## Hikmah et al./Galenika Journal of Pharmacy
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DAUN SALAM ( Syzygium polyanthum Wight.) TERHADAP GLIBENKLAMID DALAM MENURUNKAN KADAR GLUKOSA DARAH MENCIT( Mus musculus ) YANG

## DIINDUKSI ALOKSAN
THE IMPACT OF ADMINISTRATION BAY LEAF EXTRACT ( Syzygium polyanthum Wight.) ON GLIBENCLAMIDE IN LOWERING BLOOD GLUCOSE LEVELS ON MICE( Mus musculus )THAT INDUCED

## BY ALLOXAN
Nur Hikmah 1 *, Yuliet 1 , Khildah Khaerati 1
1 Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA,UniversitasTadulako, Palu, Indonesia
Received 4 Desember 2015, Accepted 10 Februari 2016

## ABSTRAK
Penggunaan obat herbal dan obat sintetik secara bersamaan banyak dilakukan oleh penderita diabetes untuk  pemeliharaan  kadar  glukosa  darah  yang  lebih  baik,  seperti  penggunaan  glibenklamid  dan  daun  salam. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak  daun  salam  terhadap  glibenklamid  dalam menurunkan kadar glukosa darah mencit  yang diinduksi aloksan. Penelitian ini menggunakan 40 ekor mencit putih  jantan  yang  terbagi  dalam  8  kelompok.  Sebelum  diberi  perlakuan,  hewan  uji  dibuat  diabetes  dengan induksi  aloksan  (70  mg/kg  BB)  terlebih  dahulu  secara  intravena.  Kelompok  kontrol  negatif  merupakan kelompok  yang  diberikan  Na  CMC  0,5%,  KG  merupakan  kontrol  glibenklamid  0,65  mg/kg  BB,  kelompok DS1, DS2, DS3 adalah kelompok kontrol ekstrak daun salam tunggal dengan dosis masing-masing 250 mg/kg BB, 500 mg/kg BB, dan 750 mg/kg BB, kelompok KD1, KD2, KD3 adalah kelompok kombinasi glibenklamid dan ekstrak daun salam dengan dosis masing-masing glibenklamid dikombinasikan dengan ekstrak daun salam 250  mg/kg  BB,  glibenklamid  dikombinasikan  dengan  ekstrak  daun  salam  500  mg/kg  BB,  dan  glibenklamid dikombinasikan dengan ekstrak daun salam750 mg/kg BB, dengan selang waktu pemberian 1 jam.  Data yang diperoleh  dianalisis  secara  statistik  dengan  menggunakan  ANOVA  ( analysis  of  variance )  pada  taraf kepercayaan  95%  dengan  parameter  selisih  penurunan  kadar  glukosa  darah.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa pemberian ekstrak daun salam berpengaruh secara signifikan terhadap glibenklamid dalam menurunkan kadar glukosa darah  dan dosis  yang efektif adalah kombinasi dosis glibenklamid 0,65 mg/kg  BB dan ekstrak daun salam 250 mg/kg BB.
Kata kunci: Aloksan, Syzygium polyanthum Wight., Glibenklamid.

## ABSTRACT
The  use  of  herbal  medicines  and  synthetic  drugssimultaneously  carried  out  by  diabetics  for  the maintenance of blood glucose levels, such as the use of glibenclamide and bay leaf. This research was carried out to know the impact of administration bay leaf extract on glibenclamide in lowering blood glucose levels on mices that induced by alloxan. This research used 40 male mices which were divided into 8 groups. Before the experiment, the mices were first induced by alloxan (70 mg/kg BW) intravenously. The negative control was the group that given Na CMC 0,5%, KG was the control of glibenclamide 0,65 mg/kg BW, group DS1, DS2, DS3 were the control of single bay leaf extract with each dose250 mg/kg BW, 500 mg/kg BW, and 750 mg/kg BW, group KD1, KD2, KD3 were the combination group of glibenclamide and bay leaf extract with each dose glibenclamide combined bay leaf extract 250 mg/kg BW, glibenclamide combined bay leaf extract 500 mg/kg BW,  and  glibenclamide  combined  bay  leaf  extract  750  mg/kg  BW,  with  an  hour  interval.  The  data  were statistically  analyzed  using  ANOVA  (Analysis  of  Variance)  at  95%  confidence  interval  with  parameter  of blood glucose levels difference between before and after treatment.The results showed that the administration of bay leaf extract gave significant impact on glibenclamide in lowering blood glucose levels and the effective dose was the combination of glibenclamide 0,65 mg/kg BWand bay leaf extract 250 mg/kg BW.
