Abstrak —Biobutanol  adalah  jenis  alkohol  ikatan  C-4 (C 4 H 9 OH)  yang  terbuat  dari  biomassa.  Penelitian  ini  dilakukan dengan  memanfaatkan  limbah  kayu  yang  dihasilkan  dari  proses penggergajian  kayu  yang  mengandung  selulosa  (55%), hemiselulosa  (14%),  dan  lignin  (21%).  Biobutanol  diproduksi dengan  cara  hidrolisis  enzim  selulase  dan  fermentasi  bakteri Clostridium acetobutylicum .  Variabel  pada  penelitian  ini  adalah penambahan  enzim  selulase  pada  proses  hidrolisis  (penambahan enzim atau tanpa penambahan enzim), pH awal proses fermentasi (5  atau  7)  dan  jumlah  penambahan  starter  bakteri Clostridium acetobutylicum (5  atau  10  ml)  dengan  variasi  lama  proses fermentasi  2,4,6,8,10,12  hari.  Parameter  dalam  penelitian  ini adalah analisa kadar selulosa, gula tereduksi, dan kadar butanol. Berdasarkan  hasil  penetian,  diketahui  bahwa  proses  hidrolisis dengan penambahan enzim selulase, kondisi awal fermentasi pH 5 dan  penambahan  inokulum  bakteri Clostridium  acetobutylicum sebanyak  10  ml  dengan  lama  waktu  fermentasi  12  hari merupakan  kondisi  yang  paling  efektif  menghasilkan  kadar butanol  tertinggi  dari  50  gram  limbah  serbuk  gergaji.  Kadar butanol  tertinggi  sebesar  1,88  %  dari  1  µL  sampel  hasil fermentasi yang diinjeksikan ke dalam kromatografi gas.
Kata Kunci — biobutanol, Clostridium acetobutylicum , selulase, serbuk gergaji.

## I. PENDAHULUAN
EIRING  dengan  terjadinya  krisis  energi  (kelangkaan BBM),  khususnya  produksi  minyak  bumi  yang  semakin menurun  sehingga  menyebabkan  harga  minyak  bumi melambung  tinggi,  sedangkan  jumlah  pengguna  bahan  bakar semakin  tahun  semakin  meningkat.  Menurut  Direktur  Hulu Minyak dan Gas Bumi Kementerian ESDM Edy Hermantoro, kebutuhan  BBM  di  Indonesia  pada  tahun  2012  diperkirakan mencapai  1,242  juta  barel  per  hari,  sedangkan  BBM  yang mampu  diproduksi  hanya  mencapai  705.000  barel  per  hari. Dengan  demikian,  Indonesia  akan  mengalami  defisit  BBM sekitar  537.000  barel  per  hari  atau  43  persen  dari  total kebutuhan 1,242 juta barel per hari [1]. Salah satu cara untuk mengurangi  keterbatasan  bahan  bakar  fosil,  perlu  adanya energi  alternatif  yang  dapat  diproduksi  secara  massal  dan kontinu.
Biofuel merupakan salah satu contoh energi terbarukan yang paling  mudah  untuk  diimplemantasikan,  salah  satunya  adalah biobutanol.  Biobutanol  adalah  jenis  alkohol  ikatan  C-4
(C 4 H 9 OH)  atau  butil  alkohol  yang  terbuat  dari  biomassa. Biomassa  merupakan  energi  yang  tersimpan  dalam  bahan organik yang berasal dari pohon, tanaman pertanian dan materi hidup  tanaman  lainnya  yang  pada  proses  fotosintesis menghasilkan  senyawa  karbohidrat.  Sedangkan  karbohidrat merupakan senyawa organik yang membentuk biomassa.
Biobutanol diproduksi dengan cara hidrolisis menggunakan enzim  selulase  dan  fermentasi  mikroba.  Sebagian  besar, penelitan  biobutanol  menggunakan  mikroorganisme  anaerob dari Clostridium  sp yang  dapat  mendegradasi  selulosa  dan hemiselulosa  [2].  Salah  satu  bakteri  genus Clostridium yang dapat  dimanfaatkan  untuk  pembuatan  biobutanol  adalah Clostridium  acetobutylicum . Clostridium  acetobutylicum memiliki  beberapa  kelebihan  dibandingkan  dengan  bakteri penghasil  butanol  lainnya. C.acetobutylicum merupakan bakteri  anaerob,  sehingga  memberikan  keuntungan  untuk proses  fermentasi  selulosa  yang  berlangsung  dalam  keadaan anaerob. Selain  itu,  bakteri C.acetobutylicum ,  dapat bertahan  pada  pH  rendah,  antara  4,5-5  dengan  suhu optimum 37 o C [3].
Adapun  tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  Membandingkan pengaruh penambahan enzim selulase sebagai katalis terhadap proses  hidrolisis  selulosa  serbuk  gergaji  menjadi  glukosa, menentukan  pH  optimum  untuk  fermentasi  limbah  serbuk gergaji  menjadi  biobutanol  menggunakan  bakteri Clostridium acetobutylicum dan  menentukan  jumlah  starter  inokulum bakteri Clostridium  acetobutylicum yang  efektif  pada  proses fermentasi serbuk gergaji.

