## Polimorfisme Protein Darah Ayam Kedu Jengger Merah dan Jengger Hitam di Satuan Kerja Non Ruminansia Temanggung

## (Polymorphism Blood Protein of Red Comb and Black Comb Kedu Chickens at Satuan Kerja Non Ruminansia Temanggung)
Bagus Praditya Setyo Nugroho, Sutopo, Edy Kurnianto JL. Kompl. drh. R. Soejono Koesoemowardojo, Tembalang Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro, Semarang email: bagus.praditya48@gmail.com
Diterima: 30 April 2016/ Disetujui: 27 Mei 2016

## ABSTRACT
The objectives of this study were to determine the blood protein diversity first generation of Kedu chickens (G 0 ) at Satuan Kerja Non Ruminansia Maron, Temanggung. The materials used in this study were each of 14 red and black  comb Kedu  chickens.  The  methods  of this  study  were  observational  and  electrophoresis  PAGE (Polyacrylamid  Gel  Electrophoresis). The observed parameters  were  loci of pre  albumin  (Palb),  albumin  (Alb), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), post transferrin (Ptf) and amylase-I (Amy-I). Gene structures were observed to characterize genetic diversity. Characterization of genetic diversity based on individual heterozygosity, mean heterozygosity and chi-square values for testing Hardy Weinberg equilibrium for each observed loci. The results showed that red comb Kedu chickens had the highest gene frequencies of pre albumin, ceruloplasmin, transferrin, post  transferrin and amylase-I those  were 0,714;  0,714;  0,643;  0,643 and 0,536 respectively. The  highest individual heterozygosity of red comb Kedu chickens found in amylase-I (0,497) and also post transferrin (0,500), and amylase-I (0,500) for black comb Kedu chickens. The highest mean heterozygosity was found in black comb Kedu  chickens (0,458).  The  chi-square calculation  showed  that the whole  loci  were  at  Hardy  Weinberg equilibrium except pre albumin at red comb Kedu chickens.

## Key-words: Kedu chicken, electrophoresis, blood protein

## PENDAHULUAN
Pembibitan  ternak  merupakan  salah  satu  aspek yang  cukup  penting untuk  mendapatkan  keturunan yang baik. Masih sedikit orang yang membudidayakan ayam Kedu, apa lagi membibitkannya.  Telah  diketahui  bahwa Ayam Kedu  merupakan  unggas  lokal  yang  memiliki potensi untuk dikembangkan. Apabila dibudidayakan  untuk  menghasilkan  bibit  yang  baik maka  akan  tercipta  ayam  Kedu  dengan  potensi  dan harga yang lebih tinggi
Ayam  Kedu  memiliki  variasi  warna  bulu  yang dibedakan  menjadi  tiga  yaitu  ayam  Kedu  Hitam, Kedu  Putih,  dan  Kedu  Lurik.  Ketiga  ayam  Kedu tersebut  dapat  juga  dibedakan  melalui  warna jenggernya  yaitu  ayam  Kedu  jengger  merah  dan ayam Kedu jengger hitam. Selain variasi warna dan
jengger, ayam Kedu dapat diketahui dari ciri-cirinya melalui  bulu,  kulit,  dan  daging. Penelitian  ayam Kedu  mengenai  sifat  kualitatif  dan  kuantitatif  telah banyak dilakukan  diantaranya oleh Wulandari et al. (2008), dan Johari et al. (2010), namun masih sedikit peneliti yang meneliti secara molecular. Berdasarkan alasan  tersebut  diatas maka untuk  mengetahui keragaman  protein darah ayam Kedu jengger merah dan  jengger  hitam generasi  awal  (G 0 ) perlu dilakukan.

