INNOVATIVE: Journal Of Social Science Research Volume 3 Nomor 5 Tahun 2023 Page 4572-4579 E-ISSN 2807-4238 and P-ISSN 2807-4246
Website: https://j-innovative.org/index.php/Innovative
Identifikasi Bakteri Gram Negatif Pada Air Tebu Di Wilayah Kota Pontianak
Destia Aufani 1 ✉ , Supriyanto 2 , Imma Fatayati 3 , Bagus Muhammad Ihsan 4
Departemen of Medical Laboratory Technology, Poltekkes Kemenkes Pontianak Email : destiaaufani5373@gmail.com 1 ✉

## Abstrak
Air  tebu  merupakan  minuman  yang  terbuat  dari  perasan  batang  tebu  yang  diperas  dengan menggunakan  mesin  khusus  membuatnya  memiliki  rasa  yang  manis  alami,  minuman  ini  sangat digemari oleh  masyarakat.  Akan tetapi kontaminasi mikroba pada air tebu sangat tinggi sehingga dapat menyebabkan berbagai penyakit. Berbagai bakteri dari genus Escherichia, Salmonella, Klebsiella, Shigella, dan Enterobacter yang merupakan salah satu indikator polusi limbah dan kondisi yang tidak menguntungkan untuk  makanan dan minuman. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui bakteri yang  terdapat  pada  minuman  air  tebu  di  Kota  Pontianak.  Penelitian  ini  menggunakan  beberapa sampel air tebu di wilayah kota Pontianak dengan menggunakan metode kultur. Hasil yang didapatkan dari 70 sampel yaitu mendapatkan 8 sampel positif bakteri Enterobacter aerogenes, 4 sampel positif bakteri Salmonella typhi, 14 sampel positif Klebsiella pneumonia, 6 sampel positif Shigella dysentriae, dan 15 sampel positif Escherichia coli.
Kata Kunci : Air tebu, Bakteri Gram-negatif

## Abstract
Water is a drink made from sugar cane shall stems and using a cane squeezed it having a special natural sweet, this drink is very had much cache by the community. But microbial contamination in cane water is so high that it can cause various diseases. A variety of bacterium of the genus escherichia, salmonella, klebsiella, shigella, and that is an indicator enterobacter waste pollution and the conditions are unfavorable for food and drink. The study aimed to identify bacteria found in a drink of cane juice in Pontianak City. The study uses several cane - water samples in the city's population using cultural methods.  The  results  obtained  from  70  samples  are  getting  8  positive  samples  of  Enterrobacter aerogenes bacteria, 4 positive samples of Salmonella typhi bacteria, 14 positive samples of Klebsiella pneumonia, 6 positive samples of Shigella dysentriae, and 15 positive samples of Escherichia coli. Keyword: Cane Water, Gram-Negative Bacteria

## PENDAHULUAN
Minuman  air  tebu  merupakan  salah  satu  minuman  yang  sangat  digemari  oleh sebagian  besar  kalangan  masyarakat  untuk  dikonsumsi  sebagai  penghilang  dahaga. Minuman ini sangat mudah ditemukan di beberapa lokasi di pinggiran jalan karena termasuk minuman yang merakyat dan ekonomis. Selain manis, menyegarkan dan lezat, minuman sari tebu juga mengandung vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, vitamin C, kandungan sukrosa, protein, kalsium, lemak, dan asam amino (Yulinar & Fitriangga, 2022). Namun, minuman ini bisa menjadi minuman yang tidak baik bagi kesehatan karena apabila sudah tercemar oleh bakteri, misalnya pada saat pengolahan bahan baku yang tidak higenis, maka berisiko tinggi menyebabkan penyakit. Di sekitar Kota Pontianak, terdapat cukup banyak penjual es tebu yang menggunakan gerobak, lengkap dengan mesin khusus untuk memeras tebu.
