Indonesian Sugar Research Journa l December 2021, Vol. 1 No. 2 page: 95-105 p-ISSN: 2275-2100   e-ISSN:  2798-5415
Efikasi  Beberapa Isolat Jamur Metarhizium anisopliae Terhadap Hama Uret Lepidiota stigma F. (Coleoptera: Scarabaeidae) di Laboratorium
Efficacy of Metarhizium anisopliae Isolates Against White Grub Lepidiota stigma F. (Coleoptera: Scarabaeidae) in The Laboratory
Wiwit Wicaksono Jati 1) , Etik Mar’ati Achadian 1)
Dendi Juliadi 1) , dan Lilik Koesmihartono Putra 1)
1) Pusat Penelitian Perkebunan Gula Indonesia, Pasuruan
Alamat korespondensi, Email: jatiwiwit@gmail.com

## ABSTRAK
Serangan  hama  uret Lepidiota  stigma F.  dapat  menyebabkan  kehilangan  hasil  tebu mencapai  30%,  dan  pada  serangan  berat  dapat  menyebabkan  gagal  panen.    Pengendalian hama  dengan  aplikasi  insektisida  sintetik  secara  terus  menerus  berpotensi  menimbulkan dampak  negatif  terhadap  keseimbangan  ekosistem  antara  lain  pencemaran  lingkungan. Pengendalian  secara  biologis  dengan  jamur  entomopatogenik  merupakan  alternatif  teknik pengendalian  yang  dapat  dikembangkan.  Oleh  karena  itu  tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui kemampuan 5 isolat jamur Metarhizium anisopliae yang diperoleh dari beberapa instansi  untuk  pengembangan  agen  hayati  hama  uret  di  wilayah  Purworejo.    Penelitian  uji efikasi  dilakukan  dalam  2  tahap.  Uji  efikasi  tahap  1  dilakukan  pada  5  isolat    terhadap  uret dari  Purworejo.  Adapun  uji  efikasi  tahap  2  dilakukan  pada  2  isolat  terpilih  dengan penyetaraan  kerapatan  spora.  Hasil  penelitian  menunjukkan    bahwa  terdapat  2  isolat  yang mampu menyebabkan kematian hama uret  yaitu  isolat M1 dan M5. Isolat  M5 menunjukkan hasil uji efikasi tahap pertama yang lebih tinggi dibandingkan isolat lainnya. Hasil uji efikasi tahap 2 antara isolat jamur M. anisopliae M1 dan M5, keduanya efektif untuk mengendalikan hama uret L. stigma .
Kata kunci : Uret, Purworejo, jamur , efikasi

## ABSTRACT
The  white  grub Lepidiota  stigma F.  infestation  decreases  sugarcane  yield  up  to  30% and heavy infestation causes crop failure. The control method using synthetic insecticides has a  potentially  negative  impact  on  the  ecosystem  balance,  including  environmental  pollution. Biological control with entomopathogenic fungus is an alternative control technique that can be developed. Therefore the purpose of this study was to determine the efficacy of 5 isolates of Metarizium  anisopliae obtained  from  several  institutions  in  the  development  of  white grub’s biological control agent in Purworejo. The efficacy test was carried out in 2 stages. For  the  first  stage,  an  efficacy  test  was  conducted  on  5  isolates  against  white  grub  from Purworejo  area.  An  efficacy  test for  the second  stage  was  conducted  on  2  selected  isolates with  equalization  of  spore  density.  The  first  stage  result  showed  that  there  were  2  isolates
have efficacy in controlling white grub, namely M1 and M5 isolates. M5 isolate had higher efficacy than other fungal isolates. The second-stage efficacy result showed that both of M1 and M5 isolates can be used as biological control agent of L. stigma white grub.
Key words: White grub, Purworejo, fungus, efficacy

## PENDAHULUAN
Uret  merupakan  hama  penting  di perkebunan  tebu  khususnya  di  lahan  kering berpasir.  Dalam  kurun  waktu  ±  20  tahun terdapat  kecenderungan  terjadi  peningkatan luas dan intensitas serangan uret di Indonesia. Peningkatan  tersebut  seiring  dengan  semakin bergesernya  tanaman  tebu  ke  lahan  kering. Hasil  survei  pada  tahun  1990  menunjukkan hanya  6  pabrik  gula  (PG)  yang  memiliki masalah  dengan  serangan  uret  (Suhartawan, 1993).
