Tipe Kerusakan Spora Myxobolus koi Pada Penyimpanan Dengan Berbagai Bahan Kimia
Gunanti Mahasri 1* , Agus Nazaruddin Yahya 2 , Boedi Setya Rahardja 1 , Moch Saad 3 , Nanuk Qomariyah 3
1 Departemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas
Airlangga, Kampus C UNAIR – Mulyorejo, Surabaya - 60115
2 Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Kampus C UNAIR – Mulyorejo,
Surabaya – 60115
3 Fakultas Perikanan Universitas Islam Lamongan, Jl. Veteran no. 53A Lamongan Phone/Fax. 0322_324706

## *Corresponding Author : mahasritot@gmail.com

## Abstrak
Myxobolus  koi merupakan  parasit  yang  menyebabkan  penyakit  Myxobolusis  pada  ikan.  Parasit  ini sangat  sulit  ditangani  dengan  prevalensi  mencapai  91%  sehingga  perlu  dilakukan  kajian  terhadap  parasit Myxobolus  koi .  Kerusakan  spora  merupakan  salah  satu  kendala  dalam  pengembangan  penelitian  tentang pengendalian  penyakit  ini.  Spora Myxobolus  koi dapat  mengalami  kerusakan  apabila  disimpan  dalam  kondisi penyimpanan  yang  kurang  baik.  Kerusakan  spora Myxobolus  koi ini  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor diantaranya  suhu  dan  bahan  kimia.  Bahan  kimia  merupakan  media  yang  biasa  digunakan  untuk  proses pengawetan. Beberapa bahan kimia yang dapat digunakan untuk menyimpan spora adalah alkohol, formaldehid, dan  kalium  bikromat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  bahan  kimia  pengawet  terhadap kerusakan  spora  dan  untuk  mengetahui  bahan  kimia  yang  paling  efektif  mengawetkan  spora  selama  proses penyimpanan.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) sebagai  rancangan  percobaan.  Perlakuan  yang  digunakan  adalah  penyimpanan  spora Myxobolus  koi pada alkohol  70%,  formaldehid  0,1%,  dan  kalium  bikromat  2%,  dengan  ulangan  sebanyak  6  kali.  Penyimpanan  ini dilakukan  selama  30  hari.  Parameter  utama  yang  diamati  adalah  persentase  kerusakan  spora Myxobolus .  Data yang diperoleh kemudian di analisis menggunakan ANAVA (Analisis Varian).
Hasil penyimpanan spora menggunakan alkohol 70% (C 2 H 6 O), formaldehida 0,1% (CH 2 O), dan kalium bikromat 2% ( K 2 Cr 2 O 7 ) selama 30 hari menunjukkan tingkat kerusakan spora yang tidak berbeda nyata di setiap perlakuan yang berarti ketiga perlakuan atau ketiga bahan kimia dapat mengawetkan spora
Kata Kunci : penyimpanan, bahan kimia, kerusakan, Myxobolus koi