Keywords:Alloxan, Syzygium polyanthum Wight, Glibenclamide.
* Correspondence author : Nurhikmah, Hikmahn86@gmail.com (ph : +62-852-411-808-67)
March 2016

## PENDAHULUAN

## International  Diabetes  Federation
(IDF)  Diabetes  Atlas  menunjukkan  bahwa 8,3%  dari  orang  dewasa  (382  juta  orang) menderita  diabetes,  dan  jumlah  penderita  ini akan  meningkat  melampaui  592  juta  dalam waktu kurang dari 25 tahun.
Daun  salam  ( Syzygium  polyanthum Wight.)  merupakan  salah  satu  obat  herbal antidiabetes yang banyak dikonsumsi masyarakat. Penelitian sebelumnya
membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  daun salam dapat menurunkan kadar glukosa darah mencit  yang  diinduksi  aloksan  pada  dosis 2,64  mg/20  g  BB  (26,6%)  dan  5,24  mg/20  g BB  (34,2%)  (Studiawan  &  Santosa,  2005). Selain  itu,  penelitian  sebelumnya  juga menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun salam  pada  dosis  249,6  mg/kg  BB  dan  499,2 mg/kg  BB  dapat  menurunkan  kadar  glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan sebanding dengan glibenklamid (Carolina, R., 2007).
Kombinasi  antara  obat  herbal  dan obat  sintesis  tidak  menutup  kemungkinan terjadinya interaksi. Ada kekhawatiran munculnya efek hipoglikemik yang berlebihan apabila antidiabetes herbal dikonsumsi  bersama  dengan  ADO.  Hasil penelitian  Steffi  Liem,  2015  menunjukkan bahwa  kombinasi  ekstrak  daun  salam  dan glibenklamid dapat menurunkan kadar glukosa  darah  yang  signifikan  pada  mencit yang  diinduksi  aloksan  dibandingkan  dengan pemberian  tunggal  glibenklamid  ataupun ekstrak daun salam.
Berdasarkan  uraian  diatas,  peneliti ingin mengetahui pengaruh pemberian ekstrak  daun  salam  terhadap  glibenklamid dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah. Sebagai  model  diabetes,  digunakan  mencit yang  mengalami  keadaan  hiperglikemia akibat induksi senyawa aloksan.

## METODE PENELITIAN Jenis Penelitian
Penelitian  yang  dilakukan  merupakan eksperimen  laboratorium  dengan  rancangan acak lengkap pola searah. Kelompok perlakuan  dibagi  menjadi  8  kelompok  uji, masing-masing  terdiri  dari  5  ekor  mencit. Kemudian  dilakukan  pengukuran kadar glukosa  darah  mencit  sebelum  dan  setelah diinduksi  dengan  aloksan  untuk  membuat
model  hewan  diabetes.  Lalu  diberikan perlakuan sesuai kelompok uji.
Lokasi dan Waktu Penelitian Penelitian
dilaksanakan di
Laboratorium  Farmakognosi-Fitokimia  dan Farmakologi-Biofarmasi  Jurusan  Farmasi, FMIPA,  Universitas  Tadulako  selama  9 bulan, yakni dari bulan Februari 2015 sampai November 2015.

## Persiapan Bahan Uji
Bahan uji yang digunakan  adalah  daun salam  ( Syzygium  polyanthum Wight.)yang diperoleh dari Desa Lolu KecamatanBiromaru  Kabupaten  Sigi  dan dilakukan  identifikasi  di  Unit  Pelaksana Teknis  (UPT)  Sumber  Daya  Hayati  Sulawesi Universitas Tadulako Palu.Daun salam dibersihkan  dengan  air  dan  ditiriskan,  lalu dirajang berukuran kecil, kemudian dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan dan  selanjutnya  diserbukkan  hingga  halus. Serbuk  daun  salamsebanyak  500  gram dimaserasi  dengan  menggunakan  etanol96% sebanyak  2,5  L.  Setelah  itu  disaring  untuk mendapatkan  maserat.  Lalu  maserat  yang diperoleh dievaporasidengan rotary evaporator kemudian  diuapkan  di  atas waterbath hingga  didapatkan  ekstrak  kental dan ditimbang untuk menghitung rendemennya.
