## KANDUNGAN ASAM AMINO PROLIN DUA VARIETAS PADI HITAM PADA KONDISI CEKAMAN KEKERINGAN
Amino Acid Proline Content of Two Black Rice

## Varieties under Drought Condition
Intan Rohma Nurmalasari 1 )*
1) Fakultas Pertanian Program Studi Agroteknologi, Universitas Merdeka
Surabaya
DOI: http://dx.doi.org/10.21111/agrotech.v3i1.1898 Terima 30 April 2018 Revisi 29 Mei 2018 Terbit 04 Juni 2018
Abstrak: Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membandingkan  ketahanan dua  varietas  padi  hitam  terhadap  kondisi  kekeringan  (cekaman)  dengan pemberian Polyethylene Glycol (PEG), mengetahui pengaruh prolin terhadap varietas padi hitam. PEG dengan perlakuan konsentrasi pada benih padi hitam dapat dimanfaatkan sebagai indikator tingkat ketahanan varietas padi hitam stres yang tinggi  meningkatkan  kandungan asam amino  prolin di kedua varietas padi hitam Data dari hasil observasi dianalisis menggunakan metode analisis varians didasarkan pada F-test tingkat 5%. Nilai rata-rata dibandingkan dengan menggunakan Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada tingkat 5%. Konsentrasi 0%, 15%, 30%, dan 45% melakukan uji korelasi.
* Korespondensi email: mbakyuintan@gmail.com Alamat : Jl. Ketintang Madya No VII/2 Surabaya
Gontor AGROTECH Science Journal Vol. 4 No. 1, Juni 2018 http://ejournal.unida.gontor.ac.id/index.php/agrotech
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  PEG  30%  mampu  meningkatkaan prolin,  sehingga  dapat  dimanfaatkan  untuk  screening  benih  awal  yang bertujuan mengetahui tahan dari berbagai stres, PEG konsentrasi yang lebih tinggi, juga meningkatkan kandungan asam amino prolin sebagai toleransi bentuk kedua varietas padi hitam terhadap stress air.
Kata Kunci : padi  hitam,  asam amino  prolin,  Polyethylene  Glycol (PEG)
Abstract: The research was aimed to compare the resistance of two varieties of black rice to the condition of drought (stress) by giving Polyethylene  Glycol  (PEG),  to  know  the  effect  of  proline  on  black rice  varieties.  PEG  with  concentration  treatments  on  black  rice seeds  can  be  utilized  as  an  indicator  of  high  resistance  resistance of black rice varieties increase the content of proline amino acids in both black rice varieties. Data from observation results are analyzed using  variance  analysis  method  based  on  F-test  level  of  5%.  The average value compared to using DMRT (Duncan Multiple Range Test) tests at the 5% level. Concentrations of 0%, 15%, 30%, and 45% performed a correlation test. The results showed that PEG 30% was able to increase proline, so it could be used for early seed screening aimed to know resistant from various stress, higher concentration of PEG, also increase the proline amino acid content as tolerance of the second form of black rice varieties to water stress.
Keywords : black paddy, amino acid proline Polyethylene Glycol (PEG), water stress intensity.

## 1. Pendahuluan
Sedikitnya  jumlah  dan  popularitas  padi  hitam  membuat masyarakat  jarang  mengenal  apalagi  mengkonsumsi  beras  hitam. Padahal beras hitam mampu mensubtitusi peran beras putih. Selain
dapat dimanfaatkan sebagai makanan pokok, juga berperan sebagai bahan  pangan  fungsional  yang  memiliki  khasiat  dalam  dunia kesehatan.
Cekaman  merupakan  ancaman  produksi  tanaman  padi. Sebagai solusi lahan dengan ketersediaan air rendah, maka diperlukan varietas  padi  tahan  terhadap  cekaman  kekeringan  (Hariyadi,  Ali, and  Nurlina  2017).  Penelitian  mengenai  tingkat  toleransi  varietas padi hitam Bantul dan Boyolali harus diketahui sebelum melakukan seleksi. Cekaman air yang terjadi dapat mengakibatkan penurunan produksi bahkan hasil padi, hal ini disebabkan karena benih yang digunakan bersifat toleran terhadap cekaman kekeringan.