## METODE PENELITIAN

## Materi penelitian
Materi  yang  digunakan dalam  penelitian  ini adalah 14  ekor  ayam  Kedu jengger  merah  dan 14 ekor ayam Kedu jengger hitam G 0, masing-masing 7
Jurnal Ilmu dan Teknologi Peternakan Indonesia Volume 2 (1): 159 - 165; Juni 2016 ISSN: 2460-6669
http://jurnal.unram.ac.id/ dan jitpi.fpt.unram,ac,id
Bagus Praditya Setyo Nugroho, Sutopo, Edy Kurnianto (Poli morfisme Protein Darah …….. )
ekor jantamn dan 7 ekor betina. Ayam-ayam tersebut dipelihara di  Satuan  Kerja  Non  Ruminansia  Maron, Temanggung, Jawa Tengah.

## Prosedur penelitian
Sebanyak 14 ekor Ayam Kedu jengger hitam Go (7 ekor jantan dan 7 ekor betina) dan 14 ekor ayam Kedu jengger merah Go (masing 7 ekor jantan dan 7 ekor  betina)  diambil  darahnya 1,5  mL melaui vena brachialis dengan menggunakan  spuit.  Sampel darah  lalu  dianalisis  di  Laboratorium  Biokimia Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas  Gadjah Mada.  Sampel  disentrifuse  dan  plasma  darahnya dimasukkan ke  minitube. Analisis  gel  elektroforesis dikerjakan  berdasarkan  Johari et  al. 2008  dengan modifikasi. Bahan- bahan disiapkan seperti gradient gel  12,5%,  stacking  gel  3%,  dan  elektroda  buffer. Gel yang telah siap diletakkan di kotak elektroforesis  secara  horizontal.  Sampel  diambil  10 L lalu  diencerkan  sebanyak  10  kali  dengan  cara diberi aquades 90 L ditambahkan sampel buffer 25 L digojok  hingga  merata.  Sampel  yang  telah  siap lalu  dicelupkan  ke  dalam  air  panas  2,5-3  menit, kemudian  didinginkan. Sampel  yang  telah  dingin dimasukkan ke  dalam  sumuran  sebanyak  20 L.
Proses  elektroforesis  dilanjutkan  dengan  memberi catu daya sebesar 100volt/jam selama 2 jam. Setelah gel  berwarna  biru  berjarak  2  cm  dari  ujung  bawah sumuran  maka  proses elektroforesis  dihentikan.  Gel diletakkan  didalam  wadah  dan  diberi  Coomassie blue  0,1  %  untuk  proses  pewarnaan  selama  1  jam dengan cara digojok.

## Analisis data
Lokus-lokus dari hasil elektroforesis diamati dan dicatat.  Frekuensi  gen  masing-masing  lokus  pre- albumin, albumin,  ceruloplasmin, transferrin,  post- transferin, dan amylase-I dihitung dengan menggunakan rumus Warwick et al. (1990), yaitu :
Keterangan: F An = frekuensi gen A pada lokus ke-n
Ragam  genetik  dihitung  menggunakan  rumus heterozigositas individual (h) dan rataan heterozogositas ( menurut Nei (1987), yatu:
Keterangan: qi =  frekuensi gen ke-I, h= heterozigositas, r = jumlah lokus yang diamati, = rataan heterozigositas
Pengujian  data  observasi  dan  nilai  estimasi genotip  dilakukan  dengan  menggunakan  rumus  chi square menurut Sugiyono (2003), yaitu:
X 2 hit =
Keterangan: X 2 hit = chi square Obs = Frekuensi Observasi
Exp =  Frekuensi  Ekspektasi  (Frekuensi  yang
diharapkan)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil elektroforesis pada ayam Kedu ditunjukkan pada Gambar 1. Menurut hasil analisis elektroforesis didapatkan  gel  yang  memiliki  muatan  protein. Diketahui  bahwa  sebagai  penentu  muatan  protein atau  nama  protein  yang  diamati  digunakan  acuan dengan  marker.  Dapat  dilihat  bahwa  protein  yang paling bawah disebut dengan pre albumin. Pita yang paling tebal disebut dengan albumin dan merupakan pita  protein  yang  dapat  dilihat  dengan  jelas  karena ketebalannya.

