## ALCHEMY , Vol. 4 No. 1 Maret 2015, hal 6-16
Anticancer Activity against Breast Cancer Cells T47D and Identification of Its Compound from Extracts and Fractions of Leaves Bamboo Grass ( Lophaterum gracile B. )
Alfi Istiqomah 1 , Roihatul Muti’ah 2 , Elok Kamilah Hayati 1
1 Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
2 Jurusan Farmasi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
Email: eloksunardji@gmail.com

## Abstract
Bamboo  grass  ( Lophatherum  gracile  B. )  is  one  of  weed  plants  which  frequently  used  as  a  medicine because  it  provides  active  compounds,  for  instance  steroids  and  tannins.  This  research  was  conducted  to determine  the  anticancer  activity  of  extracts  and  fractions  of  leaves  bamboo  grass  in  inhibiting  the  growth  of breast cancer cells T47D, and to determine the class of the active compounds contained in extracts and fractions which have the lowest IC 50 value from phytochemical test and identification with UV-Vis instruments and FTIR. The extraction of active compound leaves of bamboo grass is done  by maceration method using ethanol 80%, hydrolysis  and  partition  with  n-hexane  and  chloroform.  Four  of  the  extracts  is  phytochemical  tested  and anticancer  activity  tested  towards  breast  cancer  cells  T47D  with  MTT  method.  The  best  results  of  the  test activities are performed by the separation of classes of active compounds KLTP and are identified using UV-Vis spectrophotometer  and  FTIR.  The  value  of  IC 50 from  80%  ethanol  extraction  is  321,389,  from  hydrolysis extraction  is  481.984,  from the  fraction  of  chloroform  is 177.852, and  from n-hexane  fraction is  300.681  µg  / mL. The lowest IC50 which have the best cytotoxic is the fraction of chloroform and n-hexane. The results of phytochemical  test  fractions  of  chloroform  and  n-hexane  fraction  indicates  the  tannin  and  steroids.  The identification result by using UV-Vis and FTIR shows that the fraction of chloroform and n-hexane fraction is containing tannin, which isproven by maximum wavelength at 331.6 nm and 331.6 nm allegations of -OH, CH, C=C.  Moreover,  the  existence  of  steroid  compounds  in  fraction  chloroform  and  n-hexane  is  shown  by  the absorption at 279.1 nm and 278.0 nm of wavelength with allegations of -OH, CH, C=C, C-O.
Keywords : bamboo grass leaves ( Lophaterum gracile B. ), breast cancer cells T47D, in vitro, MTT method.

## Abstrak
Rumput  bambu  termasuk  gulma  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  obat,  karena  adanya  kandungan senyawa aktif  yang berperan di dalamnya, diantaranya adalah steroid dan tanin. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antikanker dari ekstrak dan fraksi daun rumput bambu dalam menghambat pertumbuhan sel kanker payudara T47D dan untuk mengetahui golongan senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak dan fraksi yang memiliki nilai IC50 terendah dari hasil uji fitokimia serta identifikasi dengan instrumen UV-Vis dan FTIR. Ekstraksi senyawa aktif daun rumput bambu dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 80 %, hidrolisis dan ekstraksi cair-cair dengan n-heksana dan kloroform. Keempat ekstrak diuji fitokimia dan diuji aktivitas  antikanker  terhadap  sel  kanker  payudara  T47D  dengan  metode  MTT.  Hasil  terbaik  dari  uji  aktivitas dilakukan  pemisahan  golongan  senyawa  aktif  dengan  KLTP  dan  diidentifikasi menggunakan  spektrofotometer UV-Vis dan FTIR. Nilai IC50 ekstrak dan fraksi daun rumput bambu yaitu ekstrak etanol 80 %, hasil hidrolisis, fraksi kloroform dan fraksi n-heksana berturut-turut 321,4; 482,0; 177,8 dan 300,7 μg/mL. Aktivitas terbaik atau nilai IC50 terendah adalah adalah fraksi kloroform dan fraksi n-heksana. Hasil uji fitokimia dari fraksi kloroform dan  fraksi  n-heksana  menunujukkan  adanya  senyawa  tanin  dan  steroid.  Hasil  identifikasi  dengan spektrofotometer  UV-Vis  dan  FTIR  menunjukkan  bahwa  fraksi  kloroform  dan  fraksi  n-Heksana  mengandung tanin ditunjukkan dengan panjang gelombang maksimum pada 331,6 nm dan 331,6 nm dengan dugaan adanya gugus  –OH,  C-H,  C=C,  selain  itu  adanya  senyawa  steroid  pada  fraksi  kloroform  dan  n-Heksana  ditunjukkan dengan serapan pada panjang gelombang 279,1 nm dan 278,0 nm dengan dugaan adanya gugus –OH, C-H, C=C, C-O.
Kata kunci :  Daun rumput bambu ( Lophaterum gracile B. ), sel kanker payudara T47D, in vitro, metode MTT.

