## Analisis Nilai Absorbansi dalam Penentuan Kadar Flavonoid untuk Berbagai Jenis Daun Tanaman Obat
Neldawati, Ratnawulan dan Gusnedi Jurusan Fisika, Universitas Negeri Padang Jln. Prof. Dr. Hamka, Kampus FMIPA UNP Air Tawar Barat Padang email:neldawati_unp@yahoo.com

## ABSTRACT
This research backgrounded by to the number of drug crop reported to contain compound of antioksidan in gross. Effect of antioksidan at plant caused by the existence of compound of fenol like flavonoid, and acid of fenolat.  Flavonoid  is an  compound  of  fenolik  biggest  found  by  in  potential  nature  as  antioksidan  and  have bioaktivitas  as  drug.  This  compound  can  be  found  by  at  bar,  leaf,  fruit  and  flower. This  research  represent research of done/conducted experiment in Physics laboratory that is in Material laboratory and Biophysics, and also  Chemical  laboratory  of  FMIPA,  UNP.  Variables  which  is  determined  in  this  research  that  is  used  as  by drug  crop  leaf  type  is  free  variable  consisting  of  leaf  of Rhaphidophora  pinnata  (L.f.), Piper crocatum  Ruiz, Annona muricata Linn and leaf of Sauropus androgynus (L.) Merr, absorbance value as variable tied and used as by leaf mass is control variable. Each;Every sampel measured by absorbance value use spectrophotometer of Uv-Vis. Of absorbance value can be counted/calculated by rate value of flavonoid from various drug crop leaf type. From result of measurement of absorbance value got that leaf of sirih red have biggest absorbance, while absorbance of terendah there are at leaf of katuk. Of the absorbance can know by rate of flavonoid sampel. Rate of Flavonoid at each crop leaf type medicinize different each other. For the leaf of Rhaphidophora pinnata (L.f.) have rate of flavonoid about 26,7137 µ g / ml, for the leaf of Piper crocatum Ruiz have rate of flavonoid about 39,3778 µ g / ml. For Annona muricata Linn to have rate of flavonoi about 27,5027 µ g / ml and for the leaf of Sauropus androgynus (L.) Merr have rate of flavonoid about 13,1101 µ g / ml.

