Abstrak —Polietilen  sulit  didegradasi  karena  tersusun  atas monomer  alkana  yang  memiliki  ikatan  C-C  dan  C-R  yang bersifat stabil. Jamur Aspergillus terreus diketahui menghasilkan Alkana hidroksilase (AH), salah satu enzim yang terlibat  dalam  degradasi  polietilen.  Enzim  AH  membutuhkan kofaktor  berupa  ion  Fe 2+ .  Tujuan  dari  penelitian  ini,  untuk mengetahui pengaruh 1 ppm ion Fe 2+ dan variasi pH terhadap aktivitas  enzim  AH  jamur A.  terreus dalam  mendegradasi plastik.  Penelitian  ini  menggunakan  medium  MSM  dengan  1 ppm  ion  Fe 2+ dan  variasi  pH.  Parameter  yang  diamati  adalah aktivitas enzim AH dengan menggunakan metode spektrofotometri. Hasil menunjukkan bahwa perlakuan 1 ppm ion  Fe 2+ dan  variasi  pH  berpengaruh  terhadap  aktivitas  AH. Hasil tertinggi aktivitas AH dicapai pada konsentrasi ion Fe 2+ 1 ppm dan pH 7, yaitu sebesar 10,6909 U/mL.
Kata Kunci — Alkana hidroksilase , Aspergillus terreus , Kofaktor, Polietilen, Spektrofotometri.

## I. PENDAHULUAN
ENGGUNAAN  plastik  untuk  kebutuhan  sehari-hari semakin meningkat seiring dengan perkembangan zaman dan meningkatnya jumlah penduduk. Peningkatan penggunaan plastik yang terjadi tiap tahunnya mengakibatkan  limbah  yang  dihasilkan  juga  semakin meningkat, sehingga menyebabkan permasalahan lingkungan [1]. Salah satu jenis plastik yang banyak di produksi adalah jenis polietilen.
Polietilen  (PE)  merupakan  polimer  termoplastik  yang tersusun atas rantai hidrokarbon yang panjang [2], berwarna putih  yang  mempunyai  titik  leleh  bervariasi  antara  110 o - 137 o C dan umumnya polietilen tahan terhadap zat kimia [3]. Polietilen  sulit  didegradasi  karena  tersusun  atas  monomer alkana  yang  memiliki  ikatan  C-C  atau  C-R  yang  bersifat stabil  [4].  Berbagai  metode  yang  digunakan  dalam  proses pengolahan  limbah  sampah  plastik  polietilen  antara  lain pembakaran, daur ulang, dan biodegradasi [2]. Biodegradasi merupakan  proses  pemecahan  polimer,  baik  polimer  alami maupun sintetik oleh agen biologis seperti jamur dan bakteri [5].  Biodegradasi  dianggap  sebagai  strategi  yang  ramah lingkungan  untuk  pengelolaan  limbah  plastik  dan  dapat mengurangi  polusi  yang  dihasilkan  dari  metode  degradasi plastik secara konvensional [6].
Penelitian yang dilakukan oleh Kurniawati [7] menunjukkan bahwa, jamur hasil isolasi dari tanah mangrove Wonorejo memiliki kemampuan untuk mendegradasi plastik, salah  satunya  adalah A.  terreus .  Jamur A.  terreus tumbuh pada  suhu  30 0 -37 0 C  dan  rentang  pH  4-8  [8][9].  Jamur  ini diketahui  menghasilkan  enzim Alkana  hidroksilase (AH). AH  merupakan  salah  satu  enzim  yang  terlibat  dalam degradasi polietilen. Enzim ini mengkatalis pengenalan satu
atom  oksigen  yang  berasal  dari  molekul  oksigen  ke  dalam molekul substrat alkana [10].
AH dalam mendegradasi polimer alkana dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti pH medium dan kebutuhan logam Fe yang  merupakan  kofaktor  enzim  [11].  Kofaktor  merupakan senyawa  non-protein  yang  digunakan  untuk  aktivasi  enzim, yang pada umumnya terletak pada sisi aktif dari enzim. Selain itu  Fe  juga  dapat  berperan  sebagai  elektron  donor  atau elektron  aseptor.  Fe  di  lingkungan  pada  prinsipnya  sebagai unsur yang berada dalam dua kondisi bilangan oksidasi yaitu ferrous (Fe 2+ )  yang  dapat  berfungsi  sebagai  elektron  donor dan ferric (Fe 3+ )  sebagai  elektron  aseptor  [12].  Diketahui bahwa ion Fe 2+ merupakan mikronutrien. Beberapa penelitian tentang  degradasi  plastik  menggunakan  ion  Fe 2+ sebesar  1 ppm  dalam  medium  degradasi,  seperti  penelitian  yang dilakukan oleh Rohmah [13].  Selain itu ada faktor lain yang dapat  mempengaruhi  proses  degradasi  alkana  adalah  pH medium.  Menurut  Singh  [14], AH  memiliki  pH  optimum dalam  mendegradasi  alkana  pada  rentang  7-8.  Oleh  karena itu,  penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh konsentrasi 1 ppm ion Fe 2+ dan variasi pH terhadap aktivitas AH jamur A. terreus .

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Maret  sampai  Juni 2019  di  laboratorium  Mikrobiologi  dan  Bioteknologi, Departemen  Biologi,  Fakultas  Sains,  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya.

## B. Pembuatan Medium
Medium  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain medium Potato  Dextrose  Agar (PDA)  yang  digunakan sebagai subkultur jamur Aspergillus terreus , Potato Dextrose Broth (PDB)  yang  digunakan  sebagai  kultur  starter,  dan Minimal  Salt Medium (MSM)  yang  digunakan  sebagai medium  degradasi plastik.  Pada  pembuatan  medium  PDA, pertama-tama  ditimbang  PDA  bubuk  sebanyak  39  gr  dan dilarutkan  ke  dalam  1000  mL  aquades.  Selanjutnya dipanaskan  dan  dihomogenkan  menggunakan hot  plate magnetic stirrer selama 10 menit, dan diautoklaf pada suhu 121 o C  tekanan  1.5  atm  selama  15  menit  [15].  Kemudian medium  PDA  ditambahkan chloramphenicol sebanyak  100 mg/L. Chloramphenicol merupakan antibiotik yang digunakan  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri  pada medium  kultur  [16].  Medium  PDA  selanjutnya  dituang  ke dalam tabung reaksi dan didinginkan dalam keadaan miring ( slant  agar ).  Pada  pembuatan  medium  PDB,  ditimbang kentang  sebanyak  200  gram  dan  direbus  dalam  1000  ml aquades  selama  1  jam,  lalu  disaring  ekstraknya.  Ekstrak

## Pengaruh 1 ppm Ion Fe
2+ dan Variasi pH terhadap Aktivitas Alkana hidroksilase Jamur

## Aspergillus terreus
N. Syamsi, N. D. Kuswytasari, dan M. Shovitri Departemen Biologi, Fakultas Sains, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : kuswytasari@bio.its.ac.id
P
kentang ditambah dengan 20 gram dextosa dan dihomogenkan  dengan hot  plate  magnetic  stirrer .  Medium PDB diautoklaf pada suhu 121 O C tekanan 1,5 atm selama 15 menit  [17].  Medium  PDB  selanjutnya  dituang  ke  dalam Erlenmeyer sebanyak 4,5 mL. Medium MSM dibuat dengan melarutkan 3 gr Na 2 HPO 4 .7H 2 O ; 3 gr KH 2 PO 4 ; 0.5 gr NaCl ; 1 gr NH 4 Cl ; 0.5 gr MgSO 4 .7H 2 O ; 1  mg CaCl 2 ; 0.007% (w/v) yeast extract ; 0.003% (w/v) Bacto-peptone ; dan 1 mg FeSO 4 .7H 2 O  [18]  ke  dalam  1000  mL  aquades.  Selanjutnya medium  dipanaskan  dan  dihomogenkan  menggunakan hot plate  magnetic stirrer ,  dan  di  autoklaf  dengan  suhu  121 o C, tekanan 1.5 atm selama 15 menit. Medium MSM selanjutnya dituang ke dalam botol berukuran 200 mL sebanyak 45 mL.

## C. Pembuatan Starter
Isolat  yang  akan  di  subkultur  adalah  LM  1021 ( Aspergillus  terreus )  yang  merupakan  stok  koleksi Laboratorium Mikrobiologi  &  Bioteknologi,  Departemen Biologi,  Fakultas  Sains,  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember. Spora dari isolat LM 1021 diambil menggunakan jarum tanam tajam, dan di subkulturkan pada medium slant agar (PDA). Kultur di inkubasi selama 7 hari pada suhu ruang dan  dalam  kondisi  aerob  [19].  Kemudian  pembuatan  kultur starter  dimulai  dengan  perhitungan  jumlah  spora.  Kultur Isolat jamur yang berusia 7 hari ditambahkan aquades steril sebanyak  5  ml,  kemudian  dihomogenkan  menggunakan vortex.  Perhitungan  spora  jamur  dilakukan  dengan menggunakan  metode haemocytometer dengan  perbesaran 400x.  Kepadatan  kultur  harus  mencapai  10 6 spora/ml,  yang dihitung menggunakan persamaan 1 [20].
kepadatan spora = n x fp 1 400 x 80 x 0.1 x 1000 mm 2 1 mL (1)
Keterangan: n      : Jumlah sel yang dihitung fp     : faktor pengenceran
1/400  : luas kotak kecil
80     : jumlah kotak yang dihitung
0.1    : tinggi/kedalaman haemocytometer
Apabila jumlah spora dalam suspensi memiliki kepadatan lebih  dari  10 6 spora/mL,  maka  dilakukan  pengenceran melalui persamaan 2 [21].
M 1 V 1 = M 2 V 2 (2)
Keterangan:
M 1 : Konsentrasi suspensi spora > 10 6 spora/mL V 1 : Volume suspensi spora > 10 6 spora/mL M 2 : Konsentrasi suspensi spora = 10 6 spora/mL V 2 : Volume suspensi spora = 10 6 spora/mL
Suspensi  jamur  dengan  kepadatan  10 6 spora/mL  diambil sebanyak 0.5 mL dan dimasukkan ke dalam 4.5 mL medium PDB sehingga total volume menjadi 5 mL. Kultur diinkubasi selama  3  hari,  yang  merupakan  fase  ½  log  sesuai  dengan kurva pertumbuhan [13].

## D. Persiapan Sampel Uji
Plastik  uji  yang  digunakan  adalah  plastik  dari  jenis High Density  Polyethylene (HDPE).  Plastik  uji  dipotong  dengan ukuran 1  x  1  cm  sebanyak  20  lembar.  Potongan  plastik selanjutnya  disterilkan  menggunakan  etanol  70%  [22]. Sterilisasi  menggunakan  etanol  70%  dilakukan  dengan merendam  potongan  plastik  selama  kurang  lebih  30  menit dan  dikering  anginkan  sekaligus  dengan  di  UV  pada  LAF selama kurang lebih 30 menit [23].

## E. Biodegradasi Plastik
Biodegradasi  plastik  dilakukan  dengan  dua  perlakuan, yaitu  konsentrasi  FeSO 4 .7H 2 O  1  ppm  dan  pH  (6,  7,  8). Pengaturan perlakuan pH dapat dilakukan dengan HCl 0.1 M [24] dan NaOH 0.1M. Medium MSM dimasukkan ke dalam botol  gelas  yang  berukuran  200  mL  sebanyak  45  mL. Kemudian  di  sterilisasi  menggunakan  autoklaf  dengan tekanan  1.5  atm,  121 o C  selama  15  menit.  Selanjutnya, dilakukan  pengaturan  variasi  pH  6,  7,  8  dengan  HCL  0.1M dan  NaOH  0.1M.  Kemudian  medium  MSM  ditambahkan  5 mL  kultur  starter,  serta  ditambahkan  dengan  plastik  uji sebanyak  20  lembar  (1  x  1  cm)  dengan  dua  kali  ulangan. Kemudian  diinkubasi  selama  30  hari  dalam  keadaan  statis. Setelah  30  hari  akan  dilakukan  pengukuran  aktivitas  enzim Alkana hidroksilase .
F. Aktivitas Enzim Alkana hidroksilase
Pengukuran aktivitas Alkana hidroksilase dilakukan dalam 2 seri,  yaitu dengan penambahan NADH dan tanpa NADH. Pengukuran aktivitas Alkana hidroksilase dengan penambahan  NADH  dilakukan  berdasarkan  metode  Mishra & Singh [14]. Campuran reaksi terlihat pada Tabel 1. Reaksi dimulai dengan ditambahkannya heksadekan sebanyak 10 µL ke dalam campuran reaksi dan diinkubasi selama 15 menit.
Sedangkan  aktivitas Alkana  hidroksilase tanpa  NADH dilakukan  dengan  membuat  campuran  reaksi  yang  sama seperti  pada  Tabel  1  namun  tanpa  NADH,  dimana  total campuran  reaksi  1  mL  dengan  penambahan  aquabides. Aktivitas  enzim  diukur  berdasarkan  penurunan  absorbansi NADH  pada  spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang 340 nm [25][26].
Penurunan  absorbansi  NADH  didapat  dari  selisih  NADH awal  (Campuran  reaksi  Tabel  1.  yang  diinkubasi  selama  0 menit) dengan NADH akhir (Campuran reaksi Tabel 1. yang diinkubasi  selama  15  menit).  Satu  unit  aktivitas Alkana hidroksilase merupakan jumlah enzim dalam mengoksidasi 1 µmol NADH per menit [27]. Besarnya aktivitas enzim sama dengan U/mL enzim.
Tabel 1. Campuran reaksi aktivitas Alkana hidroksilase No Bahan Volume 1 Buffer Tris-HCl 20 mM 905µL 2 Buffer CHAPS 0.15% pH 7.8 1,5µL 3 NADH 0.1 mM 33,5µL 4 Crude enzim 50µL 5 Larutan heksadekan 1% 10µL Total Volume Larutan 1mL
Blanko  untuk  spektrofotometer  adalah:  Campuran  reaksi Tabel 1 menggunakan crude enzim yang berasal dari kultur yang mengandung FeSO 4 .7H 2 O 0 ppm ditambahkan aquades dan diinkubasi selama 0 menit

## G. Analisa Data dan Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak  lengkap (RAL) dengan 1 variabel yaitu pH. Masing-masing perlakuan diulang  sebanyak  dua  kali.  Analisa  data  aktivitas Alkana hidroksilase dilakukan dengan metode deskriptif kuantitatif.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Aktivitas Enzim Alkana hidroksilase
Penelitian ini menggunakan 2 metode pengukuran aktivitas Alkana  hidroksilase (AH)  yaitu,  dengan  dan  tanpa penambahan  NADH.  Hal  ini  bertujuan  untuk  mengetahui fungsi  dari  ion  Fe 2+ sebagai  kofaktor  atau  elektron  donor.
Hasil uji aktivitas AH dengan penambahan NADH dan tanpa penambahan  NADH  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Dari  hasil aktivitas  AH  dengan  penambahan  NADH,  terlihat  bahwa nilai tertinggi dicapai pada perlakuan konsentrasi 1 ppm ion Fe 2+ dan  pH  7  sebesar  10,6909  U/mL,  sedangkan  tanpa penambahan  NADH  hasil  tertinggi  dicapai  pada  perlakuan konsentrasi  1 ppm  ion  Fe 2+ dan pH 8 sebesar 4,9737 U/mL (Tabel 2.).
Tabel 2.
Perbandingan Aktivitas AH pada konsentrasi 1 ppm ion Fe 2+ dengan pH yang berbeda.
No Konsentrasi ion Fe 2+ pH Aktivitas AH (U/mL) NADH Tanpa NADH 1 1 ppm 6 7,1152 3,9030 2 7 10,6909 3,5394 3 8 4,8929 4,9737
Berdasarkan Tabel 2, aktivitas AH mengalami penurunan pada  penambahan  NADH,  tetapi  masih  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  aktivitas  AH  tanpa  NADH.  Hal  ini mengindikasikan bahwa perubahan pH yang lebih asam atau basa  dapat  mempengaruhi  aktivitas  AH  dan  ion  Fe 2+ digunakan sebagai kofaktor, didukung dengan nilai aktivitas AH  tanpa  penambahan  NADH  yang  tidak  berbeda  jauh. Meskipun  Madigan  [12]  menyatakan  bahwa  ion  Fe 2+ merupakan  elektron  donor,  namun  pada  hasil  aktivitas  AH menunjukkan  bahwa  ion  Fe 2+ tidak  digunakan  sebagai elektron donor, melainkan sebagai kofator. Diketahui bahwa ion  Fe 2+ digunakan  sebagai  elektron  donor  pada mikroorganisme  yang  dapat  mengoksidasi  ion  Fe 2+ ,  dengan ini  dapat  diindikasikan  bahwa  jamur A.  terreus tidak  dapat mengoksidasi  ion  Fe 2+ .  Selain  itu,  ion  Fe 2+ merupakan mikronutrien  yang  biasanya  bertindak  sebagai  kofaktor dengan  konsentrasi  tertentu.  Ketika  konsentrasi  ion  Fe 2+ mencapai tingkat tertentu atau berlebihan akan bersifat racun [28].  Menurut  Singh  [14],  dalam  proses  degradasi  plastik dipengaruhi  oleh  pH,  diketahui  bahwa  pH  optimum  untuk degradasi plastik oleh enzim AH adalah pH 7-8. Setiap enzim memiliki rentang pH optimum masing-masing, ketika adanya perubahan pH akan mempengaruhi konformasi dari sisi aktif enzim  dan  mengakibatkan  laju  reaksi  enzim  menjadi menurun  [29].  Interaksi  antara  ion  Fe 2+ dan  pH  diketahui bahwa ion Fe 2+ akan stabil pada keadaan pH asam, dan pada pH  netral  ion  Fe 2+ akan  teroksidasi  secara  spontan  pada keadaan oxic [12].

## IV. KESIMPULAN
Kosentrasi 1 ppm  ion Fe 2+ dan variasi pH dalam minimal salt  medium (MSM)  berpengaruh  terhadap  aktivitas Alkana hidroksilase (AH)  yang  dilakukan  oleh  jamur A.  terreus dalam  mendegradasi plastik HDPE.  Hasil tertinggi aktivitas AH dengan penambahan NADH dicapai pada konsentrasi  1 ppm  ion  Fe 2+ dan  pH  7,  yaitu  sebesar  10,6909  U/mL. Perubahan  pH  yang  lebih  asam  atau  basa,  aktivitas  AH semakin menurun.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih  kepada Kemenristekdikti yang telah memberikan  Beasiswa  Bidik  Misi  kepada  penulis  selama  4 tahun  dan  terima  kasih  kepada  Bapak  atau  Ibu  pengurus beasiswa YBAI 2017/2018.
DAFTAR PUSTAKA
[1] T.  Octavianda,  Asri,  and  L.  Lisdiana,  “Potensi  Isolat  Bakteri Pendegradasi Kenis Plastik Polietilen Oxo-Degradable dari Tanah TPA  Benowo  Surabaya,” Lentera  Bio ,  vol.  5,  no.  1,  pp.  32–35,
2016.
[2] M. Pangestu, A. Budiharjo, and M. I. Rukmi, “Isolasi Identifikasi 16S  sRNA  dan  Karakterisasi  Morfologi  Bakteri  Pendegradasi Plastik Polietilen (PE),” J. Biol. , vol. 5, no. 1, pp. 24–29, 2016.
[3] A. Rahmawati, “Pengaruh Penggunaan Plastik Polyethylene (PE) dan High Density Polyethylene (HDPE) pada Campuran Lataston- WC Terhadap Karakteristik Marshall,” J. Ilm. Semesta Tek. , vol. 18, no. 2, pp. 147–159, 2015.
[4] K.  Leja  and  G.  Lewandowicz,  “Polymer  Biodegradation  and Biodegradable Polimers,” Polish J. Environ. Study , vol. 19, no. 2, pp. 255–266, 2010.
[5] H.  Bhardwaj,  R.  Gupta,  and  A.  Tiwari,  “Microbial  Population Associated  With  Plastic  Degradation.  Open  Access  Scientific Reports,” Open Access Sci. Reports , vol. 1, no. 5, 2012.
[6] M.  El-Morsy,  M.  Hassan,  and  E.  Ahmed,  “Biodegradative Activities  of  Fungal  Isolates  from  Plastic  Contaminated  Soils,” Mycosphere , vol. 8, no. 8, pp. 1071–1087, 2017.
[7] R. Kurniawati, “Kapang Tanah Mangrove Wonorejo Pendegradasi Plastik,” Institut Teknologi Sepuluh Nopember, 2018.
[8] E.  Coppin,  D.  Robert,  A.  Sylvine,  and  P.  Marguerite,  “Mating Types  and  Sexual  Development  in  Filamentous  Ascomysetes,” Microbiol. Mol. Biol. Rev , vol. 61, no. 4, pp. 411–428, 1997.
[9] S. Pogger, M. Nowrousian, and U.  Kock, The  Mycota I Growth,
Differentation and Sexuality . Springer-Verlag  Berlin Heidelberg, 2006.
[10] E. Aliakbari, H. Tebyanian, M. Hassanshahian, and A. Kariminik, “Degradation of Alkanes in contaminated sites,” IJABBR ,  vol. 2, no. 5, pp. 1620–1637, 2014.
[11] S. Efendi, “Deteksi Gen serta Uji Aktivitas Enzim Katabolik pad Bacillus  subtilis  3KP  pada  Substrat  Hidrokarbon,”  Universitas Airlangga, 2016.
[12] T.  Madigan,  J.  M.  Martinko,  and  J.  Parker, Brock  Biology  of Microorganisms , 10th ed. Englewood Cliffs, New Jersey: Prentice Hall International Inc, 2002.
[13] M. Rohmah, “Degradasi Plastik oleh Isolat Jamur Wonorejo pada pH 5 dan 6; serta Suhu 250C dan 350C,” Surabaya, 2018.
[14] N. Singh, B.  Kumari, and S. Mirsha, “Microbial Degradation of Alkanes,” Environ. Sci. Eng. , 2012.
[15] Difco and BBL Team, Manual of Microbiological Culture Media , 2nd ed. New York: Becton, Dickinson and Company, 2009.
[16] S. Kumala and A. Pratiwi, “Efek Antimikroba dari Kapang Endofit Ranting  Tanaman  Biduri,” J.  Farm.  Indones. ,  vol.  7,  no.  2,  pp. 111–120, 2014.
[17] H. Ahmad and A. O. Eti, “Pengaruh pH, Penggoyangan Media, dan Penambahan  Serbuk  Gergaji  Terhadap  Pertumbuhan  Jamur Xylaria sp,” J. Silvikultur Trop. , vol. 4, no. 2, pp. 57–61, 2013.
[18] R. Maddela, L. Schalvenzi, M. Perez, C. Montero, and J. M. Gooty, “Efficiency of Indigenous Filamentous fungi For Biodegradation of Petroleum Hydrocarbon in Medium and Soil: Laboratory Study from Ecuador,” Bull. Environ. Contam. Toxicol. , 2015.
[19] M.  Maharani,  I.  R.  Nuniek,  and  P.  Slamet,  “Pengggunaan Beberapa  Medium  Semisintetik  Untuk  Produksi  Miselium  jamur Maitake (Grifola frondosa (Dickson:Fr.) S.F. Gray) Isolat Cianjur dan Ekstrak Kasarnya,” Scr. Biol. , vol. 1, no. 1, pp. 20–25, 2014.
[20] J. Chenoweth and S. P. Lorton, Animal Andrology : Theories and Applications . India: CAB IInternational, 2014.
[21] R. Chang, General Chemistry : The Essential Consept . New York: The McGraw-Hill Companies, 2008.
[22] S. Devi, R. Kannan, D. Nivas, K. Kannan, S. Chandru, and A. R. Antony,  “Biodegradation  of  HDPE  by  Aspergillus  spp.  from marine  ecosystem of  Gult  of Mannar, India,” Mar.  Pollut.  Bull. , vol. 96, pp. 32–40, 2015.
[23] L. Badriyah and M. Shovitri, “Biodegradasi Plastik Putih dalam Kolom  Winogradsky,” J.  Sains  dan  Seni  ITS ,  vol.  4,  no.  2,  pp. E50–E54, 2015.
[24] H.  Kheiralla,  M.  S.  E.  Said,  and  A.  Douaa,  “Optimization  Of Cultural  Conditions  For  Lignin  Peroxidase  Production  By Phanerochaete  chrysosporium  and  Pleurotus  ostreatus,” Acad.  J. Biotechnol. , vol. 1, no. 6, pp. 087–095, 2013.
[25] S.  Mishra  and  S.  N.  Singh,  “Microbial  degradation  of  n- hexadecane  in  mineral  salt  medium  as  mediated  by  degradative enzymes,” Bioresour Technol , vol. 111, pp. 148–154, 2012.
[26] N.  Jauhari,  S.  Mishra,  B.  Kumari,  and  S.  H.  Singh.,  “Bacteria- mediated aerobic degradation of hexacosane in vitro conditions,” Bioresour Technol , vol. 170, pp. 62–68, 2014.
[27] T.  Kadri et  al. ,  “Production  and  Characterization  of  Novel
Hydrocarbon Degrading Enzymes from Alcanivorax
borkumensis,” Int.  J.  Biol.  Macromol. ,  vol.  112,  pp.  230–240,
2018.
[28] T. Purbonegoro, “Pengaruh logam berat kadmium (Cd) terhadap
metabolime dan fotosintesis di laut,” Oseana ,  vol.  33,  no.  1,  pp. 25–31, 2008.
[29] A.  Illanes, Enzyme  Biocatalysis :  Principles  and  Applications .
Springer, 2008.