KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8(2), 101-108
P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278

## KONSENTRASI HAMBAT MINUMUM  ENZIM BROMELIN DARI KULIT
DAN BONGGOL NANAS ( Ananas comosus (L.) Merr) TERHADAP Staphylococcus aureus
MINUMUM INHIBITORY CONCENTRATION OF BROMELIN ENZYME FROM THE SKIN AND CORE OF PINEAPPLE (Ananas comosus (L.) Merr) AGAINST Staphylococcus aureus
Desi Sagita 1,* , Barmi Hartesi 2 , Kurnia Fitri 3 , Lufita 3
1 Program Studi Farmasi ,Universitas Adiwangsa, Jambi, Indonesia
2 Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani , Cimahi, Indonesia 3 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu, Jambi, Indonesia
Corresponding author email: daisyfarmasi@gmail.com daisyfarmasi@gmail.com

## ABSTRAK
Enzim  bromelin  adalah  enzim  proteolitik  yang  memiliki  kemampuan  menghidrolisis protein sehingga bisa berperan sebagai antibakteri. Enzim bromelin dapat diisolasi dari kulit, buah, bonggol Nanas ( Ananas comosus (L.) Merr ). Tujuan penelitian ini adalah untuk  mendapatkan  konsentrasi  enzim  bromelin  dari  kulit  dan  bonggol  buah  Nanas dalam  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  Bromelin  diisolasi  dengan cara  ekstraksi  dengan  buffer  pospat,  dipurifikasi  dengan  ammonium  sulfat  60%.  Uji aktivitas  antibakteri  enzim  bromelin  dari  kulit  dan  bonggol  Nanas  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dilakukan  secara  invitro  menggunakan  difusi  cakram  dengan mengukur zona hambat.  Konsentrasi enzim bromelin yang digunakan adalah 1 %, 2%, 3%  dan  4%  dengan  antibiotik  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif.  Enzim  bromelin dari  kulit  dan  bonggol  Nanas  pada  konsentrasi  4%  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan zona hambat masing masing 19,23 mm dan 18,30 mm. Konsentrasi hambat minimum enzim bromelin dari kulit dan bonggol Nanas adalah 1% dengan  zona  hambat  masing-masing  11,45  mm  dan  12,24  mm.  Enzim  bromelin  dari kulit  dan  bonggol  Nanas  memberikan  aktivitas  yang  sama  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Kata kunci : Bromelin; Kosentrasi Hambat Minumum; Presipitasi Amonium Sulfat.

## ABSTRACT
The Bromelains are proteolytic enzymes that have the ability to hydrolyze proteins so they can act as antibacterial. Bromelain enzymes can be isolated  from the peel,  fruit, and  stem  of  pineapple  (Ananas  comosus  (L.)  Merr).  The  purpose  of  this  study  was  to
obtain the concentration of bromelain enzymes from the peel and stem of Pineapple in inhibiting the growth of Staphylococcus aureus. Bromelain was isolated by extraction with  phosphate  buffer,  purified  with  60%  of  ammonium  sulfate.  Antibacterial  activity tests of bromelain enzymes from the peel and stem of pineapple against Staphylococcus aureus  were  carried  out  in  vitro  using  disc  diffusion  by  measuring  clear  zones.  The bromelain enzyme concentration used was 1%, 2%, 3% and 4% with chloramphenicol antibiotics as a positive control. The results showed that bromelain enzymes from peel and  stem  of  pineapple  at  4%  concentration  inhibited  the  growth  of  Staphylococcus aureus  with  inhibition  zones  of  19.23  mm  and  18.30  mm  respectively.  The  minimum inhibitory concentration of bromelain enzymes from peel and stem of pineapple was 1% with inhibition zones of 11.45 mm and 12.24 mm respectively. Bromelain enzymes from the  peel  and  stem  of  pineapple  provide  the  same  activity  in  inhibiting  the  growth  of Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords : Bromelain;  minimum  inhibition  concentration;  ammonium  sulfate precipitation

## PENDAHULUAN
Buah    Nanas  mengandung vitamin  A  dan  C,  kalsium,  fosfor, magnesium,  besi,  natrium,  kalium, dekstrosa, sukrosa, dan enzim bromelin.  Enzim  ini  terdapat  dalam semua jaringan tanaman nanas (Fajarna, Putri, and Sulaiha 2021). Dari hasil penelitian, diketahui bahwa Nanas memiliki  kandungan  bromelin  yang tinggi  baik  pada  kulit,  daging  buah, ataupun di bonggol Nanas (Pavan et al .
