## PENDAHULUAN
Manusia mempunyai tubuh yang dilengkapi oleh sistem pertahanan  yang  dianggap  menjadi  antioksidan  dimana bisa  meminimalisir  kerusakan  yang  diakibatkan  radikal bebas.  Salah  satu  faktor  yang  mensugesti  kesehatan manusia adalah keseimbangan antara kandungan radikal bebas serta antioksidan dalam tubuh. Kurangnya asupan antioksidan  yang  cukup  dari  beberapa  aspek,  seperti kondisi  lingkungan  dan  pola  makan  yang  kurang  baik, mengakibatkan pertahanan dari pada tubuh sering masih
kurang bertenaga dalam menunda radikal bebas. Banyak sekali bukti ilmiah menunjukkan bahwa resiko penyakit kronis  dampak  senyawa  radikal  bebas  bisa  dikurangi dengan memanfaatkan peran senyawa antioksidan alami seperti  vitamin  A,  C,  E,  karoten,  asam-asam  fenol, polifenol dan flavonoid 1 .
Senyawa  antioksidan  alami  dapat  ditemukan  pada tanaman  dari  genus  Anacardiaceae  yang  telah  diteliti kandungan  kimianya.  Ramania  (Bouea  macrophylla Griffith.) merupakan tanaman herbal yang memiliki sifat

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Ramania (Bouea macrophylla
Griffith.) Menggunakan Metode DPPH

## Antioxidant Activity Test of Methanol Extract of Ramania Leaf (Bouea macrophylla Griffith.)
Using the  DPPH method
Dimas Satya Aiyuba 1*
Aditya Noviadi Rakhmatullah 2
Ratna Restapaty 3
STIKES Borneo Lestari,
Banjarbaru, Kalimantan Selatan,
Indonesia
*email:
dimassatya.168@gmail.com

## Abstrak
Manusia mempunyai tubuh yang yang dilengkapi oleh sistem pertahanan yang dianggap menjadi antioksidan dimana bisa meminimalisir kerusakan yg diakibatkan sang radikal bebas.  Ramania  (Bouea  macrophylla  Griffith.)  merupakan  tanaman  herbal  yang memiliki  sifat  antioksidan  dan  menghambat  radikal  bebas.  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui apa saja kandungan senyawa aktif yang terkandung didalam daun ramania  dan  menentukan  nilai  IC50.  Metode  ekstraksi  maserasi,  didapatkan  hasil rendemen  ekstrak 42,5699  g,  dan  kandungan  senyawa yang  terdapat  pada ekstrak yaitu senyawa flavonoid, saponin, tanin, steroid, dan alkaloid. Ekstrak diuji aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  inhibisi  radikal  DPPH  secara  kuantitatif menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis dengan kuersetin sebagai kontrol positif. Pada pengujian antioksidan kuersetin dengan konsentrasi 1, 2, 3, 4, 5 ppm didapatkan hasil 3,3434 ppm. Pada pengujian antioksidan ekstrak metanol dengan konsentrasi 2,
4, 6, 8, 10 ppm didapatkan hasil 6305 ppm. Hasil didapatkan nilai IC50 yaitu 6,305 ppm yang termasuk kategori antioksidan sangat kuat. Hal ini dapat disimpilkan bahwa ekstrak metanol daun Ramania memiliki aktivitas antioksidan.

## Kata Kunci:
Antioksidan
Daun Ramania Bouea macrophylla Griffith.
Ekstrak Metanol Kuersetin DPPH
Keywords : Antioxidant
Ramania leaf
Bouea macrophylla Griffith. Methanol Extract
Quersetin DPPH

## Abstract
Humans have a body that is equipped with a defense system that is considered to be an antioxidant  which  can  minimize  the  damage  caused  by  free  radicals.  Ramania  (Bouea macrophylla Griffith.) is an herbal plant that has antioxidant properties and inhibits free radicals. This study aims to determine what are the active compounds contained in ramania leaves and determine the IC50 value. Maceration extraction method, obtained the yield of extract 42.5699 g, and the content of compounds contained in the extract are flavonoid compounds, saponins, tannins, steroids, and alkaloids. The extract was tested for antioxidant activity  using  the  DPPH  radical  inhibition  method  quantitatively  using  a  UV-Vis spectrophotometer with quercetin as a positive control. In testing the antioxidant quercetin with concentrations of 1, 2, 3, 4, 5 ppm, the results were 3.3434 ppm. In the antioxidant test of methanol extract with concentrations of 2, 4, 6, 8, 10 ppm, the results were 6305 ppm. The results obtained IC50 value of 6.305 ppm which is included in the category of very strong antioxidants. It can be concluded that the methanol extract of Ramania leaves has antioxidant activity.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i1.5150.
