DNA Barcoding Pada Tumbuhan  Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F
Nazlil Khaira MS (1), Efrida Pima Sari Tambunan (2), Zahratul Idami (3)
Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Sumatera Utara Jl. Lap. Golf, Desa Durian Jagak, Kec. Pancur Batu, Kab. Deli Serdang,
Sumatera Utara 20353, Indonesia
Nazlykhayraa13@gmail.com (1) efrida_pima@uinsu.ac.id (2) zahratulidami@uinsu.ac.id (3)

## ABSTRAK
DNA barcoding merupakan satu atau lebih sekuen gen pendek yang diambil dari bagian genom standart dan digunakan  untuk  mengidentifikasi  spesies.  Tumbuhan  harimonting  merupakan  tumbuhan  liar,  tetapi  di beberapa  tempat  tumbuhan  ini  dijadikan  sebagai  tanaman  hias.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui karakteristik  molekuler  gen trnL-F pada  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa ,  keragaman  genetic,  dan hubungan  filogenetik Rhodomyrtus  tomentosa dengan  menggunakan  gen trnL-F .  Metode  penelitian  ini dilakukan  dengan  tahapan:  pengoleksian  sampel,  isolasi  DNA,  PCR (Polymerase  Chain  Reaction), elektroforesis,  sekuensing  dan  analisis  hasil  sekuens.  Karakterisasi  molekuler  tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa yang dikoleksi dari Bukit Tara Bunga dilihat dari hasil DNA barcoding dan pengamatan karakter morfologi yang terlihat dan studi literatur. Hasil barcode DNA tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa dari hasil analisis  molekuler Rhodomyrtus  tomentosa didapat  hasil  sekuens  sepanjang  359  bp.  Sekuens  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa dianalisis  menggunakan  aplikasi  MEGA  11  .  Dilakukan  perhitungan  jarak  genetic ( pairwise  distance ),  perhitungan GC  content, dan  keragaman  nukleotida.  Perhitungan GC  content menunjukan nilai GC content pada tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa lebih rendah dibandingkan dengan AT content yang mengindikasi spesies Rhodomyrtus tomentosa sifatnya lebih primitif. Hasil rekonstruksi pohon filogenetik, seluruh spesies terbagi menjadi 2 klad.
Kata Kunci : DNA Barcoding, Rhodomyrtus tomentosa , gen trnL-F .

## ABSTRACT
DNA Barcoding is one or more short gene sequences taken from a standard part of the genome and used to identify  species.  Harimonting  plant  is  a  wild  plant,  but  in  some  places  this  plant  is  used  as  an  ornamental plant.  This  study  aims  to  determine  the  molecular  characteristics  of  the trnL-F gene  in Rhodomyrtus tomentosa ,  to  determine  the  genetic  diversity  of Rhodomyrtus  tomentosa using  the trnL-F gene,  and  to examine  the  phylogenetic  relationships  of Rhodomyrtus  tomentosa using  the trnL-F gene.  This  research method  was  carried  out  in  stages:  sample  collection,  DNA  isolation,  PCR  ( Polymerase  Chain  Reaction), electrophoresis, sequencing and analysis of sequence results. Morphological characterization of Rhodomyrtus tomentosa plants  collected  from  Tara  Bunga  Hill  was  seen  from  the  results  of  DNA  barcodes  and observations  of  visible  morphological  characters  and  literature  studies.  The  results  of  the Rhodomyrtus tomentosa DNA  barcode  from  the  results  of  molecular  analysis  of Rhodomyrtus  tomentosa obtained  the results  of  a  sequence  of  359  bp.  The  plant  sequences  of Rhodomyrtus  tomentosa were  analyzed  using  the MEGA  11  application.  Genetic  distance  calculation  (pairwise  distance), GC  content calculation,  and nucleotide  diversity  were  performed.  Calculation  of GC  content showed  that  the  value  of GC  content in Rhodomyrtus  tomentosa  was  lower  than AT  content which  indicated  that Rhodomyrtus  tomentosa species were more primitive. Based on the phylogenetic tree reconstruction, all species are divided into 2 clades.
