## AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT  KOPI ROBUSTA TERHADAP STAPHYLOCOCCUS AUREUS DAN SALMONELLA TYPHI
Dwi Puji Rahayu 1 , Retno Sintowati 1 ,  Dodik
Nursanto 1
1 Fakultas Kedokteran, Universitas Muhammadiyah Surakarta

## ABSTRAK
Pendahuluan: Penyakit  infeksi  masih  menjadi  masalah  utama  di  Dunia,  terutama  di negara berkembang seperti Indonesia. Bakteri Gram positif dan Gram negatif yang masih menjadi penyebab infeksi tersering adalah Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi . Antibiotik dapat mencegah aktivitas bakteri pada saat terjadi infeksi namun penggunaan yang  tidak  tepat  dapat  merusak  flora  normal  dan  menyebabkan  resistensi  terhadap antibiotik tersebut. Kopi merupakan tanaman yang mempunyai kantungan senyawa kimia dengan  potensi  antibakteri,  yaitu  flavonoid  dan  alkaloid.  Kopi  robusta  mempunyai kandungan senyawa kimia lebih banyak daripada jenis kopi yang lain.
Metode: Penelitian  ini  termasuk  dalam  penelitian  eksperimental  laboratorium.  Metode yang  digunakan  adalah post-test  only  control  group  design, yaitu  dengan  memberikan fraksi etil asetat ekstrak etanol biji kopi robusta dengan konsentrasi 2.5%, 5%, 10% dan 15% terhadap pertumbuhan koloni bakteri S. aureus dan S. typhi . Hasil: Hasil  penelitian  ini  adalah  terbentuknya  zona  bening  disekitar  media  agar.  Zona bening yang terbentuk menunjukan adanya efek dari fraksi etil asetat dalam menghambat aktivitas bakteri yang disebut  sebagai zona hambat. Hasil zona hambat terbesar fraksi etil asetat dengan konsentrasi 15% untuk bakteri S. typhi adalah sebesar 8.13 mm dan bakteri S. aureus memiliki zona hambat terbesar 3.8 mm. Pembahasan: Zona hambat yang terbentuk di sekitar media agar  menunjukkan adanya aktivitas antibakteri dari fraksi etil asetat ekstrak etanol biji kopi robusta.
Simpulan: Fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  biji  kopi  robusta  mempunyai  aktivitas antibakteri.
Kata Kunci : Antibakteri, Fraksi Etil Asetat, Kopi Robusta, Zona hambat

## ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF ETHYL ACETIC FRACTION OF ROBUSTA COFFEE ON STAPHYLOCOCCUS AUREUS AND SALMONELLA TYPHI

## ABSTRACT
Introduction:  Infectious  diseases  are  still  a  major  problem  in  the  world,  especially  in developing countries like Indonesia.  Gram-positive and Gram-negative bacteria that are still the most common causes of infection are Staphylococcus aureus and Salmonella typhi.

## Penelitian Asli
Antibiotics can prevent bacterial activity during an infection, but improper use can damage normal flora and cause resistance to these antibiotics.  Coffee is a plant that has a chemical compound  sac  with  antibacterial  potential,  namely  flavonoids  and  alkaloids.    Robusta coffee contains more chemical compounds than other types of coffee.
Methods: This study was included in the experimental laboratory research.  The method used is a post-test only control group design, by giving ethyl acetate fraction of Robusta coffee  ethanol  extract  with  concentrations  of  2.5%,  5%,  10%  and  15%  on  the  growth  of bacterial colonies of S. aureus and S. typhi.
Results: The results of this study were the formation of clear zones around agar media. Clear zone formed shows the effect of ethyl acetate fraction in inhibiting bacterial activity which is called as inhibitory zone.  The highest inhibition zone yield of ethyl acetate fraction with a concentration of 15% for S. typhi bacteria was 8.13 mm and S. aureus bacteria had the largest inhibitory zone 3.8 mm.
Discussion: Inhibited zones formed around the media in order to show the antibacterial activity of the ethyl acetate fraction of Robusta coffee ethanol extract.
Conclusion:  The  ethyl  acetate  fraction  of  robusta  coffee  bean  ethanol  extract  has antibacterial activity.
Keywords: Antibacterial, Ethyl Acetate Fraction, Robusta coffee, Obstacles zone

