ISOLASI SENYAWA FLAVONOID EKSTRAK BIJI  PINANG MERAH ( Areca vestiaria Giseke) DAN UJI SITOTOKSIKNYA MELALUI UJI BRINE SHIRIMP LETHALITY TEST (BSLT)

## ISOLATION OF FLAVONOID COMPOUNDS OF RED PINANG'S SEED EXTRACT
( Areca vestiaria Giseke) AND CYTOTOXIC TEST BY BRINE SHIRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Febriyanto Rerung * , Syariful Anam, Akhmad Khumaidi Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu.
Received  9 Juni 2016/Accepted 4 Oktober  2016

## ABSTRAK
Uji  sitotoksik  merupakan  salah  satu  pengembangann  metode  untuk  memprediksi  adanya  seyawa  yang bersifat  toksik  pada  sel  yang  merupakan  syarat  mutlak  untuk  obat-obat  antikanker.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi senyawa flavonoid dan menentukan nilai aktivitas LC 50 dari ekstrak biji Pinang Merah ( Areca vestiaria Giseke).  Ekstrak  dibuat  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Isolasi  dilakukan  melalui serangkaian metode meliputi partisi dengan menggunakan pelarut n- heksana, uji pendahuluan dengan menggunakan pereaksi  warna  dan  KLT,  isolasi  dengan  kromatografi  lapis  tipis  preparatif,  kromatografi  lapis  tipis  multi  eluen, analisis  spektrofotometer  UV-Vis  dan  uji  sitotoksik  isolat.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  flavonoid ekstrak  biji  Pinang  Merah  ( Areca  vestiaria Giseke)  memiliki  potensi  sedang  sebagai  agen  sitotoksik  dengan  nilai LC 50 sebesar 583,445  ppm.
Kata kunci : Biji Pinang Merah ( Areca vestiaria Giseke), Flavonoid, Sitotoksik, Artemia salina Leach

## ABSTRACT
Cytotoxic test is one method to predict the development of compounds that are toxic to the cell that is an absolute requirement for anticancer drugs. The aim of this study is to isolate flavonoids and determine LC 50 value of the activity of the Red Pinang seed extract ( Areca vestiaria Giseke). Extracts prepared by maceration method using ethanol 96%. Isolation is done through a range of methods includes partitioning using n-hexane, a preliminary test using  the  color  reagent  and  KLT,  isolation  by  preparative  thin  layer  chromatography,  thin  layer  chromatography multi  eluent,  UV-Vis  spectrophotometer  analysis  and  cytotoxic  test  isolates.  The  results  showed  that  isolates flavonoid seed extract of Red Pinang ( Areca vestiaria Giseke) has the medium potential of being a cytotoxic agent with LC 50 values of 583.445 ppm.
Keyword: Seed of Red Pinang ( Areca vestiaria Giseke), flavanoid, cytotoxic, Artemia salina Leach
* Coressponding Author : Febriyanto Rerung rerungfebrianto@gmail.com (ph: +62-852-4134-8160)

