ISSN: 0215-7950 Volume 18, Nomor 4, Juli 2022 Halaman 145–152 DOI: 10.14692/jfi.18.4. 145–152

## Viabilitas dan Daya Hambat Bakteri Endofit Pseudomonas fluorescens
4RS1 terhadap Phytophthora palmivora dalam FormulaTepung
Viability and Inhibition of Endophytic Bacteria Pseudomonas fluorescens 4RS1 Against

## Phytophthora palmivora in Flour Formula
Andi Khaeruni * , Hariyani, Waode Siti Anima Hisein, Vit Neru Satrah, Teguh Wijayanto, Gusti Ayu Kade Sutariati, Muhammad Taufik Universitas Halu Oleo, Kendari, 93232

## ABSTRAK
Pseudomonas fluorescens 4RS1 merupakan bakteri endofit yang memiliki daya hambat kuat terhadap Phytophthora palmivora sehingga potensial dikembangkan sebagai agens hayati penyakit busuk buah pada kakao. Agar aplikasi agens hayati ini dapat dilakukan oleh petani maka diperlukan suatu formula yang mampu mempertahankan viabilitas dan daya hambatnya, serta memudahkan penggunaannya. Penelitian ini bertujuan menentukan kemampuan talk dan tepung tapioka sebagai bahan dasar formula yang dilengkapi bahan tambahan nutrisi supaya mampu mempertahankan viabilitas dan daya hambat P. fluorescens 4RS1. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan tepung tapioka sebagai bahan dasar formula P.  fluorescens 4RS1 lebih baik dibandingkan dengan talk karena memiliki daya larut yang tinggi dan endapan yang rendah. Penambahan nutrisi berupa gula merah, pepton, dan CMC dalam formula tepung tapioka mampu mempertahankan viabilitas dan daya hambat P. fluorescens 4RS1 selama 12 minggu masa penyimpanan.
Kata kunci: agens hayati, medium pembawa, penyakit busuk buah kakao, umur simpan

## ABSTRACT
Pseudomonas  fluorescens 4RS1 is an endophytic bacterium that has good inhibition against Phytophthora palmivora , and it has the potential to be developed as a biological agent for black pod rot disease in cocoa. It is necessary to have a formulation that can maintain viability and inhibition and facilitate its use and application, to apply this bacterial agent at the farm level. This study aimed to determine the ability of talc and tapioca flour as the ingredients of formulations that have strong solubility and maintain the viability and inhibition of P.  fluorescens 4RS1. The results showed that the use of tapioca flour as the basis for the formulation of P. fluorescens 4RS1 was better than talc because it had high solubility and low precipitation. The addition of nutrients in the form of brown sugar, peptone, and CMC in the tapioca flour formulation was able to maintain the viability and inhibition of P. fluorescens 4RS1 for 12 weeks of storage.
Keywords: biological agents, carrier medium, cocoa pod rot disease, shelf life
*Alamat penulis korespondensi: Program Studi Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Halu Oleo. Jalan H.E.A Mokodompit Gedung D3 Lantai 2. Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu. Kendari, Sulawesi Tenggara  93232.
