Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019

## EFEKTIFITAS IMUNOSTIMULAN DARI EKSTRAK ETANOL DAUN

## SIRSAK ( Annona mucirata) PADA TIKUS JANTAN DENGAN METODE HYPERSENSITIVITAS TIPE LAMBAT
Suci Wulandari 1 , Ahmad Syukur Hasibuan 2 , Cucu Arum Dwi Cahya 3
Institut Kesehatan Medistra Lubuk Pakam e-mail: sucici19@gmail.com DOI : https://doi.org/10.35451/jfm.v2i1.304

## Abstract
This  research  aims  to  determine  the  effectiveness  of  immunostimulant  from  ethanol extract of parasite coffee leaves with four dose variants. This research used 18 male white  rats  with  200  grams  of  weight  divided  into  6 treatment  groups.  The  rats  were induced with Escherichia coli for 7 consecutive days intra-peritoneum, then on the 7th day  gave  a  mark  on  the  rat's  feet  that  had  been  measured  (V0).  Ethanol  extract  of parasite coffee leaves with 50mg / kg weight, 100mg / kg weight, 200mg / kg weight, 400mg  /  kg  weight,  0.5%  CMC  Na  suspension,  and  25  mg  /  kg  weight  STIMUNO suspension  as  positive  control  were  given  orally  on  8 th day,  after  24  hours  of administration the volume of the rat's feet was measured again, then all data from each group was processed using the ANOVA test. The results showed that the ethanol extract of  the  parasite  coffee  leaves  proved  to  be  effective  as  an  immunostimulant.  This  is attested by reduction in the volume of swelling in the leg of a rat which tested by the slow type hypersensitivity. It’s s aid to be effective because it had an approaching value positive control that is 25 mg stimuno starting from  200 mgkg / weight dose to 400 mgkg / weight. With an average reduction in the volume of swelling 1.4 mm for dosage of 400 mgkg / weight and 1.2 mm for dosage of 200 mgkg / weight.
Keywords: Soursop Leaves (Annona mucirata), Volume Reduction of Swelling in the leg of a rat, Slow Type Hypersensitivity.

## PENDAHULUAN
Terapi  kanker  yang  dilakukan  seperti pembedahan,
radioterapi dan kemoterapi,  tetapi  belum  didapatkan hasil yang sesuai dari ketiga jenis terapi tersebut.  Dari  beberapa  terapi  tersebut mungkin  ada  efek  samping  yang berbahaya bagi pasien. Kegagalan terapi yang umum terjadi pada saat pengobatan, utamanya melalui
kemoterapi  adalah  disebabkan  karena rendahnya
selektifitas
obat-obat antikanker  terhadap  sel  normal.  Selain itu  kegagalan  kemoterapi  tersebut  juga
disebabkan  karena  resistensi  sel  kanker terhadap  agen-agen  kemoterapi  (Rahim 2017).
Hal  tersebut  dapat  disebut  sebagai fenomena  Multi  Drug  Resistance  (MDR) yang dapat meningkatkan tingkat toksisitas  obat  yang  digunakan  untuk terapi (Conze et al 2017)
Sirsak ( Annona
muricata L.)
merupakan  tanaman  yang  berasal  dari negara  Amerika  Selatan,  yaitu  Meksiko. Keberadaan  tanaman  tersebut  diduga dibawa  oleh  orang  Belanda  semasa zaman  penjajahan.  Tanaman  ini  telah
menyebar  di  seluruh  pelosok  Indonesia, walaupun  masih  ditanam  di  pekarangan rumah.  Penyebaran  tanaman  sirsak  di Indonesia dapat dijumpai di daerah Jawa Barat,  terutama  Rajamandala  dan Bandung  Selatan  serta  Jawa  Tengah  di daerah Karanganyar (Sunarjono 2005).
