Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020)
Hasminar Rachman Fidiastuti, Anis Samrotul Lathifah, Mohamad Amin, Yudhi Utomo. (2020). Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Indigen Pengurai Lemak pada Limbah Cair Batik Tulungagung. Journal Bioeksperimen. Vol. 6 (1) Pp. 29-35. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v6i1.2795

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI INDIGEN PENGURAI LEMAK PADA LIMBAH CAIR BATIK TULUNGAGUNG
Hasminar Rachman Fidiastuti 1) , Anis Samrotul Lathifah 2) , Mohamad Amin 3) , Yudhi Utomo 4) 1,2) Pendidikan Biologi, Fakultas Ilmu Pendidikan, Universitas Tribhuwana Tunggadewi,
3) Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malang,
4) Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malang E-mail korespondensi: indo.hasminar@gmail.com
Paper submit : 12 Juni 2019, Paper publish : Maret 2020
Abstract – The native bacteria have a wide life habitat and have an important role as agents in the bioremediation process of waste. Batik as one of the products of Indonesian character, has become a contributor of liquid waste that can reduce water quality. Besides being rich in dyes, batik waste is also rich in fat content. The fat content in batik waste comes from the processing (coating the fabric with a layer of wax) and washing is done repeatedly. Fat has properties that are not soluble in water and is an organic material, which if high concentrations can reduce water quality. This study aims to isolate, identify, and measure the ability of indigenous bacteria to reduce fat content in liquid waste in vitro. The method used is experimental research. Isolation and culture using Busnall Hass media enriched with 1% olive oil, then proceed with a series of biochemical tests for the purpose of characterizing indigenous bacterial isolates. The results showed that Bacillus subtilis and Pseudomonas fluorescens have the potential to reduce the fat content of batik liquid waste.
Keywords: batik, bioremediation, indigenous bacteria

## Pendahuluan
Batik merupakan warisan budaya milik Indonesia yang telah mendapat pengakuan dari UNESCO sejak 2 Oktober 2009. Berdasarkan data Kementrian Koordinator Bidang Kesejahteraan Rakyat pada tahun 2018, industri batik telah tersebar di 20 provinsi di Indonesia. Setiap daerah memiliki karakter batik yang khas dan unik. Salah satu sentra produsen batik di Jawa Timur adalah kota Tulungagung. Kementrian Perindustrian Republik Indonesia mencatat terdapat 2 sentra pabrik industri batik di Tulungagung yang berlokasi di kecamatan kauman.
Salah satu kebijakan Bupati Tulungagung adalah untuk memajukan industri batik, sehingga secara umum produksi batik di kecamatan kauman makin meningkat. Namun peningkatan industri batik menjadi
penyumbang persoalan tersendiri, terutama berkaitan dengan pembuangan limbah ke badan air sekitar. Industri tekstil merupakan industri yang memiliki kedudukan penting di Asia dan menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam hal penggunaan bahan pewarna sintetik yang kompleks dan dilepaskan ke badan air sekitar, melalui proses pencucian (Shah, 2018). Lebih lanjut, proses pencelupan, desizing , dan penggosokan merupakan sumber utama pencemaran air yang ditandai dengan warna yang terlihat pada limbah, tingginya kebutuhan oksigen secara kimiawi, konsentrasi padatan tersuspensi, serta perubahan pH.
Berdasarkan hasil penelitian pendahuluan yang telah dilakukan sebelumnya dan bertujuan untuk melakukan uji karakteristik terhadap limbah cair batik Tulungagung, diperoleh hasil bahwa kadar BOD menunjukkan 376,633 mg/L, COD sebesar 568 mg/L, DO sebesar
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020)
2,374 mg/L, TSS sebesar 1180 mg/L, pH 5,8; dan kadar lemak sebesar 2,240 % (Hasminar, 2018). Karakteristik limbah berada di atas nilai ambang baku ketentuan limbah tekstil, sehingga diperlukan pengolahan lebih lanjut sebelum dibuang.
Pada penelitian ini, kadar lemak menjadi proporsi yang diutamakan. Kandungan lemak dalam limbah batik dapat berasal dari proses pemalaman atau pelapisan lilin. Lapisan lilin berfungsi untuk menutupi bagian batik yang tidak mengalami proses pewarnaan. Lapisan lilin ini akan dihilangkan setelah proses pencelupan warna. Proses ini tidak hanya berlangsung sekali tetapi bahkan berulang kali.
Lilin batik terbuat dari minyak kelapa, getah pinus, getah meranti, parafin, dan lemak hewan yang biasa disebut “kendal”, yang semuanya mengandung lipid. Seperti diketahui bahwa lipid yang ada sulit untuk larut secara khas dalam air. Lipid hadir juga memiliki kemampuan untuk menghambat proses metanogenik (Hatamoto et al, 2007). Kadar maksium minyak dan lemak dalam sungai adalah 1 mg/L. Minyak mengandung senyawa volatil yang tidak mudah menguap dan sisa minyak yang tidak dapat menguap. Sifat minyak juga tidak dapat larut dalam air sehingga dapat mempengaruhi konsentrasi oksigen terlarut dalam air, karena fiksasi oksigen bebas terhambat. Kondisi ini akan berakibat pada ketidakseimbangan rantai makanan dalam biota perairan.
Limbah dalam kapasitas terbatas akan dapat dikelola oleh lingkungan, namun dalam jumlah yang besar, lingkungan tidak lagi seimbang, sehingga dibutuhkan tehnik pengolahan khusus. Pengolahan khusus menjadi sangat penting sebelum melepaskan air limbah air ke badan air (Moller et al., 2000). Salah satu metode dalam pengolahan limbah secara biologis adalah memanfaatkan potensi bakteri indigen. Keuntungan dari metode biologis adalah ramah lingkungan dan biaya rendah (Pandey et al., 2007).  Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi kandidat bakteri indigen yang potensial dalam menurunkan kadar lemak.

