## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN
KEREHAU ( Callicarpa longifolia Lam) TERHADAP Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Submitted : 27 Oktober 2016 Edited : 18 November 2016
Accepted : 30 November 2016
Eko Kusumawati 1 , Anita Apriliana 2 , Khusnul Khatimah 2
1 Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Mulawarman Samarinda
2 Akademi Farmasi Samarinda Email : ekokusumawati@fmipa.unmul.ac.id

## ABSTRACT
Kerehau (Callicarpa longifolia Lam) is a plant that has traditionally efficacious as a cure colds  and  diarrhea.  Part  used  as  medicine  are  the  leaves.  This  study  aims  to  determine  the antibacterial  activity  of  ethanol  extract  of  leaves  kerehau  on  Escherichia  coli  and Staphylococcus  aureus.  Kerehau  leaf  extract  prepared  by  maceration  method  using  ethanol 70%, with a test concentration of 10%, 25%, 50%, and 100% and chloramphenicol 0.1% (w / v) as  a  positive control and dimethyl sulfoxide  1%  (v  /  v)  as  a  negative  control. The  results  of antibacterial activity test with extract concentrations of 25%, 50% and 100% in Escherichia coli is 9.45 mm, 12.21 mm and 17.38 mm, for the positive control is 21.85 mm. The results of antibacterial  activity  test  with  extract  concentrations  of  10%, 25%,  50%  and  100%  in Staphylococcus aureus was 7.3 mm, 9.85 mm, 13.65 mm and 20.58 mm, for the positive control was 24.05 mm. The antibacterial activity was analyzed by One Way ANOVA showed significant differences between treatments.
Keywords : Callicarpa longifolia  Lam, antibacterial , disc  diffusion, Escherichia  coli, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Penyakit  akibat  infeksi  bakteri merupakan masalah serius dalam kesehatan,
seperti  halnya Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus (1) . Untuk  mengatasi penyakit ini digunakan obat-obatan sintetis dan  kimiawi  yang  dapat  menimbulkan ketergantungan  serta  resistensi.  Salah  satu upaya untuk mencegah terjadinya resistensi tersebut  adalah dengan memanfaatkan tumbuhan-tumbuhan  obat  yang  diduga efektif  menghambat  pertumbuhan  atau membunuh bakteri penyebab penyakit (2) . Tumbuhan  kerehau  ( Callicarpa longifolia Lam) secara tradisional digunakan  untuk  pengobatan  sebagai  obat
jerawat  yang  dibuat  dalam  bentuk sediaan bedak dingin, obat pasca melahirkan dalam bentuk sediaan  ramuan serta  masuk  angin dan  obat  diare,  bagian  tumbuhan  yang digunakan  sebagai obat  adalah  daunnya. Stephanus (2015) (3) mengemukakan  bahwa daun  kerehau mengandung  senyawa  kimia berupa  flavonoid,  tanin,  saponin  dan terpenoid. Selain  itu  daun  kerehau  juga mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Propionibacterium  acnes pada  konsentrasi 10%,  25%,  50%, 100% dan memiliki diameter zona hambat berturut-turut sebesar 7,03 mm, 8 mm, 10,01 mm, dan 11,73 mm.
Berdasarkan  latar  belakang  diatas, dilakukan penelitian mengenai uji aktivitas
antibakteri  ekstrak  etanol  daun  kerehau
( Callicarpa  longifolia Lam)    terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus sebagai  perwakilan  bakteri Gram negatif dan Gram positif yang dapat menyebabkan penyakit diare dengan melihat zona hambat yang  terbentuk  dari  konsentrasi  hambat minimum  yang  digunakan  dengan  dugaan bahwa  daun  tersebut  dapat  digunakan sebagai obat diare.

## METODE PENELITIAN Pengumpulan sampel
Sampel  berupa  daun  kerehau tua dipetik  langsung  tanpa  menggunakan  alat, yang  diperoleh  dari  desa  kecamatan Sangasanga, Kabupaten Kutai Kertanegara, Kalimantan Timur.