## 1.  PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  merupakan  salah satu  masalah  kesehatan  yang  masih menempati urutan teratas di masyarakat. Salah  satu  contoh  penyakit  infeksi  yang sering terjadi dan  dijumpai yaitu demam tifoid,  yang  disebabkan  oleh Salmonella typhi bakteri  Gram  negatif.  Penyakit  ini ditularkan  melalui  perantara  air  ( water- borne ) dan makanan (food borne ). [5,8,4] Penyakit infeksi yang masih sering dijumpai selain disebabkan oleh S.typhi , juga sering disebabkan oleh
Staphylococcus aureus. S. aureus
termasuk  bakteri  Gram  positif  penyusun flora  normal  yang  biasa  terdapat  pada kulit,  saluran  pernafasan,  dan  saluran pencernaan  makanan.  Bakteri  tersebut dapat  berubah  menjadi  patogen  jika jumlahnya dalam tubuh berlebih. [10] Infeksi  yang  disebabkan  oleh bakteri  dapat  diterapi  menggunakan antibiotik atau antibakteri yang berfungsi membunuh  bakteri  penyebab  infeksi tersebut. Antibiotik atau antibakteri yang tersedia  umumnya  memiliki  spektrum yang  luas,  sehingga  efek  sampingnya mampu  merusak  flora  normal  apabila digunakan  dalam  jangka  waktu  yang panjang,  serta  menyebabkan  resistensi terhadap antibiotik tersebut. Oleh karena
itu perlu dilakukan penelitian lebih  lanjut untuk  mendapatkan  antibakteri  yang lebih baik dengan efek samping minimal. [2]
Kopi  merupakan  tanaman  yang kandungan  senyawa  kimianya  diduga mempunyai pontensi sebagai antibakteri. Kopi merupakan salah satu tanaman dari keluarga
Rubiaceae yang banyak diproduksi dan dikonsumsi oleh masyarakat Indonesia dan dunia. [3]
Biji  kopi  mengandung  senyawa kimia antioksidan yang berfungsi sebagai pengikat senyawa radikal bebas. Senyawa  polifenol  yang  dihasilkan  dari proses
ekstraksi kopi
mampu
mengurangi kadar logam dan membunuh bakteri  penyebab  penyakit  seperti S. areus dan Escherichia  coli. Aktivitas antibakteri  kopi  terhadap  bakteri  Gram positif dan Gran negatif juga disebabkan karena  adanya  kandungan  senyawa s elain trigonelline, kafein,  dan α- dicarbonyl. [7,1]
Dua  jenis  kopi  yang  sering dibudidayakan yaitu kopi arabika ( Coffea arabica ) dan kopi robusta ( C. canephora ). Kopi robusta memiliki kandungan senyawa kimia dua kali lebih banyak daripada kopi arabika. [3]
Penelitian Fraksi etil asetat biji kopi robusta  yang  dilakukan  oleh  Nugraha menunjukan bahwa kopi robusta memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap S.  aureus dan E.  coli dengan  zona  hambat maksimum  adalah  8.11  mm  pada konsentrasi 10%. [6] Penelitian  yang  dilakukan  oleh Tanauma  dengan  memberikan  ekstrak biji  kopi  robusta  ( C.  canephora )  dengan konsentrasi  10%  terhadap  pertumbuhan bakteri S. aureus dan
E. coli menghasilkan zona hambat sebesar 22,5 mm,  dengan  konsentrasi  50%  sebesar 24  mm  dan  dengan  konsentrasi  100% sebesar 27 mm. [9] Berdasarkan penelitian
sebelumnya  maka  dalam  pengujian fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  biji  kopi robusta  ini  menggunakan  konsentrasi 2.5%, 5%, 10% dan 15%.

