## ISOLASI SENYAWA STEROID DARI KUKIT AKAR SENGGUGU
( Clerodendrum serratum
L.Moon)
Nasrudin 1,2) , Wahyono 3) , Mustofa 4) dan Ratna Asmah Susidarti 3)
1) Mahasiswa Program Studi S3 Ilmu Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281;
2) Universitas Halu Oleo, Kendari, Sulawesi Tenggara, 93232; 3) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281; 4) Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281

## ABSTRACT
Steroid  is  a  very  important  compound  in  medicine.  Its  occurence  as  a  secondary  metabolite compound  which  is  expected  to  be  the  chemical  constituent  that  gives  medicinal  value  to  certain plant. Senggugu have been use as medicine for a long time and have been reported to contain steroid. Because of that, this study’s objective is to isolate steroid compounds from Senggugu’s roots bark. Senggugu’s roots bark powder is extracted using fractional maceration using n-hexane, ethyl acetate and  methanol  to  obtain  ethyl  acetate  fraction  of  senggugu’s  roots  bark  extract.  The  extract  then fractionated  further  using  Vacuum  Liquid  Chromatography  (VLC)  with  n-hexane–ethyl  acetate– methanol  gradient  eluents  to  obtain  ten  fractions.  Further  purification  is  performed  on  fraction  D using Gravity Column Chromatography with n-hexane–ethyl acetate gradient eluents producing eight fractions that’s monitored using Thin Layer Chromatography (TLC). Purification that was performed on  fraction  D7  by  recrystallization  yielding  17  mg  isolate.  That  isolate  then  tested  for  purity  and spectroscopic analysis using GC-MS, 1 H-NMR and 13 C-NMR. Isolate N1 spectral data then compared against  reference  β-sitosterol and stigmasterol  followed  by  TLC  analysis  on  the  same  system  using anisaldehyde as stain marker. Isolation procedure yielding in isolate N1 which is white powder with melting  point 138 -141 0 C  and  chemical  formula  C 29 H 50 O. In  accordance  to  the  spectral  analysis  of isolate N1 and comparison against existing data base, we propose that isolate N1 is Stigmast-7-en- 3β-ol which is a new steroid from Clerodendrum serratum that have yet to be reported.
Keywords : Steroid, (3β, 7α, 24S)-Stigmastan-3-ol  dan Clerodendrum serratum

## ABSTRAK
Steroid  merupakan  senyawa  penting  dalam  pengobatan.  Keberadaannya  sebagai  salah  satu diantara  golongan  senyawa  metabolit  sekunder  diharapkan  menjadi  konstituen  kimia  yang  memberi nilai  pengobatan  pada  suatu  tumbuhan.  Senggugu  telah  lama  dimanfaatkan  sebagai  obat  secara tradisonal dan dilaporkan mengandung steroid. Karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa  steroid  dari  kulit  akar  senggugu.  Sebuk  kulit  akar  senggugu  die kstraksi  dengan  metode maserasi bertingkat mulai n -heksan, etil asetat hingga metanol, sehingga diperoleh ekstrak fraksi etil asetat kulit akar senggugu. Ekstrak tersebut kemudian difraksinasi menggunakan KCV (Kromatografi Cair  Vakum)  eluen n -heksan-etil  asetat-metanol  secara  bergradien,  diperoleh  sepuluh  fraksi. Selanjutnya  pada  fraksi  D  dilakukan  isolasi  senyawa  menggunkan  KKG  (Kromatografi  Kolaom Grafitasi)  eluen n -heksan-etil  asetat  secara  bergradien  pula,  dihasilkan  delapan  fraksi  yang  dipantau dengan  KLT.  Pemurnian  isolat  dilakukan  pada  fraksi  D7  dengan  cara  rekristalisasi,  diperoleh  isolat N1 sebanyak 17 mg. Isolat tersebut di uji kemurniannya dan dilakukan analisis spektroskopi GC-MS,
1 H-NMR  dan 13 C-NMR.  Data  spektra  isolat  N1  dibandingkan  dengan β-sitosterol dan  stigmasterol serta  dilakukan  analisis  KLT  dalam  sistem  yang  sama  dengan  penampak  noda  anisaldehida.  Hasil isolasi  yang  diperoleh  adalah  isolat  N1  berbentuk  serbuk  putih  dengan  titik  lebur  138 -141 0 C dan rumus molekul C 29 H 50 O. Berdasarkan analisis data spektra isolat N1 yang dibandingkan dengan data terdahulu,  maka  kami  mengusulkan  bahwa  isolat  N1  adalah Stigmast-7-en-3β-ol  yang merupakan steroid baru dari Clerodendrum serratum yang belum pernah dilaporkan .
