## IDENTIFIKASI SENYAWA DAN UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETIL ASETAT KULIT KAYU MASSOI (Cryptocarpa massoy)
Bustanussalam 1 , Haryanto Susilo 2 , Endang Nurhidayati 2
1) Laboratorium Kimia Bahan Alam, Pusat Penelitian Bioteknologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) - Cibinong
2) Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pakuan Email : bustanussalam@lipi.go.id

## ABSTRAK
Massoi  (Cryptocarpa  massoy)    merupakan  jenis  tumbuhan  yang  selama  ini  sudah digunakan oleh masyarakat lokal Papua sebagai obat tradisional. Bagian yang dimanfaatkan dari  tumbuhan  ini  adalah  kulit  kayu  yang  diekstraksi  untuk  menghasilkan  minyak. Pemanfaatan  kulit  kayu  Massoi  oleh  masyarakat  lokal  selama  ini  masih  dirasakan    kurang optimal,  oleh  karena    belum  banyaknya  penelitian  terkait    kandungan  senyawa  kimia  dan khasiat  pengunaan  kulit  kayu  Massoi  secara  farmakologis.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengidentifikasi  senyawa  bioaktif  ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  serta  menguji aktivitasnya sebagai antibakteri, antioksidan dan mengetahui tingkat toksisitasnya.Kulit kayu Massoi  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol  dan  dipartisi dengan  pelarut  air : etil  asetat  (1:1).  Ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  diuji  fitokimia, aktivitas  antibakteri,  toksisitas  dan  antioksidan.  Selanjutnya  untuk  mengidentifikasi  adanya senyawa  tertentu  dilakukan  pemisahan,  pemurnian  dan  identifikasi  secara  kromatografi. Pengujian  fitokimia  ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  diketahui  mengandung  senyawa tertentu golongan minyak atsiri, flavonoid, tanin, steroid, triterpenoid dan kumarin. Hasil uji aktivitas  diketahui  bahwa  ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  memiliki  aktivitas  positif sebagai  senyawa  sitotoksik  dengan  LC 50 sebesar  12,12  ppm  (sangat  toksik)  dan  sebagai antioksidan kuat dengan  IC 50 sebesar  44,02  ppm. Hasil  pemisahan  senyawanya  yang dilakukan  dengan  kromatografi  kolom  didapat  7  fraksi  yang  dikelompokkan  berdasarkan profil  kromatogram  KLT  hasil  kromatografi  kolom  yang  meliputi  bentuk  noda,  warna,  dan waktu  retensinya. Hasil analisis KCKT didapatkan fraksi dengan area terbesar terdapat pada fraksi  4  sebesar  95042975  pada  waktu  retensi  10,050  menit.  Fraksi  4  dianalisis  dengan menggunakan  GC-MS  untuk  mengetahui  komponen  senyawa  yang  terdapat  di  dalamnya, hasil analisisnya  didapatkan  13  senyawa  terbesar  yang  mempunyai  persen  kemiripan antara 95-99 % dari data Library program GC-MS.
Kata kunci : Cryptocarpa Massoy, toksisitas, antibakteri, antioksidan, analisis kromatografi

## COMPOUND IDENTIFICATION AND ACTIVITY TEST OF ETHYL ACETATE EXTRACTS OF BARK OF MASSOI (CRYPTOCARPA MASSOY)

## ABSTRACT
Massoi  (Cryptocarpa  massoy)  is  one  of  of  plants  that  has  been  used  by  the  local people of Papua as traditional medicine. Part of the plant used is the bark that had extracted to produce  oil.  The  utilization  of  Massoi  bark  by  local  communities  all  these  times  still  less optimal, because studies related to the content of chemical compounds and efficacy of the use of  bark  Massoi  pharmacologically  are  still  limited.  This  study  was  conducted  to  identify bioactive compounds in ethyl acetate extract of the bark of Massoi and to its test activities as antibacterial, antioxidant and to determine its toxicity level. The bark of Massoi extracted by maceration method using methanol and partitioned with mixture of water : ethyl acetate (1:1).
Ethyl acetate extract of bark of Massoi was tested for its phytochemical, and its antibacterial, antioxidants  and  toxicity.  Furthermore,  to  identify  the  presence  of  specific  compounds, separation, purification and identification by chromatography were done. Phytochemical test o  ethyl  acetate  extract  of  bark  Massoi  group  showed  several  compounds,  i.e  essential  oils, flavonoids,  tannins,  steroids,  triterpenoids  and  coumarin.  The  test  results  showed  that  the ethyl acetate extract of the bark Massoi have  positive activity as cytotoxic compounds with LC 50 of 12.12 ppm (extremely toxic) and showed its potency as a powerful antioxidant with IC 50 of  44.02  ppm.  Based  on  the  results  of  compounds  separation  performed  by  column chromatography 7 factions were obtained grouped by their TLC chromatogram profile from column  chromatography  analysis  results  including  stain  shape,  color,  and  retention  time. HPLC  analysis  results  found  fractions  with  the  largest  area  contained  in  fraction  4  at 95,042,975 at  retention time of 10.050 minutes. The fraction 4  were analyzed by GC-MS to identify  the  components  of  compounds  and    obtained  13  compounds  that  have  the  greatest percent similarity between 95-99% of the GC-MS data Library program.
Keywords: Cryptocarpa  Massoy,  toxicity,  antibacterial,  antioxidant,  chromatographic

