## EFEK ISOFLAVON KEDELAI (Glycine max) TERHADAP KADAR TESTOSTERON DAN BERAT VESIKULA SEMINALIS TIKUS JANTAN Sprague dawley

## Jont Marson
Dosen Jurusan Gizi Poltekkes Kemenkes Palembang, Jl. Sukabangun I Km 6,5 Palembang Indonesia jontmarson@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh isoflavon terhadap kadar hormon testosteron dan berat vesikula seminalis pada tikus jantan Sprague dawley. Studi eksperimental in vivo ini menggunakan rancangan post-test only group design. Sampel terdiri dari 24 ekor tikus yang dibagi ke dalam 4 kelompok yaitu kelompok 1 (kontrol), kelompok 2, 3 dan kelompok 4. Kelompok perlakuan diberikan isoflavon dengan dosis masing-masing 2,52 mg, 3,78mg dan 5,04mg diberikan peroral selama 48 hari. Kemudian tikus diambil darah dan vesikula seminalisnya. Dilanjutkan dengan pengukuran kadar hormone testosterone dan berat vesikula seminalis. Analisa dilakukan dengan One Way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Multiple Comparison jenis Bonferroni. Semua analisa menggunakan SPSS versi 16. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari hasil uji Post Hoc Bonferroni antara kontrol negatif dan kelompok 2 dosis isoflavon 2,52 mg dengan nilai p=0,631 untuk kadar testosteron dan p=0,873 untuk berat vesikula seminalis berarti pada dosis ini belum menunjukkan penurunan kadar hormon testosteron dan berat vesikula seminalis. Antara kontrol negatif dan kelompok 3 dosis isoflavon dengan nilai p=0,01 untuk kadar testosteron dan p 0,05 untuk berat vesikula seminalis berarti telah menunjukkan penurunan yang signifikan. Disimpulkan bahwa terdapat pengaruh pemberian isoflavon kedelai terhadap kadar hormon testosteron dan berat vesikula seminalis tikus putih jantan (Rattus norvegicus).
Kata Kunci: Isoflavon Kedelai, Kadar Hormon Testosteron, Berat Vesikula Seminalis

## THE EFFECT OF SOY ISOFLAVONE (Glycine max)  ON TESTOSTERONE LEVEL AND SEMINAL VESICLE                    WEIGHT
OF RAT MALE Sprague dawley

## ABSTRACT
Aim of this study was to determine the efficacy of soybean isoflavone on testosterone hormone level and seminal vesicle on Sprague Dawley male rat. This in vivo experimental study was used post-test only group design. The sample consisted of 24 rats were divided into 4 groups: group 1 (control), group 2, group 3 and 4. Isoflavone treatment group was given with each dose of 2.52 mg, 3.78 mg, and 5.04 mg administered orally for 48 days. Then the rat blood and seminal vesicles was taken. These followed by measurement of testosterone levels and seminal vesicles weight. Analysis performed by one way ANOVA and continued with Multiple Comparision test typed Benferroni. All analyzes using SPSS version 16. Results showed that of the post hoc Bonferroni test between the control & group 2 with doses of isoflavones 2.52 mg have p = 0.631 for testosterone levels and p = 0.873 for seminal vesicles weight means that at these doses have not shown decreased levels of testosterone and seminal vesicle weight. Between the negative control and 3-dose isoflavone group with p = 0.01 for testosterone levels and p <0.05 for seminal vesicle weight means that have shown a significant decline . It could be concluded that soy isoflavone have effect on level of testosterone and seminal vesicle weight of white male rats (Rattus norvegicus)
Key Words: Soybean Isoflavone, Hormone Levels of Testosterone, Vesicula Seminalis Weight.

