## SKRINING ANTIOKSIDAN DAN ANTIKANKER EKSTRAK ETANOL DAUN KARAMUNTING  ( RHONOMYRTUS
TOMENTOSA L.) SEBAGAI OBAT ALTERNATIF
Submitted : 26 Juni 2020 Edited : 22 Desember 2020
Accepted : 29 Desember 2020
Marwati, Mirnawati Salampe, Asril Burhan, Megawati, Khairuddin, A.Adi Al Ma’aridj Naneng, Nova Oktaviani
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar Email : watimar514@gmail.com

## ABSTRACT
Karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) is one of the plants used as a traditional medicine  that  is  widely  spread  throughout  Indonesia,  especially  from  Toraja,  which  has  the potential  as  antioxidants  and  anticancers  with  the  content  of  phenolic  compounds  and flavanoids. This study aims to look at total flavonoids as well as antioxidant activity and toxicity of  karamunting  leaf  extract.  Simplisia  karamunting  leaf  research  method  is  extracted  by maceration  method  using  ethanol  70%,  testing  antioxidant  activity  with  ABTS  method  and toxicity test with BSLT method. The results of the study obtained a total phenolic 3.496% , The acquisition of antioxidant activity of ethanol extract of caramel leaves with ic50 value of 24,451 bpj and the acquisition of toxicity test of ethanol extract of caramel leaves with a value of LC50 of  31.80  bpj  against  shrimp  larvae.  Based  on  the  results  obtained  ethanol  extract  of  caramel leaves has antioxidant activity and has a very strong toxicity effect.
Keywords : Antioksidan, Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk, Toksisitas.

## PENDAHULUAN
Kanker
merupakan penyebab kematian  utama  di  dunia,  tercatat  7,6  juta kematian pada tahun 2016, dan diperkirakan semakin  meningkat  hingga  mencapai  13,1 juta  kematian  pada  tahun  2020 (8) .  Health Organization (WHO) melaporkan lima besar jenis  kanker  yang  ditemukan  pada  laki-laki di  dunia,  yaitu  kanker  paru,  prostat, kolorektum,  kanker  perut,  dan  kanker  hati. Sedangkan  pada  perempuan  yang  terbanyak adalah  kanker  payudara,  kolorektum,  paru- paru,  serviks,  serta  kanker  perut  dan  di Indonesia penyakit kanker merupakan urutan  ke  6  dari  pola  penyakit  nasional  dan setiap  tahunnya  100  kasus  terjadi  diantara 100.000 penduduk (9)
Terapi herbal sebagai alternatif penyembuhan pada segala penyakit
termasuk  penyakit  kanker  bisa  menjadi pilihan.  Selain  murah  dan  minim  efek samping  dalam  jangka  panjang,  juga  dapat memberikan  kesembuhan  secara  total.  Hal ini  sesuai  dengan  konsep  pengobatan  terapi herbal,  yaitu  tidak  hanya  mengobati  bagian yang  sakit,  tetapi  memberikan  kesembuhan total dengan cara memperbaiki sistem tubuh yang  rusak  secara  keseluruhan  sehingga sistem tersebut dapat menjalankan fungsinya dengan normal seperti sediakala (7)
WHO  merekomendasi  penanganan obat  tradisional  herbal  dalam  pemeliharaan kesehatan  masyarakat,  pencegahan  dan pengobatan penyakit, terutama untuk penyakit  kronis,  penyakit  degeneratif  dan kanker. WHO juga mendukung upaya-upaya dalam  peningkatan  keamanan  dan  khasiat dari  obat  tradisional (9) .  Tanaman  atau
tumbuhan  tradisional  herbal  yang  dapat dimanfaatkan sebagai obat adalah tumbuhan Melastoma  malabathricum L.    yang  lebih dikenal  di  Indonesia  khususnya  daerah
Kalimantan Timur dengan nama Karamunting.
Berdasarkan  penelusuran  beberapa literatur, buah, batang dan daun karamunting mengandung  senyawa,  saponin,  kuinon, tanin,  dan  steroid  senyawa  flavonoid  dan terpenoid (1) .  Senyawa  flavonoid  diketahui mampu  menginduksi  terjadinya  apoptosis. ekstrak buah karamunting mampu menurunkan kadar kolesterol dan meningkatkan kadar High Density Lipoprotein (HDL) dan mencegah pembentukan  arteroklorosis (2) ekstrak  daun karamunting  memiliki  aktivitas  antioksidan yang besar (2) .
