## Pengembangan Sensor Antioksidan berbasis Kertas
Zonamikro dengan Imobilisasi DPPH pada Sampel Ekstrak Tanaman

## ( Development of Antioxidant Sensor based on DPPH Immobilization onto Microzone Paper for Plant Extract)

## Muhammad Fantoni, Indah Yulia Ningsih, Moch. Amrun Hidayat, Bambang Kuswandi
Fakultas Farmasi Universitas Jember Jl. Kalimantan No. 37, Jember 68121 e-mail: fantoni745@gmail.com

## Abstract
Development of a paper-based antioxidant sensor used DPPH reagent. This sensor is made using a screen-printing  method  to  create  a  5  mm  diameter  detection  zone  which  is  immobilized  with  DPPH reagents.  The  analysis  was  carried  out  in  one  step  by  immobilizing  antioxidants/samples  into  the detection  zone.  After  reduction  by  antioxidants,  DPPH  radicals  become  stable  DPPH  molecules, resulting  in  a change  in  color from  purple  to  pale  yellow. The  purple  intensity of  DPPH  was  inversely proportional  to  the  antioxidant  activity  of  the  sample,  and  was  measured  using  the  help  of  ImageJ software. The optimal conditions for using DPPH reagents at a concentration of 5 mM and the volume in each detection zone were 3 µL. Characterization of this sensor analysis was carried out on gallic acid with the response time in the 12-minute, linearity with r = 0,9895, detection limit (LOD) value 0,0349 mM GAE, the quantitation limit (LOQ) value was 0,1164 mM GAE, with precision <2% (RSD), and meets the accuracy range of 97-103%. This sensor is then validated against DPPH spectrophotometry UV-Vis by analyzing antioxidant activity from plant extracts. The results showed no significant differences for gallic  acid  equivalent  for  all  samples  obtained  from  two  methods  at  a  confidence  level  of  97-103%, indicating  that  the  method  developed  could  be  relied  upon  to  analyze  antioxidant  activity  from  real samples. Finally, the paper-based antioxidant sensor is known to be stable for 3 days when stored in the refrigerator (2- 4 °C), stable for 2 hours at room temperature (25ºC), and makes paper sensors easy to use for end user.
Keywords : DPPH assay, paper-based sensors, antioxidant activity

## Abstrak
Pengembangan  sensor  antioksidan  berbasis  kertas  digunakan  reagen  DPPH.  Sensor  ini  dibuat menggunakan  metode  cetak  sablon  untuk  membuat  zona  deteksi  melingkar  berdiameter  5  mm  yang diimobilisasikan  dengan  reagen  DPPH.  Analisis  dilakukan  dengan  mengimobilisasikan antioksidan/sampel  ke  zona  deteksi.  Setelah  reduksi oleh  antioksidan,  radikal  DPPH  menjadi  molekul DPPH stabil, menghasilkan perubahan warna dari ungu menjadi kuning pucat. Intensitas warna ungu DPPH berbanding terbalik dengan aktivitas antioksidan dari sampel, dan diukur menggunakan bantuan software  ImageJ .  Kondisi  optimal  penggunaan  reagen  DPPH  pada  konsentrasi  5  mM  dan  volume pada tiap zona deteksi sebesar 3 µL. Karakterisasi analisis sensor ini dilakukan terhadap asam galat dengan waktu respon pada menit ke-12, linieritas dengan r=0,9895, nilai batas deteksi (LOD) 0,0349 mM  GAE,  nilai  batas  kuantitasi  (LOQ)  sebesar  0,1164  mM  GAE,  dengan  presisi  <  2%  (RSD),  dan memenuhi  rentang  akurasi  97-103%.  Sensor  ini  kemudian  divalidasi  terhadap  uji  DPPH  dengan menganalisis  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  tanaman.  Hasil  penelitian  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  signifikan  untuk  asam  galat  yang  setara  untuk  semua  sampel  yang  diperoleh  dari  dua metode  pada tingkat kepercayaan  97-103%, menunjukkan  bahwa  metode  yang  dikembangkan  dapat diandalkan untuk analisis aktivitas antioksidan dari sampel nyata. Sensor antioksidan berbasis kertas diketahui  stabil  selama  3  hari  bila  disimpan  dalam  lemari  es  (2-4°C), stabil  selama  2  jam  pada  suhu ruang (25ºC), dan sensor kertas mudah digunakan untuk pengguna akhir.
Kata kunci : uji DPPH, sensor berbasis kertas, aktivitas antioksidan

