ISSN: 1410-8917
e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 21 (1) (2018) : 8 – 12
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi

## Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa

## Antibacterial Activity of Cinnamic Acid - Chitosan Encapsulation
Nur Amaliyah a , Ngadiwiyana a , Purbowatiningrum Ria Sarjono a,* , Ismiyarto a
a Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang * Corresponding author: purbowatining@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Cinnamic acid,
Encapsulation, Chitosan Nanopathic, Drying frozen, antibacterial
The biggest cinnamon bark is cinnamic acid. The inhibitory activity of bacterial growth of S. aureus and E. coli and its abundance in nature becomes the superiority of cinnamic acid as antibacterial. However, the use of cinnamic acid as an antibacterial is still less than optimal because of low solubility in water. One of the latest technologies to address the problem  is  encapsulation  in  nanometer  size.  Encapsulation  of  cinnamic  acid  using chitosan nanoparticles as an encapsulation material was shown to increase the activity of cinnamic acid as antibacterial by protecting the active compound, as well as increasing its solubility  in  water  through  chitosan-TPP  modification.  Emulsion  formation  was performed using Corning LSE Compact at 6,000 rpm for 30 minutes. The formation of chitosan nanoparticles as encapsulation material was done using freeze dryer with freeze drying method. Chitosan was obtained from shrimp chitin with Deacetylation Degree (% DD) of 85.98%. The synthesis of chitosan nanoparticles yielded an average particle size of 330 nm with a percentage volume of 29.9% and 79.1% with an average size of 5570 nm. The morphological form of nanometer-sized chitosan was smaller and uniform than that of chitosan morphology. Encapsulation efficiency value of 67.304% makes cinnamic acid has higher activity inhibition of bacterial growth than pure cinnamic acid and chitosan nanoparticles.

## A b s t r a k
Kata Kunci:
Asam Sinamat,
Enkapsulasi, Nanopatikel
Kitosan, Freeze drying , antibakteri
Kandungan  kulit  kayu  manis  terbesar  adalah  asam  sinamat.  Aktivitas  daya  hambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E.  coli serta  kelimpahannya  di  alam  menjadi keunggulan  asam  sinamat  sebagai  antibakteri.  Namun,  penggunaan  asam  sinamat sebagai antibakteri masih kurang optimal karena kelarutan yang rendah dalam air. Salah satu  teknologi  terkini  untuk  mengatasi  masalah  tersebut  adalah  enkapsulasi  dalam ukuran  nanometer.  Enkapsulasi  asam  sinamat  menggunakan  nanopartikel  kitosan sebagai  bahan  enkapsulan  ditunjukkan  untuk  meningkatkan  aktivitas  asam  sinamat sebagai  antibakteri  dengan  cara  melindungi  senyawa  aktif,  serta  meningkatkan kelarutannya dalam air melalui modifikasi kitosan-TPP. Pembentukan emulsi dilakukan menggunakan  Corning  LSE  Compact  dengan  kecepatan  6.000  rpm  selama  30  menit. Pembentukan nanopartikel kitosan sebagai bahan enkapsulan dilakukan menggunakan freeze  dryer  dengan  metode  freeze  drying.  Kitosan  diperoleh  dari  kitin  limbah  udang dengan  nilai  Derajat  Deasetilasi  (%DD)  sebesar  85,98%.  Sintesis  nanopartikel  kitosan menghasilkan  ukuran  partikel  rata-rata  sebesar  330  nm  dengan  volume  prosentase 29,9% dan 79,1% dengan ukuran rata-rata 5570 nm. Bentuk morfologi kitosan berukuran nanometer lebih kecil dan seragam dibandingkan bentuk morfologi kitosan. Nilai efisiensi enkapsulasi  67,304%  menjadikan  asam  sinamat  memiliki  aktivitas  daya  hambat pertumbuhan  bakteri  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  asam  sinamat  murni  dan nanopartikel kitosan.
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 21 (1) (2018) : 8 – 12