Polyethylene Glycol ( PEG) memiliki kemampuan mengontrol imbibisi  dan  hidrasi  benih,  sehingga  digunakan  dalam  pengujian ketahanan  benih  terhadap  kekeringan  dengan  memperhitungkan indeks kekeringan . Selain itu karakter cepat larut dalam air menye- babkan terjadinya penurunan potensial air dan dapat di manfaatkan sebagai media simulasi penurunan potensial air, hal ini bergantung pada  konsentrasi  dan  berat  molekul Polyethylene  Glycol  ( PEG). Banyaknya akar padi yang mampu menembus (daya tembus akar) larutan Polyethylene  Glycol  ( PEG)  setelah  mengeras  membentuk lapisan dalam, menjadi indikasi uji ketahanan tanaman padi hitam terhadap cekaman.
Kandungan  prolin  yang  melimpah  menjadi  indikator  tole- ransi  cekaman  kekeringan,  karena  prolin  berfungsi  sebagai  pe- nyimpan  senyawa  Nitrogen,  osmoregulator,  dan  protektor  enzim tertentu. Sel, jaringan atau tanaman yang tinggi kandungan prolin dianggap mempunyai sifat toleransi terhadap kekeringan yang lebih baik. Selain sebagai osmoregulator, prolin berperan penting dalam menjaga  turgor  sel  dan  pertumbuhan  akar  pada  kondisi  potensial osmotik  rendah  (Ali,  2015).  Pada  tanaman  padi  hitam  toleran,
terjadi mekanisme pertahanan turgor agar tetap di atas nol, untuk menjaga potensial air jaringan tetap rendah dibandingkan potensial air eksternalnya, sehingga tidak terjadi plasmolisis
Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh cekaman ter- hadap kandungan prolin beberapa varietas padi hitam, untuk me- ngetahui konsentrasi Polyethylene Glycol (PEG) yang tepat pada pe- napisan benih secara dini (screening) tanaman padi hitam, dan untuk membandingkan  hubungan  kandungan  prolin  dengan  per bedaan konsentrasi Polyethylene Glycol (PEG) terhadap pertumbuhan bebe- rapa varietas padi hitam.

## 2. Bahan dan Metode
Penelitian pengaruh cekaman terhadap padi hitam varietas Bantul  dan  Boyolali  dilaksanakan  di  dua  tempat,  dengan  tahapan sebagai berikut:
1)  Uji  Laboratorium:  menguji  ketahanan  dua  varietas  padi hitam  pada  media  PEG  dilaksanakan  di  Laboratorium  Fakultas MIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta, (2) Uji Lapang, me nguji perlakuan  pemberian  PEG  saat  pertumbuhan  awal  tana man  pada kondisi  sebenarnya,  uji  lapang  dilaksanakan  di  lahan  Uni versitas Merdeka Surabaya, dan (3) Uji kandungan asam amino prolin pada dua  varietas  Padi  Hitam.  Penelitian  dilak sana kan  di  Universitas Merdeka Suarabaya pada bulan Mei 2016.
2.1.  Uji  Laboratorium:  Menguji  ketahanan  dua  varietas  padi hitam pada media PEG di Laboratorium
Penelitian laboratorium untuk menguji ketahanan padi hitam pada  media Polyethylene  Glycol (PEG)  menggunakan  Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang disusun secara faktorial dan terdiri dari
2  faktor.  Faktor  pertama  yaitu  varietas  padi  (V)  yang  terdiri  dari padi  hitam  Bantul  (V1),  padi  hitam  Boyolali  (V2).  Faktor  kedua yaitu  pemberian Polyethylene  Glycol (PEG)  yang  masing-  masing dilarutkan  ke  dalam  100  mL  air  dengan  kadar  larutan  (L)  yang terdiri:  tanpa  pemberian  larutan  PEG  (L0)  sebagai  kontrol,  kadar larutan  PEG  15%  (L1),  kadar  larutan  PEG  30%  (L2),kadar  larutan PEG 45% (L3), Dengan demikian terdapat 8 kombinasi perlakuan: V1L0: padi hitam Bantul tanpa pemberian PEG V1L1: padi hitam Bantul dengan kadar larutan 15% V1L2: padi hitam Bantul dengan kadar larutan 30% V1L3: padi hitam Bantul dengan kadar larutan 45% V2L0: padi hitam Boyolali tanpa pemberian PEG V2L1: padi hitam Boyolali dengan kadar larutan 15% V2L2: padi hitam Boyolali dengan kadar larutan 30% V2L3: padi hitam Boyolali dengan kadar larutan 45%
Masing-masing perlakuan diulang sebanyak 4 kali sehingga didapat 32 tanaman percobaan.
