Journal Syifa Sciences and Clinical Research Volume 1 Nomor 2, September 2019
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187

## Uji Aktivitas Analgetik Ekstrak Etanol  Daun Inggu ( Ruta angustifolia [l.] Pers) Pada Tikus Putih Jantan
Yane Dila Keswara 1 *, Sri Rejeki Handayani 2 1,2 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta, Jl. Letjen. Sutoyo, Surakarta
* Penulis Korespondensi. Email: yanedila.keswara@gmail.com

## ABSTRAK
Nyeri merupakan perasaan tidak nyaman yang disebabkan oleh rangsangan yang kuat atau merusak,  jika  dibiarkan  dapat  mempengaruhi  rutinitas  sehari-hari.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  efek  analgesik  dan  dosis  dari  ekstrak  etanol  daun  inggu,  serta  untuk mengetahui keefektifan ekstrak etanol daun inggu sebagai analgesik narkotik dengan metode Tail  Flick  atau  sebagai  analgesik  non  narkotik  dengan  metode  Paw  Pressure  Test  Randall Selitto.  Ekstraksi  dengan  cara  maserasi  serbuk  daun  inggu  dengan  pelarut  etanol  96%. Sebanyak 25 ekor tikus putih jantan galur wistar dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok positif asam mefenamat 9 mg/200 g BB untuk metode Paw Pressure Test Randall selitto dan tramadol 0,9 mg/ 200 g BB untuk metode Tail Flick, kontrol negatif CMC Na 0,5%, ekstrak etanol daun inggu dosis 10 mg/200 g BB, 20 mg/200 g BB dan 40 mg/200 g BB. Data yang diperoleh  dianalisa  dengan  uji  ANOVA,  selanjutnya  digunakan  uji  LSD  untuk  mengetahui perbedaan antar kelompok. Hasil menunjukkan ekstrak dosis 10 mg/200 g BB, 20 mg/200 g BB, 40 mg/200 g BB memiliki efek analgetik. Dosis ekstrak 20 mg/200 g BB dan 40 mg/200 g BB  pada  metode  Paw  Pressure  Test  Randall  selitto  setara  dengan  asam  mefenamat,  dosis ekstrak 10 mg/200 g BB, 20 mg/200 g BB, dan 40 mg/200 g BB pada metode Tail Flick setara dengan Tramadol. Ekstrak etanol daun inggu lebih efektif sebagai analgesik narkotik dengan metode Tail Flick.
Kata Kunci: Daun Inggu; Analgetik; Randall Selitto; Tail Flick
Diterima: 4-07-2019 Disetujui: 7-08-2019 Online: 12-09-2019

## ABSTRACT
Pain is an uncomfortable feeling caused by strong or destructive stimulation, if unchecked can affect daily routine. This study aims to determine the analgesic effect and dosage of the leaf extract ethanol, as well as to determine the effectiveness of the leaf extract ethanol as a narcotic analgesic  by  the  Tail  Flick  method  or  as  a  non-narcotic  analgesic  by  the  Paw  Pressure  Test Randall Selitto method. Extraction was done by maceration of leaf powder with a solvent 96% ethanol. 25 male Wistar white rats were divided into 5 groups, positive group mefenamic acid 9 mg /200 g BW for the Paw Pressure Test Randall Selitto Method and tramadol 0.9 mg /200 g BW for the Tail Flick Method, negative control CMC Na 0,5%, ethanol extract leaves inggu leaves a dose of 10 mg /200 g BW, 20 mg /200 g BW and 40 mg /200 g BW. The data obtained were  analyzed  by  ANOVA  test,  then  LSD  test  was  used  to  determine  differences  between groups. The results showed extract dosage of 10 mg /200 g BW, 20 mg /200 g BW, 40 mg /200 g BW had analgesic effect. Extract dosage of 20 mg /200 g BW and 40 mg /200 g BW in the Randall selitto Paw Pressure Test method is equivalent to mefenamic acid, extract dose 10 mg /200 g BW, 20 mg /200 g BW, and 40 mg /200 g BW the Tail Flick method is equivalent to Tramadol. Ethanol leaf extract is more effective as a narcotic analgesic by the Tail Flick method.
Copyright © 2019 Jsscr. All rights reserved.
Keywords: Inggu leaf; Analgesic; Randall Selitto; Tail Flick
Received: 2019-07-4 Accepted: 2019-08-7 Online: 2019-12-9

