DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8

## Artikel Penelitian
Kadar Neuroglobin dan Sitoglobin dalam Plasma, Cairan Serebro Spinalis, dan Jaringan Otak Pasien Strok Hemoragik
Ninik Mudjihartini 1* , Mohamad Saekhu 2 , Sri Widia A. Jusman 1 , Mohamad Sadikin 1
1 Departemen Biokimia dan Biologi Molekuler, Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia, Indonesia
2 Departemen Bedah Syaraf FKUI/RSCM, Indonesia
* Corresponding author : ninikbiokim@gmail.com

## ABSTRACT
Background: The weight of the brain that does not reach 2% of the total body weight, uses 20% of the total energy produced by the body. Such a large amount of energy can only be met through aerobic oxidation. This means, the brain requires a lot of oxygen in addition to glucose as well. Ischemic hypoxia due to Spontaneous intracerebral hemorrhage (sICH) hemorrhagic stroke can disrupt the supply of oxygen and nutrients to the brain resulting in decreased energy production in the brain. This energy depletion causes brain cell damage and death to occur more rapidly. Neuroglobin (Ngb) and cytoglobin (Cygb) are globin group proteins found in the brain and act as oxygen-binding proteins in mitochondria. Purposes: This study aims to obtain an overview/profile of Ngb and Cygb levels, in plasma, cerebrospinal fluid (CSS), and brain tissue of hemorrhagic stroke patients. Methods: Current study is a part of a previous study using plasma , CSF, and brain tissue obtained during craniotomy to evacuate hematomas of  patients  with  sICH  hemorrhagic  stroke  at  Cipto  Mangunkusumo  Hospital  and  other hospitals in Jakarta. Ngb and Cygb protein levels from plasma, CSF, and brain tissue were measured  by  ELISA  method.  Results:  The  mean  level  of  brain  Ngb  is  0.058  ng/mg  brain protein,  while  in  plasma  and  CSS  are  0.017  ng/mg  brain  protein  and  0.013  ng/mg  brain protein, or 29.31% and 22.41% of average Ngb brain level respectively. The mean brain Cygb level  is  4.943  ng/mg  brain  protein,  in  CSS  it  was  1.685  ng/mg  brain  protein,  or  25.26%  of average Cygb brain level, whereas in plasma it was barely detectable. Conclusion: In hypoxic conditions  due  to  sICH  hemorrhagic  stroke,  Ngb  and  Cygb  proteins  can  be  measured  in plasma, CSF, and brain tissue.

## Keywords: neuroglobin, cytoglobin, hemorrhagic stroke

## ABSTRAK
Latar  belakang: Otak  memerlukan  oksigen  yang  banyak  selain  glukosa. Hipoksia  iskemik karena  strok  hemoragik  atau Spontaneous  intracerebral  hemorrhage (sICH)  dapat mengganggu  suplai  oksigen  dan  nutrisi  ke  otak  berakibat  produksi  energi  di  otak  akan menurun. Deplesi energi ini menyebabkan kerusakan dan kematian sel otak terjadi lebih cepat. Neuroglobin (Ngb) dan sitoglobin (Cygb) merupakan protein golongan globin yang terdapat di otak  dan  berperan  sebagai  protein  pengikat  oksigen  di  mitokondria. Tujuan: Penelitian  ini bertujuan mendapatkan gambaran/profil kadar Ngb dan Cygb, di plasma, cairan serebro spinal (CSS), dan jaringan otak pasien strok hemoragik. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian lanjutan menggunakan sampel plasma, CSS, dan jaringan otak yang diperoleh saat kraniotomi evakuasi hematoma pasien  strok hemoragik sICH di rumah sakit Cipto Mangunkusumo dan rumah sakit lainnya di Jakarta. Kadar protein Ngb dan Cygb dari plasma, CSS, dan jaringan
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
Vol. 3 No. 1 Tahun 2022 jurnal.umj.ac.id/index.php/MuJG mujgfkk@umj.ac.id e-issn: 2721 –6837
otak diukur dengan metode ELISA. Hasil: Rerata kadar Ngb otak adalah 0,058 ng/mg protein otak, sedangkan di plasma dan CSS masing-masing adalah 0,017 ng/mg protein otak dan 0,013 ng/mg protein otak atau 29,31% dan 22,41% dari rerata kadar Ngb otak. Rerata kadar Cygb otak adalah 4,943 ng/mg protein otak, di CSS adalah 1,685 ng/mg protein otak, atau 25,26% dari rerata Cygb otak, sedangkan di dalam plasma hampir tidak terdeteksi. Simpulan: Pada keadaan hipoksia oleh karena strok hemoragik sICH, protein Ngb dan Cygb dapat diukur di plasma, CSS, dan jaringan otaknya.