Uji Penapisan Fitokimia (Harborne, 1987) Ekstrak daun salam yang telah didapatkan kemudian diuji kualitatif terhadap adanya  senyawa  flavonoid,  fenolik,  saponin, steroid,  triterpenoid,  alkaloid,  dan  tanin  di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Jurusan  Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas Tadulako.

## Pengujian Aktivitas Antidiabetes
Hewan  uji  yang  digunakan  berjumlah 40  ekor,  kemudian  dibagi  menjadi  8 kelompok uji, dengan masing-masing kelompok  berjumlah  5  ekor.  Hewan  uji dipuasakan selama 16 jam dengan tetap diberi minum, kemudian darah diambil melalui vena ekor  mencit  dan  diukur  kadar  glukosa darahnya  sebagai  kadar  glukosa  darah  puasa awal (H 1 ), kemudian semua  hewan uji dibuat diabetes  dengan  induksi  aloksan  70  mg/kg BB. Pada hari ke-8 kadar glukosa darah puasa hewan uji diukur kembali  untuk melihat efek
hiperglikemia yang terjadi. Setelah mengalami  hiperglikemia,  masing-masing hewan  uji  diberi  perlakuan  sesuai  kelompok uji.  Untuk  kelompok  KD1,  KD2,  dan  KD3 pemberian pertama adalah suspensi glibenklamid  dosis  0,65  mg/kg  BB  lalu  satu jam  kemudian  diberi  ekstrak  daun  salam dengan  dosis  masing-masing  250  mg/kg  BB, 500 mg/kg BB dan 750 mg/kg BB.
Pemberian seluruh bahan uji dilakukan setiap  hari  selama  dua  minggu.  Pengukuran kadar  glukosa  darah  dilakukan  pada  hari  ke- 15  dan  hari  ke-22.  Mencit  dianggap  sudah mengalami  hiperglikemia  apabila  kadar glukosa  darah  puasa  >  200  mg/dL  (Alarcon- Aguilara et al., 1998).

## Analisis Data
Data  penurunan  kadar  glukosa  darah yang  diperoleh  dianalisis  secara  statistik dengan  menggunakan One  Way  Anova .  Data yang diperoleh sebelumnya diuji normalitasnya  dengan  uji Saphiro  Wilk .  Data dikatakan  terdistribusi  normal  jika  p  >  0,05. Kemudian dilanjutkan dengan uji homogenitas  (uji Levene ),  jika  nilai  p  >  0,05 berarti  data  yang  didapatkan  homogen. Selanjutnya  dilakukan  uji  statistik One  Way Anova pada  taraf  kepercayaan  95%.  Apabila ada  perbedaan  antar  kelompok  dilanjutkan dengan  uji  analisis Post  Hoc  Duncan untuk mengetahui kelompok perlakuan yang memiliki perbedaan signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Hasil  rendemen  yang  diperoleh  dari proses  ekstraksi  sebesar10,62%.  Berdasarkan penapisan  fitokimia  yang  telah  dilakukan diperoleh  hasil  bahwa  ekstrak  daun  salam positif  mengandung  senyawa  flavonoid, fenolik, saponin, triterpenoid, alkaloid dantanin.  Senyawa-senyawa  inilah  yang berperan dalam memberikan khasiat dan efek biologis.
Pengamatan  terhadap  kadar  glukosa darah  mencit  dilakukan  sebelum  induksi, setelah  hiperglikemia  dan  selama  14  hari pemberian perlakuan. Pada hari ke-1, hari ke- 8 setelah induksi aloksan, hari ke-15, dan hari ke-22  dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa darah  dalam  setiap  kelompok  uji  yang sebelumnya  telah  dipuasakan.  Berikut  adalah hasil  pengukuran  dan  grafik  profil  kadar
glukosa darah puasa rata-rata setiap kelompok uji.
