* Penulis untuk korespondensi. e-mail: parawita.faperta@unej.ac.id ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id J. Agron. Indonesia, Agustus 2022, 50(2):202-208 DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v50i2.39715
Somatik Embriogenesis Anggrek Dendrobium lasianthera x Dendrobium antennatum dengan Penambahan BA dan NAA
Somatic Embryogenesis of Dendrobium lasianthera x Dendrobium antennatum with the Addition of BA and NAA
Heni Dwi Sasmita 1 , Parawita Dewanti 2* , dan Firdha Narulita Alfian 3
1 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Jl. Kalimantan Tegalboto No. 37 Sumbersari, Jember, Jawa Timur 68121, Indonesia
2 Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Jl. Kalimantan Tegalboto No. 37 Sumbersari, Jember, Jawa Timur 68121, Indonesia
3 Program Studi Magister Bioteknologi, Universitas Jember, Jl. Kalimantan Tegalboto No. 37 Sumbersari, Jember, Jawa Timur 68121, Indonesia
Diterima 29 Januari 2022/Disetujui 21 Juli 2022

## ABSTRACT
Somatic embryogenesis is in vitro culture propagation technique through cell division derived from plant parts to form embryos into new plants. BA and NAA application in media supported propagation in media to trigger callus formation. This research aimed to obtain the best concentration of BA and NAA combination to induce the callus of the Dendrobium Hybrid (Dendrobium lasianthera x Dendrobium antennatum) through somatic embryogenesis. It was conducted at the Laboratory of the Center for Development of Advanced Sciences and Technology (CDAST), the University of Jember East Java from March to September 2021. The research design used was CRD with two factors, the BA hormone factor at four levels, 0, 0.025, 0.05, and 0.1 mg L -1 and the NAA hormone at three levels, 1, 2, and 3 mg L -1 . Results showed that callus formation of Dendrobium Hybrids was the fastest in the treatment of  BA 0.025 mg L -1 and NAA 3 mg L -1 , with the highest percentage of embryogenic callus at 67%. It showed that the addition of BA 0.025 mg L -1 and NAA 3 mg L -1 was the best result on the time of callus formation and the percentage of embryogenic callus.
Keywords: callus, coleoptile, embryogenic, globular, scutellar

## ABSTRAK
Somatik embriogenesis merupakan teknik perbanyakan kultur in vitro melalui proses pembelahan sel yang berasal dari bagian tanaman untuk membentuk embrio menjadi tanaman baru. Perbanyakan tersebut didukung oleh penambahan BA dan NAA dalam media untuk memicu terbentuknya kalus. Tujuan penelitian ini untuk memperoleh konsentrasi kombinasi BA dan NAA yang terbaik dalam proses induksi kalus tanaman anggrek Dendrobium Hibrida (Dendrobium lasiantera x Dendrobium antennatum) melalui metode somatik embriogenesis. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Center for Development of Advance Sciences and Technology (CDAST) Universitas Jember Jawa Timur dari bulan Maret-September 2021. Rancangan penelitian yang digunakan yaitu rancangan acak lengkap dengan dua faktor yaitu faktor BA 4 taraf, 0, 0.025, 0.05, dan 0.1 mg L -1 dan faktor NAA 3 taraf; 1, 2, dan 3 mg L -1 , dengan menggunakan tiga ulangan. Hasil penelitian menunjukkan waktu terbentuknya kalus anggrek Dendrobium Hibrida  paling cepat pada perlakuan dengan konsentrasi BA 0.025 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 dengan presentase tertinggi terbentuknya kalus embriogenik yaitu sebesar 67%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan BA 0.025 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 merupakan hasil terbaik pada variabel waktu terbentuknya kalus dan presentase kalus embriogenik.
Kata kunci: globular, embriogenik, kalus, koleoptilar, skutelar

