## Isolasi Senyawa Antioksidan dari Kulit Batang Sonneratia ovata Backer
Fatati Nurmalasari, Taslim Ersam dan Sri Fatmawati Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : paktichem@gmail.com
Abstrak —Campuran  Senyawa  β-sitosterol  (1a)  dan stigmasterol  (1b)  telah  diisolasi  dari  ekstrak  metanol  kulit batang Sonneratia  ovata Backer dengan  titik  leleh  127-128 o C. Sonneratia  ovata Backer  merupakan  tumbuhan mangrove yang  berasal  dari  Pulau  Dobo,  Kepulauan  Aru, Maluku  yang  telah  banyak  digunakan  sebagai  obat tradisional  untuk  berbagai  penyakit.  Isolasi  dilakukan dengan  ekstraksi  (maserasi)  dan  kromatografi  cair  vakum (KCV). Senyawa hasil isolasi dikarakterisasi dengan IR dan 13 C-NMR.  Fraksi  dan  senyawa  hasil  isolasi  menunjukkan aktivitas antioksidan dengan uji radikal DPPH. Fraksi dan senyawa  hasil  isolasi  menunjukkan  aktivitas  antioksidan yang lebih rendah dibandingkan dengan asam galat sebagai kontrol  positif  dengan  persentase  penghambatan  sebesar 43,652  ±  0,013  %  dan  27,159  ±  0,014%  pada  konsentrasi 319,458 µg/mL.
Kata Kunci — Sonneratia ; isolasi; antioksidan; DPPH.

## I. PENDAHULUAN
umbuhan mangrove di  Indonesia  merupakan  yang terbanyak  di  dunia,  baik  dari  segi  kuantitas  area sekitar  42.550  km 2 maupun  jumlah  spesies  [1]. Mangrove mempunyai  banyak  sekali  manfaat  bagi kehidupan  manusia,  mulai  dari  manfaat  ekologi  hingga sebagai sumber pangan dan obat. Indonesia memiliki 38 jenis mangrove ,  di  antaranya  yaitu  genus Rhizophora , Bruguiera , Avicennia , Sonneratia , Xylocarpus , Barringtonia , Luminitzera , dan Ceriops [2].
Genus Sonneratia merupakan  genus  endemik  di wilayah indo-barat pasifik. Genus ini merupakan elemen terdepan  di  muara mangrove dan  teluk  yang  terdapat  di pantai  tropis  Afrika  Timur  hingga  Indo-Malaysia,  Cina Selatan,  New  Guinea,  Australia,  dan  pulau-pulau  di Pasifik  Barat. Sonneratia memiliki  sembilan  spesies yaitu Sonneratia  alba,  S.  apetala,  S.  caseolari,  S. griffithii,  S.  gulngai,  S.  hainanensis,  S.  lanceolata,  S. ovata, dan S. urama [3].
Ekstrak  dan  bahan  mentah  dari  tumbuhan  mangrove telah banyak dimanfaatkan oleh masyarakat pesisir untuk keperluan  obat-obatan  alamiah.  Campuran  senyawa kimia  bahan  alam  oleh  para  ahli  kimia  dikenal  sebagai pharmacopoeia .  Sejumlah  tumbuhan  mangrove  dan tumbuhan  asosiasinya  digunakan  pula  sebagai  bahan tradisional insektisida dan pestisida [4].
Bagian  buah,  kulit  kayu,  dan  daun  dari  spesies Sonneratia telah  digunakan  dalam  obat  tradisonal  untuk mengobati  penyakit  seperti  asma,  obat  penurun  panas, bisul,  hepatitis,  ambeien,  keseleo,  dan  pendarahan  [5]. Dari  penelitian  sebelumnya,  telah  diisolasi  tiga  senyawa metabolit  sekunder  dari  buah S.  ovata yaitu  (-)-( R )- nyasol (2) ,  (-)-( R )-4’-O-metilnyasol (3) dan  asam maslinat (4) .  Tiga  senyawa  tersebut  menunjukkan aktivitas  sitotoksik  terhadap  tikus  glioma  garis  sel  C-6
dengan  nilai  IC 50 masing-masing  sebesar  19,02;  20,21; dan  31,77  μg/mL  [6].  Senyawa  metabolit  sekunder merupakan  salah  satu  bahan  baku  obat  dan  memiliki struktur  molekul  serta  aktivitas  biologik  yang  beraneka ragam [7].