Ada beberapa hal yang menyebabkan terjadinya pencemaran terhadap makanan atau minuman sehingga makanan menjadi  tidak aman untuk dikonsumsi, misalnya pada saat pengolahan, penyimpanan, dan penyajian(Dwi Rahmayani & Melviana Simatupang, 2019). Kontaminasi itu dapat berasal dari debu dan tanah, hewan liar seperti tikus dan serangga, serta  binatang  peliharaan  seperti  kucing,  ayam,  dan  burung.  Manusia  yang  mengelola makanan atau minuman juga berpotensi menjadi sumber penularan, misalnya karena tidak menggunakan pakaian kerja atau tutup rambut yang baik, cara pencucian alat masak yang tidak  sempurna,  dan  penyimpanannya  yang  tidak  bersih  (Nayla  Kamilia  Fithri,  2019). Kontaminasi pada makanan dan minuman dapat menyebabkan makanan menjadi media yang  baik  bagi  munculnya  penyakit.  Penyakit  yang  ditimbulkan  oleh  makanan  yang terkontaminasi  disebut  penyakit  bawaan  makanan (food-borned  diseases)  yang  dapat menyebabkan  gangguan  pencernaan  dan  kejadian  luar  biasa  (KLB)  keracunan  makanan dengan gejala mual/muntah, pusing, dan diare, (Dewi Oktavia Djasmi, 2015).
Bakteri  Gram-negatif  dari  genus Escherichia,  Salmonella,  Klebsiella,  Shigella,  dan Enterobacter dapat menjadi indikator polusi limbah dan kondisi yang tidak menguntungkan untuk makanan dan minuman. Bakteri-bakteri ini dapat menyebabkan banyak infeksi serius, seperti pneumonia, peritonitis (radang selaput yang melapisi rongga perut), infeksi saluran kemih, infeksi alirah darah, infeksi luka atau luka operasi, dan meningitis.  Sejauh ini data mengenai  bakteri  yang  terdapat  pada  minuman  air  tebu  masih  sedikit  sehingga  masih banyak  penjual  dan  pembeli  yang  tidak  memperhatikan  kebersihan  lingkungan  sekitar. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi bakteri Gram-negatif yang ada pada minuman air tebu yang dijual di wilayah Kota Pontianak.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini bersifat deskriptif dengan desain cross-sectional. Sampel adalah air tebu yang dijual oleh pedagang di wilayah Kota Pontianak yang dipilih dengan teknik purposive sampling,  yaitu  pemilihan  sampel  berdasarkan  kriteria.  Adapun  kriteria  yang  ditentukan adalah: air tebu dijual menggunakan gerobak di pinggir jalan, tidak berpindah tempat, dan berjualan pada pukul 10.00-16.00 sehingga diperoleh 70 sampel di wilayah kota Pontianak. Identifikasi bakteri dilakukan dengan metode kultur. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April 2023 di Laboratorium Bakterologi Jurusan Teknologi Laboratorium Medis, Politeknik Kesehatan Kemenkes Pontianak.
Untuk identifikasi bakteri digunakan media pengaya selenite broth (SB) dan lactose broth  (LB);  media  selektif  MacConkey’s  agar  (MCA),  eosin  methylene  blue  (EMB),  dan Salmonella  Shigella  agar  (SSA);  media  biokimia  triple  sugar  iron  agar  (TSIA),  urease, Simmon’s citrate (SC), sulfure indol and motility (SIM), methyl red (MR), Vog es-Proskauer (VP), dan karbohidrat (glukosa, laktosa, maltosa, manitol, dan sukrosa); dan pewarnaan Gram menggunakan gentian violet, lugol, asam alkohol, dan safranin.
Sampel air tebu diperoleh  dengan cara membeli air tebu dari pedagang kemudian diinokulasikan ke dalam media pengaya SB dan LB. Dari media pengaya yang keruh (positif) dilanjutkan  dengan  pewarnaan  Gram  kemudian  amati  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran  1000x.  Setelah  diamati  ciri  spesifik  secara  mikroskopis  maka  identifikasi dilanjutkan dengan menginokulasi bakteri dari media pengaya ke media selektif MC, EMB, dan SS. Dan yang terakhir, koloni spesifik yang tumbuh diinokulasikan ke media biokimia TSIA,  urease,  SC,  SIM,  MR,  VP,  dan  karbohidrat.  Setiap  inokulasi  pada  media  dilakukan inkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  bakteri  Gram-negatif  pada minuman air tebu di wilayah Kota Pontianak. Dengan menggunakan pendekatan berbasis kultur,  identifikasi  dilakukan  melalui  inokulasi  pada  media  pengayaan,  pewarnaan  Gram, inokulasi pada media selektif diferensial, dan pengujian biokimia.
