Stannum : Jurnal Sains dan Terapan Kimia, 3 (1) (2021) 16-22
Stannum : Jurnal Sains dan Terapan Kimia
Website: https://journal.ubb.ac.id/index.php/stannum doi: 10.33019/jstk.v3i1.2117 Research paper
Anti-Inflammatory Activity of Ethanol Extract of Starfruit Leaves ( Averrhoa bilimbi L.) Against Inhibition of Protein Denaturation Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol  Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Penghambatan Denaturasi Protein
Dheani Sepalia Novika * , Riska Ahsanunnisa, dan Dwi Fitri Yani
Prodi Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Raden Fatah Palembang
* Corresponding author: dheanisepalianovika98@gmail.com

## ABSTRACT
Inflammation  is  a  cell  breakdown  caused by  bacteria,  chemical  substances,  mechanical trauma and physical trauma. Testing of such antiinflammatory activity can be done in- vitro  with  the  method  of  protein  denaturation  using  natural  materials  starfruit  leaf (Averrhoa bilimbi L.). This research aims to determine the comparison of the activity of ethanol extract in the strafruit leaf and sodium diclofenac. strafruit Leaf Ethanol extract is made with a concentration of 1 ppm, 10 ppm and 100 ppm with the comparator of sodium diclofenac.  Antiinflammatory  resistance  is  obtained  by  calculating  the  percentage  of inhibition  of  protein  denaturation.  The  result  of  a  test  of  strafruit  leaf  ethanol  extract (Averrhoa  bilimbi  L .)  with  a  value  of  IC50  of  20.20  μg/mL  indicates  an  inhibitory percentage of more than 20% at the lowest concentration of 1 ppm, while IC50 sodium diclofenac of 14.93 μg/mL with an inhibitory percentage of more than 20% at 5 ppm . Key words: Anti-inflammatory activity, (Averrhoa bilimbi L.), protein denaturation

## PENDAHULUAN
Inflamasi  atau  peradangan  merupakan respon  jaringan  terhadap  reaksi  tubuh  yang dapat  menimbulkan  kerusakan  sel.  Kerusakan sel  dapat  disebabkan  oleh  bakteri,  zat  kimia, trauma mekanik dan trauma fisik (Permata,2017).  Inflamasi  sering  terjadi  pada manusia dan  hewan ditandai dengan timbulnya kemerahan,  panas,  pembengkakan,  rasa  nyeri, hilangnya  fungsi  dari  jaringan,  meningkatkan permeabilitas,  peningkatan  denaturasi  protein dan  membran.  Proses  inflamasi  jika  tidak diatasi dapat menimbulkan penyakit vasomotor rhinorrhoea, rheumatoid arthritis dan aterosklerosis (Aditya,2015).
Berdasarkan data dari Kemenkes RI (2018), prevalensi penyakit sendi di Indonesia tercatat sekitar  7,3%  dan  penyakit  sendi  yang  umum terjadi  ialah  osteoarthritis  atau  radang  sendi. Penyakit  radang  atau  inflamasi  sendi  terjadi pada rentang usia 15-24 tahun sebanyak (1,3%) dan terus meningkat pada rentang 24-35 tahun sebanyak (3,1%)
Inflamasi  pada  sendi  biasanya  diobati dengan  obat antiinflamasi  nonsteriod  (AINS). Salah  satu  contoh  golongan  obat  AINS  yang banyak digunakan dalam pengobatan antiinflamasi  adalah  natrium  diklofenak.  Obat ini mempunyai daya untuk menghambat enzim siklooksigenase. Natrium diklofenak mempunyai efek yang cepat dalam
menghilangkan  inflamasi  (peradangan)  tetapi juga  mempunyai  resiko  efek  samping  yang berbahaya, antara lain menimbulkan gangguan pada  saluran  cerna,  sistem  sirkulasi  tubuh, saluran  pernafasan,  proses  metabolik,  dan hipersensitivitas (Fridiana,2012).
Belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L) merupakan  tanaman  obat  yang  memiliki aktivitas  antibakteri,  antioksidan,  antimikroba dan  antiinflamasi  (mengurangi  dan  menekan peradangan). Tanaman dari  suku Oxalidacea ini mengandung  saponin,  kalsium  oksalat,  sulfur, asam  format,  tannin,  peroksidase,  glukosida, kalium sitrat, polifenol dan flavonoid. Flavonoid mempunyai  aktivitas  antiinflamasi  karena dapat  menghambat  beberapa  enzim  seperti aldose reduktase, xanthine oxidase,
phosphodiesterase, Ca
2+ A Tpase, lipooxygenase dan cyclooxygenase (Bashori,2008).
Penelitian  mengenai  uji  antiinflamasi  ini menggunakan metode in-vitro. Metode in-vitro memiliki kelebihan yakni waktu uji lebih cepat, sampel  yang  digunakan  sedikit  dan  tidak memerlukan  hewan  uji  (Ikrom,2014).  Salah satu  metode  in-vitro  yang  dapat  digunakan adalah  metode  denaturasi  protein.  Beberapa penelitian dengan tanaman lain telah dilakukan untuk  memperoleh  aktivitas  antiinflamasi dengan  metode  denaturasi  protein,  seperti rimpang  temulawak menunjukkan  aktivitas antiinflamasi  IC 50 sebesar  398,02±1,78  bpj (Farida,  2011)  dan  jus  buah  manggis menunjukkan  nilai  IC 50 sebesar  16,91%  (r  = 0,965) (Aditya,2015). Denaturasi
protein pada jaringan merupakan  salah  satu  penyebab  inflamasi. Denaturasi  protein  adalah  proses  dimana terjadi  perubahan  atau  modifikasi  terhadap struktur protein. Mekanisme denaturasi protein melibatkan  pengubahan  ikatan  elektrostatik hidrogen,  hidrofobik  dan  disulfide.  Aktivitas penghambatan
denaturasi protein dipresentasikan  dalam  persen  penghambatan (Yanti,2019).  Selain  itu,  denaturasi  protein melibatkan  pemanasan  sehingga  dianggap paling  cocok  untuk  digunakan  karena  tidak bersifat  asam  dan  tidak  membutuhkan  biaya yang mahal.
Berdasarkan  hal  tersebut  maka  perlu dilakukan  penelitian  untuk  menguji  aktivitas antiinflamasi  dari  ekstrak  etanol  daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L) terhadap kemampuan penghambatan denaturasi protein yang  menggunakan  spektrofotometer  UV- Visible .