## 1. Pendahuluan
Nyeri merupakan pengalaman sensoris dan emosional yang tidak menyenangkan bagi penderita, yang berkaitan dengan (ancaman) kerusakan jaringan. Nyeri disebabkan oleh rangsang  mekanis,  kimiawi  atau  fisis  dapat  menimbulkan  kerusakan  pada  jaringan. Rangsangan  tersebut  dapat  memicu  pelepasan  zat-zat  tertentu  yang  disebut  dengan mediator nyeri seperti histamin, bradikinin, leukotrien dan prostaglandin [1].
Analgesik  atau  penghalau  nyeri  adalah  zat-zat  yang  dapat  mengurangi  atau menghilangkan  rasa  nyeri  yang  dirasakan  penderitanya  tanpa  menghilangkan kesadaran.  Obat-obat  analgesik  dapat  dibedakan  menjadi  analgesik  perifer  (non narkotik)  dan  analgesik  sentral  (narkotik).  Penggunaan  obat-obat  analgesik  dalam jangka  panjang  sering  sekali  memberikan  efek  samping  ringan  (berupa reaksi  alergi) maupun efek samping berat (gangguan sistem gastrointestinal; dispepsia, mual, muntah hingga pendarahan pada lambung). Berbagai macam efek samping yang ditimbulkan sehingga  masyarakat  melakukan  banyak  cara  untuk  memperoleh  jaminan  kesehatan yang  optimal  yaitu  dengan  memanfaatkan  tanaman  obat  yang  disebut  dengan  obat tradisional [2].
Salah satu tanaman yang dapat dieksplorasi sebagai bahan obat tradisional adalah daun inggu. Daun inggu secara tradisional digunakan untuk penyakit gigi, kejang pada anak, nyeri ulu hati, merangsang haid, kecekukan, sakit kepala dan bisul [3]. Dalam penelitian Pudjiastuti dan Hendarti [4] menunjukkan infusa daun inggu berefek analgetik. Daun Inggu  juga  berefek  antiinflamasi  pada  dosis  100  mg/kg  BB  tikus  [5]  dan  berefek antipiretik pada dosis 9 mg/ 200 g BB tikus [6].
Daun Inggu mengandung minyak atsiri [7], steroid, flavonoid, tannin, kuinon [8], dan saponin [3]. Mekanisme kerja steroid yaitu merangsang biosintesis protein lipomodulin yang  dapat  menghambat  kerja  enzimatik fosfolipase,  suatu  enzim  yang bertanggung jawab terhadap pelepasan asam arakhidonat dan metabolitnya seperti prostaglandin,
leukotrien,  prostasiklin,  tromboksan  dan  glukokortikoid  yang  dapat  memblok  jalur sikloogsigenase  dan  lipoogsigenase  [1].  Selain  steroid,  Flavonoid  bekerja  dengan menghambat  enzim  sikloogsigenase  sehingga  akan  mengurangi  produksi  asam arakhidonat  sehingga  mengurangi  rasa  nyeri,  dan  menghambat  pengeluaran  sitokin, radikal bebas, serta enzim yang berperan dalam peradangan [9].
Penelitian  ilmiah  perlu  dilakukan  sebelum  dapat  memanfaatkan  tanaman  obat  agar penggunaannya  dapat  dipertanggung-jawabkan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui efek analgesik dari ekstrak etanol daun inggu, mengetahui dosis ekstrak etanol daun inggu yang dapat memberikan aktivitas analgesik yang efektif, serta untuk mengetahui  keefektifan  ekstrak  etanol  daun  inggu  sebagai  analgesik  sentral  dengan metode Tail  Flick atau  sebagai  analgesik  perifer  dengan  metode Paw  Pressure  Test ( Randall Selitto ).

## 2.  Metode
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Fitokimia  dan  Laboratorium  Farmakologi- Toksikologi, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta. Penelitian dimulai dari bulan  Maret  sampai  selesai.  Desain  penelitian  ini  berupa  penelitian  eksperimental laboratorium  yakni  untuk  menganalisa  aktivitas  analgetik  dari  ekstrak  etanol Ruta angustifolia [L.] pers dengan metode Tail Flick dan Paw Pressure Test (Randall Selitto) .

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah blender, oven, neraca analitik, ayakan nomor 40, bejana maserasi, batang pengaduk, rotary evaporator, gelas ukur, moisture balance, beaker glass, kain flannel, timbangan tikus, corong pisah, Erlenmeyer, pipet tetes, pipet ukur, spuit injeksi, jarum sonde, sarung tangan, stopwatch, tabung reaksi, pipet tetes, lampus spiritus, seperangkat alat tail flick analgesy-meter dan UGO BASILE 37215 ITALY analgesy-meter.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah simplisia daun inggu, etanol 96%, CMC-Na,  asam  mefenamat,  tramadol,  aquadestilata  atau  air  suling.  Hewan  uji  yang digunakan  adalah  tikus  putih  jantan  dengan  berat  badan  160-200  gram  sebanyak  50 ekor.

## 2.2. Sampel Tanaman
Daun  Inggu  ( Ruta  angustifolia [L.]  pers.)  diperoleh  dari  petani  di  Tawangmangu, Karanganyar,  Jawa  Tengah.  Daun  Inggu    yang  digunakan  adalah  daun  yang  masih muda dan berwarna hijau muda. Sampel dideterminasi di Laboratorium Program Studi Biologi Fakultas MIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta.

## 2.3. Hewan Penelitian
Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih galur wistar berumur 2-3 bulan, berjenis kelamin jantan, dengan berat 150-200 gram. Jumlah hewan coba untuk masing-masing kelompok uji  adalah sebanyak  5 ekor  tikus, sehingga jumlah sampel  hewan uji  yang akan  digunakan  untuk  satu  metode  analgetik  adalah  25  ekor  mencit.  Hewan  uji  lalu diadaptasi selama 7 hari, ditimbang dan diberi pakan normal. Sebelum diberi perlakuan hewan uji terlebih dahulu dipuasakan selama ±18 jam dengan tetap diberi minum. Tikus juga diadaptasikan pada masing-masing alat selama 2-3 menit.

## 2.4. Pembuatan Ekstrak Etanol
Daun inggu dicuci dan ditiriskan kemudian dikeringkan dengan menggunakan oven pada  suhu  50°C  selama  24  jam.  Daun  kering  kemudian  dihaluskan  dengan  blender menjadi serbuk lalu diayak dengan menggunakan pengayak nomor 40. Serbuk daun inggu 800 gram diekstrak dengan maserasi sederhana menggunakan etanol 96% 6000 ml selama 5 hari. Selama proses perendaman, wadah disimpan pada suhu kamar dan terlindung  dari  cahaya  matahari.  Setelah  proses  perendaman  selesai  dilakukan penyaringan  hingga  didapat  maserat.  Ampas  dari  proses  penyaringan  diremaserasi dengan  sisa pelarut yang sama sebanyak 2000 ml hingga didapat hasil maserat yang jernih. Selanjutnya maserat yang diperoleh diuapkan dalam evaporator pada suhu 50°C dan selanjutnya di oven untuk mendapatkan ekstrak kental.

## 2.5. Skrining Fitokimia

## 2.5.1. Uji Flavonoid
50  mg  serbuk  dan  ekstrak  buah  okra  dimasukan  dalam  tabung  reaksi.  Selanjutnya, ditambahkan 100 ml air panas, ditambahkan 0,1 gram serbuk magnesium, ditambahkan 2 ml larutan Mg alkohol-HCL (1:1) dan pelarut amil alkohol dikocok kuat agar memisah. Reaksi  positif  ditunjukan  adanya  warna  merah/kuning/jingga  pada  lapisan  amil alkohol [10].