Tanaman sirsak diklasifikasikan berasal  dari  kingdom  Plantae,  dari superdivisi Spermatophyta,
divisi Magnoliophyta.  Kelas  dari  tanaman  ini adalah  Magnoliopsida  dengan  subkelas Magnoliidae.  Sirsak  berasal  dari  ordo Magnoliales,  dari  famili  Annonaceae. Genus  dari  tanaman  ini  adalah  Annona dan spesiesnya adalah Annona muricata Sirsak  dapat  tumbuh  pada  daerah tropis  dan  subtropis  (Orwa  et  al  2009). Buah  sirsak  memiliki  bentuk  hati  yang dikelilingi  oleh  sesuatu  yang  berbentuk seperti  duri  yang  tumpul,  kulit  buah sirsak  berwarna  hijau  tua.  Sirsak  dapat tumbuh pada semua jenis tanah dengan derajat  keasaman  (pH)  antara  5-7. Tanah  yang  sesuai  adalah  tanah  agak asam  sampai  agak  alkalis,  namun  yang memiliki  bahan  organik  yang  tinggi. Tumbuh subur di ketinggian antara 100- 300 mdpl (di atas permukaan laut). Suhu udara  yang  sesuai  antara  22-32oC dengan curah hujan antara 1.500-3.000 mm/tahun.  Lokasi  yang  disenangi tanaman  sirsak  diantaranya  lahan  yang terbuka,  tidak  ada  naungan,  dan  tidak ada kabut. Tanaman sirsak memerlukan sinar matahari antara 50-70% (Sunarjono 2005).
Seluruh bagian tanaman sirsak dapat digunakan  sebagai  obat  tradisional, termasuk  kulit  kayu,  daun,  akar,  buah, dan biji. Buah sirsak umumnya digunakan  untuk  mengobati  penyakit yang disebabkan oleh cacing dan parasit, mengobati demam, meningkatkan produksi  ASI  pada  ibu  menyusui,  dan untuk  diare  dan  disentri.  Biji  yang dihancurkan  dapat  digunakan  sebagai
vermifug  dan  antelmintik  terhadap internal dan eksternal parasit dan cacing (Taylor 2002).
Bagian lain pada tanaman sirsak yang terkenal  dapat  digunakan  sebagai  obat- obatan  adalah  daun  (Gambar  1).  Daun sirsak banyak dimanfaatkan sebagai obat herbal  seperti  untuk  penyakit  kulit, rematik, batuk dan flu, serta antikanker (Orwa et al 2009), dan hipertensi (Lans 2006).  Khasiat  lain  dari  daun  sirsak adalah  sebagai  antispasmodik  dan memberi  efek  menenangkan.  Daun sirsak  biasa  dikonsumsi  dalam  bentuk teh.  Teh  daun  sirsak  digunakan  sebagai obat  radang  selaput  lendir  hidung. Rebusan  daun  sirsak  juga  efektif digunakan  untuk  kutu  rambut  dan  kutu busuk.  Daun  segar  yang  dihaluskan mampu  membantu  penyembuhan  luka pada kulit. Penduduk di beberapa negara seperti  Brazil  dan  Peru  diketahui menggunakan  daun  sirsak  sebagai  obat diabetes (Taylor 2002).
Menurut  Asprey  &  Thornton  (2000), daun  sirsak  mengandung  flavonoid, alkaloid,  asam  lemak,  fitosterol,  mirisil alkohol dan anonol. Senyawa pada daun sirsak  yang  diduga  memiliki  khasiat antidiabetes adalah senyawa alkaloid dan flavonoid.
Senyawa flavonoid
sebenarnya terdapat  pada  semua  bagian  tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah, dan biji. Kebanyakan flavonoid  berada  di  dalam  tumbuh- tumbuhan kecuali alga (Pulungan, et al., 2018).
Flavanoid  adalah  senyawa  polifenol yang  banyak  ditemukan  pada  epidermis daun-daunan  kulit  buahbuahan  dan memiliki peranan penting dalam kehidupan manusia sebagai antioksidan, antimutagenik, antineoplastik
dan aktivitas  vasodilatator(yulian,  2017: Kaban, 2019).
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
Makrofag merupakan salah satu sel yang  berperan  penting  dalam  respon imun,  baik  berperan  fungsional  dalam fagositosis  maupun  perannya  sebagai antigen  presenting  cells  (APC).  Dalam melakukan kedua peran tersebut, bantuan  mediator  endogen  seperti sitokin, sudah pasti dibutuhkan. Sedangkan  kebutuhan  akan  mediator eksogen  seperti  karoten  dan  flavonoid masih perlu
penelitian mendalam(okansi,2018).
