How to cite: Zaid Al Gifari (2022) Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Penghasil Enzim Fitase sebagai Kandidat Probiotik Untuk Ternak Unggas, Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia, 7 (6).
E-ISSN: 2548-1398 Published by: Ridwan Institute
Syntax  Literate:  Jurnal  Ilmiah  Indonesia  p–ISSN:  2541-0849 e-ISSN: 2548-1398 Vol. 7, No. 6, Juni 2022
ISOLASI  DAN  IDENTIFIKASI  BAKTERI  ASAM  LAKTAT  PENGHASIL ENZIM  FITASE  SEBAGAI  KANDIDAT  PROBIOTIK  UNTUK  TERNAK UNGGAS
Zaid Al Gifari, Khairil Anwar, Anwar Rosyidi, Muhamad Ali, Muhamad Amin Universitas Mataram, Indonesia Email: zaidalgifari@gmail.com, chaerilanwar76@gmail.com, anwarrosyidi@gmail.com, m_ali@unram.ac.id, muhamadamin@gmail.com

## Abstrak
Probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang bersifat non-patogenik dan non- toksik  yang  menguntungkan  bagi  inang.  Bakteri  asam  laktat  (BAL)  merupakan bakteri  probiotik  yang  digunakan  secara  luas  pada  ternak  unggas  dan  memiliki keunggulan dalam menghasilkan enzim ekstraseluler. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan  isolasi,  identifikasi  dan  karakterisasi  bakteri  asam  laktat  penghasil enzim  fitase  yang  bersumber  dari  saluran  pencernaan  entok  (Cairina  moschata). Berdasarkan  produksi  enzim  fitase,  5  isolat  bakteri  yaitu  AL01,  RIL07,  FA16, AN32,  dan  NS05  teridentifikasi  menghasilkan  enzim  fitase  yang  ditandai  dengan dengan terbentuknya clearing zone .
Kata kunci : Phytase, bacteria, probiotics.

## Abstract
Probiotics  are  living  microorganisms  that  are  non-pathogenic  and  non-toxic  that are beneficial to the host. Lactic acid bacteria (LAB) is a probiotic bacteria that is widely used in poultry and has the advantage of producing extracellular enzymes. This  study  aims  to  isolate,  identify  and  characterize  lactic  acid  bacteria  that produce  phytase  enzymes  sourced  from  the  digestive  tract  of  wild  goose  (Cairina moschata).  Based  on  the  production  of  phytase  enzymes,  5  bacterial  isolates namely  AL01,  RIL07,  FA16,  AN32,  and  NS05  were  identified  to  produce  phytase enzymes which were characterized by the formation of a clearing zone.

