Ekologia , Vol. 15  No.2 , Oktober  2015: 21-32
POTENSI ESTROGENIK KOMBINASI EKSTRAK ETANOL 70% HERBA KEMANGI ( Ocimum americanum ) DAN  BUAH ADAS ( Foeniculum vulgare ) PADA TIKUS  PUTIH ( Rattus norvegicus ) BETINA PRE-MENOPAUSE
E. Mulyati Effendi 1 , Hera Maheshwari 2 dan Mar’atul Husna 3 1,3 Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan, Bogor
2 Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
E-mail : mulyaticandra@ymail.com

## ABSTRACT
At the end of their fertile phase, female under go menopause state where ovaries cease to  produce  egg  cells  permanently,  causing  follicle  to  stop  producing  estrogen.  The degradation  of  estrogen  concentration in blood has significant undersirable influences on the structure  and  function  of  other  organs.  Some  plants  believed  to  have  potential  estrogenic effect  based  on  several  research  are  herb  basil  ( Ocimum  americanum L.)  and  fennel  fruit ( Foeniculum  vulgare Mill.).  This  research  armed  to  find  out  the  estrogenic  potency  and synergic  or  antagonictic effect  of 70%  ethanol extract  of herb  basil and  fennel  fruit  on  pre- menopause  female  rats.  Twenty  pre-menopause  female  rats  are  divide  into  5  groups  and tested  with  whitten  effect  method.  Group  I  as  positive  control  is  given  peroral  ethynil estradiol with 9x10 -3 g/200g  BB, group II as negative control is  given peroral CMC-Na 0,5%, group  III  is  given  peroral  70%  ethanol  extract  of  basil  herb  0,35g/200g  BB  and  fennel  fruit 0,0725g/200g  BB,  group IV is given  peroral 70% ethanol extract of herb basil 0,35g/200g BB and  fennel  fruit  0,145g/200g BB  and  group  V  is  given  peroral  70%  ethanol  extract  of  herb basil 0,7g/200g BB and fennel  fruit 0,0725g//200g BB. The result shows that administration of 70%  ethanol  extract  of herb  basil  0,7g/200g BB  and  fennel  0,0725g/200g  BB  gave  the  most significant  effect  as  compared  negative  control  and  better  than  positive  control  in  the improvement  of  estrous  cycle  length,  the  vascularisation  of  ovarium  and  uterus,  and  the increase in ovarium and uterus weight in female rats.
Key words : Estrogenic potential, Herb basil, Fennel fruit, Pre-menopause

## PENDAHULUAN
Saat  akhir  masa  reproduksi,  wanita mengalami  menopause  dimana  cadangan sel  telur  dalam  ovarium  sudah  tidak  ada, akibatnya  sintesis  hormon  estrogen  oleh folikel  juga  tidak  berlangsung.  Penurunan kadar  estrogen    dalam  darah  akan  berpe- ngaruh  pada  struktur  dan  fungsi  organ- organ  tubuh  dan  dapat  mengakibatkan osteoporosis (kerapuhan tulang),
takikardia ,  sakit  punggung  dan  lain-lain (Sutedjo, 2008). Osteoporosis pada manusia postmenopausal disebabkan  oleh kepadatan  tulang  yang  menurun  akibat menurunnya produksi  estrogen  serta terjadi penyusutan  tulang  sekitar  10-20%  (Tjay dan Rahardja, 2007).
Menyadari pentingnya estrogen bagi kesehatan  dan  untuk  mengurangi  efek samping  penggunaan  estrogen  sintesis seperti etinil  estradiol ,  maka  dewasa  ini pengobatan  dengan Hormone  Replacement Therapy (HRT)  beralih  pada  penggunaan obat-obatan  berasal  dari  bahan  alam. Beberapa  hasil  penelitian  tanaman  yang diduga memiliki khasiat estrogenik diantaranya kemangi ( Ocimum americanum L.)    dan  adas  ( Foeniculum vulgare Mill.),  namun  masih  diperlukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  pengaruh kombinasi  kedua  tanaman tersebut.
Adas  memiliki  kandungan  aktif dianethol  dan  stigmasterol  yang  dapat merangsang  hormon  estrogen  (Winarto,
2007). Hasil penelitian terdahulu
menyimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  serta ekstrak  metanol  buah  adas  memiliki khasiat estrogenik karena terbukti meningkatkan vaskularisasi, bobot ovarium,  dan  uterus  tikus  putih  usia produktif. Dilaporkan juga bahwa pemberian  ekstrak etanol  buah adas tersebut    pada  berbagai  dosis,  menunjuk- kan  hasil    yang  berbeda  nyata  terhadap peningkatan kadar estrogen darah, terutama pada  dosis  3,88g/200g  BB  (Carolina, 2007).
Kemangi  memiliki  kandungan  aktif anetol,  boron  dan  stigmasterol  yang  dapat merangsang  sekresi  estrogen  (Winarto, 2007). Hasil  yang diperoleh dari penelitian sebelumnya  menunjukkan  bahwa  aktifitas ekstrak  etanol  70%  herba  kemangi  dosis 0,8g/200g BB dapat  meningkatkan  aktifitas estrogenik  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus ) betina  pre-menopause  dan  setara  dengan kontrol  positif etinil  estradiol 9x10 -3 mg/200g BB (Effendi dkk., 2009). Aktifitas  estrogenik  herba  kemangi  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol 70%  buah  adas  yang  memiliki  aktifitas estrogenik  pada  dosis  1,94g/200g  BB (Carolina, 2007).
Yinghong et al. , (2007) menyatakan bahwa  herbal  yang  dikombinasi  terbukti lebih  efektif  karena  kombinasi  tersebut memiliki  efek  keseimbangan  yang  lebih dalam  tubuh,  oleh  karena  itu,  penelitian mengenai  potensi  estrogenik  kombinasi herba  kemangi  ( Ocimum  americanum L . ) dan  buah  adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.) masih  perlu  dilakukan  untuk  mengetahui efek  sinergis  atau  antagonis dari  kombinasi tersebut  serta mengetahui dosis paling tepat yang  berpotensi  estrogenik  dari  kombinasi kedua tanaman tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  70%  Herba Kemangi dan Buah Adas
Sebanyak  0,5  kg  serbuk  simplisia  yang telah  diayak,  diekstrak  dengan  menggu-
nakan  metode  maserasi,  dengan  5  L  etanol 70%  (1:10),  didiamkan  dalam  tabung selama  2  hari  dan  dilakukan  pengadukan setiap  6  jam  kemudian  disaring  dan ampasnya  dimaserasi  kembali  sebanyak  2 kali  dengan      perlakuan      yang      sama. Maserat      yang  diperoleh  divakum  untuk memperoleh  ekstrak kering  kemudian dilakukan  uji  fitokimia  (Purnomo  dkk., 2013) yang dilanjutkan dengan uji estrogenik.  Begitupun  dengan  buah  adas. Rendemen  ekstrak  etanol  dihitung  dengan membandingkan  berat  awal  simplisia  dan berat  akhir ekstrak yang  dihasilkan. Rendemen  merupakan  parameter  standar mutu  ekstrak  serta  penentuan  efesiensi ekstraksi.

