_______________________________________________________________

## Uji  Efek  Imunomodulator  Ekstrak  Biji  Karika  (Carica  pubescens Lenne  K.  Koch)  terhadap  Peningkatan  Aktivitas  Fagositosis  pada  Mencit Putih Swiss Webster
Fania Putri Luhurningtyas * , Niken Dyahariesti, Septi Fitri Eka M Program Studi Farmasi, Universitas Ngudi Waluyo, Ungaran, Indonesia, 50512

## *Corresponding author: faniaputriluhurningtyas@gmail.com
Diterima:29 Januari; Disetujui: 15 Mei 2020
Abstract: Caricae  family  plants  have  been  known  to  have  acted  as  anthelmintic,  anti-hypercholesterolemic,  antibacterial, antioxidant,  and  other  pharmacological  activities  related  to  the  immune  system.  The  karika  plant  is  one  of  the  Caricaceae families that has not been widely studied. The flavonoid content in karika is known to be higher than papaya. The objective of this study is to evaluate the immunomodulatory activity of karika seed extract based on its phagocytosis constant used the carbon  cleaning  method.  Karika  seeds  were  extracted  by  maceration  method  with  96%  ethanol  solvent.  The  study  was conducted  by  dividing  5  treatment  groups  in  the  test  animals,  namely  the  positive  group  Phyllanthus  niruri,  the  negative group, and the karika seed extract (EBK) treatment group with doses of 125, 250, and 500 mg / kg BW. The results showed that there was an effect of EBK dosage variations on the elimination rate of carbon ink. Karika seeds at a dose of 500 mg / kg BW had activity comparable to that of Phyllanthus niruri's positive control (p> 0.05) as an immunostimulant.
Keywords: seeds, Carica pubescens Lenne et Koch, phagocytosis constant
Abstrak: Tumbuhan  dari  keluarga  Caricae  telah  diketahui  mempunyai  aktivitas  sebagai  antelmintik,  antihiperkolesterol, antibakteri,  antioksidan,  dan  aktivitas  farmakologis  lain  yang  berhubungan  dengan  sistem  imun.  Tumbuhan  karika merupakan  salah  satu  keluarga  Caricaceae  belum  banyak  diteliti.  Kandungan  flavonoidnya  diketahui  lebih  tinggi dibandingkan  buah  pepaya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menskrining  aktivitas  imunomodulator  ekstrak  biji  karika berdasarkan konstanta fagositosisnya menggunakan metode bersihan karbon. Maserasi dengan pelarut etanol 96% digunakan untuk menarik metabolit sekunder biji karika. Penelitian dilakukan dengan membagi 5 kelompok perlakuan pada hewan uji yaitu kelompok positif Phyllanthus niruri , kelompok negatif, serta kelompok perlakuan ekstrak biji karika (EBK) dosis 125, 250, dan 500 mg/kgBB. Hasil penelitian menunjukkan terdapat pengaruh pemberian variasi dosis EBK terhadap kecepatan eliminasi  tinta  karbon.  Biji  karika  dosis  500  mg/kgBB  mempunyai  aktivitas  sebanding  dengan  kontrol  positif Phyllanthus niruri (p>0,05) sebagai imunostimulan.
Kata kunci: biji, Carica pubescens Lenne et Koch, konstanta fagositosis.

## 1. PENDAHULUAN
Sistem  imunitas  mempunyai  peran  penting  dalam menjaga  daya  tahan  tubuh,  terutama  sebagai  sistem pertahanan  dari  penyakit  infeksi.  Infeksi  dapat disebabkan  karena  bakteri,  virus,  cacing,  jamur parasit,  protozoa  (Menghini et  al., 2016).  Salah  satu mekanisme  non  spesifik  pertahanan  diri  karena adanya  senyawa  asing  (mikroorganisme)  misalnya bakteri yang masuk ke dalam tubuh akan hancur
karena  proses  fagositosis.  Makrofag  adalah  sel fagosit mononuclear yang berperan sebagai pertahanan  seluler  non  spesifik  (El-katcha et  al., 2016).
Fungsi  imunitas  tubuh  akan  menurun  sesuai  umur. Peningkatan  usia  mempengaruhi  kecepatan  respon melawan  infeksi,seperti  penyakit  infeksi,  penyakit kronik,  autoimun,  dan  kanker  (Akhtar et  al .,  2018).
Kemampuan memproduksi limfosit untuk mematikan

## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal
Volume 2 (1), 2020, 27-34
senyawa  asing  atau  membantu  sel  lain  dalam  proses imunitas  semakin  berkurang.  Limfosit  (sel  darah putih)  merupakan  sel  T  yang  berperan  sebagai penghasil  antibodi  disaat  ada  antigen  masuk  ke dalam tubuh (Torres-Rodriguez et al , 2016).
Penggunaan  obat  imunosupresan  dan  imunostimulan jangka  panjang  dapat  menyebabkan  efek  samping pada  sistem  imun.  Penggunaan  obat  glukokortikoid, seperti kortikosteroid dapat menyebabkan penumpukan  kadar  gula,  osteoporosis,  atropi  otot. Penggunan  obat  antihistamin  generasi  pertama menyebabkan  efek  sedatif.  Pengembangan  obat herbal  terus  menerus  dilakukan  karena  terjadi peningkatan penggunaannya sebagai
terapi komplementer.  Keuntungan  lainnya  adalah  obat herbal  mempunyai  berbagai  macam  zat  aktif,  yang diduga mempunyai peran sinergis untuk menghasilkan efek terapi (Kumari  Kotecha, 2016).
Herba  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  peningkat aktivitas  sistem  imun  adalah  karika.  Tumbuhan karika  ( Carica  pubescens L)  adalah  flora  khas  di Dataran  Tinggi  Dieng.  Karika  termasuk  keluarga Caricaceae,  sehingga  mirip  seperti  pepaya.  Buahnya berukuran  lebih  kecil  dibandingkan  pepaya,  dan jarang dikonsumsi secara mentah. Karika mengandung  getah,  yang  menyebabkan  gatal  bagi yang  mengkonsumsinya.  Di  daerah  Dieng,  karika lebih  dikenal  sebagai  olahan  manisan.  Bijinya  yang menggerombol  dan  padat  kurang  mempunyai  nilai guna  bagi  masyarakat  setempat  (Laily et  al., 2012,
Minarno et  al. ,  2015).    Kandungan  flavonoid  karika diketahui  lebih  tinggi  dibandingkan  pepaya,  hal  ini sebanding dengan
aktivitas antioksidannya
(Mu’awwanah  Ulfah. 2017).  Biji pepaya telah
diteliti  mempunyai  aktivitas  sebagai  anti  bakteri  dan larvasida (Supono et al., 2015, Novalina et al., 2013). Efek  imunomodulator  ekstrak  biji  pepaya  dapat memberikan  pengaruh  terhadap  mediator  inflamasi (Pandey et  al .,  2016).  Tidak  seperti  buah  pepaya yang  telah  banyak  dikaji  aktivitas  farmakologisnya, penelitian terhadap karika masih terbatas. Berdasarkan  uraian  tersebut,  peneliti  tertarik  untuk mengkaji  aktivitas  imunomodulator  biji  karika berdasarkan nilai konstanta fagosistosisnya, menggunakan metode clearance carbon.

## 2. BAHAN DAN METODE PENELITIAN

## 2.1. Bahan
Biji  karika  yang  diperoleh  di  daerah  Wonosobo  di Toko  Gemilang,  25  ekor  mencit  jantan  galur  Swiss Webster diperoleh di Salatiga, fitofarmaka imunostimulan Phyllanthus  niruri  L  ( Apotek Ngudiwaluyo),  CMC  Na  0,1%,  tinta  cina  Pelikan 4001, NaCl, asam asetat, NaEDTA (Indrasari), etanol 96%,  n-heksan  :  etil  asetat,  dragondroff,  H2SO4, amoniak (Brataco).

