Aktivitas Antibakteri dan Analisis Zookimia Ekstrak Bulu Babi Diadema setosum (Leske, 1778) Asal Perairan Aertembaga, Kota Bitung
(Antibacterial Activity and Zoochemical Analysis of Sea Urchin Diadema setosum (Leske, 1778) Extract From Aertembaga Waters, Bitung City)
Gebriela Rompas 1 , Rosita A. J. Lintang 2* , Deiske A. Sumilat 2 , Inneke F. M. Rumengan 2 , Elvy L. Ginting 2 , Henneke Pangkey 2
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
2 Staf Pengajar Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
*Corresponding author: rositalintang@unsrat.ac.id

## Abstract
Sea  urchin  is  one  of  the  marine  biotas  that  produce  bioactive  compounds  and  has  biological activity, one of which is antibacterial. This study aims to determine the antibacterial activity of the crude  extract  of D.  setosum gonad  and  its  fractionation  against  test  bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli and to conduct a zoochemical analysis to determine the content of bioactive compounds. The  antibacterial test used the  disc diffusion method while the chemical analysis was carried out qualitatively. The results showed that the methanol, ethyl acetate, and n-hexane fraction had antibacterial activity against the two test bacteria. The ethyl acetate fraction was  the  fraction  that  showed  the  highest  antibacterial  activity,  its  inhibition  zone  was  8  mm against S.  aureus and  7,5  mm  against E.  coli .  The  zoochemical  analyses  of  the  ethyl  acetate fraction  from  gonads  extract  showed  positive  results  for  alkaloid  compound,  phenolic,  and saponin.
Keywords: Sea urchin Gonad, Antibacterial, Disc diffusion, Zoochemistry, Extraction

## Abstrak
Bulu  babi  merupakan  salah  satu  biota  laut  yang  memproduksi  senyawa  bioaktif  dan  memiliki aktivitas  biologis  salah  satunya  adalah  antibakteri.  Tujuan  penelitian  ini  mengetahui  aktivitas antibakteri dari ekstrak kasar gonad bulu babi D. setosum dan hasil fraksinasi terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli serta melakukan analisis zookimia untuk mengetahui kandungan  senyawa  bioaktif.  Pengujian  antibakteri  menggunakan  metode  difusi  cakram sedangkan  analisis  kimia  dilakukan  secara  kualitatif.  Hasil  penelitian  menunjukkan  baik  fraksi metanol,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksana  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  kedua bakteri  uji.  Fraksi  etil  asetat  merupakan  fraksi  yang  memperoleh  aktivitas  antibakteri  tebaik dengan diameter zona hambat 8 mm terhadap bakteri S.aureus dan 7,5 mm terhadap bakteri E. coli .  Hasil  uji  zookimia  fraksi  etil  asetat  menunjukkan  bahwa  ekstrak  gonad D.  setosum mengandung senyawa dari golongan alkaloid, fenolik, dan saponin.
Kata kunci : Gonad Bulu Babi ( D. setosum ), Antibakteri, difusi cakram, Zookimia, Ekstraksi

