## Efektivitas Ekstrak Etanol Biji Edamame (Glycine max L. Merril) terhadap Jumlah Fibroblas Pada Penyembuhan Luka Bakar Derajat II
The Effectiveness of Edamame Seed (Glycine max L. Merril) Ethanolic Extract to Fibroblast Count on Second Degree Burn Wound Healing
Arifah Nur Hasanah 1 , Ika Rahmawati Sutejo 2 , Enny Suswati 3
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Laboratorium Biokimia, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
3 Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember Alamat email korespondensi ika.unej@gmail.com

## ABSTRAK
Penyembuhan  luka  bakar  terdiri  dari  3  fase  yaitu  inflamasi,  proliferasi  dan remodelling. Stres  oksidatif  pada patogenesis luka bakar dapat mengganggu proliferasi fibroblas melalui hambatan TGF-β, sehingga jumlah fibroblas menurun  dan  penyembuhan  luka  bakar  menjadi  terhambat.  Genistein  yang  terkandung  dalam  biji  edamame memiliki sifat antiinflamasi, antibakteri dan antioksidan. Edamame juga mengandung vitamin A, C, dan E yang juga memiliki sifat antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas ekstrak etanol biji edamame (ED) dalam  meningkatkan  jumlah  fibroblas  pada  penyembuhan  luka  bakar  derajat  II.  Penelitian  ini  merupakan penelitian true experimental dengan post  test  only  control  group  design .  Penelitian  dilaksanakan  di  Universitas Jember  pada  November-Desember  2017.  Sampel  penelitian  berjumlah  24  tikus  model  luka  bakar  derajat  II yang dibuat dengan menempelkan logam panas (60°C) selama 5 detik pada punggung tikus yang telah dicukur. Sampel dibagi ke dalam 6 kelompok dengan perawatan topikal, antara lain: kelompok kontrol positif ( silver sulfadiazine ), kelompok kontrol negatif (Na CMC 0,5%), kelompok dengan pemberian ekstrak etanol biji edamame secara topikal yaitu  ED  20%,  ED  40%,  ED  60%,  ED  80%.  Perawatan  dilakukan  selama  15  hari  dan  pengambilan  sampel  kulit dilakukan pada hari ke-16. Preparat dibuat dengan pewarnaan Hematoksilin dan Eosin.  Pada uji one way ANOVA, diperoleh  nilai  signifikansi  0,011  (p≤0,05)  yang  berarti  paling  tidak  terdapat  perbedaan  jumlah  fibroblas  yang bermakna antara 2 kelompok.
Kata kunci: penyembuhan luka bakar, edamame, genistein,  jumlah fibroblas, silver sulfadiazine

## ABSTRACT
Burn wound healing process consists of three phases of inflammation, proliferation and remodelling. The number of fibroblasts has increased during the proliferation phase. Oxidative stress in burn may disrupt proliferation through TGF-β  inhibition,  result  in  decreased  number  of  fibroblasts  and  poor  burn  wound  healing.  Genistein  in  edamame seeds  has  anti-inflammatory,  antibacterial  and  antioxidant  properties.  Edamame  contains  vitamins  A,  C,  and  E which  is  also  have  antioxidant  properties.  Edamame  has  been  suggested  to  protect  burn  wound  healing  from oxidative  stress.  This  study  aimed  to  understand  the  effectiveness  of  edamame  seed  (Glycine  max  L.  Merril) ethanolic extract (ED) to fibroblast count in second degree burn wound healing.  This is true experimental research with post test only control group design. The study was conducted at University of Jember during November until December  2017.  The  sample  of  this  research  was  24  rat  models  of  second  degree  burn  which  was  made  by attaching hot metal (60 ° C) for 5 seconds on the shaved back of the rats. The sample  was divided into 6 groups with topical treatment, among others: positive control group (silver sulfadiazine), negative control group (Na CMC 0.5%), group with ED 20%, ED 40%, ED 60%, and ED 80%. Treatment was given for 15 days and skin sample was taken  on  the  16th  day.  In  one  way  ANOVA  test,  significance  value  of  0.011  (p≤0,05)  indicated  that  there  was  at least a significant difference between 2 groups.
Keyword: burn wound healing, vegetable soybean, genistein, fibroblast count, silver sulfadiazine

## PENDAHULUAN
Luka  bakar  menjadi  masalah  kesehatan  tingkat global  karena  tingginya  angka  kejadian  luka  bakar. Pada  tahun 2004, tercatat  11 juta orang mengalami luka  bakar  dan  310.000  diantaranya  meninggal dunia. Insiden luka bakar mayoritas terjadi di negara- negara  dengan  pendapatan  menengah  dan  rendah, khususnya negara-negara di Wilayah Asia Timur dan Selatan  (Peden et  al .,  2008).  Dari  100.000  pasien luka  bakar  di  India,  persentase  kejadian    luka  bakar didominasi  oleh  luka  bakar  derajat  II  yaitu  sebesar 73%, luka bakar derajat I sebanyak 17%, dan sisanya sebanyak 10% adalah luka bakar derajat III (Sabarahi, 2010).
