ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id J. Agron. Indonesia, Desember 2018, 46(3):322-327 DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v46i3.16342
* Penulis untuk korespondensi. e-mail: fipspt@gmail.com
Uji Beberapa Konsentrasi Bakteri Bacillus sp. Endofit untuk Meningkatkan Pertumbuhan Bibit Kakao ( Theobroma cacao L.)
Various Concentration of Endophytic Bacillus sp. to Improve Growth of Cocoa (Theobroma cacao L.) Seedling
Fifi Puspita * , Sukemi Indra Saputra, dan Jenny Merini Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Riau Jl. Bina Widya No. 30  Simpang Baru Kec. Tampan Pekanbaru Kode Pos 28293, Indonesia
Diterima 5 Mei 2017/Disetujui 26 Juli 2018

## ABSTRACT
Development of cocoa (Theobroma cacao L.) requires high-quality seeds. Adding growth substance from Bacillus sp. endophytes is expected to increase the growth of cocoa seedlings. The purposes of this research were to determine the ability of Bacillus sp. endophytes to produce Indole Acetic Acid (IAA), understand the effects of Bacillus sp. endophytes on growth of cocoa seedling, and obtain the best concentration for increasing growth of cocoa seedlings. The experiments were conducted in the laboratory and in the field from June to October 2015. The study was conducted in two stages: in vitro and in vivo. The first experiment tested the ability of Bacillus sp. endophytes to produce IAA using tryptophan enriched picovskaya liquid medium and non-enriched tryptophan. The results from the first experiment showed that all Bacillus sp. endophytes produce IAA hormones. The second experiment tested the concentrations of Bacillus sp. endophytes to improve the growth of cocoa seedlings. The experiment was conducted using a completely randomized design consisting of 5 treatments and 4 replications, i.e., without treatment of Bacillus sp., and concentrations of 1011, 1012, 1013, and 1014 cfu/mL. The parameters observed were the number of bacterial colonies of Bacillus sp. endophytes, cocoa seed height, stem diameter, number of leaves and planting area of   4 month cocoa seedlings. The results from the second experiment showed that all concentrations of Bacillus sp. endophytes increase the growth of cocoa seedlings. The concentration of 1011 cfu/mL produced more colony in planting medium, increased height, stem diameter, leaf number and leaf area in cocoa seedlings.
Keywords: Indole Acetic Acid, in vitro and in vivo

## ABSTRAK
Pengembangan kakao (Theobroma cacao L.) membutuhkan bibit berkualitas dalam jumlah yang besar. Pemberian zat pemacu pertumbuhan dari bakteri Bacillus sp. endofit diharapkan dapat meningkatkan pertumbuhan bibit kakao. Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui kemampuan isolat Bacillus sp. endofit dalam menghasilkan Indole Acetic Acid (IAA), mengetahui  pengaruh  konsentrasi  Bacillus  sp.  endofit  terhadap  pertumbuhan  bibit  kakao  dan  mendapatkan  konsentrasi terbaik untuk meningkatkan pertumbuhan bibit kakao. Percobaan dilakukan di laboratorium dan di lapangan dari bulan Juni sampai Oktober 2015. Penelitian dilakukan dua tahap yaitu in vitro dan in vivo. Penelitian pertama menguji kemampuan bakteri Bacillus sp. endofit menghasilkan hormon IAA menggunakan media pikovskaya cair diperkaya triptofan dan tidak diperkaya triptofan. Hasil penelitian pertama menunjukan bahwa semua isolat Bacillus sp. endofit menghasilkan hormon IAA. Penelitian kedua menguji konsentrasi Bacillus sp. endofit untuk meningkatkan pertumbuhan bibit kakao. Percobaan dilaksanakan dengan rancangan acak lengkap yang terdiri atas 5 perlakuan dan 4 ulangan, yaitu tanpa perlakuan Bacillus sp.,  dan  konsentrasi  10 11 ,  10 12 ,  10 13 ,  dan  10 14 cfu/mL.  Parameter  yang  diamati  adalah  jumlah  koloni  bakteri  Bacillus sp. endofit, tinggi bibit, diameter batang, jumlah daun dan luas daun tanam bibit kakao umur 4 bulan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa semua konsentrasi Bacillus sp. endofit mampu meningkatkan pertumbuhan bibit kakao. Konsentrasi 10 11 cfu/mL menghasilkan jumlah koloni lebih banyak dalam medium tanam, meningkatkan tinggi, diameter batang, jumlah daun dan luas daun pada bibit kakao.
