## Analisis kadar fibrinogen sebagai biomarker diabetik pada tikus wistar yang diinduksi streptozotocin
Imron Rosyadi*, Ella Romadhona, Ajeng Tyas Utami, Yayik Nur Hijrati, Christin Marganingsih Santosa.
Departemen Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
ABSTRAK: Penyakit diabetes mellitus adalah serangkaian proses penyakit yang bermula dari kerusakan jaringan terutama di pankreas  dimana  awalnya  ditandai  dengan  munculnya  protein  fase  akut.  Pada  mamalia,  konsentrasi  protein  fase  akut  yang dominan adalah serum amyloid A protein, C-reaktive protein dan fibrinogen. Penelitian ini bertujuan untuk mencari korelasi protein fase akut fibrinogen untuk digunakan sebagai biomarker pada tikus diabetes yang diinduksi streptozotocin. Tikus yang digunakan adalah tikus Wistar jantan sebanyak 20 ekor, umur sekitar 2 bulan dengan berat badan 180-250 gram. Tikus dibagi menjadi dua kelompok, masing-masing kelompok 10 ekor tikus sebagai kelompok  induksi dan kelompok kontrol. Kelompok induksi dipuasakan selama 24 jam kemudian diinjeksi streptozotocin 1 kali dengan dosis 40 mg/kg bb yang dilarutkan dalam bufer sodium sitrat 0,1 M pH 4,0. Tikus diambil darah pada jam ke-0, 6, 12, 24, 48, 60, 72, 84 dan 96  post induksi diabetes untuk  diperiksa kadar  konsentrasi  protein fase  akut  fibrinogen  Hasil  penelitian  rata-rata kadar  fibrinogen pada jam  ke-0  dan ke-6  yaitu  sebesar  0,57±0,06  mg/mL  dan  0,60±0,35  mg/mL  masih  dalam  range  normal,  kemudian  mulai  meningkat  terus berturut-turut  di  jam  ke-12  sebesar  0,6±0,4  mg/mL,  jam  ke-24  0.93±0,46  mg/mL,  jam  ke-36  1,1±0,1  mg/mL,  jam  ke-48 1,13±0,81  mg/mL,  jam  ke-60  1,17±0.40  mg/mL,  jam  ke-72  1,47±0,06  mg/mL,  jam  ke-84  1,6±0,1  mg/mL  dan  jam  ke-96 1,8±0,1 mg/mL. Hasil dari penelitian ini menunjukkan protein fase akut fibrinogen dapat dijadikan sebagai  salah satu marker pada tikus yang diinduksi diabetes mellitus.
Kata kunci: diabetes, fibrinogen, protein fase akut, tikus wistar

## ■ PENDAHULUAN
Penyakit  diabetes  mellitus  adalah  penyakit  yang  bermula dari  kerusakan  jaringan  terutama  di  pankreas.  Penyakit diabetes mellitus pada awalnya ditandai dengan keberadaan protein  fase  akut  (Murata,  2004).  Respon  protein  fase  akut adalah reaksi spesifik dan kompleks organisme yang terjadi tidak  lama  setelah  terjadi  cedera  pada  jaringan  (Tóthová et al .,  2013).  Fibrinogen  merupakan  reaktan  fase  akut,  dan kadarnya akan meningkat dua sampai sepuluh kali lipat dari normal  sebagai  respon  terhadap  keadaan  stres  fisiologi, termasuk  trauma,  kehamilan,  dan  inflamasi  jaringan (Kofoed et  al., 2003).  Fibrinogen  juga  berfungsi membentuk  bekuan  darah  pada  proses  koagulasi  dan viskositas  darah  (Rothwell et  al., 2004;  Cucchiara,  2009). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mencari  korelasi  protein fibrinogen fase akut sebagai  kandidat biomarker pada tikus diabetes yang diinduksi streptozotocin.

