## Pengaruh Penambahan Bakteri Bacillus subtilis Terhadap Biodegradasi DDT Oleh Jamur Pelapuk Putih Pleurotus eryngii
Dwi Lestari dan Adi Setyo Purnomo Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : adi.spurnomo@gmail.com
Abstrak —Pengaruh  penambahan  bakteri Bacillus subtilis terhadap  biodegradasi  DDT  oleh  jamur  pelapuk putih Pleurotus eryngii telah diteliti. B. subtilis ditambahkan  ke  dalam  10  mL  kultur P.  eryngii masing- masing dengan jumlah 1, 3, 5, 7, dan 10 mL (1 mL ≈ 1,573 x 10 8 sel). Recovery DDT  dilakukan  dengan  menggunakan metode  ekstraksi  cair-cair.  Analisa  jumlah  degradasi  dan metabolit  produk yang terbentuk menggunakan instrumen HPLC  dan  GC-MS.  Degradasi  DDT  tertinggi  ditunjukkan pada  penambahan  3  mL B.  subtilis dengan  jumlah degradasi  sebesar  88,26%,  sedangkan  degradasi  DDT terendah terjadi pada penambahan 1 mL B. subtilis dengan jumlah  degradasi  sebesar  41,84%.  Metabolit  produk  yang dihasilkan  dari  proses  degradasi  ini  adalah  DDD  [l,l dikloro-  2,2-bis(p - klorofenil)  etana]  dan  DDE  [l,l-dikloro- 2,2- bis(p-klorofenil) etilena].
Kata Kunci — Biodegradasi; Pleurotus eryngii ; Bacillus subtilis ; DDT .

## I. PENDAHULUAN
erkembangan  sektor  pertanian  telah  mengakibatkan peningkatan  pencemaran  lingkungan  oleh  pestisida sintetik.  Diantara  pestisida  sintetik  tersebut,  terdapat pestisida  organoklorin  [26].  Pestisida  organoklorin pertama yang ditemukan dan dipergunakan ialah Dikloro Difenil  Trikloroetana  (DDT).  DDT  pertama  kali disentesis  oleh  Othmar  Zeidler  tahun  1873  namun  efek insektisidanya  baru  ditemukan  oleh  Paul  Muller  pada tahun 1939 di Swiss [27].
DDT  merupakan  pestisida  sintetik  tidak  berwarna dan berbentuk  kristal  [15].  DDT  tidak  larut  dalam  air  tetapi memiliki  kelarutan  yang  baik  disebagian  besar  pelarut organik, lemak dan minyak. Lethal Dose 50 (LD 50 ) DDT pada  tikus  dewasa  berkisar  antara  113-800  mg/kg,  150- 300  mg/kg dalam  mencit,  500-750  mg/kg dan  lebih  dari 1.000  mg/kg pada  domba  dan  kambing  [22],  300  mg/kg pada  babi,  400  mg/kg  dalam  kelinci  [2].  DDT  menjadi sangat  terkenal  dibidang  pertanian  karena  efektifitasnya dalam  memberantas  hama  tanaman.  DDT  juga menyelamatkan  jutaan  orang  dari  penyakit  malaria  dan tifus dengan mengendalikan serangga penularnya [9].
Disisi  lain,  DDT  juga  mempunyai  dampak  negatif terhadap  lingkungan  karena  keberadaan  dan  sifatnya yang  tidak  cepat  terurai  (persisten),  dapat  terakumulasi dalam jaringan tubuh, bersifat estrogenik dan mempunyai efek  karsinogenik  terhadap  fungsi  sistem  syaraf. Diperkirakan  butuh  waktu  sekitar  10  sampai  20  tahun untuk menghilangkan DDT dari individu jika keberadaannya  dihentikan  secara  total,  sedangkan senyawa  metabolit  utamanya  yaitu  Dikloro  Difenil
Etilena  (DDE)  kemungkinan  masih  tetap  ada  dan  juga berbahaya  [6].  Sehingga  atas  rekomendasi  EPA ( Environmental  Protection  Agency )  Amerika  Serikat, DDT  dilarang  digunakan  terhitung  1  Januari  1973. Dibeberapa  negara  maju  (khususnya  Amerika  Utara  dan Eropa  Barat)  DDT  telah  dilarang  penggunaanya  karena sifatnya yang cenderung untuk terakumulasi dalam tubuh manusia,  hewan,  burung  dan  lingkungan  (Marrs,  2004). Banyak negara telah melarang penggunaan DDT kecuali dalam  keadaan  darurat  terutama  jika  muncul  wabah penyakit seperti malaria dan demam berdarah [27].
