Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
PEMBERIAN VITAMIN E TERHADAP FRAGILITAS ERITROSIT PADA MENCIT ( Musmusculus, L. ) YANG DIPAPARI TUAK

## Noradina; Aureliya Hutagaol; Yafrinal Siregar
Prodi D-III Keperawatan, STIKes Imelda, Jalan Bilal Nomor 52 Medan; Prodi S1/D-III Keperawatan, STIKes Imelda, Jalan Bilal Nomor 52 Medan E-mail: dinanora74@gmail.com ; aureliyanovita@gmail.com ; yafrinalsiregar@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  ada  pengaruh  pemberian  vitamin  E  terhadap penurunan  fragilitas  osmotik  dan  krenasi  eritorosit  mencit  (Mus musculus,  L.) jantan  dewasa  yang dipapari  tuak.  Apakah  pengaruh  radikal  bebas  yang  ditimbulkan  pemberian  tuak  yang  mengandung alkohol  dapat  ditangkal  dengan  pemberian  vitamin  E  sebagai  antioksidan.pada  kondisi  stress oksidatif,radikal  bebas  akan  menyebabkan  terjadinya  peroksidasi  lipid  membran  sel  dan  merusak organisasi membran sel. Penelitian ini menggunakan mencit jantan dewasa (Mus musculus, L.) sebanyak 30 ekor yang dibagi dalam 6 kelompok perlakuan.Kelompok pertama sebagai kontrol negatif  yang diberi dengan  air  aquades  0,5cc  selama  30  hari,kelompok  kedua  diberi  tuak  yang  yang  terdapat  kandungan alkohol 20% sebanyak 0,5 ml/hari/ekor secara oral  15 hari pertama dan dilanjutkan dengan pemberian aquades 0,5 ml/hari/ekor/oral 15 hari berikutnya, kelompok ketiga diberi tuak yang terdapat kandungan alkohol 20% sebanyak 0,5 ml/hari/ekor secara oral  selama 30 hari,kelompok 4 diberi tuak yang terdapat kandungan    alkohol  20%  sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral    selama  15  hari  kemudian  15  hari berikutnya dilanjutkan dengan pemberian vitamin E 0,25mg/gBB/h,kelompok 5 diberi tuak yang terdapat kandungan    alkohol  20%  sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral    selama  15  hari  kemudian  15  hari berikutnya  tetap  diberi  tuak   yang  terdapat  kandungan    alkohol  20%  sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara oral    yang diselingi  waktu  1  jam  dengan  pemberian  vitamin  E 0,25mg/gBB/h,dan  kelompok  ke  6 diberi tuak  yang  terdapat  kandungan    alkohol  20%  sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral  yang  di  selingi dengan  waktu  1  jam  dilanjutkan  dengan  pemberian  vitamin  E  0,25mg/gBB/oral    selama  30 hari.Penelitian ini telah mendapat persetujuan dari komite etik penelitian USU.
Kata kunci: Tuak, Alkohol, Fragilitas Osmotik Eritrosit, Vitamin E, Mencit Jantan.

