JOURNAL OF AGROMEDICINE AND MEDICAL SCIENCES (AMS) ISSN: 2460-9048 (Print), ISSN: 2714-5654 (Electronic)
Available online at http://jurnal.unej.ac.id/index.php/JAMS
Uji In Silico Potensi Enzim Bromelain dan Enzim Actinidin Sebagai Proteolitik terhadap Protein Pembentuk Katarak
In Silico Test Potential of Bromelain and Actinidin Enzymes as Proteolytic against Cataract-forming Proteins
Elok Tiara Pratmawati 1 , Nugraha Wahyu Cahyana 2 , Zahrah Febianti 3*)
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Laboratorium Ilmu Kesehatan Mata, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
3 Laboratorium Biokimia, Fakultas Kedokteran,Universitas Jember

## Article Info
Article History:
Received: June 18, 2021 Accepted: February 23, 2024 Published: June 24, 2024
*)Corresponding author:
E-mail: zfebianti.fk@unej.ac.id

## How to cite this article:
Pratmawati, ET., Cahyana, N.W., Febianti, Z. (2024). In Silico Test Potential of  Bromelain  and  Actinidin  Enzymes  as Proteolytic  against  Cataract-forming Proteins. Journal  of  Agromedicine  and Medical Sciences , 10 (2): 95-100
https://doi.org/10.19184/ams.v10i1.254 96

## Abstrak
Katarak  adalah  kekeruhan  pada  lensa  mata  yang  menyebabkan  gangguan  penglihatan hingga terjadi kebutaan. Penyebab katarak multifaktorial, salah satunya disebabkan oleh agregasi protein crystallin , yaitu protein larut air yang mengisi 80% dari seluruh protein lensa.  Agregasi  protein  crystallin  dapat  terjadi  akibat  beberapa  mekanisme  seperti terbentuknya  amyloid  fibril  (terkait  katarak  senilis)  dan  mutasi  P23T  (terkait  katarak kongenital). Saat ini, operasi merupakan satu-satunya tata laksana katarak yang tersedia. Meskipun merupakan tata laksana terbaik, operasi membutuhkan biaya yang tidak sedikit dan tidak bebas dari komplikasi. Oleh sebab itu, diperlukan alternatif tatalaksana terkait penyakit katarak seperti penggunaan bahan alam yang memiliki sifat proteolitik. Nanas mengandung enzim bromelain dan kiwi mengandung actinidin. Enzim tersebut merupakan protease  yang  dapat  mendestabilisasi  dan  menghambat  pembentukan  agregat  sehingga berpotensi  melisiskan  protein  penyebab  katarak.  Untuk  membuktikan  potensi  tersebut, dapat dilakukan suatu penelitian dengan uji in silico dengan metode docking menggunakan ClusPro. Hasil dari uji in silico ini adalah binding energy , yaitu energi yang dibutuhkan untuk  membentuk  suatu  ikatan. Binding  energy antara  enzim  bromelain  dan  enzim actinidin dengan protein mutasi P23T γD- crystalline penyebab katarak kongenital secara berurutan  yaitu  -696,2  Kkal/mol  dan  -750,8  Kkal/mol. Binding  energy antara  enzim bromelain  dan  enzim  actinidin  dengan  protein  amyloid  penyebab katarak  senilis  secara berurutan yaitu -685,0 Kkal/mol dan -682,3 Kkal/mol. Oleh karena itu, enzim bromelain memiliki kemampuan lebih baik dalam membentuk ikatan terhadap protein mutasi P23T γD- crystalline sedangkan  enzim  actinidin  memiliki  kemampuan  lebih  baik  dalam membentuk ikatan terhadap terhadap protein amyloid β.