Keywords: DNA Barcoding, Rhodomyrtus tomentosa , trnL-F gene
Khaira  N,  Pima  Sari  E,  Idami  Z  :  DNA  Barcoding  Pada  Tumbuhan    Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F

## I. PENDAHULUAN
1. Latar Belakang
Rhomyrtus tomentosa merupakan tumbuhan yang terdapat di berbagai negara antara lain di Borneo, Cambodia, China, Myanmar, Philippines, Sri Lanka, Thailand, Vietnam, USA dan Indonesia. Di  Indonesia Rhodomyrtus tomentosa banyak dijumpai di  wilayah  Batak Toba (Harianja,  2016). Rhodomyrtus  tomentosa tumbuh  pada  berbagai  habitat  dan  jenis  tanah. Di  beberapa  tempat  tanaman  ini  digunakan  sebagai  tanaman  hias  karena  memiliki  warna bunga  yang  menarik.  Tetapi  di  tempat  lain,  tanaman  ini  dianggap  gulma  (tanaman pengganggu) karena pertumbuhannya sangat cepat sehingga mengalahkan vegetasi aslinya (Yuliana et  al., 2021).  Yenihayati  (2018)  menyatakan  bahwa  tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa dapat  menyembuhkan  penyakit  seperti  diare,  disentri  basiler,  gangguan pencernaan (dispepsi), diabetes mellitus,hepatitis, leukorea, dan pendarahan. Baru-baru ini Rhodomyrtus  tomentosa diidentifikasi  sebagai  salah  satu  dari  240  spesies  tanaman  yang terabaikan, kurang dimanfaatkan dan terancam punah. Langkah awal yang dapat dilakukan untuk  pelestarian Rhodomyrtus  tomentosa adalah  eksplorasi,  karakterisasi  berdasarkan morfologi,  dan  molekuler,  serta  pengelompokan  sesuai  karakter  (Hamid et  al., 2017). Identifikasi  molekuler  merupakan  suatu  langkah  yang  dilakukan  dalam  upaya  pemuliaan tanaman, biologi konservasi, dan aspek ilmu tumbuhan lainnya (Hanifa et al ., 2021). DNA barcoding merupakan  teknik  dengan  menggunakan  satu  atau  beberapa  buah  region  DNA dengan sekuens pendek untuk mengidentifikasi suatu spesies (Hebert et al., 2003). Teknik DNA barcoding digunakan untuk memperoleh DNA murni dengan cara memisahkan DNA dari  partikel-partikel  lainnya  seperti  lipid,  protein,  polisakarida,  dan  zat  lainnya  secara mekanik  maupun  secara  kimiawi.  Teknologi  DNA barcoding juga  telah  dikembangkan untuk identifikasi dan analisis keragaman genetik spesies hewan maupun tumbuhan secara molekuler.  Teknik  DNA barcoding juga  dapat  digunakan  dalam  bidang  taksonomi  dan filogenetik  tumbuhan  untuk  hasil  identifikasi  tumbuhan  yang  lebih  akurat  (Kress  & Erickson,  2007).    Prinsip  dasar  dari  DNA barcoding yaitu  identifikasi  menggunakan barcode yang  akan  dibandingkan  dengan  urutan barcode yang  tidak  diketahui  dengan pustaka  sekuen barcode yang  telah  diketahui  identitasnya.  Jika  hasil  dari  perbandingan sekuen  yang  diteliti  sesuai  pada  pustaka,  maka  spesimen  tersebut  diidentifikasi  sebagai spesimen dari pustaka. Apabila hasil tidak sesuai, maka dapat mengarah pada sekuen baru untuk  spesies  baru  (Ramadany,  2020).  Pendataan  keragaman  jenis  tumbuhan  harus  terus dilakukan  untuk  mengimbangi  hilangnya  keragaman. Barcode DNA  dapat  digunakan untuk  mengidentifikasi  semua  tingkatan  kehidupan  bahkan  potongan  tubuh  yang  tidak utuh.  DNA barcoding pada  tumbuhan  dimulai  dengan  proses  ektraksi  dan  amplifikasi DNA dari gen-gen genom kloroplas maupun genom inti dengan menggunakan satu region atau  juga  gabungan  dari  beberapa  region barcode .  Region  yang  sangat  sering  digunakan pada  tumbuhan  dan  memiliki  prospek  untuk barcoding adalah trnL-F (de  Groot et  al., 2011) trnH-psbA (Zhang et al., 2014) rbcL, matK (Techen et al., 2014) dan ITS (S. Chen et al.,  2010).  