksi  yang  berbeda.  Tutup dengan  aluminium  foil  tiap  tabung  reaksi dan  dimasukkan  kedalam  inkubator  selama 1x24 jam pada suhu 37 ºC (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan pelarut  metanol  untuk  menguji  apakah pelarut  metanol  memberikan  pengaruh terhadap aktivitas daya hambat.

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan larutan uji hasil ekstraksi dan  fraksinasi  Bintang  Laut L.  laevigata . dengan  konsentrasi  250  µg/50  µL  yaitu dengan  membuat  larutan  stok,  dengan  cara ditimbang  25  mg  ekstrak  kasar  etanol, kemudian  dilarutkan  dalam  5  mL  metanol. Perlakuan yang sama dilakukan untuk fraksi heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion Kirby  and  Bauer).  Pada  pengujian aktivitas antibakteri ini, cakram ( paper disc ) yang  digunakan  berukuran  6  mm  dengan daya  serap  50  µL  tiap  cakram.  Konsentrasi yang  digunakan  pada  pengujian  ini  hanya satu  konsentrasi  yaitu  250  µg/50  µL  pada setiap sampel yang terdiri dari ekstrak kasar, fraksi  heksan,  fraksi  kloroform,  fraksi MeOH,  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif. Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya  (250  µg/50  µL)  ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan mikropipet.
Untuk media agar B1 yang sudah diautoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit, kemudian  didinginkan  sampai  suhu  40  ºC. Tuangkan  media  agar  B1  ke  cawan  petri, Ambil  sebanyak  100  µL  bakteri  yang  telah di  kultur  dalam  tabung  reaksi,  dipipet  dan diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan  tunggu sampai  media  agar  B1  mengeras.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan  nomor
sampel yang sesuai. Letakkan kertas cakram yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  Bintang Laut L.  laevigata .  dengan  pinset  kedalam cawan petri lalu diinkubasi selama 1x24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dapat  dilakukan  setelah 1x24  jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada sekitaran  cakram  menunjukkan  kepekaan bakteri  terhadap  antibiotik  atau  bahan antibakteri  yang  digunakan  sebagai  bahan uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakkan  mistar  berskala  dengan  cara diukur  diameter  total  zona  bening  cakram. Kemudian  diameter  zona  hambat  tersebut dikategorikan  kekuatan  daya  antibakterinya berdasarkan  penggolongan  Davis  dan  Stoud (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Bintang laut Linckia laevigata yang telah diambil dari perairan Siladen di rajang. Hal  ini  bertujuan  untuk  memperluas permukaan  yang  akan  berinteraksi  dengan pelarut, sehingga akan lebih banyak senyawa  yang    dapat  ditarik  oleh  pelarut. Proses ekstraksi bertujuan untuk memisahkan  atau  menyari  senyawa  aktif yang ada di dalam sampel, sehingga adanya suatu  proses  pemisahan  dua  atau  lebih komponen  yang  terkandung  dalam  sampel, oleh suatu pelarut (Suryanto, 2012). Sampel di  ekstraksi    dengan  menggunakan  metode maserasi. Tujuan pemilihan metode maserasi  karena  cara  pengerjaan  dan peralatan  yang  digunakan  sederhana  serta mudah  dilakukan  dan  metode  maserasi  juga
dipilih  karena  tidak  menggunakan  suhu tinggi  dimana  ada  beberapa  senyawa  aktif dari  Bintang  laut  yang  tidak  tahan  panas  , salah  satunya  yaitu  flavonoid.  Untuk mendapatkan  penyarian  yang  maksimal, agar  senyawa  kimia  di  dalam  sampel  dapat terekstrak  secara  menyeluruh  maka  di lakukan remaserasi atau pengulangan dengan  penggantian  pelarut  sebanyak  tiga kali menggunakan pelarut etanol .
Ekstraksi  sampel  ini  menggunakan pelarut  etanol  96%  karena  pelarut  etanol menyari  hampir  keseluruhan  kandungan simplisia baik non polar, semi polar maupun polar  (Iswanti,  2009).  Pelarut  ini  bersifat selektif,  ekonomis,  tidak  beracun,  dan bersifat universal yang cocok untuk mengekstrak  semua  golongan  senyawa metabolit sekunder (Kristanti et al., 2008).
