Menara Perkebunan , 2007, 75(2), 56-69
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan anatomi dan  elektroforesis SDS- PAGE protein daerah pertautan
Compatibility of  micrografting Chincona ledgeriana and C. succirubra based on anatomy and SDS-PAGE protein electrophoresis of union area
Nurita TORUAN-MATHIUS 1) , LUKMAN 2) & AGUS - PURWITO 3)
1) SEAMEO BIOTROP, Bogor, Indonesia
2) Fakultas Pertanian, Universitas Malikussaleh,  Nagroe Aceh Darusalam, Indonesia
3) Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor, Indonesia

## Summary
Rootstocks  and  scions  interaction  causes different responses within individuals of  scion from  the  same  clone.  The  objectives  of  this research  were    to  determine    compatible  and uncompatible  combinations  of  micrografting between Cinchona succirubra A , and C. succirubra B with C.  ledgeriana QRC205 and Cib5 clones, based on anatomy structure and  SDS-PAGE  protein bands  pattern  of stem  at  union  area  between  rootstock  and scion.  The  research  was  arranged  in  a
Completely Randomized Design, with rootstock/scion  combinations  CSA/QRC205, CSA/Cib5,  CSB/QRC205,  CSB/Cib5  and  as  a controls  were    the  combination  of    CSA/CSA, CSB/CSB, QRC205/QRC205, Cib5/Cib5, succi and ledger seedlings with the same age. Effect of  rootstocks  on  scion  was  studied  based  on anatomy  structure  of  the  union  area  between rootsocks  and  scions  and  SDS-PAGE  protein bands  pattern.  The  results  showed  that    the union  of  stem  between  rootstocks  and  scion was    initiated  by  callus    formation,  cells differentiation  and  the    vascular  vessels formation. The anatomy of stem union area of CSA/QRC205  as  a  compatible  combination  of rootsotck  and  scion  was  the  same  as unmicrografted  plantlet.  At  uncompatible combination  CSB/Cib5 showed  the  formation
of  stone  cells  as  a  line  along  stem  cyrcle  at union  area  and  heavely    callus    formation  at outside  of  rootstock  and  scion  stems.    SDS- PAGE  protein  bands  pattern  from  the compatible    combination  was  the  same  as planlet  control.  On  the  otherhand,    from  the uncompatible  combinations      CSB/Cib5  were found protein degradation and the formation of new proteins with molecular weight  21 and 30 kD.
[ Key words: In-vitro micrografting, rootstock, scions, electrophoresis, SDS- PAGE protein, stem anatomy] .

## Ringkasan
Interaksi  batang  bawah  dengan  batang atas menimbulkan berbagai keragaman respons antar individu batang atas dari klon yang sama. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  me- netapkan  kombinasi  yang  kompatibel  dengan yang  tidak  kompatibel  antara  kina  klon Cinchona  succirubra A,  dan C.  succirubra B dengan C.  ledgeriana klon QRC205 dan Cib5, berdasarkan  anatomi  dan  pola  pita SDS-PAGE  protein    daerah  pertautan  antara batang  atas  dengan  batang  bawah.  Percobaan disusun  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap kombinasi  yang  diuji  adalah  CSA/QRC205,
Toruan-Mathius et al.
CSA/Cib5,  CSB/QRC205,  CSB/Cib5  dengan kombinasi  kontrol  CSA/CSA,  CSB/CSB, QRC205/QRC205,  Cib5/Cib5,  tanaman  kina succi  dan  ledger  tanpa  sambungan  dengan umur  yang  sama.  Pengamatan  dilakukan terhadap  struktur  anatomi  daerah  pertautan antar  batang  bawah  dengan  batang  atas  dan pola pita protein SDS-PAGE batang atas. Hasil yang    diperoleh  menunjukkan  bahwa  tahapan pemulihan  daerah  pertautan  penyambungan batang  bawah  dengan  batang  atas  diawali dengan pembentukan kalus, diferensiasi sel dan terbentuknya jaringan ikatan pembuluh gabungan.    Kombinasi  antar    batang  bawah dengan  batang  atas  yang  kompatibel  yaitu CSA/QRC205 memperlihatkan struktur anatomi daerah pertautan yang serupa dengan struktur  anatomi  batang  planlet  yang  tidak disambung.   Pada kombinasi yang tidak kom- patibel  yaitu  CSB/Cib5  pada  daerah  pertautan terbentuk  sel-sel  batu  berbentuk  garis  yang memanjang  di  tengah  lingkaran  batang.    Di samping  itu  pada  daerah  pertautan  terbentuk kalus  yang  berlebih  ke  arah  luar  baik  pada batang  atas  maupun  batang  bawah.  Pada kombinasi  yang  kompatibel  pola    pita  protein sama  dengan  planlet  kontrol.  Pada  kombinasi yang  tidak  kompatibel  yaitu  kombinasi CSB/Cib5  terjadi  degradasi  protein    dan pembentukan  protein  baru  dengan  berat molekul sekitar  21dan 30 kD.

