## EFEK HEPATOPROTEKTOR FRAKSI TIDAK TERSABUNKAN DARI DALMS TERHADAP KONDISI STRES OKSIDATIF PADA TIKUS WISTAR
YuyunWahyuni
Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Nusa Nipa Maumere Jl. Kesehatan No. 03 Maumere Email : uyung210683@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Effect Of Hepatoprotector Fraction Understanding From Dalms On Oxidative Stress Conditions  In  Wistar  Rats . Palm  oil  fatty  acid  distillate  (POFAD)  is  a  byproduct  of  the process of refining palm oil, which still contains compounds. As a result of the increasing production  of  palm  oil  in  Indonesia  and  POFAD,  making  POFAD  has  the  potential  as  a source  of  tocotrienols,  which  can  act  as  natural  antioxidants  and  protect  the  liver  against oxidative stress. The purpose of this  study was to study the effects of hepatoprotection of the  non-atomized  fraction  of  POFAD  in  vivo  and  to  find  out  the  best  dose  of  non-soapy fraction  of  POFAD  on  MDA  levels,  SOD  of  rat  liver,  and  histopathological  features  in oxidative  stress  conditions  due  to  waste  cooking  oil  intake.  The  study  design  used  was  a Completely  Randomized  Design  (CRD)  which  was  composed  of  6  treatment  groups consisting of negative (normal), positive (indiscriminate) control groups, non-dose fraction I  (100  mg/kg  BW)  fractions,  non-soapy  fractions  dose  II  (200  mg/kg  body  weight),  non- atomic dose III (500 mg/kg body weight), the non-dose fraction (1000 mg/kg body weight) and  each  treatment  were  repeated  four times.  Observational  data obtained  were  processed statistically  with  the  ANOVA  test  and  continued  with  the  Smallest Significant  Difference Test (BNT) processed with SPSS for Windows 16 series. The results of this study indicate that  the  non-soapy  fraction  of  palm  oil  fatty  acid  distillates  has  the  ability  to  protect  the liver from organ damage to dose III, namely the administration of non-soapy fractions at a dose of 500 mg/kg body weight.
Key Words: Bioactive Compounds, Non-Draped Faction

## PENDAHULUAN
Ketahanan pangan adalah  isu global saat  ini,  di  mana  Organisasi  Pangan  dan
Pertanian (Food and Agriculture
Organisation  atau  “FAO”)  melaporkan
e-ISSN : 2715-4955                                                          Ende NTT-Indonesia p-ISSN : 2715-6613
bahwa lebih  dari  815 juta  orang mengalami kekurangan gizi kronis. Minyak  kelapa  sawit,  sebagai sebuah komoditas yang mendukung Pembangunan  Berkelanjutan   memainkan peran penting dalam menyediakan sumber pangan  dunia  baik  secara  langsung maupun  tak  langsung,  dan  akan  terus berperan  penting  dalam  menghadapi tantangan  ini.  Limbah  dari  minyak  sawit inipun  mempunyai  keunggulan  karena mengandung  vitamin  E  yang  sangat tinggi.
Dewasa  ini  permasalahan  kesehatan dan  munculnya  berbagai  macam  penyakit mendorong  banyaknya  upaya  manusia untuk mengeksplorasi penyebab munculnya  penyakit  dan  menemukan solusinya.  Pada  dasarnya  suatu  penyakit muncul  diawali  dengan  kerusakan  sel. Salah satunya disebabkan oleh terpaparoksidasi yang tinggi (stres oksidatif).
Stres  oksidatif  merupakan  suatu keadaan ketidakseimbangan antara produksi  senyawa  turunan  oksigen  dan sistem  antioksidan  tubuh  (Robbins et  al .,
1999)  Menurut  Riegger  (2008),  stres oksidatif akibat radikal bebas menyebabkan peroksidasi lemak,
rusaknya  molekul  lemak  (fosfolipid) membran sel, rusaknya DNA dan oksidasi protein.  Stres  oksidatif  akibat  radikal bebas  dapat  terjadi  salah  satunya  karena induksi  minyak  jelantah.Pada  penelitian Maulana  (2011),  induksi  minyak  jelantah secara in  vivo pada  tikus  wistar  dengan bilangan  peroksida  118  mek/kg  ternyata menimbulkan  stres  oksidatif.  Pengamatan sel  hepar  tikus  secara  histopatologi menunjukkan  bahwa  kelompok  kontrol positif yaitu kelompok dalam kondisi stres oksidatif  (pakan  standar  +  minyak jelantah)  mengalami  stres  oksidatif  yang berdampak  pada  banyaknya  sel  hepar yang mati atau mengalami nekrosis.
Vitamin E adalah salah satu antioksidan  alami  yang  terdapat  dalam bahan  pangan  terutama  berasal  dari minyak sawit, minyak biji bunga matahari,  minyak  jagung,  minyak  kedelai dan  minyak  zaitun  (Youngson,  2005). Vitamin E ini berpotensi sebagai penangkal  stres  oksidatif.  Bahan  lainyang dapat  menjadi  sumber  vitamin  E  alami adalah  distilat  asam  lemak  minyak  sawit (DALMS).
DALMS merupakan hasil samping proses  pengolahan  minyak  sawit  pada proses  deodorisasi.  Hasil  samping  proses
tersebut  masih  mengandung  vitamin  E alami  yang  terdiri  dari  tokoferol  dan tokotrienol  dengan  kadar  1%  (Lewis, 2001).  Jumlah  DALMS  yang  dihasilkan pada proses pengolahan sawit di Indonesia tahun  2007  mencapai  4,14  juta  ton (Ekonomi  dan  Bisnis,  2007  dalam Ahmadi,  2010).  Jumlah  ini  akan  terus bertambah karena produksi minyak kelapa sawit  di  Indonesia  terus  meningkat  dan pada  tahun  2011  saja  mencapai  25,2  juta ton (GAPKI, 2011). Hal tersebut menunjukkan  bahwa  keberadaan  DALMS yang melimpah berpotensi sebagai sumber vitamin E alami.
Selama ini penelitian tentang manfaat  vitamin  E  selalu  identik  dengan tokoferol,  sehingga  penelitian  tentang tokotrienol  lebih sedikit. Padahal  menurut Perricon (2008), tokotrienol dapat bekerja 40-60  kali  lebih  efektif  dalam  mencegah kerusakan akibat radikal  bebas daripada α tokoferol.  Sen et  al .  (2010)  menyatakan pula  bahwa  fraksi  kaya  tokotrienol  pada minyak  sawit  mengandung  tokotrienol hingga 70% bagian. Pemurnian vitamin E dalam penelitian Rahmawati (2010) menghasilkan  tokotrienol  dalam  fraksi kaya  tokotrienol  sebesar  21,8%,  lebih tinggi dibanding total tokoferolnya
(14,56%).  Pada  penelitian  Budin et  al . (2009)  fraksi  kaya  tokotrienol  terbukti dapat  menurunkan  stres  oksidatif  pada tikus terinduksi
streptozotocin .
Berdasarkan potensi DALMS dan tokotrienol  sebagai  antioksidan,  maka perlu dikaji  bagaimana kemampuan  fraksi kaya  tokotrienol  dari  DALMS  dalam melindungi organ hepar tikus pada kondisi stres oksidatif.
Selama  ini  belum  ada  penelitian yang  mengkaji  bagaimana  kemampuan fraksi  tidak  tersabunkan  yang  terdapat dalam DALMS yang mengandung senyawa  bioaktif  multikomponen  dan komponen  yang  paling  tinggi  adalah vitamin  E  sebagai  antioksidan  dalam melindungi organ hepar tikus pada kondisi stres  oksidatif  dilihat  dari  kajian  kadar Malondialdehid(MDA), Superoksida dismutase  (SOD)  dan  histopatologi  organ hepar.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah: Mempelajari  efek  hepatoprotektor  fraksi tidak  tersabunkan  dari  DALMS  secara in vivo dan untuk mengetahui dosis terbaikfraksi tidak tersabunkan dari DALMS  terhadap  kadar  MDA,  SOD  dari organ hepar tikus, serta gambaran
histopatologi  pada  kondisi  stres  oksidatif akibat asupan minyak jelantah

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada tahun  2018 bertempat  Laboratorium Kimia  dan  Biokimia  Pangan  Hasil Pertanian, Jurusan Teknologi Hasil Pertanian,  Fakultas  Teknologi  Pertanian, Universitas  Brawijaya.  Sedangkan  tempat pembuatan  fraksi  tidak  tersabunkan  dan analisa kimia, Laboratorium Nutrisi
Pangan, Jurusan Teknologi Hasil
Pertanian,  Fakultas  Teknologi  Pertanian,
Universitas Brawijaya, tempat
pemeliharaan tikus dan aplikasi perlakuan in  vivo ,  Laboratorium  Farmako,  Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya, tempat  pengujian  kadar  MDA  dan  SOD, Laboraturium  Anatomi  dan  Patologi,
Fakultas Kedokteran,
Universitas Brawijaya,  tempat  pengamatan  gambaran histopatologi sel hepar tikus dan Laboratorium Sentra Kimia Jurusan Kimia Universitas  Negeri  Malang.  Penelitian terdiri  dari  pembuatan  fraksi  tidak tersabunkan  dan  pengujian  kemampuan hepatoprotektor  fraksi  tidak  tersabunkan secara in  vivo .  Rancangan penelitian  yang
digunakan adalah Rancangan Acak
Lengkap (RAL). A. Pembuatan Fraksi
Tidak

## Tersabunkan
Pada  tahap  ini  dilakukan  pada DALMS  untuk  memisahkan  asam  lemak bebas dari fraksi tidak tersabunkan. Proses pembuatan  Fraksi  Tidak  Tersabunkan dilakukan  dengan  proses  saponifikasi mengacu  pada  penelitian  Muchlisiyah (2012)  dimana  Fraksi  Tidak  Tersabunkan ini  akan  dianalisa  kandungan  bioaktifnya. Langkah-langkah saponifikasi adalah sebagai berikut:
 DALMS sebanyak 100 g dimasukkan ke  dalam  erlenmeyer  2  L  bertutup karet.
 Etanol  sebanyak  883  ml,  5  g  asam askorbat  dan  60  ml  KOH  50%  (b/v) ditambahkan pada erlenmeyer 2 L.
 Pencampuran dilakukan menggunakan magnetic stirer .
 Erlenmeyer dipanaskan dalam waterbath suhu  70 o C  selama  32 menit.
 Setelah  pemanasan  selesai,  campuran reaksi  dipindahkan  ke  dalam  corong pemisah  dan  didinginkan  pada  suhu kamar.
 Sebanyak  1500  ml  heksana  dan  2000 ml  akuades  ditambahkan,  kemudian dilakukan  pengocokan  lambat  dan didiamkan selama ± 1 jam.
 Lapisan  air  dibawah  mengandung fraksi tersabunkan dan lapisan
heksana  di  bagian  atas  mengandung fraksi tidak tersabunkan.
 Heksana  dipisahkan  dari  fraksi  tidak tersabunkan  dengan  menggunakan evaporasi  vakum  dan  dihasilkan fraksi tidak tersabunkan bebas pelarut.
B. RancanganPercobaan
Tikus Rattus  norvegicus jantan setelah  diadaptasikan  dibagi  menjadi  6 kelompok  masing-masing  terdiri  dari  4 ekor tikus. Induksi peroksidasilipid dilakukan  dengan  memberikan  asupan minyak  jelantah  dengan  tingkat  oksidasi yang  diukur  dengan  bilangan  peroksida 116  mek/kg.  Minyak  jelantah  diberikan dengan  dosis 2  ml/hari  setiap hari dengan disonde  selama  masa  adaptasi  dan percobaan.  Masa  adaptasi  dilakukan selama  7  hari.  Tikus  di  beri  fraksi  tidak tersabukan dengan  dosis  berfariasi  selama 28  hari  percobaan  dengan  cara  disonde. Selama  masa  adaptasi  dan  percobaan, tikus diberi pakan jenis pulp susu. Adapun
jenis  perlakuan  yang  dilakukan  adalah sebagai berikut:
K1 :  kelompok  tikus  tanpa  diberi minyak jelantah
K2 :  kelompok  tikus  diberi  minyak jelantah (FTT dosis 0 mg/kg bb)
K3 :  kelompok  tikus  diberi  minyak jelantah + FTT dosis100 mg/kg bb K4 :  kelompok  tikus  diberi  minyak jelantah + FTT dosis200 mg/kg bb K5 :  kelompok  tikus  diberi  minyak jelantah + FTT dosis 500 mg/kg bb K6 :kelompok  tikus  diberi  minyak jelantah  +  FTT  dosis  1000  mg/kg bb
Pelaksanaan penelitian dilakukan dalam 2 tahap yaitu:

## Saponifikasi
Saponifikasi dilakukan pada DALMS  untuk  memisahkan  asam  lemak bebas  dengan  fraksi  tidak  tersabunkan. Tahapan proses saponifikasi adalah sebagai  berikut:  100g  DALMS,  800  ml etanol,  4  g  asam  askorbat,  60  ml  KOH 40%  (b/v)  dipanaskan  dalam waterbath suhu  69,1 0 C  selama  38  menit.  Setelah pemanasan  selesai  larutan  dimasukkan kedalam  corong  pemisah,  kemudian  1500 ml  heksana  dan  2000  ml  akuades ditambahkan  ke  dalam  corong  pemisah
dan  dikocok.  Larutan  didiamkan  sampai terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan  air dibawah  mengandung  fraksi  tersabunkan dan  lapisan  heksana  di  bagian  atas mengandung  fraksi  tidak  tersabunkan. Fraksi  tersabunkan  dibuang,  sedangkan fraksi tidak tersabunkan diambil.
Tahap In Vivo
Tahap in  vivo dilakukan  setelah proses pembuatan fraksi tidak tersabunkan selesai.  Tahap  ini  meliputi  aklimatisasi (masa  adaptasi)  selama  1  minggu  dan  4 minggu (28 hari) penelitian utama dengan diet  normal,  induksi  minyak  jelantah  dan pemberian  fraksi  tidak  tersabunkan,  serta pengujian bio-assay terhadap  organ  hepar tikus  untuk  menentukan  kadar  MDA, SOD,  dan  pengamatan  histopatologi  sel hepar.
Tahap in  vivo yang  digunakan adalah True Experimental . Dengan penelitian True  Experimental ini,  peneliti bertujuan  mengetahui  suatu  gejala  atau pengaruh  yang  timbul  sebagai  akibat  dari adanya  perlakuan  tertentu.  Ciri  khusus dari  penelitian  eksperimen  adalah  adanya percobaan atau trial. Percobaan itu berupa perlakuan  atau  intervensi  terhadap  suatu variabel. Dari perlakuan tersebut diharapkan  terjadi  perubahan  terhadap
variabel  yang  lain  (Notoatmodjo,  2005). Sampel  penelitian  dibagi  menjadi  3 kelompok , yaitu:
1. Kelompok  control  positif  (kondisi stresoksidatif)
Pemberian  diet  normal  +  minyak  jelantah 2 ml secara oral selama 4 minggu
2. Kelompok control negatif
Pemberian  diet  normal  saja  selama  4 minggu
3. Empat  (4)  Kelompok  perlakuan (kondisi  stresoksidatif  +  fraksi  tidak tersabunkan).
Pemberian  diet  normal  +  minyak  jelantah 2 ml + pemberian fraksi tidak tersabunkan dosis  1,2,3,  dan  4  (masing-masing dilarutkan dengan minyak goreng sebanyak1  ml)  secara  oral  selama  4 minggu. Jumlah sampel tikus tiap kelompok yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  4  ekor  sehingga jumlah total tikus adalah 24 ekor. Adapun alur tahap in vivo dijelaskan pada Gambar 1 dan 2.  Pemberian pakan disertai dengan air  minum  yang  diberikan  secara ad libitum satu kali setiap hari per ekor tikus.
Kebutuhan  makanan  tikus  dewasa  per ekor setiap hari adalah 30 gram (Tsalissavrina, 2006).
Gambar 1. Pemberian Minyak Jelantah Gambar 2. Pemberian Pakan
Penambahan minyak
jelantah sebanyak  2  ml  (fraksi  tidak  tersabunkan) yang  telah  dilarutkan  dalam  minyak goreng  sebanyak  1  ml  diberikan  secara oral  ( force  feeding )  menggunakan  sonde atau gastrointestinal  tube (tidak  melebihi kapasitas  maksimal  lambung tikus  yaitu 5 ml).  Minyak  jelantah  yang  dipakai  dalam penelitian ini adalah minyak jelantah yang diperoleh  dari  pedagang  lalapan  ayam  di kota  Malang  dan  diinduksikan  kepada
tikus  sebagai  sumber  radikal  bebas  yang bertujuan untuk menciptakan kondisi stres oksidatif.
Sampel minyak jelantah yang diinduksikan  merupakan  minyak  jelantah yang  berbeda  namun  merupakan  minyak bekas  untuk  menggoreng  jenis  makanan yang sama  yaitu ayam goreng. Pemberian minyak  jelantah  secara  oral  dilakukan pada  pagi  hari  (pukul  09.00)  sedangkan pemberian fraksi tidak tersabunkan
Besarnya dosis fraksi tidak tersabunkan  yang  akan  diberikan  pada hewan  coba,  dianalogikan  dengan  dosis terhadap  manusia.  Pemberian  fraksi  tidak tersabunkan  pada  tikus  didasarkan  RDA ( Recommended  Daily  Allowance )  untuk manusia Eropa sebesar 500 mg (EFSA,2008) dan 500-2500 mg/orang/hari (USANA,  1999).  Dengan  asumsi  berat badan  manusia  50  kg,  maka  kebutuhan vitamin  E  adalah  10-50  mg/kg  BB.  Dari hasil  penelitian  sebelumnya  (Puspitasari, 2012), kadar vitamin E dalam  fraksi tidak tersabunkan adalah 1,96%, maka konversinya  adalah  Kebutuhan  minimal vitamin E manusia = 10 mg/kg BB Fraksi tidak tersabunkan  yang dibutuhkan agar dosis minimal tercukupi:
F = 100% 1,96% × 10 𝑚𝑔 𝑘𝑔 𝐵𝐵 = 510,20 𝑚𝑔 𝑘𝑔 𝐵𝐵
Berdasarkan  perhitungan  tersebut, aplikasi  pada  tikus  dirancang  dengan memberikan  dosis  rendah,  sedang,  dan tinggi  untuk  mengetahui  pengaruh  variasi dosis  yaitu  sebesar  100,  200,  500  dan 1000 mg/kg BB, di mana pemberian dosis
pada  tikus  dengan  berat  rata-rata  200 g/ekor  (0,2  kali  dosis  manusia)  menjadi 20, 40, 100 dan 200 mg/BBT (berat badan tikus).  Jadi,  dosis  perlakuan  tersebut dideskripsikan sebagai berikut:
Dosis  I  =  100  mg/kg  BB  (20  mg  fraksi tidak tersabunkan/tikus/hari)
Dosis  II  =  200  mg/kg  BB  (40  mg  fraksi tidak tersabunkan /tikus/hari)
Dosis III = 500 mg/kg BB (100 mg fraksi tidak tersabunkan /tikus/hari)
Dosis  IV  =  1000  mg/kg  BB  (200  mg fraksi tidak tersabunkan /tikus/hari)

## ANALISIS DATA
Data  pengamatan  yang  diperoleh diolah secara statistic dengan uji ANOVA dan  dilanjutkan  dengan  Uji  Beda  Nyata Terkecil (BNT) yang diolah dengan SPSS for Windows seri 16. Data hasil penelitian berupa preparat selhepar diamati histopatologi  secara  mikroskopis  dan dianalisa  menggunakan  metode  analisa skala  kerusakan  hati  secara  kualitatif dengan  metode  Sun et  al. (1999)  dan didukung  dengan  analisa  kuantitatif  yang berasal  dari  perhitungan  sel  hati  yang terdegenerasi.
dilakukan  pada  sore  hari  (pukul  16.00). Hal  ini  dilakukan  untuk  memaksimalkan metabolisme  hewan  uji  terhadap  minyak jelantah dan fraksi tidak tersabunkan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Distilat  Asam  Lemak  Minyak  Sawit
Bahan baku yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  distilat  asam  lemak
minyak  sawit  (DALMS)  yang  merupakan hasil  samping  pemurnian  minyak  kelapa sawit pada tahap deodorisasi.
