## Pharmacoscript Volume 7 No. 1 Februari 2024
AKTIVITAS ANTIBIOFILM EKSTRAK DAUN PEPAYA ( Carica papaya L.)

## TERHADAP Staphylococcus aureus
Mira Andam Dewi*, Anggi Gumilar, Wisma Sari Indah
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani *Email: miraandamdewi.91@gmail.com
Received: 23/01/2024, Revised: 16/02/2024, Accepted: 28/05/2024, Published: 29/05/2024

## ABSTRAK
Daun  pepaya  ( Carica  papaya L.)  mengandung  alkaloid,  tanin,  steroid,  flavonoid  dan  papain yang  dapat  menghambat  perlekatan  sel  dan  pertumbuhan Actinomyce s.  Tujuan  penelitian  ini untuk melihat aktivitas antibiofilm ekstrak daun pepaya terhadap Staphylococcus aureus , bakteri penyebab  infeksi  dan  resisten  terhadap  beberapa  antibiotik. Staphylococcus  aureus memiliki resistensi  antibiotik  yang  lebih  tinggi  dalam  bentuk  biofilm  dibandingkan  dalam  bentuk plankton.  Uji  turbidimetri  dilakukan  pada 96  well  plate dengan  penambahan  kristal  violet. Metode  maserasi    dilakukan  dengan  pelarut  air  steril  digunakan  untuk  mengekstraksi  pada simplisia  daun  pepaya.  Selanjutnya  dibuat  ekstrak  kental  daun  pepaya  diencerkan  sehingga diperoleh  dengan  sepuluh  konsentrasi  berbeda  dengan  interval  konsentrasi  9,76  –  5000 μg/mL.Tetrasiklin  HCl  dengan  konsentrasi  yang  sama  dengan  ekstrak  uji  digunakan  sebagai antibiotik  pembanding.  Uji  aktivitas  antibiofilm  pada Staphylococcus  aureus menunjukkan bahwa ekstrak daun pepaya memiliki aktivitas antibiofilm pada konsentrasi 625, 1250, 2500, dan 5000 μg/mL serta dapat menghambat pembentukan biofilm dengan nilai MBIC dari 625 g/mL.
Kata  kunci :  antibiofilm,  daun  pepaya  ( Carica  papaya L.),  biofilm, Staphylococcus  aureus ,

## MBIC

## ABSTRACT
Papaya  leaves  (Carica  papaya  L.)  contain  alkaloids,  tannins,  steroids,  flavonoids  and  papain which can inhibit cell attachment and growth of Actinomyces. The aim of this research was to examine  the  anti-biofilm  activity  of  papaya  leaf  extract  against  Staphylococcus  aureus,  a bacteria that causes infection and is resistant to several antibiotics. Staphylococcus aureus has higher  antibiotic  resistance  in  the  biofilm  form  than  in  the  plankton  form.  Turbidimetric  tests were carried out on 96 well plates with the addition of crystal violet. The maceration method is carried  out  with  sterile  water  as  a  solvent  used  to  extract  papaya  leaf  simplicia. Next,  a  thick extract  of  papaya  leaves  was  made  and  diluted  to  obtain  ten  different  concentrations  with  a concentration interval of 9.76  – 5000 μg/mL. Tetracycline HCl with the same concentration as the  test  extract  was  used  as  a  comparative  antibiotic.  The  antibiofilm  activity  test  on Staphylococcus  aureus  showed  that  papaya  leaf  extract  had  antibiofilm  activity  at concentrations of 625, 1250, 2500, and 5000 μg/mL and could inhibit biofilm formation with an MBIC value of 625 g/mL.
Keywords :  antibiofilm,  papaya  leaves  (Carica  papaya  L.),  biofilm,  Staphylococcus  aureus,
MBIC
Safitri.,et al./Pharmacoscript, Volume 1, No. 2, Februari 2019, 1-12
Dewi et al.;Aktivitas Antibiofilm Ekstrak Daun…..Pharmacoscript Volume 7 No. 1, Februari 2024