Cara mengurangi dampak buruk dari penggunaan DDT dalam  pestisida  dapat  dilakukan  dengan  mendegradasi senyawa  tersebut.  DDT  dapat  didegradasi  dengan beberapa  cara  yaitu  oksidasi  kimiawi,  pembakaran termal, pirolisis, fotodegradasi, oksidasi fotokalalitik dan biodegradasi  [10].  Namun  metode  yang  paling  aman, efisien  dan  memiliki  biaya  rendah  adalah  metode biodegradasi.  Biodegradasi  didefinisikan  sebagai  suatu proses  oksidasi  senyawa  organik  oleh  mikroorganisme, baik  di  tanah,  perairan  atau  instalasi  pengolahan  air limbah  [8].  Biodegradasi  terjadi  karena  mikroorganisme dapat melakukan metabolisme zat organik melalui sistem enzim  untuk  menghasilkan  karbondioksida,  air  dan energi [13].
Beberapa  mikroorganisme  yang  sudah  pernah digunakan  untuk  mendegradasi  DDT  antara  lain Phanerochaete chrysosporium [6] , Pleurotus florida dan Pleurotus  sajor-caju [3] ,  Pleurotus  ostreatus [20] , Xerocomus  chrysenteron [12] ,  Pseudomonas  aeruginosa [4] , Chryseobacterium sp. [21], Ganoderma ligzhi [29], Phlebia  brevispora [5].  Pada  penelitian  ini  biodegradasi DDT  dilakukan  dengan  memanfaatkan  jamur  pelapuk putih  ( white  rot  fungus ) Pleurotus  eryngii .  Kemampuan mikroorganisme  khususnya  jamur  pelapuk  putih  dalam mendegradasi  DDT  karena  mikroorganisme  tersebut memiliki  sistem  enzim  ligninolitik  yang  berperan  dalam mendegradasi  DDT  [18].  Kemampuan  jamur  pelapuk putih  untuk  mendegradasi  senyawa  pencemar  organik tergantung  pada  kemampuannya  dalam  menghasilkan enzim  ligninolitik  termasuk  lignin  peroksidase,  mangan peroksidase dan lakase [23].
Jamur P.  eryngii mampu  mendegradasi  beberapa polutan  dan  senyawa  pencemar  organik  seperti  piren [28], bisphenol ; nonylphenol dan tetrabromobisphenol [7].  Selain  itu,  Arisoy  (1998)  melaporkan  bahwa P. eryngii dapat mendegradasi DDT sebesar 65,98% dalam media Malt Extract Agar (MEA) dengan waktu inkubasi selama  20  hari.  Proses  degradasi  tersebut  kurang maksimal  karena  membutuhkan  waktu  inkubasi  yang
P
cukup lama. Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk mengoptimasi  proses  degradasi  DDT  yakni  dengan penambahan bakteri B. subtilis . Bakteri B.  subtilis merupakan  bakteri  penghasil biosurfaktan  berjenis  surfaktin  [17].  Biosurfaktan merupakan  senyawa  aktif  permukaan  yang  mampu menurunkan  tegangan  permukaan  dan  tegangan  antar muka  dua  fasa  [1].  Konsentrasi  0,005%  dari  surfaktin mampu  menurunkan  tegangan  permukaan  sebesar  27 mN/m  sehingga  membuat  surfaktin  menjadi  salah  satu biosurfaktan  terbaik  [16].  Sarbini  (2012)  melaporkan bahwa  biodegradasi  piren  dengan  konsentrasi  40  mg/L oleh B.  subtilis C19  menghasilkan  5,22%  produk bioemulsifier  yang  berperan  dalam  meningkatkan bioavaibilitas  piren    dalam  substrat  sehingga  presentase piren  yang  terdegradasi  mencapai  94,10%.  Biosurfaktan yang  dihasilkan  dari  metabolisme  bakteri  mampu meningkatkan  kelarutan  antara  DDT  yang  bersifat  non polar  dalam  media  kultur  yang  bersifat  polar  [11].  Pada penelitian  lain  yang  telah  dilakukan  oleh  Hermansyah (2014)  penambahan  sebanyak  5  mL  bakteri B.  subtilis dapat  meningkatkan  degradasi  DDT  oleh P.  ostreatus sebesar 43%. Oleh karena itu, pada penelitian ini adanya penambahan  bakteri B.  subtilis pada  kultur P.  eryngii diharapkan dapat meningkatkan proses degradasi DDT.

