## UJI PENURUNAN KADAR GLUKOSA DARAH OLEH EKSTRAK ETANOL 70% DAUN BUNCIS

## ( Phaseolus vulgaris L) PADA KELINCI JANTAN YANG DIBEBANI GLUKOSA
Desy Kurniawati, EM Sutrisna, Arifah Sri Wahyuni Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta

## ABSTRACT
This research aim to know the descent of blood glucose rate by extract etanol 70% of bean leaf  at  male rabbit which induced  glucose. Research using the method test glucose tolerance of oral was including category research of sham eksperimental with complete random attempt device of unidirectional pattern. This research use 20 male rabbits which divided in 5 treatment group. Group I given by CMC Na 1% as negative control, group II given by acarbose suspensi 2,33 mg/kgBB as positive control, group III, IV and  V given by extract etanol 70% bean leaf with each dose 200, 300 and 450 mg/kgBB. Treatment given at once after test animal induced glucose 50% ( 5 ml/1,5 kgBB). Glucose blood rate to de � ne every 30 minute, 0 minute until 300 minutes by using method of enzimatik GOD PAP (Glucose Oxidase Phenol Aminoantipyrina Peroxidase), what was later then analysed with one track Anava and continued by test of LSD (Least Signi � cant Diffeerence) with trust level 95%. Extract  etanol 70% bean leaf with dose 200, 300 and 450 mg/kgBB have effect descent of blood glucose rate to negative control of CMC Na 1% (p = 0,000) with each percentage descent of blood glucose rate (% PKGD) 80,88 ± 0,93 ; 82,73 ± 0,67 and 85,32 ± 0,21.
Keyword : Extract etanol 70%, bean leaf (Phaseolus vulgaris L), degradation of glucose rate
PENDAHULUAN Penyakit Diabetes Mellitus (DM)
merupakan  salah  satu  dari  beberapa  penyakit degeneratif  yaitu  penyakit  akibat  fungsi  atau struktur dari jaringan atau organ tubuh yang secara progresif  menurun  dari  waktu  ke  waktu,  yang diakibatkan usia atau pilihan gaya hidup (Subroto, 2006). Penyakit DM adalah suatu kumpulan gejala yang timbul pada seseorang akibat meningkatnya kadar  gula  (glukosa)  darah  yang  disebabkan kekurangan  insulin  baik  absolut  maupun  relatif, sehingga pengaturan kadar glukosa darah menjadi kacau.  Walaupun  kadar  glukosa  darah  sudah tinggi,  pemecahan  lemak  dan  protein  menjadi glukosa  ( glukoneogenesis )  di  hati  tidak  dapat dihambat  sehingga  kadar  glukosa  darah  semakin meningkat (Soegondo dkk., 2005). Penyakit DM menimbulkan  komplikasi  antara  lain:  gangguan ginjal,  gangguan  penglihatan,  gangguan  seksual, kerusakan  saraf,  gangguan  peredaran  darah, jantung,  serta  mudah  terkena  infeksi  (Anonim b , 2005).
Jumlah  penderita  penyakit  DM  terus meningkat  setiap  tahunnya.  Menurut  data  yang
dipublikasikan dalam jurnal Diabetes Care tahun 2004, penderita diabetes di Indonesia pada tahun 2000  mencapai  8,4  juta  orang  (Subroto,  2006) dan  hasil  survey  yang  dilakukan  oleh  organisasi kesehatan  dunia  WHO,  Indonesia  menempati urutan ke-4 terbesar dengan prevalensi 8,6% dari total  penduduk  dalam  jumlah  penderita  penyakit DM  (Anonim a ,  2005).  Meningkatnya  prevalensi DM  di  Indonesia  dapat  menimbulkan  dampak negatif  berupa  penurunan  kualitas  Sumber  Daya Manusia  (SDM)  akibat  sifat  penyakit  yang menahun. Pengobatan yang dilakukan tidak murah karena  penderita  DM  harus  mengkonsumsi  obat dalam  jangka  waktu  yang  cukup  lama.  Padahal obat  sintetis  kimia  (obat  konvensional)  yang dikonsumsi dan beredar di pasaran cukup mahal.
