## BIOPROSPEKSI  SPONS,  KARANG  LUNAK  DAN  ASCIDIAN ASAL  TAMAN  NASIONAL  LAUT  KEPULAUAN  WAKATOBI: ANTITUMOR  DAN  ANTIOKSIDAN
Bioprospecting of Spons, Soft Coral and Ascidian from Wakatobi Marine Nasional Park : Antitumor and Antioxidant
Nurrahmi Dewi Fajarningsih 1 , Muhammad Nursid 1 , Hedi Indra Januar 1 , dan Thamrin Wikanta 1
1 Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan,  KKP. Jl. K.S. Tubun Petamburan  VI, Jakarta  Pusat 10260 *  Korespondensi  Penulis:  nurrahmi_dewi@yahoo.com
Diterima: 29 Mei 2013,  Disetujui: 6 Desember 2013

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  manfaat  (bioprospeksi)  spons,  karang lunak,  dan  ascidian  asal  Taman  Nasional  Laut  (TNL)  Kepulauan  Wakatobi  sebagai  antitumor dan  antioksidan.  Sampel  makroinvertebrata  laut  diambil  dengan  menggunakan scuba  diving di empat  stasiun  pengambilan  di  perairan  TNL  Kep.  Wakatobi.  Sebanyak  74  sampel  diuji  aktivitas antitumornya  terhadap  3  jenis  sel  lestari  tumor  (HeLa,  MCF7,  SKOV3)  dengan  metode Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue (MTT) dan diuji pula aktivitas antioksidannya dengan menggunakan metode DPPH  ( 2,2-diphenyl  pikryl  hidrazil ).  Sampel  yang  dapat  menghambat  >50%  sel  lestari  tumor pada  konsentrasi  20  g/ml  dikategorikan  sebagai  sampel  aktif  antitumor.  Sampel  yang  memiliki aktivitas  penghambatan  radikal  bebas  >50%  pada  konsentrasi  100  g/ml  dalam  uji  DPPH dikategorikan  sebagai  sampel  yang  aktif  antioksidan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa jenis  sel  lestari  tumor,  11  sampel  aktif  terhadap  dua  jenis  sel  lestari  tumor  dan  22  sampel  aktif terhadap  satu  jenis  sel  lestari  tumor.  Dari  74  sampel  yang  diuji  aktivitas  antioksidannya,  terdapat 8  sampel  yang  tergolong  aktif  (7  sampel  spons  dan  1  sampel  karang  lunak).
KATA KUNCI: spons, karang lunak, ascidian, Wakatobi, antitumor, antioksidan

## ABSTRACT
This research was aimed to investigate the bioprospecting of sponge, soft coral, and ascidian from  Wakatobi  Marine  National  Park  (MNP)  as  antitumor  and  antioxidant.  Macroinvertebrate samples  were  collected from  4  sampling  stations of Wakatobi  MNP  using scuba  diving. Seventy four samples were tested its antitumor activity using Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue (MTT) assay (against 3 tumor cell lines: HeLa, MCF7, and SKOV3) and were also tested its antioxidant activity using  DPPH  (2,2-diphenyl  pikryl  hidrazil)  methode.  Samples  that  inhibit  more  than  50%  tumor cell  line  at  concentration  of  20  g/ml  were  considered  as  antitumor  active.  While,  samples  that inhibit more than 50%  free radicals at  concentration of  100  g/ml were considered as antioxidant active. The result showed that 3 sponges samples (ascidian W-02-08; sponge W-24-08 and W-25- 08) were active againts 3 tumor cell lines, 11 samples were active againts 2 tumor cell lines and 22 samples were active againts 1 tumor cell lines. The antioxidant assay showed that only 8 samples (7 sponge and 1 soft corals) were active as antioxidant.
KEYWORDS: sponge, soft coral, ascidian, Wakatobi, antitumor, antioxidant

## PENDAHULUAN
Indonesia  m erupak an  negara  dengan keanekaragaman  hayati  terbesar  kedua  di  dunia setelah Brasil. Brasil mempunyai daratan yang luas (hutan Amazonia), sedangkan Indonesia mempunyai jumlah pulau yang sangat banyak dengan lautan yang
luas.  Hal  tersebut  menjadikan  Indonesia  sebagai negara  dengan  keanekaragaman  hayati  laut ( megabiodiversity ) tertinggi di dunia.
Keanekaragaman  hayati  sebanding  dengan keanekar agam an  kim ia  bahan  alam   y ang dikandungnya.  Kelimpahan  dan  keanekaragaman kimia  bahan  alam  dengan  berbagai  bioaktivitas
terdapat  3  sampel  (ascidian  W ­02­08;  spons  W ­24­08  dan  W ­25­08)  yang  aktif  terhadap  tiga
potensial kemudian dapat dikembangkan ke tahap penemuan obat. Hingga saat ini, kegiatan bioprospeksi senyawa bahan alam baru dari lingkungan laut telah menghasilkan ribuan senyawa baru (Leal et al ., 2012). Hal  tersebut  menegaskan  bahwa  organisme  laut merupakan sumber penting untuk kegiatan penelitian dan pengembangan obat baru (Williams & Andersen, 2006).
Spons  dan  karang  lunak  merupakan  hewan multiseluler  dengan  tubuh  lunak  ( soft  bodied), pertumbuhan yang sangat lambat, sessil dan berwarna terang. Tekanan lingkungan, seperti kompetisi ruang, cahaya, dan sumber lainnya menyebabkan terjadinya keanekaragaman  kimia  pada  berbagai  organisme bentik,  termasuk  spons yang  berfungsi  sebagai pertahanan diri terhadap serangan predator (Sennet et al. , 2002; Leal et al., 2012 ). Spons merupakan makroinvertebrata laut yang menjadi sumber senyawa bioaktif  baru  dengan  berbagai  potensi  biomedis sebagai antitumor, antimikrobia, antivirus dan lain?lain (Pabel et al. , 2003; Mayer et al., 2013).
