## PENERAPAN TEKNOLOGI NANOPARTIKEL PROPOLIS TRIGONA SPP ASAL BOGOR SEBAGAI ANTIBAKTERI ESCHERICHIA COLI SECARA IN-VITRO
1) Prasetyorini, 2) AE. Zainal Hasan, 3) , Rofiqoh Siregar
1) FMIPA Universitas Pakuan, 2) Departemen Biokimia IPB, 3) Farmasi Universitas Pakuan

## ABSTRAK
Penelitian  penerapan  nanopartikel  propolis Trigona spp  asal  Bogor  sebagai antibakteri Escherichia  coli secara in-vitro bertujuan  membuat  sediaan  nanopartikel  dari propolis Trigona spp asal Bogor (nanopropolis). Pembuatan nanopropolis dilakukan dengan cara  penyalutan  dan  homogenizer  pada  kecepatan  22.000  rpm  selama  satu  jam.  Dalam penelitian  ini  dilakukan  melalui  empat  tahap,  yaitu  tahap  ekstraksi  raw  propolis Trigona spp,  tahap  pembuatan  sediaan  nanopropolis,  tahap  melakukan  uji  aktivitas  nanopropolis sebagai  antibakteri  dan  menentukan  konsentrasi  hambat  tumbuh  minimum  (KHTM) nanopropolis  terhadap  bakteri Escherichia  coli .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa Propolis Trigona spp asal Bogor dapat dibuat nanopartikel dengan ukuran partikel mencapai 192  –  273  nm. Ukuran  partikel  nanopropolis  dideteksi  menggunakan Scanning  Electron Microscopy .  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  0,02%- 10%  nanopropolis  aktif  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia  coli .    Konsentrasi hambat  tumbuh  minimum    nanopropolis  berada  di  bawah  konsentrasi  0,02%.  Ketika dibandingkan  dengan  sediaan  tanpa  teknologi  nano  (propolis  biasa),  pada  kondisi konsentrasi  sama  nanopropolis  lebih  efektif  daripada  propolis  biasa  karena  zona  hambat yang dihasilkan lebih besar.
Kata kunci  : Trigona spp, propolis, dan teknologi nano