## METODE PENELITIAN
Pelaksanaan penelitian dilakukan dengan mengambil sampel berupa limbah batik dalam bentuk cairan yang mengandung padatan tersuspensi. Pengambilan sampel dilakukan pada bulan Maret, dengan lokasi pengambilan sampel adalah tempat pembuangan akhir limbah di pabrik Barong Gung, kecamatan Kauman, Tulungagung. Sampel diambil pada saat musim kemarau, sehingga dianggap tidak mewakili kondisi limbah secara keseluruhan. Hasil penelitian ini merupakan kondisi yang terjadi saat musim kemarau. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Biomedik, Fakultas Kedokteran, Universitas Muhammadiyah Malang. Penelitian ini menggunakan metode eksperimen yang hasilnya disajikan secara deskriptif. Penelitian dilakukan untuk mengidentifikasi isolat bakteri indigen yang berpotensi dalam mendegradasi kadar lemak dalam limbah pabrik batik Tulungagung.

## 1.  Metode dan Desain Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan April sampai Oktober 2019. Seluruh analisis pengukuran parameter dalam penelitian ini dilakukan di Laboratorium Jasa Tirta I yang telah terakreditasi Komite Akreditasi Nasional (KAN). Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimen yang dilakukan secara in vitro dengan desain rancangan acak lengkap. Variabel bebas dalam penelitian ini yaitu isolat bakteri indigen dan variabel terikat yaitu kemampuan bakteri dalam mendegradasi kadar lemak dalam limbah. Tahapan penelitian meliputi 1) Pengambilan sampel yang dilakukan secara acak pada lokasi akhir pembuangan limbah. Limbah cair dibawa dalam wadah yang sudah disterilkan dan disimpan dalam kotak berisi es untuk mempertahankan kondisi dan karakteristik asli ke laboratorium, 2) Tahap sterilisasi alat dan medium yang digunakan: medium yang digunakan dalam penelitian ini adalah medium Busnall Hass yang diperkaya dengan olive oil 1% yang bertujan untuk
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020)
mendapatkan karakter bakteri pendegradasi lemak pada limbah. Medium lain yang digunakan adalah medium NA cair. 3) Tahap propagasi bakteri indigen yang bertujuan untuk mengkarakerisasi bakteri indigen menggunakan medium yang spesifik. Sebanyak 10% limbah cair ditambahkan pada pada 1000 ml medium BH, kemudian diletakkan dalam shaker 150 rpm selama 6 hari pada suhu 30°C.  4) Tahap pengenceran yang bertujuan untuk memperkecil konsentrasi larutan, sehingga koloni yang terbentuk tidak terlalu rapat. Hal ini akan memudahkan saat pengamatan berlangsung. Pengenceran dilakukan sampai pada tingkat pengenceran 10 -14 , sampai didapatkan koloni bakteri. Koloni bakteri yang didapatkan pada tahap ini merupakan bakteri dengan karakter mampu mendegradasi lemak 5) Tahap inokulasi limbah cair pada medium, yaitu penambahan koloni bakteri pendegradasi lemak yang telah berhasil diisolasi. 6) Tahap pengukuran aktivitas biodegradasi oleh isolat bakteri, yaitu dengan mengukur konsentrasi lemak pada limbah (24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h) sekaligus penentuan 3 bakteri indigen yang berpotensi memiliki kemampuan mendegradasi paling tinggi.

## 2.  Teknik Pengumpulan Data
Pengukuran kadar lemak menggunakan metode Direct Acid Hydroliysis . Selain kadar lemak, terdapat beberapa parameter fisik yang diukur sebagai bagian dari keberhasilan biodegradasi, yaitu kadar BOD yang diukur dengan menggunakan metode 5 th day incubation, kadar COD diukur menggunakan metode analisis Dichromate Oxidation , dan kadar DO diukur dengan menggunakan metode analisis Winkler.

## Hasil dan Pembahasan
Dari penelitian ini didapatkan 5 isolat bakteri, kelima isolat ini diujikan ke dalam limbah, selanjutnya dipilih 3 jenis isolat yang memiliki potensi tertinggi dalam penurunan kadar lemak pada limbah batik, yang diberi label isolat A, isolat B, dan isolat C. Hasil isolasi dan karakterisasi bakteri potensial yang ditemukan menunjukkan hasil sebagai berikut.

## 1.  Hasil Pengamatan Morfologi Bakteri Pendegradasi Lemak
Hasil pengamatan morfologi 3 isolat bakteri pendegradasi lemak yang potensial dalam limbah batik (Tabel 1).
Tabel 1. Morfologi Bakteri Ciri Morfologi Isolat A B C Warna Koloni Putih keruh Putih keruh Jernih transparan Bentuk Koloni Bulat Tak teratur Bulat Tepi Koloni Kasar Bergelombang Halus Elevasi Koloni Datar Berbukit-bukit Konvex Mengkilat/Suram Suram Suram Mengkilat Diameter Koloni 0,5-1 mm 2 mm 0,5-1 mm Kepekatan Koloni Pekat Pekat Kurang pekat Tipe Pertumbuhan Koloni pada Agar Menyebar Menyebar Lokalisir Gram Positif Negatif Negatif Bentuk Sel Basil Basil Basil oral Penataan Mono Mono Mono Ukuran Sel ± 4 μ ± 3 μ ± 3 μ
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020) ISSN 2460-1365
Selanjutnya dilakukan uji biokimia pada ketiga isolat bakteri, yang bertujuan untuk mengetahui karakter fisiologis bakteri.

## 2.  Hasil Uji Biokimia
Uji biokimia menggunakan MicrobactTM GNB12A/B/E, 24E Identification Kits yang meliputi uji reaksi lisin dekarboksilase, ornitin dekarboksilase, produksi H2S, fermentasi glukosa, manitol, xilosa, β -galaktosidase (ONPG), produksi indol, hidrolisis urease, reaksi Voges-Proskauer (VP), penggunaan sitrat, triptofan deaminase (TDA), pencairan gelatin, penghambatan malonat, fermentasi inositol, sorbitol, rhamnosa, sukrosa, laktosa, arabinosa, adonitol, rafinosa, salisin dan dihidroksilase arginine (Tabel 2) .
Tabel 2. Hasil Uji Biokimia
Uji Biokimia Hasil Uji A B C Spora + - - Oksidase + + + Motilitas - + + Nitrat + + + Lysin - + + Ornithin - + + H 2 S - - - Glukosa + - - Manitol + - - Xylosa + + + ONPG + + + Indole - - - Urease - - - V-P + - - Sitrat - + + TDA - - - Gelatin - + + Malonat - - - Inositol - - - Rhamnosa - - - Sukrosa - - - Lactosa - - - Arabinosa + - - Adonitol - - - Raffinosa - - - Salicin - - - Arginin - + + Katalase + - - Koagulase - - - Hemolisa beta beta beta Uji sensitive Novobiosin Tdk Tdk Tdk Starch hydrolysis + Tdk- Tdk Casein hydrolysis + Tdk Tdk Spesies Bacillus subtilis Pseudomonas fluorescens Pseudomonas fluorescens
Berdasarkan hasil pengujian secara biokimia didapatkan jika spesies Bacillus subtilis dan Pseudomonas fluorescens memiliki potensi untuk mendegradasi lemak dalam sampel limbah. Gambar 1 adalah hasil Scanning Electron Microscope yang telah dilakukan pada isolat Bacillus subtilis ( Gambar 1a ) dan Pseudomonas fluorescens ( Gambar 1b ).
Gambar 1a. Bacillus subtilis ; b. Pseudomonas fluorescens
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020)

