Efektivitas penambahan ekstrak daun kecubung ( Datura metel L) pada pakan untuk pencegahan streptocococcis pada benih ikan nila sultana, Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758)
[Effectiveness of the addition of Datura metel L . leaves extract in diet to prevent the streptocococcis on Nile tilapia, Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758) fry]
Irfan Rhamadhan 1 , Rosidah 2 , Yuli Andriani 2 
1 Alumnus Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran
2 Staf Dosen Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran
Diterima: 06 Januari 2015; Disetujui: 22 September 2015

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  dosis  penambahan  ekstrak  daun  kecubung  pada  pakan  yang  efektif  untuk pencegahan streptocococcis pada benih ikan nila sultana Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758). Penelitian mengguna- kan  Rancangan  Acak  Lengkap  yang  terdiri  atas  lima  perlakuan  dengan  tiga  kali  ulangan.  Perlakuan  yang  digunakan adalah penambahan ekstrak daun kecubung pada pakan dengan konsentrasi A (0 ppm), B (1000 ppm), C (1500 ppm), D (2000 ppm), dan E (2500 ppm). Parameter yang diamati adalah gejala klinis, kelangsungan hidup, jumlah sel darah pu- tih, rasio konversi pakan, dan kualitas air. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa penambahan ekstrak daun kecubung pada pakan dengan konsentrasi 1500 ppm paling efektif  mencegah streptococcocis pada benih ikan nila,  yang diperli- hatkan dengan tidak munculnya gejala klinis, jumlah sel darah putih yang relatif tinggi,dan kelangsungan hidup terting- gi (100%).
Kata kunci: benih ikan nila sultana, ekstrak daun kecubung, gejala klinis, kelangsungan hidup, sel darah putih, Strepto- cococcis

## Abstract
This  research  aimed  to  determine  the  dose  addition  of Datura  metel leaves  extract  in  diet  for  effective  prevention  of streptocococcis  on  tilapia  fry.  The  research  was  arranged  in  completely  randomized  design  with  five  treatments  and three replications. The D . metel leaves extract  mixed into the diet with 5 different doses, namely A (0 ppm), B (1000 ppm), C (1500 ppm), D (2000 ppm) and E (2500 ppm). Clinical symptom, survival rate, total leukocyte, feed conver- sion and water quality were observed. The result showed that the addition of D . metel leaves extract in the amount of 1500 ppm was the most effective to prevent the streptocococcis on tilapia fry, which characterized by no clinical symp- tom, high leucocyte and highest survival rate (100%).
Keywords: tilapia sultana fry, Datura metel extract, clinical symptom, survival rate, leucocyte cell, streptocococcis

## Pendahuluan
Ikan  nila, Oreochromis  niloticus (Linn.) merupakan  salah  satu  komoditas  air  tawar  yang populer  di  Indonesia,  harganya  relatif  murah  se- hingga  potensial  dijadikan  sebagai  sumber  pro- tein  hewani  yang  dapat  dijangkau  oleh  berbagai lapisan  masyarakat. Ikan  nila  sultana  merupakan hasil  seleksi  famili  dan  perkawinan  silang  43 strain  nila  (BBPBAT  2012).  Keunggulan  yang dimiliki oleh nila sultana diantaranya pertumbuh- an  lebih  cepat  hingga  40%  dibandingkan  nila strain lain dan memiliki jumlah telur yang lebih
banyak (BBPBAT 2012). Ikan nila sultana ini se- lain memiliki beberapa kelebihan juga masih me- miliki kekurangan yaitu benih yang masih rentan terhadap serangan streptocococcis.
Streptocococcis  spesifik  menyerang  ikan nila,  bersifat  akut  dan  menyebabkan  kematian hingga  mencapai  100%  pada  ikan  budi  daya (Hernandez et  al. 2009).  Gejala  klinis  ikan  nila yang  terserang  streptocococcis  adalah  luka  di permukaan kulit, bercak  merah pada sirip,  gerak renang  lambat  dan  nafsu  makan  yang  menurun. Gejala  lain  yang  sering  muncul  berupa  abnor- malitas pada mata yaitu exophthalmia (mata me- nonjol), opacity (kekeruhan  mata),  dan purelens
_____________________________  Penulis korespondensi Alamat surel: yuliyusep@yahoo.com
(mata berselaput putih) serta kehilangan  keseim- bangan  (Evans et  al. 2006).  Penanggulangan streptocococcis  selama  ini  masih  dilakukan  de- ngan  menggunakan  antibiotik.  Efek  penggunaan antibiotik secara terus  menerus dapat menimbul- kan  resistensi  mikroorganisme  patogen  terhadap antibiotik  dan  meninggalkan  residu  pada  ikan dan  lingkunganya  (FAO  2008).  Penggunaan  an- tibiotik  sering  menimbulkan  efek  resistensi,  me- ningkatkan  virulensi  bakteri,  menimbulkan  resi- du pada daging dan  mencemari  lingkungan (Wi- dya  2014).    Keputusan  Menteri  Perikanan  dan Kelautan  Republik  Indonesia  No.  52/Kepmen- KP/2014  tentang  klasifikasi  obat  ikan,  bahwa antibiotika  merupakan  obat  keras  bagi  ikan  apa- bila penggunaannya tidak sesuai dengan ketentu- an jumlah, aturan dosis, bentuk sediaan dan cara pemakaian dapat menimbulkan bahaya bagi ikan, lingkungan dan/atau manusia yang mengonsumsi ikan  tersebut.Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  di- perlukan  alternatif  penanggulangan  dan  pence- gahan  penyakit  yang  lebih  aman  bagi  ikan  dan lingkungannya.
Penggunaan  imunostimulan  dapat  dilaku- kan sebagai upaya perlindungan dan pencegahan serangan penyakit pada ikan.  Imunostimulan da- pat  meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh  alami dan adaptif pada ikan (Kani et al . 2003 ) . Penam- bahan bahan imunostimulan dapat meningkatkan sistem pertahanan tubuh ikan terutama sistem ke- kebalan non spesifik, untuk melawan segala jenis patogen  yang  menyerang (Ellis 1988). Imunosti- mulan  dapat  berasal  dari  komponen  bakteri,  nu- trisi,  ekstrak  hewan,  dan  ekstrak  tumbuhan  (Sa- kai 1999).
Kecubung  ( Datura  metel L.)  merupakan tumbuhan  yang  akar,  batang,  biji,  dan  daunnya banyak mengandung alkaloid. Selain alkaloid ta- naman kecubung mengandung steroid, flavonoid, fenol, dan tanin (Handayani et al . 2012). Bebera-
pa penelitian menunjukkan bahwa senyawa yang terkandung  pada  tanaman  obat  seperti  steroid, flavonoid, tanin, saponin, fenol dan minyak atsiri berpotensi  sebagai  antibakteri  dan  imunostimu- lan  (Yuhana et  al. 2009).  Tujuan  penelitian  ini adalah  menentukan  dosis  penambahan  ekstrak daun  kecubung  pada  pakan  yang  efektif  untuk pencegahan  penyakit  streptocococcis  pada  benih ikan nila sultana.

