## PENGGUNAAN BERBAGAI TEKANAN DAN WAKTU HIDROLISIS PADA PRODUKSI GLUKOSAMIN HIDROKLORIDA DARI KITOSAN CANGKANG
BEKICOT ( Achatina fulica )
[ UTILIZING VARIOUS OF PRESSURES AND HIDROLYSIS TIMES ON GLUCOSAMINE HYDROCHLORIDE PRODUCTION FROM SNAIL SHELLS ( Achatina fulica ) CHITOSAN ]
Noviana Linawati Dewi 1* , Syaiful Bahri 1 , Jaya Hardi 1
1) Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako
Diterima 12 Oktober 2015 , Disetujui 24 Desember 2015

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  effect  of  pressure  and  time  hydrolysis  to  produce  glucosamine hydrochloride with the highest yield and the best quality of the chitosan of a snail shell. The study used a  completely  randomized  design  (CRD)  factorial  design  consisting  of  2  factors  with  5  variations  of hydrolysis time (40; 50; 60; 70 and 80) minutes and 2 variations of pressure (1 atm and 2 atm). Each treatment  is  done  twice  so  obtained  20  experimental  units.  The  highest  glucosamine  hydrochloride was  obtained  in  hydrolysis  time  of  80  minutes  and  a  pressure  of  1  atm.  Yield  of  7,54%.  Test  of solubility in distilled water at 20°C was obtained of 3,79. Mol/L, while the maximum absorption of the UV-Vis with the addition of reagent Schales is at a wavelength of 420 nm.
Keywords : Snails, Chitosan, Glucosamine, Hydrolysis Time, Pressure

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh tekanan dan waktu hidrolisis untuk menghasilkan glukosamin  hidroklorida  dengan  rendemen  tertinggi  dan  kualitas  terbaik  dari  kitosan  cangkang bekicot.  Penelitian  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  pola  faktorial  yang  terdiri  dari  2 faktor dengan 5 variasi waktu hidrolisis (40; 50; 60; 70 dan 80) menit dan 2 variasi tekanan (1 atm dan 2  atm).  Setiap  perlakuan  dilakukan  sebanyak  dua  kali  sehingga  diperoleh  20  unit  percobaan. Glukosamin  hidroklorida  tertinggi  diperoleh  pada  waktu  hidrolisis  80  menit  dan  tekanan  1  atm, rendemennya 7,54%. Uji kelarutannya dalam aquadest suhu 20°C diperoleh sebesar 3,79. Mol/L, sedangkan  serapan  maksimum  terhadap  sinar  UV-Vis  dengan  penambahan  reagen  Schales  adalah pada panjang gelombang 420 nm.
Kata Kunci: Bekicot, Kitosan, Glukosamin, Waktu Hidrolisis, Tekanan

## LATAR BELAKANG
Bekicot  ( Achatina  fulica )  termasuk sebagai golongan hewan lunak (mollusca) atau  kelas  gastropoda.  Daging  bekicot sering  dimanfaatkan  masyarakat  sebagai pakan  ternak,  seperti  itik  dan  ayam. Namun demikian, sering pula dimanfaatkan  sebagai  sumber  protein dalam makanan karena banyak mengandung asam amino esensial.
Sementra  untuk  cangkangnya  hanya dimanfaatkan  sebagai  hiasan  seperti gantungan kunci dan bahkan lebih banyak terbuang begitu yang selanjuntnya mencemari lingkungan (Prihatman, 2000).
Cangkang bekicot dilaporkan mengandung senyawa kitin dengan rendemen 27,13% (Setyawan dkk., 2013). Kandungan kitin tersebut dapat dimanfaatkan untuk menghasilkan turunan senyawa  yang  memiliki  manfaat  besar, salah satunya adalah penambahan senyawa basa pada kitin, akan mengakibatkan terjadinya proses deasetilasi  dan  selanjutnya  menghasilkan kitosan.  Dilain  pihak  kitosan  dapat  diubah menjadi  oligomer  ataupun  monomernya yang  selanjutnya  memiliki  manfaat  yang lain pula.
