EKSTRAK Sargassum sp.  SEBAGAI  ANTIOKSIDAN

## DALAM  SISTEM  EMULSI  MINYAK  IKAN  SELAMA  PENYIMPANAN PADA  SUHU  KAMAR
Sargassum sp. Extract as an Antioxidant for Fish Oil Emulsion System During Storage at Room Temperature
Adityo Prabowo 1 , Siti Ari Budhiyanti 1 , dan Amir Husni 1*
1 Jurusan  Perikanan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Gadjah  Mada,  Jl.  Flora  Gedung A4,  Bulaksumur,  Yogyakarta *  Korespondensi  Penulis:  amrhusni@faperta.ugm.ac.id
Diterima:  4 November  2012;  Disetujui:  23 Oktober  2013

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  pengaruh penambahan  ekstrak etanolik  alga cokelat Sargassum sp.  terhadap  daya  simpan  minyak  ikan  selama  penyimpanan  pada  suhu  kamar. Pengaruh  penambahan  ekstrak  etanolik  alga  cokelat Sargassum sp.  dilihat  dari    parameter  uji aktivitas  antioksidan  (metode  DPPH),  diena  terkonjugasi,  angka  peroksida,  angka  anisidin,  dan angka  Totoks  (Total  Oksidasi).  Penelitian  ini  terdiri  dari  empat  perlakuan  (kontrol;  dengan  ekstrak 0,5%;  ekstrak  1%;  ekstrak  1,5%;  ekstrak  2%)  dengan  tiga  ulangan.  Preparasi  sampel  dilakukan dengan  mencampurkan  minyak  ikan  dengan  ekstrak  etanolik Sargassum sp.  menggunakan sistem  emulsi.  Sistem  emulsi  ini  terdiri  dari  air  (97%),  minyak  ikan  (3%), tween 20  (0,3%  dari volume  air),  dan  ekstrak  etanolik Sargassum sp.  (0;  0,5;  1;  1,5;  dan  2%  dari  volume  air  yang ditambahkan).  Masing-masing  emulsi  minyak  ikan  ini  dimasukkan  ke  dalam  tabung  konikel yang  terang  (tidak  gelap),  disimpan  dalam  inkubator  pada  suhu  kamar  (30  4  °C)  dan  diamati selama  38  hari.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  1%  ekstrak  etanolik Sargassum sp.  merupakan  perlakuan  terpilih  k arena  merupak an  konsentrasi  terendah  yang  dapat menghambat  kerusakan  oksidatif  yang  terjadi  selama  penyimpanan.  Berdasarkan  nilai  angka peroksida,  p-anisidin  dan  totoks  pada  akhir  masa  simpan  minyak  ikan  (38  hari)  dengan  nilai angka  peroksida  sebesar  0,44  meq/kg  minyak,  angka  p-anisidin  10,18%  dan  angka  TOTOKS sebesar  11,07  pada  pengamatan  hari  ke-38.
KATA KUNCI: ekstrak etanolik, Sargassum sp., emulsi, minyak ikan, daya simpan

## ABSTRACT
The  purpose  of  the  study  is  to  determine  the  effect  of  ethanolic  extracts  of  brown  algae Sargassum sp. on the shelflife of fish oil during storage at room temperature. Effect of the addition of ethanolic extracts of brown algae Sargassum sp. was assayed from antioxidant activity (DPPH method),  conjugated  diene,  peroxide  value,  anisidin  value,  and  TOTOX  value  (Total  Oxidation). Four treatments were studied i.e. (control; 0.5% extract; 1% extract; 1.5% extract ; and 2% extract) with  three  replications.  Samples  were  prepared  by  mixing  fish  oil  with  ethanolic  extracts  of Sargassum sp. in emulsion system. The system consisted of water (97%), fish oil (3%), tween 20 (0.3%  of  water  volume), and the  ethanolic  extracts  of Sargassum sp.  (0;  0.5; 1;  1.5;  and  2%  of water  volume).  Fish  oil  emulsion  was  filled  in  chonicle  tubes,  kept  in  an  incubator  at  room temperature  (30  4 °C), and  were  observed  for  38  days. The  result  showed  that the use  of  the ethanolic extracts of Sargassum sp. with concentration of 1% inhibited the oxidative deterioration occured during storage. The treatment gave the shelf life of fish oil up to 38 days with the peroxide value of 0.44 meq/kg O 2 , anasidin value of 10.18% of anisidin value and TOTOX value of 11.07 on the 38th  day of observation
KEYWORDS: ethanolic extracts, Sargassum sp., emulsion, fish oil, shelf life

