## SAINTEKS: JURNAL SAIN DAN TEKNIK Volume 5 Nomor 2 Tahun 2023

## E-ISSN : 2685-8304
Briquette Characteristics of Mixed Charcoal of Taro Peel and Rice Husk Galu Murdikaningrum, Mutiara Putri Utami Susanto, Raden Tarisa Nurhanifah, Mualifah (pp:126 –136)
Analysis of Interest In Using Electrical Bicycles in Palangka Raya
Vivien Nopella Valentina, Robby,Sutan Parasian Silitonga (pp: 137 –144)
The Effect Of H2O2 On The Bleaching-Scouring Simultaneous Process Of
100% Cotton Fabric With Pad – Batch System
Luciana, Agni Salamah (pp: 145 –153)
Management of Water Quality Parameters In Cultivating Vaname Shrimp (Litopenaeus Vannamei) In Intensive Tambak PT. Aneka Tambak Oseana Nusantara , NTB Pieter Amalo, Riris Yuli Velentine, Catur Pramono Adi, Restye Putri Geofani Mbura (pp: 154 –162)
Analysis of The Ant Number Effects on Ant Colony Optimization for Solving Russia-20-Nodes-SDVRP Instance Ekra Sanggala, Muhammad Ardhya Bisma (pp: 163 –174) Facilities Re- layout of “X” Health Center
Dini Yulianti, Tombak Gapura Bhagya, Didi Kusvendi (pp: 175 –186)
Use of Gold Mine Waste Sand From Penda Pilang Village as Hrs-Base Mixture
Deskianto, Supiyan, Devia (pp: 187 –199)
In Vitro Antagonism Test of Endophytic Isolates From The Ciplukan Plant (Physalis Angulata L.)
Against Ralstonia Solanacearums Ika Afifah Nugraheni, Inneke Ashri Mawaddah (pp: 200 –210)
Employee Performance Measurement at PT. Cahaya Mekanindo Perkasa Using the Human Resources Scorecard Method Ilyas Habibi, AuliaFashanah Hadining (pp: 211 –219)
The Effect of Temperature Variations in the Pressing Process on Glossing Defects Bigborn 2-Tuck Pants Style 3651 Trousers in the Finishing Department of PT. X Afriani Kusumadewi, Feny Nurherawati, Filly Pravitasari (pp: 220 –227)
Optimum Splice Thickness Ratio Splicer of a Winding Machine to PE20KT Thread Splicing Quality
Hendri Pujianto, Bambang Yulianto, Hamdan S Bintang, Dinda Amelia Pramesti (pp: 228 –235) The Influence of Organizational Culture and Organizational Commitment to Employee Work Discipline at the Bandung City Transportation Service Moch Ruli Chaerudin, Riza Rizkiah (pp: 236 –245)
Feasibility Analysis of Smelter Grade Alumina (SGA) Project Development at PT. X Dio Rianto , Dedy Setyo Oetomo, Rizky Fajar, Ramdhani (pp: 246 –258)
Evaluation of Decision Making on Using Online Media in the D'Amerta Berniaga Bandung Business Group Alam Avrianto , Ira Murwenie, Rahmina Puspa AR, Dwirani Fauzi L, Abdul Fatah H (pp: 259 –265)
5 Year Effectiveness Index From Research Ministry Of Marine And Fisheries
Catur Pramono Adi, Pieter Amalo (pp: 266 –273)
Technology Acceptance Model for the Use of Learning Management System in Indonesia Graha Prakarsa, Elly Komala, Tombak Gapura Bhagya, Safira Noor Andinia (pp: 274 –284)
UNIVERSITAS INSAN CENDEKIA MANDIRI dh UNIVERSITAS BANDUNG RAYA Fakultas Teknik
Jl. Pasir Kaliki No. 199 Bandung – Jawa Barat http://ejournal.uicm.ac.id/index.php/sainteks UICM – UNBAR www.uicm.ac.id
Volume 05 Nomor 02 Tahun 2023 http://ejournal.uicm.ac.id/index.php/sainteks/
In vitro antagonism test of endophytic isolates from the ciplukan plant (Physalis angulata L.) against Ralstonia solanacearums
Uji antagonis isolat endofit asal tanaman ciplukan ( Physalis angulata L.)
terhadap Ralstonia solanacearum secara in vitro
Ika Afifah Nugraheni 1*) , Inneke Ashri Mawaddah 2) 1&2) Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta , Yogyakarta, 55292
Email: ikaafifah@unisayogya.ac.id *) Corresponding author
Abstract: Ralstonia solanacearum was a pathogenic bacteria that causes wilt disease which can cause up to one hundred percent damage to horticultural plants. Therefore, a control effort  was needed to overcome this  problem.  The  use  of  pesticides  was  an  alternative  that  can  be  used  to  suppress  the  growth  of  the pathogen R. solanacearum . However, its continuous use poses a high risk to the environment so friendly and safe control efforts are needed. One way was by utilizing endophytic bacteria. This study aims to test the ability of endophytic bacterial isolates from ciplukan plant ( Physalis angulata L.) to suppress the growth of  the  pathogenic  bacteria R.  solanacearum in  vitro.  The  method  in  this  research  includes  rejuvenating endophytic bacterial isolates BA2(3), BA3(1), DA1(4) and BU3(5) from ciplukan plants ( Physalis angulata L.)  obtained  from  research  conducted  by  Setianah  (2020),  observations  macroscopic  and  microscopic endophyte isolates, hypersensitivity test of endophytic bacteria on tobacco plants ( Nicotiana tabacum L.), then continued with an in vitro antagonist test using the Kirby Baurer technique. Research data shows that of the four candidates, two isolates of endophytic bacteria, namely BA2(3) and BU3(5), showed a negative hypersensitivity  reaction  which  was  characterized  by  the  absence  of  necrosis  symptoms  in  the hypersensitivity  test,  so  these  isolates  could  be  tested  for  antagonists.  The  results  of  the  antagonist  test showed that isolates BA2(3) and BU3(5) had the potential to inhibit the growth of R. solanacearum which had an inhibitory diameter of 3.03 mm and 1.60 mm in the first 24 hours of incubation. It is hoped that the ability of endophyte isolates BA2(3) and BU3(5) to inhibit the growth of the pathogen R. solanacearum can be used as a biological agent to reduce the use of pesticides in treating plant diseases.. Keywords : endophytic bacteria, ciplukan plants, necrosis, wilt disease, R. solanacearum