## Bahan dan metode
Penelitian  dilaksanakan  dari  tanggal  18 Juni - 17 Juli 2014. Ikan uji yang digunakan ada- lah  benih  ikan  nila  sultana  ( Oreochromis  niloti- cus ) berasal dari Balai Besar Pengembangan Bu- didaya  Air  Tawar  (BBPBAT)  Sukabumi  dengan ukuran rata-rata 6,0±1,4 cm sebanyak 20 ekor se- tiap  akuarium.  Setiap  perlakuan  diulang  seba- nyak tiga kali, sehingga ikan yang digunakan da- lam  penelitian  ini  berjumlah  300  ekor.  Ikan  uji sebelum digunakan diadaptasikan terlebih dahulu dalam bak fiber selama tujuh hari untuk memas- tikan tidak ada gejala streptocococcis dan penya- kit  lainnya.  Selama  aklimatisasi  ikan  uji  diberi pakan dua kali dalam sehari secara adlibitum dan dilakukan  penyiponan  setiap  pagi  hari  sebelum pemberian  pakan  yang  tanpa  ekstrak  daun  kecu- bung.
Ekstrak  daun  kecubung  diperoleh  melalui proses ekstraksi. Sebanyak 3,2 kg daun kecubung basah  yang  tidak  terlalu  muda  dan  tidak  terlalu tua  dikering  anginkan.  Sesudah  kering  dihalus- kan dengan menggunakan blender,  kemudian di- masukkan  kedalam  maserator,  untuk  dilakukan maserasi  dengan  larutan  etanol  96%  sebanyak 8,5  L  selama  24  jam  hingga  terbentuk  superna- tan.  Selanjutnya  supernatan  dievaporasi  dengan menggunakan vakum rotavapour pada suhu 40 o C dengan  kecepatan  120x  per  menit.  Ekstrak  yang dihasilkan sebanyak 52 gram, kemudian diencer-
kan dengan menggunakan akuades sesuai dengan konsentrasi perlakuan.
Biakan  bakteri Streptococcus  agalactiae yang  digunakan  untuk  uji  tantang  berasal  dari Balai Besar Pengembangan Budidaya Air Tawar (BBPBAT)  Sukabumi.  Biakan  bakteri  sebelum digunakan diisolasi pada media agar Brain Heart Infusion  Agar (BHIA)  yang  telah  disterilkan menggunakan autoclave .  Isolat  bakteri Strepto- coccus  agalactiae yang  berasal  dari  biakan  ke- mudian diambil menggunakan jarum ose  dan se- lanjutnya  dimasukkan  ke  dalam  media  agar  de- ngan membentuk pola. Isolat bakteri pada media agar BHIA kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 24 jam.
Pakan komersial yang digunakan mengan- dung  kadar  protein  30-32%.  Pakan  ditambahkan ekstrak  daun  kecubung  yang  telah  dilakukan pengenceran  sesuai  dengan  konsentrasi  perlaku- an  0  ppm  (A),  1000  ppm  (B),  1500  ppm  (C), 2000  ppm  (D),  dan  2500  ppm  (E).  Penambahan ekstrak  pada  pakan  dengan  cara  disemprotkan hingga  homogen,  kemudian  dikering  anginkan. Pakan  yang  telah  mengandung  ekstrak  diberikan pada  ikan  uji  dengan  takaran  5%  dari  biomassa ikan  sebanyak  dua  kali  per  hari  selama  21  hari. Selanjutnya ikan diuji tantang, yaitu penginfeksi- an  ikan  uji  dengan  bakteri Steptococcus  agalac- tiae secara  kohabitasi  melalui  media  air  dengan dosis 4 ml dengan kepadatan bakteri 10 8 cfu mL -1 untuk setiap akuarium.
Penelitian  ini  dilakukan  secara  eksperi- mental  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dengan  lima  perlakuan  dan  tiga  kali ulangan.  Perlakuan  yang  digunakan  adalah  pe- nambahan  ekstrak  daun  kecubung  pada  pakan dengan konsentrasi A (0 ppm), B (1000 ppm), C (1500  ppm),  D  (2000  ppm),  dan  E  (2500  ppm). Parameter  yang  diamati  adalah  gejala  klinis,  ke-
langsungan  hidup,  jumlah  sel  darah  putih,  dan rasio konversi pakan.
Pengamatan gejala klinis  mengikuti meto- da Evans et al . (2006),dilakukan selama tujuh ha- ri setelah ikan diuji tantang dengan bakteri Strep- tococcus  agalactiae .  Gejala  klinis  yang  diamati meliputi respon terhadap pakan, kerusakan tubuh yaitu melanosis (warna permukaan tubuh menja- di    lebih  gelap),  abnormalitas  pada  mata  ( exo- phthalmia ),  dan  bercak  merah  pada  permukaan tubuh ikan.
Kelangsungan  hidup  (SR)  benih  ikan  nila sultana  diamati  dengan  cara  menghitung  jumlah ikan yang mati setelah uji tantang. Hasil yang di- peroleh  dihitung  dengan  menggunakan  rumus Effendie (1979):
SR = N t /N 0 x100%
Keterangan: SR= kelangsungan hidup, Nt = jumlah ikan uji pada akhir pengamatan, No= jumlah ikan uji pada awal pengamatan
Pengamatan  sel  darah  putih  dilakukan  se- banyak  tiga  kali,  yaitu  pada  saat  sebelum  perla- kuan,  setelah  diberi  perlakuan,  dan  setelah  diuji tantang.  Pengamatan  sel  darah  putih  mengikuti metoda Nabib & Pasaribu (1989), diawali dengan pengambilan sampel darah dengan cara merobek bagian  pangkal  ekor  ikan  dengan  menggunakan pisau.  Darah  yang  keluar  ditampung  dalam  ta- bung  eppendorf  dan  diencerkan  dengan  larutan turk’s, selanjutnya dimasukkan ke dalam haemo- sitometer untuk diamati jumlah sel darah putih di bawah  mikroskop.  Jumlah  sel  darah  putih  yang teramati  dihitung  dengan  menggunakan  rumus (Nabib & Pasaribu 1989):
∑ sel darah putih = jumlah sel terhitung x 1
volumekotak x faktorpengenceran
Rasio efisiensi pemberian pakan dihitung berdasarkan rumus Djajasewaka (1985), sebagai berikut :
Konversi Pakan = F (Wt + D) −  Wo x 100%
Keterangan:  F=    bobot  pakan  yang  diberikan  selama penelitian, Wt=  rata-rata bobot ikan pada akhir pene- litian (gram), Wo=  rata-rata bobot ikan pada awal pe- nelitian (gram), D=  jumlah bobot ikan yang mati sela- ma penelitian (gram)
Data gejala klinis dan jumlah sel sel darah putih dianalisis secara deskriptif, sedangkan data kelangsungan  hidup  dan  konversi  pakan  dianali- sis dengan uji F. Jika terjadi perbedaan yang nya- ta  antarperlakuan  dilanjutkan  dengan  uji  bergan- da  Duncan  dengan  taraf  kesalahan  5%  (Gasperz 1994).

## Hasil

## Gejala klinis
Pada hari ke- 2 setelah uji tantang dengan bakteri Streptococcus agalactiae , hampir seluruh ikan  uji  pada  perlakuan  A  (kontrol)  mengalami penurunan nafsu makan. Memasuki hari ke-4 se- telah uji tantang, ikan tidak memakan seluruh pa- kan yang diberikan dan hal ini terus terjadi sam- pai  akhir  pengamatan.  Pada  Perlakuan  B  (1000 ppm)  sebagian  kecil  ikan  mengalami  penurunan
respon  terhadap  pakan  dimulai  hari  ke-4  setelah uji tantang dan terus terjadi sampai akhir penga- matan.
Pada  Tabel  1  terlihat  hampir  seluruh  ikan uji  (rata-rata  95%)  pada  perlakuan  A  (kontrol) mengalami  gejala  klinis  awal  terinfeksi  strepto- cococcis  berupa melanosis (Gambar  1  a)  lebih cepat  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya, yaitu pengamatan di hari ke-3 (48 jam setelah uji tantang). Pada pengamatan hari ke-4 (72 jam se- telah uji tantang) gejala klinis yang muncul beru- pa bercak merah di permukaan tubuh dan abnor- malitas  pada  mata  (Gambar  1b).  Mata  agak  me- nonjol, keruh dan timbul selaput pada bagian ma- ta,  kondisi  ini  terjadi  sampai  akhir  pengamatan . Ikan  uji  pada  perlakuan  B  gejala  klinis  pertama muncul pada pengamatan hari ke-5 berupa mela- nosis dan  terjadi  sampai  akhir  pengamatan.  Ikan uji pada perlakuan lainnya (C, D, dan E) sampai akhir  pengamatan  tidak  memperlihatkan  tanda gejala  klinis  terinfeksi  streptocococcis  (Gambar 1c).
Tabel 1. Gejala klinis ikan nila setelah diuji tantang
Konsentrasi ekstrak daun kecubung (ppm) Pengamatan hari ke- 0 (A) 1.000 (B) 1.500 (C) 2.000 (D) 2.500 (E) Ulangan ke- 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 4 5 6 7 - - m m b a a - - - m b a a - - m b a a a - - - - - m m - - - - m m m - - - - mm m - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Keterangan: (-)   : Tidak ada gejala klinis (m) : melanosis (b)  : bercak merah (a)  : abnormalitas pada mata
a. melanosis
b. Abnormalitas pada mata
c. ikan nila sehat
Gambar 1. Gejala klinis ikan nila
Gejala  klinis  lain  yang  mengindikasikan ikan  uji  terserang  streptocococcis  adalah  gerak renang  yang  tidak  normal.  Ikan  cenderung  diam dan  berada  di  dasar  akuarium,  serta  mengalami gangguan  keseimbangan  ditandai  dengan  gerak- an  ikan  yang  berputar  dengan  posisi  kepala  di atas yang dikenal dengan whirling (Tabel 2). Pa- da Tabel 2 terlihat benih ikan nila pada perlakuan A (kontrol) mulai mengalami gangguan gerak re- nang pada hari ke dua sampai akhir pengamatan, ditandai  dengan  posisi  ikan  di  dasar  akuarium dan  sulit  untuk  menyeimbangkan  tubuh  di  mana ikan  berputar-putar  dengan  posisi  kepala  di  atas (Gambar 2).

## Kelangsungan hidup benih ikan nila
Berdasarkan hasil analisis sidik ragam (uji F), penambahan ekstrak daun kecubung pada pa- kan  menghasilkan  kelangsungan  hidup  benih ikan  nila  berbeda  nyata.  Hasil  uji  Duncan  mem- perlihatkan  perlakuan  A  (kontrol)  berbeda  nyata dengan  perlakuan  lainnya,  sedangkan  perlakuan B (1000 ppm) dan perlakuan E (2500 ppm) tidak berbeda nyata. Perlakuan C (1500 ppm) membe- rikan kelangsungan hidup tertinggi, berbeda nya- ta dengan perlakuan D (2000 ppm) dan perlakuan lainnya (Tabel 3). Pada Tabel 3 terlihat perlaku- an A (kontrol) memberikan tingkat kelangsungan hidup  ikan  terendah  dibandingkan  dengan  perla- kuan  lainnya.  Perlakuan  B  (1000  ppm)  kelang- sungan  hidup  benih  ikan  nila  dikatagorikan  ren- dah  dibandingkan  perlakuan  lainnya  (C,D,  dan E),  yaitu  sebesar  83,33%.  Perlakuan  C  (1500 ppm)  merupakan  konsentrasi  terbaik  dengan  ke- langsungan hidup 100%. Pada perlakuan D (2000 ppm) dan E (2500 ppm) kelangsungan hidup be- nih ikan nila sebesar 96,67% dan 93,33%.

