Uji  Aktivitas  Antikolesterol  Variasi  Ekstrak  Etanol  Sawi  Pakcoy ( Brassica chinensis ) Secara In Vitro
Anticholesterol  Activity  Test  Variation  Ethanol  Extract  of  Mustard  Pakcoy ( Brassica chinensis ) by In Vitro
Siska Andriani, Devina Ingrid Anggraini *
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional, Jl. Solo Baki, Kwarasan, Grogol, Sukoharjo
Article info: Received Date : 13/03/2023 Revised Date   : 29/05/2023 Accepted Date : 31/05/2023 Abstrak
Makanan cepat saji sering dikonsumsi masyarakat karena lebih praktis. Jenis  makanan  seperti  ini  mengandung  lemak  jenuh  dan  kolesterol tinggi yang menyebabkan pada peningkatan kolesterol darah. Dampak yang  terjadi  jika  kolesterol  total  dalam  darah  tinggi  dapat mengakibatkan  hiperkolesterol  dan  jika  berlanjut  dalam  waktu  lama memicu  timbulnya  hipertensi,  stroke,  jantung  koroner,  dan  obesitas. Terdapat banyak jenis bahan alami yang membantu mengurangi kadar kolesterol total dalam darah, senyawa seperti flavonoid, alkaloid, tanin, dan  saponin  diyakini  memiliki  efek  menurunkan  kadar  kolesterol. Tujuan penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas ekstrak sawi pakcoy  dan  pengaruh  perbedaan  konsentrasi  pelarut  ekstraksi terhadap penurunan kolesterol melalui in vitro . Aktivitas antikolesterol ditentukan dengan metode Liebermann-Burchard yang diukur dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimal 667,5 nm. Hasil  uji  fitokimia  pada  ekstrak  sawi  pakcoy  mengandung  senyawa alkaloid, saponin, tanin, dan flavonoid. Konsentrasi ekstrak etanol 70% sawi pakcoy yang digunakan berturut-turut pada konsentrasi 5, 10, 15, 20, 25 ppm sedangkan ekstrak etanol 96% menggunakan konsentrasi 15,  20,  25,  30,  dan  35  ppm.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol 70% sawi pakcoy memiliki nilai EC 50 sebesar 20,76 ppm dan ekstrak etanol 96% sawi pakcoy memiliki EC 50 sebesar 29,10 ppm. Hasil EC 50 menunjukkan bahwa potensi antikolesterol lebih baik pada sawi pakcoy yang diekstraksi menggunakan etanol 70%. Hal tersebut terjadi karena metabolit sekunder yang berperan sebagai antikolesterol bersifat polar, sehingga senyawa yang tertarik lebih banyak pada etanol 70% yang memiliki kepolaran lebih tinggi dibandingkan dengan etanol 96%.

## Abstract
Fast food is often consumed by the public because it is more practical, this  type  of  food  contains  saturated  fat  and  high  cholesterol  which causes an increase in blood cholesterol. The impact that occurs if total cholesterol in the blood is high can result in hypercholesterolemia and if  it  continues for  a  long  time,  triggers  hypertension,  stroke,  coronary heart  disease,  and  obesity.  There  are  various  types  of  natural ingredients that can be used to help lower total cholesterol in the blood. Compounds  such  as  flavonoids,  alkaloids,  tannins,  and  saponins  is thought to lower cholesterol levels. This study sought to ascertain the effectiveness  of  mustard  greens  extract  and  the  impact  of  various extraction  solvent  concentrations  on  in  vitro  cholesterol  reduction. Using  the Liebermann-Burchard method,  anticholesterol  activity  was determined  using  an  ultraviolet-visible  spectrophotometer  with  a maximum  wavelength  of  667.5  nm.  Phytochemical  test  on  mustard pakcoy  extract  contained  alkaloid,  saponins,  taninns,  and  flavonoids. The concentrations of the 70% ethanol extract of mustard greens were employed  sequentially  at  5,  10,  15,  and  25  ppm,  while  the
Keywords: Pakcoy mustard extract Anticholesterol Liebermann-Burchard Ethanol 70% Ethanol 96% Corresponding Authors*: Devina Ingrid Anggraini
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional Jl. Solo Baki, Kwarasan, Grogol, Sukoharjo Telp. 0271-644958, 644830 Fax. 0271-665023 Email: devina.ia@stikesnas.ac.id
concentrations of the 96% ethanol extract were used at 15, 20, 25, and 35 ppm. The research revealed that the 70% ethanol extract of mustard pakcoy  EC 50 of   20.76  ppm  and  the  96%  ethanol  extract  of  mustard pakcoy, which has an EC 50 of 29.10 ppm. EC 50 results showed that the anticholesterol potential was better in pakcoy mustard extracted using 70% ethanol. This happens because the secondary metabolites that act as anticholesterol are polar, so that the compounds that are attracted more to 70% ethanol have a higher polarity than 96% ethanol.

