## UJI FITOKIMIA DAN ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL
PROPOLIS LEBAH KELULUT ( Tetragonula iridipennis ) DARI

## SAMARINDA KALIMANTAN TIMUR
Submitted : 21 November 2019 Edited : 15 Juni 2020
Accepted : 25 Juni 2020
Binti Khairunnisa 1 , Enih Rosamah 1 ,  Harlinda Kuspradini 1 , Irawan Wijaya Kusuma 1 , Sukemi 3 , Nataniel Tandirogang 2, 4 , Enos Tangke Arung 1,2*
1 Laboratorium Kimia Hasil Hutan dan Energi Terbarukan, Fakultas Kehutanan Universitas Mulawarman,
2 Pusat Unggulan Ipteks Perguruan Tinggi Obat dan Kosmetik dari Hutan Tropika Lembab dan Lingkungannya
3 Laboratorium Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Mulawarman
4 Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman *Koresponding : tangkearung@yahoo.com

## ABSTRACT
The study aims to identify the secondary metabolite compounds contained in the ethanol extract  Propolis  Tetragonula  Iridipennis  and  determine  the  antioxidant  activity.  Propolis  is extracted from the beehive of Kelulut (Tetragonula Iridipennis) with a method of maceration of ethanol  96%  produce  a  yield  of  66.73%.  Propolis  extract  contains  alkaloid  compounds, flavonoids,  triterpenoids,  tannins  and  carbohydrates.  Propolis  extract  tested  its  antioxidant activity using the DPPH method (1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) with a wavelength of 514 nm. Results showed a percentage of propolis extract free radicals 59% in concentrations of 100 ppm with IC50 33.74 ppm so that propolis extract is potentially as an antioxidant.
Keywords : antioxidants, DPPH, Propolis Extract (EEP), Tetragonula Iridipennis

## PENDAHULUAN
Menurut Permenhut No: P.35/Menhut-II/2007  Pasal  1  (3)  Hasil Hutan  Bukan  Kayu  merupakan  hasil  hutan hayati  baik  nabati  maupun  hewani  beserta produk  turunan  dan  budidaya  kecuali  kayu yang  berasal  dari  hutan (1) .  Banyak  sekali produk  hasil  hutan  bukan  kayu  yang  dapat dimanfaatkan karena memiliki nilai ekonomi yang  tinggi.  Salah  satu  produk  hasil  hutan bukan  kayu  yang  sudah  lama  diketahui manfaatnya adalah produk lebah.
Lebah  kelulut  merupakan  jenis  lebah tidak bersengat ( stingless bee ) yang
merupakan  lebah  penghasil  madu.  Lebah kelulut  tidak  hanya  bermanfaat  pada madunya,  tetapi  juga  pada  sarangnya  yang dapat dimanfaatkan sebagai sumber propolis dan  menjadikannya  suatu  produk  terobosan yang  berguna  dan  disukai  di  kalangan masyarakat (2) .
Propolis merupakan resin yang
bercampur  dengan  air  liur  lebah.  Propolis merupakan  produk  dari  sarang  lebah  yang sudah  sejak  lama  digunakan  sebagai antiseptik  dan  obat  luka.  Hasil  penelitian modern  menunjukkan bahwa propolis dapat berfungsi sebagai anti inflamasi,
pengobatan    serangan  jantung,  diabetes,
kanker, antifungi, antibakteri, dan antioksidan (3) . Propolis
menunjukkan antioksidan  paling  kuat  dari  semua  produk lebah  termasuk  lebah  madu, royal  jelly dan bee  pollen .  Aktivitas  antioksidan  propolis berasal  dari  zat  polifenolnya (4) .  Penggunaan propolis dengan  kapasitas  antioksidan untuk pencegahan dan pengobatan penyakit terkait dengan  peningkatan  stres  oksidatif  seperti kanker, penuaan dan penyakit kardiovaskular (4) . Kalimantan Timur khususnya kelurahan Tanah Merah, Kecamatan
Samarinda  Utara  merupakan  salah  satu daerah  yang  membudidayakan  beberapa jenis  lebah  kelulut  dan  sangat  potensial dengan  wilayah  vegetasi  hutan  yang  masih terjaga  kelestarian  dan  fungsinya  serta
potensi
berbagai macam tanaman perkebunan. Lokasi ini sangat cocok sebagai habitat lebah kelulut dalam mencari makan.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat yang Digunakan
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah
propolis Tetragonula iridipennis asal Samarinda  Kalimantan  Timur,  etanol  96%,
NaOH  1%,  HCl  1%,  Pb  1%,  Dragendorff, Molish,  CH 3 COOH,  H 2 SO 4 ,  Vitamin  C ( Ascorbic  acid ),  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl ),  aseton,  DMSO  ( dimethyl sulfoxide ) dan Kloroform.
Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain: spatula,  cawan  petri,  aluminium  foil,  kertas saring,  corong, gelas beaker, shaker , rotary
vacuum evaporator , oven, dan spectrophotometer . Ekstraksi Propolis Tetragonula iridipennis (5) Propolis  terlebih  dahulu  dipisahkan
dengan  bee  polen  dan  kantung  madunya.
Kemudian propolis dipecahkan dan dipotong-potong menjadi bagian-bagian
kecil. Sebanyak 30 gram propolis
Tetragonula  iridipennis dimaserasi  dengan 350  ml  etanol  96%  dalam  gelas  beaker. Kemudian  dikocok  diatas shaker selama  24 jam  selama  2  hari.  Setelah  itu  disaring, filtratnya diambil kemudian residu direndam kembali  dengan  100  ml  etanol  96%.
Kegiatan berulang sampai propolis terekstrak  seluruhnya  yaitu  filtrat  yang dihasilkan berwarna jernih. Seluruh filtrat yang terkumpul kemudian dipekatkan dengan rotary vacuum evaporator pada  suhu    40 o C,  hingga diperoleh  ekstrak  kental  propolis.  Ekstrak kental  propolis  yang  diperoleh  kemudian ditimbang untuk mendapatkan nilai
rendemennya. Analisis Fitokimia Ekstrak Propolis Tetragonula iridipennis (6)