## PENDAHULUAN
Anggrek Dendrobium sp.  merupakan  salah  satu jenis  anggrek  yang  dikenal  oleh  kalangan  masyarakat sebagai  primadona,  namun  sampai  saat  ini  perbanyakan anggrek  masih  belum  dilakukan  secara  optimal. Anggrek Dendrobium sp.  seringkali  digunakan  sebagai  tetua persilangan untuk menghasilkan varietas jenis anggrek baru yang unik dan memiliki daya saing tinggi (Andriyani, 2017; Purwanto dan Semiarti,  2009).
Proses  persilangan  anggrek Dendrobium sp. membutuhkan induk yang memiliki sifat jelas dan unggul. Pemilihan induk sangat penting dilakukan untuk mendapatkan hasil anakan yang diinginkan, seperti memiliki bentuk yang identik dengan campuran warna bunga yang indah, bercorak dan  berukuran  besar  (Rianawati,  2017).  Peluang  tersebut banyak dimanfaatkan dengan cara melakukan perbanyakan dengan metode kultur jaringan (Herliana et al ., 2019). Teknik  kultur  jaringan  saat  ini  banyak  digunakan dalam  perbanyakan  bibit  tanaman,  khususnya  untuk tanaman  yang  secara  generatif  sulit  dikembangbiakkan seperti tanaman anggrek. Perbanyakan anggrek dengan cara perkecambahan  biji  (organogenesis)  memiliki  kekurangan yaitu menghasilkan bibit tidak seragam. Perkecambahan biji anggrek juga sulit dilakukan karena ukuran biji anggrek yang sangat kecil dan tidak memiliki endosperma. Permasalahan tersebut  dapat  diatasi  dengan  melakukan  perbanyakan secara kultur in vitro dengan metode somatik embriogenesis (Rofik,  2018).  Somatik  embriogenesis  merupakan  proses pembelahan sel melalui bagian sel somatik tanaman untuk membentuk embrio menjadi tanaman baru. Keunggulan dari teknologi  somatik  embriogenesis  dalam  penyediaan  bibit adalah  mampu  menghasilkan  bibit  dalam  jumlah  banyak, bersifat  seragam  dengan  waktu  yang  singkat  (Mastuti, 2017).  Penggunaan  zat  pengatur  tumbuh  dalam  kultur jaringan  tergantung  pada  jenis  tanaman  yang  digunakan dan tujuan penelitian. Golongan zat pengatur tumbuh yang sering  digunakan  dalam  kultur  jaringan,yaitu  auksin  dan sitokinin. Golongan auksin antara lain IAA ( indole acetic acid ),  NAA  ( naphtalene  acetic  acid ),  IBA  ( indole  butiric acid ),  2,4-D  (2,4- dichlorophenoxy  acetic  acid ).  Golongan sitokinin  antara  lain  BA  ( benzyl  adenine ),  kinetin  dan zeatin.  Penambahan  kombinasi  zat  pengatur  tumbuh  BA dan NAA mampu meningkatkan pembentukan kalus pada proses induksi. Zat pengatur tumbuh NAA memiliki peran untuk memacu pembentukan kalus embriogenik dan struktur embrio somatik. BA mempunyai struktur dasar yang lebih efektif  karena  memiliki  gugus  benzyl  sehingga  tanaman akan merespon dengan baik (Endang, 2011). Induksi kalus embriogenik  anggrek  yang  baik  akan  dapat  ditunjang keberhasilannya membentuk planlet dengan proliferasi kalus yang baik pula. Thidiazuron (TDZ) menjadi salah satu zat pengatur tumbuh yang digunakan untuk tujuan peningkatan tunas  pada  tanaman  anggrek.  TDZ  meningkatkan  kerja sitokinin  lain  baik  sitokinin  eksogen  maupun  endogen (Restanto et  al .,  2018).  TDZ  dengan  konsentrasi  0.3- 1.5  mg  L -1 dilaporkan  efektif  untuk  pertunasan  anggrek
Dendrobium (Rachmawati et al ., 2016). Tujuan penelitian ini untuk memperoleh konsentrasi kombinasi BA dan NAA yang terbaik dalam proses induksi kalus tanaman anggrek Dendrobium Hibrida ( Dendrobium lasiantera x Dendrobium antennatum ) melalui somatik embriogenesis.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Bioteknologi dan Biomolekuler Center for Development of Advanced Sciences and Technology (CDAST) Universitas Jember pada bulan Maret sampai September 2021. Bahan  tanam  yang  digunakan  adalah  tunas  basal planlet  dari  anggrek  Dendrobium  Hibrida  ( Dendrobium lasianthera x Dendrobium  anthennatum )  umur  3  bulan. Media yang digunakan adalah ½ MS dengan ZPT benzile adenin (BA) dan napthalene acetic acid (NAA).