Tel: +62401-3193596, Surel: andikhaeruni.uho@gmail.com

## PENDAHULUAN
Phytophthora  palmivora merupakan cendawan penyebab penyakit busuk buah, kanker batang dan busuk pucuk, penyakit hawar daun, serta busuk akar di persemaian (Azis et al . 2013).  Infeksi P. palmivora pada buah dapat mengakibatkan kehilangan hasil sebesar 64.1% (Adomako 2007).  Secara global patogen ini menyebabkan kehilangan hasil sebesar 20% sampai 30% (ICCO 2015). Salah satu alternatif pengendalian P. palmivora yang aman dan ramah lingkungan ialah menggunakan agens hayati bakteri endofit.  Pratama et  al. (2013) melaporkan bakteri  endofit Pseudomonas  fluorescens dan Bacillus  subtilis mampu menghambat P.  palmivora secara in  vitro sebesar 69.5% sampai  72.8%.  Filtrat  bakteri  endofit  BC2 asal buah kakao sehat memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan P.  palmivora 95% secara in  vitro (Sijabat et  al . 2021). Arini et  al .  (2021)  melaporkan  bakteri  endofit P. fluorescens 4RS1 memiliki daya hambat 70% terhadap perkembangan P.  palmivora yang diinokulasikan pada buah kakao di laboratorium. Lebih lanjut dikemukakan bahwa kemampuan daya hambat tersebut berkaitan dengan kemampuan bakteri menghasilkan protease, enzim pendegredasi sel. Untuk memudahkan distribusi dan aplikasi  bakteri  endofit  sebagai  agens  hayati secara luas maka perlu bentuk formula yang dapat menjaga viabilitas bakteri selama masa simpan. Preservasi bakteri dapat dilakukan menggunakan bahan pembawa tepung, seperti talk dan tepung tapioka. Tepung tapioka merupakan bahan pembawa terbaik untuk P. fluorescens dengan tingkat viabilitas cukup tinggi dan dapat disimpan selama delapan minggu (Advinda 2009). Muis et  al . (2015) melaporkan bahwa jumlah sel bakteri B. subtilis TM4 pada bahan pembawa talk memiliki kerapatan cukup tinggi, yakni rata- rata 99 × 10 5 cfu mL -1 . Formulasi dilakukan dengan menambahkan nutrisi berupa urea (Mugiastuti et  al. 2010), glukosa sebagai sumber makanan tambahan bagi bakteri (Hanudin et al . 2010), dan CMC
sebagai sumber kalsium (Alfiah et al . 2014). Peneliti ini bertujuan menentukan viabilitas dan daya hambat bakteri endofit P. fluorescens 4RS serta daya larut formula produk berbahan dasar talk dan tepung tapioka dengan beberapa tambahan nutrisi.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini disusun dalam rancangan acak lengkap yang terdiri atas enam perlakuan bahan pembawa produk, yaitu: T1, 50 g talk + 1.5 g gula merah; T2, 50 g talk + 1.5 g gula merah  + 1 g pepton + 1 g CMC; T3, 50 g talk + 1.5 g gula merah  + 0.5 g urea + 1 g CMC; T4, 50 g tepung tapioka+ 1.5 g gula merah; T5, 50 g tepung tapioka + 1.5 g gula merah + 1 g pepton + 1 g CMC; dan T6, 50 g tepung tapioka  + 1.5 g gula merah  + 0.5 g urea + 1 g CMC. Setiap perlakuan diulang sebanyak tiga kali sehingga terdapat 18 unit percobaan.
Bakteri  Endofit Pseudomonas  fluorescens dan Phytophthora palmivora Bakteri  endofit P.  fluorescens 4RS1 dan P.  palmivora PPKT  yang digunakan dalam penelitian merupakan koleksi Labororium Proteksi Tanaman, Universitas Halu Oleo. Peremajaan bakteri P.  fluorescens 4RS1 dilakukan pada medium triptic soy agar (TSA) selama dua hari, sedangkan P.  palmivora dilakukan pada medium V4 selama tujuh hari.
Uji Daya Hambat Bakteri Endofit terhadap Phytophthora palmivora Secara in Vitro Uji daya hambat bakteri P.  fluorescens 4RS1 terhadap P. palmivora PPKT dilakukan menggunakan metode biakan ganda. Uji ini diulang tiga kali. Phytophthora  palmivora diinokulasikan pada medium V4 dalam cawan petri dengan jarak 3 cm dari tepi cawan berdiameter 9 cm. Satu hari kemudian biakan bakteri  endofit  digoreskan  melintang  secara berlawanan dengan P. palmivora yang berjarak 3 cm dari tepi cawan petri yang sama (Gambar 1 a dan b). Cawan biakan diinkubasi selama tujuh hari untuk diamati daya hambat setelah diinokulasi bakteri endofit. Daya hambat (DH) bakteri endofit P. fluorescens 4RS1 terhadap P. palmivora dihitung dengan rumus:
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Khaeruni et al. DH = R1 – R2 R1 × 100%, dengan
R1, jari-jari pertumbuhan P. palmivora ke arah tepi petri (mm); R2, jari-jari pertumbuhan P. palmivora ke arah tepi koloni bakteri endofit (mm) (Khaeruni et al . 2019). Selain itu, juga diamati struktur hifa cendawan P. palmivora.
