Jurnal Riset Kesehatan
http://ejournal.poltekkes-smg.ac.id/ojs/index.php/jrk _________________________________________________________________

## INTERVENSI BUBUK KAKAO TERHADAP PERUBAHAN KADAR GULA DARAH PUASA TIKUS SPRANGUE DAWLEY DIABETES MELITUS
Arisanty Nur Setia Restuti *)1) ; Adhiningsih Yulianti 1) ; Novita Nuraini 2)
1) Program Studi Gizi Klik; Jurusan Kesehatan; Politeknik Negeri Jember Jl. Mastrip; Sumbersari; Jember; Jawa Timur; Indonesia; PO BOX 164
2) Program Studi Rekam Medik; Jurusan Kesehatan; Politeknik Negeri Jember Jl. Mastrip; Sumbersari; Jember; Jawa Timur; Indonesia; PO BOX 164

## Abstrak
Bubuk  kakao  mempunyai  kemampuan  paling  tinggi  dalam  menghentikan  kerusakan  organ  tubuh akibat  radikal  bebas.  Kandungan  antioksidan  yang  ada  didalam  bubuk  kakao  diduga  dapat menghentikan  kerusakan  sel  beta  pankreas  karena  radikal  bebas  sehingga  dapat  meningkatkan sekresi  insulin  pada  DM.  Tujuan  penelitian  untuk  menguji  efek  bubuk  kakao  Indonesia  terhadap perubahan kadar gula darah puasa tikus Sprangue dawley diabetes melitus. Desain penelitian pre-post test  control  group  design. Populasi  penelitian  yaitu  tikus  putih  jantan  galur Sprague  -  Dawley .  Ada  3 kelompok perlakuan dalam penelitian ini. Kelompok kontrol negatif diberi pakan standar (Rat Bio), sedangkan kelompok kontrol positif dan perlakuan diberi pakan High Fat Diet selama 6 minggu. Pada akhir minggu ke 6 kelompok kontrol positif dan perlakuan diinduksi streptozotocin (STZ) low dose 30 mg/Kg  BB  ip.  Tiga  hari  post  STZ  tikus  dicek  kadar  gula  darah  puasa  menggunakan  metode GOD-PAP.  Kelompok  perlakuan  disonde  larutan  bubuk  kakao  0,4gr/ekor/hari  selama  2  minggu, kemudian di cek kadar gula darah puasa. Hasil uji one way ANOVA kadar gula darah puasa pretest p 0,036,  sedangkan  postest p 0,007  yang  berarti  terdapat  perbedaan  signifikan  antar  ke  3  kelompok perlakuan.  Dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  bubuk  kakao  0,4  gram/ekor/hari  dapat menurunkan kadar gula darah puasa tikus Sprangue Dawley diabetes melitus.
Kata kunci: bubuk kakao; diabetes melitus; kadar gula darah puasa

## Abstract
[INTERVENTION OF COCOA POWDER ON CHANGES IN FAST FLOOD SUGAR CONTENTS SPRAGUE  DAWLEY  RATS  DIABETES  MELLITUS] Cocoa  powder  has  the  highest ability  to  stop organ  damage  due  to  free  radicals.  The  content  of  antioxidants  in  cocoa  powder  is  thought  to  stop pancreatic  beta  cell damage  due to  free  radicals  so  that it  can increase insulin  secretion in  DM.  The objective of research is to examine the effect of Indonesian cocoa powder on changes in fasting blood sugar  levels  of  Sprangue  dawley  rats  with  diabetes  mellitus.  Research  design  pre-post  test  control group  design.  The  study  population  was  Sprague-Dawley  male  white  rats.  There  were  3  treatment groups in this study. The negative control group was given standard feed (Rat Bio), while the positive control  group and  treatment were given  High  Fat  Diet  for  6 weeks.  