## PENDAHULUAN
Tuak  merupakan  hasil  sadapan  yang diambil  dari  mayang  enau  atau  aren  ( Arenga pinnata )  sejenis  minuman  yang  merupakan hasil  fermentasi  dari  bahan  minuman/buah yang mengandung gula. Tuak telah dikenal di Indonesia sejak zaman dahulu dan mengandung  alkohol  (etil  alkohol),  sehingga jika diminum terlalu banyak dapat menyebabkan mabuk (Ikegami,1992).
Alkohol  juga  terlibat  sebagai  penyebab  dari beberapa  sindroma  hemolitik,  beberapa  di antaranya  berkaitan  dengan  hiperlipidemia dan penyakit hati yang parah (Masters, 2002).
Menurut  Lailanita  (2002),  minuman beralkohol  dapat  menyebabkan fragilitas eritrosit. Fragilitas eritrosit merupakan reaksi membran  eritrosit  untuk  melawan  tekanan osmosis  media  di  sekelilingnya,  untuk
mengetahui  berapa  besar  fragilitas  atau  daya tegang  dinding  eritrosit  dapat  diketahui dengan  menaruh  eritrosit  dalam  berbagai larutan  (biasanya  NaCl)  dengan  tekanan osmosis yang  beragam.  Konsentrasi  larutan dengan  tekanan  osmosis  tertentu  akan memecah  eritrosit,  inilah  yang  menunjukkan fragilitas eritrosit tersebut. Darah mengandung berjuta-juta eritrosit yang umurnya tidak sama (Senturk et.al, 2005).
Hemolisis adalah  pecahnya  membran eritrosit,  sehingga  hemoglobin  bebas  ke dalam medium sekelilingnya (plasma). Kerusakan membran eritrosit dapat disebabkan  oleh  antara  lain  penambahan larutan  hipotonis,  hipertonis  dalam  darah, penurunan  tekanan  permukaan  membran eritrosit,  zat/unsur  kimia  tertentu,  pemanasan dan pendinginan, rapuh karena ketuaan dalam
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
sirkulasi darah dan lain-lain. Apabila medium di  sekitar  eritrosit  menjadi  hipotonis  (karena penambahan larutan NaCl hipotonis ) medium tersebut  (plasma  dan  larutan  NaCl)  akan masuk  ke  dalam  eritrosit  melalui  membran yang bersifat semipermiabel
dan menyebabkan  sel  eritrosit  menggembung (Masters, 2002).
Aktivitas  zat  radikal  bebas  dalam  tubuh bisa  dicegah  oleh  zat  antioksidan,  yang berfungsi  menghentikan  aktivitas  radikal bebas  dan  melindungi  sel  yang  sehat  dari kerusakan.  Vitamin  E  merupakan  suatu  zat penyapu radikal bebas lipofilik dan
antioksidan paling banyak di alam. Vitamin E berada  di  dalam  lapisan fosfolipid membran
sel  dan  berfungsi  melindungi  asam  lemak jenuh ganda dan komponen membran sel lain dari oksidasi radikal bebas dengan memutuskan  rantai peroksidase  lipid dengan cara menyumbangkan satu atom hidrogen dari gugus  OH  pada  cincinnya  ke  radikal  bebas, sehingga  terbentuk  radikal  vitamin  E  yang stabil  dan  tidak  merusak  (Suhartono, et.al ., 2007).
Tujuan Penelitian 1.   Tujuan  Umum:  untuk  membuktikan bahwa  vitamin  E  dapat  menurunkan fragilitas osmotic  eritrosit mencit  yang dipapari tuak.
2.   Tujuan Khusus:
a.   Untuk mengetahui kemampuan
vitamin E dalam menurunkan fragilitas osmotik eritrosit , hemolisis  dan  krenasi  (keriput) mencit yang dipapari tuak;
b.   Untuk  mengetahui    besarnya  dosis vitamin E dapat menurunkan fragilitas osmotik eritrosit , hemolisis  dan  krenasi  (keriput) eritrosit mencit yang dipapari tuak. 3.   Hipotesa Penelitian: Peneliti melakukan Hipotesa: a)   Terdapat pengaruh pemberian vitamin  E  terhadap  penurunan fragilitas osmotik  eritrosit mencit yang dipapari tuak;
b)    Terdapat pengaruh pemberian vitamin  E  terhadap  penurunan hemolisis  eritrosit mencit  yang dipapari tuak.
Hasil penelitian ini diharapkan memberikan  informasi  ilmiah  bagi  ilmu kedokteran untuk mencegah tejadinya hemolisis  yang  disebabkan  oleh  penambahan larutan  hipotonis,  hipertonis  dalam  darah, penurunan  tekanan  permukaan  membran eritrosit,  zat/unsur  kimia  tertentu,  pemanasan dan pendinginan, rapuh karena ketuaan dalam sirkulasi darah terutama karena radikal bebas.

## METODE Tempat dan Waktu
Lokasi penelitian dilakukan di Laboratorium  Biologi  dan  Biokimia  USU Medan,  Sumatera  Utara.  Penelitian  ini dilakukan pada Bulan Mei – Juli 2017.

## Rancangan Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan rancangan  eksperimental  dengan  desain Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Mencit jantan (Mus  musculus,  L) strain  DD  Webster dewasa, sebanyak 30 ekor, dengan menggunakan  rumus  penghitungan  Frederer (Frederer,  1963)  yaitu:  (t-1)  (n-1)  ≥  15. Dimana:  t  adalah  jumlah  perlakuan  (dalam penelitian ini ada 6 kelompok perlakuan) dan n  adalah  jumlah  ulangan  perkelompok,  maka jumlah  n  yang  diharapkan  secara  teoritis adalah  5  (6-1),  sehingga  jumlah  keseluruhan hewan coba yang diperlukan dalam penelitian ini adalah 30 ekor mencit jantan dewasa yang dipilih dari hasil perbanyakan untuk keperluan  penelitian.  Mencit  ditempatkan  ke dalam kelompok secara random.

## Bahan dan Alat Penelitian Bahan Penelitian
Hewan coba yang akan digunakan dalam penelitian  ini  adalah  mencit  jantan (Mus musculus, L) strain DD Webster dewasa sehat yang berumur 8 - 11 minggu dengan berat 20- 35  gram.  Mencit  jantan  dewasa  merupakan hasil  pengembangan  hewan  yang  diperoleh dari  Fakultas  Matematika  Ilmu  Pengetahuan
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
Alam (FMIPA) Biologi Universitas Sumatera Utara Medan, sebanyak 30 ekor mencit jantan dewasa  yang  dipilih  dari  hasil  perbanyakan untuk  keperluan  penelitian.  Bahan  Kimia yang  dipergunakan  dalam  penelitian  ini adalah, antara lain: Sediaan Vitamin E murni (Merck),  NaCl  fisiologis,  NaCl  3  %,  NaCl
0,9 % larutan ureum 1,8 % dalam NaCl 0,9 %, larutan ureum 1,8 %
dalam aquades ,antikoagulans (EDTA).