## Keywords: Absorbance, Flavonoid, Leaf Medicinize and Spektrofotometri UV-Vis

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman  hayati  yang  ada  di  bumi  ini  tak hanya  digunakan  sebagai  bahan  pangan  ataupun  untuk dinikmati  keindahannya  saja,  tetapi  dapat  juga  bermanfaat sebagai  bahan  untuk  mengobati  berbagai  jenis  penyakit. Indonesia  adalah  salah  satu  negara  yang memiliki  kekayaan alam  yang  melimpah  dan  beraneka  ragam,  namun  hanya sebagian kecil yang diteliti serta dimanfaatkan [1] .
Direktorat  jendral  POM  (1991),  menemukan  ada  283 spesies  tumbuhan  obat  yang  sudah  terdaftar  digunakan  oleh industri  obat  tradisional  di  Indonesia.  WHO  (World  Health Organization)  pada  tahun  1985  memprediksi  bahwa  sekitar 80%  penduduk  dunia  telah  memanfaatkan  tumbuhan  obat untuk  pemeliharaan  kesehatan  primernya [2] .  Kandungan senyawa  kimia  yang  beragam  pada  berbagai  tumbuhan dijumpai  secara  tersebar  ataupun  terpusat  pada  organ  tubuh tumbuhan seperti daun, bunga, buah, biji, akar, rimpang, atau kulit batang [3] .
Tanaman  berkhasiat  di  Indonesia  yang  banyak digunakan  untuk  pengobatan  penyakit  secara  tradisional diantaranya adalah ekornaga (Rhaphidophora pinnata (L.f.)), sirih  merah (Piper crocatum  Ruiz), sirsak (Annona muricata Linn) dan katuk (Sauropus androgynus (L.) Merr).
Berdasarkan  sejumlah  penelitian  pada  tanaman  obat dilaporkan  bahwa  banyak    tanaman  obat  yang  mengandung antioksidan  dalam  jumlah  besar.  Efek  antioksidan  terutama disebabkan  karena  adanya  senyawa  fenol  seperti  flavonoid, dan  asam  fenolat.  Biasanya  senyawa-senyawa  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  adalah  senyawa  fenol  yang  mempunyai gugus  hidroksi  yang  tersubstitusi  pada  posisi  orto  dan para terhadap gugus – OH dan – OR [4] .
Flavonoid  adalah  senyawa  fenol  alam  yang  terdapat dalam  hampir  semua  tumbuhan [5] . Sejumlah  tanaman  obat yang  mengandung  flavonoid  telah  dilaporkan  memiliki aktivitas  antioksidan,  antibakteri,  antivirus, antiradang, antialergi,  dan  antikanker [6] .  Efek  antioksidan senyawa  ini disebabkan  oleh  penangkapan  radikal  bebas  melalui  donor atom  hidrogen  dari  gugus  hidroksil  flavonoid.  Beberapa penyakit  seperti  arterosklerosis,  kanker,  diabetes,  parkinson, alzheimer,  dan  penurunan  kekebalan  tubuh  telah  diketahui dipengaruhi  oleh  radikal  bebas  dalam  tubuh  manusia [7] . Flavonoid  menjadi  perhatian  karena  peranannya  bersifat  obat dalam  pencegahan  kanker  dan  penyakit  kardiovaskular. Struktur dari flavonoid dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Struktur Umum Flavonoid [8]
Flavonoid  terdapat  pada  semua  bagian  tumbuhan termasuk  daun,  akar  kayu,  kulit  tepung  sari,  nektar,  bunga, buah  dan  biji.  hanya  sedikit  saja  catatan  yang  melaporkan adanya  flavonoid  pada  hewan,  misalnya dalam  kelenjar  bau berang-berang,  propolis  (  sekresi  lebah  )  dan  di  dalam  sayap kupu-kupu, itupun dengan anggapan bahwa flavonoid tersebut berasal dari tumbuhan yang menjadi makanan hewan tersebut dan tidak dibiosintesis dalam tubuh mereka [5] .
Spektrum flavonoid biasanya ditentukan dalam larutan dengan pelarut  metanol  atau  etanol.  Spektrum  khas  flavonoid terdiri  atas  dua  maksimal  pada  rentang  230-295  nm  (pita  II) dan 300-560 nm (pita I).
Tabel 1. Pita absorpsi UV dari flavonoid [5] . Bentuk daerah spektrum flavonoid pada
Spektrofotometri UV-Tampak dapat dilihat pada Gambar 2
Gambar 2. Spektrum Serapan UV- Visible Jenis Flavonoid
Penelitian  tentang  flavonoid  telah  banyak  dilakukan oleh  peneliti-peneliti  sebelumnya.  Indah  (2006) telah melakukan  penelitian  yang  berjudul  “  Metode  Cepat Penentuan  Flavonoid  Total  Meniran (Phyllantus niruri L.)
Berbasis Teknik Spektrofotometri Inframerah dan
Kemometrik  “.  Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  kadar flavonoid  meniran  pada  daerah  uji  yang  berbeda  juga memiliki  kadar  yang  berbeda  pula.  Kadar  flavonoid  meniran pada daerah uji Bantar Kambing sebesar 1,56 %, pada daerah uji  Darmaga sebesar 1,4 % dan pada daerah uji 1,4 %. Yudi (2007)  juga  telah  melakukan  penelitian  yang  berjudul “Spektrofotometri  Derivatif  Ultraviolet  (SDUV)  untuk Estimasi Kadar Flavonoid Total  Ektsrak Meniran (Phyllantus niruri L. )”.  P enelitian  ini  menyimpulkan  estimasi kadar flavonoid  total  yang  diperoleh  menggunakan  metode Spektrofotometri Derivatif Ultraviolet (SDUV) adalah 1.85 %.
