p-ISSN         : 2087-9423
e-ISSN         : 2620-309X

## PERUBAHAN KIMIA, MIKROBIOLOGIS DAN KARAKTERISTIK GEN HDC PENGKODE HISTIDIN DEKARBOKSILASE PADA IKAN TONGKOL ABU-ABU
Thunnus tonggol SELAMA PENYIMPANAN SUHU DINGIN
CHEMICAL, MICROBIOLOGY CHANGES AND DETECTION OF HDC GENE ON LONGTAIL TUNA Thunnus tonggol DURING CHILLING TEMPERATURE STORAGE
Mala Nurilmala 1 *, Asadatun Abdullah 1 , Vicentius Marco Matutina 1 , Nurjanah 1 , Roza Yusfiandayani 2 , M. Fedi A. Sondita 2 dan Hanifah Husein Hizbullah 1
1 Departemen Teknologi Hasil Perairan, FPIK-IPB, Bogor
2 Departemen Pemanfaatan Sumberdaya Perikanan, FPIK-IPB, Bogor *E-mail: malanm28@yahoo.com

## ABSTRACT
Histamine  is  a  biogenic  amine  that  appear  during  post  moterm  phase  on  the  fish  flesh  that  contain high content of histidine. The higher level of histamine can be reduced by good handling practice to maintain  fish  quality  for  example:  using  chilling  temperature.  This  research  aimed  to  determine chemical and microbiology changes from longtail tuna Thunnus tonggol and the time when hdc gene can  be  detected  during  chilling  temperature  storage 8±3°C .  This  research  design  was  a  completely randomized design (CRD) with parameters of differences in fish storage time (1,2,3,4,5,6,7 days) and ice  ratio  1:1.  The  results  showed  that  the  tuna  fish  experienced  quality  deterioration  for  7  days  of storage. Organoleptic values and pH decreased during storage and on the seventh day the fish were in the rigormortis phase. TVB and TPC values increased during storage and on the sixth day storage has passed the safe limit for consumption. Histamine levels of this tuna on the seventh day were 1.96 ppm. HDc  gene  detection  using  the  PCR  method  showed  negative  results  in  each  treatment.  The  protein profile that was formed during storage displayed to separate because of the cathepsin activity.
Keywords : HDC gene, histamine , PCR, protein profile, TPC, TVB

## ABSTRAK
Histamin  merupakan  senyawa  amin  biologis  yang  dapat  terbentuk  dari  histidin  bebas  dalam  daging ikan  pada  fase post  rigor .  Laju  pertumbuhan  histamin  dapat  diperlambat  dengan  cara  menjaga  mutu ikan  menggunakan  suhu  dingin.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  menentukan  lama  waktu penyimpanan,  perubahan  kimia  dan  mikrobiologis  ikan  tongkol Thunnus  tonggol serta  waktu terdeteksinya gen hdc selama penyimpanan suhu 8±3°C. Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  parameter  perbedaan  waktu  penyimpanan  ikan  (1,2,3,4,5,6,7 hari)  dan  perbandingan  es  1:1.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ikan  tongkol  abu-abu  mengalami kemunduran  mutu  selama  7  hari  penyimpanan.  Nilai  organoleptik  dan  pH  mengalami  penurunan selama  penyimpanan  dan  pada  hari  ketujuh  ikan  berada  pada  fase  rigormortis.  Nilai  TVB  dan  TPC meningkat  selama  penyimpanan  dan  pada  penyimpanan  hari  keenam  sudah  melewati  batas  aman untuk  dikonsumsi.  Kadar  histamin  pada  hari  ketujuh  yaitu  1,96  ppm.  DNA  berhasil  di-isolasi  dan terdeteksi  gen hdc ,  namun hasil  amplifikasi  belum  efektif,  sehingga  diperlukan  optimalisasi  metode PCR. Profil protein yang terbentuk selama penyimpanan berdasarkan hasil SDS-PAGE mulai terpisah karena adanya aktivitas enzim katepsin.
Kata kunci : gen HDC, histamine , PCR, profil protein, TPC, TVB

## I. PENDAHULUAN
Indonesia memiliki kekayaan laut dan potensi  ikan  yang  melimpah.  Sumber  daya perikanan yang melimpah dapat memberikan peluang  yang  tinggi  dalam  memasok  total kebutuhan  konsumsi  protein  di  Indonesia. Tongkol  abu-abu Thunnus  tonggol termasuk ke  dalam  kelompok  ikan  Scombridae  yang mempunyai  nilai  ekonomis  tinggi  dalam perikanan  Indonesia.  Data  statistik  me- nunjukkan  produksi  ikan  tongkol  abu-abu pada tahun 2010-2011 mengalami peningkatan sebesar 31,29% dengan rata-rata produksi  103  ribu  ton  (KKP,  2013). Tingkat konsumsi  ikan  scrombroid  di  Indonesia diduga  belum  optimal  karena  adanya  rasa khawatir  dapat  menyebabkan  alergi  atau keracunan  setelah  dikonsumsi.  Salah  satu jenis  keracunan  yang  sering  terjadi  setelah mengonsumsi ikan adalah Scombrotoxin . Scombrotoxin merupakan racun alami yang  terdapat  pada  ikan  air  laut  terutama famili  Scombridae,  yaitu  keracunan  akibat histamin setelah mengonsumsi ikan. Prasetiawan et  al .  (2013)  menyatakan histamin  merupakan  senyawa  amin  biologis heterosiklik primer aktif yang terbentuk pada fase post rigor pada daging ikan yang banyak mengandung  histidin  bebas.  Persyaratan mutu  dan  keamanan  ikan  segar  yang ditetapkan  dalam  SNI  2729:2013  adalah kadar  histamin  pada  ikan  segar  yaitu maksimum  100  mg/kg  (BSN,  2013).  Ikan tongkol,  tuna,  dan  cakalang  merupakan beberapa  jenis  ikan  yang  berasal  dari  famili Scombridae  sehingga  berpotensi  menimbul- kan Scombrotoxin . Scombrotoxin terbentuk apabila  penanganan  dan  pengolahan  ikan kurang  baik  sehingga  terbentuk  histamin akibat  aktivitas  bakteri  pendegradasi  histidin yang  memilki  enzim  histidin  dekarboksilase (Mangunwardoyo et  al ., 2007). Bakteri  yang mampu  menghasilkan  enzim  histidin  dekar- boksilase  umumnya  termasuk  ke  dalam kelompok Enterobacteriaceae dan Bacillaceae (Indriati et al., 2006).
Salah  satu  cara  untuk  menghambat laju  pertumbuhan  histamin  adalah  dengan cara  menjaga  ikan  agar  tidak  mengalami kemunduran  mutu.  Kemunduran  mutu  pada ikan  terjadi  akibat  adanya  pengaruh  enzim, reaksi  biokimia  dari  tubuh,  serta  aktivitas bakteri. Teknik penanganan ikan yang paling umum  dilakukan  untuk  menjaga  kesegaran ikan  adalah  penggunaan  suhu  dingin.  Suhu rendah  memperlambat  pertumbuhan  bakteri pembusuk  dan  proses-proses  biokimia  yang berlangsung  dalam  tubuh  ikan  sehingga menghambat  kemunduran  mutu  (Gelman et al .,  2001).  Penggunaan  suhu  dingin  dapat memperpanjang  masa  simpan  ikan.  Pada suhu  15-20  C,  ikan  dapat  disimpan  hingga dua hari, dan pada suhu 5  C tahan selama 5- 6  hari,  sedangkan  pada  suhu  0  C  dapat mencapai 9-14 hari (Sitakar et al ., 2016).
Histamin  dapat  digunakan  sebagai indikator  kebusukan  pada  ikan  karena terbentuk akibat aktivitas bakteri dengan gen histidine decarboxylase (HDC)  yang  mampu melakukan  dekarboksilasi  histidin  menjadi histamin.  Bakteri  pembentuk  histamin  sulit dideteksi secara konvensional, karena jumlahnya  sedikit  dibandingkan  bakteri  lain pada ikan segar yang ditangkap. Oleh karena itu  dibutuhkan  metode  deteksi  cepat  gen HDC  dengan  PCR,  sehingga  diperlukan penelitian tentang penyimpanan ikan tongkol pada suhu dingin  yang bertujuan  mengetahui lama  waktu  penyimpanan  ikan  yang  baik agar  produk  masih  aman  untuk  dikonsumsi dari  segi  karakteristik  kimia,  mikrobiologis dan deteksi gen HDC pembentuk histamin.

