## EFEKTIVITAS DAYA HAMBAT EKSTRAK MENGKUDU (MORINDA CITROFOLIA L.) TERHADAP PERTUMBUHAN LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS: STUDI IN VITRO

## INHIBITORY EFFECTIVENESS OF NONI (MORINDA CITROFOLIA L.) EXTRACT ON GROWTH OF LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS: IN VITRO STUDY
Meyrisa Bastari 1 * , Dhandi Wijaya 2 , Ismalayani 3
1,2,3 Jurusan Kesehatan Gigi Poltekkes Kemenkes Palembang, Indonesia
*Email: meyrisabastari@yahoo.co.id Diterima: 05 Januari 2023 Direvisi: 06 Januari 2023 Disetujui: 06 Januari 2023

## ABSTRAK
Latar  belakang: Karies  gigi  merupakan  penyakit  jaringan  keras  gigi  yang  sampai  saat  ini  belum  dapat disembuhkan.  Namun,  proses  perburukan  akibat  penyakit  ini  bisa  diantisipasi  dengan  menambal  atau menghilangkannya.  Upaya  pencegahan  terhadap  penyakit  ini  harus  dapat  mengintervensi  setidaknya  salah  satu faktor penyebab karies, salah satunya adalah Lactobacillus acidophilus. Buah mengkudu (Morinda citrofolia L.) yang merupakan tanaman endemik di Indonesia termasuk Sumatera Selatan, mengandung scopoletin yang bersifat bakteriostatik terhadap Lactobacillus dan dapat mencegah perlekatan Lactobacillus acidophilus pada pelikel yang didapat pada permukaan gigi sehingga mengurangi resiko penyakit gigi. karies.
Tujuan: Untuk  mengetahui  daya  hambat  ekstrak  mengkudu  (Morinda  citrofolia  L.)  terhadap  Lactobacillus acidophilus.
Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen dengan rancangan post test-only control group design. Ekstrak  mengkudu  pada  konsentrasi  20%,  40%,  dan  80%  diuji  daya  hambatnya  terhadap  pertumbuhan Lactobacillus  acidophilus  pada  media  agar  de  Man  Rogosa  Sharpe  (MRS)  dengan  yodium  1%  sebagai  kontrol positif dan alkohol 70% sebagai kontrol negatif. kontrol. Data dianalisis menggunakan uji One-Way Anova. Hasil: Ekstrak mengkudu pada konsentrasi 20%, 40%, dan 80% efektif menghambat pertumbuhan Lactobacillus acidophilus dengan rata-rata zona hambat masing-masing 7,2 mm, 8,3 mm, dan 11,2 mm. Ekstrak mengkudu 80% bahkan lebih efektif menghambat pertumbuhan Lactobacillus acidophilus dibandingkan kontrol positif.
Simpulan: Ekstrak  mengkudu  pada  konsentrasi  20%,  40%,  dan  80%  efektif  menghambat  pertumbuhan Lactobacillus acidophilus.
Kata kunci: Ekstrak mengkudu (Morinda citrofolia L.); Lactobacillus acidophilus; daya hambat

## ABSTRACT
Background: Dental caries is a disease of the hard tissues of the teeth which until now cannot be cured. However, the process of worsening due to this disease can be anticipated by patching or removing it. Preventive measures against  this  disease  must  be  able  to  intervene  in  at  least  one  of  the  factors  causing  caries,  one  of  which  is Lactobacillus acidophilus. Noni fruit (Morinda citrofolia L.) which is  an endemic plant in Indonesia, including South Sumatra, contains scopoletin which is bacteriostatic against Lactobacillus and can prevent the attachment of Lactobacillus acidophilus to the acquired pellicle on the tooth surface, thereby reducing the risk of dental caries. Objective: To determine the inhibition of noni extract (Morinda citrofolia L.) against Lactobacillus acidophilus. Methods: This is an experimental study with a post test-only control group design. Noni extracts at concentrations of  20%,  40%,  and  80%  were  tested  for  their  inhibition  on  the  growth of  Lactobacillus  acidophilus  on  de  Man Rogosa Sharpe (MRS) agar media with 1% iodine as a positive control and 70% alcohol as a negative control. Data were analyzed using One-Way Anova test. Noni extract at concentrations of 20%, 40%, and 80% effectively inhibited the growth of Lactobacillus acidophilus with an average zone of inhibition of 7.2 mm, 8.3 mm, and 11.2 mm, respectively. Noni extract 80% was even more effective in inhibiting the growth of Lactobacillus acidophilus than the positive control.
