## Jurnal Sains Akuakultur Tropis D e p a r t e m e n   A k u a k u l t u r
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan - Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang 50275
Telp. (024) 7474698, Fax.: (024) 7474698 Email: sainsakuakulturtropis@gmail.com , sainsakuakulturtropis@undip.ac.id
STUDI KASUS KEBERADAAN PENYAKIT IMNV (INFECTIOUS MYONECROSIS VIRUS) PADA UDANG VANAME (Litopenaeus vannamei) DI PERTAMBAKAN

## PEKALONGAN, JAWA TENGAH
A Case Study About The Presence of IMNV ( Infectious Myonecrosis Virus) Disease in Vaname Shrimp (Litopenaeus vannamei) on Brackish Water Ponds in Pekalongan, Central Java
Humidah Sarah, Slamet Budi Prayitno *) , Alfabetian Harjuno Condro Haditomo
Departemen Akuakultur Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah – 50275, Telp/Fax. +6224 7474698 *Corresponding author (Email: sbudiprayitno@gmail.com )

## ABSTRAK
Udang  vaname  ( Litopenaeus  vannamei )  menjadi  salah  satu  spesies  andalan  bagi  pertambakan  di indonesia.  Salah  satu  kendala  pada  pembudidaya  udang  vaname  saat  ini  adanya  penyakit  IMNV  (Infectious Myonecrosis  Virus).  Pekalongan  merupakan  salah  satu  produksi  udang  vaname  yang  cukup  penting  di  Jawa Tengah.  Pemantauan  penyakit  penting  seperti  IMNV  sangat  perlu  dilakukan  untuk  mengetahui  potensi  resiko tertular dan tersebarnya penyakit IMNV di Pekalongan. Peneltian ini bertujuan untuk mengkaji status kesehatan udang  khususnya  dari  infeksi  IMNV  pada  tambak  intensif  di  Kota  Pekalongan.  Metode  penelitian  yang dilakukan  adalah  menggunakan  metode  studi  kasus,  dengan  melakukan  pengambilan  sampel  udang melalui purposive  random  sampling dan  wawancara  kepada  pemilik  tambak.  Jumlah  udang  144  ekor  dari  8  tambak terpilih. Hasil real time PCR dan analisa histopatologi terhadap organ daging bagian ekor menunjukkan bahwa 25%  tambak  contoh  terinfeksi  IMNV  yaitu  di  desa  Krapyak  dan  desa  Kandang  Panjang,  sedangkan  hasil histopatologi menunjukkan bahwa jaringan daging udang mengalami nekrosis. Berdarsarkan hasil diatas, tambak intensif di Kota Pekalongan memiliki potensi terinfeksi IMNV pada tahap sedang.
Kata kunci : udang vaname, IMNV, PCR, histopatologi

## ABSTRACT
Vaname shrimp (Litopenaeus  vannamei) became a prime species cultivated in brackish water  ponds in Indonesia.  The  problem  that  are  often  found  in  field,  is  IMNV (Infectious  Myonecrosis  Virus) disease. Pekalongan  district  is  one  of  important  shrimp  produces  in  Central  Java.  Disease  monitoring  program  is  an importanted  step  that  should  be  carried  out  especially  for  IMNV  infection.  This  was  to  evaluate  the  potential disease  infection  and  spread  into  the  culture  area.  The  aim  of  this  research  was  to  study  the  health  status  of intensive  shrimp  culture  in  Pekalongan  with  regard IMNV  infection.  144  shrimp  were  randomly  selected brackish  water  intensive  ponds.  The  sample  were  then  analysed  by  real  time  PCR  to  correct  the  present  of IMNV.  Histopathologycal  study  was  also  cound.  The  research  showed  that  25%  of  intensive  shrimp  ponds samples were infected by IMNV. Furthemore, their caudal flesh demmostrated necrosis. This can be concluded that shrimp ponds in Pekalongan mildly risk of IMNV.
