## AKTIVITAS ANTIFOTOOKSIDASI DAN PENGHAMBAT
PEMBENTUKAN AGES ( ADVANCED GLYCATION END-PRODUCTS )

## DARI FRAKSI ALGA Padina australis
Syutria Trifosa Kondoj 1) , Edi Suryanto 2) , Max Runtuwene 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA Unsrat Manado, 95115
2) Jurusan Kimia FMIPA Unsrat Manado, 95115

## ABSTRACT
This  study  aims  to  assess  the  anti  photooxidation  activity  and  inhibition  of  AGEs  (Advanced Glycation  End-Products)  activity  from  fraction  of  Padina  australis  algae.  This  research  has  started  by extracting  powder  Padina  australis  algae  with  maseration  method  using  75%  methanol  solvent. Futhermore,  extract  has  fractionated  by  conventional  column  chromatography  with  the  solvent  of methanol  and  aquades.  The  fractions  have  tested  by  determine  the  total  phenolic  content,  antioxidant, anti  photooxidation  and  inhibitory  of  AGEs  (Advanced  Glycation  End-Products)  activity.  The  results show that the fraction of  F4 has the highest phenolic total content, antioxidant, anti photooxidation, and inhibition  of  AGEs  activity  followed  by  the  fractions  of  F2,  F1,  F3,  and  F5.  The  inhibition  of  AGEs (Advanced  Glycation  End-Products)  activity  in  each  fraction  was  analyzed  by  using  UV-Vis spectrophotometer. Based on this research, it can be concluded that F4 has anti photooxidation activity and inhibiting of AGEs (Advanced Glycation End-Products) activity.
Keywords : Algae, Padina australis, anti photooxidation, AGEs in vitro

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari  aktitivitas  antifotooksidasi  dan  penghambat pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End-Products ) dari Fraksi Alga Padina australis . Penelitian ini dimulai  dengan  mengekstraksi  serbuk  alga Padina  australis menggunakan  metode  maserasi  dengan pelarut  metanol  75%.  Kemudian,  ekstrak  difraksinasi  menggunakan  kromatografi  kolom  konvensional dengan pelarut metanol dan aquades. Hasil fraksi dikelompokkan menjadi 5 fraksi berdasarkan perbedaan warna.  Fraksi-fraksi  tersebut  dilakukan  pengujian  untuk  menentukan  kandungan  total  fenolik,  aktivitas antioksidan, antifotooksidasi, serta aktivitas penghambat pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End- Products ).  Hasilnya  menunjukkan  bahwa  fraksi  F4  memiliki  kandungan  total  fenolik,  aktivitas antioksidan,  antifotooksidasi,  dan  penghambat  pembentukan  AGEs  tertinggi  diikuti  F2,  F3,  F1,  dan  F5. Aktivitas  penghambat  pembentukan  AGEs  ( Advanced  Glycation  End-Products )  pada  masing-masing fraksi  dianalisis  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis.  Berdasarkan  penelitian  ini,  dapat disimpulkan  bahwa  F4  memiliki  aktivitas  antifotooksidasi  dan  penghambat  pembentukan  AGEs ( Advanced Glycation End-Products ).
Kata Kunci : Alga, Padina australis, antifotooksidasi, AGEs in vitro

## PENDAHULUAN
Seiring  dengan  berkembangnya  waktu, arus globalisasi, serta aktivitas manusia yang buruk menyebabkan udara menjadi tercemar.  Pencemaran  udara  atau  polusi bersumber  dari  asap  kendaraan,  pabrik, limbah  industri,  penebangan  pohon  secara liar,  dan  sebagainya.  Pencemaran  udara  ini menghasilkan  radikal  bebas.  Radikal  bebas adalah  oksidan  yang  sangat  reaktif,  karena radikal  bebas  merupakan  senyawa  yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan  pada  orbitalnya  (Suryanto, 2012).  Apabila  udara  yang  telah  tercemar dihirup  oleh  manusia  akan  diubah  menjadi senyawa  yang  sangat  reaktif  atau  yang dikenal  dengan  spesies  oksigen  reaktif (SOR).  SOR dapat dengan  mudah terbentuk di  dalam  tubuh  dengan  adanya  bantuan cahaya atau reaksi fotooksidasi.
Reaksi  fotooksidasi  dapat  berpengaruh terhadap  bahan  alam,  karena  cahaya  dapat mengaktivasi oksigen triplet dan mengubahnya  menjadi  oksigen  singlet. Oksigen  singlet  adalah  suatu  jenis  spesies oksigen  reaktif  (SOR)  yang  non  radikal elektrofilik. Apabila oksigen singlet bereaksi dengan asam  lemak tak  jenuh  yang terdapat dalam  bahan  alam  akan  menghasilkan hidroperoksida
terkonjugasi
dan hidroperoksida  non  terkonjugasi.  Efek  dari reaksi  fotooksidasi  dapat  menyebabkan masalah kesehatan seperti pigmentasi, katarak,  penuaan  kulit,  dan  kanker  (Davies et al ., 2001).