Yao  (2010)  telah  meneliti  keragaman  genetik R.  tomentosa di  Hongkong menggunakan  petanda  ISSR.  Dalam  penelitian  ini  diinvestigasi  300  individu  tumbuhan harimonting dari 10 populasi harimonting yang tumbuh alami di Hongkong menggunakan primer  11  ISSR.  Dari  analisis  ini  terungkap  bahwa  terdapat  variasi  genetik  level  tinggi pada  tingkat  spesies.  Koefisien  keragaman  genetik  antar  populasi  relatif  tinggi  dan  aliran genetik  relatif  rendah  dibandingkan  dengan  spesies  luar  yang  lain.  Penelitian  tentang karakteristik molekuler dengan teknik DNA barcoding tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa masih  sangat  sedikit  di  Indonesia.  Gen trnL-F merupakan  gen  kloroplas  yang  informatif dan  mampu  menunjukan  hubungan  antar  jenis.  Gen trnL-F ini  sangat  cocok  digunakan dalam  identifikasi  hingga  tingkatan  jenis,  uniparental  maupun  mendeteksi  hingga  tingkat hibrida  (Hoggard et  al., 2004).  Region  ini  terletak  pada large  single-copy  region dari
Khaira  N,  Pima  Sari  E,  Idami  Z  :  DNA  Barcoding  Pada  Tumbuhan    Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F
genome chloroplast. Region ini terdiri dari gen trnL , grup intron dan trnL-trnF intergenic spacer (Hao et al., 2009). Gen trnL-F merupakan sekuen yang terletak pada trnL (UAA) 5’ exon sampai trnF (GAA) yang kemudian disebut dengan trnL-F (Adjie et al., 2008). Gen trnL-F menjadi spacer gene yang memiliki primer tertinggi bila dibandingkan dengan rbcL dan matK. Menurut  Chen et  al (2013) ,  trnL-F merupakan  sebuah  alat  yang  efisien  untuk mengidentifikasi  gametofit  dan  potensial  untuk  menggali  gametofit  kelompok  tumbuhan paku. TrnL-F memiliki tingkatan substitusi yang lebih tinggi dari rbcL dan matK .
2. Perumusan Masalah
1. Bagaimana  karakteristik  molekuler  gen trnL-F pada  tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa ?
2. Bagaimana keragaman genetik tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa menggunakan DNA barcoding berdasarkan gen trnL-F ?
3. Bagaimana hubungan filogenetik Rhodomyrtus tomentosa menggunakan gen trnL-F ?
3. Tujuan Penelitian
1. Untuk mendapatkan karakteristik molekuler gen trnL-F pada tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa .
2. Untuk  mengetahui  keragaman genetik  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa menggunakan gen trnL-F .
3. Untuk  melihat  hubungan  filogenetik Rhodomyrtus  tomentosa dengan  menggunakan gen trnL-F .

## 4. Manfaat Penelitian
Manfaat  dari  penelitian  ini  sebagai  informasi  mengenai  data  molekuler  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa dalam  DNA barcoding menggunakan  gen trnL-F dan  dapat dijadikan  sebagai  sumber  informasi  tambahan,  bahan  rujukan  dan  data  ilmiah  bagi mahasiswa, dosen, peneliti maupun masyarakat umum mengenai data molekuler tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa.

## II. METODE Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Desember  sampai  dengan  bulan  Februari  2023. Sampel  dikoleksi  dari  Bukit  Tara  Bunga,  Kecamatan  Tampahan,  Kabupaten  Toba, Sumatera  Utara  dan  Desa  Marom,  Kecamatan  Uluan,  Sumatera  Utara.  Proses  pengerjaan DNA Barcoding dilaksanakan  di  Laboratorium  Genetika  Lt.  4,  Fakultas  Sains  dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Sumatera Utara.