## I. PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  pertumbuhan  sel secara  tidak  normal  yang  tumbuh  secara cepat  dan  tidak  terkontrol  yang  menyusup ke jaringan tubuh normal sehingga mempengaruhi  fungsi  tubuh.  Berdasarkan data IARC (2010) kanker payudara merupakan  penyebab  kematian  kanker utama  kedua  pada  perempuan,  selama  5 tahun terakhir, sejak tahun 2008 ada sekitar 1,38  juta  kasus  kanker  payudara  dimana sekitar  458  ribu  mengalami  kematian, sedangkan  di  Indonesia  ada  sekitar  40  ribu kasus  dan  20  ribu  diantaranya  mengalami kematian.
Indonesia  merupakan  negara  yang kaya  sumber  daya  alam.  Banyak  tumbuh- tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai obat, karena adanya kandungan bahan aktif, namun  penggunaan  tanaman  sebagai  salah satu alternatif pencegahan dan penyembuhan  kanker  masih  membutuhkan penelitian  lebih  lanjut.  Keanekaragaman hayati  yang  dimiliki  Indonesia  merupakan salah satu nikmat yang diberikan oleh Allah SWT,  dimana  setiap  segala  sesuatu  yang diciptakan  akan  memberikan  manfaat  bagi makhlukNya,  sehingga manusia  patut bersyukur  dan  memanfaatkannya  dengan sebaik-baiknya.  Sebagaimana  firman  Allah SWT dalam al Quran surat Taha ayat 53.
Allah menumbuhkan berbagai macam tanaman yang salah satunya dapat dimanfaatkan  sebagai  obat,  obat  tersebut tidak  akan  diketahui  manusia  jika  tidak benar-benar  memikirkannya.  Hal  inilah yang  menuntun  manusia  untuk  terus mencari  dan  menemukan  obat  dari  suatu penyakit.  Salah  satu  usahanya    adalah dengan eksplorasi senyawa aktif dari bahan alaam.
Rumput  bambu  ( Lophaterum  gracile B . ) merupakan salah satu tanaman liar yang dapat  dijadikan  sebagai  alternatif  bahan pengobatan  dan  pencegahan  antikanker. Daun    merupakan    bagian    yang    mudah didapatkan,  tidak  memerlukan  banyak tanaman,  dan  pertumbuhannya  yang  lebih
terhindar  dari  ancaman  virus  maupun penyakit. Kusumawati, dkk., (2003) menyatakan terdapat flavonoid pada bagian daun  sedangkan  pada  bagian  akar  terdapat steroid  dan  triterpenoid.  Identifikasi  yang dilakukan  Jing,  dkk.,  (2009) terhadap  daun rumput bambu menunjukkan adanya senyawa flavonoid dan triterpenoid. Ekstrak etanol dari daun rumput bambu menunjukkan adanya triterpenoid, tanin dan alkaloid (Sari, 2014).
Penelitian  Sari  (2014)  tentang  uji sitotoksik  daun  rumput  bambu  dengan variasi  pelarut  melalui  metode  BSLT didapatkan  nilai  LC 50 dari  uji  BSLT  pada ekstrak  etanol  adalah  25,2189  ppm, sehingga  ekstrak  tersebut  mempunyai  sifat toksik,  didukung  dengan  Mc.  Laughin (1991)  juga  menjelaskan  bahwa  apabila suatu  ekstrak  memiliki  nilai  LC 50 <30  ppm maka  ekstrak  tersebut  berpotensi  sebagai antikanker  (sitotoksik).  Restasari,  dkk., (2009)  menunjukkan  bahwa    ekstrak kloroform daun ketapang yang mengandung    alkaloid,  triterpenoid    dan steroid    berpotensi    sebagai  antikanker dengan  harga  LC 50 sebesar 3,22 ppm. Pembuktikan efek sitotoksik terhadap sel  kanker  dilakukan  dengan  metode  MTT untuk  mengetahui  aktifitas  biologi  secara langsung dari senyawa kompleks, selain itu metode  MTT  relatif  lebih  murah,  mudah dilakukan,  hanya  membutuhkan  peralatan sederhana  dan  interpretasi  hasilnya  relatif mudah  dan  akurat  (Kusumaningtyas,  dkk., 2008). Sel kanker payudara T47D memiliki kemampuan  replikasi  yang  tidak  terbatas, homogenitas  yang  tinggi  serta  mudah diganti  dengan frozen  stock jika  terjadi kontaminasi (Burdall, dkk., 2003).
Identifikasi  senyawa  aktif  dilakukan dengan UV-VIS dan FTIR untuk memperoleh
panjang gelombang
maksimum  dari  senyawa  sehingga  dapat diketahui  transisi  elektron  yang  dilihat  dari jenis  ikatan  pada  gugus  fungsinyaserta untuk  mengetahui  gugus-gugus  fungsi  dari suatu senyawa.
Berdasarkan  kajian  di  atas,  maka dalam  penelitian  ini  akan  dilakukan pengujian aktivitas
antikanker menggunakan  metode  MTT  ekstrak  dan fraksi  daun  rumput  bambu  secara in  vitro terhadap    sel    kanker    payudara    T47D. Penelitian  ini  menggunakan  sampel  kering daun  rumput  bambu.  Pemisahan  senyawa aktif daun rumput bambu dilakukan dengan metode  ekstraksi  maserasi  menggunakan pelarut etanol 80 %. Ekstrak pekat etanol 80 %  yang  diperoleh  selanjutnya  dihidrolisis, ekstrak  hasil  hidrolisis  dipartisi  dengan pelarut  kloroform  dan  dipartisi  dengan pelarut  n-heksana.  Keempat  ekstrak  yang diperoleh  dipekatkan  lalu  dilakukan  uji aktivitas  terhadap  sel  kanker  payudara T47D.  Sampel  yang  memiliki  bioaktifitas paling  optimal  dipisahkan  menggunakan KLTP  dilanjutkan  dengan  identifikasi golongan  senyawa  aktif  dengan  UV-Vis dan FTIR.

## II. METODE PENELITIAN Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan
diantaranya  ayakan  100  mesh,  oven, loyang,  cawan  penguap,  desikator, neraca analitik,  penjepit  kayu, aluminium  foil , shaker  incubator ,  kertas  saring,  klem  dan statif,  penyaring buchner, corong  pisah, rotary  evaporator , vortex ,  seperangkat  alat gelas  laboratorium,  96- well  plate,  Conical Tube,  Yellow  tip,  Blue  tip , Culture  Dish, Hemocytometer ,  ELISA reader ,  plat  silika gel  F 254 ,  bejana  pengembang,  lampu  UV. Instrument  UV-Vis  Shimadzu  160-A  dan FTIR  Shimadzu.  Sampel  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  daun  rumput bambu
Bahan n-heksana,  etanol  80%,  kloroform, aquades,  larutan  HCl  2  %,  larutan  metanol 50  %,  logam  Mg,  larutan  FeCl 3 ,  reagen Dragendrofff,  reagen  Meyer,  pereaksi Lieberman  Burchard,  latutan H 2 SO 4 pekat,
larutan  formaldehid  3%,  Na-asetat,  PBS, tripsin-EDTA  1x  (tripsin  0,25  %),  media kultur  RPMI,  DMSO,  MTT  5  mg/mL  (50 mg  MTT  dan  10  mL  PBS),  SDS  10  % dalam 0,1 N HCl, NaHCO 3 .

## Preparasi Sampel
Dicuci  sampel  daun  rumput  bambu hingga  bersih  lalu  dikeringanginkan  dan dipotong  kecil-kecil.  Sampel  yang  sudah kering  dihaluskan  dengan  blender  hingga halus  (serbuk)  dan  diayak  dengan  ayakan 60 mesh. Serbuk yang diperoleh merupakan sampel penelitian yang kemudian ditentukan kadar airnya
Analisis Kadar Air Dipanaskan  cawan  pada  suhu  105 o C selama ±15 menit lalu didinginkan di dalam desikator selama 10 menit. Cawan ditimbang  dan  diulangi  perlakuan  sampai diperoleh  berat  konstan.  Sampel  ditimbang sebanyak  5  g  dan  dipanaskan  dalam  oven pada  suhu  105 o C  selama  1  jam.  Sampel kering kemudian didinginkan dalam desikator  selama  ±15  menit  dan  ditimbang kembali.  Perlakuan  ini  diulangi  sampai tercapai  berat  konstan.  Kadar  air  dihitung menggunakan rumus:
(1)
Keterangan: a = berat konstan cawan kosong. b  = berat cawan + sampel sebelum dikeringkan. c  =  berat  konstan  cawan  +  sampel  setelah dikeringkan

## Ekstraksi senyawa Aktif
Ditimbang serbuk daun rumput bambu  200  g,  dimasukkan  dalam  4 erlenmayer 500 mL berbeda masing-masing 50  g.  Hasil  penimbangan  diekstraksi dengan  perendaman  menggunakan  250  mL pelarut etanol 80 % pada setiap erlenmeyer selama 24 jam, lalu diaduk dengan bantuan shaker berkecepatan 120 rpm selama 2 jam. Kemudian disaring dengan corong Buchner
dan  ampas  yang  diperoleh  dimaserasi kembali  dengan  pelarut  yang  sama  sampai filtrat  berwarna  bening.  Filtrat  yang diperoleh  digabung  dan  dipekatkan  dengan rotary evaporator vaccum hingga diperoleh ekstrak pekat etanol.
Ekstrak pekat  etanol  dibagi  menjadi 2 bagian yaitu: Bagian pertama, sebanyak 1 g  ekstrak  kasar  etanol  yang  diperoleh  dari pemekatan.  Bagian  kedua,  ekstrak  pekat etanol  dihidrolisis    dengan  ditambahkan HCl 2 N (1:2) kemudian diaduk menggunakan magnetic  stirrer  hot  plate selama  2  jam  pada  suhu  ruang.  Ekstrak hasil hidrolisis yang diperoleh ditambahkan  dengan  natrium  bikarbonat sampai  diperoleh  pH  netral  yang  ditandai dengan  tidak  terbentuknya  gelembung udara.
Ekstrak  etanol  hasil  hidrolisis  dibagi menjadi  3  bagian  yaitu:  Bagian  pertama, ditimbang dan disimpan untuk uji  lanjutan. Bagian kedua, ekstrak etanol hasil hidrolisis diekstraksi  cair-cair  dengan  kloroform, fraksi kloroform yang diperoleh dikumpulkan  menjadi  satu  dan  dipekatkan dengan rotary  evaporator  vaccum .  Bagian ketiga,  ekstrak  etanol  hasil  hidrolisis diekstraksi  cair-cair  dengan  pelarut  n- heksana,  fraksi  n-heksana  yang  diperoleh dikumpulkan    menjadi    satu    dan dipekatkan dengan rotary evaporator vaccum .

## Uji Fitokimia dengan Uji Reagen
Metode  uji  fitokimia  dilakukan untuk  mengetahui  kandungan  metabolit sekunder  didalam  daun  rumput  bambu  dari masing-masing  ekstrak  dan  fraksi.  Ekstrak dan  fraksi  daun  rumput  bambu  dilarutkan dengan  sedikit  masing-masing  pelarutnya dan  dibuat    konsentrasi  sebesar  10.000 ppm,  kemudian  dilakukan  uji  alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin,  triterpenoid  dan steroid.
Uji  aktivitas  Antikanker  dengan  Metode MTT
Uji aktivitas dilakukan dengan beberapa  tahapan  yaitu:  penyiapan  sel, perhitungan  sel,  peletakan  sel  pada  plate, pembuatan    dan    pemberian    larutan sampel, pemberian larutan MTT, pembacaan  absorbansi  dengan  ELISA reader,    analisis    probit    hasil    dengan SPSS.

## Pemisahan Senyawa Aktif dengan KLTP
Pemisahan  senyawa  aktif  dengan KLTP  dilakukan  pada  ekstrak yang memiliki  hasil  terbaik  dari  uji  aktivitas antikanker  (nilai  IC 50 paling  kecil)  dan golongan  senyawanya  positif  pada  uji reagen.  Pemisahan  dengan  KLT  preparatif ini  digunakan  plat  silica  gel  GF 254 dengan ukuran  10  x  20  cm.  Ekstrak  pekat ditotolkan  sepanjang  plat  pada  jarak  1  cm dari  garis  tepi  bawah  dan  1  cm  dari  garis tepi  atas.  Selanjutnya  dielusi  dengan menggunakan  eluen  n-heksana:  etil  asetat (6:4) untuk tanin, dan eluen n-heksana:  etil asetat  (7:3)  untuk  steroid.  Noda-noda  pada permukaan plat diperiksa dibawah sinar UV pada  panjang  gelombang  254  nm  dan  366 nm,

## Identifikasi Golongan Senyawa Aktif
Identifikasi  dengan  UV-Vis  dilakukan terhadap  isolat    yang  diperoleh  dari  KLTP dan  diduga  senyawa  tanin  dan  steroid. Isolat dilarutkan dengan etanol, dimasukkan ke  dalam  kuvet  dan  diindentifikasi  pada panjang gelombang 200  –  800  nm. Spektra dan  hasil absorbansi  yang diperoleh dicatat dan dianalisis, sedangkan identifikasi dengan  FTIR  dilakukan  terhadap  isolat yang  telah  diuapkan    dari    pelarutnya. Isolat  ditambahkan  pada  pellet  KBr, didiamkan, lalu dibuat spektrum FTIR pada rentang  bilangan  gelombang  4000  cm -1 – 400 cm -1 .

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Preparasi  sampel  merupakan  suatu tahapan  dalam  analisis  bahan  alam  yang terdiri  dari  proses  pencucian,  pengeringan dan penyerbukan sampel. Pencucian bertujuan  untuk  menghilangkan  kotoran yang  berupa  tanah  yang  menempel  pada daun rumput bambu.
Pengeringan dilakukan untuk mengurangi kandungan air dalam  daun  rumput  bambu,  meminimalkan kerusakan akibat degradasi oleh mikroorganisme/tumbuhnya
jamur.
Pengeringan dilakukan dengan cara diangin-anginkan  yang  tidak  akan  cepat menguap.
Sampel  yang  telah  kering  dihaluskan untuk memperkecil ukuran sampel. Semakin  kecil bentuk  sampel maka semakin  besar  luas  permukaannya  maka terjadinya  kontak  dengan  pelarut  dalam proses  ekstraksi  akan  semakin  besar, sehingga  proses  ekstraksi  akan  semakin cepat.  Dlanjutkan  dengan  pengayakan menggunakan  ayakan  60  mesh  untuk menseragamkan ukuran serbuk

## Analisis Kadar Air
Pengukuran  kadar  air  dalam  suatu sampel  sangat  diperlukan  sebagai  tahap awal  dalam  melakukan  sebuah  penelitian bahan  alam,  jika  kadar  air  terlalu  tinggi maka  jamur  akan  mudah  mengkontaminasi sampel  dan  menghalangi  masuknya  pelarut kedalam sampel sebab apabila pelarut yang digunakan  tidak  dapat  bercampur  dengan air  maka  pelarut  tidak  akan  bisa  masuk kedalam  dinding  sel.  Tingginya  kadar  air sampel  juga  dapat  berakibat  tumbuhnya jamur-jamur  penghasil  mikotoksin  (racun) yang  dapat  menyebabkan  data  yang  tidak akurat pada uji aktivitas sebab kematian sel kanker bukan dikarenakan ekstrak
melainkan karena jamur-jamur yang tumbuh.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  kadar air,  diperoleh  kandungan  air  pada  sampel daun  rumput  bambu  setelah  dikeringkan sebesar 8,4332 % (b/b).

## Ekstraksi  Senyawa  Aktif  daun  Rumput Bambu
Maserasi  adalah  salah  satu  metode pemisahan senyawa dengan cara perendaman  menggunakan  pelarut  organik pada  temperatur  ruangan.  Prinsip  dari metode  maserasi  adalah  terdapat  waktu kontak  yang  cukup  antara  pelarut  dengan sampel  yang  diekstrak  dengan  demikian pelarut  akan  menembus  dinding  sel  dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung  zat  aktif.  Zat  aktif  akan  larut, karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak ke luar.
Filtrat  dan  residunya  dipisahkan dengan  cara  disaring  menggunakan  corong Buchner dan  kertas  saring.  Filtrat  yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan vacuum  rotary  evaporator .  Pelarut  yang masih  bersisa  dalam  ekstrak  diuapkan dengan  gas  N 2 .  Ekstrak  pekat  yang diperoleh  dibagi  menjadi  2,  yang  pertama ditimbang sebanyak 1 g  sebagai  sampel uji dan sisanya sebanyak 22,1966 g dihidrolisis.
. . … ( i )
Gambar  1 Dugaan  reaksi  hidrolisis  ikatan O - glikosida (Nihlati, dkk., 2008)
O H H HO H H OH H O HO Metabolit sekunder + H 2 O HCl Metabolit sekunder + O H H HO H H OH H OH HO
Proses  hidrolisis  asam  menggunakan larutan  HCl 2N pada  ekstrak  kasar  etanol 80  %  daun    rumput  bambu.  Prinsip hidrolisis  asam  adalah  peruraian  suatu senyawa  dengan  cara  memutus  ikatan glikosida  menggunakan  air  dan  katalis asam.  Pada  penelitian  ini  menggunakan larutan  HCl  2N  sebagai  katalis  asam  dan natrium    bikarbonat    jenuh    sebagai penetral  (Kaur  and  Murphy,  2012).  Reaksi pemutusan  ikatan  glikosida  yang  terjadi ketika  penambahan  larutan  HCl  dan penetralan  dengan  natrium  bikarbonat ditunjukkan pada Gambar 1.
Ekstraksi
selanjutnya
adalah ekstraksi  cair-cair  (partisi)  antara  hasil hidrolisis  dengan  pelarut  kloroform  dan  n- heksana.  Tujuan  proses  ekstraksi  cair-cair ini adalah untuk mendapatkan ekstrak yang lebih  spesifik  sifat  kepolarannya.  Pada ekstraksi cair-cair dengan kloroform terbentuk  2  lapisan  yang  tidak  saling campur.  Pada  lapisan  atas  adalah  fraksi atanol-air  (hijau  kecoklatan)  dan  lapisan bawah  fraksi  kloroform  (hijau  pekat). Perbedaan massa jenis pelarut mengakibatkan  fraksi  kloroform  berada dibawah  karena  massa  jenis  kloroform (1,498  g/mL)  lebih  besar  dari  pada  massa jenis  etanol  (0,789  g/mL).  ekstrak  hasil hidrolisis dengan n-heksana juga dihasilkan dua  lapisan  organik.  Lapisan  atas  fraksi  n- heksana  (coklat  pekat)  dan  lapisan  bawah fraksi  etanol-air  (coklat  sangat  pekat). Fraksi  n-heksana  berada  di  atas  karena  n- heksana  mempunyai  massa  jenis  0,695 g/mL.

## Uji Kandungan Golongan Senyawa Aktif dengan Reagen
Tabel 1 Identifikasi kandungan golongan senyawa  aktif  yang  terdapat  pada ekstrak dan fraksi daun rumput bambu
Keterangan : +++  : terkandung senyawa lebih banyak/warna sangat pekat tanda ++   : terkandung  senyawa lebih /warna cukup pekat + : terkandung senyawa/warna muda tanda
- : tidak terkandung senyawa/tidak terbentuk warna
Uji reagen dilakukan untuk mengetahui  kandungan  golongan  senyawa aktif yang terdapat dalam ekstrak dan fraksi daun rumput  bambu.  Hasil  dari  identifikasi kandungan  golongan  senyawa  aktif  yang terdapat  pada  ekstrak  dan  fraksi  daun rumput bambu ditunjukkan dalam Tabel 1.
Uji  aktivitas  antikanker  ekstrak  dan fraksi daun rumput bambu
Pengujian antikanker dilakukan untuk mengetahui aktivitas dari ekstrak dan fraksi daun  rumput  bambu  ( Lophaterum  gracile B.)  dalam  menghambat  atau  membunuh pertumbuhan  sel  kanker  payudara  dengan menggunakan  berbagai  variasi  konsentrasi yaitu  1000,  500,  250,  125,  62.5,  31.25  dan 15.625  g/mL.  Uji  aktivitas  antikanker dilakukan  secara in-vitro terhadap  sel kanker  payudara  T47D  dengan  metode MTT.
Gambar  2 (a)  ekstrak  kloroform  konsentrasi 1000  g/mL, (b) ekstrak kloroform konsentrasi  125  g/mL  dan  (c) ekstrak kloroform konsentrasi
15,625  g/mL
Pengamatan  morfologi  sel  dilakukan setelah  di treatment di  bawah  mikroskop inverted pada  setiap  variasi  konsentrasi sampel    uji.    Pada  konsentrasi  tertinggi yaitu  1000  g/mL  jumlah  kematian  sel terlihat  lebih  banyak  daripada  jumlah kematian  sel  pada  konsentrasi  125  dan 15,625  g/mL,  sel  mati  terlihat  berbentuk bulat    jernih  dan    sel  hidup    terlihat lonjong.  Sebagaimana  ditunjukkan  pada gambar Gambar 2.
Morfologi  sel  hasil treatment tidak terlihat    jelas    akibat  warna  sampel  uji masih terlalu pekat dan menutupi morfologi selnya,  sehingga  perlu  dicuci  dengan penambahan  PBS  untuk  menghilangkan sisa  media  dan  menghilangkan  warna  pada sampel    uji.    Analisa    ini    merupakan analisa  awal  sebelum  sel  ditambahkan reagen MTT,  sedangkan setelah sel ditambahkan  reagen  MTT  kematian  sel dapat  diamati  secara  kasat  mata,  karena terjadi    reaksi  kolorimetri.  Sel  hidup mampu  mengadsorbsi  garam  tetrazolium (reagen  MTT)    dan    dipecah    menjadi kristal  formazan  oleh  sistem  suksinat tetrazolium  reduktase  yang  terdapat  dalam jalur respirasi  sel,  sehingga  reagen  MTT yang  awalnya  berwarna  kuning  akan berubah  menjadi    ungu    (formazan), sedangkan  pada  sel  mati  akan  tetap berwarna kuning.
Intensitas  warna  ungu  yang  dihasilkan digunakan sebagai analisis kualitatif kematian  sel,  semakin  pekat  warna  ungu
yang  dihasilkan  maka  semakin  banyak jumlah  sel  hidup  yang  bereaksi  dengan reagen  MTT,  sebaliknya  jika  warnanya semakin pudar (kuning) semakin sedikit sel yang  bereaksi dengan reagen MTT atau sel mati.  Hasil  kuantitatif  diperoleh  dari  nilai absorbansi  menggunakan  ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm. Penggunan  panjang  gelombang  595  nm karena  warna  yang  tampak  pada  larutan adalah  ungu  kebiruan  yang  akan  menyerap warna  kuning  dari  spektra  sinar  tampak (Effendy, 2007).
Tabel  2. Nilai  IC 50 uji  aktivitas  antikanker daun rumput bambu
Sampel IC 50 (  g/mL) Ekstrak etanol 80 % 321,389 Ekstrak etanol hasil hidrolisis 481,984 Fraksi kloroform 177,852 Fraksi n-Heksana 300,681 Semakin besar absorbansi menunjukkan  semakin  banyak  jumlah  sel hidup  (Meiyanto,  dkk.,  1999).  Potensi aktivitas sampel uji dianalisis menggunakan program  SPSS  16.0  analisis  probit  untuk mengetahui  nilai  IC 50 pada  setiap  sampel. Hasil IC 50 ditunjukkan pada Tabel 2. Fraksi kloroform memiliki nilai IC 50 terendah,  yang  artinya  dalam  konsentrasi 177,852  g/mL mampu menghambat proliferasi  sel  sebanyak  50  %.  Menurut National  Cancer  Institute (NCI)  dalam Rahmawati (2013) suatu ekstrak dinyatakan aktif  memiliki  aktivitas  antikanker  apabila memiliki  nilai  IC 50 <  30  µg/ml,  moderat aktif apabila memiliki nilai IC 50 ≥ 30 µg/ml dan  IC 50 <  100  µg/ml  dan  dikatakan  tidak aktif  apabila  nilai  IC 50 >  100,  sehingga diketahui  fraksi  kloroform  tidak  aktif sebagai agen antikanker, begitu juga dengan ekstrak  etanol,  ekstrak hasil hidrolisis, dan
fraksi  n-Heksana  yang  tidak  memiliki potensi  dalam  menghambat  pertumbuhan sel  kanker  payudara  dikarenakan  nilai  IC 50 yang tinggi.
Pemisahan Senyawa Aktif
Secara
Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif
(KLTP)
Pemisahan  senyawa  aktif  dengan KLTP  dilakukan  pada  fraksi  kloroform karena  mempunyai  nilai  IC 50 terendah. Kandungan  golongan  senyawa  aktif  fraksi kloroform  dari  hasil  uji  fitokimia  adalah tanin  dan  steroid,  sehingga  eluen  yang digunakan  pada  proses  elusi  senyawa steroid  adalah  n-heksana:etil  asetat  (7:3) dan  untuk  senyawa  tanin  menggunakan  n- heksana:etil  asetat  (6:4).  Hasil  pemisahan KLTP  dan  nilai  Rf  disajikan  pada  tabel  3 dan 4.
Hasil  pemisahan  golongan  senyawa steroid diperoleh 17  noda, dugaan senyawa steroid  adalah  noda  yang  berwarna  ungu dan  hijau  setelah  dideteksi  dibawah  lampu UV  366  nm.  Penelitian  sebelumnya (Handayani, dkk., 2008) hasil KLT golongan  senyawa  steroid  dengan  pereaksi Lieberman-Burchard menunjukkan terbentuknya  noda  berwarna  hijau.  Ungu sampai  coklat  setelah  disemprot  pereaksi Lieberman-Burchard dan dideteksi dibawah lampu  UV  366  nm  (Saleh,  2009). Sedangkan golongan senyawa tanin diperoleh  11  noda  dan  dugaan  senyawa tanin adalah noda yang berwarna lembayung dan ungu.
Tabel 3 Hasil pemisahan golongan senyawa steroid
Tabel 4 Hasil pemisahan golongan senyawa
tanin
Noda-noda  yang  didapatkan  dari KLTP  dikerok  dan  dilarutkan  dalam  etanol p.a, kemudian disentrifugasi untuk memisahkan  silika  gel  dengan  senyawa aktif  yang  terlarut  pada  etanol  p.a.  Filtrat yang diperoleh diidentifikasi dengan spektrofotometer UV-Vis dan FTIR.

## Identifikasi  Golongan  Senyawa  Aktif dengan  Spektrofotometer  UV-Vis  dan Spektrofotometer FTIR
Isolat  yang  diduga  senyawa  steroid adalah  isolat  10  yang  memiliki  satu  garis spektra pada panjang gelombang 279,1 nm. Hal  ini  didukung  dengan  hasil  penelitian Susilowati  (2011)  Spektra  UV  hasil  isolasi daun rimbang mempunyai serapan maksimum  pada  panjang  gelombang  271 nm  dan  281  nm.  Maksimum  pada  panjang gelombang  271  nm  menunjukkan  adanya ikatan rangkap yang terkonjugasi. Hasil identifikasi dengan FTIR menunjukkan bahwa dugaan steroid terdapat pada fraksi kloroform memberikan beberapa serapan penting, yaitu pita serapan
utama  gugus  –O-H  alkohol  pada  bilangan gelombang  3462,7  cm -1 ,  pada  bilangan gelombang  2921,2  dan  2852,6  cm -1 menunjukkan  serapan  uluran  C-H  metilen, pada  bilangan  gelombang  1732,8  cm -1 menunjukkan serapan C=C alkena pada luar cincin  aromatis,  pada  bilangan  gelombang 1577,7  dan  1543,5  cm -1 menunjukkan serapan  C=C  alkena  pada  cincin  aromatis, pada  bilangan  gelombang  1463  dan  1384 cm -1 menunjukkan  serapan  metilen  tekuk dan C-H tekuk metil.
Isolat  yang  diduga  senyawa  tanin adalah  isolat  9,  memiliki  satu  garis  spektra pada  panjang  gelombang  331,6  nm. Penelitian  Sa’adah  (2013)  tentang  isolasi dan  identifikasi  senyawa  tanin  yang menunjukkan  isolat  dugaan  senyawa  tanin memiliki  satu  garis  spektra  pada  panjang gelombang  331  nm  dan  hasil  identifikasi senyawa  tanin  dari  tanaman  mimosa  yang sebagai  standar  dari  tanin  karena  memiliki kadar  tanin  cukup  banyak,  memiliki  satu garis  spektra  pada  panjang  gelombang  318 nm.  Serapan  isolat  9  pada  panjang gelombang maksimum 331,6 nm ini diduga karena adanya transisi elektronik dari π – π * yaitu pada ikatan C=C aromatik.
Hasil identifikasi dengan FTIR enunjukkan  bahwa  dugaan  tanin  terdapat pada fraksi n-heksan  memberikan beberapa serapan  penting,  yaitu  pita  serapan  gugus O-H  alkohol  pada  bilangan  gelombang 3482  cm -1 ,  pada  bilangan  gelombang  2926 dan 2859 cm -1 menunjukkan serapan uluran C-H  metilen,  pada  bilangan  gelombang 1735  cm -1 menunjukkan  serapan  C=C alkena  pada  cincin  luar  aromatis,  pada bilangan gelombang
1649 cm -1 menunjukkan  serapan  C=C  alkena  pada cincin  aromatis,  pada  bilangan  gelombang 1458  dan  1384  cm -1 menunjukkan  serapan metilen tekuk dan C-H tekuk metil.

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  80  %,  ekstrak  hasil hidrolisis,  fraksi  kloroform  dan  fraksi n-heksana daun rumput bambu ( Lophaterum gracile B.) memiliki nilai IC 50 berturut-turut  321,4;  482,0;  177,8;  dan 300,7  g/mL. Ekstrak etanol 80 % memiliki aktivitas    sangat    lemah,    ekstrak  etanol hasil hidrolisis  sangat lemah, fraksi kloroform  lemah,  dan  fraksi  n-heksana sangat lemah dalam menghambat pertumbuhan  dan  membunuh  sel  kanker payudara T47D
Hasil  uji  fitokimia,  identifikasi  dengan spektrofotometer  UV-Vis  dan  FTIR  fraksi kloroform  dan  n-heksana  daun  rumput bambu  ( Lophaterum  gracile B.)  yang memiliki nilai IC 50 paling rendah mengandung  senyawa  aktif  golongan  tanin dan steroid.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Burdall,  S.E.,  Hanby,  A.M.,  Lansdown, M.R,.  dan  Speirs,  V.  2003.  Breast cancer  cell  lines  :  friend  or  foe. Breast Cancer Research , 5 , 89–95.
CCRC. 2009. Prosedur Tetap Uji Sitotoksik Metode  MTT .  Yogyakarta:  Fakultas Farmasi, UGM.
Effendy.  2007. Perspektif  Baru  Kimia Koordinasi  Jilid  I .  Malang:  Banyu
Media Publishing.
IARC  (International  Agency  for  Research on  Cancer).  2010.  GLOBOCAN 2008 Fast Stats. France: GLOBOCAN  (IARC)  Section  of Cancer Information (2/7/2014).
http://globocan.iarc.fr/factsheet.asp
Diakses tanggal 2 Juli 2014.
Jing,  Z.,    Ying,    W.,    Xiao-Qi,  Z.,  Qing- Wen,  Z.,  dan  Wen-Cai,  Y.  2009. Chemical Constituents  from  the Leaves  of  Lophatherium  gracile. China. Chinesse    Journal    of Natural    Medicines, 7(6):    428- 431.
Kaur,  N.  and  Murphy,    J.B.    2012.
Enhanced    Isoflavone  Biosynthesis in transgenic Cowpea (Vigna unguiculata  I)  Callus .  Urbana- Campaign,  USA:  University  of Illinois Departement of Crop
Sciences. Academy  Journal-Plant
Mol   Biol   Biotechnol    2012 3(1):1-
8.
Kusumaningtyas,  E.,  Astuti,  E.,  dan Darmono. 2008. Sensitivitas Metode  Bioautografi  Kontak  dan
Agar  Overlay dalam  Penentuan Senyawa  Antikapang. Jurnal  ilmu kefarmasian . Fakultas Farmasi Universitas    Pancasila.  Vol.  6,  No.
2.
Kusumawati, I., Djatmiko, W., dan
Rahman, A. 2003. Eksplorasi
Keanekaragaman  dan  Kandungan Kimia  Tumbuhan  Obat  di  Hutan Tropis  Gunung  Arjuno. Jurnal
Bahan  Alam  Indonesian Volume  2 (3).
Mc.  Laughlin  J.L.  1991. Crown  Gall
Tumours  on  Potato  Disc  and  Brine Shrimp Lethality: Two Simple Bioassay for Higher Plant Screening and Fractination . Methods  in  Plants  Biochemistry,
Academic Press.
Meiyanto,  M.,  Kudo,  G.,  Lee,  Y.,  Yang, T.J.,  Gelboin,  H.V.,  Gonzalez,  F.J.
1999.  Targeted  Disruption  of  the Microsomal Epoxide Hydrolase Gene.  The Journal  of  Biological Chemistry . 274. 23963-23968.
Nihlati,  I.,  Abdul,  R.  dan  Triana,  H.  2008. Daya  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Rimpang Temu Kunci ( Boesenbergia pandurata S.) dengan Metode Penangkapan Radikal DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil). Skripsi Diterbitkan.
Yogyakarta: Universitas Gadjah
Mada.
Rahmawati,  Emma,  dkk.  2013.  Aktivitas
Antikanker Ekstrak n-Heksana dan  Ekstrak    Metanol    Herba Pacar    Air  ( Impatiens  balsamina Linn) terhadap Sel Kanker
Payudara  T47D. Media  Farmasi Vol. 10 No.2.
Restasari, A., Kusrini, K., dan Fachriyah, E.
2009. Isolasi dan identifikasi Fraksi Teraktif dari Ekstrak Kloroform Daun Ketapang (Terminalia catappa Linn). FMIPA Kimia UNDIP. Semarang.
Saleh,  C.  2009.  Identifikasi  Senyawa Steroid dari Kulit Batang Tumbuhan Maja ( Aegle Marmelos (L) Correa ). Kimia  Mulawarman .  Volume  5  (2): 24-27.
Sari,  S.P.  dan  Hayati,  E.K.    2014.
Aktivitas Sitotoksik ekstrak Kasar    Daun   Rumput         Bambu
( Lophatherum  gracile  B. )  Terhadap Larva  Udang Artemia  salina leach Dan  Identifikasi  Awal  Senyawa
Aktifnya. Skripsi. Tidak Diterbitkan.
Fakultas Sains dan Teknologi Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim Malang. Susilowati.,  Indriati,  H.,  Limra,  W.  Isolasi Dan  Identifikasi  Senyawa  Steroid Dari  Daun  Rimbang (Solanum torvum) .  Prodi  Pendidikan  Kimia Jurusan  PMIPA  FKIP.  Universitas Riau Pekanbaru.