PENGARUH PUPUK FERMENTASI KARAGENAN TERHADAP DIAMETER SEL

## DAN KANDUNGAN LIPID Chlorella vulgaris SKALA SEMI MASSAL

## THE EFFECT OF FERMENTED CARRAGEENAN FERTILIZER ON CELL DIAMETER AND LIPID CONTENT OF
Chlorella vulgaris IN SEMI-MASS SCALE
Alfin Tauhid*, Luthfiana Aprilianita Sari, Gunanti Mahasri Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga Kampus C, Jl. Dharmahusada Permai No. 330, Mulyorejo, Kota Surabaya, Jawa Timur 60115, Indonesia *Korespondensi: alfin.tauhid209a@gmail.com

## ABSTRACT
Chlorella vulgaris is one of  the microalgae that has the potential to be used as a raw material for biodiesel. Additionally, it is also used as a food additive and a natural feed source, so efforts to culture it are necessary to meet the availability of  the C. vulgaris stock. Environmental conditions and nutrients are factors that need to be considered. One source of  nutrients can be obtained from the fermentation of  carrageenan. Meanwhile, environmental conditions are related to the culture system used. A semi-mass culture scale was used to increase the microalgae biomass. The study used ANOVA and Duncan’s multiple distance test with four treatments and five replications, namely: P1 (control): using a mixed fertilizer of  Urea 70 ppm, ZA 40 ppm, TSP 40 ppm, EDTA 5 ppm, FeCl3 1 ppm, and NPK 5 ppm with a dosage equal to the Walne fertilizer dosage of  1 mL/L; P2: using carrageenan fertilizer fermented with a dosage of 20 ppm; P3: using carrageenan fertilizer fermented with a dosage of  30 ppm; and P4: using carrageenan fertilizer fermented with a dosage of  40 ppm. The results of  the study showed that the addition of  fermented carrageenan fertilizer obtained the best dosage of  20 ppm with a cell diameter of 2.79 µm and a lipid content of  45.02%.
Keywords: C. vulgaris , carrageenan, cell diameter, fermentation, lipid

## ABSTRAK
Chlorella vulgaris merupakan salah satu mikroalga yang berpotensi digunakan sebagai bahan baku biodiesel. Selain itu juga digunakan sebagai food additive serta sumber pakan alami sehingga perlu dilakukan upaya kultur untuk memenuhi ketersediaan stok C. vulgaris . Kondisi lingkungan serta nutrien merupakan kondisi yang perlu diperhatikan. Salah satu sumber nutrien dapat diperoleh dari hasil fermentasi karagenan. Sedangkan kondisi lingkungan berkaitan dengan sistem kultur yang digunakan. Kultur skala semi massal digunakan untuk meningkatkan biomassa mikroalga. Penelitian tersebut  menggunakan  uji  ANOVA  dan  uji  jarak  berganda  Duncan  dengan  4  perlakuan  dan  5  ulangan  yaitu  P1 (Kontrol): menggunakan pupuk campuran Urea 70 ppm, ZA   40 ppm, TSP 40 ppm, EDTA 5 ppm, FeCl3 1 ppm, dan NPK 5 ppm dengan takaran pemberian disamakan dengan dosis pupuk Walne yakni 1 mL/L, P2: menggunakan pupuk karagenan yang difermentasi dengan dosis 20 ppm, P3: menggunakan pupuk karagenan yang difermentasi dengan dosis 30 ppm, dan P4: menggunakan pupuk karagenan yang difermentasi dengan dosis 40 ppm. Hasil penelitian diperoleh bahwa penambahan pupuk karagenan yang difermentasi diperoleh dosis terbaik 20 ppm dengan hasil diameter sel 2,79 µm dan kandungan lipid 45,02%.
Kata kunci: C. vulgaris , diameter sel, fermentasi, karagenan, lipid