antioksidan  dan  menghambat  radikal  bebas2. Antioksidan merupakan senyawa yang dapat meredam radikal  bebas.  Senyawa  antioksidan  dapat  meredam radikal bebas dengan cara mendonorkan elektronnya ke radikal  bebas  yang  tidak  stabil  sehingga  radikal  bebas tersebut stabil dan tidak menggangu metabolisme dalam tubuh 3 .  Fungsi  utama  antioksidan  adalah untuk menghentikan atau memutus reaksi berantai dari radikal bebas  yang  terdapat  dalam  tubuh  serta  menetralkan radikal bebas sehingga dapat melindungi sistem biologi tubuh  dari  efek  merugikan  yang  timbul  dari  proses maupun reaksi yang menyebabkan oksidasi berlebihan 4 . Aktivitas  antioksidan  dapat  dihasilkan  melalui pemanfaatan  tanaman  herbal  salah  satunya  yaitu  daun Ramania.
Peneliti  lain  menjelaskan  bahwa  daun  Ramania  yang dimaserasi  dengan  tiga  pelarut  berbeda  yaitu  etanol 96%,  etil  asetat,  dan  heksana  yang  menghasilkan  nilai TPC 5,62±0,38 mg, 0,84±0,54 mg GAE/g, dan 4,36±0,23 mg QE/g dengan metode Ferric Reducing Antioksidan Power  (FRAP)  (Hardinsyah,  2019).  Daun  Ramania mengandung  flavonoid,  terpenoid,  dan  saponin5. Ekstraksi  senyawa  antioksidan  didalam  daun  Ramania bisa  menggunakan  metode  maserasi  menggunakan pelarut metanol.
Metanol  dipilih  sebagai  pelarut  ekstraksi.  Pemilihan pelarut metanol dikarenakan metanol memiliki struktur molekul  kecil  yang  mampu  menembus  semua  jaringan tanaman untuk menarik senyawa aktif keluar. Metanol dapat melarutkan hampir semua senyawa organik baik senyawa polar ataupun nonpolar dan juga sifatnya yang sangat mudah menguap sehingga mudah dipisahkan dari ekstrak 6 .
Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  dari  daun  Ramania yang  akan  di  ekstraksi  dengan  pelarut  metanol menggunakan  metode  maserasi.  Pemilihan  pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode peredaman radikal  DPPH  dikarenakan  hanya  memerlukan  sampel
sedikit,  mudah,  sederhana,  cepat  dan  peka  dalam mengevaluasi antioksidan dari senyawa bahan alam.

## METODOLOGI
Alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  bejana  maserasi (pyrex®),  lemari  pendingin,  lampu  UV,  neraca  analtik (OHAUS®), spektrofotometer UV-Vis (PG  Instrument®),  rotary  evaporator  (pyrex®),  alat- alat kaca (Iwaki®Pyrex®) dan vortex serta waterbath. Sampel tumbuhan yang digunakan adalah buah belimbing wuluh.  Bahan  lain  yang  digunakan  antara  lain  etanol, DPPH,  aquadest,  asam  asetat  anhidrat,  FeCl3,  gelatin, HCl,  H2SO4  pekat,  kertas  label,  kertas  perkamen, kertas  saring,  kuersetin  (kontrol  positif),  NaCl  dan metanol. Metode Penelitian
Sampel Penelitian
Sampel penelitian yang digunakan yaitu ekstrak metanol daun Ramania (Bouea macrophylla Griffith.) yang dibuat dengan metode ekstraksi maserasi dengan menggunakan pelarut metanol. Sebanyak 250 g simplisia daun  ramania  yang  telah  dikeringkan  dan  dihaluskan kemudian dimaserasi dengan pelarut metanol sebanyak 1,2  L  (1:3)  selama  24  jam.  Kemudian  dilakukan remaserasi  sebanyak  2  kali.  Hasil  ekstraksi  yang diperoleh berupa ekstrak kental.
a. Uji Kualitatif
Skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap  ekstrak  metanol daun  Ramania  (Bouea  macrophylla  Griffith.)  dengan beberapa  pereaksi,  yaitu  uji  flavonoid,  uji  steroid- terpenoid, uji tanin, uji saponin, dan uji alkaloid.