Conclusion: Noni extract at a concentration of 20%, 40%, and 80% effectively inhibits the growth of Lactobacillus acidophilus.
Keywords: Noni extract (Morinda citrofolia L.); Lactobacillus acidophilus; inhibition

## PENDAHULUAN
Karies gigi merupakan penyakit pada jaringan keras gigi yang hingga saat ini tidak dapat disembuhkan. Namun proses perburukan  akibat  penyakit  ini  dapat diantisipasi  dengan  penambalan  ataupun pencabutan.  Karies  merupakan  penyakit dengan etiologi multifaktorial. Karies dapat terjadi bila faktor-faktor penyebabnya saling berinteraksi.  Adapun  faktor  yang  dapat menyebabkan karies antara lain: faktor agen (mikroorganisme), host (struktur  gigi  dan saliva),  substrat  (makanan),  serta  waktu yang tidak sebentar. 1–3
Karies gigi sangat banyak ditemukan dan  memiliki  dampak  negatif  pada  kualitas hidup  anak-anak  serta  merupakan  masalah kesehatan masyarakat yang utama di seluruh dunia. 4 Diperkirakan  hampir  3,5  miliar orang di dunia mengalami penyakit mulut. 5
Sekitar 2,4 miliar atau 36% penduduk dunia mengalami  karies  gigi  pada  gigi  tetapnya. 1
Lebih  dari  530  juta  anak  kehilangan  gigi sulung  karena  karies  gigi. 5 Menurut  data Riskesdas  tahun  2018,  sebanyak  57,6% penduduk  Indonesia  memiliki  masalah  gigi dan mulut. Prevalensi karies gigi pada anak- anak umur 3-4 tahun di Indonesia mencapai 81,5%.  Setengah  dari  75  juta  balita Indonesia  mengalami  karies  gigi  dan jumlahnya  bertambah  terus  dari  tahun  ke tahun. 6 Lactobacillus acidophilus merupakan  salah  satu  bakteri  penting  yang terdapat  di  dalam  saluran  pencernaan, vagina,  dan  rongga  mulut. 7 Walaupun keberadaan Lactobacillus dapat menghambat  pertumbuhan bakteri patogen dalam mulut, seperti Aggregatibacter actinomycetemcomitans ,
Prevotella intermedia ,  dan Porphyromonas  gingivalis , melalui pembentukan asam laktat yang dapat
menurunkan  pH  saliva  dan  pelepasan hidrogen  peroksida, 7 Lactobacillus diduga merupakan agen utama penyebab karies gigi karena  bakteri  ini  banyak  ditemukan  pada karies dan kemampuannya membentuk asam serta  mampu  bertahan  pada  pH  di  bawah 4,5. 3 Lactobacillus berperan  dalam  proses perkembangan  dan  kelanjutan  karies  gigi yang  telah  diinisiasi  terlebih  dahulu  oleh bakteri
Streptococcus mutans . 3,8
Streptococcus  mutans dan Lactobacillus acidophilus di dalam rongga mulut menghasilkan  asam  laktat  dari  gula  yang difermentasikan sehingga menyebabkan pH plak  menurun,  jika  penurunan  pH  terjadi secara  terus-menerus  akan  menyebabkan demineralisasi pada permukaan gigi. 3
Karena  penyakit  ini  menjangkiti sebagian besar masyarakat Indonesia, maka dipandang  perlu  untuk  melakukan  tindakan pencegahan  agar  tidak  terjangkit  penyakit karies  gigi.  Tindakan  pencegahan  terhadap karies  gigi  haruslah  dapat  mengintervensi paling tidak satu dari faktor penyebab karies. Saat  ini banyak produk  yang diklaim dapat mencegah  karies  gigi  beredar  di  pasaran. Hanya saja kebanyakan dari produk tersebut berasal dari bahan kimia buatan pabrik yang tentunya  menimbulkan  efek  samping  bila digunakan  dalam  jangka  waktu  yang  lama. Oleh  karena  itu,  penting  untuk  mencari alternatif  produk  yang  terbuat  dari  bahan alam  sehingga  dapat  meminimalkan  efek samping. Buah mengkudu ( Morinda citrofolia  L. )  telah  lama  dimanfaatkan mengingat manfaatnya yang beragam. Buah mengkudu  ( Morinda  citrifolia  L )  adalah tanaman yang mengandung subtansi bioaktif seperti fenolik, asam organik, dan alkanoid. Komponen-komponen  yang  terkandung dalam  mengkudu  ( Morinda  citrifolia  L ) memiliki aktivitas biologi seperti antibakterial,