## 1. Pendahuluan
Asam  3-fenil-2-propenoat  atau  asam  sinamat merupakan  senyawa  yang  salah  satunya  berasal  dari isolasi kulit kayu manis ( Cinnamomum burmanni ) famili Lauraceae [1].  Asam  sinamat  bersifat  non-toksik  dan memiliki  berbagai  aktivitas  biologis,  salah  satunya antibakteri  [2].  Asam  sinamat  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  positif S.  aureus pada konsentrasi 1,5 ppm dan bakteri Gram negatif E. coli pada konsentrasi  7  ppm  [3].  Keunggulan  ini  menyebabkan asam  sinamat sangat prospektif  dikembangkan sebagai antibakteri.
Penggunaan  asam  sinamat  sebagai  antibakteri masih terbatas karena kelarutannya yang rendah dalam air,  yaitu  0,5  gram  per  liter  [4].  Oleh  karena  itu, diperlukan  upaya  untuk  mengatasi  kekurangan  asam sinamat  tersebut,  salah  satunya  adalah  nanoteknologi. Penerapan nanoteknologi dapat meningkatkan stabilitas termal, bioavailabilitas oral, dan kelarutannya dalam air [5]. Salah satu aplikasi nanoteknologi yang saat ini sering digunakan,  yaitu  nanoenkapsulasi.  Hal  yang  perlu diperhatikan  dalam  proses  enkapsulasi  adalah  jenis penyalut  yang  digunakan  [6].  Kitosan  telah  terbukti dapat dijadikan sebagai penyalut [7, 8] karena memiliki keunggulan,  seperti  bersifat  non-toksik,  mukoadhesif, biodegradable, biocompatible [9], serta memiliki aktivitas sebagai antibakteri.
Penelitian  Goy dkk. [10]  telah  membuktikan  bahwa kitosan  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram  positif S.  aureus pada  konsentrasi  1250  ppm  dan bakteri Gram negatif E. coli pada konsentrasi 1000 ppm. Kitosan  berukuran  nano  meter  dibuat  dengan mereaksikan antara
kitosan
dan natrium tripolifosfatsehingga
mampu meningkatkan kelarutannya dalam air [11].
Pada  akhirnya,  aktivitas  antibakteri  yang  sinergis antara  asam  sinamat  dan  kitosan  serta  kelarutan  asam sinamat  dalam  air  yang  meningkat  diharapkan  mampu menjadi  solusi  untuk  meningkatkan  aktivitas  asam sinamat sebagai antibakteri.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah seperangkat alat gelas, seperangkat alat refluks, termometer,  neraca  analitik  (ohaus), magnetic  stirrer , sentrifuge 6000rpm  (Corning  LSE  Compact),  inkubator (Labnes  311DS), Laminar  Air  Flow (Thermo  Scientific), autoklaf , Scanning  Electron  Microscope (SEM)  (JEOL), Fourier  Transform  Infrared (FTIR)  (shimadzu  8201  PC), Freeze  Dryer (LL1500), Particle  Size  Analyzer (PSA) (Microtrac),  dan  Spektrofotometer  UV-Visible  (Merck). Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  cangkang  udang  vannamei  ( Litopenaeus vannamei ), aquades, HCl 1 N ( p.a ., Merck), NaOH (Merck), NaOCl teknis, indikator PP, kertas saring, asam sinamat ( p.a. , Sigma Aldrich), sodium tripolyphosphate (Na-TPP) ( p.a .,  Sigma  Aldrich),  ekstrak  ragi  (yeast  extract),  NaCl
(Merck), nutrien agar (Merck), suspensi (stok) bakteri S. aureus dan E. coli , dan tween 80.
Isolasi Kitin dan Sintesis Kitosan dari Cangkang Udang
Isolasi  kitin  dan  kitosan  dari  cangkang  udang meliputi beberapa tahap, yaitu deproteinasi, demineralisasi,  depigmentasi,  dan  deasetilasi.  Tahap awal  dimulai  dengan  pencucian  cangkang  udang menggunakan air hangat dan direbus dalam air selama 1 jam.  Cangkang  udang  dikeringkan  di  bawah  sinar matahari.  Bahan  yang  sudah  kering  dihaluskan menggunakan blender dan diayak pada ayakan 60 mesh .
Tahap  awal  disebut  sebagai  deproteinasi.  Serbuk cangkang  udang  yang  telah  diayak  sebanyak  25  gram dimasukkan  dalam  labu  alas  bulat  500  mL,  kemudian ditambahkan 100 mL NaOH 4% (b/v). Campuran tersebut direfluks  selama  1  jam  pada  temperatur  100 0 C  dengan pengadukkan  menggunakan magnetic  strirrer .  Hasil refluks,  selanjutnya  dicuci  menggunakan  aquades sampai  netral,  disaring  dan  dikeringkan  dalam  oven selama 2 jam pada temperatur 60 0 C.
Tahap  berikutnya,  demineralisasi.  Hasil  dari  tahap sebelumnya  diambil  sebanyak  10  gram,  kemudian ditambah  dengan  150  mL  HCl  1N,  diaduk  selama  1  jam pada  temperatur  kamar.  Proses  selanjutnya  dicuci dengan aquades sampai filtrat netral dan dikeringkan.
Tahap  penghilangan  pigmen  (zat  warna)  disebut dengan  tahap  depigmentasi/  dekolorisasi.  Prosesnya, sampel  diambil  sebanyak  2,5  gram  dan  ditambahkan dengan  25  mL  NaOCl,  kemudian  diaduk  menggunakan magnetic  stirrer selama  1  jam.  Hasilnya  disaring  dan dikeringkan sehingga diperoleh kitin.
Kitin hasil proses sebelumnya diambil sebanyak 1,5 gram, ditambahkan dengan 22,5 mL NaOH, dan direfluks pada  suhu  80 0 C  selama  1  jam  sehingga  dihasilkan kitosan. Tahap ini disebut sebagai deasetilasi.
Kitin  dan  kitosan  dianalisis  menggunakan Fourier Transform  Infrared (FTIR)  untuk  mengetahui  gugus- gug us fungsional yang ada di dalamnya.

