Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol 3.No.2 Desember 2017 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p-ISSN : 2442-6032 e-ISSN : 2598-9979

## Uji  Aktivitas  Antiradikal  Bebas  Ekstrak  Daun  Paliasa  (Kleinhovia  hospita Linn.)
Silviana Hasanuddin 1 , Citra Andini 2
1 STIKES Mandala Waluya Kendari
2 Akademi Farmasi Bina Husada Kendari

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  identifikasi  senyawa antiradical  bebas  pada  ekstrak  daun  paliasa  (K. hospita).Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi  senyawa  antiradical  bebas berdasarkan aktivitas pengikat radikal bebas DPPH (1,1-Diphenyl-2-picryl  Hydrasil)  ekstrak  daun paliasa.
Daun  paliasa  diekstraksi  dengan  cara maserasi menggunakan pelaru n-heksan kemudian ampas  dari  maserasi  dengan  n-heksan dimaserasi lagi dengan  etanol  96%. Ekstrak  etanol kemudian dipartisi  dengan  pelarut  etil  asetat.  Ekstrak  n- heksan,  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  memiliki aktivitas radikal bebas dengan nilai IC50 berturut- turut adalah untuk ekstrak N-heksan sebesar 28,713 mg/ml,  nilai  IC  50  untuk  ekstrak  etano  Sebesar 3,113 mg/ml dan nilai IC 50 untuk fraksi etil  asetat sebesar  4,556  mg/ml.  Sedang  nilai  IC  50  dari sampel pembanding yaitu vitamin C 0,106 mg/ml dan BHT 0,067 mg/ml. Identifikasi KLT-autografi menunjukkan    bahwa  ekstrak  daun  paliasa  aktif sebagai  antiradical  bebas  dimana  bercak
menunjukkan perubahan warna dari ungu menjadi kuning.  Sedangkan  pada  penyemprotan  dengan menggunakan  reagen  antimmon  (III)  klorida memperlihatkan  bercak  berpendar  kuning  pada UV  366  yang  menandakan  bahwa  daun  paliasa mengandung golongan senyawa flavanoid.
Identifikasi KLT-Bioautografi menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  paliasa  aktif sebagai  antiradical  bebas  dimana  bercak menunjukkan perubahan warna dari ungu menjadi kuning.  Sedangkan  pada  penyemprotan  dengan menggunakan  reagen  antimmon  (III)  klorida memperlihatkan  bercak  berpendar  kuning  pada UV  366  yang  menandakan  bahwa  daun  paliasa mengandung golongan senyawa flavanoid
Kata kunci : Antiradikal bebas, Daun Paliasa.
Penulis korespondensi : Silviana Hasanuddin STIKES Mandala Waluya Kendari silviana.hasanuddin@gmail.com

## PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  sebutan untuk  zat  yang  berfungsi  melindungi tubuh  dari  serangan  radikal  bebas,  yang termasuk  dalam  golongan  zat  ini  antara lain  vitamin,  polifenol,  karotin,  dan mineral.    Secara  alami,  antioksidan  ini sangat  besar  peranannya  pada  manusia
untuk  mencegah  terjadinya  penyakit. Antioksidan  melaukan  semua  itu  dengan cara  menekankan  kerusakan  sel  yang terjadi akibat proses oksidasi radikal bebas (Anonim, 2008).
Antioksidan  dapat  diperoleh  dari tumbuh-tumbuhan,  sayur-sayuran  dan
Silviana Hasanuddin dan Citra Andini/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 3(2);2017:119-126
buah-buahan.  Salah  satu  tumbuhan tersebut adalah daun paliasa. Daun peliasa merupakan salah satu tanaman obat yang dikenal masyarakat Sulawesi Selatan yang berfungsi  untuk  mengobati  penyakit kuning  (Suryawati,  1991),  menurunkan kolesterol,  hipertensi  serta  diabetes (Herlina,  1993)    dan  kanker  hati  (Tayeb, 2009).
Paliasa  termasuk  dalam  family Sterculiaceae mengandung senyawa kimia seperti sianogenik,
alkaloid,
proantosianin,
sianidin, flavanol,
kaemferol  dan  quercetin  serta  saponin (Watson, 1992).
Bebrapa hasil penelitian sebelumnya  membuktikan  bahwa  daun paliasa  (K.  hospital  Linn).  Fraksi  n-heksan aktif terhadap udang Artemia salina Leach (Hendra,  2005),  dekok  daun  paliasa  (K.
hospital Linn) sebagai obat radang hati akut terhadap  tikus  putih  betina  strain  wistar (Raflizar, 2006). Uji farmakokinetika dengn menggunakan  hewan  percobaan  dan hasilnya  menunjukkan  bahwa  wkatrak daun  paliasa  dapat  melindungi  radang hati  tikus  (Raflizar,  2006),  infuse  daun paliasa  mempunyai  efek  antidiabetes dengan mekanisme penghambatan terhadap transport aktif glukosa pada usus halus marmot (Hasni, 2002), sebagai  obat anti  tumor  dalam  sarcoma  mencit  (Latif, 1997).
Inilah  yang  mendasari  peneliti untuk  melakukan  penelitian  pengujian tentang uji daya hambar antioksidan dari ekstrak etanol, ekstrak n-heksan dari fraksi etil  asetat  dari  daun  paliasa  (K.Hospita Linn) dengan menggunakan DPPH.

## METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis penelitian
Jenis penelitian ini dilakukan secara eksperimental yang
merupakan npenelitian laborarotium.
B. Pembuatan Ekstrak Daun Kucai
Pembuatan  ekstrak  daun  kucai dalam  penelitian  ini  dilakukan  dengan metode  maserasi,  yaitu  simplisia  di timbang sebanyak 300 gram, dimasukkan dalam  wadah  maserasi  dan  direndam
dengan larutan n-heksan sampai terendam lalu diaduk hingga homogen, tutup segera kemudian disimpan dalam ruangan yang terhindar  dari  cahaya  matahari  selama  5 hari  sambil  sesekali  di  aduk.  Setelah direndam  selama  5  hari,  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring  sehingga diperoleh  filtrate  (ekstrak  cair).  Hasil penyarian n-heksan dikumpulkan, diuapkan  dengan  rotavapor    hingga diperoleh ekstrak cair. Kemudian
Silviana Hasanuddin dan Citra Andini/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 3(2);2017:119-126
dianginanginkan. Ekstrak kental diperoleh 38 gram.
Ampas  hasil  ekstraksi  direndam lagi dengan etanol sebanyak 3 liter hingga simplisia  tersebut  terendam,  dibiarkan selama  3  hari  dalam  bejana  tertutup  dan terlindung  dari  cahaya  sambil  berulang- ulang  diaduk.  Kemudian  simplisia disaring  dan  residunya  direndam  lagi dengan cairan penyari yang baru. Hal ini dilakukan  selama  3  kali.  Hasil  penyari yang didapat dikumpulkan dan diuapkan dengan  rotavapor  ekstrak  etanol  yang kental. Didapatkan ekstrak kental sebanyak 12 gram.
B. Partisi  Sampel  dengan  Pelarut  Etil
Asetat
Ekstrak  etanol  yang  diperoleh diambil  sebanyak  12  gram,  untuk diekstraksi  dengan  pelarut  etil  asetat dengan  cara  partisi  cair-cair.  Ekstrak etanol  sebenyak  5  gram  disuspensikan dengan  air  sebanyak  50  ml,  kemudian dimasukan  kedalam  corong  pisah  untuk dipartisi dengan n-heksan sebanyak 50 ml, kemudian  dikocok.  Sesekali  penutup corong  dibuka  setelah  itu  didiamkan selama 30 menit sampai terjadi pemisahan antara lapisan etil asetat (fraksi etil asetat) dan  lapisan  air  (residu).  Residu  dipartisi kembali  sesuai  dengan  cara  diatas,
dilakukan  berulang  hingga  jernih.  Fraksi etil  asetat  dikumpulkan  dan  diucapkan hingga diperoleh fraksi etil asetat.
C. Pembuatan larutan DPPH
Larutan  DPPH  0,4  M  dengan  cara ditimbang  DPPH  sebanyak  15  mg, kemudian dilarutkan dengan 100 ml etanol absolute dalam labu terukur.
D. Uji Aktivitas Radikal bebas a. Ekstrak kering etanol, n-heksan dan fraksi  daun  paliasa  ditotolkan  pada lempeng  KLT  kemudian  dielusi  dengan menggunakan eluen yang sesuai. Lempeng KLT disemprot dengan menggunakan  DPPH  dan  dibiarkan selama  ±  30  menit  hingga  terjadi perubahan warna dari ungu ke kuning
b. Pengukuran Blanko
Pengujian  dilakukan  dengan  memipet 1,0  DPPH  0,4  mM  dan  cukupkan volumenya dengan etanol absolute sampai 5,0  ml  dalam  labu  terukur.  Larutanini kemudian dibiarkan selama 30 menit dan selanjutnya  diukur  absorbansinya  pada panjang gelombang 517 nm.
c. Pengukuran antiradical bebas ekstrak daun paliasa
Larutan 1% disiapkan dengan cara menimbang daun paliasa sebanyak 50 mg dan  dilarutkan  dengan  etanol  absolute sambil diaduk dan dihomogenkan dengan
Silviana Hasanuddin dan Citra Andini/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 3(2);2017:119-126
bentuan vortex, volume akhir dicukupkan hingga 5,0. Untuk mendapatkan konsentrasi 0,5%, 0,25% dan 0,1 % dipipet masing-masing 500 µl, dan 100 µl larutan stok  dan  volume  dicukupkan  dengan etanol  absolute  hingga  1  ml.  pengujian dilakukan dengan memipet 100 µl larutan sampel dari berbagai konsentrasi masing- masing ditambah 1,0 ml DPPH 0,4 mM dan dicukupkan  volumenya  sampai  5,0  ml dengan  etanol  absolute  dalam  labu terukur. Campuran selanjutnya dihomogenkan  lalu  dibiarkan  pada  suhu kamar  selama  30  menit.  Serapannya diukur pada panjang gelombang 517 nm.
d. Pengukuran daya anti radikal bebas sampel pembanding
Larutan  stok  0,01%  disiapkan dengan  cara  menimbang  Vitamin  C  dan BHT  masing-masing  sebanyak  1  mg  dan dilarutkan  dengan  aquadest  sambil diaduk  dan  dihomogenkan  dengan bantuan vortex, volume akhir dicukupkan hingga 10 ml. konsentrasi larutan 0,005%, 0,0025%  dan  0,00125%  dibuat  dengan mengambil masing-masing 500 µl, 250 µl, dan  125  µl  larutan  stok  dan  volume dicukupkan dengan aquadest hingga 1 ml. pengujian dilakukan dengan memipet 100 µl  larutan  dari  berbagai  konsenrasi masing-masing ditambah 1,0 ml DPPH 0,4
mM  dan  dicukupkan  volumenya  sampai 5,0 ml dengan etanol absolute dalam labu terukur. Campuran selanjutnya dihomogenkan  lalu  dibiarkan  pada  suhu kamar selama 30 menit serapannya diukur pada panjang gelombang 517nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Simplisia  daun    paliasa  (Kleinhovia hospital  Linn)    sebnyak  300  gram diekstraksi secara maserasi menggunakan pelarut  n-heksan,  menghasilkan  ekstrak kental  sebanyak  38  gram.  Ampas  hasil maserasi  dengan  n-heksan  dimaserasi kembali  dengan  etanol,  menghasilkan ekstrak  etanol  kental  sebanyak  12  gram. Ekstrak etanol kemudian diambil sebanyak  5  gram  dipartisi  dengan  etil asetat  menghasilkan  2,25  gram.  Ketiga ekstrak  tersebut  diuji  aktifitas  antiradical bebas  secara  kualitatif  dan  kuantitatif dengan metode DPPH dan diperoleh nilai IC 50 untuk  ekstrak  etanol  sebesar  3,113 mg/ml, nilai IC 50 untuk ekstrak n-heksan sebesar 28,713 mg/ml dan nilai IC 50 untuk fraksi etil asetat sebesar 4,556 mg/ml.
Nilai  IC 50 dari  setiap  sampel dibandingkan dengan vitamin C dan BHT. Pengukuran aktivitas sampel pembanding vitamin  C,  diperoleh  nilai  IC 50 sebesar 0,106  g/ml,  sedangkan  untuk  BHT  0,067 mg/ml.  hasil  pengukuran  serapan  pada
Silviana Hasanuddin dan Citra Andini/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 3(2);2017:119-126
spektrofotometer UV-Vis 517 nm diperoleh  persentase  pengikatan  radikal bebas sebagai berikut:
Tabel.1  Hasil  Pengukuran  absorbansi, persentase  Pengikatan  DPPH  dan  Nilai IC 50 dari  daun  paliasa  (Kleinhovia  hospital Linn).
Samp el Konsentr asi (mg/ml) Absorba nsi %pengikat an radikal bebas rata-rata IC 50 (mg/m l) Ekstra k etanol
10 0,223 80,489 % 3,113 0,223 0,223 5 0,262
77,077 % 0,262 0,262 2,5 0,577
49,518 % 0,577 0,577
1 0.839 26,596 % 0,840 0,840
Ekstra k n- heksa n 10 0,797
30,271 % 0,797 0,798 5 0,814
28,696 % 0,815 0,816 2,5 0,872 23,709 % 0,872 0,872 1 0,902 21,085% 0,901 0,902 Fraksi etil Asetat 10 0,271 76,902 % 0,271 0,521 5 0,521 54,768 % 4,556 0,521 0,508 2,5 0,618 45,932%
0,617
0,618
1 0,870 23,884 %
0,870 0,870
Tabel  2.  Hasil  Pengukuran  Absorbansi, Persentase Pengikatan DPPH dan Nilai IC dari  sampel  pembanding  vitamin  C  dan BHT
Sampel Konsentr asi (mg/ml) Absorban si %pengikata n radikal bebas rata- rata IC 50 (ppm) 0,1 0,606 0,606 47,069 % 0,604 0,05 0,902 20,997 % 0,903 Vitami n C 0,905 0,106 0,025 1,023 11,199 % 1,023 1,000 0,0125 1,126 1,662 % 1,126 1,120 0,1 0,403 64,742 % 0,403 0,403 BHT 0,05 0,677 40,769 % 0,677 0,678 0,067 0,025 0,753 34,121 % 0,753 0,752 0,0125 0,902 20,997 % 0,903
Silviana Hasanuddin dan Citra Andini/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 3(2);2017:119-126

## Tabel 3. Nilai Rf dan Warna Bercak pada Profil Kromatograf Lapis Tipis Ekstrak Daun Paliasa (Kleinhovia hospitaLinn.)
Sampel Bercak UV 254 UV 366 DPPH Rf Warna Rf Warna Rf Warna Ekstrak I 0,54 Kuning 0,78 Jingga 0,11    kuning Etanol II 0,45 Kuning 0,67 Jingga III 0,34 Kuning 0,54 Jingga IV 0,45 Jingga V 0,33 Jingga VI 0,25 Jingga VII 0,11 Ungu kebiruan Ekstrak I 0,98 Kuning 0,98 Coklat 0,98    Kuning n-heksan kekuningan II 0,95 Kuning 0,93 Ungu muda 0,93    Kuning III 0,89 Kuning 0,84 Ungu muda 0,87    Kuning IV 0,76 Hijau 0,76 Jingga V 0,65 Hijau 0,64 Jingga VI 0,51 Kuning 0,42 Coklat VII 0,2 Kuning VIII 0,16 kuning Ekstrak I 0,58 Hijau 0,78 Jingga 0,13    Kuning Etil asetat II 0,53 Hijau 0,65 Jingga III 0,44 Hijau 0,53 Jingga IV 0,36 Hijau 0,44 Jingga V 0,29 Hijau 0,31 Jingga VI 0,24 Hijau 0,24 Jingga
Uji  daya  antiradikal  bebas dilakukan dengan metode Blois yang menggunakan DPPH (1,1-Diphenyl-
2-Picryl Hydrazil).
DPPH
merupakan  radikal  sintetik  yang larut  dalam  pelarut  polar  seperti metanol  dan  etanol,  dapat  diukur intensitasnya pada panjang gelombang 517 nm. Pemilihan DPPH
dipilih  karena  sederhana,  mudah, cepat dan hanya memerlukan sedikit sampel  sudah  dapat  memberikan aktivitas  yang  diinginkan.  Senyawa antioksidan  akan  bereaksi  dengan radikal  bebas  (DPPH)  melalui mekanisme  donasi  atom  hidrogen dan menyebabkan terjadinya perubahan  warna  DPPH  dari  ungu
Silviana Hasanuddin dan Citra Andini/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 3(2);2017:119-126
ke kuning yang diukur pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas radikal bebas  ditunjukkan  dengan  IC50.
Nilai IC50 merupakan nilai
konsentrasi antioksidan untuk meredam  50%  aktivitas  radikal bebas.  Menurut  Blois  menyatakan bahwa  ekstrak  dengan  nilai  IC50 yang  kurang  dari  200  µg/ml memiliki  aktivitas  antioksidan  yang kuat. Semakin kecil nilai IC50berarti semakin kuat daya antioksidannya.
Ketiga ekstrak yang diperoleh diuji  aktivitas  antiradical  bebas  dan diperoleh  nilai  IC 50 untuk  ekstrak etanol  sebesar  3,113  mg/ml,  nilai  IC 50 untuk ekstrak N-heksan sebesar 28,713 mg/ml,  dan  nilai  IC  untuk  fraksi  etil asetat sebesar 4,556  mg/ml.
Sedang nilai ICdari sampel pembanding yaitu vitamin C 0,106 mg/ml dan BHT 0,067 mg/ml.  Ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  yang  memiliki  aktivitas antioksidan yang paling kuat, walaupun  aktivitasnya  lebih  rendah jika  dibandingkan  dengan  vitamin  C dan BHT.
Gambar profil KLT dan nilai Rf untuk setiap sampel dapat dilihat pada tabel 3. Sedangkan pada penyemprotan dengan menggunakan reagen antimmon (III) klorida memperlihatkan bercak berpendar kuning pada UV 366 yang menandakan bahwa daun paliasa mengandung golongan senyawa flavanoid. Perubahan warna ini terjadi karena  adanya  fungsi  lingkaran teroksidasi  pada  senyawa  flavanoid yang bereaksi sebagai ligan-ligan ketika ditambahkan  dengan  antimmon  (III) klorida yang merupakan logam.
KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  dapat  disimpulkan  Nilai IC untuk ekstrak etanol sebesar 3,113 mg/ml,  nilai  IC 50 ekstrak  N-heksan sebesar 28,713 mg/ml, dan nilai IC 50 untuk fraksi etil asetat sebesar 4,556 mg/ml.  Sedang  nilai  IC50  dari sampel pembanding yaitu vitamin C 0,106 mg/ml dan BHT 0,067 mg/ml. Ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  paling  kuat, walaupun    aktivitasnya    lebih rendah  jika  dibandingkan  dengan vitamin C dan BHT.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  2008,  Antioksidan,  Info Kesehatan, (Online),
(http:www.blogdokter.net/2008/
10/20/antioksidan/trackback, diakses 19 April 2011).
Dirjen POM., 1979. Farmakope Indonesia, Edisi  III.  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia:Jakarta.
Hasni,  2002,  Pengaruh  Infus  Daun
Paliasa  (Kleinhovia  hospita  Linn.) Terhadap  Transport  Aktif  Glukosa Pada  Usus  Halus  Marmut,  Skripsi,
Jurusan Farmasi, FMIPA-
UNHAS: Makassar.
Hendra, E, 2005, Isolasi Dan Identifikasi
Senyawa  Metabolit  Sekunder  Fraksi n-Heksan Yang Non Aktif Terhadap Artemia  salina  Leach  Ekstrak  daun Paliasa  (Kleinhovia  hospita  Linn.)
Skripsi,  Jurusan  farmasi,  FMIPA-
UNHAS: Makassar.
Latif,  A.,  1997,  Kleinhovia  hospita  Linn.
Faridah,  H.I.  Dan  L.J.G  Van  Den
Maese, “ Plant Resources Of South-
East  Asia  No  II  ”,  Diterbitkan
Jurusan Kimia.
Raflizar,    dkk.,    2006,    Dekok    Daun
Paliasa  (Kleinhovia  hospita  Linn.)
Sebagai  Obat  Radang  Hati  Akut,
(Online),(http:www.kalbe.co.idfil escdkfiles06_150_DekokDaunPali
asaObatRadang.pdf06_150_Deko kDaunPaliasaObatRadang.html, Diakses April 2011).
Tayeb,R.,  2009,  Isolasi  Senyawa  Aktif Antikanker  Ekstrak  Metanol  Daun Paliasa (Melochia umbellate (Houtt) Staff  Var.deglabratan,  (Online),  ( http://www.unhas.ac.id/lppm/i ndex.php?option=com_content& view =article&id=88:bidang-ilmu- farmasi&catid=35:abstrak-
2009&Itemid= 63,
DiaksesApril2011).
Watson,  L.  1992,  The  Families  Of Flowering Plants: Sterculiaceae Vent,
(Online),
(Http://www.sterculiaceae,html, diakses April 11).
Wijayakusuma,  H.,  1992.  Tanaman Berkhasiat  Obat  Di  Indonesia,  Jilid I.Pustaka Kartini: Jakarta.