## POTENSI EKSTRAK KULIT LIMAU BANJAR (Citrus reticulata) DENGAN METODE DPPH SEBAGAI ANTIOKSIDAN
Bela Ghonim Nashucha*, Rakhmadhan Niah, Lutfi Anggraini, Winola Exliscia
Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin
*Email: belanashucha40011@gmail.com
Artikel diterima: 22 Juni 2019; Disetujui: 29 Oktober 2019

## ABSTRAK
Radikal  bebas  merupakan  faktor  yang  menyebabkan  terjadinya  berbagai penyakit  degeneratif.  Penyakit  degeneratif  telah  menjadi  penyebab  kematian terbesar  di  Indonesia,  seperti  kanker,  diabetes,  jantung  dan  penuaan  dini.  Tubuh memerlukan  suatu  substansi  penting  untuk  membantu  melindungi  dari  serangan radikal bebas yang bekerja dengan cara meredam dampak negatif dari senyawa ini yaitu antioksidan. Antioksidan alami dapat diperoleh melalui konsumsi tanaman- tanaman  herbal  yang  mengandung  metabolit  sekunder  antioksidan,  seperti  kulit limau banjar ( Citrus reticulata ). Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antioksidan  ekstrak  kulit  limau  banjar  yang  dinyatakan  dengan Inhibitor Consentration 50 (IC 50 ).  Kulit  limau  banjar  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  aquadest  dan  dilakukan  pengujian  aktivitas  antioksidan menggunakan metode DPPH (1,1- diphenyl -2- picrylhydrazly ) secara spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kulit  limau  banjar  mengandung  antioksidan  yaitu  10  ppm (29,814%),  20  ppm  (35,182%),  30  ppm  (43,482%),  40  ppm  (50,022%),  50  ppm (58,682%)  dengan  nilai  IC 50 sebesar  39,041  ppm  yang  termasuk  dalam  range aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Kesimpulan penelitian adalah ekstrak kulit limau  banjar  sangat  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  sumber  antioksidan alami bagi manusia.
Kata k unci: antioksidan,  aquadest,  DPPH,  IC 50 ,  kulit  limau  banjar  ( Citrus reticulata )

## ABSTRACT
Free  radicals  are  a  factor  that  causes  various  degenerative  diseases  to occur.  Degenerative  diseases  have  become  the  biggest  cause  of  death  in Indonesia, such as cancer, diabetes, heart disease and premature aging. The body needs an important substance to help protect against attacks by free radicals that work  by  reducing  the  negative  effects  of  these  compounds,  namely  antioxidants. Natural  antioxidants  can  be  obtained  through  the  consumption  of  herbal  plants that  contain  secondary  metabolites  of  antioxidants,  such  as  banjar  orange  peel (Citrus reticulata). The aim of this study was to determine the antioxidant activity of banjar orange peel extract which was expressed by inhibitors Consentration 50 (IC 50 ).  The  banjar  orange  peel  was  extracted  by  maceration  method  using
aquadest  solvent  and  antioxidant  activity  was  tested  using  the  DPPH  (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazly) method by UV-Vis spectrophotometry at a wavelength of 517 nm. The results showed that the banjar orange peel contained antioxidants which  were  10  ppm  (29,814%),  20  ppm  (35,182%),  30  ppm  (43,482%),  40  ppm (50,022%), 50 ppm (58,682%) with IC 50 values of 39,041 ppm which is included in the range of very strong antioxidant activity. The conclusion of the study is that the  banjar  orange  peel  extract  has  the  potential  to  be  developed  as  a  source  of natural antioxidants for humans.
Keywords:  antioxidant,  aquadest,  DPPH,  IC 50 ,  banjar  orange  peel ( Citrus reticulata )

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  adalah  suatu senyawa atau molekul yang mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya. (Juniarti, Osmeli, & Yuhernita, 2009). Antioksidan
merupakan senyawa pemberi elektron ( electron donor ) atau reduktan. Senyawa ini memiliki berat molekul kecil, tetapi mampu menginaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi, dengan cara mencegah terbentuknya radikal (Sekar,  2011).  Senyawa  antioksidan yang  dihasilkan  dari  tumbuhan seperti  vitamin  C,  vitamin  E, karoten,  golongan  senyawa  fenolat terutama  polifenol  dan  flavonoid diketahui berpotensi mengurangi resiko  penyakit  degeneratif  tersebut (Prakash,  2001;  Okawa et  al., 2001;
Kuncahyo dan Sunardi, 2007).