## 2.2. Alat
Seperangkat  alat  maserasi,oven,  timbangan  hewan, timbangan  analitik,  beker  glass  (Pyrex  50ml),  gelas ukur  (Pyrex  10ml),  spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu),  pipa  kapiler,  pipet  tetes,  erlemenyer (Pyrex),  tabung  sentrifuge,  kandang  mencit,  tempat makanan  dan  minuman  mencit  ,  jarum  sonde  oral, spuit intravena (Onemed).

## 2.3. Ekstraksi dan pengujian metabolit sekunder

## a. Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  biji  karika  dibuat  dengan  metode  maserasi. Langkah  pertama  yaitu 250g serbuk  simplisia  dalam 1750  ml  etanol  96%  selama  3  hari  dan  remaserasi dengan  750  ml  pelarut  selama  2  hari.  Maserat dikumpulkan  dan  dipekatkan  menggunakan rotary evaporator, kemudian  dikentalkan  menggunakan waterbath.

## b. Pengujian Metabolit Sekunder
Fase  gerak  yang  digunakan  untuk  identifikasi senyawa  flavonoid  adalah  butanol  :  asam  asetat glasial : air (4:1:5), dan fase gerak untuk identifikasi senyawa  alkaloid  adalah  etil  asetat  :  n-heksan  (9:1) yang  telah  dijenuhkan.  Fase  diam  yang  digunakan adalah  silika  gel  GF  254.  Baku  yang  digunakan untuk flavonoid adalah quercetin dan alkaloid dengan piperin.  Pengamatan  noda  menggunakan  lampu  UV 254 dan 366 nm.

## 2.4. Uji imunomodulator dan analisa statistik

## a. Hewan uji
Hewan uji yang digunakan mencit putih jantan galur Swiss-Webster ,  umur  2-3  bulan,  bobot  20-30  gram.
Hewan  uji  dibagi  menjadi  5  kelompok  yaitu  1. Kelompok negatif, 2. Kelompok positif, 3. Kelompok perlakuan I, 4. Kelompok perlakuan II, 5. Kelompok perlakuan III.

## b. Uji bersihan karbon
Metode  uji  aktivitas  imunomodulator  telah  lolos pengujian Komisi Bioetika Penelitian Kedokteran
UNISSULA Semarang, dengan nomor sertifikat: No. 380/VII/2019 / Komisi Bioetik. Hewan uji yang telah dialimatisasi  selama  1  minggu,  dibagi  menjadi  5 kelompok.
Berdasarkan  rumus  Federer,  tiap  kelompok  terdiri dari 6 ekor yang dipilih secara acak. Pengelompokkan hewan uji sebagai berikut :
1) Kelompok  1  (Kontrol  Negatif) :  hewan  uji diberikan  sediaan  suspensi  CMC  Na  0,1% pada hari 1-6
2) Kelompok  2  (Kontrol  Positif) :  Hewan  uji diberikan fitofarmaka imunostimulan
Phyllanthus niruri L 9,1 mg/20 gram mencit pada hari 1-6
3) Kelompok 3 (Dosis ekstrak 125 mg/kgBB) : Hewan  uji  diberikan  ekstrak  125  mg.kgbb pada hari 1-6
4) Kelompok 4 (Dosis ekstrak 250 mg/kgBB) : Hewan  uji  diberikan  ekstrak  250  mg/kgBB pada hari 1-6
5) Kelompok 5 (Dosis ekstrak 500 mg/kgBB) : Hewan  uji  diberikan  ekstrak  500  mg/kgBB pada hari 1-6.
Pemilihan  metode  uji  aktivitas  imunomodulator menggunakan bersihan karbon, berdasarkan penelitian Muthia  Astuti (2019). Penentuan variasi ketiga  dosis  ekstrak  berdasarkan  hasil  penelitian Tasminatun et al., 2017 tentang efektifitas imunomodulator  ekstrak  daun  pepaya.  Masing- masing  kelompok  diberikan  perlakuan  1  kali  sehari selama  6  hari,  melalui  pemberian  per  oral.  Selain perlakuan, hewan uji tetap diberikan pakan dan air ad libitum selama pengujian. Pada hari ke-7, semua
mencit  diinjeksi  dengan  karbon  melalui  vena  ekor secara  intravena  sebanyak  1  ml.  Darah  mencit diambil  sebanyak  0,5  ml  pada  menit  ke  0  dan  15 melalui  vena  mata.  Masing-masing  darah  dilisis dengan  4  mL  asam  asetat  1%  dan  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  634  nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## c. Analisa data
Hasil  absorbansi  tiap  sampel  digunakan  untuk menghitung nilai konstanta fagositosis (K), menggunakan rumus :
Dimana ;
K : Konstanta fagositosis
OD 1
: Absorbansi pada menit ke 0
OD 2 : Absorbansi pada menit ke 15 t : Waktu (menit ke 0 dan 15)
Data  hasil  penelitian  berupa  konstanta  fagosistosis seluruh  kelompok  perlakuan  dianalisis  secara statistik  menggunakan  metode  One  Way  Anova. Perbedaan  yang  signifikan  ditunjukkan  dengan  nilai p    0,05,  Untuk  mengetahui  nilai  signifikan  dari perbandingan  masing-masing  kelompok  perlakuan. Data dikatakan signifikan jika nilai p  0,05 dan data dikatakan  tidak  disignifikan  jika    nilai  p    0,05. Adanya  perbedaan  yang  signifikan  ini  mampu menjelaskan  adanya  aktivitas  fagositosis  yang dilakukan oleh makrofag yang meningkatkan setelah pemberian ekstrak biji carica pada mencit jantan.

