## UJI TOKSISITAS DAN FITOKIMIA EKSTRAK KASAR METANOL,
KLOROFORM DAN n- HEKSANA ALGA COKLAT SARGASSUM VULGARE
DARI PANTAI KAPONG PAMEKASAN MADURA

## Miftahul Jannah, Ahmad Hanapi, A. Ghanaim Fasya

## Jurusan Kimia UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Sargassum  vulgare is  a  brown  algae  ( Phaeophyceae )  specific  in  Kapong  beach  Pamekasan  Madura, suspected of secondary metabolic compound. This compound may be bioactive compounds that can be used in the  medical  world  pharmacology.  This  research  aims  to  know  the  toxicity  level  and  its  active  compound Sargassum vulgare ’s.
Extraction  of  active  compound  in Sargassum  vulgare done  by  maceration  method  uses  methanol, chloroform, and n- hexane as solutions. Each extract was tested of its toxicity to shrimp larval Artemia salina L. A.  Salina mortality  data  analyzed  by  probit  Minitab  16  analysis  to  know  the  LC 50 value  of  each  extract.  After that, the researcher identifies the classes of active compound by reagent test and continued by KLTA.
The result of research shows that the toxicity and crude methanol extracts, chloroform and n -hexane test to shrimp larval S. Salina L.  obtains  LC 50 successive value at  139,098 ppm, 39, 6343 ppm and 39, 8759 ppm. Phytochemical  test result shows that  methanol extract, chloroform, and n -hexane is a steroid. The results  were confirmed by using KLTA’s best eluent. For methanol extract eluent, n -hexane:ethyl acetate (7:3) create 5 spots by Rf 0,075-0,875 value. Chloroform extract, n -hexane:acetone (7:3) create 18 spots by Rf 0,037-0,975. Thus n - hexane eluent, n -hexane:ethyl acetate (7:3) create 8 spots by Rf  0,05-0,962 value. Keywords : Brown algae ( Sargassum vulgare ), toxicity, phytochemical test and KLTA.

## ABSTRAK
Sargassum  vulgare merupakan  spesies  alga  coklat  ( Phaeophyceae )  yang  khas  dari  pantai  Kapong Pamekasan  Madura,  yang  diduga  memiliki  senyawa-senyawa  metabolit  sekunder.  Senyawa-senyawa  tersebut kemungkinan  merupakan  senyawa  bioaktif  yang  dapat  digunakan  dalam  dunia  farmakologi.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui tingkat toksisitas dan golongan senyawa aktif pada Sargassum vulgare . Ekstraksi  senyawa  aktif Sargassum  vulgare dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut metanol,  kloroform  dan n- heksana.  Masing-masing  ekstrak  diuji  toksisitasnya  terhadap  larva  udang Artemia salina L.  Data  kematian A.  salina dianalisis  dengan  analisis  probit  Minitab  16  untuk  mengetahui  nilai  LC 50 masing-masing  ekstrak.  Selanjutnya  dilakukan  identifikasi  golongan  senyawa  aktif  dengan  uji  reagen  dan dilanjutkan dengan KLTA.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  hasil  uji  toksisitas  ekstrak  metanol,  kloroform  dan n- heksana terhadap larva udang S. salina L. diperoleh nilai LC 50 secara berturut-turut sebesar 139,098 ppm, 39,6343 ppm dan  39,8759  ppm.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol,  kloroform  dan n- heksana  adalah steroid.  Hasil  ini  diperkuat  dengan  KLTA  menggunakan  eluen  terbaik,  untuk  ekstrak  metanol  eluen n- heksana:etil  asetat  (7:3)  menghasilkan  5  spot  dengan  nilai  Rf  0,075-0,875.  Ekstrak  kloroform  eluen n- heksana:aseton  (7:3)  menghasilkan  18  spot  dengan  nilai  Rf  0,037-0,975.  Dan  ekstrak n- heksana  eluen n- heksana:etil asetat (7:3) menghasilkan 8 spot dengan nilai Rf 0,05-0,962.
Kata Kunci: Alga coklat ( Sargassum vulgare ), toksisitas, uji fitokimia dan KLTA.

