BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 4 Nomor 1 (2022):  53-60 E-ISSN: 2714-8564

## Karakterisasi dan Optimasi Aktivitas Bakteriosin Isolat Bakteri Asam Laktat LG-90 Asal Sedimen Mangrove Pantai Logending

## Fiqita Mayliani, Dyah Fitri Kusharyati, Dini Ryandini
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jl. dr. Suparno 63, Purwokerto, 53122 *Email : fiqita.mayliani@mhs.unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 23/07/2021 Disetujui  : 15/06/2022

## Abstract
Lactic  acid  bacteria  (LAB)  are  a  group of  Gram-positive  bacteria  that  produce  various  active metabolites,  including  lactic  acid,  ethanol,  hydroperoxides,  and  bacteriocins.  Bacteriocin  is  a peptide that has a broad spectrum to inhibit the growth of pathogenic microbes. The ability of bacteriocins  to  inhibit  microbial  growth  is  influenced  by  various  factors,  including  the concentration  of  antimicrobial  substances,  temperature,  storage  time,  pH,  and  microbial properties.  LG-90  isolated  from  mangrove  sediments  at  Logending  Beach  located  in  Ayah Village, Ayah District, Kebumen Regency, is known to be capable of producing bacteriocins. This research aimed to determine the characteristics and identity of LG-90, the optimum time of bacteriocin production, and the optimum pH and temperature for bacteriocin activity of LG-90 as antimicrobial agents. This research used a survey method. The independent variable in this research  was  LAB  LG-90  isolates  and  the  dependent  variable  were  the  ability  to  produce bacteriocins  and  their  antibacterial  power.  The  main  parameter  observed  was  diameter  of  the inhibition  zone  and  the  supporting  parameters  were  morphological,  physiological,  and biochemical  properties  of  bacteria.  Descriptive  data  analysis  and  characterization  of  bacterial isolates refers to Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology . The results showed that LG-90 from  the  mangrove  sediments  of  Logending  Beach  had  the  similar  phenetic  characters  as  the genus  Lactobacillus.  Optimum  bacteriocin  production  of  LG-90  at  an  incubation  time  of  16 hours. Optimum antimicrobial activity of LG-90 bacteriocin at pH 6 and heating temperature of 40 o C.
Key words : bacteriocin, isolate characteristics, lactic acid bacteria, mangrove sediments

## Abstrak
Bakteri  asam  laktat  (BAL)  merupakan  kelompok  bakteri  Gram  positif  yang  menghasilkan berbagai  metabolit  aktif,  di  antaranya  asam  laktat,  etanol,  hidroperoksida,  dan  bakteriosin. Bakteriosin  adalah  suatu  peptida  yang  mempunyai  spektrum  luas  dalam  menghambat pertumbuhan  mikroba  patogen.  Kemampuan  bakteriosin  dalam  menghambat  pertumbuhan mikroba  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor,  diantarnya  konsentrasi  zat  antimikroba,  suhu lingkungan, waktu penyimpanan, pH, dan sifat-sifat mikroba. Isolat BAL LG-90 diisolasi dari sedimen mangrove Pantai Logending yang terletak di Desa Ayah, Kecamatan Ayah, Kabupaten Kebumen,  diketahui  mampu  menghasilkan  bakteriosin.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui karakteristik dan identitas isolat BAL LG-90, waktu optimum produksi bakteriosin, serta pH dan suhu pemanasan optimum terhadap aktivitas bakteriosin isolat BAL LG-90 sebagai agen  antimikroba.  Penelitian  ini dilakukan  menggunakan  metode  survei.  Variabel  bebas pada penelitian ini yaitu isolat BAL LG-90 dan variabel tergantung yaitu kemampuan menghasilkan bakteriosin dan daya antibakteri. Parameter utama yang diukur yaitu diameter zona hambat dan parameter  pendukung  yaitu  sifat  morfologis,  fisiologis,  dan  biokimiawi  bakteri.  Analisis  data secara  deskriptif  dan  karakterisasi  isolat  bakteri  berdasarkan Bergey’s  Manual  of  Systematic Bacteriology . Hasil penelitian yang diperoleh yaitu isolat BAL LG-90 memiliki karakter fenetik serupa  dengan  genus  Lactobacillus.  Produksi  bakteriosin  isolat  BAL  LG-90  optimum  pada waktu inkubasi 16 jam. Aktivitas optimum bakteriosin sebagai antimikroba pada pH 6 dan suhu pemanasan 40 o C. Kata kunci: bakteri asam laktat, bakteriosin, pH, suhu, sedimen mangrove

## PENDAHULUAN
Bakteri asam laktat (BAL) merupakan kelompok  bakteri  Gram  positif,  tidak  berspora, berbentuk  kokus atau batang, serta pertumbuhannya bersifat anaerob hingga fakultatif anaerob. BAL dapat memetabolisme berbagai jenis gula dan menghasilkan  asam  laktat  sebagai  produk  akhir utamanya  selama  proses  fermentasi  (Kasi et  al. , 2017).  Ibrahim et  al. (2015)  menambahkan  bahwa BAL  menghasilkan  berbagai  metabolit  aktif,  di antaranya  asam  laktat,  etanol,  hidroperoksida,  dan bakteriosin.
