## POTENSI IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL BUAH
KECOMBRANG( Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) TERHADAP AKTIVITAS FAGOSITOSIS MAKROFAG MENCIT JANTAN GALUR BALB/C
Wahyuni 1) , Muh.Hajrul Malaka 1) , Adryan Fristiohady 1) , Muhammad Ilyas Yusuf 1) , Sahidin 1)
1) Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo Kendari Sulawesi Tenggara Email : wahyunimipa@gmail.com

## ABSTRACT
Kecombrang  (Etlingera  elatior  (Jack)  R.M.  Smith)  has  been  used  as  traditional  medicine and food ingredient empirically. This research was conducted to find out the influence of the ethanol fruit extracts of Etlingera elatior against the activity of macrophage phagocytosis. Various dose of the ethanol  fruit  extracts  of  Etlingera  elatior  were  given  orally  to  male  mice  strain  Balb/c  with  each extract  (100,  200,  300  or  400  mg/kg).  As  positive  control,  0,13  mg/kg  of  Phyllanthus  niruri  Linn extract  (Stimuno)  was  used  and  0.5%  Carboxymethylcellusoe  Sodium  as  negative  control.  Extracts were  given  for  seven  day  and  on  the  eighth  day  all  mice  were  injected  by  Staphylococcus  aureus intraperitoneally.  The  activity  of  macrophage  cels  was  counted  by  smear  of  periotenal  fluid.  The higher  dosage  of  the  extract,  the  more  number  of  macrophage  phagocytosis  activity  from  36.50% (Carboxymethylcellusoe  Sodium),  45.75%  (100mg/kg),  59.70%  (200mg/kg),  61%  (300  mg/kg)  and 71,25% (400 mg/kg). The result showed that 300 mg/kg and 400 mg/kg of the ethanol fruit extracts of Etlingera elatior caused a significant immunomodulatory effect compare to the activity of Stimuno to increasing  the  activity  of  cell  macrophage  phagocytosis  by  statistical  tests  post  hoc  TUKEY  (sig  > 0.05).
Keywords : Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith., Macrophage, Immunomodulator

## ABSTRAK
Kecombrang  ( Etlingera  elatior (Jack)  R.M.  Smith)  secara  empiris  telah  digunakan  dalam pengobatan  dan  sebagai  bahan  pangan.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian  ekstrak  etanol  buah  kecombrang  terhadap  daya  fagositosis  makrofag.  Sediaan  uji  berupa ekstrak  etanol  buah  kecombrang  yang  diberikan  secara  oral  terhadap  mencit  jantan    galur  Balb/C dengan  dosis  100mg/KgBB,  200mg/KgBB,  300mg/KgBB  dan  400mg/KgBB.  Eksrak Phyllanthus niruri Linn.(Stimuno®)  dosis  0,13  mg/gBB  digunakan  sebagai  kontrol  positif  dan  NaCMC  0,5% sebagai  kontrol  negatif.  Ekstrak  diberikan  sejak  hari  pertama  hingga  ketujuh.  Pada  hari  kedelapan masing-masing  mencit  diinjeksikan    bakteri Staphylococcus  aureus (SA)  secara  intraperitoneal. Aktivitas sel makrofag dihitung dari apusan cairan peritoneum. Peningkatan dosis ekstak etanol buah kecombrang  meningkatkan  jumlah  aktivitas  fagositosis  makrofag  dari  36,50%  (Na  CMC),  45,75% (100mg/kgBB),  59,70%  (200mg/kgBB),  61%  (300mg/kgBB),  71,25%  (400mg/kgBB).  Hasil menunjukan bahwa ekstrak etanol buah kecombrang memiliki potensi sebagai imunomodulator pada dosis  300  mg/kgBB  dan  400  mg/kgBB  dengan  efektivitas  yang  tidak  berbeda  jauh  dengan  stimuno dalam  meningkatkan  aktivitas    fagositosis  sel  makrofag  hasil  uji  statistik post  hoc TUKEY  (sig.  > 0,05).
Kata kunci : Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith., Makrofag, Imunomodulator