## I. PENDAHULUAN
Pantai  Indonesia  memiliki  potensi alga yang sangat tinggi, tercatat sedikitnya terdapat 555 jenis alga. Kelompok umumnya  yaitu alga biru, alga hijau,  alga merah dan  alga coklat. Sargassum vulgare merupakan  salah  satu  golongan  alga coklat.  Makro  alga  jenis  ini  belum dimanfaatkan dan dibudidayakan. Menurut Asmad  (2012)  dalam  Alfiaturrahmah (2013),  menurut  para  penduduk  dan nelayan pantai Kapong Pamekasan Madura,  keberadaan S.  vulgare di  pantai tersebut  sangat  melimpah.  Berdasarkan informasi  tersebut  alga  coklat S.  vulgare perlu  ditingkatkan  potensinya  dengan  cara diteliti guna mengetahui kandungan senyawa bioaktif khususnya yang berpotensi sebagai senyawa obat.
Skrining  awal  untuk  pengujian bahan  alam  dengan  uji  toksisitas  terhadap larva  udang Artemia  salina L.  sering digunakan untuk mengetahui senyawa aktif yang  terkandung  dalam  ekstrak  tanaman, karena  relatuf  murah,  cepat,  dan  hasilnya dapat  dipercaya  (Ledenberg,  1992).  Uji toksisitas  dengan  menggunakan  metode Brine Shrimp Lethality Test  (BSLT) dapat digunakan  sebagai  uji  pendahuluan  pada penelitian yang mengarah pada uji sitotoksik  karena  ada  kaitannya  antara  uji toksisitas  dengan  uji  sitotoksik  jika  harga LC 50 toksisitas  akut  lebih  kecil  dari  1000 ppm (Meyer, et  al. , 1982).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  toksisitas  dan  golongan senyawa  yang  terdapat  pada  ekstrak S. vulgare . Sehingga diharapkan dapat memberikan  informasi  ilmiah  kepada masyarakat mengenai bioaktivitas
toksisitas  alga  coklat  jenis Sargassum vulgare , sehingga  dapat  dimanfaatkan  di bidang farmakologi.

## II. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  hot  plate,  pisau, blender,  oven,  timbangan  analitik,  kaca arloji,  cawan  penguap,  tabung  reaksi,
pengaduk  kaca,  pipet  tetes,  pipet  ukur  5 mL,  pipet  ukur  10  mL,  pipet  ukur  1  mL, pipet  mikro,  penjepit,  gelas  beaker  100 mL, bola hisap, erlenmeyer 250 mL, gelas ukur  100  mL,  desikator,  corong  kaca, corong Buchner, aluminium  foil, kertas saring, labu ukur 10 mL, plat silika GF 254 , lampu penerang, vacum rotary evaporator, shaker.
Bahan  sampel  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  alga  coklat jenis  ( Sargassum  vulgare ),  metanol  p.a, kloroform  p.a, n- heksana p.a, DMSO,  ragi roti, air laut, etil asetat, HCl 37 %, HCl 1N, HCl  2  %,  metanol  50  %,  H 2 SO 4 pekat, asam  asetat  anhidrida,  aseton,  FeCl 3 1  %, gelatin,  pereaksi  Mayer  dan  Dragendorff, serbuk logam Mg, NaCl, pereaksi Liberman-Burchard, aquades, air.

## 1. Uji Taksonomi
Uji  taksonomi  alga  coklat S.  vulgare dilakukan secara kualitatif di Laboratorium Taksonomi,  Struktur  dan  Pengemnbangan Tumbuhan,  Jurusan  Biologi,  Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya.

## 2. Preparasi Sampel
Bahan  yang  digunakan  adalah  alga coklat Sargassum  vulgare, dibersihkan dengan  cara  dicuci  pada  air  mengalir kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu  38 o C  selama  24  jam  dan  dihaluskan menggunakan blender hingga halus Serbuk S.  vulgare diayak  menggunakan  ayakan yang berukuran 60-100 mesh.
3. Uji Kadar Air Cawan  kosong  dikeringkan  dalam oven  pada  suhu  100  –  105  ºC  kemudian didinginkan  dalam  desikator  selama  ±  15 menit.  Setelah  dingin  berat  cawan  kosong ditimbang.  Sampael  sebanyak    5  gram dimasukkan  dalam  cawan  dan  ditimbang. Kemudian  dimasukkan  dalam  oven  pada suhu  100  –  105  ºC  selama  ±  30  menit.