## Pendahuluan
Struktur  anatomi  daerah  pertautan jaringan  ikatan  pembuluh  batang  bawah dengan  batang  atas  yang  harmonis menyebabkan  translokasi  air  dan  hara mineral  dari  akar  ke  bagian  atas  planlet dan translokasi fotosintat dari bagian atas planlet  ke  akar  dapat  berjalan  dengan baik.  Sobhana et  al .  (2001)  menyatakan bahwa  interaksi  batang  bawah  dengan batang atas yang baik dapat  mempercepat laju pertumbuhan planlet. Pada kombinasi batang   bawah   dan   batang   atas   yang
kompatibel  menyebabkan  proses  meta- bolisme planlet dapat berlangsung dengan baik.  Sebaliknya  pada  kombinasi  yang tidak    kompatibel      proses  metabolisme planlet  menjadi  terganggu  dan  meng- akibatkan pertumbuhan planlet  terhambat.
Ji-Zhong et  al .  (2002)  menjelaskan bahwa  pada  daerah  pertautan  antara batang  bawah  dengan  batang  atas  yang tidak sesuai, dapat meningkatkan aktivitas enzim  peroksidase  (POD)  dan  isoperok- sidase  (IOD)  sehingga  dapat  mendegra- dasikan  auksin  yang  ditranslokasikan  dari pucuk ke akar.  Madjid (1974) mengemu- kakan  bahwa pada okulasi tanaman karet yang  tidak  kompatibel  dapat  menurunkan produksi  lateks  sampai  40%.  Toruan- Mathius et  al .  (1999)  juga  menyatakan bahwa  pada  okulasi  tanaman  karet  yang tidak  kompatibel  terdapat  penyempitan kulit  kayu  dengan  ketebalan  kulit  batang bawah yang lebih besar, serta meningkat- nya  jumlah  sel  parenkim  dan  sel  batu pada  daerah  pertautan  sampai  ke  bagian kulit kayu lunak.
Raghothama (1999) menyatakan bahwa  pada  planlet Arabidopsis sam- bungan yang kompatibel  hubungan timbal balik  ( source dan sink ) antara  batang bawah  dan  batang  atas  terjadi  secara normal.    Errea et  al .  (2001)  menjelaskan pada  sambung  mikro Apricot kombinasi yang tidak kompatibel  terdapat kulit yang menebal dan keras.  Prawoto et al . (1987) menemukan  adanya  perbedaan  anatomi kulit  batang  pada  daerah  pertautan  antara penyambungan  yang  kompatibel  dengan yang tidak kompatibel pada planlet kakao, penyambungan  yang  tidak  kompatibel ditunjukkan  dengan  banyaknya  akumulasi lignin pada daerah pertautan.
Warmund et  al .  (1993)  menjelaskan penyambungan    yang  tidak  kompatibel pada  planlet  apel  dapat  membentuk  kulit
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan...
kayu  yang  tidak  mulus  pada  pergantian pembuluh  xilem  oleh  jaringan  parenkim. Toruan-Mathius et  al .  (1999)  melaporkan bahwa pada penyambungan tanaman karet kombinasi  PB260/PR255  dan  PB260/ PR300  yang  tidak  kompatibel,  terdapat anatomi  kulit  batang  daerah  pertautan yang  tidak  mulus,  dan  terbentuk  sel  batu yang  lebih  banyak.  Mikrografting  pada jeruk  mandarin,  kombinasi  yang  kompa- tibel  menunjukkan  pertumbuhan  planlet lebih  vigor  dan  kualitas  buah  menjadi lebih baik.
Analisis  pola  pita  protein  hasil elektroforesis  SDS-PAGE  protein  telah digunakan  untuk  mengidentifikasi  ketidak sesuaian  pada  okulasi  tanaman  karet (Lizawati et  al .,  2002;  Toruan-Mathius et  al .,  1999).    Ketidak  sesuaian  antara batang  bawah  dan  batang  atas  menyebab- kan timbulnya reaksi yang negatif menye- babkan  terganggunya  proses  metabolisme antara  lain  terjadinya  degradasi  protein atau timbulnya protein yang baru (Lizawati et  al .,  2002).  Toruan-Mathius et  al .  (2002)  menyatakan  bahwa  hetero- genitas  batang  bawah  pada  sistem  okulasi Hevea brasiliensis dapat dapat menimbul- kan  berbagai  tingkat  keragaman  respons antar  individu  batang  atas  dari  klon  yang sama.
Lasminingsih et  al. (1989)  melapor- kan bahwa dari elektroforesis serum lateks yang  dielektroforesiskan  pada  gel  akrila- mid  terdapat    enam  kelompok  pola  pita protein  dari  36  klon  karet.  Lizawati et  al . (2002)  melaporkan  berdasarkan  hasil SDS-PAGE  protein  lateks  kombinasi okulasi  dari  24  klon  yang  diuji  terbagi menjadi dua kelompok yang terpisah pada koefisien  keragaman  58%,  umumnya batang bawah yang sama berada pada satu kelompok  kecuali   BPM24/RRIC101 dan
BPM1/REIC100  karena  adanya  pengaruh batang  bawah  klon  RRIC110  yang  cukup kuat  terhadap  batang  atas  klon  RRIC100 yang  menyebabkan  terjadinya  degradasi protein.