Kata kunci: Indole Acetic Acid, in vitro dan in vivo

## PENDAHULUAN
Kakao  ( Theobroma  cacao L.)  merupakan  salah  satu komoditas  perkebunan  yang  terus  mendapat  perhatian dan  dukungan  dari  pemerintah  untuk  dikembangkan. Permasalahan  dalam  pengembangan  dan  meningkatkan produktivitas  tanaman  kakao  saat  ini  adalah  kurang tersedianya  bibit  kakao  yang  bermutu  tinggi  dalam  skala besar. Perbanyakan tanaman kakao dapat dilakukan secara generatif  dan  vegetatif.  Perbanyakan  secara  generatif dianggap  lebih  mudah  untuk  dikembangkan  dan  mampu menghasilkan bibit dalam jumlah yang banyak dengan waktu yang  singkat.  Upaya  untuk  meningkatkan  pertumbuhan bibit kakao yang berkualitas untuk ditanam di perkebunan kakao dapat dilakukan dengan aplikasi bakteri endofit yang berpotensi  sebagai  pemacu  pertumbuhan  salah  satunya adalah bakteri Bacillus sp. endofit.
Bakteri endofit merupakan bakteri saprofit yang hidup dan berasosiasi dengan jaringan tanaman tanpa menimbulkan suatu gejala penyakit pada tanaman tersebut. Bakteri endofit dapat berperan sebagai agens pengendali hayati dengan cara meningkatkan pertumbuhan tanaman, menyediakan nutrisi, menghasilkan  hormon  pertumbuhan  dan  menginduksi ketahanan  tanaman  (Putri et  al ., 2016).  Keberadaan bakteri endofit di dalam jaringan tanaman berperan dalam perbaikan pertumbuhan tanaman ( plant growth promotion ), menghasilkan  zat  pemacu  tumbuh,  memfiksasi  nitrogen, memobilisasi fosfat dan berperan dalam kesehatan tanaman ( plant health promotion ) (Munif et al., 2012 ) . Bakteri endofit sebagai agen biokontrol dan pemacu pertumbuhan  karena  dapat  meningkatkan  ketersediaan nutrisi  dan  menghasilkan  hormon  pemacu  pertumbuhan seperti  IAA,  GA 3 dan  Sitokinin  (Gusmaini et  al .,  2013). Bakteri  penghasil  IAA  mampu  menghasilkan  fitohormon yang  dapat  mempercepat  pertumbuhan  tanaman.  IAA merupakan hormon yang berperan dalam pertumbuhan dan perkembangan tanaman sehingga sintesis oleh bakteri tertentu meningkatkan pertumbuhan tanaman kacang tanah (Herlina et  al .,  2016).  Tujuan  penelitian  adalah  untuk  mengetahui kemampuan isolat Bacillus sp. endofit dalam menghasilkan Indole Acetic Acid (IAA), mengetahui pengaruh konsentrasi Bacillus sp. endofit terhadap pertumbuhan bibit kakao dan mendapatkan  konsentrasi  terbaik  untuk  meningkatkan pertumbuhan bibit kakao.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini berlangsung selama 5 bulan mulai bulan Juni sampai Oktober 2015. Penelitian ini dilakukan dalam dua  tahap  yaitu in  vitro dan in  vivo .  Bahan-bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  isolat Bacillus sp. endofit yang berasal dari bagian akar, batang, pelepah dan daun  tanaman  kelapa  sawit  (isolat  koleksi  unit  BICCOM Fakultas Pertanian Universitas Riau). Bahan yang digunakan adalah nutrient  agar ,  medium  pikovskaya  cair,  triptofan, IAA sintetis, alkohol 70%, aluminium foil , aquades, polybag , pupuk kompos, Urea, TSP, KCl, air, tanah top soil dan benih kakao jenis hibrida F1 (ICS 60 x SCA 12) asal PT. Inang
Sari. Alat yang digunakan adalah timbangan analitik, cawan petri berdiameter 9 cm, tabung reaksi, erlenmeyer 250 mL, gelas ukur, beaker glass 1,000 mL, vortex, cool box , enkas, laminar air  flow  cabinet, orbital rotary shaker, micro pipet , sentrifus, oven, autoklaf, hot plate , kompor gas, test tube , jarum  ose,  batang  pengaduk,  pipet  tetes,  lampu  bunsen, inkubator dan spektrofotometer.