## II. METODOLOGI

## A. Alat dan Bahan
Alat  dan  bahan  yang  diperlukan  dalam  penelitian  ini berbeda-beda,  hal  ini  sesuai  dengan  cara  kerja  yang  sedang digunakan.  Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  adalah tabung  fermentor, shaker , electric  stove ,  timbangan  analitik, pH  meter, autoclaved , centrifuge , beaker  glass ,  gelas  ukur, erlenmeyer,  kapas  lemak,  bunse,  korek  api,  tabung  reaksi, jarum  ose,  dan  kertas  saring.  Sedangkan  bahan-bahan  yang digunakan adalah aquades, enzim selulase, bakteri Clostridium

## Pemanfaatan Serbuk Gergaji menjadi Biobutanol dengan Hidrolisis Selulase dan Fermentasi Bakteri Clostridium Acetobutylicum
Hayuni Devina Fajariah dan Wahyono Hadi
Jurusan Teknik Lingkungan, Fakultas Teknik Sipil dan Perencanaan, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia e-mail : wahyono@enviro.its.ac.id
S
acetobutylicum ,  limbah  serbuk  gergaji,  medium  agar  (NA), citric acid , H 2 SO 4 dan NaOH.

## B. Prosedur
Prosedur  kerja  pada  penelitian  ini  dibedakan  menjadi  2 bagian,  yaitu  proses  pretreatment  dan  treatment.  Proses pretreatment meliputi:
1. Pembuatan  ekstrak  serbuk  gergaji,  yaitu  serbuk  gergaji terlebih dahulu dijemur di bawah sinar matahari selama 3 hari  agar  kandungan  air  dalam  serbuk  gergaji  berkurang. Selanjutnya  dilakukan  pengayakan  menggunakan  ayakan santan  agar  diperoleh  serbuk  gergaji  yang  lebih  halus. Pada  proses  delignifikasi  atau  pelepasan  selulosa  dan hemiselulosa dari ikatan lignin, sebanyak 50 gram ekstrak serbuk gergaji direndam pada 500 ml larutan NaOH 10% selama  60  menit  disertai  pemanasan  121 o C  dengan menggunakan auto claved [4].
2. Pembuatan starter Clostridium acetobutylicum , yaitu biakan murni  bakteri Clostridium  acetobutylicum digoreskan secara  zig-zag  pada  media  agar  miring  dengan menggunakan ose lalu ditumbuhkan dalam incubator pada suhu  37 o C  selama  5  hari  (Cappuccino  dan  Sherman, 1983).  Selanjutnya  sebanyak  1  tabung  biakan  bakteri Clostridium  acetobutylicum dilarutkan  ke  dalam  100  ml larutan NaCl 0,9 % dengan cara melarutkan sedikit NaCl 0,9% dalam tabung sambil digoreskan pada media hingga bakteri  terangkat  ke  atas  menggunakan  jarum  ose. Selanjutnya  starter  bakteri  dicampur  dengan  sisa  NaCl yang  masih  ada  dalam  erlenmeyer  dan  diaduk  hingga bakteri tercampur dengan larutan [5].
Sedangkan proses treatment meliputi: 1. Proses  hidrolisis,  yaitu  serbuk  gergaji  yang  telah didelignifikasi  didinginkan  hingga  mendekati  suhu ruangan.  Selanjutnya  ditambahkan  10  ml  enzim  selulase (berdasarkan  variasi  penambahan  enzim).  Diinkubasi dalam shaker 100 rpm selama 72 [4,7].
2. Proses  fermentasi,  yaitu  setelah  3  hari  proses  hidrolisis, serbuk  gergaji  disaring  untuk  memisahkan  filtrat  dan endapannya.  Filtrat  hasil  hidrolisis  diukur  pH-nya menggunakan  pH  meter.  Rata-rata  tiap  sampel  memiliki pH  11.  Selanjutnya  sampel  ditambahkan  dengan citric acid untuk menurunkan pH hingga pH larutan menjadi 5. Selanjutnya  ditambahkan  larutan  starter  sebanyak  5  ml dan  10  ml  sesuai  dengan  variasi  penambahan,  kemudian difermentasi  selama  12  hari  di  dalam  inkubator  37 o C. Proses  fermentasi  dilakukan  pada  kondisi  anaerob menggunakan  penutup.  Setelah  proses  fermentasi  selesai, tutup botol dilepas, ditutup dengan kapas lemak dan kertas coklat untuk disterilisasi menggunakan autoclaved selama 60  menit.  Selanjutnya  hasil  fermentasi  yang  telah disterilkan  diambil  sebanyak  45  ml  untuk  di  centrifuge selama  30  menit  3000  rpm  sebelum  dilakukan  analisa kadar butanol [4].
Kemudian  dilakukan  pengujian  terhadap  pengukuran  kadar selulosa,  pengukuran  gula  tereduksi,  dan  pengukuran  kadar butanol.  Analisis  selulosa  menggunakan  metode  Chessons
(Datta,  1981),  analisa  kadar  glukosa  menggunakan  metode Luff  Schoorl,  sedangkan  analisa  kromatografi  gas  dengan temperatur detector dan injector sebesar 270 dan 230 o C.

## C. Variabel
Pada penelitian ini digunakan variasi:
1. Penambahan  enzim  pada  proses  hidrolisis:  penambahan enzim dan tanpa penambahan enzim.
2. pH awal proses fermentasi: 5 dan 7.
3. Penambahan  starter  bakteri Clostridium  acetobutylicum :  5 ml dan 10 ml.
Parameter yang diamati adalah kadar butanol (% dalam 45 mL sampel).

