## Journal of Pharmaceutical and Health Research
Vol 2, No 3, Oktober 2021, pp. 67-69 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i3.982

## Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Inai (Lawsonia inermis L.) terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus
Sasmiati Farach Dita * , Lidyawati, Mutiara Sampoerna
Akademi Farmasi YPPM Mandiri, Banda Aceh, Indonesia Email: sasmiati.fd@gmail.com
Abstrak− Daun inai sering dimanfaatkan sebagai obat tradisional diantaranya sebagai antibakteri. Daun inai mengandung beberapa komponen  aktif  diantaranya  adalah  fenol  dan  flavonoid  yang  bersifat  sebagai  antibakteri.  Adapun  tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk mengetahui daya hambat ekstrak etanol daun inai ( Lowsonia inermis L.) terhadap pertumbuhan bakteri Staphyloccocus aureus . Penelitian  ini  telah  dilakukan  menggunakan  metode  deskriptif.  Pada  penelitian  ini  ekstrak  etanol  daun  inai  dibuat  dengan  metode maserasi. Pengujian ekstrak etanol daun inai terhadap bakteri Staphylococcus aureus dilakukan pada media Nutrient Agar (NA) dan menggunakan metode sumuran dengan 3 konsentrasi ekstrak yaitu konsentrasi 40%, 50% dan 90%, kontrol negatif digunakan aquadest dengan masing-masing 3 kali pengulangan. Hasil penelitian ini menunjukkan diameter zona hambat ekstrak daun inai pada konsentrasi 40% dihasilkan sebesar 21.29 mm, pada konsentrasi 50% sebesar 23.1 mm dan pada konsentrasi 90% sebesar 24.4 mm, pada kontrol positif sebesar 27.93 mm dan kontrol negatif akuades tidak memberikan zona hambat. Zona hambat,untuk seluruh konsentrasi termasuk kategori daya hambat yang kuat.
Kata Kunci: Ekstrak Etanol Daun Inai ( Lowsonia Inermis L); Staphylococcus Aureus ; Zona Hambat
Abstract− Henna  leaves  are  often  used  as  traditional  medicine,  including  as  an  antibacterial.  Henna  leaves  contain  several  active components  including  phenols  and  flavonoids  which  act  as  antibacterial.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  antibacterial activity of ethanol extract of henna leaves ( Lowsonia inermis L.) against Staphyloccocus aureus . This research was conducted using descriptive method. In this study, ethanol extract of henna leaf was made by maceration method. Ethanol extract of henna leaves was tested against Staphylococcus aureus on Nutrient Agar (NA) medium using well diffusion method with 3 extract concentrations, namely 40%, 50% and 90%, tetracycline as positive control and aquadest as negative control with 3 repetitions each. The results of this study showed that inhibition zone diameter of henna leaves extract at a concentration of 40% was 21.29 mm, at a concentration of 50% was 23.1 mm and at a concentration of 90% was 24.4 mm, positive control was 27.93 mm and negative control did not  show inhibition zone. The inhibition zone for all concentrations belongs to strong inhibition category.
Keywords: Ethanol Extract of Henna Leaves ( Lowsonia Inermis L); Staphylococcus Aureus ; Inhibition Zone

## 1. PENDAHULUAN
Tanaman herbal masih merupakan pilihan utama yang digunakan dalam pengobatan di beberapa belahan dunia. Meskipun pemulihannya lambat, namun tanaman herbal memiliki efek samping yang lebih rendah. Penyakit  yang sering diobati dengan  tanaman  herbal  salah  satunya  adalah  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri,  salah  satu  bakteri  yang  dapat menyebabkan penyakit antara lain Staphylococcus aureus (Pratiwi et al ., 2014). Bakteri S.  aureus adalah  bakteri  gram  positif  berbentuk  bulat  yang  merupakan  bakteri  patogen  bagi  manusia. Bakteri S. aureus juga dapat menginfeksi jaringan atau alat tubuh lain yang menyebabkan timbulnya penyakit dengan tanda-tanda yang khas seperti nekrosis, peradangan dan pembentukan abses serta dapat menyebabkan berbagai macam infeksi seperti pada jerawat, bisul, atau nanah. Bakteri S. aureus memiliki kemampuan berkembangbiak dan menyebar luas dalam jaringan tubuh serta adanya beberapa zat ekstraseluler yang dapat diproduksi (Tuntu, 2016).
Menurut Razak et al ., (2013), S. aureus diperkirakan 20 – 75% ditemukan pada saluran pernapasan atas, muka, tangan,  rambut  dan vagina.  Penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri  S.  aureus  secara  medis dapat disembuhkan dengan  obat-obatan  seperti  penisilin,  kloksasilin,  dikloksasilin,  eritromisin,  nafsilin  dan  oksasilin.  Selain  penggunaan obat-obatan kimia dan medis, infeksi yang diakibatkan oleh bakteri S. aureus ini dapat juga Salah satu tumbuhan yang berkhasiat untuk pengobatan antibakteri yang disebabkan oleh bakteri S. aureus adalah Lawsonia inermis L. Tumbuhan L. inermis yang dikenal pula dengan nama Inai merupakan suatu tumbuhan berbunga, spesies tunggal dari genus Lawsonia dari famili Lythraceae. Tumbuhan ini merupakan tumbuhan asli daerah tropis dan subtropis seperti Afrika Selatan, Afrika Timur dan Utara, Asia dan Australia Utara yang secara alamiah tumbuh juga di di  daerah-daerah  tropis  di  Amerika,  Mesir,  India  dan  sebagian  daerah  Timur  Tengah  (Hairunnisa,  2015).  Menurut Zubardiah et  al .,  (2008),  daun  inai  selain  digunakan  untuk  mewarnai  rambut  dan  kuku,  memiliki  khasiat  sebagai antibakteri, antiiritan, antioksidan, antikarsinogenik, anti-inflamasi, analgetik dan antipiretik.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## 2.1 Alat dan Bahan
Alat yang digunakanan adalah pipet tetes, cork borer , ose bulat, pinset, tabung reaksi, cawan porselin gelas arloji, object glass , cover glass , mistar/penggaris, petridis, lampus piritus, erlenmayer, mikropipet, beaker glass, hot plate , timbangan analitik, autoklaf, oven, inkubator, corong, penangas air, labu ukur, dan batang pengaduk. Bahan-bahan yang digunakan adalah daun inai ( Lawsonia inermis L.), bakteri S. aureus , media Nutrient Agar (NA), larutan tetrasiklin, akuades, akuades pro injeksi, benang jagung, kertas ubi, etanol 70%, NaCl 0,9%, larutan  standar Mc Farland 0,5.

## Journal of Pharmaceutical and Health Research
Vol 2, No 3, Oktober 2021, pp. 67-69 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i3.982

## 2.2 Pembuatan Serbuk Simplisia
Daun inai yang diambil adalah daun dewasa. Daun inai  dibersihkan dari kotoran yang menempel, dengan mencuci daun inai  di  bawah  air  mengalir  sampai  besih,  kemudian  tiriskan.  Setelah  itu  daun  inai  dirajang  kecil-kecil,  lalu  dilakukan pengeringan  di  lemari  pengering  teduh  selama  3  sampai  4  hari  sesekali  daun  inai  dibolak-balik.  Simplisia  yang  telah kering  dihaluskan  menggunakan  blender,  kemudian  diayak  dengan  ayakan  mesh  no.  60,  setelah  halus  dimasukkan kedalam wadah.

## 2.3 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Inai
Serbuk  simplisia  kering  daun  inai  ditimbang  sebanyak  150  g  kemudian  ditambahkan  1500  ml  pelarut  etanol  70%. Selanjutnya direndam, selama 6 jam pertama diaduk sesekali lalu direndam lagi selama18 jam (tanpa diaduk). Sampel kemudian  dienaptuangkan  dan  diambil  filtrat  pertama  (F1).  Kemudian  ditambahkan  150  ml  pelarut  etanol  70%  pada ampas. Direndam selama 6 jam (diaduk sesekali) dilanjutkan lagi direndam selama 18 jam. Disaring dengan kain flanel, diambil filtrat kedua (F2)  dan digabungkan F1 (filtrat pertama) dan F2 (filtrate kedua), kemudian didiamkan selama 1 jam.  Selnajutnya  dienaptuangkan  dan  diuapkan  maserat  sampai  menjadi  ekstrak  pekat.  Kemudian  persen  rendemen dihitung.

## 2.4 Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Daun Inai
Konsentrasi ekstrak yang digunakan yaitu 40%, 50% dan 90%. Ekstrak daun inai ( L. inermis ) ditimbang sebanyak 4 g, 5g dan 9g untuk masing-masing konsentrasi 40%, 50% dan 90%, lalu ditambahkan ke dalam larutan pengencer (DMSO) sampai 10 ml.

## 2.5 Pembiakan Bakteri Uji
Bakteri S. aureus dari Laboratorium Fundament Lab Sains Baitusallam Aceh Besar Kemudian dibiakkan kembali pada masing-masing  media  Nutrien  Agar  secara  zig-zag  dengan  menggunakan  ose  steril,  selanjutnya  diinkubasi  di  dalam incubator pada suhu 37°C selama 24 jam.

## 2.6 Pembuatan Suspensi Standar Mc Farland
Sebanyak 0.5 ml larutan Barium Chloride dihidrat (BaCl 2 .2H 2 O) ditambahkan ke dalam 9.95 ml Asam Sulfat (H 2 SO 4 ) 1% yang berada di tabung yang memakai tutup. Kemudian dikocok sampai terbentuk larutan yang keruh. Kekeruhan ini dipakai sebagai standar kekeruhan suspensi bakteri uji.

## 2.7 Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus aureus
Disiapkan tabung reaksi yang sudah disterilkan dan dimasukkan 10 ml NaCl 0,9% ke dalam tabung reaksi. Selanjutnya diambil  biakan  bakteri S.  aureus menggunakan  ose  bulat,  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  yang  berisi  NaCl  0,9% steril, dikocok kemudian bandingkan kekeruhannya dengan standar Mc Farland.

## 2.8 Pengujian Daya Hambat Ekstrak Daun Inai terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Suspense bakteri S. aureus diambil menggunakan ose steril lalu dioleskan keseluruh permukaan media NA. Kemudian dibuat  lubang  sumuran  menggunakan cork  borer sebanyak  5  lubang.  Sebanyak  15µl  ekstrak  etanol  daun  inai  dengan konstrasi 40%, 50% dan 90% diambil dan dimasukkan ke masing-masing lubang sumuran. Sampel kemudian diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  24  jam  dan  dilakukan  tiga  kali  pengulangan.  Akuades  digunakan  sebagai  kontrol  negatif  dan tetrasiklin sebagai kontrol positif. (Prayoga, 2013). Perhitungan luas zona hambat yang diamati pada media, zona hambat dapat dikategorikan sebagai berikut, untuk diameter >20 mm dikategorikan sangat kuat, 11-20 mm dikategorikan kuat, 6-10 mm dikategorikan sedang dan <5 mm dikategorikan lemah (Susanto et al ., 2012).

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Hasil
Hasill  pengujian  daya  hambat  ekstrak  etanol  daun  inai  ( Lowsonia  inermis L.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  metode  sumuran  dan  menggunakan  konsentrasi  ekstrak  40%,  50%  dan  90%  dengan kontrol  positif  antibiotik  tetrasiklin  dan  kontrol  negatif  akuades  menunjukkan  bahwa  semua  konsentrasi  dapat menghambat pertumbuhan S. aureus . Diameter zona hambat yang terbentuk dapat dilihat pada tabel di bawah ini.
Tabel 1. Diameter Zona Hambat (Mm) Pada Media Pertumbuhan Bakteri S. Aureus.
No.
Zat Uji Diameter Zona Hambat Diameter Rata-rata  Katagori Daya Hambat P1 P2 P3 1 Konsentrasi 40% 21.33 21.09 21.45 21.29 Kuat 2 Konsentrasi 50% 22.49 23.08 23.73 23.1 Kuat 3 Konsentrasi 90% 24.29 24.72 24.19 24.4 Kuat 4 Tetrasiklin (kontrol positif) 27.04 26.88 29.87 27.93 Kuat
Vol 2, No 3, Oktober 2021, pp. 67-69 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i3.982
5 Akuades (kontrol negatif) - - - - Tidak ada

## 3.2 Pembahasan
Proses  ekstraksi  daun  inai  dilakukan  secara  maserasi.  Maserasi  adalah  cara  penarikan  simplisia  dengan  merendam simplisia  tersebut  dalam  cairan  penyari  pada  suhu  biasa  ataupun  memakai  pemanasan.  Berat  daun  inai  sebelum dikeringkan adalah 241 gr, sedangkan berat serbuk simplisia setelah dikeringkan dan haluskan adalah 184 gr.
Penelitian  uji  daya  hambat  ekstrak  etanol  daun  inai  ( Lawsonia  inermis L.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dilakukan  dengan  berbagai  konsentrasi  yaitu  40,  50%  dan  90%  serta  menggunakan  tetrasiklin sebagai  kontrol  positif  dan  akudes  sebagai  kontrol  negatif.  Pengukuran  zona  hambat  dilakukan  dengan  melihat  zona hambat disekitar sumur dan diukur menggunakan mistar dalam satuan mm pada permukaan bagian bawah petridisk. Hasil pengamatan  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  40%  pengulangan  pertama  didapatkan  zona  hambat  sebesar  21,33 mm, pengulangan kedua sebesar 21,09 mm dan pengulangan ketiga sebesar 21,45 mm sehingga diperoleh diameter rata- rata  sebesar  21,29  mm.  Pada  konsentrasi  50%  pengulangan  pertama  didapatkan  zona  hambat  sebesar  22,49  mm, pengulangan  kedua  sebesar  23,08  mm  dan  pengulangan  ketiga  23,73  mm  sehingga  diperoleh  hasil  diameter  rata-rata sebesar    23,1  mm.  Pada  konsentrasi  90%  pengulangan  pertama  didapatkan  zona  hambat  sebesar  24,29  mm,  pada pengulangan kedua didapatkan zona hambat sebesar 24,72 mm dan pengulangan ketiga 24,19 mm sehingga diperoleh hasil diameter rata-rata sebesar 24,4 mm. Hasil pengamatan pada kontrol positif (tetrasiklin) pada pengulangan pertama didapatkan 27,04 mm, pengulangan kedua sebesar 26,88 mm, pengulangan ketiga sebesar 29.87 mm sehingga diperoleh hasil  rata-rata  27.93  mm.  Hasil  pengamatan  kontrol  negatif  (akuades)  pada  pengulangan  pertama  sampai  ketiga  tidak menunjukkan adanya zona hambat yang terbentuk.
Ketiga konsentrasi yang diuji menunjukkan bahwa ketiga konsentrasi memiliki kategori daya hambat yang kuat. Konsentrasi ekstrak etanol daun inai yang menunjukkan hasil zona hambat dari yang paling tinggi hingga yang paling rendah yaitu konsentrasi 90%, 50% dan 40%. Kemampuan ekstrak daun inai yang dapat menghambat pertumbuhan S. aureus ini mungkin disebabkan oleh kandungan senyawa fitokimia yang aktif, seperti alkaloid, glikosida, flavonoid, fenol, dan saponin. Fenol dan flavonoid merupakan senyawa aktif yang paling banyak ditemukan (Hairunnisa, 2015). flavonoid bekerja dengan cara menghambat sintesis asam nukleat, mengahambat fungsi membran sel dan menghambat metabolisme energi pada bakteri. (Umarudin et al ., 2018).
Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Hairunnisa (2015) melakukan penelitian dengan metode difusi cakram dengan  menggunakan  ekstrak  etanol  daun  inai  dengan  konsentrasi  60%,  70%,  80%  dan  90%.    Pada  konsentrasi  60% didapatkan zona hambat sebesar 18.7, pada konsentrasi 70% didapatkan zona hambat sebesar 19.57 mm, pada konsentrasi 80% didapatkan hasil 22.26 dan konsentrasi 90% didapat sebesar 15.26 mm. Berdasarkan hasil penelitian tersebut, dapat dilihat bahwa penggunaan metode difusi agar sumur menghasilkan aktifitas penghambatan yang lebih besar dibandingkan dengan metode difusi cakram.

## 4. KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  inai  ( Lawsonia  inermis L.)  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcis aureus dengan menggunakan metode difusi agar sumur. Semua konsentrasi yang diuji membentuk zona hambat yang termasuk dalam  kategori daya hambat yang kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Hairunnisa. (2015). Uji Daya Hambat Ekstrak Daun Inai ( Lawsonia inermis L.) terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus . Tesis. Palangkaraya: IAIN Palangka Raya.
Pratiwi,  Novia,  D.  A.,  Yuliani,  R.    (2014).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Pacar  Kuku  ( Lawsonia  Inermis L.)  dan Bioautografi terhadap Bacillus Subtilis dan Shigella Sonnei . Tesis. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta. Prayoga, E. (2013). Perbandingan Efek Ekstrak Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.) Dengan Metode Difusi Disk dan Sumuran terhadap Bakteri Staphylococcus aureus . Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Negri Syarif Hidayatullah.
Razak, A., Djamal, A., Revilla G. 2013. Uji Daya Hambat Air Perasan Buah Jeruk Nipis ( Citrus aurantifolia s.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus secara In Vitro. Jurnal Kesehatan Andalas . 2(1): 5-8.
Susanto  D.,  Sudrajat  dan  Ruga, R.  2012.  Studi  Kandungan  Bahan  Aktif tumbuhan  Meranti Merah  ( Shorea  leprosula Miq)  sebagai Sumber Senyawa Antibakteri. Mulawarmnan Scientifie . 11(2):181-190.
Tuntun,  M.  (2016).  Uji  Efektivitas  Ekstrak  Daun  Pepaya  (Carica  papaya  L.)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . Jurnal Kesehatan . 7(3): 497-502.
Umarudin,  Rinda  Y,  S,  Ballighul  Fal,  Syukrianto.  (2018).  Efektivitas  Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  96%  Bonggol  Nanas  ( Ananas comosus L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus . Jurnal of Pharmacy and Science. 3(2): 32-36.
Zubardiah, L., Dewi, N. M., & Auerkari, E. I. (2008). Khasiat Daun Lowsonia inermis L. Sebagai Obat Tradisional Antibakteri. Jurnal Kesehatan . 19-22