J. Kartika Kimia , May 2023, 6, (1), 8-16 Journal homepage : http://jkk.unjani.ac.id/index.php/jkk P-ISSN: 2655-1322     E-ISSN: 2655-0938

## Pengaruh Tempat Tumbuh Tanaman Daun Gaharu (Aquilaria malaccensis Lam) dari Dua Daerah yang Berbeda terhadap Aktivitas Antioksidan

## The Effect of Plants Growing Agarwood Leaves (Aquilaria malaccensis Lam) from Two Different Areas on Antioxidant Activity
Aris Suhardiman * dan Wempi Budiana Fakultas Farmasi, Universitas Bhakti Kencana, Bandung, Indonesia *E-mail: aris.suhardiman@bku.ac.id
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v6i1.172
Received : 12 Oct 2022, Revised : 21 Nov 2022, Accepted : 28 Nov 2022, O nline : 29 May 2023

## Abstrak
Tempat  tumbuh  dapat  mempengaruhi  kandungan  senyawa  yang  dimilikinya,  hal  ini  juga  akan menyebabkan pengaruhnya terhadap uji aktivitas yang diteliti. Penelitian ini menggunakan daun gaharu dari dua daerah berbeda yaitu dari Palembang dan Bogor. Tujuan penelitian untuk mengetahui aktivitas antioksidan  daun  gaharu  Palembang  dan  Bogor  serta  mengetahui  kadar  flavonoid  totalnya.  Metode penelitian  dimulai  dengan  penyiapan  sampel,  karakterisasi  simplisia  kemudian  diekstraksi  dengan maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%,  selanjutnya  difraksinasi  dengan  ekstraksi  cair  –  cair menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  metanol:air.  Ekstrak  dan  fraksi  dilakukan  pemantauan dengan  KLT  serta  diuji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH  ( 1,1-Difenil-2-Pikrihidrazil ) menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dimana  intensitas  aktivitas  antioksidan  dari  nilai  IC 50 dan penetapan kadar flavonoid total. Hasil IC 50 daun gaharu Palembang ekstrak etanol, fraksi metanol:air, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan secara berurutan 47,44, 71,98, 84,30 dan 138,81 µg/ml sedangkan daun gaharu Bogor ekstrak etanol, fraksi metanol:air, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan secara berurutan 45,57, 66,39, 81,12, dan 140,09 µg/ml. Kadar flavonoid total daun gaharu Palembang 13,452 QE/g dan daun gaharu Bogor 11,254 QE/g. Kesimpulan, ekstrak etanol daun gaharu Palembang lebih kuat antioksidan dibandingkan daun gaharu Bogor. Berbanding lurus dengan kadar flavonoid total, hal ini diduga adanya pengaruh tempat tumbuh seperti kandungan unsur hara tanah, suhu, iklim, intensitas cahaya matahari.
Kata  kunci: Aquilaria  malaccensis  Lam,  Aktivitas  Antioksidan,  Nilai  IC 50 ,  Kadar  Flavonoid  Total, Pengaruh tempat tumbuh

## Abstract
Where it grows can affect the content of its compounds, this will also affect the activity test being studied. This study used gaharu leaves from two different regions, namely from Palembang and Bogor. The aim of the study was to determine the antioxidant activity of Palembang and Bogor gaharu leaves and to determine the total flavonoid content. The research method began with sample preparation, simplicia characterization then extracted by maceration using 96% ethanol, then fractionated by liquid – liquid extraction  using  n-hexane,  ethyl  acetate,  methanol:water  solvents.  Extracts  and  fractions  were monitored using TLC and tested for antioxidant activity using the DPPH (1,1-Diphenyl-2-Pikrihidrazil) method using a UV-Vis spectrophotometer where the intensity of antioxidant activity was determined by the  IC50  value  and  the  determination  of  total  flavonoid  content.  IC50  results  of  Palembang  gaharu leaves ethanol extract, methanol:water fraction, ethyl acetate fraction, n-hexane fraction respectively 47.44, 71.98, 84.30 and 138.81 µg/ml while Bogor gaharu leaves extract ethanol, methanol fraction : water, ethyl acetate fraction, n-hexane fraction respectively 45.57, 66.39, 81.12, and 140.09 µg/ml. The total flavonoid content of Palembang gaharu leaves was 13.452 QE/g and that of Bogor gaharu leaves
was  11.254  QE/g.  In  conclusion,  the  ethanol  extract  of  Palembang  gaharu  leaves  is  stronger  in antioxidants  than  Bogor  gaharu  leaves.  Directly  proportional  to  the  total  flavonoid  content,  this  is thought to be due to the influence of the place where it grows, such as soil nutrient content, temperature, climate, and sunlight intensity.