## PENDAHULUAN
Berbagai hal telah dilakukan dalam upaya memperbaiki kesehatan, salah satunya  yaitu  penggunaan  bahan-bahan yang berasal dari alam sebagai bahan baku. Propolis adalah salah satu hasil bahan alam dari  hewan  yang  digunakan  sebagai  bahan baku  obat  yang  bermanfaat  sebagai antibakteri. Propolis merupakan getah yang dikumpulkan  oleh  lebah  dari  berbagai pucuk  tanaman  dan  dari  tanaman  yang patah  di  mana  getah  tanaman  tersebut kemudian  dicampur  dengan  enzim  yang terdapat  dalam  kelenjar  ludah  lebah  dan digunakan  untuk  melindungi  sarang  dari berbagai bakteri, virus, dan jamur.
Hasan  (2006)  melaporkan  propolis hasil  ekstrak  etanol  70%  dapat  digunakan sebagai  senyawa  antibakteri,  baik  bakteri gram  positif  ( Staphilococcus  aureus dan Bacillus subtilis ),  maupun  bakteri  gram negatif  ( Escherichia  coli ).  Konsentrasi
hambat  tumbuh  minimum  dari  ekstrak propolis masing-masing untuk setiap bakteri adalah 0,39% terhadap Staphilococcus  aureus ,  0,78%  terhadap Bacillus  subtilis dan  0,78%  terhadap E. coli .  Kwon et  al., dalam  Fearnley  (2001) menyatakan  bahwa  pemakaian  propolis akan  mengurangi  diare  anak  sapi  yang diinfeksi E. coli . Teknologi nano merupakan trendsetter baru dalam dunia ilmu pengetahuan. Nanoteknologi adalah teknologi  yang  mampu  menyiapkan  bahan aktif  obat  dalam  partikel  dengan  ukuran nanno  (seperjuta  meter)  dengan  ketepatan lebih  kecil  dari  satu  mikrometer.  Di Indonesia  teknologi  nanopartikel  terutama untuk  herbal  masih  belum  dikembangkan. Sementara  itu,  efektifitas  suatu  obat  akan tercapai  setelah  melalui  proses  LADME (Liberasi,  Absorbsi,  Distribusi,  Metabo- lisme  dan  Ekskresi).  Bentuk  dan  ukuran
partikel  merupakan  salah  satu  faktor  yang mempengaruhi efektifitas`obat, karena ukuran  partikel  sangat  berpengaruh  dalam proses  kelarutan,  absorbsi  dan  distribusi obat.  Oleh  sebab  itu,  melalui  kegiatan penelitian  ini  akan  dikembangkan  inovasi teknologi  sediaan  propolis  asal  Bogor dalam bentuk nanopartikel dengan kapasitas antibiotik yang tinggi.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk membuat sediaan nanopartikel dari propolis Trigona spp  dan  melakukan  uji aktivitasnya sebagai antibakteri serta mengukur  Konsentrasi  Hambat  Tumbuh Maksimum  dari  nanopropolis  pada  bakteri Escherichia  coli .  Adapun  hipotesis  yang diajukan  adalah  popolis Trigona spp  asal Bogor dapat dibuat  nanopartikel dan lebih aktif dibandingkan propolis tanpa teknologi nano.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan selama tiga bulan,  Juni  2009  sampai  September  2009, bertempat di Laboratorium Biokimia Institut  Pertanian  Bogor  Dramaga  dan Badan  Tenaga  Atom  Nasional    Serpong. Bahan-bahan  yang  digunakan  antara  lain, propolis  kasar Trigona spp  yang  berasal dari  Bogor,  etanol  70%,  media  PYG (Peptone  Yeast  Glukosa) ,  media  cair ( Nutrient  Broth ),  aquadest,  maltodekstrin, Mg Stearat, Escherichia coli , dan kloramfenikol  250  mg  (sebagai  kontrol positif).
Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain autoklaf,  penangas  air  bergoyang  ( shaker) , rotavapor, vacuum  dryer ,  homogenator, laminar  air  flow , wrap ,  cawan  petri, aluminium  foil, spektrofotometer ,  jarum ose,  pipet  tetes,  beberapa  alat  gelas, mikropipet, inkubator suhu, neraca analitik, kertas  saring,  segitiga  penyebar,  jangka sorong, High  Energy  Milling (HEM),  dan Scanning Electron Microscopy (SEM).
Metode Penelitian Ekstraksi Propolis Trigona spp
Propolis  diekstraksi  menggunakan dengan  maserasi  metode  Hasan  (2006). Sebanyak 300 g propolis kasar Trigona spp direndam  dengan  650  mL  etanol  70%. Suspensi  tersebut  ditutup  aluminium  foil dan  dikocok  dengan shaker di  ruang  gelap selama  satu  minggu.  Selanjutnya,  suspensi disaring,  residu  yang  tersisa  diekstrak kembali dengan 50 ml etanol 70%, dikocok 24  jam  dengan  kecepatan  120  rpm,  dan filtrat  didekantasi  lagi.  Ekstraksi  residu diulang  sampai  7  hari,  sehingga  total pelarut  yang  digunakan  1000  ml,  dan  total waktu  maserasi  14  hari.  Teknik  maserasi diakhiri  apabila  warna  filtrat  terakhir berwarna  jernih.  Seluruh  filtrat  yang terkumpul  kemudian  dipekatkan  dengan rotavapor pada suhu ≤ 50° C. Ekstrak pekat yang  diperoleh  kemudian  ditimbang  untuk mendapatkan nilai rendemennya. Selanjutnya  ditambahkan  etanol  sebanyak satu  kali  volume  ekstrak  (1:1),  dan  ini disebut  dengan  ekstrak  etanol  propolis (EEP) 100%.

