Jurnal Pharmascience, Vol. 9, 2, Oktober 2022, hal: 355-367 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article
Identifikasi Fitokimia dan Uji Aktivitas

## Antiinflamasi In Vitro Fraksi n- heksana Kapur
Naga (Calophyllum soulattri Burm F) dengan Metode Uji Penghambatan Denaturasi Protein Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis
Fadlilaturrahmah 1 *, Jariyah Amilia 1 , Yuana Sukmawaty 2 , Nashrul Wathan 1
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia
2 Program Studi Statistik, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia Email: fadlilaturrahmah@ulm.ac.id

## ABSTRAK
Tumbuhan  kapur  naga  (Calophyllum  soulattri  Burm  F)  merupakan  salah  satu spesies  dari    keluarga  Calophyllum  yang  terdapat  di  hutan  Kalimantan  khususnya daerah  lahan  basah.  Secara  empiris  dimasyarakat  memanfaatkan  kulit  batang  C. soulattri  untuk  mengobati  penyakit  kulit  yang  salah  satu  mekanisme  proses penyembuhan  melawati  tahap  inflamasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan penulusuran  kandungan  fitokimia  dari  fraksi  n-heksana  kulit  batang  C.  soulattri  dan melakukan  uji  aktivitas  antiinflamasi  in  vitro  dengan  metode  uji  penghambatan denaturasi  protein  menggunakan  spektrofotometer  uv-vis.  Metode  penelitian  diawali dengan  tahapan  pembuatan  simplisia,  ekstraksi  dengan  etanol  96%,  dan  difraksinasi menggunakan n-heksana.  Setelah itu dilakukan  uji penelusuran kandungan fitokimia menggunakan  uji  tabung  dan  pengujian  antiinflamasi  menggunakan  spektrofotometri uv-vis  menggunakan  metode  penghambatan  denaturasi  protein  secara  kuantitatif dengan  natrium  diklofenak  sebagai  kontrol  positif.  Hasil  dari  identifikasi  fitokimia diperoleh bahwa fraksi n-heksana mengandung alkaloid, fenol, tanin, flavonoid, saponin, dan  triterpenoid.  Uji  aktivitas  antiinflamasi  fraksi  n-heksana  kulit  batang  C.  soulattri menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  27,43±0,74  ppm  dan  natrium  diklofenak  dengan  nilai IC 50 sebesar  39,17±0,86  ppm.  Berdasaran  uji  t-test  diperoleh  hasil  yang  menunjukkan berbeda  bermakna    dengan  IC 50 Natrium  diklofenak  (sig  =  0,00).  Kesimpulan  dari penelitian  ini  yaitu  fraksi  n-heksana  kulit  batang  C.  soulattri  memiliki  aktivitas antiinflamasi yang lebih baik dari natrium diklofenak.
Kata Kunci: Bovine Serum, Albumin, IC 50 , Natrium Diklofenak, Kuantitatif

## ABSTRACT
Kapur naga (Calophyllum soulattri Burm F) is a species of the Calophyllum family that  found  in  the  forests  of  Kalimantan,  especially  in  wetland  areas.  Empirically,  the community  uses  the  bark  of  C.  soulattri  to  treat  skin  diseases,  which  is  one  of  the mechanisms  of  the  healing  process  through  the  inflammatory  stage.  The  purpose  of  this study was to investigate the phytochemical content of the n-hexane fraction of the stem bark of C. soulattri and to test its anti-inflammatory activity in vitro with the protein denaturation inhibition test method using uv-vis spectrophotometer. The research method begins with the steps of making simplicia, extraction with 96% ethanol, and fractionation using n-hexane. After that, a test for tracing the phytochemical content was carried out using a tube test and an  anti-inflammatory  test  using  uv-vis  spectrophotometry  using  a  quantitative  protein denaturation inhibition method with diclofenac sodium as a positive control. The results of the  phytochemical  identification  showed  that  the  n-hexane  fraction  contained  alkaloids, triterpenoids, phenols, tannins, flavonoids, and saponins. The anti-inflammatory activity test of the n-hexane fraction  of  C. soulattri  stem bark produced  an  IC50 value  of 27.43±0.74 ppm and diclofenac sodium with an IC50 value of 39.17±0.86 ppm. Based on the t-test, the results showed that it was significantly different from the IC50 of diclofenac sodium (sig = 0.00).  The  conclusion  of  this  study  is  that  the  n-hexane  fraction  of  the  stem  bark  of  C. soulattri has better anti-inflammatory activity than diclofenac sodium.
Keywords: Bovine Serum, Albumin, IC 50 , Diclofenac Sodium, Quantitative

