OPTIMASI PERLAKUAN POLYETHYLENE GLIKOL (PEG) 6000 TERHADAP ISOLASI AGAROSA RUMPUT LAUT Glacilaria sp.
Siti Martinah 1) *, RTM. Sutamihardja 1) , Lilis Sugiarti 2)
1) *Program Studi Kimia FMIPA Universitas Nusa Bangsa Bogor Jl. KH Soleh Iskandar KM 4 Cimanggu Tanah Sareal Bogor 16166
2) Program Studi DIII Farmasi STIKES Cendekia Utama Kudus Jl. Lingkar Raya Kudus-Pati KM. 5 Jepang Kecamatan Mejobo Kabupaten Kudus *e-mail : sitimartina49@yahoo.com

## ABSTRACT
Optimation of Polyethylene Glycol (PEG) 6000 Treatment on Isolation of Agarose Seaweeds of Glacilaria sp
Isolation  of  agarose  from  seaweeds  (Glacilaria sp )  had  been  done  in  acid,  base,  and  neutral  condition  by using polyethylene glycol (PEG) method. Glacilaria sp , Seaweeds that used in this research was cultured by farmer in  Muara  Gembong,  Bekasi.  It  used  PEG  with  concentration  10%,  15%,  20%,  25%,  &  30%.  The  scope  of  this research ware determination of seaweeds, seaweeds water content, isolation of agarose from seaweeds, and quality test of agarose. Parameter test of agarose quality include  the strength of gel, the content of sulfat, measurement of galactose  content  and  its  proksimat.  The  high  yield  was  61,27%  r    in  PEG  30%.  The  best  quality  of  agarose  was resulted  in  PEG  20%  because  of  the  highest  strength of gel  was 379,04  g/cm 2 .The  lowest  sulfat  concentration  was 1,33% and galactose was 17,39%.
Key words: polyethylene glycol, PEG 6000, agarose, seaweeds, glacilaria sp

## ABSTRAK
Isolasi  agarosa  dari  rumput  laut Glacilaria  sp telah  dilakukan  dalam  suasana  asam,  basa  dan  netral  dengan metode  polyethylene  glikol  (PEG).  Rumput  lauat  yang  digunakan  adalah Gracilaria  sp yang  dibudidayakan  oleh petani  di  Muara  Gembong,  Bekasi  dengan  perlakuan  konsentrasi  PEG  10%,  15%,  20%,  25%  dan  30%.  Ruang lingkup  penelitian  ini  meliputi  uji  determinasi  rumput  laut,  penetapan  kadar  air  rumput  laut,  isolasi  agarosa  dari rumput  laut,  serta  uji  kualitas  agarosa.  Parameter  pengujian  kualitas  agarosa  terdiri  dari  kekuatan  gel,  kandungan sulfat, dan pengukuran kandungan galaktosa serta  proksimatnya. Isolasi agarosa perlakuan konsentrasi polyethylene Glikol  (PEG)  6000  pada  rumput  laut Glacilaria  sp diperoleh  rendemen  paling  tinggi  terdapat  pada  perlakuan  PEG 30% yaitu sebesar 61,27%. Akan tetapi untuk kualitas agarosa yang paling baik terdapat pada perlakuan konsentrasi PEG 20% karena diperoleh kekuatan gel paling tinggi sebesar 379,04 g/cm 2 . Kadar sulfat yang paling rendah sebesar 1,33% dan kadar galaktosa sebesar 17,39%.
Kata Kunci: polyethylene glikol, PEG 6000, agarosa, rumput laut, glacilaria sp

## PENDAHULUAN
Agarosa  dihasilkan  melalui  proses isolasi  dari  rumput  laut  jenis  Agarofit  yaitu Gracilaria dan Gelidium .  Metabolit  primer yang  dikandung  oleh  kedua  jenis  rumput laut  tersebut  adalah  agar.  Agarosa  memiliki muatan listrik mendekati netral, oleh karena itu,  senyawa  ini  memiliki  kemampuan membentuk gel yang kuat. (Fitri, 1992).
Agarosa dijual di pasaran dengan harga yang  cukup  mahal,  harga  jual  agarosa  di- pasaran  adalah  1000  -  5000  dollar  Amerika per kilogram, hal ini disebabkan oleh fungsi-
nya yang sangat penting dalam bidang kimia dan  biologi  (Subaryono et  al .,  2003).  Para pengusaha  lebih  dominan  untuk  memproses rumput  laut  menjadi  produk  agar-agar makanan  dibandingkan  sebagai  agarosa, karena  prosesnya  lebih  murah  dan  mudah (Anggadireja et  al .,  2006).  Agarosa  yang diproduksi  saat  ini  hanya  diisolasi  dari rumput  laut  jenis Gracilaria dan Gelidium . Metode  pengambilan  rumput  laut  ada beberapa macam, salah satunya metode pra- perlakuan  asam  sebelum  ekstraksi  (Munaf 2000 dalam Distianti et al . 2006). Berdasar- kan  percobaan  Armeidy  (1992)  mengguna-
kan  asam  asetat  (CH 3 COOH)  1%  pada bahan  baku Gracilaria  verrucosa ,  terbukti dapat meningkatkan rendemen dan kekuatan gel  agar-agar  yang  dihasilkan.  Percobaan Fitri  (1992)  proses  isolasi  menggunakan metode  PEG  terbukti  dapat  meningkatkan rendemen agarosa.  Luas penyebaran rumput laut  di  Indonesia  untuk  marga Gracilaria mencapai  255  km 2 , Eucheuma 215  km 2 dan Gelidium 47  km 2 .  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan  penelitian  mengenai  potensi  rum- put  laut  jenis Gracilaria dalam  memprodu- ksi agarosa (Rachmat et al ., 2004).
Pemanfaatan rumput laut jenis Gracilaria dan Gelidium lebih  dominan sebagai  agar-agar  karena  prosesnya  yang lebih mudah dengan biaya yang lebih murah. Agarosa  yang  diproduksi  saat  ini  hanya diisolasi  dari  rumput  laut  jenis Gracilaria dan Gelidium .  (Rachmat et  al .,  2004). Menurut  Sijian dalam Fitri  1992.  untuk mengisolasi agarosa dari rumput laut menye- butkan bahwa penggunaan PEG yang terbaik antara  5%  –  20  %.  tetapi  belum  menyebut- kan  mengenai  pemberian  konsentrasi  PEG 6000  yang  optimum  pada  saat  isolasi agarosa.  Pada  penelitian  ini  menggunakan perlakuan  dengan  konsentrasi  PEG  10%, 15%,  20%,  25%  dan  30%  diharapkan  bisa mendapatkan konsentrasi yang optimum dari PEG  6000  yang  digunakan  untuk  isolasi agarosa  rumput  laut  G racilaria ,  sehingga rendemen  agarosa  yang  dihasilkan  banyak dan kualitasnya menjadi lebih baik.
Gracilaria sp. dibudidayakan oleh petani di Muara Gembong, Bekasi. Gracilaria sp. merupakan salah satu rumput laut  penghasil  agar-agar  atau  agarofit.
Agarofit tersusun atas agarosa dan agaropektin.  Agarosa  adalah  suatu  fraksi penyusun  agar-agar,  merupakan  senyawa agar yang telah dipisahkan dari unit molekul agaropektin  dengan  muatan  listrik  men- dekati netral, agarosa umumnya bebas sulfat. Sedangkan  agaropektin  merupakan  senyawa agar yang mengandung muatan sulfat. Rasio perbandingan antara agaropektin dan agarosa pada agar yaitu 50 – 90 %.
Untuk  isolasi  agarosa  dari  rumput  laut
Gracilaria sp dapat  dilakukan  dalam  suasa- na  asam,  basa  dan  netral  dengan  metode polietilen  glikol  (PEG)    tergantung  jenis rumput  laut  yang  digunakan  (Chapman  dan Chapman  1980 dalam Asmarita  2000). Ekstraksi  pada  pH  netral  hanya  dilakukan untuk  rumput  laut  yang  diberikan  praper- lakuan  asam  (Armeidy,  1992).  Fitri  (1992) menggunakan  PEG  10  %  untuk  isolasi agarosa  dari  agar-agar Gracilaria  sp dapat meningkatkan  rendemen.  Metode  PEG didasarkan  pada  kelarutan  agarosa  yang tereduksi  dalam  media  yang  menggunakan polietilen  glikol  (Fransiska  dan  Murdinah, 2007).  Mekanisme  reaksi  agarosa  dan polietilen  glikol  (PEG)  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Gambar 1. Mekanisme Reaksi PEG dengan Agarosa
Untuk  meyakinkan  bahwa  hasil  isolasi agarosa  berkualitas  baik,  maka  dilakukan pengujian  rendemen  (ekstrak)  agarosa  yang meliputi kekuatan gel, kandungan sulfat, dan pengukuran  galaktosa  serta  proksimatnya (Rachmat  et  al.,  2004).  Semakin  tinggi konsentrasi  Polietilen  Glikol  (PEG)  6000 maka  rendemen  ekstrak  agarosa  semakin tinggi.  Ada  konsentrasi  PEG  6000  yang optimum untuk mendapatkan kualitas agarosa  terlihat  dari  kekuatan  gel  yang tinggi dan kadar sulfatnya yang rendah.

## BAHAN DAN METODA

## 1. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah neraca analitik,  labu  Kjehdahl,  kertas  whatman saring  (Whatman  41),  oven,  tanur,  corong Buchner, water  bath , Texture  Analyzer , sentrifuse,  batang  pengaduk,  gelas  piala, lemari  es,  filter  150  mesh,  cawan  porselen, spatula, esikator , soxhlet, stirrer , erlenmeyer, buret, batu didih, kertas lakmus, pipet  tetes,  pipet  volumetrik,  piper  mohr, gelas  ukur,  pendingin  tegak,  labu  ukur, hot plate , labu penyari.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah rumput laut jenis Gracilaria sp yang berasal dari  Budidaya  Rawa  Gembong  Bekasi, CH 3 COOH,  CaO,  NaOH,  HCl,  K 2 SO 4 , NaCl,  Polietilen  Glikol  (PEG)  6000,  asam borat, indikator
campuran ( brom cresolgreen :  metil  merah),  akuades,  larutan Luff,  Petroleum  Eter,  BaCl 2 ,  KCl,  Na- tiosulfat,  KIO 3 ,  KI,  H 2 SO 4 ,  H 2 O 2, BaCl 2 , larutan pati, aseton, dan Selenium.

## 2. Isolasi Agarosa dari Rumput Laut Gracilaria
Rumput  laut  kering  yang  telah  bersih ditimbang  sebanyak  30  g,  dipotong  kasar direndam  dan  dicuci  dengan  menggunakan air  bersih,  kemudian  dipucatkan  dengan larutan CaO 1% selama 1 jam. Rumput laut lalu dicuci hingga pH netral dan dilanjutkan dengan  tahapan  praperlakuan  asam.  Pada praperlakuan asam, rumput laut dimasukkan ke dalam CH 3 COOH 2 N dengan perbandingan  1  :  10.  Selama  praperlakuan asam  rumput  laut  dipanaskan  pada  suhu  60 °C  selama  1  jam.  Setelah  proses  praper-
lakuan  asam,  rumput  laut    dicuci  kembali dengan  air  hingga  pH  netral  selajutnya dilakukan ekstraksi, rumput laut dimasukkan ke dalam air dengan perbandingan 1:20 dan dipanaskan  pada  suhu  85  °C  selama  2  jam. Rumput  laut  yang  telah  diekstraksi  lalu disaring dengan menggunakan saringan kain berukuran  150  mesh.  Filtrat  hasil  penya- ringan  ditambahkan  perlakuan  PEG  6000 sebanyak  10%,  15%,  20%,  25%,  dan  30% (b/v) dan NaCl sebanyak 1% (b/v) kemudian dipanaskan kembali selama 30 menit.
Setelah  proses  pemanasan  selesai filtrat  disaring  kembali  dengan  kain  penya- ring  berukuran  150  mesh.  Filtrat  dimasuk- kan ke dalam pan-pan pencetak dan didiam- kan  selama  24  jam  pada  suhu  kamar, kemudian dikeringkan. Setelah kering lalu di grinder hingga menjadi tepung.

## 3. Rendemen Agarosa
Rendemen  agarosa  dihitung  berdasar- kan  berat  rumput  laut  bersih  kering. Pengukuran  dengan  menimbang  agarosa yang dihasilkan dibagi dengan berat rumput laut kering yang diekstraksi, sebagai berikut:

## 4. Uji Kualitas Agarosa
a. Pengukuran Kekuatan Gel ( Gel

## Strength)
Sebanyak  1  gram  sampel  agarosa ditambahkan 0.18 g KCl dan 80 mL akuades dalam  gelas  piala,  lalu  dipanaskan  sampai suhu  80  °C  sambil  terus  diaduk.  Larutan panas kemudian dituangkan ke dalam cawan untuk  dipadatkan  dan  disimpan  pada  suhu 20  °C  selama  1  jam.  Kekuatan  gel  diukur menggunakan Stevens LRFA Texture Analyzer . Keteragan :
Pps  = penjang peak sample Ppk  = panjang peak kalibrasi Bk = bobot kalibrasi
Dspg  = diameter silinder penekan gel
b. Pengukuran Kadar Sulfat (Pusat Penelitian dan Pengembangan Perikanan,  1991) Sampel  agar-agar  sebanyak  1  g  di- masukkan  dalam  erlenmeyer  dan  ditambah- kan 50 mL HCl 0,2 N. Erlenmeyer dipasang pada penangas tegak dan dipanaskan sampai mendidih, kemudian direfluks selama 1 jam. Larutan  ditambahkan  dengan  25  mL  H 2 O 2 10%  dan  refluks  kembali  selama  5  jam. Larutan  kemudian  dipindahkan  ke  dalam gelas  piala  600  mL,  dipanaskan  sampai mendidih  sambil  diaduk    lalu  ditambahkan 10  mL  BaCl 2 10%  setetes  demi  setetes selama  2  jam.  Endapan  yang  terbentuk kemudian  disaring  menggunkan  kertas Whatman  41,  lalu  dicuci  dengan  akuadest mendidih  sampai  bebas  klorida.  Kertas saring  dikeringkan  dalam  oven  kemudian diabukan  pada  suhu  800  °C  dalam  tanur sampai didapatkan   abu yang berwarna pu- tih.  Abu  yang  diperoleh  didinginkan  dalam eksikator dan ditimbang.

## c. Pengukuran karbohidrat (galaktosa)
Sampel  agarosa  sebanyak  1  gram dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  500  ml, tambahkan  200  ml  asam  klorida  3%. Campuran  tersebut  kemudian  dipanaskan dengan  pendingin  tegak  selama  3  jam, selanjutnya  didinginkan  dan  dinetralkan dengan  13  ml  natrium  hidroksida  50%. Larutan  kemudian  dibuat  agak  asam, diencerkan  dengan  250  ml  akuadest  dan disaring.
Sebanyak 10 ml larutan contoh dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  250  ml dan  ditambahkan  larutan  luff  dan  25 akuadest.  Kemudian  didihkan  10  menit  dan didinginkan  dengan  es.  Ke  dalam  larutan ditambahkan  10  ml  larutan  kalium  iodida 30%  dan  25  ml  larutan  asam  sulfat  25%. Terakhir dititrasi dengan natrium tiosufat 0,1 N dengan indikator amilum 0,5%.
Dengan  cara  yang  sama  lakukan blanko.  Selisih  volume  natrium  tiosulfat untuk blanko dan contoh dikonversi menjadi bobot  galaktosa  dalam  tabel  luff  schoorl. Bandingkan  dengan  standar  agarosa  dan
lakukan  pengukuran  kandungan  galaktosa ini sebanyak 2 kali pengulangan.
Kandungan galaktosa = Bobot galaktosa x fp    x 100% Bobot contoh
5. Analisis Proksimat
a. Penentuan Kadar Air (AOAC, 2000).
Cawan    porselin  kosong  dikeringkan pada  suhu  105°C  selama  1  jam.  Kemudian didinginkan dalam eksikator lalu ditimbang. Sampel  sebanyak 2 g dimasukkan ke dalam cawan,  ditimbang  dan  dicatat,  kemudian cawan  berisi  sampel  dimasukkan  ke  dalam oven  pada  suhu  105  °C  selama  1  jam  lalu didinginkan,  dimasukkan  dalam  eksikator selama 15 menit dan ditimbang dengan teliti dan  dicatat  hingga  mencapai  bobot  yang konstan.. Kadar air dihitung.
b. Penentuan Kadar Abu (AOAC, 2000).
Cawan  porselen  yang  telah  bebas  dari kotoran  dan  lemak  ditimbang,  dan  dicatat. Sampel  sebanyak  2  g  dimasukkan  dalam cawan,  ditimbang  dan  dicatat.  Lalu  dipa- naskan  dengan  pembakar  bunsen  sampai tidak  berasap  lagi.  Cawan  yang  berisi sampel tadi kemudian dimasukkan ke dalam tanur  dengan  suhu  600  °C,  selama  5  jam. Lalu didinginkan dalam eksikator selama 30 menit,  kemudian  ditimbang  dan  dicatat hingga mencapai bobot yang konstan.
c. Penentuan Kadar Lemak Kasar (AOAC, 2000).
Labu lemak dengan beberapa batu didih dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  105°C selama 1 jam. Kemudian didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Kertas saring bebas lemak, dibuat selongsong lalu ditimbang dan dicatat.  Sampel  sebanyak  2  g  dimasukkan dalam  selongsong  dan  ditimbang.  Selong- song  yang  berisi  sampel  dimasukkan  ke dalam  alat  soxhlet  dan  diberi  pelarut Petroleum  Eter  sebanyak  150  mL  ke  dalam labu  lemak,  lalu  diekstraksi.  Ekstraksi
dilakukan selama 4 jam. Setelah diekstraksi, labu  dikeringkan  dalam  oven  pada  105  °C selama 1 jam. Kemudian didinginkan dalam eksikator  selama  15  menit  lalu  ditimbang dan dicatat. Kadar lemak kasar dihitung.
d. Penentuan Kadar Protein  Kasar  (SNI,
1998).
Sampel ditimbang dengan teliti
sebanyak  0,1  gram,  dimasukkan  ke  dalam labu Kjeldahl, ditambahkan 0,65 gram cam- puran  Selenium  dan  2,5  mL  H 2 SO 4 pekat.
Semua  bahan  dalam  labu  dipanaskan  dalam lemari asam sampai cairan berhenti berasap. Setelah tidak berasap, pemanasan diteruskan dengan  api  besar  sampai  mendidih  dan larutan  menjadi  jernih.  Lalu  didinginkan. Larutan  diencerkan  dengan  menambahkan akuades  sebanyak  10  mL  kemudian  larutan dipindahkan  ke  dalam  alat  destilasi  dan dibilas  dua  atau  tiga  kali  dengan  3  mL akuades,  lalu  di  tambahkan  10  mL  NaOH 67%.  Uap  air  dialirkan  melewati  alat destilasi  dan  destilat  ditampung  ke  dalam erlenmeyer  yang  berisi  10  mL  asam  borat dan  2-3  tetes indikator  BCG/MM (1:1)  atau Mengsel.,  waktu  destilasi ditentukan selama 5 menit ( stopwatch ). Erlenmeyer yang berisi hasil  sulingan  dititar  dengan  H 2 SO 4 0,01  N kemudian dicatat sebagai volume contoh.
e. Penentuan Kadar Serat (AOAC, 2000). Sebanyak 1 g sampel didestruksi dalam 500  mL  H 2 SO 4 0,3  N  selama  30  menit  dan ditambahkan 25 mL NaOH 1,5 N, kemudian dididihkan  kembali  selama  30  menit.  Filtrat disaring  melalui  kertas  saring  Whatman  41 yang  telah  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu  105-110  °C,  selama  1  jam.  Hasil saringan dicuci dengan 50 ml akuades panas, 50  mL  H 2 SO 4 0,3  N,  50  mL  akuades  panas dan  50  mL  aseton.  Kertas  saring  dan  isinya dimasukkan  ke  dalam  cawan  porselin  yang telah  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 105-110 °C selama 1 jam. Setelah itu cawan diabukan  dalam  tanur  pada  suhu  600  °C
selama  1  jam,  didinginkan  dalam  eksikator, ditimbang dan dicatat.
Keterangan: BR = Bobot Residu (g) BA = Bobot Abu (g) BS = Bobot Sample (g)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Proses Pemisahan Agarosa dari Rumput Laut Kering Gracilaria sp. a. Proses Pra Ekstraksi
Proses  pra  ekstraksi  rumput  laut
Gracilaria sp . yang dihasilkan pada penelitian  ini  berupa  rumput  laut  yang berwarna  kuning  kecoklatan  sedikit  lunak dengan  pH  netral.    Proses    pemisahan agarosa  dari  rumput  laut  kering Gracilaria sp. dilakukan  dengan  beberapa  tahap  yaitu pertama,  pemucatan  dengan  Kalium  Oksida (CaO),  kedua  penetralan,  ketiga  praper- lakuan  asam,  dan  yang  terakhir  penetralan kembali.  Pemucatan  dilakuan  dimana  rum- put  laut  sebelum  ditambahkan  CaO  ber- warna  ungu  kemerah-merah  tetapi  setelah direndam  dalam  larutan  CaO  menjadi berwarna kuning kecoklatan. Kalium Oksida digunakan  sebagai  pemucat  karena  mem- punyai  beberapa  kelebihan  diantaranya mudah  diperoleh,  harganya  relatif  murah, baunya  tidak  menyengat  serta  waktu  yang diperlukan  untuk  pemucatan  cukup  singkat (Tanikawa 1985). Pada dasarnya pemucatan dengan  CaO  adalah  dengan  mendegradasi klorofil dan karoten secara oksidasi (Armeidy, 1992). Menurut Eskin et al dalam Armeidy,  1992.  mengemukakan  bahwa oksigen  dapat  mendegradasi  klorofil  men- jadi  senyawa  yang  tidak  berwarna  yang disebut klorin dan purpurin.
Tahap kedua yaitu penghilangan  unsur- unsur  alkali  dengan  cara  pencucian.  Tahap ketiga  proses  praperlakuan  asam  dengan menggunkan Asam Asetat Glasial (CH 3 COOH)  2  N  pada  proses  ini,  Rumput Laut  yang  awalnya  berupa  lembaran  keras setelah  praperlakuan  asam  bentuknya  men- jadi  lunak  dan  filtratnya  sedikit  mengental  . Menurut  Matsuhashi  (1977),  keuntungan
perlakuan  asam  dibandingkan  dengan  alkali adalah dapat memperpendek waktu ekstraksi dan  meningkatkan  rendemen  agar-agar. Proses  perendaman  dengan  asam  bertujuan untuk memecah dinding-dinding sel, sehing- ga agar-agar menjadi lebih mudah diekstrak. Kemudian    pencucian  kembali  dengan  air hingga pH netral.

## b. Ekstraksi
Hasil  ekstraksi  rumput  laut  menjadi agarosa pada penelitian ini dihasilkan serbuk ekstrak  agarosa  berbentuk  serbuk  padatan yang  dihaluskan  menggunakan  blender, serbuk agarosa berwarna kuning kecoklatan, sedangkan  agar-agar  komersil  (Swallow) berwarna  putih  tulang.  Perbedaan  warna  ini kemungkinan  disebabkan  oleh  zat  pemucat yaitu  larutan  CaO  1%  belum  maksimal  saat perendaman  sehingga  pigmen  warna  dari rumput  laut Gracilaria masih  melekat  . Adapun  perbedaan  serbuk  agarosa  hasil ekstraksi  dengan  standar  agar-agar  komersil dapat dilihat pada Gambar 2.
Pada  Gambar  2a,  6b  dan  6c  di  atas terlihat bahwa serbuk agarosa yang dihasilkan berturut-turut dari perlakuan PEG
10%,  15%,  20%,  25%  dan  30%  memiliki warna  yang  relatife  sama  yaitu  berwarna
kuning kecoklatan, dan serbuk yang dihasilkan  juga  berupa  serbuk  halus  dengan ukuran  butiran  yang  sama.  Sehingga  tidak ada  perbedaan  yang  signifikan  dikarenakan pada saat sebelum diekstraksi, Rumput Laut dipucatkan  dengan  larutan  CaO  pada konsentrasi  yang  sama  yaitu  dalam  larutan CaO  1%,  untuk  memperkecil  luas  per- mukaan  rumput  laut  sebelum  diekstraksi diblender  terlebih  dulu,  diharapkan  banyak agarosa  yang  terekstrak.  Ekstraksi  rumput laut  dilakukan  dengan  cara  ekstraksi pemanasan  pada  suhu  85 o C  selama  2  jam, menggunakan  pelarut  air  aquadest  dengan perbandingan  1:30  ml.  Menurut  Armeidy (1992),  ekstraksi  dapat  dilakukan  pada  pH netral  dan  suhu  100 o C  karena  proses ekstraksi akan lebih cepat yaitu selama 1 – 4 jam.  Pembuatan  agarosa  dari  rumput  laut berdasarkan  pada  prinsip  bahwa  agar-agar larut dalam air panas tetapi relatif tidak larut dalam  air  dingin, sehingga  ekstraksi  rumput laut dilakukan di dalam air panas (mendidih).  Agar-agar  mempunyai  gugus hidrofilik ester sulfat yang rendah dan gugus hidrofobik  3,6-anhidro-L-galaktosa  yang tinggi,  sehingga  agar-agar  tidak  larut  dalam air dingin (Armeidy, 1992).
(a) (b)
(c) (d)
Gambar  2.  a),  b),  dan  c)  Agarosa  Hasil  Eekstraksi  dari  Rumput  Laut Gracilaria  sp. d) Agar-agar Komersil (Swallow)
Saat  penambahan    poliethyilen  Glikol (PEG)  6000  dan  Natrium  Klorida  (NaCl). Larutan  berwarna  kuning  kecoklatan  berupa larutan  koloid,  dimana  larutan  ini  lebih kental.  PEG  yang  ditambahkan  berfungsi untuk  memisahkan  agarosa  dengan  agaro- pektin,  sedangkan  penambahan  Natrium Klorida  untuk  meningkatkan  reaktifitas  dari agaropektin  sehingga  kelarutannya  mening- kat. Dengan meningkatnya kelarutan menye- babkan  perbedaan  polaritas  yang  besar antara agarosa dan agaropektin. Agaropektin bersifat  lebih  polar  sehingga  akan  larut sedangkan  agarosa  akan  mengendap  (Fitri, 1992).
Penyaringan dilakukan pada saat kondisi  larutan  masih  panas,  sedangkan agarosa  larut  pada  suhu  panas  sehingga agarosa  lolos  dari  saringan  walaupun  ada sedikit endapan namun diduga unsur kotoran yang  berasal  dari  garam  Natrium.  Agarosa yang  diperoleh  dari  penelitian  ini  bukan sebagai  endapan  tetapi  berupa  larutan  yang kemungkinan  masih  bercampur  dengan agaropektin  karena  pada  saat  penyaringan tidak  memberikan  waktu  kepada  agarosa untuk  menjendal,  sehingga  larutan  dapat tersaring  semuanya.  Pada  dasarnya  agarosa merupakan senyawa yang dapat membentuk gel dengan cepat di bawah suhu 60oC. Agar- agar  yang  telah  kering  dihaluskan  dengan gringer membentuk seperti tepung agar-agar.

## c. Rendemen
Nilai  rendemen  agar  dihitung  berdasar- kan  perbandingan  berat  agar  yang  diperoleh dari  ekstraksi  terhadap  berat  rumput  laut kering.  Rendemen  agarosa  yang  dihasilkan pada  penelitian  ini  berkisar  antara  27,25  – 61,27  %.  Adapun  hubungan  antara  rende- men  rata-rata  dengan  perlakuan  konsentrasi PEG 6000 dapat dilihat pada Gambar  7.
Berdasarkan  Gambar  3  terlihat  bahwa rendemen  mengalami  kenaikan  pada  setiap penambahan konsentrasi PEG. Nilai rendemen  terendah  yaitu  27,25%  dari perlakuan PEG 10 % dan rendemen tertinggi yaitu  61,22%  dari  perlakuan  PEG    30%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan konsentrasi PEG 6000 berbanding lurus  terhadap  rendemen  agarosa  yang dihasilkan.  Semakin  tinggi  konsentrasi  PEG maka  rendemen  yang  dihasilkan  semakin
tinggi/besar,  Hal  ini  berarti  agarosa  yang dihasilkan  terekstrak  lebih  banyak.  PEG juga  merupakan  suatu  polimer  dengan  berat molekul  yang  besar  sehingga  semakin banyak  PEG  yang  ditambahkan  maka  hasil rendemennya semakin tinggi.
Gambar 3. Histogram Hubungan antara Nilai Rendemen dengan    Konsentrasi PEG
Hasil  ini  lebih  tingggi  dari  yang dilakukan  oleh  Chapman  dan  Chapman (1980)  bahwa  rendemen  agar-agar  dari ganggang  merah  jenis  Gracilaria  verrucosa adalah 25 – 35 %. Menurut Armeidy (1980), besarnya  rendemen  juga  dipengaruhi  oleh cara  proses  pengolahan  yang  dipilih.  Faktor lain  yang  mempengaruhi  hasil  rendemen salah satu diantaranya, adalah cara ekstraksi agar-agar,  yang  hanya  dilakukan  satu  kali sehingga  diduga  masih  banyak  agar-agar yang terdapat di dalam ampas Rumput Laut. Yang  mempengaruhi  besarnya  rendemen menurut  Chapman  (1970)  adalah  keasaman (pH) larutan ekstraksi yang diatur sekitar 6,5 dengan penambahan asam.
d. Kualitas Agarosa
1) Kekuatan Gel Kekuatan gel merupakan beban
maksimum yang dibutuhkan untuk memecah matriks  polimer  pada  daerah  yang  dibebani. Gel  yang  kuat  merupakan  kriteria  yang penting  sehubungan  dengan  penggunaan agarosa dalam bioteknologi.
Berdasarkan  hasil  penelitian,  kekuatan gel berkisar antara  114,08 – 379.04 gr/cm2. Adapun  hubungan  antara  kekuatan  Gel dengan  konsentrasi  agarosa  dapat  dilihat pada Gambar 4.
Gambar  4.  Histogram  Hubungan  antara Kekuatan Gel dengan Konsentrasi PEG
Berdasarkan  Gambar  4  di  atas  dapat terlihat  bahwa  hasil  ekstraksi  agarosa dengan  nilai  kekuatan  gel  paling  tinggi sebesar  379,04  g/cm 2 pada  perlakuan  PEG 20%,    dan  nilai  kekuatan  gel  paling  rendah sebesar  114,08  g/cm 2 pada  perlakuan  PEG 15%, sebagai pembanding digunakan standar  agar-agar  komersial  (Swallow) dengan  kekuatan  gel  agar-agar  komersial sebesar 1635,12 g/cm 2 .
Pengukuran kekuatan gel hasil ekstraksi dibandingkan  dengan  agar-agar  komersil karena  pada  dasarnya  agar-agar  komersil mengandung  agarosa.  Kekuatan  gel  hasil ekstraksi masih jauh lebih rendah dibandingkan dengan kekuatan gel agar-agar komersil.  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan karena  di  dalam  rendemen  yang  dihasilkan masih  banyak  terkandung  agaropektin. Menurut Winarno, (1990) kekuatan gel agar- agar  sangat  tergantung  pada  perbandingan agarosa  terhadap  agaropektin.  Hal  yang mempengaruhi  kekuatan  gel    juga  adalah adanya  kandungan  ester  sulfat    (Armeidy, 1992). Perbedaan hasil kekuatan gel ini juga diduga disebabkan oleh perbedaan kandungan  galaktosa  dan  sulfat  yang terdapat  di  dalam  sampel.  Semakin  tinggi kandungan  sulfat  pada  agarosa  maka kekuatan gelnya akan rendah (Rizqi, 2011).

## 2) Kadar Sulfat
Salah  satu  ciri  agarosa  adalah  netral, tidak  mengandung  sulfat.  Berdasarkan  hasil penelitian kadar sulfat yang terkandung pada hasil ekstraksi agarosa berkisar antara 1,33 – 1,85% sedangkan kadar sulfat pada Rumput Laut  kering  sebesar  3,67%  dan  kadar  sulfat pada  standar  agar-agar  komersil  sebesar
0,85%.  Adapun  hubungan  kadar  sulfat dengan  konsentrasi  PEG  hasil  penelitian dapat dilihat pada Gambar 5.
Gambar  5.  Histogram  Hubungan  antara Kadar Sulfat dengan Konsentrasi PEG
Dari  Gambar  5  di  atas  terlihat  bahwa kadar sulfat yang paling rendah yaitu 1,33% terdapat  pada  perlakuan  konsentrasi  PEG 20%  sedangkan  kadar  sulfat  yang  paling tinggi  yaitu  sebesar  1,85%  pada  perlakuan konsntrasi  PEG  15%.  Kadar  sulfat  hasil ekstraksi  agarosa  lebih  rendah  dari  kadar sulfat  rumput  laut  kering,  hal  ini  berarti penambahan  PEG  berpengaruh  terhadap penurunan  kandungan  sulfat  yang  terdapat pada  rumput  laut  kering.  Namun  jika dibandingkan  dengan  standar  agar-agar komersil,  kadar  sulfat  hasil  ekstraksi  masih tinggi.  Hal  ini  diduga  masih  terdapat kandungan  agaropektin  pada  hasil  ekstraksi yang  belum  terpisah,  karena  pada  saat penyaringan larutan setelah ditambahkannya PEG,  larutan  masih  dalam  keadaan  panas sehingga  semua  larutan  lolos  dari  saringan dan diduga agaropektin yang masih mengandung sulfat ikut terbawa. Akan tetapi terdapat hubungan terbalik antara kandungan  sulfat  dengan  kekuatan  gel  yang dihasilkan,  adanya  sulfat  akan  membentuk kekakuan  pada  rantai  polimer  sehingga menghambat  terbentuknya  pilinan  ganda (Fitri,  1992).  Semakin  tinggi  kadar  sulfat maka  kekuatan  gel  yang  dihasilkan  akan semakin  kecil.    Karena  ester  sulfat  pada atom  karbon  ke  6  dari  L-galaktosa  (C6) menyebabkan  rantai  polimer  membentuk tekukan  yang  dapat  menghambat  proses pembentukan gel (Glicksman, 1983).
Gel  yang  kuat  merupakan  salah  satu kriteria  yang  penting  sehubungan  dengan penggunaan  agarosa  dalam  bidang  biotek- nologi. Chapman-chapman dalam Fitri tahun (1992), mengatakan bahwa kandungan sulfat di  dalam  agarosa  adalah  0.03-0.04%, sedangkan  menurut  Guiseley  dan  Renn (1975),  agarosa  dengan  kadar  sulfat  0,7% masih  dapat  diterima  tetapi  agarosa  yang sering  terdapat  dipasaran  memiliki  kadar sulfat  sekitar  0.1-0.35%  (Subaryono,  2003). Sehingga kadar sulfat agarosa hasil ekstraksi masih belum memenuhi standar dipasaran.

## 3) Kandungan Galaktosa
Karbohidrat  yang  terkandung  di  dalam agar merupakan campuran polisakarida yang terdiri  dari  dua  fraksi  yaitu  agarosa  dan agaropektin. Galaktosa merupakan monomer terbesar  yang  terdapat  di  dalam  agarosa. Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  ekstrak agarosa,  kandungan  galaktosa  berkisar antara 13.40% -  17.39%. Adapun hubungan kandungan  antara  galaktosa  dengan  per- lakuan  konsentrasi  PEG  hasil  penelitian  ini dapat dilihat pada Gambar 6.
Gambar  6.  Histogram  Hubungan  antara
Kadar Galaktosa dengan Konsentrasi PEG
Dari  Gambar  6  dapat  dilihat  bahwa kandungan  karbohidrat  sebagai  galaktosa yang  terkandung  dalam  rumput  laut  hasil ekstrak  yang  paling  rendah  yaitu  13.40% pada  perlakuan  konsentrasi  PEG  15%  dan kandungan  galaktosa  paling  tinggi  yaitu 17.39%  pada  perlakuan  konsntrasi  PEG 20%,  sementara  kandungan  karbohidrat
sebagai  galaktosa  pada  Rumput  Laut  kering sebesar  21.98%  dan  kandungan  karbohidrat sebagai  galaktosa  pada  standar  agar-agar komersil sebesar 19.68%. Pada penambahan PEG dari 10% hingga 20% terjadi kenaikan kandungan galaktosa, sedangkan kandungan galaktosa  menurun  kembali  pada  perlakuan PEG  25%  dan  30%,  titik  optimum  terjadi pada  perlakuan  PEG  20%  yaitu  sebesar 18,11%.  Kandungan  galaktosa  berbanding lurus terhadap kekuatan gel. Kadar galaktosa yang  tinggi    dan  kadar  sulfat  yang  rendah memiliki  kekuatan  gel  yang  tinggi  hal  ini berariti kandungan agarosa lebih banyak.
Menurut Chapman dan Chapman dalam Fitri  (1992),  kandungan  galaktosa  pada agarosa  berkisar  antara  31.90%  –  51.00%. Kandungan  galaktosa  rumput  laut  menurut FAO  (1972)  adalah  83.5%  sedangkan  yang disyaratkan  SNI  adalah  lebih  dari  30% (Angka  &  Suhartono  2000).  Jika  diban- dingkan  dengan  kadar  galaktosa  standar agar-agar  komersil  (19,68%),  maka  kadar galaktosa  hasil  ekstraksi  masih  sedikit lebih rendah.  Menurut  Armeidy  (1992),  penurun- an  kadar  galaktosa  yang  terjadi  disebabkan karena terdegradasinya galaktosa. Degradasi ini  terjadi  karena  terhidrolisisnya  agarosa menjadi  disakarida  yang  berantai  pendek. Tinggi  rendahnya  kadar  galaktosa  dipe- ngaruhi  oleh  kandungan  agarosa  dan  agaro- pektin.  Karbohidrat  merupakan  senyawa organik  yang  terdiri  dari  serat  kasar  dan bahan  bebas  tanpa  nitrogen  ( nitrogen  free extract ). e. Proksimat Agarosa Gracilaria sp .
1) Kadar Air
Gambar  7.  Histogram  Hubungan  antara Kadar Air dengan Konsentrasi PEG
Kadar  air  adalah  kandungan  air  bahan yang  dinyatakan  berdasarkan  perbandingan antara  berat  basah  dan  berat  kering.  Ber- dasarkan  hasil  penelitian,  kadar  air  yang diperoleh  berkisar  antara  0.92  –  4,75  %. Adapun  hubungan  kadar  air  terhadap  kon- sentrasi PEG dapat dilihat pada Gambar 7.
Hasil  penelitian  terlihat  semakin  tinggi konsentrasi PEG maka kadar airnya semakin rendah,  hal  ini  karena  secara  kimiawi,  PEG merupakan  sekelompok  polimer  sintetik yang  larut  air  dan  memiliki  gugus  hidroksil primer  pada  ujung  rantai  polieter  yang mengandung oksietilen (-CH 2 -CH 2 -O-) sehingga  dapat  mengikat  air  dalam  sampel. Semakin  banyak  PEG  yang  ditambahkan maka  air  yang  terkandung  pada  ekstrak agarosa  semakin  berkurang  karena  terikat oleh  PEG.  Kadar  air  yang  disyaratkan  oleh SII untuk Rumput Laut kering adalah 13,2% (Soegiarto  &  Sulistyo,  1985),  sedangkan kadar  air  maksimal  yang  disyaratkan  oleh SNI untuk agar-agar berkisar antara 15-24% (Angka  &  Suhartono,  2000).  Menurut Subaryono, et al . (2003) kadar air agar-agar adalah  kurang  dari  14%.  Rendahnya  kadar air  yang  dihasilkan  dalam  penelitian  karena pada  saat  pengeringan  menjadi  serbuk agarosa,  lembaran  agarosa  sebelum  di- blender  di  hangatkan  2  –  3  kali  di  dalam oven  pada  suhu  50  –  60 o C  sehingga  pada penentuan kadar air diperoleh kadar air yang rendah.
Gambar 8.  Histogram Hubungan Kadar Abu dengan Konsentrasi PEG

## 2) Kadar Abu
Kadar  abu  dalam  bahan  pangan ditetapkan  dengan  menimbang  sisa  mineral sebagai  hasil  pembakaran  bahan  organik. Kadar  abu  yang  dihasilkan  pada  penelitian ini berkisar antara 1.03 – 6.80 %. Kadar abu paling  rendah  yaitu  1.03%  diperoleh  pada perlakuan  konsentrasi  PEG  15%  dan  kadar abu yang paling tinggi yaitu 6.8% diperoleh pada  konsentrasi  PEG  25%,  Sementara kadar  abu  yang  disyaratkan  oleh  SII  adalah sebesar  4%.  Hubungan  antara  kadar  abu dengan  konsentrasi  PEG  dapat  dilihat  pada Gambar 8.
Berdasarkan  Gambar  8  kadar  abu  yang diperoleh  pada  konsentrasi  PEG  10% (1,58%)  dan  PEG  15  %  (1,03%)  memenuhi standar SII (maksimum 4%), pada perlakuan konsentrasi PEG di atas 15% kadar abu tidak memenuhi  syarat  SII,  hal  ini  kemungkinan disebabkan  karena  kandungan  anorganik yang  terdapat  pada  sampel  berbeda-beda. Abu  atau  mineral  merupakan  komponen yang  tidak  mudah  menguap  pada  waktu pembakaran dan pemijaran senyawa organik atau bahan alam (Soebito, tahun 1988). Abu yang  terdapat  dalam  tepung  agar-agar berasal  dari  garam  atau  mineral  yang terdapat  pada  rumput  laut  yang  digunakan, sebagian  besar  terdiri  dari  Natrium  dan Kalsium.  Tinggi  rendahnya  kadar  abu  pada rumput  laut  disebabkan  karena  tinggi rendahnya kandungan mineral dalam Rumput  Laut  tersebut.  Kurang  bersihnya pencucian  dan  perbedaan  pucuk  dengan tangkai  pada  sampel  Rumput  Laut  dapat juga  menyebabkan  tinggi  rendahnya  kadar abu pada tepung agar-agar hasil ekstraksi. 3) Protein Komponen  protein  dalam  agar-agar terdapat dalam jumlah yang kecil. Berdasarkan  hasil  penelitian  kadar  protein berkisar antara  0,78 % - 1,05 %, sedangkan kadar  protein  untuk  sampel  rumput  laut kering  sebesar  1,22%  dan  standar  agar-agar komersil sebesar 0,12%. Hasil kadar protein pada sampel hasil ekstrak dapat dilihat pada Gambar 9.
Gambar  9.  Histogram  hubungan  antara
kadar protein dengan konsentrasi PEG Pada Gambar 9 terlihat bahwa kandungan  protein  pada  rumput  laut  kering memenuhi  standar  yang  disyaratkan  oleh FAO  yaitu  sebesar  1,3%  sedangkan  untuk kadar  protein  agar-agar  hasil  ekstrak  lebih besar  (0,76%  -  1,05%)  dari  kadar  protein agar-agar komersil sebesar 0,2%.
Protein  merupakan  zat  makanan  yang penting  bagi  tubuh  karena  sebagai  sumber energi,  zat  pembangun,  dan  zat  pengatur (Winarno, 1996).

## 4) Lemak
Komponen  lemak  pada  agar  terdapat dalam  jumlah  yang  kecil.  Berdasarkan pengukuruan kandungan lemak yang terdapat pada ekstrak agarosa berkisar antara 1.23%  -  3.53%,  Nilai  kadar  lemak  pada ekstrak  agarosa  dapat  dilihat  pada  Gambar 10.
Gambar  10.    Histogram  Hubungan  antara Kadar Lemak dan Konsentrasi PEG
Berdasarkan  Gambar  10  di  atas,  kadar lemak  paling tinggi  terdapat pada  perlakuan konsentrasi  PEG  10%  sebesar  3,53%  dan kadar  lemak  paling  rendah  terdapat  pada konsentrasi PEG 30% sebesar 1,22%. Kadar lemak  yang  disyaratkan  oleh  FAO  (1972) untuk  rumput  laut  kering  sebesar  ≤  1.2% (Fitri,  1992)  dan  kadar  lemak  untuk  agar- agar  sebesar  0.1%  (Susanto,  1978).    Pada Gambar 10 terlihat bahwa kandungan lemak yang  terdapat  pada  hasil  ekstraksi  masih tinggi  dibandingkan  dengan  standar.  Kadar lemak yang dihasilkan baik dari rumput laut kering maupu agar-agar hasil ekstraksi tidak memenuhi  standar.  Banyak  faktor  yang mempengaruhi  dalam  analisis  kadar  lemak salah  satu  diantaranya,  alat-alat  yang digunakan untuk analisis masih mengandung lemak. Lemak sukar larut dalam air sehingga sisa  lemak  yang  terdapat  pada  alat  ikut terlarut dalam larutan organik yang digunakan.  Lemak  merupakan  salah  satu unsur yang penting untuk menjaga kesehatan tubuh  manusia.  Lemak  di  dalam  tubuh  juga sebagai cadangan makanan.
Gambar  11.  Histogram  Hubungan  Kadar
Sserat Kasar dengan Konsentrasi PEG 5) Serat Kasar Serat  banyak  terdapat  pada  dinding  sel rumput  laut.  Secara  kimia  dinding  sel tersebut terdiri dari beberapa jenis karbohidrat  salah  satunya  yaitu  selulosa (Winarno, 1996). Berdasarkan hasil penelitian kandungan kadar serat kasar pada agar-agar  hasil  ekstraksi  berkisar  antara
9,36% - 11,57% sedangkan kadar serat kasar pada  rumput  laut  kering  sebesar  14,76%. Kadar  serat  kasar  pada  tepung  agar-agar hasil ekstrak dapat dilihat pada Gambar 11.
Kandungan serat kasar
yang disyaratkan pada rumput laut kering menurut FAO (1972) sebesar 2.7% (Fitri, 1992), dan kadar  serat  kasar  untuk  agar-agar  menurut Susanto  (1978)  sebesar  0.1%.    Kandungan serat kasar pada rumput laut kering maupun tepung agar-agar yang dihasilkan lebih besar dari  yang  disyaratkan.  Hal  ini  dikarenakan kandungan  rumput  laut Gracilaria  sp kaya akan  serat  sebagai  bahan  utama  dalam pembuatan agar.
Serat  makanan  adalah  bahan  pangan yang  berasal  dari  tanaman,  yang  tahan terhadap  pemecahan  oleh  enzim  dalam saluran pencernaan, dan tidak dapat diabsorpsi.  Zat  ini  terdiri  dari  selulosa dengan  sedikit  lignin  dan  sebagian  kecil hemiselulosa (Apriyanto, 1986). Kandungan karbohidrat  dalam  bentuk  serat  kasar  dalam jumlah tertentu
diperlukan untuk
membentuk  gumpalan  kotoran  sehingga memudahkan  dalam  pengeluaran  feses  dari dalam  usus.  Karbohidrat  pada  rumput  laut tidak  dapat  diasimilasi  untuk  menghasilkan energi  sehingga  baik  untuk  diet. Pada dasarnya  kandungan  serat  yang  terdapat dalam rumput laut adalah yang paling besar dan  merupakan  kandungan  paling  utama. Sehingga berdasarkan penelitian, kandungan serat  kasar  yang  terdapat  dalam  Rumput Laut Gracilaria  sp cukup  besar  jika dibandingkan  dengan  standar  agar-agar komersil.  Serat  ini  bersifat  mengenyangkan dan  memperlancar  proses  metabolisme tubuh  sehingga  sangat  baik  dikonsumsi penderita  obesitas.  Serat  tidak  dapat  diserap oleh  tubuh  sehingga  banyak  digunakan sebagai makanan untuk diet.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  isolasi agarosa perlakuan konsentrasi dengan Poliethylen Glikol (PEG) 6000 pada Rumput Laut Gracilaria  sp di  peroleh  rendemen paling  tinggi  terdapat  pada  perlakuan  PEG 30% yaitu sebesar 61,27% akan tetapi untuk kualitas  agarosa  yang  paling  baik  terdapat
pada perlakuan konsentrasi PEG 20% karena diperoleh  Kekuatan  Gel  paling  tinggi  yaitu sebesar  379,04  g/cm 2 ,  kadar  sulfat  yang paling rendah yaitu sebesar 1,33% dan kadar galaktosa  sebesar  17,39%    Sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  perlakuan  PEG  20  % adalah  perlakuan  yang  paling  optimum untuk  mengisolasi  agarosa  dari  rumput  laut Gracilaria sp.

## SARAN
Agar  penelitian  ini  lebih  sempurna, perlu penelitian lebih lanjut untuk mengisolasi  agarosa  murni  yaitu,  pengaruh suhu  terhadap  perendaman  praperlakuan, pengaruh  ekstraksi  bertingkat  (ekstraksi tidak  hanya  dilakukan  1  kali  pemanasan) dan  penyaringan  setelah  penambahan  PEG dilakukan  pada  suhu  hangat  (±  30  –  40 o C) sehingga  agarosa  yang  dihasilkan  lebih banyak dan lebih murni.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggadireja,  J.T,  Zatnika  A.,  Purwoto  H., Istini S., 2006. Rumput Laut . Penebar Swadaya, Jakarta. Angka, SL dan Suhartono. 2000. Bioteknologi Hasil Laut . Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir laut IPB. Bogor.
AOAC. 1995. Official Methods of Aanalysis of the Assosiation of Official
Analytical  Chemistry .  16  th  ed A.O.A.C., Inc. Arlington. Virginia AOAC. 2000. Official Methods of Aanalysis of the Assosiation of Official Analytical  Chemistry .  Ed  ke-17. Sydney  William,  editor.  Arlington,
Virginia: AOAC.
Apriyanto  A,  Fardiaz  D,  S.  Budiyanto  dan N.  L.  Puspitasari.  1986. Penuntun Analisa  pangan .  Jurusan  Teknologi Pangan dan Gizi IPB. Bogor
Armeidy. 1992. Pengaruh Konsentrasi Asam dan Lama Perendaman Optimal
Terhadap  Rendemen  dan  Mutu  Agar Gracilaria verrucosa. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian. IPB, Bogor.
Asmarita.  2000.  Pengaruh  Ukuran  Bahan Baku  Rumput  Laut  dan  Jenis  Kain
Mutu Saring Terhadap Rendemen dan
Tepung  Agar-agar. Skripsi .  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  IPB, Bogor.
Atmadja  WS,  Sulistijo.  1983. Beberapa Aspek Vegetasi dan Habitat Tumbuhan Laut Bentik di Pulau-pulau Seribu. Pusat Penelitian Pengembangan Oseanografi LIPI. Jakarta
Chapman,  V.J.,  and  Chapman,  C.J.  1980. Seaweed and Their Uses, 3rd ad., pp. 148-193. Chapman  and  Hall  Ltd. London.
Delly,  S.  2007. Pemanfaatan  Rumput  Laut dalam  pembuatan  Permen  Jelly .
Skripsi.  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan IPB. Bogor Distiantina,  S.,  Sediawan,  W.B.,  dan Kulyono, P. 2001. Pengaruh Perendaman  Rumput  Laut  dengan HCL  terhadap  Ekstraksi  Agar-agar Menggunakan  Pelarut  Air. Prosiding
Seminar Nasional Kejuangan 2001 . Fessenden  R.J.  dan  J.S.  Fessenden  1986. Kimia Organik Edisi Ketiga .
Erlangga, Jakarta.
Fitri,  E.  1992. Isolasi  Agarosa  Dengan Metode  Polyethylene  Glycol  (PEG
METHOD) dan Agar-agar Gracilaria sp. . Skripsi . Fakultas Teknologi Pertanian. IPB, Bogor. Fransiska,  Dina  dan  Murdinah. Prospek Produksi Agarosa dan Agar Mikrobiologi  Di  Indonesia. Jurnal. Squalen Vol.  2  No.  2,  Desember 2007.
Glicksman,  M.  1983. Food  Hydrocolloid . Volume  ke-2.  CRC.  Boca  Raton., Florida.
Indriani,  H.  dan  E.  Sumiarsih.  2003. Budidaya Pengolahan dan Pemasaran  Rumput  Laut .  Penebar Swadaya, Jakarta.
Istini,  S.  1986.  Manfaat  dan  Pengolahan Rumput  Laut. Majalah  BPPT:  1-12 , Jakarta.
Kadi,  A.  2004.  Potensi  Rumput  Laut  Di Beberapa  Perairan  Pantai  Indonesia. Oseana,  Vol.  XXIX,  No.  4,  Tahun 2004 : 25 – 36 .
Lindawati.  2010.  Pengaruh  pH  Terhadap Efektifitas  Natrium  Benzoat  Dalam Minuman  Sari  Kelapa  Berdasarkan
Uji  Mikrobiologi. Skripsi .  Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan
Alam. UNB, Bogor.
Rachmat,  R.,  Sulistijo  dan  A.B.  Susanto. 2004. Ekstraksi Agarose dari Agarofit
Gracillaria  verrucosa , hlm.  138-145. Prosiding  Seminar  Nasional  Rumput Laut dan Mini Symposium Mikroalgae 23-25  Oktober  2002 .  Ikatan  Fikologi
Indonesia, Jakarta. Rasyid,  A.  2004.  Berbagai  Manfaat  Alga . Jurnal Kelautan. Puslitbang Oseanologi  LIPI  hlm.  9-15.  Vol  3., Jakarta
Rasyid,  A.,  R.  Rachmat,  dan  T.  Murniasih. 1999.  Karakteristik  Polisakarida  Agar dari Gracilaria  sp. dan  Gelidium  sp. Jurnal Kelautan. Puslitbang Oseanologi-LIPI halaman 57-62, Jakarta.
Rizqi,  N.A  .2011. Isolasi  Agarosa  Rumput Laut Gracilaria sp. dan Eucheuma sp. Skripsi . Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam. UNB, Bogor. Salamah  dan  Ella.  2005.  Kualitas  Agarosa Hasil  Isolasi  dari  Rhodymenia  ciliate
Menggunakan DEAE-Selulosa. Buletin  Teknologi  Hasil  Perikanan Vol. VIII No. 1 tahun 2005 . Satriyana. 2002. Pengaruh Penambahan Iota Karaginan  Pada  Proses  Ekstraksi Agarosa  dari  Rumput  Laut  Gracilaria chilensis Dengan Metode Cetyl Pyridinium Chloride. Skripsi . Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  IPB,
Bogor.
Soegianto, S., W.S. Atmadja & H. Mubarak. 1978. Rumput Laut (Algae): Manfaat,
Potensi,  dan  Usaha  Budidaya. Jurnal Kelautan . Lembaga Oseanologi Nasional-LIPI. Jakarta. Soerawidjaja  T.H.    2005.  Alga  Sebagai Biotarget  Industri. Jurnal  Saint  dan Teknologi BPPT.
Sudjana, 1982. Desain dan Analisis Eksperimen.  Tarsito.  Bandung  Tim Elsspat Pengawetan Kayu dan Bambu .  Cetakan  Pertama.  Dinamika Media. Jakarta Subaryono B.S.B. 2003. Pengaruh Penambahan  Iota  Karaginan  pada Ekstraksi  Agarosa  dari  Agar-agar Menggunakan Cetyl Piridium Klorida. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia Vol. 9. Nomor 5: 1-9 . Susanto, M, P. Lappas dan S. Endang. 1978. Penelitian Agar-agar Pada Bermacam-macam Jenis Sango-sango (Rumput  Laut)  di  Sepanjang  Pantai Makasar. Balai  Penelitian  Kimia
Ujung Pandang.
Winarno,  F.G.  1996. Teknologi  Pengolahan
Rumput  Laut .  Pustaka  Sinar  Harapan. Jakarta.