## III. HASIL ANALISA DAN PEMBAHASAN

## A. Pengaruh Penambahan Enzim Selulase Sebagai Katalis Terhadap Kadar Butanol
Proses  hidrolisis  enzim  selulase  berlangsung  selama  3  hari dengan  dilakukan  pengadukan  menggunakan  shaker  dengan kecepatan  putaran  100  rpm.  Sehingga  enzim  selulase  yang dicampurkan  dapat  bercampur  rata  dengan  sampel  dan  gula yang  dihasilkan  pada  proses  hidrolisis  semakin  meningkat. Setelah  proses  hidrolisis  selama  3  hari  selanjutnya  sampel diatur  pH-nya  sesuai  dengan  varias  sampel  yaitu  5  dan  7. Selanjutnya  tiap  sampel  ditambahkan  bakteri Clostridium actebutylicum kemudian  difermentasi  hingga  12  hari.  Hasil fermentasi selanjutnya dianalisis kadar butanolnya menggunakan metode gas kromatografi.
Pertama-tama  temperatur  detector  dan  inlet  kromatografi diatur  terlebih  dahulu  pada  suhu  250 o C.  Selain  itu,  beberapa hal  yang  harus  diatur  pada  kondisi  kerja  alat  kromatografi adalah laju alir gas pembawa, besar arus yang melalui detector, attenuator,  kecepatan  kertas  rekorder,  dan  posisi  pen  pada rekorder.  Penyiapan  larutan  standar  yaitu  butanol  murni dilakukan  dengan  menggunakan  jarum  suntik  sebanyak  1  µL dan  disuntikkan  ke  dalam  kromatograf.  Ditunggu  hingga terlihat  titik  puncak  dan  waktu  retensi  tiap  senyawa  yang diujikan.  Selanjutnya  sampel  yang  akan  diujikan  disuntikkan dengan  cara  yang  sama  ke  dalam  kromatografi  (GC)  dan diamati  waktu  retensi,  luas  puncak  dan  lebar  puncak  yang tercetak  pada  kertas.  Luas    area  butanol  pada  sampel dibandingkan  dengan  luas  area  butanol  pada  larutan  standar butanol.  Sehingga  didapatkan  %  kadar  butanol  pada  sampel. Persamaan  metode  pembacaan  kadar  butanol  adalah  sebagai berikut:
Kadar Butanol = % 100 ] * [ ] * [  N sampel S uV Area S uV Area
Keterangan :
Area[uV*S] sampel : Luas area N-Butanol sampel Area[uV*S] N : Luas area N-Butanol larutan standar
(Surayya dan Sukandar, 2008)
Berdasarkan hasil analisis kadar butanol yang tercetak pada kertas  kromatograf,  didapatkan  perbandingan  variasi
penambahan enzim dengan kadar butanol yang dihasilkan dan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.
Perbandingan Kadar Butanol dengan Variasi Penambahan Enzim Selulase
2 4 6 8 10 12 5 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 1,00 1,55 10 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 1,34 1,88 5 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,07 10 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,25 5 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 10 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,20 5 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 10 ml 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,21
Konsentrasi Bakteri Lama Waktu Fermentasi (Hari) Enzim Selulase 5 7 Tanpa Enzim Selulase 5 7 Kadar Butanol (%) Penambahan Enzim pH