## PENDAHULUAN
Masyarakat di era modern ini memiliki gaya hidup yang sangat berubah, salah satunya kurang memperhatikan  pola  makan  dan  memilih  gaya hidup  yang  selalu  ingin  instan  seperti  pada makanan  cepat  saji  ( fast  food )  cenderung  sering dikonsumsi oleh masyarakat karena lebih praktis. Kandungan  lemak  jenuh  dan  kolesterol  banyak terdapat pada makanan sejenis ini (Tanjung dkk., 2022). Makanan    tinggi  lemak  terutama  lemak jenuh  menyebabkan  kolesterol  LDL  diproduksi dalam jumlah besar di hati, yang merupakan faktor utama  meningkatnya  kadar  kolesterol  total  di dalam darah (Dwi dkk., 2021).
Menurut RISKESDAS (2018), hampir 28,8% masyarakat  Indonesia  di  masa  remaja  memiliki kadar  kolesterol  yang  abnormal.  Kenaikan  kadar kolesterol dapat menyebabkan sekitar 2,6 juta jiwa meninggal dunia dan 29,7  juta orang cacat setiap tahun. Hal ini menjadi bukti meningkatnya resiko penyakit seperti stroke, serangan jantung, obesitas dan  hipertensi  jika  kadar  kolesterol  tinggi (Subandrate dkk., 2020).
Beberapa cara digunakan masyarakat untuk mengurangi  kadar  kolesterol,  baik  dengan  obat sintetik  maupun  bahan  alam.  Indonesia  memiliki aneka  ragam  hayati  dengan  macam-macam tumbuhan  antara  lain  buah,  sayur  dan  rempah- rempah.  Banyak  masyarakat  yang  memanfaatkan hal  tersebut  untuk  membantu  pengobatan  dan tindakan  pencegahan  terhadap  penyakit  dengan menggunakan  bahan  alami  yang  dianggap  lebih aman daripada bahan kimia yang tersedia di pasar. Tanaman  mengandung  metabolit  sekunder  yang memiliki peran penting dalam menjaga kesehatan, salah  satunya  adalah  membantu  menurunkan kadar  kolesterol.  Tibe  (2018)  melaporkan  bahwa daun  cincau  hijau  memiliki  kandungan  senyawa seperti  tannin,  flavonoid,  alkaloid  dan  saponin yang  dapat  menurunkan  kadar  kolesterol. Penghambatan  kerja  enzim  3-hidroksi-3-metil- glutaril-CoA  merupakan  mekanisme  senyawa flavonoid  untuk  membantu  menurunkan  kadar kolesterol.
Salah  satu  tumbuhan  yang  popular  di kalangan masyarakat dan banyak dikonsumsi yaitu sawi  pakcoy.  Sawi  pakcoy  ( Brassica  chinensis ) merupakan  produk  pangan  yang  mudah  didapat dan harganya terjangkau. Sawi pakcoy bermanfaat bagi kesehatan karena memiliki senyawa metabolit sekunder,  seperti  alkaloid,  flavonoid  dan  steroid (Zulaini  dan  Dalimunthe,  2022).  Sawi  pakcoy memiliki aktivitas antioksidan sebesar 8,148 ppm yang  termasuk  dalam  kategori  antioksidan  kuat
(Uliani,  2009).  Antioksidan  memiliki  peran sebagai  antikolesterol  dengan  bekerja  meng- hambat HMG-CoA dan meningkatkan HDL serum (Yunarto dkk., 2019).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,  diduga sawi pakcoy mempunyai potensi sebagai penurun kadar  kolesterol  karena  mengandung  alkaloid, flavonoid,  dan  saponin.  Oleh  sebab  itu  dilakukan penelitian  aktivitas  antikolesterol  pada  ekstrak sawi  pakcoy  dengan  variasi  perbedaan  pelarut yaitu etanol 70% dan etanol 96%.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Penelitian  ini  memakai  beberapa  alat meliputi  spektrofotometer  UV-Vis  (Shimadzu  UV mii-1240),  kuvet,  neraca  analitik  (Ohaus  Pioneer dengan  sensitivitas  0,0001  g  dan  minimal penimbangan  0,1000  g),  oven,  kompor  listrik (Maspion),  blender  (Miyako), rotary  evaporator (IKA  RV  10  basic),  cawan  porselen,  gelas  kimia (Iwaki), tabung reaksi (Iwaki), labu ukur  (Iwaki), corong kaca, pipet ukur (Iwaki), batang pengaduk, dan push ball . Beberapa bahan dalam penelitian ini seperti sayur pakcoy ( Brassica sinensis ), serbuk kolesterol 92,5%  (Sigma  Aldrich),  asam  asetat  anhidrat (Emsure),  H 2 SO 4 pekat  (Emsure),  kloroform (Emsure), aquades, aluminium foil, kertas saring, serbuk  magnesium,  HCl  2N,  FeCl 3 ,  pereaksi Dragendorff, pereaksi Mayer, etanol 70% dan 96%.