## bobot ekstrak yg dipero1eh
Rendemen  =                                                      x 100%
bobot awa1 simp1isia
Analisis Karakteristik Simplisia dan ekstrak  Penetapan  Kadar  Air  dan Kadar Abu
Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat moisture balance .  Kadar  air  simplisia  tidak  boleh lebih  dari  10%  (DepKes  RI,  1995)  dan kadar  air  ekstrak  kental  tidak  lebih  dari 10%  (Depkes  RI,  2008).  Kadar  abu  total simplisia  tidak  lebih  dari  13,1%  (DepKes RI, 2008).
Bobot abu yg diperoleh % kadar abu =                                        100% Bobot awal simplisia
Uji Fitokimia a. Senyawa Alkaloid Sebanyak  0,5 g sampel  dilarutkan secara  terpisah  dengan  10  ml  alkohol, dididihkan,  dan  disaring.  Dalam  5  ml filtrat  ditambahkan  2  ml  ammonia  encer dan  5  ml  kloroform  lalu  digoyangkan perlahan untuk mengekstraksi basa alkaloid.  Diambil  lapisan  kloroform, diekstraksi  dengan  10  ml  asam  asetat. Kemudian  dibagi  menjadi 3 bagian:
1. Tes  Dragendroff  (Protasium  Bismuth
Nitrat): Beberapa tetes larutan dragendroff  ditambahkan  ke  dalam larutan  kloroform.  Endapan  merah bata/coklat  kemerahan  mengindikasikan adanya  alkaloid.
2. Tes  Mayer  (Potasium  Merkuri  Iod): beberapa tetes reagen mayer ditambahkan ke dalam larutan kloroform.       Endapan        putih      krem menandakan adanya alkaloid.
3. Tes  Wagner  (Iodine  dalam  Potasium Iodide):  beberapa  tetes  larutan  wagner ditambahkan ke dalam larutan kloroform.  Endapan  berwarna  coklat menandakan  adanya  alkaloid  (Rajendra et al ., 2011).

## b.  Senyawa  Saponin
Uji  busa:  Sebanyak  0,5  g  sampel d imasukan  kedalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  5  ml  air  suling.  Kemudian tabung  dikocok  dengan  kuat,  lalu  diamati buih  yang dihasilkan. Buih  yang dihasilkan ditambahkan  3  tetes  minyak  zaitun  dan dikocok  dengan  kuat  setelah  itu  amati pembentukan  emulsi  (Rajendra et  al ., 2011).
c. Senyawa Flavonoid Metode  untuk  menguji  flavonoid (Rajendra et  al ., 2011):
1. Ditambahkan  beberapa  tetes  FeCl3 netral  1%  kedalam  sampel,  hasil positif  flavonoid  ditandai dengan warna hijau kehitaman.
2. Ditambahkan  beberapa  tetes  timbal asetat  kedalam  sampel,  hasil  positif flavonoid  ditandai dengan terbentuknya endapan kuning.
3. Beberapa  bagian  ekstrak  dilarutkan dalam  metanol,  kemudian  tambahkan sepotong  kecil  pita  magnesium,  lalu tambahkan  1  ml  HCl  pekat  melalui dinding tabung. Warna magenta mengindikasikan adanya flavonoid.
d. Senyawa Steroid-Triterpenoid Sebanyak  25  mg  sampel  dilarutkan
dengan  kloroform,  disaring  dan  filtratnya dilakukan  pengetesan  untuk  steroid  dan triterpenoid.
1. Tes   Salkowski:   Beberapa   tetes   asam sulfat ditambahkan ke larutan kloroform dan  diamati.  Warna  merah  di  lapisan bagian  bawah  mengindikasikan  adanya steroid  dan  warna  kuning  keemasan mengindikasikan adanya  triterpenoid.
2. Tes  Liberman  Buchard:  Beberapa  tetes asetat  anhidrat  ditambahkan  kedalam larutan  kloroform      lalu     digoyangkan agar      teraduk  sempurna,  1  ml  asam sulfat  dimasukkan  dengan  hati-hati melalui  sisi  tabung.  Warna  coklat kemerahan  mengindi-  kasikan  adanya steroid dan cincin kemerahan mengindikasikan  adanya  triterpenoid (Rajendra et al ., 2011).

## e. Senyawa Tanin
1. Uji  dengan  FeCl3:  Sebanyak  0,5  g sampel  dididihkan  dengan  10  ml  air lalu  saring,  kedalam  filtrat  ditam- bahkan  beberapa  tetes  larutan  FeCl3 0,1%.  Warna  hijau  kecoklatan  atau biru kehitaman mengindikasikan adanya  tanin.
2. Uji  dengan  Gelatin:  Beberapa  ml larutan  gelatin  1%  di  dalam  sodium klorida  10%  dimasukkan  ke  dalam sampel  dan  diamati.  Endapan  putih mengindikasikan adanya tannin (Rajendra et al ., 2011).