## II. METODE PENELITAN

## 2.1. Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  April  sampai  Juni  2018.  Penelitian  ini dilaksanakan  di  Laboratorium  Karakteristik Bahan  Baku  Hasil  Perairan,  Laboratorium Mikrobiologi  Hasil  Perairan,  Laboratorium Biomolekuler  Hasil  Perairan,  Laboratorium Pusat  Antar  Universitas,  Institut  Pertanian Bogor,  dan  Laboratorium  Balai  Besar
Pengujian Penerapan Hasil Perikanan
(BBP2HP) Jakarta.

## 2.2. Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah ikan tongkol ( Euthynnus affinis ) dan es balok yang dipecahkan. Bahan kimia yang digunakan pada penelitian kali ini adalah  akuades,  TCA  7%,  asam  borat, K 2 CO 3 , HCl,  larutan garam  fisiologis,  media PCA  ( Plat  Count  Agar ),  akuades,  media  LB ( Lactose  Broth ), buffer ATL, buffer AL, buffer AW1, buffer AW2, buffer AE, prot k, etanol  96%,  agarose, buffer TBE  1x,  primer hdc  fw, primer hdc  rv akrilamid,  bis- akrilamid, buffer tris  HCl,  SDS  10%,  APS 10%,  TEMED,  protein  marker,  metanol, glasswool ,  NaOH  1  N,  HCl  0,1N,  orto- ptalatdikarbosidehid  (OPT)  0,1%,  H 3 PO 4 3,75 N, dan resin penukar ion.
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  antara  lain Styrofoam (Akri  Kurnia Kencana,  Indonesia),  penggaris, scoresheet organoleptik  ikan  segar  berdasarkan  SNI 2729:2013, micropipette (Thermo  Scientific, Amerika  Serikat) ,  microtube,  centrifuge (Corning,  Amerika  Serikat) , PCR  (Analytik Jena,  Jerman),  elektroforesis  (Scie-Plas, Inggris),  vortex  (Biosan,  Latvia),  pH  meter (Hanna Instrument, Amerika Serikat), tabung reaksi  (Pyrex,  Amerika  Serikat),  erlenmeyer (Pyrex,  Amerika  Serikat),  cawan  petri (Pyrex,  Amerika  Serikat),  cawan  Conway (RRC,  Indonesia),  buret  (Pyrex,  Amerika Serikat), homogenizer (Nissei  Ace,  Cina), waterbath (F-ScientificLabs, Indonesia), SDS-PAGE  (PeQLab,  Jerman),  kolom  resin (Pyrex,  Amerika  Serikat),  dan  spektro- flourometer  (Agilent  Cary  Eclipse,  Amerika Serikat).

## 2.3. Prosedur Penelitian
Ikan  tongkol  diperoleh  dari  Tempat Pelelangan  Ikan  (TPI)  Kamal-Jakarta  dalam keadaan  baru  ditangkap  dan  segar.  Ikan kemudian  dimasukkan  ke  dalam styrofoam berisi  es  curai  untuk  proses  transportasi. Perbandingan  jumlah  es  dengan  berat  ikan
adalah  1:1  dengan  suhu  berkisar  antara  8- 13°C.  Perbandingan  jumlah  es  dengan  berat ikan  tetap  dipertahankan  1:1  dengan  cara mengganti  total  berat  es  yang  hilang  atau mencair  dengan  berat  es  yang  baru  setelah dikurangi  jumlah  berat  ikan  yang  hilang. Styrofoam diberi  lubang  pada  bagian  bawah untuk  mengeluarkan  es  yang  mencair. Metode penyusunan ikan di dalam styrofoam dibuat  sama  pada  saat  ikan  didapatkan.  Ikan kemudian  disimpan  dalam styrofoam selama 7  hari  dalam  keadaan  tidak  disiangi  dan dibungkus  oleh  plastik.  Analisis  yang dilakukan  selama  proses  penyimpanan  yaitu pengukuran  morfometrik,  uji  organoleptik (BSN,  2013),  uji  nilai  pH  (Apriyantono et al., 1989),  uji  kadar  TVB,  uji  TPC,  uji histamin,  analisis  gen hdc pengkode  histidin dekarboksilase  (Takahashi et  al., 2003)  dan SDS-PAGE  (Nurilmala et  al., 2017)  setiap hari  selama  7  hari  penyimpanan  dan  analisis proksimat.

## 2.3.1. Pengukuran Morfometrik
Pengukuran  morfometrik  dilakukan untuk  mengetahui  sampel  yang  digunakan selama  proses  penelitian  memiliki  berat  dan ukuran yang seragam. Parameter yang dilihat untuk  pengukuran  morfometrik  adalah  berat total,  panjang  total,  panjang  baku,  panjang cagak, tinggi, dan lebar ikan.