## Determinasi Tumbuhan
Determinasi daun kerehau ( Callicarpa longifolia Lamk)  dimaksudkan untuk  mengetahui  kebenaran  sampel. Deteminasi  dilakukan  di  Laboratorium Fisiologi  Tumbuhan  Falkutas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  (FMIPA) Universitas Mulawarman Samarinda.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun Kerehau Daun kerehau yang telah
dikumpulkan  dicuci  dibawah  air  mengalir, ditiriskan dan dikeringkan.  Pengeringan dilakukan  dengan  cara  diangin-anginkan tanpa  terkena  sinar  matahari  langsung. Simplisia dibuat  serbuk  menggunakan blender selanjutnya diayak dan hasil ayakan disimpan  didalam  wadah  tertutup  rapat. Ditimbang  100  g  serbuk  simplisia  daun kerehau, kemudian diekstraksi dengan cara maserasi  dengan  perbandingan  1:10, menggunakan  1 L  etanol  70%  sebagai cairan  penyari.  Maserasi  dilakukan  selama 5  hari  dengan  cara pengadukan  manual setelah itu dilakukan remaserasi,
Selanjutnya  ekstrak  disaring  dengan  kertas
saring.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh kemudian  diuapkan  diatas  penangas  air hingga kental (4) .
Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri ekstrak  etanol  daun  kerehau  terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus menggunakan metode kertas cakram dengan  konsentrasi  10%,  25%, 50%,  dan 100%. Media  MHA  dituang  ke  dalam  5 cawan petri masing-masing  dituang sebanyak 20 mL,  dibiarkan  hingga memadat.  Dicelupkan  lidi  kapas  steril  ke dalam  suspensi bakteri,  setelah  itu dioleskan pada seluruh permukaan medium MHA dan dibiarkan selama 5 menit supaya suspensi  bakteri  meresap  ke dalam  media agar.
Kertas  cakram yang  telah  direndam dalam  ekstrak  daun  kerehau  dengan konsentrasi  10%,  25%,  50%,  dan  100% (b/v), kemudian pada  media  ditempelkan kertas  cakram  dengan  bermacam-macam konsentrasi,  untuk  kontrol  negatif  yaitu kertas  cakram  yang  direndam  dengan DMSO  1%.  Jarak antara  disk  satu  dengan lainnya tidak kurang dari 15 mm. kemudian dinkubasi  dalam  inkubator  dengan  suhu 37 o C selama  18-24  jam.  Diukur  zona hambat (mm) dari masing-masing konsentrasi  sampel  dengan  menggunakan jangka sorong. Diameter zona hambat yang diukur  yaitu  daerah  jernih disekitar kertas cakram (tidak  ada  pertumbuhan  bakteri), diukur dari ujung yang satu ke ujung yang lain  melalui  tengah-tengah  kertas  cakram dan dihitung rata-rata zona hambatnya (5) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Tumbuhan
Hasil determinasi menunjukkan bahwa sampel yang digunakan  adalah Callicarpa  longifolia Lam, dengan  nama daerah Kerehau.

## Pembuatan Simplisia Daun Kerehau
Pada  pembuatan  simplisia  daun kerehau,  diperoleh  1,8 kg  daun  kerehau segar,  kemudian  dicuci  dan  ditiriskan  lalu dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan terlindung  dari  sinar  matahari.  Setelah kering  daun  kerehau ditimbang,  diperoleh sebanyak  450 g.  Susut  pengeringan  pada simplisia daun kerehau sebesar 25%.

## Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun Kerehau
Simplisia  daun  kerehau  diekstraksi dengan  menggunakan  metode  maserasi. Keuntungan  proses  maserasi adalah cara dan peralatan mudah dilakukan dengan alat- alat sederhana, dan cara penarikan zat aktif yang  tidak menggunakan  pemanasan dan digunakan  etanol  70%  sebagai  pelarutnya. Penggunaan cairan penyari  ini  atas  dasar bahwa    etanol    lebih    selektif,    tidak beracun,    netral,  absorbsinya  baik,  etanol dapat  bercampur  dengan  air  pada  segala perbandingan, panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih rendah, kapang dan kuman sulit  tumbuh  dalam  konsentrasi  alkohol lebih  dari  20%  sehingga  dapat  mencegah tumbuhnya jamur pada ekstrak (6) .