## Tahap  Pra-Penelitian  (Adaptasi   dan
Whitten  Effect ) Pada masa adaptasi, tikus yang digunakan  untuk  penelitian  memiliki  berat badan  200-250  g,  semua  tikus  yang digunakan  untuk  penelitian  diadaptasikan selama  1  minggu,  selanjutnya  untuk menyeragamkan  birahi  dilakukan  metode Whitten  Effect .  Metode  ini  dilakukan dengan cara kandang tikus jantan diletakkan  di  atas  kandang  tikus  betina. Whitten  effect berfungsi  untuk  sinkronisasi birahi  pada  tikus  betina  dengan  mencium
bau  feromon  yang  keluar  bersama  urin jantan  tikus  jantan.  Ketika  tikus  betina tidak  mencium  bau  feromon  tikus  jantan, maka  tikus  mengalami  fase  anestrus, sedangkan  pada  saat  tikus  betina  mencium bau  feromon   yang   ikut   keluar   bersama urin    tikus  jantan,  maka  hari  ke  3 berikutnya  tikus  betina  mengalami  masa estrus,  ciri-ciri  hewan  estrus  dapat  dilihat dari keadaan vulva yang bengkak, berwarna merah dan basah (Hafez, 1980).

## Pemeriksaan Preparat Ulas Vagina
Pemeriksaan  preparat  ulas  vagina untuk  menentukan  fase  siklus  reproduksi dilakukan menggunakan mikroskop dengan pembesaran okuler  10x  dan objektif 40x. Penentuan fase siklus reproduksi  (proestrus,  estrus,  metestrus, dan  diestrus)  dilakukan  dengan  mengamati ciri  khas  yang  terdapat  pada  siklus reproduksi.

## Penentuan Aktifitas Estrogenik
Untuk penentuan aktifitas
estrogenik dilakukan pengelompokkan tikus  percobaan  menjadi  5  kelompok secara  acak,  masing-masing  kelompok terdiri  dari  4  ekor  tikus.  Masing-masing kelompok mendapatkan perlakuan :
1. Kelompok  I:  kontrol  positif,  diberi peroral  etinil  estradiol  dengan  dosis 9x10-3g/200g  BB  dalam  CMC-Na  0,5 % sebanyak 3 ml (Effendi  dkk., 2009)
2. Kelompok  II:    kontrol    negatif    diberi peroral CMC-Na 0,5% sebanyak 3 ml.
3. Kelompok III:  diberi peroral kombinasi ekstrak  etanol  70%  herba  kemangi 0,35g/200g  BB  dan  buah  adas  dengan dosis 0,0725g/200g  BB.
4. Kelompok IV: diberi peroral kombinasi  ekstrak  etanol  70%  herba kemangi 0,35g/200g  BB  dan  buah  adas dengan  dosis  0,145g/200g  BB tikus.
5. Kelompok  V:  diberi  peroral  kombinasi ekstrak  etanol  70%  herba  kemangi 0,7g/200g  BB  dan  buah  adas  dengan dosis 0,0725g//200g BB  tikus.
Pemberian  ekstrak  herba  kemangi
dan buah  adas dilakukan setiap hari selama 14  hari  berturut-  turut.  Pemeriksaan  fase estrus  dilakukan  setiap  hari,  dua  kali sehari,  pagi  07.00  WIB  dan  malam  pada pukul    19.00    WIB    selama    masa perlakuan.  Pada  hari  ke-15  dilakukan dekapitasi  hewan-hewan  coba  tersebut untuk  mengamati  vaskularisasi  uterus  dan mengoleksi  ovarium  dan  uterus  serta menimbang bobot keduanya .
Parameter dan Cara Pengamatan A. Pengukuran Lama Fase Estrus Pengukuran lama fase estrus dilakukan  dengan  metode  preparat  ulas vagina  ( Vagina  Smear )  dan  tanda-tanda estrus  (Hafez,  1980).  Pembuatan  preparat ulas  vagina  dilakukan  setiap  hari,  dua  kali sehari, pagi dan sore  hari selama perlakuan, sekaligus melihat tanda-tanda estrus meliputi  keadaan vulva dan vagina.

