## STUDI KARAKTERISTIK PERTUMBUHAN EMPAT JENIS SPECIES MIKROALGA DAN UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA

## STUDY AND CHARACTERIZATION GROWTH OF FOUR MICROALGAE SPECIES AND TEST ANTIMICROBIAL ACTIVITY
Marniati Salim * , Abdi Dharma, Anggie Wahyulya Putri
Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Andalas, Padang, Indonesia
*e-mail korespondensi: bundosalim@gmail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  mempelajari  karakteristik  pertumbuhan  mikroalga  ( Dunaliella  salina,  Nannochloropsis oculata,  Tetraselmis  chuii  &  Chaetoceros  calcitrans ),  pada  medium  yang  berbeda  yaitu  Bold’s  Basal Medium  (BBM)  dan  modifikasi  BBM  air  laut.  Hasil  yang  didapat  mikroalga  ( N.oculata,  T.chuii, C.calcitrans )  lebih  baik  tumbuh  pada  media  BBM  sedangkan  mikrolaga  D.salina  baik  tumbuh  pada modifikasi BBM air laut. Biomassa mikroalga di esktrak dengan metoda maserasi dalam pelarut heksana dan metanol.  Bakteri  uji  digunakan  gram  positif  ( Staphylococcus  aureus )  dan  gram  negatif  ( Escherichia  coli ). Hasil  diameter  zona  hambat  dibandingkan  dengan  uji  sensitivitas  antimikroba  menurut Clinical  and Laboratory  Standards  Institute (CLSI).  Dari  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  heksana  dan  metanol mikroalga  ( D.salina,  N.oculata,  T.chuii,  C.calcitrans )  menunjukkan  bahwa  ekstrak  tidak  terlalu  sensitif menghambat pertumbuhan bakteri
Kata kunci : mikroalga, medium, antimikroba

## Abstract
In  this  study  to  the  growth  characteristics  of  microalgae  ( Dunaliella  salina,  Nannochloropsis  oculata, Tetrasel mis chuii  &  Chaetoceros calcitrans ), in different mediums, namely Bold’s Basal Medium (BBM) and BBM modification of sea water. The results obtained from microalgae ( N.oculata, T.chuii, C.calcitrans ) are better grown on BBM  media  while  microlaga D.salina  grows  well on BBM  modification of sea  water. Microalgae biomass is extracted by maceration method in hexane and methanol solvents. Test bacteria used gram  positive  ( Staphylococcus  aureus )  and  gram  negative  ( Escherichia  coli ).  Inhibitory  zone  diameter results  were compared  with antimicrobial sensitivity tests according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).  From  the  results  of  microalgae  hexane  and  methanol  extract  antibacterial  activity  tests ( D.salina, N.oculata, T.chuii, C.calcitrans ) showed that the extract was not too sensitive to inhibit bacterial growth.
Keywords: microalgae, medium, antimicrobial