2.2.  Uji Lapang, menguji perlakuan pemberian PEG saat pertum- bu han awal tanaman pada kondisi sebenarnya
a.  Persiapan Bahan Tanam
Mekanisme persiapan bahan tanaman dilakukan seperti pelak- sa naan  lapang  yakni  benih  padi  direndam  air  selama  satu malam kemudian dipilih benih yang baik. Benih yang baik yaitu benih  yang  tenggelam,  utuh  dan  tidak  rusak.  Benih  langsung disemaikan pada tempat persemaian yang telah disediakan.
b.  Pengecambahan
Pengamatan perkecambahan terhadap dua varietas padi hitam yang  memiliki  ketahanan  terhadap  kekeringan  dilakukan dengan tahapan sebagai berikut: (1) Gabah dari masing-masing
va rietas  dipilih  yang  mempunyai  ukuran  seragam,  (2)  Untuk mengecambahkan  benih  digunakan  media  tanah  yang  telah ditata ke dalam baki berlabel masing- masing varietas. Ditanam seperti biasa sampai berumur 3 Minggu Setelah Perkecambahan (MSP),  (3)  larutan  PEG  diberikan  pada  umur  tanaman  2  MSP dengan  metode  gulung  lipat.  Benih  yang  telah  berkecambah pertama  digulung  pada blotting  paper ,  kemudian  tutup  lipatan dilanjutkan tanaman kedua (varietas yang sama) tutup kembali lipatan dan  seterusnya, sampai dihasilkan lipatan  sebanyak  12 benih.  (4)  Selanjutnya  tahap  pemberian  PEG,  dengan  metode penyelupan ke dalam gelas yang telah diisi larutan PEG dengan konsentrasi  PEG  15%,  25%,  40%.  Rancangan  percobaan  yang digunakan adalah rancangan acak lengkap.

## 2.3.  Uji Kandungan Asam Amino Prolin Pada Dua Varietas Padi Hitam
Pengukuran  akumulasi  prolin  dilakukan  dengan  metode Ninhidrin. Bahan berupa daun segar (daun ke-3 dari ujung tanaman) sebanyak 0,5 g ditumbuk  dalam mortar yang  diberi larutan sulfo- salisilat  3%  sebanyak  10  ml.  Hasil  tumbukan  daun  kemudian
direaksikan dengan 2 ml asam ninhidrin dan 2 mlasam asetat glasial dalam tabung reaksi pada suhu 100° C selama 1 jam.Reaksi diakhiri dengan  memasukkan  tabung  reaksi  ke  dalam  gelas  piala  yang berisi es. Larutan asam ninhidrin dibuat dengan memanaskan 1,25 gninhidrin dalam 30 ml asam asetat glasial dan 20 ml asam fosfat hingga larut.Campuran diekstraksi dengan 4 ml toluen, kemudian digojog dengan vortex selama 15-20 detik sehingga terbentuk dua lapisan  cairan  yang  terpisah.Toluen  yang  berwarna  merah  yang
mengandung  prolin  terletak  di  bagian  atas.  Larutan  bagian  atas disedot menggunakan pipet, untuk diukur kadar prolinnya dengan spektrofotometer,  absorbansi  dibaca  pada panjang  gelombang 520 nm.  Kadar  prolin  ditentukan  berdasarkan  bacaan  larutan  standar prolin murni.
Rumus untuk mencari massa prolin:
M1
× V1 = M2 × V2 3µ × 2 ml = M2 × 10 ml M2 = 3 × 2 10 M2 = 0,6 µM
Massa prolin / ml larutan prolin × BMP = 0,6 × 115,13 gram/mol = 69,078 µg/ml
Dilakukan  pengenceran  untuk  menentukan  variasi  kon- sentrasi yang dibutuhkan untuk pembuatan kurva standar sebanyak 2 ml larutan tersebut direaksikan dengan asam ninhidrin dan asam asetat glasial untuk kemudian dibaca absorbansinya.
Dari data yang diperoleh tersebut dibuat persamaan regresi dengan  kadar  prolin  (x)  dan  absorbansinya  (y).  Persamaan  yang diperoleh adalah  y  =  6,903x  +0,0558.  Kadar  prolin  yang  diperoleh masih dalam bentuk µM, untuk menjadikannya dalam µ gram/ml, harus dikalikan BMP (Berat Molekul Prolin) 115,13 gram/mol.
Kadar prolin/berat segar daun dihitung sebagai
Data hasil pengamatan dianalisis menggunakan metode ana- lisis  ragam  berdasarkan  uji  F  taraf  5%.  Apabila  terjadi  perbedaan
5%. Untuk melihat hubungan antara uji analisis dengan perlakuan laru tan PEG konsentrasi (0%, 15%, 30%, dan 45%) dan kandungan asam amino prolin yang dihasilkan maka dilakukan uji korelasi.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Perkecambahan
Perbedaan  perkecambahan  benih  padi  hitam  varietas Bantul  pada  konsentrasi  PEG  15%  terdapat  sebesar  75%,  dan untuk  varitas  padi  hitam  Boyolali  berkecambah  90%.  Penurunan per sentase  perkecambahan  pada  varietas  Bantul  menjadi  55% seiring  bertambahnya  konsentrasi  PEG  menjadi  30%.  Penurunan juga  ditunjukkan  persentase  perkecambahan  varietas  padi  hitam Boyolali, pada konsentrasi tersebut benih berkecambah sebesar 85% (Gambar 1).
Perlakuan pemberian larutan Polyethylene glycol konsentrasi 45%  juga  tampak  berpengaruh  terhadap  penurunan  persentase perkecambahan  benih  baik  varietas  Bantul  maupun  Boyolali. Persentase benih berkecambah varietas padi hitam Boyolali sebesar 28%, padi hitam Bantul sebesar 44%.
Gambar 1. Persentase gabah berkecambah dalam larutan PEG pada varietas padi hitam Bantul, Boyolali

## 3.2.  Kandungan Prolin
Peran  asam  amino  prolin  sangat  besar  dalam  melindungi tanaman padi hitam dalam kondisi cekaman, selain itu prolin sebagai penyedia  nitrogen  organik  yang  berguna  pada  proses  pemulihan sel.  Prolin  menyimpan  karbon  dan  nitrogen  selama  cekaman air,  karena  pada  saat  itu  sintesis  karbohidrat  terhambat.  Proporsi prolin  bertambah  lebih  cepat  daripada  asam  amino  lainnya  saat cekaman. Tinggi rendahnya kadar prolin dalam jaringan tanaman digunakan untuk mengevaluasi tingkat toleransi varietas terhadap cekaman (Bates et al, 1973). Semakin tinggi peningkatan kandungan prolin yang terdapat pada tanaman maka semakin toleran tanaman terhadap cekaman kekeringan.
Varietas  padi  hitam  Bantul  dan  Boyolali,  memiliki  respon yang  sama  terhadap  kondisi  ketersediaan  air  rendah.  Kondisi  ter-
sebut dapat memacu tanaman padi, untuk meningkatkan laju res- pirasi. Respirasi tersebut berperan dalam memproduksi ATP untuk melakukan  aktivasi  sel-sel  yang  mengalami  cekaman.  Hare  (1999) menyatakan saat tanaman mengalami cekaman, respirasi tana  man lebih cepat, substansi osmotik terlarut dapat mengurangi potensial osmotik  sel,  sehingga  meningkatkan  pengambilan  air  sel  yang secara bersamaan akan meningkatkan turgiditas dan akti vitas nya.
Dilakukan pengenceran untuk memperoleh variasi kon sen- trasi  yang  dibutuhkan  untuk  pembuatan  kurva  standar.  Lang kah selanjutnya  2  ml  larutan  tersebut  direaksikan  dengan  asam  nin- hidrin  dan  asam  asetat  glasial  kemudian  dibaca  absorbansinya. Di sebabkan menggunakan 2 varietas (Padi  hitam Bantul dan padi hitam  Boyolali).  Pada  perlakuan  yaitu  konsentrasi  PEG  di  labo - ratorium,  diperoleh  tabel  hasil  pengenceran  pada  perlakuan  PEG Dari pengenceran yang dilakukan, diperoleh data sebagai berikut :
Tabel 1.   Data  pengenceran  I  prolin  pada  perlakuan  pemberian
Polyethylene Glycol PEG Volume prolin (ml) Volume asam sulfosalisilat 3%(ml) Kadar prolin (µg/ ml) Konsentrasi prolin µM Absorbansi 0,0 0,4 0,8 1,2 1,6 2
1,6 1,2
0,8 0,4 0,0 12,513 24,026 35,539 47,052 0,0 0,1 0,2 0,3 0,6 0,0 0,802 2,464 3,127 3,789
Peningkatan  tertinggi  akumulasi  prolin,  pada  pemberian la rutan  PEG  40%.  Varietas  padi  hitam  Bantul  dan  Boyolali  sama-
sama  mengalami  peningkatan  kadar  prolin  pada  konsentrasi PEG  40%.  Hasil  analisis  menunjukkan  prolin  yang  paling  rendah peningkatannya ditunjukkan padi hitam varietas Bantul 0,15 mol/ gram berat segar daun.
Prolin dengan kandungan PEG 30% menunjukkan terdapat tingkatan kandungan prolin dan didapatkan hasil bahwa kandungan prolin  varietas  padi  hitam  Bantul,  dan  Boyolali  berturut-turut sebesar 0,28 mol /gram berat segar daun untuk varietas Bantul dan 0,44 mol/gram berat segar daun untuk varietas Boyolali.
Gambar 2. Pengaruh perlakuan konsentrasi pemberian PEG terhadap kadar prolin ( mol/gram berat segar daun) tanaman padi varietas Bantul, dan Boyolali.
Prolin  tertinggi  ditunjukkan  varietas  padi  hitam  Boyolali. Kandungan  prolin  pada  tiap  tanaman  mengalami  tingkat  tolransi yang  beragam,  disebabkan  perbedaan  sifat  dan  genetika  masing- masing varietas  tanaman berbeda baik  dalam masa  produktivitas, per tumbuhan hingga panen. Terjadi peningkatan kandungan prolin
bebas  pada  tingkat  cekaman  tinggi  disebabkan  peningkatan  aku- mulasi  prolin bebas pada  daun sebagai sumber energi saat  proses oksidasi tanaman dengan kandungan karbohidra cukup rendah .
Peranan  prolin  sangat  penting  dalam  toleransi  tanaman terhadap cekaman kekeringan, dalam hal ini analisis prolin diambil dari  jaringan  daun.  Penggunaan  larutan  PEG  30-40%  terbukti meningkatkan akumulasi prolin, atau dapat diartikan cara tanaman untuk  meningkatkan  toleransi  terhadap  cekaman.  Kandungan prolin  meningkat  akibat  cekaman,  sehingga  laju  sintesis  prolin pada lintasan glutamat juga meningkat, sebagai wujud kemampuan adaptif tanaman terhadap  cekaman  kekeringan.  Berkaitan dengan kemampuan  prolin  bertindak  sebagai  osmoregulator,  atau  agen pelindung bagi enzim-enzim membran.
Varietas  Bantul  mengakumulasi  prolin  lebih  rendah  di ban- ding kan  varietas  padi  hitam  Boyolali.  Perlakuan  larutan  PEG  45% mengakumulasi  prolin  paling  tinggi  0,36 mol/gram  berat  segar daun daripada tanpa PEG sebesar 0,15 mol/gram berat segar daun.
Penggunaan  larutan  PEG  digunakan  sebagai  penapisan ketahanan  kekeringan  secara  dini  dengan  memanfaatkan  benih utuh.  Varietas  padi  hitam  Boyolali  sebagai  genotipe  yang  lebih toleran.  Tanaman  yang  toleran  mampu  melakukan  fotosintesis dan fotosintat yang dihasilkan akan lebih banyak, dan selanjutnya fotosintat tersebut segera didistribusikan ke seluruh bagian tanaman. Akumulasi dari fotosintat akan menghasilkan pertumbuhan gene- ratif  yang  lebih  baik.  Keragaman  pertumbuhan  vegetatif  masing- masing varietas berbeda, disebabkan karena perbedaan gen untuk dapat  mengikat  air.  Tanaman  yang  lebih  toleran  terhadap  ceka- man  PEG  menghasilkan  pertumbuhan  tanaman  yang  lebih  baik dibanding dengan tanaman yang peka.Varietas padi hitam Boyolali mampu  mengakmulasi  asimilat  lebih  baik  dibandingkan  varietas
padi hitam Bantul.
Konsentrasi  PEG  yang  tinggi  (PEG  45%)  pada  tanaman tercekam kekeringann menghasilkan peningkatan prolin. Dari kedua varietas pada perlakuan 40% varietas Boyolali menghasilkan prolin paling tinggi sebesar 0.56 mol/gram berat segar daun. Konsentrasi PEG  secara  nyata  mempengaruhi  hampir  seluruh  peubah  pada perlakuan konsentrasi PEG 40%. Oleh karena konsentrasi PEG 40% merupakan  kondisi  cekaman  kekeringan  bagi  varietas  padi  hitam Bantul, Boyolali, sehingga dapat digunakan untuk seleksi ketahanan kekeringan pada tanaman padi.