## Sumber: Hasil Perhitungan
Berdasarkan  tabel  di  atas  diketahui  bahwa  variasi penambahan  enzim  selulase  sangat  berpengaruh  terhadap proses  hidrolisis.  Kadar  butanol  pada  sampel  yang ditambahkan  enzim  selulase,  pH  awal  fermentasi  5  dengan inokulum 10 ml menghasilkan butanol pada rentang fermentasi 10  hingga  12  hari  lebih  besar  dari  pada  variasi  tanpa penambahan  enzim,  yakni  sebesar  1,88%.  Hal  ini disebabkan oleh  enzim  selulase  memecahkan  ikatan  kompleks  selulosa menjadi  ikatan  yang  lebih  sederhana  yaitu  gula.  Gula  hasil hidrolisis  ini  pada  proses  selanjutnya  akan  difermentasi  oleh bakteri menjadi bentuk hidrokarbon butanol.  Sedangkan pada variasi  hidrolisis  tanpa  penambahan  enzim,  pada  rentang fermentasi 10 hari belum menghasilkan butanol. Hal ini karena kadar  gula  yang  dihasilkan  pada  proses  hidrolisis  sangat sedikit. Sehingga kadar butanol yang dihasilkan sangat sedikit hingga mendekati angka nol.
B. pH Optimum Fermentasi Limbah Serbuk Gergaji Menjadi Biobutanol
pH sangat berpengaruh pada proses fermentasi. pH medium fermentasi penting untuk pertumbuhan bakteri,  karena  enzim- enzim  tertentu  hanya  akan  mengurai  substrat  sesuai  dengan aktivitasnya  pada  pH  tertentu  yang  disebut  sebagai  pH optimum.  Oleh  karena  itu,  pengaturan  pH  sangat  penting dalam  proses  fermentasi.  pH  optimum  pertumbuhan  bakteri Clostridium  acetobutylicum berada  pada  rentang  4,5-5.  Pada penelitian ini, pH yang digunakan adalah pH 5 dan pH netral yaitu 7. pH awal pada proses hidrolisis >12 sehingga sebelum proses  fermentasi  dilakukan  penyesuaian  pH  pada  sampel sesuai dengan variasi pH awal fermentasi. Yakni menggunakan larutan  citric  acid  40%  dan  larutan  NaOH  20%  untuk menurunkan  pH  menjadi  5  dan  7.  Perbandingan  variasi  pH awal  fermentasi  dengan  kadar  butanol  yang  dihasilkan  dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan Tabel 1 dapat diketahui kadar butanol pada sampel  pada  waktu  fermentasi  12  hari  dengan  variasi  pH  5 lebih  besar  dari  pada  variasi  pH  7.  Hal  ini  disebabkan  oleh
rentang  pH  optimum  bakteri Clostridium  acetobutylicum berada  pada  rentang  pH  4,5-5  [3].  Sehingga  bakteri  dapat memfermentasi  gula  menjadi  butanol.  Hal  ini  sesuai  pada penelitian  sebelumnya  yang  menyebutkan  bahwa  pH fermentasi  optimum  bakteri Clostridium  acetobutylicum adalah  pH  5  [4].  Sedangkan  pada  pH  awal  fermentasi  7 kemungkinan  bakteri Clostridium  acetobutylicum tidak  aktif bekerja memproduksi senyawa butanol. Sebagian besar bakteri dengan  genus  Clostridium sp. tidak  dapat  hidup  pada  pH netral.