## PENDAHULUAN
Sargassum sp. adalah salah satu jenis rumput laut coklat  yang  belum  dimanfaatkan  secara  optimal. Pengembangan aplikasi alga cokelat Sargassum sp.
tidak hanya dapat dikembangkan pada bidang pangan seperti alginat, makanan ternak serta pupuk, akan tetapi antioksidan yang terdapat pada alga cokelat Sargassum sp. juga mampu menghambat kerusakan yang  ditimbulkan  oleh  radikal  bebas  pada  produk
seperti  minyak  ikan  (Patra,  2008;  Winberg et  al ., 2009). Penelitian Koivikko (2008) menyebutkan bahwa pada alga cokelat Sargassum sp. ditemukan florotanin yaitu senyawa fenolik yang berperan sebagai sumber antioksidan.
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat mengurangi  dampak  terjadinya  oksidasi.  Pada umumnya  minyak  ikan  komersial  menggunakan antioksidan komersil seperti butylated hydroxytoluene (BHT) ataupun butylated hydroxyanisole (BHA). Belum ada antioksidan alami yang digunakan pada minyak ikan komersial. Santoso et al . (2004), menyebutkan bahwa antioksidan pada alga cokelat Sargassum sp. mampu menurunkan oksidasi yang terjadi pada emulsi minyak ikan selama penyimpanan pada suhu 50 ºC selama 24 jam yang ditandai dengan rendahnya nilai peroksida (59,1 meq/kg) dibanding kontrol (308,5 meq/ kg). Penyimpanan pada  suhu kamar dan penentuan beberapa variabel pengamatan baru seperti angka p- anisidin dan angka Totoks serta penggunaan etanol sebagai pelarut yang lebih aman dimaksudkan agar penelitian  ini  bersifat  lebih  aplikatif.  Sedangkan penggunaan  ekstrak  alga  cokelat Sargassum sp. sebagai antioksidan diharapkan dapat meningkatkan pemanfaatannya yang selama ini belum optimal.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Jurusan Perikanan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Gadjah Mada, Yogyakarta.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Sargassum sp. basah diperoleh dari pengepul rumput laut daerah Gunung Kidul DIY, akuades, etanol, minyak hati ikan komersial  berwarna kuning jernih (pesan secara khusus tanpa antioksidan dari pembuat minyak  ikan  di  daerah  Cilacap  Jawa  Tengah), Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH),  FeCl 2 ,  FeCl 3 , amonium thiosianat, iso-oktan, p-anisidin, dan asam asetat glasial.

## Metode
Pembuatan ekstrak Sargassum sp. (Santoso et al ., 2004)
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan menimbang 10 g Sargassum sp. basah yang sudah dipotong kecil- kecil (kadar air + 80%) kemudian dikeringkan pada oven  40 o C  selama  +  4  jam.  Rumput  laut  kering kemudian dihancurkan dan diayak dengan ayakan
ukuran 250  mesh.  Bubuk Sargassum sp.  tersebut kemudian  dicampurkan  dengan  90  ml  etanol  dan dimaserasi dengan menggunakan waterbath shaker (kekuatan getaran 100 rpm, suhu 40 o C) selama 1 jam (ekstrak I). Residu hasil pembuatan ekstrak I ditambah etanol kembali, dimaserasi dan disaring ekstraknya (ekstrak II). Ekstrak I dan ekstrak II  dicampur  dan dihomogenasikan (+ volume 100 ml). Ekstrak tersebut selanjutnya  dipekatkan  dengan rotary  evaporator (suhu 40 o C) sampai didapatkan ekstrak kental (60% pelarut yang menguap). Ekstrak kental yang sudah siap  dapat  digunakan  langsung  untuk  tahap pencampuran emulsi minyak.
Pencampuran ekstrak Sargassum sp. dengan minyak ikan (Santoso et al ., 2004)
Pencampuran  ekstrak Sargassum sp.  dengan minyak ikan dilakukan dengan sistem emulsi, karena ekstrak Sargassum sp  tidak  dapat  larut  di  dalam minyak. Sistem emulsi dibuat dengan perbandingan minyak ikan (3%), air (97%), dan tween 20 (0,3% dari volume  air),  setelah  itu  ekstrak Sargassum sp. ditambahkan dalam sistem emulsi dengan konsentrasi 0%; 0,5%; 1%; 1,5%; dan 2% dari volume air yang ditambahkan  (97%;  v/v).  Homogenisasi  dilakukan dengan menggunakan alat sonicator selama +5 menit. Emulsi  dibuat  berdasarkan  volume  total  air  yang digunakan (v/v).
Penyimpanan pada suhu 30+4 o C
Minyak  ikan  yang  sudah  diemulsikan  dengan ekstrak Sargassum sp.  kemudian  dimasukkan  ke dalam  tabung  konikel  yang  terang,  dan  disimpan didalam inkubator pada suhu 30+4 o C.
Pengamatan  dilakukan  selama  38  hari  yaitu dengan interval berbeda pada hari ke-0, 2, 4, 6, 8, 14, 20, 26, 32, dan 38 (10 pengamatan), yang didasarkan atas titik kritis penyimpanan minyak ikan yang terjadi pada 2 minggu pertama (Estiasih et al. , 2008).

## Parameter  pengujian

## Aktivitas antioksidan
Aktivitas antioksidan diuji dengan menggunakan larutan  DPPH  ( 2,  2-difenil-1-pikrilhidrazil )  dengan metode sebagaimana dijelaskan Huang et al .(2005).

## Asam lemak tidak jenuh ganda
Asam lemak tidak jenuh ganda pada minyak ikan ditentukan menggunakan Metode Conjugated Diene sebagaimana dijelaskan dalam White (1995).