At  the  end  of  the  6th  week  the positive control group and 30 mg / Kg BB ip streptozotocin (STZ) low dose treatment were induced. Three  days  after  the  STZ  post,  rats  were  tested  for  fasting  blood  sugar  levels  using  the  GOD-PAP method. The treatment group disonde 0.4g / head / day cocoa powder solution for 2 weeks, then check fasting blood sugar levels. The results of the one way ANOVA test for pretest fasting blood sugar level p  0.036,  while  posttest  p  0.007  means  that  there  are  significant  differences  between  the  3  treatment groups. It can be concluded that administration of cocoa powder 0.4 grams / head / day can reduce fasting blood sugar levels in Sprangue Dawley rats with diabetes mellitus
Keywords: cocoa powder; diabetes mellitus; fasting blood sugar levels
*) Correspondence author (Arisanty Nur Setia Restuti) E-mail: arisanty@polije.ac.id

## 1. Pendahuluan
Senyawa  polifenol  yang  terkandung  dalam bubuk  kakao  merupakan  antioksidan  yang sangat  penting  dalam  menyehatkan  tubuh manusia (Crozier et al., 2011). Senyawa polifenol tersebut  mempunyai  peran  sebagai  antioksidan, anti  kanker,  anti  diabetes,  anti  hipertensi,  anti inflamansi,  menghilangkan  stres,  mencegah karies  gigi,  memperbaiki  kemampuan  kognitif, meningkatkan  resistensi  terhadap  hemolisis, menyehatkan  jantung  (Latif,  2013).  Biji  kakao mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  teh  hijau,  anggur merah  maupun  blueberry.  Antioksidan  yang dimiliki biji kakao sangat aktif dalam melindungi sel tubuh dari serangan radikal bebas dan mudah diserap  tubuh.  Nilai  ORAC  ( Oxygen  Radical Absorbance  Capacity )  bubuk  kakao  paling  tinggi (80,933)  dibandingkan  berbagai  jenis  makanan dan  minuman  yang  lain,  sehingga  bubuk  kakao mempunyai  kemampuan  paling  tinggi  dalam menangkal atau menghentikan kerusakan organ tubuh  akibat  radikal  bebas.  Kandungan antioksidan  yang  ada  didalam  bubuk  kakao diduga  dapat  menghentikan  kerusakan  sel  beta pankreas  karena  radikal  bebas  sehingga  dapat meningkatkan  sekresi  insulin  pada  DM.  Kadar indeks  glikemik  yang  rendah  dan  kadar  serat yang  tinggi  pada  bubuk  kakao  mampu menstabilkan kadar glukosa dalam darah karena memperlambat laju pelepasan glukosa ke dalam aliran  darah.  Penelitian    Ruzaidi  (2008)  tentang efek  hipoglikemik  dari  ekstrak  polifenol  kakao malaysia  pada  tikus  DM  menunjukkan penurunan kadar glukosa darah dan peningkatan  aktivitas  insulin  tikus.  Penelitian pada  tikus  yang  diinduksi  aloksan  monohidrat kemudian di beri perlakuan dengan bubuk kakao 1 – 4  %  menunjukkan  bahwa  bubuk  kakao  4% (0,8gr/ekor/hari)  dapat  menormalkan  kadar glukosa darah puasa dibandingkan dengan tikus DM  (Olasope  et  al,  2016). Penelitian  selanjutnya tentang  pengaruh  bubuk  kakao  terhadap parameter  hematologi  dan  efek  anti  diabetik menunjukkan  hasil  bahwa  pemberian  bubuk kakao  sebanyak  2%  (0,4gr/ekor/hari)  mampu meningkatkan  aktitivas  antidiabetik  pada glukosa darah (Olasope et al, 2017).
Penelitian  ini  mengkaji  efek  bubuk  kakao Indonesia yang terbukti mempunyai kandungan antioksidan  paling  tinggi  sebagai  salah  satu alternatif  dalam  mengatasi  DM.  Tujuan penelitian  ini  untuk  melihat  efek  antioksidan terhadap perubahan kadar gula darah puasa.
