Ramdan et al. :  Peranan Suhu dan Kelembaban selama Penyimpanan Benih Kedelai 389
Jurnal Agrotek  Tropika, Agustus  2022,  Vol  10,  No.  3,  pp.  389  -  394 DOI  :  http://dx.doi.org/10.23960/jat.v10i3.5136 ISSN:  2337-4993  (Print),  2620-3138  (Online)
PERANAN SUHU DAN KELEMBABAN SELAMA PENYIMPANAN BENIH KEDELAI TERHADAP DAYA KECAMBAH DAN INFEKSI PATOGEN TULAR BENIH

## THE  ROLE  OF  TEMPERATURE AND  HUMIDITY  DURING  SOYBEAN SEED STORAGE ON GERMINATION AND SEED BORNE PATHOGEN  INFECTIONS  RATE
Evan Purnama Ramdan*, Putri Irene Kanny, Edi Minaji Pribadi dan Budiman Program Studi Agroteknologi, Fakultas Teknologi Industri, Universitas Gunadarma, Depok *Email:evan_ramdan@staff.gunadarma.ac.id
* Corresponding Author, Diterima: 4 Jul. 2021, Direvisi: 11 Jan. 2022, Disetujui: 15 Ags. 2022

## ABSTRACT
Damage to seeds during storage can be caused by infection with seed-borne pathogens. As a result, there can be a decrease in germination and death of seedlings. Temperature and humidity are one of the factors for physiological deterioration of seeds during storage. Therefore, this study aimed to examine the effect of temperature and humidity during storage on germination and fungal pathogens associated with  soybean seeds. The design used in this study was a completely randomized design consisting of 3 treatments, namely the design of room temperature and humidity (control), low temperature, and low humidity. Each treatment was repeated 5 times. Soybean seeds were prepared by wrapping 10 seeds with gauze with treatment and replication numbers. The seeds that have been wrapped in gauze are then stored at room temperature and humidity, at a cold temperature of 4oC in a refrigerator and low humidity (30%) in a desiccator with silica gel added. After 3 weeks of storage, soybean seeds were grown using the blotter test method. At 7 days after planting,  the  seeds  that  germinated  were  calculated  for  germination  and  infection  power  of  pathogenic fungi. The data obtained were then analyzed and continued with the Tukey test at the 5% level. The results showed that the temperature and humidity treatment could maintain the seeds with 96.67-100% germina- tion. Treatment of cold temperatures and low humidity can also prevent soybean seeds from infection with Cladosporium sp. and Rhizopus sp.
Keywords: Blotter test,Cladosporium sp.,Rhizopus sp., seeds storage

## ABSTRAK
Kerusakan benih selama penyimpanan dapat disebabkan oleh infeksi patogen tular benih. Akibatnya dapat terjadi penurunan daya kecambah maupun kematian bibit. Suhu dan kelembaban merupakan salah satu faktor penyebab kemunduran fisiologi benih selama penyimpanan. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk menguji pengaruh suhu dan kelembaban selama penyimpanan terhadap daya kecambah dan cendawan patogen yang berasosiasi  dengan benih kedelai.  Rancangan yang  digunakan  pada penelitian ini  adalah Rancangan Acak Lengkap yang terdiri dari 3 perlakuan, yaitu suhu dan kelembaban ruang (kontrol), suhu rendah, dan kelembaban rendah. Setiap perlakuan diulang sebanyak 5 kali.  Benih kedelai disiapkan dengan membungkus 10 butir benih dengan kain kasa sejumlah perlakuan dan ulangan. Benih yang telah dibungkus kasa kemudian disimpan pada  suhu  dan  kelembaban ruang,  pada suhu  dingin 4 o C  di refrigerator  dan  kelembaban  rendah (30%) pada desikator yang ditambah silica gel . Setelah 3 minggu penyimpanan, benih kedelai ditumbuhkan dengan metode blotter test. Pada 7 hari setelah tanam, benih yang berkecambah dihitung daya kecambah dan daya infeksi cendawan patogen. Data yang diperoleh kemudian dianalisis ragam dan dilanjutkan dengan uji Tukey  sebagai  pada  taraf5%.Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  suhu  dan  kelembaban  dapat menjaga mutu benih dengan daya kecambah 96.67-100%. Perlakuan suhu dingin dan kelembaban rendah juga dapat menghindarkan benih kedelai dari infeksi Cladosporium sp. dan Rhizopus sp.
Kata kunci: Blotter test,Cladosporium sp., penyimpanan benih , Rhizopus sp.