## 2.5.2. Uji Steroid
Ekstrak dilarutkan dalam 0,5 mL kloroform, ditambahkan dengan 0,5 mL asam asetat anhidrida. Selanjutnya campuran ini  ditetesi  dengan 2 mL asam sulfat pekat melalui dinding  tabung  tersebut.  Bila  terbentuk  warna  hijau  kebiruan  menunjukkan  adanya steroid [10].

## 2.5.3. Uji Tannin
Identifikasi  tannin.  Sebanyak  1  mg  sampel  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan 2-3 tetes FeCl3 1%. Jika larutan menghasilkan warna hijau kehitaman atau biru tua, maka sampel positif mengandung tannin [11].

## 2.5.4. Uji Saponin
Sampel dan air didihkan kemudian didinginkan lalu dikocok dan didiamkan beberapa menit. Terbentuknya busa yang stabil berarti positif terhadap saponin [12].

## 2.6. Pengujian Efek Analgetik
Pengujian  aktivitas  analgetika  dilakukan  dengan  metode Paw  Pressure  Test  (Randall Selitto) untuk  menguji  aktivitas  analgetika  perifer  dan  metode Tail  Flick  Test untuk menguji aktivitas analgetika sentral. Hewan dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kelompok 1 sebagai kelompok kontrol yang diberi suspensi CMC Na, kelompok 2, 3 dan 4 sebagai kelompok uji I, II dan III yang diberi ekstrak etanol daun inggu dengan dosis 10, 20 dan 40 mg/200 g BB serta kelompok 5 sebagai kelompok pembanding yang diberi tramadol (metode Tail Flick Test ) dan asam mefenamat (metode Randall Selitto Test ).

## 2.6.1. Metode Tail Flick
Metode Tail Flick Test menggunakan panas sebagai penginduksi nyeri. Prinsip metode Tail Flick Test dengan mencatat waktu yang dibutuhkan hewan uji untuk bertahan pada rangsangan  termal  (temperatur  50 0 C)  pada  ekor,  respons  yang  diberikan  berupa penjentikan  atau  penarikan  ekor  hewan  uji  secara  tiba-tiba  [13].  Sebelum  perlakuan hewan uji diuji dengan alat tail flick analgesy-meter terlebih dahulu, dicatat waktunya sebagai  T0.  Tikus  diberikan  perlakuan  sesuai  kelompoknya  secara  peroral.  30  menit kemudian tikus diuji menggunakan tail flick analgesy-meter. Kemudian dicatat waktu tikus mulai menarik atau menjentikkan ekornya. Pengujian dilakukan pada tikus ke 30, 60, 90, dan 120 menit.

## 2.6.2. Metode Randall Selitto
Metode Paw Pressure Test (Randall Selitto) menggunakan rangsangan tekanan mekanis sebagai  penginduksi  nyeri.  Prinsip  metode  ini  adalah  telapak  kaki  tikus  dijepit  dan diberi tekanan (gram) dengan bobot tertentu yang akan terus meningkat dalam waktu singkat. Respon yang dihasilkan berupa penarikan kaki atau mengeluarkan suara secara tiba-tiba [14; 15]. Sebelum perlakuan hewan uji diuji dengan alat UGO BASILE 37215 ITALY analgesy-meter terlebih dahulu, dicatat waktunya sebagai T0.  Tikus diberikan perlakuan  sesuai  kelompoknya  secara  peroral.  30  menit  kemudian  tikus  diberi rangsangan  nyeri  berupa  tekanan  dengan  alat  ugo  basile  analgesy  meter  dengan tekanan  beban  tertentu.  Pemegangan  tikus  harus  benar  dan  pastikan  tikus  dalam keadaan tenang agar tikus bisa beradaptasi dengan alat uji. Kemudian beban dijalankan dan dihentikan jika tikus sudah memberikan respon dengan penarikan kaki. Berat beban dicatat  dalam  gram.  Pengujian  ini  dilakukan  selama  4  jam  dengan  rentang  waktu tercatat, yaitu 30 menit, 60 menit, 120 menit, 180 menit dan 240 menit.
2.7. Analisis Data

## 2.7.1. Metode Tail Flick
Menghitung  waktu  respon  ekor  mengibas  seperti  menjentik,  dengan  rumus  waktu respon  setelah  diberi  perlakuan  dikurangi  waktu  respon  sebelum  diberi  perlakuan. Kemudian dihitung AUC ( Area under the curve ) dengan rumus:
𝐴𝑈𝐶 𝑛−1 𝑛 = 𝑊𝑡𝑛−1+𝑊𝑡𝑛 2 × (t n-1 – t n )
Keterangan : Wtn-1 : Waktu respon data perekor pada tn-1 Wtn : Waktu respon data perekor pada tn
Persentase peningkatan hambat nyeri yang dihitung dengan rumus:
= AUCp−AUCk
𝐴𝑈𝐶𝑝 x 100%
Keterangan : AUCp   : AUC kurva respon rata-rata terhadap waktu kelompok perlakuan AUCk   : AUC kurva respon rata-rata terhadap waktu kelompok kontrol negatif. Data-data yang diperoleh dianalisis dengan uji analisis varians (ANOVA) satu arah dan analisis LSD. Analisis ANOVA dinyatakan dalam rata-rata±SD, dimana hasil pengujian signifikan jika p ≤ 0,05. Analisis lanjutan LSD dilakukan dengan taraf kepercayaan 95%.