Tabel 1.  Hasil  Pengukuran  Rerata  Kadar

## Glukosa Darah  Mencit
Kelompok Perlakuan Kadar Glukosa Darah (rerata ± SD) mg/dL H 1 H 8 H 15 H 22 Kontrol - 87,4 ± 13,03 350,8 ± 124,08 424,2 ± 44,85 429,6 ± 67,18 KG 83 ± 6,08 271,6 ± 64,71 127,4 ± 29,44 98 ± 12,88 DS1 97,6 ± 16,94 253,4 ± 30,41 175,6 ± 26,20 118 ± 15,76 DS2 90,8 ± 17,72 297,8 ± 51,24 195,2 ± 40,26 134,6 ± 5,72 DS3 117,6 ± 30,43 314,6 ± 68,74 177 ± 46,24 124,4 ± 26,83 KD1 103 ± 9,27 355 ± 106,07 149,2 ± 60,68 117,6 ± 31,91 KD2 93,4 ± 15,85 329,6 ± 21,27 113,4 ± 8,61 83,6 ± 4,61 KD3 93,2 ± 20,54 393,2 ± 69,82 161 ±
45,02 105,8 ± 65,05
Gambar 1. Profil rerata kadar glukosa darah mencit
Keterangan : H 1 :  kadar  glukosa  darah  awal  sebelum pemberian sediaan uji H 8 :  kadar glukosa darah setelah pemberian aloksan 70 mg/kg BB
H 15 :  kadar  glukosa  darah  setelah  7  hari pemberian sediaan uji
H 22 :  kadar  glukosa  darah  setelah  14  hari pemberian sediaan uji Kontrol -:  kelompok perlakuan
yang diberikan Na CMC 0,5% KG  :  kelompok  perlakuan  yang  diberikan glibenklamid 0,65 mg/kg BB DS1:  kelompok  ekstrak  daunsalam  250 mg/kg BB DS2:  kelompok  ekstrak  daun  salam  500 mg/kg BB DS3:  kelompok  ekstrak  daun  salam  750 mg/kg BB KD1:  kelompok  kombinasi  glibenklamid 0,65  mg/kg  BB  +ekstrak  daun  salam
250 mg/kg BB
KD2:  kelompok  kombinasi  glibenklamid
0,65 mg/kg BB + ekstrak daun salam 500 mg/kg BB KD3:  kelompok kombinasi glibenklamid
0,65  mg/kg  BB  +  ekstrak  daun  salam 750 mg/kg BB Tabel2. Selisih  penurunan  rerata  kadar glukosa darah Kelompok Perlakuan Selisih Penurunan Rerata Kadar Glukosa Darah (rerata ± SD) mg/dL Δ 1 Δ 2 Kontrol - -73,4 ±143,02 -78,8 ±115,12 KG 144,2 ±46,05 b 173,6 ±60,55 ab DS1 77,8 ±24,80 a 135,4 ±28,89 a DS2 102,6 ±14,87 ab 163,2 ±47,99 a DS3 137,6 ±26,42 b 190,2 ±46,98 ab KD1 205,8 ±51,57 c 237,4 ±75,11 bc KD2 216,2 ±21,25 c 246 ±23,09 bc KD3 232,2 ±33,00 c 287,4 ±65,05 c
Keterangan: Δ1  :  Selisih penurunan kadar  glukosa darah H 8 dan H 15 Δ2  :  Selisih penurunan kadar  glukosa darah H 8 dan H 22
Kontrol -:  kelompok perlakuan yang diberikan Na CMC 0,5%
KG  :  kelompok  perlakuan  yang  diberikan glibenklamid 0,65 mg/kg BB DS1:  kelompok  ekstrak  daun  salam  250 mg/kg BB DS2:  kelompok  ekstrak  daun  salam  500 mg/kg BB DS3:  kelompok  ekstrak  daun  salam  750 mg/kg BB KD1:  kelompok  kombinasi  glibenklamid 0,65  mg/kg  BB+ekstrak  daun  salam 250 mg/kg BB
KD2:  kelompok  kombinasi  glibenklamid 0,65 mg/kg BB + ekstrak daun salam
500 mg/kg BB
KD3:  kelompok kombinasi glibenklamid 0,65  mg/kg  BB  +  ekstrak  daun  salam 750 mg/kg BB
 Abjad  yang  sama  menunjukkan  tidak  ada perbedaan yang bermakna.
 Abjad yang berbeda menunjukkan perbedaan yang bermakna.