## 1.  PENDAHULUAN
Kedelai  merupakan  tanaman  pangan  utama ketiga setelah padi dan jagung. Hal tersebut tidak terlepas dari kegunaan kedelai baik sebagai pangan manusia, pakan ternak, maupun bahan baku industri (Kementan, 2017). Kebutuhan manusia terhadap kedelai  sebagai  sumber  pangan dan  pakan akan terus meningkat, sesuai proyeksi Simatupang et al .
(2005) bahwa pada tahun 2025 konsumi kedelai mencapai 3.35 juta ton atau meningkat sebesar 19% per tahun selama kurun waktu 2009-2025. Oleh karena itu diperlukan upaya peningkatan produksi kedelai untuk mencukupi kebutuhan tersebut. Salah satu  upaya  yang  dapat  dilakukan  adalah menyediakan  varietas  kedelai  unggul  dengan karakter produktivitas tinggi, tahan serangan OPT, dan mempunyai daya simpan yang baik (Arief & Asnawi, 2019).
Kerusakan benih selama penyimpanan salah satunya dapat diakibatkan oleh adanya serangan OPT, khususnya patogen tular benih. Patogen tular benih kedelai yang telah dilaporkan yaitu Aspergillus flavus,  Aspergillus  niger,  Cladosporium oxysporum,  Curvularia  pallescens,  Fusarium solani,  Melanospora  zamiae, dan Nigrospora (Soesanto et al ., 2020). Sementara itu, Ramdan & Kulsum (2017) melaporkan persentase cendawan patogen  yang  berasosiasi  dengan  benih  kedelai sebesar 14% untuk Aspergillus sp. dan  38% untuk Fusarium sp.  Patogen  tular  benih  dapat didefinisikan  sebagai  patogen  yang  ditemukan secara  internal  atau  eksternal  dalam  benih  yan berpotensi menimbulkan penyakit pada tanaman (Gupta et al ., 2017, Pedrasa et al ., 2018). Selain itu, patogen terbawa benih juga dapat ditemukan dalam benih sebelum atau sesudah berkecambah (Garuba et al ., 2014). Infeksi patogen tular benih dapat  menyebabkan  penurunan  daya  kecambah benih,  kematian  bibit,  maupun  peningkatan perkembangan penyakit di lapangan. Oleh karena itu, penting untuk menghindarkan benih dari infeksi patogen. Ramdan et al . (2020) telah melaporkan bahwa  perlakuan  benih  secara  fisik  dan  kimia mampu  menurunkan  daya  infeksi  patogen  tular benih sebesar 82%. Meskipun demikian, kondisi lingkungan selama penyimpanan benih juga perlu diperhatikan, seperti suhu dan kelembaban. Faktor suhu dan kelembaban sangat berpengaruh terhadap kemunduran fisiologi benih selama penyimpanan dengan ciri penurunan viabilitas dan vigor benih (Ghassemi-Golezani et al ., 2010; Tatipati et al., 2004). Menurut Kauth & Biber (2014) suhu dan
kelembaban ruang simpan mempengaruhi kadar air benih,  peningkatan  suhu  dan  kelembaban  akan meningkatkan kadar air benih selama periode simpan Informasi penting pada penelitian ini adalah akan  diketahuinya  peranan  faktor  suhu  dan kelembaban selama penyimpanan benih terhadap daya  kecambah  dan  patogen  yang  berasosiasi dengan benih kedelai.

## 2.  BAHAN  DAN  METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Agroteknologi  Menengah,  Program  Studi Agroteknologi,  Fakultas  Teknologi  Industri, Universitas  Gunadarma  Kampus  F7,  Ciracas, Jakarta  Timur,  pada  bulan  Oktober  sampai Desember 2020.

## 2.1 Bahan
Benih  kedelai  merupakan  kedelai  varietas Anjasmoro.  Benih  diperoleh  dari  penjual  benih curah  yang telah  disimpan selama 6 bulan pada kemasan plastik pada suhu ruang. Benih kemudian disortir dari kotoran dan benih rusak.

