PENGARUH POLISAKARIDA KRESTIN DARI EKSTRAK JAMUR Coriolus versicolor TERHADAP PROFIL PROTEIN TERSTIKULER DAN KADAR TESTOSTERON Mus musculus
Sri Puji Astuti Wahyuningsih*, Virid Gibson, Alfiah Hayati
Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga Email : sri-p-a-w@fst.unair.ac.id

## ABSTRACT
The purpose of this research was to determine the effect of polysaccharide krestin ( PSK) on the testicular protein profiles and testosterone levels of Mus musculus with variety of dosages.  This  research  used  a  completely  randomized  design.  It  were  devide  into  four treatment  group  i.e.  control  group,  PSK  treatment  at  a  dose  of    15,  30,  60  mg/kgBW. Each group had six replications. Testicular proteins were isolated by flushing technique and analized by SDS-PAGE. Testosterone levels were analized using ELISA technique at wavelength  450  nm.  Protein  bands  analysis  showed  that  there  were  no  diversification between four treatments. Molecular weight of protein bands were 87, 63, 57, 35, and 30 kDa. The results  of research  showed that the testosterone levels at dosage 60 mg/kgBW had  significanly  different  with  control,  PSK  treatment  of  15  and  30  mg/kgBW.  PSK treatment  of    60  mg/kgBW  had  lowest  level  at  dosage,  i.e.  25946.8  ρg/mL.  It  can  be concluded  that  giving  variety  of  dosages  of  polysaccharide  krestin  did  not  affect  to testicular protein profiles but giving effect to testosterone levels of Mus musculus.
Keywords: Coriolus versicolor, Mus musculus, polysaccharide krestin, testicular protein, testosterone

## PENDAHULUAN
Di negara-negara Asia, jamur telah lama digunakan  sebagai  obat  tradisional.  Beberapa negara  yang  menggunakan  jamur  sebagai bahan  pengobatan  antara  lain  Jepang,  Cina, Korea  dan  daerah  Asia lainnya  sejak  berabad- abad  lalu  (Ooi  and  Liu,  1999).  Menurut  Cui and  Chisti  (2003),  klinik  modern  yang  berada di  negara-negara  Asia  sudah  menggunakan obat dari jamur, salah satunya adalah Coriolus versicolor .
Coriolus  versicolor merupakan  jamur yang  digunakan  dalam  obat  herbal  tradisional Asia.  Dua  zat  yang  diekstrak  dari  jamur  yaitu polisakarida  krestin  (PSK)  dan  polisakarida- peptide  (PSP)  yang  sedang  dipelajari  sebagai pengobatan  kanker  (Cui  and  Chisti,  2003) Polisakarida  krestin  telah  banyak  digunakan sebagai  obat  penyakit  berbahaya  di  Jepang (Ooi  and  Liu,  1999).  Berbentuk  bubuk  terang atau  coklat  gelap  yang  larut  dalam  air  panas. Polisakarida  krestin  ini  diperoleh  dari  tubuh atau  miselium  jamur.  Polisakarida  krestin mempunyai komponen utama berupa β-Glukan dengan rantai utama β-1,4 serta rantai samping β-1,3  dan  β-1,6  yang  terikat  pada  protein membran (Cui and Chisti, 2003).
Namun belakangan diketahui berdasarkan hasil penelitian Wahyuningsih dan
Darmanto  (2010),  menunjukkan  bahwa  PSK dari  ekstrak  jamur C.  versicolor memiliki potensi  toksik  (LD50)  pada  mencit  betina strain  Balb/C  pada  dosis  231,8  mg/kgBB. Polisakarida  krestin  diatas  dosis  tersebut menimbulkan  gejala-gejala  toksik  berupa aktivitas lokomotor turun, perilaku mengumpul,  tremor,  pupil  mengecil,  nafsu makan turun dan kematian. Pada dosis tersebut juga  menimbulkan  kerusakan  organ  terutama lambung  dan  usus  bengkak  serta  limpa  rusak. Berdasarkan  kategori  ketoksikan  dari  Loomis and Hayes (1996), hasil tersebut menunjukkan cukup toksik.
Pada organ reproduksi jantan, dosis PSK yang  tinggi  dan  jangka  waktu  penggunaan yang  lama  dapat  memicu  tingginya  kadar Reactive  Oxygen  Species (ROS).  Kadar  ROS yang  tinggi  berpotensi  menimbulkan  efek toksis,  sehingga  dapat  berpengaruh  pada kualitas  dan  fungsi  spermatozoa  (Hayati, 2011). Tingginya kadar ROS dapat meningkatkan jumlah sel leukosit. Sel leukosit mempunyai  peranan  dalam  pertahanan  seluler dan humoral organisme terhadap zat-zat asing. Meningkatnya jumlah leukosit dapat meningkatkan kadar ROS hingga 100 kali lipat (Agarwal et al., 2003; Lavranos et al., 2012).
Reactive Oxygen Species dapat
menyebabkan  stress  oksidatif  walaupun  disisi lain  juga  berperan  dalam  membantu  reaksi biokimia  tubuh.  Sehingga  dapat  dikatakan ROS  akan  bermanfaat  apabila  ada  dalam jumlah  yang  kecil  namun  dapat  merusak apabila  jumlahnya  meningkat  (Aitken  and Bennetts, 2006).
Diemer et al. (2003) mengatakan bahwa ROS dapat menghambat steroidogenesis dalam sel leydig dengan mentarget transfer kolesterol pada  mitokondria  sel  leydig.  Gangguan transfer  kolesterol  dalam  mitokondria  sel leydig dapat menghambat sintesis pregnenolon yang  membentuk  testosteron.  Hamada et  al.
(2011)  mengatakan  bahwa  efek  ROS  pada Blood  Testis  Barrier (BTB)  yang  terbentuk karena  adanya tight  juction antar  sel  sertoli adalah    dapat  merusak tight  junction antar membran  plasma  sel  tersebut.  Selain  itu,  efek ROS dapat merusak sitoskeleton yang menyebabkan  sel  menjadi  rapuh,  terjadinya dislokasi nukleus sel sertoli, rusaknya membran  plasma  sel  sertoli,  dan  rusaknya DNA sel sertoli yang berakhir pada apoptosis.
Blood testis barrier merupakan penghalang  fisik  yang  memisahkan  pembuluh darah dari tubulus seminiferus. Secara histologis,  BTB  terbentuk  dari  ikatan tight junction antara  sel  sertoli.  Fungsi  utama  BTB adalah untuk melindungi sel-sel spermatogenik dari  sistem  imun  tubuh.  Adanya  ROS  dalam testis  akan  merusak  sel  leydig.  Sel    terjadi apoptosis  yang  dapat  mengganggu  sintesis testosteron  yang  akibatnya  terjadi  penurunan kadar  testosteron.    Sedangkan  dalam  sel sertoli,  ROS  akan  merusak  komplek junction antar  sel  sertoli,  merusak  sitoskeleton  sel sertoli,    menyebabkan  dislokasi  nukleus  dan merusak membran plasma sel sertoli akibatnya dapat  mengganggu  proses  spermatogenesis (Hamada et al., 2011).
Penelitian  ini  menggunakan  berbagai variasi  dosis  untuk  mengetahui  dosis  PSK yang  tepat  untuk  dikonsumsi  sebagai  obat. Penelitian  ini  menggunakan  mencit.  Waktu perlakuan sesuai dengan proses spermatogenesis pada mencit yang memerlukan  waktu  selama  36  hari  setelah menempuh  4  kali  daur  epitel  seminiferus. Johnson and Everitt (1990) menyatakan bahwa lama  satu  daur  epitel  seminiferus  pada  mencit adalah  207  ±  6  jam.  Berdasarkan  latar belakang diatas, maka penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas polisakarida krestin
dari  ekstrak Coriolus  versicolor pada  profil protein  spermatozoa  testikuler  dan  kadar hormon testosteron mencit ( Mus musculus ).

