PENGARUH PEMBERIAN PAKAN TAMBAHAN TEPUNG BEKICOT ( ACHATINA FULICA ) TERHADAP MOTILITAS DAN VIABILITAS SPERMATOZOA

## PADA MENCIT (MUS MUSCULUS)
Fradila Nurmahita Rosandi 1 , Agus Sjafarjanto 2
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 1
Bagian Penyakit Dalam Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 2

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  tepung  bekicot  (Achatina  fulica) terhadap  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  mencit  (Mus  musculus).Penelitian  ini  merupakan penelitian  eksperimental  dengan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  6  ulangan. Perlakuan yang digunakan adalah mencit sebagai control, mencit yang diberi tepung bekicot 1 g, 2 g, dan  3  g.  Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Reproduksi  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas  Wijaya  Kusuma  Surabaya  pada tanggal 4  Agustus sampai  18  Agustus  2014.  Data  yang diperoleh  dianalisis  dengan  Analisis  Varian  (ANOVA).Hasil  penelitian  menunjukkan,  bahwa  ada pengaruh tepung bekicot (Achatina fulica) terhadap motilitas dan viabilitas spermatozoa mencit (Mus musculus). Perlakuan pemberian tepung bekicot (Achatina fulica) 3 g mampu meningkatkan motilitas dan viabilitas spermatozoa dibandingkan dengan pemberian tepung bekicot (Achatina fulica) 1 g dan 2 g.
Kata  Kunci  :  Tepung  Bekicot  (Achatina  fulica),  Motilitas,  Viabilitas,    Spermatozoa,  Mencit  (Mus musculus)

## PENDAHULUAN
Tikus  putih  atau  biasa  disebut  dengan Mencit    ( Mus    musculus )    merupakan    salah satu    hewan    percobaan    dilaboratorium, hewan    ini    dapat    berkembang    biaksecara cepat  dan  dalam  jumlah  yang  cukup  besar. Mencittermasuk  hewan  pengerat  (Rodentia) yang    cepat    berbiak,    mudah    dipelihara dalamjumlah    banyak,    variasi    genetiknya cukup    besar    serta    anatomi    dan fisiologisnya.  Mencit  adalah  hewan  yang sengaja  dipelihara  dan  diternakkan  untuk dipakai  sebagai  hewan  model,  dan  juga  untuk mempelajari  dan  mengembangkan  berbagai macam  bidang  ilmu  dalam  skala  penelitian atau pengamatan laboratorik. Pengujian terhadap berbagai jenis obat biasanya dilakukan  terlebih  dahulu  sebelum  diberikan kepada ternak atau manusia (Widodo, 2010).
Mengimbangi  jumlah  mencit  yang diperlukan  maka  dilakukan  suatu  proses breeding,  untuk  memulai  breeding  yang diperhatikan  adalah  memilih  indukannya, indukan memegang peran yang sangat penting untuk  menghasilkan  banyak  anak  yang  baik dan  sehat.  Selain  itu  diimbangi  dengan pemberian  pakan  seperti  campuran  biji  bijian dan  voer  (pur)  ayam.  Populasi  mencit  dapat ditingkatkan  dengan  memperbaiki  penampilan reproduksinya.  Reproduksi  ditentukan  oleh kemampuan  mencit  untuk  menghasilkan spermatozoa  yang  berkualitas.  Selain  itu, untuk  menghasilkan  spermatozoa  yang  baik dibutuhkan  dukungan  organ-organ  kelamin yang dapat berfungsi dengan normal (Robinson dan Singh, 2001).
Pakan  dengan  sumber  protein  yang tinggi  juga  diperlukan  untuk  menghasilkan kualitas  spermatozoa  yang  baik.  Ironisnya biaya  untuk  pakan  tersebut  selalu  diikuti dengan  harga  yang  tidak  sedikit.  Hingga  saat ini  pemenuhan  bahan  baku  berprotein  tinggi seperti  tepung  ikan  70%  nya  harus  dipasok dari  luar  negeri.  Memprediksi  bahwa  dalam beberpa  era  mendatang,  harga  bahan  sumber protein  tepung  ikan  akan  semakin  mahal (Widodo, 2010).