## Alat-alat Penelitian
Alat  utama  yang  dipergunakan  dalam penelitian  ini,  antara  lain:  Jarum  oval (Gavage),  spuit  1  ml,  bak  bedah  dan dissecting  set, gelas  arloji,  timbangan, vertex mixer, labu  ukur,  labu  Erlen  Meyer,  buret, objek  glas,  mikroskop  cahaya,  tabung  reaksi beserta raknya.

## Air  Tuak  dan  Penghitungan  Kadar Alkohol
Air  tuak  didapat  dari  daerah  Pancurbatu dengan  cara  mengambil  air  nira  dari  pohon aren.  Ada  4  (empat)  air  tuak  yang  diambil untuk  menentukan  kadar  alkoholnya  yaitu: nira  aren  asli,  nira  ditambah  raru (Rapistrum rugosum  L), tuak  asli,  tuak  yang  siap dipasarkan,  masing-masing  sebanyak  2  liter. Kemudian dibawa ke
Laboratorium Biokimia/Kimia  Bahan  Makanan  Universitas Sumatera  Utara  untuk  ditentukan  kadar alkohol yang dikandungnya.

## Variabel Penelitian
1.   Variabel  Independen:  1)  Tuak  (alkohol 20%): 2) Vitamin E (Merck).
2.   Variabel Dependen: 1) Fragilitas osmotik eritrosit;  2)  Hemolisis  dan  krenasi (keriput).

## Pelaksanaan Penelitian dan Pengamatan Pelaksanaan Penelitian
Mencit  ditempatkan  di  dalam  kandang yang terbuat dari bahan plastik dengan ukuran 30  x  20  x  10  cm  yang  ditutup  dibagian atasnya  dengan  kawat  kasa.  Dasar  kandang dilapisi  dengan  sekam  padi  setebal  0,5  s.d  1 cm dan diganti setiap 3 hari. Cahaya ruangan
dikontrol  persis  12  jam  terang  (pukul  06.00 s.d 18.00 wib) dan 12 jam gelap (pukul 18.00 s.d  06.00  wib).  Pakan  (pelet  komersial)  dan minuman  air  leiding/aquades  disuplai  setiap hari.

## Etika Penggunaan
Penggunaan  dan  penanganan  hewan  di laboratorium  penelitian  dilakukan  dengan aturan  etika  penelitian  hewan.  Penelitian hewan  yang  diatur  dalam  Deklarasi  Helsinki untuk  memperoleh “ethical  clearance” dari komite  etika  dan  komite  ilmiah  penelitian STIKes  Imelda  Medan,  Sumatera  Utara Medan.