## Pembahasan
Penelitian  ini  menggunakan  ekstrak daun  salam ( Syzygiumpolyanthum Wight.) yang  telah  dilakukan  identifikasi  untuk memastikan  bahwa  benar  tanaman  yang digunakan adalah daun salam
( Syzygiumpolyanthum Wight.).  Ekstrak  daun salam diperoleh dari proses maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Ekstrak kental  yang  didapatkan  sebanyak  53,14  gram dengan  rendemen  yang  diperoleh  sebesar 10,62%.
Penelitian  ini  menggunakan  mencit jantan  sebagai  hewan  uji.  Mencit  jantan dipilih  karena  mencit  jantan  mempunyai kecepatan metabolisme obat yang lebih cepat dengan  kondisi  biologis  yang  lebih  stabil dibanding  mencit  betina.  Mencit  jantan  pada usia  2-3  bulan  adalah  mencit  dewasa  muda yang  mempunyai  keadaan  fisiologik  yang optimum.  Mencit    yang  digunakan  terlebih dahulu  diadaptasi  selama  7  hari  agar  dapat menyesuaikan  diri  dengan  lingkunganya selama penelitian berlangsung.
Hewan  uji  diukur  kadar  glukosa  darah awal  dan  hasil  pengukuran  menunjukkan bahwa  kadar  glukosa  darah  masing-masing mencit  berkisar  antara  83±6,08-117,6±30,43 mg/dL.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  seluruh hewan  uji  memiliki  kadar  glukosa  darah normal,  yakni  berkisar  antara  62-175  mg/dL (Malole  &  Pramono,  1989).Selanjutnya dilakukan penginduksian dengan memberikan aloksan  dosis  70  mg/kg  BB  secara  intravena untuk membuat hewan uji diabetes. Pemilihan  aloksan  sebagai  agen  penginduksi diabetes  dikarenakan  kemampuannya  untuk membuat  hewan  uji  terkondisi  sama  seperti pasien  DM.  Selain  itu,  aloksan  dapat menimbulkan keadaan hiperglikemia permanen  dalam  waktu  yang  cukup  singkat yaitu  2-3  hari  setelah  induksi  (Anonim,
1993).
Pengukuran kadar glukosa darah puasa dilakukan  kembali  pada  hari  ke-8  untuk memastikan bahwa mencit mengalami hiperglikemia.  Penginduksian  aloksan  akan
menyebabkan kadar glukosa darah mengalami  fluktuasi  selama  24-36  jam  yang meliputi fase hiperglikemia dan hipoglikemia yang  terjadi  secara  bergantian  sebelum terjadinya hiperglikemia permanen.
Hasil  pengukuran  kadar  glukosa  darah hari ke-8 memperlihatkan terjadinya peningkatan  kadar  glukosa  darah.  Data peningkatan    kadar  glukosa  darah  yang diperoleh cukup beragam. Hal ini disebabkan karena  respon  tubuh  tiap  mencit  terhadap aloksan  berbeda  sehingga  menghasilkan peningkatan  kadar  glukosa  darah  yang berbeda  pula.  Peningkatan  kadar  glukosa darah  oleh  aloksan  disebabkan  antara  lain kerusakan pada pada sel beta pankreas karena pembentukan  oksigen  reaktif  dan  gangguan homeostasis kalsium intraseluler(Lenzen &Panten, 1988). Kadar glukosa darah mencit mengalami  kenaikan  berkisar  antara  253,4  ± 30,41 – 393,2 ± 69,82 mg/dL.