## 2.  METODE
2.1 Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Farmakologi dan Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas  Muhammadiyah  Surakarta pada  bulan  Desember  2019  sampai Januari 2020. 2.2 Jenis  Penelitian Penelitian eksperimental laboratorium ini dilakukan dengan metode post-test  only  control  group design. Fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol biji  kopi  robusta  dengan  konsentrasi 2.5%,  5%,  10%  dan  15%  diujikan  pada koloni bakteri S. aureus dan S. typhi pada media agar dan selanjutnya diamati zona hambat pada pertumbuhan koloni bakteri tersebut.
2.3 Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  pisau,  masker, sarung tangan ( handscoon ), erlenmeyer, timbangan  analitik,  gelas  ukur,  gelas kimia,  cawan  petri,  corong  pisah, autoklaf,  pinset,  spatula,  bunsen,  pipet tetes, ose, batang pengaduk, rak tabung reaksi,  tabung  reaksi  lemari  pendingin ,
incubator , cakram ( paper disc ), mikropipet, pot , jangka sorong.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  sampel  biji  kopi
robusta,  etanol  70%,  etil  asetat,  larutan NaCl  0,9%, aquades, koloni S. typhi dan S.  aureus ,  Nutrien  agar,  kloramfenikol paper disc , tetrasiklin paper disc , alkohol, label, tissue, kertas saring.

## 2.4 Prosedur Penelitian
2.4.1 Ekstraksi
Sampel sebanyak 1.000 g diekstraksi secara maserasi menggunakan etanol 70% sampai terendam  seluruhnya.  Wadah  maserasi ditutup  dan  disimpan  selama  24  jam ditempat  yang  terlindung  dari  sinar matahari    sambil  sesekali  diaduk. Maserasi  dilakukan  selama  4x24  jam. Sampel  yang  telah  direndam  disaring, terbentuk  debris  1  dan  filtrat  1.  Proses remaserasi  dilakukan  selama  3  hari dengan  merendam  debris  1  dengan pelarut  etanol  70%.  Berselang  3  hari kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring  menghasilkan  filtrat  2  dan  debris 2.  Filtrat  1  dan  2  dicampurkan  menjadi satu  kemudian  disaring,  lalu  hasil penyaringan kemudian diuapkan dengan rotary  evaporator dan waterbath hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 166 g.
[6]

## 2.4.2 Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan dengan metode  cair-cair  menggunakan  pelarut etil  asetat.  Ekstrak  sebanyak  10  g dilarutkan dengan air sebanyak 100 ml di aduk hingga homogen dan ditambahkan pelarut  etil-asetat  sebanyak  300  ml selanjutnya dimasukkan ke dalam corong pisah dikocok hingga terpisah 2 lapisan, lapisan  atas  merupakan  fase  etil  asetat kemudian  ditampung  pada  wadah  dan diuapkan menggunakan
rotary
evaporator dan water bath . [6]
2.4.3 Sterilisasi dan Pembuatan Media
2.4.3.1 Sterilisasi Alat
Alat-alat kaca disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama  15  menit.  Pinset  dan  ose disterilkan  dengan  dipijarkan  diatas  api bunsen. [6]

## 2.4.3.2  Pembuatan  Media  Nutrient Agar
Nutrien  Agar  (NA)  sebanyak 10,08  g  ditimbang  dan  ditambahkan dengan  aquadest  sampai  360  ml  dan
dilarutkan  hingga  homogen,  kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf  pada  suhu  121°C  selama  15 menit,  dan  dibiarkan  sampai  media cukup  dingin.  Media  NA  yang  dingin kemudian  dituang  ke  dalam  12  cawan petri masing-masing sebanyak 20 ml dan dibiarkan hingga memadat. [6]

## 2.4.3.3 Pembuatan Media Agar Miring
Nutrien agar (NA) sebanyak 10 ml dituang  pada  tabung  reaksi  kemudian disumbat  dengan  kapas  steril  dan dimiringkan sekitar 45°. [6]
2.4.4 Uji Aktivitas Antibakteri
2.4.4.1 Pembuatan Larutan standar Mc Farland 0,5
Larutan H 2 SO 4 1% sebanyak 9,95
ml  dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 . 2H 2 O  1,75%  sebanyak  0,05%  ml  dalam erlenmeyer,  dikocok  sampai  terbentuk larutan  yang  keruh  sebagai  standar kekeruhan suspensi bakteri. [6]

## 2.4.4.2 Pembuatan Suspensi Bakteri
S.  aureus dan S.  typhi diambil
kurang lebih 1 ose kemudian disuspensikan  ke  dalam  tabung  yang berisi 10 ml larutan NaCl 0,9%. Suspensi tersebut kemudian dibandingkan dengan standar  kekeruhan  larutan Mc  Farland 0,5. [6]
2.4.4.3  Kontrol  Positif  dan  Kontrol

## Negatif
Kontrol
positif menggunakan kloramfenikol  dan  tetrasiklin paper  disc sedangkan kontrol negatif menggunakan aquadest. [6]