antifungi, antiviral,
antihelmintik, antioksidan,
hepatoprotective , antiobesitas
dan hipoglikemik,  analgesik, anxiolytic ,  anti- inflamasi, hipotensif, aktivitas kardiovaskuler,  estrogenik,  immunologis, dan anti-kanker. 8

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan  rancangan  penelitian post  test-only  control  group design  yang dilakukan
di Jurusan
Teknologi Laboratorium  Medik  Poltekkes  Palembang pada  bulan  Desember  2021.  Sampel penelitian  adalah koloni Lactobacillus acidophilus  yang  tumbuh  pada  media de
Man  Rogosa  Sharpe  agar .  Jumlah  sampel untuk tiap-tiap konsentrasi ekstrak mengkudu  dan  kontrol  sebanyak  3  media koloni Lactobacillus
acidophilus .
Perhitungan  besar  sampel  untuk  setiap perlakuan  ditentukan  dengan  menggunakan rumus Federer:
(t–1) (n–1) ≥ 15
Keterangan: t = banyaknya   perlakuan n = banyaknya sampel
Pada  penelitian  ini  digunakan  5 kelompok perlakuan, yaitu perlakuan dengan ekstrak mengkudu 20%, 40%, 80%, kontrol  positif,  dan  kontrol  negatif,  dengan pengulangan  sebanyak  3  kali  sehingga didapatkan total sebanyak 15 kali perlakuan, maka jumlah sampel minimal yang diperlukan:
(15-1) (n-1) > 15
14n – 14 > 15
14n > 29 n > 2,07

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstraksi etanol buah mengkudu ( Morinda citrofolia L. ) dilakukan di laboratorium Loka Kesehatan Tradisional Masyarakat  Palembang  dengan  konsentrasi 20%, 40%, dan 80%. Pengujian daya hambat pertumbuhan Lactobacillus acidophilus yang terbentuk pada media de Man Rogosa Sharpe  agar dilakukan  di  laboratorium jurusan  Teknologi  Laboratorium  Medik Poltekkes Palembang. Diameter zona hambat pertumbuhan Lactobacillus acidophilus pada masing kelompok perlakuan terlihat pada Tabel 1.
Tabel  1. Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat pertumbuhan Lactobacillus acidophilus yang  terbentuk  pada  media de  Man  Rogosa Sharpe agar
Diameter zona hambat (mm) Kontrol negatif (mm) Kontrol positif (mm) Diameter zona hambat tiap konsentrasi ekstrak mengkudu (mm) 20% 40% 80% I 6,0 8,0 7,2 8,0 11,2 II 6,0 8,0 7,0 8,5 11,3 III 6,0 8,0 7,5 8,3 11,0 Rata-rata 6,0 8,0 7,2 8,3 11,2
Tabel 1 menunjukkan diameter zona hambat  masing-masing  konsentrasi  ekstrak mengkudu  pada  media de  Man  Rogosa Sharpe agar (MRSA) yang telah ditumbuhkan bakteri Lactobacillus acidophilus .  Rata-rata  zona  hambat  ekstrak mengkudu 80% pada media de Man Rogosa Sharpe  agar (MRSA)  sebesar  11,2  mm, lebih  besar  dibandingkan  rata-rata  zona hambat  pada  konsentrasi  20%  (7,2  mm), 40% (8,3 mm), kontrol negatif (6,0 mm), dan kontrol positif (8,0 mm).
Tabel 2. Uji normalitas data
Uji Kolmogorov-Smirnov Asymp. Sig. (2- tailed). Zona hambat ekstrak mengkudu 0,053
Tabel 2 menunjukkan bahwa dari hasil uji normalitas  menunjukkan  data  memiliki distribusi normal  (p> 0,05), sehingga dapat dilakukan analisis homogenitas dan uji One- Way Anova .
