## PENTINGNYA APLIKASI MARKER-ASSISTED SELECTION DALAM SELEKSI KLON KARET TOLERAN KEKERINGAN
The Importance of  Marked-Assisted Selection in The Screening of  Rubber Drought Tolerant Clones
Andi Nur Cahyo
Pusat Penelitian Karet, Jl. Raya Palembang-Pangkalan Balai Km. 29, Banyuasin 30953 Email: nurcahyo.andi@yahoo.co.uk
Diterima 18 Oktober 2023 / Direvisi 14 November 2023 / Disetujui 8 Desember 2023

## Abstrak
Seleksi  klon  karet  toleran  kekeringan sangat mendesak untuk dilakukan karena pada masa yang akan datang diperkirakan kejadian fenomena  kekeringan  sebagai  dampak pemanasan  global  akan  lebih  sering  terjadi. Untuk  melaksanakan  hal  ini,  terdapat  satu masalah,  yaitu  kegiatan  pemuliaan  tanaman karet  dengan  metode  yang  konvensional membutuhkan  waktu  sekitar  35  hingga  40 tahun karena tanaman karet adalah tanaman tahunan.  Salah  satu  solusi  untuk  mengatasi masalah  ini  adalah  dengan  memanfaatkan metode Marker-Assisted Selection (MAS). MAS adalah  metode  seleksi  tanaman  yang memanfaatkan  marka  DNA  yang  bertautan dengan  lokus  target  sebagai  alat  untuk menduga  fenotipe  tanaman  yang  diinginkan oleh pemulia tanaman. Untuk melaksanakan metode  ini  diperlukan  penentuan  QTL  dan menganalisis  gen-gen  dalam  QTL  yang terasosiasi  dengan  parameter-parameter toleransi  kekeringan  pada  tanaman  karet, misalnya  kandungan  ROS  ( Reactive  Oxygen Species ),  aktifitas  enzim  SOD  ( Superoksida Dismutase ), POD ( Peroksidase ), CAT ( Catalase ), kandungan  asam  absisat  (ABA),  asam askorbat,  tekanan  turgor  sel,  kandungan prolin,  laju  transpirasi,  bukaan  stomata, electrolyte  leakage ,  tekanan  osmosis  sel  daun, kadar air daun relatif, dan DFI ( Drought Factor Index) . Apabila marker yang diperlukan dalam metode MAS sudah selesai diidentifikasi dan divalidasi, diharapkan metode MAS ini dapat diadopsi  untuk  memangkas  durasi  waktu pemuliaan  tanaman  karet  konvensional  yang
memerlukan  waktu  antara  35-40  tahun menjadi  kurang  dari  satu  tahun.  Tulisan  ini bertujuan untuk mengulas parameter fisiologis tanaman yang terasosiasi dengan sifat toleransi kekeringan  serta  pentingnya  metode  MAS dalam seleksi klon karet toleran kekeringan.
Kata kunci: antioksidan, gen, Hevea brasiliensis , lokus sifat kuantitatif, spesises oksigen reaktif

## Abstract
The selection of  drought-resistant rubber clones is very urgent because in the future it is estimated that drought phenomena as a result of  global warming will occur more often. To do this, there is a problem, namely  the  activity  of   conventional  methods  of rubber plants breeding program takes about 35 to 40 years  because  rubber  plant  is  perennial  tree.  A solution  to  overcome  this  problem  is  to  utilize  the Marker-Assisted Selection (MAS) method. MAS is a plant  selection  method  that  utilizes  DNA  markers linked to the target locus as a tool to infer the plant phenotype desired by plant breeders. To carry out this method,  it  is  necessary  to  determine  QTL  and analyze  genes  underlying  QTL  associated  with drought resistance parameters in rubber plants, such as  ROS  (Reactive  Oxygen  Species)  content,  SOD (Superoxide  Dismutase),  POD  (Peroxidase),  CAT (Catalase)  enzyme  activity,  abscisic  acid  (ABA), ascorbic  acid  content,  cell  turgor  pressure,  proline content,  transpiration  rate,  stomatal  conductance, electrolyte leakage, leaf  cell osmosis pressure, relative leaf   moisture  content,  and  DFI  (Drought  Factor Index).  When  the  markers  required  in  the  MAS method have been identified and validated, the MAS method  can  be  adopted  to  cut  the  duration  of
conventional rubber plant breeding time that takes between 35-40 years to less than one year. This paper aimed  to  review  plant  physiological  parameters associated  with  drought  tolerance  and  the importance of  the MAS method in the selection of drought-tolerant rubber clones.
Keywords:  antioxidant,  gene,  Hevea  brasiliensis, quantitative trait loci , reactive oxygen species

## Pendahuluan
Marker-Assisted  Selection (MAS)  adalah metode seleksi tanaman yang memanfaatkan marka  DNA  yang  bertautan  dengan  lokus target  sebagai  alat  untuk  menduga  fenotipe yang  diinginkan  oleh  pemulia  tanaman. Metode MAS untuk seleksi tanaman ini selain bisa diterapkan pada tanaman semusim, juga bisa  diterapkan  pada  tanaman  tahunan, misalnya  tanaman  karet.  Metode  MAS  ini menjadi  sangat  penting  pada  tanaman  karet dapat  memangkas  waktu  yang  dibutuhkan untuk  proses  pemuliaan  tanaman  karet  dari sekitar 35 hingga 40 tahun menjadi beberapa bulan saja ketika tanaman karet masih dalam stadia  awal  pertumbuhannya  apabila  marker untuk sifat yang diinginkan pemulia tanaman karet sudah diketemukan dan divalidasi (An et a l . , 2 0 1 9 ;   Po o t a k h a m e t   a l . , 2 0 2 0 ; Priyadarshan,  2017;  Xu  &  Crouch,  2008). Metode  MAS  memungkinkan  diaplikasikan untuk  seleksi  ribuan  genotipe  dengan  cara ekstraksi DNA tanaman yang akan diseleksi, kemudian  dilakukan  proses  PCR  ( Polymerase Chain Reaction ) dengan memakai marker gen- gen sifat toleran kekeringan. Hasil amplifikasi yang  diperoleh    kemudian  divisualisasikan d e n g a n   p r o s e s   e l e k t r o f o r e s i s   u n t u k mengetahui  keberadaan  gen-gen  pembawa sifat  toleran  kekeringan  pada  individu tanaman yang diseleksi.
Pada tanaman karet, salah satu parameter seleksi  yang  saat  ini  mendesak  untuk dilakukan  seleksi  adalah  parameter  toleransi tanaman  karet  terhadap  kekeringan.  Hal  ini terkait  dengan  fenomena  perubahan  iklim sebagai  akibat  dari  fenomena  pemanasan global.  Salah  satu  akibat  dari  fenomena
pemanasan  global  adalah  terjadinya  musim kemarau  yang  diprediksi  menjadi  lebih panjang  pada  masa  yang  akan  datang (Intergovernmental Panel on Climate Change, 2018).  Sementara  itu,  curah  hujan  dengan intensitas  125  mm/bulan  diperlukan  untuk menjaga  laju  pertukaran  O   and  CO dalam
2 2
kondisi  yang  optimum  (Vijayakumar et  al ., 1 9 9 8 ) .   Ku r a n g n ya   k e t e r s e d i a a n   a i r mempengaruhi  beberapa  parameter  fisiologis tanaman,  seperti:  tekanan  osmotik  dan tekanan  turgor,  konduktansi  stomata, fotosintesis,  transpirasi,  respirasi,  aktivitas antioksidan  (Falqueto et al., 2017; Silva et al .,
2013; Velázquez-Márquez et al ., 2015; Wang, 2014; Z. Wang et al ., 2018).