Kata Kunci: ClusPro, Molecular Docking , Binding energy , SwissModel

## Abstract
A  cataract  is  the  development  of  an  opacity  within  the  lens  that  can  cause  blindness. Cataracts are caused by the aggregation of crystallin proteins, which are water-soluble proteins that make up 80% of all lens proteins. Crystallin protein aggregation can occur due to several mechanisms such as the formation of amyloid fibrils (associated with senile cataract) and P23T mutations (associated with congenital cataracts). Currently, surgery is the only cataract treatment available. Although it is the best treatment, surgery requires high  cost  and  is  not  free  from  complications.  Therefore,  alternative  treatments  for cataracts  are  needed,  such  as  the  use  of  natural  ingredients  that  have  proteolytic properties. Pineapple contains bromelain and kiwi contains actinidin. Both enzymes are protease which destabilize and inhibit the formation of aggregates. So that those enzymes can potentially lyse the protein causes cataracts. To prove the potency of the enzymes, we consucted  an  insilico  study  using  Cluspro  docking  online  program.  We  investigate  the binding energy of each enzymes with the amyloid fibril and P23T mutation. The binding energy between bromelain and actinidine with P23T mutation protein respectively are  - 696.2  Kcal/mol  and  -750.8  Kcal/mol.  The  binding  energy  between  Bromelain  and Actinidin  with  amyloid  protein  are  -685.0  Kcal/mol  and  -682.3  Kcal/mol  respectively. Therefore, bromelain enzyme had a better ability to bind to the P23T D-crystallin mutation

## Pendahuluan
Katarak  merupakan  penyebab  kebutaan  terbanyak  di  dunia yaitu sebesar 34,47% diikuti oleh gangguan refraksi yang tidak terkoreksi,  dan  glaukoma.  Di  Indonesia,  katarak  yang  tidak ditangani merupakan penyebab utama kebutaan dan gangguan pengelihatan tertinggi pada penduduk di atas 50 tahun, yaitu sebanyak  77,7%  (Ismandari,  2018).  Katarak  disebabkan  oleh agregasi protein crystallin , yaitu protein larut air yang mengisi 80%  dari  seluruh  protein  lensa  (Slingsby  &  Wistow,  2014). Agregasi  protein  crystallin  dapat  terjadi  akibat  terbentuknya amyloid  fibril . Amyloid  fibril dapat  terbentuk  pada  kondisi denaturasi  seperti  radiasi  ultraviolet  (UV).  Radiasi  UV  dapat membuat endapan yang mengandung struktur amyloid β -sheet dan  agregat  amorf  sehingga  terbentuk  katarak.  Agregasi  dari protein crystallin juga dapat terjadi akibat mutasi. Ada berbagai jenis  mutasi  pada  gen crystallin salah  satunya  yaitu  mutasi P23T.  Mutasi  tersebut  menyebabkan  perubahan  asam  amino secara dramatis, sehingga menurunkan kelarutan protein yang pada  akhirnya  menyebabkan  agregasi  protein.  Mutasi  P23T pada  γD - crystallin berkaitan  dengan  terbentuknya  katarak kongenital  (Alperstein et  al .,  2019;  Ji et  al .,  2013).  Saat  ini, operasi  merupakan  satu-satunya  tata  laksana  katarak  yang tersedia.  Meskipun  merupakan  tata  laksana  terbaik,  operasi membutuhkan  biaya  yang  tidak  sedikit  dan  terdapat kekurangan fasilitas pada negara berkembang. Operasi katarak juga tidak bebas dari berbagai komplikasi intra maupun pasca operasi  (Astari,  2018;  Cahyana et  al .,  2020;  Sreelakshmi  & Abraham,  2016).  Berdasarkan  hal  tersebut  maka  diperlukan alternatif  tata  laksana  terkait  penyakit  katarak  seperti penggunaan  bahan  alam  yang  memiliki  sifat  proteolitik  yaitu nanas dan kiwi.
Nanas ( Ananas comosus ) mengandung enzim bromelain yang merupakan  95%  campuran  protease  sistein,  yang  tahan terhadap proteolisis. Bromelain juga merupakan molekul kuat yang  dapat  mendestabilisasi  agregat  protein  dan  dapat menghambat  pembentukan  agregat  tersebut  dari  keadaan monomer dan oligomer. Oleh sebab itu bromelain merupakan unsur dari nanas yang penting dan bermanfaat  salah satunya dalam bidang farmasi (Das & Bhattacharyya, 2017; Martins et al., 2014; Setyawati & Yulihastuti, 2011). Kiwi merupakan salah satu  tanaman  tropis  yang  berasal  dari  daerah  Shaanxi  di dataran tiongkok dengan genus Actinidia. Actinidia terdiri dari banyak jenis, kurang lebih 75 spesies. Salah satu spesies utama yang telah dikembangkan yaitu Actinidia chinesis (Zamzami & Citrus,  2020).  Penelitian  menunjukkan  bahwa Actinidia chinensis mengandung  actinidin  yang  merupakan  enzim protease kuat. Actinidin merupakan enzim yang dikategorikan sebagai  protease  sistein  yang  bersifat  hidrolitik  dan mengandung  gugus  sulfhidril  bebas  yang  berperan  penting dalam  aktivitas  katalisisnya  (Homaei  &  Etemadipour,  2015; Kaur et al ., 2010; Padmanabhan & Paliyath, 2015).
Enzim protease yang berasal dari tanaman nanas (bromelain) maupun  kiwi  (actinidin)  memiliki  efek  proteolitik  yang berpotensi  melisiskan  protein  mutasi  P23T γD - crystallin dan protein amyloid  β untuk  menjadi  tata  laksana  dari  katarak. Untuk  membuktikan potensi bahan dalam menimbulkan efek
yang  diinginkan  dapat  dilakukan  suatu  penelitian.  Salah  satu metode penelitian yang dapat digunakan yaitu metode In silico . In silico dapat memprediksi efek biologis dari suatu bahan aktif melalui  teknologi  komputerisasi  dengan  tujuan  untuk menemukan obat baru dengan waktu yang singkat  dan biaya yang  murah  (Wadood  et  al.,  2013).  Pada  penelitian sebelumnya,  bromelain  dengan  kombinasi  enzim  papain  dan ficin  dapat  secara  signifikan  melarutkan  dan  menyerap kekeruhan  vitreous  (Takeuchi  et  al.,  2020).  Namun,  masih belum  ada  penelitian  terkait  enzim  bromelain  dan  enzim actinidin  terhadap  protein  mutasi  P23T  γD -crystallin  dan protein amyloid β -sheet yang menyebabkan katarak.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  Enzim Bromelain  dan  Enzim  Actinidin  sebagai  proteolitik  terhadap protein pembentuk katarak melalui uji In Silico.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  penelitian insilico berbasis komputer dengan menggunakan software molecular docking .

## Pemodelan
Sekuens enzim bromelain diperoleh melalui situs https://www.uniprot.org dengan kode akses P14518. Sekuens protein tersebut digunakan untuk pemodelan enzim bromelain menggunakan SwissModel melalui situs
https://swissmodel.expasy.org/ . Kode Protein Data Bank (PDB) struktur  enzim  actinidin  (1AEC),  protein  mutasi  P23T γD - crystallin (2KFB),  dan  protein amyloid  β (2BP4)  diperoleh melalui situs PDB https://www.rcsb.org/ .

## Molecular docking
Hasil  pemodelan  enzim  bromelain  dan  kode  PDB  yang didapatkan  digunakan  untuk  proses molecular  docking menggunakan situs https://cluspro.bu.edu/ . Struktur 3D enzim bromelain  dan  kode  enzim  actinidin  dimasukkan  pada  kolom reseptor, sedangkan kode PDB P23T γD -crystallin dan protein amyloid β dimasukkan pada kolom ligan.
Hasil  dari molecular  docking dianalisis  dengan  menampilkan binding  energy (Kkal/mol).  Nilai binding  energy terendah menunjukkan semakin mudah terbentuk ikatan. Sehingga, nilai binding energy terendah yang akan digunakan.

## Hasil Penelitian
Template yang  digunakan  untuk  melakukan  pemodelan homologi yaitu template dengan kode PDB 6u7d.1.A. Kualitas model  yang  dihasilkan  oleh  Swiss-Model  dinilai  oleh  fungsi penilaian skor QMEAN. Hasil dari pemodelan enzim bromelain memiliki skor GMQE 0,92 dan skor QMEAN sebesar -0,15.
Pencarian template enzim  Bromelain  yang  digunakan  untuk melakukan pemodelan menggunakan BLAST dan HHblits pada SwissModel  (Waterhouse  et  al.,  2018). Template yang
protein, while the actinidin enzyme had a better ability to bind to amyloid-β protein.
Keywords: ClusPro, Molecular Docking , Binding energy , SwissModel
digunakan  untuk  melakukan  pemodelan  homologi yaitu template dengan  kode  PDB  6u7d.1.A.  Pemilihan template tersebut  didasarkan  pada Global  Model  Quality  Estimate (GMQE). GMQE adalah estimasi kualitas yang menggambarkan gabungan  dari  keselarasan  struktur  target  pemodelan  dan struktur template .  Skor  GMQE  yang  dihasilkan  dinyatakan dengan  angka  antara  0  dan  1.  Angka  yang  lebih  tinggi menunjukkan kekuratan yang lebih tinggi  (Waterhouse et  al., 2018).  Skor  GMQE  dari  pemodelan  enzim  bromelain menunjukkan  skor  0,92  yang  menandakan  bahwa  hasil pemodelan yang baik dan akurat.
Model dibentuk berdasarkan template dengan ProMod3 3.2.0 .  Koordinat  yang  dipertahankan  antara  target  dan template disalin  dari template ke  model.  Selanjutnya  dilakukan  insersi, delesi, dan pemodelan ulang (Studer et al., 2021).
Kualitas  model  enzim  bromelain  yang  dihasilkan  oleh  Swiss- Model dinilai oleh fungsi penilaian skor QMEAN. Skor QMEAN
adalah  skor  penilaian  komposit  yang  menggambarkan  aspek struktur geometris protein  dan memberikan estimasi kualitas untuk seluruh struktur dan per residu berdasarkan satu model tunggal.  Skor  QMEAN  sekitar  nol  menunjukkan  kesesuaian yang  baik  antara  struktur  model  dan  struktur  eksperimental dengan  ukuran  yang  sama.  Skor  -4,0  atau  lebih  rendah merupakan indikasi model dengan kualitas rendah (Benkert et al., 2011). Hasil dari pemodelan enzim bromelain memiliki skor QMEAN sebesar -0,15 yang menunjukkan hasil dari pemodelan yang baik dan memiliki  kesesuaian yang baik dengan struktur eksperimental dengan ukuran yang sama. Oleh sebab itu, hasil pemodelan tersebut dapat digunakan untuk molecular docking .
Nilai binding  energy terendah  setiap  enzim  terhadap  target docking ditampilkan pada Tabel 1, serta bentuk model interaksi pengikatan  antara  enzim  dengan  protein  target  ditampilkan pada Gambar 1 – 4.
Tabel 1. Perbandingan nilai binding energy setiap enzim terhadap target docking Target Docking Enzim Bromelain Enzim Actinidin Nilai Binding Energy (Kkal/mol) Nilai Binding Energy (Kkal/mol) Protein mutasi P23T γD - crystallin -696,2 -750,8 Protein amyloid β -685,0 -682,3
Gambar 1. Model interaksi pengikatan terendah antara Enzim bromelain dan Protein mutasi P23T γD -crystallin
a = Enzim bromelain; b = protein amyloid β Gambar 2. Model interaksi pengikatan terendah antara enzim bromelain dan protein amyloid β
(a)= Enzim bromelain
(b) = Protein mutasi P23T γD -crystallin
b
a = Protein mutasi P23T γD -crystallin; b = Enzim actinidin
Gambar 3. Model interaksi pengikatan terendah antara enzim actinidin dan protein mutasi P23T γD -crystallin
a= Enzim actinidin; b= Protein amyloid β Gambar 4. Model interaksi pengikatan terendah antara enzim actinidin dan protein amyloid β

## Pembahasan
Katarak  kongenital  adalah  kekeruhan  pada  lensa  yang terdeteksi  saat  lahir  atau  segera  setelah  lahir  dangan  usia kurang dari satu tahun (Ilyas & Yulianti, 2017). Kelainan ini dapat  terjadi  karena  berbagai  sebab,  antara  lain  gangguan metabolisme (galaktosemia), infeksi selama embriogenesis, cacat  gen,  dan  kelainan  kromosom  (Santana  &  Waiswol, 2011). Salah satu mutasi yang dapat menimbulkan katarak kongenital  adalah  mutasi  P23T  pada  γD -crystallin.  Mutasi P23T  secara  signifikan  merubah  asam  amino  dengan menurunkan kelarutan protein, sehingga dapat menyebabkan  agregasi  protein  meskipun  keseluruhan struktur pada dasarnya tidak berubah. Agregat ini dibentuk oleh peningkatan jumlah interaksi protein-protein hidrofobik (Pande, et al., 2010; Ji, et al., 2013).
Sementara  itu,  katarak  senilis  adalah  katarak  yang  terjadi diatas  50  tahun  dan  merupakan  90%  dari  semua  jenis katarak.  Katarak  senilis  disebabkan  oleh  degenerasi  pada protein  crystallin  lensa  mata  yang  membentuk  agregat. Selain  itu,  agregasi  protein  crystallin  dapat  terjadi  akibat terbentuknya  amyloid  fibril  (Moreau  &  King,  2012; Alpersteina,  et  al.,  2019).  Amyloid  fibril  adalah  fibrosa abnormal  yang  dapat  ditemukan  di  organ  dan  jaringan. Amyloid  fibril  terbentuk  dari  protein  larut  normal  yang berkumpul untuk membentuk insoluble fibers yang resisten terhadap degradasi. Amyloid fibril sebagiang besar tersusun atas  struktur  β -sheet  dalam  cross- β  conformation (Rambarana & Serpel, 2008). Dalam penilitian ini, dilakukan peninjauan binding  energy antara  enzim  bromelain  dan enzim actinidin terhadap protein  mutasi P23T γD - crystallin dan protein amyloid β sebagai protein pembentuk katarak. Sifat  proteolitik  enzim  bromelain  dan  enzim  actinidin terhadap  protein  mutasi  P23T  γD - crystallin berpotensi melisiskan    protein  penyebab  agregasi.  Selain  itu,  sifat
proteolitik enzim bromelain dan enzim actinidin berpotensi sebagai  proteolitik  terhadap  protein amyloid β sehingga dapat mempertahankan homogenitas lensa  dan mencegah terjadinya  kerusakan  protein crystallin penyusun  struktur lensa mata. Oleh karena itu, enzim bromelain dan actinidin berpotensi digunakan sebagai terapi pada penyakit katarak senilis. Potensi enzim bromelain dan enzim actinidin dapat diprediksi  melalui  uji in  silico dengan  metode molecular docking .  Analisis docking bertujuan  untuk  mengetahui interaksi  antara  protein  ligan  dan  reseptor  dan  disajikan dalam  bermacam-macam  model  interaksi.  Interaksi  ini didasarkan  pada binding  energy . Binding  energy adalah energi  yang  dibutuhkan  untuk  membentuk  suatu  ikatan. Energi  negatif  menunjukkan  selama  proses  pembentukan ikatan  terjadi  pelepasan  energi  ke    lingkungan,  sehingga binding energy paling rendah yang akan digunakan (Kozakov et  al .,  2017;  Laily  &  Khoiri,  2016).  Berdasarkan  hasil  yang telah  disebutkan  dalam  Tabel  1,  dapat  diketahui  bahwa enzim  bromelain  memiliki  ikatan  paling stabil  atau  binding energy  paling  rendah  terhadap  protein  mutasi  P23T  γD - crystallin  sedangkan  enzim  actinidin  memiliki  ikatan  paling stabil  atau  binding  energy  paling  rendah  terhadap  protein amyloid β. Belum ada penelitian sebelumnya mengenai uji in silico enzim bromelain dan enzim actinidin terhadap protein pembentuk katarak, tetapi terdapat penelitian sebelumnya yang telah melakukan uji in silico enzim bromelain sebagai inhibitor  terhadap  protein immediate  early (IE)  pada Cytomegalovirus  penyebab  tumor  otak.  Protein  IE1  dapat memodifikasi  sel  tumor  otak  sehingga  sel  tumor  dapat tumbuh  dengan  lebih  agresif  dan  menyebar  dengan  cepat melalui  dua  jalur  utama,  yaitu  menghambat  dua  protein supresor  tumor  utama  di  dalam  sel  tumor  otak  dan meningkatkan  pertumbuhan  melalui  jalur  sinyal  di  dalam tumor.  Hasil  dari  uji in  silico pada  penelitian  tersebut didapatkan nilai binding energy antara enzim bromelain dan
a b a b
protein  IE1  sebesar  -691,39  Kkal/mol  (Agarwal  &  Verma, 2019). Perbedaan nilai binding energy tersebut disebabkan karena perbedaan struktur protein mutasi P23T γD - crystallin dan  protein amyloid  β dengan  protein  IE1.  Perbedaan struktur  molekul  dapat  menyebabkan  perbedaan  jumlah ikatan hidrogen, interaksi elektrostatis, gaya hidrofobik, dan Van der Waals yang terbentuk sehingga akan mempengaruhi nilai binding  energy .  Selain  itu,  terdapat  penelitian  yang membandingkan  kemampuan  berbagai  enzim  protease tanaman  untuk  menghidrolisis  protein  pada  daging.  Dari berbagai  enzim  yang  diteliti,  enzim  actinidin  merupakan enzim  yang  paling  efektif  untuk  menghidrolisis  protein myofibril  daging  (Ha  et  al.,  2012).  Ada  berbagai  enzim proteolitik  lain  yang  bersumber  dari  tanaman  dan berpotensi sebagai terapi katarak senilis maupun kongenital. Enzim-enzim  tersebut  diantaranya  papain,  ficin,  dan zingibain. Papain adalah enzim proteolitik yang terdapat dari tanaman  papaya.  Papain  merupakan  proteinase  sistein nonspesifik  yang  memiliki  spesifisitas  subrat  yang  luas. Enzim  papain  bersifat  hidrolitik  yang  dapat  meningkatkan pemecahan protein yang lebih besar menjadi fragmen yang lebih  kecil  yang  dinamakan  peptida  dan  asam  amino (Mótyán  et  al.,  2013;  Takeuchi  et  al.,  2020).  Ficin  adalah enzim  yang  berasal  dari  tanaman Fictus  carica .  Ficin termasuk dalam protease serine. Dalam bidang medis, ficin digunakan  dalam  produksi  material  jahit  luka,  dalam persiapan  arteri  hewan  untuk  implantasi,  dan  pada penggolongan  darah.  Ficin  juga  dapat  menghancurkan  dan membunuh protein cacing intestinal (Takeuchi et al., 2020). Zingibain  adalah  protease  sistein  yang  ditemukan  dalam jahe.  Enzim  ini  banyak  digunakan  dalam  industri  makanan untuk  pembuatan  keju  atau  pelunakan  daging.  Enzim  ini diketahui  menunjukkan  aktivitas  antiproliferatif  terhadap jamur  dan  sel  ganas  manusia  (Gagaoua  et  al.,  2015; Rajkumari  &  Sanatombi,  2018).  Efek  proteolitik  dari  enzim papain, ficin, dan zingibain tersebut dapat menjadi referensi penelitian  selanjutnya.  Dari  penelitian  tersebut  dapat dilakukan  perbandingan  kemampuan  proteolitik  dengan enzim  bromelain  dan  enzim  actinidin  sebagai  tata  laksana katarak kongenital dan senilis. Metode in silico menghasilkan prediksi  model  interaksi  dan binding  energy berdasarkan data eksperimental yang telah tersedia. Oleh sebab itu, hasil dari  uji in  silico merupakan  prediksi  secara  statistik  dan memerlukan validasi dengan metode penelitian lain seperti in  vivo  dan  in  vitro  untuk  membuktikan  keakuratan prediksinya. Selain itu pada metode in silico , sisi aktif enzim digambarkan  sebagai  senyawa  rigid  yang  tidak  dapat mengubah  bentuk  sisi  aktif  enzim  saat  berikatan  dengan ligannya, hal tersebut berbeda dengan kondisi sebenarnya. Metode in  silico juga tidak  memperhitungkan  faktor  suhu, PH,  susbtrat,  dan  inhibitor  yang  mana  hal  tersebut mempengaruhi  fungsi  kerja  enzim.  Proses  visualisasi  dari hasil molecular  docking ClusPro  antara  ligan  dan  reseptor tidak dapat memetakan pada tingkat jenis ikatan dan residu protein yang berinteraksi. Jenis ikatan yang dimaksud yaitu ikatan hidrogen, interaksi elektrostatis, gaya hidrofobik, dan Van der Waals. Proses visualsisasi dari hasil docking ClusPro memerlukan  perangkat  lunak  untuk  dapat  memetakan secara  detail,  namun  dibutuhkan  biaya  yang  lebih  untuk melakukan hal tersebut.

## Kesimpulan
Perbandingan  nilai binding energy antara  enzim  bromelain dan  enzim  actinidin  menunjukkan  bahwa  enzim  bromelain memiliki  kemampuan  lebih  baik  dalam  membentuk  ikatan terhadap  terhadap  protein  mutasi  P23T  γD - crystallin yang berperan  dalam  potofisiologi  terjadinya  katarak  kongenital sedangkan enzim actinidin memiliki kemampuan lebih baik dalam membentuk ikatan terhadap protein amyloid β yang berperan dalam patofisiologi katarak senilis. Oleh sebab itu, enzim  bromelain  potensial  untuk  dikembangkan  sebagai tata laksana katarak kongenital dan enzim actinidin potensial untuk  dikembangkan  sebagai  tata  laksana  katarak  senilis. Perlu dilakukan penelitian laboratorium untuk memastikan kemampuan proteolitik enzim bromelain dalam berinteraksi dengan  protein amyloid β dan  enzim  actinidin  dalam berinteraksi dengan protein mutasi P23T γD - crystallin . Selain itu,  dapat  juga  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan menambahkan enzim proteolitik yang berasal dari tanaman lain.

## Daftar Pustaka
Agarwal, M., & Verma, A. (2019). In Silico Molecular Docking of  Inhibitors  Against  Human  Cytomegalovirus  IE1 : Protein  responsible  for  Brain  Tumour. Journal  of Materials  Science  &  Surface  Engineering , 6 (6),  884 – 887.
Alperstein, A. M., Ostrander, J. S., Zhang, T. O., & Zanni, M. T. (2019). Amyloid found in human cataracts with two- dimensional infrared spectroscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America , 116 (14), 6602 – 6607.
https://doi.org/10.1073/pnas.1821534116
Astari,  P.  (2018).  Katarak:  Klasifikasi,  Tatalaksana,  dan Komplikasi Operasi. CDK-269 , 45 (10), 748 – 753.
Benkert,  P.,  Biasini,  M.,  &  Schwede,  T.  (2011).  Toward  the estimation of the absolute quality of individual protein structure  models. Bioinformatics , 27 (3),  343 – 350. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btq662
Cahyana, N., Widjajanto, E., Kalsum, U., & Prayitnaningsi, S. (2020). Digital Repository Universitas Jember Effect of Isolate  Catechin  GMB4  in  Expression  of  GRP8  and Tunel Digital Repository Jember of Global Universitas Pharma  Technology. Journal  of  Global  Pharma Technology , 12 (02), 335 – 343.
Das,  S.,  &  Bhattacharyya,  D.  (2017).  Bromelain  from pineapple:  Its  stability  and  therapeutic  potentials. Tropical  Fruits:  From  Cultivation  to  Consumption  and Health Benefits, Pineapple , October 2017 , 43 – 100.
Gagaoua,  M.,  Hoggas,  N.,  &  Hafid,  K.  (2015).  Three  phase partitioning of zingibain, a milk-clotting enzyme from Zingiber  officinale  Roscoe  rhizomes. International Journal of Biological Macromolecules , 73 (1), 245 – 252. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2014.10.069
Ha, M., Bekhit, A. E. D. A., Carne, A., & Hopkins, D. L. (2012). Characterisation  of  commercial  papain,  bromelain, actinidin and zingibain protease preparations and their activities  toward  meat  proteins. Food  Chemistry ,
134 (1), 95 – 105.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.02.071
Homaei, A., & Etemadipour, R. (2015). Improving the activity and  stability  of  actinidin  by  immobilization  on  gold nanorods. International Journal of Biological Macromolecules , 72 , 1176 – 1181.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2014.10.029
Ilyas,  H.  S.  &  Yulianti,  S.  R.  2017.  Ilmu  Penyakit  Mata.  5 penyunt. Jakarta: Badan Penerbit FK UI.
Ismandari,  F.  (2018).  Infodatin  Situasi  Gangguan Penglihatan.  In Kementrian  Kesehatan  RI  Pusat  Data dan
Informasi .
https://pusdatin.kemkes.go.id/download.php?file=do wnload/pusdatin/infodatin/infodatin-Gangguan- penglihatan-2018.pdf
Ji,  F.,  Koharudin,  L.  M.  I.,  Jung,  J.,  &  Gronenborn,  A.  M.
(2013). Crystal structure of the cataract-causing P23T
γD -crystallin mutant. Proteins: Structure, Function and
Bioinformatics , 81 (9), 1493 – 1498.
https://doi.org/10.1002/prot.24321
Kaur, L., Rutherfurd, S. M., Moughan, P. J., Drummond, L., & Boland, M. J. (2010). Actinidin enhances gastric protein digestion as assessed using an in vitro gastric digestion model. Journal  of  Agricultural  and  Food  Chemistry , 58 (8), 5068 – 5073. https://doi.org/10.1021/jf903332a Kozakov, D., Hall, D. R., Xia, B.,  Porter,  K. A., Padhorny, D.,
Yueh,  C.,  Beglov,  D.,  &  Vajda,  S.  (2017).  The  ClusPro web  server  for  protein-protein  docking. Nature Protocols , 12 (2), 255 – 278.
https://doi.org/10.1038/nprot.2016.169
Laily,  A.  N.,  &  Khoiri,  A.  N.  (2016).  IDENTIFIKASI  SENYAWA ANTIDIABETES  SECARA  in  Silico  PADA  Carica pubescens  Lenne  &  K.  Koch. El – Hayah , 5 (4),  135. https://doi.org/10.18860/elha.v5i4.3469
Martins, B. C., Rescolino, R., Freitas Coelho, D. de, Espindola, F.  S.,  Zanchetta,  B.,  Tambourgi,  E.  B.,  &  Silveira,  E.
(2014).  Studies  of  stability  and  characterization  this enzyme  bromelain  in  pineapple  (Ananas  comosus).
BMC Proceedings , 8 (S4), 6561. https://doi.org/10.1186/1753-6561-8-s4-p137
Mótyán,  J.,  Tóth,  F.,  &  Tőzsér,  J.  (2013).  Research Applications  of  Proteolytic  Enzymes  in  Molecular Biology. Biomolecules , 3 (4), 923 – 942. https://doi.org/10.3390/biom3040923
Moreau,  K.  L.  &  King,  J.  A.  2012.  Protein  misfolding  and aggregation  in  cataract  disease  and  prospects  for prevention. Trends in Molecular Medicine. 18(5) : 273- 282.
Padmanabhan,  P.,  &  Paliyath,  G.  (2015).  Kiwifruit. Encyclopedia  of  Food  and  Health ,  490 – 494. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-384947-2.00409- 8. Ji, F., Koharudin, L. M. I., Jung, J. & Gronenborn, A. M. 2013.
Crystal  structure  of  the  cataract-causing  P23T  cD- crystallin mutant. Protein. 81 : 1493-1498.
Pande, A. Ghosh, K. S. Priya, R. B. Jayanti, P. 2010. Increase in  Surface  Hydrophobicity  of the  Cataract-Associated P23T Mutant of Human γD -Crystallin Is Responsible for Its  Dramatically  Lower,  Retrograde  Solubility. Biochemistry. 49(29) : 6122-6129 Santana, A. & Waiswol, M. 2011. The genetic and molecular
basis  of  congenital  cataract.  Arquivos  Brasileiros  de Oftalmologia, 74(2) : 136-142
Rambarana, R. N. & Serpel, L. C. 2008. Amyloid fibrils. Prion, 2(3). : 112-117.
Rajkumari,  S.,  &  Sanatombi,  K.  (2018). Biotechnological Approaches for Medicinal and Aromatic Plants .
Setyawati,  I.,  &  Yulihastuti,  D.  A.  (2011).  Penampilan Reproduksi dan Perkembangan Skeleton Fetus Mencit Setelah Pemberian Ekstrak  Buah Nanas Muda. Jurnal Veteriner , 12 (3), 192 – 199.
Slingsby, C., & Wistow, G. J. (2014). Functions of crystallins in and out of lens: Roles in elongated and post-mitotic cells. Progress  in  Biophysics  and  Molecular  Biology , 115 (1), 52 – 67. https://doi.org/10.1016/j.pbiomolbio.2014.02.006
Sreelakshmi, V., & Abraham, A. (2016). Age Related or Senile Cataract:  Pathology,  Mechanism  and  Management. Austin Journal of Clinical Ophthalmology , 3 (2), 1067. Studer, G., Tauriello, G., Bienert, S., Biasini, M., Johner, N., & Schwede, T. (2021). ProMod3  - A versatile homology modelling toolbox. PLoS Computational Biology , 17 (1),
1 – 18.
https://doi.org/10.1371/JOURNAL.PCBI.1008667 Takeuchi, M., Shieh, P. C., & Horng, C. T. (2020). Treatment of symptomatic vitreous opacities with pharmacologic vitreolysis  using  a  mixure  of  bromelain,  papain  and ficin  supplement. Applied  Sciences  (Switzerland) , 10 (17). https://doi.org/10.3390/app10175901 Wadood, A., Ahmed, N., Shah, L., Ahmad, A., Hassan, H., & Shams,  S.  (2013).  In-silico  drug  design:  An  approach which revolutionarised the drug discovery process. OA Drug Design and Delivery , 1 (1), 1 – 4. https://doi.org/10.13172/2054-4057-1-1-1119
Waterhouse, A., Bertoni, M., Bienert, S., Studer, G., Tauriello, G.,  Gumienny,  R.,  Heer,  F.  T.,  De  Beer,  T.  A.  P., Rempfer,  C.,  Bordoli,  L.,  Lepore,  R.,  &  Schwede,  T. (2018). SWISS-MODEL: Homology modelling of protein structures  and  complexes. Nucleic  Acids  Research ,
46 (W1), W296 – W303. https://doi.org/10.1093/nar/gky427
Zamzami, L., & Citrus, I. (2020). Kiwi ( Actinidia deliciosa ). In INDO-HITS  (Indonesian  Horticultural  Innovation, Technology  and  Science) :  Sumber  Daya  Genetik Tanaman Buah Subtropika Potensial (Issue March, pp.
3 – 16).