Simplisia  daun  kerehau  dihaluskan dengan  menggunakan  blender. Proses penghalusan  simplisia  kering  dilakukan untuk  memperkecil  ukuran  simplisia, sehingga  luas permukaan yang  kontak dengan cairan penyari lebih luas dan proses penarikan  kandungan  kimia yang terdapat didalam  simplisia  lebih  optimal,  kemudian ditimbang dengan perbandingan 1 : 10 yaitu sebanyak 100 g serbuk daun kerehau dalam 1000  ml  etanol  70%. Etanol  70  %  dipilih karena dapat melarutkan senyawa polar dan non polar, etanol juga merupakan senyawa yang  mudah  menguap,  sehingga  pada proses pemekatan waktu yang
membutuhkan  lebih  sedikit  dibandingkan dengan menggunakan pelarut air. Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi yaitu 100 g
serbuk  yang  direndam  dalam  etanol  70% sebanyak  1000  mL selama  5  hari  sambil sesekali diaduk. Pengadukan yang dilakukan sesekali  secara teratur  juga membantu agar  semua bagian  simplisia terendam dan kontak dengan cairan penyari merata. kemudian disaring lalu diendapkan dan  diambil  maseratnya.  Maserat  berupa ekstrak cair  ini  kemudian  dilakukan pemekatan  dengan  cara  ditangas  diatas penangas  air, dengan  tujuan  untuk menghilangkan  pelarut  yang  digunakan selama  maserasi.  Hasil  penguapan  tersebut adalah  ekstrak  pekat  yang  berwarna  coklat tua  dengan  konsistensi  berupa  pasta. Ekstrak kental yang diperoleh sebesar 25,89 g,  sehingga  rendemen yang  diperoleh sebesar  25,89%.  Ekstrak  kental  ini  akan digunakan dalam uji aktivitas antibakteri.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Uji  ini  dilakukan  untuk  mengetahui pengaruh  ekstrak  etanol  daun  kerehau terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Konsentrasi ekstrak etanol  daun  kerehau  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  10%,  25%,  50%  dan 100%  (b/v)  yang  telah  digunakan  pada penelitian sebelumnya.
Metode  yang  digunakan  pada pengujian ini adalah metode kertas cakram (metode difusi agar). Metode ini digunakan karena  memiliki kelebihan;  mudah dilakukan,  tidak  memerlukan  peralatan khusus  dan  relatif  murah,  sedangkan kelemahannya  adalah  ukuran  zona  bening yang  terbentuk  tergantung  oleh  kondisi inkubasi, inokulum, predifusi dan preinkubasi  serta  ketebalan  medium. Apabila  keempat  faktor  tersebut  tidak sesuai  maka  hasil  dari  metode  kertas cakram relatif sulit untuk ditentukan. Selain itu,  metode  kertas  cakram  ini  tidak  dapat diaplikasikan  pada  mikroorganisme  yang pertumbuhannya lambat dan mikroorganisme  yang  bersifat  anaerob
obligat (2) .  Sebelum  melakukan  uji  aktivitas antibakteri  semua  alat  dan  bahan disterilisasikan  menggunakan autoclave dengan suhu 121°C selama 15 menit untuk mencegah  terjadinya  kontaminasi  dengan mikroorganisme  lain.  Zat  uji  yang digunakan  adalah  ekstrak  etanol  daun kerehau  dengan  konsentrasi  10%,  25%, 50%  dan  100%  (b/v)  yang  sebelumnya ekstrak  dibuat  dalam  bentuk  larutan  stok pada konsentrasi 100%.
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol  daun  kerehau  dengan  konsentrasi 10%,  25%,  50%  dan  100%  (b/v)  serta kloramfenikol  0,1%  (b/v)  sebagai  kontrol positif  dan  Dimetil  Sulfoksida  1%  (v/v) sebagai kontrol negatif terhadap
Escherichia  coli dan  Staphylococcus aureus dapat dilihat pada tabel 1 dan 2. Berdasarkan hasil pada Tabel 1 dan 2 diketahui  bahwa  dengan  meningkatnya
konsentrasi perlakuan maka meningkat juga zona  hambat  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus ,  namun daya  hambat  tersebut  lebih  kecil  bila dibandingkan  dengan  kontrol  positif Kloramfenikol  0,1%.  Hal  ini  dikarenakan kloramfenikol merupakan antibiotik dengan spektrum  luas  dan  memiliki  daya antimikroba yang kuat (7) .