Monero et  al . (1994)  melaporkan bahwa    pada  penyambungan peach dan pulm  yang  tidak  kompatibel  dapat  me- nyebabkan  penurunan  kandungan  protein dan  asam  amino  pada  seluruh  organ planlet.  Toruan-Mathius et  al. (1999  dan 2000)  menemukan  bahwa  batang  atas PB260  yang  diokulasikan  pada  berbagai klon  batang  bawah  menyebabkan  poli- morfisme  pita  protein  lateks  batang  atas dan terbentuknya protein baru dengan berat molekul 20-25 kDa. Agbaria et al . (1997) melaporkan    terbentuknya  protein  baru yang  disebut Heat  Shock  Protein (HSP) pada  daun  bunga    mawar  kultivar  jenis batang  bawah.  Agbaria et  al .  (1998)  juga menemukan  bahwa  penyambungan  mem- pengaruhi  aktivitas  enzim  untuk  pem- bungaan  pada  bunga  ros  yaitu  nitrat reduktase  dan  glutamin  sintetase  dalam daun.
Tujuan    penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  struktur  anatomi  daerah pertautan  antara  batang  bawah  dengan batang atas,  pola pita protein daun batang atas.  Serta  untuk  mengetahui  kombinasi klon C.  succirubra  A, dan C.  succirubra dengan C.  ledgeriana klon    QRC205  dan Cib5  hasil  sambung  mikro  yang  kompa- tibel.

## Bahan dan Metode
Bahan yang digunakan dalam  perco- baan ini adalah planlet kina C. succirubra (CSA dan CSB)  dan C.ledgeriana QRC205  dan  Cib5  yang  dikulturkan  da- lam medium Murashige& Skoog (1962).
Toruan-Mathius et al.
Kombinasi sambung mikro batang bawah dan  batang  atas  yang  diuji  adalah  CSA/ QRC205-V, CSB/ QRC205-V, CSA/Cib5- V, CSB/Cib5-V dengan kombinasi kontrol CSA/CSA,  CSB/CSB,  QRC205/QRC205, Cib5/Cib5, tanaman kina succi dan ledger tanpa  sambungan  berumur  tiga  bulan dengan  umur  yang  sama. Masing-masing per-lakuan  diulang  sebanyak  lima  kali. Pemilihan  contoh  untuk  analisis  anatomi dan  SDS-PAGE  protein  di  dasarkan  pada planlet yang pertumbuhannya terhambat.
Untuk  mempelajari  anatomi dan penetapkan  kompatibilitas  antar  batang bawah dengan batang atas, dibuat sediaan anatomi  penampang  melintang  dan  mem- bujur  daerah  pertautan  dari  masing- masing  perlakuan  menurut  metode  Sass (1958).  Ketebalan  irisan  sediaan  anatomi adalah  5µm. Pengamatan anatomi daerah pertautan  hasil  mikrografting  dilakukan dengan cara mempelajari struktur anatomi daerah  pertautan  meliputi  jaringan  kam- bium,  pembuluh  kayu  (xilem)  dan  pem- buluh  kulit  kayu  (floem)  selanjutnya dibandingkan dengan anatomi batang yang tidak dilakukan sambung mikro.
Pengamatan  anatomi  dilakukan  pada  saat planlet  berumur  delapan  minggu  setelah penyambungan,  sedang  dokumentasi  hasil yang  diperoleh  menggunakan  kamera Nikon yang dihubungkan dengan mikroskop  Nikon pada pembesaran 40x.

## Elektroforesis SDS-PAGE protein
Pengerjaan  contoh  dengan  SDS- PAGE mencakup ekstraksi protein, analisis  kandungan  protein,  dan  elektro- foresis.  Sebanyak  0,3  g  daun  kina  hasil sambung  mikro in  vitro dimasukkan  ke dalam  lumpang  porselin  dan  ditambah- kan  nitrogen  cair,  kemudian  digerus sampai  berbentuk  tepung  halus.  Tepung
halus  selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam tabung  Eppendorf  yang  berisi  1  mL larutan  bufer  ekstrak  kemudian  divortek dan  disentrifugasi  dengan  kecepatan 1400  rpm  selama  20  menit.  Super- natan  ditampung  dan  endapannya  di- buang. Protein daun yang sudah diperoleh kemudian  disimpan  dalam  lemari  pen- dingin  pada  suhu  0 o C  untuk  digunakan dalam analisis selanjutnya.
Kadar    protein  ditetapkan  menurut Lowry et  al. (1951)    yaitu    sampel  dari hasil  ekstraksi  protein  dipipet  sebanyak 20  µL  kemudian  di  masukkan  ke  tabung reaksi dan ditambahkan akuades 1,58 mL, pereaksi  C  600  mL  kemudian  dikocok dan  didiamkan  selama  10  menit  kemu- dian  menambahkan 200 µL pereaksi D, lalu  dikocok  dan  didiamkan  30  menit. Kadar  protein  di  dalam  larutan  sampel diukur  dengan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  750  nm.  Kadar protein  sampel  dihitung  berdasarkan kurva  standar  dengan  persamaan  regresi linear y = ax + b.
Elektroforesis  protein  dilakukan dengan  gel  akrilamida  menggunakan Sodium  Dodecyl  Suphate  fat  Polycri- lamide  Gel  Elektroforesis (SDS-PAGE) (Leammli et  al .,  1970).  Cetakan  gel  yang berisi  35  µL  contoh  diletakkan  pada  alat elektroforesis yang bagian bawahnya telah diisi  dengan  penyangga  elektroda  yang diencerkan 1/10 kalinya sampai  ¾ bagian bejana  dan  bagian  atas  juga  diisi  dengan larutan  penyangga  elektroda.  Sampel protein  sebanyak  40  µL  di  masukkan  ke dalam  sumur-sumur  yang  tercetak  pada gel.  Elektroforesis  dijalankan  dengan tegangan  110  volt  selama  80  menit. Elektroforesis dihentikan apabila indikator mobilitas  telah  hampir  mencapai  ujung gel.  Pewarnaan gel dilakukan mengguna- kan perak nitrat kemudian setelah pita-pita
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan...
protein  muncul  pada  gel,  gel  direndam dalam  larutan  fiksasi  dan  diawetkan dengan  selopan.    Pengaruh  batang  bawah dan batang atas dipelajari berdasarkan ada tidaknya  pola  pita  protein  yang  dimiliki bersama berdasarkan berat molekul protein.

