TOKSISITAS AKUT DAN LETHAL DOSE (LD 50 ) EKSTRAK BUAH WALAY ( Meistera chinensis) ASAL SULAWESI TENGGARA TERHADAP MENCIT ( Mus musculus )
Musdalipah * , Agung Wibawa Mahatva Yodha, Karmilah, Selfyana Austin Tee, Reymon, Nur Saadah Daud, Muh. Azdar Setiawan, Esti Badia, Agustini
Program Studi D-3 Farmasi, Politeknik Bina Husada Kendari *Email: musdalipahapt@gmail.com
Received: 18/08/2022 , Revised: 30/08/2022 , Accepted: 30/08/2022, Published: 31/08/2022

## ABSTRAK
Buah  walay  ( Meistera  chinensis )  mengandung  senyawa  fenolat,  flavonoid,  steroid,  terpenoid, alkaloid,  dan  saponin.  Beberapa  metabolit  sekunder,  termasuk  triterpenoid  dan  flavonoid, memiliki  potensi  sebagai  antioksidan,  antibakteri  dan  toksisitas.  Berdasarkan  penelitian sebelumnya  dengan  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test ekstrak  buah Meistera chinensis memberikan  efek  sangat  toksik  dengan  IC 50 dari  5,02  ±  1,11  mg/mL.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui efek toksik yang ditimbulkan dari ekstrak buah  walay ditinjau dari penentuan  nilai  LD 50 .  Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental.  Penentuan  kategori toksisitas  berdasarkan Generally  Recognized  As  Safe /GRAS  dan  perhitungan  LD 50 menggunakan Reed-Muench . Penelitian  menggunakan  ekor  mencit  yang  dibagi  ke  dalam  5 kelompok.  Kelompok  kontrol  diberi  Na-CMC  0,5  %  dan  kelompok  perlakuan  diberi  ekstrak buah  dengan  dosis  50  mg/KgBB;  500  mg/KgBB;  5000  mg/KgBB  dan  15.000  mg/KgB  Rute pemberian  yang  digunakan  adalah  secara  oral.  Parameter  yang  diamati  dalam  penelitian  ini adalah gejala toksik yang timbul dan nilai LD 50 yang diperoleh berdasarkan perhitungan jumlah hewan  uji  yang  mati.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  buah  walay    memberikan gejala  toksik  berupa  penurunan  aktivitas  gerak,  laju  nafas  cepat  serta  tremor  dan  nilai  LD 50 adalah  865,765  mg/KgBB  (Toksisitas  ringan).  Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa ekstrak buah walay ( Meistera chinensis) memiliki efek toksik ringan.
Kata kunci : lethal dose , buah walay ( Meistera chinensis), Sulawesi Tenggara, toksisitas

## ABSTRACT
Walay (Meistera chinensis) fruit contains phenolic compounds, flavonoids, steroids, terpenoids, alkaloids, and saponins.  Several secondary metabolites, including triterpenoids and flavonoids, have potential as antioxidants, antibacterial, and toxicity. Based on previous research using the BSLT  method,  Meistera  chinensis  fruit  extract  gave  a  very  toxic  effect  with  an  IC 50 of  5.02  ± 1.11  mg/mL.    This  study  aims  to  determine  the  safety  limits  and  toxic  effects  of  walay  fruit extract in terms of determining the LD 50 value. This type of research is experimental research. Determination  of  toxicity  category  based  on  Generally  Recognized  As  Safe/GRAS  and  LD 50 calculation  using  Reed-Muench.  The  study  used  the  tails  of  mice  which  were  divided  into  5 groups.  The control group was given 0.5 % Na-CMC and the treatment groups were given fruit extract at  a dose of 50  mg/KgBB; 500 mg/KgBW; 5000  mg/KgBW and  15.000 mg/KgBW. The
Musdalipah et al./Pharmacoscript, Volume 5, No, 2, Agustus 2022, 186-200
Safitri.,et al./Pharmacoscript, Volume 1, No. 2, Februari 2019, 1-12
Musdalipah et al.;ToksisitasAkut dan Lethal Dose…..Pharmacoscript Volume 5 No. 2, Agustus 2022
route  was  oral  administration.    Parameters  observed  were  toxic  symptoms  and  LD 50 values obtained based on the calculation of the number of dead test animals. The results showed that the  fruit  extract  of  walay  (Meistera  chinensis)  gave  toxic  symptoms  in  the  form  of  decreased movement  activity,  rapid  breathing  rate  and,  tremor.  the  LD 50 value  was  865,765  mg/KgBW (moderate toxicity). Based on the results of the study, it can be concluded that  walay (Meistera chinensis) fruit extract has a moderate toxicity.
Keywords : lethal dose, Walay (Meistera chinensis) fruit, toxicity, Southeast Sulawesi

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara yang  memiliki  keanekaragaman  tumbuh- tumbuhan yang berpotensi sebagai obat, dan di manfaatkan oleh masyarakat sebagai obat tradisional  secara  empirik.  Pemakaian  obat tradisional telah berlangsung selama berabad-abad dan terjadi peningkatan penggunaan  tanaman  obat  sebagai  sumber potensial  terhadap  berbagai  penyakit  kronis termasuk kanker, diabetes, gangguan kardiovaskular dan neurodegeneratif (Hashem et al., 2020).