## C. Pengaruh Jumlah Penambahan Inokulum Pada Proses Fermentasi Terhadap Kadar Butanol
Fermentasi butanol pada kondisi anaerob ini dilakukan pada berbagai konsentrasi inokulum yang berbeda yaitu 5 ml dan 10 ml.  Bakteri  yang  didapat  dari  Laboratorium  Bioteknologi UGM  ini  selanjutnya  diinokulasi  pada  tabung-tabung  reaksi dan diinkubasi selama 5 hari dengan suhu 37 o C. Hasil bakteri yang  telah  diinokulasi  selanjutnya  dilarutkan  dengan  larutan NaCl  0,5%  agar  membentuk  fraksi  cair  sehingga mempermudah  pada  proses  penambahan  inokulum.  Sampel yang telah dihidrolisis menggunakan atau tanpa menggunakan enzim  selulase  selanjutnya  ditambahan  dengan  inokulum bakteri Clostridium acetobutylicum sesuai dengan variasi yaitu 5  dan  10  ml.  Selanjutnya  media  fermentasi  diinkubasi  pada suhu 37 o C dalam inkubator. Fermentasi berlangsung selama 12 hari dengan pengukuran kadar butanol setiap 2 hari sekali.
Sebagian  besar,  penelitan  biobutanol  menggunakan mikroorganisme  anaerob  dari Clostridium  sp yang  dapat mendegradasi selulosa dan hemiselulosa [2]. Salah satu bakteri genus Clostridium yang dapat dimanfaatkan untuk pembuatan biobutanol  adalah Clostridium  acetobutylicum . Clostridium acetobutylicum memiliki  beberapa  kelebihan  dibandingkan dengan  bakteri  penghasil  butanol  lainnya. C.acetobutylicum merupakan bakteri anaerob, sehingga memberikan keuntungan pada  proses  fermentasi  selulosa  yang  berlangsung  dalam keadaan  anaerob.  Selain  itu,  bakteri C.acetobutylicum ,  dapat bertahan pada  pH  rendah, antara  4,5-5 dengan suhu optimum 37 o C [3]. Kadar butanol yang dihasilkan dari proses fermentasi selama  12  hari  dengan  berbagai  variasi  dapat  dilihat  pada Tabel 1 dan Gambar 1.
Gambar 1.Grafik Kadar Butanol dari Berbagai Variasi
Keterangan:
Series 1  = Variasi Enzim Selulase, pH 5, Konsentrasi
inokulum 5 ml
Series 2  = Variasi Enzim Selulase, pH 5, Konsentrasi inokulum 10 ml
Series 3  = Variasi Enzim Selulase, pH 7, Konsentrasi inokulum 5 ml Series 4  = Variasi Enzim Selulase, pH 7, Konsentrasi inokulum 10 ml Series 5  =  Variasi  Tanpa  Enzim  Selulase,  pH  5, Konsentrasi inokulum 5 ml Series 6  =  Variasi  Tanpa  Enzim  Selulase,  pH  5, Konsentrasi inokulum 10 ml Series 7  =  Variasi  Tanpa  Enzim  Selulase,  pH  7, Konsentrasi inokulum 5 ml Series 8  =  Variasi  Tanpa  Enzim  Selulase,  pH  7, Konsentrasi inokulum 10 ml