Bakteriosin merupakan suatu peptida antimikroba  yang  dihasilkan  BAL  selama  fase pertumbuhan  eksponensial  hingga  awal  stasioner (Kursia et  al .,  2020).  Riadi et  al .  (2020) menambahkan bahwa bakteriosin mempunyai spektrum  luas  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri patogen. Bakteriosin dapat bersifat bakterisida, bakteriostatik, fungisida, fungistatik atau menghambat germinasi spora bakteri.
Kemampuan  bakteriosin  dalam  menghambat pertumbuhan  mikroba  dipengaruhi  beberapa  faktor, di  antaranya  pH  dan  suhu  pemanasan  (Riadi et  al ., 2020). Bakteriosin  merupakan senyawa antimikroba yang  stabil  pada  pH  asam.  Nilai  pH  dapat mempengaruhi  struktur  bakteriosin  sehingga  akan berpengaruh  terhadap  aktivitas  antimikrobanya. Aktivitas bakteriosin dapat tetap stabil  terhadap suhu pemanasan,  karena  struktur  asam  amino  tertentu dapat tetap tidak terpengaruh oleh panas (Kusmarwati et al ., 2014).
BAL  penghasil  bakteriosin  dapat  diisolasi  dari berbagai lingkungan, di antaranya adalah lingkungan mangrove. Ekosistem mangrove memiliki biodiversitas  mikroorganisme  yang  tinggi  dan berlangsung  berbagai  aktivitas  seperti  fotosintesis, fiksasi  nitrogen,  metanogenesis,  serta  produksi antibiotik  dan  enzim.  Interaksi  organisme  dan lingkungannya  menjadikan  ekosistem  mangrove sebagai lingkungan yang dinamis (Tari et al ., 2020). Bakteri asam laktat telah diisolasi dari sedimen mangrove  Pantai  Logending,  Kebumen  (Kusharyati et  al .,  2020).  Isolat  LG-90  berpotensi  dalam menghasilkan  bakteriosin,  tetapi  isolat  belum teridentifikasi, waktu optimum produksi bakteriosin, dan  kondisi  optimum  aktivitas  bakteriosin  sebagai agen  antimikroba.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  karakteristik  dan  identitas  isolat  BAL LG-90, waktu optimum produksi bakteriosin, dan pH serta  suhu  pemanasan  optimum  yang  menghasilkan aktivitas  penghambatan  tertinggi  sebagai  agen antimikroba.

## MATERI DAN METODE
Alat-alat yang digunakan meliputi  mikropipet, microtube ,  penangas  air,  oven,  pH  meter, hot  plate magnetic stirrer , waterbath thermostatic , timbangan analitik, shaker  incubator, autoklaf,  mikroskop,
inkubator, Laminar Air Flow (LAF), spektrofotometer,  centrifuge,  dan  alat  gelas  yang lazim digunakan dalam kerja mikrobiologi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  meliputi  isolat BAL  LG-90, Escherichia  coli , Staphylococcus aureus ,  enzim  papain,  media de  Man  Rogosa  and Sharpe  Agar (MRSA), de  Man  Rogosa  and  Sharpe Broth (MRSB), Mueller Hinton Agar (MHA), Sulfide Indole Motility Agar (SIMA), Methyl Red dan Voges Proskauer (MR-VP), Nutrient Agar (NA), Nutrient Broth (NB),  kertas  cakram  6  mm,  akuades,  reagen Gram, malachite  green ,  reagen  Kovac’s,  reagen methyl  red ,  KOH  3%, α-Naphtol ,  reagen  H 2 O 2 3%, reagen oksidase, CaCO 3 , NaOH, HCl, spiritus, etanol 70%, dan syringe filter 0,22 μm.
