## DIAGNOSIS KEBUNTINGAN KUDA MENGGUNAKAN KIT MARE TEST PACK
Pregnancy Diagnosis on Mares Using Mare Test Pack Kit
Ali Saifudin 1 , Siti Aslimah 1 , Lia Nur Aini 1 , dan Theo Mahiseta Syahniar 2 1 Program Studi Produksi Ternak, Politeknik Pertanian dan Peternakan Mapena
2 Jurusan Peternakan, Politeknik Negeri Jember Email : ali.saifudin@gmail.com

## INTISARI
Penelitian ini bertujuan untuk mendiagnosis kebuntingan pada kuda menggunakan kit mare test pack (MTP). Penelitian ini menggunakan 10 kuda yang telah dipastikan status kebuntingannya dengan teknik eksplorasi rektal ( gold standard ) yang terdiri dari tujuh kuda bunting (K1) dan tiga  kuda  tidak  bunting  (K2).  Serum  dari  kedua  kelompok  kemudian  diuji  menggunakan  kit MTP.  Data  hasil  penelitian  diuji  secara  deskriptif.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  tujuh kuda yang positif bunting setelah diuji dengan menggunakan kit MTP menunjukkan bunting dan tiga kuda yang negatif menunjukkan tidak bunting dengan eksplorasi rektal. Hasil penelitian ini dapat  disimpulkan  bahwa  kit  MTP  dapat  digunakan  untuk  mendiagnosis  kebuntingan  pada kuda umur 60 sampai 100 hari kebuntingan dengan sensitivitas dan spesifisitas dengan akurasi 100%.
Kata kunci: Diagnosis Kebuntingan, Kuda, Kit MTP, eCG, Metode HI

## ABSTRACT
This  research  aimed  to  diagnosed  pregnancy  on  mares  using  a  test  mare  (MTP)  kit.  This  study using 10 mares were used to confirm their pregnancy status using a rectal exploration technique (gold  standard)  using  seven  pregnant  mares  (K1)  and  three  non-pregnant  mares  (K2).  Serums from  both  groups  were  tested  using  a  MTP  kit.  The  research  data  were  tested  descriptive.  The results  showed  that  seven  mares  that  were  positively  pregnant  and  three  negative  mares unpregnant after being tested using the MTP kit  and rectal exploration.  The conclusion that the MTP kit can be used to diagnose pregnancy in mares of 60 to 100 pregnancy days which is 100% accuracy sensitivity and specificity .
Keywords : Pregnancy Diagnosis, Mare, MTP Kit, eCG, HI Method

## PENDAHULUAN
Perkembangan populasi kuda di Indonesia  belum  mencapai  keadaan  yang menggembirakan  bahkan  secara  nasional pada  tahun  2017  terjadi  penurunan  populasi ternak kuda sebesar 400 ribu ekor atau 1,43% (Ditjen  PKH,  2017).  Beberapa  kendala  yang menghambat  perkembangan  populasi  kuda adalah waktu birahi yang panjang, keguguran, dan  diagnosis  kebuntingan  dini.  Hal  ini ditunjukkan dengan adanya gejala birahi yang sulit  dilakukan  karena  15%  kuda  bunting masih menunjukkan gejala birahi (Mahaputra, 1994;  McKinnon, et  al .,  2011).  Kendala  lain
yang  sering  dihadapi  peternak  kuda  adalah panjangnya calving  interval dan  rendahnya tingkat  kebuntingan  sehingga  upaya  untuk mencapai  tingkat  reproduktivitas  yang  tinggi sulit  dicapai.  Target  reproduktivitas  yang tinggi  dapat  dicapai  dengan  melakukan perbaikan  pengelolaan  reproduksi  yang meliputi  deteksi  birahi,  perkawinan,  dan diagnosis kebuntingan yang tepat.
Diagnosis  kebuntingan  dini  diperlukan setelah  terjadinya  perkawinan,  yaitu  dengan identifikasi  lebih  awal  pengukuran  tingkat reproduktivitas  kuda  sehingga  kehilangan waktu  produksi  sebagai  akibat  infertilitas dapat  dikurangi  (Hafez  dan  Hafez,  2008).
