UJI AKTIVITAS EKSTRAK KLOROFORM DAUN SANGKAREHO ( Callicarpa longifolia Lam.) TERHADAP PENYEMBUHAN LUKA SAYAT PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR
Activity Test Of Chloroform Extract Sangkareho (Callicarpa Longifolia Lam.) Leaf On Wound Healing In Male Wistar Rats
Theresia Carolina 1*
Dyan Fitri Nugraha 1
Umi Hanik Fetriyah 2
*1 Pharmacy Departement, Health Faculty, Sari Mulia University, Banjarmasin City, Sounth Borneo 70238, Indonesia
2 Nursing Departement, Health Faculty, Sari Mulia University, Banjarmasin City, Sounth Borneo 70238, Indonesia
*email: carolinatheresia2808@gmail.com

## Abstrak
Luka  yang  tidak  ditangani  dapat  menimbulkan  kejadian  infeksi  dan  akibat terburuknya  adalah  kematian.  Sementara  itu,  masyarakat  di  Kalimantan  Tengah menggunakan daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.) sebagai obat luka tanpa adanya  bukti  secara  ilmiah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  aktivitas ekstrak  kloroform  daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  terhadap penyembuhan  luka  sayat  pada  tikus  jantan  galur  wistar.  Penelitian  ini menggunakan metode penelitian kuantitatif true eksperimental dengan rancangan post  test  only  control  group  design. Sampel  berupa  tikus  jantan  galur  wistar berjumlah 25 ekor dipilih acak menjadi 5 kelompok. Tikus dilukai sepanjang 10 mm  kedalaman  2  mm  di regio  vertebralis  thoracis dan regio  interscapularis. Pengumpulan data berdasarkan observasi luka sayat selama 10 hari (perubahan panjang luka dan fase luka). Analisis statistik menggunakan uji kruskal wallis dan uji mann  whitney .  Hasil  yang  diapatkan  adalah  ekstrak  kloroform  daun Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  dosis  200  mg/200grBB  memasuki  fase remodeling  dengan  panjang  luka  0  mm  pada  hari  keenam  lebih  cepat dibandingkan  kontrol  positif.  Hasil  analisis  data  statistik  menunjukan  terdapat perbedaan  signifikan  antara  kelompok  ekstrak  kloroform  daun  Sangkareho ( Callicarpa  longifolia Lam.)  dosis  200  mg/200grBB  dengan  kelompok  kontrol positif. Kelompok ekstrak kloroform daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.) dosis  200  mg/200grBB  lebih  cepat  membantu  penyembuhan  luka  dibandingkan kontrol positif berdasarkan perubahan panjang luka dan fase luka. Penyembuhan luka  diduga  karena  adanya  senyawa  metabolit  sekunder  pada  daun  Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.).

## Kata Kunci:
Daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.) Ekstrak kloroform Luka sayat Penyembuhan luka
Keywords :
Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) leaf
Chloroform extract Incision wound Wound healing

## Abstract
Wounds  that  are  not  treated  properly  could  lead  to  infections  and  the  worst  result would  be  deadth.  Meanwhile,  people  in  Central  Kalimantan  use  the  Sangkareho (Callicarpa  longifolia  Lam.)  leaf  as  wound  medicine  without  any  scientific  proof. Research  aims  to  analyze  activity  chloroform  extract  of  Sangkareho  (Callicarpa longifolia  Lam.)  leaf  on  wound  healing  in  male  wistar  rats.  This  research  used  true experimental method with post test only control group deisgn. The sample is 25 male wistar rats that were randomly selected into 5 groups. Rats were wounded by 10 mm incision wound with depth 2 mm in regio vertebralis thoracis and regio interscapularis. Data collection based on observed the incision for 10 days (changed in wound length and wound phase). Statistically analysis used kruskal wallis test and mann whitney test. The results is chloroform extract of Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.)  leaf dose 200  mg/200grBW  enter  remodeling  phase  with  wound  length  0  mm  on  sixth  day faster  than  positive  control.  The  results  of  statistical  data  analysis  show  significant difference between chloroform extract of Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) leaf dose  200  mg/200grBW  group  and  positive  control  group.  Chloroform  extract  of Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) leaf dose 200 mg/200grBW group help wound healing  faster  than  positive  controls  based  on  change  on  wound  length  and  wound phase.  Wound  healing  suspected  because  secondary  metabolites  in  Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) leaf.
©  year  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya.  This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by- sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.vxix.xxx .

