SKRINING  SENYAWA  AKTIF  DARI  BALIK  ANGIN A.  excels (Fenzl)  Benth. TERHADAP RESEPTOR TNF-alpha convertase (TACE) DENGAN METODE DOCKING
Samsul Hadi 1 *,Ana maulana 1 dan Kunti Nastiti 2
1 Prodi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Lambung mangkurat
2 Prodi Farmasi, Fakultas Kesehatan Universitas Sari Mulia *Email: samsul.hadi@ulm.ac.id
Received: 05/07/2021 , Revised: 12/08/2021 , Accepted: 17/08/2021, Published: 18/08/2021

## ABSTRAK
Tumor  necrosis  factor-alpha (TNF-α)  merupakan  sitokin  proinflamasi  yang  terlibat  dalam berbagai  penyakit  seperti  radang  selaput  otak,  rematik,  asma,  tuberkolosiS,  periontitis  kronis, crohn  desease,  hepatitis  dan  sinusitis  hidung.  Sehingga    ekspresinya  perlu  dikontrol  untuk mengatasi penyakit ini. Penelitian ini bertujuan melakukan skrining  inhibitor reseptor TNF-alpha convertase (TACE) sehingga menurunkan ekspersi TNF-α. Dengan menurunnya produksi TNF-α maka  dapat  sebagai  antiinflamasi  atau  imunosupresan.  Salah  satu  tanaman  yang  dapat dipergunakan  untuk  skrining  ini  adalah A.excels .  Metode  yang  dipergunakan  untuk  skrining melalui  PASSonline  dan Docking dengan  PLANTS  serta  dilihat  prediksi  memasuki  peredaran darah dengan SWISSADME. Berdasarkan PASSonline Senyawa yang memiliki skor probability to  be  active imunosupreasant  tinggi  adalah  batulinic  acid  (0,724),  alphitolic  acid  (0,763),  cis- coumaroyl alphitolic acid (0,771). Sedangkan yang memiliki probability to be active antiinflamasi adalah  batulinic  acid  (0,741)  dan  cis-coumaroyl  alphitolic  acid  (0,783).  Berdasarkan  stabilitas interaksi,  senyawa  yang  memiliki  kemampuan  minimal  80%  terhadap  ligand  referensi  adalah alphitonin  (98,25%),  alphitexolide  (92,33%),  cis-coumaroyl  alphitolic  acid  (98,31%). Kesimpulannya senyawa yang berpotensi yang memiliki stabilitas interaksi yang bagus adalah cis- coumaroyl alphitolic acid dan alphitonin
Kata kunci : TNF-α, A.excels, stabilitas interaksi

## ABSTRACT
Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) is a proinflammatory cytokine that is involved in various diseases  such  as  meningitis,  rheumatism,  asthma,  tuberculosis,  chronic  periontitis,  Crohn's disease, hepatitis and nasal sinusitis. So that its expression needs to be controlled to overcome this  disease.  The  aim  of  this  study  was  to  screen  for  TNF-alpha  convertase  (TACE)  receptor inhibitors  to  reduce  TNF-α  expression.  By  decreasing  TNF-  expression,  it  can  act  as  an  anti- inflammatory or immunosuppressant. One of the plants that can be used for this screening is A. excels. The method used for screening is through PASSonline and Docking with PLANTS and seen the  prediction  of  entering  the  blood  circulation  with  SWISSADME.  Based  on  PASSonline Compounds that have a high probability of immunosuppressant activity score are batulinic acid (0.724), alphitolic acid (0.763), cis-coumaroyl alphitolic acid (0.771). Meanwhile, those with anti- inflammatory probability activity were batulinic acid (0.741) and cis-coumaroyl alphitolic acid (0.783). Based on the stability of the interaction, compounds that have a minimum ability of 80%
Hadi et al./Pharmacoscript, Volume 4, No, 2, Agustus 2021, 220-228
Safitri.,et al./Pharmacoscript, Volume 1, No. 2, Februari 2019, 1-12
Hadi et al.;Skrining Senyawa Aktif Dari Balik Angin…..Pharmacoscript Volume 4 No. 2, Agustus 2021
against  the  reference  ligand  are  alphitonin  (98.25%),  alphitexolide  (92.33%),  cis-coumaroyl alphitolic  acid  (98.31%).  In  conclusion,  the  compound  that  has  the  potential  as  an immunosuppressant,  anti-inflammatory  and  has  good  interaction  stability  is  cis-coumaroyl alphitolic acid and alphitonin.
Keywords : TNF-α, A.excels, interaction. interaction

## PENDAHULUAN
Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) ialah  sitokin  yang  berguna  pada  proses peradangan, pertahanan tubuh, reaksi kekebalan,  serta  kematian  sel  (apoptosis). Peranan TNF-α ialah menginduksi peradangan  melalui  faktor  transkripsi  yaitu melaluli  jalur    AP-1  dan  NF-  кB,  yang mentargetkan  terhadap    gen.    TNF-α  juga berperan dalam patagonesis penyakit tertentu khususnya  inflamasi  yaitu  radang  selaput otak, rematik, asma, tuberkoloisis, periontitis kronis, crohn deseases , hepatitis dan sinusitis hidung  (Bemelmans  et  al.,  1996).  Karena peranan  yang  besar  ini,  maka  produksi berlebih  dari  TNF-α  menjadi  perhatian peneliti, khususnya bagaimana cara mengontrol produksi ini,  sehingga gangguan kesehatan  yang  disebabkan  oleh  produksi TNF-α    dapat  tertangani.  Salah  satu  cara mengontrol  produksi  TNF-α  adalah  dengan mencari  ligand  yang  menduduki  sisi  aktif enzim TNF-alpha  convertase (TACE).
Dengan diduduki sisi aktif enzim TACE oleh senyawa  maka  produksi  TNF-α  turun (Aggarwal & Natarajan, 1996). Oleh karena itu  diperlukan  skrining  senyawa  dari tumbuhan    yang  memiliki  kemampauan
menurunkan  produksi  TNF-α  dengan  jalan menduduki sisi aktif enzim TACE. Salah satu tanaman  yang  dapat  dipergunakan  untuk skrining reseptor TNF-α adalah balik angin.
Balik  angin  dengan  nama  latin A. excels telah  digunakan    oleh  masyarakat dalam  perut  kembung,  sakit      perut  dan masuk  angin(William,  2021).  Kandungan dari  tanaman  ini  adalah  alphitolic  acid, batulinicl  acid,  alphitonin,  ceanothic  acid dari data base knapsack, alphitexolide(Branch  et  al.,  1972),  cis- coumaroyl alphitolic acid dan emmolic acid acetate  (Cock,  2020).  Dengan  sudah ditemukan  kandungan  senyawa  dari  balik angin,  maka  dilakukan  penelitian docking untuk mendapatkan data stabilitas  interaksi antara  senyawa  dari  balik  angin  dengan enzim TACE dan mencari konformasi  yang memiliki  energi  terendah.  Karena  semakin stabil  interaksi  maka  reaksi  antara  senyawa dan TACE semakin mudah (spontan)   tanpa melepaskan energi.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  dipergunkan  adalah perangkat alat keras yaitu laptop dengan ram
2  GB  dan  perangkat  lunak  (software)  yaitu marvin  bean  (ChemAxon,  2016),  yasara (Krieger & Vriend, 2014), PLANTS (Korb et al.,  2009),  Discovery  studio  (Systèmes, 2020)  dan  webserver.  Bahan  yang  di pergunakan adalah senyawa yang terkandung dalam A.  excels yaitu    alphitolic  acid, batulinicl  acid,  alphitonin,  ceanothic  acid dari  data  base  knapsack,  alphitexolide (Branch  et  al.,  1972),  cis-coumaroyl alphitolic  acid  dan  emmolic  acid  acetate (Cock, 2020) dan makromolekul TNF-alpha convertase (TACE)  yang  berikatan    ligand N-{(2R)-2-[2-(hydroxyamino)-2-oxoethyl]- 4-methylpentanoyl}-3-methyl-L-valyl-N-(2- aminoethyl)-L-alaninamide  dengan  kode PDB ID: 3EWJ.

## Jalannya Penelitian
Proses docking dimulai  dengan memisahkan  ligand  dari  struktur  3D menggunakan yasara. Persiapan  ligand  dan pembuatan konformasi menggunakan Marvin bean. Docking menggunakan software  PLANTS.  Visualisasi  interaksi ligand  dengan  residu    asam  amino menggunakan discovery studio .

## Analisis Data
Analisis  data  dengan  cara  melihat skor docking yang diperoleh.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Prediksi probability  to  be  active A. excels sebagai inhibitor TNF-α dapat dilihat dari  berbagai  macam  pendekatan,  yaitu sebagai  imunosupresant  atau  antiinflamasi seperti gambar
1.
Sebagai imumunusupresant ini berkaitan ketika suatu antigen  dipaparkan,  salah  satu  yang  dilihat adalah  penurunan  sitokin  TNF-α  ,  IL-17A, IL-6 (Guo et al., 2009). Sebagai antiinflamasi salah satu sisi yang dilihat adalah penurunan sitokin  proinflamasi  yaitu  IL-1β,  IL-6,  dan TNF-α  dan peningkatan sitokin antiinflmasi yaitu IL-4, IL-10, IL-11, dan  IL-13(Zhang & An,  2007).  Sehingga  diperlukan  webserver untuk  melihat  potensi  aktivitas    dari komponen A.  excels yaitu  dengan  PASS server. Dalam penelitian ini tidak menggunkan nilai diatas 0,7 karena nilai ini terlalu besar sehingga peneliti menggunakan threshold probability to be active (Pa) adalah 0,3 karena nilai ini adalah nilai minimal suatu senyawa diprediksi memiliki aktivitas tertentu. Dilihat dari gambar 1.
Semua senyawa memiliki nilai diatas 0,3. Sehingga dapat digunakan untuk proses docking .  Jika  nilai  berkisar  0,3-  0,7  maka berpotensi  memiliki  bioaktif  yang  moderat sedangkan  jika  nilai  diatas  0,7  memiliki potensi  bioaktif  yang  tinggi(Lagunin  et  al., 2000).  Senyawa  yang  memiliki  Pa    sebagai imunosupresan  diatas  0,7  adalah  batulinic
acid  (0,724),  alphitolic  acid  (0,763),  cis- coumaroyl alphitolic acid (0,771).
Sedangkan  yang  memiliki  Pa  sebagai antiinflamasi diatas 0,7 adalah batulinic acid (0,741)  dan  cis-coumaroyl  alphitolic  acid (0,783).  Ligand  referensi  yang  digunakan
adalah (1S,3R,6S)-4-oxo-6-{4-[(2- phenylquinolin-4-yl)methoxy]phenyl} 5 azaspiro[2.4]heptane-1-carboxylic acid
mempunyai  nilai  Pa  imunosupresan  sebesar
0,56 dan antinflamasi 0,635.
Gambar  1. Output  PASS  sever  dengan kategori  immunosupresant  dan antiinflamtory (Y menggambarkan nilai Pa dan X adalah senyawa dari A. excels. Perbedaan warna menggambarkan potensi aktivitas yang berbeda.A adalah batulinic acid; B adalah alphitonin;  C  adalah  alphitolic acid; D adalah ceanothic acid, E adalah  alphitexolide;  F  cis- coumaroyl  alphitolic  acid;  G adalah emmolic acid acetate)
Gambar  2. Visualisasi  hasil redocking (Merah adalah ligand referensi  dan  kuning  adalah ligand redocking)
Tahap  selanjutnya  adalah docking untuk melihat stabilitas interaksi. Akan tetapi terlebih  dahulu  dilakukan  validasi docking , untuk  melihat  koordinat  dan  radius  yang digunakan  pada  proses redocking .  Pada penelitian  ini  koordinat  yang  digunakan adalah  X= 6,06962 Y= 5,51062 Z: 24,6715 dan  radius  yang  dipakai  adalah  12,6623. Hasil  dari redocking ini  diperoleh  nilai RMSD 1,7543 Å seperti terlihat pada gambar 2  sehingga  metode  ini  memenuhi  syarat validitas docking karena nilai RMSD ≤  2 Å (Rodríguez  et  al.,  1989).  Oleh  karena  itu metode ini dapat dipergunakan untuk ligand yang lain terhadap makromolekul TNF-alpha convertase (TACE).
Hasil dari docking dapat dilihat pada tabel 2. Stabilitas interaksi, dengan nilai  skor docking minimal    80%  terhadap    ligand referensi adalah alphitonin (98,25%), alphitexolide (92%), cis-coumaroyl
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 A B C D E F G
imunosupresan antiinflamasi
alphitolic acid (98,31%). Nilai ini diperoleh dari persamaan dibawah ini.
Tabel 1. Prediksi aktivitas biologi menggunakan PASS online
Nama ligand Immunosupresan Antiinflamasi Pa Pi Pa pi batulinic acid 0,724 0,014 0,741 0,011 alphitonin 0,544 0,021 0,513 0,008 alphitolic acid 0,763 0,009 0,852 0,005 ceanothic acid 0,645 0,024 0,564 0,04 alphitexolide 0,401 0,065 0,456 0,071 cis-coumaroyl alphitolic acid 0,771 0,009 0,783 0,008 emmolic acid acetate 0,697 0,017 0,586 0,035
Tabel 2. Skor docking dan residu yang berinteraksi Nama ligand Skor docking Residu yang berinteraksi Ligand referensi (1S,3R,6S)-4- oxo-6- {4-[(2-phenylquinolin-4- yl)methoxy]phenyl} 5 azaspiro
[2.4]heptane-1-carboxylic acid
-92,0384   HIS336, LEU350, LEU384, LEU407, ALA335, THR403, ASN410,SER386, LEU348, GLY349, SER382, ALA351, LEU227, ILE277, LEU334, HIS336, GLU406 batulinic acid -67,2776  SER386, ALA351, ALA399, VAL402, LEU407, LEU334, LEU254, HIS336, PHE338 alphitonin -90,4311  ASN410, ALA335, ALA351, THR385, THR403, THR404, HIS336, LEU407, GLY383, LEU384, LEU350 alphitolic acid -71,1558  SER386, GLY349, LEU334, ALA351, ALA399, VAL402, LEU407, LEU254, VAL402, HIS336, PHE338 ceanothic acid -63,7751  ALA351, VAL402, LEU407, LEU318, LEU334, LEU254, ILE255, VAL258, HIS336, PHE338, TYR352 alphitexolide -84,9804  THR403, HIS336, ALA351, LEU384, LEU350, LEU318, VAL402, LEU334, LEU407, LEU254, ILE255, VAL258, HIS336, PHE338, VAL258 cis-coumaroyl alphitolic acid -90,4846  ALA335, LEU350, SER386, TYR262, ALA351, ALA399, VAL402, LEU334, HIS336, PHE338, LEU227, ILE255, VAL258 emmolic acid acetate -70,0538  ASN410, LEU407, ALA351, VAL402, LEU334, LEU254, ILE255, HIS336, PHE338
Alphitoninin dikomparatifkan dengan ligand referensi memiliki persamaan residu  yang  berikatan  adalah  ALA335, THR403,  HIS336,  LEU407,  LLEU384, LEU350  dengan  terbentuk  ikatan  hydrogen dengan  TACE  adalah  ASN410,  ALA335, ALA351.  Alphitexolide  di  komparatifkan dengan ligand referensi memiliki persamaan residu THR403, HIS336, ALA351, LEU384, LEU350,  LEU334,  LEU407,  HIS336  dan
terbentuk  ikatan  hidrogen  dengan  TACE adalah  THR403,  HIS336.  Cis-coumaroyl alphitolic  acid  dikomparatifkan  dengan ligand  referensi  memiliki  persamaan  residu yang  yang  berikatan  adalah  ALA335, LEU350,  SER386,  ALA351,  LEU334, HIS336, LEU227 dan ligand ini membentuk ikatan  hidrogen  dengan  ALA335,  LEU350, SER386.  Mengenai  interaksi  dari  ketiga ligand dan dilihat pada gambar 3.
Alphitonin
Alphitexolide cis-coumaroyl alphitolic acid
Gambar 3. Visualisasi inetraksi antara ligand dan  makromolekul Dua dimensi (Hijau adalah ikatan hidrogen,  orange adalah ikatan elektrostatik dan merah dan ungu adalah hidrofob –unfovorble bump)
TACE merupakan metaloprotease dengan massa 26 kDa, yang dinduksi oleh suatu kondisi sehingga melepaskan pro-TNF-α dengan berat molekul 17 kDa. Catalitic site dari makromoelekul ini ada di membran dengan urutan residu asam amino Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-|-Val-Arg-Ser-Ser- Ser (Uniprot kode: P78536) sehingga residu asam amino ini akan berpengaruh terhadap stabilitas interaksi. Aktive site dari makromolekul ini adalah koordinat yang berisi logam Zn yang penting untuk protonasi GLU406, sehingga sewaktu melakukan docking keberdaan Zn menjadi hal yang

## Pharmacoscript Volume 4 No. 2 Agustus 2021
utama  (Black  et  al.,  1997).  Hal  ini  merupakan  bukti  adanya  elektrostatik  pada  ligand  referensi yang berikatan residu GLU406,  Ikatan hidrogen terjadi antara C=O dari GLY349 sebagai donor dan  LEU384  dan  GLY349  memiliki backbone NH  sebagai  akseptor  (Guo  et  al.,  2009)  seperti terlihat pada tabel 1. Untuk Senyawa dari A. excels interaksi ini hanya terjadi antara alphitolic acid dengan  GLY39,  hal  ini  memberi  penjelasan    gambaran  pada  gambar  1.  yaitu  alphitolic  acid walaupun  skor docking nya  kurang  bagus  tetapi  memiliki  Pa  imunosupresant  0,763    dan antiiflamasi 0,783. Skor docking dari cis-coumaroyl alphitolic memiliki nilai yang bagus hal ini berkaitan interaksi ligand dengan dari residu Val 402 sehingga akan meningkatkan stabilitas (Guo et al., 2009).
Tabel 3. Prediksi senyawa A. excels memasuki peredaran darah.
Nama Ligand
Log P  Donor Proton Akseptor Proton Berat Molekul Mlog P batulinic acid 3,81 2 3 456,7 4,86 alphitonin 1,35 5 7 304,25 -0,23 alphitolic acid 3,72 3 4 472,7 4,97 ceanothic acid 3,11 3 5 486,68 4,86 alphitexolide 4,5 1 7 618,80 g/mol 5,71 cis-coumaroyl alphitolic acid 4,97 3 6 618,84 g/mol 5,61 emmolic acid acetate 3,45 2 5 528,72 g/mol 5,14
Tahap  selanjutnya  adalah  melihat prediksi    senyawa A.  excels memasuki peredaran  darah  dengan  menggunakan webserver SWISSADME. Metode Lipinski’s  Rule  of  Five digunakan  untuk mengevaluasi  senyawa  dengan  bentuk sediannya oral yang beredar ( Drug-likeness ) (Lipinski,  2004).  Sehingga  skrining  ini memberikan informasi berupa kemungkinan senyawa  memasuki  peredaran  darah,  hasil skrining  dapat  dilihat  pada  tabel  3. Berdasarkan aturan ini, ligand yang diprediksi mudah memasuki peredaran darah
dengan  nilai  MlogP  ≤  4,15  hanyalah alphitonin.  MlogP  adalah  Moriguchi's  logP yaitu koefisien partisi octanol/waater .
Berdasarkan  berat  molekul  yang melebihi  500  g/mol  yaitu  alphitexolide (618,80  g/mol);  cis-coumaroyl  alphitolic acid  (618,84  g/mol);  emmolic  acid  acetate (528,72 g/mol).  Berat molekul berkaitan erat dengan  distribusi  obat  melewati  membran. Obat  dengan  berat  molekul  lebih  dari  500 g/mol akan mengalami kesukaran memasuki membran. (Lipinski, 2004).
Hadi et al.;Skrining Senyawa Aktif Dari Balik Angin…..Pharmacoscript Volume 4 No. 2, Agustus 2021

## KESIMPULAN
Kesimpulannya senyawa yang berpotensi sebagai imunosupresant, antiiflamasi  dan  yang  memiliki  stabilitas interaksi  yang  bagus  adalah  cis-coumaroyl alphitolic acid dan alphitonin.

## DAFTAR PUSTAKA
Aggarwal,  B.  B.,  &  Natarajan,  K.  (1996).
Tumor necrosis  factors:  developments during  the  last  decade. European Cytokine Network , 7 (2), 93–124.
Bemelmans,  M.  H.,  van  Tits,  L.  J.,  & Buurman,  W.  A.  (1996).  Tumor necrosis  factor:  function,  release  and clearance. Critical Reviews in
Immunology , 16 (1), 1–11.
https://doi.org/10.1615/critrevimmuno l.v16.i1.10
Black, R. A., Rauch, C. T., Kozlosky, C. J., Peschon, J. J., Slack, J. L., Wolfson, M. F.,  Castner,  B.  J.,  Stocking,  K.  L., Reddy,  P.,  Srinivasan,  S.,  Nelson,  N., Boiani,  N.,  Schooley,  K.  A.,  Gerhart, M., Davis, R., Fitzner, J. N., Johnson, R.  S.,  Paxton,  R.  J.,  March,  C.  J.,  & Cerretti, D. P. (1997). A metalloproteinase disintegrin that releases  tumour-necrosis  factor-alpha from    cells. Nature , 385 (6618),  729– 733. https://doi.org/10.1038/385729a0
Branch, G., Burgess, D., Dunstan, P., Foo, L.,
Green, G., Mack, J. G., Ritchie, E., & Taylor,  W.  (1972).  Constituents  of <I>Alphitonia</I>
Species. III. Alphitexolide,  a  New  Triterpene,  and Other  Extractives. Australian  Journal of  Chemistry , 25 (10),  2209–2216. https://doi.org/10.1071/CH9722209
ChemAxon.  (2016).  ChemAxon  -  Software Solutions  and  Services  for  Chemistry and Biology. In MarvinSketch, Version 16.10.31 . https://chemaxon.com/
Cock,  I.  E.  (2020).  Alphitonia  excelsa (Fenzl) Benth. Leaf Extracts Inhibit the Growth  of  a  Panel  of  Pathogenic
Bacteria. Pharmacognosy Communications , 10 (2), 67–74. https://doi.org/10.5530/pc.2020.2.14
Guo, Z., Orth, P., Wong, S.-C., Lavey, B. J.,
Shih,  N.-Y.,  Niu,  X.,  Lundell,  D.  J.,
Madison,  V.,  &  Kozlowski,  J.  A. (2009). Discovery of novel spirocyclopropyl  hydroxamate  and carboxylate  compounds  as  TACE inhibitors. Bioorganic  &  Medicinal Chemistry  Letters , 19 (1),  54–57. https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2008.11 .034
Korb, O., Stützle, T., & Exner, T. E. (2009).
Empirical scoring functions for advanced Protein-Ligand docking with PLANTS. Journal of Chemical Information and Modeling , 49 (1), 84–
96. https://doi.org/10.1021/ci800298z Krieger, E., & Vriend, G. (2014). YASARA
View—molecular  graphics  for  all devices—from smartphones to workstations. Bioinformatics , 30 (20),
2981–2982.
https://doi.org/10.1093/bioinformatics/ btu426
Lagunin,  A., Stepanchikova, A., Filimonov, D.,  &  Poroikov,  V.  (2000).  PASS: prediction  of  activity  spectra  for biologically active substances.
Bioinformatics  (Oxford,  England) ,
16 (8), 747–748.
https://doi.org/10.1093/bioinformatics/ 16.8.747
Lipinski,  C.  A.  (2004).  Lead-  and  drug-like compounds: the rule-of-five revolution. Drug  Discovery  Today.
Technologies , 1 (4), 337–341. https://doi.org/10.1016/j.ddtec.2004.1 1.007
Rodríguez, E., Arqués, J. L., Rodríguez, R.,
Nuñez,  M.,  Medina,  M.,  Talarico,  T. L.,  Casas,  I.  A.,  Chung,  T.  C., Dobrogosz,  W.  J.,  Axelsson,  L., Lindgren,  S.  E.,  Dobrogosz,  W.  J., Kerkeni, L., Ruano, P., Delgado, L. L., Picco,  S.,  Villegas,  L.,  Tonelli,  F., Merlo,  M.,  …  Masuelli,  M.  (1989). Protein-Protein  and  Protein-Ligand
Docking. Intech , 32 (tourism),  137– 144.
https://www.intechopen.com/books/ad vanced-biometric- technologies/liveness-detection-in- biometrics
Systèmes,  D.  (2020). Free  Download: BIOVIA Discovery Studio Visualizer  - Dassault Systèmes .
https://discover.3ds.com/discovery- studio-visualizer- download#_ga=2.4935860.685747970 .1587999055-a5d1c1c0-3176-11e9- a86f-e302515d21c8
William, S. (2021). Khasiat Tanaman Balik
Angin Mengatasi Sakit Perut . https://pusakapusaka.com/balik- angin.html
Zhang,  J.-M.,  &  An,  J.  (2007).  Cytokines, inflammation,  and  pain. International Anesthesiology  Clinics , 45 (2),  27–37. https://doi.org/10.1097/AIA.0b013e31 8034194e