 Uji Flavonoid
Ekstrak  daun  ramania  sebanyak  0,1  gram  dilarutkan dengan  5  ml  etanol,  kemudian  dipanaskan  selama  5 menit  pada  tabung  reaksi.  Setelah  itu,  larutan ditambahkan 10 tetes HCl pekat dan 0,2 gram serbuk Mg dan 1 mL amil alkohol. Terdapat senyawa flavanoid ditandai  dengan  berubahnya  larutan  menjadi  warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol 7 .
 Uji Tanin
Ekstrak  daun  ramania  sebanyak  0,5  gram  dilarutkan terlebih  dahulu  dengan  etanol,  kemudian  ditambahkan larutan  gelatin  1%  (1  gram  dalam  100  mL  NaCL). Terdapat  senyawa  tanin  ditandai  terbentuk  endapan putih kekuningan 8 .
 Uji Alkaloid
Ekstrak  daun  ramania  sebanyak  0,5  gram  dilarutkan dengan etanol secukupnya, ditambahkan HCl 2 N dibagi menjadi  4  bagian  dimana  salah  satunya  sebagai pembanding 7 .
1) Pereaksi  Mayer:  Larutan  dipipet  sebanyak  2,5  mL ditambahkan pereaksi Mayer secukupnya. Ditandai dengan larutan berubah menjadi endapan putih atau putih kekuningan.
2) Pereaksi Dragendorff: Larutan dipipet sebanyak 2,5 mL ditambahkan pereaksi Dragendorff secukupnya. Ditandai dengan larutan berubah menjadi endapan coklat sampai kuning, jingga.
3) Pereaksi Wagner: Larutan dipipet sebanyak 2,5 mL ditambahkan  pereaksi  Wagner  secukupnya. Ditandai dengan larutan berubah menjadi endapan coklat.
 Uji Saponin
Ekstrak daun ramania sebanyak 0,5 gram ditambahkan 10 mL aquades kemudian dikocok kuat ± 1 menit dan didiamkan  selama  10  menit,  amati  buih  atau  busa.
Terdapat senyawa saponin ditandai dengan terbentuknya busa/buih dengan tinggi 1-3 cm yang stabil selama  10  menit  .Dilakukan  uji  penegasan  dengan menambahkan  HCl  2  M  adanya  saponin  ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil6.
 Uji Steroid/Terpenoid
Ekstrak  daun  ramania  sebanyak  0,5  gram  dilarutkan dengan  etanol,  kemudian  ditambahkan  pereaksi Liebermann-Burchard. Kemudian dikocok perlahan dan diamkan  beberapa  menit.  Terdapat  senyawa triterpenoid  ditandai  dengan  berubahnya  larutan menjadi  warna  merah  atau  ungu,  sedangkan  senyawa
steroid  ditandai  dengan  berubahnya  larutan  menjadi warna biru atau hijau7.
b. Uji Kuantitatif
 Pembuatan Larutan DPPH
Pembuatan  larutan  DPPH  0,4  mM,  dilakukan  dengan cara  menimbang  DPPH  sebanyak  7,8864  mg,  lalu dilarutkan  dalam  50  ml  metanol  p.a,  sehingga  didapat konsentrasi  larutan  DPPH  0,4  mM  yang  dihitung terhadap  BM  DPPH  sebesar  394,32  g/mol.  kemudian larutan  ditempatkan  dalam  botol  gelap  dan  digojog hingga homogen 8 .
Penentuan  Panjang  Gelombang  Maksimum  DPPH Panjang gelombang maksimum ditentukan dengan dibuat larutan pereaksi DPPH 0,4 mM dilakukan dengan cara memasukan 1,0 ml larutan DPPH 0,4 mM ke dalam vial gelap  dan  ditambahkan  4  mL  metanol  p.a  kemudian dibungkus  dengan  aluminium  foil  lalu  dihomogenkan. Selanjutnya dimasukkan ke dalam kuvet dan serapannya diukur  menggunakan  alat  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 500-600 nm 8 .
 Penentuan Operating Time
Larutan  DPPH  0,4  mM  sebanyak  1  ml  ditambahkan dengan larutan standar kuersetin 3 ppm sebanyak 4 ml. Selanjutnya  larutan  serapannya  diukur  dengan menggunakan  alat  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  maksimum  yang  telah  ditetapkan dengan  interval  waktu  2  menit  sampai  mencapai absorbansi yang stabil 8 .