Diagnosis  kebuntingan  yang  akurat  adalah kunci utama untuk penanganan kuda bunting muda.  Ketika  kebuntingan  dapat  dipastikan, penanganan  manajemen  kuda  bunting  akan lebih optimal (Morel, 2003).
Diagnosis  kebuntingan  dini  pada  kuda secara  imunologis  dapat  dilakukan  dengan dua  cara,  yaitu  dengan  mendeteksi  substansi spesifik  yang  terdapat  di  dalam  darah  induk seperti equine  chorionic  gonadotropin (eCG), early  pregnancy  factor (EPF),  dan  dengan mendeteksi substansi non spesifik yang ada di dalam  darah,  urine  atau  air  susu  selama kebuntingan  seperti  progesterone  dan estrogen (Hafez dan Hafez, 2008).
Hormon  gonadotropin  yang  hanya dimiliki  oleh  kuda  umur  kebuntingan  40 sampai  150  hari  adalah  eCG.  Kit diagnostic dikembangkan untuk dapat  melihat substansi spesifik  eCG  yang  dalam  penelitian  ini menggunakan  metode haemagglutination inhibition (HI)  yang  dapat  dilakukan  secara cepat dan mudah (Hunter, 1994; Samper et al ., 2007).  Diagnosis  kebuntingan  dengan  eCG metode  HI  adalah  suatu  pengembangan metode  yang didasarkan  pada reaksi antigen, antibody,  dan  eritrosit  domba  yang  telah disensitifkan  dengan  eCG  (Wide  dan  Wide, 1963).  Kit  eCG  metode  HI  komersil  belum banyak  digunakan  di  Indonesia.  Kit  ini digunakan  dengan  nama mare  immunological pregnancy  test (MIP Test )  (Hafez  dan  Hafez, 2008).  Kit  ini  biasa  digunakan  oleh breeder yang  tidak  mempunyai  akses  teknologi  atau ahli  pada ultrasound dan  teknik  palpasi. Penelitian  ini  bertujuan untuk  mendiagnosis kebuntingan  pada  kuda  menggunakan  kit mare  test  pack (MTP)  dengan  hormon  yang spesifik  pada  kuda  bunting  (eCG). Kit  ini diharapkan  menjadi  salah  satu  alternatif  tes kebuntingan pada kuda.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  terdiri  dari  tiga  tahap. Pertama,  pengambilan  dan  persiapan  sampel serum darah kuda. Kedua, pembuatan kit MTP dan  ketiga  pengujian  MTP . Kuda  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  kuda Thoroughbred sebanyak  10  ekor  yang  telah dipastikan  status  kebuntingannya  dengan teknik eksplorasi rektal ( gold standard ). Kuda terbagi  menjadi  dua  kelompok.  Kelompok pertama  (K1)  terdiri  dari  tujuh  ekor  kuda
bunting  (umur  kebuntingan  2  sampai  3 bulan). Kelompok kedua (K2) terdiri dari tiga ekor kuda tidak bunting.

## Pengambilan dan Persiapan Sampel Serum Darah Kuda
Darah  kuda  diambil  dari  vena  jugularis dengan  menggunakan disposable  syringe 50 ml, kemudian ditampung dalam tabung reaksi dan ditutup. Tabung tersebut dimiringkan 45° dan  didiamkan  selama  24  jam  pada  suhu kamar, kemudian disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. Serum yang didapat disaring menggunakan miliphore 0,22  μm.  Serum  ditampung  pada  vial  dan disimpan  dalam freezer dengan  suhu  –20°C atau  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  metanol  dengan  perbandingan 1:5  lalu  dikocok  selama  3  menit  kemudian didiamkan  15  sampai  20  menit  sampai terdapat 2 lapisan cairan. Supernatan diambil dengan disposable  syringe sebanyak  5  ml dan dimasukkan  dalam  vial  10  ml  untuk  dibuat sediaan  kering  beku.  Serum  yang  didapat perlu  ditambahkan  PBS  sebanyak  5  ml sebelum digunakan untuk uji selanjutnya.
Pembuatan Kit Mare Test Pack (MTP) Kit terdiri atas 2 bahan yaitu eritrosit domba  yang  telah  disensitifkan  dengan  eCG dan  antibodi  poliklonal  anti  eCG.  Antibodi poliklonal  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  diperoleh  dari  penelitian  sebelumnya, yaitu  titer  antibodi  dengan  pengenceran tertinggi  yang  masih  dapat  menyebabkan terjadinya  komplit  aglutinasi  dari  sel  dengan titer  1:200.  Eritrosit  domba  yang  telah disensitifkan dengan eCG dalam penelitian ini mengacu  pada  Wide  (1962)  yang  terdiri  dari beberapa tahap.
Pemberian antikoagulan terhadap sediaan eritrosit Eritrosit yang digunakan adalah eritrosit  domba.  Sediaan  eritrosit  domba sebanyak  100  ml  dimasukkan  ke  dalam tabung  yang  sudah  berisi  larutan alsever 110 ml, disentrifus 600 sampai 1.000 G kemudian dicuci  3  sampai  4  kali  dalam  8  sampai  10 volume salin.
Perlakuan dengan stabilizing reagents Stabilizing  reagents dibuat  dengan  cara menambahkan  0,1  N  NaOH  ke  dalam  larutan
formalin  37%  (agar  pHnya  menjadi  7  sampai 7,5), kemudian diencerkan sampai 3% dengan salin.  Satu  volume stabilizing  reagents dicampur dengan satu volume dari 8% larutan eritrosit  domba  yang  telah  diberikan antikoagulan, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C  selama  18  sampai  24  jam.  Setelah diinkubasi  eritrosit  dicuci  4  kali  dengan  8 sampai  10  volume  air  destilasi,  kemudian disimpan  pada  suhu  4°C  di  larutan  10%  air destilasi.
Penyamakan eritrosit dengan tannic acid Satu  volume  dari  eritrosit  yang  telah diformalin  dicuci  3  kali  pada  50  volume larutan phosphate  buffered  saline (PBS). Suspensi  pada  larutan tannic  acid diinkubasi pada water  bath dengan  konsentrasi tannic acid 1/40.000  (pada  pH  6,4  dalam  PBS,  suhu 56°C,  konsentrasi  eritrosit  2%,  dan  waktu  30 menit).
Pengadsorbsian eCG pada eritrosit Setelah  eritrosit  disamak,  dicuci  2  kali dengan  larutan  PBS  50  volume,  kemudian ditambahkan  eCG  100  IU/ml  (pada  pH  6,4 dalam  PBS,  suhu  56°C,  konsentrasi  eritrosit 4%,  dan  waktu  120  menit).  Setelah  terserap, dicuci  3  kali  dengan  50  volume  larutan  PBS pH 6,4 dan disimpan dalam 2,5% larutan yang berisi 0,2% serum darah kelinci normal.

## Pengujian Kit MTP
Serum  kuda  yang  telah  diekstraksi dengan  metanol,  diambil  sebanyak  0,25  ml larutan  supernatan,  dimasukkan  ke  dalam microtube ,  kemudian  ditambahkan  antibodi poliklonal  anti  eCG  sebanyak  0,25  ml  dan ditambahkan  lagi  0,25  ml  eritrosit  domba yang  tersensitisasi  ke  dalam microtube tersebut.  Campuran  tersebut  diinkubasi  pada suhu  37°C  selama  120  menit.  Hasil  reaksi positif bunting jika ada eCG dalam serum kuda yang  ditandai  dengan  terjadi  hambatan aglutinasi  eritrosit  (adanya  endapan  pada dasar microtube ).  Hasil  negatif  atau  tidak bunting  bila  tidak  ada  eCG  yang  ditandai dengan  terjadi  aglutinasi  (adanya  gumpalan berbentuk titik butiran pasir).
Analisa Diagnosability Kit MTP Hasil  dari  diagnosis  kebuntingan menggunakan  kit  MTP  dibandingkan  dengan metode  diagnosis  eksplorasi  rektal  sebagai
gold  standard . Diagnosability yang  diamati adalah sensitivitas dan spesifisitas . Sensitivitas ( true positive ) adalah probabilitas dimana  kit  MTP  menunjukkan  hasil  yang positif bunting dan kuda benar-benar bunting setelah  diujikan  dengan gold  standard , kebalikannya  adalah false  negative yaitu  kit menunjukkan  hasil  tidak  bunting  padahal kuda  bunting.  Spesifisitas  ( true  negative ) adalah  probabilitas  dimana  kit  MTP menunjukkan  hasil yang positif  tidak  bunting dan  kuda  benar-benar  tidak  bunting  setelah diujikan dengan gold standard dan kebalikannya  adalah false  positive yaitu  kit menunjukkan  hasil  bunting  padahal  kuda tidak  bunting  (Diane,  1995).  Rumus sensitivitas  dan  spesifisitas  dijelaskan  dalam persamaan menurut Akobeng (2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  kit  MTP  pada  serum  darah kuda dapat dilihat pada Gambar 1 dan Gambar 2 serta pada Tabel 1 berikut.
Gambar 1. Kelompok 1 (K1)
Gambar 2. Kelompok 2 (K2)
Gambar  1  dan  Gambar  2  serta  Tabel  1 menunjukkan  hasil  bahwa  pada  serum  kuda K1  terjadi  hambatan  aglutinasi.  Hal  tersebut ditandai atau terlihat dengan adanya endapan pada dasar microtube yang menandakan kuda bunting  dan  apabila  digoyangkan  ke  bawah
seperti tetesan air mata. Pada dasar microtube K2  terjadi  aglutinasi  yang  ditandai  dengan adanya  gumpalan  berbentuk  titik  butiran pasir  yang  menunjukkan  bahwa  kuda  tidak
bunting.  Hasil  uji  menggunakan  kit  MTP tersebut  kemudian  dibandingkan  dengan  uji ekslporasi  rektal  untuk  mengetahui  tingkat kesesuaiannya (Tabel 2).
Tabel 1. Hasil Uji Kebuntingan Menggunakan Kit MTP Kelompok Kuda Recording Tube Uji MTP Keterangan K1 +1 Hambatan aglutinasi Bunting +2 Hambatan aglutinasi Bunting +3 Hambatan aglutinasi Bunting +4 Hambatan aglutinasi Bunting +5 Hambatan aglutinasi Bunting +6 Hambatan aglutinasi Bunting +7 Hambatan aglutinasi Bunting K2 -1 Aglutinasi Tidak bunting -2 Aglutinasi Tidak bunting -3 Aglutinasi Tidak bunting K1 : Kelompok kuda bunting, hasil eksplorasi rektal
K2 : Kelompok kuda tidak bunting, hasil eksplorasi rektal
Hasil  perbandingan  uji  kit  MTP  dengan eksplorasi  rektal  (Tabel  2)  diketahui  bahwa hasil  uji  terhadap  sampel  K1  dan  K2 menunjukkan  hasil  yang  berbeda.  Kelompok pertama setelah diuji dengan MTP menunjukkan  hasil  positif  bunting  100%. Kelompok  kedua  setelah  diuji  dengan  MTP juga  menunjukkan  hasil  tidak  bunting  100%. Hasil  yang  berbeda  ini  sesuai  dengan  Morel (2003)  yang  menyatakan  bahwa  akurasi positif  bunting  tes  adalah  60  sampai  100% dan  pemeriksaan  kejadian  tidak  bunting mempunyai akurasi 100%.
Hasil  positif  bunting  atau true  positive 100%  menunjukkan  sensitivitas kit  MTP  dan hasil  tidak  bunting atau true  negative 100% menunjukkan spesifisitas  kit  MTP.  Hasil  dari sensitivitas  dan  spesifisitas  100%  dapat dimungkinkan  terjadi  karena  jenis  bangsa kuda  yang  digunakan  dalam  uji  kebuntingan penelitian ini. Kebuntingan pada keledai (jack X  jenny)  atau  pada  bagal  (mare  X  jack) endometrial  cup- nya  kecil  dan  menghasilkan eCG  dalam  jumlah  yang  sangat  sedikit sehingga tes imunologi eCG pada kebuntingan keledai  dan  bagal  menunjukkan  level  yang sangat  rendah  (Evan,  1992).  Penelitian  ini menggunakan  kuda  jenis Thoroughbred sehingga  hasilnya  signifikan  dalam  hal  ini sensitivitas dan spesifitas 100%.
Faktor  lain  yang  menyebabkan  hasil yang berbeda pada penelitian ini adalah umur kebuntingan  kuda  yang  digunakan.  Kuda bunting  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini
berumur  60  sampai  90  hari  kebuntingan. Hal ini sesuai dengan pernyataan Hafez dan Hafez (2008)  bahwa  kit  eCG  metode  HI  tes  paling akurat  dilakukan  pada  50  sampai  100  hari kebuntingan.  Konsentrasi  eCG  berada  dalam puncaknya  pada  60  sampai  70  hari kebuntingan  dan  mulai  menurun  pada  120 hari  kebuntingan  (Morel,  2003).  Menurut Noakes et  al .  (2001)  eCG  metode  HI akurasinya 95% bila diujikan pada kuda umur 40  sampai  110  hari,  sehingga  dapat dinyatakan  pada  penelitian  ini  menggunakan umur  kebuntingan  yang  tepat  sekitar  60 sampai  90  hari,  dimana  eCG  masih  berada dalam konsentrasi maksimum.
Hormon eCG diproduksi oleh endometrial  cup .  Awal  terdeteksi  pada  38 sampai  42  hari  kebuntingan  dan  mulai meningkat  dengan  cepat  sampai  level maksimum  yaitu  50  sampai  200  IU/ml  pada 50  sampai  70  hari  kebuntingan.  Konsentrasi tersebut  menurun  hingga  menghilang  pada umur  110  sampai  140  hari  kebuntingan. Beberapa kuda memproduksi konsentrasi eCG maksimum  hanya  10  IU/ml  dan  tidak terdeteksi  lagi  setelah  80  hari  kebuntingan (Noakes, et al ., 2001). Pada kuda bunting, eCG dapat  dideteksi  dengan  metode  HI,  apabila serum  kuda  mengandung  1,6  IU/ml  eCG (Wide dan Wide,  1963),  sehingga  paling akurat  eCG  metode  HI  digunakan  pada  60 sampai  70  hari  kebuntingan  atau  selambat- lambatnya  sebelum  80  hari  kebuntingan karena konsentrasi eCG masih tinggi.
Tabel 2. Hasil Perbandingan Uji Kit MTP dengan Eksplorasi Rektal Uji Hasil Uji Kelompok Kuda K1 K2 Kit MTP Hambatan aglutinasi (bunting) 7 ekor - Aglutinasi (tidak bunting) - 3 ekor Eksplorasi Rektal Bunting 7 ekor - Tidak bunting - 3 ekor Kelompok  pertama,  setelah  dilakukan uji  kebuntingan  dengan  MTP,  hasil  positif bunting  ditunjukkan  dengan  hambatan aglutinasi,  yaitu  antibodi  anti  eCG  tidak berikatan  dengan  indikator  dalam  hal  ini eritrosit  domba  yang  telah  disensitifkan dengan  eCG  melainkan  berikatan  dengan antigen  yaitu  serum  kuda  yang  mengandung eCG.  Serum  darah  pada  kuda  bunting mengandung  eCG.  eCG  merupakan  substansi spesifik  yang  hanya  dimiliki  oleh  kuda bunting.  eCG  terdeteksi  dalam  serum  kuda bunting  melalui  uji  metode  HI  yang  ditandai dengan  terjadinya  hambatan  aglutinasi.  Kuda dapat  dipastikan  kebuntingannya  apabila terjadi  hambatan  aglutinasi  yang  berarti terdapat  eCG  dalam  serum  kuda  .  Kelompok kedua,  setelah  dilakukan  uji  kebuntingan dengan MTP, hasilnya menunjukkan terjadinya  aglutinasi,  yaitu  antibodi  anti  eCG berikatan  dengan  indikator  berupa  eritrosit domba  yang  telah  disensitifkan  dengan  eCG. Pada  kuda  tidak  bunting,  serumnya  tidak terdapat  eCG,  sehingga  terjadi  aglutinasi,  dan kuda  dapat  dipastikan  tidak  bunting  (Wide dan Wide, 1963; Hafez dan Hafez, 2008). Metode HI yang digunakan termasuk uji pengikatan sekunder yaitu uji yang mengukur akibat  pembentukan  imunokomplek in  vitro , dalam  hal  ini  khususnya  aglutinasi  pasif. Aglutinasi  pasif  adalah  salah  satu  cara  yang dilakukan dengan pengikatan kimiawi antigen terlarut  dengan  partikel  lembam  seperti eritrosit, bakteri atau latex , sehingga antibodi khusus akan menyebabkan partikel yang telah disensitisasi  ini  beraglutinasi.  Eritrosit merupakan  partikel  terbaik  diantara  partikel lainnya  untuk  tujuan  ini.  Uji  yang menggunakan eritrosit terlapis dinamakan uji hemaglutinasi  pasif.  Pada  penelitian  ini menggunakan  eritrosit  domba  yang  telah disensitisasi dengan eCG.
Kit  penelitian  ini  memiliki  banyak keunggulan  apabila  dibandingkan  dengan diagnosis  kebuntingan  lain  pada  kuda,
misalnya eksplorasi rektal (Hunter, 1995). Kit penelitian  ini  tidak  memerlukan  keahlian khusus  untuk  melakukannya,  sesuai  yang dikatakan  Mahaputra  (2002)  bahwa  syarat diagnosis  kebuntingan  salah  satunya  adalah dapat  dilakukan  oleh  siapa  saja  atau  dalam istilah  Morel  (2003)  disebut uncomplicated . Kit  penelitian  ini  biasanya  digunakan  oleh breeder yang  tidak  mempunyai  akses teknologi  atau  ahli  pada ultrasound dan eksplorasi  rektal.  Penggunaan  kit  penelitian ini  tidak  tergantung  dari  jumlah  kuda  yang akan  diujikan,  artinya  jumlah  kuda  yang digunakan  sedikit  atau  banyak  tetap  efisien untuk  dilakukan.  Kit  penelitian  ini  relatif singkat  untuk  dilakukan,  yaitu  reaksi  akan terbaca  setelah  1,5  sampai  2  jam  (Wide  dan Wide, 1963).
Parameter yang diamati pada penelitian ini adalah sensitivitas dan spesifisitas kit MTP. Sensitivitas dan spesifisitas pada MTP sebagai kit  dalam  penelitian  ini  didapatkan  melalui perbandingan  dengan  eksplorasi  rektal sebagai gold  standard . Gold  standard yang digunakan  sesuai  pendapat  Diane  (1995) yaitu  tes  yang  sederhana  dan  relatif  tidak mahal.
Sensitivitas  pada  kit  MTP  hasilnya 100%  dan  tergolong  sensitivitas  tinggi.  Tes yang  mempunyai  sensitivitas  tinggi  berguna untuk screening kebuntingan  kuda  (Diane, 1995).  Kegunaan  kit  MTP  adalah  untuk memastikan kebuntingan, sehingga kuda yang telah dipastikan bunting untuk perawatan dan manajemen  selanjutnya  dapat  dilakukan sedini mungkin, sehingga kekhawatiran untuk terjadinya  abortus  dapat  dihindari  dan  untuk kuda yang tidak bunting maka prosedur untuk mengawinkannya  kembali  atau  mengevaluasi mengapa  tidak  terjadi  kebuntingan  dapat dilakukan  (Diane,  1995;  Hafez  dan Hafez, 2008). Tes yang mempunyai sensitivitas tinggi sedikit  terjadi false  negative .  Ketika  hasil  tes menyatakan kuda tidak bunting maka praktisi dapat  memastikan  kuda  memang  tidak
bunting,  sehingga  tes  yang  mempunyai sensitivitas  yang  tinggi  sangat  membantu ketika  hasilnya  negatif  atau  tidak  bunting (Diane,  1995).  Sesuai  dengan  pernyataan Morel  (2003)  bahwa  pemeriksaan  kejadian tidak bunting akurasinya 100%.
Spesifisitas  kit  MTP  juga  100%  dan tergolong  spesifisitas  tinggi.  Tes  yang mempunyai spesifisitas yang tinggi hasil false positive kecil.  Konsekuensinya  tes  yang spesifik  sangat  membantu  ketika  hasilnya positif  atau  bunting  (Diane,  1995).  Indonesia yang  merupakan  negara  berkembang,  di samping  kehandalan  dan  kepraktisan  dari suatu  tes,  biaya  pemeriksaan  merupakan faktor  yang  perlu  diperhitungkan  dalam pemilihan  tes.  Suatu  uji  laboratoris  yang sangat  handal  tetapi  tidak  praktis  dan membutuhkan biaya pemeriksaan yang mahal hanya  mempunyai  arti  akademis  dan  hanya dapat digunakan untuk penelitian tetapi tidak dapat  digunakan  untuk  keperluan  pelayanan di  lapangan  (Handojo,  1996).  Kit  MTP  ini diharapkan  menjadi  salah  satu  alternatif bahan  diagnosis  untuk  tes  kebuntingan  pada kuda  yang  relatif  murah  dan  mudah digunakan.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa tujuh  kuda  yang  positif  bunting  setelah  diuji dengan  menggunakan  kit  MTP  menunjukkan bunting  dan  tiga  kuda  yang  negatif menunjukkan tidak bunting dengan eksplorasi rektal.  Hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  kit  MTP  dapat  digunakan  untuk mendiagnosis  kebuntingan  pada  kuda  umur 60  sampai  100  hari  kebuntingan  dengan sensitivitas  dan  spesifisitas  dengan  akurasi 100%.

## DAFTAR PUSTAKA
Akobeng, A.K. 2006. Understanding diagnostic test  1:  sensitivity,  specificity,  and predictive  values.  Acta  Pædiatrica. 96(3):338-341.
Diane,  E.S.  1995.  Examination  and  Board Review  Medical  Biostatistics  and Epidemiology.  1 st ed.  Appleton  and Lange. Connecticut. Ditjen  P.K.H.  2017.  Statistik  Peternakan  dan Kesehatan  Hewan.  Direktorat  Jenderal
Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan. Kementerian Pertanian. Jakarta.
Hafez, E.S.E. and B. Hafez. 2008. Reproduction in  Farm  Animals.  7 th ed.  Blackwell. Philadelphia.
Handojo,  I.  1996.  Diktat  Kuliah  untuk  PPDS  I PK  Imunoasai  I-IV.  Lab.  Patologi  Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Surabaya. Hunter,  R.P.F.  1995.  Fisiologi  dan  Teknologi Reproduksi  Hewan  Betina  Domestik. Penerbit ITB. Bandung.
Mahaputra,  L.  2002.  Teknik  Diagnosis Reproduksi.  Edisi  I  Cetakan  Ke-3.
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Surabaya. Mahaputra,  L.  1994.  Ilmu  Kebidanan Veteriner. Edisi Lima. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Surabaya. McKinnon,  A.O.,  Squires,  E.L.,  Vaala,  W.E.  and D.D. Varner. 2011. Equine Reproduction.
2 nd ed. Wiley-Blackwell. West Sussex. Morel,  D.M.C.G.  2003.  Equine  Reproductive Physiology, Breeding and Stud Management.  2 nd ed.  CABI  Publishing. London. Noakes,  D.E.,  T.J.  Parkinson,  and  G.C.W.
England.  2001.  Arthur’s  Veterinary Reproduction  and  Obstetrics.  8 th ed.
Saunders, Philadelphia.
Samper,  J.C.,  Pycock,  J.F.  and  A.O.  McKinnon. 2007.  Current  Therapy  in  Equine Reproduction. Saunders. Missouri. Wide, L. 1962. An immunologic method for the assay of human chorionic gonadotrophin.  Acta  Endocrinologica. 41(Suppl. 70):20-27. Wide,  M.  and  L.  Wide.  1963.  Diagnosis  of pregnancy in mares by an immunological  method.  Nature.  198: 1017-1018.