Indonesia memiliki alam yang menyediakan beragam  tanaman  obat  berkhasiat  yang  dapat digunakan  untuk  mengatasi  berbagai  macam penyakit. Tanaman-tanaman yang diduga berkhasiat  untuk  pengobatan,  sebenarnya  telah digunakan secara tradisional (Subroto, 2006). Saat ini penggunaan obat-obatan dari bahan alami (obat herbal)  dalam  pengobatan  semakin  meningkat,
namun  bukti  ilmiahnya  pada  umumnya  masih sedikit, sementara tuntutan bukti-bukti ilmiah dari pengguna  obat  tradisional  semakin  meningkat dengan semakin meningkatnya kesadaran masyarakat akan kesehatan (Suharmiati, 2003).
Tanaman  obat  terbukti  salah  satu  sumber bahan  baku  obat  DM  karena  pada  tanaman tersebut  memiliki  senyawa-senyawa  yang berkhasiat  sebagai  antidiabetes  mellitus.  Buah buncis  sudah  terbukti  memiliki  khasiat  sebagai antidiabetes  yaitu  mampu  menurunkan  kadar glukosa  darah  (Muhtadi,  1987).  Daun  buncis memiliki  kandungan  yang  mirip  dengan  buah buncis  (Hutapea,  dan  Syamsyuhidayat,  1994), sehingga  mendorong  peneliti  untuk  mengetahui kemampuan daun buncis dalam menurunkan kadar glukosa  darah  pada  kelinci  jantan  yang  dibebani glukosa  dengan  menggunakan  ekstrak  etanol 70%,  karena  kemungkinan  kandungan  senyawa yang  terdapat  dalam  daun  buncis  dapat  tersari. Diharapkan  penelitian  ini  dapat  memberikan informasi  tentang  khasiat  daun  buncis  sebagai penurun kadar glukosa darah dengan dasar bukti yang dapat dipertanggungjawabkan secara ilmiah, serta nantinya dapat digunakan sebagai alternatif obat antidiabetes.

## METODE PENELITIAN
Bahan : Subjek uji yang digunakan adalah kelinci  jantan  albino  galur  lokal  dengan  berat badan  1,0-1,9  kg.  Bahan-bahan  yang  digunakan adalah daun buncis muda (daerah Karang Pandan, Tawangmangu),  acarbose  (Glucobay R ,  Bayer), aquadest (Brataco), glukosa GOD PAP (DiaSys), D-glukosa  monohidrat  (E.Merck),  CMC  Na (teknis),  dan  EDTA  (Laboratorium  Biologi Universitas  Muhammadiyah  Surakarta),  dan etanol teknis 70% (Brataco).
Alat :  Dalam  penelitian  ini  alat  yang digunakan  adalah  alat-alat  gelas,  ayakan  no.40 mesh,  corong  Buchner,  kompor,  spuit  injeksi, kateter, microtube 1,5 ml, mikropipet, yellow tips , blue  tips , vortex (maxi  mix  II), ultrasentrifuse (mini  spin  ependrof),  spektrofotometer  visibel (Star Dust FC 15 DiaSys) dan timbangan hewan uji.
Determinasi Tanaman :  Determinasi  pada tanaman buncis ( Phaseolus vulgaris L)  dilakukan di  Balai  Penelitian  Tanaman  Obat  (BPTO) Tawangmangu.
Pembuatan Serbuk Daun Buncis: Tanaman buncis  diperoleh  dari  daerah  Karang  Pandan, Tawangmangu  pada  bulan  Desember  2006. Tanaman  buncis  yang  digunakan  adalah  yang berusia  2  bulan  dengan  buah  mulai  masak. Pengambilan  daun  buncis  dilakukan  siang  hari saat proses fotosintesis sedang berlangsung. Daun yang  dipilih  adalah  daun  muda  yang  sehat,  dan terletak kira-kira 1-5 dari pucuk daun. Daun yang telah terkumpul dicuci air mengalir sampai bersih untuk  menghilangkan  kotoran  berupa  tanah, bagian  tanaman  lain  dan  bagian  tanaman  yang rusak.  Daun  ditiriskan  dan  dikeringkan  untuk mencegah timbulnya bakteri dan kapang.
