## ISOLASI BAKTERI SIMBION ALGA MERAH DARI PERAIRAN TONGKEINA, SULAWESI UTARA
(Isolation of Symbiotic Bacteria with Red Algae from Tongkaina Waters, North Sulawesi)
Elvy Like Ginting 1* Liviani Rangian 1 , Letha L. Wantania 1 , Stenly Wullur 1
1 Staf Pengajar Pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado, Sulawesi Utara, Indonesia 95115 e-mail: like.ginting@unsrat.ac.id

## ABSTRACT
This study aims to isolate symbiotic bacteria with red algae from the waters of Tongkaina, North Sulawesi. The red algae taken were red algae that are similar to the genus Portieria and Gracilaria . Bacteria were cultured and isolated using Nutrient  Agar  (NA)  +  sea  water.  Before  bacteria  from  red  algae  samples  were cultured, each sample of red algae was crushed, homogenized and diluted. The results of this study, 5 bacterial isolates were successfully isolated from red algae similar to Portieria sp. and 5 bacterial isolates from red algae similar to Gracilaria sp.  Each  bacterial  isolate  has  different  morphological  characteristics  such  as shape, colour, elevation, and edges. Of the 10 bacterial isolates, 3 bacterial cells are gram-positive cocci (round), and 7 of them are gram-negative bacilli (rod).
Keywords: Red algae, bacteria, isolation, symbionts

## ABSTRAK
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi bakteri simbion dengan alga merah dari perairan Tongkaina, Sulawesi  Utara. Alga merah yang diambil adalah  alga  merah  yang  mirip  dengan  genus Portieria dan Gracilaria. Bakteri ditumbuhkan  dan  diisolasi  menggunakan  media  Nutrien  Agar  (NA)  +  air  laut. Sebelum  bakteri  dari sampel  alga  merah  ditumbuhkan, masing-masing  sampel alga merah digerus, dihomogeniasi dan diencerkan.  Hasil penelitian ini, 5 isolat bakteri berhasil diisolasi dari alga merah mirip Portieria sp. dan 5 isolat bakteri dari  alga  merah  mirip Gracilaria sp . Masing-masing  isolat  bakteri  memiliki karakteristik morfologi yang berbeda seperti bentuk, warna, elevasi, dan tepian. Dari 10 isolat  bakteri  tersebut, 3 sel bakteri bersifat gram positif dengan bentuk bulat, dan 7 diantaranya bersifat gram negatif dengan bentuk batang.
Kata kunci:  Alga merah, bakteri, isolasi, simbion

## PENDAHULUAN
Bakteri  merupakan  salah  satu jenis mikrobia yang jumlahnya terbesar dan hidup pada berbagai tipe habitat di laut.
Bakteri yang hidup dan berkembang  di  laut  juga  mampu berinteraksi dengan berbagai organisme  laut,  sehingga  tidak  ada satupun organisme laut yang bebas dari interaksi dengan bakteri. Bakteri di laut mempunyai peranan yang sangat penting di dalam menjaga kesinambungan  kehidupan  laut  karena bakteri  mempunyai  kemampuan  untuk mendegradasi senyawa organik menjadi senyawa anorganik. Beberapa bakteri laut telah
dilaporkan menunjukkan aktivitas
antimikroba,  khususnya  bakteri  yang bersimbion  dengan  organisme  lain. Bakteri  tersebut  memiliki  kemampuan yang  hampir  sama  dengan  inangnya untuk  menghasilkan  senyawa  bioaktif (Nofiani,  2008),  salah  satunya  pada alga.
Alga  ( seaweed )  adalah  bagian terbesar  dari  tumbuhan  laut,  dimana secara  morfologi  dapat  dikelompokkan kedalam  golongan  tumbuhan  tidak berpembuluh (Thallophyta) karena tidak memiliki  perbedaan  susunan  kerangka seperti  akar,  batang  dan  daun.  Alga diklasifikasikan  dalam  empat  kelas besar yaitu Chlorophyceae (alga hijau), Cyanophyceae (alga
hijau-biru),
Phaeophyceae (alga coklat), dan Rhodophyceae (alga  merah)  (Bold  dan Wynne, 1985).
Alga merah (Rhodophyceae)
merupakan  salah  satu  organisme  laut yang dapat menyediakan sumber bahan alam dalam jumlah yang melimpah dan mudah  untuk  dibudidayakan.  Berbagai bahan  aktif  dari  alga  merah  telah ditemukan penggunaannya seperti antibakteri antivirus, antijamur, sitotoksik, antialga dan lainnya
(Vallinayagam dkk ,  2009).  Di  dalam alga  juga  tekandung  bahan-bahan organik  seperti  polisakarida,  hormon, vitamin,  mineral  dan  juga  senyawa bioaktif yang dapat dimanfaatkan (Putra, 2006).
Keberadaan  bakteri  simbion  pada umumnya  untuk  melindungi  biota  yang ditumpanginya  dan  dirinya  dengan menghasilkan metabolit sekunder. Metabolit sekunder merupakan golongan  senyawa  dengan  struktur bervariasi  dan  khas  untuk  setiap organisme, memiliki berat molekul relatif kecil,  ditemukan  dalam  jumlah  minor, berfungsi untuk pertahanan diri organisme, melawan
penyakit, pertumbuhan,  atau  hormone  (Funty, 2015).
Pemanfaatan  metabolit  sekunder pada  alga,  misalnya  sebagai  bahan bioaktif dapat menyebabkan kepunahan jenis-jenis  alga  tertentu.  Karena  itu, pemanfaatan  bakteri  simbion  alga adalah  salah  satu  solusi  yang  paling baik  dalam  mengeksploitasi  bahan bioaktif yang dihasilkan akibat simbiosis antara bakteri dan alga merah (Nurhaedar,  2008).    Oleh  sebab  itu, tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengisolasi  bakteri  simbion  dari  alga
merah, khususnya dari perairan Tongkaina,  Sulawesi  Utara.    Bakteri simbion yang dihasilkan nantinya dapat diuji kemampuannya dalam
menghasilkan  metabolit  sekunder  yang sangat bermanfaat.

## METODE PENELITIAN

## Pengambilan Sampel dan Penentuan Alga
Pengambilan  sampel  alga  merah dilaksanakan  di  perairan  Tongkaina,
Sulawesi Utara (Gambar 1) pada waktu air surut. Selanjutnya, sSmpel dimasukkan  ke  dalam  plastik  sampel dan  diletakkan  dalam  coolbox  dan dibawa ke laboratorium Biologi Molekuler  dan  Farmakologi  Laut  FPIK Universitas Sam Ratulangi untuk dianalisis. Sampel alga merah kemudian diidentifikasi  secara  morfologi  dengan memperhatikan  bentuk  dan  warna brpedoman  pada  buku  Field  Guide  To The  Common  Manggrove,  Seagrass And Algae Of Philipine (Calumpong dan Menez,  1997).  Ditemukan  2  jenis  alga merah  yang  mirip  dengan  genus Portieria dan   genus Gracilaria.

## Isolasi Bakteri
Media  yang  digunakan  dalam penumbuhkan  bakteri  adalah  media nutrient  agar  (NA).  Sampel  alga  merah yang  diambil  pada  perairan  Tongkaina diambil  bagian  batang,  daun  dan akarnya kemudian dibilas dengan menggunakan air laut steril yang sudah dimasukkan ke dalam cawan petri steril. Setelah  itu,  dengan  menggunakan teknik  aseptik,  sampel  alga  merah dihomogenasikan  dengan  dimasukkan ke  dalam  ependorf  kemudian  digerus dengan menggunakan mortal.
Untuk mendapatkan koloni bebas, sebelum  sampel  diinokulasikan  pada media  NA,  dilakukan  pengenceran sampel  dengan  menggunakan  air  laut steril.  Pengenceran  dilakukan  hingga 10 4 . Selanjutnya,  diambil 150 µl sampel hasil pengenceran, dan masing masing dituang  di  atas  media  NA  dan disebarkan menggunakan L-glass. Diinkubasi pada suhu 37 0 C  selama 24-
48  jam.  Diamati  koloni  bakteri  yang tumbuh.  Setiap  koloni  bebas  bakteri yang tumbuh dikarakterisasi berdasarkan karakteristik morfologi dan diisolasi.  Adapun karakteristik morfologi yng  diamati  meliputi  warna,  elevasi, ukuran dan tepian koloni bakteri.
Selain diisolasi berdasarkan karakteristik  morfologi  koloni,  setiap isolat bakteri dikarakterisasi berdasarkan pewarnaan gram. Pewarnaan gram dilaksanakn berdasarkan metode Hadioetomo (1993) yakni dengan melihat kemampuan  dinding  sel  bakteri  dalam menyerap  zat  warna  kristal  unggu  dan atau  safranin  setelah  sel  bakteri difikasasi pada kaca objek.
Gambar 1.  Lokasi Pengambilan Sampel Alga Merah

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri  simbion  dengan  alga merah dari perairan Tongkaina,
Sulawesi  Utara  berhasil  ditumbuhkan (Gambar  2)  dan  diisolasi.  Isolat  bakteri yang berhasil diisolas i alga merah mirip
Portieria sp. berjumlah 5 isolat dan dari
alga merah mirip Gracilaria sp . berjumlah 5 isolat juga. Masing-masing isolat  bakteri  memiliki  karakteristik morfologi  yang  berbeda  dan  dapat dilihat pada tabel 1.  Karakteristik koloni bakteri  yang  diamati    meliputi  bentuk, warna, elevasi, dan tepian
(Dwijoseputro, 1989).
Gambar 2.  Bakteri simbion alga merah yang tumbuh pada media agar
Tabel 1.  Karakteristik isolat bakteri  simbion alga merah mirip Gracilaria sp .
Kode Isolat Karakteristik Koloni Bentuk Warna Tepian Elevasi Ga(1) Irregular Coklat Raised Entire Ga(2) Irregular Coklat Flat Lebate Ga(3) Irregular Orange Raised Undulase Ga(4) Circular Coklat Flat Entire Ga(5) Circular Kuning Convex Entire
Tabel 2.  Karakteristik isolat bakteri simbion alga merah mirip Portieria sp . Kode Isolat Karakteristik Koloni Bentuk Warna Tepian Elevasi Ph(1) Irregular Putih Flat Lebate Ph(2) Irregular Coklat Raised Lebate Ph(3) Circular Kuning Convex Entire Ph(4) Circular Kuning Convex Entire Ph(5) Circular Putih Raised Entire Terlihat bahwa setiap isolat
memiliki  karekteristik  morfolgi  yang berbeda,  baik  bentuk  koloni,  warna, tepian  maupun  elvasi.  Kelima  isolat bakteri  simbion  alga  merah  mirip Gracilaria sp . didominasi  warna  coklat yaitu pada isolat Ga(1), Ga(2) , dan Ga (4). Bentuk koloni bakteri dominan tidak bulat  atau  disebut  irregular,  yaitu  pada isolate  Ga(1),  Ga(2),  Ga(3).  Kelima isolat  bakteri  simbion  alga  merah  mirip
Portieria sp.  didominasi  warna  kuning dan  putih  yaitu  pada  isolat  Ph(1),
Ph(3),Ph(4),dan Ph(5). Sementara, bentuk  koloninya  dominan  bulat  yaitu pada Ph(3), Ph(4), Ph(5).
Pertumbuhan setiap koloni bakteri pada agar miring terlihat pada gambar 3. Adapun  karakteristik  setiap  isolat  yang tumbuh pada agar miring disajikan pada tabel 3 dan tabel 4.
Tabel 3. Karakteristik isolat bakteri  simbion alga merah mirip Gracilaria sp. pada media agar miring Kode Isolat Karakteristik Koloni Warna Tipe penampakan koloni Ga(1) Kuning Filiform Ga(2) Putih Filiform Ga(3) Coklat Rhizoid Ga(4) Putih Filiform Ga(5) Kuning Filiform
Tabel  4.  Karakteristik  isolat  bakteri  simbion  alga  merah  mirip Portieria sp . pada  media  agar miring
Kode Isolat Karakteristik Koloni Warna Tipe Penampakan Koloni Ph(1) Putih Filiform Ph(2) Putih Filiform Ph(3) Kuning Rhizoid Ph(4) Coklat Filiform Ph(5) Putih Filiform Terlihat bahwa pertumbuhan koloni  bakteri  pada  agar  miring  sangat bervariasi.  Pada  tabel  1,  koloni  bakteri pada  agar  miring  didominasi  dengan warna  kuning  pada  koloni  isolat  Ga(2) dan  Ga(4)  serta  warna  kuning  pada koloni isolat Ga(3) dan Ga(5). Sementara Pada tabel 2, koloni bakteri didominasi  warna  putih  yaitu  koloni
isolat Ph(1), Ph(2), Ph(5) dan umumnya berbentuk  Filiform    yakni  pertumbuhan sepanjang garis inokulasi. Pertumbuhan yang menyebabkan bakteri    bertumbuh  menyebar  secara merata  sepanjang  garis  inokulasi  ini disebabkan  karena  kandungan  nutrisi (Holt dkk, 1994).