Pada  kontrol  negatif  larutan  DMSO 1% tidak ada daya hambat yang dihasilkan karena  DMSO  hanya  digunakan  sebagai pengencer ekstrak  untuk  memperoleh ekstrak  dengan  kadar  konsentrasi  tertentu. Hal ini didasarkan pada sifatnya yang tidak toksik,  yaitu  tidak  memberikan  daya hambat pertumbuhan bakteri sehingga tidak mengganggu  hasil  pengamatan  pengujian aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi agar (8) .
Tabel 1. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Kerehau Terhadap Escherichia coli Replikasi Diameter Zona Hambat (mm) Kontrol (-) DMSO 1% 10% 25% 50% 100% Kontrol (+) Kloramfenikol 0,1% 1 0 0 9,6 12 18,2 21,8 2 0 0 9,75 12,6 17 20,6 3 0 0 9 11,9 16,9 23 Rata-rata 0 0 9,45 12,21 17,38 21,85 Tabel 2. Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Kerehau  Terhadap Staphylococcus aureus Replikasi Diameter Zona Hambat (mm) Kontrol (-) DMSO 1% 10% 25% 50% 100% Kontrol (+) Kloramfenikol 0,1% 1 0 7,6 9,4 13,5 20,8 23,8 2 0 7,2 10,5 13,2 20,4 23,6 3 0 7,3 9,5 14,2 20,5 24,7 Rata-rata 0 7,3 9,85 13,65 20,58 24,05
Sampel  yang  digunakan  dalam pengujian  antibakteri  ini  adalah  ekstrak etanol  daun  kerehau  yang  memiliki  daya antibakteri  dikarenakan  memiliki  senyawa kimia berupa flavonoid, tanin, saponin dan terpenoid (3) . Senyawa tanin diduga memiliki kemampuan menghancurkan koloni bakteri dengan cara mengkerutkan dinding sel atau membran  sel  sehingga  mengganggu permeabilitas sel bakteri. Akibat
terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan  aktivitas  hidup  sehingga pertumbuhannya  terhambat  atau  bahkan mati.  Senyawa  flavonoid  merupakan kelompok  senyawa  fenol  yang  mempunyai kecenderungan  untuk  mengikat  protein, sehingga  menggangu  proses  metabolisme sedangkan  senyawa  saponin  termasuk dalam  golongan  alkaloid  yang  merupakan senyawa  metabolit sekunder  yang  bersifat basa  dan  banyak  terdapat  pada  tumbuhan dikotil,  saponin  merupakan  zat  aktif  yang dapat meningkatkan permeabilitas membran  sehingga  terjadi  hemolisis  sel, apabila  saponin  berinteraksi  dengan  sel kuman,  kuman tersebut  akan  pecah  atau lisis (9) . Escherichia  coli merupakan  bakteri flora  normal  yang  ada  di  saluran pencernaan manusia dan hewan yang dapat berubah  menjadi  oportunis  patogen  bila hidup diluar usus. Bakteri ini relatif sangat sensitif  terhadap  panas  dan  dapat  di inaktifkan selama pemasakan makanan (10) . Staphylococcus  aureus penyebab berbagai jenis infeksi pada manusia, antara lain  infeksi  pada  kulit,  seperti  bisul  dan furunkolisis,  infeksi  yang  lebih  serius, seperti  pneumonia,  mastitis,  flebitis, meningitis  dan  infeksi  saluran  urin.  Selain itu, Staphylococcus  aureus merupakan salah  satu  penyebab  utama  infeksi nosokmial akibat luka tindakan operasi dan pemakaian alat-alat perlengkapan perawatan dirumah sakit (11) .