## Pembuatan Simplisia
Bahan  baku  sawi  pakcoy  berasal  dari  desa Tunggul  Sari,  kecamatan  Cepogo,  kabupaten Boyolali.  Sawi  pakcoy  disortasi  basah  dengan memisahkan  daun  dari  tangkainya  dan  dibersih- kan  menggunakan  air  mengalir.  Selanjutya dikeringkan  pada  suhu  40°C  dengan  oven. Simplisia  sawi  pakcoy  dihaluskan  dan  diayak dengan pengayak no 60 mesh.

## Pembuatan Ekstrak
Metode maserasi digunakan untuk mengekstrak  simplisia  sawi  pakcoy.  Simplisia sebanyak 100 gram serbuk sawi pakcoy diekstraksi menggunakan etanol 70% dan etanol 96%, dengan rasio  sampel  dan  pelarut  (1:7,5)  selama  5  hari. Setelah  itu,  ampas  dimaserasi  kembali  dengan penambahan  2,5  bagian  pelarut  selama  2  hari. Filtrat  dari  kedua  proses  ekstraksi  digabungkan, kemudian pemekatan dilakukan dengan suhu 50 o C dengan  menggunakan rotary  evaporator dan
water  bath .  Rendemen  dihitung  menggunakan rumus yang telah ditetapkan:
berat ekstrak kental
berat simplisia 𝑥 100%

## Uji Kualitatif
Uji  kualitatif  digunakan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  dalam  sawi  pakcoy  yang meliputi uji saponin, tanin, flavonoid, steroid dan alkaloid. Uji kualitatif dilakukan dengan menambahkan pereaksi pada ekstrak dan diamati perubahan warnanya.
a. Identifikasi Saponin
Sampel  ekstrak  ditambahkan  dengan  air panas dan dikocok selama 10 detik. Pembentukan busa  setinggi  1-10  cm  menunjukkan  adanya kandungan saponin.

## b. Identifikasi Tanin
Sampel  ekstrak  direaksikan  dengan  FeCl 3 1%.  Hasil  positif  ekstrak  mengandung  tanin ditandai  dengan  larutan  yang  berubah  warna menjadi biru tinta atau hitam.
c. Identifikasi Flavonoid
Sampel ekstrak  ditambahkan  serbuk magnesium  dan  1  ml  asam  klorida.  Adanya flavonoid  ditunjukkan  perubahan  warna  menjadi merah jingga.
d. Identifikasi Steroid
Sampel  ekstrak  direaksikan  dengan  asam sulfat pekat dan asam asetat anhidrat. Perubahan warna  menjadi  hijau-biru  menunjukkan  adanya steroid.
e. Identifikasi Alkaloid
Sampel ekstrak ditambahkan dengan reagen Dragendorff,  hasil  positif  ditunjukkan  adanya endapan putih.

## Penentuan Operating Time
Awal  penelitian  dilakukan  dengan  mencari Operating  time menggunakan  larutan  kolesterol pada  konsentrasi  100  ppm,  dengan  cara mengambil  1,0  ml  larutan  baku  kolesterol  1000 ppm.  Selanjutnya  asam  asetat  anhidrat  sebanyak 2,0  ml  dan  H 2 SO 4 pekat  0,1  ml  ditambahkan sebagai  pereaksi,  kemudian  dicukupkan  dengan kloroform  dalam  labu  ukur  hingga  10,0  ml. Absorbansi  diukur  dengan  panjang  gelombang secara teori  yaitu 668 nm, pengukuran dilakukan setiap  1  menit  dari  yang  pertama  hingga  muncul absorbansi  yang  stabil  (Lindawati and Ningsih, 2020).
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Panjang  gelombang  maksimum  dapat ditentukan  dengan  melakukan scanning panjang gelombang  dari  larutan  kolesterol  dengan konsentrasi  100  ppm.  Cara  yang  dilakukan  yaitu dengan mengambil 1,0 ml larutan baku kolesterol 1000  ppm  dan  memasukkannya  ke  dalam  labu berukuran  10,0  ml.  Selanjutnya,  direaksikan dengan  2  ml  asam  asetat  anhidrat  dan  0,1  ml H2SO4  pekat,  dan  dilarutkan  hingga  tanda  batas
menggunakan  kloroform.  Karena  dari  sifat kolesterol yang tidak stabil terhadap cahaya, maka selama  waktu operating  time ,  tabung  ditutup dengan aluminium foil pada bagian luar. Larutan tersebut  kemudian  diukur  pada  rentang  panjang gelombang 600-750 nm dengan spektrofotometer UV-Vis (Lindawati dan Ningsih, 2020).