Upaya untuk meningkatkan produktivitas  mencit  dengan  pakan  tambahan yang  murah  tidak  bersaing  dengan  kebutuhan manusia atau mengurangi jumlah ransum yang diberikan  serta  ekonomis  dan  mudah  didapat.
Salah satu alternatif yang dapat diambil untuk menekan  biaya  adalah  pemanfaatan  tepung bekicot  ( Achatina  fulica )  sebagai  tambahan ransum  dalam  pakan.  Kualitasnya  menyaingi bahkan melebihi tepung ikan, harganya murah, dan  mudah  diperoleh  atau  dibudidayakan. Kandungan  proteinnya  mencapai  62,4%    dan asam  aminonya  tergolong  cukup  lengkap. Pembuatan  tepung  bekicot  merupakan  usaha untuk menghindari kesan menjijikkan terhadap bekicot  dengan  jalan  mengolahnya  menjadi bentuk yang berbeda dengan sewaktu hidupnya. Di samping itu juga bertujuan untuk memperpanjang  masa  simpan  (Komplang, 1979).
Spermatozoa  mamalia  mempunyai fertilitas  yang  tinggi  ditunjukkan  dengan presentase  spermatozoa  hidup  yang  tinggi dengan morfologi normal. Fertilitas spermatozoa yang baik dapat dipengaruhi oleh motilitas  dan  viabilitas  yang  baik  pula. Motilitas  yang  normal  dan  baik  adalah  yang mampu  bergerak  cepat  kedepan  dengan ditopang  oleh  morfologi  spermatozoa  itu sendiri,  sedangkan  viabilitas  yang  baik  adalah yang  mempunya  daya  hidup  yang  tinggi dengan  ditopang  oleh  energi  yang  dihasilkan oleh  ekor  spermatozoa  tersebut.  Berawal  dari masalah ini, penelitian mengenai motilitas dan viabilitas  spermatozoa  mencit  sangat  perlu dilakukan  mengingat  bahwa  hal  tersebut adalah  syarat  mutlak  bagi  spermatozoa  untuk bergerak menembus lapisan ovum.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memberikan informasi pengaruh penambahan tepung bekicot  ( Achatina  fulica )  sebagai  pakan tambahan  terhadap  motilitas  dan  viabilitas sperma  mencit  ( Mus    musculus ).  Hasil penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan informasi  untuk  pengembangan  penggunaan tepung  bekicot  ( Achatina  fulica )  sebagai alternatif  dalam  mengatasi  permasalahan  di bidang  kesehatan  hewan  terutama  yang menyangkut permasalahan reproduksi.
.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Hewan  Coba  dan  Laboratorium Reproduksi  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya.
Penelitian  ini  dilaksanakan  21  hari,  pada tanggal 4 Agustus sampai 18 Agustus 2014.
Pada  penelitian  ini  menggunakan  16  ekor mencit  jantan  umur  8  minggu,  pakan  BR1, NaCl  fisiologis  (NaCl  0,9%)  yang  digunakan sebagai pengencer spermatozoa, tepung bekicotdan  aquades  yang  digunakan  untuk melarutkan tepung bekicot.
Peralatan  yang  digunakan  selama  penelitian adalah 4 buah kandang mencit yang dilengkapi dengan  tempat  pakan  dan  minum,  timbangan, mikroskop, object glass, cover glass, hemocytometer,  spuit,  alat  hitung,  gelas  ukur, tabung berskala, dan kanul.