## Pendahuluan
Radikal  bebas  adalah  suatu  atom  atau molekul  yang  memiliki  satu  elektron  tidak berpasangan.  Elektron  yang  tidak  berpasangan tersebut memiliki kecenderungan untuk membentuk pasangan dengan menarik elektron dari  senyawa  lain,  sehingga  terbentuk  radikal baru  yang  sangat  reaktif  [4].  Sumber  radikal bebas  dapat  berasal  dari  endogen  yang terbentuk  sebagai  sisa  proses  metabolisme protein,  karbohidrat,  dan  lemak  yang  kita konsumsi.  Radikal  bebas  dapat  pula  diperoleh luar  tubuh  ( eksogen )  yang  berasal  dari  polusi udara,  asap  kendaraan,  berbagai  bahan  kimia, makanan  yang  telah  hangus  ( carbonated )  dan sinar  ultra  violet  [12].  Radikal  bebas  sebagai penyebab dari beberapa penyakit tersebut akan merusak  sel-sel  tubuh,  sehingga  mendorong terjadinya  pertumbuhan  sel-sel  tidak  normal (kanker).
Antioksidan  adalah  molekul  yang  dapat berinteraksi  dan  menghambat  inisiasi  atau propagasi  reaksi  oksidasi  berantai  yang dihasilkan  oleh  radikal  bebas  reaktif  sebelum molekul  vital  rusak  [10].  Antioksidan  yang terdapat  pada  tanaman,  menarik  perhatian karena potensi dan efek terapi yang dimilikinya. Kandungan antioksidan pada tanaman bertindak sebagai  peredaman  radikal  ( radical scavenger ) yang  terdapat  pada  seluruh  bagian  tanaman berupa  karotenoid,  vitamin,  flavonoid,  dan  fenol [11].  Sebagai  upaya  dalam  pencarian  senyawa antioksidan  alami,  maka  perlu  dilakukan pengujian  aktivitas  antioksidan  pada  tanaman yang berkhasiat obat.
Pendekatan lain yang dikembangkan untuk menentukan aktivitas antioksidan adalah dengan  menggunakan  sensor  kimia.  Sensor  ini menarik karena penanganannya yang sederhana  dan  biaya  rendah.  Beberapa keuntungan dari sensor ini adalah pembuatannya  yang  mudah,  preparasi  sampel minimal yang diperlukan, selektivitas, sensitivitas,  reproduktifitas,  biaya  relatif  rendah, waktu  respons  yang  cepat,  dan  penyimpanan yang mudah [3].
Sejauh  ini  banyak  peneliti  yang  telah mengembangkan sensor berbasis DPPH  dalam beragam  matriks  pendukung  ( support  matrix ), diantaranya  lempeng  KLT  [8],  basis microwell plate [6],  basis  blister  [7],  dan  basis  kertas laminasi  [9]. Metode  yang  dikembangkan  pada penelitian  ini  menggunakan  kertas Whattman No.1  karena  selain  murah,  fabrikasinya  relatif sederhana  dan  mudah.  Selain  itu,  perubahan warna  dapat  dengan  mudah  dideteksi  dengan mata  telanjang  karena  media  kertas  yang digunakan  untuk  tes spot berwarna  putih, sehingga  memberikan  kontras  yang  kuat dengan tes warna, selain itu juga memiliki rasio permukaan  volume  tinggi  yang  memfasilitasi penguapan solusi lebih cepat dan menghasilkan
analit terkonsentrasi [2].
Penelitian
ini bertujuan untuk mengembangkan  sensor  antioksidan  berbasis imobilisasi  DPPH  pada  kertas  zona  mikro ( microzone paper ) yang dapat menjadi salah satu metode  alternatif  deteksi  kandungan antioksidan dari  sampel  ekstrak  tanaman  yang  diharapkan aplikasinya lebih efektif dan efisien dibandingkan  dengan  menggunakan  metode yang umum digunakan salah satunya spektrofotometri  UV-  Vis.  Pada  penelitian  ini digunakan  sampel  ekstrak  metanol  daun  jati belanda  ( Guazuma  ulmifolia ),  daun  meniran ( Phyllanthus  niruri L.),  dan  daun  teh  hijau ( Camellia  sinensis L.)  dalam  jumlah  mikro  yang diperoleh dari Materia Medika Batu.

