PENGARUH VCO MENGANDUNG EKSTRAK WORTEL TERHADAP PEROKSIDASI LIPID PLASMA
Lidya Irma Momuat 1) , Meiske S. Sangi 1) , Ni Putu Purwati 2)
1) Program Studi Kimia FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado 95115
2) Alumni Program Studi Kimia FMIPA Universitas Sam  Ratulangi, Manado 95115

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengukur  tingkat  oksidasi  lipid  dalam  plasma  darah  tikus yang  diberi  pakan  VCO  mengandung  ekstrak  wortel.    Tikus  Wistar  jantan  pada  penelitian ini dibagi menjadi empat kelompok, yaitu  (I) pakan standar (kontrol), (II) 10% VCO tanpa ekstrak  wortel,  (III)  10%  VCO  mengandung  ekstrak  wortel  dan  (IV)  10%  minyak  jagung. Setelah  4  minggu  masa  perlakuan,  plasma  darah  dipisahkan  dengan  sentrifugasi  untuk analisis  tingkat  oksidasi  plasma  dengan  mengukur  konsentrasi  malondialdehida  (MDA) menggunakan metode uji asam tiobarbiturat.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi MDA  tertinggi  terdapat  pada  kelompok  tikus  yang  diberi  minyak  jagung  (11,253  M),  diikuti kelompok  kontrol  (10,167  M),  lalu  kelompok  tikus  yang  diberi  VCO  mengandung  ekstrak wortel  (8,656  M)  dan  VCO  (8,269  M).    Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  tingkat  oksidasi lipid plasma tikus yang diberi VCO mengandung ekstrak wortel relatif sama dengan yang diberi VCO tanpa ekstrak wortel, tetapi lebih rendah daripada kontrol dan yang diberi minyak jagung.
Kata kunci: malondialdehida, minyak kelapa, wortel

## EFFECT OF VIRGIN COCONUT OIL (VCO) CONTAINING CARROT EXTRACT ON PLASMA LIPID PEROXIDATION

## ABSTRACT
The  aim  of  this  study  was  measure  the  level  of  lipid  oxidation  in  the  blood  plasma  of  rats  fed VCO containing carrot extracts. Male Wistar rats in this study were divided into four groups: (i) control, (II) 10% VCO without the carrot extract, (III) 10% VCO containing carrot extracts, and (IV) 10% corn oil. After 4 weeks of treatment, blood from each rat was taken by syringe.  Plasma is  separated  from  whole  blood  by  centrifugation  for  analysis  of  plasma  oxidation  levels  by measuring  the  malondialdehyde  (MDA)  concentration  using  tiobarbituric  acid  test.  The  results showed  that  the  highest  concentration  of  MDA  was  found  in  rats  fed  corn  oil  (11.253    M), followed by the control group (10.167   M), then rats fed VCO containing carrot extract (8.656 M) and VCO (8.269   M). This study concluded that the level of plasma lipid oxidation in rats fed VCO containing carrot extracts is relatively similar to rats fed VCO without the carrot extract, but it is lower than the control and corn oil groups.
Keywords: malondialdehyde, coconut oil, carrot

## PENDAHULUAN
Dewasa ini diyakini bahwa timbulnya  beberapa  penyakit  seperti  kanker, kardiovaskuler,  penuaan  dini  dan  beberapa penyakit degeneratif lainnya dapat disebabkan oleh spesies oksigen reaktif yang aktif  mengoksidasi  komponen  dalam  tubuh. Untuk mencegah menderita penyakit tersebut,  berbagai  upaya  dapat  dilakukan,
di antaranya dengan meningkatkan konsumsi antioksidan alami. Sumber antioksidan  alami  dapat  diperoleh  dari bahan pangan, seperti buah dan sayuran.