## ■ BAHAN DAN METODE
Tikus  jenis  Wistar  sebanyak  10  ekor  berjenis  kelamin jantan,  umur  sekitar  2  bulan,  dengan  berat  badan  180-250 gram  digunakan  dalam  penelitian  ini.  Tikus  diperoleh  dari Laboratorium  Farmakologi  dan  Toksikologi,  Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Streptozotocin  dari  Nakalai,  Japan  dan  sodium  sitrat  bufer
sebagai pelarut dari Laboratorium Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran  Hewan,  Universitas  Gadjah  Mada,  Yogyakarta digunakan dalam penelitian ini. Tikus diberikan minum dan pakan  secara  ad  libitum,  dan bedding berupa  serutan  kayu yang telah dioven sebelumnya.
Tikus  dibagi  menjadi  dua  kelompok,  yaitu  kontrol sebanyak 10 ekor tikus dan induksi sebanyak 10 ekor tikus. Kelompok  induksi  dipuasakan  selama  24  jam  kemudian diinjeksi  streptozotocin  1  kali  dengan  dosis  40  mg/kg  bb dalam  bufer  sodium  sitrat  0,1  M  pH  4,0.  Tikus  diambil darah  sebanyak  1  mL  dari  vena plexus  retroorbitalis pada jam  ke-0,  6,  12,  24,  48,  60,  72,  84  dan  96  post  induksi diabetes untuk diperiksa kadar konsentrasi protein fase akut.
Pengukuran  konsentrasi  protein  fase  akut  fibrinogen dilakukan  dengan  menghitung  antara  Total  Protein  Plasma (TPP)  sebelum  dan  setelah  dipanaskan  pada  suhu  58  °C selama  3  menit  (Imron,  2016).  Data  hasil  penelitian dianalisa  secara  statistik  dengan  Annova  dan  dibandingkan secara deskriptif diantara kelompok.
ISSN 2581-2416 DOI: http://dx.doi.org/10.29244/avl.2.1.3-4 http://journal.ipb.ac.id/index.php/arshivetlett
Diterima: 30-09-2017 | Direvisi: 03-11-2017 | Disetujui: 14-11-2017 © 2018 CC-BY-SA. Ini adalah artikel Open Access yang didistribusikan ber- dasarkan ketentuan dari Creative Commons Attribution ShareAlike 4.0 Inter- national License ( https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ ).

## ■ HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  rata-rata  pengukuran  kadar  fibrinogen  tikus pascaperlakuan  (Gambar  1).  Hasil  rata-rata  nilai  total leukosit  pada  kelompok  induksi  pada  jam  ke-0,  6  dan  12 masih berkisar dalam range normal yaitu sebesar 0,57±0,06- 0,60±0,40 mg/ml. Kemudian mengalami kenaikan pada jam ke-24  menjadi 0,93±0,46  mg/ml.  Kenaikan  ini  berlangsung secara  stabil  dan  berturut-turut  hingga  jam  ke-96  yaitu dengan kadar fibrinogen sebesar 1,80±0,1 mg/ml. Dari hasil analisis  statistik  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang signifikan  (p<0,05)  pada  saat  jam  ke-0,6,12  dengan  pada jam  ke 24, 48,  60,  84  serta 96.  Hal ini  menunjukkan  kadar fibrinogen  meningkat  seiring  dengan  induksi  dari streptozotocin menuju ke proses diabetes.
Gambar 1 Kadar fibrinogen fase akut pada tikus Wistar pascainduksi streptozotocin.
Tikus  pada  kelompok  normal  (kontrol),  rata-rata  kadar fibrinogennya  tidak  menunjukkan  adanya  peningkatan  atau penurunan  yang  signifikan.  Terlihat  pada  jam  ke-0  hingga 96  berkisar  diantara  0,53±0.12-0,57±0.4  mg/ml.  Dari  hasil analisis statistik menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan  (p>0,05)  kadar  fibrinogen  dari  jam  ke-0  hingga 96  dalam  kelompok  tikus  normal.  Hal  ini  menunjukkan kadar  fibrinogen  kelompok  kontrol  dapat  dijadikan  acuan normal kadar fibrinogen.
Hasil  uji  statistik  menunjukkan  bahwa  tidak  adanya perbedaaan kadar fibrinogen  yang signifikan (p>0,05) pada jam ke 0,6 dan 12 antara kelompok perlakuan.  Tetapi, pada jam  ke  24  hingga  96  ada  perbedaan  peningkatan  kadar fibrinogen yang signifikan (p<0,05) diantara kelompok. Hal ini  menunjukkan  bahwa  pada  kelompok  tikus  yang diinduksi  diabetes  telah  terjadi  peningkatan  kadar fibrinogen  akibat  dari  induksi  diabetes  melitus  dengan streptozotocin (Miller & Baker, 1972).
Hasil  pengukuran  kadar  fibrinogen  ini  sebanding  dengan hasil  pengukuran  kadar  gula  dalam  darah  pada  tikus  yang
diinduksi streptozotocin. Pada jam ke 0 dan 6 post induksi, tikus masih dalam keadaan normal. Hal ini terlihat dari hasil kadar  gula  darah  dan  kadar  fibrinogen  yang  masih  dalam ambang  normal.  Namun  pada  jam  ke  12  dimana  terjadi penurunan  kadar  gula  darah  secara  signifikan,  kadar fibrinogen  juga  mulai  perlahan  meningkat.  Hasilnya  pada jam  ke  24  tikus  sudah  mengalami  hiperglikemia,  kadar fibrinogennya pun meningkat (Napoli & Singh, 2009).

## ■ SIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  peningkatan  kadar fibrinogen  sejalan  dengan  proses  terjadinya  diabetes  pada tikus  yang  diinduksi  streptozotocin.  Dengan  demikian, maka fibrinogen dapat menjadi salah satu marker pada tikus yang diinduksi diabetes dengan streptozotocin.

## ■ INFORMASI PENULIS

## Penulis untuk Korespondensi
*IR: imron.rosyadi@ugm.ac.id Departemen Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta Jl. Fauna No. 2 Karangmalang, Yogyakarta 55281 Indonesia

## ■ PUSTAKA ACUAN
Cucchiara  BL.  2009.  Evaluation  and  management  of  stroke.  ASH Education Program Book, 2009(1):293-301.
Imron R. 2016. Potensi anti diabetes melitus serbuk umbi tanaman sarang  semut  ( Myrmecodia  tuberose )  melalui  kajian hematologik,  imunologik  dan  histopatologik  organ  tikus wistar  yang  diinduksi  streptozotocin.  Thesis  Magister  Sain Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan UGM.
Kofoed  SC,  Wittrup  HH,  Sillesen  H,  Nordestgaard  BG.  2003. Fibrinogen  predicts  ischaemic  stroke  and  advanced  athero- sclerosis  but  not  echolucent,  rupture-prone  carotid  plaques: the  Copenhagen  city  heart  study.  European  Heart  Journal. 24(6):567-576.
Miller ME, Baker L. 1972. Leukocyte functions in juvenile diabe- tes mellitus: humoral and cellular aspects. The Journal of Pe- diatrics. 81(5):979-982.
Murata  H,  Shimada  N,  Yoshioka  M.  2004.  Current  research  on acute  phase  proteins  in  veterinary  diagnosis:  an  overview. The Veterinary Journal. 168(1):28-40.
Napoli MD, Singh P. 2009. Is plasma fibrinogen useful in evaluat- ing  ischemic  stroke  patients?  why,  how,  and  when.  Stroke: 40: 1549-1552.
Rothwell PM, Howard SC, Power DA, Gutnikov SA, Algra A, van Gijn J, Clark TG, Murphy MFG, Warlow CP.. 2004. Fibrino- gen concentration and risk of ischemic stroke and acute coro- nary  events  in  5113  patients  with  transient  ischemic  attack and  minor  ischemic  stroke.  Stroke.  35:  2300-  2305. DOI:10.1161/01.STR.0000141701.36371.d1
Tóthová C, Nagy  O, Kováč G. 2013. The use of acute phase pro- teins as biomarkers of diseases in cattle and swine. In: Acute Phase Proteins. Intech. http://dx.doi.org/10.5772/55857.