## analysis

## PENDAHULUAN
Kecenderungan  kembali  ke  alam  atau lebih dikenal dengan istilah “ back to nature ”, memberikan  arahan  baru  di  Indonesia  untuk mengembangkan  potensi  keanekaragaman hayati  yang  dimilikinya.  Tidak  kurang  dari 1260  jenis  tumbuhan  yang  terdapat  di  hutan hujan  tropika  merupakan  kekayaan  Sumber Daya  Alam  yang  dapat  digunakan  sebagai bahan  obat,  baik  untuk  obat  tradisional maupun  sebagai  bahan  baku  obat  modern. Terdapat  kurang  lebih  85  jenis  pohon  hutan yang  berguna  sebagai  bahan  baku  obat  di Indonesia.  Salah  satu  tumbuhan  hutan  di Indonesia  yang  berkhasiat  obat  adalah tumbuhan  Massoi  yang  berasal  dari  famili Lauraceae.
Massoi (Cryptocarpa massoy)
merupakan  jenis  tumbuhan  yang  selama  ini sudah  digunakan  oleh  masyarakat  lokal Papua  sebagai  obat  tradisional.  Bagian  yang dimanfaatkan dari tumbuhan ini adalah kulit kayu  yang  diekstraksi  untuk  menghasilkan minyak.  Beberapa  penelitian  Etnobotani pada  masyarakat  lokal  Papua  memberikan informasi  bahwa  minyak  kulit  massoi digunakan  sebagai  bahan  jamu,  obat  cacing dan  obat  untuk  kejang  perut  (Komaryati et al.,  1995).  Batang  pohon Cryptocarpa massoy mengandung  minyak  yang  mudah menguap  sebanding  dengan  kayu  manis.  Di pulau Jawa, tumbuhan ini digunakan sebagai
bahan  rempah  utama  bagi  berbagai  obat tradisional  dengan  serangkaian  manfaat, selain  itu  Massoi  juga  digunakan  sebagai bahan  campuran  pewarna  untuk  pembuatan batik Jawa.
Pemanfaatan  kulit  kayu  Massoi  oleh masyarakat lokal selama ini masih dirasakan kurang    optimal,  oleh  karena    belum banyaknya  penelitian  terkait    kandungan senyawa  kimia  dan  khasiat  pengunaan  kulit kayu  Massoi  secara  farmakologis,  sehingga penggunaanya sampai saat ini hanya berdasarkan  pada  data-data  empiris  dan belum  dapat  digunakan  secara  meluas  oleh masyarakat  pada  umumnya.  Untuk  itu penelitian  lebih  lanjut mengenai  tumbuhan ini  diharapkan  dapat  memberikan  tambahan informasi  yang  dapat  dipergunakan  untuk memaksimalkan penggunaannya dalam bidang  kesehatan  sebagai  obat  tradisional. Didasarkan  pada  permasalahan  tersebut, maka penelitian ini dilakukan untuk mengidentifikasi  senyawa  bioaktif  ekstrak etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  serta  menguji aktivitasnya  sebagai  antibakteri,  antioksidan dan mengetahui tingkat toksisitasnya.

## METODE PENELITIAN Bahan
Serbuk  simplisia  kulit  kayu  massoi (Cryptocarpa  massoy),  metanol,  etil  asetat, aquades,  kloroform,  DPPH,  serium  sulfat,
kloramfenikol,  bakteri  (Escherichia  coli ATCC  25922  dan Staphylococcus  aureus ATCC 25923), pereaksi (Meyer, Dragendorf, Buchardat,  Lieberman,  dan  FeCl 3 ),  telur Artemia salina L., dan garam laut.
Alat Mesin penyerbuk simplisia (Fort Waine, Indiana®), rotavapor, neraca analitik,  corong  pisah,  seperangkat  alat Kromatografi Lapis Tipis (KLT), lampu UV 254 nm dan 365 nm, cawan petri, sonicator, hot  plate,  kolom  kromatografi,  autoklaf, Laminar  Air  Flow,  pipet  mikro,  shaker, oven, TLC plat Alumunium silika gel GF 254 , Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (Shimadzu
Liquid Chromatograph LC-6AD®), Spektrofotometer (Beckman DU-650®), Gas Chromatograhy-Mass Spectro (Agilent
5975®)  serta  alat-alat  gelas  dan  alat-alat umum  lainnya  yang  lazim  digunakan  di dalam laboratorium kimia.

## Cara Kerja
Penelitian  dilakukan  dalam  dua  tahap. Tahap pertama dilakukan analisis pendahuluan terhadap sampel untuk mengetahui    identitas dan  gambaran  umum sampel  uji,  yaitu  berupa:  determinasi tumbuhan (sampel), preparasi sampel (pembuatan  serbuk  simplisia  dan  ekstrak) dan  uji  fitokimia.  Tahap  kedua  dilakukan analisis  kimia  lanjutan,  yaitu  uji  aktivitas antibakteri dengan metode difusi cakram, uji aktivitas antioksidan dengan metode Penangkapan  Radikal  Bebas,  serta  uji toksisitas  dengan  metode Brine  Shrimp
Lethality  Test (BSLT). Kemudian  dilakukan pemisahan, pemurnian dan identifikasi senyawa dengan menggunakan analisis KLT, kromatografi kolom, KCKT dan GC-MS.