## 2.2 Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah desikator dan kulkas sebagai alat yang mengatur kelembaban dan suhu.

## 2.2  Prosedur  Penelitian
Benih  kedelai  yang  telah  disortir  kemudian diambil secara acak. Kemudian sebanyak 10 butir benih kedelai dibungkus menggunakan kain kasa. Selanjutnya  benih  di  simpan  pada  suhu  dan kelembaban ruang sebagai kontrol (K),pada suhu 4 o C di dalam mesin pendingin sebagai perlakuan suhu dingin (T), serta disimpan di desikator yang diberikan silica gel sebagai perlakuan kelembaban rendah  dengan  RH  30%  (H).  Masing-masing perlakuan kemudian disimpan selama tiga minggu.
Setelah mencapai  waktu tiga  minggu, benih ditumbuhan  dengan  metode blotter  test .  Kertas buram  sebanyak 3  lembar  kertas diletakan  pada cawan petri berdiameter 9 cm. Kemudian kertas dilembabkan dengan menambahkan akuades steril. Selanjutnya benih  kedelai ditanam di atas kertas buram sebanyak 10 benih (Akonda et al., 2016). Setelah 7 hari setelah tanam (HST), benih yang berkecambah kemudian diamati dengan menghitung
benih yang berkecambah normal. Daya kecambah dengan rumus (1):
Keterangan: DK = daya kecambah, n = jumlah benih berkecambah, N= jumlah benih yang diuji.
Masing-masing benih diamati adanya infeksi patogen diamati pada 7 HST. Pengamatan meliputi kemunculan  miselium  yang  mengkoloni  benih, maupun adanya bercak nektorit pada benih yang berkecambah.  Persentase  daya  infeksi  patogen terbawa benih dihitung menggunakan rumus (2):
Keterangan:  DI  =  daya  infeksi,  v  =  jumlah benih terinfeksi, V = jumlah benih yang diuji.
Identifikasi dilakukan melalui pengamatan ciri morfologi.  Koloni  patogen  pada  benih  yang terinfeksi  dan  diamati  secara  mikroskopis  pada mikroskop  binokuler.  Konida  dari  cendawan patogen diamati dan dicocokkan dengan buku kunci identifikasi dari Watanabe (2002).
Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap  (RAL) dengan  3  perlakuan.  Masing- masing perlakuan diulang sebanyak 5 kali sehingga terdapat 15 satuan percobaan. Data daya kecambah dan  persentase  infeksi  kemudian  diolah menggunakan analisis ragam pada program SAS 9.1.  Uji  lanjut  dilakukan  apabila  terdapat  beda nayata menggunkan uji Tukey pada taraf 5%.

## 3.  HASIL  DAN  PEMBAHASAN
3.1  Daya  Kecambah  Benih  Kedelai  pada Perlakuan Suhu dan Kelembaban
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa perlakuan suhu dingin berpengaruh nyata terhadap daya kecambah benih  kedelai normal dibandingkan dengan perlakuan-perlakuan kelembaban rendah dan  kontrol  (Tabel  1).  Perlakuan  suhu  dingin mengakibatkan  daya  kecambah  benih  sebesar 96.67%  atau  menurun  sebesar  3.33%.  Hasil tersebut berbeda dengan Kuswanto (2007) dimana semakin  rendah  suhu  ruang  simpan  maka  akan semakin  lambat  laju  deteriorasi  sehingga  daya simpan benih akan bertahan lebih lama. Suhu yang terlalu rendah (4 o C) pada penelitian ini ditenggarai menyebabkan penurunan daya kecambah. Temuan Agustiansyah  (2020)  menunjukkan  bahwa  suhu rendah optimal menjaga mutu benih kedelai yaitu
pada 18 o C. Hal ini diperkuat dengan penelitian Pramono et al. (2019) bahwa suhu rendah 18 o C tidak menyebabkan kemunduran fisiologis benih sorgum.
Akan tetapi, meskipun terjadi penurunan daya kecambah  pada suhu  4 o C,  benih  kedelai  masih dalam  kategori  memenuhi  standar  mutu  benih, seperti persyaratan benih yang tercantum dalam Kepmentan  (2016)  bahwa  standar  mutu  benih memiliki  daya  kecambah  > 80%.Sesuai  dengan penelitian Lestari et al . (2021) bahwa benih yang di simpan pada suhu ruang memiliki daya kecambah > 80%. Begitu pula penyimpanan benih pada suhu dingin masih dapat mempertahankan mutu benih dengan  daya  kecambah  lebih  dari  80% (Ramdhaniati et al ., 2017).
Sementara  itu,  perlakuan  kelembaban  baik pada kelembaban rendah (30%) maupun kontrol menunjukkan tidak ada perbedaan nyata dengan daya  kecambah  benih  sebesar  100%,  sehingga masih dapat mempertahankan mutu benih. Kaitan antara  perlakuan  suhu  dan  kelembaban  yang mendukung  mutu  benih  disebabkan  oleh  masih terjaganya kadar air benih kedelai, dimana kadar air akan berpengaruh pada laju deteriorasi benih (Ramadhanianti et  al .,  2017).  Meskipun  pada penelitian ini tidak dilakukan pengukuran kadar air. Akan  tetapi  berdasarkan    standar  mutu  benih bersertifikat,  persentase  kadar  air  benih  harus sebesar 11% (Kepmentan 2016).