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu pusat  keragaman  palem  (Palmae)  di  dunia yang  memiliki  190  marga  palem  (Govaerts & Dransfield, 2005).Salah satu marga palem yang  banyak  terdapat  di  Indonesia  adalah Areca. Dalam klasifikasi botani, Areca termasuk  dalam  anak  suku  Arecoideae, tribus  Areceae,  dan  anak  tribus  Arecinae bersama-sama  dengan  marga Pinanga, Nenga, dan Hydriastele. Marga Areca memiliki ukuran yang bervariasi, mulai dari semak  belukar  hingga  pohon  yang  tinggi. Jenis-jenis  dari  marga Areca antara  lain A. catechu,  A.  vestiaria,  A.  macrocalyx,  A. novohibernica, A. oxycarpa, A. tiandra , dan lain-lain (Dransfield, 2008).
Beberapa penelitian  yang  telah dilakukan,  biji  pinang  memilki  potensi sebagai  agen  anti  kanker  (Meiyanto,  2008). Hasil  penelitian  yang  dilakukan  Miranti (2014),  menunjukan  bahwa  ekstrak  biji pinang  merah  mempunyai  potensi  sebagai anti kanker dengan nilai LC 50 sebesar 1,972 ppm.  Biji  pinang  merah  ( Areca  vestiaria Giseke)  mengandung  senyawa  flavonoid, triterpenoid, tanin, hidrokuinon dan saponin. Selain pinang merah, jenis pinang lain  yang berpotensi sebagai anti kanker adalah Areca catechu dimana ekstrak biji pinang memiliki kemampuan  untuk  menghambat  proliferasi dan  memacu  apoptosis  sel  kanker  payudara (Meiyanto, 2008).
Salah  satu  pengembangan  dalam pencarian  obat-obat  anti  kanker  dapat dilakukan dengan uji sitotoksik. Uji sitotoksik  merupakan  uji  invitro  dengan menggunakan  kultur  sel  yang  digunakan untuk  mendeteksi  tingkat  ketoksikan  suatu senyawa.  Sistem  tersebut  merupakan  uji kualitatif  dengan  menetapkan  kematian  sel (Anggriati, 2008).
Isolasi  merupakan  cara  pemisahan komponen-komponen  kimia  yang  terdapat dalam  suatu  bahan  alam.  Pada  dasarnya isolasi  senyawa  kimia  dari  bahan  alam
adalah  sebuah  usaha  bagaimana  caranya memisahkan  senyawa  yang  bercampur sehingga  kita  dapat  menghasilkan  senyawa tunggal  yang murni. Biasanya proses isolasi senyawa  dari  bahan  alami  ini  menargetkan untuk mengisolasi senyawa metabolit sekunder, karena senyawa metabolit sekunder  diyakini  dan  telah  diteliti  dapat memberikan manfaat bagi kehidupan manusia.
Salah  satu  contoh  senyawa  metabolit sekunder  yang  berperan  utuk  kesehatan yaitu  flavonoid.Flavonoid  dalam  pengujian sebagai agen sitotoksik menyebebkan gugus –OH  pada  flavonoid  berikatan  dengan protein  integral  membran  sel.  Hal  ini menyebabkan  terbendungnya  transpor  aktif Na + -  K + .Transpor  aktif  yang  berhenti menyebabkan  pemasukan  ion  Na + yang tidak terkendali dalam sel, hal ini menyebabkan pecahnya membran sel. Pecahnya membran sel inilah yang menyebabkan kematian sel (Miranti, 2014).
Oleh karena itu penelitian ini bertujuan  untuk  mengisolasi  kandungan senyawa  flavonoid  dan  menentukan  nilai aktivitas LC 50 dari ekstrak biji pinang merah.

## METODE PENELITIAN BAHAN
Biji  pinang  merah  ( Areca  vestiaria Giseke)  yang  diperoleh  dari  Desa  Bobo, Kecamatan  Palolo,  Kabupaten  Sigi  Provinsi Sulawesi  Tengah,  etanol  96%, n -heksana, etil  asetat,  aquades,  kloroforom,  lempeng Silika gel 60 GF 254 , serbuk silika gel  PF 254, etanol,  amonia,  aluminium  klorida , air  laut, larva Artemia salina Leach.

## METODE Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi  tumbuhan  dilakukan  di UPT.  Sumber  Daya  Hayati  Sulawesi, Universitas Tadulako.

## Ekstraksi dan Partisi
Sampel  serbuk  biji  pinang  merah  500 g  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  1500 mL.  Ekstraksi  dilakukan  selama  3 x  24 jam lalu  disaring  dan  dipekatkan.  Selanjutnya  6 g ekstrak kental yang diperoleh ditambahkan sedikit  etanol  96%,  kemudian  dipartisi dengan  pelarut n- heksana  sebanyak  15  mL secara berturut-turut selama 15 menit dalam erlenmeyer  berisi  magnetik  stirer  hingga pelarut n- heksana  tidak  bewarna  lagi. Ekstrak  hasil  partisi  dipisahkan  antara ekstrak yang larut n- heksana dan yang tidak larut  n-heksana,  lalu  diuapkan  hingga  di peroleh ekstrak yang tidak larut n- heksana.
Identifikasi  Flavonoid  dengan  Pereaksi Warna dan KLT Ekstrak Tidak Larut n-