Abstrak: Ralstonia  solanacearum merupakan  bakteri  patogen  penyebab  penyakit  layu  yang  dapat menimbulkan  kerusakan  pada  tanaman  hortikultura  hingga  seratus  persen.  Oleh  karena  itu,  dibutuhkan suatu upaya pengendalian untuk mengatasi permasalahan tersebut. Penggunaan pestisida merupakan salah satu  alternatif  yang  dapat  digunakan  untuk  menekan  pertumbuhan  patogen R.  solanacearum .  Namun, penggunaannya secara terus menerus memiliki resiko yang tinggi terhadap lingkungan sehingga diperlukan upaya pengendalian yang ramah dan aman. Salah satunya dengan memanfaatkan bakteri endofit. Penelitian ini bertujuan untuk menguji kemampuan isolat bakteri endofit dari ciplukan ( Physalis angulata L.) dalam menekan  pertumbuhan  bakteri  patogen R.  solanacearum secara in  vitro .  Metode  pada  penelitian  ini meliputi  peremajaan  isolat  bakteri  endofit  BA2(3),  BA3(1),  DA1(4)  dan  BU3(5)  dari  tanaman  ciplukan ( Physalis  angulata L.)  yang  didapat  dari  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Setianah  (2020),  pengamatan makroskopik dan mikroskopik isolat endofit, uji hipersensitifitas bakteri endofit pada tanaman tembakau ( Nicotiana tabacum L.), kemudian dilanjut dengan uji antagonis in vitro dengan teknik Kirby Baurer . Data penelitian menunjukkan  jika dari empat kandidat,  diperoleh dua isolat  bakteri endofit yaitu BA2(3) dan BU3(5) menunjukan reaksi negatif hipersensitif yang ditandai dengan tidak adanya gejala nekrosis pada uji hipersensitifitas,  sehingga  isolat  tersebut  dapat  dilakukan  pengujian  antagonis.  Hasil  uji  antagonis menunjukan  bahwa  isolat  BA2(3)  dan  BU3(5)  berpotensi  dalam  menghambat  pertumbuhan R. solanacearum yang memiliki luas diameter penghambatan sebesar 3,03 mm dan 1,60 mm pada inkubasi 24 jam  pertama.  Kemampuan  yang  dimiliki  oleh  isolat  endofit  BA2(3)  dan  BU3(5)  dalam  menghambat pertumbuhan  patogen R.  solanacearum diharapkan  dapat  dimanfaatkan  sebagai  agen  hayati  untuk mengurangi penggunaan pestisida dalam mengatasi penyakit pada tanaman. Kata Kunci: bakteri endofit, tanaman ciplukan, nekrosis, penyakit layu, R. solanacearum
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
DOI: http://dx.doi.org/10. 37577/sainteks.v%vi%i.607 Received: 07, 2023.  Accepted: 08, 2023. Published: 09, 2023.

## PENDAHULUAN
Sektor  pertanian  memiliki  peran  yang  penting  dalam  menunjang  sektor  perekonomian dan  pangan  nasional.  Namun,  peningkatan  hasil  produksi  pertanian  masih  menghadapi tantangan, antara lain adanya serangan organisme pengganggu tanaman (OPT). Salah satu OPT yang menyerang tanaman di Indonesia yaitu R. Solanacearum, yang menyebabkan penyakit layu tanaman (Navitasari et al., 2021).
Penyakit layu tergolong jenis penyakit penting yang menyerang tanaman hortikultura di Indonesia. Menurut Geddes (1992 dalam Setiawan, 2019), penyakit oleh bakteri R. solanacearum menduduki  peringkat  ke-6  penyebab  kerusakan  tanaman  yang  ada  di  Indonesia.  Sedangkan menurut  Mansfiled et  al  (2012),  patogen  R.  solanacearum  menduduki  peringkat  ke-2  dari  10 daftar bakteri patogen tanaman dalam patologi molekuler tanaman.
Dampak  kerugian  yang  ditimbulkan  oleh  bakteri  patogen R.  solanacearum  mampu menimbulkan  keparahan  serta  kerugian  pada  sektor  pertanian  hingga  sebesar  100% (Elphinstone,  2005  dalam  Setiawan,  2019).  Gejala  infeksi  yang  ditimbulkan  tanaman  apabila terinfeksi  oleh R.  solanacearum  ialah  terdapatnya  perubahan  warna  pada  akar  dan  batang tanaman  menjadi  berwarna  kuning  kecoklatan,  serta  menunjukkan  gejala  layupada  bagian tanaman  (Syukur,  2016  dalam  Apriliani,  2020).  Efek  yang  ditimbulkan  dari  tanaman  yang terinfeksi  oleh  bakteri  patogen R.  solanacearum  memiliki  dampak  yang  buruk  bagi  tanaman dikarenakan dapat menyebabkan kematian pada tanaman (Setyari et al., 2013).
Berbagai upaya yang telah dilakukan para petani dalam melakukan pengendalian infeksi patogen R. solanacearum ialah dengan menggunakan pestisida. Pestisida lebih sering digunakan karena jauh lebih mudah didapatkan serta dapat mengurangi infeksi patogen secara instan. Akan tetapi penggunaan pestisida yang terus-menerus serta melebihi dosis penggunaan menyebabkan resistensi terhadap patogen serta lingkungan (Nababan et al., 2017). Oleh karena itu dibutuhkan upaya pengendalian hayati terhadap patogen R. solanacearum yang ramah bagi lingkungan dan aman bagi lingkungan maupun kehidupan manusia.
