UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BINAHONG ( Anredera cordifolia ( Ten. ) Steenis ) TERHADAP ISOLAT BAKTERI Escherichia coli JAJANAN CILOK SECARA IN VITRO DENGAN METODE DIFUSI
Fadel Abima 1 , Meiskha Bahar 2 , Aulia chairani 3
1 Fakultas Kedokteran UPN Veteran Jakarta Email : delabima27@gmail.com
2 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran UPN “Veteran” Jakarta Email : meiskha27@gmail.com
3 Departemen Farmakologi, Fakultas Kedokteran UPN “Veteran” Jakarta ____________________________ ___________________________________________________________

## ABSTRAK
Diare masih menjadi masalah besar bagi kesehatan dunia terutama pada negara berkembang. Makanan dan  minuman  yang  terkontaminasi  oleh  mikroorganisme  menjadi  faktor  resiko  penyebab  diare, termasuk  bakteri Escherichia  coli ( E.  coli ).  Salah  satu  upaya  penanggulangan  yang  dapat  dilakukan adalah  pemanfaatan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  daun  binahong  ( Anredera cordifolia ( Ten. ) Steenis ).  Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  murni.  Sampel  yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstrak daun binahong dengan konsentrasi 25%, 50%, dan 75% dengan metode pengujian difusi agar ( Kirby-Bauer ) menggunakan media Mueller Hinton Agar (MHA) dua  lapis  ( base  layer dan seed  layer )  untuk  mengukur  zona  hambat  di  sekitar  plat  silinder.  Jumlah populasi pada penelitian ini adalah 24 isolat E. coli . Jumlah ulangan tiap kelompok perlakuan dihitung menggunakan rumus Federer. Hasil penelitian diuji dengan uji Kruskal-Wallis dan menunjukkan bahwa terdapat perbedaan efektivitas ekstrak daun binahong terhadap isolat bakteri E. coli (p < 0,05) serta pada analisis post hoc menggunakan uji Mann-Whitney menunjukkan perbedaan yang bermakna antara setiap konsentrasi, yaitu 25%, 50%, dan 75%. (p < 0,001). Hal ini  menunjukkan bahwa terdapat  perbedaan bermakna pada ekstrak daun binahong setiap konsentrasi.
Kata  Kunci :  Antibakteri; Anredera  cordifolia ( Ten. ) Steenis ; Escherichia  coli ; in  vitro ;  Daun Binahong; Uji Efektivitas
___________________________________________________________________________

