## AKTIVITAS ANTIBAKTERI JAMU MADURA SUBUR KANDUNGAN

## Andik Wijayanto dan Romi Abrori
Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang *Email korespondensi: wijayantoand@gmail.com

## ABSTRACT
Madurese traditional medicine (herbs) Subur Kandungan is a medicine that is widely used and  produced  in  Madura  that  contains  Curcuma  zedoaria (Chrism.)Rosc .,  Kaempferia galanga L ., Foeniculum vulgare Mill. , and Centella asiatica (L.)Urb. highly favoredby the Indonesian community, especially women to improve reproductive health but have not been tested  scientifically  and  standardization  to  ensure  efficacy  and  safety.  Initial  stageis screening bioactive compound and then antibacterial activity assay with paper disc method. Clinical  bacterial  isolates  such  as  Escherichia coli  and Staphylococcus  aureus  were  used as test organisms. The best treatment to inhibit the growth of E. Coli and S. aureusis 70% ethanol at a concentration of extract 1000 mg/ml with inhibition zone respectively 5mm and 6.5mm.  Although  in  crude  extract  form,  Madurese  traditional  medicine  (herbs)  Subur Kandungan had inhibitory effect on the growth of the E.coli and S.aureus so this traditional medicine potential as an antibacterial agent. It is recommended that further work be done to  identify  the  specific  secondary  metabolite  compound  that  responsible  for  this  effect, purify it, and standardize as same as a antibacterial drug.
Keyword: Madurese traditional medicine (herbs) Subur Kandungan, Antibacterial activity, C. zedoaria, K. galanga, F. vulgare, and C. asiatica

## PENDAHULUAN
Ramuan  tradisional  atau  lebih  dikenal sebagai jamu sering digunakan oleh masyarakat Indonesia  sebagai  alternatif  dalam  menjaga kesehatan  dan  mengobati  suatu  penyakit  selain berobat  ke  dokter  dan  menggunakan  obat-obat sintetis.  Data  Riset  Kesehatan  Dasar  2010 menunjukkan 56% masyarakat Indonesia pernah  mengkonsumsi  jamu  dan  Jawa  Timur mempunyai tingkat konsumsi jamu yang cukup tinggi  yaitu  71,84%.  Tingkat  konsumsi  jamu yang cukup tinggi disebabkan jamu merupakan warisan  nenek  moyang  dan  manfaatnya  dapat dirasakan  langsung  oleh  konsumen  yang sebagian besar (61,87 %) adalah wanita (Armas, 1995).
Diantara  sekian  banyak  jenis  jamu  yang dikonsumsi  wanita,  sebagian  besar  adalah  jamu Madura untuk kesehatan reproduksi (menyuburkan  kandungan).  Handayani  dan Suharti  (1999)  menginventarisasi  19  produsen jamu  di  4  kabupaten  di  Pulau  Madura (Bangkalan, Sampang, Pamekasan dan Sumenep) dan ditemukan berbagai produk jamu untuk  perawatan  dan  pengobatan  kesehatan reproduksi termasuk untuk kesehatan ibu setelah melahirkan.  Menurut  Handayani  (2003)  pulau Madura  merupakan  daerah  yang  memiliki
industri pengolahan  jamu yang terbukti memiliki  khasiat  yang  lebih  baik  jika dibandingkan  dengan  jamu  Jawa,  tetapi  jamu Madura  memiliki  rasa  yang  lebih  pahit  jika dibandingkan dengan jamu Jawa.
Salah  satu  jamu  Madura  untuk  kesehatan reproduksi  (menyuburkan  kandungan)  yang banyak  digunakan  oleh  masyarakat  adalah  jamu Subur  Kandungan.  Jamu  ini  berisi  ekstrak C. zedoaria , K.  galanga,  F  .vulgare ,  dan C. asiatica.
Penelitian  sebelumnya  telah  dilakukan  uji antibakteri  dan  terbukti  mempunyai  aktivitas antibakteri  dari  masing-masing  spesies C. zedoaria (Bugno et  al .,  2007  dan  Das  dan Rahman  2012), K.  galangal (Kochuthressia et al .,  2012,  Rao  dan  Kaladhar  2014) ,  F.vulgare (Ruberto et al ., 2000, Lo Cantore et al ., 2004), dan C.  asiatica (Taemchuay et  al .,  2009,  Dash et  al .,  2011)  tetapi  belum  pernah  dilakukan  uji antibakteri dalam bentuk ramuan/  jamu perpaduan  ekstrak C.  zedoaria , K.  galanga,
F.vulgare , dan C. asiatica .