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  negara  kepulauan yang wilayah lautnya sangat luas sehingga memiliki  kekayaan  sumberdaya  alam  laut yang berpotensi untuk dimanfaatkan secara lestari (Indrawati et al., 2018). Salah satu  sumberdaya  alam  yang  melimpah adalah  biota  laut.  Bulu  babi  merupakan biota  laut  dari  filum  Echinodermata  yang berpotensi  sebagai  sumber  bahan  obat- obatan  yang  tersebar  dan  melimpah  di
seluruh  perairan  Indonesia  (Musfirah, 2018).
Bulu babi merupakan hewan dengan duri-duri yang muncul dari badannya yang digunakan  untuk  bergerak.  Cangkang  dan gonad bulu babi memiliki potensi antibiotik karena menghasilkan toksin yang mengandung  senyawa  bioaktif  (Abubakar et  al. ,  2012).  Hal  ini  berhubungan  dengan bulu  babi  yang  memiliki  senyawa  biaktif antara  lain  alkaloid,  steroid,  flavonoid, saponin, dan fenol hidroquinon (Apriandi et
al ., 2020). Permasalahan resistensi bakteri terhadap beberapa antibiotik dan pengkajian  lebih  lanjut  mengenai  potensi dari  bulu  babi  mendorong  peneliti  untuk melakukan  penelitian  mengenai  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  kasar  bulu  babi guna  mendapatkan  kandungan  senyawa antibakteri  dari  bahan  alam  laut  untuk membunuh bakteri yang telah resisten.
Penelitian ini secara umum bertujuan untuk mendapatkan ekstrak kasar bulu babi khususnya spesies Diadema setosum dari Perairan  Aertembaga,  Kota  Bitung,  dan menguji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak dan fraksi-fraksi terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli serta melakukan pengujian kimia untuk mengetahui  kandungan  senyawa  bioaktif yang terkandung dalam ekstrak bulu babi.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  selama bulan  April  -  Juni  2022.  Sampel  bulu  babi diambil  dari  Perairan  Pantai  Kelurahan Aertembaga  II,  Kecamatan  Aertembaga, Kota  Bitung  (Gambar  1),  Sulawesi  Utara. Kegiatan ekstraksi dan pengujian antibakteri  dilakukan  di  Laboratorium Biologi  Molekuler  dan  Farmasetika  Laut, Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan, Universitas Sam Ratulangi. Untuk kegiatan pengujian kimia dilakukan di Divisi Mikrobiologi, Laboratorium Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Gambar 1. Lokasi Pengambilan Sampel

## Pengambilan dan Penanganan Sampel
Pengambilan  sampel  bulu  babi  ( D. setosum) dilakukan pada siang hari saat air surut  terendah  menggunakan  capitan  lalu cangkangnya dibelah untuk diambil bagian gonadnya kemudian dibawa ke laboratorium untuk kegiatan selanjutnya.

## Alat dan Bahan
Alat Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian yaitu tabung reaksi, Erlenmeyer, corong  pisah,  cawan  petri,  kertas  cakram,
mikropipet,  timbangan  analitik,  laminar  air flow,  1  set  rotary  vacuum  evaporator, autoclave,  freeze  dryer,  botol  kaca  kecil, mistar,  oven,  pinset,  kertas  saring,  dan aluminium foil.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu sampel gonad D. setosum , metanol,  etil  asetat,  n-heksana,  akuades, nutrient  agar  (NA),  nutrient  broth  (NB), agar,  kloramfenikol,  bakteri  uji S.  aureus dan E.  coli ,  Reagen  uji  fitokimia  (pereaksi
mayer,  pereaksi  dragendroff,  pereaksi wagner, pereaksi Lieberman burchard, HCl pekat,  serbuk  magnesium,  H 2 SO 4, NaOH, Larutan FeCl 3 1% dan FeCl 3 5%).

## Ekstraksi dan Partisi
Ekstraksi Ekstraksi sampel bulu babi menggunakan metode ekstraksi maserasi. Caranya  yaitu  bagian  gonad  bulu  babi ditimbang  kemudian  direndam  dalam pelarut  metanol  dengan  perbandingan  1:3 selama  24  jam.    Selanjutnya  difiltrasi sehingga mendapatkan filtrat 1 dan debris 1.  Setelah  itu  debris  dimaserasi  ulang dengan cara yang sama seperti sebelumnya sampai tiga kali. Filrat 1,2 dan 3  digabung  dan  diuapkan  menggunakan rotary vacuum evaporator pada suhu 40 o C.
Partisi Ekstrak  kasar  metanol  gonad D. setosum yang  dihasilkan  dari  maserasi dengan  metanol  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah  kemudian  ditambahkan pelarut  n-heksana  dengan  perbandingan (1:1). Corong pisah dikocok berulang-ulang hingga tercampur rata kemudian didiamkan hingga  terbentuk  lapisan  n-heksana  dan lapisan  metanol.  Lapisan  n-heksana  dan lapisan  metanol  kemudian  dipisahkan  dan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Selanjutnya lapisan n-heksana dievaporasi sehingga  diperoleh  fraksi  n-heksana. Lapisan  metanol  dimasukkan  kembali  ke dalam  corong  pisah  dan  dipartisi  dengan pelarut etil asetat yang prosedurnya sama seperti  sebelumnya.  Selanjutnya  lapisan etil asetat dan lapisan metanol dipisahkan dan ditampung dalam wadah yang berbeda kemudian dievaporasi hingga kering sehingga  diperoleh  fraksi  etil  asetat  dan fraksi metanol.