## 3.  Hasil Pengukuran Parameter Fisik Limbah oleh Isolat yang Berpotensi
Parameter yang digunakan dalam penelitian ini adalah penurunan kadar lemak, BOD, COD dan kenaikan DO dalam limbah. Kenaikan kadar DO ( Dissolved Oxygen ) atau oksigen yang terlarut tampak pada Gambar 2 .
Gambar 2. Kenaikan Kadar DO oleh Ketiga Isolat Bakteri (dalam satuan mg/L)
Secara umum, ketiga isolat memiliki kemampuan dalam menaikkan kadar oksigen pada limbah setelah 48 jam masa inkubasi. B. subtilis memiliki kemampuan yang lebih tinggi dalam menaikkan kadar oksigen terlarut pada limbah. Kadar oksigen terlarut akan tercatat rendah saat oksigen banyak digunakan guna keperluan perombakan materi organik oleh mikroorganisme secara alami. Kondisi ini disebut sebagai delesi oksigen dalam badan air. Penurunan kadar oksigen akan berdampak pada kelangsungan biota lain dalam perairan.
Penurunan BOD dan COD pada limbah terjadi setelah penambahan isolat bakteri (Gambar 3); (Gambar 4). Kadar BOD dan COD yang tinggi dalam sampel limbah disebabkan oleh adanya kelimpahan substrat organik. BOD merupakan parameter fisik air yang digunakan untuk mengukur aktivitas mikroba dalam pemakaian kadar oksigen terlarut. Oksigen dibutuhkan dalam proses perombakan materi organik secara alami. Sedangkan kadar COD merupakan jumlah kadar oksigen kimiawi yang
dibutuhkan mikroorganisme untuk melakukan oksidasi pada materi organik dalam limbah.
Gambar 3. Penurunan Kadar BOD oleh Ketiga Isolat Bakteri (dalam satuan mg/L)
Gambar 4. Penurunan Kadar COD oleh Ketiga Isolat Bakteri (dalam satuan mg/L)
Berdasarkan hasil penelitian didapatkan hasil jika B. subtilis memiliki kemampuan yang lebih baik dalam aktivitas menurunkan kadar BOD, dibanding kemampuan P. fluorescens . Kondisi penurunan BOD tampak berjalan optimal pada 48 jam sampai 120 jam setelah inkubasi. Setelah 120 jam, kondisi aktivitas penurunan BOD tidak lagi terjadi. Aktivitas penurunan kadar COD oleh P. fluorescens tercatat lebih signifikan terjadi dibanding B. subtilis . Kondisi penurunan kadar
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020)
COD secara optimal terjadi setelah 48 jam sampai 96 jam masa inkubasi. Secara in vitro, kondisi penurunan COD dan BOD telah tercatat berlangsung secara signifikan, walaupun hasilnya masih dalam kondisi belum memenuhi baku mutu air untuk industri tekstil. namun, kadar oksigen terlarut mengalami kenaikan yang signifikan sebagai parameter dalam perubahan kondisi air yang lebih baik.
Kadar lemak dalam limbah, jga terurai dan tercatat mengalami penurunan (Gambar 5). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kemampuan B. subtilis lebih baik dalam penurunan kadar lemak secara in vitro jika dibanding P. fluorescens . Penurunan kadar lemak secara signifikan tercatat optimal pada 72 jam sampai 120 jam setelah masa inkubasi. Aktivitas penurunan kadar lemak juga telah memperbaiki kondisi limbah, sehingga telah memenuhi baku mutu bangan air limbah untuk industri tekstil.
Gambar 5. Penurunan Kadar Lemak oleh Ketiga Isolat Bakteri (dalam satuan %)
Pembuangan limbah secara langsung ke badan air tanpa pengolahan secara lanjut akan menyebabkan polusi pada lingkungan dan bersifat toxic bagi organisme yang hidup di lingkungan perairan (Dewi et al. 2018). Polusi pada air tanah dan badan air biasanya disebabkan oleh proses industrialisasi serta urbanisasi yang semakin berkembang, ditambah tidak memperhatikan efek sampingnya terhadap konsekuensi lingkungan (Sundar et al, 2010). Industri batik di negara Indonesia
makin berkembang, seiring dengan kebijakan pemerintah dalam melestarikan warisan budaya. Hal ini menjadikan perlunya usaha untuk mengatasi limbah buangan dengan metode yang tidak banyak memberikan efek samping. Bioremediasi yang dilakukan oleh agen mikrobiologi memiliki keunggulan biaya operasional yang lebih murah serta hasil yang efektif, serta metode eco-friendly bagi penanganan limbah dan air buangan. Karakteristik limbah sangat ditentukan oleh jumlah produksi batik pada kurun waktu tertentu. Semakin tinggi produksi batik, maka limbah dapat menurunkan parameter fisik air secara signifikan. Sistem pengolahan limbah pabrik yang langsung membuang ke badan air sekitar dapat menyebabkan kondisi penurunan kualitas pada badan air. Dalam penelitian ini, didapatkan bahwa spesies B. subtilis dan P. fluorescens memiliki potensi dalam memperbaiki kondisi limbah secara in vitro. B. subtilis dan P. fluorescens memiliki kemampuan dalam menurunkan kadar lemak, kadar BOD dan COD, serta menaikkan oksigen terlarut (DO) dalam air limbah.
Komposisi lemak dalam air limbah diketahui berasal dari proses pemalaman (pelapisan lilin atau malam) selama aktivitas pewarnaan pada kain berlangsung. Kandungan senyawa lemak yang tinggi dapat menjadi penghambat aktivitas mikroba secara alami dalam sistem perairan, sehingga diperlukan penanganan yang spesifik. Kelompok Bacillus dilaporkan juga memiliki kemampuan yang baik dalam proses penurunan  kadar warna dalam limbah  (Zissi et al, 1997).  Hal ini akan menjadi lebih baik, karena  karakteristik utama dalam limbah batik adalah tingginya komposisi bahan pewarna dalam limbah.
B. subtilis memiliki kemampuan yang optimal dalam penurunan kadar lemak pada air limbah. Serupa dengan studi yang dilaporkan Bayaomi et al (2014) yang menyatakan golongan Pseudomonas dan B. subtilis (Buthelezi et al, 2012) yang menjadi komponen utama dalam isolat bakteri lokal yang diisolasi dari limbah industri tekstil.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 1 (Maret 2020)

## Simpulan
Bakteri indigen menjanjikan perbaikan yang cukup signifikan secara in vitro . B. subtilis dan P. fluorescens memiliki potensi yang menjanjikan dalam memperbaiki kondisi limbah batik Tulungagung.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan terima kasih yang sebesar- besarnya penulis sampaikan pada
KEMENRISTEKDIKTI yang telah memberikan bantuan pendanaan melalui skim PKPT (Penelitian Kerjasama Antar Perguruan Tinggi) tahun pendanaan 2018 dan 2019 dengan Nomor Kontrak Penelitian Nomor 31/TB- LPPM/TU-220/III/2019; Universitas Negeri Malang sebagai instansi mitra dalam penelitian kerjasama; Universitas Muhammadiyah Malang; dan Laboratorium Air Jasa Tirta I.

## Daftar Pustaka
Bayaomi MN, Al-Wasify RS, Hamed SR. 2014. Bioremediation of textile wastewater dyes using loval bacterial isolates. International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences 3: 962-970.
Buthelezi, S.P., Olaniran, A.O., Pillay, B. 2012. Textile dye removal from wastewater effluents using bio flocculants produced by indigenous bacterial isolates. Molecules 17:14260-14274
Dewi RS, Rina SK, Erni M, Yekti AP. 2018. Decolorization and detoxification of batik dye effluent containing indigosol blue-04B using fungi isolated from  contaminated dye effluent. Indones J Biotechnol 23 (2): 54-6.
Hasminar RF, Anis SL. 2018. Uji Karakteristik Limbah Cair Industri Batik Tulungagung: Penelitian Pendahuluan. Proceeding dalam Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Saintek III: Isu-Isu Strategis Sains, Lingkungan, dan Inovasi Pembelajarannya. Program Studi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta, 5 Mei 2018.
Hatamoto, M., Imachi, H., Yashiro, Y., Ohashi, A., and Harada, H. 2007. Diversity of anaerobic microorganisms involved in long-chain fatty acid degradation in methanogenic sludges as revealed by RNA-based stable isotope probing. Appl. And Environ Microbiology 71: 4119- 4127.
Moller P, Wallin H. 2000. Genotoxic hazards of azo pigments and other colorants related to 1-phenylazo-2-hydroxynaphthalene. Mutation Research 462: 13-30.
Pandey A, Singh P, Iyengar L. 2007. Bacterial decolorization and degradation of azo dyes. International Biodeterioration & Biodegradation 59: 73-84.
Shah, MP. 2018. Bioremediation-Waste Water Treatment. J. Bioremediat Biodregad . 9: 427.
Sundar K, Vidya R, Mukherjee A & Chandrasekaran N. 2010. High chromium tolerant bacterial strains from palar river basin: impact of tannery pollution. J Environ Earth Sci , 2: 526-530 Zissi U, Lyberatos G, Paylous. 1997. Biodegradation of aminobenzene by Bacillus subtilis under aerobic conditions. Journal of industrial microbiolog and biotechnoogy 19: 49-55.