TEKNIK, 40 (2), 2019, 115-121
doi: 10.14710/teknik.v40n2.23258               Copyright © 2019, TEKNIK, p-ISSN: 0852-1697, e-ISSN: 240-9919

## Perbaikan Proses Produksi Antosianin dari Kelopak Bunga Rosella dengan Ekstraksi Berbantuan Ultrasound
Meilya Suzan Triyastuti 1 * , Mohamad Djaeni 2
1 Program Studi Teknologi Pengolahan Produk Perikanan, Politeknik Kelautan dan Perikanan Bitung, Jl. Tandurusa Kotak Pos 12/BTG, Bitung, Sulawesi Utara, Indonesia  95526
2 Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro, Jl. Prof. Soedarto, SH, Kampus UNDIP Tembalang, Semarang, Indonesia 50275

## Abstrak
Kelopak  bunga  rosella  mengandung  senyawa  bioaktif  diantaranya  Antosianin.  Kelopak  bunga  rosella mempunyai  pigmen  berwarna  ungu  yang  berpotensi  sebagai  zat  pewarna  alami  untuk  menggantikan pewarna  sintetis  Violet  GB.  Pigmen  warna  ungu  ini  berasal  dari  senyawa antosianin.  Namun  senyawa antosianin  ini  mudah  terdegradasi  pada  temperatur  diatas  70°C,  sehingga  diperlukan  metode  ekstraksi yang  tepat  pada  kondisi  optimum.  Metode  yang  digunakan  yaitu  ekstraksi  dengan  bantuan  gelombang ultrasonik (Ultrasound  Assisted Extraction) dan dioptimasi menggunakan software Design Expert. Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  kondisi  optimum  ekstraksi  pada  waktu  ekstraksi  15  menit,  rasio  sampel dan pelarut 15 gr/ml dan temperatur ekstraksi 50°C dengan kadar antosianin sebesar 206,996 ppm.
Kata kunci: Antosianin; Kelopak Bunga Rosella; Ultrasound Assisted Extraction

## Abstract
[Title:  Improvement  of  Production  Process  of  Anthocyanin  of  Roselle  Calyces  by  Using  Ultrasound Assisted  Extraction]. Roselle  calyces  contain  bioactive  compounds  including  Anthocyanin.  Roselle calyces  have  purple  pigments  that  is  potential  to  be  food  colouring  to  replace  Violet  GB  synthetic  food colouring.  This  purple  pigment  comes  from  anthocyanin  compounds.  However,  this  anthocyanin compound is easily degraded at temperatures above 70°C, so that the right extraction method at optimum conditions  is  needed.  The  method  used  is  extraction  with  the  help  of  ultrasonic  waves  (Ultrasound Assisted  Extraction)  and  optimized  using  Design  Expert  software.  The  results  shows  that  the  optimum extraction conditions at 15 minutes extraction time, the ratio of samples and solvents were 15 gr / ml and extraction temperature was 50°C with anthocyanin content 206,996 ppm.
Keywords: Anthocyanin; Roselle calyces; Ultrasound Assisted Extraction

## 1. Pendahuluan
Pewarna  makanan  atau  warna  aditif  merupakan zat  warna  yang  ditambahkan  pada  makanan,  minuman maupun  obat-obatan.  Warna  aditif  berasal  dari  bahan kimia  yang  bereaksi  dengan  zat  lain  sehingga menyebabkan  pembentukan  warna.  Tujuan  penggunaan warna  aditif  dalam  makanan  diantaranya  menstabilkan warna  karena  paparan  cahaya,  udara,  suhu  dan  kondisi
penyimpanan;  menciptakan  warna  alami  agar  makanan lebih  unik  dan  menarik  pada  bahan  pangan  yang  tidak berwarna; mempermudah konsumen untuk mengidentifikasi  produk  pangan  khususnya  obat  obatan (Boer,  2013;    Newsome dkk., 2014).  Pada  umumnya, warna sintetis sering digunakan karena harganya murah, umur simpan lama, multifungsi (Chen dkk., 2013; Vinha et  al.  2018).  Namun,  penggunaan  warna  sintetis  dapat membentuk  senyawa  beracun  yang  menyebabkan gangguan  kesehatan  maka  diperlukan  pewarna  yang food  grade .  Pewarna  alami  dari  bahan  alam  menjadi inovasi pewarna alami  yang food grade dan bermanfaat
------------------------------------------------------------------
*) Penulis Korespondensi.