Setelah kering, didinginkan dalam desikator  selama  ±  15  menit.  Ditimbang kembali  cawan  berisi  sampel.  Kadar  air dihitung berdasarkan persamaan berikut:
Kadar air  = (b − c) (b − a) × 100 %
Keterangan:
a = berat konstan cawan kosong
b = berat cawan + sampel sebelum dikeringkan c  =  berat  konstan  cawan  +  sampel  setelah dikeringkan
Faktor koreksi = 100 100−% kadar air % Kadar air terkoreksi = Kadar air – F koreksi

## 4. Penentuan Kadar Garam
Sampel S.  vulgare dimasukkan  ke dalam beaker glass kemudian ditambahkan 10  mL  akuades  dan  diaduk  menggunakan magnetic stirrer selama 15 menit.
Ekstraksi  diulangi  sebanyak  6  kali. Kemudian
disaring menggunakan penyaring  corong buchner .  Garam  yang sudah  terekstrak  ke  dalam  pelarut  akuades diukur kadarnya menggunakan alat salinometer.
5. Ekstraksi Senyawa Aktif
Serbuk S.  vulgare sebanyak  100  g dimaserasi  dengan  menggunakan  300  mL pelarut metanol dan dilakukan pengocokan menggunakan shaker selama  3×24  jam dengan  kecepatan  120  rpm  ( rotation  per minutes ),  selanjutnya  disaring.  Ampas yang  tersisa  dimaserasi  kembali  sampai diperoleh filtrat bening (senyawa terekstrak  semua).  Ampas  yang  diperoleh dimaserasi  kembali  menggunakan  pelarut yang  sama  sebanyak  5  kali  pengulangan dengan  perlakuan  yang  sama,  setelah  itu dilakukan penyaringan. Kelima filtrat yang diperoleh digabung menjadi satu (Halimah, 2010). Perlakuan yang sama juga dilakukan terhadap 100 g sampel alga yang diekstrak  menggunakan  pelarut  kloroform dan n- heksana.
Ekstrak  metanol,  kloroform  dan n- heksana yang diperoleh kemudian dipekatkan
menggunakan
rotary
evaporator, setelah  itu  dialiri  gas  N 2. Ekstrak  pekat  ditimbang  lalu  dihitung rendemennya dengan persamaan:
% Rendemen =                             x 100 %
6. Uji Sitotoksik terhadap Larva Udang
Artemia salina Leach
a. Penetasan Larva Udang
Media  penetasan  berupa  air  laut yang  ditempatkan  di  wadah  bersekat dengan pencahayaan sinar lampu pijar/neon.  Telur Artemia  salina L. sebanyak  2,5  mg  dimasukkan  dalam  air laut  tersebut.  Kemudian  diaerasi  dalam waktu  ±  48  jam.  larva  udang  yang  telah menetas siap digunakan sebagai  hewan  uji (Juniarti, 2009).
b. Uji Toksisitas (Rita, et al., 2008) Konsentrasi  masing-masing  sampel dibuat  konsentrasi  berbeda  yakni  5  ppm, 25 ppm,  50  ppm,  100  ppm,  150  ppm,  200 ppm  dan  0  ppm  sebagai  kontrol.  Ekstrak pekat  metanol,  kloroform  dan n- heksana, masing-masing  dibuat  larutan  stok  10000 ppm  dengan  cara  ditimbang  ekstrak  pekat 100 mg dan dilarutkan dengan menggunakan pelarutnya sebanyak 10 mL. selanjutnya  dipipet  masing-masing  dari larutan stok sebanyak 5 µL, 25 µL, 50 µL, 100  µL,  150  µL  dan  200  µL.  Kemudian dimasukkan  kedalam  gelas  vial,  dan pelarutnya diuapkan hingga kering. Kemudian    ditambahkan  100  μL  dimetil sulfoksida  (DMSO),  setetes  larutan  ragi roti, dan air laut sampai volumenya 10 mL. dimasukkan  10  ekor  larva  udang Artemia Salina L.
Pada kontrol dibuat dengan dimasukkan 2 mL air laut,  100  μL dimetil sulfoksida,  dan  1  tetes  larutan  ragi  roti  ke dalam  gelas  vial,  kemudian  ditambahkan air  laut  sampai  volumenya  10  mL. dimasukkan  10  ekor  larva  udang Artemia Salina L.  pengamatan  uji  toksisitas  untuk mengetahui nilai  LC 50 dengan menghitung larva  udang Artemia  Salina L.  yang  mati setelah  24  jam  dari  perlakuan.  Kemudian dihitung  larva  udang  yang  mati  dengan rumus berikut.
% mortalitas= jumlah artemia yang mati jumlah artemia yang diuji x 100%
7. Uji Fitokimia dengan Reagen
Uji  fitokimia  kandungan  golongan senyawa  aktif  dengan  uji  reagen  dari ekstrak  pekat  metanol,  kloroform  dan n- heksana dari S. vulgare dilakukan terhadap uji alkaloid, flavonoid, triterpenoid,
steroid,  saponin,  dan  tanin  (Indrayani, et al. , 2006).