## 2.3.2. Uji Organoleptik
Pengujian  organoleptik  merupakan pengujian  yang  bersifat  subjektif  yang dilakukan dengan menggunakan panca indera manusia. Manfaat dilakukannya uji organoleptik  adalah  untuk  mengetahui  dan menilai  standar  suatu  produk  baik  dari  segi rasa,  tekstur,  aroma,  warna  serta  bentuk, pengujian  organoleptik  mengacu  pada  (SNI 2729:2013) untuk ikan segar.

## 2.3.3. Analisis Komposisi Kimia
Analisis  proksimat  yang  dilakukan pada  penelitian  kali  ini  meliputi  analisis kadar  air,  kadar  protein,  kadar  lemak,  kadar abu,  dan  kadar  karbohidrat.  Proses  analisis
proksimat  yang  dilakukan  pada  penelitian kali ini mengacu pada AOAC (2005).

## 2.3.4. Uji Nilai pH
Pengukuran nilai pH dilakukan meng- gunakan  pH  meter  yang  telah  dikalibrasi terlebih  dahulu  dengan buffer standar  pH  4 dan  7.  Daging  ikan  diambil  dan  ditimbang sebanyak  10  g.  Daging  ikan  tersebut kemudian  dicampur  dengan  akuades  se- banyak  90  mL  kemudian  dihomogenkan. Sampel  yang  telah  homogen  kemudian diukur menggunakan pH meter (Apriyantono et al., 1989).

## 2.3.5. Analisis Kadar Total Plate Count
(TPC) Prinsip  kerja  analasis  TPC  adalah pertumbuhan mikroorganisme setelah inkubasi dalam media agar. Sampel ditimbang  secara  aseptik  sebanyak  10  g kemudian  dilarutkan  dalam  90  mL  larutan garam  fisiologis.  Larutan  ini  merupakan pengenceran  10 -1 .  Sebanyak  1  mL  pada larutan  pengenceran  10 -1 diambil  meng- gunakan  pipet  kemudian  dicampurkan  ke dalam  9  mL  larutan  garam  fisiologis sehingga menjadi pengenceran 10 -2 , hal yang dilakukan  untuk  pengenceran  10 -3 ,  10 -4 ,  dan 10 -5 ,  dan  seterusnya  sesuai  dengan  kondisi sampel.  Satu  mL  larutan  dari  setiap pengenceran  diambil  dan  dimasukkan  ke dalam cawan steril menggunakan pipet steril. Media Plate Count Agar (PCA) sebanyak 12- 15  mL  ditambahkan  dan  ke  dalam  cawan yang  sudah  berisi  sampel  yang  sudah didinginkan  sehingga  mencapai  suhu  45°C dan  diamkan  hingga  agar  berubah  menjadi padat.  Setelah  itu,  cawan  dimasukkan  ke dalam  inkubator  dengan  posisi  terbalik  pada suhu 35°C selama 48 jam. Tahap selanjutnya adalah  perhitungan  jumlah  koloni  yang terlihat  pada  cawan.  Jumlah  koloni  yang dihitung  berkisar  antara  25-250.  Nilai  TPC suatu sampel dapat ditentukan dengan rumus:
N = Σ C [( 1 x n 1 ) + ( 0,1 x n 2 )] x (d) ………….. (1)
Keterangan: Σ C =  jumlah koloni pada cawan yang  dihitung,  n 1 =  jumlah  cawan  pada pengenceran  pertama  yang  dihitung,  n 2 = jumlah cawan pada pengenceran kedua  yang dihitung, dan  d = pengenceran pertama  yang dihitung.
2.3.6. Analisis Total Volatile Base (TVB ) Penentuan  kadar  TVB  didasarkan pada proses penguapan senyawa volatil pada daging  ikan.  Sampel  ditimbang  sebanyak  15 g  kemudian  dihaluskan.  Sampel  kemudian dicampurkan  dengan  larutan  TCA  7% sebanyak  45  mL.  Sampel  kemudian  disaring menggunakan  kertas  saring.  Sebanyak  1  mL filtrat  diambil  dan  dimasukkan  ke  dalam outter chamber . Larutan  K 2 CO 3 sebanyak  1  mL ditambahkan  ke  dalam outter  chamber sisi lainnya  serta  asam  borat  ke  dalam inner chamber dari  cawan  Conway.  Cawan tersebut  kemudian  diinkubasi  selama  2  jam. Sampel  yang  telah  diinkubasi  kemudian dititrasi  menggunakan  HCl  0,02  N.  Nilai kadar  TVB  suatu  sampel  dapat  ditentukan dengan rumus:
Kadar TVB (mg N/100 g) =
( Vs-Vb ) x N x 14,007 x fp x100
Berat sampel ….....…… (2)
Keterangan: Vs  = Volume titrasi sampel (mL), Vb  =  Volume  titrasi  blanko  (mL),  N  = Normalitas HCl, dan Fp = Faktor pengenceran.

## 2.3.7. Analisis Histamin
Jaringan daging ikan di-ekstrak menggunakan  metanol  dan  histamin  di- konversi  ke  dalam  bentuk  OH.  Zat-zat histamin  selanjutnya  dimurnikan  melalui resin  penukar  ion  dan  diubah  ke  bentuk derivatnya dengan senyawa OPT.
Besarnya  histamin  diukur  secara fluorometri pada panjang gelombang eksitasi 350  nm  dan  emisi  444  nm,  mengacu  pada metode BSN (2013).

## 2.3.8. Analisis Gen HDC Pengkode Histidin Dekarboksilase
Analisis  kadar  histamin  dilakukan dengan  menggunakan  metode Polymerase Chain  Reaction (PCR)  yang  akan  membaca bakteri  penghasil  enzim  histidin  dekar- boksilase  ( HDC )  mengacu  pada  metode Takahashi et  al. (2003).  Sampel  yang digunakan  diberi  perlakuan,  yaitu  berupa ikan dan bakteri hasil enrichment dari daging ikan  tersebut.  Proses  analisis  terdiri  dari beberapa  tahap,  yaitu  metode enrichment bakteri,  isolasi  DNA  menggunakan  kit komersial  Qiagen  DNeasy  Blood  &  Tissue Kit, pengukuran kualitas DNA, dan pengujian sampel dengan PCR.

