Karakterisasi Ekstrak Etanol Buah Citrus amblycarpa (L), Citrus aurantifolia (S.), dan Citrus sinensis (O.)
Andhi Fahrurroji 1 *, Hafrizal Riza 2
1 Departemen  Farmasetika  dan  Teknologi  Farmasi,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Tanjungpura,  Pontianak, Indonesia
2 Departemen Kimia Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Indonesia
*Corresponding author: roji_apt@pharm.untan.ac.id
Submitted: 28 Maret 2020 Accepted: 14 Juli 2020 Published:  30 November 2020

## Abstract
Background: Sweet citrus fruits (Citrus amblycarpa (L)), lime (Citrus aurantifolia (S.)), and sambal orange (Citrus  sinensis  (O.))  have  enormous  potential,  especially  the  content  of  secondary  metabolite compounds. Objective: This  study  aims  to  determine  the  specific  and  non-specific  characteristic  of  extract from  various  citrus  fruits  in  60%  ethanol  solvent. Methods: the  extract  obtained  was  determined  by  non- specific  parameters  and  the  extract's  specific  parameters  from  each  extract  of  the  citrus  fruit  component. Results: Based  on the  observations'  results,  ethanol  extract  of  60%  peel  and  seeds  and  water  on the  citrus fruit,  the  highest  yield  value  was  obtained  in  the  ethanol  extract  of  60%  sambal  orange  seeds  25.28%.  All samples contained phenolic and flavonoid compounds in the test tube. In the TLC test, the silica gel 60 F254 stationary phases were used to identify saponins with the mobile phase of chloroform : methanol : water (64 : 50  : 1) and identification of flavonoids using the mobile phase of  glacial acetic acid : formic acid : water  : ethyl acetate (11 : 11 : 27 : 100), both compounds showed positive reactions in all test samples. The moisture content for the orange water sample ranged from 8.149% - 9.748%. Conclusion: The highest yield value was obtained in the ethanol extract of 60% chili orange seeds by 25,28%. In the TLC test in the stationary phase of silica gel  60 F 254 to  identify saponins and flavonoids, all samples showed a positive reaction,  with ash content of all samples in the range 2,722 - 5,442%.
Keywords: sweet orange (Citrus amblycarpa (l)), lime fruit (Citrus aurantifolia (s.)), sambal orange (Citrus sinensis (o.)), specific parameters, non-specific parameters

## Abstrak
Pendahuluan: Buah  jeruk  manis  ( Citrus  amblycarpa  (L) ),  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia  (S.) ),  dan  jeruk sambal  (C itrus  sinensis  (O.) )  memiliki  potensi  yang  sangat  besar  khususnya  kandungan  senyawa  metabolit sekunder. Tujuan: Pada  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  karakteristik  spesifik  dan  non  spesifik berbagai  jenis  buah  jeruk  tersebut  pada  pelarut  etanol  60%. Metode: Ekstrak  yang  diperoleh  ditentukan parameter  nonspesifik  dan  parameter  spesifik  ekstraknya  dari  masing-masing  ekstrak  dari  komponen  buah jeruk tersebut. Hasil: Berdasarkan hasil pengamatan  yang dilakukan Ekstrak etanol 60% kulit dan biji  serta air  pada  buah  jeruk  tersebut  dengan  nilai  rendemen  tertinggi  diperoleh  pada  ekstrak  etanol  60%  biji  jeruk sambal dengan rendemen yang dihasilkan sebesar 25,28%. Seluruh sampel mengandung senyawa fenolik dan flavonoid pada uji tabung. Pada uji  KLT fase diam silica gel 60 F 254 untuk identifikasi saponin dengan  fase gerak kloroform :  metanol : air (64 : 50 : 1) dan  identifikasi flavonoid menggunakan fase gerak asam asetat glasial : asam formiat : air : etil asetat (11 : 11 : 27 : 100) pada kedua senyawa tersebut menunjukkan reaksi positif  pada  seluruh  sampel  uji. Kadar  air  untuk  sampel  air  jeruk  berkisar  antara  8,149%  -  9,748%. Kesimpulan: Nilai rendemen tertinggi diperoleh pada ekstrak etanol 60% biji jeruk sambal sebesar 25,28%.
Pada  uji  KLT  fase  diam silica  gel 60  F  254  untuk  identifikasi  saponin  dan  flavonoid  seluruh  sampel menunjukkan reaksi positif. Serta kadar abu seluruh sampel pada rentang 2,722 - 5,442%.
Kata kunci: buah jeruk manis ( Citrus amblycarpa (l) ), buah jeruk nipis ( Citrus aurantifolia (s.) ), buah jeruk sambal ( Citrus sinensis (o.) ), parameter spesifik, parameter non spesifik

