Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Buah Gambas ( Luffa acutangula (L.) Roxb.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis
Determination of Total Flavonoid Levels Gambas Fruit Extract ( Luffa acutangula (L.) Roxb.) with UV-Vis Spectrofotometry Method
Suharyanto Suharyanto 1* , Tutik Nur Hayati 1
Program Studi DII Farmasi, STIKES Nasional Surakarta, Surakarta, Indonesia *E-mail: suharyanto522@gmail.com
Received: 13 Mei 2020; Accepted: 30 Juni 2021; Published: 30 Juni 2021

## Abstrak
Buah  gambas  atau  oyong  memiliki  berbagai  manfaat  yaitu  dapat  mengatasi  pembesaran  kelenjar  limfa, diuretik, laksativa, antioksidan, hepatoprotektif, menghambat pertumbuhan jamur dan bakteri. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk menetapkan kadar senyawa flavonoid total buah gambas ( Luffa acutangula (L.) Roxb).  Metode  ekstraksi  menggunakan  sokletasi  dengan  etanol  96%  sebagai  pelarut.  Ekstrak  yang diperoleh  digunakan  untuk  analisis  kualitatif  dan i kuantitatif.  Analisis  fitokimia  terhadap  kandungan flavonoid  dalam  sampel  menggunakan  uji  Shinoda,  larutan  NaOH  10%,  dan  larutan  H 2 SO 4 pekat, diperoleh  hasil  positif  mengandung  flavonoid.  Analisis  kuantitatif  menggunakan  Spektrofotometri  UV- Vis dengan panjang gelombang maksimum yang diperoleh yaitu 429,5 nm serta operating time 30 menit. Rata-rata kadar flavonoid total yang diperoleh yaitu 9,897±0,11 mg/gram ekstrak dengan %KV 1,14%. Kata kunci : Buah gambas (Luffa acutangula (L.) Roxb), flavonoid, sokletasi, spektrofotometri UV-Vis

## Abstract
Gambas  or  Oyong  fruit  has  various  benefits,  namely  it  can  overcome  enlarged  lymph  nodes,  diuretics, laxatives, antioxidants, hepatoprotective, inhibiting the growth of fungi and bacteria. The purpose of this study was to determine the levels of total flavonoid compounds in gambas (Luffa acutangula (L.) Roxb). Extraction  methode  using  soxhletation  with  96%  ethanol  as  solvent.  The  extract  obtained  was  used  for qualitative and quantitative analysis. Phytochemical analysis of the flavonoid content in the sample using the  Shinoda  test,  10%  NaOH  solution,  and  concentrated  H 2 SO 4 solution,  obtained  positive  results containing  flavonoids.  Quantitative  analysis  using  UV-Vis  Spectrophotometry  with  the  maximum wavelength obtained is 429.5 nm and operating time is 30 minutes. The average total flavonoid content obtained was 9.897±0.11 mg/gram extract with %KV 1.14%.
Keywords: Gambas (Luffa acutangula (L.) Roxb), flavonoids, soxhletation, UV-Vis spectrophotometry

## PENDAHULUAN
Buah oyong atau gambas dapat dikonsumsi  oleh  masyarakat,  bisa  tumbuh dibeberapa  negara  yaitu  India,  Kanada, Inggris  dan  negara  lainnya  salah  satunya  di Indonesia  (Purwanti,  2012).  Kandungan kimia  yang  dimiliki  oleh  gambas  yaitu flavonoid,  karbohidrat,  karoten,  lemak, protein,  asam  amino,  alanin,  arginin,  glisin, cystin, asam glutamat, hidroksiprolin, leusin, serin,  triptopan,  dan  saponin.  Biji  buah gambas  mengandung  minyak  yaitu  palmitat, stearat, asam miristat (Sari, 2015).
Sifat  antioksidan  dari  flavonoid,  dapat menghambat  penggumpalan  keping-keping
sel  darah,  produksi  nitrit  oksida  dapat dirangsang  sehingga  pembuluh  darah  dapat melebar  dan  pertumbuhan  sel  kanker  dapat dihambat. Selain sebagai antioksidan, flavonoid dapat berfungsi sebagai hepatoprotektor,  antivirus,  antiradang,  dan antitrombotik (Winarsi, 2007).
Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh Estikawati dan  Lindawati (2019), kadar flavonoid  total  yang  terkandung  dalam  buah gambas Luffa  acutangula (L.),  setelah  di maserasi  dengan  etanol  70%  diperoleh  hasil flavonoid total yaitu 10,03% b/b.
Hasil  penelitian  oleh  Puspitasari  dan Prayogo  (2016)  diketahui  bahwa  hasil
ekstraksi  dengan  metode . sokletasi  dapat menghasilkan  rendemen  yang  lebih  tinggi daripada metode maserasi, sehingga diharapkan  kadar  flavonoid  yang  didapat lebih tinggi.
Berdasarkan  uraian  diatas,  penelitian  ini perlu dilakukan dengan metode yang berbeda yaitu  sokletasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Penelitian  ini  untuk  mengetahui kandungan flavonoid t total pada buah gambas atau  oyong  ( Luffa  acutangula (L.)  Roxb) dengan  metode  spektrofotometri  visibel. Pelarut  etanol  96%  dipilih  karena  bersifat selektif,  netral,  tidak beracun,  absorbsi  yang baik,  dapat  mencegah . pertumbuhan  kapang dan bakteri, serta suhu yang diperlukan untuk pemekatan  lebih  rendah,  sehingga  dapat meminimalkan  resiko  penyusutan  senyawa aktif akibat pemanasan (Solichati dkk, 2010).

## METODE PENELITIAN Alat
Timbangan  analitik  (Ohaus,  EP214), timbangan  teknis  (Acis  BC  500),  alat sokletasi,  seperangkat  alat  spektrofotometer . UV-Vis  (Shimadzu  UV . mini-1240),  tabung reaksi,  beker  glass  (pyrex),  kuvet  (Helma), labu  ukur  10,0  ml  (pirex),  pipet  ukur  1,0  ml (pyrex),  cawan  porselin,  pipet  tetes,  batang pengaduk,  corong  kaca  (pyrex),  heating mantels (Biobase).

## Bahan
Buah  gambas  yang  merupakan  bahan utama  diserbuk  kemudian  diekstrak,  standar kuersetin  (Aldrich  Chemistry),  Etanol  96% (Medika), Etanol p.a ( E. Merck), CH 3 COOK (E.  Merck),  aquadestillata,  serbuk  Mg, H 2 SO 4 (E.  Merck)  ,  HCl  (E.  Merck),  NaOH (E. Merck).
Cara Kerja Determinasi buah gambas Determinasi  pada  buah  gambas  ( Luffa acutangula (L.)  Roxb.)  dilakukan  untuk memastikan . kebenaran  sampel  tanaman yang digunakan benar-benar ( Luffa acutangula (L.)  Roxb.).  Tanaman  gambas dideterminasi  di  Laboratorium  Biologi  FKIP Universitas Muhammadiyah Surakarta.

## Preparasi buah gambas
Buah  gambas  ±  15  kg  disortasi  basah, dikupas, dicuci,  diiris  tipis-tipis,  dikeringkan dengan sinar matahari dan ditutup menggunakan  kain  hitam  agar  proses pengeringan  lebih  cepat  dan  senyawa  yang terkandung  dalam  buah  gambas  tidak mengalami  kerusakan.  Dilakukan  Sortasi kering,  sampel  yang  sudah  kering  diserbuk kemudian diayak dengan ayakan 60 mesh.

## Ekstraksi buah gambas
Sampel  sebanyak  100  gram  dibungkus dalam  kertas  saring,  kedua  bagian  ujungnya diikat  dengan  benang,  dimasukan  kedalam tabung  soklet,  500  mL  pelarut  dimasukkan ke dalam labu alas bulat, dan 500 mL pelarut ke  dalam  tabung  soklet  berfungsi  untuk membasahi sampel. Lakukan ekstraksi sokletasi  dengan  suhu  40 o C  hingga  tetesan siklus tidak berwarna lagi atau warna tetesan konstan.  Filtrat  yang  didapat  dari  proses ekstraksi,  kemudian  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator  pada  suhu  40 o C  dan diuapkan sampai kental.