## PENDAHULUAN
Berdasarkan  hasil  Riskesdas  tahun  2018  terjadi kenaikan  kejadian  luka  di  Indonesia  dibandingkan dengan  tahun  2013  dengan  presentase  kenaikan  dari 8,2% menjadi 9,2% (RISKESDAS, 2018). Luka termasuk kondisi  rusaknya  jaringan  kulit  di  bagian  tubuh terutama  area  sekitar  luka.  Luka  merupakan  sebuah gangguan  kontinuitas  sel-sel  atau  jaringan  tubuh.  Luka sayat termasuk jenis luka yang banyak ditemui, cedera traumatik  menimbulkan  terjadinya  luka  sayat  yang berakibat kulit menjadi robek atau kehilangan jaringan disekitar  daerah  yang  terkena  luka.  Luka  sayat  dapat terjadi  akibat  terkena  benda  tajam  seperti  pisau (Kurniawaty et al. , 2018).
Tubuh yang mengalami luka, akan ada mekanime alami dari tubuh untuk memulihkan jaringan pada kulit yang rusak  dan  terbentuk  struktur  jaringan  yang  baru. Faktor  dari  dalam  seperti  nutrisi,  sistem  imun, penggunaan obat serta kondisi metabolik berpengaruh dalam  proses  tersebut  (Handi et  al .,  2017).
Penyembuhan luka  atau cedera akan mengalami  ada 3 fase  atau  3  tahapan  mekanisme  pemulihan  dari  luka yaitu  fase  inflamasi,  dilanjutkan  fase  proliferasi  dan terakhir  fase  remodeling.  Kondisi  yang  dimulai  ketika kulit  mengalami  cedera/luka,  biasanya  fase  ini berlangsung  selama  2  hingga  3  hari  dari  awal  terkena luka  disebut  dengan  fase  inflamasi.  Pada  hari  keempat hingga  minggu  ketiga  setelah  kulit  mengalami  luka terjadi  pembentukan  jaringan  baru  di  daerah  sekitar luka yang dinamakan fase proliferasi. Fase terakhir pada proses penyembuhan luka ditandai dengan pembentukan  kolagen  di  daerah  luka  dinamakan  fase remodeling (Sinto, 2018).
Kejadian  infeksi  piogenik  ditimbulkan  akibat  dari  luka yang tidak segera diberi pengobatan, infeksi ini ditandai dengan  adanya  pembengkakan  dan  terdapat  nanah. Infeksi  ini  disebabkan  oleh  mikroorganisme  yang memasuki  jaringan  kulit  pada  luka  sehingga  dapat menyebabkan  berbagai  penyakit  seperti  impetigo, osteomyelitis,  sepsis  dan  kematian.  Komplikasi  ini
diakibatkan  bakteri Staphylococcus  aureus yang menimbulkan kejadian infeksi (Ekawati et al., 2018).
Infeksi yang terjadi akibat adanya mikroorganisme atau bakteri  pada  luka  dapat  dicegah  dengan  menggunakan terapi  farmakologi  yang  bersifat  antimikroba.  Luka sayat  dapat  ditangani  dengan  terapi  farmakologi menggunakan  obat  sintetis  atau  obat  tradisional. Tumbuhan  berpotensi  sebagai  tumbuhan  obat  dari Kalimantan  Tengah  salah  satunya  adalah  Sangkareho ( Callicarpa  longifolia Lam.)  yang  merupakan  tumbuhan yang  banyak  tumbuh  di  Kalimantan  dan  merupakan salah  satu  dari  kearifan  lokal  masyarakat  Kalimantan yang  dapat  digunakan  sebagai  antiluka.  Daun  adalah bagian  dari  tumbuhan  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  yang  digunakan  sebagai  antiluka  (Handayani  & Natasia, 2018).
Daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.) dimanfaatkan  oleh  masyarakat  Kalimantan  Tengah secara  turun-temurun  sebagai  pengobatan  luka  luar, diare, dan pendarahan pasca melahirkan  (Handayani & Natasia,  2018).  Menurut  hasil  dari  penelitian  yang sudah  dilakukan  peneliti  lain  sebelumnya  didapatkan bahwa  simplisia  daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  yang  di  ekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol memiliki  kandungan  alkaloid,  flavonoid,  dan  steroid. Senyawa metabolit sekunder ini berpotensi membantu proses  penyembuhan  luka  (Qamariah et  al. ,  2016; Saputra,  2016).    Ekstrak  etanol  daun  Kerehau ( Callicarpa  longifolia Lamk.)  berupa  sediaan  gel  dengan konsentrasi  20%  memiliki  aktivitas  antiluka  terhadap penyembuhan luka sayat yang dialami kelinci (Susilawati et al ., 2018).
Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Qamariah et al., 2016) pelarut non polar merupakan sistem pelarut yang  mempunyai  sifat  kepolaran  yang  cocok  dengan sifat  kepolaran  komponen  senyawa  kimia  yang terkandung  di  dalam  daun  Sangkareho  ( Callicarpa longifolia Lam.)  salah  satu  contoh  pelarut  non  polar adalah  kloroform.  Penelitian  sebelumnya  belum  ada peneliti  yang  meneliti  aktivitas  daun  Sangkareho
( Callicarpa  longifolia Lam.)  terhadap  luka  sayat  dengan menggunakan pelarut non polar dalam proses ekstraksi daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.),  sehingga peneliti  tertarik  untuk  menganalisis  aktivitas  ekstrak kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.) terhadap  penyembuhan  luka  sayat  pada  tikus  jantan galur  wistar  dilihat  dari  perubahan  panjang  luka  dan fase luka yang dialami hewan uji.

## METODOLOGI
Alat dan Bahan Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  kertas saring,  timbangan  analitik  ( Shimadzu  corporation ), seperangkat  alat  maserasi, rotatory  evaporator  (Dragon Lab) , hot plate (Thermo Scientific) , corong kaca (Pyrex), gelas ukur 10 ml (Pyrex), beker  glass 250 ml (Pyrex), tabung  reaksi  (Pyrex),  rak  tabung  reaksi,  pipet  tetes, sendok  tanduk,  batang  pengaduk,  alat  pencukur  bulu, pisau, toples kaca, pisau bedah (Gea Medical), kandang tikus,  gunting,  alat  tulis,  sarung  tangan  kain,  dan handscoon (Sensi).
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  Daun Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.),  tikus  jantan galur wistar berusia 3-4 bulan dengan berat badan 190- 250 gram, lidokain,  alkohol swabs, kasa  steril, alkohol 70%,  pereaksi  Mayer,  serbuk  Magnesium,  larutan aseton,  serbuk  halus  asam  oksalat,  serbuk  halus  asam borat,  HCl,  NaCl  10%,  Na  CMC  0,5%,  Pereaksi Liebermann  Burchard,  Gelatin,  Kloroform,  povidone iodine, dan aquadest.

## Metode Penelitian
Pengelolaan Simplisia 1. Pengumpulan Bahan Baku
Tumbuhan  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.) didapatkan  di  perkebunan  milik  warga  yang  tinggal di  daerah  Tumbang  Baringei,  Kuala  Kurun,
Kalimantan Tengah.
2. Sortasi Basah
Bagian tumbuhan yang tidak digunakan dan kotoran yang menempel pada sampel dipilah dan dipisahkan dari sampel (Supomo et al ., 2016).
3. Pencucian
Pencucian  dilakukan  menggunakan  air  mengalir untuk  memastikan  tidak  ada  kotoran  yang menempel  pada  sampel  tumbuhan  (Supomo et  al .,
2016).
4. Perajangan
Perajangan  dilakukan  untuk  memperkecil  ukuran daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.). Perajangan  dilakukan  dengan  menggunakan  pisau (Supomo et al ., 2016).
5. Pengeringan Pengeringan  daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.) dilakukan dengan cara diangin-anginkan pada tempat  yang  terlindung  dari  sinar  matahari (Supomo et al ., 2016).
6. Sortasi Kering
Daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  yang sudah  kering  dipilah  untuk  memisahkan  kotoran yang ada atau menempel di simplisia ketika proses pengeringan.
7. Penyimpanan Siapkan  wadah  untuk  menyimpan  simplisia  daun Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  yang  sudah ditimbang.

## Ekstraksi
Simplisia  daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.) dimasukan  kedalam  bejana  maserasi  untuk  selanjutnya dimasukan  pelarut  yaitu  kloroforom.  Pelarut  tersebut diganti  setiap  3x24  jam,  maserasi  dilakukan  dalam kurun  waktu  3  hari  kemudian  dilanjutkan  dengan proses remaserasi selama 3 hari.
Hasil  ekstraksi  dikumpulkan  lalu  disaring  hingga didapatkan  ekstrak  cair.  Ekstrak  cair  tersebut dimasukan  kedalam rotary  evaporator agar  didapatkan ekstrak  kental.  Ekstrak  kental  daun  Sangkareho
( Callicarpa  longifolia Lam.)  yang  sudah  jadi  disimpan  di wadah.
Skrining Fitokimia
1. Alkaloid
Prosedur  kerja  pengujian  alkaloid  adalah  Tabung reaksi  diisi  dengan  1  ml  ekstrak  yang  sudah disediakan, kemudian tambahkan 2-3 tetes pereaksi Mayer.  Apabila  ekstrak  mengandung  alkaloid  maka akan  timbul  warna  putih  atau  kuning  keruh  pada ekstrak (Julianto, 2019).
2. Flavonoid Pengujian  flavonoid  dengan  Ekstrak  ditambahkan kedalam  tabung  reaksi  sebanyak  1  ml  kemudian larutan  ekstrak  tersebut  diuapkan  sampai mengering,  sisa  dari  ekstrak  kemudian  dibasahkan dengan larutan Aseton. Tahap selanjutnya masukan serbuk  halus  asam  borat  secukupnya  secara perlahan  dan  tambahkan  juga  serbuk  halus  asam oksalat  kedalam  larutan  ekstrak  dan  dipanaskan secara hati-hati di penangas air. Setelah dipanaskan tambahkan  eter  sebanyak  10  ml  dan  diamati dibawah  sinar  UV  366  nm.  Apabila  positif mengandung  flavonoid  maka  akan  terbentuknya larutan yang berfluoresensi kuning intensif ketika di sinari oleh sinar UV (Lolok et al. , 2020).
3. Tanin
Pengujian  tanin,  ekstrak  diambil  sebanyak  1  ml ditambahkan  kedalam  tabung  reaksi.  Tambahkan larutan gelatin secukupnya kemudian tambahkan 3-
5 tetes NaCl 10% pada tabung reaksi berisi sampel. Apabila  ekstrak  positif  mengandung  tanin,  akan terlihat  endapan  putih  kekuningan  pada  sampel (Ikalinus et al ., 2015)
4. Saponin
Pengujian  saponin, ekstrak  diambil secukupnya lalu masukan kedalam tabung reaksi dan tambahkan 10 ml  aquadest  yang  telah  dipanaskan  sebelumnya. Dinginkan  sebentar  dan  lakukan  penggojokan selama  10  detik.  Apabila  terlihat  ada  buih  yang
tingginya  1-10  cm  yang  timbul  tidak  hilang  selama 10 menit segera tambahkan 1 tetes HCl 2N. Amati reaksi  yang  terjadi,  apabila  buih  tidak  hilang  maka sampel positif mengandung saponin (Lestiono et al. , 2020).
5. Steroid
Pengujian  steroid,  tabung  reaksi  diisi  dengan  2  ml ekstrak dan ditambahkan kloroform sebanyak 1 ml. Tambahkan pereaksi Liebermann Burchard secukupnya.  Amati  perubahan  warna  yang  terjadi, apabila  timbul  sebuah  cincin  berwarna  hijau kebiruan  maka  sampel  mengandung  senyawa steroid (Sami et al. , 2019).

## Penyiapan Hewan Uji
Tikus jantan galur wistar sehat tanpa adanya luka atau cacat,  berkelamin  jantan  dengan  berat  badan  190-230 gram  sebanyak  25  ekor  dibagi  secara  acak  menjadi  5 kelompok yang terdiri dari 5 ekor.

## Perlakuan Terhadap Hewan Uji
Tikus  jantan  galur  wistar  ditempatkan  dalam  kandang yang  terpisah  dan  diberi  tanda  berdasarkan  masing- masing  perlakuan  dan  di  aklimatisasi  selama  1  minggu ditempat  penelitian  untuk  penyesuaian  hewan  uji dengan  lingkungan.  Hewan  uji  dibagi  menjadi  5 kelompok dengan perlakuan sebagai berikut :
1. Tikus jantan galur wistar sebanyak 5 ekor diberikan larutan  Na  CMC  0,5%  pada  luka  sayat  selama  10 hari.
2. Tikus  jantan  galur  wistar  berjumlah  5  ekor diberikan  Povidone  Iodine  pada  luka  sayat  selama 10 hari.
3. Tikus jantan galur wistar sebanyak 5 ekor diberikan ekstrak daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.)
50 mg pada luka sayat selama 10 hari.
4. Tikus jantan galur wistar sebanyak 5 ekor diberikan ekstrak daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.)
100 mg pada luka sayat selama 10 hari.
5. Tikus jantan galur wistar sebanyak 5 ekor diberikan ekstrak daun Sangkareho ( Callicarpa longifolia Lam.)
200 mg pada luka sayat selama 10 hari.
Setelah  pembagian  hewan  uji  maka  dilakukan pembuatan  luka  sayat  pada  hewan  uji  yaitu  dengan mencukur terlebih dahulu bulu diarea sekitar punggung tikus  yang  akan  dilukai  menggunakan  alat  pencukur sepanjang 20 mm.
Bersihkan  daerah  yang  akan  dilukai  menggunakan alkohol  swabs  agar  area  yang  akan  dilukai  dalam kondisi  steril  dan  mencegah  kejadian  infeksi.    Tikus diberi anestesi lidokain yang dosisnya sudah dikonversi dari manusia ke tikus dengan rute subkutan.
Sayat penggung tikus menggunakan pisau bedah dengan panjang luka 10 mm dan kedalaman 2 mm. Setelah itu berikan  perlakuan  berupa  pengolesan  sampel  uji  pada luka  sayat  sesuai  dengan  kelompok  uji.  Perlakuan diberikan setiap hari selama 10 hari.
Pengamatan  pada  luka  sayat  dilakukan  1x/hari  setiap hari selama 10 hari. Pengamatan terhadap panjang luka dan ciri fase luka.
Analisis Hasil Data Statistik Analisis data secara statistik menggunakan aplikasi SPSS dengan  mengujikan  uji  normalitas  pada  data menggunakan Shapiro Wilk dan menggunakan uji Levene Test sebagai uji homogenitasnya dengan nilai perbedaan yang  signifikan  (p>0,05).  Data  tidak  terdistribusi normal  tetapi  homogen  dilakukan  pengujian  non parametrik  dengan  menggunakan  uji Kruskall  Wallis kemudian dianalisis menggunakan Mann Whitney untuk melihat perbedaan yang signifikan antara dua kelompok berpasangan (p<0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Kloroform  Daun Sangkareho ( Callicarpa Longifolia Lam.)
Pengujian  skrining  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder apa saja
yang  terkandung  dalam  ekstrak  kloroform  daun sangkareho ( Callicarpa Longifolia Lam.).
Tabel I. Skrining Fitokimia Ekstrak Kloroform Daun Sangkareho (Callicarpa longifolia Lam) Metabolit Sekunder Hasil (+/-) Keterangan Alkaloid + Kuning keruh pada ekstrak Flavonoid + Terdapat flurosensi kuning Tanin + Terdapat endapan putih Saponin + Buih setinggi 1 cm Steroid + Cincin hijau kebiruan
Berdasarkan  tabel  I  ekstrak  kloroform  daun sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam)  setelah dilakukan  skrining  fitokimia  mendapatkan  hasil bahwa  ekstrak  kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam)  positif  mengandung Alkaloid,  Flavonoid,  Tanin,  Saponin  dan  Steroid. Hasil  penelitian  sebelumnya  mengatakan  bahwa eluen  non  polar  merupakan  sistem  pelarut  yang cocok  dengan  sifat  kepolaran  senyawa  kimia  yang ada  pada  daun  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.) (Qamariah et al. , 2016).
Kandungan metabolit sekunder yang terdapat pada ekstrak  kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.)  inilah  yang  diduga  memiliki  peran dalam proses penyembuhan luka sayat pada hewan uji. Metabolit sekunder seperti Alkaloid, Flavonoid, Tanin,  Saponin  dan  Steroid  memiliki  mekanisme kerja  yang  berperan  penting  dalam  proses penyembuhan  luka.  Alkaloid  memiliki  aktivitas antibakteri,  antiinflamasi  serta  membantu  dalam penyempitan  pembuluh  darah  (vasokontriksi)  di awal  ketika  terjadinya  luka  bertujuan  untuk mengurangi  pendarahan  yang  terjadi  pada  fase hemostasis  dan  inflamasi  serta  proliferasi (Bunganaen et al ., 2020; Kemalasari et al ., 2018).
Flavonoid  memiliki  peran  sebagai  antimikroba dimana  dapat  mencegah  kejadian  infeksi  dengan menghambat bakteri masuk kedalam luka pada fase hemostasis,  selain  itu  juga  flavonoid  berperan sebagai  antiinflamasi  dimana  dapat  mengurangi
bengkak  pada  luka  ketika  luka  mengalami  fase inflamasi  dan  flavonoid  juga  memiliki  aktivitas astrigen sehingga dapat meningkatkan penyembuhan  luka  dengan  penyusutan  luka  yang membantu  untuk  mempercepat  terjadinya  fase remodeling  (Bunganaen et  al .,  2020;  Kemalasari et al. , 2018). Senyawa tanin berperan sebagai astrigen dimana  tanin  akan  menghentikan  pendarahan  yang terjadi  pada  fase  hemostasis,  mengurangi  bengkak pada  fase  inflamasi,  membantu  menyusutkan  luka dan juga bisa sebagai  antibakteri  (Bunganaen et al ., 2020; Meliala, 2020).