## Oksidasi lemak
Pengujian  kerusakan  lemak  akibat  oksidasi dilakukan  dengan  metode  angka  Peroksida  (PV) (Chapman & Mackay, 1949), angka Para-Anisidin (p- AnV)  (Hasnain,  2003)  dan    angka  Totoks ( Total Oksidasi ) (Nielsen, 2003).  Angka Totoks digunakan untuk mengukur total oksidasi, yang terdiri dari produk oksidasi primer (angka peroksida) dan produk oksidasi sekunder (angka p-anisidin). Angka Totoks dihitung menggunakan rumus (2 PV + p-AnV)

## Analisis Data
Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) satu faktor yang  terdiri  atas  5  perlakuan  dengan  10  kali pengamatan, masing-masing dilakukan sebanyak tiga ulangan.  Analisis  data  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  analisis  regresi  dan  ANOVA (Analysis of Varians) pada tingkat kepercayaan 95%, apabila terdapat beda nyata dilanjutkan dengan uji DMRT ( Duncan’s Multiple Range Test ).

## HASIL DAN BAHASAN

## Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan ekstrak etanolik Sargassum sp.  pada  emulsi  minyak  ikan  ditentukan  dengan menggunakan  metode  DPPH.  Hasil  pengamatan aktivitas antioksidan pada emulsi minyak ikan selama penyimpanan dapat dilihat pada Gambar 1.
Berdasarkan Gambar 1 dapat dilihat bahwa terjadi penurunan aktivitas antioksidan pada emulsi minyak ikan selama penyimpanan. Pada hari ke-0 sampai dengan hari ke-38, aktivitas antioksidan emulsi minyak ikan tanpa menggunakan ekstrak, semakin turun dari
A k ti vi ta s Pen a ng k a pan Rad ika l/ Ra dic al Sc av en gin g Ac ti vity (%)
Gambar 1. Aktivitas antioksidan emulsi minyak ikan selama penyimpanan. Figure 1. Antioxidant activity of fish oil emulsion during storage.
4,28% menjadi  0,38%. Pada empat perlakuan lain yaitu dengan ekstrak etanolik Sargassum sp. 0,5%; 1%; 1,5%; dan 2%, aktivitas antioksidan juga semakin turun yaitu pada kisaran rata-rata 40,96% pada hari ke-0 dan pada hari ke-38 pada kisaran rata-rata 3,88%. Perhitungan homogenitas koefisien regresi dari lima perlakuan  dengan  tingkat  kepercayaan  95% menunjukkan bahwa  kelima garis regresi bersifat tidak homogen (tidak sama). Hal ini menunjukkan bahwa 5 perlakuan  yang  diamati  mem iliki  tingkat  laju penghambatan  terhadap  aktivitas  oksidatif  yang berbeda-beda. Pemberian ekstrak etanolik Sargassum sp. mempengaruhi jumlah zat antioksidan pada emulsi minyak  ikan  yang  berfungsi  sebagai  faktor  utama dalam  penghambatan  kerusakan  oksidatif  yang berlangsung.  Semakin  tinggi  ekstrak  etanolik Sargassum sp.  yang  ditambahkan  pada  emulsi minyak ikan, maka aktivitas antioksidan dalam sistem emulsi minyak ikan semakin tinggi.
Pada  um um nya  m inyak  ik an  yang  ti dak ditambahkan antioksidan tidak dapat bertahan lebih dari 1 bulan (penyimpanan suhu kamar). Penambahan antioksidan  alami  dari Sargasssum sp.  mampu menambah masa simpan minyak ikan lebih dari 1 bulan karena penghambatan oksidasi oleh antioksidan paling aktif terjadi pada minggu ke-2 pertama. Zuta et al. , (2007) dan Tong et al ., (2000) meneliti pengaruh penambahan antioksidan tokoferol dan whey terhadap kualitas minyak ikan (EPA dan DHA) serta kerusakan yang  terjadi  di  dalamnya.  Parameter  uji  yang digunakan  seperti angka  peroksida (PV),  aktivitas antioksidan  (DPPH),  angka  p-anisidin  (AV),  dan conjugated  diene menunjukkan  bahwa  proses penghambatan kerusakan oksidatif oleh antioksidan terjadi  sampai  dengan  minggu  ke-2  selama  hari pengamatan berlangsung. Penambahan antioksidan whey dan tokoferol mampu menghambat kerusakan minyak tidak lebih dari 10 hari (pada minggu ke-2 dari
-20 -10 0 10 20 30 40 50 60 0 2 4 6 8 10 1 2 14 16 18 2 0 2 2 24 2 6 28 3 0 3 2 34 3 6 38 0%  [Y = -0,088x + 2,875 (R² = 0,641)] 0,5%  [Y = -1,392x  + 45,61
(R² = 0,809)] 1%  [Y = -1,310x + 44,98 (R² = 0,784)]
1,5%  [Y = -1,303x  + 44,94 (R² = 0,781)] 2%  [ Y = -1,237x + 43,56 (R² = 0,754)]
Hari/ Days
lama  pengamatan)  dan  hasil  pengamatan  sudah melampaui batas maksimum penerimaan kerusakan minyak pada umumnya.
Hasil analisis data menunjukkan perbedaan dari masing-masing perlakuan pada hari ke-0 sampai hari ke-32, sedang  pada hari ke-38 untuk 5 perlakuan tersebut (0; 0,5; 1; 1,5; dan 2%) tidak berbeda nyata, karena  antioksidan  yang  terdapat  pada  setiap perlakuan semakin  lama  semakin menurun akibat oksidasi .  Ber dasar kan  param eter  aktiv i tas antioksidan, pemberian ekstrak 0,5% menunjukkan hasil yang paling baik, karena merupakan konsentrasi terkecil  yang  dapat  mempertahankan  aktivitas antioksidan yang terkandung dalam emulsi minyak ikan dibandingkan dengan perlakuan tanpa ekstrak (0%). Hasil penghambatan oksidasi tersebut sama dengan  penelitian  Santoso et  al .  (2004)  yang menyebutkan  bahwa  oksidasi  yang  terjadi  pada emulsi  minyak  ikan  selama  proses  penyimpanan dapat ditekan oleh aktivitas antioksidan.

## Kandungan Asam Lemak Tidak Jenuh
Ganda pada Minyak Ikan (Pergeseran Ikatan Rangkap)
Conjugated diene atau diena yang terkonjugasi merupakan awal dalam proses oksidasi linoleat (18:2) maupun asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) yang merupakan berlangsungnya sebuah pergeseran posisi ikatan ganda. Pergeseran terjadi pada saat salah satu hidrogen yang hilang dari kelompok metilen berpindah di  antara  ikatan  rangkap  yang  terdapat  pada konfigurasi 1,4-pentadiene. Setelah itu sebuah radikal penta  dienyl  yang  telah  bergeser  terbentuk  untuk membentuk satu dari dua kemungkinan struktur diena terkonjugasi  (CD).  Komponen  tersebut  bereaksi dengan  oksigen  molekuler  untuk  membentuk
hidroperoksida  terkonjugasi.  Tingkat  perpindahan ikatan rangkap memiliki hubungan saling berkorelasi dengan tingkat peroksidasi yang terjadi dalam minyak tak jenuh (White, 1995).
Berdasarkan  Gambar  2  dapat  dilihat  bahwa conjugated  diene cenderung  semakin  meningkat dengan semakin lama waktu penyimpanan. Pada hari ke-0  sampai  dengan  hari  ke-38  perlakuan  tanpa menggunakan  ekstrak  etanolik Sargassum sp. mempunyai  nilai conjugated  diene lebih  tinggi dibandingkan  dengan  empat  perlakuan  lainnya. Perlakuan tanpa menggunakan ekstrak pada hari ke- 0 mempunyai nilai conjugated diene 30,95% dan pada hari ke-38 semakin tinggi yaitu mencapai pada titik 86,22%. Perlakuan dengan ekstrak 0,5%; 1%; 1,5%; dan 2% menunjukkan persamaan garis regresi yang mirip. Pada hari ke-0 nilai conjugated diene empat perlakuan  tersebut  terletak  pada  kisaran  15,73– 34,42% dan pada hari ke-38 terletak pada kisaran 26,86–31,88%. Perhitungan homogenitas koefisien regresi  dari  lima  perlakuan  menunjukkan  bahwa kelima  garis  regresi  bersifat  tidak homogen  (tidak sama),  berarti 5  perlakuan  mempunyai hasil yang berbeda selama 38 hari pengamatan. Perlakuan yang ditambahkan ekstrak etanolik Sargassum sp. mampu menghambat kerusakan oksidatif yang terjadi selama pengam atan.  Selam a  pr oses  peny im panan berlangsung,  kerusakan  oksidatif  yang  terbentuk akan menyebabkan terputusnya ikatan rangkap pada rantai  asam  lemak  dan  terbentuk  senyawa  diena terkonjugasi ( conjugated diene ). Penambahan ekstrak etanolik Sargassum sp. dapat menekan pembentukan senyawa terkonjugasi selama penyimpanan karena zat antioksidan dari ekstrak etanolik Sargassum sp. dapat menghambat   kerusakan  oksidatif  sehingga pergeseran ikatan rangkap pada gugus metil yang akan membentuk diena terkonjugasi dapat dikurangi.
Gambar 2. Conjugated diene emulsi minyak ikan selama penyimpanan. Figure 2. Conjugated diene of fish oil emulsion during storage.
D ie na T er k on ju ga s i/ Co nj ug at ed D ie ne (%) Hari/ Days 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 0 2 4 6 8 10 1 21 4 16 1 82 0 2 22 4 26 2 83 0 32 3 4 36 3 84 0 42 0%  (y = 3E-0 7x6 - 2E -06x5 - 0.0015x 4 + 0.067x 3 - 1.0554x2  + 6.4872x  + 36.029 [R² = 0.9966] )
0.5%  (y  = -2E-06x 6 +  0.0002 x5 - 0.01x4  +  0.2305x 3 - 2.5 191x2 + 11.232x  + 19.395 [R² = 0.89]) 1%  (y = 1E-0 6x6 - 0.0001x 5 + 0.0041x 4 - 0.0597x3  + 0.3182x 2 - 0.7788x  + 37.356 [R² = 0.7776] ) 1.5%  (y  = 6E-07x6 - 6E- 05x5 + 0.0022x 4 - 0.0308x3  + 0.1319x 2 + 0.0812x  + 31.58 [R² = 0.7143]) 2%  (y = 1E-0 6x6 - 0.0001x 5 +
0.004x 4 - 0.0707x3 + 0.5851x2  -
2.5687x  + 39.852 [R² = 0.6442] )
Hasil analisis data menunjukkan bahwa mulai hari ke-0  sampai  hari  ke-38  nilai conjugated  diene menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata  (p<0,05) untuk perlakuan 0; 0,5; 1; 1,5; dan 2%. Pada hari ke- 0,  diena  terkonjugasi  (CD)  yang  diamati  pada  5 perlakuan (0; 0,5; 1; 1,5; dan 2%) sudah cukup tinggi (di atas 20%) dan hasil pengamatan menunjukkan bahwa  perlakuan 0%  mempunyai kenaikan  paling cepat dibandingkan dengan empat perlakuan lainnya.
Berdasarkan  param eter conjugated  diene perlakuan  0,5%  merupakan  perlakuan  paling  baik dibanding perlakuan lain untuk parameter conjugated diene , karena dengan konsentrasi yang paling rendah sudah menunjukkan perbedaan dengan perlakuan kontrol (0%). Hasil pembentukan diena terkonjugasi selama penyimpanan emulsi minyak tersebut sama dengan penelitian Zuta et al . (2007) yang menyebutkan bahwa diena terkonjugasi yang terbentuk semakin lama semakin tinggi dan berbanding lurus dengan masa penyimpanan emulsi minyak.

## Angka Peroksida pada Emulsi Minyak Ikan
Bilangan peroksida merupakan parameter penting untuk menentukan mutu minyak yaitu semakin besar nilai  peroksida  maka  minyak  tersebut  semakin mendekati  ketengikan  (Ketaren,  1986).  Hasil pengamatan bilangan peroksida minyak ikan selama penyimpanan dapat dilihat pada Gambar 3.
Dari Gambar  3 dapat  dilihat bahwa  perubahan bilangan  peroksida  emulsi  minyak  ikan  selama penyimpanan  menunjukkan  pola  hubungan  yang semakin meningkat. Pada hari-0 sampai hari ke-8 menunjukkan kenaikan angka peroksida dari masing- masing perlakuan yang tidak berbeda nyata (p>0,05), dengan kisaran rata-rata dari 0,10 sampai 0,23 meq/ kg  minyak.  Mulai  pengamatan  hari  ke-14  pada
Ang ka Pero ks ida (meq /kg min yak) / Per oxi de val u e (meq /kg o il) Hari/ Days
Gambar 3. Angka peroksida emulsi minyak ikan selama penyimpanan. Figure 3. Peroxide value of fish oil emulsion during storage.
perlakuan  tanpa  menggunakan  ekstrak  etanolik Sargassum sp., angka peroksida mengalami kenaikan cukup  tinggi  (p<0,05)  dibandingkan  dengan  4 perlakuan  lainnya.  Hal  tersebut  disebabkan  tidak terdapat antioksidan yang dapat menghambat laju pembentukan  peroksida.  Pada  hari  ke-20  sampai dengan hari ke-38, perlakuan 0% dan perlakuan 0,5% mengalami laju peningkatan angka peroksida yang cukup tinggi dibandingkan dengan perlakuan 1; 1,5; dan 2% dengan nilai akhir yaitu secara berurutan mulai dari perlakuan 0% sampai dengan 2% yaitu 1,04; 1,02; 0,44; 0,38; dan 0,37 meq/kg minyak.
Perhitungan homogenitas koefisien regresi dari lima perlakuan  dengan  tingkat  kepercayaan  95% menunjukkan bahwa kelima garis regresi bersifat tidak homogen (tidak sama). Dari kemiringan garis regresi untuk  masing-masing  perlakuan  dapat  diketahui penghambatan  oksidasi  oleh  ekstrak  etanolik Sargassum sp. Semakin rendah gradien persamaan regresi  menunjukkan  semakin  rendahnya  laju peroksidasi yang terbentuk yaitu secara berturut-turut 2%  (0,004)  <  1,5%  (0,006)  <  1%  (0,008)  <  0,5% (0,022) < 0% (0,025).  Selama penyimpanan, proses kerusakan  oksidatif  akan  menyebabkan  emulsi minyak rusak dan menghasilkan senyawa peroksida yang merupakan salah satu indikator kerusakan pada minyak.  Variasi  konsentrasi    ekstrak  etanolik Sargassum sp.  yang  ditambahkan  pada  empat perlakuan  tersebut  menyebabkan  perbedaan  laju kerusakan oksidatif. Semakin tinggi konsentrasi yang ditam bahkan,  m aka  sem akin  lam bat  proses kerusakan oksidatif yang berlangsung dan senyawa peroksida yang terbentuk semakin rendah.
Pada  parameter  kerusakan  minyak  dengan menggunakan angka peroksida, perlakuan dengan ekstrak  1%  merupakan  perlakuan  yang  lebih  baik karena konsentrasi tersebut merupakan konsentrasi
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 0% [Y=  0,025x + 0,098 (R² = 0 ,983)] 0,5%  [ Y= 0,022x +
0,091  (R² = 0,959)] 1% [Y=  0,008x + 0,168
(R² = 0 ,899)]
1,5%  [ Y= 0,006x + 0,192  (R² = 0,786)]
2% [ Y =  0,004x + 0,175
(R² = 0 ,730)]
terendah  yang  dapat  menghambat  pembentukan angka  peroksida  dibanding  dengan  kontrol.  Hasil pembentukan angka peroksida tersebut sama dengan penelitian Zuta et al . (2007) yang menyebutkan bahwa angka peroksida yang terbentuk pada emulsi minyak ikan  selama  penyimpanan  suhu  kamar  semakin m eningk at  berbanding  lurus  dengan  l am a penyimpanan dan dipengaruhi oleh proses oksidasi yang  terjadi.  Pak  (2005)  menyebutkan  8  meq/kg minyak  merupakan  batas  maksimum  yang  masih dapat  diterima  untuk  parameter  angka  peroksida. Dibandingkan dengan hasil penelitian tersebut, emulsi minyak  ikan  yang  ditambahkan  ekstrak  etanolik Sargassum sp. masih memenuhi syarat, meskipun demikian  dengan  melihat  pola  kenaikan  angka peroksida pada Gambar 3  dimungkinkan minyak ikan tanpa  penambahan  antioksidan  akan  mengalami kerusakan yang lebih cepat dengan semakin lama penyimpanan.
Angka  peroksida  pada  produk  pangan  yang banyak mengandung asam lemak tidak jenuh akan meningkat  selama  penyimpanan  seiring  dengan meningkatnya  pembentukan  radikal  bebas,  dan setelah  mencapai  nilai  maksimum  maka  akan cenderung  berkurang  karena  terjadinya  proses degradasi peroksida yang menghasilkan senyawa- senyawa aldehid, alkohol, hidrokarbon, dan senyawa volatil lainnya. Angka peroksida tidak dapat digunakan dalam penentuan umur simpan suatu produk pangan karena hanya dapat digunakan untuk menentukan tingkat  kerusakan  oksidatif  pada  suatu  produk (Singhal et al ., 1997).

## Angka p-Anisidin
Angka  p-anisidin  m erupakan  angka  hasil pengukuran  produk  sekunder  dari  oksidasi  lemak
dengan  menentukan  jumlah  aldehid  (terutama  2- alkenal dan 2,4- dienal ) dalam lemak. Aldehid bereaksi dengan  p-anisidin  membentuk  kromogen  yang menyerap pada panjang gelombang 350nm, sehingga dapat diukur secara spektrofotometri (Pokorny et al ., 2001). Hasil pengamatan angka p-anisidin selama penyimpanan  emulsi  minyak  ikan  disajikan  pada Gambar 4.
Berdasarkan  Gambar  4,  angka  p-anisidin menunjukkan semakin meningkat (p<0,05) dengan semakin meningkatnya waktu penyimpanan. Pada hari  ke-4  perlakuan  0%  meningkat  cukup  tinggi (p<0,05)  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya dengan nilai berturut-turut sebesar 9,16; 5,66; 5,66; 7; dan 6,14. Setelah hari ke-4 sampai dengan hari ke-38 peningkatan angka p-anisidin yang terjadi relatif tidak terlalu tinggi, dengan nilai angka anisidin pada hari terakhir pengamatan (hari ke-38) yaitu 17,18 (0%); 15,46 (0,5%); 10,18 (1%); 10,68 (1,5%); dan 11,4 (2%). Perhitungan homogenitas koefisien regresi dari lima perlakuan di atas dengan tingkat kepercayaan 95% menunjukkan bahwa kelima garis regresi bersifat tidak homogen (tidak sama). Penambahan ekstrak etanolik Sargassum sp.  pada  saat  proses  penyimpanan berlangsung  akan  menghambat proses  kerusakan oksidatif  yang  terjadi  dan  angka  p-anisidin  yang terbentuk dari proses oksidasi lemak tersebut akan semakin  melambat.  Variasi  konsentrasi  ekstrak etanolik Sargassum sp.  yang  ditambahkan  pada emulsi  minyak  ikan  akan  mempengaruhi  hasil pem bentukan  angka  anisidin.  Semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  etanolik Sargassum sp.  yang ditambahkan  maka  proses  pembentukan  angka anisidin akan melambat seiring terhambatnya proses oksidasi pada emulsi minyak ikan.
Hari/ Days Ang ka p- Anis idin/ Ani sid in e Val ue (%)

## Gambar 4. Angka anisidinemulsi minyak ikan selama penyimpanan.
Figure 4. Anisidine value of fish oil emulsion during storage.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 3436 38 0% [Y = -0,013x2 + 0,813x + 5,307 (R² = 0,980)] 0,5% [Y= -0,003x2 + 0,400x +  4,874 (R² =
0,929)] 1% [Y = -0,008x2 + 0,495x + 4,793 (R² = 0,769) ] 1,5% [Y= -0,006x2 + 0,396x +  5,596 (R² = 0,724)] 2% [Y = -0,005x2 + 0,372x + 5,237 (R² = 0,803)]
Hasil analisis data menunjukkan bahwa pada hari ke-0 sampai hari ke-4 untuk perlakuan 0%; 0,5%; 1%; 1,5%;  dan  2%  memiliki  hasil  tidak  berbeda  nyata (p>0,05), yang berarti bahwa sampai dengan hari ke- 4, setiap perlakuan tersebut memberikan hasil yang tidak berbeda pada pembentukan senyawa sekunder dari proses kerusakan oksidatif emulsi minyak ikan. Mulai hari ke-6 sampai hari ke-38, ke-5 perlakuan tersebut (0%; 0,5%; 1%; 1,5%; 2%) memiliki hasil yang  berbeda  nyata  (p<0,05),  karena  proses kerusakan oksidatif yang terjadi semakin cepat dari hari ke hari pengamatan.
Berdasarkan  parameter kerusakan minyak angka p-anisidin, perlakuan dengan ekstrak 1% merupakan perlakuan  terbaik.  Perlakuan  1%  m erupakan konsentrasi terendah yang dapat menghambat proses pembentukan  senyawa  sekunder  akibat  dari kerusakan minyak yang terjadi dibandingkan dengan kontrol.  Hasil  penghambatan  oksidasi  (angka  p- anisidin) oleh aktivitas antioksidan tersebut serupa dengan  penelitian  Estiasih et  al .  (2008)  yang menyebutkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi pemberian  bahan  penyalut  (penghambat  proses oksidasi) pada emulsi minyak ikan, angka anisidin yang  terbentuk  semakin  rendah.  Pak  (2005) menyebutkan 20% merupakan batas maksimum yang masih dapat diterima untuk parameter angka anisidin. Dibandingkan dengan hasil penelitian tersebut emulsi minyak  ikan  yang  ditambahkan  ekstrak  etanolik Sargassum sp.  masih tergolong  baik  karena  tidak melebihi batas penerimaan angka anisidin.

## Nilai Totoks (Total Oksidasi)
Total oksidasi lemak (Gambar 5) menunjukkan hasil pengukuran angka peroksida sebagai produk primer dan angka p-anisidin sebagai produk sekunder secara
bersamaan sehingga diperoleh jumlah total produk oksidasi minyak yang dinyatakan sebagai nilai Totoks (Pokorny et al ., 2001). Hasil perhitungan nilai Totoks menunjukkan adanya peningkatan dengan semakin lamanya penyimpanan. Pada hari-0 sampai hari ke-8 menunjukkan  kenaikan  nilai Totoks  (p<0,05)  pada kisaran  rata-rata  dari  5,66  sampai  11,04.  Mulai pengam atan  hari  k e-14,  per lakuan  tanpa menggunakan  ekstrak  etanolik Sargassum sp. m engalam i  kenaikan  cuk up  ti nggi  (p<0, 05) dibandingkan dengan 4 perlakuan lainnya. Hal tersebut karena  pembentukan  radikal  bebas  pada  emulsi minyak ikan mulai meningkat karena tidak terdapat antioksidan yang  dapat menghambat laju oksidasi yang terjadi. Pada hari ke-20 sampai dengan hari ke- 38, perlakuan 0% dan perlakuan 0,5% mengalami laju peningkatan  Nilai  Tot oks  yang  cukup  t inggi dibandingkan dengan perlakuan 1%; 1,5%; dan 2% dengan nilai akhir yaitu secara berurutan mulai dari perlakuan 0% sampai dengan 2% yaitu 19,26; 17,51; 11,07; 11,43; dan 12,13. Nilai Totoks yang terbentuk dipengaruhi oleh variasi konsentrasi ekstrak etanolik Sargassum sp.  yang  ditambahkan  pada  emulsi minyak  ikan.  Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak etanolik Sargassum sp.  yang  ditambahkan  pada emulsi  minyak  ikan,  maka  semakin  rendah  Nilai Totoks  yang  terbentuk.  Hal  ini  disebabkan  zat antioksidan  yang  terdapat  pada  ekstrak  etanolik Sargassum sp. akan menghambat proses kerusakan oksidatif yang terjadi pada emulsi minyak ikan selama penyimpanan berlangsung.
Hasil analisis data menunjukkan pada hari ke-0 sampai  hari  ke-4  untuk  perlakuan  0%;  0,5%;  1%; 1,5%; dan 2% tidak berbeda nyata (p<0,05), yang berarti setiap perlakuan tersebut tidak memberikan pengaruh pada aktivitas kerusakan minyak. Sampai
Nil ai T ot a
l Oks ida s i/ T ot al Oxida tion V al ue Hari/ Days
Gambar 5. Nilai total oksidasi emulsi minyak ikan selama penyimpanan. Figure 5. Total oxidation value of fish oil emulsion during storage.
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 0 2 4 6 8 101214161820222426283032343638 0% [Y= -0,013x2 + 0,852x + 5,551 (R² = 0,985)] 0,5% [Y= -0,002x2 +
0,415x + 5,194 (R² = 0,947)] 1% [Y= -0,009x2 + 0,522x + 5,080 (R² = 0,800)] 1,5% [Y= -0,007x2 + 0,430x + 5,886 (R² = 0,759)] 2% [Y= -0,005x2 + 0,375x + 5,610 (R² = 0,815)]
dengan pengamatan pada hari ke-8, semua perlakuan tidak  beda  nyata  dengan  0%,  sedangkan  sampai dengan pengamatan pada hari ke-38, hanya perlakuan 0,5% saja yang tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan 0%.
Berdasarkan  parameter  nilai Totoks,  perlakuan dengan  ekstrak  1%  merupakan  perlakuan  terbaik dalam menekan aktivitas kerusakan minyak, karena merupakan  konsentrasi  terendah  yang  dapat menghambat proses oksidasi dibandingkan dengan control. Hasil penghambatan oksidasi (nilai Totoks) oleh  aktivitas  antioksidan  tersebut  serupa  dengan penelitian Estiasih et al . (2008) yang menyebutkan bahwa semakin tinggi konsentrasi pemberian bahan penyalut (penghambat proses oksidasi) pada emulsi minyak  ikan,  nilai  Totoks  yang  terbentuk  semakin rendah.
Pak  (2005)  menyebutkan  26  merupakan  batas maksimum  yang  masih  dapat  diterim a  untuk parameter Nilai Totoks. Dibandingkan dengan hasil penelitian  tersebut  em ulsi  m inyak  ikan  yang ditambahkan ekstrak etanolik Sargassum sp. masih tergolong  baik. Pokorny et  al .  (2001)  menyatakan bahwa Nilai Totoks dapat digunakan untuk mengetahui tingkat  kerusakan  lemak  akibat  oksidasi.  Dengan demikian nilai Totoks dapat digunakan selanjutnya sebagai  parameter  kritis  kemunduran  mutu  untuk pendugaan umur simpan minyak ikan.

## KESIMPULAN
Penggunaan  ekstrak  etanolik Sargassum sp. mampu  memberikan  hasil  yang  lebih  baik  dalam proses penghambatan oksidasi emulsi minyak ikan dibandingkan dengan kontrol. Penggunaan ekstrak etanolik Sargassum sp.  1%  menghasilkan  laju penghambatan kerusakan oksidatif yang lebih baik dibandi ngkan  dengan  m inyak  ikan  tanpa menggunakan zat antioksidan untuk parameter angka peroksida, angka anisidin, dan nilai Totoks.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Jurusan Perikanan Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada yang telah memberikan fasilitas untuk melaksanakan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Chapman, R. A. dan MacKay, K. 1949. The Estimation of Peroxides in Fats and Oils by The Ferric Thiocyanate Method. Journal of the American Oil . 26 (7): 360-363
Lemak  -3 dari Hasil Samping Penepungan Lemuru. Jurnal  Teknologi  dan  Industri  Pangan. 19(2):  121- 130.
Farquhar,  J.  W.,  Insull,  W.,  Rosen,  P.,  Stoffel,  W.,  dan Ahrens, E. H. 1959. The analysis of fatty acid mixtures by  gas-liquid  chromatography-Nutrition  Rev. San Fransisco, Amerika:  Rockfeller  Institute  Press.
Hasnain,  A.  2003.  Pakistan  Standard  Specification  for Banasp.ati  Edisi  ke-3. Pakis tan  Standards  and Quality  Control  Authority  Standards  Development Centre. Karac hi,  Pak istan.  Pak istan  Standard &Quality Control Authority (PSQCA).
Huang, D., Ou .B.,  and Prior, R. L.  2005. The  Chemistry Behind Antioxidant Capacity Assays-Reviews. Journal of Agricultural  and  Food  Chemistry. 53:  1841-1856.
Ketaren,  S. 1986. Minyak  dan  Lemak  Pangan .  Jakarta: UI  Press.
Koivikko, R. 2008. Brown  Algal Phlorotannins  Improving and  Applying  Chemical  Methods .  Departement  of Chemistry,  University  of  Turku,  Finlandia.
Nielsen,  S.  S.  2003. Food  Analysis  Laboratory  Manual 3 rd eds .  Jerman: Springer  Ltd.
Pak, C. S. 2005. Stability and Quality of  Fish Oil During Typical  Domestic  Application .  Wonsan  University  of Fisheries,  Korea.
Patra, J. K., Rath, S. K.,  and Jena, K. 2008. Evaluation of Antioxidant  and  Antimicrobial  Activity  of  Seaweed ( Sargassum sp.)  Extract:  A  Study  on  Inhibition  of Glutathione-S-Transferase Activity. Turkish Journal  of Biology. 32:  119-125. Pokorny, J. K. 2001. Preparation  of Natural  Antioxidant, inAntioxidants in Food: Practical Applications, 1 st eds .
Inggris:  W oodhead  Publishing  Ltd.
Santoso,  J.,  Yoshie-Stark, Y.,  and  Suzuki,  T.  2004. Anti- oxidant Activity  of  Methanol  Extracts from  Indonesian Seaweeds  in  an  Oil  Emulsion  Model. Fisheries Science. 70:  183-188.
Singhal,  R.  S.,  Kulkarni,  P.  R.,  and  Rege,  D.V.  1997. Handbook of Indices of Food Quality and Authenticity. Inggris:  W oodhead  Publishing  Ltd.
Suzuki, H., Wada, S., Hayakawa, S., and Tamura, S. 1985. Effects  of  Oxygen Absorber  and  Temperature  on  ù3 Polyunsaturated  Fatty  Acids  of  Sardine  Oil  during Storage. Journal  of  Food  Science:  Food  Chemistry and Toxycology. 50:  358-360.
Tong, L. M., Sasaki, S., McClements, D. J., Decker, E. A. 2000. Antioxidant  Activity  of  W hey  in  a  Salmon  Oil Emulsion . Journal of Food Science: Food  Chemistry and Toxicology. 65:  1325-1329. White, P. J. 1995. Methods to Access Quality and Stability of  Oils  and  Fat-Containing  Foods . Amerik a:
American’s Oil  Chemist Society  Press.
Winberg,  P.,  Ghosh,  D., and  Tapsell,  L. 2009. Seaweed Culture  in  Integrated  (Multi-Trophic  Aquaculture. Rural  Industries  Researc h  and  Development Corporation.  Australia.
Zuta, P. C., Simpson, B. K., Zhao, X., and Leclerc. 2007. The  Effect  of  -tochopherol  on  the  Oxidation  of Mackerel  Oil. Food  Chemistry. 100:  800-807.
Estiasih,  T.,  Ahmadi,  K.,  dan  Nisa,  F.  C.  (2008).
Karakteristik  Mikrokapsul  Minyak  Ikan  Kaya  Asam