2012).  Enzim  bromelin  merupakan enzim proteolitik yang dapat memutuskan  ikatan  peptida  dalam protein menjadi asam amino sederhana. Bromelin merupakan komponen utama dari  enzim  proteolitik  sulfhidril. Bromelin juga mengandung peroksidase,  asam  fosfatase,  sebagian inhibitor protease dan mampu berikatan dengan  kalsium  (Tochi et  al .  2008).
Bromelin terdapat dalam buah maupun limbah  nanas.  Buah  nanas  yang  muda memberikan  jumlah  bromelin  yang
lebih  banyak  dari  pada  yang  matang (Masri  2014).  Enzim  ini  stabil  pada rentang  pH  4.5-9.8  (Tochi et  al .  2008, Bhattacharyya 2008). Aktivitas bromelin  optimum  pada  suhu  50  °C dan  aktivitas  nya  menurun  jika  berada pada suhu diatas suhu 50 °C. Bromelin akan  memberikan  konformasi  yang baik  dengan  aktivitas  maksimal  jika berada  pada  pH  6.5-7  (Masri  2014). Enzim  bromelin  mempunyai  pH optimum yang berbeda jika berasal dari sumber yang berbeda. Enzim bromelin yang  diisolasi  dari  kulit  Nanas memiliki  pH  optimum  yang  berbeda dibandingkan  enzim  bromelin  yang diisolasi dari bonggol Nanas.
Secara  konvensional  bromelin digunakan  sebagai  pengempuk  daging.
Secara farmakologi, bromelin digunakan  untuk  mengobati  berbagai penyakit  seperti  agregasi  platelet, antiinflamasi, fibrinolisis, induksi sitokin,  mengobati  luka  bakar  dan
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8(2), 101-108
P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278
antibakteri (Bhattacharyya 2008, Nadzirah et  al .  2013).  Bromelin  dapat diserap  dengan  baik  di  saluran pencernaan  tanpa  kehilangan  aktivitas biologinya  dan  tidak  memberikan  efek negativ    pada  kesehatan  setelah penggunaan  jangka  panjang ( Nadzirah et al . 2013, Bhattacharyya 2008).

## METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  kulit  dan  bonggol buah  Nanas,  dapar  fosfat  pH  7.0, amonium  sulfat  (Emsure®),  aquadest, bakteri  uji  Staphylococcus  aureus,
Na2CO3, KH2PO4, NaOH (Emsure®), Ammonium sulfat (Merck®), membrane  dialisa  selofan,  DMSO (Dimethyl Sulfoksida), media  Nutrient
Broth  (Merck®)  dan  media  Mueller Hinton  Agar(Difco®).  Bovine  Serum Albumin (BSA).

## Tahapan Penelitian
1. Pembuatan  ekstrak  kasar  bonggol dan kulit nanas
Sebanyak  1  kg  Bonggol  dan  kulit Nanas    dicuci  dengan  aquadest, dipotong-potong dan diblender dengan buffer fosfat, untuk kemudian  di  saring.  Filtrate  yang diperoleh  disentrifuse  4000  rpm  10 menit.
2. Pengendapan  dengan  ammonium sulfat Fitrat  dari  bonggol  dan  kulit  Nanas dipurifikasi dengan metode presipitasi ammonium sulfat. Pengendapan dilakukan dengan cara menambahkan  ammonium  sulfat
sedikit demi sedikit ke dalam ektrak kasar  bromelin  sehingga  jenuh sambil diaduk menggunakan magnetik stirrer selama 24 jam pada suhu  4ºC.  Campuran  di  sentrifugasi 4000  rpm  selama  10  menit  untuk memisahkan  ekstrak  kasar  enzim dari  sisa-sisa  jaringan  Nanas.  Hasil sentrifugasi akan didapatkan supernatan dan pelet yang merupakan  ekstrak  kasar  enzim bromelin.