Polifenol merupakan senyawa turunan fenol yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan. Antioksidan fenolik biasanya digunakan untuk mencegah kerusakan  akibat  reaksi  oksidasi pada  makanan,  kosmetik,  farmasi dan  plastik  (Suharman,  2018).  Oleh karena  itu,  potensi  tumbuhan  kaya akan antioksidan di daerah Kalimantan perlu dikembangkan.
Limau  atau  biasanya  disebut jeruk  merupakan  salah  satu  buah yang  bisa  dimanfaatkan  sebagai antioksidan.  Limau  khas  daerah Banjarmasin  yaitu  Limau  Banjar ( Citrus reticulata ). Berdasarkan penelitian-penelitian sebelumnya, ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis ( Citrus  aurantifolia )  mengandung senyawa  golongan  flavonoid  dan vitamin  C  yang  berkhasiat  sebagai antioksidan,  ekstrak  etanol  kulit
jeruk  nipis  tersebut  memiliki  nilai IC 50 ( Inhibition  Concentration ) 50 sebesar  54,458  ppm  yang  termasuk dalam  kategori  antioksidan  kuat (Khasanah, et.al .,  2008).  Ekstrak
etanol kulit jeruk siam banjar ( Citrus reticulata )  mengandung  aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 415,17  ppm  yang  termasuk  kategori antioksidan  lemah  karena  berada dalam  range  251-500  ppm  (Putri, et.al., 2018). Berdasarkan  latar belakang  tersebut,  peneliti  tertarik untuk  meneliti  aktivitas  antioksidan ekstrak  kulit  limau  banjar  ( Citrus reticulata )  yang  diekstraksi  dengan
metode maserasi menggunakan pelarut  aquadest  yang  sebelumnya belum  pernah  diteliti.  Dan  diuji secara spektrofotometri UV-Vis
dengan metode DPPH.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan adalah toples, kain hitam, spektrofotometer  UV-Vis, rotary evaporator ,  labu  ukur,  mikro  pipet,
alat-alat  gelas  yang  umum  di laboratorium,  blender,  timbangan, waterbath ,  cawan  porselen,  toples
kaca,  spatula  kayu.  Bahan  yang digunakan  adalah  kulit  limau  banjar yang  diperoleh  di  Kabupaten  Barito Kuala,  vitamin  C,  DPPH,  aquadest, FeCl 3 , alkohol dan tisue.
Pengolahan  Simplisia  Kulit  Limau

## Banjar
Sampel  limau  banjar  yang masih  segar  dicuci  dan  diambil bagian  kulitnya.  Kulit  dikeringkan dibawah  sinar  matahari  dengan ditutup  kain  hitam  sampai  bobot konstan. Selanjutnya sampel dihaluskan  dan  dimasukkan  dalam toples kaca (Fajarwati, 2013).

## Ekstraksi Kulit Limau Banjar
Sampel  sebanyak  310  gram dihaluskan  dan  diekstraksi  dengan metode maserasi menggunakan pelarut  aquadest  sebanyak  220  ml selama 3 x 24 jam dan diaduk setiap 6  jam  sekali  untuk  mempercepat proses  penarikan  senyawa  yang diinginkan.  Selanjutnya  filtrat  yang diperoleh  disaring  dan  residunya dimaserasi  kembali  dengan  pelarut aquadest  selama  3  x  24  jam.  Filtrat hasil  ekstraksi  dipekatkan  dengan menggunakan rotary evaporator pada  suhu  50°C  kemudian  diuapkan kembali di waterbath.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Larutan  induk  dari  ekstrak dibuat  dengan  konsentrasi  100  ppm kemudian  diencerkan  menjadi  10, 20,  30,  40  dan  50  ppm  sebanyak masing-masing  10  ml.  Masing- masing konsentrasi larutan uji sebanyak 2 ml dimasukkan ke dalam tabung  reaksi,  ditambahkan  2  ml larutan DPPH dan diinkubasi  selama 30 menit kemudian didiamkan selama  waktu operating  time yang telah  diperoleh.  Selanjutnya  diukur absorbansinya pada panjang gelombang 517 nm. Sebagai
pembanding  digunakan  vitamin  C konsentrasi  2,  6,  8  dan  10  ppm dengan perlakuan yang sama dengan larutan  uji.  Setelah  didapatkan  % aktivitas antioksidan dilakukan
perhitungan IC 50 menggunakan regresi  linear  (Ghosal  &      Mandal 2012; Nurjannah, et al ., 2011).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bobot  simplisia  kering  yang didapat  sebesar  360  gram.  Hasil susut  pengeringan  adalah  44,615%. Simplisia yang sudah kering disortasi untuk  memisahkan  benda  asing  dan pengotor  lain  yang  masih  tertinggal
pada  simplisia  kering.  Bobot  serbuk simplisia  kering  diperoleh  sebesar
310 gram. Tujuan proses penyerbukan  simplisia  adalah  untuk memperkecil ukuran simplisia sehingga luas permukaan yang kontak  dengan  cairan  penyarinya lebih  luas  dan  proses  penarikan  zat- zat  yang  terkandung  di  dalamnya lebih  optimal.  Ekstrak  kental    yang diperoleh  adalah  37,993  gram  yang berwarna  coklat  dan  berbau  khas. Nilai  rendemen  ekstrak  kulit  limau banjar yaitu 12,26%. Skrining fitokimia menunjukkan adanya senyawa fenol diperoleh hasil positif dengan  menambah  pereaksi  FeCl 3 membentuk warna biru kehitaman.