Pada  fermentasi  glukosa  oleh  bakteri Clostridium acetobutylicum ini,  glukosa  diubah  menjadi  larutan  aseton- butanol-etanol (ABE), sisa glukosa, gas CO 2 , dan H 2 O. Reaksi pembentukan  aseton,  butanol,  dan  etanol  adalah  sebagai berikut:
Aseton  :  C 6 H 12 O 6 + H 2 O  C 3 H 6 O + 3CO 2 +4H 2 Butanol :  C 6 H 12 O 6  C 4 H 10 O + 2CO 2 + H 2 O Etanol   :  C 6 H 12 O 6  2C 2 H 6 O + 2CO 2 [8]
Berdasarkan Tabel 1, diketahui bahwa kadar butanol dengan konsentrasi  inokulum  10  ml  lebih  besar  dibanding  dengan konsentrasi  inokulum  5  ml  yakni  pada  waktu  fermentasi  12 hari, proses hidrolisis penambahan enzim dan pH awal proses fermentasi  5  sebesar  1,88%.  Berbeda  dengan  variasi-variasi sampel  yang  lain,  misalnya  pada  variasi  penambahan  enzim, pH  awal  5  dengan  inokulum  5  ml,  kadar  butanol  yang dihasilkan  hanya  1,55%.  Hal  ini  disebabkan  oleh  jumlah bakteri  yang  lebih  sedikit  sehingga  kurangnya  bakteri  yang memfermentasi  gula  menjadi  senyawa  butanol.  Sedangkan pada  variasi  sampel  tanpa  penambahan  enzim,  kadar  butanol yang  dihasilkan  sangat  sedikit  hingga  pada  kurva  Gas Kromatografi sangat sulit dibaca karena mendekati angka nol.
Dari  Tabel  1  juga  diketahui  bahwa  proses  pembentukan butanol baru terjadi pada waktu fermentasi 10-12 hari. Hal ini disebabkan  oleh  aktifasi  bakteri  baru  terjadi  pada  waktu fermentasi 10-12 hari karena keadaan inhibitor atau pengaruh kondisi ketersediaan oksigen pada proses fermentasi sehingga bakteri  mengalami  proses  tidak  aktif  sehingga  tidak  bisa memfermentasi gula dalam sampel. Sedangkan pada penelitian sebelumnya,  aktifitas  bakteri  memproduksi  butanol  sudah berlangsung  pada  hari  ke-1  dan  produksi  butanol  optimum pada hari ke-6 [4]. Hal ini disebabkan oleh starter bakteri yang digunakan ditumbuhkan pada media yang memiliki komposisi yang  sama  dengan  media  pertumbuhan  sebelumnya. Sedangkan pada penelitian ini, starter tidak ditumbuhkan pada media serbuk gergaji. Sehingga mikroorganisme membutuhkan waktu  yang  lebih  lama  untuk  beradaptasi  dengan  lingkungan
yang  baru  sebelum  memulai  pertumbuhannya.  Fase  adaptasi ini disebut juga dengan fase log. Fase log ini akan pendek jika inokulum  yang  digunakan  adalah  bakteri  pada  media  yang memiliki  komposisi  sama  dengan  media  pertumbuhan sebelumnya.  Inokulasi  Fase  log  mengindikasikan  waktu  yang diperlukan  bakteri  untuk  mensintesis  enzim  yang  dibutuhkan dalam metabolisme nutrisi baru [7].

