## EXAMINATION  OF  TOTAL  NUMBER  OF  BACTERIA  IN  FRESH  COW ’S  FROM COW FARM IN KALIJAMBE AREA SRAGEN

## PEMERIKSAAN  JUMLAH  TOTAL  BAKTERI  PADA  SUSU  SAPI  SEGAR  DARI PETERNAKAN SAPI DI DAERAH KALIJAMBE SRAGEN
Liss Dyah Dewi Arini 1 *, Darah Ifalahma 2

## ABSTRACT
Milk is the preferred nutrient for microbes to grow. Under normal conditions the number of microflora is  103CFU/mL  of  milk.  In  cows  infected  with  inflammation  (masitis)  can  be  found  bacteria  types Corybacterium, Staphylococcus sp, Streptococcus sp, and Enterobacteriaceae whose number can reach 105 CFU/mL of milk. The purpose of this study was to determine the total number of bacteria in  fresh  cow's  milk  in  the  Kalijambe  area,  Sragen.  The  method  in  this  study  uses  microbiological tests  with  three  tests,  namely  breed,  MBRT  and  rezasurin.  There  are  4  types  of  fresh  cow's  milk samples used in this study, namely fresh cow's milk A, fresh cow's milk B, fresh cow's milk C and fresh cow's milk D, where in each type of milk there is one repetition (in duplicate). ). Based on the three tests that have been carried out, it can be concluded that milk samples A1, A2, B1, and B2 are suitable  for  consumption  and  milk  samples  C1,  C2,  D1  and  D2  are  not  suitable  for  consumption because  the  amount  of  bacterial  contamination  exceeds  the  minimum  limit  of  SNI  3141.1-2011 (1x106CFU/ml) . The results of the "t" test showed that the total number of microbes in fresh milk in 4 samples (A, B, C, D) was significantly different (P < 0.05), so it can be concluded that the quality of fresh milk at Kalijambe farm, Sragen is good for milk A and B (according to SNI 2011), while for milk C and D are not good (not in accordance with SNI 2011).
Keywords: Bacteria, Fresh Cow's Milk, Microbiological Test

## INTISARI
Susu merupakan nutrisi yang disukai mikroba untuk tumbuh.Padakeadaan normal jumlah mikroflora adalah  10 3 CFU/mL  susu.  Pada  sapiyang  terjangkit  radang  (masitis)  dapat  dijumpai  bakteri  jenis Corybacterium,  Staphylococcus  sp,  Streptococcus  sp,  dan  Enterobacteriaceae  yang  jumlahnya dapat  mencapai  10 5 CFU/mL  susu.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  jumlah  total bakteri pada susu sapi segar di peternakan daerah Kalijambe, Sragen. Metode pada penelitian ini menggunakan uji mikrobiologi dengan tigauji, yaitu breed, MBRT dan rezasurin. Sampel susu sapi segar yang digunakan pada penelitian ini ada 4 jenis yaitu susu sapi segar A, susu sapi segar B, susu sapi segar C dan susu sapi segar D, di mana di masing-masing jenis susu tersebut terdapat pengulangan  sebanyak  satu  kali  (secara  duplo). Berdasarkan  ketiga  uji  yang  telah  dilaksankan  dapat disimpulkan  bahwa  sampel  susu  A1,  A2,  B1,  dan  B2 layak  konsumsi  dan  sampel  susu  C1,  C2,  D1  dan  D2 tidak  layak  konsumsi  dikarenakan  jumlah  cemaran bakteri melebihi batas minimum SNI 3141.1- 2011(1x10 6 CFU/ml). Hasil  uji  “t”  menunjukkan  bahwa jumlah total mikroba susu segar pada 4 sampel (A, B, C,
Afiliasi Penulis
Universitas Duta Bangsa Surakarta

## Korespondensi kepada
Lisss Dyah Dewi Arini liss_dyah@udb.ac.id
D) berbeda nyata (P < 0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa kualitas susu segar di peternakan Kalijambe, Sragen adalah termasuk bagus untuk susu A dan B (sesuai SNI 2011), sedangkan untuk susu C dan D kurang bagus (tidak sesuai dengan SNI 2011).

## Kata kunci: Bakteri, Susu Sapi Segar, Uji Mikrobiologi

## PENDAHULUAN
Bahan
pangan hewani yang mengandung  nilai  gizi  yang  baik  untuk dikonsumsi  manusia  salah  satunya  adalah susu. Namun, hampir semua komponen  yang terdapat  pada  susu  merupakan  nutrisi  yang disukai  mikroba  untuk  tumbuh.  Bakteri  yang terdapat  pada  susu  berasal  dari  sapi  dan lingkungannya.  Kualitas  susu  akan  menurun apabila terdapat bakteri pembusuk didalamnya.  Susu  mengandung  vitamin,sitrat, dan  enzim.  Susu  sapi  yang  baik  adalah  yang memiliki  warna  putih  kekuningan  dan    tidak tembus cahaya. Warna susu dipengaruhi oleh jenis sapi, jenis pakan, jumlah lemak susu, dan persentase  zat  yang  ada  didalamnya.  Susu juga memiliki kadar air dan protein yang tinggi sehingga memungkinkan mikroba untuk dapat tumbuh.
Jumlah mikroflora pada keadaan normal adalah  10 3 CFU/mL  susu.  Pada  sap  iyang terjangkit  radang  ( masitis )  dapat  dijumpai bakteri  jenis Corybacterium,  Staphylococcus sp, Streptococcus sp, dan Enterobacteriaceae yang  jumlahnya  dapat  mencapai  10 5 CFU/mL susu.  Apabila  kontaminasi  berasal  dari lingkungannya seperti dari tanah, rumput, dan pakan,  jumlah  mikroba  dalam  susu  dapat mencapai  lebih  dari  10 6 CFU/mL  (Winiati  dan Nurwitri, 2012). Infeksi mastitis dapat disebabkan oleh inflamasi kelenjar atau puting susu  hewan  ternak  oleh  bakteri  patogen  atau campuran  beberapa  bakteri  patogen.  Bakteri yang  sering  menyebabkan mastitis pada  sapi perah  misalnya  beberapa  spesies  streptokoki yang  bersifat  hemofilik, stapilococcus yang bersifat  koagulase  positif,  kadang-kadang pseudomonas , coliform dan  beberapa  basili gram  negatif  lainnya.  Susu  mentah  sangat
rentan terkontaminasi mikroorganisme patogen seperti Staphylococcus aureus, Escherichia  coli,  Mycobacterium  tuberculosis, Campylobacter jejuni, Coxiella burnetii, Yersinia enterocolitica dan Salmonella . Proses sterilisasi minimal
diperlukan untuk
menghindari risiko kontaminasi oleh
mikroorganisme  patogen  yang  berbahaya (Shazari, 2019). Salah
satu hal yang dapat
mempengaruhi  kualitas  susu  adalah  adanya interval pemerahan. Pemerahan susu biasanya  dilakukan  dua  kali  dalam  satu  hari yaitu  pagi  dan  sore  hari  (Mulyati,  2018). Interval  waktu  yang  sama  antara  pemerahan pada  waktu  pagi  dan  sore  hari  akan memberikan  perubahan  komposisi  susu  yang relatif  sedikit,  sedangkan  interval  waktu pemerahan yang berbeda akan menghasilkan komposisi susu  yang berbeda  juga. Selain itu faktor  lingkungan  berupa  temperatur  suhu kandang  yang  berbeda  antara  pagi  dan  sore hari  dapat  juga  mempengaruhi  mikrobiologis yang terkandung didalam susu hasil pemerahan  sehingga  perlu  adanya  pengujian kualitas  fisik,  kimia,  dan  mikrobiologi  susu kambing  segar  pada  waktu  pemerahan  yang berbeda yang kemudian dibandingkan dengan standar  yang  berlaku  sehingga  aman  untuk dikonsumsi (Arifin, dkk., 2016).
Mutu  mikrobiologis  pada  bahan  pangan ditentukan  oleh  jumlah  mikroorganisme  yang terdapat di dalamnya. Mutu mikrobiologis pada bahan  pangan  ini  akan  menentukan  daya simpan  dari  produksi  tersebut  ditinjau  dari kerusakan oleh mikroorganisme dan keamanan  bahan  pangan  dari  mikroorganime ditentukan  oleh  jumlah  spesies  patogenik. Standar Nasional Indonesia (SNI) tahun 2011
menetapkan  cemaran  mikroba  pada  susu segar  mempunyai  batas  maksimum  cemaran
Enterobacteriaceae 1x103 cfu/ml dan Staphylococcus  aureus 1x102  cfu/ml  dengan total  mikroorganisme  (TPC)  maksimal  1x106 cfu/ml.

## METODE
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui jumlah total bakteri pada susu sapi segar menggunakan metode DMC atau Breed, metode  MBRT  dan  resazurin.  Penelitian  ini dilaksanakan  di  daerah  Kalijambe,  Sragen dikarenakan  selain  dekat  dengan  tempat tinggal,  ternyata  didapatkan  kondisi  sapi  di peternakan  ini  rata-rata  terkena  penyakit Mastitis, sehingga hal inilah yang
melatarbelakangi  peneliti  untuk  menguji  susu sapi menggunakan meggunakan tiga metode/uji.  Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  metode  survey  yang dilakukan  pada  peternak  sapi  perah  di Kecamatan Kalijambe Kabupaten Sragen.
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu,  untuk  metode  mikrokospik  langsung (metode  DMC  atau  metode  Breed);  susu segar,  Kristal  violet,  tips  pipet  mikro  0,1  ml, pipet mikro ukuran 0,01 ml, gelas objek, kartu penolong ukuran 1 cm 2, bunsen dan jarum ose dan  mikroskop;  dua,  untuk  uji  Biru  Metilen (Metode  MBRT);  dan  pipet  mikro  1  ml  serta waterbath (Uji resazurin).
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian ini yaitu, susu segar 5 ml, susu terkena mastitis 5  ml,  pipet  mikro  1  ml  1  buah,  larutan  biru metilen  tiosianat  1  ml,  penangas  air  bersuhu 36 o C dan tabung reaksi bertutup ulir; dan tiga, untuk  uji  Resazurin:  susu  segar  5  ml,  susu terkena mastitis 5 ml, pipet mikro 1 ml, larutan resazurin dan waterbath.
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode survey yang dilakukan pada peternak  sapi  perah  di  Kecamatan  Kalijambe Kabupaten  Sragen.  Adapun  cara  kerja penelitian disajikan dalam bentuk gambar pada gambar 1, 2 dan 3 sebagai berikut:
Gambar 1 | Metode Mikroskopik Langsung (Metode DMC atau Metode Breed)
Metode  Direct  Microscopic  Count  (DMC) digunakan  untuk  menentukan  jumlah  bakteri dan menentukan perkembangan bakteri dalam berbagai  keadaan.  Jumlah  sel  dalam  suatu populasi  dapat  diukur  dengan  menghitung  di bawah mikroskop. Metode ini dapat digunakan
untuk  sampel.  Metode  ini  menggunakan  alat yang  dinamakan counting  chamber .  Alat  ini berupa  lempeng  gelas  ( grid )  yang  pada permukaannya dibuat petak-petak yang sangat kecil berbentuk bujur sangkar dengan luas dan kedalaman tertentu. Jumlah sel per unit luasan
Keringkan diudara dan fiksasi 5 ml susu segar + 5
ml susu terkena mastitis + MB levonitz water 2 tetes, 2’
Biarkan kering, lalu bilas air Keringkan diudara + imersi Amati di bawah mikroskop Hitung ∑bakteri/areal pandang
pada  grid  dapat  dihitung  secara  langsung dibawah  pengamatan  dengan  mikroskop sehingga menghasilkan ukuran jumlah sel per volume chamber .  Untuk  mengubah  nilai  ini menjadi  jumlah  sel/ml  dilakukan  dengan mengkonversi faktor volume dari sampel yang ada pada chamber .  Dalam metode ini,
hitungan mikroskopik dilakukan dengan bantuan  kotak-kotak  skala,  dimana  dalam setiap ukuran skala seluas 1 mm 2 terdapat 25 buah kotak besar dengan luas 0.04 mm 2 , dan setiap  kotak  besar  terdiri  dari  16  kotak  kecil. Tinggi  contoh  yang  terletak  diantara  gelas objek dengan gelas penutup adalah 0.02 mm.
Gambar 2 | Uji Biru Metilen (Metode MBRT)
Uji  biru  metilen  adalah  uji  yang digunakan untuk memperkirakan jumlah bakteri  pada  sampel  susu.  Dalam  uji  ini ditambahkan  sejumlah  zat  warna  ke  dalam susu kemudian diamati waktu yang dibutuhkan oleh  bakteri  untuk  melakukan  aktifitas  yang dapat  menyebabkan  perubahan  warna  zat tersebut.  Semakin  tinggi  jumlah  bakteri  di dalam susu semakin cepat terjadinya perubahan  warna. Cara  ini  memiliki kelebihan lebih cepat dalam pembacaan namun cara ini juga  memiliki  kelemahan  yaitu  tidak  cocok dilakukan  terhadap  susu  yang  mengandung dalam jumlah sedikit, misalnya susu pasteurisasi. Selain itu metode ini memerlukan waktu  pengamatan  yag  terus  menerus  yaitu paling sedikit 6 jam. Kekurangan lainnya yaitu tidak  dapat  mengetahui  koloni  bakteri  yang tumbuh.  Prinsip  metode  ini  didasarkan  pada kemampuan  bakteri  di  dalam  susu  untuk
tumbuh  menggunakan  oksigen  yang  terlarut, sehingga  menyebabkan  penurunan  kekuatan oksidasi-reduksi  dari  campuran  tersebut. Akibatnya biru metilen yang ditambahkan akan tereduksi menjadi putih metilen. Waktu reduksi yaitu  perubahan  warna  biru  menjadi  putih dianggap  selesai  jika  kira-kira  4/5  bagian  dari contoh susu telah berwarna putih.
10 ml susu + 1 ml MB
Tiosianat Hangatkan pada suhu 36 o C Hangatkan pada suhu 36 o C Balik 12 kali Amati perubahan setiap 30 menit Setelah 5’ balikkan Water Bath 36°C, catat waktu mulai Catat MBRT sampai dengan 7 x pengamatan
Gambar 3 | Uji Resazurin
Uji  resazurin  adalah  salah  satu  metoda pengujian  mokrobiologi  pada  susu  dimana prinsip  dasar  dari  uji  ini  yaitu  kemampuan bakteri  untuk  mereduksi  warna.  Semakin memudarnya warna susu menunjukan  bahwa susu  tersebut  mengandung  sejumlah  bakteri yang  cukup tinggi  dan  mutu  serta  kualitasnya rendah.  Sebaliknya  jika  warna  susu  berubah warna biru berarti susu memiliki kualitas yang bagus  dan  memiliki  sedikit  jumlah  bakteri bahkan  tidak  ada  bakteri  yang  mereduksi resazurin  tersebut.  Tujuan  dilakukan  uji resazurin ini untuk mengetahui kualitas sebuah susu dan untuk mengetahui apakah susu yang dihasilkan  oleh sapi terkena penyakit mastitis atau  tidak.  Keterangan  untuk  hasil  uji  coba
adalah  warna  biru  menunjukkan  hasil  sangat bagus,  warna  biru-pink  menunjukkan  hasil bagus, warna biru-pink tua menunjukkan hasil netral, warna pink-tua-keputihan menunjukkan hasil agak jelek (agak buruk) dan warna putih menunjukkan hasil jelek (buruk).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  pemeriksaan  jumlah  total bakteri  pada  susu  sapi  segar  dengan menggunakan  metode  Mikroskopik  Langsung (Metode  DMC  atau  Metode  Breed),  Uji  Biru Metilen  (Metode  MBRT)  dan  Uji  Resazurin disajikan  pada  Tabel  1,  Tabel  2  dan  Tabel  3 sebagai berikut:

## Tabel 1 | Rekapitulasi Pengujian Data DMC
Sampel Ʃ pengamatan Ʃ sel x sel/areal pandang sel/ml A1 50x 0 0 0 A2 50x 0 0 0 B1 50x 0 0 0 B2 50x 0 0 0 C1 10x 46 46 2.0 x 10 6 C2 10x 63 6.3 2.7 x 10 6 D1 5x 122 2.4 1.1 x 10 7 D2 10x 66 6.6 2.9 x 10 6 Keterangan: A1 :  Susu sapi A A2 :  Ulangan susu sapi A B1 :  Susu sapi B B2 :  Ulangan susu sapi B C1 :  Susu sapi C B2 :  Ulangan susu sapi C D1 :  Susu sapi C B2 :  Ulangan susu sapi D 1 ml resazurin, 10  ml sampel Kocok, lalu masukkan ke inkubator 36 o C Biarkan 1 jam, lihat standar
Pada  uji  mikrobiologi  susu  sapi  segar digunakan  beberapa  metode  analisis,  yang salah  satunya  adalah  metode  breed.  Metode breed  sering  digunakan  untuk  menganalisis susu  yang  mengandung  bakteri  yang  tinggi. Misalnya  susu  yang  diperoleh  dari  sapi  yang terkena mastitis, yaitu  penyakit  infeksi  yang menyerang  kelenjar  susu  sapi.  Cara  ini merupakan metode hitungan langsung dengan menggunakan  mikroskop.  Untuk  menghitung jumlah  bakteri  didalam  sampel,  sampel  susu dipipet  sebanyak  0,01 ml  menggunakan  pipet mikro dan disebarkan di atas gelas objek yang sudah  dibatasi  sampai  luasnya  mencapai  1 cm 2 ,  kemudian  didiamkan  sampai  kering,  di fiksasi, dan diwarnai dengan birumetilen. Rata- rata  jumlah  bakteri  per  areal  pandang mikroskop  dihitung  setelah  mengamati  5 sampai 10 kali areal pandang, tergantung dari jumlah  bakteri  per  areal  pandang.  Pada  sapi yang  terserang  mastitis,  susunya  biasanya mengandung  sel  darah  putih  yang  banyak. Setelah  pewarnaan  dengan  biru  metilen,  sel- sel darah putih akan terlihat sebagai sel yang tidak teratur, dan bewarna biru sangat tua.
Dalam  uji  mikrobiologi  susu  dengan metode breed ini didapatkan hasil pada sampel A1,  A2,  B1  dan  B2  setelah  dilakukan perhitungan  adalah  0.  Sedangkan  untuk sampel C1 adalah 2.0 x 10 6 CFU/mL, sampel C2  adalah  2.7  x  10 6 CFU/mL,  sampel  D1 adalah1.1 x 10 7 CFU/mL, sampel D2 adalah2.9 x 10 6 CFU/mL.
Berdasarkan  hasil  perhitungan  dapat dilihat bahwa sampel A1, A2, B1 dan B2 tidak mengandung  bakteri  dibandingkan  dengan sampel  C1,  C2,  D1  dan  D2  yang  jumlah bakterinya  lebih  banyak.  Setelah  dilakukan pengujian,  terlihat  bakteri  yang  berbentuk batang  yang  diduga Bacillus  sp .  Bakteri  ini memegang peranan
penting dalam pembusukan susu,
karena dapat mendenaturasi protein. Adanya koagulasi dan denaturasi protein terjadi akibat penurunan pH oleh  asam-asam  organik.  Koagulasi  dan
denaturasi  protein  inilah  yang  menyebabkan susu menjadi pecah dan menggumpal.
Kerusakan  mikrobiologis  pada  susu antara  lain  ditandai  dari  terjadinya  reaksi dekomposisi protein susu membentuk polipeptida yang dapat menimbulkan rasa pahit pada  susu.  Dekomposisi  protein  dapat  terjadi akibat aktivitas enzim protease yang dihasilkan oleh  bakteri  proteolitik,  seperti Proteus, Alcaligenes, Bacillus, Flavobacterium, Clostridium,  Micrococcus,  Pseudomonas, dan Achromobacter. Kerusakan mikrobiologis pada susu  dapat  menimbulkan off-flavour atau  bau dan  rasa  susu  yang  tidak  diinginkan.  Flovour susu yang tidak diinginkan dapat berupa asam, atau  timbulnya  rasa  pahit/flavor  karamel. Flavor  asam  pada  susu  diakibatkan  karena bakteri  penghasil  asam  seperti S.  Lactis, Leuconostoc, dan Clostridium. Rasa  pahit pada  susu  muncul  karena  terdegradasinya protein  oleh  bakteri  proteolitik  dan  flavor karamel  dapat  munncul  disebabkan  karena terbentuknya basa yang diinisiasi oleh bakteri,misalnya  bakteri  yang  membentuk amonia  dan  urea  (Winiati  dan  Nurwitri, 2012).Menurut  Fikri  dkk  (2017)  kejadian kontaminasi Escherichia  coli kemungkinan disebabkan karena adanya kontaminasi feses sapi  selama  penanganan  susu  pada  saat proses pemerahan.
Jumlah  bakteri  dalam  susu  dapat digunakan  sebagai  indikator  pencemaran  dan kualitas  sanitasi.  Jenis  bakteri  seperti E.  coli , Enterobacteriaceae dan Streptobacillus telah lama dianggap sebagai mikroorganisme indikator  mutu.  Berdasarkan  uraian  di  atas, maka pemeriksaan mikrobiologis perlu dilakukan pada susu sapi segar yang langsung diperoleh  dari  peternak  ataupun  yang  telah mendapat perlakuan pemanasan. Hal tersebut dapat digunakan sebagai bahan pertimbangan guna  menjamin  konsumen  menerima  susu berkualitas  dan  memberikan  peluang  bagi perkembangan peternakan sapi perah (Septiani dan Drastini, 2014).
Escherichia coli dapat dijadikan indikator adanya suatu cemaran yang disebabkan feses manusia  maupun  hewan  ke  dalam  susu. Escherichia coli yang terdapat pada susu segar dikhawatirkan  dapat  berkembang  biak  dan menimbulkan gangguan kesehatan bagi masyarakat.  Diperlukan  adanya  penanangan dan pemahaman yang baik dalam penanganan dan  pengolahan  produk  susu  yang  akan disebarluaskan  untuk  konsumsi  masyarakat (Pradika dkk, 2019).
Kotaminasi  air  susu  dapat  berakibat pada  kejadian  keracunan  yang  membuktikan bahwa  pentingnya  pengawasan  terhadap keamanan air susu yang dikonsumsi
masyarakat  dan  berdampak  pada  kesehatan masyarakat. Untuk mencegah adanya kontaminasi  pada  air  susu,  maka  diperlukan standar prosedur pemerahan dan penanganan air  susu  pasca  panen.  Prosedur  meliputi persiapan  sapi  yang  akan  diperah,  kondisi kandang,  kondisi  pemerah,  peralatan  dan proses  penyimpanan.  Kontaminasi  air  susu bersumber dari tubuh sapi yang kotor, tangan pemerah  yang  kurang  bersih,  keadaan kandang yang kurang bersih serta debu/faktor lain  yang  dapat  menyebabkan  terjadinya kontaminasi terhadap air susu (Santoso, dkk., 2012).
Tabel 2 | Rekapitulasi Data Pengujian MBRT
Sampel 15 Menit 30 Menit 45 Menit 60 Menit 75 Menit 90 Menit A1 Putih Putih kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kehijauan A2 Putih Putih kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kehijauan B1 Putih Putih kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kehijauan B2 Putih Putih kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kebiruan Putih agak kehijauan C1 Putih Putih Putih Putih Putih Putih C2 Putih Putih Putih Putih Putih Putih D1 Putih Putih Putih Putih Putih Putih D2 Putih Putih Putih Putih Putih Putih Keterangan: A1 :  Susu sapi A A2 :  Ulangan susu sapi A B1 :  Susu sapi B B2 :  Ulangan susu sapi B C1 :  Susu sapi C B2 :  Ulangan susu sapi C D1 :  Susu sapi C B2 :  Ulangan susu sapi D
Salah  satu  pengujian  mikrobiologi  susu adalah uji biru metilen atau MBRT. Uji ini dapat memberikan  perkiraan  jumlah  bakteri  dalam susu dengan mengamati waktu yang dibutuhkan  oleh  bakteri  untuk  melakukan aktivitas dengan memberikan perubahan pada zat biru metilen. Semakin tinggi jumlah bakteri dalam  susu  semakin  cepat  perubahan  warna yang  terjadi.  Pada  uji  biru  metilen  kali  ini
menggnnakan  2  sampel  susu  yang  berbeda kondisi. Sampel A1, A2, B1 dan B2 merupakan sampel  susu  segar,  dan  sampel  C1,  C2,  D1 dan  D2  berisikan  susu  segar  yang  telah ditambahkan  bakteri  (susu  rusak).  Pada awalnya  kedua  sampel  berwarna  biru  pekat dan  nantinya  akan  terjadi  perbedaan  warna yaitu  susu  yang  berkualitas  jelek  akan
berwarna  putih  susu  dan  yang  bekualitas bagus akan berwarna biru keputihan.
Berdasarkan  hasil  akhir  pengamatan selama  90  menit,  didapatkan  hasil  bahwa sampel A1, A2, A3 dan A4 berwarna putih agak kehijauandan  sampel  C1,  C2,  D1  dan  D2 berwarna putih susu. Bisa disimpulkan bahwa sampel  susu  A1,  A2,  A3  dan  B2  dalam keadaan  bagus  dan  sampel  susu  C1,  C2,  D1 dan  D2  dalam  keadaan  jelek.  Ini  dikarenakan sampel susu C dan D sebelumnya sudah diberi mikroba  sehingga  kualitasnya  jelek.  Untuk pemberian  zat  metilen  biru  tiosianat  kedalam sampel  susu  digunakan  untuk  mengukur aktifitas  bakteri  yang  terdapat  di  dalam  susu dan  untuk  memperkirakan  jumlah  bakteri dalam  susu.  Uji  ini  berdasarkan  atas  aktifitas mikroba  dalam  susu  sehingga  menghasilkan senyawa  pereduksi  yang  dapat  mengubah warna biru dari metilen biru menjadi putih.
Mikroba  didalam  susu  pada  prinsipnya menghasilkan  enzim  reduktase  yang  dapat mereduksi  zat  warna  biru  dari  metilen  biru menjadi tak berwarna,pada saat susu diberikan metilen biru maka susu tersebut berwarna biru dan  akan  berubah  warna  pada  saat  terdapat mikroba  dalam  susu.  Makin  lama  perubahan warna  dari  biru  menjadi  putih  berarti  aktifitas bakteri  kecil  atau  jumlah  bakteri  pada  susu sedikit dan susu mempunyai mutu yang baik.
Mekanisme  biru  metilen  dalam  uji reduktase  susu  yaitu  didalam  susu  segar terdapat  enzim  reduktase  yang  dibentuk  oleh kuman  yang  dapat  mereduksi  zat  methylene blue  menjadi  methylene  white.  Penambahan zat methylene blue untuk mengetahui aktivitas enzim  reduktase  pada  susu.  Apabila  terdapat aldehid  hasil  aktivitas  enzim  reduktase,  maka methylene  blue  akan  tereduksi,  namun  enzim ini tidak akan aktif pada suhu 130 o C.
Tabel 3 | Rekapitulasi Data Pengujian Resazurin
Sampel 15 Menit 30 Menit 45 Menit 60 Menit 75 Menit 90 Menit A1 Biru Biru Biru Biru Biru Biru A2 Biru Biru Biru Biru Biru Biru B1 Biru Biru Biru Biru Biru Biru B2 Biru Biru Biru Biru Biru Biru C1 Biru pink Pink tua Pink tua Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Putih C2 Biru pink Pink tua Pink tua Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Putih D1 Biru pink Biru Pink tua Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Putih D2 Pink tua Pink Merah muda di permukaan Merah muda di permukaan Putih Putih Keterangan: A1 :  Susu sapi A A2 :  Ulangan susu sapi A B1 :  Susu sapi B B2 :  Ulangan susu sapi B C1 :  Susu sapi C B2 :  Ulangan susu sapi C D1 :  Susu sapi C B2 :  Ulangan susu sapi D
Hasil  penelitian  juga  disajikan  dalam  bentuk gambar berdasarkan hasil pengamatan sampel dengan metode Mikroskopik Langsung
(Metode  DMC  atau  Metode  Breed),  Uji  Biru Metilen  (Metode  MBRT)  dan  Uji  Resazurin yang disajikan pada tabel 4 sebagai berikut:

## Tabel 4 | Sasil Pengamatan Sampel
Metode DMC Uji Biru Metilen Uji Resazurin Sampel A A A1 A2 Sampel B B B1 B2 Sampel C C C1 C2 Sampel D
D D1 D2
Kualitas  susu  salah  satunya  dilihat  dari kualitas  mikrobiologisnya.  Susu  merupakan media pertumbuhan yang tepat untuk organisme  perusak  yang  umum.  Perubahan yag tidak dikehendaki dalam susu dipengaruhi oleh pertumbuhan
mikroba dan metabolismenya. Susu rusak diakibatkan oleh mikroorganisme yang dapat merombak
senyawa  dalam  susu.  Misalnya  bakteri  asam laktat  yang  merombak  laktosa  dalam  susu menjadi  asam  laktat  sehingga  susu  menjadi basi (Rahayu, 2012).
Salah  satu  pengujian  mikrobiologi  susu adalah  dengan  uji  rsazurin.  Dasar  dari  uji  ini yaitu  kemampuan  bakteri  untuk  mereduksi warna.  Semakin  memudarnya  warna  susu
menunjukan bahwa susu tersebut mengandung jumlah bakteri yang cukup tinggi dan mutu serta kualitasnya rendah. Sebaliknya jika  warna  susu  berwarna  biru  berarti  susu tersebut  memiliki  kualitas  yang  bagus  dan memiliki  sedikit  jumlah  bakteri  bahkan  tidak ada bakteri yang mereduksi rezasurin tersebut (Septiani, 2014).
Pada  pengamatan  ini  menggunakan  uji resazurin. Dasar uji ini yaitu untuk mengetahui kemampuan bakteri mereduksi warna. Tujuan dilakukannya uji resazurin yaitu untuk mengetahui  kualitas  sebuah  susu  dan  untuk mengetahui apakah susu yang dihasilkan oleh sapi  tersebut  terkena  mastiitis  atau  tidak. Mastitis  itu  sendiri  merupakan  suatu  penyakit karena  infeksi  yang  menyerang  kelanjar  susu sapi  (hampir  selalu  karena  bakteri  daripada jenis  kuman  lainnya).  Uji  resazurin  dilakukan dengan  menambahkan  1  ml  larutan  resazurin ke  dalam 10  ml sampel  susu  A1,  A2,  B1,  B2, C1,  C2,  D1  dan  D2.  Kemudian  dikocok  dan diinkubator  36 o C  selama  90  menit.  90  menit dapat diamati perubahan warnanya. Dari hasil pengamatan uji resazurin dapat dilihat perbedaan warna pada susu, susu A1, A2, B1 dan B2 berwarna biru dapat dinyatakan bahwa susu  tersebut  memiliki  kualitas  sangat  bagus sedangkan susu C1, C2, D1 dan D2 berwarna putih dapat dinyatakan susu tersebut berkualitas  agak  jelek  karena  banyak  bakteri yang mereduksi resazurin.
Hasil  Uji  “t”  menunjukan  bahwa  jumlah total  mikroba  susu  segar  pada  pada  kedua kecamatan  berbeda  nyata  (P  <  0,05),  hal tersebut  diduga  disesabkan  oleh  penyakit Mastitis  pada  hewan  sapi  di  perternakan, selain itu juga dari kontaminasi peralatan yang digunakan untuk menampung susu. Susu yang diambil  untuk  dilakukan  dengan  tiga  uji dimasukan kedalam botol yang telah disediakan.  Botol  tersebut  dalam  keadaan bersih dan sudah dicuci menggunakan air dan sabun.  Namun  pada  saat  penyetoran  susu banyak  peternak  pada  kelompok  peternakan
Kalijambe  yang  menggunakan  botol  bekas, sehingga  menyebabkan  rataan  total  mikroba pada  kelompok  peternakan  tersebut  menjadi lebih tinggi. Hal ini sesuai dengan pernyataan Pramesthi,  dkk.,  (2015),  bahwa  lingkungan tempat pemerahan, sanitasi kandang dan alat pemerahan  merupakan  beberapa  faktor  yang mempengaruhi total mikroba yang terkandung didalam susu.
Hasil penelitian peneliti tidak berbeda jauh dengan  hasil  penelitian  sebelumnya.  Untuk hasil  penelitian  peneliti  adalah  berdasarkan ketiga uji yang telah dilaksankan (DMC, MBRT dan  Rezasurin)  sampel  susu  A1,  A2,  B1,  dan B2  layak  konsumsi  dan  sampel  susu  C1,  C2, D1  dan  D2  tidak  layak  konsumsi  dikarenakan jumlah  cemaran  bakteri  melebihi  batas minimum  SNI  3141.1-  2011    (1x10 6 CFU/ml). Hasil  penelitian  Cahyono  (2013)  adalah kualitas mikrobiologis susu segar di Kecamatan  Krucil  Kabupaten  Probolinggo mempunyai  rata-rata  TPC  7,4x105  cfu/ml, jumlah cemaran Enterobacteriaceae 7,5 x 102 cfu/ml  dan  cemaran Staphylococcus  aureus 7,9  x  101  cfu/ml.  Kualitas  susu  segar  pada tingkat peternak di Kecamatan Krucil Kabupaten  Probolinggo  layak  dikonsumsi karena  masih  memenuhi  standar  SNI  tentang kualitas  susu  segar  ditinjau  dari  kualitas mikrobiologis. Hasil penelitian  Shazari  (2019) disimpulkan  bahwa  terdapat  perbandingan jumlah  bakteri Escherichia  coli antara  susu sapi  Pasteurisasi  dengan  susu  sapi  UHT, ditemukan  bakteri Escherichia  coli pada  satu dari  lima  sampel  susu  sapi  Pasteurisasi  yaitu sebesar  3/ml  yang  berarti  melebihi  batas maksimum  dalam  ketentuan  SNI,  tidak terdapat  bakteri Escherichia  coli pada  lima sampel  susu  sapi  UHT,  yang  berarti  jumlah bakteri Escherichia  coli pada  lima  sampel tersebut  adalah  0/ml,  yang  berarti  sesuai dalam ketentuan SNI.
Hal  ini  terjadi  karena  mikroba  mampu mereduksi  rezasurin  menjadi  hidroresofurin atau  tidak  berwarna  sehigga  dapat  dikatakan
bahwa  sampel  susu  segar  yang  ditambahkan dengan  mikroba  sebelum dipanaskan  dengan waterbath memiliki kualitas mutu yang sedang dan  setelah  dilakukan  pemanasan  dalam waterbath  diperoleh  warna  putih  maka  dapat dikatakan  bahwa  sampel  tersebut  mutunya tidak bagus. Hal ini terjadi karena kemampuan mikroba  yang  mampu  mereduksi  warna sehingga  mengalami  perubahan  menjadi warna  putih  dan  hal  ini  jelas  terbukti  karena sampel  awal  yang  digunakan  adalah  sampel susu  segar  yang  telah  dicampur  dengan mikroba.    Kerusakan  susu  disebabkan  jarak antara  peternak  dan  tempat  pengumpul  susu jauh tanpa dilengkapi dengan sarana pendingin (Subagyo dkk, 2020).
Gejala keracunan makanan akibat bakteri ini berjalan sangat cepat dan seringkali dalam  bentuk  akut.  Dampak  keracunan S. aureus ini  akan  sangat  bergantung  pada kepekaan  individu  terhadap  toksin,  jumlah makanan tercemar yang dikonsumsi dan status kesehatan  dari  individu  tersebut.  Pada umumnya  makanan  dapat  tercemar  apabila tidak disimpan pada suhu dibawah 4 0 C. Gejala yang paling umum akibat keracunan enterotoksin adalah mual, muntah, kram pada perut  ( abdomen )  dan  diare.  Pada  tingkatan yang  lebih  parah  dapat  terjadi  sakit  kepala, kram otot, peningkatan denyut nadi, perubahan tekanan  darah  dan  kadang-kadang  sampai pingsan.  Cara  untuk  mengatasinya  dapat dilakukan  dengan  mengganti  cairan,  garam dan  mineral  yang  hilang  akibat  diare  dan muntah (Cahyomo dkk, 2013).
Batasan  pada  penelitian  ini  adalah  pada penelitian  ini  hanya  meneliti  susu  segar  yang dikelompokkan  dalam  4  sampel  dan  masing- masing sampel hanya dilakukan pengulangan 1 kali untuk uji mikrobiologisnya. Selain dari itu uji mikrobiologis yang dilakukan untuk mengetahui total bakteri pada susu sapi segar pada  peternakan  sapi  daerah  Kalijambe, Sragen  hanya  menggunakan  3  uji  (DMC, MBRT  dan  Rezasurin).  Berdasarkan  latar
belakang  tersebut  peneliti  menyadari  bahwa hasil  penelitian  ini  masih  jauh  dari  sempurna, sehingga  dapat  disarankan  untuk  penelitian selanjutnya  dapat  dilakukan  uji  mikrobiologis susu  sapi  segar  dengan  metode-metode  lain yang belum atau jarang digunakan dan juga uji dilakukan lebih dari satu pengulangan supaya mendapatkan data yang lebih baik.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  uji  DMC  didapatkan  hasil bahwa  sampel  A1,  A2,  B1  dan  B2  jumlah bakteri  adalah  0,  sedangkan  sampel  C1 sebesar 2.0 x 10 6, sampel C2 sebesar 2.7 x 10 6, sampel  D1  sebesar 1.1  x  10 7 dan  sampel  D2 sebesar 2.9  x  10 6. Berdasarkan  uji MBRT didapatkan  hasil  bahwa  semua  sampel memiliki kualitas baik karena dapat mempertahankan  warna  putih  kehijauan  lebih lama.  Berdasarkan  uji  rezasurin  didapatkan hasil  bahwa  sampel  A1,  A2,  B1  dan  D2 memiliki kualitas baik karena dapat mempertahankan  warna  biru,  tetapi  sampel C1, C2, D1 dan D2 memiliki kualitas tidak baik karena berwarna putih. Berdasarkan ketiga uji yang  telah  dilaksankan  (DMC,  MBRT  dan Rezasurin)  dapat  disimpulkan  bahwa  sampel susu A1, A2, B1, dan B2 layak konsumsi dan sampel  susu  C1,  C2,  D1  dan  D2  tidak  layak konsumsi dikarenakan jumlah cemaran bakteri melebihi  batas  minimum  SNI  3141.1-  2011 (1x106CFU/ml).

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin, M., Oktaviana, A. Y., Wihansah, R. R. S.,
Yusuf,  M.,  Rifkhan,  R.,  Negara,  J.  K.,  & Sio, A. K. (2016). Kualitas Fisik, Kimia dan Mikrobiologi  Susu  Kambing  pada  Waktu Pemerahan yang Berbeda di Peternakan Cangkurawok,  Balumbang  Jaya,  Bogor. Jurnal Ilmu Produksi Dan Teknologi Hasil
Peternakan , 4 (2), 291 –295.
https://doi.org/10.29244/jipthp.4.2.291- 295.
Badan  Standarisasi  Nasional.  2011.  No.  SNI 01 –3141–2011. Susu  Segar .  Jakarta (ID): Badan Standarisasi Nasional.
Cahyono, Dwi, Masdiana dan Manik, Eirry, S.
(2013).  Kajian  Kualitas  Mikrobiologis Total Plate Count (TPC), Enterobacteriae
dan  Staphylococcus  aureus)  Susu  Sapi Segar  di  Kecamatan  Krucil  Kabupaten Probolinggo. Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi Hasil  Ternak , 8 (1),  1 –8.  Retrieved  from http://jitek.ub.ac.id/index.php/jitek/article/ download/170/161.
Fikri, F., Hamid, I.S., Purnama, M.T.E. (2017).
Uji  organoleptis,  pH,  uji  eber  dan cemaran  bakteri  pada  karkas  yang diisolasi dari kios di Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner, 1(1), 23-27.
Kasiram, M. 2010. Metode Penelitian Kualitatif- Kuantitatif . UniversitasIslam Negeri Maliki Press. Malang.
Mulyati,  L.,  Ardhani,  F  dan  Yusuf,  R.  (2018).
Pengujian  Kualitas  Susu  Segar  dengan Perbedaan Perlakuan Pemerahan Melalui  Evaluasi  Jumlah  Mikroba  dan Derajat Keasaman (pH). Jurnal Peternakan Linkungan Tropis 1(1) http://dx.doi.org/10.30872/jpltrop.v1i1.24 40.
Pradika,  A.  Y.,  Chusniati,  S.,  Purnama,  M.  T. E.,  Effendi,  M.  H.,  Yudhana,  A.,  &
Wibawati,  P.  A.  (2019).  Uji  Total
Escherichia coli pada Susu Sapi Segar di Koperasi  Peternak  Sapi  Perah  (KPSP) Karyo Ngremboko Kecamatan Purwoharjo Kabupaten Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner , 2 (1), 1. https://doi.org/10.20473/jmv.vol2.iss1.20
19.1-6.
Pramesthi, R., T. H. Suprayogi dan Sudjatmogo.  (2015).  Total  Bakteri  dan pH  Susu  Segar  Sapi  Perah  Friesian Holstein  di  Unit  Pelaksana  Teknis Daerah  dan  Pembibitan  Ternak  Unggul Mulyorejo  Tengaran  Semarang.  Animal Agriculture Journal, 4(1): 69-74.
Rahayu,  W.P.,  &  C.C.  Nurwitri.  (2012).
Mikrobiologi  Pangan. Institut  Pertanian Bogor-(IPB) Press, Bogor.
Santoso,  L.,  Rukmi,  I  dan  Lestari,  O.  (2012).
Jumlah  Total  Bakteri  Dan Coliform Dalam  Air  Susu  Sapi  Segar  Pada Pedagang Pengecer Di Kota Semarang. Jurnal  Kesehatan  Masyarakat ,  1(2). http://ejournals1.undip.ac.id/index.php/jk m. 1.
Septiani,  Monica  dan  Drastini,  Yatri.  (2014).
Jumlah  Total  Bakteri  Susu  dari  Koperasi Susu di Yogyakarta dan Jawa Timur. Sain Veteriner , 32 (1),  68 –77.  Retrieved  from http://journal.ugm.ac.id/jsv/article/downlo ad/5424/5165.
Shazari,  P.  A.,  Soleha,  T.  U.,  Carolia,  N.,  & Ramadhian,  M.  R.  (2017).  Perbandingan Jumlah  Bakteri  Escherichia  coli  pada Susu  Sapi  Pasteurisasi  dan  Susu  Sapi Ultra  High  Temperature  (UHT)  yang Beredar  di  Bandar  Lampung. Majority ,
8 (2), 125 –130. Retrieved from http://digilib.unila.ac.id/id/eprint/26451.
Subagyo, Y., Olivia, R., & Astuti, Triana Yuni,
Soediarto,  P.  (2020).  Pengkajian  Jumlah Mikroba dan Daya Hahan Susu Segar di Kecamatan  Sumbang  dan  Baturraden.
Prosiding Seminar Teknologi Dan Agribisnis Peternakan VII –Webinar:
Prospek Peternakan Di Era Normal Baru Pasca Pandemi COVID-19 , 532 –538.