BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 1 (2020):  123 - 130 E-ISSN: 2714-8564

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Tubuh Buah
Coprinus comatus Terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus

## Ellen Evita*, Nuniek Ina Ratnaningtyas, Dini Ryandini
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 *Email : ellenevita24@yahoo.com

## Rekam Jejak Artikel:
Diterima  :  26/08/2019
Disetujui  :  31/01/2020

## Abstract
Coprinus comatus is one of fungal species that can produce bioactive compounds. Extract of this fungi  usually  be  used  for  medical  purpose,  such  as  anti-cancer,  hypoglycemic,  and cardiovascular disease, however the information of antibacterial activity has not been reported yet. The aim of this study was to know the effect of ethyl acetate and ethanol to the extraction of antibacterial  compounds  from C.  comatus , to  know  the  lowest  concentration  of C. comatus’ s fruiting body extract that can inhibit the growth of E. coli and S. aureus , and to know effect of antibacterial compounds from ethyl acetate and ethanol to E. coli and S. aureus . First, extraction of antibacterial compound was done using maceration. Solvents used on extraction method are ethanol and ethyl acetate. Assay of antibacterial activity was conducted against Escherichia coli and Staphylococcus aureus . This inhibition test use 7 months aged simplicial that has been saved in  refrigerator  and  will  be  compared  with  4  weeks  aged  simplicial.  This  research  was  done experimentally  used  Completely  Randomized  Design  with  the  treatment  of  solvent  type  and extract  concentration .  The  result  showed  that  etanol  extract  has  higher  rendement  than  ethyl acetate  rendement. Four  weeks  aged  simplicial  has  better  inhibition  than  7  months  aged simplicial. The lowest concentration that can inhibit E. coli and S. aureus was 6,75% of both extract. In general, S. aureus was more susceptible against both extract than E. coli . Keywords :  Antibacterial, Coprinus comatus , Escherichia coli , Staphylococcus aureus

## Abstrak
Coprinus  comatus merupakan  salah  satu  jamur  yang  dapat  menghasilkan  senyawa  bioaktif. Ekstrak dari jamur ini sering digunakan pada bidang medis, seperti anti-kanker, anti-diabetes, dan  penyakit  kardiovaskular,  namun  masih  belum  ada  informasi  sebagai  anti-bakteri.  Tujuan penelitian  ini  yaitu  mengetahui  jenis  pelarut  yang  menghasilkan  rendemen  tertinggi  dan memiliki aktivitas antibakteri lebih tinggi terhadap E. coli dan S. aureus , mengetahui pengaruh umur simplisia terhadap aktivitas anti-bakteri, mengetahui konsentrasi terendah ekstrak tubuh buah C.  comatus yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli dan S.  aureus , mengetahui aktivitas penghambatan ekstrak etil asetat dan ekstrak etanol terhadap E. coli dan S. aureus .  Penelitian  ini  diawali  dengan  proses  ekstraksi  senyawa  antibakteri  dari C.  comatus menggunakan  metode  maserasi.  Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses  ekstraksi  yaitu  pelarut etanol  dan  etil  asetat.  Pengujian  aktivitas  anti-bakteri  ekstrak C.  comatus dilakukan  terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Uji aktivitas anti-bakteri menggunakan simplisia berumur 7 bulan yang telah disimpan di lemari pendingin dan dibandingkan dengan ekstrak dari simplisia berumur 4 minggu. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental menggunakan rancangan penelitian Rancangan Acak  Lengkap (RAL) dengan perlakuan penggunaan pelarut dan  konsentrasi  ekstrak  yang  berbeda.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  e kstrak  etanol memiliki rendemen lebih tinggi dari ekstrak etil asetat, namun aktivitas penghambatan ekstrak etil asetat lebih baik terhadap kedua bakteri dibandingkan ekstrak etanol. Simplisia berumur 4 minggu menunjukkan aktivitas penghambatan yang lebih baik dibandingkan simplisia berumur 7 bulan. Konsentrasi terendah yang dapat menghambat E. coli dan S. aureus adalah konsentrasi 6,75% dari kedua ekstrak. Secara umum lebih baik terhadap S. aureus lebih peka terhadap kedua ekstrak dibandingkan E. coli. Kata kunci : Antibakteri, Coprinus comatus , Escherichia coli , Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Tumbuhan,  jamur,  dan  mikroba  umumnya memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif.  Jamur merupakan  sumber  senyawa  bioaktif  yang  dapat digunakan sebagai antibakteri, antitumor, hipolipidemik, dan hipoglikemik (Ren et al ., 2014).
