## PENELUSURAN ZAT TOKSIK SARANG SEMUT ACEH (Mymercodia sp) DENGAN METODE BST TERHADAP LARVA UDANG Artemia salina LEACH
Frengki 1*) , Cut Gina Indriyani 2
1 Klinik interna Fakultas Kedokteran Hewan Unsyiah, Banda Aceh
2 Staf pengajar Fakultas Kedokteran Unsyiah, Banda Aceh * ) Email: farhanayyash@gmail.com

## ABSTRACT
The Myrmecodia species as medicinal plants find Papua Island and Sumatera Island like Aceh forest.It is a member of Rubiaceae family and lives as ephyphyte on other plants. Local peoples in Aceh province boiled the tubers parts of myrmecodia species to treat inflammation, rheumatic,cancer and other diseases. Meanwhile, there is still limited scientific evidence to proof the efficacy of myrmecodia species.  The dried simplicia was extracted using maceration technique, then partitioned usingn-hexane, chloroform and n-buthanol solvent. Toxicity test was done by the Brine Shrimp Lethality Test (BST) methodat four concentration levels, i.e: 1000, 500, 250, 125 and 6.5 ppm. The result of the  research  showed  that n-buthanol,  chloroform  and n-hexan of  Myrmecodia  sphad  acute toxicity  by  LC 50 value 97.72 ppm, 262.02 ppm and 223.87 ppm respectively. Analysis Infrared spectrum of buthanol extract showed some functional groups. like hydroxy, aether and aromatic ring.

## Keyword : Sarang semut Aceh, Toxicity, BST Methode

## I. PENDAHULUAN

## Latar Belakang
Tumbuhan  merupakan  salah  satu  bahan  obat tradisional  yang  telah  dikenal  sejak  dahulu  kala. Dalam beberapa  tahun terakhir ini  penggunaan  obat tradisional telah menarik perhatian dan kepopulerannya di masyarakat kita semakin meningkat.Salah satu penyebabnya adalah penerimaan masyarakat itu sendiri terhadap manfaat dan kegunaan tumbuhan obatdalam pemeliharaan kesehatan (Christine, 1985).
Pemilihan tumbuhan dalam rangka pencarian senyawa bioaktif baru dari tumbuhan dapat dilakukan melalui pendekatan secara etnobotani dan kemotaksonomi.  Pendekatan etnobotani dimaksudkan penelusuran  berdasarkan  pemakaian  bahan  alam  oleh suatu  etnik  tertentu  untuk  berbagai  tujuan  terutama pengobatan.  Sedangkan  pendekatan  kemotaksonomi dilakukan melalui penelusuran berdasarkan hubungan kekerabatan antar tumbuhan dengan asumsi tumbuhan yang sekerabat memiliki kandungan kimia yang sama atau  paling  tidak  memiliki  rangka  atau  inti  senyawa aktif yang sama (Anonimous, 1997).
Salah  satu  tanaman  obat  tersebut  adalah sarang  semut (Myrmecodia  sp).Myrmecodia  pendans merupakan tanaman obat asal Papua obat yang cukup ampuh  mengatasi  berbagai  jenis  penyakit  terutama penyakit metabolik. Hal ini dapat dilihat dari berbagai macam  laporan  hasil  penelitian  pre-klinik  maupun melalui media masa.