Dari bakteri E. coli ditemukan 15 sampel  dengan ciri khas berbentuk Basil atau batang, berwarna merah, gram (-) pada pewarnaan Gram, pada media selektif diferensial didapatkan hasil datar, pink-gelap, kering, non-mucoid pada MC; koloni bulat, hijau-metalik, gelap pada EMB; SS negative dan IMViC-nya (+) (+) (-) (-)
Dari bakteri Klebsiella pneumoniae ditemukan 14 sampel dengan ciri khas Basil, merah, gram (-) pada pewarnaan Gram dan pada media selektif diferensial didapatkan hasil pink,
smooth,  sedang-besar,  cembung  pada  MC,  hijau-hitam,  sedang-besar    pada  EMB,  SSA negative, dan IMViC-nya (-) (-) (+) (+).
Dari bakteri Enterobacter aerogenes ditemukan 8 sampel dengan ciri-ciri khas Basil, merah, Gram (-) pada pewarnaan Gram dan pada media selektif diferensial didapatkan hasil pink, kecil, mucoid pada MC, pink, gelap, mucoid pada EMB, SS negative, dan IMViC-nya (- ) (+) (+)  (+).
Dari Shigella dysentriae ditemukan 6 sampel dengan ciri khas Basil, merah, gram (-) pada pewarnaan Gram dan pada media selektif diferensial didapatkan hasil   kecil, smooth, jernih pada MC, jernih, kecil, bulat pada SS, EMB negative dan IMViC-nya (-)(-)(-)(-).
Dari bakteri Salmonella typhi ditemukan 4 sampel dengan ciri-ciri Basil, merah, gram (-)  pada  pewarnaan  Gram  dan  pada  media  selektif  diferensial  didapatkan  hasil  bulat, smooth, kecil, bening-pucat pada MC, EMB negative, bening, tengah-hitam pada SSA, dan IMViC-nya (-) (+) (-) (-).
Tabel 1. Bakteri Gram-negatif pada minuman air tebu di Kota Pontianak
Bakteri Positif Negatif Total Escherichia coli 15 55 70 Klebsiella pneumoniae 14 56 70 Enterobacter aerogenes 8 62 70 Shigella dysentriae 6 64 70 Salmonella typhi 4 66 70
Dalam penelitian  ini, Escherichia coli adalah bakteri yang  paling banyak ditemukan pada minuman air tebu. Jika dibandingkan dengan bakteri patogen lain yang ditemukan, temuan  ini  wajar  mengingat E.  coli  merupakan  bakteri  yang  banyak  ditemukan  di  usus manusia  dan hewan  berdarah  panas (St. Firjatih Widhah, 2022). Bakteri Gram-negatif ini dapat meragi laktosa dan bersifat patogen  oportunistis. Dalam media pada suhu kamar, bakteri ini dapat bertahan selama 1 minggu, bahkan beberapa strain dapat bertahan hidup dalam es selama 6 bulan. Meskipun kebanyakan strain E. coli tidak berbahaya, namun ada strain yang dapat menghasilkan toksin Shiga (mirip seperti Shigella dysenteriae) sehingga menyebabkan  penyakit  bawaan  makanan  atau  minuman  yang  parah  (Mulia  Sari,  2015) . Penyakit  ini  ditularkan  ke  manusia  terutama  melalui  konsumsi  makanan  atau  minuman yang  terkontaminasi. Penyakit  diare  yang  disebabkan  oleh Escherichia  coli  dan  Shigella dysentriae masih merupakan masalah kesehatan yang serius (Agustina Retnaningsih, 2019)
Klebsiella merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek dengan ukuran 0,5-1,5  x  1-2  mikron.  Mempunyai  selubung  yang  lebarnya  2-3  kali  ukuran  kuman,  tidak berspora dan tidak bergerak. Salah satu agen penyebab penyakit infeksi saluran pernafasan akut adalah Klebsiella  pneumoniae (Dyah Meiningsih, 2019) . WHO menyebutkan bahwa penyebab  kematian  tertinggi  akibat  infeksi  di  dunia  adalah  infeksi  saluran  napas  akut. Klebsiella pneumoniae masih menjadi salah satu penyebab utama pneumonia komunitas di beberapa negara (Kot et al., 2023)
Enterobacter aerogenes adalah bakteri Gram-negatif. Panjang sekitar 1-3 mikron. Pada hasil  identifikasi  didapatkan Enterobacter  aerogenes  adalah  bakteri  patogen  nosocomial yang menyebabkan sebagian besar jenis infeksi oportunistik (Claudya Emma Sulistya, 2015). Enterobacter aerogenes  dapat ditemukan ada air laut, air tawar, limbah, tanah dan  juga Enterobacter aerogenes dapat tumbuh dalam berbagai media cair dan padat antara suhu 28℃ -42 ℃. Enterobacter aerogenes yang telah terisolasi dari lingkungan luar dapat tumbuh optimal antar suhu 20℃ - 30℃ dan 18℃ bila ditanam pada media yang disterilkan.
Shigella dysenteriae merupakan bakteri gram negatif yang berbentuk batang, tidak bergerak, dan tidak berspora. Shigella dapat bertahan hidup dalam air selama 6 bulan, air larut selama 2-5 bulan, dalam es selama 2 bulan. Bakteri ini bersifat aerob dan fakultatif. Suhu  optimum  pertumbuhan  yakni  37 ° C  dimana  habitatnya  berada  pada  saluran pencernaan dengan infeksinya melalui fase oral. Shigella akan mengeluarkan toksik yang akan  merangsang  terjadinya  perubahan  sistematik  pada  mukosa  usus  yang  dapat menyebabkan sel-sel akan mati pada jaringan epitel usus halus sehingga terjadi tuak kecil didaerah  invasi.  (Program  et  al.,  2018). Shigella  dysenteriae  juga  bisa  disebarkan  melalui sumber air. Penularan lain juga telah dikaitkan dengan kontak ulang yang rasional dengan air yang terkontaminasi, tinggal di komunitas atau lembaga dengan kebersihan yang padat, dan  mengkonsumsi  makanan  atau  air  yang  terkontaminasi.  Karena Shigella  mudah menyebar dan dapat bertahan dalam makanan yang didinginkan, penularan sering dikaitkan dengan makanan yang disajikan dingin atau mentah dan memerlukan penanganan selama persiapan. (Iswari, n.d.)
Salmonella typhi adalah bakteri yang paling sedikit ditemukan pada sampel. Bakteri ini merupakan  bakteri  gram  negative,  berbentuk  batang,  dengan  ukuran  lebar  0,7 – 1,5  m dengan Panjang 2,0-5,0 m, bergerak dengan adanya flagel.  Bakteri ini dapat menyebabkan infeksi pada hewan  disamping manusia dan dapat menyerang jaringan ektstra intestinal, menyebabkan demam enteric. Keadaan paling parah berupa demam thypoid. Salmonella typhi merupakan bakteri Gram negatif yang tidak memiliki spora, bergerak dengan flagel peritrik, bersifat intraseluler fakultatif dan anerob fakultatif. Demam tifoid adalah penyakit
demam akut yang disebabkan oleh bakteri Salmonella typhi. Penyakit ini khusus menyerang manusia. Bakteri ini ditularkan melalui makanan dan minuman yang terkontaminasi  oleh kotoran  atau  tinja  dari  seseorang  pengidap  atau  penderita  demam  tifoid.(Biologi  et  al., 2020).