Berbeda  dengan  survey  sebelumnya, hasil  survei  yang  dilaksanakan  pada  tahun 2008-2009  diketahui  semakin  banyak  kebun tebu  yang  terserang  uret. Kebun-kebun tersebut tersebar di 11 PG di Jawa Timur (PG Asembagus,  PG  Semboro,  PG  Prajekan,  PG Jatiroto,  PG  Ngadirejo,  PG  Pesantren  Baru, PG  Mrican,  PG  Jombang  Baru,  PG  Pagotan, PG  Purwodadi  and  PG  Sudono),  4  PG  di Jawa  Tengah  (PG  Rendeng,  PG  Jatibarang, PG  Sragi  dan  PG  Gondang  Baru)  serta  1  PG di  DIY  (PG  Madubaru)  dan  1  PG  di  Jawa Barat  (PG  Karangsuwung)  (Achadian et  al ., 2012).    Spesies  yang  paling  dominan menyerang tebu dan menimbulkan kerusakan parah  adalah Lepidiota  stigma (Coleoptera: Scarabaeidae)  (Suhartawan,  1993;  Achadian et al ., 2012).
Uret  merupakan  hama  yang  sangat merugikan karena aktivitas makannya merusak  akar  tebu  sehingga  mengurangi penyerapan air dan hara. Gejala serangan uret akan  terlihat  jelas  ketika  musim  kering dimana  daun  tebu  menjadi  menguning, batang roboh dan tanaman tebu mati sehingga menyebabkan kerusakan  yang semakin parah
pada  tanaman  keprasan.  Serangan  uret  dapat menyebabkan  penurunan  produktivitas  tebu dan  kualitas  gula.  Kehilangan  hasil  akibat serangan  uret  diperkirakan  dapat  mencapai 30%  dan  dapat  menyebabkan  gagal  panen jika  terjadi  serangan  sangat  berat  (Samoedi, 1993; Pramono, 2005).
Penggunaan  jamur  entomopatogenik sebagai  bagian  dari  PHT  hama  uret  telah banyak  dilakukan  di  beberapa  negara  di dunia.  Di  Australia,  jamur Metarhizium anisopliae digunakan  untuk  mengendalikan hama  uret  ( Dermolepida  arbohirtum ).  Jamur tersebut  juga  telah  tersedia  secara  komersial. Hasil percobaan Chelvi et al. (2011), aplikasi Metarhizium  anisopliae juga  efektif  untuk mengendalikan hama uret ( Holotrichia serrata ) pada tanaman tebu di India. Aplikasi jamur merupakan pengendalian jangka panjang  namun  lebih  ramah  lingkungan dibanding penggunaan insektisida (Samson et al. , 2001).
Gejala  infeksi  pada L.  stigma yang disebabkan  oleh M.  anisopliae adalah  mati dalam  keadaan  kaku,  berwarna  putih,  dan tidak  berbau.  Hal  tersebut  terjadi  karena semua  jaringan  dan  cairan  dalam  tubuh serangga  habis  diserap  oleh  jamur,  sehingga serangga mati dengan tubuh mengeras seperti mumi.  Hifa  tumbuh  keluar  permukaan serangga melalui spirakel, mulut dan membran intersegmen (Kershaw et al ., 1999). M.  anisopliae yang  telah  tumbuh  kemudian berubah  menjadi  hijau  ketika  konidia  sudah masak. Perubahan warna dari awal ditemukannya L.  stigma yang  diselimuti jamur  berwarna  putih  hingga  berwarna  hijau kurang lebih selama 3-4 hari.
Di Indonesia pemanfaatan jamur
Metarhizium telah dilakukan untuk mengendalikan  hama  kopi,  kakao,  kelapa, tebu  dan  lain-lain.  Hasil  penelitian  Harjaka (2006  dan  2010)  menyebutkan  bahwa  jamur M. anisopliae yang diisolasi dari Phyllophaga helleri mampu  menyebabkan  mortalitas terhadap  larva L.  stigma instar  ketiga. Sementara  itu  P3GI  telah  menghasilkan produk  jamur M.  anisopliae yang  diisolasi dari larva L. stigma dan terbukti efektif untuk pengendalian L. stigma (Achadian, 2014) .
Pengendalian uret yang hanya bertumpu pada  aplikasi  insektisida  umumnya  tidak menyelesaikan  permasalahan  uret  di  lapang. Bahkan di beberapa lokasi seperti di wilayah Purworejo,  hama  uret  masih  menjadi  hama utama yang belum dapat dikendalikan dengan baik. Aplikasi insektisida sintetik secara terus menerus  berpotensi  menimbulkan  dampak negatif  terhadap  keseimbangan  ekosistem antara  lain  pencemaran  lingkungan  serta resistensi  dan  resurjensi  hama.  Untuk mengatasi  permasalahan  tersebut,  pengen- dalian biologis dengan mikroba yang bersifat entomopatogenik merupakan alternatif teknik pengendalian  yang  dapat  dikembangkan. Tujuan Penelitian ini adalah untuk mengetahui  kemampuan  5  isolat Metarizium anisopliae yang  diperoleh  dari  beberapa instansi  dalam  pengembangan  agen  hayati  di wilayah Purworejo.