## PENDAHULUAN
Biofilm merupakan hasil interaksi dari masing-masing mikroorganisme dengan quorum sensing (QS) (Irie & Parsek, 2008).
Bakteri  gram  negatif  mengeluarkan  sinyal AHL  ( Acyl  Homserine  Lactones ),  sinyal peptida dihasilkan oleh bakteri gram positif, dan  jamur  menghasilkan  senyawa  farnesol atau  tirosol  yang  berperan  dalam    sistem quorum  sensing antar  sel  (Kalia,  2013); (Kim et al., 2015). Bakteri akan menghasilkan Extracellular Polymeric Substance (EPS)  sebagai  pelindung  yang kuat setelah menerima sinyal QS, setelah itu bakteri  membentuk  suatu  koloni  untuk mensintesis  biofilm  (Brock  et  al.,  2003). Antibiotik,  desinfektan,  dan  bahkan  sistem kekebalan  inang  tidak  dapat  menghentikan bakteri dalam biofilm (Oliveira et al., 2006); (Melchior & Vaarkamp, 2006).
Pada umumnya terapi antibiotik hanya akan  membunuh  sel  bakteri  planktonik, sedangkan  bakteri  yang  terdapat  dalam biofilm  akan  bertahan  dan  berkembang.
Pembentukan  biofilm  dapat  melindungi bakteri  dari  efektor  sistem  imun  inang. (Davey & Toole, 2000); (Kim et al., 2015).
Senyawa  terpen,  steroid,  karotenoid, fenolik,  furanon,  alkaloid,  peptida,  dan lakton  telah  diidentifikasi  sebagai  produk alami  dengan  potensi  anti-biofilm  (Viju  et
al.,  2013).  Banyak  senyawa  aktif  biologis dapat  ditemukan  di Carica  papaya  L. (Ashaye  &  Fasoyiro,  2014).  Menurut penelitian    (Alvita,  2015)  ekstrak  daun pepaya mengandung alkaloid, tanin, steroid, dan  flavonoid  yang  dapat  menghambat perlekatan  sel,  pertumbuhan  sel,  dan mendegradasi biofilm Pseudomonas aeruginosa. Menurut penelitian Mugita dkk., 2017,  papain  yang  terdapat  pada  daun pepaya  dapat  menghambat  pembentukan biofilm  Actinomyces  oral  (Mugita  et  al., 2017).
Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  yang  sering  menjadi  penyebab infeksi,  dan  telah  banyak  resisten  terhadap beberapa  antibiotik  (Mohammed  et  al., 2018));  ((Ko  et  al.,  2019).  Sebagai pertahanan  diri,  bakteri  membentuk  suatu lapisan  lendir  yang  disebut  dengan  biofilm. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat aktivitas antibiofilm ekstrak air daun pepaya terhadap biofilm Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah microplates 96-well , autoklaf, oven, inkubator, dan alat-alat gelas yang mendukung penelitian.
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  daun  pepaya,  etil alkohol  96%,  air  suling,  kloroform,  asam asetat  anhidrat,  H 2 SO 4 pekat,  FeCl 3 ,  HCl, aseton  P,  asam  borat,  asam  oksalat,  eter  P, pereaksi  Dragendorff,  pereaksi  Mayer, Mueller  Hinton  Agar (MHA) , dan Mueller Hinton  Broth (MHB),  larutan  besi(III) klorida, Phosphat  Buffer  Saline, kristal violet.
Jalannya Penelitian

## 1. Persiapan sampel
Daun  dicuci  dan  ditiriskan  di  bawah
air mengalir. Selanjutnya
proses pengeringan diangin-anginkan dan berlangsung  kurang  lebih  7  hari.  Blender kemudian  digunakan  untuk  menghancurkan daun  kering.  Sebanyak  5  g  sampel dimaserasi  dalam  50  ml  air  steril  dan dikocok  pada  suhu  ruang  selama  24  jam sebelum  disaring  dan  dipekatkan  dalam penangas  air  hingga  kering (Antibiofilm,  Air,
Pepaya, & Bakteri, 2016) ; (Gomashe, Sharma, &
Kasulkar,  2014) .  Ekstrak  kering  daun  pepaya dibuat  dengan  sepuluh  konsentrasi  larutan uji  yang  berbeda  dengan  interval  9,76  – 5000 µg/mL.
2. Analisis fitokimia