## I. PENDAHULUAN
Salah  satu  tumbuhan  yang  dapat digunakan  untuk  pengobatan  tradisional oleh masyarakat adalah tumbuhan Calophyllum  soulattri Burm  F  (kapur naga).  Tumbuhan C.  soulattri merupakan salah satu jenis dari keluarga Calophyllum yang  terdapat  di  hutan  Kalimantan (Wahidin et  al .,  2020).  Secara  empiris masyarakat di Kalimantan Barat memanfaatkan  kulit  batang  pohon C. soulattri untuk  mengobati  penyakit  kulit seperti  koreng  dan  borok  (Sangat et  al., 2000).  Penyakit  kulit  seperti  borok  pada proses  penyembuhan  lukanya  melewati beberapa tahap salah satunya adalah tahap inflamasi.
Inflamasi  merupakan  suatu  respon proteksi  jaringan  yang  disebabkan  oleh bakteri,  zat  kimia,  trauma  mekanik  dan trauma  fisik  yang  ditandai  dengan  adanya pembengkakan, rasa nyeri, kemerahan, dan peningkatan  denaturasi  protein  (Novika et al ., 2021). Senyawa yang dapat menghambat  denaturasi  protein  dapat dijadikan  obat  anti-inflamasi.  Penggunaan obat  antiinflamasi  steroid  (AIS)  dan  obat antiinflamasi    nonsteroid  (AINS)  ini  jika diminum  dalam  jangka  panjang  dapat menimbulkan  efek  samping  berupa  iritasi lambung.  Untuk  mengatasi  efek  samping diperlukan  pengobatan  alternatif  yaitu dengan  memanfaatkan  tanaman  herbal (Hidayah et al ., 2021).
Pengujian  antiinflamasi  dilakukan dengan  metode  in-vitro.  Kelebihan  dari metode  in-vitro  yaitu  tidak  menggunakan banyak sampel, tidak menghabiskan waktu yang  lama,  dan  tidak  perlu  menggunakan hewan uji (Ikrom, 2014). Secara in-vitro uji aktifitas  antiinflamsi  dapat  menggunakan metode  penghambatan  denaturasi  protein secara kuantitatif pada umumnya menggunakan spektrofotomerti uv-vis. Uji ini merupakan skrining awal untuk aktivitas antiinflamasi. Denaturasi protein merupakan  salah  satu  penyebab  dari inflamasi  yang  mengakibatkan  kerusakan pada    struktur  sekunder,  tersier  dan kuartener dari protein.  Kerusakan tersebut disebabkan  adanya  pemanasan  dan  zat pendenaturan  sehingga  fungsi  biologis protein  menjadi    berkurang  (Farida et  al ., 2018).
Penelitian  Septiana  &  Simanjuntak (2020),  metabolit  sekunder  yang  terdapat pada ekstrak etanol kulit batang C. soulattri mengandung alkaloid, flavonoid, triterpenoid,  saponin,  tanin.  Menurut Fridiana (2012), senyawa flavonoid, tanin, dan  steroid  berpotensi  digunakan  sebagai antiinflamasi  karena  mampu  menghambat denaturasi  protein  dalam  tubuh  sebagai pemicu mekanisme peradangan (inflamasi) dengan  merangsang  pelepasan  mediator inflamasi. Maka perlu dilakukan penelitian terkait identifikasi fitokimia dan pengujian antiinflamasi dengan metode
penghambatan  denaturasi  protein  pada fraksi n -heksana.

## II. METODE

## A. Preparasi Sampel
Kulit  batang C.  soulattri diperoleh dari  Kecamatan  Karang  Intan,  Kabupaten Banjar,  Kalimantan  Selatan.  Kulit  batang C. soulattri yang telah terkumpul sebanyak 5  kg  dilakukan  sortasi  basah  untuk menghilangkan  kotoran  yang  menempel dibagian  permukaannya.  Sortasi  basah dilakukan  dengan  cara  mencuci  sampel dengan air yang mengalir. Kulit batang C. soulattri dipotong kecil-kecil untuk memudahkan proses pengeringan.
Kemudian  sampel  yang  sudah  dipotong- potong  dikeringkan  menggunakan  oven pada  suhu  40-50 o C.  Sampel  yang  sudah kering disortasi kering untuk membersihkan  kotoran  yang  mungkin masih  menempel.  Kemudian  sampel  yang sudah disortasi kering dihaluskan menggunakan  blender  sampai  terbentuk simplisia  serbuk.  Untuk  mendapatkan bobot  akhir,  simplisia  serbuk  diayak dengan ukuran 14 mesh.  Serbuk simplisia yang  diperoleh  kemudian  ditimbang  dan disimpan  di  tempat  yang  kering  dengan wadah  tertutup  rapat  dalam  ruangan  yang harus  terhindar  dari  sinar  cahaya  matahari langsung (Luginda et al ., 2018; Handayani et al ., 2019).

