## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## EXTRACT AND FRACTIONS OF Stylissa carteri SPONGE FROM WATERS OF MANADO TUA ISLAND: THE ACTIVITY AGAINST GROWTH OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli BACTERIA
EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Stylissa carteri DARI PERAIRAN PULAU MANADO TUA: AKTIVITASNYA TERHDAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Gleam Yordan 1)* , Defny S. Wewengkang 1) , Irma Antasonasti 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado, 95115 *yordangleam@gmail.com

## ABSTRACT
A  rise  in  infections  in  Indonesia  is  accompanied  by  a rise  in  antibiotics resistance . Biodiversity,  especially Indonesian  marine  natural  materials,  is  considered  to  have the  ability  to  produce  antibacterial  compounds that  coulds  become  antibiotic  candidates  in  the  future. This  study  aimed  to  determine  the  antibacterial activity  from  extract  and  fractions  of  the  Stylissa  carteri  sponge  from  the  waters  of Manado  Tua Island against  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria.  Extraction  performed  using  ethanol  solvent and performed fractionation using n-hexane, chloroform, and methanol solvent. Performed antibacterial test using  agar  diffusion  method  (Disc  diffusion Kirby  and  Bauer). The  result  showed  that  the  ethanol  extracts have the biggest inhibition zone against the growth of Staphylococcus aureus bacteria (8,6 mm) and the n- hexane  fractions  have  the  biggest  inhibition  zone  against  the  growth  of  Escherichia  coli  bacteria (7,386 mm). The result of the antibacterial activity was significantly different since the positive control used had an inhibition zone diameter which was included in the very strong category, whereas the extracts and fractions with the greatest activity had an inhibition zone diameter of only moderate category.
Keywords : Stylissa carteri sponge, antibacterial, extracts, fractions, Disc diffusion Kirby and Bauer .

## ABSTRAK
Peningkatan  kasus  infeksi  di  Indonesia  beriringan  dengan  peningkatan  kasus  resistensi  terhadap  antibiotik. Keanekaragaman  hayati  khususnya  bahan  alam  kelautan  Indonesia  dinilai  memiliki  potensi  menghasilkan bahan  antibakteri  yang  dapat  dikembangkan  menjadi  kandidat  antibiotik  dikemudian  hari.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  melihat  aktivitas  Antibakteri  dari  ekstrak  dan  fraksi  spons Stylissa  carteri dari  Perairan Pulau  Manado  Tua terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Proses  ektraksi menggunakan  pelarut  etanol  dan  dilakukan  fraksinasi  menggunakan  pelarut,  n-heksan,  kloroform,  dan methanol.  Uji  antibakteri  menggunakan  metode  difusi  agar  ( Disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).    Hasil penelitian  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  dari  spons Stylissa  carteri memiliki  zona  hambat  paling  besar terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus (8,6  mm)  dan  fraksi  n-heksan  dari  spons Stylissa  carteri memilki zona hambat paling besar terhadap bakteri Escherichia coli (7,386 mm). Hasil aktivitas antibakteri berbeda signifikan,  dimana  kontrol  positif  yang  digunakan  memiliki  diameter  zona  hambat  yang  termasuk  dalam kategori sangat kuat, sedangkan ekstrak maupun fraksi dengan aktivitas paling besar memiliki diameter zona hambat dengan kategori sedang saja.
Kata kunci : Spons Stylissa carteri , antibakteri, ekstrak, fraksi, Disc diffusion Kirby and Bauer .