## Hasil dan Pembahasan
Penampang    melintang    dan    mem- bujur    hasil    sambung  mikro in  vitro planlet  kina  dapat  dilihat  pada  Gambar  1, 2 dan 3.  Hasil yang diperoleh menunjuk- kan bahwa struktur anatomi batang planlet kina sama dengan struktur anatomi batang planlet  berkayu  dikotiledon  lainnya,  yaitu terdiri  dari  jaringan  floem,  kambium  dan xilem.  Jaringan kambium adalah jaringan yang berbentuk lingkaran yang membatasi antara jaringan floem dan xilem.  Ke arah dalam  kambium  disebut  xilem  (pembuluh kayu)  yang  berfungsi  untuk  mengangkut air dan hara mineral dari akar ke atas, dan ke  bagian  luar  kambium  adalah  floem (pembuluh  kulit  kayu)  yang  mengangkut hasil  fotosintat  dari  bagian  atas  ke  bawah tanaman.
Penampang  melintang  dan  membujur planlet  yang  tidak  disambung  memper- lihatkan  sel  yang  masih  utuh  dimana antara  satu  dengan  yang  lain  merupakan satu  ikatan  yang tidak  terputus-putus baik pada jaringan floem, kambium dan xilem, hal  ini  terjadi  karena  struktur  anatomi planlet  tersebut  masih  merupakan  satu individu (Gambar 1a dan 1b).  Penampang melintang dan membujur daerah pertautan antara batang bawah dan batang atas hasil sambung  mikro in  vitro, yaitu kombinasi CSA/QRC205 menunjukkan bahwa  kam- bium,  xilem  dan  floem  tidak  berbentuk lingkaran  yang  utuh.  Hal  ini  disebabkan
adanya  pemotongan  berbentuk  huruf  V pada batang bawah dan batang atas.  Pada daerah pertautan antara batang bawah dan batang  atas  tampak  adanya  sel-sel  ber- ukuran  kecil,  dengan  sitoplasma  sel  yang penuh  dalam  jumlah  cukup  banyak.  Sel- sel  tersebut  membentuk    kalus  yang tumbuh aktif.
Hartmann et  al. (1997)  menyatakan bahwa  kalus  adalah  sekelompok  sel parenkima  yang  berkembang  di  sekitar jaringan  yang  terluka.  Produksi  sel-sel parenkim  merupakan  langkah  awal  dari pembentukan  kalus  pada  planlet  yang terluka  akibat  penyambungan  baik  ter- hadap  batang  bawah  ataupun  terhadap batang  atas.  Sel-sel  parenkima  mampu membelah  dan  mempertahankan  diri sampai  menjadi  sel  dewasa.  Perkem- bangan  sel  dan  anatomi  planlet  akan berubah  sejalan  dengan  perubahan  waktu. Fungsi  masing-masing  jaringan/sel  antara satu  dengan  lainnya  berbeda-beda,  jaring- an  yang  belum  terdiferensiasi  berbeda fungsinya  dengan  jaringan  yang  sedang dan  sudah  berdiferensiasi.    Kalus  tersebut berdiferensiasi  menjadi  sel  dewasa  atau jaringan selanjutnya akan menjadi jaringan  gabungan  antara  batang  bawah dan    batang  atas  baik  berupa  jaringan xilem gabungan, jaringan floem gabungan dan jaringan kambium gabungan.
Pertumbuhan  kalus  ini  juga  terjadi pada  kombinasi  CSB/QRC205  dan  CSA/ Cib5 penampang melintang dan membujur (Gambar  2  a,  b,  c  dan  d)  akan  tetapi berbeda  halnya  dengan  kombinasi  CSB/ Cib5  (Gambar  3).  Perkembangan  kalus menjadi  sel  dewasa  atau  jaringan  pada sambung mikro planlet kina  dapat terjadi pada  saat  planlet  sudah  berumur  lima bulan  setelah  sambung  mikro  (pasca aklimatisasi).  Struktur  anatomi  daerah pertautan pada umur tersebut sama dengan
Toruan-Mathius et al.
Gambar 1.  Penampang  melintang  dan  membujur  batang  daerah pertautan sambung mikro  planlet kina umur delapan minggu setelah penyambungan. Dengan pembesaran 40x. f. floem,  k. kambium, x. xilem, BB. batang bawah, dan BA. batang atas.  (a) and (b) planlet tidak disambung, (c) dan (d) sambung mikro CSA/QRC205; →  Daerah pertautan. Bars = 40µm.
Figure 1.  Cross and longitudinally sections union area micrografting of cinchona plantlet eight-week-old after  micrografted. With 40 x  magnification. f. phloem, k. cambium. x. xylem, BB. Rootstocks, and BA. Scion. (a) and (b)   unmicrograft  plantlet,  (c) and (d) micrografting   CSA/QRC205; →  Union area. Bars = 40 µm.
