## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN DADAP AYAM
(Erythrina variegata L .) TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA

## TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR (Rattus norvegicus)
Stefani Tjiphanata 1) , Edwin De Queljoe 1) , Sri Sudewi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Spermatozoa are a sperm cell that has flagella and produced in spermatogenesis. To fertilize the ovum, the spermatozoa have to have a good quality. The Quality of spermatozoa is one of the most important elements to evaluate the male fertility. This study was being held to determine the effect of applying  ethanol  extract  of  Dadap  leaf  against  the  quality  of  white  male  Wistar  rats  (Rattus norvegicus)’s spermatozoa. This study is using a complete random design (CRD) approached, using 24  white  male  Wistar  rats  (Rattus  norvegicus)  divided  into  several  groups  where  the  group  1  as  a non-treatment control group, while the group 2, 3 and 4 as the treatment groups with dosage of 200 mg, 400 mg and 800 mg, respectively. Treatment is given by oral with 1 cc once a day for 50 days follows  the  cycle  of  spermatogenesis.  The  observed  variable  included  the  quantity,  motility  and morphology of spermatozoa. The results of this study showed that the ethanol extract of Dadap leaf could reduce the quality of spermatozoa in terms of quantity, motility and morphology while based on statistic, the ethanol extract of Dadap leaf can only reduce the quality of spermatozoa in mophology aspect significantly.
Keywords :  Dadap  leaf  (Erythrina  variegata  L.),  spermatozoa,  white  male  wistar  rats  (Rattus norvegicus)

## ABSTRAK
Spermatozoa  adalah  sel  kelamin  jantan  yang  memiliki  bulu  cambuk  dan  dihasilkan  dalam spermatogenesis.  Untuk  dapat  membuahi  sel  telur,  syarat  yang  harus  dipenuhi  spermatozoa  adalah bahwa  kualitas  spermatozoa  harus  baik.  Kualitas  spermatozoa  merupakan  salah  satu  unsur  penting untuk evaluasi kesuburan pria. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol  daun  dadap  ayam  terhadap  kualitas  spermatozoa  tikus  putih  jantan  galur    wistar  ( Rattus norvegicus ).  Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  menggunakan  24 ekor tikus putih jantan galur  wistar ( Rattus norvegicus ) yang dibagi atas beberapa kelompok dimana kelompok  1  sebagai  kelompok  kontrol  tanpa  perlakuan,  kelompok  2,  3  dan  4  sebagai  kelompok perlakuan denagn dosis secara berturut-turut 200 mg, 400 mg dan 800 mg. Perlakuan diberikan secara oral sekali sehari sebanyak 1 cc selama 50 hari sesuai siklus spermatogenesis. Variabel yang diamati meliputi  jumlah,  motilitas  dan  morfologi  spermatozoa.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol daun dadap ayam dapat menurunkan kualitas spermatozoa dari segi kuantitas, motilitas serta morfologi spermatozoa  sedangkan berdasarkan statistik ekstrak daun dadap ayam hanya dapat menurunkan kualitas spermatozoa dalam aspek morfologi spermatozoa secara signifikan.
Kata  Kunci :  Dadap  Ayam (Erythrina  variegata L .) ,  spermatozoa,  tikus  putih  jantan  galur  wistar (Rattus norvegicus)

## PENDAHULUAN
Spermatozoa merupakan sel kelamin  jantan  yang  memiliki  bulu cambuk dan dihasilkan dalam spermatogenesis. Proses pematangan spermatozoa sebagian besar berlangsung di epididimis  melalui  serangkaian  perubahan morfologi  dan  fungsi  sehingga  dihasilkan spermatozoa  yang  motil  dan  fertil  yang dapat  membuahi  sel  telur.  Untuk  dapat membuahi  sel  telur,  syarat  yang  harus dipenuhi spermatozoa adalah bahwa kualitas  spermatozoa  harus  baik.  Kualitas spermatozoa  merupakan  salah  satu  unsur penting  untuk  evaluasi  kesuburan  pria (Soehadi et al., 1983).
Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk mengendalikan kesuburan pria yaitu melalui penggunaan bahan alam dari  beberapa  tumbuhan  yang  mempunyai bahan  aktif  yang  bersifat  antifertilitas. Pemanfaatan  bahan  alam  dari  tumbuhan untuk  pengobatan  tradisional  memiliki kelebihan  selain  murah  dan  mudah didapat,  juga  memiliki  efek  samping  yang relatif  lebih  kecil  dibandingkan  dengan bahan  kimia  atau  sintetik  (Warara et  al., 2016).
Dadap  Ayam (Erythrina  variegata L .) merupakan  tumbuhan  termasuk  famili Leguminosae,  tersebar  luas  di  Indonesia. Dadap  Ayam (Erythrina  variegata L .) adalah  salah  satu  tumbuhan  yang  telah lama  digunakan  masyarakat  Indonesia dalam  pengobatan  tradisional,  diantaranya sebagai antimalaria, antidiare dan antipiretik  (Hanum et  al. ,  1997).  Bagian tumbuhan yang digunakan dalam pengobatan  adalah  kulit  batang,  daun, akar,  dan  biji.  Secara  kimia  tumbuhan  ini
mengandung  senyawa  alkaloid,  tanin, flavonoid, dan resin. Ditinjau dari zat aktif yang  terdapat  dalam  Dadap  Ayam, menurut  penelitian  Susetyarini  (2009) dilaporkan bahwa senyawa-senyawa seperti alkaloid, flavonoid, dan tanin dapat mempengaruhi  fertilitas  tikus  jantan.  Pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Herlina et  al. (2008),  dilaporkan  bahwa ekstrak  metanol  dari  daun  Dadap  Ayam (Erythrina  variegata L .) yang  dilakukan secara  in  vitro  pada  dosis  0,25  x  10 -3  g/  L  berpotensi  sebagai  antifertilitas karena  dapat  mempengaruhi  kualitas spermatozoa  tikus  putih  jantan  yang meliputi  penurunan  motilitas,  viabilitas serta meningkatkan abnormalitas morfologi.
Informasi  mengenai  khasiat  Dadap
Ayam  ( Erythrina  variegata L .) sebagai antifertilitas  secara  tradisional  masih sangat  terbatas  dan  belum  banyak  diteliti di  Indonesia.  Hal  ini  kemudian  yang melatarbelakangi peneliti untuk melakukan penelitian  yang  belum  dilakukan  oleh peneliti sebelumnya yaitu mengenai pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  daun Dadap  Ayam (Erythrina  variegata L .) terhadap  kualitas  spermatozoa  tikus  putih jantan galur wistar (Rattus norvegicus).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium yang menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL),  dilaksanakan  pada  priode  Agustus 2016 sampai Januari 2017 di Laboratorium Patologi  Anatomi  Fakultas  Kedokteran dan  Laboratorium  Penelitian  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan
Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam
Ratulangi Manado. Penelitian ini menggunakan  24  ekor  tikus  wistar berumur  2-3 bulan dengan bobot rata-rata 150-200 gram.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  timbangan  analitik (ADAM  KERN),  ayakan  mesh  200,  oven (Ecocell),  gelas  ukur  1000  mL (Pyrex) , beaker  glass 500  mL (Pyrex) ,  labu  ukur 100  mL,  batang  pengaduk,  corong,  pipet tetes, alat sonikasi (Janres ultra 8060D-H), kertas saring, sarung tangan lateks, masker (Sensi Mask ),  botol  sampel,  gunting, blender  (Philips),  cawan  petri (Pyrex) , kandang,  mikroskop  elektron,  dispo  5  cc (One  Med),  hemasitometer,  sonde  oral, seperangkat  alat  bedah, hot  plate,  object glass dan cover glass .
Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  tikus  wistar  jantan (Rattus  norvegicus) 24  ekor,  daun  Dadap Ayam (Erythrina  variegata L. ) ,  etanol
96%,  metanol,  aquadest ,  aluminium  foil , carboxymethyl cellulose (CMC) 1%, pakan tikus  putih  jantan  galur  wistar (Rattus norvegicus) ,  formalin  35%,  safranin  1%, eter, natrium bikarbonat (NaHCO 3 ) .

## Ekstraksi
Sebanyak  450  gram  serbuk  daun Dadap  Ayam  ditimbang  dan  dimasukkan dalam beaker  glass kemudian  diekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dengan cara  serbuk  simplisia  ditambahkan  pelarut etanol  96%  hingga  volumenya  melewati batas  tinggi  sampel  di  dalam  beaker  gelas sehingga  sampel  terendam  sempurna dengan  perbandingan  1:4  (w/v)  kemudian diaduk  hingga  homogen,  setelah  itu ditutup  dengan aluminium  foil dan
dibiarkan  selama  3  hari  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  3  hari  sampel  yang direndam  tersebut  disaring  menggunakan kertas  saring  sehingga  diperoleh  filtrat. Filtrat yang diperoleh diuapkan menggunakan  oven  pada  suhu  40 0 C sehingga diperoleh ekstrak kental.

## Tahap Perlakuan
Perlakuan  pemberian  ekstrak  daun Dadap  Ayam  dilakukan  setelah  hewan percobaan  mengalami  aklimatisasi  selama 1  minggu.  Setelah  itu  dibagi  menjadi  4 kelompok perlakuan, masing-masing kelompok  terdiri  dari  6  ekor  tikus  wistar. Kelompok  perlakuan  yang  digunakan adalah  kelompok  kontrol  (tidak  diberi ekstrak) dan kelompok yang diberi ekstrak daun  Dadap  Ayam (Erythrina  variegata
L. ) dengan  3  dosis  yang  berbeda-beda yaitu 200 mg, 400 mg, dan 800 mg (Faktor konversi  dosis  manusia  ke  tikus  =  0,018).
Ekstrak  daun  Dadap  Ayam  diberikan melalui sonde lambung. Pemberian dilakukan  selama  50  hari  sesuasi  siklus spermatogenesis.

## Pengambilan Sperma
Setelah  50  hari,  masing-masing hewan  uji  dibius  menggunakan  eter, kemudian  di  bedah  dan  diambil  bagian cauda  epididimis untuk  mendapatkan sperma.  Setelah  itu cauda  epididimis diletakkan  pada objek  glass ,  kemudian diurut/diplirit hingga sperma keluar.
Sperma  yang  diambil  kemudian  dinilai jumlah, motilitas serta morfologi spermatozoa.

## Pengukuran Parameter
Perhitungan jumlah
spermatozoa dilakukan  dengan  cara  memipet  sperma dengan menggunakan pipet khusus eritrosit  sampai  skala  0,5.  Kemudian sperma diencerkan dengan larutan
pengencer sampai tanda 101 (Pengenceran 200x)  lalu  dikocok  sampai  homogen. Larutan  sperma  dikocok  dan  di  buang  3 tetes  kemudian  diteteskan  pada  kamar hitung yang sudah ditutup dengan menggunakan cover glass . Sediaan tersebut  dibiarkan  sebentar  agar  sel-sel spermatozoa mengendap, sehingga memudahkan  perhitungan.  Pemeriksaan dilakukan  dengan  5  lapang  pandang  pada kamar  hitung  dibawah  mikroskop  dengan pembesaran 400x (WHO, 2010).
Menurut  Soehadi et  al. (1987), perhitungan jumlah spermatozoa dilakukan dengan  cara  mengalikan  jumlah  sel spermatozoa yang terhitung dalam 5 kotak dengan  pengenceran  (200x)  dan  dikalikan dengan faktor Neubauer .
Konsentrasi spermatozoa = N x 200 x 10000 Dimana  N  adalah  jumlah  sel spermatozoa yang terhitung dalam 5 kotak, 200 adalah pengenceran dan 10000 adalah faktor Neubauer (Soehadi et al. , 1987).
Pengamatan motilitas spermatozoa dilakukan dengan cara meneteskan sediaan sperma  pada  object  glass  dan  ditutup dengan  cover  glass,  kemudian  diamati  di bawah  mikroskop  dengan  pembesaran 400x.  Perhitungan  motilitas  spermatozoa dilakukan dengan cara menghitung
persentase  spermatozoa  kategori  progresif dari 100 spermatozoa. Pengamatan motilitas  perlu  dilakukan  pertama  kali karena  motilitas  spermatozoa  mudah
mengalami  penurunan  pada  saat  berada diluar tubuh (WHO, 2010).
Pengamatan morfologi spermatozoa dilakukan  dengan  cara  O.  Steeno.  Sperma diletakkan  pada  object  glass  kemudian  di buat  sediaan  hapusan  lalu  dikeringkan. Kemudian difiksasi dengan larutan metanol  selama  5  menit  dan  dikeringkan diudara.  Setelah  itu  dicelupkan  ke  dalam larutan  safranin  1%  selama  5  menit  dan dibilas  dengan  air  dan  dikeringkan (Soehadi  et  al.,  1987).  Preparat  kemudian diamati  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran  400x.  Kemudian  dari  100 spermatozoa, dihitung persentase spermatozoa  yang  memiliki  morfologi normal. Pengamatan dilakukan pada kelainan bentuk atau abnormalitas spermatozoa  yang  meliputi  abnormalitas pada  bagian  kepala  dan  ekor  (midpiece, principal  piece  dan  end  piece)  (WHO, 2010).

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dari  jumlah, motilitas  dan  morfologi  spermatozoa kemudian dianalisis secara statistik dengan menggunakan parametrik One Way ANOVA dan  dilanjutkan  dengan  uji  BNT untuk  mengetahui  adanya  perbedaan  antar kelompok perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Jumlah/Konsentrasi Spermatozoa
Didapatkan hasil rerata konsentrasi spermatozoa, dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rerata Konsentrasi Spermatozoa
Kelompok Konsentrasi Spermatozoa x10 6 Juta/mL Kontrol 196,75 Dosis rendah (200 mg) 146
Dosis sedang (400 mg) 141 Dosis tinggi (800 mg) 138,75
Pada Tabel 1. Dapat dilihat  terjadi penurunan  konsentrasi  spermatozoa  pada semua  kelompok  perlakuan  terhadap kelompok  kontrol.  Penurunan  konsentrasi spermatozoa  diduga  disebabkan  karena adanya kandungan zat aktif tanin. Menurut Susetyarini (2009), tanin dapat menghambat perkembangan spermatid menjadi spermatozoa
sehingga spermatozoa  yang  dihasilkan  menjadi berkurang.  Namun  berdasarkan  analisis statistik yang diuji menggunakan
paremetrik One  Way  Anova penurunan konsentrasi  spermatozoa  yang  terjadi belum  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan  pada  pemberian  ekstrak  daun Dadap Ayam yang dibuktikan dengan nilai Sig 0,611 ( p  0,05).  Hal ini juga diduga dikarenakan dosis pemberian belum cukup untuk menyebabkan penurunan konsentrasi spermatozoa secara signifikan.

## Motilitas Spermatozoa
Didapatkan hasil rerata motilitas spermatozoa, dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Rerata Motilitas Spermatozoa Kelompok Motilitas Spermatozoa normal (%) Kontrol 65 Dosis rendah (200 mg) 40 Dosis sedang (400 mg) 32,5 Dosis tinggi (800 mg) 37,5
Pada Tabel 2. Dapat dilihat  terjadi penurunan  motilitas  spermatozoa  pada semua  kelompok  perlakuan  terhadap kelompok  kontrol.  Penurunan  motilitas spermatozoa  akibat  pemberian  ekstrak daun  Dadap  Ayam  ini  diduga  disebabkan oleh  adanya  zat  aktif  yang  bersifat sitotoksis atau mempunyai efek
spermatisida terhadap spermatozoa. Dalam hal  ini  diduga  zat  alkaloid  yang  terdapat pada daun Dadap
Ayam yang menyebabkan
penurunan
kualitas spermatozoa  melalui  efek  sitotoksis  ini.
Namun  belum  teridentifikasi  secara  pasti jenis  golongan  alkaloid  yang  terkandung dalam  daun  Dadap  Ayam.  Menurut Ganong (2011), alkaloid dapat menurunkan motilitas spermatozoa, karena alkaloid  dapat  mengganggu  aktivitas enzim  ATP-ase  yang  ada  dalam  membran sel  spermatozoa  pada  bagian  tengah  ekor. ATP-ase tersebut berfungsi mempertahankan homeostatis internal untuk  ion  natrium  dan  kalium.  Jika aktivitas ATP-ase terganggu, maka homeostatis  ion  natrium  dan  kalium  akan
terganggu. Apabila ion natrium dan kalium terganggu  maka  motilitas  spermatozoa juga  akan  terganggu  karena  motilitas spermatozoa  sangat  bergantung  pada komposisi  kalium  dan  natrium  (Gradi  dan Nelson, 1972).
Selain  senyawa  alkaloid,  senyawa flavonoid  dan  tanin  yang  terdapat  pada daun Dadap Ayam juga dapat menurunkan motilitas  spermatozoa.  Menurut  Cambie dan  Brewis  (1995),  Flavonoid  mampu merangsang  pembentukan  estrogen  yang dapat meningkatkan kadar estrogen. Kadar estrogen  akan  memberikan  umpan  balik negatif  ke  hipofisis  anterior,  yaitu  tidak melepaskan FSH dan LH. Penurunan kadar LH  menyebabkan  gangguan  terhadap sekresi testosteron oleh sel leydig. Dengan adanya gangguan terhadap sekresi testosteron  maka  motilitas  spermatozoa menjadi  terganggu.  Dan  senyawa  tanin dapat mengganggu aktivitas protein dinein yang  merupakan  salah  satu  protein  yang terdapat  pada  ekor  sperma,  yang  akan menurunkan motilitas spermatozoa.
Protein  ini  penting  karena  mempunyai aktivitas ATP-ase yang berfungsi mempertahankan homeostatis internal untuk  ion  natrium  dan  kalium.  Selain  itu
tanin juga bersifat toksik pada spermatozoa.  Tanin  bersifat  astringent yang  menyebabkan  terjadinya  pengerutan
sel,  sehingga  dapat  berpengaruh  terhadap permeabilitas membran sel sperma (Merck Indeks,    1985).  Dengan    adanya    sifat astringen    ini,  maka    tannin    yang    ada dalam    daun  dadap  ayam  tersebut      dapat menyebabkan      transportasi      zat makanan/nutrisi        melalui        membran terganggu.  Robertis    dan    Robertis  (1979) melaporkan, bahwa permeabilitas membran    erat    kaitannya    dengan transport    nutrisi  yang      diperlukan      pada metabolisme      sel      dalam  menghasilkan energi  sehingga  apabila  transpor  nutrisi terganggu maka spermatozoa akan kekurangan energi. Energi yang berkurang ini dapat menurunkan motilitas
spermatozoa Namun  berdasarkan  hasil  analisis
statistik yang diuji menggunakan paremetrik One  Way  Anova penurunan motilitas  spermatozoa  yang  terjadi  belum menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan pada pemberian ekstrak daun Dadap Ayam yang dibuktikan dengan nilai Sig  0,141  (p  0,05)  .    Hal  ini  diduga  karena  dosis pemberian belum cukup untuk
menyebabkan penurunan motilitas
spermatozoa secara signifikan.
Morfologi Spermatozoa
Didapatkan hasil rerata morfologi spermatozoa, dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Rerata Morfologi Spermatozoa Kelompok Morfologi spematozoa normal (%) Kontrol 77,5 Dosis rendah (200 mg) 65 Dosis sedang (400 mg) 42,5 Dosis tinggi (800 mg) 35
Pada  Tabel  3.  Dapat  dilihat  terjadi penurunan
persentase morfologi spermatozoa normal pada semua kelompok perlakuan terhadap kelompok kontrol. Dan hasil  analisis  uji  Anova  menunjukan bahwa  pemberian  ekstrak  daun  Dadap Ayam dapat menurunkan morfologi spermatozoa  normal  secara  signifikan (bermakna) yang dibuktikan dengan nilai p =  0,037  (p  0,05).  Sehingga  dilanjutkan dengan  uji  BNT  terlihat  bahwa  perbedaan yang  signifikan  hanya  terjadi  di  antara perlakuan  2  dan  perlakuan  3  terhadap kontrol  (p  0,05),  sedangkan  antar perlakuan-perlakuan  yang  diujikan  tidak terdapat perbedaan yang signifikan. Sehingga dapat disimpulkan bahwa perlakuan  2  dan  perlakuan  3  cukup  baik secara statistik dalam menurunkan persentase morfologi  spermatozoa normal. Namun berdasarkan Tabel 3 terlihat rerata morfologi spermatozoa normal pada kelompok perlakuan 3 mengalami penurunan  yang  lebih  besar  dibandingkan perlakuan  2.  Sehingga  dapat  disimpulkan kelompok  perlakuan  yang  paling  baik dalam menurunkan morfologi spermatozoa normal  serta  meningkatkan  abnormalitas pada morfologi spermatozoa adalah kelompok  perlakuan  3  dengan  dosis  800 mg.  Hal  ini  berarti  semakin  besar  dosis ekstrak daun Dadap Ayam yang digunakan maka  persentase  morfologi  spermatozoa yang abnormal akan semakin meningkat.
Menurut  Ermayanti  et  al  (2010), meningkatnya  bentuk  spermatozoa  yang abnormal  kemungkinan  disebabkan  oleh abnormalitas  primer  dan  abnormalitas sekunder.  Berdasarkan  hasil  pengamatan, bentuk  abnormalitas  yang  paling  banyak dijumpai adalah abnormalitas primer, yaitu kelainan  pada  kepala  seperti  kepala  rusak dan tanpa kepala. Sedangkan abnormalitas
sekunder  yang  paling  banyak  dijumpai, yaitu  kelainan  pada  ekor  seperti  ekor pendek  dan  tanpa  ekor.  Abnormalitas primer    terjadi  diduga  karena  adanya gangguan spermatogenesis di dalam tubulus seminiferus pada fase spermiogenesis yaitu pada saat pembentukan  spermatozoa  dari  spermatid, sedangkan  abnormalitas  sekunder  terjadi diduga  karena  adanya  gangguan  maturasi spermatozoa dalam epididimis.
Peningkatan
abnormalitas morfologi  spermatozoa  akibat  pemberian ekstrak daun Dadap Ayam juga disebabkan  karena  adanya  kandungan alkaloid.  Menurut  Sundari  dan  Winarno (1997),  alkaloid  dapat  menekan  sekresi hormon testosteron. Apabila kadar testosteron  rendah  maka  kemungkinan terjadi  gangguan  pada  perkembangan spermatid menjadi spermatozoa dan proses pematangan  spermatozoa  di  epididimis yang menyebabkan terjadinya abnormalitas  spermatozoa  (Partodiharjo,
1980).
Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan penelitian  sebelumnya  tentang  potensi tumbuhan  Erythrina  sebagai  antifertilitas oleh Herlina et al (2008) yang menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  Dadap
Ayam  dapat  menurunkan  motilitas  serta dapat meningkatkan abnormalitas morfologi spermatozoa.

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  Dadap Ayam secara statistik dapat mempengaruhi bentuk  morfologi  spermatozoa  secara signifikan  ( p  0,05),  namun  tidak signifikan  dalam  menurunkan  jumlah  dan motilitas spermatozoa. Sedangkan berdasarkan  pengamatan,  ekstrak  daun
Dadap  Ayam  dapat  menurunkan  jumlah dan motilitas.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  dengan  menggunakan  dosis  yang lebih  besar  untuk  membuktikan  efek antifertilitas dari daun Dadap Ayam.

## DAFTAR PUSTAKA
Cambie,  R.C.,  and  Brewis  A.A.  1995. Antifertility  Plants  of  The  Pacific .
CSIRO, Australia.
Ermayanti, N.G.A.M., dan N.M.R. Suarni. 2010. Kualitas Spermatozoa
Mencit  ( Mus  Musculus L.)  Setelah Perlakuan  Infus  Kayu  Amargo ( Quassia amara Linn.) dan Pemulihannya. Jurnal biologi. 14(2): 45-49
Ganong,  W.F.  2001. Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran . Penerbit Buku
Kedokteran EGC, Jakarta.
Grady, A.V., and Nelson, L 1972. Cationic influences  on  sperm  biopotensial .
Experimental Cell Research
Hanum,  F.,  and  L.J.G.  Maesen.  1997.
Plant  Resources  of  South-East Asia . Prosea, Bogor.
Herlina, T., E. Julaeha., U. Supratman., A.
Subarnas., S. Sutardjo. 2008. Potensi Tumbuhan Erythrina (Leguminosae) sebagai Antifertilitas. Jurnal  Kedokteran
Maranatha . 7(2): 1-8.
Merck  Index.  1985. An  Encyciopedia  of Chemical  and  Drug s.  Merck  and Company, New Yersey.
Partodihardjo,  S.  1980. Imu  Reproduksi Hewan . Mutiara, Jakarta
Robertis   E.D., and  Robertis, E.M.   1979. Cell      and  moleculer      Biology .
Sauders Colleg, Philadelphia. Soehadi,  K.,  dan  K.M.  Arsyad.  1983. Analisis Sperma . Universitas
Airlangga, Surabaya. Soehadi,  K.,  dan  H.  Winars.  1987. Arah Pemeriksaan Laboratorium
Andrologi. Universitas  Airlangga, Surabaya.
Sundari,  D.,  dan  Winarno,  W.  1997.
Informasi  Tanaman  Obat  Untuk Kontrasepsi  Tradisional .  Penerbit Cermin Dunia Kedokteran, Jakarta.
Susetyarini,  E.  2009.  Efek  Senyawa  Aktif Daun  Beluntas  terhadap  Kadar Testosteron Tikus (Rattus novergicus) Jantan. Journal Gamma . 5(1): 21-27. Warara,  S.G.,  E.D.  Queljoe.,  H.Simbala. 2016. Identifikasi Senyawa Fitokimia dan Uji Toksisitas
Ekstrak    Etanol  Daun    Dadap Ayam ( Erythrina variegata L.) dari Tidore  Kepulauan  Menggunakan Metode  Bslt  . Journal  Pharmacon.
5(3): 102-109.
World  Health  Organization.  2010. WHO
Laboratory Manual for The
Examination  and   Processing  of Human  Semen.  5 th Edition .  WHO Press, Switzerland.