## Induksi Kalus
Proses untuk menginduksi kalus anggrek Dendrobium Hibrida ( D. lasianthera x D. antennatum ) dilakukan dengan cara  mengambil  planlet  anggrek  in  vitro  umur  3  bulan. Tahap selanjutnya melakukan pengirisan pada bagian tunas basal sekitar 0.1-0.5 cm dari akar dengan ketebalan 1-2 mm. Eksplan selanjutnya ditanam pada media ½ MS yang telah dikombinasikan  dengan  BA  dan  NAA. Tahap  selanjutnya yaitu  menginkubasi  pada  ruang  gelap  selama  8  minggu dengan  suhu  ruangan  ±  20  °C.  Pengamatan  dilakukan setiap  hari  untuk  mengetahui  perkembangan  terhadap pembentukan embrio menggunakan mikroskop dan jumlah embrio pada setiap perlakuan.

## Proliferasi Kalus
Kalus dari media induksi yang sudah memasuki tahap proembrio  dan  globular  selanjutnya  dipindahkan  pada media  proliferasi  dengan  komposisi  yang  berbeda.  Media yang digunakan untuk proses proliferasi adalah media ½ MS (Murashige dan Skoog, 1962) yang dikombinasikan dengan penambahan  thidiazuron  (TDZ)  dan  naphthaleneacetic acid  (NAA)  agar  dapat  berproliferasi.  Komposisi  media proliferasi yang digunakan yaitu ½ media MS + 0.3 mg L -1 TDZ + 0.1 mg L -1 NAA (Rachmawati et al ., 2016). Tahap proliferasi dilakukan selama 4-6 minggu pada ruang gelap dengan suhu ± 20 o C.

## Regenerasi Kalus
Kalus pada fase koleoptilar hasil dari tahap proliferasi selanjutnya di pindahkan ke media regenerasi. Komposisi media yang digunakan adalah ½ MS + 1 mg L -1 BAP, 0.1 mg L -1 NAA, dan 15% air kelapa. Pada tahapan ini  kalus yang sudah dipindahkan ke dalam media regenerasi selanjutnya ditransfer  ke  kondisi  terang  dengan  penyinaran  lampu selama 16 jam dan kondisi gelap 8 jam dalam ruang kultur jaringan pada suhu 24 ± 2 °C .

## Regenerasi Kalus
Kalus pada fase koleoptilar hasil dari tahap proliferasi selanjutnya di pindahkan ke media regenerasi. Komposisi media  yang  digunakan  adalah  ½  MS  +  1  mg  L -1 BAP +  0.1  mg  L -1 NAA  +  15%  air  kelapa.  Kalus  yang  sudah dipindahkan  ke  dalam  media  regenerasi  selanjutnya ditempatkan pada rak kultur dengan kondisi ruang terang 25 °C untuk berfotosintesis dengan baik.

## Analisis Data
Rancangan percobaan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 2 faktor yaitu penambahan BA dan NAA. Setiap perlakuan diulang sebanyak tiga kali sehingga terdapat  12  perlakuan  dan  akan  diperoleh  36  percobaan dengan masing-masing botol berisi 5 eksplan basal sehingga terdapat  total  180  unit  percobaan.  Data  pengamatan  yang diperoleh selanjutnya dianalisis dengan menggunakan sidik ragam (ANOVA) dan pada perbedaan yang nyata dilanjutkan dengan uji Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu Terbentuknya Kalus
Pengamatan  waktu  terbentuknya  kalus  embriogenik dilakukan  setiap  hari.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh menunjukkan bahwa perlakuan BA 0.025 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 memberikan pengaruh terhadap waktu terbentuknya kalus  rata-rata  paling  cepat  yaitu  14  hari  setelah  tanam, sedangkan untuk perlakuan BA 0 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 memberikan pengaruh terhadap waktu terbentuknya kalus anggrek  rata-rata  paling  lama  yaitu  21  hari  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Penambahan zat pengatur tumbuh dapat menentukan keberhasilan  dalam  proses  diferensiasi  sel  pada  jaringan sel yang dikulturkan (Sulichantini et al ., 2020). Pemberian konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  yang  tidak  tepat  akan menghambat  pertumbuhan  kalus  pada  eksplan  (Hardjo dan  Hartatie,  2018).  Faktor  lain  yang  mempengaruhi pembentukan kalus diantaranya, media, lingkungan kultur dan pemilihan bahan tanam (Xiong et al ., 2018).

## Persentase Kalus Embriogenik
Hasil  presentase  kalus  embriogenik  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  BA  0.025  mg  L -1 dan  NAA  3 mg  L -1 yaitu  sebesar  67%  dan  kalus  embriogenik  dengan presentase terendah terdapat pada perlakuan BA 0 mg L -1 dan  NAA  2  mg  L -1 yaitu  sebesar  20%  dapat  dilihat  pada Gambar  2.  Perbanyakan  somatik  embriogenesis  pada tahap  induksi  membutuhkan  penambahan  hormon  auksin dengan konsentrasi yang lebih tinggi dibandingkan dengan konsentrasi  hormon  sitokinin.  Auksin  berperan  penting dalam  menginduksi  pembentukan  kalus  yaitu  memacu proses pemanjangan dan pembelahan sel di dalam jaringan
kambium pada tanaman, sehingga diperlukan penggunaan auksin dengan konsentrasi yang relatif lebih tinggi (Hartati et al ., 2016). Keberhasilan  perbanyakan  anggrek  melalui  somatik embriogenesis  dipengaruhi  oleh  benzile  adenin  (BA).  BA yang diberikan dalam media mampu meningkatkan aktivitas dalam pembelahan sel pada eksplan, sehingga mempengaruhi jumlah  kalus  yang  terbentuk  (Puspita et  al .,  2011). Napthalene acetic acid (NAA) merupakan hormon auksin yang sangat efektif dalam perbanyakan anggrek, khususnya pada  tahap  induksi  melalui  somatik  embriogenesis  (Kasi dan  Semiarti,  2016).  Penggunaan  NAA  berperan  penting dalam  pembentukan  sel  kalus  yang  kompak  dan  mampu menghasilkan warna kalus yang hijau (Prasetyo et al ., 2020). Perbanyakan  somatik  embriogenesis  pada  tahap  induksi membutuhkan penambahan auksin dengan konsentrasi yang lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  konsentrasi  sitokinin. Auksin berperan penting dalam menginduksi pembentukan kalus yaitu memacu proses pemanjangan dan pembelahan sel  di  dalam  jaringan  kambium  pada  tanaman,  sehingga diperlukan  penggunaan  auksin  dengan  konsentrasi  yang relatif  lebih  tinggi  (Lestari,  2011).  Pembentukan  kalus embriogenik  yang  rendah  disebabkan  oleh  peristiwa browning.  Peristiwa browning terjadi  karena  senyawa fenol  pada  eksplan  terlalu  tinggi,  sehingga  menyebabkan eksplan berubah warna menjadi coklat hingga kehitaman. Adanya  peristiwa  browning  mempengaruhi  penurunan proses pengkalusan hingga menyebabkan kematian jaringan (Widayanti et al ., 2014).
Keterangan: Angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama  tidak  berbeda nyata pada uji DMRT taraf 5%
Gambar 1. Waktu terbentuknya kalus anggrek Dendrobium Hibrida ( D.  lasianthera x D.  antennatum )  pada  12  perlakuan media. B0N1 = BA 0 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B0N2 = BA 0 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B0N3 = BA 0 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B1N1 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA
1 mg L -1 , B1N2 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 ,
B1N3 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B2N1 =
BA 0.05 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B2N2 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B2N3 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B3N1 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B3N2 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B3N3 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 . 20 g 21 h 20 g 19 f 15 b 14 a 17 d 18 e 18 e 16 c 19 f 15 b 0 5 10 15 20 25 W ak tu m un cu l k alu s ( Har i) Waktu terbentuknya kalus Perlakuan

## Morfologi Kalus
Morfologi  embrio  somatik  anggrek  dalam  tahap proliferasi  terdapat  beberapa  fase  yaitu  fase  globular, skutelar dan koleoptilar. Tahap awal sebelum terbentuknya kalus  adalah  proembrio  (PEM).  Fase  globular  merupakan fase yang ditandai dengan munculnya nodul atau tonjolan kecil  berbentuk  bulat  berwarna  hijau  (Astuti,  2019).  Fase selanjutnya adalah skutelar. Fase skutelar merupakan fase pemisahan dua kotiledon yang menyerupai bentuk jantung.
Fase  berikutnya  yaitu  fase  koleoptilar.  Fase  koleoptilar ditandai  dengan  kedua  kotiledon  yang  terus  berkembang hingga membentuk calon tunas dan meristem akar (Xiong et al ., 2018). Fase perkembangan kalus anggrek Dendrobium Hibrida ( D. lasianthera x D. antennatum ) dapat dilihat pada Gambar 3.

## Histologi Kalus Embriogenik
Histologi  somatik  embriogenesis  tanaman  anggrek Dendrobium Hibrida  ( D.  lasianthera x D.  antennatum ) setelah  membentuk  embrio  somatik  akan  berkembang melewati 3 fase yaitu fase globular, fase skutelar dan fase koleoptilar. Hasil pengamatan histologi menunjukkan bahwa sel  kalus  embriogenik  berukuran  kecil  dan  mempunyai sitoplasma  padat  (Gambar  4).  Pada  Gambar  4(A)  terlihat bahwa  sel  embriogenik  mengalami  pembengkakan menjadi  proembrio.  Proembrio  berkembang  membentuk embrio globular yaitu pada Gambar 4(B) dan berkembang membentuk  struktur  seperti  suspensor  pada  bagian  basal embrio. Tonjolan pada embrio globular tersebut membelah menjadi  dua  menyerupai  hati  atau  disebut  skutelar  yaitu pada Gambar 4(C). Setelah itu embrio mulai berkembang memanjang  yang  nantinya  akan  membentuk  primordia tunas dan akar seperti pada Gambar 4(D).

## Karakteristik Kalus Embriogenik
Berdasarkan  morfologinya  terdapat  dua  jenis  kalus yaitu  kalus  yang  bersifat  embriogenik  dan  kalus  non embriogenik.  Perbandingan  antara  kalus  yang  bersifat embriogenik dan non embriogenik dapat dilihat pada Gambar
1 A PEM B GE SC C D CL CL Gambar 3. Fase embrio somatik anggrek Dendrobium Hibrida ( D. lasianthera x D. antennatum ), A. Kalus embriosomatik proembrio  (PEM),  B.  Kalus  embriogenik  mulai membentuk calon embrio fase globular (GE), C. Embrio somatik fase globular dan memasuki awal fase skutelar (SC), D. Embrio somatik fase koleoptilar (CL)
1 a b d PEM GE SC CL C PEM A B D GE
Gambar 4.  Histologi  perkembangan  somatik  embriogenesis pada  tanaman  anggrek  Dendrobium  Hibrida  ( D. lasianthera x D. antennatum ). A) PEM = proembrio. B) GE = embrio globular. C) SC = skutelar. D) CL = koleoptilar
0 10 20 30 40 50 60 70 80 Pr es en tas e (% ) Perlakuan Persentase  kalus embriogenik 53 ab 67 a 40 b 40 b 33 c 47 b 27 d 53 ab
Keterangan: Angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama  tidak  berbeda nyata pada uji DMRT taraf 5%
Gambar  2.  Presentase  kalus  embriogenik  anggrek Dendrobium Hibrida  ( D.  lasianthera x D.  antennatum )  pada  12 perlakuan media. B0N1 = BA 0 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B0N2 = BA 0 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B0N3 = BA 0 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B1N1 = BA 0.025 mg
L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B1N2 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B1N3 = BA 0.025 mg L
-1 dan NAA 3 mg L -1 , B2N1 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 ,
B2N2 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B2N3 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B3N1 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B3N2 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B3N3 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 . 27 d 20 e 27 d 27 d
5(A). Kalus yang bersifat embriogenik memiliki beberapa ciri  diantaranya,  bertekstur  remah,  nampak  mengkilat dan  berwarna  putih  kekuningan.  Karakteristik  kalus  yang berwarna putih kekuningan menandakan bahwa sel-sel kalus tersebut sudah dewasa untuk menuju fase pembelahan aktif. Kalus  non  embriogenik  pada  Gambar  5(B)  memiliki  ciri- ciri kalus yang kompak, kalus nampak basah dan berwarna coklat hingga kehitaman menandakan bahwa kalus tersebut sulit bahkan tidak mampu untuk mengalami perkembangan selanjutnya (Mertaningsih et al ., 2018).

