PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL DARI EKSTRAK ETANOL BUNGA ROSELLA ( Hibiscus sabdariffa L . ) BERWARNA UNGU MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
Andi Herlinda 1 , Abd. Malik 2 dan Ahmad Najib 3
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia Makassar
1 andiherlinda@gmail.com

## ABSTRACT
One  of the  herb plants,  purple Roselle  flowers  (Hibiscus sabdariffa  L),  used to traditionally for various diseases. The aim of  this  research is to determine the total phenolic content of ethanol extract of purple  Roselle flowers.  Sample  as  many  one  kilograms  extracted  by  maceration  method  using  ethanol  96%.  Resulty  120 grams  thick extract. Total  phenolic content  determined  by UV-Vis  spectrophotometer  at  wave  leght  743 nm with gallic  acid  as  standard  reference  with  Folin-Ciocalteau  reagent.  The  result  show  the  rendamen  of  ethanolic extract  12% with total phenolic content 1.6726 %.
Keywords :  Total  phenolic,  extract  ethanol  of  purple  Roselle  flowers  (Hibiscus  sabdariffa  L),  Folin-Ciocalteau method, UV-Vis spectrophotometer .

## I.   PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Tanaman sebagai bahan obat telah dimanfaatkan  masyarakat  Indonesia  sejak  dahulu, salah  satu  tanaman  yan  banyak  digunakan  sebagai bahan  obat  saat  ini  yaitu  bunga  rosella (Hibiscus sabdariffa L .) yang  menjadi  begitu  popular,  hal  ini dikarenakan hampir seluruh bagian tanamannya dapat digunakan  untuk  kebutuhan  pengobatan.  Nilai  gizi dan  kandungan  kimia  dari  rosella  diantaranya  adalah vitamin C,  vitamin  A, dan 18 jenis asam amino yang diperlukan  tubuh,  protein,  karbohidrat,  tiamin, kalsium,  antosianin,  niacin,  flavonoid,  alkaloid  dan asam  stearat.    Antosianin,  flavonoid,  dan  polyphenol merupakan  zat  kardioprotektif  pencegah  penyakit kardiovaskular  yang  terdapat  dalam  kelopak  bunga rosella.  Selain  itu  kelopak  bunga  rosella  juga berfungsi  untuk  menurunkan  kadar  kolesterol  darah, antikanker,  peluruh  air  seni,  merangsang  keluarnya empedu dari hati, antihipertensi, antidiabetes, mengurangi kekentalan (viskositas) darah, antiskorbut (sariawan  akut),  mengurangi  batuk,  meningkatkan peristaltik  usus  serta  terapi  gangguan  liver  dan asam  urat  (Herti, 2005; Mahadevan et al .,2009). Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa, L)  adalah tanaman    yang   berasal   dari    Asia    dan    Afrika. Menurut   penelitian   yang   dilakukan   Hsieh   dkk (2008)  kelopak  bunga  Rosella  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC50  0,25  mg/ml  (Ruangsri et al , 2008).
Rosella  mengandung  senyawa  fenolik  yaitu flavonoid  (antosianin)  pada  kelopak  bunganya. Mengingat pentingnya fungsi senyawa fenolik sebagai antioksidan  untuk  pencegahan  dan  pengobatan
penyakit  degeneratif,  kanker,  penuaan  dini  dan gangguan  sistem  imun  tubuh,  maka  perlu  dilakukan penelitian mengenai kadar fenolik total dalam kelopak bunga  rosella  ungu.  Dengan  demikian,  usaha pemanfaatan  tanaman  rosella  sebagai  obat  herbal dapat  lebih  maksimal  karena  dengan  melihat  kadar fenolik  total  maka  besar  aktivitas  antioksidannya dapat diperkirakan (Apsari, 2011).

## II. METODE PENELITIAN
A. Pengambilan dan pengolahan sampel
Tanaman  Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) yang  digunakan  berasal  dari  Lahan  Gunung Pohsarung,  Kecamatan  Semen,  Kabupaten  Kediri (Jawa  Timur).  Sampel  yang  digunakan  yaitu  ekstrak etanol  bunga  Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) berwarna ungu.
B. Pengolahan Sampel
Bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.) berwarna  ungu  yang  telah  dikeringkan  selanjutnya dibuat serbuk lalu siap diekstraksi.

## C. Metode Ekstraksi
Serbuk bunga rosella kelopak berwarna ungu bunga  Ditimbang  1  kg  bunga  rosella  ( Hibiscus sabdariffa L.)  ungu,  kemudian  dimasukan  serbuk bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  ungu  yang akan   disari   kedalam   bejana   maserasi.   Dituang secara  perlahan  pelarut  etanol  96%  kedalam  bejana maserasi  yang  berisi  serbuk  bunga  rosella  ungu. Kemudian  biarkan  cairan  penyari  merendam  serbuk simplisia selama selama 3x24 jam, kemudian disaring dan  dilakukan  remaserasi  dengan  pelarut  yang  sama
sampai  jernih.  Proses  ekstraksi  ini  dapat  dihentikan apabila  warna  ampas  serbuk  telah  berubah  menjadi lebih pucat atau maserat berwarna lebih bening. Hasil penyarian dari ekstrak diuapkan dengan menggunakan  rotavapor  dibawah  titik  didih  hingga diperoleh     ekstrak kental dan  untuk menghilangkan keberadaan jejak- jejak sisa air.

## Penetapan Kadar Fenolik Total a. Pembuatan Larutan baku
Pembuatan  larutan  standar  asam  gallat dilakukan  dengan  melarutkan  10  mg  asam  galat kedalam etanol  96%  menggunakan  labu takar 10  mL hinggam  menghasilkan  konsentrasi  1000  ppm.  Dari larutan  stock  dipipet  sebanyak  0,25  mL  diencerkan dengan  etanol  96%  hingga  volume  25  mL  hingga dihasilkan  konsentrasi  10  ppm.  Dari  larutan  tersebut dipipet  1,  2,  3,  4  dan  5  mL  dan  dicukupkan  dengan etanol  96%  hingga  10  mL,  sehingga  dihasilkan konsentrasi  1,  2,  3,  4  dan  5  ppm.  untuk  pembuatan kurva baku masing-masing tabung reaksi. Selanjutnya untuk masing-masing larutan standar  tersebut ditambahkan dengan 0,4 mL reagen Folin- Ciocalteau dan  diinkubasi  selama  4-8  menit.    Kemudian  larutan ditambahkan  dengan  4,0  mL  Na2CO3  7%,  lalu ditambahkan  dengan  aquadest  steril  sampai  batas tanda.  Setelah  2  jam  inkubasi,  absorbansi  larutan diukur  pada  panjang  gelombang  743  nm  dengan larutan blanko air suling dan reagen Folin-Ciocalteau.

## b.  Pengukuran  Kadar  Fenolik  Total  dari  Bunga Rosella Berwarna Ungu
Penetapan  kadar  pada  ekstrak  etanol  bunga rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  ungu  merujuk  pada prosedur  Chun et  al (2003)  dengan  beberapa modifikasi yaitu sampel ekstrak etanol bunga rosella ( Hibiscus  sabdariffa L.)  ungu  dibuat  dengan  cara menimbang  10  mg  kemudian  dilarutkan  dengan  10 mL  etanol  96%  dan  dihomogenisasi.  Dipipet sebanyak  1  mL  kemudian  dicukupkan  dengan  10 ml  etanol  96%.  Selanjutnya  dipipet  1  ml  dari larutan  tersebut  untuk  tiga  replikasi.    Masing- masing  larutan  ditambahkan  dengan  0,4  mL  reagen Folin-Ciocalteau dikocok  dan  dibiarkan  4-8  menit, tambahkan  4,0  mL  larutan  Na2CO3  7%  kocok hingga  homogen. Tambahkan aquadest  steril  hingga 10  mL  dan  diamkan  selama  2  jam  pada  suhu ruangan.  Ukur  serapan  pada  panjang  gelombang serapan  maksimum  743  nm  yang  akan  memberikan kompleks biru. Lakukan 3 kali pengulangan sehingga kadar  fenol  yang  diperoleh hasilnya  didapat sebagai  mg  ekuivalen  asam  galat/100  mg  sampel segar.  Nilai  fenolik  total  dinyatakan  dalam Gallic Acid  Equivalents (GAE)  tiap  100  g  berat  kering
ekstrak etanol bunga rosella ungu g GAE/100 g berat kering ekstrak etanol rosella ungu.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Bobot  ekstrak  etanol  bunga  rosella  ungu yang  diperoleh  yaitu  120  gram.  Sedangkan  persen rendamen  pada  ekstrak  etanol  Rosella  ungu  12%. Hasil pemeriksaan secara kualitatif dengan menggunakan  KLT  membuktikan  bahwa  kelopak bunga Rosella mengandung fenolik.
Tabel  1. Hasil  Uji  Kualitatif  Adanya  Senyawa Fenolik  ekstrak  etanol  bunga  Rosella  ( Hibiscus sabdariffa L.) ungu Sampel Uji fenolik Hasil pengamatan (Flavonoid) FeCl 3 Kelopak Ungu Biru Kehitaman (+) Keterangan :
(+) = menunjukkan adanya flavonoid
Gambar  1. Profil  KLT  Ekstrak  Etanol  Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) Berwarna Ungu
Keterangan : Fase diam  : Silica gel 60 F 254 Fase gerak : n-nutanol:Asam asetat:Aquadest (4:1:5)
(A) Sinar tampak
(B) UV 254 nm
(C) UV 366 nm
(D) Penyemprotan FeCl 3
(E) Penyemprotan FeCl 3 UV 366 nm
Analisis  metode  penetapan  kadar  fenolik dengan  menggunakan  metode  Folin-Ciocalteau  cara Chun et  al .  (2003),  dan  sebagai  standar  digunakan larutan asam galat atau asam 3,4,5- trihidroksibenzoat  (C6H2(OH)3CO2H)  (Apsari  dan Susanti,  2011).  Asam  galat  murni  berbentuk  bubuk organik Kristal tak berwarna dan merupakan molekul bebas  atau  bagian  dari  molekul  tanin.  Asam  galat
A
B C D E
mempunyai  sifat antifungal,  antiokasidan,  dan antiviral (Nely dan Fardiaz, 2007).
Untuk  menetukan  anilis  fenolik  total, terlebih  dahulu  dilakukan  scanning  dari  panjang gelombang 400-800 nm. Diperoleh panjang gelombang  maksimal  473  nm  sesuai  dengan  metode Chun et al (2003). Selanjutnya dilakukan pengukuran  absorbansi  pada  larutan  standar  asam galat yang  akan digunakan sebagai pembanding.
Tabel  2. Hasil Penetapan  Kadar Fenolik Total Bunga Rosella  Berwarna Ungu
Sampel Rata-rata kandungan fenolik total (mg GAE/100 g % Kadar Fenolik Bunga Rosella Ungu 16,7265 1,6726
Gambar 2 . Kurva kalibrasi asam  galat pada panjang gelombang 743 nm Pengukuran absorbansi dilakukan
menggunakan spektrofotometri UV-Vis  dengan serapan  maksimum  473  nm.  Warna  yang  dihasilkan dari  larutan  standar  asam  galat  adalah  kuning. Semakin tinggi konsentrasi  yang digunakan,  semakin pekat warna kuning yang dihasilkan. Hasil Pengukuran  absorbansi  larutan  standar  asam  galat diperoleh  dimasukan  kedalam  Microsoft  excel  untuk mendapatkan  kurva  kalibrasi  larutan  4standar  asam galat  berupa  grafik  kurva  konsentrasi  (C)  versus absorbansi  (A)  dan  dapat  ditunjukan  pada  gambar  2. Berdasarkan  Gambar  dapat  dilihat        bahwa  kurva kalibrasi  dengan  persamaan  regresi  untuk  untuk absorbansi  asam  galat  sebesar  y  =  0,2312x-0,041; larutan  standar  senyawa  fenolik  diperoleh  hubungan yang linier antara absorbansi       dengan  konsentrasi. Pada  pengukuran  absorbansi  yang  ditunjukkan dengan  nilai  koefisien  korelasi  (r)  sebesar  0.9971. nilai  (r)  yang  mendekati  1  menunjukkan  bahwa persamaan regresi adalah linear.