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  antara  lain ball pipet, scanner (Canon  Lide  120  Canoscan), vortex , (Thermo  Scientific®  M16710-33  Maxi  Mix), mikropipet, neraca analitik, kertas Whattman No.1, white tip , yellow tip , stopwatch , tabung eppendorf , kuvet, spektrofotometer UV-Vis (Thermo Scientific GENESYS10S), software
ImageJ , dan seperangkat alat gelas.
Bahan  yang  digunakan  meliputi  asam  galat, DPPH,  metanol  p.a,  akuades,  serbuk  ekstrak metanol  daun  jati  belanda  ( Guazuma  ulmifolia (JB)),  daun  meniran  ( Phyllanthus  niruri L.  (M)), dan  daun  teh  hijau  ( Camellia  sinensis L.)  yang diperoleh  dari Materia Medika Batu.

## Pembuatan Ekstrak Sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah  filtrat  dari  proses  ekstraksi.  Serbuk sampel ditimbang 100 mg dan ditambahkan 10 ml metanol p.a untuk mendapatkan konsentrasi 1 %. Kemudian  sampel  di  ultrasonik  selama  ±10 menit  hingga  larut dan  disaring  dengan  kertas saring,  sehingga  didapatkan  residu  dan  filtrat. Filtrat dari sampel tersebut di sentrifuge selama ± 15  menit,  dan  filtrat  hasil sentrifuge siap digunakan  untuk  analisis  penentuan  aktivitas antioksidan.  Pada  prosedur  ini  didapatkan konsentrasi  sampel  sebesar  1  %.  Kemudian sampel dapat diencerkan kembali untuk menyesuaikan  dengan  rentang  kurva  baku  yang didapatkan  selama  proses  optimasi  konsentrasi dengan menggunakan standar asam galat.

## Pembuatan Reagen DPPH dan Standar Asam Galat
Reagen  DPPH  konsentrasi  5  mM  dibuat  dengan menimbang  19,716  mg  pada  neraca  analitik, kemudian  dilarutkan  dalam  metanol  p.a  pada labu  ukur  10  ml hingga tanda batas.
Larutan  standar  asam  galat  dibuat  6 macam  konsentrasi  dalam  metanol  p.a,  yaitu, konsentrasi 0,5  mM,  0,4  mM,  0,3  mM,  0,2  mM, 0,1  mM,  dan 0,05 mM. Kemudian di masukkan ke dalam  tabung eppendorf ,  dan  dihomogenkan
dengan menggunakan vortex .

## Fabrikasi  Sensor  Antioksidan  Berbasis Kertas
Perangkat  berbasis  kertas  dibuat menggunakan metode cetak sablon ( printing ) yang memiliki 70 area kerja melingkar dengan diameter  0,5  cm.  Untuk membuat  perangkat DPPH berbasis kertas, 3,0 μL larutan DPPH 5 mM  ditambahkan  ke  zona  deteksi.  Setelah mengering,  alat  ini  siap  digunakan  untuk analisis aktivitas antioksidan.

## Gambar  1. Desain  Sensor  Antioksidan berbasis Kertas

## Analisis  perubahan  Warna  Sensor Antioksidan berbasis kertas
Pengamatan  perubahan  warna  sensor antioksidan  berbasis  kertas  dilakukan  secara visual  dan menggunakan software  ImageJ untuk mengetahui  nilai mean  blue .  Pengambilan gambar dapat dilakukan menggunakan scanner .