 Pembuatan Larutan Blanko DPPH
Larutan blanko DPPH 0,4 mM yang telah dibuat diambil 1 ml lalu dimasukkan ke dalam vial gelap. Ditambahkan 4 ml metanol p.a dibungkus dengan aluminium foil lalu dihomogenkan.  Proses  inkubasi  dilakukan  di  ruangan yang gelap terhindar dari cahaya selama operating time yang  telah  ditetapkan  sebelumnya.  Kemudian  larutan blanko  DPPH  dimasukkan  ke  dalam  kuvet.  Diukur Serapannya  menggunakan  alat  spektrofotometer  UV- Vis  pada  panjang  gelombang  maksimum  yang  telah didapatkan sebelumnya 8 .
 Pembuatan Larutan Pembanding Kuersetin
Larutan  seri  kadar  dibuat  dengan  menggunakan kuersetin  100  mg  kemudian  dimasukkan  dalam  labu ukur 100 ml, lalu ditambahkan metanol p.a sampai tanda batas dan gojok sampai homogen. Sehingga konsentrasi kuersetin  menjadi  1000  ppm.  Seri  konsentrasi  dibuat dengan cara mengambil 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml dan 1  ml,  dilarutkan  dalam  100  ml  pelarut  etanol  70%, didapatkan  konsentrasi  1  ppm,  2  ppm,  3  ppm,  4  ppm dan 5 ppm 9 .
 Pengujian Aktivitas Antioksidan Larutan Pembanding Kuersetin
Pengujian larutan kontrol kuersetin pada masing-masing konsentrasi  dipipet  sebanyak  4  ml  kemudian ditambahkan 1 ml larutan DPPH dan divortex selama 15 detik  dalam  ruang  gelap.  Selanjutnya  diinkubasi  pada suhu ruang dan ruang gelap selama 30 menit. Langkah terakhir  dilakukan  uji  larutan  kontrol  kuersetin menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang  maksimum  yang  telah  didapatkan sebelumnya 9 .
 Pembuatan  Konsentrasi  Larutan  Uji  Ekstrak Metanol  Daun  Ramania  (Bouea  macrophylla Griffith.)
Larutan uji yang dibuat berupa ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh, 100 mg ekstrak dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, lalu ditambahkan metanol p.a sampai tanda batas hingga dan gojok sampai homogen, hingga didapatkan konsentrasi larutan induk 500 ppm. Larutan induk dibuat 5 seri konsentrasi dengan cara mengambil 10 ml, 12 ml, 14 ml, 16 ml, dan 18 ml  dan dilarutkan dalam  100  ml  pelarut  metanol  p.a,  didapatkan konsentrasi yaitu 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, dan 10 ppm 9 .
 Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Metanol Daun Ramania (Bouea macrophylla Griffith.)
Disiapkan  larutan  uji  dan  larutan  kuersetin  yang  telah dibuat.  Larutan  kuersetin  digunakan  sebagai  kontrol positif.  Setiap  konsentrasi  larutan  uji  dan  larutan kuersetin dipipet 4,0 ml dimasukkan ke dalam labu ukur
5  ml  selanjutnya  ditambahkan  larutan  DPPH  0,4  mM sebanyak 1 ml dan dihomogenkan. Larutan uji diinkubasi di  ruangan  yang  gelap  terhindar  dan  cahaya  selama operating  time  yang  telah  didapatkan  sebelumnya. Selanjutnya absorbansinya diukur dengan menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yang telah ditentukan sebelumnya 9 . c. Pengolahan Data
Hasil  pengukuran  absorbansi  yang  didapat  dari Spektrofotometer
UV-Vis digunakkan untuk menghitung  aktivitas  antioksidan.  Aktivitas  penangkal radikal  diekspresikan  sebagai  persentase  inhibisi  yang dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut :
% Inhibisi radikal DPPH
= Absorbansi blanko – Absorbansi sampel Absorbansi blanko
Setelah  didapatkan  persentasi  peredaman  dari konsentrasi  larutan  uji  dan  kuersetin,  kemudian ditentukan persamaan y = bx + a dengan perhitungan secara regresi linear dimana x adalah konsentrasi (ppm) dan  y  adalah  presentase  inhibisi  DPPH  (%).  Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan Inhibitation concentration 50% (IC50) yaitu jika konsentrasi sampel yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti y dengan 50.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengujian secara kualitatif menunjukkan hasil dari uji skrining pada ekstrak metanol daun Ramania (Bouea macrophylla  Griffith.)  yang  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  flavonoid,  saponin,  tanin,  steroid, dan alkaloid.
