…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. ISSN 2798-3471 (Cetak)
Journal of Innovation Research and Knowledge
ISSN 2798-3641 (Online)

## DAYA HAMBAT EKSTRAK BUAH PALA (Myristica fragrans Houtt) TERHADAP
Salmonella typhi SECARA IN VIVO
Oleh
Eka Noneng Nawangsih 1) , Dimas TP Baladika 2) & Ania Kurniawati Purwa Dewi 3) 1,2,3 Fakultas Kedokteran Unjani, Universitas Jenderal Achmad Yani Jl. Ters.Jenderal Sudirman PO BOX 148, Cimahi,
Jawa Barat, (022)6642781-84
Email: 1 eka.noneng@lecture.ac.id , 2 dimmstrend@gmail.com , 3 aniadewi@gmail.com

## Abstrak
Demam  tifoid  masih  menjadi  masalah  di  negara  berkembang.  Buah  pala  ( Myristica  fragrans Houtt )  merupakan  tanaman  tradisional  asal  indonesia  yang  memiliki  manfaat  antimikroba terhadap salmonella .  Pemberian  ekstrak  pala  dapat  menghambat  adhesi  mikroba,  enzim-enzim, dan  sintesis  protein.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan  daya  hambat  ekstrak metanol  daging  buah  pala  terhadap  kloramfenikol  dan  dosis  efektif  dari  ekstrak  metanol  buah pala ( Myristica fragrans Houtt ) dalam menurunkan Total Plate Count (TPC) bakteri Salmonella . Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  laboratorik  menggunakan  rancangan Pre-Post  Treatment Design. Tikus galur Wistar jantan 25 ekor dibagi menjadi 5 kelompok yaitu K1 (kontrol positif), K2  (kontrol  negatif),  K3  (diinfeksi Salmonella dan  ekstrak  pala  100  mg/kgBB),  K4  (diinfeksi Salmonella dan  ekstrak  pala  150  mg/kgBB),  K5  (diinfeksi Salmonella dan  ekstrak  pala  200 mg/kgBB). Uji beda menggunakan uji parametrik one way ANOVA dilanjutkan post hoc test LSD . Hasil menunjukkan ekstrak daging buah pala menurunkan jumlah TPC bakteri Salmonella secara bermakna  (p=0,043),  dengan  uji post  hoc LSD  ada  perbedaan  bermakna  antar  kelompok perlakuan dosis 100 mg/kgBB dengan dosis 150 mg/kgBB (p=0,021). Terdapat perbedaan yang bermakna  pada  kelompok  perlakuan  100  mg/kgBB  dan  kelompok  kontrol  positif  (p=0,028). Simpulan penelitian menunjukkan bahwa pemberian ekstrak buah pala dapat menurunkan jumlah TPC bakteri Salmonella , khususnya pada dosis 150 mg/kgBB Kata Kunci: Daya hambat, Ekstrak buah pala, Salmonella Typhi, in vivo

## PENDAHULUAN
Salmonella  enterica  serotipe  typhi ( S. typhi )  merupakan  bakteri  yang  menyebabkan penyakit  demam  tifoid.  Bakteri  ini  dapat menginfeksi  melalui  makanan  atau  minuman yang  terkontaminasi  oleh  feses  atau  urin  dari orang yang terinfeksi S. typhi [1].
Demam  tifoid  memiliki  gejala  dengan spektrum  klinis  yang  luas,  sehingga  sangat sulit  ditentukan  jumlah  kasusnya.  Data  World Health  Organization  (WHO)  tahun  2003 memperkirakan  terdapat  sekitar  17  juta  kasus demam  tifoid  di  seluruh  dunia,  dengan insidensi 600.000 kasus kematian setiap tahun [2].  Di  Indonesia,  demam  tifoid  jarang dijumpai  secara  epidemis  namun  bersifat endemis,  dan  banyak  dijumpai  di  kota-kota
besar. Insidensi tifoid secara umum dilaporkan sebesar  75%  didapatkan  pada  umur  kurang dari 30 tahun. Pada anak-anak biasanya diatas 1  tahun  dan  terbanyak  diatas  5  tahun  [3]. Berdasarkan Profil Kesehatan  Indonesia tahun 2010, demam tifoid atau paratifoid menempati urutan  ke-3  dari  10  penyakit  terbanyak  pasien rawat  inap  di  rumah  sakit  tahun  2010  yaitu sebanyak  41.081  kasus,  dan  yang  meninggal sebanyak 274 orang. sedangkan, menurut Riset Kesehatan  Dasar  Nasional  tahun  2007, prevalensi  tifoid  klinis  nasional  sebesar  1,5% yang  artinya  ada  kasus  tifoid  1.500  per 100.000 penduduk Indonesia [2].