Di lain pihak, meskipun terdapat klon yang toleran  kekeringan  misalnya  RRIM  600 (Krishan, 2017; Luke et al ., 2015; Thomas et al ., 2015), banyak klon unggul tanaman karet yang saat  ini  direkomendasikan  sensitif   terhadap kekeringan misalnya klon PB 260 (Sanier et al ., 2013).  Klon  dengan  sifat  sensitif   terhadap k e k e r i n g a n   i n i   m e m p u n ya i   k a r a k t e r menggugurkan  daun  yang  cepat  pada  awal musim  kemarau,  sehingga  produksinya menjadi  cepat  menurun  dan  dapat  mencapai 50% dibandingkan produksi karet pada musim hujan.  Untuk  mengatasi  hal  ini,  diperlukan program  pemuliaan  tananaman  untun menyeleksi  klon-klon  yang  toleran  terhadap kekeringan berdasarkan  parameter-parameter yang  berhubungan  dengan  sifat  toleransi tanaman  terhadap  kekeringan  dalam  jangka waktu yang cepat, sehingga produksinya akan tetap  dapat  dipertahankan  pada  saat  musim kemarau.  Tulisan  ini  bertujuan  untuk mengulas  parameter  fisiologis  tanaman  yang terasosiasi  dengan  sifat  toleransi  kekeringan serta  pentingnya  metode  MAS  dalam  seleksi klon karet toleran kekeringan.

## Parameter Seleksi Klon Karet terhadap Toleransi Kekeringan
Untuk  menyeleksi  tanaman  yang  toleran terhadap  kekeringan  (termasuk  tanaman karet),  terdapat  beberapa  parameter  yang dapat  digunakan  sebagai  dasar  seleksi,  yaitu
Pentingnya aplikasi marker-assisted selection dalam seleksi klon karet toleran kekeringan
parameter  biokimia  dan  fisiologis  tanaman. Beberapa  parameter  biokimia  tanaman  yang dapat  dijadikan  sebagai  kriteria  seleksi tanaman  karet  yang  toleran  terhadap kekeringan misalnya kandungan ROS ( Reactive Oxygen  Species) ,  aktifitas  enzim  SOD ( Superoksida  Dismutase ),  POD  ( Peroksidase ), CAT  ( Catalase ),  kandungan  asam  absisat (ABA), asam askorbat, tekanan turgor sel, dan kandungan prolin. Untuk parameter fisiologis tanaman,  dapat  digunakan  beberapa parameter,  misalnya  laju  transpirasi,  bukaan stomata, electrolyte leakage , tekanan osmosis sel,
kadar air daun relatif, dan DFI ( Drought Factor Index ).
Kandungan  ROS  merupakan  salah  satu parameter  yang  dapat  digunakan  untuk menyeleksi  tanaman  karet  yang  toleran terhadap  kekeringan.  Tanaman  karet  yang toleran  terhadap  kekeringan  misalnya  RRIM 600   akan mempunyai kandungan ROS yang rendah  setelah  terjadi  cekaman  kekeringan (Luke et al ., 2015; Thomas et al ., 2015). Hal ini terbukti  pada  penelitian  Santos et  al .  (2019) seperti yang tersaji pada Tabel 1.
ROS  terbentuk  sebagai  akibat  dari menutupnya  stomata  ketika  terjadi  cekaman kekeringan yang menyebabkan CO  tidak bisa 2 masuk  ke  dalam  jaringan  daun  melalui stomata. Akumulasi ROS dapat menyebabkan kerusakan jaringan dan sel, serta stres oksidatif (Hamim et  al., 2017).  Stres  abiotik  adalah penyebab  utama  stres  oksidatif   karena kontribusinya  terhadap  pembentukan  ROS. ROS  diproduksi  di  jalur  transpor  elektron mitokondria  dan  kloroplas  (Kholová et  al ., 2011).  Produksi  ROS  seperti  superoksida anion,  hidrogen  peroksida,  hidroksil  radikal, dan  oksigen  singlet  merupakan  konsekuensi yang  tak  terhindarkan  dari  metabolisme aerobik (Ahmad et al. , 2009). Pada saat cahaya tersedia  namun  stomata  tertutup  ROS terbentuk di kloroplas dan peroksisom (Foyer &  Noctor,  2003),  dan  ketika  cahaya  tidak tersedia ROS akan diproduksi di mitokondria (Møller,  2001).  Beberapa  bentuk  ROS
- misalnya superoksida anion (O ) dan hidrogen
2
peroksida  (H O )  diproduksi  sebagian  besar
2 2
oleh kloroplas (Ahmad et al. , 2009).
S e b a g a i   r e a k s i   t a n a m a n   t e r h a d a p keberadaan  ROS,  tanaman  membentuk  dua mekanisme  detoksifikasi  ROS,  yaitu:  (i) antioksidan  enzimatik,  misalnya  superoksida dismutase  (SOD),  askorbat  peroksidase (APX),  dan  katalase  (CAT) (Kholová et  al ., 2011;  Prochazkova et  al .,  2001);  dan  (ii) antioksidan  non-enzimatik,  misalnya  asam askorbat  (Akram et  al .,  2017;  Mazid et  al .,
2011).  SOD  adalah  enzim  pendetoksifikasi
- ROS yang mengubah O  yang terbentuk dalam 2 kondisi  cekaman  kekeringan  menjadi  H O
2 2 (Taiz & Zeiger, 2002).
CAT  merupakan  enzim  yang  berperan pada  konversi  H O   menjadi  H O  dan  O
2 2 2 2
(Fikret et  al .,  2013).  CAT  ditemukan  pada mitokondria,  peroksisom,  dan  sitosol (Heidari,  2009).  Selanjutnya  fungsi  enzim
APX adalah mengkonversi H O  menjadi H O
2 2 2
dan  MDHA  ( monodehydroascorbate )  (Kataria, 2017). Pada milet mutiara, aktivitas APX dan CAT  meningkat  segera  setelah  terjadi cekaman  kekeringan,  sedangkan  SOD meningkat  pada  fase  kekeringan  selanjutnya (Kholová et al ., 2011; Patil et al ., 2005). Selain itu,  asam  askorbat  adalah  substrat  utama untuk  detoksifikasi  ROS.  Asam  askorbat merupakan sumber elektron yang dibutuhkan oleh APX untuk mengubah H O  menjadi H O
2 2 2 dan O  (Akram et al ., 2017; Mazid et al ., 2011).
2 Pada  saat  pembentukan  ROS  dan antioksidan  tidak  seimbang,  cekaman oksidatif   terjadi  sehingga    menyebabkan perubahan  dalam  sistem  fisiologis  tanaman (Ahmad et  al .,  2008,  2009;  Foyer  &  Noctor,
1 2000).  Kehadiran  ROS,  seperti  O   dan  HO, 2 dapat  merusak  asam  lemak  tak  jenuh  ganda (PUFA)  dan  meningkatkan  kompleks p e n c a m p u r a n   y a n g   d i b e n t u k   o l e h hidroperoksida  lipid  (Ahmad et  al .,  2009; M u e l l e r,   2 0 0 4 ) .   Pe n i n g k a t a n   P U FA peroksidasi  mengurangi  fluiditas  membran, meningkatkan  kebocoran,  dan  menyebabkan kerusakan  sekunder  pada  protein  membran (Ahmad et al ., 2009; Halliwell, 2006). Hal ini dapat  diamati  dengan  parameter electrolyte leakage (Dionisio-Sese & Tobita, 1998).