## Pemberian Perlakuan
Penelitian  ini  terdiri  atas  6  kelompok perlakuan,  yaitu:  1)  Kelompok  1  (K0)  = Kelompok kontrol pertama, terdiri dari 5 ekor mencit jantan dewasa tanpa perlakuan selama 30  hari;  2)  Kelompok  2  (P1)  =  Kelompok perlakuan  pertama,  terdiri  dari  5  ekor  mencit jantan dewasa yang diberi tuak (alkohol 20%) sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral  setiap hari  selama  15  hari  pertama  dan  15  hari berikutnya  pemberian  tuak  dihentikan  dan diganti  dengan  pemberian  aquades  0,5  ml secara oral; 3) Kelompok 3 (P2) = Kelompok perlakuan  kedua,  terdiri  dari  5  ekor  mencit jantan dewasa yang diberi tuak (alkohol 20%) sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral  selama 30  hari;  4)  Kelompok  4  (P3)  =  Kelompok perlakuan  ketiga,  terdiri  dari  5  ekor  mencit jantan dewasa yang diberi tuak (alkohol 20%) sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral  selama 15  hari  pertama  dan  15  hari  berikutnya  tuak dihentikan  dan  diganti  dengan  pemberian vitamin  E  sebanyak  25  mg/hari/ekor  secara oral;  5)  Kelompok  5  (P4)  =  Kelompok perlakuan keempat, terdiri dari 5 ekor mencit jantan dewasa yang diberi tuak (alkohol 20%) sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral  selama 15  hari  pertama  dan  15  hari  berukutnya pemberian  tuak  dengan  pemberian  vitamin  E sebanyak  25  mg/hari/ekor  secara  oral;  6) Kelompok  6  (P5)  =  Kelompok  perlakuan kelima,  terdiri  dari  5  ekor  mencit  jantan dewasa  yang  diberi  tuak  (alkohol  20%)
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
sebanyak  0,5  ml/hari/ekor  secara  oral  dan pemberian vitamin E sebanyak 25 mg/hari/ekor secara oral selama 30 hari.
Tabel 1. Desain Perlakuan
P5 Tuak  (alkohol  20%)  sebanyak  0,5 ml/hari/ekor  +  vitamin  E  sebanyak  25 mg, secara oral Tuak (alkohol 20%) sebanyak 0,5 ml/hari/ekor  +  vitamin  E  sebanyak  25  mg, secara oral P4 Tuak  (alkohol  20%)  sebanyak  0,5 ml/hari/ekor, secara oral Tuak (alkohol 20%) sebanyak 0,5 ml/hari/ekor,  secara  oral  +  vitamin  E sebanyak 25 mg/hari/ekor secara oral P3 Tuak  (alkohol  20%)  sebanyak  0,5 ml/hari/ekor, secara oral Vitamin E sebanyak 25 mg/hari/ekor secara oral P2 Tuak  (alkohol  20%)  sebanyak  0,5 ml/hari/ekor, secara oral Tuak (alkohol 20%) sebanyak 0,5 ml/hari/ekor, secara oral P1 Tuak  (alkohol  20%)  sebanyak  0,5 ml/hari/ekor, secara oral Aquades sebanyak 0,5 ml/hari/ekor K0 Tanpa perlakuan Tanpa perlakuan 0 6 bulan 12 bulan Prosedur Pemeriksaan dan Pengamatan Setelah  perlakuan  selama  12  bulan, masing-masing hewan percobaan dikorbankan  dengan  cara  dislokasi  leher, selanjutnya  dibedah dan  pengambilan  sampel dara, kemudian dilakukan pengamatan sebagai berikut:
1. Test    fragilitas:  Diambil    6  buah  tabung reaksi  yang  bersih  lalu  diberi  kanta penomoran  yaitu  nomor  1    sampai
6,kemudian dimaasukkan kedalam masing  -masing  tabung  reaksi  tersebut larutan  NaCl  5%  sebanyak  0.8;  0,7;  0.6; 0.5;  0.4;  dan  0.3  mldengan  memakai pipet  hisap  kap.  1  ml.3.,  lalu  aquadest ditambahkan    ke  masing-masing  tabung reaksi  4.2; 4.3; 4.4; 4.5; 4.6; dan 4.7 ml yang  menggunakan  pipet  hisap  kap.  5 ml,.sehingga  volume  larutan  dalam  tiap tabung  masing-masing  menjadi  5  ml. Selanjutnya dihomogenkan sehingga tercampur dengan baik, kemudian ditempatkan  di  rak    tabung.  kadar  NaCl dalam  tiap  tabung  dihitung.  Selanjutnya meneteteskan  darah  mencit  sebanyak  3 tetes  ke  dalam  setiap  tabung  yang menggunakan  pipet kap.  1  ml atau  pipet dropping.  Lalu  dihomogenkan  sehingga
tercampur dengan baik, tempatkan di rak tabung (jangan sampai terjadi goncangan pada tabung) ditunggu sampai 1 jam,,untuk  mengamati  pada  lapis  atas  di setiap  tabung.  Jika  ditemukan  pada tabung no. 1 lrt. Tampak 2 lapis, dimana lapis  atas  berwarna  jernih  (ini  berarti darah tidak mengalami pecah membran/tidak  hemolisis).  Selanjutnya diamati  pada  tabung  mana  yang  lapis atas  mulai  berwarna  merah  (disinilah mulai  terjadinya  pecah  membran  =  titik fragilitas  eritrosit).  Bila  pada  tabung  no. 6  terjadi  hemolisis  total  maka  ditandai warna  merah  transparan  pada  semua bagian, selanjutnya tentukan kadar fragilitas eritrosit (Dharmawan, 2002).
2.   Hemolisis dan keriput: Diambil 3 tabung reaksi  lalu  dibuat  label  A,  B,  dan  C, masing-masing  tuangi  0,5  ml  darah mencit kemudian tambahkan pada tabung  B:  3  ml  NaCl  3  %;  C  3  ml aquades,  homogenkan  hingga  tercampur rata  (perhatikan  warna  darah  sekarang) dan tabung A dibiarkan sebagai kontrol,tuangkan dari tabung A, B, dan C masing-masing  1  ml.  ke  dalam  3  buah gelas  arloji,  tempatkan  di  atas  benda
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
hitam  (gelas  arloji  mana  yang  benda hitam tadi tampak). Selanjutnya tempatkan  diatas  benda  putih  (kertas yang  ada  tulisannya),  perhatikan  gelas arloji  mana  yang  tulisannya  bisa  dibaca, masing-masing  setetes  contoh  darah diambil  dengan  lidi  dari  gelas  arloji  tadi di  atas  gelas  benda  dan  tutup  dengan gelas  cover.  Lihat  di  bawah  mikroskop dengan pembesaran 400X, lalu perhatika hasilny  (tidak  ada  eritrosit,  keriput  dan atau  terlihat  normal,  dan  gambar). Selanjutnya  darah  diambildari  tabung  B 0,3 ml  tempatkan di tabung reaksi yang baru (kosong), tambah dengan aquades 3 ml  homogenkan,    darah  diambil  dari tabung C, tempatkan pada tabung kosong 0,3  ml,  tambah  3  ml  NaCl  3%, homogenkan sehingga tercampur dengan baik,  selanjutnya  tempatkan  di  atas benda  hitam  dan  putih,  kemudian sediakan 2 tabung reaksi dengan  label D dan  E,  masing-masing  0,3  ml  darah  m lalu  tabung  D  tambahkan  3  ml  larutan ureum 1.6% dalam aquades dan tabung E ditambah  3  ml  larutan  ureum  1.6% dalam NaCl 0.9%.

