## PENGARUH FRAKSI AIR EKSTRAK RIMPANG TEMU MANGGA
TERHADAP  EKSPRESI Ki67 PADA GALUR SEL KARSINOMA KOLON HT-29

## DiahAndriana
Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang E-mail : andriana_2209@yahoo.com

## ABSTRACT
The incidence rate of colon carcinoma in Indonesia has recently showed significant increase. The management of colon carcinoma has gained a lot from the result of bimolecular studies.This study is aimed as determining the effect of extracted fraction of Temu Mango (Curcuma Mango, Val) on the suppression  of  Ki67  expression,  a  protein  known  as  cell  proliferation  marker.  This  study  was conducted in vitro on HT-29 colon cancer by observing the expression of Ki67.
HT-29 colon cancer cell was cultured with the mixture of RPMI 1640 media, 1% fungi zone, and  1%  antibiotic  on  37 0 C  and  5%  CO 2 concentration.  Samples  were  divided  into  two  groups:  the TemuMangga  group  as  a  positive  control  and  5-FU  group  as  a  negative  control.Each  group  was cultured with 1640 RPMI added with extracted fraction of TemuMangga or 5-FU with concentration series  each  under  LC 50 .  Quantification  of  culture  result  was  done  by  observing  the  Ki67  expression presented in cell percentage.
This  study  demonstrated  that  5-FU  on  150  µg/ml;  75  µg/ml;  37,5  µg/ml;  and 18,75  µg/ml concentration and extracted fraction of Temu Mango on 0,125 µg/ml; 0,0625 µg/ml; 0,03125 µg/ml and 0,015625 µg/ml express the suppression of Ki67 expression respectively.
Extracted fraction of  Temu  Mango  and  5-FU  has  the  potential  of  suppressing Ki67  expression.  The Ki67 suppression between Temu Mango extract and 5-FU showed no significant difference.
Key words: Temu Mango extract (Curcuma mangga, Val); 5-FU; Ki67 expression.

## ABSTRAK
Angka  kejadian  kanker  kolon  di  Indonesia  dewasa  ini  menunjukkan  peningkatan yang  cukup  berarti.Penatalaksanaan  kanker  kolon  telah  banyak  memanfaatkan  temuan ilmiah hasil kajian molekuler. Penelitian ini dilaksanakan untuk mengetahui pengaruh fraksi air ekstrak    temu  mangga  (Curcuma  mangga,Val)  terhadap  penekanan ekspresi  Ki67  yaitu suatu protein yang berfungsi sebagai marker proliferasi sel. Penelitian ini dilakukan in vitro terhadap kanker kolon HT-29 dengan melihat ekspresi Ki67.
Kultur sel kanker kolon HT-29 dilaksanakan dengan media RPMI 1640, 1% fungizone dan  1%  antibiotik  pada  suhu  37 0 C  dan  konsentrasi  C0 2 5%.  Sampel  dibedakan  dalam  2 kelompok perlakuan yaitu kelompok temu mangga sebagai kontrol (+) dan kelompok 5-FU sebagai  kontrol  (-).  Masing-masing  kelompok  dikulturkan  dengan  RPMI  1640  lengkap ditambah  dengan  ekstrak  temu  mangga  fraksi  air  atau  5-FU  dengan  serial  konsentrasi masing-masing  dibawah  LC 50 .  Dari  hasil  kultur    kemudian    dilihat  ekspresi  Ki67  yang ditampilkan dalam bentuk prosentase sel.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian  5-FU  pada  konsentrasi  150  μg/ml, 75  μg/ml,  37,5  μg/ml,18,75  μg/ml  dan  pemberian  temu  mangga  fraksi air  pada  konsentrasi 0,125 μg/ml, 0,0625 μg/ml, 0,03125 μg/ml, 0,015625 μg/ml menunjukkan ekspresi Ki67 yang makin  menurun  dengan  meningkatnya  dosis.  Dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  air  ekstrak temu mangga dan 5-FU berpotensi menurunkan tingkat ekspresi Ki67.
Kata kunci : Ekstrak temu mangga (Curcuma mangga,Val), 5-FU, ekspresi Ki67

## PENDAHULUAN
Karsinomakolonmerupakankeganasank etigaterbanyak di duniadansebagaipenyebabkematianked uaterbanyak  (terlepasdari  gender)  di AmerikaSerikat.