## BAHAN DAN CARA KERJA Hewan coba
Hewan  coba  yang  Instalasi  Kandang Hewan Percobaan (IKHP) Pusvetma Surabaya. digunakan dalam penelitian ini adalah 40 ekor mencit  jantan  dewasa  strain  Balb/C  yang berumur 4-8 minggu dengan berat 25-30 g.

## Koleksi  dan  Pembuatan  Serbuk  Jamur Coriolus versicolor
Jamur Coriolus versicolor dikoleksi dari daerah  Surabaya,  Tulungagung,  Tuban,  dan Kediri untuk selanjutnya diidentifikasi, kemudian  jamur  dikering  anginkan  dan dihaluskan  sehingga  diperoleh  serbuk  kasar jamur.

## Isolasi dan Dosis PSK
Isolasi  PSK  menggunakan  metode  Cui and  Chisti  (2003)  yang  dimodifikasi  oleh Wahyuningsih dan Darmanto (2009).
Penentuan  kadar  PSK  menggunakan  metode phenol-sulphuric  acid assay.  Dosis  PSK  yang digunakan adalah  0 (K),  15 (P1), 30 (P2), dan 60  (P3)  mg/kgBB.  Pemberian  PSK  dilakukan selama  35  hari  dengan  dosis  berulang  secara peroral.

## Isolasi Protein Testikuler dan Isolasi Serum
Protein  testikuler  diisolasi  dari  testis menurut  metode  Hinsch et  al. (1992), dilakukan  dengan  cara flushing dalam  media PBS. Kemudian disentrifugasi dengan kecepatan  1000  rpm  selama  10  menit.  Pelet dilisiskan  dengan  buffer  lisis  dan  di  vortex. Selanjutnya  sentrifugasi  kembali.  Supernatan ditambahkan ammonium sulfat dan disentrifugasi. Selanjutnya pelet yang merupakan  protein  diresuspensi  dengan  PBS dan dilakukan elektroforesis.
Darah  diambil  dari  jantung  sebanyak  1 mL didiamkan dalam lemari pendingin hingga terdapat  serum  berwarna  kuning.  Darah disentrifugasi  dengan  kecepatan  3.000  rpm selama  10  menit. Kemudian  serum  dipisahkan dari  pelet  dan  dikoleksi  untuk  dilakukan pengukuran kadar testosteron.
Sodium  Dodecyl  Sulphate  –  Poliacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) Sampel protein hasil isolasi sebanyak 20 µL  ditambahkan  dengan Reducing  Sample Buffer (RSB)  10  µL  dan  dipanaskan  100ºC selama  5  menit,  kemudian  didinginkan  dalam suhu  kamar.  Larutan  sampel  dimasukkan sumuran  sebanyak  15  µL.  Marker  protein dimasukkan  dalam  salah  satu  sumuran. Kemudian dituangkan buffer running.
Selanjutnya  dihubungkan  dengan  arus  listrik 48 mA dengan tegangan 120 V.
Setelah 1 jam dan terbentuk pita protein dalam  gel  dilakukan  pewarnaan  dengan menggunakan Comassie Brilliant Blue. Pewarnaan  dilakukan selama  semalam  dalam shaker dan dilanjutkan dengan proses destaining dengan  larutan  metanol  50%  dan asam asetat glasial 10%.

## Enzyme-Like Immunosorbent Assay (ELISA)
Larutan  standart  atau  sampel  protein dimasukkan  dalam  sumuran  yang  terlebih dahulu  sudah  diisi  dengan diluent  standart reference dan  diinkubasi  selama  1  malam. Selanjutnya    dicuci  3x  dengan wash  buffer . Kemudian  ditambahkan biotinylated  detetion Ab dan  didiamkan  selama  1  jam  pada  suhu 37ºC. Plate ditutup  dengan plate  sealer. Selanjutnya dilakukan washing , masing- masing  sumuran  diaspirasi  dan  dicuci  3  kali dengan wash  buffer .  Setelah  semua  tercuci, kontaminan  dihilangkan  dengan  aspirasi  atau dekantasi.  Sumuran  dibalik  dan  ditepuk  diatas kertas  tissue.  Langkah  selanjutnya  adalah menambahkan HRP working solution pada tiap sumuran.  Sumuran  ditutup plate  sealer dan diinkubasi  selama  60  menit  pada  suhu  37ºC. Kemudian  dilakukan  tahap  pencucian  seperti sebelumnya. TMB substrate solution dimasukkan  dalam  sumuran  dan  ditutup dengan plate  sealer dan  diinkubasi  selama  15 menit  pada  suhu  37ºC.  Reaksi  dihentikan  jika sudah  muncul  gradien  warna.  Penghentian reaksi  dilakukan  dengan  memasukkan stop solution yaitu asam sulfat hingga warna larutan pada masing-masing sumuran berwarna kuning.  Selanjutnya  diukur Optical  Density (OD) dengan panjang gelombang 450 nm.

## Analisis Data
Profil protein dianalisis secara deskriptif. Kadar  hormon  testosteron  diuji  secara  statstik dengan  uji  Kolmogorov-Smirnov  dan  uji
Levene’s,  dan  dilanjutkan  dengan  Anova  satu arah dan Duncan (α = 0.05).

## HASIL Elektroforesis Protein
Protein  penanda  pada  penelitian  ini menggunakan Prestained  Protein  Molecular Weight  Marker yang  memiliki  berat  molekul (BM) 118, 90, 50, 36, 27, dan  20 kDa dengan jarak migrasinya sebesar 0,2; 0,6; 1,3; 2,2; 2,8; dan  3,5  cm.  Hasil  yang  diperoleh  dari perhitungan berat protein antara keempat jenis perlakuan  memiliki  pita  protein  dengan  berat molekul  (BM)  yang  sama.  Berat  molekul protein  yang  terdeteksi  yaitu  87,  63,  57,  35, dan 30 kDa (Gambar 1 dan Tabel 1).
Gambar 1. Profil  protein  testikuler  mencit yang  dielektroforesis  secara  duplo. M  (marker,  BM  118-20  kDa),  K (kontrol),  P1  (PSK  15  mg/kg  BB), P2  (PSK  30  mg/kg  BB),  dan  P3 (PSK 60 mg/kg BB).
Tabel 1.  Sebaran  berat  molekul  protein  testis setelah pemberian polisakarida krestin
Keterangan : +
: Ada protein PSK : Polisakarida krestin

## Kadar Testosteron
Kadar testosteron hasil penelitian  adalah 34.281,9  ρg/mL  (K);  33.215,2  ρg/mL  (P1); 37.115,0 ρg/mL (P2) dan 25.946,8 ρg/mL (P3).
Tabel 2.  Kadar  testosteron  setelah  pemberian polisakarida krestin
Ket.  :  angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang sama menunjukkan berbeda tidak signifikan
Data yang diperoleh dari hasil pengukuran  kadar  testosteron  menunjukkan bahwa data berdistribusi normal dan homogen sehingga  dapat  dilanjutkan  dengan  uji  Anova satu  arah  dengan  hasil  p  <  α  (0.024  <  0.05) maka dapat disimpulkan bahwa ada perbedaan antar  perlakuan.  Hasil  uji  lanjutan  yaitu  uji Duncan  menunjukkan  bahwa  perlakuan  P3 berbeda  signifikan  dengan  kelompok  kontrol, P1,  dan  P2.  Pada  perlakuan  P3,  kadar testosteron menurun dibanding dengan kontrol. Kadar  testosteron  pada  kontrol  berbeda  tidak signifikan dengan perlakuan 1 dan 2.
Pada  penelitian  ini  digunakan  indikator profil  protein  testikuler  dan  kadar  testosteron untuk  mengetahui  kualitas  sistem  reproduksi mencit jantan yang diberi perlakuan polisakarida  krestin  dengan  variasi  dosis  15, 30,  60  mg/kg  BB    dibandingkan  dengan kontrol.