Senyawa  saponin  berperan  dalam  meningkatkan kontraksi  luka,  meningkatkan  proses  epitelisasi dengan  membentuk  jaringan  baru  pada  luka  yang mengalami  fase  proliferasi  dan  senyawa  saponin dapat  meningkatkan  pembentukan  kolagen  pada luka  (Anggriawan et  al .,  2018;  Bunganaen et  al .,
2020).  Senyawa  steroid  akan  berperan  dalam meningkatkan  proses  penyembuhan  luka  karena memiliki  aktivitas  sebagai  antiinflamasi  dengan mengurangi bengkak pada luka yang mengalami fase inflamasi (Anggriawan et al ., 2018).

## 2. Perubahan Panjang Luka
Gambar 1 Grafik Rata-Rata Perubahan Panjang Luka Berdasarkan gambar 1 rata-rata perubahan panjang luka  pada  semua  kelompok  uji  didapat  dilihat bahwa  kelompok  ekstrak  kloroform  daun
sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) dosis 200 mg lukanya  lebih  cepat  menutup  sempurna  dengan panjang 0 mm tanpa meninggalkan bekas luka pada hari keenam dibandingkan kelompok kontrol positif yang lukanya menutup sempurna dengan panjang 0 mm pada hari kesembilan.
Efek  penyembuhan  luka  sayat  oleh  ekstrak kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.)  diduga  akibat  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  berada  didalam  ekstrak  kloroform  daun sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.) bukan karena mekanisme  pertahanan  tubuh  dari  hewan  uji.  Hal ini  dapat  dibuktikan  dengan  hasil  data  yaitu  ketiga dosis  ekstrak  memiliki  efek  dalam  penyembuhan luka  lebih  cepat  dibandingkan  kontrol  negatif. Kontrol negatif mengalami perubahan panjang luka dengan  panjang  0  mm  dimana  luka  menutup sempurna  pada  hari  kesepuluh,  sedangkan kelompok  yang  diberikan  ekstrak  dosis  200 mg/200grBB  luka  menutup  sempurna  dengan panjang  0  mm  pada  hari  keenam,  dosis  100 mg/200grBB  pada  hari  kedelapan,  dosis  50 mg/200grBB  pada  hari  kesembilan  dan  kontrol positif  pada  hari  kesembilan.  Kelompok  kontrol negatif  panjang  lukanya  mengecil  lebih  lama dibandingkan kelompok uji lainnya.

## 3. Percepatan Fase Luka
Tabel II. Hasil Percepatan Fase Luka Kelompok Fase Hemostasi s Fase Inflamasi Fase Proliferasi Fase Remodeling Kontrol (+) Hari 0-1 Hari 0-2 Hari 3-7 Hari 8-10 Kontrol (-) Hari 0-1 Hari 0-2 Hari 3-9 Hari 10 Ekstrak 50 mg Hari 0-1 Hari 0-3 Hari 3-7 Hari 8-10 Ekstrak 100 mg Hari 0-1 Hari 0-2 Hari 3-6 Hari 7-10 Ekstrak 200 mg Hari 0-1 Hari 0-2 Hari 2-5 Hari 6-10
Pengamatan  proses  penyembuhan  fase  luka  pada kelompok  uji  yang  diberikan  ekstrak  kloroform
0 2 4 6 8 10 12 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Povidone Iodine Na CMC 0,5% Ekstrak 200 mg Ekstrak 100 mg Ekstrak 50 mg
R at a - rat a pe rubaha n panj ang luk a (m m ) Hari
daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.) didapatkan  hasil  yang  paling  cepat  mengalami  fase penyembuhan luka adalah dosis tertinggi yaitu dosis 200  mg/200grBB.  Dosis  200  mg/200grBB  lebih cepat  memasuki  fase  proliferasi  yaitu  pada  hari kedua  sedangkan  dosis  100  mg/200grBB  dan  dosis 50  mg/200grBB  baru  memasuki  fase  proliferasi pada hari ketiga. Dosis 200 mg/200grBB lebih cepat memasuki  fase  remodeling  pada  hari  kedua dibandingkan  dua  dosis  lainnya.  Dosis  100 mg/200grBB  memasuki  fase  remodeling  pada  hari ketujuh dan dosis 50 mg/200grBB mulai memasuki fase remodeling pada hari kedelapan.
Pengamatan  terhadap  ciri  fase  penyembuhan  luka didapatkan  hasil  bahwa  dosis  200  mg/200grBB merupakan  dosis  yang  paling  efektif  diantara kelompok  kontrol  dan  kelompok  uji  lainnya.  Pada hari  kedua  kelompok  yang  diberikan  ekstrak kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.)  dengan  dosis  200  mg  sudah  memasuki  fase proliferasi dan mencapai fase remodeling pada hari keenam  dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yaitu povidone  iodine  10%  yang  baru  memasuki  fase proliferasi  dihari  ketiga  dan  masuk  ke  fase remodeling  pada  hari  kedelapan.  Hal  ini  diduga diakibatkan  oleh  ekstrak  kloroform  daun sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.)  memiliki kandungan metabolit sekunder yang memiliki peran penting dalam proses penyembuhan luka sayat.
Pengamatan  fase  luka  pada  kelompok  kontrol negatif  terlihat  bahwa  kontrol  negatif  baru memasuki  fase  proliferasi  pada  hari  ketiga  dan memasuki  fase  remodeling  pada  hari  kesepuluh atau  pada  hari  terakhir.  Hasil  pengujian  kelompok kontrol  negatif  luka  sayat  yang  dialami  hewan  uji lebih lama sembuh dibandingkan kelompok lain. Hal ini  disebabkan  karena  Na  CMC  0,5%  yang digunakan  pada  kelompok  kontrol  negatif  tidak memiliki  efek    terhadap  penyembuhan  luka, sehingga luka yang dialami oleh hewan uji kelompok
kontrol  negatif  sembuh  karena  mekanisme pertahanan tubuh alami dari hewan uji tersebut.
4. Analisis Data Statistik
Hasil  analisis  data  statistik  pada  kelompok  ekstrak kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam)  antara  dosis  200  mg  dan  100  mg  memiliki perbedaan  signifikan  ( p =0,008)  dan  antara  dosis 200  mg  dan  50  mg  memiliki  perbedaan  yang signifikan  secara  statistik  ( p =0,008).  Analisis  data statistik  pada  kelompok  ekstrak  kloroform  daun sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam)  antara  dosis 200  mg  dan  kontrol  positif  terdapat  perbedaan yang  signifikan  secara  statistik  ( p =0,007).  Tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara dosis 100 mg dengan dosis 50 mg dilihat dari p value = 0,164.

## KESIMPULAN
Senyawa  kimia  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam) antara  lain  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin  dan steroid  yang  berperan  dalam  proses  penyembuhan luka.  Ekstrak  kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa longifolia Lam.)  dosis  200  mg/200grBB  mengalami penutupan luka sayat menjadi 0 mm pada hari keenam lebih  cepat  dibandingkan  dengan  tingkatan  dosis  yang lebih  rendah  dan  kelompok  kontrol  positif.  Ekstrak kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.) dosis  200  mg/200grBB  lebih  cepat  memasuki  fase remodeling  pada  hari  keenam  dibandingkan  dua  dosis lainnya dan kontrol positif. Sehingga dapat disimpulkan bahwa  dosis  ekstrak  kloroform  daun  sangkareho (Callicarpa  longifolia Lam.)  yang  paling  efektif  dalam penyembuhan luka sayat adalah dosis 200 mg/200grBB. Saran untuk peneliti selanjutnya adalah perlu dilakukan pengujian  lebih  lanjut  terkait  pengamatan  secara mikroskopis  seperti  uji  hispatologi  terhadap  kondisi jaringan  kulit  pada  hewan  uji  setelah  dilakukan perlakuan  luka  sayat  dan  dilakukan  pengukuran  kadar
metabolit  sekunder  dari  ekstrak  kloroform  daun sangkareho (Callicarpa longifolia Lam).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  dan  apresiasi sebesar-besarnya  kepada  semua  pihak  yang  terkait pada penelitian ini dan kepada Universitas Sari Mulia.

## REFERENSI
1. RISKESDAS. (2018). Riset Kesehatan Dasar 2018. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia .
2. Kurniawaty, E., Farmitalia, C. G., Rahmanisa, S., & Andriani,  S.  (2018).  Perbandingan  Tingkat Kesembuhan  Luka  Sayat  Terbuka  antara Pemberian  Etakridin  Laktat  dan  Pemberian Propolis  Secara  Topikal  Pada  Tikus  Putih  (Rattus novergicus). Seminar Nasional Pakar Ke 1 , 1 , 339–
345.
3. Handi,  P.,  Sriwidodo,  &  Ratnawulan,  S.  (2017). Review  Sistematik :  Proses  Penyembuhan  dan Perawatan Luka. Farmaka Journal , 15 (2), 251–256.
4. Sinto,  L.  (2018).  Scar  Hipertrofik  dan  Keloid: Patofisiologi  dan  Penatalaksanaan. Cermin  Dunia Kedokteran , 45 (1), 29–32.
5. Ekawati, E. R., Yusmiati, S. N. H., & Herawati, D. (2018).  Identifikasi  kuman  pada  pus  dari  luka infeksi kulit. Jurnal SainHealth , 2 (1), 31–35.
6. Handayani,  R.,  &  Natasia,  G.  (2018).  Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun  Sangkareho (Callicarpa  longifolia  Lam.)  Terhadap  Escherichia coli. Jurnal Surya Medika Volume , 3 (2), 54–61.
7. Qamariah, N., Handayani, R., & Khadafi, A. (2016). Pemanfaatan  Tumbuhan  Sangkareho  (Callicarpa longifolia  Lam)  Asal  Kalimantan  Tengah  sebagai Obat Tradisional. Jurnal Surya Medika , 2 (1), 14–22.
8. Susilawati, E., Aligita, W., Adnyana, I. K., Patonah, Sukmawati,  I.  K.,  Anneesha,  &  Putri.  (2018). Activity  of  karehau  (Callicarpa  longifolia  lamk.) leaves  ethanolic  extract  as  a  wound  healing. Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  and  Research ,
10 (5), 1243–1247.
9. Supomo,  Supriningrum,  R.,  &  Junaid,  R.  (2016). Karakterisasi  dan  Skrining  Fitokimia  Daun Kerehau (Callicarpa longifolia Lamk.). Jurnal Kimia Mulawarman , 13 (2), 89–96.
10. Lolok,  N.,  Awaliyah,  N.,  &  Astuti,  W.  (2020). Formulasi  Dan  Uji  Aktivitas  Sediaan  Sabun  Cair Pembersih  Kewanitaan  Ekstrak  Daun  Waru (Hibiscus  tiliaceus)  Terhadap  Jamur  Candida albicans. Jurnal  Mandala  Pharmacon  Indonesia , 6 (01),
59–80. https://doi.org/10.35311/jmpi.v6i01.53
11. Ikalinus, R., Widyastuti, S. K., & Eka Setiasih, N. L. (2015).  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang Kelor (Moringa Oleifera). Indonesia Medicus Veterinus , 4 (1), 71–79.
12. Lestiono,  Kresnamurti,  A.,  Rahmad,  E.,  &  Riko Ansyori,  M.  (2020).  Aktivitas  Analgesik  Ekstrak Etanol  Bulu  Babi  (Echinometra  Mathaei)  Pada Mencit  Putih  Jantan. Journal  of  Herbal,  Clinical  and Pharmaceutical Science (HERCLIPS) , 1 (2), 7–12.
13. Sami, F. J., Soekamto, N. H., Firdaus, F., & Latip, J. (2019).  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Alga Coklat  Sargassum  polycystum  Dan  Turbinaria deccurens  Asal  Pulau  Dutungan  Sulawesi  Selatan Terhadap  Radikal  DPPH. Jurnal  Kimia  Riset , 4 (1), 1–6.
14. Bunganaen, M. C. W., Sasputra, I. N., & Artawan, I.  M.  (2020).  Studi  Komparatif  Efektivitas Pemberian  Ekstrak  Daun  Lamtoro(Leucaena Leucocephala)  Dan  Salep  Gentamisinterhadap Penyembuhan  Luka  Sayat  Kulit  Mencit  (Mus Musculus). Cendana  Medical  Journal  (CMJ) , 8 (1), 512–520. http://ejurnal.undana.ac.id/CMJ/article/view/2660
15. Kemalasari, N., Sumardi, & Febriani, Y. (2018). Uji Efektivitas  Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang  Nangka  (Artocarpus  heterophyllus  Lam) Terhadap  Penyembuhan  Luka  Sayat  Pada  Ayam Broiler (Gallus domesticus). Journal of Pharmaceutical and Sciences (JPS) , 1 (1), 1–6.
16. Meliala,  L.  (2020).  Uji  Efektvitas  Salep  Ekstrak Etanol  Rimpang  Jeringau  (Acorus  calamus  L.) Terhadap  Penyembuhan  Luka  Sayat. Jurnal Penelitian Farmasi & Herbal , 3 (1), 13–18.
17. Anggriawan,  M.,  Yuliet,  &  Khaerati,  K.  (2018). Pengaruh Pemberian Topikal Ekstrak Etanol Daun Pecut Kuda ( Stachytarpheta jamaicensis ( L .) Vahl )  Terhadap  Penyembuhan  Luka  Bakar  Derajat  II Pada Punggung Kelinci. Biocelebes , 12 (2), 47–48.
18. Julianto,  T.  S.  (2019). Fitokimia  Tinjauan  Metabolit Sekunder  dan  Skrining  Fitokimia (Cetakan  I). Universitas Islam Indonesia.