Berdasarkan  penelitian  secara in  vivo menyatakan bahwa dalam kondisi patologis,
keseimbangan normal antara produksi spesies  oksigen  reaktif  (SOR)  dengan kemampuan pertahanan antioksidan memiliki  gangguan  sehingga  memutuskan rantai reduksi oksidasi normal dan mengakibatkan  kerusakan  oksidatif  jaringan atau  yang  dikenal  dengan  stres  oksidatif (Suryanto,  2012).  Stres  oksidatif  dapat menyebabkan pembentukan AGEs ( Advanced  Glycation  End-Products )  yang dapat memicu patogenesis penyakit diabetes, alzheimer, stroke, jantung koroner, osteoporosis,  bahkan  kanker  (Ganeshan et al. ,  2015).  Untuk  mencegah  penyakit- penyakit  tersebut  dibutuhkan  suatu  senyawa antioksidan.
Senyawa antioksidan dapat diperoleh dari bahan  alam,  contohnya  biota  laut.  Alga Padina  australis termasuk  salah  satu  jenis rumput  laut  coklat  yang  memiliki  senyawa seperti fikosantin, xantofil, dan klorofil yang berpotensi  sebagai  antioksidan  (Santoso et al .,  2004).  Alga Padina  australis banyak terdapat di perairan laut Sulawesi, Indonesia. Beberapa  penelitian  terdahulu  menyatakan bahwa  alga Padina  australis memiliki aktivitas  antibakteri  (Jeong et  al .,  2011), antikanker  (Irwandi et  al .,  2011).  Sehingga menarik peneliti untuk melakukan penelitian mengenai  aktivitas  antifotooksidasi  dan analisis  untuk  menghambat  pembentukan AGEs  ( Advanced  Glycation  End-Products ) secara in  vitro dari  fraksi  alga Padina australis .
Penelitian ini bertujuan untuk menentukan  aktivitas  antifotooksidasi  dan penghambat  pembentukan  AGEs  ( Advanced Glycation  End-Products )  dari  fraksi  alga
Padina australis .

## METODE PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  adalah  alga Padina  australis yang  diambil  dari  perairan desa  Tongkaina,  Manado,  Sulawesi  Utara. Bahan  kimia  yang  digunakan  terdiri  dari asam  klorida  pekat,  asam  linoleat,  aquades, etanol  p.a,  eritrosin,  Folin-Ciocalteu  50%, gel silika, larutan glukosa,larutan penyanggapH  7,  larutan  natrium  azida,
potasium  hidroksida,  protein Bovine  Serum
Albumin , tween 20,
2,2-difenil-1- pikrilhidrazil,  dan  2,4-dinitrofenilhidrazin. Alat  yang  digunakan  berupa  alat-alat  gelas, aluminium  foil,  batang  pengaduk, blender , botol  vial,  cawan  petri,  corong  pisah,  kertas saring,  kompor  listrik,  kotak  cahaya,  oven, pipet  tetes,  pipet  mikro, rotary  evaporator , sinar  tampak  45  watt  (Philips  Helix), spektrofotometer  uv-vis  (Shimadzu),  tabung reaksi, vortex ,  termometer,  dan  timbangan analitik.

## Persiapan Sampel
Alga Padina australis dibersihkan dengan  air  yang  mengalir,  kemudian dikeringkan. Setelah itu, dihaluskan menjadi serbuk  dengan  menggunakan blender dan ditimbang sebanyak 50 g.

## Ekstraksi
Sampel  diekstraksi  menggunakan  pelarut metanol  75%.  Ekstraksi  dilakukan  dengan cara  maserasi.  Sebanyak  50  g  sampel dimasukkan dalam labu distilat, ditambahkan  pelarut  metanol  sebanyak  75 mL  ditambah  dengan  25  mL  aquades. Setelah  itu,  erlenmeyer  digoyangkan  agar tercampur  sampel  dan  pelarutnya  dan didiamkan  selama  12  jam.  Kemudian, ekstrak  disaring  dan  diuapkan  untuk
menghilangkan pelarutnya dengan menggunakan rotary  evaporator .  Setelah itu,  dikeringkan  dengan  menggunakan  oven dengan  suhu  60ºC  hingga  diperoleh  ekstrak alga Padina australis.