Keywords:  Aquilaria  malaccensis  Lam,  Antioxidant  activity,  IC 50 value,  Total  Flavonoid  content, Growing Site Effect

## 1 Pendahuluan
Tanaman  yang  memiliki  efek  farmakologi yang tumbuh di Indonesia mulai banyak dilakukan penelitian. Tanaman obat sudah lama dipakai oleh masyarakat  di  Indonesia  untuk  pengobatan tradisional secara empiris [1]. Produk herbal yang berasal  dari  tanaman  obat  terus  dikembangkan untuk diperolehnya obat baru dengan bahan aktif ekstrak atau isolat yang memiliki efek farmakologi.  Tanaman  yang  paling  dieksplorasi adalah  tanaman  yang  mengandun  metabolit sekunder  sebagai  senyawa  aktif  yang  memiliki efek farmakologi [2] . Salah satu tanaman yang dilakukan  pengembangan  dalam  penelitian adalah tanaman Gaharu ( Aquilaria malaccensis Lam)  dimana  bagian  yang digunakan daun.  Tanaman gaharu digunakan untuk  pengobatan,  sebagai  bahan  aromatik [3].  Tanaman  gaharu  juga  memiliki  efek sebagai  antioksidan,  pengaruh  antioksidan dipengaruhi oleh kandungan senyawa metabolit  sekunder.  Senyawa  metabolit sekunder  salah  satunya  adalah  kelompok flavonoid  diantaranya  flavon,  flavonol  dan isoflavon.  Daun  dari  tanaman  gaharu  ini banyak  dimanfaatkan  sebagai  minuman  teh atau  minuman  seduh  karena  memiliki  efek antioksidan [4].
Tanaman  gaharu  dapat  ditemukan  dari hutan dataran rendah, hutan pegunungan dan rawa.  Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi perbedaan pertumbuhan  tanaman yaitu dapat dipengaruhi oleh kondisi lingkungan termasuk  ketinggian.  Perbedaan  ketinggian dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti intensitas cahaya, kelembaban, suhu dan jenis tanahnya.  Hal  ini  dapat  mempengaruhi kandungan  senyawa  kimia  dalam  tanaman gaharu [5].
Tanaman gaharu oleh masyarakat Kalimantan  Timur  dipergunakan  sebagai antioksidan  karena  dapat  membantu  dalam penyembuhan luka bakar. Penelitian sebelumnya  bahwa  daun  gaharu  yang  tua
memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  dan memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus [6].  Penelitian  lain  yang  pernah  dilakukan oleh  peneliti  bahwa  daun  gaharu  memiliki aktivitas dalam penyembuhan luka bakar pada tikus  [7].  Penelitian  lainnya  daun  gaharu memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel kanker MCF-7 dimana hasil pengujian untuk fraksi  n-heksana  dengan  nilai  IC 50 144,458  g/ml  [8].  Penelitian  selanjutnya  dilakukan terhadap  uji  sitotoksik  terhadap  sel  kanker serviks  dengan  hasil  pengujian  terbaik diperoleh  fraksi  n-heksana  dengan  nilai  IC 50 120,913  g/ml  [9].  Hasil  penelitian  lain menunjukan  bahwa  daun  gaharu  memiliki aktivitas  terhadap  penghambatan  enzim  alfa glucosidase [10].  Melalui  latar  belakang tersebut,  penelitian  yang  dilakukan  saat  ini untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dari daun gaharu yang berasal dari daerah berbeda memiliki  pengaruh  aktivitas  baik  berupa pengaruh  faktor  internal  maupun  faktor eksternal.

## 2 Metode Penelitian
Penelitian dilakukan secara eksperimental di laboratorium  dengan  menggunakan  sampel  daun gaharu yang berasal dari dua daerah berbeda yaitu Palembang dan Bogor. Tahapan dalam penelitian terdiri  penyiapan  daun  gaharu,  karakterisasi simplisia  daun  gaharu,  skrining  fitokimia, ekstraksi,  fraksinasi  pemantauan  ekstrak  dan fraksi serta pengujian aktivitas antioksidan dengan metode  DPPH.  Karakterisasi  simplisia  daun gaharu  meliputi  organoleptis,  penetapan  susut pengeringan, penetapan kadar abu total, kadar abu tidak  larut  asam,  kadar  sari  larut  air,  kadar  sari larut etanol dan penetapan kadar air [11].
Proses  ekstraksi  dari  simplisia  daun  gaharu yang  diperoleh  menggunakan  metode  maserasi selama  3x24  jam  dengan  pelarut  etanol  96% kemudian  hasil  ekstrak  etanol  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator .  Ekstrak  etanol daun  gaharu  yang  diperoleh  dilakukan  pengujian
skrining  fitokimia  [7].  Selain  itu  ekstrak  yang diperoleh  kemudian  dilakukan  proses  fraksinasi menggunakan metode ekstraksi cair – cair dengan pelarut yang memiliki perbedaan kepolaran mulai dari non polar, semi polar dan polar. Pelarut yang digunakan  yaitu n -heksan,  etil  asetat  dan metanol:air  dan  tahap  selanjutnya  dilakukan pemantauan  ekstrak  dan  fraksi  dengan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  dengan  fase  gerak berdasarkan  kepolarannya  dan  fase  diam  Silika Gel F 254 [10].
Tahap  penelitian  berikutnya  dilakukan pengujian  aktivitas  antioksidan  secara  kualitatif dan  secara  kuantitatif.  Pengujian  kualitatif dilakukan  dengan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) dengan penyemprotan DPPH 0,2% dalam metanol. Hasil  bercak  yang  diperoleh  dari DPPH  menjadi  warna  kuning  dengan  latar belakang ungu ketika memiliki aktivitas antioksidan.  Sedangkan  pengujian  kuantitatif dilakukan  menggunakan  spektorofotometer  UV- Visible dengan  cara  sampel  diukur  pada  rentang panjang  gelombang  516-520  nm,  nilai  IC 50 dihitung  dari  kurva  regresi  linier  antara  % penghambatan serapan dengan konsentrasi [12].