Fraksinasi  dilakukan  untuk  senyawa berdasakan perbedaan kepolaran. Pemisahan jumlah dan jenisnya menjadi fraksi berbeda. Mula-mula  sampel  disari  berturut-turut dengan  larutan  penyari  yang  berbeda-beda polaritasnya.  Masing-masing  pelarut  secara selektif akan memisahkan kelompok kandungan kimia tersebut. Mula-mula disari dengan  pelarut  yang  non-polar,  kemudian disari dengan pelarut yang kurang polar dan terakhir  dengan  pelarut  polar.    Jumlah senyawa  yang  dapat  dipisahkan  menjadi fraksi berbeda-beda tergantung pada kandungan  senyawa  di  tiap  jenis  sampel. Pelarut  yang  digunakan  untuk  fraksinasi dapat disesuaikan dengan kandungan senyawa yang diinginkan (Fardhani, 2014). Pelarut  yang  digunakan  untuk  proses fraksinasi  yaitu  n-heksan,  kloroform,  dan metanol  secara  berkesinambungan  dengan sifat kepolarannya yang berbeda-beda
dimana  n-heksan  memiliki  sifar  nonpolar, Kloroform  memiliki  sifat  semi-polar  dan metanol  memiliki  sifat  polar.  Karena masing-masing pelarut tersebut dapat secara selektif  memisahkan  kelompok  kandungan kimia  yang  terkandung  dalam  sampel, sehingga  didapatkan  fraksi  yang  berbeda- beda.
Tabel  1.  Rendemen  ekstrak  dan  fraksi Bintang Laut Linckia laevigata
No.  Sampel Rendemen (%) Warna sampel 1. EKE 3,83 Oranye 2. FH 3,72 Kuning 3. FK 2,99 Oranye 4. FM 77,20 Kuning Kecoklatan Keterangan : EKE : Ekstrak Kasar Etanol FH  : Fraksi Heksan FK  : Fraksi Kloroform FM  : Fraksi Metanol
Untuk  mengetahui  persentase  zat yang  terekstrak  dari  sampel  maka  hasil timbang  dari  massa  ekstrak/fraksi  dibagi dengan massa sampel/ekstrak awal dan dikalikan 100%. Untuk ekstrak kasar etanol, didapatkan  massa  dari  ekstrak  sejumlah 9,7049  g  dari  massa  sampel  yang  di maserasi  sebanyak  253,22  g,  sehingga didapatkan  rendemen  3,83%  dengan  warna filtrat  oranye.  Selanjutnya  ekstrak  kasar etanol di fraksinasi menggunakan pelarut  n- heksan, kloroform dan metanol. Tahap awal fraksinasi  dilakukan  dengan    melarutkan 5,01  g  ekstrak  kasar  etanol  hasil  maserasi
dengan  menggunakan  pelarut  metanol,  lalu dipartisi  pertama  kali  menggunakan  pelarut n-heksan, didapatkan filtrat n-heksan berwarna kuning dengan massa hasil ekstrak sebanyak  0,1868  g,  sehingga  didapatkan rendemen 3,72%. Metanol kemudian dipartisi  kembali  dengan  pelarut  kloroform, didapatkan filtrat kloroform berwarna oranye dengan massa hasil ekstrak sebanyak 0,1498  g,  sehingga  didapatkan  rendemen 2,99  %  dan  didapatkan  filtrat  metanol berwarna  kuning  kecoklatan  dengan  massa hasil  ekstrak  sebanyak  3,8677  g,  sehingga didapatkan  rendemen  77,20%.    Rendeman dari fraksi metanol merupakan yang terbesar diantara fraksi yang lain, hal ini menandakan  bahwa  banyak  senyawa  yang ditarik oleh pelarut polar. Senyawa-senyawa yang  bersifat  polar  seperti  flavonoid  dan saponin  banyak  tertarik  ke  pelarut  polar karena  sesuai  dengan  prinsip  like  dissolve like , dimana pelarut polar akan larut dengan pelarut polar .

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Bintang  Laut Linckia laevigata
Uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak etanol,  fraksi  metanol,  fraksi  n-heksan,  dan fraksi  kloroform  Bintang  Laut  Linckia laevigata  terhadap  bakteri  Escherichia  coli dan  Staphylococcus  aureus  menggunakan metode  difusi  agar.    Metode  difusi  ini dilakukan  dengan  cara  kertas  cakram  yang berisi senyawa antibakteri, kemudian diletakkan  pada  media  padat  yang  telah diinokulasi  bakteri.  Senyawa  antibakteri akan  berdifusi  ke  dalam  media  padat  yang diinokulasi bakteri dan menghambat pertumbuhan  bakteri  yang  ditandai  dengan terbentuknya  daerah  jernih  di  sekeliling kertas cakram (Brooks et al., 2005).  Metode
Difusi  menjadi  metode  yang  dipilih  dalam uji  aktivitas  karena  memiliki  keuntungan yaitu  prosedurnya  yang  sederhana  (mudah dan praktis) untuk dilakukan dan merupakan metode  serbaguna  bagi  semua  bakteri patogen  yang  tumbuh  capat  dan  sering digunakan  dalam  uji  kepekaan  antibiotik dalam  program  pengendalian  mutu  (Mpila, 2012).  Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus  aureus  dan  Echerichia  coli dimana    Staphylococcus  aureus  mewakili bakteri  gram  positif  dan  Echerichia  coli untuk  mewakili  bakteri  gram  negatif. Penggunaan  bakteri  ini  bertujuan  untuk mengetahui  bahwa  apakah  ekstrak/fraksi dari  Linckia  laevigata  memiliki  aktivitas antibakteri serta untuk mengetahui spektrum
dari  aktivitas  antibakteri  Linckia  laevigata, apakah  memiliki  spektrum  luas,  yaitu  dapat membunuh  banyak  jenis  mikroba  yaitu bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif,  atau spektrum  sempit  yaitu  hanya  membunuh salah  satu  dari  gram  positif  atau  negatif. Dalam  uji  aktivitas  antibakteri  ini,  hasil diperoleh melalui pengamatan yang dilakukan  setelah  inkubasi  pada  suhu  37º  C selama  1x24  jam  dengan  pengulangan sebanyak 2 kali pada masing-masing bakteri, Terbentuknya zona hambatan (daerah bening)  disekeliling  cakram  menunjukkan kepekaan bakteri  terhadap bahan antibakteri maupun  antibiotik  yang  digunakan  sebagai kontrol positif.
Tabel  2.  Hasil  pengukuran  rata-rata  diameter  daya  antibakteri  dari  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi kloroform, fraksi n-heksan, dan fraksi metanol, Bintang Laut Linckia laevigata terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Keterangan : EKE : Ekstrak Kasar Etanol
FH  : Fraksi n-Heksan
FK  : Fraksi Kloroform
FM  : Fraksi Metanol
K+  : Kontrol Positif
K- : Kontrol  Negatif
Dalam pengujian ini digunakan kontrol positif  dan  negatif.  Kontrol  positif  yang digunakan  yaitu  antibiotik  siprofloksasin. Pemilihan  antibiotik  siprofloksasin  karena antibiotik ini memiliki spektrum luas (Sarro,
2001). Penggunaan kontrol positif berfungsi sebagai  kontrol  dari  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  daerah  hambat yang  terbentuk  Dari  hasil  menunjukan diameter  zona  hambat  dari  kontrol  positif
Rata-rata Diameter Total Zona Hambat (mm)
EKE FK FH FM K+ K- Staphylococcus aureus Escherichia coli 0,75 2,25 1,25 2,50 2,75 0,875 1,25 0,25 21 15.5 0,00 0,00
paling  besar  (21  mm)  diantara  fraksi  dan ekstrak  serta  kontrol  negatif  pada  bakteri Staphylococcus  aureus  dan  (15,5  mm)  pada bakteri  Escherichia  coli.  Kontrol  negatif digunakan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya pengaruh  pelarut  terhadap  pertumbuhan bakteri  uji,  sehingga  dapat  diketahui  bahwa aktivitas yang ditunjukan oleh ekstrak/fraksi ialah zat yang terkandung dalam sampel
bukan  berasal  dari  pelarut  yang  digunakan. Kontrol  Negatif  menunjukkan  perbedaan nyata terhdaap kontrol  positif, ekstrak kasar maupun  fraksi.  Kontrol  negatif  digunakan yaitu  metanol,  menunjukkan  tidak  adanya zona  hambat  pada  pengujian  terhadap bakteri  gram  positif  Staphylococcus  aureus maupun gram negative Escherichia coli. Hal ini  mengindikasikan  bahwa  kontrol  yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji antibakteri,  sehingga  daya  hambat  yang terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut melainkan  karena  aaktivitas  senyawa  yang ada pada bintang laut Linckia laevigata.