Upaya  pengendalian  hayati  yang  ramah  lingkungan  dapat  dilakukan  dengan menggunakan bakteri endofit sebagai agen pengendali patogen tanaman. Bakteri endofit hidup di dalam jaringan tanaman tanpa menimbulkan efek negatif pada tanaman (Desriani et al., 2014), serta  dapat  memberikan  keuntungan  terhadap  tanaman  inang  dan  lingkungan.  Penelitian terdahulu  telah  memanfaatkan  bakteri  endofit  tanaman  sebagai  pengendali  hayati R. Solanacearum. Salah satunya ialah penelitian Zahra et al (2019) yang memperoleh isolat bakteri endofit asal tanaman terung ( Solanum melogena L.), memiliki kemampuan untuk menghambat R. solanacearum secara in vitro.
Sejauh ini, penelitian terdahulu telah melakukan pemanfaatan bakteri endofit dari jenis tanaman lain, sehingga belum terdapat penelitian yang memanfaatkan bakteri endofit ciplukan ( Physalis angulata L.) sebagai agen pengendali bakteri patogen R. solanacearum. Padahal bakteri endofit  tanaman  ciplukan  memiliki  potensi  antimikroba  untuk  dalam  penghambatan  patogen. Setianah (2020) telah berhasil mengisolasi 44 bakteri endofit dari ciplukan dan didapatkan empat bakteri yang memiliki diameter penghambatan terluas  terhadap patogen P. aureginosa, E. coli, dan S.  aureus. yaitu isolat BA2(3), BA3(1), DA1(4), dan BU3(5) Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk memanfaatkan bakteri endofit dari tanaman ciplukan sebagai agen hayati dalam menghambat patogen tanaman R. solanacearum secara in vitro.
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums

## METODOLOGI
Subjek Penelitian
Penelitian  ini  tergolong  penelitian  eksperimental  menggunakan  empat  bakteri  endofit dari ciplukan ( Physalis angulata L.) yang berasal dari penelitian sebelumnya (Setianah, 2020). Bakteri endofit yang digunakan yaitu isolat BA2(3), BA3(1), DA1(4), dan BU3(5).
Alat dan Bahan
Alat  penelitian  yang  digunakan  meliputi  autoklaf,  spektrofotometer,  sentrifugasi, drigalskispatula, jarum ose, cawan petri, erlenmeyer, gelas ukur, beaker glass, timbangan analitik, pinset, penggaris, kapas, jangka sorong digital, tisu, aluminium foil, plastic warp, hotplate, hand couter, bunsen api, tube, vortex, tabung reaksi, laminar air flow, rotator shaker, spuit, kertas label, pelubang kertas, kertas saring.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini ialah Nutrient Agar (NA), Nutrient broth (NB), akuades steril, empat isolat bakteri endofit tanaman ciplukan yaitu isolat BA2(3), BA3(1), DA1(4), dan  BU3(5),  tanaman  tembakau  ( Nicotiana  tabacum  L.),  bakterisida/fungisida  Nordox  56WP, alkohol  70%,  Bakteri  patogen R.  solanacearum  yang  berasal  dari  Laboratorium  Bakteri  di Departemen Hama dan Penyakit Tumbuhan, Universitas Gajah Mada.

## Peremajaan Isolat Bakteri Endofit Tanaman Ciplukan
Bakteri  endofit  tanaman  ciplukan  yang  digunakan  merupakan  isolat  endofit  yang diperoleh dari hasil penelitian terdahulu  Empat isolat kandidat bakteri endofit terpilih dengan kode BA2(3), BA3(1), DA1(4), dan BU3(5) dilakukan peremajaan untuk selanjutnya dilakukan pengamatan  mikroskopik  dan  pengamatan  makroskopik.  Peremajaan  bakteri  endofit  dimulai dengan mengambil  biakan  murni  dari  kultur stock  sebanyak satu ose,  kemudian  ditumbuhkan pada permukaan media NA dengan cara digoreskan secara zig zag ( streak). Selanjutnya, bakteri diinkubasi pada suhu 37°C dalam waktu 24 jam (Yani et al., 2019).
Peremajaan Bakteri Patogen R. solanacearum Bakteri  patogen R.  solanacearum  diperoleh  dari  Departemen  Hama  dan  Penyakit Tumbuhan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Gajah  Mada.  Bakteri  patogen  tersebut  selanjutnya dilakukan  peremajaan.  Proses  peremajaan  dilakukan  dengan  cara  mengambil  satu  jarum  ose biakan  isolat  endofit  murni  kemudian  digoreskan  pada  permukaan  petridish  yang  berisikan media NA untuk selanjutnya diinkubasi selama 24 – 48.

## Uji Hipersensitifitas Bakteri Endofit
Uji hipersensitifitas dilakukan dengan menggunakan daun tembakau ( Nicotiana tabacum L.).  Empat  isolat  kandidat  bakteri  endofit  BA2(3),  BA3(1),  DA1(4),  dan  BU3(5)  yang  sudah diremajakan,  selanjutnya  dilakukan  pengambilan  isolat  tunggal  pada  masing-masing  bakteri endofit,  kemudian  disuspensikan  ke  dalam  akuades  steril  sebanyak  5  mL  dan  dihomogenkan menggunakan vortex  .Kemudian  dilakukan  pengukuran absorbansi menggunakan spektofotometri menggunakan panjang gelombang sebesar 625 nm, nilai absorbansi antara 0,08 sampai  0,130 sehingga  diperoleh  kerapatan  bakteri  yang setara standar  kekeruhan  McFarland 0,5. Setiap suspensi bakteri endofit tersebut diambil menggunakan spuit steril sebanyak ±2 mL untuk selanjutnya dilakukan injeksi pada bagian belakang daun tanaman tembakau, perlakuan injeksi pada setiap isolat diulang sebanyak 3 kali (Munif et al., 2015). Kontrol negatif diinjeksi dengan  akuades  steril  sedangkan  kontrol  positif  menggunakan  patogen R.  solanacearum. Selanjutnya, perlakuan tersebut diamati selama 48 jam (Arimbawa et al., 2019). Hasil positif uji hipersensitivitas ditunjukkan dengan munculnya gejala nekrosis pada daun, sebaliknya uji negatif tidak memunculkan nekrosis.
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Uji Antagonis Bakteri Endofit Terhadap R. solanacearum

## Pembuatan suspensi bakteri Patogen R. solanacearum
Patogen R. solanacearum ditumbuhkan dalam media NB 10 mL selama 72 jam pada suhu ±36°C.  Kemudian  dilakukan  pengukuran  absorbansi  menggunakan  spektofotometri menggunakan  spektofotometri  625  nm  hingga  mencapai  nilai  absorbansi  antara  0,080  sampai 0,130 yang setara McFarland 0,5 (10 8 CFU/mL) (Cockerill et al., 2012 dengan modifikasi).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Endofit
Kandidat  isolat  bakteri  endofit  dengan  hasil  uji  negatif  hipersensitivitas  diremajakan dalam  media  NB.  Inkubasi  dilakukan  dalam rotator  shaker  selama  72  jam.  Suspensi  bakteri endofit  yang  sudah  ditumbuhkan,  kemudian  diukur  kepadatannya  menggunakan spektrofotometer 625 nm yang setara McFarland 0,5. Suspensi dipindahkan ke dalam tube dan dilakukan  sentrifugasi  20  menit  kecepatan  3000  rpm  (Aqlinia et  al.,  2020),  sehingga  akan diperoleh larutan supernatan dan biomassa pada tube.

## Uji Antagonis
Uji  antagonis  dilakukan  menggunakan  teknik Kirby  Bauer.  Suspensi  R.  solanacearum diambil  sebanyak  100  µL  dan  diratakan  pada  media  NA  menggunakan drigalskispatula.  Petri kemudian dibagi 4 bagian yang digunakan untuk kontrol positif, kontrol negatif, bakteri endofit 1, dan bakteri endofit 2. Kertas saring dengan diameter ±6 mm diletakkan di atas media NA yang sudah ditumbuhkan bakteri patogen R. solanacearum yang kemudian masing-masing dari kertas saring ditetesi oleh supernatan bakteri endofit sebanyak 50µL. Perlakuan uji diulang sebanyak 3 kali.  Untuk  kontrol  negatif  digunakan  media  NB  serta  akuades  steril  dan  untuk  kontrol  positif menggunakan bakterisida Nordox 56 WP dengan konsentrasi 0,5% (Yanuar., 2016). Kemudian petri  disimpan  selama  24-96  jam  dalam  suhu  ±  36°C  untuk  selanjutnya  diamati  dan  diukur menggunakan  jangka  sorong  terhadap  terbentuknya  zona  penghambatan  yang  dihasilkan (Oktafiyanto et al., 2018).
Pengukuran Diameter Zona Hambat dan Analisis Data
Apabila  terdapat  zona  penghambatan  (zona  bening)  terbentuk  pada  sekeliling  kertas saring, maka diukur diameter penghambatan (zona bening) dengan jangka sorong menggunakan rumus  Kategori  Hambatan  Minimum  (KHM)  (Pratiwi,  2017).  Data  hasil  pengujian  selanjutnya dilakukan  perhitungan  rata-rata  ( means)  sehingga  mendapatkan  grafik  zona  hambat  yang terbentuk dari setiap isolat endofit.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Bakteri endofit dalam penelitian ini merupakan isolat  bakteri yang diperoleh dari hasil penelitian  Setianah  (2020).  Tanaman  ciplukan  dipilih  sebagai  sumber  bakteri  endofit dikarenakan  tanaman  ciplukan  banyak  dimanfaatkan  sebagai  tanaman  obat  (Setianah,  2020). Selain itu, tanaman ciplukanmemiliki senyawa bioaktif berupa saponin, alkaloid, flavonoid, tanin, dan polipenol yang mampu memiliki aktivitas antimikroba (Mahardika et al., 2021) Empat  isolat  endofit  yang  terpilih  dilakukan re-culture  dan  diinkubasi  selama  24  jam. Pertumbuhan  isolat  ditandai  dengan  peningkatan masa  sel  sehingga  terbentuknya  koloni  baru (Retnowati et al., 2011 dalam Setianah, 2020). Isolat endofit yang sudah di re-culture selanjutnya dilakukan pengamatan makroskopik (warna, tepian, bentuk, dan elevasi koloni) dan mikroskopik (pewarnaan  Gram  dan  pengamatan  bentuk  isolat)  untuk  dibandingkan  dengan  hasil  data karakterisasi  terdahulu.  Tujuan  dari  pengamatan  isolat  endofit  ialah  untuk  melihat  serta mengetahui  pertumbuhan  morfologi  isolat  bakteri  yang  terbentuk,  guna  untuk  menghindari adanya kontaminasi pada isolat endofit.
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Tabel 1. Ciri morfologi isolat bakteri endofit ciplukan No Kode Isolat Warna Koloni Bentuk Koloni Elevasi Koloni  Tepian Koloni 1 BA2(3) Oranye Bulat Cembung Mulus 2 BA3(1) Kuning Bulat Cembung Mulus 3 DA1(4) Krem Bulat Cembung Mulus 4 BU3(5) Kuning Bulat Cembung Mulus
Hasil karakterisasi makroskpik yang ditampilkan pada Tabel 1 menunjukan isolat BA3(1) dan isolat BU3(5) memiliki bentuk bulat, elevasi cembung, tepian mulus, dan koloni berwarna kuning. Isolat BA2(3) memiliki bentuk bulat, elevasi cembung, tepian mulus, dan koloni berwarna oranye. Isolat DA1(4) memiliki bentuk bulat, elevasi cembung, tepian mulus, dan koloni berwarna krem. Berdasarkan hasil pengamatan makroskopik pada isolat bakteri endofit menunjukan hasil karakterisasi yang sama dari hasil karakterisasi sebelumnya baik dari pengamatan warna, tepian, bentuk, dan elevasi koloni.