Gambar 2. Kadar testosteron setelah pemberian polisakarida krestin. Kontrol  (K),  PSK  15  mg/kgBB (P1),  PSK  30  mg/kgBB  (P2),  PSK 60 mg/kgBB (P3).

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa variasi  dosis  PSK  yang  diberikan  pada  mencit selama  36  hari  tidak  memberikan  pengaruh terhadap  profil  protein  testikuler.  Berat molekul  protein  yang  terdeteksi  dari  hasil elektroforesis  pada  keempat  perlakuan  yaitu 30, 35, 57, 63, dan 87 kDa. Menurut Chu et al.
(2002) penggunaan PSK dalam waktu 3 bulan secara peroral tidak memberikan efek mutagenik  dan  sitotoksik.  Polisakarida  krestin yang mengandung senyawa β-glukan mengobati kanker dengan tidak langsung yaitu melalui  mekanisme  imunomodulator  bukan melalui  mekanisme  sitotoksis,  sehingga  dapat dikatakan  bahwa  polisakarida  krestin  sangat aman  dan  tidak  berpengaruh  sama  sekali terhadap sel germinal pada testis. Selain itu sel germinal  dalam  testis  juga  memperoleh perlindungan  dari  adanya blood  testis  barrier .
Dengan adanya pelindung tersebut maka setiap senyawa  asing  akan  sulit  untuk  masuk  dalam tubulus  seminiferus  karena  tidak  memiliki reseptor yang tepat.
Sel germinal dalam testis dipisahkan dari aliran  darah  oleh blood  testis  barrier . Barrier tersebut  secara  anatomi  terbentuk  dari  jalinan sel  sertoli.  Pada  beberapa  spesies,  jaringan peritubular  juga  menolak  masuknya  substansi asing  (Setchell  and  Main,  1978).  Oleh  karena itu  apabila  terdapat  molekul  polisakarida krestin  yang  lolos  masuk  dalam  testis  tidak dapat memasuki tubulus seminiferous sehingga tidak  dapat  merusak  sel  germinal  serta
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000 40000 45000 50000 K P1 P2 P3 K a da r testo st ro n ( pg /m L ) Perlakuan a a a b
komponen  lain  dalam  tubulus  seminiferous akibatnya  tidak  dapat  mempengaruhi  sintesis protein.  Menurut  Cheng  and  Mruk  (2012),
blood testis barrier mencegah aliran paraselular  biomolekul  seperti  air,  elektrolit, ion,  nutrient,  hormon,  dan  molekul  biologis. Hal  ini  disebabkan  karena  pada  epitel seminiferous  tidak  dilalui  pembuluh  darah, pembuluh  limfa,  bahkan  syaraf  yang  mana ketiganya ada di bagian intersisial.
Douglas and Soderman
(1991)
mengatakan  bahwa  protein  dengan  berat  30 kDa  terdapat  pada  mitokondria  sel  leydig, kemunculan ini bersamaan dengan meningkatnya  proses  steroidogenesis.  Protein ini  hanya  akan  terekspresi  pada  saat  proses kapasitasi (Liu and Baker , 1992). Menurut Shi et  al. (2013)  protein  dengan  berat  molekul  57 kDa hanya terekspresi pada testis. Reddy et al .
(2006)  mengatakan  bahwa  protein  dengan berat  molekul  57  kDa  berperan  penting  pada saat fertilisasi terutama saat fusi dengan ovum. Menurut  Lewis  and  Aitken  (2001),  protein spermatozoa  dengan  berat molekul  50-64  kDa berperan  dalam  fosforilasi    tiroksin  pada proses  maturasi  spermatozoa  di  bagian  kauda epididimis tikus.
