## Ethanolic Extract Oitment of The Graptophylum Pictum  L Griff

## Leaves as Analgesic agent to Male White Rat
Setya Enti Rikomah 1) , Ninsi Fitri 1)
1) Pharmacy Academy of Al-Fatah Bengkulu, Bengkulu Province Indonesia E-mail : setyaentirikomah@gmail.com

## Abstract
Graptophyllum  pictum  L  Griff  Leaves  in  the  community  are  used  as  medicinal ingredients, one of which is for analgesics. Black pudding leaves contain secondary metabolite  compounds  that  act  as  suspected  analgesics,  namely  flavonoids.  The ethanolic  extract  of  black  pudding  leaves  has  been  formulated  into  cream  and ointment preparations. The purpose of this study was to determine the effectiveness of  analgesic  preparations  of  black  pudding  leaves  (Graptophyllum  pictum  L.  Griff) ethanol extract in white male mice. The effectiveness of analgesics was tested using the  hotplate  method.  The  test  animals  used  were  25  white  male  mice  which  were divided  into  5  groups:  negative  control  (F0),  positive  control  (Ichtiol®  ointment), and black pudding leaf F1 (10%), F2 (15%) ethanol extract treatment group, and F3 (20%).  Observation  of  stretching  of  mice  was  done  after  the  feet  of  mice  were induced  and  immediately  given  treatment.  Observation  of  analgesic  percentage  in each mouse was carried out every 5 minutes for 60 minutes. The data obtained were processed  and  analyzed  using  one-way  ANOVA  and  Duncan  test  with  a  95% confidence  level.  One-way  ANOVA  test  results  showed  that  there  were  significant differences  between  treatment  groups  (0.003  <0.05).  The  results  of  the  average percentage of analgesic effectiveness of formula 2 have a good effect that is equal to 77.969%.  Duncan's  test  results  showed  that  the  group  that  gave  the  best  analgesic effectiveness was formula 2 (15%) comparable to positive control.
Keywords: Graptophyllum pictum,  Analgesics, ointment, Hotplate.

## ABSTRAK
Daun Graptophyllum  pictum L.  Griff  dimasyarakat  digunakan  sebagai  bahan obat,  salah  satunya  untuk  analgetik  .  Daun  puding  hitam  mempunyai  kandungan senyawa metabolit sekunder yang berperan sebagai analgetik diduga yaitu flavonoid. Ekstrak  etanol  daun  puding  hitam  telah  diformulasikan  menjadi  sediaan  krim  dan salep.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektifitas  analgetik sediaan  salep  ekstrak  etanol  daun  puding  hitam  ( Graptophyllum  pictum L.  Griff) pada  mencit  jantan  putih.  Efektifitas  analgetik  diuji  menggunakan  metode hotplate . Hewan  uji  yang  digunakan  sebanyak  25  ekor  mencit  jantan  putih  yang  dibagi menjadi  5  kelompok  yaitu  kontrol  negatif  (F0),  kontrol  positif  (salep  Ichtiol ® ),  dan kelompok  perlakuan  salep  ekstrak  etanol  daun  puding  hitam  F1  (10%),  F2  (15%), dan F3 (20%). Pengamatan geliat mencit dilakukan setelah kaki mencit diinduksi dan langsung diberikan perlakuan. Pengamatan persentase analgetik pada masing-masing mencit  dilakukan  setiap  5  menit  selama  60  menit.  Data  yang  didapat  diolah  dan dianalisa  menggunakan one-way  anova dan  uji duncan dengan  tingkat  kepercayaan 95%. Hasil uji one-way anova menunjukan terdapat perbedaan yang signifikan antar
kelompok  perlakuan  (0,003<0,05).  Hasil  rata-rata  persentase  efektifitas  analgetik formula  2    memberikan  efek  yang  baik  yaitu  sebesar  77,969  %.  Hasil  uji duncan menunjukan kelompok yang memberikan efektifitas analgetik terbaik adalah formula 2 (15%) sebanding dengan kontrol positif.
Kata kunci: Graptophyllum pictum , Analgetika, Salep, Hotplate.