Penelitian  mengenai  isolasi  senyawa  dari  kulit  batang Sonneratia  ovata Backer  sebagai  antioksidan  belum dilakukan.  Berdasarkan  data  di  atas,  maka  perlu dilakukan  penelitian  untuk  menambah peluang  sumber obat yang dapat digunakan oleh masyarakat.

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## Uji Pendahuluan
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah kulit  batang  tumbuhan  mangrove Sonneratia  ovata Backer yang diperoleh dari Pulau Dobo, Kepulauan Aru, Maluku. Sampel dibersihkan, dipotong menjadi potongan-potongan kecil dan dikeringkan di bawah sinar matahari.  Kulit  batang  yang  telah  kering  dihaluskan sehingga  dihasilkan  serbuk  kering  yang  siap  untuk diekstraksi.
Untuk  pemilihan  pelarut  yang  sesuai  saat  ekstraksi perlu  dilakukan  uji  pendahuluan.  Uji  pendahuluan dilakukan  dengan  mengekstraksi  serbuk  kering  kulit batang Sonneratia ovata Backer masing-masing sebanyak  25  g  dengan  pelarut  organik  yang  berbeda sebanyak  200  mL  yaitu n- heksana,  metilen  klorida,  etil asetat  dan  metanol  selama  1x24  jam.  Hasil  ekstraksi diamati  menggunakan  KLT  dengan  eluen  tunggal n- heksana,  metilen  klorida,  etil  asetat  dan  metanol. Kemudian  hasil  KLT  disemprot  dengan  larutan penampak n noda 1,5 % serium sulfat dalam H 2 SO 4 . Dari analisis kromatogram KLT masing-masing ekstrak dapat dipilih pelarut yang sesuai untuk ekstraksi sampel.

## Ekstraksi Kulit Batang Sonneratia ovata Backer
Serbuk  kering  kulit  batang Sonneratia  ovata Backer sebanyak 1,5 kg diekstraksi dengan cara maserasi dalam 7  L  metanol  selama  3x24  jam.  Hasil  ekstrak  metanol berwarna coklat tua kemudian disaring untuk mendapatkan  ekstrak  cair.  Ekstrak  cair  tersebut dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator  vacuum hingga  diperoleh  ekstrak  metanol  pekat  sebanyak 153,721 g.

## Fraksinasi dan Pemurnian
Ekstrak metanol pekat sebanyak 70,480 g diimpregnasi pada  silika  gel  60  (70-230  mesh)  kemudian  difraksinasi dengan metode Kromatgrafi Cair Vakum (KCV). Proses KCV I menggunakan pelarut n- heksana 100%, etil asetat 100%  dan  metanol  100%.  Hasil  fraksinasi  ditampung dalam  29  vial  masing-masing  300  mL  dan  dilakukan
T
monitoring  menggunakan  KLT  dengan  pelarut  etil asetat: n- heksana  (1:4).  Fraksi  yang  memiliki  pola  noda dan Rf yang sama digabungkan. Dari KCV I dihasilkan 5 fraksi yaitu fraksi F 1 (0,385 g), fraksi F 2 (0,448 g), fraksi F 3 (1,794 g), fraksi F 4 (1,412 g), fraksi F 5 (F 5 4,965 g). Fraksi F 2 , F 3 dan F 4 memiliki profil noda yang hampir sama sehingga digabungkan dan difraksinasi lebih lanjut dengan  metode  Kromatgrafi  Cair  Vakum  (KCV)  Proses KCV  II  menggunakan  pelarut  etil  asetat: n- heksana (0:100,  2:98,  5:95,  7:93,  15:85,  35:65,  100:0)  yang ditingkatkan  kepolarannya  dan  metanol.  Hasil  fraksinasi ditampung  dalam  44  vial  masing-masing  100  mL  dan dilakukan monitoring dengan KLT menggunakan pelarut etil  asetat: n- heksana  (1:4).  Fraksi  yang  memiliki  pola noda  dan  Rf  yang  sama  digabungkan  Dari  KCV  II dihasilkan  5  fraksi  yaitu  fraksi  G 1 (0,7514  g),  fraksi  G 2 (0,4010  g),  fraksi  G 3 (0,1220  g),  fraksi  G 4 (0,3011  g), fraksi G 5 (1,6410 g).