Uji Kualitatif

## Uji Shinoda
Ekstrak  buah  gambas  sebanyak  2  mL dipanaskan, kemudian ditambahkan 0,1 gram logam  Mg  dan  lima  tetes  HCl  pekat.  Hasil positif  terdapat  flavonoid  apabila  terbentuk warna jingga hingga merah (Ergina, 2014). Uji NaOH 10%
Beberapa  tetes  sampel  dalam  tabung reaksi ditambahkan beberapa tetes larutan . NaOH 10%, hasil positif jika terbentuk  warna  kuning  hingga  kecoklatan (Kusnadi dan Devi, 2017).
Uji H 2 SO 4 (pekat) Beberapa  tetes  sampel . dalam  tabung reaksi  ditambahkan  beberapa  tetes  larutan H 2 SO 4 (pekat),  diamati  perubahan  warna yang  terjadi.  Hasil  positif . jika  terbentuk warna  merah  gelap  hingga  coklat  atau kehitaman (Kusnadi dan Devi, 2017).
Uji Kuantitatif Pembuatan larutan blanko
Dimasukkan  3,0  mL  etanol  p.a;  AlCl 3 10%; CH 3 COOK  1M  0,2 mL; ditambahkan aquadest hingga 10 mL.
Preparasi  larutan  baku  kuersetin  1000 ppm
Sebanyak 10,0 mg baku standar kuersetin  dimasukkan  dalam  labu . ukur  10 mL dan ditepatkan dengan etanol p.a hingga tanda batas, hingga konsentrasi menjadi 1000 ppm.
Penentuan operating time kuersetin Penentuan operating  time pada  larutan baku  kerja  kuersetin  7  ppm,  diukur  pada panjang gelombang 428 nm dari 0 hingga 45 menit  dengan  interval  waktu  1  menit. Diperoleh  kurva a hubungan  absorbansi i vs waktu.
Penentuan panjang gelombang maksimum Larutan  baku  kerja  kuersetin  yang  telah didiamkan  selama operating  time di  tempat gelap,  kemudian  diukur  pada  λ  400-475  nm. Diperoleh  kurva  hubungan  antara  panjang gelombang vs absorbansi.

## Penentuan kurva baku kuersetin
Larutan  baku  induk  dipipet  sebanyak 0,04  mL,  0,05  mL,  0,06  mL,  0,07  mL,  0,08 mL,  0,09  mL,  0,10  mL.  Selanjutnya dimasukkan  kedalam  labu  ukur  10,0  mL. Larutan  ditambah  dengan  3  mL  etanol  p.a, 0,2  mL  AlCl 3 10%  dan  CH 3 COOK  1M. Volume  ditepatkan  dengan  aquadest  sampai tanda  batas,  sehingga  diperoleh  seri  larutan baku dengan konsentrasi 4,5,6,7,8,9,10 ppm. Larutan  dapat  diukur  pada  spektrofotemeter setelah operating time pada panjang gelombang maksimal, mulai dari konsentrasi terkecil.
Penetapan  kadar  flavonoid  pada  buah gambas
Sebanyak 0,25 gram ekstrak kental buah gambas  ditambahkan  dengan  25,0  mL aquadest,  dikocok  hingga  larut.  Diambil  1 mL, ditambahkan 3,0 mL etanol p.a, 0,2 mL AlCl 3 10%,  0,2  mL  CH 3 COOK  1M,  dan volume  ditepatkan  dengan  aquadest  hingga 10 mL. Larutan diletakkan pada tempat gelap hingga  mencapai operating  time ,  kemudian pengukuran  absorbansi dilakukan pada panjang  gelombang  maksimal  menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode ekstraksi yang digunakan adalah ekstraksi  sokletasi.  Pada  ekstraksi  sokletasi, simplisia  diletakkan  pada  tabung  soklet  dan ekstrak  diletakkan  di  labu.  Pelarut  menguap akibat  pemanasan,  dan  uap  naik  masuk  ke tabung  pendingin.  Hasil  dari  kondensasi jatuh  pada  simplisia  sehingga  ekstraksi berlangsung  terus  menerus  dengan  pelarut yang jumlahnya tetap (Hanani, 2014).