Berdasarkan  beragam  uraian  di  atas tentang  aktivitas  biologi  dari  tanaman karamunting, Oleh karena itu,  penelitian ini dilakukan  untuk  menentukan  besarnya  nilai IC 50 dari ektrak tumbuhan daun karamunting melalui uji aktivitas antioksidan, uji skrining awal  dan  uji  aktivitas  antikanker  dengan metode  BSLT  sebagai  data  awal  untuk memberi informasi potensi daun karamunting sebagai obat herbal antikanker. Penelitian ini bertujuan untuk melihat  total  flavanoid  serta  aktivitas antioksidan  dan  toksisitas  ekstrak  etanol daun karamunting.

## METODE KERJA
Pembuatan Ekstrak Daun Karamunting.
Serbuk  simplisia  daun  karamunting ditimbang  sebanyak  1000  gram,  kemudian diekstraksi  menggunakan   70% sebanyak 2 liter  dengan  metode  maserasi  menggunakan perbandingan  1:10.  sampel  dimasukkan kedalam wadah maserasi kemudian ditambahkan
masing-masing pelarut secukupnya  untuk  proses  pembasahan,  lalu didiamkan  selama  ±  30  menit  setelah  itu ditambahkan  sisa  pelarut  hingga  semua
simplisia  terendam  sempurna,  kemudian disimpan  pada  suhu  kamar,  ditempat  yang terlindung dari cahaya matahari selam 3 x 24 jam dan diaduk tiap 8 jam. Setelah 3 hari di saring didapatkan filtrate dan residu, masing masing  residu  yang  diperoleh  kemudian diremaserasi  kembali  dengan  perlakuan yang  sama  seperti  sebelumnya  sampai pelarut menjadi bening. Filtrat yang didapatkan kemudian diuapkan menggunakan alat rotary evaporator sehingga  didapatkan  masing  masing  ekstrak kental.

## Penetapan kadar Flavanoid Total
Sebanyak  10  mg  masing-masing ekstrak  ditimbang  dan  dilarutkan  dalam  10 mL  etan  ol  p.a  sehingga  diperoleh konsentrasi  1000  ppm,  sebanyak  2  mL larutan  ekstrak  etanol  ditambahkan  dengan 0,1 mL AlCl3 10%, 0,1 mL natrium asetat 1 M  dan  dicukupkan  volume  sampai  5  mL dengan  etanol  p.a.  Diinkubasi  selama  30 menit,  absorbansi  dari  larutan  standar kuarsetin diukur
menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Flavonoid  total dihitung  dengan  menggunakan  persamaan regresi  linear  dari  kurva  kalibrasi  kuarsetin yang telah diukur sebelumnya.
kadarnya.  dengan  rumus  kadar flavonoid = 𝑋 𝑥 𝑉𝑥𝐹𝑝 𝑚𝑔 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑋 100 % %

## Pengukuran Aktivitas antioksidan dengan
ABTS Ekstrak Daun Karamunting
pengujian  dilakukan  dengan  cara memipipet  larutan  stok  100  bpj  dengan volume  10µl,  20µl,  30µl,  40µl,  50µl ditambahkan  60  µl  larutan  ABTS  dan dicukupkan  volumenya  hingga  200  µl dengan  etanol  p.a  ke  dalam    well  plate  96. Kemudian  dihomogenkan  dan  di  inkubasi selama 30 menit pada suhu ruangan, setelah diinkubasi  di  ukur  serapan  larutan  sampel dengan  menggunakan  mikroplate  reader pada panjang gelombang 515 nm, pengujian
dilakukan sebanyak 3 replikasi. Perhitung % aktivitas antioksidan dengan rumus :

## 𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑎𝑛𝑡𝑖𝑜𝑘𝑠𝑖𝑑𝑎𝑛  =
𝐴𝑏𝑠 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 −𝐴𝑏𝑠 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜
× 100%
Penentuan  aktivitas  Toksisitas  ekstrak daun karamunting  dengan Larva Udang Artemia salina Leac
Sepuluh  ekor  larva  dimasukkan  ke dalam  tiap-tiap  vial  uji  yang  telah  diberi sedikit  air  laut  dan  ditambahkan  satu  tetes larutan  ragi  sebagai  nutrisi  larva,  kemudian volume  air  laut  dicukupkan  sampai  10  mL, sedangkan  larutan  kontrol  hanya  berisi  air laut, satu tetes larutan ragi dan larva udang. Vial-vial uji kemudian didiamkan pada suhu kamar  selama  24  jam.  Setiap  perlakuan diulang  sebanyak  tiga  kali  (triplo).  Jumlah larva  yang  hidup  dihitung  dan  ditentukan persentase kematian larva untuk mengetahui nilai LC50.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Rendamen Daun Ekstrak Karamunting
Setelah  dilakukan  ekstraksi  daun karamunting  dengan  menggunakan  pelarut etanol  maka  didapatkan  rendamen  seperti pada tabel 1.