## PENDAHULUAN
Sistem  pertahanan  tubuh  atau disebut juga dengan sistem imun merupakan sistem yang bertanggung jawab melindungi  tubuh  dari  benda-benda  asing yang  masuk  sehingga  fungsi  tubuh  tidak terganggu.  Sistem  kekebalan  tubuh  ini terdiri  dari  dua  sistem,  yaitu  imun  alami (non  spesifik)  dan  imun  spesifik.  Sistem imun  non  spesifik  merupakan  pertahanan pertama  terhadap  mikroorganisme  atau benda  benda  asing  yang  masuk  dalam tubuh  Salah  satu  upaya  yang  dilakukan sistem imun non-spesifik dalam mempertahankan  diri  terhadap  masuknya antigen  yaitu  dengan  cara  menghancurkan antigen  melalui  proses  fagositosis.Proses fagositosis  yang  efektif  pada  invasi mikroorganisme  dini  dapat  mencegah timbulnya  penyakit  (Masurin  dan  Chairul, 2012).
Sel-sel yang berperan dalam memfagositosis  antigen  antara  lain  sel makrofag.  Makrofag  merupakan  fagosit profesional,  yang  bertanggung  jawab dalam  memusnahkan  sel  yang  terinfeksi patogen  intraseluler  dimana  aktivitas fagositosis  makrofag  dapat  ditingkatkan dengan
zat-zat
yang bersifat imunomodulator(Akrom dkk, 2015).  Imunomodulator  adalah  substansi atau  obat  yang  dapat  memodulasi  fungsi dan  aktivitas  sistem  imun.  Senyawa- senyawa  yang  dapat  memodulasi  sistem imun dapat diperoleh dari tanaman.
Kecombrang  merupakan  salah  satu family Zingiberacea dan merupakan tanaman asli  Indonesia.  Buah  kecombrang dikenal dengan nama wualae oleh masyarakat  di  daerah  Konawe  Sulawesi tenggara sebagai bahan penyedap masakan.  Selain  itu  secara  empiris  di kabupaten Kolaka Utara Sulawesi tenggara
buah wualae juga digunakan sebagai  obat dalam  pemulihan  penyakit  demam  tifoid. E.elatior mengandung  senyawa  bioaktif seperti  polifenol,  alkaloid,  flavonoid, steroid, saponin dan minyak atsiri(Handayani  dkk,  2014).  Sampai  saat ini  belum  ada  penelitian  mengenai  efek imunomudulator buah kecombrang. Berdasarkan uji pendahuluan yang dilakukan  dengan  menggunakan  ekstrak etanol  buah  kecombrang  pada  dosis 100mg/kgBB menunjukan adanya peningkatan aktivitas fagositosis makrofag pada mencit jantan  yang diinduksi dengan bakteri S.aureus .

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat  dalam  penelitian  ini  adalah Rotary  evaporator  (Buchi ® ),  autoklaf, blender  (Philips),  erlenmeyer  (Pyrex), timbangan  analitik  (Precisa ® ),  gelas  ukur (Pyrex ® ),  gelas  kimia,  oven  ( Gallenkamp Civilab-Australia ),  inkubator,  botol  vial, neraca analitik (Stuart), Laminar Air Flow (LAF)  bunsen,  pipet  tetes,  pipet  ukur, tabung  reaksi  ,  batang  pengaduk,  kertas saring, botol gelap, toples, cawan porselin, kaca  objek,  kaca  preparat,  mikroskop elektrik,  spektrofotometer  20  D,  kuvet, stirrer, pinset dan pisau bedah, elelktromantel,  ose  bulat,  spoit,  kandang mencit.  Bahan  dalam  penelitian  ini  adalah buah kecombrang ( Etlingera elatior (Jack) R.M  Smith),  mencit  jantan  galur  Balb/C, Staphylococus aureus , kapas, tissue, aluminium  foil,  etanol  96%,  alkohol  70%, metanol,  aquadest,  Na-CMC  0,5%,  NaCl fisiologis, phosphate buffered saline (PBS),  eter,  pewarna  giemsa,  minyak emersi, nutrient agar (NA), ekstra meniran komersional (Stimuno ® ).

## ProsedurKerja

## Penyiapan Simplisia Buah kecombrang
Buah  kecombrang  dikumpulkan, dikeringkan  dengan  cara  dijemur  dibawah sinar  matahri  yang  dilapisi  kain  hitam kemudian  dihaluskan  hingga  diperoleh serbuk simplisia.

## Pembuatan ekstrak buah kecombrang
Sebanyak 1,8 Kg dimasukan kedalam  wadah  tertutup  dan  direndam dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96% selama  3  x  24  jam.  Perbandingan  1:2 (jumlah  pelarut  yang  digunakan  dua  kali dari  jumlah  serbuk  halus  tanaman).  Setiap 1  x  24  jam  dilakukan  penyaringan  dan penggantian pelarut baru sehingga diperoleh  filtrat  I,  II,  dan  III.  Filtrat dikumpulkan  dan  dipekatkan  dengan penguapan  berputar  menggunakan  rotary vacum  evaporator  pada  suhu  50 o C  hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak ditimbang untuk mengetahui bobotnya.

## Penyiapan hewan uji
Hewan uji  yang digunakan adalah mencit  jantan  sehat  galur  Balb/C  dengan berat 20-30g. Hewan uji diberi makan dan minum,  dan  diaklitimasi  selama  7  hari sebelum melakukan percobaan 5 . Hewan uji dikelompokan menjadi 6 kelompok dimana  setiap  kelompok  terdiri  dari  5 hewan uji.

## Pemberian bahan uji
Kelompok  hewan  uji  terdiri  dari kelompok perlakuan (dosis 100 mg/kg BB, dosis 200 mg/kg BB, dosis 300 mg/kg BB, dosis  400  mg/kg  BB),  kelompok  kontrol positif  (ekstrak  meniran  komersial ® )  dosis 0,13mg/KgBB  dan  kelompok  kontrol negatif (Na.CMC 0,5%). Perlakuan
dilakukan setiap 1 hari sekali selama 7 hari secara  peroral  sesuai  dengan  volume pemberian.
Penyiapan bakteri uji
Bakteri uji yang digunakan
Staphylococcus aureus (SA) yang ditanam
pada  media  agar  nutrien  miring  dan diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  35- 37 0 C 8 .  Bakteri S.  aureus yang  telah diinkubasi  selama  24  jam,  disuspensikan dalam  NaCl  fisiologis  0,9%.  Kekeruhan bakteri  diukur  sesuai  dengan  standar  Mc Farlan 0,5.

## Uji fagositosis
Pada  hari  kedelapan  setiap  mencit diinfeksi  dengan  0,5  mL  suspensi  bakteri SA  dan  secara  intraperitoneal,  dibiarkan selama  satu    jam.  Mencit  dianastesi dengan  eter  lalu  dibedah  perutnya  dengan menggunakan  gunting  bedah  dan  pinset steril.  Jika  ditemukan  cairan  peritoneum dalam  jumlah  sedikit  pada  perut,  maka ditambahkan  larutan Phosphat  buffered saline (PBS) pH 7,8 steril sebanyak 1-2ml, kemudian  diambil  cairan  peritoneum dengan  spoit  1  cc.    Cairan  peritoneal dipulas  pada  gelas  obyek  dan  difiksasi dengan metanol selama 5 menit, kemudian diwarnai  dengan  pewarnaan  Giemsa  10%, didiamkan  20  menit,  dibilas  dengan  air mengalir. Setelah sediaan kering, dilihat di bawah  mikroskop  menggunakan  minyak emersi dengan perbesaran (10x–
100x)(Nugroho, 2012). Menghitung Aktivitas

## Fagositosis Makrofag
Aktivitasimunostimulan  ditentukan dengan  menghitung  aktivitas  fagositosis sel  makrofag  peritonium  mencit.  Nilai aktivitas fagositosis (SPA) adalah persentase  sel  makrofag  yang  aktif melakukan proses fagositosis di antara 100 sel makrofag(Masurin dan Chairul, 2012).
Aktivitas
fagositosis = Analisis Data Untuk mengetahui
adanya
perbedaan  pengaruh  ekstrak  etanol  buah wualae dari  berbagai  dosis  terhadap aktivitas fagositosis sel makrofag digunakan  uji  ANOVA  satu  arah  yang dilanjutkan dengan uji Tukey .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Peningkatan aktivitas makrofag ditandai  dengan  bentuk  dan  ukuran makrofag  yang  bertambah  besar  dengan penjuluran pseudopodi yang sangat bervariasi.  Fagosomnya  muncul  membran yang  menjadi  lebih  berliku-liku,  lisosom menjadi  lebih  banyak,  aparat  golgi membesar dan retikulum endoplasma kasar berkembang Gambar 1.
Gambar 1: Apusan darah tipis perbesaran 1000x (A) Makrofag aktif,
(B) Makrofag tidak aktif
Nilai  aktivitas  fagositosis  makrofag peritoneum  mencit  dapat  dihitung  dari makrofag yang aktif melakukan fagositosis diantara  100  jumlah  sel  yang  dinyatakan dalam bentuk persen.
Adapun grafik peningkatan aktivitas fagositosis  dapat  dilihat  pada  Gambar  2 .