## Gambar1. Hasil elektroforesis darah ayam Kedu
Keterangan  : M :  Marker,  A1  :  Jengger  merah  (betina),  A2  :  Jengger  merah  (betina),  A3:  Jengger  merah  (betina),  A4  : Jengger merah (betina), A5 : Jengger merah (jantan), B6 : Jengger hitam (jantan). B1: Jengger hitam (betina)

## Pre albumin
Pada  Tabel  1 ditunjukkan  bahwa  ayam  Kedu jengger  merah  dan jengger hitam  memiliki  dua  alel pada  lokus  pre  albumin.  Kedua  alel  tersebut  yaitu Palb A dan Palb B .  Hal  ini  sesuai    dengan pendapat Wulandari (2008) yang menyatakan bahwa lokus pre albumin  pada  ayam  Kedu  memiliki  dua  alel  yaitu Palb A dan Palb B .  Pada lokus  pre  albumin  terdapat tiga  genotip  yaitu Palb AA , Palb AB ,dan Palb BB .  Hasil ini sesuai dengan laporan Johari et al. (2008) bahwa di  dalam  lokus  pre  albumin  pada  ayam  Kedu
terdapat  2  genotip  yaitu  homozigot Palb AA dan Palb BB , serta 1 genotip heterozigot Palb AB .
Frekuensi gen pada lokus pre albumin pada ayam Kedu  jengger  merah  yang  paling  tinggi  terdapat pada  alel Palb B sedangkan  pada jengger  hitam  yang tertinggi  pada  alel Palb A .  Perbedaan  nilai frekuensi gen dapat  disebabkan  oleh  adanya  mutasi  dan seleksi. Noor (2000)  menyatakan  bahwa  jumlah frekuensi  genotip  dapat  berbeda  apabila  terjadi beberapa faktor diantaranya mutasi dan seleksi.
Tabel 1. Sebaran genotip dan frekuensi gen ayam Kedu jengger merah dan hitam lokus Pre-albumin
Warna jengger Jumlah sampel Genotip Frekuensi gen AA AB BB A B Merah 14 4 0 10 0,286 0,714 Hitam 14 6 3 5 0,536 0,464

## Albumin
Ayam  Kedu  jengger  merah  dan jengger hitam memiliki  dua  alel  pada  lokus  albumin (Tabel  2), yaitu Alb B dan Alb C .  Ismoyowati et  al. (2008) menyatakan  bahwa  ayam  Kedu  memiliki  dua  alel yang  mengontrol  albumin  yaitu Alb B dan Alb C .
Menurut  Johari et  al.  (2010)  menyatakan  bahwa
pada albumin juga terdapat tiga genotip yaitu Alb BB ,
Alb BC dan Alb CC . Hasvira (2008) menyatakan bahwa didalam  plasma  darah  ayam  Kedu  terdapat  lokus albumin dengan tiga  genotip  yaitu Alb BB , Alb BC danAlb CC .
Frekuensi  gen  pada  lokus  albumin  ayam  Kedu jengger  merah  (0,750) yang  paling  tinggi  terdapat
Prealbumi n Albumi n Ceruloplasmin Transferin Post  transferin Amylase-I M A5 A1
A2 A3 A4 B6 B1
Bagus Praditya Setyo Nugroho, Sutopo, Edy Kurnianto (Poli morfisme Protein Darah …….. )
pada  alel Alb B dan  pada  ayam  Kedu  jengger  hitam yang  paling  besar  juga  terdapat  pada  alel Alb B
(0,786).  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian
Abubakar et  al. (2014)  yang  menyatakan bahwa pada lokus albumin ayam Kedu hitam nilai tertinggi terdapat pada alel Alb B .
Tabel 2. Sebaran genotip dan frekuensi gen ayam Kedu jengger merah dan hitam lokus Albumin
Warna jengger Jumlah sampel Genotip Frekuensi gen BB BC CC B C Merah 14 10 1 3 0,750 0,250 Hitam 14 8 6 0 0,786 0,214