Zuhri  (2008)  juga  telah  melakukan  penelitian  yang berjudul  “Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Flavonoid dari Daun  Katuk  (Sauopus  androgunus  (L)  Merr )”.  Penelitian  ini menyimpulkan bahwa  daun  katuk  memiliki  kemampuan sebagai  antioksidan  yang  kuat    pada  konsentrasi  80,81  ppm dengan  metode  DPPH.  Secara  spesifik  suatu  senyawa dikatakan  sebagai  antioksidan  sangat  kuat jika  nilai  IC 50 kurang  dari  50  ppm,  kuat  untuk  IC 50 bernilai  50-100  ppm, sedang  jika  bernilai  100-150  ppm,  dan  lemah  jika  nilai  IC 50 bernilai  151-200  ppm  (Anonim, 2005). Umar  (2008)  juga telah  melakukan peneltian  yang berjudul  “Optimasi Ekstraksi Flavonoid  Total  Daun  Jati  Belanda”.  Penelitian  tersebut menyimpulkan  bahwa kondisi  optimum  untuk  ekstraksi flavonoid  total  dari  daun  jati  belanda  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  adalah  konsentrasi  pelarut  70%,  dengan perbandingan  antara  bahan  baku  dan  pelarut  1:10,  dan  waktu ekstraksi 3 jam.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  Cut
(2008) dengan menggunakan larutan DDPH dan mengungkapkan bahwa daun katuk memiliki aktivitas sebagai
antioksidan  kuat  pada  konsentrasi 80,81  ppm.  Namun,  untuk kadar  flavonoid  daun  katuk  tidak  diteliti.  Begitu  juga penelitian  yang  telah  dilakukan oleh Indah  (2006)  dan Yudi (2007)  melakukan  penelitian  pada  daun  yang  berbeda. Namun,  informasi  untuk  jenis  daun  lain  yang  telah diidentifikasi  memiliki  kandungan  flavonoid  masih tebatas. Maka  berdasarkan penelitian-penelitian  tersebut  peneliti tertarik untuk  meneliti tentang kadar flavonoid pada berbagai jenis daun tanaman obat lainnya dengan  melihat  karakteristik optiknya terutama  sifat  absorbansinya. Jenis  daun  yang dijadikan  sampel dalam  penelitian adalah  daun  ekor  naga, daun  sirih  merah,  daun  sirsak dan  daun  katuk. Daun-daun tersebut  dipilih  berdasarkan  pengamatan  pada  masyarakat  di lingkungan tempat tinggal peneliti banyak menkonsumsi daun tersebut  dalam  pengobatan.  Artikel  ini  berisi  analisis nilai absorbansi dalam  penentuan  kadar flavonoid untuk  berbagai jenis daun tanaman obat.
Analisis  kualitatif  flavonoid  dapat    dilakukan  dengan menggunakan  spektrofotometer    UV-Vis.  Spektrum  serapan ultra violet dan serapan tampak merupakan cara tunggal yang paling bermanfaat untuk mengidentifikasi struktur flavonoid [5] . Flavonoid  mengandung  sistem  aromatis  yang terkonjugasi  dan  dapat  menunjukkan  pita  serapan  kuat  pada daerah  UV-Vis [8] .  Metode    tersebut    juga    dapat    digunakan untuk  melakukan  uji  secara  kuantitatif  untuk menentukan jumlah  flavonoid  yang terdapat  dalam  ekstrak  metanol  juga dilakukan  dengan  spetrofotometer  UV-Vis  yaitu  dengan mengukur  nilai  absorbansinya [10] . Absorbansi  sebagai analisa kuantitatif dilakukan berdasarkan Hukum Lambert-Beer.
Spektrofotometri adalah  ilmu yang  mempelajari tentang penggunaan spektrofotometer. Sektriofotometer adalah  alat  yang  terdiri  dari  spektrofotometer dan fotometer. Spektofotometer adalah alat yang digunakan untuk mengukur energi secara relatif jika  energi  tersebut  ditransmisikan, direfleksikan,  atau diemisikan  sebagai fungsi  dari panjang gelombang. Spektrofotometer menghasilkan  sinar  dari spektrum  dengan  panjang gelombang  tertentu,  dan fotometer adalah  alat  pengukur  intensitas  cahaya  yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi.
Apabila radiasi atau cahaya  putih dilewatkan melalui larutan berwarna, maka radiasi  dengan  panjang gelombang tertentu akan diserap (absorbsi) secara selektif dan radiasi lainnya akan diteruskan (transmisi). Absorbansi  adalah perbandingan  intensitas  sinar  yang  diserap  dengan  intensitas sinar datang. Nilai absorbansi ini akan bergantung pada kadar zat  yang  terkandung  di  dalamnya,  semakin  banyak  kadar  zat yang  terkandung  dalam  suatu  sampel  maka  semakin  banyak molekul yang akan menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu  sehingga  nilai  absorbansi  semakin  besar  atau  dengan kata  lain  nilai  absorbansi  akan  berbanding  lurus  dengan konsentrasi zat yang terkandung didalam suatu sampel.
Jika  suatu  molekul  bergerak  dari  suatu  tingkat  energi ke  tingkat  energi  yang  lebih  rendah  maka  beberapa  energi akan  dilepaskan. Energi  ini  dapat  hilang  sebagai  radiasi  dan dapat dikatakan telah terjadi emisi radiasi. Jika suatu molekul dikenai  suatu  radiasi  elektromagnetik  pada  frekuensi  yang sesuai sehingga energi molekul tersebut ditingkatkan ke level
yang  lebih  tinggi,  maka  terjadi  peristiwa  penyerapan (absorpsi) energi oleh molekul.
Suatu  grafik  yang  menghubungkan  antara  banyaknya sinar  yang  diserap  dengan  frekuensi  (panjang  gelombang) sinar  merupakan  spektrum  absorpsi  (jamak:  spektra).  Spektra juga dapat berfungsi sebagai bahan informasi yang bermanfaat untuk analisa kualitatif. Banyaknya sinar yang diabsorpsi pada panjang  gelombang  tertentu  sebanding  dengan  banyaknya molekul  yang menyerap  radiasi,  sehingga  spektra  absorpsi juga dapat digunakan untuk analisa kuantitatif.
Dalam  suatu  molekul,  yang  memegang  peranan penting  adalah  elektron  valensi  dari  setiap  atom  yang  ada hingga dapat menentukan sifat suatu materi. Elektron-elektron yang  dimiliki  oleh  suatu  molekul  dapat  berpindah  (eksitasi), berputar  (rotasi)  dan  bergetar  (vibrasi)  jika  dikenai  suatu energi.
