POTENTIAL OF METHANOL EXTRACTS THE STEM BARK Lannea coromandelica (Houtt.) Merr. AGAINST Staphylococcus aureus AND ANALYSIS

## OF THE MAIN SECONDARY METABOLITES
Potensi Ekstrak Metanol Kulit Batang Lannea coromandelica (Houtt.) Merr. Terhadap Staphylococcus aureus Dan Analisis Metabolit Sekunder Utamanyanya
Syamsurya * , Ahyar Ahmad, Firdaus
Department of Chemistry, Faculty of Science, University of Hasanuddin Jl. Perintis Kemerdekaan 90245, Makassar-Indonesia
*Corresponding author, +6281342748502, email: suryasymkim@gmail.com
Received: June 2016 Published: July 2016

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  potential  of  the  methanol  extract  of  the  stem  bark Lannea  coromandelica (Houtt.)  Merr.  against Staphylococcus  aureus and  to  analyze  the  main  secondary  metabolites. Staphylococcus aureus antibacterial  activity  test  was  performed  by  Mueller-Hinton  agar  medium  whereas  the  secondary metabolite  analysis  of  the  methanol  extract  of  the  stem  bark  is  conducted  by  GC-MS  instrument.  Results  of research the methanol extract of bark Lannea coromandelica (Houtt.) Merr showed antibacterial activity against Staphylococcus aureus with inhibition zone diameter each at a concentration of 2.5% by 7.3 mm by 8.6 mm 5% and  10%  of  10.4  mm.  Selanjunya  result  of  analysis  by  using  GC-MS  showed  the  presence  of  compounds 5-hidroksimetilfurfural and compounds 1, 2, 3-benzenetriol potential as an antibacterial Staphylococcus aureus . Furthermore,  the  results  of  analysis  by  GC-MS  instrumeny  showed  the  presence  of  compounds 5-hidroksimetilfurfural and compounds 1, 2, 3-benzenetriol potential as an antibacterial Staphylococcus aureus .
Keywords : Lannea coromandelica (Houtt.) Merr, extract, Staphylococcus aureus, antibacterial, GC-MS

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  masih  merupakan  salah satu  masalah  utama  kesehatan  masyarakat  di negara berkembang dan beriklim tropis termasuk Indonesia.  Kini,  ancaman  dari  penyakit  infeksi itu makin bertambah dengan tingginya penggunaan  antibiotik  berlebihan  yang  memicu resistensi  bakteri  terhadap  antibiotic  (PDPERSI, 2017).  Persoalan  resistensi  antibiotik  terhadap bakteri  tidak  hanya  terjadi  di  Indonesia  tetapi telah  menjadi  salah  satu  persoalan  global  yang cukup  pelik  dan  harus  segera  diatasi  secara bersama-sama.  Berdasarkan  laporan  dari  Badan Kesehatan  Dunia  (WHO)  dalam Antimicrobial Resistance:  Global  Report  on  Survellience menunjukkan  bahwa  Asia  Tenggara  memiliki angka tertinggi dalam kasus resistensi antibiotik, khususnya yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus (Depkes, 2015).
Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri flora  normal  di  tubuh  manusia  yang  dapat tumbuh  secara  opurtunistik  dan  bersifat  patogen pada  kondisi  jaringan  nekrosis  pasca  bedah,
penekanan  respon  imun  yang  terkait  dengan virus,  atau    perubahan  mekanisme-mekanisme pertahanan  hospes  (Shulman,  et  al.,1994;  Roitt 2002). Infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus  aureus dapat  menyebabkan penyakit  infeksi  serius  antara  lain  septikimia, pneumonia, endokarditis, osteomielitis, gastrointeristis  dan  asbes  (Ryan,  et  al.,1994; Mandal, et al., 2006).