2. Metode
enis  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental dengan desain penelitian pre-post test  control  group  design.  Populasi  penelitian yaitu tikus putih jantan galur Sprague - Dawley (SD). Ada 3 kelompok perlakuan dalam peneitian ini yaitu kontrol negatif (normal), kontrol positif (diabetes  melitus)  dan  perlakuan  (bubuk  kakao 0,4gr/hari/ekor).  Besar  sampel  yang  digunakan untuk  penelitian  ini  dihitung  menggunakan rumus Arifin dan Zahirudin (2017) jumlah tikus yang  dibutuhkan  dalam  1  kelompok  perlakuan adalah 3 ekor, dengan demikian jumlah minimal tikus putih SD secara keseluruhan adalah 9 ekor. Kriteria  inklusi  dari  penelitian  ini  adalah  tikus putih bergerak aktif, jantan, berat badan 200 - 300 gram, usia 3 – 4 bulan, secara makroskopis tidak ada  kelainan  morfologi.  Sedangkan  kriteria eksklusinya  adalah  tikus  mati  saat  penelitian berlangsung.
Tikus  diberi  pakan  standar  (Rat  Bio)  yang mengandung    (60%  karbohidrat,  20%  protein, 4%  lemak,  4%  serat  kasar,  12%  kalsium,  0,7% fosfor)  selama  7  hari,  kemudian  kelompok kontrol positif dan perlakuan diberi pakan High Fat  Diet  (HFD)  dengan  komposisi  50%  Rat  Bio, 25%  Tepung  terigu,  2%  Kolesterol,  5%  minyak babi  (Heriansyah,  2013)  selama  6  minggu.  Pada akhir minggu ke 6 kelompok kontrol positif dan perlakuan  diinduksi  streptozotocin  (STZ)  low dose 30 mg/Kg BB intraperitoneal. Streptozotocin  dilarutkan  dalam  Phospat  Buffer Saline  0,1M  pH  4,5,  sebelumnya  tikus dipuasakan  semalam  dan  setelah  induksi  tikus diberi  minum  larutan  dekstrosa  10%  selama  1 malam.  Tiga  hari  (72  jam)  post  STZ  tikus diperiksa kadar gula darah puasa pretes dengan menggunakan  metode  GOD-PAP.  Setelah dinyatakan DM tikus diberi larutan bubuk kakao dengan dosis 0,4gr/ekor/hari selama 2 minggu, kemudian di cek kadar gula darah puasa postes.
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan  Aplikasi  pengolah  data.  Uji normalitas data menggunakan Saphiro Wilk test dan  jika  memenuhi  syarat  dilanjutkan  Uji one-way ANOVA.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian  intervensi  bubuk  kakao terhadap  kadar  glukosa  darah  puasa  tikus sprangue  dawley  diabetes  melitus  dilaksanakan selama  9  minggu  dimulai  bulan  Juni – Agustus 2018.  Hasil  penelitian  menunjukkan  rerata  gula darah antara ke 3 kelompok paling rendah pada kelompok  kontrol  negatif  yaitu  80,33  mg/dl sedangkan  rerata  tertinggi  pada  kelompok
kontrol  positif  yaitu  513,67  mg/dl.    Hal  ini menunjukkan  bahwa  kadar  gula  darah  puasa pada kelompok kontrol negatif menggambarkan bahwa  kelompok  tersebut  dalam  keadaan normal.  Sedangkan  pada  kelompok  kontrol positif  dan  perlakuan  kadar  gula  darah  puasa diatas  400  mg/dl  hal  ini  berarti  bahwa  induksi STZ low dose berhasil menyebabkan 2 kelompok tersebut dalam keadaan diabetes melitus.

## Gambar 1. Rerata Kadar Gula darah Puasa Pretes dan Postes antar kelompok perlakuan
Rerata  kadar  gula  darah  puasa  postes paling  rendah  terdapat  pada  kelompok  kontrol negatif yaitu 85,67mg/dl, sedangkan kadar gula darah  puasa  yang  paling  tinggi  terdapat  pada kelompok  kontrol  positif  yaitu  435,67  mg/dl. Pada  kelompok  kontrol  negatif  terdapat peningkatan  kadar  gula  darah  pada  dengan rerata 5,33 mg/dl. Pada kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan mengalami penurunan kadar gula darah puasa dengan rerata 78 mg/dl dan 34 mg/dl
Hasil uji normalitas shapiro wilk menunjukkan  kadar  gula  darah  puasa  pretes pada  ke  3  kelompok p >0,05  sehingga  dapat disimpulkan bahwa data kadar gula darah puasa pretes terdistribusi normal. Kemudian data gula darah  puasa  pretes  ini  dianalisa  lebih  lanjut menggunakan uji One Way ANOVA . Pada tabel 2 kita  dapat  melihat  bahwa  hasil  uji one  way ANOVA menunjukkan p =  0,036  atau p <  0,05 yang  berarti  terdapat  perbedaan  signifikan antara ke 3 kelompok perlakuan.
Tabel 1. Perbedaan Kadar Gula darah Puasa Pretes antar
kelompok perlakuan Perlakuan Mean±SD (mg/dl) p* Kontrol Negatif 80,33±4,7 0,036 Kontrol Positif 513,67±183,12 Perlakuan 421,67±208,5 *Uji One Way ANOVA signifikansi p<0,05 Sumber: Data Primer, 2018
Hasil uji normalitas shapiro wilk menunjukkan  kadar  gula  darah  puasa  postes pada  ke  3  kelompok p >0,05  sehingga  dapat disimpulkan bahwa data kadar gula darah puasa postes  terdistribusi  normal  sehingga  dapat  diuji dengan  uji  one  way  ANOVA.  Hasil  uji  statistik kadar  gula  darah  puasa  postes  menunjukkan nilai p = 0,007 atau p < 0,05 yang berarti terdapat perbedaan  signifikan  antar  ke  3  kelompok perlakuan.
Tabel 2. Perbedaan Kadar Gula darah Puasa Postes antar
kelompok perlakuan Perlakuan Mean±SD (mg/dl) p* Kontrol Negatif 85,67±8,5 0,007 Kontrol Positif 435,67±68,16 Perlakuan 387±143,8 *Uji One Way ANOVA signifikansi p<0,05 Sumber: Data Primer, 2018
Pada  penelitian  ini  didapatkan  pebedaan yang  signifikan  kadar  gula  darah  puasa  pretes antar  ke  3  kelompok  perlakuan.  Hal  ini menggambarkan  bahwa  metode  induksi  STZ single  low  dose dapat  meningkatkan  kadar  gula darah  puasa  antara  kelompok  kontrol  negatif dan  kelompok  kontrol  positif.    Rerata  kadar gula  darah  puasa  pretes  kelompok  kontrol negatif masih dalam batas normal (50-135 mg/dl) (Kusumawati,  2016),  sedangkan  pada  kelompok kontrol  positif  dan  perlakuan  kadar  glukosa darah  puasa  pretes  meningkat  lebih  dari  135 mg/dl. Kadar STZ dosis rendah    30 – 35 mg/dl sering  digunakan  untuk  membuat  tikus  model diabetes melitus tipe 2 (Takeda, 2017).
Pemeriksaan  kadar  gula  darahpuasa postes setelah intervensi bubuk kakao menunjukkan  hasil  terdapat  perbedaan  yang signifikan  antara  kedua  kelompok  perlakuan. Pada kelompok kontrol negatif terjadi peningkatan  rerata  kadar  gula  darah  puasa tetapi masih dalam batas normal yaitu 85,67±8,5 mg/dl,  sedangkan  pada  kelompok  kontrol positif dan perlakuan terdapat penurunan kadar glukosa darah puasa. Intervensi bubuk kakao 0,4 gr/ekor/hari  dapat  menurunkan  rerata  kadar glukosa  darah  puasa  meskipun  tidak  sampai dalam  batas  normal  (387±143,8  mg/dl), kemungkinan besar disebabkan karena kurangnya  dosis  pemberian  bubuk  kakao  dan kurangnya  waktu  intervensi.  Pemberian  bubuk kakao  2%  (0,4gr/ekor/hari)  selama  4  minggu pada  tikus  putih  DM  dapat  menurunkan  kadar gula darah puasa dan berat badan tikus (Olasope, et  al .,  2017).  Bubuk  kakao  4%  (0,8gr/ekor/hari)
80,33 513,67 421,67 85,67 435,67 387 0 100 200 300 400 500 600 Kontrol Negatif Kontrol Positif Perlakuan
Pretest Postest
dapat  menormalkan  kadar  glukosa  darah  puasa pada tikus DM (Olasope et al, 2016).

## 4. Simpulan dan Saran
Pemberian  bubuk  kakao  0,4  gram/  ekor/ hari dapat menurunkan kadar gula darah puasa tikus Sprangue  Dawley diabetes  melitus. Penelitian  selanjutnya  perlu  dipertimbangkan adanya penambahan waktu dan dosis pemberian  sehingga  dapat  dilihat  dampaknya terhadap  penurunan  profil  kadar  gula  darah yang optimal.

## 5. Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada Kementrian  Riset  dan  Pendidikan  Tinggi  atas pendanaan  DRPM  pada  penelitian  ini.  Sesuai dengan surat perjanjian kontrak penelitian dosen pemula  No  :    473/PL17.4/PL/2018  tanggal  22 Mei 2018..

## 6. Daftar Pustaka
Arifin,  W.N  dan  W.M.  Zahirudin.  2017.  Sample Size Calculation in Animal Studies Using Resource  Equation  Approach.  Malaysia Journal  Medical  Science .  Volume  24(5):
101 – 105
Crozier, S.J., A.G. Preston, J.W. Hurst, M.J. Payne, J. Mann, L. Hainly and D.L. Miller. 2011. Cocoa  seeds  are  a  “Super  Fruit”  :  A comparative  analysis  of  various  fruit powders and  products. Chemistry  Central Journal 5 : 1-6.
Heriansyah,  T.  2013.  Pengaruh  Berbagai  Durasi Pemberian  Diet  Tinggi  Lemak  Terhadap Profil  Lipid  Tikus  Putih  (Rattus Novergicus  Strain  Wistar)  Jantan.  Jurnal
Kedokteran  Syiah  Kuala.  Vol.  13,  No.  3, Halaman 144-150 Kusumawati,  D.  2016.  Bersahabat  dengan Hewan  Coba.  Yogyakarta:  Gadjah  mada University Press.
Latif,  R.  2013.  Chocolate  /  Cocoa  and  Human Health :  a  Review.The  Journal  of Medicine,  volume  71,  nomor  2,  halaman 63 – 68. Olasope, T.M., G.T. Fadupin, O. Olubamiwa, dan C.O.  Jayeola.  2016.  Glucose-lowering Potential  of  Cocoa  Powder  Intake  -  An Avenue  for  Positive  Management  of Diabetes  Mellitus.British  Journal  of Medicine  and  Medical  Research,  volume 16, nomor 2, halaman 1 – 7. Olasope, T.M., G.T. Fadupin, O. Olubamiwa, C.O.
Jayeola, dan K.O. Soetan. 2017. Haematological  and  Antidiabetic  Effects of  Cocoa  Powder  on  Alloxan-Induced Diabetic  Albino  Rats.  World  Journal  of Pharmaceutical  and  Medical  Research, volume 3, nomor 3, halaman 1 – 6. Ruzaidi, A., A. Maleyki, I. Amin, A.G. Nawalyah, Muhajir,  Pauliena,  dan  M.S.  Muskinah. 2008.  Hypoglycaemic  Properties  of Malaysian  Cocoa  (Theobroma  cacao) Polyphenols-Rich  Extract.  International Food Research Journal, volume 15, nomor 3, halaman 305 – 312.
Takeda,  Y.,  T.  Shimomura,  H.  Asao  .,  I. Wakabayashi. 2017. Relationship between Immunological  Abnormalities  in  Rat Models  of  Diabetes  Mellitus  and  the Amplification  Circuits  for  Diabetes. Review  Article.  Journal  of  Diabetes Research, halaman 1-9