Gambar 1. Sebaran bakteri yang ditemukan pada air tebu
Dari  data  diatas  dapat  disimpulkan  bahwa  bakteri Escherichia  coli  dan  Klebsiella pneumoniae merupakan bakeri yang paling banyak ditemukan pada sampel air tebu dan bakteri Salmonella typhi adalah bakteri yang paling sedikit ditemukan pada sampel air tebu. Ditemukannya E. coli dan Klebsiella pada sampel menunjukan bahwa terjadi kontaminasi dari air saat pembuatan minuman air tebu, sehingga ditemukannya bakteri pada sampel (Evida  Yanti  Tanjung,  2023).  Adanya  cemaran  bakteri E.  coli  pada  minuman  air  tebu disebabkan karena pedagang kurang menjaga kebersihan, alat yang digunakan tidak bersih, factor lingkungan yang juga mempengaruhi kontaminasi bakteri. Pengolahan dengan bahan baku  yang  tidak  higienis  seperti  pembuatan  pada  minumannya  serta  pelayanan  yang dijajakan langsung dipinggir jalan memungkinkan adanya pencemaran mikroba. Kondisi ini yang  demikian  memungkinkan  dapat  tercemarnya  bakteri  coliform  pada  minuman  yang diolah.(Cindy Maulina Rahmadani, 2019). Bakteri ini berasal dari tinja manusia dan hewan, tertular  kedalam  makanan  karena  perilaku  penjamah  yang  tidak  higienis,  pencucian peralatan  yang  tidak  bersih,  kesehatan  para  pengolah  dan  penjamah  makanan  serta penggunaan air pencuci yang mengandung Coliform, Escherichia coli, dan fekal Coliform. (Roni Sartika Tampubolon, 2019)
10% 5% 17% 8% 19% 41% Enterobacter aerogenes Salmonella typhi
Klebsiella pneumoniae
Shigella dysentriae Escherichia coli Negatif

## SIMPULAN
Penelitian ini berhasil menunjukkan bahwa sebagian air tebu yang dijual di wilayah kota  Pontianak  tercemar  bakteri  Gram  negatif.  Terdapat  70  sampel  yang  diperiksa  di Laboratorium  Bakteriologi  Poltekes  Kemenkes  Pontianak  di  dapatkan  37  sampel terkontaminasi bakteri Gram negatif. Bakteri yang ditemukan yaitu bakteri Escherichia coli sebanyak 15 sampel (32%), Klebsiella pneumoniae sebanyak 14 sampel (30%), Enterobacter aerogenes  sebanyak  8  sampel  (17%),  Shigella  dysentriae  sebanyak  6  sampel  (13%),  dan Salmonella  typhi  sebanyak  4  sampel  (8%).  Adanya  bakteri  Gram  negatif  pada  sampel minuman air tebu dapat menyebabkan penyakit serius pada manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina Retnaningsih. (2019). Bakteri yang dapat menyebabkan diare adalah Escherichia coli. Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Biji  Pepaya  Escherichia  Coli  Dan  Shigella Dysentriae Dengan Metode Difusi Sumuran.
Biologi, J., Sains dan Teknologi, F., Alauddin Makassar, U., Biologi, T., Tarbiyah dan Keguruan, F.,  &  Syekh  Nurjati  Cirebon  Jl  Perjuangan  Cirebon,  I.  (2020). Prosiding  Seminar Nasional  Biologi  di  Era  Pandemi  COVID-19  Gowa.  http://journal.uin- alauddin.ac.id/index.php/psb/
Cindy  Maulina  Rahmadani.  (2019). Pengolahan  dengan  bahan  baku  yang  tidak  higienis seperti pembuatan pada minuman.
Claudya  Emma  Sulistya.  (2015). POLA  BAKTERI  YANG  BERPOTENSI  MENJADI  SUMBER PENULARAN INFEKSI NOSOKOMIAL DI IRINA C RUANGAN INTERMEDIATE CARE (IMC) BLU RSUP PROF. DR. R. D. KANDOU MANADO.
Dewi Oktavia Djasmi. (2015). kontaminasi yang terjadi pada makanan dan minuman dapat menyebabkan makanan tersebut menjadi media yang baik bagi suatu penyakit. Uji Bakteriologis Pada Minuman Air Tebu Yang Dijual Di Pinggiran Jalan Khatib Sulaiman Kota Padang.