Penggunaan metanol sebagai kontrol negatif diperkuat dengan penelitian sebelumnya  oleh  Manawan  (2014)  yang menyatakan  bahwa  kontrol  negatif  metanol pada  uji  antibakteri  tidak  menunjukkan adanya  aktivitas  sehingga  dapat  dipastikan bahwa  metanol  tidak  berpengaruh  terhadap aktivitas yang terbentuk.
Menurut  penggolongan  kekuatan daya  antibakteri  yang  digolongkan  menurut Davis and Stout (1971), yaitu: diameter zona bening  5  mm  atau  kurang  dikategorikan lemah,  zona  bening  5-10  mm  dikategorikan sedang,  zona  bening  10-20  mm  di kategorikan kuat dan zona bening 10-20 mm atau  lebih  dikategorikan  sangat  kuat.
Kriteria  Inilah  yang  digunakan  dalam penelitian  untuk  menggolongakan  daya hambat kontrol dan bahan uji sampel ekstrak dan  fraksi.  Hasil  yang  di  dapatkan    untuk ekstrak  kasar  etanol  menunjukan  bahwa diameter  zona  bening  yang  terbentuk  pada bakteri  Staphylococcus  aureus  yaitu  0.75 mm,  sedangkan  pada  bakteri  Escherichia coli  2,25  mm  ,  daya  hambat  untuk  ekstrak kasar pada kedua bakteri dikategorikan daya hambat  lemah.  Hal  ini  menunjukan  bahwa ekstrak  kasar  etanol  bintang  laut  Linckia laevigata.  memiliki  daya  hambat  yang  lebih peka pada bakteri gram negatif dibandingkan bakteri gram positif.
Fraksi  kloroform  nilai  rata-rata diameter  zona  beningnya  memiliki  nilai rata-rata  terbesar  di  bandingkan  fraksi  dan ekstrak lainnya yaitu 2,50 mm untuk bakteri Escherichia coli dan untuk bakteri Staphylococcus  aureus  didapatkan  1,25  mm walaupun  kedua  nilai  tersebut  masih dikategorikan  dalam  kategori  lemah  untuk daya  antibakteri.  Dari  nilai  yang  didapat dapat  diketahui  bahwa  frkasi  klorofom bintang  laut  Linckia  laevigata.  memiliki daya  hambat  yang  lebih  peka  pada  bakteri gram  negatif  dibandingkan  bakteri  gram positif.
Fraksi n-heksan nilai rata-rata diameter  zona  beningnya  memiliki  nilai rata-rata  terbesar  di  bandingkan  fraksi  dan ekstrak lainnya yaitu 2,75 mm untuk bakteri Staphylococcus  aureus  dam  untuk  bakteri Escherichia coli didapatkan 0,875 mm .Daya hambat  untuk  fraksi  n-heksan  pada  kedua bakteri  masih  sama  dikategorikan  dalam daya  hambat  lemah.  Berbeda  dengan  kedua sampel sebelumnya  fraksi n-heksan bintang laut  Linckia  laevigata    memiliki  daya
hambat  yang  lebih  peka  pada  bakteri  gram positif dibandingkan bakteri gram negatif.