Beberapa senyawa bioaktif berhasil diisolasi dari spons asal Indonesia, di antaranya senyawa cyclic peptide barangamide A dengan bioaktivitas sebagai senyawa sitotoksik dan inhibitor HIV yang diisolasi dari spons Theonella swinhoei (Faulkner, 2001). Selain itu,  Plaza et  al. (2009)  juga  berhasil  mengisolasi beberapa senyawa cyclic depsipeptides (celebesides A dan C) baru dari spons Siliquariaspongia mirabilis yang  dikoleksi  dari  perairan  Indonesia.  Senyawa celebesides A dan C tersebut mempunyai aktivitas sebagai  anti  tum or   dan  anti ?HIV.   Seny awa Sintokamide A yang merupakan inhibitor transaktivasi N?terminal dari reseptor androgen pada kanker prostate telah  diisolasi  oleh  Sadar et  al (2008)  dari  spons Dysidea sp. asal Indonesia. Sementara itu, Januar et al. (2010) telah mengisolasi satu senyawa baru dengan formula molekuler C 22 H 36 O 3 dari karang lunak Nepthea sp. yang dikoleksi dari perairan Pulau Seribu, namun senyawa baru tersebut memiliki bioaktivitas antitumor yang lemah terhadap beberapa jenis sel lestari tumor yang diujikan.
Kawasan  Wakatobi  ditetapkan  sebagai  Taman Nasional  berdasarkan  surat  keputusan  Menteri Kehutanan  No.  393/Kpts?VI/1996  dengan  luas 1.390.000  hektar.  Taman  Nasional  Laut  (TNL) Kepulauan Wakatobi merupakan kawasan konservasi laut  dengan  potensi  sumberdaya  alam  laut  yang bernilai tinggi baik jenis maupun keunikannya sehingga menjadikannya obyek penelitian bioprospeksi yang sangat menarik. Taman Nasional Laut Kep. Wakatobi secara geografis terletak di pusat segitiga karang dunia ( coral triangle reef ) dan memiliki 25 buah gugusan
terumbu karang dengan keliling pantai dari pulau?pulau karang  sepanjang  600  km.  Sekitar  750  spesies terumbu karang dari total 850 spesies yang terdapat di dunia dapat ditemukan di TNL Kepulauan Wakatobi (Hugua, 2008).
Keanekaragaman hayati laut yang tinggi di TNK Wakatobi dapat memberikan manfaat yang sangat besar. Nursid et al . (2011) melaporkan kapang jenis Emericella  nidulans yang  diisolasi  dari  ascidian Aplidium  longitorax asal  perair an  W akat obi m enghasi lkan  senyawa  aktif   em est rin  y ang mempunyai  aktiv itas  sebagai  antikanker  T47D (payudara)  melalui  mekanisme  apoptosis.  Namun demikian, dalam berbagai review ilmiah mengenai present status senyawa bahan alam yang dikoleksi dari invertebrata laut (Mayer et al., 2011; Leal et al., 2012; Mayer et al. , 2013), hingga saat ini belum pernah dilaporkan adanya senyawa bahan alam yang diisolasi dari spons, karang lunak ataupun ascidian asal TNL Kep.  Wakatobi.  Oleh  karena  itu,  kegiatan  untuk mencari  dan  menemukan  senyawa  bioaktif  baru melalui  eksplorasi  pemanfaatan  keanekaragaman hayati (kegiatan bioprospeksi) di TNL Kep. Wakatobi perlu dilakukan untuk mengungkap potensi?potensi pemanfaatannya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui potensi manfaat (bioprospeksi) spons, karang lunak dan ascidian asal TNL Kep. Wakatobi sebagai  penghasil senyawa  bioaktif antitumor  dan antioksidan.

## BAHAN DAN METODE

## Pengambilan Sampel Spons, Karang Lunak dan Ascidian
Pengambilan 74 sampel spons, karang lunak, dan ascidian dilakukan di perairan TNL Kep. Wakatobi pada tanggal 25 dan 26 April 2008. Sampel seberat 50 hingga  550 g diambil dengan menggunakan scuba diving di  4  stasiun  pengambilan  di  perairan  TNK Wakatobi. Keempat  stasiun  pengambilan  tersebut meliputi pesisir Pantai Kapota (S ?5.35 o E 123.46 o ), Pesisir  Desa  Waha  (S  5.27 o E  123.51 o ),  Tanjung Sombano Kaledupa (S ?5.47 o E 123.73 o ) dan Pesisir Pulau Hoga Kaledupa (S ?5.48 o E 123.76 o ). Sampel tersebut  kemudian  langsung  dimaserasi  dengan menggunakan  pelarut  etanol  dalam  tabung  tahan pelarut organik, kemudian dibawa ke Laboratorium Instrumen Balai Besar Litbang Pengolahan Produk dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan  untuk diekstraksi lebih lanjut. Sebagai dokumentasi, diambil foto spons, karang lunak dan ascidian di habitatnya dan foto di permukaan air. Perkiraan identifikasi sampel dilakukan berdasarkan foto tersebut.

## Ekstraksi Spons, Karang Lunak, dan Ascidian
Ekstraksi  spons,  karang  lunak,  dan  ascidian dilakukan  menurut  Wikanta et  al. (2005).  Sampel dimaserasi dengan pelarut etanol teknis 95 % selama 72 jam kemudian maserat disaring. Maserat kemudian dievaporasi pada suhu 25 o C dan tekanan 40 Mbar menggunakan Buchi Rotavapor . Setelah pelarut etanol menguap semua, ekstrak dikeringbekukan pada suhu dan tekanan rendah ( ?40 o C, 300 x 10 ?3 Mbar) dengan menggunakan freeze  dryer (Labconco)  hingga diperoleh ekstrak berbentuk serbuk kering.