Ketika  cahaya  dengan  berbagai  panjang  gelombang (cahaya  polikromatis)  mengenai  suatu  molekul,  maka  cahaya dengan  panjang  gelombang  tertentu  saja  yang  akan  diserap. Jika  molekul  menyerap  cahaya  tampak  dan  UV  maka  akan terjadi  perpindahan  elektron  dari  keadaan  dasar  menuju  ke keadaan  tereksitasi.  Perpindahan  elektron  ini  disebut transisi elektronik.  Apabila  cahaya  yang  diserap  adalah  cahaya inframerah maka elektron yang ada dalam atom atau elektron ikatan  pada  suatu  molekul  hanya    akan  bergetar  (vibrasi), sedangkan gerakan berputar elektron terjadi pada energi yang lebih rendah lagi.
Atas  dasar  inilah  spektrofotometri  dirancang  untuk mengukur  konsentrasi    yang  ada dalam  suatu sampel, dimana molekul  yang  ada  dalam  sel  sampel  disinari  dengan  cahaya yang  memiliki  panjang  gelombang  tertentu.  Ketika  cahaya mengenai  sampel,  sebagian  akan  diserap,  sebagian  akan dihamburkan  dan  sebagian  lagi akan  diteruskan. Pada spektrofotometri,  cahaya  datang  atau  cahaya  masuk  atau cahaya  yang  mengenai  permukaan  zat  dan  cahaya  setelah melewati  zat  tidak  dapat  diukur,  yang  dapat  diukur  adalah transmittansi atau absorbansi.
Cahaya  yang  diserap  diukur  sebagai absorbansi  (A) sedangkan cahaya yang hamburkan diukur sebagai transmitansi (T), dinyatakan dengan hukum lambert-beer atau Hukum  Beer  yang  berbunyi,  “ jumlah  radiasi  cahaya  tampak (ultraviolet,  inframerah  dan  sebagainya)  yang  diserap  atau ditransmisikan  oleh  suatu  larutan  merupakan  suatu  fungsi eksponen dari konsentrasi zat dan tebal larutan” .
Secara  kualitatif,  absorpsi  cahaya  dapat  diperoleh dengan  pertimbangan  absorbsi  cahaya  pada  cahaya  tampak. Kita melihat objek dengan pertolongan cahaya yang diteruskan atau  dipantulkan.  Apabila  cahaya  polikromatis  (cahaya  putih) yang  mengandung  seluruh  spektrum  panjang  gelombang melewati  daerah  tertentu  dan  menyerap  panjang  gelombang tertentu,  maka  medium  itu  tampak  berwarna.  Karena  panjang gelombang  yang  diteruskan  sampai  ke  mata,  maka  panjang gelombang inilah yang menentukan warna medium. Warna ini disebut  warna  yang  komplementer  terhadap  warna  yang diabsorpsi.
Jika  suatu  berkas  cahaya  melewati  suatu  medium homogen,  sebagian  dari  cahaya  datang  (I 0 )  diabsorpsi sebanyak (I a ),  sebagian  dapat  dipantulkan  (I r ),  sedangkan sisanya  ditransmisikan  (I t )  dengan  efek  intensitas  murni sebesar :
(I o )=(I a )+(I t )+(I r ) Keterangan : (I o ) = Intensitas cahaya datang (I a ) = Intensitas cahaya diabsorpsi (I r ) = Intensitas cahaya dipantulkan (I t ) = Intensitas cahaya ditransmisikan Lambert (1796), Beer (1852) dan Bouger menunjukkan hubungan antara transmittan dengan intensitas cahaya sebagai berikut (Mustafa,2007) :
= = 10 -abc
Keterangan : T = Transmittansi I t = Intensitas sinar yang diteruskan I o = Intensitas sinar datang
a = Tetapan absorptivitas b = Jarak tempuh optik c = Konsentrasi
( ) = = − -Log (T) = [ ] [ ] = [ ] [ ] = = . dengan A = absorbansi, – Log T = abc = A = ε bc Transmittansi  adalah  perbandingan  intensitas  cahaya yang  ditransmisikan  ketika  melewati  sampel  (It), dengan intensitas cahaya mula- mula sebelum melewati sampel (Io). ε adalah  absorptivitas  molar  atau  koefisien  molar  ” extinction ”, nilainya  dipengaruhi  oleh  sifat-sifat  khas  dari  materi  yang diradiasi.  Jika  konsentrasi  dalam  satuan  gram/liter  maka  ε dapat diganti  dengan  a  disebut  sebagai  ”absorptivitas spesifik”.
Absorptivitas  (a)  merupakan  suatu  konstanta  yang tidak  tergantung  pada  konsentrasi,  tebal  kuvet,  dan  intensitas radiasi  yang  mengenai  larutan  sampel.  Absorptivitas tergantung  pada  suhu,  pelarut,  struktur  molekul,  dan  panjang gelombang radiasi (Yanlinastuti, 2009).
Kadar flavonoid dalam sampel herbal dapat ditentukan dengan  berbagai  metode.  Metode  yang  diakui  oleh Departemen  Kesehatan  RI  adalah  spektrofotometri  UV  yang berdasar  pada  prinsip  kolorimetri [10] .  Absorbansi  dari  warna yang  terbentuk  diukur  dengan  spektrometer  UV.  Kadar kuersetin  dihitung  sebagai  kadar  flavonoid total  dalam sampel [11] . Perhitungan ini berdasarkan pada hukum Lambert- Beer yang menunjukkan hubungan lurus antara absorbans dan kadar analat.
Untuk menentukan kadar flavonoid pada berbagai jenis daun obat berdasarkan nilai absorbansi digunakan data larutan standar.  Data  larutan  standar  ini  digunakan  untuk  membuat persamaan  regresi  yaitu  persamaan  yang  digunakan  untuk menghitung kadar flavonoid :
y=ax+b Dengan : y   = nilai absorbansi x   = kadar flavonoid a, b = konstanta
Menurut  Bohm  1987, diacu  dalam Estierte et  al. 1999 kadar  flavonoid  dan  senyawa  fenolik  lain  di  dalam  tanaman berbeda-beda  di  antara setiap  bagian,  jaringan, dan  umur tanaman,  serta  dipengaruhi  oleh  faktor-faktor  lingkungan. Faktor-faktor  ini adalah  temperatur,  sinar  ultraviolet  dan tampak,  nutrisi,  ketersediaan  air,  dan  kadar    CO 2 pada atmosfer.

## METODE  PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen yang dilakukan  di  Laboratorium  Fisika  yaitu  Laboratorium  Fisika Material  dan  Biofisika  serta  Laboratorium  Kimia  yaitu  labor penelitian Kimia FMIPA Universitas Negeri Padang.
Alat dan  bahan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah spektrofotometer  Uv  Vis T872,  etanol,  timbangan digital, kertas saring, vacum rotary evaporator, plat tetes dan corong pisah.
Sampel  pada  penelitian  ini  adalah empat  jenis  daun tanaman obat yakni ekornaga (Rhaphidophora pinnata (L.f.)), sirih  merah (Piper  crocatum  Ruiz),  sirsak  (Annona  muricata Linn) dan katuk (Sauropus  androgynus (L.)  Merr yang diambil  di  Kecamatan  Nan  Sabaris,  Kabupaten  Padang Pariaman.

## Variabel Penelitian
Variabel penelitian terdiri dari: Variabel bebas
Yang menjadi variabel bebas pada penelitian ini adalah jenis  daun  yang  berbeda yakni  daun  ekornaga,  daun  sirih merah, daun sirsak dan daun katuk.

## Variabel terikat
Yang  menjadi  variabel  terikat  dalam  penelitian  ini adalah  nilai absorbansi  dan  kadar  flavonoid  yang  terkandung pada daun obat.

## Variabel Kontrol
Yang  menjadi  variabel  kontrol  pada  penelitian  ini adalah massa daun, panjang gelombang yang digunakan untuk menentukan kadar yaitu 370 nm dan panjang gelombang yang digunakan  untuk  mendeteksi  jenis  flavonoid  yaitu  pada rentang 200nm-450nm.

## Prosedur Penelitian
Pengambilan Daun Sampel
Sampel  daun diambil dan dikumpulkan.  Selanjutnya daun-daun  tersebut  disortir dan dicuci,  kemudian  daun-daun tersebut  diiris  tipis-tipis.  Selanjutnya  irisan  daun dikeringkan selama 2 hari.
Pembuatan Ekstrak Sampel [11]
Sebanyak 25 g serbuk masing-masing  daun  sampel dimaserasi  selama  24  jam  dengan  etanol  teknis dalam labu bulat  1000 ml, sambil  sesekali dikocok. Maserat dalam  labu
lalu  direfluks. Refluks diulangi  1  kali lagi dan seluruh hasil refluks digabungkan. Ekstrak dipekatkan dengan penguap putar  kemudian  dianalisis kandungan  flavonoid total dengan cara mengukur serapannya menggunakan  spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 370 nm.
Standar kuersetin 50 μ g/ml diencerkan  dengan asam asetat glasial 5% v/v (dalam metanol)  hingga  diperoleh konsentrasi 3; 6; 12; 15; dan 24 μ g/ml.  Setelah itu serapan diukur menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 370 nm, untuk membuat kurva standar.
Ekstrak ditimbang setara dengan 200 mg simplisia lalu dimasukkan ke dalam  labu alas  bulat.  Sistem  hidrolisis ditambahkan  ke dalamnya, yaitu  1 ml  larutan 0,5% (b/v) heksametilenatetramina, 20 ml aseton, dan 2 ml larutan 25% HCl dalam  air, lalu campuran  dipanaskan sampai mendidih selama  30 menit.  Campuran hasil  hidrolisis  lalu  disaring menggunakan kapas ke  dalam  labu ukur 100 ml. Residu kemudian ditambah  20 ml aseton  untuk  dididihkan  kembali sebentar;  penambahan  aseton  dan  pendidihan ini dilakukan sebanyak 2 kali.  Seluruh filtrat  dikumpulkan  ke  dalam    labu takar. Setelah  labu takar dingin,  volume ditepatkan dengan aseton sampai 100 ml  dan  dikocok  hingga  tercampur sempurna.
Filtrat hasil hidrolisis dalam  labu takar  diambil sebanyak  20 ml,  dimasukkan ke  dalam corong pisah, dan ditambahkan 20 ml  akuades.  Selanjutnya  campuran diekstraksi,  pertama dengan  15 ml etil asetat, kemudian 2 kali dengan 10 ml etil  asetat. Fraksi  etil  asetat  dikumpulkan ke dalam  labu takar 50 ml dan ditambahkan etil asetat sampai tepat 50 ml. Sebanyak 10 ml larutan ini dipindahkan ke  dalam  labu  takar  25 ml,  kemudian ditambahkan 1 ml larutan 2 g AlCl3 dalam 100 ml larutan asam asetat glasial 5% (v/v)  (dalam metanol). Larutan asam asetat glasial 5%(v/v) ditambahkan secukupnya sampai  tepat 25 ml. Selanjutnya larutan dikocok dan  diukur serapannya pada panjang gelombang 370 nm.

## Teknik Pengumpulan Data
Dalam  penelitian  ini  data  dikumpulkan  melalui pengukuran  terhadap  besaran  fisika  yang  terdapat  dalam sistem  pengukuran  nilai absorbansi  dari  ekstraksi  keempat jenis daun obat yang digunakan. Pengukuran dilakukan secara langsung.  Pengukuran  secara  langsung  adalah  pengukuran yang  tidak  bergantung  pada  besaran-besaran  lain.  Data  yang diperoleh  secara  langsung  dari  hasil  pengukuran adalah  nilai absorbansi dari ekstraksi daun obat.

## Teknik Pengolahan Data
Dari  hasil  pengukuran  didapat  data  nilai absorbansi. Kemudian  data  ini  diolah  dengan  menggunakan  rumusan berikut:
Menentukan kadar flavonoid y = ax + b
Dimana : y : nilai absorbansi x : kadar flavonoid a, b
: konstanta

## HASIL  PENELITIAN

## Absorbansi Pengukuran
Data yang  didapatkan  setelah  dilakukan  pengukuran nilai  absorbansi  dengan  menggunakan  Spektrofotometer  UV- Vis dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.  Data  absorbansi  dari berbagai  jenis  ekstrak  daun tanaman obat
Pada  Tabel 2 terlihat  nilai  absorbansi  dari  masing- masing  ekstrak  daun  obat  pada  5  (lima)  kali  pengulangan memiliki  nilai  absorbansi  yang  berbeda-beda.  Dari  tabel terlihat  bahwa  daun  sirih  merah  memiliki  nilai  absorbansi tertinggi  dibandingkan  daun  ekornaga,  daun  sirsak  dan  daun katuk.  Sedangkan,  daun  katuk  memiliki  nilai  absorbansi terendah.
Kadar  rata-rata  flavonoid  setiap  daun  dirangkum  pada grafik yang terlihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Grafik Kadar Flavonoid dari Keempat Jenis Sampel Daun Penelitian
Pada  Gambar 1  menunjukkan  bahwa  dari  keempat jenis  daun  yang  diteliti,  yang  memiliki  kadar  flavonoid tertinggi  adalah  daun  sirih  merah  yaitu  dengan  sebesar 39,3778 µg/ml. Hal  ini  juga  setara  dengan  nilai  absorbansi yang  terukur,  dimana  daun  sirih  merah  memiliki  absorbansi tertinggi  dari  daun  lain  dalam  penelitian  ini.  Begitu  juga dengan  daun  katuk  yang  memiliki  kadar  flavonoid  terendah
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Ekornaga sirih merah sirsak katuk K a d a r F la v o n o id ( µ g /m l) Jenis Tanaman
dari  daun  lainnya  dengan  nilai  sebesar 13,1101 µg/ml.  Hal tersebut  juga  setara  dengan  nilai  absorbannsi  yang  terukur, dimana  daun katuk  memiliki  absorbansi  terendah  dari  jenis daun    lainnya.  Dengan  demikian  absorbansi  dengan  kadar flavonoid memiliki hubungan yang linear yaitu semakin tinggi absorbansi  yang  terukur  maka  kadar  flavonoid  yang terkandung di dalam daun juga semakin tinggi.

## Spektrum Serapan Flavonoid
Berdasarkan  pengukuran  pada  Spektrofotometri  UV- Vis  dapat  juga  diketahui  jenis  flavonoid  yang  terkandung dalam masing-masing sampel daun tanaman obat. Hal tersebut dapat  diketahui  berdasarkan  spektrum  serapan  maksimum yang  terlihat  pada  pengukuran  spektrum  flavonoid  masing- masing  sampel  yaitu  pada  rentang  250 – 450  nm.  Hasil pengukuran pada Spektrofotometri UV-Vis dapat dilihat pada gambar  berikut  untuk  masing-masing  sampel dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.  Jenis  flavonoid  dari  berbagai  jenis daun  tanaman obat.
Dari  Tabel 2 dapat  dilihat  bahwa  tiap  daun  tanaman obat memiliki jenis flavonoid yang berbeda-beda. Untuk daun ekor  naga  memiliki  jenis  flavon,  untuk  daun  sirih  merah  dan sirsak  memiliki  jenis  flavon  dan  flavonol,  sedangkan  pada daun katuk memilki jenis flavonon.

## PEMBAHASAN

## Kadar  Flavonoid  pada  Berbagai  Jenis  Daun  Tanaman Obat
Kadar  flavonoid  dalam  berbagai  daun  tanaman  obat dapat dihitung berdasarkan nilai absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer  Uv  Vis.  Pada  hasil  perhitungan  yang  telah dilakukan  didapatkan  bahwa  kadar  flavonoid  pada  masing- masing  daun  tanaman  obat  sangat  berbeda.  Untuk  daun ekornaga  memilki  kadar  flavonoid  sebesar  26,7137 µg/ml, untuk  daun  sirih  merah  sebesar  39,3778 µg/ml,  daun  sirsak sebesar 27,5027 µg/ml  dan  untuk  daun  katuk  memiliki  kadar flavonoid  sebesar 13,1101 µg/ml.  Dari  data  tersebut  dapat diketahui  bahwa  daun  sirih  merah  memiliki  kadar  flavonoid terbesar  dari  daun  lainnya.  Sedangkan  daun  katuk  memiliki kadar  flavonoid  yang  paling  sedikit  dibandingkan  daun lainnya.
Uji  identifikasi juga  menunjukkan  bahwa  daun  sirih merah  memiliki  kadar  flavonoid  tertinggi  dari  daun  lainnya. Dalam uji identifikasi flavonoid daun sirih merah menunjukan warna yang lebih merah dari daun lainnya (dapat dilihat pada lampiran  3).  Semakin  merah  warna  yang  ditimbulkan  maka semakin  tinggi  kadar  flavonoid  yang  terkandung  dalam  suatu daun (Tim, 2006). Hal ini terjadi karena semakin tinggi kadar flavonoid  maka  molekul-molekul yang  terdapat  pada  ekstrak daun  tanaman  obat  semakin  banyak  sehingga  molekul  yang akan menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu juga semakin  banyak.  Dengan  demikian  mengakibatkan  nilai absorbansi  semakin  tinggi. Kadar  flavonoid  dan  senyawa fenolik  lain  di  dalam  tanaman berbeda-beda  di  antara  setiap bagian,  jaringan, dan  umur  tanaman,  serta  dipengaruhi  oleh faktor-faktor lingkungan. Faktor-faktor ini adalah temperatur, sinar  ultraviolet  dan tampak,  nutrisi,  ketersediaan  air,  dan kadar  CO2 pada atmosfer (Bohm 1987, diacu dalam Estierte et al. 1999). Dari penelitian ini berarti daun sirih merah sangat baik  digunakan  dalam  pengobatan  karena  kandungan flavonoid  yang  terdapat  lebih  banyak  dibandingkan  dengan daun sirsak, daun ekornaga dan daun katuk.
Jenis  Flavonoid  yang  Terkandung  Pada  Berbagai  Jenis Daun Tanaman Obat
Seperti  yang  tertera pada Tabel  10,  tiap  jenis  daun tanaman obat mengandung jenis flavonoid yang berbeda-beda. Hal tersebut dikarenakan tiap jenis daun memiliki daerah pita serapan  maksimum  yang  berbeda  pula.  Untuk  daun  ekornaga memiliki pita serapan maksimum 271 nm pada Pita I dan 330 nm  pada  Pita  II.  Berdasarkan  hasil  analisa  data  berdasarkan Tabel  2,  didapatkan  bahwa  daun  ekornaga  mengandung flavonoid  berjenis  flavon.  Menurut  Markham  (2008) flavonoid  berjenis  flavon  memilki  daerah  pita  serapan maksimum pada rentang 250-280 nm pada Pita I dan 310-350 nm.  Sedangkan  untuk  flavonoid  berjenis  flavonol  memiliki daerah pita serapan maksimum pada rentang 250-280 nm dan 330-385  nm.  Dari  uji  identifikasi  flavonoid  yang  dilakukan pada  daun  ekornaga  menunjukkan  hasil  warna  kuning kemerahan  (dapat  dilihat  pada  lampiran  3)  yang  mana  warna tersebut merupakan ciri dari flavonoid jenis flavon.
Daun  sirih  merah  dan  sirsak  juga  mengandung  flavonoid berjenis flavon dan flavonol. Hal tersebut disebabkan oleh pita serapan maksimum yang dihasilkan juga berada pada rentang jenis  flavon  dan  flavonol.  Untuk  daun  sirih  merah  memiliki daerah pita serapan maksimum pada 269 nm untuk Pita I dan 340  untuk  Pita  II.  Sedangkan  untuk  daun  sirsak  memiliki daerah pita serapan maksimum pada 273 nm untuk Pita I dan 315 untuk Pita II. Berdasarkan hasil analisa data berdasarkan Tabel 3, didapatkan bahwa daun sirsak mengandung flavonoid berjenis  flavon  dan  flavonol.  Menurut  Markham  (2008) flavonoid  berjenis  flavon  memilki  daerah  pita  serapan maksimum pada rentang 250-280 nm pada Pita I dan 310-350
nm.  Sedangkan  untuk  flavonoid  berjenis  flavonol  memiliki daerah pita serapan maksimum pada rentang 250-280 nm dan 330-385  nm.  Dari  uji  identifikasi  flavonoid  yang  dilakukan pada  daun  sirih  merah  dan sirsa  menunjukan  hasil  warna kuning  kemerahan  (dapat  dilihat  pada  lampiran  3)  dimana warna tersebut merupakan ciri dari flavonoid jenis flavon.
Selanjutnya  untuk  daun  katuk  memiliki  daerah  pita serapan  maksimum  pada  282  nm  untuk  Pita  I  dan  325  untuk Pita II.  Hasil  analisa  data  berdasarkan  Tabel 3,  didapatkan bahwa  daun  katuk  mengandung  flavonoid  berjenis  flavonon. Menurut  Markham  (2008)  flavonoid  berjenis  flavonon memilki daerah pita serapan maksimum pada rentang 275-295 nm pada Pita I dan 300-330 nm. Dari uji identifikasi flavonoid yang  dilakukan  pada  daun  katuk  menunjukan  warna  kuning sedikit  (dapat  dilihat  pada  lampiran  3)  yang  mana  warna tersebut merupakan ciri dari flavonoid jenis flavonon. Dari uji identifikasi  flavonoid  yang  dilakukan  pada  daun  sirih  merah dan  daun  sirsak  menunjukan  hasil  warna  kuning  kemerahan (dapat  dilihat  pada  lampiran  3)  yang  mana  warna  tersebut merupakan ciri dari flavonoid jenis flavon dan flavonol.
Berdasarkan  analisa  tersebut  dapat  dikatakan  bahwa jenis flavonoid untuk keempat jenis daun dalam penelitian ini berbeda-beda.  Walaupun  demikian,  menurut  Harbone  (1996) semua  jenis  flavonoid  tersebut  benar  terdapat  pada  bagian daun pada suatu tumbuhan. Hal tersebut dapat diperjelas pada Tabel 1, dimana flavonoid jenis flavon, flavonol dan flavonol tersebar pada bagian daun tumbuhan.
Dari  jenis  flavonoid  yang  terkandung  juga  dapat disimpulkan  bahwa  daun  sirih  merah  dan  sirsak  sangat  baik digunakan  dalam  pengobatan  karena  sirih  merah  dan  sirsak flavonoid  mengandung  jenis  flavonoid  flavonol.  Dimana  di dalam flavonol ini terdapat senyawa kuersetin yang dipercaya dapat  melindungi  tubuh  dari  beberapa  jenis  penyakit degeneratif  dengan  cara  mencegah  terjadinya  proses peroksidasi  lemak.  Kuersetin  memperlihatkan  kemampuan mencegah proses oksidasi dari Low density Lipoprotein (LDL) dengan  cara  menangkap  radikal  bebas  dan  menghelat  logam transisi. Ketika  kuersetin  bereaksi  dengan  radikal  bebas, kuersetin  mendonorkan  protonnya  dan  menjadi  senyawa radikal,  tapi  elektron  tidak  berpasangan  yang  dihasilkan didelokasasi  oleh  resonansi,  hal  ini  membuat  senyawa kuersetin  radikal  memiiki  energi  yang  sangat  rendah  untuk menjadi radikal  yang reaktif [13] .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dari  penelitian  yang  dilakukan diperoleh  kadar  rata-rata  dari daun  ekornaga  sebesar  26,7137 µg/ml,  daun  sirih  merah  sebesar 39,3778  µg/ml,  daun  sirsak sebesar 27,5027 µg/ml dan daun katuk sebesar 13,1101 µg/ml. Jenis flavonoid  yang  terkandung  dari  berbagai  jenis  daun tanaman  obat  pada  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa tiap daun memiliki jenis yang berbeda. Untuk daun ekor naga memiliki  jenis  flavon,  untuk  daun  sirih  merah  dan  sirsak
memiliki  jenis  flavon  dan  flavonol,  sedangkan  pada  daun katuk memilki jenis flavonon.

## DAFTAR RUJUKAN
[1]Helliwel,  B.  dan  Gutteridge,  J.M.C.  1999.  Free  radical  in Biology  and  Medicine.3rded.Oxford:  University press. Hal. 23-31. 105-115.
[2]Peters,  D.  Whitehouse,  J.  2000. The  role  of  herbs  in modern medicine:some current and future issues. Di dalam:  Herbs.  Proceedings  of  the  International Conference  and  Exhibition;  Malaysia.  9-11  Nov 1999. Malaysia:  Malaysian  Agricultural  Research and Development Institute.
[3]Hornok,  L.  1992. General  aspects  of  medicinal  plants.  Di dalam: Hornok L, editor. Cultivation and Processing of  medicinal  Plants.  New  York:  John  Wiley &Kuntjoro,  dan  I.B.I.  Gotama  (ed.).  Lokakarya tentang Penelitian Praktek      Pengobatan Tradisonal. Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan, Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Ciawi. 14-17 Desember 1988.
[5]Markham KR. 1988. Techniques of Flavonoid Identification. London: Academic Pr.
[4]Pratiwi. 2006. Nilai peroksida  dan  aktivitas  anti  radikal bebas  diphenyl  picril  hydrazil  hydrate  (DPPH) ekstrak  metanol  Knema  laurina.  Bogor:  Bidang Botani. Puslit Biologi – LIPI
[6]Miller  AL.  1996.  Antioxidant  flavonoids:  structure, function, and clinical usage. Alt Med Rev 1:103-111.
[7]Amic  D,  Dusanka  DA,  Beslo  D,  Trinasjtia.  2003. Structure-radical  scavenging  activity  relationships  of flavonoids. Croatia Chem Acta 76:55-61.
[8]Harborne  JB.  1987. Metode  Fitok  imia.  Padmawinata  K dan  Soediro  I,  penerjemah.  Bandung:  Penerbit  ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods .
[9]Chang  CC,  Yang  MH,  Wen  HM,  Chern  JC.  2002. Estimation  of  total  flavonoid  content  in  propolis  by two  complementary  colorimetric  methods. J  Food Drug Anal 10:178 – 182.
[10]Carbonaro, M., et.al. 2005. Absorption of Quercetin and Rutin  in  Rat  Small  Intestine. Annals  Nutrition  and Metabolism
2005;49:178-
182(DOI:10.1159/000086882)
[11] [Depkes RI] Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Direktorat  Pengawasan  Obat  Tradisional.  2000. Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat. Jakarta: Depkes RI.
[12]Harborne  JB.  1987. Metode  Fitok  imia.  Padmawinata  K dan  Soediro  I,  penerjemah.  Bandung:  Penerbit  ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods .
[13]Waji,  Resi  Agestia  dan  Sugrani,  Andis.  2009.  Flavonoid (Quersetin). Makalah  Kimia  Organik  Bahan  Alam. Universitas Hasanuddin : FMIPA
[14]Burkill,  I.  H.  (1935). A  Dictionary  Of  The  Economic Products  Of  The  Malay  Peninsula.  Volume    II. London. Hal. 889.
[15]Dharma.  1997. Manfaat  Sirih Merah  sebagai  Pembasmi Penyakit Diabetes.
http://www.bptp-
jakarta@litbang.deptan.go.id .  Diakses  Tanggal  20 Juni 2012.
[16]Elly,  Sujarti.  2011. Manfaat  Daun Sirsak. http:// ellysurjati.blogspot.com/2011/04/ manfaat-daun- sirsak-terhadap-penyakit.html .  Diakses  tanggal  28 Mei 2012
[17]Fessenden, R.J. dan J.S. Fessenden. 1989. Kimia Organik, Jilid  2,  Edisi  Ketiga  (terjemahan  oleh  Pudjaatmaka, A.H.). Penerbit Erlangga, Jakarta.
[18]Hamid,Mustafa Abi.2010. Sifat Optik Bahan http://mustofaabihamid. blogspot.com /2010/07/sifat- optik-bahan.html diakses pada 23 Februari 2012
[19]Kardinan  dan  Taryono.  2003. Tumbuhan  Obat  Lembaga Biologi Nasional LIPI. Jakarta: Balai Pustaka
[20]Kurniasari,  Indah.  2006. Metode  Cepat  Penentuan Flavonoid  Total  Meniran  (Phyllantus  niruri l.) Berbasis  Teknik  Spektrometri  Inframerah  dan Kemometrik : Bogor. IPB.
[21]Lemmens  and  N.  Bunyapraphatsara.  (2003). Plant Resources  Of  South-East  Asia.  Leiden:  Backhuys Publisher. Hal. 189.
[22]Nadjeeb.  2011.  tingkat  Produksi  ASI  Daun  Katuk. http://fitokimiaumi.wordpress.co  m/tag/daun-katuk/ . Diakses tanggal 28 Mei 2012.
[23]Oktin.  2012. The  Important  of  Daun  Sirih. http://okok putri15.blogspot.com/2012/05/ important-of-daun- sirih.html.  Diakses tanggal 28 Mei 2012
[24]Peters,  D.  Whitehouse,  J.  2000. The  role  of  herbs  in modern medicine:some current and future issues. Di dalam:  Herbs.  Proceedings  of  the  International Conference  and  Exhibition;  Malaysia.  9-11  Nov 1999.  Malaysia:  Malaysian  Agricultural  Research and Development Institute.
[25]Puspaningtyas,  D.  M.  Sutrisno  dan  S.  B.  Suseto.  1997. Usaha  tani  katuk  di  desa  Cilebut  Barat  Kabupaten Bogor.  The  Journal  on  Indonesia  Medicine  Plants.  3 (3) : 9-10.
[26]Robinson  T.  1995. Kandungan  Organik  Tumbuha  n Tinggi .  Ed  ke-6.  Padmawinata K,  penerjemah. Bandung:  Penerbit  ITB. Terjemahan  dari: The Organic Constituent of Higher Plants.
[27]Rukmana, R. dan Indra M.H., (2003), Katuk. Potensi dan Manfaatnya. Kanisius. Yogyakarta.
[28]Sukendah.  1997.  Pengenalan  Morfologi  Katuk (Sauropus androgynus (L)  Merr). Jurnal. Jurnal  Tumbuhan Obat Indonesia 3:53.
[29]Sanjayasari,  Dyahruri.  G.  Piliang,  Wiranda.  (2011). “Skrining Fitokimia dan Uji Toksisitas Ekstrak Daun Katuk  (Saoropus  androyenus  (l.)  Merr.)  terhadap Larva Udang
Artemia salina : Potensi Fitofarmakapada  Ikan”. Jurnal Berkala  Perikanan Terubuk ISSN 0126-626 Vol 39 No.1, Februari 2011.
[30]Umar,  Farah.  (2008). “ Optimasi  Ekstraksi  Flavonoid Total Daun Jati Belanda” . Skripsi. Bogor : IPB.
[31]Zuhra,  Cut  Fatimah,  dkk.  2008. “Aktivitas  Antioksidan Senyawa  Flavonoid  dari  Daun  Katuk  (Sauopus androgunus (L) Merr )”. Jurnal Biologi Sumatera Vol 3 No 1. Hlm. 7-10, Januari 2008.