## Optimasi Konsentrasi Reagen DPPH
Penentuan  konsentrasi  optimal  reagen DPPH  yang  digunakan  untuk  menentukan aktivitas antioksidan dibuat tiga macam konsentrasi  DPPH,  yaitu  2  mM,  4  mM,  dan  5 mM. Kemudian dimasukkan
Sebanyak  3  µL  ke  dalam  zona  deteksi masing-masing reagen tersebut.  Larutan  standar asam  galat   konsentrasi 0,05  mM, 0,1  mM, 0,2 mM, 0,3 mM, 0,4  mM, dan 0,5  mM di tambahkan setelah  reagen  DPPH  kering,  lalu  dilakukan perhitungan  perubahan  warna  yang  terjadi  tiap rentang  waktu  tertentu  dengan  menggunakan bantuan scanner .  Replikasi  dilakukan  sebanyak tiga  kali.  Konsentrasi  reagen  DPPH  dipilih berdasarkan warna ungu yang dihasilkan. Warna ungu  dipengaruhi  oleh  variasi  konsentrasi  asam galat yang digunakan. Konsentrasi reagen DPPH yang digunakan ialah konsentrasi yang memberikan  warna  ungu  yang  signifikan, mempunyai nilai slope dan r yang baik.

## Pembuatan Kurva Baku Asam Galat
Kurva  baku  asam  galat  dibuat  tujuh  titik zona  deteksi  dengan  tiga  kali  replikasi  tiap titiknya.  Satu titik  digunakan  untuk  blanko  tanpa penambahan  asam  galat  dan  larutan  standar asam galat dengan 6 macam konsentrasi dipipet 3  µL,  ditambahkan  dalam  setiap  area  deteksi yang  telah  berisi  reagen  DPPH.  Dari  data mean blue dibuat persamaan kurva baku menggunakan
regresi  linier  antara  konsentrasi  asam  galat  dengan waktu dalam menit.

## Uji Linieritas
Penentuan  linieritas  dilakukan  dengan  cara menguji  reagen  DPPH  pada  standar  asam  galat dengan konsentrasi 0,05 mM,  0,1  mM,  0,2  mM,  0,3 mM, 0,4 mM dan 0,5 mM. Sebagai parameter adanya hubungan  linieritas  digunakan  koefisien  korelasi  (r) antara  konsentrasi  standar  dengan  intensitas  warna. Koefisien  korelasi  dihitung  menggunakan  analisis regresi linier y = bx + a, dimana hubungan linier akan ideal bila harga r mendekati +1 atau -1.

## Uji LOD dan LOQ
Penentuan  batas  deteksi  (LOD)  dan  batas kuantitasi  (LOQ)  dilakukan  dengan  cara  menguji reagen  DPPH  pada  standar asam galat konsentrasi  0,05  mM  hingga  0,5  mM,  kemudian diukur intensitas warna dengan menentukan nilai ∆ mean  blue .  Perhitungan  LOD  dan  LOQ  dilakukan dengan  menggunakan  persamaan  regresi  yang diperoleh dari kurva baku pada linieritas [5].
Keterangan:
Q  =      LOD  (batas  deteksi)  atau  LOQ  (batas kuantitasi) k  =  3  untuk  batas  deteksi  atau  10 untuk  batas kuantitasi Sb =  simpangan baku respon analitik dari blangko Sl = arah garis linear (kepekaan  arah)  dari  kurva antara respon terhadap konsentrasi = slope (b pada persamaan garis y = a+bx)

## Uji Presisi
Presisi  dilakukan  dengan  menggunakan standar asam  galat  salah  satu  konsentrasi  yang berada di tengah rentang konsentrasi antara 0,05- 0,5  mM,  yaitu konsentrasi  0,2  mM  sebanyak  6 (enam)  kali  pengulangan,  dihitung  kedekatan pengukuran  dari  nilai  %RSD  menggunakan program  validasi  metode  analisis.  Kemudian, diukur intensitas warna pada tiap pengulangan.

## Uji Akurasi
Penentuan akurasi ditentukan dengan menghitung persen recovery dari 3 kali penambahan analit  yang  diukur  berdasarkan  pengukuran  reagen DPPH  dalam  sampel.  Pengukuran  intensitas  warna akan  didapatkan  hasil  kadar  pengukuran  alat  yang kemudian  dibagi  kadar  penambahan  standar berdasarkan persamaan % recovery . Hasil percobaan  dibandingkan  dengan  hasil  teoritis  yang dinyatakan  dengan  persen  (%)  dan  dihitung simpangan recovery < 2% (RSD)[14].