## 3.2  Daya  Infeksi  Cendawan  Patogen  yang Berasosiasi  pada  Benih  Kedelai
Identifikasi  cendawan  patogen  tular  tanah dilakukan  pada  benih-benih  yang  terinfeksi. Sementara  pada  benih  yang  berkecambah  dan menunjukkan gejala nektoritk akibat infeksi patogen dihitung sebagai benih terinfeksi. Hasil identifikasi cendawan patogen tular benih setelah perlakuan didapat tiga jenis cendawan yaitu Aspergillus sp.,
Perlakuan Daya kecambah (%) K 100,00 a T 96,67 b H 100,00 a
Keterangan: Angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata berdasarkan  uji  Tukey  pada  taraf  5%. K = kontrol, T = penyimpanan suhu rendah, H = penyimpanan kelembaban rendah.
Tabel  1.  Daya  Kecambah  Benih  Kedelai  pada Perlakuan Suhu dan Kelembaban
DK = ∑ n
∑ N × 100%                                   (1)
DI = ∑ v ∑ V × 100% (2)
392 Jurnal Agrotek Tropika 10(3): 389-394, 2022
Cladosporium sp., dan Rhizopus sp. (Gambar 1). Sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya  bahwa Aspergillus sp. dan Cladosporium sp. ditemukan sebagai  cendawan  patogen  tular  benih  kedelai (Soesanto et  al .,  2020;  Escamilla et  al .,  2019; Rahayu,2016), sedangkan Rhizopus sp. ditemukan sebagai  cendawan  patogen  tular  benih  cabai (Ramdan & Kalsum, 2017).
Ciri  morfologi  dari Cladosporium sp.  yang diperoleh mempunyai bentuk konidium seperti elips. Pada salah satu ujung konidia bentuknya meruncing dan  terdapat  bintik  hitam. Aspergillus sp. merupakan hifa yang berinsulasi, fialid, metula, konidiofor erektil, tidak berwarna, dan memiliki sel kaki. Sementara itu Rhizopus sp. memiliki stolon dan rhizoid yang warnanya gelap jika sudah tua, sporangia  biasanya  besar  dan  berwarna  hitam, kolumela agak bulat dan apofisis.
Pengamatan daya infeksi cendawan patogen pada benih perlakuan suhu dan kelembaban selama penyimpanan menunjukkan bahwa benih kedelai masih terinfeksi patogen (Tabel 2). Penyimpanan suhu dingin dapat menghindarkan benih kedelai terinfeksi Cladosporium sp.  yang  ditunjukkan dengan  daya  infeksi  0%,  sedangkan  pada kelembaban  rendah  dapat  menghindari  infeksi Rhizopus sp. yang ditunjukkan daya infeksi 0%. Sementara itu untuk cendawan Aspergillus sp. baik pada penyimpanan suhu dingin maupun kelembaban rendah masih menunjukkan adanya daya infeksi
yang  sama  dengan  penyimpanan  pada suhu  dan kelembaban ruang (kontrol).
Keberadaan  cendawan  patogen  pada  benih dapat  disebabkan  oleh  kondisi  substrat perkecambahan,  alat  perkecambahan  benih, penyimpanan, dan air yang digunakan tidak steril (Soesanto et al ., 2020). Faktor lainnya yang dapat mendukung keberadaan  cendawan patogen pada benih yaitu  kondisi fisik dan kelembaban tempat penyimpanan serta status kadar air benih (Justice & Bass, 1988). Akibat adanya infeksi patogen mutu benih  akan    menjadi  berkurang,  seperti  terjadi perubahan warna pada permukaan benih, muncul aroma tertentu, dan viabilitas benih menurun.
Pengendalian  patogen  terbawa  benih  perlu dilakukan, sebab selain dapat menurunkan mutu benih dapat meningkatkan perkembangan penyakit di pembibitan maupun lapangan. Lalu lintas benih yang sudah terinfeksi benih dari suatu daerah ke daerah lain dapat membuka peluang penyakit baru di daerah tujuan. Pengendalian terhadap patogen tular  benih  kedelai  yang  sudah  dilakukan diantaranya  perlakuan  benih  dengan  pemanasan kering dan fungisida (Ramdan et al . 2021).