- Uji Alkaloid ( Kristanti, et al. , 2008 ) Ekstrak S.  vulgare dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  ditambah  0,5  mL HCl  2  %  dan  larutan  dibagi  dalam  dua tabung. Tabung I ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendorff, tabung II
ditambahkan  2-3  tetes  reagen  Mayer.
Jika  tabung  I  terbentuk  endapan  jingga dan  pada  tabung  II  terbentuk  endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.
- Uji Flavonoid Ekstrak S.  vulgare dimasukkan dalam tabung reaksi kemudian dilarutkan dalam 1-2 mL metanol panas 50  %.  Setelah  itu  ditambah  logam  Mg dan  4-5  tetes  HCl  pekat.  Larutan berwarna  merah  atau  jingga  yang terbentuk, menunjukkan adanya
flavonoid. - Uji Triterpenoid dan Steroid
( Kristanti, et al., 2008 )
Ekstrak S.  vulgare dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam 0,5  mL  kloroform,  lalu  ditambah dengan  0,5  mL  asam  asetat  anhidrat. Campuran  ini  selanjutnya  ditambah dengan  1-2  mL  H 2 SO 4 pekat  melalui dinding tabung tersebut. Jika hasil yang diperoleh berupa cincin kecoklatan atau violet  pada  perbatasan  dua  pelarut menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan  jika  terbentuk  warna  hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid.
- Uji Saponin (Harborne, 1987) Ekstrak S.  vulgare dimasukkan dalam  tabung  reaksi  ditambah  air  (1:1) sambil dikocok selama 1 menit, apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  HCl  1 N,  busa  yang  terbentuk  dapat  bertahan selama 10 menit  dengan ketinggian 1-3 cm,  maka  ekstrak  positif  mengandung saponin.
- Uji Tanin Uji dengan FeCl 3 Ekstrak S.  vulgare ditambahkan dengan  3  tetes  larutan  FeCl 3 1  %.  Jika larutan  menghasilkan  warna  hijau
kehitaman  atau  biru  tinta,  maka mengandung tanin.
Uji dengan Larutan Gelatin Ekstrak S.  vulgare sebanyak  2  mg dimasukkan dalam tabung reaksi ditambah  dengan  larutan  gelatin.  Jika terbentuk  endapan  putih,  menunjukkan adanya tanin
8. Uji Fitokimia dengan KLTA
Pemeriksaan  adanya  kandungan senyawa metabolit sekunder secara kualitatif pada ekstrak S. vulgare, dilakukan  dengan  metode  Kromatografi Lapis  Tipis  Analitik  (KlTA)  terhadap senyawa yang positif dari hasil uji reagen.
9. Analisis Data .
Data  yang  diperoleh  dibuat  dalam bentuk tabel dan grafik, kemudian dideskripsikan  hasilnya.  Tingkat  toksisitas larva  udang Artemia  salina Leach  dapat diketahui  dengan  melakukan  uji  LC 50 menggunakan analisis probit pada program MINITAB  16  dengan  tingkat  kepercayaan 95 %.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Taksonomi
Hasil  uji  taksonomi  menunjukkan bahwa  makroalga  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  memiliki  ciri-ciri  yaitu bentuk  agak  gepeng,  licin,  batang  utama silindris, percabangan selang-seling,
mempunyai  kantong  udara,  dan  daunnya memanjang lurus pinggirnya
bergelombang.
Berdasarkan ciri-ciri tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  sampel memiliki  ciri-ciri  yang  sama  dengan  alga coklat jenis
Sargassum vulgare Tjondronegoro, et al., (1989).
Preparasi Sampel Alga  coklat S.  vulgare dicuci hingga  bersih  untuk  menghilangkan  pasir maupun  lumpur  yang  menempel  pada tallusnya,  kemudian  dikeringkan  dengan cara dioven pada suhu 38 0 C. Pengeringan dimaksudkan  untuk  mengurangi  kadar  air, dan  mencegah  tumbuhnya  jamur  sehingga dapat disimpan lebih lama.