Penelitian pertama dilakukan secara in vitro , yaitu uji kemampuan bakteri Bacillus sp. endofit dalam menghasilkan IAA.  Perlakuan  yang  diuji  adalah  media  Pikovskaya  cair yang  diperkaya  triptofan  dan  tidak  diperkaya  triptofan. Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Ilmu  Tanah, Laboratorium  Penyakit  Tanaman  Fakultas  Pertanian Universitas  Riau  Pekanbaru.  Pengukuran  kemampuan bakteri Bacillus sp.  endofit  dalam  menghasilkan  IAA dengan  cara,  inokulum Bacillus sp.  endofit  sebanyak 20% dari medium dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang berisi  5  mL  medium  Pikovskaya  cair  yang  diperkaya dengan  Triptofan  0.5 g L -1 dan  pada  medium  Pikovskaya cair  yang  tidak  diperkaya  dengan  triptofan.  Kemudian diinkubasi    dan    diagitasi    pada  kecepatan  150  rpm  pada suhu ruang selama 3 hari dalam keadaan gelap. Kultur sel Bacillus sp.  endofit  disentrifugasi  pada  kecepatan  6000 rpm selama 30 menit untuk memisahkan koloni bakteri dari medium. Supernatan hasil sentrifugasi tersebut dipindahkan ke  dalam  tabung  reaksi  bersih  dan  steril  sebanyak  1  mL, kemudian  ditambahkan  pereaksi  Salkowski  sebanyak 4  mL.  Campuran  supernatan  dan  pereaksi  Salkowski diinkubasi  selama 60  menit dalam ruang gelap pada suhu ruang. Larutan akan berubah menjadi warna merah muda, yang merupakan indikasi adanya kandungan IAA. Larutan diukur  absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer pada panjang gelombang (λ) = 530 nm.  Konsentrasi  IAA ditentukan  dengan  membandingkannya  terhadap  kurva standar IAA. Persamaan regresi disubtitusikan dengan nilai absorbansi sampel.
Pembuatan  kurva  standar  IAA sebanyak  2.5  mg IAA  sintesis  ditimbang  dan  dilarutkan  ke  dalam  50  mL methanol  (konsentrasi  50  ppm).  Kemudian  larutan  IAA sintesis  dipipet  ke  dalam  tabung  reaksi  masing-masing 20 µl, 50 µl, 100 µl, 150 µl, 200 µl, 300 µl, 400 µl, 600 µl, 800 µl, dan 1,000 µl. Methanol ditambahkan ke dalam tabung  reaksi  sehingga  volume  masing-masing  tabung reaksi  menjadi  1,000  µl  (konsentrasi  0  ppm,  1  ppm,  2,5 ppm, 5 ppm, 7,5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm dan 50 ppm IAA). Pada tabung ditambahkan 4 ml larutan Salkowski  kemudian  dihomogenkan  dan  diinkubasi  60 menit pada suhu ruangan dalam keadaan gelap. Larutan akan berubah menjadi warna merah muda apabila terdapat IAA. Larutan  standar  IAA  diukur  absorbansinya  menggunakan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  (λ)  =  530  nm. Hasil  dari  spektrofotometri  dibuat  kurva  larutan  standar IAA  yang  menunjukkan  hubungan  antar  larutan  standar IAA (x) dan absorbansi (y) dan akan diperoleh persamaan Y=  a  +  bx.  Untuk  mencari  konsentrasi  IAA  dari  masing- masing sampel, nilai absorbansi yang diperoleh dari sampel disubtitusikan  ke  persamaan  di  atas  dan  hasil  penelitian dianalisis menggunakan statistika deskriptif.
Penelitian  kedua  dilakukan  secara in  vivo yaitu penanaman  bibit  kakao  di  kebun  percobaan  Fakultas Pertanian  Universitas  Riau.  Percobaan  ini  menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) yang terdiri atas 5 perlakuan yaitu  konsentrasi Bacillus sp.  0,  10 11 ,  10 12 ,  10 13 ,  dan  10 14 cfu/mL dan 4 ulangan sehingga diperoleh diperoleh 20 unit percobaan dan setiap unit percobaan terdiri atas 2 bibit kakao sehingga didapat 40 bibit kakao yang diuji dalam polybag . Tujuan percobaan ini adalah untuk mengevaluasi pengaruh konsentrasi Bacillus sp.  endofit  dalam  meningkatkan pertumbuhan  bibit  kakao.  Benih  disemai  selama  7  hari sebelum  dipindah  ke  dalam polybag .  Media  tanam  yang digunakan  adalah  tanah  dan  kompos  perbandingan  3:1. Pupuk dasar diberikan ½ dosis anjuran pupuk Urea 1 g per tanaman, TSP 1 g per tanaman dan KCI 0.5 g per tanaman. Pemeliharaan  dilakukan  dengan  penyemprotan  insektisida dan fungisida sesuai kondisi lapangan.
Aplikasi  bakteri Bacillus sp.  endofit  dilakukan dengan cara menyiramkan suspensi sebanyak 35 mL/bibit kepermukaan  medium  tanam  secara  merata.  Pemberian suspensi Bacillus sp. endofit pada media tanam dilakukan tiga kali aplikasi perlakuan. Aplikasi 1 dilakukan 1 minggu setelah tanam. Aplikasi 2 dilakukan 6 minggu setelah tanam atau 5 minggu setelah aplikasi 1. Aplikasi 3 dilakukan pada saat bibit kakao berumur 10 minggu atau 4 minggu setelah aplikasi 2. Suspensi disiapkan dengan cara memperbanyak isolat Bacillus sp.  endofit  pada  medium  NA,  kemudian disuspensikan dengan aquades dalam beaker glass berukuran 1  L.  Suspensi  bakteri Bacillus sp.  endofit  yang  berada dalam beaker glass diencerkan sesuai perlakuan mulai dari pengenceran 10 11 sampai 10 14 . Pengamatan dilakukan terhadap jumlah koloni, tinggi bibit (cm), diameter batang (cm), jumlah daun (helai) dan luas  daun  (cm 3 )  bibit    kakao.  Data  hasil  penelitian  tahap kedua dianalisis secara statistik dengan menggunakan sidik ragam dan model linier yang digunakan adalah Y ij = µ + B i + ɛ ij . Hasil analisis ragam dilanjutkan dengan uji lanjut beda nyata jujur (BNJ) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Produksi IAA oleh Bacillus sp. Endofit
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  4  isolat  bakteri Bacillus sp. endofit yang berasal dari bagian akar, batang, daun dan pelepah tanaman kelapa sawit dapat menghasilkan hormon  IAA  yang  ditandai  dengan  terbentuknya  warna merah  muda  dan  merah  muda  transparan  (Tabel  2). Kombinasi  Fe  dan  asam-asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  sebagai pereaksi  tunggal  mampu  meningkatkan  kepekaan  dalam menentukan  pembentukan  IAA.  Menurut  Sukmadewi et al .  (2015)  bakteri  yang  mampu  menghasilkan  IAA  akan berwarna  merah  saat  ditetesi  salkowski  karena  adanya interaksi antara IAA dan Fe membentuk senyawa kompleks [Fe 2 (OH) 2 (IA) 4 ]. Warna  yang  dihasilkan  isolat  bakteri Bacillus sp. endofit  setelah  penambahan  pereaksi  Salkowski  tidak stabil, warna akan cepat terbentuk dan kemudian memudar.
Tingginya stabilitas kepadatan warna setelah penambahan pereaksi akan menentukan tingginya konsentrasi IAA dan perubahan warna yang tidak stabil dapat dideteksi kembali dengan  mengadopsi  standar  waktu  antara  penambahan pereaksi dan pembacaan absorbansi (Sukarti et al ., 2013). Konsentrasi  produksi  IAA  diperoleh  dari  substitusi  nilai absorbansi sampel ke dalam persamaan regresi linear Y = a + bx dari kurva standar IAA dengan panjang gelombang 530 nm (Tabel 1 dan Tabel 2).
Konsentrasi  hormon  IAA  tertinggi  diperoleh  dari isolat Bacillus sp.  endofit  dari  daun  dengan  konsentrasi produksi  IAA  sebesar  141  ppm  tanpa  diperkaya  triptofan dan 386 ppm jika diperkaya triptofan. Hal ini diduga karena isolat  yang  berasal  dari  daun  menghasilkan  pertumbuhan bakteri Bacillus sp.  endofit  lebih  cepat  sehingga  mampu menghasilkan  enzim  yang  lebih  banyak  tersedia.  Kondisi ini mungkin terjadi karena adanya perbedaan kemampuan mikroba  dalam  menggunakan  triptofan,  perbedaan mekanisme  dalam  mensintesis  IAA  dan  IAA  dihasilkan pada fase-fase stasioner. Silitoga et al . (2013) menyatakan bahwa  IAA  disintesis  sebagai  metabolit  sekunder  yang dihasilkan dalam kondisi pertumbuhan bakteri suboptimal atau saat tersedia prekursor asam amino triptofan. Menurut Sukmadewi et al . (2015), IAA yang dihasilkan oleh bakteri melimpah  pada  fase  stasioner,  ketersediaan  karbon  yang terbatas dan dalam kondisi lingkungan pH asam.
Konsentrasi  produksi  IAA  pada  isolat  akar,  batang, pelepah dan daun pada perlakukan tanpa diperkaya triptofan lebih rendah sebesar 123 ppm, 117 ppm, 116 ppm dan 141 ppm sedangkan pada perlakukan  yang diperkaya triptofan 145 ppm, 177 ppm, 135 ppm dan 386 ppm (Tabel 2). Hal ini diduga  karena  bakteri Bacillus sp.  endofit  mengkonsumsi IAA  yang  dihasilkan  dan  digunakan  kembali  pada  proses pertumbuhan,  sehingga  medium  pertumbuhan  bakteri Bacillus sp.  endofit  yang  digunakan  miskin  nutrisi. Menurut Silitonga et al . (2013), perbedaan produksi IAA dikarenakan  bakteri  masih  mampu  membelah  diri  dan Volume (µl) Konsentrasi (ppm) Absorbansi (OD) 0 0 0 20 1 0.002 50 2.5 0.007 100 5 0.027 150 7.5 0.034 200 10 0.042 300 15 0.044 400 20 0.062 600 30 0.076 800 40 0.089 1000 50 0.093 Tabel 1. Standar IAA panjang gelombang 530 nm
Sumber: Laboratorium Ilmu Tanah Fakultas Pertanian Universitas Riau
secara  simultan  bakteri  dapat    mengkonsumsi  IAA  yang dihasilkannya  karena  medium  pertumbuhannya  miskin nutrisi.  Menurut  Sukarti et  al .  (2013),  perbedaan  sumber isolat, kondisi kultur, tahap pertumbuhan dan ketersediaan substrat mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme.
Produksi  IAA  yang  dihasilkan Bacillus sp.  endofit dari  4  isolat  yang  diuji  mengalami  peningkatan  pada penambahan Triptofan  0.5  g  L -1 (Tabel  1),  hal  ini  diduga karena pembentukan IAA dipengaruhi oleh adanya Triptofan (Trp) sebagai prekusor untuk biosintesis IAA oleh bakteri. Triptofan yang terkandung di dalam media pembiakan akan diubah menjadi IAA oleh bakteri endofit. Menurut Tanjung et al . (2015), produksi IAA oleh bakteri endofit dapat terjadi karena adanya prekursor berupa triptofan. Sukmadewi et al . (2015)  dan  Sukarti et al .  (2013)  menyatakan  kemampuan triptofan  meningkatkan  produksi  IAA  mengindikasikan bahwa  triptofan  merupakan  prekursor  untuk  biosintesis IAA oleh bakteri tersebut. Kholida et al . (2015) menyatakan biosintesis IAA (sintesis IAA) oleh bakteri terjadi dengan tryptophan  yang  diidentifikasi  sebagai  senyawa  prekursor dalam beberapa jalur yaitu indole-3-piruvat (IpyA), indole- 3-asetamida (IAM), triptamin (TAM), indole-3-asetonitril (IAN) dan jalur Trp cincin samping oksidase atau trp side- chain oxidase (TSCO).

## Jumlah Koloni Bacillus sp.
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  pemberian Bacillus sp. endofit meningkatkan jumlah koloni Bacillus sp.  endofit  pada  medium  tumbuh  bibit  kakao  (Tabel  3), akan tetapi perbedaan konsentrasi Bacillus sp. endofit yang diberikan tidak menghasilkan jumlah koloni yang berbeda. Simarmata et  al .  (2012),  menyatakan  bahwa  perbedaan tingkat  konsentrasi  pengenceran  tidak  mempengaruhi jumlah  koloni Bacillus sp.  yang  berada  diperakaran  bibit kelapa sawit.
Perbedaan jumlah koloni bakteri Bacillus sp. endofit pada  setiap  konsentrasi  dipengaruhi  oleh  ketersediaan nutrisi pada medium tumbuh di sekitar perakaran tanaman. Hal  ini  berpengaruh  terhadap  eksudat  yang  dikeluarkan akar  tanaman  yang  dimanfaatkan  bakteri Bacillus sp. untuk  sumber  nutrisi.  Berkurangnya  nutrisi  di  medium pertumbuhan  mempengaruhi  jumlah  pertumbuhan  koloni Bacillus sp.  endofit.  Penurunan  jumlah  koloni  bakteri
disebabkan  oleh  berkurangnya  nutrisi  yang  terkandung dalam medium (Putri et al ., 2016).

## Pertumbuhan Bibit
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  pemberian Bacillus sp. endofit nyata meningkatkan tinggi bibit, diameter batang, jumlah daun dan luas daun bibit kakao (Tabel 4). Hal ini dikarenakan Bacillus sp. endofit menghasilkan hormon pertumbuhan seperti IAA yang dapat memacu pertumbuhan bibit  kakao.  Saylendra  dan  Firnia  (2013)  menyatakan bahwa  bakteri  endofit  dapat  menghasilkan Indole  Acetic Acid (IAA). Menurut  Agustiansyah et al . (2013), bahwa agen  hayati  menghasilkan  IAA  yang  berfungsi  memacu pertumbuhan.
IAA yang dihasilkan oleh bakteri akan dimaanfaatkan oleh  tanaman  dan  akan  mengalami  proses  metabolisme didalam  tubuh  tanaman  sehingga  membantu  proses pertumbuhan  tinggi,  diameter  batang,  jumlah  daun  dan luas  daun  bibit  kakao.  Menurut  Putri et  al. (2016),  IAA yang  dihasilkan  bakteri  endofit  diketahui  dapat  memacu pertumbuhan bibit kakao.
IAA  adalah  auksin  endogen  yang  berperan  dalam pembesaran sel, menghambat pertumbuhan tunas samping, merangsang terjadinya absisi, berperan dalam pembentukan jaringan  xilem  dan  floem,  berpengaruh  terhadap perkembangan dan pemanjangan akar. Puspita et al . (2013) menyatakan  bahwa  kandungan  IAA  yang  dihasilkan berfungsi  sebagai  pemacu  pertumbuhan  tanaman  dengan merangsang pembelahan sel, pengatur pembesaran sel dan memacu  menyerap  air  dan  nutrisi  yang  mempengaruhi pertumbuhan tanaman.
Tabel 4 menunjukkan bahwa bibit kakao yang diberi Bacillus sp.  endofit  dengan  konsentrasi  10 11 -10 14 cfu/mL memiliki respon yang sama namun lebih tinggi dibanding tanpa pemberian Bacillus sp. endofit. Hal ini diduga karena perbedaan konsentrasi 10 11 -10 14 cfu/mL tidak mempengaruhi jumlah  koloni  yang  berkembang  diperakaran  bibit  kakao. Banyaknya jumlah koloni Bacillus sp. akan mengkolonisasi akar dan merangsang pertumbuhan akar lateral bibit kakao dengan menghasilkan hormon pemacu pertumbuhan tanaman sehingga  penyerapan  unsur  hara  lebih  optimal.  Puspita et  al. (2013)  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  jumlah koloni Bacillus sp. maka akan lebih cepat mengkolonisasi Sampel isolat Warna indikator Absorbansi (OD) Konsentrasi produksi IAA (ppm) Tanpa triptofan Diperkaya triptofan Tanpa triptofan Diperkaya triptofan Tanpa triptofan Diperkaya triptofan Akar Merah muda Merah muda 0.135 0.157 123 145 Batang Merah muda transparan Merah muda 0.129 0.189 117 177 Pelepah Merah muda transparan Merah muda 0.128 0.147 116 135 Daun Merah muda Merah muda 0.153 0.398 141 386
Tabel 2. Hasil analisis secara in vitro konsentrasi produksi IAA oleh isolat bakteri Bacillus sp. Endofit
perakaran tanaman dan membantu penyerapan unsur hara. Menurut  Putri et  al. (2016),  IAA  yang  dihasilkan  bakteri endofit  diketahui  dapat  memacu  pertumbuhan  tanaman lada.  Asyiah et  al .  (2015)  menyatakan  perlakuan  bakteri Bacillus dengan  dosis  10 8 cfu/mL  dapat  meningkatkan pertumbuhan  bibit  kopi Arabika  sebesar  35.4%.  Harni et al. (2014)  melaporkan  penggunaan  bakteri  endofit  dapat meningkatkan pertumbuhan tanaman nilam sebesar 23.6%- 57.5%.
Pemberian Bacillus sp. endofit 10 11 cfu/mL dan 10 13 cfu/mL  menghasilkan  pertambahan  luas  daun  217.62  cm 2
dan  225.58  cm 2 (Tabel  4) menunjukkan  hasil  lebih  tinggi dibanding  dengan  tanpa  pemberian Bacillus sp.  endofit, tetapi tidak berbeda nyata  dengan yang diberikan konsentrasi 10 12 cfu/mL dan 10 14 cfu/mL. Hal ini diduga karena proses fotosintesis mendukung kerja sel-sel jaringan tanaman dalam berdiferensiasi  sehingga  akan  mempercepat  pertumbuhan dan perkembangan bagi pembentukan tanaman pada bagian daun,  batang  dan  akar.  Menurut  Tinendung et  al .  (2014), peningkatan  pertumbuhan  yang  dipacu  oleh Bacillus sp. ini adalah daerah perakaran tanaman yang dapat memacu pertumbuhan  dan  meningkatkan  perkembangan  tanaman pada  fase  vegetatif,  dimana  peningkatan  ini  berdampak pada peningkatan aktifitas fotosintesis.
Meningkatnya  jumlah  daun  berkaitan  juga  dengan kemampuan konsentrasi Bacillus sp. endofit meningkatkan tinggi bibit kakao (Tabel 4). Semakin tinggi tanaman maka semakin banyak ruas-ruas yang akan meningkatkan jumlah daun. Menurut Hutabarat et al. (2014), kemampuan Bacillus sp. dalam meningkatkan jumlah pelepah bibit kelapa sawit berhubungan dengan kemampuannya dalam meningkatkan tinggi  bibit  kelapa  sawit.  Saylendra  dan  Firnia  (2013) membuktikan  bahwa  bakteri  endofit  yang  diisolasi  dari perakaran  jagung  dapat  merangsang  pertumbuhan  akar lateral, akar adventif, akar primer dan menghasilkan hormon pertumbuhan  sehingga  tanaman  dapat  tumbuh  lebih  baik dan tinggi tanaman perlakuan lebih tinggi dari kontrol.
Konsentrasi Bacillus sp. endofit (cfu/ml) Rerata jumlah koloni cfu/mL 0 0.50b 10 11 5.90a 10 12 5.27a 10 13 5.20a 10 14
4.75a
Tabel 3. Jumlah koloni Bacillus sp. endofit di medium tanam bibit kakao umur 4 bulan
Keterangan: Angka-angka pada lajur yang diikuti oleh huruf kecil yang tidak sama berbeda nyata menurut uji BNJ pada taraf 5% setelah ditrasformasi dengan √Y+0.5

## KESIMPULAN
Empat  isolat Bacillus sp.  endofit  dari  bagian  akar, batang, pelepah dan daun yang diujikan pada penelitian ini mampu menghasilkan IAA dengan indikator warna merah muda  dan  merah  muda  trasparan.  Produksi  IAA  tertinggi diperoleh pada isolat bagian daun dengan konsentrasi IAA sebesar 141 ppm tanpa diperkaya triptofan dan konsentrasi produksi  IAA  386  ppm  diperkaya  triptofan.  Pemberian Bacillus sp.  endofit  dengan  konsentrasi  yang  berbeda berpengaruh terhadap parameter pengamatan jumlah koloni, tinggi tanaman, diameter batang, jumlah daun dan luas daun bibit kakao umur 4 bulan. Pemberian Bacillus sp. endofit konsentrasi 10 11 cfu/mL mampu meningkatkan pertumbuhan
bibit  kakao  melalui  pertambahan  tinggi,  diameter  batang, jumlah daun, luas daun dan jumlah koloni yan lebih baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustiansyah,  S.  Ilyas,  Sudarsono,  M.  Machmud.  2013. Perlakuan benih dengan agen hayati dan pemupukan P untuk meningkatkan pertumbuhan tanaman, hasil, dan mutu benih padi. J. Agron. Indonesia 41:98-104.
Asyiah, I.  Nur., S. Wiryadiputra, I. Fauzi, R. Harni. 2015. Populasi Pratylenchus coffeae dan pertumbuhan bibit kopi Arabika akibat inokulasi Pseudomonas diminuta L. dan Bacillus subtilis . J. Pelita Perkebunan 31:30-
40.
Konsentrasi Bacillus sp. endofit (cfu/mL) Perubahan bibit kakao umur 4 bulan Tinggi (cm) Diameter  batang (cm) Jumlah daun (helai) Luas daun (cm 2 ) 0 36.06b 0.75b 17.75b 152.54b 10 11 49.16a 1.00a 20.87a 217.62a 10 12 44.63a 0.90ab 20.75a 203.04ab 10 13 48.31a 0.95ab 21.12a 225.58a 10 14 44.18a 0.90ab 20.87a 197.11ab
Tabel 4. Karakter pertumbuhan bibit kakao varietas F1 umur 4 bulan
Keterangan: Angka-angka pada lajur yang diikuti oleh huruf kecil yang tidak sama berbeda nyata menurut uji BNJ pada taraf 5%
Gusmaini.,  S.A.  Aziz,  A.  Munif,  D.  Sopandie,  N. Bermawie.  2013.  Potensi  bakteri  endofit  dalam upaya  meningkatkan  pertumbuhan,  produksi  dan kandungan andrografolid pada tanaman sambiloto. J. Littri. 19:167-177.
Harni, R., Supraman, Supriadi. 2014. Eficacy of endophytic bacteria  in  reducing  plant  parasitic  nematode Pratylenchus brachyurus .  Indonesian  J. Agric.  Sci. 15:29-34.
Hutabarat, R., F. Puspita, M. A. Khoiri. 2014. Uji formulasi pupuk organik cair berbahan aktif Bacillus sp. pada pembibitan  utama  kelapa  sawit  ( Elaeis  guineensis Jacq.). J. Online Mahasiswa Faperta Univ. Riau. 1:1-
8.
Herlina, L., K.K. Pukan, D. Mustikaningtyas. 2016. Kajian bakteri  endofit  penghasil  IAA  ( Indole  Acetic  Acid ) untuk  pertumbuhan  tanaman.  J.  Sainteknol.14:51- 58.
Kholida, F.T., E. Zulaika. 2015. Potensi Azotobacter sebagai penghasil  hormon  IAA  ( Indole-3-Acetic  Acid ).  J. Sains Seni ITS. 4:2337-3520.
Munif,  A.,  S.  Wiyono,  Suwarno.  2012.  Isolasi  bakteri endofit asal padi gogo dan potensinya sebagai agens biokontrol dan pemacu pertumbuhan. J. Fitopatologi Indonesia 8:57-64.
Puspita,  F.,  D.  Zul, A.  Khoiri.  2013.  Potensi Bacillus sp. asal  rizosfer  Giam  Siak  Kecil  Bukit  Batu  sebagai rhizobacteria  pemacu  pertumbuhan  dan  antifungsi pada pembibitan kelapa sawit. J. Online Mahasiswa Faperta Univ. Riau. 2014:1-2.
Putri, D., A. Munif, K. H. Mutaqin. 2016. Lama penyimpanan, karakterisasi  fisiologi  dan  viabilitas  bakteri  endofit Bacillus sp.  dalam  formula  tepung.  J.  Fitopatologi Indonesia 12:19-26.
Saylendra, A., D. Firnia. 2013. Bacillus sp. dan Pseudomonas sp.  asal  endofit  akar  jagung  ( Zea mays L.)  yang berpotensi sebagai pemacu pertumbuhan tanaman. J. Ilmu Pertanian dan Perikanan. 2:19-27.
Simarmata, A.M., B. Tjahjono, F. Puspita. 2012. Uji beberapa konsentrasi Bacillus sp. lokal Riau dan beberapa hasil persilangan kelapa sawit terhadap jamur Ganoderma boninense di  pembibitan.  J.  Teknobiologi  Ilmiah Sains  Terapan  Lembaga  Penelitian  Univ.  Riau. 3:159-165.
Silitonga, D.M., N. Priyani, I. Nurwahyuni. 2013.  Isolasi dan uji potensi isolat bakteri pelarut fosfat dan bakteri penghasil hormon IAA (Indole Acetic Acid) terhadap pertumbuhan  kedelai  ( Glycine  max L.)  pada  tanah kuning. J. Saintia Biol. 1:35-41.
Sukarti, S., D. Zul, F. Puspita. 2013. Uji potensi bakteri pelarut fosfat  asal  Bukit  Batu  Riau  dalam  menghasilkan hormon auksin sebagai pemacu pertumbuhan jagung ( Zea  mays L.).  Jurnal  Online  Mahasiswa  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau Pekanbaru. 2:1-8.
Sukmadewi,  D.K.T.,  Suharjono,  S.  Antonius.  2015.  Uji potensi  bakteri  penghasil  hormon  IAA  ( Indole Acetic Acid ) dari tanah rhizosfer cengkeh ( Syzigium aromaticum L.). J. Biotropika 3:91-94.
Tanjung,  S.R.,  U.  Hasanah,  Idramsa.  2015.  Karakterisasi bakteri  endofit  penghasil  fitohormon  IAA  ( Indole Acetic  Acid )  dari  kulit  batang  tumbuhan  raru ( Cotylelobium melanoxylon ). J. Biosains. 1:49-55.
Tinendung, R., F. Puspita, S. Yoseva. 2014. Uji formulasi Bacillus sp.  sebagai  pemacu  pertumbuhan  tanaman padi sawah ( Oryza sativa L.). J. Online Mahasiswa Faperta Univ. Riau. 1:1-15.