## Uji Sitotoksisitas Terhadap Sel Kanker HeLa, MCF 7, dan SKOV 3
Uji sitotoksisitas dilakukan dengan metode MTT (3?[4,5?dimetilthiazol?2yl]?2,5?difenil  tetrazolium bromida)  menurut  Zachary  (2003).  Sel  HeLa  dan SKOV 3 dikultur dalam media RPMI  ( Roswell Park Memorial Institue ) 1640, sementara sel MCF 7 dikultur pada  media  DMEM  ( Dulbecco?s  Modified  Eagle?s Medium ). Medium RPMI dan DMEM dilengkapi dengan Fetal Bovine Serum ( FBS) 10%, fungizone 0,5% dan Penisilin?Streptomisin 2%.
Sebanyak 100  l larutan ekstrak spons, karang lunak, dan ascidia dimasukkan ke dalam sumuran mikroplat yang telah berisi sel tumor sebanyak 2x10 4 sel (100  l), kemudian diinkubasi selama 24 jam dalam inkubator CO 2 . Selanjutnya, masing?masing ekstrak spons,  karang  lunak  dan  ascidian  diuji  pada konsentrasi 20 ?g/ml sebanyak 3 ulangan. Dibuat pula 3 macam kontrol, yaitu: kontrol sel (100  l sel + 100  l media), kontrol media (200  l media) dan kontrol sampel  (100  l  ekstrak  spons  +  100  l  media). Kemudian mikroplat diinkubasikan  selama 24  jam dalam inkubator CO 2 . Efek ekstrak terhadap perubahan morfologi sel lestari tumor yang diujikan kemudian diamati  dan  difoto  sebagai  dokumentasi.  Setelah diinkubasikan selama 24 jam, selanjutnya ke dalam mikroplat  ditambahkan  10  l  MTT  ke  dalam  tiap sumuran dan diinkubasikan kembali selama 4 jam dalam inkubator CO 2 . Reaksi MTT dihentikan dengan penambahan  sodium  dodesil  sulfat  (SDS)  10%, selanjutnya mikroplat kembali diinkubasikan selama 12 jam dalam ruang gelap pada suhu kamar. Setelah inkubasi tersebut,  absorbansi tiap  sumuran diukur dengan microplate reader ( DYNEX spektrofotometer) pada panjang gelombang 570 nm.
Penentuan  persentase  kematian  sel  dihitung berdasarkan rumus:
Keterangan: A =  Absorbansi kontrol sel
B =  Absorbansi sampel C =  Absorbansi kontrol sampel D =  Absorbansi kontrol media

## Uji Antioksidan dengan Metode DPPH
Uji antioksidan dilakukan dengan metode DPPH menurut Yong Li et al . (2006). Ekstrak spons, karang lunak, dan ascidian asal TNL Kep. Wakatobi diuji pada konsentrasi 100  g/ml dalam larutan metanol p.a. Sebanyak  160  l  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam sumuran  mikroplat  kemudian  ke  dalam  masing? masing sumuran ditambahkan 40 ?l larutan DPPH (Merck). Larutan DPPH dibuat dengan cara melarutkan 3 mg DPPH dalam 10 ml metanol p.a. Sebagai kontrol sampel, sebanyak 160 ?l ekstrak dari masing?masing sam pel  dim asukkan  ke  dalam   sum uran  lalu ditambahkan 40  l metanol p.a. Kontrol negatif dibuat dengan  cara  menambahkan  160  l  metanol  p.a dengan 40  l DPPH dan sebagai blanko digunakan 200  l  m etanol  p.a.  Asam   askorbat  (Merck) konsentrasi  100  g/ml  digunakan  sebagai  kontrol positif. Mikroplat diinkubasi pada suhu ruang selama 30  menit,  kemudian absorbansi  dari  tiap  sumuran dibaca dengan microplate reader (Dynex ) pada panjang gelombang 510 nm. Persentase penghambatan radikal bebas ditentukan dengan rumus:
Keterangan : A = absorbansi kontrol negatif
B = absorbansi blanko
C = absorbansi sampel
D = absorbansi kontrol sampel

## HASIL DAN BAHASAN
Aktivitas Antitumor Esktrak Spons, Karang Lunak, dan Ascidia
Menurut kriteria National Cancer Institute (NCI) suatu ekstrak dikategorikan aktif apabila IC 50 nya < 20  g/ml  (Schmitz et  al. ,  2001).  Ekstrak  yang dikategorikan  aktiflah  yang  kemudian  diteliti  lebih lanjut untuk diisolasi senyawa aktifnya. Berdasarkan kriteria tersebut, pada penelitian ini, masing?masing ekstrak  spons,  karang  lunak,  dan  ascidian  diuji aktivitas  sitotoksiknya  pada  konsentrasi  20  g/ml terhadap  3  jenis  sel  lestari  tumor.  Apabila  pada konsentrasi  20  g/ml,  ekstrak  tersebut  dapat menghambat 50% atau lebih sel lestari tumor maka dikategorikan sebagai sampel aktif. Ketiga jenis sel yang diujikan adalah sel HeLa (sel tumor serviks), sel MCF7 (sel tumor payudara) dan sel SKOV3 (sel tumor ovarium). Persentase kematian ketiga jenis sel setelah
% hambatan =                                x 100%
(A – B) – (C – D)
(A – B)
(A – D) (B –C)
(A – D)
% Mortalitas =
x 100%
Tabel 1. Persen kematian sel tumor HeLa, MCF 7, dan SKOV 3 yang diperlakukan dengan ekstrak spons, karang lunak, dan ascidian yang diuji pada konsentrasi uji 20 ?g/ml