S.  vulgare yang  sudah  kering dihaluskan  dengan  menggunakan  blender
dan  diayak  untuk  memperluas  permukaan bahan  sehingga  mempermudah  pada  tahap ekstraksi,  interaksi  antara  pelarut  dengan sampel  yang  diekstraksi  menjadi  lebih efektif  dan  hasil  ekstrak  yang  diperoleh maksimal  (Sembiring,  dkk.,  2006).  Dari  5 Kg  sampel  basah S.  vulgare diperoleh serbuk  kering S.  vulgare sebanyak  400 gram.

## Analisis Kadar Air
Analisis  kadar  air  dilakukan  untuk mengetahui persentase kandungan air yang terdapat di dalam sampel. Hasil persentase kadar S. vulgare pada Tabel  1 berikut:
Tabel  1 Hasil persentase kadar S. vulgare
Alga Coklat ( Sargassum vulgare) Kadar Air % Kadar Air Terkoreksi % Sampel basah 83,7970 77,6254 Sampel kering 10,4697 9,3528
Kadar  air  pada S.  vulgare basah sebesar 77,6254  %. Astwan, et al ., (2001) menyatakan  bahwa  kandungan  air  rumput laut  segar  berkisar  80-90  %  dan  setelah pengeringan  menjadi  10-20  %.  Sedangkan kadar  air S.  vulgare kering  sebesar  9,3528 %.  Menurut  Winarno  (2002)  kadar  air yang baik adalah kurang dari 10 %, karena pada  tingkat  kadar  air  tersebut  waktu simpan sampel akan relatif lebih lama dan terhindar dari pencemaran yang disebabkan  mikroba.  Oleh  karena  itu, S. vulgare kering  yang  dihasilkan  dapat dilakukan  penyimpanan  dalam  selang waktu yang cukup lama.

## Analisis Kadar Garam
Analisis  kadar  garam  dilakukan untuk  mengetahui  kadar  garam  yang terdapat  pada  sampel.  Hasil  uji  kadar garam S.  vulgare ,  pada  penelitian  ini sebesar  15,6  ppt.  Menurut  Pitoyo  (2004) Artemia  salina akan menetas dalam waktu 24-36  jam  pada  salinitas  15-35  ppt.
Matthew  (1982)  yang  menyatakan  bahwa paparan  salinitas  antara  22,7  dan  33  ppt ada  pengaruh  meski  tidak  signifikan  pada sampel  mikroalga  terhadap  perkembangan
embrio  normal.  Sehingga  dari  kedua pernyataan tersebut dapat dikatakan bahwa kadar garam pada sampel tidak mempengaruhi tingkat kematian pada larva udang Artemia salina L.

## Ekstraksi Maserasi
Proses ekstraksi maserasi dilakukan dengan  menggunakan  variasi pelarut
(metanol, kloroform dan n- heksana). Untuk  memperoleh  senyawa  metabolit sekunder  sesuai  dengan  kepolarannya. Hasil rendemen dari masing-masing ekstrak ditunjukkan pada Tabel 2 berikut:
Tabel  2 Hasil  rendemen  dari  masing- masing ekstrak Pelarut Warna Ekstrak Pekat Rendemen (%) (b/b) Metanol Hijau Pekat Kehitaman 3,39 Kloroform Hijau Pekat Kehitaman 1,1596 n- Heksana Hijau Pekat 0,4228
Nilai  rendemen  ekstrak  metanol lebih besar dari kloroform  dan n- Heksana, hal  ini  kemungkinkan  disebabkan  karena pada S.  vulgare banyak  mengandung senyawa  polar,  selain  itu  diduga  senyawa yang  terkandung  di  dalam  ekstrak S. vulgare masih berbentuk glikosida, sehingga akan lebih larut ke dalam pelarut polar.  Keberadaan  senyawa-senyawa  yang masih berbentuk glikosida sangat mempengaruhi  jumlah  rendemen  hasil ekstraksi, karena umumnya senyawa metabolit  sekunder  yang  terikat  pada  gula akan terekstrak pada pelarut polar.
Uji Toksisitas Ekstrak S. vulgare dengan Larva Udang A. salina Leach Hasil pengamatan mortalitas Artemia  salina L.  dalam  uji  toksisitas dengan menggunakan metode BSLT diperoleh  presentase  mortalitas  hewan  uji dari  masing-masing  konsentrasi  ekstrak yang  diujikan.  Berdasarkan  data  tersebut dilakukan  perhitungan  dan  analisa  probit dengan  program  Minitab  16  dilakukan untuk mengkalkulasi rataan pola mortalitas
dan  konsentrasi  untuk  mendapatkan  nilai LC 50 secara  statistika  dengan  tingkat kepercayaan  95  %.  kurva  mortalitas  larva udang Artemia  salina L.  terhadap  masing- masing  ekstrak    akar  rumput  bambu ditunjukkan  pada  Gambar  1,  2  dan 3.berikut.
