BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 1 (2020): 23 - 28 E-ISSN: 2714-8564

## Efek Subletal Limbah Batik terhadap Aktivitas Enzim Serum Glutamat Pyruvat Transaminase pada Serum Ikan Nila (Oreochromis niloticus )

## Umi Hani’ah*, Hernayanti, Sorta Basar Ida Simanjuntak
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr Suparno 63 Purwokerto 53122 *email: umihaniah528@gmail.com.
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 23/09/2019 Disetujui  : 20/01/2020

## Abstract
Batik  waste  contains  dangerous  metals  including  Cr,  Cu,  Zn,  and  Mn.  Batik  waste  produced from the textile industry is generally non-biodegradable inorganic compound, which can cause pollution especially the aquatic environment. Metals that enter in the form of these ions will be bound by blood proteins (Metalotionin), called the M+Mt bond. The bond is stable and not easily separated,  thus  triggering  the  formation  of  free  radicals.  Free  radicals  will  cause  lipid peroxidation  reactions  that  can  damage  the  liver,  resulting  in  an  increase  in  the  levels  of  the SGPT enzyme which is a parameter of impaired liver function. Tilapia ( Oreochromis niloticus ) is  considered  a  bioindicator  for  aquatic  toxicology  studies  and  environmental  monitoring,  is adaptable  in  all  environmental  conditions,  and  has high  commercial  value.  This  research  was conducted  experimentally  with  a  Completely  Randomized  Design  (CRD).  Treatment  of Naphthol Batik waste concentration: 17% v/v, 34% v/v, 51% v/ v, and control exposed for 48 hours. Data analysis used the Anova test with a confidence level of 95%  and followed by the Duncan test. The results of this study indicate that the sublethal effect of batik waste on SGPT enzyme  activity  in  serum  Tilapia  ( O.  niloticus )  is  directly  proportional.  The  results  of  the calculation of the average SGPT enzyme activity for 48 hours in the control treatment 6.17 ± 0.98 U/L, concentration of 17% v/v which is 11.67 ± 1.51 U/L, concentration of 34% v/v which is 17.67 ± 1.51 U / L, and concentration of 51% v/v which is 121.83 ± 1.9 U/L. Anova analysis (α = 0.05) obtained the calculated F value (199.552)> F table (4.30). Duncan's test results showed that  the  treatment  of  batik  waste  with  a  concentration  of  51%  v/v  for  48  hours,  most  had  an impact on the decline in SGPT enzyme function.
Key Words : Batik Waste; SGPT Enzyme; Sublethal; Tilapia.

## Abstrak
Limbah batik mengandung logam berbahaya diantaranya adalah Cr, Cu, Zn, dan Mn.  Limbah batik  yang  dihasilkan  dari  industri  tekstil  umumnya  merupakan  senyawa  anorganik non- biodegradable ,  yang  dapat  menyebabkan  pencemaran  terutama  lingkungan  perairan.  Logam yang  masuk  dalam  bentuk  ion  akan  diikat  oleh  protein  darah  (Metalotionin),  disebut  ikatan M+Mt.  Ikatan  tersebut  bersifat  stabil  dan  tidak  mudah  lepas,  sehingga  memicu  pembentukan radikal  bebas.  Radikal  bebas  akan  menimbulkan  reaksi  peroksidasi  lipid  yang  dapat  merusak hati, sehingga terjadi peningkatan kadar enzim SGPT yang merupakan parameter gangguan pada fungsi  hati.  Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus )  dianggap  sebagai  bioindikator  untuk  studi toksikologi  perairan  dan  monitoring  lingkungan,  mudah  beradaptasi  di  segala  kondisi lingkungan,  dan  memiliki  nilai  komersial  yang  tinggi.  Penelitian  ini  dilakukan  secara eksperimental dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL), dengan perlakuan konsentrasi limbah batik Naftol 17% v/v, 34% v/v, 51% v/v, dan kontrol yang dipaparkan selama 48 jam. Analisis data menggunakan uji Anova dengan taraf kepercayaaan 95% dan dilanjutkan dengan uji  Duncan.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  efek  subletal  limbah  batik  terhadap aktivitas  enzim  SGPT  pada  serum  ikan  Nila  ( O.  niloticus )  nilainya  berbanding  lurus.  Hasil perhitungan rerata aktivitas enzim SGPT selama 48 jam pada perlakuan kontrol 6,17±0,98 U/L, konsentrasi  17%  v/v  yaitu  11,67±1,51  U/L,  konsentrasi  34%  v/v  yaitu  17,67±1,51  U/L,  dan konsentrasi 51% v/v yaitu 121.83±1,9 U/L. Analisis Anova (α=0,05) didapatkan nilai F hitung (199,552) > F tabel (4,30). Hasil uji Duncan menunjukkan bahwa perlakuan limbah batik dengan konsentrasi 51% v/v selama 48 jam, paling berdampak terhadap penurunan fungsi enzim SGPT. Kata Kunci : Enzim SGPT; Ikan Nila; Limbah Batik; Subletal.

## PENDAHULUAN
Industri  batik  merupakan  salah  satu  penghasil limbah cair yang berasal dari proses pewarnaan, zat warna  yang  dimiliki  limbah  batik  tergolong  tinggi dan  mengandung  bahan-bahan  sintetik  yang  sukar
larut  atau  sukar  diuraikan.  Limbah  batik  yang dihasilkan  dari  industri  batik  umumnya  merupakan senyawa  anorganik  non-biodegradable,  yang  dapat menyebabkan  pencemaran  terutama  lingkungan perairan (Suprihatin, 2014). Industri batik
menghasilkan  limbah  cair  yang  dihasilkan  paling banyak dari proses pewarnaan batik yang mengandung  logam  berat  seperti  Cr,  Zn,  dan  Cu (Ayu, 2014).
Paparan limbah batik dapat menurunkan enzim- enzim  fungsional  diantaranya  yaitu,  SGOT  (Serum Glutamat  Oxaloasetat  Transaminase)  dan  SGPT (Serum Glutamat Pyruvat Transaminase) (Giannini et  al .,  2005).  Enzim  SGPT  merupakan  enzim  yang banyak  ditemukan  pada  sel  hati,  ditemukan  dalam jumlah  sedikit  pada  otot  jantung,  ginjal,  serta  otot rangka  (Kee,  2007).  Enzim  SGOT  berada  paling banyak pada sel parenkim hati, sel darah, sel jantung, dan  sel  otot.  Kerusakan  sel  hati  akan  menyebabkan meningkatnya  kadar  enzim  fungsional  di  dalam serum darah, dengan mekanisme melepaskan enzim dari  sel  hati  menuju  sirkulasi  darah.  Meningkatnya kadar enzim SGPT umumnya disebabkan oleh sel-sel hati yang mengandung enzim transaminase mengalami nekrosis (Sadikin, 2002).
Masuknya bahan pencemar berupa kandungan logam berat industri batik yang berasal dari zat warna batik  sangat  merugikan  bagi  lingkungan,  terutama bagi  biota  perairan  (Boyd,  1990).  Logam  berat berbahaya bagi lingkungan karena bersifat persisten, bioakumulatif,  toksik,  dan  sulit  terurai  di  dalam lingkungan (Huheey et al., 1993). Proses pewarnaan kain batik dengan pewarna sintetis akan menghasilkan  sisa  limbah  Naftol  yang  tidak  larut dalam air (Laksono, 2012). Pencemaran limbah batik Naftol  yang  menggandung  ion  Zn  akan  masuk  ke dalam tubuh ikan melalui insang.  Kandungan ion Zn yang  terakumulasi  di  dalam  jaringan  mampu menurunkan  proses  fisiologis  atau  metabolisme  sel (Palar, 2008).
Keberadaan  ion  Zn  dalam  jaringan  dapat memicu pembentukan radikal bebas dengan melepaskan  O2-  dan  OH-,  yang  mampu  memicu kerusakan pada enzim SGPT (Tyastuti et al., 2016). Radikal bebas akan menimbulkan reaksi peroksidasi lipid  yang  dapat  merusak  sel  atau  jaringna  hati, sehingga  terjadi  peningkatan  kadar  enzim  SGPT (Kasmiyati  &  Sucahyo,  2014).  Peroksidasi  lipid paling  banyak  ditemukan  di  membran  sel  terutama dalam  bentuk  asam  lemak  tak  jenuh  (Powers  & Jackson, 2008). Radikal bebas mengikat asam lemak tak  jenuh  di  membran  yang  dapat  menyebabkan peroksidasi lipid, penurunan fluiditas, dan penurunan aktivitas enzim. Sehingga memicu kerusakan protein darah  (Metalotionin)  yang  akhirnya  menyebabkan inaktivasi  sel  dan  kematian  sel  (Ayyanna et  al., 2018).
Toksisitas subletal merupakan suatu rangsangan dibawah kadar yang langsung mematikan,  tetapi  sudah  ada  respon  fisiologis (Hodgson, 2004). Efek subletal pada serum ikan Nila dapat terlihat dari peningkatan aktivitas enzim SGPT, yang merupakan enzim pertanda kerusakan hati. Ikan Nila (O. niloticus) merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang direkomendasikan oleh EPA
(Environmental  Protection  Agency)  sebagai  hewan uji.  Hal  tersebut  dikarenakan  ikan  nila  memenuhi penyebarannya  cukup  luas,  banyak  dibudidayakan, mempunyai kemampuan yang peka dalam mentoleransi lingkungan dan mudah dipelihara pada skala  laboratorium  (Radiopoetra,  1996).  Sehingga perlu  digali  lebih  lanjut  tentang  pengaruh  efek subletal dari  konsentrasi  limbah  batik  yang  berbeda terhadap aktivitas enzim SGPT serum ikan Nila (O. niloticus).  Dengan  demikian    penelitian  ini diharapkan  memberikan  informasi  tentang  deteksi dini pencemaran lingkungan akibat limbah batik dan bahaya bahan tersebut biota perairan.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  April sampai  Juni  2019  di  Stasiun  Percobaan  Program Studi  D3  Pengelolaan  Sumberdaya  Perikanan, Laboratorium  Ekotoksikologi,  dan  Laboratorium Fisiologi  Tumbuhan  Fakultas  Biologi  Universitas Jenderal  Soedirman,  Purwokerto.  Bahan  yang digunakan  pada  penelitian,  yaitu  ikan  Nila  (O. niloticus)  yang  diambil  dari  Balai  Benih  Ikan  Jalan Raya  Baturaden  Dusun  II  Pandak  Banyumas, sebanyak 96 ekor dengan rerata panjang tubuh 13,5 ± 0,75  cm  dan  rata-rata  berat  tubuh  47,26  ±  10,34  g, pakan ikan dengan kadar protein 33%, reagen SGPT, limbah  batik  yang  diambil  dari  Jalan  Pesarean Kebutuh  Sokaraja  Banyumas  dengan  konsentrasi limbah batik yang digunakan untuk uji subletal (17% v/v,  34%  v/v,  51%  v/v,  dan  kontrol),  air  tanah, Kalium  permanganat  (PK),  akuades,  pH  universal, dan  tissue.  Alat  yang  digunakan  meliputi  ember diameter  46,5  cm  dengan  tinggi  23  cm,  aerator, selang/fuso, batu aerasi, jala saring, spektrofotometer UV-VIS,  kuvet,  spuit  injeksi  ukuran  1  mL, sentrifugator, gelas ukur 500 mL, timbangan analitik, tabung  eppendrof,  mikropipet  dan  tip,  vortex,  gelas ukur  10  mL,  erlenmeyer,  tabung  reaksi,  milimeter block, dan vacutainer EDTA 3 mL.
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah metode  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL). ). Nilai LC50 96 jam limbah batik terhadap  ikan  Nila  (O.  niloticus)  yaitu  sebesar 67,61%  v/v  (Lumban  &  Ridwan,  2016),  sehingga konsentrasi  limbah  batik  yang  digunakan  untuk  uji subletal  yaitu  17%  v/v,  34%  v/v,  51%  v/v,  dan kontrol, setiap konsentrasinya terdiri dari 4 ekor ikan dan  masing-masing  konsentrasinya  6  ulangan sehingga terdapat 24 unit percobaan.
Variabel  yang  diamati  terdiri  dari  variabel bebas,  variabel  terikat.  Variabel  bebas  pada penelitian adalah konsentrasi limbah batik dan waktu pemaparan.  Variabel  terikat  pada  penelitian  adalah aktivitas enzim SGPT. Parameter yang diukur adalah aktivitas enzim Serum Glutamat Pyruvat Transamina pada  serum  darah  ikan  Nila  menggunakan  metode kinetik enzimatik sesuai.

## IFCC  (International  Federation  of  Clinical
Chemistry and Laboratory Medicine).

## Uji Subletal
Limbah  batik  Naftol  dibuat  terlebih  dahulu sesuai  konsentrasi  limbah  batik  untuk  uji  subletal. Limbah  batik  dengan  konsentrasi  17%  v/v dicampurkan 1,7 L limbah batik Naftol dengan 8,3 L air  tanah.  Konsentrasi  limbah  batik  34%  v/v dicampurkan 3,4 L limbah batik Naftol dengan 6,6 L air  tanah.  Konsentrasi  51%  v/v  dicampurkan  5,1  L limbah  batik  Naftol  dengan  4,9  L  air  tanah. Sedangkan,  perlakuan  kontrol  menggunakan  air tanah  sebanyak  10  L,  kemudian  setiap  ember dimasukkan 4 ekor ikan Nila dengan rerata panjang tubuh  13,5±0,75  cm  dan  rerata  berat  tubuh 47,26±10,34 g yang setiap hari diberi pakan pelet. Uji subletal  dilakukan  dalam  kurun  waktu  24-48  jam, dalam setiap kurun waktunya dilakukan pengambilan darah dengan spuit injeksi untuk pengujian aktivitas enzim SGPT.

## Pengambilan Darah Ikan Nila (O. niloticus)
Darah  ikan  Nila  diambil  pada  bagian  jantung ikan  menggunakan  spuit  injeksi  ukuran  1  mL, kemudian  darah  ditempatkan  dalam  vacutainer EDTA  3  mL.  Teknik  yang  digunakan  dalam pengambilan  darah  pada  ikan  Nila  yaitu  teknik cardiac  puncture.  Teknik  ini  biasa  digunakan  untuk pengambilan sampel darah ikan berukuran besar (>10 cm).  Kemudian  darah  ikan  Nila  dipindahkan  ke tabung  eppendorf  menggunakan  mikropipet  untuk dilakukan  sentrifugasi  selama  10  menit  dengan kecepatan  6.000  rpm,  sehingga  didapatkan  serum berwarna  kekuningan  pada  bagian  atas    tabung eppendrof.

## Pengukuran  Kadar  SGPT  (Serum  Glutamat Pyruvat Transaminase)
Pengukuran kadar SGPT menggunakan reagen SGPT  terdiri  dari:  reagen  1  yaitu  (Tris  pH  7,15 sebanyak  100  mmol/L,  L-alanine  sebanyak  500 mmol/L, LDH atau Lactate dehydrogenase sebanyak ≥1700  µ/L);  dan  reagen  2  yaitu  (2-oxoglutarate sebanyak  15  mmol/L,  NADH  sebanyak  0,18 mmol/L).  Dicampurkan  bagian  reagen  1  dengan reagen 2 dengan perbandingan 4 : 1, diambil 100 µL monoreagen,  kemudian  ditambahkan  serum  SGPT 1.000  µL  kemudian  homogenkan  menggunakan vortex. Dibaca absorbansi sampel dengan spektofotometer UV-VIS dengan panjang gelombang 340  nm  pada  menit  ke-1,  2,  dan  3  (Sardini,  2007). Pengukuran enzim SGPT adalah sebagai berikut :
Pengukuran SGPT= ΔA1+Δ A2 2 x 1905 U/L ΔA1= A2-A1 ΔA2= A3-A2
Keterangan : A1  =  nilai absorbansi sampel pada menit ke-1 A2  =  nilai absorbansi sampel pada menit ke-2 A3  =  nilai absorbansi sampel pada menit ke-3
Pengukuran  pH  dengan  mencelupkan  kertas indikator  universal  pada  air  tanah  dan  limbah  batik Naftol yang akan diukur nilai pH. Diamati perubahan warna  yang  terjadi,  dan  dibandingkan  perubahan warna dengan warna standar pada indikatornya.

## Analisis Data
Kadar  enzim Serum  Glutamat  Pyruvat Transaminase pada ikan Nila (O. niloticus) dianalisis menggunakan  uji Anova  dengan taraf kepercayaaan 95%.  Selanjunya  dilakukan  uji  lanjut  dengan  uji Duncan  untuk  mengetahui  konsentrasi  limbah  batik manakah yang paling berpengaruh terhadap peningkatan aktivitas enzim SGPT.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan, untuk mengetahui efek subletal limbah batik terhadap nilai  aktivitas  enzim  Serum  Glutamat  Pyruvat Transaminase pada  serum  ikan  Nila  ( O. niloticus ) selama  48  jam  pemaparan.  Uji  subletal  dilakukan untuk mengevaluasi paparan limbah batik yang dapat menurunkan  fungsi  fisiologis  pada  ikan  Nila  ( O. niloticus ) (Husni & Esmiralda, 2012),.
Toksisitas  merupakan  suatu  keadaan  yang menandakan  adanya  efek  toksik  suatu  bahan  atau senyawa  kimia  yang  menimbulkan  kerusakan  pada bagian  atau  permukaan  tubuh.  Uji  toksisitas digunakan untuk mempelajari pengaruh suatu bahan kimia  toksik  atau  bahan  pencemar  terhadap organisme tertentu (Deisy, 2010). Toksisitas subletal merupakan  suatu  rangsangan  di  bawah  kadar  yang langsung  mematikan,  tetapi  sudah  ada  respon fisiologis (Hodgson, 2004).
Indikator  efek  subletal  pada  penelitian  ini adalah meningkatnya kadar enzim SGPT serum ikan Nila  yang dipaparkan limbah  batik Naftol. Menurut Sacher (2004), enzim SGPT merupakan enzim yang berkaitan dengan kerusakan hati, dimana aminotransferase  mengkatalisis  satu  gugus  amino antara alanine dan asam α-ketoglutamat membentuk asam  oksaloasetat  dan  asam  piruvat.  Menurut Sadikin  (2002),  enzim  SGPT  banyak  ditemukan  di dalam hati dan ditemukan dalam jumlah sedikit pada otot jantung, ginjal, serta otot rangka.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  limbah  batik  yang  dipaparkan semakin  tinggi  pula  kadar  enzim  enzim  Serum Glutamat Pyruvat Transaminase serum ikan Nila ( O. niloticus )  (Gambar  1).    Efek  subletal  pada  aktivitas enzim  SGPT  nilainya  berbanding  lurus,  artinya semakin  tinggi  konsentrasi  toksikan  maka  aktivitas enzim  SGPT  juga  semakin  meningkat  (Andriani  & Hartini, 2017).
Gambar 1. Rerata Uji Subletal Limbah Batik 48 Jam terhadap Aktivitas Enzim SGPT
Berdasarkan  uji  subletal  48  jam  pada  Gambar 1.  menunjukkan  bahwa  rerata  konsentrasi  enzim SGPT pada perlakuan kontrol, 17% v/v, dan 34% v/v terjadi  peningkatan  aktivitas  enzim  secara  berkala, namun  pada  perlakuan  51%  v/v  konsentrasi  enzim SGPT meningkat tajam dibandingkan dengan ketiga perlakuan  sebelumnya.  Menurut  Sadikin  (2002), lonjakan  enzim  SGPT  yang  sangat  drastis  dari konsentrasi 34% v/v ke konsentrasi 51% v/v terjadi karena konsentrasi yang digunakan diatas nilai LC 50 (dapat  mematikan  50%  dari  organisme  hidup). Peningkatan konsentrasi enzim SGPT pada ikan Nila ( O.  niloticus )  terjadi  akibat  pelepasan  enzim intraseluler ke ekstraseluler ketika terjadi kerusakan sel atau jaringan. Kenaikan konsentrasi enzim SGPT dalam  serum  dapat  disebabkan  oleh  sel-sel  yang mengandung enzim transaminase mengalami nekrosis,  sehingga  enzim  tersebut  masuk  ke  dalam peredaran  darah  yang  mengakibatkan  terjadinya peningkatan  kadar  ALT.  Menurut  Speicher et  al . (2008),  peningkatan  aktivitas  enzim  SGPT  lebih tinggi  dibandingkan  aktivitas  enzim  SGOT  pada kerusakan  akut,  hal  ini  disebabkan  enzim  SGPT merupakan enzim yang hanya terdapat pada sel hati, sebaliknya enzim SGOT terdapat pada sel parenkim hati, sel darah, sel jantung, dan sel otot.
Rentang  konsentrasi  enzim  SGPT  pada perlakuan kontrol 5 U/L-7 U/L.  Konsentrasi normal enzim  SGPT  pada  ikan  Nila  ( O.  niloticus )  adalah 5,60±2,07 U/L. Sehingga konsentrasi pada perlakuan kontrol  relatif  normal,  sedangkan  pada  perlakuan konsentrasi limbah batik 17% v/v; 34% v/v dan 51% v/v konsentrasi enzim SGPT melebihi ambang batas normal selama pemaparan 48 jam.
Berdasarkan  pengamatan  48  jam  secara mofologi  terhadap  ikan  Nila  ( O.  niloticus )  terjadi perubahan  morfologi  setelah  dipaparkan  limbah batik.  Sebelum  dipaparkan  limbah  batik  ikan  Nila berenang  aktif,  bukaan  mulut  dan  operculumnya masih normal. Setelah dipaparkan limbah batik ikan Nila bergerak tidak beraturan cenderung bergerak ke atas  dan  ke  bawah,  membuka  dan  menutupnya operculum  semakin  cepat,  ikan  juga  mengalami kehilangan  keseimbangan  yang  ditandai  dengan tubuhnya  miring  dan  gerakan  renangnya  tidak menentu,  sering  terjadi  ikan  melompat  keluar  dari bak percobaan, ikan bergerak lambat dan mendekati
aerator.  Menurut  Martini  (2001),  ikan  Nila  ( O. niloticus )  yang  terkena  racun  atau  bahan  pencemar dapat  diketahui  dari  gerakannya  yang  hiperaktif, menggelepar, mengalami kelumpuhan dan kemudian mati.  Secara  klinis  hewan  yang  terpapar  racun  atau bahan  pencemar  memperlihatkan  gejala  stress apabila  dibandingkan  dengan  perlakuan  kontrol, ditandai dengan menurunnya nafsu makan, gerakannya  kurang  stabil,  dan  cenderung  berada  di dasar permukaan bak penampung.
Ikan  Nila  ( O.  niloticus )  yang  terpapar  bahan pencemar  pada  konsentrasi  letal  dapat  berdampak kematian, sedangkan dalam konsentrasi subletal akan menyerap  bahan  aktif  tersebut  melalui  permukaan tubuh, membran insang, dan difusi (Taufik & Setiadi, 2012). Widayati et al . (2011), ikan Nila ( O. niloticus ) dapat  menunjukkan  reaksi  terhadap  perubahan  fisik air maupun terhadap adanya senyawa pencemar yang terlarut dalam batas konsentrasi tertentu. Reaksi yang dimaksud  antara  lain  adanya  perubahan  aktivitas pernapasan,  aktivitas  dan  gerakan  renang,  warna tubuh  ikan  dan  sebagainya.  Menurut  Shahzad et  al.
(2018), logam Zn memiliki potensi untuk menginduksi  perubahan  histopatologis  pada  organ organisme  akuatik.  Logam  Zn  dalam  jumlah  yang tinggi  akan  terakumulasi  pada  jaringan  dan  terjadi perubahan biokimia pada ikan Nila ( O. niloticus ).
Berdasarkan  analisis  Anova  dengan  tingkat signifikan  α=0,05  konsentrasi  enzim  SGPT  antar perlakuan  yang  dipapar  limbah  batik  Naftol  selama 48 jam berbeda nyata (F hitung (199,552) > F tabel (4,30).
Hasil uji Duncan didapatkan bahwa perlakuan limbah batik  dengan  konsentrasi  51%  v/v  selama  48  jam paling  berdampak  terhadap  penurunan  fungsi aktivitas enzim SGPT, sedangkan konsentrasi limbah batik 17% v/v, 34% v/v, dan kontrol efeknya relatif sama  atau  belum  terlihat  efek  subletalnya  karena konsentrasinya dibawah nilai LC 50 .
Faktor-faktor lain yang menyebabkan kematian ikan Nila ( Oreochromis niloicus ) diantaranya adalah salinitas yang tinggi, pH yang terlalu tinggi atau basa, cahaya  matahari,  pemeliharaan  ikan,  faktor  biotik, dan  juga  pengambilan  darah  setiap  harinya  dari jantung  ikan.  Selain  hal  terebut  kurangnya  aerasi yang  dihasilkan  dari  aerator  yang  dikarenakan terbatasnya oksigen terlarut (DO) dalam air limbah. Kekurangan  oksigen  terlarut  (DO)  dalam  air  dapat
6.17±0,98 11,67±1,51 17,67±1,51 121,83±19 0 50 100 150 200 Kontrol 17 % v/v 34 % v/v 51 % v/v Ko n se n tras i En zim S G P T (U/L ) Konsentrasi Limbah Batik Naftol
mengganggu  pertumbuhan  dan  aktivitas  gerak  pada ikan,  disamping  itu  oksigen  diperlukan  untuk mempercepat  penguraian  kotoran  ikan,  dengan jumlah aerasi yang kurang maka penguraian terhadap kotoran  ikan  menjadi  lambat  dan  akhirnya  akan mengendap  sehingga  membentuk  amonia  (NH 3 ) yaitu  racun  bagi  ikan  itu  sendiri  (Asfari’ah  dkk., 2015).
Logam  berat  seperti  Zn  pada  limbah  batik masuk  pada  ikan  melalui  insang,  permukaan  tubuh, mekanisme  osmoregulasi,  dan  penyerapan  melalui pakan. Limbah batik dalam konsentrasi tinggi dapat menyebabkan  meningkatnya  frekuensi  pernapasan ikan dan oksigen terlarut (DO) meningkat (Mustofa, 2010). Limbah batik Naftol yang mengandung logam Zn  akan  masuk  dalam  bentuk  ion  dan  diikat  oleh protein  darah  Metalotionin,  sehingga  terjadi  ikatan Zn+Mt.  Ikatan  tersebut  bersifat  stabil  dan  tidak mudah lepas, sehingga memicu pembentukan radikal bebas.  Radikal  bebas  akan  menimbulkan  reaksi peroksidasi lipid yang dapat merusak hati, sehingga terjadi  peningkatan  aktivitas  enzim  SGPT  yang merupakan  parameter  gangguan  pada  fungsi  hati. Metalotionin dan aktivitas enzim SGPT dalam darah ikan yang terpapar Zn sejalan dengan akumulasi Zn (Ma’rifah et al ., 2019).
Hasil pengukuran faktor lingkungan khususnya pH pada air tanah dan limbah batik Naftol di Stasiun Percobaan Program Studi D3 Pengelolaan Sumberdaya  Perikanan  Fakultas  Biologi  didapatkan hasil sebagai berikut (Tabel 1).
Tabel  1. Faktor  Lingkungan  (pH)  pada  Air  Tanah  dan Limbah Batik Naftol
No Parameter pH 1 Air Tanah 7 2 Limbah Uji Subletal 8
Berdasarkan  Tabel  1  pH  air  tanah  yang digunakan  sebagai  aklimasi  ikan  Nila  ( O.  niloticus ) adalah  7.  Menurut  Kordi  (2009),  nilai  pH  air  yang cocok  digunakan  (aklimasi  ataupun  pemeliharaan) ikan  Nila  adalah  6-8,5.  Limbah  batik  yang mengandung  Naftol  pada  uji  subletal  adalah  8 (bersifat basa). Menurut Hernayanti & Proklamasiningsih  (2004),  nilai  pH  limbah  batik yang  masih  ditoleransi  adalah  6-9.  Menurut Sulaeman et  al. (1996),  limbah  batik  naftol  bersifat alkalis atau basa (pH > 7).
Keadaan pH yang dapat mengganggu kehidupan ikan adalah pH yang terlalu rendah (sangat asam)  atau  pH  terlalu  tinggi  (sangat  basa).  Setiap jenis ikan akan memperlihatkan respon yang berbeda terhadap perubahan pH dan dampak yang ditimbulkannya  pun  berbeda  (Daelami,  2001). Keadaan pH yang sangat rendah akan menyebabkan mobilitas  berbagai  senyawa  logam  berat  yang bersifat  toksik  semakin  tinggi, yang  dapat mengancam  kelangsungan  hidup  organisme  akuatik
khususnya ikan. Sementara itu, pH yang terlalu tinggi akan  menyebabkan  keseimbangan  antara  amonium (NH 4 )  dan  amonia  (NH 3 )  dalam  air  akan  terganggu dan bersifat toksik bagi organisme akuatik.  Apabila pH  tinggi  maka  kandungan  oksigen  terlarut  (DO) akan bertambah akibatnya konsumsi oksigen menaik dan  nafsu  makan  akan  berkurang.  Sedangkan,  pada pH  rendah  kandungan  oksigen  akan  berkurang akibatnya  konsumsi  oksigen  menurun  dan  nafsu makan akan bertambah (Sary, 2006).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh, dapat disimpukan bahwa Efek subletal limbah batik Naftol dengan konsentrasi yang berbeda berpengaruh terhadap  peningkatan  aktivitas  enzim  SGPT  pada serum  ikan  Nila  ( O.  niloticus ).  Konsentrasi  limbah batik  51%  v/v  paling  berpengaruh  terhadap peningkatan aktivitas enzim SGPT pada serum ikan Nila ( O. niloticus ).

## DAFTAR REFERENSI
Andriani,  R.,  &  Hartini.  2017.  Toksisitas  Limbah
Cair Industri Batik Terhadap Morfologi Sisik Ikan Nila Gift ( Oreochomis niloticus ). Jurnal Sains Health, 1(2), pp. 32- 40.
Asfari’ah, N., Alno, M., & Ridwanto, W. 2015. Uji Toksisitas  Sublethal  dengan  Menggunakan Piretroid Sintetik 0,10 ppm Terhadap Benih Ikan Mas ( Cyprinus  carpio ). Ekotoksikologi Perairan , 1 (1), pp. 1-17.
Ayu,  M.  2014.  Pengaruh  Cekaman  Kromium  pada Limbah Cair Batik terhadap Pertumbuhan Eichorniacrassipes dan Salvinia molesta. Jurnal Lentera Bio, 3(1) , pp. 67-69.
Ayyanna, C., Banu, D.T., Hussain, G.R., Rani, D.S., Mohan, G.M., Khatoon, B.S., & Reddy, B.S. 2018.  Evaluation  of  the  Hepatoprotective and Antioxidant  Activity of Ethanolic
Extract  of Nerium  indicum Mill.  Leaves Against Carbon
Tetracloride-Induced Hepatotoxicy  in  Albino  Rats. International
Journal  of  Research  in  Pharmaceutical Sciences, 9(4), pp. 1088-1095.
Boyd.  1990. Water  Quality  in  Fish  Ponds  for Aquaculture . Alabama: Auburn Universty of Alabama.
Daelami, D.A.S. 2001. Usaha Pembenihan Ikan Air Tawar . Jakarta: Penebar Swadaya.
Deisy.  2010.  Uji  Toksisitas  Oli  Bekas  Terhadap
Tanaman Kacang Hijau. Skripsi . Yogyakarta:  Program  Studi  Pendidikan Biologi Universitas Ahmad Dahlan.
EPA  ( Environmental  Protection  Agency ).  1998. Condition  of  the  Mid-Atlantic  Estuaries .
Washington,  DC,  USA:  Office  of  Research and Development.
Giannini, E. G., Testa, R., & Savarino, V. 2005. Liver Enzyme Alteration: A Guide for Clinicians. CMAJ , 172(3), pp. 367-379.
Hernayanti., & Proklamasiningsih, E. 2004. Fitoremediasi Limbah Cair Batik Menggunakan  Kayu  Apu  ( Pistia  Stratiotes L.)  Sebagai  Upaya  Untuk  Memperbaiki Kualitas Air. Jurnal Pembangunan
Pedesaan, 4(3), pp. 1-8.
Hodgson,  E.  2004. A  Textbook  of  Modern Toxicology,  3rd  Edition .  New  Jersey:  John Wiley & Sons, Inc.
Huheey,  J.E.,  Keiter,  E.A.,  &  Keiter,  R.L.  1993. Inorganic Chemistry: Principles of Structure and Reactivity.  Fourth  Eddition. New  York (US): Harper CollinsPublisher.
Husni,  H.,  &  Esmiralda,  M.T.  2012.  Uji  Toksisitas Akut  Limbah  Cair  Industri  Tahu  terhadap Ikan Mas ( Cyprinus carpio Lin). Jurnal Ilmu Lingkungan, 1(1), pp. 1-13.
Kasmiyati,  S.,  &  Sucahyo.  2014.  Deteksi  Cekaman
Oksidatif  Akibat  Toksisitas  Krom  pada Sonchus  oleraceus L.  Melalui  Penentuan Spesies Oksigen Reaktif Secara
Spektrofotometri  dan  Histokimia. AGRIC, 26(1), pp. 85-98.
Kee, J.F. 2007. Pedoman Pemeriksaan Laboratorium dan Diagnostik Edisi 6 . Jakarta: EGC.
Kordi,  K.  2009. Budidaya  Perairan .  Bandung:  PT Citra Aditya Bakti.
Laksono,  S.  2012. Pengolahan  Biologis  Limbah Batik  dengan  Media  Biofilter .  Jakarta:  UI Press.
Lumban, T.F.D., & Ridwan, A. 2016. Uji Toksisitas Limbah Batik Terhadap Ikan Nila ( Oreochromis  niloticus ). Journal  IPB , 21(2), pp. 1-5.
Ma’rifah, F., Saputri, R.M., Soegianto, A., Irwan, B., &  Putranto,  T.W.C.  2019.  The  Change  of Metallothionein  and  Oxidative  Response  in Gills of the Oreochromis niloticus . Animals, 9(6), pp. 353-360.
Martini,  K.S.,  2001.  Pengaruh  Parameter  BOD, COD, pH, Fenol, dan  Coli pada Air Sungai terhadap  Kualitas  Air  Sumur  Disekitar Aliran  Sungai  Premulung  Kota  Surakarta.
Skripsi. Surakarta  :  Program  Pascasarjana Universitas Sebelas Maret.
Mustofa. 2010. Kerusakan Jaringan Ikan Nila Akibat Kromium. Skripsi. Semarang: Program Studi Manajemen  Sumberdaya  Perairan  Jurusan Perikanan  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan Universitas Diponegoro.
Palar, H. 2008. Pencemaran dan Toksikologi Logam Berat . Jakarta: Rineka Cipta.
Powers,  S.K.,  &  Jackson,  M.J.  2008.  Exercise-
Induced Oxidative Stress: Cellular Mechanisms  and  Impact  on  Muscle  Force
Production. Physicol Rev , 88, pp. 76-83.
Radiopoetra. 1996. Kualitas Air untuk Ikan Hias Air Tawar . Jakarta: Proyek Buku Terpadu.
Sacher.  2004. Tinjauan  Klinis  Hasil  Pemeriksaan Laboratorium . Jakarta: EGC.
Sadikin, M. 2002. Biokimia . Jakarta : Widia Medika.
Sardini,  S.  2007.  Penentuan  Aktivitas  Enzim  GOT dan  GPT  dalam  Serum  dengan  Metode ReaksiKinetik  Enzimatik  Sesuai  IFCC (International Federation Of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine). Prosiding  Pertemuan  dan Presentasi Ilmiah Fungsional Pengembangan  Teknologi  Nuklir  I, pp.  91-
106.
Sary.  2006. Manajemen  Kualitas  Air .  Cianjur: Politeknik Vedca.
Shahzad,  K.,  Khan,  N.M.,  Jabeen,  F.,  Kosour,  N.,
Shakoor, A., Sohail, M., & Ahmad, N. 2018. Toxicity  of  Zinc  Oxide  Nanoparticles  in Tilapia  ( Oreochromis  niloticus ):  Tissue accmulation, Oxidative Stress, Histopathology, and Genotoxicity. Springer , 1(2), pp. 1-31.
Speicher,  M.D.,  Carl,  E.,  &  Jack,  W.S.    2008. Pemilihan  Uji  Laboratorium  yang  Efektif . Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Sulaeman., Lestari, K., & Sutadi., 1996. Pengolahan Limbah  Cair  Batik  Proses  Pencelupan
Naphtol untuk Memperkecil Kadar
Pencemar. DKB , 1(15), pp. 46-51.
Suprihatin,  H.  2014.  Kandungan  Organik  Limbah Cair  Industri  Batik  Jetis  Sidoarjo  dan Alternatif Pengolahannya. Jurnal ARB , 1(2), pp. 130-138.
Taufik,  I.,  &  Setiadi,  E.  2012 . Toksisitas  Serta Potensi  Bioakumulasi  dan  Bioeliminasi Insektisida  Endosulfan  pada  Ikan  Mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal  Riset  Akuakultur, 7(1), pp. 131-143.
Tyastuti,  E.M.,  Parama,  O.A.,  &  Sunarto.  2016. Ekogenotoksisitas  Limbah  Cair  Batik  dan Efek Antimutagenik Lemna Minor Terhadap Eritrosit  Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ). Bioeksperimen, 2(2), pp. 119-129.
Widayati, D.E., Aunurohim., & Abdulgani, N. 2011. Studi  Hispatologi  Insang  Ikan  Mujair ( Oreochromis
mossambicus )
pada Konsentrasi  Subletal  Air  Lumpur  Sidoarjo . Jurnal  Ikhtiologi  Indonesia, 18(2),  pp.  71- 81.