(a) Penampang melintang Cross section
(b) Penampang membujur
Longitudinally section (c)
(d )
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan...
Gambar 2.  Penampang melintang  dan  membujur daerah pertautan sambung mikro planlet kina umur delapan minggu setelah   penyambungan. Dengan  pembesaran 40x. BA. Batang atas, BB. Batang bawah, (a), (b). CSB/QRC205, (c) dan  (d) CSA/Cib5;  →Daerah pertautan. Bars = 40 µm.
Figure 2.   Cross and   longitudinally  sections  union area  micrografting of cinchona plantlet  eight- week-old after micrografted. With 40 x magnification. BA. Scion, BB. rootstocks,  (a), (b). CSB/QRC205, (c) and (d) CSA/Cib5; →  Union area. Bars = 40 µm.
Toruan-Mathius et al.
Gambar 3. Penampang  melintang  dan  membujur  planlet  kina CSB/Cib5  umur  delapan   minggu setelah penyambungan. Dengan  pembesaran 40x. BA. Batang atas, BB. Batang  bawah.
Bars = 40 µm.
Figure 3.   Cross and longitudinally  section  stem  plantlet of  cinchona CSB/Cib5  eight-week  after micrografted. With 40x magnification. BA. Scion, BB. Rootstocks.  Bars = 40 µm.
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan...
struktur  anatomi  batang  planlet  kina  yang tidak disambung yaitu jaringan batang atas dapat  menyatu  lebih  sempurna    dengan jaringan  batang  bawah  (Gambar  1).  Pada daerah  penyambungan    tampak  daerah irisan  atau  potongan  bekas  luka  akibat sambung  mikro  (tanda  panah  Gambar  2). Hal  ini  sesuai  dengan  definisi  kompati- bilitas  yaitu  pertumbuhan  planlet  normal, tidak terjadi lignifikasi. Hal ini menyebab- kan    transportasi  air,  hara  dan  fotosintat berlangsung dengan baik.
Errea et al . (2001) menyatakan bahwa reaksi  awal  yang  ditimbulkan  pada sambung  mikro  adalah  terjadinya  proli- ferasi  kalus  pada  daerah  pertautan  antara batang  bawah  dengan  batang  atas. Selanjutnya  pada  kombinasi  yang  kompa- tibel  menghasilkan  sambungan  yang mulus  dan  pada  kombinasi  yang  tidak kompatibel  membentuk  sambungan  yang tidak  normal  misalnya  kulit  pada  daerah pertautan  lebih  tebal  dan  lebih  keras. Estrada-Luna et  al. (2002)  menjelaskan bahwa pada sambung mikro  yang kompa- tibel  pertumbuhan  planlet  tampak  normal dan  sambungan  mulus  sedang    pada kombinasi  yang  tidak  kompatibel  planlet akan menjadi kerdil.
Xi  &  Ding  (1993)  mengemukakan bahwa  pada  planlet  walnut  ( Junglans regia )  urutan    penyembuhan  hingga  ber- tautnya  jaringan  pembuluh  batang  bawah dan  batang  atas  meliputi  mulai  dari  tidak berkalus,  inisiasi  kalus,  pertemuan  kalus batang  bawah  dengan  kalus  batang  atas, diferensiasi  kalus  menjadi  kambium,  di- susul  pertautan  kedua  kambium,  serta diferensiasi  menjadi  jaringan  pembuluh dan pertautan antara keduanya. Rifa’i-Faiz (2003)  menemukan  sampai  dengan  waktu kurang  dari  tiga  bulan  pada  sambung tanaman duku   masih dalam perkembang- an  kalus.  Tirtawinata  (2003)  melaporkan
pada  tanaman  manggis  yang  sudah  ber- umur  tiga  bulan  setelah  sambung,  proses diferensiasi  kalus  menjadi  kambium  baru terjadi  pada  beberapa  bagian  yang  ber- dekatan  dengan  lingkaran  kambium  ba- tang  bawah  dan  batang  atas.  Pada  bagian sambungan  yang  lingkaran  kambium batang  bawah  dan  batang  atas  berjauhan diferensiasi  kalus  belum  selesai  pada sebagian  besar  sambungan.  Richardson et  al .  (1996)  melaporkan  bahwa  hasil mikrografting  pada planlet  apel,  pertautan jaringan  antara  batang  bawah  dan  batang atas  terjadi  pada  hari  ke  40  setelah perlakuan  dan  terus  berlangsung  hingga selesai  dalam  waktu  enam  bulan.  Errea et al. (2001) juga menjelaskan perbedaan antara kombinasi yang kompatibel dengan yang tidak kompatibel akan terus mening- kat sejalan dengan waktu yang berjalan.
Pada  umur  delapan  minggu  setelah sambung  mikro  kina  dilakukan,  sel  kalus pada  daerah  penyambungan  belum  men- jadi  sel  dewasa.  Namun  tampaknya  trans- lokasi fotosintat, air dan hara mineral pada planlet  hasil  mikrografting  berlangsung dengan  baik.  Hal  ini  dapat  terlihat  dari pertumbuhan  dan  perkembangan  planlet yang  vigor.  Berdasarkan  hasil  yang diperoleh  pada  kombinasi    CSB/Cib5  ter- dapat  garis  memanjang  memotong  tengah lingkaran  batang  (Gambar  3).  Diduga garis  tersebut  merupakan  bagian  dari pembentukan xilem gabungan yang belum sempurna antara batang bawah dan batang atas  karena  belum  dapat  menunjukkan karakteristik  yang  khas  sebagai  xilem. Bentuk  xilem  yang  masih  samar  dapat diduga  akan  membentuk  sel  batu,  yang kemungkinan menghambat  translokasi air dan  hara  mineral    menuju    ke  tajuk  atau translokasi  fotosintat  dari  daun  ke  bagian bawah planlet   menyebabkan pertumbuh- an planlet  menjadi terhambat.