Gambar 3.  Pertumbuhan bakteri simbion alga merah mirip Gracilaria sp. dan Portieria sp. pada agar miring
Dari  hasil  penentuan  gram,  dapat dilihat  bahwa  isolat  Ga(3),  Ga(5),  dan
Ph(2)  tergolong  dalam  gram  positif dengan  bentuk  bulat  (coccus).  Isolat bakteri gram positif mempunyai kemampuan  untuk  mengikat  kristal violet  lebih  kuat  dibandingkan  dengan safranin,  sehingga  bakteri  berwarna ungu.  Bakteri  Gram  positif  mampu memepertahankan  zat  warna  utama dalam  pewarnaan  Gram,  yaitu  Gentian Violet.  Sehingga  nampak  warna  ungu saat  pengamatan  dikarenakan  dinding sel  kelompok  bakteri  ini  tersusun  oleh sebagian  besar  peptidoglikan  yang mampu  mengikat  zat  warna  dan  tidak rusak saat dicuci dengan alkohol.
Isolat  Ga(1),  Ga(2),  Ga(4),  Ph(1), Ph(3), Ph(4) dan Ph(5) tergolong dalam gram  negatif  dan  berbentuk  batang ( bacil). Hal ini ditandai dengan sel yang berwarna  merah  karena  kemampuan
bakteri dalam mengikat safranin sangat kuat  (Cappucino  dan  Sherman,  1998) (Gambar 4).
Komponen  dinding  sel  bakteri gram  negatif  sebagian  besar  tersusun lapisan  lipid,  sehingga  pada  saat pewarnaan kurang dapat
mempertahankan  zat  warna  utama terutama  pada  saat  dicuci  dengan alkohol  (lipid  rusak  pada  saat  dicuci dengan  alkohol)  akibatnya  kelompok bakteri ini terlihat berwarna merah pada hasil pewarnaan Gram.
Bakteri  yang  hidup  di  laut  pada umumnya  berbentuk  batang    dan bersifat  Gram  Negatif.  Bakteri  laut sebagian  besar  bergerak  secara  aktif. Bakteri berbentuk batang  memiliki flagel yang  digunakan  sebagai  alat  gerak. Flagel digunakan bakteri untuk bergerak menuju kondisi lingkungan yang menguntungkan  atau  menghindar  dari Ga (1 ) Ga ( 2) 22 22222
@2 Ga (3) Ph (1 ) 1 Ph (2) Ph (3 )) ) Ga (4))) Ga ( 5) 22
22222 @2
Ph (4 )) ) Ph (5 )) )
lingkungan yang merugikan bagi kehidupannya (Pelczar dan Chan, 1986;
Sidharta, 2000).
Bakteri bentuk bulat tidak memiliki flagel  sebagai  alat  gerak  sehingga keberadaannya  ditemukan  apabila  ada substrat  tempat  pelekatannya.  Bakteri simbion  dapat  melekat  pada  alga  dan memanfaatkan nutrien yang ada disekitar  alga untuk perkembangan dan pertumbuhannya.  Bakteri  bentuk  kokus dapat terikat atau bergabung sesamanya untuk membentuk permukaan  yang  kuat  (solid)  karena adanya  bahan  berlendir  sehingga  sel- sel saling terikat. Dengan cara ini bakteri dapat  membentuk  lapisan  permukaan
yang  mengakibatkan  bakteri  dapat hidup  melekat  pada  alga,  rumput  laut lamun dan tumbuhan mangrove (Hutching dan Saenger, 1987). Bakteri simbion spons dari periaran Tongkaina Sulawesi Utara juga telah berhasil diisolasi. Diperoleh sepuluh isolat bakteri yang bersimbiosis dengan dua jenis spons yakni Facaplisynopsis sp.  dan Agelas sp. dengan  karaktersitik  morfologi  yang bervariasi.  Dua  dari  kesepuluh  isolat bakteri  tergolong  dalam  Gram  positif dengan  bentuk  coccus  dan  delapan tergolong  dalam  Gram  negatif  dengan bentuk basil (batang pendek) (Wantania dkk, 2016).
Gambar 4. Hasil pewarnaan gram. (a) Gram Positif (b) Gram Negatif