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## Regenerasi Jamur Pleurotus eryngii
Jamur P.  eryngii diinokulasikan ke dalam  cawan petri yang  berisi  media potato  dextrose  agar (PDA)  dan diinkubasi pada suhu 25°C selama 7 hari [19].

## Persiapan Kultur Cair Jamur P. eryngii
Miselium  jamur  hasil  regenerasi  yang  berdiameter  1 cm  diinokulasikan  ke  dalam  erlenmeyer  yang  berisi  10 mL  potato dextrose  broth (PDB).  Selanjutnya,  dipre- inkubasi pada suhu 25°C selama 7 hari [19].

## Regenerasi Bakteri Bacillus subtilis
Bakteri B. subtilis diinokulasikan ke dalam cawan petri yang  berisi  media nutrient  agar (NA)  dan  diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam [19].
Pembuatan Kurva Pertumbuhan Bakteri B. subtilis
Sebanyak 1 koloni bakteri hasil regenerasi diinokulasi ke dalam 486 mL media NB. Kemudian diinkubasi pada suhu  37°C  dan  dikocok  dengan  kecepatan  180  rpm selama  27  jam.  Kemudian  diukur optical  density (OD) pada  panjang  gelombang  600  nm  (OD 600 )  dengan menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  setiap  1  jam sekali.  Dibuat  kurva  dengan  absorbansi  sebagai  fungsi waktu [19] .

## Persiapan Kultur Cair Bakteri B. subtilis
Sebanyak  satu  koloni  bakteri  hasil  regenerasi diinokulasi ke dalam media 90 mL NB, kemudian dipre- inkubasi  pada  suhu  37°C  selama  21  jam  dan  dikocok dengan kecepatan 180 rpm [19].

## Pembuatan Kurva Standar DDT
Larutan DDT yang digunakan memiliki konsentrasi 25, 50, 75 dan 100% (100% = 0,25 μmol DDT yang berasal dari 50 μL DDT 5 mM). Larutan standar dibuat dengan mencampurkan  DDT  dan  50  μL  piren.  Campuran dilarutkan  dengan ultrasonic  cleaner dan  dianalisa
menggunakan  HPLC  dengan  fasa  gerak  asetonitril  80%. Selanjutnya, dibuat kurva dengan nilai perbandingan luas area puncak DDT/piren sebagai fungsi konsentrasi DDT [19].

## Biodegradasi DDT oleh Jamur P. eryngii
Sebanyak  10  mL  kultur P.  eryngii yang  telah  di  pre- inkubasi  selama  7  hari  masing-masing  ditambah  50  μL dari  DDT  5  mM  dalam  DMSO  (konsentrasi  akhir:  0,25 μmol).    Tiap  erlenmeyer  ditambah  PDB  hingga  volume total  menjadi  20  mL.  Kemudian,  masing-masing erlenmeyer  ditambah  oksigen  hingga  jenuh  lalu  ditutup dengan  penutup  kaca  dan  diberi  parafilm  untuk mencegah  penguapan  DDT.  Kultur  diinkubasi  secara statis selama 7 hari pada suhu 25°C [19].

## Biodegradasi DDT oleh Bakteri B. subtilis
Erlenmeyer  yang  berisi  10  mL potato  dextrose  broth (PDB) ditambah bakteri hasil pre-inkubasi selama 21 jam masing-masing sebanyak 1, 3, 5, 7, dan 10 mL (1 mL ≈ 1,573  x  10 8 sel).  Tiap  erlenmeyer  ditambah  50  μL  dari DDT  dengan  konsentrasi  5  mM  dalam  DMSO (konsentrasi akhir: 0,25 μmol) dan ditambah PDB hingga volume  total  menjadi  20  mL.  Tiap  erlemenmeyer ditambah  oksigen  hingga  jenuh  lalu  ditutup  dengan penutup  kaca  dan  diberi  parafilm  untuk  mencegah penguapan DDT. Kultur diinkubasi secara statis selama 7 hari  pada  suhu  25°C.  Sebagai  kontrol  dilakukan degradasi  DDT  menggunakan  kultur  bakteri  yang  telah dinonaktifkan [19].