## METODOLOGI
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini, yaitu daun belimbing wuluh yang berasal  dari  Palembang,  etanol  96%  (teknis), Bovine Serum Albumin (nitra kimia), Tris Buffer Saline (bio  gear),  NaCl,  aquades,  obat  natrium diklofenak  50  gr  (Novell),  reagen  kimia  : dragendrof, mayer, H 2 SO 4 , NaOH, FeCl 3 , dan HCl.

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini,  yaitu  blender,  timbangan  analitik  (ohaus), pH  meter  (ATC),  oven,  corong  pisah  (iwaki), kertas  saring,  labu  ukur  (pyrex),  beaker  glass (iwaki), gelas ukur (pyrex), corong, Erlenmeyer (pyrex), pipet tetes, tabung reaksi (pyrex), rak tabung  reaksi,  batang  pengaduk,  spatula, seperangkat  alat rotary  evaporator (buchi), botol  kaca  gelap,  waterbath  (memmert)  dan seperangkat  instrument  spektrofotometer UV- Visible (agilent 8453).

## Prosedur Penelitian Preparasi Sampel
Daun  belimbing  wuluh  diperoleh  dari Kelurahan  Kemuning,  Ariodillah  III  Kota Palembang, Sumatera Selatan. Daun  belimbing wuluh  dikering-anginkan  5-7  hari,  setelah kering  daun  belimbing  wuluh  dihaluskan menggunakan  blender  sehingga  diperoleh serbuk daun belimbing wuluh.

## Ekstraksi Daun Belimbing Wuluh
Serbuk  daun  belimbing  wuluh  yang diperoleh dimaserasi menggunakan etanol 96% selama 1 × 24 jam dengan tiga kali pengulangan, kemudian disaring. Ekstrak dipekatkan dengan rotary  evaporator pada  suhu  40°C,  sehingga diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak  kental dilakukan  pengujian  skrining  fitokimia  dan dilakukan  variasi  konsentrasi  untuk  melihat aktivitas antiinflamasi terhadap penghambatan denaturasi protein.

## Skrining Fitokimia
Ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  diuji kualitatif terhadap senyawa alkaloid, flavonoid, fenol, steroid, terpenoid, tanin dan saponin.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  diambil    sebanyak  0,5  ml kemudian  ditambahkan  larutan  BSA  0,2% hingga  volume  5  mL  sehingga  didapatkan varian konsentrasi menjadi 1, 10, dan 100 ppm.