## Fraksinasi
Ekstrak  selanjutnya  dipisahkan  dengan teknik kromatografi kolom, dengan berdiameter  2  cm  dan  panjang  gelombang 50 cm. Fase diam yang digunakan silika gel G-60 dan fase gerak yang digunakan pelarut metanol  100  mL.  Sebelum  dimasukkan  ke dalam  kolom,  maka  silika  gel  diaktifkan terlebih  dahulu  dengan  dipanaskan  pada suhu  110°C  selama  30  menit.  Setiap  2  mL fraksi-fraksi  yang  didapat  pada  pemisahan ditampung  dalam  kolektor  fraksi.  Setiap fraksi diukur absorbansinya dengan spektrotometer UV-Vis pada ƛ 280 nm.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Fraksi  kemudian  ditentukan  kandungan total  fenolik  dengan  menggunakan  metode Folin-Ciocalteu  (Jeong et  al., 2004). Sebanyak  0,1  µg/mL  larutan  fraksi  1000 ppm  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  lalu ditambahkan 0,1 mL reagen Folin-Ciocalteu 50%.  Campuran  tersebut  divortex  selama  2 menit,  lalu  ditambahkan  2  mL  larutan natrium karbonat 2%. Selanjutnya campuran diinkubasi  dalam  ruang  gelap  selama  30 menit.  Absorbansinya  di  baca  pada  panjang gelombang 750 nm dengan spektrofotometer.  Kandungan  total  fenol dinyatakan  sebagai  ekivalen  asam  galat mg/kg ekstrak.
Penentuan  Penangkal  Radikal  Bebas  1.1- difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH)
Penentuan  aktivitas  penangkal  radikal bebas  menurut  Burda  dan  Olezek  (2001).
Sebanyak  0,1  mL  masing-  masing  ekstrak kental  ditambahkan  dengan  2  mL  larutan 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil  (DPPH)  0,2% dalam  etanol  dan  divortex  selama  2  menit. Berubahnya  warna  larutan  dari  ungu menjadi  kuning  menunjukkan  efisiensi penangkal radikal bebas. Selanjutnya pada 5 menit  terakhir  menjelang  30  menit  inkubasi absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang 517  nm  dengan  menggunakan  spektrometer UV-Vis.  Aktivasi  penangkal  radikal  bebas dihitung  sebagai  persentase  berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan persamaan:
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  (%)
= (1 − 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 ) × 100%

## Penentuan Aktivitas Antifotooksidasi Terhadap Asam Linoleat
Emulsi  dibuat  stok  1,5  g  asam  linoleat ditambah  6  mL  aquades, distirer selama  5 menit,  lalu  ditambah  2,5  g tween 20 kemudian distirer kembali  selama 10  menit.
Diambil 1 g dari stok tersebut, dan ditambah
5  mL  aquades distirer selama  2  menit, selanjutnya ditambah 5 mL aquades sebanyak  4  kali  penambahan  sehingga  total distirer 10  menit.  Pengaruh  masing-masing fraksi terhadap oksidasi oksigen singlet diuji dalam  asam  linoleat  yang  mengandung  5 𝜇 g/mL  eritrosin  dalam  emulsi  sebagai sensitizer.
Efek  fraksi  terhadap  fotooksidasi  asam linoleat  menggunakan  konsentrasi  500 𝜇 g/mL.  Sampel  dari  campuran  tersebut diambil  sebanyak  5  mL  dan  dimasukkan  ke dalam  botol  serum  berukuran  10  mL  yang dilengkapi  dengan  penutup  karet  dan aluminium  foil.  Analisis  hidroperoksida diena  terkonjugasi  dilakukan  selama  4  jam
penyinaran. Pengukuran nilai hidroperoksida diena terkonjugasi dimulai dengan mempipet  sampel  emulsi  30  mL.  Sampel tersebut  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi yang  telah  berisi  3  mL  metanol absolut e.
Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang 234  nm.  Setelah  diketahui  absorbansi, dengan rumus Lambert-Beer ( A =ε bc ) maka dapat  dicari  konsentrasi  hidroperoksida diena terkonjugasi karena diketahui: ε  =  26  000  M -1 cm -1 untuk  linoleat hidroperoksida (Frankel et al , 1994).
b = 1 cm
Penghambatan Pembentukan AGES
( Advanced Glycation End-Products ) secara

## In Vitro
Penghambatan pembentukan AGES dilakukan  menggunakan  metode  Peng et al .,(2008) dengan sedikit modifikasi. Dibuat larutan  BSA  sebanyak  1,5  g  dalam  10  mL larutan  penyangga/ buffer  phosphate pH  7, glukosa  sebanyak  2,82  dalam  15  ml  buffer phosphate  pH  7,  natrium  azida  0,002  g dalam  10  ml  buffer  phophate  pH  7,  120  ml larutan  phosphate  pH  7    dan    2000  ppm untuk masing-masing fraksi.
Setelah  itu,  diambil  1  mL  dari  masing- masing larutan BSA, glukosa, natrium azida, dan buffer  phosphate pH  7  sebagai  kontrol.
Lalu,  sebanyak  1  mL  dari  masing-masing sampel  ditambahkan  dengan  1  mL  dari masing-masing larutan BSA, glukosa, natrium  azida,  dan buffer  phosphate pH  7 untuk  diinkubasi  pada  suhu  60ºC  selama  21 hari.