## METODE

## Waktu dan tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laborato- rium  Proteksi  Tanaman  Pusat  Penelitian Perkebunan Gula Indonesia (P3GI) Pasuruan. Uji  efikasi  dilakukan  mulai  bulan  Juni- Agustus 2016.

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  yaitu  isolat M. anisopliae yang berasal dari lembaga berbeda
yaitu  dari  Pasuruan  (M1),  Jombang  (M2), Malang  (M3),  Bogor  (M4),  dan  Yogyakarta (M5),  larva  uret L.  stigma instar  3,  PDA ( Potatoes  Dextrose  Agar )  ( Difco TM BD Becton ),  PDB  ( Potatoes  Dextrose  Broth ), beras  jagung,  tanah  steril,  air  steril, aluminium  foil,  kapas, plastic  wrap ,  alkohol 70%,  Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini antara lain: cawan petri, jarum ose, tabung reaksi  ( Pyrex ), Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC)  ( Bass  Aire ),  autoklaf,  pipet  200- 1000µl  ( Socorex ),  pembakar  Bunsen,  tabung Erlenmeyer  ( Iwaki  Pyrex ),  sprayer  mini, haemocytometer , sekop kecil, pinset, spatula, mikroskop  ( Axiostar-zeiss ),  gelas  beker ( Pyrex  Iwaki  Glass ),  batang  pengaduk, kantong  plastik  (1  dan  0,5  kg),  pipa  PVC (diameter 3 cm), termometer ruangan, ember, vial  plastik  (cepuk),  timbangan  analitik ( Sartorius laboratory ), pengaduk/ shaker ( Branstead/Thermolyne ), pH meter ( Cyberscan 1000pH),  kamera  serta  peralatan potong dan tanam bibit.

## Prosedur penelitian
Penelitian  diawali  dengan  penyiapan serangga uji yaitu larva/uret L. stigma. Larva instar  3  diambil  dari  areal  perkebunan  tebu rakyat di Kabupaten Purworejo Jawa Tengah, yang merupakan daerah endemi serangan uret L.  stigma. Pengumpulan  dilakukan  dengan cara  menggali  lubang  di  sekitar  perakaran tanaman tebu.  Uret yang diperoleh kemudian dikumpulkan  dalam  kotak  dan  diberi  media tanah  setempat.    Selain  itu  juga  dilakukan pengambilan tanah untuk media pemeliharaan uret.
Uret dari lapang kemudian dipelihara di laboratorium  dalam  vial  plastik  (cepuk) ukuran  6  cm  x  8  cm  secara  invidual menggunakan  media  tanah  dari  Purworejo yang  sudah  disterilkan  dan  diberi  makanan berupa  potongan  benih  tebu  (bagal  mata  1 yang telah berakar). Pemberian atau penggantian  pakan  dilakukan  setiap  tujuh
hari.  Untuk  menjaga  kelembaban,  media tanah  diberikan  air  steril  sebanyak  10  ml. Pemeliharaan  dilakukan  selama  2  minggu sebelum  dilakukan  pengujian  untuk  memilih serangga uji yang betul-betul sehat.
Isolat jamur M. anisopliae ditumbuhkan pada  media  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar ) dalam  tabung  reaksi  selama  14  hari.    Setiap isolat jamur kemudian diperbanyak pada  150 ml  media  PDB  ( Potato  Dextrose  Broth ) dalam tabung Erlenmeyer dengan pH 5,1 dan digojok  selama  3  hari.  Jamur  yang  sudah tumbuh pada media PDB kemudian diperbanyak pada media alami berupa jagung yang  sudah  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu 120 o C, tekanan 1 atm selama 15 menit. Jamur  pada  media  jagung  diinkubasikan selama  20  hari  untuk  kemudian  digunakan dalam uji efikasi.