Penelitian  dilakukan  menggunakan  metode survei. Variabel bebas berupa isolat BAL LG-90 dan variabel tergantung  yaitu kemampuan  menghasilkan bakteriosin  dan  daya  antibakteri.  Parameter  utama yang  diukur  yaitu  diameter  zona  hambat  dan parameter  pendukung  yaitu  sifat  morfologis, fisiologis,  dan  biokimiawi  bakteri.  Analisis  data secara  deskriptif  dan  karakterisasi  isolat  bakteri berdasarkan Bergey’s  Manual  of  Systematic Bacteriology .
Cara Kerja Penelitian Peremajaan BAL (Pelczar et al. , 2005)
Kultur  BAL  LG-90  ditumbuhkan  pada  media MRSA+CaCO 3 1%  dengan  metode streaking dan diinkubasi pada suhu 32 ℃ selama 48 jam, kemudian diambil satu koloni dan diinokulasikan pada medium MRSB dan diinkubasi pada suhu 32°C selama 48 jam.
Karakterisasi isolat BAL LG-90
Karakterisasi  isolat  BAL  LG-90  meliputi karakterisasi makromorfologi, mikromorfologi, fisiologi, dan biokimiawi. Karakterisasi makromorfologi  meliputi  pengamatan  morfologi koloni bakteri. Karakterisasi mikromorfologi meliputi  pewarnaan  Gram,  endospora,  dan  uji motilitas  bakteri.  Karakterisasi  fisiologi  meliputi  uji ketahanan  suhu,  ketahanan  kadar  garam,  dan kebutuhan terhadap oksigen. Karakterisasi biokimiawi  meliputi  uji  katalase,  oksidase,  indol, MR-VP, dan uji tipe fermentasi bakteri.
Pembuatan kurva pertumbuhan bakteri (modifikasi Kusmarwati et al ., 2014)
Isolat BAL sebanyak satu ose diinokulasikan ke dalam  10  mL  medium  NB,  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  24  jam.  Kultur  diambil  1  mL diinokulasi  dalam  100  mL  medium  NB,  diinkubasi pada incubator shaker , dan diamati pertumbuhannya dengan  mengukur  nilai  Optical  Density  (OD) menggunakan  spektrofotometer  panjang  gelombang 625  nm  setiap  2  jam.  Kurva  pertumbuhan  dibuat berdasarkan plotting nilai  OD  dan  waktu  inkubasi dari jam ke-0 hingga ke-24 sehingga diperoleh fase- fase pertumbuhannya.
Penentuan  waktu  optimum  produksi  bakteriosin (modifikasi Sidabutar et al., 2015) Sebanyak 1 mL kultur BAL diinokulasikan pada 20  mL  medium  NB,  diinkubasi  pada  suhu  ruang selama  4,  10,  16,  dan  24  jam.  Kultur  disentrifugasi dengan kecepatan 6720 G selama 15 menit pada suhu 4 ℃ .  Filtrat  dinetralkan  hingga  pH  7,0  dengan menambahkan NaOH 1 N. Filtrat disterilkan dengan syringe filter berukuran  pori  0,22  μm  untuk memperoleh  supernatan  bakteriosin.  Supernatan bakteriosin sebanyak 20 μL yang diperoleh pada tiap waktu  inkubasi  diteteskan  pada  kertas  cakram  steril berdiameter  6  mm,  kemudian  diletakkan  di  atas media  MHA  yang  mengandung  bakteri  patogen E. coli dan S.  aureus .  Diameter  zona  hambat  yang terbentuk diukur menggunakan jangka sorong setelah diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37°C  dan dihitung rata-ratanya dengan rumus berikut.
D (mm) = D1 + D2

## 2
Keterangan:
D : Rata-rata diameter zona hambat
D1 : Diameter vertikal zona hambat D2 : Diameter horizontal zona hambat
Uji pengaruh enzim proteolitik terhadap aktivitas bakteriosin (modifikasi Kusmarwati et al ., 2014) Supernatan  bakteriosin  sebanyak  200  µl dicampur dengan 20 µl larutan enzim papain (larutan enzim  dibuat  dengan  cara  melarutkan  enzim  dalam NaOH pH 7), lalu diinkubasi pada suhu 37°C selama 2  jam.  Larutan  disterilkan  dengan syringe  filter berukuran  0,22  μm  ke  dalam  tabung  steril.  Larutan bakteriosin  dan  enzim  sebanyak  20  μL  diteteskan pada  kertas  cakram  steril  berdiameter  6  mm, diletakkan  di  atas  medium  MHA  yang  mengandung bakteri  patogen E.  coli dan S.  aureus .  Diamati  ada tidaknya zona hambat yang terbentuk di sekitar kertas cakram setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ℃ .