Penanganan  kasus  infeksi  yang  resisten terhadap  antibiotik  akan  mempersulit  proses pengobatan  dan  tentu  juga  akan  berpengaruh pada  biaya  pelayanan  kesehatan  menjadi  lebih tinggi.    Oleh  karena  itu  perlu  upaya  lain  untuk menaggulangi  masalah  tersebut  melalui  riset pengembangan  obat  tradisional.  Hal  ini  juga sesuai  dengan  program  pemerintah  untuk menjadikan  tanaman  obat  sebagai  produk fitofarmaka  yang  dapat  dipertanggungjawabkan khasiat dan kegunaannya (Dalimartha,  2003).
Salah  satu  tanaman  obat  yang  berpotensi untuk  dikembangkan  sebagai  obat  antibakteri terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus adalah Lannea  coromandelica Tanaman  ini  secara
empiris  telah  digunakan  oleh  masyarakat  untuk pengobatan  luka  dalam  maupun  luka  luar. Berdasarkan  uraian  di  atas  telah  dilakukan penelitian untuk menentukan efek antibakteri dan analisis  komponen  metabolit  sekunder  utama yang  terdapat  di  dalam  ekstrak  kulit  batang Lannea coromandelica

## METODOLOGI Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah  alat-alat  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium,  timbangan  digital,  oven,  alat kruiser,  kertas  saring,  cawan  petri,  mistar  geser, botol  semprot,  ose,  pembakar  bunsen,  vial, pensil, seperangkat alat destilasi rotary evaporatory,  tabung  reaksi  dan  seperangkat  alat GS MS.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  ekstak  metanol  kulit  batang Lannea coromandelica (Houtt.)  Merr.,  pelarut  metanol yang  berkualitas  teknis  yang  telah  didestilasi, biakan  murni Staphylococcus  aureus ,  medium nutrien agar (NA), aquadest dan kapas.
Prosedur Kerja Kulit batang Lannea coromandelica (Houtt.)  Merr.,  dibersihkan,  dikeringkan  dalam oven  pada  suhu  40 o C  dan  dihaluskan  dengan alat  kruiser.  Sebanyak  250  gram  serbuk  kulit batang  kemudian  diekstraksi  dengan  pelarut metanol dengan cara maserasi selama 1 x 24 jam, sebanyak  3  kali  perlakuan.  Maserat  yang dihasilkan  kemudian  disaring  dan  dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporatory hingga diperoleh ekstrak kental.
Uji  daya  antibakteri  dilakukan  dengan Metode  Difusi  Kertas  Cakram.  Hasil    uji  anti bakteri  didasarkan  pada  luas  diameter  daya hambat  bakteri    yang  terbentuk  disekeliling kertas  cakram.  Masing-masing  sebanyak  20    µl ekstrak  metanol  dengan    konsentrasi  2,5%.  5% dan  10%  dipipet  dan  diteteskan  pada  kertas cakram  yang  telah  disterilkan. Mueller  Hinton Agar (MHA)  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri dengan  ketebalan    ±  0,5  cm  dibiarkan  memadat pada  suhu  kamar.  Kemudian  bakteri  uji diinokulasikan  secara  merata  ke  dalam    medium Mueller  Hinton  Agar (MHA).    Media  agar tersebut didiamkan dalam laminar aseptik selama 30 menit atau sampai agar membeku.
Setelah  media  MHA  tersebut  membeku, setiap  kertas  cakram  yang  telah  ditetesi  dengan ekstrak  metanol  kulit  batang  kayu  kuda  dengan konsentrasi  2,5%,  5%  dan  10%  kertas  cakram control  negatif  yang  telah  dijenuhkan  dengan Dimetilsulfoksida  (DMSA)  dan    control  positif menggunakan  kertas cakram klororamfenikol 30 µg. kemudian diletakkan di atas medium tersebut dengan menggunakan pinset yang telah disterilkan terlebih dahulu. Selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam, setelah  24  jam  diamati  diameter  daya  hambat yang  terbentuk  disekitar  cakram  menggunakan jangka sorong.
Analisis metabolit sekunder dengan menggunakan  seperangkat  alat  kromatografi  gas GC  MS  Thermo  Scientific  Trace  1310.  Sampel ditimbang    sebanyak  0,02  gram  dan  dilarutkan dalam  3  ml  metanol  kemudian  diinjeksikan  ke GC-MS  yang  dioperasikan  menggunakan  kolom kapiler TG-5 MS dengan panjang 30 m, diameter 0,25  mm  dan  ketebalan  0,25  µm  dengan temperatur oven diprogram antara 50 – 300 o C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas  antibakteri    ekstrak  metanol  kulit batang tanaman Lannea coromandelica dari tabel terlihat,  pada  konsentrasi  2,5%    sebesar  7,3  mm atau  30,54%  terhadap  zona  daya  hambat kloramfenikol.
Gambar 1. Hasil uji antibakteri ekstrak metanol kulit batang Lannea coromandelica (Houtt.) Merr. terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Konsentrasi    5%  sebesar  8,6  mm  atau 36,13% terhadap zona daya hambat
kloramfenikol  dan  pada  konsentrasi  10% sebesar  10,4  mm  atau  43,69%  terhadap  zona daya hambat kloramfenikol (Gambar 1). Aktivitas  daya  hambat  antibakteri  terbesar terlihat  pada  konsentrasi  10%.    Hal  ini  karena semakin tinggi konsentrasi  ekstrak maka jumlah senyawa  aktif  yang  berinteraksi  dengan  bakteri uji.  Juga  semakin  tinggi  dan  jumlah  senyawa antimikroba  yang  dilepaskan  semakin  besar, sehingga akan mempermudah penetrasi senyawa ke dalam sel bakteri (Zuhud et al.,2001).
Tabel 1 Rata-rata diameter zona hambat ekstrak ekstrak metanol kulit   batang  (Lannea coromandelica (Houtt.) Merr. terhadap bakteri
Staphylococcus aureu Ekstrak/Senyawa Diameter Zona Hambat (mm) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureu Metanol 2,5% 7,3 Metanol 5,0% 8,6 Metanol 10% 10,4 Kloramfenikol 30µg 23,8
Hasil  uji  antibakteri  ekstrak  metanol  kulit batang Lannea  coromandelica (Houtt.)  Merr., menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri Staphylococcus aureus (Tabel 1).
Analisis  metabolit  sekunder  ekstak  metanol dengan  alat Gas  Chromatography    Mass Spectrometry (GC-MS),  didasarkan  pada    waktu retensi dari senyawa yang diinjeksikan. Keberhasilan  identifikasi  dengan  kromatografi antara  lain  dipengaruhi  oleh  suhu,  tekanan, konsentrasi  fase  gerak  dan  dimensi  kolom.  Fase gerak  untuk  GC-MS  digunakan    pada  penelitian ini  adalah  gas  helium  (He)  dan  jenis  kolom kapiler TG-5 MS yang bersifat non polar. Proses pemisahan  senyawa-senyawa  dalam  kolom, terjadi  dimana  senyawa  yang  bersifat  nonpolar akan  tertahan  lebih  lama  dalam  kolom  dengan waktu  retensi  yang  lebih  lama  dibandingkan dengan  senyawa  yang  bersifat  polar.  Selain  itu pemisahan  juga  terjadi  karena  perbedaan  titik didih,  senyawa  dengan  titik  didih  yang  lebih rendah  akan  memiliki  waktu  retensi  yang  lebih singkat.  Kromatogram  hasil  analisis  sampel ekstrak  metanol  kulit  batang    memperlihatkan  9 peak  utama,  masing-masimg  dengan  waktu retensi  masing-masing  3,55;  5,28;  5,79;  6,07; 6,29;  7,34;  7,82;  9,08  dan  11,35  (Gambar  2). K emudian  ke  kembilan  puncak  utama  ini dianalisis  dan  dibandingkan  dengan  library yang  terdapat  di  dalam  alat  GC-MS  (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil analisis spektrum massa kromatogram sampel
Gambar 3 Spektrogram fraksinasi massa senyawa puncak 5
Gambar 4 Spektrogram fraksinasi massa senyawa puncak 6
Data  hasil  analisis  kesembilan  puncak utama  pada  tabel  2,  terlihat  pada  waktu    retensi 6,29  dan  7,34  masing-masing  diduga  sebagai senyawa  5-hidroksimetilfurfural  dan  1,2,3- benzenetriol (Gambar 3).