## PENDAHULUAN
Mikroalga  merupakan  mikroorganisme uni  seluler  fotosintetik  yang  dapat  ditemukan dalam  air  laut  dan  air  tawar,  pada  lokasi  yang lembab dan mampu melakukan proses fotosintesis untuk membuat makanannya sendiri sehingga  termasuk  kedalam  jenis  fotoautotrof. Mikroalga  pada  saat  ini  adalah  salah  satu komoditi  hasil  peraian  yang  memiliki  potensi besar untuk dimanfaatkan seiring perkembangan bioteknologi mikroalga dengan sejumlah penelitian  yang  dapat  menghasilkan  produk bermanfaat  dan  bernilai  tinggi  diantara  sebagai sumber bahan kimia yang dapat menghasilkan
produk  seperti,  gliserol,  vitamin,  protein, pigmen,  enzim,  dan  bahan  –  bahan  bioaktif lainnya  yaitu  antara  lain  sebgai  antioksidan, bahan  obat  –  obatan,  bahan  pangan,  dan  zat pengatur pertumbuhan (Kabinawa, 2001).
Mikroalga  memiliki  peranan  penting dalam  ekosistem  perairan  sebagai  sumber makanan,  pelindung  fisik  bagi  organisme perairan  karena  dalam  biomassa  mikroalga mengandung  komposisi  kimia  yang  potensial. Secara umum, mikroalga mempunyai kandungan lipid sekitar 8 – 15% dan protein sebanyak 30 – 50%,  selain  itu  mikroalga  juga  mempunyai kandungan karbohidrat yang mencapai 20-40%.
Dari jumlah total karbohidrat, 45-97% merupakan  polisakarida  (Cavallo,  2013  & Naviner, 1999).
Mikroalga  mengandung  bahan-bahan organik  seperti  polisakarida,  vitamin,  mineral dan  juga  senyawa  bioaktif.  Potensi  mikroalga sangat  besar  sebagai  sumber  berbagai  produk, diantaranya  sebagai  sumber  protein  yang  dapat diperoleh dari mikroalga Chlorella dan Dunaliella, produksi  pigmen,  sebagai  bahan pewarna  yang  dapat  diperoleh  dari  mikroalga Spirulina , Haematococcus, sebagai  pakan  larva ikan  dan  non  ikan,  dapat  diperoleh  dari mikroalga Tetraselmis dan Chaetoceros serta produksi  antimikroba,  dapat  diperoleh  dari mikroalga Chlorella  vulgaris , Chaetoceros gracilis (Borowitzka, 1994).
Senyawa  bioaktif  mikroalga  memiliki potensi  untuk  digunakan  sebagai  obat-obatan karena diketahui dapat menghambat pertumbuhan bakteri, virus, dan jamur. Senyawa seperti  makrolida,  peptida  siklik,  protein, poliketida,  seskuiterpen,  terpen,  dan  asam lemak.  Senyawa  ini  dapat  diekstraksi  dari biomassa  mikroalga  salah  satunya  dengan  cara maserasi secara bertingkat menggunakan beberapa pelarut seperti metanol, n-heksana dan diklorometan,  hasilnya  menunjukkan  adanya zona hambat terhadap E.coli dan S. aureus pada D.salina (Cavallo, 2013 & Naviner, 1999). Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari karakteristik pertumbuhan mikroalga D.salina, N.oculata, T.chuii,
C.calcitrans pada medium BBM dan modifikasi BBM  air  laut  dan  menguji  aktivitas  antibakteri dari  ekstrak  heksana  dan  metanol  terhadap  4 jenis mikroalga.

## METODE PENELITIAN
Mikroalga yang digunakan adalah D.salina,  N.oculata,  T.chuii,  C.calcitrans yang diperoleh  dari  laboratorium  biokimia,  jurusan kimia  Universitas  Andalas.  Sampel  ini  di  kultur pada Medium Bold’s Basal (BBM) dan Medium Modifikasi  BBM  air  laut  dengan  perbandingan tertentu.

## Kultivasi  mikroalga  dengan  variasi  media
D.salina, N.oculata, T.chuii, C.calcitrans Dilakukan  dengan  menambahkan  50  mL  isolat ke  dalam  botol  kaca  yang  berisi  500  mL  BBM, begitu  juga  dengan  BBM  air  laut.  Kultur diaerasi pada suhu ruang (± 25 o C)  dengan
photoperiode terang  dan  gelap  di  bawah penyinaran  lampu fluorescent 36  watt  dengan siklus  12  jam  terang-12  jam  gelap.  Aerasi dilakukan 24 jam dengan mengalirkan udara dari pompa  menggunakan  selang  yang  kecepatannya konstan (El-Baky, 2013).
Penentuan  kurva  pertumbuhan D.salina, N.oculata, T.chuii, C.calcitrans
Dilakukan  pengamatan  terhadap  nilai  absorban kultur  pada  panjang  gelombang  secara  berurut  ; 750 nm, 680 nm, 540 nm dan 560 nm setiap hari hingga  nilai  absorban  mengalami  penurunan. Kurva pertumbuhan dibuat dengan cara memplotkan  antara  lama  waktu  kultivasi  (hari) dengan  nilai  serapan  (absorban).  Karakteristik pertumbuhan  mikroalga  dianalisis  dengan  kurva pertumbuhan      mikroalga yang dibuat berdasarkan  data  yang  didapatkan  per  satuan waktu.  Dari  data  tersebut  dapat  diperhitungkan waktu  generasi  ( generated/doubling  time )  dan laju pertumbuhan relatif berbagai jenis mikroalga hasil kultur dengan rumus pendugaan  waktu  generasi  adalah (Makridis dkk, 2006).