Penggunaan  obat  tradisional  banyak dimanfaatkan bagi masyarakat tetapi efektivitas dan keamanannya belum sepenuhnya didukung berdasarkan penelitian  (Gupta  et  al.,  2018).  Oleh  karena itu perlu diteliti dan dikembangkan pemanfaatannya  (Jabbar  et  al.,  2020). Keamanan  efek  toksik  potensial  dalam penelitian  obat  sangat  penting  untuk memastikan  penggunaannya.  Rendahnya toksisitas  dan  efektivitas  klinis  senyawa alam  merupakan  salah  satu  tujuan  peneliti
untuk memperoleh aktivitas biologi tanaman (Al-Enazi, 2018). Pengujian  toksisitas merupakan  langkah  awal  dalam  parameter keamanan  obat  sebelum  menjadi  produk obat  yang  digunakan  manusia  (Musdalipah, et al., 2021).
Uji  toksisitas  adalah  suatu  uji  untuk mendeteksi  efek  toksik  suatu  zat  pada sistem biologi untuk memperoleh data dosis respon  yang  khas  dari  sediaan  uji  sehingga data  yang  diperoleh  memberikan  informasi mengenai  derajat  bahaya  sediaan  untuk ditentukan  dosis  penggunaannya  demi keamanan  manusia  (BPOM  RI,  2014).  Uji toksisitas  akut  merupakan  serangakain pengujian praklinik untuk mendekteksi efek toksik suatu senyawa yang memberikan efek setelah  pemberian  sediaan  uji  dalam  dosis tunggal  atau  dosis  berulang  selama  24  jam (Riaz  et  al.,  2018).  Penentuan  kisaran  dosis letal  atau  toksik  dinyatakan  sebagai  (LD 50 ) (Bourhia et al., 2019).
Zingiberaceae merupakan  salah  satu spesies tumbuhan terbesar di dunia, termasuk di Indonesia yang telah dilaporkan
memiliki aktivitas biologis berpotensi tinggi yang  dapat  mengobati  berbagai  penyakit (Sharifi-Rad et al., 2017). Beberapa generasi baru  ditemukan  seperti Cinnamomum ,
Meistera ,  dan Wurfbainia dalam  keluarga Zingiberaceae memiliki  potensi  khasiat sebagai  obat  (de  Boer  et  al.,  2018).  Oleh karena  itu,  perlu  dilakukan  penentuan potensi tanaman obat dengan mengintensifkan  kajian  tentang  tanaman obat.
Penelitian  telah  dilakukan  dari  spesies Zingiberaceae seperti Etlingera  elatior (obor  jahe)  diketahui  sebagai  antioksidan, anti-kanker, anti-bakteri, anti-jamur, sitotoksik, aktivitas penghambatan tirosinase  dan  aktivitas  imunomodulator (Juwita  et  al.,  2018).    Studi  literatur menunjukkan  bahwa Etlingera elatior memiliki  aktivitas  farmakologis  seperti  anti tumor,  anti  hiperglikemik,  anti  inflamasi, dan  anti  hiperurisemia  (Chan  et  al.,  2011; Imran et al., 2022).
Meistera  chinensis merupakan  spesies dari  kelompok Zingiberacea yang  memiliki kesamaan  bentuk  tanaman  dengan  genus Etlingera.  Di  Sulawesi  Tenggara,  populasi Meistera  chinensis tersebar  dan  ditemukan di Kabupaten Konawe. Secara empiris buah walay ( Meistera  chinensis) digunakan sebagai penambah rasa pada makanan, nyeri
dan  meningkatkan  kekebalan  tubuh.  Fraksi buah Meistera  chinensis menunjukkan aktivitas antioksidan dan anti-kanker (Musdalipah, et al., 2021).
Hasil  skrining  ﬁtokimia  menunjukkan ekstrak  etanol  buah Meistera  chinensis mengandung  senyawa  metabolit  sekunder seperti fenolat, ﬂavonoid, steroid, terpenoid, alkaloid,  dan  saponin.  Beberapa  metabolit sekunder, termasuk triterpenoid dan flavonoid diketahui memiliki potensi sebagai  antiioksidan,  anti  bakteri  dan toksisitas.  Pengujian  toksisitas  pada  larva udang  dengan  metode  BSLT  ditemukan bahwa  ekstrak  buah Meistera  chinensis sangat  toksik  dengan  IC 50 dari  5,02  ±  1,11 mg/mL dan kontrol 2,26 ± 0,60 mg/ml (Tee et  al.,  2021).    Suatu  senyawa  dari  suatu tanaman/obat  tradisional  dikatakan  aman apabila telah melalui uji toksisitas menggunakan hewan coba dan telah terbukti aman  secara  klinis  untuk  dikonsumsi, sehingga  sangatlah  penting  mengetahui potensi  ketoksikannya  melalui  LD 50 dan spektrum  efek  toksiknya  (Sungthong  & Srichaikul, 2018).
Pengujian toksisitas menggunakan hewan  uji  sebagai  model  digunakan  untuk melihat  adanya  reaksi  biokimia,  fisiologik dan  patologik  pada  manusia  terhadap  suatu sediaan  uji.  Hasil  uji  toksisitas  tidak  dapat
digunakan secara mutlak untuk membuktikan keamanan suatu bahan/ sediaan  pada  manusia,  namun  dapat memberikan  petunjuk  adanya  toksisitas relatif  dan  membantu  identifikasi  efek toksik  bila  terjadi  pemaparan  pada  manusia (BPOM RI, 2014).
