Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## EFEK EKSTRAK DAUN GAMBIR ( Uncaria Gambir Roxb) TERHADAP TINGKAT STRESS OKSIDTIF DAN EKSPRESI SIRTUIN 3 PADA HIPOKAMPUS MENCIT BETINA
MODEL PENUAAN YANG DIINDUKSI D-GALAKTOSA
Inda Meirani H Sinaga, 1 Mutiara Indah Sari, 2 Muhammad Ichwan 3

## MAGISTER BIOMEDIK, FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA Jl. DOKTER MANSYUR NO.05, PADANG BULAN, MEDAN SUMATERA UTARA e-mail : indamhs@yahoo.com
DOI : https://doi.org/10.35451/jfm.v3i1.473

## Abstract
The aging process must be experienced by all living things, the body’s tissues will not be able to maintain its function so that pathological conditions occur. Some  things  can  cause  aging,  Free  radical  factors  are  external  and  internal factors that can trigger aging. Induce of d-galactose continuously one of the factors that can increase oxidative stress. This study was design to assess the effect of gambir leaf extract on oxidative stress and expression of the sirtuin 3 gene  in  the  hippocampus  of  female  mice  induced  intraperitoneally  by  d- galactose 150 mg/kgbb. Researchers conducted a post test only control group study with a sample of 24 female mice aged 10 - 12 weeks with the inclusion criteria  an  average  body  weight  of  25-35  grams,  obtained  from  the  same breeding place, maintained at the same place and time and never as research material. Mice were divided into 4 groups with 6 mice each , group (C) female mice  induced  only  d-galactose  150  mg  /  kg  and in  sonde  aquabidest 0,1%/body weight, mice induced by d-galactose and sonde gambir leaf extract at a dose of 100 mg / kg bw group (C1), group (C2) 200 mg/kgbw, and 400 mg/kgbw group (C3). Blood samples were collected to determine the increase in  oxidative  stress  levels  of  malondealdehyde  (MDA)  through spectrophotometry, and hippocampal tissue collected for PCR method so that the expression of the sirtuin 3 gene can be seen. Increased levels of MDA are associated with increased oxidative stress. This study reported the results of MDA  levels  were  not  significant  (  p  value  <0.05).  The  results  of  the  PCR reported an increase in expression 2 times higher than the control at a dose of gambier leaf extract 200 mg / kgbw Keywords:D-Galactose, Malondealdehid,Sirtuin 3,Cathechin.
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## 1. PENDAHULUAN
Penuaan  terjadi  akibat  hilangnya integritas  fisiologis  secara  progresif yang akhirnya menyebabkan kerusakan dan  gangguan  fungsi  organ  tubuh sehingga  terjadi  penurunan  kualitas hidup.  Terdapat  sembilan  tanda  umum dari  penuaan  pada  mamalia,  yakni; ketidak  stabilan  genom,  atrisi  telomer, perubahan epigenetik, hilangnya proteostasis,  deregulasi  penginderaan nutrisi, disfungsi mitokondria,  penuaan seluler,  kelelahan  sel  punca  dan perubahan  komunikasi  antar  sel. Penyakit  neurodegenerative,  seperti Alzheimer maupun Parkinson dan masih banyak  lagi  merupakan  salah  satu akibat  dari  gangguan  fungsi tersebut (López et al., 2013).
Berdasarkan  data penduduk, tahun 2017 jumlah penduduk usia lansia  di Indonesia diperkirakan 23,66  juta  jiwa (9,03%). Pada tahun 2020 akan terjadi peningkatan hingga menjadi 27,08 juta, pada  prediksi  pada  tahun  2025 jumlahnya  menjadi  33,69  juta,  tahun 2030  sebanyak  40,95  juta  dan  pada tahun  2035  menjadi    48,19  juta (Kesehatan and Indonesia, 2017).
Stress  oksidatif  adalah  keadaan dalam  proses  metabolisme  sel dimana peningkatan produksi radikal bebas dan ROS yang melebihi antioksidan (Marius et al,. 2010).
Seiring  dengan  peningkatan  jumlah penduduk  yang  pada  masanya  akan memasuki  usia  lanjut,  dan  secara fisiologis  akan  mengalami  proses penuaan otak.