## G = t log 2 log Nt − log No
Nilai  laju  pertumbuhan  relatif  dihitung  dengan menggunakan persamaan :

## k = ln Nt − ln No t
dimana, G (waktu generasi), k(laju pertumbuhan relatif) , Nt( jumlah sel setelah periode waktu t), No (jumlah sel yang diinokulasikan pada waktu t =0), t (waktu (hari)).
Penentuan Biomassa kering D.salina,

## N.oculata, T.chuii, C.calcitrans
Biomassa  ke  empat  mikroalga  diperoleh  pada awal  kultur  memasuki  fasa  stasioner.  Mikroalga dipanen  dengan  cara  disentrifugasi  dengan kecepatan  4000  rpm  selama  5  menit  pada  suhu ruang,  kemudian  supernatan  dikering-anginkan untuk  memeroleh  biomassa  kering.  Kemudian biomassa  kering  ditimbang  dan  dilakukan ekstraksi.

## Ekstraksi metabolit sekunder
Biomassa  kering  diekstraksi  dengan  pelarut heksana dan metanol untuk selanjutnya dilakukan proses uji aktivitas  antibakteri.
Metoda ekstraksi ditentukan berdasarkan (Choocote,      2014) dengan modifikasi.
Ditimbang  sebanyak  0,2  gram  biomassa  kering D.salina,  N.oculata,  T.chuii,  C.calcitrans lalu dimaserasi dengan 2 mL heksana selama 24 jam. Sebelumnya  dilakukan  sonikasi  selama  480 detik.  Larutan  disentrifugasi  dengan  kecepatan 4000  rpm  selama  5  menit  dan  supernatan diambil. Ekstraksi dilanjutkan dengan menggunakan pelarut metanol dengan cara yang sama. Supernatan dikeringkan sehingga didapatkan ekstrak kering dan ditimbang.

