## PERSENTASE TOTAL AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARK CHOCOLATE DAN MILK CHOCOLATE SECARA SPEKTROFOTOMETRI
Lany Nurhayati, Supriyono E. Wardoyo dan Rika Rosita FMIPA Universitas Nusa Bangsa Jl. KH. Sholeh Iskandar Km. 4, Tanah Sareal, Bogor email : lanyhikmat@yahoo.com

## ABSTRACT

## Percentage Total  Activities of Antioxidant of Dark Chocolate and Milk Chocolate Using Spectrofotometric
Chocolate is loaded with various properties, one of them as an antioxidant because it contains katetin, polyphenols, flavonoids that can prevent premature aging. The content of antioxidants in chocolate was varied, dark chocolate (DC) of at least 70 %, while milk chocolate (MC) is was lower. The compound of 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl  (DPPH)  was  a  stable  free  radical  compounds  that  would  neutralize  each  other  if  treated  with antioxidant  compound.  Percentage  of  total  activity  was  calculated  by  the  reaction  between  DPPH  compounds and chocolate spectrophotometrically at λ 520nm. The results showed that the DC brand A was 59.19  % , 17 : brand B 16 % and brand C 8.80 % , while the MC was 11, 07 % brand A, brand B 7, 00 %  and brands C 5.84 %. Comparison of  DC percentages was higher than MC because the DC contains catechins, riboflavon, vitamin E and  vitamin  C  or  minerals  Mg  and  Cu  that  reacted  with  DPPH,  so  that  DC  could  be  used  as  one  source  of antioxidants.
Keywords : antioxidants, dark chocolate, milk chocolate, DPPH .

## ABSTRAK
Cokelat  sarat  dengan  berbagai  macam  khasiat,    salah  satunya  sebagai  antioksidan  karena  mengadung katetin, polifenol, flavonoid yang dapat mencegah penuaan dini. Kandungan antioksidan dalam coklat bervariasi Dark  chocolate ( DC )  minimal  70%  sedangkan Milk  chocolate ( MC )  lebih  rendah. Senyawa 1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH)  merupakan  senyawa  radikal  bebas  stabil  yang  akan  saling  menetralkan  jika  direaksikan dengan  senyawaan  antioksidan.  Persentase  total  aktifitas  dihitung  melalui  reaksi  antara  senyawa  DPPH  dengan cokelat secara spektrofotometri pada λ 520nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa DC merk A sebesar 59.19%, merk B 17.16%, dan merk C 8.80%, sedangkan MC merk A sebesar 11.07%, merk B 7.00%, dan merk C 5.84%. Perbandingan persentase DC lebih tinggi dibanding MC karena DC mengandung katekin, riboflavon, vitamin E, dan vitamin C, serta mineral Mg dan Cu yang berekasi dengan DPPH, sehingga DC dapat dijadikan sebagai salah satu sumber antioksidan.
Kata kunci : antioksidan, dark chocolate , milk chocolate , DPPH.

## PENDAHULUAN
Cokelat terkenal  sebagai  makanan lezat  yang  dicintai  banyak  orang.  Di  balik kenikmatan  yang  diberikan  dan  sensasi unik  yang  ditimbulkan  setelah  kita mengonsumsi  cokelat,  ternyata  cokelat sarat  dengan  berbagai  macam  khasiat. Salah  satunya  adalah  sebagai  antioksidan. Cokelat  merupakan  pohon  yang  dapat tumbuh baik di daerah panas, mengandung biji seperti kacang – kacangan antara 50 –
100  biji.  Biji  –  biji  ini  diolah  menjadi bubuk  atau  kristal  cokelat  untuk  dibuat makanan  atau  minuman  (Tim  Bina  Karya Tani, 2008). Cokelat memiliki kandungan antioksidan sehingga cokelat menjadi salah satu  makanan  atau  minuman    kesehatan. Selain  itu  bermanfaat  untuk  kecantikan, karena antioksidan seperti katekin, polifenol, flavonoid, yang ada di dalamnya dapat  mencegah  penuaan  dini,  maka  tidak
heran  bila  saat  ini  berkembang  lulur cokelat yang sangat baik untuk kecantikan kulit (Astawan, 2009).