Sebelum dianalisis dilakukan pengenceran  dengan  mengambil  sebanyak 0,01  masing-masing  sampel  dilarutkan  ke dalam 10 mL larutan buffer phosphate pH 7. Lalu, dianalisis menggunakan metode
Lappin  (1951)  dengan  sedikit  modifikasi. Sebanyak  0,25  mL  masing-masing  sampel ditambahkan  0,25  mL  larutan  DNPH  (2,4- dinitrophenylhidrazine )  dan  1  tetes  HCl pekat.  Campuran  dipanaskan  selama  30 menit  pada  suhu  50ºC  dan  didinginkan. Selanjutnya ditambahkan 2 mL larutan KOH 1  N,  digojok  sampai  homogen  dan  dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 480 nm.  Setelah  itu  masukkan  ke  rumus  :
% Inhibisi AGES =   [1 −
( absorbansi sampel absorbansi kontrol )] × 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Proses  ekstraksi  maserasi  serbuk  alga Padina australis menghasilkan berat ekstrak sebanyak  3,965  g  dengan  ekstrak  berwarna cokelat  dan  diperoleh  nilai  rendemennya sebesar  7,93%.  Sebanyak  2  g  ekstrak difraksinasi dengan cara kromatografi kolom konvensional. Adapun alasan pada kromatografi kolom konvensional digunakan sillika  gel  karena  kolom  yang  dibentuk dengan  silika  gel  memiliki  tekstur  dan struktur  yang  lebih  padat  dan  menyatu. Sementara  itu,  fase  gerak  yang  digunakan sifatnya  polarnya  yaitu  metanol dan air. Hal ini  dikarenakan  pelarut  polar  merupakan pelarut  yang  lebih  optimal  dibandingkan pelarut  lainnya  dalam  mengisolasi  senyawa yang  terdapat  pada  alga Padina  australis (Limantara et al ., 2011).
Pada  proses  fraksinasi  menggunakan metanol,  eluet  yang  didapat  mengalami perubahan  warna  dari  bening  menjadi kuning.  Begitu  juga  pada  saat  ditambahkan pelarut  aquades.  Hal  ini  menunjukkkan bahwa analit  yang terdapat  pada fraksi telah terabsorpsi dengan baik oleh bantuan pelarut
(absorben). Hasil fraksi kemudian dikelompokkan  berdasarkan  warna  dan diuapkan  dengan menggunakan rotary evaporatory .  Sehingga,  diperoleh  rendemen dari  tiap  5  fraksi  yang  dapat  dilihat  dalam tabel 2.
Tabel 2. Rendemen Dari Fraksi Alga

## Padina australis
Berdasarkan  tabel  2,  dapat  dilihat  bahwa setiap  fraksi  memiliki  rendemen  yang berbeda-berbeda.  F4  memiliki  rendemen yang  tertinggi  dengan  warna  kuning  jernih. Hal ini mengindikasikan bahwa F4 memiliki banyak  senyawa  yang  telah  terabsorpsi. Begitupun  sebaliknya  F5  memiliki  nilai rendemen yang terendah. Hal ini dikarenakan  senyawa  yang  diabsorpsi  oleh F5 cenderung lebih sedikit dan menghasilkan warna bening. Semakin terang warna  yang  dihasilkan  maka  semakin  polar dan  pekat,  fraksi  yang  diperoleh  dan sebaliknya  semakin  pudar  warna  yang dihasilkan  seperti  F5  maka  fraksi  yang dihasilkan kurang polar dan encer.

## Kandungan Total Fenolik
Fraksi alga Padina australis yaitu F1, F2,
F3,  F4,  dan  F5  dibuat  larutan  dengan konsentrasi 1000 µg/mL. Kemudian dilakukan penentuan kandungan total fenolik  dengan  menggunakan  metode  Folin Sampel Rendemen (%) Warna F1 6,035 Kekuningan F2 F3 F4 F5 8,795 3,950 14,425 3,420 Kuning Keruh Kekuningan Agak Keruh Kuning Jernih
Bening
Kekuningan
Ciocelteu  (Jeong et  al., 2004).  Kandungan total  senyawa  fenolik  dari  alga Padina australis dengan  konsentrasi  1000  µg/mL dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3 . Kandungan Total Fenolik dari Fraksi Alga Padina australis Sampel Total Fenolik (μg/mL) F1 17,14±0,02 b F2 24,81±0,01 a F3 14,70±0,03 b F4 25,10±0,01 a F5 9,08±0,01 c
Berdasarkan Tabel 3, dapat dilihat bahwa kandungan  total  fenolik  yang  dihasilkan secara  berturut  dari  yang  tertinggi  hingga terendah adalah F4 sebesar 25,10 µg/mL, F2 sebesar  24,81,  F1  sebesar  17,14,  F3  sebesar 14,70, dan F5 sebesar 9,08 µg/mL. Dan hasil uji  lanjut  Duncan  terhadap  total  fenol masing-masing  fraksi  diketahui  bahwa  F4 dan  F2  memiliki  kandungan  total  fenolik yang sama dan berbeda nyata dengan sampel F1,  F3,  dan  F5  yang  juga  memiliki kandungan  total  fenolik  yang  sama.  Sampel F4  memiliki  nilai  kandungan  fenolik  yang tertinggi.  Hal  ini  dikarenakan  adanya korelasi  antara  hasil  fraksinasi  dengan kandungan  total  fenolik  yang  menyebabkan
semakin  banyak  senyawa  yang  terabsorpsi pada  pelarut  maka  akan  semakin  pekat  atau jernih  warna  yang  akan  dihasilkan  dan semakin  banyak  rendemen  yang  dihasilkan. Begitupun sebaliknya semakin sedikit senyawa yang terabsorpsi pada pelarut maka akan  semakin  encer  atau  jernih  warna  yang akan  dihasilkan  dan  semakin  sedikit  pula rendemen yang didapatkan.