## Uji Waktu Respon
Waktu  respon  merupakan  waktu  yang dibutuhkan  standar  atau  sampel  untuk  dapat bereaksi  dengan  reagen  DPPH  sampai  terjadi perubahan warna  yang  sempurna.  Konsentrasi 0,2  mM  digunakan  untuk  menentukan  waktu respon  dan  direplikasi  tiga  kali.  Pengukuran intensitas warna dilakukan setiap rantang waktu tertentu hingga reagen DPPH beraksi sempurna  dan  telah  menunjukkan  kestabilan bahkan  penurunan  stabilitas. Penentuan  waktu respon  dengan  membuat  kurva  antara  waktu (menit)  vs  nilai mean  blue .  Waktu  respon ditentukan  dengan  cara  mengukur  intensitas warna  sensor  pada  waktu  pertama  kali  respon sensor menghasilkan sinyal yang stabil.

## Uji Waktu Pakai
Penentuan  waktu  pakai  sensor  dilakukan dengan  mengamati  sensor  dari  reagen  yang disimpan  pada  suhu  kamar  ±25°C  dan  suhu lemari  es  2-4°C.  Penentuan  waktu  pakai dilakukan  dengan  mengukur  intensitas  warna dengan  penambahan  salah  satu  konsentrasi dari  enam  macam  konsentrasi  standar  asam galat,  yaitu  dengan  konsentrasi  0,2  mM sebanyak  volume  tertentu  dari  pertama  kali disimpan. Pengukuran intensitas warna dilakukan  setiap  rentang waktu  tertentu  dalam menit  untuk  penentuan  waktu  pakai  pada  suhu kamar  25°C  dan  pengamatan  setiap  24  jam pada  suhu  lemari  es  2-4°C  sampai  diketahui sudah  tidak  layak  digunakan.  Penentuan  waktu pakai  dilakukan  berdasarkan  kurva  hubungan antara waktu dan intensitas warna.

## Analisis
Aktivitas Antioksidan Dengan

## Sensor Antioksidan Berbasis Kertas
Sampel  yang  sudah  disiapkan  diambil filtratnya  untuk  analisis  aktivitas  antioksidan, yaitu  dengan  mengimmobilisasi  3µl  sampel dalam  metanol  pada  kertas  zona  mikro  yang telah  diimmobilisasi  DPPH  sebelumnya  dan dilakukan replikasi sebanyak tiga kali. Kemudian  dilakukan  pengukuran  perubahan intensitas warna sesuai dengan waktu respon pembacaan  sensor  melalui  scanner, kemudian  hasil  di  analisis  oleh  bantuan software  ImageJ hingga  diperoleh  data mean  blue .  Dari  data  tersebut,  diperoleh persamaan  kurva  baku  menggunakan regresi linier.

## Hasil

## Optimasi Konsentrasi Reagen DPPH
Intensitas warna ungu meningkat  pada konsentrasi DPPH 5 mM dan menghasilkan kurva baku yang baik dengan perolehan nilai koefisien  korelasi  (r)  paling  baik,  yaitu 0,9895.  Sedangkan,  pada  konsentrasi lainnya  memberikan  respon  yang  kurang baik  jika  dilihat  dari  kurva  baku  yang
dihasilkan  seperti  terlihat  pada  Gambar  2.  Oleh karena  itu,  5  mM  DPPH  dianggap  sebagai  nilai optimal  untuk  memungkinkan  analisis  sensitif- respons  antioksidan.  Hasil  ini  juga  menunjukkan bahwa  kita  dapat  mengukur  aktivitas  antioksidan yang  ditangkap  radikal  DPPH  dengan  cara respon  konsentrasi  yang  digunakan.  Penentuan kondisi optimal konsentrasi DPPH juga ditentukan  dari  sensitivitas  yang  diperoleh  dari persamaan  regresi  ketiga  macam  konsentrasi. Kurva dan tabel dibawah ini merupakan hasil dari optimasi konsentrasi DPPH.
Tabel  1. Data  Optimasi  Konsentrasi  Reagen DPPH Konsentrasi DPPH R 2 Slope 2 mM 0,8939 0,9552 4 mM 0,9110 4,5016 5 mM 0,9791 26,823

## Pembuatan Kurva Baku Asam Galat
Kurva baku diperoleh seperti pada Gambar  2 dengan  melakukan  pengukuran mean blue tiap  3  menit.  Berdasarkan  kurva  baku tersebut  digunakan  ketetapan  untuk  analisis berikutnya pada sampel.
Gambar  2. Kurva  Baku  Asam  Galat  (DPPH  5 mM)