Suatu  zat  yang  berperan  sebagai penambah  atau  peningkat  imun  dapat diperoleh  dengan  penggunaan  herbal yang berkhasiat sebagai imunostimulan. Salah  satu  herbal  yang  digunakan adalahekstrak  etanol  daun  benalu kopiyang  menurut  peneliti  sebelumnya berpotensi sebagai imunomodulator dengan aktivitas antioksidan yang tinggi (Achmad et al., 2018).
Imunomodulator  adalah  suatu  senyawa yang  dapat  mempengaruhi  sistem  imun humoral  maupun  seluler.  Ada  dua  tipe imunomodulator,  yaitu  imunostimulator (meningkatkan  system  imun)  dan imunosupresor  (menekan  sistem  imun). Beberapa  senyawa  yang  terkandung dalam  tumbuhan  mempunyai  efek imunostimulator  dan  imunosupresor, Imunomodulator berkaitan dengan aktivitas dan kapasitas makrofag (Rahim, M., 2017).
Metode hipersensitivitas
tipe lambat  merupakan  suatu  metode  yang sederhana untuk pengujian efek imunostimulator (Yuswantia, 2016) Uji  efektivitas  system  imun  dapat dilakukan  dengan metode  titer  antibody
yang
ditentukan berdasarkan pengenceran  terakhir  dimana  antibody masih  terdeteksi  melalui  hemaglutinasi yang  terlibat  secara  visual.  Nilai  titer antibody tersebut
selanjutnya ditransformasikan dengan [2log(titer)+1](Marbun, 2018)
Berdasarkan  pertimbangan  di  atas, penulis  merasa  penting  dan  perlu  untuk melakukan pengujian efek
imunostimulator dari ekstrak etanol daun sirsak  ( Annona mucirata)  pada  tikus jantan.  Maka,  diperlukan  penelitian ilmiah  seperti  penelitian  dan  pengujian imunostimulator di bidang farmakologi.

## METODE

## Alat dang bahan
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  yaitu rotari  evaporator,  pletismometer  air raksa,  cawan  penguap,  beaker  glas, timbangan  analitik,  tabung  reaksi,  CMC Na,  alkohor  96%,  NaCl,  ekstrak  daun sirsak.

## Hewan percobaan
Hewan yang digunakan yaitu tikus putih dengan  jumlah18  ekor  dengan  berat 150-200 gram yang diperlakukan dengan menyeragamkan makanan.

## Kelompok dosis uji
Dosis  yang  dipakai  dalam  penalitian berdasarkan penelitian sebelumnya tentang aktivitas dan vasorelaksan daun sirsak  yaitu  50mgkg/BB,  100mgkg/BB, 200mgkg/BB, dan 400mgkg/BB. Masing- masing  terdiri  3  ekor  tikus  pada  setiap kelompok.

## Pembuatan sediaan uji
Ditimbang  ektrak  sebanyak  50mg, diimasukan kedalam lumpang, kemudian tuang sedikit demi sedikit suspensi CMC Na 0,5% sambil digerus hingga homogen,  setelah  homogen  dimasukan kedalam labu tentukur 100ml.

## Skrining fitokimia
Fitokimia  digunakan  untuk  menguji ada tidaknya senyawa metabolit sekunder pada tumbuhan secara kualitatif. Metode yang digunakan untuk mencari  dan  menemukan  senyawa bioaktif  adalah  pendekatan  skrining
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
fitikima  (phytopharmacologic  screening approaches) IC50 terbaik untuk mengetahui golongan metabolit sekunder yang diduga bertanggungjawab terhadap  aktivitas  biologis  daun  benalu kopi  menggunakan  prosedur  spesifik untuk masing-masing
golongan metabolit sekunder.
1. Pemeriksaan alkaloid Sampel  ditimbang  sebanyak  0,5  g kemudian  ditambahkan  1ml  asam klorida  2N  dan  9ml  air  suling, dipanaskan  diatas  penangas  air selama  2  menit,  didinginkan  dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloid. Lalu dibagi menjadi 3  tabung  masing-masing  tabung ditambahkan 2 tetes pereaksi mayer,
2  tetes  pereaksi  bouchardat,  2  tetes pereaksi  dragendroff.  Alkaloid  positif apabila  terjadi  2  sampai  3  endapan disetiap percobaan.
2. Pemeriksaan flavonoid Sampel ditimbang 5g, lalu
ditambahkan  10  ml  air  panas, didihkan  selam  5  menit  dan  disaring dalam keadaan panas. Kedalam filtrat dimasukan  serbuk  magnesium  dan 1ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol.  Diguncang  hingga  terpisah. Flavonoid positif apabila terjadi warna kuning,  jingga  atau  merah  pada lapisan amiil alkohol.
3. Pemeriksaan tanin Sampel  ditimbang  sebanyak  1g dipanaskan  selama  3  menit  alam  air suling  hingga  mendidih  kemudian didinginkan  dan  disaring.  sisa  filtrat ditambahkan  1-2  tetes  pereaksi  besi (III) klorida 1% b/v. Apabila terbentuk warna  biru  kehitaman  atau  hijau kehitaman menunjukan adanya tanin.
4. Pemeriksaan saponin Sampel ditimbang 0,5g dan
dimasukan  kedalam  tabung  reaksi, lalu  ditambahkan  10ml  air  panas,
didinginkan, kemudian diguncang kuat selama 10 menit. Jika terbentuk busa setinggi1-10cm  yang  stabil  tidak kurang  dari  10  menit  tidak  hilang apabila  ditambahkan    1  tetes  asam klorida 2N maka menunjukan adanya saponin.
5. Pemeriksaan glikosida Sampel  ditimbang  3g  lalu  disari dengan  30ml  alkohol-air  (7:3)  dan 10ml asam klorida 2N, direfluk selama 2  jam,  didinginkan  dan  disaring. Diambil  20ml  filtrat,  ditambahkan  air suling  25  ml  dan  25  ml  timbal  (II) asetat  0,4  M,  dikocok,  di  tunggu selama  5  menit,  lalu  disaring.  Filtrat dicampurkan dengan campuran kloroform-isopropanol (3:2) sebanyak 3  kali.  Sisa  dari  sari  ditambahkan dengan  natrium  sulfat  anhidrat, disaring dan diuapkan pada suhu tidak lebih  dari  50ºC.  Sisanya  dilarutkan dengan  2  ml  metanol,  larutan  sisa dimasukan  kedalam  tabung  reaksi, diuapkan  diatas  waterbath.  Sisa sampel  ditambahkan  2  ml  aquades dan 5 tetes pereaksi molish. Ditambahkan  hati-hati  2  ml  asam sulfat  pekat  ,  terbentuk  cincin berwarna ungu kebiruan pada batasan cairan  menunjukan  adanya  ikatan gula.
6. Pemeriksaan steroid Sampel  ditimbang  sebanyak  1g,
dimaserasi dengan pereaksi 20 ml n- heksan selama 2 jam, disaring. Filtrat diuapkan  dalam  cawan  penguap  dan pada  sisanya  ditambahkan  pereaksi pekat  melalui  dinding  cawan.  Apabila terbentuk  warna  ungu  atau  merah yang
Perlakuanhewan uji
Hewan dikelompokan atas 6
kelompok  yang  antara  lain  1  kelompok dengan  suapensi  CMC  Na  0,5%,
kelompok  ke  dua  dengan  suspensi stimuno  25mg,  yang  ke  tiga  dengan suspensi ekstrak dengan dosis 50mgkg/BB,  yang  ke  empat  dengan suspensi ekstrak dengan dosis 100mgkg/BB,  yang  ke  lima  dengan suspensi ekstrak dengan dosis 200mgkg/BB,  yang  ke  enam  dengan suspensi ekstrak dengan
dosis 400mgkg/BB.  Setiap  kelompok  hewan percobaan  diinjeksikan  inokulum  e.coli secapa  i.p  sebgai  antigen  dengan  0,1 inokulum,  perlakuan  dimulai  pada  hari ke-0.
Pada  hari  ke  7  sendi  tikus  diukur kemudian  diberi  batas  pengukuran. Volume pembengkakan kaki tikus diukur kemudian  data  diolah  menggunkan  uji analisa varian (ANOVA) satu arah. Metode  Pengujian  Hipersensitifitas  Type Lambat
Tabel  1  pencatatan  hasil  volume pembengkakan kaki tikus
Table 2: Uji skrining fitokimia No   Skrining Ekstrak 1 Alkaloida + 2 Flavonoid + 3 Tanin + 4 Saponin + 5 Glikosida + 6 Steroid/triterpenoid - N o Dosis Ti ku s Volume Pembengkakan kaki tikus Rata- rata Seb elu m Ses uda h Seli sih 1  50 mg/k gBB 1 2,12  1,2 0,9
2 0,92 2 2,12  1,2 0,9 2 3 2,13  1,2 0,9 3 2  100 mg/k gBB 1 2,12  1,2 0,9
2 0,95
2 2,12  1,14  0,9 8 3 2,13  1,19  0,9 4 3  200 mg/k gBB 1 2,12  0,92  1,2 1,2 2 2,12  1,02  1,1 3 2,13  0,93  1,2 4  400 mg/k gBB 1 2,12  0,82  1,3 1,4 2 2,12  0,72  1,4 3 2,13  0,83  1,3 5  STIM UNO 1 2,12  0,45  1,6
7 1,6
2 2,12  0,47  1,6 5 3 2,13  0,48  1,6 5 6  Blank o 1 2,12  1,47  0,6
5
0,64 2 2,12  1,4 0,6 3 3 2,13  1,48  0,6 5 tikus Diberikan  ekstrak  etanol  daun sirsak  ( Annona  mucirata dengan empat konsentrasi (50, 100, 200 dan 400 mg/kgBB)
Tikus + diinjeksikan  dengan  0,1  e-colli  1% secara ip pada hari ke 0-7
Pada  hari  ke-7,  sendi  kaki  tikus sebelah  kanan  diberi  tanda  batas pengukuran volume kaki tikus
Volume  kaki  tikus  diukur  sebagai Tikus + ekstrak + e- coli diinjeksikan dengan 0,1 ml suspense E-coli
hari kedelapan (setelah 24 jam) diukur volume pembengkakan kaki tikus
Perubahan volume air raksa terlihat pada kenaikan skala pletismometer Hasil
Keterangan : + = Mengandung golongan senyawa - = tidak ada Table diatas menunjukkan bahwa hasil  uji  fitokimia  sampel  daun  sirsak mengandung  senyawa  alkaloid,  tannin, saponin, glikosida dan flavonoid.
Jenis  penelitian  yang  digunakan adalah
Experiment Laboratorium. Penelitiaan
ini menggunakan uji
parametrik Anova One Way.
Sampel yang dipakai adalah Ekstrak. Data yang didapatkan dianalisa  menggunakan  SPSS  dengan uji Annova .  Yang  dilanjutkan  dengan uji Post  Hoc  Tuckey untuk melihat variable yang memiliki nilai signifikasi p<0,05

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji fitokimia sampel daun sirsak mengandung  senyawa  alkaloid,  tannin, saponin,  glikosida  dan  flavonoid.  Dari 1500  gram  sampel  kering  dimaserasi menggunkan  rotari  evaporator  hingga mendapatkan  30  gram  ekstrak.  Ekstrak yang  kental  memiliki  bau  yang  khas, hijau kehitaman .
Hasil penelitian menggunakan ekstrak  yang  diberikan  selama  7  hari pada  dosis  50mgkg/BB  dan  dosis 100mgkg/BB  masi  memberikan  efek seperti  kontrol  negatif.  Namun  pada dosis 100mgkg/BB suadah mulaimengarah  ke  kontrol  positif,  pada dosis  400mgkg/BB  hasil  pengukuran volume  pembengkakakn  kaki  tikus mendekati kontrol positif stimuno dengan nilai rata-rata 1,6 yaitu dengan rata-rata 1,4.
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan dengan  variasi  dosis  pada  ekstrak
Dengan mengukur volume pembengkakan  tikus  menggunakan  alat pletisnometer
air raksa, dengan menggunakan  metode  hipersensitivitas type lambat  maka didapatpada gambar.