Kata Kunci : Steroid, Stigmast-7-en-3β-ol dan Clerodendrum serratum

## PENDAHULUAN
Steroid  merupakan  terpenoid  lipid yang dikenal dengan empat cincin kerangka  dasar  karbon  yang  menyatu. Struktur  senyawanya  pun  cukup  beragam. Perbedaan  tersebut  disebabkan  karena adanya  gugus  fungsi  teroksidasi  yang terikat pada  cincin dan terjadinya oksidasi cincin  karbonya  (Samejo  dkk.,  2013). Steroid berperan penting bagi tubuh dalam menjaga keseimbangan garam, mengendalikan metabolisme dan meningkatkan  fungsi  organ  seksual  serta perbedaan  fungsi  biologis  lainnya  antara jenis kelamin.
Tubuh manusia memproduksi  steroid  secara  alami  yang terlibat dalam berbagai proses metabolisme.  Sebagai  contoh  steroid  dari garam empedu, seperti garam deoksikolik, asam  kholik  dan  glisin  serta  konjugat taurin yang berfungsi memperlancar proses pencernaan (Bhawani dkk., 2011) .
Berdasarkan sumbernya steroid dibedakan  atas  steroid  sisntetis  dan  alami.
Steroid  sintetis  yang  umum  digunakan adalah glukokortikosteroid, estrogen, metilprednisolon, kortikosteroid, androgen,  squalamine  dan  hydrocortisone. Senyawa  ini  juga  digunakan  untuk pengobatan penyakit akibat kelebihan atau kekurangan  hormon,  penyakit  berbahaya serta penyakit lainnya seperti radang sendi dan  alergi  (Bhawani  dkk.,  2011).  Sterol tumbuhan  yang  telah  lama  dikenal  adalah campesterol,  stigmasterol  dan  β-sitosterol.
Sterol  ini  menunjukkan  efek  menurunkan kolesterol  dan  antikarsinogenik.  Efek antiangiogenik  diduga  melibatkan  aksi senyawa tersebut sebagai antikanker (Choi dkk.,  2007).  Stigmasterol  dimungkinkan untuk  mencegah  penyakit  kanker  tertentu, misalnya kanker ovarium, prostat,
payudara  dan  kanker  usus  besar  karena mempunyai potensi antioksidan, hipoglikemik  dan  mampu  menghambat tiroid  (Gabay  dkk.,  2010;  Panda  dkk., 2009).
Penelitian  ini  merupakan  rangkaian penelitian  kami  yang  sebelumnya  sudah kami  laporkan  baik  aktivitas  antioksidan maupun    aktivitas  hepatoprotektif  fraksi etil asetat kulit akar senggugu ( Clerodendrum  serratum )  (Nasrudin  dkk,.
2015;  Nasrudin  dkk.,  2017).  Isolasi senyawa  steroid  dari  tumbuhan  ini merupakan upayah dalam mencari senyawa antioksidan yang dapat memberikan efek hepatoprotektif.
Sebagaimana  diketahui  bahwa  senggugu secara  tradisional  telah  lama  digunakan untuk  asma, bronkitis,  peluruh  air  seni, obat  batuk  dan  untuk  memperoleh  suara yang  jernih  (Heyne,  1950).  Selain  itu, senggugu dilaporkan mengandung beberapa  jenis  steroid,  diantaranya  γ- sitosterol,
β-sitosterol, spinasterol, spinasteril-β-D-glucoporanoside, α- spinasterol, campesterol, cholestanol, cloresterol, 24-etil cholesterol dan stigmasterol  (Banerjee  S.K.  dkk ., 1969;
Nair  dkk.,  1976;  Bonsri,  2003;  Fan  dkk., 2007  dan  Singh  dkk ., 2012).  Dimana steroid  merupakan  salah  satu  diantara golongan  senyawa  metabolit  sekunder yang  kehadirannya  diharapkan  sebagai konstituen  kimia  yang  memberi  nilai pengobatan pada suatu tumbuhan
(Kardong  dkk.,  2012;  Sasidharan  dkk., 2011).  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengisolasi  senyawa steroid dari kulit akar senggugu.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang  digunakan  pada penelitian  ini  antara  lain  alat  penggiling simplisia mesin merk  Retsch  Muhle , alat maserasi (maserator), ayakan, corong kaca, gelas  beker,  gelas  ukur,  spatula,  kolom kromatografi  cair  vakum  diameter  8  cm dan  tinggi  42  cm,  kolom  kromatografi gravitasi  diameter  2  cm  da  tinggi  50  cm, statif,  botol  vial, Chamber ,  lampu  UV  λ 254  nm  dan  366  nm,  oven  (Finco  Inc), pipet ukur, pipet tetes, rotary evapavorator
(Buchi), Fisher melting Point,
spektrofotometer 1 H dan 12 C-NMR  ( JEOL type  JNM-ECA  500) spektrofotometer GC-MS  (Shimadzu  GCMS-QP2010SE) , timbangan analitik, dan waterbath (Memmert).