## Uji Linieritas
Pengukuran nilai mean blue tiap konsentrasi  standar  dapat  dilihat  pada  Tabel  2. Dalam  tabel  tersebut  diperoleh  persamaan regresi  linier,  yaitu  y  =  26,823x  +  25,2  dengan nilai  koefisien  korelasi  (r),  yaitu  0,9895.  Nilai  r tersebut  menunjukkan  adanya  hubungan  yang linier antara konsentrasi dengan respon.
Tabel 2. Nilai Mean Blue Untuk Daerah Linier
Kosentrasi Asam Galat Mean Blue ∆ Mean Blue SD (n=3) Blanko 195,350 - 0,396 0,05 mM 221,797 26,448  0,428 0,1 mM 222,362 27,012  0,519 0,2 mM 226,976 31,626  0,136 0,3 mM 228,840 33,490  0,371 0,4 mM 231,515 36,165  0,673 0,5 mM 233,387 38,037  0,948

## Uji LOD dan LOQ
Berdasarkan hasil pengujian didapatkan hasil  pengukuran  dengan  persamaan  y  = 26,823x  +  25,2.  Aktivitas  terendah  yang dapat  dideteksi  sebesar  0,0349  mM  GAE dan batas kuantitasi yang diperoleh sebesar 0,1164 mM GAE.

## Uji Presisi
Presisi pada sensor antioksidan berbasis  kertas  terhadap  analit  dapat digolongkan baik karena memenuhi persyaratan  RSD  <  2% [5] .  Berdasarkan perolehan persamaan regresi dapat ditentukan  nilai  RSD  tiap  sampel.  Pada Tabel  3  merupakan  hasil  analisis  serta perhitungan kadar analit dalam sampel.
Tabel 3. Hasil Pengukuran Presisi Sampel
Replik asi Mean Blanko Sampel (mM GAE) M JB TEH 1 0,263 0,260 0,464 2 0,268 0,271 0,466 3 196,723  0,273 0,261 0,462 4 0,268 0,262 0,460 5 0,261 0,265 0,448 6 0,267 0,261 0,449

## Uji Akurasi
Hasil pengujian akurasi untuk mendeteksi aktivitas antioksidan setelah dilakukan perhitungan  menggunakan  rumus  persen perolehan  didapatkan  nilai  %  recovery  dan nilai simpangan recovery (< 2%). Berdasarkan  nilai  akurasi  tersebut  diketahui bahwa  metode  sensor  antioksidan  berbasis kertas  ini  dapat  memenuhi  syarat  rentang akurasi  atau  persen  perolehan  kembali,  yaitu 97-103 % [14].
Tabel 4. Hasil Pengukuran Akurasi Sampel SAMPEL % Recovery 30 % 45 % 60 % Jati Belanda 99,602  99,928  98,571 SD 1,547 1,041 1,383 RSD 1,553 1,042 1,403 Meniran 97,990  101,089  99,115 SD 0,525 1,936 1,506 RSD 0,536 1,915 1,520 Teh Hijau  100,614  100,554  100,348 SD 0,832 1,331 0,684 RSD 0,827 1,324 0,682

## Uji Waktu Respon
Waktu  respon  DPPH  dan  standar antioksidan  pada  perangkat  berbasis kertas  ini  dilakukan  selama  3  hingga  30 menit.  Sensor  mengalami  kondisi  yang
stabil  pada  menit  ke-12  hingga  menit  ke-30. Oleh  karena  itu,  waktu  12  menit  digunakan sebagai  waktu  respon  untuk  aplikasi  sampel berikutnya.  Meskipun  waktu  reaksi  yang  dipilih dari  metode  yang  dikembangkan  mirip  dengan metode  tradisional  (spektrofotometri  UV-Vis), beberapa  sampel  dapat  dianalisis  pada  waktu yang sama.
Gambar 3. Kurva Waktu Respon

## Uji Waktu Pakai
Sensor  antioksidan  yang  disimpan  dalam gelap pada suhu kamar menunjukkan hilangnya stabilitas yang signifikan setelah 2 jam. Sensor antioksidan  yang  disimpan  di  lemari  es, ditemukan  relatif  stabil  selama  ±  3  hari.  Hasil yang  diamati  kurang  lebih  memiliki  beberapa kesamaan dengan laporan penelitian sebelumnya  [9]  yang  menunjukkan  bahwa DPPH mudah  terurai  pada  suhu  kamar,  tetapi lebih stabil pada suhu rendah.

## Analisis  Aktivitas  Antioksidan  Dengan Sensor Antioksidan Berbasis Kertas
Hasil  pengukuran  sampel  didapatkan  nilai  kadar sampel  dalam  mM  GAE  secara  berturut-turut  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  paling  besar  yaitu Meniran > Jati Belanda > Teh Hijau.
Tabel  5. Data  Aktivitas  Antioksidan  Sampel Dengan Sensor Antioksidan
Sampel Replikasi Aktivitas 1 2 3 Jati Belanda 0,331 0,262 0,330 0,307 Meniran 0,361 0,361 0,261 0,327 Teh Hijau 0,109 0,156 0,114 0,126

## Pembahasan
Dalam  metode  uji  DPPH,  analisis  aktivitas antioksidan  didasarkan  pada  penghambatan  DPPH radikal  oleh  senyawa  antioksidan.  Konsentrasi  awal DPPH  yang  optimal  dievaluasi  terlebih  dahulu  untuk menentukan  sensitivitas  pengujian.  Intensitas  warna ungu  meningkat  dengan  konsentrasi  DPPH  pada konsentrasi  5  mM  dan  menghasilkan  kurva  baku  yang
baik  dengan  perolehan  nilai  koefisien  korelasi  (r) paling baik, yaitu 0,9895.
Batas deteksi dan batas kuantitasi ditentukan dengan  mengukur  beberapa  konsentrasi  standar asam  galat  pada  konsentrasi  terkecil  yang  masih dapat  diukur,  sehingga  diketahui  batas  terkecil aktivitas  antioksidan  yang  masih  dapat  terdeteksi dalam  sampel.  Sedangkan  batas  kuantitasi ditentukan dengan mengukur beberapa konsentrasi dari standar asam galat hingga konsentrasi terkecil yang masih dapat di kuantitasi.
Menurut  penelitian  [13],  daun  meniran memiliki aktivitas antioksidan sebesar 0,0634 mM, sedangkan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  kadar daun meniran sebesar 0,327 mM GAE. Dalam [1], mengisolasi  senyawa  yang  ada  dalam  ekstrak  jati belanda serta ditemukan aktivitas antioksidan yang dibuktikan  oleh  analisis  kualitatif  (data  tidak terlampir).  Pada  sampel  teh  hijau  memperoleh kadar  antioksidan  sebesar  0,126  mM  GAE,  data tersebut  dapat  dikatakan  bahwa  sampel  teh  hijau memiliki  aktivitas  antioksidan  seperti  yang  telah dipublikasikan pada jurnal [9] memiliki kadar antara 0,100 mM hingga 0,150 mM.

## Simpulan dan Saran
Sebuah  metode  uji  DPPH  berbasis kertas  telah  dikembangkan  untuk  analisis aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan deteksi  kolorimetri  dengan scanner  desktop dan  bantuan software  ImageJ .  Kondisi optimum  operasional  sensor  antioksidan berbasis  kertas  ini  hanya  memerlukan penggunaan  volume  sampel  dan  reagen dengan  jumlah  yang  minim,  yaitu  3  µL dengan  konsentrasi  reagen  DPPH  optimal pada 5  mM.
Waktu respon yang diperoleh pada menit ke-12.  Reagen  sensor  antioksidan  berbasis kertas  ini  memiliki  nilai  batas  deteksi  (LOD) sebesar 0,0349 mM GAE dan batas kuantitasi (LOQ) sebesar 0,1164 mM GAE. Presisi yang dihasilkan  pada  sensor  antioksidan  berbasis kertas  ini  dapat  dikatakan  baik  pada  tiap sampel  karena memperoleh  nilai  RSD  <  2%. Akurasi  yang  dihasilkan  pada  sensor antioksidan berbasis kertas ini dilihat pada % recovery 97-103% dan simpangan recovery < 2%.  Keakuratan  metode  ini  sebanding dengan uji DPPH tradisional (spektrofotometri UV-Vis)  pada  interval  kepercayaan  berada diantara  rentang recovery berdasarkan analisis  5  sampel  ekstrak  tanaman  yang berbeda. Waktu pakai pada sensor antioksidan  berbasis  kertas  ini  ditemukan stabil  selama  3  hari  ketika  disimpan  pada  2- 4°C.
Sensor  antioksidan  berbasis  kertas  ini dapat  diaplikasikan  pada  sampel  ekstrak
tanaman dengan mereaksikan 3 µL larutan sampel kedalam  reagen  DPPH  3  µL  yang  kemudian diamati  perubahan  intensitas  warna  pada  waktu respon  menit  ke-12  dan  kadar  sampel  yang diperoleh  dinyatakan  dalam  GAE  ( Gallic  Acid Equivalent )