## Preparasi Sampel
Simplisia yang digunakan dalam penelitian  ini  merupakan  koleksi  Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI Cibinong, yang diperoleh  dari  Lembah  Baliem,  Wamena, Irian  Jaya. Pembuatan  ekstrak  dilakukan dengan  cara  maserasi  dengan  menggunakan pelarut  metanol. Maserat  metanol  yang didapat kemudian dievaporasi dengan
menggunakan  rotavapor,  hingga  didapat ekstrak  kental.  Ekstrak  kental  dipartisi menggunakan    pelarut  etil  asetat  :  air  (1:1) sebanyak  600  ml  yang  dilakukan  sebanyak tiga kali. Fase etil asetat yang sudah terpisah dari  fase  air  diambil,  kemudian  dievaporasi mengggunakan rotavapor sampai  didapat ekstrak  hampir  kental,  kemudian  diangin- anginkan hingga pekat/kental.

## Uji Fitokimia
Uji fitokimia dilakukan terhadap senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, polifenol, uji steroid/terpenoid, saponin, kuinon, kumarin dan minyak atsiri.

## Uji  Antibakteri
Ekstrak etil asetat sebelum difraksinasi dengan  kromatografi  kolom,  dilakukan  uji aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi cakram. Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah
Escherichia coli ATCC 25922 dan Staphilococcus aureus ATCC 25923. Sebagai kontrol positif digunakan kloramfenikol dan etil asetat sebagai kontrol negatif. Larutan uji dibuat dalam tiga konsentrasi  yang  berbeda  yaitu  500,  1000, 1500  ppm. Kontrol  positif dibuat  dalam konsentrasi  500  ppm. Kertas  cakram  yang telah disterilkan dicelupkan ke dalam larutan kontrol  positif  dan  ke  dalam  masing-masing larutan  uji  yang  terdiri  dari  tiga konsentrasi (500,  100,  1500  ppm),  diletakkan  di  atas media  inokulum. Dilakukan  pengamatan selama  tiga  hari  dengan  menghitung  luas Diameter Daerah Hambat (mm).

## Uji  Antioksidan
Uji aktivitas antioksidan dengan metode  Panangkapan  Radikal  Bebas  dengan pereaksi DPPH, dilakukan dengan menggunakan  Vitamin  C  sebagai  kontrol positif. Preparasi larutan blanko dibuat dari larutan DPPH 1 mM dipipet 1 Ll ke dalam  tabung  reaksi  yang  telah  ditera  5 ml,  lalu  ditambahkan  metanol  hingga  5  mL dan  dihomogenkan. Laruatan uji  dibuat dalam konsentrasi  sampel  masing-masing  5, 10, 25, 50, 100 ppm.
Kontrol positif dibuat dalam konsentrasi masing-masing 3, 6, 9, 12 dan 15 ppm. Larutan blanko, larutan uji dan larutan kontrol  positif  segera  diinkubasi  selama  30 menit  pada  suhu  37 o C,  kemudian  serapan dibaca pada panjang gelombang 515 nm.
Uji Toksisitas Larutan ekstrak
dibuat dalam
konsentrasi  masing-masing  1000,  100,  dan 10  ppm.  Sebagai  pembanding  disiapkan larutan blanko yang  sama  namun  tidak disertai  penambahan  ekstrak. Uji toksisitas BSLT dilakukan  dengan  cara  memasukkan 10 ekor larva udang Artemia salina L. untuk tiap-tiap perlakuan ke dalam botol vial yang telah berisi air laut salinitas 12% dan larutan blanko. Setelah 24 jam, dilakukan pengamatan  dengan  menghitung  jumlah larva  udang  yang  mati.  Dari  data  yang diperoleh,  dihitung  nilai  LC 50 dengan menggunakan  analisis  probit dengan  selang kepercayaan 95%.

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis/ KLT
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dilakukan bertujuan  untuk  mengetahui  pola kromatogram yang dihasilkan dari pemisahan  senyawa  yang  terdapat  pada sampel. Eluen  yang  digunakan  merupakan kombinasi dari beberapa pelarut (heksan, etil asetat,  kloroform,  aseton,  metanol  dan  air) dengan  perbandingan  tertentu,  dan  telah dijenuhkan terlebih dahulu. Kemudian
lempeng diamati di bawah sinar UV 254 nm dan  366  nm,  di  semprot  menggunakan penampak bercak serium sulfat, dan dikeringkan  diatas  pemanas.  Hasil  yang didapat  tersebut  diamati,  dan  eluen  yang menghasilkan pemisahan  terbaik  selanjutnya digunakan  sebagai  eluen  pada  kromatografi kolom dan HPLC.