## PENDAHULUAN
Tanaman  obat  tradisional  dari  alam  secara  turun-temurun  telah  digunakan  untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (Nursiyah, 2013).
Tanaman  Puding  Hitam  ( Graptophyllum  pictum L.  Griff)  disebut  juga  dengan tanaman  Daun  Wungu  atau  Daun  Unggu  ( Graptophyllum  pictum L.  Griff) merupakan  salah  satu  tanaman  obat  yang  secara  empiris  sering  digunakan  untuk pengobatan (Tukiran dkk, 2014). Tanaman puding hitam ( Graptophyllum pictum L.
Griff)  memiliki  potensi  sebagai  bahan  obat  dari  alam  dengan  adanya  senyawa metabolit  sekunder  flavonoid  yang  terkandung  didalamnya  (Nurdiana  dkk,  2000).
Daun puding hitam ( Graptophyllum pictum L. Griff) telah diekstraksi dan diketahui berkhasiat sebagai analgetika dengan dosis 100 mg/kg BB dan dosis 200 mg/kg BB mencit (Soekarno, 2009).
Ekstrak  tanaman  daun  Puding  Hitam  ( Graptophyllum  pictum L.  Griff)  telah dikembangkan  menjadi  sedian  topikal  berupa  krim  yang  berkhasiat  sebagai analgetika  pada  mencit  dengan  konsentrari  15%  (Rikomah,  2017).  Potensi  sediaan farmasi  dari  daun  puding  hitam  dapat  dikembangkan  lagi  menjadi  beberapa  bentuk sedian topikal lainnya seperti sediaan salep. Salep memiliki banyak keuntungan yaitu dapat  memberikan  bioavaibilitas  lebih  besar,  dan  waktu  kontak  dengan  kulit  lebih lama  sehingga  jumlah  obat  yang  diabsorbsi  lebih  tinggi  dengan  efek  terapetik  yang lebih  maksimal.  Selain  itu  sediaan  ini  juga  mempunyai  sifat  yang  lebih  mudah tercuci dengan air (Anief, 2008).
Analgetika  adalah  suatu  perasaan  sensoris  dan  emosional  yang  tidak  nyaman,
yang dapat berhubungan dengan kerusakan pada jaringan yang sebenarnya. Keadaan psikis  sangat  mempengaruhi  nyeri,  misalnya  emosi  dapat  menimbulkan  sakit (kepala) atau memperhebatnya, tetapi dapat pula menghindarkan sensasi rangsangan nyeri.  Rasa  nyeri  dalam  kebanyakan  hal  merupakan  suatu  gejala,  yang  berfungsi melindungi  tubuh  (Price,  2006)  .  Nyeri  dapat  terjadi  apabila  ada  rangsangan  secara kimiawi, fisik, mekanik pada kulit, mukosa, dan akan terasa nyeri di daerah rangsang (Puspitasari dkk, 2003).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Tempat dan Waktu
Penelitian  akan  dilaksanakan  di  Laboratorium  Farmakologi  dan  Laboratorium
Fitokimia Akademi Farmasi  Al-Fatah  Bengkulu pada bulan Desembar 2017 sampai Mei 2018.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  spidol,  stopwatch,  spatel,  pinset,
cottonbud , hot plate dan alat pelindung diri (masker, handscoon ,).
Salep  ekstrak  daun  puding  hitam  ( Graptophyllum  pictum L.  Griff),  Etanol  70%,
Aquadest, salep Echtyol ® .

## Persiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  ialah  daun  Puding  hitam ( Graptophyllum pictum L.Griff ) yang diperoleh Jalan Bukit Barisan Rt 10 Karabelah
Kebun Tebeng Kota Bengkulu.
Verifikasi Tanaman Daun Puding Hitam ( Graptophyllum pictum L. Griff )
Verifikasi  taksonomi  tanaman  telah  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  MIPA
Universitas  Bengkulu  disesuaikan  dengan  Atlas  Tanaman  Obat  Indonesia.  Hasil verifikasi dari tanaman yang digunakan dalam penelitian yaitu tanaman puding hitam Keluarga Acanthaceae , Nama Ilmiah Graptophyllum pictum (L.) Griff , Nama Daerah
Puding hitam yang disahkan
dengan nomor surat 402/UN30.28.LAB.BIOLOGI/PM/2017.

## Pembuatan Ekstrak Daun Puding Hitam
Simplisia  ditimbang  sebanyak  3500  gram  kemudian  dikeringkan.  Ekstraksi  daun dilakukan maserasi selama 5 hari dengan re-maserasi sebanyak 3x.

## Evaluasi ekstrak daun puding hitam
Uji sifat fisik ekstrak meliputi :
a. Uji organoleptis
b. Kelarutan
c. Pemeriksaan pH
d. Rendemen
e. Susut pengeringan
f. Kadar abu

## Uji skrining fitokimia metabolit skunder flavonoid
Ambil  2  ml  larutan  ekstarak  ditambahkan  dengan  serbuk  Mg  dan  HCL  2N sebanyak 2 ml. Hasil positif mengandung flavonoid ditunjukan dengan warna jingga sampai merah   (Nirwana, 2015).

## Penyiapan Bahan Uji Analgetik
Bahan  uji  yang  digunakan  adalah  sediaan  salep  ekstrak  etanol  daun  puding hitam ( Graptophyllum pictum L.Griff ) dari empat formulasi yang terdiri dari Formula
1  (10%),  Formula  2  (15%),  Formula  3  (20%),  Formula  0  (basis  salep),  dan  control positif (salep Ichtyol ® ).
Tabel  1  Formulasi  Konsentrasi  Salep  ekstrak  daun  puding  hitam ( Graptophyllum pictum L. Griff) (Paju, 2013). Komposisi Konsentrasi (%) Ket F0 F1 F2 F3 1 2 Ekstrak daun puding hitam 0 10 15 20 Zat aktif 3 Adeps lanae 15 15 15 15 Basis salep 4 Nipagin 0,3 0,3 0,3 0,3 Pengawet 5 Nipasol 0,03 0.03 0,03 0,03 Pengawet 6 Vaselin alba ad 100 100 100 100 Basis salep

## Kelompok hewan uji
Untuk kelompok perlakuan hewan uji dikelompokan menjadi 5 kelompok yang terdiri  dari kelompok kontrol positif (Salep  Ichtyol ® ),  control negatif  (Basis Salep), formula 1 (salep ekstrak daun puding hitam dengan konsenterasi dosis 10%), formula 2 (salep ekstrak daun puding hitam dengan konsenterasi dosis 15%), formula 3 (salep ekstrak daun puding hitam diberikan konsenterasi dosis 20%).

## Metode Pengujian Analgetik
Metode  yang  dipakai  pada  penelitian  ini  adalah  metode hotplate pada  suhu 55 o C-56 o C lalu satu kaki mencit yang telah dibersihkan terlebih dahulu ditempelkan pada hotlate selama  lebih  kurang  5  detik.  Pengamatan  dilakukan  dalam  5  menit sekali selama 60 menit yaitu 5”, 10”, 15”, 20”, 25”, 30”, 35”, 40”, 45”, 50”, 55”, 60” setelah diberikan perlakuan obat (Afrianti dkk, 2014). Pengamatan dilakukan dengan berapa kali respon analgetik mencit menjilat kaki, melompat atau menjinjitkan kaki (Ponggele, 2013).
Perhitungan  AUC  menggunakan  software  Microsoft  Excel  PK1  dan  PK2,
persentase daya dihitung dengan rumus :

## Perhitungan efektivitas analgetika

## Analisis Data
Pada  penelitian  ini  hasil  penelitian  dianalisa  dengan  menggunakan    AUC  hasil
Pengamatan  dikumpulkan  dan  disajikan  dalam  bentuk  tabel,  grafik,  dan menggunakan  ANOVA  Satu  Arah  dengan  media  analisa  Spss  24  dengan  taraf kepercayaan 95% (α-0,005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  organoleptis  yang  didapatkan  dari  ekstrak  berwarna  hijau  kehitaman,  berbau khas,  rasa  pahit  dan  konsestensinya  kental.  Kelarutan  ekstrak  daun  puding  hitam yang diuji dengan cara titrasi menggunakan buret dengan penetrasi aquadest, etanol 70  %  dan  etanol  96  %.    Dari  hasil  titrasi  ekstrak  daun  puding  hitam  berdasarkan
Farmakope Indonesia masuk kedalam bagian 10-30 yaitu menunjukan bahwa ekstrak daun puding hitam larut  dalam aquadest, etanol 70 % dan etanol 96 %  (Depkes RI, 1979). Hasil yang didapat menggunakan aquadest sebanyak 17,60 ml, menggunakan etanol 70 % sebanyak 14,00 ml, dan menggunakan etanol 96 % 13,60 ml.
Rendemen  merupakan  persentase  sampel  sebelum  dan  setelah  perlakuan.
Rendemen ekstrak daun puding hitam sebesar 22,82 %, berdasarkan literature belum memenuhi  syarat  rendemen  yang  baik  berkisar  9,9%-11,9%  (Johari,  2005).  Hal  ini bisa  dikarenakan  pada  saat  pemekatan  hasil  ekstrak  kurang  pekat  dan  ekstrak disimpan ke dalam kulkas terlalu lama.
Penetapan susut pengeringan dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui besarnya kadar air yang hilang pada saat proses pengeringan, dari hasil pengujian ekstrak daun puding  hitam  diperoleh  bahwa  susut  pengeringan  sebesar  8  %.  Pada  persyaratan susut pengeringan tidak boleh melebihi dari 12 % (Depkes RI, 2008). Sampel ekstrak daun puding hitam yang didapat pada saat susut pengeringan memenuhi persyaratan.
Uji  kadar  abu  tujuannya  untuk  mengetahui  jumlah  senyawa  anorganik  (kotoran, tanah,  tanah  liat  dan  lain-lain  yang  terdapat  dalam  sampel  yang  terbentuk  dalam sampel  atau  melekat  pada  sampel  selama  proses  pembuatan  ekstrak)  dari  sisah pemijaran.  Hasil  uji  kadar  abu  ekstrak  daun  puding  hitam  mendapatkan  41,17  %.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kadar  abu  ekstrak  daun  puding  hitam  tidak  memenuhi syarat  untuk  kadar  abu  total  ekstrak  daun  puding  hitam  tidak  lebih  dari  0,4  % (Anonim,  2010).  Sedangkan  pada  penelitian  lain  uji  kadar  abu  daun  puding  hitam didapatkan  hasil  24,77  %,  perbedaan  hasil  dikarenakan  pada  waktu  pemijaran  suhu yang  digunakan  tidak  selalu  stabil,  bisa  saja  terlalu  panas  atau  sebaliknya  jadi mempengaruhi hasil  (Anggraini, 2011 dalam Elmitra & Rikomah 2018).
Tabel 2 Hasil Jumlah Rata-rata Respon Analgetik pada Mencit (Per Menit)
No Kelompok Perlakuan Rata-rata Respon Analgetik Mencit pada Menit Ke 5” 10” 15” 20 25” 30” 35” 40” 45” 50” 55” 60” 1 Kontrol Negatif 54,2± 11,5 49± 8,7 41,4± 11,3 40,8± 12,4 39± 11,8 40,2± 11,1 39± 11,6 40,2± 15,2 36,8± 13,1 36,4± 12,9 35,2± 11,5 29,4± 11,1 2 Kontrol Positif 47,6± 11,4 40± 11,5 35,6± 10,8 29,8± 9,7 24,6± 10,9 23± 9,7 15,8± 3,4 13± 4,0 9,4± 2,3 6,2± 3,4 5± 2,4 1,6± 1,5 3 F1 64,2± 7,0 57± 9,2 51,6± 9,0 48,4± 6,5 43,6± 6,8 37,8± 11,4 33,4± 9,4 32,6± 5,1 26,2± 6,2 19,2± 9,8 14± 10,5 8,6± 5,5 4 F2 47± 7,9 41,6± 9,5 42,2± 11,1 31,8± 8,3 29,4± 7,7 23,6± 8,9 20,6± 9,1 15,8± 5,7 12,8± 4,0 8,2± 2,4 4,4± 1,9 1,4± 1,1 5 F3 52,4± 11,9 47± 15,7 49,8± 12,9 40,4± 11,5 37,6± 12,2 31,4± 8,4 28,8± 7,4 20,4± 7,2 12,6± 6,1 9,6± 3,9 6,8± 5,2 2± 2,3
Perhitungan AUC menggunakan software Microsoft Excel PK1 dan PK2,
Gambar 1 Grafik Rata-rata Jumlah Respon Analgetik Mencit
Pada  penelitian  ini  formula  ekstrak  etanol  daun  puding  hitam  yang  diduga memberikan  efek  analgetik  terbaik  yaitu  formula  2  (15%)  dengan  menunjukan penurunan jumlah rata-rata respon analgetik pada menit ke 5 sebesar 47 kali sampai menit ke 60 sebesar 1,4 kali. Kemudian diikuti formula 3 (15%) ekstrak etanol daun puding  hitam  menunjukan  penurunan  jumlah  rata-rata  respon  analgetik  pada  menit ke 5 sebesar 52,3 kali sampai menit ke 60 sebesar 2 kali. Sedangkan, pada formula 1 salep ekstrak etanol daun puding hitam  (10%) menunjukan penurunan  jumlah rata- rata respon analgetik pada menit ke 5 sebesar 64,2 kali sampai menit ke 60 sebesar 8,6 kali.
0 10 20 30 40 50 60 70 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 waktu (menit) J um la h Reso n Ana lg et ik

## Gambar 2 Rata-rata Persentase Daya Analgetik
Hasil persentase daya analgetik formula 2 memberikan efek yang baik sebesar 36,822  %.  Kemudian  di  ikuti  hasil  persentase  daya  analgetik  formula  3    sebesar
25,836 % dan hasil persentase daya analgetik formula 1 sebesar 4,712 %.

## Gambar 3.Rata-rata Persentase Efektifitas Daya Analgetik
Hasil  persentase  efektifitas  analgetik  formula  2  memberikan  efek  yang  baik yaitu  sebesar  77,969  %.  Kemudian  di  ikuti  hasil  persentase  efektifitas  analgetik
0 20 40 60 80 100 120 kontrol positif F1 F2 F3 F0 P er sent a se E fek tif it a s Ana lg et ik Kelompok Perlakuan 0 10 20 30 40 50 kontrol positif F1 F2 F3 F0 P er sent a se Da y a Ana lg et ik Kelompok Perlakuan
formula  3  sebesar  54,707  %  dan  hasil  persentase  efektifitas  analgetik  formula  3 sebesar 9,977 %.
Dari  hasil  penurunan  jumlah  rata-rata  respon  analgetik,  hasil  persentase  daya analgetik  dan  hasil  persentase  efektifitas  analgetik  bahwa  formula  2  (15%) memberikan  efek  yang  baik.  Pada  penelitian  ini  sebanding  dengan  penelian  yang sudah  pernah  dilakukan  bahwa  formula  krim  ekstrak  daun  puding  hitam  yang berkhasiat  sebagai  analgetik  terbaik  yaitu  formula  2  dengan  konsentrasi  15%
(Rikomah E.S., 2017).
Formula  3  menimbulkan  efek  analgetik  menurun.  Hal  ini  sebanding  dengan penelitian  lain  menyatakan  bahwa  dosis  ke  3  (12,6g/kgBB)  menimbulkan  efek analgetik  yang menurun  dibandingkan dengan dosis 2 (6,3g/kgBB)  (Pandey, 2013).
Hal  ini  dikarenakan  bahwa  ekstrak  tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  bahan  obat jika  memiliki  konsentrasi  terlalu  tinggi  dapat  bersifat  toksik  dan  tidak  memberikan efek terapi yang optimal (Mukherjee, 2015).
Formula  1  sedikit  lebih  lambat  menunjukan  efek  analgetik.  Hal  ini  sebanding dengan  penelitian  lain  yang  sudah  pernah  dilakukan  bahwa  formula  salep  ekstrak etanol kulit buah jengkol formula 1 (5%) memberikan efek penyembuhan luka diabet yang  sedikit  dibandingkan  dengan  formula  2  (10%)  dan  formula  3  (15%).  Hal  ini dikarenakan  bahwa  ekstrak  tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  bahan  obat  jika memiliki  konsentrasi  terlalu  rendah  hanya  mengandung  senyawa  bioaktif  dalam jumlah yang sedikit, sehingga fungsi biologisnya menjadi tidak optimal (Mukherjee, 2015).
Senyawa  metabolit  sekunder  dalam  formula  salep  ekstrak  etanol  daun  puding hitam  memiliki  khasiat  sebagai  analgetik  yaitu  flavonoid  dan  alkaloid  dengan mekanisme  kerja  menghambat  enzim  siklooksigenase  sehingga  pembentukan
prostaglandin terhambat dengan demikian akan mengurangi rasa nyeri  (Mohan dkk,
2012).  Pada  metabolit  sekunder  flavonoid  yang  berperan  dalam  menekan  produksi dari  prostaglandin,  dengan  cara  menghambat  enzim  siklooksigenase-2  (COX-2) (Brunetton  dalam  Purnama,  2007).  Alkaloid  sebagai  analgetik  dengan  mekanisme kerja  menghambat  dehidrogenase  jalur  prostaglandin  yang  akan  menghambat pengaktifan  prostaglandin  (Robinson,  1995).  Dari  penelitian  ekstrak  etanol  pelepah daun pisang uli bahwa senyawa yang memiliki efek sebagai analgetik yaitu saponin (Rikomah  E.S.,  2016).  Hal  ini  dikarnakan  adanya  penghambatan  enzim siklooksigenase  sehingga  sentesis  prostaglandin  terhambat  serta  gejala  nyeri  dari mencit  makin  berkurang  disebabkan  kadar  obat  dalam  darah  mencit  pada  waktu tersebut makin tinggi sehingga efek penghambatan terbentuknya perstaglandin makin tinggi (Muharam H., 2015).
Analisa  data  dilakukan  dengan  menggunakan  anova  satu  arah,  dengan  vareabel denpenden  berupa  nilai  yang  dapat  dipengaruhi  oleh  data  dan  vareabel indenpendennya berupa kelompok perlakuan (kontrol positif, kontrol negatif, F1, F2,
F3). Hasil uji normalitas adalah 0,637 ˃ 0,05 begitu juga dengan hasil homogenitas adalah  0,792  >  0,05,  data  tersebut  terdistribusi  normal  dan  homogen.  Anova  satu arah  menghasilkan  nilai  signifikasinya  0,003  ˂  0,05  yang  berarti  data  setiap perlakuan  tersebut  memiliki  perbedaan  atau  pengaruh  yang  bermakna/signifikan pada  setiap  kelompok  perlakuan.  Dapat  dilanjutkan  dengan  uji  lanjutan  LSD  dan
Duncan,  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan  antara  setiap  dua  kelompok perlakuan.  Sedangkan  uji  duncan  dilakukan  untuk  melihat  manakah  dari  kelima kelompok  perlakuan  tersebut  yang  paling  efektif  atau  hampir  sama  dengan  kontrol positif  dalam  khasiat  ekstrak  daun  puding  hitam  sebagai  analgetik.  Hasil  uji  LSD
tersebut  didapat  nilai  signifikansi  setiap  dua  kelompok  perlakuan  ˂  0,05  yang menandakan bahwa setiap kelompok perlakuan berbeda signifikan.

## Tabel 3 Hasil Analisa Data Anova Satu Arah
kelompok perlakuan
N Subset for alpha = 0.05 1 2 3 Duncan a kontrol positif 5 1134,60 F2 5 1272,80 F3 5 1557,60 F1 5 2000,60  2000,60 kontrol negatif 5 2209,00 Sig. ,159 ,121 ,456
Hasil  dari  uji  Duncan  didapatkan  kelompok  perlakuan  formula  2  salep  ekstrak etanol  daun  puding  hitam  dengan  konsentrasi  15  %  menempati  posisi  pertama sebesar  1272,80  hampir  menyarupai  kontrol  positif  sebesar  1134,60  sebagai  obat analgetik yang paling efektif.

## Kesimpulan
Salep  ekstrak  etanol  daun  puding  hitam  ( Graptophylum  pictum  L.  Griff ) memberikan efek analgetik pada mencit jantan putih, dengan dosis yang paling baik yaitu formula 2 dengan konsentrasi dosis 15 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Afrianti,  R.  Yenti,  R.  &  Meustik,  D.,  2014, Uji  Aktifitas  Analgetik  Ekstrak  Etanol Daun  Pepaya  (Carica  papaya  L.)  Pada  Mencit  Putih  Jantan  Yang  Di  Induksi Asam Asetat 1%. Jurnal Sains Farmasi & Klinis, ISSN:2407-7062. Anggraini dan Silvia. 2011, Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Puding Hitam (Graftophyllum pictum Griff) Terhadap Mencit Putih Betina . Padang, Sekolah Tinggi Farmasi Perintis
Anief,  M.,  2008, Ilmu  Meracik  Obat  Teori  dan  Praktik ,  Gadjah  Mada  University Press, Yogyakarta.
Anonim,  2010, Suplemen  Farmakope  Herbal  Indonesia .  Jakarta,  Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.
Depkes  RI,  1979, Farmakope  Indonesia  Edisi  Ketiga .  Defartemen  Kesehatan Republik Indonesia.
Depkes  RI,  2008, Farmakope  Herbal  Indonesia (Edisi  1),  Jakarta  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Elmitra  &  Rikomah  E.S.,  2018,  Formulasi  Sediaan  Krim  Ekstrak  Etanol  Daun Puding Hitam (Graptophyllum Pictum  (L.) Griff). Akademi Farmasi  Al-Fatah Bengkulu.
Muharam H., 2015, Uji Aktivitas Analgetik Daun Murbei (Morus alba L) Pada Mencit Jantan Galur Webster. Jurnal Kesehatan Tunas Husada Mukherjee  PK.,  2015, Evidence-Based  Validation  of  Herbal  Medicine .  Elsevier, Amsterdam
Nirwana  P.A.,  Astirin  P.  O.,  Widiyani  T.  2015, Skrining  Fitokimia  Ekstrak    Etanol Daun Benalu  Kersen (Dendrophtoe pentandra L. Miq.) , ISSN: 2339-1901. Nurdiana; Kirana, C; Arifatin, R dan Mulyohadi. 2000, Uji Efek Analgesik Ekstrak Kasar  dan  Ekstrak  Flavonoid  Daun  Wungu  (Graftophyllum  pictum  L.  Grift) pada tikus (Rattus rattus Wister). Jurnal Kedokteran Yarsi 8 (2): 56-57. Nursiyah,  2013, Studi  Deskriptif  Tanaman  Obat  Tradisional  Yang  Di  Gunakan Orang  Tua  Untuk  Kesehatan  Anak  Usia  Dini  Di  Gugus  Melati  Kecamatan Kalikajar  Kabupaten  Wonosobo,  Skripsi ,  Fakultas  Ilmu  Pendidikan, Universitas Negeri Semarang
Pandey,  V.  P.,  Bodhi,  W.,  Yudistira,  A.,  2013, Uji  Efek  Analgetik  Ekstrak  Rumput Teki  (Cyperus  rotundus  L.).  Pada  Tikus  Putih  Jantan  (Rattus  novergicus) . Jurnal Ilmiah Farmasi-UNSRAT. ISSN : 2302-2493.
Ponggele,  R.  M.,  Najoan  J.,  Wuisan  J.,    2013 ,  Uji  Efek  Analgetik  Ekstrak  Kulit Manggis  (Garcinia  Mangostana  L.)  Pada  Mencit  Swiss  (Muss  muculus). Jurnal e-Biomedik (eBM) 1 (2) : 796-801. Price,  S.A.,  Wilson  I.M.  2006 ,  Patofisiologi  Konsep  Klinis  Prosesproses  Penyakit Edisi  6 .    EGC.Jakarta  Puspitasari,  H.,  Listyawati,  S.,  Widiyani,  T.,  2003, Aktivitas  Analgesik  Ekstrak  Umbi  Teki  (Cyperus  rotundus L .)  pada  Mencit Putih (Mus musculus L .) Jantan . Biofarmasi 1 (2): %0-57.ISSN: 1693-2242 Puspitasari, H., Listyawati, S., Widiyani, T., 2003, Aktivitas Analgesik Ekstrak Umbi Teki  (Cyperus  rotundus L .)  pada  Mencit  Putih  (Mus  musculus L .)  Jantan . Biofarmasi 1 (2): %0-57.ISSN: 1693-2242.
Rikomah, S.E. 2016, Uji Efektivitas Analgetika Ekstrak Etanol 95% Pelepah Pisang Uli  (Musa  X  Paradisiaca  L)  Pada  Mencit  Jantan  (Mus  Musculus). Akademi Farmasi Al-Fatah. Bengulu.
Rikomah,  S.E.  2017, Efektifitas  Analgetik  Krim  Ekstrak  Daun  Puding  Hitam (Graptophyllum pictum) Pada Mencit Putih Jantan (Mus muscullus). Akademi Farmasi Al-Fatah. Bengulu
Soekarno,  M.,  2009, Efek  Analgesik  Ekstrak  Etanol  Daun  Ungu  (Graptophyllum pictum L. Griif ). Karya Tulis Ilmiah, Uversitas Kristen Maranatha Bandung Tukiran,  Suyatno,    dan  Hidayati,  N.,  2014, Skrining  Fitokimia  Pada  Beberapa Ekstrak  Dari  Tumbuhan  Bugenvil  (Bougainvillea  Glabra),  Bunga  Sepatu (Hibiscus  Rosa-Sinensis L .)  dan  Daun  Ungu  (Graptphylum  Pictum L. Griff ). ISBN : 976-602-0951-00-3 .