Tabel 3. Uji varians data
Uji varians Sig. Zona hambat ekstrak mengkudu 0,058
Tabel 2 menunjukkan bahwa semua data pada  penelitian  ini  memiliki  varian  yang sama (p>0,05), sehingga dapat dilakukan uji O ne-Way Anova.
Tabel 4. Uji One-Way Anova
Uji One-Way Anova Sig. Kelompok perlakuan ekstrak mengkudu 0,000 Tabel 4 menunjukkan hasil uji O ne- Way Anova terhadap masing-masing kelompok perlakuan dengan ekstrak mengkudu.  Dari  hasil  uji One-Way  Anova didapatkan nilai p= 0,000 (<0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaaan bermakna rata-rata zona hambat tiap-tiap  konsentrasi  ekstrak  mengkudu terhadap  bakteri Lactobacillus  acidophilus pada  media de  Man  Rogosa  Sharpe  agar (MRSA).  Selanjutnya,  untuk  mengetahui perbedaan antar kelompok perlakuan, maka dilanjutkan uji post-hoc seperti terlihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Uji post hoc
Ekstrak mengkudu 20% Ekstrak mengkudu 40% Ekstrak mengkudu 80% Kontrol negatif  Kontrol positif Ekstrak mengkudu 20% - 0.000* 0,000* 0,000* 0,003* Ekstrak mengkudu 40% 0.000* - 0,000* 0,000* 0,887 Ekstrak mengkudu 80% 0,000* 0,000* - 0,000* 0,000* Kontrol negatif 0,000* 0,000* 0,000* - 0,000* Kontrol positif 0,003* 0,887 0,000* 0,000* -
Hasil  uji post  hoc menunjukkan bahwa  pada  konsentrasi  ekstrak  mengkudu 20% dan 80% memiliki perbedaan bermakna rata-rata diameter zona hambat Lactobacillus  acidophilus dibandingkan konsentrasi 20%, 40%, kontrol negatif, dan kontrol positif (p< 0,05). Sedangkan ekstrak mengkudu  40%  tidak  memiliki  perbedaan bermakna  rata-rata  diameter  zona  hambat Lactobacillus  acidophilus dibandingkan dengan  kontrol  positif  (p>0,05),  namun
berbeda  secara  bermakna  dibandingkan ekstrak  mengkudu  20%,  80%,  dan  kontrol negatif.
Dari penelitian yang telah dilakukan, terlihat bahwa ekstrak mengkudu 80%, 40%, dan  20%  efektif  menghambat  pertumbuhan bakteri Lactobacillus  acidophilus .  Hal  ini dimungkinkan terjadi karena adanya kandungan  flavonoid  dan  fenolat  yang bersifat  antimikroba. 9 Mengkudu  juga mengandung skopoletin yang bersifat
bakteriostatik terhadap
Lactobacillus acidophilus . Skopoletin merupakan coumarin dan  merupakan  agen  anti- inflamasi  dan  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan. 10 Scopoletin dapat memengaruhi  ekspresi  sitokin  inflamasi melalui  penghambatan  faktor  transkripsi nuclear factor (NF)-ĸβ yang mengakibatkan penghambatan  produksi  atau  sekresi  dari sitokin-sitokin  pro-inflamasi. 11 Hal  inilah yang  menginduksi  efek  bakteriostatik  dari ekstrak mengkudu.
Efektivitas  daya  hambat  ekstrak mengkudu  ( Morinda  citrofolia  L. )  80% terhadap Lactobacillus  acidophilus lebih besar dibandingkan ekstrak mengkudu 40%, 20%, alkohol 70%, bahkan bila dibandingkan.  Iodine  yang  merupakan antiseptik  spektrum  luas  yang  dapat menekan pertumbuhan bakteri-bakteri penyebab karies melalui mekanisme penghancuran  fungsi  sel  dan  struktur membran  sel  dari  bakteri.  Penelitian
Masadeh dkk. (2013) 12 dan
Venkataraghavan dkk. (2008) 13 menyatakan bahwa  penggunaan  povidon  iodin  dengan konsentrasi 1% mampu mengurangi jumlah bakteri  asidogenik  walaupun  efektivitas iodine  1%  sebagai  antibakteri  masih  lebih rendah dibandingkan klorheksidin.