## 3. HASIL DAN DISKUSI
Bahan utama penelitian ini adalah ekstrak biji karika. Biji karika didapatkan dari limbah usaha manisan
karika  ‘Carica  Gemilang’  Wonosobo.  Bagian tumbuhan yang akan diuji yaitu karika dideterminasi di  Laboratorium  Ekologi  Biosistematik  Jurusan Biologi  Fakultas  MIPA  Universitas  Diponegoro Semarang.  Kunci  identifikasi  tumbuhan  karika  yaitu 1b,  2b,  3b,  4b,  6b,  7b,  9b,  10b,  11b,  12b,  13b,  14a, 15a.  Hasil  identifikasi  menunjukkan  sampel  yang digunakan  adalah  benar  tumbuhan  karika  ( Carica pubescen ).
Gambar 1. Buah dan biji tumbuhan karika
Identifikasi  kandungan  metabolit  sekunder  ekstrak biji  karika  menunjukkan  positif  mengandung glikosida  rutin  dan  kuersetin,  berdasarkan  Rf  spot sampel  yang  mendekati  atau  sama  dengan  Rf  spot pembanding.  Terdapat  kandungan  alkaloid  pada  biji karika,  pada  literature  dijelaskan  alkaloid  khas  pada Caricae adalah alkaloid carpain (Julianti et al. , 2014).
Uji  imunomodulator  menggunakan  metode  bersihan karbon ( clearance carbon) dilakukan untuk mengukur aktivitas sel imun non spesifik (sel fagosit) mengeliminasi  sel  pathogen  yang  masuk  tubuh. Pengujian  ini  berdasarkan  kecepatan  sel  fagosit menelan zat asing setelah diberikan zat imunomodulator (EBK). Zat atau partikel asing yang digunakan  dalam  percobaan  ini  adalah  tinta  karbon (Ding et al. , 2016).  Parameter yang digunakan untuk
menilai aktifitas imunomodulator yaitu nilai konstanta  fagositosis.  Nilai  konstanta  fagositosis yang tinggi menunjukkan aktivitas senyawa
imunostimulan,  yang  berarti  semakin  cepat  sel fagositik  melakukan  proses  fagositosis.  Nilai konstanta fagositosis dapat dilihat pada tabel 3.
Gambar 2. Pola kromatogram ekstrak etanol biji   karika(EEBK).
A. Identifikasi flavonoid. Fase diam silika GF 254 nm. Fase gerak BAA (4 :1 :5)
B. Identifikasi Alkaloid. Fase gerak n heksan: etil asetat (1 :9) Keterangan : 1. Sampel, 2. Kuersetin, 3. Rutin, dan 4. Piperin Tabel 3. Hasil rata-rata nilai indeks fagosistosis kelompok perlakuan Perlakuan Rata-rata konstanta fagositosis Kontrol negatif a 0.0019 ± 0.001 b,c,d,e Kontrol positif b 0.0256 ± 0.0014 a,c,d EBK 125 c 0.0152 ± 0.0023 a,b,d,e EBK 250 d 0.0200 ± 0.0001 a,b,c,e EBK 500 e 0.0251 ± 0.0003 a,c,d
Keterangan : Hasil signifikansi berdasarkan hasil uji statistik One Way Anova dilanjutkan Post Hoc Test . Indeks menunjukkan perbedaan signifikan antar kelompok (p0.05)
Pada  tabel  3  menunjukkan  nilai  konstanta  variasi dosis  EBK  dan  kontrol  positif  imunostimulan Phylanthus  niruri lebih  besar  dibandingkan  kontrol negative.  Semakin  besar  nilai  konstanta  fagositosis maka  semakin  tinggi  kecepatan  bersihan  karbon. Peningkatan  nilai  konstanta  fagositosis  variasi  dosis ekstrak biji karika menunjukkan aktivitas imunostimulan.  Semakin  tinggi  dosis  ekstrak  biji karika  yang  diberikan  ke  hewan  uji,  semakin  besar efek imunostimulan.
