## UJI STABILITAS DAN IRITASI FORMULA KRIM ANTI NYERI EKSTRAK ETANOL DAUN KELOR ( Moringa oleifera )
Submitted : 01 Agustus 2020 Edited : 22 Desember 2020 Accepted : 29 Desember 2020
Amriani Sapra, Suwahyuni Mus, Rifka Malluka, Dwirandy
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar Email : amriani.sapra@gmail.com

## ABSTRACT
Moringa oleifera leaf contains quercetin act as an analgesic by inhibiting cyclooxygenase and  lipooxygenase.  These  enzymes  interfere  synthesis  of  prostaglandins  by  arachidonic  acid and lead to reduce pain. This study aimed to obtain a physically stable M/A cream formula from the lyophilized ethanol extract of Moringa leaf and to determine the irritation effect. The cream prepared  with  variations  of  cetyl  alcohol  concentration  F1  (2%),  F2  (4%,)  and  F3  (6%).  The cream stability was determined with organoleptic, homogeneity, type of emulsion, pH, viscosity, and spreadability parameters after accelerated condition. The Irritancy test was determined to the Albino Oryctolagus cuniculus. The results showed that F1 has the best stability than F2 and F3 and showed irritation index 0,5 classified as moderate irritation.
Keywords : Moringa oleifera, stability testing, Irritancy testing, analgesic, cream

## PENDAHULUAN
Nyeri  merupakan  suatu  sensasi  yang tidak  menyenangkan  baik  secara  sensoris maupun emosional yang berhubungan dengan  adanya  kerusakan  jaringan  atau faktor lain sehingga individu merasa tersiksa yang  akhirnya  akan  mengganggu  aktivitas sehari-hari,  psikis  dan  lain-lain (1) . Bila  tidak teratasi dengan baik nyeri dapat mempengaruhi  aspek  psikologis  dan  aspek fisik  dari  penderita.  Aspek  psikologis meliputi kecemasan, takut, perubahan kepribadian  dan  perilaku,  gangguan  tidur dan  gangguan  kehidupan  sosial.  Sedangkan dari  aspek  fisik,  nyeri  mempengaruhi peningkatan angka morbiditas dan mortalitas. Obat  penghilang  rasa  nyeri  dikenal dengan sebutan analgetik. Berbagai penelitian menunjukkan bahwa obat analgetik    memiliki  efek  samping  yang serius terutama jika digunakan dalam jangka
panjang  menyebabkan    pengaruh  negatif pada ginjal, liver dan saluran pencernaan (2) .
Daun kelor ( Moringa oleifera ) merupakan  salah  satu  tanaman  yang  telah dibuktikan  manfaatnya  antara  lain  sebagai analgesik, antikanker,
antioksidan, antimikroba,  antiinflamasi,  antipiretik,  dan menurunkan  gula  darah (3,4,5) .  Daun  kelor ( Moringa  oleifera )  mengandung  flavonoid yang  berfungsi  sebagai  analgesik  yang menghambat  kerja  enzim  siklooksigenase dan  lipoksigenase  sehingga  mengganggu sintesis  prostaglandin  dan  mengurangi  rasa nyeri (6) . Ramadhan  (2017)  pada  penelitiannya menyatakan  bahwa  ekstrak  air  daun  kelor memiliki khasiat sebagai analgesik (7) . Sedangkan penelitian lain oleh Mutmainnah (2018) terhadap ekstrak methanolnya memberikan  kemampuan  sebagai  analgetik pada  konsentrasi  75  mg/kgBB.  Hasil penelitian  tersebut  menunjukkan  efek  yang
lebih bagus dibandingkan dengan meloksikam (8) . Berdasarkan berbagai penelitian, ekstrak etanol daun kelor diketahui memberikan  aktivitas  analgetik  sentral  dan perifer (9,10) .  Salah  satu  bentuk  sediaan  yang sesuai  untuk  mengatasi  nyeri  perifer  adalah sediaan  krim  karena  lebih  lama  tertahan  di kulit  yang  memungkinkan  penetrasi  bahan aktif  lebih  optimal  sehingga  efek  analgetik dapat  bertahan  lebih  lama.  Selain  itu  krim juga  memberikan  penyebaran  yang  merata dan mudah dibersihkan (11) .
Konsistensi  krim  yang  dipengaruhi oleh  basis  serta  efek  iritasi  dari  bahan  yang digunakan  merupakan  parameter    penting untuk diperhatikan dalam formulasi.
Pengaplikasian  produk  kemungkinan  dapat menimbulkan  iritasi  terhadap  kulit  yang dapat  disebabkan  oleh  beragam  faktor diantaranya  lama  pemberian,  luas  area pemberian, tingkat  penetrasi  dan  ketoksikan dari  bahan  yang  diaplikasikan (11) .  Penelitian ini  bertujuan  untuk  memformulasi  sediaan krim  ekstrak  etanol  daun  kelor  ( Moringa oleifera ) dan melihat stabilitas serta keamanan penggunaannya.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat  yang  dipakai  meliputi  alat laboratorium,  blender,  cawan  porselin, climatic  chamber (MEMMERT), freeze dryer (BUCHI  L-200),  magnetic  stirrer, neraca  analitik,  oven,  perangkat  ekstraksi, pH  meter  (LAQUA  pH  1100), rotary evaporator (BUCHI  L-100) , thermometer, ultraturax (IKA T-25), viscometer (brookfield).  Bahan-bahan  yang  digunakan yaitu  daun  kelor  ( Moringa  oleifera ), aquadest,  alfa-tokoferol,  aluminium  klorida, asam  steatat,  DMDM  hydantoin,  isopropyl miristat, metilen blue, natrium asetat, oleum rosae , paraffin cair, phytocream , phenoxyethanol,
propilenglikol, setil alkohol.