## Ceruloplasmin
Pada  Tabel  3 ditunjukkan  bahwa  ayam  Kedu jengger  merah  dan  hitam  memiliki  dua  alel  pada lokus ceruloplasmin. Kedua alel tersebut adalah Cp F dan Cp S .  Hal  ini  sesuai  pendapat Abubakar et  al.
(2014) yang menyatakan bahwa lokus ceruloplasmin pada  ayam  Kedu,  ayam  Lurik,  dan  ayam  Lignan dikontrol oleh dua alel yaitu Cp F dan Cp S . Terdapat dua genotip  homozigot pada  ceruloplasmin  yaitu Cp FF dan Cp SS .  Genotip  heterozigot  yang  terdapat
pada  lokus  ceruloplasmin  adalah Cp FS .  Hasil frekuensi  gen pada  lokus  ceruloplasmin  yang diperoleh yaitu pada ayam Kedu jengger merah yang tertinggi  pada  alel Cp S (0,714),  sedangkan  pada jengger hitam yang tertinggi juga terdapat pada alel Cp S (0,679). Dinyatakan oleh Abubakar et al. (2014) yang menyebutkan bahwa pada lokus ceruloplasmin ayam Kedu frekuensi genotip yang tertinggi terdapat pada alel Cp S (0.900).
Tabel 3. Sebaran genotip dan frekuensi gen ayam Kedu jengger merah dan hitam lokus Ceruloplasmin
Warna jengger Jumlah sampel Genotip Frekuensi gen FF FS SS F S Merah 14 3 2 9 0,286 0,714 Hitam 14 1 7 6 0,321 0,679

## Transferin
Ayam Kedu jengger merah dan hitam  memiliki dua  alel yaitu Tf B dan Tf C pada lokus  transferin (Tabel  4).  Hasil  ini  sama  dengan  hasil  yang diperoleh  oleh Johari et  al. (2007) bahwa lokus transferin  pada  ayam  Kedu  memiliki  dua  alel  yang mengontrolnya  yaitu Tf B dan Tf C .  Adapun  tiga genotip yang mengontrol lokus transferin yaitu Tf BB , Tf BC ,  dan Tf CC .  Penelitian  Wulandari  (2008) memperlihatkan bahwa  pada  ayam  Kedu pada
transferin dikontrol oleh tiga genotip yaitu Tf BB , Tf BC dan Tf CC .  Pada  frekuensi  gen ayam  Kedu  jengger merah  dan  hitam  yang  memperoleh  hasil  tertinggi adalah  alel Tf B .  Hasil  ini  sesuai  dengan  penelitian Johari et  al. (2007)  yang  menyatakan  bahwa frekuensi  genotip  pada  lokus  transferin  yang  paling tinggi  terdapat  pada  alel Tf B .  Hasil  ini  tidak  sesuai dengan hasil penelitian Abubakar et al. (2014) yang menyatakan bahwa lokus transferin pada ayam Kedu memiliki nilai yang sama.
Tabel 4. Sebaran genotip dan frekuensi gen ayam Kedu jengger merah dan hitam lokus Transferin
Warna jengger Jumlah sampel Genotip Frekuensi gen BB BC CC B C Merah 14 6 6 2 0,643 0,357 Hitam 14 6 5 3 0,607 0,393
Post Transferin
Ayam  Kedu  jengger  merah  dan  hitam  memiliki dua alel pada lokus post tranferin yaitu Ptf F dan Ptf S sebagaimana  ditunjukkan  pada Tabel  5.  Hal  ini sesuai  dengan  pendapat  Wulandari  (2008)  yang menyatakan  bahwa pada  lokus  post  tranferin  ayam Kedu  memiliki  dua  alel yaitu Ptf F dan Ptf S .  Pada lokus post tranferin terdapat tiga genotip yaitu Ptf FF , Ptf FS ,  dan Ptf SS .  Hasil  frekuensi  gen menunjukkan bahwa pada lokus post tranferin ayam Kedu jengger merah nilai  paling  tinggi  terdapat  pada Ptf S sedangkan  pada  jengger  hitam, menunjukkan nilai frekuensi  alel Ptf F dan Ptf S sama.  Hal  ini  sesuai dengan  Abubakar et  al. (2014)  yang  menunjukkan bahwa  frekuensi  gen  tertinggi  lokus  post  tranferin terdapat pada Ptf S .

## Amylase-I
Hasil  pengamatan  pita  protein  pada  lokus amylase-I  ayam  Kedu  jengger  merah  dan  hitam disajikan pada  Tabel  6. Ayam  Kedu  jengger  merah dan hitam  memiliki dua alel yaitu Amy-I B dan Amy- I C .  Hal  ini  sesuai  pendapat  Abubakar et  al. (2014) yang  menyatakan  bahwa  terdapat  dua  alel  yang berada pada lokus amylase-I yaitu Amy-I B dan Amy- I C . Genotip  homozigot pada  lokus  amylase-I  yaitu Amy-I BB dan Amy-I CC , sedangkan genotip heterozigot pada amylase-I yaitu Amy-I BC . Pada lokus amylase-I ayam  Kedu  jengger  merah,  frekuensi  gen  Amy-I A
sebesar  0,536  lebih  tinggi  dibandingkan Amy-I B (0,536). Pada  ayam  Kedu  jengger  hitam  memiliki nilai frekuensi gen yang sama besar. Perbedaan nilai frekuensi gen disebabkan oleh mutasi dan seleksi di Satuan  Kerja  Non  Ruminansia  Temanggung  seperti pengelompokkan  sesuai  warna  jengger  dan  bobot tubuh yang seragam. Hal ini sesuai dengan pendapat Noor  (2000)  bahwa  perbedaan  nilai  frekuensi  dapat disebabkan oleh seleksi dan mutasi.
Heterozigositas Individu dan Rataan Heterozigositas Pada ayam Kedu jengger merah nilai heterozigositas  individu yang  lebih tinggi  terdapat pada lokus amylase-I, sedangkan pada jengger hitam yang  paling  tinggi  terdapat  pada  lokus  post transferrin  dan  amylase-I (Tabel  7).  Hal  ini  sesuai dengan hasil penelitian  Abubakar et al. (2014) yang menunjukkan  bahwa  nilai  heterozigositas  individu pada  ayam  Kedu  terdapat  pada lokus  post  tranferin dan amylase  I.  Rataan  heterozigositas  ayam  Kedu jengger hitam lebih tinggi dibandingkan ayam Kedu jengger  merah. Nilai  heterozigositas    dapat dipengaruhi  oleh  beberapa hal  yaitu jumlah  sampel, populasi,  dan  bangsa.  Dinyatakan  oleh Ardiningsasi et al. (1997) perbedaaan nilai heterozzigositas dapat disebabkan oleh jenis bangsa ternak yang diamati.
Tabel 5. Sebaran genotip dan frekuensi gen ayam Kedu jengger merah dan hitam lokus Post Transferin
Warna jengger Jumlah sampel Genotip Frekuensi gen FF FS SS F S Merah 14 3 4 7 0,357 0,643 Hitam 14 6 2 6 0,500 0,500 Tabel 6. Sebaran genotip dan frekuensi gen ayam Kedu jengger merah dan hitam lokus Amylase-I Warna jengger Jumlah sampel Genotip Frekuensi gen BB BC CC B C Merah 14 4 7 3 0,536 0,464 Hitam 14 4 6 4 0,500 0,500

## Perhitungan Chi Square
Hasil perhitungan chi-square ayam Kedu jengger merah  dan  jengger  hitam  disajikan  pada  Tabel  8. Perhitungan dengan menggunakan chi-square sering
dilakukan  untuk  mengetahui  kondisi keseimbangan Hardy-Weinberg.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Graffelman  (2010) bahwa  chi  square  sering digunakan  untuk  menilai  kesetimbangan  Hardy
Bagus Praditya Setyo Nugroho, Sutopo, Edy Kurnianto (Poli morfisme Protein Darah …….. )
Weinberg  dalam  sampel  acak.  Faktor-faktor  yang mempengaruhi  kondisi  Hardy  Weinberg  adalah perkawinan secara acak, tidak ada mutasi gen, tidak terjadi  migrasi,  dan  tidak  terjadi  seleksi.  Hal  ini sesuai  dengan  pendapat  Ismoyowati et  al. (2005) yang menyatakan bahwa keseimbangan pada hukum
Hardy  Weinberg  dipengaruhi  oleh  faktor-faktor yaitu  genotip  yang  ada  mempunyai  viabilitas  dan fertilitas  yang  sama,  perkawinan  secara  acak,  tidak ada  mutasi  gen,  tidak  terjadi  migrasi,  dan  tidak terjadi seleksi.
Tabel 7. Heterozigositas individu dan rataan heterozigositas ayam Kedu
Lokus Jengger merah Jengger hitam Pre-albumin 0,408 0,497 Albumin 0,375 0,337 Ceruloplasmin 0,408 0,436 Transferin 0,459 0,477 Post-transferin 0,459 0,500 Amylase-I 0,497 0,500 H 0,434 0,458 Tabel 8. Perhitungan chi square ayam Kedu jengger merah dan jengger hitam Lokus Chi square jengger merah Signifikasi 95% Chi square jengger hitam Signifikasi 95% Pre-albumin 14 ns 4,536 s Albumin 9,174 s 1,041 s Ceruloplasmin 5,915 s 0,299 s Transferin 0,062 s 0,884 s Post-transferin 1,998 s 7,143 s Amylase-I 0,003 s 0,286 s Keterangan: S = Signifikan