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  disterilkan dalam oven pada suhu 150 o C selama ± 2 jam.  Media  yang  digunakan  disterilkan autoklaf  pada  suhu  120 o C  selama  20 menit.

## Pembuatan Media Cair
Media  cair  yang  digunakan  dibuat dengan  cara  melarutkan nutrient  broth
sebanyak  1,3  gram  dengan  100  ml  air dalam erlenmeyer atau sebanyak 1,3% b/v kemudian  dipanaskan  hingga  terbentuk larutan jernih berwarna kuning. Setelah itu, media didinginkan dan dibagikan ke dalam 10 tabung sehingga masing-masing tabung berisi  media  NB  sebanyak  10  ml.  Semua tabung yang sudah berisi media, disumbat dengan kapas kemudian disterilkan dengan autoclave selama 20 menit pada suhu 120º C.  Setelah  disterilkan,  media  didinginkan sehingga  siap  untuk  digunakan  sebagai media kultur bakteri.

## Kultur Bakteri Uji
Bakteri yang digunakan untuk pengujian antibakteri ini adalah E. coli dan S. aureus . Sebanyak 200 µL suspensi dari masing-masing bakteri diambil menggunakan
mikropipet kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  yang  berisi media cair. Kedua bakteri tersebut disuspensikan  ke  dalam  media  cair  pada dua tabung yang berbeda kemudian tabung disumbat  kembali  dengan  kapas  dan diinkubasi selama 24 jam sebelum digunakan.

## Pembuatan Media Padat (NA)
Komposisi  bahan  yang  digunakan pada pembuatan media padat adalah 1,3% b/v  larutan  nutrient  agar  dan  0,625%  b/v larutan agar. Pada penelitian ini digunakan 240  ml  air  sehingga  menggunakan sebanyak  3,2  gram  nutrient  agar  dan sebanyak  1,5  gram  agar.  Media  dibuat menggunakan  dua  erlenmeyer  untuk  dua bakteri, sehingga masing-masing erlenmeyer berisi media NA sebanyak 120 ml. Masing-masing erlenmeyer yang sudah berisi media, ditutup dengan aluminium foil kemudian dipanaskan hingga bahan-bahan terlarut dengan sempurna. Media kemudian  disterilkan  dengan autoclave selama  20  menit  pada  suhu  120º  C. Setelah  disterilkan,  media  didiamkan hingga  hangat  kemudian  dimasukkan bakteri uji sebanyak 1 ml yang diambil dari media  cair  yang  telah  dikultur  dengan bakteri sebelumnya. Setelah itu, campuran media  NA  dan  bakteri  dihomogenkan dengan cara menggoyangkan erlenmeyer, lalu  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  dan didiamkan hingga memadat.
Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif Sebagai pembanding
dalam pengujian  ini  mengunakan  kontrol  positif yang  dibuat  dengan  melarutkan  250  mg obat chloramphenicol ke  dalam  250  ml aquades  (1  mg/ml  atau  1000  ppm)  dan kontrol negatif  menggunakan larutan metanol 40% yaitu mencampurkan metanol 40  ml  dengan  aquades  yang  sudah disterilkan 60 ml.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode pengujian aktivitas antibakteri ini  menggunakan  metode  difusi  cakram (metode Kirby-Bauer ).  Kertas  cakram ( paper disk ) yang digunakan berdiameter 6 mm  dengan  banyaknya  ekstrak  pada  tiap kertas  cakram  adalah  30  μl.  Pengujian dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan dan pengamatan dilakukan setelah 24 jam masa inkubasi.

## Pengujian Analisis Zookimia Kualitatif
Analisis  zookimia  secara  kualitatif ekstrak  metanol D.  setosum dilakukan berdasarkan Harborne (1984) dan Sangi et al. (2008)  dengan  beberapa  modifikasi yang meliputi pengujian alkaloid, flavonoid, fenolik,  steroid,  triterpenoid,  saponin,  dan tannin.
a. Alkaloid
Sebanyak 1 mg ekstrak dari masing- masing pelarut dilarutkan dalam beberapa tetes  asam  sulfat  2  N,  setelah  itu  diuji dengan  beberapa  pereaksi  alkaloid  di antaranya Dragendorff, Meyer dan Wagner.  Setelah  pengocokkan  terbentuk dua  lapisan,  lapisan  bagian  atas  diambil dan dipindahkan dalam tiga tabung reaksi. Masing-masing larutan tersebut ditambahkan pereaksi-pereaksi yang telah disiapkan  sebelumnya,  yakni  pereaksi Mayer,  Dragendorff  dan  Wagner.  Ekstrak dinyatakan  positif  mengandung  senyawa alkaloid  apabila  terbentuk  endapan  putih kekuningan dengan pereaksi Mayer, endapan  merah  sampai  jingga  dengan pereaksi  Dragendorff  dan  endapan  coklat dengan pereaksi Wagner.
b. Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak  1  ml  ekstrak  dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 2 -  3  tetes  asam  asetat  anhidrat  dan  asam sulfat  pekat.  Ekstrak  dinyatakan  positif
mengandung senyawa triterpenoid apabila terjadi  perubahan  warna  menjadi  merah, jingga  atau  ungu.  Sementara  itu,  adanya kandungan  steroid  bila  terjadi  warna  biru dan hijau.

## c. Tanin
Ekstrak  sebanyak  1  ml  diambil  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan 2 - 3 tetes larutan FeCl 3 1%.
Ekstrak  dinyatakan  positif  mengandung senyawa tanin apabila terjadi warna hitam kebiruan atau hijau.
d. Flavonoid
Sebanyak  1  ml  ekstrak  dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan HCl  pekat.  Ditambahkan  juga  0,2  gram bubuk logam Mg. Ekstrak dinyatakan positif mengandung  senyawa  flavonoid  apabila terjadi  buih  dalam  intensitas  yang  banyak dan  warna  merah,  kuning,  atau  jingga dalam waktu 3 menit.
e. Saponin
Ekstrak  diambil  sebanyak  1  ml  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  akuades.  Larutan  tersebut dididihkan selama beberapa waktu, kemudian  didinginkan.  Setelah  dingin, kocok  kuat-kuat  larutan,  apabila  terbentuk buih yang stabil selama 30 menit dan tidak hilang  jika  ditambahkan  1  tetes  HCl  2N menandakan adanya kandungan senyawa saponin.
f. Fenolik
Identifikasi senyawa fenolik dilakukan dengan  mengambil  1  ml  ekstrak  dari  stok yang  sudah  disediakan  sebelumnya  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Ekstrak ditambahkan 2 - 3 tetes FeCl 3 5% dan apabila terbentuk warna coklat orange menunjukkan kehadiran senyawa fenolik.

## Hasil dan Pembahasan

## Penanganan dan Pengambilan sampel
Sampel D.  setosum diambil  dari Perairan  Aertembaga,  Kota  Bitung,  dibela cangkangnya  untuk  mengeluarkan  gonad di  dalamnya  (Gambar  2).  Gonad D. setosum dalam keadaan basah didapatkan sebanyak  90  g  kemudian  diekstraksi dengan  cara  maserasi  menggunakan pelarut metanol.

## Hasil Ekstraksi (Maserasi)
Ekstraksi  dilakukan  terhadap  gonad D. setosum menggunakan pelarut metanol dan mendapatkan ekstrak kasar gonad D. setosum dengan berat 14 g.

## Hasil Partisi
Ekstrak  kasar  metanol  gonad D. setosum dilanjutkan dengan proses partisi Partisi dilakukan untuk menarik komponen- komponen senyawa sesuai dengan kepolarannya  yaitu  dengan  menggunakan dua  pelarut  dengan  tingkat  polaritas  yang berbeda  sehingga tidak saling  bercampur. Partisi  menggunakan  3  jenis  pelarut  yaitu n-heksana,  etil  asetat,  dan  metanol.  Dari hasil  partisi  yang  dilakukan,  didapatkan  3 fraksi  dengan  berat  masing-masing  yaitu
fraksi  n-heksana  0,172 g,  fraksi  etil  asetat 3,764 g dan fraksi metanol 6 g.

## Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri
Adanya aktivitas penghambatan suatu  ekstrak  terhadap bakteri  uji  ditandai dengan  adanya  zona  bening  disekitar kertas cakram. Pengukuran dan pengamatan  zona  hambat  menggunakan mistar  dengan  satuan  milimeter  yang dilakukan  pada  dua  jenis  media  bakteri, yaitu S. aureus yang mewakili bakteri gram positif  dan E.  coli yang  mewakili  bakteri gram  negatif.  Pengujian  antibakteri  dari fraksi-fraksi gonad D. setosum menunjukkan aktivitas zona hambat (Gambar 3).
Gambar 2. Gonad D. setosum
Gambar 3. Hasil Pengujian Antibakteri Fraksi-fraksi
Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Media Bakteri : Escherichia coli Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Media Bakteri : Staphylococcus aureus Ket : M : Fraksi Metanol
E  : Fraksi Etil Asetat
H  : Fraksi N-Heksana + : Kontrol positif -  : Kontrol negative

## Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi-fraksi
Fraksi Bakteri Uji Escherichia coli Staphylococcus aureus I (mm) II (mm) III (mm) Rata- Rata (mm) I (mm) II (mm) III (mm) Rata- Rata (mm) Metanol 6,75 6,5 6,75 6,67 6,5 7 8 7,16 Etil asetat 7,5 7,5 7,5 7,5 8 7 8 7,67 N-heksana 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,75 6,58 K + 19 19 20,5 16,16 16,5 16,67 16,5 16,55 K - 0 0 0 0 0 0 0 0 Ket : K + : Kontrol positif (Chloramphenicol 1.000 ppm)
K -  : Kontrol negatif (larutan metanol 40%) Banyaknya ekstrak dalam kertas cakram: 30 µl Diameter kertas cakram: 6 mm Konsentrasi fraksi : 100%
Berdasarkan data pada tabel di atas, menunjukkan bahwa  ketiga fraksi memiliki zona  hambat  yang  berbeda  terhadap masing-masing  bakteri  uji  (Tabel  1).  Pada bakteri uji E. coli fraksi metanol menunjukkan  diameter  zona  hambat  yang sama pada ulangan I dan III yaitu 6,75 mm, dan pada ulangan II menurun menjadi 6,5 mm. sedangkan fraksi etil asetat menunjukkan  diameter  zona  hambat  yang sama  pada  ulangan  I,  II,  maupun  III  yaitu 7,5 mm. Hal tersebutpun terjadi pada fraksi n-heksana yang menunjukkan nilai diameter  zona  hambat  sebesar  6,5  mm pada ulangan I, II, dan III.
Pada  bakteri  uji S.  aureus ,  fraksi metanol  menghasilkan  zona  hambat  pada ulangan I (6,5 mm), ulangan II (7 mm), dan ulangan  III  (8  mm).  Zona  hambat  yang dihasilkan fraksi etil asetat pada ulangan I (8 mm), ulangan II (7 mm), dan ulangan III (8 mm). Sementara untuk fraksi n-heksana menghasilkan zona hambat pada ulangan I dan II (6,5 mm) dan ulangan III (6,75 mm).
Rata-rata diameter zona hambat yang dihasilkan  dari  masing-masing  fraksi  dan kontrol  positif  terhadap  kedua  bakteri  uji setelah  diinkubasi  selama  1x24  jam menunjukkan  nilai  yang  berbeda-beda (Tabel  1).  Fraksi  etil  asetat  menunjukkan rata-rata  diameter  zona  hambat  nilai tertinggi  yaitu  7,5  mm  pada  bakteri  uji E. coli ,  sedangkan  fraksi  metanol  rata-rata diameter  zona  hambat  sebesar  6,67  mm dan  n-heksana  6,5  mm.  Sedangkan  pada
bakteri  uji S.  aureus ,  fraksi  etil  asetat memiliki rata-rata diameter 7, 67 mm, fraksi metanol  sebesar  7,16  mm  dan  fraksi  n- heksana menjadi yang paling rendah yaitu sebesar  6,58  mm.    Bila  dibandingkan dengan  kloramfenikol  yang  memiliki  zona hambat rata-rata 16,16 mm pada bakteri uji E. coli dan 16, 55 pada bakteri uji S. aureus , ketiga fraksi ini memiliki zona hambat yang jauh dibawah kloramfenikol.
Kekuatan antibakteri yang ditunjukkan  dari  zona  hambat  masing- masing  fraksi  ini  dikategorikan  pada golongan  sedang  dibandingkan  dengan kekuatan  antibakteri  dari  kontrol  positif pada  penelitian  ini  dikategorikan  pada golongan  kuat.  Kriteria  kekuatan  fraksi gonad D. setosum ini juga sejalan dengan penelitian  Indrawati et  al. (2018)  bahwa kekuatan  antibakteri  ekstrak  gonad D. setosum dikategorikan  sedang  dengan rata-rata zona hambat 8,5 mm pada bakteri uji E.  coli dan  14  mm  pada  bakteri  uji S. aureus . Pengujian menunjukkan masing- masing  fraksi  metanol,  fraksi  etil  asetat, dan fraksi n-heksana dari ekstrak gonad D. setosum memiliki  aktivitas  antibakteri spektrum  luas  karena  dapat  menghambat bakteri  gram  negatif  maupun  gram  positif. Antibakteri spektrum luas adalah antibakteri  yang  dapat  membunuh  bakteri gram positif maupun gram negatif, sedangkan  antibakteri  spektrum  sempit
hanya  dapat  membunuh  salah  satu  jenis bakteri saja (Lullman, 2000).
Hasil Analisis Zookimia Kualitatif
Hasil  Analisis  Zookimia  kualitatifdari fraksi  etil  asetat  gonad D.  setosum dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Hasil Pengujian Zookimia Kualitatif
Tabel 2. Hasil Pengujian Zookimia Kualitatif Fraksi Etil Asetat Gonad D. setosum
Sampel Uji Alkaloid Triterpenoid Steroid Tanin Flavonoid Fenolik Saponin Mayer Dragebdorff Wagner Fraksi Etil Asetat + - - - - - - + +
Ket : (+) Mengandung senyawa yang dimaksud,  (-)  Tidak mengandung senyawa yang dimaksud
Hasil yang tertera di tabel menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat gonad D.  setosum mengandung  senyawa bioaktif dari golongan alkaloid, fenolik, dan saponin. Berbeda dengan penelitian Akerina et  al. (2015)  ekstrak  etil  asetat gonad D.  setosum mengandung  golongan flavonoid, fenol-hidrokuinon, steroid/triterpenoid, dan saponin.
Sedangkan pada penelitian Sukiman et al.
(2020)  ekstrak  metanol  utuh D.  setosum hanya  mengandung  senyawa  alkaloid. Perbedaan  ini  dapat  disebabkan  oleh pelarut dan metode ekstraksi yang digunakan (Sukiman et al., 2020).
Hasil  pengujian  zookimia  secara kualitatif ini maka dapat disimpulkan bahwa zona hambat yang terbentuk pada pengujian  antibakteri  dari  fraksi  etil  asetat gonad D. setosum adalah karena mengandung  senyawa  golongan  alkaloid,
fenolik, dan saponin. Namun zona hambat yang  dihasilkan  masih  tergolong  rendah. Menurut  Rinehar,  1992 dalam Opa, et  al. 2018,  tekanan  lingkungan  berpengaruh pada produksi metabolit sekunder, apabila tekanan  lingkungan  relatif  tinggi  maka senyawa  yang  dihasilkan  akan  banyak, sebaliknya  jika  tekanan  lingkungan  relatif rendah maka senyawa yang akan dihasilkanpun  sedikit,  maka  dari  hasil penelitian  ini  dapat  dikatakan  bahwa Perairan  Aertembaga  yang  merupakan lingkungan hidup bulu babi D. setosum ini memiliki  tekanan  lingkungan  yang  rendah sehingga memproduksi metabolit sekunder dengan aktivitas antibakteri dengan kriteria sedang.

