Arjinal, et al.

## ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIDIABETES KULIT BATANG TUMBUHAN
JELUTUNG ( Dyera costulata )
Arjinal Arjinal, Muhammad Almurdani, Rudi Hendra, Hilwan Yuda Teruna *
Program Studi Pasca Sarjana Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Riau, Pekanbaru (28293), Riau, Indonesia
* email: hyteruna@lecturer.unri.ac.id
Received 6 December 2019 Accepted 22 January 2020

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antidiabetes  senyawa  dari  hasil  isolasi ekstrak n -heksana  dan  diklorometana  kulit  batang  jelutung  ( Dyera  costulata ).  Teknik ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  dan  tahap  isolasi  dilakukan  dengan  metode kromatografi  vakum  cair.  Uji  aktivitas  antidiabetes  dilakukan  menggunakan  metode penghambatan aktivitas  enzim α- Glukosidase  dengan  subtrat p -nitrophenyl- α - D - glucopyranosida  ( p -NPG)  dengan  akarbose  sebagai  obat  standar  dan  diukur  pada  panjang gelombang  415  nm.  Hasil  isolasi  yang  dilakukan  pada  ekstrak  diklorometana  diperoleh senyawa asam benzoat,  sedangkan dari ekstrak n -heksana didapatkan senyawa lupeol. Hasil uji  antidiabetes  menunjukkan  bahwa  asam  benzoat  memiliki  aktivitas  sedang  dengan  nilai IC 50 143,259  µg/mL,  sedangkan  lupeol  memiliki  aktivitas  kuat  dengan  nilai  IC 50 42,257 µg/mL (akarbose IC 50 19,734 µg/mL). Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa tumbuhan ini dapat digunakan sebagai obat antidiabetes.
Kata kunci : Dyera costulata, Asam Benzoat, Lupeol, Akarbose

## Abstract
The  purpose  of  this  research  was  aimed  to  investigate  the  antidiabetic  activity  of  the compound  from  the  isolation  dichloromethane  extracts  and n -hexane  jelutung  bark  (Dyera costulata). Extraction technique is done by maceration method and isolation stage is done by liquid vacuum chromatography method. Antidiabetic activity test have been carried out used the  α-glucosidase  enzyme  activity  inhibition  method  with  the  substrate  p-nitrophenyl-α-D- glucopyranosida (p-NPG) with rootbose as a standard drug and measured at a wavelength of 415  nm.  The  results  of  isolation  carried  out  on  dichloromethane  extracts  obtained  benzoic acid  compounds,  while  from n -hexane  extract  obtained  lupeol  compounds.  The  results  of antidiabetic  test  showed  that  benzoic  acid  had  moderate  activity  with  IC 50 value  143,6173 µg/mL,  whereas  lupeol  had  strong  activity  with  IC 50 value  43,0016  µg/mL  (acarbose  IC 50 19,734 µg/mL). Therefore, it can be concluded that this plant can be used as an antidiabetic drug.
Keywords : Dyera costulata, Asam Benzoat, Lupeol, Acarbose