## 3 Hasil dan Diskusi
Karakterisasi  simplisia  bertujuan  untuk mengetahui  kualitas  simplisia  daun  gaharu  yang digunakan.  Adapun  hasil  karakterisasi  simplisia daun gaharu dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel 1 . Hasil Karakterisasi Simplisia
Parameter karakterisasi Hasil % b/b Palembang Bogor Susut Pengeringan 7,0 3,3 Kadar Abu Total 4,6 2,3 Kadar Abu Tidak Larut Asam 1,3 1 Kadar Sari Larut Air 15 15 Kadar Sari Larut Etanol 13 10 Kadar Air 5* 2,5*
Penetapan susut pengeringan yang dilakukan menggunakan  alat Moisture  Balance dengan temperatur 105⁰C hingga massa konstan.
Penetapan ini  bertujuan  untuk  memberikan  batas maksimal  senyawa  yang  hilang  pada  saat  proses pengeringan  [13].  Penetapan  kadar  abu  total bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan  senyawa  anorganik  baik  mineral internal  maupun  eksternal,  tingginya  kadar  abu
memberikan  informasi  kandungan  mineral  dan pencemar  anorgank  tinggi  pada  simplisia. Penetapan  kadar  abu  yang  lain  yaitu  penetapan kadar  abu  tidak  larut  asam  dengan  tujuan  untuk mengetahui jumlah mineral yang berasal dari luar tanaman  seperti  zat  pengotor  baik  air  atau  tanah yang  menempel.  Hasil  daun  gaharu  yang digunakan  sebagai  sampel  menunjukan  bahwa kandungan mineral di dalam simplisia sedikit.
Penetapan  kadar  sari  bertujuan  untuk menunjukan  berapa  banyak  jumlah  kandungan senyawa  dalam  simplisia  yang  terlarut  dalam pelarut  tertentu,  dalam  penetapan  kadar  sari menggunakan pelarut etanol dan air. Berdasarkan hasil  yang  diperoleh  bahwa  daun  gaharu Palembang dan Bogor lebih banyak terlarut dalam pelarut air dibandingkan dalam pelarut etanol, ini memberikan  informasi  bahwa  sampel  memiliki kandungan  senyawa  yang  tinggi  larut  dalam  air dibandingkan  senyawa  larut  dalam  etanol. Penetapan parameter karakterisasi simplisia yang lain  adalah  penetapan  kadar  air  dilakukan berhubungan  dengan  kualitas  simplisia  daun gaharu baik yang berasal dari Palembang maupun dari  Bogor  agar  tidak  mudah  ditumbuhi  oleh mikroorganisme.  Hasil  penetapan  kadar  air  daun gaharu Palembang dan Bogor masih masuk dalam kategori yang baik karena kurang dari 13% [11].
Daun gaharu Palembang ditimbang 400 g dan daun  gaharu  Bogor  1500  g  kemudian  diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pertimbangan  untuk  mengurangi  kerusakan senyawa  pada  daun  gaharu  karena  tekstur simplisia daun gaharu termasuk ke dalam tekstur halus. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% karena  pelarut  etanol  merupakan  pelarut  yang memiliki  sifat  universal  yang  dapat  menarik  dan melarutkan  sebagian  besar  senyawa  baik  non polar, semi polar dan polar. Selain itu etanol 96% tidak  bersifat  toksik  dan  sulit  ditumbuhi mikroorganisme.  Hasil  rendemen  ekstrak  yang sudah  dilakukan  pemekatan  dapat  dilihat  pada tabel berikut.