Karsinomakolonmemilikiinsidensidanan gkakematian yang cukuptinggi di negara-
negaraberkembang.Angkakejadian  yang pastidarikarsinomakolon    di  Indonesia belumada, tetapikarsinomakolonmasukdalam 10 jeniskankertersering. Evaluasi data DepartemenKesehatanRepublik Indonesia padatahun 1986 mendapatkanangkakejadian 1,8setiap 100.000  penduduk.      Berdasarkan  data histopatologikkanker di Indonesia tahun 1996 dan 1999, karsinomakolonmenempatiurutan  ke-9 yaitusebanyak  3,11%  dan  3,33  %.
(KKAK, 2004., YKI, 1999., Helena, 1997., Alfred, 1997., Kodner, 1999).
Kemajuanilmupengetahuandantekn
ologi di bidangkedokterankhususnyabidangbiol ogimolekuler yang sangatpesat, mempengaruhitatacarapenanganankarsi nomakolon, mulaidarideteksidini, diagnostik, terapi, prediksitingkatkeganasan, prognosis danpenanganantindaklanjut.
Pemeriksaanimunohistokimiadapatmem beriinformasimengenaikandunganberba gaiunsur  protein  di  dalamsel  normal maupunneoplastik.Pemeriksaanimunohi stokimiasebagaikelanjutanpemeriksaanr utinsemakinmeningkatpenggunaannya, karenainformasiberbagaiekspresi proteinspesifikdalamselneoplasmadapat dipakaisebagaisalahsatucarauntukmene ntukankeganasan,
pemilihanmetodeterapisertaprognosisny a(Ashariati,  2004.,  Allen  1995.,  Norton, 2000).  Salah  satupetanda  tumor  adalah Ki67.Ki67  merupakan  protein  spesifik yang
keberadannyamelimpahpadasaatterjadi pembelahansel, sehingga Ki67 mudahdideteksipadapertumbuhansel normal maupunpadasel tumor.Pemeriksaansecaraimmunohistok imiaterhadap Ki67 padakarsinomakolondenganmenggunak anmetoda Ki-67 labeling index menunjukkanbahwapeningkatan level Ki67  berhubungandengankualitashidup yang buruk,
danpadakarsinomakolonbisadigunakans ebagaipetandauntukmenentukanperke mbangan  tumor  (Maltzman,2002.,Vilar, 2007., Oshima,2007).
Selainprosedurbakusecaramedis, banyakcara
yang
dilakukanpenderitauntukmencarikesem buhandaripenyakitkanker, salahsatunyadenganmenggunakantana manobat.
Meskipunsecaraempirispotensidaritana manobattersebutdalammenghambatprol iferasiselkankerbelumterujisecarailmiah. Banyakjenistemumangga  yang  sudah lama  dikenalsebagaiobat  anti  kanker, beberapasudahdiisolasikandungannyam enjadiobatkemopreventifdankemoterapi
(Adijaya, 2006.,Katzung, 2001). Temumanggamengandungsenyawa protein  mirip  ribosome  inactivating protein (RIPs) yang mempunyaiaktifitasmemotong DNA superkoil.  Secara  in  vitro  ekstrakkasar Curcuma manggamempunyaiefeksitotoksikterhad ap  B-LCL(B-limphoblastoid  Cell  Lines) danlimfosit normal yang diberikanekstrakkasartemumanggadan menunjukkanbahwapersentaseefeksitot
oksikpadaselkankerlebihtinggisecarasig nifikandibandingsel Normal(Sismindari,2003). 5-FU  merupakanagenkemoterapi  yang potenuntukkarsinomakolondansaatinisu dahsecaraluasdigunakanbaiksebagaiage ntunggalmaupunkombinasidenganagen
kemoterapi yang lain. 5-FU merupakansenyawa anti metabolit, yaitusenyawa
yang
secarastrukturalmemilikikemiripandeng anmolekulendogenus.Dalamhalinimolek ulendogenus  yang  miripdengan  5-FU adalahbasa nitrogen dari DNA.Senyawainimampuberperandalam jalurmetabolisme yang diperankanolehsenyawa
yang ditirunya.5-FU
berperandalammenghambatsintesaasam nukleat  (Polymerase  DNA)  padafase  S (Pecorino, 2005).
