## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Daun Pining Bawang ( Horntedtia alliacea )
Jekilian Sumati Popala 1* , Jeane Mongie 1 , Selvana S. Tulandi 2 , Friska Montolalu, 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
*Penulis Korespondensi:jekilianspopala@gmail.com
Diterima tanggal :  27 Januari 2022, Disetujui tanggal : 28 April 2022

## ABSTRAK
Tumbuhan  pining  bawang Hornstedtia  alliacea merupakan  salah  satu  jenis  tumbuhan  yang terdapat di Kabupaten Halmahera Barat  Provinsi Maluku Utara. Secara tradisional masyarakat sekitar  telah  memanfaatkan  sebagai  obat  mual.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang terkandung dalam  ekstrak daun pining bawang H. alliacea dan aktivitasnya sebagai antioksidan serta nilai antioksidannya yang  dinyatakan dalam  IC 50 .  Jenis  dalam  penelitian  ini  yaitu  penelitian  eksperimental  di  laboratorium menggunakan  metode  DPPH.  Hasil  penelitian  menunjukkan  kandungan  senyawa  yang terkandung dalam daun pining bawang H. alliacea yaitu senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, steroid, saponin dan fenolik. Senyawa kimia yang terkandung dalam daun pining bawang H. alliacea salah  satunya  adalah  fenol  yang  merupakan  golongan  utama  antioksidan  yang terdapat pada tumbuh-tumbuhan. Antioksidan dapat mencegah oksidasi dan dapat melindungi tubuh  dari  radikal  bebas.  Radikal  bebas  merupakan  suatu  molekul  yang  memiliki  elektron tidak berpasangan dalam orbital terluarnya sehingga sangat reaktif. Senyawa radikal bebas ini cenderung  mengadakan  reaksi  berantai  yang  apabila  terjadi  di  dalam  tubuh  maka  dapat mengakibatkan kerusakan pada sel-sel  yang ada didalam tubuh yang  kemudian berlangsung terus menerus. Ekstrak daun pining bawang H. alliacea memiliki aktivitas sangat kuat sebagai antioksidan pada nilai IC 50 3,87 ppm.
Kata kunci : Antioksidan, Radikal Bebas, H. alliacea

## ABSTRACT
The  pining  onion  plant  H.  alliacea  is  one  of  the  types  of  plants  found  in  West  Halmahera Regency, North Maluku Province. Traditionally the surrounding community has used it as a nausea  medicine.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  content  of  chemical compounds  contained inpining  leaf  extract  H.  alliacea  and  its  activity  as  an  antioxidant  as well  as  its  antioxidant  value  expressed  in  IC 50 .  The  type  of  this  research  is  experimental research in the laboratory using the DPPH method. The results showed that the compounds contained  in  the  pining  leaves  of  onion  H.  alliacea  were  alkaloids,  flavonoids,  tannins, steroids,  saponins  and  phenolics.  One  of  the  chemical  compounds  contained  in  the  pining leaves of onion H. alliacea is phenol which is the main group of antioxidants found in plants. Antioxidants can prevent oxidation and can protect the body from free radicals. Free radicals are molecules that have an unpaired electron in their outer orbital so they are highly reactive. These free radical compounds tend to hold chain reactions which, if they occur in the body, can cause damage to the cells in the body which then goes on continuously.onion leaf extract pining H.alliacea have a very strong antioxidant activity at IC 50 of 3.87 ppm.
Keywords: Antioxidants , Free Radicals , H. Alliacea
memiliki  berbagai  jenis  tumbuhan  yang
1. PENDAHULUAN Indonesia merupakan negara yang mempunyai   kekayaan    alam yang berkhasiat  sebagai  obat-obatan.  Secara turun-temurun masyarakat telah memanfaatkan  berbagai  jenis  tumbuhan