Pengambilan Sampel Pengambilan sampel sperma dilakukan  setelah  mencit  berumur  8  minggu. Cara  pengambilan  sperma  yaitu  dengan pembedahan dan pengambilan organ reproduksi  yaitucauda  epididimis  tepatnya. Ditempat  tersebut  diklem  kemudian  dipotong. Bagian  yang  dipotong  tadi,  dikeluarkan spermanya  dengan  cara  dipencet,  kemudian ditetesi  NaCl  0,9%  sebanyak  2  tetes,  diaduk agar menjadi homogen sehingga memudahkan pemeriksaan. Sperma diletakkan di atas object glass,  ditutup  dengan deck  glass diperiksa dibawah  mikroskop  dengan  lensa  obyektif perbesaran  40x,  ditentukan  dari  100  sperma dalam satu lapang pandang.
Pembuatan Dosis Pakan Tambahan Bekicot  yang  sudah  dikeringkan  lalu diblender  agar  mendapatkan  tekstur  halus seperti  tepung.  Tepung  bekicot  tersebut diberikan  pada  mencit  perlakuan  pertama sebanyak  1g  dan    dilarutakan  dengan  aquades sebanyak  1ml,  mencit  perlakuan  kedua  yaitu tepung  bekicot  2g  dilarutkan  dengan  aquades sebanyak  1ml,  dan  perlakuan  ketiga  yaitu tepung  bekicot  3g  dilarutkan  dengan  aquades sebanyak 1ml.
Prosedur Penelitian Ke-24  ekor  mencit  dibagi  dalam  4 level  perlakuan  dengan  6  kali  pengulangan. Satu unit perlakuan terdiri dari 1 ekor mencit. Adapun  perlakuan  yang  digunakan  adalah sebagai berikut :
P 0 : pakan komersil (BR-1) 3 gram tanpa penambahan tepung bekicot + kecambah P 1 : pakan  komersil  (BR-1)  3  gram dengan  penambahan  tepung  bekicot 1 gram + kecambah
P 2 :  pakan  komersil  (BR-1)  3  gram dengan  penambahan  tepung  bekicot 2 gram + kecambah
P 3 :  pakan  komersil  (BR-1)  3  gram dengan  penambahan  tepung  bekicot 3 gram + kecambah
Penelitian  dilakukan  sampai selama  21  hari  dan  dilakukan  pengambilan spermatozoa. Parameter  yang  diukur  pada saat  penelitian  adalah  pengaruh  penambahan tepung  bekicot  pada  motilitas  dan  viabilitas spermatozoa.Analisis  data  yang  digunakan adalah  dengan  cara  deskriptif  dan  rancangan percobaan  dengan  menggunakan  rancangan acak  lengkap  (RAL)  dan  dianalisis  dengan metode ANOVA.

## PEMBAHASAN
Dalam penelitian ini pengaruh pemberian  pakan  tambahan  tepung  bekicot ( Achatina  fulica )  terhadap  motilitas  dan viabilitas  spermatozoa  mencit ( Mus  musculus. Hasil sidik ragam menunjukan bahwa pemberian  pakan  tambahan  tepung  bekicot  (1 gr,  2  gr,  3  gr)  tidak  berbeda  nyata  terhadap kontrol. Rataan nilai motilitas pada spermatozoa mencit  jantan secara oral disajikan dalam tabel berikut ini :
Tabel1. Rataan Nilai Motilitas Spermatozoa
Hasil Penelitian Perlakuan X ± SD P0 (kontrol) 50,17 ± 2,317 P1 (tepung bekicot 1 g) 46,00 ± 6,663 P2 (tepung bekicot 2 g) 51,17 ± 6,369 P3 (tepung bekicot 3 g) 55,17 ± 8,864
Keterangan :  Tidak menunjukkan perbedaan yang  nyata  akibat  perlakuan  p<0,05 berdasarkan analisa ANOVA
50.17 46 51.17 55.17 40 45 50 55 60 P0 P1 P2 P3 Pemberian Tepung Bekicot Terhadap Motilitas Spermatozoa

## Mean of Motilitas Spermatozoa
Gambar  5.1.  Grafik  motilitas  spermatozoa setelah dianalisa dengan ANOVA

## Viabilitas Spermatozoa
Hasil sidik ragam menunjukkan bahwa  pemberian  pakan  tambahan    tepung bekicot berbeda nyata terhadap control . Untuk lebih  jelasnya,  dapat  dilihat  rataan  nilai viabilitas  pada  spermatozoa  mencit  jantan secara oral disajikan dalam tabel berikut ini :
Tabel.2. Rataan Nilai Viabilitas Spermatozoa Hasil Penelitian Perlakuan X ± SD P0 ( kontrol ) 89,83 ± 0,408 a P1 (tepung bekicot 1 g) 90,33 ± 0,516 a P2 (tepung bekicot 2 g) 95,67 ± 0,816 b P3 (tepung bekicot 3 g) 96,50 ± 1,378 b
Keterangan  :  Angka  yang  diikuti  superskrip huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan  nyata  akibat  perlakuan  pada p<0,05 berdasarkan analisa ANOVA.
89.83 90.33 95.67 96.5 86 88 90 92 94 96 98 P0 P1 P2 P3 Pemberian Tepung Bekicot Terhadap Viabilitas

## Mean Viabilitas of Spermatozoa
Gambar 5.1. Grafik viabilitas spermatozoa setelah dianalisa dengan ANOVA

## Motilitas Spermatozoa
Motilitas
merupakan suatu kemampuan  spermatozoa  untuk  bergerak secara  progresif  dan  dapat  dijadikan  patokan yang  sederhana  dalam  penilaian  semen  untuk inseminasi  buatan  pada  ternak-ternak  besar. Motilitas spermatozoa ini berasal dari gerakan mendorong  spermatozoa  pada  bagian  ekor yang menyerupai gerakan cambuk.
Pada  kelompok  pemberian  tepung bekicot  1  gr  rerata  motilitas  yang  didapat adalah sebesar 46%, pada kelompok pemberian  tepung  bekicot 2  gr  adalah  sebesar 51%,  pada  kelompok  pemberian  tepung bekicot  3  gr  adalah  sebesar  55%  dan  pada kelompok  kontrol  memiliki  rerata  sebesar 50%. Hasil pengukuran diatas relatif tidak jauh berbeda.
Keragaman motilitas spermatozoa mencit  yang  diberi  tepung  bekicot  3  gr menunjukkan nilai tertinggi sedangkan mencit control  menunjukkan  nilai  terendah.  Ini menunjukkan bahwa pemberian tepung bekicot ternyata dapat meningkatkan keragaman motilitas spermatozoa mencit.
Pemberian  pakan  tambahan  tepung bekicot  terhadap  mencit  (mus  musculus) selama  21  hari  dapat  menyebabkan  terjadinya kenaikan motilitas dan viabilitas spermatozoa. Parameter  yang  diamati  pada  pengamatan motilitas  spermatozoa  adalah  spermatozoa yang bergerak lurus ke depan dan cepat, hal ini didasarkan  bahwa  untuk  dapat  membuahi  sel telur  dengan  baik,  maka  spermatozoa  harus menempuh  perjalanan  yang  jauh  agar  dapat menembus  getah  mulut  rahim  dan  lapisan
yang  membungkus  sel  telur.  Tipe  gerakan spermatozoa  yang  baik  adalah  gerakan  lurus kedepan  sedangkan  gerakan  yang  berkelok kelok  atau  berputar-putar menandakan  adanya kelainan pada struktur spermatozoa. Peningkatan motilitas juga menentukan kemampuan  spermatozoa  dalam  membuahi ovum. Seiring  dengan meningkatnya motilitas maka  akan  meningkat  pula  kemampuan spermatozoa  dalam  membuahi  ovum  (Surya, 2010).
Spermataozoa
yang
hidup berhubungan  erat  dengan  motilitas  sperma karena  spermatozoa  hidup  merupakan  syarat mutlak bagi spermatozoa untuk dapat menghasilkan energi dan melakukan pergerakan.  Semen  mamalia  mempunyai fertilitas  yang  tinggi  ditunjukan  dengan presentase  spermatozoa  hidup  yang  tinggi dengan  morfologi  normal.  Motilitas  akan berlangsung  dengan  baik  jika  ditopang  oleh banyak  hal  diantaranya  adalah  morfologi  dari spermatozoa  itu  sendiri.  Morfologi  yang  baik adalah  kepala  bentuk  “koma”  dengan  besaran yang  normal,  ekor  panjang  tidak  melingkar ataupun  ganda.  Penambahan  tepung  bekicot pada  pakan  mencit  ternyata  berpengaruh terhadap  daya  motilitas  spermatozoa  mencit walaupun  tidak  signifikan,  hal  ini  bisa  dilihat dari  hasil  sidik  ragam  yang  menunjukan  nilai yang  relatif  tidak  jauh  berbeda  (Setyadi, 2006).
Ekor  digunakan  oleh  spermatozoa untuk  melakukan  gerakan.  Bagian  utama  ekor mengandung  sebagian  besar  mekanisme  daya gerak  spermatozoa  dan  memiliki  peranan  fital terhadap  motilitas.  Ekor  spermatozoa  terdiri dari  tiga  bagian  yaitu  bagian  tengah,  utama, dan  bagian  ujung.  Bagian  tengah  ekor merupakan  gudang  energy  untuk  kehidupan dan  gerakan  spermatozoa  yang  dihasilkan melalui  proses  metabolik.  Energi  inilah  yang digunakan  oleh  ekor  untuk  menggerakkan spermatozoa untuk bergerak (Toelihere, 1985).
Tepung bekicot seperti yang telah kita ketahui  mempunyai  kandungan  air,  protein, lemak,  kalsium,  fosfor,  dan  serat  kasar    yang salah  satu  fungsinya  adalah  sebagai  cadangan makanan.  Cadangan  makanan  ini  juga  bisa digunakan  sebagai  cadangan  makanan  bagi spermatozoa. Spermatozoa dapat juga menggunakan oksigen didalam proses metabolisme dan respirasi untuk mengoksidasi substrat-substrat  pokok  dan  mengembalikan
ikatan  fosfat  untuk  membangun  kembali  ATP ( Adenosin  Tri  Phosphat ).  ATP  yang  bisa diubah  menjadi  energi  inilah  yang  digunakan oleh sperma (Toelihere, 1985).

## Viabilitas Spermatozoa
Hasil  sidik  ragam  menunjukan  bahwa kelompok  mencit  yang  diberi  perlakuan pemberian  bekicot  1  gr  (P1)  memiliki viabilitas  berbeda  nyata  dengan  kontrol (p<0,05).  Rataan  viabilitas  pada  mencit dengan  pemberian  tepung  bekicot  1  gr  adalah 89%,  pemberian  tepung  bekicot  2  gr  adalah 95%,  pemberian  tepung  bekicot  3  gr  adalah 96%.
Pemberian  tepung  bekicot  1  gr  (P1) ternyata  meningkatkan  daya  hidup  (viabilitas) spermatozoa.  Taraf  pemberian  tepung  bekicot merupakan taraf yang optimal untuk meningkatkan daya hidup spermatozoa. Pemberian  tepung  bekicot  yang  lebih  besar atau  lebih  kecil  dari  1  gr  tidak  dianjurkan diberikan kepada mencit.
Tepung  bekicot  sebagai  salah  satu sumber  protein  yang  kaya  akan  asam  amino. Asam  amino  arginin  mempunyai  peranan penting  dalam  sistem  pertahanan  tubuh imunitas  seluler.  Selain  itu,  arginin  juga diketahui  berperan  dalam  spermatogenesis. Senyawa  ini  dapat  memblok  dan  menahan agen  yang  menghambat  glikolisis  pada  sel sperma.  Hal  tersebut  dapat  mengakibatkan peningkatan aktivitas metabolik hingga mencapai  delapan  kali  lipat.  Proses  ini  akan meningkatkan  ketersediaan  energi  sel  sperma dan memperkuat daya tahan hidup spermatozoa. Kekurangan arginin dapat mengacaukan  metabolisme  sperma  sehingga mengakibatkan  penurunan  viabilitas  dan gangguan spermatozoa (Komplang, 1979).

## DAFTAR PUSTAKA
Adi,  Prasetya,  2000. Pengaruh  Pemberian Tepung  Bekicot  terhadap  Kdar  total
Protein Darah pada Rattus
Norvegicus  Strain  wistar  dengan  Diet Non  Protein .  Fakultas  Kedokteran Umum Universitas Brawijaya.
Amrullah,  I.K.,  2003. Nutrisi  Ayam  Petelur . Satu Gunung budi, Bogor.
Arrington, L.R., 1972. Introductory Laboratory  Animal.  The  Breeding, Care and
Management  of  Experimental  Animal Science . The Interstate Printers and
Publishing., New York. Berata, I Ketut, 2010. Studi Patologi Kejadian
Cysticercosis Pada Tikus Putih . Fakultas Kedokteran Hewan. Universits Udayana. Bloom  &  Fawcett,  2004. Buku  Ajar  Histologi E/12 .  Penerbit  Buku  Kedokteran. Jakarta.
Champbel, 2004. Biologi . Erlangga. Jakarta. Faranita,  O.V.,  2009. Kualitas  Spermatozoa
Pada  TikusWistar  Jantan  Diabetes Melitus .  Laporan  Akhir  Penelitian Karya Tulis Ilmiah Fakultas Kedokteran  Universitas  Diponegoro. Semarang.
Hafez,  E.S.E.,  1987. Semen  Evaluation . InHafez,  E.S.E  (Ed.).  Reproduction  in Farm  Animals.  Lea  and  Febiger. Philadelphia.
Hartono,1988. Histologi  Veteriner  Jilid  II, Organologi . Laboratorium Histologi,
Bagian Anatomi, Fakultas Kedokteran Hewan  Institut Pertanian Bogor.
Bogor.
Hartono,  1992. Histologi  Veteriner  Jilid  II .
Organologi. Laboratorium Histologi,Bagian  Anatomi.  Fakultas Kedokteran  Hewan.  Institut  Pertanian
Bogor.Bogor.
Heffner, Linda & Danny J. Schust, 2006. At a Glance Sistem Reproduksi Edisi ke 2
Iriandini,  2012. Pengaruh  Aplikasi  Cahaya Terhadap  Spermatozoa  Mencit  (Mus musculus) . Fakultas Kedokteran Hewan Sam Ratulanggi. Manado. Kaspul,  2004. Kualitas  Spermatozoa  Tikus Putih  (Rattus  norvegicus  L.)  Setelah Perlakuan Dengan Boraks . Bioscientiae Volume 1, Nomor 2
Komplang, IP., 1979. Pendayagunaan Bekicot. Kongres Biologi IV. Bandung
Kusumawati,  D.,  2004. Bersahabat  Dengan Hewan Coba . Gadjah MadaYogyakarta: University Press. Malole,  M.B.M  dan  C.S.U.  Pramono,  1989. Penggunaan Hewan – hewan Percobaan  di  Laboratorium .  Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Parakkasi,  A.,  1999. Ilmu  Nutrisi  dan Makanan Ternak Ruminan . Universitas Indonesia, Jakarta.
Rahardja,  Boedi  Setya,  2011. Pengaruh Penggunaan  Tepung  Daging  Bekicot (Achatina  fulica)  pada  Pakan  Buatan Terhadap Pertumbuhan, Ratio, Konversi Pakan dan tingkat Kelulushidupan  Benih  Ikan  Patin (Pangatus pangatus) . Universitas
Airlangga. Surabaya.