## Fraksinasi dengan Kromatografi Kolom
Fraksinasi
dilakukan dengan
menggunakan cairan eluasi pada KLT   yang sesuai  sebagai  fasa  gerak  dan  silika  gel sebagai fasa diam. Sebanyak 4 g ekstrak etil asetat  kulit  kayu    Massoi  dimasukkan  ke dalam  kolom  kaca  yang  telah  berisi  silika gel.  Ditambahkan  cairan  eluasi  secara
gradient  menggunakan n-heksan  :  etilasetat (10:1 - 1:1)  dilanjutkan kloroform  :  metanol (5:1 - 1:1)  dan  dibiarkan  mengalir  melalui kolom.  Adanya  senyawa  dalam  fraksi-fraksi tersebut  dideteksi  dengan  KLT,  fraksi  yang mempunyai  pola  yang  sama  selanjutnya digabungkan menjadi satu sehingga
diperoleh  fraksi  yang  mempunyai  sifat hampir  sama.  Setelah  itu  dilakukan  analisis KLT  kembali  dengan  eluen  yang  sesuai, kemudian  noda  pada  KLT  divisualisasi dengan lampu UV 254 nm dan 366 nm, dan disemprot  dengan  penampak  bercak  serium sulfat.  Fraksi-fraksi  yang  dihasilkan  ini kemudian akan diuji aktivitas kembali (hasil yang  positif)  dan  digunakan  untuk  analisis KCKT dan GC-MS.

## Analisis Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Fase  gerak  yang  digunakan  adalah campuran palarut heksan-etil asetat (2:1) dan fase  diam  menggunakan  Shperisorb  S5W (untuk  senyawa  non  polar).  Kondisi  alat diatur  dengan  flow  rate  1  ml/menit,  tekanan 121-141 kg/cm 2 dan pada panjang gelombang  230  nm.  Fraksi-fraksi  yang didapat  dari  hasil  pemisahan  kromatografi kolom  dilarutkan  dengan  metanol  sampai larut,  kemudian  disaring  dengan  kertas saring  Millipore  0,45  µm,  masing-masing fraksi  diinjeksikan  20  µl  menggunakan syringe.

## Analisis Kromatografi Gas- Spektrometri Massa (GC-MS)
Sampel fraksi 4 ekstrak etil asetat kulit kayu  Massoi  di  analisis  dengan  instrumen GC-MS Agilent  5975 untuk  mengetahui senyawa organik yang terdapat di dalamnya. Sebelumya  fraksi  4  yang  telah  difraksinasi pada  kromatografi    kolom,  dimurnikan dengan  menggunakan  KLT  Preparatif.  KLT preparatif yang dilakukan menggunakan fase gerak  heksan-etil  asetat  (2:1)  dan  fase  diam silika yang dilapisi pada lempeng kaca. Hasil KLT dikerok dan dilarutkan dengan kloroform. KLT preparatif dilakukan sebanyak dua  kali pengulangan  hingga didapatkan  pola  bercak  tunggal,  untuk kemudian siap dianalisis dengan GC-MS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Preparasi Sampel
Serbuk  kulit  kayu  Massoi  diekstraksi dengan metode maserasi  menggunakan metano sebagai  pelarutl. Maserasi  bertujuan untuk menghindari  terjadinya  kerusakan terhadap  komponen  organik  penyusunnya. Maserat yang diperoleh dari proses maserasi,
dipartisi dengan ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut etil asetat - air (1:1).
Ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi dari hasil pemisahan yang didapat kemudian digunakan  sebagai  sampel  dalam  penelitian ini.

## Tabel 1. Hasil Rendemen Partisi
Sampel Bobot awal (gr) Fase Berat (gr) Rendemen (%) kulit kayu Massoi 200 Etil asetat 6,2931 3,1465 Air 8,2206 4,1103 Keterangan : Rendemen didasarkan pada perbandingan    bobot  awal  serbuk  simplisia  dengan bobot akhir ekstrak etil astat.

## Uji Fitokimia
Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  etil  asetat kulit kayu Massoi menunjukkan hasil positif pada  senyawa  golongan  minyak  atsiri, flavonoid,  tanin,  steroid,  terpenoid,  dan kumarin. Hasil uji fitokimia pada Tabel 2.
Tabel  2. Hasil  Uji  Fitokimia  Ekstrak  etil

## asetat kulit kayu massoi
Uji Fitokimia Hasil Keterangan Minyak Atsiri +++ (+) berbau aromatik Flavonoid ++ (+) terbentuk warna kuning/ merah /jingga Tanin + (+) terbentuk warna biru tua/ hijau kehitaman Steroid/ Terpenoid + (+) terbentuk warna merah Kumarin + (+) berfluoresensi hijau/biru Alkaloid - (-) tidak terbentuk endapat merah bata/putih Saponin - (-) tidak terbentuk busa Kuinon - (-) tidak terbentuk warna merah

## Uji Antibakteri
Hasil  pengukuran  Diameter Daerah Hambat ekstrak etil asetat kulit kayu Massoi dapat dilihat pada Tabel 3.

## Tabel  3. Hasil    Pengamatan    Diameter Daerah Hambat (DDH)
Konsentrasi Populasi larva udang (ekor) Letal (kematian) Rata- rata Ulangan 1 2 3 Blanko 10 - - - 0 10 ppm 10 2 4 2 2.67 100 ppm 10 10 10 10 10 1000 ppm 10 10 10 10 10
Pengujian antibakteri ekstrak etil asetat kulit  kayu  Massoi  menunjukkan  hasil negatif,  dimana  dari  ketiga  konsentrasi larutan yang dibuat 500 ppm, 1000 ppm, dan 1500  ppm  menghasilkan  DDH  0  mm,  yang berarti  larutan  ekstrak  kulit  kayu  Massoi tidak menunjukkan aktivitas sebagai antibakteri.  Kontrol  positif  menggunakan larutan  kloramfenikol  500  ppm  yang menghasilkan  DDH  1600  mm,  dan  kontrol negatif  dengan  menggunakan  larutan  etil asetat menunjukkan DDH 0 cm.

## Uji Toksisitas Larva Udang (Brine Shrimp

## Lethality Test)
Hasil  uji  toksisitas  ekstrak  etil  asetat terhadap larva udang dapat diketahui dengan menghitung  jumlah  larva  udang  yang  mati. Tabel 4 merupakan  rekapitulasi  nilai  persen kematian  larva  udang  dari  masing-masing konsentrasi  tiap  sampel  pada  uji  toksisitas, dari  hasil  ini  kemudian    dapat      dihitung nilai LC 50 menggunakan analisis probit. LC 50 merupakan  konsentrasi  yang  mematikan 50% dari populasi hewan uji. Dari percobaan ini,  nilai  LC 50 ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu Massoi  adalah  12,12  ppm.  Nilai  LC 50 12,12 ppm  menunjukkan  tingkat  toksisitas  yang sangat  toksik,  senyawa  dikatakan  sangat toksik  apabila  nilai  LC 50 lebih  kecil  atau sama dengan 30 ppm.
Tabel  4. Hasil  Uji  Toksisitas  ekstrak  etil asetat  kulit  kayu  Massoi  terhadap  larva udang Keterangan Konsentrasi Larutan (ppm) Diameter Daerah Hambat (mm) E. coli S. aureus Larutan Uji 500 0 0 1000 0 0 1500 0 0 Kontrol Positif 500 1600 1400 Kontrol Negatif 500 0 0 1000 0 0 1500 0 0
Menurut Meyer (1982), hasil toksisitas yang  tinggi  ditunjukkkan  dengan  nilai konsentrasi  yang  menyebabkan  kematian 50%  larva  udang,  semakin  kecil  nilai  yang dimiliki ekstrak tanaman maka akan semakin toksik.  Meyer  (1982)  juga  memaparkan, senyawa  kimia  berpotensi  bioaktif  jika memiliki  nilai  LC 50 kurang  dari  1000  ppm. Oleh karena itu ekstrak etil asetat kulit kayu
Massoi  dapat  dikatakan  mempunyai  potensi bioaktivitas.

## Antioksidan
Ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi diuji  aktivitas  antioksidan  dengan  pereaksi DPPH dan vitamin C sebagai kontrol positif. Ekstrak  Etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  dibuat dalam  deret  konsentrasi  yang  berbeda dimaksudkan  untuk  menentukan  IC 50 . Dari tabel diatas dapat diketahui nilai IC 50 ekstrak etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  adalah  sebesar 44,02  ppm.  Ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu Massoi  dapat  dikatakan  sebagai  antioksidan kuat  karena  nilai  IC 50 <  100  ppm. Menurut Mardawati et al. (2008),  secara  spesifik suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan kuat  jika  nilai IC 50 bernilai  51-100,  sedang jika IC 50 bernilai  101-150,  dan  lemah  jika IC 50 adalah 151-200.
Nilai  penghambatannya  dapat  dilihat dengan  menghubungkan  persen  hambatan dengan  konsentrasi  larutan,  seperti yang tetera pada Gambar 7 dan 8.
Tabel 5. Hasil uji antioksidan ekstrak etil asetat kulit kayu Massoi
Larutan Konsentrasi (ppm) Absorbansi Hambatan (%) IC 50 (ppm) Blanko 0 2,3377 0 44, 02 Larutan Uji 5 1,9973 14,56 10 1,8137 22,41 25 1,4472 38,09 50 0,9803 58,06 100 0,1706 92,70 Kontrol Positif 3 1,9215 17,80
5,95
6 0,9770 58,21 9 0,4506 80,72 12 0,0746 96,80
Gambar 7. Kurva konsentrasi inhibisi 50 (IC 50 ) ekstrak etil asetat kulit kayu Massoi y = 0.8028x + 14.657 r = 0.9943 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 20 40 60 80 100 120 Konsentrasi Larutan Pe rs e n H a m b a ta n
Gambar 8. Kurva konsentrasi inhibisi 50 (IC 50 ) Vitamin C