Fraksi  G 2 membentuk  dua  fasa  yaitu  fasa  padat  dan fasa  cair.  Kedua  fasa  tersebut  dipisahkan,  kemudian dilakukan monitorng dengan KLT. Padatan G 2 yang telah ditimbang  (37,4  mg)  dicuci  dengan  metanol  dan dimurnikan  dengan  rekristalisasi  menggunakan  pelarut metilen  klorida  dan  metanol.  Padatan  G 2 hasil rekristalisasi  berwarna  putih  sebanyak  16,5  mg. Kemudian  padatan  G 2 diuji  kemurniannya  dengan  uji KLT sistem 3 eluen yang berbeda kepolarannya yaitu etil asetat: n -heksana  (5:95,  25:75,  40:60),  uji  KLT  dua dimensi  (etil  asetat: n -heksana  (25:75),  metilen  klorida) dan uji titik leleh.

## Pengujian Spektrofotometer IR
Senyawa  hasil  isolasi  sebanyak  ±  1  mg  ditambahkan ke  dalam  KBr  lalu  digerus  hingga  homogen,  lalu dipadatkan hingga membentuk pelet. Pelet sampel diukur serapannya  pada  bilangan  gelombang  500-4000  cm -1 menggunakan Spektrofotometer IR.

## Pengujian Spektrometer NMR
Sampel  murni  12,1  mg  dilarutkan  dengan  kloroform kemudian  diinjeksikan  ke  dalam  tabung injection pada alat  spektrometer  sehingga  dapat  diukur  pergeseran kimianya pada 0-220 ppm.

## Uji Antioksidan dengan Radikal DPPH
Metode  yang  digunakan  untuk  mengukur  aktivitas penangkapan  radikal  DPPH  secara  kuantitatif  adalah metode  yang  dilakukan  oleh  Brand  Williams  yang dimodifikasi  oleh  Dudonn’e  (2009)  [10].  Langkah pertama,  pembuatan  larutan  DPPH  radikal  6×10 −5 M dengan  melarutkan  1.182  mg  DPPH  kedalam  50  mL metanol. Langkah kedua, pembuatan larutan stok uji dari fraksi  gabungan  F 234 ,  dan  senyawa  hasil  isolasi  masing- masing dengan melarutkan 10 mg sampel ke dalam 1 mL metanol. Kemudian dari larutan stok tersebut diencerkan konsentrasinya menjadi 5000 µg/mL, 2500 µg/mL, 1250 µg/mL,  625  µg/mL.  Larutan  tersebut  dihomogenkan menggunakan vortex mixer selama 10 detik.
Larutan  uji  dipipet  33 𝜇 L  dan  dimasukkan  ke  dalam tube yang terlindung dari cahaya, kemudian ditambahkan 1  mL  DPPH.  Selanjutnya,  larutan  tersebut  diinkubasi selama 20 menit. Selama proses reduksi oleh antioksidan, larutan  DPPH  radikal  akan  berubah  warna  dari  ungu menjadi kuning pucat. Pengukuran absorbansi menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang
gelombang 515 nm (As). Larutan blanko yang digunakan terdiri  dari  33 𝜇 L  metanol  dalam  1  mL  DPPH  yang diukur  pada  panjang  gelombang  yg  sama  (Ab).  Asam galat  digunakan  sebagai  kontrol  positif.  Perlakuan  pada uji  DPPH  ini  dilakukan  dengan  tiga  kali  pengulangan ( triplo ).  Aktivitas  penghambatan  radikal  dapat  dihitung dengan menggunakan rumus di bawah ini:
Inhibisi DPPH (%) = [(Ab-As) / Ab)] x100 (1)
Keterangan:
Ab = Absorbansi blanko As = Absorbansi sampel
Setelah  diperoleh  persentase  inhibisi  dari  masing- masing  konsentrasi,  ditentukan  persamaan  Y  =  AX 2 + BX  +  C  dengan  perhitungan  secara  regresi  dimana  X adalah  konsentrasi  (μg/mL)  dan  Y  adalah  persentase inhibisi.  Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dengan Inhibisi Concentration 50% yaitu  konsentrasi larutan uji yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50%.

## III. HASIL DAN DISKUSI

## Uji Pendahuluan
Sampel  kulit  batang  tumbuhan  mangrove Sonneratia ovata Backer  yang  telah  diperoleh  terlebih  dahulu dibersihkan,  dipotong  menjadi  potongan-potongan  kecil dan  dikeringkan  di  bawah  sinar  matahari.  Proses pengeringan  bertujuan  untuk  menghilangkan  kadar  air sampel.  Bahan  kering  tersebut  kemudian  dihaluskan hingga  menjadi  serbuk  untuk  memperbesar  luas permukaannya sehingga mengoptimalkan proses ekstraksi yang dilakukan.
Sebelum proses ekstraksi, terlebih dahulu dilakukan uji pendahuluan untuk menentukan pelarut yang digunakan. Uji pendahuluan dilakukan dengan mengekstraksi serbuk kering  kulit  batang Sonneratia  ovata Backer  masing- masing  sebanyak  25  g  dengan  pelarut  organik  yang berbeda  sebanyak  200  mL  yaitu n- heksana,  metilen klorida, etil asetat dan metanol selama 1x24 jam. Ekstrak n -heksana, metilen klorida, etil asetat dan metanol dielusi menggunakan  eluen  metanol  dengan  plat  KLT.  Hasil analisis  kromatogram  KLT  menunjukkan  bahwa  pelarut metanol  memiliki  kemampuan  mengekstrak  lebih  baik dibandingkan  pelarut  yang  lain.  Metanol  merupakan pelarut yang mampu mengekstrak lebih banyak senyawa baik yang bersifat non polar maupun polar.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  karena maserasi  memiliki  beberapa  kelebihan  diantaranya  cara yang  digunakan  mudah  dan  sederhana,  dapat  digunakan untuk sampel dengan jumlah yang besar, dan tidak terjadi dekomposisi  senyawa  karena  dilakukan  pada  suhu kamar.  Sampel  kulit  batang Sonneratia  ovata Backer sebanyak  1,5  kg  dimaserasi  selama  3x24  jam menggunakan  pelarut  metanol  sebanyak  7  L. Proses maserasi dilakukan berulang-ulang untuk mengoptimalkan  proses  ekstraksi  pada  sampel.  Proses maserasi  dimonitoring  menggunakan  KLT  dan  dapat dihentikan  setelah  noda  pada  plat  KLT  tidak  tebal  lagi. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa-senyawa  yang dapat  diekstrak  oleh  pelarut  metanol  telah  terekstrak semua.  Hasil  ekstrak  metanol  berwarna  coklat  dan keseluruhan  ekstrak  yang  diperoleh  diuapkan  sehingga diperoleh ekstrak metanol pekat sebanyak 153,72 g.

## Fraksinasi dan Pemurnian
Ekstrak  metanol  pekat  kulit  batang Sonneratia  ovata Backer  sebanyak  70,480  g  difraksinasi  menggunakan metode  Kromatografi  Cair  Vakum  (KCV).  Metode kromatografi cair  vakum  (KCV)  ini dipilih  karena  dapat memisahkan  sampel  dalam  jumlah  cukup  besar  dalam waktu  singkat  dan  dapat  memisahkan  senyawa-senyawa target  ke  dalam  fraksi-fraksi  yang  lebih  sederhana. Pelarut  yang  digunakan  yaitu n -heksana,  etil  asetat  dan metanol.  Untuk  mengontrol  peningkatan  kepolaran pelarut dilakukan monitoring menggunakan Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dengan  pelarut  etil asetat: n -heksana  (1:4).  Monitoring  ini  bertujuan  untuk mengetahui distribusi senyawa pada tiap vial yang dapat dilihat  dari  pola  noda  hasil  KLT.  Pengelompokan  fraksi berdasarkan  pola  noda  dan  Rf  yang  sama  sehingga didapatkan lima fraksi gabungan dan kromatogram KLT fraksi gabungan. Untuk melihat profil noda keseluruhan, hasil  KLT  disemprot  menggunakan  reagen  penampak noda Ce(SO 4 ) 2 1,5%. Dihasilkan lima subfraksi gabungan F 1 (0,385 g), F 2 (0,448 g), F 3 (1,794 g), F 4 (1,412 g), dan F 5 (4,965 g).