Hidrolisis kitosan akan menyebabkan  pemutusan  pada  ikatan glikosidik  dengan  bantuan  asam  dapat menghasilkan  kitooligosakarida  dan  juga monomer glukosamin (GlcN) dalam jumlah yang  beragam  (Cabrera  dan  Cutsem, 2005).  Glukosamin  merupakan  senyawa gula  amino  yang  banyak  dimanfaatkan
untuk kesehatan. Pada bentuk Glukosamin  Sulfat  dan  Glukosamin  HCl banyak  dimanfaatkan  untuk  perawatan kesehatan  tulang  atau  sendi  yang  biasa disebut  osteoartritis  (Zhou et  al., 2005). Selain  itu,  glukosamin  juga  memiliki aktivitas  antikanker  (Chesnokov et  al ., 2014) dan antimikroba (Malik et al., 2013).
Salah satu penelitian yang berkaitan dengan sintesis glukosamin dilakukan oleh Wardani  (2010)  tentang  sintesis  dan karakterisasi glukosamin hidroklorida berbasis  kitosan.  Hasil  sintesis  yang diperoleh  dengan  menggunakan  HCl  4  N pada  suhu 90 °C selama 120 menit, yaitu berupa  padatan  putih  dengan  titik  leleh 188 –190  °C.  Rendemen  yang  diperoleh sebesar  87,93%  dan  kemurnian  sebesar 86,70%. Keberadaan glukosamin hidroklorida  pada  hasil  sintesis  didukung oleh  hasil  karakterisasi  yang  dilakukan dengan uji titik leleh, FTIR, TLC, SEM, dan XRD. Afridiana (2011) mensintesis glukosamin  hidroklorida  dengan  tingkat kemurnian  sebesar  45,64%  dari  kitin udang menggunakan HCl 37% pada suhu 90  ºC  selama  4  jam.  Ernawati  (2012) berhasil  mensintesis  glukosamin  dengan menggunakan  autoklaf  pada  tekanan  1 atm selama 1 jam dan menggunakan HCl 8%.  Glukosamin  yang  dihasilkan  memiliki kelarutan  sempurna  dalam  air,  berbentuk serbuk  berwarna  putih  kekuningan,  nilai LoD  0,92%,  titik  leleh  190-192  ºC,  dan rendemen 69,80%.
Penggunaan autoklaf pada hidrolisis kitosan  menjadi  glukosamin  hidroklorida
menggabungkan faktor tekanan dan waktu.  Tekanan  berperan  penting  dalam pemotongan  ikatan  polimer  menjadi  unit- unit yang lebih kecil. Keuntungan menggunakan  autoklaf  yaitu  waktu  yang digunakan untuk proses produksi glukosamin menjadi lebih cepat dan biaya produksi lebih murah.
Merujuk  pada  penelitian  Ernawati (2012), yang berhasil mensintesis glukosamin  dari  kitosan  menggunakan autoklaf hanya membutuhkan waktu hidrolisis  1  jam,  lebih  cepat  dari  pada tanpa menggunakan tekanan membutuhkan  waktu  hidrolisis  lebih  lama yaitu  2  jam.  Oleh  karena  itu,  dilakukan penelitian  tentang  produksi  glukosamin dari  kitosan  cangkang  bekicot  dengan variasi tekanan dan waktu hidrolisis.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Peralatan
Bahan dasar yang digunakan adalah cangkang  bekicot  yang  diperoleh  dari desa  Boilan,  Kabupaten  Buol,  Sulawesi Tengah, sedangkan bahan kimia lain yang diperlukan  dalam  proses  ekstraksi  dan analisis  mencakup  NaOH,  HCl  1  M,  HCl Pekat,  NaOCl  0,315%,  GlcN-HCl  standar, HCl  8%,  Isopropil  Alkohol  (teknis),  kertas indikator  pH,  aquadest,  Reagen  Schales dan asam asetat 2%.
Peralatan  yang  digunakan  terdiri dari:  neraca  analitik,  oven,  autoklaf
Hirayama Hiclave HVE-50, spektrofotometer FTIR Bruker,
spektrofotometer  Uv-Vis  Perkin  Elmer
Lamda  25,  Melting  Point  aparatus  tipe SMP 10, hot plate stirer , 1 set alat refluks, 1  set  alat  penyaring  vakum,  ayakan  60 mesh,  termometer,  viskometer  oswald, labu  alas  datar,  magnetik  stirer,  spatula, lumpang  dan  alu,  gegep,  botol  semprot dan alat-alat gelas  yang umum digunakan dalam laboratorium kimia.

## Prosedur Penelitian
Ekstraksi kitin
Ekstraksi kitin menggunakan modifikasi  metode  Salami  (1998)  dalam Kusumaningsih  dkk.,  (2004).  Tepung cangkang  bekicot  yang  telah  diayak  pada ukuran  60  mesh,  dideproteinasi  sebanyak 75  g  menggunakan  750  ml  NaOH  3,5% pada  rangkaian  refluks  suhu  ±  65ºC selama2  jam.  50  g  tepung  kering  hasil deproteinasi  direfluks  bersama  dengan 750 ml HCl 1 N pada suhu ± 40ºC selama 30  menit  untuk  menghilangkan  mineral dalam  tepung.  50  g  tepung  bekicot  yang telah kering selanjutnya dihilangkan warnanya  (depigmentasi)  menggunakan 500  ml  NaOCl  0,315%  dalam  alat  refluks suhu  ±  40ºC  selama  1  jam.  Serbuk  yang diperoleh  merupakan  serbuk  kitin  yang digunakan pembuatan kitosan.

## Produksi Kitosan
Pembuatan  kitosan  dilakukan  melalui proses deasetilasi kitin (modifikasi metode Salami,  1998  dalam  Kusumaningsih  dkk., 2004).  Kitin  sebanyak  30  g  ditambahkan NaOH 60% sebanyak 600 ml dan direfluks sambil  diaduk  menggunakan  magnetik stirer  pada  suhu  110ºC  selama  1  jam.
Padatan  yang  diperoleh  disaring,  dan dinetralkan pHnya serta dikeringkan dalam oven.  Kitosan  yang  terbentuk  selanjutnya ditentukan  Derajat  Deasetilasi  dengan FTIR, kadar abu dan berat molekulnya.
Sintesis Glukosamin Hidroklorida
(Modifikasi Cara Ernawati 2012)
Sebanyak  2,5  g  kitosan  direndam dalam larutan HCl 8% (Kitosan:HCl = 1:9) dan di autoklaf selama (40, 50, 60, 70 dan 80) menit pada tekanan 1 atm dan 2 atm. Sampel  yang  telah  di  autoklaf  dicuci dengan  larutan  isopropil  alkohol  hingga mencapai  pH  5  dan  dikeringkan.  Serbuk yang  diperoleh  merupakan  glukosamin hidroklorida, selanjutnya ditentukan rendemen  dan  karakteristiknya  untuk mendapatkan glukosamin hidroklorida terbaik.  Karakterisasi  meliputi  penentuan kelarutan,  spektrum  UV-Vis,  titik  leleh, LoD  ( Loss  On  Drying ),  dan  spektrum FTIR.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kitin  hasil  ekstraksi  dari  cangkang Bekicot
Proses  ekstraksi  kitin  terdiri  dari  3 tahap  yaitu  deproteinasi,  demineralisasi dan depigmentasi. Pada proses deproteinasi dilakukan dengan cara menambahkan  NaOH  3,5%,  tujuannya yaitu  untuk  menghilangkan  protein  yang terkandung  dalam  cangkang  bekicot, karena  protein  akan  larut  dalam  NaOH. Proses  demineralisasi,  yang  bertujuan untuk menghilangkan mineral yang terkandung dalam sampel dengan
penambahan HCl 1 M. Komponen mineral utama  yang  terdapat  dalam  cangkang bekicot  adalah  kalsium  karbonat  (CaC ) (Cardenas et  al. 2004  dalam  Afridiana, 2011).
Hasil  demineralisasi  menghasilkan serbuk  yang  berwarna  kecoklatan.  Warna kecoklatan  menandakan  masih  terdapat pigmen  yang  perlu  dihilangkan,  sehingga perlu  dilakukan  proses  depigmentasi dengan  penambahan  NaOCl  0,315% bertujuan  untuk  menghilangkan  pigmen warna dan memberikan warna yang cerah pada  kitin  yang  diperoleh  yaitu  dari kecoklatan  menjadi  putih  kecoklatan. Serbuk  kitin  cangkang  bekicot  yang diperoleh berwarna putih kecoklatan dengan  rendemen  33,24%.  Hasil  ini hampir  sama  dengan  rendemen  kitin cangkang  bekicot  yang  yang  diperoleh oleh Setyawan dkk. (2013), yaitu 27,13%.

## Kitosan dari cangkang Bekicot
Produksi  kitosan  dilakukan  melalui proses  deasetilasi  kitin  yang  bertujuan untuk mengubah gugus asetil (- NHCOCH 3 ) menjadi  gugus  amina (-NH 2 ) dengan  penambahan  larutan NaOH 60%. Kitosan  yang  diperoleh  berupa  serbuk putih kecoklatan dengan rendemen sebesar 34,66% dari kitin, sedangkan dari sampel  awal  cangkang  bekicot  sebesar 11,52%. Berdasarkan penelitian Kusumaningsih dkk. (2004) dari cangkang bekicot  rendemen kitosan  yang  dihasilkan adalah  6,95%  dan  Puspitasari  (2007)  dari cangkang  bekicot  adalah  6,46%.  Kitosan
yang  diperoleh,  dikarakterisasi  kadar  abu, berat molekul, dan derajat deasetilasinya.
Kadar  abu  kitosan  yang  diperoleh pada  penelitian  ini  yaitu  87,40%.  Hasil  ini lebih rendah daripada penelitian Puspitasari  (2007),  dari  kitosan  cangkang bekicot  yaitu  95,00%  dan  lebih  tinggi daripada penelitian Kusumaningsih (2004),  dari  kitosan  cangkang  bekicot yaitu  10,11%.  Kadar  abu  yang  diperoleh sangat tinggi dibandingkan dengan standar.  Standar  kadar  abu  kitosan  niaga adalah ≤ 2 %. Tingginya kadar abu pada kitosan  diduga  disebabkan  karena  pada proses demineralisasi kitin belum sempurna,  sehingga    kitosan    yang diperoleh    masih  mengandung  banyak mineral.
Derajat  deasetilasi  kitosan  yang dihasilkan  adalah  76,46%.  Sementara penelitian  Puspitasari  (2007)  adalah  58- 75%  dan  Kusumaningsih  (2004)  adalah 74,78-77,99%. Hal ini telah sesuai dengan kitosan  standar  yaitu  berkisar  antara  60- 100%.  Namun  belum  memenuhi  standar kualitas  teknis,  makanan  dan  farmasetis. Pujiastuti (2001) dalam Puspitasari (2007) menyebutkan  standar  kitosan  kualitas teknis,  makanan  dan  farmasetis  berturut- turut  sebesar  85%,  90%  dan  95%. Semakin  tinggi  derajat  deasetilasinya maka semakin banyak gugus  amino pada rantai  molekul  kitosan  sehingga  kitosan akan semakin reaktif.
Berat molekul kitosan yang dihasilkan  pada  penelitian  ini  yaitu  5,85  x 10 4 g/mol. Hasil ini lebih rendah
dibandingkan  penelitian  El-Hefian,  dkk (2009),  yaitu  7,9  x  10 5 g/mol.  Menurut (Cahyono, 2015) faktor-faktor yang mempengaruhi berat molekul adalah suhu dan  panjang  rantai  polimer.  Suhu  yang tinggi  akan  menyebabkan  rantai  molekul pada  kitosan  akan  terdepolimerisasi  dan mengakibatkan terjadinya penurunan berat  molekul.  Karena  suhu  yang  tinggi dapat  menyebabkan  degradasi  pada kitosan.    Sedangkan  untuk  panjang  rantai polimer yaitu jika ukuran rantai polimernya menjadi kecil maka laju gerak translasinya menjadi  cepat  sehingga  berat  molekul menjadi  rendah.  Berat  molekul  kitosan bervariasi  sesuai  dengan  sumber  bahan mentah dan metode preparasinya.
Kitosan  yang  diperoleh  dianalisis dengan  spektrofotometer  FTIR  untuk menentukan  gugus  fungsi  kitosan  dan menentukan DD (Gambar 1).
Gambar 1. Hasil analisis FTIR kitosan
Pada gambar spektrum FTIR kitosan cangkang  bekicot  terlihat  adanya  pita serapan pada bilangan gelombang
3442.94  cm -1 yang  menunjukkan  vibrasi – OH  ulur  dan  vibrasi  N ulur  yang
tumpang tindih. Pita serapan pada bilangan gelombang  2972.31-2852.72  cm - 1 menunjukkan  adanya  gugus  fungsi  CH 2 ulur, pita serapan pada bilangan gelombang  1643.35  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  fungsi  C=O  amida,  pita serapan pada bilangan gelombang
1170.79 –898.83 cm -1 menunjukkan adanya  gugus  fungsi  C-O-C,  dan  pita serapan pada bilangan gelombang 858.32 cm -1 menunjukkan  masih  adanya  mineral silika.
Glukosamin  hidroklorida  dari  kitosan cangkang Bekicot
Proses pembuatan glukosamin hidroklorida pada penelitian ini merupakan
modifikasi  dari  penelitian  Ernawati  (2012)
yaitu menerapkan sistem hidrolisis bertekanan menggunakan autoklaf.
Sehingga  pada  penelitian  ini  kitosan dihidrolisis  dengan  perlakuan  tekanan  1 atm  (120°C)  dan  2  atm  (132°C),  dengan waktu  hidrolisis  (40,  50,  60,  70  dan  80) menit  dengan  menggunakan  konsentrasi HCl 8%. Parameter spesifikasi glukosamin hidroklorida  meliputi  rendemen,  kelarutan dan  warna  untuk  mendapatkan  hasil glukosamin  terbaik,  namun  yang  menjadi indikator utama untuk menentukan keberhasilan  hidrolisis  kitosan  menjadi glukosamin  hidroklorida  adalah  tingkat kelarutannya dalam air.

## Rendemen glukosamin hidroklorida
Rendemen  glukosamin  hidroklorida tertinggi diperoleh pada waktu hidrolisis 70 menit baik pada 1 atm maupun 2 atm dan
merupakan waktu hidrolisis optimum (Gambar  2).  Nilai  rendemen  glukosamin dipengaruhi  oleh  faktor  suhu,  konsentrasi asam,  waktu  pemanasan,  dan  tekanan yang diberikan (Ernawati, 2012).
Gambar 2.  Grafik hubungan waktu hidrolisis  terhadap  rendemen glukosamin hidroklorida
Berdasarkan  grafik  di  atas  dapat dilihat  bahwa  waktu  hidrolisis  70  menit merupakan  waktu  hidrolisis  optimum. Sedangkan pada waktu hidrolisis 80 menit rendemen  glukosamin  hidroklorida  yang dihasilkan  menurun  kembali.  Hal  ini menunjukkan  adanya  kerusakan  senyawa kitosan  bila  dihidrolisis  melebihi  waktu optimumnya.  Pengaruh  tekanan  terhadap rendemen  glukosamin  hidroklorida  yaitu semakin  tinggi  tekanan  yang  digunakan menghasilkan rendemen glukosamin hidroklorida  semakin  kecil.  Penurunan rendemen  diduga  terjadi  karena  pada tekanan  tinggi  tentunya  diikuti  dengan kenaikan suhu, sehingga terjadi kerusakan atau  degradasi  dan  dapat  membentuk senyawa  furfural  yang  akhirnya  akan
9,3 8,62
9,96 11,12 7,54 5,44 5,16 5,48
7,5 5,04 0 2 4 6 8 10 12 40 50 60 70 80 R e n d e m e n (% ) Waktu Hidrolisis (Menit)
1 Atm 2 Atm
menurunkan
rendemen glukosamin hidroklorida (Ernawati, 2012).
Adanya  pengaruh  interaksi  waktu dan  tekanan  hidrolisis  dibuktikan  dengan analisis  sidik  ragam  yang  dilanjutkan dengan  BNJ  taraf  5%  yang  menghasilkan perbedaan  tiap  kombinasi.  Dari  hasil  uji BNJ menunjukkan bahwa semua  interaksi berbeda  tidak  nyata  kecuali  untuk  waktu hidrolisis  70  menit  pada  tekanan  1  atm berbeda  nyata  dengan  waktu  hidrolisis (40, 50, 60 dan 80) menit pada tekanan 2 atm.
Pada  penelitian  ini  rendemen  yang dihasilkan sangat rendah apabila dibandingkan  dengan  penelitian  Ernawati (2012)  adalah  69,80%  dan  Cahyono (2015)  adalah  65,33%.  Hal  ini  terjadi karena  kitosan  yang  digunakan  masih mengandung mineral yang tinggi dibuktikan  pada  nilai  kadar  abu  yang dihasilkan  sangat  tinggi  (87,4%).  Kadar abu  yang  tinggi  disebabkan  karena  pada saat  proses  demineralisasi,  mineral  yang terdapat  dalam  sampel  belum  hilang sempurna, karena cangkang bekicot banyak mengandung mineral.

## Kelarutan glukosamin hidroklorida
Kelarutan  glukosamin  yang  terbaik ditunjukan pada waktu 80 menit baik pada tekanan  1  atm  maupun  2  atm.  Uji kelarutan  dilakukan  menggunakan  air bersuhu 20°C, semakin tinggi suhu pelarut yang  digunakan  maka  kelarutan  zat  akan terjadi  lebih  cepat.  Kelarutan  cenderung berjalan  lambat  dalam  pelarut  bersuhu
rendah.  Suatu  zat  yang  larut  dengan mudah  pada  pelarut  bersuhu  rendah mengindikasikan bahwa zat terlarut memiliki  tingkat  kelarutan  yang  baik (Ernawati,  2012).  Fungsi  tekanan  pada autoklaf  terhadap  kelarutan  tidak  lagi memutus  gugus  asetil  melainkan  hanya memotong  polimer  kitosan  menjadi  unit yang  lebih  kecil  sehingga  ion  Cl-  dari  HCl lebih mudah berikatan dengan gugus amin kitosan membentuk N Cl. Adanya gugus hidroksil O-H dan N Cl pada unit karbon menyebabkan glukosamin hidroklorida bersifat larut dalam air (Ernawati, 2012).
Gambar 3.  Grafik Hubungan
Waktu
Hidrolisis  terhadap  Kelarutan Glukosamin Hidroklorida
Berdasarkan  Gambar  3,  ditunjukkan bahwa  semakin  besar  tekanan  maka kelarutan  glukosamin  semakin  tinggi. Begitu  pula  untuk  suhu,  semakin  tinggi suhu  maka  kelarutan  semakin  tinggi (Cahyono, 2015). Sedangkan untuk waktu hidrolisis  yaitu  semakin  lama  waktu hidrolisis maka semakin tinggi kelarutannya.
1,298
2,411 2,829 3,524 3,803 1,947 2,828 3,246 3,478 4,081 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 40 50 60 70 80 K e lar u tan m o l/ L (x10 -3) Waktu Hidrolisis (menit)
1 Atm 2 Atm
Berdasarkan  analisis  sidik  ragam dan  dilanjutkan  dengan  uji  BNJ  taraf  5%, menunjukkan  bahwa  terjadi  perbedaan yang  nyata.  Dari  hasil  uji  pada  tiap kombinasi  menunjukkan  bahwa  untuk pengaruh  utama  waktu hidrolisis  terhadap kelarutan,  pada  waktu  hidrolisis  (40,  50, 60  dan  70)  menit  berbeda  nyata,  namun untuk  waktu  hidrolisis  70  dan  80  menit berbeda  tidak  nyata.  Sedangkan  untuk interaksi  waktu  dan  tekanan  hidrolisis, waktu hidrolisis 40, 50,  dan 60 menit baik pada  tekanan  1  atm  maupun  2  atm kelarutan  glukosamin  berbeda  nyata. Sementara untuk waktu hidrolisis 60 menit pada  tekanan  2  atm  berbeda  tidak  nyata dengan  waktu  hidrolisis  70  menit  baik pada tekanan 1 atm maupun 2 atm, tetapi berbeda  nyata  dengan waktu  hidrolisis  80 menit.  Namun  demikian,  waktu  hidrolisis 70 menit pada 1 dan 2 atm berbeda tidak nyata  dengan  waktu  hidrolisis  80  menit pada 1 atm, sedangkan waktu hidrolisis 80 menit  pada  2  atm  berbeda  nyata  dengan seluruh  kombinasi  lainnya,  kecuali  waktu hidrolisis 80 menit pada 1 atm.
Berdasarkan  hasil  analisis  tersebut,  maka waktu  hidrolisis  80  menit  pada  tekanan  1 dan  2  atm  dapat  diasumsikan  sebagai perlakuan  terbaik  jika  merujuk  pada kelarutan  glukosamin.  Namun,  apabila merujuk  pada  rendemen  glukosamin, maka  perlakuan  waktu  hidrolisis  80  menit pada  tekanan  1  atm  adalah  perlakuan terbaik.
Spektrum Uv-Vis glukosamin
hidroklorida
Glukosamin  hasil  degradasi  kitin atau kitosan tidak dapat langsung dianalisis  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  karena  molekulnya  tidak  memiliki gugus  kromofor.  Untuk  itu  glukosamin direaksikan  terlebih  dahulu  menggunakan Reagent  Schales  agar  dapat  menyerap sinar  UV  pada  panjang  gelombang  yang lebih tinggi (Nasution, 2013). Pola spektrum warna glukosamin yang dihasilkan  dari  semua  perlakuan  sama, dengan  panjang  gelombang  maksimum adalah  420  nm.  Panjang  gelombang maksimum  glukosamin  yang  diperoleh sama dengan panjang gelombang maksimum glukosamin standar dan sintesis hasil dari penelitian Puspita (2007) dan Pratitis (2006) yaitu 420 nm.

## Titik leleh glukosamin hidroklorida
Titik  leleh  glukosamin  hidroklorida yang  dihasilkan  pada  penelitian  ini  cukup baik  dan  telah  sesuai  dengan  titik  leleh glukosamin standar yaitu 185 –189 °C dan hampir  sama  dengan  hasil  titik  leleh Wardani,  dkk  (2010)  yaitu  188-190°C  dan Afridiana (2011) adalah 187-189°C dengan  rentang  titik  leleh  yang  cukup kecil. Namun lebih kecil apabila dibandingkan dengan hasil hidrolisis Ernawati (2012), titik leleh yang dihasilkan adalah  190-193°C.  Rentang  titik  leleh yang  besar  dapat  menandakan  bahwa glukosamin  hasil  sintesis  yang  diperoleh
masih  mengandung  banyak  oligomer (Wardani dkk., 2010).
Loss  On  Drying  (LoD)  glukosamin hidroklorida
Uji loss  on  drying (LoD)  dilakukan untuk  mengukur  jumlah  air  dan  bahan volatil yang terdapat pada sampel.
Berdasarkan rata-rata hasil uji menunjukkan  bahwa  nilai  pengurangan bobot  glukosamin  hidroklorida  tidak  lebih dari  1%,  yaitu  hanya  mencapai  0,95%. Nilai  LoD  ini  telah  sesuai  dengan  standar yang disyaratkan oleh CARGIL, USP, dan EFSA, yaitu < 1%.
Spektrum FTIR glukosamin hidroklorida Spektrum FTIR Glukosamin hidroklorida ditunjukkan pada Gambar 4. Gambar 4.  Hasil Analisis FTIR Glukosamin Hidroklorida Berdasarkan Gambar spektrum FTIR  glukosamin  hidroklorida  terlihat adanya  pita  serapan  pada  bilangan gelombang 3421,72
. Pita ini merupakan  pita  serapan  ulur  O-H  yang lebih  dominan    dengan  garis  lebar dibandingkan dengan ulur N-H.
(Brugnerotto,  2001  dalam  Wardani  dkk.,
2010)  menambahkan  bahwa  monomer GlcN  HCl  akan  menunjukkan    gugus  O-H pada 3350 sedangkan apabila berbentuk  polimer,  gugus  O-H  semakin mendekati 3450
. Hal ini menunjukkan  bahwa  pada  penelitian  ini glukosamin  hidroklorida  yang  dihasilkan masih  mengandung  banyak  campuran oligomer.  Sedangkan  ikatan  N-H  ditandai dengan bilangan gelombang 1641,42 cm -1 yang  merupakan  gugus  amida  primer. Pada  bentuk  sampel  padat,  pita  amida primer  berada  pada  kisaran  bilangan gelombang  1640-1620 dan  pita amida  sekunder  berada  pada  daerah bilangan  1550
.  Pita  serapan  ulur  C-
N  pada  penelitian  ini  tidak  nampak  pada spektrum,  diduga  terjadi  tumpang  tindih pada  daerah  serapan  C-O-C  glikosidik yang  memiliki  pita  yang  sangat  lebar. Berdasarkan  literatur  bahwa  pita  serapan
C-N ditunjukkan pada 1394 (Mojarrad et al. 2007 dalam Wardani dkk., 2010). Sementara pada bilangan gelombang  1477,47 merupakan  pita
serapan  vibrasi  tekuk  C-O-H.  Akan tetapi, pada  daerah  serapan  tersebut  juga terdapat  vibrasi  tekuk  -C Pita  serapan ulur  C ditunjukkan  pada  2854,65
dan  2926,01 sedangkan  669,30 menunjukkan  tekuk  C .  Pita  pada
1014,56 menunjukkan  pita  serapan ikatan glikosida.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa
glukosamin  hidroklorida  terbaik  dihasilkan pada  perlakuan  waktu  hidrolisis  80  menit pada  tekanan  1  atm  yaitu  dengan rendemen 7,54% dan kelarutan
3,803. mol/L.

## DAFTAR PUSTAKA
Afridiana,  N.  2011. Recovery  Glukosamin Hidroklorida  dari  Cangkang  Udang Melalui  Hidrolisis  Kimiawi  Sebagai Bahan Sediaan Suplemen Osteoarthritis. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Perikanan dan Ilmu
Kelautan. Institut Pertanian Bogor.
Cabrera,    J.  C  dan  Cutsem,  P.  V.  2005. Preparation  of  Chitooligosaccharides with Degree of Polymerization Higher than  6  by  Acid  or  Enzymatic Degradation  of  Chitosan. Biochem Eng J. 25:165-172.
Cahyono,  E.  2015. Produksi  Glukosamin dengan Metode Hidrolisis Bertekanan sebagai Bahan Penunjang Kesehatan Sendi . [Tesis]. Bogor: Sekolah Pascasarjana.  Institut  Pertanian Bogor. Chesnokov  V,  Gong  B,  Sun  C,  Itakura  K.
2014. Anti-cancer activity of glucosamine  through  inhibition  of N-linked glycosylation. Cancer  Cell International . 14: 1-10.
El-Hefian,  E.A.,  Yahaya,  A.H  dan  Misran,
M. 2009. Characterisation of chitosan  solubilised  in  aqueous formic  and  acetic  acids. Maejo  Int. J. Sci. Technol . 3(3): 415-425.
Ernawati.  2012. Pembuatan  Glukosamin
Hidroklorida (GlcNHCl) dengan Metode  Autoklaf .  [Skripsi].  Bogor:
Departemen Teknologi Hasil Perairan.  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu  Kelautan.  Institut  Pertanian Bogor. Malik  S.,  Singh  M.,  Mathur  A.  2014. Antimicrobial Activity of Food
Grade  Glucosamine. International
Journal of Biotechnology and
Bioengineering Research . 4(4): 307-312. Nasution,  A.  K.  2013. Pembuatan  dan Karakteristik Glukosamin Hidroklorida  dari  Kitin  Cangkang Belungkas (Tachypleus gigas) . [Skripsi]. Medan: Departemen Kimia. FMIPA. Universitas Sumatera Utara. Kusumaningsih,  T.,  Masykur,  A.,  Arief,  U. 2004. Pembuatan Kitosan dari Kitin Cangkang Bekicot (Achatina fulica) . Biofarmasi. 2 (2): 64-68.
Pratitis,  A.  2006. Isolasi  dan  Karakterisasi Enzim  Kitonase  dari  Bakteri  Laut yang  Berasosiasi  dengan  Spons . [Skripsi].  Bogor:  Progam  Studi Teknologi Hasil Perikanan. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor.
Prihatman,  K.  2000. Budidaya  Bekicot (Achatina  spp.). Jakarta:  TTG Budidaya Peternakan.
Puspitasari,  A.  2007. Pembuatan  dan Pemanfaatan  Kitosan  Sulfat  dari Cangkang Bekicot (Achatina fulica) sebagai adsorben zat warna Remazol  Yellow  FG  6 .  [Skripsi].
Surakarta: FMIPA Universitas
Sebelas Maret. Puspita,  E.  2007. Studi  Karakteristik Kitonase dari Isolat (Bacillus licheniformis) MB-2 . [Skripsi]. Bogor: Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan. Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor. Setyawan  FL.,  Darjito,  Khunur  MM.  2013. Pengaruh  pH  dan  Lama  Kontak pada Adsorpsi Ca2+ Menggunakan Adsorben Kitin Terfosforilasi dari Limbah Cangkang Bekicot ( Achatina fulica ). Kimia Student Journal . 1(2):
201 – 207.
Wardani W  K,  Sugita  P,  Srijanto  B.  2010. Sintesis dan Karakterisasi Glukosamin  Hidroklorida  Berbasis Kitosan.  Di  dalam:  Supena  EDJ, Nugraheni  EH,  Hamim,  Hasim, Indahwati,  Dahlan  K,  editor. Sains Sebagai Landasan Inovasi Teknologi  dalam  Pertanian  dan Industri. Prosiding Seminar Nasional  Sains  III ;  Bogor,  13 November  2010.  Bogor:  Fakultas MIPA Institut Pertanian Bogor. hlm 271 – 281.
Zhou JZ, Waszkuc T, Mohammed F. 2005.
Determination  of  Glucosamine  in Raw Materials and Dietary Supplements Containing Glucosamine Sulfate and/or Glucosamine Hydrochloride by High-Performance Liquid Chromatography  with  FMOC-Su
Derivatization: Collaborative Study.
Journal  of  AOAC  International . 88(4):1048-1058.