## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , July 2021, 19(2): 188-196
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v19i2.47176

## Original Article
Degenerasi dan nekrosis pada neuron penyusun sistem saraf enterik di usus halus dan usus besar tikus yang diinjeksi paraquat dichloride
Tri Wahyu Pangestiningsih *, Daisynta Prima Aninditya, Gerarda Gita Puspitandaru, Iffah Sofana, Rina Pratiwi
Department of Anatomy, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281 * Correspondence: estifkh@ugm.ac.id
Received: December 31 th , 2020; Accepted: March 18 th , 2021; Published online: July 24 th , 2021

## Abstrak
Tujuan: Pada penderita penyakit Parkinson (PP) terjadi gangguan fungsi neuron katekolaminergik pada  Sistem  saraf  enterik  (SSE)  dengan  gejala  yang  terlihat  yaitu  konstipasi  juga  diare. Paraquat dichloride (PQ) merupakan herbisida bersifat neurotoksik yang diduga dapat menginduksi terjadinya PP. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari gambaran histologis neuron pada sistem saraf enterik usus halus dan usus besar tikus yang diinjeksi PQ.
Metode: Sepuluh ekor tikus dibagi menjadi 2 kelompok masing-masing 5 ekor. Kelompok kontrol diinjeksi akuades dan kelompok perlakuan diinjeksi PQ dengan dosis 7 mg/kg bb. Injeksi diberikan secara intraperitoneal, dua kali seminggu selama 3 minggu dengan volume 1 ml/injeksi. Usus halus dan usus besar dikoleksi dan diproses untuk preparat histologi dalam sayatan  parafin, kemudian diwarnai  dengan cresyl  violet dan  imunohistokimia  menggunakan  antibodi  tirosin  hidroksilase sebagai  penanda  neuron  katekolaminergik.  Preparat  histologi  usus  diamati  menggunakan mikroskop cahaya dan dianalisis secara deskriptif.
Hasil: Neuron pada usus halus dan usus besar tikus kelompok normal teramati normal sedangkan pada kelompok perlakuan ada yang normal, namun ada pula yang mengalami degenerasi berupa kromatolisis,  juga  nekrosis  yang  ditandai  dengan  rusaknya  membran  sel,  kariolisis,  hilangnya sebagian besar badan Nissl, dan penurunan jumlah neuron katekolaminergik.
Kesimpulan: Paraquat  dichloride dapat  menyebabkan  perubahan  pada  struktur  neuron  berupa degenerasi,  nekrosis,  serta  penurunan  jumlah  neuron  katekolaminergik  pada  SSE  usus  halus  dan usus besar.
Kata Kunci: neuron; paraquat dichloride ; sistem saraf enterik; usus besar; usus halus

## Abstract
Objective: In  Parkinson's  disease  (PD)  patients,  there  is  a  disruption  in  the  function  of catecholaminergic neurons in Enteric nervous system (SSE) with some symtoms: constipations and diarrhea.  Paraquat  dichloride  (PQ)  is  a  neurotoxic  herbicide  which  is  thought  to  induce  PD.  This study aims to study the histological features of neurons in the enteric nervous system of small and large intestines injected with PQ.
Methods: Ten rats were divided into 2 groups of 5 each. The control group was injected with distilled water  and  the  treatment  group  was  injected  with  PQ  7  mg/kg  BW.  The  injection  was  given
Pangestiningsih et al. (2021) Livest. Anim. Res. 19(2): 188-196
intraperitoneally, twice a week for 3 weeks with a volume of 1 ml/injection. Small intestine and large intestine were collected and processed for histological preparations in paraffin incisions, then stained with  cresyl  violet  and  immunohistochemistry  using  tyrosine  hydroxylase  antibody  as  a  marker of  catecholaminergic  neurons.  Intestinal  histological  preparations  were  observed  under  light microscope and analyzed descriptively.
Results: Neurons  in  the  small  intestine  and  large  intestine  of  normal  group  rats  were  observed normal,  while  in  the  treatment  group  some  neurons  were  normal,  but  some  of  them  became degeneration in the form of chromatolysis, also necrosis which was characterized by damage of cell membranes, karyolysis, loss of most of the Nissl bodies, and decreased numbers of catecholaminergic neurons.
Conclusions: Paraquat  dichloride  cause  changes  in  enteric  nervous  system’s  neuron  structures  in the form of degeneration, necrosis, and a decrease in the number of catecholaminergic neurons in the small intestine and large intestine.