Fraksi metanol nilai rata-rata diameter  zona  beningnya  pada  bakteri Staphylococcus  aureus  yaitu  1,25  mm  dan pada  bakteri  Escherichia  coli  memiliki  nilai rata-rata  diameter  zona  bening  yang  paling kecil yaitu 0.25 mm, dan masih sama seperti ketiga  sampel  sebelumnya  Fraksi  Metanol ini  dikategorikan    berdaya  hambat  lemah. Nilai  yang  didapat  fraksi  metanol  bintang laut Linckia laevigata memiliki daya hambat yang  lebih  peka  pada  bakteri  gram  positif dibandingkan bakteri gram negatif.
Secara  umum  pembentukan  zona hambat pada bakteri gram positif lebih besar daripada  pembentukan  zona  hambat  pada bakteri  gram  negatif.  Hal  ini  ditunjukan pada  fraksi  n-heksan  dan  fraksi  methanol.. hal  ini  terjadi  karena  adanya  perbedaan sensitivitas  bakteri  terhadap  antibakteri dipengaruhi  oleh  struktur  dinding  sel bakteri. Bakteri gram positif cenderung lebih sensitif terhadap antibakteri, Karena struktur dinding  sel  bakteri  gram  positif  lebih sederhana dibandingkan struktur  dinding sel bakteri  gram  negatif  sehingga  memudahkan senyawa antibakteri untuk masuk ke  dalam sel  bakteri  gram  positif.  Hasil  pengamatan pada  ekstrak  kasar  etanol  dan  fraksi kloroform  menunjukan  bahwa  daerah  zona hambat  bakteri  gram  negatif  lebih  besar daripada  zona  hambat  bakteri  gram  positif. Hal  ini  diduga  adanya  perbedaan  struktur- struktur  dinding  sel  menentukan  penetrasi, ikatan  dan  aktivitas  senyawa  antibakteri (Jawetz dkk., 2004). Dalam hal ini senyawa aktif  dalam  ekstrak  kasar  dan  fraksi kloroform  bintang  laut  L.laevigata  lebih aktif  dalam  menghambat  bakteri  gram
negatif.  Menurut  Davidson et  al (2005), senyawa antibakteri yang berupa asam-asam organik  memiliki  daya  hambat  yang  lebih besar terhadap bakteri gram negatif. Masing- masing  fraksi  ternyata  menghasilkan  zona hambatan  yang  berbeda  terhadap  kedua bakteri  uji.  Hal  ini  diduga  karena  tingkat kepekaan dari masing-masing bakteri berbeda  untuk  setiap  fraksi.  Menurut Prenggienis  (2015)  menyatakan  bahwa  luas diameter zona hambatan disekeliling cakram dipengaruhi  oleh  kepekaan  bakteri  uji terhadap  agen antibakteri,  kesesuaian media pertumbuhan  organisme,  kondisi  pada  saat inkubasi,  laju  difusi  dari  agen  antibiotik  di dalam  media  dan  konsentrasi  molekul antibiotik
Ekstrak kasar etanol,fraksi kloroform,  fraksi  metanol  dan  fraksi  n- heksan  dari  bintang  laut  Linckia  laevigata berdasarkan  kriteria  Davis  dan  Stout  (1971) menunjukan  senyawa  yang  terkandung didalamnya  memiliki  aktivitas  antibakteri yang  kurang  efektif  atau  berdaya  hambat lemah,  namun  ekstrak  dan  fraksi-fraksi  ini bersifat  spektrum  luas,  artinya  kandungan senyawa tersebut memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri gram positif dan gram negatif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak kasar, fraksi metanol, fraksi kloroform  dan  fraksi  n-heksan  memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan golongan daya antibakteri lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina,  DS.  2012.  Aktivitas  Antioksidan dan  Komponen  Bioaktif  Bintang Laut  Culcita  sp.  [ Skripsi ].  bogor agricultural university, Bogor.