Keywords : vaname shrimp, IMNV, PCR, histopathology

## PENDAHULUAN
Udang  vaname  ( Litopenaeus  vannamei )  menjadi  salah  satu  spesies  andalan  bagi  pertambakan  di Indonesia. Berdasarkan keunggulannya udang vaname relatif tahan terhadap penyakit dan memiliki produktivitas yang  relatif  tinggi,  namun  kendala  pada  pembudidaya  udang  saat  ini  adanya  penyakit  IMNV  di  pertambakan. ( Infectious  Myonecrosis  Virus) IMNV  merupakan  salah  satu  virus  menyerang  udang  vaname  pada  bagian  otot dan hepatopankreas yang mengancam budidaya udang di Indonesia bahkan dunia.
Kota  Pekalongan  memiliki  potensi  yang  besar  dalam  pengembangan  sektor  budidaya  udang  di  Jawa Tengah. Potensi lahan yang besar tersebut juga tidak lepas dari kecenderungan penyebaran virus yang luas. Salah satu tambak di Pekalongan sudah terlihat gejala klinis bahwa vaname tersebut terindikasi IMNV. Hingga saat ini, metode  pengobatan  infeksi  oleh  virus  belum  ditemukan  sehingga  usaha  yang  dapat  dilakukan  adalah pencegahan.  Salah  satu  metode  pencegahan  yaitu  pengetahuan  mengenai  status  penyebaran  IMNV,  dengan mengetahui  status  persebaran  penyakit  IMNV  maka  kerugian  dalam  kegiatan  budidaya  yang  disebabkan  oleh penyakit IMNV dapat diminimalisir.
Informasi  tersebut  diperlukan  oleh  pembudidaya  udang  sehingga  dilakukan  studi  kasus  keberadaan penyakit  IMNV  dengan  pendekteksian  virus  berupa  metode Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  dan  analisa histopatologi  untuk  mengetahui  kerusakan  sel  atau  jaringan  yang  telah  ditimbulkan  oleh  virus  tersebut. Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  adalah  suatu  teknik  uji  terhadap  virus  melalui  hasil  reaksi  berantai  suatu primer dari rangkaian yang menggunakan enzim polymerase, sehingga menjadi amplifikasi DNA secara in vitro (Sunarto et al ., 2003). Perubahan bentuk atau struktur pada bagian otot udang yang terkena virus biasanya sulit dilihat.  Perubahan  struktur  ini  hanya  dapat  dilihat  bila  jaringan  tubuh  udang  tersebut  diamati  menggunakan mikroskop. Menurut Khaisar, (2006) analisa histologi dapat menjadi parameter yang sangat sensitif dan menjadi sangat penting didalam menentukan perubahan struktur sel yang terjadi di organ dalam.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  status  penyebaran  IMNV  di  pertambakan  dan  memperoleh informasi untuk para petambak tentang status terkini perkembangan penyakit IMNV di Kota Pekalongan, Jawa Tengah.

## MATERI DAN METODE
Udang  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  vaname.  Jumlah  total  udang  144  ekor  untuk pengambilan  di  8  tambak,  jadi  tiap  tambaknya  udang  vaname  diambil  18  ekor  dengan  ukuran  7,67  ±  2,80  cm umur 1-2 bulan yang memiliki riwayat IMNV di Kecamatan Pekalongan Utara. Penelitian dilakukan pada bulan November  2016  sampai  pada  bulan  Januari  2017.  Total  Lokasi  sampling  berjumlah  8  tambak  dari  16  tambak pada  Kecamatan  Pekalongan  Utara,  Jawa  Tengah.  Tambak  yang  dijadikan  lokasi  sampling  yaitu  4  tambak perwakilan dari Desa Degayu, 1 tambak dari Desa Kandang Panjang, dan 3 tambak dari Desa Krapyak. Analisis penyakit IMNV dilakukan di Balai Karantina Ikan Pengendalian Mutu Dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas I Juanda, Surabaya I.
Metode  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  studi  kasus,  sedangkan  metode  pengambilan  sampel menggunakan  metode purposive  random  sampling .  Prosedur  penelitian  ini  terdapat  tahap  persiapan  meliputi persiapan  alat  dan  survey  tempat.  Tahap  pelaksanaan  meliputi  wawancara,  penentuan  lokasi,  pengambilan sampel, diagnosa virus menggunakan Real Time PCR dan pembuatan preparat histopatologi udang sampel. Uji real time PCR terdiri dari tiga tahap. Tahap pertama menyiapkan standar IMNVdengan melakukan 5 pengenceran  berseri  (10 5 –  10 1 )  standar  IMNV.  Tahap  kedua  membuat master  mix PCR  untuk  IMNVdengan komponen yaitu 2× Multiplex RT-PCR Buffer 12.5 µl, 10× Multiplex RT-PCR Enzyme Mix 2.5 ml, 25× IMNV Primer  Probe  Mix  1  µl  dan  RT-PCR grade  water 1  µl  dengan  total  17  µl master  mix per  reaksi,  kemudian dimasukkan  ke  dalam microtube 1.5  ml. Master  mix di vortex 5  detik  dan  di spin 5  detik  dan  dimasukkan  ke dalam tiap sumuran plate . Ditambahkan 8 µl RT-PCR grade water untuk sumuran No Template Control (NTC), 8 µl untuk setiap konsentrasi standar, 8 µl ekstrak RNA sebagai sampel target. Total volume per reaksi sebanyak 25  µl. Tahap  ketiga,  amplifikasi  IMNV.  Profil  amplifikasi  yang  digunakan  yaitu  suhu  48  °C  selama  10  menit, suhu 95 °C selama 10 menit, 95 °C selama 15 detik 40 siklus dan suhu 60 °C selama 1 menit.
Pembuatan  preparat  histopatologi  udang  mengacu  pada  prosedur  NWFHS  (2009)  yaitu,  preparasi  organ otot, dehidrasi, clearing , dan infiltrasi lalu embedding , pemotongan jaringan dan terakhir pewarnaan. Pembuatan preparat dilakukan untuk melihat perubahan bentuk atau struktur pada bagian otot udang yang terkena IMNV.
Hasil dari Uji PCR dapat dihitung prevalensi tambak yang terindikasi IMNV. Rumus prevalensi menurut Cameron (2002) yaitu sebagai berikut:
.

## HASIL
Berdasarkan  hasil  penentuan  lokasi  sampling  dengan  tambak  yang  riwayat  terindikasi  IMNV  di Kecamatan  Pekalongan  Utara  yaitu  Desa  Degayu,  Desa  Kandang  Panjang  dan  Desa  Krapyak.  Jumlah  Tambak
Prevalensi =
Jumlah positif IMNV
x 100%
Jumlah total sampel
untuk lokasi sampling ada 8 tambak. Desa Degayu berjumlah 4 tambak, Desa Kandang Panjang 1 Tambak dan Desa  Krapyak  berjumlah  3  Tambak.  Berikut  adalah  peta  tambak  Kecamatan  Pekalongan  Utara  tersaji  pada Gambar 1.
Gambar 1. Peta lokasi tambak Kecamatan Pekalongan Utara; (1) Kandang Panjang,  (2)Degayu  (3) Krapyak.
Penentuan lokasi sampling berdasarkan pada tambak terindikasi IMNV  yang berada di Desa Kandang Panjang, Desa Degayu dan Desa Krapyak yaitu dengan hasil pengambilan undian nomor secara acak 50% dari 16 tambak, berikut adalah tambak yang terpilih sebagai lokasi sampling dengan kode sampel: Desa Kandang Panjang
= G Desa Degayu = A, B, C dan D Desa Krapyak = E, F, dan H
Hasil pengujian IMNV pada sampel udang vaname dengan real time PCR tersaji pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil Uji IMNVdengan real time PCR pada udang vaname
Hasil uji real time PCR dapat diketahui nilai Ctnya, Ct adalah jumlah waktu siklus yang dibutuhkan oleh sinyal fluoresen untuk mecapai garis treshold . Pada awal siklus sinyal fluoresen masih lemah, kemudian sinyal tersebut akan naik secara eksponensial, jika suatu sampel melewati garis treshold dengan Ct < 29 maka dapat dikatakan sampel tersebut positif. Nilai Ct IMNV pada real time PCR tersjadi pada Tabel 1.
Tabel 1. Keterangan nilai Ct IMNV pada real time PCR.
No Warna Sampel Ct 1. A 36,28 2. B N/A 3. C 37,2
Hasil  pemeriksaan  sampel  menunjukkan  sampel  E  dan  G  positif  karena  memotong  garis treshold IMNV dengan Ct 18,58 dan 15,65. Sampel A, C, D, H nilai Ct berkisar 36 – 37, sampel B dan F negatif penyakit  IMNV.  Ct  digunakan  untuk  menghitung copy DNA.  Semakin  banyak copy DNA  semakin  sedikit jumlah salinan virus terdeteksi. Jumlah Ct yang banyak menunjukkan adanya virus yang sedikit, dan sebaliknya jumlah  Ct  yang  sedikit  menunjukkan  adanya  virus  yang  banyak  dalam  sampel.  Berdasarkan  hasil  PCR  dapat dihitung  prevalensi  tambak  yang  terindikasi  IMNV.  Perhitungan  prevalensi  diperoleh  dari  jumlah  udang  yang positif  IMNV  dibandingkan  dengan  jumlah  seluruh  udang  yang  diambil  saat  sampling.  Perhitungan  prevalensi dapat di lihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Perhitungan prevalensi
No Tambak sampel Jumlah Udang Keterangan IMNV 1. Tambak A 18 ekor - 2. Tambak B 18 ekor - 3. Tambak C 18 ekor - 4. Tambak D 18 ekor - 5. Tambak E 18 ekor + 6. Tambak F 18 ekor - 7. Tambak G 18 ekor + 8. Tambak H 18 ekor - Jumlah 144 ekor 36 ekor (+)
Berdasarkan hasil dapat diketahui prevalensi dengan jumlah udang yang positif IMNV adalah 36 ekor total udang sampel seluruhnya 144 ekor. Dimasukan kedalam rumus jumlah positif IMNV dibandingkan dengan total sampel seluruhnya, jadi prevalensi tambak sampel di Kecamatan Pekalongan Utara yaitu 25%.
Melalui  pembuatan  preparat histologi  yang  telah  dilakukan  didapatkan  hasil  gambaran  histopatologi otot  udang  vaname  yang  positif  IMNV.  Hasil  histopatologi  yang  didapatkan  udang  yang  terkena  IMNV menunjukan  adanya  nekrosis  dan  ifiltrasi  hemosit  pada  bagian  otot.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  Poulus et  al. (2006)  yang  menyatakan  bahwa  udang  vaname  menunjukan  gejala  nekrotik  pada  otot daging  setelah  disuntik  virion  IMNV.  Pengamatan  preparat  pada  organ  otot  udang  vaname  dengan  perbesaran 100x. Hasil histopatologi udang vaname tersaji pada Gambar 3.
4. D 36,8 5. E 18,58 6. F N/A 7. G 15,65 8. H 36,7 9. + IMNV 28,25 10. NTC N/A
Gambar  3.  Histopatologi  udang  vaname;  (1)  udang  sampel  tambak  kode  E  (2)  udang sampel  tambak  G  (3)  menurut  Tang et  al .  (2005)  (4)  menurut  Poulos et  al . (2006).  Tanda  panah;  Jaringan  otot  mengalami  nekrosis  disertai  infiltrasi hemosit dan badan inklusi.

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  ada  beberapa  faktor  kemungkinan  yang  menyebabkan  tambak tersebut positif IMNV yaitu, desain dan tata letak antar tambak yang tidak sesuai dan tidak teratur menyebabkan virus  mudah  terjadi.  Tidak  teratur  tata  letak  dari  beberapa  lokasi  tambak,  serta  desain inlet dan outlet dari pertambakan yang juga tidak sesuai mengakibatkan penyebaran virus terjadi di dalam tambak. Ketidaksesuaian penempatan inlet dan outlet dari pertambakan  menyebakan  air buangan,  yang banyak  mengandung limbah dan kemungkinan  mengandung  bibit  penyakit,  dari  salah  satu  tambak  menjadi  air  masukan  pada inlet tambak  lain. Air buangan  yang digunakan untuk kegiatan budidaya pada tambak lain tersebut  memiliki kualitas  yang buruk sehingga menyebabkan udang yang dibudidayakan stres dan lebih rentan terserang penyakit. Menurut Subiyakto (2009),  menyatakan  bahwa  faktor  yang  memicu  stress  pada  udang  dan  menyebabkan  daya  tahan  tubuh  udang menurun. Penurunan daya tahan tubuh mengakibatkan udang lebih mudah terjangkit penyakit. Hal tersebut dapat menjadi salah satu penyebab munculnya IMNV di tambak yang positif IMNV.
Kemampuan  metoda  diagnosa  mendeteksi  infeksi  penyakit  pada  tahap  awal  sangat  penting  untuk pengendalian penyakit. Metoda deteksi patogen yang cepat, sensitif menjadi prioritas utama dalam pengendalian penyakit.  Kemampuan real  time RT-PCR  udang  yang  terinfeksi  IMNV  menjadikan  metoda  deteksi  ini  sangat dibutuhkan  dalam  pengendalian  infeksi  IMNV.  Jaringan  yang  diambil  untuk  diuji real  time RT-PCR  yaitu pleopod, otot dan insang. Menurut Andrade et al . (2007), menyatakan bahwa sampel udang klinis dan sub klinis yang diuji  menunjukkan nilai Ct  maupun konsentrasi jumlah salinan tertinggi IMNV adalah pada jaringan otot dan pleopod. Jaringan udang yang memiliki jumlah virus terbesar adalah pada haemolim dan otot, diikuti dengan pleopod    dan  insang.  Berdasarkan  hasil  pengujian  PCR  pada  sampel  dengan  jumlah  delapan  sampel menunjukkan  sampel  E  dan  G  positif  IMNV  dengan  Ct  18,58  dan  15,65.  OIE  (2009),  Ct  <29  adalah  reaksi positif yang kuat menunjukkan asam nukleat target yang berlimpah dalam sampel. Ct dari 30 - 37 menunjukkan reaksi lemah.
Berdasarkan  hasil  perhitungan  prevalensi  dari  data  penelitian  didapatkan  prevalensi  IMNV  di Kecamatan  Pekalongan  Utara  sebesar  25%  dari  total  8  tambak  2  tambak  yang  positif  IMNV.  Dari  data sebelumnya  nilai prevalensi di tambak Kecamatan Pekalongan Utara 10%. Prevalensi di wilayah sampling  25% dapat dikatakan wilayah sampling memiliki resiko penyakit sedang. Prevalensi 16-25% wilayah secara produksi memiliki resiko penyakit sedang (Prayitno, personal communication , 2016).
Tambak  yang  positif  IMNV  yaitu  tambak  sampel  E  dan  tambak  sampel  G.  Ada  beberapa  faktor  nilai prevalensi IMNV di pertambakan Kecamatan Pekalongan Utara meningkat yaitu transmisi horizontal IMNV di pertambakan  diduga  terjadi  akibat  perairan  lepas  yang  sudah  terkontaminasi  IMNV.  Tambak  yang  terinfeksi IMNV  biasanya  membuang  air  dan  udang  mati  langsung  ke  laut  tanpa  perlakuan  sterilisasi  terlebih  dahulu sehingga  dapat  mengkontaminasi  pertambakan  lain  yang  berada  di  kawasan  tersebut  yang  juga  mengambil  air laut yang sudah terkontaminasi sehingga infeksi virus semakin meluas. Desain dan tata letak antar tambak yang tidak  sesuai  dan  tidak  teratur  menyebabkan  virus  mudah  terjadi.  Tidak  teratur  tata  letak  dari  beberapa  lokasi
3 4
tambak, serta desain inlet dan outlet dari pertambakan  yang juga tidak sesuai  mengakibatkan penyebaran  virus terjadi  di  dalam  tambak.  Ketidak  sesuaian  penempatan inlet dan outlet dari  pertambakan  menyebakan  air buangan yang banyak mengandung limbah dan kemungkinan mengandung bibit penyakit, dari salah satu tambak menjadi air masukan pada inlet tambak lain. Air buangan yang digunakan untuk kegiatan budidaya pada tambak lain  tersebut  memiliki  kualitas  yang  buruk  sehingga  menyebabkan  udang  yang  dibudidayakan  stres  dan  lebih rentan  terserang  penyakit.    Ada  faktor  pendukung  lain  yang  mempengaruhi  nilai  prevalensi  IMNV  meningkat yaitu  adanya  perubahan  iklim.  Perubahan  iklim  dapat  membuat  udang  menjadi  stres  dan  menyebabkan ketahanan  tubuh  menurun.  Menurut  Costa et  al. (2009),  menyatakan  bahwa  faktor  pendukung  lain  yang mempengaruhi nilai prevalensi IMNV cukup tinggi yaitu adanya dampak dari perubahan iklim. Perubahan iklim yang tercermin dari pergantian cuaca harian yang ekstrim, membuat suhu perairan berfluktuasi. Perubahan cuaca dan suhu perairan tersebut memicu stres pada udang dan menyebabkan daya tahan tubuh udang menurun.
Hasil histopatologi dari sampel yang positif IMNV pada jaringan otot udang vaname terdapat kerusakan jaringan  atau  nekrosis  pada  bagian  otot  udang.  Histologi  otot  udang  uji  menunjukkan  adanya  perubahan dibandingkan  dengan  histologi  otot  udang  normal.  Hal  ini  terlihat  dengan  terjadinya  nekrosis  dan  adanya infiltrasi  hemosit  pada  jaringan  otot.  Menurut  Takashima et  al. (1995),  menyatakan  bahwa  nekrosis  ialah keadaan  dimana  sel  dan  jaringan  mengalami  penurunan  aktivitas  dan  akhirnya  mati.  Sel  yang  mengalami nekrosis  terlihat  hancur  dan  akan  hilang  atau  mati.  Otot  merupakan  jaringan  yang  umum  digunakan  sebagai sampel untuk pengujian skala sel untuk IMNV. Secara umum udang yang terinfeksi virus IMNV menunjukkan lesi  pada  otot  skeletal,  koagulasi  nekrosis  termasuk  nekrosis multifocal ,  kongesti  pada hemocyte ,  inflamasi fibrocytic , fagositosis dan bodi inklusi sitoplasma serta infiltrasi hemocyte (Tang et a l., 2005).

## KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  diperoleh  dari  penelitian  ini  adalah  status  penyebaran  penyakit  IMNV  pada pertambakan  Kecamatan  Pekalongan  Utara  yaitu  ditemukan  hasil  positif  IMNV  pada  tambak  sampel  E  dan tambak  sampel  G  dengan  prevalensi  yang  didapatkan  25%  yakni  tambak  tersebut  tingkat  keberadaan  penyakit IMNVmemiliki potensi terinfeksi pada tahap sedang.

## SARAN
1. Sebaiknya tersedianya bak  tandon di tambak untuk sterilisasi air, jika tambak tersebut terkena IMNV, air di sterilisasi terlebih dahulu tidak membuang air ke laut secara langsung.
2. Sebaiknya desain dan tata letak inlet maupun outlet dibuat teratur seperti saluran outlet dari satu tambak tidak menjadi air masukan pada inlet tambak lain dan penyusunan yang sesuai dari lokasi beberapa tambak.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih penulis ucapkan kepada Dinas Peternakan Perikanan dan Kelautan Pekalongan  yang telah mengizinkan  tempat  dan  fasilitas  untuk  pelaksanaan  sampling  penelitian  ini,  Balai  Karantina  Ikan  dan Pengendalian  Mutu  kelas  I  Juanda  yang    telah  memberi  fasilitas  untuk  penelitian  ini,  Novia  Cristhi  sebagai penyelia  histologi  dan  Fatoni  sebagai  penyelia  PCR,  dan  semua  pihak  yang  telah  membantu  kelancaran penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Andrade, TPD. Srisuvan. T, Tang KFJ, Lightner, DV. 2007. Real-Time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction  Assay  Using  TaqMan  probe  for  Detection  and  Quantification  of  Infectious  Myonecrosis Virus (IMNV). Aquaculture 264:9–15.
Cameron,  A.  2002.  Survey  Toolbox  for  Aquatic  Animal  Disease-  a  Practical  Manual  and  Software  Package . ACIAR Monograph . No. 94. 375p.
Costa,AM. Buglione, CC, Bezerr. FL, Martins, PCC. Barracco, MA. 2009. Immune assessment of farm-reared Penaeus vannamei shrimp naturally infected by IMNV in NE Brazil. Aquaculture 291:141-146.
Khaisar,  O.  2006.  Kandungan  Timah  Hitam  (Pb)  dan  Kadmium  (Cd)  dalam  Air,  Sedimen  dan  Bioakumulasi Serta  Respon  Histopatologis  Organ  Ikan  Alu-alu  ( Sphyraena  barracuda) di  Perairan  Teluk  Jakarta. [ Skripsi]. Bogor: Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Pp 6-8.
Mumford,  S.  2009.  Chapter  13  Histology  of  Finfish.  5 th ed.,  NWFHS  Laboratory  Procedures  Manual, Washington D.C. 350 p.
OIE [Office International des Epizooties; World Organisation for Animal Health]. 2009. Infectious Myonecrosis.
Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals. 96‒104.
Poulos, B.T., K.F.J. Tang., C.R. Pantoja., J.R. Bonami., D.V. Lightner. 2006. Purification and Characterization of Infectious Myonecrosis Virus of Penaeid Shrimp. Journal of General Virology. 87:987-996.
Takashima. F, Hibiya, T. 1995. An Atlas of Fish Histology: Second Edition. Tokyo:Kodansha Ltd.  Pp 789-848.
Tang, KFJ. Pantoja, CR. Poulos, BT. Redman, RM. Lightner, DV. 2005. In Situ Hybridization demonstrates that Lithopenaeus vannamei, L. stylirostris and Penaeus monodon are susceptible to experimental infection with infectious myonecrosis virus (IMNV). Dis. Aquat. Org. 63:261-265.
Subiyakto,  S.,  Sutende,  D.,  Afandi,  M.,  dan  Sofiati  2009. Budidaya  Udang  Vannamei  ( Litopenaeus  vannamei ) Semi  Intensif  dengan  Metode  Sirkulasi  Tertutup  untuk  Menghindari  Serangan  Virus.  Jurnal  Ilmiah Perikanan dan Kelautan Vol 1 No 2. Situbondo.121-127 hal.
Sunarto, A., T.I. Koesharyani., A. Rukyani. 2003. Prosedur PCR Untuk Diagnosa Cepat Penyakit Bercak Putih Pada  Udang.  Direktorat  Kesehatan  Ikan  dan  Lingkungan  .  Direktorat  Jenderal  Perikanan  Budidaya  . Jakarta. 20 hlm.