Keywords: enteric nervous system; large intestine; neurons; paraquat dichloride; small intestine

## PENDAHULUAN
Sistem saraf enterik merupakan sistem  saraf  yang  besar  dan  kompleks pada  sistem  saraf  perifer,  serta  bekerjanya secara  otonom  pada  saluran  pencernaan. Sistem  saraf  ini  terdiri  dari  beberapa  tipe neuron  yang  berbeda,  jumlah  neuronnya sebanding  dengan  jumlah  neuron  pada medula spinalis dan susunan neurotransmiter serta  neuromodulator  mirip  dengan  yang ditemukan  di  sistem  saraf  pusat.  Neuron pada  SSE  yang  saling  terhubung,  disokong oleh  sel  glia  membentuk  pleksus  dan terletak  di  dua  pleksus  utama:  pleksus submukosa ( Meissner's) dan pleksus mienterikus ( Auerbach’s ). Sistem saraf enterik berfungsi  untuk  mengontrol  pergerakan usus,  pertukaran  cairan  melewati  membran mukosa,  aliran  darah  dan  sekresi  hormonal usus  [1].  Pleksus  submukosa  terletak  di  area tunika  submukosa  [2],  berfungsi  untuk mengatur  sekresi  gastrointestinal  dan  aliran darah  lokal  [3].  Pleksus  mienterikus  terletak di antara dua lamina muskulus, yaitu lamina muskularis  sirkularis  interna  dengan  lamina muskularis  longitudinalis  eksterna  tunika muskularis  [4].  Pleksus  ini  mengandung neuron  sensorik  intrinsik,  beberapa  tipe interneuron,  neuron  motor  eksitatori,  dan inhibitor  yang  berfungsi  untuk  mengatur motilitas [3].
Dalam  upaya  memaksimalkan  hasil pertanian,  para  petani  sering  menggunakan herbisida untuk menghilangkan gulma, salah satu  herbisida  itu  adalah  PQ. Paraquat
dichloride merupakan  herbisida  kelompok Bipiridilium  umumnya  dijual  dalam  larutan 20% (Gramoxone. Gramoxone S, Herbatop 276 dan  Paracol). Paraquat  dichloride merupakan senyawa  yang  dapat  menyebabkan  penyakit Parkinson
(PP) dengan mekanisme mengganggu  proses  rantai  transfer  elektron kompleks  I  mitokondria  neuron.  Pada kompleks  I  tersebut  PQ  menginduksi terbentuknya reactive  oxygen  species (ROS) seperti  superoksida  (O 2 )  dan  hidrogen peroksida  (H 2 O 2 ).  Akumulasi  dari  ROS  akan menyebabkan  disfungsi  mitokondria  dan stress  oksidatif  yang  memicu  degenerasi neuron  [5].  Pada  penderita  PP  gejala gangguan  pencernaan  sering  muncul  lebih dahulu  dibandingkan  gejala  yang  berkaitan dengan  fungsi  sistem  saraf  pusat.  Gangguan sistem  pencernaan  yang  muncul  pada penderita PP meliputi berat badan berkurang, hipersalivasi,  disfagia,  disfungsi  lambung pertumbuhan  bakteri  pada  usus  halus meningkat, diare [6]. Paraquat dichloride dapat merangsang aktivasi sinyal cascades intraseluler  yang  sangat  awal  dan  cepat sehingga  menyebabkan  degenerasi  neuron [7]  juga  proses  apoptosis  yaitu  kematian sel  secara  terprogram  dalam  situasi  tertentu [8].  Menarik  untuk  diteliti  apakah  PQ  dapat menyebabkan  perubahan  histologi  neuron pada usus sebagai penyusun SSE.

## MATERI DAN METODE
Sepuluh  ekor  tikus  ( Rattus  norvegicus albinus ) strain Wistar, jantan, berumur 3 bulan,
dikelompokkan  menjadi  2  masing-masing terdiri  dari  5  ekor.  Kelompok  I  (kelompok kontrol) diinjeksi akuades, sedangkan kelompok  II  (kelompok  perlakuan)  diinjeksi PQ  yang  dilarutkan  dalam  akuades  dengan dosis  7  mg/kg  bb.  Injeksi  diberikan  secara intraperitoneal,  volume  1  ml,  seminggu  dua kali  selama  3  minggu.  Setelah  selesai perlakuan,  hewan  dieutanasi  menggunakan anastetika  ketamin  dosis  40  mg/kg  berat badan dan xylazin dosis 5 mg/kg berat badan yang  diinjeksikan  secara  intramuskular. Organ  usus  halus  (duodenum,  jejunum, ileum)  dan  usus  besar  (sekum  dan  kolon) difiksasi menggunakan neutral buffered formalin 10% dengan cara perfusi intrakardial.
