PEWARISAN POLA WARNA IKAN KLON BIAK, Amphiprion percula

## HEREDITY OF BAND PATTERN IN CLOWN FISH, Amphiprion percula
Sari B.M. Sembiring 1* , K.M. Setiawati 1 , J.H. Hutapea 1 , dan W. Subamia 2
1 Institute for Mariculture Research and Development, Bali
* e-mail: moriasembiring@yahoo.co.id
2 Research and Development Institute for Ornamental Fish Culture, Depok

## ABSTRACT
One of marine ornamental fishes which was succeeded on its breeding, from eggs production to larval and juvenile rearing at Institute for Mariculture Research and Development, Gondol was Clown  fish,  Amphiprion  percula.  In  local  name,  the  fish  also  known  as  Biak  Clown  fish.  In culture development, the fish frequently faced the problem on color pattern which was not meet with  export  demand.  The  fish  should  be  bright  orange  and  thin  black  stripe  pattern.  In  this experiment, analysis was conducted to understand the juvenile color variation produced from 3 pairs broodstock. Larvae and juvenile were reared in the indoor hatchery for 2-3 months,then reared at outdoor tanks for other 3-4 months. Amplification of broodstock and juvenile genoms using specific primer for pigment sequens. Parameters observed on juvenile were classified into three  color  pattern  classes  i.e.,  class  I  (thick  black  stripe  and  disperse),  class  II(thick  black stripe), and class III (thin black stripe). Numbers of juvenile analyzed from its pair broodstock and each class were 2-3 fishes. Color perform similarity coefficient was analyzed  molecularly using  sequencing.  Sequencing  process  followed:  DNA  isolation,  amplification using      gen  Tyr primer,  purification  PCR  product  and  finally  DNA  sequencing.  Sequencing  analyses  of  PCR product, after alignment  showed that similarity coefficient of color pattern of class I, II, and III between broodstock and juvenile was only 50 %, and phenotipically, color pattern appeared on juvenile  were  different  than  its  broodstock.  The  changes  of  color  perform  on  Clown  fish  also affected by interaction between genotype and environment and feed pigment concentration.
Keywords: heredity, color pattern, Tyr gene, clown fish, A. percula

## ABSTRAK
Dalam pengembangan budidaya ikan klon hitam, Amphiprion percula , sering ditemui kesulitan dalam  memperoleh  benih  dengan  kualitas  yang  memenuhi  kriteria  ekspor,  yaitu  warna  benih yang  oranye  cerah dan  setrip  hitam  yang  tebal.    Dalam  penelitian  ini  analisis  dilakukan  untuk mengevaluasi  variasi  warna  benih  secara  fenotipe  serta  koefisien  kemiripan  genotype  dengan gen  Tyr  dari  tiga  pasang  induk.  Selanjutnya  larva  dan  benih  yang  dihasilkan  dipelihara  di hatchery indoor selama  2-3  bulan,  kemudian  dilanjutkan  dengan  pemeliharaan  di outdoor selama  3-4  bulan.  Amplifikasi  genom  induk  dan  benih  menggunakan  primer  yang  mengkode sekuen  gen  Tyr  yang  mengontrol  pengontrol  pigmen  gen  Tyr.  Variabel  yang  diamati  meliputi performa  warna  klas  I  (hitam  tebal  melebar),  klas  II  (bergaris  hitam  tebal),  dan  kelas  III (bergaris  hitam  tipis).  Jumlah  benih  yang  dianalisis  dari  setiap  klas  sebanyak  2-3  ekor  untuk setiap  pasang  induk.  Koefisien  kemiripan  performa  warna  dengan  gen  Tyr  dianalisis  secara molekuler  menggunakan  sekuensing.  Hasil  sekuensing  menunjukkan  nilai  koefisien  kemiripan performa    pola  warna  klas  I;  II  dan  III  antara  induk    dan  benih  hanya  50  persen,  akibatnya secara fenotipe pola warna yang muncul pada benih berbeda dari induknya.
Kata kunci: pewarisan, pola warna, gen Tyr, ikan klon hitam, A. percula

## I.  PENDAHULUAN
Ikan  klon  Biak  atau  klon  hitam ( Amphiprion percula ) adalah ikan hias air laut  yang  memiliki  daya  tarik  pada warnanya.  Warna  merupakan  salah  satu parameter  dalam  penentuan  nilai  ikan hias.  Semakin  cerah  warna  suatu  jenis ikan,  maka  semakin  tinggi  nilainya.  Ikan dengan  nama  dagang true  clown  fish ini memiliki  warna    kuning  oranye  dengan  3 ban  putih  pada  bagian  kepala,  badan  dan pangkal  ekor  dengan  ciri  khusus  terdapat warna  hitam  di  sepanjang  bagian  sisi badan  (Allen,  2000;  Poernomo et  al ., 2003).  Namun perkembangan pola warna hingga muncul 3 ban putih secara lengkap dengan  warna  hitam  di  sepanjang  sisi badan masih tidak stabil.
Pembenihan  ikan  klon  Biak  atau klon  hitam  telah  dilakukan  pada  tahun 2010.  Permasalahan yang dihadapi dalam pengembangan  budidaya  ikan  klon  biak ini  adalah  sulitnya  memperoleh  benih dengan  kualitas  yang  memenuhi  kriteria ekspor  dengan  warna  benih  yang  oranye cerah  dan  setrip  hitam  yang  tebal.    Di samping  itu benih yang dihasilkan  dari 1 pasang induk masih sangat bervariasi.
Sebagaimana telah diketahui bahwa  pola  pigmen  merupakan  karakter fenotipe yang selalu diturunkan dari induk pada  turunannya.  Selain  faktor  gen sebagai pengontrol pola pigmen, lingkungan  juga  mempengaruhi  fisiologi sel  pigmen  yang  mendorong  perubahan formasi  pola  pigmen  yang  muncul.  Salah satu  gen  yang  diketahui  bertanggung jawab  dalam  mengkode  pola  pigmen  dari ikan  adalah  gen tyrosinase (Tyr)  (Haffter et  al .,  1996;  Inagaki et  al .,  1998; Kusumawati,  2011).  Secara  spesifik  gen tyrosinase bertanggung  jawab  terhadap sintesis  enzim  tirosinase  yang  merupakan kunci utama untuk mensintesis
melanocyte dan mutasi pada gen tyrosinase memberikan  dampak defisiensi
pigmentasi  pada  retina  dan  kulit  embrio ikan rainbow  trout (Boonanuntanasarn et al ., 2004).
Fenomena  perubahan  warna  ini sangat  menarik  untuk  dikaji  lebih  lanjut mengenai penyebab terjadinya degeneratif benih urunan pertama (F1). Oleh sebab itu penelitian ini dilakukan untuk mengetahui variasi  warna  benih  yang  dihasikan  oleh beberapa  pasang  induk  secara  fenotipe dan juga mengetahui persentase kemiripan/perbedaan  antara  benih  dan induk  dengan  menggunakan  primer  yang mengkode  sekuen  gen  pengontrol  pigmen dalam hal ini gen tyrosinase .

## II.  METODOLOGI

## 2.1.  Pemeliharaan Induk, Larva dan Benih
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah induk dan benih ikan hias klon Biak  yang berasal  dari  hasil  pembenihan  secara terkontrol  di  Balai  Besar  Riset  Perikanan Budidaya  Laut  Gondol,  Bali.    Penelitian ini  menggunakan  3  pasang  induk  yang berasal  dari  hasil  penangkapan  di  alam dengan  diberi  kode  IA1;  IA3  dan  IA7. Benih  yang  dihasilkan  (F1)  dari  setiap pasang induk  dikelompokkan berdasarkan pola  warna  garis  hitam.  Larva  dan  benih dipelihara  di  hatchery indoor selama  3 bulan,  kemudian  dilanjutkan  dengan pemeliharaan  di outdoor selama  3-4 bulan.  Setelah  6-7  bulan  pemeliharaan, selanjutnya  dilakukan  pengamatan  warna secara fenotipe. Variabel pola warna benih yang diamati  sebagai  berikut (Gambar 2): pola  warna  klas  I  (hitam  tebal  melebar), klas  II  (bergaris  hitam  tebal),  klas  III (bergaris hitam tipis). Jumlah sampel yang dianalis  untuk  mengetahui  persentase kemiripan/perbedaan  antara  benih  dan induk  sebanyak  2  -  3  ekor  benih  dari masing-masing pola warna  kelas I; II dan III.
Gambar 1. Pola warna induk ikan klon biak dari alam.
Gambar 2.   Performawarna  benih  klas  I  (hitam  tebal  melebar  terutama  diantara  strip putih di kepala dan badan dan atau antara strip putih di badan dan ekor) (A), klas  II  (hanya  bergaris  hitam  tebal)  (B)  dan    klas  III  (bergaris  hitam  tipis) (C).
2.2.  Isolasi DNA DNA  ikan  diisolasi  dari  bagian sirip dan atau daging dengan menggunakan Nucleospin tissue kit
(Macherey-Nagel) .  Tahapan  isolasi  DNA sesuai  dengan  standar  protokol  dari produk tersebut.

## 2.3. Amplifikasi PCR Menggunakan
Primer Gen Tyrosinase (Tyr) DNA ikan diamplifikasi
menggunakan  primer  gen Tyr yang mengkode  pola  pigmen  (Sugie et  al ., 2004).  Hasil  produk  PCR  (amplikon) dielektroforesis  menggunakan  gel  agarosa
2%  dalam  0,5  x  SB buffer ,  yang selanjutnya diamati dengan UV transilluminator  serta  dicetak  dengan gel doc camera .

## 2.4.  Purifikasi Hasil PCR
Sebelum  disequensing,  hasil  PCR terlebih dahulu dipurifikasi dengan
QIAquick  PCR  Purification Kit  (Qiagen). Proses purifikasi mengikuti standar protokol  dari  kit  tersebut.  Larutan  hasil purifikasi  dikonfirmasi  terlebih  dahulu dengan  elektroforesis  menggunakan    gel agarosa 2% dalam 0,5x SB buffer.
A C B

## 2.5.  Sekuensing
Sekuensing  fragmen  DNA  hasil amplifikasi  PCR  dilakukan  di  Lembaga UIN,  Jogjkarta  menggunakan  prinsip chain  terminator ddNTPs  secara  otomatis dengan mesin ABI Prism Sequencer.

## 2.6.  Analis Data
Data  hasil  sequencing  terlebih dahulu  dilakukan  alligment  menggunakan program ClustalW dari situs EBI: hhtp://www.ebi.ac.uk/egi-in/CLUSTALW
(Higgins et  al., 1994).  Selanjutnya  hasil alligment dianalisis menggunakan beberapa  software  yaitu:    Phydit  untuk analisis similarity dan perbedaan nukelotida,  Phylip  untuk  mengkonstruksi filogenetik  tree  dan  treeview32    program untuk visualisasi filogenetik tree.

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN
Benih  yang  dihasilkan  dari  3 pasang  induk  yang  dipijahkan,  ternyata semua  mempunyai  pola  warna  yang berbeda  (Tabel  1).    Berdasarkan  Tabel  1
di  atas,  terlihat  bahwa  benih  yang dihasilkan hampir 50% mempunyai performa  warna  pada  klas  II,  yaitu  hanya bergaris hitam tebal tanpa adanya bayangan  warna  hitam  yang  terletak  di belakang mata. Sementara pola warna klas
I  hanya  berkisar  antara  4,5  -  37,3%.  Jika dilihat dari pola warna induk yang hampir sama  antara  induk  jantan  dan  betina, diharapkan  seharusnya  turunannya  lebih dari  50  persen  berada  pada  warna  klas  I. Namun  demikian  kenyataannya  pola warna  benih  yang  paling  tinggi  muncul pada  klas  II.  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil dari  analisis  similarity  dan  perbedaan nuleotida  (Tabel  2),  ternyata  bahwa jumlah  nukelotida  yang  mengkode  gen Tyr  antara  induk  terhadap  benihnya sebagian besar berbeda. Kisaran perbedaan nukleotida antara induk dengan benihnya sebesar 14  – 29% dari total  133 nukleotida  yang  dianalisis.  Hal  ini  yang menyebabkan  adanya  perbedaan  pola warna  antara  induk  dengan  anakannya pada ikan klon biak.
Tabel 1.  Persentase benih berdasarkan performan warna klas (I, II, III) dari hasil pemijahan 3 pasang induk ikan klon Biak ( A. percula ). Induk Persentase benih (%) I
II III 1A1 4.5 62.2 33.3 1A3 37.3 39,0 23.7 1A7 14.3 71.4 14.3
Keterangan: klas I : hitam tebal melebar terutama diantara strip putih di kepala dan badan dan atau antara strip putih di badan dan ekor; klas II hanya bergaris hitam tebal dan  klas III bergaris hitam tipis (lihat Gambar 2).

## 3.1.  Amplifikasi Primer Tyr
Regulasi  suatu  pigmen  dikontrol secara genetik yang dikode oleh suatu gen yang memiliki susunan nukleotida interspesifik  yang  sesuai  terhadap  pola pigmen  yang  terbentuk  (Sugie et  al., 2004).  Gen  tyrosinase  merupakan  salah
satu  gen  yang  bertanggung  jawab  dalam mengkode pola pigmen.  Hasil amplifikasi DNA  genom  hasil  isolasi  dengan  primer
Tyr (F)  dan Tyr (R)  ditunjukkan  pada Gambar  3.  Amplifikasi  gen  Tyr  dengan primer Tyr (F)  dan Tyr (R)  menghasilkan sebuah produk yang berukuran 70 bp.
Tabel 2. Hasil analisis similarity gen Tyr antara induk dengan benih ikan klon biak, A. percula menggunakan software Phydit.
Keterangan:  133 nukleotida yang dianalisis, segitiga bawah ke kiri merupakan nilai % similarity/kemiripan,  dan  segitiga  atas  ke  kanan  merupakan  nilai perbedaan jumlah nukleotida
Berdasarkan  pohon  filogenetik yang terbentuk yang berasal dari penjajaran  antara alligment DNA  yang dimiliki  menunjukkan  bahwa  koefisien kemiripan performa warna induk IA1; IA3 dan  IA7  pada  klas  I  berkisar  antara  0.25- 0.64  (25%-64%),  sedangkan  pada  klas  II sebesar  0.23-0.76  (23%-76%)  dan  pada klas  III  antara  0.26-0.65  (26%-65%) (Tabel  3)  dan  (Gambar  4).    Ternyata
berdasarkan  analisis  genetik,  performa kemiripan induk dan benih memang benar diturunkan  dengan  pengaruh  gen  induk jantan dan betina yang hampir sama.   Hal ini  dapat  dilihat  dari    hasil  analisis similarity  (lihat Tabel 2). Sebagai contoh adalah  sampel  dengan  kode  E4-F  yang mempunyai  nilai  kemiripan  terhadap induk  jantan  sebesar  58,7%  dan  induk betina 53,3%.
Gambar 3.   Performasi pita DNA melalui amplifikasi PCR dengan menggunakan primer Tyr pada benih dan induk  ikan klon biak ( Amphiprion percula ) (M; maker ultra low range ; 1-16 sampel ikan klon biak).
Gambar 4. Dendrogram kemiripan genetic populasi induk IA1 dan benih ikan hias klon biak ( Amphiprion percula ).
50  bp
M   1    2    3    4   5    6   7    8    9   10  11  12  13 14 15 16 10  bp 70  bp
Tabel 3.   Persentase kemiripan performan warna antara benih dan induk ikan klon biak ( A. percula) dari hasil analisa sequencing.
Kode induk Pola warna Kode sampel Koefisien kesamaan performan warna Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina IA1 I D-1 0.420 0.478 - - - - E-1 0.333 0.478 - - - - II C-2 0.234 0.432 - - - - B-3 0.641 0.395 - - - - III D-4 0.412 0.500 - - - - E-4 0.587 0.533 - - - - IA3 I A-5 - - 0.579 0.571 - - B-5 - - 0.502 0.443 - - D-5 - - 0.250 0.355 - - II A-6 - - 0.465 0.000 - - B-6 - - 0.489 0.514 - - C-6 - - 0.306 0.400 - - III A-7 - - 0.444 0.355 - - D-7 - - 0.411 0.484 - - E-7 - - 0.263 0.667 - - IA7 I 2-8 - - - - 0.550 0.504 4-8 - - - - 0.610 0.639 5-8 - - - - 0.518 0.359 II 2-9 - - - - 0.611 0.600 3-9 - - - - 0.756 0.500 4-9 - - - - 0.556 0.500 III 1-10 - - - - 0.488 0.432 2-10 - - - - 0.645 0.500 3-10 - - - - 0.651 0.500
Berdasarkan  Tabel  2  dan  Gambar 4,  terlihat  bahwa  koefisien  kemiripan performan  warna  menunjukkan  nilai  rata- rata  50  persen,  ini  berarti  bahwa  pola warna  dari  benih  tersebut  sebenarnya hanya  mempunyai  kemiripan  50  persen dengan  induknya,  akibatnya    secara fenotipe  pola  warna  yang  muncul  pada benih  berbeda  dari  induknya.  Seperti terlihat  dari  Tabel  2,  salah  contoh  sampel E4-F dari hasil analisis similarity ternyata ada  perbedaan  nukleotida  sebanyak  19 nukleotida  dari  46  nukleotida  yang mengkode  gen  Tyr  pada  induk  jantan, demikian  juga  pada  induk  betina  ada perbedaan sebanyak 21 nukleotida dari 45 nukelotida.    Adanya  perbedaan  jumlah nukleotida  antara  induk  dan  anaknya, diduga akibat terjadinya proses
rekombinasi  selama  meiosis  sebagai pindah silang kromosom antara kromosom yang  berpasangan  dan  ini  dikenal  juga sebagai  hukum  segregasi.  Proses  ini menyebabkan  benih  memiliki  kombinasi gen  yang  berbeda  dari  induknya,  dan dapat  menghasilkan  alel  kimerik  yang baru.    Pada  populasi  seksual,  gen direkombinasi pada setiap generasi, menghasilkan  genotipe  baru.  Kebanyakan keturunan spesies seksual mewarisi separuh  gennya  dari  induk  betina  dan separuhnya lagi dari induk jantan, susunan genetiknya  dengan  demikian  berbeda dengan  kedua  induknya  atau  dengan individu  yang  lain  di  dalam  populasi (Indrawan et al ., 2007).
Melalui pendekatan secara genetik, suatu  karakter  fenotipe  akan  selalu
diturunkan  oleh  induk  pada  turunannya, namun  kenyataannya  terdapat  berbagai macam  hal  yang  menyebabkan  adanya penyimpangan  karakter  fenotipe,  hal  ini yang  membuat  adanya  keanekaragaman genetik dari suatu populasi.
Penyimpangan  karakter  fenotipe  ini  dapat terjadi  karena  adanya  interaksi  dari beberapa  faktor  seperti  mutasi,  migrasi, rekombinasi, seleksi, dan hanyutan genetik  ( genetic  drift ).  Mutasi,  migrasi, dan  rekombinasi  gen  akan  memperkaya keragaman dalam populasi alami, sedangkan  seleksi  dan  hanyutan  genetik cenderung  mengurangi  variasi  (Ford- Lloyd  dan  Jackson,  1986).  Suryanto (2003),  Elrod  dan  Stansfield  (2007)  juga mengemukakan bahwa keragaman genetik dalam sebuah populasi organisme terutama  dihasilkan  oleh  tiga  mekanisme yaitu  mutasi,  perpasangan  alel  secara bebas  atau  rekombinasi,  dan  migrasi  gen dari satu tempat ketempat lain.
Selain faktor gen sebagai pengontrol  pola  pigmen,  pakan  dan lingkungan  juga  mempengaruhi  fisiologi sel  pigmen  yang  mendorong  perubahan formasi  pola  pigmen  yang  muncul. Seperti  yang  dikemukan  oleh  Hansen (2011), bahwa pemberian naupli kopepoda  memberikan  pigmen  warna yang  lebih  kuning  pada  larva  ikan  kod daripada perlakuan (kopepoda dan pengkayaan  rotifer),  pengkayaan  rotifer, dan  rotifer Chlorella .  Demikian  juga Menurut  Setiawati et  al .,  2011,  kopepoda merupakan  pakan  alami  yang  umumnya ditemukan  pada  ikan  klown  asli  yang dipelihara  di  karamba  jaring  apung. Selanjutnya  Gouveia et  al .,  (2003) menyatakan  bahwa  ekspresi  pigmentasi dari  beta-karoten  yang  terkandung  dalam daging atau kulit ikan merupakan komponen  biologi  pembentuk  warna merah pada ikan. Beberapa hasil penelitian  yang  menunjukkan  bahwa factor lingkungan juga berpengaruh terhadap pigmentasi pada ikan diantaranya
dari  hasil  penelitian  Kusumawati  (2011), yang  menyatakan  adanya  korelasi  positif terhadap  migrasi  pola  pigmen  ikan  badut pada  eksperimen  pemeliharaan  dengan dua  kondisi  yang  berbeda  yaitu outdoor dan indoor .  Selanjutnya  Said et  al., (2005),  juga  menyatakan  bahwa  selain faktor makanan, lingkungan pemeliharaan dapat  mempengaruhi  penampakan  warna pada  ikan.  Ikan  yang  dipelihara  pada kondisi  terang  akan  memberikan  reaksi warna  yang  berbeda  dengan  ikan  yang dipelihara  di  tempat  gelap  karena  adanya reaksi melanosom yang  mengandung pigmen melanofor terhadap  rangsangan cahaya  yang  ada.  Oleh  karena  itu  pola warna yang ada pada benih ikan klon biak selain  dipengaruhi  oleh  faktor  genetik, juga  dipengaruhi  oleh  faktor  pakan, lingkungan atau adanya interaksi genotipe dengan lingkungan.

## IV.  KESIMPULAN
Sepasang primer
Tyr yang mengkode  sekuen  gen  pengontrol  pigmen dapat  digunakan  untuk  analis  penurunan warna secara genetik pada ikan klon biak.
Koefisien  kemiripan  warna  antara induk  dan  benih  pada  ikan  hias  klon  biak secara  genotipe  menunjukkan  separuh gennya  dipengaruhi  induk  betina  dan separuhnya lagi dari induk jantan.

## DAFTAR PUSTAKA
Allen,  G.  2000.  Marine  fishes  of  south east  Asia.  Periplus  Edition  Ltd. Australia. 292p.
Boonanuntanasam,  S.,  G.  Yoshizaki,  K.
Iwai,  and  T.  Takeuchi.  2004. Molecular cloning, gene expression  in  albino  mutants  and gene knockdown studies of tyrosinase mRNA in tainbow trout.
Pigment  Cell  Research ,  17:413-
421.
Elrod,  S.  dan  W.  Stansfield.  2007. Genetika. (Damaring, T.W. Penterjemah).  Penerbit  Erlangga Jakarta. 417p.
Hansen,  M.H.    2011.    Effects  of  feeding with  copepod  nauplii  ( Acartia tonsa ) compared to rotifers ( Brachionus  ibericus ,  Cayman)  on quality  parameters  in  Atlantic  cod ( Gadus morhua ) larvae. Norwegian  University  of  Science and  Technology.  Department  of Biology. 91p.
Kusumawati,  D.  2011.  Kajian  gen
pengkode  pola  pigmen  dan  profil protein  pada  ikan  badut  hitam ( Amphiprion percula ). Tesis Program  Studi  Pasca  Sarjana Jurusan Biologi. Universitas Brawijaya, Malang. 76hlm. Ford-Lloyd,  B.  and  Jackson.  1986.  Plant genetic  resources  and  introduction to  their  conservation  and  use.
Edward Arnold Pty. Ltd. Australia.
152p. Gouveia,  L.,  P.  Rema,  O.  Pereira,  dan  J. Empis.  2003.  Coloring  ornamental fish ( Cyprinus carpio and
Carassius  auratus )  with  micro- algal  biomass. Aquaculture  Nutri- tion, 9: 123–129.
Haffter,  P.,  J.  Odenthal,  M.C.  Mullins,  S. Lin, M.J. Farrell, E. Vogelsang, F. Haas,  M.  Brand,  F.J.M.V.  Eden, M.F.  Seiki,  M.  Granato,  M. Hammerschmidt,  C.P.  Heisenberg, Y.J. Jiang, D.A. Kane, R.N. Kelsh,
N.  Hopskin,  and  C.N.  Volhard. 1996. Mutations affecting pigmentation  and  shape  of  the adult Zebrafish. Development
Genes  and  Evaluation, 206:260- 276.
Inagaki,  H.,  A.  Koga,  Y.  Bessho  and  H.
Hori.  1998  The  tyrosinase  gene from Medakafish:
transgenic expression  rescues  albino  muta-
tion. Pigment  Cell  Research , 11:283-290.
Indrawan,  M.,  R.B.  Primack  dan  J. Supriatna.  2007.  Biologi  konser- vasi.  Yayasan  Obor  Indonesia, Jakarta. 345hlm.
Poernomo, A., S. Mardlijah, M.L. Linting,
E.M.  Amin,  and  Widjopriono.
2003.  Ikan  hias  laut  Indonesia. Penebar Swadaya. 182hlm. Said, S.D., W.D. Supyawati, dan
Noortiningsih. 2005. Pengaruh jenis  pakan  dan  kondisi  cahaya terhadap  penampilan  warna  ikan pelangi  merah, Glossolepis  incisus jantan. J.  Iktiologi  Indonesia,
5(2):61-67.
Setiawati,  K.M.,  Gunawan,  H.T.,  Yudha,
J.H.,  Hutapea,  dan  K.,  Suarsana.
2011.    Pengaruh  shelter  pada pemeliharaan benih ikan klon biak ( Amphiprion  percula )    di  karamba jaring apung. Forum Inovasi Teknologi Akuakultur, 2:79-85.
Storebaken,  T.  and  H.K.  No.  1992.
Pigmentation  of  rainbow  trout. Aquaculture, 100:209-229.
Sugie, A., Y. Terai, R. Ota, and N. Okada. 2004.  The  evaluation  of  genes  for pigmentations  in  African  cichild fishes. Gene , 343:337-346.
Suryanto,  D.  2003.  Melihat  keanekara- gaman  organisme  melalui  bebera- pa  teknik  genetika  molecular.
Program Studi Bioteknologi,
Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas
Sumatera  Utara.  http://library.usu. ac.id/download/fmipa/biologi- dwiss.pdf.  [Diakses,  20  Agustus 2013]
Diterima : 15 November 2013 Direvisi  : 3 Desember 2013 Sisetujui : 18 Desember 2013