Toruan-Mathius et al.

## Elektroforesis protein
Hasil elektroforesis protein kina daun batang  atas  kombinasi  CSA/QRC205, CSB/QRC205,  CSA/Cib5  dan  CSB/Cib5 umur  delapan  minggu  setelah  sambung mikro  dilakukan      menunjukkan  bahwa protein  daun    batang    atas      planlet    kina dari    klon    yang    diuji      memiliki      berat molekul    14  -  45  kD.    Pada    umumnya pola    pita    protein  SDS-PAGE  daun batang  atas  hasil  sambung  mikro  sama dengan  pola  pita  protein  planlet  kontrol, kecuali kombinasi CSB/Cib5. Pada kombinasi CSB/Cib5 terjadi degradasi dua pita protein pada berat molekul sekitar 21 dan  30  kD    (Gambar  5).  Dapat  disimpul- kan bahwa pola pita protein hasil sambung mikro  yang  sama  dengan  kontrol  disebut kombinasi  yang  kompatibel,  dan  kombi- nasi  yang  berbeda  dengan  kontrol  disebut
kombinasi  yang  tidak  kompatibel.  Tidak terbentuknya protein pada kombinasi yang tidak  kompatibel  (CSB/Cib5)  pada  berat molekul  sekitar  21  dan  30  kDa  karena diduga  adanya  hambatan  translokasi nutrisi  dan  air  dari  bawah  ke  atas  atau translokasi  asimilat  dari  atas  ke  bawah. Terjadinya  hambatan  translokasi  tersebut diduga  pula  karena  jaringan  parenkima terbentuk  secara  berlebihan  pada  daerah pertautan,  sehingga  hubungan  vaskular dan  translokasi  hara,  air  dan  asimilat antara  batang  bawah  dan  batang  atas terhambat.
Hal  tersebut  menyebabkan  pertum- buhan  dan  perkembangan  planlet  menjadi terganggu,  atau    terbentuk  sambungan yang  tidak  harmonis  sehingga  aktivitas enzim  tertentu  meningkat  yang  dapat menghambat  translokasi  dan  senyawa- senyawa  tertentu  yang  melintasi  daerah
Gambar  4.  Penampang melintang  area pertautan sambung mikro batang  planlet  kina CS/CL  umur lima bulan setelah sambung mikro in vitro dengan bentuk sambung  tipe V. Bars = 40 µm.
Figure 4.    Cross section of union area stem  micrografed of cinchona plantlet CS/CL five-week after micrografted  with type micrografted V. Bars = 40 µm .
Derah pertautan Union area Derah pertautan Union area
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan...
pertautan.  Hasil  yang  diperoleh  men- dukung  hasil  analisis  anatomi  daerah pertautan,  yaitu  kombinasi  CSB/Cib5 memperlihatkan  terbentuknya  sel-sel  baru pada  daerah  pertautan.  Di  samping  itu terbentuk  kalus  yang  berlebihan  pada daerah  pertautan  sambungan  yang  tidak mulus  (Gambar  3).  Dari  hasil  percobaan juga menunjukkan bahwa pada kombinasi CSB/Cib5    pertumbuhan  jumlah  daun lebih rendah dari kombinasi lainnya.
Ji-Zhong et  al .  (2001)  menyatakan pada  penyambungan  apel  yang  tidak kompatibel  menyebabkan  tingginya  akti- vitas enzim POD dan IOD dan dapat men- degradasi  auksin  yang  ditranslokasikan dari pucuk ke akar. Holbrook et al. (2002) menyatakan  bahwa  pada  kombinasi  yang kompatibel terjadi  hubungan yang positif antara  batang  bawah  dengan  batang  atas sehingga  proses  distribusi  hara,  kemam- puan  hara  bergerak  melintasi  bagian penyambungan,  dan  regulasi  transpor
hormon berlangsung dengan baik.
Raghothama  (1999)  menyatakan  bahwa pada  penyambungan Arabidopsis yang kompatibel    hubungan  timbal  balik ( source dan sink ) antara  batang  bawah dan batang atas terjadi secara normal.
Monero et  al .  (1994)  menemukan pada penyambungan planlet peach dengan plum yang tidak kompatibel me- nyebabkan  penurunan  kandungan  protein dan asam amino di seluruh organ planlet. Adanya  degradasi  pita  protein  terhadap kombinasi    yang  diuji    diduga  karena adanya  hambatan  translokasi  berbagai senyawa  yang  diperlukan  planlet  dalam proses  metabolisme  pada  kombinasi  yang tidak  kompatibel.  Bertrand  &  Etienne (2001)  menyatakan  bahwa  tidak  muncul- nya  pola  pita  protein  tertentu  karena terganggunya  proses  metabolisme  atau hambatan  dalam  proses  translokasi  ber- bagai  senyawa  yang  diperlukan  planlet. Toruan-Mathius et  al .  (1999,  2000  &
Gambar  5. Elektroforesis protein daun batang atas planlet kina hasil sambung mikro in vitro . M. Marker; 1.Cib5;   2. QRC205;  3. CSA/QRC205;   4. CSA/Cib5;   5. CSB/Cib5;     6.CSB/QRC205;  7. CSA/CSA;  8. CSB/CSB;  9. QRC205/QRC205;  10. Cib5/Cib5.
