Verifikasi Uji Potensi Antibiotik Secara Mikrobiologi Dengan Metode Cylinder Plate Pada Produk Erythromycin Ethylsuccinate
Henny Rochaeni, Muhammad Jabal Iqyan, Desi Silmi Amalia, Singgih Wibowo *
Program Studi Analisis Kimia, Politeknik AKA Bogor Jl. Pangeran Sogiri No.283, Tanah Baru, Bogor Utara, Kota Bogor, Jawa Barat 16154
*) Email: singgihwibowo@kemenperin.go.id (Received : 3 November 2021; Accepted: 16 Desember 2021; Published: 21 Desember 2021)

## Abstrak
Pada  penelitian  ini,  telah  dilakukan  verifikasi  uji  potensi  antibiotik  produk  erythromycin  ethylsuccinate (EES)  dengan  metode  cylinder  plate.  Hasil  pengujian  menunjukkan  potensi  antibiotik,  simpangan  baku relatif  (SBR)  uji  presisi,  uji  akurasi,  dan  R 2 uji  linearitas  yaitu  107,03%,  0,95%,  105,00-108,70  %,  dan 99,90%  berturut  –  turut.  Dari  hasil  pengujian,  dapat  disimpulkan  bahwa  produk  EES  telah  memenuhi syarat keberterimaan yang telah ditetapkan dalam standar acuan USP 41 2018 dan AOAC 2016.
Kata kunci: verifikasi, antibiotik, EES, akurasi, linearitas

## Abstract
In  this  study,  verification  of  antibiotic  potency  test  has  been  done  using  cylinder  plate  method  for erythromycin  ethylsuccinate  (EES)  product.  The  results  showed  that  the  antibiotic  potency,  relative standard  deviation  of  precission  test,  accuracy  test,  and  R 2 of  linearity  test  were  107,03%,  0,95%, 105,00-108,70 %, dan 99,90%, respectively. From the obtained results, it can be concluded that the EES product  has  fulfilled  the  acceptance  requirements  of  standard  references  of  USP  41  2018  dan  AOAC 2016.
Keywords:  verification, antibiotics, EES, accuracy, linearity

## PENDAHULUAN
Antibiotik  adalah  senyawa  kimia  yang dalam  kadar  rendah  mempunyai  kemampuan  untuk menghambat  (bakteriostatik)  atau  menghancurkan (bakterisidal)  bakteri  atau  mikrooganisme  lain (Herawati  &  Irawati,  2011).  Menurut  Bezoen et  al (2001),  beberapa  antibiotik  bersifat  aktif  terhadap beberapa spesies bakteri (berspektrum luas) sedangkan  antibiotik  lain  bersifat  lebih  spesifik terhadap  spesies  bakteri  tertentu  (berspektrum sempit).
Antibiotik e rythromycin ethylsuccinate (EES) adalah obat antibiotik golongan makrolid yang terdiri  beberapa  jenis  sediaan  obat,  mulai  dari sediaan  suspensi,  tablet,  kapsul,  hingga  sediaan kaplet  (Ganiswarna,  1995).  Menurut  Sinha  (2021), antibiotik  EES  digunakan  untuk  mengobati  dan mencegah  berbagai  jenis  infeksi  bakteri,  seperti infeksi  kulit,  infeksi  saluran  pernapasan,  dan  infeksi saluran  kemih.  EES  terserap  sebagai  ester  dan terhidrolisis  perlahan  di  dalam  tubuh  membentuk eritromisin, esternya tidak larut dalam air tetapi larut dalam alkohol dan eter (Beale & Block, 2011).
Pengujian  terhadap  antibiotik  EES  sangat penting  dilakukan  untuk  mengetahui  mutu  produk yang  terkandung  di  dalamnya.  Pengujian  potensi antibiotik  dilakukan  secara  mikrobiologi  dengan metode cylinder  plate yang  telah  mengalami pengembangan dan sudah divalidasi. Untuk mengonfirmasi  unjuk  kerja  dalam  memberikan  hasil yang andal maka perlu dilakukan verifikasi metode.
Verifikasi metode dilakukan dengan menguji  parameter  presisi,  akurasi,  dan  linearitas. Pengujian ini bermanfaat untuk memberikan informasi bahwa metode pengujian potensi antibiotik secara  mikrobiologi  dengan  metode cylinder  plate pada produk EES menghasilkan data yang andal dan dapat  digunakan  untuk  analisis  di  laboratorium quality  control  serta  menunjukkan  bahwa  produk EES terjamin kualitasnya.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  dalam  pengujian  ini terdiri  dari  bahan  uji,  bahan  kimia,  dan  bakteri  uji. Bahan uji yang digunakan adalah sampel EES kaplet. Bahan  kimia  yang  digunakan  adalah  larutan  dapar
fosfat  (LDF)  3  pH  8,00  steril,  media tryptone  soya broth (TSB)  steril,  media  antibiotik  agar  1  steril, media  antibiotik  agar  11  steril,  media tryptone  soya agar (TSA)  steril,  akuades,  dan  metanol.  Bakteri  uji yang  digunakan  adalah Kocuria  rhizophila ATCC 9341.