Pengeringan  dilakukan  di  bawah  sinar matahari  ditutup  kain  hitam,  untuk  mencegah kerusakan  kandungan  senyawa  aktif  dalam  daun buncis akibat pancaran sinar matahari, karena kain hitam  dapat  mencegah  masuknya  sinar  matahari namun dapat menyimpan panas, sehingga proses pengeringan  berlangsung  baik  tanpa  merusak senyawa  kimia  dalam  daun  buncis.  Simplisia kering diserbuk dengan blender dan diayak dengan ayakan  no.40  mesh.  Tujuan  pembuatan  serbuk adalah untuk memperbesar luas permukaan daun buncis, sehingga kontak antara bahan dan larutan penyari  lebih  besar  dan  penyarian  berlangsung lebih cepat serta senyawa aktif yang tersari lebih banyak.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  70%  Daun Buncis :  Pembuatan  ekstrak  etanol  70%  daun buncis menggunakan cairan penyari etanol teknis 70%.  Metode  penyarian  yang  digunakan  adalah remaserasi,  yaitu  maserasi  secara  berulang. Sebanyak  420,900  gram  serbuk  simplisia  disari dengan  etanol  teknis  70%.  Volume  etanol sebesar  5  kali  berat  simplisia  yang  digunakan. Kemudian  rendaman  didiamkan  selama  3  hari (3X24  jam)  sambil  sesekali  diaduk.  Filtrat diambil melalui penyaring dengan menggunakan corong  Buchner  dan  dienapkan  selama  2  hari. Setelah dienaptuangkan, penyari diuapkan hingga diperoleh  ekstrak  kental  etanol. Ampas  diangin- anginkan  sampai  kering  dan  direndam  kembali dengan  etanol  70%  sesuai  dengan  volume  awal penyari  yang  digunakan.  Hal  tersebut  dilakukan berulang  sampai  3  kali  berturut-turut  untuk pengambilan sari yang maksimal.
Penentuan Operating Time (OT) : Sebanyak  10,0 μ l aquadest ditambah  1000,0 μ l reagen Glucose Oxidase Phenol Amino antipyrin
Peroxidase (GOD PAP) DiaSys, yang digunakan sebagai blangko. Sebagai standart digunakan 10,0 μ l glukosa baku dari DiaSys ditambah 1000,0 μ l reagen GOD PAP (DiaSys), kemudian diinkubasi pada suhu kamar (25-30 o C). Absorbansinya dibaca dengan  menggunakan  spektrofotometer  visibel (Star Dust FC) pada panjang gelombang 500 nm (berdasarkan  panjang  gelombang  yang  tertera pada  lea � et  reagen  glukosa  GOD  PAP  DiaSys) dan pada menit ke 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60.
Penentuan Panjang Gelombang
Absorbansi  Maksimum :  Sebanyak  10,0 μ l aquadest ditambah  1000,0 μ l  reagen  GOD  PAP (DiaSys)  yang  digunakan  sebagai  blangko. Sebagai  standart  digunakan  10,0 μ l  glukosa baku  dari  DiaSys  ditambah  1000,0 μ l  reagen GOD  PAP  (DiaSys),  kemudian  diinkubasi  pada suhu  kamar  (25-30 o C)  selama operating  time . Absorbansinya  dibaca  dengan  menggunakan spektrofotometer  visibel  (Star  Dust  FC)  pada panjang gelombang 405, 500, 546, 578, dan 630 nm.  Panjang  gelombang  maksimum  ditentukan untuk mendapatkan absorbansi yang maksimum.
Pembuatan  Larutan  Glukosa  50% : Sebanyak  50,0  gram  D-glukosa  monohidrat dilarutkan  sedikit  demi  sedikit  dalam  air  panas sampai volume 100,0 ml sambil diaduk.
Pembuatan  Larutan  CMC  Na  1% : Sebanyak  1,0  gram  CMC  Na  dilarutkan  dalam aquadest sambil  dipanaskan  dan  diaduk  sampai terbentuk  suspensi,  kemudian  ditambahkan aquadest sampai volume 100,0 ml.
Perhitungan Dosis Acarbose : Perhitungan dosis acarbose untuk kelinci didasarkan pada dosis terapi peroral sekali untuk manusia. Acarbose yang digunakan ialah glucobay R .  Dosis untuk manusia berat 70 kg sekali minum= 50 mg. Konversi dosis
manusia  70  kg  ke  kelinci  1,5  kg=  0,07.  Dosis untuk kelinci 1,5 kg sekali minum adalah 3,5 mg atau 2,33 mg/kgBB.
Penetapan  Peringkat  Dosis :  Penetapan peringkat  dosis  ekstrak  etanol  70%  daun  buncis dengan trial and error sebesar 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB dan 450 mg/kgBB.