Namun dalam pengembangan jamu Madura  terdapat  beberapa  kendala,  antara  lain standarisasi sulit untuk dilakukan karena bahan baku sebagian besar dibeli dari pasar tradisional. Selain  itu,  dosis  yang  digunakan  juga  belum
terstandarisasi dengan baik. Berdasarkan kondisi  diatas,  maka  perlu  dilakukan screening fitokimia  (metabolit  sekunder)  dan  analisis aktivitas  antibakteri  jamu  Madura  Subur Kandungan.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah C. zedoaria , K. galanga, F. vulgare , C.  asiatica ,  etanol  p.a,  aquades,  metanol, larutan  HCl  2  %,  larutan  metanol  50%,  logam Mg,  larutan  FeCl 3 ,  larutan  gelatin,  reagen Dragendroff, reagen Meyer, pereaksi Lieberman  Burchard ,  latutan  H 2 SO 4 pekat, larutan formaldehid 3%,  isolat E.  coli dan S. aureus , media pertumbuhan bakteri Luria Broth (LB) dan Luria Agar (LA).
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  oven,  loyang,  cawan  petri,  cawan penguap, desikator, neraca analitik, dan penjepit kayu,  blender,  gunting,  dan  ayakan  60  mesh, neraca analitik, kaca arloji, erlenmeyer 500 mL, aluminium  foil , shaker ,  gelas  ukur  100  mL, beaker  glass 100  mL,  kertas  saring,  penyaring buchner , rotary  evaporator ,  erlenmeyer  500 mL,  botol  vial,  desikator,  tabung  reaksi,  bola hisap,  rak  tabung  reaksi,  pipet  tetes,  penjepit kayu, vortex dan pipet ukur 5 mL, plat silika gel F 254 ,  bejana  pengembang, Laminar  Air  Flow (LAF),dan lampu UV.
Pembuatan Jamu. Sampel  tanaman  rizoma C.  zedoaria , rizoma K.  galanga, biji F.vulgare dan  daun C. asiatica dicuci  bersih  dan  dikeringanginkan. Selanjutnya sampel dipotong kecil-kecil dengan gunting  atau  pisau  dan  dikeringkan  dengan oven  pada  suhu  30  –  37 o C  selama  1  –  2  jam. Kemudian  sampel  kering  dihaluskan  dengan blender  sampai  menjadi  serbuk  dan  diayak dengan ayakan 60 mesh.  Jamu Subur Kandungan  dibuat  dengan  mencampurkan  4 macam  bahan  tanaman  dengan  komposisi masing-masing  25%.  Kemudian  jamu  tersebut digunakan sebagai sampel proses ekstraksi.

## Proses Ekstraksi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah metode maserasi dengan pelarut aquades, etanol 70%,  dan  etanol  100%.  Serbuk  jamu  Subur Kandungan  ditimbang  sebanyak  60  g,  lalu diekstraksi  dengan  perendaman  menggunakan 300 mL pelarut etanol selama 24 jam, kemudian dishaker selama 3 jam, selanjutnya disaring dan ampas  yang  diperoleh  dimaserasi  kembali
dengan  pelarut  yang  sama  dan  dilakukan sebanyak  3  kali  pengulangan  sampai  filtratnya berwarna  bening.  Hasil  penyaringan  dilakukan evaporasi dengan rotary evaporator , pada suhu 40 o C  selama  30  menit.  Hasil  dari  proses evaporasi  kemudian  disimpan  pada  suhu  4 o C untuk selanjutnya dilakukan uji fitokimia.

## Uji Fitokimia
Uji  Alkaloid (Harbone,  1987).  Ekstrak jamu Subur Kandungan diambil sebanyak 2 mg dan dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambah 0,5  mL  HCl  2  %  dan larutan  dibagi dalam  dua tabung.  Tabung  I  ditambahkan  0,5  mL reagen Dragendorff ,  tabung  II  ditambahkan  0,5  mL reagen Meyer . Jika tabung I terbentuk endapan jingga  dan  pada  tabung  II  terbentuk  endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.
Uji  Flavonoid (Indrayani et  al .,  2006). Ekstrak  jamu  Subur  Kandungan  diambil sebanyak  2  mg  dimasukkan  dalam  tabung reaksi  kemudian  dilarutkan  dalam  1–2  mL metanol  panas  50  %.  Setelah  itu  ditambah logam  Mg  dan  0,5  mL  HCl  pekat.  Larutan berwarna  merah  atau  jingga  yang  terbentuk, menunjukkan adanya flavonoid.
