Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
1 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi
2 Research Center for Pharmaceutical Ingredients and Traditional Medicine, Nation Research and Innovation Agency
3 Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi
*Email: nurfitriyawatie@gmail.com
Artikel diterima: 16 September 2023; Disetujui: 27 Maret 2023 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v8i1.1078

## ABSTRAK
Fotoaging  menyebabkan  dermis  dan  serat  kolagen  mengalami  penurunan yang  mengakibatkan terjadinya  penuaan kulit,  Genus  Bacillus  memiliki  aktivitas SOD  sebagai  antifotoaging  yang  mampu  menetralkan  ROS  ( Reactive  Oxigen Spesies) akibat  paparan  sinar  UV-A.  Penelitian  ini  bertujuan  melihat  aktivitas ekstrak  kasar  SOD  dan  kareteristik  enkapsulasi  liposom  dari B.  altitudinis.
Penelitian diawali dengan isolasi enzim SOD, penetapan kadar protein total ekstrak kasar enzim SOD dan enkapsulasi liposom , selanjutnya dilanjutkan uji karakterisasi liposom  meliputi analisa ukuran partikel, efisiensi penjerapan dan zeta potensial.
Hasil pengujian aktivitas ekstrak kasar sebesar 85,09 % ± 1,24 %. Uji kareteristik dihasilkan      dengan  ukuran  112,96  ±17,3;  efisiensi  penjerapan  81,1%  dan  zeta potensial  7,0  ±5,1  mV.  Hasil  menunjukkan  partikel  liposom  SOD B.  altitudinis berada di rentang nanopartikel.
Kata kunci: Karateristik, Liposom, SOD, Bacillus altitudinis

## ABSTRACT
Photoaging causes the dermis and collagen fibers to decrease which results in skin aging. Genus Bacillus has SOD activity as an anti-photoaging agent that can neutralize ROS (Reactive Oxygen Species) due to exposure to UV-A rays. This study  aimed  to  examine  the  activity  of  crude  extract  and  the  encapsulation characteristics of liposomes from B. altitudinis. The study began with the isolation of the SOD enzyme, determination of the total protein content of the crude extract of the SOD enzyme and liposome encapsulation, then characterization liposome tes including particle size analysis, sorption efficiency and zeta potential. The results of the crude extract activity test were 85.09% ± 1.24%. The characteristic test was produced with a size of 112.96 ± 17.3; the adsorption efficiency was 81.1% and the zeta  potential  was  7.0  ±5.1  mV.  The  results  showed  that  the  SOD  B.  altitudinis liposomes were in the nanoparticle range.
Keywords: Characteristics, Liposomes, SOD, Bacillus altitudinis