Berdasarkan  uraian  tersebut,  perlu untuk melanjutkan pengujian toksisitas pada hewan  coba  sebagai  data  ilmiah  untuk keamanan  buah  walay  ( Meistera  chinensis) bila  dikonsumsi  oleh  manusia.  Penelitian terkait  uji  toksisitas  akut  ekstrak  buah Meistera  chinensis secara in-vivo belum pernah  dilakukan.  Oleh  karena  itu  peneliti beriniasiatif  melakukan  penelitian  dengan judul  “Uji  Toksisitas  Ekstrak  Buah  Walay ( Meistera  chinensis ) Dengan  Penentuan LD 50 Pada Mencit ( Mus musculus )”.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah alumunium foil, batang pengaduk, blender (Philips), corong, erlenmeyer (Pyrex),  gelas  ukur  (Pyrex),  gelas  kimia, gunting  bedah, hot  plate ,  kandang  mencit, kertas  saring,  krus  porselen,  masker,  oven, penangas  air,  pipet  tetes, rotary  evaporator (Rotavapor,  Buchi,  Switzerland),  sarung tangan, stirrer, spoit injeksi 1 cc, spoit oral 1
cc  (sonde),  toples,  timbangan  analitik, timbagan digital dan waterbath.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah ekstrak  buah  walay,  metanol,  akuades,  Na CMC  0,5%,  pakan  mencit  (jagung  kering dan pelet).

## Jalannya Penelitian
1. Ekstraksi
Pembuatan ekstrak buah walay ( Meistera  chinensis )  dilakukan  dengan metode  Maserasi.  Ditimbang  sekitar  3.000 gram  serbuk  buah Meistera  chinensis , dilarutkan  serbuk  buah  dengan  metanol dalam  wadah  kaca  tertutup  selama  3  x  24 jam  dan  pelarut  yang  digunakan  sebanyak 22.500  mL  (1:7,5).  Dilakukan  proses maserasi  selama  tiga  hari  dan  diremaserasi sebanyak  2  kali,  kemudian  hasil  filtrasi dikumpulkan  dan  dipekatkan  menggunakan rotary evaporator pada suhu 50 ℃ , sehingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 150 gram (Reymon et al., 2021)
2. Pembuatan Sediaan Uji
Pembuatan  larutan  koloidal  Na-CMC 0,5 % dilakukan dengan cara ditimbang Na- CMC  sebanyak  0,5  gram,  dimasukkan  ke dalam  lumpang  yang  telah  berisi  air  panas sebanyak  1  mL,  dibiarkan  selama  15  menit sehingga  mengembang,  digerus  hingga diperoleh massa yang transparan, diencerkan  dengan  aquades,  dimasukkan
kedalam  wadah,  dan  ditambahkan  akuades hingga 100 mL (Jumain et al., 2018).

## 3. Penyiapan Hewan Uji
Hewan  yang  digunakan  adalah  mencit putih  jantan  umur  2-3  bulan  dengan  berat antara  20-30  gram  sebanyak  25  ekor. Sebelumnya, mencit diaklimatisasi selama 7 hari  dengan  diberi  makan  dan  minum  yang cukup. Mencit yang sehat tidak
menunjukkan perubahan berat badan berarti (deviasi maksimal >10 %) serta menunjukkan perlakuan yang normal secara visual. Hewan uji yang sehat bila menunjukkan  prilaku  normal  dengan  ciri- ciri  diantaranya  lincah,  berlari,  memanjat kandang, serta menggaruk telinga dan gigi.

## 4. Aklimatisasi
Aklimatisasi adalah pemeliharaan hewan coba dengan tujuan adaptasi terhadap lingkungan  baru.  Aklimatisasi  hewan  coba mencit  ( Mus  musculus )  sebanyak  25  ekor dipelihara  di  rumah  hewan  selama  7  hari. Pemeliharaan  mencit  dilakukan  dalam rumah  hewan  yang  dilengkapi  rak-rak kandang.  Kandang  mencit  berupa  bak plastik  yang  ditutupi  kawat  kasa  dan  diberi sekam  sebagai  alas,  dilengkapi  botol minum. Pakan diberikan pada mencit antara pukul  09.00-15.00  WITA  dan  minuman berupa  air  yang  diberikan  secara  oral (Mustapa et al., 2018).

## 5. Perlakuan Hewan Uji
Hewan  uji  dikelompokkan  menjadi  5 kelompok. Pemilihan jumlah dosis didasarkan  pada  kriteria  penggolongan sediaan  uji  toksisitas  dan  diperoleh  dosis sebesar 500 mg/KgBB, 5000 mg/KgBB dan 15000 mg/KgBB yang merupakan perwakilan dari tiap kategori toksisitas yaitu toksik,  toksik  sedang,  toksik  ringan  dan praktis  tidak  toksik  (BPOM  RI,  2014) Kelompok  I  sebagai  kontrol  negatif  mencit diberikan  Na-CMC  0.5%.  Kelompok  II diberikan  ekstrak  dosis  50  mg/kgBB, kelompok III diberikan dosis 500 mg/kgBB, kelompok IV diberikan dosis 5.000 mg/kgBB,  dan  kelompok  V  diberikan  dosis 15.000 mg/kgBB.
6. Penentuan Nilai LD 50 dan

## Pengamatan Gejala Toksik
Penentuan  nilai  LD 50 dilakukan  dengan membagi  mencit  menjadi  5  kelompok perlakuan. Pengujian toksisitas akut menggunakan  4  tingkat  dosis  pada  4 kelompok  perlakuan  dan  1  kelompok kontrol  negatif.  Sebelumnya,  hari  ke-0 dilakukan  penimbangan  mencit  dan  diamati aktivitasnya.  Sebelum  dilakukan  perlakuan, mencit dipuasakan terlebih dahulu selama 4 jam dan masih tetap diberikan minum tanpa batas  (ad libitum ).  Pada  hari  ke-1  mencit diberikan  larutan  uji  ekstrak  buah  walay
Musdalipah et al.;ToksisitasAkut dan Lethal Dose…..Pharmacoscript Volume 5 No. 2, Agustus 2022
( Meistera
chinensis)
secara oral menggunakan  sonde  dan  hanya  diberikan satu  kali  pada  awal  penelitian  yaitu  pada hari pertama (BPOM RI, 2014). Pengamatan dilakukan  tiap  hari  selama  sekurang- kurangnya 14 hari terhadap sistem kardiovaskuler,  pernafasan,  somatomotor, kulit  dan  bulu,  mukosa,  mata  (BPOM  RI, 2014).

## Analisa Data
Data  yang  dikumpulkan  berupa  data primer berdasarkan hasil pengamatan hewan uji, baik kelompok kontrol maupun kelompok  perlakuan.  Data  yang  diperoleh berupa  data  kuantitatif  dan  kualitatif.  Data kuantitatif yang akan diperoleh yaitu jumlah hewan  coba  yang  mati.  Data  LD 50 diambil dari  jumlah  mencit  yang  mati  dan  yang masih hidup pada setiap kelompok.
Selanjutnya
dihitung nilai LD 50
menggunakan  metode  Aritmatik Reed-
Muench. Data  kualitatif  yang  diperoleh berupa  pengamatan  tingkah  laku  hewan  uji meliputi  aktivitas  gerak  (tremor,  keaktifan bergerak,  dan  diam),  perubahan  perilaku (berputar berlebihan dan penjilatan) dan laju pernapasan (bradipnea dan trakipnea) (BPOM RI, 2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk melanjutkan  penelitian  sebelumnya  dimana buah Meistera  chinensis (gambar  1)  telah diuji  toksisitas  dengan  metode  BSLT dengan  nilai  LC 50 sangat  toksik  terhadap larva  udang.  Untuk  mengetahui  pengujian toksisitas  akut  maka  dilanjutkan  pengujian LD 50 dengan  menggunakan  hewan  uji mencit  jantan  sebanyak  25  ekor.  Penelitian dilakukan  beberapa  tahap  yaitu  preparasi sampel  buah Meistera  chinensis ,  ekstraksi. buah Meistera  chinensis dan  pengujian toksisitas akut.
\
Gambar 1. Buah Meistera chinensis
Pada penelitian ini menggunakan hewan  uji  mencit  dewasa  dan  sehat  yaitu mencit  dewasa  umur  12-14  minggu  dengan bobot  rata-rata  20-30  g,  dan  mencit  sehat secara  fisik  ditandai  dengan  bulu  berwarna putih  seperti  beludru  dan  ekor  berwarna
merah  muda  (Erwin  et  al.,  2012).  Jenis mencit yang digunakan adalah mencit jantan Galur  Balb/C.  Pemilihan  jenis  hewan  uji berdasarkan  alasan  bahwa  mencit  jantan Galur  Balb/C  memiliki  sifat  fisiologi  yang lebih kuat, sehingga sering digunakan dalam pengujian histopatologi, termasuk uji antikanker  dan  uji  tingkat  toksisitas  suatu zat.  Selain  itu  pemilihan  jenis  kelamin jantan  karena  mencit  jantan  diketahui  tidak terlalu  dipengaruhi  oleh  hormon  sehingga lebih  stabil  dibandingkan  dengan  mencit betina (BPOM RI, 2014)
Pemberian  sediaan  uji  dilakukan  sesuai dengan  bobot  mencit  tiap  kelompok. Penyesuaian  bobot  badan  mencit  dilakukan dengan  cara mengambil  bobot  rata-rata dari mencit  pada  tiap-tiap  kelompok.  Sebelum dilakukan  pemberian  ekstrak  buah Meistera chinensis ,  hewan  uji  dipuasakan  terlebih dahulu  selama  4  jam,  tetapi  tetap  diberikan minum  tanpa  batas  (ad libitum )  tujuannya agar  kondisi  hewan  uji  sama  dan  dapat mengurangi pengaruh makanan yang dikonsumsi  terhadap  absorpsi  sampel  yang diberikan.
Pada pengujian, mencit diberikan bahan uji  secara  oral  menggunakan  Sonde.    Rute oral  dipilih  karena  disesuaikan  dengan  rute
yang  biasa  digunakan  pada  manusia.  Saat sampel  diujikan  pada  mencit,  ekstrak  buah Meistera  chinensis disuspensikan  terlebih dahulu dalam Na-CMC 0,5% karena esktrak buah tidak larut sempurna dalam air (Eriadi et  al.,  2016).  Menurut Handbook  of Excipients bahwa  Na-CMC  merupakan senyawa  yang  tidak  toksik  dan  tidak menimbulkan iritan, sehingga dapat dikatakan bahwa zat pembawa tersebut tidak berpengaruh  pada  pengujian  toksisitas  ini. Tahapan penentuan hasil penelitian berdasarkan  gejala  toksik  yang  ditimbulkan dan perilaku hewan uji dan seberapa banyak hewan  uji  yang  hidup  dan  mati  setelah pemberian sebagai dasar penentuan LD 50.