Mencit  yang  hiperglikemia  mengalami poliuria. Hal ini terlihat pada kondisi kandang yang  lembab.  Mencit  ini  kemudian  diberi perlakuan  sesuai  kelompok  uji  secara  oral selama 14 hari.  Kontrol positif glibenklamid digunakan sebagai pembanding untuk melihat pengaruh  antidiabetika  oral  yang  telah terbukti  khasiatnya  untuk  menurunkan  kadar glukosa darah. Glibenklamid merupakan obat golongan  sulfonilurea  generasi  kedua,  yang sering digunakan pada pasien DM. Glibenklamid  tidak  larut  dalam  air  sehingga disuspensikan  dengan  zat  pensuspensi  Na CMC  0,5%.Glibenklamid  tidak  larut  dalam air sehingga diberikan dalam bentuk suspensi menggunakan  agen  pensuspensi  Na  CMC. Alasan  pemilihan  Na  CMC  dikarenakan sistem  pencernaan  mencit  tidak  memiliki enzim  selulase,  maka  penggunaan  Na  CMC tidak  akan  berpengaruh  pada  kadar  glukosa darah  (Akhtar,  M.  S.,  dkk.,  1981).  Dosis glibenklamid  yang  digunakan  adalah  0,65 mg/kg BB. Dosis tersebut digunakan berdasarkan  dosis  efektif  oral  pada  manusia yaitu 5 mg/hari yang kemudian dikonversi ke dosis  mencit.  Ekstrak  daun  salam  tunggal juga  digunakan  sebagai  faktor  koreksi,  untuk melihat  efek  sinergis  atau  antagonis  yang dihasilkan  oleh  kombinasi  glibenklamid  dan ekstrak daun salam terhadap penurunan kadar glukosa  darah.  Kontrol  negatif  yakni  kontrol yang diinduksi aloksan sehingga menyebabkan  diabetes  diperlukan  untuk mengetahui  penurunan  kadar  glukosa  darah
dari  keadaan  normal  selama  penelitian. Pengukuran  kadar  glukosa  darah  dilakukan pada hari ke-15 dan hari ke-22.
Hasil  pengukuran  kadar  glukosa  darah kelompok kontrol positif dan kontrol uji pada hari  ke-15  dan  ke-22  menunjukkan  adanya penurunan  kadar  glukosa  darah  secara bertahap.Sedangkan kelompok kontrol negatif  Na  CMC  0,5%  masih  mengalami hiperglikemia.Berdasarkan  hal  tersebut  maka untuk  kontrol  negatif  Na  CMC  0,5%  tidak dilakukan  uji  statistik.  Penurunan  kadar glukosa darah juga ditandai dengan penurunan gejala poliuria.
Hasil  uji  statistik  selisih  penurunan kadar  glukosa  darah  pada  hari  ke-15 menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna antara  kelompok  KD1,  KD2,  KD3  dengan kelompok  kontrol  glibenklamid  maupun kelompok  DS1,  DS2,  DS3.  Sedangkan  hasil uji  statistik  kelompok  DS2  menunjukkan perbedaan  tidak  bermakna  dengan  kelompok DS1,  DS3, dan  kontrol  glibenklamid.  Hal  ini terjadi karena penurunan kadar glukosa darah kelompok  KD1,  KD2,  KD3  jauh  lebih  besar dibandingkan kelompok kontrol glibenklamid maupun  ekstrak  daun  salam  tunggal,  dimana kadar glukosa rata-rata kelompok KD1, KD2, KD3  sudah  mencapai  kadar  glukosa  darah normal  sedangkan    kadar  glukosa  rata-rata kelompok DS1, DS2, DS3 masih tetap tinggi. Kejadian  ini  memperlihatkan  terjadinya interaksi sinergis, dimana efek antihiperglikemik yang dihasilkan oleh
kelompok kombinasi lebih besar dibandingkan  kelompok  tunggal  masing- masing.
Hal  yang  sama  juga  terjadi  pada  hari ke-22.  Penurunan  kadar  glukosa  darah kelompok  KD1,  KD2,  KD3  jauh  lebih  besar dibandingkan kelompok kontrol glibenklamid dan  kelompok  ekstrak  daun  salam  tunggal. Penurunan kadar glukosa darah tertinggi pada hari  ke-22  adalah  kelompok  kombinasi glibenklamid  dan  ekstrak  daun  salam  750 mg/kg BB, yaitu 287,4±65,05.
Peningkatan  efek  terjadi  berbarengan dengan  peningkatan  dosis  daun  salam  yang diberikan  dalam  penggunaan  kombinasi. Semakin  tinggi  dosis  yang  digunakan,  maka semakin  besar  pula  efek  penurunan  kadar glukosa  darah  yang  dihasilkan.  Namun,  hasil uji  statistik  ANOVA  menunjukkan  bahwa kelompok KD1, KD2, dan KD3tidak memberikan  perbedaan  yang  bermakna,
sehingga kombinasi dosis yang efektif adalah KD1,  yakni  kombinasi  glibenklamid  dan ekstrak daun salam 250 mg/kg BB.
Analisis  fitokimia  yang  diperoleh menunjukkan bahwa pada ekstrak daun salam memberikan  hasil  positif  terhadap  golongan senyawa flavonoid, fenolik, saponin, terpenoid,  alkaloid  dan  tanin.  Senyawa- senyawa  inilah  yang  berperan  sebagai antidiabetes.
Flavonoid diketahui mampu
menangkap  radikal  bebas  (ROS/ Reactive Oxygen Species atau RNS/ Reactive Nitrogen  Species )  melalui  transfer  elektron, serta menghambat reaksi peroksidasi (Lugasi,  Hovari,  Sagi,  &  Biro,  2003). Flavonoid merupakan pengkhelat logam dan menghambat  reaksi  Fenton  dan  Haber- Weiss, yang penting sebagai sumber radikal oksigen  reaktif  (Shahidi  &  Wanasundara, 1992).  Flavonoid  dapat  bekerja  secara langsung terhadap sel beta pankreas, dengan memicu  pengaktifan  kaskade  sinyal  cAMP dalam  memperkuat  sekresi  insulin  yang disensitisasi  oleh  glukosa  (Brahmachari, 2011).
Senyawa  fenolik  di  dalam  daun  salam seperti  3,4,5-trihidroksi  asam  benzoat,  4- hidroksi  3-metoksi  asam  benzoat,  dan  4- hidroksi-3,5-dimetoksi asam benzoat bersifat  sebagai  antioksidan  (Lelono  & Tachibana, 2013).
Saponin bertanggungjawab untuk
mempertahankan konsentrasi Ca 2+
intraseluler  dan  homeostasis  Ca 2+ (Mythili,
Parameswari,  &  Dayana,  2012).  Saponin dapat  merangsang  sekresi  insulin  pada  sel beta  pankreas.  Mekanismenya  sama  seperti obat hipoglikemik
oral
golongan sulfonilurea,  dengan  menghambat channel K-ATPase , sehingga aliran kalium keluar sel terganggu.  Akibatnya  terjadi  depolarisasi membran  sel  beta  pankreas,  sehingga channel  Ca 2+ -ATPase terbuka  dan  ion kalsium  masuk  ke  sitoplasma.  Keberadaan ion  kalsium  tersebut  mengaktifkan  enzim kalmodium  dalam  sel    sehingga  terjadi eksositosis  insulin  dari  vesikel  untuk disekresikan  keluar  sel  (Murray,  Granner, Mayes, & Rodwel, 2003).
Terpenoid  seperti  triterpenoid  dapat meningkatkan  penyerapan  glukosa  dengan bertindak  meniru  kerja  insulin  dan  sebagai insulin  sensitizer .  Triterpenoid  yang  dapat berperan  sebagai  insulin  (insulinotropik)
mampu  berikatan  dengan  reseptor  insulin (Lee  &  Thuong,  2010).  Triterpenoid  juga mampu  menghambat  produksi TNF-α ( Tumor  Necrosis  Factor )  di  jaringan pankreas.  TNF-α  dihasilkan  oleh  aktivitas ROS (Gwozdziewiczova, Linchnovska,
Ben,  Chlup,  &  Hrebicek,  2005).  Dengan dihambatnya  produksi  TNF-α,  maka  efek kerusakan  serta  menurunnya  sensitivitas insulin lebih rendah.
Alkaloid cincin imidazol menstimulasi sekresi  insulin,  menurunkan  kadar  glukosa darah  dan  memperkuat  toleransi  terhadap glukosa (Patel, Kumar, Laloo, & Hemalatha,  2012).Tanin  dapat  menurunkan kadar glukosa darah dengan cara menangkap  radikal  bebas  dan  mengurangi peningkatan  stres  oksidatif  pada  penderita diabetes sehingga mampu mengontrol kadar glukosa darah (Widowati, 2008).
Penggunaan bersama glibenklamid dan ekstrak daun  salam secara oral terbukti dapat memperbesar penurunan kadar glukosa darah. Untuk  itu,  pengkombinasian  glibenklamid dengan  ekstrak  daun  salam  dapat  dilakukan oleh  pasien  diabetes  untuk  memperbesar penurunan  kadar  glukosa  darah,  tetapi  tetap diperlukan
pengawasan dalam penggunaannya terutama jika digunakan lebih dari 14 hari.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhtar,  M.  S.,  Athar,  M.  A.,  &  Yaquib,  M. (1981). Effect of Momordica charantia on Blood Glucose Level of
Normal and Alloxan –Diabetic Rabbits. Planta Medica .