E-mail: meilyalia92@gmail.com

## TEKNIK, 40 (2), 2019, 116
doi: 10.14710/teknik.v40n2.23258               Copyright © 2019, TEKNIK, p-ISSN: 0852-1697, e-ISSN: 240-9919
bagi  kesehatan  (Solymosi dkk., 2015).  Sumber  pewarna alami diperoleh dari buah dan sayuran, contohnya warna kuning  dari  lemon,  merah  muda  dari  buah  anggur,  biru dari blueberry ,  dan  merah  dari  rosella  dan  stroberi. Pewarna  alami  dari  buah  sangat  identik  dengan  warna dan aroma yang khas (Dai dan Mumper 2010); Manach dkk., 2004; Triyastuti dkk., 2017; Boer 2013). Hibiscus sabdariffa L. (Malvaceae) yang dikenal dengan rosella  merupakan  tanaman tropis dan subtropis yang  dapat  dibudidayakan  di  Indonesia,  India,  Saudi Arabia,  China,  Malaysia  (Inggrid dkk., 2017). Tanaman rosella  mempunyai  manfaat  yang  penting  dalam  bidang pangan  maupun  obat  tradisional.  Keloak  rosella  kering maupun  segar  digunakan  sebagai  bahan colouring dan flavouring pada  rum  (Piyarat,  Walaisiri,  &  Pornpen, 2014;  Cissé dkk., 2012).  Farmakologi  dari  kelopak bunga rosella yaitu asam organik, antosianin, polisakarida dan flavonoid (Hussein dkk., 2010). Pigmen kelopak rosella memiliki 3 isolasi antosianin diantaranya delphinidin-3-sambubioside  (hibiscin),  delphinidin-3- glucoside dan cyanidin-3-glucoside  (chrysanthenin) (Eiman dkk., 2014)  yang  ditunjukkan  pada    Gambar  1. Di  Eropa,  antosianin  telah  diklasifikasikan  sebagai pewarna  alami  dengan  kode  E163  (Lee dkk., 2005). Antosianin merupakan kelompok senyawa fenolik alami yang  menghasilkan  warna  merah  cerah,  biru,  dan  ungu pada  buah,  sayur  dan  bunga.  Pigmen  antosianin mempunyai  warna  yang  menarik,  tidak  berbahaya  dan bermafaat  bagi  kesehatan  (Castañeda-Ovando dkk., 2009).  Dengan  demikian,  rosella  berpotensi  sebagai pewarna alami makanan yang baik bagi kesehatan.
Antosianin mudah terdegradasi pada suhu tinggi. Diperlukan  metode  ekstraksi  yang  efektif  dan  effisien untuk  meningkatkan  kandungan  antosianin Hibiscus Sabdariffa. Metode nonconventional lebih  efisien  dan proses  yang  cepat  dibandingkan  dengan  metode ekstraksi  konvensional.  Teknik Ultrasound-Assisted Extraction (UAE)  merupakan  salah  satu  metode nonconventional dalam pengolahan pangan yang efektif, non-thermal atau low temperature dan cepat dibandingkan Microwave-assisted  extraction  (MAE), Pulsed  electric  field  (PEF)  extraction,  Supercritical fluid  extraction  (SPE),  Enzyme-assisted  extraction (EAE) .  Namun  kekurangan  PEF  dan  SPE  adalah  harga instrumentasi  yang  tinggi,  EAE  adalah  harga  enzim yang  mahal  dan  MAE  adalah  senyawa  bioaktif  mudah terdegradasi.  UAE  merupakan  metode  ekstraksi  yang tepat  untuk  menghasilkan  kandungan  senyawa  bioaktif yang  tinggi  dengan  waktu  ekstraksi  yang  lebih  pendek (Maran,  2017).  Maran  (2017)  menghasilkan  kandungan total  antosianin  sebesar  10,26  (mg/  100  g)  dari  buah Nephelium  Lappaceum L.  menggunakan  UAE  dan optimasi central  composite  face  centered  response surface  design .  Yield  total  antosianin  dan  phenolic dengan  optimasi  metode  UAE  lebih  tinggi  daripada
menggunakan  metode Conventional  Solvent  Extraction (CSE)  (He dkk., 2016). Pengaruh kavitasi dalam pelarut pada  UAE  menghasilkan  gerakan  molekul  yang  lebih cepat  dan  penetrasi  pelarut  yang  baik  ke  dalam  bahan ekstraksi (Corbin dkk., 2015). Fenomena ini menghasilkan  percepatan  pelepasan  senyawa  yang diinginkan  (Chavan,  Avhad,  &  Rathod,  2015).  Oleh karena  itu,  UAE  merupakan  metode  ekstraksi  yang efektif  dimanfaatkan  pada  ekstraksi  senyawa  bioaktif dari  sumber  alami  untuk  diaplikasikan  pada  bidang pangan (Corbin dkk., 2015).