Wortel ( Daucus carota L)
merupakan  salah  satu  jenis  sayuran  yang telah  dikenal  luas  oleh  masyarakat. Wortel  kaya  akan  kandungan  antioksidan, teristimewa  β–karoten  yang  dapat  larut dalam lemak/minyak (Sudjaswadi &
Sitangang,  2002).  Kemampun -karoten sebagai antioksidan terutama didasarkan pada sifatnya  sebagai  pemunah  oksigen  singlet. Aktivitas  pemunah  oksigen  singlet  dari karotenoid  teristimewa  bergantung  kepada jumlah  ikatan  rangkap  terkonjugasi  dari molekul tersebut dan kurang dipengaruhi oleh gugus  ujung    karotenoid  (siklik  atau  asiklik) atau subtituen  yang  terikat  pada  gugus  siklik ujung karotenoid (Rao dalam Momuat, 2005).
Penelitian  terhadap  efek  antioksidan
dari -karoten  telah  banyak  dilakukan. Informasi  mengenai  efek  antioksidan - karoten yang dilaporkan umumnya berimplikasi  terhadap  kesehatan,  seperti meningkatkan  respon  imun  dan  inhibisi mutagenesis,  proteksi terhadap  kerusakan  sel dan  jaringan  yang  dapat  menyebabkan penyakit  fotosensitivitas  dan  kardiovaskuler (Mayne,  1996;  Sesso et  al. ,  2004).    Karena besarnya  manfaat  provitamin  A  ini  bagi kesehatan tubuh, sehingga usaha-usaha untuk meningkatkan  konsentrasi -karoten  dalam plasma  darah  banyak  dilakukan,  misalnya dengan  mengkonsumsi  suplemen  minyak yang secara alamiah kaya akan kandungan  - karoten  (Lietz et  al. ,  2001)  ataupun melakukan fortifikasi minyak kedelai dengan -karoten  yang  ditambahkan  ke  nasi  (Dutra- de-Oliveira et al. , 1998).
Wortel  juga  telah  dimanfaatkan dalam  pembuatan  minyak  kelapa  murni ( virgin  coconut  oil ,  VCO)  (Momuat, 2010).  Pada  pembuatan  minyak  tersebut senyawa antioksidan, teristimewa β– karoten  yang  terdapat  dalam  wortel  dapat larut  dalam  minyak  sehingga  melindungi minyak  dari  kerusakan  yang  disebabkan oleh reaksi oksidasi.  Sejauh ini belum ada informasi
mengenai pengaruh mengkonsumsi  VCO  yang  mengandung ekstrak  wortel,  terhadap  tingkat  oksidasi lipid plasma darah. Untuk itu penelitian ini dilakukan dengan tujuan mengukur konsentrasi malondialdehida (MDA) dalam  plasma  darah  tikus  yang  diberi pakan  VCO  mengandung  ekstrak  wortel. Malondialdehida  merupakan  salah  satu senyawa  produk  oksidasi  lipid  dalam tubuh  dan  sering  digunakan  sebagai indikator  terjadinya  proses  oksidasi  lipid. Penelitian ini diharapkan dapat berimplikasi terhadap peningkatan kualitas minyak  kelapa  serta  dapat  memberikan
informasi  tentang  tingkat  oksidasi  lipid (konsentrasi  MDA)  dalam  plasma  darah hewan  coba  yang  diberi  pakan  VCO mengandung  ekstrak  wortel,  terutama dalam  upaya  pencegahan  penyakit  yang berhubungan  dengan  oksidasi  lipid  seperti PJK.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  plasma  darah  dari setiap tikus percobaan, VCO tanpa ekstrak wortel,  VCO  mengandung  ekstrak  wortel, minyak  jagung,  campuran  mineral  dalam ransum  (NaCl,  Kl,  KH 2 PO 4 ,  MgSO 4 anhidrida,
CaCO 3 ,
FeSO 4 .H 2 O, MnSO 4 .H 2 O,  ZnSO 4 .7H 2 O,  CuSO 4 .5H 2 , CoCl 2 .6H 2 O), campuran vitamin
(ultravita),  protein  (susu  Protifar),  pati jagung (tepung maizena), selulosa ( carboxy  metyl  celulosa ,  CMC)  dan  untuk analisa MDA digunakan 1,1,3,3-
tetrametoksipropana  (TMP),  trikloroasetat (TCA), asam tiobarbiturat (TBA), aquades, dan asam asetat glasial.
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  untuk  pemeliharaan tikus  digunakan  kandang,  sekam,  kamera dan  timbangan.  Untuk  pembuatan  VCO mengandung  ekstrak  wortel  digunakan blender,  saringan,  botol-botol  pemisah minyak,  pemanas  air,  gelas  ukur,  loyang, parutan,  dan  gilingan  kelapa.  Untuk analisis  MDA  digunakan  labu  takar, neraca  analitik,  pipet  mikro,  oven,  tabung sentrifugasi,  spektrofotometer  dan  untuk pengambilan darah tikus digunakan disposable  syringe ,  pisau  bedah  dan tabung sentrifugasi.

## Rancangan Penelitian dan Hewan Coba
Penelitian  ini  menggunakan  12 ekor  tikus  jantan  strain  Wistar  yang berumur 2 bulan dengan berat badan relatif sama.    Setiap  ekor  tikus  ditempatkan dalam  satu  kandang.    Sebelum  dilakukan analisis MDA, tikus diadaptasikan terlebih dahulu  pada  keadaan  laboratorium  selama 7  hari  dengan  pemberian  pakan  standar yang  mengandung  8%  b/b  minyak  jagung, sesuai  komposisi  pakan  untuk  penentuan
protein  efficiency  ratio menurut  AOAC (1990) (Tabel 1).
Tabel 1.  Komposisi Pakan Standar Tikus.
Bahan-bahan Campuran Jumlah (%) Protein 10 Minyak 8 Campuran garam mineral 5 Campuran vitamin 1 Selulosa 1 Air 5 Pati jagung untuk membuat 100% Sumber: AOAC, 1990. Pada hari ke-8, dengan menggunakan  metode  penarikan  contoh
acak,  tikus  tersebut  dibagi  menjadi  empat kelompok  pakan,  yaitu  kelompok  I:  pakan standar (kontrol), II: pakan  standar ditambah  10%  VCO  tanpa  ekstrak  wortel, III:  pakan  standar  ditambah  10%  VCO mengandung ekstrak  wortel dan  IV: pakan standar  ditambah  10%  minyak  jagung (Tabel  2).    Setiap  kelompok  terdiri  atas  3 ekor  tikus.    Tikus-tikus  tersebut  diperoleh dari POLTEKES Farmasi Manado. Pemberian  pakan  dilakukan  setiap  pagi, dan  air  minum  diberi  secara ad  libitum (terus  menerus).    Perlakuan  diberikan selama 4 minggu.
Tabel 2. Susunan Pakan dalam Setiap 1000 gram Pakan Standar
Nama Bahan Kelompok I (g) II (g) III (g) IV (g) Kasein 145 145 145 145 Campuran mineral 50 45 50 50 Campuran vitamin 10 10 10 10 Minyak jagung 80 80 80 80 VCO - 100 - - VCO + tomat - - 100 - Minyak jagung - - - 100 CMC 10 10 10 10 Air 50 50 50 50 Pati jagung 655 655 655 655

## Pengambilan dan Pemisahan Plasma Darah Tikus
Sebelum  pengambilan  darah,  tikus dipuasakan  selama  semalam.  Tikus  dibius dengan  dietil  eter,  caranya  dietil  eter dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala  dan ditempatkan di bawah penyangga eksikator.    Kemudian  tikus  dimasukkan dalam eksikator dan ditutup rapat.
Selanjutnya  darah  diambil  melalui  jantung dengan  menggunakan disposable  syringe berukuran  2.5  mL.  Darah  yang  telah diambil ditampung dalam tabung sentrifugasi dan disentrifugasi pada kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit. Selanjutnya,  plasma  darah  yang  terletak pada  bagian  atas  dipisahkan  dan  diambil untuk dianalisis konsentrasi MDA-nya.

## Analisis Konsentrasi MDA Plasma Pembuatan Kurva Standar
Larutan  stok  pereaksi  1,1,3,3- tetrametoksipropana  (TMP)  konsentrasi 6M diencerkan menjadi 0.5, 0.8, 1, 2, 3, 4, 5,  6,  7,  8,  9,  10,  11,  12,  13,  14,  15  μM. Selanjutnya, setiap konsentrasi TMP direaksikan  dengan  1.0  mL  TCA  20%  dan 1.0 mL TBA 1% dalam pelarut asam asetat glasial  50%.  Semua  larutan  kemudian diinkubasi  selama  45  menit  pada  suhu 95 0 C.    Setelah  didinginkan,  larutan disentrifugasi  pada  kecepatan  1000  rpm selama 15 menit.  Supernatan pada lapisan atas diukur absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm. Pengukuran Sampel Pengukuran konsentrasi dari sampel  percobaan  dilakukan  dengan  cara yang  sama  seperti  larutan  standar,    yaitu
1.0  mL  plasma  darah  direaksikan  dengan 1.0  mL  TCA  20%  dan  1.0  mL  TBA  1% dalam  asam  asetat  glasial  50%,  kemudian diinkubasi  selama  45  menit  pada  suhu 95 0 C,  lalu  dibiarkan  dingin.    Larutan disentrifugasi  selama  15  menit  pada kecepatan 1000 rpm. Supernatan dipisahkan kemudian diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 532  nm.    Konsentrasi  sampel  diperoleh dengan  memplot  data  absorbansi  sampel ke dalam kurva standar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengukuran konsentrasi malondialdehida  (MDA)  plasma  dari  ke-4 kelompok perlakuan pakan tertera pada Tabel 3.  Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa konsentrasi  MDA  tertinggi  terdapat  pada kelompok  tikus  yang  diberi  pakan  stadar ditambah  10%  minyak  jagung  (kelompok IV),  diikuti  kelompok  kontrol  (kelompok  I), lalu kelompok tikus yang diberi pakan stadar ditambah  10%  VCO  mengandung  ekstrak wortel  (kelompok  III),  dan  yang  terendah pada kelompok tikus yang diberi pakan stadar ditambah  10%  VCO  (kelompok  II).    Hasil analisis  statistika  memperlihatkan  adanya perbedaan  konsentrasi  MDA  yang  signifikan antara kelompok kontrol (I) dengan kelompok II, III, dan IV.  Namun, konsentrasi MDA  antara  kelompok  II  dan  III  tidak berbeda secara signifikan.
Tabel 3.  Konsentrasi MDA plasma pada setiap perlakuan Kelompok Konsentrasi MDA ( M) I: Pakan standar (PS) 10,167 ± 1,006 a II: PS + 10% VCO 8,269 ± 0,057 b III: PS + 10% VCO_wortel 8,656 ± 0,145 b IV: PS + minyak jagung 11,253 ± 0,113 c
Ket.:  huruf  berbeda  dibelakang  konsentrasi  MDA menunjukkan perbedaan signifikan ( =5%)
Rendahnya konsentrasi MDA plasma pada  tikus  yang  diberi  VCO  mengandung ekstrak  wortel  disebabkan  oleh  adanya senyawa  karotenoid,  teristimewa  β-karoten, dalam  minyak  tersebut.    Terlarutnya  β- karoten  dalam  VCO  ditandai  oleh  warna
jingga dari minyak tersebut.  Momuat (2010) mengemukakan  bahwa  β-karoten  merupakan pigmen  warna  jingga  yang  terdapat  dalam wortel  dan  bersifat  larut  dalam  lipid,  serta memiliki peran sebagai antioksidan.
Kemampuan  karotenoid  sebagai  antioksidan terletak  pada  struktur  kimia  β-karoten  yang mengandung  sejumlah  diena  terkonjugasi yang berperan sebagai kuenser atau pemunah oksigen  singlet  penyebab  reaksi  oksidasi (Huang et al ., 2005).
Konsentrasi  MDA  pada  kelompok  II yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  10% VCO  juga  lebih  besar  daripada  kelompok kontrol  (Tabel  2).    Hasil  ini  menunjukkan bahwa mengkonsumsi VCO dapat menurunkan  tingkat  oksidasi  dalam  plasma. Hasil  penelitian  ini  mendukung  penelitian yang  dilakukan  oleh  Nevin  dan  Rajamohan (2006)  yang  melaporkan  bahwa  pada  tikus jantan Sprague–Dawley yang diberikan VCO selama  45  hari  memiliki  status  antioksidan yang  lebih  tinggi  dan  konsentrasi  MDA dalam  jaringan  yang  lebih  rendah  daripada tikus  yang  diberi  minyak  kacang  tanah  dan minyak  kopra.    Marina et  al. (2009) mengemukakan  bahwa  VCO  mengandung senyawa  fenolik,  seperti  asam  ferulat  and p - coumarat yang memberikan kontribusi terhadap aktivitas antioksidan VCO.
Konsentrasi  MDA  plasma  pada kelompok  II  yang  diberi  VCO  relatif  sama dengan  kelompok  III  yang  diberi  VCO mengandung  ekstrak  wortel  (Tabel  2). Konsentrasi MDA yang relatif sama pada ke- 2  kelompok  tersebut  menunjukkan  bahwa ekstrak  wortel,  teristimewa  -karoten  yang dikonsumsi  oleh  tikus  pada  kelompok  III, belum
menunjukkan kemampuan antioksidannya  dibandingkan  dengan  VCO yang  dikonsumsi  oleh  kelompok  II.    Belum tampaknya  efek  antioksidan  dari  ekstrak wortel dapat disebabkan oleh masih kurangnya  ekstrak  wortel  yang  digunakan dalam pembuatan VCO (30%-v/v).
Penelitian  mengenai  perbandingan  efek antioksidan dari berbagai senyawa karotenoid yang  dilakukan  oleh  Heber  dan  Lu    (2000) menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  yang sama,  aktivitas  antioksidan  -karoten  lebih rendah daripada likopen dan  -karoten.
Konsentrasi MDA pada kelompok IV yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  10% minyak jagung lebih tinggi daripada kelompok I, II dan III.  Tingginya konsentrasi
MDA  kelompok  IV  menunjukkan  bahwa mengkonsumsi  minyak  jagung  yang  berlebih selama 4 minggu dapat meningkatkan tingkat oksidasi  dalam  plasma  darah  hewan  coba. Hal  ini  sejalan  dengan  yang  dikemukakan oleh  Ketaren  (1986)  bahwa  asam  lemak  tak- jenuh  lebih  mudah  dioksidasi  daripada  asam lemak  jenuh.    Menurutnya,  minyak  jagung sebagian  besar  terdiri  dari  asam  lemak  tak- jenuh,  yaitu  linoleat  sebesar  56%  dan  oleat sebesar  30%.    Tingginya  konsentrasi  MDA dalam  plasma  darah  hewan  pada  kelompok IV  kemungkinan  disebabkan  oleh  oksidasi yang  terjadi  pada  asam  lemak  tak-jenuh tersebut.
Malondialdehida adalah senyawa dialdehida  yang  mengandung  tiga  atom karbon  dengan  gugus  karbonil  berada  pada posisi  atom  C 1 dan  C 3 .    MDA  mempunyai rumus  kimia  C 3 H 4 O 2 dengan  berat  molekul
72.    Reaksi  pembentukkan  MDA  diawali dengan  terbentuknya  radikal  lipid  akibat serangan  radikal  bebas  pada  ikatan  takjenuh dari  suatu  asam  lemak.    Pengukuran konsentrasi  MDA  dalam  penelitian  ini menggunakan  metode  uji  asam  tiobarbiturat (t iobarbituric  acid ,  TBA).  MDA  bila direaksikan dengan TBA dalam suasana asam akan  menghasilkan  kompleks  MDA-TBA yang  berwarna  merah  muda  (Gambar  1). Janero  (1990)  melaporkan  bahwa  MDA  dan metode  uji  TBA  merupakan  metode  yang paling  banyak  digunakan  sebagai  indeks diagnosa  kerusakan/terjadinya  peroksidasi lipid dan pembentukan hidroperoksida lemak. Reaktivitas  MDA-TBA  merupakan  indikator bagi  peroksidasi  lipid,  baik  secara  kualitatif maupun kuantitatif.
H C CH 2 O C O H N N CH CH CH N N SH OH OH OH OH S + H 2 O 2 N N HS OH OH 2
Gambar 1.  Reaksi Pembentukan Kompleks TBA-MDA (Nawar dalam Sugiman, 2000)

## KESIMPULAN
Konsentrasi MDA plasma darah tikus yang diberi VCO mengandung ekstrak wortel (8.656  μM)  relatif  sama  dengan  yang  diberi VCO  tanpa  ekstrak  wortel  (8,269  μM),  dan lebih  rendah  daripada  kontrol  (10.167  μM) dan yang diberi minyak jagung (11,253 μM).

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC.  1990. Official  methods  of  analysis . AOAC, Inc. Virginia.
Dutra-de-Oliveira,  J.F.,  R.M.D.  Fávaro,  I.R.
Leonardo, A.A. Jordão, H. Vannucchi. 1998.    Absorption,  by  human,  of  - carotene  from  fortified  soybean  oil added  to  rice:  effect  of  heat  treatment. J. Am. Coll. Nutr. 17(4):361-365.
Heber,  D.,  Q.Y.  Lu.    2002.    Overview  of Mechanisms  of  Action  of  Lycopene. Exp Biol Med 227: 10 920-923.
Huang,  D.,  B.  Ou,  R.L.  Prioi.    2005.    The
Chemistry behind Antioxidant Capacity  Assays. J.  Agric.  Food
Chem . 53:1841-1856.
Janero,  D.R.    1990.    Malondialdehyde  and thiobarbituric
acid-reactivity as diagnostic indices of lipid peroxidation and  peroxidative  tissue  injury. Free Radical Biology and Medicine
9(6):515–540.
Ketaren,  S.  1986.  Pengantar  Teknologi Minyak  dan  Lemak  Pangan.  UI–Press,
Jakarta.
Lietz,  D., et  al .    2001.    Comparison  of  the effects  of  supplemental  red  palm  oil and  sunflower  oil  on  maternal  vitamin A status. Am. J. Clin. Nutr . 74(4):501- 509.
Marina, A.M., Y.B. Cheman, S.A.H. Nazimah, I. Amin.  2009.  Antioxidant capacity  and  phenolic  acids  of  virgin coconut  oil. International  Journal  of Food Sciences and Nutrition 60(s2):114-123. Mayne, S.T. 1996. Beta-karoten, carotenoids,  and  disease  prevention  in humans. FASEB J . 10:690-701.
Momuat, L.I. 2005. Karotenoid dan Pencegahan Aterosklerosis. Jurnal Ilmiah Sains 5(2):121-125. Momuat,  L.I.    2010.    Aktivitas  antioksidan dalam  minyak  kelapa  yang  dibuat dengan memanfaatkan aktivitas proteolitik wortel [Abstrak]. Di dalam: Seminar  Molecular  Biotechnology  in Medicine  and  Bioindustry;    The  Third Gruber-Soedigdo Lecture 2010; Bandung,  27  Juli  2010.    Institut Teknologi  Bandung  &  University  of Groningen.  Hlm 72. Nevin,  K.G.,  T.  Rajamohan.    2006.    Virgin coconut oil supplemented diet increases the antioxidant status in rats. Food Chemistry 99(2):260–266.
Sesso,  H.D.,  J.E.  Buring,  E.P.  Norpus,  J.M. Gaziano.  2004.  Plasma  Lycopene, Other  Carotenoids  and  Retinol  And The  Risk  Cardiovascular  Disease  in Women. Am. J. clin. Nutr. 79:47-53.
Sudjaswadi  dan  Sitanggang.  2005.  Tanaman Obat  Untuk  Penyakit  Jantung,  Darah Tinggi,  dan  Kolesterol.  Agromedia Pustaka, Jakarta.
Sugiman.    2000.    Pengaruh  Sari  Jahe (Zingiber  officinale  roscoe) dalam Menghambat  Oksidasi  LDL  Plasma Darah pada Mahasiswa.  Skripsi . IPB, Bogor.