Bahan Pembawa Bakteri Endofit Bahan pembawa yang digunakan ialah talk dan tepung tapioka serta bahan tambahan lainnya ialah gula merah halus, urea, pepton, dan CMC. Bahan pembawa yang dibuat ialah sebanyak enam formula produk. Semua bahan pembawa sesuai perlakuan dicampur secara merata kemudian dikemas di dalam plastik tahan panas, disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 120 ℃. Formula didinginkan dalam laminar  air  flow selama 48 jam, kemudian disimpan dalam kotak plastik berukuran 25 × 15 × 10 cm 3 pada suhu ruang.
Formulasi  Bakteri  Endofit  dalam  Bahan Pembawa Bakteri  endofit P.  fluorescens 4RS1 berumur 48 jam pada medium TSA disiapkan sebagai suspensi pada kerapatan 10 8 cfu mL -1 atau setara dengan OD 1 pada panjang gelombang 540 nm (Arini et  al . 2021). Sebanyak 10 mL suspensi sel bakteri endofit dimasukkan ke dalam setiap kemasan bahan pembawa dan dicampur secara merata. Kemasan keenam formula bahan pembawa yang sudah diinokulasi dengan bakteri endofit diinkubasi di dalam kotak simpan pada suhu ruang selama 12 minggu. Setiap formula diulang sebanyak tiga kali. Kemasan perlakuan ini dinamakan produk T1, T2, T3, T4, T5, dan T6.
Uji Fisik Produk Uji fisik produk T1, T2, T3, T4, T5, dan T6 merujuk pada Suwahyono dan Wahyudi (2008) yang dimodifikasi pada nutrisi tambahannya. Uji ini meliputi dua peubah pengamatan, yaitu daya kelarutan produk dalam air dan pengendapan produk. Uji kelarutan dilakukan satu minggu setelah penyimpanan produk. Sebanyak 1 g produk dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang berisi 200 mL akuades, lalu digoyang perlahan-lahan selama dua menit,
dan didiamkan untuk diamati daya kelarutan produk.
Daya larut produk dalam air diamati meng- gunakan empat kriteria, yaitu: 1, sediaan larut sempurna setelah digoyang selama 2 menit; 2, kriteria 1 tidak dicapai, sediaan larut sempurna setelah dilakukan pengocokan ulang selama 2 menit; 3, hanya > 50% saja produk yang larut setelah dikocok ulang selama 2 menit; dan 4, hanya sedikit atau tidak larut sama sekali setelah dilakukan pengocokan ulang selama 2 menit (Suwahyono dan Wahyudi 2008). Pengendapan produk dilakukan dalam erlenmeyer 500 mL yang diisi 1 g produk ditambah 100 mL akuades steril (suhu 30 ℃, pH 7), lalu botol digoyang perlahan-lahan selama dua menit, didiamkan untuk diamati terjadinya pengendapan secara sempurna. Endapan ditimbang dan ditentukan persentase endapan dengan rumus Suwahyono dan Wahyudi (2008):
Endapan = Bobot endapan yang terbentuk Bobot produk formula yang diuji × 100%
Uji  Viabilitas  Bakteri  Endofit    dalam Produk T Uji viabilitas bakteri endofit dalam enam produk T1, T2, T3, T4, T5, dan T6 dilakukan dengan menumbuhkannya pada medium TSA. Sebanyak 1 g bahan pembawa yang mengandung  bakteri  endofit P.  fluorescens 4RS1 dibiakkan pada medium TSA. Koloni bakteri yang tumbuh pada medium TSA digunakan untuk menghitung viabilitas bakteri P.  fluorescens 4RS1 yang ada dalam produk T. Viabilitas bakteri diamati setiap 2 minggu selama 12 minggu penyimpanan dengan cara menghitung koloni bakteri dengan rumus:
Viabilitas bakteri = A (B × C) , dengan
A, jumlah total koloni (cfu g -1 ); B, volume yang disebar ke cawan petri; dan C, faktor pengenceran.
Uji  Daya  Hambat  Bakteri  Endofit  dalam Produk T terhadap Phytophthora  palmivora Biakan bakteri P.  fluorescens 4RS1 dari uji viabilitas pada setiap waktu pengamatan diuji daya hambatnya terhadap P.  palmivora menggunakan metode biakan ganda.