## Daftar Pustaka
[1]  Assis  RQ, Andrade  KL,  Emanoela  L,  Batista G,  Rios  ADO,  Dias  DR,  Ndiaye  EA,  dan De Souza  EC.  Characterization  of  Mutamba ( Guazuma  ulmifolia Lam.)  Fruit  Flour  and Development  of  Bread. Biocatalysis  and Agricultural Biotechnology . 2019. 101120.
[2]  Carrilho  E,  Phillips  ST,  Vella  SJ,  Martinez AW,  dan  Whitesides  GM.  Paper  Microzone Plates. Analytical Chemistry . 2009. 81(15):5990–5998.
[3]  Gomes  S  dan  Rebelo  MJF.  A  New Laccase Biosensor  for  Polyphenols  Determination. Sensors . 2003. 3:166–175.
[4]  Halliwell  B.  dan  Gutteridge  JMC. Free Radicals  in  Biology  and  Medicine .  Fifth Edition.  Oxford:  Oxford  University  Press. 2015.
[5]  Harmita.  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi Metode  Dan  Cara  Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian . 2004. 1(3):117–135.
[6]  Hidayat  MA,  Fitri  A,  dan  Kuswandi  B. Scanometry  As  Microplate  Reader  for  High Throughput  Method  Based  on  DPPH  Dry Reagent for Antioxidant Assay. Acta Pharmaceutica Sinica B . 2017. 7(3):395–400.
[7]  Hidayat  MA,  Sari  P,  dan  KuswandiB.  Simple Scanometric  Assay  Based on DPPH Immobilized  on  Pharmaceutical  Blister  for Determination of Antioxidant Capacity in  The Herbal  Extracts. Pharmaceutical  Journal . 2018. 22(3):450–459.
[8]  Huang  SS,  Deng  JS,  ChenHC,  Lin  YH,  dan Huang  GJ.  Antioxidant  Activities  of  Two Metallothionein-Like  Proteins  from  Sweet Potato  ( Ipomoea  batatas [L.]  Lam.  “Tainong 57”)  Storage  Roots  and  Their  Synthesized Peptides. Botanical Studies . 2014. 55(1):1–9.
[9]  Irivibulkovit  KS,  Ouanthavong  SN,  dan Ameenoi  YS.  Paper-Based  DPPH  Assay  for Antioxidant  Activity  Analysis. Analytical Science . 2018. 34(July):795–800.
[10]  Ismail  A,  Marjan  ZM,  dan  Foong  CW.  Total Antioxidant  Activity  and  Phenolic  Content  in Selected  Vegetables. Food  Chemistry .  2004. 87(4):581– 586.
[11]  Mandal S, Yadav S, Sunita Yadav, dan Nema RK.  Antioxidants:  a  review. Journal  of Chemical  and  Pharmaceutical  Research . 2009. 1(1):102– 104.
[12]  Sari AN. Antioksidan Alternatif Untuk Menangkal Bahaya Radikal Bebas Pada Kulit. Journal  of  Islamic  Science  and  Technology . 2015. 1(1):63–68.
[13]  Vilanova  CDDA,  Pereira  RP,  Reetz  LGB, Oliveira  L,  Farias  ILG,  Boligon  AA,  dan
Athayde  ML.  Antioxidant  Effects  of Phyllanthus  niruri Tea  on  Healthy Subjects. Asian  Pacific  Journal  of Tropical Medicine . 2014. 113–118.
[14]  Yuwono  M.  dan  IndrayantoG.  Validation  of Chromatographic Methods of Analysis. Profiles  of  Drug  Substances,  Excipients,  And Related Methodology . 2005. 32(05).