Riskana,    T.,    1999. Pengaruh    Kafein Terhadap    Peningkatan    kadar    Asam Urat  Pada    Darah    Mencit .    Tugas Akhir    Tidak    Diterbitkan.    Program S1    FakultasMalang:  Kedokteran. Unibraw.
Robinson,  D.,  Singh  D.N.,  2001. Alternative Protein  Sources  for  Laying  Hens.  A report  for  the  Rural  Industries . Research and Development Corporation.Publication No00/144. www.rirdc.gov.au/reports/Index.htm Rohmad,  2012. Diktat  kuliah  dasar  aneka ternak . Uniska. Kediri(http://rohmatfapertanian.wordp ress.com/2012/08/06/diktat-aneka-
ternak-mencit)  diakses  pada  tanggal 11 Januari 2014.
Setijono, Marcellino Mardanung, 1985. Mencit (Mus musculus) sebagai hewan percobaan.(skripsi) . Fakultas
Kedokteran  Hewan.  Institut  Pertanian Bogor.
Setyadi,  A.D.,  2006. Organ  Reproduksi  Dan Kualitas Sperma Mencit (Mus musculus). Yang  Mendapat  Pakan tambahan Kemangi (Ocinum Basilium) Segar. Skripsi
Smith,  B.J.  dan  S.  Mangkoewidjojo.  1988.
Pemeliharaan, Pembiakan
dan
Penggunaan  Hewan  Percobaan  di Daerah  Tropis .  Universitas  Indonesia Press. Jakarta.
Smith,    J.B.    dan    Soesanto,  1997. Pemeliharaan,    Pembiakan,    dan Penggunaan  Hewan  Coba  di  Daerah Tropis . UI Press. Jakarta.
Soewolo,    2000. Pengantar    Fisiologi
Hewan .    Proyek    Pengembangan GuruSekolah    Menengah    Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi DepartemenJakarta: Pendidikan. Suharto,  1999. Pengolahan  Bekicot  Untuk Pakan Ternak . Balai Penelitian Ternak. Bogor
Tabu,  Charles  Rangga,  2002. Penyakit  ayam dan penanganannya –  vol  2 . KanisiusYogyakarta.(Online)(http://bo oks.google.co.id/books?id=9QnxNifP CQgC&pg=PA106&dq=pakan+menci t&hl=id&sa=X&ei=mIvSUqWpA8eO rQfG7oGoDQ&redir_ esc=y#v=onepage&q=mencit&f=false ) diakses pada tanggal 11 Januari 2014
Toelihere,  M.R.,  1981. Fisiologi  Reproduksi Pada Ternak . Penerbit Angkasa.Bandung.Program Studi Teknologi Reproduksi Ternak Fakultas  Peternakan  Institut  Pertanian Bogor. Bogor.
Toelihere,  M.R,  .1985. Inseminasi  Buatan Pada  Ternak .Penerbit  Angkasa  : Bandung.
Toelihere,  M.R.,  1993. Inseminasi  Buatan pada  Ternak .  Bandung:  Penerbit Angkasa.
Watson,  Roger,  1997. Anatomi  dan  Fisiologi untuk Perawat . Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Widodo,  Wahyu,  2002. Nutrisi  dan  Pakan Unggas Konstektual . Depdiknas. Jakarta
Widodo W., 2010. Bahan Pakan Unggas Non Konvensional .  Buku Ajar Fakultas Peternakan Universitas Muhammadiyah. Malang. http://wahyuwidodo.staff.umm. ac.id/files/2010/ 01/.pdf Qauliyah,  2006. Mekanisme  Kerja  Beberapa Antioksidan . (http://astaqauliyah.blogspot.com)
Yatim,  Wildan,  1996. Histologi .  Bandung: Tarsito.