## PENDAHULUAN
Mikroalga adalah salah satu sumber potensial minyak nabati karena memiliki kandungan minyak yang tinggi dalam bentuk lipid (Amini dan Susilowati 2010). Salah satu mikroalga yang berpotensi sebagai penghasil lipid adalah Chlorella vulgaris (Harahap et al . 2013). C. vulgaris juga digunakan sebagai makanan kesehatan atau food additive serta pakan alami ikan (Wenno et al . 2010; Yulita 2014). Manfaat yang dimiliki C. vulgaris menyebabkan perlunya ketersediaan stok C. vulgaris dimana hal tersebut yang menjadi alasan dilakukannya upaya kultur. Kondisi lingkungan serta nutrien merupakan kondisi yang perlu diperhatikan (Mufidah et al . 2017; Mahdi et al . 2012). Kultur C. vulgaris pada umumnya menggunakan campuran pupuk kimia, dimana pupuk kimia tersebut memiliki harga yang relative mahal (Aulia et al . 2021). Sumber nutrien alternatif untuk C. vulgaris salah satunya dapat diperoleh dari karagenan. Karagenan merupakan hasil ekstraksi dari rumput laut yang memiliki kandungan antara lain karbohidrat, protein, besi, fosfor, kalsium, potasium, dan sodium (Rasyid 2003; Webber et al . 2012). Melalui proses fermentasi, karagenan dapat digunakan untuk pupuk C. vulgaris . Hasil pengujian kandungan N dan P pupuk karagenan yang difermentasi diperoleh nilai N 24,6 g/L dan P 8,4 g/L. Harapan penerapan pupuk hasil fermentasi karagenan tersebut dapat digunakan sebagai alternatif atau subtitusi terhadap pupuk kimia yang sebelumnya digunakan. Kultur skala semi massal digunakan untuk meningkatkan biomassa mikroalga yang sebelumnya telah dikultur dalam skala laboratorium (Buwono dan Nurhasanah 2018). Oleh sebab itu, penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengevaluasi pengaruh penambahan dan dosis optimal dari pupuk karagenan yang difermentasi terhadap diameter sel dan kandungan lipid C. vulgaris yang dikultur pada kondisi semi massal ( semi indoor ).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan tempat
Penelitian dilakukan pada bulan Agustus-Oktober 2022 di Laboratorium Bioteknologi dan Laboratorium Kimia
Analisis Fakultas Perikanan dan Kelautan serta Laboratorium Gizi Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Airlangga, Surabaya.

## Alat dan bahan
Peralatan yang digunakan pada penelitian tersebut antara lain adalah akuarium 19 L, rak, aerator RESUN LP60, selang aerator, batu aerator dan pipa ½ inchi, sambungan T pipa ukuran ½ inchi, tutup pipa ukuran ½ inchi, kran aerator, stop kontak, bor, selang 5/8 inchi, gergaji, gunting, water pump resun ,  profil  tank, termometer, refraktometer, pH paper, dan lux meter , erlemeyer, toples, kertas saring 10 mikron dan corong, autoclave , mikroskop optica, haemocytometer , dan laptop dengan aplikasi Proview , tabung sentrifuse, Centrifuge Hettich Rotanta 460R, oven Memmert UN 55, vortex  DWB mx-S, dan neraca analitik dengan ketelitian 0,01 g, dan cawan petri, pipet tetes, dan test tube , serta beaker glass . Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian tersebut antara lain adalah C. vulgaris , lem pipa, ties cable, bubuk karagenan, EM4 (dekomposer), Urea, ZA, TSP, EDTA, FeCl3, NPK, aquadest, alkohol 70%, Chlorin, Na-Thiosulfat, sabun, air laut, aquabides, serta methanol dan kloroform.

## Metode dan rancangan penelitian
Metode penelitian yang digunakan pada penelitian tersebut adalah eksperimental dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) 4 perlakuan dan 5 kali ulangan dengan rincian perlakuan yaitu, P1 (Kontrol): menggunakan pupuk campuran Urea 70 ppm, ZA 40 ppm, TSP 40 ppm, EDTA 5 ppm, FeCl 3 1 ppm dan NPK 5 ppm dengan takaran pemberian disamakan dengan dosis pupuk Walne yakni 1 mL/L (Irfiansyah 2015), P2: menggunakan pupuk karagenan yang difermentasi dengan dosis 20 ppm, P3: menggunakan pupuk karagenan yang difermentasi dengan dosis 30 ppm, P4: menggunakan pupuk karagenan yang difermentasi dengan dosis 40 ppm (Dini 2012). Analisa data yang digunakan adalah ANOVA yang dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan dengan selang kepercayaan 95% dan tingkat kesalahan 5% (Hidayati et al . 2020).