## 4.  KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  bahwa penyimpan benih kedelai pada suhu dan kelembaban ruang (kontrol), suhu dingin dan kelembaban rendah
Cendawan Patogen Daya infeksi (%) K T H Aspergillus sp 46.7 43.3 46.7 Cladosporium sp. 27.1 0 40 Rhizopus sp. 26.7 20.0 0 Tabel 2. Daya Infeksi Cendawan Patogen Tular Benih Kedelai
Gambar 1. Cendawan patogen terbawa benih kedelai: A) Aspergillus sp., B) Curvularia sp. , dan C) Rhizopus sp.
masih dapat menjaga mutu benih dengan ditunjukkan oleh daya kecambah > 80%. Penyimpanan benih kedelai pada suhu dingin dapat mengindarkan benih dari  infeksi Cladosporium sp.,  sedangkan penyimpanan  pada  kelembaban  rendah  dapat menghindarkan benih dari infeksi Rhizopus sp. Meskipun demikian, benih pada kondisi dua penyimpanan tersebut masih dapat terinfeksi oleh Aspergillus sp. sebesar 43.3 – 46.7%. Oleh karena itu, perlakuan benih sebelum penaman diperlukan untuk mengeliminasi patogen terbawa benih.

## 5. DAFTAR  PUSTAKA
Agustiansyah, A., Y. Nurmiaty, E. Ermawati & A.S. Putri. 2020. Mutu limabelas lot benih kedelai  ( Glycine  max [L.]  Merr)  yang disimpan  sampai  enam  bulan  pada  suhu ruang  yang  berbeda. Jurnal  Galung Tropika. 9 (30): 223 – 232.
Akonda, M.M.R., M. Yasmin & I. Hossain. 2016.
Incidence of seedborne mycoflora and their effects  on  germination  of  maize seeds. InternationalJournal  of  Agronomy and AgriculturalResearch. 8  (1):  87 – 92.
Arief R.W., & R. Asnawi. 2019. Perubahan mutu fisik  dan  mutu  kimia  kedelai  selama penyimpanan. Jurnal  Wacana  Pertanian . 15 (1): 22 – 29.
Escamilla,  D.,  M.L.  Rosso  &  B.  Zhang.  2019. Identification  of  fungi  associated  with soybeans  and  effective  seed  disinfection treatments. Food  Science  and  Nutrition. 7:3194 – 3205.
Ghassemi-Golezani, K., J. Bakhshy & Y. Raey, A. Hossainzadeh-Mahootchy.  2010. Seed vigor and field performance of winter oilseed rape ( Brassica  napus L.)  cultivars. Not.  Bot. Hort. Agrobot . Cluj . 38: 146 – 150.
Kauth, P.J., & P.D. Biber. 2014. Moisture content, temperature, and relative humidity influence seed  storage  and  subsequent  survival  and germination of Vallisneria americana seeds. J. Aquabot . 120: 297 – 303.
Kepmentan [Keputusan Menteri Pertanian Republik Indonesia] Nomor 1316/HK.150/C/12/2016 tentang perubahan atas Keputusan Menteri Pertanian  Nomor  355/HK.130/C/05/2015
Tentang Pedoman  Teknis  Sertifikasi  Benih Bina  Tanaman  Pangan .  Kementerian Pertanian, Jakarta. 40 hlm.
Kementan [Kementerian Pertanian]. (2017). Statistik Pertanian  2016 .Pusat  Data  dan  Sistem