## Sintesis Nanopartikel Kitosan
Metode yang digunakan dalam sintesis nanopartikel kitosan  adalah  metode  gelasi  ionik  [12].  Asam  asetat glasial  1  mL  diencerkan  menjadi  100  mL  menggunakan aquades  menghasilkan  larutan  asam  asetat  glasial. Kitosan  sebanyak  0,1  gram  dilarutkan  dalam  larutan asam  asetat  glasial  menghasilkan  larutan  kitosan.  Na- TPP  sebanyak  0,25  gram  dilarutkan  dalam  100  mL aquades  menghasilkan  larutan  TPP,  kemudian  larutan kitosan  ditambahkan  dengan  larutan  TPP  tetes  demi tetes sambil diaduk menggunakan magnetic stirrer selama 1 jam. Larutan agak kental yang dihasilkan, di sentrifuge dengan  kecepatan  6000  rpm  selama  1  jam  sehingga menghasilkan  suspensi  dan  supernatan.  Suspensi dikeringkan menggunakan freeze dryer sehingga dihasilkan  nanopartikel  kitosan.  Nanopartikel  kitosan dianalisis  menggunakan Scanning  Electron  Microscope (SEM) dan Particle Size Analyzer (PSA).
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 21 (1) (2018) : 8 – 12

## Enkapsulasi Asam Simanat Dalam Nanopartikel Kitosan
Metode  yang  digunakan  dalam  enkapsulasi  asam sinamat  dengan  nanopartikel  kitosan  adalah  freeze drying.  Na-TPP  sebanyak  0,25  gram  dilarutkan  dalam 100  mL  aquades  menghasilkan  larutan  TPP.  Asam sinamat sebanyak 0,1 gram dilarutkan dalam larutan TPP menghasilkan larutan asam sinamat. Asam asetat glasial sebanyak 1 mL dilarutkan menjadi 100 mL menggunakan aqudes  sehingga  menghasilkan  larutan  asam  asetat glasial. Kitosan sebanyak 0,1 g dilarutkan dalam 100 mL larutan  asam  asetat  glasial  menghasilkan  larutan kitosan, kemudian larutan asam sinamat di teteskan ke dalam larutan kitosan.
Larutan  agak  kental  yang  dihasilkan,  kemudian dilakukan sentrifuge dengan kecepatan 6000 rpm selama 30 menit hingga menghasilkan suspensi dan supernatan. Suspensi  dikeringkan  menggunakan freeze  dryer sehingga  dihasilkan serbuk  enkapsulasi  asam sinamat- kitosan.  Serbuk  enkapsulasi  asam  sinamat-kitosan kemudian  dihitung  efesiensi  enkapsulasi  (%EE) menggunakan spektrofotometer UV-Visible.
Panjang gelombang dan konsentrasi yang diperoleh, kemudian dibuat grafik [11], selanjutnya dihitung dengan persamaan,
%EE= 𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑎𝑤𝑎𝑙−𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑏𝑒𝑏𝑎𝑠 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑎𝑠𝑎𝑚 𝑠𝑖𝑛𝑎𝑚𝑎𝑡 x 100%