Kata kunci: neuroglobin, sitoglobin, strok hemoragik

## PENDAHULUAN
Strok  adalah  suatu  keadaan  darurat  medis yang dapat mengakibatkan cacat tubuh dan keadaan fatal (1). Ada dua jenis strok, yaitu iskemik  dan  hemoragik.  Strok  hemoragik adalah jenis strok yang terutama disebabkan  oleh  hipertensi  kronis  atau amyloid  angiopatyhy  cerebral ,  sedangkan penyebab  sekunder  antara  lain  malformasi arteriovenosa (AVM), aneurisma intrakranial, angioma  cavernosa , angioma venosa , trombosis vena, neoplasma intrakranial,  koagulopati,  vaskulitis,  dan penyalahgunaan obat (2).
Perdarahan intraserebral spontan non traumatik  ( supratentorial  Intracerebral Hemorrhage/ sICH)  adalah  salah  satu penyebab  strok  hemoragik  penyebab morbiditas dan mortalitas yang bermakna di seluruh dunia. Perdarahan sICH menyumbang  15  hingga  20%  dari  semua strok  di  populasi  Negara  Barat  dan  20 sampai  50%  di  negara  berkembang  (3–5). Perdarahan  sICH  adalah  strok  hemoragik yang  paling  mematikan,  dengan  angka kematian  mencapai  40%  di  antara  semua strok (6). Angka kejadian ICH sekitar 2 juta setiap  tahun  di  seluruh  dunia,  namun pengobatan  yang  efektif  masih  kurang.
Pada kasus sICH dengan  volume <30 cm 3 dalam  waktu  30  hari  kemungkinan  untuk terjadi kematian sebesar 19 % (7).
Tindakan  operasi  kraniotomi  untuk evakuasi  bekuan  darah  yang  pecah
meskipun  masih  menjadi  perdebatan, namun  masih  tetap  dilakukan  untuk mencegah terjadinya komplikasi yang lebih buruk  (8,9).  Tindakan  bedah  pasien  sICH dinyatakan  masih  bermanfaat,  khususnya jika  dilakukan  dengan  prosedur  invasif yang minimal dan dilakukan segera setelah timbulnya gejala (10).
Penelitian terbaru telah mengungkapkan  ekspresi  protein  globin selain  haemoglobin  (Hb)  dalam  eritrosit vertebrata,  termasuk  mioglobin  (Mb), sitoglobin (CYGB), globin E (GbE), globin Y(GBY),  dan  Ngb  (11).  Neuroglobin adalah  suatu  protein  golongan  globin  ke tiga, yang ditemukan oleh Burmester pada tahun 2000 (12). Struktur Ngb mirip dengan mioglobin, yaitu merupakan protein monomer yang terdiri dari 151 asam amino dan  mempunyai  berat  molekul  17  kDa. Protein Ngb terutama diekspresikan dalam neuron  sistem  saraf  pusat  dan  perifer, ekspresi  Ngb  dinyatakan  tertinggi  pada retina,  namun  ekspresi  mRNA  dan/atau protein  Ngb  juga  ditemukan  di  dalam jaringan  non-saraf  (10).  Beberapa  peneliti menyatakan  bahwa  distribusi  protein  Ngb terutama  di  sitoplasma  sel  neuron  (13). Hasil  penelitian  Mitz,  dkk.  menyatakan bahwa  distribusi  Ngb  pada  mamalia  darat (tikus)  terutama  di  sel  neuron,  sedangkan pada  mamalia  laut  (anjing  laut)  di  astrosit (14).  Sitoglobin  adalah  golongan  protein globin  ke  empat  yang  ditemukan  oleh
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
Kawada  pada  tahun 2001  (15).  Protein  ini adalah  suatu  dimer  hemoprotein  dengan berat molekul 21 kDa dan tersusun dari 190 asam  amino.  Cygb  diekspresikan  pada fibroblast  dan fibroblast  like  cell dalam berbagai  organ  seperti  hati,  jantung,  usus, ginjal, paru-paru, dan pancreas (16). Cygb juga diekspresikan di jaringan otak (17).
Sel-sel  otak  sangat  sensitif  terhadap kekurangan oksigen dan dapat mulai terjadi kematian  dalam  waktu  lima  menit  setelah suplai  oksigen  terputus  (18).  Pada  kondisi hipoksia jaringan otak mengalami iskemik, yaitu  di  daerah  pusat  pendarahan  dan dikelilingi  oleh  penumbra.  Pada  daerah iskemik ini terjadi kematian sel, sedangkan di  dalam  penumbra  diekspresikan  gen secara  selektif,  termasuk  gen  Ngb  dalam upaya  untuk  meningkatkan  suplai  oksigen (19).  Ngb  dapat  terdeteksi  pada  berbagai regio  otak setelah  infark  serebral,  dan ekspresinya secara signifikan meningkat di penumbra iskemik (20).
Kedua protein Ngb dan Cygb anggota famili globin ini  dinyatakan terdapat pada sel-sel  neuron  dan  berperan  dalam mensuplai oksigen di mitokondria (21,22). Hasil  penelitian  sebelumnya  ditemukan kadar  protein  Ngb  dalam  plasma  pasien strok  hemoragik  sICH  yang  meningkat secara  signifikan  dibandingkan  dengan subjek normal, namun tidak ada perbedaan yang  signifikan  antara  Ngb  di  plasma  dan jaringan otak pasien tersebut (23).
Berangkat  dari  kenyataan  ini  dilakukan penelitian  lanjutan,  yaitu  mendeteksi  dan mengukur  Ngb  dan  Cygb  di  CSS.  Hasil  - nya diharapkan dapat melengkapi gambaran  kadar  protein  Ngb  dan  Cygb  di plasma,  CSS,  dan  jaringan  otak  yang diperoleh  saat  kraniotomi  pasien  strok hemoragik sICH di R.S. Cipto Mangunkusumo dan rumah sakit lainnya di Jakarta.

## METODE
Penelitian  ini  adalah  penelitian  analitik observasional  menggunakan  sampel  yang didapatkan  secara  konsekutif.  Subyek penelitian sebanyak 7 orang didapatkan dari R.S. Cipto Mangunkusumo dan rumah sakit lainnya  di  Jakarta.  Penelitian  dilakukan  di Departemen Biokimia dan Biologi Molekuler Fakultas Kedokteran,
Universitas Indonesia.
Sampel  berupa  plasma,  CSS,  dan jaringan  otak  yang  didapatkan  saat kraniotomi  evakuasi  hematoma  dari  7 pasien  stroke  hemoragik  sICH.  Jaringan otak  dibuat  homogenat  dengan  cara melumatkan  jaringan  otak,  kemudian menambahkan  larutan  bufer  fosfat  0,1  M pH  7,4  dengan  ratio  pengenceran  1:10.
Campuran  disentrifugasi  selama  10  menit dengan  kecepatan  5000  g  pada  suhu  4°C, supernatan yang dihasilkan dipisahkan dan ditampung.
Darah  EDTA  dari  vena  kubiti disentrifugasi  dengan  kecepatan  5000  g pada  suhu  4°C,  plasma  yang  dihasilkan dipisahkan dari endapannya dan ditampung. Homogenat jaringan otak, CSS, dan  plasma  disimpan  pada  suhu  -80°C sampai  saatnya  dilakukan  pengukuran biomarker, yaitu: kadar protein Ngb, Cygb, dan  kadar  protein  total  dari  plasma,  CSS, dan jaringan otak.
Konsentrasi  protein  total  plasma,
CSS,  dan  jaringan  otak  diukur  dengan metode  Christian  Warburg  menggunakan teknik  spektrofotometri  pada  panjang gelombang 280 nm. Kurva standar protein dibuat  dengan  menggunakan  albumin serum sapi (24).
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
Kadar  protein  Ngb  dan  Cygb  dari plasma,  CSS,  dan  jaringan  otak  diukur dengan  metode  ELISA  menggunakan  kit human Ngb dan Cygb (USCN ® ). Absorbansi hasil ELISA diukur
menggunakan Varioscan.
Penelitian  ini  telah  mendapatkan
Surat  Keterangan  Lolos  Kaji  Etik  dengan Nomor: 493/PT02/FK/ETIK/2012  dari komisi etik Fakultas Kedokteran,
Universitas Indonesia.

## HASIL
1. Kadar  Ngb  plasma,  CSS,  dan  jaringan otak
Hasil  pengukuran  ELISA  kadar  Ngb plasma,  CSS,  dan  jaringan  otak  dari  tujuh sampel ditampilkan pada Tabel 1, sedangkan  perbandingan  kadar  Ngb  dan Cygb antara plasma, CSS, dan jaringan otak diperlihatkan pada Gambar 1. Penelitian ini mendapatkan rerata kadar Ngb otak adalah 0,058 ng/mg protein otak, sedangkan kadar
Ngb  plasma  dan  CSS  masing-masing adalah 0,017  ng/mg  protein  otak  dan  0,013 ng/mg protein otak (Tabel 1.) .  Jika dibandingkan  dengan  rerata  kadar  Ngb  di otak, didapatkan rerata kadar Ngb di plasma dan  CSS  masing-masing  adalah  29,31% dan 22,41%.
Tabel  1. Kadar  Ngb  di  plasma,  CSS,  dan jaringan otak
Ngb ng/mg protein
No. Plasma CSS Jaringan otak 1 0.018 - 0.005 2 0.016 0.039 0.121 3 0.016 - 0.078 4 0.005 0.009 - 5 0.023 - 0.029 6 0.020 0.002 - 7 0.019 0.001 - Rerata 0,017 0,013 0,058
Catatan: (-) sampel tidak ada
Gambar  1. Gambaran  rerata  kadar  Ngb  antara plasma CSS, dan jaringan otak. Kadar Ngb  jaringan  otak  0,058  ng/mg protein  otak,  Ngb  plasma  dan  CSS masing-masing  adalah  29,31%  dan 22,41% dari kadar rerata Ngb otak
2. Kadar Cygb plasma, CSS, dan jaringan otak
Hasil  pengukuran  ELISA  kadar  Cygb plasma,  CSS,  dan  jaringan  otak  dari  tujuh sampel ditampilkan pada Tabel 2,
sedangkan  perbandingan  kadar  Ngb  dan Cygb antara plasma, CSS, dan jaringan otak diperlihatkan pada Gambar 2. Rerata kadar Cygb otak adalah 4,943 ng/mg protein otak, dan  kadar  Cygb  CSS  adalah 1,685  ng/ mg protein otak, sedangkan rerata kadar Cygb di  dalam  plasma  mendapatkan  hasil  yang sangat rendah hampir tidak terdeteksi. Jika dibandingkan dengan rerata kadar Cygb di dalam  otak,  rerata  kadar  Cygb  di  CSS adalah 25,26%.
Tabel 2. Kadar Cygb di plasma, CSS, dan jaringan otak
Cygb ng/mg protein No. Plasma CSS Jaringan otak 1 0.003 - 9.557 2 0.003 2.262 0.599 3 0.014 - 5.940 4 0.003 3.618 - 5 0.002 2.320 3.111 6 0.003 0.170 5.509 7 0.005 0.056 - Rerata 0,005 1,685 4,943 Catatan: (-) sampel tidak ada
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
Vol. 3 No. 1 Tahun 2022 jurnal.umj.ac.id/index.php/MuJG mujgfkk@umj.ac.id e-issn: 2721 –6837
Gambar  2. Gambaran  rerata  kadar  Cygb  antara plasma CSS, dan jaringan otak. Rerata kadar  Cygb  otak  adalah  4,943 ng/mg protein  otak,  dan  kadar  Cygb  CSS adalah  25,26%  dari  rerata  Cygb  otak, sedangkan Cygb di dalam plasma tidak terdeteksi.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  membuktikan  bahwa pada pasien strok hemoragik sICH, protein Ngb  terdeteksi  dan  terukur  baik  di  dalam plasma,  CSS  dan  jaringan  otaknya. Gambaran  rerata  kadar  Ngb  tertinggi didapatkan pada jaringan otak, kemudian di CSS dan terendah di plasma. Ekspresi Ngb meskipun di plasma terendah, namun relatif konsisten  jika  dibandingkan  dengan  kadar di  CSS  dan  jaringan  otak  (Tabel  1). Kraniotomi untuk mengevakuasi hematoma  pada  pasien  strok  hemoragik pada penelitian ini dilakukan dalam waktu yang  bervariasi  namun  tidak  lebih  dari  72 jam. Hasil pengukuran kadar Ngb jaringan otak  yang  bervariasi  dari  kadar  yang terendah  dan  tertinggi  pada  penelitian  ini dimungkinkan  berkaitan  dengan  waktu kapan  dilakukannya  kraniotomi.  Pecahnya pembuluh  darah  pada  strok  hemoragik sICH menyebabkan terbentuknya hematoma,  sehingga  terjadi  hipoksia  pada lokasi  hematoma  dan  sel  otak  sekitarnya yang mengalami desakan. Ekspresi Ngb di penumbra,  diinduksi  oleh  hipoksia  yang terjadi pada daerah iskemik (20).
Peningkatan  ekspresi  Ngb  baik  di  tingkat mRNA maupun proteinnya sudah dibuktikan  pada  penelitian  sebelumnya (23).  Hipoksia  menginduksi  ekspresi  Ngb
dapat  dijelaskan  oleh  karena  Ngb  sebagai anggota    protein  globin  mempunyai beberapa fungsi, yaitu detoksifikasi oksigen reaktif (ROS) dan spesies nitrogen (RNS); deoksigenasi  nitrogen  monoksida  (NO) menjadi  nitrat  (NO 3 ),  dan  memasok oksigen ke neuron serta melindungi neuron dari  kerusakan  melalui  beberapa  jalur persinyalan (21,22). Pada hipoksia sistemik oleh  karena  sICH  ini  tidak  hanya menginduksi ekspresi Ngb di jaringan otak saja, namun juga di plasma dan di CSS. Hal ini  mungkin merupakan suatu mekanisme untuk  memenuhi  kebutuhan  oksigen    di plasma dan CSS (25).
Ngb  terdeteksi  pada  plasma  pada penelitian ini sejalan dengan penelitian lain oleh  Cai  dkk  yang  dapat  mengukur  kadar Ngb  serum  pada  hari  kedua  setelah perdarahan  subarachnoid  dan  terkait  erat dengan prognosis yang buruk. Berdasarkan temuan  tersebut  dinyatakan  bahwa  Ngb mungkin  menjadi  target  biologis  yang potensial  untuk  memprediksi  prognosis perdarahan  subarachnoid  (26).  Penelitian lain  oleh Gao  Y,  yang  melakukan pengukuran  Ngb  pada  serum  pasien post stroke .  Hasil  penelitiannya  menyimpulkan bahwa Ngb serum dapat berfungsi sebagai biomarker yang potensial untuk memprediksi  penurunan  kognitif  setelah ICH  (27).  Penelitian  ini  juga  dapat mendeteksi  dan  mengukur  Ngb  di  CSS, studi  lain  yang  juga  telah  mendeteksi  dan mengukur  protein  Ngb  di  dalam  CSS adalah  penelitian  Casado  B  dkk.,  namun bukan  pada  pasien  strok  hemoragik melainkan  pada  subyek  yang  mengalami nyeri (28).
Selain  Ngb  penelitian  ini  juga  dapat mendeteksi  dan  mengukur  kadar  Cygb  di jaringan  otak  dan  CSS,  namun  di  plasma kadarnya  sangat  rendah  jika  dibandingkan dengan  kadar  Cygb  di  jaringan  otak.
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
Hipoksia  pada  strok  hemoragik  sICH  ini menginduksi ekspresi Cygb pada CSS dan jaringan  otak.  Hasil  ini  sejalan  dengan penelitian terdahulu oleh Fordel dkk. yang menyatakan  terjadi  peningkatan  protein Cygb  yang  berbeda  pada  berbagai  organ, yaitu otak, otot, hati, dan jantung tikus yang mengalami  hipoksia  (29).  Demikian  juga hasil penelitian Lie dkk. terjadi peningkatan ekspresi  protein  Cygb  baik  pada  hipoksia intermiten  maupun  hipoksia  berkelanjutan 1,  3,  7,  dan  14  hari,  meskipun  secara statistik  tidak  signifikan  (30).  Ekspresi protein  Cygb  di  plasma  yang  kadarnya sangat  rendah  dibanding  dengan  kadar  di jaringan  otak  pada  pasien  ini  belum  dapat dijelaskan.
Keterbatasan  pada  penelitian  ini adalah  tidak  didapatkan  sampel  yang lengkap  pada  ketujuh  subjek,  sehingga tidak dapat diperbandingkan  kadar  protein Ngb dan Cygb di plasma, CSS, dan jaringan otak  per  subjek. Selain  itu  pada  penelitian ini tidak diukur mRNA Ngb dan Cygb pada plasma,  CSS,  maupun  di  jaringan  otak sehingga  tidak  dapat  membandingkan ekspresi di tingkat mRNA dengan proteinnya.  Namun  meskipun  demikian hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa pada  keadaan  hipoksia  oleh  karena  strok hemoragik sICH ini protein Ngb dan Cygb dapat diukur di plasma, CSS, dan jaringan otaknya.

## SIMPULAN
Pada  keadaan  hipoksia  oleh  karena  strok hemoragik sICH ini protein Ngb dan Cygb dapat diukur di plasma, CSS, dan jaringan otaknya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kepada  Departemen Bedah  Syaraf  FKUI  RSCM  yang  telah
membantu mendapatkan sampel dari subjek penelitian.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Saya  menyatakan  tidak  memiliki  konflik kepentingan,  dan  tidak  ada  afiliasi  atau koneksi atau entitas dengan organisasi apa pun,  yang  dapat  menimbulkan  pertanyaan bias dalam diskusi dan kesimpulan naskah.

## REFERENSI
1. Patil  M,  Patel  S.  Pharmacogenomic analysis of single-nucleotide polymorphisms of angiotensin-I converting  enzyme  gene  in  stroke. Asian  J  Pharm  Res.  2015  Jan 1;8:308–10.
2. Qureshi AI, Tuhrim S, Broderick JP,
Batjer  HH,  Hondo  H,  Hanley  DF. Spontaneous intracerebral hemorrhage.  N  Engl  J  Med.  2001 May;344(19):1450–60.
3. Feigin  VL,  Lawes  CMM,  Bennett DA,  Barker-Collo  SL,  Parag  V. Worldwide  stroke  incidence  and early  case  fatality  reported  in  56 population-based studies: a
systematic  review.  Lancet  Neurol.
2009 Apr;8(4):355–69.
4. Feigin  VL,  Krishnamurthi  R  V., Parmar P, Norrving B, Mensah GA, Bennett  DA,  et  al.  Update  on  the global  burden  of  ischemic  and hemorrhagic  stroke  in  1990-2013: The
GBD 2013 study. Neuroepidemiology. 2015;45(3) :161–76. 5. Feigin VL, Forouzanfar MH,
Krishnamurthi  R,  Mensah  GA, Connor M, Bennett DA, et al. Global and regional burden of stroke during 1990-2010: findings from the Global Burden  of  Disease  Study  2010. Lancet (London, England)
[Internet].  2014  Jan  18;383(9913):
245–54.  Available  from:  https:// pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24449944
6. van Asch CJ, Luitse MJ, Rinkel GJ,
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
van der Tweel I, Algra A, Klijn CJ. Incidence, case fatality, and functional  outcome  of  intracerebral haemorrhage    over  time,  according to  age,  sex,  and  ethnic  origin:  a systematic review and meta- analysis. Lancet  Neurol.  2010 Feb;9(2):167–76.
7. Broderick JP, Brott TG, Duldner JE, Tomsick  T,  Huster  G.  Volume  of intracerebral hemorrhage. A powerful  and  easy-to-use  predictor of    30-day  mortality.  Stroke.  1993 Jul;24(7):987–93.
8. Hemphill JC, Greenberg SM,
Anderson  CS,  Becker  K,  Bendok BR,  Cushman  M,  et  al.  Guidelines for the Management of Spontaneous Intracerebral Hemorrhage: A Guideline for Healthcare Professionals  from  the  American Heart  Association/American  Stroke Association.  Stroke.  2015;46(7):
2032–60.
9. Steiner T, Al-Shahi Salman R, Beer R,  Christensen  H,  Cordonnier  C, Csiba  L,  et  al.  European  Stroke Organisation  (ESO)  guidelines  for the  management  of  spontaneous intracerebral  hemorrhage.  Int  J stroke    Off  J  Int  Stroke    Soc.  2014 Oct;9(7):840–55.
10. De  Marinis  E,  Fiocchetti  M, Acconcia  F,  Ascenzi  P,  Marino  M.
Neuroglobin  upregulation  induced by 17β-estradiol sequesters cytocrome  c  in  the    mitochondria preventing H2O2-induced apoptosis of  neuroblastoma  cells.  Cell  Death Dis. 2013 Feb;4(2):e508.
11. Götting M, Nikinmaa M. More than hemoglobin - the unexpected diversity of globins in vertebrate red blood  cells.  Physiol  Rep  [Internet].
2015  Feb  3;3(2):e12284.  Available from:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25 649247
12. Burmester T, Weich B, Reinhardt S, Hankeln  T.  A  vertebrate  globin
expressed  in  the  brain.  Nature [Internet].  2000;407(6803):520–3.
Available from: https://doi.org/ 10.1038/35035093
13. Ascenzi P, Bocedi  A, de Sanctis D, Pesce A, Bolognesi M, Marden MC, et  al.  Neuroglobin  and  cytoglobin: Two  new  entries  in  the  hemoglobin superfamily*.  Biochem  Mol  Biol Educ    a  Bimon  Publ    Int  Union
Biochem Mol Biol. 2004 Sep;32(5):305–13.
14. Mitz SA, Reuss S, Folkow LP, Blix AS, Ramirez J-M, Hankeln T, et al. When  the  brain  goes  diving:  glial oxidative  metabolism  may  confer hypoxia  tolerance to the seal brain. Neuroscience.  2009  Oct;163(2): 552–60.
15. Kawada N, Kristensen DB, Asahina K, Nakatani K, Minamiyama Y, Seki S, et al. Characterization of a stellate cell  activation-associated  protein (STAP)  with    peroxidase  activity found  in  rat  hepatic  stellate  cells.  J Biol  Chem.  2001  Jul;276(27):
25318–23.
16. Kawada N. Cytoglobin as a Marker of  Hepatic  Stellate  Cell-derived Myofibroblasts. Front Physiol. 2015;6:329.
17. Hundahl CA, Allen GC, Hannibal J, Kjaer  K,  Rehfeld  JF,  Dewilde  S,  et al.  Anatomical  characterization  of cytoglobin  and  neuroglobin  mRNA and protein  expression in the mouse brain.  Brain  Res.  2010  May;1331:
58–73.
18. Paulbabu  K,  Deepak  Singh  K, Prashanti
P, Padmaja M.
Neuroprotective potential and efficacy of neurodegenerative disorders  of  fruit  extract  of  Aegle marmelos.  Int  J  Pharm  Pharm  Sci. 2015;7(1):155–9.
19. Dirnagl  U,  Iadecola  C,  Moskowitz MA.  Pathobiology  of  ischaemic stroke:  an  integrated  view.  Trends Neurosci. 1999 Sep;22(9):391–7.
20. Yu Z,  Liu N,  Liu J, Yang  K, Wang
DOI: 10.24853/mujg.3.1.1-8
X.  Neuroglobin,  a  novel  target  for endogenous  neuroprotection  against stroke and neurodegenerative disorders.  Int  J  Mol  Sci  [Internet].
2012/06/07.  2012;13(6):6995–7014.
Available  from:  https://pubmed. ncbi.nlm.nih.gov/22837676
21. Hankeln  T,  Ebner  B,  Fuchs  C, Gerlach F, Haberkamp M, Laufs TL, et al. Neuroglobin and cytoglobin in search of their role in the vertebrate globin    family.  J  Inorg  Biochem. 2005 Jan;99(1):110–9.
22. Xie  LK, Yang SH. Brain globins in physiology and pathology. Med Gas Res. 2016;6(3):154–63.
23. Mudjihartini  N,  Lasma  Nurhayati, Saekhu M, Sri Widia A Jusman, Jan Purba, Mohamad Sadikin. Responses  of  brain  tissues  against hypoxic  condition  in  hemorrhagic stroke patients: Neuroglobin expression  in  brain  tissue  and plasma.  Asian  J  Pharm  Clin  Res [Internet].  2017  Feb  1;10(2  SE- Original Article(s)):407–9. Available from: https://www. innovareacademics.in/journals/inde x.php/ajpcr/article/view/15971
24. Warburg O, Christian W. Isolierung und Kristallisation des Gärungsferments Enolase. Naturwissenschaften [Internet]. 1941;29(39):589–90. Available from: https://doi.org/10.1007/ BF01482279 25. Baez  E,  Echeverria  V,  Cabezas  R, Ávila-Rodriguez  M,  Garcia-Segura
LM,  Barreto  GE.  Protection  by Neuroglobin  Expression  in  Brain
Pathologies        [Internet].  Vol.  7, Frontiers  in  Neurology    .  2016.
Available from: https://www. frontiersin.org/article/10.3389/fneur .2016.00146 26. Cai H, Zheng S, Cai B, Yao P, Ding C,  Chen  F,  et  al.  Neuroglobin  as  a Novel Biomarker for Predicting Poor Outcomes in Aneurysmal Subarachnoid  Hemorrhage.  World Neurosurg. 2018 Aug;116:e258–65.
27. Gao  Y,  Wang  B,  Miao  Y,  Han  Y. Serum  Neuroglobin  as  a  Potential
Prognostic Biomarker for Cognitive Impairment After Intracerebral
Hemorrhage        [Internet].  Vol.  13, Frontiers  in  Neurology    .  2022.
Available from: https://www. frontiersin.org/article/10.3389/fneur .2022.885323
28. Casado  B,  Pannell  LK,  Whalen  G, Clauw  DJ,  Baraniuk  JN.  Human neuroglobin protein in cerebrospinal fluid.  Proteome  Sci  [Internet]. 2005;3(1):2. Available from: https:// doi.org/10.1186/1477-5956-3-2 29. Fordel  E,  Geuens  E,  Dewilde  S, Rottiers P, Carmeliet P, Grooten J, et al. Cytoglobin expression is upregulated  in  all  tissues  upon hypoxia:  an  in  vitro  and    in  vivo study by quantitative real-time PCR. Biochem  Biophys  Res  Commun. 2004 Jun;319(2):342–8.
30. Li RC, Lee SK, Pouranfar F, Brittian KR,  Clair  HB,  Row  BW,  et  al. Hypoxia  differentially  regulates  the expression  of  neuroglobin  and cytoglobin  in    rat  brain.  Brain  Res. 2006 Jun;1096(1):173–9.