Uji  aktivitas  bakteriosin  pada  pH  yang  berbeda (modifikasi Kusmarwati et al ., 2014)
Sebanyak  5  mL  supernatan  bakteriosin  kasar pada  tabung  yang  berbeda,  masing-masing  diatur pada pH 3, 4, 5, 6, dan 7 menggunakan larutan NaOH atau HCl. Setelah diinkubasi selama 4 jam pada suhu ruang,  selanjutnya  aktivitas  bakteriosin  diuji menggunakan metode difusi cakram terhadap bakteri patogen E. coli dan S. aureus . Diameter zona hambat yang  terbentuk  diukur  menggunakan  jangka  sorong setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ℃ dan dihitung rata-rata diameternya dengan rumus (3 – 1).
Uji  aktivitas  bakteriosin  pada  suhu  pemanasan yang berbeda (modifikasi Kusmarwati et al ., 2014) Sebanyak 5 mL supernatan bakteriosin masing- masing  dipanaskan  pada  suhu  40 ℃ ,  60 ℃ ,  80 ℃ ,  dan 100 ℃ selama 30 menit di waterbath thermostatic dan 121 ℃ selama  15  menit  di  autoklaf.  Aktivitas bakteriosin kemudian diuji dengan metode difusi agar terhadap  bakteri  patogen E.  coli dan S.  aureus . Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  diukur menggunakan  jangka  sorong  setelah  diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ℃ dan dihitung rata-rata diameternya dengan rumus (3 – 1).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Peremajaan  isolat  BAL  LG-90  pada  medium MRSA  yang  diperkaya  CaCO 3 1%  menunjukkan pertumbuhan koloni bulat berwarna putih susu (Tabel 1.).  Isolat  BAL  LG-90  merupakan  bakteri  Gram positif yang tidak memiliki endospora. Bentuk selnya batang panjang  membentuk susunan rantai (Gambar 1.).
Isolat  BAL  LG-90  bersifat  fakulatif  anaerob, katalase  negatif,  dan  homofermentatif.  Menurut Ibrahim et al. (2015), BAL merupakan bakteri yang pada  umumnya  bersifat  fakultatif  anaerob  yang tumbuh  pada  kondisi  sedikit  oksigen.  Menurut Surono (2016), Lactobacillus yang bersifat homofermentatif  menghasilkan  asam  laktat  sebagai produk  utama  metabolitnya.  Hasil  karakterisasi morfologi, fisiologi, dan biokimiawi berdasarkan Vos et al . (2009),  isolat BAL  LG-90 termasuk  ke dalam genus Lactobacillus (Tabel 1.).
Gambar 1. Mikromorfologi isolat BAL LG-90 Keterangan: (I) Pewarnaan Gram isolat BAL-90 perbesaran 1000x
(II) Pewarnaan endospora isolat BAL-90 perbesaran 1000x
I II
Tabel 1. Karakterisasi fenetik isolat BAL LG-90
Karakterisasi Isolat BAL LG-90 Karakteristik Hasil Pengamatan Makromorfologi Permukaan koloni Halus mengkilap Bentuk koloni Sirkular Warna koloni Putih susu Elevasi koloni Cembung Tepi koloni Rata Ukuran koloni Kecil Optik koloni Opaque Pigmentasi - Mikromorfologi Gram Positif Bentuk sel Batang Susunan sel Strepto Endospora - Motilitas + Fisiologi Suhu 5 ℃ - Suhu 37 ℃ + Suhu 45 ℃ + Kadar garam 0% + Kadar garam 3% + Kadar garam 5% + Kadar garam 6,5% + Kadar garam 10% - Kebutuhan oksigen Fakultatif anaerob Biokimiawi Katalase - Oksidase + Indol - MR + VP - Tipe Fermentasi Homofermentatif Genus Bakteri Lactobacillus Keterangan: +    = Interpretasi positif -     = Interpretasi negatif
Fase  pertumbuhan  bakteri  digunakan  sebagai acuan penentuan waktu optimum produksi bakteriosin.  Gambar  2.  menunjukkan  bahwa  selama 24  jam  inkubasi  isolat  BAL  LG-90  mengalami  tiga fase  pertumbuhan,  yaitu  fase  lag,  eksponensial,  dan stasioner. Fase lag terjadi pada jam ke-0 hingga ke-2 inkubasi.  Fase  eksponensial  terjadi  pada  jam  ke-2 hingga  ke-16  inkubasi.  Menurut  Prissilia et  al. (2019),  pada  fase  ini  bakteri  akan  mengalami peningkatan jumlah sel yang berlangsung cepat. Fase stasioner  terjadi  pada  jam  ke-16  hingga  ke-24.  Fase ini  ditandai  dengan  pertumbuhan  konstan  antara  sel bakteri hidup dan yang mati. BAL akan menghasilkan metabolit  sekunder  yaitu  bakteriosin  pada  fase  ini sebagai pertahanan diri terhadap lingkungannya dan mikroorganisme lain.