## 2.4.4.4 Pembuatan Larutan
Larutan stok 100% dibuat dengan cara  melarutkan  5  g  fraksi  etil  asetat dengan aquadest hingga 5 ml. Larutan uji fraksi  etil  asetat  2.5%,  5%,  10%  dan 15%,  dibuat  dengan  cara  mengambil masing-masing sebanyak 0,125 ml, 0,25 ml,  0,50  ml  dan  0,75  ml  untuk  setiap konsentrasi  dan  dicukupkan  dengan aquadest hingga 5 ml. [6]

## 2.4.4.5  Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi  agar  disk.  Kertas  cakram  yang digunakan  berukuran  6  mm,  digunakan
untuk tempat fraksi etil asetat yang akan diujikan.  Media  agar  dituang  masing- masing  sebanyak  20  ml  ke  dalam  18 cawan  petri  hingga  memadat  kemudian suspensi  bakteri  dioleskan  kedalam media agar tersebut. Kertas cakram diisi fraksi  etil  aesetat  dengan  berbagai konsentrasi  yang  sudah  ditentukan menggunakan  mikropipet  sebanyak  20 µL  dan  kemudian  diteteskan  ke  dalam cawan petri dengan pinset lalu diinkubasi selama 24 jam. [6]

## 2.4.4.6  Pengukuran Zona Bening
Diameter  zona  bening  diukur dalam satuan milimeter (mm) menggunakan jangka sorong. Interpretasi hasil diperoleh dari diameter zona  bening  horizontal  dijumlahkan dengan  diameter  zona  bening  vertikal dibagi dua kemudian  dikurangi diameter disk 6 mm. [6]

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN
4.  3.1 S. typhi
Gambar 1 .  Hasil uji Post Hoc Man
Whitney pada S. typhi Data hasil penelitian yang
didapatkan  setelah  dilakukan  uji Post Hoc  Man  Whitney menunjukkan  hasil yang signifikan bermakna pada
kelompok  kontrol  negatif  dibandingkan dengan  kelompok  perlakuan.  Nilai  p (<0.014) yang diperoleh mengindikasikan bahwa terdapat
aktivitas  antibakteri  pada  konsentrasi 2.5%, 5%, 10% dan 15% (nilai p (<0.05)).
Data yang didapatkan dari  kontrol positif yang dibandingkan dengan kontrol negatif  menujukkan  nilai  p  (<0.014). Kontrol positif digunakan sebagai kontrol pembanding untuk menguji potensi fraksi
etil asetat ekstrak etanol biji kopi robusta (C.  canephora )  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  typhi .  Data kontrol positif dengan perlakuan konsentrasi  2.5%,  5%,  10%  dan  15% menunjukan hasil yang signifikan bermakna  dengan  nilai  p  (<0.021).
Berdasarkan hasil tersebut dapat dikatakan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanol  biji  kopi  robusta  pada  semua konsentrasi perlakuan mempunyai aktivitas  anti  bakteri  secara  bermakna (p<0.05),  akan  tetapi  untuk  efek  potensi yang dihasilkan belum dapat dikategorikan “menyamai” potensi antibakteri  kloramfenikol  pada  kontrol positif.
Data yang diperoleh pada sesama kelompok perlakuan dengan konsentrasi yang  berbeda  menunjukkan  nilai  yang signifikan  bermakna  (p  (<0.021))  pada semua perbandingan kelompok kosentrasi,  kecuali  pada  perbandingan kelompok kosentrasi 10% dengan konsentrasi  5%  dan  konsentrasi  5% dengan konsentrasi 2.5% yang menunjukkan hasil tidak bermakna (nilai p  >0.005).  Hal  ini  menunjukkan  adanya persamaan  potensi  aktivitas  antibakteri pada konsentrasi 10%
dengan konsentrasi  5%,  dan  konsentrasi  5% dengan konsentrasi 2.5%.