Uji  flavonoid  didapatkan  hasil  positif  buah  Belimbing wuluh  (Bouea  macrophylla  Griffith.)  ditunjukkan terbentuknya  perubahan  warna  menjadi  kuning  atau kuning  kemerahan  pada  lapisan  amil  alkohol.  Uji flavonoid  dilakukan  penambahan  HCl  pekat  digunakan untuk    menghidrolisis    O-glikosil.    Glikosil    akan tergantikan  oleh  H  +  dari  asam  karena  sifatnya  yang elektrofilik. Glikosida berupa gula yang biasanya seperti
glukosa, raminosa, dan galaktosa. Reduksi dengan HCl pekat  dan  Mg  menghasilkan  senyawa  komplek  yang berwarna merah atau jingga atau kuning terhadap flavon, flavanol, flavanonol, dan xanton 10 .
Ekstrak  metanol  daun  Ramania  (Bouea  macrophylla Griffith.) pada menggunakan uji Dragendorff, terbentuk endapan  coklat  yang  menandakan  positif  mengandung alkaloid. Hasil positif pada pereaksi Dragendroff diduga karena terjadinya kompleks kalium alkaloid (K dengan ion tetraiodobismutat. Pembuatan pereaksi Dragendroff terdiri dari bismuth nitrat yang dilarutkan dalam HCl kemudian direaksikan dengan kalium iodide. Pada saat ion Bi3+ dari bereaksi dengan kalium iodida berlebih maka akan membentuk kalium tetraiodobismutat.  Gugus  nitrogen  pada  alkaloid  akan bereaksi dengan logam K+ dari kalium tetraiodobismutat membentuk ikatan kovalen koordinat  sehingga  memberikan  endapan  berwarna coklat 11 .
Ekstrak  metanol  daun  Ramania  (Averrhoa  bilimbi  L.) yang direaksikan  dengan pereaksi Mayer menghasilkan endapan  putih  kekuningan  yang  menandakan  positif mengandung alkaloid. Pembuatan pereaksi Mayer terdiri dari  larutan  merkurium  klorida  dengan  kalium  iodida. Produk  yang  dihasilkan  dari  reaksi  tersebut  yaitu endapan  merah  merkurium  iodida.  Apabila  kalium iodida  ditambahkan  berlebih  maka  akan  membentuk kalium  tetraiodomerkurat.  Alkaloid  memiliki  atom nitrogen  yang  mempunyai  pasangan  elektron  bebas, sehingga  dapat  digunakan  untuk  membentuk  ikatan kovalen koordinat dengan ion logam diantaranya yaitu kalium. Gugus nitrogen pada alkaloid diperkirakan akan berekasi dengan logam K+ dari kalium tetraidomerkurat dan  akan  membentuk  kompleks  kalium  alkaloid  yang memberikan endapan berwarna putih 11 .
Ekstrak  metanol  daun  Ramania  (Bouea  macrophylla Griffith.)  direaksikan  dengan  pereaksi  Wagner  positif mengandung  alkaloid.  Hasil  positif  pada  pereaksi Wagner  diduga  karena  terjadinya  kompleks  kaliumal kaloid dan ion I3. Pembuatan pereaksi Wagner terdiri
dari  iodin  dengan  kalium  iodida.  Iodin  akan  bereaksi dengan  ion  dari  kalium  iodida  menghasilkan  warna coklat 11 .
Ekstrak  metanol  daun  Ramania  (Bouea  macrophylla Griffith.)  positif  mengandung  saponin  yang  ditandai terbentuk  busa  dan  tidak  hilang  setelah  ditambahkan HCl 2N. Uji saponin menunjukkan hasil positif karena buih yang terbentuk setelah pengocokan bertahan lama. Saponin memiliki glikosil sebagai gugus polar serta gugus steroid  atau  triterpenoid  sebagai  gugus  nonpolar sehingga bersifat aktif permukaan dan membentuk misel saat dikocok dengan air. Pada struktur misel gugus polar menghadap  ke  luar  sedangkan  gugus  nonpolar menghadap  ke  dalam  dan  keadaan  inilah  yang  tampak seperti busa.