## PENDAHULUAN
Myxobolus  koi merupakan  spesies dari protozoa yang menyebabkan penyakit Myxobolusis  pada  ikan.  Kebanyakan infeksi  parasit  ini  pada  ikan  dapat menimbulkan  masalah  ringan  seperti timbulnya  nodul  pada  insang,  namun infeksi  berat  dapat  menjadikan  masalah serius  dalam  budidaya,  khususnya  bagi ikan  muda  (Klinger and Floyd,  2009). Bentuk  spora Myxobolus koi seperti  buah pir  atau  biji  semangka  yang  terbungkus
dalam  nodul  yang  berisi  ribuan  spora (Anshary, 2008).
Myxobolus koi merupakan  parasit yang  berbahaya  dan  sulit  untuk  ditangani dengan prevalensi mencapai 91%
(Rukyani, 1990). Hal tersebut menunjukkan  bahwa Myxobolus  koi dapat merugikan  dan  berbahaya  bagi  usaha budidaya terutama pada usaha pembenihan,  sehingga  perlu  dilakukan kajian  terhadap  parasit Myxobolus  koi .
Kerusakan  spora  merupakan  salah  satu kendala  dalam  pengembangan  penelitian tentang  pengendalian  penyakit  ini.  Spora Myxobolus koi dapat mengalami kerusakan apabila disimpan dalam kondisi penyimpanan yang kurang baik . Kerusakan spora Myxobolus  koi ini  dipengaruhi  oleh berbagai  faktor  diantaranya  suhu  dan bahan  kimia.  Pengembangan  penelitian tentang kerusakan spora Myxobolus merupakan  hal  penting  karena  kurangnya sumber  yang  menjelaskan  tentang  cara menangani  kerusakannya  dan  sebagai acuan untuk penelitian lebih lanjut tentang pengendalian parasit tersebut.
Penyimpanan  spora  bertujuan  agar  spora tahan lebih lama untuk keperluan penelitian  lebih  lanjut  tentang  parasit  ini. Bahan kimia merupakan media yang biasa digunakan  untuk  proses  pengawetan. Beberapa bahan kimia yang dapat digunakan untuk  menyimpan spora adalah alkohol, formaldehid, dan kalium bikromat. Alkohol dan formaldehid mempunyai  sifat  fiksatif  karena  memiliki daya dehidrasi yang menyebabkan pengerasan  sel  atau  jaringan  (Nowacek, 2012),  sedangkan  kalium  bikromat  adalah larutan  oksidator  dan  fiksatif yang memiliki  daya  penetrasi  sehingga  dapat mengawetkan  nucleus  dan  mitokondria (Casselman,  1955).  Pada  penelitian  ini spora Myxobolus  koi akan  disimpan menggunakan berbagai bahan kimia di atas dan  diidentifikasi  pengaruh  bahan  kimia tersebut terhadap spora Myxobolus koi . Kurangnya sumber yang menjelaskan  tentang  cara  pengawetan spora  pada  penyimpanan  dan  sebagai acuan untuk penelitian lebih lanjut tentang pengendalian  parasit  ini,  penelitian  ini dilakukan  dengan  harapan  dapat  menjadi solusi  dari  masalah  yang  telah  dijelaskan di atas.

## METODOLOGI PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium Pendidikan Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas
Airlangga Surabaya. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juni -Juli 2016.

## Alat dan Bahan Penelitian
Peralatan
penelitian yang dibutuhkan  antara  lain  nampan  bedah, cawan  petri,  mikroskop  cahaya,  pinset, gunting  bedah,  scalpel,  tabung  reaksi, gelas ukur, pipet, kertas label, Haemacytometer, object  glass , cover glass , beaker  glass , microtube , Counter .
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  Spora Myxobolus  koi didapat dari  ikan  koi  yang  positif  terinfeksi Myxobolus koi , Phosphate Buffered Saline (PBS), alkohol 70% (C 2 H 6 O), formaldehid 0,1%  (CH 2 O),  dan  kalium  bikromat  2% (K 2 Cr 2 O 7 ), Aquadest dan minyak emersi.

## Prosedur kerja
Ikan yang positif terinfeksi
Myxobolus koi dibersihkan dengan air, lalu spora  diambil  dengan  cara  mengambil nodul  pada  insang  ikan  koi  dengan menggunakan  pinset  dan  scapel  secara perlahan agar tidak pecah. Nodul diletakkan  dalam  cawan  petri  berisi aquadest  lalu  dipotong  beberapa  bagian untuk  mengeluarkan  spora,  ditambah dengan  air  dan  di  dihitung.  Penghitungan spora  dilakukan  dengan  cara  mengambil endapan  dengan  pipet  sebanyak  1  tetes pada parit kaca haemocytometer yang telah diberi cover glass di atasnya dan dibiarkan sebentar  agar  larutan  menyebar  rata  ke seluruh  ruang.  Setelah  itu  memulai penghitungan  dengan  metode big  block yaitu  penghitungan  menggunakan  petak empat  besar.  Hasil  dari  masing  –  masing petak (nA, nB, nC, nD) tersebut dijumlahkan  dan  dibagi  empat,  hasil pembagian dikalikan dengan 10.000
(Mahasri dalam Titis, 2009).
Keterangan : nA, nB, nC, nD     =    jumlah spora pada blok
A, B, C, D; 4 = jumlah blok yang dihitung.
Setelah  diketahui  jumlah  spora maka  dilakukan  pengenceran,  hingga didapatkan  jumlah  spora  sebanyak  200 spora/ml.  Pengenceran  dilakukan  dengan rumus : keterangan : M1
=  konsentrasi  awal,  V1  =  volume konsentrasi  awal,  M2  =  konsentrasi  yang dikehendaki, V2 = volume dari konsentrasi yang dikehendaki.
Spora Myxobolus  koi yang  telah dipreparasi dan diseleksi kemudian dimasukkan  kedalam microtube sejumlah 3  perlakuan  dan  6  ulangan.  Setelah  itu spora  di  simpan  dalam  3  perlakuan  yakni perlakuan alkohol 70%, formaldehid 0,1%, dan kalium bikromat 2%. Penyimpanan ini dilakukan  selama  30  hari.  Jumlah  spora pada tiap perlakuan adalah 200 spora.
Pengamatan kerusakan spora Myxobolus dilakukan  dengan  perbesaran 1000x  dan  ditambah  minyak  imersi.  Data yang diambil adalah total spora Myxobolus yang dalam keadaan rusak dan dinyatakan dalam bentuk persentase. Parameter utama yang  diamati  adalah  persentase  spora Myxobolus yang rusak.
Parameter penunjang  adalah  tipe  kerusakan  spora Myxobolus koi .