## PENDAHULUAN
Perkembangan  penggunaan  obat-obatan  herbal saat  ini  sangat  signifikan.  Salah  satu  alasan dikarenakan  memiliki  toksisitas  yang  sangat  rendah. Saat ini badan kesehatan dunia (WHO) merekomendasikan dan mendorong penggunaan ramuan  tradisional  atau  obat  karena  memiliki  sumber bahan baku yang besar dan mudah tersedia. Tumbuhan memiliki  sifat  kandungan  yang  berbeda  tergantung kepada  masa  tanam,  waktu  panen,  sehingga  memiliki aktivitas  terapi  yang  bervariasi  sesuai  dengan  spesies, lokasi  geografis  dan  proses  panen  (World  Health Organization,  1998).  Proses  identifikasi  herbal  yang tidak  tepat,  keberadaan  mikroorganisme  pada  bahan, serta  residu  pestisida  akibat  proses  pembersihan  yang tidak  tepat  dapat  menyebabkan  efek  samping.  Oleh sebab itu, perlu dilakukan standarisasi obat herbal baik simplisia, ekstrak maupun sudah dalam bentuk sediaan. Menurut  WHO,  secara  makroskopis  dan  deskripsi mikroskopis  dari  suatu  tanaman  obat  merupakan gambaran  kebenaran  identitas  suatu  spesies  dan  dapat dijadikan sebagai landasan pengujian yang lain (World Health Organization, 1998; Apraj dkk., 2011).
Buah  jeruk  dalam  hal  ini  jeruk  manis  ( Citrus sinensis (O.) ), jeruk nipis ( Citrus aurantifolia (S.) )  dan jeruk  sambal  ( Citrus  amblycarpa  (L) )  di  Kalimantan Barat  merupakan  salah  satu  unggulan  tanaman  yang jumlahnya melimpah di masyarakat.  Berdasarkan data dari Kementerian Pertanian produksi jeruk di Indonesia pada  rentang  tahun  1980  -  2015  meningkat  secara signifikan  dengan  peningkatan  9,94%  per  tahun. Perkembangan itu terjadi dapat dilihat pada tahun 1980 total  produksi  jeruk  di  Indonesia  311.014  ton. Sedangkan  pada  tahun  2015  sudah  menjadi  1,86  juta ton (Pusat Data dan Sistem Informasi Pertanian, 2015). Berdasarkan  data  dari  dinas  pertanian  tahun  2018 tentang  tanaman  biofarmaka.  Tanaman  jeruk  bukan merupakan  produk  tersebut  meskipun  Kalimantan Barat  merupakan  salah  satu  sentra  tanaman  jeruk namun  jeruk  hanya  masih  sebatas  konsumsi  biasa  dan belum  masuk  pada  bahan  biofarmaka.  Jeruk  sendiri memiliki kandungan metabolit sekunder yang memiliki aktivitas berbagai macam indikasi penyakit.
C.  aurantifolia mengandung  zat  fitokimia  aktif sebagai  berikut:  (1)  flavonoid  termasuk  apigenin, hesperetin,  kaempferol,  nobiletin,  quercetin,  dan  rutin, (2)  flavones,  (3)  flavanon  dan  naringenin,  (4) triterpenoid,  dan  (5)  limonoid  (Poulose  dkk.,  2005). Penelitian  lain  yang  dilakukan  Lota  mengungkapkan setidaknya 62 senyawa volatil dalam minyak kulit buah dan 59 dalam minyak daun dari beberapa spesies jeruk nipis  (Lota  dkk.,  2002).  Adapun  kandungan  fitokimia dan vitamin dari lima varietas spesies jeruk; C. sinensis, C.  reticulata,  C.  limonum,  C.  aurantifolia ,  dan C. grandis ,  diantaranya  senyawa  bioaktif  dalam  100  g jeruk terdiri dari alkaloid (0,4 mg), flavonoid (0,6 mg), tanin  (0,04  mg),  riboflavin  (0,1  mg),  tiamin  (0,2  mg), fenol  (0,4  mg),  niasin  (0,5  mg),    dan  asam  askorbat (62 mg). Selain itu, buah jeruk ini mengandung protein kasar  (18%),  serat  kasar  (8%),  karbohidrat  (78%), kelembaban  (6%),  lemak  mentah  (1%),  abu  (8%),  dan kandungan  energi  makanan  adalah  (363  g/kal)  buah segar (Narang and Jiraungkoorskul, 2016).
Penggunaan  sebagai  bahan  obat  tradisional  atau sifat  fitokimia  dari C.  aurantifolia dari  beberapa tinjauan  literatur  dapat  digunakan  sebagai  antibakteri, antidiabetik,  antijamur,  antihipertensi,  antiinflamasi, aktivitas  anti-lipidemia,  antioksidan,  anti-parasit,  dan antiplatelet.  Fungsi  lainnya  dapat  digunakan  untuk pengobatan penyakit kardiovaskular, hati, osteoporosis, dan  urolitiasis  dan  bertindak  sebagai  promotor kesuburan.  Selain itu, dapat digunakan untuk aktivitas insektisida (Narang and Jiraungkoorskul, 2016).
Citrus  sinensis  (O.) (L.  Osbeck)  atau  jeruk  manis berasal  dari  Asia  Tenggara,  karena  terbukti  memiliki vitamin C yang sangat tinggi, sehingga dapat dijadikan sebagai sumber antioksidan alami. Kandungan metabolit  penting  penting  pada  jeruk  ini  seperti narirutin  17,33  mg/g    limonoid  398,30  mg/g, synephrine 2,81  mg/g,  Hesperidin  191,53  mg/g, Nobiletin  3,00  mg/g,  Tangeretin  0,26  mg/g  (Sun  dkk., 2013)  Selain  itu  pada  jeruk  terdapat  kandungan polifenol, pektin, dan  folasin, kalsium, kalium, tiamin, niasin,  dan  magnesium.  Kandungan  tersebut  secara biologis  dapat  mencegah  arteriosklerosis,  kanker,  batu ginjal,  bisul  perut  dan  pengurangan  kadar  kolesterol
darah  manusia  dan  darah  tinggi  yang  meningkatkan kesehatan  manusia.  Jeruk  memiliki  manfaat  yang sangat  banyak  dan  buah  dapat  diperoleh  hampir sepanjang  tahun  serta  harga  buahnya  relatif.  (Etebu  & Nwauzoma, 2014).
Skrining  fitokimia  juga  membuktikan  adanya kandungan glikosida pada ekstrak etanol 70% daun C. amblycarpa ,  dimana  diduga  senyawa  glikosida  yang terdapat  pada  tanaman C.  amblycarpa merupakan glikosida flavonoid. Senyawa glikosida flavonoid yang terdapat dalam jumlah besar pada tanaman citrus yaitu neohesperidin,  naringin, neoeriocitrin ,  dan  ponsirin yang  mana  senyawa  ini  memiliki  peran  menimbulkan rasa  pahit  pada  jeruk.  Senyawa  glikosida  flavonoid memiliki  sifat  farmakokinetik  yaitu  kecenderungan membentuk ikatan dengan protein plasma yang rendah sehingga  konsentrasi  senyawa  dalam  darah  apabila dikonsumsi  dapat  bertahan  lebih  lama  dimana  sifat farmakokinetik  ini  merupakan  sifat  yang  diinginkan dalam  suatu  obat.  Senyawa  glikosida  flavonoid  yang terdapat  pada  tanaman Citrus memiliki  berbagai aktivitas  farmakologi  seperti  antioksidan,  antikanker dan antitumor, hepatoprotektif, antiinlamasi, antidiabetes, antiviral, antibakteri dan antifungal (Putra dkk., 2018; Wang dkk., 2017; Xiao dkk., 2016).
Menurut  penelitian  yang  dilakukan  Truong  pada tahun  2018  menunjukkan  bahwa  perbedaan  pelarut dalam  proses  ekstrasi  akan  memberikan  perbedaan konsentrasi  kandungan  metabolit  sekunder    yang dihasilkan (Truong dkk., 2019).
Berdasarkan  acuan  di  atas  peneliti  bermaksud untuk penelitian karakteristik spesifik dan non spesifik berbagai  jenis  buah  jeruk  tersebut  pada  pelarut  etanol 60% dari buah jeruk baik biji, air dan kulitnya.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  buah  jeruk sambal  ( Citrus  amblycarpa (L)),  jeruk  manis (Citrus sinensis (O.)), dan jeruk nipis ( Citrus aurantifolia (S.)), larutan  aluminium,  asam  sulfat  pekat  ( Merck ), methanol  ( Merck ),  asam  asetat  glasial  ( Merck ),  etanol 96%  teknis,  larutan  FeCl 3 1%,  indikator  fenolftalein, kloroform beramonia 2N serbuk Mg, H 2 SO 4 pekat, HCl pekat,  pereaksi  Mayer,  perekasi  Dragendorff,  DMSO 15%,  toluena  ( Merck ),  etil  asetat  ( Merck ),  metanol ( Merck ), larutan gelatin 0,5%, akuades, asam asetat, n- heksan  ( Merck ),  kloroform,  sitroborat,  anisaldehid asam  sulfat, dietilamin, pereaksi Liebermann-Burchad,
asam formiat, FeCl 3, plat kromatografi lapis tipis ( Silica Gel F 254 Merck ).

## Alat
Peralatan  yang  digunakan  adalah  alkoholmeter (Amarell),    lemari  oven  ( Memmert  Beschickung- Loading Model  100-800), hot  plate ( Thermolyne  Hot Plate RC 2240), kaca arloji, maserator (berbahan kaca), krus  proselen,  mortir,  jarum  ose,  desikator,  sendok tanduk,  timbangan  analitik  ( Precisa tipe  XB  4200C dan BEL tipe  M254Ai),  plat  silika  gel  F 254 dan  bejana KLT, rotary evaporator ( Rotavapor II BUCHI), lampu UV254 nm dan UV366 nm.

## Metode

## Determinasi tanaman
Identitas  dan  kebenaran  suatu  tanaman  dapat diketahui  melalui  determinasi.  Determinasi  dapat menggunakan  tanaman  utuh,  maupun  bagian  dari tanaman. Pada penelitian ini determinasi menggunakan buah  jeruk  tersebut  sebagai  media.  Adapun  proses determinasi  tersebut  dilakukan  di  Jurusan  Biologi Fakultas MIPA Universitas Tanjungpura Pontianak.

## Preparasi bahan
Sebelum  dilakukan  ekstraksi  sampel,  maka terlebih  dahulu  dilakukan  preparasi  bahan  tersebut. Sampel tersebut diantaranya adalah jeruk sambal, jeruk manis,  dan  jeruk  nipis  meliputi  bagian  kulit,  biji,  dan sari  buah  jeruk.  Pelarut  yang digunakan dalam proses ekstraksi  menggunakan  etanol  60%.  Ketiga  sampel dicuci  dengan  air  mengalir  kemudian  dikeringkan. Sampel dipisahkan bagian sari, biji, dan kulitnya. Kulit jeruk  nipis  (KJN),  kulit  jeruk  sambal  (KJS),  biji  jeruk nipis (BJN) dan biji jeruk sambal (BJS) dipisahkan dari masing  masing  komponen,  kemudian  dikeringkan dalam  oven  bersuhu  40 o C.  Simplisia  yang  kering ditandai  dengan  diremas  untuk  kulit  akan  hancur, sedangkan  untuk  biji  sudah  terpisah  dari  masing- masing  biji.  Kulit  jeruk  tiap  sampel  yang  telah  kering dibuat  serbuk  dengan  diblender  agar  menjadi  serbuk dan kemudian dilewatkan pada ayakan  mesh 60. Hasil preparasi  sampel  dari  buah  jeruk  tersebut  yang  berupa air  jeruk  nipis  (AJN),  air  jeruk  sambal  (AJS)  dan  air jeruk manis (AJM) dilakukan freeze drying .