Prevalensi  cedera  di  Indonesia  secara  nasional adalah  8,2%,  diantaranya  0,7%  merupakan  cedera karena  terbakar  (Riyadina et  al .,  2013).  Unit  Luka
Bakar Rumah Sakit Cipto Mangunkusumo menerangkan  terdapat  275  pasien  luka  bakar, selama  bulan  Januari  2011  sampai  Desember  2012, dengan  jumlah  pasien  anak  sebanyak  72  pasien  (26 %) (Dewi, 2014). Data pasti mengenai angka kejadian luka bakar belum tercatat dengan baik di Indonesia.
Proses penyembuhan luka terdapat 3 fase yaitu fase inflamasi,  fase  proliferasi  dan  fase  maturasi (remodelling) (Sjamsuhidajat, 2013). Jumlah fibroblas  mengalami  peningkatan  selama  fase proliferasi. Fase proliferasi berlangsung pada hari ke- 3 sampai hari ke-21. Proliferasi fibroblas dipengaruhi oleh TGF-ß, yakni suatu sitokin yang dihasilkan oleh sel  makrofag  (Mustaqim,  2014).  Sitokin  TGF-β dipengaruhi  oleh  radikal  bebas  dan  antioksidan alami dalam tubuh. Pada stres oksidatif, kerja TGF-β akan  terganggu  dan  menyebabkan  penurunan proliferasi,  migrasi,  dan  sintesis  fibroblas  (Irrera et al ., 2017).  Hasil penelitian yang dilakukan pada 180 pasien luka bakar, menunjukkan adanya keterlibatan kuat  stres  oksidatif  pada  patogenesis  luka  bakar ringan (Al-Jawad et al ., 2008).
Luka  bakar  perlu  ditangani  dengan  tepat  untuk mencapai keberhasilan dalam penyembuhan. Prinsip penanganan utama luka bakar adalah mendinginkan daerah  yang  terbakar  dengan  air,  mencegah  infeksi pada luka, dan menutup permukaan luka. Obat yang dianjurkan  dan  umum  digunakan  adalah  pemberian topikal  golongan silver  sulfadiazine (Sjamsuhidajat, 2013).  Meskipun  ada  kemajuan  teknik  perawatan luka  bakar,  masih  ada  kecenderungan  kegagalan pengobatan  pada  pasien.  Pemberian  antioksidan pada perawatan pasien luka bakar sangat dianjurkan
untuk  mencegah  morbiditas  dan  mortalitas  dengan lebih efektif (Al-Jawad et al ., 2008).
Edamame  merupakan  salah  satu  komoditas unggulan di Kabupaten Jember dan telah menembus pasar  internasional  (Firmansyah  dan  Dhuha,  2014). Edamame  mengandung  zat  antioksidan  golongan isoflavon  (Siddiq  dan  Prabawati,  2016).  Genistein merupakan  isoflavon  utama  pada  kedelai  edamame yang  memiliki  efek  antiinflamasi,  antibakteri,  dan antioksidan (Yang et al ., 2012). Selain itu, edamame mengandung  vitamin  A,  C,  dan  E  yang  termasuk antioksidan  poten  yang  dapat  digunakan  secara topikal  dan  bermanfaat  pada  kulit  (Samsu,  2001; Telang,  2013;  Keen  dan  Hasan,  2016;  Mukherjee, 2006;  Mackay  dan  Miller,  2003).  Antioksidan  pada edamame dapat melindungi proliferasi fibroblas dari kerusakan akibat stres oksidatif (Irrera et  al ., 2017). Kandungan-kandungan pada edamame dapat menjadi sumber antioksidan alami yang dipilih untuk terapi secara topikal pada penyembuhan luka bakar.
Berdasarkan  uraian  tersebut,  potensi  antioksidan pada  edamame  dapat  diteliti  pengaruhnya  dalam memperbaiki  proses  penyembuhan  luka  bakar. Penelitian tentang potensi edamame pada penyembuhan  luka  diharapkan  dapat  meningkatkan nilai  jual  edamame.    Biji  edamame  diduga  memiliki efek lebih baik daripada kulitnya, karena terlindungi dari  paparan  pestisida  yang  dapat  menganggu proses  penyembuhan  luka.  Peneltian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  efektivitas  ekstrak  etanol  biji edamame  (Glycine  max  L.  Merril)  terhadap  jumlah fibroblas pada penyembuhan luka bakar derajat II.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  di  Universitas  Jember  pada November-Desember 2017.
Penelitian ini
menggunakan  desain  penelitian true  experimental laboratories secara in  vivo dengan  rancangan eksperimen  sederhana post  test  only  control  group design. Populasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur  Wistar yang didapatkan dari peternak di Kabupaten Malang. Sampel  yang  dipilih  adalah  tikus  jantan  berusia  2-3 bulan  dengan  berat  badan  150-250  gram,  normal, sehat,  dan  memiliki  kulit  normal  tanpa  ditemukan kelainan.  Sampel  yang  digunakan  adalah  24  ekor tikus model yang diberi luka bakar derajat II. Sampel terbagi ke dalam 6 kelompok  dengan jumlah 4 ekor tikus  untuk  setiap  kelompok.  Sampel  dipilih  dengan teknik acak sederhana ( simple random sampling ).

## Etik Penelitian
Penelitian  ini  telah  mendapat  persetujuan  etik  dari Komisi  Etik  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Jember dengan  nomor  etik  1.190/H25.1.11/KE/2017  dan disetujui pada tanggal 06 November 2017.