## KARATERISTIK ENKAPSULASI LIPOSOM EKSTRAK SUPEROKSIDA
DISMUTASE (SOD) Bacillus altitudinis
Nurfitriyawatie 1 *, Ana Indrayati 1 , Rizal Maarif R. 2,3
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan
senyawa  yang  dibutuhkan  tubuh untuk  menetralisir  dan  mencegah kerusakan akibat radikal bebas dengan cara mencegah reaksi berantai pembentukan  radikal  bebas  yang dapat  menimbulkan  stres  oksidatif (Fatimah,  N  dan  Sundu,  R.,  2020). Salah  satu  penyebab  terjadinya penuaan  dini  adalah  karena  spesi oksigen reaktif (Roni A, dkk., 2022). Fotoaging merupakan proses penuaan kulit disebabkan adanya radiasi sinar UV.  Paparan  radiasi  uv  pada  kult selama bertahun tahun akan menyebabkan  dampak  kronis  antara lain kerusakaan struktur kulit, penuaan  kulit  dan  kanker  kulit..
(Anshori et al. 2017). Fotoaging yang terjadi secara signifikan mempengaruhi kualitas
hidup seseorang, oleh karena itu perawatan sangat diperlukan.
Enzim  yang  ditemukan  dalam hati  dan  paling  banyak  berfungsi antioksidan adalah Superoksida dismutase  (SOD).  Kemampuan  dari enzim  SOD  dalam  menetralkan radikal  bebas  dimanfaatkan  tidak hanya  untuk  pengobatan  tetapi  juga
dimanfaatkan dalam bidang kosmetik sebagai antifotoaging (Rahman et al. 2012).  Krim  kulit  yang  mengandung SOD  berfungsi  untuk  pencegahan penuaan  dini  merupakan  fungsi  dari antioksidan (Santos et al., 2011).
Mikropartikel  yang  berukuran 1-1000    μm    saat    ini    sering digunakan dalam penghantaran sediaan  obat  (Pradana,  A.T.,  dkk 2022).  Melalui  sistem  enkapsulasi, Liposom dapat meningkatkan efikasi dan  indeks  terapeutik  serta  stabilitas obat  (Akbarzadeh  et  al.,  2013). Berdasarkan  sistem  penghantaran obat,  liposom  dapat  melarutkan  atau enkapsulasi  untuk  obat  berisfat hidrofobik dan hidrofilik. Ini merupakan keunggulan obata topikal karena memiliki sistem penghantaran yang  terbaik  sehingga  banyak  yang menggunakan (Purwanto 2019). Liposom  secara  fisika  dan  kimia merupakan satu kesatuan yang terkarakterisasi  dengan  baik,  bersifat biokompatibel sehingga toksisitasnya rendah,  dan  dapat  digunakan  pada kebanyakan  cara  pemberian  obat meliputi  ocular,  paru-paru,  nasal, intramuscular,  subkutan,  topikal  dan intravena (Karina 2009).
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Bakteri Bacillus  altitunidis ,
Nutrient  Agar (NA), Brain  Heart
Infusion (BHI), NaCl, KCl, Na2HPO,
KH2PO4, Coomasssie Brilliant Blue ,
Bovine Serum Albumin (BSA), Blood Agar  Plate (BAP), Water  For
Injection (WFI),  larutan  WST-1, buffer  fosfat,  pereaksi Bradford, Pewarnaan Gram Bacillus altitudinis  Agar (BCA),  H 2 O 2 , Brain
Heart  Infusion  Broth (BHIB),  etanol
P.A,  fosfolipid  (Phospolipon  90  G), kolesterol (Sigma), aquadest steril.

## Identifikasi Bakteri
Dengan  menggunakan  jarum
Ose, Biakan bakteri Bacillus altitudinis  diambil  lalu  digoreskan pada cawan petri yang berisi media BAP  dan  di  inkubasi  pada  suhu 370C selama 24 jam, diamati koloni bakteri  yang  terbentuk..  Biakan bakteri Bacillus  altitudinis juga dilakukan  identifikasi  pewarnaan Gram, uji katalase dan uji koagulase.
Isolasi Enzim Suspensi bakteri Bacillus
altitudinis diinokulasi  sebanyak    2% suspensi  ke  dalam  300  mL  media
produksi  BHI,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam. Setelah  dinkubasi  dilakukan  kultur bakteri pada media BHI  dengan cara disentrifugasi.  Pelet  yang  diperoleh ditambah  buffer  PBS  selanjutnya disonikasi  dengan  amplitudo  50 selama  5  menit  dalam  suhu  dingin. Supernatan hasil sentrifugasi ditempatkan  dalam microtube serta disimpan pada alat pendingin bersuhu 4 0 C.

## Penetapan Protein Total
Penetapan  kadar  protein  total ekstrak  kasar  enzim  SOD  dengan metode  Bradford  yaitu  mengambil  4 µL  sampel  ditambah  200  µL  reagen Bradford  dan  dicukupkan  hingga volume  1  mL  dengan  aquades. Selanjutnya  diukur  nilai  absorbansi menggunakan  spektrofotometri  uv- vis.

## Uji Aktivitas Sod Bakteri
Pengukuran aktivitas SOD dilakukan  dengan  menggunakan  kit
WST-1 dari Biovision yang menghasilkan  perwarna  formazan larut  air  pada  saat  mereduksi  anion superoksida. Nilai absorbansi ekstrak kasar  enzim  SOD  bakteri dan  nilai absorbansi  blanko  1,  2,  dan  3  yang
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
diperoleh  lalu  dihitung.  Aktivitas SOD diukur melalui derajat penghambatan  pembentukan  warna pada panjang gelombang 450 nm.