## Analisis Data dan Pengujian Hipotesis
Semua data dipresentasikan dalam bentuk  rata-rata  ±  simpangan  baku  (rata-rata
± SD).  Dilakukan  uji  normalitas  dan
homogenitas  dari  hasil  penelitian  didapatkan data  dengan  distribusi  normal  dan  homogen maka  dilakukan  uji  parametrik  Anova.  Bila terdapat  perbedaan  yang  nyata  dilanjutkan dengan  uji  Post  Hoc  analisa  Benferroni  taraf 5% untuk melihat perbedaan antara kelompok kontrol  dari  masing-masing  perlakuan.  Jika distribusi  data  tidak  normal  dan  tidak homogen  maka  dilakukan  trasformasi  data. Kemudian diuji lagi normalitas dan homogenitas  data.  Apabila  masih  tidak normal  distribusinya dan data  tidak  homogen maka  dilakukan  uji  Mann  Whitney  untuk membandingkan antara 2 kelompok perlakuan (kontrol  vs  perlakuan).  Pada  kelompok  data lebih  dari  2  kelompok  maka  dilakukan  uji Friedman.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tekanan Osmotik Eritrosit (Test Fragilitas) atau Hemolisis karena Fragilitas Membran Hasil  rata-rata  persentase  darah  yang mengalami hemolisis karena pengaruh fragilitas  Membran dapat  dilihat  pada (lampiran).  Setelah  dilakukan  uji  normalitas dan  homogenitas  data  hemolisis  karena fragilitas, maka didapatkan bahwa data tidak berdistribusi  normal  meskipun  variasi  data homogen. Setelah dilakukan transformasi data, maka  data  tetap  berdistribusi  tidak  normal. Oleh sebab itu, data diuji dengan analisis non parametrik kruskal wallis, karena data bersifat independen  dan  lebih  dari  dua  perlakuan. Hasilnya  menunjujkkan  bahwa  ada  pebedaan yang  nyata  (p<0,05;)  antar  perlakuan  dalam penelitian (P0,P1,P2,P3,P4, dan P5). Sehingga  dilakukan  uji  lanjut  mann-whitney untuk  melihat  perbedaan  masing-masing perlakuan  penelitian.  Hasilnya  dapat  dilihat pada gambar 1.
Gambar  1. Tekanan osmotik  eritrosit  ( Test fragilitas) atau Hemolisis karena fragilitas Membran.
Pada  Gambar  1  di  atas,  hemolisis  yang disebabkan fragilitas membran berbeda antara satu  perlakuan  dengan  perlakuan  lain. Hemolisis  yang  paling  tinggi  terjadi  pada  P2 ( 93,33±10,33%), berbeda tidak nyata dengan P1  (66,67±27,33%),  P4  (60,00±12,65%)  dan P5  (53,33±16,33%)  tetapi  berbeda  nyata dengan P3 (33,33±10,33%) dan P0 (23,33±32,04%)  ini  terjadi  kemungkinan karena  pengaruh  tuak  yang  didalamnya terkandung  alkohol,  sehingga    menimbulkan
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
gangguan  struktur  membran  sel  eritrosit terdiri  dari  lipid  bilayer  dan  ditemukan protein  integral  yang  berfungsi  sebagai protein  channel  atau  pore  bagi  ion-ion  yang dibutuhkan  oleh  sel  eritrosit.  Seperti  yang dinyatakan  Lailannita  (2002),  minuman beralkohol  dapat  menyebabkan fragilitas osmotik eritrosit sebagian besar tersusun atas lemak.
Persentase  hemolisis  terendah  akibat konsumsi  tuak  pada  mencit  didapatkan  pada P)  (23,33±32,04%)  yang  berbeda  tidak  nyata dengan P3 (33,33±10,33%) dan P5 (53,33±16,33%), tetapi berbeda nyata dengan