## SIMPULAN
Ekstrak mengkudu ( Morinda citrofolia  L. )  80%,  40%,  dan  20%  efektif menghambat pertumbuhan bakteri Lactobacillus acidophilus . Pada konsentrasi 80%, efektivitas ekstrak mengkudu ( Morinda  citrofolia  L. )  bahkan  lebih superior  dibandingkan  iodine  1%  dalam menghambat  pertumbuhan Lactobacillus acidophilus .  Perlu  dilakukan  penelitian
lanjutan  untuk  mengetahui  konsentrasi ekstrak  mengkudu  ( Morinda  citrofolia  L. ) yang menghasilkan daya hambat paling baik terhadap pertumbuhan Lactobacillus acidophilus . Walaupun mengkudu ( Morinda citrofolia  L. )  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan Lactobacillus  acidophilus , namun  menjaga  kebersihan  gigi  dan  mulut tetap  merupakan  upaya  terbaik  dalam mencegah karies gigi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis menyampaikan ucapan terima  kasih  yang  sebesar-besarnya  kepada Bapak  Muhammad Rio Gumay,  AMF dari Loka  Kesehatan  Tradisional  Masyarakat Palembang  dan  kepada  Ibu  Handayani, AMAK,  ST,  MT.  dari  Jurusan  Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Palembang, yang telah banyak membantu dan memfasilitasi penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Yadav  K,  Prakash  S.  Dental  Caries:  A Review. Asian  J  Biomed  Pharm  Sci 2016;6(53):1–7.
2.   Shitie  A,  Addis  R,  Tilahun  A,  Negash  W. Prevalence  of  Dental  Caries  and  Its Associated  Factors  among  Primary  School Children in Ethiopia. Int J Dent 2021;2021.
3.   Ahirwar SS, Gupta MK, Snehi SK.  Dental Caries and Lactobacillus: Role and Ecology in  the  Oral  Cavity. Int  J  Pharm  Sci  Res 2019;10(11):4818–29.
4.   Dixit  LP,  Shakya  A,  Shrestha  M,  Shrestha A.  Dental  caries  prevalence,  oral  health knowledge  and  practice  among  indigenous Chepang  school  children  of  Nepal. BMC Oral Health 2013;13(1):1–5.
5.   WHO. Oral  health .  Geneva,  Switzerland:
2020.
6.   Balitbang Kemenkes RI. Laporan Nasional Riskesdas 2018 . Jakarta: 2019. 7.   Karpinski TM, Szkanadkiewics AK.
Microbiology of dental caries. J Biol Earth Sci 2013;3(1):21–4.
8.   Kurniawan D, Widodo E, Djunaidi IH. The Effect  of  Noni  (Morinda  citrifolia)  Fruit Meal  as  Feed  Additive  on  Intestinal
Microfloras  and  Villi  Characteristics  of Hybrid Duck. Bul Peternak 2016;40(1):34– 9.
9.   Kurniawan  D.  Aktivitas  antimikroba  dan antioksidan  ekstrak  tepung  daun  dan  buah mengkudu (Morinda citrifolia). J Ilmu-Ilmu Peternak 2018;28(2):105.
10.  Abou  Assi  R,  Darwis  Y,  Abdulbaqi  IM, Khan  AA,  Vuanghao  L,  Laghari  MH. Morinda citrifolia (Noni): A comprehensive review on its industrial uses, pharmacological  activities,  and  clinical
trials. Arab J Chem 2017;10(5):691–707.
11.  Hassanein  EHM,  Sayed  AM,  Hussein  OE, Mahmoud  AM.  Coumarins  as  Modulators of the Keap1/Nrf2/ARE Signaling Pathway. Oxid Med Cell Longev 2020;2020. 12.  Masadeh. Antimicrobial Activity of Common Mouthwash Solutions on Multidrug-Resistance  Bacterial  Biofilms . J Clin Med Res 2013;5(5):389–94.
13.  Neeraja  R,  Anantharaj  A,  Praveen  P, Karthik  V,  Vinitha  M.  The  effect  of povidone-iodine  and  chlorhexidine  mouth rinses  on  plaque  Streptococcus  mutans count in  6- to  12-year-old school  children: An in vivo study. J Indian Soc Pedod Prev Dent 2008;26(SUPPL. 5).