## Pendahuluan
Diabetes  mellitus merupakan  penyakit yang paling banyak diderita oleh masyarakat  Riau.  Hal  ini  dibuktikan  dari data Riskersdas tahun 2013 yang melaporkan provinsi Riau berada di urutan nomor tiga tertinggi di Indonesia penderita diabetes mellitus
sebesar 1,0 %. Peningkatan  jumlah  penderita  diabetes melitus  di  Indonesia  dari  tahun  ke  tahun mengalami kenaikan yang cukup signifikan dimana pada tahun 2007 dengan prevalensi  1,1  %  menjadi  2,1  %  pada tahun 2013.
Arjinal, et al.
Didalam penatalaksanaan penyakit diabetes,  terdapat  beberapa  program  yang dapat dilaksanakan. Salah satu upaya yang dapat dilakukan adalah dengan memperbanyak  temuan  sumber  obat  baru dengan  pendekatan  etnomedisin  terhadap tumbuhan obat tradisional yang digunakan oleh  suku-suku  pedalaman.  Salah  satu tumbuhan  yang  sangat  bermanfaat  bagi penduduk suku pedalaman sebagai tradisional adalah tumbuhan jelutung .
Jelutung  merupakan  tumbuhan  yang berasal  dari  famili  Apocynaceae  yang berupa  pohon  dengan  diameter  batang kayu  sekitar  100  cm  dangan  tinggi mencapai 25-45 meter  (Martawijaya at  al., 2005).
Penelitian sebelumnya telah dilaporkan  oleh  Kouji et  al .  (1992),    yang meneliti  daun D.  costulata sebagai penghambat  alergi.  Penelitian  tersebut menggunakan  metode passive cutaneus anaphylaxis untuk  reaksi  alergi  tipe  1 yang diuji pada ekstrak dan senyawa murni yang  diisolasi  dari D.  costulata. Hasil penelitian diperoleh bahwa ekstrak butanol dari daun D. costulata mampu menghambat  alergi  sebesar  55%  dan senyawa  murni  yang  didapatkan  adalah dimetilinositol  mampu menghambat  alergi sebesar 34.2%.
Subhadhirasakul at  al .  (2003),  yang meneliti  ekstrak  kloroform  dan n -butanol dari daun D. costulata . Hasil penelitian ini diperoleh senyawa β–amirin dan rhamnazin  yang  diisolasi  dari  ekstrak kloroform dan kuersetin-3-O- α -L- rhamnopiranosida  yang  diisolasi  dari ekstrak n -butanol.
Sejauh ini belum ada yang melaporkan  tentang  uji  antidiabetes  dari kulit batang tumbuhan ini. Oleh karena itu, penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan metabolit sekunder dan aktivitas  antidiabetes  dari  kulit  batang D. costulata sehingga  dapat  memberikan informasi  dalam  pemanfaatan  tumbuhan D. costulata.

## Metode Penelitian
Alat dan bahan Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah satu  set  alat destilasi, ultrasonicator (Kery  Pulsatron),  satu  set kromatografi  cair  vakum,  satu  set  alat HPLC  (Shimadzu  LC  solution),  satu  set flash  chromatography ,  satu  unit rotary evaporator (Buchi  R-114),  lampu  UV model  UVL-52(254  dan  366  nm),  alat penentu titik leleh Fisher Johns , spektrofotometer  UV-Visible  (Genesys
10S UV-Vis), spektrofotometer IR (Shimadzu,  IR  Prestige-21),  spektrometer NMR Agilent 500 MHz dan peralatan lain yang umum digunakan sesuai cara kerja.
Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  kulit  batang D. costulta diambil dari Kecamatan
Kelayang,  Kabupaten  Indragiri  Hulu, Provinsi  Riau.  Pelarut  yang  digunakan adalah  metanol,  etil  asetat,  n-heksana, diklorometana,  dimetil  sulfoksida  asam sulfat,    kloroform,  amoniak,  reagen penampak  noda  anisaldehid,  pereaksi Dragendorff,  pereaksi  Mayer,  pereaksi Liebermann  Burchard,  HCl  pekat,  larutan besi(III) klorida 1%, aqua DM, pelat KLT silika gel  GF 254 , silika gel 60 GF 254 , silika gel  60  (230-400  mesh),  enzim  α- glukosidase, akarbose.

## Preparasi Sampel
Kulit batang tumbuhan jelutung dikering  anginkan  dan  dijaga  agar  tidak terkena  sinar  matahari  secara  langsung, kemudian  dihaluskan  hingga  menjadi bubuk yang siap untuk dimaserasi .

## Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi.  Serbuk  kulit  batang  jelutung sebanyak  3,9  kilogram  dimaserasi  secara bertingkat  dalam  botol  gelap  dengan menggunakan pelarut diklorometana selama  3  hari,  kemudian  disaring.  Proses ekstraksi  dilakukan  hingga  beberapa  kali pengulangan  sampai  hasil  penyaringan bening.  Maserat  yang  diperoleh  diuapkan pelarutnya menggunakan alat rotary
Arjinal, et al.
evaporator ,  sehingga  didapat  ekstrak diklorometana.  Selanjutnya  diekstraksi dengan  pelarut n -heksana  dengan  cara yang  sama,  sehingga  didapatkan  ekstrak total  heksana.  Ekstrak  ini  kemudian dianalisis menggunakan KLT untuk melihat  noda  dan  perbandingan  eluen terbaik  untuk  menjadi  acuan  ke  tahap isolasi menggunakan VLC.