## ABSTRACT
Diarrhea is still one of the world’s major health problem especially in developing country. Foods and beverages  contaminated  by  microorganism  become  the  risk  factor  of  diarrhea,  including Escherichia coli ( E. coli ). One of the curative effort that can be done is to utilise the secondary metabolite compounds contained  in  binahong  leaf  ( Anredera  cordifolia ( Ten. ) Steenis ).  This  study  used  true  experimental method. The sample was binahong leaf extract with concentration of 25%, 50, and 75% using diffusion method (Kirby-Bauer) on double-layered Mueller Hinton Agar (MHA)  (base layer and seed layer)  in order to measure the growth inhibition zone around the cylinder plate. The amount of population on this study  was  24  isolations  of E.  coli. The  repetition  of  each  treatment  group  was  counted  by  Federer formula.  The  result  analyzed  using  Kruskal-Wallis  test  and  showed  that  there  was  difference  on binahong leaf extract effectiveness (p < 0,05), as well as on post hoc analysis using Mann-Whitney test showed that there was significant difference at concentration of 25%,50%, and 75%. (p < 0,001). This shows that there is a significant differences in the concentration of binahong leaf extract.
Keywords :  Antibacteria; Anredera  cordifolia ( Ten, ) Steenis ; Escherichia  coli ;  Binahong  Leaf; Effectiveness Test; In Vitro
___________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Diare  masih  menjadi  masalah  besar bagi kesehatan dunia terutama pada negara berkembang.  Hal  ini  tercermin  dari  angka morbiditas  dan  mortalitas  penyakit  diare. 1
Menurut  World  Health  Organization, 2 terdapat  hampir  1,7  miliar  kasus  diare  di dunia setiap tahunnya. Data dari Riskesdas tahun 2013 menyimpulkan bahwa insidensi diare  di  Indonesia  mencapai  3,5%. Kejadian  Luar  Biasa  (KLB)  diare  juga masih  sering  terjadi.  Pada  tahun  2010 sendiri terjadi KLB diare di 33 kecamatan dengan  jumlah  penderita  4.204  orang, termasuk  diantaranya  73  orang  meninggal dunia. 3 Salah satu faktor resiko diarea adalah makanan dan minuman yang terkontaminasi oleh mikroorganisme penyebab  diare.  Kontaminasi  yang  terjadi pada bahan pangan tersebut menjadi media bagi suatu penyakit. Melalui makanan dan minuman, mikroorganisme pathogen masuk  ke  dalam  tubuh  manusia  untuk menginfeksi  maupun  mengeluarkan  toksin yang  menimbulkan  penyakit  ( food-borne diseases ). 4 Faktor - faktor yang menyebabkan  kontaminasi  ini  bervariasi, diantaranya  adalah  bahan  makanan,  suhu pemasakan, air untuk pengolahan makanan, dan  jenis  tempat  pengelolaan  makanan terutama pedagang kaki lima. 5
Salah  satu  jenis  bakteri  yang  sering mengkontaminasi bahan pangan adalah dari golongan Enterobacteriacea, yaitu Escerichia  coli . E.  coli mempunyai beberapa antigen, yaitu antigen O (polisakarida), antigen K (kapsular), antigen H (flagella). Antigen O merupakan antigen  somatik  berada  dibagian  terluar dinding sel lipopolisakarida dan terdiri dari unit berulang polisakarida. Antibodi terhadap antigen O adalah IgM. Antigen K adalah antigen polisakarida yang terletak di kapsul. 6
Saat  ini,  telah  banyak  laporan mengenai  resisten E.  coli terhadap antibiotik.  Beberapa  antibiotik  yang  telah dianggap  resisten  antara  lain  golongan  β- laktam, fosfomisin, dan golongan
kuinolon. 7 Antimicrobial Resistance Global Report  of  Surveillance tahun  2014  yang dilakukan oleh WHO menunjukkan resistensi E.  coli terhadap  antibiotik golongan  sefalosporin  generasi  ke-3  dan golongan fluorokuinolon. Resistensi antibiotik yang terjadi telah mempersempit pilihan  terapi. 8 Hal  ini  memunculkan kebutuhan mendesak untuk membuat agen anti infeksi yang baru,
Hasil penelitian menunjukkan bahwa daun  binahong  mengandung  senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, dan polifenol. 9 Flavonoid  telah  menarik  banyak  perhatian karena  studi  secara in  vitro dan in  vivo menunjukkan potensinya sebagai antioksidan  dan  pembunuh  radikal  bebas. Selain itu, flavonoid juga berfungsi sebagai anti alergi, anti karsinogenik, anti hipertensi,  anti  artritis,  dan  efek  anti mikroba. 10 Alkaloid  merupakan  salah  satu metabolit sekunder yang banyak ditemukan di alam dan mempunyai keaktifan fisiologis tertentu. 11 Senyawa  saponin  merupakan larutan  berbuih  yang  diklasifikasikan berdasarkan  struktur  aglikon  ke  dalam triterpenoid dan steroid saponin. 12 Saponin terbukti  mempunyai  aktivitas  sebagai antibakteri. 13

## METODE PENELITIAN Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  ini  merupakan penelitian  eksperimental  murni.  Peneliti akan  melakukan  uji  makroskopik  dan mikroskopik pada isolat bakteri, kemudian melakukan  uji  efektivitas  antibakteri ekstrak daun binahong ( Anredera cordifolia ( Ten. ) Steenis )  terhadap  isolat bakteri  yang  positif  terdapat Escherichia coli secara in vitro dengan metode difusi .

## Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di laboratorium mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Pembangunan Nasional “Veteran” Jakarta

## Sampel
Sampel  pada  penelitian  ini  adalah daun  binahong  yang  diperoleh  dari  kebun tanaman  obat  Balai  Penelitian  Tanaman Obat  dan  Aromatik  (BALITTRO),  Bogor. Ekstrak  daun  binahong  akan  didapatkan melalui proses maserasi

## Besar Sampel
Pada penelitian ini kelompok perlakuan  berjumlah  lima  yaitu  ekstrak daun  binahong  sebanyak  tiga  konsentrasi: 25%,  50%,  dan  75%  serta  larutan  kontrol yaitu  kontrol  negatif  akuades  steril  dan kontrol positif antibiotik kloramfenikol.
Rumus Federer:
(n-1)(t-1) ≥ 15 (n-1)(5-1) ≥ 15 4n-4 ≥ 15
4n ≥ 19
n ≥ 4,75

## Bahan Penelitian
Ekstrak  daun  binahong  ( Anredera cordifolia ( Ten. ) Steenis ),    Suspensi  isolat bakteri E. coli yang telah dibiakkan dengan media  MHA  selama  24  jam.;  Media
Mueller Hinton Agar (MHA), Akuades  steril;  Antibiotik  kloramfenikol suspensi dosis 125 mg/5 mL.;  NaCl 0,9% steril; BaCl 2 1,175% ;  H 2 SO 4 1%.

## Alat Penelitian
Rak  tabung  reaksi;  Pengaduk, Beaker  glass 50  mL  (Pyrex),  Cawan  petri (Pyrex),  Tabung  reaksi  diameter  (Pyrex), Plat silinder, Jangka sorong digital (Digital Caliper),  Pipet,  Otoklaf  (All  American), Inkubator (Memmert),
Mikroskop
(Olympus).

## Variabel Penelitian
VariabelBebas Variabel  bebas  atau independent  variable pada  penelitian  ini  adalah  ekstrak  daun
binahong  dengan  konsentrasi  25%,  50%, dan 75%.

## Variabel Terikat
Variabel  terikat  atau dependent variable pada  penelitian  ini  adalah  zona hambat Escherichia coli.

## Variabel Kontrol
Variabel kontrol pada penelitian ini adalah  akuades  steril  sebagai  kontrol negatif dan antibiotik kloramfenikol sebagai kontrol positif.

## Prosedur Penelitian
Membuat  larutan  ekstrak  daun binahong  dengan  konsentrasi  25%,  50%, dan 75% serta menyiapkan larutan kontrol negatif  dan  kontrol  positif.Setelah  itu Membuat  lapisan  dasar  MHA  (Mueller Hinton Agar) dengan cara menuangkan 20 mL MHA pada masing-masing cawan petri, lalu dibiarkan memadat. Setelah memadat, dituangkan  10  mL  campuran  suspensi  dan media  perbenihan  tersebut  ke  dalam masing-masing  cawan  petri.  Setelah  itu, pada permukaan dasar diletakkan lima plat silinder dengan jarak sedemikian rupa agar daerah pengamatan tidak saling bertumpuk. Masukkan ekstrak daun binahong konsentrasi  25%,  50%,  dan  75%  serta larutan  kontrol  negatif  dan  kontrol  positif masing-masing sebanyak 0,5 mL ke dalam masing-masing plat silinder secara aseptik. Di  bagian  bawah  cawan  petri  diberi  tanda atau  tulisan  konsentrasi  masing-masing atau  larutan  kontrol  untuk  memudahkan dalam  mengidentifikasi  hasil  zona  hambat masing-masing  konsentrasi.  Agar  MHA dibungkus  dengan aluminium  foil sampai seluruh cawan tertutup kemudian dimasukkan  ke  dalam  inkubator  untuk diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Ukur diameter zona hambat yang terbentuk dengan  menggunakan  jangka  sorong digital. Zona hambat diukur dari tepi ke tepi zona bening melewati plat silinder.

## HASIL PENELITIAN
Dari  hasil  penelitian  diperoleh bahwa, ekstrak binahong dapat menghambat pertumbuhan  isolat  bakteri  E.coli  dengan ditunjukkan  adanya  zona  bening  di  sekitar plat silinder.
Gambar 1. Aktifitas daya hambat ekstrak binahong terhadap isolat bakteri E. coli
Tabel 1. Hasil pengukuran rata-rata diameter zona hambat isolat bakteri E. Coli setiap konsentrasi dengan lima kali pengulangan
Tabel  1 menunjukan  bahwa  ekstrak daun binahong pada konsentrasi 25%, 50% dan 75% menghasilkan zona hambat. Hal ini menunjukan  bahwa  ekstrak  daun  binahong pada konsentrasi tersebut memiliki efektivitas dalam menghambat pertumbuhan isolat  bakteri E.  coli .  Zona  hambat  juga terlihat pada kontrol positif sedangkan pada kontrol negatif tidak terbentuk zona hambat. Hal  ini  menunjukan  bahwa  kontrol  negatif tidak memiliki efektivitas untuk menghambat pertumbuhan  isolat bakteri E. coli .  Rata-rata  diameter  zona  hambat  isolat bakteri E. coli yang tertinggi adalah kontrol positif  sebesar  16,86  mm,  diikuti  ekstrak daun  binahong  konsentrasi  75%  sebesar 15,41 mm. Pada penelitian ini, peningkatan konsentraasi  ekstrak  berbanding  lurus
dengan  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.

## Analisis Bivariat
Tabel 2. Uji Kruskal-Wallis kelompok perlakuan ekstrak daun binahong
Tabel 2 menunjukkan hasil statistic uji Kruskal-Wallis yaitu ekstrak daun binahong memiliki  signifikansi  p  <  0,05  yang berartiter dapat perbedaan efektivitas ekstrak  daun  binahong  sebagai  antibakteri terhadap isolat bakteri E. coli. Analisis Post Hoc Untuk mengetahui kelompok
perlakuan yang memiliki perbedaan bermakna  dilakukan  analisis post  hoc . Analisis post  hoc untuk  uji Kruskal-Wallis adalah uji Mann-Whitney.
Tabel 3. Uji analisis data Post Hoc diameter zona hambat isolat bakteri E. Coli
Tabel 3 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan  yang  bermakna  antara  tiap kelompok  konsentrasi  (25%,  50%,  75%) dan  kelompok  kontrol,  dengan  nilai signifikansi p < 0,001.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan efektivitas  ekstrak  daun  binahong  dalam menghambat pertumbuhan isolat bakteri E. coli, dibuktikan dengan terbentuknya zona hambat  di  sekitar  plat  silinder.  Analisis statistik yang digunakan untuk
Konsentrasi Rata-rata Zona Hambat (mm) 25% 11,86 50% 13,75 75% 15,41 Kontrol (+) 16,86 Kontrol (-) 0
Uji Kruskal-Wallis Sig. Ekstrak daun binahong 0.000 Konsentrasi ekstrak daun binahong Konsentrasi ekstrak daun binahong Sig. 25% 50% 0.000 75% 0.000 Kontrol (+) 0.000 Kontrol (-) 0.000 50% 75% 0.000 Kontrol (+) 0.000 Kontrol (-) 0.000 75% Kontrol (+) 0.000 Kontrol (-) 0.000 Kontrol (+) Kontrol (-) 0.000
menganalisis  efektivitas  ekstrak  daun binahong  sebagai  antibakteri  terhadap isolat  bakteri E.  coli menunjukkan signifikansi  (p  <  0,05)  yang  artinya terdapat perbedaan efektivitas ekstrak daun binahong sebagai antibakteri pada masing- masing  konsentrasi  terhadap  isolat  bakteri E.  coli. Hal  ini  dikarenakan  dengan semakin  tingginya  konsentrasi  ekstrak, maka  semakin  banyak  senyawa  bioaktif yang  terkandung  di  dalamnya.  Senyawa bioaktif  tersebut  yang  menyebabkan timbulnya zona hambat pada media kultur bakteri.  Analisis post  hoc yang  dilakukan untuk membandingkan kelompok konsentrasi  ekstrak  daun  binahong  yang memiliki  perbedaan  bermakna  terhadap zona  hambat  pada  isolat  bakteri E.  coli menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan bermakna  pada  ekstrak  daun  binahong setiap  konsentrasi  (25%,  50%,  dan  75%) dan larutan kontrol (positif dan negatif)  (p < 0,001).
Hasil uji fitokimia pada ekstrak yang digunakan pada penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak daun binahong  mengandung  senyawa  alkaloid, saponin,  tanin,  fenolik,  flavonoid,  steroid, dan  glikosida.  Senyawa-senyawa  bioaktif tersebut  menyebabkan  gangguan  pada pertumbuhan E.  coli yang  merupakan bakteri  Gram  negatif  yang  dikenal memiliki  struktur  dinding  sel  yang kompleks sebagai pertahanan diri. Membran terluar sel pada E.coli mengandung molekul protein yang disebut porin. Ketika porin mengalami denaturasi, komponen senyawa bioaktif lain akan lebih mudah  masuk  ke  dalam  sel  bakteri. Alkaloid  akan  merusak  ikatan  silang komponen penyusun peptidoglikan sehingga E.coli kehilangan  integritas dinding  sel.  Aktivitas  saponin  dan kerusakan  yang  terjadi  pada  struktur dinding sel menyebabkan lisis osmotik dan kematian  pada E.coli. Hasil  aktivitas senyawa-senyawa inilah yang menyebabkan terbentuknya zona hambat di sekitar plat silinder yang berisikan ekstrak
daun  binahong  yang  pada  dasarnya mengandung senyawa bioaktif.