## Pembuatan Propolis 20%
Ekstrak  etanol  propolis  100% sebanyak  20  g  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer  250  ml  dan  ditambahkan dengan 120 ml etanol 70%. Bahan penyalut maltodekstrin  sebanyak  85  g  dilarutkan dalam akuades 80 ml dan ditambahkan Mg stearat  sebanyak  5  g  lalu  diaduk  dengan stirrer sampai  tercampur  rata  selama  30 menit.  Selanjutnya,  larutan  dicampurkan dengan  propolis  yang    terlarut  dengan etanol  70%  dan  dengan  cepat  campuran diaduk  dengan stirer kembali  selama  30 menit.  Kemudian,  larutan  dikeringkan dengan vacuum dryer pada suhu ≤ 50° C.
Pembuatan Nanopropolis 20% Pembuatan  nanopropolis  20%  dilakukan dengan  metode  modifikasi  Bhaskar et  al ., 2009.  Sejumlah  20  g  ekstrak  etanol propolis  100%  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer  250  ml  dan  ditambahkan
dengan 120 ml etanol 70%. Bahan penyalut maltodekstrin sebanyak 85 gram dilarutkan dalam  akuadest  80  mL  dan  ditambahkan Mg  stearat  sebanyak  5  gram  lalu  diaduk dengan stirrer sampai  tercampur  rata, kemudian  dengan  cepat  dihomogenisasi pada  kecepatan  22.000  rpm  selama  30 menit.  Selanjutnya  setelah  30  menit penyalut  dihomogenisasi,  propolis  yang telah terlarut dengan etanol 70% dicampurkan  dan  dengan  cepat  campuran dihomogenisasi  kembali  pada  kecepatan 22.000  rpm  selama  30  menit.  Setelah  itu, larutan  dikeringkan  dengan vacuum  dryer pada  suhu  50 ˚ C.  Serbuk  yang  terbentuk kemudian  dihaluskan  dan  disamaratakan dengan High  Energy  Milling (HEM) sehingga akan terbentuk partikel berukuran nano  dan  pengidentifikasian  ukurannya dilakukan menggunakan SEM.

## Karakterisasi Sampel Dengan SEM
Sampel dikarakterisasi menggunakan  alat  SEM  di  BATAN.  Plat platinum  disiapkan  terlebih  dahulu  lalu diambil  secuplik  sampel  dan  diletakkan pada  permukaan  plat.  Sampel  terlebih dahulu  di coating (dilapisi)  dengan  emas. Sampel  yang  telah  dilapisi  lalu  diamati dengan SEM
Pengujian Kadar Air Sediaan  nanopropolis  dan  propolis biasa  yang  telah  dibuat  dihitung  kadar airnya  menggunakan Mousture  Balance dengan  suhu  105 0 C  dan  rentang  waktu pengukuran 10 menit.
Uji Aktivitas Antibakteri Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode perforasi atau metode  sumur  (Andrews,  2001).    Sampel untuk  uji  aktivitas  antibakteri  adalah larutan propolis biasa dan larutan nanopartikel  propolis  yang  dibuat  masing- masing  sebanyak  10  seri  konsentrasi. Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah kloramfenikol  kapsul  250  mg  dengan konsentrasi 10 mg/ml. Kontrol negatif yang digunakan adalah etanol 1% dan aquadest.

## Regenerasi Bakteri Uji
Bakteri yang akan dipakai diregenerasikan  terlebih  dahulu.  Bakteri yang berasal dari kultur primer mula–mula dibiakkan  ke  dalam  agar  miring Nutrient agar (NA), kemudian di ambil satu ose dan digoreskan  ke  dalam  agar  miring  lalu diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Biakan  ini  merupakan  aktivitas  awal  stok bakteri  yang  disimpan  pada  suhu  4-5 o C. Kultur  regenerasi  ini  akan  digunakan sebagai stok kerja yang digunakan pada uji aktifitas antibakteri.

## Preparasi Inokulum
Sebanyak satu ose bakteri dari stok biakan  dibiakkan  dalam  media  cair,  NB ( nutrient  Broth )  diinkubasi  pada  suhu  37° C  selama  24  jam.  Biakan  segar  diukur densitas optiknya. Jika densitas optiknya > 0,5,  untuk  inokulasi  di  ambil  50  µL.  Jika densitas optiknya <  0,5, untuk inokulasi di ambil 100 µL.

## Uji Pendahuluan Aktivitas Antibakteri a). Ekstrak Propolis
Uji pendahuluan aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan    metode difusi  sumur.  Sebanyak  satu  ose  bakteri dari  stok  biakan  diambil  lalu  diinkubasi di dalam  10  ml  media  cair  ( Nutrient  Broth ) selama  18-24  jam  pada  suhu  37°  C  dalam inkubator dan sambil dikocok menggunakan  penangas  air  bergoyang. Selanjutnya  dari  biakan  diambil  50µL bakteri  dan  disebarkan  di  dalam  cawan Petri,  yang  telah  berisi  media  Agar  PYG ( Peptone  yeast  Glucose )  bersuhu  ±  45°  C, kemudian cawan digoyangkan agar bakteri tersebar  rata.  Selanjutnya  didiamkan  pada suhu  kamar  sampai  media  agar  memadat. Setelah  memadat  agar  dilubangi  dengan diameter  ±  5  mm.  Ke  dalam  lubang tersebut dimasukkan ekstrak etanol propolis  sebanyak  50µL  dan  diinkubasi pada  suhu  37°  C  selama  24  jam.  Daerah bening  yang  terlihat  disekeliling  lubang menandakan adanya aktivitas antibakteri.

## b).  Sediaan  Nanopropolis  dan  Propolis Biasa
Uji  pendahuluan  juga  dilakukan pada  sediaan  nanopropolis  dan  propolis biasa,  yaitu  dengan  cara:  Biakan  bakteri yang  telah  dibuat  dan  dikur  densitas optiknya, disebar ke dalam petri yang telah berisi  media  agar  PYG  ( Peptone  yeast Glucose )  bersuhu  ±  45°  C,  kemudian cawan  digoyangkan  agar  bakteri  tersebar rata.  Selanjutnya  didiamkan  pada  suhu kamar  sampai  media  agar  memadat. Setelah  memadat  agar  dilubangi  dengan diameter  ±  5  mm.  Ke  dalam  lubang tersebut masing-masing dimasukkan nanopropolis  dan  propolis  biasa  sebanyak 50µL.  Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 37° C selama 24 jam. Daerah bening  yang terlihat  disekeliling  lubang  menandakan adanya aktivitas antibakteri.

## Penyiapan Larutan Nanopropolis
Nanopropolis
yang diperoleh dilarutkan dalam aquadest dengan perbandingan 1:1 (b/b), sehingga diperoleh larutan  nanopropolis  dengan  kadar  20% kemudian diencerkan menggunakan aquadest.  Jangkauan  pengenceran  yang digunakan  pada  formula  nanopropolis  ini adalah:  (10%;  5%;  2,5%;  1,25%;  0,625%; 0,31%;  0,15%;  0,078%;  0,04%;  dan
0,02%).  Seri  pengenceran  ini  dibuat dengan  melarutkan  nanopropolis  dengan aquadest.  Perlakuan  yang  sama  juga dilakukan pada propolis biasa.
Uji  KHTM  Nanopropolis  dan  Propolis Biasa
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan  dengan  metode  difusi  sumur (Andrews,  2001).  Sebanyak  50µL  bakteri hasil inokulasi pada media cair dimasukkan ke  dalam  cawan  Petri  steril  yang  telah berisi  10  ml  PYG  padat.  Kemudian  dibuat lubang (sumur) berdiameter kira-kira 5 mm menggunakan  tip  mikropipet.  Ke  dalam setiap  sumur  dimasukkan  50µL  larutan nanopropolis untuk tiap konsentrasi, propolis  biasa,  kontrol  positif  dan  negatif
pada  sumur-sumur  lainnya.  Cawan  ditutup rapat    dengan wrap dan  diinkubasi  pada suhu 37˚ C selama 24 jam. Setelah 24 jam diinkubasi,  dilakukan  pengamatan  dan pengukuran daerah bening disekitar sumur.
Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak
Lengkap,  data  yang  diperoleh  dianalisis dengan analisis ragam pada selang kepercayaan 95% dan taraf α 0,05. Seluruh data  dianalisis  menggunakan  program SPSS 17,00

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstrak Propolis
Ekstrak propolis Trigona spp berwarna  merah  kecoklatan  serta  tidak larut  dalam  air.  Rendemen  ekstrak  yang didapat  sebesar  27,350  g  (9,12%).  Hasil sediaan  propolis  biasa  berbentuk  serbuk yang sangat kering. Warna coklat, kadar air 5,38%. bertekstur kasar dan ukuran partikel tidak merata (Gambar 1)
Gambar 1 . Serbuk propolis biasa
Sediaan  nanopropolis  yang  dihasil- kan  berbentuk  serbuk  yang  sangat  kering, agak  kasar  dan  bergerombol,  selanjutnya dihaluskan dengan HEM dengan kecepatan ±  916  rpm  dan  frekuensi  28,8  Hz  selama 15  menit.  Hasil  pembuatan  nanopartikel disajikan pada Gambar 2.

## Karakterisasi SEM Nanopropolis
Hasil observasi menggunakan SEM memperlihatkan morfologi
partikel
nanopropolis terlihat tidak seragam, bentuk tidak  simetris  dengan  tepian  kurang  rata, namun dengan persebaran yang sudah jelas (tidak  bergerombol),  kadar  air  4,42%. Ukuran  partikel  terkecil  yang  masih terukur  sebesar  192  nm-273  nm  (Gambar 3).
Gambar  3 Ukuran partikel nanopropolis dengan SEM
Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Propolis
Hasil  uji  pendahuluan  ekstrak propolis terhadap bakteri E. coli menunjukkan  bahwa  ekstrak  propolis 100%  aktif  sebagai  antibakteri  ditandai dengan    adanya  zona  hambat  di  sekitar sumur.  Data  hasil  uji  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel  1 .  Hasil  uji  pendahuluan  zona hambat (cm) ekstrak etanol propolis
Perlakuan
Ulangan ke- rata (cm) 1 2 3 Eks Propolis 1,33  1,36  1,38 1,36 Kloramfenikol  1,49  1,52  1,50 1,50 EtOH 1% 0,00  0,00  0,00 0,00 Aquadest 0,00  0,00  0,00 0,00
Gambar 4 Histogram Zona Hambat Ekstrak Etanol Propolis
Dari  histogram  diatas  dapat  terlihat bahwa  ekstrak  propolis  aktif  sebagai antimikroba seperti kloramfenikol. Sedangkan  etanol  1%  dan  aquadest  yang digunakan sebagai pelarut tidak memberikan zona hambat.

## (b) Nanopropolis dan Propolis Biasa
Sediaan  nanopropolis  dan  propolis biasa  10%  aktif  sebagai  antibakteri, ditandai  dengan  adanya  zona  hambat disekitar sumur, masing-masing nanopropolis  dan  propolis  biasa  sebesar 1,99 cm dan 1,59 cm. Untuk lebih jelasnya hasil  uji  dapat  dilihat  pada    tabel  dan gambar di bawah ini.
Gambar  5 Histogram  zona  hambat  nano- propolis,  propolis  biasa  dan kontrol
Tabel  2. Uji  pendahuluan  zona  hambat (cm) nanopropolis,propolis biasa dan kontrol Perlakuan Ulangan ke- Rata 2 (cm) 1 2 3 Nanopropolis 10% 2,40  1,57  1,99 1,99 Propolis biasa 10% 2,09  1,53  1,16 1,59 Kloramfenikol 2,42  1,97  1,63 2,01 Aquadest 0,00  0,00  0,00 0,00 Efektifitas Nanopropolis Terhadap Propolis Biasa .
Keefektifitasan  nanopropolis  10%
terhadap  propolis  biasa  10%  sebesar 125,16%. Berdasarkan besarnya presentase efektifitas  nanopropolis  terhadap  propolis biasa, maka aktivitas nanopropolis terhadap E  coli lebih  besar  dan  lebih  baik dibandingkan  propolis  biasa.  Perbedaan efektifitas  ini  diduga  karena  berbedanya ukuran  partikel  pada  kedua  sediaan, sehingga  berpengaruh  terhadap  kelarutan dan jumlah obat yang terserap.
Efektifitas  Nanopropolis  dan  Propolis Biasa Terhadap Kloramfenikol
Efektivitas nanopropolis
10%
terhadap kloramfenikol adalah 99%.
Sedangkan  propolis  biasa  10%  sebesar 79%.
Berikut
diperlihatkan keefektifitasanya secaragrafik.
Gambar7. Histogram    efektifitas    nano- propolis        10%,  propolis  biasa 10%  dan kloramfenikol
Dari  histogram  diatas  dapat  terlihat bahwa  nanopropolis  dan  propolis  biasa berada  di  bawah  kloramfenikol.  Nilai efektifitas  tersebut  berbeda  dan  aktivitas kloramfenikol lebih besar karena perbedaan tingkat sensitifitas bakteri terhadap antibakteri..
Keuntungan dari penggunaan nanopropolis  adalah  propolis  bersifat sebagai  antimikroba  alami  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen tanpa mematikan bakteri yang menguntungkan  bagi  tubuh,  sedangkan antibiotik  sintetik  bersifat  bakteriosidal yang  mematikan  seluruh  bakteri  yang menguntungkan juga (Fajrina, 2009).

## Konsentrasi Hambat Tumbuh Minimum Nanopropolis dan Propolis Biasa.
Uji aktivitas antibakteri dari variasi konsentrasi  larutan  propolis  terhadap bakteri Escherichia coli dinyatakan sebagai rata-rata zona hambat disekitar sumur. Dari 10 konsentrasi, zona hambat yang dihasilkan berbeda-beda. Secara keseluruhan  makin  kecil  konsentrasi  daya hambat bakteripun makin kecil. Tetapi ada 2  konsentrasi  yang  menyimpang  (0,05% dan 0,08%), dimana zona hambatnya lebih tinggi  dibandingkan  konsentrasi  diatasnya. Hal  ini  merupakan  galat  pekerjaan,  yang diduga oleh tiga kemungkinan, yaitu media cair  yang  dimasukkan  ke  dalam  cawan untuk  dicampurkan  dengan  biakan  bakteri, suhunya masih relatif tinggi, kemungkinan kedua  adalah  media  yang  ditambahkan  ke dalam cawan sudah dingin dan menyebabkan media memadat, dan kemungkinan  terakhir  yaitu  kurangnya volume larutan propolis yang dimasukkkan. Hasil analisis statistik menunjukkan  bahwa  zona  hambat  pada  10 konsentrasi  nanopropolis  tidak  berbeda nyata (P<0,05). Hasil analisis ini menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi rendahpun, nanopropolis memiliki keefektifitasan  yang  hampir  sama  dengan kosentrasi tinggi.
Hasil  uji  propolis  biasa  secara keseluruhan  menunjukkan  bahwa  makin kecil  kosentrasi,  daya  hambat  terhadap bakteripun  makin  kecil.  Tetapi  ada beberapa  penyimpangan  yang  terjadi  yaitu pada  konsentrasi  2,5%,  0,08%  dan  0,04%. Penyebab  penyimpangan  ini  sama  halnya dengan  penyimpangan  pada  nanopropolis.. Hasil  uji  secara  statistik  menunjukkan bahwa  propolis  biasa  pada  10  konsentrasi berbeda  nyata  (P<0,05)  dan  signifikan (α>0,05).
Selanjutnya
data hasil uji
nanopropolis  dan  propolis  biasa  pada  10 konsentrasi dapat dilihat pada histogram di bawah ini.
Gambar 8 Histogram zona hambat nanopropolis dan propolis dalam 10  konsentrasi.
Dari  histogram  diatas  dapat  terlihat bahwa pada setiap konsentrasi, nanopropolis  lebih  aktif  dibandingkan propolis  biasa,  kecuali  konsentrasi  0,08% dan  0,04%.  Sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  pada  konsentrasi  yang  sama nanopropolis  lebih  aktif  dibandingkan propolis  biasa.  Ini  disebabkan  oleh  lebih kecilnya  bentuk  dan  ukuran  partikel nanopropolis, sehingga daya larut dan daya serap obat lebih cepat. Keaktifan nanopropolis  juga  terlihat  dari  perhitungan statistik.  Secara  keseluruhan,  nanopropolis lebih  baik  daripada  propolis  biasa  karena rata-rata  zona  hambat  yang  dihasilkan secara keseluruhan lebih besar dibandingkan propolis biasa. Gambar zona
hambat  yang  dihasilkan  oleh  nanopropolis dan propolis biasa disajikan dalam Gambar 9.
A 1 B
2
3
Gambar 9 .  Zona hambat, 1, nanopropolis,
2  propolis biasa dan 3, kloram- fenikol
Pada 10 konsentrasi yang diberikan, nanopropolis  dan  propolis  biasa  masing- masing  menghasilkan  zona  hambat  seperti gambar diatas.
Sehingga KHTM
nanopropolis dan propolis biasa belum ada pada  kesepuluh  konsentrasi.  Nilai  KHTM nanopropolis  dan  propolis  biasa  berada dibawah konsentrasi 0,02%..

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
 Propolis Trigona spp  asal  Bogor  dapat dibuat dalam bentuk nanopartikel dengan ukuran 192-273 nm.
 Secara  keseluruhan  nanopropolis  lebih efektif  sebagai  antibakteri E  coli dibandingkan propolis biasa
 KHTM  nanopropolis  dan  propolis  biasa berada di bawah konsentrasi 0,02%.
 Rendemen yang dihasilkan dari ekstraksi trigona spp sebesar 9,12%.

## Saran
Perlu  dilakukan  pembuatan  dan pengujian  terhadap  sediaan  nanopropolis menggunakan metode lain. Perlu dilakukan uji  lanjutan  secara in-vivo .    Serta  untuk mendapatkan nilai KHTM dari nanopropolis  perlu  dilakukan  pengenceran di bawah konsentrasi 0,02%.
0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 1.60 1.70 1.80 1.90 2.00 10% 5% 2.50% 1.25% 0.63% 0.31% 0.16% 0.08% 0.04% 0.02% Perlakuan Z O N A H A M B A T nanoprolis Propolis Biasa

## DAFTAR PUSTAKA
Andrew  JM.  2001. Determination  of minimum inhibitory concentrations . Journal of Antimikrobial Chemotherapy,  2001.  48.suppl,  SI,
5-16
Allemann  E,  Gurny  R,  and  Doelker  E. 1993. Drug  loaded  nanoparticles preparation  methods  and  drug targeting  issue .  European  Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 39, 173-191. Angraini  AD.  2006 .  Potensi  Propolis Lebah  Madu  Trigona  spp  sebagai Bahan Antibakteri. [skripsi]. Program  Studi  Biokimia  FMIPA, IPB, Bogor Anonim. 2008. Teknologi nano . http://biomineral.com/2008/05/26/t eknologi-nano. (05 Maret 2008).
Brigger  I,  Dubernet  C,  and  Couvreur  P. 2002. Nanoparticles  in  canser therapy  and  diagnosis. Advanced Drug  Delivery  Reviews  54,  631- 651.
Depkes  RI.  1995. Farmakope  Indonesia,
Edisi IV . Direktorat Jendral
Pengawasan    Obat  dan  Makanan. Jakarta. Hal: 65, 1009-10.
Fahri  VR.  2009. Potensi  Nanopropolis
Trigona spp Asal Bukittinggi Sebagai Pemacu Pertumbuhan Pada Tikus Putih ( Sprague-Dauley )
[Skripsi]. IPB, Bogor.
Fajrina  I.  2009. Ketahanan  tablet  Propolis Trigona  spp  sebagai  antibakteri terhadap  cairan    rumen  in-vitro. [skripsi].  Program  Studi  Biokimia FMIPA, IPB, Bogor Fatoni  A.  2008. Pengaruh  Propolis
Trigona  spp  Asal  Bukit  Tinggi
Terhadap  Beberapa  Bakteri  Usus
Halus Sapi Dan Penelusuran Komponen Aktifnya [Tesis]. Sekolah PascaSarjana IPB, Bogor.
Fearnley,  J.  2001. Bee  propolis : Natural Healing  from  the  Hive .  Souvenir Press ltd: London.
Hadioetomo,  R.  S.  1993. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek dan Prosedur dasar  Laboratorium. Jakarta.  PT. Gramedia. Hal: 53-56.
Handbook  of  Pharmaceutical  Exipients Four th edition .  Raymond  C  Ravo Paul  J  Sheskey,  Paul  J  Weller. Royal  Pharmaceutical  Society  of Great Britain. UK: London Hasan,  A  E  Z.  2006. Potensi  Propolis Lebah  Madu  Trigona spp.  Sebagai Bahan Antibakteri. Seminar Nasional HKI: Bogor. Jawezt,  E,  Melnick,  J.  L  dan  Adelberg, E.A. 2001, Mikrobiologi Kedokteran .  Terjemahan  Irawati Setiawati.  Edisi  ke-20.  Penerbit Buku kedokteran. ECG. Jakarta.Hal: 211-239.
Lachman  L,  H.  A.  Lieberman,  J.  L.
Kaning.  1994. Teori  dan  Praktek Farmasi Industri jilid II. Terjemahan Siti Suyatmi. Universitas Indonesia Press. Jakarta.
Tukan  GD.  2008 .  Pengaruh  Propolis Trigona  spp  Asal  Pandeglang Terhadap  Beberapa  Isolat  Bakteri Usus Sapi dan Penelusuran Komponen Aktifnya [tesis]. Sekolah Pascasarjana IPB, Bogor.