## Uji Antidiabetes
Uji  antidiabetes  menggunakan  metode penghambatan aktivitas enzim α- glukosidase  dengan  subtrat p -nitrophenyl- α - D -glucopyranosida  ( p -NPG)  oleh  Salehi et  al. (2013),  Sheng et  al. (2014)  dan Zhang et  al. (2016).  Sampel  di  encerkan dengan  metode two  fold  dilution dari konsenrasi 1000 - 31,25 µg/mL.  Sebanyak 10 µL DMSO (B 0 ) dan 10 µL sampel (S 0 ) ditambah dengan 50 µL buffer fosfat pH 7, 25  µL p -NPG  20  mMserta10  µL  DMSO (B 1 ) dan 10 µL sampel (S 1 ) dengan 50 µL buffer fosfat pH 7, 25 µL p -NPG  20 mM dan
25 µL α -Glucosidase 0,2
U/mLdicampur  di  dalam microplate  96- well dan  diinkubasi selama 30 menit pada suhu  37 0 C.  Reaksi  dihentikan  dengan penambahan  100  µL  Na 2 CO 3 0,1  M, selanjutnya  absorbansi  diukur  dengan microplate reader pada panjang gelombang  415  nm.  Hal  yang  sama  juga dilakukan  pada  kontrol  positif  akarbose dengan  konsentrasi two  fold  dilution 100  - 3,125  µg/mL.  Nilai  %  inhibisi    dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut:
% Inhibisi = (B 1 −B 0 )−(S 1 −S 0 ) (B 1 −B 0 ) x 100
Keterangan: (B 1 -  B 0 )  =  Absorbansi  tidak  mengandung sampel
(S 1 - S 0 )     =  Absorbansi sampel
Nilai  IC 50 dihitung  menggunakan persamaan logaritma (Y  = a lnX + b) dari kurva kalibrasi dengan memplotkan konsentrasi sampel vs nilai % inhibisi.

## Hasil Dan Pembahasan Isolasi Senyawa
Hasil  isolasi  yang  diperoleh  dari  kulit batang  jelutung  ekstrak  diklorometana adalah  adalah  kristal  bewarna  kuning kecoklatan yaitu pada fraksi DC-D-01. Spektroskopi  inframerah  dari  DC-D-01 memperlihatkan adanya serapan maksimum pada bilangan gelombang 3070 cm -1 yang  mengindikasikan  adanya  gugus O-H, pada 2950, 2881 dan 2878 cm -1 yang mengindikasikan  adanya  gugus  C-H,  pada 1697 mengindikasikan adanya gugus C=O, dan pada 1584 cm -1 yang mengindikasikan adanya gugus C=C. Analisis spektrum 1 H- NMR  memperlihatkan  pergeseran  kimia pada  δH  8,15  ppm  (1H, d =  5  Hz),    7,64 ppm (1h, dd = 5 Hz), 7,50 (1H, d ).
Sehingga  senyawa  ini  diperkirakan sebagai Asam benzoat.
Gambar 1. Asam Benzoat
Hasil  isolasi  yang  diperoleh  dari  kulit batang  jelutung  ekstrak  n-heksana  berupa kristal  putih  yaitu  pada  fraksi  DC-H-01. Analisis  inframerah  senyawa  DC-H-01 menunjukkan  adanya  serapan  maksimum pada  bilangan  gelombang  3286  cm -1 yang mengindikasikan  adanya gugus O-H, pada 2946,  2856  cm -1 yang  mengindikasikan adanya  gugus  C-H  alifatik,  pada  1637 mengindikasikan  adanya  gugus  C=C,  dan pada  1188  cm -1 yang  mengindikasikan adanya  gugus  C-O.  Analisis  spektrum 1 H
NMR dari senyawa DC-H-01 menunjukkan  sinyal  pada  daerah  δH  4,68 dan 4,56 (1H, s) diduga  merupakan sinyal dari  proton  metilen  yang  terikat  pada  C kwartener sehingga muncul sebagai puncak singlet.
Arjinal, et al.
Selanjutnya  terlihat  adanya  sinyal untuk  proton  metin  pada  δH  3,20  (1H,  m) yang diduga merupakan proton metin yang terikat  pada  C  yang  mengikat  OH  yang terkopling  dengan  dua  proton  tetangganya dan  juga  terkopling  dengan  proton  dari gugus  OH  sehingga  muncul  sebagai puncak  multiplet.  Sinyal  ini  khas  untuk triterpenoid yang mengikat OH pada posisi C-3. Sinyal pada δH 0,77; 0,80; 0,84; 0,96; 0,98;  1,04  dan  1,69  yang  merupakan  khas dari  proton  metil  senyawa  triterpenoid. Senyawa DC-H-01 diduga senyawa lupeol