## B. Pembuatan ekstrak etanol
Serbuk  kulit  batang C.  soulattri sebanyak  500  gram  sampel  serbuk,  lalu dimasukan kedalam maserator dan ditambahkan  pelarut  etanol  96%  hingga serbuk terendam seluruhnya dengan tinggi pelarut  1-2  cm  di  atas  permukaan  serbuk. Ekstraksi  dilakukan  selama  5  x  24  jam. Sesekali  dilakukan  pengadukan  setiap  6 jam. Pelarut diganti tiap 1 x 24 jam. Ekstrak cair dan ampas ekstraksi dipisahkan dengan cara  disaring  menggunakan  kertas  saring Whatman  No.  1.  Ekstrak  cair  yang diperoleh selanjutnya diuapkan menggunakan waterbath pada  suhu  55 o C hingga  diperoleh  ekstrak  kental  dengan bobot  tetap.  Ekstrak  yang  telah  didapat selanjutnya  disimpan  di  wadah  yang tertutup  rapat.  Ekstrak  yang  didapat ditimbang  dan  hasilnya  dinyatakan  dalam persen rendemen.

## C. Pembuatan fraksi n-heksana
Ekstrak  kulit  batang C.  soulattri selajutnya  di  fraksinasi  dengan  metode cair-cair  menggunakan  corong  pisah. Ekstrak kental yang didapat disuspensikan dengan  aquades  dengan  perbandingan  1:2 dan  diaduk  hingga  homogen. Suspensi kemudian  dimasukkan  ke  dalam  corong pisah  lalu  ditambahkan  dengan  pelarut n - heksana 100 mL. Corong pisah ditutup lalu digojok selama 15 menit sambil dikeluarkan gas dengan membuka kran dari
corong  pisah.  Setelah  itu,  corong  pisah ditegakkan dan didiamkan sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan bawah yang berupa fase air dan lapisan atas yang berupa fase  pelarut  organik  dikeluarkan  dari corong  pisah.  Selanjutnya,  fase  air dimasukkan kembali ke dalam corong pisah dan  ditambahkan  pelarut n -heksana  yang baru. Refraksinasi dilakukan hingga lapisan n -heksana bening.

## D. Identifikasi Fitokimia
Identifikasi  fitokimia  dilakukan untuk  senyawa  alkaloid,  tanin,  fenol, flavonoid, saponin, terpenoid,  dan steroid (Vernanda et  al., 2019;  Samodra,  2019; Wirasti, 2019).
E. Uji In Vitro Aktivitas Antiinflamasi
1. Pembuatan Larutan TBS (Tris Buffer

## Saline)
Larutan  TBS  dibuat  dengan  cara melarutkan  4,35  gram  NaCl  ke  dalam aquadest 200 mL, selanjutnya ditambahkan 605  mg Triss  buffer ,  serta    200  mL aquadest.  Kemudian  untuk  mengatur  pH ditambahkan    asam  asetat  glasial  untuk mendapatkan pH patologis 6,2-6,5 kemudian  ditambahkan  100  mL  aquadest (Reynaldi & Yani, 2021).

## 2. Pembuatan 0,2% BSA (Bovine Serum

## Albumin)
Pembuatan  BSA  0,2%  dilakukan dengan  cara    melarutkan  0,2  gram  BSA ( Bovine  Serum  Albumin )  dengan  100  mL larutan Triss  buffer  saline (Reynaldi  & Yani, 2021).

## 3. Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Sebanyak 50 µL n -heksana ditambahkan  0,2%  BSA  hingga  diperoleh volume 5 mL (Farida et al ., 2018).

## 4. Pembuatan Larutan Uji dan Kontrol Positif
Sebanyak  50  mg  fraksi n -heksana dilarutkan  dengan n -heksana  sebanyak  25 mL. Natrium diklofenak diambil sebanyak 50  mg  dilarutkan  pada  pelarut  etanol sebanyak  25  mL.  Larutan  induk  yang digunakan  adalah  2000  ppm.  Kemudian larutan  induk  masing-masing  diencerkan menjadi  12,5;  25;  50;  100;  dan  200  ppm (Kanjikar & Londonkar, 2017).
Penggunaan  natrium  diklofenak  sebagai kontrol  positif  karena  memiliki  efek  yang cepat  dalam  menghilangkan  inflamasi (peradangan)  selain  itu  juga  merupakan obat antiinflamasi non steroid yang aksinya secara non selektif dan memiliki kelarutan yang baik di dalam air dan pelarut organik (Novika et al ., 2021).
5. Pengujian Aktivitas Antiinflamasi
Larutan uji dan natrium diklofenak diambil  sebanyak  500  µL  dari  setiap konsentrasi larutan kemudian ditambahkan 0,2% BSA hingga volume mencapai 5 mL. Masing-masing konsentrasi akan menghasilkan  konsentrasi  12,5;  25;  50; 100;  dan    200  ppm.  Kemudian  diinkubasi pada  suhu  37  °C  selama  15  menit. Selanjutnya dilakukan pemanasan selama 5 menit di suhu 70 °C, lalu didiamkan hingga dingin. Larutan dikocok dengan kuat alasan dilakukan  pengocokan  agar  pada  tabung tidak  terjadi  penggumpalan  sehingga memudahkan saat pembacaan di spektrofotometri dan dilakukan pengukuran  absorbansi  dengan  panjang gelombang  660  nm.  Panjang  gelombang maksimum  dari  protein  adalah  660  nm (William et  al .,  2008;  Kanjikar  & Londonkar, 2017).