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
sebagai  bahan  obat  tradisional  untuk pencegahan maupun pengobatan terhadap berbagai macam penyakit, salah satunya adalah tumbuhan pining bawang . Halmahera  Barat  merupakan daerah  yang  terletak  di  bagian  Timur Indonesia.  Halmahera  Barat  sendiri tumbuhan  Pining  bawang  digunakan sebagai obat tradisional untuk pencegahan maupun pengobatan terhadap  berbagai  macam  penyakit. Tumbuhan  pining  bawang  ditemukan didaerah  hutan  terutama  pada  daerah lembab  yang  kaya  akan  humus.  Pining bawang  telah  banyak  dimanfaatkan  oleh masyarakat,  dapat  menghilangkan  rasa lelah,  mengurangi  kolesterol  bahkan menambah stamina.
Senyawa kimia yang terkandung
dalam buah Pining bawang ( H. alliacea ) yaitu berupa flavonoid, saponin, alkaloid,  tanin dan  polifenol  [1]. Senyawa fenolik berupa golongan flavonoid, turunan asam sinamat,
kumarin,  tokoferol  dan  asam  organik polifungsional.  Flavonoid  juga  terdapat pada  semua  tumbuhan  yang  terkandung senyawa  metabolit sekunder  dan banyak digunakan  dalam  pengobatan  tradisional sebagai antikoagulan, antioksidan, antihipertensi, antivirus dan antiinflamasi[2]. Antioksidan  dapat  mencegah
oksidasi dan dapat melindungi tubuh dari Reactive  Oxygen  Species (ROS)  atau radikal bebas. Radikal bebas yang masuk ke  dalam  tubuh  dan  menyerang  sel-sel yang  sehat  kemudian  terakumulasi  dan dari  kerusakan  tersebut  berkontribusi terhadap beberapa penyakit dan menyebabkan kondisi yang biasa disebut sebagai  penuaan  dini  [3].  Penyakit degeneratif  seperti  diabetes  mellitus, jantung  koroner,  stroke,  hipertensi, peyakit  autoimun  hingga  kanker  dapat disebabkan oleh radikal bebas [4].
2. METODOLOGI PENELITIAN
Alat dan Bahan Peralatan yang digunakan    dalam penelitian  ini  yaitu  sarung  tangan,
masker,  beker  gelas,  labu  ukur,  tisu kering,  kertas  saring,  batang  pengaduk, toples, timbangan analitik, tabung reaksi, Yamato  RE-201 rotary  evaporator , aluminium  foil,  buret,  botol  vial,  gelas ukur,  mikropipet,  penggaris,  gunting, corong  kaca,  pensil,  label,  kuvet,  cawan petri,  vortex,  dan  spektrofotometer UV – 1800.
Bahan penelitian yang digunakan adalah daun pining bawang yang  diperoleh  dari Desa Tuguis, Kecamatan Tabaru, Kabupaten Halmahera Barat. Bahan lain yang digunakan sebagai bahan
pengekstrak  dan  bahan  kimia  untuk analisis  yaitu  etanol  95%,  metanol,
DPPH,  dan  vitamin  C  p.a,  pereaksi mayer,  pereaksi  dragendorf,  pereaksi wagner,  HCl  pekat,  Mg  Etanol,  FeCl 3 1%,  aquades,  asam  asetat  glasial,  asam sulfat pekat, FeCl 3 5%.

## Penyiapan Sampel
Daun H. alliacea yang diperoleh dari  Desa  Tuguis,  Kecamatan  Tabaru, Kabupaten Halmahera Barat. Daun yang digunakan  tidak  terlalu  muda  dan  tidak terlalu  tua  untuk  mendapatkan  zat  aktif yang  maksimal,  kemudian  dicuci  dan dibersihkan  menggunakan  air  mengalir setelah  itu  dipotong-potong.  Disiapkan kemudian di maserasi.
Ekstraksi Daun Pining Bawang ( H. alliacea ) Daun Pining bawang H. alliacea diekstraksi dengan cara maserasi. Daun Pining  bawang  H.  alliacea ditimbang sebanyak  1  kilogram  ditambahkan  2  L pelarut etanol 95% dan direndam selama 24  jam,  lalu  filtrat  dipisahkan.  Sampel kemudian  dimaserasi  sebanyak  5  kali. Filtrat yang telah diperoleh dicampurkan dan  diuapkan  dengan rotary  evaporator pada suhu 40 0 C sampai diperoleh ekstrak kental yang masih bisa dituang kemudian dimasukkan  ke  dalam  botol  vial  lalu ekstrak ditimbang [5] Identifikasi Kandungan Kimia Ekstrak Pemeriksaan dilakukan menggunakan  beberapa  pereaksi  kimia untuk mengidentifikasi senyawa
alkaloid,  triterpenoid  dan  steroid,  tanin,

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
flavonoid, saponin  dan fenolik ( Sangi et al. , 2008 ) . Alkaloid Untuk mengidentifikasi alkaloid, ekstrak sebanyak 50-100 mg ditambahkan  kloroform  secukupnya, selanjutnya ditambahkan 10 mL amoniak dan 10 mL kloroform. Kemudian larutan disaring  ke  dalam  tabung  reaksi  dan filtrat  ditambahkan  10  tetes  H 2 SO 4 2N. Campuran  dikocok  dengan  teratur, dibiarkan beberapa menit sampai terbentuk  2  lapisan.  Lapisan  atas dipindahkan ke dalam tiga tabung reaksi masing-masing sebanyak 1 mL. Kemudian masing-masing tabung tersebut  ditambahkan  beberapa  tetes pereaksi mayer, wagner dan dragendorff.
Jika setelah penambahan pereaksi mayer terbentuk  endapan  putih,  dan  pereaksi wagner  terbentuk  endapan  berwarna coklat  serta  pada  penambahan  pereaksi dragendorff menghasilkan endapan
berwarna  jingga  maka  sampel  positif mengandung alkaloid.

## Triterpenoid dan Steroid
Ekstrak  sebanyak  50-100  mg ditambahkan  asam  asetat  glasial  sampai semua  sampel  terendam,  dibiarkan selama 15 menit kemudian 6 tetes larutan dipindahkan ke dalam tabung reaksi  dan ditambahkan 2-3 tetes asam sulfat pekat. Sampel  dikatakan  positif  mengandung triterpenoid  apabila  terjadi  perubahan warna menjadi  merah, jingga atau ungu, sedangkan  steroida  akan  berubah  warna menjadi biru.

## Tanin
Ekstrak sebanyak 50 mg ditambah etanol sampai  terendam  semuanya.  Kemudian ditambahkan 2-3 tetes larutan FeCl 3 1%. Sampel  positif  mengandung  senyawa tanin  apabila  terjadi  perubahan  warna menjadi hitam kebiruan atau hijau.
Flavonoid
Sampel  ekstrak sebanyak 50  mg diekstrak  dengan  5  mL  etanol  dan dipanaskan  selama  lima  menit  di  dalam tabung  reaksi.  Selanjutnya  ditambah beberapa  tetes  HCL  pekat.  Kemudian ditambahkan  0,2  g  bubuk  Mg.  Hasil
positif jika selama 3 menit sampel menunjukkan warna merah tua.

## Saponin
Sampel  ekstrak  sebanyak  50  mg dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, kemudian  ditambahkan  aquades  hingga seluruh  sampel  terendam,  dididihkan selama 2-3 menit dan kemudian didinginkan,  lalu  sampel  dikocok  kuat- kuat.  Jika  terbentuk  buih  yang  stabil maka sampel positif mengandung saponin. Fenolik Sebelum  melakukan  identifikasi senyawa fenolik perlu dilakukan ekstraksi secara terus-menerus menggunakan alat soxhlet dengan pelarut eter untuk melarutkan lemak dan klorofil yang  terdapat  pada  sample.  Setelah diekstraksi menggunakan eter selanjutnya  diekstraksi  dengan  metanol 90%  kemudian  dengan  metanol  50% untuk  mengikat  komponen-komponen yang bersifat polar. 1 mL ekstrak metanol ditambah FeCl 3 5% jika terjadi perubahan warna dari kuning kecoklatan menjadi  coklat  orange  maka  sampel memiliki kandungan senyawa fenolik. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun  Pining  Bawang  Dengan  Metode DPPH Ekstrak  daun H.  alliacea diuji  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH, dengan tahapan sebagai berikut :
1 Pembuatan Larutan DPPH
Serbuk  DPPH    (BM  394,32)
0.39432 gram dilarutkan dengan methanol  p.a  10  ml.  Larutan
DPPH  0.1M  dipipet    100µl dimasukkan  kedalam  labu  ukur 100  ml  dicukupkan  dengan methanol p.a sampai tanda batas (DPPH 0.1mM).
2 Penentuan Panjang Gelombang
DPPH
Larutan DPPH 0.1mM sebanyak 2  ml  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  lalu  ditambahkan dengan  metanol  p.a  2  ml, divortex  hingga  homogen  lalu dituang  ke  dalam  kuvet  dan diukur  pada  panjang  gelombang

