## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVANOID PADA DAUN ADAM HAWA  (Rhoe discolor)
Risma Meidy Hardina Sitorus 1) , Adeanne C. Wullur 2) Paulina V.Y.Yamlean 3)
1) ProgramStudiFarmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Poltekkes Manado
3) Program StudiFarmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRAK
Salah  satu  tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat  ialah  tanaman  Adam  Hawa  (Rhoe  discolor) yang diduga mengandung senyawa flavanoid, hal ini terlihat dari warna ungu padadaunnya. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya  senyawa  flavanoid  serta  jenis  flavanoid  apa  yang terkandung  dalam  daun  Adam  Hawa  (Rhoe  discolor).  Isolasi  flavanoid  dilakukan  dengan  cara maserasi.  Identifikasi  senyawa  flavanoid  dilakukan  dengan  Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif (KLTP)  menggunakan  eluen  n-butanol  :asamasetat :  air  (BAA)  dengan  perbandingan  4:1:5. Identifikasi  senyawa  flavanoid  dilakukan  dengan  spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  penelitian menunjukkan  ekstrak  daun  Adam  Hawa  (Rhoe  discolor)  mengandung  senyawa  flavanoid.  Terlihat dari hasil kromatografi lapis tipis preparatif yang menghasilkan 3 noda dengan nilai Rf 0,09; 0,36; dan 0,71.  Berdasarkan  analisis  spektrofotometer  UV-Vis,  isolat  3  dengan  nilaiRf  0,71  memiliki  panjang gelombang maksimum sebesar 275 nm.
Kata  Kunci:  Daun  Adam  Hawa  (Rhoe  discolor),  Flavanoid, Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif (KLTP), Spektrofotometer UV-Vis.

## ABSTRACT
One of the plants can be used  as a drug crop is Adam Hawa (Rhoe discolor) are thought to contain flavanoid compounds, it is seen from the purple on the leaf. This study aims to determine the presence or  absence  of  flavonoids  and  other  types  of  flavanoid  compounds  are  contained  in  the  leaf  Adam Hawa  (Rhoe  discolor).  Isolation  of  flavonoids  is  done  by  maceration.  Flavanoid  compound identification is done by preparative Thin Layer Chromatography (KLTP) using the eluent n-butanol: acetic acid: water (BAA) with a ratio of 4:1:5. Identification of flavanoid compounds made with UV- Vis spectrophotometer. The results showed the leaf extract of Adam Hawa (Rhoe discolor) contains flavanoid  compounds.  Seen  from  the  results  of  preparative  thin  layer  chromatography  to  yield three spots with Rf value of 0.09; 0.36, and 0.71. Based on the analysis of UV-Vis spectrophotometer, three isolates with Rf value of 0.71 has a maximum wavelength of 275 nm. Keyword : Adam Eve leaf (Rhoe discolor), Flavanoid, Preparative Thin Layer Chromatography (KLTP), UV-Vis spectrophotometer.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  dengan kekayaan alam yang melimpah.Sebagian besar sudah  dimanfaatkan  sejak  dahulu  kala  untuk mengobati  berbagai  penyakit  secara  turun temurun(Redaksi Agromedia, 2008).Salah satu tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat ialah tanaman Adam Hawa (Rhoe
discolorL.Her.)yang termasuk  dalam  famili Commelinaceae.  Tanaman  ini  berkhasiat sebagai anti radang, memelihara paru, mencairkan  dahak,  anti  batuk,  anti  diare  dan membersihkan darah.
Daun  Adam  Hawa  (Rhoe  discolorL.Her.) yang  berwarna  ungu  diduga  karena  adanya senyawa  flavanoid.  Senyawa  flavanoid  adalah kelompok  senyawa  fenol  terbesar  yang terdapat  di  alam.  Senyawa  ini  merupakan  zat warna  merah,  ungu,  biru  dan  sebagian  zat warna  kuning  yang  ditemukan  pada  tumbuh- tumbuhan (Markham, 1988).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui ada  tidaknya  senyawa  flavanoid  pada  daun Adam Hawa (Rhoe discolor) serta mengetahui jenis  senyawa  flavanoid  yang  terdapat  pada daun  Adam  Hawa  (Rhoe  discolor)  dengan menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis Tipis Preparatif dan Spektrofotometer UV-Vis.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Desember  2011  di  Laboratorium  Advance Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi, Manado