Metode  koleksi  sampel  ini  telah  mendapat persetujuan dari komisi etik, LPPT Universitas  Gadjah  Mada  dengan  nomor 00018/04/LPPT/V/2016.  Sampel  organ  usus diproses  histologi  dengan  metode  parafin kemudian disayat secara longitudinal dengan ketebalan 5 μm dan diambil 2 sayatan se cara serial.  Sayatan  organ  ditempelkan  pada slide,  sayatan  pertama  untuk  pewarnaan cresyl  violet dan  sayatan  ke  dua  untuk pewarnaan imunohistokimia.
Pewarnaan cresyl violet Slide  sayatan  pertama  organ  usus diinkubasi  selama  semalam  pada  suhu 45 o C,  kemudian  ditunggu  hingga  dingin pada  suhu  ruang.  Proses  selanjutnya  yaitu deparafinisasi  dengan  larutan  silol  I,  II, dan  III  masing-masing  selama  lima  menit. Selanjutnya dilakukan proses rehidrasi menggunakan  etanol  absolut  I  dan  II,  etanol 90% I dan II, etanol 80%, etanol 70% masing- masing  selama  lima  menit,  kemudian dicelupkan  ke  dalam  akuades  selama  10 celup  atau  sampai  etanol  hilang.  Slide dimasukkan  ke  dalam  larutan cresyl  violet selama 15 menit, pada suhu 37 o C.
Tahap  selanjutnya  yaitu  dilakukan dehidrasi  dengan  merendam  slide  jaringan dalam  etanol  70%,  80%,  90%,  etanol absolut  I  dan  II  masing-masing  30  detik, kemudian  proses clearing dalam  silol  I, II,  III  masing-masing  selama  dua  menit. Tahap terakhir yaitu mounting menggunakan entelan secukupnya kemudian ditutup dengan cover glass.
Pewarnaan  imunohistokimia  menggunakan antibodi terhadap tirosin hidroksilase (TH)
Slide  sayatan  ke  dua  organ  usus dideparafinisasi  dan  direhidrasi  seperti  pada pewarnaan cresyl  violet, kemudian  slide dilakukan  proses  membuka  epitop  dengan memanaskan  slide  dalam  buffer  sitrat,  pH:  6 menggunakan microwave selama  30  menit kemudian dibiarkan dingin pada suhu ruang selama  30  menit.  Peroksidase  endogen pada  organ  diblok  dengan  cara  merendam sediaan  pada  3%  H 2 O 2 dalam  akuades selama  30  menit,  kemudian  latar  belakang ( background )  organ  diblok  menggunakan sniper (Biocare Medical, Cat No: STUHRP700) selama 60 menit.
Antibodi  primer  mouse  anti-TH (1/500; Immunoleader,  Cat.  No:  PB  9449)  diteteskan pada  slide  organ  dan  diinkubasikan  selama satu  malam  pada  suhu  4 o C.  Preparat  control pewarnaan  yang  dipakai  adalah  sayatan kelenjar adrenal tikus sehat. Preparat kontrol positif  diberi  antibodi  primer  dan  preparat kontrol  negatif  diberi  diluent  buffer,  tanpa antibodi  primer.  Proses  selanjutnya  adalah pemberian  antibodi  sekunder  yaitu  Trekkie Universal  Link  Biocare  (Medical,  Cat  No: STUHRP700)  selama  20  menit  kemudian pemberian TrekAvidin-HRP (Biocare Medical, Cat No: STUHRP700) selama 60 menit. Proses selanjutnya  adalah  pemberian  kromogen Betazoid DAB + substrat (Biocare Medical, Cat No: STUHRP700) selama 5 menit. Setiap tahap pewarnaan  mulai  dari  pemberian  3%  H 2 O 2 sampai ke pemberian Betazoid DAB + substrat selalu  diawali  dengan  pencucian  3  kali  di dalam larutan phosphate buffered saline masing- masing  selama  10  menit.  Setelah  pemberian Betazoid DAB+ substrat slide dicuci sebanyak 3  kali  dalam  akuades  kemudian  diwarnai hematoksilin  sebagai counterstain selama  1 menit,  dilanjutkan  dengan  proses  dehidrasi, clearing , dan mounting seperti slide organ yang diwarnai cresyl violet.