## Sterilisasi Alat
Cylinder  plate, cawan  petri,  dan  tabung reaksi  disterilisasi  dengan  oven  pada  suhu  160  ºC selama  2  jam  dan  didiamkan  hingga  suhu  ruang. Pipet tips  disposable disterilisasi  dengan  autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  20  menit  dan  didiamkan hingga suhu ruang.

## Pembutan Media TSA
Media  TSA  ditimbang  1,0000  g  ke erlenmeyer  100  mL  dan  dilarutkan  dalam  25  mL akuades. Erlenmeyer ditutup dengan alumunium foil . Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 ºC selama 20 menit. Media TSA yang telah disterilisasi, dituangkan  ke  cawan  petri  di  dalam  BSC  dan didiamkan hingga media menjadi padat.

## Pembuatan Media TSB
Media  TSB  ditimbang  0,8100  g  ke erlemeyer 100 dan dilarutkan dalam 27 mL akuades. Media  TSB  dipipet  masing-masing  9  mL  ke  tabung reaksi  ulir  dan  ditutup.  Media  disterilisasi  dengan autoklaf pada suhu 121 ºC selama 20 menit.

## Pembuatan Media Agar Miring Antibiotik 1
Media  antibotik  1  ditimbang  0,5670  g  ke erlenmeyer  100  mL  dan  dilarutkan  dalam  21  mL akuades. Erlenmeyer ditutup dengan alumunium foil . Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 ºC selama  20  menit.  Media  yang  telah  disterilisasi, dipipet  masing-masing  7  mL  ke  tabung  reaksi. Tabung  reaksi  dimiringkan  dan  didiamkan  hingga media menjadi padat.