## Alat dan Bahan Penelitian

## Alat Penelitian :
Alat  penelitian  yang  digunakan  pada penelitian ini meliputi erlenmeyer, gelas ukur, corong  pisah,  labu  ukur  100  mL,  gelas  arloji, timbangan, vacum  rotary  evaporator,  batang pengaduk,  waterbath,  kertas  saring,  pipa kapiler,  plat KLT  silika  G60  F254,  bejana pengembang,  tabung  reaksi,  pipet  tetes, ayakan 60 Mesh, blender, lampu sinar UV 254 dan  366  nm,  shaker,  oven,  seperangkat  alat UV-Vis.

## Bahan Penelitian
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  tanaman  Adam  Hawa,  dipilih daun  yang segar.  Tanaman  ini  diperoleh  dari daerah Bethesda, Manado. Bahan-bahan kimia yang  digunakan  meliputi:  n-butanol,  etanol 95%,  aquades,  asam  asetat,  metanol,  amoniak dan kuersetin.

## Metode Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dengan metode penelitian  eksperimental  laboratorik.  Proses ekstraksi  dilakukan secara  maserasi dengan menggunakan pelarut  etanol  95%.  Ekstrak dipisahkan  menggunakan  KLT  dengan  eluen n-butanol  :  asam  asetat  :  air  (4:1:5),  dimana merupakan eluen yang memberikan pemisahan paling  baik  saat  digunakan  dalam  pemisahan dengan KLT preparatif. Kemudian dilanjutkan dengan identifikasi menggunakan spektrofotometri UV-Vis.

## Prosedur Kerja
Sebanyak  1  kgdaun  Adam  Hawa  dicuci bersih dengan air mengalir kemudian dipotong kecil-kecil  dan  dikeringkan  dengan  cara dimasukkan  dalam  oven  dengan  suhu  40 o C selama  7  hari  hingga  kering  dan  selanjutnya dihaluskan  menggunakan  blenderlalu  diayak sehingga diperoleh serbuk halus yang digunakan sebagai sampel penelitian. Sejumlah  50  g  serbuk  daun  Adam  hawa pertama-tama diekstrasi secara maserasi dengan etanol 95% sebanyak 250 mL. Masing- masing  ekstrak  dipekatkan  dengan  penguap putar vakum sehingga diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM, 1985).
Pada  pemisahan  dengan  KLT  preparatif digunakan  plat  silika  G  60  F254  dengan ukuran  10  cm  x  20  cm.  Ekstrak  pekat  hasil ekstraksi  dilarutkan  dengan  etanol  95%, kemudian ditotolkan sepanjang plat pada jarak 1 cm dari garis bawah dan 1 cm dari garis tepi.
Selanjutnya  dielusi  dengan  menggunakan eluen  n-butanol  :  asam  asetat  :  air  (BAA) (4:1:5).  Setelah  gerakan  larutan  pengembang sampai  pada  garis  batas,  elusi  dihentikan. Noda  yang  terbentuk  masing-masing  diukur harga  Rf  nya.  Noda-noda  diperiksa  di  bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm (Harbone, 1996).
Menurut  Markham  (1998)  isolat-isolat yang  diperoleh  dari  hasil  KLT  preparatif
dengan  cara  mengkerok  fasa  diam  di  tempat yang sesuai pada pelat yang telah dikembangkan,  lalu  serbuk dilarutkan  dengan metanol  sebanyak  2,5  ml dan  akhirnya disentrifugasi untuk mengendapkan fase diamnya  (silika  gel),  lalu  supernatannya (selanjutnya  disebut  isolat)  diambil  dan dimasukkan  dalam  kuvet  kemudian  dianalisis dengan  spektrofotometer  UV-Vis  dengan spektrum  pada  bilangan  gelombang  200-800 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebanyak  1  kg  daun  segar  dicuci  dengan air  mengalir  untuk  menghilangkan  pengotor seperti tanah yang menempel pada daun. Daun kemudian dipotong kecil- kecil lalu dikeringkan  dalam  oven  dengan  suhu  40 0 C untuk menghilangkan kadar air dan mencegah terjadinya perubahan kimia (daun cepat busuk sehingga  dapat  menghasilkan  mikroorganisme yang  dapat merubah  konformasi  senyawaan kimia  yang  terkandung  di  daun  tersebut). Sampel yang telah kering diblender dan diayak untuk memperluas permukaan serta membantu pemecahan dinding dan membran sel, sehingga mempermudah memaksimalkan proses  ekstraksi.  Sampel  yang  diperoleh adalah serbuk yang berwarna coklat kehijauan sebanyak 57,5 g.
Sampel ditimbang sebanyak 50 g
kemudian  diekstraksi  secara  maserasi  dengan menggunakan  pelarut  etanol  95%  sebanyak 250  mL  dengan  perbandingan  1  :  5  selama  7 hari. Semakin lama waktu ekstraksi, kesempatan  untuk  bersentuhan  makin  besar sehingga hasilnya juga bertambah sampai titik jenuh  larutan.Kontak  antara  sampel  dan pelarut  dapat  ditingkatkan  apabila  dibantu dengan  pengadukan.  Pada  penelitian  ini pengadukan dilakukan
dengan
cara menggoyang  erlenmeyer  tempat  dilakukannya maserasi  sehingga  proses  ekstraksi  berjalan sempurna  karena  terjadi  kontak  antara  sampel dan  pelarut.  Penelitian  ini  menggunakan pelarut  etanol  95%  mengingat  senyawa flavanoid yang terdapat dalam Tanaman Adam Hawa bersifat polar. Penggunaan jenis pelarut sangat  menentukan  dalam  proses  ekstraksi. Diniyah  (2005)  menyatakan  bahwa  untuk ekstrak  bunga  sepatu,  etanol  95%  ternyata efektif  digunakan.  Hal  ini  disebabkan  pada pelarut  etanol  95%  komponen  bunga  lebih
optimal  terdifusi  kelarutannya  dibandingkan pada  pelarut  etanol  70%,  sehingga  lebih efektif.
Pada umumnya jenis pelarut yang digunakan  adalah  metanol,  etanol  dan  air karena  polaritas  dari  ketiga  jenis  pelarut  ini mendekati  polaritas  flavanoid.  Lestario, etal., (2003) menggunakan  metanol  dan  air  untuk mengekstrak  antosianin  dari  buah  duwet, sedangkan  Karppa  menggunakan  etanol  untuk mengekstrak  antosianin  dari  buah crowberry (Empetrum nigrum).
Maserat yang didapat kemudian disaring untuk  memisahkan  residu  dan  filtrat.  Filtrat yang  diperoleh  kemudian  dipisahkan  dari pelarutnya dengan menggunakan vacum rotaryevaporator dengan  suhu  40-50  °C. Filtrat  yang  diperoleh  berwarna  coklat  pekat kehijauan.
Pendugaan  senyawa  flavanoid  pada  daun Adam  Hawa  dilakukan  dengan  metode kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  KLT  yang digunakan  terbuat  dari  silika  gel  dengan ukuran 5 cm x 10 cm G60 F254 (Merck)yang diaktifasi  pada  suhu  100  ºC  selama  60  menit untuk  menghilangkan  air  yang  terdapat  pada plat  (Sastrohamidjojo,  2007).Eluen  yang digunakan adalah n-butanol : air : asam asetat (4:1:5).  Ekstrak  kemudian  ditotolkan  dan dielusi selama 6 jam sehingga menghasilkan 3 noda  yang  berwarna  merah  jingga  dan  merah lembayung. Sedangkan kuersetin yang digunakan sebagai pembanding rutin
menghasilkan  1  noda  yang  berwarna  kuning. Menurut Harbone (1987) terbentuknya bercak- bercak  yang  berwarna  kuning,  biru  muda  dan coklat  pada  sistem  KLT  yang  digunakan menandakan adanya golongan flavanoid sedangkan  noda  berwarna  merah  lembayung atau merah mengindikasikan adanya antosianin.
Tabel 1. Harga Rf yang dihasilkan pada KLTP
Selanjutnya dari ketiga noda yang dihasilkan  dari  KLT  Preparatif,  dikerok  dan masing-masing  diekstrak  dengan  metanol, Isolat Rf Warna Bercak dengan Sinar Ultraviolet tanpa NH 3 1 0,09 Merah jingga 2 0,36 Merah jingga 3 0,71 Merah muda 4 0,64 Kuning
disentrifus,  kemudian  supernatannya  diambil untuk  analisis spektrofotometer.  Isolat  yang diduga senyawa flavanoid antosianidin
memiliki  satu  garis  spektrum  pada  pita  II dengan panjang gelombang 275 nm.
Gambar 1. Hasil pengamatan Spektrum Daun Adam Hawa
Dari hasil identifikasi senyawa flavanoid  dengan  spektrofotometer  UV-Vis dapat  diduga  bahwa  senyawa flavanoid  yang ada  dalam  tanaman  Adam  Hawa  yaitu Antosianidin.  Antosianidin  adalah  aglikon antosianin  yang  terbentuk  bila  antosianin dihidrolisis  dengan  asam.    Antosianidin  yang paling  umum  dikenal  adalah  sianidin  yang
berwarna  merah  lembayung.  Warna  jingga disebabkan  oleh  pelargonidin  yang  gugus hidroksilnya kurang satu dibandingkan sianidin,  sedang  warna  merah  senduduk, lembayung,  dan  biru  umumnya  disebabkan oleh  delfinidin  yang  gugus  hidroksilnya  lebih satu dibandingkan sianidin (Harborne, 1996).
Gambar 2. Hasil Pengamatan Spektrum Kuersetin
Dari  hasil  identifikasi  dengan  menggunakan kuersetin  sebagai  pembanding  rutin  diperoleh pada  pita  II  dengan  panjang  gelombang  296 nm.Kuersetin  adalah  senyawa  kelompok flavonol  terbesar,  kuersetin  dan  glikosidanya berada  dalam  jumlah  sekitar  60-75  %  dari flavanoid. Perbedaan antosianidin dan kuersetin  dapat  disebabkan  karena  cara ekstraksi  dan  perlakuan  pemurnian  serta struktur kimia yang berbeda. Antosianidin dan kuersetin  termasuk  dalam  golongan  flavanoid
kelompok  besar  yang  berfungsi  sebagai antioksidan (Sugrani dan Waji, 2009).

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  hasil  penelitian  Isolasi dan  Identifikasi  Senyawa  Flavanoid  dari tanaman Adam Hawa (Rhoe discolor) yaitu : a. Padatanaman  Adam  Hawa  (Rhoe  discolor) terdapat senyawa flavanoid.
b. Jenissenyawaflavanoid  yang  terdapat pada tanaman Adam Hawa (Rhoe discolor) yaitu
antosianidin.

## SARAN
Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut tentang  identifikasi  jenis  senyawa  flavanoid yang  ada  pada  tanaman  Adam  Hawa  (Rhoe discolor) menggunakan
metode spektrofotometer  lain  seperti  Infra  Red,  GC- MS dan NMR.

## DAFTAR PUSTAKA
Diniyah, N. 2005. Ekstraksi dan Uji Stabilitas
Antosianin Kulit Terung Jepang (Solanum  molangena  L.)  Kajian  Jenis Terung  dan  Konsentrasi  HCl  dalam Etanol.
[SkripsiTidak Diterbitkan]. Malang:  Fakultas  Teknologi  Pertanian Unibraw.
Ditjen POM. 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Depkes RI : Jakarta.
Harborne,  J.B.  1996. Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB.
Lestario,  Astuti,  Raharjo  dan  Trenggono. 2005.  Sifat  Antioksidatif  Ekstrak  Buah Duwet (Syzigum cumini).
Dalam Nugrahan 2007. Ekstraksi Antosianin dari
Buah  Kiara  Payung  (Filicum  decipiens) dengan Menggunakan Pelarut yang Diasamkan (Kajian  jenis  Pelarut  dan Lama Ekstraksi). Skripsi Tidak
Diterbitkan.  Malang:  Fakultas  Teknologi Pertanian Unibraw.
Markham,  R.K.  1988. Cara  Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: ITB.
Redaksi  Agromedia.  2008.  Buku  Pintar Tanaman  Obat.  PT.  Agromedia  Pustaka  : Jakarta.
Sastrohamidjojo,  H.  2007. Spektroskopi. Yogyakarta: Liberty Yogyakarta.
Sugani  dan  Waji.  2002.  Makalah  Kimia
Organik Bahan Alam Flavanoid
(Quercetin). FMIPA : Makasar.