1. Pengamatan  dengan  melihat  gejala toksik  berdasarkan  prilaku  yang ditimbulkan pada hewan uji
Pengamatan  tingkah  laku  hewan  uji dilakukan selama 4 jam pertama dan 24 jam setelah  pemberian  ekstrak.  Pengamatan tingkah  laku  hewan  uji  meliputi  aktivitas salivasi,  urinaria,  diare,  kejang-kejang, diuretik,  laju  napas  cepat,  penurunan aktivitas  gerak,  dan  kehilangan  daya cengkram dan kelumpuhan. Hasil pengamatan disajikan pada tabel 1.
Tabel 1. Gejala/efek toksik yang timbul pada hewan coba mencit ( Mus musculus ) No  Dosis (mg/kgBB) Gejala/efek toksik yang muncul I Na-CMC Aktivitas normal II 50 aktivitas gerak menurun, perubahan perilaku penjilatan III 500 Penurunan aktivitas gerak, perubahan perilaku penjilatan, pernafasan cepat (takipnea) IV 5000 Penurunan aktivitas gerak, perubahan perilaku penjilatan dan pernafasan cepat (takipnea) V 15.000 Tremor, penurunan aktivitas gerak, perubahan perilaku penjilatan dan pernafasan cepat (takipnea)
Berdasarkan  tabel  1  menunjukan  hasil pengamatan  gejala  toksik  memiliki  respon yang  berbeda-beda  pada  tiap  kelompok, tergantung  jumlah  dan  dosis  ekstrak  buah walay  yang  diberikan.  Gejala  toksik  yang terjadi selama pengamatan sangat bervariasi. Beberapa  hewan  mulai  menunjukkan  gejala toksik  setelah  pemberian  ekstrak , namun ada  beberapa  hewan  yang  menunjukkan pemulihan  kondisi  secara  perlahan  setelah pemberian ekstrak tersebut. Hal ini disebabkan  karena  setiap  spesies  memiliki perbedaan  dalam  kemampuan  bioaktivasi dan  toksikasi  suatu  zat  (Ihwan  et  al.,  2018; Mushtaq et al., 2014).
Pemberian ekstrak buah Meistera chinensis secara oral menyebabkan zat aktif yang  terdapat  dalam  diabsorbsi  dalam saluran  pencernaan.  Zat  aktif  kemudian mengalami proses distribusi dan metabolisme.  Produk  metabolisme  yang
bersifat  toksik  bekerja  sebagai  inhibitor enzim untuk tahap metabolisme selanjutnya, reaksi antar zat aktif dengan reseptor dalam organ  efektor  menyebabkan  timbulnya gejala  keracunan.  Setiap  sampel  yang digunakan  akan  memberikan  respon  yang berbeda  pada  dosis  tertentu.  Perbedaan respon  tersebut  diakibatkan  oleh  perbedaan tingkat  kepekaan  setiap  sampel  (Jumain  et al., 2018).
Gejala  yang  timbul  berupa  laju  nafas cepat  lemas,  penurunan  aktivitas  gerak  dan tremor  gejala  ini  terjadi  karena  adanya gangguan system saraf yang mengendalikan otot-otot  sehingga  mencit  lemas,  sehingga terjadi  penurunan  aktivitas  gerak  hingga kematian  akibat  pemberian  ekstrak  buah Meistera chinensis yang memiliki kandungan  senyawa  flavonoid  yang  dapat mengganggu  system  saraf  pusat.  Hasil pengamatan  ini  menunjukan  dosis  50
mg/kgBB-15.000 mg/kgBB merupakan dosis  toksik  dan  yang  paling  berbahaya adalah dosis 15.000 mg/kgBB, karena dapat mematikan  hewan  uji  hingga  80  %.  Hal  ini menunjukan  bahwa  pemberian  dosis  yang semakin  tinggi  akan  mempengaruhi  gejala ketoksikan  sebagaimana  terlihat  dengan semakin  meningkatnya  dosis  menyebabkan peningkatan jumlah hewan uji yang mengalami penurunan aktivitas gerak hingga menyebabkan kematian (Haleagrahara  et  al.,  2010;  Ihwan  et  al., 2018).
2. Penentuan Nilai LD 50 Penentuan nilai LD 50 merupakan bagian dari  instrumen  penelitian  uji  toksisitas  akut dan  uji  keamanan  ekstrak  hasil  pengamatan terhadap jumlah kematian mencit, selama 24 jam. Penentuan LD 50 pada uji toksisitas akut sampai  toksisitas  sub  kronik  dapat  diamati dalam  24  jam  setelah  pemberian  zat  kimia dalam  dosis  1  kali  atau  beberapa  kali pemberian.  Jika  tidak  ada  efek  yang  berarti yang  ditimbulkan  maka  dibutuhkan  durasi pengamatan  sampai  hari  ke-7  atau  hingga hari ke-14, dengan tujuan untuk mengetahui efek toksik yang tertunda pada mencit. Hasil pengamatan kematian mencit disajikan pada tabel 2.