Stres
oksidatif, peroksidasi lipid, disfungsi mitokondria, penurunan tingkat neurotransmiter dan kelebihan  produksi  beta  amiloid  (Aβ) menjadi  mediator  utama  terjadinya penuaan otak dan gangguan neurologis terkait  usia (Sadigh-eteghad  et  al.,
2017). Kondisi  ini  menyebabkan produktifitas  dan  kemandirian  lansia menurun.  Jika  penurunan  kemampuan
ini  dapat  diperlambat,  maka  masa produktifitas  dan  kualitas  hidup  lansia juga  akan  meningkat  (Blondell,  et al.,2014).
Penuaan  dini disebabkan  oleh beberapa faktor internal dan eksternal. Faktor internal juga bisa berupa faktor kondisi kejiwaan, penyakit turunan dan daya  tahan  tubuh. Faktor internal merupakan proses alami pada manusia, sehingga keberadaannya sulit dihindari, yang  memicu  terjadinya perubahan hormonal  dan  tingkat  stres. Untuk faktor  eksternal dapat  melibatkan paparan sinar  matahari,  asap  rokok, konsumsi  minuman  alkohol yang berlebihan, diet yang buruk, dan radikal bebas. Radikal  bebas  juga  dapat dihasilkan  dari  produk  metabolisme tubuh  dan  juga  dari  beberapa  faktor eksternal.
Radikal bebas bersifat sangat reaktif dan cenderung bereaksi dengan molekul lain  terutama  lipid  membrane,  protein, dan  DNA,  sehingga  dapat  merubah struktur dan
fungsinya, yang menyebabkan berbagai penyakit degeneratif
hingga menyebabkan kematian sel. Mitokondria sebagai pusat daya  seluler  dan  melakukan  banyak fungsi  biokimia  mulai  dari  produksi energi juga menghasilkan radikal bebas hingga  berlanjut  pada  kematian  sel yang terprogram
(Nunnari
and Suomalainen, 2012).
Mitokondria  merupakan  sumber  dan target  utama  pembuatan  ROS  yang merupakan  produk  sampingan  dari proses  rantai  transport  electron. Elektron  yang  dihasilkan  berasal  dari Nicotinamida  Adenosin  dinucleotide hydrogen (NADH) pada kompleks I dan Flavin  Adenine  Dinucleotide  Hidrogen (FADH)  pada  kompleks  III.  Rantai transport  elektron  pada  mitokondria memainkan  peran terhadap  produksi Adenosin Trifosfat (ATP). Dalam proses pembentukan ATP, Mitokondria
membutuhkan  85%  oksigen (Ames,  et
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
al., 1993). Diperkirakan bahwa 0,2-2% oksigen diambil oleh sel lalu diubah oleh mitokondria  menjadi  ROS  melalui produksi  anion  superoksida  (O2●¯  ). ROS primer yang dihasilkan mitokondria adalah  (O2●¯  )  lalu  diubah  menjadi H2O2 oleh superoxida dismutase (SOD). H2O2  dipecah  menjadi  air  (polar)  oleh glutathione  peroxidase  atau  katalase (Paradies et al., 2011). Setiap ROS yang terbentuk  akan memulai  suatu  reaksi berantai  dan  akan terus  berlanjut sampai  ROS  itu  dihilangkan oleh  ROS yang lainnya atau sistem
antioksidannya.
Reactive oxygen species merupakan oksidator  kuat  dan  sangat  reaktif berikatan  dengan  molekul  disekitarnya sehingga  dapat  merusak    sel  dengan mengoksidasi hampir semua biomolekul termasuk  protein,  DNA  (baik inti  dan mitokondria),  lipid  dan  karbohidrat (Valko et al., 2007).
Radikal bebas yang berlebihan akan mengakibatkan kerusakan  komponen seluler  secara  permanen  sehingga terjadi kematian sel  melalui  jalur apoptosis  intrinsik pada mitokondria, keadaan  ini  akan memicu  kerusakan DNA  mitokondria, sehingga  terjadi disfungsi, dan  peningkatan  apoptosis sel. Peningkatan apoptosis sel tentunya berhubungan  dengan  perombakan  sel dan  pemendekan  telomer - ujung  DNA yang  membatasi  jumlah  mitosis  sel. Peningkatan jumlah telomer yang hilang karena produksi  ROS yang  tidak seimbang  menjadi salah  satu  faktor dalam  proses  penuaan  (Wang  et  al., 2013)
D-galaktosa banyak digunakan dalam beberapa penelitian untuk model penuaan  pada  hewan  coba.  Induksi  D- galaktosa menyebabkan stress oksidatif pada berbagai jaringan dengan meningkatnya  produksi  ROS  dan  AGEs yang juga terjadi pada penuaan normal Penelitian  model  penuaan  dengan pemberian  d-galaktosa  dapat  juga
digunakan  untuk  mempelajari  penuaan pada otak. Hal ini merupakan alternatif yang efektif untuk mempercepat proses penuaan (Sadigh et al, 2017).
Penurunan  fungsi  otak,  seperti demensia dan gangguan kognitif dapat disebabkan karena
disfungsi mitokondria (Ali et al., 2015).
Gangguan  respons  seluler  di hipokampus ditandai dengan penurunan viabilitas,  peningkatan  mortalitas,  dan pemendekan akson neuron pada bagian tanduk  ammon  atau  cornu  ammonis (Rosenzweig and Barnes, 2003).
Enzim  sirtuin  adalah  keluarga  dari tujuh deasetilase protein yaitu sirtuin 1 hingga sirtuin 7,  Enzim sirtuins berada dalam  kompartemen  yang  berbeda  di dalam
sel, dimana aktivitas enzimatiknya  membutuhkan  kofaktor nicotinamide adenine dinucleotide (NAD +) (Sidorova et al, 2018). Enzim  sirtuin  3  berada pada mitokondria dan berfungsi sebagai deasetilase protein NAD + -
dependen  yang  menargetkan  protein histone  dan  non-histone.  Sirtuin  3 diidentifikasi untuk menargetkan protein  yang  menurunkan  kadar  ROS yang  timbul  sebagai  akibat  dari peningkatan  oksidasi  asam  lemak. Sirtuin 3 secara langsung menargetkan superoksida dismutase 2 (SOD2) untuk aktivitas antioksidannya (Iwahara et al., 2012). Ekspresi yang berlebihan dari sirtuin 3    akan  menekan  produksi  ROS, sehingga  akan  mencegah  kematian neuron (Ansari et al., 2017).
Akibat dari timbulnya peroksidasi lipid  pada  rantai  asam  lemak  di membran  sel    akan  terbentuk  suatu produk marker, salah satunya malondialdehyde (MDA) yang kadarnya relatif  lebih  stabil.  MDA  merupakan produk  akhir  peroksidasi  lemak  tak jenuh jamak (asam arakhidonat) dalam tubuh  oleh  radikal  bebas.  Peningkatan kadar MDA dalam jaringan dan plasma
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
darah,  menjadi  ukuran  dimana  terjadi peningkatan radikal bebas
dan penurunan  antioksidan  dalam  tubuh (Kedokteran and Udayana, 2018).
Pada  keadaan  stress  oksidatif  yang tinggi,  akan  terjadi  peningkatan  kadar MDA  serum  secara  signifikan,  namun bila  keadaan  stress  oksidatif  teratasi, tidak  akan  terjadi  peningkatan  kadar MDA (Talarowska et al., 2012)
Penelitian tentang penggunaan bahan-bahan  alami  yang  memiliki  efek sebagai antioksidan sedang berkembang pesat saat ini, selain lebih aman  penggunaan  antioksidan  sintesis sudah dibatasi oleh pemerintah.
Gambir merupakan komoditi berupa rempah
yang biasa dikonsumsi
bersamaan dengan daun sirih.  Ekstraks dari daun gambir (Uncaria Gambir Roxb) yang  mengandung  senyawa  polifenol adalah  katekin,  berperan  sebagai senyawa  antimikroba  dan  antioksidan (Ariyanti and Aditya, 2016).
Berdasarkan  latar  belakang  diatas peneliti tertarik untuk mengetahui efek ekstrak  daun  gambir terhadap  stress oksidatif  pada  hewan  mencit  model penuaan  yang  diinduksi  d-galaktosa dengan  mengukur  kadar  MDA  dan ekspresi  sirtuin  3  pada  hipokampus. Model  penuaan  dengan  pemberian  d- galaktosa menjadi alternatif yang efektif untuk  dapat  mempercepat  proses penuaan.

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian ini dirancang menggunakan jenis penelitian
eksperimental  dalam  bentuk  in  vivo dengan desain penelitian post test only control group (Dahlan, 2013).
Pada  penelitian  ini,  peneliti  ingin mengetahui  efek  ekstrak  daun  gambir terhadap  kadar  MDA  hewan  coba penuaan  yang  diinduksi  d-galaktosa serta  hubungannya  dengan  ekspresi sirtuin 3 pada hipokampus, selanjutnya dilakukan  pengukuran  variable  setelah
pemberian  perlakuan  pada  kelompok eksperimen.
Sample  yang  digunakan sebanyak 24  ekor  mencit  betina sesuai  dengan kriteria inklusi yaitu mencit betina yang berusia  10-12  minggu  dengan  berat badan rata-rata 25-35  gram, diperoleh dari  tempat  pembiakan  yang  sama, dipelihara pada tempat dan waktu yang sama dan belum  pernah sebagai bahan penelitian. Sample akan dibagi menjadi 4  group,  masing-masing  group terdiri dari  6  ekor  mencit  di,ana  masing- masing akan  mendapat  perlakuan kontrol,induksi d-galaktosa tanpa Penelitian  dilaksanakan  setelah mendapat  persetujuan  Komisi  Etik Penelitian  FMIPA  Universitas  Sumatera Utara.  Pelaksanaan  penelitian  ini berlangsung selama 6 minggu.
2.1 pengukuran MDA kadar  MDA  diukur  dari  hasil sample serum dengan menggunakan Thyobarbituric Acid (TBA) dan dibaca pada alat spektrofotometri 2.2 Isolasi RNA Isolsi RNA dengan menggunakan Kit  Tiangen  Cat  No.  419, dan dibaca hasil pada nanophotometer 2.3 Ekspresi Sirtuin 3 Menggunakan  sample  jaringan hipokampus  mencit  betina  dan Ssofast Ssofast Evagreen® supermix qPCR universal master mix 200 µ. 2.4 Analysis statistic
Data  di  catat  dan  di  tampilkan dalam  bentuk  rata-rata  dan standart  deviasi,  dimana  uji –T tidak  berpasangan  digunakan untuk ukuran level MDA.
Uji  normalitas  dan  homogenitas dengan  uji  annova (ρ-value ≥ 0.05) digunakan  untuk  melihat ekspresi  sirtuin  3.  Hasil  uji statistik  diambil  pada  tingkat signifikan  5% (ρ-value  =  0.05)
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
jika  p ≤  0.05 dianggap signifikan.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Hasil
3.1.1 Perubahan berat badan Berat  badan  (g)  rata-rata  berat badan  mencit  betina  yang digunakan dalam  penelitian  ini  dianalisa  sebelum dan  sesudah  perlakuan. Tujuannya adalah untuk  memantau  perubahan berat badan mencit betina sebelum dan sesudah  diberikan  perlakuan  yang terkait dengan takaran pakan standart, pemberian galaktosa dan ekstrak daun gambir.  Rata-rata  berat  badan  mencit betina  sebelum  dilakukan  intervensi berkisar  antara  26,20  g – 27,20  g. Berdasarkan uji Kolmogorov - Smirnov tidak  ada  perbedaan  yang  bermakna berat  badan  mencit  betina  antar perlakuan sebelum dilakuan intrevensi. Sedangkan setelah dilakukan intervensi selama 6 minggu,  rata-rata berat badan mencit betina kelompok
kontrol meningkat  berkisar  27,20  g - 33,20  g dengan menggunakan uji Kolmogorov – Smirnov.
Dari  tabel 1  hasil  uji  normalitas dengan  menggunakan  Kolmogorov - Smirnov  didapati  adanya  data  tidak terdistrbusi  normal  pada  kelompok kontrol  di  awal  penelitian  (C)  (P= 0,0468)  dan  diakhir  penelitian  juga didapati data tidak terdistribusi normal pada kelompok perlakuan (C4)
(P=0,0005).
Dengan demikian untuk uji hipotesis selanjutnya  kami  menggunakan  uji multivariate  yang  non  parametrik (Kruskal -Wallis).
Tabel 1. Uji  normalitas  terhadap  berat badan mencit betina (g)
Kon trol C 100 C 200 C 400 Awal pen eliti an Nilai median (min- max) 27 (26 - 30) 26 (25- 28) 28 (25 - 28) 28 (25- 28) Nilai Mean (±SD) 27, 20 ± 1,6 43 26,2 0 ± 1,30 4 26, 60 ± 4,5 17 26,6 0 ± 1,14 0 Nilai *P 0,0 468 >0,1 00 >0, 100 >0,1 00 Ak Hir Nilai median (min- max) 33 (3- 35) 28 (25- 31) 29 (25 30) 28 (28- 29) Nilai Mean (±SD) 33, 20 ± 1,9 24 27,6 0 ± 2,30 2 28 ± 2,3 45 28,2 0 ± 0,44 72 Nilai *P >0, 100 >0,1 00 >0, 100 >0,0 005 Seli sih (∆) Nilai median (min- max) 6 (5- 7) 2 (0- 3) 1 (0- 2) 0 (0- 4) Nilai Mean 6± 1 1,4± 1,11 4 1,4 ±0, 89 1,6± 1,51 Nilai *p >0, 100 >0,1 00 0,0 46 >0,1 00
Dari table 1 dijumpai kenaikan berat badan  pada  semua  kelompok  setelah diberikan  perlakuan.  Perbedaan  berat badan  awal  dan  akhir  perlakuan ditampilkan  pada  tabel 2  dengan menggunakan  uji  multivariate  non parametric  kruskal-Wallis  dilanjutkan dengan  uji  Dunn  dan  didapati  adanya kenaikan  berat badan  yang  bermakna pada  kelompok  kontrol  (p<0,05) dibanding dengan kelompok perlakuan. Dari  tabel 2  pada  pengamatan  dari selisih  berat  badan  sebelum  dan sesudah  perlakuan,  di  dapati  kenaikan berat  badan  pada  semua  kelompok. Rerata kenaikan berat badan pada awal hingga  akhir  penelitian  pada  kelompok kontrol  lebih  tinggi  dibandingkan
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
kelompok  yang  diberikan  perlakuan ekstrak daun gambir. Terdapat
perbedaan  yang  signifikan  antara kelompok  kontrol  dan  kelompok perlakuan (p=0,0111).
Tabel 2.  Kenaikan  berat  badan  mencit setelah diberikan perlakuan KELOMPOK Rerata kenaikan BB *P KONTROL (C) 6 ± 1
0,0111 C100 (C1) 1,4  ± 1,14 C200 (C2) 1,4  ± 0,8944 C400 (C4) 1,6  ± 1,517
*Uji anova non parametrik Kruskall Wallis
Uji normalitas untuk data kadar MDA dari  seluruh  perlakuan  dilakukan dengan menggunakan uji Shapiro-Willk. Didapati  bahwa  data  terdistribusi normal.  Kemudian  dilakukan  analisis multivariate  dengan  menggunakan  uji anova  untuk  melihat  perbedaan  antar kelompok  dapat  dilihat  pada  table  3, didapati P > 0,05.
Table 3. Hasil rerata kadar MDA mencit betina setelah perlakuan. Kelompok Kadar MDA (nmol/ml) Rat a-rata ± SD *P Control 13,68 ± 5,858 0,8911 C100 15,45  ± 8,082 C200 13,15  ± 4,420 C400 15,15  ± 2,738 *one way anova
Kuantitas  mRNA  dalam  sel  merupakan parameter jumlah gen yang terekspresi. Untuk  menganalisa  tingkat  ekspresi gen,  cDNA  yang  telah  disintesis  dari mRNA diuji
secara
kuantitatif menggunakan  RT-PCR. Pada  tabel
dibawah ini memberikan gambaran nilai CT(  cyle  threshold  )  dengan  metode Livak. Nilai CT didapat dari jumlah siklus pada proses RT-PCR yang berpotongan dengan  garis  threshold.  Hasil  data seluruh perlakuan dilakukan
uji normalitas  dengan  metode    Shapiro- Willk  test.  Didapati  bahwa  data terdistribusi  normal  sehingga  dapat dilakukan  analisis  multivariate  dengan menggunakan uji Annova untuk melihat perbedaan  antar  kelompok.  Didapati nilai p tidak signifikan , p > 0,05 (p = 0,7203).
Tabel 4. Rerata  nilai  CT  SIRT3 mencit betina setelah perlakuan
Kelompok perlakuan ∆CT SiRT3 Rata- rata ± SD
*p Kontrol
6,512 ±
0,4137 0,7203
C100 7,653 ±1,471 C200 5,497  ± 1,378 C400 6,025  ± 3,681 Ekspresi  gen  SIRT3 dianalisis dengan membandingkan nilai CT (cycle threshold)
gen target dengan housekeeping  gen  sebagai  nilai  CT. Untuk  mendapatkan  tingkat  ekspresi gen  target  relative  terhadap  control maka  dicari  fold  change  dengan menggunakan  rumus  Livak.  Ekspresi gen relative
dianalisis
dengan menggunakan referensi gen (beta aktin) berdasarkan persamaan:
R= 2 -∆∆CT
2 -(CT target gen – CT reference gene) , dan dianalisis secara kualitatif.
Hasil  dari  data  dengan  uji  Shapiro menunjukkan bahwa pemberian ekstrak daun gambir dengan dengan dosis 200 mg/kgbb  secara  oral  menunjukkan
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
adanya  peningkatan  ekspresi  SIRT3 dibandingkan kelompok lainnya.
3.2. PEMBAHASAN
Pada  kelompok  kontrol  mengalami kenaikan yang  signifikan (p<0,05).  Hal ini  sesuai  dengan  hasil    penelitian (Chinedu et al., 2018), yang mendapati terjadinya  kenaikan  berat  badan berkaitan  dengan  pertambahan  usia.
Dimana pemberian D-galaktosa 150mg/kgbb pada penelitian ini bertujuan untuk induksi penuaan. Dalam hal ini pemberian D-galaktosa
secara  terus  menerus mengakibatkan terakumulasinya galaktosa
dalam jaringan  ,  dengan  pemberian  ekstrak daun  gambir  dapat  menekan  kenaikan bb  pada  mencit  betina  yang  diinduksi penuaan  dengan  d-galaktosa.  Dimana ekstrak  daun  gambir  kandungan utamanya adalah katekin, yang merupakan  senyawa  metabolit  skunder turunan  flavonoid  yang  memiliki aktivitas  sebagai  antiobesitas  dan antihiperlipidemia  (Kobayashi  et  al.,
2011)
Tingkat  stress  oksidatif    kelompok perlakuan (C2) didapati kadar MDA lebih rendah  dari  kadar  MDA  kontrol.  Pada konsentrasi    yang  tinggi,  aktivitas  dari antioksidan berubah menjadi prooksidan sehingga  menghasilkan  pembentukan radikal  anion  superoksida  dan  ROS lainnya (Kadji, et al., 2013)
Dari  hasil  data  ekspresi  SIRT3
dengan
menggunakan
analisis
kuantitatif  real  time  PCR  secara  umum menunjukkan  bahwa  konsentrasi  gen SIRT3 pada kelompok C2 lebih tinggi di bandingkan kelompok kontrol. Peningkatan  ekspresi  gen  SIRT3 tersebut
menunjukkan
akumulasi peningkatan enzim antioksidan, terbukti dengan meningkatnya ekspresi gen SIRT 3  pada  kelompok  C2  pemberian  dosis ekstrak  daun  gambir  200  mg/kgbb. Maryadhi
et al., 2014
dalam penelitiannya  terhadap  hewan  coba
mencit,  juga  menemukan  bahwa minuman  gambir  dengan    dosis  200 mg/kgbb merupakan dosis yang efektif untuk meningkatkan daya ingat mencit (p<0,05). Dengan  demikian  kelompok ekstrak  gambir  dosis  200  mg/kgbb dapat mengurangi kerusakan miotokondria hipokampus
karena gambir  mempunyai  kandungan  katekin yang dapat menembus sawar darah otak dan dapat menghambat kenaikan stress oksidatif  yang  disebabkan  induksi  D- galaktosa.

## 4. KESIMPULAN
Pemberian  D-galaktosa  selama  6 minggu berturut-turut dapat meningkatkan  berat  badan  secara signifikan. Pemberian  ekstrak  daun gambir dengan dosis 100mg/kgbb, 200 mg/kgbb,  dan  400  mg/kgbb  selama  6 minggu berturut-turut, mampu menghambat  kenaikan  berat  badan pada  mencit  betina  yang  diinduksi d- galaktosa selama 6 minggu.
Pemberian  ekstrak  katekin  gambir dengan dosis  100  mg/kgbb,  200 mg/kgbb,  dan  400  mg/kgbb  selama  6 minggu tidak efektif
dalam menghambat  proses  lipid  peroksidasi pada  mencit  betina  yang  diinduksi  d- galaktosa.
Pemberian  ekstrak  daun  gambir dengan dosis 200 mg/kgbb lebih efektif dalam meningkatkan ekspresi SIRT 3.
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## DAFTARPUSTAKA
Ames,  B.  N.,  Shigenaga,  M.  K.  and Hagen,  T.  M.  (1993)  ‘Oxidants, antioxidants, and the degenerative diseases  of  aging.’,  Proceedings  of the  National  Academy  of  Sciences, 90(17),  pp.  7915–7922.  doi: 10.1073/pnas.90.17.7915.
Ansari, A. et al. (2017) ‘Aging Cell’, pp. 4–16. doi: 10.1111/acel.12538. Ariyanti, P. R. and Aditya, M. (2016) ‘Manfaat  Gambir  (  Uncaria  gambir Roxb  )  sebagai  Antioksidan’, Majority, 5(3), pp. 129–133.
Ariyanti,  P.  R.  and  Aditya,  M.  (2016) ‘Manfaat  Gambir  (  Uncaria  gambir Roxb  )  sebagai  Antioksidan’, Majority, 5(3), pp. 129–133.
Blondell, S. J., Hammersley-mather, R. and  Veerman,  J.  L.  (2014)  ‘Does physical  activity  prevent  cognitive decline and dementia ?: A systematic  review  and  meta- analysis  of  longitudinal  studies’, 14(1), pp. 1–12. doi: 10.1186/1471-2458-14-510. Dahlan,  M.  Sopiyudin  (2013)  ‘Besar sampel dalam penelitian kedokteran  dan  kesehatan  (seri evidence based medicine)’, seri 2.
Jakarta: Arkans
Iwahara,  T.  et  al.  (2012)  ‘SIRT3 Functions  in  the  Nucleus  in  the Control  of  Stress-Related  Gene Expression’,  32(24),  pp.  5022– 5034.  doi:  10.1128/MCB.00822-
12. Kedokteran, F. and Udayana, U. (2018) ‘Kadar malondialdehid serum tinggi meningkatkan faktor risiko gangguan  kognitif  pada  penderita hiv dengan haart Kementrian  kesehatan  RI.  Gambaran Kesehatan Lanjut Usia di Indonesia. Bul jendela Data dan Inf Kesehat. 2013.
Lopez, 0. et al. (2013) ‘the hallmark of aging, volume 153, issue 6, p1194-
1217. doi: 10.1016/j.cell.2013.05.039. López-otín, C. et al. (2013) ‘Europe PMC Funders Group The Hallmarks of Aging’, 153(6), pp. 1194–1217. doi: 10.1016/j.cell.2013.05.039.
Marius-Daniel R, Stelian S, Dragomir C. The  effect  of  acute  physical exercise  on the  antioxidant  status of the skeletal and cardiac muscle in  the  Wistar  rat.  Rom  Biotechnol Lett. 2010;15(SUPPL.3):56-61.
Nunnari, J. and Suomalainen, A. (2012) ‘Review Mitochondria : In Sickness and  in  Health’,  Cell.  Elsevier  Inc., 148(6),  pp.  1145–1159.  doi: 10.1016/j.cell.2012.02.035.
Paradies, G. et al. (2011) ‘Mitochondrial dysfunction in brain aging: Role of oxidative  stress  and  cardiolipin’, Neurochemistry International. Elsevier  Ltd,  58(4),  pp.  447–457. doi: 10.1016/j.neuint.2010.12.016. Sidorova-darmos, E., Sommer, R. and Eubanks, J. H. (2018) ‘The Role of SIRT3  in  the  Brain  Under Physiological and Pathological Conditions’,  12(July),  pp.  1–16. doi: 10.3389/fncel.2018.00196.
Sadigh-eteghad,  S.  et  al. (2017) ‘Correction :  D -galactose-induced brain  ageing  model :  A  systematic review  and  meta-analysis  on cognitive  outcomes  and  oxidative stress indices’, p. 190328
Talarowska, M. et al. (2012) ‘Malondialdehyde plasma concentration correlates with declarative and working memory in patients  with  recurrent  depressive disorder’,  pp.  5359–5366.  doi: 10.1007/s11033-011-1335-8.
Valko,  M.  et  al.  (2007)  ‘Free  radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease’,  International  Journal  of Biochemistry  and  Cell  Biology,
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 20 September 2020 :: Accepted: 06 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
39(1), pp. 44–84. doi: 10.1016/j.biocel.2006.07.001. Wang,  C.  H.  et  al.  (2013)  ‘Oxidative stress response elicited by mitochondrial dysfunction:
Implication in the pathophysiology of aging’, Experimental Biology and Medicine,  238(5),  pp.  450–460. doi: 10.1177/1535370213493069.