## Prosedur penelitian

## Persiapan wadah
Pipa sepanjang 4 m dipotong menggunakan gergaji dengan ukuran 1 m menjadi 4 buah kemudian dilubangi menggunakan bor sebanyak 20 lubang. Selanjutnya ujung pipa ditutup ujung yang satu disambungkan pada selang 5/8”. Pipa dikaitkan pada rak menggunakan ties cable . Aliran udara aerator dipecah menggunakan sambungan T 1/2”. Selang selanjutnya disambungkan pada aerator.
Sterilisasi dilakukan pada air laut, akuarium, selang aerator, kran aerator dan batu aerator. Alat-alat tersebut dicuci menggunakan sabun lalu disterilisasi menggunakan chlorin. Konsentrasi chlorin yang digunakan berdasarkan Utami (2014) adalah 60 ppm yang dinetralkan menggunakan Na-thiosulfat 20 ppm. Sterilisasi dilakukan dengan merendam peralatan yang disebutkan pada air yang diberi chlorin. Air laut diencerkan terlebih dahulu menggunakan air tawar hingga salinitasnya menjadi 25 ppt selanjutnya diberi chlorin dan diaerasi. Sterilisasi untuk alat lain seperti rak, pipa, dan aerator adalah disemprot menggunakan alkohol 70%.
Lubang-lubang tersebut kemudian dipasang kran aerator, selang aerator, serta batu aerator. Akuarium disusun pada rak masing-masing 5 akuarium, sehingga masing-masing rak terdiri dari 10 akuarium.

## Pembuatan pupuk
Pupuk yang digunakan pada penelitian tersebut terdiri dari dua jenis yakni pupuk kontrol yang terdiri dari campuran Urea 70 ppm, ZA 40 ppm, TSP 40 ppm, EDTA 5 ppm, FeCl3 1 ppm, dan NPK 5 ppm serta pupuk perlakuan yang berasal dari hasil fementasi karagenan menggunakan EM4. Persiapan pupuk kontrol dilakukan dengan menghitung gram dari masing- masing campuran pupuk kemudian pupuk dicampurkan dan dilarutkan dengan aquades hingga mencapai volume yang diinginkan.
Pembuatan pupuk perlakuan dilakukan dengan mencampurkan karagenan sebanyak 100 g dengan 1000 mL aquades kedalam toples kaca kemudian diberikan EM4 sebanyak 10% dari total volume larutan karagenan, toples selanjutnya ditutup. Campuran bahan tersebut kemudian difermentasi selama 3
minggu. Setelah 3 minggu, hasil fermentasi kemudian disaring menggunakan corong dan kertas saring 10 mikron ditampung pada tabung erlenmeyer. Pupuk yang telah disaring selanjutnya disterilisasi menggunakan autoclave dengan suhu 121°C selama 15 menit.
Kultur C. vulgaris
Bibit C. vulgaris yang digunakan pada penelitian tersebut berasal dari Balai Perikanan Budidaya Air Payau (BPBAP) Situbondo. Volume bibit C. vulgaris untuk setiap akuariumnya adalah 20% dari volume total (Dirjen Perikanan Budidaya BPBBAP Situbondo 2017). Air laut dipindahkan menggunakan bantuan water pump . Proses pemeliharaan dan pengamatan C. vulgaris dilakukan dari fase adaptasi hingga fase kematian.

## Pengukuran kualitas air
Pengukuran kualitas air dilakukan setiap hari. Parameter kualitas air yang diukur antara lain adalah suhu, pH, dan salinitas. Pengukuran suhu dilakukan menggunakan termometer dengan cara memasukkan termometer pada akuarium kemudian dilakukan pencatatan pada suhu yang tertera pada termometer. Pengukuran pH dilakukan menggunakan pH paper dengan mencocokkan warna yang diperoleh pada kertas indikator pH dengan indikator warna yang tersedia. Pengukuran salinitas dilakukan dengan refraktometer. Pengukuran salinitas dilakukan dengan cara meneteskan masing-masing sampel pada refraktometer selanjutnya diamati dan dilakukan pencatatan nilai salinitasnya.

## Pengukuran diameter sel C. vulgaris
Pengukuran diameter sel C. vulgaris dilakukan dengan cara mengambil sampel C. vulgaris dari masing-masing akuarium kemudian dimasukkan pada test tube . Masing-masing test tube diberi label perlakuan dan ulangan. Pengukuran diameter sel dilakukan di bawah mikroskop optika yang disambungkan pada laptop dengan aplikasi proview . Aplikasi proview tersebut perlu dilakukan kalibrasi terlebih dahulu untuk pengukuran yang pertama. Kalibrasi dilakukan dengan cara menyesuaikan perbesaran yang digunakan pada mikroskop dengan perbesaran yang teradapat pada aplikasi proview . Perbesaran
mikroskop yang digunakan adalah dengan perbesaran 400x dengan satuan mikron. Pengukuran dilakukan dengan menghitung rata-rata diameter sel C. vulgaris minimal 30 sel dari masing-masing sampel. Pengukuran diameter sel dilakukan setiap hari.

## Pengukuran kadar lipid C. vulgaris
Pengukuran kadar lipid C. vulgaris dilakukan dengan cara ekstrasi dalam jangka waktu dua hari sekali. Sampel yang digunakan sebanyak 20 buah sampel yang diperoleh dari masing-masing akuarium perlakuan. Ekstrasi lipid berdasarkan Febtisuharsi (2016) adalah dengan cara memasukkan 50 mL sampel pada tabung sentrifuse. Sampel disentrifuse dengan kecepatan 6000 rpm selama 10 menit, pellet yang mengendap didasar tabung diambil dan diletakkan pada cawan petri lalu dikeringkan menggunakan oven dengan suhu 80°C selama 24 jam. C. vulgaris yang telah kering disuspensikan menggunakan 1 mL aquabides. Selanjutnya ditambahkan larutan methanol 2,5 mL dan kloroform 1,25 mL kemudian di- vortex selama 2 menit. Selanjutnya, ditambahkan 1,25 mL aquabides dan 1,25 mL kloroform disentrifuse kembali dengan kecepatan 6000 rpm selama 10 menit. Lipid yang mengendap diletakkan pada cawan petri. Campuran larutan kimia yang digunakan sebelumnya dihilangkan dengan pemanasan 80°C selama 50 menit. Kadar lipid dihitung menggunakan rumus sebagai berikut (Febtisuharsi 2016).
Keterangan: Lw = Berat lipid sampel (g) Bw = Berat biomassa sampel (g)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Diameter sel C. vulgaris
Hasil uji ANOVA menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata (p>0,05) kecuali pada hari keempat. Hasil uji jarak berganda Duncan diperoleh perlakuan pupuk karagenan 20 ppm dan pupuk karagenan 30 ppm berbeda nyata (p<0,05) terhadap perlakuan pupuk kimia. Hasil diameter sel tertinggi adalah perlakuan pupuk karagenan 20 ppm dengan diameter sel 2,79 µm dilanjutkan perlakuan pupuk
karagenan 30 ppm dengan diameter sel 2,78 µm dan hasil terendah adalah perlakuan pupuk kimia dengan diameter sel 2,46 µm (Tabel 1). Berdasarkan hasil penelitian, perubahan ukuran diameter sel terus terjadi dan yang signifikan adalah pada hari keempat. C. vulgaris pada hari ketiga hingga hari keenam memasuki fase eksponensial dimana sel akan lebih aktif dalam melakukan pembelahan sel. Mikroalaga dalam fase ini memerlukan ketersediaan nutrien dan kondisi lingkungan yang optimal untuk pertumbuhannya (Sartika 2010). Sumber nutrien (nitrogen) dalam kultur mikroalga dapat diperoleh dari nitrit, nitrat, dan ammonium (Elystia et al . 2019b). Nitrat merupakan senyawa yang mudah larut dalam air sehingga lebih mudah dimanfaatkan oleh mikroalga untuk pertumbuhannya (Triastuti et al . 2011). Hasil rata-rata diameter sel yang diperoleh diduga terjadi karena ketersediaan nitrogen yang terdapat dalam lingkungan kultur kurang sesuai dengan kebutuhan C. vulgaris . Wijaya (2006) dalam Elystia et al . (2019a) menyebutkan bahwa nitrogen dalam bentuk nitrat memengaruhi pertumbuhan dan produktivitas biomassa alga karena nitrat tersebut dibutuhkan untuk pembentuk protein, lemak, dan klorofil. Hadiyanto dan Azim (2012) menyebutkan, bahwa makronutrien berperan dalam menentukan kuantitas mikroalga. Sedangkan jika terjadi nutrien (nitrogen) yang tersedia terbatas akan menyebabkan perubahan arah pertumbuhan untuk akumulasi cadangan makanan yang berakibat terjadinya peningkatan ukuran sel mikroalga. Pernyataan tersebut didukung oleh Li et al . (2020) yang menyebutkan bahwa kondisi nutrien yang terbatas pada lingkungan budidaya dapat memberikan rata-rata diameter sel mikroalga yang lebih tinggi.
Faktor-faktor kondisi yang menyebabkan diperolehnya hasil rata-rata diameter sel C. vulgaris yang fluktuatif juga dipengaruhi oleh kondisi parameter kualitas air. Sebagaimana penelitian Aprilliyanti et al . (2016) yang menyebutkan bahwa parameter kualitas air lingkungan budidaya Chlorella sp. skala semi masal memiliki pengaruh terhadap kelimpahan sel Chlorella sp. Berdasarkan penelitian Utami et al . (2012) lama waktu penyinaran terbaik adalah 18 jam pada siklus terang dan 6 jam siklus gelap. Selain itu, suhu dan salinitas juga berpengaruh terhadap terjadinya
pembelahan dan pembesaran ukuran sel C. vulgaris (Adar et al . 2016). Sedangkan pada kondisi lingkungan penelitian, intensitas cahaya, dan lama waktu penyinaran tidak bisa dibuat selalu tetap karena adanya pengaruh cuaca.
Persentase lipid C. vulgaris
Data persentase diukur pada hari kesatu, ketiga, kelima, dan ketujuh. Berdasarkan analisis ANOVA, diperoleh perbedaan nyata (p<0,05) pengaruh pemberian pupuk karagenan terhadap persentase lipid C. vulgaris kecuali pada hari pertama. Pengujian dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan untuk mengetahui perlakuan yang berbeda nyata.
Berdasarkan Tabel 2, hasil rata-rata persentase lipid tertinggi adalah perlakuan pupuk karagenan 20 ppm pada hari kelima
dengan persentase lipid 45,02% kemudian dilanjutkan dengan perlakuan pupuk karagenan 30 ppm dengan persentase 28,19%, perlakuan pupuk karagenan 40 ppm 22,78%, dan hasil terendah adalah perlakuan pupuk kimia dengan persentase 19,68%. Persentase lipid tertinggi diperoleh pada hari kelima dikarenakan kondisi kultur mendekati fase stasioner dimana pada fase tersebut mikroalga akan melakukan akumulasi cadagan makanannya dan terjadi penurunan tingkat pembelahan sel. Sebagaimana penelitian yang dilakukan Baroni et al . (2019) terhadap mikroalga Nannochloropsis salina , Chlorella sp. ( marine ), dan Haematococcus pluvialis yakni pada fase linier mikroalga tersebut mengalami penurunan tingkat pembelahan sel dan terjadi akumulasi cadangan makanan di dalam sel mikroalga.
Tabel 1. Rata-rata diameter sel C. vulgaris (µm) yang dikultur menggunakan pupuk kimia dan pupuk fermentasi karagenan Hari Pupuk Pupuk kimia Karagenan F 20 Karagenan F 30 Karagenan F 40 0 2,21±0,00 2,21±0,00 2,21±0,00 2,21±0,00 1 2,57±0,36 2,75±0,22 2,50±0,35 2,65±0,31 2 2,56±0,14 2,63±0,36 2,62±0,36 2,45±0,25 3 2,58±0,26 2,89±0,28 2,67±0,27 2,78±0,11 4 2,46±0,18a 2,79±0,13b 2,78±0,28b 2,56±0,14ab 5 2,59±0,19 2,82±0,22 2,78±0,48 2,65±0,18 6 2,73±0,22 2,74±0,27 2,90±0,33 2,86±0,37 7 2,67±0,19 2,76±0,19 2,67±0,31 2,72±0,18 8 2,70±0,39 2,76±0,42 2,65±0,37 2,94±0,21 Keterangan: Pupuk kimia: Urea, ZA, TSP, EDTA, FeCl 3 , NPK (Kontrol); Karagenan F 20: konsentrasi 20 ppm; Karagenan F 30: konsentrasi 30 ppm; Karagenan F 40: konsentrasi 40 ppm, Superskrip berbeda dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Tabel 2.  Rata-rata lipid (%) C. vulgaris yang dikultur menggunakan pupuk kimia dan pupuk fermentasi karagenan
Hari Pupuk Pupuk kimia Karagenan F 20 Kaaragenan F 30 Karagenan F 40 1 21,55±8,89 35,43±9,74 27,24±8,42 26,07±9,42 3 12,06±6,65a 32,90±7,63b 19,29±6,73a 14,49±2,41a 5 19,62±3,75a 45,02±8,05b 28,19±8,02a 22,78±2,74a 7 12,64±3,27a 39,21±4,97c 24,23±9,45b 14,99±4,00a Keterangan: Keterangan: Pupuk kimia: Urea, ZA, TSP, EDTA, FeCl3, NPK (Kontrol); Karagenan F 20: konsentrasi 20 ppm; Karagenan F 30: konsentrasi 30 ppm; Karagenan F 40: konsentrasi 40 ppm, Superskrip berbeda dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Pengujian ANOVA pada hari pertama diperoleh hasil yang tidak berbeda nyata. Kondisi yang terjadi pada fase ini adalah populasi yang belum banyak bertambah namun proses fotosintesis masih aktif berlangsung dan terjadi peningkatan ukuran sel (Dirjen Perikanan Budidaya BPBBAP Situbondo 2017). Selain itu juga terdapat kemungkinan kematian sel mikroalga apabila sel mikroalga yang dikultur tidak dapat beradaptasi dengan baik (Hadiyanto dan Azim 2012). Proses terjadinya akumulasi cadangan makanan pada mikroalga juga dipengaruhi kondisi lingkungan. Kondisi tersebut berkaitan dengan proses fotosintesis dan penyimpanan cadangan makanan yang terjadi didalam sel C. vulgaris yang dipicu oleh kondisi lingkungan yang terdiri dari nutrien dan kondisi parameter air. Hasil tersebut selaras dengan pernyataan Elystia et al . (2019b) yang menyebutkan kondisi nitrogen yang terbatas menyebabkan mikroalga akan memodifikasi jalur biosistesisnya untuk mengakumulasi lipid. Hasil penelitian tersebut berbeda dengan penelitian Febtisuharsi (2016) terkait persentase kandungan lipid dengan penambahan nutrien yang berasal dari kotoran ternak ayam, sapi, dan kambing, dimana hasil persentase lipid tertinggi adalah pada kotoran ternak ayam yang memiliki kandungan nitrogen tinggi. Selain dari ketersediaan nutrien, lama penyinaran atau fotoperiode memiliki pengaruh terhadap reaksi terang dan reaksi gelap C. vulgaris sehingga berdampak pada pembentukan cadangan makanan seperti lipid. Dimana telah diketahui bahwa proses pembentukan ATP dan NADPH terjadi pada fase terang sedangkan proses pembentukan cadangan makanan terjadi pada fase gelap (Ai 2012). Hasil penelitian yang dilakukan oleh Bahar et al . (2022) diperoleh hasil bahwa variasi lama fotoperiode memiliki dampak terhadap persentase lipid pada C. vulgaris .
Hasil pengukuran kualitas air (Tabel 3) diperoleh kisaran suhu yaitu
26-30°C, kemudian pH 7, salinitas 30-37
ppt dan intensitas cahaya berkisar 450- 910 lux. Parameter pH dan suhu berada pada kisaran normal selama masa kultur. Nilai pH optimum pertumbuhan Chlorella adalah berkisar 7-8,5 (Makmur et al . 2011). Sedangkan untuk suhu optimum berkisar 25°C namun masih memiliki batas toleransi berkisar  30-35°C  (Mufidah et al . 2017; Makmur et al . 2011). Kisaran optimum salinitas untuk C. vulgaris adalah 25-34 ppt namun masih dapat ditoleransi pada kisaran 30-40 ppt (Aulia et al . 2021; Triastuti et al . 2011). Sedangkan intensitas cahaya yang terukur selama masa kultur tidak terlalu optimal. Kisaran intensitas cahaya yang dibutuhkan untuk kultur Chlorella sp. adalah 3.000-30.000 lux (Regista et al . 2017).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, perlakuan yang diberikan menunjukkan hasil yang fluktuatif dan berbeda nyata pada hari keempat yang disebabkan oleh adanya pengaruh kondisi lingkungan dari parameter kualitas air serta ketersediaan nitrogen di dalam media kultur. Selanjutnya dampak dari ketersediaan nitrogen di dalam media kultur juga mempengaruhi kandungan lipid C. vulgaris skala semi massal yang dapat dilihat bahwa dosis terbaik pupuk yang digunakan adalah 20 ppm.

## Saran
Mengacu dari hasil penelitian yang telah dijelaskan pada bagian pembahasan dapat dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui bentuk sumber nitrogen yang terdapat di dalam kandungan pupuk karagenan yang difermentasi. Selain itu juga dapat dilakukan pengukuran terlebih dahulu terhadap kandungan karagenan sebelum dilakukan proses fermentasi sebagai perbandingan dengan hasil fermentasinya.
Tabel 3. Kisaran kualitas air selama 8 hari kultur No Parameter Hasil 1 Suhu air 26-30°C 2 pH 7 3 Salinitas 30-37 ppt 4 Intensitas cahaya 450-910 lux

## DAFTAR PUSTAKA
Adar O, Kaplan-Levy RN, Banet G. 2016. High Temperature Chlorellaceae ( Chlorophyta ) Strains from the Syrian- african Rift Valley: The Effect of Salinity and Temperature on Growth,
Morphology and Sporulation Mode. European Journal of Phycology . 51(4): 387-400.
Ai NS. 2012. Evolusi Fotosintesis pada
Tumbuhan. Jurnal Ilmiah Sains . 12(1): 28-34.
Amini S, Susilowati R. 2010. Produksi
Biodiesel dari Mikroalga Botryococcus braunii . Squalen . 5(1): 23-32. Aprilliyanti S, Soeprobowati TR, Yulianto B. 2016. Hubungan Kemelimpahan Chlorella sp. dengan Kualitas Lingkungan Perairan pada Skala Semi Masal BBBPBAP Jepara. Jurnal Ilmu Lingkungan . 14(2): 77-81. Aulia AE, Maimunah Y, Suprastyani H. 2021. Penggunaan Ekstrak Daun Lamtoro ( Leucaena leucocephala ) sebagai Pupuk dengan Salinitas yang
Berbeda terhadap Laju Pertumbuhan Biomassa  dan  Klorofil-a  pada Mikroalga Chlorella vulgaris . Journal of Fisheries and Marine Research . 5(1): 47-55.
Bahar HS, Djunaedi A, Widianingsih.
2022. Perbedaan Lama Fotoperiode terhadap Total Lipid Kultur Mikroalga Chlorella vulgaris . Journal of Marine Research . 11(1): 92-97.
Baroni EG, Yap KY, Webley PA, Scales PJ, Martin GJO. 2019. The Effect of Nitrogen Depletion on The Cell Size, Shape, Density, and Gravitational Settling of Nannochloropsis salina , Chlorella sp. ( Marine ) and Haematococcus pluvialis . Algal Research . 39: 1-10. Buwono NR, Nurhasanah RQ. 2018. Studi Pertumbuhan Populasi Spirulina sp. pada Skala Kultur yang Berbeda. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan . 10(1): 26-33. Dini W. 2012. Kombinasi Pupuk Urea dan Perasan Eucheuma sp. terhadap Populasi Nannochloropsis oculata [Skripsi]. Surabaya (ID): Universitas Airlangga. Direktorat Jendral Perikanan Budidaya Balai Perikanan Budidaya Air Payau Situbondo. 2017. Petunjuk Teknis Produksi Phytoplankton. Situbondo. Direktorat Jendral Perikanan
Budidaya Balai Perikanan Budidaya Air Payau Situbondo. 49 hlm.
Elystia S, Darmayanti I, Muria SR. 2019a. Pengaruh Variasi Konsentrasi Bead Alga Chlorella sp. dalam Flat- fotobioreaktor untuk Menyisihkan Nutrien pada Palm  Oil  Mill  Effluent (POME). Jurnal Sains dan Teknologi .
18(1): 14-20.
Elystia S, Muria SR, Pertiwi SIP. 2019b.
Pemanfaatan Mikroalga Chlorella sp. untuk Produksi Lipid dalam Media Limbah Cair Hotel dengan Variasi Rasio C:N dan Panjang Gelombang
Cahaya. Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan . 11(1): 25-43. Febtisuharsi A. 2016. Kepadatan Sel dan