Hasil  pengamatan  morfologi  isolat  endofit  secara  mikroskopik  dilakukan  pewarnaan Gram pada setiap isolat endofit yang nantinya akan dibandingkan dengan hasil data pengamatan mikroskopik  terdahulu.  Menurut  Hajar  (2012),  pewarnaan  Gram  bertujuan  mengetahui  ciri morfologi suatu bakteri beserta dengan sifatnya berdasarkan uji Gram. Hasil dari karakterisasi mikroskopik,  menunjukan  kesamaan  sifat  Gram  dan  bentuk  sel  dengan  hasil  karakterisasi mikroskopik pada penelitian terdahulu. Empat isolat endofit yang terpilih terdapat dua bakteri Gram  positif  berbentuk coccus,  yaitu  BA2(3)  dan  DA1(4)  kemudian  dua  bakteri  lainya  yaitu, BA3(1)  dan  BU3(5)  termasuk  dalam  kelompok  Gram  negatif  dan  berbentuk coccus.  Hasil pewarnaan Gram serta pengamatan bentuk isolat disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil pewarnaan Gram dan pengamatan bentuk isolat endofit No Kode Isolat Bentuk sel Sifat Gram 1 BA2(3) Coccus Gram Positif 2 DA1(4) Coccus Gram Positif 3 BA3(1) Coccus Gram Negatif 4 BU3(5) Coccus Gram Negatif
Berdasarkan hasil perwarnaan Gram pada isolat endofit, didapatkan dua  isolat bersifat Gram  positif  dengan visualisasi sel berwarna ungu, serta dua isolat endofit lainya bersifat Gram negatif  dengan  sel  berwarna  pink  kemerahan.  Perbedaan  warna  pada  hasil  pewarnaan  Gram dikarenakan  terdapat  perbedaan  senyawa  penyusun  antara  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif dengan  Gram  positif.  Hal  ini  sesuai  dengan  penjelasan  Wulandari  dan  Desi  (2019),  yang menjelaskan  bahwa  bakteri  Gram  positif  mampu  mempertahankan  cat  kristal  violet.  Hal  ini dikarenakan penyusun dinding sel pada bakteri Gram positif memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal.  Bakteri  Gram  negatif  tidak  memiliki  kemampuan  untuk  dapat  mempertahankan  warna kristal violet dikarenakan tipisnya peptidoglikan.
Selain itu, dinding sel Gram positif memiliki sifat tidak dapat larut dalam aseton, sehingga pewarnaan kristal violet mampu tetap dipertahankan oleh sel dan dapat memberikan visualisasi sel yang berwarna ungu kebiruan. Dinding sel Gram negatif dapat larut dalam aseton, sehingga visualisasi  sel  berwarna  merah.  Hal  tersebut  dikarenakan  cat  Gram  berupa  safranin  masih dipertahankan  sel  (Rohmah,  2017).  Hasil  pengamatan  makroskopik  dan  mikroskopik  isolat endofit menunjukan hasil karakterisasi yang sama dari hasil karakterisasi sebelumnya.  Hal ini menunjukan  bahwa  isolat  endofit  tidak  terkontaminasi  oleh  mikroorgansime  lainya  sehingga kandidat  isolat  endofit  terpilih  dapat  digunakan  untuk  pengujian  selanjutnya  yaitu  uji hipersensitifitas. .
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Uji hipersensitifitas dilakukan untuk mengetahui apakah ke-empat isolat bakteri endofit yang terpilih bersifat patogen terhadap tanaman yang ditandai dengan adanya gejala nekrosis. Uji hipersensitifitas  dilakukan  dengan  menginokulasikan  suspensi  bakteri  uji  pada  daun  tanaman tembakau.  Tanaman  tembakau  digunakan  dalam  uji  hipersensitifitas  dikarenakan  merupakan tanaman  yang  sensitif  akan  hama  serta  penyakit  (Fajarika et  al.,  2022).  Selain  itu,  tanaman tembakau banyak digunakan sebagai parameter untuk mengetahui patogensitas isolat mikroba terhadap  tanaman  dikarenakan  tanaman  tembakau  memiliki  respon  yang  cepat  terhadap terjadinya reaksi hipersensitif (Herdiyantoro et al., 2022).
Berdasarkan  hasil  pengujian  hipersensitifitas  terhadap  empat  isolat  endofit  yang  telah diinokulasikan ke daun tembakau (Tabel 3), terdapat dua isolat bakteri yaitu BA3(1) dan DA1(4) menunjukan rekasi hipersensitif yang ditandai dengan adanya gejala nekrosis pada permukaan daun tembakau yang telah diinokulasikan bakteri endofit. Reaksi negatif hipersensitif ditunjukan oleh  isolat  BA2(3)  dan  BU3(5)  yang,  tidak  terdapat  adanya  bercak  kuning  pada  tanaman tembakau. Kontrol positif ( R. solanacearum) menunjukan terdapatnya reaksi hipersensitif yang ditandai  dengan  adanya  nekrosis,  kemudian  pada  kontrol  ngatif  (akuades  steril)  tidak menunjukkan timbulnya bercak nekrosis pada titik inokulasi isolat di daun tanaman tembakau (Gambar 1)
Gambar 1. Reaksi hipersensitif pada daun tembakau yang telah diinokulasikan bakteri uji  pada 48 jam setelah inokulasi, (A) isolat BA3(1), (B) Isolat DA1(4), (C) Isolat BA2(3), (D) Isolat BA2(3), (E) kontrol negatif dan (F) kontrol positif.
Tingkat keparahan isolat bakteri pada uji hipersensitif, dipengaruhi oleh luasnya bercak diameter nekrosis yang terbentuk. Hasil ini sesuai dengan Chung et al (2011), yang menjelaskan tingkat  keparahan  uji  patogensitas  berdasarkan  bercak  nekrosis  yang  terbentuk.  Pada  hasil penelitian, isolat BA2(3) dan BU3(5) tidak terdapat bercak nekrosis sehingga isolat tersebut tidak berpotensi  sebagai  patogen  terhadap  tanaman,  sedangkan  Isolat  BA3(1)  dan  isolat  DA1(4) memiliki luas bercak nekrosis yang lebih kecil dibandingkan pada kontrol positif. Kontrol positif memiliki  bercak  nekrosis  yang  lebih  lebar,  berwarna  coklat  serta  mengering.  Oleh  karena  itu,
B C E
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
tingkat  keparahan  patogensitas  tertingi  pada  uji  hipersensitifitas  ditunjukkan  oleh  daun  yang telah diinokulasi isolat patogen R. solanacearum.
Bakteri  endofit  ataupun  bakteri  patogen  lainya  memiliki  faktor  virulensi  terhadap pertahanan tumbuhan, sehingga mikroorganisme endofit berpeluang memiliki sifat patogenitas laten  atau  tersembunyi,  oleh  karena  itu    dibutuhkan  rangsangan  atau    uji  tertentu  untuk menimbulkan respon  patogensitasnya terhadap tanaman (Kumala, 2019). Houdenat dan Isabelle (2017) menjelaskan, respon pertahanan yang ditimbulkan tanaman dipicu oleh adanya interaksi gen Avr (Avirulen) yang dimiliki oleh  patogen terhadap gen R (resisten) tanaman. Pertahanan tersebut  disebut  dengan gene  for  gene  interaction.  Apabila  gen  R  yang  dimiliki  oleh  tanaman mampu mengkode reseptor spesifik dan mengenali kode produk protein dari Avr patogen, maka akan  terjadi  induksi  ekspresi  gen  ketahanan  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  patogen. Sehingga menimbulkan reaksi hipersensitif yang ditandai dengan timbulnya bercak nekrosis pada tanaman.
Isolat endofit yang telah menunjukan reaksi negatif pada uji hipersensitifitas selanjutnya dilakukan pengujian antagonis terhadap patogen R.solanacearum secara in vitro. Dalam hasil uji hipersensitifitas,  isolat  endofit  BA2(3)  dan  isolat  BU3(5)  merupakan  isolat  yang  tidak menunjukan  reaksi  hipersensitif  positif.  Suspensi  isolat  endofit  yang  digunakan  dalam  uji antagonis  merupakan  suspensi  yang  telah  diinkubasi  selama  72  jam.  Alasan  menggunakan suspensi  dengan  waktu  inkubasi  72  jam,  dikarenakan  isolat  endofit  BA2(3)  dan  isolat  BU3(5) sudah memasuki fase stasioner. Hasil ini selaras dengan penelitian yang sedang berjalan bahwa isolat  endofit  tersebut  memasuki  fase  stasioner  pada  waktu  72  jam  dengan  nilai  absorbansi pertumbuhan  sebesar  0,829  A.  Pengujian  dilakukan  secara  tripo  untuk  masing-masing  isolat endofit  sehingga  diameter  zona  hambat  yang  didapatkan  diperoleh  dari  rata-rata  hasil perhitungan triplo tersebut. Pengukuran diameter zona hambat dilakukan setiap 24 jam selama 4 hari (96 jam) sehingga didapatkan grafik pertumbuhan zona hambat.
Hasil  yang  diperoleh  dari  uji  antagonis  isolat  endofit  terhadap R.  solanacearum menunjukan  bahwa  isolat  BA2(3)  dan  BU3(5)  berpotensi  memiliki  aktivitas  penghambatan patogen dengan diameter zona bening bervarisi (Gambar 2). Pada isolat endofit BA2(3) memiliki luas diameter penghambatan terluas pada inkubasi 24 jam pertama sebesar 3,03 mm, dan isolat endofit BU3(5) memiliki luasan diameter penghambatan terluas pada inkubasi 24 jam pertama sebesar 1,60 mm. Pada 48 jam selanjutnya, masing-masing isolat BA2(3) dan BU3(5) mengalami penurunan diameter zona hambat hingga mencapai penurunan luas diameter sebesar 0,67 mm untuk BU3(5) dan 0,70 mm untuk isolat BA2(3) selama pengamatan 96 jam.
Gambar 2. Grafik uji antagonis bakteri endofit terhadap R. solanacearum
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 24 48 72 96 D ia m et er z o na h am b at ( mm ) Waktu (jam) BA2(3) BU3(5)
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Adanya penurunan diameter penghambatan pada media pertumbuhan dapat dipengaruhi oleh  beberapa  faktor.  Pada  waktu  inkubasi  di  24  jam  pertama,  kondisi  media  pertumbuhan, kondisi inkubasi, serta sensitivitas organisme semuanya masih dalam keadaan optimal sehingga didapatkan  diameter  zona  penghambatan  tertinggi.  Pada  inkubasi  48  hingga  96  jam,  terjadi penurunan diameter zona hambat, hal ini dikarenakan terdapatnya faktor yang mempengaruhi penurunan  diameter  zona  hambat.  Ariyanti  (2012)  menyebutkan,  faktor  yang  memungkinkan penyebab  terjadinya  perbedaan  diameter  zona  hambat  yaitu  kondisi  medium  kultur,  pH,  , komposisi media, suhu inkubasi, serta waktu inkubasi.
Berdasarkan  luasan  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk,  isolat  BA2(3)  dan  isolat BU3(5)  memiliki  kategori  aktivitas  penghambatan  lemah  dikarenakan  diameter  zona  hambat yang terbentuk dalam uji antagonis berukuran <5 mm. Desriani et al. (2014) menjelaskan bahwa lemahnya aktivitas antibakteri yang dihasilkan oleh bakteri endofit dimungkinkan karena bakteri endofit  hanya  mampu  berinteraksi  dan  menghasilkan  senyawa  antibakteri  secara  langsung dengan tanaman inang. Hal tersebut mengakibatkan aktivitas kemampuan bakteri endofit dalam menghasilkan senyawa anti bakteri menurun.
Penghambatan yang terbentuk antara bakteri endofit terhadap R. solanacearum pada uji antagonis ditunjukkan dengan adanya zona bening di sekitar kertas saring atau kertas cakram. Menurut Zahra (2019), keefektifan hasil uji antagonis secara in vitro didasarkan pada terbentuk atau  tidaknya  zona  hambat  antara  patogen  dan  agen  antagonis.  Terdapatnya  zona  hambat tersebut  dikarenakan  terdapatnya  potensi  endofit  yang  mampu  mengendalikan,  menghambat, bahkan  membunuh  pertumbuhan  patogen  melalui  mekanise  antibiosis  (Deswanti,  2021). Antibiosis  merupakan  mekanisme  pertahanan  bakteri  antagonis  yang  mampu  menghambat pertumbuhan  morfologis  maupun  fisiologis  dari  mikroorganisme  lain  dengan  mensekresikan metabolit sekunder berupa antibiotik seperti enzim pelisis, siderofor dan substansi toksik lainya (Prihatinningsih et al., 2015).
Gambar 6.  Diameter zona hambat isolat bakteri endofit terhadap R. Solanacearum, Isolat BA2(3), (B) isolat BU3(5), (C) kontrol negatif (akuades steril), (D) kontrol negatif (NB), (D) kontrol positif (Bakterisida / fungisida Nordox 56 WP)
A B C D E D E
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Pada saat bakteri endofit memasuki fase stasioner, maka  nutrisi pada media akan terbatas atau  habis  sehingga  bakteri  akan  mensintesis  metabolit  sekunder  (Pratiwi,  2008).  Metabolit sekunder  merupakan  senyawa  organik  yang  diggunakan  sebagai  sarana  dalam  penyokong pertumbuhan, perkembangan, dan pertahanan (Asmara, 2017). Metabolit sekunder diproduksi melalui  proses  biosintesis  pada  tumbuhan.  Selain  menjadi  sumber  nutrisi,  metabolit  sekunder juga  digunakan  bakteri  endofit  sebagai  sebagai  agens  biokontrol  yang  bersifat  antimikroba (Juwita, 2010).
Kemampuan  isolat  endofit  BA2(3)  dan  BU3(5)  dalam  menghambat  pertumbuhan R. solanacearum,  diharapkan  dapat  dimanfaatkan  serta  diaplikasikan  sebagai  agen  hayati  untuk menangulangi  penyakit  tanaman  dan  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  untuk  mengurangi penggunaan pestisida dalam mengatasi penyakit pada tanaman. Menurut Wahyuni et al. (2022), penggunaan  agen  hayati  untuk  mengatasi  penyakit  tanaman  memiliki  beberapa  keunggulan dibandingkan  penggunaan  pestisida  kimia.  Keunggulan  tersebut  antara  lain  aman  dan  tidak meninggalkan  residu  bagi  lingkungan,  serta  bersifat  berkelanjutan  sehingga  penggunaan  yang berulang-ulang tidak berbahaya bagi lingkungan dan makhluk hidup.

## SIMPULAN
Penelitian ini diperoleh hasil bahwa dari empat kandidat isolat bakteri endofit, diperoleh dua  isolat  bakteri  non  patogen  yang  menunjukan  reaksi  negatif  hipersensitif  pada  uji hipersensitifitas yaitu isolat BA2(3) dan BU3(5). Sehingga dua isolat tersebut dapat dilakukan uji antagonis.  Hasil  uji  antagonis  menunjukan  bahwa  isolat  BA2(3)  dan  BU3(5)  memiliki  potensi dalam  menghambat  pertumbuhan R.  solanacearum  secara  in  vitro  dengan  luas  diameter  zona penghambatan sebesar 3,03 mm dan 1,60 mm pada inkubasi 24 jam pertama.

## DAFTAR PUSTAKA
Apriliani,  S.  (2020).  Identifikasi  biovar Ralstonia  solanacearum  penyebab  layu  semu  pada tanaman  cabai  rawit  di  Kabupaten  Banyuwangi  serta  pemanfaatanya  sebagai  poster. Skripsi. Fakultas Keguruan Dan Ilmu Pendidikan. Universitas Jember. JawaTimur.
Aqlinia,  M.,  Sri,  P.  dan  Wijanarka.  (2020).  Isolasi  bakteri  endofit  bangle  ( Zingiber Cassumunar Roxb.) dan uji antibakteri supernatan crude metabolit sekunder isolat potensial terhadap Staphylococcus aureus. Jurnal Akademika Biologi, 9 (1): 23-31
Arimbawa, I. M., Gusti, N. A. S. W., I Made, S dan I Made, W. Isolasi dan seleksi bakteri antagonis untuk  pengendalian  penyakit  busuk  batang  panili  ( Vanilla  planifiola  Andrews).  Jurnal Agroteknologi Tropika, 8(2).
Ariyanti, N. K., Ida, B. G. D dan Sang, K. S. (2012). Daya hambat ekstrak kulit daun lidah buaya ( Aloe barbadensis Miller) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 25922, XVI (1): 1-4.
Chung, W. C., Chen, L. W., Huang, J. H., Huang, H. C dan Chung, W. H. (2011). A new “forma specialis” of fusarium solani causing leaf yellowing of phalaenopsis. Plant Pathology, 60 (2), 244- 252.
Cockerill III, F. R., Wikler, M. A., Alder, J., Dudley, M. A., Eliopoulos, G. M., Ferraro, M. J., Hardy, D. J., Hecht,  D.  w.,  Hindler,  J.  A.,  Patel,  J.  B.,  Powell,  M.,  Swenson,  J.M.,  Thomson  Jr,  R.B., Traczewski, M,A., Turnidge, J. D., Weinstein, M. P. dan Zimmer, B. L. (2012). Performance standards  for  antimicrobial  disk  susceptibility  Tests  ;  Approved  Standard-  eleventh Edition. CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute, 32 (1),M02-A11.
Desriani., Ukhraida, M. S. P., Maria, B., Akhmad, R. dan Puspita, L. (2014). Isolasi dan karakterisasi bakteri endofit dari tanaman binahong dan katepeng china. Jurnal Kesehatan Andalas, 3 (2), 89-93.
Deswanti, C, H. (2021). Isolasi dan uji antagonis khamir dari tanaman pala ( Myristica fragrans Houtt.)  terhadap Aspergillus  flavus  penghasil  aflatoksin.  Skripsi.  Fakultas  Sains  dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.Jakarta.
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Fajarika, R., Taufiq, H., Hanny, H. N., Novriza, S dan Jajang, S. (2022). Isolasi Pseudomnas sp. untuk pengendalian biologi terhadap layu bakteri. Jurnal Agroteknologi dan Sains, 6 (2), 106- 114.
Hajar,  D.  (2012).  Isolasi,  identifikasi,  dan  analisis  kemampuan  degradasi    hidrokarbon  bakteri tanah  sampel  b,  cilegon,  banten. Skripsi.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam. Departemen Biologi Universitas Indonesia.Depok
Herdiyantiro, D., Mieke, R, S dan Tualar, S. (2022). Reaksi hipersensitif daun tembakau oleh isolat bakteri pelarut kalium pada praformulasi pupuk hayati. Soilrens, 20(2). Houdenat, Y. P dan Isabelle, F. (2017). Complex interactions between fungal avirulance genes and their  corresponding  plant  resistance  managment. frontiers  in  plant  science.doi: 10.3389/fpls.2017.01072.
Juwita.  (2010).  Potensi  bakteri  endofit  dalam  meningkatkan  ketahanan  tanaman  kentang ( Solanum  tuberosum)  terhadap  seranga  nematoda  sista  kuning  (Globodera rostochiensis). Skripsi. Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang.
Kumala, Shirly. (2019). Mikroba endofit 2: pemanfaatan mikroba endofit dalam bidang farmasi. Jakarta Barat. PT. ISFI.
Mahardika, W. A., Rukmi, M. G. I dan Sri P. (2021). Isolasi kapang endofit ( Physialis angulata L) dan potensi antibakteri terhadap Escherechia coli dan Staphylococus aureus. Journal of Tropical Biology, 4(1): 33-39.
Mansfield, J., Genin, S., Magori, S., Citovsky, V., Sriariyanum, M., Ronald, P., Dow, M., Verdier, V., Beer,  S.V.,  Machado,  M.A.,  Toth,  I.,  Salmond,  G  dan  Foster,  G.D.  (2012).  Top  10  plant pathogenic bacteria in molecular plant pathology. Molecular plant pathology, 13 (6), 614 – 629.
Munif,  A.,  Arif,  R.W  dan  Elis,  N.H.  (2015).  Bakteri  Endofit  dari  Tanaman  Kehutanan  Sebagai Pemacu  Pertumbuhan  Tanaman  Tomat  dan  Agens  Pengendali Meloidogyne  sp.  Jurnal Fitopatologi Indonesia, 11 (6),179-186.
Nababan, C. P dan Suswati dan Syahbudin, H. (2017). Efektivitas penggunaan biofumigan limbah b rassica  terhadap  penyakit  layu  bakteri  (Ralstonia  solanacearum  ras  3)  pada  tanaman kentang di Pematang Silima Huta Kabupaten Simalungun. Agrotekna, 2 (1), 56-64. Navitasari, L., Tri, J dan Triwidodo, A. (2021). Pengaruh tomat sambung pada intensitas penyakit layu  bakteri  ( Ralstonia  solanacearum),  komponen  hasil  produksi,  dan  kualitas  buah. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia, 26 (3), 413- 420
Oktafiyanto,  M.F.,  Abdul,  M  dan  Kikin,  H.M.  (2018).  Aktivitas  antagonis  bakteri  endofit  asal mangrove  terhadap Ralstonia  solanacearum  dan  Meloidogyne  spp.  Jurnal  Fitopatologi Indonesia, 14 (1), 23-29.
Pratiwi, R. H. (2017). Mekanisme pertahanan bakteri patogen terhadap antibiotik. Journal Pro- Life, 4 (3), 418-429.
Prihatiningsih, N., Triwidodo, A., Bambang, H dan Jaka, W. (2015). Mekanisme antibiosis Bacillus subtilis B315 untuk pengendalian penyakit layu bakteri kentang. Jurnal HPT Tropika, 15 (1), 64-71.
Rohmah, S. N. (2017). Isolasi dan identifikasi bakteri yang berpotensi sebagai agen bioremediasi timbal (Pb) dari lumpur lapindo. Skripsi. Fakultas Sains dan Teknologi. Jurusan Biologi. Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang.
Setianah, H. (2020). Isolasi bakteri endofit dari tanaman ciplukan ( Physals angulata L.) berpotensi sebagai antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri patogen. Skripsi. Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta. Yogyakarta
Setiawan, A. W. (2019). Epidemiologi penyakit layu bakteri dan perkembangan kompleks spesies Ralstonia solanacearum. Jurnal Galung Tropika,8 (3), 243-270.
Setyari,  A.  R.,  Luqman,  Q.A  dan  Abdul,  L.A.  (2013).  Pengaruh  pemberian  pupuk  cair  terhadap penyakit  layu  bakteri  ( Ralstonia  solanacearum)  pada  tanaman  tomat  (Lycopersicum esculentum Mill.). Jurnal HPT, 1 (2), 80-87.
In  vitro  antagonism  test  of  endophytic  isolates  from  the  ciplukan  plant  (Physalis  angulata  L.)  against Ralstonia solanacearums
Wahyuni,  S.,  Nomi,  N.,  Leni,  H.  (2022).  Seleksi  uji  antagonis  bakteri  dan  jaamur  endofit  dari patogen tanaman karet. Education Science & Technology, 5(2): 524-539.
Wulandari,  D  dan  Desi,  P.  (2019).  Identifikasi  dan  karakterisasi  bakteri  amilolitik  pada  umbi Colocasia esculanta L. secara morfologi, biokimia, dan molekuler.  Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia, 6(2): ISSN 2548-611X.
Yani,  R.  B.,  Anthoni,  A  dan  Feskaharny,  A.  (2019).  Pengaruh  pH  dan  suhu  terhadap  produksi antibiotika dari isolat bakteri endofitik pada tumbuhan andalas ( Morus macroura Miq.). Jurnal Metamorfosa, 6 (1), 90-96.
Yanuar,  A.  (2016).  Potensi  agens  hayati  dalam  menekan  perkembangan  penyakit  hawar  daun bakteri Xanthomonas oryzae pv. Oryzae. Skripsi. Fakultas Pertanian Universitas Jember. Jawa Timur.
Zahra, D. A., Arika, P dan Herry, N. (2019). Seleksi bakteri endofit asal tanaman terung ( Solanum melongena  L)  terhadap  Ralstonia  solanacearum  secara  in  vitro.  Seminar  nasional  dies natalis UNS ke-43, 3(1).