Penggunaan  antibiotik  pertama  kali untuk mengobati demam tifoid yaitu kloramfenikol,  pada  tahun  1948  dan  menjadi
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. Journal of Innovation Research and Knowledge
terapi  pilihan  sampai  tiga  dekade  di  samping ampisilin  dan  trimetoprim  sulfametoksazol. Namun  karena  penggunaan  berbagai  jenis antibiotik  secara  luas  yang  tidak  tepat,  dan mudahnya  mendapatkan  obat  tersebut  di masyarakat,  dapat  menimbulkan  peningkatan terjadinya resistensi bakteri terhadap antibiotik,  yang  disebut antibiotic  resistant bacteria (ABRB),  termasuk S.  typhi . Laporan pertama  mengenai  resistensi S.  typhi terhadap kloramfenikol  pada  tahun  1974,  duapuluh tahun  kemudian  dilaporkan  resistensi S.  typhi terhadap kloramfenikol, ampisilin, dan trimetoprimsulfametoksazol, atau dikenal sebagai  MDR  ( multiple drug  resistance ) S. typhi [4,5]. Selain itu pengunaan kloramfenikol dapat menimbulkan efek samping  seperti  anemia  aplastik, gray  baby symdrome , dan pertumbuhan Candida albicans pada  membran  mukosa  [6].  Oleh karena  itu,  diperlukan  suatu  alternatif  lain yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri  tanpa  menimbulkan  efek  samping  dan murah,  yaitu  rempah-rempah  seperti  tanaman pala yang mempunyai potensi antibakteri.
[1] Pala merupakan tanaman rempah-rempah  yang  berasal  dari  Maluku, namun  pusat  pembudidayaan  hanya  di  dua kawasan  Indonesia  yaitu  Pala  Hindia  Timur ( East  Indian  Nutmeg )  dan  Kepulauan  Pala Hindia  Barat  ( West  Indian  Nutmeg ). 7 Bagian terbanyak dari buah pala ialah daging buah pala sebesar  77,9%  sisanya  terdiri  dari  biji  dan tempurung. Namun bagian buah yang mempunyai  nilai  ekonomi  cukup  tinggi  ialah biji  pala yang dapat  dijadikan minyak pala dan Indonesia  merupakan  pengekspor  biji  pala terbesar didunia sekitar 60%. Sedangkan bagian buah  pala  lainnya  terutama  daging  buah  pala kurang dimanfaatkan, padahal daging buah pala merupakan  bagian  terbesar  dari  hasil  panen tanaman  pala  yang  mempunyai  potensi  bahan baku  yang  sangat  besar.  Salah  satu  upaya pemanfaatan daging buah pala adalah pembuatan manisan pala, dodol pala, sirup pala, bahan baku kosmetik, dan juga obat-obatan [8]. Dari  beberapa  penelitian  yang  telah  dilakukan
diketahui  bahwa  rempah-rempah  seperti  pala dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroba. Komponen  utama  yang  memberikan  sifat antimikroba ialah minyak atsiri. Senyawa yang terkandung  didalamnya  seperti  α -pinene,  β- pinene,  terpine-4-ol, dan myristicin memiliki aktivitas antimikroba yang baik, juga antiinflamasi dan antifungal [7-11]. Mekanisme antimikroba pala berkorelasi dengan kemampuannya  menghambat  adhesi  mikroba, enzim-enzim, dan sintesis protein [7].
[2] Pada  penelitian  yang  dilakukan oleh  Ropy  pada  tahun  2011  mengenai  daya hambat  ekstrak  metanol  daging  buah  pala ( Myristica fragrans houtt ) terhadap salmonella typhi secara in  vitro ,  didapatkan  bahwa konsentrasi  100%  ekstrak  daging  buah  pala menunjukkan  diameter  zona  hambat  sebesar 24,5  mm  sudah  cukup  efektif  namun  masih lebih  efektif  kloramfenikol  dengan  zona hambat  sebesar  35,0  mm  [12].  Selain  buah pala, ekstrak tanaman daun senggani ( Melastoma  candidum )  konsentrasi  100% menunjukkan  daya  hambat  sebesar  21,44  mm [13,14].  Hal  ini  menunjukkan  ekstrak  daging buah  pala  lebih  unggul  dari  tanaman  lain dalam  penghambatan  antimikroba  terhadap S. typhi .  Belum  banyak  literatur  mengenai penelitian rempah-rempah sebagai antimikroba secara in  vivo ,  khususnya  terhadap S.  typhi . Salah  satu  uji  potensi  rempah-rempah  yang pernah  dilakukan  oleh  Siwipeni, et  al pada tahun  2013  menguji  curcumin  ( Curcuma domestica )  sebagai  antimikroba  secara in  vivo terhadap S.  typhi ,  diketahui  bahwa  kombinasi kotrimoksazol  dengan dosis 200 mg curcumin menunjukkan  daya  hambat  yang  signifikan setelah diterapi selama 5 hari [15].
Berdasarkan uraian diatas penulis bermaksud  melanjutkan  penelitian  mengenai daya  antimikroba  buah  pala  secara in  vivo dengan  menggunakan  sampel  feses  tikus ( Rattus  norvegicus )  jantan  galur  wistar  yang sebelumnya telah diinduksi S. typhi dan diberi terapi  esktrak  metanol  buah  pala  dalam berbagai  dosis  selama  10  hari  kemudian dibandingkan dengan kloramfenikol.
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
ISSN 2798-3641 (Online)

## METODE PENELITIAN
Prosedur  Pembuatan  Ekstrak  Metanol Daging Buah Pala
Daging  buah  pala  diekstrak  dengan menggunakan  teknik  maserasi  menggunakan pelarut  metanol.  Ekstrak metanol  daging  buah pala  diberikan  secara  oral  dan  diemulsifikasi dengan Carboxy  Methyl  Cellulose .  Terapi dimulai  7  hari  setelah  infeksi,  selama  10  hari. Dosis yang digunakan 100 mg/kgBB/hari, 150 mg/kgBB/hari,  dan  200  mg/kgBB/hari  yang diberikan dalam empat kali pemberian [16].

## Preparasi Kloramfenikol
Dosis  kloramfenikol  500  mg  dikonversi pada  hewan  coba  tikus  ( Rattus  norvegicus ) dengan faktor konversi 0,018. Dosis terapeutik yang  diberikan  36  mg/hari  yang  dibagi  dalam empat  kali  pemberian.  Terapi  diberikan menggunakan sonde gavage secara per oral.
Pembuatan Media Xylose Lysine

## Deoxycholate (XLD)
Sebanyak  53  gram  agar  powder  XLD disuspensikan  ke  dalam  1    liter  aquades  yang telah  disterilkan  dalam autoclave pada  suhu 121 0 C  15  menit  selama  2  jam.  Larutan  XLD agar,  dipanaskan sambil  diaduk dalam  tabung schott  duran menggunakan vortex hingga homogen dan mendidih. Setelah itu didiamkan sebentar  hingga  suhu  ±50 0 C.  Dituang  ke dalam cawan petri masing - masing diisi 15 ml [17].
Reidentifikasi Bakteri
Reidentifikasi  bakteri  dilakukan  secara makroskopis,  mikroskopis,  dan  uji  biokimia. Pemeriksaan  makroskopis  dilakukan  dengan cara melihat secara langsung morfologi koloni Salmonella  typhi pada  media  pertumbuhan. Pengamatan secara mikroskopis dapat dilakukan  setelah  pewarnaan  Gram.  uji biokimia  dengan  mengambil  koloni  bakteri ditanam  pada  media  uji  biokimia  (indol,  MR, Vp, simmons  citrate ,  motilitas,  urea,  TSIA, glukosa,  laktosa  dan  sukrosa)  diinkubasi  pada suhu 37˚C selama 24 jam [18,19].
Peremajaan Bakteri Uji
Media  XLD  agar  yang  digunakan  untuk peremajaan  harus  dalam  bentuk  padat.  Koloni bakteri Salmonella  typhi yang  tumbuh  pada
media XLD setelah di inkubasi selama 24 jam, diamati. Satu koloni bakteri diambil menggunakan  ose  yang  sudah  dipanaskan sampai  pijar  kemudian  dengan  cara streak diratakan  pada  permukaan  XLD  agar  dalam cawan  petri.  Setelah  itu  diinkubasi  selama  24 jam pada suhu 37 0 C [18,20].

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Koloni bakteri yang ditumbuhkan dalam media  XLD  lalu  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  37 0 C.  Bakteri  hasil  biakan dicampurkan  dengan  larutan  NaCl  0,9%  steril ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian  dinilai kekeruhannya  menggunakan  spektrofotometer dengan  panjang  gelombang  650  nm  dan absorbansi  0,25  atau  setara  dengan  kekeruhan McFarland  0,5  yaitu  10 8 cfu/ml,  kemudian diencerkan  tiga  kali  hingga  didapatkan  10 5 cfu/ml  sesuai  dosis  infeksi S.  typhi terhadap tikus percobaan [15,21].
Penentuan  Kepadatan  Bakteri  Salmonella typhi
Kepadatan  bakteri S.  typhi ditentukan dengan  membandingkan  berat  badan  tikus ( Rattus norvegicus ) rata-rata 200 gram dengan berat  badan  manusia  rata-rata  70  kg,  lalu dikalikan  kepadatan  rerata  bakteri  yang  sudah bisa mengifeksi manusia. Maka dapat dihitung 200/70.000  ×  10 8 =  2,8  ×  10 5 bakteri  per mililiter.  Namun  dengan  mempertimbangkan kapasitas  lambung  mencit,  maka  volume diperkecil  menjadi  0,5  ml  dan  kepadatan dikalikan  2  menjadi  5,7  ×  10 5 dalam  0,5  ml suspensi bakteri [21].
Lama Penginfeksian yang Diberikan secara per Oral
Infeksi  sistemik Salmonella typhi terjadi pada  hari  ke-tujuh  setelah  terinfeksi  [15]. Berdasarkan  pernyataan  studi  tersebut,  maka peneliti  mengkonfirmasi  bahwa  tikus  jantan galur  wistar  diberi  terapi  setelah  diinduksi selama  7  hari.  Pemberian  terapi  dilakukan selama 10 hari.

## Prosedur Kultur Spesimen Feses
Kultur  spesimen  feses  tikus  dilakukan dengan  cara  sampel  feses  tikus  sebanyak  satu gram  ditambah  dengan  9  ml  larutan  NaCl 0,9%  steril  hingga  didapatkan  pengenceran  P-
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. Journal of Innovation Research and Knowledge
1.  Sampel  P-1  diencerkan  kembali  dengan NaCl  0,9% steril  hingga  didapat  pengenceran yang  diinginkan.  Sebanyak  1  ml  sampel  dari pengenceran  yang  diinginkan  dipipet  dan ditanamkan pada cawan petri steril, selanjutnya  ditambahkan  medium  XLD  agar cair sebanyak  15  ml  kemudian  dihomogenkan digoyangkan  cawan  petri  dengan  pola  angka delapan.  Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 24 – 48 jam, dan diamati adanya pertumbuhan koloni bakteri [17,22].

## Cara Pengukuran Total Plate Count
Koloni  yang  tumbuh  dihitung,  yaitu yang  berjumlah  antara  25-250  koloni  dengan rumus Total  Plate  Count (TPC),  jumlah bakteri  (cfu/gram)  =  rata-rata  koloni  x  faktor pengenceran. Apabila  jumlah  koloni  kurang dari  25,  catat  jumlah  aktual  koloni  pada pengenceran  yang  paling  rendah  dan  laporkan sebagai  dugaan  cfu/g.  Jika  jumlah  koloni  tiap cawan  petri  lebih  dari  250,  hitung  koloni dalam  bagian  petri  berdasar  distribusi  yang mewakili, jika dalam hitungan < 10 koloni/cm 2 ,  hitung  koloni  dalam  12  luasan dengan cara 6 luasan horizontal berurutan dan 6  luasan  sudut  kanan  berurutan.  Bila  dalam hitungan > 10 koloni /cm 2 hitung koloni dalam 4 luasan yang mewakili seperti cara yang telah dijelaskan  sebelumnya.  Kalikan  rerata  jumlah koloni  per  cm 2 dengan  luas  petri.  Pada umumnya luas petri sekitar 56 cm 2 gunakan ini sebagai faktor pengali [23].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Reidentifikasi bakteri Pemeriksaan Makroskopis dan Mikroskopis Berdasarkan hasil pemeriksaan makroskopis,  hasil  kultur  feses  sebelum  dan sesudah perlakuan didapatkan koloni Salmonella  typhi ukuran  1-3  mm, translucent , berwarna  merah  hingga  oranye-merah  muda dengan  bintik  hitam  di  tengah  koloni  [19]. Pemeriksaan  morfologi  koloni  juga  dilakukan dari  hasil  peremajaan  bakteri,  menunjukkan hasil yang hampir sama (Gambar 1).
Pemeriksaan mikroskopis dilakukan dengan  pewarnaan  gram  untuk  identifikasi morfologi dan sifat pewarnaan dari sel bakteri secara mikroskopis. Bahan pemeriksaan berasal dari hasil penanaman feses pada media XLD.  Berdasarkan  hasil  pewarnaan  gram didapatkan  bakteri  gram  negatif,  berbentuk batang  lurus  dan  berwarna  merah  sesuai dengan  karakteristik  mikroskopis Salmonella typhi dapat dilihat pada Gambar 2
Gambar  1.  Koloni  Salmonella  typhi  (a) sebelum  terapi,  (b)  setelah  terapi,  (c)  hasil peremajaan.
(a)               (b)                    (c) Gambar 2.
Gambaran mikroskopis
Salmonella typhi.
Untuk memastikan bakteri yang digunakan Salmonella  typhi perlu  dilakukan uji  biokimia  yang  terdiri  dari  sulfur  indol motilitas  (SIM), simon  citrate , methyl  red (MR), voges  proskauer (VP),  urease,  dan  uji Triple Sugar Iron Agar (TSIA) [19]. Uji gula- gula terdiri dari glukosa, sukrosa, dan laktosa. Hasilnya dapat dilihat pada tabel 1 dan gambar 3.
Tabel 1. Hasil uji gula-gula S. typhi
Uji biokimia Hasil SC  MR  VP  U Glu  Suk   lak - + + - + - -
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
Gambar  3.  Hasil  uji  pada  perbenihan    TSIA (trile sugar iron agar)
Rerata  Total  Plate  Count  (TPC)  Salmonella typhi antar Perlakuan
Setelah  dilakukan  perhitungan  TPC didapatkan  rerata  jumlah  koloni Salmonella typhi sebelum  dan  sesdudah  perlakuan.  Data awal  sebelum  dan  setelah  perlakuan  dapat dilihat  pada  Tabel  2  hingga  Tabel  5  Hasil perhitungan  jumlah  rerata  bakteri  dari  kultur feses  tikus  putih  jantan  galur  wistar  dapat dilihat pada masing-masing tabel.
Tabel 2 TPC jumlah bakteri S.typhi kelompok 1 Kelompok 1 Sebelum perlakuan (CFU/g) Setelah perlakuan (CFU/g) Log a Tikus 1 12,9 5 Tikus 2 16,3 0 Tikus 3 16,3 0 Tikus 4 12,3 0 Tikus 5 15,07 0 Rerata 14,57 ± 1,9 1,00 ± 2,23
Tabel  3.TPC  jumlah  bakteri S.typhi kelompok 2 Kelompok 2 Sebelum perlakuan (CFU/g) Setelah perlakuan (CFU/g) Log a Tikus 6 12,47 4,11 Tikus 7 12,3 4,07 Tikus 8 12 4,17 Tikus 9 10,47 3,47 Tikus 10 18 3,95 Rerata 13,05 ± 2,9 3,95 ± 0,3
Tabel 4 TPC jumlah bakteri S.typhi kelompok 3 Kelompok 3 Sebelum perlakuan (CFU/g) Setelah perlakuan (CFU/g) Log a Tikus 11 16,77 3,3 Tikus 12 16,77 3 Tikus 13 18 0 Tikus 14 12,47 4,17 Tikus 15 16 0 Rerata 16,00 ± 2,1 2,09 ± 1,95
Tabel 5 TPC jumlah bakteri S.typhi kelompok 4 Kelompok 4 Sebelum perlakuan (CFU/g) Setelah perlakuan (CFU/g) Log a Tikus 16 12 3 Tikus 17 16,3 5 Tikus 18 14 3,84 Tikus 19 12,3 2,3 Tikus 20 10,3 2,47 Rerata 12,98 ± 2,27 3,32 ± 1,11 Keterangan:
a Persamaan hasil konversi dari bentuk pangkat menjadi bentuk logaritma (log 10) Kelompok 1 : Kontrol Positif (Kloramfenikol) Kelompok 2 : Ekstrak metanol buah pala dosis 100 mg/kgBB Kelompok 3 : Ekstrak metanol buah pala dosis 150 mg/kgBB Kelompok 4 : Ekstrak metanol buah pala dosis 200 mg/kgBB
Tabel  2  hingga  tabel  5  memperlihatkan selisih  rerata  jumlah  bakteri  dari  kultur  feses tikus  yang  telah  diinduksi Salmonella  typhi seminggu  sebelumnya.  Pada  perlakuan  yang diterapi  ekstrak  buah  pala,  kelompok  3 merupakan  kelompok  dengan  jumlah  rerata bakteri terbanyak 16,00 log 10 CFU/g sebelum perlakuan  dan  mengalami  penurunan  bakteri dengan menyisakan 2,09 log 10 CFU/g setelah diterapi selama 10 hari. Pada kelompok 1 yang diterapi  kloramfenikol  menunjukkan  hasil rerata TPC sebesar 1,00 log 10 CFU/g jumlah bakteri.  Kelompok  perlakuan  setelah  diterapi
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. Journal of Innovation Research and Knowledge
ekstrak  buah  pala  lainnya  yakni,  kelompok  2 memiliki  rerata  TPC  3,95  log  10  CFU/g setelah  diterapi  ekstrak  buah  pala  dosis  100 mg,  serta  kelompok  4  setelah  diterapi  pada dosis 200 mg memiliki rerata TPC 3,32 log 10 CFU/g.

## Signifikansi TPC antar Perlakuan
Untuk  mengetahui  apakah  terdapat perbedaan TPC secara signifikan sebelum dan setelah  perlakuan  maka  dilakukan  uji  T berpasangan.  Pengolahan  secara  statistik diawali  dengan  uji  normalitas  dan  uji  varians. Distribusi data dianalisis melalui uji normalitas Shapiro  Wilk dan  uji  varians dianalisis  melalui  ( Levene  Test ).  Hasil didapatkan  data  berdistribusi  tidak  normal karena  p<0,05  (p=0,000).  Oleh  karena  itu, dilakukan  transformasi  data  melalui  fungsi Log 10 hasilnya distribusi data menjadi normal p>0,05  (p=0,151)  pada  kelompok  sebelum perlakuan  dan  (p=0,206)  pada  kelompok setelah  perlakuan.  Karena  hasil  transformasi data  normal  maka  dapat  dilakukan  uji  T berpasangan, hasilnya dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel  6  Hasil  uji  t-berpasangan  sebelum  dan setelah perlakuan
Kelompok Uji n Rerata jumlah bakteri ± SD p Sebelum perlakuan 25 1,12 ± 0,07 0,000 b Setelah perlakuan 25 0,55 ± 0,10 Keterangan:
b p<0,05:  terdapat  perbedaan  bermakna  antara jumlah bakteri sebelum dan setelah perlakuan.
Tabel  6.  menunjukkan  hasil  bahwa terdapat  perbedaan  bermakna  (p<0,05)  antara jumlah bakteri sebelum dan setelah perlakuan baik pada kelompok yang diberi kloramfenikol  maupun  ekstrak  metanol  buah pala  pada  masing-masing  dosis  100  mg,  150 mg,  dan  200  mg.  Data  tersebut  membuktikan
teori  sebelumnya  bahwa  buah  pala  memiliki daya  antimikroba  baik  terhadap  gram  positif maupun gram negative [9].
Setelah  mengetahui ada  perbedaan bermakna  sebelum  dan  setelah  perlakuan, maka  dilanjutkan  uji One  Way  Anova untuk mengetahui  apakah  terdapat  perbedaan  rerata TPC  secara  signifikan  antar  perlakuan  yakni kelompok  kontrol  positif  (kloramfenikol), ekstrak  buah  pala  dosis  100  mg,  150  mg,  dan 200  mg.  Data  yang  digunakan  pada  uji  ini adalah  selisih  jumlah  koloni  antara  sebelum dan  setelah  perlakuan  yang  sudah  dilakukan transformasi data melalui fungsi Log 10.
Data  dilakukan  tes Saphiro-Wilk untuk dinilai  distribusinya  dan Levene  Test untuk melihat  homogenitas  datanya  sebagai  syarat dilakukan  uji One  Way  Anova data  harus berdistribusi  normal  dan  homogen.  Hasil didapatkan  data  berdistribusi  normal  karena p>0,05  (p=0,069)  dan  homogen  karena  nilai p>0,05  (p=0,673).  Maka  dapat  dilakukan  uji One Way Anova , hasil dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel  7  Hasil  uji One  Way  Anova pada penurunan jumlah Salmonella typhi. Perlakuan n Rerata ± SD P Kelompok 1 5 1,11 ± 0,13 0,043 Kelompok 2 5 0,94 ± 0,11 Kelompok 3 5 1,12 ± 0,12 Kelompok 4 5 0,98 ± 0,06
Dari  uji  statistik  ANOVA  pada  Tabel  6 menunjukkan  bahwa  pemberian  terapi  esktrak buah  pala  maupun  kloramfenikol  sebagai kontrol  positif  mempengaruhi  jumlah  koloni Salmonella  typhi secara in  vivo dilihat  dari nilai  p<0,05  (p=0,043).  Hal  ini  disebabkan karena  efektivitas  ekstrak  buah  pala  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen diduga  berasal  dari  zat-zat  yang  ada  di dalamnya  seperti α-pinene , β-pinene , terpine-
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
4-ol , myristicin, terpine-4-ol , bergamol , dan α- terpineol asetat [7-11] Kemampuan antimikroba pala berkorelasi dengan
kemampuannya menghambat  adhesi  mikroba,  enzim-enzim, dan  sintesis  protein  [7]. Minyak  essensial  dan komponen  kimia  dalam  pala  telah  diketahui dapat mempengaruhi lapisan phospholipid dari membran sitoplasma mikroba yang
menyebabkan peningkatan permeabilitas, mengurangi ketersediaan substrat energi seperti  glukosa, Adenosine  Triphosphate (ATP)  sehingga  nutrisi  sel  berkurang  yang menyebabkan  gangguan  fungsi  enzim  bakteri dan  akhirnya  berujung  pada  hancurnya  sel-sel bakteri  secara keseluruhan. Kemungkinan lain yakni  penghambatan  produksi  amilase  dan protease  yang  menghentikan  produksi  toksin, aliran  elektron  dan  mengakibatkan  tidak berfungsinya sel-sel bakteri. Apabila komponen  struktural  mikroba  melemah  dan tidak  berfungsinya  sel-sel,  maka  tingkat kerentanan  meningkat.  Sel-sel  bakteri  yang lemah memungkinkan akses  yang mudah bagi agen  antimikroba  ke  dalam  komponen intraseluler  dari  sel  bakteri  dan  menginduksi aktivitas  penghambatan  pada  mikroorganisme [25].
Pengaruh Peningkatan Dosis Ekstrak Buah Pala Terhadap Salmonella Typhi Pada  penelitian  sebelumnya  diketahui bahwa rempah-rempah seperti  curcumin dapat digunakan  sebagai antimikroba  terhadap Salmonella  typhi secara in  vivo dimulai  dari dosis  100  mg/kgBB,  150  mg/kgBB,  hingga 200  mg/kgBB. 15 Berdasarkan  hasil  penelitian tersebut, penulis menjadikan dasar penggunaan  dosis  terapi  terhadap Salmonella typhi . Setelah  dilakukan  uji One  Way  Anova didapatkan  hasil  yang  signifikan  (p<0,05) maka  dilanjutkan  dengan  melakukan  uji analisis Post  Hoc LSD  untuk  mengetahui kelompok  manakah  yang  memiliki  perbedaan bermakna  antar  perlakuan.  Hasil  uji Post  Hoc LSD dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel  7  Hasil  uji Post  Hoc LSD  terhadap rerata selisih penurunan S. typhi
Kelompok perlakuan Kelompok perlakuan Rerata selisih p 2 0,17 0,028 * 1 3 -0,01 0,876 4 0,13 0,076 1 -0,17 0,028 * 2 3 -0,18 0,021 * 4 -0,03 0,615 1 0,01 0,876 3 2 0,18 0,021 * 4 0,14 0,056 1 -0,13 0,076 4 2 0,03 0,615 3 -0,14 0,056
Keterangan:
*p<0,05:  terdapat  perbedaan  yang  bermakna dengan kelompok lain.
Data  pada  Tabel  7  menunjukkan  bahwa terdapat  perbedaan  penurunan  jumlah  bakteri yang  bermakna  antara  kelompok  kontrol positif  (kloramfenikol)  dengan  kelompok perlakuan  ekstrak  buah  pala  dosis  100 mg/kgBB, namun tidak pada kelompok ekstrak lainnya.  Diantara  kelompok  perlakuan  ekstrak buah  pala  terdapat  perbedaan  penurunan jumlah  bakteri  bermakna  antara  kelompok dosis  100  mg/kgBB  dengan  dosis  150 mg/kgBB. Tidak terdapat perbedaan bermakna antara  kelompok  dosis  200  mg/kgBB  dengan kelompok positif maupun kelompok dosis 100 mg/kgBB, dan 150 mg/kgBB.
Berdasarkan hasil tersebut maka peningkatan  dosis  ekstrak  buah  pala  hingga 150 mg/kgBB berpengaruh terhadap penurunan  jumlah  bakteri Salmonella  typhi seperti  halnya  kloramfenikol.  Pada  dosis  200 mg/kgBB  efektivitas  menurun  dibandingkan dengan  dosis  150  mg/kgBB  karena  diduga berhubungan dengan konsentrasi obat terhadap target  obat  atau  reseptor  dalam  tubuh  tikus. Obat akan menimbulkan efek apabila konsentrasi  obat  yang  berikatan  dengan reseptor mampu mencapai threshold atau onset obat.  Apabila  konsentrasi  obat  yang  berikatan pada  reseptor  tidak  mencapai  onset,  maka tidak  akan  menimbulkan  efek  yang  optimal [26].
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. Journal of Innovation Research and Knowledge
Ekstrak  metanol  buah  pala  dosis  100 mg/kgBB kurang efektif dibandingkan dengan dosis  150  mg/kgBB  karena  diduga  tidak memiliki  konsentrasi  obat  yang  sesuai  untuk berikatan  dengan  reseptor  dalam  tubuh  tikus. Sedangkan  pada  ekstrak  metanol  buah  pala dosis  150  mg/kgBB  terlihat  paling  efektif dibandingkan dengan dosis  100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB. Hal ini diduga karena dosis 150 mg/kgBB  memiliki  konsentrasi  yang  sesuai dengan  jumlah  reseptor  yang  terdapat  dalam tubuh tikus, sehingga menghasilkan efek yang optimal. Disisi lain, kemungkinan peningkatan efektivitas  ekstrak  buah  pala  dosis  150 mg/kgBB dikarenakan kesalahan dalam membaca hasil TPC, dimana pada hasil kultur feses  tikus  13  dan  tikus  15  terdapat  koloni yang  belum  membentuk  H 2 S  (sulfur)  yang memerlukan waktu lebih lama untuk menghasilkan  H 2 S  (sulfur),  sehingga  saat pembacaan  menunjukkan  hasil  negatif  (tidak terdapat  koloni salmonella ),  juga  tidak  ada pembaca  kedua  dan  ketiga  untuk  mengurangi tingkat  kesalahan  subjektivitas  penulis  dalam melakukan penelitian.

## PENUTUP Kesimpulan
Rerata Total Plate Count (TPC)
Salmonella setelah  diterapi  kloramfenikol yakni  1,00  log  10  CFU/g,  ekstrak  metanol buah pala dosis 100 mg/kgBB sebesar 3,95 log 10 CFU/g, dosis 150 mg/kgBB yakni 2,09 log 10 CFU/g, dan 200 mg/kgBB sebesar 3,32 log 10 CFU/g. Terdapat perbedaan signifikan TPC antar  kelompok  positif  dengan  ekstrak  buah pala  dosis  100  mg/kgBB,  dan  terdapat perbedaan signifikan antara dosis 150 mg/kgBB ekstrak buah  pala dengan dosis 100 mg/kgBB.  Selain  itu  ekstrak  buah  pala  dosis 150  mg/kgBB  mampu  menurunkan  jumlah TPC bakteri salmonella paling efektif.
Penelitian selanjutnya hendaknya dilakukan penelitian yang sama khusus ekstrak metanol daging buah pala dosis 150 mg/kgBB dengan  inkubasi  kultur  feses  yang  lebih  lama untuk membuktikan apakah terjadi
pertumbuhan  koloni  dan  pembentukan  H 2 S atau  tidak.  Dilakukan  penelitian  lanjut  uji toksisitas  dan  efek  samping  ekstrak  metanol daging  buah  pala.  Dilakukan  juga  penelitian uji stabilitas ekstrak metanol daging buah pala.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Parry CM, Hien TT, Dougan G, White NJ, Farrar JJ, 2002, Typhoid fever. The New  England  Journal  of  Medicine, No.347, Vol.22, 1770-79.
[2] Pramitasari  OP,  2013,  Faktor  risiko kejadian  penyakit  demam  tifoid  pada penderita yang dirawat di rumah sakit umum daerah ungaran. Jurnal Kesehatan  Masyarakat,  No.2,  Vol.1, 1-10. [3] Keputusan Menteri Kesehatan Republik  Indonesia,  2006,  Pedoman pengendalian  demam  tifoid.  Menkes. Jakarta.
[4] Alam A, 2011, Pola resistensi Salmonella  enterica  serotipe  typhi  di Dept  IKA  RSHS  2006-2010,  No.12, Vol.5, 296-300.
[5] Zahar  H.  Enteric,  2012,  fever  an overview  escalating  threat,  diagnostic and management options. Isra Medical Journal, No. 4, Vol.3, 179-181.
[6] Howland  RD,  Mycek  MJ,  2006,
Lippincott’s Illustrated Reviews
Pharmacoloy.  3rd  ed.  Philadelphia
Baltimore  New  York  London  Buenos Aires  Hong  Kong  Sydney  Tokyo: Lippincott  Williams  Wilkins;  Hal. 375-7.
[7] Sipahelut  GS,  2010,  Isolasi  dan identifikasi  minyak  atsiri  dari  daging buah  pala  (Myristica  fragrans  Houtt). Jurnal Agroforestri, Vol.2, 296-9.
[8] Sukmayanti  A,  Mutiatikum  D,  2009, Pengembangan  dan  potensi  pala
(Myristica fragransi). Jurnal
Kefarmasian  Indonesia,No.  1,  Vol.2, 64-70.
[9] Joseph  J,  Pushparani  D,  Baskar  V, Sakhtivel  K,  2013,  Potential  socio-
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
economic  value-added  therapeutic food  from  nutmeg  fruit.  Journal  of Biological  and  Information  Sciences,
No.2, Vol.2, 14.
[10] Kusumaningrum GS, Suranto, Setyaningsih R, 2003, Aktivitas penghambatan  minyak  atsiri  dan ekstrak  kasar  biji  pala  (Myristica fragrans  Houtt  dan  Myristica  fattua
Houtt)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Xanthomonas  campestris  Oammel asal tanaman brokoli (Brassica oleracea  var.  Italica).  Biofarmasi, No.1, Vol.1, 20-24.
[11] Asgarpanah  J,  Kazemivash  N.  2012, Phytochemistry  and  pharmacologic properties  of  Myristica  fagrans  Houtt. African  Journal  of  Biotechnology; No.11, Vol 65, 12787-12793.
[12] Ropy,  2013,  Daya  hambat  ekstrak metanol  daging  buah  pala  (Myristica fragrans  houtt)  terhadap  salmonella typhi secara in vitro. Cimahi: Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani. 2013. [13] Arinta  A,  Kusnadi  J,  2012,  Uji aktivitas  Antibakteri  ekstrak  kasar daun gambir (Uncaria gambir) metode microwave-assisted extraction terhadap  bakteri  patogen.  Malang: Fakultas Teknologi Pertanian Brawijaya. [14] Mulyani S, Sofiatun, Retnaningtyas E, 2010,  Aktivitas  antibakteri  ekstrak metanol dan fraksi n- heksan:kloroform:asam  asetat  (7:2:2) dari daun Melastoma candidum D.Don terhadap pertumbuhan Salmonella  typhi.  Surakarta:  Fakultas Pendidikan  Kimia  Universitas  Negeri
Sebelas Maret.
[15] Rahayu  SI,  Nurdiana  N,  Santoso  S, 2013,  The  effect  of  curcumin  and cotrimoxazole in salmonella typhimurium infection in vivo. Malang: Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya. [16] Ekasari, Tjahjaningsih W, Cahyoko Y. 2012,  Daya  antibakteri  tepung  cacing tanah  (Lumbricus  rubellus)  terhadap pertumbuhan  bakteri  Vibrio  harveyi secara  In    Vitro.  Jurnal  Ilmiah Perikanan  dan  Kelautan,  No.4,  Vol.1, 1-6.
[17] Bridson EY, 1998, The oxoid manual. 8 ed. Hamspire: Oxoid.
[18] Nesa MK, Khan MSR, Alam M, 2011,
Isolation, identification, and characterization of salmonella
serovars from diarrhoeic stool samples of  human.  Bangl.  J.  Vet.  Med.  No.9, Vol.1, 85-93 [19] WHO, 2010, Global Salm-Surv. Laboratory protocol: biochemical identification of salmonella and shigella using an abbreviated panel of tests. Atlanta, GA; USA.
[20] Cappuccino  JG,  Sherman  N,  2005, Microbiology:  a  laboratory  manual. 7th  ed.  San        Fransisco:  Benjamin Cummings.
[21] Purwaningroom DL, 2004, Uji in vitro pengaruh  jenis  tepung  cacing  tanah (Lumbricus  rubellus  dan  Pheretima aspergillum)  dengan  variasi  suhu pengolahan  500,  600,  dan  700 terhadap  penghambatan  pertumbuhan bakteri  Salmonella  typhi.  Malang:
Fakultas Sains dan Teknologi Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik  Ibrahim.  2010.Funke  BR, Tortora  GJ,  Case  CL.  Microbiology: an introduction. 8th ed. San Francisco: Benjamin Cummings.
[22] Pertiwi  WA,  2008,  Profil  mikroflora feses  dan  usus  tikus  putih  (Rattus norvegicus)  dengan  konsumsi  daging yang  difermentasi  oleh  Lactobacillus plantarum. Bogor: Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor. [23] Funke  BR,  Tortora  GJ,  Case  CL, 2004,  Microbiology:  an  introduction. 8th  ed.  San  Francisco:  Benjamin Cummings.
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. Journal of Innovation Research and Knowledge
[24] Dahlan  S,  2001,  Statistik  untuk Kedokteran  dan  Kesehatan.  Ed  5. Jakarta: Salemba Medika, Hal.69-101.
[25] Abdelouaheb  Djilani  and  Amadou Dicko. 2012. The Therapeutic
Benefits  of  Essential  Oils,  Nutrition, Well-Being  and  Health,  Dr.  Jaouad Bouayed  (Ed.),  ISBN:  978-953-51- 0125-3,  InTech,  Available  from: http://www.intechopen.com/books/nut rition-well-being-and-health/the therapeutic-benefits-of-essential-oils
[26] Nagano  I,  2008,  Myristica  fragrans:
An Exploration of the Narcotic Spice.
The Entheogen Review. Vernal
Equinox.  No.16, Vol.1, 15-24. Online edition: Erowid.org/nutmeg/nutmeg_article1.s html.