Penelitian  dilanjutkan  dengan pengujian aktivitas antioksidan secara kuantitatif menggunakan metode DPPH ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazly ). Metode DPPH
dipilih  karena  merupakan  metode yang  sederhana,  mudah,  cepat  dan peka serta hanya memerlukan sedikit sampel  untuk  pengujian  aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam (Molyneux, 2004).
Pengukuran aktivitas
antioksidan  secara  spektrofotometri
dilakukan  pada  panjang  gelombang maksimum DPPH. Panjang gelombang  maksimum  untuk  larutan DPPH  40  ppm  adalah  pada  panjang gelombang 517 nm. Panjang gelombang  maksimum  ini  bertujuan untuk mengetahui absorbansi maksimal dalam pemeriksaan
spektrofotometri karena panjang gelombang maksimum memiliki kepekaan  maksimal.  Metode  uji menggunakan DDPH didasarkan pada  penurunan  absorbansi  akibat perubahan  warna  larutan  warna DPPH,  dimana  DPPH  akan  bereaksi dengan  atom  hidrogen  dari  senyawa peredam  radikal  bebas  membentuk DPPH  Hidrazin  yang  lebih  stabil.
Reagen DPPH yang bereaksi dengan antioksidan akan mengalami perubahan  warna  dari  ungu  ke kuning,  intensitas  warna  tergantung kemampuan dari antioksidan (Molyneux, 2004).
Pengukuran  absorbansi  ekstrak kulit  limau  banjar  dilakukan  pada konsentrasi  10  ppm,  20  ppm,  30 ppm,  40  ppm,  dan  50  ppm.  Data absorbansi dan % hambatan aktivitas antioksidan dari beberapa konsentrasi ekstrak kulit  limau banjar  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Sedangkan kurva regresi linier antara konsentrasi  ekstrak  dan  %  hambatan aktivitas  antioksidan  ekstrak  dapat dilihat pada Gambar 1.
Tabel 1. Data absorbansi dan % hambatan aktivitas antioksidan ekstrak kulit
limau banjar No Konsentrasi Larutan Replikasi Absorbansi pada lamda 517 nm % Aktivitas Antioksidan Rata-rata Aktivitas Antioksidan 1 2 DPPH 10 ppm - 1 0,739 0,519 - 29,769 % 0 % 29,814 % 2 0,519 29,769 % 3 0,518 29,905 % 3 20 ppm 1 0,479 35,182 % 35,182 % 2 0,479 35,182 % 3 0,479 35,182 % 4 30 ppm 1 0,418 43,437 % 43,482 % 2 0,418 43,437 % 3 0,417 43,572 % 5 40 ppm 1 0,368 50,202 % 50,022 % 2 0,369 50,067 % 3 0,371 49,797 % 6 50 ppm 1 0,306 58,592 % 58,682 % 2 0,305 58,592 % 3 0,304 58,863 %
Berdasarkan Gambar 1
menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit limau  banjar  mempunyai  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat  karena mempunyai nilai IC 50 kurang dari 50 ppm  yaitu  sebesar  39,041  ppm. Sedangkan  penelitian  sebelumnya ekstrak etanol kulit jeruk siam banjar
mengandung  aktivitas  antioksidan dengan  nilai  IC 50 sebesar  415,17 ppm  (Putri, et.al., 2018).  Aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat  dari ekstrak  kulit  limau  banjar  sangat berpotensi sebagai bahan baku antioksidan alami.
Gambar 1. Kurva regresi linier ekstrak
Tingginya daya aktivitas antioksidan pada ekstrak bisa dikarenakan dari pelarut yang digunakan  pada  saat  ekstraksi  yaitu menggunakan  pelarut  aqudest  yang merupakan  pelarut  polar,  yang  mana semakin  polar  pelarut maka  semakin banyak komponen senyawa metabolit sekunder yang tertarik dari senyawa  polar  tanaman  tersebut, maka semakin
banyak antioksidannya.  Semakin  kecil  nilai
IC 50 didapatkan maka semakin tinggi nilai  IC 50 senyawa  yang  bersifat antioksidan  untuk  melawan  radikal bebas (Niah dan Dwi, 2018).
Data absorbansi dan % inhibisi dari  beberapa  konsentrasi  vitamin  C (2  ppm,  6  ppm,  8  ppm  dan  10  ppm) dapat dilihat pada Tabel 2 dan kurva regresi  linier  antara  konsentrasi vitamin  C  dan  %  inhibisi  vitamin  C dapat dilihat Gambar 2.
y = 0.7258x + 21.664 R² = 0.9948 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 % Ha m b at an a kt iv it as a n ti o ks ida n Konsentrasi (ppm)
Tabel 2. Data absorbansi dan % hambatan aktivitas antioksidan vitamin C
No Konsentrasi Larutan Replikasi Absorbansi pada lamda 517 nm % Aktivitas Antioksidan Rata-rata Aktivitas Antioksidan 1 DPPH 1 0,739 - 0    % 2 2 ppm 1 0,483 34,641 % 34,641 % 2 0,483 34,641 % 3 0,483 34,641 % 3 6 ppm 1 0,390 47,225 % 47,18 % 2 0,391 47,090 % 3 0,390 47,225 % 4 8 ppm 1 0,313 57,645 % 57,735 % 2 0,312 57,780 % 3 0,312 57,780 % 5 10 ppm 1 0,282 61,840 % 61,75 % 2 0,283 61,705 % 3 0,283 61,705 %
Gambar 2. Kurva regresi linier vitamin C
Berdasaran Gambar 2 menunjukkan  bahwa  vitamin  C sebagai  pembanding  atau  kontrol positif mempunyai
aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat  karena mempunyai nilai IC 50 kurang dari 50 ppm yaitu sebesar 6,407 ppm.
Kurva  pada  Gambar  1  dan Gambar 2 diperoleh dengan menggunakan  regresi  linier  pada
aplikasi microsoft excel 2013. Koefisien  y  pada  persamaan  linier bernilai  50  merupakan  koefisien IC 50 .  Sedangkan  koefisien  x  pada persamaan  linier  ini  merupakan konsentrasi  ekstrak  yang  akan  dicari nilainya,  dimana  x  yang  diperoleh merupakan besarnya konsentrasi yang diperlukan untuk dapat meredam  50%  aktivitas  radikal
y = 3.5215x + 27.437 R² = 0.9835 0.000 10.000 20.000 30.000 40.000 50.000 60.000 70.000 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 % Ha m b at an a kt iv it as a n ti o ks ida n Konsentrasi (ppm)
DPPH.  Nilai  R 2 yang  mendekati  +1
(bernilai positif) menunjukkan korelasi yang baik antara konsentrasi sampel  dengan  %  inhibisi  (Harmita, 2004).
Berdasarkan Tabel 1 dan Tabel 2,  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak kulit  limau  banjar  dan  vitamin  C, menunjukkan  dengan  bertambahnya konsentrasi  ekstrak  maupun  vitamin C  maka  semakin  kecil  absorbansi DPPH sehingga peningkatan konsentrasi  hambat  radikal  bebas
DPPH  semakin  besar  (aktivitas
antioksidan juga meningkat).
Semakin  banyaknya  senyawa antioksidan akan menyebabkan semakin besar pula peredaman warna ungu  dari  DPPH  sehingga  nilai absorbansi  yang  diperoleh  semakin kecil.  Peredaman  tersebut  dihasilkan oleh  bereaksinya  molekul  DPPH dengan atom hidrogen yang
dilepaskan  satu  molekul  komponen sampel  sehingga  terbentuk  senyawa 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin  (DPPH- H)  dan  menyebabkan  terjadinya peluruhan warna DPPH dari ungu ke kuning (Zuhra et al., 2008).

## KESIMPULAN
Ekstrak kulit limau banjar yang diekstraksi  dengan  pelarut  aquadest memiliki  aktivitas  antioksidan  yang sangat  kuat  dengan  nilai  nilai  IC 50 sebesar  39,041  ppm.  Sedangkan vitamin  C  memiliki  nilai  IC 50 yang lebih  besar  dari  pada  ekstrak  yaitu sebesar  6,407  ppm  yang  termasuk dalam  range  aktivitas  antioksidan yang  sangat  kuat.  Hal  tersebut menunjukkan  ekstrak  aquadest  kulit limau  banjar  memiliki  aktivitas antioksidan yang sama-sama termasuk kategori sangat kuat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih diucapkan kepada  RISTEKDIKTI  yang  telah membantu  penelitian  ini  dengan skim  riset  PKM-  penelitian  tahun pendanaan 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Fajarwati, Nilam. 2013, ‘ Uji
Aktivitas  Antioksidan  Pada
Ekstrak  Daun  Jeruk  Nipis (Citrus  Aurantifolia)  Dengan Menggunakan  Metode  DPPH
(1,1Diphenyl-2-
Picrylhydrazyl) ’. Skripsi, Program Study Pendidikan Dokter  Fakultas  Kedokteran
UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta. Ghosal,  M  And  Mandal,  P.  2012, Phytochemical  Screening  and Antioxidant  Activities  of  Two Selected  ‘Bihi’  Fruits  Used  as Vegetables In Darjeeling Himalaya. International Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences , ISSN: 0974-1491. Harmita, 2004, ‘Petunjuk Pelaksanaan  Validasi  Metode dan Cara Perhitungannya’, Departemen Farmasi FMMIPA-UI  Majalah  Ilmu Kefarmasiaan. Vol.  1,  No.  3, hal 117-135.
Juniarti,  Osmeli,  D.,  &  Yuhernita, 2009,  ‘Kandungan  Senyawa Kimia,  Uji  Toksisitas  (Brine Shrimp  Lethality  Test)  dan Antioksidan  (1,1-Diphenyl-2- Pikrilhydrazyl)  dari  Ekstrak Daun  Saga (Abrus  precatorius L.)’,  Makara  Sains, 13(1),  50- 54.
Khasanah,  I.,  Ulfah,  M.,  Sumantri, 2008, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Etanolik  Kulit  Buah Jeruk Nipis (Citrus Aurantifolia)  Dengan  Metode DPPH (1,1- Difenil-2- Pikrilhidrazil), Semarang & Yogyakarta, Hal: 16. Kuncahyo,  I.,  Dan  Sunardi.,  ‘Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa bilimbi L) terhadap 1,1 Diphenyl -2- Picrylhidrzyl
9DPPH )’,  Seminar  Nasional Teknologi 2007 (SNT 2007), ISSN : 1978-9777
Molyneux,  P,  2004,  ‘The  use  of  the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant  activity’ ,J.  Sci., Technol , 26(2), 211-219.
Niah Rakhmadhan, Dwi Rizki Febrianti, 2018,  ‘Optimasi
Ekstrak  Daun  Karamunting ( Melastoma Malabathricum L.) Dari  Berbagai  Pelarut  Sebagai Antibakteri Tifoid’, Jurnal
Insan  Farmasi  Indonesia, 1(2) 191-200.
Nurjannah,  Izzati,  dan  Abdullah, 2011,  ‘Aktivitas  Antioksidan dan Komponen Bioaktif Kerang  Pisau  ( Solen sp.)’, Jurnal  Ilmu  Kelautan Vol  16 (3); hal.119-124. ISSN
Okawa,  M.,  J.  Kinjo,  T.  Nohara,  M.
Ono., 2001, ‘Modification Method  DPPH  (1,1-Diphenyl- 2-Picrylhydrazyl) radical Scavenging Activity of Flavonoid Obtained from Some  Medicinal  Plants’, Biol.
Pharm.,  Bull 24  (10):  1202-
1205
Prakash, A.,2001, Antioxidant Activity. Medallion Laboratories: Analytical Progress Vol 19 No 2: 1-4 Putri,  A.  L.,  Rakhmadhan  Niah  dan Dwi  Rizki  Febrianti,  2018,  Uji Antioksidan  Ekstrak  Etanol Kulit Jeruk Siam Banjar ( Citrus reticulata )
Menggunakan  metode  DPPH
(1,1 Diphenyl -2- Picrylhidrzyl ),
Banjarmasin.
Sekar,  TR.,  2011, Manfaat  Buahan- Buahan di Sekitar Kita . Siklus:
Yogyakart. Hal: 55-56
Suharman,  2018, Gambir  Peluang Pasar, Budidaya dan Pengolahannya, Edisi  ke-1, Yogyakarta, Deepublish. Zuhra,  C.  F.,  Tarigan,  J.  B.,  &
Sihotang,  H.,  2008,  ‘Aktivitas
antioksidan  senyawa  flavonoid dari  daun  katuk (Sauropus androgunus (L) Merr.)’, Jurnal Biologi  Sumatera, 3(1),  7-10.