## Warna Kalus
Pengamatan  warna  kalus  dapat  dipermudah  dengan menggunakan  bantuan  buku  pedoman Munsell  Color Chart  For  Plant  Tissue untuk  membandingan  kecocokan warna kalus yang sesuai pada setiap perlakuannya. Tabel 1 menunjukkan adanya perbedaan warna pada masing-masing kalus pada tiap perlakuan. Karakteristik warna kalus dapat menandakan  ada  tidaknya  kandungan  klorofil  di  dalam jaringan  tanaman.  Kalus  yang  memiliki  warna  semakin dekat  dengan  warna  hijau  maka  semakin  banyak  pula kandungan klorofil yang dihasilkan, sedangkan kalus yang berwarna  putih  hingga  putih  kekuningan  sudah  dikatakan sebagai jaringan embrionik  dengan kandungan butiran pati yang tinggi (Muliati et al ., 2017).

## Regenerasi Kalus
Kalus pada umur 3 minggu dalam media regenerasi kalus tampak berkembang menggerombol, lebih besar dan berwarna  hijau  segar  seperti  terlihat  pada  Gambar  6(A). Pada  bagian  koleoptil  terlihat  bagian  yang  berkembang
1
A B Gambar 5. Karakteristik kalus anggrek Dendrobium Hibrida ( D. lasianthera x D. antennatum ). Kalus non  embriogenik (A), Kalus embriogenik (B). Kalus non embriogenik
Perlakuan Visual warna Munsell color chart Gambar kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan Tabel 1. Warna kalus pada tahap induksi hingga tahap proliferasi berdasarkan Munsell Color Chart
1
Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2
Putih keabuan
B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3
5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4
Hijau muda B1N2 5 Y 7/6
Hijau kekuningan
B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan
B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1
5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2
2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2
Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan
B1N3 2.5 GY 7/6
Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3
5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan
B1N3 2.5 GY 7/6
Hijau B2N1
5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3
5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1
2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2
2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1
Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual
Warna Munsell
Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1
Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2
Putih keabuan
B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2
5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2
Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1
Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2
Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3
5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3
5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2
Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1
5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan
B0N3 5 Y 8/4
Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan
B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4
Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan
B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
1
Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4 Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2
5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4
Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan 1 Perlakuan Visual Warna Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4
Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan
B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan
B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3
2.5 Y 8/2 Putih keabuan
1
Perlakuan Visual Warna
Munsell Color Chart Gambar Kalus B0N1 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B0N2 2.5 Y 6/2 Kecoklatan B0N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B1N1 2.5 GY 7/4
Hijau muda
B1N2 5 Y 7/6 Hijau kekuningan B1N3 2.5 GY 7/6 Hijau B2N1 5 Y 8/4 Putih kekuningan B2N2 2.5 Y 8/2 Putih keabuan B2N3 5 Y 8/4 Putih kekuningan B3N1 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N2 5 Y 8/6 Kuning kehijauan B3N3 2.5 Y 8/2 Putih keabuan Keterangan: B0N1 = BA 0 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B0N2 = BA 0 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B0N3 = BA 0 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B1N1 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B1N2 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B1N3 = BA 0.025 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B2N1 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B2N2 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B2N3 = BA 0.05 mg L -1 dan NAA 3 mg L -1 , B3N1 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 1 mg L -1 , B3N2 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 2 mg L -1 , B3N3 = BA 0.1 mg L -1 dan NAA 3 mg L
-1
memanjang seperti muncul bakal tunas seperti pada Gambar 6(B). Pada Gambar 6(C) terlihat kalus tersebut sudah mulai muncul tunas dan bakal daun dan dilanjutkan pada Gambar 6(D) terlihat bahwa bakal daun pada kalus sudah tumbuh dan berkembang sempurna menjadi tanaman lengkap.
Regenerasi  dilakukan  agar  kalus  dapat  berkembang secara sempurna membentuk planlet. Pada hasil regenerasi kalus  yang  berwarna  hijau  dihasilkan  dari  adanya penambahan air kelapa pada media (Saepudin et al ., 2020). Penambahan  bahan  organik  seperti  air  kelapa  memiliki banyak  kelebihan,  diantaranya  untuk  mendorong  laju pertumbuhan  kalus,  mampu  meningkatkan  pertumbuhan tunas, jumlah akar dan bobot pada planlet tanaman anggrek (Ambarwati et al ., 2021). Sumber nutrisi yang terkandung dalam  air  kelapa  bermacam-macam,  diantaranya  asam organik,  asam  amino,  vitamin,  sumber  gula  dan  hormon hormon  auksin  dan  hormon  sitokinin  yang  berpengaruh besar terhadap pertumbuhan eksplan kalus anggrek (Utami dan Hariyanto, 2020).
diberikan dan dana penelitian dari Program Pengembangan Usaha Produk Intelektual Kampus (PPUPIK) dengan nomor kontrak  1614/UN25.3.2/PM/2022 Tanggal  17  Maret  2022 atas nama Dr. Ir. Parawita Dewanti, M.P.

## DAFTAR PUSTAKA
Andriyani,  A.  2017.  Membuat  Tanaman  Anggrek  Rajin Berbunga.  Publ.  Agromedia  Pustaka,  Jakarta, Indonesia.
Ambarwati,  I.D.,  F.N.  Alfian,  P.  Dewanti.  2021.  Respon anggrek Dendrobium  sp.,  Oncidium  sp., dan Phalaenopsis  sp .  terhadap  pemberian  empat  jenis nutrisi organik yang berbeda pada tahap regenerasi planlet. Agrikultura 32:27-36.
Astuti,  T.A.  2019.  Induksi  embriogenesis  somatik  pada anggrek Vanda s umatrana Schltr . dengan penambahan beberapa konsentrasi asam 2,4- Diklorofenoksiasetat (2,4-D). BIO. UA. 7:6-13.
Endang, G.  L. 2011.  Peranan zat pengatur tumbuh dalam perbanyakan  tanaman  melalui  kultur  jaringan.
Agrobiogen 7:63-68.
Hardjo,  P.H.,  Hartatie.  2018.  Kultur  Jaringan  Anggrek Embriogenesis Somatik Vanda tricolor (Lindl.) var. pallida. Graha Ilmu, Yogyakarta, Indonesia.
Hartati,  S.,  A.  Budiyono,  O.  Cahyono.  2016.  Pengaruh NAA  dan  BAP  terhadap  pertumbuhan  subkultur anggrek  hasil  persilangan Dendrobium  biggibum x Dendrobium liniale . J. Sustain. Agric. 31:33-37.
Herliana,  O.,  E.  Rokhminarsih,  A.  Iqbal,  Kartini.  2019.
Pelatihan  pembibitan  anggrek  secara  vegetatif, generatif dan kultur jaringan pada paguyuban mantan buruh  migran  “Seruni”  Kabupaten  Banyumas. Logista 3:2579-6283.
Kasi,  P.D.,  E.  Semiarti.  2016.  Pengaruh  thidiazuron  dan naphthalene acetic acid untuk induksi embriogenesis somatik  dari  daun  anggrek Phalaenopsis “ Sogo Vivien ”. Dinamika 7:31-40.
Lestari,  E.G.  2011.  Peranan  zat  pengatur  tumbuh  dalam perbanyakan  tanaman  melalui  kultur  jaringan. Agrobiogen 7:63-68.
Mastuti, R. 2017. Dasar-dasar Kultur Jaringan Tumbuhan. UB Press, Malang, Indonesia.
Mertaningsih, N.P., H. Yuswanti, A.A.M. Astingsih. 2018. Induksi kalus pada  kultur pollen Phalaenopsis dengan menggunakan  asam  2,4D-Diklorofenoksiasetat. Agrotrop 8:47-55.
1 B C D A
Gambar  6.  Hasil  regenerasi  kalus  embriogenik  anggrek Dendrobium Hibrida  ( D.  lasianthera x D. antennatum ).  (A)  Kalus  umur  3  minggu  di dalam  botol  kultur  (B)  kalus  umur  5  minggu yang  diamati  melalui  mikroskop  (C)  kalus umur 8 minggu (D) kalus umur 14 minggu