## 2.7.2. Metode Randall Selitto
Menghitung  daya  tahan  beban  penarikan  kaki  hewan  uji  dengan  rumus  daya  tahan beban  setelah  diberi  perlakuan  (gram)  dikurangi  daya  tahan  beban  sebelum  diberi perlakuan (gram). Kemudian dihitung AUC ( Area under the curve ) dengan rumus:
𝐴𝑈𝐶 𝑛−1 𝑛 = 𝐹𝑡𝑛−1+𝐹𝑡𝑛 2 (t n – t n-1 )
Keterangan : Ftn-1: daya tahan beban rata-rata pada tn-1 (gram) Ftn: daya tahan beban rata-rata pada tn (gram)
Persentase peningkatan hambat nyeri yang dihitung dengan rumus:
= AUCp−AUCk
AUCp x 100%
Keterangan : AUCk : AUC kurva daya tahan beban rata-rata terhadap waktu kontrol negatif AUCp :AUC kurva daya tahan beban rata-rata terhadap waktu kelompok perlakuan
Data-data yang diperoleh dianalisis dengan uji analisis varians (ANOVA) satu arah dan analisis LSD. Analisis ANOVA dinyatakan dalam rata-rata±SD, dimana hasil pengujian signifikan jika p ≤ 0,05. Analisis lanjutan LSD dilakukan dengan taraf kepercayaan 95%.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Pengujian aktivitas analgetika dilakukan dengan 2 metode, yaitu metode Tail Flick Test (jentik  ekor)  dan  metode  Paw  Pressure  Test  (Randall  Selitto).  Penelitian  ini  telah disetujui  oleh  Komisi  Etik  Penelitian  Kesehatan  RSUD  Dr.  Moewardi  dengan  nomor surat 707/V/HREC/2019. Determinasi daun Inggu dilakukan di Laboratorium Program Studi  Biologi    Fakultas  MIPA  Universitas  Sebelas  Maret  Surakarta,  No.  84/ UN27.9.6.4/Lab/2019 menyatakan tanaman yang digunakan sebagai bahan uji dalam penelitian adalah tanaman Inggu (Ruta angustifolia (L.) Pers.
Bagian ini adalah bagian paling penting dari artikel Anda. Analisis atau hasil penelitian harus  jelas  dan  ringkas.  Hasilnya  harus  meringkas  (ilmiah)  temuan  daripada memberikan  data  dengan  sangat  rinci.  Harap  disorot  perbedaan  antara  hasil  atau temuan Anda dan publikasi sebelumnya oleh peneliti lain.

## 3.1.  Hasil Skrinning Fitokimia
Tabel 1. Hasil uji fitokimia ekstrak daun inggu Kandungan kimia Hasil Flavonoid Positif, terbentuk warna jingga Steroid Positif, terbentuk warna hijau Tannin Positif, terbentuk warna hijau kehitaman Saponin Positif, terbentuk busa
Sumber Data : Data primer yang diolah, 2019
Uji  kualitatif  pada  ekstrak  daun  inggu  dilakukan  di  Laboratorium  Farmakognosi Universitas  Setia  Budi  Surakarta  dengan  hasil  uji  identifikasi  kandungan  kimia menunjukan bahwa ekstrak daun inggu positif mengandung flavonoid, steroid, tannin dan saponin (dapat dilihat pada tabel 1).  Sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Noer dan Pratiwi (2016); Noer et al., (2018)  yang melakukan uji identifikasi kualitatif
terhadap daun inggu dengan hasil positif terhadap senyawa steroid, flavonoid,  tannin dan saponin.
3.2.  Uji Analgetik Ekstrak Etanol Daun Inggu