Tabel  1.  Data  Hasil  Analisa  Distilat  Asam  Lemak  Minyak  Sawit  dan  Fraksi  Tidak
Tersabunkan Karakteristik DALMS FTT Kadar asam lemak bebas (%) 87,83 1,37 Bilangan peroksida (mek/kg) 1,53 12,18 Bilangan anisidin 6,92 10,35 Bilangan total oksidasi 9,98 34,71 Sumber : Muchlisyiyah (2013)
Superoksida  Dismutase  (SOD)  dalam

## Organ Hepar
Pengukuran  kadar  SOD  dari  organ hepar  tikus  yang  dilakukan  pada  minggu akhir  perlakuan.  Rerata  kadar  SOD  dari organ  hepar  tikus  pada  kelompok  kontrol negatif  adalah  23,78  unit/ml,  kelompok kontrol  positif  adalah  11,35  unit/ml, kelompok dosis I 16,12 unit/ml, kelompok dosis II 18,23 ml/unit, kelompok dosis III 22,44  unit/ml,  dan  kelompok  dosis
IV19,43  unit/ml.  Kadar  SOD organ  hepar yang  terkecil  adalah  pada  kelompok kontrol  positif  dan  yang  terbesar  pada kelompok kontrol negatif.
Hasil  uji  statistik  ragam  (ANOVA) menunjukkan  hasil  bahwa  faktor  jenis perlakuan  memberikan  pengaruh  yang nyata (α=0,05) terhadap kadar SOD organ hepar  tikus.  Berdasarkan  hasil  tersebut perlu  dilakukan  uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT).
Tabel 2. Rerata Kadar SOD Organ Hepar pada Berbagai KelompokPerlakuan
Jenis Perlakuan Kadar SOD (unit/ml) Kontrol negatif (normal) Kontrol positif (stres oksidatif) Dosis I (100 mg/kg BB) Dosis II (200 mg/kg BB) Dosis III (500 mg/kg BB) Dosis IV (1000 mg/kg BB) 23,78 e 11,35 a 16,12 bc 18,23 bc
22,44 d 19,43 cd
Keterangan: Rerata dengan notasi yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (p=0,05)
Hasil uji lanjut menunjukkan bahwa terdapat perbedaan nyata antara kelompok kontrol  negatif  dengan  kontrol  positif, jenis  perlakuan  dosis  I,II,  III  dan IV.Namun kelompok kontrol negatif tidak berbeda  nyata  dengan  jenis  perlakuan dosis  III  dan  nilai  antara  perlakuan  yaitu dosis  I  dan  II  tidak  berbeda  nyata  pula. Rerata kadar SOD dari perlakuan dosis III berbeda  nyata  dengan  jenis  perlakuan yang  lain  dengan  nilai  tertinggi.  Kondisi tersebut    dapat  terjadi  akibat  pengaruh konsumsi  pakan,  metabolisme  tubuh,  dan efektivitas  kerja  antioksidan  dari  vitamin E.  Hal  ini  berkaitan  dengan  pernyataan Zidenberg  (1991)  yang  menyebutkan bahwa  aktivitas  SOD  dipengaruhi  oleh status diet dan faktor lingkungan.
Malondialdehid  (MDA)  dalam  Organ Hepar
Berdasarkan hasil pengukuran kadar MDA  dari  organ  hepar  tikus  yang dilakukan  sesudah  4  minggu  perlakuan. Rerata kadar MDA dari organ hepar tikus pada  kelompok  kontrol  negatif  adalah 0,36  ng/ml,  kelompok  kontrol  positif adalah  0,67  ng/ml,  kelompok  dosis  I  0,55 ng/ml,  kelompok  dosis  II  0,50  ng/ml, kelompok  dosis  III  0,39  ng/ml,  dan kelompok  dosis  IV0,47  ng/ml.  Kadar MDA  organ  hepar  yang  terkecil  adalah pada  kelompok  negatif  dan  yang  terbesar pada kelompok kontrol positif. Kelompok perlakuan pemberian fraksi tidak tersabunkan  dosis  I,  II, III,  dan  IV  secara umum  menunjukkan  kadar  MDA  organ hepar  yang  lebih  rendah  dibanding kelompok kontrol positif.