## B. Vaskularisasi  Ovarium  dan  Uterus Tikus
Pengamatan  vaskularisasi  ovarium  dan uterus  pada  tikus    betina    dilakukan dengan   cara   mematikan  tikus dengan eter pada  tikus  yang  mengalami  masa  estrus, lalu dibedah untuk dikeluarkan ovarium dan uterusnya,  setelah  itu  melihat  warna mukosa  pada  ovarium  dan  uterus  tikus. Pengamatan vaskularisasi dinyatakan dengan  scoring,  sesuai  dengan  modifikasi metode Rugh (1968), dimana : Skor 1 Sedikit Merah Skor 2 Merah Skor 3 Sangat Merah C. Penimbangan  Bobot  Ovarium  dan
Uterus Tikus
Setelah dilakukan penelitian
aktifitas estrogenik, tikus dimatikan dengan  menggunakan  eter  lalu  dibedah dan  dikeluarkan  ovarium  serta  uterusnya, kemudian  dilakukan  penimbangan  bobot ovarium  dan  uterus.  Untuk  menimbang dilakukan  dengan  menggunakan timbangan analitik.
HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil  Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Herba Kemangi dan Buah Adas
Hasil ekstraksi serbuk herba
kemangi  d e n g a n   pelarut    etanol    70% menghasilkan  5  L ekstrak encer,  kemudian ditambahkan  maltodextrin  lalu  dikeringkan menggunakan vaccum rotavapor dan menghasilkan  ekstrak  kering  +  malto dekstrin sebanyak 413g.  Penambahan maltodekstrin sebelum pengeringan sebanyak  360  g  sehingga  berat  murni ekstrak  adalah  53  g.  Rendemen  herba kemangi  yang  didapatkan  yaitu  10,6  %. Rendemen  merupakan  parameter  standar mutu  ekstrak  serta  penentuan  efesiensi ekstraksi.  Hasil herba kemangi,  serbuk dan ekstrak  kering  herba  kemangi  dapat dilihat pada Gambar 1.
A B C D Gambar  1 .A.  Simplisia  basah  herba  kemangi; B. Simplisia  kering herba kemangi; C.  Serbuk  kering  herba  kemangi;
D. Ekstrak kering herba kemangi
Hasil  Pembuatan   Ekstrak  Etanol  Buah Adas  ( Foeniculum vulgare Mill.)
Sebanyak  0,5  kg  serbuk  buah  adas diekstraksi  dengan  menggunakan  metode maserasi  menggunakan  pelarut    etanol 70%  dengan  perbandingan  1:10  mengha- silkan  5  L  ekstrak  encer,  kemudian ditambahkan  maltodextrin  lalu  dikeringkan menggunakan vaccum rotavapor dan menghasilkan  ekstrak  kering  +  maltodeks- trin  sebanyak  45,7g.  Penambahan  malto- dekstrin  sebelum  pengeringan  sebanyak 400g  sehingga  berat  murni  ekstrak  adalah 52,7g. Rendemen buah adas yang didapatkan yaitu 10,54%. Rendemen merupakan parameter standar mutu
ekstrak
serta  penentuan  efesiensi  ekstraksi.  Hasil buah  adas,  serbuk dan  ekstrak  kering  buah adas  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
A B C Gambar 2 . A. Simplisia kering buah adas; B. Serbuk kering  buah adas;
C. Ekstrak kering buah adas
Hasil  Karakteristik  Simplisia  dan Ekstrak  Hasil  Kadar  Air  dan  Kadar Abu
Hasil penetapan kadar air disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1. Hasil  Pemeriksaan  Kadar  Air Serbuk  Simplisia dan Ekstrak
Jenis Bahan Ulangan Kadar Air  (%) Rata- Rata  ( %) Herba Kemangi Simplisia 1 4,60 4,71 2 4,82 Ekstrak 1 3,54 3,43 2 3,32 Buah  Adas Simplisia 1 4,01 4,21 2 4,41 Ekstrak 1 3,11 3,23 2 3,35
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh, kadar  air  serbuk  simplisia  dan  ekstrak herba  kemangi  dan  buah  adas  memenuhi persyaratan  (DepKes  RI,  1989) yaitu kadar air  tidak  boleh  lebih  dari  10  %.  Semakin kecil kandungan air dalam  suatu  simplisia, maka  akan  sangat  berguna  untuk  memper- panjang  daya  tahan  serbuk  simplisia selama  penyimpanan.  Kadar  air  yang terlalu  kecil  dapat  merusak  senyawa  aktif yang  terkandung  dalam suatu simplisia.
Hasil  penentuan  kadar  abu  pada simplisia  herba  kemangi  dan  buah  adas dapat  dilihat  pada  Tabel 2.
Tanaman Golongan Senyawa Simplisia Ekstrak Herba Kemangi Alkaloid + + Saponin + + Tannin + + Flavonoid + + Steroid - - Triterpenoid + + Buah Adas Alkaloid + +
Saponin + + Tannin + + Flavonoid + + Steroid + +
Triterpenoid - -
Tabel  2. Hasil  Pemeriksaan  Kadar  Abu Serbuk  Simplisia dan Ekstrak.
Jenis Bahan Ulangan Kadar Abu (%) Rata-Rata (%) Herba Kemangi Simplisia 1 12,3 12,21 2 12,21 Ekstrak 1 4,53 4,575 2 4,62 Buah Adas Simplisia 1 10,07 9,995 2 9,92 Ekstrak 1 3,41 3,31 2 3,21 Hasil pemeriksaan kadar abu memenuhi syarat sesuai Departemen Kesehatan  (2008)  yang  menyatakan  bahwa kadar  abu  total  simplisia  tidak  lebih  dari 13,1%.  Pengotor  mineral  yang  melebihi batas akan mempengaruhi kualitas senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam simplisia.

## Hasil Uji Fitokimia
Keseluruhan  uji  fitokimia  menunjukkan hasil positif (Tabel 3.)
Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia pada Simplisia dan  Ekstrak
Keterangan : (+) : terdapat (-)  : tidak terdapat
Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol Herba  Kemangi  ( Ocimum  americanum L.)  dan  Buah  Adas ( Foeniculum vulgare

## Mill.) Terhadap  Lama Fase Estrus
Siklus  estrus  terdiri  dari  proestrus (12  jam),  estrus  (12  jam),  metestrus  (21 jam)  dan  diestrus  (57  jam)        yang keseluruhan    berjumlah    4-5    hari (Syamsudin  dan  Darmono,  2011;  Hafedz, 1980).
Hasil  pengujian  ekstrak  etanol herba  kemangi  ( Ocimum  americanum L.) dan  buah  adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.) terhadap  lama  fase  estrus  dilakukan  setiap 12  jam  sekali  dengan  mengamati  sel-sel yang  ditemukan  dalam  apusan  vagina secara mikroskopik, yang dapat dilihat pada Tabel 4.