## Gambar 2: Grafik peningkatan aktivitas fagositosis sel makrofag
Berdasarkan  grafik  diatas  dapat  dilihat bahwa  aktivitas  fagositosis  makrofag semakin meningkat seiring dengan peningkatan  dosis  sediaan.  Pada  dosis 400mg/kgBB menunjukan persen aktivitas fagositosis  tertinggi  yaitu  sebesar  71.25% yang  lebih  tinggi  dari  kelompok  kontrol positif  sebesar  63.75%. Hasil  uji  skrining fitokimia buah wualae menunjukan bahwa buah wualae memiliki kandungan senyawa flavonoid. Flavonoid
memiliki kemampuan meningkatkan sistem imunomodulator  dengan  meningkatkan efektivitas proliferasi limfokin yang
dihasilkan  oleh  sel  T  sehingga  akan merangsang sel–sel fagosit untuk melakukan  respon  fagositosis  (Santoso dkk,  2013).  Pada  penelitian  sebelumnya telah terbukti bahwa flavonoid meningkatkan  aktivasi  sel  efektor  seperti limfosit, makrofag yang memproduksi dan melepaskan sitokin, interleukin IL-1; IL-6; IL-12;  tumor  nekrosis  faktor  alpha  (TNF alpha).    Dosis  flavonoid  yang  lebih  tinggi membuat  sel  leukosit  (fagosit)  lebih  aktif terhadap  sel  bakteri  fagosit,  dan  lebih banyak  bakteri  yang  dapat  dirusak  dan
0,00% 50,00% 100,00% 36,00% 63,75% 46%  59,70% 61,00% 71,25% Persen Aktivitas K.Nega tif K.Posit if K.Neg atif K.Pos itif D.100
dicerna  dengan  sel  leukosit  (Zalizar,
2013).
Tabel 1 . hasil uji post hoc Tukey
Kelompok Perbandingan Dosis 100mg/KgBB Dosis 200mg/KgBB Dosis 300mg/KgBB Dosis 400mg/KgBB K (+) K(-) Dosis 100mg/KgBB - -14.000(*) -15.250(*) -25.500(*) -18.000(*) 9.25 Dosis 200mg/KgBB 14.000(*) - -1.25 -11.500(*) -4 23.250(*) Dosis 300mg/KgBB 15.250(*) 1.25 - -10.250(*) -2.75 24.500(*) Dosis 400mg/KgBB 25.500(*) 11.50000(*) 10.250(*) - 7.5 34.750(*) K (+) 18.000(*) 4.00000 4 2.75 - 27.250(*) K(-) -9.25 -23.250(*) -24.500(*) -34.750(*) 27.250(*)
Keterangan :
* Perbedaan bermakna dengan sig < 0,05
Data hasil uji post hoc Tukey Tabel 1  menunjukan  pada  dosis  200mg/KgBB,
300mg/KgBB  dan  400mg/KgBB  tidak berbeda  signifikan  dengan  kelompok kontrol  positif,  yang  artinya  pada  dosis 200mg/KgBB,
300mg/KgBB dan 400mg/KgBB  memiliki  aktivitas  yang sama  dengan  kontrol  positif  ekstrak P.niruri L. Namun pada dosis
400mg/kgBB  menunjukan  peningkatan aktivitas yang lebih baik dibanding dengan dosis  200mg/kgBB,  300mg/kgBB,  dan kontrol positif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwaaktivitas  fagositosis makrofag  semakin  meningkat    dengan peningkatan dosis sediaan. Pada dosis 400 mg/kgBB  menunjukkan  persen  aktivitas fagositosis  tertinggi  yaitu  sebesar  71.25%. Kandungan  senyawa  flavonoid  diduga memiliki kemampuan meningkatkan sistem imunomodulator dengan meningkatkan efektivitas proliferasi limfokin  yang  dihasilkan  oleh  sel  T sehingga  akan  merangsang  sel–sel  fagosit untuk melakukan respon fagositosis.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  Kementrian  Riset,  Teknologi  dan Pendikan  Tinggi  yang  telah  mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Aldi,  Y.,  Rasyadi,  Y.,  dan  Handayani,  D., 2014,  Aktivitas  Imunomodulator dari Ekstrak Etanol Meniran (Phyllanthus  niruri  Linn.)  terhadap Ayam Broiler, Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 1(1): 20-26. Akrom,  Widjaya,  A.,  dan  Armansyah,  T., 2015,  Ekstrak  Etanol  Biji  Jintan Hitam (Nigella sativa) Meningkatkan Aktivitas Fagositosis Makrofag Mencit
Swiss  Yang  Diinfeksi  Lysteria monocytogenes, Jurnal Kedokteran
Hewan , 9(2): 94-100.
Chairul dan Praptiwi, 2011, Uji Efektivitas
Imunomodulator Tiga jenis Zingiberaceae Secara In-Vitro Melalui  Pengukuran  Aktivitas  Sel Makrofag Dan Kapasitas Fagositosis, Jurnal Botani , 2(1).
Handayani,  V.,  Ahmad,  A.R.,  dan  Sudir,
M., 2014, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Bunga dan Daun Patikala (Etlingera  elatior  (Jack)  R.M.Sm) Menggunakan Metode DPPH, Pharmaci Science Research ,
1(2): 86-93.
Masurin,  S.,  Chairul,  2012,  Efek  Ekstrak
Air  Dan  Alkohol  Pada  Siwak (Salvadora  Persica  L.)  Terhadap Peningkatan Aktivitas Dan Kapasitas Fagositosis Sel Makrofag, Media Litbang Kesehatan , 22(1): 38-44.
Nugroho,  Y.A.,  2012,  Efek  Pemberian Kombinasi Buah Sirih (Piper Betle L) Fruit, Daun Miyana ( Plectranthus  scutellarioides (L.) R.  BR.)  Leaf,  Madu  Dan  Kuning Telur Terhadap Peningkatan Aktivitas Dan Kapasitas Fagositosis  Sel  Makrofag, Media Litbang Kesehatan , 22(1) :1-5.
Santoso,  T.A,  Diniatik,  dan  Kusuma, A.M.,  2013,  Efek  Imunostimulator
Ekstrak Etanol Daun Katuk ( Sauropus  androgynus L  Merr) Terhadap Aktivitas Fagositosis Makrofag, Pharmacy, 10(1): 63-70. Tasia,  W.R.N.,  dan  Widyaningsih,  T.D.,
2014, Potensi Cincau Hitam ( Mesona  Palustris Bl.),  Daun Pandan  ( Pandanus  amaryllifolius ) Dan  Kayu  Manis  ( Cinnamomum burmannii )  Sebagai  Bahan  Baku
Minuman Herbal Fungsional, Jurnal Pangan dan Agroindustri , 2 (4): 128-136.
Zalizar, Lili, 2013, Flavonoids of Phylanthus Niruri as Immunomodulators  A  Prospect  to Animal Disease Control, Journal of Science and Technology , 3(5): 529- 532.