Metode  ekstraksi  sokletasi  memiliki kelebihan  yaitu  proses  ekstraksi  yang berlangsung  terus-menerus  dan  sampel diekstraksi  dari  pelarut  murni  dari  hasil kondensasi, sehingga rendemen yang didapatkan  lebih  banyak  daripada  metode ekstraksi  maserasi  (Puspitasari  dan  Prayogo, 2016).
Menggunakan pelarut etanol 96% karena bersifat  selektif,  netral,  tidak  beracun, absorbsi  baik,  dapat  mencegah  pertumbuhan kapang  dan  bakteri,  serta  suhu  yang diperlukan  untuk  pemekatan  lebih  rendah, sehingga dapat meminimalkan risiko penyusutan senyawa aktif . akibat pemanasan (Solichati  dkk,  2010).  Pelarut  etanol  96% lebih  dipilih  dari  pada  etanol  70%  karena lebih mudah menguap sehingga membutuhkan  suhu  yang  tidak  terlalu  tinggi untuk  proses ekstraksi  sokletasi. Etanol  70% memiliki  kadar  air  30% sehingga  lebih  lama untuk  diuapkan  dari  pada  etanol  96%  yang memiliki kadar air lebih sedikit.
Ekstraksi  berlangsung  hingga  warna pelarut  sudah  konstan  yaitu  berwarna  putih kekuningan, sehingga dianggap bahwa seluruh  zat  dalam  sampel  gambas  sudah terekstrak  semua.  Hasil  ekstraksi  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 40 o C  dengan  kecepatan 200  rpm,    setelah dikentalkan  dengan rotary  evaporator tidak boleh  diuapkan  sampai  terlalu  kental  karena dapat  menempel  di  labu  dan  tidak  bisa dituang.
Filtrat  dikentalkan  namun  masih  dapat dituang,  selanjutnya  filtrat  ditampung  dalam cawan  porselen  diuapkan  diatas waterbath elektrik  pada  suhu  50 o C  hingga  diperoleh ekstrak  kental  dengan  bobot  konstan.
Pemekatan  dilakukan  agar  pelarut  dan ekstrak  yang  diperoleh  dapat  dipisahkan. Hasil  ekstraksi  buah  gambas  mendapatkan rendemen  replikasi  1  sebanyak  25,1%, replikasi  2  sebanyak  24,2%,  dan  replikasi  3 sebanyak 24,5%. Karakteristik yang dihasilkan  yaitu  ekstrak  berbentuk  kental, baunya khas, dan warnanya coklat kehijauan. Hasil ektraksi berada di tabel 1.
Tabel 1. Hasil ekstraksi buah gambas Replikasi Berat bahan awal Berat ekstrak yang didapat % Rendemen 1 100 gram 25,1 gram 25,1% 2 3 100 gram 100 gram 24,2 gram 24,5 gram 24,2% 24,5% Tabel 2. Hasil Uji Kualitatif Metode Warna Hasil Uji Shinoda Jingga Positif Pereaksi NaOH 10% Pereaksi H 2 SO 4 (Pekat) Kuning Coklat Kehitaman Positif Positif
Analisa  kualitatif  senyawa  flavonoid bertujuan  untuk  mengetahui  keberadaan senyawa  flavonoid  dalam  sampel  buah gambas.  Hasil  ekstraksi  dapat  dilihat  pada tabel 2.
Gambar 1.  Pembentukan kompleks kuersetin dengan AlCl 3 (Salmia, 2016)
Penentuan kandungan
senyawa flavonoid  total  bertujuan  untuk  menentukan kadar  senyawa  flavonoid  total  yang  terdapat dalam  buah  gambas  (Luffa  acutangula  (L.) Roxb). Penentuan flavonoid dilakukan dengan  menggunakan  Spektrofotometri  UV- Vis.
Prinsip penetapan kadar flavonoid metode  kolorimetri  adalah  terbentuknya kompleks  antara  aluminium . klorida  dengan gugus  keto  pada  atom  C-4  dan  gugus hidroksi  pada  atom  C-3  atau  C-5  yang bertetangga  dari  golongan  flavon  dan flavonol (Azizah, 2014).