## Tabel 4. Lama Fase Estrus
Jumlah Ulangan Lama Fase Estrus (Jam) Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 1 144 100 160 174 186 2 146 96 163 175 178 3 150 104 168 171 180 4 148 110 165 174 - Total 588 410 656 694 544 Rata- rata 147b  102,5 a 164c  173,5d 181, 3e
Ket :  Huruf  superscript  yang  berbeda, menyatakan pengaruh    yang  sangat  berbeda nyata pada setiap perlakuan (P<0,01).
P1 = kontrol positif (ethinyl estradiol 9x10 -3 mg/200g BB) P2 = kontrol negatif (CMC-Na 0,5%)
P3= kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba  kemangi 0,35g/200g  BB dan buah   adas 0,0725g /200g BB.
P4= kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba  kemangi 0,35g/200g  BB dan buah adas 0,145g/200g BB P5= kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi 0,7g/200g
BB dan buah adas 0,0725g /200g BB.
Gambar 3. Diagram Lama Fase Estrus
Hasil  pengujian  pada  Tabel  4 berdasarkan  rata-rata  lama  fase  estrus menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol herba kemangi ( Ocimum americanum L.) dan buah adas ( Foeniculum  vulgare Mill.)  pada  tikus putih  cenderung  memperpanjang lama  fase estrus.  Diagram  perbedaan  pengaruh  ini dapat dilihat  pada Gambar 3.
Hasil  uji  statistik  diketahui  bahwa CMC-Na  sebagai  kontrol  negatif  (P2), etinil estradiol sebagai  kontrol positif (P1), kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g  /200g  BB  sebagai  dosis  1  (P3), kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,145g/200g  BB  sebagai dosis  2  (P4) dan kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memberikan  pengaruh  yang sangat berbeda nyata  terhadap  lama  fase  estrus.  Hal  ini dibuktikan  dengan  nilai  sig  =  0.000 (P<0,01).  Untuk  mengetahui  perbedaan antar  perlakuan  dilanjutkan  dengan  uji Duncan.
Hasil  uji  Duncan  menunjukkan bahwa semua perlakuan memberikan pengaruh  yang  sangat  berbeda  nyata. Pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol  70  % herba  kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah adas 0,0725g/200g BB sebagai dosis 1 (P3) dan  kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba
kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,145g/200g  BB  sebagai  dosis  2  (P4)  dan kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memberikan  pengaruh  yang sangat  berbeda nyata  dibandingkan  kontrol  negatif  (P2) dan  lebih  baik  dari  kontrol  positif  (P1). Maka  dapat  diketahui  bahwa  pemberian dosis terendah kombinasi ekstrak etanol  70 % herba kemangi 0,35g/200g BB dan buah adas  0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  1 (P3)  pun  sudah  memberikan  pengaruh yang  sangat  berbeda  nyata  dibandingkan kontrol  negatif  (P2)  dan  lebih  baik  dari kontrol positif (P1).
Peningkatan  lama  fase  estrus  ini dipengaruhi  oleh  peningkatan  produksi estrogen  di  dalam  tubuh  tikus.  Fungsi utama estrogen adalah menimbulkan proliferasi  sel  dan  pertumbuhan  jaringan organ-organ  kelamin  serta  jaringan  lain yang berkaitan dengan reproduksi (Mutscher,1991). Estrogen  pada  buah adas pada  fase  proestrus  diduga  menyebabkan proliferasi  sel  epitel  vagina  dan  pada  fase estrus diduga  menyebabkan  kornifikasi  sel epitel  vagina  (Setiawan,  2010).  Begitupun pada  herba  kemangi.  Hal  ini  terlihat  pada peningkatan  lama  fase  estrus  pada  tikus yang  diberikan  kombinasi  ekstrak  herba kemangi dan buah adas.
Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol Herba  Kemangi  ( Ocimum  americanum L.)  dan  Buah  Adas ( Foeniculum vulgare Mill.)  Terhadap  Vaskularisasi  Ovarium dan  Uterus  pada  Fase  Estrus
Pada pengujian  ekstrak  etanol herba  kemangi  ( Ocimum  americanum L.) dan  buah  adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.) terhadap  vaskularisasi  organ  reproduksi (ovarium  dan  uterus)  tikus  menggunakan modifikasi metode Rugh (1968) berdasarkan  scoring  yang  dapat  dilihat dari  perbedaan  warna  mukosa  ovarium dan  uterus  (Gambar 4).
L A M A F A S E E S T R U S 1,5 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0
Kontrol (+)       Kontrol  ( - )       Dosis i     Dosis ii       Dosis iii
PERLAKUAN
Jumlah
Ulangan Skor Warna Ovarium dan Uterus Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 1 2 1 2 3 3 2 2 1 3 3 3 3 3 1 3 2 3 4 2 1 2 3 - Total 9 4 10 11 9 Rata-rata 2,25b 1a  2,5bc  2,75bc 3c
Keterangan:
Skor 1 Skor 2 Skor 3
Gambar 4. Penampang Ovarium dan Uterus pada Fase Estrus Tikus
Tabel 5. Pengamatan Vaskularisasi pada Ovarium  dan Uterus
* Skor 1 Sedikit Merah Skor 2 Merah
Skor 3 Sangat Merah
*superscript  yang  berbeda,  menyatakan  pengaruh yang  sangat  berbeda nyata pada setiap perlakuan (P<0,01).
*P1 = kontrol positif (ethinyl estradiol 9x10-3 mg/200g BB)
P2 = kontrol negatif (CMC-Na 0,5%) P3= kombinasi ekstrak etanol 70 % herba kemangi 0,35g/200g  BB dan buah adas 0,0725g/200g BB P4= kombinasi ekstrak etanol 70 % herba kemangi 0,35g/200g  BB dan buah adas 0,145g/200g BB P5= kombinasi ekstrak etanol 70 % herba kemangi 0,7g/200g  BB dan buah adas 0,0725g /200g BB
Gambar  5. Diagram Vaskularisasi Ovarium dan Uterus
Pemberian  ekstrak  etanol  herba  kemangi ( Ocimum  americanum L.)  dan  buah  adas ( Foeniculum  vulgare Mill.)  mempengaruhi warna  pada  mukosa  uterus  dan  ovarium tikus.  Data  skor warna  vaskularisasi ovarium  dan  uterus  disajikan  pada  Tabel 5.  terlihat  bahwa  pemberian  ekstrak  pada kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,8g/200g  BB  dan  buah  adas 0,145g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memberikan  skor  yang  paling  tinggi. Perbedaan  pengaruh ini  juga sangat  terlihat pada grafik yang disajikan pada Gambar 5. Hasil  uji  statistik  diketahui  bahwa CMC-Na  sebagai  kontrol  negatif  (P2), ethinyl  estradiol  sebagai  kontrol  positif (P1), kombinasi ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  1  (P3), kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,145g/200g  BB  sebagai  dosis  2  (P4)  dan kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memberikan pengaruh yang sangat berbeda nyata terhadap vaskularisasi ovarium  dan  uterus  hal  ini  dibuktikan dengan  nilai  sig  =  0.000  (P<0,01).  Untuk mengetahui  perbedaan  antar  perlakuan dilanjutkan  dengan uji Duncan.
Hasil  uji  Duncan  menunjukkan bahwa pemberian kombinasi ekstrak etanol  70  %  herba  kemangi  0,35g/200g BB  dan  buah  adas  0,0725g/200g  BB sebagai dosis 1 (P3) dan  kombinasi ekstrak etanol  70  %  herba  kemangi  0,35g/200g BB dan buah adas 0,145g/200g BB  sebagai dosis  2  (P4)  memberikan  pengaruh  yang sangat  berbeda  nyata  dibandingkan  kontrol negatif  (P2)  serta  memberikan  pengaruh yang  relatif  sama  dengan  kontrol  positif. Kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memberikan  pengaruh yang sangat  berbeda nyata  dan paling  baik dibandingkan  semua perlakuan  terhadap  vaskularisasi  ovarium
W A R N A O V A R IU M DAN U T E R U S Kontrol Kontrol  Dosis i  Dosis ii Dosis iii (+)        (-) 2 1.5 1 0.5 0
PERLAKUAN
dan  uterus  pada  tikus  putih  betina.
Hasil  pengamatan  secara  kasat mata,  pada  permukaan  ovarium  juga terlihat tonjolan-tonjolan yang  memperlihat kan adanya perkembangan folikel. Vaskularisasi organ reproduksi ini disebabkan  oleh  aktifitas  pembuluh  darah yang  berada  di  dalamnya.  Peningkatan aktifitas  pembuluh  darah  ini  disebabkan karena  adanya  pengaruh  tidak  langsung dari  senyawa  aktif  yang  diberikan  kepada tikus.  Senyawa  aktif  yang  terdapat  pada ekstrak etanol 70% herba kemangi
( Ocimum  americanum L.)  dan  buah  adas ( Foeniculum vulgare Mill.) akan mempengaruhi secara tidak  langsung dalam    meningkatkan estrogen  pada ovarium.