Informasi Pertanian. Kementerian Pertanian Republik Indonesia, Jakarta.408 hlm.
Kuswanto,  H.  2007. Teknologi  pemrosesan pengemasan  dan  penyimpanan  benih . Kanisius, Yogyakarta. hal. 73 – 75.
Lestari, E., Azizah, W. Rianti & Sugiarto. 2021. Pengaruh  perlakuan  suhu  dan  beberapa genotipe  terhadap  daya  kecambah  dan vigor benih kubis bunga ( Brassica oleracea var. botrytis L.)  pada  dataran  rendah. Media Agro Jurnal Ilmu-ilmu Pertanian .
17 (1): 16 – 25.
Permentan [Peraturan Menteri Pertanian] Nomor 90/Permentan/OT.140/9/2013. Standar Operasional  Prosedur  Penetapan  Kebun Sumber  Benih,  Sertifikasi  Benih,  dan Evaluasi  Kebun  Sumber  Benih  Tanaman Kakao (Theoborma cacao L.) .
Kementerian Pertanian, Jakarta.
Pramono, E., M. Kamal, K. Setiawan &  Tantia, M.A. 2019. Pengaruh lama simpan dan suhu ruang penyimpanan pada kemunduran dan vigor benih sorgum ( Sorghum bicolor (L.) Moench.)  varietas  samurai-1. Jurnal Agrotek Tropika, 7 (2): 383 – 389.
Rahayu, M. 2016. Patologi dan teknis pengujian kesehatan  benih  tanaman  aneka kacang. Buletin Palawija . 14 (2): 78 – 88. Ramdan, E.P. & U. Kalsum. 2017. Inventarisasi cendawan terbawa benih padi, kedelai, dan cabai. Jurnal  Pertanian  Presisi. 1  (1): 2017.
Ramdan,  E.P.,  I.M. Arti  &  R.  Risnawati.  2020. Evaluasi viabilitas patogen terbawa benih jagung  pada  perlakuan  fisik  dan  kimia. Jurnal Berkala Penelitian Agronomi . 8 (2):
16 – 24.
Ramdan, E.P., A.Y. Perkasa, T.K.K Azmi, A. Aisyah, R. Kurniasih, P.I. Kanny, R. Risnawati & P. Asnur. 2021. Effects of physical and chemical treatments on seed germination and soybean seed-borne  fungi. IOP  Conf.  Ser.:  Earth Environ. Sci. 883: 1 – 6.
Ramdhaniati, S., I. Noviana, A. Diratmaja &Y. Sukarya.  2017.  Daya  kecambah  benih kedelai  yang  disimpan  dengan  beberapa metode  pengemasan  pada  dua  kondisi penyimpanan. Buletin Hasil Kajian. 7 (7): 33 – 38.
Simatupang,  P.,  Marwoto  &  D.K.S.  Swastika. 2005. Pengembangan kedelai dan kebijakan penelitian di Indonesia. Makalah disampaikan pada Lokakarya Pengembangan Kedelai di
Lahan  Sub  Optimal.Balai  Penelitian  dan Pengembangan  Kacang-Kacangan  dan Umbi-Umbian.  Balai  Penelitian  Kacang- kacangan dan Umbi-umbian, Malang. Tatipati, A.,  P.  Yudono, A.  Purwantoro,  &  W.
Mangoendidjojo. 2004. Kajian aspek fisiologi
dan biokimia deteriorasi benih kedelai dalam penyimpanan. Ilmu Pertanian . 11 (2): 76–87. Watanabe T.  2002. Pictorial  Atlas of  Soil  and Seed  Fungi: Morphologies  of  Cultured Fungi and Key to Species . Ed ke-2. Florida (US): CRC Press LLC.