Kuersetin dipilih sebagai standar, karena kuersetin termasuk senyawa golongan flavonol  yang  jumlahnya  paling  banyak, kuersetin dan glikosidanya . berjumlah sekitar 60%  hingga  75%  dari  flavonoid  total (Anggorowati dkk., 2016).
Penentuan operating  time diukur  dari menit  1  hingga  45  dengan  interval  waktu  1 menit  pada  panjang  gelombang  428  nm. Hasil  absorbansi  stabil  diperoleh  pada  menit ke-28  hingga  menit  ke-32.  Dipilih  operating time pada  menit  ke-30  karena  sesuai dengan operating  time teoritis  yaitu  pada menit ke-30 (Chang dkk.,2002).
Analisis  secara  kuantitatif . dilakukan pada  panjang  gelombang  maksimal,  karena pada  saat  gelombang  maksimal  memiliki kepekaan yang maksimal sehingga perubahan  serapan  untuk  setiap  konsentrasi paling  besar,  bentuk  kurva  serapan  yang dihasilkan  berbentuk  datar,  dan  jika  diulang kesalahan  yang  dapat  terjadi  akan  kecil, hukum  Lambert-Beer  dapat  terpenuhi.  Hasil pengukuran  panjang  gelombang  maksimal yaitu 429,5 nm.
Hasil  absorbansi  kurva  baku  dapat dilihat pada tabel 3. Hasil menunjukkan tidak ada  absorbansi  yang  dibawah  0,2  dan  diatas 0,8. Serapan yang dihasilkan oleh konsentrasi  seri  kurva  baku  seharusnya  0,2- 0,8 untuk menghindari kesalahan fotometrik Tabel 3. Hasil seri kurva baku kuersetin Konsentrasi (ppm) Absorbansi Nilai regresi linier 4 5 6 7 8 9 10 0,250 0,289 0,330 0,371 0,412 0,460 0,504 y = 0,0424x + 0,0772 r = 0,999

## Gambar 2. Grafik linearitas kurva baku
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  kurva baku yang dihasilkan linier. Kurva baku yang linier dapat diperoleh jika konsentrasi dengan absorbansi  berbanding  lurus  proporsional, yang  artinya  konsentrasi  meningkat  diikuti dengan  peningkatan  absorbansi.  Hubungan yang kuat antara konsentrasi dengan absorbansi dinyatakan dengan nilai r (koefisien  korelasi)  yang  nilainya  mendekati +1.  Absorbansi  larutan  sampel  juga  harus pada  rentang  absorbansi  seri  kurva  baku. Regresi  linier  pada  kurva  baku  digunakan untuk menghitung kadar sampel. Perhitungan regresi  linier  didapatkan  persamaan  Y= 0,0424x + 0,0772 dengan nilai r= 0,999.
Penetapan  kadar  dilakukan  pada  menit ke-30  (OT),  diukur  serapannya  dengan panjang  gelombang  maksimal  429,5  nm. Penetapan  kadar  flavonoid  total  dilakukan  3 kali replikasi dan triplo.
Tabel 4. Kadar flavonoid dalam ekstrak buah gambas
Hasil  pada  tabel  4  menunjukkan  rata- rata  kadar  flavonoid  total  ekstrak  buah gambas  9,897  0,11  mgQE/gram  ekstrak dengan %KV 1,14% setara dengan 0,9897%b/b.  Nilai  koefisien  variasi  yang baik adalah kurang dari 2% (Harmita, 2004). Hasil  pada  tabel  4  menunjukkan  bahwa  data diperoleh dengan ketelitian kerja yang baik.
Pada penelitian sebelumnya telah dilakukan  oleh  Estikawati  dan  lindawati (2019), kandungan flavonoid total pada buah gambas Luffa  acutangula (L.),  setelah  di maserasi menggunakan etanol 70% diperoleh hasil flavonoid total yaitu 10,03% b/b.