Pada  siklus  ovarium  terdapat  dua fase  yaitu  fase  folikular  dan  fase  luteal. Fase  proestrus  dan  estrus  disebut  fase folikular  sedangkan  fase  metestrus  dan diestrus  disebut  fase  luteal.  Pada  fase folikular  kadar  estrogen  yang  tinggi menyebabkan  vaskularisasi  tinggi  pada uterus.  Estrogen  juga  menyebabkan  uterus mengalami  pembesaran  dan  menggem- bung  akibat  akumulasi  cairan  (Turner  dan Bagnara,  1976).  Hal  ini  sesuai  penyataan Dellman  (1992)  yaitu  pada  saat  estrus terjadi  peningkatan  tekanan  darah  dalam kapiler  yang  menyelimuti  organ  repro- duksi,  terutama  pada  ovarium  dan  uterus serta  terdapat  pelebaran  pembuluh  darah yang  mengakibatkan  terjadinya  penam- bahan bobot ovarium dan uterus.
Menurut  Guyton  dan  Hall  (1997) estrogen menyebabkan pembesaran ovarium,  tuba  fallopi,  uterus,  dan  vagina. Perbesaran  ini  terjadi  pada  genitalia eksternal.  Estrogen  menstimulasi  pening- katan  pertumbuhan  epitel  vagina  untuk ber kornifikasi (mengalami  penandukan). Estrogen  mengubah  epitel  vagina  yang semula  epitel  pipih selapis  menjadi kuboid (bujur sangkar) bertingkat. Estrogen menyebabkan perubahan nyata pada endometrium  dan  kelenjarnya.  Selain  itu,
estrogen  merangsang hipertropi (produksi sel  baru)  dan hyperplasia (perbesaran  sel) pada endometrium dan myometrium, akibatnya  ukuran  uterus  bertambah  dua kali  sampai  tiga  kali  lipat  dibandingkan sebelum  pubertas  dan  berwarna  lebih merah.
Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol Herba  Kemangi  ( Ocimum  americanum L.)  dan  Buah  Adas ( Foeniculum vulgare Mill.)  Terhadap  Bobot  Ovarium  dan Uterus pada Fase Estrus
Hasil  pengujian  ekstrak  etanol herba  kemangi  ( Ocimum  americanum L.) dan  buah  adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.) terhadap  peningkatan  bobot  ovarium  dan uterus  dilakukan  setelah  terjadinya  estrus hingga  estrus  berikutnya,.  Dengan  cara menimbang  ovarium  dan  uterus  tikus setiap  perlakuan.
Tabel  6. Data  Penimbangan  Bobot Ovarium  dan  Uterus Tikus pada Setiap Perlakuan
Jumlah  Ulangan
Pengukuran Bobot Ovarium dan  Uterus Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 1 1,3 0,5 1,2 1,4 1,4 2 0,9 0,6 1,0 1,3 1,5 3 1,1 0,7 1,1 1,3 1,6 4 1,0 0,8 1,1 1,2 - Total 4,3 2,6 4,4 5,2 4,5 Rata-rata 1,075b 0,6a 1,1b 1,3c 1,5d
Ket : superscript  yang  berbeda,  menyatakan  pengaruh yang  sangat  berbeda  nyata  pada  setiap  perlakuan (P<0,05).
P1 = kontrol positif (ethinyl estradiol 9x10 -3 mg/200g BB) P2 = kontrol negatif (CMC-Na 0,5%) P3= kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba  kemangi 0,35g/200g  BB  dan  buah  adas  0,0725g/200g BB
P4= kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba  kemangi 0,35g/200g BB dan buah adas 0,145g/200g BB P5= kombinasi ekstrak etanol 70 % herba kemangi 0,7g/200g BB dan buah adas 0,0725g /200g BB
Ekologia , Vol. 15  No.2 , Oktober  2015: 21-32
Hasil  pengujian  pada  Tabel  6 menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  herba kemangi  ( Ocimum  americanum L.)  dan buah  adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.) memberikan pengaruh  yang  sama  terhadap peningkatan  bobot  ovarium  dan  uterus tikus.
Hasil  uji  statistik  diketahui  bahwa CMC-Na  sebagai  kontrol  negatif  (P2), ethinyl  estradiol  sebagai  kontrol  positif (P1), kombinasi ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  1  (P3), kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,145g/200g  BB  sebagai  dosis  2  (P4)  dan kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memberikan pengaruh yang sangat berbeda  nyata  terhadap  bobot ovarium dan uterus  hal ini  dibuktikan  dengan  nilai    sig =    0.000    (P<0,01).    Untuk    mengetahui perbedaan  antar  perlakuan  dilanjutkan dengan  uji  Duncan.
Hasil  uji  Duncan  menunjukkan bahwa pemberian kombinasi ekstrak etanol  70  %  herba  kemangi  0,35g/200g BB  dan  buah  adas  0,0725g/200g  BB sebagai dosis 1 (P3) memberikan  pengaruh yang  sangat  berbeda  nyata  dibandingkan kontrol  negatif  (P2)  serta  memberikan pengaruh  yang  relatif sama  dengan  kontrol positif.  Kombinasi  ekstrak  etanol  70  % herba  kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah adas  0,0725g/200g  BB  sebagai  dosis  3 (P5)  memberikan  pengaruh  yang  sangat berbeda nyata dan paling baik dibandingkan semua  perlakuan  terhadap  bobot  ovarium dan  uterus pada tikus putih betina.
Tingginya bobot ovarium dan uterus  tikus diduga  karena  senyawa estrogenik  dalam  herba  kemangi  dan  buah adas  yang  mampu  berikatan dengan reseptor  estrogen  pada  ovarium.  Ikatan estrogen  dengan  reseptor  estrogen  ini akan  mengaktivasi  sel  dan  menginduksi produksi  dan  proliferasi  sel-sel  ovarium
sehingga menyebabkan penambahan jumlah  sel  dalam  ovarium  yang  akan meningkatkan  masa  ovarium.  Penambahan bobot  ovarium  diperkirakan  berasal  dari penambahan  sel-sel  mesenkim  dan  sel-sel folikular  ovarium  disertai  dengan  pening- katan  kadar  cairan  dalam  ovarium,  cairan ini  berupa  transudat  dari  serum  dan mukopolisakarida  yang    disekresikan  oleh sel-sel  granulosa  (Setiawan,  2010).  Selain itu  pada  tikus  yang  sedang  estrus  terdapat akumulasi  cairan  di  dalam  lumen  uterus yang akan  meningkatkan berat  basah organ (Hafedz, 1980).
Dari  hasil  penelitian  yang  dilakukan berdasarkan parameter yang telah diperoleh,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g  BB  berpengaruh  sangat berbeda  nyata  terhadap  lama  fase  siklus estrus  dibandingkan  kontrol  negatif  dan lebih  baik  dibandingkan  kontrol  positif, dan    berpengaruh  sangat  berbeda  nyata dalam  meningkatkan  vaskularisasi  uterus dan  ovarium  tikus  dibandingkan  kontrol negatif  dan  setara  dengan  kontrol  positif serta  berpengaruh  sangat  berbeda  nyata terhadap  peningkatan  bobot  ovarium  dan uterus  tikus  dibandingkan  kontrol  negatif dan  memberikan  pengaruh  yang  relatif sama  dengan  kontrol  positif.  Sedangkan kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,145g/200g  BB  sebagai  dosis  3  (P5) memiliki  pengaruh  yang  sangat  berbeda nyata dibandingkan semua perlakuan terhadap  lama  fase  estrus,  vaskularisasi ovarium  dan  uterus,  serta  bobot  ovarium dan  uterus  tikus.  Jadi  dosis  3  merupakan dosis yang paling berpotensi untuk memperpanjang  fase  estrus,  peningkatan vaskularisasi,  serta  peningkatan  bobot ovarium dan  uterus  tikus.  Dosis  3  dengan dosis  kemangi  lebih  besar  dibandingkan adas  diduga  paling  berpotensi,  hal  ini diduga  dikarenakan  senyawa  estrogenik pada  kemangi  lebih  banyak  diantaranya
terdapat  anethol,  boron,  dan  stigmasterol, dibandingkan pada  adas  yang  hanya mengandung  dianethol  dan  stigmasterol. Selain  itu  pada  buah  adas  terdapat senyawa beta-sitosterol  yang ternyata dapat menghambat  pengeluaran  estrogen  oleh tubuh.
Estrogen  pada  herba  kemangi  dan buah  adas  bekerja  dengan  cara  berikatan pada  reseptor  estrogen  dan  kompleks reseptor  ligan  untuk  menginduksi  ekspresi dari  gen  yang  responsif  terhadap  estrogen sehingga  terjadi  peningkatan  masa  uterus (Setiawan,  2010).  Selanjutnya  Satyaning- tiyas  dkk.,  (2014)  menyebutkan  bahwa flavonoid  yang  bersifat  estrogenik  akan menduduki  reseptor  estrogen  yang  berada di  dalam  tubuh.  Lain  halnya  dengan steroid  yang  merupakan  prekursor  hormon testosteron  yang  kemudian  diubah menjadi estrogen.  Senyawa  flavonoid  tersebut  akan bekerja  secara  kompetitif  dengan  estrogen sehingga  akan  menduduki  reseptor  apabila produksi estrogen di dalam tubuh
menurun.  Jadi,  senyawa  flavonoid  akan menggantikan  estrogen  untuk  berikatan dengan reseptor.
Estrogen dapat menyebabkan
peningkatan  aliran  darah  secara  tidak langsung yaitu melalui terjadinya peningkatan  prostaglandin  yang  dapat menyebabkan  vasodilatasi  pembuluh  darah pada miometrium
maupun
pada endometrium  (Guyton  dan Hall ,1997).
Dari  hasil  penelitian,  dosis  paling berpotensi estrogenik bila dikonversi untuk  manusia  (70  kg)  yaitu  kombinasi simplisia  segar  herba  kemangi  3,46 kg dan buah adas 0,085 kg.