## 2.1 Alkaloid
Sebanyak  2  g  serbuk  simplisia dibasahi  dengan  5  mL  amonia  dan  digerus dalam  mortar.  Kloroform  sebanyak  20  mL
ditambahkan  ke  dalam  mortar  dan  digerus kuat-kuat.  Campuran  disaring,  filtrat  yang diperoleh  diteteskan  pada  kertas  saring  dan diberi  beberapa  tetes  pereaksi  Dragendorf. Reaksi positif ditunjukkan oleh pembentukan warna merah atau jingga. Sisa filtrat  diekstraksi  dua  kali  dengan  asam klorida  10%  (1:2)  dan  fraksi  asam  diambil. Fraksi  asam  dibagi  menjadi  dua  tabung masing-masing  5  mL.  Tabung  pertama ditetesi pereaksi Dragendorf, positif alkaloid bila  terbentuk  endapan  merah  bata.  Tabung kedua  ditetesi  pereaksi  Mayer  dan  reaksi positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan putih(Farnsworth, 1966).

## 2.2 Flavonoid
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak dalam tabung reaksi ditambahkan 10 mL  air  suling,  kemudian  dididihkan  selama 5 menit dan disaring. Sebanyak 5 mL filtrat ditambahkan  serbuk  magnesium  dan  1  mL asam  klorida  2N.  Campuran  dididihkan diatas  penangas  air  selama  5  menit  dan disaring  dengan  kertas  saring.  Filtrat dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lalu ditambahkan  5  mL  amil  alkohol,  kemudian dikocok  kuat.  Terbentuknya  warna  warna kuning  hingga  merah  pada  lapisan  amil alkohol  (lapisan  atas)  menunjukkan  adanya senyawa flavonoid(Farnsworth, 1966).

## 2.3 Polifenol
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak dalam tabung reaksi ditambahkan 20
mL  air  suling,  kemudian  dididihkan  selama 5 menit dan disaring. Filtrat ditambahkan 2- 3 tetes pereaksi besi (III) klorida. Terbentuknya  warna  hijau-biru  hingga hitam menunjukkan adanya senyawa polifenol(Farnsworth, 1966).

## 2.4 Kuinon
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak dalam tabung reaksi ditambahkan 20 mL  air  suling,  kemudian  dididihkan  selama 5 menit dan disaring. Filtrat ditambahkan 2- 3  tetes  kalium  hidroksida  (KOH)  5%. Terbentuknya  warna  kuning  hingga  merah menunjukkan  adanya  senyawa  kuinon (Farnsworth, 1966).
2.5 Monoterpenoid
dan

## Seskuiterpenoid
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak  digerus  dengan  20  mL  eter, kemudian  disaring.  Filtrat  diuapkan  pada cawan  penguap  hingga  kering.  Pada  residu kering  diteteskan  2-3  tetes  larutan  pereaksi anisaldehid-asam  sulfat  atau  vanilin  10% dalam  asam  sulfat  pekat.  Terbentuknya warna-warna (ungu, coklat, merah) menunjukkan adanya senyawa monoterpenoid dan seskuiterpenoid (Farnsworth, 1966).

## 2.6 Steroid dan Triterpenoid
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak  digerus  dengan  20  mL  eter, kemudian  disaring.  Filtrat  diuapkan  pada cawan  penguap  hingga  kering.  Pada  residu
kering diteteskan 2-3 tetes pereaksi Liebermann-Bouchardat. Terbentuknya warna  ungu  menunjukkan  adanya  senyawa triterpenoid dan warna hijau-biru menunjukkan adanya senyawa steroid (Farnsworth, 1966).

## 2.7 Saponin
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak dalam tabung reaksi ditambahkan 10 mL  air  suling,  kemudian  dididihkan  selama 5  menit  dan  disaring.  Filtrat  dikocok  kuat- kuat  selama  30  detik,  kemudian  diamati pembentukkan  busa  atau  buih.  Adanya senyawa  saponin  dalam  simplisia  ditandai dengan  terbentuknya  busa  setinggi  1  cm sampai 10 cm dan stabil selama 5 sampai 10 menit serta tidak hilang setelah ditambahkan 1  tetes  larutan  asam  klorida  2  N (Farnsworth, 1966).