## SIMPULAN
Ayam Kedu jengger merah dan jengger hitam di Satuan Kerja Non Ruminansia Maron, Temanggung memiliki keragaman genetik. Rataan heterozigositas ayam Kedu jengger hitam relatif lebih tinggi (0,458) dari  pada  jengger  merah  (0,434). Hasil  perhitungan chi-square menunjukkan bahwa seluruh lokus berada dalam  keseimbangan  Hardy  Weinberg  kecuali  pre albumin pada ayam Kedu jengger merah.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar,  E.  Suprijatna,  dan  Sutopo.  2014.
Genotype  distribution  of  local chicken  crosbred in Poultry Breeding Centre Temanggung Central Java. International Refereed Journal of Engineering and Science (IRJES).3: 01-14.
Apsari,  I.  A.  P  dan I.  M.  S.  Arta.  2010.  Gambaran darah  merah  ayam  buras  yang  terinfeksi leucocytozoon.  Jurnal Veteriner.  11  (2)  :  114-
118.
Manwell,  C.  and  C.  M.  A.  Baker.  1986.  Population Genetics, Molecular Marker and Gene
Conservation of Bovine Breeds. In: Neimann and Hickman  (Ed)  .World  Animal  Science.  Elsevier Healt Sciences, London.
Bollag,  D.  M  and  S.  J.  Edelstein.  1991.  Protein Method. A John Willey and Sons Inc, New York. Direktorat  Jenderal  Peternakan.  2002.  Statistik Peternakan 2012. Direktorat Jenderal Peternakan, Jakarta.
Harper, H.A., V. W. Rodwell and P.A. Mays. 1984. Biochemistry. Large Medical Publication Drawer L, Los Atlas, California.
Holsinger,  K.E.  2001.  Encyclopedia  of  Genetics. Academic Press. 2: 912-914.
Ismoyowati.  2008.  Kajian  deteksi  produksi  itik Tegal  melalui  polimorfisme  protein  darah. Journal Animal Production 10 (2): 122 – 128.
Johari,  S.,  E.  Kurnianto  and  E.  Hasviara.  2008.
Blood  protein  polymorphism  of  kedu  chicken. Jurnal Pengembangan Peternakan Tropis. 33 (4): 313-318.
Johari, S., E. Kurnianto, Sutopo and A. Santi. 2010. Genetic diversity of colour pattern (feather, skin, and  shank)  in  Kedu  chicken.  Proceeding  of  the International Seminar on Prospects and Challenges  of  Animal  Production  in  Developing Countries in the 21st Century, 23-25 March 2010. Malang Indonesia. Hal: OP142-148.
Johari,  S.,  S.  Ekasari  and  E.  Kurnianto.  2012.
Genetic  variation  in  three  breeds  of  Indonesian local ducks based on blood and eeg white protein polymorphism. Journal of the Indonesian Troical Animal Agriculture 38 (1): 20-26.
Keren,  D.  F.  2003.  Protein  Electrophoresis  in Clinical Diagnosis. Hodder Arnold, London. Laily,  A.N.  2010.  Perbandingan  Lokus  Plasma Ceruloplasmin (Cp) dan Amylase I (Amy I) pada Domba Beranak Tunggal dan Beranak Kembar di Kabupaten Semarang. Fakultas Peternakan Universitas Diponegoro. Semarang. (Skripsi)
Murtidjo,  M.  A. B.  1992. Pedoman  Beternak  Ayam Broiler. Kanisius. Yogyakarta.
Muryanto.,  Subiharta  dan  D.M.  Yuwono.  1996.
Pembibitan  Ayam  Buras.  Prosding  Aplikasi Teknologi  pada  Ayam  Buras.  Balai  Pengkajian Teknologi Pertanian. Ungaran, Semarang.
Nataamijaya,  A.G. 2000.  The  native  chicken  of Indonesia. Bulletin Plasma Nutfah. 6 (1): 1-6.
Nei,  M.  1987.  Molecular  Evolutionary Genetics. Colombia University Press, New York.
Nicholas,  F.  W. 1987.  Veterinary  Genetics.
Clarendon Press, Oxford.
Noor, T., C. Sumantri  dan  Adiani.  2011. Jarak genetik  populasi  kuda  lokal  Sulawesi  Utara berdasarkan  analisis  morfologi. Jurnal Ilmu Sains. 11 (1). Hal: 48-58.
Noviani,  F.  2010.  Perbandingan  Lokus  Plasma  Pre Albumin  (Pa)  dan  Albumin  (Alb)  pada  Domba Beranak  Tunggal  dan  Beranak  Kembar  di Kabupaten Semarng. Fakultas Peternakan Universitas Diponegoro. Semarang. (Skripsi) Rodriguez, S. 2014. Hardy-Weirnberg Law. Brenner’s  Encylopedia  of  Genetics  2nd Edition. (3): 396-398.
Rukmana,  H.  R.  2003.  Ayam  Buras.  Intensifikasi dan Kiat Pengembangan. Kanisius, Yogyakarta.
Sugiyono. 2003. Statistika untuk Penelitian, Cetakan Kelima, CV Alpha Betha, Bandung.
Sutopo.,  K.  Nomura,  Y.  Sugimoto  and  T.  Amano. 2001.  Genetic  relationships  among  Indonesian native cattle. Journal Animal Genetic. 28 (2) : 3- 11.
Warwick, E. J., J. M. Astuti dan W. Hardjosoebroto.1990.  Pemuliaan  Ternak.  Edisi ke-4. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Wulandari,  Ani  R.  2008. Studi  tentang  keragaman genetik  melalui  polimorfisme  protein  darah  dan putih  telur  pada  tiga  jenis  ayam  kedu  periode “layer”.  Fakultas  Peternakan  dan  Pertanian Universitas Diponegoro. (Tesis).
Yuwono,  T.  2005.  Biologi  Molekular.  Erlangga,
Jakarta.