## Prosedur Kerja
Simplisia  daun  kelor  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  70%,  hasilnya  kemudian diuapkan dan dikering bekukan menggunakan freeze  dryer .  Ekstrak  kering yang  diperoleh  kemudian  dianalisis  secara kualitatif  terhadap  kandungan  flavonoidnya dengan penambahan serbuk Mg 0,1 g dan  2 tetes  HCl  pekat.  Setelah  itu  ekstrak  kering diformulasi  menjadi  sediaan  krim  dengan komposisi pada tabel 1.

## Tabel 1. Formula Krim
Bahan Formula (% b/v) 1 2 3 Ekstrak kering 5 5 5 Setil Alkohol 2 4 6 Asam Stearat 5 5 5 Parafin Cair 6 6 6 Propilenglikol 15 15 15 Isopropyl Miristat 5 5 5 Phytocream ® 5 5 5 DMDM Hydantoin 0,2 0,2 0,2 Phenoxyetanol 0,5 0,5 0,5 Alfa-tokoferol 0,05 0,05 0,05 Aquadestillata 56,25 54,25 52,25

## Prosedur pembuatan krim
Krim  dibuat  dengan  melebur  asam  sterat, setil  alcohol,  phenoxy  ethanol,  paraffin  cair dan  isopropyl  myristat,  suhu  dipertahankan pada  70 o C.  Fase  air  dibuat  dengan melarutkan  DMDM  Hydantoin,  propilen glikol, aquadest dan phytocream ® pada suhu 80 o C.  Fase  minyak  dimasukkan  ke  dalam fase air dan diaduk menggunakan ultraturax sampai  terbentuk  emulsi  lalu  ditambahkan alfa-tokoferol dan ekstrak kering yang sudah dilarutkan  dengan  propilenglikol  sambil dihomogenkan pada suhu 45 o C.

## Uji Stabilitas Dipercepat
Sediaan krim yang diperoleh dilakukan uji stabilitas dipercepat
menggunakan climatic  chamber pada  suhu 40 o C±2 o C  dan  RH  75%±5%.  Pengujian parameter  dilakukan  sebelum  dan  sesudah penyimpanan dipercepat.

## Pengamatan Organoleptik
Pengamatan  organoleptik  meliputi bau, warna dan rasa. Sediaan dianggap stabil jika  tidak  terjadi  perubahan  baik  sebelum maupun setelah uji stabilitas.

## Uji Homogenitas
Sejumlah  krim  dioleskan  pada  kaca objek  yang  bersih  dan  kering  membentuk suatu lapisan yang tipis, kemudian ditutup.

## Penentuan pH
Sediaan krim diukur pHnya
menggunakan pH meter yang sudah terkalibrasi.  Sediaan  dianggap  stabil  jika tidak  terjadi  perubahan  pH  yang  signifikan setelah penyimpanan dipercepat.

## Penentuan Viskositas
Viskositas sediaan krim diukur menggunakan viscometer  brookfield dengan kecepatan 6 rpm dan spindle no. 64 (12) .

## Pengujian Daya Sebar
Pengujian dilakukan dengan menempatkan  0,5  gram  krim  diantara  dua lempeng kaca yang diletakkan di atas kertas grafik kemudian diberi beban yang meningkat  secara  berturut-turut  (50  gram, 100  gram,  150  gram  dan  200  gram)  dan diamati daerah diameter yang terbentuk (13) .

## Evaluasi Tipe Emulsi
Evaluasi tipe emulsi dilakukan dengan metode sebaran zat warna dan pengenceran. Krim  dimasukkan  kedalam  2  vial,  kedalam salah  satu  vial  ditambahkan  dengan  10  mL aquadest dan yang lain ditetesi metilen blue. Sediaan  dikatakan  stabil  jika  tidak  terjadi perubahan  tipe  emulsi  setelah  penyimpanan dipercepat.

## Uji Iritasi
Uji  iritasi  dilakukan  pada  formula yang  paling  stabil  dari  uji  stabilitas berdasarkan  metode  yang  mengacu  pada prosedur  OECD Guidline  for  Testing  of Chemicals, Acute Dermal Irritational Corrosio dan  ISO  10993-10 Test  For Irritation and Delayed-type of Hypersensitivity (14) menggunakan  kelinci albino  sebanyak  3  ekor.  Hewan  uji diaktimalisasi  selama  5  hari  dan  dicukur daerah  punggung  seluas  1  inchi  sehari sebelum pengujian. Kulit dibersihkan dengan kapas bersih yang dibasahi aquadest dan  dioleskan  0,5  gram  sampel  uji.  Kasa steril direkatkan dengan plester lalu dibungkus  dengan  perban  selama  24  jam. Setelah  24  jam,  plester  dan  perban  dibuka dan  dibiarkan  1  jam,  diperiksa  dan  diamati tingkat  eritema  (reaksi  kemerahan)  dan tingkat  edema  (bengkak)  dan  diberi  skor berdasarkan OECD.  Dilakukan pengamatan kembali  setelah  48  dan  72  jam.  Tingkat iritasi yang timbul diberi skor dan dianalisis secara statistik (14,15) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Karakteristik Sampel Penelitian
Ekstrak  etanol  daun  kelor  dari  hasil maserasi terlebih dahulu diidentifikasi kandungan  senyawa  flavonoidnya  yang dicurigai  berperan  dalam  mengatasi  nyeri. Hasil pengujian menunjukkan bahwa ekstrak etanol  daun  kelor  positif  mengandung flavonoid dengan terbentuknya warna merah.  Selanjutnya  ekstrak  diliofilisasi  dan diformulasi  menjadi  sediaan  krim  tipe minyak  dalam  air  dengan  menggunakan variasi  konsentrasi  setil  alkohol  sebagai stiffening agent (F1, F2, F3) yang merupakan  salah  satu  bahan  yang  dapat berpengaruh  terhadap  stabilitass  sediaan, selain  itu  variasi  konsentrasinya  dapat berpengaruh terhadap konsistensi dan
pelepasan zat aktif dari sediaan.
Sediaan  krim  yang  diperoleh  diuji stabilitasnya menggunakan climatic
chamber pada  suhu  40 o C  dengan  RH  75% dan  dilanjutkan  dengan  uji  iritasi  pada kelinci  albino.  Pada  uji  stabilitas,  parameter yang diamati meliputi organoleptis,