Hasil  uji  statistik  ragam  (ANOVA) menunjukkan  hasil  bahwa  faktor  jenis
perlakuan  memberikan  pengaruh  nyata (α=0,05)  terhadap  kadar  MDA  organ hepar  tikus.  Berdasarkan  hasil  tersebut
perlu  dilakukan  uji  lanjut  Beda  Nyata Terkecil (BNT).
Tabel 3. Rerata Kadar MDA Organ Hepar pada Berbagai KelompokPerlakuan
Jenis Perlakuan Kadar MDA (ng/ml) Kontrol negatif (normal) Kontrol positif (stres oksidatif) Dosis I 100 mg/kg BB) Dosis II (200 mg/kg BB) Dosis III (500 mg/kg BB) Dosis IV (1000 mg/kg BB) 0,36 a 0,67 d 0,55 c 0,50 c
0,39ab
0,47 bc
Keterangan: Rerata dengan notasi yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (p=0,05)
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut,  dapat diketahui  bahwa  kadar  MDA  kelompok kontrol  negatif  tidak  berbeda  nyata dengan  dosis  III.  Kadar  MDA  dosis  I,  II dan  IV  pun  selisihnya  tidak  terlalu  jauh. Sedangkan  kadar  MDA  pada  kelompok perlakuan  yang  lain  yaitu  kontrol  positif berbeda  nyata  dengan  perlakuan  yang lainnya.  Kadar  MDA  organ  hepar  pada kelompok  kontrol  positif  paling  tinggi dengan  notasi  d  dan  paling  berbeda  nyata dengan  perlakuan  yang  lain.  Hal  ini mengindikasikan  tingginya  kondisi  stres oksidatif  akibat  induksi  minyak  jelantah sehingga  terjadi  akumulasi  produk  hasil peroksidasi  lipid  dalam  organ  yang  salah
satunya malondialdehid. Tidak ada asupan antioksidan dari luar tubuh untuk membantu  kerja  enzim  antioksidan  alami dalam tubuh yang bekerja berat.
Adapun  rerata  kadar  MDA  organ hepar  untuk  kelompok  perlakuan  yang paling  rendah  terdapat  pada  dosis  III dibanding pemberian fraksi tidak tersabunkan dosis lain. Hal ini mengindikasikan  bahwa  pada  dosis  fraksi tidak  tersabunkan  sebesar  500  mg/kg  BB dapat  menurunkan  kadar  MDA  organ hepar  lebih  efektif  dibanding  dosis  yang lainnya.

## Morfologi Sel Hepar
Pengamatan  histopatologi  sel  hepar pada  penelitian  ini  dimaksudkan  untuk mengetahui  pengaruh  pemberian  fraksi tidak  tersabunkan  dari  DALMS  terhadap kondisi  stres  oksidatif  dengan  melihat tingkat  kerusakan  sel  hepar.  Menurut Robbins et  al .  (1999),  hepar  merupakan organ  yang  dalam  kondisi  tertentu  dapat mengalami  akumulasi  substansi  hasil metabolisme  seperti  lemak,  karbohidrat, dan  protein  secara  abnormal.  Akumulasi ini  terjadi  secara  intraseluler  dan  bersifat reversible pada  kondisi  akumulasi  yang belum parah.
Secara umum gambaran histopatologi  menunjukkan  jaringan  hati tikus  dari  semua  kelompok  perlakuan masih dapat diamati komponen- komponennya  dengan  jelas.  Lobulus  hati masih  teramati,  vena  sentral  juga  terlihat dikelilingi  oleh  sel-sel  hepatosit  yang tersusun  secara  radial  dan  masih  teratur. Hal  yang  membedakan  antara  kondisi jaringan  satu  dengan  yang  lainnya  adalah terjadi  perbedaan  kerapatan  susunan  dari sel-sel  hati,  adanya  perbedaan  warna
secara  umum,  dan  perbedaan  ukuran  inti sel  yang  nampak.  Selain  itu  tidak ditemukan  adanya  ciri-ciri  kematian  sel. Kematian  sel  disebut  juga  nekrosis dimana ciri-cirinya adalah terjadi  lisis sel, pengerutan  inti  sel,  penampakan  sel  yang sangat pucat, bahkan hingga menghilangnya  inti  sel  (Robbins et  al ., 1999).
Skala Kerusakan Hepar
Sun et al . (1999), dalam penelitiannya  mengkaji  induksi  etanol sebagai  sumber  stres  oksidatif  dan pengaruhnya  terhadap  morfologi  jaringan hati  tikus  menggunakan  skala  kualitatif (1-5) untuk menentukan tingkat kerusakan sel  hepar.  Skala  tersebut  menunjukkan seberapa besar perubahan struktur histologi  dari  jaringan  hepar  dan  dengan skala tersebut dilakukan analisis statistik.
Jika  dilakukan  perbandingan  hasil pengamatan  histopatologi  sel  hepar  pada penelitian  ini  dengan  menggunakan  skala kerusakan hati  menurut Sun et  al . (1999), maka  histologi  jaringan  hepar  tikus  dari masing-masing  perlakuan  dapat  diberi skala sesuai dengan tingkat kerusakannya.
Tabel 4. Skala Kerusakan Hati pada Berbagai Kelompok Perlakuan Jenis Perlakuan Skala Kerusakan Kontrol negatif (normal) Kontrol positif (stres oksidatif) Dosis I (100 mg/kg BB) Dosis II (200 mg/kg BB) Dosis III (500 mg/kg BB) Dosis lV (1000 mg/kg BB) 1 2 2 1 1 2
Pendeskripsian  kelompok  perlakuan dengan menggunakan skala kerusakan hati berdasarkan  metode  Sen et  al .  (1999), ternyata menunjukkan  bahwa tidak terjadi variasi  perubahan  morfologi  jaringan  hati dari keenam kelompok perlakuan.
Kerusakan  terparah  hanya  pada  tahap skala 2, tidak ada tanda nekrosis,  maupun steatosis  atau  akumulasi  lemak  dalam jaringan. Hal tersebut menandakan  bahwa perlakuan  stres  oksidatif  pada  penelitian ini  hanya  memberikan  efek  cedera sublethal  atau  cedera reversible pada jaringan  hati.  Namun  ada  indikasi  bahwa perlakuan pemberian konsentrat vitamin E pada  beberapa  kelompok  menyebabkan perbaikan  kondisi  sel  atau  bersifat melindungi  sel  dibanding  pada  kelompok stres  oksidatif  (kontrol  positif).  Hal  ini didasarkan pada literatur yang menyatakan bahwa cedera reversible tidak
menyebabkan  kematian  sel  dan  sering disebut  cedera  sublethal,  dimana  bila stimulusnya  dihentikan  maka  sel  akan kembali pulih seperti sebelumnya (Sudiono, 2003).
Perhitungan Sel Hepar Terdegenerasi Oleh karena analisa deskriptif kualitatif  pada  pengelompokkan  skala kerusakan  hati  masih  sangat  umum  dan kurang  dapat  memberikan  hasil  yang terlihat nyata, maka dilakukan pendekatan lain untuk mendukung deskripsi yang ada. Pada  gambaran  histopatologi  sel  hepar berbagai  kelompok  pada  penelitian  ini terlihat  adanya  fenomena  degenerasi  sel, dimana  terlihat  jelas  pada  kelompok kontrol  positif,  dimana  ada  area  jaringan yang tersusun atas sel-sel dengan inti yang tampak  membesar  dibanding  yang  lain, berwarna  agak  pucat  dengan  tepian  inti yang pudar, dan warna dari sitoplasmanya
lebih muda. Ciri-ciri tersebut
mengindikasikan  terjadinya  degenerasi hidropik.
Pembengkakan  sel  terjadi  jika  sel tidak  mampu  untuk  mempertahankan kesimbangan  ion  pada  lingkungan  sel. Peristiwa  ini  merupakan  manifestasi  awal dari  semua  bentuk  cedera  pada  sel. Degenerasi  hidropik  merupakan  efek jangka  panjang  dari  pembengkakan  sel yang  ditunjukkan  oleh  akumulasi  air dalam jumlah besar. Degenerasi memberikan  efek  penampakan  sel  yang membesar (Robbins et al ., 1999). Eroschenko  (2010)  juga  menambahkan bahwa degenerasi hidropik akan menyebabkan  akumulasi  cairan  pada sitosol, retikulum endoplasma, dan pembengkakan  mitokondria.  Pada  proses ini sitoplasma sel menjadi berwarna muda dan inti sel membengkak.
Setelah  mengetahui  bahwa  terjadi fenomena pembengkakan sel yang berlanjut  pada  degenerasi  hidropik,  maka dilakukan penghitungan terhadap sel yang menunjukkan  ciri-ciri  degenerasi  pada setiap  preparat  jaringan  hati  dari  berbagai perlakuan. Penghitungan  sel terdegenerasi dilakukan  pada  tiap  lapangan  pandang  di bawah  pengamatan  mikroskop.  Pada  satu preparat diambil 15 lapangan pandang lalu dihitung  rerata  jumlah  sel  terdegenerasi tiap perlakuan.
Hasil  uji  statistik  ragam  (ANOVA) menunjukkan hasil bahwa faktor perlakuan  pemberian  tambahan  pakan memberikan  pengaruh  nyata  (α=0,05) terhadap jumlah sel hepar tikus terdegenerasi.  Oleh  karena  itu,  dilakukan uji lanjut DMRT.

## Tabel 5. Rerata Sel Hepar Terdegenerasi pada Berbagai KelompokPerlakuan
Jenis Perlakuan Jumlah sel per lapangan pandang Kontrol negatif (normal) Kontrol positif (stres oksidatif) Dosis I (100 mg/kg BB) Dosis II (200 mg/kg BB) Dosis III (500 mg/kg BB) Dosis IV (1000 mg/kg BB) 0,56 a 4,07 d 2,20 c 1,36 b 3,93 d
2,49 c
Keterangan: Rerata dengan notasi yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (p=0,05)
Hasil  dari  uji  lanjut  menunjukkan bahwa jumlah sel hepar terdegenerasi dari perlakuan pemberian fraksi kaya tokotrienol  dengan  berbagai  dosis  saling berbeda nyata. Jumlah sel hepar terdegenerasi pada perlakuan dosis I lebih kecil dibanding kontrol positif, sedangkan untuk  perlakuan  dosis  II  lebih  kecil dibanding  dosis  I.  Namun  pada  perlakuan dosis III jumlah sel terdegenerasi meningkat  dan  tidak  berbeda  nyata dengan  kontrol  positif  yang  merupakan perlakuan stres oksidatif saja.