Subroto  dan  Saputro (2006),  mengungkapkan bahwa  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  sarang semut  itu  adalah flavonoid, tanin,  dan polifenol  yang berfungsi sebagai antioksidan dalam tubuh. Selain itu dalam  sarang  semut  juga  ditemukan  kandungan senyawa  yang  bermanfaat  lainnya,  seperti tokoferol, magnesium, kalsium, besi, fosfor, natrium,  dan seng. Senyawa  aktif  polifenol  yang  terkandung  dalam sarang  semut  memiliki  banyak  khasiat,yaitu  sebagai antimikroba, antidiabetes, dan antikanker.
Seiring  dengan  pemberitaa ntersebut,  banyak ditemukan  tumbuhan  sejenis  diberbagai  daerah  di Indonesia  termasuk  di  Aceh.  Penelitian  dan  publikasi ilmiah  sarang  semut  Aceh  masih  sangat  terbatas bahkan  laporan  khasiatnya  belum  ada  sama  sekali, padahal masyarakat di Aceh sudah lama memanfaatkan sarang semut tersebut secara tradisional sebagai obat.
Setiap  penelitian  bahan  alam  yang  diduga berpotensi  sebagai  obat  maupun  secara  empiris  telah digunakan  masyarakat  sebagai  obat,  diawali  dengan uji  pre-klinis  toksisitas  untuk  memprediksi  tingkat keamanannya,  kemudian dilanjutkan  dengan  uji farmakologi  lainnya.  Metode  uji  toksisitas  dapat dilakukan  secara in  vitro maupun in  vivo. Salah  satu metode  toksisitas  in  vitro  yang  sering  digunakan adalah  metode  BST  (Bhrine  Shrine Test) (Alam, 2002).
BST merupakan salah satu cara yang cepat dan murah  untuk  skrining toksisitas dari  ekstrak tanamandengan  menggunakan  hewan  laut  yaitu  larva
udang Artemia  salina Leach  (Meyer,  1982).Uji toksisitas  dengan  metode  BST  ini  memiliki  spektrum aktivitas farmakologi yang luas, prosedurnya sederhana,  cepat  dan  tidak  membutuhkan  biaya  yang besar,  serta  hasilnya  dapat  dipercaya.  Disamping  itu metode ini sering dikaitkan dengan metode penapisan senyawa antikanker.
Hasil  skrining  fitokimia  tumbuhan  sarang semut  Aceh  yang  telah  peneliti  lakukan  sebelumnya diketahui  mengandung  golongan  senyawa  fenol, saponin,  steroid  dan Triterpenoid (Frengki,  dkk. 2013).  Hal  ini  mengindikasikan  tumbuhan  ini  kaya dengan  senyawa  bioaktif.  Kesimpulan  ini  diperkuat dengan  hasil  uji  toksisitas  dengan  metode  BST terhadap  ekstrak  kasar  etanol  diperoleh  LC 50 61,10 µg/ml.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  penulis berkeinginan mengetahui lebih  jauh  golongan senyawa aktif apa sebenarnya  yang paling toksik dan berpeluang  untuk  dikembangkan  sebagai  sumber bahan  baku  obat  dengan  melakukan  penelusuran berkelanjutan  terhadap  fraksi-fraksi  yang  dibedakan berdasarkan tingkat kepolarannya. Selanjutnya terhadap fraksi yang paling aktif dilakukan identifikasi kandungan senyawa kimia secara spektroskopi.