Bahan  tumbuhan  yang  digunakan pada  penelitian  ini  adalah  kulit  akar senggugu  yang  diperoleh  dari  daerah Imogiri,  Bantul  Yogyakarta. Determinasi tumbuhan  dilakukan  oleh  bagian  Biologi Farmasi  Fakultas  Farmasi  Universitas Gadjah Mada. Bahan lainya adalah pelarut n -heksan,  etil  asetat  dan  metanol  kualitas p.a.,  silika  gel  GF 254 ,  silika  gel  G  60  (70- 230 mesh), plat KLT silika gel 60 F 254 dan stigmasterol standar 3 mg.

## Prosedur Penelitian

## Pembuatan serbuk dan  ekstraksi
Kulit akar senggugu  yang diperoleh dikeringkan  pada  suhu  kamar  (25-30 0 C) di  ruang  tertutup.  Kulit  akar  kering dicacah  sehingga  diperoleh  ukuran  yang kecil-kecil. Selanjutnya digiling menggunakan  mesin merk  Retsch  Muhle dan  diayak  dengan  ayakan  serbuk  (4/18) di Laboratorium Biologi Farmasi UGM.
Serbuk  kering  kulit  akar  senggugu sebanyak  3  kg  diekstraksi  dengan  metode maserasi  bertingkat  mulai n -heksan,  etil
asetat  hingga  metanol,  masing-masing selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk. Filtrat hasil ekstraksi dipekatkan mengunakan rotary  evaporator untuk mendapatkan ekstrak kental secara berurutan  disebut  sebagai  fraksi n -heksan 7,68  gram,  fraksi  etil  asetat  52,20  gram dan  fraksi  metanol  523,92  gram.  Pada fraksi  etil  asetat  tersebut  selanjutnya dilakukan fraksinasi.

## Fraksinasi
Fraksi etil asetat kulit akar senggugu sebanyak 30 gram difraksinasi menggunakan  KCV  dengan  eluen n - heksan,  etil  asetat  dan  metanol  secara bergradien  untuk  menyederhanakan  pola noda pada hasil KLT fraksi etil asetat yang dilakukan  sebelumnya.  Hasil  fraksinasi dikelompokkan  sesuai  dengan  urutan kepolarannya  berdasarkan  hasil  KLT dengan  eluen n -heksan-etil  asetat  (8  :  2) menghasilkan  10  fraksi.  Pada  fraksi  D sebanyak  1,33  gram  yang  diperoleh selanjutnya  dilakukan  isolasi  senyawa. menggunakan KKG (Kromatografi Kolom Garvitasi)  dengan  eluen n -heksan  dan  etil asetat secara bergradien.

## Isolasi dan pemurnian
Isolasi  senyawa  pada  Fraksi  D dilakukan  menggunakan  KKG  dengan eluen n -heksan  dan  etil  asetat  secara bergradien  pula.  Hasil  eluasi  dari  KKG ditampung  dalam vial kemudian  dipantau dengan  KLT  menggunakan  eluen n - heksan-etil  asetat  (9  :  1).  Hasil  isolasi dengan pola/nilai Rf yang sama digabungkan  sehingga  diperoleh  8  fraksi, yaitu  fraksi  D1  (5  mg),  D2  (6  mg),  D3  (8 mg), D4 (7 mg), D5 (19 mg), D6 (18 mg), D7  (35 mg) dan D8 (902 mg).  Fraksi  D7 dimurnikan  dengan  cara  rekristalisasi
menggunakan  dua  pelarut  yang  berbeda jauh  kepolarannya  dan  tidak  bercampur yaitu n -heksan  dan  metanol.  Isolat  murni dalam  metanol  selanjutnya  disebut  N1 diperoleh  sebanyak  17  mg,  sedangkan dalam heksan disebut N2 sebanyak 18 mg. Isolat  tersebut  diuji  kemurniannya  secara KLT dengan eluen n -heksan-etil asetat (7 : 3)  dan n -heksan-kloroform  (6  :  4)  serta ditentukan  titik  leburnya.  Selanjutnya identifikasi dan penentuan struktur senyawa  hanya  dilakukan  pada  isolat  N1, karena isolat N2 tampak belum murni pada uji KLT.