P1  (66,67±27,33%),  P2  (93,33±10,33%),  dan P4  (60,00±12,65%).  Kemungkinan  hal  ini terjadi karena mencit hanya menerima asupan aquadest  selama  30  hari  (tanpa  penambahan tuak).  Meskipun  terjadi  hemolisis,  tetapi persentasenya  tidak  mengakibatkan  kelainan fisiologis dari mencit atau gangguan kesehatan  pada  mencit.  Hasil  ini  tidak berbeda  nyata  dengan  P3  atau  asupan  tuak (20%  alkohol)  selama  15  hari  pertama  dan hari  ke  16  berikutnya  diberikan  vitamin  E (25mg)  sampai  30  hari.  Keadaan  ini membuktikan  adanya  pengaruh  kuartif  atau terapi  dari  vitamin  E  pada  eritrosit  mencit sehingga  adanya    penurunan  persentase hemolisis yang terjadi yaitu dari 93,33±10,33% pada P2 menjadi
33,33±10,33% pada P3. Kemungkinan hal ini terjadi karen adanya kandungan alkohol pada tuak  dapat  ditekan  atau  terjadi  penekanan aktivitas  peroksidasi  lipid  pada  membran  sel eritrosit.  Seperti  pernyataan  Wahyuningsih (2009), bahwa vitamin E memiliki kemampuan  untuk  menghentikan  peroksidasi lipid dengan cara menyumbangkan satu atom hidrogennya  dari  gugus  OH  kepada  lipid peroksil  yang  bersifat  radikal  sehingga menjadi  vitamin  E  yang  kurang  reaktif  dan tidak  merusak.  Oleh  karena  membran  sel eritrosit  kaya  akan  lipid  yang  peka  terhadap serangan  radikal  bebas  yang  disebabkan  oleh alkohol dalam tuak, maka yang lebih berperan untuk  meminimalisir  dampak  dari  (ROS) Reactive Oxygen System adalah vitamin E.
Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Indera et.al.,
(2006), bahwa ROS dapat mengakibatkan oksidasi pada biomakromolekul
penyusun membran eritrosit  dan  begitu  juga  Suhartono et.al (2007) yang menyebutkan radikal bebas dapat mengganggu integritas sel dan dapat bereaksi dengan komponen-komponen sel, baik
komponen struktural (molekul-molekul penyusun  membran)  maupun  komponen fungsional  (protein,  enzim-enzim,  DNA) dengan  merusak  sel  pada  komponen  protein, DNA  dan  membran  sel  ( poly  unsaturated fatly  acids ),  sehingga  membran  selnya  rusak dan  menyebabkan  gangguan  pada  integritas sel.  Pemberian  tuak  yang  berlalu  lama menyebabkan peningkatan persentase hemolisis akibat fragilitas membran eritrosit.
Seperti yang terlihat pada P4 (60,00±12,65%),  dimana  tuak  diberikan selama 30 hari pada mencit dan berbeda tidak nyata dengan P5 (53,33±16,33%). Kemungkinan  karena  akumulasi  alkohol dalam  tuak  yang  terlalu  banyak  dan  umur eritrosit  yang  bertambah  sesuai  dengan lamanya  pemberian  tual  (30  hari).  Kemudian juga,  lama  pemberian  tuak  telah  melebihi siklus atau waktu paruh eritrosit dalam tubuh mencit, sehingga penggantian eritrosit terganggu karena adanya tuak yang diberikan. Seperti  hasil  penelitian  Evans  (2000),  yang menunjukkan  bahwa  umur  eritrosit  sangat berpengaruh  terhadap  daya  fragilitasnya. Dalam  uji  fragilitas  darah  di  laboratorium mulai  terjadinya  hemolisis  awal  (initial hemolisis)  ditentukan  sebagai  titik  awal fragilitas  eritrosit,  sedangkan  apabila  semua sel  eritrosit  mengalami  lisis  (total  hemolisis) ditentukan  sebagai  fragilitas  total,  ketahanan eritrosit  untuk  lisis  dapat  diukur  dengan meningkatkan  konsentrasi  larutan  NaCl. Ketahanan  sel  darah  merah  untuk  lisis  ini dipengaruhi oleh volume dari sel darah merah.