## Pengukuran Kontrol Positif
Pengukuran  kontrol  positif  dilakukan menggunakan  konsentrasi  175  ppm,  dengan mengambil  larutan  baku  kolesterol  1000  ppm sebanyak  1,75  dimasukkan  pada  labu  10,0  ml. Larutan  direaksikan  dengan  2  ml  asam  asetat anhidrat  dan  0,1  ml  H 2 SO 4 pekat,  kemudian dicukupkan  dengan  kloroform.  Labu  dibiarkan selama waktu operating time dan ditutup dengan aluminium foil.

## Uji Aktivitas Antikolesterol
Untuk  pengujian  antikolesterol,  dibuat variasi pada konsentrasi ekstrak etanol 70% 5, 10, 15, 20, dan 25 ppm sedangkan ekstrak etanol 96% dibuat seri konsentrasi 15, 20, 25, 30, 35 ppm dari larutan  sampel  ekstrak  konsentrasi  1000  ppm. Untuk  menyiapkan  sampel,  larutan  tersebut dimasukkan ke dalam labu ukur berukuran 10,0 ml dan  ditambahkan  dengan  kontrol  positif  berupa larutan standar kolesterol dengan konsentrasi 175 ppm.  Campuran tersebut  kemudian  ditambahkan dengan  asam  sulfat  pekat  sebanyak  0,1  ml  dan asam asetat anhidrat sebanyak 2,0 ml, serta diberi kloroform hingga batas tertentu. Larutan ditunggu selama  13  menit  atau  waktu operating  time di ruangan kedap cahaya hingga terdapat perubahan warna  menjadi  hijau.  Hasil  larutan  yang  telah berubah  warna  dibaca  pada  panjang  gelombang maksimumnya  dengan  spektrofotometri  UV-Vis, setelah  itu  dihitung  penurunan  kadarnya  dengan melihat absorbansi yang dihasilkan (Putri, 2020).

## Analisa Data
Penurunan kadar kolesterol dapat dihitung dengan rumus:
𝐴 = 𝐶 − 𝐵
𝐶 𝑥 100%
Keterangan: A= % kolesterol yang berkurang B= absorbansi kolesterol + sampel C= absorbansi kontrol positif
Nilai  EC 50 ditentukan  untuk  mengetahui besarnya  aktivitas  antikolesterol  menggunakan persamaan berikut:
Y = bx + a Keterangan: Y= % penurunan kolesterol X= konsentrasi sampel a= i ntercept b= slope / harga kemiringan kurva
Koefisien  variasi  dihitung  untuk  menguji presisi  menggunakan  data  persen  penurunan kolesterol tiap konsentrasi dengan rumus berikut:
%𝐾𝑉 = ( 𝑆𝐷 𝑥 ) 𝑥100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel
Sawi  pakcoy  diperoleh  dari  desa  Cepogo, Boyolali.  Preparasi  awal  yang  dilakukan  yaitu membuat  sampel  simplisia  sawi  pakcoy  melalui beberapa  tahap  yaitu  sortasi  basah,  pencucian, perajangan,  dan  pengeringan  untuk  menghilang- kan  kadar  air  agar  tidak  rentan  terhadap pertumbuhan  jamur  dan  bakteri.  Pengeringan dilakukan pada suhu 40 o C dengan oven agar tidak merusak  kandungan  pada  senyawa  yang  tidak tahan  terhadap  suhu  tinggi.  Simplisia  dihaluskan dan  diayak  dengan  pengayak  no  60  mesh,  untuk memperluas  permukaan  dan  memperoleh  serbuk yang seragam. Hal tersebut bertujuan meningkat- kan luas permukaan pada simplisia sehingga saat bereaksi  dengan  pelarut  dapat  diperluas,  dan  zat aktif  yang  terkandung  di  dalamnya  dapat terekstraksi secara maksimal. Proses ini dilakukan dengan  pelarut  mengalir  masuk  ke  dalam  rongga sel  dengan  menembus  dinding  sel  yang  memiliki kandungan zat aktif untuk mengekstraknya.