## Identifikasi  dan  penentuan  struktur senyawa
Identifikasi  isolat  N1  dilakukan dengan  menggunakan  teknik  analisis spektroskopi  yaitu  analisis  spektra 1 H  dan 13 C-NMR  serta  analisis  spektrum  GC-MS dibandingkan  dengan  data  literatur . Selain itu,  identifikasi  senyawa  isolat  juga dilakukan  dengan  analisis  KLT  dalam sistem  yang  sama  baik  isolat  N1  maupun isolat N2 dan senyawa steroid pembanding menggunakan stigmasterol standar.
Struktur senyawa ditentukan berdasarkan  hasil  analisis  data  spektra 1 H dan 13 C-NMR  serta  data  spektrum  GC- MS .  Kombinasi  pembacaan  dari  seluruh hasil  analisis  data  spektra  yang  ada kemudian  dibuatlah  rangkaian  sebuah struktur senyawa yang utuh.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi  dan  penentuan  struktur senyawa
Isolat  N1  yang  diperoleh  berbentuk serbuk putih dengan titik lebur 279-285 0 C. Identifikasi isolat berdasarkan data spektra 1 H-NMR  menunjukkan  adanya  signal- signal  proton  yang  khas  pada  kerangka
dasar  karbon  senyawa  steroid.  Proton  H-3 cincin  A  steroid  pada  δH  3,59  ppm  (1H; m ; 4,5 Hz) memperlihatkan adanya gugus - OH juga terikat pada C-3. Proton H-7 pada cincin B daerah δH 5,15 ppm (1H; q ; 5, 10 Hz)  menunjukkan  adanya  ikatan  rangkap dua  pada  C-7.  Proton  H-9  dan  H-14  pada cincin  C  dan  D  masing-masing  δH  2,01 (1H; t ;  5  Hz)  dan  δH  2,02  (1H; t ;  5  Hz) menunjukkan bahwa kedua proton tersebut dicoupling oleh  dua  proton  yang  berbeda pada karbon tetangga terdekat.
Selain itu, signal  proton  gugus metil dengan  intensitas  kuat  diperlihatkan  pada daerah alifatik yaitu proton H-18 dan H-19 menunjukkan  pita singlet masing-masing pada  δH  0,53  ppm  (3H; s )  dan  0,55  ppm (3H; s ).  Proton  lain  adalah  proton  H-21 pada δH 0,80 ppm (3H; d ) dan proton gem dimetil  H-26  dan  H-27  pada  pergeseran kimia yang sama  yaitu δH 0,79 ppm (3H;
d ;  5  Hz),    memperlihatkan  pita doublet dengan intensitas kuat menunjukkan adanya  proton  metil  pada  gugus  alkil rantai samping pada senyawa steroid.
Spektra 13
C-NMR  menunjukkan adanya  signal  C-3  pada  δC  71,27  ppm yang mengikat gugus hidroksil, memperlihatkan  pergeseran  kimia  yang lebih  tinggi  dibandingkan  karbon  lainnya pada  cincin  A  kerangka  dasar  steroid. Adanya karbon olefin (C=C) yaitu C-7 dan C-8  masing-masing  pada  δC  130,23  ppm dan 139,76 ppm, memperlihatkan pergeseran  kimia  pada  daerah  yang  jauh lebih deshelded dibandingkan  karbon lainya  pada  cincin  B  steroid.  Data  spektra karbon juga memperlihatkan adanya karbon gem-dimetil pada  C-26  dan  C-27 yang  keduanya  mempunyai  pergeseran kimia  yang  sama  yaitu  δC  19,18  ppm. Data ini memperkuat dugaan adanya gugus
alkil pada rantai samping senyawa steroid. Berdasarkan data spektra 1 H dan 13 C-NMR yang diperoleh tersebut selanjutnya dilakukan  perbandingan  dengan  data literatur  yaitu  β-sitosterol  (Patra  dkk.,
2010; Kuncoro dkk,. 2015) dan stigmasterol (Raphael, 1991). Perbandingan  data  spektra  proton  dan karbon antara senyawa pembanding stigmasterol  dan  isolat  N1  dapat  dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Data spektra 1 H dan 13 C-NMR Senyawa Pembanding Stigmasterol (Raphael, 1991) dan β-sitosterol (Patra dkk., 2010; Kuncoro dkk,. 2015)
No . C δ 13 C (ppm)
δ 1 H (ppm) Stigmaster ol Isolat N1 β-sitosterol  Stigmasterol Isolat N1 β-sitosterol 1 37,31 37,32 37.28 1,29 1.47 2 31,69 31,65 31.69 1,69 1.56 3 71,81 71,27 71.82 3,71 3,59 (1H; m ; 4,5) 3.52 4 42,35 41,03 42.33 2,40 2.28 5 140,50 32,12 140.70 - 1,77 (1H; m ; 10) - 6 121,69 32,06 121.72 5,30 1,74 (2H; t ; 5) 5.36 7 31,94 130,23 31.69 2,20 5,15 (1H; q ; 5;10) 2.03 8 31,94 139,76 31.93 1,56 - 1.67 9 50,20 51,43 50.17 0,96 2,01 (1H; t ; 5) 1.48 10 36,56 38,16 36.52 - - - 11 21,11 21,73 21.10 1,52 1.52 12 39,74 39,64 39.80 1,40 1.49 13 42,35 43,47 42.33 - - - 14 56,91 56,07 56.79 1,05 2,02 (1H; t ; 5) 1.50 15 24,39 23,21 24.37 1,56 1.60 16 28,96 28,70 28.25 1,69 1.84 17 56,06 55,31 56.09 1,53 1.49 18 12,07 12,2 11.86 1,02 0,53 (3H; s ) 0.68 19 19,42 13,24 19.40 0,99 0,55 (3H; s ) 1.02 20 40,54 40,44 36.52 2,22 1.64 21 21,11 21,29 18.79 0,89 0,80 (3H; d ; 5) 0.94 22 138,37 34,41 33.98 5,16 1,58 (2H; m ;  5) 0.88 23 129,32 26,40 26.14 5,10 1,39 (2H; m ;  5) 1.04 24 51,29 49,62 45.88 2,10 1.50 25 31,94 28,95 28.91 1,73 1.65 26 21,26 19,18 19.80 0,80 0,79 (3H; d ; 5) 0.83 27 19,02 19,18 18.79 0,80 0,79 (3H; d ; 5) 0.85 28 25,44 12,44 23.10 1,44 1.04 29 12,27 12,20 11.99 0,87 0,85 (3H; t ; 5) 0.88 30 * OH(pada posisi C-3) 2,42 2,05 (1H; s ) 2,00
Data  spektra 1 H  dan 13 C-NMR  pada tabel  1  memperlihatkan  bahwa  isolat  N1 menunjukkan  data  pergeseran  kimia  yang mirip  dengan  data  literatur  baik  β- sitosterol  maupun  stigmasterol.  Namun, beberapa  pergeseran  kimia  proton  dan karbon  tertentu  berbeda  karena  posisi ikatan  rangkapnya  yang  berbeda  antara kedua  senyawa  tersebut.  Senyawa  isolat N1  mempunyai  karbon olefin (C=C)  pada posisi C-7 dan C-8, sedangkan β-sitosterol dan  stigmasterol  masing-masing  pada  C-5 dan  C-6  serta  C-22  dan  C-23  pada stigmasterol.  Karena  itu,  menyebabkan perbedaan  pergeseran  kimia  proton  yang terikat pada tiap karbon tersebut sebagaimana ditunjukkan tabel 1. Menurut Manitto (1980), bahwa perbedaan diantara senyawa  steroid  ditentukan  oleh  panjang rantai  karbon  R  pada  C-17,  gugus  fungsi yang  terdapat  pada  substituen  R  serta jumlah  dan  posisi  gugus  fungsi  oksigen dan ikatan rangkap.