## Heksana
Sejumlah 1 ml ekstrak yang tidak larut n -heksana  yang  telah  di  larutkan  dengan etanol 95%, dimasukan dalam tabung reaksi, ditambahkan 100 mg serbuk magnesium dan 0,5  ml  asam  klorida  pekat,  apabila  terjadi perubahan  warna  menjadi  merah  keunguan dinyatakan positif flavonoid (metode shinode).
Pengujian  KLT  dilakukan  dengan melarutkan    ekstrak  tidak  larut n- heksana dengan  sedikit  etanol,  kemudian  ditotolkan pada plat  KLT dan dielusi  dengan pelarut n- heksana:etil  asetat:metanol  (1:5:1).  Lalu warna noda diamati pada lampu UV 254 dan 366  nm,  baik  sebelum  dan  setelah pemberian uap amonia dan pereaksi AlCl 3 .

## Fraksinasi dan Isolasi
Sebanyak  3  g  ekstrak  yang  tidak  larut n- heksana difraksinasi
menggunakan Kromatografi  Cair  Vakum  (KCV)  dengan fase diam silika gel 60 GF 254 sebanyak 14 g dan  fase  gerak  dengan  gradien  kepolaran yang meningkat  yaitu n- heksana : etil asetat (1:1)  2  kali,  etil  asetat  100  %,  etil  asetat  : etanol  (80:20),  etil  asetat  :  etanol  (60:40),
etil asetat : etanol (40:60), etil asetat : etanol (20:80),  etanol  100  %,  metanol  100  % dengan masing-masing volume sebanyak 25 ml.
Hasil  fraksi  yang  positif  mengandung flavonoid  kemudian  dikromatografi  lapis tipis preparatif dengan cara ditotol pada plat KLTP  20  x  20  cm.  Penotolan  diulangi sebanyak 3 kali dan dikeringkan. Plat dielusi dengan  menggunakan  eluen n- heksana:etil asetat:metanol (1:5:1). Kemudian isolat diuji kemurniannya  dengan  kromatografi  lapis tipis  multi  eluen  serta  dianalisis  dengan spektrofotometer UV-VIS. Selanjutnya isolat  flavonoid  diuji  sitotoksinya  dengan metode BSLT.
Uji Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Isolat dengan bobot 100 mg dilarutkan sedikit dengan DMSO, setelah itu dimasukkan  dalam  labu  ukur  100  ml  dan dicukupkan  volumenya  hingga  100  ml dengan  air  laut  sehingga  diperoleh  larutan stok dengan konsentrasi 100 mg/100 ml atau 1000  µg/ml  (ppm).  Untuk  pengujiannya digunakan  5  seri  kosentrasi  yaitu  10  ppm, 100 ppm, 200 ppm, 500 ppm, 1000 ppm dan tiap kosentrasi pengujiannya 5 kali replikasi. Persentase  kematian  larva  dihitung  dengan persamaan:
% kematian larva = Σ kematian −Σ kematian  kontrol Σ larva  awal 𝑥 100
Setelah diketahui jumlah persen kematian  larva Artemia  salina Leach  yang telah dikonversikan ke tabel probit, selanjutnya  dapat  dilakukan  perhitungan  LC 50 dari isolat.

## HASIL
Hasil  identifikasi  tumbuhan  pinang merah  yang  digunakan  pada  penelitian  ini dengan  nomoridentifikasi    500/UN.28.UPT- SDHS/LK/2015  yang  dilakukan  di  UPT. Sumber  Daya  Hayati  Sulawesi  Universitas Tadulako adalah Areca vestiaria Giseke

## Ekstraksi dan Partisi
Hasil ekstrak kental biji pinang merah diperoleh 151,22 g, dengan persen rendemen  30,244  g.  Melalui  proses  partisi diperoleh  ekstrak  tidak  larut n- heksan  4,57 g dengan persen rendemen 76,16 %.
Identifikasi  Flavonoid  dengan  Pereaksi Warna  dan  KLT  Pada  Ekstrak  Tidak Larut n- Heksana
Hasil uji warna dan KLT (uap amonia dan  pereaksi  AlCl 3 )  dapat  dilihat  pada gambar 1 berikut.
a b       c        d           e         f

## g        h         i          j
Gambar  1.Hasil  uji  ekstrak  tidak  larut n -heksana dengan  pereaksi  warna,dan  foto  hasil  KLT  pada lempeng  Silika  gel  60  GF 254, eluen: n -heksana:etil asetat:metanol (1:5:1), jarak elusi 7 cm.
a. Uji pereaksi warna (metode shinode)
b. Visualisasi pada lampu 254
c. Visualisasi pada lampu 366
d. Visualisasi visibel sebelum diuap amonia
e. Visualisasi  setelah  diuap  amonia  pada  lampu 254
f. Visualisasi  setelah  diuap  amonia  pada  lampu 366
g. Visualisasi viisibel setelah diuap amonia
h. Visualisasi setelah disemprot AlCl 3 pada lampu 254
i. Visualisasi setelah disemprot AlCl 3 pada lampu
366
j. Visualisasi visibel setelah disemprot AlCl 3
Uji  pendahuluan  pada  ekstrak  tidak larut n -heksana  meliputi  uji  pereaksi  warna (metode  shinode),  dimana  warna  yang dihasilkan adalah merah
keunguan.Penambahan  logam  Mg  dan  HCl pekat pada uji kualitatif flavonoid bertujuan untuk mereduksi intibenzopiron yang terdapat  pada  struktur  flavonoid  sehingga akanterjadi perubahan warna menjadi jingga atau merah. Reduksi dengan magnesium(Mg)  dan  asam  klorida  akan menghasilkan  warna  merah  pada  flavonol, flavonon, flavanonol dan santon.  Pada hasil KLT,  setelah  dilakukan  pemberiandengan uap  amonia  pada  lampu  UV  254  nm terdapat  noda  yang  berfluoresensi  kuning, pada  lampu  UV  366  nm  berfloresensi  biru muda serta dengan penyemprotan menggunakan  pereaksi  semprot  AlCl 3 hasil yang  diperoleh  adalah  adanya  noda  dengan fluoresensi  kuning  pada lampu UV 254 nm dan  adanya  nodaberfloresensi  biru  muda (agak  pudar)  pada  lampu  UV  366  nm. Pereaksi semprot AlCl 3 ini dapat membentuk  kompleks  tahan  asam  antara gugus hidroksil dan keton yang bertetangga dan  membentuk  kompleks  tak  tahan  asam dengan  gugus  orto-dihidroksi  sehingga dapat  digunakan  untuk  mendeteksi  kedua gugus  tersebut.  Gugus  OH  pada  C 3 dan  C 5 pada  flavon  dan  flavonol  akan  membentuk kompleks yang stabil dengan adanya AlCl 3 , sebaliknya  kompleks  yang  terbentuk  antara AlCl 3 dengan gugus orto dihidroksi bersifat labil  sehingga  dengan  penambahan  asam akan terdekomposisi(Markham, 1988).
Fraksinasi  dengan  Kromatografi  Cair Vakum
Hasil fraksinasi  ekstrak tidak larut n - heksana  dapat  dilihat  pada  tabel  di  bawah ini:

## Tabel 1. Hasil fraksinasi ekstrak tidak larut
n- heksana
Fraksi Perbandingan Eluen Bobot Fraksi (g) PersenRend emen FI n- heksana  :  etil asetat (1:1) 0,05 1,66 F2 Etil  asetat  100 % 0,06 2 F3 Etil asetat : etanol (80:20) 1,10 36,66 F4 Etil asetat : etanol (60:40) 0,09 3 F5 Etil asetat : etanol (40:60) 0,45 15 F6 Etil asetat : etanol (20:80) 0,70 23,33 F7 Etanol 100 % 0,31 10,13 F8 Metanol 100 % 0,10 3,33 Persen Recovery 2,86 95,31
Hasil uji pereaksi warna dan penampakan  noda  semua  fraksi  pada  lampu UV  254  dan  366  nm  serta  sebelum  dan sesudah di uap amonia dan disemprot AlCl 3 dapat dilihat pada Gambar 2 dibawah ini.
a                                    b c
d
e                                     f

## g                                     h

## i                                      j
Gambar 2. KLT hasil fraksinasi pada lempeng Silika gel  60  GF 254, eluen n -heksana:etil  asetat:metanol (1:5:1);  jarak  elusi  7  cm  dan  pengujian  dengan pereaksi warna,
a. Uji pereaksi warna (metode shinode) b. Visualisasi pada lampu 254 c. Visualisasi pada lampu 366 d. Visualisasi setelah diuap amonia pada lampu 254
e. Visualisasi setelah diuap amonia pada lampu 366
f. Visualisasi  setelah  disemprot  AlCl 3 pada  lampu 254
g. Visualisasi  setelah  disemprot  AlCl 3 pada  lampu 366
h. Visualisasi visibel sebelum diuap amonia
i. Visualisasi visibel setelah diuap amonia
j. Visualisasi visibel setelah disemprot AlCl 3 5 %
Dari hasil pengamatan  secara  visibel  dan di  bawah  lampu  UV  254  dan  366  nm  pada Gambar  2,  fraksi  yang  positif  mengandung flavonoid  yaitu  terletak  pada  fraksi  6  dan  7 dimana  dari  profil  noda  (visibel,  uap  amonia, pereaksi  AlCl 3 )  dan  nilai  Rfnya  sama  yaitu 0,87.Noda  hasil  elusi  lempeng  KLT  sebelum
pemberian  uap  ammonia,  pada  lampu  UV  254 nm  tidak  terdapat  noda  dengan  fluoresensi, pada  lampu  UV  366  nm  terdapat  noda berfloresensi biru muda, dan setelah di beri uap amonia pada lampu UV 254 nm terdapat noda hijau  kekuningan,  366  nm  terdapat  noda berfloresensi biru muda, dan setelah disemprotkan  pereaksi  AlCl 3 pada  lampu  UV 254  nm  terdapat  noda  kuning  kehijauan,  366 nm  terdapat  noda  berfloresensi  biru  muda. Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan,  fraksi  6 dan 7 di gabungkan menjadi satu dan kemudian dilakukan  uji  kembali  yang  meliputi  uji  warna dan  KLT  (uap  amonia  dan  pereaksi  AlCl 3 ), yang  dapat  dilihat  pada  Gambar  3.  Hasil  uji warna  (metode  shinode)  didapatkan  warna hasil  gabungan  fraksi  6  dan  7  bewarna  merah keunguan  dan  untuk  pengamatan  KLT  (lampu UV  254  dan  366  nm)  diperoleh  hasil  yang sama  pada  proses  sebelum  penggabungan fraksi  6  dan  7.  Kemudian  fraksi  6  dan  7 dilanjutkan pada proses KLTP untuk mendapatkan isolat flavonoid.
a           b             c d
e f               g            h
i              j
Gambar  3:  Hasil  penggabungan  fraksi  (6  dan  7) dengan  pengujian  pereaksi    warna  dan  hasil  KLT pada  lempeng  silika  gel  60  GF 254, eluen n -heksana  : etil asetat : metanol (1:5:1); jarak elusi 7 cm a. Uji pereaksi warna (metode shinode)
b. Visualisasi pada lampu 254
c. Visualisasi pada lampu 366
d. Visualisasi setelah diuap amonia pada lampu 254
e. Visualisasi setelah diuap amonia pada lampu 366
f. Visualisasi setelah disemprot AlCl 3 pada lampu 254
g. Visualisasi setelah disemprot AlCl 3 pada lampu 366
h. Visualisasi sebelum diuap amonia
i. Visualisasi setelah diuap amonia
j. Visualisasi setelah disemprot AlCl 3 5 %

## Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Hasil  KLTP  gabungan  fraksi  6  dan  7 dapat dilihat pada gambar 4 dibawah ini
a
b c
Gambar  4:  Hasil  isolasi  dengan  kromatografi  lapis tipis preparatif  fraksi (gabungan fraksi 6 dan 7). a. Visualisasi KLTP secara visibel b. Visualisasi KLTP pada lampu UV 254 c. Visualisasi KLTP pada lampu UV 366 Setelah di elusi dan diamati pada lampu UV  254  dan  366  nm  didapatkan  4  isolat (Gambar 4). Selanjutnya keempat
Isolat 1 Isolat 2 Isolat 3 Isolat 4
isolattersebut  di  keruk    menggunakan spatula,  dan  dimasukan  kedalam  tabung sentrifuge dan ditambahakan dengan pelarut metanol  5  ml  kemudian  dikocok  dengan menggunakan vortex. Setelah isolat terlarut, dilakukan  sentrifuge  selama  15  menit dengan kecepatan sentrifugasi 3000 rpm.Pemilihan  kecepatan  ini  agar  dapat memisahkan  antara  komponen  senyawa dengan  bagian  silika  gel  sehingga  isolat yang diperoleh merupakan murni komponen senyawa  yang  diinginkan.  Selanjutnyaisolat ditampung  dalam  vial  dan  dibiarkan menguap,  setelah  pelarutnya  menguap isolat-isolat  tersebut  diKLT  kembali  untuk melihat profil  nodanya.  Dari  4 isolat, hanya isolat 2 yang menunjukkan profil KLT untuk senyawaflavonoid,  yang  dapat  dilihat  pada gambar 5 dibawah ini.
a                       b                    c
d
e f

## g                    h                       i
Gambar 5: Hasil KLT empat isolat
a. Visualisasi isolat pada lampu 254 nm
b. Visulisasi isolat pada lampu 366 nm
c. Visualisasi visibel sebelum diuap amonia
d. Visualisasi  isolat  setelah  diuap  amonia  pada lampu 254
e. Visualisasi  isolat  setelah  diuap  amonia  pada lampu 366
f. Visualisasi visibel isolat setelah diuap amonia
g. Visualisasi  isolat  setelah  disemprot  AlCl 3 pada lampu 254
h. Visualisasi isolat setelah  disemprot AlCl 3 pada lampu 366
i. Visualisasi  visibel  isolat  setelah  disemprot
AlCl 3

## Kromatografi Lapis Tipis Multi Eluen
Hasil  kromatografi  lapis  tipis  multi eluen  menggunakan  4  perbandingan  eluen dengan kepolaran berbeda dapat dilihat pada gambar 6 dibawah ini.

## a          b          c         d         e          f
Gambar 6: Hasil KLT  multi eluen, plat silika  gel 60 GF 254 ; jarak elusi 7 cm
a. Eluen  kloroform:  etil  asetat  (5:2)  pada  lampu UV 254 nm
b. Eluen kloroform: metanol (2:1) pada lampu UV
254 nm
c. Eluen n- heksan:  metanol (2:4) pada lampu UV
254 nm
d. Eluen  kloroform:  etil  asetat  (5:2)  pada  lampu UV 366 nm
e. Eluen kloroform: metanol (2:1) pada lampu UV 366 nm
f. Eluen n- heksan:  metanol (2:4) pada  lampu UV 366 nm
Dari  Gambar  6 memperlihatkan bahwa  pada  lempeng  KLT  yang  telah dielusi  dengan  tiga  perbandingan  eluen dengan  kepolaran  yang  berbeda  noda terlihat  sudah  tunggal.Ini  mengindikasikan bahwa isolat telah murni secara KLT.

## Hasil Spektrofotometri UV-Vis
Hasil  analisis  spektrofotometri  UV- Vis  dengan  melakukan  scanning  panjang gelombang  200-700  nm  menghasilkan  2 puncak yang dapat dilihat pada Gambar 7 di bawah ini.
Gambar 7. Spektrum isolat 2
Dari hasil scanning panjang gelombang  terlihat  spektrum  yang  mirip dengan  golongan  senyawa  flovanoid  jika dibandingkan  dengan  literatur.Spektrum memperlihatkan  2  puncak  pada  rentang panjang  gelombang  (300-550  nm  (Puncak I)) dan (240-285 nm (puncak II)) (Markham, 1988), puncak II pada spektrum yaitu (270 nm) sedangkan puncak I (440 nm ). Berdasarkan data – data tersebut senyawa yang  telah  di  isolasi  hingga  sampai  proses pemurnian  dengan  kromatografi  lapis  tipis multi eluen diduga adalah senyawa flavonoid.
Hasil  Uji Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)
Pengukuran aktivitas sitotoksik menggunakan metode Brine Shrimp Lethality  Test (BSLT)  dengan  melihat jumlah  kematian  (LC 50 )  larva Artemia salina Leach  dari  isolat  flavonoid  biji pinang  merah  yang  diperoleh  dari  hasil KLTP.  Hasil  LC 50 isolat  flavonoid  biji pinang  merah  terhadap Artemia  salina Leach,  dapat  dilihat  pada  pada  Tabel  2 dibawah ini.
Tabel  2.Hasil  LC 50 isolat  flavonoid  biji pinang  merah  terhadap Artemia  salina Leach.
Kosentrasi (ppm) Log Konsentrasi (X) Nilai Probit (Y) LD 50 (µg/ml) 10 1 4,01 100 2 4,36 200 2,301 4,69 583,445 500 2,698 4,95 1000 3 5,25 Dari hasil perhitungan yang dilakukan didapatkan  nilai  LC 50 isolat  flavonoid melalui  uji Brine  Shirimp  Lethality  Test (BSLT)  terhadap  larva Artemia  salina Leach  adalah  kategori  sedang  (500-750) dengan nilai sebesar 583,445 ppm (Anderson, 1991).

## Ucapan Trima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Bapak  Prof.  Ramadhanil,  M.Si  dan Bapak Sahlan, S.Si yang telah mengidentifikasi tumbuhan yang digunakan sebagai sampel penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  J.  E.,  Goetz  C.  M.,  Mc  Laughlin J.  L.,  1991, A  Blind  Comparison  of
Simple Bench-top Bioassay and Human  Tumor  Cell  Cytotoxicities  as
Puncak II Puncak I
Antitumor Prescrenss , Natural Product Chemistry, Elseiver, Amsterdam.
Anggriati,  P.,  2008, Uji  sitotoksik  ekstrak etanol  70  %  buah  kemukus ( Piper
cubeba L.) terhdap sel Hela, Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dransfield, J., 2008. Genera Palmarum : The Evolution and Classsification of Palms ,  Kew,  Royal  Botanic  Gardens Kew, UK.
Govaerts  R,  Dransfield  J,    2005. World Checklist  of  Arecaceae.  The  Board  of Trustees of the RoyalBotanic Gardens , Kew, Update on the internet; http://www.kew.org/wcsp/,  akses  7 Februari 2015.
Markham,K.R.,1988, Cara  Mengidentifikasi
Flavonoid , terjemahan Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung .
Meiyanto,  E.,  2008. Ekstrak  Etanolik  Biji Buah  Pinang  (Areca  cathecu  Linn) Mampu  Menghambat  Proliferasi  dan
Memacu  Apoptosis  Sel    MCF-7 .
Majalah  Farmasi  Indonesia,  19  (1):
12-19.
(online),
http://mfi.farmasi.ugm.ac.id/files/news /2.Edy.pdf, diakses 7 Februari 2015.
Miranti,  2014, Uji  Potensi  Anti  Kanker Ekstrak  Biji  Pinang  Merah  dan Implementasinya dalam Pembelajaran Mitosis ,  skripsi,  Fakultas  Keguruan dan  Ilmu  Pendidikan  Universitas Tanjungpura, Pontianak.