## Pembuatan Media Antibiotik 11
Media antibiotik 11 ditimbang 15,2500 g ke gelas piala 250 mL. Media dilarutkan dalam 500 mL akuades  ke  erlenmeyer  500  mL.  Erlenmeyer  ditutup dengan alumunium  foil .  Media  disterilisasi  dengan autoklaf  pada  suhu  121  ºC  selama  20  menit.  Media yang telah disterilisasi, diletakkan di atas waterbath.
Pembuatan Suspensi Bakteri Kocuria rhizophila Reference culture Kocuria rhizophila ATCC 9341  digoreskan  ke  media  TSA  dan  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  32-35  ºC.  Koloni  bakteri Kocuria  rhizophila yang  tumbuh  (o riginal  culture ) diinokulasi  menggunakan  ose disposable steril  ke media  agar  miring  antibiotik  1  dan  diinkubasi  pada suhu  32-35  ºC  selama  24  jam.  Media  agar  miring antibiotik  1  yang  telah  diinkubasi  ( working  culture ), ditambahkan  9  mL  TSB  steril.  Koloni  bakteri  yang tumbuh  dipanen  menggunakan  ose disposable steril hingga  bercampur  dengan  TSB  steril  menjadi suspensi  bakteri.  Suspensi  bakteri  dipindahkan  ke
tabung  reaksi  steril.  Suspensi  bakteri  dihomogenkan menggunakan vortex.
Pembuatan LDF 3 pH 8,00 Kalium  hidrogen  fosfat  (K 2 HPO 4 )  dan kalium  dihidrogen  fosfat  (KH 2 PO 4 )  ditimbang masing-masing  16,7300  g  dan  0,5230  g  dan dilarutkan  dalam  1000  mL  akuades  ke  botol Schott Duran 1  L.  pH  LDF  3  disesuaikan  hingga  pH  8,00 menggunakan pH meter.
Pembuatan  Larutan  Induk  Standar  EES  1000 μg/mL
Working  standart EES  ditimbang  tepat sebanyak 58,7 mg dan dilarutkan dalam  0,5  g  metanol  dan  20  mL  LDF  3  pH  8,00  ke labu ukur 50 mL. Larutan disonikasi selama 20 menit dan ditambahkan LDF 3 pH 8,00 hingga tanda batas, kemudian dihomogenkan.

## Pembuatan  Larutan  Induk  Standar  EES  20 μg/mL
Larutan  induk  standar  1000  μg/mL  dipipet 2000 μL ke labu ukur 100 mL dan ditambahkan LDF 3 pH 8,00 hingga tanda batas, lalu dihomogenkan.
Pembuatan  Larutan  Standar  EES  (0,64  ;0,80 ;1,00 ;1,25 ;1,56) μg/mL
Larutan  induk  standar  EES  20  μg/mL dipipet  (1600;  2000;  2500;  3125;  3900)  μL  ke  labu ukur  50  mL  untuk  membuat  larutan  deret  standar (0,64; 0,80; 1,00; 1,25; 1,56) μg/mL. LDF 3 pH 8,00 ditambahkan  hingga  tanda  batas  dan  dihomogenkan. Larutan  (0,64  ;0,80  ;1,00  ;1,25  ;1,56)  μg/mL selanjutnya berturut-turut disebut larutan S1, S2, S3, S4, dan S5.

## Pembuatan  Larutan  Induk  Sampel  EES  1000 μg/mL
Sampel  sebanyak  20  kaplet  salut  selaput ditimbang dan dihitung bobot rata-ratanya.  Sampel  digerus  hingga  halus  dan ditimbang  tepat  sebanyak  73,5  mg.  Sampel dilarutkan dalam 0,5 g metanol dan 20 mL LDF 3 pH 8,00  ke  labu  ukur  50  mL.  Sampel  disonikasi  selama 20  menit  dan  ditambahkan  LDF  3  pH  8,00  hingga tanda batas, kemudian dihomogenkan.

## Pembuatan Larutan Induk Sampel EES 20 μg/mL
Larutan  induk  sampel  1000  μg/mL  dipipet 2000 μL ke labu ukur 100 mL dan  ditambahkan  LDF  3  hingga  tanda  batas, kemudian dihomogenkan.

## Pembuatan Larutan Sampel EES 1,00 μg/mL
Larutan  induk  sampel  20  μg/mL  dipipet 2500 μL ke labu ukur 50 mL dan ditambahkan LDF 3  hingga  tanda  batas,  kemudian  dihomogenkan. Larutan sampel EES 1,00 μg/mL selanjutnya disebut larutan U3.

## Tahap Pengujian Uji Potensi Antibiotik
Alas cawan petri diberi tanda dengan desain 5  +  1  seperti  pada  Gambar  1.  Desain  5  +  1  adalah desain  uji  potensi  antibiotik  yang  terdiri  dari  lima konsentrasi,  yaitu  larutan  S1,  S2,  S4,  S5,  dan  U3 yang  dibandingkan  dengan  satu  larutan  konsentrasi tengah,  yaitu  larutan  S3.  Setiap  cawan  petri  terdiri dari dua konsentrasi larutan, yaitu S1 terhadap S3, S2 terhadap S3, S4 terhadap S3, S5 terhadap S3, dan U3 terhadap S3.
Setiap  cawan  petri  terdiri  dari  dua  lapisan media,  yaitu base  layer dan seed  layer . Base  layer dibuat  dengan  cara  menuangkan  21  mL  media antibiotik  11  ke  cawan  petri  dan  didiamkan  hingga media  menjadi  padat.  Suspensi  bakteri Kocuria rhizophila sebanyak 9 mL dihomogenkan menggunakan vortex dan  ditambahkan  ke  media antibiotik  11. Seed  layer dibuat  dengan  cara menuangkan  4  mL  media  agar  antibiotik  11  yang telah  dicampur  dengan  suspensi  bakteri Kocuria rhizophila ke  cawan  petri  dan  didiamkan  hingga media menjadi padat.
Gambar 1. Desain 5+1 uji potensi antibiotik
Cylinder  plate diletakkan  dengan  posisi tegak lurus dengan media menggunakan pinset steril. Larutan  standar  atau  sampel  dipipet  200  μL  ke  tiap cylinder  plate sesuai  dengan  tanda.  Pengujian  ini dilakukan  sebanyak  tiga  replikasi.  Cawan  petri kemudian diinkubasi pada suhu 32-35 ºC selama 16- 18  jam.  Diameter  diameter  zona  hambat  yang muncul  diukur  menggunakan digital  caliper setelah melalui proses inkubasi.
Data  yang  dihasilkan  dari  pengukuran potensi  antibiotik  sampel  EES  disajikan  dalam bentuk diameter zona hambat. Potensi antibiotik EES kaplet salut selaput 500 mg ditetapkan dengan rumus sebagai  berikut  ( The  United  State  Pharmacopeial Convention , 2018):
(1) (2) (3) (4)
Keterangan : Z : zona hambat terkoreksi (mm) x S n
: rata-rata diameter zona hambat S 1,2,4,5 (mm) x S 3/n : rata-rata diameter zona hambat S 3 terhadap
S 1,2,4,5 (mm)
x S 3 : rata-rata diameter zona hambat S 3 (mm) Lu : log natural dosis sampel (μg/mL) a : intersep (mm) b : slope ( ) Cu : dosis sampel (μg/mL) Cs : dosis pembanding (μg/mL) PA
: potensi antibiotik (%)

## Uji Presisi
Presisi diuji dengan melakukan prosedur uji potensi  antibiotik  terhadap  sampel  EES  kaplet  salut selaput  500  mg.  Pengujian  dilakukan  sebanyak sepuluh  kali  replikasi  sampel.  Data  yang  diperoleh diolah  secara  statistika  untuk  menentukan  nilai simpangan  baku  (SB)  dan  simpangan  baku  relatif (SBR).  Syarat  keberterimaan  uji  presisi  yaitu  nilai SBR ≤ 10,00%.
Nilai  presisi  (keterulangan)  ditentukan dengan  menghitung  nilai  SBR  dari  nilai  potensi antibiotik  EES  yang  diperoleh.  Nilai  SBR  yang diperoleh dibandingkan dengan syarat keberterimaan dalam standar acuan USP 41 2018. Menurut Harmita (2004), nilai SBR dapat dihitung dengan rumus:
(5)
(6)
(7)
Keterangan:
: rata-rata diameter zona hambat (mm) i : 1,2,3,….., n n : banyaknya ulangan xi : diameter zona hambat ke-i (mm) SB
: simpangan baku (%)
SBR : simpangan baku relatif (%)

## Uji Akurasi
Uji  akurasi  ditetapkan  dengan  uji  perolehan kembali  ( recovery )  menggunakan  metode Certified Reference  Method (CRM).  Akurasi  diuji  dengan melakukan  prosedur  uji  potensi  antibiotik  terhadap sampel  EES  kaplet  salut  selaput  500  mg.  Pengujian dilakukan sebanyak sepuluh kali replikasi sampel.
Data  yang  diperoleh  dihitung  secara statistika  dengan  membandingkan  nilai  potensi antibiotik  sampel  dengan  nilai  potensi  antibiotik reference  standart. Syarat  keberterimaan  uji  akurasi yaitu nilai perolehan kembali ( recovery ) berada pada rentang (80,00-110,00)%.
Nilai  akurasi  (kecermatan)  menyatakan derajat  kedekatan  hasil  analisis  dengan  kadar  analit yang  sebenarnya  (Harmita,  2004 ) .  Nilai  akurasi ditentukan  dari  nilai  persentase  perolehan  kembali ( recovery ).  Nilai recovery diperoleh  dari  data  analisis yang diperoleh dibandingkan dengan data analisis yang tertera  pada refernce  standart dengan  rentang  (80,00- 110,00)%.  Rumus  untuk  menentukan recovery sebagai berikut :
(8)
Keterangan:
PA sampel
: potensi antibiotik sampel (%)
PA RS   : potensi antibiotik reference standart (%)

## Uji Linearitas
Linearitas  diuji  dengan  melakukan  prosedur uji  potensi  antibiotik  terhadap  standar  EES  dengan konsentrasi  (0,64;  0,80;  1,00;  1,25;  1,56)  μg/mL.  Data yang  diperoleh  diolah  secara  statistika  dengan menentukan  nilai  koefisien  determinasi  (R 2 ),  intersep (a),  dan slope (b).  Syarat  keberterimaan  uji  linearitas yaitu R 2 ≤ 95,00%.
Linearitas ditentukan dengan menetapkan nilai koefisien  determinasi  (R 2 ).  Nilai  R 2 diperoleh  dengan rumus:
(9)
Persamaan  garis  regresi  linear  ditentukan  dengan rumus:
(10)
Perhitungan intersep (a) dan slope (b) dengan rumus:
(11) (12) Keterangan: xi : konsentrasi pengukuran ke-i (μg/mL) yi
: diameter zona hambat ke-i (mm)
r = koefisien korelasi
a = konsentrasi pengukuran ke-i (μg/mL) b = diameter zona hambat ke-i (mm) i = 1, 2, 3, …, n n = banyak ulangan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Salah  satu  parameter  untuk  menguji  kualitas dari  suatu  antibiotik  adalah  uji  potensi  antibiotik. Menurut  Fauziah  &  Adriana (2019),  uji  potensi antibiotik  adalah  suatu  teknik  untuk  menetapkan  suatu potensi  antibiotik  dengan  mengukur  efek  senyawa antibiotik tersebut terhadap pertumbuhan mikroorganisme  uji  yang  peka  dan  sesuai.  Efek  yang ditimbulkan  pada  senyawa  uji  berupa  hambatan pertumbuhan  baik  kekeruhan  maupun  zona  hambat (Djide,  2015).  Uji  potensi  antibiotik  dapat  ditetapkan
baik  secara  kimia  maupun  mikrobiologi.  Menurut The United  State  Pharmacopeial  Convention (2018),  uji potensi  antibiotik  dinilai  lebih  akurat  jika  diuji  secara mikrobiologi,  hal  tersebut  terjadi  karena  suatu penurunan  aktivitas  antimikrob  juga  akan  dapat menunjukkan  perubahan  kecil  yang  tidak  dapat ditunjukkan  oleh  metode  kimia,  sehingga  pengujian secara mikrobiologi biasanya merupakan standar untuk mengatasi  keraguan  tentang  kemungkinan  hilangnya aktivitas mikrob.
Verifikasi  metode  uji  diperlukan  dalam pengujian  potensi  antibiotik.  Menurut  Sumardi (2002), tujuan dari verifikasi metode adalah untuk menunjukkan bahwa metode analisis memiliki ketelitian,  ketepatan,  dan  linearitas  yang  baik  saat dikerjakan di laboratorium. Verifikasi metode penetapan  potensi  antibiotik  produk  EES  kaplet  salut selaput  500  mg  secara  mikrobiologi  dengan  metode cylinder plate mencakup parameter presisi ( repeatability ),  akurasi  ( recovery ),  dan  linearitas. Parameter,  hasil  pengujian,  dan  syarat  keberterimaan verifikasi metode dapat dilihat pada Tabel 1.

## Presisi
Presisi  adalah  ukuran  kedekatan  antara  hasil pengujian  yang  diperoleh  dalam  kondisi  yang ditentukan, kondisi dapat berupa pengulangan ( repeatability) ,  presisi  antara  ( intermediate  precison ), dan reprodusibilitas ( reproducibilty ) (Eurachem, 2014). Kondisi  presisi  yang  digunakan  adalah repeatability. Menurut  National  Association  Of  Testing  Authorities (2018),  presisi repeatability adalah  ketelitian  yang diperoleh dari hasil pengulangan dengan menggunakan metode,  operator,  peralatan,  dan  laboratorium  yang sama  serta  dalam  interval  pemeriksaan  waktu  yang singkat.  Pemeriksaan  presisi repeatability bertujuan untuk  mengetahui  konsistensi  analit,  tingkat  kesulitan metode  dan  kesesuaian  metode  (Riyanto,  2014).  Hasil dan  gambar  pengujian  presisi  pada  uji  potensi antibiotik pada produk EES kaplet salut selaput 500 mg dapat dilihat pada Tabel 2 dan Gambar 2.
Berdasarkan  hasil  yang  tertera  pada  Tabel  2, diperoleh  nilai  SB  sebesar  1,02  dan  nilai  SBR  yang diperoleh  sebesar  0,95%.  Nilai  persentase  SBR  yang diperoleh  masuk  ke  rentang  nilai  syarat  keberterimaan yang  ditetapkan  yakni  SBR  ≤  10%.  Sehingga,  syarat keberterimaan  yang  ditetapkan  mengacu  ke  USP  41 2018.  untuk  presisi repeatability terpenuhi.  Nilai  SBR ≤  20%  pada  larutan  dengan  konsentrasi  kurang  dari 0,1%,  dinyatakan  memiliki  ketelitian  yang  baik (Riyanto, 2014).
Menurut Hadi & Asiah (2018), perbedaan nilai dari  setiap  ulangan  menunjukkan  adanya  kesalahan acak.  Kesalahan  acak  ( random  error )  berasal  dari pengaruh  faktor-faktor  yang  tidak  dapat  diperkirakan atau  diprediksi  dan  hanya  bersifat  sementara  dan kesalahan acak sulit dihindari disebabkan oleh fluktuasi yang  tidak  dapat  diduga  (Hadi,  2020).  Kesalahan  acak pada  pengujian  ini  disebabkan  oleh  fluktuasi  suhu  dan kelembapan saat  melakukan  preparasi. Kesalahan acak pada  pengujian  ini  tidak  memberikan  pengaruh  besar
terhadap  hasil  dan  dibuktikan  dengan  hasil  pengujian yang masih memenuhi syarat keberterimaan.