Analisis  data  spektra  proton  dan karbon  antara  senyawa  pembanding  dan senyawa  isolat  N1  membuktikan  bahwa keduanya  merupakan  senyawa  steroid, meskipun  diduga  kuat  jenisnya  berbeda. Hal ini karena beragamnya variasi struktur senyawa steroid dari bahan alam. Perbedaan  jenis  steroid  pada  senyawa pembanding  dan  isolat  juga  dibuktikan dari hasil analisis KLT eluen n -heksan-etil asetat  (7  :  3)  dan  penampak  noda anisaldehida seperti  ditunjukkan  pada gambar 1.
Gambar  1.  KLT  isolat  N1,  N1*( recovery
NMR), Stgm (stigmasterol), N2*(
recovery NMR)  dan  N2,  eluen n -heksan- etil  asetat  (7  :  3)  dan  penampak  noda anisalsehida
Hasil KLT pada gambar 1
memperlihatkan  bahwa  isolat  N1  dan senyawa pembanding stigmasterol mempunyai  pola  noda  dan  Rf  yang  sama yaitu  0,33.  Namun,  respon  warna  yang diberikan oleh keduanya dengan pengggunaan penampak noda anisaldehida menunjukkan  warna  yang  berbeda.  Isolat N1 berwarna ungu, sedangkan pembanding  stigmasterol  berwarna  biru. Hal ini menunjukkan bahwa isolat N1 dan stigmasterol keduanya merupakan senyawa  golongan  steroid,  tetapi  jenis steroidnya  yang  berbeda.  Isolat  N1  larut sempurna  dalam  kloroform  dengan  titik lebur 138 -141 0 C.
Analisis  data  GC-MS  isolat  N1
menunjukkan  bahwa  massa  ion  molekuler isolat  N1  pada  spektrum  MS  adalah  414 dengan rumus molekul C 29 H 50 O. Fragmentasi  massa  isolat  (m/z)  adalah 414,  314,  271,  255,  231,  207,  173,  147,
107,  91  dan  55.  Data  GC-MS  senyawa pembanding stigmasterol (m/z) adalah 412 (Raphael, 1991). Oleh karena itu, berdasarkan  hasil  analisis  data  spektra proton  dan  karbon  serta  spektrum  massa menunjukkan  bahwa  isolat  N1  merupakan senyawa    Stigmast-7-en-3β-ol. Hasil penelusuran  literatur  khususnya  steroid
dari C.  Serratum yang  sudah  dilaporkan menunjukkan  bahwa  Stigmast-7-en-3 β -ol adalah  jenis  steroid  baru  yang  dilaporkan dari C.  Serratum pada  penelitian  ini. Struktur  senyawa  Stigmast-7-en-3β-ol  dan senyawa stigmasterol sebagai  pembanding ditunjukkan pada gambar 2 berikut.
Stigmast-7-en-3β-ol Stigmasterol (pembanding)
Gambar 2. Struktur Stigmast-7-en-3β-ol dan Stigmasterol (Pembanding)

## KESIMPULAN
Senyawa steroid yang dapat diisolasi dari  kulit  akar  senggugu  asal  imogiri Yogyakarta  merupakan  jenis  steroid  baru yang  dilaporkan  dari  tumbuhan  ini  adalah Stigmast-7-en-3β-ol.  Untuk  mengetahui efek farmakologi senyawa tersebut sehingga bisa dimanfaatkan dalam pengobatan,  selanjutnya  perlu  dilakukan pengembangan  uji  aktivitas  senyawa  yang sesuai.
Ucapan Terima Kasih
( Acknowledgment )
Ucapan terima kasih kepada Dirjend  Dikti  Kemenristek  RI  yang  telah memberikan  biaya  berupa  BPPDN  dalam mengikuti  program  pascasarjana  S3  Ilmu Farmasi  di  Fakultas  Farmasi  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

## DAFTAR PUSTAKA
Banerjee, S.K., Chakravarti,
R.N., Sachdev, K.S., dan Vasavada, S.A., 1969,  Constituents  of  root  bark  of Clerodendrum serratum , Phytochemistry , 8, 515.
Bhawani,  S.A., Sulaiman, O., Hashim, R.,
dan Ibrahim, M.N.M., 2011, Thinlayer chromatographic analysis of steroids., Trop J Pharm
Res ., 9, 301-313.
Boonsri,  S.,  2003,  Chemical  Constituents from Clerodendrum  serratum and Mesua kunstleri.