Berdasarkan tabel 2. menunjukkan hasil pengamatan  terhadap  jumlah  kematian
mencit  setelah  pemberian  ekstrak  buah Meistera  chinensis selama  7  hari.  Pada kelompok  perlakuan  dosis  50  mg/kgBB sampai 5000 mg/kgBB menunjukkan jumlah  kematian  mencit  sampai  hari  ke-7 sebanyak  masing  masing  1  ekor.  Tiap kelompok  diperoleh  persen  kematian  yaitu 20%  yang berarti pada konsentrasi  ini tidak dapat membunuh 50% dari hewan coba. Hal ini disebabkan konsentrasi kandungan kimia dari ekstrak buah walay ( Meistera chinensis) tidak  sampai  dalam  kadar  yang menyebabkan  toksisitas  akut.  Penyebab kematian  di  sebabkan  beberapa  faktor, pertama  dipengaruhi  oleh  fisiologis  mencit yang  memiliki  berat  badan  yang  lebih  kecil yang  bisa  menimbulkan  kematian.  Kedua, disebabkan oleh stress yang dapat menurunkan  sistem  imun,  dimana  stres mempengaruhi  sistem  imun  tubuh  melalui stimulasi sekresi kortisol dan adrenalin serta berpengaruh terhadap pelepasan nonadrenalin  dan  postganglion  simpatik terminal saraf dipermbuluh darah dan organ lymphoid.  Berbeda  halnya  pada  kelompok lima  dengan  dosis  15.000  mg/kgBB, kematian  terjadi  pada  hari  ke-1  setelah pemberian  ekstrak  buah Meistera  chinensis menunjukkan  jumlah  kematian  tertinggi sebanyak  4  ekor  dari  5  ekor  hewan  uji dengan  persen  kematian  yaitu  80  %  yang
berarti  pada  konsentrasi  ini  terjadi  efek toksisitas (LD 50 ) (Ihwan et al., 2018).
Berdasarkan  perhitungan Lethal  dose 50  (LD 50 )  dengan  menggunakan  metode Reed  -  Muench dapat  diketahui  bahwa ekstrak  buah Meistera  chinensis dengan
nilai sebesar 865,765
mg/kgBB.
Berdasarkan  kriteria  penggolongan  tingkat toksisitas  sediaan  uji  berdasarkan Hodge dan Sterner (BPOM  RI,  2014) termasuk dalam kategori toksik ringan yaitu 500-5000 mg/kgBB (tabel 3).
Tabel 2. Jumlah kematian Mencit Setelah pemberian ekstrak buah Meistera chinensis
No Dosis Jumlah hewan uji Jumlah Hewan uji mati % kematian 1 Kontrol (-) 5 0 0 2 Dosis 50 mg/kgBB 5 1 20 3 Dosis 500 mg/kgBB 5 1 20 4 Dosis 5.000 mg/kgBB 5 1 20 5 Dosis 15.000 mg/kgBB 5 4 80
Tabel 3. Kriteria penggolongan derajat toksisitas sediaan uji berdasarkan Hodge dan Sterner
Tingkat toksisitas LD 50 oral (mg/kg BB) Klasifikasi 1 <1 Sangat Toksik 2 1-50 Toksik 3 50-500 Toksik Sedang 4 500-5,000 Toksik Ringan 5 5000-1,5000 Praktis Tidak Toksik 6 >15000 Relatif Tidak Membahayakan
Tingkat kematian pada kelompok perlakuan  disebabkan  oleh  dosis  ekstrak buah Meistera  chinensis yang  diberikan terhadap  hewan  uji  mencit  ( Mus  musculus ).
Semakin  tinggi  dosis  yang  diberikan  maka efek  toksik  yang  ditimbulkan  semakin tinggi.  Berdasarkan  kandungan  metabolit sekunder  ekstrak  buah Meistera  chinensis mengandung senyawa flavonoid dan terpenoid.  Senyawa  flavonoid  di  dalam  sel menyebabkan  gugus  –OH  pada  flavonoid berikatan dengan protein integral membrane
sel.  Hal  ini  menyebabkan  transport  aktif terhenti.  Transport  aktif  yang  terhenti menyebabkan  pemasukan  ion  yang  tidak terkendali  dalam  sel  yang  dapat  menjadi penyebab kematian sel (Al-Enazi, 2018).
Hasil  penelitian  toksisitas Meistera chinensis di dukung Juwita (2018) menunjukkan bahwa pada golongan Zingiberaceae dapat  menghambat  aktivitas antikanker terhadap garis sel kanker MCF-7 dan  MDA-MB-231  dengan  menunjukkan aktivitas  antikanker  yang  kuat  dengan  LC 50
dari  173,1  dan  196.2  µg/ml  terhadap  garis sel tumor masing-masing MCF-7 dan MDA- MB-231. Hashem, et al., (2020) mengemukaan tumbuhan Zingiberaceae efektif melawan kanker  payudara dan dapat menurunkan  klonogenesitas  dan  migrasi  sel pada  garis sel  kanker payudara  (MDA-MB- 231 dan AT1) dengan menurunkan ekspresi matriks metalloproteinase (MMP-9).
Senyawa  terpenoid  yang  terdapat  dalam golongan Zingiberaceae yang dapat menghambat  perkembangan  tumor  dengan proses penghentian siklus sel dan apoptosis. Senyawa kimia seperti furanoidiena, germakron, 13-hidroksigermakron dan sesquiterpen yang berasal dari minyak atsiri didalam timbuhan golongan Zingiberaceae.

