e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume I No 1 Oktober 2012 ISSN: 2302-3600
EFEKTIFITAS EKSTRAK DAUN Rhizophora mucronata DALAM

## MENGHAMBAT PERTUMBUHAN
Aeromonas salmonicida
DAN Vibrio harveyi
EFECTIVITY OF Rhizophora mucronata LEAF EXTRACT TO INHIBIT
Aeromonas salmonicida AND Vibrio harveyi
Anisa Suciati * , Wardiyanto* dan Sumino †

## ABSTRACT ‡
Infectious  diseases  lead  to  reducing  aquaculture  productivity.  The  using  of chemical antibiotic was avoided since their negative effect was known, i.e. created resistant  bacteria,  contaminating  environment  and  fish  meat.  The  purpose  of  the research is to find the active compound from Rhizophora mucronata leaf and their activity to inhibit pathogenic bacteria Aeromonas salmonicida and Vibrio harveyi .
Extraction procedure conducted by using maceration technique to extract type of mangrove  leaf  (tip,  main  leaf,  dried  leaf),  and  organic  solvent  (hexan, ethylacetate, methanol). The result of this research showed that active compound from Rhizopra  mucronata give  negative  response  inhibiting Aeromonas salmonicida while  postif  to Vibrio  harveyi .  The  tip  of Rhizophora  muncronata leaf  is  more  effective  to  inhibit  pathogenic  bacteria,  and  ethylacetate  is  the  best solvent  to  extract Rhizophora  muncronata leaf.  Lethal  concentration  (LC-50) from Rhizopra macronata is 200 ppm.
* Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung
† Stasiun Karantina Ikan Panjang Lampung
‡ Corresponding Author : jrtbp@yahoo.com

## Pendahuluan
Hambatan  yang  sering  dihadapi  oleh pembudidaya  ikan  adalah  timbulnya penyakit.
Banyak faktor yang menyebabkan timbulnya penyakit diantaranya  lingkungan  yang  buruk, virus,  dan  bakteri.  Penularan  penyakit yang  disebabkan  oleh  bakteri  dapat menyebabkan  kerugian  yang  cukup besar, bahkan kadang dapat menyebabkan  proses  budidaya  terhenti (Feliatra, 1999). Selama ini pencegahan terhadap serangan bakteri pada
umumnya dilakukan dengan pemberian antibiotik.  Akan  tetapi,  penggunaan antibiotik  ternyata  dapat  menimbulkan efek  samping  bagi  patogen  itu  sendiri maupun terhadap ikan  yang dipelihara. Pemberian  antibiotik  secara  terus menerus dapat menyebabkan organisme  patogen  menjadi  resisten dan  lebih  berbahaya.  Selain  itu,  residu dari antibiotik dapat mencemari lingkungan perairan yang mengakibatkan  kualitas  air  menjadi turun (Nanin, 2011).
Salah  satu  alternatif  yang  dapat digunakan  adalah  bahan  aktif  dari mangrove .  Disamping jumlahnya yang melimpah, mangrove juga telah banyak dimanfaatkan sebagai obat-obatan alamiah.  Beberapa  spesies mangrove bahkan secara tradisional telah digunakan  sebagai  bahan  insektisida dan  pestisida  alami  (Hery,  2004). Tumbuhan mangrove banyak  tumbuh di  pesisir  Lampung.  Jenisnya  beraneka ragam  mulai  dari Rhizophora sp. Sonneratia  alba dan  lain  sebagainya. Rhizophora sp.  banyak  ditemukan  di Pantai  Ringgung,  Pesisir  Lampung Timur, hingga pesisir Lampung Barat. Feliatra  (2000),  melaporkan  bahwa beberapa  spesies mangrove memiliki sifat  antimikroba  khsusunya  terhadap bakteri Vibrio sp.  Sedangkan  hasil
penelitian
Yasmon (2000), menyebutkan bahwa ekstrak daun lebih efektif  dibandingkan  buah  dan  kulit batangnya. Maka dari itu, penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  jenis  daun mangrove yang  berpotensi  sebagai bahan  antibakteri  alami,  juga  jenis pelarut  yang  paling  efektif  serta efektifitas ekstrak Rhizophora mucronata dalam  menghambat  bakteri Aeromonas  salmonicida dan Vibrio harveyi.