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  antibakteri  dilakukan  dengan  pengambilan bakteri S. aureus dan E. coli sesuai standar Mc. Farland 0,5 dengan 5 variasi konsentrasi, yaitu  250 ppm, 500 ppm, 750  ppm,  1000  ppm,  1250  ppm.  Uji  antibakteri  pada penelitian ini menggunakan metode difusi cakram.Cakram kertas dengan ukuran diameter 0,55 mm diimpregnasi  dengan  larutan  ekstrak  yang  terdiri  dari asam  sinamat,  nanopartikel  kitosan,  dan  hasil enkapsulasi asam sinamat-kitosan.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Isolasi Kitin dan Sintesis Kitosan dari Cangkang Udang
Cangkang udang mengandung beberapa komponen, diantaranya protein, kalsium karbonat, dan kitin.
Tabel 1: Hasil isolasi kitin dan sintesis kitosan dari cangkang udang Tahap Berat sampel Berat hasil perlakuan Rendemen Deproteinasi 25 gram 15,65 gram 62,60% Demineralisasi 5 gram 2,63 gram 52,60% Depigmentasi 2,5 gram 1,62 gram 64,80% Deasetilasi 1,5 gram 1,186 gram 79,06%
Isolasi  kitin  melalui  tahap  deproteinasi  dengan tujuan  menghilangkan  protein  dari  cangkang  udang. Rendemen  yang  diperoleh  pada  tahap  ini  sebesar 62,60%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  lebih  dari  50% protein  pada  cangkang  udang  terlepas  dan  membentuk Na-proteinat yang dapat larut.
Tahap
demineralisasi dengan tujuan menghilangkan  senyawa  anorganik  yang  terdapat  pada cangkang  udang.  Rendemen  yang  diperoleh  pada  tahap ini  sebesar  52,60%,  menunjukkan  bahwa  telah  terjadi proses pemisahan mineral pada cangkang udang [13].
Tahap depigmentasi untuk menghilangkan pigmen (zat warna) pada limbah udang menghasilkan rendemen sebesar 64,80%.
Proses  selanjutnya,  sintesis  kitin  melalui  tahap deasetilasi  kitin  untuk  mengubah  gugus  asetil  (- NHCOCH 3 ) pada kitin menjadi gugus amina (-NH 2 ) pada kitosan  dengan  penambahan  suhu  tinggi.  Rendemen yang  diperoleh  sebesar  79,06%.  Hal  ini  menunjukkan bahwa gugus asetil  telah  hilang  lebih  dari 50%  melalui pemutusan  ikatan  antara  karbon  pada  gugus  asetil dengan nitrogen pada gugus amin.

## Hasil Analisis Kitin Dan Kitosan
Keberhasilan isolasi kitin dan sintesis kitosan dapat dilihat melalui analisis menggunakan FTIR, seperti pad gambar dibawah ini.
Gambar 1. Spektrum FTIR Kitin
Gambar 2. Spektum FTIR Kitosan
Perbedaan  peak  yang  terlihat  jelas  antar  kitin  dan kitosan  pada  bilangan  gelombang  sekitar  3500  cm -1 . Spektrum kitosan menunjukkan peak yang melebar pada bilangan  gelombang  sekitar  3500  cm -1 karena – NH amina primer lebih banyak dibandingkan pada kitin. Hal ini  memperlihatkan  salah  satu  keberhasilan  sintesis kitosan  dengan  adanya  perubahan  gugus  fungsi  pada kitin. Nilai derajat deasetilasi (DD) sebesar 85,98%, kitin yang  berubah  menjadi  kitosan  sebesar  85,98%. Dibandingkan  dengan  kitosan  dari  Brataco  dengan  DD sebesar 65,63% [14].