## Ekstraksi
Metode ekstraksi untuk sampel sawi pakcoy yang  dipakai  pada  penelitian  ini  adalah  maserasi dengan  variasi  pelarut  antara  etanol  70%  dan etanol 96%. Maserasi merupakan salah satu teknik ekstraksi  dengan  cara  dingin  yang  tidak menggunakan pemanasan sehingga dapat menghindari degradasi senyawa seperti flavonoid yang sensitif terhadap suhu tinggi. Proses dan alat yang  sederhana  juga  menjadi  pertimbangan pemilihan  metode  ekstraksi  pada  penelitian  ini. Cairan penyari etanol bersifat universal, memiliki kemudahan  saat  diuapkan  dan  ketoksikannya rendah  daripada  pelarut  lainnya.  Perubahan konsentrasi  etanol  dapat  memengaruhi  kelarutan senyawa bioaktif dengan mengubah polaritas dari pelarut. Etanol dengan konsentrasi 70% memiliki polaritas  yang  lebih  tinggi  daripada  etanol  96%, sehingga  dapat  memengaruhi  kelarutan  senyawa tersebut  (Riwanti  dkk.,  2020).  Penguapan menggunakan rotary evaporator dan water bath pada  suhu  50 o C  bertujuan  untuk  menghilangkan cairan  penyari  dan  mendapatkan  ekstrak  kental sawi  pakcoy.  Rendemen  ekstrak  dapat  digunakan untuk  menghitung  jumlah  metabolit  sekunder yang  terlarut  dalam  pelarut  selama  proses ekstraksi  (Senduk  dkk.,  2020).  Hasil  rendemen ekstrak etanol 70% sawi pakcoy pada penelitian ini sebesar  17,71%  sedangkan  ekstrak  etanol  96% sebesar 11, 87%. Perbedaan rendemen disebabkan karena perbedaan kepolaran pelarut dan senyawa metabolit sekunder pada sawi pakcoy. Sawi pakcoy didominasi senyawa yang bersifat polar, sehingga kadar  senyawa  yang  tertarik  lebih  tinggi  pada
ekstrak etanol 70% yang lebih polar dibandingkan dengan etanol 96%. Bentuk berupa ekstrak kental, berwarna kuning kecoklatan dan berbau khas.

## Uji Kualitatif
Pengujian  kualitatif  dilakukan  untuk mengidentifikasi  kandungan  senyawa  dalam  sawi pakcoy  yang  berpotensi  sebagai  antikolesterol. Berdasarkan analisa kualitatif pada  Tabel 1 dapat disimpulkan bahwa dalam ekstrak etanol 70% dan etanol  96%  sawi  pakcoy  mengandung  senyawa tanin,  alkaloid,  flavonoid  dan  saponin.  Hasil  ini sesuai dengan penelitian (Zulaini dan Dalimunthe, 2022) yang menyebutkan bahwa pada sawi pakcoy mengandung  flavonoid,  alkaloid,  saponin  dan steroid. Pada pengujian ini tidak terdeteksi adanya steroid  di  kedua  ekstrak.  Hal  tersebut  dapat disebabkan  karena  penggunaan  pelarut  yang cenderung bersifat polar sehingga senyawa steroid yang bersifat non polar tidak ikut terbawa.
Penelitian  uji  aktivitas  antikolesterol menggunakan  pereaksi Liebermann-Burchard. Sampel  tidak  boleh  mengandung  steroid  karena kolesterol  merupakan  golongan  steroid  sehingga jika sampel positif steroid dapat mengganggu dan menambah kolesterol yang diukur pada instrumen dan  menyebabkan  metode  yang  digunakan menjadi tidak spesifik.

## Tabel 1. Skrining Fitokimia
Uji Fitokimia Hasil Pengamatan Etanol 70% Etanol 96% Flavonoid + + Alkaloid + + Saponin + + Tanin + + Steroid + +

## Penentuan Operating Time
Untuk  menentukan  waktu  yang  diperlukan agar  senyawa  mencapai  reaksi  yang  stabil,  perlu dilakukan  pengukuran  waktu  operasi  yang diindikasikan dengan tidak adanya perubahan atau penurunan nilai absorbansi. Untuk mencari waktu operasi, larutan kolesterol dengan konsentrasi 100 ppm digunakan dan waktu pengukuran dilakukan mulai  dari  menit  ke-1  hingga  menit  ke-25.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  waktu  operasi yang diperlukan untuk mencapai reaksi yang stabil adalah  pada  menit  ke-12.  Hasil  tersebut  cukup mendekati dengan hasil penelitian  (Anggraini dan Ali,  2017)  bahwa  larutan  kolesterol  konsentrasi 100 ppm memiliki waktu operating time 15 menit. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Tujuan dari
menentukan panjang gelombang maksimum adalah untuk mendapatkan nilai  serapan  maksimum.  Dalam  melakukan tindakan  tersebut,  absorbansi  larutan  referensi kolesterol diukur pada rentang panjang gelombang yang berada pada wilayah cahaya terlihat (visibel). Absorbansi  maksimum  yang  didapat  pada
penelitian ini adalah 667,5 nm. Hal ini mendekati penelitian Lindawati dan Ningsih (2020) yaitu 668 nm.