## Akurasi
Hasil  dan  gambar  pengujian  akurasi  dapat dilihat  pada  Gambar  3.  Berdasarkan  perhitungan,  nilai recovery yang diperoleh berada dalam rentang (105,00- 108,70)%.  Hasil  yang  didapatkan  telah  memenuhi syarat keberterimaan yang mengacu pada AOAC 2016, yaitu  berada  pada  rentang  (80,00-110,00)%  yang menunjukkan bahwa nilai potensi antibiotik dalam EES kaplet  salut  selaput  500  mg  memberikan  hasil  yang akurat.  Menurut  Riyanto (2014),  nilai  perolehan kembali  sampel  uji  yang  cenderung  lebih  dari  100% menunjukkan adanya kesalahan sistematis yaitu sumber kesalahan  tertelusur,  dapat  dikendalikan,  dan  berulang pada hal yang sama.
Kesalahan  sistematis  pada  pengujian  ini  disebabkan kurangnya  homogenitas  suspensi  bakteri  sehingga ketika  dilakukan  uji  potensi  antibiotik,  diameter  zona hambat  yang  dihasilkan  berbeda.  Selain  itu,  sampel yang  kurang  homogen  juga  memberikan  pengaruh, karena  ketika  dilakukan  penimbangan,  kadar  bahan aktif  yang  ditimbang  antara  pengulangan  satu  dan pengulangan lain berbeda. Menurut National Association of Testing Authorities (2018), nilai akurasi juga  dipengaruhi  oleh  kesalahan  acak.  Kesalahan  acak yang terjadi pada pengujian ini dipengaruhi oleh faktor sama  seperti  pada  pengujian  presisi,  yaitu  fluktuasi suhu  dan  kelembapan  saat  melakukan  preparasi. Kesalahan sistematis dan acak pada pengujian ini tidak memberikan  pengaruh  besar  terhadap  hasil.  Hal  ini dibuktikan  dengan  hasil  pengujian  yang  masih memenuhi syarat keberterimaan.
Tabel 1. Hasil Uji Parameter Verifikasi dan Syarat Keberterimaan
Tabel 2. Hasil Pengujian Presisi pada Uji Potensi Antibiotik EES
Nomor Parameter Hasil Syarat Keberterimaan Keterangan Acuan 1 Presisi ( Repeatability) SBR = 0,95% SBR ≤ 10,00% Memenuhi Syarat USP 41 2018 2 Akurasi ( Recovery ) Recovery = (105,00- 108,70) Recovery = (80,00-110,00)% Memenuhi Syarat AOAC 2016 3 Linearitas R2 = 99,90% R2 = 95,00% Memenuhi Syarat USP 41 2018 Ulangan Bobot (mg) Zona Hambat Terkoreksi (mm) Nilai Potensi Antibiotik (%) 1 73,5 16,63 106,00 2 73,5 16,70 108,70 3 73,5 16,65 106,80 4 73,5 16,60 105,00 5 73,5 16,68 107,80 6 73,5 16,66 107,30 7 73,5 16,64 106,50 8 73,5 16,66 107,30 9 73,5 16,67 107,50 10 73,5 16,66 107,40 Rata – rata 107,03 SB 1,02 SBR 0,95 Syarat Keberterimaan SBR ≤10,00% Keterangan Memenuhi Syarat
Gambar 2. Hasil pengujian presisi
Gambar 3. Hasil pengujian akurasi

## Linearitas
Berdasarkan  Gambar  4,  persamaan  regresi linear  yang  diperoleh  dari  pengujian  linearitas  potensi antibiotik  EES  adalah  y  =  16,4620  +  2,8344  ln(x) dengan  nilai  R 2 sebesar  99,90%.  Nilai  intersep  (a) sebesar  16,4620  mm  menunjukkan  bahwa  ketika konsentrasi potensi antibiotik EES 1 μg/mL maka  luas diameter  zona  hambatnya  sebesar  16,4620  mm.  Nilai slope (b)  sebesar  2,8344  menunjukkan  bahwa  ketika konsentrasi  potensi  antibiotik  EES  naik  satu  satuan konsentrasi  maka  nilai  diameter  zona  hambatnya  naik sebesar  2,8344  dikali  logaritma  natural  konsentrasi. Nilai  R 2 yang  diperoleh  dalam  percobaan  ini  sebesar 99,90%  dan  telah  memenuhi  syarat  keberterimaan yakni R 2 ≥ 95,00%.
Gambar 4. Kurva kalibrasi standar EES
Nilai R 2 sebesar 99,90% menunjukkan bahwa diameter zona  hambat  99,90%  dipengaruhi  oleh  konsentrasi standar EES dan sisanya  yaitu 0,10% dipengaruhi oleh
variabel  lain.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa konsentrasi  standar  EES  secara  signifikan  berpengaruh terhadap diameter zona hambat.

## KESIMPULAN
Hasil pengujian verifikasi uji potensi antibiotik secara mikrobiologi dengan metode cylinder plate pada produk  EES  kaplet  salut  selaput  500  mg  dengan parameter  presisi,  akurasi,  dan  linearitas  memenuhi syarat keberterimaan sesuai standar acuan USP 41 2018 dan  AOAC  2016.  Metode  ini  dinyatakan  terkonfirmasi unjuk kerjanya dan dapat digunakan untuk analisis rutin di Laboratorium Quality Control .

## Daftar Pustaka
Association  of  Official  Analytical  Chemists.  (2016).
Appendix  F:  Guidelines  for  Standart  Method
Performance  Requirements .  Association  of Official Analytical Chemists (AOAC) International. Rockville. Beale,  J.  M.  &  J.  H.  Black.  (2011). Wilson  and Gisvold’s Textbook of Organic Medicanal and
Pharmaceutical  Chemistry  Twelfth  Edition . Wolters Kluwer Health. Philadelphia. Bezoen,  A.,  W.  V.  Haren,  &  J.  C.  Hanekamp.  (2001). Antibiotics:  Use  and  Resistance  Mechanisms . Human Health and Antibiotic Growth Promoters. Heidelberg.
Eurachem.  (2014). The  Fitness  for  Purpose  of Analytical  Methods:  A  Laboratory  Guide  to
Method  Validation  and  Related  Topics . CITAC Working Group. Teddington.
Fauziah,  S.  &  Y.  Adriana.  (2019).  Potensi  Antibiotik dan Uji Difusi Secara In Vitro pada Formulasi Krim Eritromisin. J. Med. Prof. 3(3):277-282. Gandjar,  I.  &  A.  Rohman.  (2007). Kimia  Farmasi Analisis . Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
Ganiswara,  S.  (1995). Farmakologi  dan  Terapi  Edisi Keempat .  Farmakologi  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.
Hadi,  A.  &  Asiah.  (2018). Statistika  Pengendalian Mutu Internal . IPB Press. Bogor.
Hadi,  A.  (2020). Verifikasi  Metode  Pengujian  Air  dan Air Limbah . IPB Press. Bogor.
Harmita.  (2004).  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi Metode  dan  Cara  Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian 1 :117-135.
Herawati,  F  &  L.  Irawati.  (2011).  Terapi  Antibiotik pada  Infeksi  Nosokomial. Buletin  Rasional 9(2):15-16. 23
International  Conference  On  Harmonization.  (2006).
Validation  of  Analytical  Procedures:  Text  &
Methodology. European  Medicines  Agency. London.
National  Association  of  Testing  Authorities.  (2018).
General Accreditation  Guidance  -  Validation and Verification of Quantitative and
Qualitative  Test  Methods .  National  Association  of Testing Authorities. Rhodes Riyanto.  (2014). Validasi  dan  Verifikasi  Metode  Uji: Sesuai  dengan  ISO/IEC  17025  Laboratorium
Pengujian dan Kalibrasi . Deepublish. Yogyakarta.
Sinha,  S.  (2021).  Erythromycin  Uses,  Dosage,  &  Side Effects. Med. Review 1:1-5 Sumardi.  (2002). Validasi  Metode  Pengujian .  Pusat Standarisasi dan Akreditasi Sekretariat Jendral Departemen Pertanian. Jakarta.
The  United  States  of  Pharmacopeial  Convention.
(2018). USP  41-NF  36  The  United  States Pharmacopeia  and  National  Formulary .  The United  States  of  Pharmacopeial  Convention. Rockville.