Bakteriosin  sebagai  agen  antimikroba  sangat potensial  digunakan  untuk  mengendalikan  beberapa bakteri kontaminan, tetapi secara komersial ketersediannya  masih  sedikit  dan  harganya  sangat mahal. Koleksi BAL di alam tersedia cukup banyak
yang dapat dimanfaatkan untuk produksi bakteriosin. Waktu optimum produksi bakteriosin diperlukan agar produksi bakteriosin menjadi efektif dan mengurangi biaya produksi.
Gambar 2. Kurva pertumbuhan isolat BAL LG-90
0 0,5 1 1,5 2 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Nila i A bs o rba ns i (A )
Waktu Inkubasi (Jam)
Tabel 2. Hasil uji aktivitas bakteriosin isolat BAL LG-90 berdasarkan waktu  produksi yang berbeda
Bakteri Patogen Waktu Inkubasi (jam) Diameter Zona Hambat (mm) I II x ± SD S. aureus 4 7,55 7,95 7,75 ± 0,28 10 8,85 8,80 8,83 ± 0,03 16 8,80 9,30 9,05 ± 0,35 24 7,30 7,55 7,43 ± 0,18 E. coli 4 7,45 7,95 7,70 ± 0,35 10 8,40 8,55 8,48 ± 0,11 16 9,15 8,90 9,03 ± 0,18 24 7,95 8,25 8,10 ± 0,21 Keterangan: x    = Rata-rata SD = Standar Deviasi
Gambar 3. Aktivitas bakteriosin berdasarkan waktu produksi yang berbeda terhadap bakteri patogen.
Keterangan: (I) S. aureus ; (II) E. coli. (a, 4 jam; b, 10 jam; c, 16 jam; d, 24 jam).
Gambar 4. Uji pengaruh enzim proteolitik terhadap aktivitas bakteriosin pada bakteri  patogen.
Keterangan: (I) S. aureus ; (II) E. coli. (a, bakteriosin; b, bakteriosin dengan enzim papain).
Tabel  2.  menunjukkan  bahwa  waktu  optimum produksi  bakteriosin  terjadi  pada  inkubasi  16  jam, karena memiliki diameter zona hambat paling besar. Menurut  Prissilia et  al .  (2019),  bakteriosin  dapat dideteksi  pada  fase  eksponensial  dan  semakin optimum  aktivitasnya  pada  fase  stasioner.  Rata-rata diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  terhadap S. aureus sebesar 9,05 ± 0,35 mm, sedangkan terhadap E. coli 9,03 ± 0,18 mm (Gambar 3).
Besarnya  aktivitas  penghambatan  bakteriosin  pada tiap  waktu  produksi  berkaitan  dengan  jumlah  sel bakteri.  Pertumbuhan  bakteri  ditandai  dengan meningkatnya nilai OD. Aktivitas terendah bakteriosin terjadi pada inkubasi 4 jam dengan nilai OD  0,532.  Nilai  OD  pada  inkubasi  10  jam  sebesar 1,389  dan  pada  inkubasi  24  jam  1,508.  Aktivitas
tertinggi  bakteriosin  terjadi  pada  inkubasi  16  jam yang memiliki nilai OD sebesar 1,551.
Hasil  uji  pengaruh  enzim  proteolitik  terhadap bakteriosin menunjukkan bahwa tidak terbentuk zona hambat (Gambar 4.). Menurut Ningsih et al . (2018), penambahan enzim proteolitik dapat menghilangkan aktivitas  bakteriosin  yang  ditandai  hilangnya  zona hambat  di  sekitar  cakram.  Hasil  penelitian membuktikan  bahwa  antimikroba  yang  dihasilkan BAL  LG-90  adalah  bakteriosin  yang  merupakan protein  antimikroba  yang  mampu  terdegradasi  oleh enzim proteolitik. Enzim proteolitik yang digunakan yaitu enzim papain yang merupakan enzim hidrolase sistein protease yang dapat ditemukan pada pepaya.