## 3.2.1. Metode Tail Flick
Tabel 2. Rata-rata selisih waktu respon ekor mengibas
Kelompok Rata-rata selisih waktu respon ekor mengibas (detik) ∆T 1 (T 30 -T 0 ) ∆T 2 (T 60 -T 0 ) ∆T 3 (T 90 -T 0 ) ∆T 4 (T 120 -T 0 ) Kontrol negatif (CMC Na) 1,50 ± 0,65 b 3,87 ± 1,36 b 4,33 ± 2,02 b 2,95 ± 1,67 b Kontrol positif (Tramadol 0,9 mg/200 g BB 6,83 ± 1,28 a 7.95 ± 1,21 a 7,84 ± 0,69 a 6,69 ± 1,94 a Ekstrak dosis 10 mg/200 g BB 2,52 ± 0,94 b 6,58 ± 1,11 a 7.87 ± 0,68 a 4,94 ± 2,35 Ekstrak dosis 20 mg/200 g BB 3,21 ± 1,11 ab 7,64 ± 1,19 a 8,44 ± 0,78 a 6,44 ± 1,77 a Ekstrak dosis 40 mg/200 g BB 4,15 ± 0,90 ab 7,93 ± 0,89 a 8,79 ± 0,80 a 6,27 ± 0,79 a Sumber Data : Data primer yang diolah, 2019 Keterangan : a = berbeda bermakna dengan kontrol negatif b = berbeda bermakna dengan kontrol positif
Secara keseluruhan setiap kelompok perlakuan pada tabel  2 mengalami peningkatan ambang nyeri. Kelompok kontrol negatif memiliki selisih waktu respon hambat nyeri yang paling rendah dibandingkan kelompok kontrol positif. Menurut penelitian Wagh et  al,  [16],  CMC  Na  sebagai  kelompok  kontrol  tidak  memiliki  kemampuan  dalam meningkatkan ambang nyeri dan kontrol lain. Kelompok kontrol positif (tramadol) pada menit  ke-30 mampu menghasilkan daya tahan beban yang lebih besar dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif. Kelompok kontrol positif yang diberikan tramadol pada menit ke-30 mampu menghasilkan peningkatan daya tahan beban yang lebih besar dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif. Hasil uji statistik LSD menyatakan ada perbedaan signifikan antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif, yang berarti kelompok kontrol positif mampu memberikan efek analgetik pada menit ke-30.
Pada menit ke-30 kelompok kontrol positif, ekstrak dosis 10 mg/200 g BB, 20 mg/200 g BB,  dan  40  mg/200  g  BB  memiliki  rata-rata  waktu  respon  yang tinggi  dibandingkan dengan kontrol negatif setelah pemberian obat secara peroral. Kelompok kontrol positif yang diberikan tramadol mengalami peningkatan reaksi setelah pemberian sediaan uji secara peroral. Rata-rata waktu respon tikus mengibaskan ekor pada menit ke-30 yaitu 6,83 detik yang berbeda bermakna dengan kontrol negatif, pada menit ke-60 rata-rata waktu  respon  yaitu  7,95  detik  yang  berbeda bermakna  dengan  kontrol negatif,  pada menit  ke-90  rata-rata  waktu  respon  yaitu  7,84  detik  yang  berbeda  bermakna  dengan kontrol  negatif,  dan  pada  menit  ke-120  rata-rata  waktu  respon  yaitu  6,69  detik  yang berbeda bermakna dengan kontrol negatif. Hal ini menunjukkan bahwa kontrol positif (tramadol)  mempunyai  waktu  absorbsi  yang  cepat  dan  dapat  memberikan  efek analgesik. Tramadol absorbsinya di usus cepat, plasma T1/2 nya 6 jam, efeknya dimulai sesudah  1  jam  dan  dapat  bertahan  6-8  jam.  Sehingga  efek  analgesik  yang  optimal muncul pada menit ke-60 dengan rata-rata waktu respon yang meningkat, hal ini sesuai
dengan konsentrasi puncak yang dicapai setelah 1 jam pemberian kelompok perlakuan [1].
Pada  kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun  inggu  dengan  dosis  10 mg/200 g BB rata-rata waktu respon tikus mengibaskan ekor  pada menit ke-30 yaitu 2,52 detik yang berbeda bermakna dengan kontrol positif dan pada menit ke-60 rata-rata waktu  respon  yaitu  6,58  detik  yang  berbeda  bermakna  dengan  kontrol  negatif  yang artinya pada menit ke-60 ekstrak daun inggu mulai berefek, pada menit ke-90 rata-rata waktu  respon  mengalami  peningkatan  lagi  yaitu  7,87  detik  yang  berbeda  bermakna dengan  kontrol  negatif,  dan  pada  menit  ke-120  rata-rata  waktu  respon  mengalami penurunan yaitu 4,94 detik, yang tidak terlihat kebermaknaannya. Kelompok perlakuan dosis 20 mg/200 g BB pada menit ke-30 dengan rata-rata waktu respon 3,21 detik yang berbeda bermakna dengan kontrol positif dan pada menit ke-60 dengan rata-rata 7,64 detik  yang  berbeda  bermakna  dengan  kontrol  negatif.  