## Aktivitas antidiabetes
Uji  antidiabetes  dilakukan  pada  senyawa asam  benzoat  dan  lupeol  dengan  metode penghambatan  α-glukosidase  (in  vitro) dengan
p-nitrophenyl-α-D-
glucopyranoside (p-NPG). Reaksi diakhiri dengan penambahan 100 μL Na2CO3 0,1 M.  Kemudian,  absorbansi  diukur  dengan pembaca  plat  96-sumur.  Asam  benzoat menunjukkan aktivitas enzim α- glukosidase  dengan  nilai  IC 50 143,6173 µg/mL.  Sedangkan  aktivitas  senyawa lupeol  dengan  nilai  IC 50 43,0016  µg/mL.
Tabel 1
Penelitian penghambatan enzim α- glukosidase  terhadap  senyawa  asam benzoat dan lupeol belum pernah dilaporkan sebelumnya.
Gambar 2. Lupeol
Tabel 1. Nilai IC 50 senyawa hasil isolasi dari kulit batang D. costulata

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa kulit batang D.costulata mengandung  senyawa  asam  benzoat  dan lupeol.  Uji  aktivitas  antidiabetes  dari senyawa  asam  benzoat  menunjukkan  nilai IC 50 143,259±0,327,  sedang  sedangkan aktivitas  antidiabetes  dari  senyawa  lupeol menunjukkan hasil IC 50 42,136±0,157.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  kepada  hibah  penelitian tim  pascasarjana  KEMENRISTEKDIKTI tahun anggaran  2018  yang telah membiayai penelitian  ini  dengan  kontrak  Nomor: 339/UN.19.5.1.3/PP/2018, tanggal 19
Februari 2018.

## Daftar Pustaka
Kouji,  S.,  Hosomi,  K.,  Arakawa,  T.,
Uzawa,  M.,  Ito,  H.,  Saburi,  Y.. 1992. Isolation and Characterization of  an  Allergy  Inhibitor  from  the Jelutong, Dyera  costulata Hook.  f.,
Bioscience, Biotechnology, and Biochemistr y, 56(6): 975-975
Martawijaya,  A.,  Kartasujana,  I.,Kadir, K., Prawira, S.A., 2005, Atlas Kayu Indonesia  jilid  I,  Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Departemen kehutanan,Bogor Riset  Kesehatan  Dasar  (Riskerdas)  2013 .Badan Penelitian Dan Sample IC 50 (ppm) Asam Benzoat 143,259±0,327 Lupeol 42,136±0,157 Akarbose 0,974 ± 0,342
Arjinal, et al.
Pengembangan Kesehatan Kementerian  Kesehatan  RI  Tahun
2013. p: 87- 89.
Salehi, P., Asghari, B., Esmaeili, M. A.,
Dehghan, H., and Ghazi,  I., 2013. α -Glucosidase and  α  -amylase inhibitory  effect  and  antioxidant activity  of  ten  plant  extracts traditionally  used  in  Iran  for diabetes. Journal  of  Medicinal Plants Research , 7 (6), 257–266. Sheng,  Z.,  Dai,  H.,  Pan,  S.,  Wang,  H., Hu,  Y.,  and  Ma,  W.,  (2014). Isolation  and  Characterization  of  an α-Glucosidase  Inhibitor  from  Musa
spp.  (Baxijiao)  Flowers. Molecules , 19 , 10563–10573.
Subhadirasakul,  S.,  Jankeaw  B,  Malinee A.,  2003.  Chemical  constituent  and antioxidative activity of the extracts from Dyera  costulata leaves. J. Sci. Technol. 25(3): 351-357.
Zhang,  L.,  Tu,  Z.,  Yuan,  T.,  Wang,  H., Xie,  X.,  and  Fu,  Z.,  (2016). Antioxidants  and  α-glucosidase inhibitors  from  Ipomoea  batatas leaves identified by bioassay-guided approach and structure-activity relationships. Food  Chemistry , 208 , 61–67.