## 6. Perhitungan
Presentase

## Penghambatan Denaturasi Protein
Perhitungan presentase
penghambatan  denaturasi  protein  dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
% inhibisi = A KN - A LU x 100%
A KN Keterangan :
A KN = Absorbansi Kontrol Negatif A LU = Absorbansi Larutan Uji
7. Perhitungan Presentase Nilai IC 50
Perhitungan  nilai  IC 50 dilakukan dengan  membuat  persamaan  regresi  linear sehingga didapatkan nilai IC 50 dari fraksi n - heksan dan fraksi n -butanol kulit batang C. soulattri dan natrium diklofenak.
Ekstrak/konsentrasi obat untuk penghambatan  50%  (IC 50 )  ditentukan dengan memplot persentase penghambatan sehubungan  dengan  kontrol  terhadap konsentrasi  perlakuan  (Chandra et  al ., 2012). Nilai IC 50 menunjukkan konsentrasi yang  dapat  menghambat  sebanyak  50%. (Novika et al., 2021). Aktivitas antiinflamasi  semakin  besar  apabila  nilai IC 50 yang didapatkan semakin kecil.

## F. Analisis Data
Data hasil penelitian ini dianalisis  secara  kualitatif  dan  kuantitatif. Data  kualitatif  berupa  hasil  identifikasi kandungan  senyawa  kimia  yang  terdapat fraksi n -heksana  yang  disajikan  secara deskriptif.  Data  kuantitatif  berupa  hasil penentuan  aktivitas  antiinflamasi  berupa nilai IC 50 dan uji signifikansi dengan  uji t- test menggunakan SPSS versi 21 .