Gambar  1. Grafik  Uji  Toksisitas  (LC 50 ) Ekstrak Metanol
Gambar 2. Grafik  Uji Toksisitas (LC 50 )
Ekstrak kloroform
Gambar 3 . Grafik  Uji Toksisitas (LC 50 ) Ekstrak n- Heksana
Berdasarkan kurva mortalitas masing-masing  ekstrak  pelarut,  diperoleh nilai LC 50 sebagaimana pada tabel berikut:
Tabel 3 Nilai LC 50 pada berbagai pelarut
Ekstrak LC 50 (ppm) Metanol 139,098 Kloroform 39,6343 n -Heksana 39,8759 Mayer, et  al., (1982)  menyatakan bahwa suatu ekstrak menunjukkan aktivitas  ketoksikan,  jika  ekstrak  dapat menyebabkan  kematian  50  %  hewan  uji pada  konsentrasi  kurang  dari  1000  ppm. Dari  pernyataan  tersebut  dapat  diketahui bahwa  ekstrak  metanol,  kloroform  dan n-
heksasna S.  vulgare bersifat  toksik terhadap  larva  udang A.  salina L.  karena memiliki nilai LC 50 < 1000 ppm.

## Identifikasi Golongan Senyawa Aktif
Uji  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder suatu  sampel.  Hasil  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  pada  ekstrak  metanol, kloroform dan n- heksana S. vulgare adalah steroid. Ditunjukkan pada Tabel  berikut:
Tabel 4. Hasil kandungan senyawa metabolit  sekunder  pada  ekstrak metanol, kloroform dan n- heksana S. vulgare adalah steroid Golongan senyawa aktif Hasil  uji  reagen  pada  masing- masing ekstrak Metanol  Kloroform n- Heksana Alkaloid - - - Flavonoid - - - Saponin - - - Tanin - - - Steroid +++ +++ +++ Triterpenoid - - - Keterangan: +++ =kandungan senyawa lebih banyak (warna sangat pekat) ++ =mengandung  senyawa  (warna  cukup pekat) + =mengandung senyawa (sedikit berwarna) - =tidak mengandung senyawa
Pemisahan Senyawa dengan Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Hasil identifikasi golongan
senyawa  steroid  menggunakan  KLT  pada ekstrak  metanol S. vulgare dengan menggunakan  eluen  n-heksana:etil  asetat (7:3) ditunjukkan sebagaimana pada Gambar  4  dan  Tabel  5.  Penelitian sebelumnya  penelitian  Handayani,  dkk (2008)  golongan  senyawa  steroid  hasil KLT  setelah  disemprot  dengan  reagen Liberman-Burchard  dengan  terbentuknya bercak  noda  hijau.  Menurut  Syamsudin (2007)  golongan  senyawa  steroid  setelah disemprot  dengan  reagen  LB  dan  diamati pada  sinar  UV  λ 366 menghasilkan  warna biru, ungu sampai coklat.
b
Gambar  4 Hasil  KLT  senyawa  steroid n- heksana:etil asetat (7:3)
Keterangan:
a. Hasil  pengamatan  dengan  lampu  UV  366  nm sebelum disemprot reagen Liberman-Burchard
b. Hasil  pengamatan  dengan  UV  366  nm  setelah disemprot reagen Liberman-Burchard
Tabel  5. Data  penampakan  noda  senyawa steroid dari KLTA ekstrak metanol S.  vulgare pada  eluen terbaik n- Heksana:Etil Asetat
(7:3) Rf Warna noda dibawah sinar UV pada λ 366 nm Dugaan senyawa Sebelum disemprot LB Setelah disemprot LB 0,075 Ungu Ungu Steroid 0,112 Ungu Ungu Steroid 0,675 Merah muda Ungu Steroid 0,825 Merah muda Ungu Steroid 0,875 Merah muda Ungu Steroid
Hasil pemisahan golongan senyawa aktif  steroid  dari  ekstrak S.  vulgare kloroform  dengan  menggunakan  eluen n- Heksana:Aseton
(7:3) menunjukkan pemisahan yang terbaik, sebagaimana pada Gambar  5 dan Tabel 6.  Menurut Syamsudin (2007) yang menyatakan bahwa  eluen n- Heksana:Aseton  (7:3) merupakan eluen yang baik dalam memisahkan senyawa steroid yang menghasilkan  warna  biru,  ungu  sampai coklat,  setelah  disemprot  dengan  reagen LB  dan  diamati  pada  sinar  UV  λ 366 yang diduga  merupakan  golongan  senyawa steroid.  Hayati  (2012)  senyawa  steroid setelah  disemprot  LB  terbentuk  bercak noda ungu, merah muda dan hijau.