## Enkapsulasi Liposom
Larutan fosfatidilkolin 50 µM/mL  dan  larutan  kolesterol  25
µM/mL dilarutkan dalam 5 mL etanol dimasukkan ke dalam labu alas bulat 300 mL sampai homogen. Selanjutnya  pelarut  diuapkan rotary evaporator sampai terjadi
pembentukan  lapisan  tipis  lipid  pada permukaan  labu.  Proses  Hidrasi lapisan  tipis  film  dilakukan  dengan masing-masing  5  mL  ekstrak  enzim SOD Bacillus  altitudinis dengan konsentrasi 0,5 mg/mL dalam larutan buffer  fosfat  (PBS)  dengan rotary evaporator selama  15  menit  pada suhu  37 0 C.  Dispersi  lipososm  yang dihasilkan  dipertahankan  selama  1 jam  pada  suhu  4 0 C.  Liposom  yang terbentuk dengan sonikator bertujuan menyeragamkan ukuran lalu diujikan atau  disimpan ke dalam lemari es.

## Ukuran Partikel Liposom
Pengukuran  ukuran  partikel menggunakan  alat particle  size analyzer (Horiba  Scientific,  Nano
Particle
Analyzer
SZ-100).
Pembacaan  PSA  dapat  dilakukan menggunakan  sediaan  yang  telah  di top  down ukuran  oleh  alat  sonikator yang  telah  dilakukan  pada  PBS (Loquercio et al, 2015).

## Zeta Potensial Liposom
Sampel  liposom  diencerkan dengan pengenceran 1 tetes dalam 10 mL  larutan  pendispersi,  yaitu  dapar fosfat  7,4.  Liposom  diencerkan dengan larutan PBS sebelum pengukuran kemudian, sampel dimasukkan  ke  dalam  kuvet  dan dianalisis  pada  suhu  25°C  dan dianalisis  menggunakan zeta-sizer .

## Effiseinsi Penjerapan Liposom
Sebanyak 5 mL sampel ditambahkan  5  mL  buffer  kalium fosfat 0,05 M, selanjutnya disentrifugasi dengan kecepatan 3500 rpm  selama  30  menit,  supernatan diambil sebanyak 1 mL dan diencerkan dalam labu takar menggunakan  aquadest  hingga  25 mL,  kemudian  1,0  mL  dari  larutan sebelumnya diencerkan kembali dengan  aquadest  hingga  25,0  mL. Dilakukan pembacaan serapan larutan dengan spektrofotometer UV- Vis. Hitung kadarnya dengan menggunakan persamaan kurva
p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
kalibrasi  dan  diperoleh  kadar  obat bebas (FD).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Bakteri
Hasil identifikasi bakteri
B.altitudinis menunjukkan  koloni warna  biru  dikelilingi  endapan  telur
pada  media B.  altitudinis  Agar (BCA). Hasil pengujian secara
pengecatan gram tampak
menunjukkan  hasil  berwarna  ungu atau  violet,  berbentuk  batang  ( bacil ) dan tunggal.  Hasil uji katalase bakteri B.altitudinis menunjukkan  hasil positif  dibuktikan  adanya  buih  atau gelembung  gas  setelah  ditambah hidrogen peroksida 3%. Pada pengujian  koagulase  memberikan hasil  negatif  yang  berarti  bakteri B.altitudinis tidak  memiliki  enzim koagulase.
Gambar 1. Hasil identifikasi Bakteri

## Isolasi Enzim Sod
Hasil  sentrifugasi  ini  diperoleh supernatan  yang  berisi  ekstrak  kasar enzim  SOD B.    altitudinis dengan
rata-rata  sebanyak  13,3  mL  dan diperoleh  rendemen  ekstrak  kasar enzim SOD yaitu 4,36 % v/v.  Tahap isolasi protein merupakan tahap awal dalam  pemurnian  protein  sehingga menghasilkan  protein  dalam  bentuk ekstrak  kasar  (Koolman  &  Roehm, 2005).

