## KARAKTER SPESIFIK DAN PENGARUH PEMBERIAN ORAL
EKSTRAK TERPURIFIKASI KELOPAK ROSELLA ( Hibiscus sabdariffa

## L.) TERHADAP MAKROSKOPIS ORGAN HEPAR TIKUS WISTAR

## SPECIFIC CHARACTER AND EFFECT ORAL ADMINISTRATION OF
ROSELLA (Hibiscus sabdariffa L .) CALYX PURIFIED EXTRACT ON

## MACROSCOPIS WISTAR RATS HEPAR
Fita Sari, Dyah Aryantini

## Info Artikel
Sejarah Artikel: Diterima  1  Maret
2018 Disetujui  1  Juni 2018
Dipublikasikan  16 Juni 2018 Kata Kunci : Karakterisasi, ekstrak,  purifikasi, hepar, rosella
Keywords : characterize, extraxt, purified,
hepar, rosella
.

## Abstrak
Latar  belakang :  Proses  pembuatan  obat  tradisonal  memerlukan  karakter  spesifik yang  dapat  menjamin  kualitas  senyawa  bioaktif  tanaman  sehingga  memiliki aktivitas  farmakologi.  Ekstrak  yang  berkualitas  adalah  ekstrak  yang  memenuhi persyaratan standar parameter yang tercantum dalam Farmakope Herbal Indonesia. Tujuan :  Untuk  mengetahui  karakterisasi  spesifik  ekstrak  terpurifikasi  kelopak rosella  dan  pengaruhnya  terhadap  organ  hepar  Tikus  Wistar  secara  makroskopis. Metode : Purifikasi ekstrak, karakterisasi parameter spesifik dan pengamatan organ hepar.  Analisis  data  secara  deskriptif. Hasil :  Parameter  sari  larut  air  dengan  kadar 24,9 % dan kadar sari larut dalam etanol kadar 30,6%. Deteksi kandungan flavonoid menunjukkan R f senyawa bioaktif sama dengan R f quersetin. Simpulan dan saran: Karakter  spesifik  ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  memenuhi  persyaratan  FHI dan  melalui pemberian oral ekstrak tidak  mempengaruhi organ  hepar tikus  Wistar. Memerlukan uji aktivitas farmakologi terhadap kelompok hewan uji.

## Abstract
Background: The  process  of  making  traditional  medicine  requires  a  specific character  that  can  ensure  the  quality  of  bioactive  compounds  that  have pharmacological activity. Quality extracts are extracts that meet the requirements of the standard parameters listed in Farmakope Herbal Indonesia.
Objectives :    determine  the  specific  characterization  of  purified  extract  of  roselle calyx and their effect on liver organ Wistar Rats as macroscopis.
Methods: purification  of  extracts,  characterization  of  specific  parameters  and observation  of  liver  organ.  Descriptive  data  analysis. Result :  water  soluble  extract parameter  with concentration 24,9 % and soluble extract  content of  ethanol 30,6%.
Detection  of  flavonoid  content  showed  R f of  bioactive  compound  equal  to  R f quercetin.
Conclusions  and  suggestions: specific  character  of  purified  extract  suitable  to requirements  of  FHI  and  through  oral  administration  of  the  extract  does  not  affect the Wistar rats liver organ. Requires test of pharmacological activity against animal group of test.
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018

## PENDAHULUAN
Penyakit  merupakan  keadaan  yang  tidak  normal  dialami  oleh  tubuh,  karena berhubungan  dengan  organ  penting  lain  seperti  jantung,  paru  serta  otak.  Banyak  cara  yang digunakan  untuk  mencegah  dan  mengobati  terjadinya  penyakit  baik  secara  alami  maupun kimiawi.  Tanaman  di  Indonesia  memiliki  peran  penting  dalam  mengobati  berbagai  penyakit mulai  dari  akar,  batang,  daun,  kelopak  bunga  hingga  biji  dari  tanaman.  Berbagai  tanaman tradisonal  di  Indonesia  yang  tersebar,  banyak  dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  (Anonim, 2005).
Penemuan  obat  tradisional  memerlukan  suatu  rangkaian  pengujian  khusus  sehingga kualitas  dari  obat  tradisional  tetap  terjamin.  Terdapat  beberapa  syarat  mutu  dalam  pembuatan obat  tradisional  diantaranya  adanya  karakterisasi,  standardisasi  simplisia  dan  ekstrak, identifikasi senyawa aktif tanaman hingga menghasilkan suatu isolat murni yang siap dijadikan sebuah produk obat baru (Morales et al ., 2014). Produksi obat tradisional baru diperlukan suatu karakterisasi  dari  bahan  baku,  identifikasi  dan  perhitungan  total  senyawa  aktif  agar  terjamin keamanan dan khasiat suatu produk (S.Pramono et al., 2004). Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) merupakan tanaman yang sangat mudah dijumpai di Indonesia karena termasuk dalam golongan tanaman rumahan. Kandungan senyawa aktif rosella berfungsi sebagai antioksidan yang baik dan dapat meredam radikal bebas  (Ojeda et al ., 2010). Terdapat beberapa golongan  senyawa aktif dalam rosella  diantaranya asam organik,  antosianin yang  tercermin  dalam  warna  kelopak  rosella,  serta  flavonoid.  Antosianin  merupakan  golongan flavonoid  dengan  derivatnya  adalah gossypetin-8-glucoside serta gossypetin-7-glucoside yang menghasilkan pigmen warna alami pada rosella (Da-Costa-Rocha et al ., 2014).
Penelitian terdahulu yang berkaitan dengan manfaat senyawa aktif rosella sebagai terapi suatu  penyakit  yaitu  pada  ekstrak  air  kelopak  rosella  dengan  dosis  1  mg/kg  BB  hingga  1000 mg/kg  BB  memiliki  efek  menurunkan  tekanan  darah  pada  hewan  uji  dan  tidak  menimbulkan efek  toksik ( Hopkins et  al .,  2013).    Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Barhe et  al .,  (2016) menyatakan  bahwa  senyawa  flavonoid  banyak  terdapat  pada  kelopak  bunga  dengan  pigmen warna  menarik  memiliki  banyak  manfaat  sebagai  antioksidan  untuk  mengobati  berbagai penyakit.  Senyawa  flavonoid  dapat  berperan  dalam  menangkap  radikal  bebas  sehingga  tidak terjadi stres oksidatif dan tidak akan menimbulkan penyakit baru.
Penelitian  ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah tentang karakter  spesifik dari  ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  serta  pengaruhnya  secara  oral  terhadap  organ  hepar tikus  Wistar  secara  makroskopis.  Pelarut  yang  digunakan  dalam  ekstraksi  adalah  etanol dikarenakan  memiliki  sifat  kepolaran  sama  dengan  zat  aktif  rosella.  Karakterisasi  terhadap parameter  spesifik  ekstrak  dilakukan  untuk  menjamin  kandungan  senyawa  bioaktif  serta  efek farmakologi  kelopak  bunga  rosella,  keamanan  dan  khasiatnya  sebagai  produk  obat  tradisional baru  yang  terstandar.  Pembedahan  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh  tingkat  ketoksikan ringan  ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  terhadap  organ  hepar  sehingga  dapat  menentukan berapa  besarnya  dosis  dan  efek  senyawa  aktif  dalam  suatu  ekstrak  jika  diolah  menjadi  obat tradisional baru.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Simplisia  kelopak  rosella  yang  diperoleh  dari  kota  Kediri  Jawa  Timur,  etanol  70% (teknis),  N-heksan  (teknis),  akuades,  kloroform  (teknis),  n-butanol  (p.a),  asam  asetat  (pa), aquadest.
Corong Buchner , Alat Penggilingan, Erlenmeye r, Sonde (5 ml OneMed), Spuit injeksi ukuran 5 ml (Terumo), perangkat alat bedah hewan uji, perangkat KLT ( chambe r dan fase diam silica gel 60F 254), lampu UV 254 nm dan 366 nm.
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018

## Prosedur kerja 1. Prosedur Pembuatan Sampel Ekstrak Terpurifikasi
Serbuk  simplisia  kelopak  bunga  rosella  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  70%  sebanyak  tiga  kali  pada  suhu  kamar.  Maserat  diuapkan  dengan vacum  rotary evaporator suhunya  60 ο C  kemudian  diuapkan  di  atas  waterbath  hingga  didapatkan  ekstrak kental (Adeyemi et al ., 2014).
Ekstrak  kental  ditimbang  20  gram  dimasukkan  dalam  corong  pisah  kemudian  dilarutkan kembali  dengan  etanol  70%.  Penambahan  penyari  dan  pengadukan  dilakukan  secara bertahap  hingga  diperoleh  fase  bening.  Filtrat  yang  diperoleh  dimasukkan  ke  corong  pisah dan ditambah kloroform 100 ml. Kemudian digojog kurang lebih satu menit dan didiamkan selama 48 jam. Diperoleh fraksi kloroform dan kemudian difraksi kembali dengan kloroform sebanyak  tiga  kali  pengulangan  hingga  diperoleh  fraksi  bening.  Kemudian  hasil  dari  fraksi dipekatkan hingga diperoleh ekstrak kental dan dihitung rendemen.

## 2. Prosedur Penapisan Fitokimia
Skrining golongan senyawa saponin dengan cara menambahkan HCl 2N sebanyak 5 mL pada  sampel.  Larutan  didinginkan  kemudian  dikocok,  hasil  positif  ditunjukkan  dengan timbulnya busa konstan selama 30 detik.
Skrining  golongan  senyawa  alkaloid  dengan  cara  menambahkan  HCl  2N  sebanyak  5 mL  pada  sampel,  kemudian  dilakukan  uji  dengan  reagen  Mayer,  Wagner,  dan  Dragendorf. Hasil positif menunjukkan endapan putih dengan pereaksi Mayer, warna coklat muda dengan pereaksi Wagner, warna merah jingga dengan pereaksi Dragendorf.
Skrining  golongan  senyawa  tannin  dengan  cara  1  mL  sampel  dimasukkan  ke  dalam tabung reaksi dengan 10 mL aquadest kemudian disaring dan diteteskan 2-3 tetes FeCl 3. Hasil positif menunjukkan perubahan warna menjadi hijau kehitaman.
Skrining  golongan  senyawa  triterpenoid  dengan  menambahkan  3  tetes  reagen Lieberman-Buchard.  Hasil  positif  akan  menunjukkan  warna  merah  atau  ungu  pada  larutan sampel.
Skrining golongan senyawa flavonoid dengan cara 0,5 mg sampel ditambahkan dengan serbuk Mg 2 mg,  kemudian ditambahkan 3 tetes HCl pekat. Hasil positif akan menunjukkan warna orange jika terdapat kandungan flavonoid (Handarini, 2016).
Skrining golongan senyawa antosianin dengan cara 0,5 mg sampel ditambahkan HCl sebanyak 5 ml, kemudian dipanaskan pada suhu 100 º C selama 5 menit. Hasil positif jika terdapat kandungan antosianin akan menunjukkan warna merah (Handarini, 2016).

## 3. Prosedur Karakterisasi Parameter Spesifik
a. Uji Organoleptik
Uji  organoleptik  dari  ekstrak  terpurifikasi  meliputi  bentuk,  bau,  warna  dan  rasa  dari ekstrak terpurifikasi kelopak rosella (Astuti et al ., 2011).
b. Deteksi Kandungan Flavonoid
Deteksi  kandungan  flavonoid  dalam  sampel  menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT) dengan fase diam silika gel 60F 254 dan fase gerak menggunakan n-butanol : asam asetat  :  air  (6:6:1).  Ekstrak  kental  dan  quersetin  ditotolkan  pada  silika  gel  60F  254. Pengamatan dilakukan pada sinar tampak UV-Vis 254 nm dan 366 nm. Tujuan dilakukan identifikasi  flavonoid  menggunakan  KLT  adalah  untuk  mengetahui  profil  kromatografi senyawa  flavonoid  dalam  ekstrak  terpurifikasi  dan  menentukan  baku  standar  dengan membandingkan bercak antara ekstrak dan pembanding (Sari, 2015).
c. Penetapan Kadar Senyawa Larut Air
Sebanyak 0,5 gram ekstrak terpurifikasi kelopak rosella ditambahkan dengan 10 ml air dan kloroform,  kemudian  dimaserasi  di  labu  bersumbat.  Dilakukan  pengocokan  selama  enam jam  dan  diinkubasi  selama  18  jam  lalu  disaring.  Hasilnya  diuapkan  2  ml  filtrat  tersebut hingga kering di dalam cawan penguap. Residu dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap  dan  kemudian  hitung  persen  kadar  senyawa  larut  dalam  air  terhadap  berat  ekstrak awal.
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018

## d. Penetapan Kadar Senyawa Larut Etanol
Sebanyak 0,5 gram ekstrak terpurifikasi ditambahkan dengan 10 ml etanol 95% kemudian  dimaserasi  menggunakan  labu  bersumbat.  Lakukan  pengocokan  selama  enam jam  dan  diinkubasi  selama  18  jam  kemudian  disaring.  Hasilnya  diuapkan  2  ml  filtrat hingga  kering  di  dalam  cawan  penguap  serta  untuk  residu  dipanaskan  pada  suhu  105ºC sampai  bobot  tetap  kemudian  menghitung  persen  kadar  senyawa  larut  dalam  etanol terhadap berat ekstrak awal.
4. Prosedur Uji Pengaruh Pemberian Oral Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) terhadap Organ Hepar Tikus Wistar
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  tikus  Wistar  jantan.  Hewan  uji diperoleh  dari  lokasi  peternakan  hewan  coba  Wistar  Farm  Kediri.  Penelitian  ini  sudah mendapatkan  persetujuan  dari  komite  etik  Institut  Ilmu  Kesehatan  Bhakti  Wiyata  Kediri dengan nomor 109/PP2M-KE/IV/2018. Hewan uji dikondisikan pada suhu ruang 22ºC (± 3 ºC), dengan keadaan ruang terang selama 12 jam dan gelap selama 12 jam. Tikus diberikan makan  secukupnya  dan  air  minum ad  libitum (tanpa  batas)  dengan  adaptasi  selama  1 minggu.
Hewan  uji  dibagi  menjadi  empat  kelompok,  masing  –  masing  kelompok  terdiri  dari empat  ekor  tikus  secara  acak.  Empat  kelompok  dalam  penelitian  ini  terdiri  dari  kelompok kontrol    (I)  yang  hanya  diberikan  suspensi  CMC-Na,  kelompok  perlakuan  (II)  diberikan ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  100  mg/kg  BB,  kelompok  perlakuan  (III)  diberikan ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  200  mg/kg  BB,  kelompok  perlakuan  (IV)  diberikan ekstrak terpurifikasi kelopak rosella 400 mg/kg BB semua diberikan secara oral dengan cara dipuasakan 18 jam sebelum dipejani ekstrak terpurifikasi. Sampel diberikan satu kali di hari pertama    kemudian  dilakukan  pengamatan  selama  satu  jam  serta  diamati  perubahan  organ hepar  secara  makroskopis  dengan  dilakukan  pembedahan  organ  pada  tahap  akhir.  Kriteria pengamatan  untuk  uji  pengaruh  pemberian  ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  terhadap organ  hepar  adalah  warna  organ.  Pengamatan  dilakukan  secara  makroskopis  setelah dilakukan pembedahan organ.
5. Teknik dan Analisis Data
Penelitian ini menggunakan teknik random sampling dan data yang diperoleh disajikan dalam bentuk deskriptif .

## HASIL PENELITIAN

## 1. Hasil Pembuatan Sampel Ekstrak Terpurifikasi
Serbuk  simplisia  kelopak  rosella  sebanyak  200,12  gram  diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak 75,24  gram  dan  rendemen  sebesar  29,75  %.  Ekstrak  kental  hasil  purifikasi  diperoleh sebanyak 25,00 gram yang ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1. Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018

## 2. Hasil Penapisan Fitokimia
Uji skrining fitokimia awal menunjukkan bahwa terdapat beberapa kandungan senyawa kimia aktif dalam tanaman rosella, seperti yang tercantum pada Tabel 1.
Tabel 1. Skrining Fitokimia Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella
Skrining Fitokimia Hasil Flavonoid Positif (Merah) Antosianin Positif (Merah bening) Alkaloid Positif (Endapan Coklat) Tanin Positif (Biru Kehitaman) Steroid Negatif Triterpenoid Positif (Merah) Fenolik Positif (Lebih Merah Pekat) Saponin Negatif

## 3. Hasil Karakterisasi Parameter Spesifik Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella
a. Uji Organoleptik
Hasil pengujian organoleptik secara lengkap terlihat pada Tabel 2. Tabel 2. Hasil Uji Organoleptik dari Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella
Bentuk Ekstrak kental Warna Merak kecoklatan Rasa Masam Bau Khas rosella

## b. Deteksi Kandungan Flavonoid
Hasil  deteksi  kandungan  flavonoid  ekstrak  terpurifikasi  terhadap  kuersetin  secara KLT terlihat pada Gambar 2 berikut.
Gambar 2. Hasil KLT Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella dengan fase gerak Toluen:Asam Asetat:Asam Formiat (6:6:1) yang dilihat pada UV 254 nm Keterangan : a : totolan ekstrak terpurifikasi kelopak rosella b : totolan baku quersetin
a b
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018
Hasil  deteksi  kandungan  flavonoid  secara  KLT  menunjukkan  bahwa  ekstrak  terpurifikasi kelopak  rosella  mengandung  senyawa  flavonoid  sesuai  dengan  R f pembanding  quersetin  yang digunakan.
c. Penetapan Kadar Senyawa Larut dalam Air
Rerata  berat  ekstrak  setelah  dilakukan  uji  sebesar  0,124  gram.  Berat  ekstrak  awal  sebelum dilakukan uji sebesar 0,500 gram. Persen kadar senyawa larut air sebesar 24,9 % memenuhi persyaratan Farmakope Herbal Indonesia tidak kurang dari 15,5%.
d. Penetapan Kadar Senyawa Larut dalam Etanol
Rerata  berat  ekstrak  setelah  dilakukan  uji  sebesar  0,153  gram.  Berat  ekstrak  awal  sebelum dilakukan  uji  sebesar  0,500  gram.  Persen  kadar  senyawa  larut  etanol  sebesar  30,6% memenuhi persyaratan Farmakope Herbal Indonesia 16,3%.
4. Pengaruh Pemberian Oral Ekstrak Terpurifikasi Kelopak Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) terhadap Organ Hepar Tikus Wistar
Ekstrak terpurifikasi kelopak rosella, selain memiliki efek terapi juga diduga memiliki efek toksik  terhadap  suatu  organ.  Senyawa  aktif  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  terpurifikasi kelopak  rosella,  memiliki  tingkat  toksik  ringan  hingga  berat.  Hasil  uji  dari  pengamatan  secara makroskopis,  terlihat  bahwa  ekstrak  terpurifikasi  kelopak  rosella  yang  diberikan  secara  oral pada  hewan  uji  tikus  Wistar  tidak  menimbulkan  pengaruh  toksisitas  pada  organ  hepar  dalam Gambar 3. Ekstrak terpurifikasi kelopak rosella diberikan secara oral pada hari pertama dengan satu kali pemberian.
Gambar  3.  Hasil  pengamatan  makroskopis  pengaruh  ekstrak  terpurifikasi  pada  organ  hepar tikus Wistar
Keterangan: a : Organ hepar yang diberi larutan suspensi CMC-Na b : Organ hepar yang diberi ekstrak terpurifikasi kelopak rosella dosis 100 mg/kg BB c : Organ hepar yang diberi ekstrak terpurifikasi kelopak rosella dosis 200 mg/kg BB d : Organ hepar yang diberi ekstrak terpurifikasi kelopak rosella dosis 400 mg/kg BB

## PEMBAHASAN
Perbedaan  hasil  rendemen  ekstrak  dengan  penelitian  sebelumnya  (Sari et  al .,  2016) disebabkan oleh beberapa faktor meskipun hasil memperoleh sampel dari tempat tumbuh  yang sama,  diantaranya  pengaruh  suhu  ataupun  iklim  yang  sedang  terjadi.  Sehingga  hasil mendapatkan  sampel  juga  berpengaruh  pada  kualitas  dan  kuantitas.  Selain  itu  sifat  zat  aktif tanaman  atau  senyawa  metabolit  sekunder  tanaman  dan  jenis  kepolaran  dari  pelarut  dapat mempengaruhi hasil ekstraksi (Rezki et al ., 2015).
a
b c d
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018
Karakterisasi spesifik dari ektrak terpurifikasi kelopak bunga rosella memenuhi persyaratan yang  tercantum  dalam  monografi  Farmakope  Herbal  Indonesia.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa kualitas ekstrak purifikasi tersebut mampu menjamin senyawa bioaktif yang bertanggung jawab terhadap efek farmakologi.
Gambaran makroskopis hepar tikus wistar pada semua kelompok baik kelompok kontrol ataupun  kelompok  perlakuan  dosis  100,  200  dan  400  mg/kg  BB  tidak  menunjukkan  adanya kelainan  ataupun  perubahan  bermakna.  Organ  hepar  tidak  mengalami  pengerasan, permukaannya  halus  dan  warnanya  terlihat  merah  kecoklatan  atau  merah  pekat.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Liwandouw et  al., (2017) menunjukkan  bahwa  hepar  yang  normal  memiliki permukaan  rata  dan  halus  serta  berwarna  merah  kecokelatan,  sedangkan  hepar  yang  tidak normal  memiliki  permukaan  berbintik-bintik,  terdapat  kista  dan  mengalami  perubahan  warna. Penelitian  terdahulu  oleh  Kurniawan et  al., (2014)  organ  hepar  yang  normal  terlihat  berwarna merah pekat, jika ditekan terasa agak keras.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  terpurifikasi  rosella  tidak memberikan efek toksik pada organ tikus Wistar terutama pada hepar, hal ini bisa terjadi karena pada  rosella  mengandung  senyawa  antosianin  yang  memberi  efek  hepatoprotektif  (Da-Costa- Rocha et al., 2014). Percobaan pada penelitian Sireeratawong et al., (2013) tentang uji toksisitas ekstrak  air  kelopak  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  pada  hewan  coba  menunjukkan  bahwa ekstrak rosella tidak menyebabkan kerusakan di pankreas, hepar atau ginjal.

## SIMPULAN
Karakter  spesifik  ekstrak  terpurifikasi  memenuhi  syarat  yang  tercantum  dalam monografi  Ekstrak  Kelopak  Bunga  Rosella  pada  Farmakope  Herbal  Indonesia  dan  tidak memiliki pengaruh di organ hepar pada tikus Wistar.

## SARAN
Sebaiknya dilakukan uji aktivitas farmakologi dari masing-masing kelompok hewan uji, kemudian dari organ yang dibedah tidak hanya diamati secara makroskopis.

## REFERENSI
Adeyemi,  D.O.,  Ukwenya,  V.O.,  Obuotor,  E.M.,  Adewole,  S.O.,  2014.  Anti-hepatotoxic activities of Hibiscus sabdariffa L. in animal model of streptozotocin diabetes-induced liver damage. BMC Complement. Altern. Med. 14, 277. doi:10.1186/1472-6882-14-277.
Astuti  Indah  S.,  Tulandi  Maximus  S.,  Ulfa  Maria  D.  2011. Serial  Buku  Ajar Analis Farmasi dan Makanan, Analisa Obat Tradisional. Politeknik Kesehatan Kemenkes
Jakarta II.
Barhe A.T., Tchouya Feuya R.G., 2016. Comparative study of the anti-oxidant   activity  of  the total polyphenols extracted from Hibiscus sabdari ﬀ a L.,  Glycine  max  L.  Merr.,  yellow tea and red wine through reaction with   DPPH  free  radicals.  Arabian Journal of Chemistry. Issue 9. Halm. 1 – 8.
BPOM RI, 2005. Standarisasi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia, salah satu Tahapan Penting dalam Pengembangan Obat Asli Indonesia. Info POM.
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018
Da-Costa-Rocha,  I.,  Bonnlaender,  B.,  Sievers,  H.,  Pischel,  I.,  Heinrich,  M.,  2014.  Hibiscus sabdariffa L. - A Phytochemical And Pharmacological Review. Food Chem . 165, 424–
443. doi:10.1016/j.foodchem.2014.05.002.
Handarini, K., 2016. Potensi Ekstrak Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) Sebagai Pewarna dan Pengawet Alami Pada Jelly Jajanan Anak. Heuristic J. Tek. Ind. 11.
Hopkins,  A.L.,  Lamm,  M.G.,  Funk,  J.,  Ritenbaugh,  C.,  2013. Hibiscus  sabdariffa L.  in  The Treatment Of Hypertension  And Hyperlipidemia: a Comprehensive Review of Animal and Human Studies. Fitoterapia 85, 84–94. doi:10.1016/ j.fitote. 2013.01.003.
Kurniawan Yoga Andi W.I., Wiratmini I.N., Sudatri W.N., 2014. Histologi Hati   Mencit  ( Mus musculus L.) Yang Diberi Ekstrak Daun Lamtoro ( Leucaena leucocephala ). Jurnal
Simbiosis II (2): 226 - 235. Udayana.
Liwandouw R.J., Simbala H., Bodhi Widdhi. 2017. Pengaruh Ekstrak Etanol
Buah  Pinang Yaki ( Areca vestiaria ) Terhadap Gambaran Makroskopis Organ Hati Pada Tikus
Putih Jantan Galur Wistar ( Rattus norvegicus ).   Jurnal  Ilmiah  Farmasi.  Unsrat.  Vol.  6.
No. 3. ISSN : 2302 - 2493.
Morales,  G.,  Paredes,  A.,  Olivares,  A.,  Bravo,  J.,  2014.  Acute  Oral  Toxicity  And  Anti- Inflammatory  Activity  Of  Hydroalcoholic  Extract  From Lampaya  medicinalis  Phil in rats. Biol. Res. 47, 6. doi:10.1186/0717-6287-47-6.
Ojeda, D., Enrique Jiménez-Ferrer, E., Enrique, A., Herrera-Arellano, A., Tortoriello,  J., & Alvarez, L. (2010). Inhibition Of Angiotensin Convertin Enzyme (Ace) Activity By The Anthocyanins Delphinidin-And Cyanidin- 3-O-Sambubiosides From Hibiscus sabdariffa . Journal of Ethnopharmacology .  Retrieved  October  2, 2015.
Rezki,  R.  S.,  Anggoro,  D.,  &  Mz,  S.  (2015).  Ekstraksi  Multi  Tahap  Kurkumin  Dari  Kunyit  ( Curcuma    domestica Valet)  Menggunakan  Pelarut  Etanol. Jurnal  Teknik  Kimia  Usu,
Article In Press .
Sari, R.P., 2015. Pengaruh Jenis Solvent Terhadap Stabilitas Zat Warna Pada Ekstrak Kelopak Bunga Rosella Dengan Metode Analisa Spektrofotometer ( Solvents Effect To Substance Stability Of Rosella Flower Extract With Spectrophotometer Analysis Method ) (Other). Undip.
Sari,  Fita.,  Nurkhasanah.,  Bachri  Saiful  Moch.  2016.  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol Kelopak Rosella ( Hibiscus Sabdariffa L.) Pada Tikus Sprague Dawley. Trad. Medicine Journal. Universitas Gajah Mada. Vol. 21 (1). Halm. 12-18.
Fita Sari | Karakter Spesifik Dan Pengaruh Jurnal Wiyata, Vol. 5 No. 1 Tahun 2018
Sireeratawong, S. (2013). Toxicity Studies Of The Water Extract From The Calyces Of Hibiscus  sabdariffa L. In Rats. Afr J Tradit Complement Altern Med. (2013) 10
(4):122-127 , 10 (4) , 122–127.
S. Pramono., D. Ajiastuti. 2004. Standardisasi Ekstrak Herba Pegagan ( Centella   asiatica (L) Urban) Berdasarkan Kadar Asiaticosida secara KLT- Densitometri. Majalah
Farmasi Indonesia. Vol. 15 (3). Halm. 119 - 123.