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan sebuah negara kepulauan  yang  sering  dijuluki  sebagai  negara maritim  karena  luas  lautannya  melebihi  daratan. Oleh  karena  letaknya  berada  diantara  dua  benua dan  juga  dua  samudera.  Indonesia  memiliki keanekaragaman  hayati  dan  sumber  daya  alam yang melimpah (Kadar, 2015). Hal ini menjadikan wilayah kelautan Indonesia mengandung berbagai macam  spesies  organisme  laut  baik  tumbuhan maupun  hewan.  Salah  satu  penyusun  komponen kehidupan  bawah  laut,  terutama  pada  terumbu karang adalah spons. Spons merupakan salah satu biota  laut  yang  mempunyai  potensi  bioaktif sebagai  antibakteri,  antikanker,  dan  antijamur namun masih belum sering dimanfaatkan (Sibarani dkk, 2020).
Di sisi lain, peningkatan pola hidup masyarakat  dan  peradaban  manusia  beriringan dengan  peningkatan  infeksi  oleh  mikroorganisme pathogen  serta  peningkatan  kasus  resistensi terhadap  antibiotik  golongan  β-laktam  (penisilin) oleh  bakteri  seperti Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli (Lawani  dkk,  2019). S.  aureus dan E. coli merupakan bakteri flora normal tubuh, namun  jika  populasinya  tinggi  dan  berada  di  luar habitat  aslinya  akan  mampu  memproduksi enterotoksin  yang  dapat  mencemari  makanan terutama  protein  dan  menyebabkan  keracunan (Mulyatni dkk, 2012).
Hal ini memacu para peneliti dan pengembang  obat  untuk  melakukan  eksplorasi sumber  bahan  antibakteri/antibiotik  baru  yang dapat  menghambat  perkembangbiakan  bakteri atau  bahkan  dapat  membunuh  beberapa  jenis bakteri  penyebab  penyakit  (Tinambunan  dkk, 2012).
Salah  satu  spons  laut  yang  sering  ditemukan di  perairan  Indonesia  terlebih  perairan  Sulawesi Utara  adalah Stylissa  carteri .  Menurut  penelitian yang  telah  dilakukan  sebelumnya, Stylissa  carteri diketahui mampu memproduksi beberapa senyawa metabolit  sekunder  yang  memiliki  aktivitas anti- viral seperti debromohymenialdisine, hymenialdisine,  dan  oroidin,  anti-inflamasi,  serta aktivitas  anti-kanker  yang  memiliki  sifat  sitotoksi seperti  senyawa  carteritins  A  (O’Rourke, et  al ., 2016;  Afifi, et  al .,  2016).  Spons Stylissa  carteri diketahui juga memiliki aktivitas antimikroba/antibakteri
terhadap
bakteri Staphylococcus aureus , Escherichia coli , Bacillus
megaterium DSM32T,  dan  jamur Candida albicans (Watupungoh  C.  C.  dll,  2019;  Palungan I. dll, 2019).

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  berupa  penelitian eksperimental  di  laboratorium  yang  dilakukan dengan  cara  menguji  komponen  terekstrak  dari spons Stylissa  carteri sebagai  bahan  alam antibakteri  pada Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan oktober 2021 sampai Maret 2022 di Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  dan  Laboratorium Lanjutan  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.

## Alat dan Bahan
a. Alat Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu Scuba  diving (peralatan  selam),  plastik zipper  lock  bag ,  gunting,  sarung  tangan,  masker, botol  air  kemasan  600  ml,  pisau,  talenan,  corong pisah,  corong  gelas,  wadah  kaca,  erlenmeyer, gelas  ukur  (pyrex),  gelas  kimia  (pyrex),  tabung reaksi, rak tabung reaksi, microtubes, cawan petri, timbangan  analitik,  spatula,  oven,  pinset,  batang pengaduk,  pembakar  spiritus,  pipet  tetes,  jarum ose,  vial,  lemari  pendingin, incubator  inucell (N- Biotek), laminary air flow , autoklaf (autoklaf KT- 30s),  mikropipet,  jangka  sorong,  jas  lab,  kamera, kertas  cakram  ( paper  disc ),  kertas  label,  dan spidol permanen.
b. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  spons Stylissa carteri , bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli ,  ethanol,  akuades,  methanol, n-heksan,  kloroform,  pepton,  ekstrak  daging, nutrient  agar,  kloramfenikol  ( paper  disc ),  tissue, aluminium foil, kertas saring, dan kapas.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  spons Stylissa  carteri diambil  dari perairan  Pulau  Manado  Tua  menggunakan peralatan  selam  ( scuba  diving ).  Sampel  yang diperoleh  dimasukkan  ke  dalam zipper  lock  bag dan  diletakkan  ke  dalam cool  box ,  kemudian

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
langsung  dibawa  ke  Laboratorium  Farmakognosi dan Fitokimia Program Studi Farmasi Universitas Sam  Ratulangi.  Sampel  difoto  dan  diberi  label serta nomor sampel, untuk selanjutnya dideterminasi. Kemudian dibersihkan dan dipotong  kecil-kecil,  setelah  itu  dimasukan  ke dalam wadah plastik.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  spons Stylissa  carteri dibuat  dengan cara  maserasi.  Sampel  yang  sudah  dibersihkan dan  dipotong  kecil-kecil  dan  dimasukkan  ke dalam  botol  600  ml,  kemudian  direndam  dengan pelarut  etanol  sampai  sampel  terendam  semuanya dan  dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel  yang direndam  disaring  menggunakan  kertas  saring menghasilkan  filtrat  1  dan debris 1. Debris 1 kemudian  diremaserasi  dengan  pelarut  etanol sampai  terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama 24  jam,  sampel  tersebut  disaring  menggunakan kertas  saring  menghasilkan  filtrat  2  dan debris 2. Debris 2  kemudian  diremaserasi  dengan  pelarut etanol  sampai  terendam  semuanya  dan  dibiarkan selama  24  jam,  sampel  tersebut  disaring menggunakan kertas saring  menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat  1,2,  dan  3  dicampur  menjadi satu kemudian disaring, lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 ℃ hingga  menjadi  ekstrak  kental  dan  selanjutnya ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik. Selanjutnya  ekstrak  kental  spons Stylissa  carteri digunakan  dalam  fraksinasi  dan  pengujian antibakteri (Ortez, 2005).

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak  kasar  spons Stylissa  carteri yang diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer, kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  80% sebanyak  100  mL.  Setelah  larut,  dimasukkan  ke dalam  corong  pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n- heksan  sebanyak  100  mL  setelah  itu  dikocok dalam  corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  lapisan  metanol  dan  lapisan  n- heksan, kemudian masing-masing lapisan ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan n- heksan  kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang dan  diperoleh  fraksi  n-heksan.  Selanjutnya, lapisan  metanol  ditambahkan  akuades  sebanyak 100  mL  kemudian  dipartisi  dengan  pelarut kloroform  sebanyak  200  mL  dalam  corong  pisah, setelah  itu  dikocok  kembali  sampai  homogen. Dibiarkan  sampai  tebentuk  dua  lapisan  yaitu lapisan metanol dan kloroform, kemudian masing-
masing  lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang  berat  sampel  dan diperoleh  fraksi  kloroform.  Lapisan  metanol kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan diperoleh  fraksi  metanol.  Ketiga  fraksi  yang diperoleh  akan  digunakan  dalam  pengujian antibakteri.  %Rendemen  ekstrak  dan  fraksi dihitung dengan persamaan berat hasil ekstrak/fraksi  dibagikan  dengan  berat  sampel segar kemudian dikalikan dengan 100% (Watupongoh et al., 2019).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian aktivitas antibakteri ini disterilkan terlebih dahulu. Alat-alat  gelas  disterilkan  dengan  autoklaf  pada suhu  121˚C  selama  15  menit,  pinset  dibakar dengan  pembakaran  di  atas  api  langsung  dan media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit (Mpila, 2012).

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat  extract ) 0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  dan  aquades sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata  kemudian dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit, ukur pH dengan  menggunakan kertas pH. Dipipet 1  mL  media  cair  B1,  kemudian  masukkan  dalam tabung  reaksi  dan  tutup  dengan  alminium  foil. Media  cair  B1  siap  digunakan  sebagai  media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya, ditambahkan bersama masing- masing bakteri yang sudah dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ) dipipet  sebanyak  100  µL  kedalam  tabung  reaksi yang  berbeda.  Tutup  dengan  alumunium  foil  tiap tabung  reaksi  dan  dimasukkan  kedalam  inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol positif dalam pengujian antibakteri ini menggunakan kloramfenikol  paper  disc yang sudah  tersedia.  Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan  pelarut metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  µL metanol kemudian ditotolkan pada kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  1  mg  ekstrak kasar  spons Stylissa  carteri kemudian  dilarutkan dalam  200  μL  metanol  sehingga  menghasilkan konsentrasi  larutan  uji  sebesar  250  μg/50  μL. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada  fraksi  n- heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat  extract ) 0,3  g, agar 1,5  g  dan  aquades  sebanyak  100  mL diaduk  sampai  rata  kemudian  dibuat  homogen menggunakan  magnetic  stirrer  lalu  diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit. Media agar B1 siap  digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and Bauer ).  Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  ini, cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan  berukuran  6 mm  dengan  daya  serap  50  µL  tiap  cakram. Sampel  yang  telah  ditentukan  kosentrasinya  250 µg/50  µL  ditotolkan  pada  masing-masing  cakram dengan  menggunakan  mikropipet.  Untuk  media agar  B1  yang  sudah  diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C selama  15  menit,  kemudian  dinginkan  sampai suhu  40  ˚C.  Tuangkan  media  agar  B1  ke  cawan petri,  Ambil  sebanyak  100  µL  bakteri  yang  telah di  kultur  dalam  tabung  reaksi,  dipipet  dan diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan  tunggu sampai  media  agar  B1  mengeras.  Masing-masing cawan  petri  diberi  label  dan  nomor  sampel  yang sesuai.  Letakkan  kertas  cakram  yang  telah ditotolkan  sampel  uji  spons Stylissa  carteri dengan pinset kedalam cawan petri lalu diinkubasi selama 1x24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter  Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam  masa inkubasi. Daerah pada sekitaran cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau  bahan  antibakteri  yang  digunakan  sebagai bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona hambat. Diameter zona hambat diukur menggunakkan  mistar  berskala  dengan  cara diukur diameter zona hambat horizontal ditambahkan  dengan  diameter  zona  hambat
vertikal  lalu  dibagi  dua.  Diameter  ≤  5  mm memiliki  kekuatan  daya  hambat  lemah,  6-10  mm daya hambat sedang, 11-20 mm daya hambat kuat dan  ≥21  mm  daya  hambat  sangat  kuat  (Susanto, dkk, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi  spons Stylissa  carteri dilakukan di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Program  Studi  Farmasi,  Universitas  Sam Ratulangi.  Determinasi  sampel  dilakukan  agar memastikan  sampel  yang  digunakan  sesuai  yaitu spons Stylissa carteri .

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  segar  spons Stylissa  carteri diambil dari  perairan  pulau  Manado  Tua,  diekstraksi menggunakan  metode  maserasi.  Metode  maserasi digunakan  dalam  proses  ektraksi  karena  proses pengerjaannya yang sederhana serta tidak melibatkan  pemanasan  sehingga  zat  aktif  yang termofobik  dari  sampel  tidak  akan  rusak.  Proses ekstraksi terjadi akibat dari perbedaan konsentrasi di  dalam  dan  di  luar  sel,  hal  ini  memaksa  pelarut untuk  berpenetrasi  ke  dalam  rongga  sel  sehingga zat  aktif  di  dalamnya  akan  terlarut  ke  dalam pelarut  organik  yang  berdifusi  ke  dalam  sel (Marjoni, 2016).
Pelarut etanol 95% digunakan sebagai larutan penyari karena memiliki sifat selektif, tidak toksis dan  bersifat  universal  sehingga  cocok  digunakan untuk  mengekstrak  berbagai  senyawa  metabolit sekunder  (Watupungoh,  dkk.,  2019).  Proses maserasi  dilakukan  dengan  tiga  kali  pengulangan atau  remaserasi  selama  3  ×  24  jam,  sebagai langkah  untuk  memaksimalkan  proses  penarikan sekaligus  memastikan  seluruh  metabolit  sekunder dalam  sampel  segar  sudah  ditarik  seluruhnya (Mujipradana  dkk,  2018). Filtrat  yang  didapat selanjutnya  diuapkan  pada  suhu  40oC  untuk menjaga  kandungan  kimia  ekstrak  selama  proses penguapan, baru didapatkan ekstrak kental.
Ekstrak kental dari proses ekstraksi selanjutnya difraksinasi untuk memisahkan senyawa-senyawa  kimia  berdasarkan  tingkat kepolarannya  menggunakan  tiga  pelarut  yang berbeda. Metode fraksinasi cair-cair yang dilakukan  menggunakan  pelarut  metanol  untuk menarik  senyawa  polar,  pelarut  kloroform  untuk menarik  senyawa  semi-polar,  dan  pelarut  n- heksan  untuk  menarik  senyawa  non  polar.  Proses

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
penggojokan  dilakukan  untuk  pertama  menyebar ratakan  sampel  dalam  dua  pelarut  yang  tidak tercampur  dan  kemudian  didiamkan  sehingga kembali  terbentuk  dua  lapisan  pelarut  yang berbeda.  Pelarut  dengan  massa  jenis  ringan  akan berada  pada  bagian  atas  corong  pisah,  sedangkan yang  massa  jenisnya  berat  berada  pada  bagian dasat  corong  pisah.  Hasil  fraksinasi  kemudian diuapkan  Kembali  untuk  didaptkan  ekstrak  kental dari masing-masing fraksi.
Hasil  dari  proses  ekstraksi  maupun  proses fraksinasi  menunjukan  warna  yang  berbeda-beda. Hal  ini  membuktikan  bahwa  perbedaan  kepolaran pelarut menarik senyawa yang berbeda juga sesuai dengan  sifat  kepolaran  yang  dimiliki  senyawa tersebut.  Berbagai  penelitian  juga  membuktikan bahwa  spesies  ini  memiliki  beberapa  senyawa metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  steroid,  dan terpenoid (Gozcelioglu dan Konuklugil, 2012)
Hasil  rendemen  dari  proses  ekstraki  dan fraksinasi dari sampel spons Stylissa carteri dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen Ekstrak dan Fraksi Spons Stylissa carteri

## Uji Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam  uji  aktivitas antibakteri  adalah  metode  difusi  agar  Kirby  & Bauer.  Mudahnya  proses  pengujian  serta  untuk mendapatkan  bahan  dan  alat,  menyebabkan metode  ini  dipilih  dalam  penelitian  ini.  Pengujian ini  dilakukan  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus yang  mewakili  bakteri  Gram  positif  dan bakteri Escherichia  coli yang  mewakili  bakteri Gram  negatif,  hal  ini  berkaitan  dengan  spektrum kekuatan  aktivitas  antibakteri  dari  sampel. Aktivitas  antibakteri  dikatakan  berspektrum  luas bila  mampu  menghambat  baik  pertumbuhan bakteri  Gram  positif  maupun  bakteri  Gram negatif,  sedangkan  spektrum  sempit  bila  hanya menghambat  pertumbuhan  salah  satu  perwakilan bakteri  Gram  positif  maupun  Gram  negatif (WHO,  2014).  Zona  hambat  yang  terbentuk disekitar cakram menggambarkan kekuatan aktivitas  antibakteri  dari  sampel  spons Stylissa
carteri ,  hasil  pengamatan  zona  hambat  dapat dilihat pada gambar 1.
Pengukuran  diameter  zona  hambat  dilakukan setelah  media  uji  sudah  diinkubasi  selama  1  ×  24 jam.  Sediaan  cakram  antibiotik  kloramfenikol digunakan sebagai kontrol positif karena diketahui sebagai salah satu bahan aktif yang memiliki sifat antibakteri  spektrum  luas,  sedangkan  larutan methanol  digunakan  sebagai  kontrol  negatif. Kontrol  positif  dan  negatif  dalam  pengujian  ini berguna sebagai pembanding.
Uji aktivitas antibakteri telah dilakukan. Rata- rata  diameter  zona  hambat  dari  ekstrak  dan  fraksi spons Stylissa  carteri terhadap  pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil  pengukuran  zona  hambat  ekstrak maupun  fraksi  spons Stylissa  carteri menunjukan adanya  aktivitas  antibakteri  yang  dimiliki  oleh metabolit  sekunder  dari  biota  ini.  Ukuran  zona hambat yang paling besar pada pengujian terhadap bakteri Staphylococcus  aureus ,  zona  hambat terbesar  ditunjukan  oleh  ekstrak  etanol  kemudian fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan,  dan  yang terkecil adalah metanol dengan nilai 8,6 mm, 8,59 mm, 8,36 mm, dan 8, 31 mm, sedangkan terhadap bakteri Escherichia  coli ditunjukan  oleh  fraksi  n-
1 2 3 4 - + B A 1 2 3 4
- +
Gambar 1. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak dan Fraksi Spons Stylissa carteri : (A) Staphylococcus aureus , (B) Escherichia coli , (1) Ekstrak etanol, (2) Fraksi n-heksan, (3) Fraksi kloroform, (4) Fraksi metanol, (-) kontrol negative, (+)
kontrol positif.

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
heksan,  disusul  ekstrak  etanol,  fraksi  kloroform metanol,  kemudian  fraksi  kloroform  dengan  nilai 7,386  mm,  7,08  mm,  6,96  mm,  dan  6,89  mm. Setiap  zona  hambat  baik  dari  ekstrak  maupun fraksi  spons Stylissa  carteri memiliki  aktivitas antibakteri kategori sedang (Rastina dkk, 2015).
Diketahui  bersama  bahwa  dinding  sel  bakteri gram negatif didominasi oleh lipid/lipopolisakarida  yang  bersifat  non  polar,  hal ini  menjelaskan  mengapa  sampel  pada  fraksi  n- heksan  yang  juga  bersifat  non-polar  dapat memperlihatkan  aktivitas  yang  besar  pada  bakteri Escherichia  coli (gram  negatif).  Pada  pengujian terhadap Staphylococcus  aureus yang  mewakili gram  positif,  terlihat  kemampuan  aktivitas  dari ekstrak  etanol  adalah  yang  paling  kuat,  hal  ini dikarenakan  dinding  bakteri  gram  positif  yang didominasi  peptidoglikan  bersifat  polar  seperti pelarut  etanol  yang  digunakan  dalam  proses ektraksi,  selain  itu  kumpulan  senyawa  hasil ekstraksi  juga  belum  terpisah  oleh  proses fraksinasi, sehingga diduga meningkatkan efektivitas  ekstrak  dalam  memnunjukan  aktivitas antibakteri.
Aktivitas  antibakteri  yang  ditunjukan  dari ekstrak  maupun  fraksi  dari  Spons Stylissa  carteri dari perairan pulau Manado Tua hanya menunjukan  aktivitas  dengan  kategori  sedang, sedangkan  sampel  Spons Stylissa  carteri yang diambil  dari  perairan  Selat  Lembeh  Bitung menunjukan aktivitas yang yang tergolong sedang (8,14  mm)  dan  kuat  (13.76  mm)  pada  fraksi metanol  (Davis  dan  Stout,  1971  &  Watupungoh, 2019).
Bila  dibandingkan  dengan  hasil  penelitian dengan  sampel  serupa  yang  berasal  dari  Teluk Manado, Stylissa  carteri dari  perairan  Pulau Manado  Tua  menunjukan  aktivitas  pada  semua fraksi  dan  juga  ekstrak  sedangkan  sampel  yang berasal  dari  perairan  Teluk  Manado  tidak menunjukan  aktivitas  pada  ekstrak  etanol  serta fraksi  kloroform  namun  menunjukan  rata-rata zona hambat pada fraksi metanol  dengan  kategori kuat  (10,21  mm)  pada  bakteri Staphylococcus aureus dan  kategori  sedang  (7,96  mm)  pada bakteri Escherichia  coli .  Hal  ini  membuktikan faktor-faktor physical oceanography pada masing- masing  lingkungan  tempat  sampel  bertumbuh dapat  memengaruhi  jenis  maupun  konsentrasi senyawa  metabolit  sekunder  yang  dieksresi  oleh sampel dengan spesies yang sama (Tompunu dkk, 2022).
Dilakukan  uji  statistik  menggunakan  metode Mann  Whitney untuk  melihat  perbedaan  antara tiap-tiap  kelompok  uji.  Hasil  yang  dapat  dilihat pada  lampiran  13  menunjukan  bahwa  tiap kelompok  uji  tidak  memiliki  perbedaan  yang signifikan  dengan  nilai  asymp,  sig  >  0.05,  hal  ini selaras  dengan  kenyataan  bahwa  tiap  kelompok uji  memiliki  diameter  zona  hambat  yang menunjukan  aktivitas  pada  kategori  yang  sama. Sedangkan  analisis  antara  kelompok  uji  dengan kelompok  kontrol  menunjukan  perbedaan  yang signifikan  dengan  nilai  asymp,  sig  <  0.05, perbedaan  ini  menandakan  perbedaan  efektivitas dari  aktivitas  yang  dihasilkan  oleh  sampel  pada ekstrak  maupun  fraksi  dengan  kontrol  positif maupun kontrol negatif yang digunakan.
Tabel 2. Hasil Rata-Rata Pengujian Aktivitas Antibakteri
Mikroba Rata-rata diameter zona hambat (mm) EtOH n-Hxn ChCl 3 MeOH C+ C- Ec I 6,56 6,88 6,48 7,36 20,66 0 II 7,21 7,18 6,99 6,43 III 7,47 8,10 7,21 7,09 ∑ 21,24 22,16 20,68 20,88 20,66 0 𝒙 ̅ 7,08 7,386 6,89 6,96 Sa I 8,26 8,65 8,87 8,91 29,08 0 II 7,93 7,86 8,42 8,15 III 9,61 8,57 8,48 7,88 ∑ 25,8 25,08 25,77 24,94 29,08 0 𝒙 ̅ 8,6 8,36 8,59 8,31
Keterangan : ( Sa ) Staphylococcus aureus, ( Ec ) Escherichia coli, (EtOH) Ekstrak Etanol, (n-Hxn) Fraksi n- Heksan, (ChCl 3 ) Fraksi Kloroform, (MeOH) Fraksi Metanol, (∑) Jumlah zona hambat, ( 𝑥̅ ) Rata-rata zona hambat

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa spons Stylissa carteri yang dikoleksi dari perairan pulau Manado Tua  memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan  zona hambat  yang  paling  besar  terhadap  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli terdapat  pada  fraksi  n- heksan  yaitu  7,386  mm  (kategori  sedang) sedangkan terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus terdapat  pada  ekstrak etanol  yaitu  8,6  mm  (kategori  sedang).  Analisis data  secara  statistik  menunjukan  bahwa  antar kelompok  uji  tidak  memiliki  perbedaan  yang signifikan,  namun  bila  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  akan  ada  perbedaan  yang signifikan.

## SARAN
Berdasarkan hasil yang didapat dan pembahasan mengenai aktivitas antibakteri ekstrak  dan  fraksi  spons Stylissa  carteri ,  maka disarankan untuk dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai uji antibakteri dengan metode pengujian yang  berbeda  atau  dengan  menggunakan  bakteri uji  yang  berbeda.  Serta  lebih  lagi  mengeksplor senyawa  yang  berperan  dalam  hal  ini  aktivitas antibakteri pada Spons Stylissa carteri .

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  S.S.,  Djide,  N.,  Natsir, S.  (2021).  KLT Bioautografi  Hasil  Partisi  Ekstrak  Etanol Herba  Bandotan  ( Ageratum  conyzoides  L. ) Terhadap Shigella  dysentriae . Chem.  Prog. 14(1).15-17
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  assay. Journal of microbiology . 22 : 659-665.
Gozcelioğlu, B., Konuklugil, B., 2012, Qualitative Detection  of  Some  Secondary  Metabolites from  Three  Turkish  Marine  Sponges, Fabad J. Pharm . Sci., 37 : 73-78.
Lawani,  V.  C.,  Herny  E.  I.  Simbala,  Henki Rotinsulu. 2019. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak  dan  Fraksi  Alga Turbinaria  ornata (Turner)  J.  Argadh  dari  Perairan  Desa Tumbak,  Minahasa  Tenggara  Terhadap Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli dan Candida  albicans . Jurnal  Pharmacon ,
Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Sam Ratulangi, 3(8) :792.
Legi,  A.P.,  Edy,  H.J.,  Abdullah ,  S.  S.,  (2021), Formulasi  Dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri Sediaan  Sabun  Cair  Ekstrak  Etanol  Daun Sirsak  ( Annona  Muricata Linn)  Terhadap Bakteri Staphylococcus ,  Pharmacon, 10(3) , 1058–1065.
Marjoni,  R.  2016. Dasar-Dasar  Fitokimia .
Jakarta: Trans Info Media.
Mopangga, E., Yamlean, P. V. Y., & Abdullah, S.
S.  (2021). Formulasi  Sediaan  Sabun  Mandi Padat Ekstrak Etanol Daun Gedi ( Abelmoschus manihot L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis . Pharmacon, 10(3) , 1017–1024.
Mulyatni,  A.  S.,  Budiani,  A.  &  Taniwiryono. 2012.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  kulit buah kakao (Theobroma cacao L.) terhadap Escherichia  coli , Bacillus  subtilis ,  dan
Staphylococcus aureus . Menara
Perkebunan 80(2) , 77-84
Mpila,  D.  A.  2012. Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana  (Coleus atropurpureus benth) Terhadap Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan Pseudomas  aeruginosa  Secara
Invitro. Program  Studi  Farmasi  FMIPA Universitas Sam Ratulangi: Manado.
Mujipradhana.  V.  N,  D.  S.  Wewengkang  dan  E. Suryanto.  2018. Aktivitas  Antimikroba  dari Ekstrak  Ascidian  Herdmania  momus  pada Mikroba Patogen Manusia . Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi: Manado.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed). American society for Microbiology.
O’Rourke,  A.,  Stephan  Kremb,  Theresa  Maria Bader,  Markus  Helfer,  Phillippe  Schmitt- Kopplin, William H. Gerwick, Ruth Brack- Werner, dan Christian R. Voolstra. Alkaloids  from  the  Sponge Stylissa  carteri Present  Prospective  Scaffolds  for  the

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Inhibition of Human Imminodefiency Virus 1 (HIV-1). Mar. Drugs 2016, 14(2), 28.
Palungan,  I.,  Robert,  A.  Bara,  Remy,  E.  P. Mangindaan, Kurniati Kemer, Stenly Wullur,  Unstain,  N.  W.  Rembet.  Aktivitas Antibakteri  Spons Stylissa  carteri dari Teluk  Manado,  Sulawesi  Utara. Jurnal Ilmiah Platax , Program Studi Ilmu
Kelautan,  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Manado, 1(10) :16-17.
Pelealu,  E.,  Wewengkang,  D.,  &  Sumantri,  S. (2021).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Dan  Fraksi  Spons Leucetta  chagosensis dari  Perairan  Pulau  Mantehage  Sulawesi Utara  Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli , Pharmacon, 10(2) , 834–840 .
Rastina,  Minarwati  Sudarwanto,  Ietje  Wientarsih. AKTIVITAS  ANTIBAKTERI  EKSTRAK
ETANOL DAUN KARI ( Murraya koenigii ) TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Pseudomonas sp.. Jurnal Kedokteran Hewan . 2(9) :187.
Sahuleka,  A.S.G.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.  S., (2021), formulasi Sediaan Krim Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Eceng  Gondok ( Eichhornia  crassipes )  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus ,  Pharmacon, 10(4) , 1162–1168.
Sibarani,  S.  I.  M.,  Adithya  Yudistira,  Deby  A.
Mpila. 2020. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SPONS Stylissa sp.

## DENGAN  MENGGUNAKAN  METODE
DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ). Jurnal
Pharmacon , Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi, 3(9) :420.
Sinrang,  V.N.S.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.S.,, (2022),  Formulasi  Sediaan  Obat  Kumur Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang  ( Areca  catechu
L. ), Pharmacon, 11(1) , 1342–1349.
Susanto,  D.,  Sudrajat  dan  R.  Ruga.  2012.  Studi
Kandungan Bahan Aktif Tumbuhan Meranti  Merah  (Shorea  leprosula  Miq) Sebagai  Sumber  Senyawa  Antibakteri. Mulawarmnan Scientifie . 2(11) : 181-190.
Tinambunan,  H.,  Melki,  dan  Isnaini,  2012, Efektifitas Ekstrak Bakteri yang Berasosiasi dengan  Spons  dan  Karang  Lunak  sebagai Antibakteri  dari  Perairan  Pulau  Tegal Lampung. Maspari Journal . 4 (2) : 225-230.
Tompunu,  V.  F.,  Defny  S.  Wewengkang,  Erladys M.  Rumondor.  2022.  Potensi  Antibakteri Ekstrak  dan  Fraksi  dari  Organisme  Laut Stylissa  carteri Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Eschrichia coli . Pharmacon . 1 ( 11 ): 1262.
Watupungoh,  C.  C.  A.,  Defny  S.  Wewengkang,
Henki Rotinsulu. 2019. Aktivitas
Antimikroba  dari  Ekstrak  dan  Fraksi Organisme Laut Spons Stylissa carteri yang Dikoleksi  dari  Perairan  Selat  Lembeh  Kota Bitung. Jurnal  Pharmacon ,  Program  Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam
Ratulangi, 3(8) :664-666.
WHO.  2014. Antmicrobial  resistance:  global report  on  survaillance  2014 .  World  Health Organization. p 257.