## Keywords: Phytase, bacteria, probiotics

## Pendahuluan
Peternakan  unggas  ialah  kegiatan  yang  bertujuan  untuk  menghasilkan  produk ternak  berupa  telur  dan  daging.  Tantangan  global  dalam  budidaya  perunggasan  di Indonesia ialah lemahnya kinerja penyediaan bahan baku pakan, yang merupakan 60-70 persen  dari  biaya  produksi  karena  sebagian  besar  masih  sangat  tergantung  dari  impor. Sehingga  pengembangan  industri  peternakan  unggas  diarahkan  untuk  optimalisasi penggunaan bahan lokal sebagai pakan ternak unggas. Penggunaan bahan lokal sebagai pakan  ternak  unggas  merupakan  upaya  untuk  mengurangi  impor  bahan  baku  dan menurunkan biaya produksi dalam indutsri perunggasan yang berasal dari pakan. Bahan
pakan lokal diketahui memiliki ketersediaan yang melimpah karena mudah diperoleh di dalam  negeri.  Jenis  bahan  lokal  dapat  berasal  dari  tanaman,  hewan,  dan  limbah (pertanian,  peternakan,  perkebuanan  dan  industri  pengolahannya).  Hal  yang  perlu diperhatikan  dalam  pemilihan  bahan  baku  lokal  sebagai  pakan  ternak,  yaitu:  tidak bersaing  dengan  kebutuhan  manusia,  mudah  diperoleh,  dan  dapat  diproduksi  secara kontinyu.
Kendala  yang  sering  ditemukan  dalam  penggunaan  bahan  lokal  yaitu  tingginya kandungan serat dan adanya zat antinutrisi pada bahan pakan lokal. Senyawa antinutrisi berupa  asam  fitat  banyak  terkandung  pada  biji-bijian  sumber  pakan  unggas (Yanuartono,  Nururrozi,  &  Indarjulianto,  2017).  Asam  fitat  ialah  salah  satu  zat antinutrisi yang terdapat dalam pakan ternak. Asam fitat akan menghambat penyerapan nutrisi  bagi  ternak  unggas.  Adanya  asam  fitat  memiliki  efek  antinutrisi  yang  kuat,  hal ini  didasarkan  pada  struktur  molekul  asam  fitat  yang  mampu  berikatan  dengan  kation divalent  (P,  K,  Ca2+,  Cu2+,  Fe2+,  Mn2+,  Zn2+),  protein,  dan  karbohidrat  (Kerovuo, von Weymarn, Povelainen, Auer, & Miasnikov, 2000) (Wang et al., 2014) (Yanuartono et  al.,  2017).  Sehingga  mineral  tersebut  menjadi  tidak  larut  dan  menyebabkan  logam kation tersebut tidak tersedia sebagai faktor nutrisi (Bohn, Meyer, & Rasmussen, 2008).
Peningkatan  nilai  nutrisi  pakan  dapat  dilakukan  dengan  cara  penambahan  enzim fitase yang berasal dari mikroorganisme. Nielsen et al., (1997) menyatakan bahwa fitase asal  mikroba  aktif  (Esceria  coli  cellular,  Aspergillus)  di  dalam  saluran  pencernaan mampu  memperbaiki  kecernaan  mineral  (P,  K,  Ca2+,  Cu2+,  Fe2+,  Mn2+,  Zn2+)  dan memperbaiki mineralisasi tulang serta mereduksi kandungan P dalam feses pada broiler (Shin,  Ogburn,  Varban,  Gilbert,  &  Burd,  2001).  Mikroba  yang  bermanfaat  ini  dapat dimanfaatkan  sebagai  probiotik.  Probiotik  merupakan  organisme  hidup  yang  bersifat non-patogenik dan menguntungkan bagi inangnya (Hotel & Cordoba, 2001).
Mikroorganisme  yang  dijadikan  probiotik  didapatkan  melalui  jalur  isolasi, identifikasi  dan  karakterisasi.  Tujuan  identifikasi  adalah  untuk  penentuan  atau penetapan  nama  suatu  mahluk  hidup  (Bin  Masalam  et  al.,  2018).  Pada  penelitian  ini dilakukan  uji  fitase  pada  isolat  bakteri  AL01,  RIL07,  FA16,  AN32  dan  NS05  pada medium  LB  yang  mengandung  sodium  fitat.  Tujuan  dilakukan  penelitian  ini  untuk mengetahui  kemampuan  bakteri  kandidat  probiotik  dalam  memecah  asam  fitat  dan menghasilkan enzim fitase.

## Metode Penelitian
Pembuatan  media  LB  cair  dilakukan  dengan  menimbang tryptone  powder (1%), NaCl (1%), yeast extract (0,5%) dari jumlah volume aquades yang digunakan kemudian dihomogenkan menggunakan hot  plate  stirrer dan  diukur  pH  (7,2)  (El-Toukhy, Youssef, & Mikhail, 2013). Media dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 5 ml kemudian disterilisasi menggunakan autoclave.
Media yang digunakan  dalam melakukan uji fitase yaitu 1,5 g glukosa, 0,375 g NH 4 NO 3 , 0,0375 g MgSO 4 :7H 2 O, 0,0375 g KCl, 0,15 g CaCl2:H2O, 0,3 g Sodium Fitat dan 1,125 g Agar dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang berisi 75 ml aquades (pH 5,5).
Kemudian dipanaskan sambil dihomogenkan menggunakan hot plate stirrer . Sterilisasi dilakukan dengan autoclave selama 15 menit pada suhu 121°C dengan tekanan 15 lbs. Setelah  media  disterilkan,  media  dituang  pada  cawan  petri  steril  dan  ditunggu membeku.