## SIMPULAN DAN SARAN Simpulan
1. Perlakuan ekstrak etanol herba kemangi  ( Ocimum    americanum L.) dan    buah    adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.)  bekerja  secara  sinergis  dalam meningkatkan  aktifitas  estrogenik tikus putih betina pre-menopause
2. Kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,35g/200g  BB  dan  buah adas 0,0725g/200g
BB (P3) berpengaruh  sangat  nyata  terhadap lama  fase  estrus  dibandingkan  kontrol negative  dan  lebih  lama  dibandingkan kontrol positif.
3. Kombinasi  herba  kemangi  0,35g/200g BB  +  buah  adas  0,0725g/200g  BB (P3)  dan  herba  kemangi  0,35g/200g BB  +  buah  adas  0,145g/200g  BB  (P4) berpengaruh    sangat  nyata  terhadap vaskularisasi  dan    bobot  ovarium  dan uterus  tikus dibandingkan  kontrol negatif dan memberikan  pengaruh  yang relatif  sama  dengan kontrol positif.
4. Kombinasi  ekstrak  etanol  70  %  herba kemangi  0,7g/200g  BB  dan  buah  adas 0,0725g/200g BB  sebagai  dosis  3  (P5) memiliki  pengaruh  yang  sangat    nyata dibandingkan    semua    perlakuan terhadap  lama  fase estrus, vaskularisasi ovarium  dan uterus,  serta  bobot ovarium dan  uterus tikus.