Optimasi  kondisi  ekstraksi  sangat  penting  untuk menghasilkan  kadar  antosianin  yang  tinggi. Respon
Surface
Methodelogy (RSM) merupakan alat matematika  dan  statistik  yang  telah  banyak  digunakan untuk  menyelidiki  optimasi  variabel  eksperimental dalam  berbagai  proses  (Bezerra dkk., 2008).  Tujuan penelitian  ini,  mendapatkan  kadar  antosianin  optimum dengan memprediksi kondisi optimum UAE, berdasarkan  waktu  ekstraksi,  temperature  ekstraksi  dan rasio  bahan  dan  pelarut  menggunakan Box  Bohnken Design .

## 2. Bahan dan Metode Bahan
Kelopak  rosella  ungu  kering  diperoleh  dari Kediri,  Jawa  timur.    Mereduksi  rosella  ungu  kering berukuran  60  mesh. Menyimpan  bubuk  kelopak  bunga rosella  kering  (kadar  air  12-14%)  pada  temperatur ruang, di dalam lemari yang gelap dan kering.

## Ultrasound-Assisted Extraction
Ekstraksi  antosianin  dari  kelopak  bunga  rosella ungu  menggunakan  metode  UAE  (Branson  3510E- DTH).  UAE  merupakan  ekstraksi  non  konvensional yang  memanfaatkan  bantuan  gelombang ultrasonic dengan  frekuensi  antara  20kHz  hingga  2000  kHz. Variabel  independen  dalam  ekstraksi  kelopak  bunga rosella  ungu  dengan  UAE  :  suhu  ekstraksi  (50-60°C), waktu  ekstraksi  (15-25  menit)  dan  Rasio  (15-30  ml/g). Detail variabel independen ditunjukkan pada Tabel 1.
.
Tabel  1. Nilai  dan  kode  percobaan  dari  variabel independen menggunakan Box Bohnken Design
Tingkat faktor Variabel Independen Suhu ekstraksi ( o C) Rasio Cair- padat (mL/g) Waktu ekstraksi -1 50 15 15 0 55 22,5 20 +1 60 30 25

## Kadar Total Antosianin
Analisis  kadar  total  antosianin  dari  kelopak rosella  ungu  menggunakan  metode  perbedaan  pH  (Lee

## TEKNIK, 40 (2), 2019, 117
doi: 10.14710/teknik.v40n2.23258               Copyright © 2019, TEKNIK, p-ISSN: 0852-1697, e-ISSN: 240-9919
dkk. ,  2005)  yang  mana  dapat  diukur  menggunakan spektrofotometer  (Shimadzu  UV-1800,  Kyoto,  Japan). Metode  perbedaan  pH  menggunakan  buffer  pada  pH  1 dan pH 4,5. Pembuatan buffer pada pH 1 menggunakan larutan  potassium  kloridan  dan  pelarut  air  sedangkan pada pH 4.5 menggunakan sodium asetat dan pelarut air dengan  penambahan  HCl.  Mengencerkan  ekstrak kelopak  bunga  rosella  sebanyak  0,5  ml  dengan menambahkan  larutan  buffer  pH  1  dan  pH  5  pada  labu ukur  50  ml.  Penentuan  absorbansi  sampel  ekstrak kelopak  bunga  rosella  ungu  pH  1  dan  pH  4,5  pada panjang  gelombang  520  nm  dan  700  nm  menggunakan alat  spektrofotometer  UV-Vis.  Berikut  ini  persamaan menghitung  konsentrasi  pigmen  antosianin  (He dkk., 2016):
dimana,  A=  (A 520nm -A 700nm )pH  1.0  -  (A 520nm -A 700nm )pH 4.5;  MW=  449,2  g/mol  (untuk  Cyanidin-3-glucoside); DF=  faktor  pengenceran;  l=  panjang  kuvet;  dan  ɛ= 26900 koefisien ekstingsi molar.