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN

## A. Kesimpulan
a. Kadar  gula  reduksi  pada  proses  hidrolisis  dengan penambahan  enzim  selulase  lebih  besar  13%  dibanding dengan  proses  hidrolisis  tanpa  penambahan  enzim selulase.
b. pH  optimum  untuk  fermentasi  limbah  serbuk  gergaji menjadi  biobutanol  menggunakan  bakteri Clostridium acetobutylicum adalah pH 5. c. Jumlah starter inokulum bakteri Clostridium acetobutylicum yang efektif pada proses fermentasi serbuk gergaji sebesar 10 ml.

## B. Saran
a. Sebaiknya  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  tentang fermentasi  butanol  dengan  menggunakan  limbah  bahan lignoselulosa lainnya.
b. Perlu dicoba penelitian lebih lanjut tentang proses hidrolisis dalam  berbagai  kondisi,  antara  lain  dalam  kondisi  asam, basa, atau proses hidrolisis lainnya.
c. Sebaiknya diperlukan penelitian lebih lanjut tentang jumlah penambahan enzim pada proses hidrolisis.
d. Hasil  fermentasi  berupa  aseton  dan  etanol  dapat dimanfaatkan untuk penelitian selanjutnya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis H.D.F. mengucapkan terima kasih kepada Bapak Ir. Eddy Setiadi Soedjono, Dipl. Eng., M.Sc. PhD., selaku Ketua Jurusan  Teknik  Lingkungan  serta  dosen-dosen  pengajar, karyawan  dan  laboran  di  Jurusan  Teknik  Lingkungan  ITS untuk semua ilmu dan bantuan yang telah diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Antara.http://www.republika.co.id/berita/ekonomi/makro/11/09/20/lrtr 20-diperkirakan-537000-barelhari-impor-bbm-2012,  diakses  pada  21 Februari 2012.
[2] Ohara,  H.,  Karita  S.,  Kimura  T.,  Sakka  K.,  and  Ohmiya  K.,  1998. “Cellulase  Complex  from  Ruminococcus  albus”.  Annual  Report  IC Biotech Vol. 21. 358-370
[3] Whitman W.B. 2009. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology 2 nd edition Volume: 3 The Firmicutes. New York
[4] Noomtim  P.,  dan  Cheirsilp  B.,  2011.  “Production  of  Butanol  from Palm  Empty  Fruit  Bunches  Hydrolyzate  by  Clostridium acetobutylicum”.  9th  Eco-Energy  and  Materials  Science  and Engineering Symposium. Energy Procedia 9 : 140-146.
[5] Azhiizhaa.  2012.  http://azhiizhaa.blogspot.com/2012/03/pembuatan- media-pengenceran-dan.html, diakses pada 20 Juli 2012.
[6] Qureshi  N.,  Ezeji  T.C.,  Ebener  J.,  Dien  B.S.,  Cotta  M.A.,  Blaschek H.P. 2008. “Butanol production by Clostridium beijerinckii ”. Part I:
[7] Jujubandung. http://jujubandung.wordpress.com/2012/06/05/kurva- pertumbuhan-bakteri/, diakses pada 23 Juni 2012.
[8] Rahma A., Junita D., Wuri L., 2011. Pabrik Biobutanol dari Ubi Kayu. TA. Program Studi Teknik Kimia-ITB