Brooks  G.F,  J.S.  Butel.,  S.A  Morse.  2004.
Jawetz,  Melnick,  &  Adelberg’s Medical Microbiology . 23rd ed page.
15-31,  184-186.  Lange  Medical Books, New York.
Davidson  BH,  Sofos  JN,  Branen  AL.  2005.
Antimicrobals  in  Food.  3rd  edition. Taylor  and  Francis  Group,  CRC Press, Boca Raton.
Davis,  W.W.,  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Method  of  microbiological  assay. Journal  of  Microbiology . 22 :659- 665.
DeLeo,  F.R.,  Diep,  B.A.,  Otto,  M.  2009, „Host  defense  and  pathogenesis  in Staphylococcus  aureus  infections,
Journal Dent , 23 :17-34.
Fardhani,  H.L.  2014.  Pengaruh  Metode
Ekstraksi Secara Infundasi dan Maserasi Daun Asam Jawa (Tamarindus  indica  L.)  Terhadap Kadar  Flavonoid  Total [ skripsi ].
Fakultas  Farmasi  Universitas Gadjah
Mada, Yogyakarta.
Fitriana, N. 2010. Inventarisasi Bintang Laut
(Echinodermata: Asteroidea) Di Pantai  Pulau  Pari,  Kabupaten  Adm. Kepulauan  Seribu. Jurnal  Ilmiah
Faktor Exacta. 3 :167-174.
Iswanti, D.A. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi  N-Heksan,  Fraksi  Etil  Asetat,
Dan  Fraksi  Etanol  96%  Daun  Ekor Kucing  (Acalypha  Hispida  Burm.  F) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus  ATCC  25923  Secara  Dilusi [ skripsi ]. Fakultas
Farmasi Universitas Setia Budi, Surakata.
Juariah,S.  2014.  Aktifitas  Anti  Bakteri Spesies  Asterias  Forbesii  Terhadap Beberapa  Jenis  Bakteri  Patogen [ Skripsi ]. FMIPA Universitas Sumatera Utara, Medan. Kayser,  Fritz  H.,  Kurt  A.  Bienz,  Johannes Eckert,  Rolf  M.  Zinkernagel.  2005. Medical Microbioly . Thieme Stuttgart, New York.
Kristanti, A. N., N.S. Aminah., M. Tanjung.,
B.  Kurniadi.  2008. Buku  Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Kusuma,  S.A.F.  2009,  Staphylococcus
aureus, [ Tesis ], Universitas Padjajaran, Bandung. Manawan, F. 2014. Aktifitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Spons Haliclona  Sp,  yang  diperoleh  dari Teluk Manado. [ Skripsi ]. FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Mpila, D. A. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mayana (Coleus atropurpureus benth)
Terhadap  Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli  dan  Pseudomas aeruginosa  Secara  Invitro [ skripsi ]. Program  Studi  Farmasi  FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Neal,  M.  J.,  2006, Farmakologi  Medis , diterjemahkan  oleh  Surapsari,  J.,  81. Penerbit Erlangga,Jakarta.
Ortez,  J.H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual of antimicrobial susceptibility testing . Marie B. Coyle
(Coord.  Ed).  American  society  for
Microbiology.
Prenggienis,D.2015.Aktivitas Antibakteri Ekstrak Nudibranch Polka-Dot (Jorunna funebirs)(Gastropda:Moluska) Terhadap Bakteri Multidrug Resistent (MDR). Jurnal Ilmu Kelautan. 20 (4):195-206
Radjab,A., Rumahenga,S., Soamole,A., Polnaya,D., Barends,W. 2014. Keragaman Dan Kepadatan
Ekinodermata  Di  Perairan  Teluk Weda,  Maluku  Utara. Jurnal  Ilmu Teknologi  dan  Kelautan  Tropis . 6 : 17-30.
Sarro,  A.D.,  G.D.  Sarro.  2001.  Adverse Reactions  to  Fluoroquinolones.  An Overview  on  Mechanism  Aspect. Current  Medicinal  Chemistry.  8 :371-384.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Penerbit  Putra  Media  Nusantara,
Surabaya.