## Desain Percobaan
Optimasi Box  Bohnken  Design ditentukan menggunakan software Design-Expert (Version 12, Stat- Ease Inc., USA). Optimasi Box Bohnken Design dengan 3 variabel independen : suhu ekstraksi (50-60 o C), waktu ekstraksi  (15-25  menit)  dan  Rasio  (15-30  ml/g).  Detail
design  optimasi  ekstraksi  antosianin  menggunakan Box Bohnken  Design ditunjukkan  pada  tabel  3.    Variabel respon  (kadar  total  antosianin)  dicocokkan  dengan persamaan  model  polinomial  orde  kedua  pada persamaan  1,  yang  mampu  menggambarkan  hubungan antara respon dana variabel independen (He dkk., 2016). Berikut ini persamaan model polinomial orde kedua :
dimana,  Y=    Variabel  Respon  (kadar  total  antosianin);
=  independen  variabel; =  koefisien
konstan; =  koefisien  linier;
=  koefisien  kuadratik; dan = koefisien cross-product.
3. Hasil dan Pembahasan

## Ekstraksi  Antosianin  dari  kelopak  rosella  ungu dengan UAE
Antosianin  merupakan  senyawa  flavonoid  yang memiliki  manfaat  untuk  meningkatkan  stabilitas pewarna  alami,  industri  makanan  dan  kecantikan. Senyawa  alami  antosianin  dari  kelopak  rosella  ungu bermanfaat bagi kesehatan manusia sebagai pencegahan dan pengobatan berbagai patologi. Antosianin merupakan pigmen flavonoid yang larut dalam air  yang menghasilkan warna biru, ungu, dan merah dari tanaman (Vinha dkk., 2018).  Gambar  1  menunjukkan  struktur antosianin.  Ekstraksi  kelopak  rosella  ungu  dengan metode  UAE  menggunakan  pelarut  air  distilasi  yang bersifat polar sehingga mampu mengekstraksi antosianin,  hal  ini  berdasarkan  solute  akan  larut sempurna  dalam  pelarut  yang  nilai  polaritasnya  sama (Pandey & Tripathi 2014; Kumoro, 2015).
O + OH HO O R 2 OH R 1 R 3 Cyanidin-3-sambubioside (R 1 =OH; R 2 =H; R 3 =Sambubioside) Delphinidin-3-sambubioside (R 1 =OH; R 2 =H; R 3 =Sambubioside) Cyanidin-3-glucoside (R 1 =OH; R 2 =H; R 3 =glucose) Delphinidin-3-glucoside (R 1 =OH; R 2 =H; R 3 =glucose)
Gambar 1. Struktur Antosianin Pewarna  alami  mudah  terdegradasi  dan  tidak stabil  selama  pemrosesan  sehingga  diperlukan  kondisi
Tabel  3. Optimasi  Kondisi  Ekstraksi  Antosianin  menggunakan Box Bohnken Design
Run Suhu ( o C) Waktu (menit) Rasio (ml/g) Kadar Antosianin aktual (ppm) Kadar Antosianin prediksi (ppm) 1 55 25 30 98,69 109,99 2 60 25 22,5 114,39 103,59 3 55 20 22,5 105,76 105,76 4 55 20 22,5 105,76 105,76 5 55 15 30 65,33 58,04 6 50 20 15 202,06 202,57 7 55 20 22,5 105,76 105,76 8 50 25 22,5 113,97 106,17 9 60 15 22,5 82,38 90,17 10 60 20 15 150,01 153,51 11 50 20 30 52,32 48,81 12 55 15 15 205,40 194,10 13 55 25 15 171,44 178,73 14 55 20 22,5 105,76 105,76 15 50 15 22,5 72,22 83,01 16 55 20 22,5 105,76 105,76 17 60 20 30 102,98 102,4651
doi: 10.14710/teknik.v40n2.23258               Copyright © 2019, TEKNIK, p-ISSN: 0852-1697, e-ISSN: 240-9919
operasi  yang  optimum  untuk  menghasilkan  kadar antosianin yang tinggi. Mekanisme degradasi antosianin ditunjukkan pada gambar 2. Menurut Sinela et al . (2017) degradasi  antosianin  diidentifikasi  dengan  cara  oksidasi yang  dikatalisis  dengan  logam  yang  mengakibatkan reaksi  kondensasi  dan  secara  pemutusan  ikatan. Antosianin  dioksidasi  mennjadi  radikal  semikuinon  dan kuinon  sedangkan  O 2 direduksi  menjadi  hidrogen peroksida,  dan  seluruh  dimediasi  oleh  siklus  redoks Fe 3+ ,  Cu 2+ ,  Mn 2+ (Elias dkk., 2009).  Kuinon  dapat bergabung  dengan  senyawa  nukleofilik  (karbohidrat, asama  amino,  fenol,  dll)  karena  mempunya  sifat elektrofiliknya yang tinggi (Li dkk., 2008). Penggabungan  kuinon  dan  senyawa  nukleofilik  dapat menghasilkan  polimer  yang  mempunyai  potensi  redoks lebih  rendah  daripada  fenol  awal  dan  lebih  mudah teroksidiasi.  Oleh  karena  itu,  oksidasi  produk  ini menghasilkan  proses  polimerisasi  yang  lebih  cepat. Degradasi  termal  delphinidin  lebih  cepat  dibandingkan sianidin  karena  terkait  peningkatan  oksidasi  yang berpengaruh  pada  peningkatan  jumlah  fungsi  hidroksil pada  cincin  B.  Degradasi  oksidatif  cincin  B  fenolik merupakan  reaksi  degradasi  yang  dominan  pada  suhu tinggi (20°C) (Hrazdina dkk., 1970).