## Bahan dan Peralatan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain plastik klip kedap udara (plastic zip- lock ),  pena  permanen, aluminium  foil, gunting,  tissue,  kamera  digital, gloves ,  spatula, mortal dan alu, timbangan digital, kertas parafilm, ice box, tube Eppendorf 1,5 ml dan 2ml, labu ukur 100, 250 dan 500 ml, mikro pipet (Rainin) dengan volume 10 μl, 20 μl, 100 μl, dan 1000 μl, tip mikro pipet kuning, biru, dan putih, rak tip, vortex (Biosan Multi-Vortex V-32), water bath,  hot  plate, centrifuge (Eppendorf) , microcentrifunge tube, spin  column, collection tube, PCR (Polymerase Chain Reaction) gradient : MC nexus, tabung PCR, labu erlenmeyer  500  ml  (Pyrex),  gelas  ukur  100ml,  mini  horizontal electrophoresis HU10 (BIO-RAD),  alat Gel  Documentation (BIOSTEP),  PTC  ( Programmer  Thermal  Cycler ), dan freezer .  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  DNA barcoding pada  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa ,  diantaranya  adalah  sampel  daun  tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa yang diambil dari Bukit Tara Bunga, Sumatera Utara , alkohol 70%, DNA Mini
Khaira  N,  Pima  Sari  E,  Idami  Z  :  DNA  Barcoding  Pada  Tumbuhan    Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F
Kit Plant (Geneaid), primer trnF forward (5’- ATT TGA ACT ACT GGT GAC ACG AG- 3’) dan primer trnL  reverse (5’-GGT TCA AGT CCC TCT ATC CC-3’), akuades steril, loading  dye  (Thermos-scientific) ,  RNase (Thermo-scientific), TBE (tris  HCl, asam  borat, dan EDTA )  10x  (1st  Base), DNA  Ladder 100  bp  (Geneaid), primer  reverse dan forward (Tabel  1.) ,  DNA  loading  dye , Gel  Agarose (Infitrogen), red  gel  stain (Infitrogen), Taq Polymerase , KIT PCR ( Myfi mix Bioline) dan ddH2O ( deionized water ) atau akuabides.

## Analisis Data
Hasil sekuensing berupa kromatogram diedit menggunakan aplikasi Geneious Prime versi trial untuk  melihat  kualitas  basa  dan  aplikasi  Bioedit  versi  7.2.5  untuk  memperoleh sekuens  konsensus  berdasarkan  sekuens  konservatif  yang  dihasilkan  dari  sekuensing primer trnL-F dan trnF-rev .  Sekuens  konsensus  yang  telah  diperoleh  kemudian di alignment menggunakan Basic  Local  Alignment  Search  Tool (BLAST)  dari National Center  for  Biotechnology  Information (https://www.ncbi.nlm.nih.gov).  Data  dengan similaritas  yang  tinggi  dengan  sampel  diikutkan  dalam  analisis  pohon  filogenetik.  Pohon filogenetik  dibangun  dengan  menggunakan  program Molecular  Evolutionary  Genetik Analysis (MEGA)  11.  Analisis  dilakukan  untuk  menghitung  persentase  similaritas, GC Content dan  jarak  genetik.  Keragaman  genetik  antar  sampel Rhodomyrtus  tomentosa diidentifikasi dengan aplikasi MEGA 11

## III. HASIL PENELITIAN
Karakteristik Molekuler Gen trnL-F pada Tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa Karakteristik  Molekuler Rhodomyrtus  tomentosa berhasil  dilakukan  dengan  gen trnL-F . Hasil didapatkan setelah melalui beberapa tahapan dan dijelaskan sebagai berikut: Sampel  N1  tumbuhan  Harimonting Rhodomyrtus  tomentosa memperlihatkan  hasil  urutan nukleotida  yang  memiliki  tingkatan  similaritas  100%  sehingga  dapat  digunakan  sebagai barcode DNA.

## DNA Rhodomyrtus tomentosa sampel N1
Gambar  1. Ilustrasi nukleotida DNA dengan warna berbeda (A:hijau, T:merah, G: hitam dan C:biru) serta angka yang menunjukan panjang dari sekuen DNA yang dapat digunakan sebagai informasi sekuens DNA Rhodomyrtus tomentosa yang jelas.