Selain  ROS  dan  antioksidan  parameter biokimia  lain  yang  menjadi  kriteria  toleransi tanaman  terhadap  kekeringan  adalah  prolin. Akumulasi  prolin  ini  mempunyai  hubungan yang  positif   dengan  toleransi  tanaman  karet terhadap  kekeringan  (Xavier et  al .,  2018). P r o l i n   i n i   d a p a t   b e r f u n g s i   s e b a g a i osmoregulator.  Osmoregulasi  adalah kemampuan  tanaman  untuk  mengatur tekanan  osmotik  sebagai  akumulasi  solut dalam  jaringan  tanaman.  Klon  karet  dengan kemampuan  osmoregulasi  yang  tinggi memiliki tingkat tekanan osmotik yang tinggi sehingga mampu mempertahankan turgiditas sel  dan  kadar  air  relatif   daun  selama  berada dalam  kondisi  kekeringan  (Karyudi,  2001). Hal  ini  dapat  ter jadi  karena  adanya pengaturan  lebar  bukaan  stomata  yang menyebabkan  CO   tetap  dapat  masuk  ke 2 dalam jaringan daun walaupun dalam jumlah
yang  relatif   sedikit  pada  waktu  musim kemarau.
Lebar  bukaan  stomata  mempunyai hubungan  yang  erat  dengan  konduktansi stomata  dan  laju  tranpirasi.  Di  antara  efek kekeringan  pada  proses  fisiologis  tanaman karet, perubahan konduktansi stomata adalah yang  paling  dominan  (Sanier et  al .,  2013). Fotosintesis  bersih  dan  konduktansi  stomata yang  dipengaruhi  oleh  kondisi  kekeringan menunjukkan  kurva  hubungan  sigmoid (Ceulemans et  al .,  1984).  Salah  satu  gejala kekeringan adalah layunya   daun yang terjadi 25 hari setelah cekaman kekeringan pada klon RRII 105 dan RRII 208 (Krishan, 2017). Selain itu,  pada  cekaman  kekeringan  yang  parah cabang-cabang juga mengering (Indraty, 2003). Tanaman  karet  dikategorikan  ke  dalam golongan  C3  (Cahyo et  al .,  2022a;  Liu et  al ., 2 0 1 6 ) .   O l e h   k a r e n a   i t u ,   p e nu r u n a n konduktansi stomata pada pohon karet dapat memiliki  dua  efek.  Pertama,  penurunan konduktansi stomata  menyebabkan turunnya laju  transpirasi,  sehingga  tanaman  dapat menghemat  serapan  air  dari  tanah  dan meningkatkan  efisiensi  penggunaan  air (Chaves et al ., 2009; Wang et al ., 2018). Kedua, penurunan  konduktansi  stomata  dapat meningkatkan  kemungkinan  fotorespirasi yang mengurangi akumulasi karbohidrat yang dihasilkan dari proses fotosintesis  (Hamim et al ., 2017). Oleh karena itu, laju pertumbuhan dan  hasil  tanaman  karet  menjadi  menurun. S e l a n j u t n y a ,   p e n u t u p a n   s t o m a t a mengakibatkan penurunan laju asimilasi CO , 2 maka  pada  paparan  cahaya  yang  berlebihan, terjadi  gangguan  fungsional  pusat  reaksi fotosintesis  PSII  dan  ROS  (Reactive  Oxygen Species)  terbentuk.  Akumulasi  ROS  dapat merusak  jaringan  dan  sel  dan  menyebabkan stres oksidatif  (Hamim et al ., 2017).
Semua  parameter  pengamatan  yang berhubungan dengan reaksi tanaman terhadap cekaman kekeringan tercermin pada aktivitas PSII (Photosystem II). Kondisi fisiologis PSII yang  juga  menggambarkan  vitalitas  tanaman dapat  diamati  dengan  cara  memonitor  emisi chlorophyll  fluorescence (CF)  dari  PSII.  Oleh karena itu, pengukuran CF juga memberikan
informasi  tidak  langsung  tentang  kondisi fisiologis tanaman yang dipengaruhi oleh stres kekeringan.  Data  CF  ini  dibutuhkan  untuk menghitung nilai DFI. DFI adalah parameter integratif   yang  mencerminkan  penurunan Performance  Index (PI)  akibat  kekeringan selama  periode  stres  kekeringan.  PI memberikan  informasi  kuantitatif   tentang vitalitas tanaman. PI adalah salah satu variabel pada  parameter  CF (Kalaji et  al .,  2016; Oukarroum et al ., 2007).
PI  dihasilkan  oleh  tiga  parameter independen, yaitu: konsentrasi pusat reaksi per klorofil, parameter yang terkait dengan proses fotosintesis,  dan  parameter  yang  terkait dengan transpor elektron  (Kalaji et  al ., 2016; Strasser et  al .,  2004).  PI  terkait  erat  dengan D r o u g h t   F a c t o r   I n d e x ( D F I ) .   D F I menggambarkan  pengurangan  relatif   PI karena  kekeringan  selama  periode  stres kekeringan  (Kalaji et  al .,  2016).  Prinsip  DFI adalah  bahwa  genotipe  toleran  kekeringan harus dapat mentolerir stres kekeringan untuk jangka  waktu  yang  lebih  lama  daripada genotipe sensitif  kekeringan (Oukarroum et al ., 2007). Strauss et al . (2006) menyebutkan bahwa penurunan PI setelah periode kedua stres bisa lebih  signifikan  (dengan  faktor  2)  daripada penurunan  PI  selama  periode  pertama  stres. Akibatnya,  genotip  yang  sensitif   terhadap kekeringan  menunjukkan  penurunan  PI ter tinggi  selama  periode  kedua  stres kekeringan juga  memiliki nilai DFI  terendah (paling  negatif)  (Boureima et  al .,  2012).  DFI yang  rendah  menunjukkan  penurunan aktivitas  PSII  yang  lebih  besar  yang disebabkan  oleh  kekeringan.  DFI  yang  lebih rendah  juga  menunjukkan  toleransi  genotipe yang lebih rendah terhadap kekeringan (Stirbet et  al .,  2018).  DFI  telah  berhasil  digunakan untuk  mengur utkan  tingkat  toleransi kekeringan  dari  beberapa  genotipe  beberapa spesies, yaitu Sesamum indicum (Boureima et al ., 2012 ) , Cicer  arientinum L.  (Çiçek  &  Arslan, 2015), Hordeum  vulgare L.  (Oukarroum et  al ., 2007)  dan Elaeis  guineensis (de  Raissac et  al .,
2017).

## Gen-Gen Pengendali Sifat Fisiologis Yang Berkaitan Dengan Parameter Toleransi Tanaman Terhadap Kekeringan
Dalam rangka memperpendek waktu yang dibutuhkan  untuk  menyeleksi  tanaman  yang toleran  terhadap  kekeringan  terutama  pada tanaman  tahunan,  beberapa  peneliti melakukan penelitian untuk mengidentifikasi gen-gen  yang  mengendalikan  sifat  toleransi terhadap kekeringan pada beberapa tanaman. I d e n t i f i k a s i   g e n   d i p e r l u k a n   u n t u k melaksanakan  metode  MAS  yang  dapat memperpendek waktu seleksi tanaman. Pada tanaman apel dan tembakau,   gen peroxidase (prx8)  dilaporkan  mengendalikan  toleransi tanaman  terhadap  cekaman  kekeringan dengan  mendetoksifikasi  ROS  (Vicuna Requesens et  al .,  2012).  Selain  itu,  gen CRT/DRE bf  dilaporkan mengendalikan sifat toleransi terhadap cekaman kekeringan, suhu dingin,  dan  salinitas  tinggi  pada  tanaman A r a b i d o p s i s   t h a l i a n a d e n g a n   c a r a mengendalikan  pembentukan  asam  absisat (ABA)  (Shinozaki et al ., 2003). Tf  MBF juga dilaporkan mengendalikan sifat toleran kering pada tanaman Arabidopsis thaliana dengan cara mengatur konduktansi stomata dan kadar air daun relatif  (Rizhsky et al ., 2004). Sementara itu,  gen  GPX  (Glutathione  peroxidase) dilaporkan  mengendalikan  sifat  toleransi terhadap  kekeringan  melalui  aktivasi  enzim GPX  yang  berperan  dalam  mendetoksifikasi ROS pada tanaman tembakau  (Yoshimura et al .,  2004).  Pada  tanaman  padi,  gen  SNAC1 dilaporkan  mengendalikan  sifat  toleransi terhadap  kekeringan  dengan  pengaturan bukaan stomata (Kuruvilla et al ., 2016). Selain itu, beberapa faktor transkripsi gen pengendali toleransi terhadap kekeringan seperti WRKY, bZIP, NAC, AP2 dan C2H2 (Karnatam et al ., 2 0 2 0 )     d a n   L O C _ O s 0 1 g 7 2 8 0 0   d a n LOC_Os01g72950  ( Punchkhon et  al .,  2020) juga terdapat pada tanaman padi.
Pada  tanaman  karet,  beberapa  gen pengendali sifat toleransi terhadap kekeringan juga  telah  dilaporkan  oleh  beberapa  peneliti. Luke et al . (2015), melaporkan bahwa Mitogen
Pentingnya aplikasi marker-assisted selection dalam seleksi klon karet toleran kekeringan
Activated Protein (MAP) kinase, Myeloblastosis (Myb) transcription  factor ,  C- repeat  responsive element/Dehydration  Responsive  Element (CRT/DRE) binding factor , dan Nuclear Factor Y subunit A  (NFYA)  menunjukkan  asosiasi yang  positif   terhadap  sifat  toleransi  terhadap kekeringan.  Gen  Hb33HP,  Hb22HP,  dan Hb20HP juga dilaporkan mengendalikan sifat toleransi  terhadap  kekeringan  pada  tanaman karet (Thomas et al ., 2012). Wang (2014) juga menyebutkan  bahwa  beberapa  gen  seperti HbCuZnSOD, HbMnSOD, HbAPX, HbCAT,
H b C O A ,   H b A T P,   d a n   H b A C A T mengendalikan sifat toleransi kekeringan pada tanaman  karet  dengan  cara  meregulasi pembentukan  antioksidan  pendetoksifikasi ROS.  Selain  itu,  Leclercq et  al .  (2012)  juga membuktikan  bahwa  over  ekspresi  dari  gen H b C u Z n S O D   d a n   H b M n S O D   d a p a t meningkatkan  toleransi  kekeringan  tanaman karet  klon  PB  260.  Selain  itu,  beberapa  gen seperti peroxidase, WRKY transcription factor (WRKY) dan Late Embryogenesis Abundant 5 (LEA 5) protein dilaporkan juga mempunyai asosiasi  yang  kuat  dengan  toleransi  terhadap
kekeringan pada karet  (Kuruvilla et al ., 2016; Thomas et al ., 2012). Primer dari beberapa gen tersebut disajikan pada Tabel 2.
Untuk parameter DFI pada tanaman karet, belum  terdapat  laporan  mengenai  gen-gen yang  mengendalikannya,sehiingga  untuk parameter  tersebut  saat  ini  baru  terdapat publikasi  mengenai  QTL  yang  bertautan dengan  sifat  tersebut.  Cahyo et  al .  (2022b) melaporkan  bahwa  QTL  yang  terasosiasi dengan  parameter  DFI  terletak  pada  lokus g5TA2155, yang terdapat pada jarak 0,553 cM pada linkage group nomor 5. Penelitian tersebut masih  perlu  diteliti  lebih  dalam  lagi  untuk mengidentifikasi  gen-gen  yang  terdapat  pada lokus tersebut.

## Penerapan Metode MAS untuk Seleksi Klon Karet Toleran Cekaman Kekeringan
Penerapan metode MAS dalam seleksi klon karet  unggul  berdasarkan  parameter- parameter  toleransi  terhadap  kekeringan  ini sangat penting karena dapat mempercepat dan
meningkatkan  akurasi  seleksi.    Untuk parameter sifat toleransi terhadap kekeringan, sampai saat ini belum ada laporan mengenai hasil  seleksi  klon  karet  toleran  cekaman kekeringan dengan metode MAS.  Diharapkan dengan  menggunakan  metode  MAS,  seleksi klon unggul tanaman karet dapat diselesaikan dalam  jangka  waktu  kurang  dari  satu  tahun (stadia awal pertumbuhan tanaman) (An et al ., 2019;  Pootakham et  al .,  2020;  Priyadarshan, 2017;  Xu  &  Crouch,  2008),  apabila gen/kumpulan  gen  pengendali  ekpresi  suatu sifat  telah  diketahui  dan  telah  divalidasi. Urutan  kegiatan  pemuliaan  tanaman  dalam menentukan marker untuk penerapan metode MAS disajikan dalam Gambar 1.
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  tahapan kegiatan marker-assisted selection dimulai dari kegiatan  pembentukan  populasi  hasil persilangan antar tetua yang mempunyai sifat yang diinginkan. Diharapkan bahwa gen yang diinginkan  dari  tetua  diwariskan  ke  sebagian anggota  populasi  keturunannya  (progeni). Gen  pengendali  sifat  ini  dapat  berupa
Pentingnya aplikasi marker-assisted selection dalam seleksi klon karet toleran kekeringan
gabungan  beberapa  gen  yang  saling mempengaruhi  yang  terdapat  dalam  suatu lokus  dalam  kromosom  yang  sering  disebut dengan QTL.
QTL ( Quantitative Trait Loci ) (Geldermann, 1976; Kearsey, 1998 ) , merupakan bagian DNA (lokus)  yang  terkait  dengan  variasi  sifat kuantitatif  dalam fenotip populasi. QTL dapat didefinisikan  sebagai  wilayah  genom  yang dikaitkan  dengan  efek  pada  sifat  kuantitatif. Selain itu, QTL melibatkan gen tunggal atau sekelompok  gen  terkait  yang  mempengaruhi sifat  tersebut.  Sebelum  penemuan  penanda molekuler,  QTL  dikenal  sebagai  poligen (Kearsey,  1998).  Karena  konstruksi saturated linkage map dapat dibangun dengan teknologi marka  molekuler,  teknologi  QTL  dapat digunakan  untuk  melakukan  analisis  genetik yang  bersifat  kompleks.  Informasi  mengenai QTL  Ini  berguna  untuk  program  pemuliaan tanaman  dengan  metode Marker-Assisted Selection (Botstein et al. , 1980; Price et al ., 2002).
Terdapat tiga kegiatan yang perlu dilakukan untuk  mengidentifikasi  QTL,  yaitu:  a) kegiatan  genotiping,  b)  kegiatan  fenotiping, dan  c)  analisis  statistik  dengan  perhitungan data  genoting  dan  fenotiping  untuk menentukan  signifikansi  korelasi  yang mungkin  antara  penanda  genetik  dan  sifat agronomis  tanaman  atau  dengan  karakter yang menentukan tingkat toleransi   (Gambar 1). Dari data QTL yang telah dihasilkan, dapat diidentifikasi  gen-gen  yang  terkait  dengan suatu  sifat  agronomis  yang  diinginkan.  Oleh karena itu, marker genetik yang terkait dengan QTL  dapat  dimanfaatkan  oleh  pemulia tanaman  untuk  mempersingkat  waktu  yang dibutuhkan dalam seleksi tanaman (Clément- Demange et al ., 2006).
Perbaikan  genetik  tanaman  untuk kemampuan  adaptasi  terhadap  kekeringan merupakan  tantangan  karena  kompleksitas sifat dan mekanisme molekuler dan fisiologis yang terkait dengan kekeringan (Ghimire et al ., 2012).  Toleransi  terhadap  kekeringan dianggap  sebagai  sifat  kompleks  karena mekanisme  toleransi  kekeringan  diatur  oleh beberapa  QTL,  seperti  mekanisme  toleransi kekeringan,  penghindaran,  dan  pemulihan (Kim et al ., 2017).
Gambar  1  juga  menunjukkan  bahwa setelah  QTL  yang  berisi  gen  gen  pengendali sifat  tahan  cekaman  kekeringan  ditemukan, masih diperlukan validasi QTL dan gen-gen di dalamnya untuk mengkonfirmasi bahwa QTL dan  gen-gen  yang  dimaksud  adalah  benar- benar mengendalikan sifat toleransi terhadap kekeringan.  Validasi  ini  penting  untuk dilakukan  karena  bisa  saja  posisi  QTL  dan efeknya  bisa  tidak  akurat  karena  faktor  bias saat dilakukan sampling. Kegiatan validasi ini dapat  dilakukan  pada  populasi  yang  berbeda untuk  mengkonfirmasi  bahwa  QTL  tersebut juga  efektif   pada  populasi  lain  dengan  latar belakang genetic yang berbeda.
Apabila  semua  tahap  dalam  Gambar  1 telah  selesai  dilakukan,  kegiatan  seleksi  klon karet yang toleran cekaman kekeringan dapat dilakukan  dengan  metode  MAS,  sehingga durasi  waktu  pemuliaan  tanaman  karet konvensional yang memerlukan waktu antara 35  hingga  40  tahun  diharapkan  dapat diperpendek menjadi kurang dari satu tahun. Hal  ini  dapat  terjadi  karena  sifat  genetik tanaman  (termasuk  gen-gen  pembawa  sifat toleransi  klon  karet  terhadap  kekeringan), dapat diidentifikasi dengan metode MAS sejak t a n a m a n   b a r u   b e r k e c a m b a h   d a n mengeluarkan  beberapa  daun  pertamanya ketika  tanaman  berumur  beberapa  minggu. Oleh  karena  itu,  metode  MAS  ini  sangat penting  bagi  program  pemuliaan  tanaman karet terutama untuk seleksi klon karet toleran kekeringan.

## Kesimpulan
Salah  satu  sifat  klon  karet  unggul  yang mendesak untuk diseleksi adalah sifat toleransi terhadap cekaman kekeringan. Permasalahan lamanya  waktu  pemuliaan  tanaman  karet dengan  metode  konvensional  dapat  diatasi d e n g a n   m e t o d e   M A S.   U n t u k   d a p a t menjalankan  metode  MAS,  diperlukan identifikasi  marker  gen  gen  yang  terdapat dalam  QTL  yang  terasiosiasi  dengan  sifat fenotip  yang  diinginkan  pemuia  tanaman. Untuk  itu,  diperlukan  beberapa  tahapan kegiatan  sebelum  metode  MAS  ini  dapat dilaksanakan,  antara  lain:  pembentukan
populasi,  pemetaan  QTL,  validasi  QTL,  dan validasi marker. Dengan metode MAS, durasi waktu  pemuliaan  tanaman  karet  yang membutuhkan  waktu  sekitar  35  hingga  40 tahun  diharapkan  dapat  dipangkas  menjadi kurang dari satu tahun.

## Daftar Pustaka
Ahmad,  P.,  Jaleel,  C.  A.,  Azooz,  M.  M.,  & Nabi,  G.  (2009).  Generation  of   ros  and non-enzymatic antioxidants during abiotic stress  in  plants.  Botany  Research International, 2(1), 11–20.
Ahmad, P., Sarwat, M., & Sharma, S. (2008).
Reactive oxygen species, antioxidants and signaling  in  plants.  Journal  of   Plant B i o l o g y ,   5 1 ( 3 ) ,   1 6 7 – 1 7 3 . https://doi.org/10.1007/BF03030694 Akram, N. A., Shafiq, F., & Ashraf, M. (2017).
Ascorbic acid-a potential oxidant scavenger and  its  role  in  plant  development  and abiotic  stress  tolerance.  Frontiers  in  Plant Science, 8(613), 1–17.
An, Z., Zhao, Y., Zhang, X., Huang, X., Hu,
Y., Cheng, H., Li, X., & Huang, H. (2019). A  high-density  genetic  map  and  QTL mapping on growth and latex yield-related traits  in  Hevea  brasiliensis  Müll.Arg. Industrial  Crops  and  Products,  132, 4 4 0 – 4 4 8 . d o i : 10.1016/j.indcrop.2019.03.002.
Botstein,  D.,  White,  R.  L.,  Skolnick,  M.,  &
Davis,  R.  W.  (1980).  Construction  of   a Genetic  Linkage  Map  in  Man  Using R e s t r i c t i o n   F r a g m e n t   L e n g t h Polymorphisms.  American  Society  of Human Genetics, 32, 314–331.
Boureima,  S.,  Oukarroum,  A.,  Diouf,  M.,
Cisse,  N.,  &  Van  Damme,  P.  (2012). Screening for drought tolerance in mutant germplasm of  sesame (Sesamum indicum) probing  by  chlorophyll  a  fluorescence.
Environmental and Experimental Botany, 8 1 , 3 7 – 4 3 . d o i : 10.1016/j.envexpbot.2012.02.015.
Cahyo,  A.  N.,  Murti,  R.  H.,  Putra,  E.  T.  S., Oktavia, F., Ismawanto, S., & Montoro, P. ( 2 0 2 2 a ) .   Ru b b e r   G e n o t y p e s   w i t h Contrasting  Drought  Factor  Index Revealed  Different  Mechanisms  for Drought  Resistance  in  Hevea  brasiliensis. P l a n t s ,   1 1 ( 2 4 ) ,   3 5 6 3 .   d o i : 10.3390/plants11243563.
Cahyo,  A.  N.,  Murti,  R.  H.,  Putra,  E.  T.  S.,
Oktavia,  F.,  Ismawanto,  S.,  Mournet,  P., Fabre,  D.,  &  Montoro,  P.  (2022b). Screening and QTLs detection for drought factor  index  trait  in  rubber  (Hevea brasiliensis  Müll.  Arg.).  Industrial  Crops a n d   P r o d u c t s ,   1 9 0 ,   1 1 5 8 9 4 . doi:10.1016/j.indcrop.2022.115894.
Ceulemans,  R.,  Gabriels,  R.,  &  Impens,  I.
( 1 9 8 4 ) .   C o m p a r a t i v e   s t u d y   o f photosynthesis in several hevea brasiliensis clones  and  hevea  species  under  tropical field  conditions.  Tropical  Agriculture (Trinidad), 61(4), 273–275.
Chaves,  M.  M.,  Flexas,  J.,  &  Pinheiro,  C. (2009). Photosynthesis under drought and salt  stress:  Regulation  mechanisms  from whole  plant  to  cell.  Annals  of   Botany, 1 0 3 ( 4 ) ,   5 5 1 – 5 6 0 .   d o i : 10.1093/aob/mcn125.
Chye, M.-L., & Tan, C.-T. (1992). Isolation and nucleotide  sequence  of   a  cDNA  clone encoding the beta subunit of  mitochondrial ATP  synthase  from  Hevea  brasiliensis. Plant  Molecular  Biology,  18(3),  611-612. doi: 10.1007/BF00040680.
Çiçek,  N.,  &  Arslan,  Ö.  (2015).  Are  the photosynthetic  performance  indexes  and the  drought  factor  index  satisfactory selection  criterion  for  stress?  Fresenius E nv i r o n m e n t a l   B u l l e t i n ,   2 4 ( 1 1 ) , 4190–4198.
C l é m e n t - D e m a n ge,   A . ,   P r a p a n ,   K . , Ratanawong,  R.,  &  Teerawatanasuk,  K. (2006,  June  1-2).  Molecular  genetic markers and rubber breeding in Thailand 2 –  Field  study  of   the  family  RRIM600  x PB217  for  QTL  identification.  Tulisan disajikan  pada  The  Conference  of   Thai- Franch  Rubber  Cooperation  2005-2008: “Towards the Improvement of  Rubber Tree Productivity". Bangkok
Pentingnya aplikasi marker-assisted selection dalam seleksi klon karet toleran kekeringan
Collard,  B.  C.  Y.,  &  Mackill,  D.  J.  (2008). Marker-assisted selection: An approach for precision plant breeding in the twenty-first century. Philosophical Transactions of  the Royal  Society  B:  Biological  Sciences,
3 6 3 ( 1 4 9 1 ) ,   5 5 7 – 5 7 2 . doi:10.1098/rstb.2007.2170.
de Raissac, M., Perez, R., & Fabre, D. (2017).
New challenges in oil palm phenotyping in relation to climate. In A. C. Soh, S. Mayes, &  J.  Roberts  (Ed.),  Oil  Palm  Breeding, Genetics and Genomics (p. 446). Abingdon , UK : CRC Press, Taylor & Francis Group, LLC.
Deng, L. H., Luo, M.W., Zhang, C.F., & Zeng,
H.  C.  (2012).  Extraction  of   high-quality RNA  from  rubber  tree  leaves.  Bioscience, Biotechnology,  and  Biochemistry,  76(7), 1394–1396. doi: 10.1271/bbb.120014. Dionisio-Sese,  M.  L.,  &  Tobita,  S.  (1998). Antioxidant responses of  rice seedlings to salinity stress. Plant Science, 135(1), Article 1. doi: 10.1016/S0168-9452(98)00025-9. Falqueto, A. R., da Silva Júnior, R. A., Gomes, M. T. G., Martins, J. P. R., Silva, D. M., & Partelli,  F.  L.  (2017).  Effects  of   drought stress on chlorophyll a fluorescence in two rubber tree clones. Scientia Horticulturae, 2 2 4 , 2 3 8 – 2 4 3 . d o i : 10.1016/j.scienta.2017.06.019.
Fikret,  Y.,  Manar,  T.,  ebnem,  E.,  ebnem, K.,  &  Özlem,  U.  (2013).  SOD,  CAT,  GR and APX enzyme activities in callus tissues of   susceptible  and  tolerant  eggplant varieties under salt stress. Research Journal of  Biotechnology, 8(11), 45–51.
Foyer,  C.  H.,  &  Noctor,  G.  (2000).  Tansley review  no.  112:  oxygen  processing  in photosynthesis:  regulation  and  signalling. New  Phytologist,  146(3),  359–388.  doi  : 10.1046/j.1469-8137.2000.00667.x
Foyer,  C.  H.,  &  Noctor,  G.  (2003).  Redox sensing  and  signalling  associated  with r e a c t i ve   ox yg e n   i n   c h l o r o p l a s t s, p e r o x i s o m e s   a n d   m i t o c h o n d r i a . Physiologia  Plantarum,  119(3),  Article  3. doi: 10.1034/j.1399-3054.2003.00223.x.
Geldermann,  H.  (1976).  Investigations  on inheritance  of   quantitative  characters  in animals  by  gene  markers  ii.  expected effects. Theoretical and Applied Genetics, 47(1), 1–4. doi : 10.1007/BF00277397.
Ghimire, K. H., Quiatchon, L. A., Vikram, P.,
Swamy,  B.  P.  M.,  Dixit,  S.,  Ahmed,  H., Hernandez,  J.  E.,  Borromeo,  T.  H.,  & Kumar,  A.  (2012).  Identification  and mapping  of   a  QTL  (qDTY1.1)  with  a consistent  effect  on  grain  yield  under drought. Field Crops Research, 131, 88–96. doi: 10.1016/j.fcr.2012.02.028.
Halliwell,  B.  (2006).  Reactive  species  and antioxidants.  Redox  biolog y  is  a fundamental  theme  of   aerobic  life.  Plant Physiology,  141(2),  312–322.  doi  : 10.1104/pp.106.077073.
Hamim,  H.,  Violita,  V.,  Triadiati,  T.,  & Miftahudin,  M.  (2017).  Oxidative  stress and photosynthesis reduction of  cultivated (glycine  max  l.)  And  wild  soybean  (g. Tomentella  l.)  Exposed  to  drought  and paraquat. Asian Journal of  Plant Sciences,
1 6 ( 2 ) , 6 5 – 7 7 . d o i : 10.3923/ajps.2017.65.77.
Heidari,  M.  (2009).  Antioxidant  activity  and osmolyte  concentration  of   sorghum (sorghum  bicolor)  and  wheat  (triticum aestivum)  genotypes  under  salinity  stress. Asian  Journal  of   Plant  Sciences,  8(3), 240–244. doi:10.3923/ajps.2009.240.244.
Indraty, I. S. (2003). The endurance of  rubber planting  material  clones  planted  in polybags  on  the  drought  condition. Indonesian  Journal  of   Natural  Rubber R e s e a r c h ,   2 1 ( 1 – 3 ) ,   1 2 – 2 4 . Intergovernmental  Panel  on  Climate C h a n g e   .   ( 2 0 1 8 ) .   S u m m a r y   f o r Policymakers.
In V. Masson-Delmotte, P. Zhai, H. O. Pörtner,
D. Roberts, J. Skea, P. R. Shukla, A. Pirani, W. Moufouma-Okia, C. Péan, R. Pidcock, S. Connors, J. B. R. Matthews, Y. Chen, X. Zhou,  M.  I.  Gomis,  E.  Lonnoy,  T. Maycock, M. Tignor, & T. Waterfield (Ed.), Global  warming  of   1.5°C.  An  IPCC Special  Report  on  the  impacts  of   global warming  of   1.5°C  above  pre-industrial levels  and  related  global  greenhouse  gas emission  pathways,  in  the  context  of strengthening  the  global  response  to  the threat  of   climate  change,  sustainable development,  and  efforts  to  eradicate poverty  (p.  32).  Geneva,  Switzerland  : World Meteorological Organization. Kalaji,  H.  M.,  Jajoo,  A.,  Oukarroum,  A.,
Brestic, M., Zivcak, M., Samborska, I. A., Cetner, M. D.,  ukasik, I., Goltsev, V., & Ladle,  R.  J.  (2016).  Chlorophyll  a fluorescence  as  a  tool  to  monitor physiological status of  plants under abiotic stress  conditions.  Acta  Physiologiae P l a n t a r u m ,   3 8 ( 1 0 2 ) ,   1 – 1 1 .   d o i : 10.1007/s11738-016-2113-y.
Karnatam, K. S., Jaganathan, D., Dilip, K. R., Boopathi N, M., & Muthurajan, R. (2020). Shortlisting  putative  candidate  genes underlying  qDTY1.1,  a  major  effect drought tolerant QTL in rice (Oryza sativa L.). Electronic Journal of  Plant Breeding,
1 1 ( 0 3 ) ,   9 1 6 – 9 2 4 .   d o i : 10.37992/2020.1103.149
Karyudi. (2001). Osmoregulasi tanaman karet sebagai  respons  terhadap  cekaman  air  I: variasi diantara klon anjuran, harapan dan plasma  nutfah.  Indonesian  Journal  of Natural Rubber Research, 19(1–3), 1-17.
Kataria,  S.  (2017).  Oxidative  Stress  and
Antioxidative Defence System in Plants in Response to UV B Stress. In V. P. Singh, S. Singh,  S.  M.  Prasad,  &  P.  Parihar  (Ed.), UV-B  Radiation:  From  Environmental Stressor to Regulator of  Plant Growth (1st ed., pp. 99–122). New Jersey, USA : John
Wiley & Sons, Ltd.
Kearsey, M. J. (1998). The principles of  QTL analysis  (a  minimal  mathematics approach).  Journal  of   Experimental
Botany, 49(327), 1619–1623.
Kholová,  J.,  Hash,  C.  T.,  Ko ová,  M.,  & Vadez, V. (2011). Does a terminal drought tolerance QTL contribute to differences in R O S   s c a v e n g i n g   e n z y m e s   a n d photosynthetic  pigments  in  pearl  millet exposed  to  drought?.  Environmental  and Experimental  Botany,  71(1),  99–106.  doi: 10.1016/j.envexpbot.2010.11.001.
Kim, T.-H., Hur, Y.-J., Han, S.-I., Cho, J.-H., Kim, K.-M., Lee, J.-H., Song, Y.-C., Kwon, Y.-U., & Shin, D. (2017). Drought-tolerant QTL  qVDT11  leads  to  stable  tiller formation under drought stress conditions in  rice.  Plant  Science,  256,  131–138.  doi: 10.1016/j.plantsci.2016.11.008.
Krishan,  B.  (2017).  Assessment  of   drought tolerance  in  few  clones  of   natural  rubber (Hevea brasiliensis) under dry hot climate of  Odisha, India. Journal of  Experimental Biology  and  Agricultural  Sciences,  5(1), 1 0 6 – 1 1 0 . d o i : 10.18006/2017.5(1).106.110.
Kuruvilla, L., Sathik, M. B. M., Thomas, M.,
L u k e,   L .   P. ,   S u m e s h ,   K .   V. ,   & Annamalainathan,  K.  (2016).  Expression of   miRNAs  of   Hevea  brasiliensis  under drought  stress  is  altered  in  clones  with varying levels of  drought tolerance. Indian Journal of  Biotechnology, 15(2), 153-160.
Leclercq,  J.,  Martin,  F.,  Sanier,  C.,  Clément- Vidal, A., Fabre, D., Oliver, G., Lardet, L., Ayar,  A.,  Peyramard,  M.,  &  Montoro,  P. (2012).  Over-expression  of   a  cytosolic isoform of  the HbCuZnSOD gene in Hevea brasiliensis changes its response to a water deficit.  Plant  Molecular  Biology,  80(3), 255-272. doi: 10.1007/s11103-012-9942-x. Liu, J.-P., Zhuang, Y.-F., Guo, X.-L., & Li, Y.-J. (2016). Molecular mechanism of  ethylene stimulation  of   latex  yield  in  rubber  tree (Hevea  brasiliensis)  revealed  by  de  novo sequencing  and  transcriptome  analysis. BMC  Genomics,  17(1),  257.  doi: 10.1186/s12864-016-2587-4.
Pentingnya aplikasi marker-assisted selection dalam seleksi klon karet toleran kekeringan
Luke,  L.  P.,  Sathik,  M.  B.  M.,  Thomas,  M.,
Kur uvilla,  L.,  Sumesh,  K.  V.,  & Annamalainathan, K. (2015). Quantitative expression  analysis  of   drought  responsive genes in clones of  Hevea with varying levels of   drought  tolerance.  Physiology  and Molecular  Biology  of   Plants,  21(2),  179- 186. doi: 10.1007/s12298-015-0288-0. Mai, J., Herbette, S., Vandame, M., Kositsup,
B., Kasemsap, P., Cavaloc, E., Julien, J.-L., Améglio, T., & Roeckel-Drevet, P. (2009). Effect  of   chilling  on  photosynthesis  and antioxidant enzymes in Hevea brasiliensis Muell.  Arg.  Trees,  23(4),  863–874.  doi: 10.1007/s00468-009-0328-x.
Mazid,  M.,  Khan,  T.  A.,  Khan,  Z.  H., Quddusi,  S.,  &  Mohammad,  F.  (2011). O c c u r r e n c e ,   B i o s y n t h e s i s   a n d Potentialities  of   Ascorbic  Acid  in  Plants. International Journal of  Plant, Animal and Environmental Sciences, 1(2), 167–184.
Miao,  Z.,  &  Gaynor,  J.  J.  (1993).  Molecular cloning, characterization and expression of Mn-superoxide dismutase from the rubber tree  (Hevea  brasiliensis).  Plant  Molecular B i o l o g y,   2 3 ( 2 ) ,   2 6 7 – 2 7 7 .   d o i : 10.1007/BF00029003.
Møller, I. M. (2001). Plant mitochondria and oxidative  anitioxidant  capacity  and resistance  to  stress:  electron  transport, nadph  turnover  and  photoinhibition  in poplar trees. Plant physiol., metabolism of reactive oxygen species. Annual Review of Plant  Physiology  and  Plant  Molecular B i o l o g y,   5 2 ( 1 ) ,   5 6 1 - 5 9 1 .   d o i : 10.1146/annurev.arplant.52.1.561.
Mueller,  M.  J.  (2004).  Archetype  signals  in plants:  The  phytoprostanes.  Current Opinion  in  Plant  Biology,  7(4),  441–448. doi: 10.1016/j.pbi.2004.04.001.
Oukarroum, A., Madidi, S. E., Schansker, G.,
&  Strasser,  R.  J.  (2007).  Probing  the responses  of   barley  cultivars  (Hordeum vulgare  L.)  by  chlorophyll  a  fluorescence OLKJIP  under  drought  stress  and  re- w a t e r i n g .   E n v i r o n m e n t a l   a n d Experimental Botany, 60(3), 438–446. doi:
10.1016/j.envexpbot.2007.01.002.
Patil,  H.  E.,  Mahatma,  M.  K.,  Patel,  N.  J., Bhatnagar,  R.,  &  Jadeja,  G.  C.  (2005). Differential  response  of     pearl  millet hybrids  to  water  stress  in  relation  to antioxidant  enzymes  and  proline.  Indian Journal  of   Plant  Physiology,  10(4), 344–348.
Pootakham,  W.,  Shearman,  J.  R.,  & T a n g p h a t s o r n r u a n g ,   S .   ( 2 0 2 0 ) . Development  of   Molecular  Markers  in Hevea  brasiliensis  for  Marker-Assisted Breeding.  In  M.  Matsui  &  K.-S.  Chow (Ed.),  The  Rubber  Tree  Genome  (pp. 67–79).  New  York,  USA  :  Springer International Publishing.
Price, A. H., Cairns, J. E., Horton, P., Jones, H. G.,  &  Griffiths,  H.  (2002).  Linking drought resistance  mechanisms  to drought  avoidance  in  upland  rice  using  a QTL  approach:  Progress  and  new opportunities  to  integrate  stomatal  and m e s o p hy l l   r e s p o n s e s.   Jo u r n a l   o f Experimental  Botany,  53(371),  989-1004. doi: 10.1093/jexbot/53.371.989.
Priyadarshan, P. M. (2017). Biology of  Hevea Rubber.  Berlin  ,  Germany  :  Springer Science+Business Media.
Prochazkova, D., Sairam, R. K., Srivastava, G. C., & Singh, D. V. (2001). Oxidative stress and  antioxidant  activity  as  the  basis  of senescence in maize leaves. Plant Science, 161(4),  765–771.  doi:  10.1016/S0168- 9452(01)00462-9.
Punchkhon,  C.,  Plaimas,  K.,  Buaboocha,  T., Siangliw, J. L., Toojinda, T., Comai, L., De Diego, N., Spíchal, L., & Chadchawan, S. ( 2 0 2 0 ) .   D r o u g h t - t o l e r a n c e   g e n e identification  using  genome  comparison and  co-expression  network  analysis  of chromosome  substitution  lines  in  rice. G e n e s ,   1 1 ( 1 0 ) ,   1 1 9 7 . doi:10.3390/genes11101197.
Rizhsky,  L.,  Liang,  H.,  Shuman,  J.,  Shulaev, V.,  Davletova,  S.,  &  Mittler,  R.  (2004). When  defense  pathways  collide.  The response of  Arabidopsis to a combination of   drought  and  heat  stress.  Plant Physiology,  134(4),  1683–1696.  doi: 10.1104/pp.103.033431.
Sanier,  C.,  Oliver,  G.,  Clément-Vidal,  A.,
Fabre, D., Lardet, L., & Montoro, P. (2013). Influence  of   water  deficit  on  the physiological and biochemical parameters of   in  vitro  plants  from  Hevea  brasiliensis clone PB 260. Journal of  Rubber Research, 16(1), 61–74.
Santos, J. O. dos, Oliveira, L. E. M. de, Souza,
T.  de,  Lopes,  G.  M.,  Coelho,  V.  T.,  & Gomes,  M.  P.  (2019).  Physiological mechanisms  responsible  for  tolerance  to, and recuperation from, drought conditions in  four  different  rubber  clones.  Industrial Crops  and  Products,  141,  111714. doi:10.1016/j.indcrop.2019.111714.
Shinozaki,  K.,  Yamaguchi-Shinozaki,  K.,  &
Seki,  M.  (2003).  Regulatory  network  of gene  expression  in  the  drought  and  cold stress responses. Current Opinion in Plant B i o l o g y ,   6 ( 5 ) ,   4 1 0 – 4 1 7 . doi.org/10.1016/S1369-5266(03)00092-X
Silva, P. E. M., Cavatte, P. C., Morais, L. E.,
Medina, E. F., & DaMatta,  F. M.  (2013). The  functional  divergence  of   biomass partitioning, carbon gain and water use in coffea canephora in response to the water supply: implications for breeding aimed at i m p r o v i n g   d r o u g h t   t o l e r a n c e .
Environmental and Experimental Botany,
8 7 , 4 9 – 5 7 .
d o i : 10.1016/j.envexpbot.2012.09.005.
Stirbet,  A.,  Lazár,  D.,  Kromdijk,  J.,  & Govindjee.  (2018).  Chlorophyll  a fluorescence  induction:  can  just  a  one- second  measurement  be  used  to  quantify abiotic  stress  responses?  Photosynthetica,
56(1),  86–104.  doi:  10.1007/s11099-018- 0770-3.
Strasser,  R.  J.,  Tsimilli-Michael,  M.,  &
Srivastava,  A.  (2004).  Analysis  of   the Chlorophyll  a  Fluorescence  Transient.  In G.  C.  Papageorgiou  &  Govindjee  (Eds.), Chlorophyll  a  Fluorescence  (Vol.  19,  pp. 321–362).  Dordrecht,  Netherland  : Springer Netherlands.
Strauss, A. J., Krüger, G. H. J., Strasser, R. J., & Heerden,  P.  D.  R.  V.  (2006).  Ranking  of dark  chilling  tolerance  in  soybean genotypes  probed  by  the  chlorophyll  a f l u o r e s c e n c e   t r a n s i e n t   O - J - I - P. Environmental and Experimental Botany, 5 6 ( 2 ) ,   1 4 7 – 1 5 7 .   d o i : 10.1016/j.envexpbot.2005.01.011.
Taiz, L., & Zeiger, E. (2002). Plant physiology (3rd  ed.).  Sunderland,  USA:  Sinauer Associates.
Thomas,  M.,  Thirruvithamkottil,  M.  sathik, Luke, L. P., Sumesh, K. V., Satheesh, P. R., Annamalainathan, K., & Jacob, J. (2012). Stress  responsive  transcripts  and  their association  with  drought  tolerance  in Hevea  brasiliensis.  Journal  of   Plantation Crops, 40, 180–187.
Thomas,  M.,  Xavier,  S.  M.,  Sumesh,  K.  V., Annamalainathan,  K.,  Nair,  D.  B.,  & Mercy,  M.  A.  (2015).  Identification  of p o t e n t i a l   d r o u g h t   t o l e r a n t   h eve a germplasm accessions using physiological and  biochemical  parameters.  Rubber Science, 28(1), 62–69.
Velázquez-Márquez,  S.,  Conde-Martínez,  V.,
Trejo, C., Delgado-Alvarado, A., Carballo, A., Suárez, R., Mascorro, J. O., & Trujillo, A.  R.  (2015).  Effects  of   water  deficit  on radicle  apex  elongation  and  solute accumulation  in  Zea  mays  L.  Plant Physiology  and  Biochemistry,  96,  29–37. doi: 10.1016/j.plaphy.2015.07.006.
Vicuna Requesens, D., Malone, R., & Dix, P.
(2012).  Increased  tolerance  to  abiotic stresses  in  tobacco  plants  expressing  a barley cell wall peroxidase. Journal of  Plant S c i e n c e s , 6 , 1 – 1 3 .
doi:10.3923/jps.2011.1.13.
V i j a y a k u m a r,   K .   R . ,   D e y,   S.   K . , Chandrasekhar,  T.  R.,  Devakumar,  A.  S., Mohankrishna, T., Rao, P. S., & Sethuraj, M.  R.  (1998).  Irrigation  requirement  of rubber  trees  Hevea  brasiliensis  in  the subhumid  tropics.  Agricultural  Water Management, 35(3), 245–259.
Wang, L. (2014). Physiological and molecular responses  to  drought  stress  in  rubber  tree (Hevea  brasiliensis  Muell.  Arg.).  Plant Physiology and Biochemistry, 83, 243–249. doi: 10.1016/j.plaphy.2014.08.012.
Wang,  Z.,  Li,  G.,  Sun,  H.,  Ma,  L.,  Guo,  Y.,
Zhao,  Z.,  Gao,  H.,  &  Mei,  L.  (2018). Effects of  drought stress on photosynthesis and  photosynthetic  electron  transport chain  in  young  apple  tree  leaves.  Biology O p e n ,   7 ( 1 1 ) ,   b i o 0 3 5 2 7 9 . doi:10.1242/bio.035279.
Xavier, S. M., Thomas, M., Sumesh, K. V., & Annamalainathan,  K.  (2018).  Drought induced  changes  in  leaf   pigments  and osmolyte  contents  in  hevea  germplasm accessions.  Indian  Journal  of   Scientific Research, 19(1), 61–67.
Xu,  Y.,  &  Crouch,  J.  H.  (2008).  Marker- assisted  selection  in  plant  breeding:  from publications  to  practice.  Crop  Science, 4 8 ( 2 ) ,   3 9 1   -   4 0 7 .   d o i : 10.2135/cropsci2007.04.0191.
Yoshimura, K., Miyao, K., Gaber, A., Takeda, T.,  Kanaboshi,  H.,  Miyasaka,  H.,  & Shigeoka, S. (2004). Enhancement of  stress tolerance  in  transgenic  tobacco  plants o v e r e x p r e s s i n g   C h l a m y d o m o n a s glutathione  peroxidase  in  chloroplasts  or cytosol.  The  Plant  Journal:  For  Cell  and Molecular  Biology,  37(1),  21–33.  doi: 10.1046/j.1365-313x.2003.01930.x.