Fraksi F 2 , F 3 dan F 4 memiliki profil noda yang hampir sama  sehingga  digabung  dan  diberi  nama  fraksi  F 234 . Fraksi 234 difraksinasi  lebih  lanjut  dengan  metode  KCV dan dielusi dengan eluen metilen klorida: n- heksana yang ditingkatkan  kepolarannya  (0:100,  2:98,  5:95,  7:93, 15:85, 35:65, dan 100:0). Untuk mengontrol peningkatan kepolaran  pelarut  dilakukan  monitoring  menggunakan KLT  dengan  pelarut  etil  asetat: n -heksana  (1:4).  Hasil KCV  dimonitoring  di  atas  plat  KLT  menggunakan campuran  etil  asetat: n -heksana  (1:4).  Pengelompokan fraksi berdasarkan pola noda dan Rf yang sama sehingga didapatkan lima fraksi gabungan dan kromatogram KLT fraksi gabungan. Untuk melihat profil noda keseluruhan, hasil  KLT  disemprot  menggunakan  reagen  penampak noda Ce(SO 4 ) 2 1,5%. Dihasilkan lima subfraksi gabungan G 1 (0,751  g),  G 2 (0,401  g),  G 3 (0,122  g),  G 4 (0,301  g), dan G 5 (1,641 g). Fraksi  G 2 membentuk  dua  fasa  yaitu  fasa  padat  dan fasa cair. Fasa padat G 2 berwarna putih dan fasa cair G 2 berwarna  orange.  Kedua  fasa  tersebut  dipisahkan  dan dilihat  profil  nodanya  pada  KLT.  massa  padatan  G 2 sebesar 37,4 mg.  Pada kromatogram  KLT  masih  terlihat bahwa  padatan  G 2 hasil  isolasi  masih  mengekor,  hal  ini mengindikasikan  bahwa  endapan  tersebut  belum  murni dan perlu dilakukan rekristalisasi. Sebelumnya dilakukan uji  kelarutan  menggunakan  lima  macam  pelarut  dimana padatan G 2 tidak larut pada metanol, larut sebagian pada etil  asetat  dan  metilen  klorida  serta  larut  sempurna pada kloroform  dan n -heksana.  Uji  kelarutan  ini  berguna untuk referensi yang digunakan dalam penentuan pelarut untuk rekristalisasi dan analisis penentuan struktur.
Fasa  padat  G 2 dicuci  dengan  metanol  dan  selanjutnya rekristalisasi  menggunakan  2  macam  pelarut  yaitu metilen  klorida  panas  dan  metanol  dingin.  Pemilihan pelarut  karena  metilen  klorida  melarutkan  sebagian endapan pada suhu ruang dan melarutkan sempurna fasa padat G 2 pada suhu tinggi, sedangkan metanol yang tidak melarutkan  akan  membantu  proses  pembentukan endapan  (pengendapan).  Kedua  hal  ini  merupakan prinsip  dari  rekristalisasi.  Setelah  terbentuk  padatan berwarna  putih,  padatan  tersebut  disaring  vakum  dan dicuci dengan metanol yang bertujuan untuk  melarutkan
pengotor  yang  masih  tersisa.  Proses  rekristalisasi  ini menghasilkan padatan seberat 16,5 mg.
Padatan  hasil  rekristalisasi  diuji  kemurniannya menggunakan  KLT  dengan  tiga  eluen  yang berbeda  dan diperoleh  noda  tunggal  dengan  Rf  yang  berbeda. Kemudian  diuji  menggunakan  KLT  2D  dan  diperoleh noda  tunggal.  Dari  dua  uji  tersebut  mengindikasikan bahwa  padatan  telah  murni.  Selanjutnya  dilakukan  uji titik leleh pada   senyawa hasil isolasi  menggunakan alat pengukur  titik  leleh Fisher  John  Melting  Point dan diperoleh  titik  leleh  sebesar  127-128 o C.  Senyawa dikatakan murni jika rentang titik lelehnya ± 1 o C.

## Penentuan Sturktur
Senyawa  hasil  isolasi  berupa  padatan  berwarna  putih dengan  massa  16,5  mg  dan  titik  leleh  127-128 o C. Analisis  spektrum  inframerah  (KBr)  pada  bilangan gelombang  500-4000  cm -1 memperlihatkan  pita-pita serapan yang khas untuk beberapa gugus fungsi (Gambar 2).  Serapan  pada  bilangan  gelombang  1047  cm -1 menunjukkan  adanya gugus C-O,  serapan  pada bilangan gelombang 1464  cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  C=C, serapan pada bilangan gelombang 2935 cm -1 menunjukkan gugus C-H sp 3 dan 3444 cm -1 menunjukkan gugus O-H.
Gambar 1. Spektrum IR senyawa hasil isolasi dalam KBR
Gambar 2. Spektrum IR senyawa steroid dalam KBR [8]
Kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada  Genus Sonneratia yaitu  golongan  flavonoid,  terpenoid  dan steroid.  Data  spektrum  IR  senyawa  hasil  isolasi  perlu dibandingkan  dengan  beberapa  senyawa  yang  telah dilaporkan  sebelumnya  dan  hasil  tersebut  memiliki kesamaan  pola  dengan  serapan  bilangan  gelombang senyawa  triterpen  jenis  steroid  yaitu  pada  serapan  1056, 1462,  2936,  dan  3429  cm -1 (Gambar  3)  serta  didukung bahwa  senyawa  hasil  isolasi  tidak  memiliki  serapan gugus C=C aromatik pada bilagan gelombang 1475 cm -1 .
Penentuan  struktur  selanjutnya  menggunakan  analisis spektrum 13 C-NMR pada frekuensi 125 MHz menggunakan  pelarut  CDCl 3 .  Analisis  spektrum 13 C- NMR  memperlihatkan  sinyal-sinyal  pada  pergesaran kimia  (δc)  dari  0-230  ppm  (Gambar  4.11).  Adanya pergeseran  kimia  pada  140,878;  138,467;  129,395  dan 121,870  ppm  merupakan  pergeseran  khas  dari  karbon alkena  (C=C),  pergeseran  71,954  ppm  merupakan pergeseran  dari  karbon  (-C-OH).  pergeseran  36,29  ppm merupakan  pergeseran  khas  dari  karbon  metin  (-CH-), pergeseran    29,07  ppm  merupakan  pergeseran  karbon metilen  (-CH 2 -)  dan  untuk  pergeseran  12,41  ppm merupakan pergeseran khas dari karbon metil (-CH 3 -).
Analisis data spektrum 13 C-NMR senyawa hasil isolasi memperlihatkan  adanya  44  sinyal  karbon.  Golongan senyawa  steroid  memiliki  jumlah  atom  karbon  27 (zimasterol),  28  (ergosterol),  dan  29  (stigmasterol) sehingga  diprediksi  senyawa  tersebut  terdiri  dari  dua isomer  senyawa  steroid.  Struktur  senyawa  hasil  isolasi ini  memiliki  kesamaan  dengan  campuran  senyawa  β- sitosterol (1a) dan  stigmasterol (1b) sehingga  perlu adanya perbandingan spektrum 13 C-NMR antara senyawa hasil  isolasi  dengan  campuran  senyawa  β-sitosterol (1a) dan stigmasterol (1b) (Tabel 1)
T ABEL 1. D ATA PERBANDINGAN PERGESERAN ( ΔC ) 13C-NMR SENYAWA HASIL ISOLASI DENGAN Β - SITOSTEROL (1 A ) DAN STIGMASTEROL (1 B ) [9] Nomor Karbon Senyawa Hasil Isolasi β-sitosterol dan stigmasterol δc (ppm) δc (ppm) 5a, 5b 140,87 140,72 22b 138,46 138,31 23b 129,39 129,25 6a, 6b 121,87 121,71 3a, 3b 71,95 71,80 14b 57,00 56,85 14a 56,90 56,73 17a 56,18 56,02 17b 56,08 55,93 24b 51,38 51,22 9a, 9b 50,26 50,10 24a 45,96 45,81 13a, 13b, 4b 42,42 42,26 4a 42,35 42,19 20b 40,66 40,48 12a 39,91 39,74 12b 39,81 39,66 1a, 1b 37,39 37,22 10a, 10b 36,64 36,48 20a 36,29 36,12 22a 34,07 33,91 7a, 7b, 8a, 8b, 25b 32,04 31,87 2a, 2b 31,79 31.63 25a 29,27 29,11 16b 29,07 28,91 16a 28,40 28,22 23a 26,18 26,02 28b 25,56 25,39 15b 24,51 24,34 15a 24,45 24,29
28a 23,19 23,04 26b 21,36 21,20 11a, 11b, 21b 21,22 21,07 26a 19,97 19,80 19a, 19b 19,54 19,39 27a 19,17 19,01 27b 19,12 18,96 21a 18,92 18,76 29b 12,41 12,23 18b 12,19 12,03 29a 12,12 11.97 18a 12,00 11,84
Berdasarkan  analisis  hasil  tersebut  dapat  dinyatakan bahwa  senyawa  hasil  isolasi  identik  dengan  campuran senyawa  β-sitosterol (1a) dan  stigmasterol (1b) .  Kedua senyawa  tersebut  merupakan  senyawa  mayor  dari golongan  fitosterol  yang  paling  sering  ditemukan  pada membran  sel  tumbuhan.  Struktur  β-sitosterol (1a) merupakan isomer gugus fungsi dari senyawa stigmasterol (1b) . Struktur senyawa hasil isolasi tersebut dapat digambarkan sebagai berikut:

## Uji Antioksidan dengan Radikal Bebas DPPH
Metode  yang  digunakan  untuk  mengukur  aktivitas penangkapan  radikal  DPPH  secara  kuantitatif  adalah metode  yang  dilakukan  oleh  Brand  Williams  yang dimodifikasi  oleh  Dudonn’e  (Brand-Williams,  1995) (Dudonn’e,  2009).  Metode  ini  dipilih  karena  sederhana dan  hanya  memerlukan  sedikit  sampel.  Pada  proses pengujian,  zat  uji  akan  mendonorkan  atom  hidrogennya kepada  radikal  bebas  DPPH  sehingga  DPPH  tereduksi menjadi  senyawa  nonradikal  yaitu  1,1-difenil-2-pikril- hidrazin  yang  stabil  dan  ditandai  dengan  perubahan warna  ungu  menjadi  kuning  pucat  (Bendra,  2012). Semakin  kecil  absrobansi  larutan  uji  dibandingkan dengan  blanko  maka  semakin  baik  kemampuan  suatu senyawa  dalam  meredam  radikal  DPPH.  Pengukuran absorbansi  dengan  spektrofotometer  UV-vis  pada panjang gelombang 515 nm.
Sampel  uji  yang  diukur  aktivitas  antioksidan  adalah fraksi F 234 , senyawa hasil isolasi serta asam galat sebagai kontrol positif dengan beberapa variasi konsentrasi yaitu 10.000 µg/mL, 5000 µg/mL,  2500 µg/mL,  1250 µg/mL, dan  625  µg/mL.  Setelah  diperoleh  persentase  inhibisi dari masing-masing konsentrasi, ditentukan persamaan Y =  AX 2 +  BX  +  C  dengan  perhitungan  regresi  dimana  X adalah  konsentrasi  (μg/mL)  dan  Y  adalah  persentase penghambatan.  Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dengan Inhibisi Concentration 50% yaitu  konsentrasi larutan uji yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50%.
Pada konsentrasi penghambatan 319,458 µg/mL fraksi F 234 ,  senyawa  hasil  isolasi  serta  asam  galat  memiliki persentase penghambatan masing-masing sebesar 43,652 ±  0,013%;  27,159  ±  0,014%  dan  96,410%.  Fraksi  F 234 dan  seyawa  hasil  isolasi  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  rendah  dilihat  dari  persentase  penghambatan terhadap  radikal  DPPH  dibawah  50%.  Sedangkan  untuk asam galat dibuat kurva persentase penghambatan DPPH yang  menghasilkan  persamaan  untuk  perhitungan  nilai IC50 (Gambar 3).