Penelitian  tersebut  dapat  dibandingkan bahwa  kadar  flavonoid  total  dengan  metode ekstraksi  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  70%  lebih  baik  daripada  kadar flavonoid metode sokletasi dengan menggunakan  etanol  96%.  Berdasarkan  segi kepolaran  mempengaruhi  hasil  ekstraksi, dimana etanol 96% memiliki kepolaran lebih rendah  dari  pada  etanol  70%.  Etanol  70% lebih  polar  dapat  mengekstrak  senyawa flavonoid  yang  bersifat  polar  lebih  banyak dari pada etanol 96%.
Hasil  penetapan  kadar  flavonoid  total dari  kedua  penelitian  yang  menggunakan metode  ekstraksi  berbeda-beda,  memiliki hasil  yang  berbeda-beda.  Metode  maserasi memiliki kelebihan sederhana tidak menggunakan alat-alat yang rumit sedangkan kelemahannya  waktu  yang  diperlukan  lebih lama  serta  penggunaan  pelarut  yang  tidak efisien (Kiswandono, 2011).
Kelebihan dari metode ekstraksi sokletasi  penyarian  yang  dilakukan  kontinyu dan  pelarut  yang  digunakan  tidak  banyak. Pelarut  dipanaskan  sehingga  menguap  dan nantinya akan turun membasahi sampel yang letaknya terpisah dari pelarut. Proses tersebut terus  berulang sampai  ekstraksi  selesai. Kelemahan  sokletasi  yaitu  proses  ekstraksi berjalan dengan pemanasan, sehingga berisiko  merusak senyawa  kimia  dalam sampel (Muliati, 2014).
Hasil  kadar . flavonoid  total dengan metode  sokletasi  tidak  lebih  baik  dari  pada maserasi,  hal  ini  dapat  disebabkan  oleh
y = 0,0424x + 0,0772 r = 0,999 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0 5 10 15 Grafik Linieritas Kurva Baku Konsentrasi
Replikasi Triplo Kadar mgQE/g ekstrak Rata- rata % KV 1 1 2 3 9,934 10,028 9,981 9,981 2 1 2 3 9,722 9,769 9,816 9,769 1,14 3 1 2 3 9,887 9,958 9,981 9,942 Rata-rata kadar 9,897 ± 0,11 mg/ gram ekstrak dengan %KV 1,14%
A b so rb an si
faktor  pemanasan.  Hasil  penelitian  ini membuktikan  bahwa  flavonoid  tidak  tahan panas  meskipun  diekstraksi  menggunakan suhu  dibawah  50 o C.  Hal  ini  tidak  sejalan dengan . penelitian  oleh  Sa’adah  dkk  (2017) yang  menyatakan  bahwa  suhu  50 o C  relatif aman dan mencegah kerusakan pada senyawa metabolit sekunder tertentu, termasuk flavonoid. Hal ini juga tidak sejalan dengan  penelitian  Riadini  dkk  (2015)  yang memberi  saran  jika  suhu  yang  digunakan untuk  ekstraksi  sokletasi  sebaiknya  kurang dari  60 o C,  karena  dapat  berpengaruh  pada kandungan senyawa kimia dalam ekstrak.
Kadar  flavonoid  total  dari  buah  gambas ( Luffa  acutangula L.)  yang    diperoleh  dapat
memiliki  hasil  yang  berbeda-beda,  bisa disebabkan oleh perbedaan metode ekstraksi, perbedaan pelarut yang digunakan, perbedaan  alat  yang  digunakan,  dapat  juga dipengaruhi  oleh  perbedaan  laboratorium tempat pengujian.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian pada sampel buah gambas mengandung flavonoid total sebesar 9,897±0,11 mgQE/gram ekstrak dengan nilai koefisien variasi 1,14%.