Berdasarkanuraian di atasdianggapperludilakukanpenelitianuj ilaboratorikpotensifraksi air ekstrakrimpangtemumangga  (Curcuma mangga,Val) dalampenghambatanekspresi Ki67 suatu marker
proliferasisel, denganmenggunakangalurselkarsinoma kolon  HT2-9  secara  in  vitro.  5-FU sebagaikemoterapitertuadigunakanseba gaipembandingsecaradeskriptifterhadap ekstraktemumangga.Penelitianinidihara pkandapatmemberikaninformasi yang bergunabagikajianterapikomplementer molecular  target  therapy  di  masa  yang akandatangataupenemuankandidatanti tumor
yang berasaldariekstraktemumangga METOD E PENELITIAN

## Rancangan penelitian
Penelitian  ini  berupa  penelitian  analitik eksperimental laboratorik. Subyek penelitian adalah galur cell kanker kolon HT-29.Penelitian  dilakukan  selama  3 bulan

## Kultur Sel
Kultur    sel  HT-29  dilakukan  setelah thawing  dari  tangki  nitrogen  cair,  sel selanjutnya  dikultur  pada  media  RPMI 1640,  FBS  10%,  Penstrep  2%,  Fungizone 0,5%  setelah  konfluent  sel  dipanen dengan tripsin 0,25%.
Starvasi
Tujuan langkah ini adalah mencapai  keseragaman  umur  sel  HT-29 dalam  kultur.  Dalam  menggunakan RPMI  1640,  FBS  0,5%,  Penstrep  2%, Fungizone  0,5%,  selama  7  hari  setiap  3 hari  sekali  media  diganti  dengan  yang baru.

## Imunositokimia
Biakan sel HT-29 pada media murni dan setelah diberi perlakuan dengan ekstrak rimpang  temu  mangga  serta  5-FU  pada konsentrasi  dibawah  LC 50 ,  dan  3  serial di  bawahnya  dikulturkan  pada  media RPMI  1640.  1%  Amphotricin,  2% penstrep, 10% FBS diteteskan dengan 24 well  yang  dilengkapi  dengan plastic cover  slips dengan  diameter  1,3  cm. Setelah  3  hari  diperlakukan  dengan konsentrasi  temu  mangga  0,125  ug/ml,
0,0625ug/ml, 0,03125μg/ml, 0,0151625μg/ml dan 5-FU dengan konsentrasi 150ug/ml, 75ug/ml, 37,5ug/ml, 18,75ug/ml, pada
konsentrasi  5%  CO2      dan  suhu  37 o C
(dalam  inkubator).  Setelah  itu  media diambil  dan  diganti  dengan  PBS formalin 10% selama 30 menit.
Kemudian PBS diambil dan dicucidenganAquadestkemudianditaba
h  metanol  dan  0,3%  H 2 O 2 selama  30 menit.  PBS  formalinselanjutnyadiambil dan dicucidenganAquadestkemudianditamb ahkan metanol selama 30 menit.Welldicucidengan  PBS  2x5  menit. Dilakukanblockingdengan normal serumselama 20 menit,
diinkubasidenganantibodi  Ki67  selama 18  jam  pada  4 0 C.  Dicucidenganwashing buffer  (PBS)  2  kaliselanjutnyadiinkubasi 20  menitdengan polyvalent  universal  HRP conjugate . Dicucidengan PBS 2
kaliselanjutnyadiinkubasidengan  DAB ( DeaminoBenzidin )  sebagaisubtratensim.
Pewarnaantanding ( counterstain ) digunakan Hematoxilin Mayer . Pengamatandilakukandenganmikrosko
pcahayaOlympus DP40. Penilaianmaknatampilanekspresi Ki67 dinyatakansebagaiprosentasesel yang dihitungberdasarkantampilanpositifdari ki67.