Gambar 3. Aktivitas Penghambatan DPPH dari asam galat
Kurva  aktivitas  penghambatan  DPPH  dari  asam  galat menghasilkan  persamaan  Y  =  -1,574X 2 +  24,466X  + 7,116 dengan R² = 0,990. Selanjutnya dihitung IC 50 yaitu konsetrasi  penghambatan  untuk  meredam  radikal  DPPH sebanyak  50%  dan  dari  perhitungan  didapatkan  X 1 = 13,525 dan X 2 = 2,018. Nilai IC 50 dari asam galat sebesar 2,018  µg/mL.  Nilai  13,525  tidak  digunakan  karena  nilai tersebut keluar dari range kurva. Semakin kecil nilai IC 50 menunjukkan bahwa sampel uji aktif sebagai antioksidan.  Uji  aktivitas  penghambatan  radikal  DPPH menunjukkan bahwa fraksi F 234 dan senyawa hasil isolasi memiliki aktivitas penghambatan lebih rendah dibandingkan asam galat sebagai kontrol positif.

## IV. KESIMPULAN
Isolasi  senyawa  dari  kulit  batang Sonneratia  Ovata
Backer  menghasilkan  campuran  senyawa  β-sitosterol (1a) dan stigmasterol (1b) yang belum pernah dilaporkan untuk  spesies Sonneratia  Ovata Backer.  Senyawa  hasil isolasi  tersebut  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang rendah  dengan  persentase  penghambatan  sebesar  27,159 ±  0,014%  pada  konsentrasi  penghambatan  319,458 µg/mL

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  disampaikan  kepada  tim  penelitian Laboratorium  Kimia  Bahan  Alam  dan  Sintesis  Jurusan Kimia  FMIPA  ITS,  serta  semua  pihak  yang  turut membantu.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Spalding,  M.,  Ravilious,  C.,  Green,  E.  (2001).  “World  Atlas  of Coral Reef” . Berkeley USA: University of California Press.
[2] Supriharyono. (2000). “Pelestarian dan Pengelolaan Sumberdaya Alam Wilayah Pesisir Tropis” . Jakarta: Gramedia Pustaka.
[3] Duke,  N.C.,  (2006).  “Australia’s  Mangroves.  The  Authoritative Guide  to  Australia’s  Mangrove  Plants”.  University  of Queensland, Brisbane, 200 pp.
[4] Purnobasuki,  H.  (2004).  “Prospect  of  Mangrove  as  Herbal Medicine”. Biota IX (2), 125-126.
[5] Nguyen,  T.-H.-T.  (2015).  “Chemical  Constituents  from Sonneratia  Ovata Backer  and  Their  In  Vitro  Cytotoxicity  and Acetylcholinesterase  Inhibitory  Activities”.  Bioorganic  and Medicinal Chemistry Letters 25 , 2366–2371.
[6] Wu,  S.-B.  (2009).  “Chemical  Constituents  from  The  Fruits  of Sonneratia Caseolaris and Sonneratia Ovata ( Sonneratiaceae )”. Biochemical Systematics and Ecology 37 , 1-5.
[7] Deus B., MH Zenk. (1982). “Exploitation of plant cells for the production of natural compounds”. Biotechnol Bioeng 24, 1965- 1974.
[8] Tukiran, Hamdani, B. E., Mahyudi, R., Syarief, S. H., Hidayati, N.  (2009).  “Beberapa  Senyawa  Hasil  Isolasi  dari  Kulit  Batang Tumbuhan  Kedoya  ( Dysoxylum  gaudichaudianum (A.  Juss.) Miq.) (Meliaceae)”. Jurnal Ilmu Dasar, Vol. 10 No. 2, 236-244.
[9] De-Eknamkul,  W.,  Potduang,  B.  (2003).  “Biosynthesis  of  b- sitosterol  and  stigmasterol  in  Croton  sublyratus  proceeds  via  a mixed origin of isoprene units”. Phytochemistry 62, 389–398.
[10] Dudonn’e,  S.  Vitrac,  X.,  Couti’ere,  P.,  Woillez,  M.,  M’erillon, J.-M.,  (2009).  “Comparative  Study  of  Antioxidant  Properties and  Total  Phenolic  Content  of  30  Plant  Extracs  of  Industrial Interest Using DPPH, ABTS, FRAP, SOD, and ORAC Assay”. Journal of Agricultural and Food Chemistry 57: 1768-1774.