Tabel  6. Data  penampakan  noda  senyawa steroid dari  KLTA  ekstrak kloroform S. vulgare pada eluen terbaik n- Heksana:Aseton (7:3).
Rf Warna noda dibawah sinar UV pada λ 366 nm Dugaan senyawa Sebelum disemprot LB setelah disemprot LB 0,037 Merah muda Merah muda Steroid 0,125 Merah muda Merah muda Steroid 0,162 Merah muda Ungu Steroid 0,2 Ungu Hitam - 0,237 Merah muda Merah muda Steroid 0,262 Merah muda Ungu Steroid 0,3 Merah muda Ungu Steroid 0,325 Merah muda Ungu Steroid 0,362 Ungu Merah muda Steroid 0,412 Merah muda Ungu Steroid 0,437 Merah muda Ungu Steroid 0,537 Merah muda Merah muda Steroid 0,662 Merah muda tengah hitam Merah muda tengah merah Steroid 0,725 Merah muda tengah hitam Ungu Steroid 0,787 Merah muda Ungu Steroid 0,9 Merah muda Ungu Steroid 0,925 ungu Ungu Steroid 0,975 Orange muda Ungu Steroid
Gambar 5 Hasil  KLT  senyawa  steroid n- heksana:aseton (7:3)
Hasil pemisahan golongan senyawa aktif  steroid  dari  ekstrak S.  vulgare  n- heksana  dengan  menggunakan  eluen n- Heksana:Etil  Asetat  (7:3)  menunjukkan pemisahan yang terbaik, sebagaimana pada Gambar  6  dan  Tabel  7.  Pada  penelitian Handayani,  dkk  (2008)  golongan  senyawa steroid  hasil  KLT  setelah  disemprot dengan reagen  Liberman-Burchard dengan terbentuknya  bercak  noda  hijau.  Hayati (2012)  senyawa  steroid  setelah  disemprot LB  terbentuk  bercak  noda  ungu,  merah muda  dan  hijau.  Menurut  Syamsudin (2007)  golongan  senyawa  steroid  setelah disemprot  dengan  reagen  LB  dan  diamati pada  sinar  UV  λ 366 menghasilkan  warna biru, ungu  sampai coklat.
Gambar 5 Hasil  KLT  senyawa  steroid n- heksana:aseton (7:3)
Tabel  7. Data  penampakan  noda  senyawa steroid  dari  KLTA  ekstrak n-
heksana S.  vulgare pada  eluen terbaik n- Heksana:Etil  Asetat (7:3). Rf Warna noda dibawah sinar UV pada λ 366 nm Dugaan senyawa Sebelum disemprot LB Setelah disemprot LB 0,05 Merah muda Merah muda Steroid 0,075 Ungu Merah muda Steroid 0,162 Merah muda Merah muda Steroid 0,462 Merah muda Kuning - 0,687 - Ungu Steroid 0,787 Merah muda Hijau Steroid 0,912 Merah muda tengan merah Merah muda tengah ungu Steroid 0,962 Merah muda tangah ungu Merah muda Steroid

## IV. PENUTUP Kesimpulan
1. Berdasarkan hasil uji toksisitas Ekstrak metanol,  kloroform  dan n- heksana Sargassum  vulgare diperoleh    nilai LC 50 dari  ekstrak  metanol,  kloroform dan n- heksana S.  vulgare secara berturut  tutur  sebesar  139,098  ppm, 39,6343 ppm dan 39,8759 ppm.
2. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak  metanol,  kloroform  dan n- heksana S. vulgare mengandung senyawa golongan steroid. Hasil pemisahan KLTA untuk ekstrak metanol  eluen n- heksana:etil  asetat (7:3)  menghasilkan  5  spot.  Ekstrak kloroform eluen n- heksana:aseton (7:3)
menghasilkan  18  spot.  Dan  ekstrak n- heksana  eluen n- heksana:etil  asetat (7:3) menghasilkan 8 spot.