Mengalami  peningkatan  pada menit ke-90 yaitu 8,44 detik, berbeda bermakna dengan kontrol negatif. Menit ke-120 mengalami penurunan yaitu 6,44 detik tidak terlihat kebermaknaannya, hal ini mungkin terjadi karena standar deviasi yang tinggi sehingga pada analisa statistik tidak terlihat kebermaknaannya.  Sedangkan  pada  dosis  40  mg/200  g  BB  pada  menit  ke-30  telah terlihat efek analgesiknya dengan rata-rata waktu respon yaitu 4,15 detik. Pada menit ke-60  efek  analgesiknya  mengalami  peningkatan  dengan  rata-rata  waktu  respon  7,93 detik, lalu mengalami peningkatan kembali pada menit ke-90 dengan rata-rata waktu respon 8,79 detik dan mengalami penurunan pada menit ke-120 dengan rata-rata waktu respon 6,27 detik.
Hasil AUC terbesar adalah kelompok positif, dan yang terendah adalah kontrol negatif. Semakin besar nilai AUC maka persentase peningkatan ambang nyeri semakin besar. Hasil AUC menunjukkan kelompok ekstrak dosis semuanya berbeda bermakna dengan kontrol  negatif,  dan  hanya  kelompok  dosis  20  mg/200  g  B  yang  berbeda  bermakna dengan  kontrol  positif.  Nilai  AUC  yang  dihasilkan  dapat  dihitung  persentase  nilai peningkatan  ambang  nyeri  sebagai  daya  analgesik.  Persentase  hambatan  nyeri merupakan besarnya kemampuan senyawa uji dalam mengatasi rasa nyeri dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Data AUC dan persentase hambat nyeri pada kelompok perlakuan
Kelompok uji Data AUC Persentase peningkatan ambang nyeri (%) (rata- rata±SD) (rata-rata±SD) Kontrol negatif (CMC Na) 537,39±226,39 b - Kontrol positif (Tramadol 0,9 mg/200 g BB) 1203,99±161,71 a 54,60±18,37 Ekstrak dosis 10 mg/ 200 g BB 962,16±136,48 ab 41,20±29,02 Ekstrak dosis 20 mg/ 200 g BB 1097,64±172,71 a 52,20±18,53 Ekstrak dosis 40 mg/ 200 g BB 1179,06±74,31 a 54,00±20,14
Sumber Data : Data primer yang diolah, 2019 Keterangan : a = Berbeda bermakna dengan kontrol negatif b = Berbeda bermakna dengan kontrol positif
Daya aktivitas analgesik pada sediaan uji ditunjukkan dengan persentase hambat nyeri yang lebih besar atau sama dengan 50% dibandingkan kelompok kontrol negatif, maka dianggap  efektif  sebagai  analgesik  [17].  Berdasarkan  tabel  diatas  persentase  ambang nyeri yang dihasilkan oleh ekstrak dosis terendah 10 mg/200 g BB adalah 41,20%, hal ini menunjukkan bahwa pada dosis 10 mg/200 g BB memiliki aktivitas analgesik yang lemah karena. Berdasarkan data statistik ekstrak etanol daun inggu dosis 20 mg/200 g BB dan 40 mg/200 g BB memiliki aktivitas analgesik yang sebanding dengan kontrol positif.
Pemberian ekstrak etanol daun inggu terbukti mampu meningkatkan rata-rata reaksi sebagai  respon  peningkatan  ambang  nyeri.  Secara  statistik  dengan  uji  Shapiro-Wilk persentase  peningkatan  ambang  nyeri  terdistribusi  normal  (p<0,05)    dan  uji  levene diperoleh  nilai  signifikasi  0,431  (p>0,05)  artinya  varian  data  homogen.  Selanjutnya dilakukan  uji  one  way  ANOVA  dimana  hasil  menunjukkan  P=0,748  (p>0,05)  berarti tidak  terdapat  perbedaan  bermakna  antara  kelompok  perlakuan.  Hal  ini  berarti tramadol dan variasi dosis ekstrak etanol daun inggu memilik efek analgesic pada tikus putih jantan. Walaupun ektrak etanol daun inggu dosis 10 mg/200 g BB memiliki hasil terendah tetapi saat diuji statistic tidak ada perbedaan atau sebanding atau sama antar kelompok perlakuan.
Ekstrak etanol daun inggu mengandung senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid, tannin,  dan  saponin.  Wemay  et  al.  [18]  menyatakan  bahwa  senyawa  terpenoid  dan flavonoid  mampu  menghambat  lintasan  enzim  siklooksigenase.  Saponin  terdiri  dari membran  steroid  yang mampu  berinteraksi  dengan  membran  lipid  seperti  fosfolipid yang merupakan precursor prostaglandin [19]. Saponin juga mempunyai efek analgesik dengan cara menghambat sintesis PGE2 [20].