Peningkatan  konstanta  fagosistosis  hewan  uji  yang telah  diberikan  EBK  selama  7  hari  dapat mempercepat eliminasi tinta karbon sebagai antigen. Respon  sel  fagosit  juga  menginisiasi  pengaktifan respon sel imun adaptif pada hewan uji. Sistem imun yang  berperan  sebagai natural  first  barrier saat terdapat  invasi  senyawa  asing/organisme  adalah makrofag dan sel NK ( natural killer cell ). Kedua sel imun  tersebut  dinamakan  sel  fagosit  karena mekanisme  kerja  mempertahankan  tubuh  melawan infeksi dengan cara fagositosis (menelan senyawa
asing/antigen).  Proses  fagositosis  antigen  oleh  APC ( antigen  presenting  cells) yaitu  makrofag,  akan mempengaruhi  pengaktifan  sel  T.  Sel  T  merupakan sistem  imun  adaptif  yang  berperan  sebagai  pertama mengaktifkan  sel  B  sebagai  precursor  pembentukan antibody.  Kedua,  sel  T  akan  memproduksi  sel  T sitotoksik  yang  melawan  langsung  sel  yang terinfeksi (Magrone et al., 2018).
Karika  merupakan  tumbuhan  satu  genus  dengan papaya,  perbedaan  kedua  tumbuhan  yang  menonjol adalah ukuran buahnya. Buah karika berukuran lebih kecil,  sebesar  genggaman  tangan  orang  dewasa. Kandungan metabolit sekunder pada kedua tumbuhan hampir sama, sehingga aktivitas farmakologisnya juga sama, hanya kekuatan potensinya  yang  berbeda.  Penggunaan  daun  pepaya yang diekstraksi menggunakan pelarut air (dosis 250 mg/kgBB) dapat menaikkan aktivitas IgM dan IgGD pada  hewan  uji  tikus.  Biji  pepaya  diketahui  mampu meningkatkan respon phytohemaglutinin dari limfosit.  Daun  karika  menyebabkan  penurunan jumlah limfosit pada hewan uji tikus Sprague dawley yang diberikan paparan azoxymethane. Zat azoxymethan merupakan agen karsinogenik, menginduksi terjadinya kanker kolorektal (Kharisma et al., 2011). Penelitian tentang aktivitas imunomodulator  dengan  metode  bersihan  karbon pada  ekstrak  etanol  kulit  buah  nanas  (EKBN), diperoleh  hasil  bahwa  dosis  EKBN  250  mg/kgBB memiliki  efek  imunomodulator  yang  paling  baik (Azizah et al., 2017).
Analisa statistik dengan ANOVA menunjukkan nilai konstanta  fagositosis  dosis  EBK  500  mg/kgBB memiliki efektifitas sebanding dengan kontrol positif
Phyllanthus niruri 19.1 mg/kgBB (p  0.05). Variasi dosis  EBK  memiliki  perbedaan  bermakna  dengan kontrol negatif (p  0.05). Aktivitas imunomodulator dengan efek imunostimulan pada EBK diduga karena pengaruh  metabolit  sekunder  alkaloid,  flavonoid golongan quersetin dan glikosida rutin.
Menurut  Perez  and  Castell  (2016)  dalam  studi  in vitronya, quersetin  (100  µmol/L)  dapat  menghambat LPS  (lipospolisakarida)  yang  menginduksi  mRNA dari  TNFα  sehingga  terjadi  proses  apoptosis  sel mikrogial. Kuersetin (3 µmol/L) menghambat enzim yang  dapat  menghasilkan  mediator  inflamasi  yaitu siklooksigenase  (COX)  dan  lipooksigenase  (LOX) terhadap  sel  epitel  babi.  Efek  pemberian  rutin  pada mencit  galur  Swiss  albino  dapat  sebagai  agen proteksi  terhadap  hewan  uji  yang  diinduksi  CCl4, sehingga  menurunkan  konsentrasi  lipid  peroksidase (Hosseinzadeh et  al .,  2014).    Alkaloid  dari  bahan alam  menunjukkan  dapat  berperan  sebagai  agen antiproliferasi  dan  sitotoksik.  Alkaloid  mampu melakukan down  regulasi dengan  menghambat aktifitas protein pembentuk sel, yaitu VEGF, TNF-α, dan  HIF-1α.  Alkaloid  jenis berberine,  noscapine, brucine, matrine, homoharringtonine diketahui dapat memblok aliran aktivasi proses angiogenesis (Alasvand et al. , 2019).