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
400-800 nm dengan menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  (Musfiroh  dan  Syarief 2009)  panjang  gelombang maksimum 517 nm. 3 Pembuatan Larutan Blangko Larutan DPPH 0.15mM sebanyak 2 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan  metanol  p.a  2  ml, divortex hingga homogen, diinkubasi  dalam  ruangan  gelap selama  30  menit  ,  selanjutnya serapan  diukur  pada  panjang gelombang 517 nm. 3. Pembuatan      Larutan     Induk Ekstrak    dan    Vitamin C (Konsentrasi 1000 ppm) Sebanyak    100     mg   sampel dilarutkan  dengan  methanol  p.a lalu  dimasukkan  ke  dalam  labu takar 100     ml, volume dicukupkan    dengan  methanol p.a sampai tanda batas. Tabel 1. Pembuatan Larutan Uji Seri Konsentrasi Konsentrasi Larutan stok (ml) Metanol p.a (ml) 5ppm 0.05 10 10 ppm 0.1 10 15 ppm 0.15 10 20 ppm 0.2 10 25 ppm 0.25 10 4. Pengukuran serapan menggunakan spektrofotometer UV-Vis Sebanyak  2  ml  masing-masing konsentrasi larutan uji dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi, ditambahkan 2 ml larutan DPPH 0.15 mM, divortex hingga homogen, diinkubasi dalam ruang  gelap  selama  30  menit. Selanjutnya, serapan diukur pada panjang gelombang 517 nm. 5. Penentuan Persen inhibisi Akitivitas  penangkal  radikal masing-masing sampel dinyatakan sebagai nilai y sebesar 50 dan nilai x yang akan diperoleh sebagai IC 50 (Nurjanah,Izzati  &  Abdullah, 2012). Dari % peredaman yang diperoleh  tentukan  IC 50 yaitu konsentrasi yang mampu menghambat 50% radikal bebas.
Harga  IC 50 ditentukan  dengan rumus :
IC 50 = 50−𝑎 diekspresikan  sebagai  persen inhibisi  yang  dapat  dihitung Keterangan : 𝑏 a  :  nilai  x  pada dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut: % inhibisi Abs kontrol − Abs sampel = Abs kontrol x 100%
6. Penentuan  Nilai  IC 50 ( Inhibitory Concentration) Konsentrasi  sampel  dan  persen inhibisinya diplot masing- masing pada sumbu x dan y pada persamaan regresi linier. Persamaan  tersebut  digunakan untuk menentukan nilai IC 50 dari
kurva linear b  :  nilai  y  pada kurva linear Senyawa yang dikatakan sebagai antioksidan  sangat  kuat  apabila nilai  IC 50 kurang  dari  50  ppm, kuat apabila nilai IC 50 antara 50- 100  ppm,  sedang  apabila  nilai IC 50 berkisar  antara  100-150 ppm, dan lemah apabila nilai IC 50 berkisar  antara  150-200  ppm.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
Semakin  kecil  nilai  IC 50 suatu senyawa maka semakin kuat pula aktivitas  antioksidan  senyawa tersebut karena dengan konsentrasi  yang  kecil  mampu menghambat radikal bebas DPPH dengan baik [6]. 3.4.5.   Analisis Data Data antioksidan dianalisis dengan persamaan regersi linear menggunakan program Microsoft  Excel untuk  melihat hubungan  variasi  konsentrasi dengan persen inhibisi. 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Sampel Daun Pining Bawang Pada penelitian digunakan daun Hornstedtia  alliacea atau daun  pining bawang yang diperoleh dari Desa Tuguis, Kecamatan Tabaru, Kabupaten Halmahera Barat. Proses yang dilakukan untuk memisahkan dari bagian tumbuhan yang  tidak  diinginkan  kemudian  sampel dibersihkan  dengan  menggunakan  air bersih dan yang mengalir. Pencucian juga dilakukan untuk  membersihkan  kotoran- kotoran  maupun  bahan-bahan  asing lainnya yang melekat pada bahan sampel. Daun yang digunakan tidak terlalu muda dan  tidak  terlalu  tua  untuk  mendapatkan zat aktif yang maksimal. Sampel ditiriskan untuk mengurangi  kandungan  air  kemudian dipotong-potong  menjadi  bagian-bagian lebih  kecil yang ditujukan  untuk memperluas  permukaan  sampel  agar mempermudah proses penarikan zat aktif pada  saat  ekstraksi.  Sampel  tidak dikeringkan karena proses ekstraksi akan langsung  dilakukan  sesaat  setelah  daun H.  alliacea dipetik  sehingga  tidak  akan mengalami  proses  penyimpanan  dalam waktu  yang  lama,  dan  juga  untuk mengurangi resiko hilangnya kandungan senyawa  kimia  yang  terkandung  pada sampel dan proses pengeringan. Daun H. alliacea sebanyak  1  kilogram  setelah melewati proses sortasi basah, pencucian, dan pemotongan. Daun H. alliacea yang siap di ekstraksi.
Proses ekstraksi digunakan metode  maserasi,  karena  metode  ini sangat  sederhana  dan  umum  digunakan, yakni dengan merendam sampel di dalam pelarut pada suhu kamar (tanpa pemanasan) untuk mencegah atau menghindari kerusakan kandungan senyawa  kimia  yang  terkandung  pada tumbuhan  yang  tidak  tahan  pada  suhu panas  dan  juga  menggunakan  pelarut etanol karena etanol adalah pelarut polar namun  dapat  juga  menyari  senyawa kimia  yang  bersifat  polar  maupun nonpolar.
Selama  proses  maserasi,  wadah selalu dalam keadaan tertutup rapat untuk menghindari  terjadinya  proses  oksidasi oleh  udara  dari  luar.  Maserasi  juga dilakukan  di  dalam  ruangan  tertutup untuk  menghindari  pengaruh  cahaya sinar matahari terhadap stabilitas senyawa-senyawa  yang  akan  diekstraksi [7,8,9 ].
Pelarut  yang  digunakan  dalam ekstraksi yakni etanol 95% (Sebanyak 14 L),  dengan  memiliki extracting  power (daya  ekstraksi)  yang  luas  sehingga pelarut  etanol  95%  dapat  mengekstraksi hampir semua senyawa metabolit sekunder  pada  daun H.  alliacea .  Etanol digunakan sebagai pelarut dalam pembuatan  ekstrak  daun H.  alliacea dapat  melarutkan  kandungan  senyawa- senyawa alkaloid, polifenol, tanin, flavonoid, steroid [10].
Proses  maserasi  selama  5  x  24 jam,  dengan  setiap  24  jam  di  lakukan penggantian  pelarut  dan  didapatkan filtrat  1-5.  Larutnya  komponen  kimia dalam  simplisia  saat  proses  maserasi, umumnya  akan  terjadi  apabila  pelarut menembus  dinding  sel  dan  masuk  ke dalam  rongga  sel.  Rongga  sel  terdapat senyawa  aktif  yang  dapat  larut  di  dalam pelarut.
Perbedaan  konsentrasi  antara larutan senyawa aktif di dalam sel dengan diluar  sel  menyebabkan  larutan  dengan konsentasi  tinggi  didesak  keluar  ke konsentrasi rendah. Apabila telah terjadi keseimbangan  konsentrasi  di  dalam  dan di  luar  sel,  maka  proses  ekstraksi