Peningkatan  kandungan  prolin  terlihat  pada  perlakuan pemberian larutan PEG mulai 20% sudah menunjukkan peningkatan kandungan prolin hingga perlakuan PEG 40% (Gambar.2). Namun, perlu  diingat  bahwa  besarnya  peningkatan  akumulasi  prolin beragam  berdasarkan  karakter  masing-masing  varietas.  Varietas padi  hitam  Boyolali  mulai  mengalami  peningkatan  kadar  prolin pada konsentrasi PEG 15%. Sedangkan prolin yang paling rendah peningkatannya ditunjukkan padi hitam varietas Bantul 0,19 mol/ gram berat segar daun.
Prolin  terakumulasi  lebih  banyak  pada  tanaman  yang lebih  toleran terhadap cekaman  kekeringan  dibandingkan dengan tanaman  yang  peka  (Kirkham  1990).  Menurut  Pangaribuan  (2001) bahwa  peningkatan  kandungan  prolin  bebas  pada  tanaman  padi hitam  cukup  tinggi,  hal  tesebut  ada  kesesuaian  dengan  hasil penelitian yang menunjukkan adanya keterkaitan dengan ketahanan terhadap  cekaman  kekeringan.  Varietas  Boyolali  mengandung prolin paling tinggi (Gambar 2), sehingga varietas ini lebih toleran terhadap cekaman kekeringan.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, maka dapat disimpulkan , Ceka- man  yang  tinggi  berpengaruh  terhadap  peningkatan  kandungan asam  amino  prolin  pada  kedua  varietas  padi  hitam , Konsentrasi PEG 25% tepat digunakan untuk penapisan benih ( screening ) , secara dini mengetahui ketahanan suatu varietas terhadap cekaman, sebab pada perlakuan PEG 25% menunjukkan peningkatan awal kan du- ngan prolin dan Semakin tinggi konsentrasi Polyethylene Glycol ( PEG), semakin  meningkat  pula  kandungan  asam  amino  prolin  sebagai bentuk toleransi kedua varietas padi hitam terhadap cekaman.

## 5. Referensi
Ali,  Mahrus.  2015.  Pengaruh  Dosis  Pemupukan  Npk  Terhadap Pro  duksi  Dan  Kandungan  Capsaicin  Pada  Buah  Tanaman Cabe Rawit (Capsicum Frutescens L.). Jurnal Agrosains: Karya Kreatif Dan Inovatif 2 (2):171–78.
Bargmann,  B.O.R.,  A.M.  Laxalt,  B.  ter  Riet,  B.  van  Schooten,  E. Merquiol,  C.  Testerink,  M.A.  Haring,  D.  Bartels,  and  T. Munnik. 2009. Multiple PLDs Required for High Salinity and
Plant and Cell Physiology 50
(1) : 78 - 89.
Dhanda, S.S., G.S. Sethi, R.K. Behl. 2004. Indices of Drought Tolerance in  Wheat  Genotypes  as  Early  Stages  of  Plant  Growth. J.
Agronomy & Crop Science 190:6- 12.
Hariyadi, Bambang Wicaksono, Mahrus Ali, and Nurlina Nurlina. 2017. “Damage Status Assessment Of Agricultural Land As A Result Of Biomass Production In Probolinggo Regency East Java.” ADRI International Journal Of Agriculture 1 (1): 1-12. Jumin.H.B. 2002. Agroekologi Suatu Pendekatan Fisiologi.
Persada. Jakarta.
Kirkham. M. B. 1990.
. P 323-342. In B.
A. Stewart and D. R. Nielsen (Ed.) Irrigation of agricultural crops. Madison, Winsconsin USA
Lagerwerff,  J.V.,  G.  Ogata,  H.E.  Eagle.  1961.  Control  of  Osmotic Pressure  of  Culture  Solutions  with  Polyethylene  Glycol. Science 133:1486.
Pangaribuan,  Y.  2001. Studi  karakter  morfologi  tanaman  kelapa  sawit ( Elaeis  guineensis Jacq.) di  pembibitan  terhadap  cekaman kekeringan .  (Thesis)  Program  Pascasarjana,  Intitut  Pertanian Bogor. Bogor. 74 hal.