Tabel 2 . Hasil Rendemen Simplisia Simplisia Bobot Simplisia (g) Bobot ekstrak kental (g) Rendemen ekstrak (%b/b) Gaharu Palembang 400 45,71 11,25 Gaharu Bogor 1.500 215,8 14,38
Ekstrak  kental  yang  diperoleh  dilanjutkan dengan  proses  fraksinasi  yang  bertujuan  untuk mengisolasi  senyawa  berdasarkan  perbedaan kepolaran dan menghilangkan residu sisa pelarut. Ekstrak kental daun gaharu Palembang ditimbang sebanyak 40 g dan ekstrak daun gaharu sebanyak 120 g, masing-masing dilarutkan dalam campuran metanol:air  hingga  larut.  Selanjutnya  dilakukan fraksinasi menggunakan pelarut non polar yaitu n- heksana  dengan  tujuan  untuk  menarik  senyawa non  polar,  fraksinasi  dengan  pelarut  n-heksana dilakukan  sebanyak  3x200  ml,  lalu  sisa  residu metanol:air  difraksinasi  kembali  dengan  pelarut semi  polar  yaitu  etil  asetat  sebanyak  3x200  ml dengan tujuan untuk menarik senyawa semi polar. Fraksinasi  dilakukan  sebanyak  3x  pengulangan untuk  masing-masing  pelarut  selanjutnya.  Fraksi cair  yang  diperoleh  dari  n-heksana  (FHe),  fraksi etil  asetat  (FEa)  dan  fraksi  metanol:air  (FMeA) dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator hingga  diperoleh  fraksinat  yang  pekat.  Hasil rendemen fraksi yang diperoleh dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel 3 . Hasil Fraksinasi Ekstrak
Sampel Fraksi Kental (g) Rendemen Fraksi (%b/b) FHe FEa FMeA FHe FEa FMeA Palembang 3,9 2,71 4,5 9,8 6,8 10 Bogor 12,6 15,5 22,4 10,4 12 18
Dari hasil  rendemen  fraksi  metanol:air  daun gaharu Palembang dan Bogor diperoleh nilai lebih dari 10% rendemen, hal ini memberikan informasi banyaknya  senyawa  polar  yang  terkandung  pada fraksi metanol:air hasil rendemen fraksi metanol:air  daun  gaharu  Bogor  lebih  besar dibandingkan  fraksi  metanol:air  daun  gaharu Palembang, hal ini memberikan informasi bahwa adanya  faktor  pengaruh  tempat  tumbuh  yang berbeda  baik  faktor  internal  seperti  unsur  hara dalam  tanah,  faktor  eksternal  seperti  intensitas sinar  cahaya  matahari,  suhu  dan  iklim  memiliki pengaruh terhadap jumlah rendemen fraksi.
Pengujian skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui  suatu  golongan  senyawa  kimia  yang terdapat pada ekstrak daun gaharu. Data hasil uji skrining fitokimia dapat dilihat pada tabel berikut.
Berdasarkan hasil pengujian skrining fitokimia ekstrak daun gaharu baik Palembang dan Bogor  memiliki  senyawa  alkaloid,  flavonoid, saponin,  tannin.  Untuk  daun  gaharu  Palembang memiliki senyawa steroid sedangkan daun gaharu
Bogor  memiliki  senyawa  triterpenoid.  Untuk golongan  senyawa  kuinon  baik  daun  gaharu Palembang  maupun  daun  gaharu  Bogor  tidak terdeteksi.
Tabel 4 . Hasil Uji Fitokimia
Golongan Senyawa Daun Gaharu Palembang Daun Gaharu Bogor Alkaloid (+) (+) Flavonoid (+) (+) Kuinon (-) (-) Saponin (+) (+) Tannin (+) (+) Steroid/triterpenoid Steroid Triterpenoid Keterangan: + (memiliki), - (tidak memiliki)
Tahapan  selanjutnya  dilakukan  pemantauan ekstrak dan fraksi menggunakan metode kromatografi lapis tipis dengan menggunakan fase gerak  yang  berbeda  kepolarannya.  Pengujian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  senyawa  apa  saja yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  dan  fraksi. Selain  itu  juga  dapat  digunakan  sebagai  uji kualitatif  aktivitas  antioksidan.  Fase  diam  yang digunakan berupa silica gel F254 sedangkan fase gerak  yang  digunakan  terdiri  dari  fase  ferak  non polar  yaitu n -heksana:etil  asetat  (8:2), fase  gerak semi  polar  terdiri  dari  kloroform:metanol  (8:2) dan fase gerak polar terdiri dari etil asetat:metanol:air  (8:1:1).  Penggunaan  tiga  fase gerak  bertujuan  untuk  mengetahui  proses pemisahan  pada  setiap  fase  gerak  yang  berbeda kepolarannya  sehingga  dapat  diketahui  senyawa golongan  non  polar,  senyawa  semi  polar  dan senyawa polar.
Penampak  bercak  yang  digunakan  untuk mendeteksi senyawa aktif daun gaharu Palembang dan  Bogor  terdiri  dari  H 2 SO 4 10%  merupakan penampak bercak universal yang dapat memberikan informasi seluruh komponen senyawa  dalam  ekstrak  dan  fraksi.  Penampak bercak  FeCl 3 10%  untuk  senyawa  fenolik, penampak  bercak  AlCl 3 5%  untuk  senyawa flavonoid  dan  penampak  bercak  DPPH  0,2% untuk  aktivitas  antioksidan  [14].  Adapun  hasil penampak  bercak  ekstrak  dan  fraksi  dengan  fase gerak  non  polar  ( n -heksana:etil  asetat  (8:2),  fase gerak  semi  polar  (kloroform:metanol  (8:2)  dan fase gerak polar (etil asetat:metanol:air (8:1:1).
Adapun  penggunaan  fase  gerak  yang digunakan berbeda kepolarannya bertujuan untuk mendapatkan  informasi  golongan  senyawa  kimia
yang  bersifat  non  polar,  senyawa  yang  bersifat semi  polar  dan  senyawa  yang  bersifat  polar. Dengan  adanya  infornasi  golongan  senyawa tersebut,  dapat  diketahui  senyawa  golongan  apa
yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan  dari daun  gaharu  baik  yang  dari  Palembang  maupun dari Bogor.