## KESIMPULAN
a. Ekstrak daun binahong memiliki efektivitas  antibakteri  terhadap  isolat bakteri E.  Coli pada  konsentrasi  25%,
50%, dan 75% secara in vitro.
b. Terdapat perbedaan efektivitas antibakteri  ekstrak  daun  binahong terhadap  isolat  bakteri E.  Coli pada konsentrasi 25%, 50%, dan 75% secara in vitro.
c. Ekstrak daun binahong konsentrasi 75% adalah  konsentrasi  yang  paling  efektif sebagai  antibakteri  pada  penelitian  ini, diikuti konsentrasi 50% dan konsentrasi 25%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Adisasmito W.  Faktor risiko diare pada bayi dan balita di Indonesia; systematic review  penelitian  akademik  bidang kesehatan masyarakat. Makara. 2007;11(1).
2. World  Health  Organization  2013, Diarrhoeal  disease .  2013.  Available from  :  http://www.who.int/mediacentre /factsheets/fs330/en/.  Accessed  April 9, 2016.
3. Kementerian  Kesehatan  RI, Situasi diare di Indonesia , Jakarta : Kementerian Kesehatan RI; 2011.
4. Sari M. Uji bakteriologis dan resistensi antibiotik  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Shigella sp pada makanan gado- gado di kantin UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Available from http:
//repository.uinjkt.ac.id/dspace/bitstrea m/123456789/29523/1/Mulia%20Sari- fkik.pdf. Accessed April 9,  2015.
5. Djaja  IM.  Kontaminasi Eschericia  coli pada  makanan  dari  tiga  jenis  tempat pengelolaan makanan (TPM) di Jakarta Selatan 2003. Makara. 2008; 12(1)
6. Jawetz, Melnick, & Adelberg. In Brooks GF,  Butel  JS,  Morse  SA,  editors. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta:
EGC; 2008.
7. Noviana  H.  Pola  kepekaan  antibiotika Escherichia  coli yang  diisolasi  dari berbagai spesimen klinis. Jakarta: Jurnal Kedokteran Trisakti. 2004; 23(4).
8. Martha  D,  Achmad  S,  Tejasari, Escherichia  coli  resisten  terhadap seftriakson dan
siprofloksasin
: Prosiding Pendidikan Dokter Universitas  Islam  Bandung.  Bandung; 2015
9. Rochani  N.  Uji  aktivitas  antijamur ekstrak  daun  binahong  ( Anrederacordi folia (Tenore) Steen) terhadap Candida albicans serta  skrining  fitokimianya; 2009.  Available  from  http://eprints. ums.ac.id/5267/1/K100050305.pdf. Accessed  Desember 25, 2015.
10. Araruna  MKA,  Santos  KKA,  da  Costa JGM,  Coutinho  HDM,  Boligon  AA,
Stefanello  ST,  Athayde  ML,  Saraiva RA,  da  Rocha  JBT,  Kerntopf  MR,  de Menezes  IRA.  Phenolic  composition and in vitro activity of the Brazilian fruit tree CaryocarcoriaceumWittm ;  2012. Eur  J  of  Integrative  Medicine.  2013; 5(2):178-183.  Available  from  https:// www.sciencedirect.com/science/article/ pii/S1876382012011250. Accessed
Maret 26, 2015.
11. Emilia  I.  Isolasi  dan  identifikasi senyawa  alkaloid  dari  daun  tumbuhan sengugu ( Clerodendron serratum
Spreng ), Sainmatika. 2010; 7(2).
12. Soeksmanto A. Pengaruh ekstrak butanol  buah  tua  mahkota  dewa ( Phaleria
macrocarpa ) terhadap
jaringan  ginjal  mencit  ( Mus  musculus ), Biodiversitas. 2006; 7(3).
13. Rosyidah K, Nurmuhaimina SA, Komari  N,  Astuti  MD.  Aktivitas antibakteri  fraksi  saponin  dari  kulit batang  tumbuhan  kasturi  ( Mangifera casturi ).  Journal  of  Chemistry.  2006. 1(2).  Available  from  http:  //ejournal. uinmalang.ac.id/index.php/Kimia/articl
e/view/1674.  Accessed  December  2,
2015.