## Hemolisis karena Keriput (Krenasi)
Rata-rata data hemolisis karena pengaruh krenasi (keriput) dapat dilihat pada Lampiran 4  halaman  62  Data  hemolisis  (krenasi) merupakan  data  ordinal  (peringkat  atau
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
kategorik),  sehingga  data  dapat  langsung dianalisis  dengan  non  parametrik  kruskal Wallis  (data  independen  dan  lebih  dari  2 perlakukan) (Lampiran 4 halam 62). Hasilnya menunjukkan  bahwa  ada  perbedaan  yang nyata (p<0,05; lampiran 4 halaman 64) antara berbagai perlakukan dalam penelitian (P0, P1, P2,  P3,  P4,  dan  P5).  Sehingga  dilakukan  uji lanjut Mann-Whitney untuk melihat perbedaan
masing-masing perlakuan penelitian (Lampiran 4 halaman 65). Hasilnya dapat dilihat pada Gambar 2 di bawah ini.
Gambar 2. Hemolisis karena Keriput (Krenasi).
Rata-rata  hemolisis  karena  krenasi  pada darah Mencit Jantan Dewasa. Grafik histogram  pada  perlakuan  berbeda  yang diikuti  oleh  huruf  kecil  yang  sama  berbeda tidak  nyata  pada  taraf  uji  5%.  P0=  aquadest 30  hari;  P1=tuak  (20%)  selama  15  hari, selanjutnya  aquadest    sampai  30  hari; P3=tuak (20%) 15 hari, selanjutnya vitamin E (25mg)  sampai  30  hari;  P4=  tuak  (20%)  30 hari, vitamin E (25mg) dari hari ke 16 sampai 30  hari.  P5=  Tuak  (20%)  dan  vitamin  E selama 30 hari.
Pada  Gambar  2  di  atas,  hemolisis  yang disebabkan oleh krenasi (pengkerutan) berbeda  antara  satu  perlakuan  dengan perlakuan  lain.  Hemolisis  yang  paling  tinggi terjadi  pada  P2  (2,9±0,04),  berbeda  nyata dengan  P0  (1,9±0,00)  dan  P3  (1,7±0,06),  P4 (2,2±0,21)  dan  P5  (2,0±0,12).  Kemungkinan ini terjadi  karena pengaruh alkohol di dalam tuak  yang  dapat  menimbulkan  gangguan susunan  kimiawi  membran    dari  eritrosit mencit. Akumulasi kandungan alkohol akibat
konsumsi tuak berlebihan dapat menyebabkan tingginya tekanan (hipertonis) di dalam cairan darah sehingga dapat menyebabkan keriputnya  sel  darah  merah  mencit.  Seperti yang dinyatakan Senturk et.al., (2005), bahwa bila  eritrosit  berada  pada  medium  yang hipertonis,  maka  cairan  eritrosit  akan    keluar menuju  ke  medium  luar  eritrosit  (plasma), akibatnya  eritrosit  akan  keriput  (krenasi). Keriput  ini  dapat  dikembalikan  dengan  cara menambahkan  cairan  isotonis  ke  dalam medium  luar  eritrosit.    Hemolisis  karena krenasi  darah  yang  terkecil  didapatkan  pada perlakuan  P3  (1,7±0,06)  yang  berbeda  nyata dengan  perlakukan  lainnya  P0  (1,9±0,10),  p1 (1,9±0,00),  P2  (2,9±0,040,  P4  (1,7±0,06),
DAN  P5  (2,0±0,12).  Kemungkinan  karena pemberian  tuak  yang  hanya  15  hari  dan kemudian penambahan vitamin E selanjutnya sampai  30  hari,  dapat  menekan  efek  radikal bebas  alkohol  (kandungan  tuak)  sehingga terjadi  peroksidase  lemak.  Menurut  Juwita (2009),  penelitian  mengenai  karetenoid  dan vitamin  E  menunjukkan  bahwa  kedua  zat tersebut dapat berfungsi mencegah perolsidasi lemak.  Mekanisme  tersebut  terjadi  dengan cara  menonaktifkan  radikal  oksigen  yang timbul.
Terjadinya stres oksidatif di dalam tubuh, akan  terbentuk  radikal  bebas  berikutnya. Apabila  radikal  bebas    yang  bersifat  reaktif tidak dihentikan maka akan merusak membran  sel  eritrosit  dan  terjadi  peroksidasi lipid.  Adanya  peroksidasi  lipid  membran  sel memudahkan sel eritrosit mengalami hemolisis  yang  menyebabkan  hemoglobin terbebas, sehingga jumlah hemoglobin semakin  berkurang  (Indera et.al., 2006). Vitamin E berada di dalam lapisan fosfolopid membran  sel  dan  berfungsi  melindungi  asam lemak  jenuh  ganda  dan  komponen  membran sel  lain  dari  oksidasi  radikal  bebas  dengan memutuskan  rantai  peroksidase  lipid  dengan cara menyumbangkan satu atom hidrogen dari gugus  OH  pada  cincinnya  ke  radikal  bebas, vitamin  E  berfungsi  sebagai  pelindung terhadap  peroksidasi  lipid  di  dalam membran (Suhartono, et.al ., 2007).
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
Komposisi  molekuler  eritrosit  lebih  dari setengahnya terdiri atas air (60%) dan sisanya berbentuk  substansi  padat.  Keseluruhan  isi eritrosit  merupakan  substansi  koloid  yang homogen,  sehingga  sel  bersifat  elastis  dan lunak.  Radikal  bebas  hanya  berdampak  pada asam  lemak  terutama  pada  membran  yang kaya fosfolipid sebagai asam lemak tak jenuh dan  juga  protein  yang  dikenal  sebagai peroksidasi lipid yang menyebabkan terputusnya  rantai  asam  lemak  menjadi senyawa  yang  bersifat  toksik  terhadap  sel.
ROS  dapat  mengakibatkan  oksidasi  pada biomakromolekul
penyusun membran eritrosit (Indera et.al., 2006).

## KESIMPULAN
Pada  penelitian  ini  ditemukan  bahwa dengan pemberian tuak yang terdapat alkohol sebanyak 20% 0,5ml/hr/ekor, akan menyebabkan kecendrungan terjadinya
hemolisis  darah,  baik  melalui fragilitas osmotik  eritrosit maupun krenasi. Hal  ini disebabkan  karena  tuak  yang  dipasarkan dimasyarakat  terdapat  kandungan  kadar alkohol  20%  dapat  menyebabkan  terjadinya gangguan hematologi. Namun pada penelitian ini terbukti bahwa dengan pemberian Vitamin E  0,25mg/gBB/hr/oral  ditemukan  penurunan fragilitas dan  krenasi eritrosit.

## SARAN
Untuk  mencegah  terjdinya  peningkatan hemolisis  darah  baik  melalui fragilitas  dan krenasi  eritrosi akibat  radikal  bebas  maka perlu asupa antioksidan yang memadai dalam tubuh    dan  diharapkan  pada  peneliti selanjutnya agar menambahkan dosis pemberian  Vitamin  E  dengan  waktu  yang berbeda.
Ucapan  terima  kasih  kepada  Direktorat Kemenristekdikti  yang  telah  memberikan kesempatan  kepada  kami  untuk mendapatkan hibah  dosen  peneliti  pemula  di  tahun  2016  – 2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdollahi M, Ranjbar A, Shadnia S, Nikfar S &  Rezale  A.  (2004). Pestiscides  and Oxidative        Stress:  a  review. Med sci.monit 10(6): 141-147. Almaster, S. (2004). Prinsip Dasar Ilmu Gizi . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. Arief  S.  (2008). Radikal  Bebas .  Bagian  Ilmu Kesehatan  Anak  Surabaya.  On  line  at http://www.pediatrik.com/buletin/06224 113752-x0zu6l.pdf  [accessed 2  Februari 2008] .
Chandrasoma,  P  dan  Taylor,  C.  R.  (2005).
Ringkasan  Patologi  Anatomi .  Jakarta:
EGC.
Fleming,  M.,  S.  J.  Mihic,  dan  R.  A.  Harris. (2007). Etanol  Dasar  Farmakologi Terapi . Jakarta: EGC.
Gunawan,  S.  G.  (2008). Farmakologi  dan Terapi . Jakarta: FKUI.
Guyton  &  Hall.  (1997). Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran . Terjemahan: Setiawan Irawati, Edisi Kesembilan. Jakarta: EGC.
Hariyatmi.  (2004) .  Kemampuan  Vitamin  E Sebagai  Antioksidan  Terhadap  Radikal Bebas  Pada  Lanjut  Usia .  Jurnal  MIPA. 14 (1): 52 – 60.
Huang H., Appel, L.J., Crot, K. D., Miller, E. R., Mori, T. A. & Puddley, I. B. (2002). Effects  of  Vitamin  C  and  E  On  In  Vivo Lipid Peroxidation: Results Of Randomized Controlled Trial . Am J Clin Nutr, 76, 549-555.
Kay  I.  (2002). Pengantar  Fisiologi  Hewan . Terjemahan:  Isnaeni  W.  Semarang:
Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, UNNES. .
Laurance dan Bachrach. (1964). Azas  Umum
Uji Toksikologi dalam Petunnjuk Praktikum  Toksiokologi.  Editor  imono Agro Donatus . Yogyakarta: Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi UGM, Hal.32 . Lautan  J.  (1997). Radikal  Bebas  pada Eritrosit dan Lekosit. Kopertis Wilayah-I dpk  Laboratorium  Biokimia  Fakultas Kedokteran  Universitas  Islam  Sumatera Utara . Medan: Cermin Dunia Kedokteran (116): 49-52.
Jurnal Ilmiah Keperawatan Imelda                                                       Vol. 3, No. 2, September 2017 http://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALKEPERAWATAN e-ISSN 2597-7172, p-ISSN 2442-8108
Marianti  A  &  Wulan  C.  (2006). Petunjuk Praktikum  Fisiologi  Hewan .  Semarang: Laboratorium  Fisiologi  Hewan  Jurusan Biologi FMIPA UNNES.
Masters,  S.  B.  (2002). Farmakologi  Dasar dan  Klinik  Katzung:  Alkohol .  Jakarta: Salemba Medika.
May  J,  Qu  Z  &  Mendirat  ta  S.  (1998). Protection  and  Recycling  of  alfa- Tocopherol  in  Human  Erythrocytes  by Intra  Cellular  Ascorbic  Acid .  Arch. Biochem. Biophys . 349(2): 281-289. Pavlovic  V,  Cekic  S,  Rankovic  G  & Stoiljkovic  N.  (2005). Antioxidant  and Pro-oxidant  Effect  of  Ascocbic  Acid. Acta Medica Medianae . 44 (1): 65-69. Srivastava  A,  Srivastava  M  &  Raizada  R.
(2005). Ninenty  Day  Toxicity  And  One Generation   Reproduction Study In Rats
Exposed  To  Allethrin  Based  Liquid Mosquito Repellent . Jurnal of
Toxicological Sciences, 31 (1): 1-7. Sudjadi  dan  Rohman,  A.  (2008). Analisis Kuantitatif  Obat .  Yogyakarta:  Gadjah Mada Universitas Press. Suhartono E, Fachir H & Setiawan B. (2007) . Kapita  Sketsa  Biokimia  Stres  Oksidatif Dasar dan Penyakit . Universitas Lambung Mangkurat. Banjarmasin: Pustaka Banua. Syamsulina & Revianti. (2003). Efek Proteksi Ekstrak Buah Merah (Pandanus Conoideus Lam) Terhadap Stres
Oksidatif  Di  Eritrosit  Rattus  Norvegicus Galur  Wistar  Yang  Terpapar  Asap Rokok  Kretek. Penelitian  Eksperimental Laboratories .