Gambar  1:  Volume  pembengkakan  kaki tikus
Gambar 2: Pemeriksaan secara mikroskopik
Gambar 3: Lapisan kulit 2 1 4 5 6 7 8 3 0.92 0.95 1.2 1.4 1.6 0.64 0 0.5 1 1.5 2 Volume pembengkakan kaki Volume
Keterangan gambar: Rambut penutup (1),
Kolenkim  (2),  Epidermis  atas (3),  Parenkim  palisade  (4), Jaringan  bunga  karang  (5),
Keterangan gambar: Parenkim tangkai daun (1),
Parenkim  daun  dengan hablur kalsium oksalat (2), Rambut penutup (3), Fragmen palisade dan parenkim daun (4), Fragmen  mahkota  bunga dengan kelopak (5), Fragmen parenkim pericarp (6), Trakea (7), Serbuk sari
(8)
ANOVA perubahan volume pembengkakan kaki tikus Sum of Squ ares d f Mean Squa re F Sig. Between Groups 1,89 4 5  ,379 287 ,64 3 ,00 0 Within Groups ,016 1 2 ,001 Total 1,90 9 1 7
Hasil  penelitian  yang  didapatkan  dari pemberian ekstrak dengan dosis 50mgkg/BB, 100mgkg/BB,
200mgkg/BB, dan 400mgkg/BB selam 7 hari  menunjukan  adanya  penrunan volume  pembengkakan  pada  tikus. Namun hasil dari beberapa varian dosis didapatkan  hasil  rata-rata  setiap perlakuan.  Perbandingan  nilai  rata –
rata  setiap  perlakuan  yaitu  pada  dosis 50mgkg/BB  dan  100mgkg/BB  yang cenderung  memiliki  nilai  rata – rata mendekati kontrol negatif yaitu CMC Na
,  namun  pada  dosis  200mgkg/BB sampai  dosis  400mgkg/BB  nilai  rata – rata  berubah  menuju  arah  kontrol positif.  Adanya  perbedaan  nilai  rata – rata  pada  setiap  kelompok  pengujian yang  sudah  dilakukan  Maka  akan dilanjutkan  dengan  menggunakan  uji post  hock  tukey untuk  mengetahui variabel mana yang memiliki perbedaan berdasarkan  nilai  signifikasi  <  0,005 yang dianggap signifikan.
Perubahan  volume  pembengkakan kaki tikus
Tukey HSD a
Dosis EEBK  N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5 Blanko 3 ,64 33 EEBK 50/kgBB 3 ,92 33 EEBK  100 mg/kgBB 3 ,94 67 EEBK    200 mg/kgBB 3 1,1 667 EEBK  400 mg/kgBB 3 1,3 333 Stimuno 3 1,6 567 Sig. 1,0 00 ,96 4 1,0 00 1,0 00 1,0 00 Means  for  groups  in  homogeneous subsets are displayed.
3 1 2 4 5 6 7 8
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3,000.
Dari hasil uji post hock tukey antara kelompok kontrol negatif,
dosis 50mgkg/BB  dan  dosis  100mgkg/BB memberikan efek namun tidak signifikan dibandingkan  dosis  200mgkg/BB  dan dosis  400  mgkg/BB  yang  memberikan nilai rata - rata mendekati kontrol positif Stimuno 25mg.
Penurunan  volume  pembengkakan kaki tikus diduga karena didalam ekstrak terkandung senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, tanin, saponin,  dan  glikosida  yang  terkandung didalam daun sirsak ( Annona mucirata ).
Senyawa ini termasuk kedalam golongan polifenol  yang  selain  memiliki  fungsi biologis seperti memperbaiki
metabolisme  glukosa  juga  sebagai antioksidan dan imunostimulan.
4. KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa Penggunaan ekstrak
pada dosis 400mgkg/BB dapat menurunkan volume pembengkakan  kaki  tikus  dan  efektif sebagai  imunostimulan.  Yang  signifikan dapat dilihat dari nilai signifikasi nilai р < 0,005.  Dosis  yang  disarankan  yang digunakan  sebagai  imunostimulan  yaitu dosis tertinggi. Pada dosis tertinggi pada penelitian  ini,  memiliki  efektifitas  yang sama dengan kontrol positif yang sudah ada dipasaranyaitu imunstimulan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Achmad.  Et  al  (2018).  senyawa triterpenoid  dari  tumbuhan  sirsak (annona  mucirata). Jurnal  ITEKIMA.