Gambar 2. Mekanisme degradasi antosianin
Mekanisme  degradasi  antosianin  yang  dimediasi oleh aldehid dan turunannya telah dilakukan oleh Dallas et al . (1996) dan  Debick-Pospsil et al . (1983). Sinela et al .  (2017)  meneliti  efek  phloroglucinaldehyde  dan pengaruhnya terhadap degradasi sianidin 3-O- sambubioside.  Penelitian  ini  juga  menguji  efek  produk pada  degradasi  antosianin  dan  interaksi  dianatar  kedua antosianin. Berdasarkan pada senyawa fenolik,
degradasi  antosianin  dapat  dicegah  atau  ditingkatkan menjadi  lebih  panjang  atau  lebih  pendek.  Asam  galat mencegah  degradasi  delphinidin  3-O-sambubioside. Hasil  penelitian  menyimpulkan  baik  sianidin  3-O- sambubioside  maupun  delphinidin  3-O-sambubioside mempengaruhi degradasi antosianin yang lain.

## Model dari Optimasi Proses UAE
Kadar  antosianin  dari  kelopak  bunga  rosella  di optimasi  dengan  model  analisis Box  Bohnken  Design (BBD),  variabel  independen  :  suhu  ekstraksi  (50-60 o C), waktu  ekstraksi  (15-25  menit)  dan  Rasio  (15-30  ml/g). Setiap percobaan dalam BBD dieksekusi dalam rangkap 3  (n=3).  Variabel  berubah  dan  tetap  didapatkan  dari Design  Expert ditunjukkan  pada  tabel  3.  Hasil percobaan  untuk  kadar  total  antosianin  (aktual  dan prediksi)  ditunjukkan  tabel  3.  Hasil  percobaan  kadar total antosianin pada ekstrak kelopak bunga rosella ungu bervariasi  dari  52,32  sampai  205,40  ppm.  Persamaan  1 merupakan  persamaan  aktual  yang  diperlukan  untuk mengetahui  kadar  antosianin  prediksi.  Berikut  ini persamaan  polinomial  orde  kedua  digunakan  untuk menyatakan  hasil  kadar  antosianin  sebagai  fungsi  dari variabel independen:
298,9+27,23475X 1 -1,594X 2 -77,68583X 3 - 0,36785X 1 2 +0,03295X 2 2 +0,53829X 3 2 - 0,0974X 1 *X 2 +0,68473X 1 *X 3 +0,4488X 2 *X 3 (1)
dimana, X 1 = Temperature; X 2 = waktu; dan X 3 = rasio. Waktu dan temperatur ekstraksi dalam menghasilkan ekstrak kelopak bunga rosella menggunakan  metode  UAE  merupakan  variabel  yang berpengaruh  terhadap  kadar  antosianin.  Hasil  optimasi gambar  3  menunjukkan  bahwa  peningkatan  waktu ekstraksi  menyebabkan  kadar  antosianin  meningkat, namun  saat  mencapai  titik  optimum  respon  kadar antosianin menurun. Kondisi optimum untuk mendapatkan  kadar  antosianin  optimum  206,996  ppm pada waktu ekstraksi 15 menit, rasio pelarut dan sampel 15  ml/gr  dan  temperatur  ekstraksi  50°C.  Antosianin merupakan  senyawa  yang  sensitif  terhadap  panas sehingga semakin lama waktu ekstraksi maka antosianin akan  terdegradasi  (He dkk., 2016).  Selain  waktu ekstraksi,  penggunaan  temperatur  yang  tinggi  selama ekstraksi  mengakibatkan  degradasi  antosianin  dan penurunan kadar antosianin (Blackhall, Berry, Davies, & Walls, 2018).