Aktivitas Penangkal Radikal Bebas
(DPPH)
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dari fraksi  alga Padina  australis dianalisis dengan  menggunakan  pengujian  penangkal radikal  bebas  atau  metode  DPPH  Burda et al .,  (2001).  Metode  DPPH  merupakan  salah satu  dari  metode  penentuan  aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  reagen DPPH (1,1-diphenyl-2-picylhydrazyl).
Rumput  laut  memiliki  kemampuan  dalam mensintesis  senyawa  antioksidan  sebagai suatu sistem pertahanan dari paparan radikal bebas  (Budhiyanti  et  al.,  2012).  Nursid et al .,  (2013)  mengatakan  bahwa  alga Padina australis memiliki  aktivitas  antioksidan yang  paling  kuat  dibandingkan  alga  coklat lainnya. Hasil presentasi aktivitas penangkal radikal  bebas  dari  fraksi  alga Padina australis dapat dilihat pada gambar 2.
b a b c a 0 10 20 30 40 50 60 70 F1 F2 F3 F4 F5 A k ti v it a s P en a n g k a l R a d ik a l B eba s (% ) Fraksi Alga Padina australis
Gambar 2. Aktivitas Penangkal Radikal Bebas (DPPH) dari Fraksi Alga Padina australis .
Berdasarkan  Gambar  2,  dapat  dilihat bahwa  sampel  F4  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  fraksi  lainnya.  Hal  ini  dikarenakan nilai absorbansi yang dimiliki oleh F4 sangat rendah sehingga berpengaruh pada presentase aktivitas penangkal radikal  bebas (DPPH).  Semakin  rendah  nilai  absorbansi sampel  maka  semakin  tinggi  aktivitas antioksidan  dari  sampel  tersebut.  Begitupun sebaliknya  semakin  tinggi  nilai  absorbansi sampel  maka  semakin  rendah  aktivitas antioksidan dari sampel tersebut.
Hasil  uji  Duncan  juga  menunjukkan bahwa  F4  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  tertinggi.  Diikuti  F2,  F1,  F3,  dan  F5. Hal  ini  dikarenakan  adanya  komponen struktural  yang  terdapat  pada  alga  seperti asam-asam  lemak  yang  tidak  mengalami kerusakan oksidatif yang disebabkan radikal bebas  (Kelman et  al .,  2012).  Kemampuan rumput  laut  dalam  mensintesis  senyawa antioksidan  sebagai  suatu  sistem  pertahanan dari paparan radikal bebas dapat merefleksikan  kemampuan  adaptasi  rumput laut terhadap radiasi sinar matahari (Budhiyanti et al ., 2012).
Hasil  aktivitas  antioksidan  berbanding lurus  dengan  kandungan  fenolik.  Hal  ini dikarenakan kemampuan penagkapan radikal bebas (DPPH) yang dipengaruhi oleh gugus  OH  yang  terdapat  dalam  senyawa fenolik  (Nakiboglu et  al .,  2007).  Semakin banyak  gugus  hidroksil    yang  tersubstitusi dalam molekul maka kemampuan penangkap  radikal  bebasnya  semakin  kuat
karena semakin  banyak atom hidrogen  yang dapat didonorkan (Yu Lin et al ., 2009).
Aktivitas Antifotooksidasi Terhadap Asam Linoleat Aktivitas antifotooksidasi dilakukan dengan mengukur aktivitas antioksidan pada sistem emulsi dengan metode diena terkonjugasi.  Prinsip  dari  metode  diena terkojugasi adalah mengukur hidroperoksida diena  terkonjugasi  dari  emulsi  (o/w)  10 persen yang telah diinduksi sinar tampak 25 watt  selama  4  jam.  Diena  terkonjugasi merupakan  proses  fotooksidasi  pada  asam linoleat  dengan  menggunakan  eritrosin sebagai fotosensitiser. Proses ini menyebabkan  terjadinya  pergeseran  posisi sebuah  ikatan  rangkap,  dimana  ikatan rangkap pada asam lemak atau asam linoleat memperlemah ikatan C-H pada atom karbon yang  berdekatan  dengan  ikatan  rangkap tersebut sehingga pelepasan H menjadi lebih mudah (Ruharjo, 2006).