Figure 5.   Protein  electrophoresis  of  scion leaves of cinchona  from  micrografted.  M. Marker 1.Cib5; 2.  QRC205;  3. CSA/QRC205;   4. CSA/Cib5;   5. CSB/Cib;   6.CSB/QRC205;  7. CSA/CSA; 8. CSB/CSB;  9. QRC205/QRC205;  10. Cib5/Cib5.
Toruan-Mathius et al.
2002)  menyatakan  bahwa  terjadinya variasi  pola  pita  protein    dan  isoenzim esterase  dan  peroksidase    pada  penyam- bungan  tanaman  karet    karena  interaksi yang  berbeda  terhadap  masing-masing kombinasi batang bawah dan batang atas.
Berdasarkan  ada  dan  tidaknya  pola pita  protein  yang  muncul  pada  planlet hasil  mikrografting    dapat  disimpulkan bahwa  protein  merupakan  salah  satu indikasi pada fase dini terhadap kombinasi yang  kompatibel  dengan  kombinasi  yang tidak  kompatibel  dalam  mikrografting. Errea et  al .  (2001)  menyatakan  bahwa teknik  mikrografting dapat  digunakan untuk  mendeteksi  secara  dini  kombinasi penyambungan  batang  bawah  dan  batang atas  yang  kompatibel  maupun  kombinasi yang tidak kompatibel.
Lizawati et  al .  (2002)  melaporkan bahwa  adanya  pengaruh  batang  bawah tanaman  karet  klon  RRC110  dapat mendegradasikan  beberapa  pita  protein lateks batang atas klon RRIC100. Menurut Turnbull et al. (2002) pada batang bawah yang  tidak  kompatibel  terhadap  batang atas,  terjadi  pengiriman  sinyal  ke  batang atas  yang  mirip  dengan  sinyal  tanaman terhadap cekaman lingkungan.

## Kesimpulan
1. Pada  kombinasi  mikrografting  yang kompatibel  CSA/QRC205  menunjuk- kan  struktur  anatomi  daerah  pertautan yang  sama  dengan  struktur  anatomi batang  individu  batang  yang  tidak disambung. Sedangkan kombinasi mikrografting  yang  tidak  kompatibel CSB/Cib5, pada daerah pertautan terbentuk  lapisan  nekrotik  yang  me- manjang  hampir  memotong  bagian tengah batang.
2. Tahapan  pemulihan  daerah  pertautan penyambungan  batang  bawah  dengan batang  atas  diawali  dengan  pemben- tukan  kalus,  diferensiasi  sel  dan  ter- bentuknya  jaringan  ikatan  pembuluh gabungan.
3. Pada  kombinasi  yang  kompatibel,  pola pita  protein  yang  muncul  sama  dengan planlet  yang  tidak  disambung  sedang- kan  pada  kombinasi  yang  tidak  kompa- tibel  pola  pita  protein  berbeda  dengan pola  pita  protein    planlet  kontrol  yaitu terjadi    degradasi  dua  pita  protein  pada berat molekul sekitar 21 dan 30 kD.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Kepala  Balai  Penelitian  Biotek- nologi  Perkebunan  Indonesia,  Bogor  atas fasilitas  penelitian  dan  Direktur  Pusat Penelitian  Teh  dan  Kina,  Gambung  atas izin menggunakan bahan tanam kina yang digunakan dalam penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Agbaria,  H.,  B.Heuer  &  N.  Zieslin  (1997). Rootstock-imposed  formation  of  protein in  leave  of  rose  ( Rosa  hybrida cv Mercedes). Adv . Hort. Sci., 11, 159-160.
Agbaria,  H.,  B.Heuer  &  N.  Zieslin  (1998). Rootstock-imposed  alterations  in  nitrate reductase and glutamine synthetase activities  in  leaves  for  rose  plant. Biol.
Plant., 41 (1), 85-101.
Bertrand,  B.  &  H.  Etienne  (2001).  Growth, production,  and  bean  quality  of Coffea Arabica as  affected  by  interspecific grafting:  Consequences  for  rootstock breeding. J. Hort. Sci., 36 , 269 – 273 .
Kompatibilitas sambung mikro Cinchona ledgeriana dengan C. succirubra berdasarkan...
Errea,  P.,  L.  Garay  &  A.J.  Marin  (2001).
Early  detection  of  graft  incompatibility in  apricot  ( Prunus  armeniaca )  using in vitro techniques. Physiol.  Plant., 112 , 135-141.
Estrada-Luna,  A,  A.,  C.  Lopez-Peralpa  & E.  Cardenas-Soriano  (2002). In  vitro m icrografting  and  the  histology  of  graft union  formation  of  selected  species  of prikly  pear  cactus  ( Opuntia spp.). Sci. Hort., 92, 317-327.
Hartmann,  H.T., D.E. Kester & F.T Davies (1997). Plant  Propagation,  Principles and  Practice .  Sixth  Edition.  New Jersey,  Practice  Hall  International Inc. 770p.
Holbrook, N.M., V.R. Shashidhar, R.A.  James &  R.  Munns  (2002).  Stomatal  control  in tomato with ABA-deficient roots: response  of  grafted  plants  to  soil  drying. J. Exp. Bot., 53, 1503-1514 . Ji-Zhong,  Xu.,  Shi  Bao-Sheng,  MA  Bao-kun, Guo  Run-Fang,  Li  Xiao-Dong  &  Zhang Xian-Bin (2002). Studies on the POD and IOD activities of the dwarfing stocks and the red fuji apple grafted on corresponding  interstocks. China . Agric. Sci., 1 (5),  562-567.
Lasminingsih,  M.,  A.  Hartana  &  D.  Fardiaz (1989).  Pola  pita  protein  beberapa  klon karet Buletin  Perkebunan  Rakyat, 5, 34- 38.
Leammli, U.K. (1970). Cleavage  of  structural protein  during  the  assembly  of  the heat  of  bacteriophag  T4. Nature , 227, 680-685.
Lizawati  (2002).  Analisis  interaksi  batang bawah  dan  batang  atas  pada  okulasi tanaman  karet. Tesis Bogor,  Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Lowry, O.H., F.A.L. Rosebrough & R.J. Randal (1951). Protein measurement with  the  folin  phenolreagent. J.  Biol. Chem., 193-205.
Madjid, A. (1974). Bahan tanaman karet untuk peremajaan. Menara  perkebunan , 42 (5),
267-269.
Monero,  M.A.,  J.P.  Gaidillere  &  A.  Moing (1994).  Protein  and  amino  accid  content in  compatible  and  incompatible  peach/ plum  grafts. J  Hort.    Sci., 115 (2),  312- 319.
Murashige,    T  &  F.  Skoog  (1962).  A  revised medium  for  rapid  growth  and  bioassay with  tobacco  tissue  culture. Physiol.
Plant ., 15 ,  473-497.
Prawoto,  A.A.,  W.  Soerodikoesoemo  &
J.  Isbandi  (1987).  Kajian  okulasi  pada tanaman  kakao (Theobroma  cacao  L)
III. Anatomi  pertautan  batang  bawah  dan batang atas. Pelita Perkebunan, 6 (2), 13-
30.
Raghothama, K.G. (1999). Phosphate acquisition. Ann.  Rev.  Plant  Physiol. Plant Mol. Biol., 50, 665-693.
Richardson,  F.  V.  M.,  S.  M.Tsaoir    & B.M.R.  Harvey  (1996).  A  study  of  the graft  union in  vitro micrografted  apple.
Plant Growth Regul ., 20, 17-23.
Rifa’i-Faiz  (2003).  Pengaruh  batang  bawah dan jenis bibit serta studi anatomi bidang penyambungan  pada  bibit  grafting  duku ( Lansium  domesticum Corr). Skripsi Bogor, Jurusan Budidaya, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Sobhana,  P.,  J.  Gopalakrishan,    J.  Jacob  &
M.R.Sethuraj  (2001).    Physiological  and biochemical aspects of stock-scion interaction  in Hevea  brasiliensis .    Indian J.  Nat. Rub. Res., 14 (2), 131-136.
Tirtawinata,  M.R.  (2003).  Kajian  anatomi  dan fisiologi  sambung  bibit  manggis  dengan beberapa  anggota  kerabat  Clusiaceae.
Disertasi. Bogor,  Sekolah  Pasasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Toruan-Mathius,  N.,  S.A.  Adimihadja  & I.  Boerhendhy  (1999).  Rootstock-Scion
Toruan- Mathius et al.
interaction  in Havea  : Bark  protein patterns  and  anatomy  in  correlation  with genetic  similarities. Menara  Perkebunan 67 (l), 1- 2.
Toruan-Mathius,  N.,  I.  Boerhendhy,    Madjid- Akbar  &  Kuswanhadi  (2000).  Rootstock- scion interaction induced the alteration of protein  banding  patterns  of  scion,  and  its correlation  with  genetic  similarities  in Hevea  brasiliensis Muell  Agr. In  Proc. Indonesian  Rubb.  Conf.  &  IRRDB Symposium. Bogor,  12-14  September 2000, volume I p. 169-179.
Toruan-Mathius, N., Lizawati, H. Aswidinnoor & I. Boerhendhy (2002). Pengaruh batang bawah  terhadap  pola  pita  isoenzim  dan protein batang atas pada okulasi tanaman
karet  ( Hevea  brasiliensis Muell  Agr.). Menara Perkebunan, 70 (1), 20-34.
Turnbull,  C.  G.  N.,  J.  P.  Booker  & H.  M.  O  Leyser  (2002).  Micrografting techniques  for  testing  long-distance signalling  in Arabidopsis.  The  Plant  J.,
32, 255-262.
Warmund,  M.R.,  B.H  Barritt,  J.M.  Brown, K.L.  Schaffer  &  B.R.  Jeong  (1993).
Detection  of  vascular  discontinuity  in bud  union  of  'Jonagold'  apple  on  mark rootstock with magnetic resonance imaging. J.  Amer.  Soc.  Hort.  Sci., 118, 92-96.
Xi,  R.T.  &  P.H.  Ding  (1993).  A  study  on  the uniting  proccess  of  walnut  grafting  and the  factors  affecting. Acta.  Hort ., 311, 160-170.