## KESIMPULAN
Sepuluh isolat bakteri simbion alga merah  telah  diisolasi  dari  perairan Tongkaina, Sulawesi Utara. Hasil isolasi bakteri dari alga merah mirip Gracilaria sp.  berjumlah  5  isolat  dan  alga  merah mirip Portieria sp.    berjumlah  5  isolat.
Dari  10  isolat    bakteri    tersebut,  3  sel bakteri  memiliki  sifat  gram  positif dengan bentuk bulat, dan 7 diantaranya memiliki  sifat  gram  negatif  dengan bentuk batang.

## DAFTAR PUSTAKA
Bold,  H.  C.  dan  M.  J.  Wynne.  1985.
Development  In  Aquaculture  And Fisheries  Science.  Volume  16. Seaweed Cuktivation For Renewable  Resources.  Elsevier. Amsterdam. p 381. Calumpong  dan  Menez.  1997.  Field Guide To The Common
Manggrove,  Seagrass  and  Algae of  Philipine..  Inc.  Makati  City, Philippines. p 197. Cappucino,    J.G.  dan    Sherman,    N. 1998.  Microbiology:  A  Laboratory Manual.  5  th  Edition.  California: Benjamin/Cummings Science Publishing. p 94. Dwioseputo. 2005. Dasar- dasar Mikrobiologi. PT Penerbit Djambatan. Jakarta. Funty.  2015.  Potensi  Antibakteri  dari Ekstrak  Kasar  Bakteri  Asosiasi Karang  Batu  yang  Terinfeksi Penyakit Brown Band (BrB) Terhadap Bakteri Patogen Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Skripsi- Universitas  Hasanudin.  Makasar. 39 hal. Hadioetomo,  R.  S.  1993.  Mikrobiologi Dasar  Dalam  Praktek  Teknik  dan (a)
(b)
Prosedur   Dasar Laboratorium. PT Gramedia. Jakarta.
Holt, J. G. N. R., Krieg. Ph, A.,  Sneath.
J.  T., Staley  and    Williams. S. T. 1994. Bergey’s  Manual  of Determination Bacteriology. Williams and  Wilkins.  Baltomore. 475 hal. Hutching,  P.  dan  Saenger,  P.  1987. Ecology  of  Mangrove  Aus.  Eco. Series.  Universityof  Queensland Press St Lucia, Quesland. Nofiani, R., 2008, Urgensi dan Mekanisme  Biosintesis  Metabolit Sekunder  Mikroba  Laut,  Jurnal Natur Indonesia, 10 (2), 120-125. Nurhaedar.  2008.    Potensi    Bakteri Simbion Spons Class Demospongiae sebagai Sumber  Senyawa  Antimikroba. Makalah Poster Seminar Nasional Persatuan  Biologi  Indonesia  Ke – XIX, Universitas Hasanuddin, Makassar. Pelczar, M. J. and Chan, E. C. S. 1986. Dasar-Dasar  Mikrobiologi.  Jilid  I. Terjemahan Ratna Siri Hadioetomo. UI Press, Jakarta Putra,  S.E.  2006.  Alga  Laut  Sebagai Bioetarget Industri. Artikel Seawed.  Devisi  Penelitian  dan Pengembangan  Seaweed.  Devisi penelitian  dan  Pengembangan Seaweed-UNDIP. Semarang . Sidharta, B.R. 2000. Pengantar Mikrobiologi Kelautan.  Universitas Atma Jaya. Yogyakarta. 122 hal. Vallinayagam, K, Arumugam, Kannan,R.R.R.,  Thirumaran,  G., Anantharaman, P.2009. Antibacterial  Activity  of  Some Selected Seaweeds from Pudumadam  Coastal  Regions. Global Journal of Pharmacology 3 (1): 50-52.
Wantania, L.L., Ginting, E.L., Wullur, S.
2016.  Isolasi  Bakteri  Simbion dengan Spons dari Perairan Tongkeina, Sulawesi Utara. Jurnal LPPM Bidang Sains dan Teknologi, 3(1):57-65.