Adanya  perbedaan  hasil  uji  daya hambat pada bakteri Gram positif dan Gram negatif  dapat dihubungkan melalui perbedaan  dinding  sel  bakteri.  Data  dari Tabel 1 dan  2 menunjukkan  bahwa hambatan  terbesar  dapat  diamati  pada Staphylococcus  aureus yang  merupakan bakteri Gram positif.  Umumnya  bakteri Gram positif  lebih  peka  terhadap  senyawa antibakteri  dibandingkan  dengan  bakteri Gram negatif  kerena  dinding  sel  bakteri Gram positif  tidak  memiliki  lapisan lipopolisakarida sehingga senyawa antimikroba  yang  bersifat  hidrofilik maupun hidrofobik dapat melewati dinding sel  bakteri Gram positif  kemudian berinteraksi langsung dengan peptidoglikan pada  sel  bakteri  yang  sedang  tumbuh  dan menyebabkan kematian sel (12) . David Stout (1971) dalam Christiani dkk (2015) (13) menjelaskan apabila diameter zona hambat yang terbentuk memiliki nilai < 5  mm  maka daya antibakterinya dikategorikan  lemah,  apabila  zona  hambat yang  terbentuk  memiliki  nilai  5-10  mm maka daya hambat antibakterinya dikatagorikan sedang, jika zona hambatnya yang  terbentuk  10-20  mm  maka  daya hambat  antibakterinya  dikategorikan  kuat dan bila  luas  zona  hambatnya > 20  mm masuk kategori sangat kuat.
Hasil  yang  diperoleh  pengujian antibakteri terhadap Escherichia coli untuk konsentrasi  10%  tidak  memiliki  zona hambat,  hal  ini  diduga  karena  perbedaan bakteri Gram positif dan Gram negatif, daya  aktivitas  ekstrak  yang  telah  menurun serta penyebaran suspensi bakteri ke media agar  terlalu  banyak  sehingga  zona  hambat tidak terlihat, konsentrasi 25% dengan zona hambat  sebesar  9,45  mm  dengan  respon hambatan  sedang  dan  konsentrasi  50% dengan  zona  hambat  sebesar  12,21  mm dengan  respon  hambatan  kuat,  konsentrasi 100% memiliki zona hambat sebesar 17,38 mm  daya  antibakterinya  termasuk  dalam
respon  hambatan  kuat  dan  untuk  kontrol positif dengan zona hambat 21,85 mm daya antibakterinya  termasuk  dalam  respon hambatan  sangat  kuat,  dengan  konsentrasi minimum  yang  dapat  menghambat  bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 25%. Hasil  pengujian  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus untuk  konsentrasi 10% dengan zona hambat sebesar 7,3 mm, konsentrasi  25%  dengan  zona  hambat sebesar  9,85  mm  termasuk  dalam  respon hambatan  sedang  dan  untuk    konsentrasi 50% dengan zona hambat 12,65 mm respon hambatan kuat dan untuk konsentrasi 100% memiliki  zona  hambat  sebesar  20,58  mm termasuk  dalam  respon  hambatan  kuat, untuk kontrol positif memiliki zona hambat sebesar  24,05  mm  termasuk  dalam  respon hambatan  sangat  kuat,  dengan  konsentrasi minimum  yang  dapat menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi 10%.
Berdasarkan  uji distribusi normal yang  menguji  apakah  suatu  nilai pembanding  berbed[=[pa  bermakna  atau sama  dengan  nilai  rata-rata  setiap perlakuan,  jika  rata-rata  sampel  (> 0,05) maka sampel terdapat perbedaan bermakna dengan  nilai  pembanding  dan  data  dapat diterima,  dari  hasil  uji  distribusi  normal didapatkan  hasil  yang  signifikan  untuk diameter rata-rata zona hambat yaitu 0,890 > 0,05  yang  membuktikan  bahwa  data berdistribusi  normal  kemudian  data dilanjutkan  dengan  uji anova yang bertujuan untuk menganalisa diameter rata- rata  zona  hambat,  jika  nilai  signifikasi  > 0,05  maka  rata-rata  populasi  dinyatakan sama  dan  data  dapat  diterima,  hasil  uji anova yaitu  nilai  signifikasi  sebesar  0,000 yang menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  bermakna  pada  diameter  rata- rata  zona  hambat  karena  < 0,05  dan  data tersebut ditolak.