## Alkaloid
Sejumlah 5 ml ekstrak ditambahkan 2 ml  HCl  pekat  kemudian  dimasukkan  1  ml larutan  dragendorff.  Adanya  perubahan warna  larutan  menjadi  jingga  atau  merah menandakan  bahwa  ekstrak  mengandung alkaloid.

## Flavonoid
Sejumlah  1  ml  ekstrak  diberikan beberapa  tetes  NaOH  1%.  Adanya  warna kuning yang terang pada larutan ekstrak dan berubah  menjadi  tidak  berwarna  setelah penambahan  HCl  1%  menandakan  adanya flavonoid.

## Triterpenoid/Steroid
Sejumlah  1  ml  ekstrak  dicampur dengan  0,5  ml  kloroform;  lalu  1,5  ml terkonsentrasi  untuk  membentuk  lapisan ditambahkan  H 2 SO 4 pekat  pada  sisi  tabung.
Apabila  terbentuk  warna  coklat  kemerahan diantara  permukaan  maka  mengindikasikan adanya  triterpenoid  dan  jika  lapisan  atas berwarna merah dan lapisan H 2 SO 4 berwarna kuning  kehijauan maka menandakan adanya kandungan steroid.

## Tannin
Sejumlah  1  ml  larutan  ekstrak ditambahkan  beberapa  tetes  larutan  Pb  1%. Keberadaan  tanin  dinyatakan  positif  jika terbentuk endapan kuning pada tabung.

## Saponin
Sejumlah 1 ml ekstrak direbus dengan 2  ml  aquades  selama  10  menit.  Kemudian campuran  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring,  lalu  dimasukkan  2,5  ml  filtrat kedalam  tabung  erlenmeyer  dan  diencerkan hingga  10  ml  aquades  kemudian  setelah tercampur  rata  larutan  dikocok  selama  2 menit.  Jika  menghasilkan  buih  maka menandakan adanya saponin.

## Kumarin
Pengujian dilakukan dengan
memasukkan  etanol  sebanyak  1  ml  pada tabung,  kemudian  memasukkan  NaOH sebanyak  1  ml.  Larutan  ekstrak  akan berubah menjadi kuning jika positif mengandung kumarin.

## Karotenoid
Sejumlah  1  ml  larutan  ekstrak dimasukkan  1  ml  kloroform  dan  0,5  ml H 2 SO 4 pekat  pada  tabung.  Jika  positif mengandung  karotenoid  apabila  muncul warna hijau di permukaan larutan ekstrak.

## Karbohidrat
Sejumlah 1 ml ekstrak ditetesi molish, lalu dikocok dan ditambahkan 0,5 ml H 2 SO 4 pekat.  Jika  terbentuk  cincin  ungu  diantara  2 lapisan  maka  larutan  positif  mengandung karbohidrat.

## Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak
Propolis Tetragonula iridipennis
Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan  menggunakan  metode  peredaman DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ) menggunakan  UV-VIS  Spectrophotometer pada panjang gelombang 514 nm (7) .
Sebanyak  3  mg  ekstrak  dilarutkan  dalam 1000  µl  DMSO.  Kemudian  divariasikan kedalam 5 konsentrasi yaitu 6,25 ; 12,5 ; 25 ; 50  dan  100  ppm.  Larutan  DPPH  dibuat dengan  menimbang  3  mg  DPPH  dilarutkan kedalam  100  ml  etanol.  Larutan  uji disiapkan dengan memasukkan 33 µl sampel dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dengan ditambahkan  467  µl  etanol  dan  500  µl larutan  DPPH.  Selanjutnya  larutan  uji diinkubasi  selama  20  menit  dalam  ruang minim cahaya.
Larutan  uji  dibaca  absorbansinya menggunakan  alat  spectrophotometer  untuk melihat persentase peredaman DPPH. Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah vitamin  C  ( ascorbic  acid )  yang  telah diketahui sebagai antioksidan alami (8) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Ekstraksi  Propolis Tetragonula iridipennis
Propolis direndam dengan etanol 96% kemudian  filtrat  disaring  menggunakan kertas  saring  dan  dipekatkan  menggunakan vacuum  rotary  evaporator .  Selanjutnya ekstrak  dikeringkan  di  dalam  oven  hingga benar-benar  kering.  Berat  ekstrak  etanol propolis Tetragonula iridipennis 20,76 gram dengan  perolehan  rendemen  ekstrak  adalah 66,73%.
Hasil  Uji  Fitokimia  Ekstrak  Etanol Propolis Tetragonula iridipennis
Tabel 1 .  Analisis  Fitokimia  Ekstrak  Etanol Propolis Tetragonula iridipennis Senyawa Hasil Uji Alkaloid + Flavonoid + Triterpenoid + Steroid - Tannin + Saponin - Kumarin - Karotenoid - Karbohidrat +
Lebah  kelulut  mengambil  makanan sehari-hari dari sari-sari bunga, embun daun, maupun  getah  kayu  dari  tumbuhan  di sekitarnya (9) .  Selain  itu,  lebah  kelulut  juga membawa  resin  yang  digunakan  dalam membuat  sarangnya.  Setiap  bulannya  lebah kelulut  memakan  dan  membawa  resin  yang berbeda tergantung dari bunga dan tumbuhan  yang  berproduksi  di  sekitar sarang. Hasil analisis fitokimia
menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  propolis Tetragonula  iridipennis positif  mengandung senyawa  alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid, tanin  dan  karbohidrat.  Senyawa  flavonoid, dan  tanin  termasuk  kedalam  senyawa polifenol  yang  telah  diketahui  bahwa senyawa  polifenol  memiliki  sifat  sebagai pengikat  radikal  bebas,  penghambat  enzim hidrolisis dan oksidatif serta bekerja sebagai antiinflamasi (8) .
Hasil  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Propolis Tetragonula iridipennis
Gambar 1 .  Grafik  Persentase  Peredaman
DPPH  Ekstrak  Etanol  Propolis
T.iridipennis .
Dapat  dilihat  bahwa  ekstrak  etanol propolis Tetragonula  iridipennis dapat menghambat  DPPH  dengan  sangat  baik. Pada  konsentrasi  6,25  ppm  persentase peredaman  DPPH  sebesar  27,66%  ;  12,5 ppm persentase peredaman sebesar 39,26% ; 50  ppm  persentase  peredaman  54,77%  dan
pada  konsentrasi  100  ppm  persentase peredaman  sebesar  59%.  Parameter  yang digunakan  sebagai  uji  peredaman  DPPH adalah  nilai  IC 50 ( half  maximal  inhibitory concentration )  yaitu  besarnya  konsentrasi ekstrak  yang  dapat  menghambat  radikal bebas sebesar 50% (10) . Nilai  IC 50 didapatkan dari  persamaan  regresi  polinomial.  Semakin kecil  nilai  IC 50 maka  semakin  tinggi aktivitas antioksidan ekstrak terhadap DPPH (10) . Ekstrak etanol propolis
Tetragonula  iridipennis memiliki  nilai  IC 50 33,74  ppm  sehingga  termasuk  kategori antioksidan  sangat  kuat.  Kekuatan  aktivitas antioksidan digolongkan kedalam 4 kategori (11) .
Berikut  merupakan  tabel  tingkat  kekuatan aktivitas antioksidan.
Tabel 2 .  Tingkat Kekuatan Aktivitas Antioksidan Intensitas Kekuatan Nilai IC 50 Sangat Kuat < 50 ppm Kuat 50-100 ppm Sedang 100-250 ppm Lemah 250-500 ppm
Hasil  penelitian  sebelumnya,  ekstrak etanol  propolis  lebah Trigona  sp. memiliki kemampuan  meredam  radikal  bebas  DPPH dengan  sangat  baik  walau  masih  jauh dibawah Vitamin C. Penelitian ini menggunakan  kontrol  positif  antioksidan alami  yaitu  Vitamin  C  (asam  askorbat). Berdasarkan  nilai  IC 50 ,  ekstrak  propolis  ini mampu menghambat radikal bebas sebanyak 50%  jika  konsentrasi  yang  diberikan  adalah sebanyak  14,53  ppm  sehingga  diduga senyawa flavonoid dan tanin dalam propolis berperan  aktif  dalam  mengikat  radikal bebas (12) .  Penelitian  ini  memiliki  kesamaan dalam  hal  metode  yaitu  proses  ekstraksi
0.00 50.00 100.00 (% ) P e re d am an Konsentrasi Persentase Peredaman DPPH VIT C T.iridipennis
menggunakan pelarut etanol dan menggunakan metode DPPH. Penelitian  terkait  dengan  propolis
Tetragonula  iridipennis baru  dilaporkan oleh Kothai dan Jayanthi (13) dimana propolis dari Tetragonula  iridipennis ini  dilaporkan memiliki  antioksidan  dan  antimikroba. Fungsi  ini  diduga  karena  propolis  ini memiliki kandungan  senyawa flavonoid dan fenolik.

## SIMPULAN
Analisis  fitokimia  ekstrak  etanol propolis Tetragonula iridipennis mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid, triterpenoid, tanin dan karbohidrat. Ekstrak etanol propolis Tetragonula iridipennis memiliki persentase
penghambatan  radikal  bebas  59%  pada konsentrasi  100  ppm  dengan  nilai  IC 50 sebesar  33,74  ppm  sehingga  berpotensi sebagai antioksidan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  sebagian  danai  oleh
JASTIP  Net  program  (2017-2018)  dan Kemenristekdikti (No. 198/UN17.41/KL/2019)

## DAFTAR PUSTAKA
1. Permenhut  No:  P.35/Menhut-II/2007
Pasal  1  (3)  tentang  Hasil  Hutan  Bukan
Kayu.
2. Ramadhan.  2012.  Pembuatan  Permen Hard Candy Yang Mengandung Propolis  Sebagai  Permen  Kesehatan Gigi. Departemen Teknik Kimia.
Fakultas  Teknik  Universitas  Indonesia. Depok.
3. Wulandari,  Diana,  dkk.  2013.  Isolasi dan  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Etanol  Propolis Trigona  spp .  Jurusan Kimia,  FMIPA,  Universitas  Halu  Oleo, Kendari. 3 (2): 74-80.
4. Riendriasari,  S.D.  2014.  Budidaya  dan
Produk  Perlebahan Trigona  spp .  di
Lombok, Nusa Tenggara Barat. Seminar Nasional “Peranan dan
Strategi Kebijakan Pemanfaatan HHBK dalam Meningkatkan Daya Guna Kawasan Hutan” (pp. 213221). Yogyakarta:Universitas Gadjah Mada. 5. Mantienzo,  A.C,  dan  Lamorena    M. 2004. Extraction and Initial Characterization of  Propolis  from Stingless  Bees  ( Trigona  Biro  Fries ). Proceeding  ot  7 th Asian  Apicultural Association Conference and 10 th BEENET Symposium and Technofora Los Banos. Univ Philippines. 6. Senthilmurugan,  G.B.  Vasanthe,  K. Suresh. 2013. Screening and Antibacterial Activity Analysis of some Important  Medical  Plants.  International Journal  of  Innovation  and  Applied Studies. Vol.2 Num.2. 146-152. 7. Arung, E.T. 2006 . Melanin Biosynthesis  Inhibitory  Compounds from Artocarpus heterophyllus (Desertation). Kyushu University. Japan. 8. Kusuma, dkk. 2011. Biological Activity and  Phytochemical  Analysis  of  Three Indonesian Murraya  konigii,  Syzygium polyanthum, and Zingiber purpura . 9. Mujetahid, M.A. 2014. Teknik Pemanenan  Madu  Lebah  Hutan.  2014  : 4(1), 36-40. 10. Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  the Stable Free Radical Diphenyl Picrylhydrazyl  (DPPH)  for  Estimating Antioxidant Activity.  Songklankarin  J.
Sci. Thecnol,. 26(2). 211-219.
11. Suratmo.  2009.  Potensi  Ekstrak  Daun Sirih  Merah  ( Piper  crocatum )  sebagai Antioksidan. http://fisika.brawijaya.ac.id/.
12. Sativa,  Novriza.  Agustin,  Rini.  2018. Analisis  Uji  Kadar  Senyawa  dan  Uji
Antioksidan  Ekstrak  Propolis  Coklat dari Lebah Trigona sp. JAGROS Vol.2. No. 2 Juni 2018.
13. Kothai, S. Jayanthi, B. 2014. Evaluation Of Antioxidant And Antimicrobial  Activity  Of  Stingless Bee  Propolis  ( Tetragonula  iridipennis ) Of  Tamilnadu,  India.  Int  J  Pharm Pharm Sci, Corpus ID 212523259.