## Prosedur Uji
Rancangan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  yang  dilakukan  secara eksperimental.  Penelitian  ini  terdiri  dari tiga  perlakuan,  yakni  :  A  perlakuan alkohol  70%,  B  perlakuan  formaldehid 0,1%,  C  perlakuan  kalium  bikromat  2% dengan  6  kali  ulangan,  sehingga  terdapat 18  sampel  perlakuan  yakni  A1,  A2,  A3, A4, A5, A6, B1, B2, B3, B4, B5, B6, C1, C2, C3, C4, C5, C6. Data yang didapatkan berupa persentase  spora Myxobolus yang  rusak.
Data tersebut kemudian dianalisis menggunakan Analysis of Varian
(ANOVA).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kerusakan Spora Myxobolus koi Penyimpanan  spora Myxobolus  koi pada beberapa bahan kimia :  alkohol 70% (C 2 H 6 O ) ,  formaldehida  0,1%  (CH 2 O),  dan kalium  bikromat  2%  ( K 2 Cr 2 O 7 )  bertujuan untuk menghambat proses kerusakan  yang terjadi  pada  spora  sehingga  morfologi spora  dapat  dipertahankan  secara  utuh dalam waktu yang lebih lama dari keadaan normal.
Penghitungan  kerusakan  dilakukan di hari ke-30. Hasil pemeriksaan menunjukkan  terjadi  kerusakan  pada ketiga  perlakuan  yang  diberikan.  Pada perlakuan  alkohol  70%  dan  formaldehid 0,1% mayoritas spora mengalami pengerutan  (gambar  b).  Lain  halnya dengan  kerusakan  yang  ditemukan  pada perlakuan  kalium  bikromat  2%.  Pada perlakuan kalium bikromat 2% spora tidak terjadi pengerutan seperti yang terjadi pada perlakuan  alkohol  70%  dan  formaldehid 0,1%.  Kerusakan  yang  terjadi  berupa kapsul  polar  yang  mengalami  dislokasi atau hancur (gambar c) dan beberapa spora kosong atau tidak berisi (gambar d).