## Ekstraksi kulit jeruk, air jeruk, dan biji jeruk
Simplisia  kulit  jeruk  dan  biji  jeruk  yang  sudah diserbukkan  ditimbang  dan  maserasi  dalam  alat maserator  dan  ditambah  dengan  pelarut  etanol  60% sambil  diaduk  dengan  batang  pengaduk.  Maserasi dilakukan sebanyak 3 kali replikasi dengan penggantian  pelarut  dilakukan  setiap  72  jam  dengan pelarut  yang  sama  pada  saat  maserasi  pertama.  Hasil
maserat  3  kali  replikasi  dikumpulkan  dan  disaring menggunakan  corong buchner yang telah diberi kertas saring  Whatman  no  1.  Maserat  yang  telah  diperoleh disaring, kemudian dievaporasi dengan hingga terbentuk  masa  yang  pekat.  hasil  dari  massa  tersebut dimasukkan  pada  desikator  untuk  membentuk  ekstrak, Proses  pengeringan  berhenti  ketika  massa  yang terbentuk konstan setelah dilakukan penimbangan.

## Pengujian skrining fitokimia ekstrak
Proses  skrining  fitokimia  ekstrak  dilakukan dengan  2  cara  yaitu  pertama  dengan  menggunakan kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  yang  dilakukan  untuk melihat  parameter  spesifik  dari  ekstrak  tersebut. Metode  kedua  metode  uji  tabung  dan  menggunakan penetapan  susut  pengeringan,  penetapan  kadar  sari larut air, kadar air, kadar sari  yang  larut dalam etanol, kadar abu tidak larut asam, dan kadar abu total.

## Kromatografi lapis tipis
Pada  pengujian  menggunakan  kromatografi  lapis tipis dilakukan beberapa orientasi terutama penggunaan pelarut sebagai fase gerak. Fase diam yang digunakan adalah silica gel 60 F 254 . Pengamatan bercak dilakukan pada sinar tampak (panjang gelombang 380- 700 nm), UV254 dan UV366. Adapun fase gerak yang digunakan  pada  pengujian  skrining  fitokimia  meliputi toluene  :  etil  asetat  :  dietil  amina  (7  :  2  :  1)  dengan pereaksi  semprot  :  Dragendorff  (uji  kandungan alkaloid),  etil  asetat  :  toluene  :  asam  formiat  :  air (6:3:1,5:0,5)  menggunakan  pereaksi  semprot:  FeCl 3 (uji  fenolik),  asam  asetat  glasial  :  asam  formiat  :  air  : etil  asetat  :  (11  :  11  :  27  :  100)  dengan  sitroborat digunakan  sebagai  pereaksi  semprot  (uji  flavonoid), kloroform : metanol : air (64 : 50 : 1) pereaksi semprot : Liebermann-Burchard (saponin), n-heksana : etil asetat (4  :1)  disemprot  menggunakan  pereaksi  Liebermann- Burchard (uji steroid), dan heksana : etil asetat (93 : 7) pereaksi  semprot  :  anisaldehid  asam  sulfat  (uji terpenoid)  (Kaya  dkk.,  2012;  Fauziah,  2006;  Safitri, 2016;  Wagner  &  Bladt,  1996;  Santosa  &  Haresmita, 2015).

## Penentuan karakteristik non spesifik ekstrak
Penentuan karakteristik ekstrak meliputi penetapan susut pengeringan, penetapan kadar sari larut air, kadar air, kadar sari yang larut dalam etanol, kadar abu tidak larut  asam,  dan  kadar  abu  total.  Prosedur  kerja  dari penetapan  parameter  tersebut  menggunakan  aturan yang  berlaku  (Direktorat  Jenderal  Bina  Kefarmasian dan  Alat  Kesehatan,  2008;  Direktorat  Pengawasan Obat Tradisional, 2000).

## Metode uji tabung Uji alkaloid
Sampel yang diperoleh ditambahkan pelarut dalam beberapa tetes asam  sulfat 2 N kemudian diuji dengan pereaksi  alkaloid  yaitu,  pereaksi  Mayer (Harborne dkk., 1996).

## Uji fenolik
Sejumlah  100  mg  sampel  uji  dilarutkan  dengan 1 mL air pada tabung reaksi dan kemudian tambahkan 1-2 tetes besi III klorida (FeCl 3 ). Jika terbentuk warna biru, hijau,  merah atau ungu  menunjukkan keberadaan senyawa fenol (Rao, 2016).
Uji flavonoid Pengujian flavonoid didahului dengan menambahkan  magnesium  0,1  mg  dan  0,4  mL  amil alkohol  (campuran  asam  klorida  37%  dan  etanol  95% dengan  volume  yang  sama)  ke  dalam  sampel  ekstrak yang  diuji  dan  ditambahkan  4  mL  alkohol  kemudian campuran  dikocok.   Senyawa  mengandung  flavonoid ditunjukkan  dengan  perubahan  warna  menjadi  merah, kuning  atau  jingga  pada  lapisan  amil  alkohol. (Harborne dkk., 1996).

## Saponin
Sampel  ekstrak  dilarutkan  dengan  air  hingga volume 20  mL kemudian dikocok dengan roller  mixer selama 5  menit dan apabila terbentuk sabun setinggi 2 cm pada lapisan atas menunjukkan keberadaan saponin (Mir dkk., 2016).

## Uji steroid
Sampel  ekstrak  dilarutkan  ke  dalam  air  sehingga membentuk  larutan  siap  untuk  di  uji.  Larutan  tersebut diambil  sebanyak  2  mL  diuapkan,  residu  yang diperoleh dilarutkan dengan 0,5 mL kloroform, 0,5 mL ditambahkan  asam  asetat  anhidrat  kemudian  2  mL asam  sulfat  P  melalui  dinding  tabung.  Cincin  biru kehijauan akan terbentuk apabila senyawa mengandung  steroid  dan  cincin  kecoklatan  atau  violet menandakan  adanya  triterpenoid  (Putra  dkk.,  2018). Warna  biru  dan  hijau  untuk  steroid  (Dwisari  dkk., 2016).

## Uji terpenoid
Sampel  ekstrak  yang  sudah  dilarutkan  dalam  air diambil  sebanyak  2  mL  selanjutnya  ditambahkan reagen Liebermann-Burchad yang mengandung campuran  antara  HCl  pekat  dengan  H 2 SO 4 pekat. Perubahan  warna  merah  jingga  akan  muncul  jika sampel mengandung triterpenoid (Sangi dkk., 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determiasi Tanaman
Determinasi  tanaman  merupakan  salah  satu tahapan  untuk  mengetahui  identitas  suatu  sampel adalah benar.  Sampel yang  digunakan  dalam determinasi  pada  penelitian  ini  adalah  buah  dari tanaman  yang  diidentifikasi  di  laboratorim  biologi, Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam (FMIPA) Universitas Tanjungpura. Buah  yang  diambil  adalah  yang  berusia  8  bulan,  buah tersebut  diperoleh  dari  desa  Pal  Sembilan  kecamatan Sungai kakap. Berdasarkan hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang digunakan termasuk dalam genus rutaceae, familia Citrus dengan spesies Citrus amblycarpa (L), Citrus aurantifolia (S.), dan Citrus sinensis (O.).

## Ekstraksi
Ekstraksi  yang  dilakukan  adalah  dengan  metode ekstraksi  dingin  yaitu  maserasi.  Metode  ini  dapat digunakan  untuk  bahan  yang  tidak  tahan  tehadap pemanasan, serta penggunaannya relatif sederhana, dan dapat mengekstraksi lebih banyak kandungan metabolit sekunder. Namun tidak semua terkestraksi dengan baik karena  pelarut  yang  digunakan  pada  suhu  kamar. (Nurhasnawati  dkk.,  2017)  Pelarut  yang  digunakan merupakan  pelarut  polar  yaitu  etanol  60%.  Pelarut  ini dapat  menyari  senyawa  yang  memiliki  karakteristik polar, semi polar maupun non polar, hal ini disebabkan karena  karakter  pelarut  universal  yakni  pelarut  yang dapat  menyari  hampir  seluruh  metabolit  sekunder. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Do  menggunakan variasi pelarut etanol 75% dan 50 % memberikan hasil rendemen  lebih  banyak  pada  konsentrasi  50%  dengan rendemen  32,98%  serta  kandungan  fenolik  total
sebesar 30,30 GAE /g dengan nilai yang tidak signifikan dibandingkan  dengan  konsentrasi  75%.  (Do  dkk., 2014). Berdasarkan penelitian yang dilakukan rendemen  tertinggi  diperoleh  pada  ekstrak  etanol  biji jeruk sambal dengan rendemen 25,28%. Pelarut etanol 60%  memiliki  kandungan  air  yang  relatif  kecil sehingga proses evaporasi atau pengeringan lebih cepat dan  dapat  menghindari  pertumbuhan  jamur/kapang pada ekstrak. Proses ekstraksi dilakukan selama 72 jam berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  pada  rentang waktu  tersebut  (kisaran  3-6  hari)  memberikan  nilai total fenolik yang optimal. (Kelebek dkk., 2006).
Hasil  ekstrak  memiliki  wujud  berwarna  kuning hingga  coklat  tua  dengan  karakteristik  ekstrak  kental. Hal  ini  menandakan  bahwa  senyawa-senyawa  tersebut mengandung  salah  satu  metabolit  flavonoid,  terutama flavanon  dan  kalkon  berwarna  kuning orange .  Warna kuning  kecoklatan  menandakan  bahwa  senyawa- senyawa  flavonoid  larut  dalam  ekstrak  (Handayani dkk., 2005).
Ekstrak yang digunakan berjumlah 7 sampel  yaitu ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis  (KJN),  kulit  jeruk sambal  (KJS),  biji  jeruk  nipis  (BJN),  dan  biji  jeruk sambal  (BJS)  dengan  2  diantaranya  yaitu  hasil freeze dry air  jeruk  nipis  (AJN),  air  jeruk  manis  (AJM)  dan air jeruk sambal (AJS). Hasil organoleptik menunjukkan  bahwa  ekstrak  termasuk  dalam  kategori ekstrak  kental  berwarna  cokelat.  Hasil  berat  ekstrak yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan data pada Tabel 1 menunjukkan bahwa rendemen yang paling banyak dari hasil proses ekstraksi adalah ekstrak etanol  60%  biji  jeruk  sambal  dengan  rendemen  yang dihasilkan sebesar 25,28%.
Tabel 1. Berat ekstrak dan persen rendemen tiap ekstrak etanol 60% buah jeruk sambal, jeruk manis, dan jeruk nipis
Sampel Berat serbuk yang diekstraksi (g) Berat ekstrak (g) %Rendemen KJN 350,00 20,70 5,91 KJS 350,00 32,30 9,23 BJS 26,50 6,70 25,28 BJN 25,50 1,80 7,06 AJN 65,19 13,50 20,70 AJS 79,13 4,80 6,06 AJM 53,77 8,50 15,80 Skrining fitokimia dengan menggunakan KLT Skrining fitokimia dengan menggunakan kromatografi  lapis  tipis  adalah  salah  satu  identifikasi untuk  melihat  profil  kandungan  metabolit  sekunder yang  ada  di  dalam  suatu  sampel.  Hasil  Identifikasi dapat  dijadikan  rujukan  untuk  menentukan  bahan spesifik yang ada di dalam ekstrak sampel tersebut.
Berdasarkan  Gambar  1  dapat  diketahui  bahwa sebelum  disemprot  menggunakan  penampak  bercak sitroborat  tidak  terjadi  perubahan  warna  pada  sinar UV254  yang  dapat  dikatakan  bahwa  sebelum  atau setelah  disemprot  dengan  penampak  bercak.  Hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  flavonoid  pada  sinar UV254  memberikan  hasil  yang  negatif.  Sedangkan
pada UV366 terjadi peredaman fluorosensi dan setelah penyemprotan  dengan  penampak  bercak  sitroborat terjadi  fluorosensi  kuning,  hijau  atau  biru  serta warnanya menjadi lebih intensif. Intensitas warna pada setiap  jenis  ekstrak  berbeda  menunjukkan  bahwa konsentrasi  dari  flavonoid  yang  dihasilkan  berbeda. (Wagner  &  Bladt,  1996)  Sitroborat  digunakan  sebagai pendeteksi  golongan  flavonoid  menghasilkan  warna kuning  terang  ketika  disinar  dengan  UV366.  Hal  in terjadi  karena  kromatogram  ekstrak  etanol  jeruk sesudah  disemprot  sitroborat  yang  memiliki  struktur dasar  flavonol  yang  mengandung  3-OH  bebas  dengan atau  tanpa  5-OH  bebas  serta  mengandung  gugus
ortodihidroksi.  Ekstrak  menunjukkan  kemungkinan mengandung  senyawa  flavonoid  berstruktur  dasar flavonol dengan gugus orto-dihidroksi (Challice, 1984).
Pada  Gambar  3  menunjukkan  bahwa  seluruh ekstrak  buah  jeruk  mengandung  saponin  yang  tampak pada  kromatogram  pada  sinar  UV366  tampak  bercak berwarna  coklat  kehitaman  dan  intensitas  bercak semakin  jelas  setelah  disemprot  dengan  pereaksi Liebermann-Burchad  baik  disinar  tampak,  UV254  dan UV366. Adapun nilai Rf dari data kromatogram adalah 0,75,  perbedaan  intensitas  penampakan  bercak  pada kromatogram  tersebut  dapat  disebabkan  karena  ada perbedaan  konsentrasi  saponin  di  dalam  ekstrak.
(a) (b)
(c)                (d) (e) (f)
Gambar 1. Hasil skrining senyawa flavonoid pada ekstrak etanol 60% kulit, biji buah jeruk serta air jeruk menggunakan fase diam silica gel 60 F 254 dan fase gerak asam asetat glasial : asam formiat : air : etil asetat (11:11:27:100) dengan perekasi penampak bercak sitroborat;  (a) sinar tampak (sebelum semprot), (b) UV254 (sebelum semprot), (c) UV366 (sebelum semprot), (d) sinar tampak (setelah semprot), (e) UV254 (setelah semprot),
(f) UV366 (setelah semprot)
(a) (b)
(c) (d) (e) (f)
Gambar 2. Hasil skrining senyawa saponin pada ekstrak etanol 60% kulit, biji buah jeruk serta air jeruk menggunakan fase diam silica gel 60 F 254 dan fase gerak kloroform : methanol : air (64 : 50 : 1) dengan pereaksi penampak bercak Liebermann-Burchad;   (a) sinar tampak (sebelum semprot), (b) UV254 (sebelum semprot), (c) UV366 (sebelum semprot), (d) Sinar tampak (setelah semprot), (e) UV254 (setelah semprot), (f) UV366 (setelah semprot)
Sampel  yang  diuji  dengan  KLT  (Gambar  3) menunjukkan hasil yang positif terpenoid pada ekstrak biji  jeruk  sambal,  ekstrak  kulit  jeruk  nipis  dan  ekstrak air  jeruk  nipis  yang  dapat  dilihat  pada  sinar  UV366 dengan  kromatogram  berwarna  hijau.  Namun  tidak tampak  pada  UV254  dan  sinar  tampak.  Setelah dilakukan  penyemprotan  menggunakan  penampak bercak  Anisaldehida-asam  sulfat     intensitas  bercak pada  UV366  menurun  namun  pada  sinar  tampak berwarna  merah  keunguan,  hal  ini  disebabkan  karena adanya  reaksi  antara  sampel  dan  pereaksi  menbentuk kompleks  pada  daerah  sinar  tampak  (Karthika  dkk., 2014). Golongan senyawa terpenoid dan fenol bereaksi dengan  Anisaldehida-asam  sulfat  memberikan  warna ungu,  biru,  merah,  kelabu  atau  hijau  tergantung  jenis
senyawanya (Irianti dkk., 2016).
Pengujian  steroid  sampel  ekstrak  dan  air  buah jeruk menggunakan KLT diperoleh profil kromatogram (Gambar  4)  pada  UV366  ekstrak  biji  jeruk  sambal, Ekstrak kulit jeruk nipis, Ekstrak air jeruk nipis berupa warna  biru  kehijauan  yang  memberikan  6  spot  dan masing-masing  memberikan  2  nilai  rf  yakni  0,38  dan 0,56.  Kemudian  setelah  disemprot  dengan  pereaksi Liebermann-Burchard  yang  menghasilkan  warna  biru kehijauan  yang  menunjukkan  adanya  senyawa  steroid dengan  jumlah  spot  kromatogram  yang  muncul sebanyak  9,  pada  ekstrak  biji  jeruk  sambal,  ekstrak kulit  jeruk  nipis,  ekstrak  air  jeruk  manis,  ekstrak  air jeruk nipis dan ekstrak air jeruk sambal (Hidayah dkk., 2016).
(a) (b) (c) (d) (e) (f)
Gambar 3. Hasil Skrining senyawa terpenoid pada ekstrak etanol 60% kulit, biji buah jeruk serta air jeruk menggunakan fase diam silica gel 60 F 254 dan fase gerak heksana : etil asetat (93 : 7) dengan perekasi penampak bercak Anisaldehida-asam sulfat; (a) sinar tampak (sebelum semprot) (b) UV254 (sebelum semprot), (c) UV366 (sebelum semprot), (d) sinar tampak (setelah semprot), (e) UV254 (setelah semprot), (f) UV366 (setelah semprot)
(a) (b)
(c) (d) (e) (f)
Gambar 4. Hasil skrining senyawa steroid pada ekstrak etanol 60% kulit, biji buah jeruk serta air jeruk menggunakan fase diam silica gel 60 F 254 dan fase gerak heksana: etil asetat (4:1) dengan perekasi penampak bercak Liebermann-Burchad; (a) sinar tampak (sebelum semprot), (b) UV254 (sebelum semprot), (c) UV366 (sebelum semprot), (d) sinar tampak (setelah semprot), (e) UV254 (setelah semprot), (f) UV366 (setelah semprot)
Berdasarkan  pengamatan  pada  Gambar  5  tampak bahwa hasil kromatogram sebelum direaksikan dengan penampak  bercak  menggunakan  UV366  sebanyak  8 titik dengan nilai rf 0,56; 0,62; 0,81; dan 0,94 berwarna hijau  dan  biru.  kromatogram  tersebut  muncul  pada sampel  ekstrak  biji  jeruk  nipis,  ekstrak  kulit  jeruk sambal,  ekstrak  air  jeruk  manis,  ekstrak  air  jeruk sambal.  Setelah  dilakukan  penyemprotan  dengan pereaksi  Dragendorff  pola  kromatogram  yang  muncul intensitasnya  menurun  pada  UV366  akibat  peredaman pereaksi  pada  senyawa,  reaksi  tersebut  muncul  karena pergeseran  panjang  akibat  derivatisasi  pereaksi  dan sampel  ke  arah  sinar  tampak  (Farnsworth,  1966). Namun,  dilihat  setelah  semprot  dengan  pereaksi Dragendorff  di  sinar  tampak  berwarna  jingga  yang menunjukkan  positif  alkaloid.  Faktor  lain  yang  dapat mempengaruhi  adalah  katena  elektron  pasangan  bebas N 4 mungkin memiliki kadar yang sedikit dalam sampel sehingga  proses  adsorpsi  isomer  dan  adanya  karbonil amida  pada  lingkungan  yang  sama  dengan  isomer. Peristiwa tersebut kemungkinan menyebabkan perbedaan  dalam  adsorpsi  akibat  dari  ketersediaan oksigen piran yang bervariasi atau gugus karbometoksi (Phillipson  &  Hemingway,  1975).  Perbedaan  pola kromatogram  dari  sampel  dapat  disebabkan  oleh  jenis alkaloidnya  (Berdasarkan  pengamatan  pada  gambar  6
tampak bahwa hasil kromatogram sebelum direaksikan dengan  penampak  bercak  menggunakan  UV366 sebanyak  8  titik  dengan  nilai  rf  0,56;  0,62;  0,81;  dan 0,94  berwarna  hijau  dan  biru.  kromatogram  tersebut muncul  pada  sampel  ekstrak  biji  jeruk  nipis,  ekstrak kulit  jeruk  sambal,  ekstrak  air  jeruk  manis,  ekstrak  air jeruk sambal.  Setelah dilakukan penyemprotan dengan pereaksi  Dragendorff  pola  kromatogram  yang  muncul intensitasnya  menurun  pada  UV366  akibat  peredaman pereaksi  pada  senyawa,  reaksi  tersebut  muncul  karena pergeseran  panjang  akibat  derivatisasi  pereaksi  dan sampel  ke  arah  sinar  tampak.  (Farnworth,  1966) Namun,  dilihat  setelah  semprot  dengan  pereaksi Dragendorff  di  sinar  tampak  berwarna  jingga  yang menunjukkan  positif  alkaloid.  Faktor  lain  yang  dapat mempengaruhi  adalah  karena  elektron  pasangan  bebas N 4 mungkin memiliki kadar yang sedikit dalam sampel sehingga  proses  adsorpsi  isomer  dan  adanya    karbonil amida  pada  lingkungan  yang  sama  dengan  isomer. Peristiwa tersebut kemungkinan menyebabkan perbedaan  dalam  adsorpsi  akibat  dari  ketersediaan oksigen piran yang bervariasi atau gugus karbometoksi (Phillipson  and  Hemingway,  1975).  Perbedaan  pola kromatogram  dari  sampel  dapat  disebabkan  oleh  jenis alkaloidnya  (Pamungkas  &  Murrukmihadi,  2015; Wagner & Bladt, 1996; Wagner & Bladt, 1996).
(a) (b)
(c) (d) (e) (f)
Gambar 5. Hasil skrining senyawa  alkaloid pada ekstrak etanol 60% kulit, biji buah jeruk serta air jeruk menggunakan fase diam silica gel 60 F254 dan fase gerak toluene : etil asetat : dietil amina (7 : 2 : 1) dengan pereaksi penampak bercak Dragendorff; (a) sinar tampak (sebelum semprot), (b) UV254 (sebelum semprot), (c) UV366 (sebelum semprot), (d) sinar tampak (setelah semprot), (e) UV254 (setelah semprot), (f) UV366 (setelah semprot)
Pada  Gambar  6  terlihat  oleh  hasil  kromatogram dengan  UV366  untuk  senyawa  fenolik  pada  semua sampel  tampak  nyata  dengan  membentuk  spot  yang berbeda setiap senyawa, hal ini disebabkan bahwa jenis senyawa  fenolik  setiap  sampel  uji  berbeda.  Namun
setelah  disemprot  dengan  FeCl 3 Pola  kromatogram tersebut  intensitasnya  menurun  atau  terbentuk  warna ungu.  Perubahan  tersebut  disebabkan  oleh  senyawa fenolik memiliki ikatan rangkap terkonjugasi pada saat belum  disemprot  dengan  FeCl 3 ,  ketika  setelah
disemprot  ikatan  tersebut  akan  lepas  dan  akan berikatan  dengan  ion  Fe 3+ yang  akan  membentuk kompleks  dan  mengakibatkan  pergeseran  panjang gelombang  (Al-Maliki,  2011).  Sedangkan  pada  sinar tampak setelah semprot berwarna hijau tua kehitaman) (Santosa  &  Haresmita  2015).  Perubahan  warna  hijau, merah,  coklat,  ungu,  biru,  atau  hitam  yang  kuat  akan muncul ketika ekstrak yang diuji mengandung senyawa
fenol  setelah  direaksikan  dengan  penampak  bercak FeCl 3 . Setelah disemprot FeCl 3 , pada plat KLT Gambar 6  tampak  terjadi  perubahan  warna  yaitu  hijau kecoklatan  lebih  pudar  dan  biru  keunguan  menjadi lebih intensif. Hal ini dapat menunjukkan kemungkinan  bahwa  spot  yang  muncul  tersebut mengandung senyawa fenol (Harborne dkk., 1996). (a) (b) (c) (d) (e) (f)
Gambar 6. Hasil skrining senyawa fenol pada ekstrak etanol 60% kulit, biji buah jeruk serta air jeruk di elusi menggunakan fase diam silica gel 60 F 254 dan fase gerak etil asetat : toluene : asam formiat : air (6 : 3 : 1,5 : 0,5) dengan pereaksi penampak bercak FeCl 3 ; (a) sinar tampak (sebelum semprot), (b) UV254 (sebelum semprot), (c) UV366 (sebelum semprot), (d) sinar tampak (setelah semprot), (e) UV254 (setelah semprot), (f) UV366 (setelah semprot)

## Skrining fitokimia
Skrining  Fitokimia  merupakan  salah  satu  bentuk standarisasi  suatu  ekstrak  untuk  melihat  kandungan metabolit yang terdapat dalam suatu tanaman. Skrining ini menjadi dasar untuk melanjutkan pengujian analisis farmakologi, toksikologi serta farmasetika.
Berdasarkan  data  pada  Tabel  2  diketahui  bahwa seluruh  sampel  mengandung  senyawa  fenolik,  hal  ini
ditunjukkan dengan perubahan warna sampel dari hijau menjadi  biru  kehitaman.  Seluruh  sampel  juga menunjukkan  mengandung  flavonoid  yang  ditandai dengan perubahan warna sampel menjadi merah pekat. Pada uji  flavonoid  menggunakan pereaksi  magnesium. Pereaksi  ini  dapat  digunakan  karena  dapat  mereduksi terutama  senyawa  flavonoid  dalam  suasana  asam dengan penambahan HCl (Sopianti, 2018).
Tabel 2. Hasil identifikasi Golongan senyawa ekstrak etanol 60% pada komponen buah C. amblycarpa (L.), C. sinensis (O.), dan C. aurantifolia (S.) Jenis metabolit sekunder Ekstrak Fase gerak Pereaksi semprot Deteksi setelah semprot UV 254 Deteksi setelah semprot UV366 Warna bercak Hasil Flavonoid BJS Asam asetat glasial : Asam formiat  :  Air  :  Etil asetat (11:11:27:100) Sitroborat Peredaman Berwarna Kuning + BJN Peredaman Berwarna Kuning + KJN Peredaman Berwarna Kuning + KJS Peredaman Berwarna Kuning + AJM Peredaman Berwarna Kuning + AJN Peredaman Berwarna Kuning + AJS Peredaman Berwarna Kuning + Saponin BJS Kloroform : Metanol : Air (64:50:1) Liebermann- Burchard Peredaman Berwarna Coklat Kehitaman + BJN Peredaman Berwarna Coklat Kehitaman + KJN Peredaman Berwarna Coklat +
Kehitaman KJS Peredaman Berwarna Coklat Kehitaman + AJM Peredaman Berwarna Coklat Kehitaman + AJN Peredaman Berwarna Coklat Kehitaman + AJS Peredaman Berwarna Coklat Kehitaman + Terpenoid BJS Heksana : Etil asetat (93:7) Anisaldehid- asam sulfat Peredaman Berwarna Hijau + BJN Peredaman Peredaman  - - KJN Peredaman Berwarna Hijau + KJS Peredaman Peredaman  - - AJM Peredaman Peredaman  - - AJN Peredaman Berwarna Hijau + AJS Peredaman Peredaman  - - Steroid BJS Heksana : Etil asetat (4:1) Liebermann- Burchad Peredaman Berwarna Biru Kehijauan + BJN Peredaman Peredaman  - - KJN Peredaman Berwarna Biru Kehijauan + KJS Peredaman Peredaman  - - AJM Peredaman Berwarna Biru Kehijauan + AJN Peredaman Berwarna Biru Kehijauan + AJS Peredaman Berwarna Biru Kehijauan + Alkaloid BJS Toluena : Etil asetat : Dietil amina (7: 2: 1) Dragendorff Peredaman Peredaman  - - BJN Peredaman Berwarna Hijau + KJN Peredaman Peredaman  - - KJS Peredaman Berwarna Biru + AJM Peredaman Berwarna Hijau + AJN Peredaman Peredaman  - - AJS Peredaman Berwarna Hijau + Fenolik BJS Etil asetat : Toluena  :    Asam formiat :  Air (6:  3: 1,5: 0,5) FeCl 3 Peredaman Berwarna Biru Keunguan + BJN Peredaman Berwarna Biru Keunguan + KJN Peredaman Berwarna Hijau + KJS Peredaman Berwarna Biru Keunguan + AJM Peredaman Berwarna Biru Keunguan + AJN Peredaman Berwarna Biru Keunguan + AJS Peredaman Berwarna Biru Keunguan +
Keterangan : BJS:  biji  jeruk  sambal;  BJN:  biji  jeruk  nipis;  KJN:  Kulit  jeruk  nipis;  KJS:  kulit  jeruk  sambal;  AJM:  air jeruk manis; AJN: air jenuk nipis; AJS: air jeruk sambal; fase diam yang digunakan adalah Silica Gel 60 F 254
Kandungan  alkaloid  didapat  pada  ekstrak  etanol kulit  dan  biji  jeruk  namun  tidak  ditemukan  pada  sari dari  jeruk  nipis  maupun  jeruk  sambal.  Pada  uji Alkaloid  ini  di  dalamnya  terdapat  atom  nitrogen  yang bersifat lone  pair  electron. Apabila  pasangan  ion tersebut berinteraksi dengan ion logan akan membentuk ikatan kovalen koordinat (McMurry, 2004).
Proses  pembentukan  alkaloid  pada  pereaksi  Mayer diperkirakan  karena  nitrogen  pada  alkaloid  akan membentuk  ikatan  ion  logam  K + dari  kalium tetraiodomerkurat  (II)  sehingga  terbentuk  endapan. Endapan  inilah  yang  tidak  terbentuk  pada  uji  yang dilakukan pada semua fraksi, sehingga dapat dikatakan beberapa  sampel  negatif  terhadap  alkaloid  dengan
pereaksi  mayer  (Dwisari  dkk.,  2016).  Pada uji  saponin dapat  diketahui  bahwa  pada  ekstrak  kulit  jeruk  nipis, kulit  jeruk  sambal  dan  ekstrak  biji  jeruk  nipis menunjukkan  hasil  yang  positif,  hal  ini  ditunjukkan dengan  terbentuknya  buih  setelah  perlakuan  pada lapisan atas ± 2 cm.
Suatu  senyawa  mengandung  saponin  karena memiliki permukaan gugus glikosil yang berkarakteristik polar dan gugus steroid dan triterpenoid  bersifat nonpolar. Senyawa  yang  memiliki gugus  polar  dan  nonpolar  akan  bersifat  aktif  apabila terdapat  keberadaan  air  permukaan  sehingga  saat dikocok  dengan  air  saponin  dapat  membentuk  misel, dimana  struktur  polar  akan  menghadap  ke  luar
sedangkan gugus  nonpolar akan  menghadap ke dalam. Pada  kondisi  inilah  saponin  akan  berbentuk  seperti busa (Sangi dkk., 2008). Sedangkan pada sampel yang lain tidak menunjukkan hal yang sama. Seluruh sampel uji  pada  metode  tabung  tidak  ditemukan  kandungan steroid  dan  terpenoid  yang  ditunjukkan  dengan  hasil negatif.  Berdasarkan  hasil  pengujian  steroid  tidak ditemukan cincin biru kehijauan menandakan dan pada terpenoid tidak terbentuk warna merah jingga.

## Hasil pengukuran parameter non spesifik ekstrak
Adapun  hasil  pengukuran  parameter  non  spesifik ekstrak meliputi kadar sari larut air kadar air, kadar abu, susut pengeringan, abu tidak larut asam, dan kadar sari larut etanol seperti ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Data parameter non spesifik ekstrak etanol 60% dan air dari C. amblycarpa (L), C. sinensis (O.), dan C.
aurantifolia (S.) No. Ekstrak Susut pengeringan (%) Kadar air (%) Kadar abu (%) Abu tidak larut asam (%) Abu tidak larut air (%) Kadar sari larut air (%) 1. AJM 9,565 9,087 4,985 3,175 18,117 15,984 2. BJS 17,752 15,961 5,442 3,661 25,156 10,640 3. KJN 13,496 14,576 3,882 3,404 28,012 11,857 4. AJS 8,149 8,024 2,722 1,903 20,460 15,647 5. AJN 9,748 9,443 4,183 1,991 14,858 16,157 6. KJS 15,413 14,661 2,881 0,929 20,209 16,329 7. BJN 15,002 15,708 3,333 1,686 21,329 16,749
Berdasarkan  pada  Table  3  kadar  air  serbuk simplisia  pada  ekstrak  etanol  BJM  (22,420%  b/b), KJM (15,708% b/b), KJS (14,661% b/b), BJS (15,961% b/b),  KJN  (14,576%  b/b),  namun  untuk  kadar  AJM, AJS  dan  AJN  dibawah  10%  perbedaan  hasil  tersebut dapat  disebabkan  adanya  perbedaan  cara  pengeringan yang  dilakukan  dan  karena  karaktersitik  ekstrak  yang bersifat  esktrak  kental.  Pada  air  jeruk  metode pengeringan yang digunakan dengan metode freeze dry . Berdasarkan  pada  referensi  yang  sudah  ditetapkan untuk  kadar  air  dipersyaratkan  kurang  dari  10%. Kadar  air  simplisia  dan  ekstrak  etanol  kulit  dan  biji jeruk  akan  memiliki  stabilitas  yang  baik  apabila kandungannya  kurang  dari  10%.  Kadar  tersebut terbukti  dapat  menghambat  pertumbuhan  jamur  dan kapang serta dapat meningkatkan kualitas ekstrak yang diperoleh (Zainab dkk., 2016). Berdasarkan data WHO menunjukkan  bahwa  kadar  air  yang  tinggi  dapat menyebabkan reaksi enzimatis dan munculnya mikroba sehingga  menyebabkan  penurunan  kualitas  simplisia (World Health Organization, 1998).
Kadar abu total menggambarkan adanya kandungan  mineral  internal  dan  eksternal  pada  serbuk maupun  ekstrak  yang  diperoleh  dari  preparasi  awal
hingga diperoleh sampel ekstrak yang mana metode ini didasarkan  atas  pemanasan  sampel  pada  temperatur dimana  senyawa  organik  dan  turunannya  terdestruksi dan menguap (Direktorat Pengawasan Obat Tradisional, 2000).  Berdasarkan  data  yang  diperoleh  pada  Tabel  3 tersebut  kadar  abu  seluruh  sampel  rata-rata  dibawah  5% yakni  pada  rentang  2,722  -  5,442%  menunjukkan bahwa  kandungan  anorganik  di  dalam  ekstrak  sudah relatif  rendah  karena  sebagian  besar  tidak  melebihi ketentuan  yang  ditetapkan  sebesar  5%  (Zainab  dkk., 2016).
Berdasarkan  data  pada  Tabel  3  menunjukkan bahwa kadar abu tidak  larut asam berada pada rentang 0,929  -  3,661%.  Abu  yang  tidak  larut  asam  adalah residu  yang  diperoleh  setelah  memanaskan  total  abu dengan  diencerkan  menggunakan  asam  klorida.  Kadar abu  tidak  larut  asam  digunakan  untuk  melihat gambaran  terutama  keberadaan  silica  yang  terdapat dalam  sampel  yang  dapat  bersumber  dari  pasir  dan tanah  mengandung  silika  (World  Health  Organization, 1998).  Kadar  abu  dalam  suatu  ekstrak  tanaman  harus seminimal  mungkin  untuk  mencegah  terjadinya  hal yang  tidak  diinginkan.  Kadar  sari  larut  air  merupakan gambaran metabolit sekunder yang terlarut di dalam air.
Berdasarkan  data  yang  diperoleh  diketahui  bahwa  sari larut  air  berada  pada  rentang  10,640  -  16,749%. Kandungan  metabolit  sekunder  sampel  kulit,  biji  dan
air C.  amblycarpa  (L.) , C.  sinensis(O.) ,  dan C. aurantifolia (S.) dapat dilihat pada Tabel 4 berikut.
Tabel 4. Kandungan metabolit sekunder sampel kulit, biji dan air C. amblycarpa (L.) , C. sinensis(O.) , dan C.
aurantifolia (S.) dengan menggunakan metode tabung Parameter Pustaka KJN KJS BJS BJN AJN AJS AJM Alkaloid (Mayer) Terbentuk endapan berwarna kuning + + + + - - - Fenolik Terbentuk warna biru, hijau, merah atau ungu menunjukkan keberadaan senyawa fenol + + + + + + + Flavonoid Perubahan warna merah, kuning atau jingga menunjukkan adanya flavonoid + + + + + + + Saponin Terbentuk sabun setinggi 2 cm pada lapisan atas + + - + - - - Steroid Terbentuknya cincin biru kehijauan menandakan adanya steroid - - - - - - - Terpenoid Membentuk warna merah jingga untuk analisis triterpenoid - - - - - - -
Keterangan: (+) Positif; (-) Negatif

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  60%  kulit  dan  biji  serta  air  pada buah  jeruk  manis  ( Citrus  amblycarpa (L)),  jeruk  nipis ( Citrus  aurantifolia (S.)),  dan  jeruk  sambal  ( Citrus sinensis (O.))  dengan  nilai  rendemen  tertinggi diperoleh  pada  ekstrak  etanol  60%  biji  jeruk  sambal dengan  rendemen  yang  dihasilkan  sebesar  25,28%. Seluruh  sampel  mengandung  senyawa  fenolik  dan flavonoid  pada  uji  tabung.  Pada  uji  KLT  fase  diam silica  gel 60  F  254  untuk  identifikasi  saponin  dengan fase  gerak  kloroform  :  methanol  :  air  (64  :  50  :  1) menggunakan penampak bercak Liebermann- Burchard, dan identifikasi flavonoid menggunakan fase gerak    asam  asetat  glasial  :  asam  formiat  :  air  :  etil asetat  (11  :  11  :  27  :  100)  dengan  penampak  bercak sitroborat,  pada  kedua  senyawa  tersebut  menunjukkan reaksi positif pada seluruh sampel uji. Serta kadar abu seluruh  sampel  rata-rata  dibawah  5%  yakni  pada rentang 2,722 - 5,442%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kami ucapkan kepada Fakultas Kedokteran  Universitas  Tanjungpura  Pontianak  atas dukungan  dana  yang  diberikan  untuk  menuntaskan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Maliki, A. D. M. (2011). Isolation and Identification  of  Phenolic  Compounds  from
Elettaria  Cardamomum  Seeds  and  Study  of
Their  Medicinal  Activity  Against  Pathogenic Bacteria of Prostate Gland. Journal of Missan Researches; 8 ; 13–35.
Apraj,  V.,  Thakur,  N.  D.,  Bhagwat,  A.,  Mallya,  R., Sawant, L. & Pandita, N. (2011). Pharmacognostic and Phytochemical Evaluation  of Citrus  aurantifoli a  (Christm) Swingle  PEEL. Pharmacognosy  Journal; 3 ; 70–76.
Challice,  J.  (1984).  Techniques  of  Flavonoid Identification. London: Academic Press.
Direktorat  Jenderal  Bina  Kefarmasian  dan  Alat Kesehatan. (2008). Farmakope Herbal Indonesia  (1st  ed.).  Jakarta:  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Direktorat  Pengawasan  Obat  Tradisional.  (2000).
Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan Obat (1st ed.). Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Do,  Q.  D.,  Angkawijaya,  A.  E.,  Tran-Nguyen,  P.  L.,
Huynh, L. H., Soetaredjo, F. D., Ismadji, S. & Ju. Y. (2014). Effect of Extraction Solvent on Total  Phenol  Content,  Total  Flavonoid Content, and Antioxidant Activity of Limnophila  aromatica . Journal  of  Food  and
Drug Analysis; 22 ; 296–302.
Dwisari,  F.,  Alimuddin,  A.  H.  &  Harlia.  2016.  Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Terpenoid Ekstrak Metanol  Akar  Pohon  Kayu  Buta-Buta
( excoecaria  agallocha  L. ). Jurnal  Kimia Khatulistiwa; 5 ; 25–30.
Etebu,  E.  &  Nwauzoma.  A.  B.  2014.  A  Review  on Sweet  Orange  ( Citrus  sinensis  L  Osbeck ): Health,  Diseases  and  Management. American Journal  of  Research  Communication; 2 ;  33– 70.
Fauziah,  D.  T.  (2006).  Identifikasi  dan  Skrining
Aktivitas  Antibakteri  dan  Antijamur  Ekstrak Etanol  Rimpang  Kunci  Pepet  (Kaempferia Rotunda L.). Tesis ; Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi, Surakarta.
Farnsworth, N. R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants. Journal of Pharmaceutical Sciences; 55 ; 225–276.
Harborne,  J.  B.,  Sudiro,  I.,  Padmawinata,  K.  & Niksolihin,  S.  (1996).  Metode  Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Bandung:  Institut  Teknologi Bandung.
Handayani,  S.,  Sunarto  &  Kritianingrum,  S.  (2005).
Kromatografi  Lapis  Tipis  untuk  Penentuan Kadar  Hesperidin  dalam  Kulit  Buah  Jeruk. Jurnal Penelitian Saintek; 10 ; 53–68.
Hidayah,  W.  W.,  Kusrini,  D.  &  Fachriyah.  E.  (2016). Isolasi,  Identifikasi  Senyawa  Steroid  dari Daun  Getih-Getihan  ( rivina  humilis  L .)  dan
Uji  Aktivitas  Sebagai  Antibakteri. Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi; 19 ; 32.
Irianti, T., Murti, Y. B., Kanistri, D. N., Pratiwi, D. R., Kuswandi  &  Anggar,  R.  (2016).  Dpph Radical  Scavenging  Activity  of  Aqueous Fraction from Ethanolic Extract of Talok Fruit ( muntingia calabura L.). Traditional Medicine Journal; 21 ; 38–47.
Karthika  K,  Jamuna  S.  &  Paulsamy  S.  (2014).  TLC and  HPTLC  Fingerprint  Profiles  of  Different Bioactive  Components  from  the  Tuber  of
Solena amplexicaulis. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry; 3 ;  198– 206.
Kaya, B. Y., Menemen, & Fz Saltan. (2012). Flavonoid
Compounds Identified in Alchemilla l. Species Collected  in  the  North-Eastern  Black  Sea Region  of  Turkey. African  Journal  of Traditional,  Complementary  and  Alternative
Medicines; 9 ; 418–425.
Kelebek, H., Canbas, A., Selli S., Saucier, C., Jourdes, M.  &  Glories,  Y.  (2006).  Effects  of  Different
Maceration  Times  and  Pectolytic  Enzyme
Addition  on  the  Anthocyanin  Composition  of Vitis  Vinifera  Cv.  Kalecik  Karasi  Wines. Journal of Food Engineering; 77 ; 1012–1017. Lota, M., Serra, D. D. R., Tomi, F., Jacquemond, C. &
Casanova,  J.  (2002).  Volatile  Components  of Peel  and  Leaf  Oils  of  Lemon  and  Lime Species. Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry; 50 ; 796–805.
Mir,  M.  A.,  Parihar,  K.,  Tabasum,  U.  &  Kumari,  E.
(2016).  Estimation  of  Alkaloid,  Saponin  and Flavonoid,  Content  in  Various  Extracts  of crocus  sativa. Journal  of  Medicinal  Plants Studies; 4 ; 171–174.
McMurry,  J.  (2004).  Organic  Chemistry  (6 th ed.). Belmont: Thomson-Brooks/Cole.
Narang,  N.  &  Jiraungkoorskul,  W.  (2016).  Anticancer Activity  of  Key  Lime, Citrus  aurantifolia .
Pharmacognosy Reviews; 10 ; 118.
Nurhasnawati,  H.,  Sukarmi  &  Handayani,  F.  (2017).
Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi  dan Sokletasi  terhadap  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Daun  Jambu  Bol  ( Syzygium malaccense L.). Jurnal Ilmiah Manuntung; 3 ; 91–95.
Pamungkas,  K.  &  Murrukmihadi,  M.  (2015).  Isolasi dan  Penetapan  Kadar  Alkaloid  Ekstrak Etanolik  Bunga  Kembang  Sepatu  ( Hibiscus rosa-sinensis  L .)  secara  Spektrodensitometri. Traditional Medicine Journal; 20 ; 112–118. Phillipson,  J.  D.  &  Hemingway,  S.  R.  (1975).
Chromatographic  and  Spectroscopic  Methods for  the  Identification  of  Alkaloids  from Herbarium  Samples  of  the  Genus  Uncaria. Journal of Chromatography A; 105 ; 163–78. Poulose, Shibu M., Edward, D. H. & Bhimanagouda, S. P. (2005). Citrus Limonoids Induce Apoptosis in  Human  Neuroblastoma  Cells  and  Have Radical  Scavenging  Activity. The  Journal  of Nutrition; 135 ; 870–77.
Pusat  Data  dan  Sistem  Informasi  Pertanian.  (2015).
Outlook  Komoditas  Pertanian  Subsektor Hortikultura  Jeruk  by  Sekretariat  Jenderal
Kementerian Pertanian. http://epublikasi.setjen.pertanian.go.id/epublik asi/outlook/2015/Hortikultura/Outlook%20Jer uk%202015/files/assets/common/downloads/
Outlook%20Jeruk%202015.pdf. Accessed:  17
Februari 2019.
Putra, G. M. D., Satriawati, D. A., Astuti, N. K. W. &
Yadnya-Putra, A. A. G. R.. (2018).
Standarisasi  dan  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Etanol  70%  Daun  Jeruk  Limau  ( Citrus amblycarpa (hassk.) Osche ). Jurnal Kimia ; 12;
187-194.
Rao, U.  S.  M. (2016).  Phytochemical Screening, Total Flavonoid  and  Phenolic  Content  Assays  of Various  Solvent  Extracts  of  Tepal  of musa paradisiaca . Malaysian  Journal  of Analytical Science; 20 ; 1181–90.
Safitri,  D.  A.  (2016).  Pemisahan  Senyawa  Steroid Fraksi  Etil  Asetat  Mikroalga Chlorella  sp.
Menggunakan  Kromatografi  Kolom  Cara Basah dan Kering. Skripsi ; Fakultas Sains dan
Teknologi  Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim, Malang.
Sangi,  M.,  Runtuwene,  M.  R.  J.,  Simbala,  H.  E.  I.  & Makang,  V.  M.  A.  2008.  Analisis  Fitokimia Tumbuhan  Obat  di  Kabupaten  Minahasa
Utara. Chemistry Progress; 1 ; 47–53.
Santosa,  D.  &  Haresmita,  P.  P.  (2015).  Antioxidant
Activity Determination Garcinia dulcis (Roxb.)  Kurz,  Blumeamollis  (D.  Don)  Merr., Siegesbeckia  orientalis  L .,  and Salvia  riparia H.B.K Which Collected from Taman Nasional
Gunung  Merapi  Using  DPPH  (2,2-Diphenyl- 1-Pikril -Hidrazil) and Thin Layer.
Traditional Medicine Journal; 20 ; 28–36. Sopianti,  D.  S.  (2018).  Skrining  Fitokimia  dan  Profil KLT  Metabolit  Sekunder  dari  Daun  Ruku- Ruku  ( Ocimum  tenulflorum  l. )  dan  Daun Kemangi  ( Ocimum  sanctum  l ). Scientia:
Jurnal Farmasi Dan Kesehatan; 8; 44. Sun, Y., Qiao, L., Shen, Y., Jiang, P., Chen, J. & Ye, X.
(2013). Phytochemical Profile and
Antioxidant Activity of Physiological Drop of Citrus  Fruits. Journal  of  Food  Science; 78 ; C37–42.
Truong,  D.,  Nguyen,  D.  H.,  Ta,  N.  T.  A.,  Bui,  A.  V.,
Do, T. H. & Nguyen, H. C. (2019). Evaluation of  the  Use  of  Different  Solvents  for Phytochemical  Constituents,  Antioxidants, and In  Vitro Anti-Inflammatory  Activities  of Severinia  buxifolia . Journal  of  Food  Quality; 2019 ; 1–9.
Wagner, H. & Bladt. S. (1996). Plant Drug Analysis: A Thin  Layer  Chromatography  Atlas.  Berlin: Springer-Verlag Berlin Heidelberg.
Wang, S, Yang, C., Tu, H.,  Zhou, K., Liu, X., Cheng, Y.,  Luo,  J.,  Deng,  X.,  Zhang,  H.  &  Xu,  J. (2017). Characterization and Metabolic Diversity  of  Flavonoids  in Citrus Species. Scientific Reports; 7 ; 10549.
World  Health  Organization.  (1998).  Quality  Control Methods  for  Medicinal  Plant  Materials. Geneva: World Health Organization.
Xiao,  J.,  Capanoglu,  E.,  Jassbi,  A.  R.  &  Miron,  A.,
(2016).  Advance  on  the  Flavonoid C - Glycosides  and  Health  Benefits. Critical Reviews  in  Food  Science  and  Nutrition ; 56 ;
S29–45.
Zainab,  Sulistyani,  N.  &  Anisaningrum.  (2016).
Penetapan Parameter Standardisasi Non Spesifik  dan  Spesifik  Ekstrak  Daun  Pacar Kuku ( Lawsonia inermis L .). Media Farmasi;
13 ; 212–26.