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Simplisia  kulit  batang C.  soulattri diolah  dari  sampel  segar  kulit  batang C. soulattri yang  telah  dikumpulkan  dengan bobot sebesar 5 kg. Kemudian sampel segar disortasi  basah  untuk  memisahkan  kulit
batang  dari  bagian  yang  kurang  baik. Selanjutnya untuk menghilangkan pengotor yang  ada  pada  kulit  batang  dilakukan pencucian dengan air mengalir. Setelah itu, dilakukan  proses  perajangan  menjadi bagian yang lebih kecil. Tahap selanjutnya untuk  mengurangi  kadar  air  pada  sampel, dilakukan  pengeringan  dalam  lemari pengering pada suhu 50 o C sehingga tidak mudah rusak oleh pertumbuhan bakteri atau jamur  agar  dapat  disimpan  dalam  waktu yang  lama.  Selain  itu,  pengeringan  yang dilakukan  bertujuan  untuk  mengurangi kadar  air sampel dan menghentikan reaksi enzimatik  yang  dapat  mengakibatkan perubahan  kandungan  senyawa  kimia sehingga  penurunan  mutu  simplisia  dapat dihindari (Supriningrum et al ., 2018).
Simplisia yang sudah kering kemudian  disortasi  kering  dan  dihaluskan menggunakan blender. Penghalusan simplisia  bertujuan  untuk  memperkecil ukuran  partikel  simplisia  sehingga  saat proses  ekstraksi  pelarut  lebih  mudah menyari  kandungan  kimia  pada  sampel C. soulattri dan persen rendemennya meningkat  (Supriningrum et  al .,  2018).
Sampel yang telah dihaluskan menggunakan  blender  kemudian  disaring menggunakan  ayakan  mesh  no.  14  untuk memperoleh serbuk kasar (Handarni et al .,
2020). Penyaringan dilakukan menggunakan  ayakan  mesh  no.  14 bertujuan  agar  serbuk  memiliki  ukuran
yang  seragam  (Handarni et  al .,  2020).
Simplisia  serbuk  kulit  batang C.  soulattri yang dihasikan berupa serbuk kasar, aroma khas  batang,  tidak  berasa,  dan  berwarna coklat tua (Gambar 1).
Gambar 1 . Serbuk kulit batang C. soulattri
Metode  ekstraksi  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  metode maserasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Metode  ini  digunakan  karena mudah,  sederhana  dan  tidak  memerlukan proses  pemanasan  sehingga  baik  untuk senyawa-senyawa yang tidak tahan terhadap  pemanasan.  Proses  maserasi dilakukan  dengan  merendam  serbuk  kulit batang C.  soulattri ke  dalam  maserator dengan  pelarut  hingga  proses  ekstraksi sempurna  ditandai  dengan  perubahan pelarut  yang  menjadi  bening.  Hal  ini dilakukan  agar  mendapatkan  seluruh senyawa kimia yang ada pada kulit batang C. soulattri.
Serbuk  simplisia  kulit  batang C. soulattri ditimbang  sebanyak  500  gram.
Serbuk  yang  telah  ditimbang  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  96%. Pemilihan  pelarut  etanol  96%  pada  proses
maserasi  karena  merupakan  pelarut  yang dapat menarik senyawa-senyawa metabolit sekunder  pada  sampel  baik  senyawa  non polar  maupun  senyawa  polar.  Selain  itu, etanol  96%  sebagai  cairan  penyari  ialah lebih aman digunakan dan mudah menguap (Voight, 1994). Proses ekstraksi dilakukan selama  5  x  24  jam  atau  dilakukan  5x remaserasi.  Pergantian  pelarut  dilakukan setiap 1 x 24 jam dengan pengadukan setiap 6  jam  sekali  selama  5  menit.  Pengadukan dilakukan  agar  meningkatkan  frekuensi kontak  antara  serbuk  dengan  larutan penyari  agar  hasil  yang  lebih  optimal (Nurhasnawati et  al .,  2017).  Pergantian pelarut  dilakukan  agar  menarik  senyawa kimia yang tidak dapat tertarik pada pelarut sebelumnya  sehingga  dapat  menghasilkan ekstraksi yang lebih  maksimal. Pergantian pelarut  dilakukan  menggunakan  kertas saring. Penyaringan dilakukan agar ekstrak cair  terpisah  dari  ampas  (Saadah  & Nuhasnawati,  2015).  Ekstrak  cair  yang didapatkan diuapkan menggunakan waterbath pada  suhu  50 o C  sampai menunjukkan bobot tetap karena jika suhu yang  digunakan  terlalu  tinggi  akan menyebabkan  kerusakan  senyawa  yang tidak tahan pemanasan (Arifin et al ., 2018).
Bobot tetap diketahui dari hasil penimbangan tidak menunjukkan perbedaan lebih dari 0,25% (Kemenkes RI, 2017). Bobot ekstrak kental yang diperoleh kemudian  dihitung  rendemennya  terhadap
bobot awal simplisia serbuk yang digunakan.  Hasil  rendemen  dari  serbuk, ekstrak, dan fraksi kulit batang C.soulattri
dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I . Hasil Rendemen Sampel Rendemen (%) Serbuk 10 Ekstrak 7,67 Fraksi 31,5 Persen  rendemen  ekstrak  adalah
perbandingan bobot ekstrak yang didapatkan  dari  proses  ekstraksi  terhadap bobot  simplisia  serbuk  yang  digunakan dalam  proses  ekstraksi  (Dewatisari et  al .,
2017).  Rendemen  menggunakan  satuan persen (%), semakin tinggi nilai rendemen yang  dihasilkan  menandakan  nilai  ekstrak semakin  banyak  (Maulida  &  Guntarti, 2015).  Tujuan  dari  perhitungan  rendemen ini  adalah  untuk  mengetahui  persentase perolehan  hasil  ekstrak  sehingga  nantinya bisa  diketahui  jumlah  simplisia  yang digunakan untuk membuat sejumlah ekstrak kental tertentu. Hal-hal yang dapat mempengaruhi  besarnya  persen  rendemen ekstrak  adalah  ukuran  partikel  serbuk, metode  ekstraksi,  waktu  dan  kondisi penyimpanan,  lama waktu  ekstraksi, perbandingan  jumlah  pelarut  terhadap jumlah  sampel  yang  digunakan,  jenis pelarut yang digunakan, lokasi pengambilan  sampel,  dan  lingkungan
pengambilan sampel (Salamah & Widyasari, 2015; Tambunan et al ., 2017).

## A. Identifikasi Fitokimia
Identifikasi  fitokimia  dilakukan untuk  menentukan  kandungan  golongan- golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada sampel. Selain itu, identifikasi juga dapat menunjukkan senyawa  identitas  yang  menjadi  ciri spesifik  dari  suatu  tanaman.  Hasil  dari identifikasi  senyawa  ini  dapat  digunakan untuk  pengujian  lebih  lanjut,  seperti identifikasi senyawa aktif yang yang dapat berperan dalam pengobatan suatu penyakit (Indriyanti et al ., 2018; Maliangkay et al .,
2019). Hasil identifikasi fitokimia fraksi n- heksana dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II . Hasil identifikasi fitokimia

