Jurnal Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian
http://journals.usm.ac.id/index.php/jtphp

## PENGARUH LAMA MASERASI TERHADAP SENYAWA BIOAKTIF EKSTRAK ETANOLIK TEH DAUN DARUJU

## (ACHANTUS ILICIFOLIUS)
Aldila Sagitaning Putri 1) , Anisa Rachma Sari 2) , Asah Wiari Sidiq 3)
1,2,3 Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Semarang, Indonesia
DOI : 10.26623/jtphp.v19i1.8987

## Info Artikel Abstrak
Senyawa bioaktif seperti alkaloid, flavonoid, fenol dan tanin berpotensi sebagai antioskidan. Potensi antioksidan alami untuk Kesehatan semakin menarik para peneliti, seperti halnya teh memiliki potensi sebagai antioksidan alami karena memiliki senyawa bioaktif. Daun daruju merupakan  tanaman  lokal  berasal  dari  Desa  Banjarsari,  Kecamatan  Sayung,  Kabupaten Demak  yang  saat  ini  dikembangkan  dengan  cara  dibuat tea-like daun  daruju.  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui    lama  waktu  maserasi  yang  paling  efektif  dalam menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  terdapat  pada  teh  daun  daruju.  Waktu  maserasi  yang tepat akan menghasilkan rendemen ekstrak senyawa yang tinggi. Penelitian ini menggunakan Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  dengan  satu  faktor  yaitu  lama  waktu  maserasi,  4 perlakuan (maserasi 18 jam, 24 jam, 30 jam dan 36 jam) masing masing perlakuan dilakukan 4 kali pengulangan. Perlakuan pertama adalah lama maserasi selama 18 jam, perlakuan kedua lama maserasi selama 24 jam, perlakuan ketiga lama maserasi selama 30 jam dan perlakuan keempat lama maserasi selama 36 jam. Parameter yang diamati adalah total flavonoid, total tannin, total fenolik dan uji aktivitas antioksidan RSA DPPH. Hasil penelitian menunjukkan bahwa lama maserasi berpengaruh terhadap total flavonoid, total tannin, total fenol, alkaloid dan  aktivitas  antioksidan.  Senyawa  bioaktif  dengan  lama  maserasi  24  jam  menghasilkan senyawa bioaktif seperti total fenolik (2,28 mg GAE/g; 3,81 mg TAE/g; 2,45 mg QE/g dan aktivitas antioksidan sebesar 92,51% serta alkaloid sebesar 0,75 g/100 g.

## Abstract
Bioactive  compounds  such  as  alkaloids,  flavonoids,  phenols  and  tannins  have potential  as  antioxidants.  The  potential  of  natural  antioxidants  for  health  is increasingly attracting researchers, as tea has the potential as a natural antioxidant because  it  has  bioactive  compounds.  Daruju  leaves  are  a  local  plant  originating from Banjarsari Village, Sayung District, Demak Regency which is currently being developed by making tea-like daruju leaves. The aim of this research is to determine the  most  effective  length  of  maceration  time  in  producing  bioactive  compounds found  in  daruju  leaf  tea.  The  right  maceration  time  will  produce  a  high  yield  of compound extract. This research used a Randomized Block Design (RAK) with one factor, namely the length of maceration time, 4 treatments (18 hours, 24 hours, 30 hours and 36 hours maceration) each treatment was carried out 4 times. The first treatment  was  a  maceration  period  of  18  hours,  the  second  treatment  was  a maceration duration of 24 hours, the third treatment was a maceration duration of
Sejarah Artikel: Disubmit 26 Februari 2024 Direvisi 28 Januari 2024 Disetuji 1 Oktober 2023
Keywords: Ekstrak etanolik, Lama maserasi, Senyawa bioaktif, Teh daun daruju
30  hours  and  the  fourth  treatment  was  a  maceration  duration  of  36  hours.  The parameters observed were total flavonoids, total tannins, total phenolics and RSA DPPH  antioxidant  activity  test.  The  results  showed  that  the  length  of  maceration had  an  effect  on  total  flavonoids,  total  tannins,  total  phenols,  alkaloids  and antioxidant  activity.  Bioactive  compounds  with  a  maceration  period  of  24  hours produced bioactive compounds such as total phenolics (2.28 mg GAE/g; 3.81 mg TAE/g;  2.45  mg  QE/g  and  antioxidant  activity  of  92.51%  and  alkaloids  of  0, 75g/100g.

## PENDAHULUAN
Teh daun daruju yang biasa dimanfaatkan oleh masyarakat Sayung, Kabupaten Demak dibuat dengan 2 cara, diseduh. Mengingat banyak masyarakat Sayung, Kabupaten Banjarsari memanfaatkan daun  daruju  diolah  menjadi  teh  herbal  sebagai  minuman  penghangat  tubuh  dan  dipercaya  dapat mengobati  berbagai  penyakit, maka  perlu  dikaji  lebih  lanjut  tentang  senyawa  bioaktif  yang  terdapat dalam ekstrak teh daun daruju. Avijit et al (2012) telah meneliti tentang aktivitas antioksidan ekstrak metanol  pada  tanaman  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.)  dengan  menggunakan  1,1  Diphenil  2 Picrylhidrazil (DPPH) hasilnya menunjukkan bahwa nilai IC 50 ekstrak methanol daun daruju ( Acanthus ilicifolius L)  yaitu  5.1  µg/mL  yang  termasuk  pada  kategori  intensitas  antioksidan  yang  sangat  kuat. Senyawa bioaktif bersifat polar sehingga dibutuhkan pelarut yang bersifat polar (Gillespie dan Paul, 2001), namun dalam hal ini pelarut metanol penggunaanya tidak diperbolehkan karena ada residu yang tertinggal di produk. Etanol merupakan pelarut organik yang sering digunakan untuk proses ekstraksi dan  sudah  sangat  banyak  laporan  atau  artikel  penelitian  dari  penggunaan  etanol.  Beberapa  alasan penggunaan etanol yang sangat luas antara lain karena etanol relatif tidak toksik dibandingkan dengan aseton dan metanol, biaya murah, dapat digunakan pada berbagai metode ekstraksi, serta aman untuk ekstrak yang akan dijadikan obat-obatan dan makanan.
Proses  ekstraksi  yang  umum  digunakan  adalah  maserasi.  Maserasi  merupakan  proses perendaman sampel menggunakan pelarut organik pada temperatur ruangan (Cikita et al , 2016). Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam karena dengan perendaman sampel akan terjadi pemecahan dinding sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna. Pemilihan pelarut didasarkan pada efektivitas yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan senyawa bahan alam dalam pelarut tersebut (Winata et al , 2015). Semakin lama waktu ekstraksi, kuantitas bahan yang terekstrak juga akan semakin meningkat (Winata et al ., 2015).. Waktu maserasi yang melewati waktu optimum akan merusak zat terlarut dan berpotensi meningkatkan senyawa yang terekstrak karena penguapan (Cikita et al ., 2016). Tujuan dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  lama  waktu  maserasi  yang  paling  tinggi  menghasilkan yield dalam menghasilkan senyawa bioaktif  teh daun daruju ( Achantus ilicifolius ). .

## METODE

## Bahan Baku
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Daun  Daruju  yang  diperoleh  dari Kecamatan  Sayung,  Desa  Banjarsari  dengan  spesifikasi  daun  baris  ke  4  dari  pangkal.  Penelitian  ini menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  dengan  satu  faktor  yaitu  lama  waktu  maserasi,  4 perlakuan (maserasi 18 jam, 24 jam, 30 jam dan 36 jam) masing masing perlakuan dilakukan  4 kali pengulangan. Perlakuan pertama adalah lama maserasi selama 18 jam, perlakuan kedua lama maserasi selama 24 jam, perlakuan ketiga lama maserasi selama 30 jam dan perlakuan keempat lama maserasi selama 36 jam. Parameter yang diamati adalah total fenolik, total flavonoid, total tannin, total alkaloid dan uji aktivitas antioksidan RSA DPPH

## Alat
Alat yang digunakan meliputi alumunium foil, plastik klip, autoklaf, erlenmeyer, evaporator, gelas piala (beaker glass), gelas ukur, inkubator, kertas saring Whatman No. 41, oven, pemanas lisrik (hotplate),  pipet  tetes,  spatula,  spektrofotometer  UV-Vis,  tabung  reaksi,  timbangan  analitik,  tip  dan Vortex

## Preparasi Sampel
Penelitian  ini mengacu  berdasarkan penelitian  Kristanti et al, 2019.  Dalam proses  ini  bahan baku  dipilih  dari  tingkat  kesegaran  dan  warna.  Bagian  yang  diambil  adalah  4  daun  daruju  keatas. Kemudian dilakukan pemotongan dengan cara dirajang. Daun yang telah dirajang kemudian dijemur dibawah  sinar  matahari  hingga  benarbenar  kering.  Agar  mendapatkan  ekstraksi  yang  sempurna, potongan daun daruju yang telah dijemur tersebut kemudian diblender hingga halus.

## Metode Ekstraksi Maserasi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  dalam  penelitian  yaitu  metode  maserasi  Tunggal  dengan menggunakan etanol 70%. Metode maserasi tunggal yaitu dengan menggunakan 40 gram serbuk daun
daruju  dimasukkan  kedalam  botol  gelap,  tambahkan  200  mL  larutan  etanol  70%.  Maserasi menggunakan  shacker  sesuai  perlakuan  yaitu  maserasi  selama  18  jam,  24  jam,  30  jam,  dan  36 jam, setelah itu disaring dengan kertas saring Whatman No. 41 (Kristanti et al , 2019). Ampas yang didapat kemudian dimaserasi ulang hingga dihasilkan volume ekstrak hingga volume 200 mL. Ekstrak yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50ºC.

## Metode Total Flavonoid
Larutan ekstrak 1000 ppm diambil sebanyak 1 mL, ditambahkan dengan 1 mL AlCl 3 10% dan 8  mL  asam  asetat  5%  didiamkan  selama  16  menit.  Dilakukan  pembacaan  absorbansi  pada  panjang gelombang maksimum. 350-450 nm (Das et al, 2014).

## Metode Fenolik

## 1. Penentuan panjang gelombang maksimal
Penentuan panjang gelombang maksimal asam galat dilakukan dengan mengukur larutan asam galat  konsentrasi  5  ppm  pada  range  panjang  gelombang  400-800  nm  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan diperoleh panjang gelombang maksimal yaitu 662,85 nm.

## 2. Pengukuran Larutan standar Asam Galat
Dibuat konsentrasi 3, 13, 23, 33, 43, dan 53 ppm yang dipipet dari larutan standar asam galat konsentrasi 100 ppm, kemudian ditambahkan 0,4 ml reagen Folin Ciocalteau, dikocok dan dibiarkan 4- 8 menit. Ditambahkan 4,0 ml larutan Na 2 CO 3 , dikocok hingga homogen. Kemudian dicukupkan dengan aquabidestillata hingga 10 ml dan didiamkan selama 2 jam pada suhu ruangan. Diukur absorbansi pada panjang  gelombang  maksimal  662,85  nm,  dibuat  kurva  kalibrasi  hubungan  antara  konsentrasi  asam galat (µg/ml) dengan absorbansi (Ahmad et al ., 2015).

## 3. Penentuan kadar fenolik total ekstrak etanol
Penentuan kadar fenolik total pada ekstrak etanol daun daruju merujuk pada prosedur Chun et al., (2003) yaitu dibuat dengan cara menimbang 10 mg ekstrak etanol daun daruju kemudian dilarutkan dengan 10 ml etanol p.a dan dihomogenkan. Dipipet 1 ml dari larutan tersebut, kemudian ditambahkan dengan 0,4 ml reagen Folin Ciocalteau dikocok dan dibiarkan 4-8 menit.

## Metode Tannin
Kandungan  total  tanin  ditentukan  dengan  metode  Chanwitheesuk et  al .  (2004)  yang  sedikit dimodifikasi. Sebanyak 0,5 g biji alpukat diekstraksi dengan 10 mL dietil eter selama 20 jam, kemudian disaring  dan  residu  yang  diperoleh  dididihkan  dengan  100  mL  akuades  selama  2  jam,  kemudian didinginkan dan disaring. Ekstrak yang diperoleh ditambahkan dengan akuades hingga volume ekstrak 100 mL. Sebanyak 0,1 mL ekstrak ditambahkan N dengan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu dan divortex, ditambahkan  dengan  2  mL  Na 2 CO 3 dan  divortex  lagi.  Absorbansi  dibaca  pada  λ=  760  nm  setelah diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar. Hasil yang diperoleh diplotkan terhadap kurva standar asam  tanat  yang  dipersiapkan  dengan  cara  yang  sama.  Kandungan  total  tanin  dinyatakan  dalam  mg TAE/g ekstrak.

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN RSA- DPPH
Larutan blanko DPPH 0,4 mM sebanyak 1 mL dalam metanol p.a. ditambahkan sampai tanda batas metanol p.a pada labu ukur 5 mL kemudian didiamkan selama 30 menit ditempat gelap. Serapan larutan  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  450-550  nm  (Molyneux, 2004;  Nihlati et  al., 2008).  b.  Penentuan  Operating  Time  Larutan  DPPH  0,4  mM  sebanyak  1  mL ditambahkan larutan standar kuersetin 6 ppm sampai tanda batas pada labu ukur 5 mL. Larutan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang maksimum 516 nm dengan interval waktu 2 menit (Maulina, 2014).

## Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis pengaruh dan keterkaitan antar variabel menggunakan Annova dengan  tingkat  signifikan  5%.  Data  juga  dilakukan  analisa  dengan  uji  F,  apabila  berpengaruh  nyata maka dilanjutkan dengan uji Duncan atau Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada taraf kepercayaan 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Kadar Tanin
Berdasarkan analisis ragam menunjukkan bahwa semakin lama waktu maserasi, kadar tannin berbeda nyata terhadap lama waktu maserasi. Hasil analisa kadar tannin ekstrak teh daun daruju dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil analisa kadar tanin ekstrak teh daun daruju
Perlakuan Kadar Tanin (mg.TAE/g) P1( lama maserasi 18 jam) 3,49 ± 0,14 a P2 (lama maserasi 24 jam) 3,81 ± 0,06 b P3 (lama maserasi 30 jam) 3,64 ± 0,08 ab P4 (lama maserasi 36 jam) 3,59 ± 0,06 c
Keterangan: angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata ( p < 5%), n=4.
Berdasarkan Tabel 1 menunjukkan bahwa semakin lama waktu maserasi, maka ekstrak teh daun  daruju  semakin meningkat dan pada  saat  lama  waktu maserasi  selama  30 jam dan 36 jam, kadar  tannin  ekstrak  teh  daun  daruju  akan  mengalami  penurunan.  Adanya  pengaruh  waktu  ini dikarenakan lamanya waktu kontak antara pelarut dan bahan yang diekstraksi sampai batas tidak adanya senyawa yang terekstraksi (Ningsih, et al ., 2015). Sedangkan menurut Kristanti, et al . (2019) waktu ekstraksi yang terlalu lama atau terlalu singkat dapat mempengaruhi sifat kimia dan fisika dari bahan yang diekstraksi (Cikita et al , 2016).
Hal ini menunjukkan bahwa semakin lama maserasi, maka kadar tannin ekstrak teh  daun daruju semakin  meningkat  pada  lama  maserasi  selama  24  jam.  Terlalu  singkatnya  waktu  ekstraksi mengakibatkan  pelarutan  senyawa  fenolik  tidak  optimum  sehingga  bahan  belum  terekstraksi  secara sempurna  dan  sebaliknya,  semakin  lama  waktu  ekstraksi  maka  akan  menaikkan  jumlah  analit  yang terekstrak karena kontak antara pelarut dengan zat terlarut akan semakin lama sehingga proses pelarutan senyawa  bioaktif  akan  terus  berlangsung  dan  berhenti  sampai  pelarut  jenuh.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian Ince et al, 2013 yang menyatakan bahwa ketika waktu ekstraksi telah tercapai, penambahan waktu ekstraksi tidak lagi dapat meningkatkan kandungan senyawa bioaktif yang terekstrak (Ince et al ., 2013). Dapat disimpulkan bahwa waktu yang dapat menghasilkan  senyawa bioaktif tertinggi adalah pada lama maserasi selama 24 jam.

## 2. Alkaloid
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  lama  maserasi  berpengaruh  nyata terhadap  alkaloid  teh  daun  daruju.  Hasil  analisa  alkaloid  ekstrak  teh  daun  daruju  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil analisa alkaloid ekstrak teh daun daruju
Perlakuan Alkaloid (g/100g) P1( lama maserasi 18 jam) 0,56 ± 0,03 a P2 (lama maserasi 24 jam) 0,75 ± 0,01 c P3 (lama maserasi 30 jam) 0,72 ± 0,09 bc P4 (lama maserasi 36 jam) 0,71 ± 0,04 b
Keterangan: angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata ( p < 5%), n=4.
Tabel 2 menunjukkan bahwa lama maserasi 30 jam dan 36 jam mengalami penurunan alkaloid ekstrak  teh daun daruju. Hal ini disebabkan karena pada lama maserasi 24 jam adalah lama maserasi yang paling efektif mengekstrak teh daun daruju. Setelah diuji lanjut DMRT ternyata antar perlakuan memberikan  pengaruh  yang  nyata.  Pada  lama  maserasi  selama  24  jam  merupakan  lama  serasi  yang paling  efektif  untuk  menghasilkan  senyawa  bioaktif  seperti  alkaloid.  Adanya  pengaruh  waktu  ini dikarenakan lamanya waktu kontak antara pelarut dan bahan yang diekstraksi sampai batas tidak adanya senyawa yang terekstraksi (Ningsih, dkk., 2015). Menurut Saliny, dkk. (2019) prinsip dasar ekstraksi
yaitu  like  dissolves like  yang  berarti  bahwa  kelarutan  senyawa  pada  pelarut  didasari  oleh  kesamaan polaritas antara pelarut dan senyawa yang akan diekstrak.

## 3. Total Fenolik
Berdasarkan analisis ragam menunjukkan bahwa interaksi waktu ekstraksi dalam ekstraksi teh daun daruju berpengaruh nyata. Hasil analisa total fenol ekstrak teh daun daruju dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil analisa total fenolik ekstrak teh daun daruju
Perlakuan Total  Fenolik (mg.GAE/g) P1( lama maserasi 18 jam) 2,10 ± 0,05 a P2 (lama maserasi 24 jam) 2,38 ± 0,01 c P3 (lama maserasi 30 jam) 2,28 ± 0,00 b P4 (lama maserasi 36 jam) 2,19 ± 0,00 b
Keterangan: angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata (p < 5%), n=4.
Dari  Tabel 3 senyawa bioaktif yang terdapat pada ekstrak teh daun daruju maksimal pada lama maserasi 24 jam, dan akan mengalami penurunan pada saat lama maserasi 30 jam dan 36 jam. Setelah dilakukan uji lanjut DMRT, ternyata ada perbedaan nyata.

## 4. Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan mengalami  penurunan pada lama maserasi selama 30 jam dan 36 jam. Penurunan aktivitas antioksidan ini disebabkan kemampuan pelarut etanol  dalam mengekstrak senyawa bioaktif yang terdapat di dalam teh daun daruju tidak maksimal atau sudah mengalami titik jenuh. Hasil analisis aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil analisis aktivitas antioksidan ekstrak teh daun daruju
Perlakuan Aktivitas  Antioksidan  (  % RSA DPPH ) P1( lama maserasi 18 jam) 92,16 ± 0,08 a P2 (lama maserasi 24 jam) 92,46 ± 0,07 b P3 (lama maserasi 30 jam) 92,36 ± 0,07 c P4 (lama maserasi 36 jam) 91,24 ± 0,05 d
Keterangan: angka yang diiikuti oleh huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata ( p < 5%), n=4.
Berdasarkan Tabel 4, menunjukkan bahwa perlakuan 3 dan perlakuan 4 tidak berbeda nyata namun antara perlakuan 1 dan perlakuan 2 berbeda nyata.  Aktivitas antioksidan tertinggi adalah pada lama maserasi selama 24 jam  dan akan mengalami penurunan saat lama  maserasi selama 30 dan 36 jam, hal ini disebabkan karena pada lama  maserasi 24 jam senyawa bioaktif dalam hal ini aktivitas antioksidan sudah terekstrak secara maksimal dan sudah mengalami kondisi jenuh dalam arti senyawa bioaktif sudah tidak mampu terkekstrak lagi.

## SIMPULAN
Lama  maserasi  terhadap  senyawa  bioaktif  ekstrak  etanolik  teh  daun  daruju  berpengaruh terhadap kadar tannin, total fenol, alkaloid dan aktivitas antioksidan (RSA-DPPH) dan senyawa bioaktif dengan lama maserasi 24 jam menghasilkan total fenolik sebesar 2,28 mg GAE/g; 3,81 mg asam TAE/g; 2,45 mg QE/g total flavonoid aktivitas antioksidan sebesar 92,51% serta alkaloid sebesar 0,75 g/100 g.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  A.R.,  Juwita.,  Ratulangi,  S.A.D.,  dan  Malik,  A.,  2015,  Pharm  Sci  Res,  Penetapan  Kadar Fenolik dan Flavanoid Total Ekstrak Metanol Buah dan daun Patikala ( Etlingera elatior (Jack) R.M.SM), 2(1): 1-10.
Avijit, D, Sarkar, R, Howlader, IS, Hamiduzzaman, & Al-Hossain. (2012). Phytochemical Screening and  The  Evaluation  of  the  Antioxidant,  Cytotoxic  and  Antimicrobial Properties  of  Acanthus ilicifolius (Family: Acanthaceae ), 3(8):153 -
Dewi,  N.  P.  (2020).  Uji  Kuantitatif  Metabolit    Standar  Ekstrak  Etanol  Daun  Awar-Awar  ( Ficus septica Burm. f) Dengan Metode kromatografi. Acta Holistica Pharmaciana , 2(1):16–24.
Cikita,  I.,  I.  H.  Hasibuan  dan  R.  Hasibuan.  2016.  Pemanfaatan  Flavonoid  Ekstrak  Daun  Katuk ( Sauropus androgynous (L) Merr)  Sebagai  Antioksidan  pada  Minyak  Kelapa. Jurnal  Teknik Kimia USU .Vol  (3) Hal 1-7.
Chanwitheesuk, A.; Teerawutgulrag A.; Rakariyatham N. 2004. Screening of Antioxidant Activity and Antioxidant Compounds of Some Edible Plants  of Thailand. Food Chemistry.  Vol (92): 491- 497.
Chun,  O.K.,  Kim,  D.O.,  dan  Lee,  C,  Y.,  2003, Journal  of  Agric  Food  Chem .  Superoxide  Radical Scavenging Activity of The Major Polyohenols in Fresh Plums.
Das,  N.,  Md.  E.  Islam.,  N.  Jahan.,  M.  S.  Islam.,  A.  Khan,  Md.  R.  Islam,  &  Mst.  S.  Parvin.  2014. Antioxidant  Activities  of  Ethanol  Extracts  and  Fractions  of  Crescentia  cujete  Leaves  and Stembark  and  The  Involvement  of  Phenolic  Compounds.  BMC  Complementary  and Alternative Medicine.Vol (3):14-45.
Ince,  A.E.,  S.  Sahin dan G.S.  Servet.  2013. Extraction  of phenolic compounds from  melissa using microwave and ultrasound. Turk Journal Agritech, Vol (37):69-75.
Kristanti,  Yessica;    I  Wayan  Rai  Widarta,  I  Dewa  Gede  Mayun  Permana.  2019.  Pengaruh  Waktu Ekstraksi  dan  Konsentrasi  Etanol  Menggunakan  Metode Microwave  Assisted  Extraction (MAE) Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rambut Jagung ( Zea mays L.). Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan ,  ISSN: 2527-8010 (ejournal), 8(1): 94-103.
Maulina, R. 2014. Penentuan Nilai Sun Protection Factor (SPF) dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kulit  Batang  Bangkal  ( Nauclea  subdita )  secara  in  vitro.  Skripsi,  Fakultas  Matematika, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Ningsih, R; Afif, S., and Fasya, A. G. 2015. Extraction, Toxicity Assay and Identification of Active Compounds of Red Algae (Eucheuma cottonii) from Sumenep Madur. ALCHEMY: Journal of Chemistry, 4(2):101-106.
Gillespie, R.J. dan Paul. 2001. Chemical Bonding and Molecular Geometry . Oxford University Press, London.
Saliny Aiyer, K.G. Manju. 2019. Phytochemical screening in vitro antioxidant activity, cytotoxicity study  using  Brine  shrimp  and  antimicrobial  study  of  (Linn.)  Acanthus  ilicifolius  leaves. Journal. Department of Zoology, Mar Ivanios College, Trivandrum: India, 4(5):654-658
Winata,  E.  W  dan  Yunianta.  2015.  Ekstraksi  Antosianin  Buah  Murbei  ( Morus  alba L.)  Metode Ultrasonic Batch (Kajian Waktu dan Rasio Bahan : Pelarut). Jurnal Pangan dan Agroindustri, 3(2): 773-783.