Tabel 1. Urutan nukleotida DNA Rhodomyrtus tomentosa
Sampel Urutan Sekuens DNA Rhodomyrtus tomentosa Sampel N1 ACACATCATTCTCATTTTACTAGATGACTTGGTTCTAT GTCAATTAAAAAGACGAAAGGGGTAGAAAAAGTCTT ATCCAGCCCTAGAATTTTTTGTATTTTCAAAAAAAAA AGATATAGGATAGATCGTTAATTTAAGGAGTCAAATG
GTCCTTTTTTGGGGATAGAGGGACTTGAACCACTCCT TAATTAACGATCTATCCTATATCTTTTTTTTTTGAAAA
TACAAAAAATTCTAGGGCTGGATAAGACTTTTTCTAC CCCTTTCGTCTTTTTAATTGACATAGAACCAAGTCATC TAGTAAAATGAGAATGTAAGGAATAGGATAGCTCAG
Khaira  N,  Pima  Sari  E,  Idami  Z  :  DNA  Barcoding  Pada  Tumbuhan    Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F

## CTGGTAGAGCAGAGGACTGAAAATCC
Penelitian barcode DNA  dari  tumbuhan  Harimonting (Rhodomyrtus  tomentosa) menggunakan  gen trnL-F didapatkan dari hasil sekuensing  (Tabel  1). Pada penelitian ini, gen trnL-F telah  berhasil  digunakan  dalam  pembuatan Barcode DNA  untuk  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa. Gen trnL-F mudah  digunakan  untuk  proses  amplifikasi  dan sekuensing,  panjang  urutan  nukleotida  pada  fragmen  DNA  amplikon  Fragmen  amplikon DNA  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa sampel  N1  yaitu  359  bp..  Wang et  al., (2017) berpendapat bahwa untuk melakukan amplifikasi, sekuensing dan pensejajaran ( alignment ) dan  tanpaharus  melakukan  pengeditan  manual, barcode DNA  perlu  memiliki  urutan nukleotida yang pendek (<1000bp).
Keragaman genetik tumbuhan Rhodomyrtus tomentosa menggunakan DNA barcoding dengan gen trn L-F Analisis Variasi dan Presentase AT GC Content
Hasil  dari  analisis  komposisi  nukleotida  yang  berasal  dari  seluruh  sampel  pada  penelitian menunjukan  bahwa Rhodomyrtus  tomentosa sampel  N1 memiliki  persentase AT  content (66,10%)  dan GC  content (33,89%).  Tingginya  presentase AT  content disebabkan  oleh sebagian besar komposisi nukleutida pada kloroplas tersusun atas basa nukleotida Adenin (A) dan Tymine (T).
Tabel 2. Analisis Variasi dan Presentase AT GC Content
No Spesies Basa Nukleotida (%) A+T (%) G+C (%) T C A G 1. Rhodomyrtus tomentosa (N1) Indonesia 31,63 16,38 34,46 17,51 66,10 33,89 2. Rhodomyrtus tomentosa USA 27,11 16,38 40,11 16,38 67,23 32,76 2. Rhodomyrtus tomentosa UK 34,46 11,86 41,80 11,86 76,27 23,72 2. Rhodomyrtus tomentosa UK 2 27,11 16,38 40,11 16,38 67,23 32,76 Avg 30,39 15,59 38,30 15,70 68,70 31,29
Semakin tinggi kandungan pasangan basa A dan T maka semakin tinggi titik lebur DNA, hal ini  disebabkan  karena  pasangan  A  dan  T  lebih  stabil  dan  memerlukan  lebih  banyak  energi panas untuk menguraikannya dibandingkan dengan pasangan G dan C. Presentase AT content yang  tinggi  dibandingkan  dengan GC  content dipengaruhi  oleh  lokasi  gen trnl-F yang teramplifikasi  memiliki  banyak  subtitusi  nukleotida.  Rendahnya  persentase CG  content menunjukkan  bahwa  spesies  tersebut  lebih  primitif,  dilihat  dari  hasil  perhitungan  rata-rata yaitu AT content (68,70%) dan GC content (31,29%) (Hapsari et al , 2015).