Pada  pengujian  efikasi  isolat  jamur M. anisopliae, inokulasi jamur dilakukan dengan menggunakan  metode  tular  media  seperti yang  digunakan  oleh  Harjaka et  al (2011) yaitu  dengan  cara  mencampur  biakan  jamur pada  media  jagung  dengan  tanah  sebagai media  pemeliharaan  larva L.  stigma dengan konsentrasi  10 9 konidia/gr  media  jagung. Sebelum  inokulasi  dilakukan  penghitungan kerapatan konidia setiap isolat jamur menggunakan  rumus  (Gabriel  &  Riyatno, 1989):
K = t × d × 10 6 n × 0,25
Keterangan:  K=  konsentrasi  konidia,  t=  jumlah  total konidia  dalam  kotak  sampel  yang diamati,  d=  faktor  pengenceran,  n= jumlah kotak sampel yang diamati, 0,25= faktor  koreksi  penggunaan  kotak  sampel skala kecil dalam Haemcytometer .
Uji efikasi dilakukan dalam 2 tahap. Uji efikasi  tahap  pertama  dilakukan  terhadap    5 isolat M.  anisopliae dan  uji  efikasi  tahap  2 dilakukan  terhadap  2  isolat  yang  terpilih. Pada uji efikasi tahap 2 dilakukan penyetaraan  kerapatan  spora  dari  kedua
isolat.    Percobaan  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  dengan  6  perlakuan,  3  kali ulangan  dan  setiap  unit  perlakuan  digunakan 10 ekor larva L. stigma .  Adapun  6 perlakuan yang  diuji  adalah:  1)  Isolat  M1  (P3GI, Pasuruan); 2) Isolat M2 (BBP2TP, Jombang); 3) Isolat M3 (Balittas, Malang); 4) Isolat M4 (PPBBI,  Bogor);  5)  Isolat  M5  (UGM, Yogyakarta); dan 6) kontrol.

## Analisis Data
Data  mortalitas  uret  dianalisis  dengan menggunakan  uji Anova  One  Way .  Apabila perlakuan  dinyatakan  berpengaruh,  maka dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT)  pada  taraf  5%.  Data  uji  efikasi  tahap 2,  dari  2  isolat  terpilih  dibandingkan  dengan menggunakan Uji T. Analisis Data menggunakan program Statistix versi 8.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Morfologi  Isolat  Jamur  Entomopatogen Hama Uret
Hasil  pengamatan  morfologi  kelima isolat  jamur M.  anisopliae yang  digunakan dalam  penelitian  ini  seperti  disajikan  pada Gambar 1. dan Tabel 1.
Hasil pengamatan makroskopis menunjukkan bahwa pada awal pertumbuhan koloni  jamur  berwarna  putih  kemudian setelah beberapa hari berubah warna menjadi hijau.  Setiap  isolat  menunjukkan  perbedaan warna  dan  ketebalan  miselium.  Isolat  yang berasal  dari  M5  memiliki  warna  lebih  muda dan  lebih  tebal  dibandingkan  dengan  isolat lainnya.  Isolat  M1  dan  M4  memiliki  warna hijau  zaitun  (agak  tua)  dan  miselium  terlihat lebih  tipis  dibandingkan  dengan  isolat  M5 dan  M2.  Diameter  koloni  jamur  pada  media PDA  juga  menunjukkan  perbedaan  satu dengan yang lain. Hal ini menandakan bahwa masing-masing  isolat  mempunyai  kecepatan
pertumbuhan  yang  berbeda-beda.  Jamur M. anisopliae M1  dan  M5  menunjukkan pertumbuhan yang lebih cepat dari pada isolat lainnya  yaitu  dengan  diameter  mencapai  3,5 cm  dan  2,5  cm  pada  hari  ke  7  serta  5,06  cm dan 5,5 cm pada hari ke 14.
Hasil  pengamatan  mikroskopis  pada setiap  isolat  menunjukkan  bahwa  secara umum  konidia  berbentuk  silindris  dan  hialin serta membentuk rantai. Ukuran konidia pada setiap isolat menunjukkan adanya perbedaan. Panjang konidia pada isolat M. anisopliae M2 adalah  5,84  µm  dan  isolat  M5  3,44  µm. Kedua  isolat  tersebut  yang  memiliki  konidia lebih panjang dari isolat lainnya.