Uji  Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah : Hewan  uji  dikelompokkan  menjadi  5  kelompok perlakuan.  Setiap  kelompok  terdiri  dari  4  ekor. Subyek  uji  dipuasakan  12-18  jam  dan  tetap diberi  minum ad  libitum ,  kemudian  mendapat pembebanan  glukosa  50%  (5  ml/1,5  kgBB)  dan seketika diberi perlakuan secara oral dengan dosis tunggal  sebagai  berikut:  a)  Kelompok  I  kontrol negatif diberi larutan CMC Na 1%, b) Kelompok II  kontrol  positif  diberi  suspensi  acarbose  dosis 2,33 mg/kgBB dalam CMC Na 1%, c) Kelompok III  diberi  ekstrak  etanol  70%  daun  buncis  dosis 200  mg/kgBB,  d)  Kelompok  IV  diberi  ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 300 mg/kgBB dan e)  Kelompok  V  diberi  ekstrak  etanol  70%  daun buncis dosis 450 mg/kgBB.
Cuplikan  darah  diambil  dari  vena  lateralis telinga kelinci pada menit ke 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, dan 300. Kadar glukosa darah  ditetapkan  dengan  metode  enzimatis  yang menggunakan pereaksi GOD PAP (DiaSys).
Penetapan  Kadar  Glukosa  Darah : Kadar glukosa darah ditetapkan secara enzimatis dengan  reagen  GOD  PAP  (DiaSys).  Cuplikan darah  diambil  dari  vena  lateralis  telinga  kelinci, ditampung  dalam microtube 1,5  ml  yang  telah diberi  antikoagulan Ethylen  Diamin  Tetra Acetic acid (EDTA),  dan  di  vortex  serta  disentrifuge dengan  kecepatan  2.500  rotasi  per  menit  (rpm) selama  10  menit,  selanjutnya  dipersiapkan komposisi seperti yang disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1.  Komposisi Sampel, Standart, dan Blanko yang Dianalisis pada Penetapan Kadar Glukosa Darah
Komposisi Bahan Volume Pengambilan ( μ l) Sampel Standart Blanko Darah 10 - Glukosa standart - 10 - Aquadest - - 10
Ditambah Reagen GOD PAP 1000 ( μ l). Diinkubasi pada suhu kamar (25-30 O C) selama 10-15 menit. Kemudian serapan dibaca dengan spektrofotometer (Star Dust FC) pada panjang gelombang 500 nm.
Cara Analisis : Absorbansi yang diperoleh dari  hasil  pembacaan  pada  panjang  gelombang 500  nm  dengan  operating  time  10-15  menit digunakan  untuk  menghitung  kadar  glukosa
darah.  Konsentrasi  glukosa  standart  adalah  100 mg/dl. Rumus yang digunakan untuk menghitung kadar glukosa darah:
AbsorbansiSampel Kadar (mg/dl) xKadar glukosa standart(mg/dl) (1) AbsorbansiStandart      0 1 0-n 2 1 1 0 2 1 n n-1 n n-1 C +C AUC (C +C ) =t -t x
+ t -t x + + t -t x C +C (2) 2
2 2
Data  AUC 0-300 dihitung  dengan  rumus persentase  penurunan  kadar  glukosa  darah (%PKGD) yaitu:
0-300 0-300
0-300 AUC kontrol negatif - AUC kelompok perlakuan %PKGD= x100% (3)
AUC kontrol negatif
Data  AUC 0-300 yang  diperoleh  dianalisis dengan Anava satu jalan dan dilanjutkan dengan uji Least  Signi � cant  Difference (LSD)  dengan menggunakan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Buncis : Penyarian  menghasilkan  sari  etanol,  yang kemudian diuapkan hingga menjadi ekstrak kental etanol.  Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  dari  420, 900 gram serbuk simplisia adalah sebanyak 88,11
gram.  Rendemen  yang  diperoleh  dari  ekstrak kental etanol adalah sebesar 20,974 %.