doi: 10.14710/teknik.v40n2.23258               Copyright © 2019, TEKNIK, p-ISSN: 0852-1697, e-ISSN: 240-9919
15.00 17.00 19.00 21.00 23.00 25.00 50.00 52.00 54.00 56.00 58.00 60.00 0 50 100 150 200 250 Ka da r A nt osi an in A: Temperatur (Celcius) B: Waktu (Menit) 3D Surface Factor Coding: Actual
Design Points:
Above Surface Below Surface 52.32 205.4 X1 = A: Temperatur X2 = B: Waktu Actual Factor C: Rasio = 15.00
Factor Coding: Actual
Design Points: Above Surface Below Surface 52.32 205.4 X1 = A: Temperatur X2 = B: Waktu Actual Factor C: Rasio = 15.00
Gambar  3. Grafik  pengaruh  Waktu  dan  Temperatur ekstraksi terhadap kadar antosianin
Tabel 2 menunjukkan bahwa hasil ekstraksi total antosianin  dipengaruhi  secara  signifikan  oleh  rasio pelarut  dan  sampel  karena  hasil  dari  nilai P <0,01 sehingga rasio pelarut dan sampel (X3) sangat signifikan dibandingkan  dengan  suhu  (X1)  dan  waktu  (X2). Interaksi  X1X2  tidak  signifikan  ( P >0,05)  sedangkan X1X3 dan X2X3 signifikan pada P <0,05. Istilah kuadrat X3 2 sangat signifikan pada P <0,01 diikuti oleh X1 2 dan X2 2 yang tidak signifikan pada P >0,05.
Tabel  2. Analisis  ANOVA  dari  respon  surface  model kuadratik  untuk optimasi antosianin dari kelopak bunga rosella
Sumber Sum of squares df Mean Square F- Value P- Value Model X1 X2 X3 X1X2 X1X3 X2X3 X1 2
X2 2
X3 2 Lack of fit Pure Error 34909,26 10,56 232,31 24160,42 23,72 2637,34 2370,23 706,39 36,21 4877,39 1646,24 0,000 9 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 4 3878,81 10,56 232,31 24160,42 23,72 2637,34 2370,23 706,39 36,21 4877,39 548,75 0.000 16,49 0,045 0,99 102,73 0,10 11,21 10,08 3,00 0,15 20,74 0,0006 0,8382 0,3534 0,0001 0,7601 0,0123 0,0156 0,1267 0,7064 0,0026
Hasil  ANOVA  dari  hasil  kelayakan  model  dan untuk mendapatkan model analisis, nilai R 2 , nilai F, nilai P . Berdasarkan hasil Analisis Varians (ANOVA) design expert untuk respon kadar antosianin menghasilkan nilai P sebesar 0,01 maka model matematis ini dapat diterima karena  memiliki pengaruh  yang  signifikan. Menurut He et  al. (2016)  model  matematis  memiliki  pengaruh  yang
signifikan jika nilai P kurang dari 0,05 sedangkan tidak memiliki pengaruh signifikan jika nilai P lebih dari 0,05. Nilai  R 2 didapatkan  sebesar  0,98%  sehingga  0,02% merupakan  faktor  lain  yang  tidak  termasuk  pada  model optimasi.
Hasil Validasi Prediksi Model Optimasi kondisi ekstraksi antosianin
menggunakan Box  Bohnken  Design ditunjukkan  pada tabel  3.  Hal  ini  diperlukan  analisis  kelayakan  untuk membandingkan  kadar  antosianin  aktual  dan  prediksi. Analisis  kelayakan  model  dalam  menggambarkan  data empiris  dengan  validasi.  Validasi  ini  dilakukan menggunakan  nilai  prediksi  yang  diperoleh  dari persamaan  1  dengan  nilai  aktual  dari  hasil  penelitian. Hasil  validasi  ditunjukkan  pada  gambar  perbandingan nilai  prediksi  dan  nilai  aktual  untuk  respon  kadar antosianin.
Gambar 4. Perbandingan nilai prediksi dan aktual untuk respon kadar antosianin
Perbandingan  nilai  prediksi  dan  aktual  untuk respon  kadar  antosianin  ditunjukkan  pada  gambar  4. Analisis  kelayakan  hasil  nilai  prediksi  dan  aktual diperoleh  nilai  R 2 sebesar  98%.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  nilai  prediksi  dan  aktual  mempunyai  pengaruh yang  besar  sehingga  memiliki  kecocokan  model  yang sangat baik karena R 2 mendekati 1.

## 4. Kesimpulan
Kondisi  optimum  untuk  mendapatkan  senyawa bioaktif antosianin dari rosella menggunakan desain Box Bohnken  Design berhasil  dioptimalkan.  Analisis kelayakan  nilai  prediksi  dan  aktual  mempunyai kecocokan  model  yang  sangat  baik.  Kondisi  optimum waktu  ekstraksi,  rasio  pelarut  dan  sampel,  temperatur ekstraksi  untuk  menghasilkan  ekstraksi  maksimum senyawa  antosianin.  Parameter  ekstraksi  yang  optimal adalah  waktu  ekstraksi  15  menit,  rasio  sampel  dan pelarut 15 gr/ml dan temperatur ekstraksi 50°C.

## Daftar Pustaka
Bezerra, M. A., Santelli, R. E., Oliveira, E. P., Villar, L. S.,  Escaleira,  L.  A.  (2008).  Response  surface methodology  (RSM)  as  a  tool  for  optimization  in analytical  chemistry. Talanta, 76,  965–977. https://doi.org/10.1016/j.talanta.2008.05.019
Blackhall, M. L., Berry, R., Davies, N. W., Walls, J. T. (2018).  Optimized  extraction  of  anthocyanins from Reid Fruits’ Prunus avium “Lapins” cherries.
Food Chemistry , 256 , 280–285. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2018.02.137
Boer,  L.  de.  (2013).  Health  safety  issues  of  synthetic food colorants. Advances in Biochemical Engineering , 143 , 51–89.
https://doi.org/10.1016/j.yrtph.2015.09.026
Castañeda-Ovando,  A.,  Pacheco-Hernández,  M.  de  L.,
Páez-Hernández,  M.  E.,  Rodríguez,  J.  A.,  Galán- Vidal,  C.  A.  (2009).  Chemical  studies  of anthocyanins:  A  review. Food  Chemistry ,  113(4), 859–871. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.09.001 Chavan,  R.  S.,  Avhad,  D.  N.,  Rathod,  V.  K.  (2015). Optimization  of  Aqueous  Two-Phase  Extraction of  Protease  Produced  from  Bacillus  licheniformis
NCIM 2042 Using Response Surface
Methodology. Separation Science and Technology
, 50 (1), 45–55. https://doi.org/10.1080/01496395.2014.948963 Chen,  W.,  Müller,  D.,  Richling,  E.,  Wink,  M.  (2013). Anthocyanin-rich  purple  wheat  prolongs  the  life span  of  Caenorhabditis  elegans  probably  by activating the DAF-16/FOXO transcription factor. Journal  of  Agricultural  and  Food  Chemistry , 61 (12), 3047–3053. https://doi.org/10.1021/jf3054643
Cissé, M., Bohuon, P., Sambe, F., Kane, C., Sakho, M., Dornier,  M.  (2012).  Aqueous  extraction  of anthocyanins from Hibiscus sabdariffa: Experimental  kinetics  and  modeling. Journal  of Food Engineering , 109(1), 16–21.
https://doi.org/10.1016/j.jfoodeng.2011.10.012 Corbin,  C.,  Fidel,  T.,  Leclerc,  E.  A.,  Barakzoy,  E., Sagot,  N.,  Falguiéres,  A.,  Hano,  C.  (2015). Development  and  validation  of  an  efficient ultrasound assisted extraction of phenolic compounds  from  flax  (Linum  usitatissimum  L.) seeds. Ultrasonics  Sonochemistry ,  26,  176–185. https://doi.org/10.1016/j.ultsonch.2015.02.008 Cowan,  M.  M.  (1999).  Plant  products  as  antimicrobial agents. Clinical  Microbiology  Reviews ,  12(4), 564–582. https://doi.org/10.1128/CMR.12.4.564 Dai,  J.,  Mumper,  R.  J.  (2010).  Plant  phenolics: Extraction,  analysis  and  their  antioxidant  and anticancer  properties. Molecules ,  15(10),  7313–
7352. https://doi.org/10.3390/molecules15107313
Dallas,  C.,  Ricada-da-Silva,  J.,  Laureano,  O.  (1996).
Products formed in model wine solution involving anthocyanins,  procyanidin  B2,  and  acetaldehyde. Journal of agricultural and food chemistry , 44(8), 2402-2407.
Debick-Pospsil,  J.,  Lovric,  T.,  Trinajstic,  N.,  Sabjic,  A. (1983).  Anthocyanin  Degradation  in  the  Presence of Furfural and 5‐Hydroxymethylfurfural. Journal of food science , 48(2), 411-416.