Berdasarkan  penelitian  ini,  eritrosin  pada emulsi  berfungsi sebagai  inisiator terjadinya oksidasi.  Sensitiser  dapat  menyerap  energi cahaya dan mentransfer kelebihan energinya ke  oksigen  triplet  membentuk  oksigen singlet sehingga dapat menyebabkan oksigen  singlet  bereaksi  dengan  ikatan rangkap  yang  kaya  elektron  seperti  pada asam  lemak  tak  jenuh  dalam  hal  ini  asam linoleat sehingga menyebabkan asam linoleat  lebih  mudah  untuk  teroksidasi (Suryanto,  2012).  Aktivitas  antifotooksidasi dari fraksi alga Padina australis konsentrasi 500 µg/mL dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar  3. Kandungan Diena Terkonjugasi dari Fraksi  Alga Padina australis
(Ket. K1 = kontrol yang dicahayakan; K2 = kontrol yang tidak dicahayakan;
K= kontrol yang berisi hanya emulsi dan dicahayakan)
Berdasarkan  Gambar  3,  dapat  dilihat bahwa  kandungan  diena  terkonjugasi  dari fraksi  alga Padina  australis menurun dibandingkan dengan K1.
Semakin meningkatnya nilai kandungan diena terkonjugasi  yang  diperoleh  maka  semakin tinggi terjadinya reaksi fotooksidasi terhadap  asam  linoleat.  Dan  juga  semakin lama dicahayakan maka semakin tinggi nilai diena  terkonjugasi  yang  akan  diperoleh. Diena  terkonjugasi  merupakan  awal  proses oksidasi  asam  lemak  tak  jenuh  seperti  asam linoleat  maupun  asam  lemak  tak  jenuh ganda  ( polyunsaturated  fatty  acids) ,  dimana terjadinya  pergeseran  posisi  sebuah  ikatan rangkap.  Struktur  1,4-pentadiena  didalam asam  linoleat  membuatnya  menjadi  sangat mudah  mengalami  oksidasi.  Adanya  ikatan ganda  pada  asam  lemak  memperlemah ikatan  C-H  pada  atom  karbon  yang  dekat dengan  ikatan  ganda  tersebut  sehingga pelepasan H lebih mudah (Ruharjo, 2006).
Fraksi  alga Padina  australis pada konsentrasi  500  µg/mL  memberikan  efek penstabil  oksigen  singlet  atau  aktivitas antifotooksidasi terhadap asam linoleat yang berbeda-beda.  F4  menunjukkan  kandungan
diena terkonjugasi terendah. Hal ini mengindikasikan bahwa F4 memiliki aktivitas  antifotooksidasi  yang  lebih  tinggi dibandingkan  fraksi  lainnya. Diikuti  F2, F1, F3  dan  F5  yang  juga  memiliki  aktivitas antifotooksidasi  yang  sama.  Hal  ini  dapat mengindikasikan  bahwa  fraksi  alga Padina australis memiliki  kemampuan  yang  dapat melindungi lipid dalam sistem emulsi.
Tabel  4. Slop  Diena  Terkonjugasi  dari Fraksi Alga Padina australis Sampel Slop K1 0,03 ± 0,01 c K2 0,01 ± 0,01 a K 0,04 ± 0,01 d F1 0,02 ± 0,01 b F2 0,02 ± 0,01 b F3 0,03 ± 0,01 c F4 0,01 ± 0,01 a F5 0,04 ± 0,01 d
Tabel  4  dan  hasil  uji  Duncan  juga menunjukkan  bahwa  sampel  F4  memiliki perbedaan  yang  sangat  nyata  terhadap sampel  F2,  F1,  F3  dan  F5  (lampiran  8). Perbedaan  yang  dimaksud  adalah  aktivitas antifotooksidasi. Urutan aktivitas
0 5 10 15 20 25 30 0 1 2 3 4 D ien a Ter ko n ju gas i
(mmo l/ kg ) Waktu (Jam) K1 K2 K F1 F2 F3 F4 F5
antifotooksidasi dalam fraksi secara berturut F4  >  F2  >  F1  >  F3  >  F5.  K2  dan  F4 memiliki  kemampuan  yang  sama  dalam melindungi  lipid.  Sehingga  angka  peroksida yang  diperoleh  F4  sangat  rendah  bahkan mendekati  nilai  absorbansi  kontrol  tanpa cahaya  (K2).  Sedangkan,  F1  dan  F2 memiliki  aktivitas  yang  sama  begitupun  F3 dan  F5. Berbanding terbalik dengan  K1 dan K  yang  memiliki  angka  peroksida  yang sangat  tinggi.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa K1  dan  K  kurang memiliki kemampuan  dalam  melindungi  lipid  karena lipid  telah  mengalami  oksidasi  dengan bantuan cahaya.