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi dianalisis KLT dengan menggunakan beberapa pelarut, tujuannya untuk memperoleh  profil  kromatogram  senyawa dengan  beberapa  perbandingan  komposisi. Hasil  kromatogram  KLT  ekstrak  etil  asetat kulit kayu Massoi dapat dilihat pada Gambar 9. Hasil  analisis  KLT  ekstrak  kulit  kayu Massoi dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel  6. Hasil analisis  KLT  ekstrak  etil asetat kulit kayu Massoi Pelarut Keterangan Hasil Jumlah Noda Warna Rf Heksan-Etil asetat (2:1) 6 coklat 0,3 coklat 0,46 coklat muda 0,66 coklat muda 0,7 coklat 0,78 coklat 0,88 Heksan- kloroform-etil asetat (2:1:1) 6 putih kecoklatan 0,14 kuning kecoklatan 0,38 coklat muda 0,56 putih kecoklatan 0,62 putih kecolatan 0.67 coklat muda 0,76 Heksan- Kloroform- metanol (1:1:2) 3 coklat muda 0,69 coklat 0,82 coklat muda 0,93

## Gambar 9. Kromatogram KLT ekstrak etil asetat kulit kayu Massoi
Keterangan:
Fase gerak (a): Heksan-Etil asetat (2:1) (b): Heksan-kloroform-etil asetat (2:1:1) (c): Heksan-kloroform-metanol (1:1:2) Fase diam: Silika Gel GF254 Penampak bercak: serium sulfat Pengamatan:
*    noda tampak dibawah sinar    UV254 nm **  noda tampak dibawah sinar UV 365 nm
*** noda tampak dengan penampak bercak
Gambar diatas merupakan profil komposisi  eluen  terbaik  dalam  analisis  KLT yang dilakukan pada penelitian ini. Perbedaan  nilai  Rf  dalam  hal  ini  dapat dipengaruhi  oleh  komposisi  senyawa  dalam sampel. Dari hasil analisis ini diperoleh hasil eluen  terbaik  untuk  elusi  KLT  ekstrak etilasetat kulit kayu Massoi adalah campuran pelarut heksan - etil asetat dengan perbandingan  2:1.  Pemilihan  eluen  tersebut berdasarkan nilai Rf, bentuk dan jumlah spot yang  dihasilkan  serta  pola  pemisahan senyawanya.
y = 8.6503x - 1.495 r = 0.9778 0 20 40 60 80 100 120 0 2 4 6 8 10 12 14 Konsentrasi Larutan P e rs e n n H a m b a ta n a b c * ** ***

## Kromatografi Kolom
Pemilihan  pelarut  sebelumnya  telah dilakukan  pada  saat  KLT  dengan  pelarut heksan-etil  asetat  (2:1), sehingga  dengan metode  gradien  komposisi  pelarut  yang digunakan  dimulai  dari  perbandingan  10:1 sampai  dengan  1:1  (untuk  pelarut  yang sifatnya  nonpolar)  dan  untuk  pelarut  yang lebih  polar  digunakan  pelarut  kloroform- metanol  perbandingan  5:1  sampai  dengan 1:1.  Fraksi-fraksi  hasil  tampungan  eluen yang dikumpulkan didapat sebanyak 203 vial dengan volume rata-rata 14 ml. Fraksi-fraksi ini  kemudian  dikelompokkan  berdasarkan profil kromatogram KLT (Tabel 7).

## Tabel  7. Fraksi-fraksi hasil Kromatografi
kolom ekstrak etil asetat kulit kayu Massoi Fraksi Keterangan Bobot (mg) 1 gabungan vial 1-4 47,9 2 gabungan vial 5-14 84,9 3 gabungan vial 15-44 403,4 4 gabungan vial 45-69 49,3 5 gabungan vial 70-89 7,7 6 gabungan vial 90-130 40,2 7 gabungan vial 131-203 844,8 Pola  kromatogram  ketujuh  fraksi  hasil kromatografi  kolom  ekstrak  etil  asetat  kulit kayu  Massoi  dapat  dilihat  pada  Gambar  10. Masing-masing fraksi yang didapat selanjutnya  akan  dianalisis  menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).

## Gambar 10. Kromatogram Fraksi
Kromatografi Kolom ekstrak etil asetat kulit kayu Massoi

## Keterangan:
Fase gerak : heksan-kloroform-metanol (5:2:1) Fase diam: Silika Gel GF254 Penampak bercak: serium sulfat Pengamatan: * noda tampak dibawah sinar UV254 nm **   noda tampak dibawah sinar UV  365 nm *** noda tampak dengan penampak bercak

## Uji Aktivitas Positif
Aktivitas  positif  ini  dimaksudkan untuk  menguji  kembali  senyawa  yang terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  kulit  kayu Massoi  yang  sebelumnya  telah  difraksinasi dengan  kromatografi  kolom.  Fraksi-fraksi yang  di  dapat  diuji  aktivitas  antioksidan dengan  menggunakan  metode  penangkapan radikal  bebas  dengan  pereaksi  DPPH  yang sama  dengan  pengujian  awal.  Hasil  uji aktivitas  antioksidan  metode  penangkapan radikal  bebas  dengan  peraksi  DPPH  pada konsentrasi  sampel  100  ppm  dengan  cara spekrofotometri dapat dilihat pada Tabel 8.
Jika  hasil  uji  ini  dibandingkan  dengan uji  antioksidan  di  awal, hasil  uji  aktivitas antioksidan pertama lebih besar hambatannya  dibandingkan  dengan  hasil uji aktivitas  positif  kedua.  Ini  berarti  senyawa yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  dalam ekstrak  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  akan lebih  aktif  jika  dalam  bentuk  sebelum dipisahkan (fraksinasi).
Tabel  8. Hasil  Uji Aktivitas Positif Antioksidan  Fraksi  etil  asetat kulit kayu  Massoi Fraksi Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi Blanko 0 2,3377 0 1 100 1,7776 24,25 2 100 1,7659 24,46 3 100 2,1063 9,90 4 100 1,8369 21,42 5 100 1,6643 28,81 6 100 1,4094 39,82 7 100 0,7375 68,45