## Penetapan  Protein  Total  Ekstrak Kasar
Ekstrak  kasar  enzim  SOD bakteri B.    altitudinis dilakukan penetapan kadar protein total dengan metode  Bradford.  Kadar  protein dilakukan melihat perbandingan absorbansi ekstrak kasar enzim SOD bakteri  dengan  persamaan  linier kurva  baku,  y=  0,0292  x  +  0,1075 menjadi  dasar  penentuan  kadar protein dalam sampel. Rata-rata nilai absorbansi ekstrak kasar enzim SOD B. altitudinis didapat 0,1340 kemudian dimasukkan dalam persamaan  maka  didapat  kadar protein  2,27  mg/mL.  Pengukuran kadar  protein  total  dilakukan  untuk melihat efek ekstrak terhadap produksi enzim atau terhadap aktivitas  enzim.  Enzim  dalam  tubuh antara  lain  enzim  CAT  (katalase). GSH-Px (glutation peroksidase).
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
SOD (superoksida dismutase) merupakan suatu antioksidan metalloenzim yang mengandung
enzim  berfungsi  untuk  pencegahan fotoaging  dengan  mekanisme  kerja dengan  cara  mengkonversi  anion superoksida untuk melindungi kerusakan sel. Prinsip metode Bradfort adalah zat warna Coomassie Brilliant  Blue  G-250  (CBB)  yang terkandung  dalam  pereaksi  Bradford akan  berikatan  dengan  protein  yang mengandung  residu  asam  amino dengan  rantai  samping  aromatik (tirosin, triptofan, fenilalanin) sehingga  terbentuk  warna  biru  yang kompleks  (Fahmi,  Winni,  &  Saibun, 2017).

## Uji Aktivitas SOD
Hasil pengujian aktivitas
ekstrak  kasar  SOD  diperoleh  dengan perhitungan  rerata  persen  inhibisi SOD Bacillus  altitudinis sebesar 85,09 % ± 1,24 %. Hasil pengukuran aktivitas  SOD  pada  ekstrak  kasar enzim  SOD  bakteri B.    altitudinis diperoleh  hasil  yang  tinggi  yaitu >50%,  hasil  uji  aktivitas  SOD  pada penelitian  ini,  diperoleh  hasil  85,09 %.  Aktivitas  SOD  memiliki  kriteria aktivitas  tinggi  jika  mempunyai
persen  inhibisi  >50%  dan  aktivitas rendah  apabila  persen  inhibisinya <50%. Berdasarkan (Panji, Suharyanto, & Marini, 2009)
perbandingan  aktivitas  SOD  dalam sampel ekstrak kasar dengan aktivitas SOD dalam sampel yang dimurnikan dengan  amonium  sulfat  memberikan hasil  yang  lebih  tinggi.  Hal  ini disebabkan  karena  protein  dalam ekstrak  kasar  enzim  SOD  masih dalam  keadaan  utuh  mengakibatkan aktivitas katalitiknya tidak terganggu, sedangkan    penggunaan  fraksinasi amonium  sulfat  untuk    pemisahan protein  tidak  dapat  memisahkan seluruh  enzim  SOD  dalam  biomassa sel S, platensis.

## Enkapsulasi Liposom Ekstrak SOD
Hasil  pembuatan  liposom  pada penelitian  ini  menggunakan  metode hidrasi  lapis  tipis  yang  dimodifikasi dengan sonikasi, Fosfatidilkolin (Phospholipon  90  G)  dan  kolesterol diuapkan pelarutnya dengan menggunakan rotary  evaporator . Lapisan  tipis  yang  terbentuk  pada dinding  labu,  selanjutnya  dihidrasi dengan  larutan  dapar  fosfat  pH  7,6 yang  mengandung  ekstrak  SOD sampai  terbentuk  lapisan  liposom.
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Lapisan liposom berwarna putih agak terang. Tujuan hidrasi untuk mengetahui penjerapan zat aktif yang optimal  dan  pengembangan  vesikel. Lipomer yang terdapat zat aktif yang terjerap  berasal  dari  obat  yang memiliki  berat  molekul  tinggi  atau rendah.  Proses  lanjutan  dari  cairan dispersi  dihasilkan  adalah  dilakukan sonifikasi dengan tujuan untuk mengoptimalkan  penjerapan  serta ukuran partikel diperkecil.
Kareteristik Liposom
Pengukuran  partikel  liposom dilakukan menggunakan Particle Size Analyzer (PSA).    Alat  ini  memiliki sensitivitas 3-10,000 nm dan mampu mengukur partikel dan molekul yang berada  pada  rentang  0,15-10  μm. Hasil  uji  ukuran  partikel  sebagai berikut:

## Tabel 1. Hasil Ukuran Partikel
B.  altitudinis Kolagen Repitasi 1 93,8 122 Repitasi 2 117,8 128,4 Repitasi 3 127,3 129,8 Rata - rata 112,96±17,3 a 126,7±4,2 a a = tidak berbeda signifikan antar kelompok
Hasil  penelitian  menunjukkan liposom SOD B.  altitudinis memiliki ukuran partikel  sebesar 112,97±17,3 nm.  Hasil  ini  memenuhi  standar ukuran  nanopartikel,  berdasarkan
(Jonassen,  2014)  suatu  partikel dengan  ukuran  kisaran  10-1000  nm dapat  disebut  nanopartikel.  Partikel nano  dengan  rata  rata  ukuran  50 hingga  500  nm  dapat  digunakan sebagai  pembawa  obat  (nanokarier) untuk  keperluan  penghantaran  obat ( drug  delivery )  (Angelia  F, et  al 2019).
Hasil pengukuran zeta potensial menggunakan Particle  Size  Analyzer (PSA)  diperoleh  nilai  zeta  potensial liposom SOD B.  altitudinis sebesar +7,0  ±5,1  mV.  Menurut  (Ronson, 2012)  nanopartikel  dengan  nilai potensial  zeta  lebih  besar  dari  +25 mV  atau  kurang  dari  -25  mV memiliki  derajat  stabilitas  tinggi, sedangkan  menurut  Murdock et  al (2008)  nanopartikel  dengan  nilai potensial zeta lebih besar dari ±30mV memiliki stabilitas lebih tinggi.
Tabel 2. Hasil Zeta potensial B.  altitudinis Kolagen Repitasi 1 10,5 52,1 Repitasi 2 1,2 45,1 Repitasi 3 9,3 53,3 Rata - rata 7,0 ±5,1 b 50,17±4,4 b b = Ada beda signifikan
Akumulasi dari jumlah muatan pada  permukaan  partikel  sampai lapisan  terluar  pada  partikel  disebut Zeta  potensial.  Pada  umumnya
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
rentang  potensial  yang  digunakan  ± 30 mV dengan menentukan pada tepi
buble. Pencegahan terjadinya flokulasi/peristiwa penggabungan koloid dari yang kecil besar kemungkinan terjadi
apabila tingginya  nilai  zeta  potensialnya. Apabila  nilai  zeta  potensial  kecil berakibat  terjadinya  flokulasi  karen saling  tarik  menarik  pada  partikel. (Prakash et al 2014).
Efisiensi penjerapan dalam penelitian  ini  dilakukan  secara  tidak langsung  dengan  cara  kuantifikasi obat  bebas  dalam  sistem  yang diperoleh  berdasarkan  perbandingan jumlah ekstrak kasar enzim SOD total dalam  larutan  dengan  ekstrak  kasar enzim  SOD  dalam  liposom  dengan dinyatakan dalam bentuk persen. Dari hasil analisa bahwa efisiensi penjerapan  liposom B.  Altitudinis masih  tinggi.  Hal  ini  dikarenakan adanya  kolesterol  berfungsi  sebagai penstabil  liposom  yang  menurunkan permeabilitas  sehingga  mencegah kebocoran obat (Halim, 2016).
Tabel 3. Kadar Protein dan Effisenisi Penjerapan Kadar Protein (mg/mL) Effiseinsi Penjerapan 2,27 81,1 %
Berdasarkan hasil tersebut,
maka  efisiensi  penjerapan  dikatakan baik  karena  memiliki  rentang  >80%. Komponen utama pembentuk gelembung  (vesicles)  pada  sistem liposom  yang  bertugas  menjerap ekstrak kasar SOD adalah Fosfatidilkolin.  Pada  saat  hidrasi secara spontan akan terbentuk nanolipomer dimana yang gelembung menjadi  renggang  sehingga  ekstrak kasar SOD yang terlarut dapat masuk ke  vesikel  dan  terjadi  penjerapan optimal.    Proses  ini  terjadi  karena masuknya  fase  air  pada  fosfolipid yang menyebabkan lipid bilayer akan melekuk secara spontan.