## Pengukuran Kontrol Positif
Pengukuran  kontrol  positif  dilakukan dengan tujuan mendapatkan absorbansi kolesterol awal  sebelum  diberi  sampel.  Absorbansi  kontrol positif pada penelitian ini yaitu 0,741.

## Penentuan Aktivitas Antikolesterol
Metode Liebermann-Burchard digunakan untuk  mengukur  aktivitas  penurunan  kolesterol karena sangat spesifik dalam menentukan senyawa golongan  steroid  dengan  cara  mengidentifikasi senyawa kolesterol. Dalam metode ini, asam sulfat pekat  dan  asam  asetat  anhidrat  digunakan  untuk pereaksi.  Penambahan  asam  asetat  anhidrat bertujuan untuk menghasilkan turunan dari asetil steroid  dengan  melakukan  reaksi  asetilasi  pada gugus  -OH  dari  steroid,  serta  memastikan  bahwa sistem reaksi bebas dari air karena kandungan air dapat mempengaruhi proses reaksi dan menyebabkan  ketidakstabilan  senyawa  yang terbentuk.  Penambahan  asam  sulfat  pekat  untuk membentuk  kompleks  warna  hijau.  Prinsip  dari metode  ini  ialah  reaksi  asetilasi  gugus  hidroksil pada  kolesterol  oleh  asam  asetat  anhidrat membuat  ikatan  rangkap,  lalu  gugus  hidrogen akan  terlepas  yang  mengakibatkan  berpindahnya ikatan  rangkap  (Gambar  1).  Senyawa  yang bertindak  sebagai  elektrofil  atau  karbokation mengalami proses resonansi sehingga menyebabkan  adisi  elektrofilik  dan  pelepasan hidrogen.  Kompleks  warna  muncul  karena perpanjangan  konjugasi  yang  dialami  senyawa tersebut.  Hasil  larutan  yang  telah  berubah  warna diukur  dengan  spektrofotometri  UV-Vis  agar panjang  gelombang  maksimal  dapat  diketahui (Siadi, 2012).
Data pada Tabel 1 menunjukkan persentase penurunan  kolesterol  pada  ekstrak  sawi  pakcoy yang  diekstraksi  menggunakan  etanol  70%  dan 96%.  Semakin  tinggi  konsentrasi  sampel,  maka persentase  penurunan  kolesterol  yang  dihasilkan akan  semakin  tinggi.  Hal  ini  terjadi  karena semakin tinggi konsentrasi sampel, maka semakin banyak kolesterol yang berikatan dengan flavonoid dan  semakin  sedikit  kolesterol  bebas,  sehingga nilai  absorbansinya  menjadi  lebih  rendah  dan aktivitas antikolesterol semakin besar.
Nilai EC 50 yaitu nilai yang menggambarkan konsentrasi  ekstrak  untuk  menurunkan  kadar kolesterol  50%  dari  kadar  kolesterol  total  awal. Pada ekstrak etanol 70% sawi pakcoy menunjukkan  hasil  EC 50 yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  96%  sawi pakcoy  yaitu  sebesar  20,76  ppm,  sehingga  sawi pakcoy yang diekstraksi menggunakan etanol 70% memiliki  aktivitas  antikolesterol  yang  lebih  baik dibandingkan dengan sawi pakcoy yang diekstraksi dengan  etanol  96%.  Hal  ini  diduga  dipengaruhi oleh  kepolaran  pelarut.  Etanol  70%  memiliki
polaritas  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan etanol  96%  karena  semakin  tinggi  konsentrasi etanol,  maka  tingkat  kepolaran  pelarut  akan semakin  rendah  (Riwanti  dkk.,  2020).  Senyawa polar  seperti  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  dan saponin akan lebih mudah larut dalam etanol 70%, sehingga dengan konsentrasi ekstrak yang rendah, senyawa  tersebut  sudah  dapat  menurunkan  total kolesterol.
Koefisien  variasi  atau  %KV  adalah  suatu nilai yang mencerminkan tingkat ketelitian dalam pelaksanaan  percobaan.  Nilai  ini  dianggap  baik jika kurang dari 2% (Budari dkk., 2015). Pada hasil penelitian yang ditunjukkan pada Tabel 1 diperoleh %KV yang memenuhi standar. Hal ini menunjuk- kan  bahwa  percobaan  tersebut  memiliki  tingkat ketelitian yang baik dalam pelaksanaannya.
Aktivitas antikolesterol pada ekstrak etanol sawi  pakcoy  dikarenakan  semua  kandungan senyawa  yang  terdapat  di  dalam  ekstrak  sawi pakcoy  seperti  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  dan saponin. Adanya flavonoid yang terkandung pada ekstrak diduga berperan penting dalam penurunan kolesterol  menggunakan  metode Liebermann- Burchard. Terjadinya ikatan hidrogen disebabkan oleh reaksi antara gugus hidroksil pada kolesterol dan gugus karbonil pada flavonoid. Ikatan antara flavonoid dan kolesterol tersebut yang menyebab- kan  penurunan  kadar  kolesterol,  kolesterol  yang tidak  membentuk  ikatan  kompleks  disebut kolesterol  bebas  yang  ditambahkan  dengan pereaksi Liebermann-Burchard membentuk kompleks  warna  hijau  dan  diukur  dengan spektrofotometri  UV-Vis  (Anggraini  dan  Fathrah, 2018).  Ikatan  kimia  antara  kolesterol  dengan flavonoid dilihat pada Gambar 2. Kuersetin adalah salah satu senyawa flavonoid yang termasuk dalam golongan  flavonol.  Senyawa  ini  memiliki  gugus hidroksil  yang  terletak  pada  atom  C-3,  C-5,  C-3', dan  C-4',  serta  gugus  keto  pada  atom  C-4. Kemungkinan adanya reaksi antara steroid dengan gugus  -OH  pada  atom  C-5  dan  gugus  keto  pada atom C-4, serta gugus hidroksil pada atom C-3' dan C-4',  dapat  membentuk  senyawa  kompleks  yang stabil (Li et al. , 2016).
Kemampuan  penurunan  kolesterol  dari ekstrak  etanol  sawi  pakcoy  dapat  disebabkan metabolit sekunder lain seperti alkaloid, saponin, dan tanin. Ketiganya memiliki gugus karbonil atau C-O  yang  dapat  mengikat  gugus  hidroksil  pada kolesterol  dan  dimungkinkan  dapat  membantu menurunkan kadar kolesterol.
Selain dari kandungan senyawa metabolit di  atas,  menurut  penelitian  Uliani  (2009) dilaporkan  bahwa  sawi  pakcoy  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat.  Penurunan  kadar kolesterol  juga  dapat  dipengaruhi  oleh  aktivitas antioksidan pada suatu senyawa. Dalam menurunkan kadar kolesterol, mekanisme antioksidan terdiri dari penghambatan HMG-CoA reductase  (enzim  yang  mempercepat  pembentuk- an  kolesterol)  dan  peningkatan  aktivitas  lecitin kolesterol acyl. Fungsi lecitin kolesterol acyl adalah
mengkonversi  kolesterol  bebas  menjadi  ester kolesterol  yang  bersifat  tidak  mudah  larut  dalam air.  Kemudian,  ester  kolesterol  ini  bergabung dengan inti lipoprotein dan membentuk HDL baru,
yang menghasilkan peningkatan konsentrasi HDL dalam darah (Yunarto dkk., 2019).
Gambar 1. Reaksi antara kolesterol dengan Liebermann-Burchard membentuk kompleks warna (Siadi,
2012) Tabel 2. Hasil Penurunan Kolesterol Sampel ekstrak Persen penurunan kolesterol (%) EC 50 %KV 5 ppm     10 ppm     15 ppm      20 ppm      25 ppm                (ppm)           rata-rata Etanol 70%                 12,551      20,782      33,198       47,503        62,348 12,281     21,052       33,468      46,802        62,753                 20,76              1,055% 12,146     21,452       33,873       47,503        62,887 Persen penurunan kolesterol (%) EC 50 %KV 15 ppm    20 ppm     25 ppm       30 ppm      35 ppm            (ppm)              rata-rata Etanol 96 % 11,470     25,236       39,271        52,226        65,856 11,605     25,101        39,136        51,956        66,261 29,10               0,617% 11,470     25,371        39,676        52,631        65,260
Gambar 2. Ikatan kimia antara kolesterol dengan kuersetin

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  ditarik beberapa kesimpulan yakni:
1. Ekstrak  sawi  pakcoy  ( Brassica  chinensis ) berpotensi  sebagai  antikolesterol  karena memiliki  nilai  EC 50 sebesar  20,76  ppm  pada ekstrak  etanol  70%  dan  ekstrak  etanol  96% sebesar 29,10 ppm.
2. Ekstrak etanol 70% sawi pakcoy ( Brassica chinensis )  memiliki  aktivitas  antikolesterol
lebih  baik  dibandingkan  ekstrak  etanol  96% sawi pakcoy ( Brassica chinensis ).

## SARAN
1. Dilakukan
penelitian uji aktivitas
antikolesterol secara in vivo pada sawi pakcoy ( Brassica chinensis ).
2. Dilakukan  pengujian  aktivitas  antikolesterol memakai metode fraksinasi pada sawi pakcoy ( Brassica chinensis ).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan  Nasional
Surakarta atas fasilitas yang telah diberikan dalam pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggraini,  D.  and  Fathrah,  L.,  2018,  Activity  test  of  suji  leaf extract  ( Dracaena  angustifolia Roxb.)  on  in  vitro  cholesterol lowering, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 21(2): 54 – 58.
Anggraini, D. I. and Ali, M. M., 2017, Uji aktivitas antikolesterol ekstrak  etanol  daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten) Steenis) secara in vitro, Jurnal Ilmiah Kesehatan , 9(1): 1 – 6.
Budari, M. K. S., Dewantara, I. N. A., and Wijayanti, N. P. A. D., 2015,  Validasi  metode  analisis  pene tapan  kadar  α -mangostin pada gel ekstrak kulit buah manggis ( Garcinia mangostana L.) dengan KLT-Spektrofotodensitometri, Jurnal Farmasi
Udayana , 4(2): 20 – 24.
Dwi,  F.,  Melati,  P.,  and  Widiany,  F.  L.,  2021,  Asupan  lemak jenuh  dengan  kadar  lipoprotein  pada  kelompok  lanjut  usia kolesterol, Jurnal Nutrisia , 23(1): 44 – 51, doi:
10.29238/jnutri.v23i1.205.
Li, Y., Yao, J., Han, C., Yang, J., Caudhry, M.T., Wang, S., Liu, H., and Yin, Y., 2016, Quercetin, inflammation and immunity, Nutrients , 8(3):167, doi: 10.3390/nu8030167.
Lindawati,  N.Y.  and  Ningsih,  D.W.,  2020,  Aktivitas antikolesterol  ekstrak  etanol  buah  kiwi  hijau  ( Actinidia deliciosa ), Jurnal  Ilmiah  Manuntung ,  6(2):  183,  doi: 10.51352/jim.v6i2.344.
Riwanti,  P.,  Izazih,  F.,  and  Amaliyah,  2020,  Pengaruh perbedaan  konsentrasi  etanol  pada  kadar  flavonoid  total ekstrak etanol 50, 70 dan 96%, Journal of Pharmaceutical Care Anwar Medika , 2(2): 82 – 95.
Senduk, T.W., Montolalu, L.A.D.Y., and Dotulong, V., 2020, The rendement of boiled water extract of mature leaves of mangrove
Sonneratia alba , Jurnal Perikanan Dan Kelautan Tropis , 11(1):
9, doi: 10.35800/jpkt.11.1.2020.28659.
Siadi,  K.,  2012,  Ekstrak  bungkil  biji  jarak  pagar  ( Jatropha curcas ) sebagai biopestisida yang efektif dengan penambahan larutan NaCl, Jurnal MIPA Unnes , 35(1): 77 – 83.
Subandrate,  Susilawati,  and  Safyudin,  2020,  Mentorship  of prevention  and  treatment  effort  of  hypercholesterolemia  in students, Jurnal Arsip Pengabdian Masyarakat , 1(1): 1 – 7.
Tandi, J., Tibe, F., and Rimpa, M., 2018, Hijau terhadap tikus putih  jantan  galur  wistar, Farmakologika  Jurnal  Farmasi , 15(2): 134 – 141.
Tanjung,  N.U.,  Amira,  A.P.,  Mutmainah.  N.,  and  Rahma,  S., 2022, Junk food dan kaitannya dengan kejadian gizi lebih pada remaja, Jurnal Ilmiah Kesehatan Masyarakat , 14(3): 133 – 140.
Uliani, N.N.M., 2009, Perbandingan daya antioksidan sari sawi caisim  ( Brassica  rapa subsp.parachinensis)  dengan  sari  sawi pakcoy  ( Brassica  rapa subsp.chinensis)  secara  in  vitro menggunakan metode DPPH, 53(9): 1689 – 1699.
Yunarto,  N.,  Aini,  N.,  Oktoberia,  I.S.,  Sulistyowati,  I.,  and Kurniatri, A.A. , 2019, Aktivitas antioksidan serta penghambatan  HMG  CoA  dan  lipase  dari  kombinasi  ekstrak daun  binahong-rimpang  temu  lawak, Jurnal  Kefarmasian Indonesia , 9(2): 89 – 96, doi: 10.22435/jki.v9i2.1930.
Zulaini,  L.  and  Dalimunthe,  G.I.,  2022,  Formulasi  sediaan gummy  candies  sari  sawi  pakcoy  ( Brassica  rapa L)  dengan variasi sukrosa sebagai pemanis, 1(3): 69 – 77.