## KESIMPULAN
Perlakuan  pemberian  kombinaasi  BA  0.025  mg  L -1 +  NAA  3  mg  L -1 pada    media  kultur  memberikan  respon terbaik dalam induksi kalus anggrek Dendrobium Hibrida ( Dendrobium  lasianthera x Dendrobium  antennatum ) melalui  somatik  embriogenesis  dengan  rerata  presentase pembentukan kalus sebesar 67%, dan waktu pembentukan kalus pada 14 hari setelah tanam.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih pada UPT Center for  Development  of  Advanced  Science  and  Technology (CDAST) Universitas Jember atas fasilitas penelitian yang
Muliati,  T.,  Nurhidayah,  Nurbaiti.  2017.  Pengaruh  NAA, BAP  dan  kombinasinya  pada  media  ms  terhadap perkembangan Sansevieria  Makrophylla secara  in vitro. Faperta. 4:1-13.
Prasetyo, Y. , K. Njudan, H.M.P. Wibowo, A.H. Krisnawan. 2020. Evaluasi pertumbuhan suspensi sel Dendrobium anosmum  var . Gigantea dan  aktivitasnya  sebagai antioksidan. Pharmaceutica Indonesiana 3:70-79.
Purwanto,  A.W.,  E.  Semiarti.  2009.  Pesona  Kecantikan Anggrek. Kanisius, Yogyakarta, Indonesia.
Puspita, C., Sudiarso, T. Wardiyati 2011. Pengaruh benzyl adenin dan  media  dasar  pada  perbanyakan  embrio anggrek secara in vitro. Buana Sains 11:1-16.
Rachmawati, F., N.M.A. Wiendi, N.A. Mattjik, A. Purwito,
B. Winarto. 2016. Perbanyakan in vitro Dendrobium Indonesia Raya ‘Ina’ melalui embriogenesis somatik berbasis  sistem  bioreaktor.  J.  Agron.  Indonesia 44:306-314.
Restanto, D.P., B. Kriswanto, M.N. Khozim, S.Soeparjono. 2018. Kajian thidiazuron (TDZ) dalam induksi PLB anggrek Phalaenopsis sp  secara  in  vitro.  Agritrop 16:176-185.
Rianawati, S. 2017. Ragam anggrek Dendrobium Indonesia yang berpotensi sebagai induk persilangan komersial. Hortikultura 13:27-32.
Rofik.  A.  2018.  Peluang  wirausaha  budidaya  anggrek Dendrobium hybrid.  Abdimas  Mahakam  2:2549- 5755.
Saepudin.  A.,  Y.  Yulianto,  N.  Aeni.  2020.  Pertumbuhan eksplan  in  vitro  anggrek  hibrida Dendrobium pada beberapa  media  dasar  dan  konsentrasi  air  kelapa. Media Pertanian 5:2085-4226.
Sulichantini.  E.,  Eliyanti,  A.  Saputro,  A.P.D.  Nazari, Susylowati.  2020.  Pengaruh  zat  pengatur  tumbuh dan  bahan  organik  terhadap  anggrek  tebu Grammatophyllum  speciosum  Blume secara  kultur jaringan . Agrotek. Trop. Lembab 4:13-19.
Utami,  E.S.W.,  Hariyanto,  S.  2020.  Organic  compounds: contents and their role in improving seed germination and protocom development in orchids. Int. J. Agron. 2020:1-12.
Widayanti, A.I., R. Dwiyani, H. Yuswanti. 2014. Pengaruh kombinasi naphthalene  acetic  acid (NAA) benzyl amino  purine (BAP)  dan  jenis  eksplan  pada mikropropagasi  anggrek Vanda  tricolor  Lindl.  Var. Suavis. Agrotrop 4:1-16.
Xiong,  Y.,  X.  Yang,  T.  Gao,  T.  Zhao,  Z.  Chen,  X.  An. 2018. High-efficiency somatic embryogenesis from seedlings  of Koelreuteria  paniculata Laxm.  Forest 9:1-17.