Vol. 11 No. 2, Hlm. 377-386, August 2019
p-ISSN         : 2087-9423
http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnalikt
e-ISSN         : 2620-309X

## ISOLASI DAN PENAPISAN BAKTERI PENGHASIL ENZIM PROTEASE, SELULASE, DAN AMILASE DARI SEDIMEN DAN SALURAN PENCERNAAN TERIPANG HITAM Holothuria atra

## ISOLATION AND SCREENING OF PROTEASE, CELLULOSE, AND AMYLASE ENZYME SECRETION BACTERIA FROM SEDIMENT AND GUT OF SEA
CUCUMBER Holothuria atra
Dien Arista Anggorowati*, Hendra Munandar dan Lisa Fajar Indriana Balai Bio Industri Laut – LIPI Jl.Raya Senggigi, Teluk Kodek, Malaka, Lombok Utara, NTB 83352 *E-mail: dien003@lipi.go.id

## ABSTRACT
Sea  cucumber  Holothuria  atra  has  potential  value  as  raw  material  for  pharmacy  industry  that  has been  cultivated  in  Research  Development  Division for  Marine  Bio  Industry  –  Indonesian  Institute  of Sciences (LIPI) since 2016. Disease infections and decreased survival rate are one of the obstacles in in  this  type  of  sea  cucumber  cultivation  activities  especially  during  broodstock  management.  One effort  to  overcome  this  is  the  use  of  probiotic  bacteria.  This  research  aims  to  isolate  and  select bacteria that produce protease, cellulase, and amylase enzymes as candidates for probiotic bacteria in the sediment and digestive tract of sea cucumber H. atra. The growth of bacteria from sediments and digestive tract on selective media which added cellulose, starch, and casein substrates was carried out to  see  the  potential  of  bacteria  capable  of  producing  cellulase,  amylase,  and  protease  enzymes through the hydrolysis process. The two bacterial isolates that had the highest cellulase and amylase enzyme activity were obtained, namely SSe9 isolates with Hydrolysis Capacity 7 mm index and SAm6 isolates with hydrolysis index Capacity 6.6 mm. These results indicate that the two bacterial isolates have the potential to be further developed into probiotic bacteria.
Keywords : Holothuria atra, enzyme activity, probiotic bacteria

## ABSTRAK
Teripang  hitam Holothuria  atra yang  memiliki  nilai  potensial  sebagai  bahan  baku  pada  industri farmasi telah dibudidayakan di Balai Bio Industri Laut  – LIPI sejak tahun 2016. Infeksi penyakit dan penurunan  sintasan  hidup  menjadi  salah  satu  kendala  dalam  kegiatan  budidaya  teripang  jenis  ini terutama  pada  saat  pemeliharaan  induk.  Salah  satu  upaya  untuk  mengatasi  hal  tersebut  adalah penggunaan  bakteri  probiotik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan  isolasi  dan  seleksi  bakteri yang  menghasilkan  enzim  protease,  selulase,  dan  amilase  sebagai  kandidat  bakteri  probiotik  pada sedimen  dan  saluran  pencernaan  teripang H.  atra .  Penumbuhan  bakteri  dari  sedimen  dan  saluran pencernaan pada media selektif  yang ditambahkan substrat selulosa, pati, dan kasein  dilakukan untuk melihat  potensi  bakteri  yang  mampu  menghasilkan  enzim  selulase,  amilase,  dan  protease  melalui proses hidrolisis. Dua isolat bakteri yang memiliki aktivitas enzim selulase dan amilase tertinggi telah diperoleh, yaitu isolat SSe9 dengan indeks Hydrolysis Capacity 7 mm dan isolat SAm6 dengan indeks Hydrolysis  Capacity 6,6  mm.  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  kedua  isolat  bakteri  tersebut berpotensi untuk dapat dikembangkan lebih lanjut menjadi bakteri probiotik.
Kata kunci : Holothuria atra , aktivitas enzim, bakteri probiotik

## I. PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  pada  biota  yang dibudidayakan merupakan salah satu kendala
dalam  kegiatan  akuakultur.  Antibiotik  dan pestisida  yang  telah  digunakan  secara  luas untuk  mengontrol  penyakit,  terungkap  dapat menimbulkan efek negatif berupa meningkat-
nya  strain  bakteri  yang  resisten  terhadap antibiotik.  Penggunaan  probiotik  sebagai upaya  pencegahan  penyakit  yang  ramah lingkungan  dan  berkelanjutan  telah  banyak digunakan untuk  mengatasi  masalah tersebut (Newal-Fyzul et  al .,  2014;  Pandiyan et al ., 2013). Probiotik adalah produk suplementasi yang  terdiri  dari  sel  utuh  mikroba  dan memiliki  sifat  menguntungkan  terhadap inang (Hapsari et al ., 2016) dimana probiotik juga  digunakan  sebagai  perlakuan  yang ramah lingkungan untuk mengontrol penyakit,  meningkatkan  imunitas  spesifik dan non-spesifik, menstimulasi pertumbuhan, memperbaiki sintesa vitamin dan pencernaan, atau memperbaiki kualitas air di lingkungan  budidaya  (Chi et al .,  2014). Umumnya  sumber  kultur  bakteri  probiotik berasal  dari  lingkungan  akuatik,  yaitu  air atau  pasir,  kelenjar  mukus,  dan  khususnya dari  saluran  pencernaan  biota  (Newal-Fyzul et  al .,  2014).  Bakteri  probiotik  yang  berasal dari saluran pencernaan memiliki kemampuan  dalam  memproduksi  enzim ekstraseluler  yang  berfungsi  dalam  proses pencernaan  misalnya  amilase,  protease, lipase dan selulase. Enzim tersebut menghidrolisis  nutrien  pada  pakan  dengan memecah  atau  memotong  ikatan  panjang rantai  karbohidrat,  protein  dan  lemak  (Putra dan  Hermawan,  2014). Holothuria  atra merupakan  salah  satu  jenis  teripang  yang dieksploitasi dan  mempunyai  nilai komersial walaupun  rendah  (Kinch et  al. ,  2008;  Choo, 2008).  Studi  awal  di  bidang  farmakologi menunjukkan bahwa ekstrak H. atra merupakan sumber potensial metabolit bioaktif yang dapat digunakan dalam industri farmasi,  selain  itu  mempunyai  kandungan antioksidan yang efektif seperti anti- inflamasi, analgesik, antipiretik, dan aktivitas imunomodulator (Dhinakaran  and  Lipton, 2014); produk alami yang dapat meringankan toksisitas  hepatorenal  (Dakrory et  al. ,  2015) dan  juga  mengandung  senyawa  bioaktif seperti flavonoid, komponen fenolik, terpenoid, saponin, alkaloid ( Dhinakaran and Lipton, 2014). Selain itu, beberapa penelitian
menunjukkan  bahwa  teripang  jenis  ini memiliki  zat  bioaktif  sebagai  anti  oksidan dan  anti  bakteri  (Oktaviani et  al .,  2015). H. atra memiliki  kemampuan  menumbuhkan kembali  bagian  tubuhnya  yang  terputus dengan  cepat  setelah  melakukan  reproduksi secara  aseksual  melalui fission (Purwati et al. , 2009).  Potensi H. atra yang  besar dalam industri  farmasi  mendorong  Balai  Bio Industri  Laut  (BBIL)  LIPI  untuk  melakukan kegiatan  budidaya  teripang  jenis  ini  sejak tahun 2016.
Salah satu permasalahan dalam budidaya  teripang H.  atra yang  dihadapi selama  ini  adalah  menurunnya  tingkat kelangsungan  hidup  pada  saat  pemeliharaan induk. Induk H. atra dipelihara di laboratorium  untuk  kemudian  diseleksi sebelum dilakukan pemijahan untuk menghasilkan  larva  dan  anakan.  Pengkajian terhadap  peningkatan  sistem  kekebalan penyakit  pada  teripang H.  atra yang dibudidayakan  di  BBIL  LIPI  belum  pernah dilakukan sebelumnya apabila sistem kekebalan  teripang H.  atra meningkat  maka dapat  menekan  munculnya  penyakit  dan meningkatkan  tingkat  kelangsungan  hidup sehingga mampu mendukung kegiatan budidaya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk melakukan  isolasi  dan  seleksi  bakteri  yang menghasilkan  enzim  protease,  selulase,  dan amilase  sebagai  kandidat  bakteri  probiotik pada  sedimen  dan  saluran  pencernaan teripang H. atra .

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1. Teripang Hitam Holoturia atra
Penelitian  ini  menggunakan  sepuluh ekor  teripang  hitam  ( Holothuria  atra )  yang dikoleksi  dari  perairan  Pantai  Medana, Lombok  Utara,  Nusa  Tenggara  Barat. Perairan  tersebut  merupakan  habitat  asli teripang H.  atra dan  menjadi  salah  satu lokasi  potensial  keberadaan  induk  untuk mendukung  kegiatan  budidaya.  Sampel teripang H.  atra di packing ke  dalam  wadah plastik yang berisi sedikit air laut, sedangkan
sampel  sedimen  diambil  dan  disimpan  ke dalam  botol  plastik  steril  volume  50  mL. Selanjutnya dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi,  BBIL  LIPI  untuk  dilakukan preparasi sampel dan isolasi bakteri.

## 2.2. Isolasi Bakteri
Sebanyak  1  g  sampel  sedimen ditambahkan  dalam  9  mL  air  laut  steril sebagai pengenceran. Sampel saluran pencernaan  teripang  diambil  secara  aseptik dengan  menggunakan dissecting  set dan dibilas  dengan  larutan  alkohol  70  %, kemudian  digerus  dengan  menggunakan mortar. Selanjutnya, 1 g sampel ditambah ke dalam 9  mL air  laut steril  dan dihomogenasi menggunakan Vortex (TAITEC). Kedua jenis sampel  yang  telah  ditambahkan  dalam  9  mL air  laut  steril  diencerkan  secara  bertingkat dari  10 -1 hingga  10 -5 .  Diambil  sebanyak  100 µL untuk di-inokulasikan pada media Marine Agar dan  diinkubasi  suhu  30 o C  selama  24- 48 jam.

## 2.2. Seleksi Bakteri
Bakteri  yang  tumbuh  pada Marine Agar dipisahkan  berdasarkan  ciri  morfologi yang  berbeda  dan  dipindahkan  pada  media selektif Cellulose  Congo  Red  Agar (CCRA), Skim  Milk  Agar ,  dan Starch  Agar untuk mengetahui  aktivitas  isolat  bakteri  penghasil enzim selulase, protease, dan amilase.

## 2.2.1   Uji Aktivitas Selulase
Media selektif kultur bakteri Cellulose  Congo  Red  Agar (CCRA)  dengan beberapa modifikasi menurut Charania (2009)  dan  Supriyatna et  al. (2012)  dalam 100  mL  menggunakan  komposisi  bahan (MgSO 4 .7H 2 O  0,05  g;  K 2 HPO 4 0,5  g;  NaCl 0,23  g; Yeast  Extract 0,245  g;  CMC  1  g; Agar  1,5  g;  Congo  red  0,02  g),  digunakan untuk  membiakkan  bakteri  yang  akan  diuji hidrolisis selulosa (Gupta et al., 2012). Isolat bakteri  diisolasikan  pada  media  tersebut  dan diinkubasi  selama  24-48  jam  dalam  suhu  30 °C  (MEMMERT  INB200).  Zona  bening ( clear zone ) yang muncul di sekeliling koloni
bakteri menunjukkan terjadinya proses hidrolisis  selulosa,  sebaliknya  jika  tidak terjadi  proses  hidrolisis  maka  tidak  akan terlihat  zona  bening  di  sekitar  koloni  yang tumbuh. Isolat bakteri yang membentuk zona bening  ditandai  dan  dikultur  ulang  pada media Nutrient  Agar (NA)  +  3%  ( w / v )  NaCl untuk dimurnikan.

## 2.2.2.  Uji Aktivitas Amilase
Media  selektif  kultur  bakteri  yang digunakan mengandung pati dengan komposisi Nutrient  Agar 2,8  g  dan Starch 1%  ( w / v )  dalam  100  mL.  Isolat  bakteri  yang akan diuji diinokulasikan pada media selektif tersebut  sebanyak  satu  mata  ose  biakan  dan diinkubasi  selama  24-48  jam  dalam  suhu  30 °C  (MEMMERT  INB200).  Zona  bening ( clear zone ) yang muncul di sekeliling koloni bakteri menunjukkan terjadinya proses hidrolisis  amilum,  sebaliknya  jika  proses hidrolisis  tidak  terjadi  maka  tidak  akan terlihat  zona  bening  di  sekitar  koloni  yang tumbuh. Isolat bakteri yang membentuk zona bening  dipisahkan  dan  dikultur  ulang  pada media Nutrient  Agar (NA)  +  3%  ( w / v )  NaCl untuk dimurnikan dan digunakan lebih lanjut.

## 2.2.3.   Uji Aktivitas Protease
Media  selektif  yang  digunakan  untuk melihat  kemampuan  bakteri  dalam  meng- hidrolisis  protein  dari  susu,  dalam  100  mL media agar  mengandung Nutrient Agar 2,8 g dan  media Skim  Milk  Agar 5,15  g.  Isolat bakteri  yang  ditumbuhkan  pada  media selektif selanjutnya diinkubasi  selama  24–48 jam pada suhu 30 °C (MEMMERT INB200). Biakan bakteri  yang tumbuh dan membentuk zona  bening  di  sekitar  koloni,  selanjutnya dipisahkan  dan  dimurnikan  dengan  metode quadrant streak (Triyanto et al ., 2009). Isolat murni  disimpan  pada  media Nutrient  Agar (NA) + 3% ( w / v ) NaCl untuk digunakan lebih lanjut.

## 2.2.4.   Uji Hydrolysis Capacity Index
Setiap  isolat  bakteri  yang  dapat menghasilkan  zona  bening  diinokulasikan
pada  media selektif Skim Milk Agar , CCRA, dan Starch Agar sebanyak  masing-masing satu  ose  dan  diinkubasi  pada  suhu  30  °C (MEMMERT  INB200)  selama  tujuh  hari. Perhitungan  Indeks Hydrolysis  Capacity yang  diukur  pada  hari  ketujuh  pengamatan zona  bening  untuk  mengetahui  tingkat kemampuan  masing-masing  biakan  bakteri dalam menghidrolisis substrat.
Rasio  zona  bening  yang  dihasilkan  selama tujuh  hari  pengamatan  (Gupta  and  Samant , 2012):
𝐻𝑦𝑑𝑟𝑜𝑙𝑦𝑠𝑖𝑠 𝑐𝑎𝑝𝑎𝑐𝑖𝑡𝑦 (𝐻𝐶) = 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑍𝑜𝑛𝑎 𝐵𝑒𝑛𝑖𝑛𝑔 (𝑚𝑚) 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 (𝑚𝑚) ………..……… (1)

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Isolasi Bakteri
Konsentrasi  bakteri  yang  diperoleh dari  sampel  sedimen  3x10 7 CFU/g  dan saluran  pencernaan  1,8x10 7 CFU/g  di- temukan 35  isolat  bakteri  dengan  ciri morfologi berbeda (Tabel 1) yang terdiri dari 14  isolat  berasal  dari  saluran  pencernaan teripang H.  atra sedangkan 21  isolat  lainnya berasal  dari  sedimen.  Rendahnya  jumlah isolat  bakteri  yang  berbeda  secara  morfologi dari  dalam  saluran  pencernaan  diduga  salah satunya  disebabkan  oleh  kondisi  mikro habitat  saluran  pencernaan  teripang  tersebut. Hal     tersebut  sesuai    dengan   hasil    dari
penelitian Gao et al. (2014) yang menunjukkan indikasi keanekaragaman komposisi bakteri dalam sedimen lebih tinggi dibandingkan  yang ditemukan dalam saluran pencernaan  teripang.  Perbedaan  jumlah isolat-isolat  bakteri  secara  morfologi  yang didapatkan dari sedimen dan saluran pencernaan  memiliki  tiga  kemungkinan:  1) pemilihan makanan oleh teripang; 2) reproduksi mikroba spesifik di dalam saluran pencernaan; dan 3) mikroflora yang menempel  pada  dinding  saluran  pencernaan (Gao et  al .,  2014).  Perbedaan  tersebut  juga ditemukan  oleh  Ward-Rainey et  al. (1996), menyatakan  bahwa  jumlah  bakteri  yang dapat  ditumbuhkan  pada  media  kultur Marine Agar dari sampel saluran pencernaan teripang H.  atra lebih  rendah  daripada  yang diperoleh  dari  sampel  sedimen.  Sebaliknya, hasil  berbeda  ditunjukkan  ketika  digunakan metode penghitungan secara langsung dengan epiflourescence microscopy (Deming and  Colwell,  1982)  dimana  populasi  bakteri meningkat  di  dalam  saluran  pencernaan teripang hitam dibandingkan dalam sedimen. Hal ini dapat disebabkan oleh satu atau lebih dari  tiga  sumber  yang  memungkinkan  yaitu 1)  bakteri  yang  tersisa  dari  sedimen  yang melewati  pencernaan,  2)  bakteri  dari  air  laut yang  difilter  ke  dalam  saluran  pencernaan, dan  3)  jumlah  mikroflora  yang  menempel pada  dinding  saluran  pencernaan  (Ward- Rainey et al ., 1996).
Tabel 1. Ciri-ciri isolat bakteri yang diisolasi dari sedimen dan saluran pencernaan teripang hitam pada media Marine Agar (MA) dengan suhu 30 °C.
Sampel Kode Isolat Warna Karakteristik Optik Bentuk Elevasi Margin Permukaan Saluran pencernaan GAm1 putih translucent circular  umbonate entire Halus GSe1 putih transparan circular  umbonate entire Halus
GAm2 putih translucent irregular  umbonate lobate Halus
GPr1 krem translucent circular  umbonate entire Halus GPr2 putih opaque irregular flat undulate Kasar
GSe2 putih transparan circular convex entire Halus
GSe3 krem transparan circular convex entire Halus
GAm4 putih opaque irregular  umbonate lobate Berkerut
Sampel Kode Isolat Warna Karakteristik Optik Bentuk Elevasi Margin Permukaan GAm5 krem transparan irregular flat lobate Halus GAm6 putih opaque irregular  convex entire Kasar GPr2 krem transparan circular  umbonate entire Halus GPr3 putih transparan circular convex entire Halus GPr4 putih opaque circular raised filamentous Halus
GPr5 putih opaque circular raised filamentous Kasar
Sedimen SPr1 putih translucent circular  umbonate entire Halus SSe1 putih transparan circular convex entire Halus SSe3 krem translucent circular  umbonate entire Halus SAm1 putih translucent circular  umbonate entire Halus SSe4 krem transparan circular convex entire Halus SSe2 krem opaque irregular flat lobate Halus SAm2 krem translucent circular flat entire Halus SAm3 putih translucent circular convex entire Halus
SSe5 krem translucent circular raised undulate Halus SAm4 putih opaque circular  umbonate entire Halus SAm5 putih opaque irregular flat serrate Kasar SAm6 putih opaque circular flat lobate Kasar SPr2 putih translucent circular convex entire Halus
SSe6 putih translucent circular raised entire Halus SAm7 krem translucent circular flat entire Halus SAm8 putih translucent circular  umbonate entire Halus SPr3 krem opaque circular convex entire Halus SSe7 krem transparan circular flat entire Halus SSe8 krem transparan circular flat entire Halus SPr4 putih translucent circular convex entire Halus
SSe9 putih translucent circular  umbonate entire Halus Sebagian  besar  perbedaan  jumlah  jenis  bakteri  yang  ditemukan  pada  sedimen  dan  saluran pencernaan kemungkinan disebabkan oleh pemilihan makanan ( selective feeding ) (Gao et al ., 2014; Uthics and Karez, 1999; Amon and Herndl, 1991).
3.2. Seleksi Bakteri
3.2.1. Aktivitas Enzim Selulase, Protease, dan Amilase Isolat  bakteri  ditanam  pada  media selektif Skim  Milk  Agar,  Starch  Agar, dan CCRA dimana reaksi positif akan ditunjukkan  apabila  bakteri  memiliki  enzim ekstraselular  maka  koloni  bakteri  akan menghasilkan  zona  inhibisi  ( clear  zone ) disekeliling  koloni.  Jumlah  koloni  bakteri yang  mampu  menghasilkan  enzim  ekstra- selular ditampilkan pada Gambar 1.
Berdasarkan  data  yang  ditunjukkan dapat  diketahui  bahwa  jumlah  isolat  bakteri yang  memiliki  aktivitas  enzim  ekstraselular lebih  banyak  diperoleh  di  sedimen  di- bandingkan dalam saluran pencernaan teripang H. atra . Isolat bakteri selulotik yang ditemukan  dalam  percernaan  teripang  cukup rendah  yaitu  sebanyak  4  isolat  sedangkan, bakteri  yang  ditemukan  pada  sedimen  relatif tinggi  yaitu sejumlah 13 isolat. Isolat bakteri yang memiliki aktivitas amilase dan protease jumlahnya  sama  masing-masing  6  isolat.
Gambar 1. Jumlah koloni bakteri yang memiliki aktivitas enzim ekstra selular.
Sebaliknya,  hasil  tersebut  berbeda  dengan yang ditemukan pada teripang pasir ( Holothuria  scabra )  di  mana  bakteri  yang ditemukan  pada  saluran  pencernaan  teripang pasir  73,3  %  menghasilkan  enzim  protease dan  13,3%  menghasilkan  enzim  amilase (Hatmanti dan Purwati, 2011). Pada sedimen, jumlah  bakteri  tertinggi  ditemukan  pada isolat  yang  menghasilkan  aktivitas  enzim selulase  yaitu  13  isolat,  selanjutnya  isolat bakteri  yang  dapat  menghasilkan  enzim amilase  sejumlah  12  isolat  dan  jumlah terendah  adalah  isolat  bakteri  penghasil enzim  protease  sebanyak  7  isolat.  Hal  ini, kemungkinan dipengaruhi oleh habitat teripang H.  atra di  perairan  Medana  yang didominasi  oleh  tumbuhan  lamun  dan pecahan  karang  mati,  sehingga  bakteri
pendegradasi  selulosa  ditemukan  dalam jumlah  lebih  tinggi  dibandingkan  jenis lainnya.  Bakteri  penghasil  enzim  ekstra- selular juga terdapat dalam saluran pencernaan teripang merah Holothuria leucospilota dengan  keanekaragaman  jumlah jenis  tertinggi  diperoleh  pada  isolat  bakteri yang  mampu  mendegradasi  amilum  (Zhang et al ., 2012).

## 3.2.2.  Indeks Hidrolysis Capacity
Hasil  pengujian Hidrolysis  Capacity Index untuk  mengukur  tingkat  kemampuan bakteri dalam menghidrolisis substrat melalui rasio  zona  bening  yang  dihasilkan  selama tujuh  hari  pengamatan  (Prasetya,  2010) (Tabel 2).
Tabel 2. Isolat bakteri penghasil enzim protease, selulase, dan amilase berdasarkan zona inhibisi yang dihasilkan.
Jenis Enzim Isolat Diameter koloni (mm) Diameter zona bening (mm) Indeks HC (mm) Selulase GSe1 10 33 3,3 SSe1 4 15 3,75 SSe2 7 12 1,71 SSe3 4 8 2 SSe4 6 15 2,5 SSe5 4 9 2,25
0 2 4 6 8 10 12 14 16 Selulase Protease Amilase Ju m lah is ol at b ak te ri (k ol on i) Jenis enzim Saluran pencernaan Sedimen
Jenis Enzim Isolat Diameter koloni (mm) Diameter zona bening (mm) Indeks HC (mm) SSe6 5 12 2,4 SSe7 11 43 3,9 SSe8 7 13 1,85 GSe2 7 17 2,43 GSe3 2 6 3 SSe9 4 28 7 Amilase SAm1 8 15 1,875 GAm1 15 23 1,53 GAm2 9 16 1,78 GAm6 30 46 1,53 SAm7 19 40 2,11 SAm8 6 15 2,5 SAm2 7 - - SAm3 8 27 3,375 GAm4 30 46 1,53 GAm5 83 - - SAm4 15 41 2,73 SAm5 56 79 1,41 SAm6 5 33 6,6 Protease GPr1 22 34 1,54 SPr1 15 22 1,46 GPr2 29 47 1,62 SPr2 12 38 3,16 GPr2 2 - - GPr3 2 - - GPr4 42 62 1,47 GPr5 4 - - SPr3 40 45 1,13 SPr4 3 9 3 Hasil pengamatan menunjukkan
bahwa nilai rasio tertinggi pertama ditemukan  pada  isolat  bakteri  SSe9  yaitu  7 mm  kemudian  6,6  mm  pada  isolat  SAm6. Rasio  HC  lebih  dari  3  mm  diperoleh sebanyak 7 isolat bakteri. Rasio HC tertinggi sebesar  7  mm  ditemukan  pada  isolat  bakteri dari  sedimen  yang  mampu  mendegradasi substrat  selulosa.  Kandungan  serasah  daun lamun  dalam  sedimen  yang  tinggi  dapat menjadi  penyebab  banyaknya  jenis  bakteri pengasil  enzim  selulase  yang  hidup  dan berfungsi sebagai dekomposer. Hal ini sesuai dengan  Gambar  1  bahwa  jenis  bakteri selulotik  ditemukan  dalam  jumlah  yang
paling tinggi pada sedimen. Selulosa merupakan  polisakarida  organik  sebagai komponen  utama  penyusun  dinding  sel  pada tumbuhan. Menurut Meryandini et al. (2009) setiap bakteri selulolitik menghasilkan kompleks enzim selulase yang berbeda-beda, tergantung dari gen yang dimiliki dan sumber karbon yang digunakan.
Semua  isolat  tumbuh  pada  media CCRA  yang  mengandung  CMC  1%  sebagai komponen  indusernya.  Isolat  bakteri  dengan rasio  HC  tertinggi  kedua  (6,6  mm)  (gambar 2)  diperoleh  dari  isolat  yang  menghidrolisis substrat  pati  dengan  enzim  amilase  dengan hasil akhir maltosa.
Gambar 2. Isolat bakteri yang memiliki nilai indeks HC tertinggi yang menghasilkan jenis enzim yang berbeda.
Amilum atau pati merupakan karbohidrat kompleks yang tidak larut dalam air dan sebagai bahan utama yang dihasilkan tumbuhan  untuk  menyimpan  kelebihan glukosa.  Sebaliknya,  nilai  HC  tertinggi  pada kelompok  bakteri  penghasil  enzim  protease hanya  3  mm  merupakan  yang  terendah dibandingkan nilai HC dari kelompok bakteri penghasil enzim selulase dan amilase. Semua isolat  bakteri  yang  menghasilkan  HC tertinggi  dari  ketiga  enzim  yang  diuji, ditemukan pada sampel  sedimen (gambar 2). Dalam  hal  ini  mungkin  dapat  disebabkan oleh  tekstur  sedimen  yang  mempengaruhi kelimpahan bakteri (Karbasdehi et al., 2017), di  habitatnya H.  atra ditemukan  di  daerah pesisir  atau  pasang  surut  yang  ditumbuhi lamun  dengan  15-25%  pecahan  karang  mati, pasir  kasar  (0,7-1,2  mm),  dan  2-3,5% kandungan organik (Dissanayake and Stefansson, 2012).
Kandidat bakteri probiotik yang diperoleh dari hasil penelitian dapat digunakan untuk uji lanjutan dengan diaplikasikan  pada  fase  pemeliharaan  induk teripang H.  atra yang  merupakan  salah  satu tahapan kegiatan budidaya.

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  penelitian  ini  diperoleh dua  isolat  bakteri  SSe9  dan  SAm6  sebagai
kandidat probiotik yang mampu menghasilkan  enzim  ekstraselular,  yaitu selulase  dan  amilase  dengan  rasio  indeks Hidrolysis Capacity masing-masing  yaitu  7 mm dan 6,6 mm. Hasil tersebut menunjukkan bahwa  kedua  isolat  bakteri  berpotensi  untuk dapat  dikembangkan  lebih  lanjut  menjadi bakteri probiotik.

## DAFTAR PUSTAKA
Amon,  R.M.W.  and  G.J.  Herndl.  1991. Deposit  feeding  and  sediment:  I. Interrelationships between Holothuria tubulosa
( Holothuridae:
Echinodermata )  and  the  sediment microbial  community. Mar.  Ecol. Prog.  Ser., 12:63-174.  http://doi.org/ 10.1111/j.1439-0485.1991.tb00250.x
Chi,  C.,  J-Y.  Liu,  S-Z.  Fei,  C.  Zhang,  Y-Q. Chang,  X-L.  Liu,  and  G-X.  Wang.
2014.
Effect of intestinal autochthonous probiotics isolated from  the  gut  of  sea  cucumber ( Apostichopus  japonicus )  on  immune response and growth of A.  japonicus. Fish & Shellfish Immunology , 38:367-373. http://dx.doi.org/10.10 16/j.fsi.2014.04.001
Choo,  P.S.  2008.  Population  status,  fisheries and  trade  of  sea  cucumbers  in  Asia. In: Toral-Granda,  V.,  A.  Lovatelli and  M.  Vasconcellos  ( eds ).  Sea cucumbers.  A  global  review  of fisheries  and  trade.  FAO  Fisheries and Aquaculture Technical Paper. No. 516. Rome, FAO. 81-118 pp.
Dakrory,  A.I.,  S.R.  Fahmy,  A.M.  Soliman, A.S.  Mohamed,  and  S.A.M.  Amer. 2014.  Protective  and  curative  effects of  the  sea  cucumber Holothuria  atra extract against DMBA-induced hepatorenal  diseases  in rats.  BioMed Research  International ,  2015:1-11. http://dx.doi.org/10.1155/563652.
Deming,  J.W  and  R.R.  Colwell.  1982.
Barophilic  bacteria  associated  with digestive tracts of abyssal
0 1 2 3 4 5 6 7 8 SSe9 SAm6 SPr2 N il a i in d ek s H C ( m m ) Isolat bakteri
holothurians. Applied Enve. Microbiology , 44(5):1222-1230.
Dhinakaran,  D.I.  and  A.P.  Lipton.  2014. Pharmacological  potentials  of  sea cucumber Holothuria atra extracts from  the  Indian  Ocean. Asian  J.  of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, 4(35):36-43.  http://10.15
272/ajbps.v4i35.537.
Dissanayake,  D.C.T.  and  G.  Stefansson. 2012.  Habitat  preference  of  sea cucumber: Holothuria atra and Holothuria edulis  in the coastal water of  Sri  Lanka. J.  of  the  Marine Biological  Association  of  the  United Kingdom. 92(3):581-590.  http://dx. doi.org/10.1017/Soo25315411000051
Gao,  F.,  F.  Li,  J.  Tan,  J.  Yan,  and  H.  Sun.
2014. Bakterial community composition  in  the  gut  content  and ambient
of sea cucumber
Apostichopus  japonicus revealed  by 16S  rRNA  gene  pyrosequencing. PLoS ONE 9(6):e100092. http://10.1371 / journal.pone.0100092
Hatmanti,  A.  dan  P.  Purwati.  2011.  Bacteria associated  holothurians:  the  key  of habitat preference, diet, and
functions. J.  Ilmu  dan  Teknologi Kelautan Tropis, 3(1):73-81. http://dx.doi.org/10.29244/jitkt.v3ij.7 836.
Hapsari, T., W. Tjahjaningsih, M.A. Alamsjah  dan  H.  Pramono.  2016. Aktivitas enzimatis bakteri proteolitik asal  gastrointestinal  udang  vannamei
( Litopenaeus vannamei ). Pena Akuatik, 16(1):22-37.  http://dx.doi.o rg/10.31941/penaakuatik.v16i1.522.
Gupta,  P.,  K.  Samant,  A.  Sahu.  2012.
Isolation of cellulose-degrading bacteria  and  determination  of  their cellulotyc  potential. International  J. of  Microbiology. 2012:1-5.  http://dx. doi.org/10.1155/2012/578925.
Karbasdehi,  V.N.,  S.  Dobaradaran,  I. Nabipour,  A.  Ostovar,  H.  Arfaeinia, A.  Vazirizadeh,  R.    Mirahmadi,  M.
Keshtkar,  F.F.  Ghasemi,  and  F. Khalifei.  2017.  Indicator  bacteria community  in  seawater  and  coastal sediment:  the  Persian  Gulf  as  a  case. J.  of  Environmental  Health  Science and Enginering,
15(6):1-15.
http://dx.doi.org/10.1186/s40201- 017-0266-2.
Kinch,  J.,  S.  Purcell,  S.  Uthicke,  and  K. Friedman.  2008.  Population  status, fisheries  and  trade  of  sea  cucumbers in  the  Western  Central  Pacific. In: Toral-Granda, V., A. Lovatelli and M. Vasconcellos ( eds ) Sea cucumbers. A global  review  of  fisheries  and  trade. FAO  Fisheries  and  Aquaculture Technical  Paper.  No.  516.  Rome, FAO. 7–55pp.
Meryandini, A., W. Widosari, B. Maranatha, T.C.  Sunarti,  N.  Rachmania,  dan  H. Satria.  2009.  Isolasi  bakteri  selulotik dan  karakterisasi  enzimnya. Makara Sains, 13(1):33-38.  https://doi.org/
10.7454/mss.v13i1.369.
Newal-Fyzul,  A.,  A.H.  Al-Harbi,  and  B.
Austin.  2014.  Developments  in  the use  of  probiotics  for  diseases  control in  aquaculture. Aquaculture, 431:1-
11. http://dx.doi.org/10.1016/j.aqua culture.2013.08.026.
Oktaviani,  D.,  Y.  Mulyani,  dan  E.  Rochima.
2015.  Aktivitas  antioksidan  dan antibakteri  ekstrak  jeroan  teripang Holothuria  atra dari  pantai  Pulau Biawak. J. Perikanan Kelauta n, 2 (1): 1-6.
Pandiyan,
P., D. Balaraman, R. Thirunavukkarasu,  E.G.J.  George,  K. Subaramaniyan,  S.  Manikkan,  and  B. Sadayappan. 2013. Probiotic in aquaculture. Drug  Inventory  Today , 5:55-59. http://dx.doi.org/10.1016 /j.dit.2013.03.003.
Purwati,  P.,  S.A.P.  Dwiono,  L.F.  Indriana, and  V.  Fahmi.  2009.  Shifting  the natural  fission  of Holothuria atra
(Aspidochirotida, Holothuroidea,
Echinodermata). SPC  Beche-de-mer Information Bulletin , 29: 16-18.
Putra, A.N. dan D. Hermawan. 2014. Seleksi Bakteri  Probiotik  Amilolitik  pada Saluran  Pencernaan  Ikan  Gurame ( Osphronemus  gauramy ). J.  Ilmu Pertanian  dan  Perikanan ,  3  (1):37- 45.
Triyanto,  T.A.  Isnansetyo,  I.D.  Prijambada, dan J. Widada. 2009. Isolasi, karakterisasi  dan  uji  infeksi  bakteri proteolitik dari kawasan hutan  bakau. J. Perikanan, 11 (1): 13-18. https://doi.org/10.22146/jfs.2966.
Uthicke,  S.  and  R.  Karez.  1999.  Sediment patch  selectivity  in  tropical  sea cucumbers (Holothuridae: Aspidochirotida) analysed with multiple choice experiments. J.
Experimental Marine  Biology  and Ecolology ,  236:69-87.  https://doi.org/
10.1016/S0022-1981(98)00190-7.
Ward-Rainey,  N.,  F.A.  Rainey,  and  E. Stackebrandt.  1996.  A  study  of  the bacterial flora associated with Holothuria  atra . J.  of  Experimental Marine  Biology  and  Ecology ,  203: 11-26.  https://doi.org/10.1016/0022- 0981(96)02566-x.
Zhang,  X.,  T.  Nakahara,  M.  Miyazaki,  Y. Nogi,  S.  Taniyama,  O.  Arakawa,  T. Inoue,  and  T.  Kudo.  2012.  Diversity and  function  of  aerobic  culturable bacteria  in  the  intestine  of  the  sea cucumber Holothuria  leucospilota . The  J.  of  General  and  Applied
Microbiology, 58: 447-456. https://doi.org/10.2323/jgam.58.447. Received : 19 July 2018 Reviewed : 06 March 2019 Accepted         : 04 July 2019