Tabel 3. Hasil uji pengaruh enzim proteolitik terhadap aktivitas bakteriosin isolat BAL LG-90
Bakteri Patogen Diameter Zona Hambat (mm) I II x ± SD Bakteriosin S. aureus 10,05 9,55 9,80 ± 0,35 E. coli 8,50 8,95 8,73 ± 0,32 Bakteriosin + Enzim Proteolitik S. aureus 6,00 6,00 6,00 ± 0,00 E. coli 6,00 6,00 6,00 ± 0,00 Keterangan: x    = Rata-rata SD = Standar Deviasi
Gambar 5. Aktivitas bakteriosin terhadap bakteri patogen.
Keterangan: (I) S. aureus ; (II) E. coli. (a, bakteriosin; b, kontrol negatif).
Tabel 3. menunjukkan bahwa bakteriosin BAL LG-90 lebih sensitif terhadap bakteri Gram positif S. aureus dibandingkan  bakteri  Gram  negatif E.  coli . Hal ini dibuktikan dengan diameter zona hambat yang terbentuk  lebih  besar  terhadap  bakteri S.  aureus (Gambar  5.) . Rata-rata  diameter  zona  hambat  yang terbentuk terhadap bakteri patogen S. aureus adalah sebesar 9,80 ± 0,35 mm, sedangkan terhadap E. coli sebesar  8,73  ±  0,32  mm.  Perbedaan  sensitivitas tersebut  dikarenakan  bakteri  Gram  negatif  memiliki membran luar yang bertindak sebagai barier sehingga lebih sulit ditembus bakteriosin. Bakteri Gram positif hanya  memiliki  membran  plasma  tunggal  yang dikelilingi dinding sel tebal berupa peptidoglikan dan asam  lipoteikoat.  Asam  lipoteikoat  merupakan reseptor  spesifik  dan  terkait  dengan  pengikatan senyawa bakteriosin (Pelczar et al ., 2005).
Berdasarkan  Tabel  4.,  bakteriosin  BAL  LG-90 memiliki  aktivitas  pada  pH  3  hingga  pH  7  dan optimum pada pH 6. Rata-rata diameter zona hambat yang  terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram  dengan bakteriosin  pH  6  terhadap  bakteri  patogen S.  aureus adalah sebesar 10,70 ± 0,14 mm, sedangkan terhadap
E.  coli sebesar  10,03  ± 0,11  mm  (Gambar  6.).  Hasil yang diperoleh sesuai dengan penelitian Duraisamy et al .  (2015),  bahwa  kestabilan  aktivitas  bakteriosin terjadi pada rentang pH 3 sampai pH 7 dan memiliki aktivitas  optimum  pada  pH  6.  Menurut  Sari et  al . (2018),  stabilitas  bakteriosin  pada  skala  pH  yang berbeda merupakan faktor pembatas untuk direkomendasikan  dalam  pengaplikasiannya  sebagai pengawet pada bahan makanan.
Tabel  5.  menunjukkan  bahwa  bakteriosin  BAL LG-90 tahan terhadap pemanasan sampai suhu 100 ℃ . Bakteriosin  yang  dipanaskan  pada  suhu  40 ℃ masih memiliki sifat antimikroba yang tinggi, tetapi aktivitas bakteriosin  menurun  seiring  perlakuan  suhu  yang semakin  tinggi.  Diameter  zona  hambat  terbesar terdapat  pada  bakteriosin  suhu  pemanasan  40 ℃ , dengan rata-rata diameter zona hambat yang terbentuk terhadap S.  aureus adalah  sebesar  11,68  ± 0,03  mm, sedangkan terhadap E. coli sebesar 9,45 ± 0,28 mm (Gambar 7.). Hasil tersebut sesuai penelitian Ningsih et  al .  (2018)  dan  Duraisamy et  al .  (2015),  bahwa bakteriosin  memiliki sifat tahan terhadap  panas pada suhu 40 ℃ hingga 100 o C dan optimum pada suhu 40 ℃ .
Tabel 4. Hasil uji aktivitas bakteriosin isolat BAL LG-90 berdasarkan nilai pH yang berbeda
Bakteri Patogen Nilai pH Diameter Zona Hambat (mm) I II x ± SD S. aureus 3 8,05 8,20 8,13 ± 0,11 4 8,10 8,30 8,20 ± 0,14 5 9,75 9,45 9,60 ± 0,21 6 10,80 10,60 10,70 ± 0,14 7 9,75 9,60 9,68 ± 0,11 E. coli 3 7,95 7,45 7,70 ± 0,35 4 7,75 8,05 7,90 ± 0,21 5 8,55 8,75 8,65 ± 0,14 6 10,10 9,95 10,03 ± 0,11 7 8,85 8,40 8,63 ± 0,32 Keterangan: x    = Rata-rata SD = Standar Deviasi
Gambar 6. Aktivitas bakteriosin berdasarkan nilai pH yang berbeda terhadap bakteri patogen.