Pada  pengukuran  senyawa  flavanoid total  dibuat  sebanyak  tiga  replikasi  untuk keperluan akurasi data (table 2). Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  diperoleh kadar  fenolik  total  ekstrak  etanol  Daun
Karamunting  sebesar  3,496  %,  yang  artinya dalam  setiap  gram  ekstrak  etanol  Daun Karamunting    terdapat  fenolik  yang  setara dengan 3,496 %, kuarsetin

## Hasil  pengukuran  Antioksidan  daun karamunting
Pengujian aktivitas antioksidan pada penelitian  ini  menggunakan  metode  ABTS hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  dari ekstrak dapat dilihat pada tabel 3.
Pada  pembuatan  kurva  kalibrasi dengan  metode  AlCl3  digunakan  kuersetin sebagai pembanding karena kuersetin merupakan  flavonoid  golongan  flavonol yang  mempunyai  gugus  keto  pada  C-4  dan memiliki gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5  yang  bertetangga  dari  flavon  dan flavonol.  Panjang  gelombang  maksimum yang  dihasilkan  dari  pengukuran  kuersetin adalah 420 nm.   Dari hasil yang didapatkan total  flavanoid  yang  terdapat  pada  ekstrak daun  karamunting  sebesar  3.496%  b/b dimana  semakin  besar  total  fenolik  didalam ekstrak  maka  semakin  besar  pula  potensi sebagai antioksidan.
Tabel 1. Hasil Perhitungan Rendemen Sampel Bobot simplisia Berat ekstrak (g) Rendemen (%) Ekstrak Etanol 1000 g 31,27 g 15,635 %
Tabel 2. Hasil Pengukuran Flavanoid Total    Ekstrak Etanol Daun Karamunting
Ekstrak Replikasi Absorbansi Flavanoid Total (%) Rata-Rata Flavanoid Total (%) Ekstrak Etanol 70% I 0.325 1,186% 3.496% II 0.362 1,217 % III 0.321 1,093 %
Tabel 3. Hasil uji antioksidan ekstrak Etanol Daun karamunting Konsentrasi (bpj) Replikasi Absorbansi Rata-rata penghambatan % inhibisi Nilai IC 50 Blanko 1 2 3 0.853 0.844 0.826 0.841 ` 24,451 µg/mL 5 1
2 3 0.763 0.732 0.738 0.744 11.494 10 1 2 3 0.625 0.618 0.667 0.636 24.296 15 1 2 3 0.578 0.546 0.573 0.565 32.738 20 1 2 3 0.525 0.498 0.516 0.513 39.001 25 1 2 3 0.399 0.403 0.409 0.403 52.001
Tabel 4. Hasil uji antioksidan pembanding kuarsetin Konsentrasi (bpj) Replikasi Absorbansi Rata-rata penghambatan % inhibisi Nilai IC 50 Blanko 1 2 3 0.811 0.877 0.826 0.838
` 3,7345 µg/mL 1 1
2 3 0.664 0.707 0.797 0.723 13.763 2 1 2 3 0.571 0.596 0.676 0.614 26.691 3 1 2 3 0.444 0.473 0.494 0.470 43.874 4 1 2 3 0.434 0.402 0.348 0.395 52.904 5 1 2 3 0.153 0.356 0.385 0.298 64.439
Tabel 5. Hasil uji Sitotoksik ekstrak etanol daun karamunting terhadap Larva Udang
Pengamatan Replikasi Kontrol Ekstrak etanol 70% 5 ppm 10 Ppm 15 ppm 20 ppm 25 Ppm % Mortilitas 0% 23,3% 40% 60% 70% 73,33%
Berdasarkan  hasil  absorbansi  pada tabel  3,  setelah  perhitungan  IC 50 maka diperoleh  nilai  (IC 50 )    24,451 µg/mL,  suatu senyawa  dinyatakan  sebagai  antiradikal bebas  sangat  kuat  apabila  nilai  IC50<  10 µg/mL, kuat apabila nilai IC50 antara 10-50 µg/mL,  sedang  apabila  nilai  IC50  berkisar antara  50-100  µg/mL,  lemah  apabila  nilai IC50  berkisar  antara  100-250  µg/mL  dan tidak aktif apabila IC50 diatas 250 µg/mL (6) , dari  pernyataan  diatas  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  daun  karamunting  tergolong dalam  antioksidan  dengan  intensitas  yang sangat  kuat  (<50  µg/mL)  karena  diperoleh nilai  IC50  sebesar  24,451 µg/mL .  Pada umumnya  senyawa  flavnoid  mempunyai sifat  antioksidan  yang  kuat  oleh  sebab  itu ekstrak etanol daun karamunting
mempunyai  potensi  sebagai  antioksidan alami.  Antiokidan  erat  kaitanya  dengan antikanker  dimana  antioksidan  mempunyai mekanisme  kerja  menangkap  radikal  bebas yang dapat menyebabkan penyakit kanker.
Berdasarkan  hasil  tabel  5  kematian larva  udang  ekstrak  etanol  70%  daun karamunting  setelah  24  jam,  terlihat  jumlah larva  yang  mati  pada  konsentrasi  5  ppm, untuk  replikasi  1-3  total  larva  yang  mati adalah  7  dan  persen  mortalitasnya  23,3%. Pada konsentrasi 10 ppm, untuk replikasi 1- 3 total larva yang mati adalah 12 dan persen mortalitasnya  40%.  Pada  konsentrasi  15 ppm,  untuk  replikasi  1-3  total  larva  yang mati  adalah  18  dan  persen  mortalitasnya 60%.  Pada  konsentrasi  20  ppm,  untuk replikasi 1-3 total larva yang mati adalah 21 dan  persen  mortalitasnya  70%.  Pada konsentrasi 25 ppm, untuk replikasi 1-3 total larva  yang  mati  adalah  22  dan  persen
mortalitasnya  73,33%.  Sedangkan  untuk kontrol  air  laut  tidak  ada  larva  Artemia salina yang mati.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh dapat  disimpulkan  bahwa  semakin  rendah nilai  LC50  maka  semakin  besar  tingkat toksisitasnya  sehingga  ekstrak  etanol  70% merupakan  ekstrak  dengan  nilai  LC50 tertinggi. termasuk dalam kategori toksisitas kuat karena berada pada rentang 0-100 ppm.
Suatu  ekstrak  dapat  dinyatakan  aktif, poten atau positif apabila memiliki nilai IC 50 sebagai berikut (3) :
Tabel 6 . Kategori Nilai IC 50 Kategori Nilai IC 50 Sangat Toksik IC 50 <20 ppm Toksik 21-200 ppm Toksik Lemah 201-500 ppm Tidak Toksik IC 50 >500 ppm
Ekstrak  etanol  daun  karamunting memiliki senyawa  metabolit sekunder yang berperan  sebagai  antikanker  yaitu  Senyawa flavonoid,  saponin  dan  tanin.  Senyawa Flavanoid memiliki senyawa kuersetin yang secara  signifikan  mampu  menghambat proliferasi  sel (9,11) .Senyawa  saponin  dapat berpotensi sebagai antikanker dengan menghambat  pembentukan  Bcl-2  yang diekspresikan  terlalu  tinggi,  menginduksi protein caspase-3 yang diekspresikan terlalu rendah,  meningkatkan  ekspresi  p53,  dan dapat pula memicu G1 cell cycle
arrest (7) .Golongan  senyawa  Tanin  yang berguna sebagai antikanker seperti mekanisme flavonoid yaitu pengaktifan jalur apoptosis sel kanker. Tanin mampu menghambat  poliferasi  kanker  yang  salah
satunya  dengan  menginhibisis  aktivitas protein  kinase  sehingga  menghambat  jalur transduksi  sinyal  dari  membran  ke  inti  sel. Tanin  juga  menghambat  aktivitas  reseptor tirosin kinase yang mengikat berperan dalam pertumbuhan  keganasan  sel  kanker.  Dan tannin  berfungsi  mengurangi  resistensi tumor terhadap agen kemoterapi (3,11) .

## SIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa :
Ekstrak  etanol  daun  karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) mengandung  total  flavanoid  3.496%,nilai IC
50 sebesar  24,451  bpj  dan  memiliki  efek toksisitas  terhadap  Larva  Udang  dengan nilai  IC 50 31,80  bpj  dalam  kategori  sangat kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kusuma, I., Ainiyati, N, Suwinarti, W. 2015.
Search  for  Biological  Activities  drom  an Invasive  Shrub  Species  Rose  Myrtle (Rhodomyrtus tomentosa) . Jurnal Nusantara Bioscience . 8(1).
2. Lavanya,  G.,  Voravutthikunchai,  S.P., Towatana, N.H. 2012. Acetone Extract from Rhodomyrtus  tomentosa: A  Potent  Natural Antioxidant. Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine . Volume 2012. Article ID 535479.
3. Meiyanto, E., Susidarti, R.A., Handayani, S., Rahmi  F.  2008.  Ektrak  Etanolik  Biji  Buah Pinang  ( Areca  catechu L.)  mampu menghambat Poliferasi dan memacu Apoptosis  sel  MCF-7. Majalah  Farmasi
Indonesia 19 (1), 12-19.
4. Meyer,  U.N.,  N.R.,  Ferigni,  J.E.,  Putnam, L.B.,  Ja  Cobsen,  D.E.,  Nichols,  and  J.L., Melaughlin,  1982, Brine  shrimp:  A Covenient General Bioassay for Active Plant Constituent, Planta Medika, 45:31-34.
5. Mordmuang, A. dan Voravuthikunchai, S.P. 2015. Rhodomyrtus  tomentosa (Aiton)
Hassk. leaf extract: An alternative approach
for  the  treatment  of  staphylococcal  bovine mastitis. Research  in  Veterinary  Science 102 . 6. Phongpaichit, S., Nikom, J., Rungjindamai, N., Sakayaroj, J., Hutadilok  Towatana,  N., et  a l.  (2007). Biological  Activities  of  Extracts  From Endophytic Fungi Isolated From Garcinia  Plant. FEMS Immunology  & Medical  Microbiology ,51(3),  517  – 525.
7. Raju  dan Rao., 2004 ,  Diosgenin,  a  Steroid Saponin  of  Trigonella  foenum  graceum (Fenugreek). Inhibits Azoxymethane- Induced  Aberrant  Crypt  Foci  Formation  in F344  Rats  and  Induces  Apotosis  in  HT-29 Human  Colon  Cancer  Cells.  Cancer Epidemiology,  Biomarker  and  Prevention, 13: 1392 8. Suryo,  J.  2010.  Herbal  Penyembuh Gangguan Sistem Pernapasan: Pneumonia,  Kanker  Paru-Paru,  TB, Bronkitis dan Pleurisi. Bentang Pustaka
9. Wirahadi,  A.  Kusuma.,  Nurulita,  N.  A.,  & Hartanti,  D.  2010.  Efek  Sitotoksik  dan Antiproliferatif  Kuersetin  pada  Sel  Kanker Kolon WiDr. PHARMACY: Jurnal Farmasi Indonesia  (Pharmaceutical  Journal  of Indonesia) , 7 (03).
10. Widowati, L., Siswanto, S., Delima, D., dan Siswoyo, H. 2014. Evaluasi praktik dokter  yang  meresepkan  Jamu  untuk pasien  penderita  penyakit  degenerative di  12  propinsi.  Media  Penelitian  dan Pengembangan  Kesehatan.  24(2):95- 102.
11. Asril, B., Akbar, A., Zulham,
Burhanuddin  T.,  Abdul,  G.,  2019. Antioxidant and anticancer activities of murbei  ( Morus  alba L.)    stem  extract on  in  vitro  widr  cancer  cells.  Jurnal Farmasi Sains Dan Komunitas. 16(2):63-67.