## Pengamatan sel darah putih
Jumlah sel darah putih pada ikan yang di- beri  perlakuan  ekstrak  daun  kecubung  (B,  C,  D, dan  E)  selama  21  hari  mengalami  peningkatan lebih besar dibandingkan perlakuan A (Tabel 4). Pada  Tabel  4  terlihat  ikan  uji  yang  telah  diberi perlakuan ekstrak daun kecubung selama 21 hari mengalami  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih yang signifikan. Ikan uji pada perlakuan A (kon- trol)  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih  bukan karena pemberian ekstrak daun kecubung namun karena bertambahnya umur dan bobot  ikan  yang telah  dipelihara  selama  3  minggu.  Oleh  karena itu  walaupun  terjadi  peningkatan  jumlah  sel  da- rah  putih  namun  nilainya  jauh  lebih  rendah  di- bandingkan perlakuan B, C, D dan E.
Setelah uji tantang, ikan uji pada perlaku- an  A  mengalami  peningkatan  jumlah  sel  darah putih  lebih  besar  dibandingkan  perlakuan  B,  C, D,  dan  E . Pada  perlakuan  B  (1000  ppm)  setelah uji tantang peningkatan sel darah putih lebih be- sar  dibandingkan  perlakuan  C,  D,  dan  E  tetapi tidak lebih besar daripada perlakuan A (kontrol). Jumlah  sel  darah  putih  tertinggi  setelah  pembe- rian  ekstrak  terdapat  pada  perlakuan  C  (1500 ppm), D (2000 ppm), dan E (2500 ppm).
Rasio konversi pakan
Berdasarkan jumlah pakan yang diberikan dan  perhitungan  konversi  pemberian  pakan  pada ikan  uji  selama  penelitian  berkisar  antara  1,37- 1,47.  Nilai  konversi  pakan  terendah  terjadi  pada perlakuan  D  dengan  penambahan  ekstrak  daun kecubung  sebanyak  2000  ppm  dengan  rata-rata nilai konversi pakan sebesar 1,37; sedangkan ni- lai  konversi  pakan  tertinggi  terdapat  pada  perla- kuan A (kontrol) yaitu sebesar 1,47. Berdasarkan hasil  analisis  sidik  ragam  (uji  F)  antarperlakuan tidak  memberikan  perbedaan  yang  nyata  terha- dap  konversi  pakan  dan  semua  perlakuan  mem- berikan nilai konversi pakan yang baik (Tabel 5).
Tabel 2. Gerak renang ikan nila setelah uji tantang
Konsentrasi ekstrak daun kecubung (ppm) Pengamatan hari ke- 0 (A) 1.000 (B) 1.500 (C) 2.000 (D) 2.500 (E) Ulangan ke- 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 4 5 6 7 + + - - - - - + - - - - - - + - - - - - - + + + + +
+ + +
+ + + + + + +
+
+ + + + + +
+
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
+ + +
+ + +
+ + + Keterangan :  + Gerak renang normal; - Gerak renang tidak normal
Gambar 2. Gangguan gerak renang ( whirling)
Tabel 3. Rata-rata kelangsungan hidup (KH) benih ikan nila Perlakuan (ppm) Rata-rata kelangsungan hidup Notasi % Hasil transformasi A (kontrol) 33,33±7,64 35,17 A B (1000) 83,33±2,89 70,11 B C (1500) 100±0 90,00 D D (2000) 96,67±2,89 81,39 C E (2500) 93,33±2,89 75,24 BC
Keterangan: nilai yang diikuti dengan huruf sama tidak berbeda nyata pada taraf  kepercayaan 95%
Tabel 4. Rata-rata jumlah sel darah putih selama penelitian Perlakuan ekstrak (ppm) Rata-rata jumlah sel darah putih (sel mm -3 ) Sebelum penambahan ekstrak Setelah penambahan ekstrak Setelah uji tantang A (kontrol) 25.567,00±1955,33 56.900,00±1665,33 128.533,00±8764,32 B (1000) 24.200,00±2023,20 67.600,00±400,00 100.800,00±1969,77 C (1500) 23.533,00±305,51 71.467,00±4103,65 77.533,00±1501,11 D (2000) 24.067,00±1474,22 75.466,00±1101,51 80.667,00±754,98 E (2500) 23.934,00±401,04 78.334,00±4105,28 82.134,00±757,19
Tabel 5. Rata–rata nilai konversi pakan benih ikan nila selama penelitian Perlakuan Rasio konversi pakan Notasi A (Kontrol) 1,47±0,15 A B (1000 ppm) 1,46±0,05 A C (1500 ppm) 1,39±0,07 A D (2000 ppm) 1,37±0,04 A E (2500 ppm) 1,38±0,03 A
Keterangan: Nilai yang diikuti huruf sama tidak berbeda nyata pada taraf   kepercayaan 95%.

## Pembahasan

## Gejala klinis
Penurunan  dan  tidak  adanya  nafsu  makan pada  sebagian  besar  ikan  perlakuan  A  dan  seba- gian kecil pada ikan perlakuan B,  karena bakteri Streptococcus  agalactiae berhasil  masuk  ke  da- lam bagian diencefalon otak ikan, sehingga kese- imbangan  tubuh  ikan  terganggu.  Hal  ini  beraki- bat pada terganggunya gerak renang ikan dan ter- ganggunya sistem pencernaan ikan sehingga ikan
tidak  merespon  pakan  yang  diberikan  (Austin  & Austin 2007).
Ikan uji pada perlakuan A (kontrol) dan B (1000  ppm)  mengalami  gejala  klinis  awal  terin- feksi  streptocococcis  berupa  melanosis,  bercak merah di permukaan tubuh dan abnormalitas pa- da mata. Hal ini sesuai dengan pernyataan Evans et  al. (2006)  bahwa  gejala  klinis  ikan  nila  yang terserang  streptocococcis  adalah  luka  di  permu- kaan  tubuh, melanosis ,  gerak  renang  lambat  dan
tidak seimbang serta mengalami penurunan nafsu makan  m.  Gejala  klinis  lain  yang  sering  muncul berupa  abnormalitas  pada  mata  yaitu exoptalmia (mata  bengkak), opacity (kekeruhan  mata),  dan purelens (mata berselaput putih).
Perubahan  warna  tubuh  berupa melanosis yang  terjadi  pada  ikan  uji  perlakuan  A  (kontrol) dan B (1000 ppm) disebabkan adanya kerusakan pada  organ  pembentuk  sel  darah.  Menurut  Ko- marudin  &  Supriyadi  (2003), melanosis pada ikan  nila  yang  terinfeksi  streptocococcis  dikare- nakan adanya kerusakan di jaringan pembuat da- rah, yaitu ginjal. Hal ini mengakibatkan ikan nila kekurangan  darah,  diindikasikan  dengan  warna tubuh  menjadi  lebih  gelap.  Pendapat  yang  sama dikemukakan oleh Hardi et al . (2011) bahwa ke- beradaan  bakteri  pada  ginjal  ikan  dapat  menye- babkan perubahan warna tubuh menjadi lebih hi- tam. Terjadinya  gerakan  renang  yang  tidak  me- nentu  ( whirling )  karena  adanya  gangguan  kese- imbangan sebagai akibat dari kerusakan pada or- gan otak  sehingga  granuloma pada stratum  gise- rum pusat terganggu.