Keterangan: (I) S. aureus ; (II) E. coli (a, pH 3; b, pH 4; c. pH 5; d, pH 6; e, pH 7).
Tabel 5. Hasil uji aktivitas bakteriosin isolat BAL LG-90 berdasarkan suhu pemanasan yang berbeda
Bakteri Patogen Suhu Pemanasan ( o C) Diameter Zona Hambat (mm) I II x ± SD S. aureus 40 11,70 11,65 11,68 ± 0,03 60 8,95 8,70 8,83 ± 0,18 80 7,55 7,85 7,70 ± 0,21 100 6,35 6,20 6,28 ± 0,11 121 6,00 6,00 6,00 ± 0,00 E. coli 40 9,25 9,65 9,45 ± 0,28 60 8,05 7,95 8,00 ± 0,07 80 7,75 7,50 7,63 ± 0,18 100 6,30 6,20 6,25 ± 0,07 121 6,00 6,00 6,00 ± 0,00 Keterangan: x    = Rata-rata SD = Standar Deviasi
Gambar 7. Aktivitas bakteriosin berdasarkan suhu pemanasan yang berbeda terhadap bakteri patogen.
Keterangan: (I) S. aureus ; (II) E. coli. (a, 40 o C; b, 60 o C; c, 80 o C; d, 100 o C;  e, 121 o C).
Masih  adanya  aktivitas  bakteriosin  ketika diberi  perlakuan  panas  dikarenakan  bakteriosin merupakan  peptida  pendek  yang  stabil  terhadap panas.  Asam  amino  tertentu  yang  ada  pada bakteriosin mampu mempertahankan struktur bakteriosin dari pengaruh panas. Stabilitas bakteriosin  terhadap  suhu  pemanasan  penting apabila  bakteriosin  akan  diaplikasikan  sebagai pengawet makanan (Andarilla et al ., 2018).

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat BAL  LG-90  asal  sedimen  mangrove  Pantai Logending  memiliki  karakter  fenetik  yang  serupa dengan  genus  Lactobacillus.  Waktu  optimum produksi  bakteriosin  BAL  LG-90  yaitu  pada inkubasi  16  jam.  Rata-rata  diameter  zona  hambat yang  terbentuk  terhadap S.  aureus adalah  sebesar 9,05 ± 0,35 mm, sedangkan terhadap E. coli sebesar
9,03  ±  0,18  mm.  Bakteriosin  isolat  BAL  LG-90 memiliki  aktivitas  optimum  sebagai  antimikroba pada  pH  6.  Rata-rata  diameter  zona  hambat  yang terbentuk terhadap S. aureus adalah sebesar 10,70 ± 0,14 mm, sedangkan terhadap E. coli sebesar 10,03 ± 0,11 mm.  Bakteriosin isolat BAL LG-90 memiliki aktivitas penghambatan tertinggi sebagai antimikroba  pada  suhu  pemanasan  40 ℃ .  Rata-rata diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  terhadap S. aureus adalah sebesar 11,68 ± 0,03 mm, sedangkan terhadap E. coli sebesar 9,45 ± 0,28 mm

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  projek  penelitian  dosen dengan  sumber  dana  BLU  Unsoed  tahun  2020 dengan skema penelitian Riset Peningkatan Kompetensi.

## DAFTAR REFERENSI
Andarilla,  W.,  Sari,  R.  &  Apridamayanti,  P.,  2018.
Optimasi Aktivitas Bakteriosin yang
Dihasilkan  oleh Lactobacillus  casei dari Sotong Kering. Jurnal Pendidikan Informatika dan Sains , 7(2), pp. 187-196.
Duraisamy,  S.,  Gurusamy,  R.  &  Sentihilkumar,  B., 2013.  Antagonistic  Effect  of  Brevicin  on Gram  Positive  and  Gram  Negative  Food Borne  Bacteria  and  Its  Biopreservative Efficacy  in  Milk. African  Journal  of Biotechnology , 12(2), pp. 175-185.
Ibrahim,  A.,  Fridayanti,  A.  &  Delvia,  F.,  2015.
Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat
(BAL)  dari  Buah  Mangga  ( Mangifera indica L.). Jurnal Ilmiah Manuntung , 1(2), pp. 159-163.
Kasi,  P.D.,  Ariandi  &  Mutmainnah,  H.,  2017.  Uji
Antibakteri  Isolat  Bakteri  Asam  Laktat yang  Diisolasi  dari  Limbah  Cair  Sagu terhadap Bakteri Patogen. Jurnal
Biotropika , 5(3), pp. 97-101.
Kursia, S., Imrawati, Ismail, Halim, A., Ramadhani, N., Ramadhani, F., Priska, F. & Hanifah, F., 2020.  Identifikasi  Biokimia  dan  Aktivitas Antibakteri  Isolat  Bakteri  Asam  Laktat Limbah  Sayur  Bayam. Jurnal  Media Farmasi , 16(1), pp. 27-32.
Kusharyati,  D.F.,  Satwika,  T.D.  &  Mariana,  A., 2020. Potensi  Bakteri  Asam  Laktat  Asal
Sedimen  Mangrove  Pantai  Logending
Sebagai Agen Biopreservasi Produk
Makanan  Laut  Secara  In  Vitro .  Prosiding Seminar  Nasional  dan  Call  for  Papers. Purwokerto: Universitas Jenderal
Soedirman.
Kusmarwati,  A.,  Arief,  F.R.  &  Haryati,  S.,  2014. Eksplorasi  Bakteriosin  dari  Bakteri  Asam Laktat Asal Rusip Bangka dan Kalimantan. Jurnal  Pascapanen  dan  Bioteknologi Kelautan dan Perikanan , 9(1), pp. 29-40.
Laily, I.N., Utami, R. & Widowati, E., 2013. Isolasi dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat Penghasil Riboflavin dari Produk Fermentasi  Sawi  Asin .  Jurnal  Aplikasi Teknologi Pangan , 2(4), pp. 179-184.
Ningsih,  N.P.,  Sari,  R.  &  Apridamayanti,  P.,  2018.
Optimasi Aktivitas Bakteriosin yang Dihasilkan  oleh Lactobacillus  brevis dari Es Pisang Ijo. Jurnal Pendidikan
Informatika dan Sains , 7(2), pp. 233-242.
Pelczar,  M.J.  &  Chan,  E.C.S.,  2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi 1 . Jakarta: UI Press.
Prissilia,  N.,  Sari,  R.  &  Apridamayanti,  P.,  2019. Penentuan  Waktu  Optimum  Produksi Bakteriosin  dari Lactobacillus  plantarum Terhadap  Bakteri  Patogen Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli . Jurnal Mahasiswa  Farmasi  Fakultas  Kedokteran UNTAN , 4(1), pp. 1-22.
Riadi,  S.,  Setiyawati,  D.  &  Situmeang,  S.,  2020. Isolasi dan Uji Potensi Bakteri Asam Laktat Asal  Kimchii  dan  Teh  Kombucha  dalam Menghambat  Bakteri  Patogen. Jurnal Kesmas Prima Indonesia , 2(1), pp. 25-29.
Sari, R., Apridamayanti, P. & Octaviani, M., 2018.
Optimasi Aktivitas Bakteriosin yang Dihasilkan  oleh  Bakteri Lactobacillus plantarum dari  Minuman  Ce  Hun  Tiau. Pharmaceutical  Sciences  and  Research , 5(1), pp. 1-6.
Sidabutar,  A.R.,  Feliatra.  &  Andi,  D.,  2015.  Uji Aktivitas  Antimikroba  Bakteriosin  dari Bakteri Probiotik yang Diisolasi dari Udang Windu  ( Penaeus  monodon Fabricus). Jurnal Online Mahasiswa Bidang
Perikanan dan Ilmu Kelautan , 2(2), pp. 1- 13. Surono,  I.S.,  2016. Probiotik,  Mikrobiome  dan Pangan Fungsional . Yogyakarta:
Deepublish.
Tari,  K.,  Iswahyudi.  &  Siregar,  D.S.,  2020.
Kesesuaian Kawasan untuk Pengembangan Ekowisata Hutan Mangrove Kuala Langsa. Jurnal Belantara , 3(2), pp. 173-185.
Vos,  P.D.,  Garrity,  G.M.,  Jones,  D.,  Krieg,  N.R., Ludwig, W., Rainey, F.A., Schleifer, KH. & Whitman,  W.B.  (Eds.).  2009. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology . Second Edition.  Volume  Three:  The  Firmicutes. New York: Springer.