Abstrak —Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  tentang produksi  Polihidroksialkanoat  (PHA)  oleh  bakteri Ralstonia pickettii .  Sistem  fermentasi  yang  dilakukan  dengan  metode batch menggunakan  media  minimal  cair  dengan  glukosa sebagai  sumber  karbon.  Fermentasi  dilakukan  selama  68  jam pada  suhu  37 o C  dan  150  rpm.  PHA  yang  dihasilkan dikarakterisasi menggunakan Fourier Transform Infrared (FT- IR) untuk mengidentifikasi gugus fungsi. Sel bakteri dianalisis menggunakan Scanning  Electron  Microscopy (SEM)  untuk mengetahui  morfologi  permukaannya.  Hasil  penelitian  ini didapatkan  PHA  berbentuk  padatan  putih  sebanyak  14,53% berat sel kering. PHA yang didapatkan memiliki spektra FT-IR yang sesuai dengan spektra PHB komersial.
Kata kunci ─ Fermentasi; Bioplastik; PHA; Ralstonia pickettii

## I. PENDAHULUAN
NDUSTRI  polimer  akhir-akhir  ini  mengalami  peningkatan yang  sangat  drastis,  utamanya  digunakan  sebagai  bahan baku  plastik  sintetis.  Plastik  sintetis  memiliki  sifat  yang  kuat, ekonomis  dan  elastis  serta  dapat  digunakan  untuk  berbadai kebutuhan.  Akan  tetapi,  plastik  sintetis  juga  memiliki kelemahan  yakni  membutuhkan  waktu  cukup  lama  untuk didegradasi  oleh  alam.  Penggunaan  plastik  sintetis  yang berlebihan  akan  merusak  ekosistem  dikarenakan  menumpuk pada lapisan tanah [1].
Untuk  mengurangi  penggunaan  polimer  sintetis  beberapa cara  dilakukan  seperti  program  3R, reduce , reuse , recycle . Selain  itu  beberapa  bahan  polimer  alami  juga  mulai dikembangkan.  Polimer  alami  merupakan  plastik  yang  dapat mengalami  degradasi  lebih  cepat  dibandingkan  polimer sintetis.  Penggunaan  polimer  alami  dapat  dimodifikasi  secara fisik maupun kimia untuk memperbaiki sifat-sifatnya dan dapat didegradasi  bila  dibuang  ke  lingkungan  [2].  Salah  satu  jenis polimer  alami  yang  ramah  lingkungan  dan  dapat  didegradasi oleh mikroba yaitu polihidroksialkanoat (PHA).
Polihidroksialkanoat  atau  PHA  adalah  salah  satu  jenis bioplastik  yang  dihasilkan  dari  metabolisme  mikroba  yang memiliki  sifat  mirip  dengan  plastik  sintetis  dan  dapat dimodifikasi  sesuai  dengan  kebutuhan.  Selain  itu  plastik berbahan  PHA  dapat  terbiodegradasi  sempurna  oleh mikroba. PHA  terbentuk  dari  cadangan  karbon  dan  energi  intraseluler
yang  dihasilkan  oleh  beberapa  jenis  bakteri  sebagai  respon dari  kondisi  lingkungan  yang  tidak  seimbang  [3].  Bila dibandingkan  dengan  bioplastik  jenis  lain  sepertinya  protein, PHA memiliki kelebihan lain yaitu bersifat hidrofobik, resisten terhadap uap air dan permeabilitas oksigennya rendah. Dalam kehidupan sehari-hari PHA dapat diaplikasikan sebagai bahan coating (pelapis), kemasan, bahan sekali pakai serta keperluan operasi bedah seperti benang jahit, pembalut luka pemasangan tulang dan pembuluh darah.
Ralstonia merupakan  salah  satu  jenis  bakteri  yang  sedang banyak  digunakan  oleh  peneliti.  Saat  ini  terdapat  12  spesies Ralstonia yang  telah  teridentifikasi  termasuk Ralstonia pickettii ( Genomes Online Database , 2014). R. pickettii adalah salah  satu  spesies  dari  genus Ralstonia yang  dijumpai  pada daerah  tercemar  dan  oligotropik.  Berdasarkan  penelitan  yang pernah dilakukan, R. pickettii memiliki kemampuan mendegradasi  polutan  seperti  toluena  dan  trikloroetilena  hasil dari limbah industri. Selain itu, bakteri ini juga berkemampuan menghasilkan  PHA  yang  dimanfaatkan  sebagai  cadangan energi  tubuhnya  pada  kondisi  lingkungan  yang  minimum nutrisi [4] [5].
Untuk  melakukan  biosintesis  PHA  melalui  fermentasi dibutuhkan  media  serta  sumber  karbon  agar  bakteri  dapat berkembang dengan baik. Media pertumbuhan bakteri terdapat beberapa  jenis  dengan  komposisi  yang  berbeda-beda tergantung  kebutuhan  dari  jenis  bakteri  yang  digunakan. Sumber karbon yang digunakan juga bermacam-macam seperti glukosa,  fruktosa,  hemiselulosa,  gliserol  dan  lain-lain  [6]. Dalam  beberapa  penelitian  bakteri R.  picketii yang  telah dilakukan  sebelumnya,  media  yang  digunakan  seperti Nutrien Broth pada  jurnal  milik  Asranudin,  2014  menghasilkan  PHA 20%  per  bobot  biomassa  kering.  Sedangkan  nutrien  media yang mengandung yeast extract dan manitol pada jurnal milik Saito, 2006 menghasilkan PHA 40% per berat biomassa kering [7].
Telah  diketahui  bahwa beberapa bakteri dapat hidup dalam kondisi  yang  minimal  nutrisi  termasuk  bakteri R.  pickettii . Pada  penelitian  ini  digunakan  media  minimal  nutrisi  sebagai media tanam untuk mengetahui pertumbuhannya dalam kondisi minimal  dan  pengaruhnya  terhadap  produksi  PHA.  Dalam penelitian  ini  digunakan  glukosa  sebagai  sumber  karbon dimana  glukosa  merupakan  gula  yang  dapat  digunakan  dalam

## Studi Produksi Plastik PHA dengan Pengaruh Penggunaan Media Minimal Cair dan Glukosa oleh Ralstonia pickettii

## Putu Satwika Anggaswari Pujawati dan Refdinal Nawfa
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia e-mail : refnawfa@chem.its.ac.id
I
metabolisme  tubuhnya  yang  dapat  menghasilkan  produk primer  maupun  sekunder.  PHA  termasuk  dalam  produk sekunder  dari  metabolisme R.  pickettii .  Penggunaan  glukosa sebagai  sumber  karbon  dapat  mempengaruhi  hasil  dari bioplastik  yang  diproduksi  oleh  bakteri.  Berdasarkan penjelasan  tersebut  dalam  penelitian  ini  dilakukan  studi biosintesis  PHA  melalui  proses  fermentasi  bakteri R.  pickettii menggunakan media minimal dengan sumber karbon glukosa.

## II. METODELOGI PENELITIAN

## A. Pembuatan Media Cair
Media  cair  yang  digunakan  yaitu  media  minimal  dan Nutrien Broth . Media minimal cair yaitu campuran garam M9 yang  terdiri  dari  Na 2 HPO 4 .7H 2 O,  KH 2 PO 4 ,  NaCl,  NH 4 Cl, MgSO 4 , CaCl 2 , dan air destilat. Sebanyak 64g Na 2 HPO 4 .7H 2 O, 15g  KH 2 PO 4 ,  2,5g  NaCl,  dan  5,0g  NH 4 Cl  dimasukkan kedalam  1000  ml  air  destilat  kemudian  diaduk  hingga  larut. Selanjutnya  700  mL  air  destilat  dalam  labu  ukur  dimasukkan 200  mL  larutan  campuran  garam  M9,  2  mL  MgSO 4 1M,  100  L CaCl 2 1 M dan labu ukur ditambahkan air kembali sampai tanda batas. Sedangkan untuk media Nutrien Broth , ditimbang sebanyak 20g kemudian dilarutkan kedalam 1 liter aquades.

## B. Pembuatan Media Padat
Media padat yang digunakan yaitu Nutrien Agar dan media minimal  padat.  Untuk  media  minimal  padat  (agar)  dibuat dengan  14,3  mL  campuran  garam  M9  dalam  50  mL  air destilasi.  Setelah  itu  ditambahkan  143  L  MgSO 4 1M,  1,43 mL glukosa 3%, 7  L CaCl 2 1 M dan 0,75 gram agar kemudian diaduk selama beberapa menit. Setelah itu disterilisasi dengan autoclave dan  dituangkan  kedalam  plate.  Sedangkan  media Nutrien Agar , ditimbang 2g Nutrien Agar kemudian dilarutkan dalam  100  mL  aquades.  Setelah itu disterilisasi menggunakan autoclave dan diletakkan dalam plate

## C. Pertumbuhan Bakteri R. pickettii
Bakteri R.  pickettii diinokulasi  kedalam  cawan  petri  yang berisi Nutrien Agar dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.  Dilakukan  penumbuhan  bakteri  pada  media  minimal padat  dengan  menginokulasikan  bakteri R.  pickettii kedalam cawan  petri  yang  berisi  media  minimal  padat  dan  diinkubasi pada suhu 37 o C.
Satu ose bakteri dari hasil pembiakan media minimal padat diaktifkan  terlebih  dahulu  ke  dalam  25  mL  media  minimal cair.  Biakan  selanjutnya  dishaker  dengan  kecepatan  120  rpm selama  24  jam.  Kemudian  biakan  dipindahkan  ke  media minimal  cair  250  mL.  Biakan  bakteri  diambil  sebanyak  1  mL lalu diukur absorbansinya setiap 4 jam dengan spektrofotometer  UV-VIS  pada  =  600  nm.  Apabila  terjadi penurunan  absorbansi  maka  pengukuran  dihentikan.  Dibuat kurva hubungan absorbansi dengan fungsi waktu.

## D. Produksi PHA
Produksi PHA dari R. pickettii menggunakan media minimal cair  serta  glukosa  sebagai  sumber  karbon.  Sebanyak  10%
media  kultivasi  diambil  sebagai  prekultur  (  24  jam,  120  rpm) sebelum  ditumbuhkan  pada  media  besar  (250mL).  Glukosa sebanyak  20  mL  dengan  konsentrasi  3  mg/L  dimasukkan kedalam  media  kultivasi  sebagai  sumber  karbon.  Kultivasi dilakukan  selama  68  jam  dengan  kecepatan  150  rpm  (sesuai dengan kurva pertumbuhan yang memasuki fase stasioner).

## E. Pemisahan PHA
Biomassa  yang  didapat  dipisahkan  dari  cairan  kultivasi dengan  sentifugasi  dengan  kecepatan  3000  rpm.  Sel  yang diperoleh  lalu  dicuci  dengan  akuades  kemudian  sel dikeringkan  dengan freeze  dryer .  Sel  yang  telah  kering ditimbang  kemudian  dilakukan  ekstraksi  menggunakan metanol:  kloroform  dengan  perbandingan  1:2.  Sebanyak  0,5 gram  sel  dicampurkan  dengan  50  mL  campuran  metanol: kloroform  dimasukkan  kedalam  labu  bundar  kemudian direfluks pada suhu 50 o C selama 6 jam. Setelah proses refluks selesai,  hasil  disaring  dan  diuapkan  filtratnya  dengan rotary eveporator .
F. Karakterisasi Sampel
Karakterisasi  sampel  menggunakan Fourier  Transform Infrared untuk  mengetahui  kandungan  PHA  melalui pendekatan  gugus  fungsi.  Selain  itu,  dilakukan  karakterisasi menggunakan Scanning Electron Microscopy untuk mengetahui morfologi sel R. pickettii yang mengandung PHA.

## III. H A SIL DAN PEMBAHASAN

## A. Pertumbuhan Bakteri R.pickettii
Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini yaitu bakteri R. picketti yang  diperoleh  dari  NBRC  ( Nation  Institute  of Technology and Evaluation 2-5-8 Kasuza-Kamatari Kisarazu- shi  Chiba,  Jepang).  Bakteri  ini  bersifat  autotrof  sehingga membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya.  Media pertumbuhan R.  pickettii yaitu  media  agar  (padat)  dan  media cair.  Penanaman  pada  media  agar  bertujuan  untuk meregenerasi  sel  serta  mengetahui  apakah  bakteri  dapat tumbuh  pada  media  tersebut.  Sedangkan  penanaman  pada pedia  cair  bertujuan  untuk  menggumpulkan  biomassa  yang nantinya digunakan pada proses selanjutnya.
Bakteri R. pickettii terlebih dahulu ditumbuhkan pada media minimal  padat  (agar).  Sebelum  digunakan,  media  minimal padat  dilakukan  sterilisasi  terlebih  dahulu  agar  tidak  terjadi kontaminasi yang dapat mengganggu pertumbuhan dari bakteri R.  pickettii. Pada  saat  diinokulasikan  kedalam  media  minimal padat dan diinkubasi, setelah 24 jam lebih akan muncul koloni putih seperti pada Gambar 1.
(A) (B)
Gambar  1.  Hasil  pertumbuhan  bakteri R.  pickettii pada  media  agar (A) media minimal padat (B) Nutrien Agar
Pada Gambar 1 (A) menunjukkan bahwa bakteri R. pickettii dapat tumbuh dengan baik pada media minimal padat. Hal ini ditunjukkan  pada  hasil  koloni  yang  berwarna  putih  pada permukaan  agar.  Jika  dibandingkan  dengan  Gambar  1  (B), koloni  putih  dihasilkan  lebih  tebal  pada  media Nutrien  Agar dibandingkan  pada  media  minimal  padat.  Ini  disebabkan kandungan  nutrisi  pada Nutrien  Agar lebih  kompleks dibandingkan  pada  media  minimal  padat  sehingga  sel  bakteri yang  dihasilkan  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  media minimal padat.

## B. Produksi Biomassa
Biomassa  bakteri R.  pickettii diproduksi  menggunakan metode  fermentasi batch .  Metode  fermentasi batch yakni semua nutrisi dicampur langsung kedalam media pertumbuhan. Proses  produksi  biomassa R.  pickettii diambil  10%  media kultivasi sebagai prekultur yang diinkubasi selama 24 jam. Hal ini  bertujuan untuk mengadaptasi bakteri terhadap lingkungan media yang digunakan. Proses inkubasi dilakukan menggunakan shaker  incubator yang  bertujuan  untuk memelihara  bakteri  pada  jam  tertentu  dan  menjaga  kadar oksigen  tetap  ada  di  lingkungan  media.  Bakteri R.  pickettii merupakan  bakteri  aerob  sehingga  keberadaan  oksigen  sangat diperlukan  pada  pertumbuhannya  [4].  Prekultur  kemudian dipindah kedalam media kultivasi dengan volume 250 mL dan ditambahkan  glukosa  5  mL  dengan  konsentrasi  3  mg/L. Inkubasi dilakukan selama 68 jam dengan kecepatan 150 rpm. Waktu  inkubasi  disesuaikan  dengan  waktu  stationer  bakteri karena  pada  waktu  stationer  ini  jumlah  sel  yang  hidup mencapai  keadaan  maksimum.  Pada  proses  ini  didapatkan media  berubah  warna  dari  tidak  berwarna  menjadi  keruh (Gambar  2).  Hal  ini  menandakan  bahwa  terdapat  sel  didalam media.
Gambar  2.  Media  hasil  kultivasi  sebelum  inkubasi  dan  setelah inkubasi.
Hasil  inkubasi  kemudian  di  sentrifugasi  untuk  memisahkan
antara  media  dengan  sel.  Teknik  sentrifugasi  yaitu  teknik pemisahan  yang  berdasarkan  pada  perbedaan  berat  molekul dari  partikel.  Partikel  dengan  berat  molekul  lebih  besar  akan terkumpul  dibawah  tabung.  Hasil  yang  diperoleh  berupa endapan  berwarna  putih  dengan  cairan  supernatan  yang  tidak berwarna.  Endapan  putih  berupa  sel  basah  yang  didapat sebanyak 0,1608 gram per liter media. Hasil yang didapat pada penelitian  ini  berbeda  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Asranudin  (2014)  yaitu  0,56  g/L.  Hal  ini  disebabkan  karena media  yang  digunakan  berbeda  dan  kandungan  nutrisi  yang berbeda.  Penelitian  sebelumnya  menggunakan Nutrien  Broth yang didalamnya terkandung ekstrak daging dan ekstrak yeast sehingga sel yang dihasilkan lebih banyak.

## C. Pemisahan dan Pemurnian PHA
Pemisahan  PHA  dari  sel  dilakukan  dengan  metode  refluk yaitu  mengekstrak  sel  menggunakan  pelarut  tertentu  sehingga PHA  dapat  keluar  dari  sel.  Biomassa  kering  sebanyak  0,2937 gram  dihaluskan  terlebih  dahulu  dengan  mortar.  Ini  bertujuan untuk memperluas permukaan dari sel. Pelarut yang digunakan yaitu metanol:kloroform (1:2 v/v). Ekstraksi dilakukan selama 6  jam  pada  suhu  50 o C  kemudian  dipisahkan  antara  filtrat  dan residunya.  Filtrat  yang  didapatkan  kemudian  dievaporasi sehingga  didapatkan  padatan  PHA  yang  berupa  serbuk berwarna putih seperti pada Gambar 3.
Gambar 3. Padatan PHA hasil evaporasi.
PHA  yang  didapat  sebanyak  0,0427  gram  dengan  persen rendemen  sebesar 14,53 % berat sel kering. Hasil ini berbeda dengan  penelitian  sebelumnya  dengan  rendemen  sebesar  20% (Asranudin,  2014)  dan  30%  (Saito,  Takahashi,  &  Terumi, 2006).  Berbeda  pula  pada  penelitian  milik  Martha  dkk  [8], pada  penelitian ini media yang digunakan sama tetapi metode yang digunakan berbeda dan terdapat penambahan asam asetat dan  asam  propionate  dihasilkan  PHA  32,7%.  Penambahan asam  asetat  dan  asam  propionat  ini  yang  mempengaruhi banyaknya hasil PHA yang didapatkan. Hasil yang berbeda ini dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  yaitu  teknik  isolasi, bahan  pengekstrak  dan  jenis  substrat  yang  digunakan.  Hasil PHA  yang  didapatkan  kemudian  dicuci  dengan  n-heksana untuk memurnikan dari lemak yang ikut terekstrak.

## D. Karakterisasi Sampel
PHA  yang  telah  dimurnikan  kemudian  dikarakterisasi menggunakan  FT-IR.  Tujuan  dari  penggunaan  FT-IR  adalah untuk mengetahui gugus fungsi yang terkandung dalam sampel sehingga dapat   diperkirakan  struktur  molekulnya.  Hasil spektra FT-IR dari PHA hasil produksi seperti pada Gambar 4.
Pada  spektra  FT-IR  PHA  hasil  bakteri R.  picketti dapat dilihat  bahwa  terdapat  4  puncak  yang  dominan.  Puncak  yang didapatkan  dari  spektra  sesuai  dengan  spektra  IR  PHB komersil  yang  telah  dilaporkan  oleh  Galo  dkk  (2006).  Gugus fungsi  yang  didapatkan  pada  spektra  sesuai  dengan  gugus fungsi  pada  struktur  PHA  yang  memiliki  gugus  fungsi  C=O karbonil, C-O ester, C-H metil dan –OH. Berikut adalah tabel perbandingan  hasil  serapan  puncak  PHB  komersial  dengan hasil biosintesis.
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 % T ra nsmi tta n Bilangan Gelombang (cm -1 )
Gambar 4. Spektra FT-IR PHA R. pickettii dalam media minimal cair dengan substrat glukosa
Tabel 1. Tabel perbandingan puncak serapan FT-IR hasil R. pickettii
dan PHB komersial. Gugus Fungsi Bilangan Gelombang (cm -1 ) PHA R. picketti PHB komersial C-O-C 1168 1054 C=O ester 1737 1726 CH 2 dan CH 3 2852 dan 2924 2933 dan 2984 -OH 3429 3440
Untuk  dapat  melihat  morfologi  material  yang  didapat dilakukan pengamatan menggunakan SEM. Pada penelitian ini SEM  digunakan  untuk  mengamati  sel R.  pickettii yang menggandung  PHA  dan  yang  tidak  menggandung  PHA. Sampel  yang  digunakan  berupa  sel  bakteri  yang  sebelumnya telah dikeringkan menggunakan metode freezedry.
(a)
(b)
Gambar  5.  Hasil  Pengamatan  menggunakan  SEM  sel R.  pickettii (a) sel  kering  mengandung  PHA  (b)  sel  kering  setelah lisis.
Pada  Gambar  5  (a)  menunjukkan  bahwa  biomassa  sel mengandung  PHA  yang  ditunjukkan  dengan  adanya  granula
berwarna  putih.  Setelah  proses  ektraksi,  PHA  akan  terekstrak keluar  dari  sel  yang  menyebabkan  struktur  sel  mengalami perubahan  dan  jumlah  granula  putih  berkurang  seperti  pada Gambar 5 (b).

## IV. KESIMPULAN
Adapun kesimpulan yang didapat dari penelitian ini yaitu:
1) PHA yang didapat berupa padatan berwarna putih.
2) Penggunaan media minimal cair dan glukosa mempengaruhi  jumlah  hasil  produksi  PHA  yang dihasilkan.
3) PHA  yang  didapatkan  sebesar  14,53%  berat  sel  kering lebih  sedikit  dibandingkan  menggunakan  media  lain seperti  media Nutrien  Broth 20%  berat  sel  kering (Asranudin  &  Putra,  2014),  media  yang  mengandung yeast  extract dan  manittol  40%  berat  sel  kering  (Saito, Takanashi,  &  Terumi,  2006)  dan  media  minimal  dengan penambahan asam asetat dan asam propionat 32,7% berat sel kering (Aznury, Setiadi, & Pancoro, 2010)

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  menyampaikan  ucapan  terima  kasih  kepada  dosen pembimbing  Drs.  Refdinal  Nawfa,  M.S.  dan  Prof.  Dr.  Drs. Surya Rosa Putra, MS. Penulis juga mengucapkan terima kasih atas  semua  doa,  dukungan  dan  bantuan  yang  telah  diberikan kepada penulis selama proses pengerjaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Asranudin,  &  Putra,  S.  R.  (2014).  Efek  Penambahan  PEG  400  Pada Plastik  PHA  yang  Diproduksi  dari Ralstonia  pickettii . Prosiding Seminar Nasional Kimia (pp. 90-102). Surabaya: Jurusan Kimia FMIPA Universitas Negeri Surabaya.
[2] Syamsu,  K.,  Hartoto,  L.,  Fauzi,  A.  M.,  &  dkk.  (2007).  Peran  PEG  400 Dalam  Pembuatan  Lembaran  Bioplastik  Polihodroksialkanoat  Yang Dihasilkan Oleh Ralstonia eutropha Dari Substrat Hidrolisat Pati Sagu. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 63-68.
[3] Atifah,  N.,  Syamsu,  K.,  &  Suryani,  A.  (2007).  Kajian  Fermentasi Bioplastik  Poli-(3-Hidroksialkanoat)  (PHA)  Oleh Ralstonia  eutropha Menggunakan  Sumber  Karbon  Hidrolisat  Pati  Sagu. Jurnak  Teknologi Pertanian vol. 8 no. 3 , 160-171.
[4] M.P.Ryan,  J.  P.  (2007). Ralstonia  pickettii in  Environmental Biotechnology:  Potential  and  Applications. Journal  of  Applied Microbiology , 754-764.
[5] Ryan,  M.,  Pembroke,  J.,  &  Adley,  C.  (2007). Ralstonia  Pickettii in Enviromental  Biotechnology:  Potential  and  Application. Journal  of
Applied Microbiology , 754-764. [6] Kim,  E.-J.,  &  Kim,  K.-J.  (2014).  Crystal  Structure  and  Biochemical Characterization of PhaA from Ralstonia eatropha , a polyhydroxyalkanoate-Producing Bacterium. Biochemical and Biophysical Research Communication , 124-129.
[7] Saito,  M.  T.  (2006).  Characterizaton  of  Two  3-Hydroxybutyrate Dehydrogenase  in  Poly(3-Hydroxybutyrate)-Degradable  Bacterium, Ralstonia pickettii T1. Journal of Bioscience and Bioengineering , 501- 507.
[8] Aznury,  M.,  Setiadi,  T.,  &  Pancoro,  A.  (2010).  Pengaruh  Sumber Karbon  Terhadap  Produksi  Bioplastik  Polihidroksialkaoat  (PHA) Dengan Ralstonia eutropha . Jurnal Teknik Kimia Indonesia , 28-32.