## 3. Dialisis ekstrak kasar bromelin
Pellet yang merupakan ekstrak kasar bromelin  di  diresuspensikan  dengan dapar  fosfat  (pH  7,0),  kemudian  di dialisis selama 16 jam. Hasil dialysis disentrifugasi  kembali  sehingga didapatlah  endapan  yang  berupa ekstrak kasar bromelin yang dimurnikan sebagian (parsial purified). 4. Penentuan  kadar  protein  dengan metode Lawry
Larutan  sampel  sebanyak  0,125  mL ditambah dapar fosfat pH 7,0 sampai dengan 0,5 mL dan ditambahkan 0,7 ml  Reagen  Lowry  kemudian  di vortex  dan  diinkubasi  pada  suhu 25°C  selama  20  menit.  Campuran ditambah  0,1  mL  Folin  Ciocalteu’s di  vortex  lalu  diinkubasi  pada  suhu 25  °C  selama  10  menit.  Larutan diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang maksimum BSA kemudian  kadar  protein  ditentukan dengan regresi linier terhadap kurva standar BSA.
P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278
5. Pengujian antibakteri ekstrak bromelain Pengujian  antibakteri  ekstrak  kasar bromelin  dengan  metode  difusi cakram. Konsentrasi larutan ekstrak kasar  bromelin  yang  digunakan adalah  1%,  2%,  3%,  dan  4%), kontrol positif (+) cakram kloramfenikol,  dan  kontrol  negatif (-) dapar fosfat. Pengujian antibakteri dilakukan terhadap Staphylococcus  aureus .  Aktivitas antibakteri  diamati  dengan  adanya zona  bening  di  sekitar  cakram, kemudian  diukur  diameter  zona hambat tersebut.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah kulit dan bonggol nanas  Ananas  comosus  L  (merr). Proses determinasi sampel dilakukan di
Herbarium  Jatinangor,  Laboratorium Taksonomi  Tumbuhan  Departemen Biologi FMIPA, Universitas Padjajaran,  Bandung.  Pengekstrasian bromelin  dari  kulit  dan  bonggol  nanas menggunakan pelarut buffer pospat pH
7  bertujuan  untuk  menjaga  kestabilan enzim.  Bromelin  memiliki  aktivitas optimum pada pH 5-7 (Masri 2014). Stabilitas enzim bromelin
dipengaruhi oleh beberapa faktor  yaitu suhu,  pH  (asam),  proease  pada  asam lambung,  pelarut  organik  dan  zat-zat kimia  (Nathania  and  Bratadiredja 2018).  Semakin  tinggi  suhu,  semakin banyak  molekul  dengan  energi  kinetik bereaksi.  Saat  melebihi  suhu  optimum akan  terjadi  reaksi  biokimia  dengan energi  yang  tinggi  sehingga  ikatan
peptida  dan  disulfida  terganggu  dan kinerja  enzim  menjadi  tidak  aktif (Sarkar et al. 2017,Corzo, Waliszewski, and Welti-Chanes 2012). Bromelin  diisolasi  dari  kulit  dan bonggol  nanas  mentah,  dikarenakan kandungannya yang tinggi dibandingkan  nanas  masak  (Masri 2014). Proses purifikasi bromelin dilakukan dengan pengendapan ammonium  sulfat  sampai  titik  jenuh. Ammonium sulfat dapat mengendapkan  kandungan  bromelin lebih  murni  dan  dapat  menghasilkan enzim  yang  memiliki  aktivitas  yang tinggi. Metode ini sering dipakai untuk purifikasi  protein.  Hal  ini  dikarenakan garam ammonium memiliki harga yang murah dan tidak larut  (Nadzirah et al. 2013,  Manzoor et  al .  2016,  Sari et  al.
2018).  Pada  penelitian  ini  jumlah garam  ammonium  sulfat  yang  terpakai sebanyak 60%.
Enzim  bromelain  dari  buah  nanas dapat  diekstraksi  2.8  kali  lebih  murni jika  menggunakan  ammonium  sulfat dengan  saturasi  40-60%  (Devakate et al .  2009).  Hal  ini  dikarenakan  jumlah garam  tersebut  telah  mencapai  titik jenuh yang menyebabkan protein sudah berada pada titik isoelektriknya. Garam ammonium  sulfat  ini  berfungsi  untuk mengendapkan  protein,  dikarenakan adanya  persaingan  antara  garam  dan protein untuk mengikat air. Ammonium  sulfat  akan  lebih  kuat mengikat  air  dibandingkan  protein dikarenakan ammonium sulfat memiliki  densitas  muatan  yang  lebih besar  sehingga  air  yang  terikat  dengan
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8(2), 101-108 P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438
DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278
protein menurun. Hal ini menyebabkan gaya  tarik  menarik  antara  garam  dan molekul protein lebih kuat dibandingkan  dengan  gaya  tarik menarik  antara  protein  dengan  air.
Sehingga protein akan mengendap dari larutan  (Wingfield  2016,  Sari et  al .
2018). Proses dialisa protein menggunakan membran semipermeabel dimana protein akan tertahan dalam membrane dan molekul dengan ukuran lebih kecil dari  protein  akan  keluar  melalui  pori-
pori membran. Proses Penentuan kadar protein  dilakukan  dengan  metode Lowry,  menggunakan  reagen Folin- Ciocalteu dan  larutan  standar  Bovine Serum  Albumin  (BSA)  (Wuryanti 2004). Larutan ini merupakan golongan enzim protein sulfihidril yang memiliki residu  sulfidril  (sistein)    pada  sisi aktifnya  sama  seperti  enzim  bromelin yang memiliki asam amino sistein pada sisi  aktifnya  (Ali,  Milala,  and  Gulani 2015).
Tabel  1. Kadar  protein  enzim  bromelin  pada  pengendapan  ammonium  sulfat  60% dengan metode Lawry
No Sampel Kadar protein (μg/mL) 1 Bonggol nanas 50.93 2 Kulit Nanas 45.73
Dari  Table  1  terlihat  bahwa  kadar bromelin  banyak  terkandung  pada bonggol  nanas.  Wuryanti,  (2004) melaporkan  bahwa  besarnya  unit aktivitas  ekstrak  kasar  enzim  bromelin dari  bonggol  nanas  adalah  5,373  U/mL (Wuryanti  2004).  Peneliti  lain  juga mendapatkan  kadar  protein  Enzim bromelin  dari  ekstrak  bonggol  nanas yang  di  presipitasi  dengan  ammonium sulfat  60%  adalah  37,214  μg/  mL (Masri 2014) dan sebesar 37,785 μg/mL protein  enzim  bromelin  dari  ektrak batang  nanas  (Nurhidayah,  Masriany, and Masri 2013).
Aktivitas  antibakteri  dari  enzim bromelin diujikan terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus .  Peneliti  lain  membuktikan bahwa  jus  buah  nanas  dan  papaya mampu menghambat pertumbuhan
bakteri enteric (D.S and M.D 2013). Jus segar buah nanas baik dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia  coli,  Shigella  sonnei  dan Salmonella  parathypi B  (D.S  and  M.D 2013).  Ektrak  buah  nanas  juga  mampu menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans (Nurnaningsih and  Laela  2022)  dan Streptococcus beta-hemolitycus (Ujiani and Marhamah
2019).  Enzim  bromelin  dapat  sebagai antimikroorganisme pada karies dengan konsentrasi 10% (Al-Falah, Prihatiningrum,  and  Nugroho  2022). Ektrak  kasar  (crude)  bromelin  yang diisolasi  dari  buah  nanas  juga  mampu menghambat pertumbuhan bakteri Proteus  spp Corynebacterium spp,
Bacillus  subtilis dan Streptococcus pyogenes (Ali,  Milala,  and  Gulani 2015).