Jamur  sebagai  sumber  senyawa  bioaktif  memiliki kelebihan,    diantaranya    produksi     tubuh    buah
membutuhkan  waktu  yang  relatif  singkat,  dan  bila miselium  ditumbuhkan  pada  medium  cair  dapat dimanipulasi  untuk  memproduksi  jumlah  produk aktif dari biomassa miselium (Lavanya & Subhashini, 2013).
Salah  satu  jamur  yang  dapat  menghasilkan senyawa bioaktif adalah Coprinus comatus . Jamur C. comatus , atau yang biasa disebut dengan jamur paha ayam,  merupakan  salah  satu  jenis  jamur  liar  yang biasanya  ditemukan  di  beberapa  daerah  di  Filipina sepanjang musim hujan (Kalaw & Albinto, 2014). C. comatus sebagai  jamur  liar  dapat  dibudidayakan sebagai  jamur  pangan,  namun  masih  jarang dibudidayakan  di  Indonesia.  Ekstrak  dari  jamur  ini sering  digunakan  pada  bidang  medis,  seperti  anti- kanker,  anti-diabetes,  dan  penyakit  kardiovaskular (Stojkovic et  al .,  2013).  Jamur  ini  masih  jarang dibudidayakan di Indonesia.
Kajian  mengenai C.  comatus sebagai  sumber senyawa  antibakteri,  terutama  dari  ekstrak  tubuh buah,  masih  jarang  dilakukan.  Senyawa  antibakteri dari C.  comatus dapat  diperoleh  melalui  proses ekstraksi,  salah  satunya  yaitu  maserasi.  Maserasi merupakan  metode  ekstraksi  yang  sederhana  dan dilakukan  dengan  cara  merendam  serbuk  simplisia dalam  cairan  pelarut  (Kosasih  &  Soediro,  1987). Pelarut yang biasa digunakan dalam metode maserasi yaitu pelarut etanol dan etil asetat. Berdasarkan sifat kepolarannya, jenis pelarut dibagi menjadi tiga, yaitu pelarut non-polar (n-heksan), semi polar (etil asetat) dan  polar  (etanol  dan  air).  Ekstrak  dengan  pelarut tertentu  akan  menarik  senyawa  tertentu  yang  sesuai dengan  sifat  kepolaran  pelarutnya . Sifat  kimia  zat pelarut  yang  akan  digunakan  harus  sesuai  dengan sifat  kimia  yang  akan  diesktrak,  sehingga  dapat memberikan  efektivitas  yang  tinggi  terhadap kelarutan  senyawa  bioaktif  dalam  larutan  tersebut (Sudarmadji et  al .,  1989).  Pelarut  polar  akan melarutkan  senyawa  bioaktif  yang  bersifat  polar, begitupun sebaliknya.
Senyawa  bioaktif  jamur  dapat  diperoleh  dari supernatant/filtrat  medium  (ekstraseluler),  biomassa miselium  (intraseluler),  dan  tubuh  buah  jamur (Poucheret et al. , 2006). Senyawa bioaktif antibakteri biasanya  merupakan  metabolit  sekunder  yang dihasilkan  pada  akhir  fase  pertumbuhan  akhir  atau pada  fase  stationer.  Senyawa  antibakteri  dapat berspektrum luas, yaitu mampu menghambat bakteri Gram  positif,  bakteri  Gram  negatif  dan  fungi, sedangkan  antibakteri  berspektrum  sempit  hanya menghambat  pertumbuhan  kelompok  tertentu  saja (Pelczar & Chan., 2010). Pengujian ekstrak terhadap bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif  perlu dilakukan untuk mengetahui kemampuan antibakterinya.  Bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif memiliki komposisi dinding sel yang berbeda sehingga  memungkinkan  terjadinya  respon  yang
berbeda. Bakteri Gram negatif Escherichia coli dan bakteri Gram positif Staphylococcus aureus merupakan  dua  bakteri  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini.  Tujuan  pengujian  dengan  kedua bakteri  ini  adalah  untuk  mengetahui  kemampuan aktivitas  antibakteri C.  comatus terhadap  bakteri Gram positif dan negatif serta diharapkan C. comatus dapat  berfungsi  sebagai  antibakteri  saat  terjadi infeksi  yang  disebabkan  oleh E.  coli dan S. aureus.