Sedangkan  pada  uji  metabolit  sekunder  lainnya  tidak didapatkan hasil yang positif seperti uji terpenoid. Hal ini dikarenakan perbedaan tempat pengambilan sampel yang  dipengaruhi  oleh  kesuburan  tanah,  suhu  dan kelembaban  tempat  tumbuh  tanaman,  sehingga  dapat membuat perbedaan kandungan kimia pada tanaman.
Tabel 1.
Hasil Uji Kualitatif Terhadap Sampel Jenis Uji Hasil Pengujian (+/-) Flavonoid + Alkaloid + Tanin + Saponin + Steroid + Terpenoid -
Pada  penentuan  panjang  gelombang  maksimum  yang didapat  pada  penelitian  adalah  515  nm  dengan absorbansi 0,713. Hal ini sesuai dengan rentang panjang gelombang maksimum DPPH yaitu 500-600. Penentuan operating  time  untuk  mengetahui  waktu  pengukuran yang dibutuhkan suatu senyawa untuk bereaksi dengan senyawa  lain  hingga  terbentuk  senyawa  produk  yang stabil12.  Dapat  diketahui  stabil  dengan  mengamati absorbansi  mulai  dari  saat  direaksikan  hingga  tercapai serapan  yang  stabil.  Hasil  penentuan  operating  time dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis
dinyatakan  bahwa  dengan  interval  waktu  2  menit didapatkan  absorbansi  yang  stabil  pada  waktu  30-34 menit.
Penentuan  aktivitas  antioksidan  Ekstrak  daun  Ramania (Bouea  macrophylla  Griffith.)  dilakukan  dengan  cara sederhana  yaitu  pengujian  menggunakan  DPPH  (2- 2,diphenyl-1-picrylhydrazyl) dimana hanya memerlukan sedikit  sampel  untuk  pengujian.  Metode  pengujian  ini secara kuantitatif memiliki prinsip yaitu menghitung nilai aktivitas  hambatan  pada  radikal  bebas  DPPH  yang dihambat oleh ekstrak Buah Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) diukur dengan Spektrofotometri UV-Vis dan dinyatakan sebagai nilai IC50 (Inhibitory Concentration). Penentuan aktivitas antioksidan dengan cara mereaksikan sampel ekstrak daun Ramania (Bouea macrophylla  Griffith.)  dengan  radikal  bebas  berupa larutan  DPPH  yang  kemudian  diinkubasi  diruang  gelap dalam waktu 30 menit, hal ini dilakukan agar bereaksinya larutan  sampel  dan  larutan  DPPH  dapat  berlangsung secara  optimal  sebelum  dilakukan  pengukuran  dengan Spektrofotometri  UV-Vis.  Kontrol  positif  yang digunakan dalam penelitian ini adalah kuersetin karena kuersetin  merupakan  golongan  flavonoid  yang  sering ditemukan  dalam  tumbuhan  dan  terbukti  merupakan senyawa antioksidan kuat dengan cara memotong reaksi oksidasi  berantai  radikal  bebas  atau  dengan  cara menangkapnya.  Parameter  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah IC50 yang merupakan konsentrasi senyawa uji untuk meredam radikal DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC50 berarti semakin besar aktivitas antioksidan.
Gambar 1. Kurva  regresi  linear  penetapan  IC50 ekstrak  metanol  daun  Rmania  (Bouea macrophylla Griffith.).
Berdasarkan  hasil  uji  kuantitatif  aktivitas  antioksidan kontrol positif kuersetin memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar 3,3434 ppm. Pada  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  ramania (Bouea  macrophylla  Griffith.)  didapatkan  nilai  IC50 sebesar  6,305  ppm  yang  dapat  dikategorikan  sebagai antioksidan sangat kuat.

## KESIMPULAN
Senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam ekstrak  metanol  daun  ramania  (Bouea  macrophylla Griffith.) adalah flavonoid, alkaloid, tanin, saponin, dan steroid. Uji aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun ramania  (Bouea  macrophylla  Griffith.)  dengan  metode DPPH  didapatkan  nilai  IC50  yaitu  6,305  ppm  yang termasuk kategori antioksidan sangat kuat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  meyampaikan  ucapan  terimakasih  sebesar- besarnya kepada Bapak apt. Aditya Noviadi R, M.Farm dan Ibu Ratna Restapaty, M.Pd yang telah memberikan bimbingan  serta  arahan  sehingga  penelitian  ini  dapat selesai dengan baik.

## REFERENSI
Hardinsyah,  H.,    Windardi,    I.    P.,  Aries,    M.,    & Damayanthi,    E.  2019.    Total    phenolic content, quercetin, and antioxidant activity of gandaria (Bouea Macrophylla Griff.) leaf extract at two stages of maturity. Jurnal Gizi Dan Pangan , 14(2), 61-68. https://doi.org/10.25182/jgp.2019.14.2.61- 68 Hasim, Y. Y. Arifin, D. Andrianto, D. N. Faridah. 2019. Ekstrak  etanol  daun  Belimbing  wuluh (Averrhoa blimbi) sebagai antioksidan dan antiinflamasi. Jurnal  Aplikasi  Teknologi Pangan . 8(3):86- 93. https://doi.org/10.17728/jatp.4201
Khairiah, K., Taufiqurrahman, I., & Putri, D. K. T. 2018. Antioxidant  activity  test  of  ethyl  acetate fraction  of  binjai  (Mangifera  Caesia)  leaf ethanol extract. Dental    Journal    (Majalah Kedokteran Gigi) , 51(4), 164-168. https://doi.org/10.20473/j.djmkg.v51.i4.p16 4-168 Khotimah, K. 2016. Skrining Fitokimia Dan Identifikasi Metabolit Sekunder Senyawa Karpain Pada Ekstrak  Metanol  Daun  Carica  pubescens Lenne  &  K.Koch  Dengan  LC/MS  (Liquid Chromatograph- tandem Mass Spectrometry). Skripsi. Fakultas  Sains  dan Teknologi. Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana Malik Ibrahim.
Ningsih, A.  W.,  I.  Hanifa,  A.  Hisbiyah.  2020. Pengaruh Perbedaan  Metode  Ekstraksi  Rimpang Kunyit  (Curcuma  domestica)  Terhadap Rendemen dan Skrining Fitokimia. Journal of Pharmaceutical  Care  Anwar  Medika .  2(2). http://dx.doi.org/10.36932/jpcam.v2i2.27
Pamungkas,  D.  K.,  Retnaningtyas,  Y.,  &  Wulandari,  L. 2017.  Pengujian  Aktivitas  Antioksidan Kombinasi  Ekstrak  Metanol  Daun  Mangga
Gadung  (Mangifera  indica  L.  var.  gadung) dan  Ekstrak  Etanol  Daun  Pandan  Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) (Antioxidant  Activity  Assay  of  Methanolic Extract  of  Gadung  Mango  Leaves (Mangifera  indica  L.  var.  gadung)  and Ethanolic  Extract  of  Pandan  Leaves (Pandanus amaryllifolius Roxb.) Combination). Pustaka Kesehatan , 5(1), 46-
49. https://doi.org/10.19184/pk.v5i1.3949
Putri,  A.D.,  I.    Taufiqurrahman,  N.    Dewi.    2019. Antioxidant  Activity  Of  Binjai  Leaves (Mangifera  caesia)  Ethanol  Extracts. Jurnal Kedokteran Gigi . 4(1): 55-59.
http://dx.doi.org/10.20527/dentino.v4i1.61
76
Rahayu     WP,     Anisyah,     Heny     E.     2012. Antiprofirelative  Activity  of  Jintan  Hitam (Nigella  sativa)  in  the  Rat  Lung  Cells  by 7,12-Dimetilbenz-Antrasena-induce. Makara Journal of Healt Research . 16 (2): 51- 56. https://dx.doi.org/10.7454/msk.v16i2.1629
Rahmi,  H.  2017.  Review:  Aktivitas  Antioksidan  dari Berbagai Sumber Buah-buahan di Indonesia. Jurnal  Agrotek  Indonesia .  2(1):  34  –  38.
https://doi.org/10.33661/jai.v2i1.721
Syahadat,      A.,      &      N.      Siregar.      2020.      Skrining Fitokimia Daun Katuk (Sauropus androgynus  )  Sebagai  Pelancar  Asi. Jurnal
Kesehatan Ilmiah Indonesia . 5(1) : 85-89.
Yunita,  E.,  D.  G.  Permatasari,  dan  D.  Lestari  2020. Antibacterial  Activity  Of  Moringa  Leaves Extract  Against  Pseudomonas  aeruginosa. Jurnal Ilmiah Farmako Bahari . 11(2): 189-195