Alarcon-Aguilara,  F.  J.,  Roman-Ramos,  R.,
Perez-Gutierrez, S., Aguilar-
Contreras,  A.,  Contreras-Weber,  C.
C.,  &  Flores-Saenz,  J.  L.  (1998). Study  of  the  Anti-Hyperglycemic
Effect of Plants Used as Antidiabetics. Ethnopharmacology .
Anonim.  (1993). Penapisan  Farmakologi, Pengujian  Fitokimia  dan  Pengujian
Klinik. Jakarta : Yayasan Pengembangan  Obat  Bahan  Alam Phyto Medica.
Anonim.  (2013). Internasional  Diabetes Federation 2013.
Brahmachari,  G.  (2011).  Bioflavonoids  with Promising  Anti-Diabetic  Potentials: A  Critical  Survey:  Opportunity, Challenge,  and  Scope  of  Natural Products. Medicines Chemistry .
Carolina, R. (2007). Pengaruh Ekstrak Etanol
Daun  Salam  (Polyanthi  Folium) Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah Mencit  Jantan  Galur  BALB/C  Yang Diinduksi Aloksan. Universitas Surabaya, Surabaya. Gwozdziewiczova,  S.,  Linchnovska,  R.,  Ben, R.  Y.,  Chlup,  R.,  &  Hrebicek,  J. (2005). TNF-alpha in the Development  of  Insulin  Resistance and  Other  Disorders  in  Metabolic
Syndrome. Biomed Pap Med Fac Uni Palacky Olmouc Czech Repub.
Harborne,  J.B.,  (1987). Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan . Bandung: Penerbit ITB.
Lee,  M.  S.,  &  Thuong,  P.  T.  (2010). Stimulation  of  Glucose  Uptake  by Triterpenoids From Weigela Subsessilis. Phytotherapy research.
Lelono,  R.  A.  A.,  &  Tachibana,  S.  (2013). Preliminary  Studies  of  Indonesian Eugenia  polyantha  Leaf  Extracts  as Inhibitors  of  Key  Enzymes  for  Type 2 Diabetes. J. Med. Sci.
Lenzen,  S.,  &  Panten,  U.  (1988).  Alloxan: History  and  Mecanism  of  Action. Diabetologia.
Liem,  S.  (2015). Uji  Aktivitas  Antidiabetes
Kombinasi Glibenklamid dan Ekstrak Daun  Salam  (Syzygium  polyanthum Wight.) Terhadap Mencit (Mus musculus)  yang  Diinduksi  Aloksan. Universitas Tadulako, Palu.
Lugasi, A., Hovari, J., Sagi, K. V., & Biro, L. (2003).  The  Role  of  Antioxidant Phytonutrients  In  The  Prevention  of Disease. Acta Biologica Szegediensis,
47 , 119-125.
Malole,  M.  B.  M.,  &  Pramono,  C.  S.  U.
(1989). Penggunaan  Hewan-Hewan
Percobaan dalam Laboratorium . Bogor:  Departemen  Pendidikan  dan
Kebudayaan Direktorat Jendral Pendidikan  Tinggi Antar Universitas, Bioteknologi, IPB. Murray, R. K., Granner, D. K., Mayes, P. A.,
&  Rodwel,  V.  W.  (2003). Biokimia Harper (Vol.  25).  Jakarta:  Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Mythili,  Parameswari,  C.,  &  Dayana,  J.
(2012). Phytochemical analysis of the Bark  Extract  of  Terminalia  Arjuna and  its  cardioprotective  Effect. 2nd
National  Level  Students  Conference on Nascent Technologies in Biomedical .
Patel,  D.,  Kumar,  R.,  Laloo,  D.,  &
Hemalatha, S. (2012). Natural
Medicines  From  Plant  Source  Used For Therapy of Diabetes Mellitus: An
Overview  of  Its  Pharmacological Aspects. Asian  Pacific  Journal  of Tropical Disease .
Shahidi, F., & Wanasundara. (1992).
Phenolic Antioxidants. Crit Rev Food Sci Nutr .
Studiawan,  H.,  &  Santosa,  M.  H.  (2005).
Uji Aktivitas Penurun Kadar Glukosa Darah Ekstrak Daun Syzygium polyanthum pada Mencit yang  Diinduksi  Aloksan. Medika Kedokteran Hewan.
Widowati,  W.  (2008).  Potensi  Antioksidan sebagai Antidiabetes. JKM .