Abstract : Quality inspection and standardization of traditional medicine raw materials is an important as the begining  of    standardization  of  traditional  medicines.    This  study  aims  to  determine  specific  and  nonspecific parameters physical standardization and to determinae any potential of sapodilla leaves (Manilkara zapota L.) ethanol extract as an antibacterial against E.coli.  Simplisia of  sapodilla leaf (Manilkara zapota L.) collected from Manjalling Village, West Bajeng District, Gowa Regency. Simplisia was extracted to produce thick extraxt by maceration using ethanol 96% as solvent.  The thick extract, then tested for specific parameters (identity, organoleptic),  nonspecific  (shrinkage  drying)  and  its  activity  as  an  antibacterial  against  E.coli  through paperdisc method. The results of this study showed that organoleptically the extract produced was thick extract with a distinctive blackish-green (dark green) color, and bitter taste. Confirmed Identification of the plant name is  Sapodilla  (Manilkara  zapota  L.)  known  as  sawo  manilla  in  the  local  terms.  The  results  for  non-specific parameters by testing the drying shrinkage levels are an average of 79.5488%. this process aimed to provide maximum limits on the amount of  compound lost in the drying process. The results for antibacterial activity against E. coli gained in extract concentration of 10% w/v   with 11 mm inhibition zone.
Keywords :  Extract; Leaf; Sapodilla (Manilkara zapota L.); Standardization; Antibacterial; E.coli
Abstrak  :  Pemeriksaan  mutu  dan  standardisasi    bahan  baku  obat  tradisonal  merupakan  titik  awal  yang penting bagi standardisasi obat tradisional secara keseluruhan karena obat tradisional yang bermutu hanya akan diperoleh bila simplisia yang menjadi bahan baku juga bermutu. Penelitian ini bertujuan mengetahui parameter  spesifik  dan  nonspesifik  serta  potensi  ekstrak  etanol  daun  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.) sebagai  antibakteri  terhadap  E.coli.  Simplisia  daun  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.)  diperoleh  di    Desa Manjalling  Kecamatan  Bajeng  Barat    Kabupaten  Gowa.  Simplisia    diekstraksi  dengan  metode  maserasi dengan pelarut etanol 96% hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak lalu diuji parameter spesifik (idenititas, organoleptik), nonspesifik (susut pengeringan) dan aktivitasnya sebagai antibakteri terhadap E.coli dengan metode  paperdisc.  Hasil  penelitian  yang  diperoleh  untuk  uji  parameter  spesifik  yaitu  secara  organoleptik ekstrak yang dihasilkan merupakan ekstrak kental yang memiliki warna hijau kehitaman berbau khas, dan memiliki  rasa  pahit.  Secara  identitas  nama  tanaman  adalah  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.),  bagian tanaman yang diambil yaitu bagian daun. Hasil untuk parameter non spesifik dengan pengujian kadar susut pengeringan  yaitu  rata-rata  79,5488%  dengan  tujuan  untuk  memberikan  batasan  maksimal  tentang besarnya  senyawa  yang  hilang  pada  proses  pengeringan.  Hasil  untuk  pengujian  aktivitas  antibakteri terhadap E.coli dengan konsentrasi ekstrak 10% b/v diperoleh besar zona hambatan sebesar 11mm.
Kata Kunci :  Ekstrak; Daun; Sawo Manila (Manilkara zapota L.); Standardisasi; Antibakteri; E.coli
STANDARDISASI  MUTU FISIK EKSTRAK ETANOL DAUN SAWO MANILA (Manilkara zapota L.) DAN UJI POTENSI ANTIBAKTERI TERHADAP E.coli
1| A. Tenriugi Daeng Pine, 2| Yuyun Sri Wahyuni, 3| Nirmala, 4| A. Tenri Muji Email Korespondensi : pinefarma@gmail.com Akademi Farmasi Yamasi Makassar, Indonesia

## PENDAHULUAN
Standardisasi  dalam  kefarmasian  tidak  lain  adalah  serangkaian  parameter  prosedur  dan cara  pengukuran  yang  hasilnya  merupakan  unsur-unsur  terkait  paradigma  mutu kefaramasian, mutu dalam artian yang memenuhi syarat standar (kimia, biologi dan farmasi), termasuk  jaminan  (batas-batas)  stabilitas  sebagai  produk  kefarmasian  umumnya  (BPOM, 2014). Pemeriksaan mutu dan standardisasi sebagai bahan baku obat tradisonal merupakan titik awal yang penting dalam standardisasi obat tradisional secara keseluruhan, karena obat tradisional yang bermutu hanya akan diperoleh bila simplisia yang menjadi bahan baku juga bermutu.
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya,  buah  sawo  manila  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap E.coli. yang dapat menyebabkan penyakit diare (Ningrum, Yeni and Ariyati, 2011). Ekstrak  etanol  buah  sawo  manila  (Achras  zapota  L.)  juga  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri  Streptococcus  mutans,  Staphylococcus  aureu,  Staphylococcus  epidermidis, dan Salmonella thyposa, dengan konsentrasi optimum 1500 ppm atau 1,5 mg/ml (Mukhriani, Nurlina, Baso, 2014).
Dari penelusuran pustaka, belum ditemukan laporan mengenai standardisasi ekstrak etanol daun  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.)  sehingga  dirasakan  perlu  dilakukan  penelitian standardisasi  mutu  fisik  ekstrak  etanol  daun  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.)  dan potensinya  sebagai  antibakteri  terhadap  E.coli.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui mutu  ekstrak  etanol  daun  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.)  yang  dihasilkan  dalam penelitian ini dan aktivitasnya sebagai antibakteri terhadap E.coli. Diharapkan penelitian ini dapat  memberikan  informasi  tentang  standar  mutu  dari  ekstrak  etanol  daun  sawo  manila dan  dapat  memberikan  informasi  kepada  masyarakat  tentang  tanaman  sawo  manila  yang memiliki khasiat sebagai obat, khususnya sebagai antibakteri terhadap E.coli.
Pada penelitian ini digunakan daun sawo manila (Manilkara zapota L.) yang diperoleh dari Desa  Manjalling  Limbung,  Kecamatan  Bajeng  Barat,  Kabupaten  Gowa,  Provinsi  Sulawesi Selatan.

## METODE PENELITIAN

## 1. Pengambilan sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sawo manila (Manilkara zapota L.) yang diambil dari pohon sawo manila yang berada di Limbung, Desa Manjallng, Kec. Bajeng Barat, Kab Gowa.

## 2. Proses Ekstraksi
Daun  sawo  manila  yang  telah  dikumpulkan  kemudian  dicuci,  dibersihkan,  dan  dikeringkan dengan cara diangin-anginkan  (tidak terkena cahaya matahari langsung) dan setelah kering kemudian  diserbukkan.  Dimasukkan  500  g    daun  sawo  manila  yang  telah  diserbukkan  ke dalam alat maserasi, ditambahkan pelarut etanol 96 % sebanyak 1000 ml dan ditutup dengan rapat serta disimpan pada tempat yang  terhindar dari sinar matahari langsung. Didiamkan selama  1x24  jam  kemudian  disaring  dan  ampasnya  diambil  kembali  dan  ditambahkan dengan  cairan  penyari  yang  sama  dengan  jumlah  yang  sama.  Dilakukan  pengulangan sebanyak  2  kali.  Hasil  maserasi  diuapkan  dengan  rotavapor  (rotary  evaporator)  hingga diperoleh ekstrak yang diinginkan.
3. Penentuan Uji Parameter (BPOM, 2000)

## a. Parameter Spesifik
- Penetapan organoleptik
Sampel  yang  digunakan  diamati  terlebih  dahulu,  meliputi  bentuk,  bau,  rasa,  dan  warna dengan menggunakan panca indera.
- Identitas
Memberikan identitas nama tanaman dan bagian tanaman yang digunakan.
b. Parameter Non Spesifik
- Parameter Susut Pengeringan
Sejumlah  1  g  ekstrak  ditimbang  dalam  krus  porselin  bertutup  yang  sebelumnya  telah dipanaskan  pada  suhu  105ºC  selama  90  menit  dan  telah  ditera.  Ratakan  dengan menggoyangkan  hingga  lapisan  setebal  10-15  mm  dan  dikeringkan  pada  suhu  penetapan hingga  bobot  tetap,  buka  tutupnya,  biarkan  krus  dalam  keadaan  tertutup  dan  mendingin dalam  deksikator  hingga  suhu  kamar,  kemudian  dicatat  bobot  tetap  yang  diperoleh  untuk menghitung persentase susut pengeringannya. Dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.

## 4. Penyiapan Bakteri Uji
- Peremajaan Eschericia coli
Medium  Nutrient  Agar  yang  telah  dibuat,  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  lalu dimiringkan,  setelah  Nutrient  Agar  memadat,  diambil  1  ose  biakan  murni  Eschericia  coli
dengan  menggunakan  ose  lurus,  kemudian  digoreskan  pada  permukaan  medium  Nutrient Agar lalu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 jam.
- Pembuatan Suspensi Eschericia coli
Diambil  satu  ose  hasil  peremajaan  bakteri,  kemudian    disuspensikan  dengan  5  ml NaCl, diinkubasi 1x24 jam pada suhu 37 o C.

## 5. Pengujian Daya Hambat
Disiapkan  medium  NA  steril  cair  yang telah  dibuat  lalu  dituang  kedalam  2  cawan  petri kosong  steril  masing-masing  sebanyak  ±20  ml  kemudian  dibiarkan  memadat,  setelah memadat diinokulasikan suspensi biakan Escherichia coli  ke dalam 2 cawan petri yang berisi medium NA dengan menggunakan swab steril. Kemudian  Paper disk 1 ditetesi 10 µl larutan Na CMC  (Carboxy Methyl Cellulose) (kontrol negatif) dan Paper disk 2 ditetesi 10 µl ekstrak Daun  Sawo  manila  konsentrasi  10%b/v  yang  telah  dilarutkan  ke  dalam  Na  CMC  (Carboxy Methyl Cellulose) (kontrol positif).  Paper disk tersebut diletakkan di atas permukaan media dan diinkubasi selama 1x24 jam dengan suhu 37 o C.

## 6. Pengamatan Dan Pengukuran Diameter Hambatan
Pengamatan  dan  pengukuran  diameter  hambatan  dilakukan  dengan  menggunakan  jangka sorong setelah diinkubasikan selama 1x24 jam dan dicatat pada tabel pengamatan.

## HASIL PENELITIAN
Tabel 1. Data Organoleptik Ekstrak Etanol Pada Daun Sawo Manila (Manilkara zapota L.)
No. Uji organoleptik Hasil Pengamatan 1. Bentuk Ekstrak kental 2. Warna Hijau Kehitaman 3. Bau Khas 4. Rasa Pahit
Tabel 2. Data identitas Ekstrak Etanol Pada Ekstrak etanol Pada Daun Sawo Manila (Manilkara zapota L.) Tabel 3 Kadar Susut Pengeringan Ekstrak etanol daun Sawo Manila (Manilkara Zapota L.)
No. Uji identitas Hasil Pengamatan 1. Nama ekstrak Ekstrak kental etanol Daun Sawo Manila (Manilkara Zapota L.) 2. Nama latin (Manilkara Zapota L.) 3. Bagian tanaman Daun 4. Nama Indonesia tanaman Daun sawo manila Replikasi Krus    kosong (g) (A) Krus + Sampel (g) (B) Bobot akhir ekstrak (g) (D) Kadar Susut Pengeringan (% b/v) Rata-rata (%b/v) 1. 26,1374 27,1414 26,9268 78,6254 79,5488 2. 25,4902 26,4934 26,2840 79,1267 3. 26,7563 27,7602 27,5684 80,8945
Tabel 4 Diameter Zona Hambat Ekstrak etanol daun Sawo Manila (Manilkara Zapota L.)
10%b/v Terhadap E.coli Replikasi Diameter zona hambat (mm) Rata-rata (mm) 1 11 11 2 11

## DISKUSI
Penelitian standarisasi mutu fisik ekstrak etanol pada daun sawo manila (Manilkara zapota L.)  dan  uji  potensi  antibakteri  terhadap  E.coli  bertujuan  untuk  mengetahui  standar  mutu ekstrak  etanol  daun  sawo  manila  (Manilkara  zapota  L.)  yang  dihasilkan  dari  penelitian  ini dan  dapat  memberikan  informasi  kepada  masyarakat  tentang  tanaman  sawo  manila  yang memiliki khasiat sebagai antibakteri.
Pada penelitian ini digunakan daun sawo manila (Manilkara zapota L.) yang diperoleh dari Limbung,  Desa  Manjalling,  Kec.  Bajeng  Barat,  Kab  Gowa,  Provinsi  Sulawesi  Selatan.  Daun sawo manila yang sudah dikeringkan dibuat ekstrak kental dengan cara dimaserasi dengan etanol  96%  selama  1x24  jam.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh  kemudian  diuapkan  hingga diperoleh ekstrak kental.
Dari  hasil  pengujian  parameter  spesifik  organoleptik  bertujuan  sebagai  pengenalan  awal menggunakan  panca  indra  dengan  mendeskripsikan  bentuk,  warna,  bau,  dan  rasa.  Ekstrak yang  diperoleh  berupa  ekstrak  kental,  berwarna  hijau  kehitaman,  bau  khas,  dan  rasanya pahit, sedangkan identitas ekstrak bertujuan untuk memberikan identitas objektif dari nama tanaman  dan  bagian tanaman  yang  digunakan  serta  senyawa  identitas  (BPOM,  2000).  Dari penelitian ini diperoleh identitas berupa nama tanaman daun sawo manila (Manilkara zapota L.), bagian tanaman yang diambil yaitu daun.
Pengujian  susut pengeringan sebagai  parameter  non  spesifik  bertujuan  untuk  memberikan batasan  maksimal  tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang  pada  proses  pengeringan.  Hasil dari  kadar  susut  pengeringan  adalah  79,5488%.  Jika  bahan  yang  menguap  diasumsikan adalah  air,  maka  dapat  artikan  kadar  air  ekstrak  adalah  sebesar  79,5488%  dan  melebihi standar  yang  diperbolehkan.  Hal  ini  dapat  terjadi  jika  proses  penyimpanan  ekstrak  tidak dilakukan pada tempat yang tepat karena ekstrak dapat menyerap air yang ada di udara dan proses  pengeringan/penguapan  pelarut  yang  kurang  sempurna  sehingga  jumlah  air  dan pelarut  dalam  ekstrak  yang  dihasilkan  masih  cukup  besar  (Ratnani  et  al.,  2015).  Kadar  air dalam  sediaan  obat  tradisional  termasuk  ekstrak  tidak  boleh  melebihi  batas  10  %  (BPOM, 2014).  Kadar  air  yang  melebihi  10%  dapat  mengakibatkan  ekstrak  akan  mudah ditumbuhi jamur (Ratnani et al., 2015).
Pada pengujian aktivitas antibakteri, ekstrak etanol daun sawo manila  konsentrasi 10%b/v mempunyai  diameter  zona  hambat  terhadap  E.coli  sebesar  11  mm.    Hal  ini  juga  didukung dari data penelitian sebelumnya bahwa ekstrak daun sawo dapat menghambat pertumbuhan E.coli  yang berasal dari  6 sampel specimen pasien yang  berbeda (Mufti, Bahar and Arisanti, 2017).
Kemampuan ekstrak daun sawo manila dalam menghambat pertumbuhan beberapa bakteri karena adanya kandungan zat aktif yang berperan sebagai antibakteri, diantaranya saponin, tanin dan flavonoid. Hal ini dibuktikan dengan phytochemical screening yang dilakukan oleh Rahman  dan  Ganguly  (2016)  bahwa  ekstrak  etanol  daun  sawo  mengandung  alkaloid, flavonoid, tanin, dan saponin. Kandungan flavonoid pada daun sawo manila memiliki jumlah
yang  sangat  signifikan  dan  diketahui  memiliki  efek  antiinflamasi  (Hemayet  Hossain  et  al., 2012).
Saponin  memiliki  komponen  aktif  aglycone  yang  bersifat  membranolitik  yang  dapat menyebabkan  terjadinya  penurunan  tegangan  permukaan  dinding  sel  bakteri.  Setelah tegangan  permukaan  dinding  sel  bakteri  menurun,  saponin  membentuk  kompleks  dengan sterol yang menyebabkan pembentukan single ion channel. Single ion channel menyebabkan ketidakstabilan membran sel sehingga menghambat aktivitas enzim dalam transport ion yang berperan dalam kehidupan bakteri. Tegangan permukaan dinding sel bakteri yang menurun juga  dapat  menyebabkan  kebocoran  sel  sehingga  senyawa  intraseluler  keluar.  Hal  ini menyebabkan pertumbuhan sel bakteri terhambat.
Senyawa  tanin  bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  menghambat  pembentukan  polipeptida dinding  sel  bakteri  yang  menyebabkan  lisisnya  dinding  sel  bakteri.  Tanin  mempunyai  efek spasmolitik yang selain dapat mengurangi gerak peristaltik usus, juga dapat mengkerutkan dinding sel bakteri, sehingga menyebabkan terganggunya permeabilitas sel bakteri. Senyawa tanin  sebagai  antibakteri  juga  dapat  menghambat  enzim  reverse  transkriptase  dan  DNA topoisomerase  yang  berperan  dalam  proses  multiplikasi  bakteri  sehingga  sel  bakteri  tidak dapat terbentuk dan memperbanyak diri.
Mekanisme  kerja  senyawa  flavonoid  yaitu  menyebabkan  koagulasi  atau  penggumpalan protein sel.  Protein  yang  menggumpal  mengalami  denaturasi  sehingga tidak  berfungsi  lagi. Flavonoid  dalam  konsentrasi  tinggi  menyebabkan  kerusakan  membran  sel  bakteri  secara total  dan  mengendapkan  protein  sel,  sedangkan  dalam  konsentrasi  rendah  menyebabkan kebocoran  sel  bakteri  sehingga  keluarnya  metabolit-metabolit  penting  dari  sel  bakteri. Flavonoid  juga  dapat  menghambat  enzim  DNA  girase  bakteri.  Enzim  DNA  girase  berperan dalam membuka pilinan DNA untuk proses replikasi DNA. Jika enzim DNA girase terhambat maka  proses  replikasi  DNA  dan  transkripsi  juga  terhambat  sehingga  mengakibatkan kerusakan  pada  sel  bakteri  dan  akhirnya  kematian  sel  bakteri  (Mufti,  Bahar  and  Arisanti, 2017).

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  ini  disimpulkan  bahwa  standardisasi  mutu  fisik  ekstrak  etanol  daun  sawo manila yang diperoleh dari Desa Manjalling, Limbung, Kec. Bajeng Barat, Kab. Gowa memiliki parameter  spesifik  (organoleptik  dan  identitas)  yaitu  berwarna  hijau  kehitaman,  bentuk kental,  berbau  khas,  dan  berasa  pahit  dengan  identitas  nama  tanaman  sawo  manila (Manilkara zapota L.) dan nama lokal sawo manila, dan bagian yang digunakan adalah bagian daun.  Parameter  nonspesifik  berupa  susut  pengeringan  diperoleh  79,5488%  dan  potensi antibakteri ekstrak etanol daun sawo manila dengan konsentrasi 10%b/v memiliki diameter zona hambat terhadap bakteri E.coli  sebesar 11 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
BPOM  (2000)  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat.  Indonesia:  Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
BPOM (2014) Peraturan Kepala BPOM RI  Nomor 12 Tahun 2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional, BPOM RI. Jakarta.
Hemayet  Hossain,  M.  et  al.  (2012)  ‘Evaluation  of  Anti-inflammatory  Activity  and  Total Flavonoids  Content  of  Manilkara  zapota  (Linn.)  Bark’,  International  Journal  of Pharmaceutical and Phytopharmacological Research Int.J.Pharm.Phytopharmacol.Res, 35(21), pp. 2249–6084.
Mufti,  N.,  Bahar,  E.  and  Arisanti,  D.  (2017)  ‘Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Sawo  terhadap Bakteri  Escherichia  coli  secara  In  Vitro’,  Jurnal  Kesehatan  Andalas,  6(2),  pp.  289– 294.
Mukhriani,  Nurlina,  Baso,  F.  F.  (2014)  ‘Uji  Aktivitas  Antimikroba  Dan  Identifikasi  Ekstrak Buah Sawo Manila (Achras Zapota L.) Terhadap Beberapa Mikroba Patogen Dengan Metode Difusi Agar.’, Jf Fik Uinam, 2(2), p. 69.
Ningrum, H. P., Yeni, L. F. and Ariyati, E. (2011) ‘Uji Daya Antibakteri Ekstrak Sawo Manila Terhadap E.coli dan Implementasinya dalam Pembelajaran Peranan Bakteri’, pp. 1– 17.
Ratnani,  R.  D.  et  al.  (2015)  ‘Standarisasi  Spesifik  dan  Non  Spesifik  Ekstraksi  Hidrotropi Andrographolid  Dari  Sambiloto  (Andrographis  paniculata)’,  Prosiding  Seminar Nasional Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine, pp. 147–155.