## Uji Antimikroba
Suspensi  bakteri  uji  yang  telah  dipersiapkan dipipet  sebanyak  200  µL  lalu  disebar  ke  dalam media  MHA  (Mueller  Hinton  Agar)  steril. Ditunggu  hingga  kering  ±  5  menit.  Kertas cakram Whatman No.1 steril dengan diameter ± 6  mm,  diletakkan  pada  media  padat  dengan menggunakan  pinset  steril,  kemudian  diteteskan masing-masing  ekstrak,  kontrol  positif  dan kontrol  negatif  masing-masingnya  sebanyak  20 µL. Masing-masing cawan petri diinkubasi pada suhu  37 o C  selama  18-24  jam.  Hasil  inkubasi berupa  daerah  bening  di  sekitar  cakram  yang menunjukkan tidak adanya pertumbuhan bakteri .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kurva  pertumbuhan  mikroalga D.  salina, N.oculata , T.  chuii , C.  calcitrans ditentukan dengan  nilai  absorban  (y)  dengan  waktu  (hari), kultivasi  (x)  pada  panjang  gelombang  masing  – masing  680  nm,  540  nm,  560  nm  dan  750  nm Kurva  pertumbuhan  mikroalga D.  salina, N.oculata , T.  chuii , C.  calcitrans dapat  dilihat pada gambar 2 dibawah ini
Gambar 1. Kurva Pertumbuhan D.salina (BBM dan BBM Air Laut)
Dari Gmbar 1 dapat dilihat bahwa pada medium BBM  fase  lag  sudah  terjadi  pada  hari  pertama dan dilanjutkan fase logaritma sampai hari
kelima,  lebih  dari  5  hari  masuk  pada  fase stasioner dan diikuti dengan fase penurunan atau kematian,  sedangkan  kurva  pertumbuhan  untuk medium  BBM  air  laut  fase  logaritma  terjadi hingga  hari  kesembilan  diikuti  fase  stasioner sampai  hari  kesebelas  dan  diikuti  penurunan kurva pertumbuhan lewat hari kesebelas menuju fase  kematian.  Dari  data  diatas  dapat  dilihat waktu  generasi  mikroalga D.Salina dengan medium  BBM  lebih  cepat  dibandingkan  dengan BBM  air  laut  yaitu  0,545  hari  pada  medium BBM  dan  0,781  hari  pada  BBM  air  laut, sementara  laju  pertumbuhan  relatif  lebih  besar BBMair laut dibandingkan BBM yaitu masing – masing  0,888  dan  0,702.  Hal  ini  disebabkan karena D.Salina lebih  baik  tumbuh  pada  BBM air laut.
Kurva pertumbuhan N.oculata dapat dilihat pada gambar dibawah ini:

## Gambar 2. Kurva Pertumbuhan N.oculata pada Medium BBM dan BBM Air Laut
Dari  Gambar  2,  kurva  pertumbuhan N.oculata pada medium BBM dapat dilihat bahwa fase lag sudah  terjadi  pada  hari  ketiga  diikuti  fase logaritma terjadi sampai hari ketiga belas, diikuti fase stasioner sampai hari kelima belas dan fase penurunan  menuju  kematian  lewat  hari  kelima belas,  sedangkan  pada  medium  BBM  air  laut fase  lag  sampai  hari  keempat  diikuti  fase logaritma  hingga  hari  kesepuluh  dan  langsung menuju  fase  kematian  lewat  dari  sepuluh  hari. Dari data ini laju pertumbuhan relatif dan waktu generasi masing – masing pada N.oculata waktu generasi  pada  medium  BBM  dan  BBM  air  laut adalah  sama  yaitu  0,307  hari,  sedangkan  laju pertumbuhan  relatif  kultur  masing  –  masing 0,378 dan 0,375 hari. Pada mikroalga N.oculata tidak  terdeteksi  fase  stasioner  karena  waktu hidupnya  lebih  singkat  jika  dibandingkan D.salina yang  mempunyai  fase  stasioner.Kurva
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17
Waktu ( Hari ) BB M Air laut
BB M 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 0 1 3 5 7 9 11131517 Waktu ( Hari )
BB M Air laut BB M 2,5 2 1,5 1 0,5 0 A b s (68 0 m m ) A b s (54 0 mm )
pertumbuhan T.  chuii dapat  dilihat  pada  kurva dibawah ini
Gambar 3. Kurva Pertumbuhan T.chuii pada Medium BBM dan BBM Air Laut
Pada Gambar 3, dapat dilihat bahwa pertumbuhan  mikroalga T.chuii fase  lag  terjadi sampai hari kelima, fase logaritma terjadi hingga hari  kesembilan  yang  diikuti  fase  stasioner sampai  hari  keempat  belas,  pada  medium  BBM air laut fase lag pada hari ketiga dilanjutkan fase logaritma  terjadi  dan  fase  stasioner  lewat  dari hari  kesebelas  diikuti  fase  kematian  lewat  dari hari  ketiga  belas.  Dari  data  diatas  dapat  dilihat laju  pertumbuhan  relatif  dan  waktu  generasi masing  –  masing  mikrolaga T.chuii pada  BBM lebih  cepat  dibandingkan  BBM  air  laut  yaitu 1,315  dan  1,242  hari,  demikian  juga  dengan dibandingkan laju pertumbuhan BBM dan BBM air  laut  lebih  besar  yaitu  2,678  dan  0,558  hari, ini  menunjukkan  bahwa  kultivasi  mikroalga T.chuii lebih efektif pada medium BBM.
Kurva  pertumbuhan C.  calcitrans dapat  dilihat pada kurva dibawah ini
Gambar 4. Kurva Pertumbuhan C. calcitrans pada Medium BBM dan BBM Air Laut
Dari  gambar  4  dapat  dilihat  bahwa  fase  lag untuk  medium  BBM  mulai  terjadi  hari  kedua, fase logaritma terjadi hingga hari
kesembilan  diikuti  fase  stasioner  hingga  hari ketiga belas dan menuju fase kematian lebih dari hari ketiga belas, sedangkan pada medium BBM air  laut  fase  lag  sampai  hari  kelima  diikuti  fase logaritma  hingga  hari  kedua  belas,  langsung terjadi  penurunan  laju  pertumbuhan  hingga  hari ketujuh belas. Pada medium BBM air laut tidak ada fase stasioner untuk mikroalga C.calcitrans . dari  data  diatas  diduga  laju  pertumbuhan  relatif dan  waktu  generasi  masing  –  masing  mikroalga pada C.calcitrans laju  pertumbuhan  relatif BBMnya  adalah  0,688  hari  sedangkan  untuk BBM  air  laut  0,236  hari,  begitu  juga  waktu generasinya kultur BBM lebih cepat dibandingkan  dengan  BBM  air  laut  masing  – masing yaitu selama 1,037 hari dan 2,941 hari. Dari  kurva  pertumbuhan  1,  2,  3,  4,  bahwa mikroalga D.salina lebih  efektif  tumbuh  pada medium  BBM  air  laut  (Salim  dk,  2016)  jika dibandingkan  dengan  mikroalga N.oculata , T.chuii , C.calcitrans yang  lebih  efektif  pada medium BBM.
Hasil  Penentuan  biomassa  kering  4  jenis mikroalga ( D.salina, N.oculata , T.chuii ,
C.calcitrans )
Biomassa  sel  dari  keempat  mikrolaga  dialkukan setelah pemanenan fase awal stasioner, dilakukan pemisahan dengan filtrat menggunakan  sentrifugal  untuk  memisahkan komponen  air.  Menurut  Vonshak  A  (1990), teknik  pemisahan  biomassa  dengan  filtrat menggunakan sentrifugal mer upakan salah satu cara yang sangat efisien.
Hasil  berat  biomassa  kering  yang  diperoleh dapat dilihat pada tabel 1
Tabel 1. Hasil Biomassa Kering D.salina, N.oculata, T.chuii, C.calcitrans Jenis Mikroalga Vol (L) Berat kering (gram) D.salina 3 0,2901 N.oculata 3 0,2950 T.chuii 3 0,3884 C.calcitrans 3 0,3536
Dari Tabel 1 dapat dilihat biomassa berat kering diperoleh  paling  banyak  berturut  –turut  pada T.chuii, C.calcitrans, N.oculata, D.salina masing- masing adalah 0, 3884, 0,3536, 0,2950 dan 0,2901 gram.
3 2,5
2 1,5 1 0,5 0 BBM Air laut
BBM 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 Waktu ( Hari ) 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 Waktu ( Hari ) BB M Air laut BB M
3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Ab s (5 6 0 m m )
A b s (75 0 m m )
Hasil ekstraksi senyawa metabolik sekunder 4  jenis  mikroalga  ( D.salina,  N.oculata , T.chuii , C.calcitrans )
Ekstraksi  senyawa  ini  digunakan  pelarut  yang berbeda  –  beda  heksana  (pelarut  non  polar)  dan pelarut  metanol  (pelarut  olar)  dilakukan  dengan dua  pelarut  agar  zat  aktif  yang  terkandung  dan belum diketahui sifatnya dapat terekstrak secara optimal  sesuai  kepolarannya.  Berat  ekstraksi senyawa metabolik sekunder keempat mikroalga dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil Esktraksi Keempat Jenis Mikroalga ( D.salina, N.oculata , T.chuii , C.calcitrans ) Jenis Mikroalga Jenis pelarut Berat ekstraksi (gram) Rendemen Ekstrak Kering (%) D.salina Heksana 0,0054 2,7 Metanol 0,0364 18,2 N.oculata Heksana 0,0107 5,35 Metanol 0,0017 10,85 T.chuii Heksana 0,0051 2,55 Metanol 0,0315 15,75 C.calcitrans Heksana 0,0088 4,4 Metanol 0,0342 17,1
Dari  Tabel  2,  dapat  dilihat  bawah  rendemen ekstrak  kering  yang  diperoleh  dari  ekstraksi dengan pelarut metanol menghasilkan rendemen yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  pelarut heksana.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  keempat senyawa mikroalga ini lebih banyak mengandung  senyawa  aktif  yang  mudah  larut dengan pelarut polar.

## Hasil pengujian aktivitas uji antibakteri
Untuk pengujian aktivitas antibakteri dilakukan uji terhadap bakteri gram positif adalah staph ylococcus aureus dan bakteri gram negatif yaitu escherichia coli .
Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  heksana  dan metanol,  sedangkan  untuk  kontrol  positif digunakan  amoxilin,  kontrol  negatif  dimetil sulfoksida  (DMSO).  Kemudian  hasil  –  hasil ekstrak diteteskan pada kertas cakram 25 µg/µL sebanyak  20  µL.  Uji  aktviitas  antibakteri ditunjukkan  oleh  diameter  zona  hambat  atau zona  bening  yang  terbentuk  disekitar  kertas cakram. Pada tabel 3 dibawah ini.
Tabel 3. Hasil Uji Aktvitas Antibakteri Mikroalga yaitu D.salina, N.oculata , T.chuii , C.calcitrans Terhadap Bakteri Gram Positif dan Negatif
Jenis Mikroalga Ekstrak Diameter Zona Hambat Rata – rata (mm) S. aureus E. coli D. salina Heksana 10 10,75 Metanol 8,5 8,5 N.oculata Heksana 9,25 9,00 Metanol 11,25 8,75 T.chuii Heksana 8,5 9,50 Metanol 9,00 10,25 C.calcitras Heksana 10,5 9,25 Metanol 11,5 9,50 Amoxilin (Kontrol positif) 19,75 20 DMSO (Kontrol negatif) 0 0
Hasil  uji  aktivitas  antimikroba  dapat  dilihat bahwa  masing  –  masing  ekstrak  memiliki aktivitas  yang  kecil  dibandingkan  dengan kontrol  positif  (Amoxilin),  bila  dilihat  dari kategori (CLSI) termasuk  kategori  resisten,  bila dibandingkan  amoxilin  yang  cukup  besar termasuk  kategori  intermediet  sensitif,  kontrol positif  mempunyai  daya  hambat  yang  luas, sedangkan kontrol negatif DMSO tidak memberikan zona hambat, ini juga membuktikan bahwa diameter hambat ekstrak bukan pengaruh dari  pelarut,  tetapi  murni  dari  senyawa  aktif dalam  keempat  ekstrak  mikroalga D.salina, N.oculata , T.chuii , C.calcitrans.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  dari  keempat  mikrolaga yaitu N.oculata,  T.chuii,  C.calcitrans lebih  baik tumbuh pada medium BBM sedangkan D.salina lebih  baik  tumbuh  pada  BBM  air  laut.  Uji aktivitas  antibakteri  bila  dilihat  berdasarkan CLSI,  uji  sensitivitas  antimikrobanya  diperoleh D.salina untuk  hasil  ekstrak  heksana  memiliki zona  hambat  tertinggi  pada  bakteri E.coli yaitu 10,75  mm  dan  hasil  ekstrak  metanol N.Oculata menunjukkan  zona  hambat  11,25  mm  untuk bakteri S.aureus lebih  tinggi  dibandingkan dengan mikroalga lainnya tetapi secara keseluruhan memiliki potensi sebagai antibakteri yang tidak terlalu sensitif.

## DAFTAR PUSTAKA
Barsanti, L., and Gualtieri, P., Algae Anatomy,
Biochemistry  and  Biotechnology  Second Edition.  Taylor  &  Francis  Group,  the academic  division  of  T&F  Informa  plc. 2014.
Borowitzka  M.  A.,  Microalgae  as  Source  of Pharmaceuticals  and  Other  Biologically Active  Compounds, Algal  Biotech  Lab ,
School  of  Biological  &  Enviromental Sciences, Murdoch University, Perth,W.A, 1994. Cavallo,  R.A.,  Acquaviva,  M.I.,  Stabili,  L., Cecere, E., Petrocelli, A., and Naracci, M. Antibacterial Activity of Marine
Macroalgae  Against  Fish  Pathogenic Vibrio  Species, Cent.  Eur.  J.  Biol ,  2013, 8; 646-653.
Choocote,  Weena,  Linchong,  S.,  and  Duangjai, O.,  Evaluation  Of  Antioxidant  Capacities Of  Green  Microalgae,  Int.  J.  Applied Phycology, 2014, 26; 43-48.
El-Baky,  A.H.H.,  and  El-Baroty,  S.G.,  Healthy Benefit of Microalgal Bioactive Substances ,  J.  of  Aquatic  Sciences, 2013, 1(1); 11-23 El-Baky, A.H.H., and El-
Baroty, S.G., Healthy Benefit of
Microalgal  Bioactive  Substances ,  J.  of Aquatic Sciences, 2013, 1(1); 11-23
Franklin,  R.,  Performance  Standards  for
Antimicrobial Disk Susceptibility Tests ,
Approved Standard , CLSI USA, 2012,
32(11); 18.
Kabinawa,  Mikroalga  sebagai  Sumber  Daya
Hayati Perairan dalam Perspektif Bioteknologi, Puslitbang-Biotek LIPI ,
Bogor, 2001.
Makridis,  Pvlos,  Rita,  Alves,  Costa,  Maria,
Teresa,  and  Dinis.  Microbial  Conditions ad  Antimicrobial  Activity  in  Cultures  of Two  Microalgae  Species,  Tetraselmis chuii and Chlorella minutissima, Effect on Bacterial  Load  of  Enriched  Artemia Metanauplii.  J.  Of  Aquaculture,  2006, 255; 76-81.
Salim,  M.,  Yulia  Ekanasti,  R.,  and  Chaidir,  Z.,
Efek Nitrogen Terhadap Media
Pertumbuhan  Mikroalga  Dunaliella  salina Untuk  Produksi  Lipid  Sebagai  Bahan Baku  Biodiesel.  Seminar  Nasional  Kimia FMIPA Universitas Mataram. 2016 Naviner,  M.,  Berge,  J.P.,  Duran,  P.,  and  Le Bris,  H.,  Antibacterial  Activity  of  the Marine  Diatom  Skeletonema  Costatum
Againts Aquacultural Pathogens, J.
Aquaculture , 1999, 174; 15-24.
Vonshak,  A.,  Recent  Advances  in  Microalgal
Biotechnology, Biotechnology adv,
Britain Pergamon Press, 1990, 8.