3(1): 12-20.
2. Andi  emelda.  et  al  (2018)  Journal  of Global  Pharma  Technology  10  (08): 425-429.
3. Conze  et  al    2017,  Autocrine Production  of  Interleukin  6  Causes Multidrug Resistance in Breast Cancer Cells, cancer reasearch, 61.
4. Hablutzel et al (2019) Malar  J 18:33
5. Hosseinzade et  al  (2019)  Frontiers  in Imunology vol 10 – 51
6. Hueza  et  al  (2018)  Phytoterapy Research 33 167-173
7. Kaban, V., & Yusmarlisa, S. (2018). Uji Aktivitas Kandungan Antioksidan Pada Daun  Bangun-Bangun  (Plectranthus amboinicus)  Secara  Spektrofotometri Ultraviolet-Visible. JURNAL FARMASIMED  (JFM) , 1 (1),  16-20. https://doi.org/10.35451/jfm.v1i1.90
8. Kadiyala  et  al  (2018)  Compotion  and metods for Immunolomodulation.
9. Lisa .D. et al (2018) Human Vacines & Immunotheraupetic vol 14 no 1 59-66
10. Marbun,  R.  (2018).  Test  Of Immunomodulatory Activity of Alkoholic Ekstract Herb Binara ( Artemisia  Vulgaris  L .)  In  Male  Rats. Asian  Journal  Pharmaceutical  and Clinical Research . 11(1):246 11. Mutiah.R et al . (2017). Anticancer Activity of Sabrang Onion (Eleutherine palmifolia (L) Merr) on Cervical Cancer
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
Hela  Cell  LineTraditional  Medicine Journal 22(3)
12. Nurfaat.(2016). Acute Toxicity Extract of Mango Misletoe (Dendrophthoe petandra) to Strain of Swiss Webster Mice. IJPST. Vol.6
13. Ofokansi  et  al  (2018).  Journal  of Clinical & Celularl Imunologis 9:5
14. Ojezele  et  al  (2016).  Chemistri International 2 (1) 109b-113b.
15. Osama  et  al  (2019).  Journal  of applied  pharmaceutical  science  vol  9 (04)
16. Poelman et al (2018) The Journal of Pediatrik vol 195
17. Poelman  et  al  (2019).  Orphanet Journal of Rare Disease 14:71.
18. Pulungan, A., Sitepu, D., & Sinaga, D. (2018).  Formulation of Ointment of Antibactery  Ethanol  Extract  of  Torch Ginger  (Etlingera  elatior)  Against
Bacteria Staphylococcus
aureus. Jurnal  Penelitian  Farmasi  & Herbal , 1 (1),  1-5.  Retrieved  from http://ejournal.delihusada.ac.id/index
.php/JPFH/article/view/30
19. Rahim.
Et al (2017).
(Immunostimulatory  Effect  Of  Leaf
Extract Kasturi (Mangifera Casturi) In
Mice). 6 (1): 10-19.
20. Sembiring, H.B., Lenny, S.,
Marpaung, L. (2016)
Aktivitas
Antioksidan  Senyawa  Flavonoida  dari Daun  Benalu  Kakao  (Dendrophthoe pentandra (L.) Miq.)
21. Wathoni  Nasrul  (2016).  Mjalah Farmasetika vol 1 No 2.
22. Yulian  .M.  (2018).  The  test antioxidant  activity)  with  the  DPPH method (1,1-diphenyl-2-
pikrildidrazil). Lantanida Journal vol 6 no 2 103-202. 23. Yuswantina. (2016). The Imunomodulator  Effect  Of  Ethanol Extract Of Breadfruit Leaves ( Artocarpus  Altilis (Park)  Fosberg) Toward Nonspesific Immune Response  On  Male  Mice  Balb/C Strain.
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019

## Gambar 2 penginjeksian bakteri e coli
Gambar 3 pemberian suspensi CMC Na secara oral sonde (kontrol negatif)
Gambar 4 tikus uji