Pengaruh  Penambahan  Bakteri  B.  subtilis  terhadap Biodegradasi DDT oleh P. eryngii
Sebanyak  10  mL  kultur P.  eryngii hasil  pre-inkubasi ditambah  dengan  kultur B.  subtilis masing-masing sebanyak 1, 3, 5, 7 dan 10  mL (1 mL ≈ 1,573 x 10 8 sel). Kemudian,  masing-masing  kultur  ditambah  50  μL  dari DDT  dengan  konsentrasi  5  mM  dalam  DMSO (konsentrasi akhir: 0,25 μmol) dan ditambah PDB hingga volume  total  masing-masing  campuran  menjadi  20  mL. Tiap  erlenmeyer  ditambah  oksigen  hingga  jenuh  lalu ditutup  dengan  penutup  kaca  dan  diberi  parafilm  untuk mencegah  penguapan  DDT.  Kultur  diinkubasi  secara statis selama 7 hari pada suhu 25°C [19].

## Perolehan Kembali (Recovery) DDT
Tiap  kultur  hasil  inkubasi  ditambah  20  mL  metanol dan  50  μL  piren  5mM  kemudian  dipindahkan  ke  dalam tabung  falkon.  Erlenmeyer  dicuci  menggunakan  5  mL aseton  untuk  mengambil  sampel  yang  masih  menempel pada  tabung  kemudian  dituang  ke  dalam  tabung  falkon untuk selanjutnya dihomogenkan menggunakan homogenizer .  Sampel  yang  telah  homogen  kemudian dipisahkan  dengan  sentrifugasi  berkecepatan  300  rpm selama 7 menit [19].
Sampel  yang  telah  dipisahkan  dengan  sentrifugasi kemudian disaring  menggunakan corong Buchner dalam kondisi  vakum  dengan  kertas  saring  whatman  41 diameter 90 mm. Filtrat dimasukan ke dalam labu bundar dan  residu  yang  terdapat  pada  kertas  saring  dikeringkan dan ditimbang untuk mengetahui berat biomassa [19].
Filtrat  ditampung  dalam  labu  bundar  dan  dievaporasi pada suhu 64°C hingga volume tersisa sebanyak 15 mL. Setelah  dievaporasi  sampel  dipindah  ke  dalam  corong pisah. Labu bundar dicuci dengan 50 mL air dan 50 mL
n-heksan  sebanyak  2  kali.  Selanjutnya,  sampel  dikocok biasa  dengan  tangan  dan  dikeluarkan  uap  n-heksan bertekanan  yang  ada  di  dalam  corong  pisah  kemudian dikocok menggunakan shaker secara konstan berkecepatan  sedang  selama  10  menit.    Fasa  organik ditampung  dalam  erlenmeyer  sedangkan  fasa  aquos diekstrak kembali dengan  20  mL aquades dan  50 mL n- heksan sebanyak 2 kali [19].
Fasa  organik  dari  kedua  ekstraksi  digabung  dalam erlenmeyer  yang  sama  dan  ditambah  4  sendok  Na 2 SO 4 anhidrat ke dalamnya. Fasa organik disaring menggunakan  kapas  yang  telah  diberi  Na 2 SO 4 anhidrat.
Filtrat  kemudian  dievaporasi  pada  suhu  67°C  hingga tersisa  sebanyak  5  mL.  Ekstrak  n-heksan  diambil  2  mL untuk  analisa  GC-MS  sedangkan  3  ml  sisanya dievaporasi hingga kering kemudian dilarutkan dengan 2 mL  metanol.  Filtrat  disonifikasi  dan  disimpan  dalam botol vial untuk analisa HPLC [19].