homogenitas, pH, viskositas, daya sebar, dan tipe  emulsi.  Pengujian  dilakukan  sebelum dan  setelah  penyimpanan  dipercepat.  Hasil uji organoleptis dan homogenitas menunjukkan  tidak  terjadi  perubahan  baik sebelum  maupun  setelah  penyimpanan dipercepat  untuk  semua  formula.  Hal  ini didukung  dengan  pengujian  tipe  krim,  tidak terjadi  perubahan  tipe  krim  m/a  baik sebelum  maupun  setelah  uji  stabilitas. Pengujian  pH  menunjukkan  adanya  sedikit peningkatan  pH  untuk  semua  formula setelah  penyimpanan  dipercepat,  namun masih  berada  dalam  rentang  pH  kulit  yaitu 4,5-6,5 dan masih dianggap stabil.
Gambar 1. Hasil Evaluasi pH
Hasil  pengujian  viskositas  sebelum penyimpanan  menunjukkan  semakin  tinggi konsentrasi  setil  alkohol,  viskositas  krim semakin  tinggi  dengan  range  14.000-21.000 cps.  Viskositas  sediaan  sehubungan  dengan kemampuan  suatu  sediaan  untuk  melekat dan  menyebar  saat  pengolesan,  selain  itu juga  akan  berpengaruh  terhadap  pelepasan zat  aktif  dari  sediaan.  Setelah  penyimpanan dipercepat,  viskositas  sediaan  baik  F1,  F2 maupun  F3  berkurang  hal  ini  karena  setil alkohol  merupakan  senyawa  yang  seperti
lilin  dan  memiliki  titik  lebur  45-52 o C (16) sehingga  pada  penyimpanan  40 o C  yang berdekatan dengan titik leburnya akan mulai mengalami  perubahan  fase  yang  awalnya konsistensinya  kaku  karena  berada  pada suhu  ruang    dan  menyebabkan  viskositas sediaan turun.
Gambar 2. Hasil Evaluasi Viskositas
Gambar 3. Hasil Evaluasi Daya Sebar
Daya  sebar  krim  sehubungan  dengan kemudahan  penggunaannya  saat  dioleskan pada kulit. Persyaratan daya sebar yang baik adalah  5-7  cm (13) .  Pada  pengujian  daya sebar,  luas  permukaan  daerah  penyebaran krim  meningkat  dengan  meningkatkan  berat beban  yang  ditambahkan  pada  ketiga formula. Namun, yang memenuhi persyaratan  daya  sebar  yang  baik  untuk sediaan  krim  adalah  F1.  Pada  F2  dan  F3 daya  sebarnya  <5  cm,  hal  ini  menunjukkan daya  sebar  sediaan  krim  berkurang  dengan meningkatnya  konsentrasi  setil  alkohol
sebagai stiffening  agent sehubungan  dengan sifatnya yang kaku seperti lilin. Pengujian iritasi dilakukan berdasarkan prosedur dalam OECD. Kelinci yang digunakan adalah kelinci albino karena memiliki  kulit  sensitif  dibandingkan  kelinci jenis  lainnya.  Hasil  pengamatan  uji  iritasi pada  F1  menunjukkan  bahwa  krim  tersebut memiliki indeks iritasi 0.5 atau menimbulkan iritasi ringan.
Gambar 4. Hasil Uji Iritasi Formula  1
Tabel 2 . Penentuan Indeks Iritasi krim Formula 1 Ekstrak Etanol daun Kelor
Replikasi Waktu Pengamatan 24 Jam 48 Jam 72 Jam Eritema Edema Eritema Edema Eritema Edema 1 1 0 2 0 2 0 2 0 0 1 0 1 0 3 0 0 1 0 1 0 Rata-rata 0,33 0 1,33 0 1,33 0
Ket :
Tidak ada eritema = 0; Eritema sangat ringan = 1; Eritema ringan = 2; Eritema sedang = 3; Eritema berat = 4
Tidak ada edema = 0; Edema sangat ringan = 1; Edema sangat ringan = 2; Edema sedang = 3; Edema berat = 4

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  kelor  ( Moringa oleifera)  yang  diformulasi  dalam  bentuk sediaan  krim  dengan  variasi  konsentrasi setyl  alcohol  dengan  stabilitas  fisik  yang paling  baik  ditunjukkan  oleh  F1  dengan konsentrasi setyl alcohol 2% dan
memberikan indeks iritasi 0,5 atau menimbulkan iritasi sedang. DAFTAR PUSTAKA 1. Asmadi, Teknik prosedural keperawatan :  konsep  dan  aplikasi kebutuhan  dasar  klien  |  OPAC
Perpustakaan  Nasional  RI. Jakarta: Salemba Medika, 2008.
2. Tjay,  T.H  and  Kirana,  R., Obat-Obat Penting  Khasiat,  Penggunaan  dan Efek-Efek  Sampingnya ,  VI.  Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.
3. Ahimsa,  Ganang  K  and  Widyastuti, Widya,  “Aktivitas  Antikanker  Ekstrak Air  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera  L.)
terhadap Cell Line Kanker Seviks Hela dengan  Uji  Sitotoksisitas,  Apoptosis, dan Jalur Induksi Apoptosis berdasarkan  Ekspresi  Gen  P53,”  PhD Thesis, [Yogyakarta]: Universitas Gadjah Mada, 2014.
4. S.  Sulistyorini,  Ratna,  Sarjadi,  Johan,
Andrew, and Djamiatun, Kis, “Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa  oleifera)  pada  Ekspresi Insulin  dan  Insulitis  Tikus  Diabetes Melitus,” Majalah Kedokteran Bandung ,  vol.  47,  no.  2,  Art.  no.  2, 2015.
5. Yanthi,  M.L.,  “Uji  Efek  Antipiretik Infusa  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera Lamk.)  pada  Kelinci  Putih  Jantan Galur  New  Zealand,”  Universitas Muhammadiyah Surakarta, 2010.
6. Pandey,  Putri,  Bodhi,  Widhi,  and
Yudistira, Adithya, “Uji Efek Analgetik Ekstrak Rumput Teki (Cyperus  rotundus  L.)  pada  Tikus
Putih  Jantan  Galur  Wasitar  (Rattus novergicus)WISTAR (RATTUS NOVERGICUS),” Pharmacon ,  vol.  2, no. 02, pp. 44–49, 2013.
7. Ramadhan,  Rezky,  “University  Syiah
Kuala | Electronic theses and dissertations,” Electronic  Theses  and Dissertation , 2017. .
8. Mutmainnah  A,  Nafsul,  Rinidar,  and
Hasan,  M.,  “Kemampuan  Analgesik Ekstrak Metanol Daun Kelor (Moringa oleifera)  pada  Mencit  (Mus  musculus) yang  Diberi  Rangsangan  Panas  pada Telapak Kaki,” Jurnal Ilmiah Mahasiswa Veteriner , vol. 2, no. 3, pp.
396–401, 2018.
9. Bhattacharya,  Ayon,  Tiwari,  Prashant, Sahu,  Pratap,  and  K.  Kumar,  Sanjay, “A  Review  of  the  Phytochemical  and Pharmacological  Characteristics  of Moringa  oleifera,” J  Pharm ,  2018,
Accessed: Jul. 30, 2020. [Online].
10. Bhattacharya,  Ayon,  Kumar,  Sanjay,
Mishra, Sudhansu S., Patnaik, Shantilata,  Sahu,  Pratap  K.,  and Agrawal,  Divya,  “Analgesic  effect  of ethanolic  leaf  extract  of  moringa oleifera  on  albino  mice,” Indian  J Pain , vol. 28, no. 2, p. 89, 2014.
11. More, B.H, Sakharwade, S N,
Tembhurne,  S  V.,  and  S.  Sakarkar,  D M,  “Evaluation  for  Skin  irritancy testing  of  developed  formulations containing extract of Butea monosperma for its topical application,” International  Journal  of Toxicology and Applied Pharmacology ,  vol.  3,  no.  1,  p.  4, 2013.
12. Voight,  R., Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi ,  5th  ed.  Gadjah  Mada University Press, 1995.
13. Garg,  A.,  Aggarwal,  D.,  and  Sigla, A.K., Pharmaceutical Tecnology. Spreading  of  Semisolid  Formulation: An Update. 2002.
14. OECD  Guidelines  for  The  Testing  of Chemicals, “Test No. 404 Guidance on Integrated  Approached  to  Testing  and Assesment for Acute Dermal Irritation/Corrosion.” Enviromental Health  and  Safety  Publicationa,  2015, [Online]. Available: https://www.oecd- ilibrary.org/.
15. Dirjen  POM, Farmakope  Indonesia , IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI,
2014.
16. Rowe,  R.C.,  Sheskey,  Quinn  M.,, Handbook of Pharmaceutical Excipient , Sixth Edition. USA: Pharmaceutical Press, 2009.