## Analisis  KCKT
Hasil  analisis KCKT dibandingkan
antara  waktu  retensi  dan  area  sampel.
*** ** *
Terdapat  tiga  senyawa  yang  kemungkinan berada  pada  beberapa  fraksi,  senyawa- senyawa tersebut dapat dilihat pada Tabel. 9 di bawah ini.
Tabel  9. Kemungkinan senyawa  yang
terdapat dalam fraksi hasil analisis KCKT Senyawa Fraksi Waktu Retensi (menit) Luas Area 1 F1 3.733 38468387 F2 3.925 9393627 F6 3.467 2359848 F7 3.708 11982655 2 F2 6.025 3852263 F3 6.233 49981059 3 F4 10.05 95042975 F5 10.1 52415311 F6 10.083 8882340 F7 10.125 11338392

## Analisis GC-MS
Analisis  GC-MS  fraksi  4  (F4)  ekstrak etil  asetat  kulit  kayu  Massoi  merupakan tahap lanjutan untuk mengidentifikasi senyawa  yang  terdapat  di  dalam  sampel. Senyawa-senyawa  yang  terdapat  di dalam Tabel  10. adalah  senyawa-senyawa  yang mempunyai persen kemiripan berkisar antara 95-99  %. Hasil  uji  aktivitas  positif  terhadap ekstrak  dan  fraksi  etil  asetat  kulit  kayu Massoi adalah aktivitasnya sebagai antioksidan.
Menurut (Halliwell  dan  Gutteridge, 1999) senyawa  antioksidan  non-enzimatis dapat  berupa  tokoferol,  karotenoid,  quinon, bilirubin,  asam  askorbat,  asam  urat,  dan protein  lainnya).  Berdasarkan  hasil  uji fitokiamia  yang  telah  dilakukan  sebelumnya kemungkinan  senyawa  yang  tedapat  dalam sampel  adalah  senyawa  golongan  flavonoid. Namun  demikian  dari  ketiga  belas senyawa diatas,  tidak  terdapat  adanya  senyawa golongan  flavonoid  hal  ini  diduga  karena keberadaan  senyawa  tersebut  dalam  sampel ada  dalam  konsentrasi  kecil  sehingga  perlu dilakukan  pemurnian  senyawa  (isolasi) lanjutan  dan    analisis  pada  fraksi  yang lainnya selain fraksi 4 (F4).
Tabel  10. Tiga  belas  senyawa  terbesar  hasil analisis GC-MS
No Library/ ID (senyawa) RT % Kemiripan 1 (1-methylene-prophenyl) benzene 4,73 95 2 1,3-cyclohexadien, 1- phenyl 6,18 96 3 3-phenyl-1,4- cyclohexadien 6,60 96 4 1,1-biphenyl 6,81 95 5 3-hydroxy-4- methoxybenzaldehyde (isovanillin) 6,97 96 6 1,3-cyclohexadien, 1- phenyl 7,26 95 7 6-pentyltetrahydro-2H- pyran-2-one 7,76 96 8 dodecanoic acid 8,18 99 9 benzoic acid 9,86 97 10 n-hexadecanoid acid 11,11 99 11 9,12-octadecanoid acid 12,20 99 12 1,2-benzenedicarboxylic acid, butyl phenylmethyl ester 31,54 97 13 icosane 15,24 96

## SIMPULAN DAN SARAN Simpulan
Ekstrak  etilasetat  kulit  kayu  Massoi (Cryptocarpa  Massoy) mengandung  minyak atsiri,  flavonoid,  tanin,  steroid,  triterpenoid dan  kumarin. Nilai  LC 50 diperoleh sebesar 12,12  ppm  yang  menunjukkan  tingkat toksisitas  yang  sangat  tinggi dan nilai IC 50 sebesar 44,02 ppm yaitu sebagai antioksidan kuat.
Hasil  analisis  KCKT  ketujuh  fraksi hasil  kromatografi  kolom,  didapatkan  fraksi dengan waktu retensi dan area terbesar pada fraksi  4,  yaitu  pada  Rt=  10.050  menit  dan area 95042975. Aktivitas antioksidan senyawa  yang  terdapat  pada  ekstrak  etil asetat  lebih  besar  dibandingkan  dengan fraksi  hasil  pemisahan  dengan  kromatografi kolom,  dimana  %  hambatan  ekstrak  etil asetat  kulit  kayu  Massoi  dengan  konsentrasi 100  ppm  lebih  aktif  dibandingkan  hasil fraksinasi.  Analisis  GC-MS  senyawa  pada fraksi  4,  terdapat  13  senyawa  terbesar  yang mempunyai  persen  kemiripan  antara  95-99 % dari 72 senyawa yang teridentifikasi.

## Saran
1. Perlu  dilakukan  pengeringan  ekstrak kental  etil  asetat  kulit  kayu  Massoi dengan freezedryer agar diperoleh ekstrak kering.
2. Perlu  dilakukan  isolasi  senyawa  aktif dengan menggunakan pelarut yang sesuai dengan tingkat kepolaran yang lebih.
3. Perlu  dilakukan  penelusuran  senyawa aktif  dan  uji  aktivitas  secara  kuantitatif untuk  mengidentifikasi  senyawa  kimia yang terdapat pada ekstrak etil asetat kulit kayu  Massoi  yang  mempunyai  aktivitas positif  sebagai  antioksidan  dan  senyawa sitotoksik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih kami sampaikan kepada: 1. Laboratorium  Biofarmaka  IV,  Lembaga
Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI) - Cibinong.
2. Program  Studi  Farmasi, Universitas
Pakuan, Bogor.

## DAFTAR PUSTAKA
Alam,  G.  2002. Brine  Shrimp  Lethality (BSLT)  Sebagai  Bioassay  dalam Isolasi  senyawa  Bioaktif  dari  Bahan Alam. Majalah Farmasi dan Farmakologi. hal-6. Departemen Kesehatan RI. 1979. Farmakope Indonesia,  Edisi  III. Direktorat
Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
Jakarta.
Direktorat  Pengawasan  Obat  dan  Makanan. 1985. Cara  Pembuatan  Simplisia.. Jakarta.
Direktorat    Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
1995. Farmakope  Indonesia,  Edisi IV.. Jakarta.
Direktorat  Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
2000. Parameter  standar  Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.. Jakarta. Gariswara,  G.S.  1995. Farmakologi  dan Terapi, Edisi IV. Fakultas Kedokteran, UI Press. Jakarta. Gritter,  R.J.  Bobbit  JM.  Schwarting  AE.
1991. Pengantar Kromatografi, Edisi kedua (Penerjemah: Padmawinata K.
Soediro  I).  ITB.  Bandung,  hal.  23- 32.
Halliwell,  B.  and  J.M.C. Gutteridge.  1990. Role  of  free  radical  and  catalytic logam  ions  in  humans  disease  :  An overview. Meth.  Enzymol.  186:  1-
83.
Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia: Penentuan Cara Modern Menganalisis                  Tumbuhan (Padmawinata  K,  penerjemah).  ITB. Bandung. hal.84-94. Jawets,  E.,  J.L.  Melnick  dan  E.A.  Adelberg. 1986. Mikrobiologi Kedokteran Edisi  20  (penerjemah: Nugroho  E, Maulany RF). Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta. hal. 143-177. Lemmens.  1995.  Plant  Resources  of    South- East  Asia  No.5(2).  Timber  Trees: Minor Commercial Timbers. Blackhuys  Publisher.  Leiden.  152- 161. Mardawati,  E;  F.  Filianty  dan  H.  Marta. 2008. Kajian  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Kulit Manggis  (Garcinia mangostana L) Dalam Rangka Pemanfaatan  Limbah  Kulit  Manggis Di Kecamatan Puspahiang Kabupaten Tasikmalaya.  Fakultas Teknologi Industri Pertanian Universitas Padjadjaran. Bandung. Meyer  BN.  1982.    Brine  shrimp:  a convenient general  bioassay  for active plant constituent. Planta Medica. 45: 31-4. Mulyati, A.H. 2007. Dasar-dasar Kromatografi. Jurusan Kimia, FMIPA,  Universitas  Pakuan. Bogor. hal.3-42. Nugroho,  R.G.,  Triantoro  dan  C.M.E. Susanti.    2007. Kandungan  Bahan Aktif Kayu Kulilawang (Cinnamomum  culilawane  Bl.)  dan Masoi  (Cryptocaria  massoia). Balai Penelitian dan Pengembangan Kehutanan Papua Maluku. Manokwari. Pujianti,  S.  Ningsih  dan  Triwidodo.  2002. Uji Toksisitas terhadap Larva Artemia  Salina  dari  Fraksi  n-
Heksana,  Kloroform,  Etil  asetat  dan
Air  Eksstrak  Etanol  Rimpang  Temu Mangga  (Curcuma  magga  Val). Fakultas Farmasi,
Universitas
Surabaya. hal.109.
Rali, T., S.W. Wossa dan D.N. Leach. 2007.
Comparative  Chamical  Analysis  of the  Essential  Oil  Constituens  in
Bark,  Heartwood  and  Fruits  of
Cryptocarya massoy (Oken) Kostrem. (Lauraceae)  from  Papua New  Guinea. Molecules  12(1);  149-
154. Soerbito,  S.  1991. Analisis  Senyawa  Obat. Pusat Antar Universitas Ilmu Hayati. ITB. Bandung. hal 131-152.