## Saran
1. Masih perlu dilakukan penelitian mengenai ekstrak etanol herba kemangi ( Ocimum  americanum L.)  dan buah  adas  ( Foeniculum  vulgare Mill.) dengan  dosis  yang  lebih  rendah  serta toksisitas  kombinasi  kedua  tanaman tersebut.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai aktifitas folikel dengan metode histology ovarium.

## DAFTAR PUSTAKA
Carolina,  E.  2007. Uji Aktivitas  Estrogenik Ekstrak  Etanol  Buah  Adas  pada Tikus  Putih  Betina  Pre-menopause Jalur  Spraque  Dawley .  Skripsi. Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas
Pakuan.  Bogor: 32.
Dellman,
H.D. 1992. Buku Teks
Histology  Veteliner .  Edisi  ke-3.
Terjemahan:  R.  Hartono.. UI Press. Jakarta: 517-520
DepKes RI. 1989. Materia Medika
Indonesia .  Edisi  V.          Departemen Kesehatan          Republik  Indonesia. Jakarta.
.  1995. Materia  Medika Indonesia. Jilid  VI.  Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta
. 2008. Farmakope Herbal Indonesia. Edisi  I.          Departemen Kesehatan          Republik  Indonesia. Jakarta.
Guyton  dan  Hall.  1997. Buku  Ajar Fisiologi  Kedokteran .  Edisi  II. Penerbit  Buku  Kedokteran.  EGC. Jakarta.
Hafez,  E.S.E.  1980. Reproduction  In Farm Animals .  6th  ed.  Lea  & Febiger. Philadephia.
Purnomo,  R.H.,  Maheswari H, dan Effendi,
E.M.2013. Potensi Androgenik Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Herba Kemangi  (Ocimum  basilicum  L.) dan Buah Adas (Foeniculum vulgare   Mill.)   pada   Tikus   Putih Jantan  Galur  Sprague  Dawley. Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Pakuan. Bogor.
Rajendra  CE.,  Magadum  G.S.,  Nadaf. M.A.,  V.  Yashoda.,  M.  Manjula. 2011 Phytochemical  Screening  Of The Rhizome Of Kaempferia galanga . International       Journal of  harmacognosy  and    Phyto chemical  Research ; 3 (3): 61 – 63.
Rugh,  R.  1968.  The Mouse  Reproduction and Development . Burgess
Publishing  Company.  Menneapolis.
USA.
Satyaningtiyas, A.S., Maheswari, H.,
Achmadi, P., Pribadi, W.A., Hapsari, S., Jondriatno, D.,
Bustamin, I., dan Kiradani, B. 2014.
Kinerja  Reproduksi  Tikus  Bunting
Akibat  Pemberian  Ekstrak  Etanol Purwoceng . Jurnal Kedokteran
Hewan. 8 (1) : 35-37. Setiawan. 2010. Aktivitas Ekstrak
Methanol  Buah  Adas  (Foeniculum Vulgare  Mill.)  Terhadap  Lama Siklus  Estrus  Serta  Bobot  Uterus dan  Ovarium  Tikus  Putih .  Skripsi.
Fakultas Kedokteran
Hewan.
Institute Pertanian  Bogor, Bogor.
Sutedjo.  2008. Mengenal  Obat-Obatan Secara  Mudah  dan  Aplikasinya dalam  Perawatan .  Penerbit  Amara Books. Yogyakarta
Tjay,  T.H  dan  Rahardja,  K.  2007. Obat- Obat Penting, Khasiat, Penggunaan, dan Efek Sampingnya . PT Elex Media komputindo.  Jakarta.
Turner,  C.D.  dan  Bagnara  J.J.  1976. Endokrinologi  Umum .  Penerjemah: Harjoso. Airlangga University Press. Surabaya.
Winarto.  2007. Memanfaatkan  Tanaman Sayur  Untuk  Mengatasi  Aneka Penyakit. Agremedika Pustaka. Jakarta.
Yinghong,  L.,  Ming,  K.J.,  Liansai,  C.,  and Khang,  G.P.  2007. Synergistic  Effect Of  Tradisional  Chinese  Medicine . Nongyang  Technological  University Of  Singapura, Singapura.