## 3.2 S. aureus
Gambar 2 .  Hasil uji Post Hoc Man Whitney pada S. aureus
Data yang diperoleh pada kelompok kontrol negatif dengan
kelompok perlakuan. Menunjukkan nilai p (<0.021).  Hal  tersebut  mengindikasikan adanya  aktivitas  antibakteri  fraksi  etil asetat ekstrak etanol biji kopi robusta ( C. canephora )  pada  bakteri S.  aureus dengan konsentrasi 2.5%, 5%, 10% dan 15% (p (<0.05)). Data pada kontrol positif dengan kelompok kontrol negatif menunjukan  bahwa  nilai  p  (<0.014)., sedangkan data pada kontrol positif yang dibandingan dengan
kelompok perlakuan  konsentrasi  2.5%,  5%,  10% dan  15%  menunjukkan  hasil  yang signifikan  bermakna  (p  (<0.021)).  Hasil tersebut mengindikasikan bahwa secara statistik  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol biji  kopi  robusta  mempunyai  efek antibakteri  pada  semua  konsentrasi perlakuan, namun efek potensi antibakteri  yang  dihasilkan  belum  dapat dikatakan “menyamai” antibakteri tetrasiklin pada kontrol positif. Data yang diperoleh pada sesama kelompok perlakuan  dengan  konsentrasi  yang berbeda menunjukkan nilai yang signifikan  tidak  bermakna  (p  (>0.05)) pada  semua  perbandingan  kelompok konsentrasi. Hal tersebut mengindiksikan adanya  persamaan  potensi  aktivitas antibakteri pada semua konsentrasi.

## 3.3  Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil  rata-rata  diameter  zona hambat S. typhi dan S. aureus ditunjukan pada Gambar 3 dan 4 berikut ini.
Gambar 3. R erata Diameter Zona
Hambat  pertumbuhan koloni bakteri S.
typhi
Gambar 4. Rerata Diameter Zona Hambat pertumbuhan koloni bakteri S. aureus
Zona hambat pertumbuhan bakteri S.  typhi dan S.  aureus seperti  yang disajikan  pada  Gambar  5  dan  6 menunjukan adanya zona bening disekitar pertumbuhan koloni bakteri.
Gambar  3  dan  4  menunjukkan rerata  diameter  zona    hambat.  Pada S. typhi , fraksi etil asetat ekstrak etanol biji kopi  robusta  ( C.  canephora) pada konsentrasi 15% menghasilkan rata-rata diameter  zona  hambat  sebesar  (8.13 mm),  konsentrasi  10%  (2.33  mm),
konsentrasi 5% (1.60 mm) dan konsentrasi 2.5% adalah (0.71 mm).
Pada S.  aureus ,  fraksi  etil  asetat dengan  konsentrasi  15%  menghasilkan rata-rata diameter zona hambat sebesar (3.8  mm),  konsentrasi  10%  (2.70  mm), konsentrasi  5%    (2.61  mm)  dan konsentrasi 2.5% adalah (2.39 mm). Hal
Gambar 5. Zona hambat  pertumbuhan koloni bakteri S. typhi
Gambar 6. Zona hambat  pertumbuhan koloni bakteri S. aures
ini  membuktikan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  fraksi  etil  asetat,  maka semakin  besar  diameter  zona  hambat yang terbentuk.
Kontrol positif menunjukkan perbedaan yang nyata, karena menghasilkan  aktivitas  antibakteri  yang paling besar terhadap
bakteri dibandingkan  dengan  kontrol  negatif, maupun fraksi etil asetat. Diameter zona hambat  kloramfenikol  dan  tetrasiklin yang terbentuk, lebih besar pada bakteri gram negatif S. typhi dibandingkan gram positif S. aureus .
Senyawa  alkaloid  dan  flavonoid yang terkandung  dalam fraksi etil asetat ekstrak etanol biji kopi robusta diketahui mempunyai  potensi  sebagai  antibaketri. Mekanisme  aktivitas  biologis  senyawa flavonoid dilakukan dengan cara mengganggu  metabolisme  bakteri  yaitu dengan  mengikat  protein  dan  merusak dinding sel. [2] Alkaloid  merupakan  gugus  basa yang mengandung nitrogen, Senyawa ini apabila mengalami kontak dengan bakteri  akan  bereaksi  dengan  senyawa asam  amino  penyusun  dinding  sel  dan DNA  bakteri    penyusun  utama  sel  inti.
Perubahan  urutan  asam  amino  akan merubah  susunan  rantai  DNA  pada  inti sel yang semula memiliki susunan asam dan basa yang saling berpasangan. [5]
Berdasarkan  teori  tersebut  dan dikaitkan  dengan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa pemberian  fraksi  etil  asetat  ekstrak etanol biji kopi robusta
dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Zona hambat  yang  tidak  terbentuk  pada beberapa  kelompok  konsentrasi  fraksi etil
asetat
kemungkinan dapat
disebabkan  oleh  beberapa  faktor.  Salah satunya  yaitu  senyawa  aktif  tidak  dapat terlarut sempurna pada proses ekstraksi dan fraksinasi sehingga aktivitas antibakteri  tidak  maksimal.  Faktor  lain yang dapat mempengaruhi proses ekstraksi  diantaranya  adalah  pemilihan pelarut,  ukuran  dan  bentuk  partikel, lamanya  ekstraksi,  dan  temperatur ekstraksi.