## B. Uji Aktivitas Antiinflamasi
Uji aktivitas  antiinflamasi fraksi n- heksana kulit batang C. soulattri dilakukan dengan metode   penghambatan denaturasi protein.  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah  natrium diklofenak yang diketahui
Golongan Senyawa
Hasil
Alkaloid
+ Fenol + Tanin + Flavonoid + Saponin + Triterpenoid + Steroid -
memiliki  aktivitas  antiinflamasi.  Persen inhibisi  dari  natrium  diklofenak dapat dilihat pada Tabel III.
Tabel III . Nilai Persentase  Natrium Diklofenak Konsentra si (ppm) % Inhibisi 12,5 13,69 25 45,72 50 68,78 100 78,28 200 96,72
Nilai persen inhibisi larutan kontrol positif (natrium diklofenak) dapat diketahui
bahwa  pada  konsentrasi  25  ppm  dapat menghambat  denaturasi  dan  memiliki aktivitas antiinflamasi. Penelitian Farida et al (2018) data  persen  inhibisi  larutan kontrol  positif  (natrium  diklofenak)  dapat diketahui  bahwa  larutan  kontrol  positif pada  konsentrasi  12,5  ppm  sudah  dapat menghambat denaturasi protein.
Uji aktivitas  antiinflamasi fraksi n - heksana kulit batang C. soulattri dilakukan pada  konsentrasi  12,5  ppm,  25  ppm,  50 ppm,  100  ppm,  dan  200  ppm.  Hasil aktivitas  antiinflamasi  fraksi n -heksana dapat dilihat pada Tabel IV dan Gambar 2.
Tabel IV. Aktivitas antiinflamasi fraksi n -heksan kulit batang C. soulattri
Konsentrasi (ppm) % Inhibisi 12,5 42,28 25 45,42 50 65,09 100 67,08 200 88,30
Gambar 2. Kurva hubungan konsentrasi (ppm) dengan %inhibisi fraksi n -heksan kulit batang C. soulattri y = 0.2324x + 43.623 R² = 0.9033 0.00 25.00 50.00 75.00 100.00 0.0 50.0 100.0 150.0
200.0 250.0
% Inh ibi si Konsentrasi (ppm)
Dari  data  persen  inhibisi fraksi n - heksan  kulit  batang C.  soulattri dapat diketahui  bahwa  pada  konsentrasi  yang dapat  menghambat  denaturasi  protein  dan mempunyai    aktivitas antiinflamasi  adalah 12,5 ppm. Pada penelitian Mah et al (2018) data  persen  inhibisi  larutan n- heksan  kulit batang C. soulattri sebesar 63,04%.
Penentuan  nilai  IC 50 natrium diklofenak  bertujuan  untuk  mengetahui besarnya  aktivitas  antiinflamasi.  Natrium diklofenak  digunakan  sebagai  kontrol positif  karena  merupakan  salah  satu  obat yang dapat digunakan sebagai antiinflamasi (Farida et  al .,  2018).  Konsentrasi  larutan natrium diklofenak yang digunakan adalah 12,5; 25; 50; 100; dan 200 ppm. Absorbansi
diukur  pada    panjang  gelombang  660  nm karena panjang gelombang tersebut protein dapat  teridentifikasi  (William et  al ., 2008;
Kanjikar & Londonkar, 2017).  Tabel hasil aktivitas  antiinflamasi  natrium  diklofenak dan fraksi n- dapat dilihat pada Tabel V.
Nilai  IC 50 fraksi n- heksan  kulit batang C.  soulattri yang  didapat  dari perhitungan adalah 27,43 ppm yang berarti pada konsentrasi tersebut mampu menangkal  atau  menghambat  inflamasi sebanyak 50%. Penelitian Mah et al (2018) nilai IC 50 n- heksan kulit batang C. soulattri sebesar  204,95  ppm.  Hasil    analisis  data dengan t-test menggunakan  SPSS didapatkan hasil pada Tabel VI.
Tabel V. Nilai IC 50 natrium diklofenak dan fraksi n-heksana Kelompok IC 50 x  IC 50 ± SD RSD (%) Natrium diklofenak 48,32 48,14±0,32 0,66 48,34 47,78 Fraksi n-heksana 26,65 27,43±0,74 2,69 27,51 28,12 Tabel VI. Uji t-test Levene's Test t-test F Sig. t df Sig. (2-tailed) 95% CI of the Difference Lower Upper 1.45 .295 44.639 4 .000 19.43 22.01 44.639 2.72 .000 19.15 22.29
Berdasarkan hasil uji t-test dengan taraf  kepercayaan  95%  dapat  disimpulkan bahwa  nilai  IC 50 dari  kelompok    fraksi  n- heksana    dan  natrium  diklofenak    berbeda bermakna karena memiliki nilai signifikansi  0,00  (<0,05). Fraksi n- heksan kulit batang C. soulattri memiliki nilai IC 50 lebih  kecil  dibandingkan  dengan  natrium diklofenak sehingga fraksi n -heksan memiliki aktivitas  antiinflamasi  lebih baik dibandingkan natrium diklofenak Aktivitas antiinflamasi  semakin  baik  apabila  nilai IC 50 yang  didapatkan  semakin  kecil (Novika et  al., 2021).  Fraksi  n-heksan memiliki  kandungan  senyawa  kimia  yang memiliki  aktivitas  antiinflamasi  seperti triterpenoid,  flavonoid,  fenolik  dan  tanin. Menurut Hidayah et al (2021) sampel yang mengandung  senyawa  metabolit  sekunder flavonoid,  fenolik  dan  steroid/triterpenoid dapat  menghambat  denaturasi  protein sehingga  memiliki  aktivitas  antiinflamasi karena struktur senyawa tersebut mengandung  gugus  hidroksil  dan  ikatan rangkap terkonjugasi yang dapat berikatan dengan  residu  asam  amino  pada  struktur bovine  serum  albumin.  Adanya  ikatan tersebut mengakibatkan stabilnya  struktur protein  menjadi,  sehingga  jika  dipanaskan protein  yang  berikatan  dengan  senyawa aktif  dalam  ekstrak  tidak  mengalami denaturasi.

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini adalah identifikasi fitokimia pada fraksi n- heksan kulit batang C. Soulattri mengandung    alkaloid,  fenol,  tanin, flavonoid, saponin, dan triterpenoid. Fraksi n -heksana  kulit  batang C.  soulattri memiliki aktivitas antiinflamasi yang lebih baik dari natrium diklofenak.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada proyek PDWM  LPPM ULM dengan nomor SK : 023.126/UN8.2/PL/2022 yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin, H., S. Oktavia & S. Chania. (2019). Efek Toksisitas Sub Akut Fraksinasi Air  Ekstrak  Etanol  Daun  Bandotan ( Ageratum conyzoides (L.)) terhadap Beberapa  Parameter  Darah  Mencit Putih  Jantan.  Jurnal  Farmasi  Higea. 11: 166-174.
Chandra,  S.,  P.  Chatterjee.,  P.  Dey  &  S. Bhattacharya.  (2012).  Evaluation  of in vitro anti-inflammatory activity of coffee  against  the  denaturation  of protein. Asian  Pacific  Journal  of Tropical Biomedicine . 1 :178-180.
Dewatisari,  W.F.,  L.  Rumiyanti  &  I. Rakhmawati. (2017). Rendemen dan Skrining  Fitokimia  pada  Ekstrak
Daun Sanseviera sp. Jurnal Penelitian dan Terapan. 17: 197-202.
Farida,  Y.,  Rahmat,  D.,  Amanda,  A,  W.
(2018).  Uji  Aktivitas  Antiinflamasi Nanopartikel Ekstrak Etanol Rimpang Temulawak ( Curcuma xabthorriza Roxb ) Dengan  Metode Penghambatan  Denaturasi  Protein.
Jurnal Farmasi . 2 : 225-230.
Handayani, F., Apriliana, A., & Natalia, H. (2019).  Karakterisasi  dan  skrining fitokimia simplisia daun Selutui Puka ( Tabernaemontana macracarpa Jack). Jurnal Ilmiah Ibnu Sina . 1 : 49- 58.
Hidayah,  N.,  Daniel,  D.,  &  Marliana,  E.
(2021).  Aktivitas  Ekstrak  Metanol
Daun Keledang ( Artocarpus lanceifolius Roxb) Sebagai Antiinflamasi.  In Prosiding  Seminar
Kimia . 05 :126-131.
Indriyanti,  E.,  Y.  Purwaningsih  &  D.
Wigati.  (2018).  Skrining  Fitokimia dan Standardisasi Ekstrak Kulit Buah Labu  Kuning  ( Cucurbita  moschata ). Jurnal  Ilmiah  Cendikia  Eksakta.  3: 20-25.
Kanjikar,  A.  P.,  Aruna,  L.  H.,  & Londonkar,  R.  (2017).  A  novel investigation of in-vitro anti- inflammatory and antioxidant activity of Ficus krishnae . European journal of biomedical and pharmaceutical  sciences . 10 :313- 317.
Kemenkes  RI.  (2017).  Farmakope  Herbal
Indonesia  Edisi  2.  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Kemenkes RI. (2020). Farmakope Indonesia Edisi Keenam Departemen Kesehatan Republik Indoensia, Jakarta.
Luginda,  R.A.,  B.L.  Sari  &  L.  Indriani.
(2018). Pengaruh Variasi Konsentrasi Pelarut Etanol terhadap Kadar
Flavonoid  Total  Daun  Beluntas
( Pluchea  indica (L.)  Less)  dengan Metode  Microwave  –  Assisted Extraction  (MAE). Jurnal  Online
Mahasiswa  (JOM)  Bidang  Farmasi . 1: 1-9.
Maliangkay,  H.  P.,  R.  Rumondor  &  M. Kantohe.  (2019).  Skrining  Fitokimia dan  Potensi  Antidiabetes  Ekstrak Etanol  Herba  Ciplukan  ( Physalis angulata L.) pada Tikus Putih ( Rattus novergicus ) yang Diinduksi Aloksan. Jurnal Pendidikan Biologi. 4: 98-107.