Uji  Triterpenoid  dan  Steroid (Indrayani et  al .,  2006).  Ekstrak  jamu  Subur  Kandungan diambil  sebanyak  2  mg  dimasukkan  dalam tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5  mL kloroform  lalu  ditambah  dengan  0,5  mL  asam asetat  anhidrat .  Campuran  ini  selanjutnya ditambah dengan 1 – 2 mL H 2 SO 4 pekat melalui dinding  tabung  tersebut.  Jika  hasil  yang diperoleh    berupa  cincin  kecoklatan  atau  violet pada  perbatasan  dua  pelarut  menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan  jika  terbentuk warna  hijau  kebiruan  menunjukkan  adanya steroid.
Uji  Saponin (Halimah,  2010)  Ekstrak jamu Subur Kandungan diambil sebanyak 2 mg dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  ditambah  air (1:1)  sambil  dikocok  selama  1  menit,  apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  2  tetes  HCl  1 N  dan  dibiarkan  selama  10  menit,  bila  busa yang  terbentuk  bisa  tetap  stabil  maka  ekstrak positif mengandung saponin.
Uji Tanin (Indrayani et al ., 2006).Ekstrak jamu  Subur  Kandungan  sebanyak  2  mg
dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  dengan  2-3  tetes  larutan  FeCl 3 1  %.  Jika  larutan  menghasilkan  warna  hijau kehitaman  atau  biru  tinta,  maka  bahan  tersebut mengandung tanin.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Bakteri  yang  diuji  adalah  bakteri  normal yang  terdapat  pada  saluran  reproduksi  wanita yaitu E. coli dan S. aureus.
Regenerasi  Bakteri. Sebelum  melakukan uji  antibakteri,  bakteri  yang  akan  dipakai diregenerasi  terlebih  dahulu.  Yang  pertama dilakukan  adalah  membuat  biakan  agar  miring yaitu menggoreskan biakan dari stok bakteri ke agar  miring  dengan  media Luria  Broth (LB) yang  masih baru.  Sebanyak 1ose koloni E. coli dan S. aureus diambil dari media penyimpanan dan disebarkan ke medium LB baru. Kemudian diinkubasi  pada  suhu  35-40 o C  selama  24-48 jam.
Uji  Aktivitas  dengan  Metode  Difusi Cakram Kertas (Paper Disc). Biakan ditanam satu  ose  pada  media  padat  dalam  cawan  Petri, selanjutnya diratakan sampai kering menggunakan  kaca speader .  Cakram  kertas dengan  diameter  5,5  mm  dibasahi  dengan ekstrak jamu Madura Subur Kandungan dengan konsentrasi  0  mg/ml,  100  mg/ml,  500  mg/ml, dan  1000  mg/ml.  Selanjutnya  diinkubasi  pada suhu  37 0 C  selama  24  jam  kemudian didokumentasikan. Antibiotik tetrasiklin digunakan sebagai pembanding (kontrol positif) dengan  konsentrasi  50  mg/ml.  Antibiotik  ini
dipilih  karena  telah  teruji  sensitif  terhadap E. coli dan S. aureus .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Fitokimia JamuSubur Kandungan
Pengujian  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam  jamu  Madura  Subur  Kandungan.    Hasil pengujian fitokimia dapat dilihat pada Tabel1.
Tabel 1.
Hasil Uji Fitokimia jamu Madura Subur Kandungan Penapisan fitokimia Hasil Flavonoid Positif (++) Alkaloid Positif (++) Saponin Negatif (-) Tanin Negatif (-)
Senyawa  yang  terdapat  dalam  jamu Madura  Subur  Kandungan  adalah  senyawa golongan  flavonoid  dan  alkaloid.Senyawa golongan  flavonoid  dan  alkaloid  ini  telah terbukti berpotensi sebagai senyawa antibakteri (Nazrul et al ., 2002, Saravanakumar et al. , 2009, Ozcelik et al ., 2011).

## Uji  Aktivitas  Antioksidan  Jamu  Subur Kandungan
Hasil  pengamatan  aktivitas  antibakteri jamu Subur Kandungan terhadap bakteri E. coli dan S.  aereus dengan  beberapa  konsentrasi pelarut  yang  digunakan  disajikan  pada  tabel  2, gambar 2 dan3. Jenis dan konsentrasi pelarut
Tabel 2 Aktivitas antibakteri jamu Subur Kandungan terhadap bakteri E. coli dan S. aereus dengan beberapa konsentrasi pelarut
Pelarut Spesies Bakteri Ulangan Zona Hambat (mm) pada perlakuan Jamu Subur Kandungan Tetrasiklin 0 mg/ml 100 mg/ml 500 mg/ml 1000 mg/ml 50 mg/ml Air destilata E. coli 1 0 2 0 3 16 2 0 1.5 0.75 2 16 Rata- rata 0 1.75 0.375 2.5 16 STDEV 0.00 0.35 0.53 0.71 0.00 S. aureus 1 0 2.5 4 5 15.5 2 0 1 2 3 7 Rata- rata 0 1.75 3 4 11.25 STDEV 0.00 1.06 1.41 1.41 6.01 Etanol 70% E. coli 1 0 1.5 2 5 17.5 2 0 3.5 4 5 15 Rata- rata 0 2.5 3 5 16.25 STDEV 0.00 1.41 1.41 0.00 1.77 S. aureus 1 0 6.5 4 6 10 2 0 4 4 7 11 Rata- rata 0 5.25 4 6.5 10.5 STDEV 0.00 1.77 0.00 0.71 0.71 Etanol 100% E. coli 1 0.5 5 4 4 21 2 0 3 3 5 20 Rata- rata 0.25 4 3.5 4.5 20.5 STDEV 0.35 1.41 0.71 0.71 0.71 S. aureus 1 0 0.5 1 3 17 2 0 0.5 0.5 1 16 Rata- rata 0 0.5 0.75 2 16.5 STDEV 0.00 0.00 0.35 1.41 0.71
Gambar 2  Aktivitas antibakteri jamu Subur Kandungan terhadap bakteri E. coli dan S. aereus dengan beberapa jenis dan konsentrasi pelarut
A B
Gambar  3    Zona  hambat jamu  Subur  Kandungan  konsentrasi  0  mg/ml  (kontrol  negatif),  100  mg/ml, 500  mg/ml,  dan  1000  mg/ml  serta  tetrasiklin  50  mg/ml  (kontrol  positif)  dengan  pelarut etanol 100% terhadap terhadap pertumbuhan bakteri E. coli (A) dan S. aureus (B).
terbaik  yang  memiliki  aktivitas  penghambatan pertumbuhan  bakteri E.  coli maupun S.  aereus adalah pelarut etanol 70%. Dari semua perlakuan konsentrasi  jamu  Subur  Kandungan  yang digunakan, yaitu 0 mg/ml, 100 mg/ml, 500 mg/ml, dan  1000  mg/ml;  konsentrasi  terbaik  yang menunjukkan  daya  hambat  maksimum  adalah pada konsentrasi 1000 mg/ml dengan segala jenis pelarut.
Daya  hambat  ini  lebih  kecil  daripada daya hambat antibiotik tetrasiklin yang digunakan sebagai  kontrol  +.  Hal  ini  wajar  terjadi  karena tetrasiklin  yang  digunakan  merupakan  senyawa bioaktif  murni  sedangkan  ekstrak  jamu  yang digunakan  masih  dalam  bentuk crude (ekstrak kasar).  Meskipun  dalam  bentuk  ekstrak  kasar, jamu telah mempunyai kemampuan daya hambat terhadap  pertumbuhan  bakteri E.  coli dan S. aereus sehingga  jamu  Subur  Kandungan  ini berpotensi sebagai antibakteri dan perlu dilakukan screening dan isolasi senyawa bioaktif serta uji antibakteri lanjutan dengan menggunakan  bakteri-bakteri  patogen  yang terkait  kesehatan  reproduksi  wanita  seperti Neisseria gonorrhoeae dan Trichomonas vaginalis .

## SIMPULAN
Senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam jamu Madura Subur Kandungan adalah golongan flavonoid  dan  alkaloid.  Senyawa  ini  diduga berperan aktif dalam aktivitas antibakteri.
Daya  hambat  terbaik  ekstrak  terhadap pertumbuhan  bakteri E.  coli dan S.  aereus pada perlakuan  pelarut  etanol  70%  pada  konsentrasi 1000 mg/ml dengan zona hambat masing-masing 5  mm  dan  6.5  mm.  Meskipun  dalam  bentuk ekstrak  kasar,  jamu  ini  telah  mempunyai kemampuan  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aereus sehingga jamu Subur Kandungan ini berpotensi sebagai antibakteri.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Kami  ucapkan  terimakasih  kepada  LP2M UIN  Maulana  Malik  Ibrahim  Malang  atas dukungan  dana  penelitian  dan  Tim  Riset Biofarmaka  FST  UIN  Maulana  Malik  Ibrahim Malang atas kerjasamanya.

## DAFTAR PUSTAKA
Armas  EJ.  1995. Learning Together. A woman’s Story .  In:  Learning  about  Sexuality.  A Practical  Beginning.  Editor:  Sondra Zeidenstein  and  Kristen  Moore.  New
York : The Population Council International Women’s Health Coalition. Bugno  A,  Nicoletti  MA,  Almodovar  AAB, Pereira  TC,  Auricchio  MC.  2007. Antimicrobial  efficacy  of  Curcuma zedoaria  extract  as  assessed  by  linear regression  compared  with  commercial mouthrinses. Brazilian  J  of  Microbiol 38:440-445.
Das  K  dan  Rahman  MA.  2012.  Analgesic  and microbial activities of Curcuma zedoaria . Int J Pharm Pharm Sci 4(5):322-328. Dash BK, Faruquee HM, Biswas SK, Alam MK,
Sisir SM, Prodhan UK. 2011.
Antibacterial and Antifungal Activities of Several  Extracts  of Centella  asiatica L. against Some Human Pathogenic Microbes. Life Sci and Med
Research 2011:1-5.
Halimah  N.  2010.  Uji  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas  Ekstrak  Tanaman  Anting- anting  ( Acalypha  indica L.)  terhadap Larva  Udang Artemia  salina Leach. Skripsi .  Malang:  UIN  Maulana  Malik Ibrahim Malang.
Handayani L. 2003. Membedah Rahasia Ramuan Madura.  Jakarta:  Agromedia  Pustaka Press.
Handayani  L  dan  Suharti S.  1999.  Industri  Kecil Obat  Tradisional  di  Madura. Medika 5:
290–295.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia:  Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan  Terbitan  Kedua .  Bandung  : ITB Press.
Indrayani  L,  Soetjipto  H,  Sihasale  L.  2006.
Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Toksisitas Ekstrak Daun Pencut Kuda ( Stachytarpheta  jamacencis L.  Vahl) terhadap  Larva  Udang Artemia  salina Leach. J of Sci . 12: 57-61.
Kementrian  Kesehatan  2010. Riset  Dasar Kesehatan 2010. Jakarta: Kementrian Kesehatan Republik Indonesia Press.
Kochuthressia  KP,  Britto  SJ,  Jaseentha  MO,
Raphael  R.  2012.  In  vitro  antimicrobial evaluation  of Kaempferia  galanga L. rhizome  extract. Am.  J.  Biotechnol.  Mol. Sci. 2(1):1-5.
Lo  Cantore  P,  Iacobellis  NS,  De  Marco  A,
Capasso F, Senatore F. 2004.
Antibacterial  activity  of Coriandrum sativum L.  and Foeniculum  vulgare Miller  var.  vulgare  (Miller)  essential
oils. J  Agric  Food  Chem .  52(26):7862- 7866. Nazrul ISK, Gray AI, Waterman PG, Ahasan M. 2002.  Screening  of  eight  alkaloids  and ten flavonoids  isolated  from  four  species of  the  genus  Boronia  (Rutaceae)  for antimicrobial  activities  against  seventeen clinical  microbial  strains. Phytother Res .16(7):672-4.
Ozcelik B, Kartal M, Orhan I. 2011. Cytotoxicity, antiviral  and  antimicrobial  activities  of alkaloids, flvonoids,  and  phenolic  acids. Pharm Biol 49(4):396-402. Rao RV dan Kaladhar DSVGK. 2014. Antioxidant  and  Antimicrobial  Activities of RhizomeExtracts of Kaempferia galanga . World  J  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sci 3(5):1180-1189. Ruberto  G,  Baratta  MT,  Deans  SG,  Dorman  HJ. 2000.  Antioxidant  and  antimicrobial activity  of Foeniculum  vulgare and Crithmum  maritimum essential  oils. Planta Med 66(8):687-693. Saravanakumar A, Venkateshwaran K, Vanitha J, Ganesh  M,  Vasudevan  M,  Sivakumar  T. 2009. Evaluation of antibacterial activity, phenol and flavonoid contents of Thespesia  populnea flower  extracts. Pak J Pharm Sci . 22(3):282-6. Taemchuay D, Rukkwamsuk T, Sakpuaram  T,  Ruangwises  N.  2009. Antibacterial  Activity  of  Crude  Extracts of Centella
asiatica
against Staphylococcus aureus in Bovine Mastitis.
Kasetsart Veterinarians 19(3):119-128.