Senyawa5-hidroksimetilfurfural,  merupakan senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  sebagai antiinflamasi  (Khodaei,  H.,  dan  Alizadeh,  M., 2016),  sedangkan  1,2,3-benzenetiol  merupakan senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  sebagai antibakteri  (Duke,  et.al.,  2002).  Infeksi  yang disebabkan  oleh  bakteri Staphylococcus  aureus dapat  menyebabkan  radang  supuratif  (bernanah) pada  jaringan  lokal  dan  cenderung  menjadi abses.  Pemberian  obat    yang  mempunyai  efek antinflamasi  dan  antibakteri  diharapkan  dapat mempecepat  penyembuhan  penyakit  akibat infeksi.

## KESIMPULAN
Ekstrak  metanol  kulit  batang Lannea coromandelica (Houtt.)  Merr.  mempunyai  efek antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan  diduga    mengandung  senyawa  aktif 5-hidroksimetilfurfural  serta  antibakteri  1,2,3- benzenetiol. Sehingga berpotensi untuk dikembangkan    sebagai  obat  alternatif  untuk penanganan  penyakit  infeksi  yang  disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim:  www.depkes.go.id  Jakarta,  5  Agustus 2015 Dalimartha,  S.  2003. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia Jilid   2.  Penerbit Trubus Agriwidya , Jakarta James  A.  Duke.,  Mary  Jo  Bogenschutz- Godwin.,  Judi  duCellier.,  Penggy-Ann  K.
Duke,  2002.  Handbook  Of  Medicinal  Speces Crc  Press  Boca  Raton    London    New  York Washington, D.C.
Khodaei,  H.,  Alizadeh,  M.  2016.  Inhibition  of IL-4 not IFN -ɣ Production by Splenocytes of mice  immunized  with  Ovalbumin  After  Oral Administration  of  5-hydroxymethylfurfural.
Journal Food and Agricultural
Immunology,  Tabriz  University  of  Medical Sciences, Tabriz, Iran Mandal, K.B., Wilkins, G.E.,Dunbar,
M.E.,White, M, T.R., 2006. Penyakit  Infeksi, ed.  Ke  6  Penerbit  Erlangga,  Jakarta Publishers.
Pusat Data dan Informasi Persatuan Rumah Sakit
Seluruh Indonesia. 2017 diambil dari http://www.pdpersi.co.id/  content/  news.php? mid=5&catid=2&nid=2483 Ray,  M.,  and  Chikindas,  M.,  2011.  Naural Antimicrobials in Food Safety  Quality, COOK college Rutgers University, USA Roitt,  I.,  2002. Imunologi ,  Edisi  8,  Penerbit
Widya Medika, Jakarta
Ryan KJ, Ray CG.2004.Sherris Medical Microbiology:  An  Introduction  to  Infectious Diseases. Edisi ke-4. McGraw Hill
Ryan,  K.J.,  J.J.  Champoux,  S.  Falkow,  J.J. Plonde, W.L. Drew, F.C. eidhardt,
Shulman, S.T., Phai, P.J., Sommers, M.H., 1994.
Dasar  Biologis  dan  Klinis  Penyakit  Infeksi. Edisi-4.  Penerbit  Gajah  Mada  University, Yogyakarta
Zuhud,  E.A.M.,  W.P.  Rahayu,  C.H.  Wijaya  dan P.P. Sari. 2001. Aktivitas antimikroba ekstrak kedaung (Parkia roxburghii G, Don) terhadap bakteri  patogen.  Jurnal  Teknologi  dan Industri Pangan 12(1):6-12