Pembuatan Temu mangga fraksi air ekstraksi  temu  mangga  fraksi  air berbentuk  larutan.  Dalam  penelitian digunakan  temu  mangga  fraksi  air murni (Curcuma  mangga,Val), yang dibuat  dari  100gr  serbuk  rimpang  temu mangga  yang  dioven  selama  3  jam dengan suhu 60 o sehingga kadar air 0%, kemudian  diencerkan  dengan  1000  ml aquabidest  dan  dipanaskan  sehingga mendidih  selama  15  menit  sehingga tinggal 200 cc dan disaring dengan filter paper mesh dengan porositas 20 μm dan ditimbang  sekitar 90 gr.
Ekspresi Ki67 ekspresi  protein  Ki67  yang  terdapat pada inti sel kanker kolon HT29 sebagai hasil  pengecatan imunostaining dengan metode avidin-biotin-complex menggunakan  mouse  anti  human  Mo
Ab Ki67 . Sistem enzimatis yang digunakan  adalah  peroksidase  substrat enzim  DAB.  Nilai  tampilan  Ki67 dinyatakan sebagai prosentase sel.

## Proliferasi sel
Proliferasi  sel  dihitung  setelah  24  jam inkubasi pada suhu 37 o C dan dilakukan penghitungan  jumlah  sel  secara direct counting menggunakan mikroskop inverted dan  bilik  hitung Improved Neubeuer haemocytometer.  Prosentase sel  mati  ditentukan  dengan  banyaknya prosentase  sel  yang  menyerap  warna Triphan blue .

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dalam  penelitian, dilakukan  uji  normalitas  data  dengan menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov. Untuk  mengetahui  kemampuan    fraksi air  ekstrak  rimpang  temu  mangga ( Curcuma  mangga,Val )  dan  5-FU  dalam menghambat  pertumbuhan  sel  kanker kolon  HT-29  menggunakan  uji  statistik
korelasi  regresi.  Uji  korelasi  regresi dilaksanakan untuk mengetahui: 1.  pengaruh  pemberian  baik  5-FU maupun ekstrak temu mangga fraksi air terhadap  penghambatan  proliferasi  sel kanker kolon HT-29.
2.  Pengaruh  pemberian  5-FU  maupun ekstrak temu mangga fraksi air terhadap tingkat  ekspresi  Ki67  sel  kanker  kolon HT-29.
Untuk  mengetahui  profil  perbedaan pengaruh  penekanan  ekspresi  Ki67 antara  fraksi  air  ekstrak  temu  mangga ( Curcuma  mangga,Val )  dengan  5-FU dilakukan  secara  deskriptif,  karena konsentrasi fraksi air temu mangga dan 5-FU  tidak  sama  sehingga  tidak  dapat dibandingkan secara analitik.

## HASIL PENELITIAN
Penentuan Level Ekspresi Ki67 Akibat Pemberian  Fraksi  air  Ekstrak  Temu Mangga  ( Curcuma  mangga,  Val )  pada Kultur Sel Karsinoma Kolon HT-29
Kultur  dengan  perlakuan  fraksi  air temu mangga( Curcuma mangga,
Val )setelah  ditentukan  konsentrasi  LC
50,
selanjutnya dilakukan kultur sel karsinoma kolon HT-29 pada konsentrasi LC 50 yaitu 0,125 μg/ml dan 3 serial konsentrasi di bawahnya sehingga perlakuan yang diberikan menggunakan konsentrasi  fraksi  air  temu  mangga sebagai berikut: 0,125 μg/ml, 0,0625ug/ml, 0,03125ug/ml, 0,01563 ug/ml,  Pemeriksaan  imunositokimia dengan menggunakan
monoklonal antibodi primer anti-Ki67 . Ekspresi positif kuat  dari  Ki67  ditunjukkan  dengan adanya granula kecoklatan pada inti sel, sedangkan  sel  yang  negatif  tidak menampakkan adanya granula kecoklatan  tersebut.  Prosentase  sel karsinoma  kolon  HT-29  yang  positif mengekspresikan Ki67 ditentukan dengan melakukan pengamatan menggunakan
mikroskop cahaya
OLYMPHUS  BX-41 dengan pembesaran 400x  pada  9  lapang  pandang.  Hasil pengamatan  sebagaimana  ditampilkan dalam gambar berikut ini:
Ekspresi  Ki67  dengan  pemberian
Curcuma mangga (pembesaran 1000x).
Berdasarkan hasil pengamatan sitologi  tersebut  dapat  ditentukan  nilai kuantitatif ekspresi Ki67 yang dinyatakan  dengan  prosentase  sel, untuk  masing-masing  sampel  adalah sebagai berikut:
Prosentase  tampilan  Ki67  pada  sel karsinoma kolon HT29 dengan perlakuan  fraksi  air  ekstrak  temu mangga ( Curcuma mangga,Val ).
No SAMPEL % 1 Temu  mangga 0,125 ug/ml 5,22 2 Temu  mangga 0,0625 ug/ml 13,44 3 Temu  mangga 0,03125 ug/ml 21,11 4 Temu  mangga 0,01563 ug/ml 27,67 Data tersebut ditampilkan dalam bentuk histogram sebagai berikut:
tampilan  ekspresi  Ki67  pada  sel karsinoma  kolon  HT-29  pada  berbagai serial  konsentrasi  perlakuan  dengan ekstrak temu mangga( Curcuma mangga,Val ).
Penentuan  Level  Ekspresi  Ki67 akibat Pemberian 5-FU pada Kultur Sel Karsinoma Kolon HT-29.
Konsentrasi  5-FU  yang  digunakan dalam kultur sel karsinoma kolon HT-29
adalah: 150 μg/ml, 75 μg/ml, 37,5 μg/ml dan 18,75 μg/ml. Hasil kultur kemudian dilakukan  pemeriksaan  imunositokimia dengan menggunakan monoklonal
antibodi primer anti-Ki67 . Deteksi ekspresi  Ki67  dilaksanakan  dengan metode  ABC (Avidin  biotin  Complex)
dengan  hasil  sebagaimana  ditampilkan pada gambar berikut ini:
Tampilan  ekspresi  Ki67  pada  sel karsinoma  kolon  HT-29  pada  berbagai serial  konsentrasi  perlakuan  dengan ekstrak temu
mangga( Curcuma
mangga,Val ).
Ekspresi  Ki67  dengan  pemberian  5-FU ditunjuk  anak  panah    (perbesaran 1000x).
Berdasarkan hasil pengamatan imunositokimia tersebut dapat ditentukan  nilai  kuantitatif  ekspresi Ki67 yang dinyatakan dengan
prosentase  sel,  untuk  masing-masing sampel adalah sebagai berikut:
Prosentase  tampilan  Ki67  pada  sel karsinoma kolon HT-29 dengan
perlakuan 5-FU
No SAMPEL % 1 5-FU 150 ug/ml 7,00 2 5-FU 75 ug/ml 19,00 3 5-FU 37,5 ug/ml 25,56 4 5-FU 18,75 ug/ml 28,11 Hasil  di  atasditampilkandalambentuk histogram sebagaiberikut: Profil  tampilan  ekspresi  Ki67  pada  sel karsinoma kolon HT-29
pada perlakuan dengan  5-FU.

## PEMBAHASAN
Ki67  adalah  protein  inti,  bisa  dideteksi dengan  mudah  pada  sel  sedang  aktif membelah, sehingga keberadaan protein ini  bisa  digunakan  untuk  mendeteksi kecepatan
pertumbuhan tumor
(Maltzman,  2002).  Ki67  bisa  digunakan sebagai marker untuk proliferasi sel(Kanai,  2009).  Antigen  Ki67  bisa
dideteksi  dalam  inti  sel  pada  fase interfase.  Fase  mitosis  sebagian  besar protein direlokasi ke permukaan
khromosom.  Ki67  didapatkan  pada semua  fase  pada  siklus  sel  (  G1,  S,  G2, dan  mitosis),  tetapi  tidak  didapatkan pada fase resting cells (G0)(Scholzen,2000)
Zat  aktif  dari  temu  mangga    adalah minyak  atsiri,  amilum,  tanin,  gula  dan damar  (Anonim,1988).  Minyak  atsiri Curcuma mangga Terdiri dari 4 komponen utama yaitu yang
teridentifikasi  sebagai α-pinene (1,71%), β-myrcene (19,74%), geranyl alcohol (76,24%)  dan bicyclo  3.1.1  heptan  3-ol (2,31%)  (Khasanah,  2002). Curcuma mangga mengandung  senyawa  protein mirip ribosome inactivating protein (RIPs) yang mempunyai aktifitas memotong DNA superkoil(Sismindari,2003). Beberapa
tumbuhan  mengandung  protein  yang disebut sebagai (RIPs ) yang merangsang aktifitas  dari  enzim RNA  N-glycosidase dan adenosine glikosidase , sehingga mampu menghentikan siklus sel.
Dari  hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa penurunan prosentase sel karsinoma  kolon  HT-29  yang  positif mengekspresikan Ki67 berasosiasi dengan pengikatan konsentrasi fraksi air temu mangga( Curcuma mangga,Val) .
Hasil  uji korelasi regresi terhadap peran fraksi air ekstrak temu mangga (Curcuma  mangga,Val) terhadap  ekspresi ki67  mengikuti    persamaan  linier Y=22,092-0,105X dengan koefisien korelasi  R=0,994  yang  menunjukkan bahwa  fraksi  air  ekstrak  temu  mangga mampu  menurunkan  ekspresi  Ki67 secara  signifikan.  Pengembangan  obat antikanker yang didasarkan pada regulasi siklus sel selanjutnya diarahkan pada  penghambatan  terjadinya  proses pembelahan  sel  sehingga  senyawa  atau protein  yang  diberikan  pada  penderita dapat  mencegah  sintesis  DNA  dan mitosis sehingga menghentikan proliferasi sel kanker.
RIPs protein memiliki aktivitas ensim N- glikosidase ,  dan polinucleotide:  adenosine glycosidase(PAG), serta  memilika  aktifitas DNAse like dan phosphatase , dan mampu meningkatkan  aktifitas  enzim RNA  N- glikosidase pada konsentrasi yang sangat rendah  sehingga  mampu  menghentikan siklus sel terutama pada fase G1(Willy,2001).  Hal  ini  kemungkinan terjadi  juga  pada  kultur  sel  karsinoma kolon HT-29 dengan perlakuan fraksi air
ekstrak  temu  mangga,  sehingga  terjadi penghentian  siklus  sel  pada  fase  G1 sebelum  terbentuk cyclin  E ,  sehingga siklus sel tidak bisa berlanjut sampai ke fase S dan fase selanjutnya.
Penurunan  prosentase  sel  karsinoma kolon HT-29 yang positif mengekspresikan Ki67 berasosiasi
dengan  pengikatan  konsentrasi  5-FU mengikuti  persamaan  Y=31,335-24,375 dengan koefisien korelasi R=1,00, menunjukan  bahwa  terjadi  penurunan ekspresi  Ki67,  yang  menggambarkan terjadinya  penurunan  proliferasi  sel.  5- FU  digunakan    pada  penelitian  ini karena 5-FU merupakan agen kemoterapi
yang poten untuk karsinoma  kolon  dan  saat  ini  sudah secara luas digunakan baik sebagai agen tunggal  maupun  kombinasi  dengan agen kemoterapi yang lain.
Hasil penelitian menunjukan bahwa  terdapat  penurunan  ekspresi Ki67  yang  bermakna  pada    perlakuan menggunakan  fraksi  air  ekstrak  temu mangga maupun 5-FU dan pemberian 5- FU  maupun  fraksi  air  ekstrak  temu mangga dengan konsentrasi yang berbeda    memberikan  pengaruh  yang nyata dalam penurunanan ekspresi Ki67 pada sel karsinoma kolon HT-29  secara in vitro. Penurunanproliferasiselinidisebabk anpenghambatansintesa DNA. 5-FU adalahagenkemoterapi yang bersifat anti metabolit,  artinya  secara  biologis  5-FU berfungsimenghalangiterbentuknya dTM P(deoxyTimidin mono Phosphat) suatumonomer DNA yang pembentukannyamelibatkanenzim Tymi dilatSyntetase . Karenaadanya 5-FU
maka dTMP tidakterbentuk,
enzim TymidilatSyntetase terhambatoleh 5-FU sehinggaterbentuk F- deoxyuridylate(F-dUMP) .
Telahdiketahuibahwamonomer DNA butuh dTTP(deoxyTymidinTri-phosphat),
dAMP(deoxyAdenosineTri-Phosphat),
dCTP(deoxyCitosineTri-Phosphat) dan dGTP(deoxyGuanidineTri-
Phosphat) sehinggaakanmenghalangipoli merisasidNTPsmenjadi  DNA.(Pecorino, 2005)..Dengantidakterbentuknya  DNA makatidakadatranskripsi RNA sehinggasintesaproteintidakberlangsung ,  tidakterbentukselanakanbaru,  dengan kata laintidakadaproliferasisel. Halinisesuaidenganmenurunnyatingkat ekspresi  Ki67  pada  pemberian  5-FU pada
kultursel,
mampumenghambatproliferasiselkarsin omakolon HT-29.

## Kesimpulan
ekstrak  temu  mangga  fraksi  air menekan  ekspresi Ki67 pada sel kanker kolon  HT-29  secara in  vitro .  Semakin tinggi  dosis  yang  diberikan  ekspresi
Ki67 semakin menurun.
Saran
1. Disarankan untuk  dilakukan penelitian terhadap    ekspresi  Ki67  pada  galur  sel karsinoma  kolon  yang  lain    atau penelitian  secara in  vivo dengan konsentrasi  pada  LC 50 dan  atau  di bawahnya.
2. Disarankan untuk  dilakukan penelitian dalam  bidang  biologi  molekuler  lebih lanjut  mengenai  pengaruh  ekstrak temu  mangga    khususnya  fraksi  lain terhadap  penghambatan  proliferasi  sel karsinoma kolon HT-29.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfred M.C., Bruce D.M., 1997, Cancer of The  Colon, In  :  Cancer,  Principles and  Practice  of  Oncology,  5 th Ed, Editors  :  Devita  V.T.,  Lippincott  - Raben, Philadelphia,  pp. 1144 – 85
Allen  J.I.,  1995, Molecular  Biology  of Colorectal  Cancer  :  a  Clinician’s
View, Perspect Colon Rectal Surgery, 8, pp. 181 – 202 American  Joint  Committee  on  Cancer
(AJCC), 1992, Manual for Staging of Cancer ,      4 th Edition,  Philadelphia, pp. 82 Arief T.Q.M., 2004, PengantarMetodologiPenelitianun tukIlmuKesehatan, CetakanKedua,  Penerbit  CSGF, Klaten Ashariati A., 2004, Adjuvant Chemotherapy  of  Colorectal  Cancer , In: Recent Advances and Challenges In General Surgeons in
Indonesia, Surabaya Budiani D.R.2006, Expression of LMP1 in Javanese  Colon  Carcinoma  Patient’s with  Duke’s  Classification  System  : Indicated  The  Association of  Epstein-
Barr  Virus  Infection  In  Colon Malignancies, Department of Patology Anatomy, Medicine Faculty  of  SebelasMaretUniverity, UNS Press, Surakarta Cancer Researh UK, 2007, Chemotherapy  Drugs  For  Bowel Cancer,
http://survey.cancerresearchuk.org Carlos  C.C.,  2004, p53  and  RB  :  Simple Interesting  Correlates  or  Tumors Markers of Critical Predictive Nature?, Journal  of  Clinical  Oncology.  Vol. 22.  No.  8,  Memorial-Kettering Cancer Center, New York, pp. 975 – 7 Chung-Faye  G.A.,  Kerr  J.D.,  2000, ABC of  Colorectal  Cancer  :  Innovative Treatment  for  Colon  Cancer ,  BMJ  : 321,  pp. 1397 – 99
Compton  C.C.,  2005, The  Staging  of Colorectal  Cancer  :  2004  and  Beyond , Ca  Cancer  Journal  for  Clinicians, Vol. 54. No. 6,  pp. 295 – 308 Helena  R.C.,  Kirby  I.B.,  1997, Tumors  of the  Colon, In:  Maingot’s  Abdominal Operations , Volume  II,  10 th Ed, Editors :Zinner M.J., et al., Appleton
& Lange, Conecticut, pp.1281 – 301 Irene M.G., Thomas E.W., 2005, Targeting  Apoptosis  Pathways  in
Cancer Therapy,
Janne  P.A.,  2000, Chemoprevention  of Colorectal Cancer, The New England Journal  of  Medicine,  Vol.  342.  No. 26,  pp. 1960 – 66 Katzung  B.G.,  2001, Basic  &  Clinical Pharmacology ,  8 th Ed,  McGraw-Hill
Companies, Philadelphia KelompokKerjaAdenokarsinomaKolore ktal, 2004, PanduanPengelolaanAdenokarsino maKolorektal,pp. 1 – 49
King M.W., 2004, Tumor Suppressors and Cancer ,  IU  School  of  Medicine, Sergio Marchesini, pp. 1 – 11 Kodner  I.J.,  Robert  D.F.,  1999, Colon, Rectum,  and  Anus ,  In  :  Principles  of Surgery,  7 th Ed,  Vol.  2,  Editors  : Schwartz  I.S.,  McGraw-Hill  Health
Professions  Division.,  New  York, pp. 1265 – 380 Murti B., 1996, PenerapanMetodeStatistikNonpara metrikuntukIlmu-ilmuKesehatan, GramediaPustakaUtama, Jakarta, pp. 37 Murti B., 2006, DesaindanUkuranSampeluntukPen elitianKuantitatifdanKualitatif di Bidangkesehatan, GadjahMada University Press, Yogyakarta Norton  J.A., et  al. ,  2000, Surgery  Basic Science  and  Clinical  Evidence, Part  1, Springer, New York, pp. 702 –  4 Phillips J., 1997, The Biology of the Disease, Blacwell  Science,  Oxford,  pp.  429  – 587
Priyanto,  2007.  Toksisitas  Obat,  Zat Kimia  dan  Terapi  Antidotum,I:1- 31 Pusztai L., et al ., 1996, Cell Proliferation in
Cancer  ;  Regulatory  Mechanisms  of Neoplastic  Cell  growth, Oxford
University Press, New York Rickwood  D.,  Harris  J.R.,  1996,  Cell Biology,    Essential  Techniques, Jhon Willey & Sons Ltd,
Chichester, pp. 38 – 66
Shengli  C.,  2001, Cell  Cycle  and  Tumor Suppressor Genes, Charles Cai Tech, edit Tom Beron, pp. 1 – 36
Sigma  A,  2007,  HT29  Cell  Line  Human
Colon Adenocarcinoma, http://sigmaaldrich.com Sjamsuhidayat  R.,  de  Jong  W.,  1997, Buku  Ajar  IlmuBedah,  EGC, Jakarta, pp. 876 - 99 Soetamto W.P., 2004, PembedahanKarsinomaKolondan Rektum,  In  :  Recent  Advance  and Challenges  in  General  Surgeon  in
Indonesia,  pp. 12 – 9
Sudigdo  S.A.,  Ismael  S.,  2002,  Dasar  - DasarMetodologiPenelitianKlinis, Ed. 2, SagungSeto, Jakarta Suryadi  H.,  Malik  S.G.,  Sudoyo  H., Marzuki  S.,  2004, Mitochondrial Medicine , Eijkman Lecture Series 2, Lembaga Eijkman, Jakarta, pp. 145
– 64
Tannock  I.E.,  Hill  R.P.,  1998, The  Basic Science  of  Oncology ,  3 rd Edition, McGraw Hill, Singapore
Teich  N.M.,  1997, Oncogenes  and
Cancer, In  :  Cellular  and Molecular Biology of Cancer 3 rd Ed, Editors : Franks  L.M.,  Teich  N.M.,  Oxford University  Press,  New  York,  pp.
169 – 201 Tjarta  A.,  2001,    Neoplasia,  Dalam  : Patologi Umum,Sagung Seto,
Jakarta,  pp. 198 – 9
Tjokronegoro  A.,  Sudarsono  S.,  1999, Metodologi Penelitian Bidang Kedokteran , Cetakan ketiga, Fakultas  Kedokteran  Universitas
Indonesia, Jakarta Trigan,  2007,  5  Flurouracil  (  5-FU  ),
http://www.trigan.com/contact.ht m Yayasan Kanker Indonesia, 1999, Rangkuman  Hasil  Seluruh  Pusat Patologi  di  Indonesia,  Dalam  : Kanker di Indonesia , Data
Histopatologi
Yuwono  T.,  2005,  Biologi  Molekular, Penerbit Erlangga, Jakarta