Uji  penghambatan  menggunakan  simplisia  berumur 7 bulan yang telah disimpan di lemari pendingin dan dibandingkan dengan ekstrak dari simplisia berumur 4  minggu.  Berdasarkan  latar  belakang  tersebut penelitian  ini  bertujuan  untuk  1) mengetahui  jenis pelarut  yang  menghasilkan  rendemen  tertinggi  dan memiliki aktivitas antibakteri lebih tinggi terhadap E. coli dan S.  aureus ,  2)  mengetahui  pengaruh  umur simplisia terhadap aktivitas anti-bakteri, 3) mengetahui konsentrasi terendah ekstrak tubuh buah C. comatus yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aureus , 4) mengetahui aktivitas penghambatan  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol terhadap E. coli dan S. aureus .

## MATERI DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  simplisia C.  comatus koleksi  CV  Asa  Agro Corporation  Cianjur,  isolat S.  aureus dan E.  coli koleksi Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman.
Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental menggunakan rancangan penelitian Rancangan Acak Lengkap  (RAL)  dengan  perlakuan  penggunaan pelarut yang berbeda (E1: etil asetat, dan E2: etanol), dan pengaruh konsentrasi ekstrak yang berbeda (K1 : konsentrasi  ekstrak  100%,  K2  :  konsentrasi  ekstrak 50%, K3 : konsentrasi ekstrak 25%, K4 : konsentrasi ekstrak 12,5%, dan K5 : konsentrasi ekstrak 6,75%) terhadap pertumbuhan E. coli dan S. aureus . Masing- masing perlakuan diulang 3 kali sehingga menghasilkan total 30 unit percobaan.

## Pembuatan Tepung Jamur (Simplisia)
Tubuh  buah  jamur  paha  ayam  ( C.  comatus ) segar dipotong kecil-kecil dan ditimbang, kemudian dikeringkan  menggunakan  oven  dengan  temperatur 55˚C  selama  2  x  24  jam.  Jamur  yang  telah  kering kering  kemudian  dihaluskan  dengan  blender,  dan diayak hingga halus. Simplisia siap untuk diekstraksi ( Susanto et al ., 2018).
Ekstraksi Senyawa Antibakteri dari C. comatus
Simplisia  dengan  umur  penyimpanan  berbeda disiapkan  dan  ditimbang.  Simplisia  lama  ditimbang sebanyak  dua  kali  masing-masing  seberat  80  gram, sedangkan  simplisia  baru  ditimbang  sebanyak  dua kali  masing-masing  50  gram  dan  dimasukkan  ke dalam empat beaker glass yang berbeda, selanjutnya direndam  dengan  pelarut  etanol  dan  etil  asetat. Simplisia  lama  direndam  dengan  400  mL  pelarut (perbandingan  b/v  =  1  :  5).  Sama  halnya  dengan simplisia lama, simplisia baru juga direndam dengan pelarut masing-masing sebanyak 250 mL (b/v = 1:5), kemudian  diaduk  selama  5  menit  dan  dimaserasi selama 24 jam. Hasil maserasi pertama disaring dan dikumpulkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer.  Simplisia yang  tersisa  direndam  kembali  (remaserasi)  dengan pelarut yang baru selama 24 jam. Hasil remaserasi ini disaring  digabungkan  menjadi  satu  dengan  hasil maserasi pertama (Susanto et al ., 2018, Radji et al ., 2011, dengan modifikasi) .
Evaporasi Ekstrak C. comatus
Filtrat  yang  telah  didapatkan,  dipekatkan menggunakan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu sesuai titik didih pelarut (Etanol 79˚C, sedangkan etil asetat  77˚C)  hingga  warna  ekstrak  lebih  pekat  dari sebelum dimasukkan ke dalam evaporator, kemudian diuapkan  kembali  menggunakan hotplate hingga ekstrak  mengental  dan  berwarna  agak  kecoklatan. Ekstrak  yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  botol vial  untuk  ditimbang  dan  disimpan  dalam  kulkas hingga  digunakan.  Ekstrak  dihitung  dengan  rumus sebagai berikut:
Bobot ekstrak = (Bobot botol vial + ekstrak) – (bobot botol vial kosong)
Selanjutnya,  ekstrak  yang  didapatkan  dihitung rendemennya dengan rumus sebagai berikut :
Rendemen = Bobot ekstrak Bobot sampel x 100%
Ekstrak  etanol  dan  etil  asetat C.  comatus dibuat variasi  konsentrasi.  Konsentrasi  ekstrak C.  comatus yang digunakan yaitu 100%; 50%; 25%; 12,5% dan 6,75%.  Larutan  pengencer  yang  digunakan  adalah DMSO 5%.
Pengujian Antibakteri dengan Metode Difusi
Bakteri E. coli dan S. aureus diambil sebanyak
1  ose  dan  diinokulasikan  ke  dalam  9  mL  media Nutrient  Broth (NB)  kemudian  diinkubasi  selama  8 jam.  Kultur  bakteri  cair  yang  telah  dibiakkan diinokulasikan  pada  media Nutrient  Agar (NA) secara pour  plate .  Ekstrak  sebanyak  20  µL  dengan berbagai konsentrasi diteteskan ke atas kertas cakram berdiameter 6 mm. Kertas cakram yang telah ditetesi dengan ekstrak jamur diletakkan di atas biakan pada medium  NA.  Biakan  diinkubasi  selama  8  jam  pada suhu  ruang    dan  adanya  aktivitas  antibakteri dibuktikan dengan terbentuknya zona hambat. Zona hambat diukur dengan rumus :
D = d1+d2+d3+d4

## 4
Keterangan: D1 = diameter 1 D2 = diameter 2 D3 = diameter 3 D4 = diameter 4
Daya  antibakteri  yang  dihasilkan  dibandingkan dengan  kontrol  positif  dan  negatif.  Kontrol  positif menggunakan  kloramfenikol  30 µg/mL ,  sedangkan kontrol negatif menggunakan DMSO 5% (Efendi & Hertiani,  2013,  Radji et  al .,  2011,  Ngazizah et  al ., 2016, dengan modifikasi).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi senyawa antibakteri dengan menggunakan  metode  maserasi  dilakukan  terhadap simplisia C.  comatus yang  telah  disimpan  sekitar  7 bulan  di  dalam  lemari  pendingin.  Ekstrak  yang diperoleh  dari  80  gram  simplisia C.  comatus lama dengan pelarut etanol didapatkan sebanyak 1,85 gram sehingga  diperoleh  rendemen  sebesar  2,3125%, sedangkan  dengan  pelarut  etil  asetat  didapatkan sebanyak  1,76  gram  sehingga  diperoleh  rendemen sebesar 2,2%, seperti yang ditunjukkan oleh Gambar 1.
Gambar 1. Histogram Nilai Rendemen Ekstrak Tubuh Buah Jamur C. comatus dengan Pelarut yang Berbeda
Hasil  pengukuran  rendemen  menunjukkan bahwa ekstrak yang dihasilkan dari maserasi dengan pelarut  etanol  memiliki  persentase  lebih  tinggi dibanding ekstrak dengan pelarut etil asetat. Hal ini berarti C. comatus mengadung lebih banyak senyawa polar  yang  diikat  oleh  etanol  dibandingkan  dengan senyawa  semi  polar  yang  diikat  oleh    etil  asetat. Persentase  rendemen  menunjukkan  kandungan senyawa dalam biomassa sel dengan sifat kepolaran yang  sama  dengan  pelarut  (Sani et  al. ,  2014). Guenther (1987) melaporkan bahwa ekstraksi sangat dipengaruhi oleh pelarut. Ekstraksi senyawa bioaktif dari C.  comatus menggunakan  etanol  juga menghasilkan  rendemen  lebih  tinggi  dibandingkan pada  ekstraksi  menggunakan  n-heksan  (Susanto et al ., 2018).
Ekstrak  etanol  dan  etil  asetat  simplisia C.  comatus memiliki  kemampuan  penghambatan terhadap E. coli dan S. aureus . Ekstrak etanol dan etil
asetat, secara umum, memiliki kemampuan penghambatan  lebih  tinggi  terhadap S.  aureus daripada E.  coli (Gambar  2  dan  3).    Hal  ini kemungkinan  terjadi  karena  perbedaan  susunan komposisi  dinding  sel  dari  kedua  bakteri  uji  yang digunakan  sehingga  memberikan  respon  kepekaan yang berbeda. Dinding sel bakteri Gram positif hanya tersusun  dari  satu  lapisan  peptidoglikan  yang  lebih tebal  (90%),  sedangkan  dinding  sel  bakteri  Gram negatif  mempunyai  dua  lapisan  dinding  sel,  yaitu lapisan  luar  yang  tersusun  dari  lipopolisakarida  dan protein, dan lapisan dalam tersusun dari peptidoglikan  (5-20%),  lebih  tipis  daripada  lapisan peptidoglikan  pada  Gram  positif  (Timotius,  1982). Menurut  A’yunin et  al .  (2016),  jumlah  penyusun dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  lebih  banyak daripada jumlah penyusun dinding sel bakteri Gram positif, sehingga menyebabkan bakteri Gram positif lebih rentan terhadap zat antibakteri
.
Gambar 2. Histogram Penghambatan Ekstrak Etanol dan Etil Asetat Simplisia C. comatus Lama dengan berbagai konsentrasi terhadap E. coli dan S. aureus Keterangan : E : ekstrak etanol
EC : E. coli EL
: ekstrak etil asetat
SA
: S. aureus
2,3125 2,2 2,1 2,15 2,2 2,25 2,3 2,35 Jenis Pelarut P er sen tase ren d em en ( %) Etanol Etil Asetat
0 5 10 15 20 25 100% 50% 25% 12.5% 6.75% Diame ter Zo n a H amb at (mm ) Konsentrasi E. EC E. SA
EL. EC EL. SA
Hasil  uji  tantang  kontrol  negatif  yang menggunakan DMSO 5%
terhadap S.  aureus menghasilkan  zona  hambat  rata-rata sebesar  7,2  mm  dan  terhadap E.  coli menghasilkan zona hambat rata-rata sebesar 6 mm. Hal ini berarti DMSO  dalam  penelitian  ini  juga  memiliki  peran penghambatan terhadap S. aureus dan E. coli . Hal ini tidak  sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Pottz et al .  (1967)  yang  menyatakan  bahwa  DMSO 0% hingga 20% tidak memberikan efek penghambatan terhadap E. coli dan S. aureus .
Perbedaan jenis ekstrak menghasilkan penghambatan yang berbeda karena senyawa terlarut dalam  ekstrak  dipengaruhi  oleh  kepolaran  pelarut. Konsentrasi  yang  berbeda  juga  memberikan  respon penghambatan  yang  berbeda.  Hal  ini  dikarenakan semakin  kecil  konsentrasi,  semakin  kecil  pula senyawa yang terlarut dalam ekstrak (Tabel 1).
Tabel  1. Uji  Lanjut  Beda  Nyata  Jujur  (BNJ)  Kemampuan  Penghambatan  Ekstrak  Etil  dan  Etanol C.  comatus terhadap Bakteri Uji
Perlakuan Rata-rata zona hambat terhadap bakteri S. aureus E. coli E1K1 15,33 cd 12,67 c E1K2 9,90 abc 9,00 b E1K3 7,50 a 7,25 a E1K4 7,00 a 6,30 a E1K5 6,00 a 6,00 a E2K1 18,00 d 11,30 c E2K2 14,00 bcd 9,30 b E2K3 8,67 ab 9,50 b E2K4 8,00 a 7,00 a E2K5 7,33 a 6,00 a
Keterangan : Angka yang disertai notasi yang berbeda menunjukkan berpengaruh nyata dengan tingkat kesalahan 5% E1   : Ekstrak Etanol
K1
: Konsentrasi 100%
E2   : Ekstrak Etil Asetat K2 : Konsentrasi 50% K3 : Konsentrasi 25% K4 : Konsentrasi 12,5% K5 : Konsentrasi 6,75%
Berdasarkan hasil uji lanjut BNJ, ekstrak yang paling  mempengaruhi  penghambatan  terhadap S. aureus yaitu  ekstrak  etil  asetat,  sedangkan  ekstrak yang  paling  mempengaruhi  penghambatan  terhadap E. coli yaitu ekstrak etil asetat dan etanol (Tabel 1). Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat lebih memiliki aktivitas antibakteri lebih tinggi dibandingkan ekstrak etanol, karena dapat menghambat  kedua  jenis  bakteri.  Huliselan et  al.
(2015)  melaporkan  bahwa  pada  ekstrak  etil  asetat terdapat  kandungan  fenolik  yang  lebih  tinggi dibandingkan  ekstrak  etanol.  Menurut  Carolia  & Noventi  (2016),  mekanisme  fenol  sebagai  agen antibakteri berperan sebagai toksin dalam protoplasma,  merusak  dan  menembus  dinding  serta mengendapkan  protein  sel  bakteri.  Huang et  al .
(2005)  menyatakan  bahwa  senyawa  antioksidan berbanding lurus dengan total fenol. Semakin tinggi kandungan fenol dalam suatu bahan, semakin tinggi pula  aktivitasnya  sebagai  antioksidan,  begitu  pun sebaliknya.  Palekahelu  (2018)  juga  melaporkan bahwa  senyawa  antioksidan  juga  berperan  sebagai antibakteri, contohnya flavonoid dan tanin (termasuk dalam polifenol), yang dapat merusak permeabilitas dinding sel bakteri.
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat C.  comatu s  terhadap S.  aureus dan E.  coli menunjukkan adanya zona hambat dan zona resisten.
Zona hambat  menunjukkan kemampuan  membunuh bakteri,  sedangkan  zona  resisten  menunjukkan kemampuan menghambat bakteri (Vandepitte et al ., 1991).  Penghambatan  terhadap S.  aureus dengan
konsentrasi  50%  menghasilkan  diameter  zona hambat sebesar 14,5 mm dan zona resisten sebesar 20 mm,  konsentrasi  25%  menghasilkan  diameter  zona hambat  sebesar  9  mm  dan  zona  resisten  sebesar  13 mm. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat C. comatu s terhadap E. coli dengan konsentrasi 100% menghasilkan  diameter  zona  hambat  sebesar  11,5 mm dan zona resisten sebesar 19,33 mm, konsentrasi 50% menghasilkan diameter zona hambat sebesar 9,5 mm dan zona resisten sebesar 18,5 mm, konsentrasi 25% menghasilkan diameter zona hambat sebesar 9,5 mm dan zona resisten 13 mm. Hal ini berarti kedua bakteri  bersifat  resisten  terhadap  ekstrak  etil  asetat. Hal ini didukung oleh Vandepitte et al ., (1991) yang menyatakan  bahwa  ketika  inokulum  terlalu  pekat, ukuran zona hambat akan berkurang dan strain yang rentan akan berubah menjadi strain yang resisten.
Gambar
3. menunjukkan hasil uji penghambatan  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  etil  asetat yang berasal dari simplisia lama (7 bulan) dan baru (4 minggu) terhadap E. coli dan S. aureus . Hasil uji menujukkan efek penghambatan yang berbeda, yaitu simplisia  baru  menghasilkan  penghambatan  lebih tinggi.  Hal  ini  dapat  terjadi  karena  senyawa  yang terkandung  dalam  simpisia  bersifat  tidak  stabil  dan dapat teroksidasi selama penyimpanan. Faktor-faktor yang dapat mengakibatkan terjadinya oksidasi kimia senyawa  bioaktif  diantaranya  yaitu  waktu,  suhu, kelembaban  udara  di  sekitarnya,  kelembaban  bahan atau kandungan air dari bahan, ketebalan bahan yang dikeringkan,  sirkulasi  udara,  dan  luas  permukaan bahan (Muhamad et al. , 2015).
Gambar 3. Histogram Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol dan Etil Asetat dari Tubuh Buah C. comatus terhadap E. coli dan S. aureus Keterangan : SL : simplisia umur 7 bulan
EC  : E. coli SB  : simplisia umur 4 minggu
SA  : S. aureus E : ekstrak etanol
K0  : kontrol negatif
EA  : ekstrak etil asetat
K1   : kontrol positif (kloramfenikol)
Penghambatan E.  coli dan S.  aureus oleh ekstrak  tubuh  buah C.  comatus disebabkan  oleh senyawa bioaktif yang bersifat antibakteri. Menurut Husein  (2019,  komunikasi  pribadi)  hasil  analisis senyawa  bioaktif  ekstrak  etil  asetat  jamur C. comatus secara  kualitatif  menunjukkan  ekstrak mengandung  alkaloid  dengan  konsentrasi  lemah, flavonoid  dengan  konsentrasi  sedang,  dan  saponin dengan  konsentrasi  lemah.  Menurut  Ratnaningtyas et  al. (2019)  ekstrak  etanol  jamur C.  comatus mengandung  alkaloid  dengan  konsentrasi  lemah, flavonoid dengan konsentrasi tinggi, dan mengandung saponin dengan konsentrasi sedang.
Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri yaitu membentuk  senyawa  kompleks  dengan  protein ekstraseluler  dan  terlarut  sehingga  dapat  merusak membran  sel  bakteri  dan  diikuti  dengan  keluarnya senyawa  intraseluler.  Mekanisme  saponin  sebagai antibakteri adalah menurunkan tegangan permukaan sehingga mengakibatkan naiknya permeabilitas atau kebocoran sel bakteri dan diikuti dengan keluarnya senyawa intraseluler (Nuria, et al ., 2009). Menurut Rijayanti (2014), mekanisme kerja alkaloid sebagai antibakteri yaitu dengan cara mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 E.EC E.SA EA.EC EA.SA d iam eter zo n a h am b at (m m ) Jenis simplisia, ekstrak dan bakteri
SL SB K0 K1
utuh  dan  menyebabkan  kematian  sel  tersebut. Mekanisme  lain  yaitu  alkaloid  diketahui  sebagai interkelator DNA dan menghambat enzim topoisomerase sel bakteri.

## SIMPULAN
Pelarut  etil  asetat  mampu  mengekstraksi senyawa antibakteri dari tubuh buah C. comatus yang lebih  tinggi  dibanding  etanol,  konsentrasi  terendah ekstrak  tubuh  buah C.  comatus yang  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli dan S. aureus , yaitu 6,75% , dan penghambatan ekstrak etil asetat dan etanol dari tubuh buah C. comatus terhadap S. aureus lebih baik dibandingkan E. coli.

## DAFTAR REFERENSI
A’yunin, A. Q., Nawfa, R. & Purnomo, A.S., 2016. Pengaruh  Tongkol  Jagung  sebagai  Media Pertumbuhan  Alternatif  Jamur  Tiram  Putih ( Pleurotus  ostreatus )  terhadap  Aktivitas Antimikroba. Jurnal Sains dan Seni ITS , 5 (1), pp.57-60.
Carolia,  N.,  &  Noventi,  W.,  2016.  Potensi  Ekstrak
Daun  Sirih  Hijau  ( Piper  betle L.)  sebagai Alternatif Terapi Acne vulgaris . Majority ,5(1), pp. 140-145
Efendi,  Y.  N.,  &  Hetiani,  T.,  2013.  Potensi Antimikroba  Ekstrak  Etanol  Sarang  Semut ( Myrmecodia tuberosa
Jack) terhadap Candida  albicans,  Escherichia  coli ,  dan Staphylococcus aureus . Traditional Medicinal Journal , 18(1), pp. 53 – 58 Guenther, E. 1987. Minyak Atsiri Jilid 1 . Jakarta : UI Press
Huang,  D.,  Ou,  B.,  &  Prior,  R.  L.,  2005.  The Chemistry  Behind  Antioxidant  Capacity Assays. Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry , 53(6), pp. 1841 – 1856
Huliselan,  Y.  M.,  Runtuwene,  M.  R.  J.,  & Wewengkang, D. S., 2015. Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol,  Etil  Asetat,  dan N-heksan dari Daun Sesewanua
( Clerodendron  squamatum Vahl.). Jurnal Ilmiah Farmasi-Unsrat , 4(3), pp. 155 – 163 Kalaw,  S.P.  &  Albinto,  R.F.,  2014.  Functional activities  of    Phillippine  wild  strain  of Coprinus comatus (O. F. Mull. : Fr) Pers and Pleurotus cystidiosus O. K.  Miller grown on rice  straw  based  substrate  formulation. Mycosphere , 5(5), pp. 646-655 Kosasih,  P.  &  Soediro,  I.  1987. Metode  Fitokimia . Bandung : ITB Press. Lavanya, J. &
Subhashini,  S.,  2013.  Therapeutic  Proteins  and Peptides  from  Edible  and  Medicinal Mushroom  Review. European  Scientific Journal , 9(24), pp. 162-176
Muhamad, P. H., Wrasiati, L. P., & Anggraeni,  A. A.  M.  D.  2015.  Pengaruh  Suhu  dan  Lama Curing terhadap Kandungan Senyawa Bioaktif Ekstrak Etanol Bunga Kecombrang ( Nicolaia speciose Horan). Jurnal Rekayasa dan  Manajemen  Agroindustri ,  3(4),  pp.  92- 102
Ngazizah,  F.  N.,  Ekowati,  N.,  &  Septiana,  A.  T., 2016. Potensi Daun Trembilungan ( Begonia hirtella Link)  sebagai  Antibakteri  dan Antifungi. Biosfera , 33(3), pp. 126 – 133
Nuria,  M.  C.,  Faizatun,  A.,  &  Sumantri.  2009.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L.)  terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 25293, Escherichia  coli ATCC  25922,  dan Salmonella  typhii ATCC  1408. Jurnal Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang , pp. 1 – 12
Palekahelu,  N.  Y.  C.,  2018.  Aktivitas  Antioksidan dan  Antibakteri  dari  Ekstrak  Etanol  dan
Metanol  Daun  Kapehu  ( Guioa  diplopetala ). ResearchGate , Pelczar, M. J., & Chan, E. C. S., 2010. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI Press Pottz,  G.E.,  Rampey,  J.H.  &  Benjamin,  F.,  1967.
The Effect  Of  Dimethyl  Sulfoxide (DMSO) on  Antibiotic  Sensitivity  of  A  Group  of Medically Important
Microorganisms:
Preliminary Report. Annals of the New York Academy of Sciences , 141 (1), pp.261-272
Poucheret,  P.,  Fons,  F.,  &  Rapior,  S.  2006. Biological  and  Pharmacological  Activity  of Higher  Fungi  :  20-Year  Retrospective Analysis. Cryptogamie  Mycol. ,  27(4),  pp. 311-333.
Radji, M., Sumiati, A., Rachmayani, R., & Elya, B.,
2011.  Isolation  of  Fungal  Endophytes  from Garcinia mangostana and Their Antibacterial  Activity. African  Journal  of Biotechnology , 10(1), pp. 103 – 107
Ren,  L.,  Hemar,  Y.,  Perera,  C.  O.,  Lewis,  G., Krissansen, G. W., & Buchanan, P. K., 2014. Antibacterial  and  Antioxidant  Activities  of Aqueous Extracts of Eight Edible
Mushrooms. Bioactive  Carbohydrate  and Dietary Fibre , 3(1), pp. 41 – 51 Rijayanti,  R.  P.,  2014.  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Etanol  Daun  Mangga  Bacang ( Mangifera foetida L.) terhadap Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Jurnal Mahasiswa PSPD FK Universitas Tanjungpura , 1(1), pp. 1-19
Sani, R. N., Nisa, F. C., Andriani, R. D. & Maligan, J. M., 2014. Analisis Rendemen dan Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Mikroalga  Laut
Tetraselmis  chuii . Jurnal  Pangan  dan Agroindustri , 2(2), pp. 121 – 126
Stojković, D., Reis, F. S., Barros, L., Glamoclija, J.,
Ciric, A., Griensven, L. J. I. D., Sokovic, M.,
&  Ferreira,  I.  C.  F.  R.,  2013.  Nutrients  and Non-Nutrients  Composition  and  Bioactivity of  Wild  and  Cultivated Coprinus  comatus (OF  Müll.)  Pers. Food  and  chemical toxicology , 59 , pp.289-296
Susanto,  A.,  Ratnaningtyas,  N.  I.,  &  Ekowati,  N., 2018.  Aktivitas  Antioksidan  Esktrak  Tubuh Buah Jamur Paha Ayam ( Coprinus comatus ) dengan  Pelarut  Berbeda. Majalah  Ilmiah Biologi Biosfera , 35 (2), pp. 63 – 68 Sudarmadji,  S.,  Kasmidjo,  R.,  Sardjono,  D.  W.,  & Magino,  S.,  1989. Mikrobiologi  Pangan .
Yogyakarta : Universitas Gadjah Mada.
Timotius, K. H. 1982. Mikrobiologi Dasar. Skripsi . Salatiga : Universitas Kristen Satya Wacana Press.
Vandepitte,  J.,  Engbaek,  K.,  Piol,  P.,  &  Heuck,  C.
C.,  1991. Basic  Laboratory  Procedures  in Clinical  Bacteriology .  Geneva  :  World
Health Organization