## Koefisien Similaritas Sampel
Jarak genetik antar  populasi  yang lebih besar dari (>) 3,0% menunjukkan bahwa spesies yang  dibandingkan  merupakan  spesies  yang  sangat  berbeda  dan  tidak  termasuk  dalam populasi  takson  yang  diamati  (Hebert, et  al .,  2003).  Jarak  genetik  antara  populasi  yang
Khaira  N,  Pima  Sari  E,  Idami  Z  :  DNA  Barcoding  Pada  Tumbuhan    Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F
sama  biasanya  kurang  dari    (<)  1,0%  atau  kurang  dari  (<)  2,0%  (Xiong,  2006). Pairwise distance dapat dihitung menggunakan model yang berbeda.
Tabel 3. Koefisien Similaritas Sampel ( Pairwise Distance ) Spesies 1 2 3 4 5 6 R. tomentosa (N2) 2725,649 R. tomentosa (USA) 0065,359 0000,000 R. tomentosa (UK) 0065,359 0000,000 0,042 R. tomentosa (UK) 7225,000 3587,000 9668,560 5454,000 0000,000

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan didapat kesimpulan sebagai berikut:
1.  Karakteristik  molekuler  dari  sampel Rhodomyrtus  tomentosa menggunakan  gen trnL-F yaitu  didapatkan  panjang  nukleotida  pada  fragmen  DNAamplikon  yang  terlihat  pada sampel N1: 359bp.
2.  Sekuens  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa yang  dianalisis  menggunakan  aplikasi MEGA  11.  Dilakukan  perhitungan  jarak  genetik  ( pairwise  distance ),  perhitungan GC content, dan keragaman nukleotida. Pada perhitungan GC content menunjukan nilai GC content pada  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa lebih  rendah  yaitu  :  33,89% dibandingkan  dengan AT  content 66.10%  yang  mengindikasi  spesies Rhodomyrtus tomentosa sifatnya  lebih  primitif.  Kemudian  didapatkan  nilai  jarak  genetik  ( pairwaise distance) yaitu  lebih  dari  (>)  3,0%,  menunjukan  bahwa  spesies  yang  dibandingkan merupakan spesies yang sangat berbeda.
3.  Berdasarkan  hasil  rekonstruksi  pohon  filogenetik  menunjukan  bahwa  hubungan filogenetik  tumbuhan Rhodomyrtus  tomentosa yang  dikoleksi  dari  Bukit  Tara  Bunga menggunakan  gen trnL-F didapatkan  spesies  membentuk  klad  tersendiri,  klad  tersebut masuk kedalam kelompok monofiletik yang merupakan kelompok yang semua taksanya diturunkan  dari  satu  nenek  moyang  ( common  ancestor )  yang  sama,  tidak  pada  garis keturunan atau taksa yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Adjie,  B.,  Takamiya,  M.,  Ohta,  M.,  Oshawa,  T.  A.,  &  Watano,  Y.  (2008). Molecular Phylogeny  of  the  Lady  Fern  Genus  Athyrium  in  Japan  Based  on  Chloroplast  rbcL and trnl-trnF Sequences .
Chen, C. W., Huang, Y. M., Kuo, L. Y., Nguyen, Q. D., Luu, H. T., Callado, J. R., Farrar, D. R., & Chiou, W. L. (2013). TrnL-F is a powerful marker for DNA identification of  field  vittarioid  gametophytes  ( Pteridaceae ). Journal  Annals  of  Botany , 111 (4), 663–673.
Chen, S., Yao, H., Han, J., Liu, C., Song, J., Shi, L., Zhu, Y., Ma, X., Gao, T., Pang, X., Luo, K.,  Li,  Y.,  Li,  X.,  Jia, X.,  Lin,  Y.,  &  Leon, C. (2010). Validation of the  ITS2 region  as  a  novel  DNA  barcode  for  identifying  medicinal  plant  species. Journal PLoS ONE , 5 (1).
de Groot, G. A., During, H. J., Maas, J. W., Schneider, H., Vogel, J. C., & Erkens, R. H. J.
(2011).  Use  of  rbcL  and  trnL-F  as  a  two-locus  DNA  barcode  for  identification  of NW-European ferns: An ecological perspective. Jou.rnal PLoS ONE , 6 (1).
Hamid,  H.  A.,  Roziasyahira  Mutazah,  S.  S.  Z.,  &  Yusoff,  M.  M.  (2017).  Rhodomyrtus tomentosa:  A  phytochemical  and  pharmacological  review. Asian  Journal  of
Khaira  N,  Pima  Sari  E,  Idami  Z  :  DNA  Barcoding  Pada  Tumbuhan    Harimonting ( Rhodomyrtus tomentosa ) Menggunakan Gen trnL-F
Pharmaceutical and Clinical Research 10 (1): 10–16. Innovare Academics Sciences Pvt. Ltd..
Hanifa,  R,  Y,.  Sri  P,.  Rejeki,  S,  F,.  &  Hermin,  P.  (2021).  Identifikasi  Molekuler  Jeruk Nipis Tegal Berdasarkan Fragmen Gen 18s Ribosomal RNA. Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia, 8(2): 244-254.
Hao, D. C., Huang, B. L., Chen, S. L., & Mu, J. (2009). Evolution of the Chloroplast trnL- trnF region in the gymnosperm lineages taxaceae and cephalotaxaceae . Biochemical Genetics , 47(5–6): 351–369. Hapsari, L. (2015). Keragaman dan Kekerabatan Genetik Pisang (Musa L.) di Jawa Timur berdasarkan  Sekuen  Daerah  Internal  Transcribed  Spacer .  UniversitasBrawijaya. Malang.
Hebert,  P.  D.  N.,  Cywinska,  A.,  Ball,  S.  L.,  &  DeWaard,  J.  R.  (2003).  Biological identifications  through  DNA  barcodes. Proceedings  of  the  Royal  Society  B: Biological Sciences , 270 (1512): 313–321.
Hoggard, G. D., Kores,  P. J., Molvray, M., & Hoggard, R. K. (2004). The Phylogeny  Of Gaura  ( Onagraceae) Based  On  ITS,  ETS,  And  TRNL-F  Sequence  Data  1. In American Journal of Botany , 91 (1): 139-148.
Kress,  W.  J.,  &  Erickson,  D.  L.  (2007).  A  Two-Locus  Global  DNA  Barcode  for  Land Plants:  The  Coding  rbcL  Gene  Complements  the  Non-Coding  trnH-psbA  Spacer Region. Journal PLoS ONE , 2 (6): 1-10 Ramadany,  Z.  (2020).  Desain  Primer Internal  Transcribed  Spacer  (ITS) Sebagai  Dasar Identifikasi Molekuler Anggrek Obat Dendrobium discolor Lindl . Skripsi. Techen, N., Parveen, I., Pan, Z., & Khan, I. A. (2014). DNA barcoding of medicinal plant material  for  identification.  In Current  Opinion  in  Biotechnology ,  25  (1):  103–110. Elsevier Ltd.
Wang,  D.-Y.,  Wang,  Q.,  Wang,  Y.-L.,  Xiang,  X.-G.,  Huang,  L.-Q.,  &  Jin,  X.-H.  (2017). Evaluation  of  DNA  barcodes  in  Codonopsis (Campanulaceae) and  in  some  large angiosperm plant genera. Journal PLos One: 1-14. Yenihayati.  (2018).Identification  of  secondary  metabolites. Jurnal  Pendidikan  Teknologi Dan Kejuruan BALANGA , 6(1): 1-12.
Yuliana,  I.,  Asnawati,  &  Maria  Ulfa.  (2021).  Potensi  Daun  Karamunting  Sebagai Fitofarmaka  Penyakit  Diabetes  Mellitus.  Lambung  Mangkurat  University  Press. Banjarmasin.
Zhang,  D.,  Duan,  L.,  &  Zhou,  N.  (2014).  Application  of  DNA  barcoding  in Roscoea (Zingiberaceae) and  a  primary  discussion  on  taxonomic  status  of  Roscoea cautleoides  var.  pubescens. Journal  Biochemical  Systematics  and  Ecology ,  52:  14– 19.
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 05 Desember 2023 28 Desember 2023 15 Januari 2024 Ya