## KESIMPULAN
Gejala  toksik  yang  dominan  yang timbul  setelah  pemberian  ekstrak  buah Meistera chinensis dengan dosis 50 mg/kgBB,  500  mg/kgBB,  5000  kg/kgBB dan  15.000  mg/kgBB  menunjukkan  efek toksik  berupa  penurunan  aktivitas  gerak, laju  nafas  cepat,  perubahan  perilaku penjilatan,  serta  tremor.  Nilai  LD 50 ekstrak buah Meistera  chinensis sebesar  865,765 mg/kgBB  dan  termasuk  kategori  toksik ringan.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Enazi,  N.  M.  (2018).  Phytochemical screening  and  biological  activities  of some species of alpinia and Convolvulus plants. International Journal of Pharmacology , 14 (3), 301–
309.
https://doi.org/10.3923/ijp.2018.301.3
09
Bourhia,  M.,  Lahmadi,  A.,  Achtak,  H.,
Touis,  A.,  Elbrahmi,  J.,  Ullah,  R., Shahat,  A.  a.,  Mahmood,  H.  M., Aboudkhil,  S.,  Benbacer,  L.,  &  Khlil, N. (2019). Phytochemical analysis and toxicity study of aristolochia paucinervis  rhizomes  decoction  used in  moroccan  alternative  medicine: Histopathological  and  biochemical profiles. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine , 2019 . https://doi.org/10.1155/2019/1398404 BPOM RI. (2014). Peraturan Kepala Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  RI Nomor  7  Tahun  2014  Tentang Pedoman  Uji  Toksisitas  Nonklinik
Secara In Vivo . https://peraturanpedia.id/peraturan- badan-pengawas-obat-dan-makanan- nomor-7-tahun-2014/?quad_cc
Musdalipah et al.;ToksisitasAkut dan Lethal Dose…..Pharmacoscript Volume 5 No. 2, Agustus 2022
Chan, E. W. C., Lim, Y. Y., & Wong, S. K.
(2011). Phytochemistry and pharmacological properties of
Etlingera elatior: A review.
Pharmacognosy  Journal , 3 (22),  6–10. https://doi.org/10.5530/pj.2011.22.2
De  Boer,  H.,  Newman,  M.,  Poulsen,  A.  D.,
Jane Droop, a., Fér, T., Hiền, L. T. T., Hlavatá,  K.,  Lamxay,  V.,  Richardson,
J. E.,  Steffen, K., & Leong-
Škorničková,  J.  (2018).  Convergent morphology in alpinieae
(Zingiberaceae): Recircumscribing
amomum  as  a  monophyletic  genus.
Taxon , 67 (1), 6–36. https://doi.org/10.12705/671.2
Eriadi,  A.,  Arifin,  H.,  &  Nirwanto,  N.
(2016).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Etanol Daun Kirinyuh
(Chromolaenodorata  (L)  R.M.King  & H.  Rob)  Pada  Mencit  Putih  Jantan. Jurnal Farmasi Higea , 8 (2), 122–132.
Erwin,  E.,  Etriwati,  E.,  &  Rusli,  R.  (2012).
Mencit (Mus musculus) Galur BALB- C  yang  Diinduksikan  Streptozotosin Berulang  Sebagai  Hewan  Model Diabetes  Melitus. Jurnal  Kedokteran Hewan , 6 (1), 47–50.
Gupta, N., Gudipati, T., & Prasad, G. B. K. .
(2018).  Plant  Secondary  Metabolites of  Pharmacological  Significance  in
Reference to Plant Secondary Metabolites of Pharmacological
Significance  in  Reference  to  Diabetes Mellitus :  An  Update. International Journal  of  Current  Microbiology  and Applied  Science , 7 (5),  3409–3448. https://doi.org/10.20546/ijcmas.2018.7 05.398
Haleagrahara,  N.,  Jackie,  T.,  Chakravarthi, S.,  Rao,  M.,  &  Kulur,  A.  (2010). Protective  effect  of  Etlingera  elatior (torch ginger) extract on lead acetate - Induced hepatotoxicity in rats. Journal of Toxicological Sciences , 35 (5), 663– 671. https://doi.org/10.2131/jts.35.663 Hashem,  S.,  Nisar,  S.,  Sageena,  G.,  Macha, M.  A.,  Yadav,  S.  K.,  Krishnankutty,
R.,  Uddin,  S.,  Haris,  M.,  Bhat,  A.  A., Hashem,  S.,  Nisar,  S.,  Sageena,  G., Macha, M. A., & Yadav, S. K. (2020). Therapeutic  Effects  of  Curcumol  in Several  Diseases ;  An  Overview. Nutrition  and  Cancer , 0 (0),  1–15. https://doi.org/10.1080/01635581.202 0.1749676
Ihwan,  Yusuf,  A.,  &  Khumaidi,  A.  (2018).
Uji  Toksisitas  Akut  Dan  Letal  Dose (LD50)  Ekstrak  Etanol  Daun  Pepolo (Bischofia  javanica  Blume  )  Pada Mencit Putih (Mus musculus). Journal

## Pharmacoscript Volume 5 No. 2 Agustus 2022
of Science and Technology , 7 (1), 110–
116.
Imran, Fristiohady, A., Leorita, M., Malaka,
M.  H.,  Y,  M.  I.,  Rahmatika,  N.  S., Darmawan, A., Fajriah, S., Yodha, A. W.  M.,  &  Sahidin,  I.  (2022).  Radical Scavenger and Anti-diabetic Potencies of  Etlingera  elatior  Fruits  growing  in
South East Sulawesi-Indonesia ABSTRACT : Research  J.  Pharm.
and  Tech. , 15 (May),  2141–2146. https://doi.org/10.52711/0974-
360X.2022.00355
Jabbar,  A.,  Wahyuni,  W.,  Yusuf,  M.  I., Helmia,  W.  O.  N.,  &  Sahidin,  I. (2020).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Etanol Buah Wualae (Etlingera elatior (Jack)  R.  M.  Smith)  Terhadap
Gambaran Histopatologi Organ Jantung Tikus Wistar (Rattus norvegicus). Pharmauho: Jurnal
Farmasi,  Sains,  Dan  Kesehatan , 5 (2), 1–5. https://doi.org/10.33772/pharmauho.v 5i2.10167
Jumain, J., Syahruni, S., & Farid, F. (2018).
Uji Toksisitas Akut dan LD50 Ekstrak Etanol  Daun  Kirinyuh  (Euphatorium odoratum  Linn)  Pada  Mencit  (Mus musculus). Media  Farmasi , 14 (1), 28.
https://doi.org/10.32382/mf.v14i1.82
Juwita,  T.,  Puspitasari,  I.  M.,  &  Levita,  J.
(2018). Torch  Ginger  (  Etlingera elatior  ):  A  Review  on  its  Botanical Aspects , Phytoconstituents and Pharmacological Activities . April . https://doi.org/10.3923/pjbs.2018.151.
165
Musdalipah, Karmilah, Tee, S. A., Nurhikma, E., Fauziah, Y.,
Fristiohady, A., Sahidin, I., & Mahatva  Yodha,  A.  W.  (2021). Meistera  chinensis  fruit  properties: Chemical compound, antioxidant, antimicrobial,  and  antifungal  activity. IOP  Conference  Series:  Earth  and Environmental Science , 755 (1),
012014.  https://doi.org/10.1088/1755- 1315/755/1/012014
Musdalipah,  M.,  Tee,  S.  A.,  Karmilah,  K.,
Sahidin, S., Fristiohady, A., & Yodha, A.  W.  M.  (2021).  Total  Phenolic  and Flavonoid  Content,  Antioxidant,  and Toxicity  Test  with  BSLT  of  Meistera chinensis Fruit Fraction from
Southeast  Sulawesi. Borneo  Journal of Pharmacy , 4 (1), 6–15.
https://doi.org/10.33084/bjop.v4i1.168
6
Mushtaq, A., Akbar, S., Zargar, M. a., Wali,
A.  F.,  Malik,  A.  H.,  Dar,  M.  Y., Hamid,  R.,  &  Ganai,  B.  a.  (2014).
Phytochemical
screening, physicochemical properties, acute toxicity  testing  and  screening  of hypoglycaemic  activity  of  extracts  of eremurus himalaicus baker in normoglycaemic  wistar  strain  albino rats. BioMed  Research  International ,
2014 .
https://doi.org/10.1155/2014/867547 Mustapa,  M.,  Tuloli,  T.,  &  Mooduto,  A.
(2018).  Uji  Toksisitas  Akut  Yang
Diukur  Dengan  Penentuan  Ld50 Ekstrak Etanol Bunga Cengkeh (Syzygium  Aromaticum  L.)  Terhadap Mencit (Mus Musculus)
Menggunakan  Metode  Thompson-
Weil. Frontiers:  Jurnal  Sains  Dan
Teknologi , 1 (1), 105–117.
https://doi.org/10.36412/frontiers/001 035e1/april201801.10
Reymon,  Sofyan,  S.,  Yodha,  A.  W.  M.,  & Musdalipah.  (2021).  The  toxicity  of Meistera  chinensis  rhizome  fraction by  shrimp  larvae  with  BSLT  method. Natural  Science :  Journal  of  Science and Technology , 10 (2), 53–58. https://doi.org/10.22487/25411969.20 21.v10.i2.15673
Riaz,  B.,  Zahoor,  M.  K.,  Zahoor,  M.  A., Majeed,  H.  N.,  Javed,  I.,  Ahmad,  A., Jabeen,  F.,  Zulhussnain,  M.,  &
Sultana, K. (2018). Toxicity, Phytochemical Composition, and Enzyme Inhibitory Activities of Some Indigenous  Weed  Plant  Extracts  in Fruit  Fly,  Drosophila  melanogaster. Evidence-Based  Complementary  and
Alternative
Medicine , 2018 . https://doi.org/10.1155/2018/2325659 Sharifi-Rad,  M.,  Varoni,  E.  M.,  Salehi,  B.,
Sharifi-Rad,  J.,  Matthews,  K.  R., Ayatollahi,  S.  A.,  Kobarfard,  F., Ibrahim, S. a., Mnayer, D., Zakaria, Z. A.,  Sharifi-Rad,  M.,  Yousaf,  Z.,  Iriti, M.,  Basile,  A.,  &  Rigano,  D.  (2017). Plants  of  the  genus  zingiber  as  a source  of  bioactive  phytochemicals: From tradition to pharmacy.
Molecules , 22 (12), 1–20.
https://doi.org/10.3390/molecules2212
2145
Sungthong,  B.,  &  Srichaikul,  B.  (2018).
Antioxidant  activities,  acute  toxicity and chemical profiling of torch ginger (Etlingera  elatior  Jack.)  inflorescent extract. Pharmacognosy Journal ,
10 (5), 979–982.
https://doi.org/10.5530/pj.2018.5.166 Tee,  S.  a.,  Musdalipah,  Karmilah,  Sahidin,
I., Fristiohady, a., & Yodha, a. W. M.
(2021).  Phytochemical  and  Toxicity Assay  of  Meistera  chinensis  Fruit

## Pharmacoscript Volume 5 No. 2 Agustus 2022
Extract:  The  Endemic  Plant  of Southeast  Sulawesi  . Proceedings  of
the International Seminar on Promoting Local Resources for Sustainable Agriculture and Development (ISPLRSAD 2020) , 13 (Isplrsad
2020), 379–384.
https://doi.org/10.2991/absr.k.210609.
059