## 2.8 Tanin
Sebanyak  1  g  serbuk  simplisia  dan ekstrak  dalam  tabung  reaksi  ditambahkan  5 mL  air  suling,  kemudian  dididihkan  selama 5  menit  dan  disaring.  Filtrat  dibagi  dalam dua  tabung  reaksi.  Tabung  reaksi  pertama dimasukkan 1 mL filtrat dan ditambahkan 5 tetes  larutan  gelatin  1%.  Terbentuknya endapan putih menunjukkan adanya senyawa  tanin.  Tabung  reaksi  kedua dimasukkan 1 mL filtrat dan ditambahkan 5 tetes pereaksi Steasny. Terbentuknya endapan berwarna merah muda
menunjukkan adanya senyawa tanin (Farnsworth, 1966).
3. Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun  Pepaya Terhadap  Biofilm Staphylococcus aureus
Pengujian  dilakukan  menggunakan metode  turbidimetri  menggunakan  kristal violet sebagai berikut:
3.1 Pembuatan suspensi bakteri Staphylococcus aureus
Bakteri  dari S.   aureus diinokulasikan ke  dalam  media  MHB  dan  diinkubasi  pada suhu  dan  waktu  yang  sesuai.  Suspensi bakteri  diencerkan  hingga  kekeruhannya sama dengan 0,5 McFarland.
3.2 Uji Ekstrak Daun Pepaya Terhadap Biofilm Staphylococcus aureus .
Pada  penelitian  ini,  dibuat  kontrol positif  sebanyak  100  L  media  MHB  steril dan  100  L  suspensi  bakteri  dan  kontrol negatif  hanya  200  L  media  MHB  steril.
Supernatan  secara  perlahan  dituang  dari sumur untuk memisahkannya dari sedimen.
Pada larutan uji, ditambahkan 100  L ekstrak daun pepaya dan 100  L media pada masing-masing  sumuran  sehingga  diperoleh 10  seri  konsentrasi  dengan  interval  9,76  – 5000  µg/mL,  kemudian  diinkubasi  pada suhu 37℃ selama 24 jam. Setiap supernatan pada sumur didekantasi untuk memisahkannya  dari  endapan.  Dengan menggunakan  agar  semi-padat,  endapan
didasar  sumur  diuji  untuk  memastikan  daya bunuh  biofilm S.  aureus .  Endapan  pada dasar  sumur  diuji  menggunakan  media MHA  untuk  mengetahui  pertumbuhan bakteri.
Endapan  dibilas  dua  kali  dengan Phosphate  Buffer  Saline (PBS).  Endapan yang  terbentuk  dipanaskan  dengan  oven pada  suhu  60°C  selama  1  jam  untuk memfiksasi endapan. Kristal violet ditambahkan  sebanyak  100  L  ke  tiap sumur  dan  didiamkan  selama  dua  menit, kemudian dibilas dengan air steril hingga air bilasan  jernih.  Setelah  cairan  di  dalam sumur  dibuang,  dilihat  ada  atau  tidaknya pembentukan biofilm pada dasar sumur. Hal ini  ditandai  oleh  adanya  lapisan  warna kristal  violet  pada  dasar  sumur  yang dibandingkan  dengan  kontrol  positif  dan kontrol negatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode  ekstraksi  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah metode maserasi.  Prinsip  maserasi  adalah  cairan penyari  akan  menembus  dinding  sel  dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung  senyawa  metabolit  sekunder. Senyawa  tersebut  akan  larut  dan  dengan adanya perbedaan konsentrasi antara larutan senyawa  di  dalam  dengan  di  luar  sel menyebabkan  larutan  keluar  hingga  terjadi