P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438
DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278
Tabel  2. Diameter  zona  hambat  kulit  dan  bonggol  nanas  terhadap  bakteri

## Staphylococcus aureus
Ekstrak  bromelain  dari  bonggol nanas mampu menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus yang  berbeda  dibandingkan ekstrak  bromelain  dari  kulit  nanas seperti  yang  terlihat  pada  Table  2. Kemampuan enzim bromelain menghambat pertumbuhan bakteri dikarenakan  enzim  ini  menghidrolisis beberapa  ikatan  peptida  yang  ada  pada dinding  sel  bakteri.  Enzim  bromelin mengganggu  ikatan  peptide  pada peptidoglikan  membrane  sel  bakteri menyebabkan ketidakstabilan  gaya
elektrostatik  membrane  (Liliany et  al. 2018). Selain itu adanya enzim protease lainnya  yang  terdapat  pada  ekstrak kasar ( crude bromelain ) seperti glukosidasae,  peroksidase,  selulase  dan protease  lainnya  juga  ikut  membantu proses  penghambatan  pertumbuhan mikroba (Bhattacharyya,2008).

## KESIMPULAN
Enzim  bromelin  dari  kulit  dan bonggol  Nanas  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus pada konsentrasi 1 %.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih Universitas Adiwangsa Jambi,  Universitas  Jenderal  Achmad Yani,  STIKES  Harapan  Ibu  Jambi  dan semua  pihak  yang  terkait  dengan penelitian ini

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Falah, Johan, Berlian Prihatiningrum, and Raditya Nugroho.  2022.  “Perbandingan
Efektivitas  Enzim  Bromelain  Dan Enzim Papain Terhadap Degradasi
Jaringan  Karies  Dentin  Sebagai Agen  Chemo-Mechanical  Caries
Jenis sampel Konsentrasi Diameter zona hambat (mm) Hasil Ulangan 1  Ulangan 2  Ulangan 3 Kulit Nanas 1% 12.75 8.85 12.75 11.45±0.225 Bonggol Nanas 1% 12.35 12.13 12.25 12.24±0.10 Kulit Nanas 2% 14.95 11.4 13.5 13.28±0.178 Bonggol Nanas 2% 14.25 14.35 14.23 14.27±0.06 Kulit Nanas 3% 15.3 18.1 14.95 16.11±0.172 Bonggol Nanas 3% 16.2 16 16.35 16.18±0.17 Kulit Nanas 4% 19.65 18.85 19.2 19.23±0.040 Bonggol Nanas 4% 18.35 18.3 18.25 18.30±0.05 Kontrol Kloramfenikol 0.03% 21.45 21.4 21.35 21.30±0.10 Kontrol negatif 0 0 0 0
P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278
Removal  Comparison  of  the Effectiveness  of  Bromelain  and Papain Enzymes on the Degradation  of  Dentinal  Caries Tissue A.” Jurnal Kedokteran Gigi
Universitas  Padjadjaran 34(1):
58 – 65. Ali,  Ali  Abdulrahman,  Mohammed Adamu  Milala,  and  Isa  Adamu Gulani. 2015. “Antimicrobial Effects  of  Crude  Bromelain Extracted  from  Pineapple  Fruit  ( Ananas  Comosus  (  Linn  .)  Merr  .
).” Advances in Biochemistry 3(1):
1 – 4. Bhattacharyya, B. K. 2008. “Bromelain : An Overview.” Naturl  Product  Radiance 7(4): 359 – 63.
Corzo,  Carlos  A.,  Krzysztof  N.
Waliszewski,  and  Jorge  Welti-
Chanes.  2012.  “Pineapple  Fruit
Bromelain  Affinity  to  Different Protein Substrates.” Food Chemistry 133(3): 631 – 35. D.S,  Bansode,  and  Chavan  M.D.  2013. “Evaluation of Antimicrobial Activity and Phytochemical Analysis  of  Papaya  and  Pineapple Fruit  Juices  Against  Selected Enteric  Pathogens.” international
Journal  of  Pharma  and  Bio
Science 4(2): 1176 – 84. Devakate,  R  V,  V  V  Patil,  S  S  Waje, and B N Thorat. 2009. “Purification  and  Drying  of Bromelain.” Separation and Purification  Technology 64(3): 259 – 64.
Fajarna,  Farah,  Safridha  Kemala  Putri, and  Sulaiha.  2021.  “Uji  Perasan
Bonggol  Nanas  (Ananas  Comosus (L)  Merr)  Sebagai  Antikoagulan.” Jurnal Serambi Konstruktivis 3(3): 14 – 21.
Liliany,  Dewi  et  al.  2018.  “  Enzymatic Activity  of  Bromelain  Isolated Pineapple  (  Ananas  Comosus  ) Hump  and  Its  Antibacterial  Effect on  Enterococcus  Faecalis  .” Scientific Dental Journal 2(2): 39.
Manzoor,  Zoya,  Ali  Nawaz,  Hamid Mukhtar,  and  Ikram  Haq.  2016. “Bromelain: Methods of Extraction, Purification and Therapeutic  Applications  Human and  Animal  Health.” Brazilian archives of Biology and Technology 59: 1 – 16. Masri,  Mashuri.  2014.  “Isolasi  Dan Pengukuran Aktivitas Enzim Bromelin  Dari  Ekstrak  Kasar Bonggol Nanas ( Ananas Comosus )  Pada  Variasi  Suhu  Dan  PH.”
Biogenesis 2(2): 119 – 25.
Nadzirah, K. Z., S. Zainal, A. Noriham,
and I. Normah. 2013. “Efficacy of
Selected  Purification  Techniques for Bromelain.” International Food Research Journal 20(1): 43 –
46.
Nathania,  Destyalitha  Sethya,  and Marline  Abdassah  Bratadiredja. 2018.  “Isolasi  Dan  Uji  Stabilitas Enzim  Bromelin  Dari  Nanas (Ananas  Comosus  L.).” Jurnal Farmaka 16(1): 374 – 79. Nurhidayah,  Masriany,  and  Mashuri Masri. 2013. “Isolasi Dan Pengukuran Aktivitas Enzim Bromelin  Dari  Ekstrak  Kasar Batang Nanas ( Ananas Comosus )
P - ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438
DOI: 10.26874/kjif.v8i2.278
Berdasarkan Variasi PH.” Biogenesis 1(2): 116 – 22.
Nurnaningsih,  Hera,  and  Dewi  Sodja Laela.  2022.  “Efektivitas  Berbagai KonsentrasiIenzim Bromelain Dari Ekstrak Buah Nanas (AnanasIcomosus (L.) Merr) Terhadap Daya Antibakteri Streptococcus  Mutans  Secara  in Vitro.” Padjadjaran  Journal  of
Dental  Researchers  and  Students 6(2): 74.
Pavan, Rajendra, Sapna Jain, Shraddha,
and Ajay Kumar. 2012. “Properties and  Therapeutic  Application  of Bromelain: A Review.” Biotechnology research international 2012: 976203. Sari,  A.  A.,  S.  Setiasih,  S.  Hudiyono,
and  E.  Saepudin.  2018.  “Isolation and Purification of Bromelain from Pineapple  Core  (Ananas  Comosus [L].  Merr)  by  Ammonium  Sulfate and  Ethanol  Precipitation.” AIP Publishing : 1 – 5.
Sarkar,  Shampa  et  al.  2017.  “Isolation and  Characterization  of  Bromelain Enzyme  from  Pineapple  and  Its Utilization as Anti-Browning
Agent  Mineral  Extraction  from Plant  Leaves,  Specially  Moringa View Project Isolation and Characterization  of  Bromelain Enzyme  from  Pineapple  and  Its
Uti.” Process Engineering Journal 1: 52 – 58.
Tochi, Bitange Nipa, Zhang Wang, Shi Ying  Xu,  and  Wenbin  Zhang. 2008.  “Therapeutic  Application  of Pineapple  Protease  (  Bromelain  ): A  Review.” Pakistan  Journal  of Nutrition 7(4): 513 – 20.
Ujiani,  Sri,  and  Marhamah  Marhamah. 2019.  “Efektivitas  Ekstrak  Nanas (Ananas Comosus(L.) Pada Pertumbuhan  Streptococcus  Beta- Hemolitycus.” Jurnal  Kesehatan 10(3): 390.
Wingfield,  Paul  T.  2016.  “Protein Precipitation  Using  Ammonium Sulfate.” Current  Protocols  in Protein Science 13(1): 1 – 10.
Wuryanti. 2004. “Isolasi Dan Penentuan Aktivitas Spesifik Enzim Bromelin Dari Bah Nanas ( Ananas Comosus L  .).” J.Kim.Sains  &  Apl VII(3): 78 – 82.