## KESIMPULAN
Fraksi metanol, fraksi etil asetat, dan fraksi  n-hekasana  dari  ekstrak  kasar
Alkaloid Triterpenoid Steroid Mayer Dragendroff Wagner Tanin Fenolik Flavonoid Saponin
metanol D.  setosum mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri E.  coli dan S. aureus dengan  zona  hambat  tertinggi  ada pada  fraksi  etil  asetat.  Hasil  uji  zookimia kualitatif  terhadap  fraksi  etil  asetatpun mengandung  senyawa  alkaloid,  fenolik, dan saponin.

## DAFTAR PUSTAKA
Indrawati, I., Hidayat, T. R., & Rossiana, N.
(2018). Aktivitas Antibakteri Dari Bulu Babi  ( Diadema  setosum )  terhadap Escherichia  coli dan Saphylococcus aureus . Jurnal Biodjati, 3 (2), 183-192.
Musfirah, N. H. (2018). Struktur Komunitas
Bulu Babi (Echinoidea) Yang Berasosiasi Dengan Ekosistem Lamun  Di  Pulau  Berrang  Lompo, Sulawesi Selatan .
Makassar: Universitas Hasanuddin.
Abubakar,  L.,  Mwangi,  C.,  Uku,  J.,  & Ndirangu,  S.  (2012).  Antimicrobial activity of various extracts of the sea urchin Tripneustes
gratilla
(Echinoidea). African  Journal  of Pharmacology and Therapeutics,
1 (1), 19-23.
Apriandi,  A.,  Putri,  R.  M.,  &  Tanjung,  I. (2020). Karakterisasi, Aktivitas Antioksidan  dan  Komponen  Bioaktif Bulu  Babi  ( Diadema  savignyi )  dari Perairan  Pantai  Trikora  Tiga  Pulau Bintan. Majalah Ilmiah Biologi
Biosfera : A Scientific Journal, 37 (1),
49-54
Harborne,  J.  B.  (1984).  Phytochemical Methods:  A  Guide  To  Modern Technique  Of  Plant  Analysis  (2nd ed.). London: Chapman And Hall.
Sangi, M., Runtunewe, M. R., Simbala, H. E.,  &  Makang,  V.  E.  (2008).  Analisis Fitokimia Tumbuhan Obat di
Kabupaten  Minahasa  Utara. Chem. Prog., 1 (1), 47-53.
Lullman, H., Mohr, K., Ziegler, A., & Bieger,
D. (2000). Color atlas pharmacology . New York: Thieme.
Akerina,  F.  O.,  Nurhayati,  T.,  &  Suwandy,
R. (2015). Isolation and Characterization of Antibacterial
Compounds from Sea Urchin. JPHPI,
18 (1), 61-7
Sukiman, R., Ali, A., & Mu’nisa, A. (2019). Identifikasi  Senyawa  Bioaktif  Ekstrak Bulu Babi ( Diadema setosum ). Prosiding Seminar Nasioal Biologi, 6 , 631-635.
Opa,  S.  L.,  Bara,  R.  A.,  Gerung,  G.  S.,
Rompas,  R.  M.,  Lintang,  R.  A.,  & Sumilat,  D.  A.  (2018).  Uji  Aktivitas Antibakteri Fraksi N-Heksana,
Metanol,  dan  Air  Dari  Ascidian Lissoclinum  sp. Jurnal  Pesisir  dan Laut Tropis, 1 (1), 69-80.