Hasil  pewarnaan  diamati  menggunakan mikroskop  cahaya  yang  tersambung  dengan perangkat software  Optilab .  Pengamatan mikroskopik  struktur  neuron  penyusun pleksus  submukosa  dan  pleksus  mienterikus yang  diwarnai cresyl  violet sebagai  pewarna badan  Nissl  menunjukkan  warna  biru  pada neuron.  Hasil  pewarnaan  imunohistokimia
Pangestiningsih et al. (2021) Livest. Anim. Res. 19(2): 188-196
menggunakan  antibodi  untuk  TH  yaitu salah satu enzim yang mensintesis
neurotransmitter dopamin menunjukkan bahwa neuron katekolaminergik pada pleksus  submukosa  dan  pleksus  mienterikus adalah  neuron  yang  imunoreaktif  terhadap antibodi  TH  (TH-IR)  berwarna  coklat kekuningan.  Data  hasil  pengamatan  struktur neuron dianalisis secara deskriptif.

## HASIL
Neuron penyusun SSE yang diwarnai cresyl violet
Hasil pewarnaan
cresyl violet menunjukkan  bahwa  neuron  penyusun pleksus  submukosa  dan  pleksus  mienterikus pada  usus  halus  dan  usus  besar  tikus berwarna biru, berbentuk multipolar, bipolar dan pseudounipolar. Pada kelompok kontrol,  neuron  terlihat  normal  sedangkan pada  kelompok  perlakuan  terlihat  neuron yang  normal,  namun  juga  teramati  neuron yang  mengalami  degenerasi  yang  ditandai dengan  menghilangnya  sebagian  badan Nissl.  Pada  kelompok  perlakuan  ditemukan neuron  yang  mengalami  nekrosis  dengan tanda  rusaknya  membran  sel,  kariolisis, dan hilangnya sebagian besar badan Nissl.  Pada  Gambar  1  ditampilkan  neuron normal,  pada  pleksus  mienterikus  dan pleksus  submukosa  berbentuk  multipolar
dan  bipolar.  Pada  Gambar  1A  dengan perbesaran lemah dalam satu bidang pandang terlihat  neuron  pada  pleksus  submukosa dan  pleksus  mienterikus  berbentuk  bipolar dan  dengan  perbesaran  kuat  (Gambar  1B) terlihat neuron penyusun pleksus mienterikus pada  sekum  yang  berbentuk  bipolar.  Pada Gambar  2  menunjukkan  neuron  yang mengalami perubahan struktur pada pleksus submukosa  sekum  dan  pleksus  mienterikus ileum pada hewan kelompok perlakuan. Pada pleksus  submukosa  sekum  menunjukkan terdapat  neuron  multipolar  normal  dan neuron multipolar yang mengalami degenerasi ditandai dengan badan Nissl yang mulai  menghilang,  dan  neuron  multipolar yang  mengalami  nekrosis  ditandai  dengan rusaknya  membran  sel,  kariolisis,  dan hilangnya  sebagian  besar  badan  Nissl.  Pada pleksus  mienterikus  ileum  menunjukkan adanya  neuron  multipolar  yang  mengalami kerusakan  berupa  kariolisis  ditandai  dengan menyebarnya badan Nissl  ke tepi sitoplasma dan mulai menghilang.

## Neuron  penyusun  SSE  yang  diwarnai imunohistokimia  menggunakan  antibodi
tirosin hidroksilase (TH)
Pewarnaan  imunohistokimia  dengan antibodi primer mouse anti-TH menunjukkan hasil positif, sel berwarna coklat (Gambar 3A) dibandingkan area yang sama pada kontrol A. B.
Gambar 1. Neuron  penyusun  sistem  saraf  enterik  pada  usus  halus  dan  usus  besar  tikus  yang diinjeksi akuades. A. Dengan perbesaran lemah dalam satu bidang pandang terlihat neuron  pada  pleksus  submukosa  (panah  merah)  dan  pleksus  mienterikus  (panah hitam) berbentuk bipolar. B. Pada perbesaran kuat, terlihat neuron penyusun pleksus mienterikus  pada  sekum  (panah  kuning)  yang  berbentuk  bipolar.  Pewarnaan cresyl violet .
negatif  teknik  pewarnaan  (Gambar  3B)  tidak berwarna  coklat  karena  tidak  diberi  antibodi primer.
Imunoreaktifitas  TH  terdeteksi  pada pleksus  submukosa  dan  pleksus  mienterikus usus  besar  dan  usus  halus  tikus.  Jumlah neuron
TH-imunoreaktif
mengalami penurunan  pada  tikus  kelompok  perlakuan. Selain  itu  pada  kelompok  perlakuan  juga terlihat  bahwa  neuron  TH-imunoreaktif berukuran  lebih  kecil.  Perbandingan  neuron
yang TH imunoreaktif pada kelompok kontrol dengan  kelompok  perlakuan  ditampilkan pada Gambar 4.

## PEMBAHASAN
Pada  SSE  usus  halus  dan  usus  besar tikus  terdapat  dua  pleksus  utama  yaitu pleksus mienterikus ( Auerbach’s ) dan pleksus submukosa  ( Meissner’s ).  Pleksus  mienterikus terletak diantara lamina muskularis sirkularis
A. B.
Gambar 2. Neuron  penyusun  sistem  saraf  enterik  pada  usus  halus  dan  usus  besar  tikus  yang diinjeksi paraquat  dichloride dosis  7  mg/kg  bb.  A.  Pleksus  mienterikus  ileum  tikus menunjukan  adanya  kerusakan  berupa  kariolisis  (a)  dan  neuron  normal  berbentuk multipolar (b). B. Neuron pada pleksus submukosa sekum. Neuron multipolar normal (panah kuning), neuron multipolar degenerasi (panah merah) yang ditandai dengan badan Nissl yang mulai menghilang, dan neuron multipolar nekrosis (lingkar merah) ditandai  dengan  rusaknya  membran  sel,  kariolisis,  dan  hilangnya  sebagian  besar badan Nissl. Pewarnaan cresyl violet .
A. B.
Gambar 3. Kelenjar  adrenal  tikus  sebagai  preparat  kontrol  teknik  pewarnaan  imunohistokimia menggunakan antibodi tirosin hidroksilase. A. kontrol positif dan B.  kontrol negatif.
Warna  coklat  pada  sel  kromafin  di  medula  adrenal  pada  Gambar  A  (panah  hitam) menunjukkan bahwa positif terhadap TH, sedangkan organ yang tidak diberi antibodi primer tidak berwarna coklat (Gambar B, panah hijau).
interna dan lamina muskularis longitudinalis eksterna  dari  tunika  muskularis.  Pleksus submukosa  terletak  diantara  tunika  mukosa dan  tunika  muskularis,  lebih  tepatnya berada  di  tunika  submukosa.  Neuron  pada kedua pleksus ini berbentuk pseudounipolar, bipolar,  dan  multipolar.  Bentuk  neuron pada  SSE  tikus  ini  sesuai  dengan  pendapat Mandic  dkk  [2]  serta  Waxenbaum  dan Varacallo  [9]  yang  menyatakan  bahwa neuron  pada  sistem  saraf  enterik  berbentuk bipolar, pseudounipolar, dan multipolar.
Pada  penelitian  ini  perubahan  struktur neuron  pada  kelompok  hewan  perlakuan berupa  degenerasi  dan  nekrosis  yang ditandai dengan badan Nissl tersebar ke tepi sitoplasma  dan  mulai  menghilang  (neuronal kromatolisis).  Neuronal  yang  mengalami kromatolisis  ditandai  dengan  hipertrofi perikarion,  badan  Nissl  hancur,  dan  inti sel  bergeser  dari  tempat  semula  [10]  yang dapat  menyebabkan  hilangnya  substansi Nissl  secara  parsial  maupun  total  [11]. Kemungkinan  terjadinya  neuronal  yang mengalami  kromatolisis  pada  penelitian  ini adalah  akibat  paparan  PQ  yang  merupakan bahan  kimia  bersifat  neurotoksik.  Neuron
penyusun  SSE  yang  mengalami  degenerasi dan  nekrosis  kemungkinan  karena  efek toksik PQ dosis 7 mg/kg bb yang diinjeksikan secara  intraperitoneal  seminggu  dua  kali selama  3  minggu.  Menurut  [12]  PQ merupakan  senyawa  yang  toksik  bagi neuron  ( neurotoxicant )  akibat  sifat  radikal bebasnya  dan  menyebabkan  stress  oksidatif pada  neuron  karena  banyaknya  akumulasi produk ROS, sehingga paparan PQ menyebabkan  inflamasi  pada  neuron.  Hal ini  didukung  oleh  pendapat  Blesa et  al.
[5]  serta  Gawarammana  dan  Buckley  [13] bahwa  PQ  memiliki  efek  toksik  pada mitokondria  sehingga  dapat  mengakibatkan disfungsi  mitokondria  dan  stress  oksidatif. Paraquat  dichloride yang  masuk  ke  tubuh dimetabolisme  oleh  beberapa  sistem  enzim seperti Nikotinamide adenine dinucleotide phosphate  oxidase (NADPH)- cytochrome P450 reductase, xantin oksidase, Nikotinamide adenosine  dinucleotide  hydrogen (NADH)- ubiquinone  oxidoreductase ,  dan nitrit  oxide synthase .  Wang et  al [14]  menyatakan  bahwa metabolisme  PQ  di  tubuh  mirip  dengan 1-methyl-4phenyl-1,2,3,6-tetrahidropyrydine (MP TP)  yaitu  menghasilkan 1-methyl-4phenyl-2,3-
A. B. Gambar 4. Neuron  katekolaminergik  pada  pleksus  mienterikus  rektum  tikus  yang  diwarnai imunohistokimia menggunakan antibodi
tirosin hidroksilase. Neuron katekolaminergik  terlihat  berwarna  coklat  karena  imunoreaktif  terhadap  antibodi tirosin  hidroksilase.  Pada  rektum  tikus  yang  diinjeksi  akuades  neuron yang  imunoreaktif  terhadap  tirosin  hidroksilase  (panah  pada  Gambar  A)  terlihat lebih  banyak  dibandingkan  pada  tikus  yang  diinjeksi paraquat  dichloride dosis 7 mg/kg bb (panah pada Gambar B).
dyhidropyrydinium (MPP + ),  suatu  metabolit yang  bersifat  toksik  pada  mitokondria dengan  menghambat  kompleks  I  rantai transfer elektron (RTE) mitokondria.
Penurunan  aktivitas  kompleks  I  (NADH- ubiquinone  oxidoreductase )  RTE  mitokondria menyebabkan terjadinya peningkatan produksi  ROS,  radikal  bebas  yang  sangat reaktif  di  dalam  mitokondria.  Radikal bebas  yang  dihasilkan  ini  dapat  merusak struktur  dan  fungsi  mitokondria  secara langsung  sehingga  menyebabkan  terjadinya penurunan  fungsi  respirasi  mitokondria dan produksi energi. Menurut Guo
dan  Chen  [15],  peningkatan  kerusakan  sel akibat stres oksidatif tersebut dapat meningkatkan respon inflamasi pada neuron . Proses  degenerasi  neuron  atau proses  neurodegeneratif  diawali  dengan adanya  hal  yang  menginduksi  inflamasi neuron  [16].  Respon  inflamasi  merupakan respon imun terhadap stimuli yang berbahaya dan merupakan proses mengeliminasi penyebab cidera atau jejas sehingga terjadi proses kesembuhan [17]. Jejas tersebut dapat  kembali  normal  apabila  penyebab jejas  dapat  dihilangkan  ( reversible). Namun ketika  jejas  berlangsung  secara  menerus, maka  akan  terjadi  jejas  yang  bersifat irreversible yang  menyebabkan  kematian sel [18].
Terjadinya nekrosis neuron pada penelitian ini merupakan sutu tanda gangguan  proses  biokimiawi  pada  neuron. [19]  menyatakan  bahwa  salah  satu  jenis kematian  sel  saraf  berdasarkan  kriteria biokimia  dan  morfologi  adalah  nekrosis. Menurut [20] nekrosis pada neuron merupakan  proses  yang  terjadi  apabila neuron gagal melakukan regenerasi, sehingga neuron tersebut mengalami kematian neuron atau  kerusakan  neuron  bersifat irreversible . Secara mikroskopis nekrosis ditandai dengan  inti  yang  piknotik,  karioreksis, atau  kariolisis.  Nukleus  yang  piknotik ditandai  dengan  nucleus  yang  mengecil karena  mengalami  kondensasi.  Karioreksis ditandai  dengan nukleus  yang  dapat hancur  (terfragmentasi)  dan  robek  sehingga dapat  meninggalkan  pecahan-pecahan  zat kromatin  yang  tersebar  di  dalam  neuron [18].  Kariolisis  ditandai  dengan  nukleus
yang  hilang,  terdapat  residu  dari  sel  yang berbentuk  vakuola,  dan  debris  dari  sel yang  membentuk  masa  fragmen  di  sekitar nukleus [21].
Hasil pengamatan imunohistokimia menggunakan  antibodi  TH  pada  neuron penyusun  pleksus  submukosa  dan  pleksus mienterikus  menunjukkan  bahwa  terjadi penurunan  jumlah  neuron  katekolaminergik pada  kelompok  perlakuan  juga  neuron yang  menjadi  lebih  kecil.  Hasil  ini  sejalan dengan  hasil  pengamatan  histologi  usus yang  diwarnai  menggunakan cresyl  violet pada penelitian ini yaitu penurunan jumlah  neuron  katekolaminergik  akibat terjadinya  nekrosis  neuron  pada  kelompok perlakuan.  Mengecilnya  ukuran  neuron katekolaminergik  pada  kelompok  perlakuan kemungkinan  karena  proses  degenerasi. Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa pemberian PQ juga menyebabkan penurunan densitas  neuron  katekolaminergik  pada substansia  nigra  pars  kompakta  tikus [22]  serta  terjadi  penurunan  jumlah  neuron katekolaminergik  [23].  Ada  3  macam  neuron katekolaminergik yaitu neuron dopa- minergik,  noradrenergik  dan  adrenergik. Neuron  dopaminergik  yang  dihasilkan  di mesensefalon  bagian  ventral  yaitu  di substansia  nigra  pars  kompakta,  berfungsi untuk  mengontrol  gerak  tubuh  yaitu mengawali dan mengakhiri gerak dan apabila neuron ini mengalami kerusakan maka timbul gejala  klinis  gerak  yang  kaku,  tremor yang  menjadi  ciri  penyakit  PP.  Hasil penelitian  ini  mendukung  peringatan  akan bahaya  penggunaan  PQ  yang  tidak  tepat karena  menyebabkan  perubahan  struktur neuron katekolaminergik pada usus halus dan usus  besar  sebagai  komponen  dari  sistem saraf  enterik  yang  merupakan  bagian  dari sistem saraf tepi.

## KESIMPULAN
Pemberian paraquat dichloride
menyebabkan  penurunan  jumlah  neuron katekolaminergik  pada  usus  halus  dan usus besar tikus, juga menyebabkan perubahan  struktur  neuron  pada  sistem saraf  enterik  usus  halus  dan  usus  besar berupa terjadinya degenerasi dan nekrosis.
Pangestiningsih et al. (2021) Livest. Anim. Res. 19(2): 188-196

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  tidak  ada  konflik kepentingan  dengan  pihak  manapun  terkait materi yang ditulis dalam naskah ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan  terima  kasih kepada  Fakultas  Kedokteran  Hewan  yang telah  mendanai  penelitian  ini  melalui  Dana Hibah Penelitian Pengembangan Departemen dengan  Nomor  Kontrak:  1022/J01.1.22/HK4/ 2019 dan 1346/UN1/FKH/HK4/2020.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Furness,  J.  B.  2006.  The  Enteric  Nervous
System. Blackwell Publishing, Inc. Denmark. p. 31-43.
2. Mandic  P.,  T. Filipović, M. Gasić, N. Djukić -Macut, M. Filipović, and  I. Bogosavljević . 2016. Quantitative morphometric  analysis  of  the  myenteric nervous plexus ganglion structures along the human digestive tract. Vojnosanit. Pregl. 73:559 – 565. Doi: 10.2298/ vsp141231046m
3. Hana,  A.,  P.  Astuti,  Y.  Fibrianto,  S. Sarmin,  dan  C.  Arifin.  2015.  Profil  saraf nitrergik  sekum  ayam  pedaging  yang diinfeksi  eimeria  tenella.  Jurnal  Veteriner, 16(4):468-473.
4. Mazzuoli,  G.  and  M.  Schemann.  2012. Mechanosensitive  enteric  neurons  in  the myenteric  plexus  of  the  mouse  intestine. PlosOne.  7(2):1-9.  Doi:  10.1371/journal. pone.0039887
5. Blesa, J., S. Phani, V. Jackson-Lewis, and S. Przedborski. 2012. Classic and new animal models  of  parkinson's  disease.  J.  Biomed. Biotechnol. 2012:1-10.
6. Kim, J. and H. Sung. 2015. Gastrointestinal autonomic  dysfunction  in  patients  with parkinson’s disease. J Mov Disord 8(2):76 - 82. Doi: 10.14802/jmd.15008
7. Niso-Santano,  M.,  J.  M.  Moran,  L.  Garcia- Rubio,  A.  Gomez-  Martin,  and  R.  A. Gonzalezpolo. 2006. Low concentrations of paraquat  induces  early  activation  of extracellular  signal  regulated  kinase  1/2, protein  kinase  B,  and  C-Jun  N  terminal
kinase  1/2  pathways:  role  of  c-Jun  N- terminal  kinase  in  paraquat  induced cell  death.  Toxicol.  Sc.  (2):507-15.  Doi: 10.1093/toxsci/kfl013
8. Anita, H. P. Sharma,  P.  Jain, and P. Amit. 2014. Apoptosis (Programmed Cell Death)
- A Review. WJPR. 3(4): 1854-1872.
9. Waxenbaum, J. A., and M. Varacallo. 2019. Anatomy,  autonomic  nervous  system. StatPearls Publishing. USA. pp. 86-88.
10. Emril,  D.  R.  2010.  Peran  cytidine  5'- diphosphocoline  dalam  penatalaksanaan nyeri neuropatik. Jurnal Kedokteran Syiah Kuala. 2010(1):51-62.
11. Moon,  L.  D.  F.  2018.  Chromatolysis:  Do injured  axons  regenerate  poorly  when ribonucleases  attack  rough  endoplasmic reticulum,  ribosomes  and  RNA?  Dev. Neurobiol. 78(10):1011 – 1024.  Doi: 10.1002/ dneu.22625
12. Wu,  B.,  B.  Song,  H.  Yang,  B.  Huang, B.  Chi,  V.  Guo,  and  H.  Liu.  2013.
Central  nervous  system  damage  due to acute paraquat poisoning: An experimental  study  with  rat  model.
Neurotoxicology. 1(35):62-70. Doi: 10.1016/j.neuro.2012.12.001 13. Gawarammana,  I.  B.,  dan  N.  A.  Buckley. 2011.  Medical  management  of  paraquat ingestion.  Br.  J.  Clin.  Pharmacol.  72(5): 745-757.  Doi:  10.1111/j.1365-2125.2011.040 26.x
14. Wang,  Q.,  N.  Ren,  Z.  Cai,  Q.  Lin, Z.  Wang,  Q.  Zhang,  S.  Wu,  and  H.  Li. 2017. Paraquat and MPTP induce neurodegeneration  and  alteration  in  the expression profile of  microRNAs: the role of transcription factor Nrf2. NPJ Parkinsons Dis. 3 (31):1-10. Doi:
10.1038/s41531-017-0033-1
15. Guo, C. and P. Chen. 2012. Mitochondrial free radicals, antioxidants, nutrient substances,  and  chronic  hepatitis  C.  In: El-Missiry,  M.  A.  2012.  Antioxidant Enzyme.  IntechOpen.  Croatia.  237.  Doi:
10.5772/51315
16. Reynolds,  A.  D.,  R.  Banerjee,  J.  Liu,  H.  E. Gendelman,  and  R.  L.  Mosley.  2010.
Neuroprotective  activities  of  CD4 + CD25 + regulatory  T  cells.  Neuroimmune  Biol. 9(17): ]197-210. Doi: 10.1189/jlb.0507296
17. Chen,  L.,  H.  Deng,  H.  Cui,  J.  Fang, Z.  Zuo,  J.  Deng,  Y.  Li,  X.  Wang,  and
L.  Zhao.  2017.  Inflammatory  responses and  inflammation-associated  diseases  in organs.  Oncotarget.  9(6):7204-7218.  Doi: 10.18632/oncotarget.23208
18. Kumar,  V.,  A.  K.  Abbas,  N.  Fausto,  and Aster,  J.  C.  2009.  Robbins  &  Cotran
Pathologic Basis of Disease E-Book. 8 th ed. Elsevier Health Sciences. Philadelphia. p 3- 14.
19. Franco,  R.,  S.  I.  Li,  H.  Rodriguez-Rocha, M.  M.  I.  M.  Burns,  and  Panayiotidis. 2010.  Molecular  mechanisms  of  pesticide- induced  neurotoxicity:  Relevance  to parkinson’s  disease.  Chem .  Biol.  Interact.
188(2):289-300.  Doi:  10.1016/j.cbi.2010.06. 003
20. Miller,  M.  A.  dan  J.  F.  Zachary.  2017. Mechanisms  and  morphology  of  cellular injury,  adaptation,  and  death.  In:  J.  F. Zachary, ed. Pathologic Basis of Veterinary Disease.  London:  Elsevier.  2-43.  Doi: 10.1016/B978-0-323-35775-3.00001-1
21. Boudreau, M. D., H. W. Taylor, D. G. Baker, and J. C. Means. 2006. Dietary exposure to 2-aminoanthracene induces morphological and  immunocytochemical  changes  in pancreatic  tissue  of  fisher  344  rats.  J. Toxicol.  Sci.  93:  50-61.  Doi:  10.1093/ toxsci/kfl033 22. Pangestiningsih,  T.  W.,  W.  D.  Wendo, Y.  N.  Selan,  F.  A.  Amalo,  N.  A. Ndoang, and  V. Lenda. 2014. Histological features  of  catecholaminergic  neuron  in substantia  nigra  induced  by  paraquat dichloride (1,1-dimethyl-4,4 bipirydinium) in  Rat  as  a  Medel  of  Parkinson  Disease. Indonesian  J.  Biotech.  10(1):91-98.  Doi: 10.22146/ijbiotech.8638
23. Adi,  Y.  K.,  R.  Widayanti,  and  T. W.  Pangestiningsih.  2018.  n-Propanol extract  of  boiled  and  fermented  koro benguk ( Mucuna  pruriens  seed)  shows a  neuroprotective  effect  in  paraquat dichloride- induced Parkinson’s di sease rat model.  Vet.  World.  11(9),1250-1254.  Doi: 10.14202/vetworld.2018.1250-1254