Maulida, R & A. Guntara. (2015). Pengaruh Ukuran Partikel Beras Hitam ( Oryza sativa L.)  Terhadap  Rendemen Ekstrak Dan Kandungan Total Antosianin. Pharmaciana. 5: 9-16.
Novika, D. S., Ahsanunnisa, R., & Yani, D. F. (2021). Uji Aktivitas Antiinflamasi
Ekstrak  Etanol  Daun  Belimbing
Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)
Terhadap  Penghambatan  Denaturasi Protein. Stannum:  Jurnal  Sains  Dan Terapan Kimia . 1 :16-22.
Reynaldi, R., & Yani, D. F. (2021). Potensi Anti-Inflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun Cocor Bebek ( Kalanchoe pinnata L) Terhadap  Denaturasi  Protein  Secara In  Vitro. Spin  Jurnal  Kimia  & Pendidikan Kimia . 1 : 12-21.
Salamah,  N  &  E.  Widyasari.  (2015).
Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Metanol Daun Kelengkeng (Euphoria longan  (L.)  Steud.)  dengan  Metode Penangkapan Radikal 2,2’-Difenil-1-
Pikrilhidrazil. Pharmaciana. 5: 25-34. Samodra, G. (2019). Standardisasi Parameter Spesifik Dan Non Spesifik Ekstrak  Etanol  Buah  Asam  Gelugur ( Garcinia  atroviridis Griff.). Jurnal Kesehatan, Kebidanan, dan
Keperawatan. 11 :16-26.
Sa’adah,  H  &  H.  Nurhasnawati.  (2015). Perbandingan Pelarut Etanol dan Air pada  Pembuatan  Ekstrak  Umbi
Bawang Tiwai ( Eleutherine americana Merr) menggunakan
Metode  Maserasi. Jurnal  Ilmiah Manuntung . 1 : 149-153.
Sangat,  H.  M.,  Zuhud,  E.  A.  M.,  & Damayanti,  E.  K.  (2000). Kamus Penyakit dan Tumbuhan Obat
Indonesia  (Etnofitomedika) .  Pustaka Populer Obor, Indonesia.
Supriningrum,  R.,  N.  Fatimah.,  &  S.  N. Wahyuni.  (2018).  Penetapan  Kadar
Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Pacar Kuku ( Lawsonia inermis L.) berdasarkan Perbedaan Cara Pengeringan. Jurnal Ilmiah Manuntung . 2 : 156-161.
Tambunan, B.Y., S. Ginting & L.M. Lubis. 2017.  Pengaruh  Suhu  dan  Lama Pengeringan  terhadap  Mutu  Bubuk Sate Padang. Jurnal Rekayasa Pangan dan Pertanian. 5: 258-266.
Vernanda, R.Y., M.R. Puspitasari, & H.N.
Satya.  (2019).  Standarisasi  Spesifik dan  Non  Spesifik  Simplisia  Dan
Ekstrak Etanol Bawang Putih
Tunggal  31  Terfermentasi  ( Allium sativum Linn.). Journal of
Pharmacey  Science  and  Practice .
6 :74-83.
Wahidin,  W.,  Ponisri,  P.,  &  Ohorella,  S. (2020).  Sifat  Fisis  Kayu  Bintangur
( Calophyllum soulattri Brum. f.) Asal Makbon Kota Sorong. Jurnal Agrohut . 2 :54-63.
Williams,  L.  A.  D.,  A.  O.  Connar.,  L Latore., O, Dennis., S. Ringer., J. A, Whittaker., J. Conrad., B. Vogler., H. Rosner  &  W.  Kraus.  (2008).  The  in vitro anti-denaturation effects induced by natural products and non- steroidal  compounds  in  heat  treated (immunogenic) bovine serum albumin  is  proposed  as  a  screening assay  for  the  detection  of  anti- inflammatory  compounds,  without the use of animals, in the early stages of  the  drug  discovery  process. West Indian Medical Journal . 04 : 327-331.
Wirasti. (2019) . Penetapan Kadar Fenolik Total,  Flavonoid  Total,  dan  Uji Aktivitas Antioksidan EKstrak Daun Benalu Petai ( Scurrula atropurpurea Dans.)  Beserta  Penapisan  Fitokimia. Journal  of  Pharmaceutical  and Medicinal Sciences. 4 : 1-5.