Table 1. Percent  mortality of  HeLa, MCF  7,  and SKOV  3  cell lines  treated with  sponge,  soft coral  ,and ascidian extracts at concentration of 20 ?g/ml
HeLa MCF 7 SKOV 3 1 W?01?08 Karang Lunak/ Soft Coral 47.00 53.50              53.30 2 W?02?08 As cidian 55.20              70.80              65.40 3 W?03?08 Karang Lunak/ Soft Coral 38.90              21.90              40.90 4 W?04?08 Spons/S ponge 37.34 45.49 97.02 5 W?05?08 Karang Lunak/ Soft Coral 34.79 0 27.31 6 W?06?08 Spons/S ponge 21.40              17.20              35.70 7 W?07?08 Spons/S ponge 25.30              51.10              45.50 8 W?08?08 Spons/S ponge 19.10              27.10 74.60 9 W?09?08 Spons/S ponge 41.90              25.00 66.30 10 W?10?08 Spons/S ponge 57.70 47.28 40.35 11 W?11?08 Spons/S ponge 7.08 56.26 0 12 W?12?08 Spons/S ponge 27.4 67.4 23.64 13 W?13?08 Karang Lunak/ Soft Coral 48.14 38.4 44.95 14 W?14?08 Spons/S ponge 49.10 65.60 47.40 15 W?15?08 Spons/S ponge 95.08 47.28 40.35 16 W?16?08 Spons/S ponge 95.57          100.00 29.87 17 W?17?09 Spons/S ponge 12.97 0 0 18 W?18?08 Spons/S ponge 23.67 5.62 11.52 19 W?19?08 Spons/S ponge 63.81 49.01             43.60 20 W?20?08 Spons/S ponge 35.44 28.91 21.54 21 W?21?08 Spons/S ponge 62.83 12.61 29.26 22 W?22?08 Karang Lunak/ Soft Coral 0 0 58.20 23 W?23?08 Karang Lunak/ Soft Coral 43.22 0 43.02 24 W?24?08 Spons/S ponge 67.70              66.60              85.60 25 W?25?08 Spons/S ponge 79.90              97.30              83.00 26 W?26?08 Spons/S ponge 33.50 36.74 24.48 27 W?27?08 Karang Lunak/ Soft Coral 32.20 61.10 41.50 28 W?28?08 Karang Lunak/ Soft Coral 28.63 8.15 43.97 29 W?29?08 Spons/S ponge 40.70 15.54 56.23 30 W?30?08 Spons/S ponge 44.41 12.5 28.44 31 W?31?08 Karang Lunak/ Soft Coral 57.70 60.9 29.40 32 W?32?08 Karang Lunak/ Soft Coral 22.94 10.53 37.36 33 W?33?08 Spons/S ponge 18.22 0             40.30 34 W?34?08 Spons/S ponge 32.14 37.39 100.00 35 W?35?08 Spons/S ponge 67.86 0 38.44 36 W?36?08 Spons/S ponge 34.49 40.79 44.13 37 W?37?08 Spons/S ponge 26.69 6.47               0.84 38 W?38?08 Spons/S ponge 0 58.45 64.74 39 W?39?08 Spons/S ponge 17.63 0 37.88 40 W?40?08 Spons/S ponge 46.88 37.74 18.67 41 W?41?08 Karang Lunak/ Soft Coral 9.16 0 27.08 No Kode/ Code Kelompok/Group % Kematian / % Mortality
Tabel 1. Persen kematian sel tumor HeLa, MCF 7, dan SKOV 3 yang diperlakukan dengan ekstrak spons, karang lunak, dan ascidian yang diuji pada konsentrasi uji 20  g/ml (lanjutan)
Table 1. Percent  mortality of  HeLa, MCF  7,  and SKOV  3  cell lines  treated with  sponge,  soft coral,  and ascidian extracts at concentration of 20  g/ml (continued)
HeLa MCF 7 SKOV 3 42 W?42?08 Spons/S ponge 50.40 71.50 44.80 43 W?43?08 Spons/S ponge 5.67 0 57.26 44 W?44?08 Spons/S ponge 75.40 33.10 54.20 45 W?45?08 Karang Lunak/ Soft Coral 50.40 33.90 40.50 46 W?46?08 Spons/S ponge 1.12 90.15 0 47 W?47?08 Karang Lunak/ Soft Coral 34.10 68.10 37.40 48 W?48?08 Karang Lunak/ Soft Coral 32.70 22.40 0 49 W?49?08 Spons/S ponge 3.55 0 38.72 50 W?50?08 Spons/S ponge 26.10 86.90 90.90 51 W?51?08 Karang Lunak/ Soft Coral 24.00 64.10 74.20 52 W?52?08 Karang Lunak/ Soft Coral 32.67 19.07 56.54 53 W?53?08 Spons/S ponge 23.14 8.85 7.36 54 W?54?08 Spons  yang Tidak Teridentifikasi/ unidentified s ponge 25.47 0 17.60 55 W?55?08 Spons/S ponge 32.23 16.9 28.12 56 W?56?08 Spons/S ponge 54.70 45.10 65.20 57 W?57?08 Spons/S ponge 20.90 5.62 31.21 58 W?58?08 Karang Lunak/ Soft Coral 21.34 13.94 9.53 59 W?59?08 Karang Lunak/ Soft Coral 33.20 28.00 67.10 60 W?60?08 Karang Lunak/ Soft Coral 63.40 0 50.20 61 W?61?08 Spons/S ponge 28.16 45.71 44.93 62 W?62?08 Spons/S ponge 29.90 9.70 43.70 63 W?63?08 Spons/S ponge 10.60 2.30 42.90 64 W?64?08 Spons/S ponge 42.55 26.22 50.35 65 W?65?08 Spons/S ponge 43.40 51.70 51.90 66 W?66?08 Spons/S ponge 9.75 20.19 30.76 67 W?67?08 Spons/S ponge 42.55 22.04 31.76 68 W?68?08 Karang Lunak/ Soft Coral 26.82 0 48.58 69 W?69?08 Spons/S ponge 15.60 29.50 50.20 70 W?70?08 Spons/S ponge 30.97 27.69 60.39 71 W?71?08 Spons/S ponge 13.55 0 29.61 72 W?72?08 Spons/S ponge 19.05 0 0.83 73 W?73?08 Spons/S ponge 60.98 26.88 58.63 74 W?74?08 Spons/S ponge 43.40              19.90              33.30 Kode/ Code Kelompok/ Group % Kematian / % Mortality No
diperlakukan dengan ekstrak spons, karang lunak, dan ascidian (Tabel 1).
Ada dua model yang dikembangkan dalam riset pencarian senyawa bioaktif antitumor dari bahan alam. Model  pertama  adalah  mencari  bahan  alam  yang memiliki toksisitas yang tinggi (sangat toksik terhadap berbagai jenis sel). Sedangkan model yang lain adalah mencari senyawa bioaktif yang dapat membunuh sel tumor secara spesifik (Boyd, 1997). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa terdapat 3 sampel (W?02?08; W?24?08; W?25?08) yang aktif terhadap t iga jenis sel
lestari tumor yang diujikan. Terdapat 11 sampel aktif terhadap dua jenis sel lestari tumor (3 sampel aktif terhadap HeLa dan MCF7; 2 sampel aktif terhadap sel HeLa dan SKOV3; 4 sampel aktif terhadap sel MCF7 dan SKOV3). Selain itu, terdapat 22 sampel aktifitasnya bersifat selektif terhadap satu jenis sel lestari tumor (6 sampel aktif terhadap HeLa; 6 sampel aktif terhadap sel MCF7 dan 10 sampel aktif terhadap sel  SKOV3)  dan  38  sampel  yang  lain  tidak  aktif terhadap sel lestari tumor yang diujikan.
Tiga jenis ekstrak yang mampu mematikan 3 jenis sel diatas 50% adalah ekstrak W?02?08, W?24?08,
dan W?25?08 (Gambar 1). Morfologi sel Hela, MCF7, dan  SKOV3  setelah  diberi  perlakuan  ke?3.  Jenis ekstrak tersebut disajikan pada Gambar 2,3, dan 4. Ekstrak  yang  aktif  dapat  merubah  morfologi  sel. Dalam hal ini sel kehilangan integritasnya dan dibawah mikroskop, sel terlihat hancur dengan bentuk yang
tidak beraturan. Dalam kondisi seperti ini sel sudah terlepas  dari  dasar flask  culture yang  digunakan sebagai  substratnya.  Banyak  ahli  yang  menduga (Pawlik, 1993; Schmitz, 2001; Williams & Andersen, 2006)  bahwa  metabolit  sekunder  pada  spons  dan karang  lunak berhubungan  erat dengan  fungsinya
(A) (B)
(C)
(a) (b)
(c) (d)
(a) (b)
(c) (d)
Gambar 1. Ketiga jenis sampel yang ekstraknya aktif terhadap 3 jenis sel lestari tumor (A) Ascidian W­02­08 (tidak teridentifikasi), (B) Spons W­24­08 ( Aaptos sp.) dan (C) Spons W­25­08 (Tak Teridentifikasi). Picture 1. Three specimens that the crude extracts were active against 3 tumor cell lines (A) Ascidian W- 02-08 (unidentified), (B) Sponge W-24-08 (Aaptos sp. ) and (C) Sponge W-25-08 (not identified).
Gambar 2. Foto morfologi sel HeLa setelah diberi perlakuan ekstrak selama 24 jam (a) kontrol sel; (b) W­02­ 08; (c) W­24­08; (d) W­25­08.
Figure  2. Picture of HeLa cell lines morphology after 24 hours treated with extract of (a) cell control; (b) W- 02-08; (c) W-24-08; (d) W-25-08.
Gambar 3. Foto morfologi sel MCF7 setelah diberi perlakuan ekstrak selama 24 jam (a) kontrol sel; (b) W­ 02­08; (c) W­24­08; (d) W­25­08.
Figure  3. Picture of MCF7 cell lines morphology after 24 hours treated with extract of (a) cell control; (b) W- 02-08; (c) W-24-08; (d) W-25-08.
sebagai pertahanan diri terhadap serangan predator. Dari 54 sampel ekstrak spons  dan ascidia yang diteliti aktivitas sitotoksiknya terdapat 2 sampel spons (W? 24?08 dan W?25?08) dan 1 sampel ascidia (W?02?08) yang  aktif  terhadap  3  jenis  sel  lestari  tumor  yang diujikan dan 7 sampel spons aktif terhadap 2 jenis sel tumor (W?16?08, W?38?08,W?42?08,W?44?08,W? 50?08,W?56?08,W?73?08).  Sementara  itu,  dari  20 sampel ekstrak karang lunak yang diteliti, terdapat 4 sampel (W?01?08; W?31?08; W?51?08; dan W?60?08) yang menunjukkan aktivitas sitotoksik terhadap 2 jenis sel  lestari  tumor  yang  diujikan  namun  tidak  ada sampel yang aktif terhadap 3 jenis sel tumor yang diujikan.  Dibandingkan  dengan  tubuh  spons  yang lunak dan berpori, karang lunak mempunyai tubuh yang lebih keras dibandingkan spons, bahkan beberapa jenis spesies karang lunak memiliki semacam duri yang  diduga  berfungsi  sebagai  pertahanan  fisik terhadap predator. Dibandingkan karang lunak, spons merupakan organisme yang tidak memiliki pertahanan fisik dan bersifat sessil sehingga hanya mengandalkan senyawa  kimia  sebagai  pertahanan  diri  terhadap predator  (Nursid et  al .,  2006;  Larghi et  al. ,  2009). Karena hal itulah, senyawa bioaktif baru lebih banyak diisolasi dari spons dibandingkan dari karang lunak. Dilaporkan oleh Lael et al (2012), diantara 4 kelas anggota filum porifera, kelas demospongia (sponge) merupakan penyumbang senyawa bahan alam baru terbesar dengan persentase mencapai 99,8%. Trianto et al. (2004) melakukan skrining bahan antikanker L1210 pada berbagai jenis spons dan gorgonian yang dikoleksi  dari  Perairan  Jepara  dan  Flores  dan mendapatkan beberapa sampel spons yang mampu menghasilkan senyawa aktif anti kanker L1210, di ant arany a  ekstrak   spons Xes tospongia sp., Phyllospongia sp., dan Agelas nakamurai .
Spons  dan  ascidian  menghasilkan  senyawa? senyawa yang mengandung nitrogen, yang dikenal sebagai  senyawa  alkaloid.  Senyawa  alkaloid mempunyai  efek  sitologis  (siklus  sel)  sehingga
dilaporkan memiliki banyak bioaktivitas, di antaranya sebagai antibakteri, antikoagulan, antiviral, antifungal, antituberculosis, antimalaria dan antitumor (Erpenbeck & van Soest, 2007; Larghi et al, 2009). Genus Aaptos dikenal  sebagai  produsen  senyawa  alkaloid  1H? benzo[de][1,6]?naphtyridine alkaloids atau  aaptamin. Senyawa  aaptamin  dan  deriv atnya  dilaporkan mempunyai  aktivitas sebagai  antitumor yang  baik terhadap sel HeLa (Nakamura 1982 dalam Larghi et al., 2009), sel MCF?7 dan sel KB (Calcul et al ., 2003), sel P388, KB16, A549 dan HT?29 (Shen et al, 1999). Spons MFW?24?08, yang merupakan ekstrak teraktif pada bioprospeksi ekstrak spons dan karang lunak asal perairan TNL Wakatobi ini diidentifikasi sebagai Aapt os sp.  Di duga  kuat,  senyawa  yang bertanggungjawab  terhadap  aktiv itas  antitumor esktrak MFW?24?08 merupakan senyawa aaptamin atau derivatnya.
Dalam review yang ditulis oleh Leal et al (2012), sejak tahun 1990?2009 terdapat 9812 senyawa bahan alam baru yang berhasil diisolasi dari biota laut. Pada dekade 1990an sebanyak 450,8?70,9 senyawa baru berhasil diisolasi dari biota laut pertahunnya. Angka tersebut kemudian meningkat pada dekade 2000an, yaitu rata?rata 530,4?63,2 senyawa bahan alam baru berhasil diisolasi dari biota laut pertahunnya. Dalam review Farmakologi Laut tahun 2007?8 (Mayer et al ., 2011)  dan  tahun  2009?2011  (Mayer et  al .,  2013) dilaporkan bahwa  sebagian besar  senyawa bahan alam laut baru dari laut memiliki bioaktivitas sebagai antibakteri,  antivirus,  antitumor,  antituberculosis, antioksidan, antidiabetes dan antiinflamasi.

## Aktivitas Antioksidan
Oksidasi yang disebabkan oleh senyawa radikal bebas  dapat  m enyebabkan  peroksidasi  lipid, kerusakan membran  protein dan mutasi  DNA. Hal tersebut  merupakan  pemicu  terjadinya  berbagai penyakit seperti kanker, penyakit kardiovaskuler dan
(a) (b) (c) (d) Gambar 4. Foto morfologi sel SKOV 3 setelah diberi perlakuan ekstrak selama 24 jam (a) kontrol sel; (b) W­
02­08; (c) W­24­08; (d) W­25­08.
Figure  4. Picture of SKOV 3 cell lines morphology after 24 hours treated with extract of (a) cell control; (b) W-02-08; (c) W-24-08; (d) W-25-08.
atherosclerosis . Senyawa antioksidan dengan aktivitas antiradikalnya  memegang  peranan  penting  dalam pencegahan  perkembangan  berbagai  penyakit ter sebut .  Sam pai  saat  ini  penel itian  untuk mengungkap potensi antioksidan spons dan karang lunak masih sangat sedikit. Padahal banyak senyawa baru yang ditemukan dari spons dan karang lunak merupakan senyawa-senyawa benzenoid (phenol) yang merupakan senyawa aktif antioksidan (Utkina et  al. ,  2004).  Menurut  Blois  (1958),  suatu  bahan dikategorikan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat jika IC 50 nya di bawah 200 mg/L. Pada  penelitian ini, kami  kategorikan  suatu  sampel  memiliki  aktifitas antioksidan  yang  kuat  apabila  mampu  meredam radikal bebas DPPH > 50% pada konsentrasi uji 100 g/ml. Hasil uji antioksidan ekstrak spons dan karang
lunak  asal  TNK  Wakatobi  dengan  menggunakan metode DPPH disajikan pada Gambar 5.
Dapat kita ketahui dari Gambar 5, hanya terdapat 8  sampel  dari  74  sampel  yang  diujikan  yang memperlihatkan aktivitas peredaman radikal bebas DPPH  (antioksidan).  Namun  demikian,  terdapat  2 sampel yang menunjukkan aktivitas peredaman radikal bebas DPPH yang sangat baik. Sampel karang lunak W?45?08 dapat meredam 91,7 % radikal bebas DPPH, bahkan spons W?72?08 dapat meredam 94,1 % radikal bebas dalam uji DPPH yang berarti melebihi aktivitas peredaman  radikal  bebas  asam  askorbat  (kontrol positif) yang sebesar 92,1 ?g/ml. Sementara itu, Hanani et al . (2005) mengidentifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp dari Kepulauan Seribu
Gambar 5. Persentase penghambatan radikal bebas DPPH  ekstrak spons dan karang lunak asal TNK Wakatobi yang diuji pada konsentrasi 100  g/ml. Picture 5. DPPH free radical scavenging percentage of Wakatobi Marine Nasional Park sponges and soft corals extract at concentration of 100  g/ml. % P en g h am b at an R ad ik al B eb as / % Fr ee R ad ic al I nh ib it io n Kode/ Code
Gambar 6. (A) Karang lunak W­45­08 dan (B) spons W­72­08 dengan aktivitas antioksidan terbaik . Picture 6. (A) Soft coral specimen W-45-08 and (B) sponge specimen W-72-08 with the highest antioxidant activity.
sebagai golongan alkaloid dengan IC? 50 sebesar 41,21 ?g/ml.
Menurut  Athukorala et  al. (2006),  senyawa? senyawa  aktif  antioksidan  kemungkinan  besar mengandung senyawa polifenol yang tinggi. Beberapa senyawa metabolit sekunder yang diisolasi dari spons dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa? senyawa tersebut diantaranya senyawa turunan indol, alkaloid aromatik, poliketida aromatik dan senyawa yang mengandung fenol (Perdicaris et al. , 2013).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  beberapa  jenis spons, karang lunak dan ascidian asal Taman Nasional Laut Kepulauan Wakatobi mempunyai bioprospeksi sebagai penghasil  senyawa bioaktif antitumor  dan antioksidan. Terdapat 3 sampel ( ascidian W?02?08; spons W?24?08 & W?25?08) yang aktif terhadap tiga jenis sel lestari tumor, 11 sampel aktif terhadap dua jenis sel lestari tumor dan 22 sampel aktif terhadap satu jenis sel lestari tumor. Dari 74 sampel yang diuji aktivitas  antioksidannya,  terdapat  8  sampel  yang tergolong aktif (7 sampel spons dan 1 sampel karang lunak). Sampel spons W?72?08 mempunyai aktivitas antioksidan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  asam askorbat (kontrol positif).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima kasih disampaikan kepada  Pak Rachmat dan rekan?rekan dari Balai Taman Nasional Laut Kepulauan Wakatobi atas bantuannya dalam kegiatan pengambilan sampel spons dan karang lunak di TNK Wakatobi.

## DAFTAR PUSTAKA
Athu k o rala,Y.,  Kim,  K.  N.  an d  J eo n,  Y.  J .  2 00 6 . Antiproliferative  and  antioxidant  properties  of  an enzymatic  hydrolysate  from  brown  alga, Ecklonia cava . Food and Chemical Toxicology . 44: 1065?1074. Blois,  M. S.  1958. Antioxidant  determinations  by the  use of a stable  free radical. Nature .  181: 1199?1200. Doi: 10.1038/1811199a0
Boyd,  M.  R.  1997.  The  NCI  in  vitro  anticancer  drug discovery  sc reen .  Co ncept,  implementation  and operation, 1985?1995 . In: Teicher, B.A (ed.). Anticancer drug  development  guide:  preclinical  screening, clinical  trials,  and  approval .  Humana  Press. Calcul,  L.  A.,  Longeon,  A.,  Al?Mourabit,  A.,  Guyot,  M., Bourguet?Kondracki,  L.  2003.  Novel  alkaloids  of  the aaptamine  class  from  an  Indonesian  marine  sponge of  the  genus  Xestospongia. Tetrahedron. 59:  6539? 6544
Erpenbeck, D., and van Soest, R. W. M. 2007. Status and perspective  of  sponge  chemosystematics. Marine Biotechnology .  9(1):  2?19.
Faulkner, D. J. 2001. Marine Natural Products. Nat. Prod. Rep. 18: 1?49.
Hanani, E., Mun?im, A., dan Sekarini, R. 2005. Identifikasi senyawa  antioksidan  dalam  spons Callyspongia sp. dari  Kepulauan  Seribu. Majalah  Ilmu  Kefarmasian. II (3):  127?133.
Hugua.  2008.  W elcome  to  Wakatobi  regency. http:// www.wakatobi.info .  Diakses  pada  tanggal  11  Juli 2008.
Januar, H. I., Chasanah, E., Motti, C. A., Tapiolas, D. M., Liptrot,  C.  H.,  and  W right,  A.  D.  2010.  Cytotoxic cembranes  from  Indonesian  specimens  of  the  soft co ral Nephthea sp. Mar.  Drugs. 8:  2 142 ?2 15 2. Doi:10.3390/md8072142
Larghi,  E.  L.,  Bohn,  M.  L.,  and  Kaufman,  T.S.  2009. Aaptamine  and  related  products.  Their  isolation, c h emic al  syn theses,  an d   bio lo gic al  ac tivity. Tetrahedron. 65:  4257?4282 Leal, M. C., Puga, J., Serodio, J., Gomes, N. C. M., Calado,
R.  2012.  Trends  in  the  discovery  of  new  marine natural  products  from  invertebrates  over  the  last  two decades?W here  and  what  are  we  bioprospecting? Plos One . 1 (1): 1?16.
Mayer, A. M. S., Rodriguez, A. D., Taglialatela?Scafati, O., and  Fusetani,  N.  2013.  Marine  pharmacology  in 2009?2011:  marine  compounds  with  antibacterial, an tid iab etic , an tifu n g al, an ti?in flammatory, antiprotozoal,  antituberculosis,  and  antiviral  activities; affecting the immune and nervous systems, and other miscellaneous  mechanisms  of  action. Mar.  Drugs.
11:2510?2573.  Doi:10..3390/md1  1072510 Mayer, A. M. S., Rodriguez, A. D., Berlinck, R. G. S., and Fusetani,  N.  2011.  Marine  pharmacology  in  2007?8: marine  compounds  with  antibacterial,  anticoagulant, an tifu n g al, anti?inflammato ry, an timalarial, antiprotozoal,  antituberculosis,  and  antiviral  activities; affecting the immune and  nervous system,  and  other miscellaneous  mechanisms  of  action. Comparative Biochemistry and Physiology, Part C. 153:  191?222 Nursid,  M.,  W ikanta,  T.,  Januar,  H.  I.,  dan  Fajarningsih, N.  D.  20 06 .  Hubu ngan  antara  keberadaan   du ri dengan  toksisitas  karang  lunak  dan sponge . Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia .vol II No. Pp 83 ? 92. Nursid, M.,  Chasanah,  E.,  Murwantoko, and  Wahyuono,
S.  2 011.  Iso lasi  sen yawa  sitotoksik   dari  kapang Emeric ella  nidulans . J urnal  Pasc a  Panen  dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan . 6 (2): 119?130 Pabel,  C.  T.,  J o ac h im,  V.,  W ild e,  C.,  Fran k e,  P., Hofemeister,  J., Adler,  B., Bringmann,  G., Hacker,  J., and  Hentschel,  V.  2003. Antimicrobial  activities  and matrix  assisted  laser  desorption/  ionization  mass spectrometry  of Baccilus isolated  from  the  marine spons Aplysina  aerophoba . Marine  Biotechnology . p.  424?434.
Pawlik ,  J .  R.  1 9 9 3 .  Marin e  inverteb rate  c h emic al defenses. Chem.  Rev. 93  :  1911?1922.
Perdicaris, S., Vlachogianni, T., and Valavanidis, A. 2013. Bioactive  natural  substances  from  marine  sponges:
n ew  d evelo pmen ts  an d   p rosp ec ts  fo r  futu re pharmaceuticals. Nat. Prod. Chem. Res .  1: 115. Doi: 10.4172/2329?6836.1000115 Plaza, A., Bifulco, G., Keffer, J. L., Lloyd, J. R., Baker, H. L., and   Bewley,  C.  A.  20 09 .  Celeb esides  A?C  an d th eo p ap uamid es  B?D,  d epsip eptid es  fro m  an Indonesian sponge that  inhibit  HIV?1  entry. J.  Org. Chem. 74:  504?512.
Sadar, M. D., Williams, D. E., Mawji, N. R., Patrick, B. O., Wikanta,  T.,  Chasanah,  E.,  Irianto,  H.  E., Van  Soest, R.,  and Andersen,  R.  J.  2008.  Sintokamides A  to  E, chlorinated  peptides  from  the  sponge Dysidea sp. that  inhibit  transactivation  of  the  N?terminus  of  the androgen receptor in prostate cancer cells. Org. Lett. 10  (21):  4947?4950.  Doi:  10.1021/ol802021w Schmitz,  F.  J.,  Bowden,  B.  F.,  and  Toth,  S.  I.  2001.
Antitumor  and  cytotoxic  compounds  from  marine organisms .  Marin e  Bio tec h n o lo g y  vo lu me  1   : Pharmaceutical  an d  Bioactive  Natural  Pro ducts. Edited by : Attaway, D. H. and Zaborsky, O. R. Plenum Press. New York and  London. p  198.
Sennett, S. H., Mc Carthy, P. J., Wright, A. E., and Pomponi, S.  A.  2 0 02 .  Natu ral  p ro d u cts  fro m  marin e invertebrates:  The  Harbor  Branch  Oceanographic Institution experience. Pharmaceutical News. 9: 438?
488
Shen, Y. C., Lin, T. T., Sheu, J. H., and Duh, C. Y. 1999.
Stru c tu res  an d  c ytoto xic ity  relation sh ips  o f
isoaaptamine and aaptamine. J. Nat. Prod. 62: 1264? 7
Trianto, A., Ambariyanto, and Muwarni, R. 2004. Skrining bahan  anti  kanker  pada  berbagai  jenis  sponge  dan gorgonian terhadap L1210 cell line . Ilmu Kelautan. 9 (3):  120?124.
Utkina,  N.K.,  Makachenko, A.E.,  Shchelokova,  O.V.  and Virovaya,  M.V.  2004. Antioxidant  activity  of  phenolic metabolites from marine spons. Chemistry of Natural Compounds. 40  (4):  373?377.
Wikanta, T., Januar, H. I., dan Nursid, M. 2005. Uji aktivitas antiokasidan,  dan  sitotoksisitas  ekstrak  alga  merah Rhodymenia  palmata. Jurnal  Penelitian  Perikanan Indonesia. II  (4).
Williams, D.  E. and Andersen,  R. J. 2006. Coral reefs  to clinical trials : bio prospecting for drugs from the sea . Proceeding  International  Seminar  and  Workshop  on Marine Biodiversity and Their Potential for Developing Bio?pharmaceutical  Industry  in  Indonesia.  Jakarta. Yong, L., Xifeng, L., Lee, U., Kang, J. S.,  Choi , H. D., and Son ,  B.  W .    20 0 6.  A  New  Rad ical  Sc aven g in g Anthracene  Glycoside,  Asperflavin  Ribofuranoside, and  Polyketides  from  a Marine  Isolate  of the  Fungus Microsporum.  Chem.  Pharm. Bull. 54(6)  :  882?883 Zachary,  I.    2003.    Determination  of  cell  number.  In  : Hughes,  D  and  Mehmet,  H  (eds). Cell  proliferation and  apoptosis .    BIOS  Scientific  Publisher  Limited.