Dwi Rahmayani, R., & Melviana Simatupang, M. (2019). Analisis Pengaruh Higiene Penjamah Dan Sanitasi Makanan Terhadap Kontaminasi E. Coli Pada Jajanan Sekolah. In Jurnal Kesehatan Masyarakat (Vol. 3, Issue 2). http://ejournal.urindo.ac.id/index.php/jukmas Dyah Meiningsih. (2019). IDENTIFIKASI STAPHYLOCOCCUS AUREUS DAN BAKTERI GRAM
NEGATIF  PADA  SPUTUM  PENDERITA  PPOK  DAN  RESISTENSINYA  TERHADAP ANTIBIOTIKA  DI  RS  TELOGOREJO  SEMARANG. IDENTIFIKASI  STAPHYLOCOCCUS AUREUS  DAN  BAKTERI  GRAM  NEGATIF  PADA  SPUTUM  PENDERITA  PPOK  DAN RESISTENSINYA TERHADAP ANTIBIOTIKA DI RS TELOGOREJO SEMARANG.
Evida Yanti Tanjung. (2023). IDENTIFIKASI BAKTERI ESCHERICHIA COLI PADA AIR ES TEBU YANG DIJUAL DI JALAN MAYJEND H. T RIZAL NURDIN SERDANG BEDAGAI TAHUN 2023. IDENTIFIKASI BAKTERI ESCHERICHIA COLI PADA AIR ES TEBU YANG DIJUAL DI JALAN MAYJEND H. T RIZAL NURDIN SERDANG BEDAGAI TAHUN 2023.
Iswari,  I.  S.  (n.d.).  IDENTIFIKASI  Shigella  dysenteriae  PADA  MAKANAN  SALAD  DI  KOTA
DENPASAR I Made  Reza Pramudya 1 , Made  Agus Hendrayana 2 , I  Dewa  Made Sukrama. JUNI, 10(6), 2021. https://doi.org/10.24843.MU.2020.V10.i6.P01
Kot, B., Piechota, M., Szweda, P., Mitrus, J., Wicha, J., Grużewska, A., & Witeska, M. (2023). Virulence analysis and antibiotic resistance of Klebsiella pneumoniae isolates from hospitalised patients in Poland. Scientific Reports, 13(1). https://doi.org/10.1038/s41598-023-31086-w
Mulia Sari. (2015). UJI BAKTERIOLOGIS DAN REISISTENSI ANTIBIOTIK TERHADAP BAKTERI ESCHERICHIA COLI DAN SHIGELLA SP. PADA MAKANAN GADO-GADO DI KANTIN UIN  SYARIF  HIDAYATULLAH  JAKARTA. UJI  BAKTERIOLOGIS  DAN  RESISTENSI ANTIBIOTIK  TERHADAP  BAKTERI  ESCHERICHIA  COLI  DAN  SHIGELLA  SP.  PADA MAKANAN GADO-GADO DI KANTIN UIN SYARUF HIDAYATULLAH JAKARTA.
Nayla  Kamilia  Fithri,  SKM.  ,  M.  (2019). Sumber  bahan  pencemar  fisik  dapat  terjadi  pada kondisi tempat pengolahan makanan dan minuman.
Program, F. A., Biologi, S., Sains, F., Teknologi, D., Jambi, U., Kampus, J., Masak, P., Raya, J., Bulian, J.-M., & Darat, M. (2018). ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Shigella sp. PENYEBAB DIARE PADA BALITA ISOLATION AND IDENTIFICATION OF Shigella sp. CAUSES OF DIARRHEA IN TODDLERS. 04(1), 1 – 40.
Roni Sartika Tampubolon. (2019). bakteri ini berasal dari tinja manusia dan hewan, tertular kedalam makanan karena perilaku penjamah yang tidak higienis.
St. Firjatih Widhah. (2022). Analisi Kelimpahan Bakteri Escherichia coi Di Kawasan Wisata Pantai Mallasoro, Kabupaten Jeneponto. Analisis Kelimpahan Bakteri Escherichia Coli
Di Kawasan Wisata Pantai Mallasoro, Kabupaten Jeneponto.
Yulinar,  E.,  &  Fitriangga,  A.  (2022).  Deteksi  bakteri  coliform  pada  minuman  sari  tebu (Saccharum  officinarum)  di  Pontianak  Utara. Jurnal  Cerebellum,  8(3),  23 – 29. https://doi.org/10.26418/jc.v%vi%i.55001