Saran
Diperlukan  pemisahan  lebih  lanjut untuk  memisahkan  senyawa  aktif  dengan Kromatografi kolom. Hasil isolat diidentifikasi dengan instrumen LC-MS

## V. DAFTAR PUSTAKA
Alfiaturrahmah. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Kasar  Etanol, Kloroform  dan n- heksana  Alga Coklat Sargassum  vulgare Asal
Pantai  Kapong  Pamekasan. Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: Fakultas  Sains  dan  Teknologi  UIN malang. Asmad.  2012.  Wawancara  komunikasi .
Kelimpahan  alga  coklat  jenis Sargassum vulgare di Pantai
Kapong Kabupaten Pamekasan. 17 Maret 2012.
Astawan,  M.,  Muchtadi,  D.,  Tutik,  W., 2001.Pemanfaatan  Rumput  Laut pada  Berbagai  Makanan  Jajanan Untuk Mencegah Timbulnya Defisiensi  Iodium  dan  Penyakit Degeneratif. LaporanPenelitian. Bogor: IPB. Halimah,  N.  2010.  Uji  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas Ekstrak Tanaman
Anting-anting ( Acalypha indica L.)
Terhadap  Larva  Udang  ( Artemia
Salina Leach) . Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: Jurusan Kimia  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim. Handayani, D., Sayuti, N. dan Dachriyanus.  2008 . Isolasi  dan Karakterisasi  Senyawa  Antibakteri Epidioksi  Sterol  dari  Spon  Laut Petrosia  nigrans,  Asal  Sumatera Barat .  Prosiding  Seminar  Nasional
Sains dan Teknologi-II 2008.
Lampung: Universitas Lampung. Harborne.  J.B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Diterjemahkan oleh Kokasih Padmawinta  dan  Iwang  Soediro. Bandung. Penerbit ITB.
Hayati,  E.K.,  Jannah,  A.,  dan  Ningsih,  R.
2012.  Identifikasi  Senyawa  Dan Aktivitas  Antimalaria  In  Vivo
Ekstrak  Etil  Asetat  Tanaman Anting-Anting (Acalypha  Indica L.). molekul, Vol. 7. N0.1. hal:20-
32.
Juniarti. 2009. Kandungan Senyawa Kimia, Uji Toksisitas ( Brine Shrimp Lethality Test ) dan Antioksidan ( 1,1-diphenyl-2- pikrilhydrazyl )  dari  Ekstrak  Daun Saga ( Abrus precatorius L.). Jurnal Kimia Fakultas Kedokteran Universitas YARSI Jakarta . Vol 13, No 1: 50-54 .
Kristanti,  A.N.,  Aminah,  N.S.,  Tanjung,
M.  dan  Kurniadi,  B.  2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya: Airlangga University Press. Ledenberg, J. 1992. Encylopedi of
Microbiology ,  Volume  Academic Press  Inc,  Rockefller  University, New York.
Matthew  P.  Coglianese.  1982. The  Effects of  Salinity  on  Copper  and  Silver Toxicity to Embryos of the Pacific Oyster. California  Department  of Fish  and  Game,  Marine  Bioassay Laboratory,  2201  Garden  Road,
Monterey, California.
Meyer,  B.N.,  Fergini,  N.R.,  Putnam,  J.E., Jacobsen,  L.B.,  Nicholas,  D.E.  dan
Mc  Laughin,  J.L.  1982. Brine Shrimp; a Convient General Bioassay for Active Plant Constituents . Plant Medica. Pitoyo, Ahmad. 2004. perikanan- nusantara.blogspot.com/artemia.ht ml diakses pada Maret 2014.
Rita,W.S.,  Suirta,  I.W.  dan  Sabirin,  A.
2008. Isolasi dan Identifikasi Senyawa  yang  Berpotensi  Sebagai Antitumor  pada  Daging  Buah  Pare ( Momordica  carantia L). Jurnal Jurusan  Kimia  FMIPA  Universitas Udayana 2(1) , ISSN 1907-9850: 1-
6.
Syamsudin,  Tjokrosonto,  S.,  Wahyuno,  S dan  Mustofa.  2007.  Aktivitas  Anti- plasmodium dari dua fraksi Ekstrak
n-heksana  Kulit  Batang  Asam Kandis (Gracinia parvifoli Miq).Majalah  Farmasi  indonesia ,
18 (4), 210-215.
Tjondronegoro  dan  Dewi,  P.  1989. Botani Umum  II .  Bogor:    Pusat  Antar Universitas IPB. Winarno,  F.G.  2002. Kimia  Pangan  dan Gizi .  Jakarta:  gramedia  Pustaka Utama.