Kandungan  penting  yang  terdapat  pada kelopak  bunga  rosela  adalah  pigmen  antosianin  yang merupakan golongan flavonoid yang berperan sebagai antioksidan (Mardiah et al , 2009).
Adapun  hasil  yang  diperoleh  dari  kadar fenolik  total  ekstrak  etanol  bunga  Rosella  ungu, 16,7265  mg RE/  g ekstrak  atau  1,6726  %.  Senyawa fenol  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  bunga Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  berwarna  ungu merupakan  hasil  metabolit  sekunder  yang  potensial sebagai sumber bahan baku obat.

## IV. KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  kadar  ekstrak  etanol  bunga  rosella  ungu memiliki  kandungan  fenolik  dengan  kadar  fenolik total  sebesar  16,7265  mg  GAE/g  ekstrak  dengan persentase kadar fenol total (b/b) sebesar 1,6726 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Apsari,  P.D.,  &  Susanti,  H.  2011. Perbandingan
Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Metanol Kelopak  Merah  dan  Ungu  Bunga  Rosella (Hibiscus sabdariffa, Linn) Secara Spektrofotometri. ISBN:  978-979-18458-4- 7 .
Ariati, R.,  Arifin,  H., & Muchtar,  H. 2012. Pengaruh Fraksi Air Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa.  L)  Terhadap  Kadar  Kolesterol Darah  Tikus  Putih  Jantan Hiperkolesterol dan  Hiperkolesterol  Disfungsi  Hati. Artikel. Universitas Andalas.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  2000.
Penelitian Tanaman Obat Dibeberapa Perguruan Tinggi Indonesia Edisi X . Jakarta: Percetakan Negara.
Direktorat  Jendral  Pengawasan  Obat  dan  Makanan. 2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat. Jakarta  :  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Chun,  O.K.,  Kim,  D.O.,  and  Lee,  C.Y.,  2003, Superoxide  Radical  Scavenging  Activity  of The Major.
Polyphenols  in  Fresh  Plums, J.  Agric.  Food Chem, 51, 8067-8072.
Fessenden.  J, et  al .  1986. Kimia  Organik  Edisi  III . Glora Aksara Pratama. Jakarta.
Harborne.  (1996) .  Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern  Menganalisa  Tumbuhan .  Bandung:
ITB.
Harbone,  J.R.,  (1987).  Metode  Fitokimia  Penuntun Cara  Modern  Mengekstraksi  Tumbuhan. Terjemahan  Padmawinata  Edisi  kedua  ITB. Bandung.
Harmanto,  N.  2007. Herbal  Untuk  Keluarga  Jus Herbal Segar dan Menyehatkan. Jakarta: PT Elex Media Komputindo.
Harmita.  2006. Petunjuk  pelaksanaan  Validasi Metode  dan  Cara  Perhitungannya .  FMIPA.
Universitas Indonesia. Depok.
Herty,  M  dan  Kristiana,  L.  2005, Khasiat  dan Manfaat  Rosela.  Cetakan  I, Agromedia Pustaka. Jakarta.
Huang,  D.,  Ou,  B.,  and  Prior,  R.L.,  2005,  The Chemistry  behind  Antioxidant  Capacity
Assays,  Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry, 53, 1841.
Khopkar.    1990. Konsep  Dasar  Kimia  Analitik . Universitas Indonesia. Jakarta.
Laurence,  J.D.  12  Juli  2013. Hibiscus  sabdariffa. 17 September 2013: http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/Single Rpt?search_topic=TSN&search_value=5030 01.
Lee,  K.I.,  Kim,  Y.J.,  and  Lee,  C.H.  2003.  Cocoa Has  Mora  Phenolic      Phytochemical  and Hiher  Antioksidant  Capacity than Teas and Red  Wine.  J.  Agric.  Food  Chem.,  51  :
7292-7295.
Mahadevan,  N.,  Shivali  and  Kamboj,  V.  2009. Hibiscus  sabdariffa  Linn.  –  An overview .
Natural  product  radiance,  Vol.  8(1),  2009, pp. 77-83.
Mardiah, et  al .  2009. Budidaya  dan  Pengolahan Rosella . Ed. Ke-1. Jakarta. Agromedia.
Markham,  K.  R.  1988.  Cara  Mengidentifikasi Flavanoid. Terjemahan Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB : Bandung.
Maryani, H., Kristiana, L. 2008. Khasiat dan Manfaat Rosela. Jakarta. PT  Agro  Media Pustaka. hal 6, 25-31.
Mulja, M, dan Suharman. 1995. Spektrofotometri UV- Vis.  Analisis  Instrumental  (pp.  26,28-30 ). Surabaya : Airlangga University Press.
Nely  dan  Fardiaz.  2007.  Aktivitas  Antioksidan Rempah  Pasar  dan  Bubuk  Rempah  Pabrik dengan  Metode  Polifenol  dan  Uji  AOM (Active Oxygen Method). Institute Tehnologi Bandung : Bandung. Ruangsri,  P.,  Chumsri,  P.,  Sirichote,  A.,  dan  Itharat, A.,  2008,  Changes  in  Quality  and  Bioactive Properties of Concentrated Roselle ( Hibiscus sabdariffa Linn.)  Extract, As.  J.  Food  Ag- Ind, 1(02), Hal 62-67.
Rostinawati,  T.,  2009. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Bunga  Rosella  (Hibiscus  sabdariffa L. )  Terhadap  Escherichia  coli,  Salmonella typii  dan  Staphylococcus  aureus  Dengan Metode  Difusi  Agar .  (Skripsi).  Jatinangor  : Universitas Padjadjaran.
Seafast.  2  Maret  2012. Senyawa  Fenolik  pada Sayuran  Indigenous. 21  September  2013  : http://seafast.ipb.ac.id/  tpc-  project/  wp- content/uploads/2012/03/1-senyawa- fenolik.pdf
Seafast.    2012. Biosintesis  Senyawa  Fenolik .    21 September 2013. seafast.ipb.ac.idtpc- projectwp. 2-biosintesis.pdf.
Silvi,2008  Special  Preblem  With  The  Extraction  of Plant. Human Press : Totowa, New Jersey.
Steenis. V, et al . 2005. Flora. PT. Pradnya Paramita, Jakarta.
Sukesi  dan  Sirat,  D.W.  2012.  Antioksidan  dalam Baksos  Rumput  Laut  Merah  Eucheuma Cottonii.  Jurnal  Sains  dan  Seni  Pomits Vol. 1, No. 1: 1-4.
Soekamto,  M.A. Pengaruh  Pemberian  Seduhan Kelopak  Kering  Bunga  Rosella  (Hibiscus sabdariffa)  Terhadap  kadar  Trigliserida Serum Tikus Sprague-Dawley Hiperkolestrolemik . Karya Tulis Ilmiah
Sudjadi.  2007. Kimia  Farmasi  Analisis .  PT.  Pustaka Pelajar. Jakarta.
Tanjong,  A.  2011. Pengaruh  Konsentrasi  Ekstrak
Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa L .)  Terhadap  Koloni  Candida
Albicans yang Terdapat pada Plat Gigitiruan. (Skripsi). Makassar: Universitas Hasanuddin.
Ukieyana,  E.,  (2012).  Aktivitas  Antioksidan,  Kadar Fenolik  Dan  Flavanoid  total  Tumbuhan Suruhan  (Peperomia  pellucid  L.  Kunth). Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor. Bogor
Voigt  R.  1994. Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi . Penerjemah  Dr.  Soendani  Noerono.  Edisi Kelima. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.