## Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Metabolit Sekunder Ekstrak
Biji Kelor ( Moringa oleifera Lam . ) dengan Metode

## Spektrofotometri UV- Vis
[Qualitative and Quantitative Analysis of Secondary Metabolite of Moringa Seed Extract ( Moringa oleifera Lam.) with UV-Vis Spectrophotometry Method]

## Tien Wahyu Handayani*, Yulistien Yusuf, Joni Tandi
Program studi S1 Faramasi, STIFA Pelita Mas Palu
*Corresponding author: tienwahyu99@gmail.com
ABSTRACT. This study aims to determine the content and total levels of secondary metabolites of ethanol extract of  moringa  seed  ( Moringa  oleifera Lam.).  Extraction  of  moringa  seed  using  the  maceration  method  to  obtain  a filtrate.  The  filtrate  obtained  was  concentrated  using  a  rotary  evaporator  to  obtain  a  concentrated  extract.  The extract was tested qualitatively for alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins using a suitable reagent with the test parameters. The quantitative test was using UV-Visible spectrophotometry. Alkaloids using test parameters equivalent total alkaloid quinine, flavonoids use parameter test equivalent of the total flavonoids quercetin, saponin using test parameters from Quillaja total saponins and tannins quantitative bark using test parameters total tannin tannic  acid  equivalent.  The  result  showed  that  moringa  seed  positive  for  alkaloids  characterized  by  orange deposition, flavonoids are characterized by the formation of the yellow color orange, saponin their stable foam, and tannins are marked in black. Quantitative test results  alkaloids of 916,87 µg/g, flavonoids of 0.255%, saponin of 6.367%, and tannin of 3,724.5 µg/g.
Keywords: Moringa oleifera Lam., secondary metabolites, spectrophotometry
ABSTRAK. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan dan kadar total metabolit sekunder dari ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.). Ektraksi biji kelor menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96% untuk mendapatkan filtrat. Filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak pekat.  Ekstrak  yang diperoleh  diuji  kualitatif  dengan  uji  Alkaloid, Flavonoid,  Saponin  dan  Tanin  dengan menggunakan pereaksi yang sesuai dengan parameter uji. Uji Kuantitatif menggunakan metode Spektrofotometri UV- Visible .  Untuk  alkaloid  menggunakan  parameter  uji  total  alkaloid  ekuivalen  kuinin,  flavonoid  menggunakan parameter uji total flavonoid ekuivalen kuersetin, saponin menggunakan parameter uji total saponin  dari Quilaja bark  kuantitatif  dan  tanin  menggunakan  parameter  uji  total  tanin  ekuivalen  asam  tanat.  Hasil  uji  kualitatif menunjukkan biji kelor positif  mengandung alkaloid ditandai dengan adanya  endapan  orange, flavonoid ditandai dengan  terbentuknya warna  kuning  jingga, saponin  adanya  busa yang  stabil,  dan  tanin  ditandai  dengan  warna hitam. Hasil uji kuantitatif, yaitu kadar alkaloid 916,87 µg/g,flavonoid 0,255%; saponin 6,367%; dan tanin 3.724,5 µg/g.
Kata Kunci : Moringa oleifera Lam., metabolit sekunder, spektrofotometri
Riwayat artikel: Diterima 6 November 2020, Disetujui 18 Desember 2020 Cara sitasi: Hadayani, TW., Yusuf, Y., & Tandi, J. (2020). Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Metabolit Sekunder Ekstrak Biji Kelor ( Moringa oleifera Lam.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. KOVALEN: Jurnal Riset Kimia , 6(3): 230-238.
DOI: https://doi.org/10.22487/kovalen.2020.v6.i3.15324

## LATAR BELAKANG
Jumlah  tumbuhan  berkhasiat  obat  di Indonesia  diperkirakan  sekitar  1.260  jenis tumbuhan. Setiap tumbuhan memiliki kandungan  metabolit  sekunder  yang  spesifik atau berbeda disetiap tumbuhan dengan fungsi yang juga berbeda-beda (Atun, 2010).
Metabolit  sekunder  dari  tumbuhan  dapat dimanfaatkan pada bidang farmakologi (Mustarichie, 2013  dalam Ergina et  al., 2014),
seperti berfungsi sebagai antioksidan, antikoagulan  darah,  antikanker,  antibiotik,  dan dapat  menghambat  efek  karsiogenik.  Jenis- jenis  senyawa  metabolit  sekunder  meliputi flavonoid, alkaloid, terpenoid, steroid, saponin, tanin  dan  lainnya  (Saxena  &  Kalra,  2011). Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  metabolit sekunder  yang  banyak  dimanfaatkan  ialah tanaman kelor. Hampir seluruh bagian tanaman kelor  dapat  dimanfaatkan,  baik  sebagai  sayur maupun sebagai obat.
Bagian  daun  dari  tumbuhan  kelor memiliki  kandungan  flavonoid  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  (Salimi et  al., 2017).
Bagian lain dari tanaman kelor yang berpotensi memiliki  senyawa  metabolit  sekunder  yang dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  obat  ialah bagian  biji.  Anggi et  al. ,  (2020)  sebelumnya melaporkan  bahwa  dalam  ekstrak  etanol  biji kelor  terdapat  kandungan  flavonoid  1,26%, namun demikian tidak terdapat informasi lebih lengkap mengenai kandungan senyawa metabolit  sekunder  lainnya,  sehingga  perlu kajian  tentang  jenis  dan  kadar  metabolit sekunder dalam biji kelor, baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan yang dipergunakan meliputi akuades,  AlCl 3 10%,  anisaldehid,  buffer
phospat,  dietil  eter,  biji  kelor  ( Moringa  oleifera Lam.), etanol 96%, eter, gas Nitrogen, HCl 2 N dan  4  N,  HCl  pekat,  H 2 SO 4 20%  dan  25%, kertas  saring,  kloroform,  kuinin,  kursetin, larutan  BCG,  Metanol,  NaOH  0,1  dan  1  N, natrium  karbonat  20%,  natrium  nitrit  5%, pereaksi  besi  (III)  klorida  (FeCl 3 ),  pereaksi dragendorff  LP,  pereaksi  mayer,  pereaksi wagner, reagen folin crocalteu , serbuk magnesium, tannic acid .
Peralatan  yang  digunakan  berupa  autoklaf, ayakan  nomor  40  mesh,  batang  pengaduk, blender, cawan porselin, corong kaca, erlenmeyer,  gelas  kimia,  gelas  ukur,  labu  ukur, inkubator, rotary  vakum  evaporator ,  pengaduk magnet,  stopwatch,  tabung  reaksi,  labu  ukur, timbangan  analitik,  wadah  maserasi,  waterbath, spektrofotometer  UV- Vis  evolition  201 ,  vortex, timbangan analitik, dan timbangan kasar.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.)
Pembuatan ekstrak
biji kelor menggunakan  metode  maserasi  (Anggi et  al., 2020) dengan cara serbuk simplisia ditimbang sebanyak 600 gram lalu dimasukkan ke dalam bejana maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 2 L, lalu dibiarkan selama 3  x  24  jam  terlindung  dari  cahaya  sambil sesekali  diaduk.  Ekstrak  kental  cair  yang diperoleh  dipekatkan  dengan  menggunakan rotavapor  hingga  menjadi  ekstrak  kental. Kemudian  ekstrak  kental  ditimbang  dan dihitung rendamennya.
Rendemen= Berat ekstrak kental (g) Berat sampel (g) x 100 ........(1)
Analisis kualitatif (Harborne et al., 2006)
a.  Uji flavonoid
Ekstrak biji buah kelor ( Moringa oleifera Lam.)  ditimbang  sebanyak  0,5  gram  lalu
dimasukkan
dalam tabung reaksi, ditambahkan  10  ml  aquadest,  5  ml  larutan amonia  dan  1  ml  asam  sulfat.  Perubahan warna  menjadi  warna  kuning  menunjukkan adanya flavonoid.
b.  Uji saponin
Ekstrak biji buah kelor ( Moringa oleifera
Lam.)  ditimbang  sebanyak  0,5  gram dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  lalu ditambahkan  10  ml  air  panas,  dinginkan kemudian  dikocok  dengan  kuat  selama  10 detik.  Jika  terbentuk  buih  yang  menetap selama tidak kurang dari 1 menit setinggi 10 cm  atau  pada  penambahan  1  tetes  asam klorida  2N buih  tidak hilang maka menunjukkan adanya saponin.
c.  Uji alkaloid Ekstrak biji buah kelor ( Moringa oleifera
Lam.)    ditimbang  sebanyak  0,5  gram  lalu ditambahkan  5  ml  asam  klorida  2  N  dan dipanaskan  di  atas  penangas  air  selama  2 menit  lalu  ditambahkan  3  tetes  pereaksi Dragendrof  LP.  Jika  hasil  memberikan endapan kuning orange sampai merah bata maka sampel mengandung alkaloid. d. Uji tanin
Ekstrak biji buah kelor ( Moringa oleifera
Lam.)  ditimbang  sebanyak  0,5  gram dimasukkan ke dalam cawan lalu ditambahkan  dengan  20  ml  air  panas  dan larutan  NaCl  10%  sebanyak  3  tetes. Kemudian  ditambahkan  larutan  FeCl 3 ,  bila terbentuk  warna  biru  hitam  menunjukkan adanya tanin.

## Analisis kuantitatif
a.  Uji kadar total flavonoid
1.  Pembuatan kurva standar
Ditimbang larutan baku standar quercetin 10 mg ditambahkan 0,3 ml natrium nitrit 5%. Setelah 5 menit, ditambahkan 0,6
ml aluminium klorida 10%, tunggu 5 menit, kemudian  ditambahkan  2  ml  NaOH  1  M. Setelah itu addkan dengan aquades hingga 10  ml  dengan  labu  takar.  Kemudian dipindahkan ke dalam kuvet, lalu menetapkan serapan pada panjang
gelombang 510 nm.
2.  Penetapan uji total flavonoid
Diambil 0,10 g sampel uji dan ditambahkan 2ml HCl 4 N. Autoklaf selama 2 jam dengan suhu 110 O C. Dinginkan, lalu ektraksi  dengan  eter,  masukkan  dalam tabung reaksi 10 ml. Uapkan eter, kemudian keringkan dengan gas N 2 . Ditambahkan 0,3 ml  natrium  nitrit  5%.  Setelah  5  menit tambahkan  0,6  ml  aluminium  klorida  10%, tunggu 5 menit, lalu tambahkan 2 ml NaOH 1  M.  Kemudian  addkan  dengan  aquades hingga 10 ml dengan labu takar. Dilakukan pengenceran  sebanyak  25x.  Pindahkan  ke dalam  kuvet,  menetapkan  serapan  pada panjang gelombang 510 nm.
Total flavonoid ( % b b )
= hasil pembacaan ( ppm ) ×vol.add akhir (ml)
massa sampel (g) ÷10000 ..........(2)
b.  Uji kadar total saponin
1.  Pembuatan kurva standar
Ditimbang larutan standar saponin 10 mg dan  ditambahkan  air  sebanyak  5  ml kemudian ekstraksi dengan vortex selama 5 menit.  Lalu  ditambahkan  50  µl  anisaldehid dan  kocok.  Diamkan  selama  10  menit kemudian tambahkan 2 ml asam sulfat 50%. Panaskan  pada  penangas  air  pada  suhu 60 o C selama 10 menit dan ditambahkan air hingga  volume  10  ml  dengan  labu  takar.
Diencerkan  larutan  standar  mulai  dari  200;
100;  50;  25;  12,5;  6,25  µl.  kemudian
membaca serapan
pada panjang gelombang 435 nm.
2.   Penetapan uji total saponin
Ditimbang  100  mg    sampel  dan ditambahkan  2  ml  H 2 SO 4 25%.  Autoclave selama  120  menit,  dengan  suhu  110 O C.
Ekstraksi  dengan  eter  lalu  mengeringkan filtrat. Kemudian ditambahkan air sebanyak 1 ml dan ekstraksi dengan vortex selama 5 menit. Tambahkan 50 µl anisaldehid, kocok kemudian  diamkan  selama  10  menit. Tambahkan  2  ml  asam  sulfat  50%  dan panaskan dengan penangas air pada suhu 60 o C  selama  10  menit.  Kemudian ditambahkan  air  hingga  volume  10  ml dengan  labu  takar.  Diencerkan  sebanyak 10x  dan  membaca  serapan  pada  panjang gelombang 435 nm.
Total saponin ( % b b ) = hasil pembacaan ( ppm ) ×vol.add akhir (ml)
massa sampel (g) ÷10000 .......(3) c.  Uji kadar total alkaloid 1.  Pembuatan kurva standar Ditimbang larutan standar kuinin sebanyak 10 mg dan ditambahkan 5 mL HCl 2  N,  kocok  kemudian  saring.  Mencuci larutan dengan 10 ml kloroform sebanyak 3 kali  dalam  corong  pisah,  buang  fase kloroform. Netralkan larutan dengan menambahan  NaOH  0,1  N.  Tambahkan  5 ml  larutan  BCG  dan  5  ml  Buffer  Phosphat, lalu ekstraksi larutan dengan 5 ml klofororm, aduk  menggunakan  pengaduk  magnet dengan  kecepatan  500  rpm  selama  15 menit.  Ulangi  ekstraksi  dengan  kloroform sebanyak  2  kali  dan  kumpulkan  fase kloroform, evaporasikan dengan gas Nitrogen,  kemudian  tambahkan  dengan kloroform  hingga  volume  10  ml.  Encerkan
dan baca serapan pada panjang gelombang 470 nm.
2.  Penetapan uji total alkaloid
Ditimbang sampel uji sebanyak ± 100 mg dan  ditambahkan  5  ml  HCl  2  N,  kocok  lalu mencuci  larutan  dengan  10  ml  kloroform sebanyak 3 kali dalam corong pisah. Buang fase kloroform dan netralkan larutan dengan menambahan  NaOH  0,1  N.  Kemudian tambahkan  5  ml  larutan  BCG  dan  5  ml Buffer Phosphat. Ekstraksi larutan dengan 5 ml kloroform, aduk menggunakan pengaduk magnet dengan kecepatan 500 rpm selama 15  menit.  Mengulang  ekstraksi  dengan kloroform  sebanyak  2  kali  dan  kumpulkan fase  kloroform.  Evaporasikan  dengan  gas Nitrogen,kemudian addkan dengan kloroform  hingga  volume  5  ml.  Membaca serapan pada panjang gelombang 470 nm.
d.  Uji kadar total tanin
1.  Pembuatan kurva standar
Ditimbang  larutan  standar  Tannic  Acid sebanyak 1 mg lalu tambahkan dengan 10 ml  reagen  Folin Ciocalteu dan  divortex, tunggu  5  menit.  Kemudian  ditambahkan dengan  larutan  natrium  karbonat  20%, menepatkan  volumenya  sampai  100  ml. dilakukan  pengenceran  sesuai  konsentrasi kurva  standar Tannic  Acid .  Membaca absorbansi  pada  panjang  gelombang  760 nm setelah diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar.
2.  Penetapan uji total tanin
Ditimbang  sampel  sebanyak  ±  100  mg, lalu ekstraksi dengan 10 ml metanol selama 20  jam,  kemudian  saring.  Uapkan  sisa methanol  dan  tambahkan  aquadest  ke dalam sampel hingga volume 10 ml. Diambil 1  ml  larutan  sampel  dan  ditambahkan dengan  0,1  ml  reagen Folin  Ciocalteu dan
vortex, tunggu 5 menit. Kemudian ditambahkan dengan 2 ml Natrium Carbonat 20%  dan  vortex,  tunggu  5  menit.  Addkan dengan Aquadest hingga volume 10 ml dan lakukan  pengenceran  sebanyak  5  kali. Membaca absorbansi pada panjang gelombang  760  nm  setelah  diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  kamar (Chanwitheesuk et al. , 2005) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menggunakan  sampel  biji kelor yang diperoleh di wilayah kecamatan Palu Selatan Sulawesi Tengah. Biji kelor sebelumnya  telah  diidentifikasi  dengan  tujuan memastikan  bahwa  tanaman  yang  digunakan tersebut benar ( Moringa oleifera Lam.). Metode ekstraksi  yang  digunakan  adalah  metode maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%.  Pelarut  dipilih  sebagai  cairan  penyari karena tidak beracun, netral, absorbsinya baik.
Analisis  kualitatif  metabolit  sekunder dilakukan pada ekstrak kental, yaitu berupa uji penapisan  fitokimia  menggunakan  tes  warna dengan  beberapa  pereaksi  untuk  golongan senyawa alkaloid,  flavonoid,  tanin,  dan saponin. Sementara itu, analisis kuantitatif atau penentuan  kadar  total  senyawa-senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.) menggunakan  metode  Spektrofotometri  UV- Vis . Penentuan kadar total yang dilakukan yaitu penentuan  kadar  total  senyawa  alkaloid, flavonoid,  saponin  dan  tanin  yang  terdapat pada ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.)  berdasarkan  pada  kurva  baku  larutan standar masing- masing senyawa.

## Kandungan Senyawa Alkaloid
Berdasarkan  uji  kualitatif  dan  kuantitatif pada ekstrak kental biji kelor  ( Moringa oleifera
Lam.)  diperoleh  hasil  positif  mengandung alkaloid  pada  uji  Dragendroff  ditandai  dengan terbentuknya endapan kalium alkaloid (Tabel 1, Gambar 1).
Tabel 1. Hasil  uji  penapisan  fitokimia  ekstrak etanol  biji  kelor  ( Moringa  oleifera Lam.).
Pengujian Pereaksi Pengamatan Hasil Uji Flavonoid HCL pekat dan logam Mg Terdapat endapan (+) Uji Saponin Dikocok + HCl 2 N Terbentuk buih (+) Uji Alkaloid Dragendorf LP Terbentuk endapan (+) Uji Tanin FeCl 3 Terbentuk warna hitam (+)
Gambar 1. Reaksi  uji  dragendroff (Ergina  et al. , 2014)
Pada pembentukan pereaksi Dragendroff, terjadi  pelarutan  bismut  nitrat  dalam  HCl  agar garam-garam bismut tidak terhidrolisis menjadi ion  bismutil  (BiO + ),  seabagaiman  persamaan berikut:
Bi 3+ + H 2 O BiO + + 2H +
Ion  Bi 3+ bereaksi  dengan  KI  membentuk endapan  hitam  bismut  (III)  iodida  dan  terlarut dalam  KI  berlebih  sehingga  terbentuk  kalium tetraiodobismutat.  Penggunaan  nitrogen  pada uji  alkaliod  dimaksudkan  untuk  membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K + .
Kurva standar alkaloid dimanfaatkan untuk menentukan  kadar  alkaloid  dalam  sampel
ekstrak  etanol  biji  kelor.  Pada  kurva  standar alkaloid diperoleh persamaan regresi y=0,0002x-0,0005  dan  koefisien  korelasi  (r 2 ) 0,9939 (Gambar 2).
Gambar 2. Kurva standar alkaloid
Berdasarkan persamaan regresi tersebut, dilakukan  perhitungan  kadar  alkaloid  total dengan  parameter  uji  total  alkaloid  ekuivalen kuinin  diperoleh  kadar  alkaloid  pada  sampel ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.) yaitu  916,87  µg/g  (Tabel  2).  Alkaloid  memiliki aktivitas  farmakologis  antara  lain  sebagai analgesik,  antimalaria  dan  sebagai  anastesi lokal (Hanani, 2014).
Tabel 2. Hasil penentuan kadar ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.) No Parameter Uji Hasil 1. Total alkaloid ekuivalen quinine 916,87 µg/g 2. Tanin total ekuivalen tannic acid 3.724,5 µg/g 3. Saponin from quillaja bark kuantitatif 6,367% 4. Total flavonoid ekuivalen quercetin 0,255%

## Kandungan Senyawa Tannin
Ekstrak  etanol  bji  kelor  ( Moringa  oleifera Lam.)  positif  mengandung  tanin  yang  ditandai dengan  larutan  berwarna  hitam  setelah ditambahkan  larutan  FeCl 3 (Tabel  1),  hal  ini dikarenakan adanya salah satu senyawa fenol
yaitu  tanin  yang  terdapat  dalam  sampel membentuk  senyawa  kompleks  dengan  ion Fe 3+ .
Gambar 3. Reaksi antara tanin/ polifenol dan FeCl 3 (Simaremare, 2014)
Pada uji kuantitatif kadar tanin diperoleh persamaan  regresi  senyawa  saponin  yaitu  y= 0,0423x + 0,0033 dengan koefisien korelasi (r 2 ) yaitu 0,9999 (Gambar 4).
Gambar 4. Kurva standar tanin
Kadar  senyawa  tanin  dengan  parameter uji  total  tanin  ekuivalen  asam  tanat  diperoleh kadar total untuk  kadar total tanin, yaitu 3.724,5 µg/g  (Tabel  2).  Sifat  tanin  sebagai  astringen dapat dimanfaatkan sebagai antidiare, menghentikan  perdarahan,  dan  mencegah peradangan  terutama  pada  mukosa  mulut, serta  digunakan  sebagai  antiseptik  karena adanya gugus fenol (Hanani, 2014).

## Kandungan Senyawa Saponin
Hasil  analisis  kualitatif  ekstrak  etanol  bji kelor ( Moringa oleifera Lam.) positif mengandung saponin yang ditandai
terbentuknya buih pada saat sampel ditambahkan  HCl  lalu  dikocok  (Tabel  1). Terbentuknya koloid buih dikarenakan saponin memiliki  dua  jenis  gugus  berbeda,  yaitu
y = 0.0002x - 0.0005 R² = 0.9939 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0 200 400 600 A bs orba n Konsentrasi (ppm) y = 0.0423x + 0.0033 R² = 0.9999 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 5 10 15 20 A bs orba n Konsentrasi (ppm)
hidrofilik dan hidrofobik. Larutan HCl berfungsi untuk  meningkatkan  kepolaran  campuran sehingga  interaksi  gugus  hidrofil  saponin  dan air  akan  lebih  stabil  dan  buih  yang  terbentuk juga menjadi lebih stabil.
Gambar 5. Kurva standar saponin
Pada  kurva  standar  saponin,  diperoleh persamaan  regresi  y=  0,0423x  +  0,0033  dan koefisien  korelasi  (r 2 )  yaitu  0,995  (Gambar  5).
Kadar  saponin  total  ekstrak  etanol  biji  kelor berdasarkan kurva regeresi dengan parameter uji  total  saponin  dari Quillaja  bark kuantitatif, yaitu  6,367%  (Tabel  2).  Saponin  memiliki aktivitas farmakologi antara lain dapat menurunkan
kolestrol, mempunyai
sifat
sebagai antioksidan, antivirus dan anti karsinogenik (Hanani, 2014).

## Kandungan Senyawa Flavonoid
Hasil  uji  kualitatif  senyawa  flavonoid terhadap  ekstrak  etanol  bji  kelor  ( Moringa oleifera Lam.)  dengan  menggunakan  pereaksi HCl  dan  logam  Mg  diperoleh  hasil  positif mengandung flavonoid  yaang ditandai dengan terbentuknya  larutan  berwarna  kuning  (Tabel 1).
Penambahan  logam  Mg  dan  HCl  pada proses identifikasi bermaksud untuk mereduksi inti  benzopiron  dalam  struktur  flavonoid sehingga  akan  terbentuk  garam  flavilium (Gambar 6).
Gambar 6 .  Reaksi flavonoid dengan HCl dan logam Mg (Septyaningsih, 2010).
Penentuan kadar flavonoid menggunakan kuersetin sebagai kurva baku standar sehingga diperoleh pesamaan regresi yaitu y= 0,0046x + 0,0023 dan koefisien korelasi (r 2 )  yaitu 0,9995 (Gambar 7).

## Gambar 7. Kurva standar flavonoid
Berdasarkan  pesamaan  regresi  y  = 0,0046x + 0,0023, maka dilakukan perhitungan kadar  total  flavonoid  total  dan  diperoleh  kadar flavonoid  total  dengan  parameter  uji  total flavonoid  ekuivalen  kuersetin  pada  sampel ekstrak etanol biji kelor, yaitu 0,255% (Tabel 2). Flavonoid memiliki aktivitas sebagai antioksidan,  diuretik  dan  dapat  menurunkan kadar kolestrol serum (Hanani, 2014).
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan,  ekstrak  etanol  biji  kelor  memiliki kadar metabolit sekunder lebih rendah dibandingkan  dengan  penelitian  terdahulu pada  tanaman  Tamoenju,  dimana  ekstrak etanol  biji  kelor  memiliki  kadar  total  alkaloid
y = 0.0002x - 0.0033 R² = 0.995 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0 200 400 600 A bs orba n Konsentrasi (ppm) y = 0,0046x + 0,0023 R² = 0,9995 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0 50 100 150 A bs orba n
Konsentrasi (ppm)
sebesar 916,87µg/g, flavonoid 0,255%, saponin  6,367%  dan  tanin  3.724,5  µg/g. Ekstrak  daun  Tamoenju  memiliki  kadar metabolit sekunder lebih tinggi yaitu kadar total alkaloid  sebesar  15,32%,  flavonoid  14,99 mg/100g,  saponin  6,65%  dan  tanin  0,143% (Alasa et al., 2017). Penelitian terdahulu  pada daun  Inggu  memiliki  senyawa  flavonoid sebesar  1,67%  dan  tanin  7,04%  (Noer et  al. ,
2018)  yang  menandakan  kadar  flavonoid  dan tanin  daun  Inggu  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  ekstrak  biji  kelor,  namun  untuk senyawa  saponin  daun  Inggu  memiliki  kadar total  saponin  lebih  rendah  yaitu  2,13% dibandingkan  dengan  ekstrak  biji  kelor.  Pada penelitian  kulit  buah  alpukat  menunjukan kandungan  flavonoid  kulit  buah  alpukat  lebih tinggi  dari  ekstrak  biji  kelor  yaitu  sebesar 4,012%  (Aminah et  al. ,  2017).  Hal  ini dikarenakan  keberadaan  metabolit  sekunder terbatas dan spesifik pada tanaman atau suku tertentu, kandungan metabolit sekunder tergantung  dari  berbagai  faktor  biotik  dan nonbiotik antara lain suhu, kondisi tanah, iklim dan sinar matahari (Hanani, 2014).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  dapat disimpulkan  bahawa  ekstrak  etanol  biji  kelor ( Moringa oleifera Lam.) mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu alkaloid, tanin,saponin dan flavonoid.  Ekstrak etanol biji kelor ( Moringa oleifera Lam.) memiliki kadar senyawa alkaloid dengan  parameter  uji  total  alkaloid  ekuivalen kuinin  sebesar  916,87µg/g,  senyawa  tanin dengan parameter uji total tanin ekuivalen asam tanat  sebesar  3.724,5  µg/g,  senyawa  saponin dengan parameter uji total saponin dari Quilaja bark kuantitatif  sebesar  6,367%  dan  senyawa flavonoid  dengan  parameter  uji  total  flavonoid ekuivalen kuersetin sebesar 0,255%.
Pada  penelitian  berikutnya,  perlunya dilakukan kajian lebih lanjut terhadap hewan uji untuk  mengetahui  efek  farmakologi  ekstrak etanol biji kelor.

## DAFTAR PUSTAKA
Alasa, A. N., Anam, S., & Jamaluddin, J. (2017).
Analisis  Kadar  Total  Metabolit  Sekunder Ekstrak  Etanol  Daun  Tamoenju  ( Hibiscus surattensis L.). KOVALEN:  Jurnal  Riset Kimia , 3 (3): 258 –268.
Aminah, A., Tomayahu, N., & Abidin, Z. (2017). Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Etanol  Kulit  Buah  Alpukat  ( Persea americana Mill.) Dengan Metode Spektrofotometri UV-VIS. Jurnal Fitofarmaka  Indonesia , 4 (2):  226 –230. https://doi.org/10.33096/jffi.v4i2.265
Anggi, V., Tandi, J., & Veronika, V. (2020). Total Flavonoid  Dan  Efektivitas  Ekstrak  Etanol Biji  Kelor  (Moringa  Oleifera  L)  Asal  Kota
Palu Sulawesi Tengah Terhadap Histopatologi Pankreas Tikus Putih Jantan ( Rattus norvegicus ) Yang Diinduksi Streptozotocin. Jurnal  Ilmiah  Manuntung ,
6 (1), 24 –31.
Atun,  S.  (2010).  Pemanfaatan  Bahan  Alam
Bumi  Indonesia  Menuju  Riset  Yang Berkualitas Internasional. Prosiding Seminar Nasional Kimia . Seminar Nasional Kimia, Yogyakarta. http://staffnew.uny.ac.id/upload/13187395 6/penelitian/Pemanfaatan+bahan+alam+I
ndonesia+menuju+riset+yang+berkualitas +internasional-SemNas+Kimia-2010.pdf
Chanwitheesuk,  A.,  Teerawutgulrag,  A.,  & Rakariyatham,  N.  (2005).  Screening  of antioxidant activity and antioxidant compounds  of  some  edible  plants  of Thailand. Food  Chemistry , 92 (3):  491 – 497.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2004.0 7.035
Ergina, Nuryanti, S., & Pursitasari, I. (2014). Uji Kualitatif  Senyawa  Metabolit  Sekunder Pada  Daun  Palado  (Agave  angustifolia) Yang Diekstraksi Dengan Pelarut Air Dan Etanol. J. Akad. Kim. , 3 (3): 165 –172.
Hanani,  E.  (2014). Analisis  Fitokimia .  Buku Kedokteran ECG, Jakarta.
Harborne,  J.,  Padmawinata,  K.,  &  Soediro,  I. (2006). Metode  Fitokimia  Penuntun  cara modern  menganalisis  tumbuhan .  ITB, Bandung.
Noer,  S.,  Pratiwi,  R.,  &  Gresinta,  E.  (2018). Penetapan  Kadar  Senyawa  Fitokimia (Tanin,  Saponin  dan  Flavonoid)  sebagai Kuersetin Pada Ekstrak Daun Inggu (Ruta angustifolia L.). Jurnal Eksakta , 18 (1): 19 –
29. https://doi.org/10.20885/eksakta.vol18.iss 1.art3
Salimi, Y. K., Bialangi, N., & Saiman, S. (2017). Isolasi Dan Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder  Ekstrak  Metanol  Daun  Kelor ( Moringa  oleifera Lamk.). Akademika , 6 (2), Article 2.
https://doi.org/10.31314/akademika.v6i2.5 4
Saxena,  G.,  &  Kalra.  (2011).  Antimicronial Activity  Pattern  of  Certain  Terpenoids.
Internasional  Journal  of  Pharma  and  Bio Sciences , 2 (1): 87 –91.
Septyaningsih, D. (2010). Isolasi dan
identifikasi  komponen  utama  ekstrak  biji buah merah ( Pandanus conoideus lamk). [ Skripsi ].  FMIPA  Universitas  Sebelas Maret, Surakarta.
Simaremare,  E.  S.  (2014).  Skrining  Fitokimia Ekstrak  Etanol  Daun  Gatal  ( Laportea decumana (Roxb.)  Wedd). PHARMACY ,
11 (1): 98 –107.