ANALISIS AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN MANGROVE Avicennia marina DARI KABUPATEN TRENGGALEK DAN KABUPATEN PASURUAN TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus DAN Vibrio alginolyticus
Ridha Handriany Danata , Ade Yamindago
Program Studi Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya e-mail: adeydago@ub.ac.id

## ABSTRAK
Avicennia  marina  mampu  beradaptasi  pada  habitat  pasang-surut  dan  memiliki  toleransi  salinitas bervariasi.  Bentuk  adaptasi  tersebut  berpotensi  mempengaruhi  komposisi  senyawa  metabolit sekunder  A.  marina.  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  komposisi  senyawa  bioaktif  yang terdapat pada ekstrak daun A. marina dari Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten Pasuruan dan mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  A.  marina  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Vibrio  alginolyticus.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  kandungan alkaloid,  flavonoid,  dan  saponin  pada  ekstrak  A.  marina  dari  kedua  lokasi.  Namun,  kandungan senyawa  Terpenoid  dan  Tanin  hanya  ditemukan  pada  stasiun  dengan  kondisi  tertentu.  Hasil  uji aktivitas antibakteri ekstrak daun A. marina dari Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten Pasuruan terhadap  S.  aureus  menunjukkan  hasil  rata-rata  diameter  zona  bening  sebesar  4,43 –  5,79  mm dan terhadap V. alginolyticus sebesar 4,25 – 5,48 mm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun mangrove  A.  marina  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  S.  aureus  dan  V.  alginolyticus. Perbedaan  habitat  tidak  memberikan  pengaruh  yang  signifikan  terhadap  kemampuan  daya hambat, tetapi pada komposisi senyawa bioaktif.
Kata Kunci : aktivitas antibakteri, Avicennia marina, Kabupaten Pasuruan, Kabupaten Trenggalek, senyawa metabolit sekunder

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY ANALYSIS OF LEAF EXTRACT FROM DISTRICT MANGROVE
Avicennia marina PASURUAN TRENGGALEK AND ON THE GROWTH AND Staphylococcus aureus, Vibrio alginolyticus

## ABSTRACT
Avicennia  marina  capable  of  adapting  to  the  habitat  in  tidal  and  have  varying  salinity  tolerance. Adaptation  has  the  potential  to affect  the  composition  of secondary  metabolites,  A.  marina. This study aims to determine the composition of bioactive compounds contained in extracts of leaves of A. marina of Trenggalek and Pasuruan and determine the antibacterial activity of the extracts of A.  marina  in  inhibiting  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  and  Vibrio  alginolyticus.  The  test results showed phytochemical content of alkaloids, flavonoids and saponins in the extracts of A. marina  from  both  locations.  However,  the  compound  Terpenoid  and  Tannins  are  found  only  in stations with certain conditions. The test results of antibacterial activity of the extracts of leaves of A.  marina  Trenggalek  and  Pasuruan  against  S.  aureus  showed  an  average  yield  of  clear  zone diameter of 4.43 to 5.79 mm and against V. alginolyticus of 4.25 to 5.48  mm. This indicates that A. marina mangrove leaf extract can inhibit the growth of bacteria S. aureus and V. alginolyticus. Differences  habitat  does  not  have  a  significant  impact  on  the  ability  of  inhibition,  but  the composition of bioactive compounds.
Keywords: antibacterial activity, Avicennia marina, Pasuruan, secondary metabolites, Trenggalek
ISSN: 1907-9931

## PENDAHULUAN
Avicennia  marina atau  mangrove  api-api  (Famili Avicenniaceae )  merupakan  salah  satu  jenis mangrove yang terdapat di Indonesia (Macnae, 1968). Jenis mangrove tersebut umum ditemukan di wilayah pantai utara dan selatan Pulau Jawa antara lain Kabupaten Trenggalek dan Pasuruan, Jawa Timur.
A.  marina mengandung senyawa  bioaktif  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat  herbal  untuk mengobati  berbagai  macam  gangguan  biologis  seperti  sebagai  antioksidan,  antitumor, antiinflammatory, antialergi, antimikroba, antiageing , anticholinergic, anticonvulsant, antiartheroscelorotic dan antituberculin (Prabhu et  al., 2012).  Menurut  Amirkaveei et  al. (2011), ekstrak A. marina lebih efektif digunakan sebagai anti bakteri dibandingkan anti jamur.
Wibowo et al. (2009) mengemukakan bahwa A. marina yang terdapat di Indonesia mengandung senyawa alkaloid,  saponin,  tanin,  fenolik,  flavonoid,  triterpenoid dan glikosida serta  tidak ditemukan  adanya  steroid.  Namun,  Abeysinghe et  al. (2006)  menemukan  kandungan  senyawa steroid pada A. marina yang terdapat di Sri Lanka. Selanjutnya, Oktavianus (2013) menunjukkan adanya  perbedaan  kemampuan  antibakteri  secara  signifikan  sebagai  akibat  dari  perbedaan habitat mangrove A. marina yang di koleksi di Sulawesi Selatan.
Populasi mangrove A.  marina yang  terdapat  di  Pantai Utara (Kabupaten Pasuruan) dan Selatan (Kabupaten  Trenggalek)  memberikan  gambaran  perbedaan  habitat.  Fauzi  (2012)  menyatakan bahwa banyak sungai yang bermuara di pantai utara pulau Jawa. Sungai ini membawa sejumlah material organik dari daratan. Berbeda dengan Pantai Selatan Pulau Jawa  yang sebagian besar merupakan  pantai  berpasir  dan  memiliki  dasar  laut  yang  curam.  Perbedaan  habitat  tersebut diduga memberikan pengaruh terhadap komposisi senyawa bioaktif dan kemampuan anti bakteri pada mangrove A. marina .
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui komposisi senyawa bioaktif yang terdapat pada ekstrak daun A. marina pada Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten Pasuruan serta aktivitas antibakteri ekstrak A.  marina dalam  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Vibrio alginolyticus .

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  April-Mei  2014.  Pengambilan  sampel  daun  mangrove A. marina dilakukan  pada  6  stasiun  yang  terdiri  dari  3  stasiun  di  Desa  Cengkrong  Kecamatan Karanggandu,  Kabupaten  Trenggalek  dan  3  Stasiun  di  Desa  Penunggul  Kecamatan  Nguling, Kabupaten Pasuruan.
Proses  ekstraksi  daun  mangrove  dilakukan  di  Laboratorium  Ilmu  Kelautan  Fakultas  Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya, Malang.  Uji  fitokimia dan uji  aktivitas bakteri dilakukan di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Brawijaya, Malang.
Ekstraksi Daun Mangrove A. marina
Sampel daun diambil pada bagian  yang tua (berwarna hijau) dan utuh masing-masing sebanyak 1 kg. Sampel dimasukkan ke dalam plastik polyethylene dan dikeringkan dengan panas matahari hingga  kandungan  air  ±15%  (Prihanto et  al. ,  2012).  Sampel  daun  dikeringkan  dan  dihaluskan kemudian dimaserasi menggunakan pelarut metanol (perbandingan 1:3) selama 24 jam.

## Uji Fitokimia
Uji fitokimia yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1.  Uji Alkaloid (Prihanto et al. , 2011)
Lima ml ekstrak ditambahkan  dengan 2 ml HCl kemudian ditambahkan Reagen  Dragendorff. Ekstrak yang positif mengandung alkaloid akan menunjukkan warna orange atau merah pada presipitat.
2.  Uji Terpenoid (Prihanto et al ., 2011)
Lima  ml  ekstrak  ditambahkan  2  ml  kloroform  dan  3  ml  H 2 SO 4 secara  pelan  dan  hati-hati hingga terbentuk lapisan berwarna merah kecoklatan yang menunjukkan positif terpenoid
3.  Uji Saponin (Astuti, 2010)
Kurang  lebih  2  gram  serbuk  sampel  daun  kering  dilarutkan  dengan  20  ml  aquades  dan dididihkan dengan pemanas air, kemudian disaring menggunakan kertas saring. Sebanyak 10 ml  filtrat  ditambahkan  dengan  5  ml  aquades  dan  dikocok  hingga  terbentuk  busa  stabil. Selanjutnya,  ditambahkan olive  oil dan  dikocok  dengan  keras.  Ekstrak  mengandung  saponin apabila terbentuk emulsi yang stabil.
4.  Uji Flavonoid (Astuti, 2010)
Satu  gram  sampel  diekstraksi  dengan  5  ml  etanol  kemudian  tambahkan  beberapa  tetes  HCl pekat  dan  1,5  gram  magnesium.  Indikasi  adanya  flavonoid  ditandai  dengan  terbentuknya warna merah muda atau merah magenta dalam waktu 3 menit.
5.  Uji Tanin (Zohra et al. , 2012)
Kurang  lebih  1  ml  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  2  ml  air. Kemudian  ditambahkan  2-3  tetes  larutan  FeCl 2 dan  diamati  perubahan  warna  yang  terjadi. Warna hijau hingga biru kehijauan menandakan adanya cathechic tannin atau biru kehitaman yang menandakan adanya gallic tannin.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  cakram.  Isolat  murni  bakteri  uji diperbanyak/diremajakan menggunakan agar TSA miring dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24  jam.  Hasil  peremajaan  tersebut  diambil  beberapa  koloni  bakteri  dan  dipindahkan  ke  dalam larutan  NaFis  0,9%  menggunakan  jarum  ose.  Kekeruhan  larutan  dibandingkan  dengan  reagen Mc Farlan’s Barium Sulfat yang setara dengan ±10 7 sel bakteri.
Pembuatan media NA dilakukan dengan dua cara yaitu: (1) NA ( Nutrien Agar) sebanyak 1,6 gram dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan  ditambahkan dengan air laut steril sebanyak 80 ml. Media NA ini digunakan untuk penanaman bakteri Vibrio alginolyticus , (2) media NA untuk penanaman bakteri Staphylococcus  aureus yaitu  dengan  memasukkan  1,6  gram  NA  ke  dalam  erlenmeyer dan  ditambahkan  dengan  aquades  sebanyak  80  ml.  Kedua  erlenmeyer  diaduk  dan  direbus hingga  homogen  kemudian  disterilisasi  menggunakan  autoklaf.  Media  steril  dituang  ke  dalam cawan petri kurang lebih sebanyak 20 ml dan ditunggu hingga memadat. Penuangan dilakukan di dalam laminar flow untuk mencegah adanya kontaminasi.
Larutan perendaman ekstrak mangrove A. marina dengan konsentrasi 1600 ppm dibuat dengan melarutkan  1600  mg  ekstrak  ke  dalam  1  liter  metanol.  Larutan  perendaman  streptomicin  2% digunakan  sebagai  penanda  adanya  penghambatan  terhadap  pertumbuhan  bakteri  uji  dibuat dengan  melarutkan  2  gram  bubuk  streptomicin  ke  dalam  98  ml  aquades  (b/v).  Larutan perendaman  metanol  p.a  digunakan  untuk  menunjukkan  bahwa  pelarut  dalam  proses  ekstraksi tidak  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji  dibuat  dengan  menuangkan  20  ml  larutan metanol p.a ke dalam cawan petri.
Bakteri  diinokulasi  pada  media  menggunakan cotton  swab dengan  metode  tebar  ( spread  plate method), kemudian  meletakkan paper  disc yang  telah  mengandung  ekstrak  dari  masing-masih stasiun,  streptomicin,  dan  metanol  p.a  pada  media  agar  dengan  sedikit  ditekan  supaya  dapat meresap. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 35 o C.
ISSN: 1907-9931

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Daun Mangrove A. marina
Dari  daun  kering  sebanyak  150  gram  yang  diekstraksi  dengan  metanol  p.a  450  ml,  didapatkan hasil rendemen seperti pada Tabel 1 berikut ini:
Tabel 1. Hasil Rendemen Ekstrak Daun Mangrove A. marina
Lokasi Pengambilan Sampel Stasiun Rendemen Lama Perendaman (%) (jam) Trenggalek 1 3,97 26 2 5,38 30 3 3,68 26 Pasuruan 1 4,43 28 2 4,27 28 3 2,99 24

## Uji Fitokimia
Berdasarkan  uji  fitokimia  yang  dilakukan  pada  ekstrak  daun Avicennia  marina dari  Kabupaten Trenggalek  dan  Kabupaten  Pasuruan  dapat  diketahui  bahwa  ekstrak  dari  seluruh  stasiun  positif mengandung  alkaloid,  flavonoid,  dan  saponin.  Senyawa  tanin  hanya  ditemukan  di  stasiun  2 (Kabupaten  Pasuruan)  dan  senyawa  terpenoid  ditemukan  di  seluruh  stasiun  kecuali  stasiun  2 (Kabupaten Trenggalek) (Tabel 2).
Tabel 2. Uji Fitokimia
Lokasi Pengambilan Sampel S tas iun A lk a lo id F lav on o id S ap on in T an in T erpeno id Trenggalek 1 +
+ + - + 2 + + + - - 3 + + + - + Pasuruan 1 + + + - + 2 + + + + + 3 + + + - +

## Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak daun mangrove A.marina (setelah dikurangi dengan diameter kertas  cakram  sebesar  6  mm) terhadap S.  aureus dari  Kabupaten  Trenggalek  dan  Kabupaten Pasuruan  menunjukkan  hasil  rata-rata  diameter  zona  bening  sebesar  4,43-5,79  mm.  Hasil  uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  mangrove A.marina terhadap Vibrio  alginolyticus menunjukkan hasil rata-rata diameter zona bening sebesar 4,25-5,48 mm (Tabel 2) dan Gambar 1.
ISSN: 1907-9931

## Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Lokasi Penga mbilan Sampel S tas iun Diameter Zona Bening (mm) S.aureus V.alginolyticus Metan ol Pengulangan Rat a- rata Strepto - mycin Pengulangan Rata -rata Strepto - mycin 1 2 3 1 2 3 Trengg alek 1 6 4,2 8 3 4,43
19,4
4,4 3,3 5 5 4,25 13,69
0
2 8,2 4,4 4,1 5 5,58 6 4,2 5 6,2 5,48 0 3 10,0 5 2,3 2,3 8 4.91 5,18 2,4 6,3 8 4,65 0 Pasuru an 1 6,2 6,2 3 4,0 8 5,5 6 4,2 5 4,4 4,88 0 2 6,23 4,1 5 3,3 8 4,58 8 4,1 8 4,1 8 5,08 0 3 8,05 4,0 8 5,2 5 5,79 7,25 3,2 5 3,2 5 4,63 0
Gambar  1.  Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  (Ditandai  Dengan  Lingkaran) S.  aureus (a)  Kabupaten Trenggalek, (b) Kabupaten Pasuruan dan V. alginolyticus (c) Kabupaten Trenggalek, (d) Kabupaten Pasuruan

## Hasil Pengukuran Parameter Lingkungan
Hasil pengukuran parameter lingkungan menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada Salinitas dan suhu pada kedua lokasi penelitian tersebut (Tabel 4).
Tabel 4. Parameter Lingkungan
Stasiun Parameter Lingkungan Perairan Tanah pH DO Suhu Salinitas pH tanah Bahan Organik Trenggalek 1 7,29 10,1 32 5 6,3 5,27 2 7,11 10,5 31 2 5,35 2,01 3 7 9,3 30,7 4 5,3 2,6 Pasuruan 1 7,94 5,00 29,30 31,33 7,3 0,3 2 7,92 5,37 30,87 30,67 6,9 1,47 3 8,22 5,37 31,40 29,33 7,5 0,69

## Pembahasan Uji Fotokimia
Pada  stasiun  2  (Kabupaten  Pasuruan)  tidak  ditemukan  adanya  terpenoid.  Hal  ini  dapat disebabkan  oleh  salinitas  yang  rendah.  Menurut  Oku et  al. (2003),  senyawa  triterpenoid memainkan  peran  penting  untuk  melindungi  mangrove  dari  tekanan  garam  atau  salinitas.  Pada kondisi  salinitas  tinggi,  tumbuhan A.  marina dapat  mengubah  tingkat metabolit  sekunder  seperti triterpenoid  atau  senyawa  fenolik  untuk  meningkatkan  sistem  pertahanan  terhadap  tekanan oksidatif.  Hal  tersebut  berpotensi  mempengaruhi  kandungan  senyawa  terpenoid  pada  stasiun  2 Kabupaten Trenggalek yang diketahui memiliki salinitas 2 ‰ atau lebih rendah daripada stasiun lainnya (Tabel 4).
Hanya  pada  stasiun  2  (Kabupaten  Trenggalek)  yang  mengandung  tanin  yang  dapat disebabkan oleh pengaruh pH tanah. Berdasarkan penelitian  yang dilakukan oleh Ehike dan LeGare (1993), diketahui  bahwa  kandungan  tanin  dalam  tanaman  dipengaruhi  oleh  pH  tanah.  Kadar  pH  tanah yang  rendah  atau  cenderung  asam  berpotensi  mengurangi  produksi  tanin  oleh  tanaman.  Kadar pH tanah di stasiun 2 Kabupaten Pasuruan adalah 6,9 yang berarti lebih tinggi daripada pH tanah di  Kabupaten  Trenggalek  (5,3 –  6,3)  namun  paling  rendah  daripada  stasiun  lain  di  Kabupaten Pasuruan (7,3 di stasiun 1 dan 7,5 di stasiun 3) (Tabel 4).

## Pembahasan Uji Aktivitas Antibakteri
Perbedaan Zona Hambat Antara Bakteri Stapylococcus aureus dan Vibrio Alginolyticus
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  mangrove A.  marina dari  Kabupaten  Trenggalek  dan Kabupaten  Pasuruan  menunjukkan  adanya  zona  bening  sebagai  indikator  adanya  daerah hambatan. Hal ini berarti bahwa senyawa antimikrobial  yang  berdifusi ke dalam agar dari kertas cakram  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan V.  alginolyticus. Kontrol streptomicin yang digunakan untuk menunjukkan daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri uji menunjukkan  hasil  positif  (ada  zona  bening),  sedangkan  metanol  p.a  yang  digunakan  untuk menunjukkan bahwa  pelarut  yang  digunakan  dalam proses ekstraksi tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri uji menunjukkan hasil negatif (tidak ada zona bening).
Ekstrak  daun  mangrove A.  marina dengan  konsentrasi  1600  ppm  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus dengan  zona  hambatan  rata-rata  sebesar  4,43 –  5,79  mm  dan menghambat pertumbuhan bakteri V. alginolyticus dengan zona hambat rata-rata sebesar 4,25 – 5,48  mm,  sedikit  lebih  rendah  dibandingkan  dengan S.  aureus. Kemampuan  antibakteri  ekstrak metanol A. marina terhadap S. aureus juga ditunjukkan pada penelitian Subashree et al. (2010) yang menunjukkan bahwa zona bening yang dihasilkan pada S. aureus lebih besar dibandingkan dengan  bakteri  uji  yang  lain.  Menurut  Prihanto et  al. (2011),  hal  ini  dikarenakan S.  aureus merupakan  bakteri  gram  positif  yang  sensitif  terhadap  senyawa-senyawa  aktif  karena  dinding selnya tidak mengandung peptidoglikan seperti yang terdapat pada mikroba gram negatif.
Kemampuan  antibakteri  ekstrak  metanol A.  marina terhadap V.  alginolyticus masih  belum diketahui dengan baik. Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak A. marina memiliki kemampuan anti  bakteri.  Setiap  spesies  bakteri Vibrio menunjukkan  perbedaan  zona  hambat  yang  berbeda seperti pada V. parahaemolyticus (tidak ada zona bening) , V. flurialis (2 mm) dan V. splendidus (4 mm) (Subashree et al. , 2010).

## Pengaruh Perbedaan Habitat terhadap Zona Hambat
Ekstrak A.  marina yang  dikoleksi  dari  Kabupaten  Trenggalek  dan  Kabupaten  Pasuruan menunjukkan  kemampuan  anti  bakteri.  Namun,  hasil  uji  One-Way  Anova  tidak  menunjukkan perbedaan yang nyata antara aktivitas antibakteri yang dihasilkan oleh ekstrak daun mangrove A. marina pada  kedua  lokasi  tersebut,  baik  pada  bakteri  S.  Aureus  dengan  nilai sig .  ( p-value ) sebesar  0,554  (>  0,05)  dan  bakteri V.  alginolyticus dengan  nilai sig.  (p-value) sebesar  0,861  (> 0,05).
Penelitian  yang  dilakukan  Oktavianus  (2010)  menunjukkan  bahwa  kemampuan  antibakteri ekstrak daun mangrove A. marina yang diambil dari Kabupaten Maros lebih baik dari pada  yang
diambil dari Kabupaten Takalar, Sulawesi Selatan. Hal ini disebabkan karena habitat A. marina di Kabupaten  Maros  berada  di  sekitar  pemukiman  penduduk  dan  aktivitas  masyarakat  sehari-hari, sedangkan habitat A. marina di Kabupaten Takalar masih alami. Faktor abiotik yang berasal dari aktivitas  manusia  di  sekitar  habitat  mangrove A.  marina diduga  menjadi  penyebab  kemampuan anti bakteri pada Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten Pasuruan tidak signifikan. Gomez-Parra et al. (2000) mengemukakan bahwa gangguan  dari faktor antropogenik seperti  adanya  buangan limbah industri dan rumah tangga mempengaruhi kandungan senyawa metabolit sekunder pada organisme sebagai bentuk adaptasi pada kondisi lingkungan tercemar. Hal ini sebagaimana yang dikemukakan  Burhanuddin et  al. (2007),  mangrove A.  marina memiliki  system  pengenceran (dilusi) untuk beradaptasi dengan logam berat yang ada di lingkungannya.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan dari penelitian ini yaitu:
1.  Terdapat  perbedaan  komposisi  senyawa  bioaktif  atau  senyawa  metabolit  sekunder  pada ekstrak  daun  mangrove Avicennia  marina dari  Kabupaten  Trenggalek  dan  Kabupaten Pasuruan.  Tanin  hanya  ditemukan  pada  stasiun  2  (Kabupaten  Pasuruan)  dan  terpenoid ditemukan pada semua stasiun kecuali stasiun 2 (Kabupaten Trenggalek).
2.  Aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  daun  mangrove A.  marina yang  diperoleh  dari  Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten Pasuruan dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan V. alginolyticus tidak menunjukkan adanya perbedaan yang nyata.
Penelitian  lebih  lanjut  sebaiknya  memperhatikan  pengaruh  aktivitas  antropogenik  sehingga diperoleh pemahaman yang lebih komprehensif.

## DAFTAR PUSTAKA
Abeysinghe,  P.  D.,  &  Wanigatunge,  R.  P.  (2006).  Evaluation  of  antibacterial  activity  of  different mangrove plant extracts. Ruhuna Journal of Science, 1 , 104-112.
Amirkaveei,  S.,  &  Behbahani,  B.  A.  (2011).  Antimicrobial  effect  of  mangrove  extract  on Escherichia coli dan Penicillium digitatum. IPCBEE, 9, 185-188. Astuti,  M.  S.  (2010). Skrining  fitokimia  dan  uji  aktifitas  antibiotika  ekstrak  etanol  daun,  batang, bunga  dan  umbi  tanaman  binahong  (Auredera  cordifolia  (Ten  Steenis). Universitas Malaysia Pahang: Malaysia.
Burhanuddin, Violet, & Yuliana (2007). Produksi dan analisis kualitatif senyawa aktif getah pohon api-api ( Avicennia marina Vierh). Jurnal Hutan Tropis Borneo, 8 (21), 71-83.
Ehike, N. J., & LeGare, D. G. (1993). The effects of temperature and soil stress on the production of tannins in birdsfoot trefoil ( Lotus corniculatus L). Lotus-Newsletter , 24 , 64-66. Fauzi,  R.  G.  (2012).  Dampak  pendangkalan  pantai  utara  Pulau  Jawa  bagi  perekonomian.
Makalah . UM: Malang.
Gomez-Parra, A., Forja, J. M., DelValls, T. A., Saenz, I., & Riba, I. (2000). Early contamination by heavy metals of the Guadalquivir estuary after the aznalcollar mining spills (SW Spain). Marine Pollution Bulletin, 40 (12), 1115-1123. Karlian, T. (2009). Identifikasi mikroba air laut di Ujung Grenggengan Semenanjung Muria. Sigma Epsilon, 13 (2), 59-63.
Macnae, W. (1968). A general account of the fauna and flora of mangrove swamps and forests in the Indo-West-Pacific region. Advances Marine Biology , 6 , 73-270. Oktavianus, S. (2013). Uji daya hambat ekstrak daun mangrove jenis Avicennia marina terhadap bakteri Vibrio parahaemolyticus . Skripsi. Universitas Hasanuddin: Makassar. Oku,  H.,  Baba.,  Kogah.,  Takarak.,  &  Iwasaki,  H.  (2003).  Lipid  composition  of  mangrove  and  its relevance to salt tolerance. J Plant Rest, 116 , 37-45.
Prabhu, V., & Guruvayoorappan, C. (2012). Phytochemical screening of methanolic  extract  of  mangrove Avicennia  marina (Forssk.)  Vierh. Der  Pharmacia Sinica, 3 (1), 64-70.
Prihanto.,  Asep,  A.,  Firdaus,  M.,&    Nurdiani,  R.  (2011). Penapisan  fitokimia  dan  antibakteri ekstrak metanol mangrove (Excoecaria agallocha) dari Muara Sungai Porong .
Subashree, M., Mala, P.,  Umanrnahasewari,  M., Jayakumari, M., Maheswari, K., Sevanthi, T., & Manikandan,  T.  (2010).  Screening  of  the  antibacterial  properties  of Avicennia  marina from Pichavaram Mangrove. Asian Journal of Science and Technology, 1, 16-19. Taslihan,  A.,  Murdriani,  M.,  Purbomartono,  C.,  &  Kusnendar,  E.  (2000).  Bakteri  patogen penyebab  penyakit  mulut  merah  pada  ikan  kerapu  tikus  ( Cromileptes  altivelis ). Jurnal Perikanan, 2 (2), 57-62.
Wibowo,  C.,  Kusmana,  A.  Suryani,  Y.  H.,  &  Oktadiyani,  P.  (2009).  Pemanfaatan  jenis  pohon mangrove  api-api  ( Avicennia spp.)  sebagai  bahan  pangan  dan  obat-obatan. Seminar Hasil Penelitian. Institut Pertanian Bogor: Bogor. Zohra,  F.  S.,  Meriem,  B.,  Samira,  S.,  &  Muner,  A.  (2012).  Phytochemical  screening  and identification  of some compounds from mallow. J. Nat. Prod.  Plant. Resour., 2 (4), 512- 516.