## KESIMPULAN
Hasil pengujian aktivitas ekstrak  kasar  SOD  diperoleh  dengan persen inhibisi SOD Bacillus altitudinis sebesar 85,09 % ± 1,24 %.
Hasil  uji  kateristik  liposom Bacillus altitudinis dengan  ukuran  112,96 ±17,3;  efisiensi  penjerapan  81,1% dan zeta potensial 7,0 ±5,1 mV. Hasil menunjukkan  partikel  liposom  SOD B.  altitudinis berada  di  rentang nanopartikel.
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima kasih kepada hibah pendidikan tinggi (DIKTI),  Penelitian  Tesis  Magister (PTM), tahun 2020.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbarzadeh,  A.,  Sadabady,  R.R.,
Davaran, S., Joo, SW., Zarghami, N., Hanifehpour, Y., Samiei, M., Kouhi M & Koshki K.N., 2013, Liposome: classification,  preparation,  and applications, Nano scale Research Letters , 8:102 Anshori,  AM.,  Wiraguna  A.A.G.P., Pangkahila W., 2017, Pemberian  oral  ekstrak  kulit buah  lemon  ( Citrus  limon ) menghambat peningkatan ekspresi MMP-1 (matrix metaloproteinase-1) dan penurunan jumlah kolagen pada tikus  putih  galur  wistar  jantan ( Rattus norvegicus ) yang dipajan  sinar  UV-B Jurnal  e- Biomedik  (eBm), Volume 5, Nomor 1
Babazadeh, A., Zeinali, M.,
Hamishehkar,  H.,  2018,  Nano- Phytosome: A Developing Platform  for  Herbal  Anti- Cancer  Agents  in  Cancer Therapy, Current Drug Targets , 19, 170-180 Fahmi,  I.,  Winni,  A.,  &  Saibun,  S., 2017,  Isolasi  amilase  dari kecambah biji nangka ( Artocarpus heterophyllus
Lam ). Jurnal  Atomik ,  2:140- 142
Fatimah, N dan Sundu, R., 2020, Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi N- Heksan Daun Afrika (Vernonia Amygdalinadel.) Dengan Metode  DPPH,  Jurnal  Ilmiah Ibnu  Sina,  5(2),  Oktober  2020, 250-257 Halim,  2016,  Efektivitas  Sistem
Penghantaran  Liposom  pada Katekin  Sebagai  Antioksidan, 2(May). 176–182,
Jonassen,  H,  2014.    Polysaccharide based  nanoparticles  for  drug delivery application.
Loquercio et al, 2015, Preparation of Chitosan-Alginate Nanoparticles  for  Trans  - cinnamaldehyde Entrapment:
Chitosan  alginate  nanoparticle synthesis, J,  Food  Sci,  80 ,
N2305–N2315
Panji, T., Suharyanto, & Marini, W.,
2009,  Produksi,  Isolasi,  dan Karakterisasi Superoksida Dismutase dari Spirulina platensis yang dibiarkan dalam serum lateks, Menara Perkebunan , 77:23-35 Pradana, A.T., dkk 2022, Karakteristik Fisik Mikropartikel kuersetin Dengan  Kombinasi  Kitosan- Natrium Tripolifosfat Menggunakan  Metode  Orifice Ionic  Gelation,  Jurnal  Ilmiah Ibnu  Sina,  7(1),  Maret  2022,
133-142
Prakash, S., Mishra, R., Malviya, R.,
&  Sharma,  P.  K.,  2014,
Measurement  techniques  and pharmaceutical  applications  of zeta potential: a review . Journal of  Chronotherapy  and  Drug Delivery , 5(2), 33-40
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 8(1), Maret 2023, 21-30 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Purwanto,  M.,  2014,  Perbandingan Analisa  Kadar  Protein  Terlarut dengan Berbagai Metode Spektroskopi UV-Visible, Jurnal Ilmiah Sains & Ternologi , 7: 64-71 Roni A, dkk, 2022, Penetapan Kadar Flavonoid dan Aktivitas Antioksidan Pada Ekstrak Batang  Brotowali  ( Tinospora Crispal .) dengan Metode Cuprac,  Jurnal  Ilmiah  Ibnu
Sina, 7(1), 165-173
Ronson, 2012, Zeta Potensial Analysis of Nanoparticles, Nano Composix, San Diego
Rahman,  H.,  Tutus,  G.K.,  Elin.  J.,
2012,  Uji  aktivitas  enzim superoksida  dismutase  dalam ektrak  mesokarp  buah  merah ( Pandanus conoideus Lamarck ) menggunakan densitometri citra elektrogram, Acta Pharmaceutica  Indonesia 37: 43 - 44