Gambar 1. Pemantauan Ekstrak dan Fraksi Daun Gaharu Palembang dan Bogor menggunakan fase gerak non polar
Keterangan Gambar: Dari arah sebelah kiri ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol:air. (a) Visual, (b) Uv 254 nm, (c) Uv 366 nm, (d) AlCl 3 5%, (e) FeCl 3 10%, (f) DPPH 0,2%, (g) H 2 SO 4 10%
Hasil  pemantauan  ekstrak  dan  fraksi  yang menggunakan fase gerak non polar n -heksana:etil asetat  (8:2)  menghasilkan  bercak  gelap  dengan latar  berfluoresensi  hijau  di  bawah  sinar  UV 254 nm, kemudian disemprot dengan H 2 SO 4 10% hasil kromatogram menimbulkan spot hijau dan merah kecoklatan  [15].  Senyawa  flavonoid  akan menimbulkan  bercak  berwarna  biru,  hijau  dan kuning  dilihat  di  bawah  sinar  UV 366. Hasil  yang telah  disemprot  penampak  bercak  AlCl 3 5% dilihat  dibawah  sinar  UV  366  nm  menimbulkan spot  biru  dan  kuning,  adanya  spot  warna  biru,
kuning  diduga  adanya  senyawa  flavonoid. Sedangkan  adanya  spot  berwarna  biru,  merah, hijau, ungu atau hitam dilihat secara visible . Hasil kromatogram daun gaharu terdapat spot berwarna hitam, diduga adanya senyawa fenol. Selanjutnya disemprot dengan DPPH 0,2% tidak menimbulkan bercak diduga tidak memiliki aktivitas antioksidan dengan  fase  gerak  non  polar.  Hal  ini  diduga senyawa  yang  bersifat  non  polar  tidak  memiliki aktivitas antioksidan baik untuk ekstrak dan fraksi dari  daun  gaharu  Palembang  dan  daun  gaharu Bogor.
Gambar 2. Pemantauan Ekstrak dan Fraksi Daun Gaharu Palembang dan Bogor menggunakan fase gerak semi polar
Keterangan Gambar: Dari arah sebelah kiri ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol:air. (a) Visual, (b) Uv 254 nm, (c) Uv 366 nm, (d) AlCl 3 5%, (e) FeCl 3 10%, (f) DPPH 0,2%, (g) H 2 SO 4 10%
Hasil  pemantauan  daun  gaharu  Palembang dan  Bogor  yang  menggunakan  fase  gerak semipolar kloroform:metanol (8:2) menghasilkan bercak gelap  dengan  latar  berfluoresensi hijau  di bawah  sinar  UV 254 nm  dan  bercak  yang berfluoresensi  hijau  dan  biru  dengan  latar belakang gelap. Bercak tersebut disemprot dengan penampak bercak H 2 SO 4 10% hasil kromatogram
menimbulkan  spot  hijau  dan  merah  kecoklatan selanjutnya disemprot penampak bercak AlCl 3 5% dilihat  di  bawah  sinar  UV 366 nm  menimbulkan spot berwarna biru dan kuning kehijauan, adanya spot  warna  biru  dan  kuning  kehijauan  diduga adanya senyawa flavonoid. Selanjutnya disemprot dengan  FeCl 3 10%  hasil  kromatogram  terdapat spot berwarna hitam dan diduga adanya senyawa
fenol.  Penampak  bercak  yang  selanjutnya digunakan adalah DPPH 0,2% hasil kromatogram terdapat  spot  berwarna  kuning  dengan  latar belakang  ungu.  Adanya  spot  berwarna  kuning
dengan  latar  belakang  ungu  pada  sampel  ekstrak etanol,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  metanol:air diduga memiliki potensi sebagai antioksidan.
Gambar 3. Pemantauan Ekstrak dan Fraksi Daun Gaharu Palembang dan Bogor menggunakan fase gerak polar
Keterangan Gambar: Dari arah sebelah kiri ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol:air. (a) Visual, (b) Uv 254 nm, (c) Uv 366 nm, (d) AlCl 3 5%, (e) FeCl 3 10%, (f) DPPH 0,2%, (g) H 2 SO 4 10%
Hasil  pemantauan  daun  gaharu  Palembang dan Bogor yang menggunakan fase gerak polar etil asetat:metanol:air  (8:1:1)  bahwa  ekstrak  dan fraksi  yang  diujikan  menghasilkan  bercak  gelap dengan  latar  berfluoresensi  hijau  di  bawah  sinar UV 254 nm dan bercak yang berfluoresensi hijau dan biru dengan  latar  belakang  gelap.  Kemudian disemprot dengan H 2 SO 4 10% hasil kromatogram menimbulkan  noda  hijau  dan  merah  kecoklatan selanjutnya disemprot penampak bercak AlCl 3 5% dan  dilihat  di  bawah  sinar  UV  366  nm menimbulkan  spot  berwarna  biru  dan  kuning kehijauan,  adanya  spot  warna  biru  dan  kuning kehijauan  diduga  adanya  senyawa  flavonoid. Dilanjutkan  disemprot  dengan  FeCl 3 10%  hasil kromatogram noda berwarna hitam diduga adanya senyawa  fenol.  Penampak  bercak  selanjutnya yaitu DPPH 0,2% hasil kromatogram terdapat spot berwarna kuning dengan latar belakang ungu dan diduga ekstrak etanol, fraksi etil asetat dan fraksi metanol:air memiliki potensi sebagai antioksidan.
Dari  ketiga  hasil  pemantauan  ekstrak  dan fraksi  yang  menggunakan  fase  gerak  non  polar, semi  polar  dan  polar,  hasil  pengujian  secara kualitatif  dapat  diketahui  bahwa  golongan senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan adalah golongan senyawa yang bersifat semi polar dan  senyawa  yang  bersifat  polar  dimana  hasil pembuktiannya  terdapat  pada  fase  gerak  semi polar dan fase gerak polar.
Pengujian  kuantitatif  aktivitas  antioksidan ekstrak  dan  fraksi  daun  gaharu  ( A.  malaccensis Lam)  yang  berasal  dari  Palembang  dan  Bogor dilakukan  dengan  metode  DPPH.  Metode  ini dipilih  karena  sederhana,  cepat  dan  mudah.
Prinsip  dari  metode  ini  adanya  interaksi  oleh senyawa  antioksidan  terhadap  penangkapan radikal  bebas  DPPH  dan  menetralkan  radikal DPPH menjadi tidak radikal [16].
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  pada sampel  daun  gaharu  dan  larutan  DPPH  dengan perbandingan  (1:1),  setelah  direaksikan  sampel dengan DPPH diinkubasi selama 30 menit dimana akan  terjadi  reaksi  pendonoran  proton  yang berasal  dari  sampel  daun  gaharu  yang  memiliki aktivtas antioksidan. Setiap pengukuran dilakukan sebanyak  tiga  kali  untuk  melihat  akurasi  dan presisinya.  Terjadi  perubahan  warna  semula berwarna  ungu  menjadi  kuning  kemudian  diukur pada  panjang  gelombang  serapan  maksimum DPPH  516  nm.  Peredaman  warna  DPPH  terjadi karena  adanya  senyawa  yang  memberikan  atau mendonorkan atom  hidrogen  pada  radikal  DPPH sehingga mereduksinya dan mengubahnya menjadi DPPH non radikal yang ditandai dengan berkurangnya  intensitas  warna  ungu  menjadi kuning pucat [12].
Aktivitas antioksidan dihitung nilai IC 50 yaitu konsentrasi  senyawa  yang  mampu  menghambat 50% radikal bebas. Nilai IC 50 didapat dengan cara memplotkan  konsentrasi  sampel  (µg/ml)  dengan persentase  penghambatan  yang  akan  diperoleh persamaan regresi linier. Hasil pengujian aktivitas antioksidan  daun  gaharu  Palembang  dan  Bogor dapat dilihat pada tabel berikut.
Berdasarkan hasil pengujian aktivitas antioksidan untuk ekstrak dan fraksi daun gaharu dengan pembanding vitamin C menunjukkan nilai IC 50 vitamin  C  sebesar  4,22  g/ml,  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  daun  gaharu  Palembang  sebesar
a b c d e g h
Pemantauan Ekstrak dan Fraksi Daun Gaharu Palembang
47,44 µg/ml dan daun gaharu Bogor sebesar 45,57 µ g/ml.  Berdasarkan  hasil  nilai  IC 50 tersebut termasuk  ke  dalam  kategori  sangat  kuat  karena memiliki  nilai  IC 50 <50 µ g/ml.  Hal  ini  diduga kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  masih  lebih banyak  dibandingkan  fraksi.  Untuk  hasil  fraksi metanol:air  pada  daun  gaharu  Palembang  dan Bogor  secara  berurutan  71,98  µg/ml  dan  66,39 µ g/ml.  Sedangkan  untuk  fraksi  etil  asetat  daun gaharu  Palembang  dan  Bogor  secara  berurutan 84,30 µ g/ml  dan  81,12  µg/ml.  Kedua  fraksi tersebut  masuk  ke  dalam  kategori  kuat  dengan nilai IC 50 berada  dalam  rentang  50  –  100  µg/ml. Untuk  hasil  fraksi n -heksana  daun  gaharu Palembang  nilai  IC 50 sebesar  138,81  µg/ml  dan daun gaharu  Bogor  140,09  µg/ml  yang  termasuk kategori antioksidan sedang.
Tabel 5 . Nilai IC₅₀ tiap fraksi
Sampel Nilai IC₅₀ (µg/mL) Daun Gaharu Palembang Daun Gaharu Bogor Ekstrak etanol 47,44 ± 1,12 45,57 ± 0,90 Fraksi n-heksana 138,81 ± 0,30 140,09 ± 0,60 Fraksi etil asetat 84,30 ± 0,23 81,12 ± 0,55 Fraksi metanol:air 71,98 ± 0,47 66,39 ± 0,25 Vitamin C 4,22 ± 0,201
Dari hasil yang diperoleh tersebut menunjukkan  bahwa  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  sangat  kuat  adalah  ekstrak  etanol, sedangkan fraksi etil asetat dan fraksi metanol air termasuk dalam kategori antioksidan kuat. Ekstrak etanol,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  metanol:air memiliki  senyawa  yang  bersifat  polar  dan  semi polar,  hasil  ini  juga  didukung  oleh  hasil pemantauan ekstrak dan fraksi dimana pemantauan  yang  menggunakan  fase  gerak  semi polar  dan  polar  setelah  disemprot  penampak bercak  DPPH  0,2%  hasil  kromatogram  terdapat spot berwarna kuning dengan latar belakang ungu. Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  senyawa  yang berperan dalam  aktivitas antioksidan  diantaranya flavonoid  dan  fenolik.  Berdasarkan  penelitian sebelumnya  yang  telah  dilakukan  menunjukan bahwa ekstrak etanol daun gaharu ( A. malaccensis Lam) memiliki antioksidan yang sangat kuat. Berdasarkan  hasil  pengujian  dari  ekstrak etanol  dan  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi  metanol:air  dari  daun  gaharu  Palembang serta  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil
asetat  dan  fraksi  metanol:air  dari  daun  gaharu Bogor memiliki tingkat potensi aktivitas antioksidan  yanhg  sangat  kuat  dan  kuat.  Akan tetapi terdapat perbedaan dari hasil nilai IC 50 yang diperoleh  dari  tiap  daerah  berbeda  yaitu  daun gaharu  yang  berasal  dari  Palembang  memiliki nilai  IC 50 lebih  tinggi  dibandingkan  daun  gaharu yang  berasal  dari  Bogor.  Hal  yang  dapat mempengaruhi  nilai  suatu  senyawa  dalam tanaman  diantaranya  adalah  letak  geografis tanaman  (ketinggian,  intensitas  cahaya),  faktor iklim yang meliputi suhu dan kelembaban, faktor esensial  seperti  cahaya,  air  dan  unsur  hara  tanah sehingga dapat mempengaruhi kandungan senyawa aktif antioksidan [17].
Palembang merupakan daerah yang memiliki suhu rata-rata 28,92 o C berdasarkan data klimatologi, minimum suhu 22,4 0 C dan maksimum  34 o C  dengan  kelembaban  rata-rata 80,54%,  minimum  60%  dan  maksimum  100%. Intensitas cahaya  21%  dan  ketinggian  rata-rata  8 mdpl  [18].  Sedangkan  untuk  daerah  Bogor merupakan  daerah  yang  memiliki  ketinggian minimum  190  meter  dan  maksimum  330  mdpl, berdasarkan  data  klimatologi  Bogor  memiliki suhu rata – rata 26,4 o C, minimum suhu 21,4 o C dan maksimum 34,1 o C dengan kelembaban rata – rata 84%,  minimum  67%  dan  maksimum  92%, intensitas cahaya matahari 35% [19].
Pertumbuhan suatu tanaman akan meningkat jika  suhu  meningkat  dan  kelembaban  idara menurun  demikian  pula  sebaliknya  serta  cahaya yang  digunakan  untuk  proses  fotosintesis, semakin  baik  proses  fotosintesis  maka  semakin baik  pada  pertumbuhan  tanaman,  kemudian semakin  tinggi  tempat  maka  suhunya  semakin rendah  dan  kelembabannya  akan  semakin  tinggi. Dari  informasi  yang  diperoleh  tersebut  adanya perbedaan antara ketinggian, suhu, kelmebaban da intensitas  cahaya,  sehingga  akan  mempengaruhi produksi  metabolit  sekunder  pada  tanaman gaharu. Sehingga nilai IC 50 yang didapatkan pada daerah  Bogor  lebih  rendah  dibandingkan  pada daerah Palembang.

## 4 Kesimpulan
Kandungan senyawa metabolit sekunder dari suatu  tanaman  dipengaruhi  oleh  tempat  tumbuh tanaman tersebut. Daun gaharu yang berasal dari Palembang  dan  Bogor  memiliki  letak  geografis yang  berbeda  yaitu  terdapat  perbedaan  dari ketinggian, intensitas cahaya, suhu dan kelembaban.  Nilai  IC 50 dari  ekstrak  dan  fraksi masing-masing  berbeda-beda.  Daun  gaharu
Palembang  untuk  ekstrak  etanol  47,44  µg/ml, fraksi  metanol:air  71,98  µg/ml,  fraksi  etil  asetat 84,30 µ g/ml  dan  fraksi  n-heksan  138,81  µg/ml sedangkan  daun  gaharu  Bogor  untuk  ekstrak etanol  45,57  µg/ml,  fraksi  metanol:air  66,39 µ g/ml, fraksi etil asetat 81,12 µg/ml dan fraksi n- heksan 140,09 µg/ml.

## Ucapan Terima Kasih
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  untuk dana  penelitian  skema  Penelitian  Dosen  Pemula dari Kemenristekdikti, untuk Lembaga Penelitian dan  Pengabdian  Masyarakat  Universitas  Bhakti Kencana  yang  mendampingi  dalam  pelaksanaan penelitian ini. Terima kasih untuk anggota peneliti apt. Wempi Budiana, M.Si yang membantu dalam pelaksanaan penelitian.