## 3.2.2. Metode Paw Pressure Test Randall Selitto
Hasil  yang  didapat  dalam  pengamatan  berupa  nilai  berat  beban  tertentu  yang selanjutnya  digunakan  dalam  perhitungan  AUC  untuk  menentukan  nilai  persentase ambang  nyeri.  Hasil  rata-rata  peningkatan  ambang  nyeri  oleh  suatu  beban  pada kelompok perlakuan tiap waktu dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Rata-rata selisih  daya tahan beban metode Randall Selitto Kelompok Rata-rata selisih daya tahan beban (gram) T30 T60 T120 T180 T240 Kontrol negatif (CMC Na)  18,00±4,42 b 30,00± 4,30 b 42,20±4,38 b 39,60 ± 7,92 b 26,60 ± 8.11 b Kontrol  positif  (Asam mefenamat  9  mg/200  g BB) 59,20±22,51 a 113,40 ±22,32 a 128,00±16,79 a 76,80 ±26,36 a 56,80 ±26,7 a Ekstrak dosis 10 mg/200 g BB 20,60±5,59 b 70,00±18,29 ab 89,00±23,02 ab 61,20±16,96 ab 40,80±14,96 Ekstrak dosis 20 mg/200 g BB 20,40±11,42 b 75,40±28,29 ab 104,40±36,38 a 75,40±10,74 a 65,40±8,53 a Ekstrak dosis 40 mg/200 g BB 13,00±7,04 b 75,80±10,18 ab 109,80±17,84 a 89,00±12,90 a 71,80±21,19 a Sumber Data : Data primer yang diolah, 2019 Keterangan : a = berbeda bermakna dengan kontrol negatif b = berbeda bermakna dengan kontrol positif
Berdasarkan  tabel  4  kelompok  kontrol  negatif  (CMC  Na),  kelompok  kontrol  positif (Asam mefenamat), dan kelompok perlakuan ekstrak etanol daun inggu pada menit ke- 30 mengalami peningkatan reaksi tikus menahan rangsangan nyeri. Kelompok kontrol negatif (CMC Na) menghasilkan rata-rata nilai daya tahan beban yang paling rendah dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  lain.  Hal  ini  terjadi  karena  CMC  Na  tidak memiliki kemampuan menangani nyeri karena tidak mengandung zat aktif [16].
Kelompok  kontrol  positif  (asam  mefenamat)  pada  menit  ke-30  secara  statistik  non parametric  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  dengan  kontrol  negatif  yang berarti  sudah  terjadi  penghambatan  nyeri  oleh  asam  mefenamat  pada  menit  ke-30. Untuk menit ke-60 rata-rata daya tahan beban yang dihasilkan oleh pemberian asam mefenamat  meningkat,  efek  analgetik  kelpmpok  asam  mefenamat  mencapai  puncak pada menit ke-120 dan menurun pada menit ke 180, dan menit ke-240. Hasil pengujian ini  sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Oktavianus  et  al.  [21]  bahwa  efek analgesik  pada  asam  mefenamat  mencapai  puncak  pada  menit  ke-120  karena konsentrasi puncak dicapai 2-4 jam setelah pemberian oral. Faktor perbedaan spesies antara  manusia  dengan  hewan  uji  bisa  saja  menyebabkan  perbedaan  pada  proses metabolisme, namun efek analgesik asam mefenamat dalam metode ini sesuai dengan teori yang dinyatakan oleh Gunawan et.al [22] bahwa efek analgesik asam mefenamat mencapai puncak dalam waktu 2-4 jam.
Menit ke-60 rata-rata respon daya tahan beban pada semua kelompok perlakuan ekstrak etanol  daun  inggu  meningkat  dan  berbeda  bermakna  dengan  kontrol negatif, berarti kelompok perlakuan ekstrak etanol daun inggu mulai memberikan efek analgetik pada menit  ke-60.  Kelompok perlakuan  yang  diberi  sediaan  uji  ekstrak  etanol  daun inggu dengan dosis 10 mg/200 g BB pada menit ke-60 memberikan rata-rata respon daya tahan beban 70 gram, menit ke-120 mengalami peningkatan rata-rata respon daya tahan beban 89 gram, mulai mengalami penurunan pada menit ke-180 dan ke-240. Dosis 20 mg/200 g BB mulai memberikan efek analgesik pada menit ke-60 dengan rata-rata respon daya tahan beban 75,40 gram, dan pada menit ke-60 mengalami peningkatan rata-rata respon daya  tahan  beban  104,40  gram.  Pada  dosis  40  mg/200  g  BB  mulai  memberikan  efek analgesik pada menit ke-60 dengan rata-rata respon daya tahan beban 75,80 gram dan mengalami peningkatan daya tahan beban pada menit ke-120 dengan rata-rata respon daya  tahan  beban  109,80  gram.  Peningkatan  ambang  nyeri  yang  terjadi  menyatakan adanya daya hambat nyeri  sehingga tikus mampu menahan beban yang berat ketika beban dijalankan.
Keseluruhan  data  respon  peningkatan  ambang  nyeri  yang  berupa  peningkatan  daya tahan  beban  selanjutnya  digunakan  untuk  menghitung  AUC  dan  persentase peningkatan ambang nyeri sebagai daya analgesik (tabel 5).
Semakin besar nilai AUC maka persentase peningkatan ambang nyeri semakin besar. Hasil AUC menunjukkan kelompok ekstrak dosis semuanya berbeda bermakna dengan kontrol  negatif,  dan  kelompok  dosis  10  mg  dan  20  mg/200  g  BB  berbeda  bermakna dengan  kontrol  positif.  AUC  yang  dihasilkan  dapat  dihitung  persentase  nilai peningkatan  ambang  nyeri  sebagai  daya  analgesik.  Persentase  hambatan  nyeri merupakan besarnya kemampuan senyawa uji dalam mengatasi rasa nyeri dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Data AUC dan persentase peningkatan ambang nyeri pada kelompok perlakuan
Kelompok uji Data AUC (rata-rata±SD) Persentase peningkatan ambang nyeri (%) (rata- rata±SD) Kontrol negatif (CMC Na) 7596±907,01 b - Kontrol positif (Asam mefenamat 9 mg/200 g BB) 20871±4038,68 a 62,60±5,94 Ekstrak dosis 10 mg/ 200 g BB 14004±3528,29 ab 42,60±16,80* Ekstrak dosis 20 mg/ 200 g BB 54,20±8,87 Ekstrak dosis 40 mg/ 200 g BB 16755±2348,23 ab 17,883±1770,43 a 57,40±4,83
Sumber Data : Data primer yang diolah, 2019 Keterangan : a = Berbeda bermakna dengan kontrol negatif b = Berbeda bermakna dengan kontrol positif
Daya aktivitas analgesik pada sediaan uji ditunjukkan dengan persentase hambat nyeri lebih besar atau sama dengan 50% dari kelompok kontrol negatif, maka dianggap efektif sebagai  analgesik  [17].  Persentase  ambang  nyeri  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  dosis terendah 10 mg/200  g BB adalah 42,60%, hal  ini  menunjukkan bahwa pada dosis  10 mg/200  g  BB  memiliki  aktivitas  analgesik  yang  lemah.  Berdasarkan  data  statistik ekstrak etanol daun Inggu dosis 20 mg/200 g BB dan dosis 40 mg/200 g BB memiliki aktivitas  analgesik  yang  sebanding  dengan  kontrol  positif.  Persentase  hambat  nyeri terbesar terlihat pada ekstrak dosis 40 mg/200 g BB yaitu 57,40% dan dosis 20 mg/200 g BB yaitu 54,20%,  hal ini dapat disimpulkan bahwa pada esktrak dosis 40 mg/200 g BB dan 20 mg/200 g BB memiliki lebih banyak kandungan senyawa aktif dengan jumlah yang terabsorbsi lebih banyak sehingga dapat menimbulkan efek analgesik yang lebih baik.
Pemberian ekstrak etanol daun inggu terbukti mampu meningkatkan daya tahan beban sebagai  respon  peningkatan  ambang  nyeri.  Hasil  secara  statistik  dengan  uji  Shapiro- Wilk  persentase  peningkatan  ambang  nyeri  semua  kelompok  terdistribusi  normal (p>0,05) dan uji levene yang diperoleh nilai signifikasinya 0,013 (p<0,05) artinya varian data  tidak  homogen.  Selanjutnya  dilakukan  uji  non  parametric  Kruskal-Wallis, menunjukkan  bahwa  nilai  p=0,087  (p>0,05)  berarti  tidak  ada  perbedaan  bermakna antara kelompok kontrol positif dengan kelompok dosis 10 mg/200 g BB, 20 mg/200 g BB, dan 40 mg/200 g BB. Hal tersebut berarti bahwa asam mefenamat dan variasi dosis ekstrak etanol daun inggu memiliki efek analgesik pada tikus putih jantan. Walaupun ektrak etanol daun inggu dosis 10 mg/200 g BB memiliki hasil terendah tetapi saat diuji statistik  tidak  ada  perbedaan  atau  sebanding  atau  sama  antar  kelompok  perlakuan. Persentase peningkatan ambang nyeri merupakan besarnya kemampuan senyawa uji dalam  mengatasi  nyeri  akibat  beban  yang  dijalankan.  Semakin  besar  dosis  semakin besar juga daya beban yang mampu ditahan oleh hewan uji.
Hasil uji analgetik dengan metode Tail flick dan metode Randall Selitto menunjukkan hasil yang sama dimana dosis 20 mg/200 g BB dan dosis 40 mg/200 g BB memiliki efek analgetik yang sebanding dengan kontrol positifnya.

## 4.  Kesimpulan
Dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun inggu mempunyai aktivitas analgesik dengan metode Tail Flick maupun Randall Selitto, pada dosis 40 mg/200 g BB ekstrak etanol  daun  inggu  mempunyai  aktivitas  analgesik  tertinggi  dan  sebanding  dengan kontrol  positif.  Ekstrak  etanol  daun  inggu  lebih  efektif  sebagai  analgesik  narkotik dengan metode Tail Flick  yaitu pada dosis 10 mg/200 g BB, 20 mg/200 g BB, dan 40 mg/200 g BB karena sebanding dengan pembanding.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Universitas Setia Budi Surakarta melalui Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat  (LPPM)  Universitas  Setia  Budi Surakarta yang telah membiayai penelitian ini, sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.

## Referensi
[1]       Tjay TH, Rahardja K. 2007. Obat-obat penting: Khasiat, Penggunaan, dan Efek- efek sampingnya, edisi ke-6.Cetakan pertama, Gramedia, Jakarta.
[2]       Katno,  Pramono  S.  2002.  Tingkat  manfaat  dan  keamanan  Tanaman  Obat  dan Obat Tradisional. Yogyakarta: Fakultas Farmasi UGM.
[3]      Noer  S.,  Pratiwi  RD.,  Gresinta  E.,  2018,  Penetapan  Kadar  Senyawa  Fitokimia (Tanin,  Saponin  Dan  Flavonoid  Sebagai  Kuersetin)  Pada  Ekstrak  Daun  Inggu (Ruta angustifolia L.), Jurnal Ilmu-ilmu MIPA, e. ISSN: 2503-2364
[4 ]       Pudjiastuti, Hendarti N., 1999. Penelusuran Beberapa Tanaman Obat Berkhasiat Sebagai Analgetik, Media Litbang Kesehatan Volume IX No 3.
[5]      Kusniawati, M.A., 2018, Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Inggu (Ruta angustifolia [l] pers) Pada Tikus Putih Jantan Dengan Metode Induksi Karagenan Dan Radiasi Uv (Skripsi), Fakultas Farmasi Universitas Setiabudi, Surakarta.
[6]      Pratiwi,  N.M.,  2018,  Aktivitas  Antipiretik  Ekstrak  Etanol  Daun  Inggu  (Ruta angustifolia (l.) pers.) Pada Tikus Putih Jantan Yang Diinduksi Demam Dengan Vaksin  Dtp-Hb-Hib.  (Skripsi).  Fakultas  Farmasi.  Universitas  Setia  Budi. Surakarta.
[7]       Saputri, Wina Adestia, 2013, Efek Antikonvulsi Ekstrak Etanol Daun Inggu ( Ruta angustifolia PERS.) Pada Mencit  Galur BALB/C Dengan Induksi PTZ Secara In Vivo (Skrpsi), Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
[8]      Noer S., Pratiwi RD., 2016. Uji Kualitatif Fitokimia Daun Ruta Angustifolia, Jurnal Ilmu-ilmu MIPA, Faktor Exacta 9(3): 200-206, 2016  p-ISSN: 1979-276X. e- ISSN: 2502-339X.
[9]        Patel  JM.  2008.  A  review  of  potential  health  benefits  of  flavonoids.  Lethbridge Undergraduate Reserch Journal. ISSN 1718-8482.
[10]    Baud,  G.S.,  Sangi,  M.S.,  Koleangan,  H.S.J.,  2014,  Analisis  Senyawa  Metabolit Sekunder  Dan  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Etanol  Batang  Tanaman  Patah  Tulang ( Euphorbia tirucalli L.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), Jurnal Ilmiah Sains, 14(2): 108.
[11]    Wijayah,  Alfonsius  Bryan.,  Gayatri  Citraningtyas.,  Frenly  Wehantouw.  2014. Potensi  Ekstrak  Etanol  Tangkai  Daun  Talas  (Colocasia  esculenta  L)  Sebagai Alternatif  Obat  Luka  Pada  Kulit  Kelinci  (Oryctolagus  cuniculus).  Skripsi. Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado.
[12]    Mustikasari  K,  Ariyani  D.  2008.  Studi  Potensi  Binjai  (Mangifera  caesia)  dan Kasturi (Mangifera casturi) Sebagai Antidiabetes melalui Skrining Fitokimia pada Akar dan Batang. Sains dan Terapan Kimis 2; 64-73.
[13]     Yusuf H. 2001. Efek analgesia ekstrak daun klausena (Clausena anisa Hook.f.) pada tikus putih dengan metode rat tail analgesy test [Tesis]. Medan: Universitas Sumatera Utara.
[14]    Wong,  C.E.,  2009,  Uji  Analgesik  Kombinasi  Tapak  Liman  dan  Patikan  Kebo Dengan  Metode  Paw  Pressure  Test  pada  Tikus  Putih,  (Skripsi),  Universitas Surabaya, Surabaya.
[15] Kayser V. 2013 Randall-Selitto Paw Pressure Test. In: Gebhart G.F., Schmidt R.F. (eds) Encyclopedia of Pain. Springer, Berlin, Heidelberg. https://link.springer.com/referenceworkentry/10.1007%2F978-3-642-28753-
4_3726 (21 Agustus 2019).
[16]    Wagh N.K., Hemantkumar S., Deokar., Badal S., Rathi., Subhash L., Bodhankar, Vithal  M.K.  2006.  Anti-inflammatory  and  Analgesic  Activity  of  4’- Methylbiphenyl-2-(Substituted  Phenyl)Carboxamide  Analog  in  Animal  Models of Inflammation. Pharmacologyonline. Vol: 2.
[17]   Puspitasari,  H.,  Listyawati,  S.,  Widiyani,  T.,  2003.  Aktivitas  Analgetik Ekstrak Umbi Teki (Cyperus rotundus L.) pada Mencit Putih (Mus musculus L.) Jantan. Biofarmasi, ISSN: 1693-2242. 1(2).
[18]    Wemay  M.A,  Fatimawali,  Wehantaouw  F.  2013.  Uji  fitokimia  dan  aktivitas analgesik  ekstrak  etanol  tanaman  kucing-kucingan  (Acalypha  indica  L)  pada tikus  putih  betina  galus  wistar  (Rattus  novergicus  L).  Jurnal  Ilmiah  Farmasi. 2(3):1-8.
[19]    Hidayati R.S, Napitupulu R.M. 2015. Kitab Tumbuhan Obat. Cetakan I. Jakarta: Agriflo .
[20] Adesokan AA, et.al., 2008. Effect of administration aqueous and ethanol extracts of Enantia chlorantha stem bark on brewer’s yeast induced pyresis in rats. African J of Biochemustry. 2:165-169
[21]     Oktavianus S, Fatmawati, Widya AL. 2014. Uji Efek analgetik ekstrak etanol daun papaya  (Carica  Papaya  L)  pada  mencit  putih  jantan  (Mus  mucculus).  Jurnal Ilmiah Farmasi 3: 2.
[22]      Gunawan  SG,  Setiabudy  Riyanto,  Nafrialdi,  Elysabeth.  2007.  Farmakologi  dan Terapi  edisi  5.  Departemen  Farmakologi  dan  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia.