Journal of Natural Resources and Environmental Management 11 (2): 309-323. http://dx.doi.org/10.29244/jpsl.11.2.309-323 E-ISSN: 2460-5824
http://journal.ipb.ac.id/index.php/jpsl
Laju nitrifikasi pada bioremediasi air limbah organik menggunakan Chlorella sp. dan bakteri nitrifikasi-denitrifikasi
Nitrification rate in the bioremediation of organic wastewater using Chlorella sp. and nitrifying- denitrifying bacteria
Arya Ksatria Fernanda Hendrawan a , Norma Afiati a , Arif Rahman a
a Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Departemen Sumberdaya Akuatik, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Semarang, 50275, Indonesia
Article Info: Received: 09 - 02 - 2021 Accepted: 10 - 06 - 2021
Keywords: Bioremediation, Chlorella sp., nitrification, nitrifying- denitrifying bacteria, organic waste

## Corresponding Author:
Arya Ksatria Fernanda Hendrawan Departemen Sumberdaya Akuatik, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro; Tel. +628588236021 Email: aryaksatria@students.undip.ac.id
Abstract. Global  nitrogen  pollution  in  the  aquatic  environment  has  been increased  mostly  due  to  the  disposal  of  organic  wastewater  from  human activities.  Chronic  disposal  of  nitrogen  compounds  into  the  waters  caused eutrophication  and  death  of  aquatic  organisms.  The  process  of  reducing nitrogen in wastewater can be carried out economically and efficiently using nitrifying-denitrifying  bacteria.  Besides  that,  another  environmentally friendly technology that can also be used is bioremediation using microalgae such  as Chlorella sp.  The  synergistic  relationship  between  bacteria  and microalgae  has  a  better  performance  in  reducing  nitrogen  compounds  in organic  wastewater.  This  study  aims  to  determine  the  rate  of  nitrification, changes in nitrate concentrations, and the effect of differences in treatments and time on changes in nitrate levels in organic wastewater. This study was conducted from July to August 2020 was an experimental laboratory using a randomized block design. Organic wastewater samples were taken from Lake Rawa Pening Central Java. The results showed the highest nitrification rate was performed by treatment C (a combination of probiotics and Chlorella sp.) of  0.2  mg  NH4-N  l-1.hour-1,  followed  by  treatment  B  ( Chlorella sp.),  D (control), and A (probiotics) of 0.169, 0.009 and 0.008 mg NH4-N l-1.hour-1, respectively. The highest percentage change in nitrate levels during the study was  treatment  C  (1  874%),  B  (1  664%),  D  (200%),  and  A  (175%), respectively. The analysis of variance and the DMRT test showed that there were differences between treatments and times of changes in nitrate levels (p- value  <0.05),  with  the  highest  average  change  in  nitrate  levels  found  in treatment C.
How to cite (CSE Style 8 th Edition):
Hendrawan AKF, Afiati N, Rahman A. 2021. Laju nitrifikasi pada bioremediasi air limbah organik menggunakan Chlorella sp. dan bakteri nitrifikasi-denitrifikasi. JPSL 11 (2): 309-323. http://dx.doi.org/10.29244/jpsl.11.2.309-323.

## PENDAHULUAN
Pencemaran  nitrogen  secara  global  meningkat  sejak  akhir  abad  ke-20  seiring  dengan  pertumbuhan ekonomi  negara  berkembang.  Tidak  hanya  itu,  di  negara-negara  maju  seperti  Eropa  Utara,  pencemaran nitrogen juga terjadi akibat produksi pangan secara belebihan (Martinez et al ., 2019). Nitrogen yang masuk ke perairan  menjadi  penyebab  eutrofikasi  yang  dapat  merusak  ekosistem  perairan  (LIPI,  2015).  Di  Indonesia, ancaman  terhadap  lingkungan  terjadi  simultan  di berbagai  wilayah  tanah  air  akibat  pembuangan  air  limbah
nitrogen yang tidak terkendali. Seiring dengan meningkatnya pembangunan di tanah air, tingkat pencemaran nitrogen  ke  perairan  pun  menjadi  semakin  meningkat  (Suswanti et  al .,  2019).  Data  WWF  tahun  2018 menunjukkan bahwa dari 550 sungai yang ada di Indonesia, sebanyak 82 persen berada dalam kondisi rusak. Selain  itu,  seiring  berjalannya  waktu  terjadi  perubahan  status  trofik  perairan  di  Indonesia  akibat  pencemar nitrogen, salah satunya terjadi di danau Rawa Pening (Zulfia dan Aisyah, 2013).
Senyawa nitrogen di dalam air dapat berubah-ubah melalui proses nitrifikasi dan denitrifikasi (Prabowo, 2017).  Nitrifikasi  dan  denitrifikasi  di  dalam  siklus  nitrogen  memiliki  peran  penting  pada  produksi  primer perairan dan termasuk siklus nutrien yang utama (Paul et al ., 2020). Pada proses nitrifikasi, senyawa anorganik amonia  dirubah  menjadi  nitrit,  kemudian  menjadi  nitrat  oleh  bakteri  nitrifikasi,  sedangkan  dalam  proses denitrifikasi senyawa nitrat dirubah menjadi N 2 O (Herlambang dan Marsidi, 2003). Berbeda dengan amonia, nitrat  merupakan  nutrien  paling  dominan  (Adyasari et  al .,  2018),  yang  dapat  memengaruhi  produktivitas perairan.  Oleh  karena  itu,  reaksi  nitrifikasi  sangat  penting  bagi  keseimbangan  nitrogen  dan  faktor  penentu kualitas perairan (Paul et al ., 2020).
Dalam  waktu  yang  lama,  akumulasi  senyawa  nitrogen  yang  terjadi  secara  terus-menerus  tinggi  dapat mencemari  lingkungan  perairan  dan  menjadi  penyebab  terjadinya  kematian  biota  air  (Rustadi,  2009)  dan eutrofikasi, sehingga terjadi blooming fitoplankton dan tumbuhan air lainnya (Lihawa dan Mahmud, 2017). Oleh karena itu, teknologi yang tepat dan ramah lingkungan untuk mengurangi kandungan senyawa nitrogen pada  air  limbah  diperlukan  guna  mencegah  pencemaran.  Proses  reduksi  senyawa  nitrogen  pada  air  limbah dapat  dilakukan  dengan  berbagai  cara,  salah  satunya  yang  tergolong  ekonomis  dan  efisien  adalah menggunakan  bakteri  denitrifikasi  (Agustiyani et  al .,  2007).  Adapun,  teknologi  yang  juga  dapat  digunakan untuk  mengurangi  kandungan  nitrogen  pada  air  limbah  adalah  bioremediasi,  secara  umum  menggunakan mikroalga seperti Chlorella sp. (Chen dan Wang, 2020).
Mikroalga memiliki kelebihan melalui kemampuannya mengasimilasi senyawa amonia dan nitrat untuk pertumbuhan  (Chen  dan  Wang,  2020)  dan  untuk  memenuhi  kebutuhan  fotosintesis  yang  menghasilkan produksi primer (Lomas dan Lipschultz, 2006). Selain itu, mikroalga juga memanfaatkan karbon dioksida yang dihasilkan  bakteri  melalui  respirasi  aerob  untuk  memproduksi  oksigen  bagi  kebutuhan  bakteri  aerob  dalam mengoksidasi senyawa nitrogen dan menguraikan bahan organik (Kwon et al ., 2019).
Penelitian oleh Herlambang dan Marsidi (2003) menunjukkan bahwa proses denitrifikasi pada air limbah dapat menghilangkan konsentrasi nitrat sebanyak 100% dalam 7 hari. Dari penelitian lain  oleh Taziki et al . (2015) dan Al-Mamoori et al . (2020), diketahui bahwa pada percobaan bioremediasi limbah cair menggunakan Chlorella sp., efisiensi reduksi konsentrasi nitrat mencapai 88.17% dan 86%. Adanya hubungan sinergis dari bakteri dan mikroalga berpotensi meningkatkan kinerja reduksi senyawa nitrogen nitrat pada air limbah (Ma et al ., 2014). Lebih lanjut, gabungan kultur bakteri dapat meningkatkan efisiensi reduksi senyawa nitrat dalam air (Kwon et al ., 2019). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui laju nitrifikasi dan perubahan kadar nitrat, serta pengaruh perbedaan perlakuan dan waktu terhadap perubahan kadar nitrat pada air limbah organik.

## METODE

## Hipotesis Penelitian
1. Hipotesis Variabel Perlakuan
H 0 =  Tidak  terdapat  perbedaan  antar  perlakuan  aplikasi  probiotik  dan  mikroalga Chlorella sp.  Terhadap perubahan (peningkatan) kadar nitrat.
H 1 = Terdapat perbedaan antar perlakuan aplikasi probiotik dan mikroalga Chlorella sp. terhadap perubahan (peningkatan) kadar nitrat.
2. Hipotesis Variabel Waktu
H 0 =  Tidak  terdapat  perbedaan  antar  perlakuan  aplikasi  probiotik  dan  mikroalga Chlorella sp.  terhadap perubahan (peningkatan) kadar nitrat.
H 1 = Terdapat perbedaan antar perlakuan aplikasi probiotik dan mikroalga Chlorella sp. terhadap perubahan (peningkatan) kadar nitrat.

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan selama 18 hari pada bulan Juli hingga Agustus 2020 di Laboratorium Hidrobiologi dan Laboratorium Pengelolaan Sumberdaya Ikan dan Lingkungan (PSDIL), Departemen Sumberdaya Akuatik, serta Laboratorium Biologi, FPIK, Universitas Diponegoro.

## Gambar 1 Peta lokasi pengambilan sampel air Danau Rawa Pening

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  diantaranya  adalah  Spektrofotometer  Hach  2  000  untuk  pengukuran  kadar  nitrat. Mikroskop, aerator, akuarium 12 liter, lampu LED grow light , botol sampel 600 ml, slide glass dan Sedgewick- Rafter  Counting  Cell untuk  pengukuran  kelimpahan  mikroalga Chlorella sp.  Cawan  Petri, hand  counter , tabung  reaksi,  inkubator,  Erlenmeyer  1  000 ml,  mikropipet  dan hotplate  magnetic  stirer untuk  pengukuran Angka  Lempeng  Total  (ALT).  Gelas  Beaker  100  ml,  gelas  ukur  100  ml,  pipet  ukur  25  ml,  kuvet  dan  serta thermometer , DO meter dan pH meter untuk mengukur variabel kualitas air.
Bahan  yang  digunakan  diantaranya  yaitu  air  limbah  48  liter,  probiotik  starter  bakteri  nitrifikasi- denitrifikasi  yang  diperoleh  dari  toko  online,  yang  terdiri  dari  konsorsium  bakteri Bacillus  pumilus- megaterium , Thiobacilus  denitrificans , Nitrosomonas sp.  dan Nitrobacter sp.,  kultur  mikroalga Chlorella pyrenoidosa , pupuk Walne, akuades steril dan Plate Count Agar (PCA). Adapun bahan yang digunakan untuk analisis laboratorium diantaranya reagen Nitrate ver 5 Nitrate untuk pengukuran kadar nitrat.

## Pengambilan Sampel Air Limbah
Pengambilan sampel air limbah dilakukan dengan metode grab sample pada lokasi tertentu berdasarkan SNI  6989.59:2008.  Sampel  air  limbah  diambil  sebanyak  48  liter  untuk  kebutuhan  6  liter  air  per  akuarium dengan mengisi air menggunakan gayung dan ember, kemudian dimasukkan ke dalam wadah sampel (jerigen), ditutup  dengan  rapat  dan  dibawa  ke  laboratorium.  Lokasi  pengambilan  sampel  air  limbah  pada  satu  titik,
terletak di Danau Rawa Pening, Ambarawa, Jawa Tengah pada koordinat 7°16'16.06318"S 110°25'19.75253"E antara  area  pertanian  dan  dermaga  berdasarkan  peta  lokasi  pengambilan  air  sampel  pada  Gambar  1.  Hal tersebut  mengacu  pada  penelitian  Zulfia  dan  Aisyah  (2013),  dimana  kadar  nitrogen  yang  diperoleh  cukup tinggi terdapat pada wilayah perairan dekat dengan dermaga.

## Penelitian Pendahuluan
Penelitian  pendahuluan  dimaksudkan  untuk  mempersiapkan  kultur  mikroalga Chlorella sp.  dan mengetahui laju pertumbuhannya pada sampel segar limbah cair organik. Tahap awal dimulai dengan kultur Chlorella sp.  dari  250  mL  bibit  kultur Chlorella sp.  yang  dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  1  000  ml, diencerkan  dengan  akuades  sebanyak  750  ml  dan  ditambah  dengan  pupuk  Walne  sebanyak  2.5  mL.  Pupuk Walne  mengandung  larutan  nutrien,  larutan trace  metal ,  vitamin  B12,  thiamin  dan  biotin  yang  berfungsi memberikan  nutrisi  untuk  mendukung  pertumbuhan Chlorella sp.  Setelah  itu,  bibit  kultur Chlorella sp. sebanyak  250  ml dimasukkan  ke  dalam  akuarium  berisi  sampel  segar  limbah  cair  organik  6  liter  diberikan aerator sebagai sumber oksigen dan pencahayaan menggunakan lampu LED grow light 3 watt sebagai sumber cahaya untuk fotosintesis karena apabila wadah uji diletakkan di dalam ruangan, dapat ditambah dengan lampu LED sebagai susbstitusi cahaya matahari yang diperlukan mikroalga selama proses fotosintesis (Rusdiani et al ., 2016).
Pengukuran  kelimpahan  awal  sel  mikroalga  Chlorella  sp.  dengan  selang  waktu  5,  10,  30,  60  menit, dilanjutkan menjadi 2, 4, 6, 8, 12, 16 dan 24 jam pada 24 jam pertama. Pengamatan hari berikutnya dilakukan dengan  selang  waktu  24  jam dimulai  pada  pada  pukul  08.00  WIB  setiap  harinya,  hingga  laju  pertumbuhan mikroalga Chlorella sp. mencapai fase penurunan yaitu hari ke-9 (Prayitno, 2015). Ketika kultur Chlorella sp. mencapai fase pertumbuhan puncak (hari ke-7) (Prayitno, 2015), bibit kultur Chlorella sp. tersebut digunakan sebagai bahan untuk rancangan percobaan, sambil tetap melanjutkan pengamatan hingga hari ke 9.

## Rancangan Percobaan
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  laboratoris  menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  dengan pengelompokan  berdasarkan  dua  faktor  dan  dua  ulangan.  Adapun,  faktor-faktor  tersebut  adalah  faktor perlakuan  (4  taraf)  yaitu  perlakuan  A  (probiotik),  B  (mikroalga Chlorella sp.),  C  (kombinasi  mikroalga Chlorella sp. dan probiotik) dan D (kontrol), sedangkan faktor waktu (4 taraf) meliputi hari ke-0, ke-3, ke-6 dan  hari  ke-9  (Gambar  2).  Rancangan  percobaan  pada  penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian perlakuan  terhadap perubahan  kadar nitrat pada  waktu pengamatan yang berbeda. Percobaan ini dilakukan selama 9 hari untuk mengetahui variasi kadar nitrat yang terkandung pada setiap wadah uji. Skema rancangan percobaan disimulasikan dalam wadah uji berupa akuarium berisi 6 liter sampel air limbah organik yang diberi perlakuan berbeda dengan dua ulangan. Wadah disusun seperti Gambar 2.
Gambar 2 Skema rancangan percobaan tiga perlakuan dengan dua ulangan dan kontrol: A. Perlakuan dengan probiotik (bakteri nitrifikasi-denitrifikasi), B. Perlakuan dengan mikroalga Chlorella sp., C. Kombinasi mikroalga Chlorella sp. dan probiotik, D. Kontrol tanpa perlakuan
Setiap  wadah  uji  perlakuan  probiotik  diberi  probiotik  sebanyak  7.2  x  10 -3 gr  (Suprianto et  al .,  2019), sedangkan penambahan mikroalga Chlorella sp. sebanyak 100 ml dari bibit kultur Chlorella sp. yang telah diketahui kelimpahan selnya, diukur sebelum percobaan pendahuluan yaitu sebesar 183.4 x 10 3 sel/L. Wadah D berisi air limbah tanpa penambahan probiotik maupun mikroalga Chlorella sp atau sebagai wadah kontrol.

## Pengukuran Variabel Kualitas Air
Pengukuran  kualitas  air  dilakukan  pada  sampel  air  dari  wadah  uji,  meliputi  variabel  kimia  dan  fisika. Waktu pengukuran variabel kimia dan fisika kualitas air yang meliputi pH, DO, kadar nitrat, temperatur air dan udara adalah setiap 3 hari selama 9 hari yaitu pada waktu (jam) ke-0, ke-72, ke-144 dan ke-216 (Cytryn et al ., 2012), yang dilakukan selama rancangan percobaan.
Pengukuran variabel oksigen terlarut ( Dissolved Oxygen , DO) dilakukan menggunakan DO-meter dengan cara memasukkan reference electrode ke dalam air (Carritt dan Kanwisher, 1959). Pengukuran temperatur air dan udara dilakukan menggunakan thermometer dengan memasukkan sensor temperatur ke dalam sampel air (EPA, 1974). Pengukuran pH dilakukan menggunakan pH meter dengan cara memasukkan sensor pH ke dalam air (Karangan et al ., 2019). Kemudian pengukuran kadar nitrat dilakukan dengan metode Hach Programme menurut Arizuna et al . (2014) dalam Ikhsan et al . (2020).
Kelimpahan Chlorella sp.
Pengamatan kelimpahan mikroalga Chlorella sp. dilakukan menggunakan mikroskop pada pembesaran lensa  objektif  10x.  Sebelum  itu,  perlu  dilakukan  sterilisasi  alat  yang  akan  digunakan  untuk  menghindari kontaminasi biologi seperti kontaminasi Protozoa yang dapat diminimalisir melalui proses sterilisasi peralatan yang akan digunakan sesuai Standard Operational Procedure (SOP). Air sampel diambil sebanyak 1 ml dan ditambahkan  ke  dalam Sedgewick-Rafter  Counting  Cell ,  kemudian  ditutup  dengan slide  glass .  Apabila kelimpahan  sel  terlalu  tinggi,  dilakukan  pengenceran  dengan  akuades.  Kelimpahan  mikroalga  dihitung menggunakan rumus APHA (1989), yaitu:
N = n x V c V src x A src A a x 1 V k (1)
Dimana:
N = Kelimpahan mikroalga (sel/L)
n = Jumlah mikroalga yang diamati
V c = Volume air yang diambil (1 ml)
V src = Volume air dalam Sedgewick-Rafter Counting Cell (1 ml)
A a = Luas total petak Sedgewick-Rafter Counting Cell yang diamati (30 mm 2 ) A src = Luas area Sedgewick-Rafter Counting Cell (1 000 mm 2 ) V k = Volume kultur (6 liter)

## Perhitungan Kelimpahan Total Bakteri
Pengukuran kelimpahan total bakteri dilakukan pada awal dan akhir rancangan percobaan. Kelimpahan total bakteri dengan media PCA atau Plate Count Agar dihitung menggunakan metode Angka Lempeng Total (ALT)  sesuai  SNI  01-2332.3-2006  dengan  pengenceran  sampel  bakteri  secara  bertingkat  dan  penanaman bakteri menggunakan teknik spread plate.

## Metode Analisis Data

## Analisis Perubahan Kadar Nitrat
Persentase perubahan kadar nitrat mengacu pada perhitungan persen perubahan kualitas air (Arifin, 2000), yang dirumuskan sebagai berikut:
E = B−A A x100% (2)
Keterangan:
E  = Persentase perubahan kadar nitrat selama percobaan A  = Kadar nitrat di awal percobaan (mg/l) B   = Kadar nitrat di akhir percobaan (mg/l)

## Laju Nitrifikasi (Nitrification Rate)
Laju  nitrifikasi  dengan  satuan  mg  NH4-N  l-1.jam-1,  indikatornya  adalah  peningkatan  atau  penurunan kadar nitrat, menurut Gilhawley (2008) diestimasikan dalam persamaan sebagai berikut:
Laju nitrifikasi (NH 4 -N l -1 .jam -1 ) = ( C x,NO3 –C 0,NO3 t x )/24 (3)
Keterangan:
C x,NO 3 = Kadar nitrat di waktu ke-x (di akhir percobaan) (mg/l) C 0,NO 3 = Kadar nitrat di waktu ke-0 (di awal percobaan) (mg/l) tx = Waktu ke-x (jam)

## Analisis Sidik Ragam Univariate dan Uji Duncan Multiple Range Test
Analisis  data  pada  rancangan  acak  kelompok  ini  menggunakan  analisis  sidik  ragam univariate ,  untuk menguji  hipotesis  dengan  dua  variabel  atau  lebih.  Analisis  sidik  ragam  pada  penelitian  ini  menggunakan Aplikasi SPSS 25. Model matematik Rancangan Acak Kelompok ini ditunjukkan dalam formula berikut:
Y ij = μ + α i + β j + ε i (4)
Keterangan:
Yij   = Pengaruh pengamatan pada perlakuan ke-i dan waktu ke- j µ   = Rataan umum αi   = Pengaruh perlakuan ke-i βj   = Waktu ke-j ɛij   = Pengaruh acak dari waktu dengan perlakuan (0,σ2)
Uji linearitas atau uji pengaruh dilakukan  untuk mengetahui  hubungan linear antara  variabel dependen dengan setiap variabel independen yang diuji. Uji pengaruh diperoleh dengan membandingkan nilai p - value (signifikansi) dengan α (taraf signifikansi). Jika p - value (α)<0.05, maka dikatakan H 0 ditolak (Djazari et al ., 2013).  Pada  kondisi  demikian,  aplikasi  probiotik  (bakteri  nitrifikasi-denitrifikasi)  dan  kultur  mikroalga Chlorella sp. dapat berpengaruh terhadap kenaikan/penurunan kadar nitrat. Menurut Mattjik dan Sumertajaya (2000), jika kesimpulan uji pengaruh yang didapatkan menolak H 0 , yang dalam hal ini adalah aplikasi probiotik dan  kultur  mikroalga  memberikan  pengaruh  yaitu  berbeda  nyata  terhadap  perubahan  kadar  nitrat,  maka dilakukan uji lanjut, yaitu uji perbandingan berganda Duncan atau Duncan Multiple Range Test (DMRT) untuk menentukan perlakuan mana yang menyebabkan terjadinya penolakan terhadap H 0 . Menurut Persulessy et al . (2016),  uji Duncan Multiple  Range  Test (DMRT)  digunakan  untuk  menguji  beda  nilai  rata-rata  dari  urutan nilai rata-rata tiap perlakuan dari terbesar sampai yang terkecil atau sebaliknya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kelimpahan Bakteri dan Kondisi Kualitas Air Selama Percobaan
Hasil pengukuran kelimpahan bakteri, pH, dissolved oxygen (DO) dan temperatur ditunjukkan pada Tabel 1. Kelimpahan bakteri pada setiap perlakuan menunjukkan bahwa kelimpahan bakteri pada akhir pengamatan lebih tinggi daripada awal pengamatan yang berarti terjadi peningkatan kelimpahan bakteri. Pada perlakuan probiotik (perlakuan A), kelimpahan bakteri meningkat dari 2.6 x 10 4 cfu/ml menjadi 35.3 x 10 4 cfu/ml. Pada perlakuan kombinasi (perlakuan C), kelimpahan total bakteri meningkat dari 3.05 x 10 4 cfu/ml menjadi 23.5 x 10 4 cfu/ml.  Peningkatan  kelimpahan  total  bakteri  hingga  akhir  pengamatan  dipengaruhi  oleh  kandungan oksigen terlarut (DO) yang tinggi, sehingga membantu kinerja bakteri dalam proses nitrifikasi dan denitrifikasi (Cui et  al .,  2019).  Sebaliknya  pada  kondisi  oksigen  terlarut  (DO)  yang  rendah,  pertumbuhan  bakteri  akan menjadi lambat dan dapat menghambat proses nitrifikasi dan denitrifikasi (Chen et al ., 2020).
Tabel 1  Kondisi kualitas air pada perlakuan A (probiotik), B ( Chlorella sp.), C (kombinasi probiotik dan
Chlorella sp.), D (kontrol tanpa perlakuan) Variabel Perlakuan Hari ke- Rata-rata 0 3 6 9 Kelimpahan Bakteri (cfu/ml) A 2.60 x 10 4 - - 35.3 x 10 4 - C 3.05 x 10 4 - - 23.5 x 10 4 - pH A 8.11 8.05 8.13 8.18 8.12 ± 0.05 B 8.00 8.08 8.02 6.64 7.68 ± 0.14 C 7.87 8.05 7.17 6.67 7.44 ± 0.6 D 7.78 8.12 8.13 8.21 8.06 ± 0.02 DO (mg/l) A 11.30 10.55 9.90 9.75 10.38 ± 0.07 B 11.05 10.45 10.00 9.90 10.35 ± 0.14 C 10.9 10.55 10.20 10.05 10.43 ± 0.07 D 10.95 10.75 10.30 10.05 10.51 ± 0.05 Temperatur Air ( ͦ C) A 25.05 25.86 25.75 26.20 25.71 ± 0.13 B 25.30 25.75 25.60 26.10 25.69 ± 0.09 C 25.50 25.55 25.65 26.00 25.68 ± 0.04 D 25.85 25.65 25.70 26.10 25.83 ± 0.07 Temperatur Udara ( ͦ C) 24 24 24 24 24
Variabel pH pada perlakuan C (kombinasi) dan B ( Chlorella sp.) mengalami penurunan pH hingga akhir pengamatan dengan rata-rata pH yang paling rendah  yaitu 7.44±0.6 dan 7.68±0.14, sedangkan perlakuan A (probiotik) dan D (kontrol) relatif mengalami peningkatan dengan rata-rata 8.12±0.05 dan 8.06±0.02. Sebagian besar pH berada pada kondisi optimal berkisar antara 7.9-8.1 (Grunditz dan Dalhammar, 2001). Kandungan oksigen terlarut (DO) setiap perlakuan mengalami penurunan dengan rata-rata tertinggi adalah perlakuan D (kontrol) yaitu 10.51±0.05 mg/l, diikuti dengan perlakuan C (kombinasi) yaitu 10.43±0.07 mg/l, perlakuan A (probiotik) yaitu 10.38±0.07 mg/l dan perlakuan B ( Chlorella sp.) yaitu 10.35±0.14 mg/l. Variabel temperatur memiliki  angka  yang  relatif  homogen  dan  mengalami  peningkatan  hingga  akhir  pengamatan  pada  setiap perlakuan  yaitu  berkisar  antara  25-26 ⁰ C. Kebutuhan  oksigen  terlarut  (DO)  dipenuhi  dengan  adanya  aerasi secara konstan dan temperatur yang dicapai optimal pada 25±1°C (Feng et al ., 2020).
Kelimpahan dan Laju Pertumbuhan Mikroalga Chlorella sp.
Kelimpahan Chlorella sp.  pada  percobaan  pendahuluan,  memiliki  pola  pertumbuhan  yang  meningkat hingga mencapai puncak pada hari ke-6 dengan kelimpahan Chlorella sp. tertinggi sebesar 113 x 10 3 sel/L. Setelah  itu,  kelimpahan Chlorella sp.  mengalami  penurunan  hingga  hari  ke-9  (hari  terakhir)  dengan kelimpahan  terendah  sebesar  8.6  x  10 3 sel/L  (Gambar  3).  Pada  pengamatan  di  hari  pertama  (hari  ke  0), kelimpahan Chlorella sp.  meningkat  secara  drastis  mencapai  43  x  10 3 sel/L  hingga  jam  ke  8,  pada  waktu memasuki  malam  hari.  Peningkatan  kelimpahan Chlorella sp.  secara  drastis  disebabkan  karena  kandungan nutrien yang berasal dari air limbah dan adanya penambahan pupuk Walne. Menurut Sutomo (2005) dalam Boroh et  al .  (2019), pada  awal  pertumbuhan Chlorella sp.  memiliki  laju  pertumbuhan  relatif  tinggi, menandakan bahwa Chlorella sp. cepat memiliki daya adaptasi lingkungan yang baru sehingga dapat tumbuh dengan  cepat.  Pada  pengamatan  berikutnya,  kelimpahan Chlorella sp.  mengalami  penurunan  sebesar  13% hingga  38  x  10 3 sel/L,  yang  menunjukkan  sebagian  kecil Chlorella sp.  tidak  dapat  bertahan  terhadap lingkungan yang baru sehingga Chlorella sp. mengalami pertumbuhan yang lambat (Boroh et al ., 2019).
Gambar 3 Laju pertumbuhan Chlorella sp. pada percobaan pendahuluan
Chlorella sp. mengalami pertumbuhan secara eksponensial mulai hari ke-1 hingga mencapai puncak pada hari  ke-6  dengan  kelimpahan  sebesar  113  x 10 3 sel/L.  Hal  ini  disebabkan  ketersediaan  unsur  hara  nitrogen membuat  pembelahan  sel  masih  terus  berlangsung  hingga  masa  puncak  eksponensial,  dan  menurun  secara signifikan pada hari ke-7 menjadi 38 x 10 3 sel/L. Menurut Fogg (1965) dalam Chilmawati dan Suminto (2008), penurunan  kelimpahan Chlorella sp.  setelah  masa  puncak  disebabkan  karena  berkurangnya  nutrien  diikuti dengan  peningkatan  jumlah  populasi Chlorella sp.,  sehingga Chlorella sp.  tidak  mampu  dalam mempertahankan  kelimpahan  selnya  dan  terjadi  penurunan  secara  drastis.  Selain  itu,  pada  pengamatan ditemukan  adanya  organisme  lain  seperti  zooplankton  yang  merupakan  predator  bagi Chlorella sp.  juga merupakan  faktor  yang  memengaruhi  penurunan  kelimpahan Chlorella sp.  Adanya  kompetisi,  sifat  fisik lingkungan (daya dukung), predasi dan sifat genetik menjadi faktor yang memengaruhi kelimpahan Chlorella sp. yang dalam waktu berbeda akan mengalami penurunan populasi akibat faktor tersebut (Boroh et al ., 2019) Kelimpahan Chlorella sp. pada rancangan percobaan yang dilakukan, menunjukkan bahwa pada setiap perlakuan yang dilakukan pengukuran kelimpahan Chlorella sp. yaitu perlakuan B (mikroalga Chlorella sp.) dan perlakuan C (kombinasi mikroalga dengan probiotik), juga memiliki pola pertumbuhan yang sama seperti pada percobaan pendahuluan yaitu meningkat dari waktu ke waktu pengamatan hingga mencapai hari puncak
(hari  ke-6),  kemudian  menurun  hingga  akhir  pengamatan  (hari  ke-9)  (Gambar  4).  Pada  perlakuan  C, kelimpahan Chlorella sp. mencapai puncaknya pada 114 x 10 3 sel/L, sedangkan pada perlakuan B mencapai puncak pada 109 x 10 3 sel/L, sedikit lebih rendah dari perlakuan C. Kelimpahan Chlorella sp. pada perlakuan C  dan  B  hingga  hari  puncak,  masing-masing  menunjukkan  persentase  kenaikan  sebesar  82.6% dan  81.6%. Kelimpahan terendah terjadi pada hari ke-9, yaitu perlakuan B sebesar 4 x 10 3 sel/L, sedangkan perlakuan C sebesar 4.4 x 10 3 sel/L (Gambar 4). Dari waktu ke waktu pengamatan, kelimpahan Chlorella sp. pada perlakuan C  relatif  lebih  tinggi  daripada  perlakuan  B.  Hal  tersebut  menandakan  bahwa  populasi Chlorella sp.  pada perlakuan C lebih tinggi dibandingkan perlakuan B. Tingginya kelimpahan Chlorella sp. didukung oleh adanya faktor kualitas air terutama temperatur, yang menjadi faktor pembatas untuk organisme air (Cech, 2005 dalam Djoharam et  al .,  2018).  Berdasarkan  hasil  pengamatan  temperatur  air,  menunjukkan  bahwa  temperatur  air memiliki angka yang optimal untuk pertumbuhan mikroalga Chlorella sp. berkisar 25±1°C (Feng et al ., 2020).
Gambar 4 Rancangan percobaan kelimpahan Chlorella sp. pada perlakuan B ( Chlorella sp.) dan C (kombinasi Chlorella sp. dan probiotik)

## Perubahan Kadar Nitrat
Hasil  pengukuran  variabel  nitrat  menunjukkan  bahwa  kadar  nitrat  berbeda-beda  antar  perlakuan.  Pada perlakuan  penambahan  probiotik  (A)  dan  perlakuan  kontrol  (D),  variasi  nitrat  dari  hari  0  hingga  hari  ke  9 memiliki pola yang sama yaitu mengalami penurunan kadar nitrat pada hari ke-3 (Gambar 5). Berbeda dengan perlakuan penambahan mikroalga (perlakuan B) dan kombinasi probiotik dan mikroalga (perlakuan C) yang memperlihatkan pola perubahan yang serupa dengan kenaikan kadar nitrat setiap harinya. Pada perlakuan A dan D, kenaikan kadar nitrat relatif lebih rendah dibandingkan perlakuan B dan C. Hasil perhitungan perubahan kadar nitrat (persamaan 2) menunjukkan bahwa persentase kenaikan kadar nitrat tertinggi adalah perlakuan C (probiotik dan Chlorella sp.) sebesar 1 874%, diikuti perlakuan B dengan 1 664%, perlakuan D sebesar 200% dan terendah adalah perlakuan A sebesar 175%.
Kadar  nitrat  yang  meningkat  secara  signifikan,  sangat  dipengaruhi  oleh  faktor  lain  yang  salah  satunya adalah  pH.  Dalam  penelitian  ini,  pada  saat  angka  pH  menurun  diikuti  oleh  peningkatan  kadar  nitrat  seperti pada perlakuan B (mikroalga Chlorella sp.) dan C (kombinasi probiotik dan mikroalga). Peningkatan senyawa nitrat diduga diakibatkan kenaikan senyawa amonium yang dipengaruhi oleh fluktuasi pH. Senyawa amonium dianggap  sebagai  sumber  nitrogen  yang  hemat  energi  untuk  mikroalga  karena  dalam  penyerapannya membutuhkan lebih sedikit energi dibandingkan nitrat (NO 3 ) (Minhas et al ., 2016). Fluktuasi pH yang terjadi akan  memengaruhi  kesetimbangan  amonia  (NH 3 )  dan  ion  amonium  (NH 4 + )  di  air.  Semakin  tinggi  pH  dan temperatur air akan memungkinkan terbentuknya amonia (NH 3 ) yang bersifat toksik, begitu juga sebaliknya.
Gambar 5 Persentase perubahan kadar nitrat pada perlakuan A (probiotik), B ( Chlorella sp.), C (kombinasi Chlorella sp. dan probiotik), D (kontrol tanpa perlakuan)
Pada perlakuan penambahan probiotik (A) dan kontrol (D), angka pH cenderung meningkat dan berada pada kondisi optimal pH antara 7.9-8.1 (Grunditz dan Dalhammar, 2001). Hal tersebut menandakan bahwa kadar amonia (senyawa amonium) pada perlakuan tersebut meningkat seiring dengan peningkatan pH. Apabila terdapat nitrat dan amonia secara bersamaan, maka nitrat tidak akan diabsorpsi sampai semua amonia habis terserap (Nurhayati et al ., 2014). Sementara itu pada perlakuan C (kombinasi), kondisi pH setelah pengamatan hari  ke  6,  cenderung  menurun  di  bawah  kondisi  optimal  bagi  bakteri  nitrifikasi  dan  denitrifikasi  (pH<7.9), sehingga  pertumbuhan  bakteri  melambat,  karena  pada  pH  rendah  laju  nitrifikasi  terjadi  secara  lambat  dan pertumbuhan bakteri menjadi lebih rendah.
Peningkatan senyawa nitrat juga diduga disebabkan karena pada saat fase lag atau fase adaptasi Chlorella sp.  terhadap  lingkungan  yang  baru,  sebagian Chlorella sp.  tidak  dapat  beradaptasi  terhadap  air  limbah, sehingga sebagian mati dan membentuk nitrogen organik yang menjadi senyawa amonium, kemudian diurai menjadi nitrat oleh bakteri nitrifikasi. Senyawa amonium yang tinggi terbentuk karena proses ionisasi amonia pada pH<7, dan menjadi sumber energi yang lebih disukai oleh Chlorella sp. meskipun senyawa amonia dalam bentuk  ini  bersifat  racun  bagi  mikroalga  (Arifin,  2012).  Peningkatan  kadar  nitrat  secara  drastis  juga  sangat dipengaruhi  oleh  kelimpahan  bakteri.  Hal  ini  ditunjukkan  pada  setiap  perlakuan  dengan  pengukuran kelimpahan total bakteri yaitu perlakuan A (probiotik) dan C (kombinasi probiotik dan mikroalga), memiliki hasil kelimpahan bakteri yang meningkat hingga akhir pengamatan (Tabel 1). Berbeda dengan perlakuan C, perlakuan A (probiotik) memiliki laju nitrifikasi yang paling rendah. Hal tersebut diduga disebabkan karena adanya pengaruh kinerja bakteri denitrifikasi dalam mengurai nitrat menjadi N 2 O dan nitrogen bebas, sehingga kadar nitrat menjadi berkurang yang memengaruhi angka laju nitrifikasi. Sementara itu, pada perlakuan kontrol (D)  laju  nitrifikasi  meningkat  disebabkan  karena  adanya  bakteri  nitrifikasi  yang  berasal  dari  air  limbah  itu sendiri dan dipengaruhi oleh adanya aerasi.
Menurut  Djokosetiyanto et  al .  (2006),  suplai  oksigen  dari  proses  aerasi  dapat  memengaruhi  proses nitrifikasi,  sehingga  jumlah  oksigen  mencukupi  untuk  kebutuhan  proses  merubah  senyawa  amonia  menjadi nitrit  dan  kemudian  nitrat.  Organisme  dalam  air  yaitu  bakteri  heterotrof  dan  bakteri  nitrifikasi-denitrifikasi sangat  membutuhkan  oksigen  untuk  mengoksidasi  senyawa  amonia  menjadi  nitrat  (Kwon et  al .,  2019), sehingga  oksigen  terlarut  pada  setiap  perlakuan  cenderung  mengalami  penurunan  pada  hingga  akhir pengamatan  (Tabel  1).  Hal  tersebut  ditunjukkan  pada  peningkatan  kelimpahan  total  bakteri  hingga  akhir pengamatan yang dipengaruhi oleh kandungan oksigen terlarut (DO). Kandungan DO yang tinggi membantu kinerja bakteri dalam proses nitrifikasi dan denitrifikasi yang mungkin tidak dapat dicapai pada keadaan DO yang rendah yaitu <3 mg/l (Cui et al ., 2019).
Laju Nitrifikasi ( Nitrification Rate )
Laju  nitrifikasi  disebut  juga  sebagai  laju  oksidasi  amonia  atau  amonium  secara  biologis  menjadi  nitrit diikuti  dengan  oksidasi  nitrit  menjadi  nitrat  (Hong et  al .,  2018).  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan, besarnya  laju  nitrifikasi  menunjukkan  besarnya  perubahan  (peningkatan)  kadar  nitrat  pada  waktu  awal pengamatan hingga waktu akhir pengamatan pada setiap perlakuan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa laju nitrifikasi pada 4 perlakuan yang dilakukan memiliki pola yang berbeda-beda (Gambar 6). Kombinasi antara bakteri dan Chlorella sp. (perlakuan C) memperlihatkan laju  nitrifikasi paling tinggi yaitu 0.2 mg NH 4 -N l - 1 .jam -1 , sedangkan laju nitrifikasi paling rendah terjadi pada penambahan probiotik bakteri (perlakuan A) yaitu 0.008  mg  NH 4 -N  l -1 .jam -1 .  Kedua  perlakuan  lainnya  yaitu  perlakuan  B  (penambahan Chlorella sp.)  dan  D (kontrol) masing-masing memiliki laju nitrifikasi 0.169 dan 0.009 mg NH 4 -N l -1 .jam -1 (Gambar 6).
Gambar 6 Laju nitrifikasi pada perlakuan A (probiotik), B ( Chlorella sp.), C (kombinasi Chlorella sp. dan probiotik), D (kontrol tanpa perlakuan)
Perlakuan yang memiliki laju nitrifikasi tertinggi adalah perlakuan C yaitu kombinasi antara bakteri dan Chlorella sp. sebesar 0.2 mg NH 4 -N l -1 .jam -1 atau 0.2 miligram amonium per liter per jam. Hal ini didasarkan pada kadar  nitrat yang meningkat  sebesar 1  874% hingga  akhir pengamatan (Gambar 5).  Nitrat merupakan indikator penentu laju nitrifikasi, dimana semakin banyak terjadi nitrifikasi maka kadar nitrat akan semakin tinggi. Laju nitrifikasi tertinggi yang terjadi pada perlakuan C (kombinasi probiotik dan Chlorella sp.), dapat disebabkan  oleh  adanya Chlorella sp.  Mikroalga Chlorella sp.  memiliki  pengaruh  yang  besar  terhadap peningkatan nitrat. Hal tersebut dikarenakan adanya proses nitrifikasi dan penyerapan terhadap nitrat terjadi sangat sedikit karena mikroalga lebih menyukai bentuk senyawa amonium (NH 4 + ), sehingga penyerapannya lebih tinggi daripada nitrat (Minhas et al ., 2016).
Tabel 2 Hasil analisis sidik ragam dan uji Duncan Multiple Range Test (DMRT) Faktor (Variabel) Keterangan Notasi Signifikansi Perlakuan (P) A (probiotik) a 0.000435 (p<0.05) D (kontrol) a B ( Chlorella sp.) b C (kombinasi A dan B) b Waktu (W) Hari ke-0 a 0.000905 (p<0.05) Hari ke-3 a Hari ke-6 b Hari ke-9 c
Analisis sidik ragam (ANOVA) menggunakan data kadar nitrat yang ditransformasi menjadi logaritma natural  (ln)  menunjukkan  bahwa terdapat  perbedaan  nyata  antar  perlakuan  dan  waktu  (durasi  perlakuan) terhadap  perubahan  (peningkatan)  kadar  nitrat  ( p-value <0.05)  (Tabel  2).  Hasil  uji  lanjut Duncan  Multiple Range Test (DMRT), menunjukkan angka rata-rata tertinggi terdapat pada perlakuan C (kombinasi probiotik dan mikroalga Chlorella sp.), diikuti dengan perlakuan B (mikroalga Chlorella sp.), perlakuan D (kontrol) dan terendah adalah perlakuan A (probiotik) (Tabel 2). Pada variabel waktu (W) rata-rata tertinggi terdapat pada hari ke-9, diikuti dengan hari ke-6, hari ke-3 dan terendah adalah hari ke-0 (Tabel 2). Hal tersebut menunjukkan bahwa  perlakuan  C  (kombinasi)  dan  waktu  ke-9  adalah  perlakuan  dan  waktu  yang  memiliki  perubahan (peningkatan)  kadar  nitrat  paling  tinggi  karena  memiliki  rata-rata  tertinggi.  Hasil  tersebut  dipengaruhi  oleh peningkatan  kadar  nitrat  pada  setiap  perlakuan  hingga  akhir  pengamatan.  Kadar  nitrat  yang  sangat  tinggi menandakan bahwa kadar amonium yang terkandung dalam air cukup tinggi, dimana sebagian besar amonium mengalami  proses  nitrifikasi  karena  ada  donor  oksigen  yang  berasal  dari  aerasi  (Riffiani,  2009)  dan  dari mikroalga sebagai penghasil oksigen bagi bakteri nitrifikasi (Jia dan Yuan, 2016).
Proses  nitrifikasi  yang  terjadi  menyebabkan  senyawa  amonium  dan  nitrit  secara  signifikan  berubah menjadi nitrat, sehingga menyebabkan terjadinya akumulasi nitrat yang tinggi (Riffiani, 2009). Sementara itu, akumulasi nitrat berbanding terbalik dengan penyerapan kadar nitrat oleh mikroalga dan bakteri yang terjadi. Hal tersebut terjadi karena mikroalga lebih menyukai senyawa berbentuk amonium (NH 4 + ) karena lebih sedikit energi  yang  dikeluarkan  dalam  penyerapannya  daripada  penyerapan  senyawa  nitrat  (Minhas et  al .,  2016). Mikroalga  lebih  mengutamakan  penyerapan  senyawa  amonium  dibandingkan  dengan  penyerapan  senyawa bentuk nitrat, karena penyerapan amonium dapat melalui membran sel secara langsung, sedangkan untuk nitrat harus dilakukan proses translokasi ion terlebih dahulu karena membran tidak bersifat permeabel untuk nitrat (Riffiani, 2009). Mikroalga memiliki pengaruh yang sangat besar terhadap peningkatan senyawa nitrat, terlihat dari perlakuan yang memiliki rerata paling tinggi yaitu perlakuan kombinasi probiotik dan mikroalga (C) dan pelakuan Chlorella sp.  (B),  yang  keduanya  merupakan  perlakuan  dengan  adanya  penambahan  mikroalga Chlorella sp.,  berbeda  dengan  perlakuan  A  (probiotik)  dan  perlakuan  D  (kontrol)  yang  tanpa  adanya penambahan Chlorella sp.
Hubungan  mikroalga Chlorella sp.  dengan  bakteri  nitrifikasi-denitrifikasi  dapat  dikatakan  sangatlah kompleks.  Konsorsium  mikroalga  dengan  bakteri  dapat  membentuk  hubungan  yang  berlangsung  secara sinergis. Mikroalga Chlorella sp. dapat menghasilkan berbagai zat organik yang dapat diasimilasi oleh bakteri secara langsung serta menghasilkan oksigen untuk kebutuhan bakteri dalam proses nitrifikasi (Jia dan Yuan, 2016).  Di  dalam  proses  fotosintesis  untuk  menghasilkan  oksigen,  mikroalga Chlorella sp.  menyerap  CO 2 sehingga meningkatkan penyerapan amonium dan konsentrasi ion OH - serta banyak melepaskan ion H + (Knud- Hansen, 1998 dalam Jia dan Yuan, 2016), dimana melimpahnya ion hidrogen yang terlepas dapat menurunkan pH  (Le et  al .,  2018).  Hubungan  bakteri  dan  mikroalga Chlorella sp.  memiliki  kesamaan,  hal  itu  karena pelepasan ion hidrogen sama halnya pada proses fotosintesis (mikroalga) juga terjadi pada proses nitrifikasi (bakteri), yaitu saat terjadinya oksidasi amonia (amonium) menjadi nitrit (Le et al ., 2018).

## KESIMPULAN
Laju nitrifikasi pada setiap perlakuan memiliki pola yang berbeda-beda tetapi relatif meningkat hingga akhir pengamatan. Laju nitrifikasi tertinggi terjadi pada perlakuan C (kombinasi probiotik dan Chlorella sp.) yaitu 0.2 mg NH 4 -N l -1 .jam -1 , diikuti perlakuan B ( Chlorella sp.), D (kontrol), dan A (probiotik) masing-masing sebesar 0.169, 0.009 dan 0.008 mg NH 4 -N l -1 .jam -1 . Persentase perubahan (peningkatan) kadar nitrat dari awal hingga akhir pengamatan dari yang tertinggi secara berurutan yaitu perlakuan C sebesar 1 874%, perlakuan B sebesar 1 664%, D sebesar 200% dan perlakuan A sebesar 175%. Hasil analisis sidik ragam dan uji DMRT menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antar perlakuan dan waktu terhadap perubahan kadar nitrat ( p-value <0.05) dengan rata-rata perubahan (peningkatan) kadar nitrat tertinggi terdapat pada perlakuan C dan hari ke- 9.

## DAFTAR PUSTAKA
[APHA]  American  Public  Health  Association.  1989. Standar  Methods  for  The  Examination  of  Water  and Wastewater. Washington DC (US): American Public Control Federation.
[EPA]  Environmental  Protection  Agency.  1974. Methods  for  Chemical  Analysis  of  Water  and  Wastes . Washington DC (US): EPA.
[LIPI] Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. 2015. Eutrofikasi Penyebab Kematian Massal Ikan [Internet].
[diunduh 2020 Jan 12]. Tersedia pada: http://lipi.go.id/.
Adyasari D, Oehler  T, Afiati N, Moosdorf N. 2018. Groundwater  nutrient inputs into an  urbanized tropical estuary system in Indonesia. Science of the Total Environment . 627(1): 1066-1079.
Agustiyani  D,  Imamuddin  H,  Gunawan  E,  Darusman  LK.  2007.  Proses  nitrifikasi  oleh  kultur  mikroba penitrifikasi N-Sw dan zeolit. Jurnal Ilmiah Nasional . 8(5): 405-411.
Al-Mamoori SOH, Al-Yaseen BM, Jabuk SIA, Kamil ZS, Jawad ZF, Naji OM. 2020. Bioremediation by using the  microalgae Chlorella  vulgari s  to  remove  phosphate  and  nitrite  from  the  domestic  waste  water treatment plant in Iraq. The Journal of Research on the Lepidoptera . 51(1): 660-668.
Arifin F. 2012. Uji kemampuan Chlorella sp. sebagai bioremidiator limbah cair tahu [tesis]. Malang (ID): UIN Maliki Malang.
Arifin M. 2000. Pengolahan limbah hotel berbintang [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Boroh R, Litaay M, Umar MR, Ambeng. 2019. Pertumbuhan Chlorella sp. pada beberapa kombinasi media kultur. BIOMA: Jurnal Biologi Makassar . 4(2): 129-137.
Carritt DE, Kanwisher JW. 1959. Electrode system for measuring dissolved oxygen. Anal Chem 31: 5-9. Chen H, Wang Q. 2020. Microalgae-based nitrogen bioremediation . Algal Research . 46: 10-17 .
Chen Z, Jiang Y, Chang Z, Wang J, Song X, Huang Z, Chen S, Li J. 2020. Denitrification characteristics and pathways  of  a  facultative  anaerobic  denitrifying  strain, Pseudomonas  denitrificans G1 .  Journal  of Bioscience and Bioengineering. 30: 1-8.
Chilmawati D, Suminto. 2008. Penggunaan media kultur yang berbeda terhadap pertumbuhan Chlorella sp. Jurnal Saintek Perikanan . 4(1): 42-49.
Cui B, Yang Q, Liu X, Huang S, Yang Y, Liu Z. 2019. The effect of dissolved oxygen concentration on long- term stability of partial nitrification process . Journal of Environmental Sciences . 30: 1-9 .
Cytryn E, Levkovitch I, Negreanu Y, Dowd S, Frenk S, Silber A. 2012. Impact of short-term acidification on nitrification  and  nitrifying  bacterial  community  dynamics  in  soilless  cultivation  media. Appl  Environ Microbiol . 78(18): 6576-6582.
Djazari M, Rahmawati D, Nugroho MA. 2013. Pengaruh sikap menghindari risiko sharing dan knowledge self- efficacy terhadap informal knowledge sharing pada mahasiswa FISE UNY. Jurnal Nominal . 2(2): 181- 209.
Djoharam  V,  Riani  E,  Yani  M.  2018.  Analisis  kualitas  air  dan  daya  tampung  beban  pencemaran  Sungai Pesanggrahan di wilayah Provinsi DKI Jakarta. Jurnal Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan 8(1): 127-133.
Djokosetiyanto  D,  Sunarma  A,  Widanarni.  2006.  Perubahan  ammonia  (NH 3 -N),  nitrit  (NO 2 -N)  dan  nitrat (NO 3 -N)  pada  media  pemeliharaan  ikan  nila  merah  ( Oreochromis sp.)  di  dalam  sistem  resirkulasi. Jurnal Akuakultur Indonesia . 5: 13-20.
Feng P, Xu Z, Qin L, Alam AM, Wang Z, Zhu S. 2020. Effects of different nitrogen sources and light paths of flat  plate  photobioreactors  on  the  growth  and  lipid  accumulation  of Chlorella sp.  GN1  outdoors.
Bioresource Technology . 301: 1-9.
Gilhawley  F.  2008.  Factors  governing  nitrification  in  an  activated  sludge  system  treating  a  pharmaceutical wastewater [tesis]. Dublin (IE): Dublin City University.
Grunditz  C,  Dalhammar  G.  2001.  Development  of  nitrification  inhibition  assays  using  pure  cultures  of
Nitrosomonas and Nitrobacter . Water Research . 35(2): 433-440.
Herlambang A, Marsidi R. 2003. Proses denitrifikasi dengan sistem biofilter untuk pengolahan air limbah yang mengandung nitrat. J Tek Ling . 4(1): 46-55.
Hong Y, Wang Y, Wu J, Jiao L, He X, Wen X, Chang X. 2018. Developing a mathematical modeling method for  determining  the  potential  rates  of  microbial  ammonia  oxidation  and  nitrite  oxidation  in environmental samples. International Biodeterioration & Biodegradation . 133: 116-123.
Ikhsan MK, Rudiyanti S, Ain C. 2020. Hubungan antara nitrat dan fosfat dengan kelimpahan fitoplankton di Waduk Jatibarang Semarang. MAQUARES . 9(1): 23-30.
Jia  H,  Yuan  Q.  2016.  Removal  of  nitrogen  from  wastewater  using  microalgae  and  microalgae–bacteria consortia. Cogent Environmental Science . 2(1): 1-15.
Karangan  J,  Sugeng,  B,  Sulardi.  2019. Uji  keasaman  air  dengan  alat  sensor  pH  di  STT  Migas  Balikpapan. Jurnal Keilmuan Teknik Sipil . 2(1): 65-72.
Kwon G, Kim H, Song C, Jahng D. 2019. Co-culture of microalgae and enriched nitrifying bacteria for energy- efficient nitrification. Biochemical Engineering Journal. 152: 1-54.
Le TTH, Fettig J, Meon G. 2018. Kinetics and simulation of nitrification at various pH values of a polluted river in the tropics. Ecohydrology & Hydrobiology . 118: 1-12.
Lihawa  F,  Mahmud  M.  2017.  Evaluasi  karakteristik  kualitas  air  Danau  Limboto. Jurnal  Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan. 7(3): 260-266.
Lomas MW, Lipschultz F. 2006. Forming the primary nitrite maximum: nitrifiers or phytoplankton?. Limnol Oceanogr . 51(5): 2453-2467.
Ma X, Zhou W, Fu Z, Cheng Y, Min M, Liu Y, Ruan R. 2014. Effect of wastewater-borne bacteria on algal growth and nutrients removal in wastewater-based algae cultivation system. Bioresource Technology . 167: 8-13.
Martinez S, Alvarez S, Marin MR, Delgado DMM. 2019. Food consumption contribution to nitrogen pollution of cities in Northern and Southern Europe. Sustainable Cities and Society . 50: 1-10.
Mattjik AA, Sumertajaya M. 2000. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab . Bogor (ID): IPB Press.
Minhas AK, Hodgson P, Barrow CJ, Adholeya A. 2016. A review on the assessment of stress conditions for simultaneous production of microalgal lipids and carotenoids. Front Microbiol . 7: 1-19.
Nurhayati C, Hamzah B, Pambayun R. 2014. Pengaruh pH, konsentrasi isolat Chlorella vulgaris dan waktu pengamatan terhadap tingkat cemaran limbah cair crumb rubber. Jurnal Dinamika Penelitian Industri . 25(2): 97-106.
Paul  I, Panigrahi  AK, Datta  S. 2020. Influence of nitrogen cycle bacteria on  nitrogen mineralisation,  water quality and productivity of freshwater fish pond: A review. Asian Fisheries Science . 33: 145-160. Persulessy ER, Lembang FK, Djidin H. 2016. Penilaian cara mengajar menggunakan rancangan acak lengkap (studi kasus: Jurusan Matematika FMIPA UNPATTI). Jurnal Ilmu Matematika dan Terapan . 10(1): 9- 16.
Prabowo R. 2017. Kadar nitrit pada sumber air sumur di Kelurahan Meteseh, Kec. Tembalang, Kota Semarang.
Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta . 1(1): 55-61.
Prayitno  J.  2015.  Pola  pertumbuhan  dan  pemanenan  biomassa  dalam  fotobioreaktor  mikroalga  untuk penangkapan karbon. Jurnal Teknologi Lingkungan . 17(1): 45-52.
Riffiani R. 2009. Peningkatan kualitas akuakultur menggunakan teknologi biofilter mikroalga imobil. Biosfera 26(3): 124-130.
Rusdiani RR, Boedisantoso R, Hanif M. 2016. Optimalisasi teknologi fotobioreaktor mikroalga sebagai dasar perencanaan strategi mitigasi gas CO 2 . Jurnal Teknik ITS . 5(2): 2337-3539.
Rustadi.  2009.  Eutrofikasi  nitrogen  dan  fosfor  serta  pengendaliannya  dengan  perikanan  di  Waduk  Sermo.
Jurnal Manusia dan Lingkungan . 16(3): 176-186.
Suprianto,  Redjeki  ES,  Dadiono  MS.  2019.  Optimalisasi  dosis  probiotik  terhadap  laju  pertumbuhan  dan kelangsungan hidup ikan nila ( Oreochromis niloticus ) pada sistem bioflok. Journal of Aquaculture and Fish Health . 8(2): 80-86.
Suswanti I, Sutamihardja RTM, Arrisujaya D. 2019. Potensi senyawaan nitrogen dan fosfat pada pencemaran Sungai Ciliwung hulu Kota Bogor. Jurnal Sains Natural Universitas Nusa Bangsa . 9(1): 11-21. Taziki M, Hossein A, Marcia AM. 2015. Growth of Chlorella vulgaris in high concentrations of nitrate and nitrite for wastewater treatment. Current Biotechnology . 4(3): 1-7.
Zulfia N, Aisyah. 2013. Status trofik Perairan Rawa Pening ditinjau dari kandungan unsur hara (NO 3 dan PO 4 ) serta klorofil-a. BAWAL 5(3): 189-199.