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Larutan kontrol positif diambil  sebanyak 0,5 ml  kemudian ditambahkan dengan larutan BSA 0,2% hingga volume 5 ml sehingga didapatkan variasi konsentrasi menjadi 1,3 ppm, 2,5 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm dan 40 ppm.
Pembuatan larutan TBS (Tris Buffer Saline) Timbang  1,21  gram tris  base dan  8,7  gram NaCl, lalu tambahkan aquades sebanyak 900 ml. Stabilkan pH dengan penambahan asam asetat glasial sampai pH 6,2-6,5. Kemudian tambahkan aquades sampai 1000 ml dalam labu ukur.
Pembuatan  0,2%  BSA (Bovine  Serum Albumin)
Timbang    0,2  gram  BSA  lalu  masukkan  ke dalam  labu  ukur  100  ml,  kemudian ditambahkan  dengan  larutan  TBS  hingga volume 100 ml.

## Aktivitas Antiinflamasi
Setiap  larutan  diinkubasi  pada  suhu  25°C selama  30  menit  dan  dipanaskan  selama  5 menit  pada  suhu  ±72  °C  dengan  water  bath, kemudian  didinginkan  selama  25  menit  pada suhu  ruang  dan  diukur  absorbannya  dengan spektrofotometer  Uv-visible  pada  panjang gelombang  660  nm.  Uji  aktivitas  antiinflamasi dilakukan sebanyak tiga kali (triplo).

## Denaturasi Protein
Persentase penghambatan denaturasi protein  diukur  dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut :
%inhibisi = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓−𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑢𝑗𝑖 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓 𝑥 100%
Senyawa yang menghambat denaturasi protein lebih  besar  dari  20%  dianggap  memiliki  sifat antiinflamasi dan dapat digunakan sebagai nilai acuan untuk pengembangan obat
Perhitungan Persentase Nilai IC 50 Nilai  IC 50 dihitung  dengan  membuat persamaan regresi linear antara konsentrasi (X) dengan % inhibisi (Y) sehingga didapatkan nilai IC 50 dari ekstrak etanol daun belimbing wuluh dan natrium diklofenak.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Skrining Fitokimia
Ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  yang telah  diperoleh  dilakukan  skrining  fitokimia untuk  mengetahui  senyawa  metobolit  yang terkandung  di  dalam  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh.  Hasil  uji  fitokimia  dapat dilihat pada Tabel 1.
Dapat  diketahui    pada  Tabel  1  terdapat perbedaan  kandungan  senyawa  metabolit sekunder dari daun belimbing wuluh. Penelitian Arifin (2019) dan Yanti (2019) menunjukkan uji positif  lemah  terhadap  senyawa  flavonoid  dan fenol, sedangkan pada penelitian ini memberikan uji positif kuat terhadap flavonoid dan  fenol,  selain  itu  pada  penelitian  ini  juga menunjukkan  uji  negatif  terhadap  senyawa steroid.  Hal  tersebut  diduga  karena  beberapa faktor diantaranya tempat tumbuh, faktor stres lingkungan seperti kandungan logam berat atau paparan sinar UV, usia tanaman, faktor genetik dan  faktor  fisik  seperti  iklim,  suhu  dan  cuaca (Yani,2017)

## Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi
Pengujian  aktivitas  antiinflamasi  terhadap denaturasi protein dilakukan dengan penambahan  larutan Bovine  Serum  Albumin (BSA),  hal  ini  dikarenakan  untuk  mengurangi penggunaan  spesimen  hidup  dalam  proses pengembangan obat dan ketika BSA dipanaskan maka  akan  terjadi  denaturasi.  Menurut Nasution  (2019)  senyawa  yang  dapat menstabilkan  protein  dari  proses  denaturasi protein  merupakan  senyawa  yang  berpotensi sebagai antiinflamasi. Dimana, terjadi interaksi antara  BSA    dengan  zat  aktif  senyawa  yang mengakibatkan adanya ikatan zat aktif dengan tirosin,treosin  dan  lisin.  Ketika  zat  aktif menempel  dengan  zat  aktif  maka  akan  tidak mencegah terjadinya denaturasi BSA. Pengujian ini  dilakukan  pada  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh  dan  natrium  diklofenak seperti Gambar 1.
Tabel 1. Hasil Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh
Golongan Senyawa Metode Perubahan Warna Hasil Uji Hasil Uji Pengamatan Arifin (2019) Yanti (2019) Alkaloid Uji Mayer Kuning, tidak ada endapan + + + Flavonoid Uji NaoH Kuning ++ + + Fenol Uji FeCl 3 Hitam Kebiruan ++ + + Steroid Uji Tessalkowski Tidak terbentuk cincin cokelat - + + Terpenoid Uji Liberman Bunchardat Merah Kecokelatan + Tidak diuji Tidak diuji Tanin Uji Uji FeCl 3 Hijau Kecokelatan ++ ++ ++ Saponin Tes Foam Terbentuk busa ++ ++ ++
Keterangan   :   (-) = Negatif  (+) = Lemah   (++)  = Kuat

## Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi
Pengujian  aktivitas  antiinflamasi  terhadap denaturasi protein dilakukan dengan penambahan  larutan Bovine  Serum  Albumin (BSA),  hal  ini  dikarenakan  untuk  mengurangi penggunaan  spesimen  hidup  dalam  proses pengembangan obat dan ketika BSA dipanaskan maka  akan  terjadi  denaturasi.  Menurut Nasution  (2019)  senyawa  yang  dapat menstabilkan  protein  dari  proses  denaturasi
protein  merupakan  senyawa  yang  berpotensi sebagai antiinflamasi. Dimana, terjadi interaksi antara  BSA  dengan  zat  aktif  senyawa  yang mengakibatkan adanya ikatan zat aktif dengan tirosin,treosin  dan  lisin.  Ketika  zat  aktif menempel  dengan  zat  aktif  maka  akan  tidak mencegah terjadinya denaturasi BSA. Pengujian ini  dilakukan  pada  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh  dan  natrium  diklofenak seperti Gambar 1.
(a) (b)
Gambar 1. (a) Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh  (b) Natrium diklofenak Kontrol positif yang digunakan yaitu natrium diklofenak dengan variasi konsentrasi 40 ppm, 20 ppm, 10 ppm, 5 ppm, 2,5 ppm dan 1,3 ppm. Pemilihan  obat  natrium  diklofenak  ini dikarenakan  mempunyai  kemampuan  untuk memblokir isoenzim cyclooxigenase-2 (COX-2) sepuluh  kali  lipat  lebih  besar  dibandingkan dengan  obat  AINS  lainnya.  Hasil  aktivitas
antiinflamasi  dari  natrium  diklofenak  dapat dilihat pada Tabel 2.

## Aktivitas Antiinflamasi Natrium Diklofenak
Berdasarkan  Tabel  2  dapat  diketahui persentase inhibisi denaturasi protein natrium diklofenak  pada  konsentrasi  1,3  ppm  dan  2,5 ppm memberikan  hasil  kurang dari  20% yang
berarti  kurang  efektif  untuk  menghambat proses inflamasi, sedangkan pada konsentrasi 5 ppm,10  ppm,  20  ppm  dan  40  ppm  nilai persentase  inhibisi  denaturasi  protein  lebih besar  dari  20%  sehingga  memiliki  aktivitas antiinflamasi.  Konsentrasi  40  ppm  mampu menghambat  denaturasi  protein  sebesar 89,39%,  nilai  ini  sangat  tinggi  dan  mendekati 100%. Hal ini dikarenakan natrium diklofenak
merupakan penghambat COX yang kuat dengan efek  antiinflamasi.  Obat  ini  memiliki  aktivitas penghambatan  pembentukan  prostaglandin yang  merupakan  mediator  nyeri  dan menurunkan  konsentrasi  intrasel  arakidonat bebas  dalam  leukosit  dengan  mengubah pelepasan  dan  pengambilan  asam  lemak (Aulia,2015).
Tabel 2. Aktivitas Antiinflamasi Natrium Diklofenak Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi Kontrol Negatif 0,066 0,000 1,3 0,064 3,03 2,5 0,060 9,09 5 0,044 33,33 10 0,023 65,15 20 0,015 77,27 40 0,007 89,39

## Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh
Aktivitas  penghambatan  denaturasi protein ekstrak etanol daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L) dilakukan dengan konsentrasi 1 ppm, 10  ppm  dan  100  ppm.  Perbedaan  konsentrasi antara  natrium  diklofenak  dan  ekstrak  etanol dimaksudkan  untuk  mengetahui  aktivitas antiinflamasi
dengan menggunakan konsentrasi  yang  rendah,  jika  dengan konsentrasi yang rendah ekstrak etanol mampu menghambat lebih dari 20% denaturasi protein dan  nilai  persentase  penghambatannya  lebih baik  dari  natrium  diklofenak,  maka  ekstrak etanol daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L)  dianggap  dapat  menghambat  denaturasi protein dengan baik, sehingga dapat digunakan untuk  mengurangi  efek  samping  penggunaan obat antiinflamasi natrium diklofenak. Hasil uji aktivitas  antiinflamasi  ekstrak  etanol  daun belimbing wuluh dapat dilihat pada Tabel 3. Berdasarkan Tabel 3 dapat diketahui bahwa persentase  inhibisi  denaturasi  protein  ekstrak
etanol daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L)  pada  konsentrasi  1  ppm,  10  ppm  dan  100 ppm  memiliki  persentase  inhibisi  denaturasi protein  lebih  dari  20%  sehingga  memiliki aktivitas antiinflamasi yang baik. Konsentrasi 1 ppm  sudah  mampu  menghambat  denaturasi protein  sebesar  30,30%.  Jika  dibandingkan dengan  natrium  diklofenak  ekstrak  etanol  1 ppm lebih baik dalam menghambat denaturasi protein karena dengan konsentrasi yang sangat kecil  ekstrak  etanol  sudah  menghambat  lebih dari  20%.  Akan  tetapi,  jika  dilihat  pada konsentrasi  10  ppm  persentase  inhibisi  yang didapatkan  ekstrak  etanol  lebih  kecil dibandingkan natrium dilkofenak pada konsentrasi 10 ppm dan juga pada konsentrasi 100  ppm  ekstrak  etanol  mendapatkan persentase  inhibisi  lebih  kecil  dari  natrium diklofenak 40 ppm. Hal ini diduga karena obat natrium  diklofenak  merupakan  obat  yang sangat  kuat  dalam  menekan  atau  mengurangi inflamasi.
Tabel 3. Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh
Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi Kontrol Negatif 0,066 0,000 1 0,046 30,30 10 0,028 57,57 100 0,010 84,84
Penghambatan denaturasi protein ini diduga karena  adanya  metabolit  sekunder  dalam ekstrak  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi
L) yang berpotensi sebagai antiinflamasi,  karena  mampu  menghambat denaturasi  protein  dalam  tubuh  yang disebabkan  oleh  pembentukan  radikal  bebas yang  menyebabkan  mekanisme  peradangan (inflamasi)  dengan  merangsang  pelepasan mediator  inflamasi.  Menurut  Fridiana  (2012) flavonoid  menghambat  jalur  lipooksigenase secara langsung pada inflamasi  yang menyebabkan penghambatan biosintesis eikosanoid  dan  mengaktifkan  radikal  bebas yang  dapat  menarik  berbagai  mediator inflamasi.  Tanin  dapat  mempengaruhi  respon inflamasi dengan aktivitasnya sebagai penangkal  radikal  bebas.  Steroid  dapat menghambat pelepasan prostaglandin dari sel- sel sumbernya, sehingga pembentukan histamin, prostaglandin dan mediator-mediator
kimia lainnya yang mengakibatkan peradangan dapat terhambat (Meiriana,2007).
Senyawa  metabolit  sekunder  yang berperan  sebagai  antiinflamasi  mempunyai gugus  hidroksil  (OH),  sehingga  dapat melindungi  membran,  menghambat  pelepasan mediator  dan  menginaktifkan  radikal  bebas. Denaturasi  protein  merupakan  sebuah  proses dimana protein kehilangan struktur tersier dan struktur  sekunder  oleh  senyawa  eksternal, seperti  asam  kuat  atau  basa  kuat,  garam organik,  pelarut  organik  dan  pemanasan (Muliati,2014).
Hasil Perhitungan IC 50 Berdasarkan  persamaan  regresi  linear antara  konsentrasi  (X)  dan  %  inhibisi  (Y) sehingga  didapatkan  nilai  IC 50 natrium diklofenak  dan  ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh dapat dilihat pada tabel 4.

## Tabel 4. Hasil Perhitungan IC 50
Sampel Nilai IC 50 Natrium Diklofenak 14.93 μg/mL Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh 20.20 μg/mL
Nilai  IC 50 merupakan  bilangan  yang menunjukkan  konsentrasi  ekstrak  (ppm) yang mampu  menghambat  sebesar  50%,  sehingga nilai  50  disubtitusikan  untuk  nilai  y.  Setelah mensubtitusikan  akan  didapatkan  nilai  x sebagai  IC 50. Berdasarkan  tabel  4  nilai  IC 50
natrium  diklofenak  dan  ekstrak  etanol menunjukkan  nilai  IC 50 kurang  dari  50  sesuai dengan  parameter  nilai  IC 50. Grafik  regresi linear aktivitas antiinflamasi natrium diklofenak  dan  ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh dapat dilihat pada gambar 2 .
(a) (b)
Gambar  2. (a)  Regresi  linear  natrium  diklofenak    (b)  Regresi  linear  ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh
y = 2,1169x + 18,408 R² = 0,746 0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 % In h ib isi Konsentrasi (ppm) Natrium Diklofenak y = 0,4504x + 40,905 R² = 0,8176 0 20 40 60 80 100 0 50 100 150 % Inh ibi si Konsentrasi (ppm) Ekstrak Etanol Duan Belimbing Wuluh

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa ekstrak etanol daun  belimbing  wuluh  mengandung  senyawa alkaloid,  flavonoid,  fenol,  terpenoid,  tanin  dan saponin. Ekstrak etanol daun belimbing wuluh memiliki  aktivitas  terhadap  penghambatan denaturasi  protein.  Ekstrak  etanol  dapat menghambat  denaturasi  protein  karena memiliki  persentase  inhibisi  lebih  dari  20% dengan  nilai  IC 50 sebesar  20.20 μg/mL. Akan tetapi  jika  dibandingkan  dengan  natrium diklofenak, ekstrak etanol belum efektif  dalam penghambatan  denaturasi  protein.  Natrium diklofenak  memiliki  persentase  inhibisi  lebih dari  20%  dan  memiliki  persentase  inhibisi tertinggi pada konsentrasi 40 ppm dengan IC 50 sebesar  14,93%.  Peneliti  menyarankan  untuk peneliti selanjutnya dapat menentukan zat yang paling aktif di dalam daun belimbing wuluh dan melakukan  perluasan  rentang  konsentrasi untuk meningkatkan aktivitas antiinflamasi.

## REFERENSI
Arifin,  dkk  (2019).  Ekstrak  Etanol  Daun Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi  ) sebagai  Antioksidan  dan  Antiinflamasi,: JAP Teknologi Pangan. 8(3) hlm. 86,. Aulia. (2015). Modifikasi Struktur Senyawa Etil p-metoksisimat  melalui  proses  nitrasi dengan metode cold microwave serta uji aktivitas  sebagai  antiinflamasi.  Skripsi.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Bashori.  (2008).  Efek  Antiinflamasi  Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh pada Tikus Putih Jantan. Skripsi.Universitas Muhammadiyah Surakarta. Farida,  dkk  (2018).  Uji  Aktivitas  Antiinflamasi Nanopartikel  Ekstrak  Etanol  Rimpang
Temulawak  (Curcuma    xanthorrhiza Roxb.)  dengan  metode  Penghambatan Denaturasi  Protein.    J.  Ilmu  Kefarmasian Indonesia. 16(2) hlm. 225 – 230 Fridiana.  (2012).  Uji  Antiinflamasi  Ekstrak Umbi Rumput Teki Pada Kaki Tikus Galur Wistar  Jantan  yang  Diinduksi  Karagen.
Skripsi. Universitas Jember
Ikrom, dkk (2014 ). Studi In Vitro Ekstrak Etanol Daun  Kamboja  (  Plumeria  alba)  sebagai Anti  aeromonas  hydrophila.  Jurnal  Sains Veteriner. 32(1) Kementrian  Kesehatan  RI.  (2018).  Data  dan Informasi  Profil  Kesehatan.  Jakarta. Kemenkes RI
Meirian,  Agnes.  (2007).  Uji  Antiinflamasi Ekstrak Etanol Akar Krokot Belanda Pada Mencit  Putih  Betina.  Skripsi.  Universitas Sanata Dharma Yogyakarta Muliati.  (2014).  Uji  Aktivitas  Antiinflamasi Ekstrak Daun Paku ( Pyrrosia lanceolata (L.)  Farw  Terhadap  Penghambatan Denaturasi  Protein.  Skripsi.  UIN  Syarif Hidayatullah Jakarta Nasution. (2019).  Hidrolisis Kuda Laut dan Uji Aktivitas  Antiinflamasi  dengan  Metode Penghambatan Denaturasi Protein. Jurnal Perikanan Yani, Dwi. (2017). Pencirian Senyawa Aktif dan Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak  Buah  Sosis terhadap  Sel  Kanker  Payudara  MCF-7. Skripsi. Institut Pertanian Bogor. Yanti. (2019). Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L). Jurnal  Kesehatan  Ilmiah  Indonesia. 4(2).