## Kelangsungan hidup benih ikan nila
Ikan uji pada perlakuan A (kontrol) meng- alami  tingkat  kelangsungan  hidup  ikan  terendah dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya  (Tabel 3). Rendahnya kelangsungan hidup pada perlaku- an  A  (kontrol)  disebabkan  benih  ikan  nila  tidak diberi perlakuan ekstrak daun kecubung sehingga tidak  tahan  terhadap  serangan  bakteri Streptoco- ccus  agalactiae. Hal  ini  memperlihatkan  bahwa ekstrak  daun  kecubung  mengandung  senyawa yang  berfungsi  sebagai  imunostimulan  yang  da- pat  menginduksi  ketahanan  tubuh  terhadap  se- rangan  bakteri Streptococcus  agalactiae .  Me- nurut Sastrapradja (1978), akar, batang, biji, dan daun kecubung mengandung alkaloid. Yuhana et al (2009)  mengemukakan  bahwa  steroid,  flavo-
noid,  fenol,  dan  tanin  berpotensi  selain  sebagai antibakteri,  juga  sebagai  imunostimulan.  Menu- rut  Anderson  (1992),  steroid,  flavonoid,  fenol, dan  tanin  tergolong  paraimunitas  yang  bekerja sebagai  mitogen,  yang  dapat  mengaktivasi  sel pertahanan  seluler.  Leukosit  sebagai  pertahanan seluler  yang  termasuk  pertahanan  non  spesifik yang akan memfagosit patogen, sehingga pening- katan ketahanan tubuh ikan ditandai dengan geja- la  klinis  yang  ringan  dan  meningkatnya  jumlah sel leukosit,
Pada perlakuan B (1000 ppm) kelangsung- an hidup benih ikan nila dikatagorikan rendah di- bandingkan dengan perlakuan lainnya yang dibe- ri  ekstrak  (C,  D,  dan  E),  yaitu  sebesar  83,33%. Hal ini disebabkan senyawa imunostimulan yang ada  pada  ekstrak  daun  kecubung  masih  belum maksimal dalam meningkatkan daya tahan tubuh ikan.  Hal  ini  terindikasi  dari  kandungan  leukosit pada ikan uji setelah diberi ekstrak kecubung le- bih rendah dibandingkan dengan perlakuan C, D, dan  E.  Akibatnya,  bakteri Streptococcus agalac- tiae masih dapat menembus sistem imun dan me- rusak  jaringan  tubuh  pada  ikan  yang  akhirnya menyebabkan kematian.
Perlakuan  C  (1500  ppm)  merupakan  kon- sentrasi  terbaik  dengan  kelangsungan  hidup 100%. Pada konsentrasi ini dosis yang diberikan tepat  sehingga  senyawa  imunostimulator  yang terkandung dalam ekstrak daun kecubung bekerja optimal  untuk  meningkatkan  sistem  ketahanan tubuh pada ikan, akibatnya bakteri Streptococcus agalactiae tidak  dapat  masuk  dan  merusak  sis- tem  ketahanan  tubuh  ikan.  Sistem  kekebalan  tu- buh non spesifik yang ada pada tubuh ikan dapat menelan  dan  menghancurkan  bakteri Streptoco- ccus agalactiae sehingga bakteri tidak dapat ber- kembang biak dalam tubuh ikan.
Pada  perlakuan  D  (2000  ppm)  dan  E (2500  ppm)  kelangsungan  hidup  benih  ikan  nila
sebesar 96,67% dan 93,33%. Kematian yang ter- jadi pada perlakuan ini diduga karena dosis eks- trak  daun  kecubung  yang  berlebihan  sehingga menyebabkan  toksik  bagi  ikan.  Kandungan  tok- sik  pada  ekstrak  daun  kecubung  diduga  berasal dari  tanin.  Menurut  Makkar et  al. (2007),  kan- dungan tanin dengan konsentrasi yang tinggi da- pat bersifat toksik karena dapat mengikat protein dan  membentuk  senyawa  kompleks  yang  sulit untuk dicerna.

## Pengamatan sel darah putih
Sel  darah  putih  memiliki  peranan  penting dalam  sistem  pertahanan  tubuh  ikan  untuk  men- cegah terjadinya infeksi bakteri . Jumlah sel darah putih  pada  ikan  berkisar  antara  20.000-150.000 sel  mm -3 (Lagler et  al .  1977).  Peningkatan  jum- lah sel darah putih pada perlakuan A dan B pada masa  setelah  uji  tantang  dikarenakan  terjadinya proses  fagositosis  dalam  tubuh  ikan  yang  terin- feksi penyakit streptocococcis. Menurut Dwinan- ti et  al .  (2014),  meningkatnya  jumlah  sel  darah putih  menunjukkan  bahwa  ikan  sedang  menga- lami  infeksi  dan  tubuh  ikan  mengantisipasi  kon- disi  tersebut  dengan  memproduksi  sel  darah  pu- tih lebih banyak sebagai respon imunitas.
Jumlah  sel  darah  putih  tertinggi  setelah pemberian  ekstrak  terdapat  pada  perlakuan  C (1500  ppm),  D  (2000  ppm),  dan  E  (2500  ppm). Hal ini menunjukkan bahwa dosis yang diberikan pada  perlakuan  C,  D,  dan  E  merupakan  dosis yang  tepat  sehingga  senyawa  imunostimulan yang  terkandung  dalam  ekstrak,  yaitu  steroid dapat menstimulasi sistem imun pada tubuh ikan dengan baik. Penambahan dosis ekstrak daun ke- cubung  yang  tepat  mengakibatkan  naiknya  jum- lah  sel  darah  putih  pada  tubuh  ikan,  sehingga ikan  tidak  mudah  terserang  penyakit.  Hal  ini  se- suai dengan pernyataan Anderson (1992) bahwa
aplikasi  imunostimulan  yang  tepat  akan  mensti- mulasi  ketahanan  tubuh  terhadap  infeksi  penya- kit,  terindikasi  dengan  jumlah  sel  darah  putih yang  cukup  tinggi,  sehingga  mampu  menghan- curkan antigen yang masuk ke dalam tubuh ikan.
Uraian di atas memperlihatkan bahwa eks- trak  daun  kecubung  dapat  berperan  sebagai  im- munostimulator yang mampu meningkatkan jum- lah sel darah putih pada benih ikan nila. Menurut Rea et  al. (1992),  penambahan  immunostimulan akan  merangsang  proses  produksi  limfosit  yang akan  menyebabkan  naiknya  produksi  antibodi pada tubuh ikan.

## Rasio konversi pakan
Konversi  pakan  merupakan  jumlah  per- bandingan pakan yang diberikan terhadap jumlah pertambahan  bobot  yang  dihasilkan  pada  ikan. Nilai  konversi  pemberian  pakan  berbanding  ter- balik  dengan  pertambahan  bobot  ikan,  sehingga semakin  rendah  nilai  konversi  pakan,  maka  se- makin  baik  kualitas  pakan  dan  semakin  efisien ikan  dalam  memanfaatkan  pakan  yang  dikon- sumsi  untuk  pertumbuhan.  Berdasarkan  hasil analisis  sidik  ragam  uji  F  bahwa  nilai  konversi penambahan  ekstrak  daun  kecubung  pada  pakan tidak berbeda nyata (Tabel 3).
Penambahan  ekstrak  daun  kecubung  pada pakan  sebesar  2000  ppm  dengan  nilai  konversi 1,37  memiliki  nilai  konversi  yang  paling  baik. Menurut  Elangoven  &  Lethi  (1994),  nilai  kon- versi  yang  baik  adalah  <3,  semakin  kecil  nilai konversi pakan  maka semakin efisien pengguna- an pakan dalam menghasilkan pertumbuhan ikan.

## Kesimpulan
Penambahan  ekstrak  daun  kecubung  pada pakan  sebesar  1500  ppm  efektif    untuk  mening-
katkan  sistem  kekebalan  tubuh  benih  ikan  nila yang  diuji  tantang  dengan  bakteri Steptococcus agalactiae ,  dengan  kelangsungan  hidup  menca- pai 100%.

## Daftar pustaka
Anderson DP. 1992. Fish Immunology . TFH Pu- blication Ltd. Hongkong.  239 p.
Austin  B,  Austin  DA.  2007. Bacterial  Fish  Pa- thogens . Fourth Edition. Praxis Publishing Ltd. New York. 552 p.
Balai Besar Pengembangan Budidaya Air Tawar (BBPBAT).  2012.  Laman  resmi Flyer Sultana .   www.bbpbat.net .  ( Diakses  23 Januari 2014 )
Djajasewaka  H. Pakan  Ikan .  CV.  Yasaguna.  Ja- karta. 45 hlm.
Dwinanti  SH , Sukenda,  Yuhana  M,  Lusiastuti AM.  2014.  Toksisitas  dan  imunogenisitas produk  ekstraseluler Streptococcus  aga- lactiae tipe  non-hemolitik  pada  ikan  nila ( Oreochromis niloticus ). Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia , 2(1) : 105-116
Effendie  MI.  1979. Biologi  Perikanan .Yayasan Pustaka Nusatama, Yogyakarta.163 hlm.
Ellis  AE.  1988. Fish  Vaccination .  Academic
Press Limited. London. 255 pp.
Elangoven A, Lethi CD. 1994. Growth rate com- parisons  of  two  indian  major  carps-catla ( Catla catla ) and rohu ( Labeo rohita ) with tilapia ( Oreochromis  mosambicus ). Jour- nal  of  Aquaculture  in  the  Tropics ,  9(3): 241-246.
Evans  JJ,  Pasnik  DJ,  Klesius  PH,  Al-Ablani  S. 2006.  First  report  of Streptococcus  aga- lactiae and Lactococcus  garvieae from  a wild  bottlenose Dolphin  (Tursiops  trun- cates) . Journal  of  Wildlife  Diseases , 42(3): 561-569
FAO (Food and Agriculture Organization). 2008. Cultured aquatic species information pro- gramme  Penaeus  monodon (Fabricius, 1798). http://www.fao.org/fishery/cultured species/Penaeusmonodon/en.
Gasperz  V.  1995. Metoda  Perancangan  Perco- baan untuk Ilmu-ilmu Pertanian dan Ilmu- ilmu  Teknik  Biologi. CV.  Armico.  Ban- dung. 472 hlm.
Handayani W, Yulita N, Nintya S. 2012. Respon pertumbuhan  dan  produksi  alkaloid  pada kalus  berakar Datura  metel L.  terhadap
peningkatan  mikronutrien  dari  medium MS. Buletin Anatomi dan Fisiologi , 20(1): 29-36
Hardi  EH,  Sukenda,  Harris  E,  Lusiastuti  AM. 2011.  Karakteristik  dan  patogenisitas
Streptococcus agalactiae tipe Β-hemolitik dan  non-hemolitik  pada  ikan  nila. Jurnal
Veteriner 12(2): 152-164.
Hernandez  E,  Figueroa  J,  Iregui  C.  2009. Strep- tococcosis on  red  tilapia Oreochromis sp. Journal of Fish Diseases , 32(3): 247-252 . Kani RA, Rantetondok A, Malina AS. 2003. Pe- ngaruh  pemberian  CpG-ODN  terhadap sistem  kekebalan  tubuh  ikan  kerapu  ma- can. Jurnal  Pasca  Universitas  Hasanud- din , l 11( 261): 8 hlm.
Komarudin O, Supriyadi H. 2003. Kerusakan ja- ringan  ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) yang terinfeksi  penyakit  streptococcosis.
Jurnal  Penelitian  Perikanan  Indonesia ,
9(2): 35-38
Lagler KF, Bardach JE, Miller RR, Pasino DRM.
1977. Ichthyology. John Willey and Sons Inc. New York. 506 p.
Makkar HPS, Sidduraju P, Becker K. 2007. Tan- nins. Plant  Secondary  Metabolites .  Pu- blisher Humana Press. New York. 130 p.
Nabib  R,  Pasaribu  FH.  1989. Patologi  dan  Pe- nyakit  Ikan .  Departemen  Pendidikan  dan Kebudayaan.  Direktorat  Jenderal  Pendi- dikan Tinggi. Pusat Antar Universitas Bio- teknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
158 hlm.
Raa  J,  Roersted  G,  Engstad  R,  Robertsen  B. 1992. The use of immunostimulants to in- crease  resistance  of  aquatic  organism  to microbial  infectious. In :  Shariff  M,  Suba- singhe  RP,  Arthur  JR  (Eds). Diseases  in Asia  Aquaculture .  Fish  Health  Section.
Asean  Fisheries  Society.  Manila.  Phili- pines. pp. 3-50
Sakai  M.  1999.  Current  research  status  of  fish and  shellfish  immunostimulant. Aquacul- ture , 172(1): 63-92.
Sastrapradja  S.  1978. Tanaman  Obat .  Lembaga Biologi Nasional. LIPI. Bogor. 126 hlm.
Yuhana  SA,  Rahayu  K,  DewaKM.  2012.  Daya antibakteri  ekstrak  daun  kemangi  ( Oci- mum  sanctum L.)  terhadap  bakteri Strep- tococcus inae secara in vitro. Media Jour- nal  of  Aquaculture  and    Fish  Health.  De- partemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Budidaya  Perairan,  Fakultas  Perikanan
Nabib R, Pasaribu FH. 1989. Patologi dan
Pe-nyakit  Ikan .  Departemen  Pendidikan dan  Kebudayaan.  Direktorat  Jenderal Pendi-dikan Tinggi. Pusat Antar Universitas Bio-teknologi. Institut
Pertanian Bogor. Bogor. 158 hlm.
Raa  J,  Roersted  G,  Engstad  R,  Robertsen  B.
1992. The use of immunostimulants to in- crease  resistance  of  aquatic  organism  to microbial  infectious. In :  Shariff  M,  Suba- singhe  RP,  Arthur  JR  (Eds). Diseases  in Asia  Aquaculture .  Fish  Health  Section. Asean  Fisheries  Society.  Manila.  Phili- pines. pp. 3-50
Sakai  M.  1999.  Current  research  status  of  fish and  shellfish  immunostimulant. Aquacul- ture , 172(1): 63-92.
Sastrapradja  S.  1978. Tanaman  Obat .  Lembaga Biologi Nasional. LIPI. Bogor. 126 hlm.
Yuhana  SA,  Rahayu  K,  DewaKM.  2012.  Daya antibakteri  ekstrak  daun  kemangi  ( Oci- mum  sanctum L.)  terhadap  bakteri Strep- tococcus inae secara in vitro. Media Jour- nal  of  Aquaculture  and    Fish  Health.  De- partemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Budidaya  Perairan,  Fakultas  Perikanan dan  Kelautan.Universitas  Airlangga.  1(2): 7 hlm.
Widya DR. 2014. Aktivitas antimikroba biji tera- tai  ( Nymphaea  pubescens L.).  terhadap bakteri Aeromonas  hydrophila , Streptoco- ccus  agalactiae dan Saprolegnia sp. Jur- nal Aquacoastmarine , 2(1):  7-17 dan Kelautan.Universitas Airlangga. 1(2): 7 hlm.
Widya DR. 2014. Aktivitas antimikroba biji tera- tai  ( Nymphaea  pubescens L.).  terhadap bakteri Aeromonas  hydrophila , Streptoco- ccus  agalactiae dan Saprolegnia sp. Jur- nal Aquacoastmarine , 2(1):  7-17