Pada analisa HPLC digunakan kolom nonpolar inertsil ODS-3  dan  menggunakan  pelarut  metanol  :  air  (1% TFA)  dengan  perbandingan  82  :  18  mL.  Laju  alir  yang digunakan 1 mL/menit. Sedangkan untuk analisa GC-MS menggunakan  sistem  kolom  HP-5MS  dengan  ukuran  30 m  X  250  μm  X  0,25  μm.  Suhu  oven  diatur  pada  80°C selama  3  menit,  dinaikkan  hingga  mencapai  320°C  dan ditahan  selama  2  menit  dengan  kenaikan  konstan  20°C per menit, kemudian suhu diturunkan menjadi 300°C dan ditahan selama 5 menit [19].

## III. HASIL DAN DISKUSI

## Kurva Standar DDT
Kurva  standar  DDT  adalah  nilai  perbandingan  luas puncak  DDT/piren  terhadap  konsentrasi  larutan  standar yang digambarkan dalam sebuah grafik dengan sumbu x adalah  konsentrasi  DDT  dan  sumbu  y  adalah perbandingan  luas  puncak  DDT/piren.  Kurva  standar DDT  dibuat  dengan  cara  mengukur  luas  puncak DDT/piren  dengan  variasi  konsentrasi  larutan  standar  0, 25,  50,  75  dan  100%  (100%  =  0,25  μmol  DDT  yang berasal  dari  DDT  5  mM)  menggunakan  instrumen High Performance  Liquid  Chromatography (HPLC).  Fasa gerak  yang  digunakan  adalah  metanol  dan  air  dengan perbandingan 82% : 18%. Hasil analisis ditunjukan pada tabel 3.1 berikut.
T ABEL 3. 1 D ATA K URVA S TANDAR DDT
Berdasarkan  data  pada  tabel  3.1  diatas  maka  dapat dibuat grafik seperti pada gambar 3.1 berikut.
Gambar 3. 1 Kurva Standar DDT
Dari  grafik  kurva  standar  diatas  maka  diperoleh persamaan  regresi  0,004x.  Persamaan  regresi  yang diperoleh  digunakan  sebagai  acuan  untuk  menentukan konsentrasi  DDT  dalam  sampel.  Hubungan  konsentrasi larutan  standar  DDT  dan  perbandingan  luas  puncak DDT/piren  dapat  diketahui  dengan  cara  mencari  nilai koefisien  korelasi  (r).  Koefisien  korelasi  (r)  adalah bilangan  yang  menyatakan  besar  kecilnya  hubungan antara  dua  variabel.  Besarnya  koefisien  korelasi  antara +1  s/d  -1.  Koefisien  korelasi  menunjukkan  kekuatan ( strength )  hubungan  linier  dan  arah  hubungan  dua variabel.  Dari  hasil  perhitungan  pada  percobaan  ini diketahui  nilai  koefisien  korelasi  (r)  adalah  0,994, sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  konsentrasi  larutan standar  DDT  dan  perbandingan  luas  puncak  DDT/piren memiliki hubungan linier yang sangat kuat.
Hubungan signifikansi antara larutan standar DDT dan perbandingan  luas  puncak  DDT/piren  diketahui  dengan melakukan  uji  signifikansi  koefisien  korelasi  (uji  t). Selain  itu  uji  t  juga  digunakan  untuk  mengetahui kelayakan  persamaan  regresi  dari  kurva  standar.  Uji signifikansi  koefisien  korelasi  (uji  t)  adalah  uji  untuk memberikan  gambaran  mengenai  kesempatan  benar  dari hasil  suatu  riset.  Jika  angka  signifikansi  sebesar  0,05 maka tingkat kepercayaan sebesar 95%. Sedangkan, jika angka signifikansi sebesar 0,1 maka tingkat kepercayaan adalah  90%.  Pada  penelitian  ini  uji  t  dilakukan  dengan tingkat  signifikansi  0,05.  H 0 menyatakan  tidak  ada hubungan  yang  signifikan  antara  konsentrasi  larutan standar  DDT  dan  perbandingan  luas  puncak  DDT/piren. Sedangkan,  H 1 menyatakan  hubungan  yang  signifikan antara konsentrasi larutan standar DDT dan perbandingan  luas  puncak  DDT/piren.  Dari  hasil perhitungan pada lampiran 2 diketahui t hitung > t tabel maka H 0 ditolak  dan  H 1 diterima.  Dari  hasil  tersebut  dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  hubungan  yang  signifikan antara konsentrasi larutan standar DDT dan perbandingan luas puncak DDT/piren. Dari hasil tersebut juga  dapat  diketahui  bahwa  persamaan  regresi  linier kurva  standar  layak  digunakan  untuk  menuntukan konsentrasi DDT dalam sampel.