## Sintesis Nanopartikel Kitosan
Nanopartikel  kitosan  dibuat  dengan  mereaksikan antara  kitosan  dan  Na-TPP.  Gugus  amina  (NH 2 )  pada kitosan menjadi bermuatan positif ( + NH 3 ) ketika kitosan dilarutkan dalam asam asetat glasial, sedangkan natrium tripolifosfat yang dilarutkan dalam aquades mengalami ionisasi  dan  dapat  membentuk  polianion  tripolifosfat. Hal  ini  mengakibatkan  adanya  interaksi  ionik  antara gugus  bermuatan  positif  ( + NH 3 )  dengan  gugus bermuatan  negatif  tripolifosfat  (H 3 P 3 O 10 2- )  (Ngah  dan Fathinathan,  2010).  Hasil  karakterisasi  kitosan  dan nanopartikel  kitosan  menggunakan  SEM  ditunjukkan pada gambar 3.
Gambar 3. (A) Hasil asnalisis Scanning Electron Microscope Kitosan; (B) Scanning Electron Microscope Nanopartikel Kitosan.
Terlihat  perbedaan  morfologi  permukaan  antara kitosan  dan nanopartikel  kitosan.  Ukuran  partikel  pada morfologi  permukaan  nanopartikel  kitosan  lebih  kecil dibandingkan kitosan. Selain itu, nanopartikel memiliki bentuk  yang  lebih  seragam  dibandingkan  kitosan. Ukuran  partikel  diinterpretasikan  melalui  karakterisasi PSA. Berikut adalah hasil karakterisasi PSA.
Gambar 4. Hasil analisis nanopartikel kitosan menggunakan Particle Size Analyzer
Berdasarkan  hasil  karakterisasi  menggunakan Particle  Size  Analyzer  (  [15]PSA),  distribusi  ukuran partikel  kitosan  menunjukkan  bahwa  70,1%  ukuran partikel kitosan belum terbentuk nanopartikel (Gambar 4).  Mode  pertama  memiliki  ukuran  patikel  rata – rata sebesar 5570 nm dan mode kedua menunjukkan ukuran partikel  rata – rata  sebesar  330  nm  dengan  volume presentase  29,9%  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa partikel yang terbentuk sudah berukuran nano meskipun partikel  yang  berukuran  mikro  lebih  banyak  terbentuk. Hal  ini  karena  nanopartikel  kitosan  belum  terbentuk secara belum menyeluruh.

## Hasil Enkapsulasi Asam Sinamat Dalam Nanopartikel Kitosan
Nilai  efisiensi  enkapsulasi  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  sebesar  64,304%.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  kemampuan  nanopartikel  kitosan  dalam menyalut asam sinamat sudah melebihi 50% dari jumlah asam sinamat awal.

## Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri pada sampel asam sinamat, kitosan,  serta  hasil  enkapsulasi  asam  sinamat  dalam nanopartikel  kitosan  dilakukan  dengan  metode  cakram pada  medium  agar  yang  dibuat  variasi  konsentrasi  250 ppm;  500  ppm;  750  ppm;  1000  ppm;  1250  ppm menggunakan  bakteri  gram  positif S.aureus dan  bakteri gram  negatif E.coli .  Hasil  yang  diperoleh  dalam  uji antibakteri  antara  asam  sinamat,  nanopartikel  kitosan, dan hasil enkapsulasi asam sinamat-kitosan ditampilkan pada gambar 5 terhadap bakteri gram positif S.aureus dan gambar 6 terhadap bakteri gram negatif E.coli .
Gambar 5. Diagram uji aktivitas terhadap bakteri S. aureus
Berdasarkan diagram yang terdapat pada Gambar 5 dan6menunjukkan  aktivitas  antibakteri S.  aureus dan E.coli yang  lebih  tinggi  daripada  asam  sinamat  dan nanopartikel  kitosan.  Hal  ini  sesuai  dengan  hipotesa karena  adanya  sinergisitas  antara  asam  sinamat  dan kitosan  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri. Dapat disimpulkan, tujuan enkapsulasi ini telah tercapai dalam meningkatkan aktivitasnya sebagai antibakteri.

## 4. Kesimpulan
Nanopartikel  kitosan  mampu  melindungi  senyawa aktif  pada  asam  sinamat  melalui  proses  enkapsulasi, sehingga  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  lebih  baik dibandingkan  senyawa  murni  asam  sinamat.  Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai penggunaan beberapa  variasi  konsentrasi  antara  asam  sinamat dengan kitosan sehingga dapat diketahui hasil efisiensi maksimum dan aktivitas antibakteri yang lebih baik.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Jeffry  Julianus,  Elvan  Luckyvano,  Sintesis  Asam Sinamat  Dari  Benzaldehida  Dan  Asam  Malonat Dengan Katalis Dietilamina, Journal of Pharmaceutical Sciences and Community , 11, 1, (2016)
[2]  Marcellino  Rudyanto,  Lanny  Hartanti,  Synthesis  of Some  Cinnamic  Acid  Derivatives:  Effect  of  Groups Attached  on  Aromatic  Ring  to  the  Reactivity  of Benzaldehyde, Indonesian Journal of Chemistry , 8, 2,
(2010) 226-230
[3]  Sandrina  A.  Heleno,  Isabel  C.  F.  R.  Ferreira,  Ana  P. Esteves,  Ana  Ćirić,  Jasmina  Glamočlija,  Anabela Martins,  Marina  Soković,  Maria  João  R.  P.  Queiroz, Antimicrobial  and  demelanizing  activity  of Ganoderma lucidum extract, p-hydroxybenzoic and cinnamic  acids  and  their  synthetic  acetylated glucuronide  methyl  esters, Food  and  Chemical Toxicology , 58, (2013) 95-100
http://dx.doi.org/10.1016/j.fct.2013.04.025
[4]  John  A  Hoskins,  The  occurrence,  metabolism  and toxicity  of  cinnamic  acid  and  related  compounds, Journal of Applied Toxicology , 4, 6, (1984) 283-292
[5]  Qingrong  Huang,  Hailong  Yu,  Qiaomei  Ru, Bioavailability  and  delivery  of  nutraceuticals  using nanotechnology, Journal of food science , 75, 1, (2010)
[6]  A  Sakha  Rujita,  Karakteristik  Mikrokapsul  Minyak Atsiri  Lengkuas  dengan  Maltodekstrin  Sebagai Enkapsulan [Characteristics of Galangal Essential Oil
Microencapsulation Using Maltodextrin
Encapsulant], Jurnal  Teknologi  dan  Industri  Pangan ,
24, 2, (2013) 201
[7]  Cleonice Gonçalves da Rosa, Caroline Dellinghausen Borges, Rui Carlos Zambiazi, Michael Ramos Nunes, Edilson  Valmir  Benvenutti,  Suzane  Rickes  da  Luz, Roseane  Farias  D’Avila,  Josiane  Kuhn  Rutz,
Microencapsulation  of  gallic  acid  in  chitosan, β - cyclodextrin  and  xanthan, Industrial  Crops  and Products , 46, (2013) 138-146
http://dx.doi.org/10.1016/j.indcrop.2012.12.053
[8]  Mike  TL  Tobing,  Nor  Basid  Adibawa  Prasetya, Khabibi  Khabibi,  Peningkatan  Derajat  Deasetilasi Kitosan  dari  Cangkang  Rajungan  dengan  Variasi Konsentrasi  NaOH  dan  Lama  Perendaman, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 14, 3, (2011) 83-88
[9]  R.  Harris,  E.  Lecumberri,  I.  Mateos-Aparicio,  M. Mengíbar,  A.  Heras,  Chitosan  nanoparticles  and microspheres  for  the  encapsulation  of  natural antioxidants  extracted  from  Ilex  paraguariensis, Carbohydrate  Polymers ,  84,  2,  (2011)  803-806 http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2010.07.003
[10] Rejane C Goy, Douglas de Britto, Odilio BG Assis, A review  of  the  antimicrobial  activity  of  chitosan, Polímeros , 19, 3, (2009) 241-247
[11]  S.  Hassani,  A.  Laouini,  H.  Fessi,  C.  Charcosset, Preparation  of  chitosan – TPP  nanoparticles  using microengineered membranes – Effect of parameters and encapsulation of tacrine, Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects , 482, (2015) 34-43 http://dx.doi.org/10.1016/j.colsurfa.2015.04.006
[12] Lok  P.  Singh,  Sriman  K.  Bhattacharyya,  Rahul Kumar, Geetika Mishra, Usha Sharma, Garima Singh, Saurabh  Ahalawat,  Sol-Gel  processing  of  silica nanoparticles  and  their  applications, Advances  in Colloid  and  Interface  Science ,  214,  (2014)  17-37 http://dx.doi.org/10.1016/j.cis.2014.10.007
[13] Emma Rochima, Karakterisasi kitin dan kitosan asal limbah  rajungan  cirebon  jawa  barat, Jurnal Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia ,  10,  1,  (2010) http://dx.doi.org/10.17844/jphpi.v10i1.965
[14] Westriani Prambaningrum, Khabibi Khabibi, Muhammad Cholid Djunaidi, Adsorpsi Ion Besi (III) dan Kadmium (II) Menggunakan Gel Kitosan, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 12, 2, (2009) 47-51
[15] W.  S.  Wan  Ngah,  S.  Fatinathan,  Adsorption characterization  of  Pb(II)  and  Cu(II)  ions  onto chitosan-tripolyphosphate beads: Kinetic, equilibrium  and  thermodynamic  studies, Journal  of Environmental  Management ,  91,  4,  (2010)  958-969 http://dx.doi.org/10.1016/j.jenvman.2009.12.003