keseimbangan  konsentrasi  antara  larutan  di dalam  dengan  di  luar  sel  (K.R.Markham, 1988). Pemekatan ekstrak dilakukan  sampai kering bertujuan untuk menguapkan air dari ekstrak.  Ekstrak  kering  yang  didapatkan kemudian  dihitung  rendemennnya  dengan cara  membandingkan  antara  bobot  ekstrak kering  yang  diperoleh  dengan  simplisia yang  digunakan  dalam  proses  ekstraksi. Rendemen  ekstrak  yang  didapatkan  yaitu 14,0745%. Nilai rendemen tersebut menunjukkan  bahwa  senyawa  metabolit sekunder yang tersari dalam air cukup besar.
Penapisan  fitokimia  yang  dilakukan dimaksudkan untuk mengidentifikasi metabolit  yang  terdapat  pada  ekstrak  dan simplisia.  Penapisan  fitokimia  ekstrak  dan simplisia  daun  pepaya  mengungkapkan adanya alkaloid, flavonoid, polifenol, monoterpenoid, dan seskuiterpenoid.
Adanya  alkaloid,  flavonoid,  dan  polifenol pada  simplisia  dan  ekstrak  menunjukkan bahwa  daun  pepaya  ( Carica  papaya L) berpotensi  sebagai  antibiofilm.  Alkaloid berperan penting dalam menghambat pembentukan biofilm karena dapat menghambat  aktivitas  komunikasi  sel. Flavonoid telah terbukti menghambat ekspresi  gen  pembentuk  biofilm icaA dan icaD .  Salah  satu  faktor  penting  dalam pembentukan biofilm adalah Polysaccharide Intercellular Adhesion (PIA) yang disintesis oleh gen icaA dan icaD (Rohde et al., 2010).
Polifenol  dapat  mendenaturasi  protein bakteri.
Pada  uji  aktivitas  antibiofilm  diuji menggunakan  metode  turbidimetri  dengan pewarnaan  kristal  violet.  Sampel  yang  diuji adalah  ekstrak  kering  daun  pepaya  sebagai sampel  uji  dan  tetrasiklin  HCl  sebagai sampel  pembanding.  Menurut  penelitian sebelumnya,  ekstrak  air  daun  pepaya  yang mengandung  alkaloid,  tanin,  steroid,  dan flavonoid dapat menghambat adhesi sel, dan menghambat pembentukan biofilm Pseudomonas  aeruginosa .  Tetrasiklin  HCl dipilih sebagai pembanding karena merupakan  antibiotik  spektrum  luas  dengan cara mengganggu sintesis protein.
Ekstrak  uji  dan  pembanding  dibuat menjadi  sepuluh  konsentrasi  DMSO  yang berbeda.  Ekstrak  uji  dan  konsentrasi referensi  yang  digunakan  dalam  pengujian memiliki  rentang  konsentrasi  antara  9,76  – 5000  μg/mL.  Karena  dapat  melarutkan ekstrak  maka  dipilih  dimetil  sulfoksida (DMSO)  sebagai  pelarut  dalam  pembuatan larutan uji (Pratiwi, 2008).
Pada  kontrol  negatif  tidak  terbentuk endapan  karena  tidak  ditambahkan  suspensi bakteri.  Hasil  proses  pembentukan  biofilm dapat dilihat pada Gambar 1.

## Pharmacoscript Volume 7 No. 1 Februari 2024
Gambar  1. Pembentukan  biofilm  pada dasar sumur 96 well plate . Keterangan : a= kontrol negatif biofilm b= pembentukan biofilm oleh bakteri Staphylococcus aureus c= kontrol positif biofilm
Berdasarkan  hasil  pengujian  pada tabel  1  terjadi  penghambatan  pertumbuhan biofilm pada konsentrasi ekstrak 625, 1250, 2500,  dan  5000    μg/mL  jika  dibandingkan dengan  kontrol  positif  yang  berwarna  biru seperti  tertera  pada  gambar  2.  Konsentrasi ekstrak  daun  pepaya  berbanding  lurus dengan  kemampuannya  dalam  menghambat pembentukan biofilm Staphylococcus aureus .  Berdasarkan  hasil  pengujian  yang tertera  pada  tabel  2,  pertumbuhan  biofilm terhambat pada konsentrasi larutan pembanding 156,25 – 5000  g/mL. Gambar 2  menggambarkan  hasil  uji  ekstrak  daun pepaya dan tetrasiklin HCl dalam menghambat pertumbuhan biofilm
Staphylococcus aureus .
Gambar  2. Hasil  uji  ekstrak  daun  pepaya dan  tetrasiklin  HCl  sebagai antibiofilm Staphylococcus aureus Keterangan: A = Kontrol negatif G =156,25 µg/mL B =5000 µg/mL H = 78,12 µg/mL C = 2500 µg/mL I  = 39,06 µg/mL D = 1250 µg/mL J  = 19,53 µg/mL E = 625 µg/Ml K = 9,76 µg/mL F = 312,5 µg/mL L = Kontrol positif
Sumur berwarna ungu terlihat sebagai hasil dari pembentukan biofilm Staphylococcus  aureus pada  kontrol  positif. Pembentukan  warna  ungu  pada  biofilm Staphylococcus  aureus yang  menempel pada dasar sumuran sama dengan mekanisme pewarnaan Gram pada umumnya (Kawarai et al., 2016). Kemampuan  senyawa  menembus  biofilm yang  terbentuk,  yaitu  dapat  menembus lapisan  EPS  bakteri.  Banyak  senyawa antimikroba  tidak  dapat  menembus  biofilm. Sebagai  alternatif,  senyawa  yang  mampu mengurai  komponen  biofilm  dengan  cara menghilangkan EPS.
Dewi et al.;Aktivitas Antibiofilm Ekstrak Daun…..Pharmacoscript Volume 7 No. 1, Februari 2024
Tabel  1. Hasil  Uji  Aktivitas  Antibiofilm
Ekstrak  Daun  Pepaya  terhadap Staphylococcus aureus Konsentrasi Ekstrak  Daun Pepaya (µg/mL) Endapan Terwarnai Kristal Violet 5000 - 2500 - 1250 - 625 - 312,5 + 156,25 + 78,12 + 39,06 + 19,53 + 9,765 +
Keterangan: +   = tidak ada aktivitas biofilm
-    = ada aktivitas biofilm
Tabel 2. Hasil Pengujian Aktivitas Antibiofilm  Tetrasiklin  HCl terhadap Staphylococcus aureus Konsentrasi Tetrasiklin HCl (Pembanding) (µg/mL) Endapan Terwarnai Kristal Violet 5000 - 2500 - 1250 - 625 - 312,5 - 156,25 - 78,12 + 39,06 + 19,53 + 9,765 µg/mL.
+
Keterangan: (+) = tidak ada aktivitas antibiofilm (-)  = ada aktivitas antibiofilm
Berdasarkan  hasil  pengujian,  ekstrak daun  pepaya  memiliki  aktivitas  antibiofilm terhadap Staphylococcus aureus pada konsentrasi  625,  1250,  2500,  dan  5000
μg/mL  jika  dibandingkan  dengan  kontrol positif  dan  negatif.  Larutan  pembanding tetrasiklin HCl memiliki aktivitas antibiofilm  pada  konsentrasi  156,25;  312,5; 625; 1250; 2500; dan 5000 μg/mL. Hasil uji antibiofilm  dibandingkan  dengan  hasil  uji konfirmasi  biofilm Staphylococcus  aureus pada  media  agar  yang  ditunjukkan  pada Gambar 3 dan Tabel 3 dan 4.