## PENDAHULUAN
Kedelai  salah  satu  komoditi  pangan  utama setelah padi dan jagung. Produk olahan kedelai yang paling banyak dikonsumsi oleh penduduk Indonesia golongan menengah dan bawah adalah tahu dan tempe. Kedelai  mengandung isoflavon  yang merupakan salah satu senyawa fitokimia (Muchtadi, 2010). Kandungan isoflavon  pada kedelai berkisar 2-4 mg/g kedelai (Winarsi, 2005).
Isoflavon sering disebut sebagai fitoestrogen atau  estrogen  nabati  karena  mempunyai  struktur hampir sama dengan estrogen (Schmidl & Labuza, 2000). Isoflavon  dapat  berikatan  dengan  receptor estrogen  di hipofisis  anterior  untuk menghambat pengeluran Follicle Stimulating Hormone (FSH)  dan Luteinizing  Hormone (LH).   Penghambatan  ini berakibat testosteron dalam darah menurun.
Jumlah sel spermatogenik sangat tergantung pada aktivitas tubuli seminiferi yang dipengaruhi oleh sistem hormon, sehingga faktor endokrin mempunyai efek  paling  penting  terhadap  spermatogenesis. Testosteron yang disintesis sel Leydig diperlukan untuk berlangsungnya  proses spermatogenesis pada tubuli seminiferi  (Junqueira  & Carneiro,  1995).  Proses spermatogenesis  dipengaruhi  oleh  hormon-hormon yang dihasilkan oleh organ hipothalamus, hipofise dan testis sendiri. Hormon yang terlibat adalah testosteron, hormon lutein (LH), hormon perangsang folikel (FSH: follicle stimulating hormone) , estrogen,  dan hormon pertumbuhan lainnya ( Rosenfiel  &  Fathalla, 1997; Speroff, Glass & Kase, 1999 ). Hipotalamus mensekresi G onadotropin- Releasing  Hormon (GnRH),  yang akan  menstimuli hipofisis anterior untuk mensekresi LH maupun FSH. LH berikatan dengan reseptor spesifik pada membran sel Leydig yang berlanjut dengan sekresi androgen. FSH terikat reseptor spesifik pada sel Sertoli di tubulus seminiferus. Molekul androgen akan berikatan dengan reseptor androgen khusus yang ada di sitoplasma sel Sertoli, kompleks reseptor androgen tersebut kemudian ditranslokasi ke dalam inti dan berikatan dengan daerah tertentu dalam kromatin. Melalui proses yang terjadi dalam inti, akhirnya dihasilkan mRNA untuk sintesis protein,  yang  selanjutnya  menghasilkan Androgen Binding  Protein (Zaneveld  &  Chatterton,  1982). Pengaruh testosteron terhadap sel Sertoli adalah untuk pematangan  sel  Sertoli  dan  sintesis ABP (Hadley, 1992).
Vesikula seminalis merupakan organ asesoris reproduksi  hewan  jantan  yang  bersifat androgen dependent yaitu fungsinya yang tergantung pada ada tidaknya androgen  dalam tubuh.  Androgen adalah nama untuk kelompok steroid, alamiah dan sintetik (Neischlag,  1996).  Testosteron  adalah  principal testiscular  androgen  (Johnson  &  Everitt,  1988). Sintesis  androgen  membutuhkan  konversi  dari kolesterol menjadi testosterone (Neischlag, 1996). Jika
kadar testosteron rendah  sel-sel vesikula seminalis terjadi atropi dan keseluruhan kelenjar akan menjadi kecil sehingga vesikula seminalis dalam mengeluarkan semen terjadi penurunan (Yatim, 1994).
Peneliti  lain  menuliskan  bahwa  terjadi penurunan berat vesikula seminalis dan prostat setelah pemberian isolat mangostin  yang dapat disebabkan oleh penurunan hormon testosterone (Nita, 2003). Baik perkembangan  maupun  fungsi  kedua  organ  ini bergantung pada hormon testosteron. Bila kedua organ ini  kekurangan hormon  testosteron  maka  aktifitas sekretorisnya akan terganggu dan sel-sel epitelnya mengalami penyusutan (Johnson & Everitt, 1988).
Sebagai salah satu sumber pangan setelah padi dan  jagung  yang  banyak  dikonsunsi  masyarakat Indonesia maka peneliti  bermaksud  untuk  melihat pengaruh isoflavon  kedelai terhadap kadar hormon testosteron dan berat vesikula seminalis pada tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ) karena kedelai dan produknya mengandung isoflavon.
.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan Bahan & Hewan Uji
Bahan  uji  berupa  kacang  kedelai  yang dihdrolisis untuk menghasilkan isoflavon yang lebih banyak dan dilakukan uji KLT ( Kromatografi  Lapis Tipis ) yang memperlihatkan hanya senyawa isoflavon yang diekstrak.
Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan ( Rattus norvegicus )  strain Sprague Dawley berumur 3-4 bulan sebanyak 24 ekor dan dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan.

## Pelaksanaan Penelitian
Ekstrak kedelai diberikan secara oral dengan dosis 2,52 mg, 3,78 mg dan 5,04 mg selama 48 hari. Hari ke 49 tikus dikorbankan dengan cara dislokasi leher,  kemudian  diambil  darah  dari  jantung. Selanjutnya darah di sentrifus 5000 rpm. Cairan bening yang merupakan serum darah  kemudian  dianalisis untuk mengetahui kadar hormon testosteron dengan metode ECLIA. Selain itu assesoris organ reproduksi yaitu vesikula seminalis diambil   dan   dibersihkan dalam    larutan    NaCl    0,9%    sampai    lemak    yang menempel  pada  organ  tersebut  hilang,  kemudian dikeringkan  dengan  kertas saring dan di   timbang dengan   timbangan   analitik   sartorius   dengan ketelitian 0,001g.

## HASIL PENELITIAN

## Hasil Uji KLT
Pengujian  KLT  dilakukan  untuk  menguji senyawa yang terkandung di dalam hasil hidrolisis kacang  kedelai.  Hasil  uji  KLT  (Gambar  1.) memperlihatkan hanya keluar warna krem yang berarti
hasil hidrolisis kacang kedelai hanya mengandung senyawa golongan flavonoid.
Gambar 1. Golongan senyawa flavonoid sebagai hasil uji KLT dari hidrololisis kacang kedelai

## Hasil Uji Homogenitas
Berdasarkan  Tabel  1 didapatkan  hasil  uji homegenitas terhadap berat badan tikus dengan nilai p sebesar 0,399, dan hasil uji homegenitas terhadap umur tikus dengan nilai p sebesar 0,714 yang artinya sampel homogen dan syarat eksperimental terpenuhi, sehingga dapat dilanjutkan dengan uji berikutnya.
Tabel 1. Hasil Uji Homogenitas terhadap Berat Badan dan Umur Tikus Jantan Sprague Dawley
Variabel P Berat Badan (gr) 0,399 Umur (bulan) 0,714

## Levene Test

## Kadar Testosteron
Berdasarkan Tabel 2 didapatkan bahwa terdapat penurunan rata-rata kadar testosteron tikus putih jantan antara K1 dengan K2, K3, dan K4 yang diberi ekstrak kedelai  dan  diperoleh  nilai p sebesar  0.000,  yang berarti  ada  pengaruh  pemberian  ekstrak  kedelai terhadap kadar testosteron. Untuk melihat signifikasi antara kelompok perlakuan maka dilanjutkan dengan uji Post Hoc Bonferroni .
Tabel  2. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Ekstrak Kedelai terhadap Kadar Testosteron (ng/l) Tikus Jantan Sprague
Dawley Kelompok Mean (ng/l) +  SD p K1 (kontrol) 5,550 ± 0,008 0,000 K2 (2,52 mg) 5,540 ± 0,008 K3 (3,78 mg) 5,523  0,005 K4 (5,04 mg) 5,470 ± 0,014
ANOVA Test
Dari gambar 1 diketahui bahwa antara K1 dengan K2 menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan ( p >0,05), sedangkan antara K1 dengan K3, antara K1 dengan K4, antara K2 dengan K3, antara K2 dengan K4, dan antara K3 dengan K4 menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan ( p >0,05).
a=p<0,05 b=p>0,05
Gambar 2. Rerata Kadar Testosteron pada  Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan.

## Berat Vesikula Seminalis
Berdasarkan Tabel 3 didapatkan bahwa terdapat peningkatan rata-rata  berat vesikula seminalis tikus putih  jantan  antara  K1  dengan  K2,  K3,  dan  K4  yang diberi ekstrak kedelai dan diperoleh nilai p sebesar 0,000 yang berarti ada pengaruh pemberian ekstrak kedelai  terhadap  persentase  morfologi  abnormal spermatozoa.  Untuk  melihat  signifikasi  antara kelompok perlakuan maka dilanjutkan dengan uji Post Hoc Bonferroni .
Tabel  3. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Ekstrak Kedelai terhadap Berat Vesikula Seminalis (g) Tikus Jantan
Sprague Dawley
Kelompok Mean (g) +  SD p K1 (kontrol) 1,850 ± 0,008
0,000 K2 (2,52 mg) 1,841 ± 0,007 K3 (3,78 mg) 1,823  0,005 K4 (5,04 mg) 1,770 ± 0,014

## ANOVA Test
Dari gambar 2. diketahui bahwa antara K1 dengan K2 menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan ( p >0,05), sedangkan antara K1 dengan K3, antara K1 dengan K4, antara K2 dengan K3, antara K2 dengan K4, dan antara K3 dengan K4 menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan ( p >0,05).
a=p<0,005 b=p>0,05
Gambar 3. Rerata Berat Vesikula Seminalis pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan
Gambar 4. Vesikula Seminalis Tikus Jantan Sprague Dawley Kelompok Kontrol  dan Kelompok Perlakuan

## PEMBAHASAN
Kadar  testosteron  akibat  pemberian  isoflavon kedelai.
Analisa data hasil eksperimental in vivo diatas membuktikan  bahwa  ada  pengaruh  signifikan pemberian isoflavon kedelai ( Glycine max )  terhadap kadar hormon testosteron dalam darah tikus jantan Sprague Dawley . Peneliti lain juga menyatakan bahwa kadar hormon testosteron mengalami penurunan sesuai dengan makin tinggi dosis isoflavon yang diberikan pada tikus (Wahyuni, 2012). Hal ini disebabkan senyawa isoflavon   bersifat estrogen  like dan  juga bersifat  antiandrogenik.  Artinya  Isoflavon  dapat bekerja dengan cara meniru kerja estrogen, sehingga isoflavon dapat   berikatan dengan reseptor estrogen pada  hipofisis  anterior.  Menurunnya  konsentrasi hormon  testosteron  yang  disebabkan  pemberian estrogen dapat terjadi karena penghambatan terhadap fungsi hipofisa (Parrott & Davies, 1979).
Dalam sistem portal hipotalamus-hipofisis- testis,  hipotalamus  mensekresikan  GnRH  untuk merangsang hipofisis anterior mengeluarkan FSH dan
LH, oleh karena isoflavon telah mengikat reseptor estrogen menyebabkan sekresi FSH  dan LH menurun. Produksi  LH  terhambat,  maka  pertumbuhan, pematangan  dan  jumlah  sel Leydig kemungkinan berkurang sehingga produksi hormon testosteron akan terganggu.  Sel Leydig merupakan tempat  terjadinya proses steroidogenesis  yang  menghasilkan  hormon testosteron,  jika  jumlah/fungsinya  berkurang maka produksinyapun akan berkurang (Hanum, 2010).
Isoflavon juga menghambat kerja enzim 17- - hidroksisteroidoksidorektase,  yang  diperlukan  untuk sintesis hormon testosteron. Testosteron berasal dari prekursor kolesterol, kolesterol mengandung 27 atom karbon, setelah hidroksilasi dari kolesterol pada atom C20 dan atom C22 terjadi pemecahan rantai samping menjadi bentuk pregnenolon  dan  asam isocaproat, pemecahan  ini  di  samping  adanya  enzim  20 hidroksilasi dan 22  hidroksilasi juga adanya peran LH dalam  meningkatkan  aktivitas  enzim  (Kuczynski, 1982).  Selanjutnya  konversi  pregnenolon  menjadi testosteron membutuhkan beberapa enzim, yaitu 3 - hidroksisteroid-dehidrogenase,  17 -hidroksilase  dan 17- -hidroksisteroidoksidorektase  (Murray et al ., 1997). Berarti dengan demikian jika LH menurun maka pemecahan  rantai  samping  menjadi  bentuk pregnenolon  dan  asam isocaproat akan terganggu sehingga pregnenolon tidak terbentuk dan selanjutnya testosteronpun tidak terbentuk. Begitu  juga   dengan gangguan    pada enzim 17- - hidroksisterodoksidorektase,  meskipun  pregnenolon terbentuk namun  tidak  dapat  dikonversi menjadi testosteron
Berat vesikula seminalis akibat pemberian isoflavon kedelai.
Dari  analisa  data hasil  penelitian  diatas diketahui bahwa ada pengaruh signifikan pemberian isoflavon kedelai ( Glycine max ) terhadap berat vesikula seminalis  tikus  jantan Sprague Dawley .  Hal  ini disebabkan oleh pemberian isoflavon pada dosis tinggi yang mengakibatkan terhambatnya perkembangan sel Leydig atau berkurangnya jumlah sel Leydig yang disebabkan oleh sekresi LH yang terhambat akibat efek anti androgenik dari isoflavon, sehingga menyebabkan penurunan kadar testosteron.   Isoflavon yang berikatan dengan reseptor estrogen, akan menghambat kerja hipofisis anterior dalam mensekresikan FSH dan LH. Penurunan produksi LH akan berdampak pada sekresi testosteron oleh sel Leydig . Hal ini akan mengganggu pertumbuhan dan perkembangan organ aksesoris dan dapat menyebabkan atrofi sel dan penurunan berat organ vesikula seminalis (Gambar 3). Penelitian ini bersesuaian dengan penelitian lain bahwa penurunan berat vesikula seminalis dan prostat menggambarkan adanya penurunan hormon testosteron (11) , karena  baik perkembangan  maupun  fungsi  kedua  organ  ini bergantung pada hormon testosteron (12) .  Bila  kedua
organ  ini  kekurangan hormon  ini maka aktifitas sekretorisnya akan terganggu dan sel-sel epitelnya mengalami penyusutan. Jika kadar testosteron rendah, sel-sel organ vesikula seminalis menjadi atrofi dan keseluruhan  kelenjar akan menjadi kecil  sehingga fungsi vesikula seminalis dalam sekresi untuk volume semen, untuk koagulasi dan sumber fruktosa juga terjadi penurunan (9) .

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian tentang pengaruh pemberian isoflavon kedelai ( Glycine max )  terhadap kadar testosterone dan berat vesikula seminalis tikus jantan Sprague Dawley dapat disimpulkan bahwa
1. Terjadi penurunan yang bermakna kadar hormon testosteron  dalam  darah  tikus  jantan Sprague Dawley mulai  pemberian  isoflavon  kedelai ( Glycine max ) dosis 3,78 mg setiap 200 gram berat badan tikus.
2. Pemberian isoflavon kedelai ( Glycine max ) mulai dosis 3,78 mg dapat menyebabkan penurunan yang bermakna berat vesikula seminalis tikus jantan Sprague Dawley .

## Saran
Penulis menyarankan untuk dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efek isoflavon kedelai ( Glycine max )  terhadap  kadar Follicle Stimulating Hormone (FSH) dan Luteinizing Hormone (LH).

## Daftar Acuan
Muchtadi, D. 2010. Kedelai Komponen Bioaktif untuk Kesehatan. Penerbit Alpabeta. Bandung. Winarsi, 2005. Isoflavon, Berbagai Sumber, Sifat dan
Manfaatnya pada Penyakit  Degeneratif. UGM
University Press, Yogyakarta.
Schmidl, M.K, and T.P Labuza. 2000. Essentials  of Function  Foods,  Aspen  Publishher,   Inc, Gaitherburg, Maryland.
Junqueira, L.C, dan J. Carneiro, 1995. Basic Histology
(Histologi  Dasar).  Terjemahan  oleh               Adji Dharma. Edisi Ketiga. Penerbit EGC, Jakarta.
Rosenfiel, A, and M.A. Fathalla. 1997. Reproductive physiology. 1:55-69 The Parthenon
publishing group,  New Jersey.
Speroff, L., R.H. Glass  and N.G. Kase. 1999. Clinical gynecologic endocrinology and        infertility.
6 th ed.(page  1075-1096), William and Wilkins,
L. Philadelphia.
Zaneveld,  L.J.D.  and  R.T.  Chatterton.  1982, Biochemistery of Mammalian Reproduction, A Wiley-Interscience Publication, John Wiley and
Sons, New York.
Hadley, M.E, 1992. Endocrynology, Prentice-Hall, Inc,
Simon dan Schuster Company        Englewood. Neischlag,  E,  1996.  Testosterone  Replacement Therapy. Clinical Endocrinology. 162-261.
Yatim, W. 1994. Reproduksi dan Embriologi. Tarsito, Bandung. 254-260.
Nita, S. 2003. Efek Mangostin  terhadap kwlitas sperma, epididimis kauda Tikus wistar jantan. JKK, 35 (3): 553-557.
Johnson,  M.H.  & B.J.  Everitt.  1988.  Essential reproduction.3 th ed  Blackwell  Sci.  Publ. Oxford London Edinburg.
Wahyuni,  R.S.  2012.  Pengaruh  Isoflavon  Kedelai terhadap  Kadar  Hormon  Testosteron,  Berat Testis,  Diameter  Tubulus  Seminiferus  dan Spermatogenesis Tikus Putih Jantan ( Rattus norvegicus ) 3(12): 3-4.
Parrott,  R.F,  and  Davies,  R.V.  1979.  Serum gonadotrophin levels in prepubertally castrated male sheep treated for  long periods with propionated testosteron, dihydrotestosteron, 19- hydroxytestosteron  or  oestradiol.  J. Reprod.Fert.56: 543-548.
Hanum, M. 2010. Biologi Reproduksi. Nuha medika,
Yokyakarta.
Kuczynski, H.J, 1982. Fertility Control in the Male, A Development Perspective. In: F.X.A.
Murray,  R.K.,  Granner,  D.K.,  Mayes,  P.A.  and Rodwell,  V.W.  1997.  Biokimia  Harper ed.25 (alih bahasa Hartono A). Penerbit EGC,
Jakarta.