## 2.3.9. SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel)
Pembuatan  gel  untuk  SDS-PAGE dilakukan  dengan  mencampurkan  akrilamid, bis-akrilamid,  buffer  tris-HCl,  SDS  10%, APS 10% dan TEMED. Gel  yang digunakan pada  penelitian  kali  ini  menggunakan konsentrasi  gel  pemisah  yaitu  15%  dan  gel pengumpul  yaitu  3%  mengacu  pada  metode (Nurilmala et al., 2017).
Sampel  daging  dicampurkan  dengan akuades  dengan  perbandingan  1:2  kemudian disentrifugasi pada kecepatan 6000 g selama 30 menit dan diambil supernatant. Supernatan  dicampur  dengan  buffer  dengan perbandingan  1:1  dan  dipanaskan  pada  suhu 85°C  selama  10  menit.  Sampel  sebanyak  10 µL  dan  protein  marker  sebanyak  5  µL dimasukkan dalam sumur. Running elektroforesis  dilakukan  pada  150  Volt  dan 15 mA selama 3 jam.
Marker  yang  digunakan  yaitu  protein marker  standar  ( Thermo  scientific -USA) dengan  ukuran  10-260  kDa.  Elektroforesis dihentikan  bila  migrasi  dye  mencapai  batas ±1  cm  di  bagian  bawah  gel.  Proses staining selama  60-90  menit  dan  proses destaining dilakukan sampai diperoleh pita protein  latar belakang relatif jernih.

## 2.4. Analisis Data
Analisis  data  pada  penelitian  ini dilakukan  menggunakan  rancangan  acak lengkap  (RAL).  Faktor  yang  mempengaruhi pada  penelitian  kali  ini  adalah  perbedaan waktu  penyimpanan  ikan  dengan  per- bandingan  es  1:1.  Pengujian  dilakukan dengan  dua  kali  ulangan.  Data  dianalisis secara  statistik  dengan  analisis  ragam (ANOVA).

## III.   HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  morfometrik  ikan  tongkol  pada penelitian  ini  dapat  dilihat  pada  Gambar  3. Berdasarkan  analisis  morfologi  diperoleh nilai rata-rata bobot total 2110 gram, panjang total  53,04  cm;  panjang  baku  46,25  cm; panjang  cagak  48,93  cm;  tinggi  21  cm;  dan lebar  8,49  cm.  Griffiths et  al. (2010) menyatakan  ikan  tongkol  abu-abu  dapat mencapai  panjang  total  maksimum  142  cm dan berat 35,6 kg.
Gambar 1. Morfologi ikan tongkol abu-abu Thunnus tonggol .
Perbedaan  morfometrik  pada  suatu spesies ikan dapat disebabkan oleh perbedaan pertumbuhan pada setiap individu. Pertumbuhan  suatu  individu  makhluk  hidup dipengaruhi  oleh  faktor  internal  meliputi jenis kelamin, keturunan, umur, dan penyakit atau  parasit,  serta  faktor  eksternal  meliputi lingkungan dan ketersediaan makanan
(Nuzapril et al ., 2013). 13
Gambar 3 Morfologi ikan tongkol abu-abu ( Thunnus tonggol ).
Morfometrik  adalah  ciri  yang  berkaitan  dengan  ukuran  atau  bagian  tubuh ikan.  Tiap  spesies  ikan  mempunyai  ukuran  yang  berbeda-beda.  Karakter morfometrik yang diukur pada penelitian kali ini adalah bobot total, panjang total, panjang baku, panjang cagak, tinggi, dan lebar ikan. Hasil pengukuran morfometrik ikan tongkol dapat dilihat pada Tabel 1
Tabel 1  Morfometrik ikan tongkol abu-abu
Parameter Nilai Bobot Total (gram)  2110  ± 0,14 Panjang total (cm) 53,04 ± 1,42 Panjang Baku (cm) 46,25 ± 1,14 Panjang cagak (cm)  48,93 ± 1,09 Tinggi (cm) 21 ± 1,18 Lebar (cm) 8,49  ± 0,75 n=14
Pengukuran morfometrik ikan tongkol pada penelitian ini memperoleh  nilai rata-rata bobot total 2110 gram, panjang total 53,04 cm; panjang baku 46,25 cm; panjang cagak 48,93 cm; tinggi 21 cm; dan lebar 8,49 cm. Griffiths et al. (2010) mengatakan ikan tongkol abu-abu dapat mencapai panjang total maksimal 142 cm dan berat 35,6 kg. Perbedaan morfometrik pada suatu spesies ikan dapat disebabkan oleh  perbedaan  pertumbuhan  pada  setiap  individu.  Pertumbuhan  suatu  individu makhluk hidup dipengaruhi oleh faktor internal meliputi jenis kelamin, keturunan, umur,  dan  penyakit  atau  parasit,  serta  faktor  eksternal  meliputi  lingkungan  dan ketersediaan makanan (Nuzapril et al . 2013)