Elias,  R.  J.,  Andersen,  M.  L.,  Skibsted,  L.  H., Waterhouse,  A.  L.  (2009).  Key  factors  affecting radical formation in wine studied by spin trapping and  EPR  spectroscopy. American  Journal  of Enology and Viticulture , 60(4), 471-476. Eiman,  H.  A.  R.  E.,  Elhadi,  M.  A.,  Nizar,  S.  (2014). Standardization of Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) Calyx  cultivated  in  Sudan. Journal  of  Medicinal
Plants Research , 8 (4), 217–222.
https://doi.org/10.5897/JMPR2013.4448
He, B., Zhang, L., Yue, X., Liang, J., Jiang, J., Gao, X., Yue,  P.  (2016).  Optimization  of  ultrasound- assisted  extraction  of  phenolic  compounds  and anthocyanins  from  blueberry  (  Vaccinium  ashei  ) wine  pomace. Food  Chemistry ,  204,  70-76. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.02.094 Hrazdina, G., Borzell, A., Robinson, W. (1970). Studies on  the  Stability  of  the  Anthocyanidin-3,  5- Digucosides. American  Journal  of  Enology  and Viticulture , 21(4), 201-204.
Hussein, R. M., Shahein, Y. E., Hakim, A. E. El, Awad, H.  M.  (2010).  Biochemical  and  molecular characterization  of  three  colored  types  of  roselle (Hibiscus  sabdariffa  L.). Journal  of  American Science , 11(6), 726–733.
Inggrid,  H.  M.,  Jaka,  Santoso,  H.  (2017).  Natural  red dyes extraction on roselle petals. IOP Science , 1– 7. https://doi.org/10.1088/1757- 899X/162/1/012029
Ismail,  A.,  Ikram,  E.  H.  K.,  Nazri,  H.  S.  M.  (2008). Roselle  (Hibiscus  sabdariffa  L.)  Seeds  – Nutritional  Composition,  Protein  Quality  and Health Benefits. Food, 2 (1), 1–16.
Lee,  J.,  Durst,  R.  W.,  Wrolstad,  R.  E.  (2005). Determination  of  total  monomeric  anthocyanin pigment content of  fruit juices, beverages, natural colorants,  and  wines  by  the  pH  differential method:  Collaborative  study. Journal  of  AOAC International , 88 (5), 1269–1278. https://doi.org/10.5555/jaoi.2005.88.5.1269
Li,  H.,  Guo,  A.,  Wang,  H.  (2008).  Mechanisms  of oxidative  browning  of  wine. Food  Chemistry , 108(1), 1-13.
Maran,  J.  P.  (2017).  Ultrasound  assisted  extraction  of bioactive  compounds  from  Nephelium  lappaceum
L . fruit peel using central composite face centered response  surface  design. Arabian  Journal  of
Chemistry ,
10,
S1145–S1157.
https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2013.02.007
Newsome,  A.  G.,  Culver,  C.  A.,  Breemen,  R.  B.  Van.
(2014). Nature’ s Palette : The Search for Natural Blue Colorants. Journal of Agricultural and Food Chemistry , 62, 28, 6498-6511. Pandey, A., Tripathi, S. (2014). Concept of standardization,  extraction  and  pre  phytochemical screening  strategies  for  herbal  drug. Journal  of Pharmacognosy and Phytochemistry JPP , 115(25),  115–119.  https://doi.org/10.1037/0278- 7393.6.2.107
Piyarat,  K.,  Walaisiri,  M.  Pornpen,  W.,  I.  (2014). Comparison  of  stability  of  red  colorants  from natural  sources  ,  roselle  and  lac  in  micelles. International Food Research Journal , 21(1), 325– 330.
Sinela,  A.  M.,  Mertz,  C.,  Achir,  N.,  Rawat,  N.,  Vidot, K., Fulcrand, H., Dornier, M. (2017). Exploration of reaction mechanisms of anthocyanin
degradation  in  a  roselle  extract  through  kinetic studies  on  formulated  model  media .  Food Chemistry, 235:67-75.
. http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2017.05.027 Solymosi,  K.,  Latruffe,  N.,  Morant-Manceau,  A., Schoefs,  B.  (2015). Food  colour  additives  of natural  origin . Colour  Additives  for  Foods  and Beverages, 4-34.  https://doi.org/10.1016/B978-1- 78242-011-8.00001-5
Triyastuti,  M.  S.,  Kumoro,  A.  C.,  Djaeni,  M.  (2017).
Physical  properties  evaluation  of  roselle  extract- egg white mixture under various drying temperatures. AIP Conference Proceedings , 1823 . https://doi.org/10.1063/1.4978116
Vinha, A. F., Rodrigues, F., Nunes, M. A., Oliveira, M. B. P. P. (2018). Natural pigments and colorants in foods  and  beverages. Polyphenols:  Properties, Recovery, and Applications . Elsevier Inc. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-813572- 3.00011-7 .