Pengaruh  Penambahan  Bakteri  B.  subtilis  terhadap Biodegradasi DDT oleh P. eryngii
Sebanyak  10  mL  Kultur P.  eryngii yang  telah  dipre- inkubasi  selama  7  hari  ditambah  bakteri B.  subtilis masing-masing 1, 3, 5, 7 dan 10 mL, kemudian ditambah DDT  sebanyak  50  μL  5  mM  dalam  DMSO  dan  media PDB  hingga  volume  total  20  mL.  Kultur  dalam erlenmeyer  ditambah  oksigen  hingga  jenuh,  ditutup dengan  penutup  kaca  dan  diberi  parafilm  untuk mencegah penguapan DDT dan kontaminan. Erlenmeyer
digoyang  perlahan  untuk  meratakan  persebaran  DDT dalam kultur. Kultur diinkubasi statis selama 7 hari pada suhu  25°C.  Langkah  terakhir  pada  penelitian  ini  adalah ekstraksi  yang  bertujuan  untuk  mengetahui  besarnya DDT  yang  terdegradasi.  Langkah-langkah  dalam  proses ekstraksi  seperti  yang  telah dijelaskan  dalam  bab  3  poin J.  Hasil  analisa  degradasi  DDT  oleh P.  eryngii dengan penambahan B. subtilis menggunakan HPLC ditunjukkan pada tabel 3.2 berikut.
T ABEL 3.2 D ATA D EGRADASI DDT OLEH P. ERYNGII DENGAN P ENAMBAHAN B AKTERI B. SUBTILIS
Gabungan  antara  data  jumlah  degradasi  DDT  oleh bakteri B.  subtilis dan  jumlah  degradasi  DDT  campuran B. subtilis dan P. eryngii seperti yang ditunjukkan pada tabel  3.2  maka  akan  diperoleh  data  perbandingan keduanya seperti ditunjukkan pada gambar 3.2 berikut.
Gambar 3.2 Perbandingan Degradasi DDT oleh P . eryngii , B. subtilis dan Campuran Keduanya
Berdasarkan  grafik  pada  gambar  3.2  dapat diketahui  bahwa  penambahan  bakteri B.  subtilis dalam kultur P.  eryngii memiliki  pengaruh  terhadap  degradasi DDT.  Pada  penambahan  1  mL B.  subtilis tidak  terjadi peningkatan  kemampuan  degradasi,  hal  tersebut  terjadi karena  penambahan  jumlah  bakteri  yang  terlalu  kecil menyebabkan produksi metabolit sekunder yang digunakan  untuk  proses  degradasi  DDT  menurun, akibatnya penambahan bakteri pada jumlah tersebut tidak dapat  meningkatkan  kemampuan  degradasi  DDT  oleh jamur,  sehingga  jumlah  degradasi  jamur  saja  dan campuran hampir sama.Jumlah optimum B. subtilis yang ditambahkan  ke  dalam  kultur P.  eryngii untuk mendegradasi  DDT  adalah  3  mL. B.  subtilis dapat meningkatan  proses  degradasi  DDT  oleh P.  eryngii karena kemampuannya dalam memproduksi biosurfaktan berupa surfaktin [17]. Namun, pada penambahan 5 mL B. subtilis terjadi  penurunan  degradasi  DDT  menjadi 58,02%.  Penurunan  tersebut  disebabkan  oleh  adanya kompetisi  antara  jamur  dan  bakteri  dalam  proses metabolisme sehingga B. subtilis menghasilkan beberapa peptida  yang  berperan  sebagai  antibiotik  dan  antifungi seperti subtilin , aterimin , ituirin , serexin , basillomicin , basillisin ,  asam  10  sianida,  fengimisin,  surfaktin  dan basillisosin [25].
Dari  kromatogram  GC  terdeteksi  beberapa  senyawa antara  lain  piren  pada  waktu  retensi  12,83  menit,  DDE pada waktu retensi 13,20 menit, DDD pada waktu retensi 13,75  menit  dan  DDT  pada  waktu  retensi  14,43  menit.
Dari  analisa  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  metabolit produk  yang  terbentuk  dari  degradasi  DDT  oleh campuran P.  eryngii dan B.  subtilis adalah  DDD  dan DDE.
Gambar 3.3 Kromatogram GC Hasil Analisa Sampel P.eryngii dan B. subtilis

## Perkiraan Jalur Degradasi DDT
Pada  penelitian  ini  diperoleh  beberapa  metabolit produk  hasil  degradasi  DDT  pada  tiap-tiap  kultur.  Pada degradasi DDT oleh jamur P. eryngii diperoleh metabolit produk antara lain DDD, DDE dan DDA. Pada degradasi DDT oleh bakteri B.  subtilis diperoleh  metabolit produk berupa  DDE  dan  DDD.  Degradasi  DDT  oleh  campuran jamur P.  eryngii dan  bakteri B.  subtilis diperoleh metabolit  produk  berupa  DDD  dan  DDE.  Dari  beberapa metabolit  produk  yang  diperoleh  dapat  diusulkan  jalur yang  mungkin  terjadi  pada  proses  degradasi  DDT (Gambar 3.4).
Gambar 3.4 Jalur Degradasi DDT oleh P. eryngii, B. subtilis dan Campuran Keduanya

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat disimpulkan bahwa:
1. Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  maka dapat  dapat  diambil  kesimpulan  bahwa  penambahan bakteri B.  subtilis dapat  meningkatkan  kemampuan degradasi P.  eryngii Penambahan  3  mL  bakteri B. subtilis ke  dalam  10  mL  kultur P.  eryngii meningkatkan  kemampuan  degradasi  DDT  paling optimal  dengan  jumlah  degradasi  tertinggi  yaitu 88,26%, sedangkan pada penambahan 1 mL memiliki jumlah degradasi terendah yaitu 41,84%.
2. Metabolit  produk  yang  dihasilkan  dari  penambahan B.  subtilis pada  biodegradasi  DDT  oleh P.  eryngii adalah DDD dan DDE.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didukung  oleh  dana  dari  proyek penelitian untuk “Penelitian Unggulan Perguruan Tinggi (BUPT) 2016 No:078/sp2h/lt/drpm/II/2012, dari Direktorat  Jendral  Penguatan  Riset  dan  Pengembangan, Kementrian  Riset  Teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi, Indonesia.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Abalos,  A.  dkk.,  (2001).  Physicochemical  and  Antimicrobial Properties  of  New  Rhamnolipids  Produced  by Pseudomonas aeruginosa AT10  from  Soybean  Oil  Refinery  Wastes. Langmuir 17, 1367-1371.
[2] Agency  for  Toxic  Substances  and  Diseases  Registry  (ATSDR), (1994). Toxicological profile for 4,4'-DDT, 4,4'-DDE, 4,4'- DDD (Update) . Atlanta: US Public Health Service.
[3] Arisoy,  M.  (1998). Biodegradation  of  Chlorinated  Organic Compounds  by  White-Rot  Fungi. Tukiye:  Department  of  Basic Health Science, Faculty of Health Educatio University of Ankara. [4] Ashari,  K.  (2014). Pengaruh  Penambahan  Pseudomonas aeruginosa terhadap Biodegradasi DDT oleh Pleurotus ostreatus. Surabaya: FMIPA ITS.
[5] Ayu,  D.  K.  (2016). Pengaruh  Penambahan  Bakteri  Ralstonia picketti  terhadap  Biodegradasi  DDT  oleh  Jamur  Pelapuk  Putih Phlebia brevispora. Surabaya: FMIPA ITS.
[6] Bumpus,  A.  J.,  &  Steven,  D.  A.  (1987).  Biodegradation  of  DDT by White Rot Fungus Phanerochaete chrysosporium . Applied and Environmental Microbiology Journal , 1008-2001.
[7] Chang,  B.  V  &  Chang,  Y.  M.  (2014).  Biodegradation  of  Toxic Chemicals  by Pleurotus  eryngii in  Submerged  Fermentation  and Solid  State  Fermentation.  Journal of  Microbiology,  Immunology and Infection , 1-7.
[8] Chereminisoff,  N.  P.  (1996). Safety  Management  Practices  for Hazarddous Materials . New York: Marcel Dekker Publishers.
[9] Djojosumarto,  P.  (2008). Pestisida  dan  Aplikasinya .  Jakarta:  PT Agromedia Pustaka.
[10] Guniazurdi,  J.  (2001). Fotokatalisis  Pada  Permukaan  TiO 2 : Aspek  Fundamental  dan  Aplikasinya .  Jakarta:  Seminar  Kimia Fisika II Jurusan Kimia Universitas Indonesia.
[11] Hermansyah,  F.  T.  (2014). Optimasi  Degradasi  DDT  oleh Pleurotus  ostreatus  dengan  Penambahan  Bakteri  Bacillus subtilis . Surabaya: FMIPA ITS.
[12] Huang ,, Y & Wang, J. (2013). Degradation and Mineralization of DDT  by  The  Ectomycorrhizal  Fungi, Xerocomus  chrysenteron . Chemosphere , 760-764.
[13] Husin,  A.  (2008). Pengolahan  Limbah  Cair  Industri  Tahu Dengan  Biofiltrasi  Anaerob  dalam  Reaktor  Fixed-Bed .  Medan: Universitas Sumatra Utara.
[14] Marrs, T. C. dkk., (2004). Pesticide Toxicology and International Regulation. New York: J. Wiley.
[15] Mish,  Frederick  C.  (1985). Webster’s  Ninth  New  Collegiate Dictionary 9 th Edition . Springfield, MA: Merriam-Webster.
[16] Mulligan,  C.  N.  (2005).  Environmental  Application  for Biosurfactans. Environmental Journal , 183-198.
[17] Mulligan, C. N.,  & Gibbs, B. F.  (1993). Factors Influencing The Economics of Biosurfactans. Biosurfactans Production, Properties and Application , 329-371.
[18] Pointing,  S.  (2001).  Feasibility  of  Bioremediation  by  White-Rot Fungi. Applied Microbiology and Biotechnology , 20-23.
[19] Purnomo, A. S., Kamei, I., dan Kondo, R. (2008). Degradation of 1,1,1-trichloro-2,2-bis(4-chlorophenyl)ethane  (DDT)  by  brown- rot fungi. Journal of bioscience and bioengineering , 614-621.
[20] Purnomo,  A.  S.  et  al.,  (2010).  Application  of  Mushroom  Waste Medium  from Pleurotus  ostreatus for  Bioremedation  of  DDT- Contamined Soil. International Biodeterioration and Biodegradation , 350-357.
[21] Qu, J. et al., (2015). Novel Chryseobacterium sp. PYR2 Degrades Various  Organochlorine  Pesticides  (OCPs)  and  Achieves Enhancing  Removal  and  Complete  Degradation  of    DDT  in Highly Contamined Soil. Journal of Environmental Management , 350-357.
[22] Royal  Society  of  Chemistry,  (1991). The  Agrochemicals Handbook .  Cambridge,  UK:  Royal  Society  of  Chemistry Information Service.
[23] Ryu, W. R. dkk., (2000). Biodegradation of Pentachlorophenol by white-rot  Fungi  Under  Ligninolytic  and  Nonligninolytic Conditions. Biotechnology Bioprocess Engineering , 211-214.
[24] Sarbini,  K.  (2012). Biodegradasi  Pyrena  Menggunakan  Bacillus subtilis C19. Depok: Fakultas Teknik UI.
[25] Schaechter,  M.  (2004). The  Desk  Encyclopedia  of  Microbiology .
California USA: Elsevier Academic Press.
[26] Soemirat, J. (2005). Toksikologi Lingkungan . Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
[27] Tarumingkeng,  R.  C.  (1989). Pengantar  Toksikologi  Insektisida .
Bogor: IPB Press.
[28] The,  Z.  C  &  Hadibarata  Tony.  (2014).  Enhanced  Degradation  of Pyrene  and  Metabolite  Identification  by Pleurotus  eryngii F032. Water Air Soil Pollut , 225.
[29] Yuniarti,  E.  P.  (2016). Pengaruh  Penambahan  Bakteri  Ralstonia picketti  terhadap  Biodegradasi  DDT  oleh  Jamur  Pelapuk  Putih Ganoderma lingzhi . Surabaya: FMIPA ITS.