## 4 KESIMPULAN
Ekstrak    biji  karika  dosis  500  mg/kgBB  mampu meningkatkan  aktifitas  respon  fagositosis  dan sebanding  dengan kontrol  imunostimulan Phyllantus niruri. Biji karika dapat ditingkatkan pemanfaatannya  sebagai  obat  tradisional  yang mempunyai aktivitas imunostimulan. Perlu dilakukan penelitian aktivitas imunomodulator lanjutan pada
biji  karika,  yaitu  untuk  mengetahui  aktivitas fagositosis makrofag dan proliferasi sel limfosit pada hewan uji.

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Rekan  sejawat  Prodi  S1  Farmasi  Universitas  Ngudi Waluyo dan rekan mahasiswa tim penelitian karika.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
Akhtar‐Schäfer, I., Wang, L., Krohne, T. U., Xu, H., Langmann,  T.  (2018).  Modulation  of  three  key innate  immune  pathways  for  the  most  common retinal  degenerative  diseases. EMBO  molecular medicine , 10 (10).
Alasvand, M., Assadollahi, V., Ambra, R., Hedayati, E.,  Kooti,  W.,    Peluso,  I.  (2019).  Antiangiogenic effect  of  alkaloids. Oxidative  medicine  and  cellular longevity .
Azizah,  M.,  Wiraningsih,  W.,    Sari,  E.  R.  (2017). Efek imunomodulator ekstrak etanol kulit buah nanas ( Ananas  comosus l.  Merr)  terhadap  mencit  putih jantan  dengan  metode  bersihan  karbon  (carbon clearance). Indonesian  Journal  of  Applied  Sciences , 7 (2).
Ding, X. Y., Ji, L., Cheng, X., Su, L. L., Li, L.,  Lu, T. L. (2016). Effect of Astragali Radix with different sulfur  fumigation  technologies  on  immune  function in  mice. China  journal  of  Chinese  materia  medica , 41 (15), 2819-2823.
El-katcha,  M.  I.,  Soltan,  M.  A.,  Sharaf,  M.  M., Hasen,  A.  (2016).  Growth  performance,  immune response, blood serum parameters, nutrient digestibility  and  carcass  traits  of  broiler  chicken  as affected  by  dietary  supplementation  of  garlic  extract (Allicin). Alexandria Journal of Veterinary Sciences , 49 (2), 50-64
Hosseinzadeh, H.,  Nassiri-Asl, M. (2014). Review of  the  protective  effects  of  rutin  on  the  metabolic function as an important dietary flavonoid. Journal of endocrinological investigation , 37 (9), 783-788.
Julianti,  T.,  Oufir,  M.,    Hamburger,  M.  (2014). Quantification  of  the  antiplasmodial  alkaloid carpaine  in  papaya  ( Carica  papaya )  leaves. Planta medica , 80 (13), 1138-1142.
Kharisma,  Y.,  Ariyoga,  A.,    Sastramihardja,  H.  S. (2011). Efek ekstrak air buah pepaya ( Carica papaya
L.)  muda  terhadap  gambaran  histologi  kelenjar mamma mencit laktasi. Majalah Kedokteran Bandung , 43(4), 160-165.
Kumari, R.,  Kotecha, M. (2016). A review on the standardization of herbal medicines. Int J Pharm Sci Res , 7 (2), 97-106.
Laily,  A.  N.,  Suranto,  S.,    Sugiyarto,  S.  (2012). Characterization  of Carica  pubescens in  Dieng Plateau,  Central  Java  based  on  morphological characters, antioxidant capacity, and protein banding pattern. Nusantara Bioscience , 4 (1).
Magrone,  T.,  Spagnoletta,  A.,  Salvatore,  R., Magrone, M., Dentamaro, F., Russo, M. A., Jirillo, E. (2018). Olive leaf extracts act as modulators of the human  immune  response. Endocrine,  Metabolic Immune  Disorders-Drug  Targets  (Formerly  Current Drug  Targets-Immune,  Endocrine    Metabolic Disorders) , 18(1), 85-93.
Minarno,  E.  B.  (2015).  Skrining  fitokimia  dan kandungan  total  flavanoid  pada  buah Carica pubescens Lenne    K.  Koch  di  kawasan  bromo, cangar, dan dataran tinggi dieng. el–Hayah , 5(2), 73- 82.
Mu’awwanah, A.,  Ulfah, M. (2017). Uji aktivitas antioksidan  fraksi  n-heksan  ekstrak  etanol  daun karika  ( Carica  pubescens )  dan  identifikasi  senyawa alkaloid  dan  flavonoidnya. e-Publikasi  Fakultas Farmasi , 118-124.
Muthia,  R.,    Astuti,  K.  I.  (2018).  Efek Imunomodulator  Infusa  Umbi  Bawang  Dayak ( Eleutherina  palmifolia L.  Merr)  Dengan  Metode Bersihan Karbon. Jurnal Pharmascience , 5(1).
Novalina, D., Sugiyarto, S.,  Susilowati, A. (2018). Aktivitas antibakteri kulit buah karika dieng terhadap Shigella  flexneri dan Escherichia  coli . Jurnal Teknologi Laboratorium , 7(2), 53-60.
Pandey,  S.,  Cabot,  P.  J.,  Shaw,  P.  N., Hewavitharana, A. K. (2016). Anti-inflammatory and immunomodulatory  properties  of Carica  papaya. Journal of immunotoxicology , 13(4), 590-602.
Pérez-Cano,  F.,    Castell,  M.  (2016).  Flavonoids, inflammation and immune system.
Supono,  S.,  Susilowati,  A.,  Purwantisari,  S.  U.  S.  I. A.  N.  A.,    Kurniawati,  F.  N.  (2015).  Biokontrol Larva  nyamuk  aedes  aegypti  menggunakan  limbah biji  karika  ( Vasconcellea  pubescens ). Pros  Sem  Nas Biodiv Indon , 1(5), 27-31.
Tasminatun,  S.,  Pravitasari,  R.,    Makiyah,  S.  N. (2017). Potential ethanol of Carica papaya L. extract
as immunomodulatory through histology observation at  mice  balb/C  spleen. Berkala  Kedokteran ,  13(2), 205-210.
Torres-Rodríguez,  M.  L.,  García-Chávez,  E., Berhow,  M.,    de  Mejia,  E.  G.  (2016).  Anti-
inflammatory  and  anti-oxidant  effect  of Calea urticifolia lyophilized aqueous extract on lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 macrophages. Journal  of  ethnopharmacology ,  188, 266-274.