## II. MATERIAL DAN METODE PENELITIAN

## A. MATERIAL
Material  yang  digunakan  meliputi  blender, batang pengaduk, cawan petri, gelas piala 250 ml-500 ml, gelas ukur 10 ml-100 ml, seperangkat alat refluks, evaporator, toples, seperangkat alat skrinning fitokimia,  sumur  plat  dan  pipet  mikro,  sedangkan bahan yang  digunakan  adalah    ekstrak  etanol  sarang semut, pelarut etanol  70% , n-heksan,  kloroform  dan aquadest, air laut serta larva udang renik.
B. METODE

## 1. Jenis Penelitian
Penelitian ini adalah deskripsi eksploratif dan penelitian  eksperimental dengan  pendekatanpost  test- only  control  group  design.  Perlakuan  dengan pemberian  ekstraketanol,  fraksi  n-heksan,  etilasetat dan  airtumbuhan  sarang  semut  asal  Aceh terhadap larva Artemia  salina  Leach. Terhadap  ekstrak  paling toksik  akan  dianalisis  kandungan senyawa  aktifnya secara spektroskopi

## 2. Populasi Dan Sampel
Populasi  penelitian eksperimental ini  adalah larva Artemia  salina  Leach. Sampel diambil  secara
acak  terhadap  larva  tang  memenuhi  kriteria sebagai berikut :
Kriteria Inklusi:
- Larva Artemia salina Leach berumur 48 jam
- Larva yang tidak tampak cacat secara anatomi
Kriteria Eksklusi: - Larva Artemia salina Leach yang tidak menunjukkan aktivitaspergerakan sebelum perlakuan.

## Besar Sampel
Jumlah  larva Artemia  salina  Leach yang digunakan  adalah  10  ekorlarva  tiap  kelompok perlakuan. Pada penelitian ini terdapat tiga kelompokperlakuan dengan  lima  kali replikasi  untuk tiap  kelompokperlakuan. Sehingga jumlah  sampel total  yang  diperlukan  adalah 150 ekor  larva masing- masing ekstrak (n-heksan, kloroform, dan air).

## 3. Variabel Penelitian Uji Eksperimental
Variabel  bebas  dalam  penelitian  ini  adalah ekstrak fraksi  n-heksan,  kloroform  dan  air  tumbuhan sarang  semut,  sedangkan  variabel terikat adalah  efek toksikterhadap larva Artemia salina Leach.

## 4. Cara Kerja Pengolahan sampel
Sarang  semut  di  potong  kecil-kecil  dan dikeringkan dan di  jemur  di  bawah  paparan  sinar matahari,  kemudian  di  serbukkan  dengan  cara  di blender.

## Ekstraksi sampel
Sampel (10 kg) direndam  dalam etanol 70% dengan  perbandingan  1:3  dengan  sesekali  dikocok. Proses  perendaman  ini  berlangsung  selama  3  hari. Kemudian  dilanjutkan  dengan  proses  penyaringan, maserat yang diperoleh diuapkan pelarutnya menggunakan rotary  evaporator hingga  diperoleh ekstrak kental. Selanjutnya ekstrak tersebut dimasukkan kedalam oven hingga semua air menguap dan  ekstrak  menjadi  kering.  Lakukan  penimbangan terhadap rendemen yang diperoleh.

## Uji Toksisitas
Pembiakan  udang  dilakukan  dalam  sebuah kotak  yang  telah  dibagi  menjadi  dua  bagian  dengan sekat  berlubang  dimasukkan  air  laut  secukupnya. Salah  satu  sisi  kotak  ditutup  dengan  alumunium  foil, kemudian  kotak  diletakkan  di  bawah  lampu  UV selama  48  jam.  Larva yang  menembus  daerah  terang setelah berumur  48  jam  siap  digunakan  untuk  uji toksisitas.
Larutan  induk  dibuat  dengan  melarutkan  4 mg  sampel  dengan  10  µL  DMSO  dan  ditambahkan
5 0 0 7 5 0 1 0 0 0 1 2 5 0 1 5 0 0 1 7 5 0 2 0 0 0 2 5 0 0 3 0 0 0 3 5 0 0 4 0 0 0 1 / c m 3 5 4 0 4 5 5 0 5 5 6 0 6 5 7 0 7 5 8 0 8 5 9 0 9 5 % T 36 03 .0 3 35 50 .9 5 34 96 .9 4 31 76 .7 6 31 22 .7 5 30 66 .8 2 29 31 .8 0 27 17 .7 0 23 82 .0 9 22 77 .9 3 20 50 .3 3 16 02 .8 5 15 10 .2 6 14 42 .7 5 12 80 .7 3 10 99 .4 3 10 68 .5 6 96 8. 27 63 2. 65 58 2. 50 50 5. 35 43 9. 77 1 4 0 5 2 0   0 2 3 4 -20 0 20 40 60 80 100 120 0 500 1000 1500
M or tal itas (% )
Konsentrasi (ppm)
Ekst rak heks an
dengan  air  laut  dengan  kadar  garam  hingga  2  mL. Kadar larutan induk adalah 2000 µg/mL. Sampel yang akan  diuji  disiapkan  pada  konsentrasi  500,  250,  100 dan 50 µg/mL. Sebagai blanko tanpa larutan uji dibuat dengan  cara  10 µL DMSO  ditambahkan  air  laut hingga 2 mL.
Sebanyak  10  larva  udang  dalam  100  µL  air laut  dimasukkan  ke  dalam  vial  uji,  kemudian ditambahkan  100  µL  larutan  sampel.  Untuk  setiap konsentrasi  dilakukan  3  kali  pengulangan.  Sebagai kontrol    dilakukan  dengan  100 µL larutan  blanko kemudian  ditambahkan  air  laut  hingga 100µL. Pengamatan  dilakukan  setelah    24  jam  dengan menghitung  jumLah  larva  udang  yang  masih  hidup dan yang sudah mati, kemudian dihitung mortalitasnya seperti persamaan berikut :
Nilai  LC 50 ditentukan melalui  persamaan regresi  (sumbu  x  adalah  [log  k],  sedangkan  sumbu  y adalah  %  mortalitas) dengan bantuan program komputer sederhanaMic. Excel 2007. Suatu fraksi atau ekstrak    dikatakan  aktif  bila  mempunyai  nilai  LC 50 ≤ 1000 µg/mL (Meyer, dkk. 1984 dan Alam. 2002).
Fraksi  yang  menunjukkan  aktivitas  daya paling  toksik  akan  diidentifikasi  kemungkinan senyawa  yang  dikandungnya  secara  deskriptif menggunakan spektrofotometer Infra Merahuntukmengetahui  gugus  fungsi  senyawa  kimia penyusunnya. SpektrumIR yang diperoleh diinterpretasikan  berdasarkan  pita  serapan  dari  pola spektrum yang terbentuk.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Hasil
Hasil  partisi 1,8  g ekstrak etanol  sarang semut diperoleh  masing-masingnya  fraksi  heksan 100mg,  fraksi kloroform  300  mg,  dan  fraksi butanol sebanyak 1,4 g.
Hasil uji BSLT diperoleh nilai LC 50 masing- masing  fraksi  tersebut  sebesar  223.87  ppm  untuk fraksi heksan, 26.02 ppm untuk fraksi kloroform, dan 97.72 ppm untuk fraksi butanol.
Gambar 1. Grafik Hasil Uji BST
Hasil identifikasi gugus fungsi fraksi butanol diketahui  adanya  pita serapan  pada  bilangan gelombang (v) 962.27, 1068.56, 1099.43, 1280.73,
1442.75, 1510.28, 1602.87, 2050.33,
2277.93,  2382.09,  2717.70,  2931.80,  3066.82, 3122.75, 3176.76 3496.94, 3550.95 dan 3603.03 cm -1

## Gambar 2. Grafik FT-IR ekstrak butanol

## B. Pembahasan
Hasil  partisi  menunjukkan  fraksi  polar (n- buthanol) merupakan  komponen  terbanyak  yang terdapat dalam  ektrak  etanol  sarang  semut  yaitu sebesar  77,78%,  selanjutnya  fraksi  semi  polar (kloroform) dengan  persentase  16,67%  dan  terakhir fraksi non polar (n-hexan) 5,56%.
Komponen  yang  terkandung  dalam  fraksi polar  diduga  senyawa  golongan  polifenol dan glikosida. Hasil skrining uji fitokimia yang telah telah peneliti  laporkan  sebelumnya  (Frengki  dkk,  2013) dengan  metode  Simes dkk  (1995) yang  dimodifikasi, positif  mengandung  fenol dan  saponin  (glikosida). Senyawa golongan fenol ditandai terjadinya perubahan  warna  endapan  ekstrak  uji  menjadi  biru setelah  diteteskan  FeCl 3 ,  sedangkan  indikasi  adanya senyawa  golongan  glikosidamelalui  pengocokan  kuat secara  vertikal  selama  10  detik  campuran  sedikit ekstrak  sarang  semut  dengan  air  didalam  tabung reaksi membentuk  busa setinggi  1-10  cm  yang  stabil kurang  lebih  15  menit  dan  tidak  hilang  pada penambahan setetes asam klorida 2 N.
Informasi ini diperkuat berdasarkan interpretasi  spektrum  infra  merah  (FTIR)  yang menunjukkan  pita  serapan  pada  bilangan  gelombang (v) 3496.94,  3550.95  dan  3603.03 cm -1 yang menunjukkan  vibrasi  ulur gugus-O-H.    Pita  serapan dengan bilangan  gelombang (ν) 3 122.75 dan 3176,76 cm -1 menunjukkan  gugus  aromatis  (vibrasi  ulur  C-H aromatis)  dan  1602.85 cm -1 (vibrasi  ulur  C=C aromatis). Adanya  puncak  serapan  pada  bilangan gelombang  ν: 2931.80,  3066.82,  dan  3122.75 cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi  ulur  dari  C-H.  Adanya pita serapan  pada  daerah  bilangan  gelombang  ν  :
1068.56,  1099.43,  dan  1280.73 cm -1 menunjukkan adanya  ikatan  C-O-C (Khopkar  SM.  1990, Larry  G Hargis. 1988)
Hasil  uji  BSLT (Brine  Shrime  Letality  Test) menunjukkan  ketiga  fraksi  hasil  partisi  tersebut bersifat  toksik.  Sebagaimana  dikemukan  Meyer  dkk (1984)  dimana  suatu  ekstrak  yang  berasal  dari  bahan alam  dikatakan  toksik  jika  nilai  mortalitas  (LC 50 )  < 1000  ppm.  Informasi  ini  dapat  pula  diterjemahkan bahwa  sifat  toksik  tersebut  berasal  dari  komponen bioaktifnya.  Lebih  jauh  metode  BSLT  ini  sering dihubungkan  dengan  potensi  ekstrak  tersebut  sebagai antikanker.
Dari  ketiga  fraksi  tersebut  ternyata  fraksi polar  yang  paling  kuat  daya  toksiknya  yaitu    97,72 ppm.  Sedangkan  fraksi  semi  polar  dan  fraksi  non polar masing-masingnya 262,02 ppm dan 223,87 ppm. Perbedaan  daya  toksik  tersebut  diduga  komponen- komponen  senyawa  aktif  yang  dikandung  masing- masing  fraksi  berbeda  satu  sama  lain.  Komponen senyawa  aktif  fraksi  polar  diduga  lebih  kuat ketimbang dua fraksi lannya. Selain itu karena jumlah komponen  senyawa  aktif  yang  dimiliki  fraksi  polar lebih banyak ketimbang fraksi semi polar maupun non polar.
Berdasarkan  hasil  partisi  dan  uji  BSLT tersebut  dapat  diamati  kemungkinan  senyawa  aktif yang  potensial  ditelusuri  adalah  fraksi  polar.  Potensi fraksi  ini  larut  dalam  air  juga  lebih  besar  sehingga dapat  dimengerti  pengolahan  sarang  semut  ini  secara tradisional oleh masyarakat melalui teknik perebusan, seduhan  menghasilkan efek  terapi  yang  signifikan baik  terhadap  penyakit  akut  yang  sering  diderita seperti  flu  dan  batuk  juga  terhadap  penyakit  kronis seperti  hiperkolesterol,  diabetes,  asam  urat  hingga penyakit kanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Alam,  G. 2002.  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) Sebagai  Bioassay  dalam  Isolasi  Senyawa Bioaktif  dari  Bahan  Alam. Majalah  Farmasi dan Farmakologi. 6(2). 432-435.
Anonimus.  1997. Tumbuhan  Hutan  Tropik  Sebagai Sumber  Bahan  Kimia.  Bogor :  Puslitbang Biologi LIPI. 5-11.
Christine. 1985. Penggunaan Tanaman Obat. Penerbit Buletin Farmakon, Jakarta.
Frengki.,  Wati.,  R,  Pertiwi,  D.  Uji  toksisitas  Ekstrak Etanol  Tumbuhan  Sarang  Semut  Aceh (Myrmecodia  sp)  dengan  metode  BSLT. Jurnal  Veterinaria Medika.  Vol  7.  No.2 FKH-Unsyiah. Banda Aceh
Khopkar  SM.  1990. Konsep  Dasar  Kimia  Analitik. Jakarta : UI Press.
Larry  G  Hargis.  1988. Analytical  Chemistry. Principles  And  Technigues. NewJersey  : Prentice Hall Inc
Meyer, B.N. 1982.  “Brine  Shrimp  :  A  Convenie nt
General Bioassay for Active Plant Constituents” . Journal of  Medical Plant Research Planta MedicaUSA. 31-34
Simes,  J.J.H.,  J.G.  Tracey,  L.J.  Webb,  and  W.J.
Dunston. 1995. An Australian PhytochemicalSurvey, Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization, Australia.
Subroto,  A.  dan  Saputro,  H. 2006.  Gempur  Penyakit Sarang Semut. Penerbit Swadaya, Depok.