Berdasarkan hasil pengamatan makroskopis dan mikrospis tersebut menunjukan  bahwa  kelima  isolat  jamur
tersebut  adalah M.  anisopliae seperti  yang digambarkan oleh Barnett  dan Hunter (1972) yang  menyatakan  bahwa M.  anisopliae memiliki  konidia  yang  bersel  satu  berwarna hialin, berbentuk silindris. Konidiofor tersusun  tegak,  berlapis,  dan  bercabang dipenuhi  dengan  konidia.  Koloni  jamur berwarna  hijau  zaitun,  panjang  konidiofor mencapai 75 µm, bertumpuk-tumpuk diselubungi  oleh  konidia  berbentuk  apikal berukuran  6-9,5x1,5-3,9  µm  dan  bercabang- cabang.  Kelima  isolat  jamur M.  anisopliae yang digunakan dalam penelitian menunjukkan  adanya  perbedaan  satu  sama lainnya  yaitu  dalam  hal  warna  koloni, kecepatan pertumbuhan serta ukuran konidia. Oleh  karena  itu  patut  diduga  bahwa  antar isolat tersebut adalah strain yang berbeda.
(a)                                         (b)                                            (c)
d
(d)                                                (e)
Gambar 1.  Isolat jamur M1 (a), M2 (b), M3 (c), M4 (d), dan  M5 (e) pada umur 2 minggu.
Figure 1. Isolates of M1 (a), M2 (b), M3 (c), M4 (d), and M5 (e) at 2 weeks old
Tabel 1. Morfologi isolat M. anisopliae
Table 1. Morphology of M. anisopliae isolates
Kode isolat Isolate code Ukuran konidia PxL(µm) Conidia size Diameter koloni umur 7 hari (cm) Colony diameter in 7 days (cm) Diameter koloni umur 14 hari (cm) Colony diameter in 14 days (cm) Gambar konidia M. anisopliae M. anisopliae conidia picture M1 2,74x1,43 3,5 5,06 M2 5,84x1,31 1,3 3,08 M3 2,93x1,64 2,25 3,30
M4 2,76x1,64 1,9 2,20 M5 3,44x1,29 2,5 5,50

## Pengujian Efikasi Tahap 1
Hasil  pengamatan  kerapatan  konidia jamur  yang  diaplikasikan  disajikan  pada Tabel  2.    Adapun  persen  mortalitas  uret tersaji  pada  Tabel  3.  Isolat  jamur  M3 memiliki  nilai  kerapatan  konidia  yang
tertinggi  dibandingkan  isolat  jamur  yang lain  yaitu  mencapai  5,07  .10 9 .    Isolat  M1, M2,  dan  M4  memiliki  nilai  kerapatan  yang hampir  sama  yaitu  berkisar  2,16-2,7  .10 9 . Sementara itu jamur M5 memiliki kerapatan konidia  yang  lebih  rendah  dari  jamur  M3
tetapi  lebih  tinggi  dari  yang  lainnya  yaitu 4,7 .10 9 .
Tabel  2.  Kerapatan  konidia  5  isolat  jamur M. anisopliae yang diaplikasikan pada uji efikasi
Table 2. Conidia density of 5 M. anisopliae isolates  applied  on  the  efficacy test
No.
No . Isolat Isolates Kerapatan konidia Jamur Fungus conidia density 1 M1 (Pasuruan) 2,40 x 10 9 2 M2 (Jombang) 2,16 x 10 9 3 M3 (Malang) 5,07 x 10 9 4 M4 (Bogor) 2,70 x 10 9 5 M5 (Yogyakarta) 4,70 x 10 9
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  dari  5 isolat  jamur  yang  diuji  yang  dapat menyebabkan kematian uret hingga pengamatan  pada  minggu  ke-6  hanya  ada dua  isolat  yaitu  M1  dan  M5.  Namun demikian  tingkat  mortalitas  uret  relatif rendah,  yaitu  berkisar  10-23%.  Secara statistik  kedua  perlakuan  berbeda  nyata dengan kontrol. Tingkat mortalitas M5 lebih tinggi  dan  berbeda  nyata  bila  dibandingkan dengan  M1.  Sementara  itu  tiga  isolat lainnya  tidak  menyebabkan  kematian  pada uret.
Apabila dikaitkan antara nilai kerapatan konidia dengan tingkat mortalitas uret tampak bahwa isolat M3 memiliki nilai kerapatan yang tinggi tetapi tidak memberikan kematian pada uret.  Sementara itu isolat M5 dengan nilai kerapatan hampir sama  dengan  M3  berpengaruh  dalam mematikan  uret.    Isolat  M1,  M2  dan  M4 memiliki  nilai  kerapatan  yang  hampir  sama tetapi  yang  mampu  mematikan  uret  hanya isolat  M1.  Nilai  kerapatan  konidia  ternyata
tidak  berhubungan  dengan  tingkat  virulensi masing-masing isolat terhadap serangga uji.