## Suhu selama Penyimpanan Ikan Tongkol Abu-Abu
Penggunaan  suhu  rendah  merupakan  teknik  yang  paling  umum  dilakukan untuk mempertahankan tingkat kesegaran ikan. Pada kondisi penyimpanan dengan suhu  rendah,  pertumbuhan  bakteri  pembusuk  dan  proses-proses  biokimia  yang berlangsung  dalam  tubuh  ikan  yang  mengarah  pada  kemunduran  mutu  menjadi lebih  lambat  (Gelman et  al .  2001).  Proses  penyimpanan  yang  digunakan  pada penelitian ini menggunakan es balok yang dihancurkan dengan perbandingan ikan dan es yaitu 1:1. Penggantian es dilakukan sebanyak 2x dalam sehari. Nilai fluktuasi suhu penyimpanan ikan tongkol abu-abu dapat dilihat pada Gambar 4.
Panjang Total Panjang Cagak Panjang Baku Tinggi
Gambar 2  menunjukkan nilai organo- leptik  dari  semua  parameter  mengalami penurunan selama penyimpanan suhu dingin. Hari pertama sampai dengan hari ketiga ikan masih memiliki kualitas yang sangat baik dan masuk  dalam  kriteria  ikan  segar  karena memiliki nilai organoleptik berkisar 7-9. Ikan yang baik adalah ikan yang segar. Ikan segar
adalah  ikan  yang  mempunyai  sifat  sama seperti  ikan  hidup,  baik  rupa,  bau,  rasa, maupun teksturnya. SNI 2729:2013 mengatakan  ikan  segar  secara  organoleptik memiliki  karakteristik  mata  cerah  dan cemerlang,  bau  segar  spesifik  jenis,  tekstur elastis, padat, dan kompak (BSN, 2013).
(a) (b) (c) (d) (e) (f)
Gambar 2. Nilai organoleptik (a) mata, (b) insang, (c) lendir, (d) daging, (e) bau, dan (f) tekstur ikan tongkol selama penyimpanan suhu dingin.
9 d 8.3 c 8 b 7.2 c 6.6 a 6.3 a 6 a 0 2 4 6 8 10 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai o r gan o le p ti k Waktu penyimpanan (hari) 8.4 e 7.7 d 7.6 cd 7.1 bc 7 ab 6.6 ab 6.4 a 0 2 4 6 8 10 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai o rgan o le p ti k Waktu penyimpanan (hari) 9 e 8.2 d 7.6 c 7 b 7 b 6.7 ab 6.3 a 0 2 4 6 8 10 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai o r gan o le p ti k Waktu penyimpanan (hari) 8.7 e 7.9 d 7.2 c 6.5 b 6.4 b 6 b 5.3 a 0 2 4 6 8 10 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai o r gan o le p ti k Waktu penyimpanan (hari) 9 e 8 d 7.5 c 6.9 b 6.6 b 6.1 a 6 a 0 2 4 6 8 10 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai o r gan o le p ti k Waktu penyimpanan (hari) 8.8 e 7.9 d 7.7 d 7.1 c 6.5 b 6 ab 5.7 a 0 2 4 6 8 10 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai o rgan o le p ti k
Waktu penyimpanan (hari)
Hari  keempat  ikan  tongkol  mulai memasuki  fase rigor  mortis .  Fase  ini merupakan  tahapan  sebelum  terjadinya  fase post rigor dan kebusukan oleh mikroba. Ikan tongkol  masih  memiliki  kualitas  yang  cukup baik  pada  fase  ini,  dan  masuk  dalam  kriteria ikan  agak  segar  karena  memiliki  nilai organoleptik  berkisar  5-6.  Ekasari et  al . (2017) dalam penelitiannya menyatakan ikan tongkol  mulai  memasuki  fase  rigormortis pada  hari  keempat  sampai  dengan  hari kedelapan. Fase  rigor  pada  ikan  tongkol ditandai  dengan  tekstur  yang  mengeras  dan kaku,  mata  berubah  menjadi  sedikit  cekung, insang  berubah  menjadi  kecoklatan,  lendir permukaan  tubuh  masih  transparan,  bau netral,  dan  daging  yang  kurang  cemerlang. Fase rigor  mortis berlangsung  sampai pengamatan hari ketujuh.
Tabel  1  memperlihatkan  komposisi kimia  ikan  tongkol  pada  awal  dan  akhir penyimpanan  suhu  dingin  Hasil  uji  t-test menunjukkan bahwa perlakuan penyimpanan suhu  dingin  tidak  berpengaruh  nyata  ter- hadap  kadar  air  ikan  tongkol  abu-abu (p>0,05)  Kadar  air  mempunyai  peranan penting  dalam  menentukan  daya  awet  bahan pangan karena dapat memengaruhi sifat fisik, perubahan fisik dan umur simpan. Hasil uji t- test  menunjukkan  bahwa  perlakuan  penyim- panan  suhu  dingin  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  kadar  abu  ikan  tongkol  abu-abu (p>0,05).  Tingginya  tingkat  kadar  abu  dapat disebabkan masih adanya kandungan mineral yang tidak terbakar dengan sempurna seperti Na, Ca, dan P (Landeng et al., 2017).
Hasil  uji  t-test  menunjukkan  bahwa perlakuan  penyimpanan  suhu  dingin  mem-
berikan pengaruh nyata terhadap kadar lemak ikan tongkol abu-abu (p<0,05). Kadar  lemak ikan  tongkol  abu-abu  mengalami  penurunan. Penurunan  kadar  lemak  pada  ikan  tongkol abu-abu  diakibatkan  oleh  hilangnya  fraksi trigliserda  yang  disebabkan  oleh  oksidasi lemak  (Kusuma et  al., 2017).  Beberapa faktor  yang  mempengaruhi  komposisi  lemak ikan antara lain musim, suhu, habitat, spesies ikan,  umur,  jenis  kelamin  dan  kebiasaan makan (Pratama et  al., 2011). Hasil uji t-test menunjukkan bahwa perlakuan penyimpanan suhu dingin tidak berpengaruh nyata terhadap  kadar  air  ikan  tongkol  abu-abu (p>0,05).  Kandungan  protein  sangat  di- pengaruhi oleh jenis ikan, umur, ukuran ikan, kualitas  protein  pakan,  kecernaan  pakan  dan kondisi lingkungan (Pramono et al., 2007). Gambar  3  menunjukkan  perubahan nilai  pH  ikan  tongkol  abu-abu  selama penyimpanan  suhu  dingin.  Nilai  pH  pada pengamatan  hari  pertama  (H1)  sebesar  5,58. Nilai  pH  ikan  tongkol  mulai  terjadi  pada penurunan pada hari ke-4 sampai dengan hari ke-7.  Nilai  pH  yang  dihasilkan  pada penelitian kali  ini  berada pada kondisi asam. Wijayanti et  al. (2006)  menyatakan  bahwa penyimpanan  ikan  cakalang  pada  suhu ±11°C  berada  pada  kondisi  asam  yaitu berkisar  antara  5,83-6,42.  Sormin et  al. (2016)  mengatakan  pada  fase rigor  mortis , beberapa  spesies  ikan  seperti  tuna  dan makarel  mengalami  penurunan  pH  sampai 5,4. Susanto et al. (2011) menyatakan bahwa variasi  perubahan  nilai  pH  tergantung  pada spesies, proses penangkapan, kondisi biologis, variasi musim, dan metode penanganan.
Tabel 1. Komposisi kimia ikan tongkol awal dan akhir penyimpanan suhu dingin.
Komposisi Kimia Waktu Penyimpanan Awal Akhir Kadar Air (%) 73,70 ± 0,20 a 73,26 ± 0,53 a Kadar Abu (%) 1,53 ± 0,11 a 1,58 ± 0,08 a Kadar Lemak (%) 0,41 ± 0,14 a 0,23 ± 0,08 b Kadar Protein (%) 22,64 ± 0,38 a 21,79 ± 0,29 a
Gambar 3. Nilai pH ikan tongkol abu-abu selama penyimpanan suhu dingin .
Gambar 4. Nilai TVB ikan tongkol selama penyimpanan suhu dingin.
Gambar  4  menunjukkan  perubahan nilai  TVB  ikan  tongkol  abu-abu  selama penyimpanan  suhu  dingin.  Nilai  TVB  pada pengamatan hari pertama (H1) sebesar 14,03 mgN/100 g dan terus mengalami peningkatan sampai  dengan  hari  ketujuh  (H7)  yaitu sebesar  21,13  mgN/100  g.  Nilai  tersebut menunjukkan  ikan  tongkol  abu-abu  masih layak  dikonsumsi  sampai  hari  ketujuh. Nurjanah et  al .  (2004)  menyebutkan  bahwa ikan termasuk sangat segar apabila nilai TVB kurang dari 10 mgN/100 g. Ikan dengan nilai TVB  antara  10-20  mgN/100  g  masuk  dalam kriteria  segar.  Nilai  TVB  antara  20-30 mN/100 g merupakan batas penerimaan  ikan untuk  dikonsumsi  sedangkan  jika  nilai  TVB lebih  dari  30  mgN/100  g  termasuk  ikan busuk.
Al-Busaidi et  al. (2017)  menyatakan nilai  TVB  ikan  tongkol  abu-abu  yang disimpan pada suhu 8°C mengalami peningkatan yaitu mulai dari 7,35 mgN/100 g pada  hari  pertama  sampai  dengan  21,99 mgN/100 g pada hari kesembilan. Nilai TVB akan terus meningkat selama proses kemunduran  mutu  berlangsung.  Peningkatan kandungan  TVB  pada  daging  ikan  selama penyimpanan  disebabkan  karena  adanya degradasi protein dan derivatnya oleh mikro- organisme  yang  menghasilkan  senyawa  basa yang mudah menguap seperti Trimethylamine (TMA),  amoniak,  dan  H 2 S (Husni et al ., 2014).
Gambar 5. Nilai TPC ikan tongkol abu-abu selama penyimpanan suhu dingin.
Gambar  5  menunjukkan  perubahan nilai  TPC  ikan  tongkol  abu-abu  selama penyimpanan  suhu  dingin.  Nilai  TPC  pada pengamatan  hari  pertama  (H1)  sebesar  4,24 log CFU/g dan terus mengalami peningkatan sampai  dengan  hari  ketujuh  (H7)  yaitu sebesar  6,23  log  CFU/g.  SNI  2729:  2013 menyatakan  syarat  mutu  ikan  segar  adalah memiliki  nilai  TPC  sebesar  5x10 5 CFU/g atau  setara  dengan  5,70  log  CFU/g  (BSN 2013).  Hal  ini  menunjukkan  ikan  pada  hari penyimpanan  keenam  dan  ketujuh  sudah tidak layak untuk dikonsumsi. Hal ini diduga karena  ikan  tongkol  terkontaminasi  dengan es  yang  digunakan  dan  juga  mikroba  yang berkembang di dalam tubuh ikan.
5.58 a 5.58 a 5.61 a 5.53 a 5.49 a 5.37 a 5.35 a 2 3 4 5 6 7 8 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai p H Waktu penyimpanan (hari) 14.03 a 14.81 a 17.10 a 17.47 a 17.53 a 19.14 a 21.15 a 0 5 10 15 20 25 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai TV B (m gN /100g) Waktu penyimpanan (hari) 4.24 a 5.40 b 5.49 b 5.54 b 5.69 b 5.91 b 6.23 b 0 1 2 3 4 5 6 7 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 N il ai TP C (Lo g C F U /g) Waktu penyimpanan (hari)
Pengujian kadar histamin pada penelitian  kali  ini  dilakukan  pada  ikan  yang sudah  disimpan  selama  7  hari  pada  suhu dingin.  Hasil  analisis  menunjukkan  ikan tongkol  abu-abu  yang telah disimpan selama 7  hari  pada  suhu  dingin  memiliki  kadar histamin  sebesar  1,96±0,05  ppm.  SNI 2729:2013  tentang  ikan  segar  menyatakan syarat  kadar  histamin  pada  ikan  segar  yaitu maksimal  30  ppm  (BSN,  2013).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  ikan  tongkol  yang disimpan  pada  suhu  dingin  selama  7  hari masih layak untuk dikonsumsi. Al-Busaidi et al. (2011)  dalam  penelitiannya  menyatakan ikan  tongkol  abu-abu  yang  disimpan  pada suhu  0°C  setelah  15  hari  memiliki  kadar histamin  sebesar  4  ppm.  Silbande et  al.
(2016)  menyatakan  ikan  tuna  yang  disimpan pada suhu 4°C memiliki kadar histamin yang stabil  sampai  dengan  hari  penyimpan kedelapan.  Histamin  tidak  akan  terbentuk selama  ikan  tetap  disimpan  dalam  suhu  di bawah 5°C (Alasalvar and Taylor, 2002).
Hasil pengamatan PCR dengan primer hdc menggunakan elektroforesis pada berbagai perlakuan (Gambar 6 a-d) menunjukkan DNA  berhasil  di-isolasi  dan terdeteksi  gen hdc ,  namun hasil  amplifikasi belum  efektif,  sehingga  diperlukan  optimalisasi metode  PCR. Mangunwardoyo et  al. (2007) menyatakan  kadar  histamin  yang  dihasilkan oleh  tiap  bakteri  berbeda-beda.  Bakteri  yang mampu  memproduksi  histamin  paling  besar adalah Enterobacter sp.
(a) (b) (c) (d)
Gambar 6. Hasil PCR ikan tongkol selama penyimpanan suhu dingin dengan (a) tanpa enrichment kit Qiagen (b) enrichment kit GenCheck (c) enrichment kit Qiagen (d) enrichment Kit GenCheck. H1 = pengamatan hari pertama, H2 = pengamatan hari kedua, H3 = pengamatan hari ketiga, H4 = pengamatan hari keempat, H5 = pengamatan hari kelima, H6 = pengamatan hari keenam, H7 = pengamatan hari ketujuh.
Gambar 7. SDS-PAGE ikan tongkol selama penyimpanan suhu dingin.
Pita  protein  yang  terdeteksi  pada Gambar  7  menunjukkan  jenis  yang  sama dengan  luas  dan  ketebalan  yang  berbeda- beda.  Profil  protein  ikan  tongkol  abu-abu mengalami  perubahan  selama  penyimpanan suhu  dingin.  Profil  protein  pada  pengamatan hari  pertama  sampai  dengan  hari  ketujuh menunjukkan  adanya  penumpukan  protein pada  bobot  molekul  72-89  kDa.  Pada  setiap pengamatan  nampak  pita  protein  mulai terpisah  karena  adanya  denaturasi  protein.
Pemecahan protein tersebut berkaitan dengan menurunnya pH yang  menyebabkan aktifnya enzim  katepsin  sehingga  mampu  memecah protein  menjadi  komponen  yang  lebih sederhana. Nurhayati et al. (2010) menyatakan  bahwa  aktivitas  enzim  katepsin akan  meningkat  selama  proses  kemunduran mutu, sehingga pita protein akan terdegradasi dan terlihat semakin tipis.
Pada pengamatan hari pertama sampai  dengan  hari  keenam  menunjukkan adanya  bobot  molekul  protein  sebesar  237 kDa.  Ladrat et  al .  (2003)  menyatakan terdapat  protein myosin  heavy  chain (MHC) pada bobot molekul sekitar 200 kDa. Hal  ini menunjukkan  pada  ikan  tongkol  abu-abu terdapat protein  MHC  yang dapat digunakan dalam pembentukan gel pada surimi.

## IV.   KESIMPULAN
Ikan  tongkol  abu-abu  mengalami kemunduran mutu selama 7 hari penyimpanan  dalam  suhu  dingin.  Nilai organoleptik  mengalami  penurunan    selama penyimpanan  dan  pada  hari  ketujuh  ikan berada  pada  fase  rigormortis.  Nilai  pH  ikan tongkol  abu-abu  mengalami  penurunan selama penyimpanan suhu dingin. Nilai TVB ikan tongkol abu-abu mengalami peningkatan  selama  penyimpanan  suhu dingin,  namun  masih  dalam  batas  aman. Nilai  TPC  ikan  tongkol  abu-abu  mengalami peningkatan  selama  penyimpanan  suhu dingin  dan  pada  penyimpanan  hari  keenam sudah melewati batas aman untuk dikonsumsi.  Histamin  ikan  tongkol  abu-abu mulai muncul pada hari ketujuh yaitu sebesar 1,96  ppm  dan  masih  batas  aman  untuk dikonsumsi.    DNA  berhasil  di-isolasi  dan terdeteksi  gen  hdc,  namun hasil  amplifikasi belum efektif, sehingga diperlukan optimalisasi metode PCR. Profil protein yang terbentuk selama penyimpanan mulai terpisah  karena  adanya  aktivitas  enzim katepsin.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima kasih kepada Program Insentif  Riset  Sistem  Inovasi  Nasional Gelombang 1 Tahun Anggaran 2018 Nomor:
12/INS-1/PPK/E4/2018 a.n Dr. Mala Nurilmala  SPi,  MSi,  tanggal  9  Maret  2018 antara  Direktorat  Pengembangan  Teknologi Industri  Kementrian  Riset,  Teknologi  dan Pendidikan  Tinggi  dan  Lembaga  Penelitian dan  Pengabdian  Kepada  Masyarakat  Institut Pertanian Bogor (LPPM IPB).

## DAFTAR PUSTAKA
Alasalvar, C.T. and Taylor. 2002. Seafoods – quality,  technology  and  nutraceutical applications.  Springer-Verlag  Berlin Heidelberg. Berlin.
224 p.
22
Gambar 9 SDS-PAGE ikan tongkol abu-abu selama penyimpanan suhu dingin.
Pita protein yang terdeteksi pada Gambar 10 menunjukkan jenis yang sama dengan  ketebalan  yang  berbeda-beda.  Profil  protein  ikan  tongkol  abu-abu mengalami  perubahan  selama  penyimpanan  suhu  dingin.  Profil  protein  pada pengamatan  hari  pertama  sampai  dengan  hari  ketujuh  menunjukkan  adanya penumpukan  protein  pada  bobot  molekul  72-89  kDa.  Pada  setiap  pengamatan Nampak pita protein mulai terpisah. Pemecahan protein tersebut berkaitan dengan menurunnya  pH  yang  menyebabkan  aktifnya  enzim  katepsin  sehingga  mampu memecah protein menjadi komponen yang lebih sederhana. Nurhayati et al. (2010) menyebutkan  bahwa  aktivitas  enzim  katepsin  akan  meningkat  selama  proses kemunduran mutu, sehingga pita protein akan terpisah dan terlihat semakin tipis.
Pada  pengamatan  hari  pertama  sampai  dengan  hari  kelima  menunjukkan adanya  bobot molekul protein sebesar 237  kDa. Ladrat et al . (2003) mengatakan terdapat protein myosin heavy chain (MHC) pada bobot molekul sekitar 200 kDa. Hal ini menunjukkan pada ikan tongkol abu-abu terdapat protein MHC yang dapat digunakan dalam pembentukkan gel pada surimi.
Deteksi Gen hdc Ikan Tongkol Abu-abu selama Penyimpanan Suhu Dingin
Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  merupakan  teknik  in  vitro  yang digunakan untuk melakukan replikasi atau amplifikasi bagian spesifik dari berjuta lipatan DNA hanya dalam beberapa jam (Prayoga dan Wardani 2015). Proses PCR dilakukan dengan mereaksikan, ekstrak DNA, enzim DNA polimerase, dan primer dalam  larutan  buffer  yang  sesuai.  Reaksi  PCR  dilakukan  dengan  bantuan  alat thermocycle . Ekstrak DNA yang digunakan harus murni. Kemurnian ekstrak DNA mempengaruhi  hasil  PCR  dimana  jika  pada  ekstrak  DNA  banyak  pengotornya,
kDa 150 100 75 50 37 10 kDa 237 184 128 72-89 69 59
Marker          H1          H3            H5          H7
https://doi.org/10.1007/978-3-662-
09836-3
Apriyantono,
A., D. Fardiaz, N.L.
Puspitasari,  Y.  Sedarnawati,  dan  S. Budianto. 1989. Petunjuk laboratorium  analisis  pangan.  Pusat
Antar  Universitas  Pangan  dan  Gizi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Badan  Standarisasi  Nasional  (BSN).  2013.
SNI  2729:2013.  Ikan  segar.  Badan Standarisasi Nasional. Jakarta. 20 p.
Ekasari,  D.,  I.K.  Suwetja,  dan  L.A.D.Y.
Montolalu.  2017.  Uji  mutu  ikan cakalang  ( Katsuwonus  pelamis )  dan ikan tongkol ( Euthynnus affinis ) segar di  TPI  Tumpua  selama  penyimpanan dingin. J.  Media  Teknologi  Hasil Perikanan , 5(2):134-141.
Gelman,  A., L.  Galtman,  V.  Drabkin, and S.
Harpaz.  2001.  Effect  of  storage temperature and preservative treatment  on  shelf  life  of  the  pond- raised  freshwater  fish,  silver  perch ( Bidyanus bidyanus ). J. Food Protection ,  64:1584-159.  https://doi. org/10.4315/0362-028X-64.10.1584 Griffiths,  S.P.,  G.C.  Fry,  F.J.  Manso,  D.C
Lou.  2010.  Age  and  growth  of longtail  tuna  ( Thunnus  tonggol )  in tropical  and  temperate  waters  of  the central  Indo-Pacific. J.  of  Marine
Science , 67: 125-134. https://doi.org/10.1093/icesjms/fsp22 3
Husni,  A.,  A.  Ustadi,  Hakim.  2014. Penggunaan  ekstrak  rumput  laut Padina sp.  untuk  peningkatan  daya simpan filet nila merah yang disimpan pada suhu dingin. Agritech . 34(3):  239-246.  https://doi.org/10. 22146/agritech.9451
Indriati,  N.,  Rispayeni.  E.S.  Heruwati.  2006.
Studi  bakteri  pembentuk  histamin pada  ikan  kembung  peda  selama proses pengolahan. J. Pascpanen dan bioteknologi Kelautan dan Perikanan , 2(1): 88-99.
Kementerian Kelautan dan Perikanan (KKP). 2013. Data produksi perikanan tangkap nasional. [Internet]. [diunduh pada  2018  Juli  20]  Tersedia  pada: https://data.go.id/dataset/produksi- perikanan-tangkap-nasional.
Kusuma,  A.A.,  E.N.  Dewi  I.  Wijayanti. 2017.  Perbedaan  jumlah  nutrisi  yang hilang  pada  bandeng  beku  non  cabut duri dan cabut duri selama penyimpanan suhu rendah. J. Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 20(1): 153-163.
Ladrat,  C.,  V.V.  Bagnis,  J.  Noel,  J.
Fleurence.  2003.  In  vitro  proteolysis of  myofibrillar  and  sarcoplasmic proteins  of  white  muscle  of  sea  bass ( Dicentrarchus  labrax ):  effect  of cathepsins  B,  D,  and  L. Food Chemistry . 81(6): 517-525.
https://doi.org/10.1016/S0308- 8146(02)00481-8
Landeng,  P.J.,  E.  Suryanto,  L.I.  Momuat. 2017.  Komposisi  proksimat  dan potensi  antioksidan  dari  biji  jagung manado  kuning  ( Zea  mays L.). Chemistry Progress , 10(1): 36-44. Mangunwardoyo.  W.,  R.A.  Sophia,  E.S.
Heruwati. 2007. Seleksi dan pengujian aktivitas enzim L-Histidine Decarboxylase
dari bakteri
pembentuk  histamin. Makara  Sains , 11(2):  104-109.  https://doi.org/10. 7454/mss.v11i2.292
Nurhayati.  T.,  E.  Salamah,  E.  Irfan,,  R. Nugraha.  2010.  Aktivitas  enzim katepsin  dan  kolagenase  pada  kulit ikan bandeng ( Chanos chanos ) selama  periode  kemunduran  mutu. Akuatik  J.  Sumberdaya  Perairan , 4(1):13-17.
Nurilmala M., A. Abdullah, T. Nurhayati, A.
Zakiah.  2017.  Panduan  praktikum matakuliah biomolekuler hasil perairan. IPB Press. Bogor.
Nurjanah,  I.  Setyaningsih,  Sukarno,  M.
Muldani.  2004.  Kemunduran  mutu ikan  nila  merah  ( Oreochromis sp.)
selama  penyimpanan  pada  suhu ruang. Buletin Teknologi Hasil Perikanan , 7(1): 37-42.
Nuzapril.  M., N.  Widyorini,  N.  Afiati. 2013.
Analisis  morfometrik  dan  faktor kondisi  pada  cumi-cumi Photololigo chinensis dan Photololigo  duvauceli
yang  didaratkan  di  beberapa  TPI pantai utara Jawa Tengah.
Diponegoro J. of Maquares , 2(4): 18- 27.
Pramono,  T.B.,  D.  Sanjayasari,  and  P.H.T. Soedibya.  2007.  Optimasi  pakan dengan  level  protein  dan  energi protein  untuk  pertumbuhan  calon induk  Ikan  Senggaringan  ( Mystus nigriceps ). J.  PROTEIN .,  15(2):  153- 157.
Prasetiawan.  N.R.,  T.W.  Agustini,  and  W.F. Ma’ruf. 2013. Penghambatan
pembentukan  histamin  pada  daging ikan  tongkol  ( Euthynnus  affinis ) selama  penyimpanan. J.  Pengolahan Hasil  Perikanan  Indonesia .  16(2): 151-158.  http://dx.doi.org/10.17844/ jphpi.v16i2.8049
Pratama,  R.I.,  M.Y.  Awaluddin,  and  S.
Ishmayana.  2011.  Analisis  komposisi asam  lemak  yang  terkandung  dalam ikan  tongkol,  layur  dan  tenggiri  dari Pameungpeuk,  Garut. J.  Akuatika . 2(2): 1-10.
Silbande,  A.,  S.  Adenet,  S.  Smith-Ravin,  J.
Joffraud, K. Rochefort, and F. Leroi . 2016.  Quality  assessment  of  ice- stored tropical yellowfin tuna
( Thunnus albacares ) and influence of vacuum  and  modified  atmosphere packaging. Food  Microbiology ,  60: 62-72. https://doi.org/10.1016/j.fm.
2016.06.016
Sitakar, N.M., Nurliana,  F. Jamin, M. Abrar, Z.H.  Manaf,  dan  Sugito.  2016. Pengaruh  suhu  pemeliharaan  dan masa  simpan  daging  ikan  nila ( Oreochromis niloticus ) pada penyimpanan  suhu  -20°C  terhadap total  jumlah  bakteri. J.  Medika Veterinaria , 10(2): 163-165.
Sormin,  R.D.,  F.  Pattipeilohy,  and  N.
Koritelu. 2016. The effect of cool box insulator on the temperature characteristics and quality of Decapterus  russelly (Rüppell,  1830) during  chilling  preservation. Aquatic Procedia ,  7:195-200.  https://doi.org/
10.1016/j.aqpro.2016.07.027
Takahashi,  H.,  B.  Kimura,  M.  Yoshikawa and  T.  Fujii.  2003.  Cloning  and sequencing of the histidine decarboxylase genes of gram negative, histamine producing bacteria  and  their  application  in detection  and  identification  of  these organism  in  fish. Applied  and Environmental Microbiology ,
69(5):2568-2579.  https://doi.org/10.
1128/AEM.69.5.2568-2579.2003
Wijayanti,  I.,  F.  Swastawat,  and  T.W.
Agustini.  2006.  Pola  perubahan  k- value  dan  ORP  ikan  cakalang ( Katsuwonus  pelamis )  pada  suhu rendah (±11°C). J. Pesisir Laut , 2(1): 1-12.
Received : 16 November 2018 Reviewed : 18 January 2019 Accepted : 04 July 2019