Choi,  J.M.,  Lee,  E.O.,  Lee,  H,Y., dkk .,
2007,  Identification  of  campesterol from  Chrysanthemum  coronarium L. and its antiangiogenic activities., Phytother Res ., 21, 954-959.
Fan, Ju-di., Long, Qing-de., Yang, J., Luo, dan  Xi-rong.,  2007,  Studies  on  the chemical
constituents of
Clerodendrum serratum (L.) Moon., Medical Journal of Chinese People’s Health , 19, 423.
Gabay,  O.,  Sanchez,  C.,  Salvat,  C., dkk .,
2010,  Stigmasterol:  a  phytosterol with  potential  anti  osteoarthritic properties., Am  J  Clin  Nutr .,  18, 106-116.
Heyne,  K.,  1950, Tumbuhan  Berguna Indonesia , Terjemahan Badan Litbang  Kehutanan,  Jilid  III  Ed.  I,
1686,  Penerbit  Yayasan  Sarana
Wanarja, Jakarta.
Kardong,  D.,  Upadhyaya,  S.,  dan  Saikia,
L.R., 2012, Screening of phytochemicals,  antioxidant  and antibacterial  Activity  of  crude extract  of  Pteridium  aquilinum Kuhn., J  Pharm  Res .,  5(11),  5194- 5196.
Kuncoro, H., Farabi, K, Julaeha, E., Rijai,
L.,  dan  Supratman,  U.,  2015,
Stigmast-5(6)-en-3-ol  dari  herba tumbuhan
krokot ( Lygodium microphyllum ), Jurnal Kimia
VALENSI , 1(1), 50-54.
Manitto,  P.,  1981, Biosynthesis  of  natural products , Terjemahan Dra. Koensoemardiyah Apt, SU., Penerbit  IKIP  Semarang  Press. Semarang-Indonesia. Nair,  A.G.R.,  Vedantham,  T.N.C.,  dan Subramanian, S.S., 1976, Crystalline components of Clerodendrum  serratum , Current Science , 45, 391.
Nasrudin, Wahyono, Mustofa, dan Asmah, R.,  2015,  Uji  aktivitas  antioksidan ekstrak  etil  asetat  kulit  akar senggugu  ( Clerodendrum  serratum L. Moon) asal Imogiri Yogyakarta, Prosiding  Semnas  Peluang  Herbal
Sebagai  Alternatif  Medicine  Fak. Farmasi  Univ.  Wahid  Hasyim , ISBN: 978-602-19556-2-8, 12-117. Nasrudin, Wahyono, Mustofa, dan Asmah,
R.,  2015,  Hepatoprotective  activity of ethyl acetate fraction of senggugu’s root bark ( Clerodendrum serratum L. Moon)
on rats induced by carbon tetrachloride, Indonesian J. Pharm ., 28(1), 10-18.
Panda,  S.,  Jafri,  M.,  Kar,  A.,  dan  Meheta,
B.K.,  2009,  Thyroid  inhibitory, antiperoxidative  and  hypoglycemic effects  of  stigmasterol isolated from Butea
monosperma.,
Fitoterapia , 80, 123-126.
Patra,  A.,  Jha,  S.,  Murthy,  P.N.,  Manik, dan  Sharone,  A.,  2010,  Isolation and  characterization  of  stigmast-5- en-3β-ol  (β-sitosterol)  from  the leaves  of Hygrophila  spinosa T. Anders., Int. J. of Pharma Sci. and Res. , 1(2), 95-100.
Samejo, M,Q., Memon, S., Bhanger, M.I., dan  Khan,  K.  M.,  2013, Isolation and  characterization  of  steroids from  Calligonum  polygonoides., J.
Pharmacy Res ., 6, 346-349.
Sasidharan,  S.,  Chen,  Y.,  Saravanan,  D.,
Sundram,  K.M.,  dan  Latha,  L.Y., 2011,  Extraction,  isolation  and characterization of bioactive compounds  from  plants’  extracts.,
Afr  J  Tradit  Complement  Altern Med ., 8(1), 1-10.
Singh,  M.Kr.,  Khare,  G.,  Iyer,  S.Kr., Sharwan,  G.,  dan  Tripathi,  D.K., 2012, Chelerodendrum  serratum : A  clinical  aproach, J.  Aplied Pharmaceutical Sci ., 2(2), 11-15.
Raphael,  I.,  1991, Natural  Prodacts:  A
laboratory  guide ,  second  edition,
Academic  Press  Limited,  United
States of America.