Menurut Sen et al . (2010), tokotrienol  mampu  melindungi  membran sel  dengan  melindungi  komponen  PUFA ( Polyunsaturated  Fatty Acid ) pada bagian lipid  membran  dari  serangan  radikal bebas.  Terlebih  lagi  tokotrienol  mampu disimpan  dalam  tubuh  dan  memiliki spesifitas antioksidan pada jaringan (Yamashita et  al .,2002).  Namun  pada dosis  yang  berlebihan  diduga  tokotrienol dapat  teroksidasi  apabila  gugus  hidroksil pada  α-tokotrienol  dalam  keadaan  bebas dan  sama  halnya  dengan  α-tokoferol (Hamm dan Hamilton, 2000).

## KESIMPULAN
Kesimpulan  penelitian  ini  adalah Distilat  asam  lemak  minyak  sawit  diolah menjadi  vitamin  E  kaya  tokotrienol. Pemberian  fraksi  kaya  tokotrienol  dari DALMS  dapat  memberikan  perlindungan pada tikus terhadap kondisi stres oksidatif. Jenis  perlakuan  memberikan  pengaruh yang nyata (α=0,05) terhadap kadar MDA dan  SOD,  aktivitas  katalase  dari  serum darah.  Faktor  waktu  pengambilan  sampel berpengaruh yang nyata (α=0,05) terhadap kadar  MDA  dan  SOD  serum  darah. Vitamin E kaya tokotrienol yang diperoleh dari DALMS mempunyai aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  dan sebagai  antioksidatif  secara  in  vivo  yang dapat mencegah strees oksidatif pada tikus dengan  menurunkan  kadar  MDA  serum darah  dan  meningkatkan  aktivitas  enzim SOD.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  disampaikan kepada  Ibu  Dr.  Teti  Estiasih,  S.TP,  MP dan Ibu Dr. Widya Dwi Rukmi Putri, STP, MP dari Universitas Brawijaya Malang

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmadi,  K  dan  T.  Estiasih.  2011. Kristalisasi  Pelarut  Suhu  Rendah
pada Pembuatan Fraksi Kaya Vitamin E Mengandung Tokotrienol
dari  Distilat  Asam  Lemak  Minyak
Sawit. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, Vol. XXII No.2.
Eroschenko  VP.  2010.  Atlas  Histologi  di Fiore  dengan  Korelasi  Fungsional Edisi 11. Jakarta: EGC. Hlm: 324-6,
331, 342. Gabungan Pengusaha Kelapa Sawit
Indonesia,  2011.  Industri  Minyak
Sawit  Indonesia  Menuju  Tahun 2050. Bogor: PAPSI. Maulana, Hafiz I. 2011. Efek Antioksidan Effervescent Rosella Ungu
( Hibiscus  sabdariffa  L. )  terhadap Kondisi  Stres  Oksidatif  pada  Tikus Wistar   ( Rattus norvegicus ).
Skripsi. FTP-ITP UB. Malang.
Muchlisyiyah, Jhauharotul. 2013. Karakteristik Senyawa Bioaktif Distilat Asam  Lemak Minyak Sawit
(DALMS)  dari  Beberapa  Industri Pemurnian  serta  Peningkatan  Skala
Saponifikasi  pada  Separasi  Fraksi Tidak  Tersabunkan  DALMS.  Tesis Teknologi  Hasil  Pertanian.  Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya.
Norhidayah,  Baharin  B.S,  Hamed  M,  Zaidul
I.S.  2012.  Squalene  Recovery  from Fatty Acid Distillate Using Supercritical Fluid Extraction .
International  Food  Research  Journal
19(4): 1661-1667 (2012)
Posada,  L.,  R.  et  al,.  2012.  Extraction  of tocotrienols  from  palm  fatty  acid distillates  using  molecular  distillation. Separation and Purification Technology 57 (2007) 220–229
Puspitasari,  R.  2013.  Optimasi  Destilat
Asam Lemak MinyakSawit
(DALMS)  pada  Separasi  Fraksi
Tidak  Tersabunkan  Mengandung
Senyawa  Bioaktif  Multi  komponen. Skripsi. Universitas Brawijaya
Malang.
Riegger, C. 2008. Genistein.
http://www.phytochemicals.info.
Diakses tanggal12 September 2013.
Sen,C.K  ,  Cameron  R.,  dan  Savita  K. 2010.  Palm  Oil–Derived  Natural
Vitamin  E  a-Tocotrienol  in  Brain
Health  and  Disease.  Journal  of  the
American  College  of  Nutrition. 29(3): 314S–323S (2010).