Hasil  pengukuran  kadar  testosteron terlihat pada P3 yang memiliki beda signifikan dengan K, P1, dan P2 dengan kadar testosteron paling rendah yakni 25.946,8 ρg/mL sedangkan  paling  tinggi  pada  P2  sebesar 37.115,0  ρg/mL.  Sehingga  dapat  dikatakan bahwa  pemberian  dosis  PSK  sebesar  60 mg/kgBB  memberikan  perubahan  signifikan pada  kadar  testosteron.  Pada  kelompok perlakuan PSK 30 mg/kg BB kadar testosteron yang  terukur  adalah  37.115  ρg/mL  yang merupakan  kadar  tertinggi  dibandingkan  3 kelompok  perlakuan  lain.  Hal  ini  ada kemungkinan  bahwa  PSK  pada  dosis  tersebut justru dapat mengoptimalkan kadar testosteron yang  diperlukan  oleh  tubuh.  Pada  kelompok kontrol  dan  kelompok  perlakuan  PSK  15 mg/kgBB  kadar  testosteron  yang  terukur adalah  34.281,9  dan  33.215,2  ρg/mL  yang mana  kadarnya  tidak  berbeda  jauh  sehingga dapat  dikatakan  bahwa  pada  dosis  15 mg/kgBB  tidak  mengubah  kadar  testosteron sehingga  kadarnya  cenderung  normal.  Kadar testosteron  rata-rata  pada  keempat  perlakuan diatas  adalah  32.639.7  ρg/mL  dimana  pada kadar  tersebut  termasuk  dalam range kadar testosteron normal yaitu 24.000-37.700 ρg/mL. Namun munculnya gejala penurunan
tetsosteron  pada  perlakuan  PSK  dosis  60 mg/kgBB  dapat  mengindikasikan  bahwa  pada dosis  yang  lebih  besar  lagi  dapat  semakin menurunkan kadar testosteron.
Penurunan  kadar  testosteron  yang  turun dengan  signifikan  pada  perlakuan  PSK  60 mg/kgBB  dapat  terjadi  dimungkinkan  karena pada  dosis  60  mg/kgBB  termasuk  kategori dosis  yang  tinggi  dimana  pada  dosis  tersebut polisakarida  krestin  akan  terakumulasi  pada testis dan dapat menyebabkan dampak toksik.
Molekul polisakarida krestin yang masuk  dalam  testis  akan  terakumulasi  dan menjadi  toksik.  Pada  kondisi  toksik  tersebut terjadi  reaksi  oksidasi  karena  adanya  senyawa ROS akibat akumulasi dari molekul polisakarida krestin. Senyawa superoksida ROS
menyebabkan gangguan steroidogenesis dengan  dan  golongan  ROS  yang  lain  selain dihasilkan  dari  senyawa  asing  juga  dihasilkan oleh  mitokondria  selama  proses  oksidasi fosforilasi.  Sel  leydig  mengandung  enzim sitokrom  P450  yang  mengkatalisis  reaksi oksidasi  dalam  proses  steroidogenesis  yang kemudian menghasilkan radikal bebas (Beattie et  al. ,  2013).  Keberadaan  ROS  dapat menyebabkan gangguan steroidogenesis dengan  cara  memblok  kompleks  multiprotein transduceosom yang berfungsi sebagai reseptor kolesterol  pada  mitokondria  sel  leydig  yang meliputi A-kinase anchoring protein (AKAP121), peripheral-type  benzodiazepine receptor acosiated protein (PAP7), steroidogenesis acute regulatory protein (StAR),  protein  translokator  dan  ion  channel (Diemer, et  al., 2003),  serta  dapat  merusak komponen makromolekul dari sel leydig (Chen and Zirkin, 1999). Terganggunya jalur sintesis testosteron  ini  dapat  mengakibatkan  turunnya kadar testosteron.
Sintesis testosteron memberikan feedback  negative pada  hipotalamus  untuk memproduksi GnRH serta pada pituitari untuk memproduksi  LH  yang  dengan  segera  akan menstimulasi transfer kolesterol pada membran  dalam  mitokondria  (Beattie et  al., 2013). Menurut  Beattie et al. (2013) stimulasi LH  dalam  waktu  lama  dapat  menurunkan steroidogenesis,  hal  tersebut  didasarkan  pada studi  yang  dilakukan  oleh  Chen  and  Zirkin (1999)  yang  menuturkan  bahwa  penekanan kadar  LH  dapat  menstimulasi  ulang  sintesis testosteron.  Mekanisme feedback  negative pada regulasi testosteron juga dapat terganggu
akibat  keberadaan  ROS  yang  besar,  hal  ini terjadi  karena  meskipun  hipotalamus  dan hipofisa  anterior  menanggapi  sinyal  untuk memproduksi  GnRH,  LH,  dan  FSH  hormon peptide  tersebut  tidak  akan  bisa  memasuki proses sintesis testosteron karena terblokir oleh ROS.
Pada  beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  obat-obat  antikanker  memiliki  dua mekanisme  dalam  melawan  kanker  yaitu secara  langsung  karena  memiliki  dampak sitotoksik  dan  dengan  cara  tidak  langsung yaitu  melalui  mekanisme  imunomodulator. Sebagian  besar  obat  kanker  yang  berbahan kimia sintesis akan bersifat sitotoksik sehingga dapat  membunuh  sel  kanker  secara  langsung. Chan et  al., (2009)  mengatakan  bahwa  obat kanker  yang  bersifat  sitotoksik  tidak  dapat membedakan  manakah  yang  termasuk  sel kanker  dan  manakah  yang  termasuk  sel normal.  Kelebihan  dari  polisakarida  krestin dalam  mengobati  kanker  adalah  adanya senyawa aktif β-glukan yang berperan sebagai imunomodulator. Sehingga polisakarida krestin  sangat  aman  untuk  dikonsumsi  dalam waktu lama untuk mengobati kanker.

## KESIMPULAN
Dari pembahasan diatas dapat
disimpulkan  bahwa  pemberian  variasi  dosis polisakarida krestin tidak memberikan pengaruh  pada  profil  protein  testikuler  mencit dikarenakan  polisakarida  krestin  bukanlah bahan  yang  bersifat  mutagenik.  Pengaruh  dari variasi  dosis  tersebut  nampak  pada  kadar testosteron  dimana  pada  P3  terjadi  penurunan kadar  testosteron.  Polisakarida  krestin  tidak mempengaruhi  profil  protein  meskipun  terjadi penurunan  kadar  testosteron.  Kadar  tersebut masih dalam rentang kadar testosteron normal, meskipun  demikian  akan  ada  kemungkinan dapat  menyebabkan  turunnya  konsentrasi protein testikuler secara tidak langsung melalui mekanisme hormonal.

## DAFTAR PUSTA KA
Agarwal  A.,  Saleh  R.  A.  and  Bedaiwy  M.  A. 2003. Role of Reactive  Oxygen Species in  the  Pathophysiology  of  Human Reproduction. Fertil Steril. 79: 829-43.
Aitken  R.  J.  and  Bennetts.  2006.  Reactive Oxygen  Species:  Friend  or  Foe. The Sperm  Cell De  Jonge  C,  Barratt  C,
editors., ed 170–193 Cambridge: Cambridge University Press.
Beattie  M.  C.,  Chen  H.,  Fan J.,  Papadopoulos V., Paul Miller P. and Zirkin B. R. 2013. Aging and Luteinizing Hormone Effects on Reactive Oxygen Species Production and  DNA  Damage  in  Rat  Leydig  Cells. Biol of Reproduc. 88 (4): 1-7.
Chan G. C., Chan W. K. and Sze D. M. 2009. The  Effects  of  β-Glucan  on  Human Immune  and  Cancer  Cells.  J  Hematol and Oncol. 2-25.
Chen  H.  and  Zikrin  B.  R.  1999.  Long-term
Suppression of Leydig Cell
Steroidogenesis  Prevents  Leydig  Cell Aging.  Proc  Nat  Acad  Sci  USA.  96: 14877-14881.
Cheng C. Y. and Mruk D. D. 2012. The Blood- Testis  Barrier  and  Its  Implications  for Male  Contraception.  Pharmalogic  Rev. 64: 16-64.
Chu  K.  K.  and  Chow  A.  H . 2002.  Coriolus versicolor: A Medicinal Mushroom with Promising  Immunotherapeutic Values. J Clinic Pharmacol. 42: 976. Cui J. and Chisti Y. 2003.
Polysaccharopeptides of Coriolus versicolor:  Physiological  activity,  uses, and  production.  Biotechnol  Adv.  21(2): 109-122.
Diemer T., Allen J. A., Hales K. H. and Hales D.  B.  2003.  Reactive  Oxygen  Disrupts Mitochondria  in  MA-10  Tumor  Leydig Cells  and  Inhibits  Steroidogenic  Acute
Regulatory (StAR) Protein and
Steroidogenesis.  Endocrinol.  144(7):
2882–2891.
Douglas  M.  S.  and  Sodeman  T.  C.  1991.  The 30-kDa  Mitochondrial  Protein  Induced by  Hormone  Stimulator  in  MA-10 Mouse Leydig Tumor Cells are Processed from Larger Precursor. J Biol Chem. Vol. 266: 29.
Hamada A. J., Aspinder S. and Ashok A. 2011. Cell  Phones  and  their  Impact  on  Male Fertility:  Fact  or  Fiction.  The  Open Reproduc Sci Journal. 5: 125-137.
Hayati A. 2011. Spermatologi. Surabaya: Pusat Penerbitan dan Percetakan Unair.
Hinsch  K.  D.,  Hinsch  E.  and  Aumuller  G. 1992. Immunological Identification of G Protein  alpha-  and  beta-subunits  in  Tail Membrane  of  Bovine  Spermatozoa. Biology Reproducy. 47: 337-346.
Johnson,  M. and  Everitt,  B.  1990. Essential in Reproduction.  Blackwell  Science  Pub Oxford. London.
Lavranos  G.,  Balla  M.,  Tzortzopoulou  A.,
Syriou  V.,  and  Angelopoulou  R.  2012. Investigating  ROS  Sources  in  Male
Infertility: a Common End for Numerous Pathways. Reproducy Toxicology. 34: 298-307.
Lewis,  B.  and  Aitken,  R.  J.  2001.  A  redox- regulated tyrosine phosphorylation cascade  in  rat  spermatozoa.  J  Androl. 22(4): 611-622.
Liu  D.  Y.  and  Baker  H. W.  G.  1992. Tests  of human  sperm  function  and  fertilisation in vitro. Fertil Steril. 58: 465-483.
Loomis T. A. and Hayes A. W. 1996. Loomis's Essentials of Toxicology, fourth edition. Elsevier Inc.
Ooi  V.  E.  C.  and  Liu  F.  1999.  A  review  of pharmacological activities of mushroom Polysaccharides. Int Jl Med Mushrooms. 1: 195–206.
Reddy K. V. R., Vijayalaxmi G., Rajeev K. S., and  Aranha  C.  2006.  Inhibition  in Sperm-egg  Binding  and  Fertilisation  in
Mice  by  a  Monoclonal  Antibody Reactive  to  57-kDa  Human  Sperm
Surface Antigen. Reprod Fertil and Dev: 18(8): 875- 884.
Setchell,  B.  P.  and  S.  J.,  Main.  1978.  Drugs and the
Blood-Testis Barrier.
Environmental  Health  Perspective.  vol. 24: 61-64.
Shi Y., Zhang L., Song S., Teves ME., Li H., Wang  Z.,  Hess  RA.,  Jiang  G.,  and
Zhang Z. 2013. The Mouse Transcription Factor-like 5 Gene
Encodes  a  Protein  Localized  in  the Manchette and Centriole of the Elongating Spermatid. Andrology. 431- 439.
Wahyuningsih,  S.  P.  A.  dan  Darmanto,  W. 2010.  Uji  Toksisitas  Akut  Polisakarida Krestin  dari  Ekstrak  dan  Miselium
Jamur Coriolus versicolor: Upaya Menggali  Potensi  Bahan  Hayati  sebagai Imunomodulator Respon Imun Terhadap Mycobacterium  tuberculosis.  Lembaga Penelitian. Universitas Airlangga. Surabaya.