## Daftar Pustaka
Anggorowati,  A.D.,  Priandini,  G.,  Thufail.  2016.  Potensi  daun  alpukat  (persea  americana miller) sebagai minuman teh herbal yang kaya antioksidan. Industri Inovatif, 6(1): 1-7
Azizah,  D.N,  Kumolowati,  E.,  Faramayuda,  F.,  2014.  Penetapan  kadar  flavonoid  metode AlCl 3 pada  ekstrak  metanol  kulit  buah  kakao  (Theobroma  cacao  L.).  Kartika  Jurnal Ilmiah Farmasi, 2 (2): 45-49
Chang,  C.  C.,  Yang,  M.  H.,  Wen,  H.  M.,  Chern,  J.  C.,  2002.  Estimation  of  total  flavonoid content  in  propolis  by  two  complementary  colorimetric  methods.  Journal  of  Food  and Drug Analysis,10:178-182
Ergina, Nuryanti, S., Puspitasari,  I.D., 2014. Uji  kualitatif senyawa metabolit  sekunder pada daun palado (Agave angustifolia) yang diekstraksi dengan pelarut air dan etanol. Jurnal Akademika Kimia, 3(3): 165-172
Estikawati,  I.,  Lindawati,  N.Y.,  2019.  Penetapan  kadar  flavonoid  total  buah  oyong  (Luffa Acutangula (L.) Roxb.) dengan metode spektrofotometri  Uv-Vis. Jurnal Farmasi  Sains dan Praktis, 5 (2): 96-105
Harmita, 2004,  Petunjuk pelaksanaan validasi metode dan cara perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian, 1(3): 117-135
Kiswandono, A.A., 2011. Perbandingan dua ekstraksi yang berbeda pada daun kelor (Moringa Oleifera, lamk) terhadap rendemen kestrak dan senyawa bioaktif yang dihasilkan. Jurnal Sains Natural Nusa Bangsa, 1(1): 45-51
Kusnadi, K., Devi, E.T., 2017.  Isolasi dan identifikasi senyawa flavanoid pada ekstrak daun seledri  (Apium  graveolens  L.)  dengan  metode  refluks.  Pancasakti  Science  Education Journal, 2(1): 56-67
Muliati, F., 2014, Uji aktivitas antiinflamasi ekstrak daun paku Pyrrosia Lanceolata (l.) farw. terhadap  penghambatan  denaturasi  protein  secara  in  vitro.  Skripsi,  Program  Studi Farmasi Uin Syarif Hidayatullah, Jakarta
Purwanti, S., 2012. Efek antihiperlipidemia ekstrak etanol 70% buah oyong (luffa acutangula (l.) roxb.) pada tikus putih jantan yang diberi diet tinggi kolesterol dan lemak. Skripsi, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Indonesia, Depok
Puspitasari, A.D., Prayogo, L.S., 2016. Perbandingan metode ekstraksi maserasi dan sokletasi terhadap kadar flavonoid total  ekstrak etanol daun kersen (Muntingia calabura). Jurnal Ilmu Farmasi & Farmasi Klinik, 13(2): 16-23
Riadini,  R.K.,  Sidharta,  B.B.R.,    Pranata,  F.S.,  2015.  Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun sambung  nyawa(Gynura  procumbens  (Lour.)  Merr.)  berdasarkan  perbedaan  metode ekstraksi  dan  umur  panen.  Jurnal  Teknobiologi,  Fakultas  Teknobiologi  Universitas Atma Jaya, Yogyakarta
Salmia.  2016.  Analisis  kadar  flavonoid  total  ekstrak  kulit  batang  kedondong  bangkok (Spondias  dulcis)  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis.  Skripsi,  Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Allaudin, Makassar
Sa’adah,  H.,  Nurhasnawati,  H.,  Permatasari,  V.,  2017.  Pengaruh  metode  ekstraksi  terhadap kadar  flavonoid  ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  (Eleutherine  palmifolia(L.)Merr) dengan  metode  spektrofotometri.  Jurnal  Borneo  Journal  of  Pharmascientech,  01(01): 2541 – 3651
Sari,  H.T.,  2015.  Pengaruh  pemberian  infusa  buah  gambas  (Luffa  acutangula  L)  terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  tikus  putih  yang  diinduksi  aloksan.  Skripsi,  Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta
Solichati,  E.L.,  Kusuma,  A.M.,  Diniatik.,  2010.  Aktivitas  antivirus  ekstrak  etanol  daun bandotan  (Ageratum  conyzoides  L.)  terhadap  virus  newcastle  disease  beserta  profil kromatografi lapis tipis. Pharmacy, 07(01): 64-75
Winarsi, H., 2007. Antioksidan Alami & Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta