22 Cakradonya Dental Journal p-ISSN: 2085-546X; e-ISSN: 2622-4720. Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ

## KONSENTRASI HAMBAT DAN BUNUH MINIMUM FORMULA HIDROGEL EKSTRAK
DAUN TIN ( Ficus carica ) TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus

## MINIMUM INHIBITORY AND BACTERICIDAL CONCENTRATION OF THE HYDROGEL
FORMULA OF TIN’S LEAF ( Ficus carica ) TOWARDS THE GROWTH OF Staphylococcus aureus
Teuku Ahmad Arbi, Afrina, Dewa Judhistira Guntara
Bagian Bedah Mulut Fakultas kedokteran Gigi Universitas Syiah Kuala Corresponding Email: arbi1975@gmail.com

## Abstrak
Staphylococcus  aureus merupakan  patogen  yang  menyebabkan  berbagai  infeksi  sekunder  seperti  infeksi pada  kulit  dan  jaringan  lunak  di  rongga  mulut,  dilaporkan  bahwa S.  aureus berperan  dalam  kegagalan implan gigi, menginfeksi perawatan saluran akar dan juga dapat berkolonisasi pada mukosa pengguna gigi tiruan.  Daun  Tin  ( Ficus  carica )  yang  diekstrak  dibuat  dalam  sedian  hidrogel  dan  dapat  dijadikan  obat karena  memiliki  kandungan  senyawa  aktif  seperti  alkaloid,  flavonoid,  kumarin,  saponin,  polifenol  dan tanin yang dapat menghambat dan membunuh bakteri dan berfungsi sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini  untuk  mengetahui  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM) formula  hidrogel  ekstrak  daun  Tin  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus. Daun  Tin  diekstraksi dengan  metode  maserasi,  selanjutnya  dilakukan  uji  konsentrasi  hambat  dan  bunuh  minimum  dengan metode  dilusi.  Berdasarkan  hasil uji Kruskal-Wallis diperoleh nilai  P  =  0,76  (P>0,05)  yang  menunjukan tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok  perlakuan  terhadap  pertumbuhan S.  aureus. Hasil  perlakuan  menunjukan  nilai  tertinggi  sampai  terendah  yaitu  kontrol  negatif,  5%,  25%,  50%  dan kontrol positif. Kesimpulan penelitian ini didapatkan konsentrasi formula hidrogel ekstrak daun Tin dalam menghambat S. aureus adalah pada konsentrasi 5%, dan pada konsentrasi 50% tidak menunjukan hasil uji yang sama seperti kontrol positif.
Kata Kunci: Staphylococcus aureus, Hidrogel, Daun Tin ( Ficus carica ), Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)

## Abstract
Staphylococcus aureus is  pathogen that can cause various secondary infections such as infections of the skin  and  mucosa,  it  is  reported  that S.  aureus has  a  role  in  the  failure  of  dental  implants,  root  canal treatment infection and also colonizes the mucosa of denture users. Tin’s ( Ficus carica ) leaves is made in hydrogel and can be used as medicine because it contains active compounds such as alkaloids, flavonoids, coumarin, saponins, polyphenols and tannins have antibacterial activity. The purpose of this study was to determine  the  minimum  inhibitory  and  bactericidal  concentration  of  the  hydrogel  formula  of  Tin’s  leaf extract towards the growth of Staphylococcus aureus . Tin’s leaf was extracted by maceration method, next do  the  minimum  inhibitory  and  bactericidal  concentration  test  was  carried  out  by  the  dilution  method. Kruskal wallis test showed that P = 0,076 (P>0,05) the data was not significant which mean there was no different result. Based on research the result from the highes to the lowest are negative control, 5%, 25%, 50%  and  positive  control.  Conclusion  of  the  research  showed  the  concentration  from  hydrogel  of  Tin’s leaf extract inhibiting S. aureus in concentration of 5%, and in 50% concentration showed that the result not same like control positive.
Keywords : Staphylococcus  aureus ,  Hydrogel,  Tin’s  ( Ficus  carica )  Leaf,  Minimum  Inhibitory Concentration, Minimum Bactericidal Concentration
Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ

## PENDAHULUAN
Rongga  mulut  adalah  tempat  tinggal berbagai  macam  elemen  seperti  gigi,  gingiva, lidah,  palatum  durum  dan  mole  serta  tonsil. Rongga mulut menjadi tempat hidup mikroorganisme seperti bakteri, jamur dan virus. Bakteri adalah kelompok mikroorganisme terbanyak yang hidup pada rongga mulut dengan jumlah  500  hingga  700  spesies. Staphylococcus adalah salah satu bakteri rongga mulut yang ada sejak seseorang lahir. 1 Staphylococcus merupakan  bakteri  Gram  postif  yang  memiliki 40 spesies yang salah satunya adalah Staphylococcus aureus . 2 Staphylococcus aureus ( S. aureus ) merupakan patogen penting yang dapat menyebabkan  berbagai  infeksi  sekunder  seperti infeksi yang terdapat di kulit dan jaringan lunak rongga mulut. 3 S.aureus merupakan flora normal pada kulit, orofaring, serta mukosa. 4 Berdasarkan studi  pustaka,  dilaporkan  bahwa S.  aureus memiliki  peran  dalam  kegagalan  implan  gigi, karena  bakteri  ini  mampu  melekat  pada permukaan  material  kedokteran  gigi.  Selain  itu, S.  aureus juga  berperan  menginfeksi  dalam perawatan  saluran  akar  dan  juga  dapat berkolonisasi  pada  mukosa  pengguna  gigi tiruan. 5,6
Pengobatan infeksi akibat S. aureus dapat digunakan  biasanya  antibiotik  pada  umumnya. Antibiotik  dapat  digunakan  dalam  menghambat dan  membunuh  bakteri  tetapi  penggunaan antibiotik  secara  berlebihan  akan  menyebabkan perubahan ekologi dan menimbulkan resistensi. 7 Dalam Al-quran telah disebutkan pada surat At- tin pada ayat pertama terdapat kata “At-tin”. Tin adalah  sejenis  tumbuhan  yang  memiliki  banyak khasiat yang dapat dijadikan obat-obatan. 8 Tidak hanya  buahnya  bahkan  daunnya  juga  memiliki efek antiinflamasi, antidiabetik, antioksidan serta sebagai  antimikrobial  yang  dapat  menghambat dan membunuh bakteri. 9
Hidrogel  adalah  sebuah  sedian  gel  semi padat  yang  dapat  digunakan  secara  topikal  atau dioles  dan  dicampur  dengan  ekstrak  yang mengandung  senyawa  aktif  antibakteri  untuk mendapatkan  efek  antimikrobial. 10 Hidrogel tersusun  dari  ikatan  saling  silang  oleh  monomer hidrofilik  melalui  ikatan  kimia  atau  gaya  kohesi seperti interaksi ionik dan memiliki
biokompabilitas  yang  tinggi  dan  tegangan permukaan  rendah  terhadap  cairan  biologi. Hidrogel  juga  dapat  meminimalkan  kekuatan adsorpsi  dari  protein  dan  daya  lekat  sel,  serta memiliki sifat lunak/lembut sehingga meminimalkan iritasi. 11
Daun Tin ( Ficus carica ) terdapat senyawa aktif  alkaloid,  flavonoid,  kumarin,  saponin, polifenol dan tanin yang dapat menghambat dan membunuh  bakteri  dan  berfungsi  sebagai antibakteri. 12,13 Penelitian  Weli  dkk  tahun  2015 menyebutkan bahwa kandungan antibakteri pada ekstrak  daun  tin  dapat  menghambat S.  aureus dalam  kategori  sedang  pada  konsentrasi  1000 dan  2000  µg/ml  yang  diambil  dari  sampel makanan  tersimpan. 9 Berdasarkan  hal  tersebut, peneliti  tertarik  untuk  melihat  Konsentrasi Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) daun Tin dalam sedian gel  terhadap  pertumbuhan S.aureus secara In Vitro .

## SAMPEL PENELITIAN
Daun Tin ( Ficus carica ) yang didapat dari Aceh  Farm  School, Banda  Aceh  adalah  sampel dari penelitian ini. Daun yang dipilih merupakan daun segar, berwarna hijau, dan merupakan daun tua. Staphylococcus  aureus ATCC  25932 diperoleh dari Laboratorium
Pengujian Mikrobiologi  Fundamental  Lab  Sains,  Aceh Besar.

## PROSEDUR PENELITIAN

## 1. Sterilisasi Alat
Sterilisasi  alat  dan  media  menggunakan autoklaf pada  suhu  121  °C  selama  15  menit dengan  tekanan  2  atm.  Alat  yang  tidak  tahan panas  disterilkan  menggunakan  alkohol  70  %. Dan jarum ose disterilkan langsung menggunakan spiritus dengan cara dibakar. 14
2. Ekstraksi Daun Tin ( Ficus carica ) Daun  tin  segar,  berwarna  hijau,  dan merupakan daun tua sebanyak 1000 g dicuci dan diletakkan  diatas  kertas  dan  didiamkan  pada suhu  ruang.  Setelah  kering,  daun  dihaluskan menggunakan  blender  sampai  mendapatkan tekstur  seperti  serbuk.  Lalu  sampel  bubuk  daun tin dimasukan pada beaker glass dan
24 Cakradonya Dental Journal p-ISSN: 2085-546X; e-ISSN: 2622-4720. Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
ditambahkan  etanol  96%  sebanyak  1,5  L, biarkan  rendaman  selama  satu  minggu  dan diganti  pelarutnya  setiap  hari.  Kemudian pisahkan  ampas  dengan  larutan  menggunakan kertas  saring.  Setelah  itu  etanol  diuapkan  pada tekanan rendah  menggunakan rotary  evaporator untuk menguapkan etanol sehingga mendapatkan ekstrak kental daun tin. 9
3. Uji  Fitokimia  Ekstrak  Daun  Tin  ( Ficus carica )
Pengujian fitokimia dari  ekstrak daun Tin bertujuan  untuk  mengkonfirmasi  senyawa  aktif ekstrak daun Tin yang mmiliki efek antimikroba, berikut cara untuk uji fitokimia ekstrak daun Tin : 15

## a. Uji Flavonoid
Uji  flavonoid  didapatkan  dengan  cara menambahkan sedikit logam zink atau magnesium  pada  3  ml  ekstrak  murni  daun  Tin ( Ficus  carica )  yang  berada  di  tabung  reaksi serta diberi lima tetes asam klorida 5N kemudian Hasil  yang  diperoleh  dibandingkan  dengan kontrol. 16

## b. Uji Alkaloid
Ekstrak daun tin 3 ml dilarutkan dengan 5  mL  HCl  2N.  Larutan  yang  didapat  kemudian dibagi  3  tabung  reaksi.  Tabung  1  digunakan sebagai  blanko,  tabung  2  ditambahkan  pereaksi Dragendroff sebanyak 3 tetes, dan tabung ketiga ditambahkan  pereaksi  Mayer  sebanyak  3  tetes. endapan  jingga  dapat  terbentuk  pada  tabung kedua  dan  endapan  putih  hingga  kekuningan pada  tabung  ketiga  yang  menunjukkan  adanya alkaloid. 15

## c. Uji Polifenol dan Tanin
Warna  biru  tua  atau  hitam  kehijauan menunjukkan  adanya  tanin  dan  polifenol  yang didapatkan  dari  melarutkan  ekstrak  sebanyak  3 mL  kemudian  dibagi  kedalam  3  bagian  yaitu tabung  1,  tabung  2,  tabung  3.  Tabung  1 digunakan  sebagai  blanko,  tabung  2  direaksikan dengan larutan besi (III) klorida 10%, sedangkan pada tabung 3 hanya ditambahkan garam gelatin. Apabila  terbentuk  endapan  pada  tabung  3  maka larutan ekstrak positif mengandung tanin. 17

## d. Uji Saponin
Ekstrak  daun  Tin  Sebanyak  3  ml ditambahkan dengan air hangat di dalam tabung reaksi  sebanyak  1  g,  dikocok  kuat-kuat  secara
vertikal  selama  10  detik.  Pembentukan  busa setinggi 1-10 cm yang stabil selama tidak kurang dari  10  menit  menunjukkan  adanya  saponin. Pada  penambahan  1  tetes  HCl  2N,  sehingga didapatkan busa tidak hilang. 18
4. Pembuatan  Formulasi  Hidrogel  Daun Tin ( Ficus carica )
Formula hidrogel sebanyak 25  g dari setiap konsentrasi memiliki kandungan Carboxy Methyl  Celluose (CMC),  propilen  glikol,  dan gliserin. Bahan ditimbang sesuai dengan formula yang  diracik  serta  diperhitungkan  seperti  yang tertera  pada  Tabel  1.  Kemudian  dipanaskan akuades  dan  masukkan  ke  dalam  mortal  serta ditaburkan  Na-CMC  secara  merata,  kemudian ditunggu  hingga  mengembang,  diaduk  hingga homogen dan  terbentuk mucilago secara kontinyu  selama  kurang  lebih  15  menit  yang mengendap  ke  bawah  dan  tambahkan  gliserin, propilenglikol,  nipagin  dan  Tri-Etanol-Amin (TEA)  yang  berfungsi  sebagai  stabilitas  dan diaduk hingga homogen. 19
Pada mortir lainnya, ekstrak daun tin ( Ficus carica )  untuk  konsentrasi  5%  dilarutkan  dengan sebagian  akuades  bersuhu  50°C  ditambahkan mucilago  Na-CMC  diaduk  secara  homogen selama  15  menit  sampai  terbentuk  gel.  Lalu disimpan  dalam  botol  vial.  Dilakukan  Prosedur yang  sama  terhadap  ekstrak  untuk  konsentrasi 25%  dan  50%,  sedangkan  pada  konsentrasi 100%  digunakan  ekstrak  murni  dari  daun  tin ( Ficus carica ). 19

## Tabel 1. Formulasi Gel
Bahan Jumlah (g) Basis Gel (Kontro l Negatif) Gel Konsentra si 5 % Gel Konsentra si 25 % Gel Konsentra si 50 % Ekstrak - 1,25 6,25 12,5 CMC- Na 0,3125 0,3125 0,3125 0,3125 Gliserin 0,3125 0,3125 0,3125 0,3125 Propilen glikol 0,3125 0,3125 0,3125 0,3125 Nipagin 0,01 0,01 0,01 0,3125 TEA 0,3125 0,3125 0,3125 0,3125 Aquades 23,75 ml 22,5 ml 17,5 ml 11,25 ml
Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
5. Persiapan  Media Mannitol  Salt  Agar
(MSA) Mannitol  Salt  Agar (MSA)  dibuat  dengan cara  pembuatannya  dengan  mencampur  ekstrak daging  sapi  0,2  g,  pepton  2  g,  NaCl  15  g, mannitol 2 g, agar fenol merah 0,005 g, akuades 200 ml. Kemudian  dipanaskan pada suhu 121 o C hingga  pH  mencapai  7.4.  ketika  suhu  mencapai 55 o C tuangkan pada petri. 20
6. Kultur Staphylococcus  aureus ATCC 25932 pada MSA Metode streak  plate atau  metode  goresan merupakan  media  yang  dipiih  untuk  kultur Staphylococcus aureus pada MSA. Biakan murni dilakukan  untuk  mengisolasi  koloni  mikroba agar  didapatkan  koloni  terpisah.  Selanjutnya dilakukan  penanaman  bakteri  dimedia  MSA dengan  membagi  menjadi  tiga  kuadran,  lalu ambil  1  ose  dari  bakteri  sampel  dan  ditanam pada  media  MSA  yang  baru  secara  zig  zag  dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 18-24 jam. 21,26

## 7. Pewarnaan Gram
Pewarnaan  Gram  dilakukan  dengan  cara mengambil  bakteri  uji  dengan  jarum  ose,  lalu dioles  pada  kaca  preparat  dan  difiksasi  diatas lampu  spiritus.  Preparat  ditetesi  dengan  violet selama  2  menit  lalu  dibilas  dengan  air.  Lalu ditetesi lugol selama 1 menit, kemudian preparat apus  dilunturkan  dengan  alkohol  95%  selama  1 menit. Selanjutnya alkohol dibersihkan, preparat dicuci dengan akuades dan diberi pewarna kedua dengan  larutan fuschine selama  2  menit.  Warna kemudian  dibilas  dengan  akuades,  dikeringkan dan  diamati  morfologi  sel,  serta  warnanya  di bawah  mikroskop.  Bakteri S.  aureus akan berwarna ungu, berbentuk bulat dan berkelompok  seperti  anggur.  Pewarnaan  Gram bertujuan  untuk  mengamati  morfologi  sel Staphylococcus dan  mengetahui  kemurnian  sel bakteri. 39

## 8. Suspensi Staphylococcus aureus
Biakan Staphylococcus
aureus disuspensikan  dengan  NaCl  0.9  %  sebanyak  5 ml,  kemudian  disetarakan  kekeruhannya  sama dengan  larutan McFarland  0,5 dan  didapatkan kekeruhan setara dengan  10 8 CFU/ml. 22
9. Pengenceran  Bertingkat Staphylococcus aureus Pembuatan  pengenceran  bertingkat  ( serial dilution ) dengan  menyiapkan  7  tabung  reaksi yang  sudah  diisi  oleh  NaCL  sebanyak  9  ml kedalam  setiap  tabung,  lalu  masukan  1  ml suspensi S. aureus ke tabung pengenceran 1 dan dihomogenkan.  Dari  tabung  1  diambil  1  ml dengan  pipet eppendorf kemudian  dipindahkan ke  tabung  2  dan  dihomogenkan.  Lakukan langkah  yang  sama  sampai  pada  tabung  seri pengenceran  terakhir.  Selanjutnya,  ambil  0,1  ml suspense  menggunakan  pipet eppendorf pada tabung  pengenceran  terakhir  (10 -7 )  sampai pengenceran  2  (10 -2 )  dan  diteteskan  ke  masing- masing  cawan  petri  untuk  ditanam  dimedia MHA dengan metode spread plate menggunakan batang  L  dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  37 o C.  Lakukan  pengamatan  dengan  cara menghitung  koloni  menggunaan colony  counter dan  pilih  tabung  yang  memiliki  jumlah  koloni 30-300 CFU/ml. 23
10. Uji  KHM  Dan  KBM  Hidrogel  Daun  Tin terhadap Staphylococcus aureus
Enam  tabung  reaksi  disiapkan  untuk  uji KHM  dan  KBM. Ciprofloxacin 50  µg/ml (kontrol positif) adalah Tabung 1 yang diisi 1 ml, tabung  2  diisi  1  ml  akuades  steril  (kontrol negatif), selanjutnya tabung 3 diisi 1 ml hidrogel ekstrak daun tin konsentrasi 5%, tabung 4 diisi 1 ml  hidrogel  ekstrak  daun  tin  konsentrasi  25%, tabung  5  diisi  1ml  hidrogel  ekstrak  daun  tin konsentrasi  50%,  Kemudian  setiap  tabung  diisi 0,1  ml  suspensi S.  aureus dan  dihomogenkan. Selanjutnya diambil 0,1 ml suspensi dari masing- masing  tabung,  dikultur  dimedia  MHA  dengan metode  sebar  ( spread  plate )  dan  diinkubasi dalam  inkubator  selama  24  jam  dengan  suhu 37 o C.  Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  dari  hidrogel  ekstrak  daun  tin  adalah cawan petri yang memiliki jumlah koloni bakteri yang  lebih  sedikit  dibandingkan  cawan  petri kelompok  kontrol  negatif.  Konsentrasi  Bunuh Minimum (KBM) dari hidrogel ekstrak daun tin dengan  cawan  petri  yang  tidak  terdapat pertumbuhan koloni bakteri. 24
Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ

## 11. Cara Pengelolahan Limbah
Limbah  infeksi/limbah  medis  dapat  diolah dengan cara disinfeksi, dekontaminasi, sterilisasi dan insenerasi. Limbah laboratorium (cair/padat) dapat diolah dengan cara insenerasi, sebelum dan sesudah  di  autoklaf  dengan  membakar  limbah tersebut  dalam  alat  insenerator  pada  suhu  1000 o C,  untuk  limbah  cair  dialirkan  masuk  ke  dalam septik tank .  Limbah  cair  yang  bersifat  infeksius dipisahkan dengan non infeksius dan ditambahkan  desinfektan  sebelum  dibuang  ke saluran pembuangan limbah. 25

## 12. Analisa Data
Penelitian ini hasilnya dikumpulkan.
Kemudian dilakukan tabulasi data yang diperoleh. Selanjutnya hasil data yang ditabulasi dan  dianalisis  dengan  bantuan  piranti  lunak SPSS untuk dilakukan uji Annova.

## HASIL PENELITIAN
1. Ekstraksi Daun Tin (Ficus carica)
Daun  Tin  ( Ficus  carica )  sebanyak  1  kg yang digunakan dalam penelitian ini didapat dari
Aceh Farm School, Banda Aceh. Ekstraksi Daun Tin  ( Ficus  carica )  dilakukan  dengan  cara dipotong  kecil-kecil  dan  dikering  anginkan, direndam  dengan  pelarut  etanol  96  %  sebanyak 1,5  L  dan  di  diamkan  selama  semalaman kemudian  disaring  menggunakan  kertas  saring dan  diulangi  selama  3  hari.  Selanjutnya  untuk mendapatkan  ekstrak  kental  daun  Tin  ( Ficus Carica ) diuapkan menggunakan rotary evaporator dan didapatkan hasil ekstrak daun tin ( Ficus carica ) sebanyak 52,6 g.
2. Hasil  Uji  Fitokimia  Ekstrak  Daun  Tin ( Ficus carica )
Ekstrak  daun  Tin  ( Ficus  carica )  dilakukan uji  fitokimia  untuk  melihat  senyawa  yang terdapat  didalamnya  dan  diharapkan  memiliki kandungan  senyawa  antibakteri.  Hasil  uji menunjukan  bahwa  ekstrak  ini  mengandung alkaloid,  steroid,  flavonoid,  fenol  dan  tanin (Tabel 2.)
Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Daun Tin ( Ficus carica ) Kandungan Metabolit Reagen Hasil Uji Alkaloid Mayer - Wagner - Dragendorff + Steroid Uji Liebermann-burchard + Terpenoid Uji Liebermann-burchard - Saponin Akuades - Flavonoid HCL dan Logam Mg + Fenol FeCl 3 + Tanin FeCl 3 + 3. Hasil  Ekstrak  daun  Tin  ( Ficus  carica ) sedian gel
Ekstrak kental daun Tin ( Ficus carica ) yang didapatkan  dari  proses  ekstraksi  kemudian diproses  menjadi  sedian  gel.  Gel  ekstrak  daun Tin ( Ficus carica ) diproses menjadi sediaan 25 g gel  dengan  basis  CMC-Na  dalam  varian konsentrasi  yang  berbeda  yaitu  5  %,  25  %,  dan 50 %.
Proses  pembuatan  sedian  gel  ini  diawali dengan  menimbang  ekstrak  kental  daun  Tin ( Ficus carica ) sesuai dengan dosis pada Tabel 1, kemudian  menimbang  basis  CMC-Na  sebanyak
0,3125  g,  dan  nipagin  sebanyak  0,01  g. Selanjutnya  kedalam  lumpang  masukan  basis CMC-Na  dan  akuades  yang  telah  dipanaskan sebanyak 22,5 ml untuk varian konsentrasi 5 %, 17,5  ml  untuk  varian  konsentrasi  25  %,  dan 11,25  ml  untuk  varian  konsentrasi  50  %, diamkan  selama  5  menit,  aduk  secara  merata, masukan  gliserin  0,3125  g,  TEA  0,3125  g, propilengligol  0,3125  g,  dan  nipagin  0,01  g (Gliserin, TEA, propilenglikol merupakan cairan yang  dosisnya  dikonversikan  dalam  tetes  yang setara  dengan  7  tetes),  aduk  secara  merata. Setelah  dibuatkan  basis  dalam  sedian  gel
27 Cakradonya Dental Journal p-ISSN: 2085-546X; e-ISSN: 2622-4720. Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
kemudian masukan ekstrak kental 5 %, 25 %, 50 %  pada  masing  masing  lumpang,  aduk  hingga basis  dengan  ekstrak  menyatu,  gel  siap  untuk disimpan seperti pada (Gambar 1.).
Gambar  1.  Hidrogel  Ekstrak  Daun  Tin  ( Ficus carica ) Konsentrasi 5 %, 25 %, 50 %

## 4. Hasil Kultur dan Konfirmasi

## Staphylococcus aureus
Staphylococcus  aureus dikultur  pada  MSA dan  diinkubasi  pada  inkubator  selama  24  jam dengan  suhu  37 0 C  dan  memperlihatkan  koloni berwarna  kuning  yang  mengkonfirmasi  spesies Staphylococcus aureus. (Gambar 2.)
Gambar 2. Koloni S. aureus pada MSA Hasil pewarnaan Gram juga mengkonfirmasi  bahwa Staphylococos  aureus dilihat menggunakan mikroskop dengan pembesaran  100x  menunjukan  karakteristik berwarna  ungu,  bulat,  dan  bergerombol  seperti buah anggur. (Gambar 3.)
Gambar 3. Hasil Pewarnaan Gram S. aureus

## 5. Hasil Suspensi dan Pengenceran Bertingkat
Suspensi S.  aureus dibuat  dengan  cara mengambil  1  ose  koloni S.  aureus kemudian dimasukan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang  berisi NaCl, selanjutnya di homogenkan menggunakan vortex  dan  disetarakan  dengan  larutan  Mc Farland 0,5 yang setara dengan 1,5x10 8 CFU/ml. (Gambar 4.)
Gambar  4.  Penyetaraan  Suspensi S.  aureus dengan Mc. Farland 0,5
Tujuh  Kali  Pengenceran  Bertingkat dilakukan  pada  penelitian  ini  dapat  dilihat  pada (Gambar 4.). Berdasarkan hasil tersebut didapatkan  2  tabung  yang  memenuhi  kriteria yaitu  tabung  pengenceran  10 -5 dan  10 -6 (Tabel 3.),  kemudian  dari  pengenceran  rendah  dan tinggi  secara  berurutan  yang  memiliki  jumlah koloni  30-300  dan  hasil  bagi  dari jumlah  koloni pengenceran  tertinggi  dan  terendah  >2,  maka yang  dilaporkan  merupakan  cawan  dengan pengenceran  terendah,  dan  pengenceran  10 -5 yang digunakan untuk uji KHM dan KBM.
Tabel  3.  Jumlah  Koloni  S.aureus  setelah Pengenceran Bertingkat
Tingkat Pengenceran Jumlah Koloni (CFU/cawan) 10 -1 TBUD 10 -2 TBUD
10 -3 615 10 -4 400 10 -5 160
10 -6 65 10 -7
20
Keterangan: TBUD: Tidak Bisa Untuk Dihitung
Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
6. Hasil Uji KHM dan KBM Formula Hidrogel Ekstrak Daun Tin ( Ficus carica ) Terhadap Staphylococcus aureus Uji  KHM  dan  KBM  formula  hidogel ekstrak  daun  tin  ( Ficus  carica )  terhadap S. aureus dibagi  menjadi  3  kelompok.  Kelompok pertama  yaitu  kelompok  perlakuan  yang  terdiri dari  4  konsentrasi  yaitu  5%,  25%,  dan  50% masing-masing diambil 1 ml dan tambahkan 0,1 ml  suspensi S.  aureus.. Kelompok  kedua merupakan  kontrol  positif  terdiri  dari  1  ml ciprofloxacin 50  µg/ml  dan  ditambahkan  0,1  ml suspensi S.  aureus. kelompok  ketiga  yaitu kelompok  kontrol  negatif  terdiri  dari  1  ml  basis hidrogel  CMC-Na  dan  ditambahkan  0,1  ml suspensi S. aureus . Langkah selanjutnya hasil uji dikultur dimedia MHA dan dilakukan pengujian sebanyak 2 kali (Tabel 4.)
Hasil  uji KHM  dan  KBM formula  hidrogel ekstrak  daun  Tin  ( Ficus  carica )  terhadap  S. aureus  berdasarkan  Tabel  4  menunjukan  KHM formula hidrogel ekstrak daun Tin ( Ficus carica ) terdapat  pada  konsentrasi  5%,  yang  mana  hasil pada  konsentrasi  5%  mendekati  kontrol  negatif. Berdasarkan  Gambar  5  KBM  formula  hidrogel ekstrak  daun  Tin  ( Ficus  carica )  tidak  dapat ditentukan  karena  kosentrasi  tertiggi  pada hidrogel  ekstrak  daun  Tin  di  kedua  hasil  uji terhadap dua kali pengulangan menunjukan nilai yang tidak sama seperti kontrol positif.
One  Way  ANNOVA digunakan  untuk  uji statistik dalam penelitian ini dengan syarat lebih dari dua kelompok, distribusi normal, dan varian data  normal.  Penelitian  ini  menggunakan  3 kelompok  dengan  2  kelompok  perlakuan,  yang mana  1  kelompok  kontrol  positif  dan  1 kelompok  kontrol  negatif.  Hasil  uji  normalitas menggunakan  Kolmogorov  Smirnov  dinyatakan bahwa  data  tidak  normal.  Uji Homogenity  of Variance terlihat  bahwa  hasil  uji  menunjukkan bahwa  varian  keenam  kelompok  tersebut  (P- value =  0,00),  sehingga  uji  Anova  tidak  valid untuk  menguji  hubungan  ini.  Oleh  karena  itu, digunakan uji alternatif Kruskal-Wallis .
Berdasarkan hasil uji Kruskal-Wallis diperoleh  nilai  P  =  0,76  (P>0,05)  yang menunjukkan  tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna  antara  kelompok  perlakuan  terhadap pertumbuhan S.aureus .  Jika  dilihat  dari  nilai perbedaan  peringkat  rata-rata,  bahwa  hasil perlakuan  dari  nilai  tertinggi  sampai  terendah
yaitu kontrol negatif, 5%, 25%, 50% dan kontrol positif.
Gambar  5.  Grafik  Hasil  Uji  KHM  dan  KBM Formula  Hidrogel  ekstrakdaun  Tin  ( Ficus carica ) terhadap S. aureus
Tabel 4. Hasil Uji KHM dan KBM Formula Hidrogel ekstrak daun Tin ( Ficus carica ) Terhadap S. aureus
Ekstrak dan Kontrol Pengulan gan I (CFU/ml) Pengulang an II (CFU/ml) Rata-Rata 5 % 39 35 37 x 10 -5 25% 34 28 31 x 10 -5 50% 20 23 21,5 x 10 -5 Kontrol Positif 0 0 0 x 10 -5 Kontrol Negatif 38 44 41 x 10 -5

## PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dimulai  dengan  membuat ekstrak  daun  tin  ( Ficus  carica ).  Daun  tin diperoleh  dari Aceh  Farm  School Banda  Aceh sebanyak 1 kg kemudian diekstrak menggunakan metode  maserasi. 9 Prosesnya  dengan  mencuci daun  Tin  ( Ficus  carica ),  dikering  anginkan, dipotong kecil-kecil dan dilarutkan dalam etanol 96%.  Penyaringan  menggunakan  kertas  saring dan  dipekatkan  menggunakan  alat rotary evaporator sampai diperoleh ekstrak kental. 26 Hasil  uji  fitokimia  pada  penelitian  ini terdapat  alkaloid,  steroid,  flavonoid,  fenol  dan tanin.  Hal  ini  berbeda  dengan  penelitian  Hasan dkk  pada  tahun  2008  yang  menyebutkan  bahwa daun  Tin  ( Ficus  carica )  mengandung  alkaloid, flavonoid,  kumarin,  saponin,  polifenol  dan tanin. 12 Penelitian Refli tahun 2012 menyebutkan
0 10 20 30 40 50 5% 25% 50% K+ K- Pengulanga n 1
Pengulanga n 2
Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
kandungan  fitokimia  pada  ekstrak  daun  Tin ( Ficus  carica )  berupa  flavonoid,  tanin,  alkaloid, terpenoid, dan steroid. Perbedaan ini disebabkan karena  pengaruh  tempat  tumbuh  daun  tin  yang berbeda. 27 Hasil  penelitian  mengandung  steroid berbanding  lurus  dengan  penelitian  Refli  tahun 2012,  steroid  merupakan  antibakteri  dengan yang  bekerja  merusak    membran  lipid  sehingga akan mengalami kebocoran pada lisosom. 28
Pembuatan  hidrogel  daun  Tin  ( Ficus carica )  menggunakan  basis  CMC-Na,  dengan cara  mencampurkan  ekstrak  dengan  basis hidrogel.  Berdasarkan  penelitian  Lena  dkk  pada tahun 2015 menyebutkan bahwa hidrogel dengan basis  CMC-Na  memiliki  viskositas  yang  besar dan  sifat  fisiknya  lebih  baik  dari  gel  lainnya. Selain  itu  adanya  penambahan  ekstrak  dapat menurunkan  gaya  kohesi  sehingga  ikatan  antar molekul  CMC-Na  menjadi  berkurang  (Lena  cit Erawati 2013). 29
Tiga  varian  uji  Konsentrasi  Hambat Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh Minimum (KBM) formula hidrogel ekstrak daun Tin ( Ficus carica ) dengan konsentrasi 5%, 25%, dan  50%.  Konsentrasi  Hambat  Minimum  dapat ditentukan  dengan  melihat  hasil  uji S.  aureus yang mendekati kontrol negatif. 30 Hasil penelitian  menunjukkan  nilai  KHM  terdapat pada  konsentrasi  5%.    Konsentrasi  Bunuh Minimum dapat ditentukan dengan melihat hasil uji S. aureus yang sama dengan kontrol positif. 31
Penelitian Weli dkk tahun 2015 juga menyebutkan  bahwa  ekstrak  daun  Tin  ( Ficus carica )  mampu menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi 1000  dan  2000  µg/ml  atau  setara  dengan  0,1  % dan  0,2%. 9 Konsentrasi  Bunuh  Minimum  tidak dapat  ditentukan  karena  butuh  lebih  banyak varian  konsentrasi  agar  bisa  didapatkan  nilai KBM pada penelitian ini.
Penelitian  ini  hanya  dilakukan  sebanyak dua kali pengulangan (duplo) sehingga data yang didapatkan  setiap  perlakuan  tidak  bervariasi yang  dapat  menyebabkan  hasil  uji  data  tidak normal  dan  juga  tidak  homogen  pada  analisis statistik . Hasil uji non parametrik Kruskal Wallis didapatkan  data  tertinggi  setelah  kontrol  negatif pada  konsentrasi  5%  diikuti  pada  konsentrasi 25%,  50%  dan  data  terendah  didapatkan  pada kontrol positif.
Penelitian  ini  menggunakan  basis  hidrogel CMC-Na  sebagai  kontrol  negatif,  hasil  uji  basis hidrogel  terhadap  pertumbuhan  bakteri S.aureus menunjukan rata- rata sebesar 41 x 10 -5 CFU/ml hal  ini  dinyatakan  bahwa  tidak  ada  senyawa kimia  pada  hidrogel  yang  mampu  menghambat maupun membunuh S.aureus.

## SIMPULAN
Konsentrasi  Hambat  Minimum  formula hidrogel  ekstrak  daun  Tin  ( Ficus  carica ) terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus terdapat  pada  konsentrasi  5%.  Konsentrasi Bunuh  Minimum  formula  hidrogel  ekstrak  daun Tin  ( Ficus  carica )  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus tidak  didapatkan  karena kosentrasi yang dibuat kurang variatif.

## SARAN
1. Dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui pengaruh  hidrogel  ekstrak  daun  tin  ( Ficus carica )  secara in  vivo (mengamati  proses penyembuhan  luka  yang  terjadi  dimulut tikus wistar).
2. Dilakukan  penelitian  menggunakan  variasi konsentrasi hidrogel ekstrak daun tin ( Ficus carica ) yang lebih rendah terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan tiga kali pengulangan (triplo).

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Samaranayake  L,  Matsubara  VH.  Normal oral flora and the oral ecosystem. Dent Clin North  Am.  2017;61(2):199–215.  Available from:
https://doi.org/10.1016/j.cden.2016.11.002 2.   Brooks  G,  Carroll  KC,  Butel  J,  Morse  S. Jawetz,  Melnick  &  Adelberg’s  medical microbiology. 26th ed. NYC: The McGraw- Hills Companies; 2013. 880 p.
3.   Rosalina  D,  Martodihardjo  S,  Listiawan MY. Staphylococcus aureus sebagai penyebab  tersering  infeksi  sekunder  pada semua  erosi  kulit  dermatosis  vesikobulosa. Berkala Ilmu Kesehatan Kulit dan Kelamin. 2010;2(22):102–8.
4.   Rieuwpassa  IE,  Rahmat,  Karlina.  Daya hambat ekstrak Aloe vera terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus (studi in vitro). Dentofasial . 2011;10(2):65–70. 5.   Merghni  A,  Kammoun  D,  Hentati  H,  Janel
30 Cakradonya Dental Journal p-ISSN: 2085-546X; e-ISSN: 2622-4720. Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
S, Popoff M, Lafont F, et al. Quantification of Staphylococcus  aureus adhesion  forces on various dental restorative materials using atomic  force  microscopy.  Appl  Surf  Sci. 2016;379:323–30. Avaiable from: https://doi.org/10.1016/j.apsusc.2016.04.07
2
6.   McCormack  MG,  Smith  AJ,  Akram  AN, Jackson  M,  Robertson  D,  Edwards  G. Staphylococcus  aureus and  the  oral  cavity:
An  overlooked  source  of  carriage  and infection?. Am J Infect Control. 2015;43(1):35–7. Availlable from:
https://doi.org/10.1016/j.ajic.2014.09.015
7.   Fatimah  S,  Nadifah  F,  Burhanudin  I.  Uji Daya hambat ekstrak etanol kubis ( Brassica oleracea  var.  capitata  f.alba )  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus secara  in vitro. J Ilm Biol. 2016;4(2):102–6. Available from: https://doi.org/10.24252/bio.v4i2.2515
8.   Fira  R.  Keistimewaan  buah  tin  dalam  al- quran  [Internet].  2017.  Available  from: www.conferene.unsyiah.ac.id/SN-MIPA
9.   Weli  AM,  Al-Blushi  AAM,  Hossain  A. Evaluation  of  antioxidant  and  antimicrobial potential  of  different  leaves  crude  extracts of Omani  Ficus  carica against  food  borne pathogenic  bacteria.  Asian  Pacific  J  Trop Dis.  2015  Jan;5(1):13–6.  Available  from: https://doi.org/10.1016/S2222- 1808(14)60619-8
10.   Edy HJ, Marchaban, Wahyuono S, Nugroho AE.  Formulasi  dan  uji  sterilitas  hidrogel herbal ekstrak etanol daun Tagetes erecta L . J Ilm Farm. 2016;5(2):9–16.
11.   Kartika R, Gadri A, Darma GCE. Formulasi basis  sediaan  pembalut  luka  hidrogel dengan  teknik  beku  leleh  menggunakan polimer kappa karagenan. SPeSIA: Seminar Penelitian  Sivitas  Akademika  Unisba. 2015;643–8.
12.   Gilani  AH,  Mehmood  MH,  Janbaz  KH, Khan AU, Saeed SA. Ethnopharmacological studies on antispasmodic  and  antiplatelet  activities  of Ficus  carica. J  Ethnophermacology.  2008 Sep;119(1):1–5. Available from: https://doi.org/10.1016/j.jep.2008.05.040
13.   Maulida  VS,  Adi  AC.  Daya  terima  dan kandungan  flavonoid  sirup  kombinasi
belimbing  wuluh  ( Averrhoa  Bilimbi  L )  dan daun tin ( Ficus Carica L ) sebagai minuman alternatif antioksidan kaya flavonoid. Media Gizi Indones. 2018;13(2):159–66. Available from: http://dx.doi.org/10.20473/mgi.v13i2.159- 167
14.   Mujipradhana VN, Wewengkang DS, Suryanto  E.  Aktivitas  antimikroba  dari ekstrak Ascidian  herdmania  momus pada mikroba  patogen  manusia.  Pharmacon. 2018;7(3):338–47.
15.   Simaremartye ES. Skrining fitokimia ekstrak etanol daun  gatal  ( Laportea decumana (Roxb.) Wedd ). Pharmacy. 2014;11(01):98–107.
16.   Lynda  B,  Soegihardjo  C.  Uji  aktivitas antibakteri  ekstrak  etanolik  daging  buah buni  ( Antidesma  bunius  (L.)  Spreng ) Terhadap Staphylococcus  aureus ATCC 25922 dan Escherichia coli ATCC 25923. J Farm Sains dan Komunitas. 2014;11(1):23– 31.
17.   Puspitasari  L.  Skrining  fitokimia  ekstrak etanol  95%  kulit  buah  manggis (Garcinia mangostana L.). J Farm Udayana . 2013;2(3):1–5.
18.   Artini,  P.,  Astuti,  K.,  Warditiani  N.  Uji fitokimia  ekstrak  etil asetat  rimpang  bangle (Zingiber  purpureum  Roxb.). J  Farm Udayana. 2013;2(4)1–7.
19.   Desiyana  LS,  Husni  MA,  Zhafira  S.  Uji efektivitas  sedian  gel  fraksi  etil  asetat  daun jambu biji ( Psidium guajava Linn ) terhadap penyembuhan  luka  terbuka  pada  mencit ( Mus musculus ). Natural . 2016;16(2):11–2.
20.   Shields  P,  Tsang  AY.  Mannitol  salt  agar plates  protocols  [Laboratory  protocol].  Am Soc Microbiol . 2016;1–6.
21.   Hidayat  H.  Identifikasi  morfologi  dan  uji aktivitas  antimikroba  terhadap  bakteri Escherichia  coli dari  fermentasi  buah markisa ( Passiflora sp .). Eksakta. 2015;14:76–85.
22.   Ririn  N,  Sari  C,  Wisnu  P,  Wardana  A, Indrayani AW, Kedokteran F, et al. Uji zona hambat  ekstrak  daun  putri  malu  ( Mimosa pudica )  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Methicillin-resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  secara  in vitro.  E-jurnal  Med  Udayana.  2015;4(4):1-
31 Cakradonya Dental Journal p-ISSN: 2085-546X; e-ISSN: 2622-4720. Available at http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ
9.
23.   Mubarak  Z,  Chrismirina  S,  Daulay  HH. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  propolis  alami dari  sarang  lebah  terhadap  pertumbuhan Enterococcus  faecalis. J  Syiah  Kuala  Dent Soc. 2016;1(2):175–86. 24.   Afrina, Chismirina S, Aulia CRP. Konsentrasi  hambat  dan  bunuh  minimum ekstrak buah kapulaga ( Amomum compactum ) terhadap Aggregatibacter actinomycetemcomitans. J  Syiah  Kuala Dent Soc. 2016;1(2):192–200.
25.   Pusat  Laboratorium  Kesehatan.  Pedoman Keamanan  Laboratorium  Mikrobiologi  dan Biomedis. Jakarta: Depkes RI; 1997.
26.   Agustina E. Uji aktivitas senyawa antioksidan  dari  ekstrak  daun  tiin  ( Ficus Carica  Linn )  dengan  pelarut  air,  metanol dan campuran metanol-air. Klorofil. 2017;1(1):38–47.
27.   Refli  R.  Potensi  ekstrak  daun  tin  ( Ficus Carica L .) sebagai antioksidan dan aktivitas hambatannya terhadap Proliferasi sel kanker hela  [Internet].  2012.  Available  from: https://repository.ipb.ac.id/jspui/bitstream/1 23456789/57783/3/G12rre.pdf 28.   Sudarmi  K,  Darmayasa  IBG,  Muksin  IK.
Uji fitokimia dan daya hambat ekstrak daun
juwet ( Syzygium cumini ) terhadap pertumbuhan
Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus ATCC.  Simbiosis  J Biol  Sci . 2017;5(2):47.  Available  from: https://doi.org/10.24843/JSIMBIOSIS.2017. v05.i02.p03 29.   Maulina  L,  Sugihartini  N.  Formulasi  gel ekstrak etanol kulit buah manggis ( Garcinia mangostana L .) dengan variasi gelling agent sebagai  sediaan  luka  bakar.  PharmaCiana . 2015;5(1):43–52.
Available from: http://dx.doi.org/10.12928/pharmaciana.v5i
1.2285
30.   Magdalena NV, Kusnadi J. Antibakteri dari ekstrak kasar daun gambir ( Uncaria gambir var  Cubadak )  metode  microwave-assisted extraction  terhadap  bakteri  patogen.  J Pangan  dan  Agroindustri . 2015;3(1):124– 35.
31.   Fardani  FE,  Ramdhani  AT,  Khasanah  AN, Ramadhani BA, Ananda M, Istiqomah NN, et  al.  Aktivitas  daya  hambat  ekstrak  jahe merah  ( Zingiber  officinale  var  rubrum ) terhadap pertumbuhan kuman staphylococcus  aureus.  J  Vocat  Heal  Stud [Internet].  2018;01:113–6.  Available  from: www.ejournal.unair.ac.id/index.php/JVHS