Penetapan Operating Time (OT) : Penetapan operating  time dimaksudkan  untuk mengetahui  waktu  larutan  seny  awa  berwarna merah (kuinonimin) terbentuk, sehingga memberikan absorbansi stabil yang dimungkinkan reaksi warna antara glukosa dengan reagen GOD PAP  sudah  sempurna  membentuk  senyawa  akhir kuinonimin.  Reaksi  pembentukan  senyawa kuinonimin disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Pembentukan Senyawa Berwarna Merah (Kuinonimin) dari Substansi Awal Glukosa dengan Reagen GOD PAP (Chaplin, 1996, cit Rezeki, 2005)

## Tabel 2.   Absorbansi Glukosa dengan Pereaksi GOD
PAP (DiaSys) pada Berbagai Waktu Inkubasi Waktu (Menit) Absorbansi 0 0,061 5 0,317 10 0,354 15 0,354 20 0,344 25 0,353 30 0,353 35 0,352 40 0,347 45 0,353 50 0,348 55 0,347 60 0,357
Metode penetapan kadar glukosa darah yang digunakan adalah metode enzimatis. Reaksi antara glukosa  dan  GOD  PAP  terjadi  secara  bertahap. Tahap  pembentukan  senyawa  kuinonimin  dari substansi awal glukosa dengan senyawa di dalam reagen    yaitu  pembentukan  asam  glukonat  dan senyawa  lain hidrogen  peroksidase (H 2 O 2 )  dari glukosa dengan katalis enzim glukosidase (GOD), dan pembentukan senyawa kuinonimin dari fenol dan  4-amino-antipirin,  dengan  katalis  enzim peroksidase.  Pembentukan  kuinonimin  dapat dilihat pada Gambar 3.
Hasil  penetapan  OT  pada  Tabel  2 menunjukkan  bahwa  pada  menit  ke  10-15 memperlihatkan  absorbansi  yang  stabil.  Pro � l kurva  OT  merupakan  absorbansi  dari  larutan standart pada menit ke 0 sampai 60 pada panjang gelombang 500 nm.
Panjang  Gelombang  Absorbansi  Mak- simum : Penetapan panjang gelombang absorbansi maksimum  dimaksudkan  untuk  menetapkan panjang  gelombang  tertentu  yang  menghasilkan
absorbansi  maksimum,  sehingga  dimungkinkan diperoleh kepekaan yang maksimum.
Tabel 3.   Absorbansi Glukosa dengan Pereaksi GOD PAP  (DiaSys)  pada  Pengukuran  Berbagai Panjang Gelombang
Panjang gelombang (nm) Absorbansi 405 0,102 500 0,484 546 0,336 578 0,202 630 0,042
Tabel 3 menunjukkan bahwa pada panjang gelombang  500  nm  dengan  operating  time (OT)  10-15  menit  diperoleh  absorbansi  glukosa maksimum. Dengan demikian penyerapan sampel glukosa darah untuk selanjutnya dilakukan dengan menggunakan panjang gelombang 500 nm.
Uji  Efek  Penurunan  Kadar  Glukosa Darah:  Uji  efek  antidiabetes  dilakukan  dengan metode  toleransi  glukosa  oral  (Anonim,  1993), yaitu  hewan  uji  dibebani  glukosa  untuk  melihat pengaruh  terhadap  toleransi  glukosa  tanpa merusak  pankreas  hewan  uji.  Pembebanan glukosa  dilakukan  sebelum  perlakuan  sehingga hewan uji akan mengalami hiperglikemia setelah pembebanan glukosa.
Obat  oral  antidiabetes  yang  digunakan sebagai pembanding adalah acarbose (glucobay R , Bayer)  yaitu  golongan  inhibitor  alfa  glukosida, yang  didasarkan  pada  metode  uji  toleransi glukosa.  Acarbose  bersifat  inhibitor  kompetitif, yang berikatan dengan enzim alfa glukosidase dan menghambat  kerja  enzim  dalam  menghidrolisis komplek  sakarida,  sehingga  monosakarida (glukosa)  yang  dihasilkan  dalam  jumlah  sedikit dan  penyerapan  glukosa  di  usus  menurun  serta kadar  glukosa  darah  tidak  meningkat  secara drastis.
Gambar 4.Kurva Hubungan Kadar Glukosa Darah (mg/dl) terhadap Waktu Pengamatan setelah Perlakuan CMC Na 1%, Acarbose 2,33mg/kgBB, Ekstrak Etanol 70% Daun Buncis Dosis 200, 300, dan 450 mg/kgBB
Tabel 4.   Purata  Kadar  Glukosa  Darah  yang  Diperoleh  pada  Menit-menit  Tertentu  pada  Semua  Kelompok Perlakuan (n=4)
Waktu Purata Kadar Glukosa Darah (mg/dl), (x ± SD) Kontrol Negatif Kontrol Positif Ekstrak Etanol Daun buncis 200 mg/kgBB Ekstrak Etanol Daun buncis 300 mg/kgBB Ekstrak Etanol Daun buncis 450 mg/kgBB 0 122,40 ± 13,17 107,30 ± 2,79 103,56 ± 30,50 108,29 ± 16,88 64,68 ± 14,60 30 189,48 ± 12,61 167,09 ± 36,86 152,82 ± 28,28 111,69 ± 21,28 86,79 ± 9,94 60 205,76 ± 11,60 158,42 ± 31,58 170,58 ± 24,23 141,06 ± 15,54 109,22 ± 10,39 90 208,87 ± 38,23 150,71 ± 25,90 135,66 ± 18,24 129,87 ± 27,88 92,87 ± 4,36 120 160,54 ± 43,22 130,87 ± 29,30 121,57 ± 17,00 105,20 ± 10,63 85,39 ± 13,64 150 146,81 ± 29,53 116,31 ± 16,76 108,52 ± 18,52 96,50 ± 4,80 80,48 ± 14,01 180 127,36 ± 16,48 96,45 ± 9,70 97,67 ± 11,56 91,06 ± 5,91 78,94 ± 15,41 210 118,01 ± 11,73 91,50 ± 6,30 94,98 ± 11,07 89,77 ± 4,12 77,13 ± 16,64 240 113,87 ± 10,79 89,20 ± 13,92 86,25 ± 17,28 84,19 ± 6,24 63,68 ± 27,78 270 106,93 ± 15,80 90,67 ± 11,59 83,76 ± 14,55 86,14 ± 12,86 72,21 ± 26,78 300 118,15 ± 21,05 90,81 ± 8,58 84,42 ± 4,23 90,37 ± 14,58 59,08 ± 17,42
Tabel  purata  kadar  glukosa  darah  yang diperoleh  pada  menit-menit  tertentu  oleh  semua kelompok perlakuan disajikan pada Tabel 4 yang menunjukkan  bahwa  purata  kadar  glukosa  darah kelompok kontrol negatif paling tinggi dibanding purata  kadar  glukosa  darah  kelompok  perlakuan lainnya,  karena  kelinci  hanya  diberi  perlakuan CMC Na 1%, sehingga kadar glukosa cenderung lebih tinggi. Kelompok kontrol positif, mengalami penurunan  kadar  glukosa  darah  yang  rendah karena diberi perlakuan acarbose yang merupakan obat  untuk  menurunkan  kadar  glukosa  darah. Kelompok sampel ekstrak etanol 70% dosis 200, 300  dan  450  mg/kgBB  mengalami  penurunan kadar  glukosa  darah  lebih  rendah  dibanding kontrol positif.
Nilai  kadar  glukosa  darah  digunakan untuk  menghitung  luas  daerah  di  bawah  kurva Area  Under  The  Curve (AUC)  setiap  kelompok perlakuan  terhadap  waktu  pengamatan,  yang menunjukkan  jumlah  perubahan  kadar  glukosa dalam darah selama 300 menit, karena pengaruh perlakuan  dalam  setiap  kelompok.  Nilai  purata AUC 0-300 pada  Tabel  5  menunjukkan  bahwa yang memiliki nilai AUC 0-300 paling besar adalah kelompok  perlakuan  kontrol  negatif  (CMC  Na 1%).
Uji statistik Kolmogorov-Smirnov dilakukan  setelah  diperoleh  nilai  AUC  untuk mengetahui  distribusi  data  penelitian.  Nilai signi � kansi  diperoleh  >  0,05  yaitu  0,868  artinya
data  AUC 0-300 terdistribusi  normal.  Dilanjutkan Levene test untuk mengetahui homogenitas varian, dan  diperoleh  nilai  signi � kansi  >  0,05  yaitu 0,409 berarti data AUC 0-300 memiliki varian yang homogen. Data terdistribusi normal dan homogen, dipilih  analisis  statistik  model  parametrik Anava satu  jalan,  untuk  melihat  perbedaan  semua kelompok perlakuan. Berdasarkan analisis varian satu  jalan,  diperoleh  harga  signi � kansi  0,000 menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  bermakna antar  kelompok  (P<0,05).  Dilakukan  uji Least Signi � cant  Difference (LSD)  menggunakan  taraf kepercayaan  95%  untuk  mengetahui  kelompok perlakuan mana yang berbeda bermakna.
Hasil  uji  LSD  AUC 0-300 pada  Tabel  6 menunjukkan  perbedaan  yang  bermakna  antara kelompok  perlakuan  kontrol  negatif  CMC  Na 1%  dengan  kelompok  perlakuan  kontrol  positif, ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 200, 300 dan 450 mg/kgBB dengan harga signi � kansi masing- masing  0,000,  berarti  ke  4  kelompok  perlakuan memiliki  efek  menurunkan  kadar  glukosa  darah pada  kelinci  jantan  yang  dibebani  glukosa.  Pada kelompok  perlakuan  ekstrak  etanol  70%  daun buncis dosis 200, 300 dan 450 mg/kgBB diketahui bahwa  data  yang  diperoleh  antara  dosis  200 dan  300  mg/kgBB  berbeda  tidak  bermakna  (p  = 0,109)  berarti  data  yang  diperoleh  hampir  sama, sedangkan data yang diperoleh antara dosis 200, 300 mg/kgBB dengan dosis 450 mg/kgBB berbeda bermakna (p = 0,001 dan p = 0,031).
Tabel 5.   Nilai  Purata  AUC 0-300 (menit,  mg/dl)  dari  Kadar  Glukosa  Darah  terhadap  Waktu  Pengamatan  pada Perlakuan CMC Na 1%,  Acarbose 2,33mg/kgBB, Ekstrak Etanol 70% Daun Buncis Dosis 200, 300, dan 450 mg/kgBB
Nilai Purata AUC 0-300 (menit, mg/dl) Perlakuan Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V Kelinci 1 50174,99 32031,93 34126,10 34273,68 26700,02 Kelinci 2 44890,40 36211,34 32001,53 28856,75 26700,02 Kelinci 3 42286,62 36285,92 32183,91 29592,66 25249,98 Kelinci 4 42396,69 38301,780 39183,32 31454,43 26886,45 (x ± SE) 44937,17 ± 1846,54 35707,74 ± 1317,47 34373,71 ± 1673,72 31044,38 ± 1207,26 26384,12 ± 80,59 Keterangan :
Kelompok I Kontrol negatif (CMC Na 1%) Kelompok II Kontrol positif (acarbose 2,33 mg/kgBB) Kelompok III Ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 200 mg/kgBB) Kelompok IV Ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 300 mg/kgBB) Kelompok V Ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 450 mg/kgBB)
Tabel 6.   Hasil Uji LSD AUC0-300  Antar Kelompok Perlakuan dengan Taraf Kepercayaan 95%
Antar kelompok perlakuan Nilai P Keterangan I-II 0,000 Berbeda bermakna I-III 0,000 Berbeda bermakna I-IV 0,000 Berbeda bermakna I-V 0,000 Berbeda bermakna II-III 0,505 Berbeda tidak bermakna II-IV 0,031 Berbeda bermakna II-V 0,000 Berbeda bermakna III-IV 0,109 Berbeda tidak bermakna III-V 0,001 Berbeda bermakna IV-V 0,031 Berbeda bermakna *P < 0,05 : berbeda bermakna
P > 0,05 : berbeda tidak bermakna
Nilai  purata  AUC 0-300 digunakan  untuk mencari  nilai  persentase  efek  penurunan  kadar glukosa  darah  (%PKGD)  untuk  mengetahui kemampuan kelompok perlakuan dalam menurunkan kadar glukosa darah. Hasil %PKGD terhadap nilai AUC 0-300 pada Tabel 7 menunjukkan persentase  penurunan  kadar  glukosa  darah 80,14%  ±  0,73  (kelompok  II),  80,88%  ±  0,93 (kelompok III), 82,73% ± 0,67 (kelompok IV) dan 85,32% ± 0,21 (kelompok V). Persentase terendah
dihasilkan kelompok II yang secara statistik (pada Tabel 8) data berbeda tidak bermakna (p = 0,461) dengan  kelompok.  III  dan  berbeda  bermakna dengan kelompok IV dan V dengan p 0,021 dan 0,000. Data kelompok III dengan IV menunjukkan hasil  berbeda  tidak  bermakna  (p  =  0,082).  Data kelompok V menunjukkan hasil berbeda bermakna dengan kelompok III dan IV dengan p 0,001 dan 0,021,  yang  menunjukkan  bahwa  kelompok  V memiliki  efek  penurunan  kadar  glukosa  darah paling besar.
Tabel 7.   Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah (% PKGD) Terhadap Nilai Purata AUC 0-300 Nilai % PKGD Perlakuan Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V Kelinci 1 82,18 81,02 80,93 85,15 Kelinci 2 79,85 82,20 83,95 85,15 Kelinci 3 79,81 82,10 83,54 85,95 Kelinci 4 78,69 78,20 82,50 85,04 (x ± SE) 80,14 ± 0,73 80,88 ± 0,93 82,73 ± 0,67 85,32 ± 0,21
Tabel 8. Hasil Uji LSD % PKGD Antar Kelompok Perlakuan dengan Taraf Kepercayaan 95% Antar kelompok perlakuan Nilai P Keterangan II-III 0,461 Berbeda tidak bermakna II-IV 0,021 Berbeda bermakna II-V 0,000 Berbeda bermakna III-IV 0,082 Berbeda tidak bermakna III-V 0,001 Berbeda bermakna IV-V 0,021 Berbeda bermakna Keterangan : Kelompok I Kontrol negatif (CMC Na 1%)
Kelompok II Kontrol positif (acarbose 2,33 mg/kgBB) Kelompok III Ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 200 mg/kgBB) Kelompok IV Ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 300 mg/kgBB) Kelompok V Ekstrak etanol 70% daun buncis dosis 450 mg/kgBB)

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol 70% daun buncis ( Phaseolus vulgaris L)    dosis  200,  300  dan  450  mg/kgBB memiliki  efek  menurunkan  kadar  glukosa  darah terhadap kontrol negatif CMC Na 1% (p = 0,000) dengan  persentase  penurunan  kadar  glukosa darah (%PKGD) masing-masing 80,88% ± 0,93 ; 82,73% ± 0,67 dan 85,32% ± 0,21.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang pengaruh ekstrak etanol 70% daun buncis menggunakan  metode  uji  lain.  Perlu  dilakukan penelitian dengan dosis ekstrak etanol 70% daun buncis yang lebih kecil untuk menurunkan kadar glukosa darah.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  1993, Penapisan  Farmakologi,  Pengujian Fitokimia Dan Pengujian Klinik, Pengembangan  dan  Pemanfaatan  Obat Bahan Alam, Jakarta.
Anonima, 2005, Diabetes Mellitus Masalah Kesehatan Masyarakat  Yang  Serius ,  (Online),  (http:// www.depkes.go.id/  index.php?option=news &task=viewarticle&sid=942&itemid=2, diakses 22 November 2006).
Anonim b , 2005, Menormalkan Gula Darah
Dengan  Bahan  Alami ,  (Online),  (http://
w w w. r e p u b l i k a . c o . i d / k o r a n _ d e t a i l . asp?id=189096&kat_id=123,  diakses  23 November 2006).
Backer,  C.A.,  dan  Van  Den  Brink,  1965, Flora  of Java  (Spermatophytes  only) ,  volume  I,
Groningen, The Netherlands.
Hutapea,  J.R.,  dan  Syamsyuhidayat,  S.S.,  1994,
Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia
(III),  Hal  201,  Departemen  Kesehatan
Republik  Indonesia  Badan  Penelitian  Dan Pengembangan Kesehatan.
Muhtadi,  1987, Uji  Efek  Ekstrak  Kental  Buah Phaseolus  vulgaris  L,  Terhadap  Kadar Glukosa  Darah  Tikus ,  (Online),  (http:// digilib.itb.ac.id/go.php?id=jbptitbpp-gdl- s2-1987-ahmadmuhta-1734,  diakses  27 November 2006).
Rezeki,  S.,  2005, Efek  Hipoglikemik  Fraksi  Etanol 90%  Ekstrak  Etanol  50%  Daun  Mengkudu (Morinda  citrifolia  L) Pada  Tikus  Jantan Wistar, Skripsi , Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Soegondo,  S.,  Soewondo,  P.,  dan  Subekti,  I.,  2005,
Diabetes Mellitus Penatalaksanaan Terpadu ,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Indonesia, Jakarta.
Subroto, 2006, Ramuan Herbal untuk Diabetes Melitus , Penebar Swadaya, Yogyakarta.