Bahan dan Metode Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah:  250  gram  serbuk daun Rhizopora , mucronata yang diambil  dari  pesisir  Teluk  Lampung, larutan  metanol,  etil  asetat,  dan  hexan, media TSA, MHB ( muller hilton broth ), biakan A. salmonicida dan V. harveyi.
Peralatan  yang  digunakan  adalah: sterofoam, blender, kain saring, timbangan analitik, vacuum evaporator , beaker  glass , paper  disc, cawan  petri, batang  kaca  penyebar , mikropippet, tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  dan inkubator serta colony counter .
Pembuatan  ekstrak  daun Rhizophora mucronata dilakukan dengan menggunakan metode maserasi. Bagian daun  yang  digunakan  adalah  pucuk daun, daun tua dan daun kering.  Daun dicuci sampai bersih kemudian dikeringkan pada suhu ruangan dengan bantuan  cahaya  matahari,  selanjutnya daun  dihaluskan  dengan  menggunakan blender  dan  diayak  dengan  saringan sampai didapatkan bubuk halus.
Kemudian  sebanyak  250  gram  serbuk daun diektrak dengan tiga pelarut yaitu metanol, etil asetat,  dan  hexan. Kemudian disaring dengan menggunakan  kertas  saring  supaya didapatkan ekstrak yang siap digunakan.
Bakteri A.  salmonicida dan V.  harveyi diinokulasikan  pada  media  agar  dalam cawan  petri  yang  telah  diberi  label. Isolat  dengan  kepadatan  10 7 CFU/ml diambil sebanyak 0,1 ml menggunakan mikropipet  dan  disebar  menggunakan batang kaca penyebar kemudian cawan petri diinkubasi selama 24 jam (Meylia, 2010).
Uji  in vitro dilakukan  untuk  melihat aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  daun mangrove terhadap bakteri A.
salmonicida dan V.  harveyi uji  ini dilakukan  dengan  menggunakan  uji MIC ( minimum inhibitory concentration )  menggunakan paper disk . Metode ini dilakukan dengan cara menentukan  konsentrasi  terendah  dari ektrak daun mangrove yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan mikroorganisme uji. Pengujian  MIC  dilakukan  dengan metode serial tube dilution dengan cara membuat  larutan  ekstrak  pada  media muller  hinton  broth (MHB)  dengan konsentrasi  100  ppm,  200  ppm,  300 ppm,  400  ppm,  dan  500  ppm.
Kemudian  pada  masing-masing  tabung dinokulasikan bakteri dengan kepadatan  10 7 CFU/ml  dan  diinkubasi selama 24 jam, Uji antibakteri dilakukan dengan mengambil sebanyak
1  ml  biakan bakteri  dan  dituangkan  ke dalam  cawan  petri  yang  berisi  media TSA  padat.  Selanjutnya  potongan peper  disk yang  telah  dicelupkan  pada ekstrak daun mangrove diletakkan pada permukaan  media  bakteri  uji,  biakan kemudian diinkubasikan selama 24 jam (Meylia, 2010).
Pengamatan  dilakukan  dengan  melihat ada  tidaknya  daerah/  zona  hambatan atau daerah jernih yang tidak ditumbuhi  bakteri  di  sekitar  kertas. Zona yang terbentuk diukur diameternya (Ambarwati, 2007).