Kadar Lipid Mikroalga Chlorella sp. pada Kultur Media Alternatif Kotoran Ternak [Skripsi]. Surakarta (ID): Universitas Sebelas Maret. Hadiyanto, Azim M. 2012. Mikroalga Sumber Pangan dan Energi Masa Depan . Semarang (ID): UPT UNDIP Press. Harahap PS, Susanto AB, Susilaningsih D, Rahma DY. 2013. Pengaruh Substitusi Limbah Cair Tahu untuk Menstimulasi Pembentukan Lipida pada Chlorella sp. Journal of Marine Research . 2(1): 80-86. Hidayati PA, Mubarak AS, Sudarno. 2020. The Optimal N/P Ratio of Shrimp Culture Waste Liquid Fertilizer on Growth of Chlorella vulgaris . 2nd
International Conference on Fisheries and Marine Science 26 September 2019, Surabaya, Indonesia. IOP
Conference Series: Earth and Enviromental Science.
Irfiansyah MR. 2015. Teknik Kultur Chlorella sp. Skala Massal untuk Pakan Rotifera sp. dan Starter Tambak di BBPBAP Jepara, Jawa Tengah [Skripsi]. Surabaya (ID): Universitas Airlangga. Li P, Sun X, Sun X, Tang J, Turaib A, Wang X, Cheng Z, Deng L, Zhang Y. 2020. Response of Lipid Productivity to Photosynthesis of Chlorella vulgaris Under Various Nutrient Stress Modes. Journal of Renewable and Sustainable Energy . 12: 1-13. Mahdi ZM, Titisari YN, Hadiyanto. 2012.
Evaluasi Pertumbuhan Mikroalga dalam Medium POME: Variasi Jenis Mikroalga, Medium, dan Waktu Penambahan Nutrient. Jurnal Teknologi Kimia dan Industri. 1(1):
312-319.
Makmur, Rachmansyah, Fahrur M. 2011.
Hubungan antara Kualitas Air dan Plankton di Tambak Kabupaten Tanjung Jabung Barat Provinsi Jambi. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur . 2(1): 961-968.
Mufidah  A,  Agustono,  Sudarno,  Nindarwi DD. 2017. Teknik Kultur Chlorella sp. Skala Laboratorium dan Intermediet di Balai Perikanan Budidaya Air Payau (BPBAP) Situbondo Jawa
Timur. Journal of Aquaculture and Fish Health . 7(2): 50-56.
Rasyid A. 2003. Beberapa Catatan tentang
Karagenan. Oseana . 28(4): 1-6. Regista R, Ambeng A, Litaay M, Umar MR. 2017. Pengaruh Pemberian
Vermikompos Cair Lumbricus rubellus
Hoffmeister pada Pertumbuhan
Chlorella sp. Bioma: Jurnal Biologi Makassar . 2(1): 1-8.
Sartika D. 2010. Aktivitas Antioksidan Lipid Mengandung Pigmen dan Komposisi Kimia dari Chlorella vulgaris pada
Umur Panen yang Berbeda [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Triastuti RJ, Mubarak AS, Prabandari L. 2011. Pengaruh Penambahan Pupuk Bintil Akar Kacang Tanah sebagai
Sumber Nitrogen dan Fosfor terhadap
Populasi Chlorella sp. Jurnal Ilmiah
Perikanan dan Kelautan . 3(2): 157-
163. Utami NP, Suherman YS, Haetami K. 2012. Pertumbuhan Chlorella sp. yang Dikultur pada Perioditas Cahaya yang Berbeda. Jurnal Perikanan dan Kelautan . 3(3): 237-244. Utami RA. 2014. Pengaruh Pemberian Konsentrasi Pupuk Daun Turi Putih ( Sesbania grandiflora ) terhadap
Kandungan  Klorofil  dan  Karotenoid pada Chlorella sp [Skripsi]. Surabaya (ID): Universitas Airlangga. Webber V, de Carvalho SM, Ogliari PJ, Hayashi L, Barreto PLM. 2012. Optimization of The Extraction of Carrageenan from Kappaphycus alvarezii Using Response Surfacec Methodology. Food Science and Technology ( Campinas ). 32(4): 812- 818. Wenno MR, Purbosari N, Thenu JL. 2010. Ekstraksi Senyawa Antibakteri dari Chlorella sp. Jurnal Penelitian Terapan . 10(2): 131-137. Yulita E. 2014. Pemanfaatan Limbah Cair Industri Karet Remah sebagai Media Pertumbuhan Chlorella vulgaris untuk Pakan Alami Ikan. Jurnal Dinamika Penelitian Industry . 25(1): 1-11.