## Penghitungan  Persentase  Kerusakan Spora Myxobolus koi
Setelah  proses  penyimpanan  spora selama  30  hari  didapatkan  data  kerusakan spora,  spora  yang  masih  utuh  dan persentase  kerusakan  spora  seperti  yang terlihat  pada  tabel  1.  Data  yang  diperoleh kemudian di analisis menggunakan ANAVA (Analisis Varian) untuk mengetahui  apakah  terdapat  perbedaan dari ketiga bahan kimia terhadap kerusakan spora Myxobolus koi .
Gambar 1 Spora Myxobolus koi dan beberapa tipe kerusakan spora. Keterangan : a) Spora yang masih utuh (tidak rusak), b) Spora mengkerut, c) kapsul polar dislokasi, d) spora kosong,
Tabel 1 Data Hasil Penyimpanan Spora Myxobolus koi selama 30 hari Perlakuan Rerata Spora Yang Rusak Rerata Spora Yang Tidak Rusak Persentase Kerusakan (%) ± SD P 1 63 137 31,66 a ± 9,62 P 2 68 132 33,83 a ± 9,46 P 3 51 149 25,41 a ± 8,14
Keterangan : superskrip yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (p>0,05) P 1 : Alkohol 70% (C 2 H 6 O) P 2 : Formaldehida 0,1% (CH 2 O) P 3 : Kalium bikromat 2% (K 2 Cr 2 O 7 )
Kerusakan spora dari tiga perlakuan berkisar 25,41 - 33,83% dengan jumlah  spora  tiap  sampel  sebanyak  200 spora.  Rata-rata  kerusakan  pada  P 1
(alkohol 70%) sebesar 31,66%, P 2 (formaldehid  0,1%)  sebesar  33,83%,  dan pada  P 3 (kalium  bikromat  2%)  memiliki rata-rata  kerusakan  sebesar  25,41%.  Rata-
rata  total  kerusakan  spora  pada  tiga perlakuan  sebesar  30,3%  dan  spora  yang tidak mengalami kerusakan sebesar 69,73%.  Hasil  uji  ANOVA  dengan  nilai signifikasi  yang  digunakan  adalah  0,05. Tidak  ada  perbedaan  yang  nyata  dari ketiga  perlakuan  yakni  alkohol  70%
(C 2 H 6 O ) ,  formaldehida  0,1%  (CH 2 O),  dan kalium bikromat 2% ( K 2 Cr 2 O 7 ).
Hasil penyimpanan
spora menggunakan  alkohol  70%  (C 2 H 6 O), formaldehida  0,1%  (CH 2 O),  dan  kalium bikromat  2%  ( K 2 Cr 2 O 7 )  selama  30  hari menunjukkan  kerusakan  spora  yang  tidak berbeda  nyata  di  setiap  perlakuan  yang berarti  ketiga  perlakuan  atau  ketiga  bahan kimia  memberikan  pengaruh  yang  sama terhadap  spora Myxobolus  koi .  Hal  ini terjadi  karena  ketiga  bahan  kimia  di  atas merupakan  larutan  fiksatif  sehingga  dapat mengawetkan spora dengan cara menghentikan  proses  enzimatif  sel  tubuh untuk mencegah autolysis. Larutan fiksatif dapat  mengkoagulasi  protein  dengan membentuk  senyawa  aditif  atau  dengan mengkombinasi  proses  koagulasi  dan aditif (Kuhlmann, 2009). Dari total jumlah spora terjadi kerusakan sebesar 30,3% dan spora  yang  tidak  mengalami  kerusakan atau  masih  utuh  sebesar  sebesar  69,73%, sehingga  ketiga  bahan  kimia  dapat digunakan  untuk  mengawetkan  spora Myxobolus  koi. Perlu  dilakukan  uji terhadap  spora  yang  tidak  mengalami kerusakan  apakah  spora  tersebut  masih infektif terhadap ikan atau sudah mati.
Spora  yang  rusak  pada  perlakuan alkohol  70%  dan  formaldehid  0,1% mengalami pengerutan, hal ini berhubungan dengan sifat alkohol. Alkohol  70%  pada  dosis  tertentu  dapat mengkoagulasi  protein  dan  presipitasi glukogen  yang  menyebabkan  spora  tidak mendapatkan  asupan  protein  sehingga spora tidak dapat tumbuh dan berkembang. Hal  itu  tersebut  mengakibatkan  struktur dinding  spora  menjadi  rusak,  selain  itu alkohol  memiliki  daya  dehidrasi  yang dapat  menyerap  cairan  di  dalam  spora sehingga kadar air di dalam spora menjadi lebih  rendah,  akibatnya  spora  menjadi mengkerut  (Nowacek,  2012).  Hal  yang serupa  terjadi  pada  formaldehid  0,1%, mekanismenya sama yaitu dapat menyerap cairan  dan  mengeraskan  spora.  Larutan formaldehid  adalah  desinfektan  yang efektif  melawan  bakteri  vegetatif,  jamur,
atau  virus,  tetapi  kurang  efektif  melawan spora bakteri. Formaldehid bereaksi dengan protein, dan hal tersebut mengurangi aktivitas mikroorganisme.
Efek  sporosidnya  yang  meningkat  tajam dengan adanya kenaikan suhu. Formaldehida  bereaksi  dengan  protein sehingga  membentuk  rangkaian-rangkaian antara  protein  yang  berdekatan.  Akibat dari  reaksi  tersebut  protein  mengeras  dan spora  menjadi  mengkerut.  Formaldehid memiliki  sifat  penetrasi,  tetapi  gerakan penetrasinya  lambat  sehingga  walaupun formaldehida  dapat  digunakan  untuk mengawetkan  spora  tetapi  tidak  dapat melindungi  secara  sempurna  (Nowacek, 2012).  Formaldehid  mampu  berpenetrasi hingga pada area yang sulit dijangkau, dan sangat  efektif  terhadap  sebagian  besar jenis  mikroorganisme,  termasuk  spora  di atas suhu 20 o C. Kalium bikromat sebagai larutan fiksatif adalah sama yaitu menghambat  kerusakan  spora  selama penyimpanan,  perbedaannya  ada  pada mekanisme  kerjanya.  Kalium  bikromat dapat  mengawetkan  dan  mempertahankan struktur  protein  tanpa  mempresipitasi protein  tersebut,  sehingga  pada  perlakuan kalium  bikromat  tidak  terjadi  pengerutan spora.  Kalium  bikromat  memiliki  daya penetrasi  sehingga  dapat  mengawetkan nucleus dan mitokondria. Kalium bikromat dengan konsentrasi 2,5% digunakan sebagai  media  sporulasi  atau  sebagai larutan  fiksatif  karena  pada  konsentrasi 2,5%  pH  yang  dihasilkan  stabil,  pada konsentrasi  4,6%  kalium  bikromat  efektif mengawetkan  kromosom  karena  pada kadar  asam  yang  rendah  dapat  menjaga struktur sitoplasma sel (Casselman, 1955).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian tentang  pengaruh  penyimpanan  pada berbagai  bahan  kimia  terhadap  kerusakan spora Myxobolus  koi dapat  diambil kesimpulan  bahwa  ketiga  perlakuan  yang diberikan  yaitu  alkohol  70%  (C 2 H 6 O), formaldehida  0,1%  (CH 2 O),  dan  kalium bikromat  2%  (K 2 Cr 2 O 7 )  tidak  terjadi
perbedaan  yang  nyata  yang  berarti  ketiga bahan  kimia  dapat  digunakan  untuk mengawetkan spora Myxobolus koi .
Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut untuk menentukan konsentrasi yang paling efektif pada alkohol (C 2 H 6 O ) , formaldehida (CH 2 O), dan kalium bikromat ( K 2 Cr 2 O 7 ) . Perlu penelitian lebih lanjut  untuk  mengetahui  apakah  spora Myxobolus  koi yang  telah  disimpan  dan tidak  mengalami  kerusakan  masih  bersifat infektif terhadap ikan dan pengaruh bahan kimia  tersebut  terhadap  perkembangan spora.

## DAFTAR PUSTAKA
Anshary,  H.  2008.  Modul  Pembelajaran Berbasis Student Center Learning (SCL).  Lembaga  kajian  dan pengembangan  pendidikan  Mata Kuliah Parasitologi Ikan. Fakultas Ilmu  Kelautan  dan  Perikanan. Universitas Hasanuddin. Hal 38.
Bruce, C.W.G. 1955. Cytological  Fixation
by Chromic Acid and Dichromates.  present  address, The Banting and Best Department of  Medical  Research,  University of Toronto, Toronto, Canada. Hal. 203-221.
Jamie  M.  Nowacek.  2012.  Fixation  and Tissue  Processing.  Chapter  16. Fixative. America. 141-152 pp.
Klinger,  R.  and  R.F.  Floyd.  2009. Introduction  to  Freshwater  Fish Parasites.  University  of  Florida. 13 hal.
Leiro,  J.M.,  C.  Piazzon.,  B.  Dominguez., N.  Mallo.,  J.  Lamas.  2011.
Evaluation Of Some Physical and Chemical Treatments for Inactiviting Microsporidian Spore Isolated  From  Fish.  Santiago  de Compostela.  Intern  J  of  Food
Microbio.  Elsevier.  156  :  152- 160.
Titis,  C.D.,  W.S.D.  Nugroho,  D.  Daenuri, H.  Nurul  dan  Sumayani.  2009.
Laporan Uji Coba Identifikasi dan Penentuan Derajat Kerusakan Akibat  Infeksi Myxobolus sp. pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ). Balai  Karantina  Ikan  kelas  II Tanjung Emas Semarang.
Wolf,  D.K.  2009.  Fixative.  Division  of
Radiooncology,
Deutsches Krebsforschungszentrum,  69120
Heidelberg. Germany.