## 5.  SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  biji kopi robusta memiliki aktivitas antibakteri terhadap S.  aureus dan S.  typhi . Semakin  tinggi  konsentrasi  fraksi  etil asetat semakin tinggi zona hambat yang terbentuk.
6.  SARAN Penelitian ini perlu disempurnakan  lagi  dengan  melakukan uji  fitokimia  secara  kuantitatif  untuk mengetahui senyawa kimia yang mempunyai peran utama sebagai
antibakteri  pada  hasil  fraksinasi  biji  kopi robusta.  Hasil  penelitian  ini  dapat digunakan sebagai bahan acuan, rujuakan dan informasi bagi
pengembangan penelitian selanjutnya.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Akhlaghi, N. The antibacterial effects of  coffee  extract,  chlorhexidine,  and fluoride against Streptococcus mutans and Lactobacillus plantarum: An  in  vitro  study .  Dent  Res  J (Isfahan), 2019;16(5):346 –353. 2.  Choesrina,  R.,  Suwendar,  Mulqi,  L., & Dieni, M. Potensi Aktivitas Antibakteri  dari  Fraksi  Etil  Asetat Daun  Jambu  Air  [Eugenia  Aqueum (Burn F.) Alston] terhadap Sthaphylococcus Aureus dan Escherichia Coli. Jurnal Ilmiah Farmasi  Farmasyifa.  2019;2(1):33- 39. 3.  Farhaty,  N.,  &  Muchtaridi. Tinjauan Kimia dan Aspek Farmakologi Senyawa Asam Klorogenat pada Biji Kopi : Review . Farmaka.
2016;14(1):214-216.
4.  Jayanti, D. T., Ariyanti, & Masruriati, E. Uji Aktivitas Antibakteri Infusa dan Sirup Daun Rambutan (Nepheliumlappaceumlinn) Terhadap  BakteriSalmonella  typhi
Secara  In  Vitro .  Jurnal  Farmasetis. 2017;6(2):71-76.
5.  Nugraha,  A.,  &  Suwendar,  H.  S. Potensi  Anti  Mikroba  dari  Rebusan Biji Kopi Robusta (Coffea canephora
L)  terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli,  dan  Jamur Candida albicans. Prosiding Farmasi. 2016;2(2):407-412.
6.  Paputungann,  W.  A.,  Lolo,  W.  A., Siampa, J . PAktivitas Antibakteri dan Analiis  KLT-BIOAUTOGRAFI  dari fraksi  biji  kopi  robusta  (Coffea canephora). Pharmacon. 2019;8(3):100-108. 7.  Patay. Antioxidant  potential,  tannin and polyphenol contents of seed and pericarp  of  three  Coffea  species.
Asian  Pacific Journal  of  Tropical Medicine.2016;9(4):366 –371.
8.  Simanjuntak, R. J., & Kurniawaty, E.
Efek  Antibakteri  Kopi  Robusta  yang Difermentasi dengan Kombucha Terhadap Salmonella typhi . J Agromedicine. 2019;6(1).
9.  Tanauma, H. A., Citraningtyas, G. & Lolo,  W.  A. Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Biji  Kopi  Robusta  (Coffea Canephora) Terhadap Bakteri Escherichia Coli. Jurnal Ilmiah
Farmasi – UNSRAT. . 2016; 5(4). 10.  Yaqin,  M.  A.,  &  Nurmilawati,  M. Pengaruh  Ekstrak  Kopi  Robusta (Coffea robusta) sebagai Penghambat Pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  Seminar
Nasional XII Pendidikan Biologi FKIP UNS(SP-018-6).2015;867-872.