Kandungan  antioksidan  bervariasi pada  setiap  cokelat,  bergantung  pada berbagai  faktor,  diantaranya  kandungan cokelat  dan  proses  pengolahannya. Dark Chocolate sebagai  salah  satu  jenis  cokelat memiliki  kandungan  cacao    yang  paling tinggi yaitu paling sedikit 70%. Sedangkan, milk  chocolate atau cokelat  susu merupa kan campuran cacao dengan susu dan gula, sehingga  kandungan  cokelatnya  tidak sebanyak  pada dark  chocolate (Sofia, 2005).
Antioksidan adalah substansi yang diperlukan tubuh untuk menetralisir radikal bebas sehingga dapat mencegah kerusakan yang  ditimbulkan  oleh  radikal  bebas terhadap  sel  normal,  protein  dan  lemak. Antioksidan  menstabilkan  radikal  bebas dengan  melengkapi  kekurangan  elektron yang dimiliki  radikal bebas. Ada beberapa bentuk  antioksidan,  di  antaranya  vitamin, mineral,  dan  fitokimia.  Berbagai  tipe antioksidan  tersebut  bekerja  bersama dalam  melindungi  sel  normal  dengan  cara menetralisir  radikal  bebas  (Brotodjojo,
2008). Senyawa 1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH) merupakan senyawa  radikal  bebas  stabil  yang  akan saling menetralkan jika direaksikan dengan senyawaan  antioksidan,  dengan  merubah warna  ungu  menjadi  kuning  karena antioksidan  memberikan  elektronnya  pada DPPH. Uji aktivitas antioksidan dilakukan melalui  reaksi  peredaman  radikal  DPPH. Uji  DPPH  ini  merupakan  metode  yang mudah  untuk  menapis  sejumlah  kecil molekul  antioksidan,  karena  reaksi  dapat diamati  intensitas  antioksidannya  melalui spektrofotometri sederhana (Yuhernita dan Juniarti,  2011).  Hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Liempah  tahun  2008, membuktikan  bahwa  senyawa  antioksidan berupa  propolis  dalam  madu  lebah  dapat saling  menetralkan  ketika  direaksikan dengan  radikal  bebas  DPPH.  Namun  dari hasil penelitian tersebut tidak diungkapkan persentase  total  aktifitasnya,  sehingga perlu dilakukan penelitian lanjutan dengan menggunakan  bahan  antioksidan  lain
seperti  cokelat.  Antioksidan  dalam  cokelat pun  akan  saling  menetralkan  jika  direaksi kan  dengan  DPPH.  Hal  inilah  yang menjadi dasar pada penelitian ini, sehingga persentase total aktifitas antioksidan dalam cokelat pun dapat ditetapkan melalui reaksi antara  senyawa  DPPH  dengan  cokelat  itu sendiri secara spektrofotometri.
Penelitian ini bertujuan mengetahui  perbandingan  persentase  total aktifitas  antioksidan dark  chocolate dan milk chocolate .

## BAHAN DAN ALAT

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah cokelat siap konsumsi ( dark  chocolate dan milk  chocolate dari  3 merk berbeda) yang dijual bebas di toko  – toko  dan  pasar,  etanol  (96  %),  1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH) dan
Asam  askorbat  ( working  standard, batch no.806009,  kemurnian  :  99.40  %,  tanggal kadaluarsa  :  23  Februari  2010,  suhu penyimpanan 2 – 8 ºC).
Sampel  yang  digunakan  berasal dari  3  merk  berbeda,  masing  –  masing merk  tersebut  terdiri  dari  dua  jenis,  yaitu dark  chocolate dan milk  chocolate .  Merk A  merupakan  sampel  cokelat  yang  di dalamnya  terdapat  bahan  tambahan  madu dan  kacang  almon.  Merk  B  merupakan sampel  cokelat  yang  di  dalamnya  terdapat bahan  tambahan  kacang  mete.  Sedangkan merk  C  merupakan  sampel  cokelat  yang tidak  terdapat  madu,  kacang  almon maupun  kacang  mete  sebagai  bahan tambahan.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain  :  neraca  analitik, labu  ukur,  piala  gelas,  pipet  volumetrik, kertas karbon, ultrasonic , penyaring 0,45µm, labu semprot, 8453.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan
metode  eksperimental,  terdiri  dari  empat tahap, yaitu :
1. Preparasi Sampel
 Sampel Dark Chocolate
Sejumlah  sampel dark  chocolate ditimbang  ±  1.00  gram  dengan teliti menggunakan neraca analitik, dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur 100mL,  dilarutkan  dengan  etanol 96  %,  di ultrasonic selama  ±  15 menit, sampai semua sampel larut, didiamkan  sampai  tercapai  suhu ruang,  diimpitkan  dengan  etanol, dihomogenkan  kemudian  disaring menggunakan  penyaring 0,45µm.
Larutan hasil saringan dipipet 4mL, dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur 20mL,  diencerkan  dan  diimpitkan dengan etanol 96 %, dihomogenkan (konsentrasi sample 2  x  10 -3 mg/mL).  Larutan  tersebut dipipet 2mL dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  bertutup  yang  telah dilapisi  dengan  kertas  karbon  dan telah  berisi  2mL  larutan  DPPH (konsentrasi  larutan  DPPH  yang dipakai 5 x 10 -2 mg/mL), dihomogenkan, kemudian di diamkan  selama  ±  30  menit. Diukur  absorbans  sampel  (A  spl) menggunakan spektrofotometer UV  –  VIS Agilent 8453  di  λ maksimum  dengan  etanol  sebagai blanko.
 Sampel Milk Chocolate
Pengerjaan  sampel milk  chocolate
sama dengan sampel dark chocolate .
 Larutan  kontrol  terdiri  dari  2mL larutan  DPPH    dengan  konsentrasi 5x10 -2 mg/mL  ditambah  2mL etanol  96  %,  yang  direaksikan dalam  tabung  reaksi  bertutup  dan telah  dilapisi  oleh  kertas  karbon. Setelah dihomogen kan, didiamkan selama  ±  30  menit,  kemudian diukur  absorbansnya  (A  ctrl) menggunakan spektrofotometer
UV  –  VIS Agilent 8453  di  λ maksimum.  Sebagai  pembanding,  ditetapkan juga  persentase  total  aktifitas antioksidan terhadap asam askorbat.  Tahapan  kerja  yang dilakukan  sama  dengan  tahapan kerja  pada  sampel  cokelat,  baik dark chocolate maupun milk chocolate .
 Semua  tahapan  preparasi  sampel dilakukan secara triplo dan dilakukan  di  ruang  gelap  (ruang preparasi dengan pencahayaan lampu  neon  yang  diberi  cat berwarna  kuning  gelap).  Semua labu ukur yang dipakai adalah labu ukur berwarna coklat ( amber glass ) dan dilapisi kertas karbon dibagian luarnya.
2. Penetapan  λ  (panjang  gelombang) maksimum :
Spektrum dibuat dari larutan standard DPPH dalam etanol 96 %, antara panjang  gelombang  (λ)  400  –  900  nm, sehingga didapatkan absorbans maksimum pada λ tertentu.

## 3. Kurva standard DPPH :
DPPH  ditimbang  ±  5.00  mg, dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50mL yang telah dilapisi kertas karbon,
dilarutkan  dan  diimpitkan  sampai  tanda garis  dengan  etanol  96  %,  kemudian dihomogenkan.  Pengenceran  dibuat  serial dengan beberapa konsentrasi, yaitu memipet larutan tersebut 2mL, 3mL, 4mL,
5mL  dan  6mL  ke  dalam  masing  –  masing labu  ukur  20mL  yang  telah  dilapisi  oleh kertas  karbon,  kemudian  diencerkan  dan diimpitkan dengan etanol 96 %, dihomogenkan.  Sehingga  didapat  deret konsentrasi  larutan  standard  1  x  10 -2 mg/mL,  1.5  x  10 2 mg/mL,  2  x  10 -2 mg/mL,
2.5  x  10 -2 mg/mL  dan  3  x  10 -2 mg/mL. Selanjutnya, diukur absorbans deret larutan standard    tersebut  pada  λ maksimum  yang telah didapat.

## 4. Penentuan waktu reaksi optimum :
Asam  askorbat  ditimbang  ±  60.00 mg,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur  100mL,  dilarutkan  dengan  etanol 96  %,  di ultrasonic selama  ±  15  menit, sampai  larut  sempurna,  didiamkan  sampai tercapai  suhu  ruang,  diimpitkan  dengan etanol.  Selanjutnya,  dipipet  5mL  larutan tersebut,  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur 50mL,  diencerkan  dan  diimpitkan  dengan etanol  96  %,  dihomogenkan.  Kemudian,  2 mL larutan tersebut dipipet, dimasukkan ke dalam  labu  ukur  20mL,  diencerkan  dan diimpitkan dengan etanol 96 %, dihomogenkan (konsentrasi larutan 6 x 10 -3 mg/ml).  Larutan  tersebut  dipipet  2mL sebanyak empat kali, dimasukkan masing – masing  ke  dalam  empat  tabung  reaksi bertutup  yang  telah  dilapisi  oleh  kertas karbon dan telah berisi 2mL larutan DPPH dalam  etanol  96  %  (konsentrasi    larutan DPPH  yang  dipakai  5  x  10 -2 mg/mL), dihomogenkan dan didiamkan dalam ruang gelap, kemudian setiap 10 menit sekali (10, 20,  30  dan  40  menit)  diambil  satu  tabung tersebut,  diukur  absorbansinya  mengguna kan  spektrofotometer  UV  –  VIS Agilent 8453 di λ maksimum.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Panjang gelombang (λ) maksimum
Berdasarkan  hasil scanning yang telah  dilakukan  terhadap  larutan  standard 1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH)
dalam etanol 96 %, antara λ 400 – 900nm, didapatkan  absorbans  maksimum  pada  λ 518nm  (Gambar  1),  spektrum  dari  hasil pengukuran menggunakan spektrofoto meter UV – VIS Agilent 8453. Hasil  pengukuran  λ  maksimum
DPPH  dapat  berbeda  pada  beberapa penelitian.  Pada  penelitian  ini,  diperoleh 518 nm, menggunakan pelarut etanol 96%, labu  ukur  berwarna  coklat  yang  dilapisi dengan  kertas  karbon  dan  melakukan tahapan  analisis  dalam  ruang  gelap. Kondisi ruang mempengaruhi hasil pengukuran, karena ruang yang gelap akan
meminimal kan reaksi oksidasi DPPH oleh cahaya,  begitu  juga  dengan  pemakaian labu ukur berwarna coklat dan dilapisi oleh kertas  karbon,  sehingga  akan  diperoleh kestabilan  pengukuran  DPPH.  Kurva absorbansi sampelpun menghasilkan bentuk  spektrum  yang  sama  dengan  kurva absorbansi  larutan  DPPH.  Sedangkan, penelitian  yang  dilaku  kan  pada  uji aktifitas  antioksidan  propolis  lebah  madu yang  dilakukan  oleh  Liempah  (2008),  λ maksimum yang didapatkan adalah 520nm, pelarut  yang  digunakan  etanol  96%, dengan  labu  ukur  yang  digunakan  tidak berwarna  dan  hanya  dilapisi  dengan aluminium  foil . Kuncahyo  (2007),  uji aktifitas  antioksidan  ekstrak  belimbing wuluh  λ  maksimum  yang  didapatkan adalah  517nm,  pelarut  yang  digunakan metanol  dan  eter.  Ketidakstabilan  ini disebabkan perbedaan penggunaan pelarut, kondisi ruang dan perangkat analisisnya.

## B. Perhitungan Aktifitas Antioksidan :
Nilai  Aktifitas  Antioksidan  sampel dapat dihitung melalui rumus berikut ini :
𝐴𝐴 (%) = 100 − (𝐴 𝑠𝑝𝑙 𝑥 100)
𝐴 𝑐𝑡𝑟𝑙
Keterangan :
AA(%)  :  Nilai  Aktifitas  Antioksidan (%) A spl :   Absorbans larutan sampel ( dark  chocolate atau milk chocolate dalam  etanol  96  %
yang direaksikan dengan larutan  DPPH  dalam  etanol 96 %). A ctrl :   Absorbans  larutan  standard 1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH)  dengan  konsentrasi 5x10 2 mg/mL  ditambah  2mL etanol 96 %

## C. Kurva kalibrasi larutan standard
Deret larutan  standard  yang  terdiri dari 5 titik konsentrasi (1 x 10 -2 mg/ml ; 1.5 x  10 2 mg/ml;  2  x  10 -2 mg/ml;  2.5  x  10 - 2 mg/ml  dan  3  x  10 -2 mg/ml)  memberikan
hasil berupa garis linier dengan persamaan garis Y= 27,593x + 0,001 dan R 2 = 0,9999 (Gambar 2). Hasil pengukuran tersebut membuktikan  bahwa  DPPH  merupakan radikal bebas stabil pada berbagai konsentrasi.
Gambar 1.  Spektrum Larutan DPPH dalam Etanol 96 %
Gambar 2. Kurva kalibrasi larutan standard DPP
Kurva Kalibrasi Larutan Standard DPPH y = 27,593x + 0,001 R 2 = 0,9999 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0,000 0,010 0,020 0,030
0,040 Konsentrasi (mg/ml)
Ab so r b a n s i

## D. Waktu reaksi optimum
Pengukuran waktu reaksi optimum dilakukan  terhadap  reaksi  antara  DPPH dengan  salah  satu  antioksidan  yang  telah diketahui kemurniannya secara pasti, yaitu Asam  askorbat.  Hasil  pengukuran  tersebut mendapatkan  waktu  reaksi  optimum  pada menit ke 30 (Gambar 3).
Hasil pengukuran tersebut ditandai dengan  tidak  adanya  penurunan  yang signifikan  antara  besarnya  absorbans  yang dihasilkan  pada  pengukuran  menit  ke  20 dengan menit ke 30.
E. Persentase total aktifitas antioksidan  pada  beberapa  jenis dan merk cokelat Penelitian terhadap persentase total aktifitas  antioksidan  pada  beberapa  jenis dan merk cokelat menghasilkan kandungan yang bervariasi (Gambar 4).
Hasil penelitian terhadap persentase  total  aktifitas  antioksidan  pada beberapa jenis dan merk cokelat didapatkan hasil terbesar pada sampel dark chocolate merk  A,  yaitu  sebesar  59.19  %.
Sampel merk A merupakan sampel cokelat yang di dalamnya terdapat bahan tambahan madu  dan  kacang  almon.  Madu  dan kacang–kacangan termasuk bahan makanan yang banyak mengandung
antioksidan,  sehingga  antioksidan  yang terdapat dalam sampel merk A tidak hanya berasal  dari  katekin  dan  antioksidan  lain dalam  cokelat  itu  sendiri,  tapi  madu  dan kacang  almon  yang  terdapat  di  dalamnya juga  memberikan  aktifitas  antioksidan.
Semua jenis madu mengandung antioksidan, seperti vitamin E dan vitamin C.  Sedangkan  kacang  almon  mengandung riboflavin dan vitamin E yang sangat tinggi
(Joseph, 2008).
Hasil  persentase  total  aktifitas antioksidan pada sampel merk B menempati  urutan  kedua,  dengan  hasil pada dark  chocolate sebesar  17.16  %. Sampel B merupakan sampel cokelat yang di  dalamnya  terdapat  bahan  tambahan kacang  mete.  Kacang  mete  berisi  banyak magnesium  dan  tembaga  (Joseph,  2008). Magnesium  dan  tembaga  merupakan mineral  –  mineral  yang  termasuk  dalam antioksidan,  sehingga  aktifitas  antioksidan yang dihasilkan pada sampel merk B tidak hanya berasal dari katekin dan antioksidan lain  dalam  cokelat  itu  sendiri,  tapi magnesium  dan  tembaga  yang  terkandung dalam kacang mete pun ternyata memberikan  aktifitas  antioksidan.  Reaksi antara  DPPH  dengan  antioksidan  katekin, riboflavin,  vitamin  E  dan  vitamin  C maupun  dengan  mineral  magnesium  (Mg) dan tembaga (Cu) (Gambar 5).
Gambar 3. Waktu reaksi optimum antara DPPH dengan Asam askorbat
Gambar 4.   Grafik perbandingan persentase total aktifitas antioksidan pada beberapa jenis dan merk cokelat
Radikal  bebas  dikenal  sebagai faktor utama dalam kerusakan biologi, dan DPPH  digunakan  untuk  mengevaluasi aktivitas  peredaman  radikal  bebas  dari suatu  antioksidan  alami.  Elektron  tak berpasangan  pada  DPPH  memberikan suatu absorpsi yang  kuat, maksimum pada λ  517  nm  dan  berwarna  ungu.  DPPH merupakan  senyawa  radikal  bebas  stabil yang  akan  saling  menetralkan,  jika direaksikan dengan senyawaan antioksidan sebagai  penangkap  radikal  bebas  ini dengan  adanya  sebuah  donor  hidrogen. Antioksidan yang terkandung dalam sampel  (senyawa  x  pada  Gambar  5) menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang kemudian menyebabkan penghilangan  warna  sebanding  dengan elektron  yang  diambil,  sehingga  terdapat perbedaan besarnya nilai serapan (absorbans)  dari  masing-masing  sampel. Perbedaan  ini  berbanding  lurus  dengan banyaknya  kandungan  antioksidan  dalam sampel  tersebut.  Senyawa  antioksidan dapat mengubah warna   arutan DPPH dari ungu  menjadi  kuning  (Dehpour  etl  al., 2009).
Semakin banyak jumlah
antioksidan  dalam  sampel  maka  akan semakin  banyak  juga  penghilangan  warna yang  dihasilkan  dari  reaksi  antara  DPPH dengan  sampel.  Warna  akhir  yang  diukur sebagai  nilai  serapan  sampel  merupakan
warna dari sisa  DPPH  yang  tidak  bereaksi dengan antioksidan dalam sampel.
Sampel merk C, cokelat yang tidak terdapat  madu,  kacang  almon  maupun kacang  mete  di  dalamnya  sebagai  bahan tambahan,  sehingga  aktifitas  antioksidan yang  diperoleh  dari  sampel  merk  C  hanya berasal  dari  katekin  dan  antioksidan  lain dalam  cokelat  itu  sendiri  (Gambar  1), menempati  urutan  ketiga  dengan  hasil persentase  total  aktifitas  antioksidan  pada dark  chocolate sebesar  8.80  %.  Sampel dark  chocolate merk  A  memberikan  rasa yang  paling  pahit  jika  dibandingkan dengan sampel dark chocolate merk B dan C.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  komposisi cokelat  terbesar  terkandung  dalam  sampel dark chocolate merk A tersebut. Selain itu, warna pada sampel dark chocolate merk A paling  gelap  jika  dibandingkan  dengan warna pada sampel dark chocolate merk B dan C.
Berbeda  halnya  dengan  sampel milk  chocolate ,  persentase  total  aktifitas antioksidan terbesar dihasilkan oleh sampel milk  chocolate merk  B,  sebesar 11.07  %,  urutan  kedua  dihasilkan  oleh sampel milk  chocolate merk  C  sebesar
7.00 % dan hasil terkecil pada sampel milk chocolate merk  A  sebesar 5.84  %.  Hal  ini terjadi  karena  perbedaan  besarnya  jumlah cokelat di dalam masing – masing sampel. Warna pada sampel milk chocolate merk B
11,07 7,00 59,19 17,16 8,80 5,84 0 10 20 30 40 50 60 70 1 2 3 Merk cokelat % to ta l a k tifi ta s a n tio k si d a n Milk Chocolate Dark chocolate C A B A A
paling  gelap  jika  dibandingkan  dengan warna pada sampel milk chocolate merk C, apalagi  jika  dibandingkan  dengan  sampel milk chocolate merk A yang terlihat paling pucat.  Meskipun  sampel milk  chocolate merk  A  mengandung  bahan  tambahan yang  sama  dengan  yang  terdapat  pada sampel  dark chocolate  merk A,  tetapi kandungan  cokelat  di  dalamnya  sangat sedikit,  dapat  dilihat  dari  warnanya  yang sangat  pucat  tersebut,  sehingga  semakin menguatkan  bahwa  jumlah  katekin  dan antioksidan  lain  yang  terkandung  dalam cokelat  memberikan  aktifitas  antioksidan sesuai dengan besarnya jumlah kandungan zat  tersebut  di  dalam  masing  –  masing sampel cokelat.
Besarnya aktivitas antioksidan juga  sangat  dipengaruhi  oleh  jenis  bahan tambahan  yang  terkandung  dalam  cokelat. Madu,  kacang  almon  dan  kacang  mete sebagai  bahan  tambahan  dalam  cokelat ternyata  memberikan  aktifitas  antioksidan juga.  Sehingga  aktifitas  antioksidan  dalam cokelat  tidak  hanya  berasal  dari  katekin dan  antioksidan  lain  dalam  cokelat  itu sendiri,  tapi  juga  berasal  dari  bahan tambahannya.  Sampel dark  chocolate
memberikan hasil persentase total aktifitas antioksidan  lebih  besar  daripada  yang dihasilkan  oleh  sampel milk  chocolate pada masing – masing merk.
Menurut  Eskin  dan  Przybylski
(2001)  dalam  Sari  (2005),  mekanisme kerja senyawa antioksidan adalah mengkelat  ion  logam,  menghilangkan oksigen  radikal,  memecah  reaksi  rantai inisiasi,  menyerap  energi  oksigen  singlet, mencegah pembentukan radikal, menghilangkan  dan  atau  mengurangi jumlah  oksigen  yang  ada.  Mekanisme reaksi senyawa antioksidan sebagai berikut : AH + ROO . . + ROOH AH + RO . . + ROH A . + ROO . A . + RO .
A . + A .
A . . A . .
Keterangan :
AH = antioksidan ROO. = radikal peroksil RH = lemak atau minyak tak jenuh R. = radikal asam lemak tak jenuh
Gambar 5.   Reaksi antara DPPH dengan senyawa x (katekin, riboflavin,vitamin E, vitamin C, Mg dan Cu)
Gambar  6.   Perubahan warna larutan pada reaksi radikal DPPH dengan antioksidan (Witt et al , 2010)
Menurut  Hartanto  (2012),  hasil penelitian  terhadap  potensi  antioksidan minuman  cokelat  menggunakan  metode radikal  bebas  DPPH,  menunjukkan  bahwa minuman cokelat yang mengalami berbagai  preparasi  seperti  penambahan  air mendidih (100 o C) langsung dan penambahan  air  suhu  ruang  kemudian dipanaskan sampai mendidih, menunjukkan aktivitas penangkalan radikal  bebas  DPPH  tidak  berbeda  nyta dibanding  dengan  vitamin  E  sebagai kontrol pada taraf 5%. Asam askorbat sebagai pembanding pada penelitian ini, menghasilkan  persentase  total  aktifitas antioksidan  sebesar  45.13  %.  Hal  ini menunjukkan bahwa kandungan antioksidan  dalam  cokelat  tidak  kalah pentingnya dengan antioksidan yang terkandung  dalam  asam  askorbat.  Angka ini masih jauh lebih kecil jika
dibandingkan dengan angka yang dihasilkan  dari  persentase  total  aktifitas antioksidan sampel dark chocolate merk A, yaitu sebesar 59.19 %.
Asam askorbat (vitamin C) mudah dioksidasi  menjadi  asam  dehidroaskorbat, dengan  demikian  maka  vitamin  C  juga berperan dalam menghambat reaksi oksidasi  yang  berlebihan  dalam  tubuh dengan cara bertindak sebagai antioksidan. Vitamin  C  terkandung  dalam  sayuran
berwarna  hijau  dan  buah  –  buahan  (Sofia, 2005).
Selain  vitamin  C,  coklat  memiliki senyawa  polifenol  yang  berfungsi  sebagai antioksidan dan pengawet alami dari coklat. Aktivitas  antioksidan  polifenol  berkaitan erat dengan struktur samping dan substitusi pada cincin aromatiknya, serta jumlah dan posisi hidrogen fenolik dalam molekulnya. Dengan  demikian,  aktivitas  antioksidan tinggi  karena  memiliki  jumlah  gugus hidroksi  yang  lebih  banyak  pada  inti flavonoidnya  (Es-Safi et  al .  2007.,  dalam Yuhernita  dan  Juniarti,  2011).  Senyawa fenolik  ini  memiliki  kemampuan  untuk menyumbangkan hidrogen,  maka aktivitas antioksidan senyawa fenolik dapat dihasilkan  pada  reaksi  netralisasi  radikal bebas,  yang  mengawali  proses  oksidasi atau  pada  penghentian  reaksi  radikal berantai yang terjadi.
Hasil  penelitian  ini  menambah informasi bahwa ternyata cokelat mengandung  banyak  antioksidan  yang dapat  disejajarkan  dengan  bahan  makanan sehat  lain  yang  merupakan  sumber  utama antioksidan,  salah  satunya  yaitu  makanan yang  banyak  mengandung  vitamin  C. Sehingga  cokelat  ( dark  chocolate merk  A khususnya) dapat dijadikan sebagai sumber antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Afriansyah,  N.  2005. Cokelat,  Sarat Antioksidan  Penyehat  Jantung. http://www2. kompas.com/kompas- cetak/0503/30/ilpeng/1652470. htm.(Rabu, 30 Maret 2005)
Amrun,  M.  2005. Pengujian  Antiradikal Bebas  Difenilpikril  Hidrazil (DPPH)  Ekstrak  Buah  Kenitu (Chrysophyllum cainito,L.) Dari Daerah Sekitar Jember. Jurnal Ilmu  Dasar Vol. 6. No. 2, 2005 : 110 – 114.
Anonim,  2008. Antioksidan  Tinggi  dalam
Coklat Hitam . http://www. qvida.co.id/ index. php/news/detil/145.(17 Oct 2008). Anonim,  2009. Coklat  Membuat  Hidup Lebih Sehat . http://kumpulan.info /sehat/ artikel-kesehatan/48-artikel- kesehatan/161-cokelat- membuat-hidup-lebih sehat.html(Selasa,  17  Maret 2009)
Anonim,  (Tanpa  Tahun). Antioksidan .
http://id.wikipedia.org/wiki/Ant ioksidan Astawan, M. 2009. Cokelat, Tanda Sayang Sehatkan Jantung . http://perempuan. kompas.com/read/xml/2009/02/ 12/22155938/cokelat.tak.selam anya.merugikan. ( Nutrition Thu ,
26 Feb 2009 15:30:00 WIB)
Brotodjojo, LC. 2008. All About Chocolate .Jakarta: PT.Gramedia Pustaka Utama. Dehpour, A. A., M. A. Ebrahimzadeh, , N. S. Fazel, dan N. S. Mohammad,
2009. Antioxidant  Activity  of Methanol  Extract  of  Ferula
assafoetida  and  Its  Essential
Oil Compotition ., Grass Aceites,
60 (4), 405 – 412.
Hartanto,  H.  2012. Identifikasi  potensi antioksidan  minuman  cokelat dari  kakao  lindak  (Theobroma cacao  L.)  dengan  berbagai cara  preparasi  metode  radikal bebas 1,1 diphenyl-2 picryhidrazil  (DPPH) .  Skripsi. Fak.Teknologi  Pertanian.  Univ. Katolik Widya Mandala. Surabaya. Joseph,  JA.,  2008. Diet  Sehat  Dengan Kode  Warna  Makanan .  PT. Mizan Publika : Jakarta. Kuncahyo, I., 2007. Uji Aktifitas Antioksidan  Ekstrak  Belimbing Wuluh  (Averrhoa  bilimbi,L.) terhadap 1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl (DPPH) . Makalah pada Seminar Nasional Teknologi (SNT 2007) : Yogyakarta. Liempah,  MVL.,  2008. Production  Of
Bee-Propolis  Extract  Powder
As  Antibacterial  Material  For Pharmaceutical Industry . Swiss German University : Tangerang. Nur,  MA.  1989. Spektroskopi .  Institut Pertanian Bogor : Bogor.
Rusdiana, T. 2007. Formulasi Gel Antioksidan Dari Ekstrak Seledri  (Apium  graveolens,L.) Dengan Menggunakan AQUPEC  HV-505 .  Makalah pada Kongres Ilmiah XV ISFI :
Jakarta.
Sari, D., 2009. Aktivitas Antioksidan Daun Belantas  dalam  Sistem  Model
Asam  Linoleat  Beta  Karoten . Skripsi S-1. Surabaya : Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.
Sofia,  D.,  2005. Antioksidan  dan  Radikal Bebas . Situs Web Kimia ( online ). http:www.chemis- try.org.(diakses Maret 2009). Tahir, I. 2003. Terapan Analisis HANSCH Untuk Aktifitas Antioksidan
Senyawa  Turunan  Flavon  / Flavonol . Makalah Seminar Khemometri.  25  Januari  2003.
Jurusan  Kimia  FMIPA  UGM  : Yogyakarta. Tim  Bina  Karya  Tani.,  2008. Pedoman Bertanam Cokelat . Yrama Widya : Bandung. Witt,  S.,  M.  Lalk,  C.  Hager  dan  B.  Voigt, 2010. Determination of Scavenger properties, http://www.baltic- analytics./index. php?id=7&L-1, diakses  tanggal  14  September 2010.
Yuhernita  dan  Juniarti.  2011. Analisis
Senyawa  Metabolit  Sekunder dari  Ekstrak  Metanol  Daun Surian yang Berpotensi sebagai Antioksidan .  Makara,  Sains. Vol. 15, No. 1, April 2011 : 48–
52.