Hasil penelitian menunjukkan masing- masing  isolat  memiliki  tingkat  virulensi yang  berbeda.  Geden et  al. (1995) menyatakan bahwa isolat yang lebih virulen memiliki pertumbuhan yang lebih cepat dan miselianya  lebih  padat.  Sebaliknya  isolat yang avirulen/virulensi rendah tumbuh lebih lambat  dan  sering  terkontaminasi  bakteri. Isolat M1 dan M5 memiliki tingkat virulensi yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan  3 isolat  lainnya  karena  kedua  isolat  tersebut memiliki  pertumbuhan  yang  lebih  cepat yang  ditunjukkan  dengan  diameter  koloni yang  lebih  besar  bila  dibandingkan  dengan ke-3  isolat  lainnya  (Tabel  1).    Pada  isolat M3  selain  pertumbuhannya  lambat  juga dalam  proses  pemurniannya  sering  kali mengalami kontaminasi.
Tabel  3.  Persentase  mortalitas  uret  pada uji efikasi  tahap  pertama  5  isolat jamur M. anisopliae .
Table 3. Percentage of white grub mortality in  the  first  stage  efficacy  test  of  5 fungal isolates of M. anisopliae .
No.
No. Perlakuan isolat
Treatment Persentase mortalitas uret Percentage white grub mortality 1 M0 (Kontrol) 0  c 2 M1 (Pasuruan) 10  b 3 M2 (Jombang) 0  c 4 M3 (Malang) 0  c 5 M4 (Bogor) 0  c 6 M5 (Yogyakarta) 23,33  a BNT 5 % LSD 5 % 4,19 4,19
Keterangan:  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang sama  pada  kolom  yang  sama  tidak berbeda nyata pada uji BNT 5%
Note: Number followed by  different  letters indicated significant differences ( α=0,05%)
Isolat  M1  dan  M5  merupakan  isolat jamur M.  anisopliae yang  telah  dilaporkan mampu  mengendalikan Lepidiota  stigma di lapang  (Achadian,  2014  dan  Harjaka et  al ., 2011). Isolat M2 dan M3 juga diinformasikan  oleh  pemilik  isolat  dapat menginfeksi L.  stigma. Tampaknya  dalam penelitian ini isolat M2 dan M3 menunjukkan  tingkat  patogenisitas  atau virulensi yang lebih rendah dibanding isolat M1  dan  M5  sehingga  6  minggu  setelah aplikasi tidak ada uret yang mati. Sementara itu  untuk  isolat  M4,  berdasarkan  informasi dari  pemilik  produk,  isolat  tersebut  belum pernah diujicobakan untuk L. stigma.
Jamur  entomopatogen  mempunyai kespesifikan inang. Jamur akan menunjukkan  virulensi  yang  tinggi  apabila diaplikasikan  pada  inang  aslinya  atau spesies serangga yang mempunyai hubungan  dekat  dengan  serangga  inangnya (Feng et  al .,  1994).    Asal  isolat  juga mempengaruhi  keragaman  virulensi  jamur terhadap serangga inang karena berhubungan  dengan  jenis  atau  ras  atau strain jamur (Bedjo et al ., 2000).
Dari  hasil  uji  efikasi  diketahui  hanya ada  2  isolat  yang  dapat  membunuh  uret L. stigma yaitu M1 dan M5.  Gejala infeksi M. anisopliae ditunjukan  pada  Gambar  2. Kedua  isolat  tersebut  menunjukkan  tingkat mortalitas  yang  berbeda  nyata.    Perbedaan tingkat mortalitas uret pada perlakuan isolat M1  dan  M5  kemungkinkan  disebabkan perbedaan kerapatan konidia yang diaplikasikan.    Dari  Tabel  2  terlihat kerapatan konidia isolat M5 yang diaplikasi adalah  4,7  x  10 9 yaitu  2  kali  lipat  dari  nilai kerapatan  konidia  isolat  M1  yang  sebesar 2,4  x  10 9 .    Prayogo et  al .  (2005) menyatakan  bahwa  kerapatan  konidia  yang diaplikasikan  pada  serangga  target  akan mempengaruhi efektivitas jamur M. anisopliae .      Semakin  tinggi  kerapatan konidia semakin tinggi pula mortalitas pada serangga. Oleh karena itu untuk mengetahui  isolat  mana  yang  lebih  efektif maka dilakukan uji lanjutan untuk membandingkan  efikasi  antara  isolat  M1 dan M5 pada tingkat kerapatan konidia yang sama yaitu ± 4 x 10 9 .