## Pharmacoscript Volume 7 No. 1 Februari 2024
Gambar 3. Hasil Uji Konfirmasi Aktivitas Ekstrak Daun Pepaya dan Tetrasiklin HCL terhadap Biofilm Staphylococcus aureus pada Media Agar
Tabel  3. Hasil  Uji  Konfirmasi  Aktivitas Tetrasiklin HCl terhadap pada Media Agar
Konsentrasi Tetrasiklin HCl (Pembanding) (µg/mL) Pertumbuhan pada Media Agar 5000 - 2500 - 1250 - 625 - 312,5 - 156,25 - 78,12 + 39,06 + 19,53 + 9,765 + Keterangan: +  = ada pertumbuhan bakteri
-   = tidak ada pertumbuhan bakteri
Tidak  terdapat  pertumbuhan  mikroba pada  hasil  uji  konfirmasi  daya  bunuh terhadap Staphylococcus  aureus ,  maka dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun pepaya  pada  konsentrasi  625,  1250,  2500, dan  5000  μg/mL  memiliki  aktivitas  anti- biofilm.  Larutan  pembanding  memiliki aktivitas  pada  konsentrasi  156,25;  312,5; 625;  1250;  2500;  dan  5000  μg/mL. Konsentrasi  hambat  biofilm  minimum (MBIC) adalah konsentrasi bahan antibiofilm  terendah  yang  menghambat pembentukan  biofilm.  Dengan  nilai  MBIC sebesar  625  μg/mL  pada  ekstrak  daun
Keterangan : a = kontrol positif b = kontrol negatif c = ekstrak 5000 µg/mL   d = ekstrak 2500 µg/mL e = ekstrak 1250 µg/mL f = ekstrak 625 µg/mL g = ekstrak 312,5 µg/mL  h = ektrak 156,25 µg/mL i = ekstrak 78,12 µg/mL  j = ekstrak 39,06 µg/mL  k = ektrak 19,53 µg/mL l = ektrak 9,765 µg/mL m = tetrasiklin 5000 µg/mL n = tetrasiklin 2500 µg/mL
o = tetrasiklin 1250 µg/mL p = tetrasiklin 625 µg/mL q = tetrasiklin 312,5 µg/mL r = tetrasiklin 156,25 µg/mL
s = tetrasiklin 78,12 µg/mL t = tetrasiklin 39,06 µg/mL u = tetrasiklin 19,53 µg/mL v = tetrasiklin HCl 9,765 µg/mL
Nama Penulis.;Judul Penelitian…..Pharmacoscript Volume X No. X, Bulan Tahun Terbit
pepaya  dan  nilai  MBIC  156,25  μg/mL, dapat  menghambat  pembentukan  biofilm dan  tidak  ada  pertumbuhan  mikroba  pada hasil  uji  konfirmasi  daya  bunuh  terhadap Staphylococcus  aureus. Kandungan  enzim papain  ekstrak  dapat  mendegradasi  biofilm dengan  melemahkan  strukturnya  yaitu menghidrolisis molekul protein dan mengubahnya menjadi unit yang lebih kecil.
Tabel  4 Hasil  Uji  Konfirmasi  Aktivitas Ekstrak  Daun  Pepaya  terhadap Pembentukan Biofilm Staphylococcus aureus pada Media Agar Konsentrasi Ekstrak  Daun Pepaya (µg/mL) Pertumbuhan pada Media Agar 5000 - 2500 - 1250 - 625 - 312,5 + 156,25 + 78,12 + 39,06 + 19,53 + 9,765 + Keterangan: + = ada pertumbuhan bakteri
-  = tidak ada pertumbuhan bakteri

## KESIMPULAN
Uji aktivitas antibiofilm pada Staphylococcus aureus menunjukkan bahwa ekstrak  daun  pepaya  memiliki  aktivitas antibiofilm  pada  konsentrasi  625,  1250, 2500,  dan  5000  μg/mL  dengan  nilai  MBIC sebesar 625 g/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Alvita,  L.  R.  (2015). Aktivitas  Antibiofilm Dari  Bakteri  Escherichia  Coli  Oleh Ekstrak  Air  Daun  Singkong,  Pepaya Dan Melinjo Secara In Vitro . 1–45.
Antibiofilm,  A.,  Air,  E.,  Pepaya,  D.,  & Bakteri,  L.  (2016). The  In  Vitro Antibiofilm  Activity  of  Water  Leaf Extract of Papaya ( Carica papaya L .) against Pseudomonas aeruginosa . 2 (3),
150–163.
Ashaye,  O.,  &  Fasoyiro,  S.  (2014).
Chemical and Organoleptic Characterization  of  Pawpaw  and Guava Leathers Chemical and Organoleptic Characterization of Pawpaw and Guava Leathers . June , 5–
7.
Brock  1926-2021  (viaf)108182990,  T.  D.,
Madigan, M. T. (viaf)27221308, Martinko,  J.  M.  (viaf)24825109,  & Parker,  J.  (viaf)115234898.  (2003). Brock biology of microorganisms (10th ed.).  Upper  Saddle  River  (N.J.) : Prentice-Hall.
Davey,  M.  E.,  &  Toole,  G.  A.  O.  (2000).
Microbial  Biofilms :  from  Ecology  to
Molecular Genetics . 64 (4), 847–867.
Farnsworth,  N.  R.  (1966).  Biological  and Phytochemical  Screening  of  Plants. Journal  of  Pharmaceutical  Sciences , 55 (3), 225–276.
Gomashe,  A.  V,  Sharma,  A.  A.  and,  & Kasulkar, A. (2014). Original Research
Article Investigation of Biofilm Inhibition  Activity  and  Antibacterial Activity  of  Psidium  guajava  Plant Extracts  against  Streptococcus  mutans Causing  Dental  Plaque. International Journal  of  Current  Microbiology  and Applied Sciences , 3 (9), 335–351.
Irie,  Y.,  &  Parsek,  M.  R.  (2008). Quorum Sensing  and  Microbial  Biofilms (pp.
67–84). Kalia,  V.  C.  (2013).  Quorum  sensing inhibitors : An
overview.
Biotechnology  Advances , 31 (2),  224– 245.
Kawarai,  T.,  Narisawa,  N.,  Yoneda,  S., Tsutsumi,  Y.,  Ishikawa,  J.,  Hoshino, Y.,  &  Senpuku,  H.  (2016).  Inhibition of  Streptococcus  mutans  biofilm formation  using  extracts  from  Assam tea compared to green tea. Archives of
Oral Biology , 68 , 73–82.
Kim,  H.,  Lee,  S.,  Byun,  Y.,  &  Park,  H. (2015). virulence  via  quorum  sensing inhibition .
Ko, S. J., Kang, N. H., Kim, M. K., Park, J., Park,  E.,  Park,  G.  H.,  Kang,  T.  W., Na, D. E., Park, J. B., Yi, Y. E., Jeon,
S. H., & Park, Y. (2019).
Antibacterial and anti-biofilm activity,  and  mechanism  of  action  of pleurocidin  against  drug  resistant
Staphylococcus  aureus. Microbial Pathogenesis , 127 , 70–78. K.R.Markham. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavanoid . ITB Press.
Melchior,  M.  B.,  &  Vaarkamp,  H.  (2006).
The  Veterinary  Journal . 171 ,  398– 407.
Mohammed,  Y.  H.  E.,  Manukumar,  H.  M.,
Rakesh,  K.  P.,  Karthik,  C.  S.,  Mallu, P.,  &  Qin,  H.  L.  (2018).  Vision  for medicine: Staphylococcus aureus biofilm  war  and  unlocking  key’s  for anti-biofilm drug development. Microbial  Pathogenesis , 123 ,  339– 347.
Mugita,  N.,  Nambu,  T.,  Takahashi,  K.,
Wang,  P.  L.,  &  Komasa,  Y.  (2017). Proteases,  actinidin,  papain  and trypsin  reduce  oral  biofilm  on  the tongue  in  elderly  subjects  and  in vitro. Archives  of  Oral  Biology , 82 , 233–240.
Oliveira,  M.,  Bexiga,  R.,  Nunes,  S.  F.,
Carneiro, C., Cavaco, L. M.,
Bernardo,  F.,  &  Vilela,  C.  L.  (2006). Biofilm-forming  ability  profiling  of
Staphylococcus aureus and Staphylococcus  epidermidis  mastitis isolates . 118 , 133–140.
Rohde,  H.,  Frankenberger,  S.,  Zähringer, U.,  &  Mack,  D.  (2010).  Structure, function and contribution of
polysaccharide  intercellular  adhesin (PIA)  to  Staphylococcus  epidermidis biofilm formation and pathogenesis of biomaterial-associated infections.
European  Journal  of  Cell  Biology ,
89 (1), 103–111.
Viju,  N.,  Satheesh,  S.,  &  Vincent,  S.  G.  P.
(2013). Antibiofilm activity of coconut  (Cocos  nucifera  Linn.)  husk fibre  extract. Saudi  Journal  of
Biological Sciences , 20 (1), 85–91.