## Daftar Pustaka
[1] Sari  DI,  Rahmawanty  D,  Apriana  D, Amelia  R.  2018.  Aktivitas  Antioksidan
Sediaan  Gel  Mengandung  Ekstrak  Etanol Dan  Fraksi  Etil  Asetat  Daun  Aquilaria Microcarpa. In: Prosiding Seminar Nasional Lingkungan Lahan Basah [Internet] Banjarmasin: Universitas Lambung Mangkurat; p. 111–5. Available from: https://snllb.ulm.ac.id/prosiding/index.php
/snllb-lit/article/view/28
[2] Isromarina  R,  Sriwijaya  RA.  2017.  Uji Aktifitas  Antioksidan  Ekstrak  Dan  Fraksi Ekstrak  Metanol  Daun  Gaharu  (Gyrinops Versteegii (Gilg). Domke) Dengan Metode DPPH. J  Ilm  Bakti  Farm [Internet]
2(1):57–62. Available from: https://ejournal.stifibp.ac.id/index.php/jibf /article/view/18
[3] Razak  RNHA,  Ismail  F,  Muhammad  Isa LM,  Wahab  AYA,  Muhammad  H,  Ramli R,  et  al.  2019.  Ameliorative  Effects  Of Aquilaria  Malaccensis  Leaves  Aqueous Extract On Reproductive Toxicity Induced By  Cyclophosphamide  In  Male  Rats. Malaysian J Med Sci 26(1):44–57.
[4] Adam  AZ,  Lee  SY,  Mohamed  R.  2017. Pharmacological  Properties Of  Agarwood Tea Derived From Aquilaria (Thymelaeaceae)  Leaves:  An  Emerging Contemporary  Herbal  Drink. Perspect
Med .
[5] Safrina  D.  2019.  Pengaruh  Ketinggian Tempat Tumbuh Dan Metode Pengeringan
Terhadap Organoleptik Dan Kadar Asiatikosid Pegagan (Centella Asiatica (L)
Urb). J  Tek  Pertan  Lampung  (Journal Agric  Eng [Internet]  8(3):208.  Available from: http://dx.doi.org/10.23960/jtep-
l.v8i3.208-213
[6] Suryana S, Prasetiawati R. 2017. Aktivitas Antimikroba  Dan  Antioksidan  Ekstrak Etanol Akar Dan Ranting Gaharu
(Aquilaria  Moluccensis  Oken.). J  Ilm Farm Bahari [Internet] 8(1):1–20. Available from: https://journal.uniga.ac.id/index.php/JFB/ article/view/623/602 [7] Suhardiman A, Juanda D. 2019.
Pengembangan  Obat  Herbal  Fraksi  Daun Gaharu  (Aquilaria  Malaccensis  Lam)
Dalam  Bentuk  Gel  Untuk  Penyembuhan Luka  Bakar. J  Sains  dan  Teknol  Farm Indones [Internet]  8(1).  Available  from: http://dx.doi.org/10.58327/jstfi.v8i1.95
[8] Suhardiman  A,  Hanifah  H,  Roni  A, Asnawi A, Kencana UB, Author C. 2020. Cytotoxic  Activities  Of  Extract  And Fraction Of Agarwood Leaves (. 11:1012– 8.
[9] Suhardiman  A,  Ramdani  A,  Kurnia  D, Asnawi  A.  2021.  Cytotoxic  Test  Of Fraction  Of  Gaharu  Leaves  (  Aquilaria Malaccensis  )  On  Cervic  Cancer  Cells  ( Hela  Cells  )  Using  MTT  Assay  Method. 12(2):1624–31.
[10] Suhardiman  A,  I  KA,  Sukamawati  IK, Rostinawati T. 2022. Activity Of Gaharu ( Aquilaria  Malaccensis  Lam  )  Leaves Extract  And  Fraction  As  Herbal  Drug Against  α  -Glucosidase  Inhibition. 13(1):35–41.
[11] Kementrian Kesehatan RI. 2017. Farmakope  Herbal  Indonesia.  2nd  ed.
Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta;
[12] Molyneux P. The Use Of The Stable Free Radical Diphenylpicryl- Hydrazyl ( DPPH ) For Estimating Antioxidant Activity. Vol.
50. [13] Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta; 1–68 p.
[14] Forestryana  D,  Arnida  A.  2020.  Skrining Fitokimia  Dan  Analisis  Kromatografi Lapis  Tipis  Ekstrak  Etanol  Daun  Jeruju (Hydrolea Spinosa L.). J Ilm Farm Bahari [Internet]  11(2):113.  Available  from: http://dx.doi.org/10.52434/jfb.v11i2.859
[15] Harborne. 1987. Phytochemical Methods.
[16] Don  MD.  2017.  Antioxidant  Activity  Of Methanol Extract / Fractions Of Senggani Leaves  Pharmaceutica  Analytica  Acta. 8(8):1–6.
[17] Aminah A, Maryam S, Baits M, Kalsum U. 2016. Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  (Annona Muricata L.) Berdasarkan Tempat Tumbuh Dengan  Metode  Peredaman  DPPH. J Fitofarmaka  Indones [Internet]  3(1):146– 50. Available from:
http://dx.doi.org/10.33096/jffi.v3i1.175
[18] Badan  Pusat  Statistik  Kota  Palembang.
2022. Kota Palembang Dalam Angka 2022 [Internet].  Palembang;  Available  from: https://palembangkota.bps.go.id/publicati on/2022/02/25/6207b7fbd626b373a44b1b 1a/kota-palembang-dalam-angka- 2022.html
[19] Badan  Pusat  Statistik  Kota  Bogor.  2022. Kota Bogor Dalam Angka 2022. Bogor;