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
berhenti. Penggantian pelarut  diperlukan karena  terjadi  proses  keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel [11].
Hasil  maserasi  disaring  untuk memisahkan filtrat dan ampasnya. Filtrat 1-5 disatukan dan di evaporasi (Penguapan)  pada rotary  evaporator dengan suhu 40ºC sampai terbentuk
dari  evaporasi  didapatkan  ekstrak  kental dengan  bobot  79,18  gr.  Pelarut  yang digunakan  pada  ekstraksi  ini  adalah etanol  yang  merupakan  jenis  pelarut polar  untuk  mengekstraksi  senyawa polar.  Ekstrak  kental  yang  dihasilkan ditimbang  kemudian  nilai  %  rendemen dihitung menggunakan rumus:
Bobot ekstrak kental ekstrak dengan kekentalan yang %rendemen = x100% maksimal dan dibantu dengan alat vakum udara  sehingga  titik  didih  pelarut  lebih rendah.  Penguapan  berlangsung  cepat sehingga kemungkinan terjadinya penguraian  senyawa  yang  termolabil dapat  dihindari  (Hanani,  2016).  Hasil
Bobot sampel yang diekstraksi
Nilai  %  rendemen  ekstrak  dapat dilihat  pada  Table  1.  Ekstrak  kental tersebut  kemudian  digunakan  dalam pengujian selanjutnya.
Tabel 2. Hasil Rendemen Ekstrak Daun H. alliacea Nama Sampel Bobot Sampel Basah (gr) Bobot Ekstrak kental (gr) Rendemen Ekstrak (%) Ekstrak etanol 1.000 79,18 7,918 Penapisan Fitokimia Hasil  ekstrak  kental  daun H. alliacea yang diperoleh kemudian dilakukan  pengujian  skrining  fitokimia senyawa alkaloid, triterpenoid dan steroid,  tanin,  flavonoid,  saponin  dan fenolik.  Skrining  fitokimia ekstrak dilakukan  dengan  menggunakan  uji tabung  yaitu  mereaksi  sampel  dengan larutan pereaksi spesifik untuk mengidentifikasi  kandungan  metabolit sekunder yang ada dalam tumbuhan. Uji fitokimia ini bertujuan untuk mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder  yang  terdapat  pada  daun H.
alliacea . Hasil skrining dapat dilihat pada tabel 3. Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia Daun H. alliacea Golongan Senyawa Pereaksi Hasil Dragendorff + Alkaloid Wagner + Mayer + Flavonoid HCl pekat dan Mg + Tanin Etanol dan FeCl 3 1% + Saponin Aquades +

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
Steroid Asam asetat glasial dan asam sulfat pekat + Triterpenoid Asam asetat glasial dan asam sulfat pekat - Fenolik FeCl 3 5% +
Keterangan  :  Tanda  (+)  menunjukkan  adanya  senyawa  yang  diuji,  sementara  tanda  (-)
menunjukkan senyawa yang  diuji tidak ada pada ekstrak etanol  Daun
H. alliacea
Hasil  uji  golongan  senyawa yang  diperoleh,  diketahui  ekstrak  daun H. alliacea hasil ekstraksi menggunakan pelarut  etanol  yang  merupakan  pelarut polar  diketahui  positif  teridentifikasi kelompok  senyawa  alkaloid,  flavonoid, tanin, saponin, steroid, dan fenolik. Hasil positif  dalam  pengujian  alkaloid  dengan menggunakan  tiga  pereaksi  seperti Dragendorf, Wagner dan Meyer. Pada uji Dragendorf diketahui sampel mengandung alkaloid karena terbentuknya  endapan  berwarna  jingga, untuk pereaksi wagner terbentuk endapan warna  coklat  dan  pada  pereaksi  Meyer terbentuk endapan warna putihPembentukan endapan terjadi karena  terbentuknya  senyawa  kompleks dari  reaksi  senyawa  alkaloid  dengan  ion K + pada  masing-masing  pereaksi  yang digunakan  [12].Hasil  positif  pengujian flavonoid dengan terjadinya warna jingga setelah penambahan serbuk Mg dan HCl ditunjukkan  oleh  sampel.  Serbuk  logam Mg  dan  HCl  berfungsi  mereduksi  inti benzopiron  yang  terdapat  pada  struktur flavonoid dan membentuk garam flavililium  yang  berwarna  merah  atau jingga [13].
Hasil  positif  pengujian  tanin
diketahui  dari  perubahan  warna  yang terjadi setelah penambahan larutan FeCl 3 1%  yaitu  warna  hijau  kehitaman. Perubahan  warna  terjadi  akibat  reaksi penambahan  FeCl 3 dengan  salah  satu gugus  hidroksil  yang  terdapat  pada
senyawa  tanin.  Penambahan  FeCl 3 menyebabkan  terjadinya  warna  hijau kehitaman yang mengindikasikan adanya tanin  terkondensasi[14].  Hasil  pengujian pada sampel diketahui positif mengandung  saponin  yang  ditandai dengan terbentuknya busa setelah pengocokan  dan  tidak  hilang  setelah  10 menit.  Kemampuan  membentuk  busa dalam  air  yang  terhidrolisis  menjadi glukosa dan senyawa aglikonnya [15].
Pada  pengujian  senyawa  steroid menunjukkan hasil positif dengan ditandai  terjadinya  perubahan  warna pada sampel larutan uji setelah penambahan  asam  asetat  anhidrida  dan asam  sulfat  pekat.  Sedangkan  pada pengujian
senyawa triterpenoid menunjukkan  hasil  negatif  karena  tidak terjadi perubahan warna. Pada pengujian steroid dan triterpenoid, analisis senyawa didasarkan  pada  kemampuan  senyawa tersebut membentuk warna dengan asam asetat  anhidrida  dan  asam  sulfat  pekat [15].  Hasil  positif  pengujian  fenolik ditunjukkan dengan terjadinya perubahan warna  coklat.  Reaksi  FeCl 3 dengan sampel  membuat  pembentukan  warna pada uji ini, yang berperan adalah ion Fe 3- yang mengalami hibridasi [12].
Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol Daun H. alliacea
Pengujian  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  daun H.  alliacea dengan menggunakan  metode  DPPH.  Pada penelitian yang telah dilakukan terdahulu

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
cara  ini  paling  sering  dipakai  untuk menguji  aktivitas  antioksidan  sampel secara in  vitro serta  merupakan  metode yang  sederhana,  membutuhkan  waktu singkat dan juga bahan kimia dan sampel yang  digunakan  relatif  sedikit  [16]. Spektrofotometer  UV- Vis digunakan untuk  mengukur  panjang  gelombang dengan panjang gelombang optimum 517 nm. Nilai antioksidan dinyatakan dengan IC 50, yaitu  konsentrasi  larutan  sampel yang  dibutuhkan  untuk  menghambat 50% radikal bebas dari DPPH. Pengukuran  serapan  dilakukan selama rentang waktu inkubasi
memasuki menit ke-26 hingga menit ke- 30  agar  terjadi  reaksi  antara  DPPH sebagai  radikal  bebas  dengan  sampel yang  diuji  secara  maksimal.  Karena operating  time dengan  serapan  yang stabil meningkat pada senyawa antioksidan terjadi di menit ke 15 sampai menit ke 30 dan absorbansi maksimalnya terjadi pada menit ke 26 sampai 30 [17].
Nilai  IC 50 dihitung  menggunakan  rumus persamaan regresi.
Prinsip  dari  metode  DPPH adalah  interaksi  antioksidan  dengan DPPH  baik  secara  transfer  elektron  atau radikal  hidrogen  pada  DPPH  akan menstabilkan senyawa radikal bebas dari DPPH. Perubahan warna larutan berubah dari  ungu  menjadi  kuning  menjadi indikasi  bahwa  semua  elektron  pada radikal bebas telah berpasangan [16].
Data  %  inhibisi  baik  terhadap ekstrak  etanol  daun H.  alliacea dan vitamin C dapat dilihat pada Tabel 4 dan 5. Hasil uji antioksidan ekstrak menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun H. alliacea memiliki aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 yakni  3.87 μm/mL. Data selengkapnya dapat dilihat pada tabel 4. Vitamin C yang digunakan sebagai  pembanding  memiliki  IC 50 1.34 μm/mL. Data selengkapnya dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun H. alliacea Konsentras i (ppm) Ulangan Rata-rata % Inhibisi IC 50 U1 U2 U3 5 0,416 0,403 0,434 0,418 50.06 10 0,383 0,336 0,334 0,351 58.07 15 0,139 0,127 0,211 0,159 81.00 20 0,139 0,124 0,127 0,130 84.47 3.87 25 0,123 0,121 0,105 0,116 86.14 Kontrol DPPH 0.836 0.838 0.837 0.837 0
Tabel 5. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Vitamin C Sebagai Pembanding
Konsentrasi (ppm) Ulangan Rata- rata U1 U2 U3 %Inhibisi IC 50 5 0.418 0.418 0.418 0.418 50.06 10 0.227 0.233 0.231 0.230 72.52 15 0.196 0.199 0.123 0.173 79.33 1.34 20 0.104 0.092 0.109 0.102 87.81 25 0.084 0.085 0.086 0.085 89.84

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
Kontrol DPPH 0.836 0.838 0.837 0.837 0
Nilai  IC  50  ekstrak  daun H. alliacea dan vitamin C didapat dari hasil perhitungan  persamaan  regresi  linier pada  gambar  4  dan  5  dibawah,  dimana persamaan  regresi  dari  ektrak  daun H. alliacea yang  didapat  pada  gambar  4 dibawah adalah  y = 1,972x +42,368 dan r  =  0,9637  dan  vitamin  C  yang  didapat pada  gambar  5  dibawah  adalah  y  = 1,897x    +   47,457    dan   r    =    0,9659. Koefisien  y  pada  persamaan  ini  adalah sebagai  IC50,  sedangkan  koefisien  x pada  persamaan  ini  adalah  konsentrasi dari  ekstrak  daun H.  alliacea dan vitamin  C  yang  akan  dicari  nilainya, dimana  nilai  dari  x  yang  didapat merupakan  besarnya  konsentrasi  yang diperlukan  untuk  dapat  meredam  50% aktivitas  radikal  DPPH.  Menurut[18] bahwa Nilai R yang mendekati 1 bernilai positif, Nilai R memiliki nilai maksimum 1  tidak  pernah  lebih  dari  1  yang menggambarkan bahwa dengan meningkatnya  konsentrasi  ekstrak  daun H. Alliacea dan vitamin C maka semakin besar  aktivitas  antioksidannya  hal  ini dapat  dilihat  dari  kurva  hubungan konsentrasi ekstrak daun H. alliacea dan vitamin  C  terhadap  persen  inhibisi  pada gambar 4 dan 5 berikut:
Gambar  4. Kurva % Inhibisi Ekstrak.
Konsentrasi Ekstrak (x)
Gambar 5. Kurva %Inhibisi Vitamin C

## Konsentrasi Vitamin C (x)
Pada  penelitian  ini,  termasuk kategori  sangat  kuat  yang  dinyatakan dalam  IC 50 .  Semakin  rendah  nilai  IC 50 maka semakin besar kemampuan antioksidannya dikarenakan IC 50 menunjukkan besarnya konsentrasi suatu senyawa  dalam  menghambat  radikal DPPH  sebanyak  50%  [6].Nilai  IC 50 dari ekstrak  daun H.  alliacea lebih  rendah dibandingkan nilai IC 50 dari vitamin C.
Aktivitas
antioksidan berdasarkan  penangkapan  radikal  DPPH memiliki  hubungan  dengan  kandungan senyawa  fenol  dan  flavonoid  yang terdapat  pada  tanaman.  Berdasarkan penelitian terdahulu [19]. telah ditemukan bahwa senyawa-senyawa fenol  mempunyai  aktivitas  antioksidan karena sifat yang dapat menyumbangkan elektronnya.  Senyawa  fenol  bereaksi sebagai agen pereduksi, pendonor hidrogen,  peredam  oksigen  singlet,  dan juga  sebagai  pengelat  logam  yang potensial.

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak  daun H.  alliacea memiliki kandungan  senyawa  metabolit  sekunder jenis  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin, steroid, dan fenolik dan Ekstrak daun H. alliacea memiliki  aktivitas  sangat  kuat sebagai  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 3.87 μm/mL.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
1. Firman  G.,  Winda  T.W.,  Vera  N.,
Keni  I.  2020. Antioxidant  Activity  Of Pining  (Hornstedtia  Alliacea)  By Using  DPPH  Method ,  Jurnal  Ilmiah Farmako Bahari. Hal. 73 2. Rahmania  N.,  Herpandi.,  Rozirwan. 2018. Phytochemical Test Of Mangrove Avicennia Alba, Rhizophora Apiculata And Sonneratia Alba From Musi River Estuary, South % In h ib isi (y) % In h ib isi (y)

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
Sumatera. Biovalentia:  Biological
Research Journal . Issn: 2477-1392. 3. Liochev S.I. 2013. Reaztive OxygenSpecies  and  the  Free  Radical Theoryof Aging. Free Radical Biology and Medicine . 60: 1-4.
4. .Salamah  N.,  Widyaningsih  W., Izati  I.,  Susanti  H.  2015.  Aktivitas
Penangkap  Radikal  Bebas  Ekstrak
Etanol  Ganggang  Hijau Spirogyra sp. dan Ulva  lactuca dengan  metode DPPH. J Ilmu Kefarmasian Indonesia. 2015;13(2):145–50.
5. .Encik  E.  R.,  Adha  P.  W.,  2016. Pengaruh  Ekstraksi  Cara  Basah  dan Cara  Kering  Terhadap  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Cengkodok ( Melastoma malabathricum L .) Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan 5 (11).
6. Syaifuddin  S.  2015.  Uji  Aktivitas Antioksidan Bayam Merah (Alternanthera  amoena  voss.) Segar dan  Rebus  dengan  Metode  DPPH. Dissertation , UIN Walisongo. Semarang. 7. Departemen Kesehatan Republik Indonesia .  2000.  Parameter  Umum Standar  Ekstrak  Tumbuhan  Obat Cetakan Pertama. Direktorat Jenderal Pengawasan  Obat  dan  Makanan,
Jakarta.
8. Srijanto B, Rosidah I, Ris E, Syabirin G,  Aan,  Mahreni.  2004.  Pengaruh Waktu,  Suhu  dan  Perbandingan Bahan  Baku-Pelarut  pada  Ekstraksi Kurkumin dari Temulawak ( Curcuma xanthorizza Roxb.)  dengan  Pelarut Aseton.  Prosiding  Seminar  Nasional Rekayasa Kimia dan Proses. 1-5.
9. Tensiska.,  Marsetio.,  Yudiastuti,  S.
2007. Pengaruh Jenis Pelarut terhadap Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Kasar Isoflavon  dari  Ampas  Tahu.  Laporan Penelitian. FTIP Universitas Padjadjaran, Bandung. 10. . Cowan, M.M. 1999. Plant Product as Antimicrobial Agents. Journal Microbiology Reviews. 12(4): 564- 582. 11. Hanani  E.  2016.  Analisis  Fitokimia. Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC: Jakarta. Hal. 13-103.
12. Marliana,  S.  D.,  V.  Suryanti,  dan Suyono. 2005. Skrining Fitokimia dan Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis Komponen  Kimia  Buah  Labu  Siam (Sechium  edule  Jacq.  Swartz.)  dalam Ekstrak  Etanol.  J.  Biofarmasi.  3(1): 26-31. 13. Khotimah, K. 2016. Skrining Fitokimia  dan  Identifikasi  Metabolit Sekunder  Senyawa  Karpain  pada Ekstrak Metanol Daun ( Carica pubescens Lanne & K. Koch) dengan
LC/MS.  Skripsi  S1.  UIN  Maulana Malik Ibrahim, Malang. 14. Sangi M., Runtuwene M.R.J., Simbala  H.E.I.,  dan  Makang  V.M.A.
2008.  Analisis  Fitokimia  Tumbuhan
Obat  diKabupaten  Minahasa  Utara.
Chemistry Progress. 1,47-53.
15. Setyowati, W. A. E., Ariani, S. R. D., Ashadi.,  Mulyani,  B.  Rahmawati,  C. P.  2014.  Skrining  Fitokimia  dan Identifikasi Komponen Utama Ekstrak Metanol Kulit Durian ( Durio zibethinus Murr.)  Varietas  Petruk. Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia UNS, Surakarta. 16. Erawati. 2012. Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Daun  Garcinia daedalanthera  Pierre  Dengan  Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrihidrazil) Dan  Identifikasi  Golongan  Senyawa Kimia  Dari  Fraksi  Paling  Aktif. Skripsi. Universitas Indonesia, Depok.
17. Widyowati,  H.,  Ulfah,  M.,  Sumantri. 2014.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Etanolik Herba Alfalfa ( Medicago sativa L.) Dengan Metode
DPPH (1,1-difenil-2-pikrihidrazil).
Jurnal  Ilmu  Farmasi  Dan  Farmasi
Klinik. 11(1): 25-33.
18. Molyneux,  p.  (2004), The  use  of  the stable  freee  radical  diphenylpicryl hidrazyl (DPPH) foe  estimating antioxidant activity. Songklanakarin
J.  Sci. Technol.hal 211-219 19. Rohman,  A.  S.  Riyanto,  dan  N.  K. Hidayati. 2007. Aktivitas Antioksidan, Kandungan Fenolik
Total,  dan  Flavonid  Total  Daun Mengkudu. Jurnal Agritect. 27(4).

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (1), 18-28
L