Pada  hasil anova ditemukan  bahwa diameter  rata-rata  zona  hambat  adalah
berbeda bermakna maka dilanjutkan dengan uji  setelah anova yaitu  uji  LSD (Last Significant Differences) merupakan prosedur pengujian perbedaan diantara rata- rata  perlakuan  yang  paling  sederhana  dan paling  umum  dilakukan  untuk  uji perbandingan terencana tanpa
memperhatikan  perlakuan.  Hasil  dari  uji LSD  bahwa  semua  rata-rata  konsentrasi mempunyai  nilai  signifikasi  sama  yang menunjukkan  diameter  rata-rata  zona hambat  memiliki  perbedaan  jarak  yang tidak  jauh  karena  setiap  rata-rata konsentrasi  zona  hambat  mempunyai  jarak rata-rata  yang  sama  seperti  konsentrasi 100%.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun kerehau memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus . Hasil  uji aktivitas antibakteri daun  kerehau  pada konsentrasi  25%,  50%  dan  100%  terhadap Escherichia  coli berturut-turut adalah 9,45 mm,  12,21  mm  dan  17,38  mm dan  untuk kontrol positif adalah 21,85 mm sedangkan hasil  uji  aktivitas  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi 10%,  25%,  50%  dan  100%    berturut-turut adalah 7,3  mm,  9,85  mm,  13,65  mm,  dan 20,58  mm untuk  kontrol  positif adalah 24,05  mm. Daya  antibakteri  diukur menggunakan  metode  kertas  cakram dan data  dianalisis  dengan One  Way  Anova, menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna antara perlakuan dengan kontrol positif dan kontrol negatif.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Dewi,  S,  M.,  N,  Handayani.,  S, Ngaisah.,  E,  N,  Seteyowati.  Aktivitas Antibakteri Minyak Daun Sirih Merah (Piper  crocatum  Ruiz  &  pav)  Jurnal Penelitian Kimia Vol 9 .
2. Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E.
A.,  1996. Mikrobiologi  Kedokteran. Edisi XXII . Jakarta : Buku Kedokteran EGC. Hal 170.
3. Stepanus.  R.  2015.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol    Daun Kerehau  (Callicarpa  longifolia  Lamk) Terhadap  Propionibacterium  acnes. Karya  Tulis  Ilmiah.  Samarinda  : Akademi Farmasi Samarinda.
4. Departemen  Kesehatan  RI.  2008.
Farmakope  Herbal. Jakarta  :  DepKes RI. Hal 4-171.
5. Soemarno. 2000. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Klinik. Yogyakarta. Akademi Analis Kesehatan Yogyakarta  Departemen Kesehatan RI.
6. Departemen  Kesehatan  RI.  2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan Obat  Cetakan  Pertama.
Jakarta : DepKes RI. Hal 10-11 7. Tjay,  T.  H.  Dan  Rahardja,  K.  2007. Obat-Obat Penting: Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya.  Jakarta  :  Elex  Media
Komputido.
8. Handyani, D., Deapati M., Marlina dan Meilan.  2009.  Skrining  Aktivitas Antibakteri  Beberapa  Biota  Laut  dari Perairan  Pantai  Painan. Karya  Tulis Ilmiah. Padang  :  Fakultas  Farmasi
Universitas Andalas.
9. Poeloengan.,  Masniari.,  Praptiwi. 2010.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Kulit  Manggis  (Ganicia mangostana  Lin).  Skripsi.  Malang  :
Universitas Negeri Malang.
10. Supardi,  I  dan  Sukamto.  1999. Mikrobiologi  Dalam  Pengolahan  dan
Keamanan Pangan. Bandung : Penerbit Alumni Yayasan Adikarya 11. Radji, M. 2010. Buku ajar Mikrobiologi,  Panduan  mahasiswa farmasi & Kedokteran. EGC. Jakarta. 12. Yasni, S., Syammsir, E., dan Direja, E.
2009. Antimicrobial Activity of Black Cumin Extract (Nigella sativa) Against Food  Pathogenic  and  Spoilage Bacteria. Microbiology  Indonesia. (3). Hal 146-150.
13. Christiani, S., A. Fridayanti, R. Rusli. 2015.  Aktivitas  Antibakteri  Akar Karamunting (Melastoma malabathricum).  Prosiding  Seminar Nasional Kefarmasian Ke-1. Samarinda.