## Pembuatan Ekstrak
Ekstraksi  biji  edamame  dilakukan  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  97%. Edamame seberat 10 kg dikupas lalu diambil bijinya. Biji  edamame  dicuci  dan  dikeringkan  dalam  suhu kamar  hingga  kadar  air  menjadi  nol.  Biji  edamame kering  dihaluskan  dengan  blender  hingga  menjadi serbuk  homogen  dan  ditimbang  sebanyak  730  mg. Serbuk  homogen  dimaserasi  dengan  etanol  97% dengan perbandingan 1:10. 730 mg serbuk homogen dimaserasi  ke  dalam  etanol  97%  sebanyak  7,3  L selama 3 hari, sambil sesekali diaduk. Hasil maserasi disaring  dengan  kertas  saring  Whatmann  dan didapatkan  filtrat  berwarna  hijau  segar.  Filtrat kemudian  diuapkan  pada  alat  rotary  evaporator pada  suhu 50°C dan didapatkan ekstrak  semi kental sebanyak 98,7 g berwarna hijau kehitaman.
Ekstrak  etanol biji edamame  ( Glycine max L.  Merril) dilarutkan dengan Na CMC 0,5% sesuai rumus:
Keterangan rumus:
A  = konsentrasi ekstrak (%)
e   = volume ekstrak biji edamame (ml)
v  = volume zat pelarut/Na CMC 0,5% (ml)

## Pemberian Luka Bakar
Luka  bakar  derajat  II  dibuat  dengan  menempelkan uang logam yang telah dipanaskan pada dry oven 60 °C  selama  5  menit,  kemudian  ditempelkan  pada punggung  tikus  yang  telah  dicukur  selama  5  detik (Venter, et  al., 2015;  Fuadi et  al., 2015).  Tikus dianastesi  dengan  ketamin  dosis  40  mg/kgBB  dan xylazin  dosis  5  mg/kgBB  secara  intraperitoneal (Tiesnamurti,  2016).  Luka  bakar  derajat  II  memiliki ciri-ciri yaitu luka berwarna putih, nyeri sekali, tanpa bula, edema  ringan sampai  hari ke 3 setelah cedera (Pereira et al., 2012).

## Perawatan Luka Bakar
Luka  bakar  derajat  II  pada  punggung  tikus dibersihkan dengan normal saline, selanjutnya diberi perawatan secara topikal sesuai kelompok. Kelompok  kontrol  positif  diberikan  krim silver sulfadiazine dan kelompok  kontrol negatif diberikan Na  CMC  0,5%.  Pada  kelompok  perlakuan  diberi ekstrak  yang  telah  dilarutkan  dalam  konsentrasi pada dosis 20%, 40%, 60%, dan 80%. Obat diberikan satu  kali  dalam  sehari  selama  15  hari  pada  pukul 08.00-11.00.  luka  ditutup  dengan  kasa  dan direkatkan dengan plester.

## Pengamatan Preparat
Pada  hari  ke-16,  hewan  coba  diterminasi  kemudian jaringat  kulit  yang  diberi  perlakuan  diambil  dan disimpan  dalam  botol  jaringan  berisi  formalin  10%. Sediaan  kulit  yang  diambil  terutama  dari  tepi  luka karena  proses  penyembuhan  luka  sebagian  besar berawal  dari  tepi.  Sediaan  kulit  dikirim  ke  RSD Soebandi  Jember  untuk  dilakukan  pembuatan preparat histologi. Preparat menggunakan pewarnaan hematoksilin dan eosin (H&E).
Pengamatan histopatologi dilakukan di Laboratorium Biomedik  Fakultas  Farmasi  Universitas  Jember. Preparat  diamati  dengan  mikroskop  cahaya  pada perbesaran lensa 400x pada  5 lapang pandang yang digeser  secara zig  zag ..  Pengamatan  dilakukan dengan metode blinding . Sel fibroblas dihitung pada foto  hasil  pengamatan  dengan  menggunakan software image-J. Hasil  dari  5  lapang  pandang  ini kemudian akan dirata-rata. Jumlah fibroblas dihitung sebagai  rata-rata  jumlah  hitung  dari  kelima  lapang pandang.

## Analisis Data
Sebelum  dilakukan  uji  statistik,  dilakukan  uji normalitas  data  berupa  uji  Saphiro  Wilk  dan  uji homogenitas  data  berupa  uji  Lavene.  Data  yang terdistribusi  normal  diuji  dengan one  way ANOVA dan  uji post  hoc LSD  untuk  mengetahui  perbedaan antar kelompok (Dahlan, 2013).

## HASIL PENELITIAN
Dari  hasil  penelitian,  didapatkan  jumlah  fibroblas hari ke-16 pada kelompok perlakuan dengan ekstrak
etanol biji edamame dosis 20%, 40%, 60%, dan 80% berturut-turut adalah 133,45 ± 41,11; 127,25 ± 5,84; 147,2  ±  32,12;  dan  99,5  ±  10,66  sel  per  lapang pandang. Pada kontrol positif, jumlah fibroblas yang diamati  sebesar  147,65  ±  34,61  sel  per  lapang pandang. Pada kontrol negatif, jumlah fibroblas yang diamati  sebesar  97,275  ±  10,38  sel  per  lapang pandang. Perbedaan yang nyata pada penyembuhan luka  dapat  dilihat  secara  makroskopis  pada pengecilan diameter luka seperti pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Perbandingan makroskopis luka tiap kelompok (sumber: dokumen peneliti).
Uji normalitas data dengan
Saphiro-Wilk
menunjukkan  nilai  signifikasi  diantaranya  sebesar 0,439  (p>0,05)  pada  kontrol  negatif,  0,96  (p>0,05) pada  kelompok  P1,  0,306  (p>0,05)    pada  kelompok P2,  0,117  (p>0,05)  pada  kelompok  P3,  dan  0,895 (p>0,05)  pada  kelompok  P4  yang  berarti  bahwa sebaran  data  normal  pada  tiap  kelompok.  Pada kontrol  positif  sebesar  0,023  yang  berarti  sebaran data  tidak  normal.  Pada  uji Lavene ,  nilai  signifikansi sebesar  0,072  (p>0,05)  yang  berarti  bahwa  varian data sama.
Pada  penelitian  ini,  kelompok  kontrol  positif memiliki  sebaran  data  tidak  normal.  Jika  asumsi normalitas  dilanggar,  peneliti  dapat  menghapus kasus-kasus  terpencil,  mengubah  data,  atau melakukan  tes  non  parametrik,  selama  proses tersebut  dilaporkan  dengan  jelas  (Nimon,  2012). Pada penelitian ini, data ditranformasi dengan log10 dan  dilakukan  inverse  (Osborne,  2002)  yaitu dimasukkan  ke  dalam  rumus  1/log10-1.  Data kemudian  diuji  dengan  one  way  ANOVA  untuk mengetahui adanya perbedaan kelompok.
Uji one  way ANOVA  menunjukkan  nilai  signifikansi 0,011  (p≤0,05)  yang  berarti  paling  tidak  terdapat perbedaan  jumlah  fibrolas  yang  bermakna  dari  2 kelompok.  Data  kemudian  dilanjutkan  dengan analisis  post  hoc  multiple  comparison  test
menggunakan  metode  LSD  (Least  Significant Difference)  dengan  nilai  p<0,05.    Analisis  LSD menunjukkan bahwa ada perbedaan bermakna pada kelompok  P3  (ekstrak  60%)  dengan  kontrol  negatif, kelompok  P3  (ekstrak  60%)  dengan  kelompok  P4 (ekstrak  80%),  kelompok  P4  (ekstrak  80%)  dengan kontrol  positif,  dan  kontrol  negatif  dengan  kontrol positif.
*p<0,05 terhadap kontrol negatif
Gambar 4.2 Histogram rata-rata jumlah fibroblas (sumber: dokumen peneliti)

## PEMBAHASAN
Proses penyembuhan luka terdiri dari tiga fase, yaitu fase inflamasi, fase proliferasi, dan fase remodelling . Fase  proliferasi  berlangsung  selama  3-24  hari tergantung  luas  luka.  Perawatan  luka  bakar  pada penelitian ini dilakukan selama 15 hari untuk melihat proses penyembuhan luka. Penyembuhan luka bakar diamati  melalui  peningkatan  jumlah  fibroblas  pada hari ke-16. Hal ini berdasarkan penelitian Kalsum et al .  (2015),  proses  penyembuhan  luka  yang  diamati menunjukkan  jumlah  fibroblas  pada  hari  ke-16 mengalami peningkatan.
Berdasarkan uji LSD, luka bakar yang dirawat dengan ekstrak  etanol  biji  edamame  20,  40,  dan  60% menunjukkan  perbedaan  bermakna  pada  jumlah fibroblas  jika  dibandingkan  dengan  kontrol  negatif. Dengan  demikian,  pemberian  ekstrak  etanol  biji edamame secara topikal efektif dalam meningkatkan jumlah  fibroblas  pada  proses  penyembuhan  luka. Makroskopis  luka  kelompok  pemberian  ekstrak  20, 40, dan 60% (P3) yang dapat dilihat pada Gambar 4.1 menunjukkan penutupan luka dengan diameter yang mengecil secara nyata pada hari ke-16.
Jumlah  fibroblas  mengalami  peningkatan  selama fase  proliferasi.  Profliferasi  fibroblas  dipengaruhi oleh TGF-β, yakni suatu  sitokin yang dihasilkan oleh sel  makrofag  (Mustaqim,  2014).  Sitokin  TGF-β
dipengaruhi  oleh  radikal  bebas  dan  antioksidan alami dalam tubuh. Pada keadaan radikal bebas yang berlebihan,  kerja  TGF-β  akan  terganggu  dan menyebabkan  penurunan  proliferasi,  migrasi,  dan sintesis  fibroblas  (Santibanez, et  al .,  2015).  Radikal bebas  yang  dihasilkan  pada  luka  bakar  dapat mengganggu  proses  proliferasi  fibroblas  pada penyembuhan luka. Akibatnya, proses reepitelialisasi menjadi  lambat  dan  hasil  penutupan  serta penyembuhan luka kurang sempurna (Hameedaldeen et  al .,  2009).  Enzim  yang  terkait pembentukan  radikal  bebas  pada  luka  bakar  yaitu xanthine oxidase . Selain itu, neutrofil yang adherensi dan  aktif  juga  menghasilkan  radikal  bebas  pada penyembuhan luka bakar (Horton, 2003).