## Hasil dan Pembahasan Karakterisasi bakteri
Hasil peremajaan isolate bakteri dengan kode isolate AL01, RIL07, FA16, AN32, dan  NS05  ( Tabel  1 )  diamati  secara  makroskopis.  Karakterisasi  morfologi  berguna untuk  mengetahui  bentuk  koloni,  warna  koloni,  tepi  koloni  dan  elevasi  koloni  bakteri yang  dikultur.  Perbedaan  makroskopis  dapat  disebabkan  karena  perbedaan  media tumbuh  yang  digunakan.  Perbedaan  makroskopis  ini  dapat  dijadikan  patokan  awal dalam  proses  pemurnian  bakteri.  Berdasarkan  hasil  pengamatan  morfologi  koloni didapatkan bentuk bulat (100%). Warna koloni atau pigmentasi putih (60%) dan krem (40%).  Tepi  koloni  ada  yang  rata  (80%)  dan  bergerigi  (20%).  Elevasi  berbentuk umbonate (20%) dan convex (80%).
Hasil penelitian Risna et al. (2020) melaporkan bahwa isolate bakteri asam laktat yang  berasal  dari  saluran  pencernaan  entok  memiliki  karakteristik  morfologi  yang berbentuk  bulat  atau  bergerigi  atau  timbul,  memiliki  warna  putih  sampai  putih  krim, permukaan  koloni  cembung  dan  umbonat,  dan  ukuran  koloni  yang  beragam.  Hasil penelitian  lain  juga  menyatakan  bahwa  bakteri  yang  diisolasi  dari  saluran  pencernaan entok  yaitu  Pediococcus  acidalactici, Lactobacillus  rhamnosus,  Lactobacillus  lactis, Lactobacillus  salivarius,  Streptococcus  lactis, dan Lactobacillus  murinus (Xie  et  al., 2015).
Setelah  melakukan  pengamatan  morfologi  secara  makroskopis,  dilakukan pengamatan  morfologi  secara  mikroskopis  dengan  cara  melakukan  pewarnaan  Gram. Pewarnaan  Gram  bertujuan  untuk  mengetahui  golongan  bakteri.  Berdasarkan pewarnaan  Gram,  karakteristik  bakteri  dibagi  menjadi  2  kelompok  yaitu  bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Bakteri Gram positif akan berwana ungu dan bakteri Gram  negatif  berwarna  merah.  Selain  itu,  pengecatan  Gram  juga  dilakukan  untuk mengetahui  bentuk  sel  bakteri  (Holderman,  de  Queljoe,  &  Rondonuwu,  2017). Berdasarkan Tabel  1 ,  hasil  pengamatan  sel  bakteri  dari  pewarnaan  Gram,  diperoleh isolat  bakteri  AL01,  RIL07,  FA16,  AN32,  dan  NS05  termasuk  Gram  positif  (100%), berbentuk  sel  basil  (batang)  pada  isolate  kode  AL01,  RIL07  FA16,  dan  AN32  (80%). Adapun isolat NS05 memiliki bentuk sel coccus (bulat) (20%).
Berdasarkan  hasil  uji  katalase  menggunakan  larutan  hydrogen  peroksida  3% menunjukkan semua isolate bakteri menunjukkan katalase negatif, ditandai dengan tidak terbentuknya gelembung setelah ditetesi larutan hydrogen peroksida 3%. Enzim katalase mampu  memecah  hydrogen  peroksida  menjadi  molekul  air  (H 2 O)  dan  oksigen  (H 2 O) (Risa,  Harimurti,  &  Widodo,  2020).  Khalid  (2011)  melaporkan  bahwa  sebagian  besar bakteri  asam  laktat  menunjukkan  katalase  negatif.  Bakteri  asam  laktat  merupakan
bakteri  yang  bersifat  anaerob  dan  tidak  dapat  mensintesis cytochromes dan  enzim katalase (Goyal, Dhingra, Bajpai, & Joshi, 2012).
Proses  identifikasi  bakteri  dilanjutkan  dengan  menggunakan  media  gula-gula. Kemampuan  bakteri  membentuk  asam  dari  berbagai  sumber  karbon  dapat  diketahui dengan uji fermentasi gula-gula. Sebanyak 10 jenis gula-gula digunakan pada penelitian ini yaitu glukosa, rhamnose, sukrosa, meltosa, arabinosa, dan laktosa ( Tabel 2 ).

## Tabel 2. Profil Biokimia Bakteri Kandidat Probiotik
Hasil  uji  fermentasi  gula-gula  menunjukkan  5  isolat  bakteri  AL01,  RIL07, FA16, AN32, dan NS05 tidak menghasilkan gas H 2 S, indol negatif dan non-motil. Semua  isolate  bakteri  mampu  memfermentasi  sukrosa  dan  glukosa  menjadi  asam tanpa  menghasilkan  gas  dari  glukosa.  AL01  mampu  memfermentasi  glukosa, sukrosa dan arabinosa, tetapi tidak mampu memfermentasi rhamnosa, meltosa, dan laktosa.  RIL07  mampu  memfermentasi  glukosa,  rhamnose,  sukrosa,  meltosa,  dan arabinosa,  tetapi  tidak  mampu  memfermentasi  laktosa.  FA16  mampu memfermentasi semua jenis gula-gula yang diujikan. AN32 mampu memfermentasi glukosa,  sukrosa,  dan  laktosa,  tetapi  tidak  mampu  memfermentasi  rhamnose, meltosa,  dan  arabinosa.  Sedangkan  NS05  mampu  memfermentasi  glukosa, rhamnose,  sukrosa,  laktosa  dan  arabinosa,  tetapi  tidak  mampu  memfermentasi meltosa.  Profil  biokimia  berkaitan  erat  dengan  proses  metabolisme  pada  tubuh bakteri (TUGAS & ARRACHMAN, n.d.).

## 3.2 Verifikasi Bakteri Penghasil Enzim Fitase
Hasil  uji  fitase  menggunakan  medium  yang  mengandung  sodium  fitat menghasilkan clearing  zone atau zona  bening  di  sekitar  koloni  yang  tumbuh  pada medium ( Gambar 1 ). Hal ini menandakan isolate AL01 (A), RIL07 (B), FA16 (C), AN32 (D), dan NS05 (K) memiliki aktifitas dalam memecah asam fitat.
Gambar 1 Hasil uji fitase bakteri AL01 (A), RIL07 (B), FA16 (C), AN32 (D), dan NS05 (K) pada medium sodium fitat.
NO KODE ISOLAT H2S MOTILITAS GLU GAS DARI

## GLUKOSA
RHAM SUK MAL ARA LAK 1 AL01 − − + − − + − + − 2 RIL07 − − + − + + + + − 3 FA16 − − + − + + + + + 4 AN32 − − + − − + − − + 5 NS05 − − + − + + − + +
Hasil  uji  fitase  ini  menunjukkan  bahwa  bakteri  AN32,  FA16,  dan  NS05 memiliki clearing  zone (zona  bening)  lebih  besar  (d  ;  1,9  cm)  dibandingan  isolat AL01 (d ; 1,5 cm), dan isolat RIL07 (d ; 1,6 cm). Perbedaan diameter pada setiap isolat  disebabkan  karena  perbedaan  kemampuan  isolat  dalam  menghirolisis  asam fitat  menjadi  fosfor.  mikroorganisme  yang  menghasilkan  fitase  ekstraseluler mampu  menghidrolisis  asam  fitat  menjadi  fosfor  sehingga  wilayah  di  sekeliling koloni terlihat jernih. Fosfor yang dihasilkan  dari proses penguraian asam fitat ini larut dalam media sehingga kekeruhan di sekililing koloni hilang.
Enzim  fitase  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  umumnya  dikategorikan  ke  dalam bentuk  beta  protein  (Porto,  Kuniyoshi,  Azevedo,  Vitolo,  &  Oliveira,  2017).  Hasil penelitian  sebelumnya  melaporkan  jenis  bakteri  penghasil  enzim  fitase  ialah Bacillus  subtilis (Shimzu,  1992), Bacillus  coagulans (Lee,  Kwon,  Koo,  Kang,  & Kim,  2006), Bacillus  amyloliquefaciens dan Lactobacillus  sanfranciscensis . Suplementasi  bakteri  penghasil  enzim  fitase  pada  bahan  pakan  ternak  akan membantu  mengoptimalkan  penyerapan  mineral  yang  terkandung  dalam  bahan pakan.  Hasil  penelitian  Adegbehiningbe  (2015)  melaporkan  bahwa  penggunaan beberapa bakteri mampu menurunkan kandungan asam fitat pada campuran sorgum dan kentang dengan kisaran 50,5 – 61,3 %.

## 3.3  Pengukuran  Biomassa  Isolat  Bakteri  Penghasil  Enzim  Fitasi  pada  Berbagai Media
Berdasarkan  hasil  Analisis  Sidik  Ragam  (ANOVA)  menunjukkan  bahwa tidak  ada  perbedaan  yang  nyata  (P>0,05)  terhadap  berat  pelet  isolat  bakteri penghasil  enzim  fitase  pada  media  LB,  limbah  tempe  glukosa  dan  limbah  tempe molasses (Tabel 4).
Tabel  4.  Produksi  Biomassa  Bakteri  Penghasil  Enzim  Fitase  pada  Berbagai Media
Berat Pellet pada Berbagai Media (± STDV) No          Isolat LB (g) Limbah Tempe Glukosa (g) Limbah Tempe Molases (g) 1. AL01 0.05 ± 0.02 0.04 ± 0.01 0.03 ± 0.02 2. RIL07  0.05 ± 0.03 0.04 ±0.01 0.03 ± 0.01 3. FA16 0.05 ± 0.02 0.05 ± 0 0.03 ± 0.01 4. AN32 0.05 ±0.01 0.05 ± 0.03 0.03 ± 0.01 5. NS05 0.03 ± 0.01 0.05 ± 0.02 0.04 ± 0.02
Pada  Tabel  4  menunjukkan  isolat  bakteri  AL01,  RIL07,  FA16,  AN32 memiliki berat pelet rata-rata yang sama pada media LB yaitu 0,05 g/ml dan bakteri NS05  sebesar  0,03  g/ml.  Rata-rata  berat  pelet  isolat  AL01,  RIL07,  FA16,  AN32 dan  NS05  pada  media  limbah tempe  glukosa  hampir  sama  pada media  LB  sekitar 0,04  g/ml  dan  0,05  g/ml.  Pada media  limbah  tempe  molases,  isolat memiliki  rata- rata berat pelet sebesar 0,03 g/ml sedangkan isolat bakteri NS05 sebesar 0,04 g/ml. Pertumbuhan  biomassa  akan  terus  meningkat  sampai  titik  maksimal  seiring
pertambahan  waktu,  dan  akan  menurun  karena  terjadi  penuaan  dan  kematian bakteri .
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka  media  alternatif  limbah  tempe  glukosa  dan molases  layak  untuk  digunakan  sebagai  media  tumbuh  isolat  bakteri  penghasil  enzim fitase karena kandungan yang dimiliki oleh limbah tempe yaitu protein, lemak, air, dan beberapa  mineral  lainnya.  Kandungan  nutrisi  pada  limbah  gula  (molases)  yang  cukup tinggi  dapat  menumbuhkan  bakteri  dengan  baik.  Adanya  kandungan  nutrisi  yang terkandung  di  dalam  masing-masing  media  akan  meningkatkan  kemampuan  tumbuh isolat bakteri penghasil enzim fitase.

## Kesimpulan
Isolat  bakteri  AL01,  RIL07,  FA16,  AN32,  dan  NS05  teridentifikasi  sebagai penghasil  enzim  fitase  yang  ditandai  adanya clearing  zone (zona  bening)  disekitar koloni isolat bakteri yang ditumbukan pada media yang mengandung asam fitat.

## BIBLIOGRAFI
Bin Masalam, Maged S., Bahieldin, Ahmed, Alharbi, Mona G., Al-Masaudi, Saad, Al- Jaouni,  Soad  K.,  Harakeh,  Steve  M.,  &  Al-Hindi,  Rashad  R.  (2018).  Isolation, molecular  characterization  and  probiotic  potential  of  lactic  acid  bacteria  in  Saudi raw  and  fermented  milk. Evidence-Based  Complementary  and  Alternative Medicine , 2018 .
Bohn,  Lisbeth,  Meyer,  Anne  S.,  &  Rasmussen,  Søren.  (2008).  Phytate:  impact  on environment and human nutrition. A challenge for molecular breeding. Journal of Zhejiang University Science B , 9 (3), 165–191.
El-Toukhy,  Nabil  M.  K.,  Youssef,  Amany  S.,  &  Mikhail,  Mariam  G.  M.  (2013). Isolation, purification and characterization of phytase from Bacillus subtilis MJA. African Journal of Biotechnology , 12 (20).
Goyal,  Renuka,  Dhingra,  Harish,  Bajpai,  Pratima,  &  Joshi,  Navneet.  (2012). Characterization of the Lactobacillus isolated from different curd samples. African Journal of Biotechnology , 11 (79), 14448–14452.
Holderman,  Michelle  V,  de  Queljoe,  Edwin,  &  Rondonuwu,  Sendy  B.  (2017). Identifikasi  bakteri  pada  pegangan  eskalator  di  salah  satu  pusat  perbelanjaan  di kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains , 17 (1), 13–18.
Hotel, Amerian Córdoba Park, & Cordoba, A. (2001). Health and nutritional properties of  probiotics  in  food  including  powder  milk  with  live  lactic  acid  bacteria. Prevention , 5 (1), 1–10.
Kerovuo,  Janne,  von  Weymarn,  Niklas, Povelainen,  Mira,  Auer,  Sanna,  &  Miasnikov, Andrei. (2000). A new efficient expression system for Bacillus and its application to production of recombinant phytase. Biotechnology Letters , 22 (16), 1311–1317.
Lee,  Seung  Hun,  Kwon,  Hyuk  Sang,  Koo,  Kyo  Tan,  Kang,  Byung  Hwa,  &  Kim,  Tae Yong.  (2006).  Characterization  of  phytase  from  Bacillus  coagulans  IDCC  1201. Microbiology and Biotechnology Letters , 34 (1), 28–34.
Porto,  Maria  Carolina  W.,  Kuniyoshi,  Tais  Mayumi,  Azevedo,  P.  O.  S.,  Vitolo, Michele, & Oliveira, R. P. Souza. (2017). Pediococcus spp.: An important genus of lactic  acid  bacteria  and  pediocin  producers. Biotechnology  Advances , 35 (3),  361– 374.
Risa,  Yayuk  Kurnia,  Harimurti,  Sri,  &  Widodo,  Widodo.  (2020).  Screening  for probiotic  of  lactic  acid  bacteria  isolated  from  the  digestive  tract  of  a  native  Aceh duck (Anas platyrhynchos). Biodiversitas Journal of Biological Diversity , 21 (7).
Shin, Marcus E., Ogburn, Kenyon D., Varban, Oliver A., Gilbert, Penney M., & Burd, Christopher  G.  (2001).  FYVE  domain  targets  Pib1p  ubiquitin  ligase  to  endosome and vacuolar membranes. Journal of Biological Chemistry , 276 (44), 41388–41393.
TUGAS,  I.,  &  ARRACHMAN,  KHAIRUNNISA.  (n.d.). MIKROBIOLOGI PEWARNAAN .
Wang,  Lei,  Yang,  Yuxin,  Cai,  Bei,  Cao,  Pinghua,  Yang,  Mingming,  &  Chen,  Yulin.
(2014).  Coexpression  and  secretion  of  endoglucanase  and  phytase  genes  in Lactobacillus  reuteri. International  Journal  of  Molecular  Sciences , 15 (7),  12842– 12860.
Xie, Z. L., Bai, D. P., Xie, L. N., Zhang, W. N., Huang, X. H., & Huang, Y. F. (2015). Intestinal lactic acid bacteria from Muscovy duck  as potential probiotics that alter adhesion factor gene expression. Genetics and Molecular Research , 14 (4), 12262– 12275.
Yanuartono,  Yanuartono,  Nururrozi,  Alfarisa,  &  Indarjulianto,  Soedarmanto.  (2017). Fitat  dan  fitase:  dampak  pada  hewan  ternak. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan (Indonesian Journal of Animal Science) , 26 (3), 59–78.

## Copyright holder:
Zaid Al Gifari, Khairil Anwar, Anwar Rosyidi, Muhamad Ali, Muhamad Amin (2022)
First publication right:
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia
This article is licensed under: