## Pengaruh Pemberian Minuman Cokelat (Theobroma cacao L.) Terhadap Berat Basah Organ Hati Tikus Diabetes Melitus
Putri Rahayu Ratri 1 , Adhiningsih Yulianti 2 , Arisanty Nur Setia Restuti 3
1) Program Studi Gizi Klinik, Jurusan Kesehatan, Politeknik Negeri Jember, putri_ratri@polije.ac.id 2) Program Studi Gizi Klinik, Jurusan Kesehatan, Politeknik Negeri Jember, adhiningsih@polije.ac.id 3) Program Studi Gizi Klinik, Jurusan Kesehatan, Politeknik Negeri Jember, arisanty @polije.ac.id

## ABSTRAK
Kakao (Theobroma cacao L.) diketahui memiliki potensi yang sangat besar karna mengandung vitamin A1, B1, B2, C, D, dan E serta mineral seperti zat besi, zinc, fosfor, magnesium, dan tembaga. Selain itu, cokelat juga kaya bahan aktif antioksidan seperti senyawa fenolik, prociandin, dan flavonoid yang mampu meredam efek buruk antioksidan di dalam tubuh. Pemberian cokelat pada hewan coba maupun intervensi konsumsi pada manusia mampu mencegh dan mengatasi  masalah  beberapa  penyakit  salah  satunya  diabetes  melitus.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  melihat pengaruh dari pemberian minuman bubuk cokelat terhadap berat basah organ hati tikus diabetes melitus. Desain penelitian yang digunakan adalah penelitian eksperimental menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan desain post test only control group. Sampel percobaan menggunakan lima belas tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprangue Dawley. Tikus percobaan tersebut dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif (K-) yaitu tikus  normal  tanpa  perlakuan  apapun,  kelompok  positif  yaitu  kelompok  tikus  diabetes  melitus  (K+);  kelompok perlakuan 1 (KP1), kelompok perlakuan 2 (KP2), kelompok perlakuan 3 (KP3) yaitu kelompok tikus diabetes melitus yang  diberikan  perlakuan  minuman  cokelat  dengan  konsentrasi  minuman  bubuk  cokelat  dosis  2%,  4%  dan  6%. Analisis data dilakukan menggunakan uji One Way ANOVA. Hasil penelitian menunjukan berat organ pada kelompok K-  =  10,46±0,44;  K+  =  11,49±0,39;  KP1  =  9,95±0,60;  KP2  =  11,30±0,60;  KP3  =  11.09±0,90.  Analisis  statistik menunjukan  bahwa  tidak  adanya  perbedaan  signifikan  tiap  perlakuan  dengan  nilai  p  =  0,077.  Kesimpulan  pada penelitian mengenai pengaruh pemberian minuman cokelat terhadap berat basah organ hati tikus diabetes melitus menunjukan  bahwa  pemberian  minuman  bubuk  cokelat  dengan  konsentrasi  2%,  4%  dan  6%  belum  mampu memengaruhi berat basah organ hati secara signifikan.

## Kata kunci: cokelat, berat basah hati, diabetes melitus

## ABSTRACT
Cacao (Theobroma cacao L.) is known to have enormous potential advantages because they contain vitamins A1, B1, B2, C, D, and E as well as minerals such as iron, zinc, phosphorus, magnesium, and copper. In addition, chocolate is also known to be rich in active antioxidant ingredients such as phenolic compounds, prociandin, and flavonoids which can reduce the bad effects of antioxidants in the body. giving chocolate to experimental animals and consumption interventions in humans can prevent and overcome the problem of several diseases, one of which is diabetes mellitus. The purpose of this study was to see the effect of giving cocoa powder drink to the wet weight of the liver in rats with diabetes mellitus. The research design used was experimental research using a completely randomized design with a post-test only control group design. The experimental sample used fifteen male white rats (Rattus norvegicus) Sprague Dawley strain. The experimental mice were divided into 5 groups, namely the negative control group (K-), namely normal rats without any treatment, the positive group, namely the diabetes mellitus (K +) group; treatment group 1 (KP1), treatment group 2 (KP2), treatment group 3 (KP3), namely the diabetes mellitus group of rats that were given the treatment of chocolate drink with a concentration of cocoa powder drink doses of 2%, 4% and 6%. Data analysis was performed using the One Way ANOVA test. Results: The results showed that the organ weight in the group K- = 10.46 ± 0.44; K + = 11.49 ± 0.39; KP1 = 9.95 ± 0.60; KP2 = 11.30 ± 0.60; KP3 = 11.09± 0.90. Statistical analysis showed that there was no significant difference for each treatment with a value of p = 0.077. The conclusions in the study regarding the effect of giving chocolate drink on the wet weight of the liver in rats with diabetes mellitus showed that giving cocoa powder with a concentration of 2%, 4% and 6% was not able to significantly affect the wet weight of the liver.

## Keywords: chocolate, liver weight, diabetes melitus
*  Korespondensi  Author  :  Putri  Rahayu  Ratri,  Politeknik  Negeri  Jember, putri_ratri@polije.ac.id , +6821384105501

## I. PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara yang memiliki kepadatan penduduk yang cukup tinggi.  Hasil  survey  Badan  Pusat  Statistik Indonesia  pada  tahun  2020  menunjukan  jumlah penduduk  Indonesia  pada  tahun  2019  adalah 268.074.600  jiwa  dengan  laju  pertumbuhan penduduk  sebesar  1,31%  terhitung  sejak  2010- 2019. 1 Meningkatnya  jumlah  penduduk  tiap tahunnya  menyebabkan  kebutuhan  akan  nutrisi yang  semakin  tinggi.  Ketahanan  pangan  yang stabil harus selalu diupayakan agar selalu tercipta kesejahteraan sosial. 2,3
Berbagai  cara  dilakukan  untuk  dapat menciptakan  ketahanan  pangan  salah  satunya adalah  mengembangkan  pangan  fungsional dengan memanfaatkan potensi dari sumber daya pangan lokal. Pengembangan pangan fungsional bukan  hanya  menitikberatkan  pada  kandungan zat gizi namun juga eksplorasi dan pengembangan  potensi  zat  non  gizi  seperti komponen bioaktif. Komponen bioaktif tersebut diketahui mampu memberikan efek menyehatkan dan dapat mencegah penyakit tertentu. Salah satu bahan  pangan  lokal  yang  memiliki  potensi  cukup besar adalah cokelat ( Theobroma cacao ). 3
Biji cokelat diketahui memiliki potensi yang sangat  besar  karna  mengandung  vitamin  A1,  B1, B2, C, D, dan E serta mineral seperti zat besi, zinc, fosfor, magnesium, dan tembaga. Selain itu cokelat juga kaya bahan aktif antioksidan seperti senyawa fenolik,  prociandin,  dan  flavonoid  yang  mampu meredam efek buruk antioksidan di dalam tubuh. 3,4
Beberapa  hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  biji kakao  memiliki  kandungan  flavonol  monomerik seperti  katekin  dan  epikatekin  serta  flavonol oligomerik  (prociandin)  yang  diketahui  mampu menyediakan pertahanan terhadap aktivitas Reactive  Oxygen  Species (ROS). 4 Menurut Kelishadi  (2005)  cokelat  memiliki  nilai  ORAC ( Oxygen Reactive Species Capacity ) hingga 13.120 unit/100  gram.  Angka  tersebut  merupakan  nilai tertinggi bila dibandingkan dengan produk pangan fungsional  dari  bahan  alam  lain  seperti  kelompok buah  beri,  kale,  raisin,  bayam,  brokoli,  alfalfa, anggur,  jeruk,  ceri,  bawang  merah,  jagung,  dan terong. 5
Beberapa  penelitian  menunjukan  bahwa pemberian  cokelat  pada  hewan  coba  maupun
intervensi  konsumsi  pada  manusia  mampu mencegah  dan  mengatasi  masalah  beberapa penyakit  salah  satunya  diabetes  melitus.  Seperti penelitian  yang  dilakukan  Grassi et  al. (2004) menggunakan sampel manusia sehat menunjukan bahwa pemberian dark cokelat pada mampu  meningkatkan  sensitifitas  dan  resistensi insulin. 6 Jalil et al. (2008) melakukan penelitian mengenai    pengaruh  ekstrak  cokelat  terhadap glukometabolisme,  stress  oksidatif  dan  enzim oksidasi pada tikus obes-diabetes. Hasil penelitiannya menunjukkan  bahwa  suplementasi ekstrak  kakao  berpengaruh  terhadap  pengendalian glukosa post  prandial tetapi  tidak  untuk  jangka panjang (4 minggu). Selain itu, suplementasi kakao dapat mengurangi asam lemak bebas plasma yang bersirkulasi dan 8-isoprostane serta dapat meningkatkan sistem pertahanan antioksidan. 7
Penelitian Marco et al. (2014) menunjukan bahwa  pemberian  bubuk  cokelat  mampu menormalkan  berat  badan  mencit  diabetes melitus 8 .  Selanjutnya  penelitian  eksperimental yang  dilakukan  oleh  Olasope et  al. (2016) menunjukan  bahwa  bubuk  cokelat  mampu berperan  sebagai  agen  anti  diabetes  dengan percobaan pada tikus diabetes melitus selama tiga minggu. Hasil penelitiannya menunjukan bahwa bubuk  kakao  dapat  meningkatkan  berat  badan serta dapat menurunkan kadar gukosa darah tikus diabetes melitus yang diinduksi aloksan. 9
Berdasarkan  penelitian-penelitian  diatas dapat diketahui bahwa kakao dan olahan cokelat kaya akan senyawa antioksidan yang bermanfaat bagi  kesehatan,  namun  dalam  pemanfaatannya diperlukan kajian yang luas dan mendalam untuk mengetahui mekanisme, dosis, dan cara konsumsi yang tepat yang tepat dalam mencegah dan  mengatasi  masalah  kesehatan  seperti penyakit metabolisme khususnya diabetes melitus. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk    melihat  pengaruh  pemberian  minuman cokelat  dengan  berbagai  dosis  terhadap  berat basah organ hati tikus diabetes melitus. Penelitian ini  merupakan  salah  satu  langkah  yang diharapkan  mampu  memberikan  kontribusi dalam  upaya  mendukung  kesejahteraan  dan ketahanan pangan lokal.

## II. METODOLOGI
Desain  penelitian  yang  digunakan  adalah penelitian eksperimental menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan desain post test only control group .  Variabel  bebas  dalam  penelitian  ini  adalah pemberian  minuman  cokelat,  sedangkan  Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah berat basah organ  hati/hepar.  Sampel  penelitian  menggunakan hewan  coba  berupa  lima  belas  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  jantan  galur Sprangue  Dawley . Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  biomedik Program Studi Gizi Klinik Polteknik Negeri Jember dan di Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember,
Tikus  percobaan  tersebut  kemudian  dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif (K-)  yaitu  tikus  normal  tanpa  perlakuan  apapun, kelompok  positif  yaitu  kelompok  tikus  diabetes melitus  (K+);  kelompok  perlakuan  1  (KP1), kelompok perlakuan 2 (KP2), kelompok perlakuan 3 (KP3) yaitu kelompok tikus diabetes melitus yang diberikan  perlakuan  minuman  cokelat  dengan konsentrasi minuman bubuk cokelat dosis 2%, 4% dan  6%.  Empat  kelompok  tikus  model  diabetes melitus  (K+,  KP1,  KP2,  KP3)  diperoleh  dengan cara pemberian pakan HFD ( High Fat Diet ) dengan komposisi  50%  Rat  Bio,  25%  Tepung  terigu,  2% Kolesterol, 5% minyak babi  selama 6 minggu lalu ditambahkan dengan perlakuan injeksi streptozotocin  (STZ)  dengan  dosis  30mg/kg  BB secara intraperitoneal.
Bubuk kakao yang digunakan pada penelitian ini berasal dari Pusat Penelitian Kopi dan Kakao  Indonesia  ( Indonesian  Coffee  and  Cocoa Research Institute / ICCRI) yang ada di kabupaten Jember  Propinsi  Jawa  Timur.  Bubuk  kakao  yang digunakan berasal dari bungkil kakao yang digiling kemudian  disaring  hingga  mendapatkan  ukuran seragam  95-110  mikron.  Bubuk  kakao  kemudian dibuat minuman dengan cara melarutkan dengan air matang tanpa tambahan apapun dan dibuat menjadi konsentrasi 2%, 4%, dan 6%. 9 Pemberian minuman cokelat diberikan 1 kali/hari selama 14 hari.
Cara  membuat  larutan  minuman  bubuk kakao 2%, 4% dan 6% adalah sebagai berikut:
a) Larutan  minuman  kakao  2%  dengan  cara melarutkan  4  gr  bubuk  kakao  dalam  30  ml  air mendidih,  setelah  kemudian  disondekan  3  ml/ tikus/ hari.
b) Larutan  minuman  kakao  4%  dengan  cara melarutkan 8 gr bubuk kakao dilarutkan dalam 30 ml air mendidih, kemudian disondekan 3 ml/ tikus/ hari.
c) Larutan  minuman  kakao  6%  dengan  cara melarutkan 12 gr bubuk kakao dilarutkan dalam 40 ml air mendidih, kemudian disondekan 4 ml/ tikus/ hari
Setelah pemberian minuman cokelat terhadap  tikus  diabetes  selama  14  hari  lalu  tikus di euthanasia dengan  metode dislokasi  serviks kemudian dilakukan  isolasi  organ hati.  Organ  hati atau  hepar  yang  telah  diisolasi  kemudian  dicuci dengan larutan fisiologis dan ditimbang.
Data yang berskala rasio seperti berat organ basah ditampilkan dalam bentuk mean dan standar deviasi.  Analisis  univariat  dan  bivariat  diuji menggunakan software SPSS 22. Uji  homogenitas untuk melihat normalitas distribusi data menggunakan uji Saphiro Wilk . Nilai p > 0,05 maka data  berdistribusi  normal,  sehingga  digunakan  Uji one-way ANOVA. Uji One-way ANOVA digunakan untuk  melihat  secara  umum  berat  badan  tikus didalam kelompok dan antar kelompok. Alur kerja pada metode penelitian dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1. Alur kerja metode penelitian

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan dengan
menggunakan sampel tikus wistar diabetes melitus. Model  diabetes  melitus  dilakukan  dengan  cara pemberian  pakan High  Fat  Diet (HFD).  Pakan tinggi  kalori  dan  lemak  diketahui  dapat  memicu terjadinya  gangguan  pada  metabolisme  glukosa dalam  tubuh  pada  hewan  coba.  Kadar  glukosa dalam darah yang tinggi secara terus menerus akan memicu terjadinya resistensi insulin. Akibatnya sel target insulin seperti otot yang bertugas memetabolisme  glukosa  idak  mampu  merespon keberadaan  insulin.  Selain  itu  pakan  HFD  yang tinggi  kadar  lemak  akan  memicu  tingginya  kadar asam  lemak  bebas  dalam  darah.  Tingginya  kadar
lemak  bebas  dalam  darah  dapat  memicu peningkatan  aktivitas Reactive  oxygen  species (ROS) /  stress oksidatif  yang memicu pengaktifan kaskade  sinyaling  kinase  serin/treonin  multiple. Kinase  tersebut  dapat  merusak  proses  persinyalan hormon  insulin  dengan  meningkatkan  fosforilasi serin  yang  bersifat  menghambat insulin  receptor substrate (IRS). 9-12
Selain  pemberian  pakan  HFD,  tikus  model diabetes  melitus  juga  diinduksi  oleh  injeksi Streptozotocin  (STZ)  dengan  dosis  30  mg/kg  bb secara  intraperitoneal.  Menurut  Nugroho  (2006) induksi  STZ  dapat  memprofile  metabolisme diabetes  melitus  tipe  2  pada  tikus 13 .  STZ merupakan senyawa 2-deoxy-2-(3-(methyl-3- nitrosoureido)  –  D  glucopyranose yang  dapat merusak DNA pada inti sel β pankreas. Perubahan yang terjadi pada sel β pankreas akibat induksi STZ dapat  menyebabkan  disfungsi  pankreas  dalam sekresi insulin. 13,14
Tikus  model  diabetes  melitus  kemudian diberikan  perlakuan  pemberian  minuman  cokelat dengan dosis berbeda (2%,4%, dan 6%) dan dilihat pengaruhnya terhadap berat basah organ hati/hepar. Data  rerata  berat  basah  organ  hati  tiap  kelompok perlakuan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rerata berat basah organ hepar Perlakuan Mean (g/dl) Standar Deviasi P Kontrol Negatif 10,46 0,44 0,077 Kontrol Positif 11,49 0,39 Perlakuan 1 (Minuman bubuk cokelat 2%) 9,95 0,60 Perlakuan 2 (Minuman bubuk cokelat 4%) 11,30 0,60 Perlakuan 3 (Minuman bubuk cokelat 6%) 11,09 0,90
Uji One  Way  ANOVA dengan  p  <  α  (α  =  0,05) menunjukkan signifikan
Berat  basah  organ  hepar  digunakan  sebagai parameter  dalam  penelitian  ini  karena  sesuai dengan  penelitian  Rust  (2002)  yang  menyatakan menyatakan bahwa perubahan bobot, fisiologis, dan morfologis  hepar  berkaitan  dengan  pakan  yang dikonsumsi, kesehatan, dan asupan zat toksik dalam tubuh  hewan. 16 Wahyuningtyas  dkk.  (2018)
menyatakan bahwa kerusakan sel-sel hati umumnya diikuti  oleh penurunan atau kenaikan bobot  badan serta bobot organ yang signifikan 17 .
Berdasarkan uji One Way ANOVA penelitian diketahui  bahwa  pemberian  minuman  cokelat belum  mampu  memengaruhi  berat  badan  organ tikus secara signifikan. Hal dapat  disebabkan oleh kemampuan  hati  untuk  melakukan  regenerasi  sel. Kerusakan  hati  yang  sifatnya  degeneratif  dapat bersifat reversible dimana sel hati dapat kembali ke struktur  normal  sehingga  menyebabkan  tidak adanya perbedaan yang signifikan pada berat basah organ hati tikus pada tiap kelompok perlakuan. 18,19
Sel-sel  hepatosit  pada  hepar  merupakan  sel yang mempunyai aktivitas tinggi, sehingga mudah rusak,  namun  juga  mempunyai  sifat  mudah beregenerasi dengan cara mitosis untuk menggantikan  sel  yang  rusak. 19 Oleh  karena  itu diperlukan penelitian lebih lanjut dengan penambahan waktu pemberian perlakuan agar efek perbaikan  dari  senyawa  antioksidan  yang  terdapat dalam kakao dapat terlihat secara signifikan.
Walaupun  berdasarkan  analisis  statistik yang  menunjukan  tidak  adanya  perbedaan  yang signifikan  antar  perlakuan,  namun  dapat  dilihat pada Tabel 1 bahwa nilai rerata berat basah organ hati  tidak  pada  kelompok  perlakuan  kotrol  positif (tikus  diabetes  melitus  yang  tidak  diberikan minuman  cokelat)  menunjukan  angka  rerata tertinggi  (11,49  ±  0,39)  sedangkan  nilai  rerata kelompok tikus yang diberikan perlakuan minuman cokelat  berada  di  bawah  nilai  rerata  kelompok kontrol positif (KP1 = 9.95 ± 0.60; KP2 = 11.30 ± 0.60;  KP3  =  11.09±  0.90).  Fenomena  tersebut kemungkinan terjadi karena pada kelompok kontrol positif sel-sel hati mulai mengalami pembengkakan.  Kerusakan  sel  hepatosit  dimulai dengan  adanya  pembengkakan  sel  yang  kemudian diikuti  oleh  kejadian  atrofi  dan  nekrosis 19 .  Hal tersebut  juga  menjelaskan  pada  kelompok  tikus yang diberikan minuman cokelat dengan dosis 6% menunjukan penurunan berat berat organ.
Kemungkinan  dosis  6%  memberikan  efek  yang lebih baik dari dosis 4%.
Penurunan  berat  organ  pada  kelompok perlakuan  yang  diberikan  minuman  cokelat mendekati  nilai  rerata  berat  organ  hati  pada kelompok kontrol negatif kemungkinan dikarenakan  adanya  aktifitas  dari  senyawa antioksidan  yagg  terkandung  dalam  minuman
cokelat (senyawa flavonoid) yang mampu meredam efek  buruk  dari  adanya  ROS  /  stres  oksidatif. Penelitian  oleh  Agata  dkk  (20016)  menunjukan bahwa senyawa antioksidan flavonoid dalam daun sirsak mampu  memengaruhi berat organ hati secara signifikan 20 .  Sebagai  tambahan  bukti  manfaat antioksidan  dalam  kakao  adalah  penelitian sebelumnya yang telah dilakukan  oleh Restuti dkk pada  tahun  2018    yang  membuktikan  bahwa senyawa  antioksidan  flavonoid  yang  terkandung dalam  bubuk  kakao  dapat  menurunkan  gula  darah puasa tikus diabetes melitus. 21

## IV. SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan pada penelitian mengenai pengaruh  pemberian  minuman  cokelat  terhadap berat  basah  organ  hati  tikus  diabetes  melitus menunjukan  bahwa  pemberian  minuman  bubuk cokelat dengan konsentrasi 2%, 4% dan 6% belum mampu  berpengaruh  terhadap  berat  basah  organ hati secara signifikan (p = 0,077). Oleh karena itu peneliti menyarankan perlu dilakukannya penelitian lebih  lanjut  secara  mendalam  mengenai  efek minuman  cokelat  terhadap  pencegahan  dan pengobatan diabetes melitus. Penelitian mendalam yang  disarankan  dari  sisi  pengaruhnya  terhadap organ-organ lain yang berperan dalam metabolisme seperti pankreas, ginjal, dan sebagainya. Penelitian dengan  parameter  histologis  organ  maupun molekular (analisis gen dan protein yang berperan) juga  perlu  dilakukan  untuk  mendapatkan  data pendukung  penegakan  dosis  dan  cara  konsumsi yang tepat.

## V. TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada DIPA  Politeknik  Negeri  Jember  atas  pendanaan hibah PNBP sesuai dengan
SP  DIPA-023.18.2.677607/2020,  Tanggal  27 Desember 2019, Tahun Anggaran 2020.

## REFERENSI
1. Badan  Pusat  Statistik  Indonesia.  Statistik Indonesia  2020.  Badan  Pusat  Statistik.  Jakarta; 2020.
2. Rivani  E.  Penentuan  Dimesi  Serta  Indikator Ketahanan  Pangan  Di  Indonesia  :  Kaji  Ulang Metode  Dewan  Ketahanan  Pangan-World  Food Program. Widyariset.  2010;15(1): 151-162.
3. Ikrawan  Y,  Hasnelly,  Stahrudin  D.  Sifat
fungsional dark  chocolate yang  bergula  rendah kalori  dengan  penambahan green  tea dan soy powder. Dalam. Peran ahli teknolog pangan dalam mewujudkan ketahanan pangan nasional. Seminar Nasional  Perhimpunan  Ahli  Teknologi  Pangan Indonesia (PATPI). Bandar Lampung: 2017.
4. Sudibyo A. Peran cokelat sebagai produk pangan derivate  kakao  yang  menyehatkan.  Jurnal  Riset Industri. 2012; 6(1): 23-40.
5. Kelishadi,  RMD.  Cacao  to  Cocoa  to  Chocolate  : Healthy  Food?  ARYA  Journal.  2005;  1(1):  28  – 34.
6. Grassi, D., Lippi, S., Nicozione, S., Desideri, G. & Ferri,  C.    Short-term  administration  of  dark chocolate  is  followed  by  significant  increase  in insulin sensitivity and a decrease in blood pressure in  healthy  persons.  American  Journal of  Clinical Nutrition. 2004; 81: 611 – 614.
7. Jalil  AMH,  Ismail  A,  Pei  CP,  Hamid  M, Kamaruddin  SHS.  Effect  of  CocoExtract  on Glucometabolism, Oxidative Stress, and Antioxidant Enzymes in Obese-Diabetic (Ob-Db) Rats. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2008; 56(17),
8. Marco  Fidaleo,  Anna  Fracassi,  Antonio  Zuorro, Roberto  Lavecchia,  Sandra  Moreno,  Claudia Sartori. Cocoa protective effects against abnormal fat storage and oxidative stress induced by a high fat diet involve PP ARa signaling activation. Food Funct. 2014;5:2931-2939.
9. Olasope, T.M., G.T. Fadupin, O. Olubamiwa, dan C.O.  Jayeola.  Glucose-lowering  Potential  of Cocoa  Powder  Intake  -  An  Avenue  for  Positive Management of Diabetes Mellitus. British Journal of Medicine and Medical Research, 2016; 16(2):
1–7.
10. Park J. Increase in Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase in Adipocytes Stimulates
Oxidative  Stress  and  Inflammatory  Sig-  nals.
Diabetes. 2006; (55):2939-2949.
11. Qatanani M. Mechanisms of obesity-as- sociated insulin  resistance:  many  choices  on  the  menu. Genes & Development. 2007;  (21): 1443- 1455
12. Dewi  M.  Resistensi  Insulin  Terkait  Obesitas: Mekanisme  Endokrin  dan  Intrinsik  Sel.  Jurnal Gizi dan Pangan. 2007; 2(2): 49 – 54.
13. Nugroho  AE.  2006.  Hewan  percobaan  diabetes mellitus:  patologi  dan  mekanisme  aksi  dia- betogenik. Jurnal Biodiversitas 7(4):378- 382.
14. Kusumawati, D. 2016. Bersahabat dengan Hewan Coba . Yogyakarta: Gadjah mada University Press.
15. King, A.J.F. 2012. The use of Animal Models in
Diabetes Research. British Journal of
Pharmacology ,  nomor  166,  halaman  877-894. [serial online]. www.brjpharmacol.org. DOI:10.1111/j.1476-5381.2012.01911.x.  [4  juni 2017].
16. Rust,  M.B.  2002.  Nutritional  Physiology.  In: Halver,  J.E.,  R.W.  Hardy(eds.).  Fish  nutrition. USA: Academic Press. 2002
17. Wahyuningtyas, P., A. J. Sitasiwi, S. M. Mardiati. 2018.  Hepatosomatic  Index  (HSI)  dan  Diameter Hepatosit  Mencit  ( Mus  musculus L)  setelah paparan ekstrak air biji pepaya ( Carica papaya L). Jurnal Biologi 7 (1): 8- 17.
18. Maulida, A., I. Syafruddin, H. Salomo. Pengaruh Pemberian Vitamin C dan E Terhadap Gambaran Histologis Hepar Mencit ( Mus musculus L.) yang Dipajankan  Monosodium  Glutamat  (MSG). Fakultas  MIPA,  Universitas  Sumatera  Utara (USU). 2013.
19. Utari, K.D., T .R. Saraswati. 2009. Efek Rebusan Daun T apak Dara pada Dosis dan Frekuensi yang Berbeda  terhadap  Kerusakan  dan  Akumulasi Glikogen  pada  Hepar  Mencit  ( Mus  musculus ). Jurnal Bioma. 11(1): 1-5.
20. Agata A, Widiastuti EL, Susanto GN, Sutaryoso. Respon  Histopatologis  Hepar  Mencit  ( Mus musculus )  yang  diinduksi  Benzo  (  )  Piren terhadap  Pemberian  Taurin  dan  Ekstrak  Daun Sirsak ( Annona muricata ). Jurnal Natur Indonesia. 2016;16(2): 54 – 63.
21. Restuti  ANS,  Yulianti  A,  Nuraini  N.  2018. Intervensi  bubuk  kakao  ( Theobroma  caco L.  ) terhadap perubahan kadar gula darah puasa tikus Sprague  Dawley  Diabetes  Melitus.  Jurnal  Riset Kesehatan. 2018:. 7(2): 57 – 60.