Ekstrak  etanol  biji  edamame  mengandung  isoflavon yang merupakan senyawa antioksidan dan berfungsi menangkal  radikal  bebas  (Siddiq  dan  Prabawati, 2016). Komponen aktif dari isoflavon pada edamame meliputi  genistein,  daidzein  dan  glycitin  (Kim et  al ., 2015).  Genistein  mempercepat  perbaikan  jaringan luka  dengan  menghambat  aktivitas  yang  menunda penyembuhan, serta meningkatkan proses remodelling  pada  matriks  ekstra  sel  (Irrera et  al ., 2017).  Genistein juga  menghambat aktivitas protein tirosin  kinase  dan  meningkatkan  proliferasi  sel (Ponnusha et  al .,  2011).  Genistein  diteliti  dapat meningkatkan kadar TGF-β pada proses penyembuhan  luka  sekaligus  melindungi  proliferasi fibroblas dari gangguan stres oksidatif (Irrera, et al ., 2017).  Pada  penelitian  ini,  aktivitas  isoflavon terutama  genistein  pada  ekstrak  etanol  biji edamame mampu mempercepat penyembuhan luka melalui  mekanisme  antioksidan,  untuk  menangkal radikal  bebas  sehingga  aktivitas  TGF-β  tidak terhambat dan proliferasi fibroblas meningkat.
Kandungan  lain  yang  terdapat  pada  edamame adalah  saponin,  vitamin  C,  E  dan  vitamin  A  (Samsu, 2001).  Saponin  memiliki  aktivitas  antiinflamasi, antibakteri,  dan  antikarsinogenik  yang  mampu menstimulasi  sintesis  fibroblas  oleh  fibronektin (Kalsum et al., 2015). Vitamin A (retinoid) baik untuk perawatan  dan  penunda  penuaan  pada  kulit sehingga  mendukung  proses  perbaikan  jaringan pada  penyembuhan  luka.  Sedangkan  vitamin  E mempercepat  proses  penyembuhan  luka  sebagai agen  antioksidan  (Keen  dan  Hasan,  2016; Mukherjee, 2006). Penelitian yang dilakukan Butt et al. (2017)  menunjukkan  pretreatment  fibroblas dengan  vitamin  E  sebelum  transplantasi  kulit  yang terbakar  mempercepat  proses  penyembuhan  luka dengan  cara  meningkatkan scavenging  response
terhadap antioksidan pada lingkungan stres oksidatif pada luka bakar (Butt et al ., 2017).
Vitamin C juga memiliki aktivitas antioksidan. Selain itu,  vitamin  C  merupakan  zat  yang  dapat meningkatkan  produksi  sel  fibroblas  dengan  cara menghidroksi  lisin  dan  prolin  (Setyaningrum,  2002). Sebuah uji klinis yang dilakukan oleh Sarpooshi et al. (2016)  juga  menunjukkan  bahwa  pemberian  cairan vitamin  C  secara  topikal  dapat  mempercepat penyembuhan luka pada pasien luka bakar derajat II yang diukur dari peningkatan pembentukan jaringan granulasi pada hari ke-14.
Jumlah    fibroblas  yang  menurun  secara  signifikan pada  pemberian  ekstrak  etanol  biji  edamame  80%. Pada  penelitian  ini,  proses  penyembuhan  luka  pada kelompok  dosis  80%  lebih  lambat  yang  diakibatkan adanya  efek  antagonis  ekstrak  etanol  biji  edamame sehingga  mengurangi  efektivitas  ekstrak  dalam penyembuhan  luka  bakar.  Isoflavon  dapat  memberi efek  yang  disebut biphasic ,  yakni  fungsi  ganda isoflavonoid,  baik  secara  agonis  atau  antagonis tergantung  pada  konsentrasi  isoflavon  yang  ada. Isoflavon  memiliki  efek  sebagai  antagonis  estrogen di  lingkungan  estrogen  tinggi,  atau  dapat  bertindak sebagai  agonis  estrogen  di  lingkungan  estrogen rendah  (Hwang et  al .,  2006).  Genistein  juga menunjukkan efek biphasic pada penelitian terhadap regulasi pertumbuhan dan metastasis kanker prostat (Touny  dan  Banerjee,  2009).  Pada  dosis  ekstrak etanol  biji  edamame  80%  terdapat  efek biphasic genistein  yang  menyebabkan  penyembuhan  luka bakar  terhambat  dan  jumlah  fibroblas  menurun pada pengamatan.
Pada  kontrol  negatif,  Na  CMC  0,5%  yang  diberikan pada  perawatan  luka  bakar  merupakan  pelarut ekstrak  dan  tidak  mengandung  ekstrak  etanol  biji edamame.  Dari  hasil  penelitian,  jumlah  fibroblas pada  kelompok  perlakuan  Na  CMC  0,5%  paling sedikit  jika  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya yakni 97,275 ± 10,38 sel per lapang pandang. Hal ini disebabkan karena Na CMC 0,5% tidak mengandung senyawa  seperti  isoflavon,  saponin,  vitamin  A, vitamin  E,  dan  vitamin  C.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  Fuadi et  al .  (2015),  yaitu  luka  yang  tidak diberi ekstrak memiliki jumlah fibroblas lebih sedikit dibandingkan dengan kelompok yang  diberi ekstrak. Jumlah fibroblas yang menurun pada kontrol negatif terjadi  karena  proses  penyembuhan  luka  lebih lambat. Sesuai dengan penelitian Zulfia et al. (2014), yaitu  pada  kelompok  yang  tidak  diberi  ekstrak menunjukkan  kecepatan  reepitelialisasi  menurun
dan  scab  (kerak  luka)  belum  terlepas  sehingga proses penyembuhan luka tidak sempurna.
Pada  kontrol  positif,  jumlah  fibroblas  adalah  147,65 ±  34,61  sel  per  lapang  pandang.  Jumlah  ini meningkat  paling  tinggi  jika  dibandingkan  dengan seluruh  kelompok. Silver  sulfadiazine (SSD)  yang diberikan  pada  kelompok  ini  merupakan gold standard pengobatan  luka  bakar  secara  topikal. Sediaan  SSD  yang  digunakan  adalah  krim  Burnazin® 1%.  Selama  beberapa  dekade,  SSD  1%    telah digunakan  untuk  mengobati  luka  bakar  dan  luka kronis.  Krim  SSD  memiliki  spektrum  aktivitas antimikroba  yang  luas,  resistensi  bakteri  yang rendah, sedikit reaksi merugikan dan risiko toksisitas sistemik yang rendah (Hosseini et al., 2009).
Krim  SSD  memiliki  sifat  antibakteri  dengan  cara berkompetisi  dengan  substrat  PABA  untuk  sintesis enzim  dihidropetroat  sehingga  mencegah  sintesis asam  folat  bakteri,  selain  itu  mampu  merangsang sel-sel  seperti  makrofag  untuk  mengasilkan growth factor dan  sitokin  dalam  proses  penyembuhan  luka seperti  TGF-β,  EGF,  interleukin-1,  interleukin-4  dan interleukin-8. Krim SSD juga  mempunyai efek positif pada proliferasi fibroblas yang merupakan penghasil kolagen dan fibronektin (Esfahani et al. , 2012).
Kekurangan  dari  penelitian  ini  adalah  pengamatan dilakukan  satu  kali,  sehingga  tidak  dapat  dilakukan pengamatan  pada  setiap  fase  penyembuhan  luka. Hal  ini  memengaruhi  interpretasi  dari  jumlah fibroblas  yang  didapatkan  menurun  pada  dosis ekstrak  yang  lebih  tinggi  yakni  antara  lain disebabkan  oleh  fase  penyembuhan  telah  berlanjut atau penyembuhan luka berjalan lambat.
Pemberian  ekstrak  tanpa  menggunakan  vehicle seperti  basis  krim  atau  basis  salep  menjadi kekurangan  lain  pada  penelitian  ini.  Pemilihan pelarutan  ekstrak  dengan  Na  CMC  0,5%  kurang sesuai jika dibandingkan dengan kontrol positif, yaitu menggunakan  sediaan  krim  dengan  zat  aktif silver sulfadazine .  Pada  saat  perawatan  luka,  sulit dilakukan  kontrol  terhadap  tikus  yang  menggaruk, menjilat,  dan  melepas  esktrak  atau  obat  yang  telah diaplikasikan  pada  luka  bakar  yang  terletak  di punggung tikus. Penggunaan kasa dan perekat telah digunakan  untuk  mengurangi  kejadian  penggarukan dan  penjilatan  oleh  tikus,  akan  tetapi  peneliti  tidak dapat  mengontrol  upaya  tikus  untuk  melepas  kasa tersebut.  Penggunaan vest-collar ,  salah  satu  tipe rodent collar , seperti pada penelitian yang dilakukan oleh Jang et al. (2016) dapat dipasang di leher tikus
selama penelitian berlangsung untuk mencegah tikus dari menjilat dan menggaruk bagian luka.
Pada penelitian ini, pemberian anastesi menyebabkan  sianosis  pada  2  tikus  cadangan  dan berakhir  kematian.  Kematian  terjadi  beberapa  saat setelah  pemberian  ketamin  dan  xylazin  secara intraperitoneal.  Pemberian  dosis,  ketamin  40 mg/KgBB tikus dan xylazin 5 mg/KgBB, masih dalam rentang  dosis  efektif  sesuai  dengan  Petunjuk  Teknis Penggunaan  dan  Perawatan  Rodentia  sebagai Hewan Coba yang dikeluarkan oleh Badan Penelitian dan Pengembangan Peternakan (Tiesnamurti, 2016). Perlu  penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui faktor-faktor sianosis pada tikus yang diberi anastesi ketamin dan xylazin.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, maka dapat disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  biji edamame  ( Glycine  max L.  Merril)  secara  topikal dapat meningkatkan jumlah fibroblas pada penyembuhan  luka  bakar  derajat  II.  Pemberian secara  topikal  ekstrak  etanol  biji  edamame  ( Glycine max L.  Merril)  pada  dosis  60%  efektif  jika dibandingkan dengan kontrol negatif.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada  dr.    Ika Rahmawati Sutejo, M.Biotech. Dan dr. Enny Suswati, M.Kes.  Atas  bimbingan  yang  diberikan  selama penelitian hingga tersusun-nya artikel penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Jawad, F. H., A.S. Sahib, A. A. Al-Kaisy. 2008. Role Of  Antioxidant  In  The  Treatment  Of  Burn Lesions. Annals  Of  Burn  And  Fire  Disaster . 21(4): 186-191.
Butt,  H.,  A.  Mehmood,  M.  Ali,  S.  Tasneem,  M.  S.
Anjum,  M.  N.  Tarar,  S.  N.  Khan,  S.  Riazuddin. 2017. Protective Role Of Vitamin E
Preconditioning  Of  Human  Dermal  Fibroblasts Against  Thermal  Stress  In  Vitro. Life  Sciences . 184: 1-9.
Dewi, R. 2014. Tata Laksana Luka Bakar Pada Anak. Dalam Current Evidences In Pediatric Emergencies Management . Jakarta: Departemen Ilmu Kesehatan Anak FKUI-RSCM.
Esfahani,  Imanieh,  Khoshneviszadeh,  Meshksar,
Noorafshan,  Geramizadeh,  Ebrahimi,  Handjani, Tanideh.  2012.  The  Healing  Effect  Of  Arnebia Euchroma  In  Second  Degree  Burn  Wounds  In Rat  As  An  Animal  Model. Iranian  Red  Crescent Med Journal . 14(2): 70-74.
Firmansyah  Dan  Dhuha.  2014.  Kedelai  Jember
Tembus Pasar Internasional. Pusdatin Sekretariat Kabinet Republik Indonesia. Http://Setkab.Go.Id/Kedelai-Jember-Tembus-
Pasar-Internasional/.  [Diakses  Pada  10  Juni 2017].
Fuadi,  M.  I.,  U.  Elfiah,  Misnawi.  2015.  Jumlah Fibroblas Pada Luka Bakar Derajat II Pada Tikus Dengan  Pemberian  Gel  Ekstrak  Etanol  Biji Kakao Dan Silver Sulfadiazine. E-Jurnal Pustaka Kesehatan . 3(2): 244-248.
Hameedaldeen, A., J. Liu, A.  Batres,  G. S. Graves, D. T. Graves. 2014. FOXO1,  TGF-Β Regulation And Wound  Healing. International  Journal  Of Molecular Sciences. 15: 16257-16269.
Horton,  J.  W.  2003.  Free  Radicals  And  Lipid Peroxidation  Mediated  Injury  In  Burn  Trauma: The  Role  Of  Antioxidant  Therapy. Toxicology . 189:75-88.
Hosseini,  S.  N.,  A.  Karimian,  S.  N.  Mousavinasab,  H. R.  Rahmanpour,  M.  Yamini,  S.  H.  Zahmatkesh. 2009.  Xenoderm  Versus  1%  Silver  Sulfadiazine In  Partial-Thickness  Burns. Asian  Journal  Of Surgery . 32(4): 234-239.
Hwang,  C.  S.,  H.  S.  Kwak,  H.  J.  Lim,  S.  H.  Lee,  Y.  S. Kang,  T.  B.  Choe,  H.  G.  Hur,  K.  O.  Han.  2006. Isoflavone  Metabolites  And  Their  In  Vitro  Dual Functions:  They  Can  Act  As  An  Estrogenic Agonist  Or  Antagonist  Depending  On  The Estrogen  Concentration. Journal  Of  Steroid Biochemistry  And  Molecular  Biology .  101:246- 253.
Irrera,  N.,  G.  Pizzino,  R.  D’Anna,  M.  Vaccaro,  V. Arcoraci,  F.  Squadrito,  D.  Altavilla,  A.  Bitto. 2017. Dietary Management Of Skin Health: The Role Of Genistein. Nutrients. 9(622): 1-10.
Jang,  Y.,  Y.  E.  Park,  C.  W.  Yun,  D.  H.  Kim,  H.  Chung. 2016.  The  Vest-Collar  As  A  Rodent  Collar  To
Prevent Licking And Scratching During
Experiments. Laboratory  Animal .  50(4):  296- 304.
Kalsum, U., Y. W. Utami, L. Mafula. 2015. Perbedaan Perawatan Luka Bakar Derajat  II Menggunakan Ekstrak Kedelai (Glycine Max) Dan Normal Salin Terhadap  Jumlah  Sel  Fibroblas  Pada  Tikus (Rattus  Norvegicus)  Galur  Wistar. Majalah Kesehatan FK UB .
Keen,  M.  A.  Dan  I.  Hassan.  2016.  Vitamin  E  In Dermatology. Indian  Dermatology  Online
Journal . 7(4): 311-314. Kim,  Y.  M.,  J.  S.  Huh,  Y.  Lim,  M.  Cho.  2015.  Soy Isoflavone Glycitin (4’-Hydroxy-6- Methoxyisoflavone-7-D-Glucoside) Promotes Human Dermal Fibroblast Cell Proliferation And
Migration  Via  TGF-Β  Signaling. Phytotherapy Research. 29: 757-769.
Mackay,  D.,  A.  L.  Miller.  2003.  Nutritional  Support For  Wound  Healing. Alternative  Medicine Review. 8(4): 359-377.
Mukherjee, S., A. Date, V. Patravale, H. C. Korting, A. Roeder,  G.  Weindl.  2006.  Retinoid  In  The Treatment  Of  Skin  Aging:  An  Overview  Of Clinical Efficacy And Safety. Clinical Intervention In Aging. 1(4): 372-348.
Mustaqim,  K.B.  2014.  Pengaruh  Gel  Ekstrak  Etanol Biji Kakao (Theobroma Cacao) Terhadap Jumlah Fibroblas  Pada  Proses  Penyembuhan  Luka Bakar Derajat II Secara In Vivo. Skripsi. Jember: Fakultas Kedokteran Universitas Jember.
Nimon,  K.  F.  2012.  Statistical  Assumptions  Of Substantive Analyses Across The General Linear Model: A Mini-Review. Frontiers In Psychology. 3(322): 71-75.
Osborne,  J.  W.  2002.  Note  On  The  Use  Of  Data Transformations. Practical Assesment, Research & Evaluation. 8 (6): 1-7.
Peden, M., K. Oyegbite, J. Ozanne-Smith, A. A. Hyder, C.  Branche,  A.  K.  M.  F.  Rahman,  F.  Rivara,  K. Bartolomeeos.  2008 .  World  Report  On  Child Injury  Prevention. Switzerland:  World  Health Organization Publisher.
Ponnusha,  B.  S.,  S.  Subramaniyam,  P.  Pasupathi,  B.
Subramaniyam,  R.  Virumandy.  2011.  Review
Article: Antioxidant And Antimicrobial
Properties  Of  Glycine  Max. Int  J  Cur  Bio  Med Sci. 1(2): 49-62.
Riyadina,  W.,  A.  M.  Sirait,  S.  Tuminah,  F.  X.
Suharyanto,  Z.  Nantabah.  2013. Cedera .  Riset Kesehatan Dasar 2013: 100-110.
Sabarahi,  S.  2010. Principles  And  Practice  Of  Burn Care. New Delhi: Jaypee Ltd
Santibanez, J. F., J. Krstic, D. Trivanovic, S. Mojsilovic.
2015.  Transforming  Growth  Factor-Beta  And Oxidative  Stress  Interplay:  Implications  In
Tumorigenesis And Cancer Progression. Oxidative  Medicine  And  Cellular  Longevity. 2015: 1-10.
Samsu,  S.H.  2001. Edamame:  Vegetable  Soybean .
Jember: PT Mitratani Dua Tujuh.
Sarpooshi,  H.  R.,  F.  Mortazavi,  M.  Vaheb,Y.
Tabarayee. 2016. The Effects Of Topical Vitamin C  Solution  On  Burn  Wounds  Granulation:  A Randomized  Clinical  Trial. J Biomed. In Press(In Press). E8301:1-5
Setyaningrum,  A.  2002.  Pengaruh  Pemberian Vitamin  C  Dosis  Tertentu  Terhadap  Kecepatan
Pertumbuhan Penyembuhan Luka Pasca
Pencabutan  Gigi .  Skripsi. Yogyakarta:  Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Gadjah Mada
Shurtleff,  W.  Dan  A.  Aoyagi.  2009. History  Of Edamame,  Green  Vegetable  Soybeans,  And
Vegetable-Type  Soybeans  (1275  -  2009): Extensively Annotated Bibliography And
Sourcebook. Lafayette: Soyinfo Center.
Siddiq, H. B. H. F., E. F. Prabawati. 2016. Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Biji  Edamame
(Glycine  Max  L.  Merril)  Dengan  Metode  DPPH. Jurnal Ilmiah Kesehatan . 1(1): 27-31.
Sjamsuhidajat,  R.  2013. Buku  Ajar  Ilmu  Bedah Sjamsuhidajat-De  Jong. Edisi  3.  Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Telang, P. S. 2013. Vitamin C In Dermatology. Indian Dermatology Online Journal . 4(2): 143-146.
Tiesnamurti, B. 2016. Penggunaan Dan Penanganan Hewan Coba Rodentia Dalam Penelitian Sesuai Dengan Kesejahteraan Hewan. Bandung: Pusat Penelitian Dan Pengembangan Peternakan.
Touny,  L.  H.  E.  Dan  P.  P.  Banerjee.  2009.
Identification  Of  A  Biphasic  Role  For  Genistein In  The  Regulation  Of  Prostate  Cancer  Growth And Metastasis. Cancer Research . 69 (8): 3695- 3703.
Yang,  Z.,  K.  Kulkarni,  W.  Zhu,  M.  Hu.  2012.
Bioavailability And Pharmacokinetics Of Genistein:  Mechanistic  Studies  On  Its  ADME. Anticancer  Agent  Med  Chem .  12(10):  1264- 1280.
Zulfia,  R.,  Y.  W.  Utami,  E.  Asmaningsih.  2014. Pengaruh  Pemberian  Topikal  Ekstrak  Etanol (Gylicine Max) Terhadap Pembentukan Jaringan Epitel  Pada  Perawatan  Luka  Bakar  Derajat  II Pada  Tikus  Wistar. Berkala  Ilmiah  Mahasiswa Keperawatan Indonesia . 2(2): 19-30.