# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Sempur  No.  1,  Bogor  16129,
Indonesia Tel.:  +  62  251  8313200 E-mail:  tuti.sumiati@yahoo.co.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## EVALUASI  STANDAR  KUALITAS  VAKSIN  HYDROVAC  UNTUK  PENCEGAHAN  PENYAKIT
MOTILE AEOMONADS SEPTICEMIA (MAS) PADA IKAN LELE AFRIKA (Clarias sp.)
Tuti  Sumiati # ,  Taukhid,  dan  Angela  Mariana  Lusiastuti
Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan Jl. Sempur  No. 1, Bogor 15410
(Naskah diterima: 30 Mei 2018; Revisi final: 18 Maret 2019; Disetujui publikasi: 19 Maret 2019)

## ABSTRAK
Vaksinasi merupakan salah satu cara untuk meningkatkan kekebalan spesifik suatu individu terhadap suatu penyakit. HydroVac merupakan sediaan vaksin dari bakteri Aeromonas hydrophila AHL0905-2 yang diinaktivasi dengan penambahan formalin 0,3% (formalin killed) merupakan produk yang diharapkan menjadi salah satu alternatif untuk pencegahan penyakit yang disebabkan oleh infeksi bakteri tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi standar kualitas vaksin, serta efikasinya pada ikan. Sebanyak 20 botol vaksin disimpan dalam refrigerator selama18 bulan, kemudian setiap periode pengujian tertentu diambil satu botol untuk dilakukan pengujian terhadap viabilitas, sterilitas, keamanan, dan efikasinya terhadap ikan lele. Vaksin yang disimpan  pada  suhu  dingin  (2°C-8°C)  selama  0,  1,  2,  3,  6,  9,  12,  dan  15  bulan  masih  stabil,  tidak  ada kontaminasi mikroorganisme dan tidak terjadi pertumbuhan kembali bakteri setelah dilakukan uji in vitro. Selama penyimpanan tersebut, vaksin masih efektif diaplikasikan dengan tingkat kelangsungan hidup ikan di atas 60% untuk setiap perlakuan dibandingkan kontrol 31% setelah diuji tantang.
KATA KUNCI: stabilitas; vaksin; motile aeromonads septicemia; Aeromonas hydrophila
ABSTRACT: Quality standard evaluation of HydroVac vaccine for disease prevention of motile aeromonads septicemia in African catfish (Clarias sp.). By: Tuti Sumiati, Taukhid, and Angela Mariana Lusiastuti
Vaccination is given to individual fish as one of the effort to enhance its specific immunity against a disease. HydroVac is an inactive bacterial vaccine of Aeromonas hydrophila which has been deactivated by the addition of 0.3% formalin. This vaccine is expected to be one of the alternatives to prevent the occurrence of the disease in freshwater fish. This study aimed to evaluate the standard quality of the vaccine and its efficacy to fish after storage. A total of 20 bottles of the vaccines were stored in a refrigerator set between 2°C-8°C. Vaccine samples from each bottle were then tested for viability, sterility, safety, and efficacy in catfish at predetermined storage times (0, 1, 2, 3, 6,9, 12, and 15 months). The result shows that all vaccine samples were in stable condition with no microbial contamination and no bacterial regrowth after tests using in vitro assays. All stored vaccines using different storage periods were still effective when applied to treated fish showed by a higher survival rate of 60% for each treatment compared to 31% control after the challenge test.
KEYWORDS: stability; vaccine; motile aeromonads septicemia; Aeromonas  hydrophila

## PENDAHULUAN
Lahan budidaya di Indonesia masih sangat potensial untuk  dikembangkan.  Berdasarkan  data  statistik perikanan budidaya tingkat pemanfaatan lahan pada tahun 2012 hanya sebesar 6,33%. Budidaya di laut dan di perairan umum yang tingkat pemanfaatannya masih sangat  rendah  yakni  dikisaran  angka  satu  persen.
Sementara budidaya lain tingkat pemanfaatannya juga tidak terlalu besar. Bahkan budidaya kolam dan tambak yang  sangat  berkembang  tingkat  pemanfaatannya masih jauh di bawah 50%. Produksi budidaya ikan air tawar dalam  kolam didominasi  oleh ikan  mas, lele, patin,  nila,  dan  gurame.  Lima  jenis  ikan  tersebut menyumbang lebih dari 80% dari total produksi (KKP, 2015).
Salah satu kendala teknis yang selalu dirasakan oleh sebagian  besar  pembudidaya  adalah  gangguan penyakit,  baik  penyakit  infeksius  maupun  non- infeksius. Infeksi penyakit dengan intensitas serangan
yang  tinggi  akan  mengakibatkan  kerugian  yang signifikan.  Selain  mengakibatkan  wabah  yang mematikan, infeksi penyakit juga akan menurunkan nilai jual ikan hidup.
Salah  satu  alternatif  yang  ditawarkan  untuk pengendalian penyakit ikan adalah melalui program pencegahan yaitu dengan metode vaksinasi. Program vaksinasi  pada  perikanan  budidaya  telah  terbukti memberi kontribusi yang sangat signifikan terhadap peningkatan produksi, serta menurunkan penggunaan antibiotik (Rahman & Kawai, 2000; Ebanks et al., 2004; Sommerset  et  al.,  2005).  Vaksinasi  menggunakan vaksin monovalen Aeromonas hydrophila inaktif telah memberikan  proteksi  pada  beberapa  jenis  ikan (Chandran et al., 2002; Poobalane, 2007; Jeney et al., 2009; Ismail et al., 2010; Sugiani & Komarudin, 2011).
Vaksin HydroVac merupakan sediaan vaksin bakteri in-aktif  dari  sel  A.  hydrophila  sebagai  produk  yang diharapkan  menjadi  salah  satu  alternatif  untuk pencegahan penyakit MAS pada budidaya ikan air tawar. Penggunaan vaksin sebagai upaya pencegahan suatu penyakit harus memperhatikan beberapa faktor antara lain  kemurnian,  keamanan,  stabil,  serta  efektif  dan efisien  (Sommerset  et  al.,  2005;  DJPB,  2012;  EMA, 2013).
Kesadaran  masyarakat  akan  kesehatan  dan keamanan pangan termasuk produk perikanan budidaya telah mendorong dibuatnya regulasi tentang jaminan mutu (quality assurance) dan keamanan pangan (food safety).  Jaminan  mutu  dan  keamanan  produk  salah satunya produk vaksin sebagai sediaan biologik yang digunakan  untuk  menimbulkan  kekebalan  terhadap suatu penyakit telah menjadi suatu keharusan. Oleh karena  itu,  produk  yang  akan  diedarkan  untuk digunakan  masyarakat  harus  memenuhi  beberapa persyaratan antara lain aman, berkhasiat dan bermutu (DJPB, 2012).
Tujuan  penelitian  ini  adalah  melakukan  evaluasi terhadap  standar  kualitas  vaksin  HydroVac  dengan mengetahui  sterilitas,  viabilitas,  dan  tingkat keamanan, serta mengetahui stabilitas dan efikasinya selama masa penyimpanan.

## BAHAN DAN METODE

## Preparasi  Vaksin
Isolat terpilih yang dijadikan sebagai master seed yang digunakan untuk pembuatan vaksin yaitu bakteri A.  hydrophila  kode  AHL  0905-2,  merupakan  hasil penapisan bertingkat dari koleksi isolat bakteri sejenis yang  didasarkan  pada  tiga  kriteria,  yaitu  1)  nilai patogenisitas tertinggi yang ditentukan dari nilai LD 50
terhadap  inang  rentan,  2)  memiliki  potensi imunogenik yang baik (tinggi dan berlangsung lama) berdasarkan  hasil  pengukuran  kadar  titer  antibodi spesifik,  serta  3)  mampu  bereaksi  silang  terhadap beberapa bakteri sejenis yang berasal dari lokasi dan inang yang berbeda.
Preparasi sediaan baku vaksin monovalen tersebut mengacu pada standar produksi yang telah dipatenkan (Taukhid et al., 2011), selanjutnya vaksin disimpan pada suhu 2°C-8°C untuk dilakukan pengujian lebih lanjut.

## Ikan Uji
Ikan uji yang digunakan adalah ikan lele ukuran 10- 25 g/ekor yang telah diketahui jenis-jenis bakteri yang menginfeksinya. Aklimatisasi ikan dipelihara dalam bak fiber  dengan  volume  air  200  L,  dan  kepadatan  200 ekor. Pemberian makan 3 kali sehari secara adlibitum dengan  penyiponan  dan  penggantian  air  dilakukan sesuai keperluan.

## Pengujian  Stabilitas  Penyimpanan  dan  Efikasi Vaksin
Pengujian stabilitas vaksin dan pengujian sterlitas, viabilitas, dan  rangkaian pengujian  lainnya terdapat dalam formulir tata cara pengisian data teknis obat ikan  (DJPB,  2012).  Pengujian  yang  dilakukan  dalam evaluasi  standar  kualitas  vaksin  ini  antara  lain: pengujian  sterilitas,  viabilitas,  kerapatan  optik,  dan pH,  serta  stabilitas  penyimpanan,  dan  keamanan produk.  Setiap  pengujian  tersebut,  dievaluasi  juga efikasinya terhadap ikan.
Stabilitas  vaksin  dievaluasi  berdasarkan  hasil penyimpanan sediaan vaksin pada refrigerator. Vaksin yang telah disimpan tiga bulan pertama diuji sterilitas dan viabilitasnya setiap bulan, selanjutnya dilakukan pengujian setiap tiga bulan sampai masa penyimpanan 18 bulan. Selain itu, juga dievaluasi tingkat keamanan vaksin  dengan  melakukan  pengamatan  ikan pascavaksinasi. Vaksin dikatakan aman apabila tidak ada  kematian ikan selama 24 jam setelah vaksinasi.
Pengujian  sterilitas  dan  viabilitas  dilakukan berdasarkan  metode  Sugiani  (2012)  dengan  cara sediaan vaksin dikultur pada media TSA dan diinkubasi selama 72 jam untuk memastikan tidak ada bakteri yang tumbuh dari jenis A. hydrophila yang sama seperti bakterin sediaan vaksin dan tidak terdapat kontaminasi mikroba lainnya.
Nilai kerapatan optik diukur untuk mengetahui nilai absorbansinya pada panjang gelombang tertentu. Selain beberapa indikator tersebut, nilai pH juga diukur pada setiap perlakuan penyimpanan menggunakan kertas pH universal.

## Uji Tantang  dan Efektivitas  Vaksin
Uji  tantang  dilakukan  pada  hari  ke-22  setelah vaksinasi pada setiap pengujian penyimpanan vaksin, dengan infeksi buatan secara intra peritoneal sebanyak 0,1 mL/ekor dengan kepadatan sel bakteri A. hydrophila setara 10 7 cfu/mL. Selain untuk ikan yang divaksin, uji tantang dilakukan juga terhadap kontrol. Pemeliharaan ikan selama uji tantang dilakukan pada kontainer plastik dengan volume 60 L air dan kepadatan ikan 30 ekor/ kontainer. Pengamatan harian dilakukan terhadap gejala klinis  dan  mortalitas  ikan,  selanjutnya  dilakukan penghitungan sintasan.
Efektivitas vaksin yang sudah disimpan dievaluasi berdasarkan uji aplikasi dari setiap perlakuan vaksin yang disimpan. Vaksin diujikan pada 30 ekor ikan lele dengan  ulangan  masing-masing  tiga  kali.  Vaksinasi dilakukan dengan teknik perendaman selama 30 menit, untuk kontrol ikan direndam dalam air tanpa vaksin.

## Sampel  Darah  dan  Titer  Antibodi
Pengambilan  darah  dilakukan  setiap  minggu sebelum vaksinasi, setelah vaksinasi dan setelah uji tantang. Sampel serum dikumpulkan dari empat ekor ikan  pada  setiap  kelompok  (vaksinasi  dan  kontrol). Darah  diambil  tanpa  anti-koagulan,  kemudian disentrifugasi dan serum yang diperoleh disimpan pada freezer -20°C sampai digunakan untuk pengujian.
Pengukuran  titer  antibodi  dilakukan  menurut metode  yang  dikembangkan  oleh  Roberson  (1990), yaitu teknik aglutinasi langsung dengan menggunakan microtitre plate, selanjutnya proses aglutinasi diamati secara  mikroskopis.

## Analisis  Data
Data  berupa  nilai  sintasan  pascauji  tantang  dari kelompok  ikan  lele  yang  divaksinasi  dan  kelompok kontrol  pada  setiap  periode  penyimpanan  vaksin disajikan dalam bentuk tabel. Data dianalisis dengan t student–test, hasil pengujian dianggap signifikan pada nilai probabilitas P<0,05.

## HASIL DAN BAHASAN
Vaksin sebagai salah satu alternatif yang ditawarkan untuk  pengendalian  penyakit ikan  harus  memenuhi standar  kualitas  yang  disyaratkan  sehingga efektivitasnya  dapat  dirasakan  oleh  pembudidaya. Beberapa  indikator  kualitas  vaksin  antara  lain: keamanan,  sterilitas,  viabilitas,  dan  stabilitas penyimpanan vaksin akan menentukan efektivitas dari suatu produk vaksin. Hasil pengujian fisik (sterilitas, viabilitas, kerapatan optik, dan pH) vaksin A. hydrophila secara  in  vitro  selama  waktu  penyimpanan  tertentu disajikan pada Tabel 1.
Hasil uji in vitro, diketahui tidak ada pertumbuhan kembali  bakteri  A.  hydrophila  dan  tidak  ada kontaminasi mikroba lainnya meskipun sediaan vaksin sudah disimpan selama 18 bulan (Tabel 1). Penurunan terjadi pada nilai kerapatan optik, dan nilai pH pada vaksin  yang  disimpan  selama  18  bulan  sedangkan penyimpanan vaksin sampai 15 bulan masih tetap stabil ditunjukkan dengan nilai absorbansi yang relatif sama pada  setiap  pengukuran  sediaan  vaksin  mulai penyimpanan 0 sampai 15 bulan. Pengujian tersebut membutikan  bahwa  pada penyimpanan  vaksin  yang sesuai dengan prosedur, vaksin akan tetap steril dan bakteri tidak mampu aktif kembali (inaktif), nilai pH dan kerapatan optik tetap terjaga sampai penyimpanan 15 bulan. Hal ini menunjukkan bahwa vaksin tersebut dalam kondisi stabil dan steril dengan tetap disimpan pada suhu kisaran untuk penyimpanan vaksin.
Respons  tubuh  terhadap  antibodi  sebagai  salah satu  indikator  proteksi  pada  ikan  dapat  diketahui dengan pengukuran titer antibodi. Nilai titer antibodi pada pengujian stabilitas vaksin disajikan pada Gambar 1.
Vaksinasi  telah  menimbulkan  respons  pada  ikan dengan ditunjukkan oleh nilai titer yang lebih tinggi pada  kelompok  ikan  yang  divaksin  dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 1). Hal ini terjadi pada semua perlakuan  penyimpanan sediaan vaksin dari  0  sampai  18  bulan,  tetapi,  seiring  masa penyimpanan vaksin yang semakin lama, maka efek terhadap respons pembentukan antibodi ikan semakin menurun.
Selain beberapa indikator di atas, stabilitas vaksin HydroVac juga dievaluasi dari efektivitas sediaan vaksin yang  telah  disimpan,  sesuai  dengan  waktu penyimpanan yang telah ditentukan. Hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 2 nilai sintasan ikan lele pada pengujian stabilitas vaksin HydroVac.
Ikan lele yang divaksin selama induksi kekebalan yaitu  setelah  vaksinasi  dan  sebelum  uji  tantang menghasil rata-rata sintasan yang lebih tinggi 97,8%- 100% dibandingkan dengan kelompok kontrol 92,2%- 94,4%. Ikan lele yang divaksin menghasilkan rata-rata sintasan 50%-89% dengan vaksin yang telah disimpan pada kisaran waktu 0 bulan sampai 18 bulan setelah diuji tantang (Tabel 2). Nilai rataan sintasan kelompok ikan yang tidak divaksin hanya 31%-65% setelah diuji tantang. Data tersebut menjelaskan bahwa meskipun vaksin  sudah  disimpan  dengan  lama  waktu penyimpanan hingga 18 bulan tapi masih memberikan proteksi pada ikan ketika dilakukan uji tantang. Hasil tersebut menerangkan bahwa vaksin HydroVac mampu menghasilkan proteksi yang tinggi untuk kelompok ikan  yang  divaksin,  namun  demikian  proteksi  yang
diberikan  dari  vaksin  yang  sudah  tersimpan  selama 18 bulan semakin menurun, yaitu hanya memberikan sintasan sebesar 50,72%.
Berdasarkan data yang disajikan diketahui bahwa vaksin HydroVac yang disimpan sampai 15 bulan dalam kondisi  steril,  tidak  terjadi  pertumbuhan  kembali
bakteri  dan  tidak  terdapat  kontaminan  lain  selama masa  pengujian.  Imunogenik  dan  protektif berdasarkan nilai titer dan sintasan rata-rata dari ikan yang divaksin, aman berdasarkan dari nilai mortalitas yang sangat rendah pada ikan yang divaksin selama masa  induksi  kekebalan  dan  stabil  sampai  masa
Tabel 1. Sterilitas dan viabilitas vaksin HydroVac

## Table 1. The sterility and viability of HydroVac vaccine
Keterangan (Note): NC: tidak ada kontaminasi (no contamination); NR: tidak ada pertumbuhan kembali A. hydrophila (no regrowth)
Penyimpanan (bulan) Storage (months) Sterilitas Sterility Viabilitas Viability kerapatan optik Optical density pH 0 NC NR 1,516 5 1 NC NR 1,512 5 2 NC NR 1,509 5 3 NC NR 1,504 5 6 NC NR 1,509 5 9 NC NR 1,507 5 12 NC NR 1,506 5 15 NC NR 1,497 5 18 NC NR 1,341 4.5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0V 0UV 1V 1UV 2V 2UV 3V 3UV 6V 6UV 9V 9UV 12V 12UV 15V 15UV 18V 18UV T it er a n ti b od i ( -l og 2 ) Penyimpanan vaksin (bulan)
Vaccine storage (months)
Sebelum vaksinasi (Before vaccination) 24 jam pascavaksinasi (24 hours post vaccination) 1 minggu pascavaksinasi (1st weeks post vaccination)
2 minggu pascavaksinasi (2nd weeks post vaccination)
3 minggu pascavaksinasi (3rd weeks post vaccination) 1 minggu pasca-uji tantang (1st weeks post challenge)
2 minggu pasca-uji tantang (2nd weeks post challenge)
Gambar 1. Nilai titer antibodi ikan selama pengujian stabilitas vaksin HydroVac. Figure 1.
Level of antibody titer of fish during stability testing of HydroVac vaccine.
Keterangan (Note):  V: kelompok vaksinasi (vaccinated groups); UV: kelompok tanpa vaksinasi (unvaccinated groups)
Sebelum vaksinasi (Before vaccination) 1 minggu pascavaksinasi (1 st weeks post vaccination) 3 minggu pascavaksinasi (3 rd weeks post vaccination) 2 minggu pasca-uji tantang (2 nd weeks post challenge)
24 jam pascavaksinasi (24 hours post vaccination) 2 minggu pascavaksinasi (2 nd weeks post vaccination) 1 minggu pasca-uji tantang (1 st weeks post challenge)
penyimpanan  15  bulan.  Sedangkan  pada  pengujian bulan  ke-18,  hampir  semua  parameter  mengalami penurunan kecuali sterilitas dan viabilitas.
Vaksin  yang  ideal  harus  memenuhi  beberapa persyaratan yang ditentukan antara lain imunogenik dan  protektif,  aman,  stabil  serta  efektif  dan  efisien (Sommerset et al., 2005). Hasil tersebut menunjukkan bahwa  proses  produksi  vaksin  tersebut  telah memenuhi standar produksi vaksin (CEC, 1998; EMA, 2013). Sumiati et al. (2014) menyebutkan bahwa vaksin HydroVac juga  aman terhadap ikan,  lingkungan dan aspek  keamanan  pangan.  Penelitian  lainnya  juga menyebutkan  bahwa  kekebalan  protektif  dan korelasinya dengan tingkat kelangsungan hidup ikan dari vaksinasi tunggal bakterin A. hydrophila pada ikan lele menunjukkan bahwa tidak diperlukannya vaksinasi ulang  (booster)  untuk  ikan  ini  selama  periode pemeliharaan tertentu (Sumiati et al., 2015).
Hasil  ideal  yang  diharapkan  pada  pengujian stabilitas suatu vaksin adalah akan memberikan nilai proteksi yang stabil pada ikan. Semakin lama vaksin disimpan,  maka  proteksi  terhadap  ikan  mempunyai pola penurunan yang stabil, tetapi pada penelitian ini tidak  terjadi  seperti  demikian  pada  penyimpanan  1 dan 6 bulan. Dugaan yang memengaruhi kondisi ini adalah karena faktor batch ikan yang digunakan dalam penelitian yang berbeda. Meskipun hasil pengujian awal ikan  tersebut  sudah  terbebas  dari  patogen  yang menginfeksinya, sehingga respons tanggap kebal ikan terhadap vaksin pun berbeda. Namun dari nilai kontrol memperlihatkan bahwa setelah dilakukan uji tantang ikan  yang  tidak  divaksin  tidak  dapat  memberikan respons kebal terhadap patogen target.
Gravningen et al. (2008) melaporkan bahwa ikan yang  divaksinasi  menunjukkan  tingkat  aglutinasi antibodi yang meningkat pasca-vaksinasi. Penelitian yang dilakukan Prasad & Areechon (2010) menunjukkan pentingnya  vaksin  untuk  meningkatkan  ketahanan terhadap penyakit A. hydrophila dan infeksi Streptococ- cus  sp.  oleh  stimulasi  imunitas  humoral  tertentu. Taukhid et al. (2015) mengevaluasi bahwa nilai Relative Percentage  Survival  (RPS)  vaksin  HydroVac  pada  ikan lele dan nila di atas 50%. Hasil uji tantang bakteri A. hydrophila telah mengaktifkan kekebalan humoral yaitu tingkat transkripsi IgM, MHC-I, dan MHC-II yang lebih tinggi pada ikan Rohu (Labeo rohita) yang divaksinasi (Dash et al., 2017).
Tu et al. (2009) mengemukakan bahwa imunisasi oral dengan bakteri A. hydrophila dapat menimbulkan respons  imun  adaptif  sistemik  dan  mukosa  dan memiliki  potensi  lebih  tinggi  untuk  menginduksi kekebalan adaptif daripada vaksin normal. Imunisasi oral  dengan  bakteri  merupakan  solusi  baru  yang menjanjikan  dengan  aplikasi  potensial  untuk mencegah  penyakit  pada  ikan.  Sedangkan  Aly  et  al. (2015)  menyimpulkan  bahwa,  vaksinasi  terhadap  A. hydrophila  meningkatkan  ketahanan  nila  terhadap infeksi  tersebut  dan  akibatnya  meningkatkan kelangsungan hidup dan nilai ekonominya.
Vaksinasi pada perikanan budidaya telah terbukti memberi kontribusi yang sangat signifikan terhadap peningkatan produksi perikanan budidaya, terutama industri salmon dan trout di Eropa (Sommerset et al., 2005). Di Indonesia, program vaksinasi menjadi salah satu  solusi  terhadap  adanya  larangan  penggunaan antibiotik dalam proses budidaya ikan. Akan tetapi,
Tabel 2. Nilai rataan sintasan (%) selama pengujian stabilitas vaksin Aeromonas hydrophila in-aktif Table 2. Mean of survival rate (%) during stability testing of Aeromonas hydrophila inactivated vaccine
24 jam 24 hours Induksi kekebalan Induction of immunity Uji tantang Challenge test 24 jam 24 hours Induksi kekebalan Induction of immunity Uji tantang Challenge test 0 100 97.8 82.72  ±  4.28* 100 92.2 60.49  ±  2.14 1 100 97.8 60.71  ±  3.57* 100 94.4 42.85  ±  6.19 2 100 98.9 83.33  ±  3.21* 100 94.4 60.60  ±  14.61 3 100 97.8 88.41  ±  2.51* 100 94.4 59.56 ±  0 6 100 100.0 77.27  ±  4.54* 100 92.2 60.60  ±  9.46 9 100 98.9 89.33  ±  4.04* 100 94.4 58.00  ±  15.59 12 100 97.8 84.61  ±  3.57* 100 92.2 65.38  ±  2.14 15 100 100.0 71.00  ±  3.46* 100 92.9 38.00  ±  10.15 18 100 97.8 50.72  ±  6.64* 100 94.4 31.88  ±  10.04 Perlakuan (bulan) Treatments (months)
Rerata sintasan (Mean of survival rate ) (%) Vaksin (Vaccination ) Kontrol (Control )
vaksinasi hanya merupakan salah satu alternatif yang ditawarkan. Adanya dukungan dan praktek berbudidaya ikan yang baik akan lebih meningkatkan produktivitas akuakultur secara nyata. Sejalan dengan hal tersebut NOAH  (2006)  melaporkan  bahwa  vaksin  bukan merupakan  satu-satunya  solusi  untuk  semua  jenis penyakit yang saat ini dihadapi oleh industri akuakultur, namun  merupakan  alat  yang  sangat  berguna  bila digunakan  bersamaan  dengan  praktek  pengelolaan budidaya yang baik.
Ketersediaan vaksin murni, aman, stabil, ampuh, dan  efektif  sangat  penting  untuk  pemeliharaan kesehatan  ikan  dan  keberhasilan  budidaya  ikan. Vaksinasi  ikan  dengan  vaksin  berkualitas  tinggi merupakan cara utama pengendalian beberapa jenis penyakit  ikan.  Dalam  kasus  lain,  vaksin  digunakan dalam  hubungannya  dengan  program  pengendalian atau  pemberantasan  penyakit  ikan  secara  nasional. Sebagai  pemangku  kebijakan,  Direktorat  Jenderal Perikanan Budidaya (DJPB) memberikan aturan tentang sediaan  obat  ikan  yang  akan  diedarkan  harus memenuhi beberapa kriteria yang menjadi persyaratan dan harus dipenuhi oleh produsen untuk memberikan jaminan  kualitas  produk  obat-obatan  dalan  proses budidaya  ikan  (DJPB,  2012).  Kebijakan  serupa  juga diterapkan  di  negara-negara  di  Uni  Eropa,  di  mana dibuat  peraturan  yang  akan  mengawasi  tentang peredaran  dan  ketersediaan  obat-obatan  yang diperlukan dalam industri akuakultur (Alderman, 2009).
Regulasi  pada  Keputusan  Direktur  Jenderal Perikanan  Budidaya No.  KEP. 35/DJ-PB/2012  Tentang Tata Cara Pengisian Formulir Data Teknis Obat ikan. EMA (2013) memberikan informasi tentang poin-poin yang harus dipertimbangkan dalam perancangan dan pelaksanaan penelitian untuk mendukung keselamatan dan kemanjuran produk obat hewan imunologis pada ikan.  Pedoman  tersebut  menguraikan  poin  penting untuk dipertimbangkan pada skala laboratorium dan uji  coba  lapangan  sehingga  penelitian  mewakili keamanan dan keefektifan vaksin bila diberikan sesuai dengan penggunaannya (misalnya jenis ikan yang akan digunakan,  kondisi  air,  metode  administrasi, penggunaan kelompok kontrol, dan lain-lain).
Pedoman tersebut juga menguraikan aspek-aspek yang harus dipertimbangkan dalam menentukan durasi imunitas vaksin yang ditujukan untuk penggunaan pada ikan. Persyaratan dan prosedur yang dijelaskan di sini adalah  bersifat  umum  supaya  konsisten  dengan standar  yang  ada  sebagai  panduan  dalam  produksi vaksin  ikan.  Pendekatan  ini  untuk  memastikan kemurnian, keamanan, potensi, dan kemanjuran vaksin ikan yang mungkin berbeda dari satu negara ke negara lain tergantung pada kebutuhan lokal. Namun, standar yang tepat dan kontrol terhadap kualitas produk sangat
penting  untuk  menjamin  ketersediaan  produk  yang konsisten  dan  berkualitas  tinggi  untuk  digunakan dalam program pengendalian kesehatan ikan.

## KESIMPULAN
Vaksin HydroVac telah memenuhi standar kualitas vaksin sesuai persyaratan dan efektif untuk pencegahan penyakit Motile Aeomonads Septicemia pada ikan lele.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Pada  kesempatan  ini  perkenankanlah  penulis mengucapkan terima kasih yang tak terhingga kepada Kepala Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan, serta teknisi litkayasa Sdr. Edy Farid W. dan Ahmad Wahyudi sehingga terlaksananya penelitian ini.

## DAFTAR  ACUAN
Alderman,  D.J.  (2009).  Control of  the  use  of  veteri- nary drugs and vaccines in aquaculture in the Eu- ropean Union.  In Rogers,  C. &  Basurco, B.  (Ed.). The use of veterinary drugs and vaccines in Medi- terranean aquaculture. Options Méditerranéennes, A/ No. 86, 13-28.
Aly,  S.M.,  Albutti,  A.S.,  Rahmani,  A.H.,  &  Abdel-Atti, N.M.  (2015).  The  response  of  New-season  nile tilapia to Aeromonas hydrophila vaccine. Int. J. Clin. Exp. Med., 8(3), 4508-4514.
Chandran,  M.R.,  Aruna,  B.V.,  Logambal,  S.M.,  & Michael, R.D. (2002). Immunisation of Indian ma- jor carps against Aeromonas hydrophila by intrap- eritoneal injection. Fish & Shellfish Immunology, 13, 1-9.
Commission  of  the  European  Communities  [CEC]. (1998). Specific requirements for the production and  control  of  live  and  inactivated  vaccines  in- tended  for  fish.  In:  The  rules  governing  medicinal products  in  the  European  Union,  Guidelines  for  the testing of veterinary medicinal products Volume VII, p. 245-250. Office for Official Publications of the European Communities, Luxembourg. Available at: http://ec.europa.eu/enterprise/pharmaceuticals/ eudralex/eudralex_en.htm.
Dash,  P.,  Yadav,  S.K.,  Garg,  L.C.,  Dixit,  A.,  &  Sahoo, P.K.  (2017).  Post-challenge  immune  gene  ex- pression profiling in rohu, Labeo rohita vaccinated with modified adjuvant-based Aeromonas hydrophila outer  membrane  protein  R  formulation. Veterinarski Arhiv., 87(5), 607-622.
Direktur Jenderal Perikanan Budidaya [DJPB]. (2012).
Tata Cara Pengisian Formulir Data Teknis Obat Ikan. Keputusan Direktur Jenderal Perikanan Budidaya No. Kep. 35/DJ-PB/2012. 25pp.
Ebanks,  R.O.,  Dacanay,  A., Goguen,  M.,  Pinto,  D.M.,
& Ross, N.W. (2004). Differential proteomic analy- sis of Aeromonas salmonicida outer membrane pro- teins in response to low iron and in vivo growth conditions. Proteomics, 4, 1074-1085.
European Medicines Agency [EMA]. (2013). Guideline on  the  design  of  studies  to  evaluate  the  safety and  efficacy  of  fish  vaccines.  http:// w w w . e m a . e u r o p a . e u / d o c s / e n _ G B / document_library/Scientific_guideline/2011/11/ WC500118226.pdf. 16 Oktober 2017.
Gravningen, K., Sakai, M., Mishiba, T., & Fujimoto, T. (2008).  The  efficacy  and  safety  of  an  oil-based vaccine  against  Photobacterium  damsela  sub  sp. piscicida in yellowtail (Seriola quinqueradiata): A field study. Fish & Shellfish Immunology, 24, 523-529.
Ismail,  N.D.A.,  Atta,  N.S.,  &  Aziz,  A.E.  (2010).  Oral vaccination  of  nile  tilapia  (Oreochromis  niloticus). Eur. Assoc. Fish Pathol., 19(1), 1-3.
Jeney,  Z.,  Racz,  T.,  Thompson,  K.D.,  Poobalane,  S., Ardo,  L.,  Adams,  A.,  &  Jeney,  G.  (2009).  Diffe- rences  in the  antibody response  and survival  of genetically  different  varieties  of  common  carp (Cyprinus carpio L.) vaccinated with a commercial Aeromonas  salmonicida/A.  hydrophila  vaccine  and challenged with A. hydrophila. Fish Physiol. Biochem., 35, 677-682.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan  [KKP].  (2015). Potensi usaha budidaya ikan air tawar, 1 Septem- ber  2015.  https://news.kkp.go.id/index.php/ potensi-usaha-budidaya-ikan-air-tawar/ 01 Agustus 2018.
National Office of Animal Health [NOAH]. (2006). Res- ponsible use  of vaccines and vaccination  in fish production.  The  Responsible  Use  of  Medicines in Agriculture Alliance (RUMA) Guidelines. 24 pp. Poobalane,  S.  (2007).  Aeromonas  hydrophila  vaccine development using immunoproteomics. Thesis. Insti- tute  of  Aquaculture,  University  of  Stirling.  U.K., 217 pp.
Prasad, S. & Areechon, N. (2010). Efficacy of forma- lin-killed Aeromonas hydrophila and Streptococcus sp. vaccine in Red Tilapia. Our Nature, 8, 231-240.
Rahman, M.H. & Kawai, K. (2000). Outer membrane proteins  of  Aeromonas  hydrophila  induce  protec-
tive  immunity  in  goldfish.  Fish  &  Shellfish  Immu- nology, 10, 379-382.
Roberson, B.S. (1990). Bacterial agglutination dalam fish immunology technical communication No. 1. Stolen,  J.S.,  Fletcher,  T.C.,  Anderson,  D.P., Roberson, B.S., & van Muiswinkel, W.B. (Eds.). SOS Publications. Fair Haven, N.J. 197 pp.
Sommerset,  I.,  Krossoy,  B.,  Biering.  E.,  &  Frost,  P. (2005). Vaccines for fish in aquaculture. Vaccines, 4(1), 89-101.
Sugiani,  D.  (2012).  Vaksin  bivalen  untuk  pencegahan penyakit motile aeromonas septicemia (MAS) dan strep- tococcosis  pada  ikan  nila  (Oreochromis  niloticus). Disertasi. Sekolah Pasca-sarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor, 135 hlm.
Sugiani,  D.  &  Komarudin,  O.  (2011).  Uji  efektifitas sediaan  produk  vaksin  HydroVac  terhadap pengulangan aplikasi rendaman. Prosiding Seminar Nasional  Ikan  VI  &  Kongres  Masyarakat  Ikhtiologi Indonesia III. hlm. 151-159.
Sumiati,  T.,  Taukhid,  &  Nafiqoh,  N.  (2015).  Durasi imunitas  protektif  dan  titer  antibodi  ikan  lele (Clarias  sp.)  yang  divaksinasi  dengan  bakterin Aeromonas  hydrophila.  Prosiding    Forum  Inovasi Teknologi Akuakultur, hlm. 557-563.
Sumiati, T., Taukhid, & Lusiastuti, A.M. (2014). Evaluasi vaksin Aeromonas hydrophila in aktif terhadap ikan, lingkungan dan aspek keamanan pangan. Prosiding Forum  Inovasi  Teknologi  Akuakultur  2014,  hlm. 1129-1139.
Taukhid,  Sumiati,  T.,  Andriyanto,  S.,  &  Gardenia,  L. (2015). Evaluasi pasca-rilis vaksin bakteri in-aktif Aeromonas hydrophila (Hydrovac) dan Streptococcus agalactiae (Streptovac) untuk pencegahan penyakit motile  aeromonads  septicemia  (MAS)  dan  strepto- coccosis  pada  budidaya  ikan  air  tawar.  Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur, hlm. 515-524.
Taukhid, Supriyadi, H., Komarudin, O., & Sugiani, D. (2011). Vaksin Aeromonas hydrophila. Republik In- donesia. Nomor Paten P002011 00092.
Tu,  F.P.,  Chu,  W.H.,  Zhuang,  X.Y.,  &  Lu,  C.P.  (2009). Effect  of  oral  immunization  with  Aeromonas hydrophila  ghosts  on  protection  against  experi- mental  fish  infection.  Applied  Microbiology,  50, 13-17.