Pengamatan daya hambatnya dilakukan pada umur enam hari setelah inokulasi menggunakan rumus Khaeruni et al. (2019). Pengamatan mikroskopis dilakukan untuk melihat  pengaruh  bakteri  endofit  terhadap struktur hifa P. palmivora. Data  viabilitas  bakteri  endofit  dan  daya hambat bakteri endofit dianalisis menggunakan analisis ragam. Jika analisis ragam berbeda nyata maka dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan pada taraf α 5%.

## HASIL
Daya Hambat Bakteri Endofit Daya hambat bakteri endofit P. fluorescens 4RS1 terhadap pertumbuhan miselium cendawan P. palmivora ialah sebesar 64.44%. Penghambatan miselium P.  palmivora oleh bakteri  endofit P.  fluorescens 4RS1 ditandai dengan terbentuknya zona hambatan (Gambar 1a dan b). Pembengkakan hifa P.  palmivora dapat diamati secara mikroskopi pada koloni cendawan yang dipasangkan pada metode biakan ganda (Gambar 1c).

## Daya Larut dan Endapan Produk
Produk formula endofit P. fluorescens 4RS1 memiliki daya larut yang lebih tinggi pada pada medium pembawa tepung tapioka (produk T4, T5, dan T6) dibandingkan dengan daya larut pada medium pembawa talk (produk T1, T2, dan T3). Perlakuan dengan medium pembawa tepung tapioka, daya larutnya tergolong ke dalam kategori 2, sedangkan produk dengan medium pembawa talk termasuk ke dalam kategori 3 (Tabel 1).
Formula  bakteri  endofit P.  fluorescens 4RS1 dengan medium pembawa tepung tapioka memiliki persentase endapan yang lebih rendah dibandingkan dengan formulasi talk. Rata-rata persentase endapan terendah ialah pada produk T5 dan T6 masing-masing sebesar 46.67%, sedangkan endapan tertinggi terdapat pada produk T2 dengan endapan sebesar 60% (Tabel 2).

## Viabilitas Bakteri Endofit Produk T
Formula yang menggunakan tepung dan bahan nutrisi tambahan yang berbeda berpengaruh nyata terhadap viabilitas bakteri endofit P.  fluorescens 4RS1. Populasi P. fluorescens 4RS1 pada produk T5 dan T6 dengan tepung tapioka meningkat sampai 6 minggu masa simpan, namun mulai pada minggu ke-8 sampai minggu ke-12 mulai menurun. Rata-rata populasi P.  fluorescens 4RS1 pada produk T5 selalu lebih tinggi dibandingkan dengan produk lainnya. Pada masa simpan minggu ke-12, kisaran populasi P.  fluorescens 4RS1 relatif stabil dengan populasi 1.53 × 10 8 cfu g -1 dan berbeda nyata dengan produk lainnya (Tabel 3).
Daya Hambat Bakteri Endofit Produk T Penggunaan bahan pembawa dan bahan tambahan dalam formula produk bakteri endofit P.  fluorescens 4RS1 berpengaruh nyata terhadap daya hambatnya terhadap P. palmivo ra. Daya hambat P. fluorescens 4RS1 pada produk T5 meningkat dari 2 minggu sampai 8 minggu masa penyimpanan dengan daya hambat di atas 60%, sementara perlakuan lain daya hambatnya berfluktuatif.  Pada masa
a c

## b
Gambar 1  Daya hambat Pseudomonas fluorescens 4RS1 terhadap Phytophthora palmivora . a dan b, terbentuk zona bening di antara P. palmivora (kiri)  dan P. fluorescens 4RS1 (kanan); dan c, pembengkakan hifa P. palmivora .
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Khaeruni et al. penyimpanan minggu ke-12 daya hambat P.  fluorescens 4RS1 tertinggi (46.15%) juga terdapat pada produk T5 (Tabel 3). Daya  hambat  bakteri  endofit P.  fluorescens 4RS1 terhadap P. palmivora ditandai dengan
terbentuk zona bening di antara kedua mikrob tersebut (Gambar 1a dan b) dan pembengkakan hifa P. palmivora yang berdekatan dengan P. fluorescens 4RS1 (Gambar 1c).
Tabel 1  Daya larut dan endapan enam produk komposisi bahan pembawa bakteri Pseudomonas fluorescens 4RS1 Produk Daya Larut Endapan (%) T1 (talk + gula merah) 3 53.33 T2 (talk + gula merah + pepton + CMC) 3 60.00 T3 (talk + gula merah + urea + CMC) 3 53.33 T4 (Tepung tapioka + gula merah) 2 50.00 T5 (Tepung tapioka + gula merah + pepton + CMC) 2 46.67 T6 (Tepung tapioka + gula merah + urea + CMC) 2 46.67
Tabel  2   Viabilitas  bakteri  endofit Pseudomonas  fluorescens 4RS1 selama 12 minggu masa simpan dalam  enam produk formula bahan pembawa
Produk
Viabilitas bakteri endofit (cfu g -1 ) a pada minggu ke-
2 4 6 8 10 12 T1 (talk + gula merah) 8.19 c 7.71 b 7.78 e 7.72 b 8.24 b 7.83 bc T2 (talk + gula merah + pepton + CMC) 8.52 ab 8.38 a 8.43 c 8.36 a 8.15 b 7.96 b T3 (talk + gula merah + urea + CMC) 8.34 bc 7.73 b 8.33 d 8.17 ab 7.86 c 7.77 cd T4 (Tepung tapioka + gula merah) 7.89 d 7.68 b 8.33 d 8.15 ab 7.85 c 7.64 d T5 (Tepung tapioka + gula merah + pepton + CMC) 8.64 a 8.66 a 8.77 a 8.63 a 8.55 a 8.18 a T6 (Tepung tapioka + gula merah + urea + CMC) 8.40 abc 8.64 a 8.68 b 8.11 ab 8.29 b 7.83 bc
Keterangan: a Data merupakan transfomasi Log N.
Angka pada kolom yang sama dan diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata berdasarkan uji berganda Duncan pada taraf α 5%.
Tabel 3  Rerata persentase daya hambat Pseudomonas  fluorescens 4RS1 terhadap pertumbuhan P.  palmivora selama 12 minggu masa simpan dalam enam produk formula bahan pembawa
Produk
Daya hambat (%) terhadap P. palmivora pada minggu ke- 2 4 6 8 10 12 T1 (talk + gula merah) 54.44 a 63.33 a 60.69 a 62.22 a 48.33 a 39.63 a T2 (talk + gula merah + pepton + CMC) 42.11 b 45.52 b 45.40 b 54.37 ab 38.89 ab 25.23 b T3 (talk + gula merah + urea + CMC) 39.09 b 48.50 b 54.19 ab 48.44 b 41.38 a 38.77 a T4 (Tepung tapioka + gula merah) 28.63 c 41.16 b 43.68 b 44.72 b 22.83 b 35.68 ab T5 (Tepung tapioka + gula merah + pepton + CMC) 53.37 a 61.76 a 63.33 a 64.44 a 53.56 a 46.15 a T6 (Tepung tapioka + gula merah + urea + CMC) 46.67 ab 62.22 a 65.94 a 61.11 a 37.58 ab 43.56 a
Angka pada kolom yang sama dan diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata berdasarkan uji berganda Duncan pada taraf α 5%.

## PEMBAHASAN
Pseudomonas fluorescens 4RS1 merupakan bakteri endofit asal tanaman kakao sehat yang berpotensi dikembangkan sebagai agens hayati karena mampu meningkatkan pertumbuhan tanaman kakao di persemaian (Khaeruni et al . 2020) dan menghambat perkembangan P. palmivora baik secara in vitro (Khaeruni et al. 2019) maupun in vivo (Arini et al . 2021). Agar agens hayati potensial tersebut dapat digunakan secara luas oleh masyarakat maka dibentuk dalam suatu formula produk yang mampu mempertahankan umur simpan, viabilitas, dan daya antagonis, serta memudahkan penggunaan dan pengaplikasiannya.
Hasil uji fisik tampilan produk menunjukkan bahwa formula tepung tapioka memiliki sifat fisik yang lebih baik jika dibandingkan dengan formula talk karena memiliki kelarutan yang lebih tinggi dan endapan yang lebih rendah. Daya larut yang tinggi dengan endapan rendah pada formula tepung tapioka disebabkan karena medium pembawa tersebut memiliki tekstur yang halus dan memiliki daya serap air yang yang lebih besar. Hal tersebut mendukung pendapat beberapa peneliti sebelumnya yang menjelaskan bahwa tepung tapioka memiliki kondisi fisik yang cenderung halus sehingga lebih mudah larut dalam air (Yanti dan Habazar 2015;  Edhirej et al. 2017). Formula yang menggunakan medium pembawa talk dan tepung tapioka dengan penambahan bahan nutrisi tertentu dapat mendukung  pertumbuhan  bakteri  endofit P. fluorescens 4RS1 sampai pada masa simpan 12 minggu dengan jumlah populasi berkisar 10 7 –10 8 cfu g -1 . Uji viabilitas menunjukkan bahwa pertumbuhan P. fluorescens 4RS1 pada formula tepung tapioka dengan tambahan nutrisi gula merah, pepton, dan CMC (produk T5) dan formula tepung tapioka dengan tambahan nutrisi gula merah, urea, dan CMC (produk T6) mengalami peningkatan dari 2 minggu sampai 6 minggu masa simpan. Setelah 8 minggu populasi P. fluorescens 4RS1 mengalami penurunan pada semua perlakuan. Dari dua jenis bahan pembawa formula yang diuji, populasi P. fluorescens 4RS1 pada produk T5 selalu tertinggi dibandingkan dengan
perlakuan lain pada setiap waktu pengamatan. Tingginya populasi P. fluorescens 4RS1 pada formulasi tepung tapioka disebabkan karena bakteri mampu memanfaatkan nutrisi dengan baik yang terdapat pada formula tersebut. Edhirej et  al. (2017)  melaporkan bahwa tepung tapioka memiliki kandungan nutrisi yang cukup tinggi berupa kalori, air, protein, dan lemak yang dibutuhkan oleh bakteri untuk pertumbuhannya.
Selain dipengaruhi oleh bahan pembawa, pertumbuhan bakteri juga dipengaruhi oleh bahan tambahan. Bakteri P. fluorescens 4RS1 memiliki pertumbuhan yang cukup baik pada formula tepung tapioka yang mengandung pepton. Pepton mengandung unsur nitrogen yang dapat mendukung pertumbuhan bakteri. Tingginya populasi bakteri pada formula yang mengandung pepton disebabkan karena bakteri menyukai sumber nitrogen tersebut dan mampu memecah ikatan-ikatan peptida yang terdapat di dalam pepton (Yustina et al . 2016). Pepton mengandung senyawa-senyawa peptida sehingga bakteri mampu mengonsumsi nitrogen dengan tingkat konsumsi yang lebih tinggi (Baroqah et  al. 2017). Fachraniah et al. (2002) juga menyebutkan bahwa pepton merupakan salah satu unsur nutrien yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikrob. Pepton merupakan sumber nitrogen utama yang terdiri atas beberapa senyawa polipeptida, dipeptida, dan asam amino yang berasal dari bahan yang mengandung protein dan dapat diperoleh melalui reaksi hidrolisis asam atau enzimatis. Adapun penurunan rata-rata populasi P. fluorescens 4RS1 pada 8 hingga 12 minggu masa simpan dikarenakan nutrisi yang terdapat pada formulasi semakin berkurang setelah lama penyimpanan. Pada formulasi produk T5 walaupun terjadi penurunan populasi bakteri  endofit  pada  penyimpanan  8–12 minggu, tetapi tingkat populasi tetap tinggi, yaitu > 10 8 cfu g -1 bahan formula. Hasil ini mendukung hasil penelitian Yanti et al . (2017) bahwa populasi bakteri Bacilus thuringiensis TS2 dalam berbagai formula semakin menurun seiring dengan lamanya penyimpanan.
Sejalan dengan uji viabilitas, bakteri endofit P. fluorescens 4RS1 di dalam bahan pembawa tepung tapioka memiliki daya hambat lebih
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Khaeruni et al.
tinggi dibandingkan dengan dalam formula talk. Daya hambat P.  fluorescens 4RS1 terhadap P.  palmivora pada formula yang menggunakan tepung tapioka dengan tambahan gula merah, pepton, dan CMC (Produk T5) secara konsisten mengalami peningkatan dari 2 sampai 8 minggu masa penyimpanan dengan daya hambat > 60%, sementara produk formula lainnya daya hambatnya tidak konsisten. Pada masa simpan selanjutnya (10 dan 12 minggu), daya hambat pada produk T5 mulai menurun walaupun tetap memiliki daya hambat yang lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan lainnya, dan pada akhir penyimpanan daya hambatnya sebesar 46.15%.
Kemampuan daya hambat bakteri endofit P. fluorescens 4RS1 jika dibandingkan dengan daya hambat di dalam produk memiliki persentase daya hambat yang lebih tinggi. Kemampuan daya hambat yang tinggi ini dikarenakan nutrisi yang terdapat pada bahan pembawa dan tambahannya yang mampu memicu berbagai senyawa yang terdapat pada bakteri untuk aktif dalam menghambat pertumbuhan patogen. Fakhruddin dan Nurcahyanti (2020) melaporkan bakteri mampu memanfaatkan nutrisi yang terdapat pada formula produk sehingga mampu mengaktifkan senyawa metabolik sekunder yang dapat menghambat pertumbuhan patogen dengan persentase daya hambat yang cukup tinggi. Dapat disimpulkan bahwa tepung tapioka memiliki tingkat kelarutan dan daya endapan yang lebih baik dibandingkan dengan talk sebagai bahan pembawa formula bakteri endofit P. fluorescens 4RSI. Pemberian bahan tambahan berupa gula merah, pepton, dan CMC dalam formula tepung tapioka mampu mempertahankan viabilitas P.  fluorescens 4RS1 dengan populasi > 10 8 cfu g -1 dan daya hambat (>40%) terhadap P. palmivora secara in  vitro selama 12 minggu penyimpanan. Penelitian lanjut tentang keefektifan produk bakteri endofit perlu dilakukan di lapangan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini merupakan bagian Penelitian Terapan Kompetitif Nasional DIPA Direktorat Riset, Teknologi dan Pengabdian Masyarakat,
Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Riset dan Teknologi Tahun 2022, dengan Kontrak Nomor: 019/E5/PG.02.00.PT/2022.

## DAFTAR PUSTAKA
Adomako B. 2007. Causes and extent of yield losses in cocoa progenies. Tropical Science. 47:22–25. DOI: https://doi. org/10.1002/ts.187.
Advinda L. 2009. Tanggap fisiologis tanaman pisang yang diintroduksi dengan formula Pseudomonas  fluorescens terhadap blood disease bacteria (BDB) [disertasi], Padang (ID): Universitas Andalas.
Alfiah, Majid A, Hasjim S. 2014. Efektivitas formulasi tepung biofungisida berbahan aktif Trichoderma  harzianum terhadap serangan patogen tular tanah dan pengaruhnya terhadap pertumbuhan tanaman tembakau [skirpsi]. jember (ID): Universitas Jember.
Arini R, Sutariati GAK, Khaeruni A, Wijayanto T, Putri NP, Joko T. 2021. Control activity and antibiotic gene detection of endophytic bacteria in suppressing cocoa black pod disease ( Phytophthora  palmivora butl.). Indian Jurnal of Agricultural Research. 55(6):727–732. DOI: https://doi. org/10.18805/IJARe.A-659.
Azis AI, Rosmana A, Dewi VS. 2013. Control of Phytophthora leaf blight disease on cacao seedling using Trichoderma  asperellum . Jurnal Fitopatologi Indonesia. 9(1):15–20. DOI: https://doi.org/10.14692/jfi.9.1.15.
Baroqah GR, Ibrahim B, Nurhayati T. 2017. Karakteristik mikroenkapsul pepton ikan hasil tangkapan sampingan (HTS) multispesies busuk dengan metode spray drying. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 20(2):401–412. DOI: https:// doi.org/10.17844/jphpi.v20i2.18108.
Edhirej A, Sapuan SM, Jawaid M, Zahari NI. 2017. Preparation and characterization of cassava bagasse reinforced thermoplastic cassava starch. Fibers and Polymers. 18(1):162–171. DOI: https://doi. org/10.1007/s12221-017-6251-7.
Fachraniah D, Fardiaz, Idiyanti T. 2002. Pembuatan pepton dari pungkil kedelai dan
khamir dengan enzim papain untuk media pertumbuhan bakteri. Jurnal Teknologi Industri Pangan. 13(3):260–266. Fakhruddin DK, Nurcahyati SD. 2020. Viabilitas Bacillus sp. sebagai agen antagonis patogen tanaman dalam formulasi berbahan dasar tepung. Jurnal. Pengendalian Hayati. 3(1):29–37. DOI: https://doi.org/10.19184/jph.v3i1.17151.
Hanudin H, Nuryani W, Silvia E, Djatnika I, Marwoto B. 2010. Formulasi biopestisida berbahan aktif Bacillus subtilis,  Pseudomonas  fluorescens dan Corynebacterium sp. nonpatogenik untuk mengendalikan penyakit karat pada krisan. Jurnal Hortikultura. 20(3):247–261. http:// ejurnal.litbang.pertanian.go.id/index.php/ jhort  [diakses 15 Mei 2022].
ICCO. 2015. Production of cocoa beans. ICCO Quarterly Bulletin of Cocoa Statistics. Vol. 42. No. 1.
Khaeruni A, Wijayanto T, Darmansyah, Arini R, Sutariati GAK. 2019. Antagonistic activity of indigenous endophytic bacteria from Cocoa plants against Phytophthora palmivora Bult the cause of black pod rot disease in Cocoa. Bioscience Research. 16(1):272–280.
Khaeruni A, Nirmala T, Hisein WSA,
Gusnawaty, Wijayanto T, Sutariati GAK. 2020 Potensi  dan  karakterisasi  fisiologis bakteri  endofit  asal  tanaman  kakao sehat bagai pemacu pertumbuhan benih kakao.  Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia. 25(3):390−397.  https://doi.org/10.18343/ jipi.25.3.388.
Mugiastuti E, Soesanto L, Rahayuniati RF. 2010. Pemanfaatan Pseudomonas fluorescens P60 dalam formula cair organik untuk mengendalikan penyakit layu bakteri pada tanaman tomat. Seminar Nasional  Pengelolaan  OPT  Ramah Lingkungan .  https://www.researchgate. net/profile/Ruth-Rahayuniati [diakses 10 Mei 2022]
Muis A, Djaenuddin N, Nonci N. 2015. Evaluasi lima jenis inner  carrier dan formulasi Bacillus  subtilis untuk pengendalian hawar pelepah jagung ( Rhizoctonia solani Kuhn.). Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika. 15(2):164–169. DOI: https://doi.org/10.23960/j.hptt.215164- 169.
Pratama SW, Sukamto S, Asyiah IN, Ervina YV. 2013. Penghambatan pertumbuhan jamur patogen kakao Phytophthora  palmivora oleh Pseudomonas  fluorescens dan Bacillus subtilis . Jurnal Pelita Perkebunan. 29(2):120–127.  http://repository.unej. ac.id/ handle/123456789/56240.
Sijabat SM, Sudarma IM, Khalimi K. 2021. Pengujian  bakteri  endofit  indigenous dalam mengendalikan penyebab penyakit busuk buah kakao ( Phytophthora palmivora Butler) secara in vitro. Jurnal Agroekoteknologi Tropika. 10(4):456– 465.
Suwahyono U, Wahyudi P. 2008. Produksi dan formulasi bioinsektisida dari propagul aktif jamur Baeuveria  bassiana . Jurnal Teknologi Lingkungan. 9(1):85–91. DOI: https://doi.org/10.29122/jtl.v9i1.448.
Yanti Y, Habazar T, Resti Z. 2017. Formulasi padat rhizobakteria indigenus Bacillus thuringiensis Ts2 dan waktu penyimpanan untuk mengendalikan penyakit pustul bakteri Xanthomonas  axonopodis pv. glycines . Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika. 17(1):9–18. DOI: https://doi.org/10.23960/j.hptt.1179-18. Yustinah, Gozan M, Hermansyah H, Alamsyah R. 2016. Pengaruh jenis sumber nitrogen pada pembuatan polyhydroxybutyrate dari glukosa menggunakan bakteri Bacillus cereus . Prosiding Seminar Nasional Sains dan Teknologi; 2016 Nov 8. Jakarta (ID): Fakultas Teknik Universitas Muhammadiyah Jakarta.