F4  memiliki  aktivitas  antifotooksidasi paling tinggi. Hal ini dikarenakan antioksidan memiliki pengaruh dalam sistem emulsi  karena  antioksidan  lipofilik  bersifat cukup  aktif  pada  permukaan  yang  berada pada  droplet  emulsi  dan  terorientasi  pada interfasa minyak-air sehingga akan menghambat  minyak  dari  proses  oksidasi (Fatimah, 2008). Semakin tinggi konsentrasi antioksidan  pada  antar  permukaan  minyak- air  maka  aktivitasnya  melindungi  minyak terhadap  oksidasi  akan  menjadi  lebih  baik (Huang et  al .,  1996).  Sehingga  hasil aktivitas  antifotooksidasi  yang  didapatkan
berbanding lurus dengan aktivitas
antioksidan. Aktivitas Penghambat Pembentukan AGES ( Advanced Glycation End-Products )
secara In Vitro
Dalam  penelitian  ini,  penentuan  aktivitas penghambat  pembentukan  AGEs  ( Advanced Glycation  End-Products )  dilakukan  dengan menggunakan  metode  Peng  dan  Zheng et al ., (2008) yang dimodifikasi dengan metode Lappin et al ., (1951) pada fraksi alga Padina australis .  Pada  proses  pengujian  digunakan protein Bovine  Serum  Albumin (BSA). Penentuan  karbonil  Lappin et  al .,  (1951)
dilakukan untuk mempercepat reaksi
Maillard dengan penambahan 2,4-
dinitrofenilhidrazin  (DNPH).  Penambahan 2,4-dinitrofenilhidrazin (DNPH) dengan BSA  akan  membentuk  gugus  keton  atau aldehid (Yuichiro et al ., 2010). Gugus keton atau  aldehid  yang  terbentuk  akan  memicu terjadinya reaksi glikasi yang akan membentuk  AGEs.  Sehingga,  diharapkan dengan  adanya  penambahan  fraksi  alga Padina australis dapat menghambat pembentukan  AGEs.  Aktivitas  penghambat pembentukan  AGEs  ( Advanced  Glycation End-Products )  dari  fraksi  alga Padina australis dengan  konsentrasi  2000  µg/mL dapat dilihat pada gambar  4.
Gambar 4. Aktivitas Penghambat Pembentukan AGEs ( Advance Glycation End- Products ) dari Fraksi Alga
Padina australis. b a b a c 0 10 20 30 40 50 60 F1 F2 F3 F4 F5 A kt iv it as P en gh am b at an Pem b en tuka n A G E S (%) Fraksi Alga Padina australis
Gambar  4  menunjukkan  bahwa  sampel  F4 memiliki aktivitas penghambat pembentukan AGEs  yang  tertinggi.  Hal  ini  dikarenakan adanya  aktivitas  penangkal  radikal  bebas (DPPH)  atau  antioksidan  yang  tinggi  atau sangat  kuat.  Sehingga  dapat  menghambat terjadinya oksidasi radikal bebas yang dapat memicu  terjadinya  stres  oksidatif.  Stres oksidatif akan membentuk AGEs ( Advanced Glycation End-Products ).
Hasil  uji  statistik  juga  menunjukkan bahwa fraksi alga Padina australis memberikan  perbedaan  sangat  nyata  dalam proses  penghambat  pembentukan Advanced Glycation  End-Products (AGEs)  (lampiran
8).  Perbedaan  yang  dimaksud  adalah aktivitas  penghambat  pembentukan  AGEs. Hasil  uji  Duncan  menunjukkan  bahwa  F4 memiliki aktivitas yang tertinggi. Diikut F2, F1,  F3  dan  F5.  Hal  ini  mengindikasikan adanya  korelasi  antara  hasil  fraksinasi, kandungan  senyawa  fenolik,  serta  aktivitas penangkal  radikal.  Semakin  tinggi  nilai rendemen  yang  didapatkan  dari  hasil fraksinasi serta warna yang jernih atau pekat yang  didapatkan  oleh  fraksi.  Maka  semakin tinggi pula kandungan total fenolik, aktivitas penangkal  radikal  bebas,  serta  aktivitas penghambat pembentukan AGEs. Begitupun sebaliknya,  semakin  rendah  nilai  rendemen yang  didapatkan  dari  hasil  fraksinasi  serta warna  yang  encer  atau  bening  seperti  yang didapatkan  oleh  F5.  Maka  semakin  rendah pula  kandungan  total  fenolik,  aktivitas penangkal  radikal  bebas,  serta  aktivitas penghambat pembentukan AGEs.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  fraksi  alga Padina
australis memiliki  aktivitas  antifotooksidasi dan penghambat pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End-Products ).

## DAFTAR PUSTAKA
Burda  S.  &  Oleszek  W.  2001.  Antioxidant And  Anti-  in Northern  Kyushu, Japan. Jpn.  J.  Cancer  Res.  79,  Radical Activities  OfFlavonoids. Journal  of Agricultural  andFood Chemistry. 49
:2774-2779.
Budhiyanti,  S.A.,  Raharjo,  Marseno,  D.W., and  Lelana,Y.B.  2012.  Antioxidant Activity  Of  Brown  Algae  Sargassum Species Extract From The Coastline Of Java    Island. American  Journal  of Agricultural  and  Biological  Sciences .
3 : 337–346.
Davies,  K.J.  dan  Goldberg,  A.L.1987.
Protein  Damaged  by  Oxygen  Radicals Are  Rapidly  Degraded  in  Extracts  of Red Blood Cells. Journal of Biological Chemistry . 262: 8227–8234.
Frankel, E.N.,& W. E.  Neff. 1979. Analysis of Autoxidised Fats by Gas Chromatography-Mass  Spectrometry. IV. Soybean Oil Methyl Esters . Lipids .
14: 39-46.
Ganeshan,  S.,  A.Balasubramaniem.,  &  V,
Perumal.  2015.  Pholotannins  From Brown  Algae :  Inhibition  Of  AGES Formation  In  High  Glucose  Induced
Caenorhabditis elegans . Indian Journal  of  Experimental  Biology . 53 :371-379.
Huang, S. W., E. N. Frankle, K. Schwarz, R. Aesbach  &J.  B.  German.  1996. Antioxidant  Activity  of  Camosic  Acid and  Methly  Ca,osate  in  Bulk  Oils  and Oil-in-Water  Emulsions. Journal  of
Agricultural and Food Chemistry . 44 : 2951-2956. Irwandi, J., N.Dedi, M.S.Hamzah,&M.Kazuo. 2011. Isolation  of  Fucoxanthin  And  Fatty
Acids  Analysis  Of Padina  australis
And  Cytotoxic  Effect  Of  Fucoxanthin On Human Long Cancer (H1299) Cell Lines. Full  Length  Research  Paper . 10 : 18855-18862.
Jeong, S.M., Kim, S.Y., Kim, D.R.,  Jo, S.C., Nam, K.C., Ahn, D.U. dan Lee, S.C. 2004. Effect of Heat Treatment on the Antioxidant Activity of Extracts from Citrus Peels. Journal of Agricultural and Food Chemistry.
52: 3389-3393.
Kelman, D., Posner, E. K., McDermid, K. J.,
Tabandera,  N.  K.,  Wright,  P.  R.,  & Wright,  A.  D.  2012.  Antioxidant Activity  of  Hawaiian  Marine  Algae.
Marine Drugs Journal . 10 : 403–416.
Lappin,  G.,  &  L,  Clark.  1951.  Colorimetric Method For Determination of Traces of  Carbonyl  Compounds. Analytical
Chemistry . 23 : 541-542.
Limantara, L., & Heriyanto. 2011. Optimasi Proses  Ekstraksi  Fukonsantin  Rumput Laut  Coklat  Padina  australis  Hauck Menggunakan  Pelarut  Organik  Polar. Jurnal Ilmu Kelautan . 2 : 86-94.
Nakiboglu, M., Urek, R. O., & Kayali, H. A.
2007. Antioxidant Capacities Of Endemic Sideritis Sipylea And
Origanum Sipyleum From Turkey. 104
: 630-635.
Nursid,  M.,  Wikanta,  T.,  &  Susilowati,  R. 2013. Aktivitas Antioksidan, Sitotoksisitas Dan Kandungan Fukosantin  Ekstrak  Rumput  Laut Coklat Dari Pantai Binuangeun Banten. JPB Kelautan Dan Perikanan .
1 : 73-84.
Peng, X., Z, Zheng., K. W. Cheng., F. Shan., G.  X.  Ren.,  F.  Chen.,  &  M.  Wang. 2008. Inhibitory Effect Of Mung Been Extract  And  It’s  Constituent’s  Vitexin And  Isovitexin  On  The  Formation  Of Advanced  Glycation  Ends  Product. Food  Chemistry  Journal. 106 :  475- 500.
Ruharjo, S. 2006. Kerusakan Oksidatif pada Makanan .  Gadjah  Mada  University Press, Yogyakarta.
Santoso,  J.,  Y.  S.  Yoshie.,  &T.  Suzuki.
2004. Anti-Oxidant Activity Of Methanol  Extracts  From  Indonesian Seaweeds  In  An  Oil  Emulsion  Model. Fisheries  Science  Journal . 70 :  183- 188.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioxidan . Putra Media Nusantara, Surabaya.
Yu  Lin,  H.  K,  Lin,  Y.  H.,  &  Chiang,  W.
2009.  Antioxidative  Effect  and  Active Components  From  Leaves  Of  Lotus ( Nelumbo nucifera ). Journal Of Agriculture  And  Food  Chemistry . 57 : 6623-6629.
Zheng, W.,& S. Y. Wang. 2001. Antioxidant activity  and  phenoliccompounds  in selected  herbs .  Journal  Agriculture,
Food Chemistry . 49 : 5165-5170.