Selanjutnya  untuk  melihat  kepadaatan bakteri  pada  masing  perlakuan  diambil dengan  ose  dan  ditanam  pada  media TSA  2,5%  dengan  cara spread dan dihitung  jumlah  bakteri  dengan colony counter setelah  sebelumnya  diinkubasi selama 24 jam. Analisis  nilai  LC-50  dilakukan  dengan menggunakan  metode  Finney  (1971). Analisis ini bertujuan untuk mengetahui  konsentrasi  ekstrak  yang dapat  menyebabkan  kematian  bakteri uji  sebanyak  50%  dari  populasi  awal, yaitu 10 7 CFU/ml. Pengujian dilakukan dengan menggunakan lima konsentrasi, yaitu 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm  dan  500  ppm.    Pengamatan dilakukan  dengan  mengamati tingkat kekeruhan  pada  tabung  reaksi  dan dilihat  pada  batas  konsentrasi  berapa bakteri  masih  dapat  tumbuh  pada tabung reaksi.

## Hasil dan Pembahasan
Penelitian  ini  menggunakan  tiga  jenis pelarut  yaitu  metanol,  etil  asetat  dan hexan,  hal  ini  didasarkan  pada  tingkat kepolaran  dari  masing-masing  pelarut, yakni polar, semi polar dan pelarut non polar. Maksud dari penggunaan berbagai  pelarut  ini  adalah  untuk mengekstrak  semua  jenis  bahan  aktif yang  mungkin  dimiliki  oleh  daun Rhizopora macronata . Menurut Markham  (1988),  komponen  yang terbawa  pada  proses  ekstraksi  adalah komponen  yang  berpolaritas  sesuai dengan  pelarutnya,  sehingga  jenis pelarut yang digunakan dapat mempengaruhi  jumlah  rendemen  yang dihasilkan. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa perbedaan  jenis  daun  berpengaruh signifikan (P < 0,05) terhadap rendemen  dari  bahan  aktif  yang dihasilkan,  nilai  rendemen  tertinggi
berturut-turut  adalah daun pucuk, daun tua  dan  daun  kering.  Sedangkan pengaruh  perbedaan  jenis  pelarut  juga bersifat nyata ( P <0,05) terhadap rendemen yang dihasilkan, nilai rendemen tertinggi adalah menggunakan pelarut etil asetat, diikuti metanol dan heksan. Penggunaan pelarut etil asetat
menghasilkan  rendemen  ekstrak  yang paling  banyak  (Gambar  1)  yaitu sebanyak  10,8  gram  dari  jenis  daun pucuk.  Hal  ini  dimungkinkan  pada pucuk  daun  masih  banyak  terdapat senyawa  tumbuh  baik  berupa  pigmen maupun  zat  pertumbuhan  lainnya  yang terekstrak oleh pelarut.
Gambar 1. Rendemen bahan aktif daun Rhizophora mucronata
Senyawa  etil  asetat  merupakan  pelarut semi  polar,  sehingga  dimungkinkan banyaknya  zat  aktif  daun  Rhizopora yang  bisa  terlarut  di  dalamnya  yang menyebabkan tingginya nilai rendemen yang dihasilkan. Menurut Correl, et al ., (1955),  kandungan  senyawa  dalam daun mangrove adalah golongan fenolik, alkaloid, saponin dan beberapa senyawa  lainnya  yang  terkait  dengan industri  obat-obatan.  Harbonne  (1987), mengatakan  bahwa  senyawa  etil  asetat mampu  mengekstrak  senyawa  fenol dan  terpenoid,  sedangkan  metanol
7.1 2.4 2.9 10.8 1.8 2.4 0.6 0.7 1.7 0 2 4 6 8 10 12 Pucuk Tua Kering Metanol Etil asetat Hexan Jenis daun Berat rende m en a b c a a b ab a b
mampu  mengekstrak  senyawa  alkaloid kuartener, komponen fenolik, karotenoid  dan  tanin,  dan  senyawa nonpolar  heksan  dapat  mengektrak golongan triterpenoid/ steroid
Bahan  yang  mampu  larut  dalam  etil asetat  juga  berupa  senyawa  flavonoid. Flavonoid merupakan metabolit sekunder yang dihasilkan oleh tanaman, yang  bisa  dijumpai  pada  bagian  daun, akar,  kayu,  kulit,  tepung  sari,  bunga dan biji (Pramono dkk., 1993). Uji in vitro bertujuan untuk menentukan  jenis  sampel  ekstrak  daun
mangrove yang  paling  efektif  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri A. salmonicida dan V.  harveyi secara in vitro .  Pengujian  ini  didahului  dengan pengujian sensitifitas bahan aktif terhadap bakteri pathogen A. salmonicida dan V.  harveyi. Hasil ekstraksi  dari  tiga  bagian  daun  yaitu daun  pucuk  (DP),  daun  tua  (DT)  dan daun  rontok  (DR),  dengan  tiga  macam pelarut  yaitu  hexan  (H),  etil  asetat  (E) dan  metanol  (M),  sehingga  didapatkan sembilan  kombinasi  perlakuan  yang berbeda (Tabel 1).
Tabel 1.  Hasil Uji Sensitifitas Jenis Sampel Jenis Bakteri Aeromonas salmonicida Vibrio harveyi DPM - ++ DTM - ++ DRM - - DPE - - DRE - + DTE - + DPH - - DTH - - DRH - - Keterangan:      (+) = terbentuk zona hambat (-)  = tidak terbentuk zona hambat
Bahan aktif daun Rhizopora macronata tidak  memiliki  kemampuan  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri A. salmonicida .  Hal  ini  mungkin  terjadi dikarenakan  bakteri A.  salmonicida merupakan bakteri yang banyak terdapat di lingkungan air tawar (Kordi,
2005).  Sedangkan  daun mangrove merupakan  tumbuhan  dengan  habitat air  payau.  sedangkan  pada  bakteri V. harveyi , memiliki aktifitas penghambatan  terutama  pada  sampel daun pucuk methanol (DPM), daun tua metanol (DTM), daun rontok etil asetat
(DRE), dan  daun tua etil  asetat (DTE) sedangkan sampel lainnya tidak menunjukkan adanya zona hambat.
Gambar 2. Uji in vitro ekstrak Rhizophora mucronata terhadap Vibrio harveyi.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa jenis  sampel  DPM  memiliki  diameter zona  hambat  yang  paling  besar dibandingkan jenis sampel yang lainnya  (Gambar  2).  Hasil  ini  sesuai dengan hasil penelitian Feliatra (2000), yang  dilakukan  terhadap  beberapa spesies mangrove memiliki  antibakteri terhadap bakteri Vibrio sp.
Dari pengamatan diperoleh bahwa jenis sampel  DPM  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri V.  harveyi mulai pada  konsentrasi  200  ppm.  Pada konsentrasi  yang  lebih  rendah  yaitu 100 ppm dan 200 ppm hasil pengamatan menunjukkan bahwa warna  kedua  media  tersebut  sama dengan  kontrol  positif.  Semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  daun mangrove berarti  kandungan  bahan  antibakteri
juga semakin banyak, sehingga mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri V. harveyi .  Perhitungan  jumlah  koloni bakteri V.  harveyi (Tabel  2),  dimana pada  konsentrasi  300  ppm  mampu menekan pertumbuhan secara signifikan dari 1 x 10 7 CFU/ml menjadi 5,502 x 10 3 CFU/ml.
Sifat antimikroba suatu senyawa dikatakan  memiliki  aktivitas  yang tinggi terhadap apabila nilai konsentrasi penghambatan bakteri yang terendah (MIC) kecil, tetapi mempunyai diameter penghambatannya besar (Irianto, 2007). Suatu bahan dikatakan mempunyai aktivitas antibakteri apabila diameter hambatan yang terbentuk lebih besar atau sama dengan
6 mm (Bell, 1984).
8.50±0.5 6.67 8.00 14.80 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 DTM DRE DTE DPM a c Di amet er ra ta -ra ta ( mm) b a Jenis sampel ab
Tabel 2.  Uji MIC Ekstrak Rhizophora mucronata terhadap Vibrio harveyi. Konsentrasi  (ppm) Pertumbuhan (TPC) 100 9,927x10 6 200 8,870x10 6 300 5,502x10 3 400 3,930x10 3 500 1,585x10 3 Hasil perhitungan LC-50 dapat diketahui bahwa ekstrak daun mangrove ( Rhizophora  mucronata ) adalah terdapat pada konsentrasi sebesar 200 ppm, hal ini sesuai dengan pernyataan  Juniarti  (2009)  suatu  zat dikatakan  aktif  atau  toksik  bila  nilai LC-50
1000  ppm  untuk  suatu
senyawa.

## Daftar Pustaka
Ambarwati.  2007.  Efektivitas  Zat Antibakteri Biji Mimba ( Azadirachta indica ) untuk Menghambat Pertumbuhan Salmonella thyposa dan Staphylococcus aureus . Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta. Bell,  S.M.  1984.  Antibiotic  Sensivity Testing  by  CDS  Methods  dalam:
Clinical  Microbiology  UP  Date Programme.  Hertwig  N,  editor. New South Wales
Correll,  D.S.,  B.    G.    Schubert,  H.    S. Gentry  and  W.    D.    Hawley. 1955.    The  Search  for  Plant Precurors of Cortisone. Economic Botany. 52:307-375. Feliatra.    1999.    Identifikasi  Bakteri Patogen  ( Vibrio sp)  di  Perairan Nongsa  Batam  Provinsi  Riau. Jurnal Natur Indonesia II .
Feliatra.    2000.  Studi  Awal  Tumbuhan Mangrove  sebagai  Antimikroba.
Lembaga  Penelitian  Universitas Riau.  22 hal. Finney,  D.J.  1971.  Probit  Analysis. Third Edition. Agricultural Research Council Unit of Statistics.  United States. Harborne.  1987.  Metode  Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalis Tumbuhan. Penerjemah:    K.  Padmawinata dan  I.  Soediro.  Penerbit  ITB. Bandung. Hery,  P.  2004.  Potensi  Mangrove sebagai Tanaman Obat. Universitas Airlangga. Surabaya. Irianto, K. 2007. Mikrobiologi: Menguak Dunia Mikroorganisme. CV. Yrama Widya. Bandung Kordi,  G,H.   2005.   Penanggulanagn Hama dan Penyakit Ikan.  Rineka Cipta dan Bina Adiaksara. Jakarta. Markham,  LG.  1988.  Fish  Hatchery Management. United State Departemen  of  The  Interior  Fish and Wildlife Service: Washington DC. 304-306 p.
Meylia  ,  F.    2010.    Efektivitas  Ekstrak
Bawang  Putih  ( Allium  sativum ) terhadap  Ketahanan  Tubuh  Ikan Mas  ( Cyprinus  carpio L)  yang Diinfeksi Aeromonas
Salmonicida . Universitas
Lampung. Lampung. Nanin.    2011.    Daya  Antibakteri Tumbuhan  Majapahit  ( Cresentia cujete L.)  Terhadap  Bakteri Vibrio Alginolyticus . ITS. Surabaya.
Pramono  S.,  Sumarno,  Wahyono  S.,
1993,  Flavonoid  Daun Sonchus arvensis L. Senyawa Aktif Pembentuk Komplek dengan Batu  Ginjal  Berkalsium.  Warta Tumbuhan  Obat  Indonesia.  Vol 2. Jakarta. Yasmon,  A.  2000.  Sensitifitas Vibrio Parahaemolyticus terhadap Ekstrak  Mangrove Rhizopora Apiculata di  Dalam  Lumpur  dan Air Laut. Skripsi Sarjana Fakultas Perikanan dan IlmuKelautan  Universitas  Riau. 37p.