Gambar 2. Gejala larva L. stigma yang terinfeksi M. anisopliae , A). larva sehat, B). larva yang terinfeksi jamur M. anisopliae asal Pasuruan 9 hari setelah aplikasi, C). larva  yang  terinfeksi  jamur M.  anisopliae asal  Yogyakarta  9  hari  setelah aplikasi
Figure 2. Symptoms of M. anisopliae infection on larvae of L. stigma, A) healthy larvae, B)  larvae  of  L.  stigma  at  9  days  after  infection  of  M.  anisopliae  from Pasuruan,  C)  larvae  of  L.  stigma  at  9  days  after  infection  of  M.  anisopliae from Yogyakarta . A C B

## Pengujian Efikasi Tahap 2
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa tingkat  mortalitas  uret  pada  perlakuan  isolat M1  mencapai  30  %  dan  isolat  M5  mencapai 20  %.  Dengan  aplikasi  jamur  pada  tingkat kerapatan  jamur  yang  sama  (±  4  x  10 9 ), mortalitas  M1  lebih  tinggi  dibandingkan  M5 walaupun hasil uji T antara M1 dan M5 tidak berbeda  nyata.  Dalam  uji  banding  ini,  isolat M1  menunjukan  mortalitas  uret  yang  lebih tinggi  sejak  minggu  pertama  hingga  minggu ke-4  (Gambar 3).
Dari  keseluruhan  uji  efikasi  tampak bahwa tingkat mortalitas uret di laboratorium tergolong  rendah.  Rendahnya  persentase mortalitas tersebut diduga disebabkan kondisi lingkungan  laboratorium  yang  cukup  panas dengan  kelembaban  yang  rendah  sehingga kurang  mendukung  pertumbuhan  jamur. Rata-rata  suhu  ruangan  selama  pengamatan adalah  30,2 0 C  dengan  kelembaban  rata-rata 66,6%.  Menurut  Prayogo  (2005)  suhu optimum  pertumbuhan  jamur  adalah  22-27° C  dan  suhu  optimum  pada  waktu  infeksi berkisar  antara  23-25°C.  Sementara  itu
menurut  Bidochka et  al. ,  (2000)  kelembaban optimum  pertumbuhan  jamur  adalah  di  atas 90%. Virulensi jamur akan semakin menurun jika  kelembaban  udara  juga  menurun.  Pada kelembaban udara kurang dari 86%, virulensi jamur akan terus menurun.

## KESIMPULAN
Kemampuan isolat Metarizium anisopliase berbeda-beda  tergantung  pada tingkat  virulensi  masing  masing.  Spesifitas isolat  dengan  asal  inang  berpengaruh terhadap  kemampuan  jamur Metarizium anisopliae .  Isolat  M5  memiliki  hasil  uji efikasi  tahap  pertama  yang  lebih  tinggi dibandingkan isolat lainnya. Pada penyetaraan nilai kerapatan spora menunjukkan  isolat  M1  memiliki  nilai mortalitas  yang  lebih  tinggi  dibanding  isolat M5 meskipun tidak berbeda nyata. Ini berarti kedua  isolat  M1  dan  M5  memiliki  potensi sebagai  agen  pengendali  hayati L.  stigma pada tebu.

## Gambar 3. Perkembangan mortalitas uret pada uji banding isolat M1 dan M5
Figure 3.   The development of grub’s mortality in the comparative test of isolates M1
and M5 M1, 30 M5, 20 0 5 10 15 20 25 30 35 minggu 1 minggu 2 minggu 3 minggu 4 % m or ta lit as u re t

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada Badan Litbang Pertanian,
Kementerian  Pertanian  selaku  penyandang dana  penelitian.  Ucapan  terimakasih  juga disampaikan  kepada  Ir.  I  Gusti  Agung  Ayu Indrayani,  MP  (Balittas),  peneliti  UGM, BBP2TP  dan  PPBBI  untuk  bantuan  isolat jamur, Direktur, staf tanaman, petani, petugas lapang  PT  PG  Madu  Baru  dan  Herwan Cahyono  Adi,  SP.  (P3GI)  serta  Istiqomah, SP.  (Mahasiswi  UB)  atas  bantuan  yang diberikan terhadap pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Achadian, E.M., Kristini, A., Putra L. K. and Dian  Pratiwi,  T.  2012.  Hama-hama pertanaman  tebu  di  Jawa:  Sebaran, Intensitas  Serangan  dan  Keberadaan Musuh Alami Hama.  MPG 48 (2): 73 – 83
Achadian,  E.M.    2014.    Pengendalian Terpadu  Hama  Terpadu  Uret  di Wilayah  PTPN  X.    Kerjasama  P3GI dengan  PTPN  X.  Laporan  Kerjasama. 19 hlm (tidak dipublikasikan).
Barnett  H.L.  and  Hunter  B.B.  1972. Illustrated  Genera  of  Imperfect  Fungi.
Third  Edition.  Burgess.  Publishing Company. Minneapolis, Minnesota. 241 p.
Bedjo,  Arifin,  M.,  Rahayu,  M.  &  Sumartini.
2000. Pemanfaatan Nuclear Polyhedrosis Virus, Bacillus thuringiensis dan Metarhizium
anisopliae sebagai  Biopestisida  untuk
Pengendalian  Hama  Kedelai.  Laporan Hasil  Penelitian  The  Participatory Development of Agriculture Technology Project (PAATP).
Balitkabi. 32 p.
Bidochka,  M.J.,  Kamp,  A.M.  &  Decroos, J.N.A.  2000.  Insect  pathogenic  fungi:
from  genes  to  populations.  Fungal Pathol, 42:171-193.
Chelvi, C.T., W. R. Thilagaraj and R. Nalini. 2011.  Field  efficacy  of  formulations  of microbial insecticide Metarhizium anisopliae (Hyphocreales:
Clavicipitaceae)  for  the  control  of sugarcane white grub Holotrichia serrata F  (Coleoptera  :Scarabidae)  J.
Biopest, 4 (2): 186-189
Feng, M.G., Poprawski, T.J. & Khachatourians, G.G. 1994. Formulation  and  application  of  the entomopathogenic  fungus Beauveria bassiana for insect control. J.
Biocontrol  Science  and  Technology, 4:3-34.
Gabriel,  B.P.  &  Riyatno.  1989. Metarhizium anisopliae (Metsch.)  Sor:  Taksonomi,
Patologi,  Produksi,  dan  Aplikasinya. Jakarta: Proyek Pengembangan Perlindungan Tanaman Perkebunan Departemen Pertanian. 25 p.
Geden,  C  J.,  A,  Rutz  D.,  C,  Steinkraus,  D.
1995.  Virulence  of  different isolats  and formulations  of Beauveria  bassiana for house flies and the parasitoid Muscidifurax  raptor. Bio  Control, 5:615-621.
Harjaka,  T.  2006.  Isolasi  jamur Metarhizium anisopliae pada hama uret perusak akar padi  gogo.  Prosiding  Seminar  Hasil Penelitian Pertanian.  Fakultas Pertanian UGM Hal : 200-205.
Harjaka, T. 2010. Susceptibility of  Lepidiota stigma  to  Metarhizium  anisopliae. Papper  presented  on  the  International Seminar  of  Food  Safety  and  Food Security. Dec, 1-2. 2010, Yogyakarta.
Harjaka,  T.  Martono,  E.,  Witjaksono, Sumarminto, B.H.  2011.  Potensi jamur Metharizhium anisopliae untuk pengendalian  uret  perusak  akar  tebu. Pros.    Seminar  Nasional  Pesnab  IV. Jakarta 15 Oktober 2011. Hal : 91-102.
Kershaw,  M.J.,  Moorhouse,  E.R.,  Bateman,
R.,  Reynolds,  S.E.,  Charnley,  A.K. 1999.  The  role  of  destruxin  in  the pathogenecity of
Metarhizium
anisopliae  for  three  species  of  insect. Journal  of  Invertebrate  Pathology, 74:213-223.
Pramono,  D.    2005.  Seri  pengelolaan  hama tebu  secara  terpadu.  Dioma.  Malang. hal. 79 – 145
Prayogo,  Y.,  Tengkano,  W.  &  Marwoto.
2005. Prospek cendawan entomopatogen Metarhizium  anisopliae untuk mengendalikan ulat grayak
Spodoptera  litura pada  kedelai.  J. Litbang Pertanian, 24(1):19-23..
Samoedi,  D.    1993.    Hama-hama  Penting Pertanaman  Tebu  di  Indonesia.    Pusat Penelitian  Perkebunan  Gula  Indonesia. 36 hlm.
Samson,  P,  L.  Robertson,  P.  Bakker,  R. Cocco,  A.  Horsfield,  D.  Logan,  C. Kettle,  W.  Harris,  P.  Allsopp,  N. McGill,  R.  Milner    and  G.  Bullard. 2001.    Development  of Metarhizium - based  biopesticides  for  use  against sugarcane  whitegrubs  in  Australia. Proc. Int. Soc. Sugar Cane Technol. 24, 354-360
Suhartawan.  1993.    Penyebaran  Hama-Hama Tebu  Penting  di  Indonesia  Pada  Saat Ini. Berita P3GI (6) : 58-64.