Agro Estate , 4 (2) Desember 2020  ISSN : 2580-0957 (Cetak)   ISSN : 2656-4815 (Online)

## AGRO ESTATE
Jurnal Budidaya Perkebunan Kelapa Sawit dan Karet
Available online https: //ejurnal.stipap.ac.id/index.php/JAE

## ISOLASI DAN UJI ANTAGONIS BAKTERI ASAL TANDAN KOSONG SAWIT YANG DIAPLIKASIKAN PADA AREAL TANAMAN KARET TERHADAP PENYAKIT JAMUR AKAR PUTIH

## ISOLATION AND ANTAGONISTIC ASSAY OF BACTERIA FROM THE OIL PALM EMPTY FRUIT BUNCHES APPLIED IN RUBBER FIELD ON THE WHITE ROOT DISEASE
Priyo Adi Nugroho (1) , Cici Indriani Dalimunthe (2) 1,2) Pusat Penelitian Karet, Balai Penelitian Sungei Putih PO BOX 1415 Medan 20001
*Coresponding Email: priyo.nugroho@puslitkaret.co.id

## Abstrak
Kekhawatiran pemanfaatan TKKS di perkebunan karet yang dapat berpotensi sebagai inang jamur akar putih ( R. Microporus ) perlu dikaji secara mendalam. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa terdapat bakteri- bakteri di permukaan TKKS yang dapat menghambat perkembangan jamur R. microporus . Uji antagonis terhadap jamur R. microporus telah dilakukan pada delapan isolat bakteri di laboratorium proteksi Balai Penelitian Sungei Putih.  Isolat-isolat  tersebut  diisolasi  dari  permukaan  TKKS  yang  diaplikasikan  di  perkebunan  karet.  Media nutrient agar (NA) digunakan dalam isolasi dan pemurnian bakteri. Uji antagonis dilakukan secara in vitro dengan metode Dual Culture dan diamati pada 2,4,6, dan 8 hari setelah inokulasi (HSI). Hasil penelitian menunjukkan kemampuan penghambatan jamur R. microporus yang berbeda. Penghambatan oleh bakteri mulai terlihat pada 2 HSI  terutama  pada  isolat  B2, B3,  B4,  dan  B7.  Persentase  penghambatan masing-masing isolat  tersebut  adalah 30%, 60%, 65% dan 69%. Hingga 8 HSI, isolat B2, B3, B4, B6, B7 dan B8 mampu menghambat perkembangan jamur R.  microporus ≥  80%.  Isolat  B3  dan  B4  memiliki  kemampuan  antagonisme  yang  paling  baik  dengan persentase  penghambatan  ≥  95%.  Sedangkan  isolat  B1  dan  B5  hanya  menghambat  perkembangan  jamur R. microporus  ≤ 50%.  Eksistensi  bakteri-bakteri  antagonis  inilah  yang  kemungkinan  besar  menyebabkan  TKKS tidak menjadi inang penyakit jamur akar putih ketika diaplikasikan di lapangan .
Kata kunci: Hevea brasiliensis, TKKS, jamur akar putih, bakteri

## Abstract
The concern of oil palm empty fruit bunches (OPEFB) utilization in the rubber field that potential to be a host of white root disease needs to be deeply investigated. The objective of this study was to assess the bacteria on the surface of OPEFB that able to inhibit the growth of R. microporus fungi. The antagonistic assay of eight isolates of  bacteria  against  R.  microporus  fungi  was  conducted  in  the  Plant  Protection  Laboratory  of  Sungei  Putih Research Centre. The isolates were isolated from the surface of OPEFB applied in the rubber field. Nutrient agar (NA) was employed in the isolation and purification of bacteria. The antagonistic assay was carried out in vitro using the dual culture method. The observation was performed on 2, 4, 6, and 8 days after incubation (DAI). The result indicated that the eight isolates have varied in inhibition ability of R. Microporus fungi. The initial inhibition was started since 2 DAI particularly in the isolates B2, B3, B4, and B7. The percentage of inhibition were 30%, 60%, 65% dan 69% respectively. Until 8 HSI, the isolates B2, B3, B4, B6, B7, and B8 were still inhibiting the growth of R. microporus fungi > 80%. The isolates B3 and B4 showed the best performance in fungi inhibition with the percentage > 95%. Whereas, the ability of inhibition of the isolates B1 and B5 were very low as < 50%. The existence of such antagonistic bacteria perhaps led to OPEB was not role as the host of white root disease while applied in the rubber field.

## Keywords: Hevea brasiliensis, OPEFB, white root disease, bacteria
How to cite :   Nugroho,  P.A.  &  Dalimunthe,  C.I.  (2020). Isolasi  Dan  Uji  Antagonis  Bakteri  Asal Tandan  Kosong  Sawit  Yang  Diaplikasikan  Pada  Areal  Tanaman  Karet  Terhadap Penyakit Jamur Akar Putih. Jurnal Agro Estate Vol.4 (2) : 109-118.

## PENDAHULUAN
Tandan kosong kelapa sawit (TKKS), palm oil mill sludge dan palm oil mill  effluent (POME)  adalah  jenis-jenis limbah segar yang sering diaplikasikan pada pertanaman  kelapa  sawit.  Di  beberapa perusahaan perkebunan, TKKS diaplikasikan  dalam  bentuk  yang  sudah dikomposkan  sebagai  pupuk  organik  yang dapat  mengurangi  penggunaan  pupuk anorganik  (Saputra  &  Stevanus,  2019; Wijaya,  2010).  TKKS  mengandung  51,1% C,  0,5%  N,  0,19%  P,  1,4%  K,  0,17%  Mg, 2%  Ca  (Abdul  Rahman  &  Lim,  2000)  dan unsur-unsur  mikro  diantaranya  10  ppm  B, 23  ppm  Cu,  dan  51  ppm  Zn  (Singh  et  al., 1990).
Aplikasi TKKS maupun komposnya masih  terbatas  pada  areal  tanaman  kelapa sawit.  Padahal  dengan  potensinya  yang sangat  besar  sebagai  amelioran,  TKKS sangat berpeluang untuk diaplikasikan pada areal komoditas perkebunan lainnya. Apalagi  jika  dikaitkan  dengan  kesuburan tanah,  tanaman  perkebunan  di  Sumatera Utara  umumnya  dibudidayakan  pada  jenis tanah  yang  relatif  rendah  kandungan  C- organik  dan  miskin  hara  (Syahputra  et  al., 2015; Nugroho & Wijaya, 2017; Farrasati et al., 2020).
Penelitian  pemanfaatan  TKKS  di
areal perkebunan karet menghasilkan umur 7  tahun  klon  PB  260  telah  dilakukan  oleh Nugroho  et  al.,  (2012).  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa setelah aplikasi TKKS selama  satu  tahun  terdapat  kenaikan signifikan pada nilai Kapasitas Tukar kation (KTK), kandungan C-organik, hara N, P, K dan  Mg  pada  top  soil  tanah  Ultisol.  Selain itu  volume  perakaran  hara  serta  populasi mikrobia tanah meningkat secara signifikan. Nitrogen  pada  daun  karet  juga  mengalami peningkatan  secara  signifikan  setelah  5 bulan  aplikasi  TKKS  (Simbolon  et  al., 2015).
Kekhawatiran TKKS menjadi inang bagi Rigidoporus microporus yang merupakan  patogen  penyakit  jamur  akar putih (JAP) menjadi alasan utama mengapa TKKS tidak diaplikasikan sebagai amelioran  di  perkebunan  karet.  Padahal hasil  pengamatan  secara  visual  tidak ditemukan  miselium R.  microporus pada TKKS  yang  diaplikasikan.  Kami  menduga terdapat mikrobia di permukaan TKKS yang berperan dalam menghambat perkembangan jamur R. microporus . Tujuan dari penelitian ini  adalah  untuk  memberikan  pembuktian ilmiah  bahwa  terdapat  bakteri-bakteri  di permukaan TKKS yang bersifat  anatagonis terhadap  jamur R.  microporus. Informasi dari  tulisan  ini  diharapkan  dapat  menjadi
pertimbangan  bagi  para  pekebun  dalam mengaplikasikan  TKKS  di  perkebunan karet.  Sehingga  mitos  TKKS  sebagai sumber  inokulum  penyakit  JAP  dapat terpatahkan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  di  kebun percobaan  dan  Laboratorium  Proteksi Tanaman  Balai  Penelitian  Sungei  Putih. Lokasi penelitian berada pada ketinggian + 50 m dpl dan secara geografis terletak pada 3°25‘26‘‘ N dan 98° 52‘ 06“ E.  Jenis tanah di  lokasi  penelitian  adalah  Ultisol  (USDA) dengan  kandungan  C-organik  dan  N  total yang  rendah  (masing-masing  1,22%  dan 0,13%).  Penelitian  ini  terdiri  dari  tiga kegiatan yaitu:
1. Aplikasi  TKKS  di  areal  perkebunan karet klon PB 260.
Sebanyak  empat  TKKS  diletakkan  di atas permukaan tanah pada tiga titik di areal tanaman karet menghasilkan.
2. Isolasi mikrobia dari TKKS.
TKKS  yang telah dibiarkan selama  +1 bulan di lapangan, diambil sebanyak 10 gram untuk selanjutnya diisolasi mikrobia  yang  tumbuh  terutama  dari golongan bakteri. Metode isolasi mikrobia  mengacu  kepada  (Hastuti  &
Ginting, 2007). Media yang digunakan dalam  isolasi  bakteri  adalah Nutrient Agar (NA). Bakteri yang telah diisolasi selanjutnya  dibiakkan  secara  tunggal dan diberi kode.
3. Pengujian aktivitas penghambatan terhadap jamur R. microporus.
Isolat biakan tunggal bakteri selanjutnya diuji kemampuannya dalam menghambat  perkembangan  jamur R. microporus. Uji  penghambatan R. microporus oleh  jamur  secara  in  vitro menggunakan  metode Dual  Culture yaitu  dengan  menanam  isolat  bakteri dan  jamur R. microporus dalam media PDA  pada  cawan  petri.  Isolat  bakteri yang  akan  diuji  pada dual  culture dimodifikasi  dengan  menggunakan kertas  saring  yang  direndam  dalam larutan isolat bakteri yang akan diuji.
Pengamatan  dilakukan  pada  masa 2,  4,  6,  dan  8  hari  setelah  inokulasi (HSI).  Perkembangan  diameter  jamur R.  microporus pada  setiap  cawan  petri diukur  dan  diberi  tanda.  Persentase penghambatan  pertumbuhan  (PORG) dihitung  dengan  menggunakan  rumus yang  dikembangkan  oleh  Skidmore  & Dickinson, (1976):
𝑃𝑂𝑅𝐺 = 𝑅1 − 𝑅2
𝑅1 𝑥 100
keterangan:
PORG = Persentase penghambatan pertumbuhan (%)
R1 = Diameter pertumbuhan R. microporus pada kontrol (mm)
R2
= Diameter R. microporus pada tiap jenis bakteri (mm)

## Analisis statistik
Data  hasil  pengukuran  selanjutnya dianalis  secara  statistik  menggunakan software IBM SPSS statistics for windows, version  25.0  (IBM  Corp.,  2017).  ANOVA akan  dilakukan  untuk  melihat  kemampuan bakteri dalam menekan pertumbuhan jamur R.  microporus. Dikarenakan  setiap  bakteri memiliki  kemampuan  penghambatan  yang berbeda berimplikasi kepada rentang ukuran diameter yang cukup besar. Oleh karena itu standarisasi  data  (z-score)  perlu  dilakukan pada data 2,6 dan 8 HSI.
Uji  asumsi  (normalitas  dan  keragaman varian) dilakukan pada masing-masing hari pengamatan. Hasil uji normalitas menggunakan metode Kolmogorov- Smirnov menunjukkan semua data berdistribusi  normal.  Hasil  uji  normalitas adalah sebagai berikut: 2 HSI (F(27)=0.17; p>0.05); 4 HSI (F(27)=0.10; p>0.05); 6 HSI (F(27)=0.12;  p>0.05);  8  HSI  (F(27)=0.09; p>0.05).  Hasil  uji  keragaman  varian  akan menentukan  metode  uji  lanjutan (post  hoc test) . Hasil analisis menunjukkan bahwa p- value data 2 HSI dan 4 HSI adalah 0.15 dan 0.07  (p>0.05)  sehingga  metode  Tukeys digunakan dalam uji lanjutan. Sedangkan p- value  pada  data  6  HSI  dan  8  HSI  masing-
masing  sebesar  0.043  (p<0.05)  maka  uji lanjutan  menggunakan  metode  Games- Howell.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik bakteri
Beberapa  isolat  bakteri  telah  berhasil diisolasi  dari  TKKS  yang  diaplikasikan  di areal tanaman karet menghasilkan. Beberapa diantaranya berasal dari jenis yang berbeda. Hal ini dicerminkan dari karakteristik atau penampakan morfologinya. Isolat bakteri beserta karakterisasi  morfologinya  disajikan  pada Tabel  1.  Kandungan  C  dan  N  yang  cukup tinggi  pada  TKKS  merupakan  sumber nutrisi  yang  sangat  diperlukan  oleh mikroorganisme.  Banyak  penelitian  yang telah  mengisolasi  dan  mengkarakterisasi jenis-jenis mikroorganisme yang hidup pada TKKS.  Diantaranya  adalah  pendegradasi lignin dan selulosa (Widiastuti et al., 2015). Sedikit  sekali  peneliti  yang  melaporkan potensi  bakteri  yang  hidup  di  permukaaan TKKS sebagai anatogonisme JAP. Penelitian  ini  diharapkan  menjadi  trigger untuk mengeksplorasi lebih dalam mengenai keragaman mikroorganisme permukaan TKKS.
Tabel 1. Karakteristik isolat bakteri dan jamur hasil isolasi dari TKKS Kode
Bentuk Ciri Pertumbuhan Koloni
Isolat Warna Elevasi Tepian B1 Bulat Kuning Cembung Rata Bergerigi Rata Berliku ada zona bening Rata ada zona bening
Rata Rata Bergelombang B2 Tidak Beraturan Putih pucat Bergelombang B3 Bulat Putih krem Datar B4 Tidak Beraturan Putih pucat Bergelombang B5 Bulat Putih Datar B6 Bulat Hijau kehitaman Cembung B7 Bulat Putih bening Agak Bergelombang B8 Tidak beraturan Putih krem Datar
Kandungan  C  dan  N  yang  cukup tinggi  pada  TKKS  merupakan  sumber nutrisi  yang  sangat  diperlukan  oleh mikroorganisme.
Jumlah  isolat  yang  diperoleh  dalam penelitian  ini  lebih  sedikit  dibandingkan dengan  keragaman  bakteri  yang  diisolasi dari  rhizosfer  tanaman  karet  (Hardiyanti  et al., 2018; Widawati, 2015).

## Aktivitas penghambatan terhadap jamur

## R. microporus
Hasil  pengamatan  selama  8  hari menunjukkan  bahwa  setiap  isolat  bakteri memberikan respon yang bervariasi terhadap perkembangan jamur R. microporus .  Perkembangan  dan  persentase penghambatan  jamur R.  microporus oleh kedelapan  isolat  bakteri  disajikan  pada Tabel 2 di bawah ini.
Tabel 2. Perkembangan diamater jamur R. microporus selama 8 hari pengamatan Bakteri Diameter jamur akar putih (mm) 2 HSI 4 HSI 6 HSI 8 HSI B1 2.58 a (-291)    8.27 d (-172)    11.81 b (3)  22.34 abc (12) B2 0.42 a (30)    1.06 ab (60)    1.29 a (88) 1.42 a (94) B3 0.25 a (60)    0.63 a (79)    0.95 a (92) 0.95 abc (96) B4 0.23 a (65)    0.90 ab (76)    1.21 a (91) 1.21 abc (95) B5 1.20 a (-85)    4.55 c (-57)    9.90 b (10) 15.10 b (37) B6 0.79 a (-27)    2.18 abc (41)    2.18 ab (83) 2.18 abc (91) B7 0.24 a (69)    0.67 a (87)    1.37 a (90) 2.29 abc (91) B8 1.00 a (-54)    4.79 c (-62)    4.79 ab (57) 4.79 abc (80) Kontrol 0.64 a (0)    3.52 bc (0)    12.14 b (0) 24.09 c (0)
Keterangan: HSI = Hari Setelah Inokulasi; Angka yang diikuti oleh huruf yang tidak sama pada kolom yang sama,  berbeda  nyata  pada  P<0.05;  Angka  dalam  kurung  menunjukkan  persentase  penghambatan  bakteri terhadappertumbuhan R. microporus.
Diamater jamur R. microporus pada masa  2  hari  setelah  inokulasi  mulai menunjukkan  tanda-tanda  terhambat  oleh beberapa  isolat  bakteri  namun  secara statistik  belum  berbeda  nyata.  Pada  isolat bakteri  B1,  B5,  B6,  dan  B8  menunjukkan persentase penghambatan yang negatif yaitu
-291%,  -85%,  -27%  dan  -54%.  Angka negatif  menunjukkan  bahwa  pertumbuhan jamur R.  microporus di  masing-masing cawan  petri  isolat  tersebut  lebih  cepat dibandingkan pertumbuhan jamur R. microporus pada  kontrol.  Pada  masa  4-8 hari setelah inokulasi, penghambatan
terhadap  pertumbuhan  diameter  jamur R. microporus sangat  jelas.  Isolat  bakteri  B3 dan  B7  secara  signifikan  mampu  menekan pertumbuhan  jamur R.  microporus pada pengamatan 4 hari setelah inokulasi, dengan persentase  penghambatan  masing-masing sebesar 79% dan 87% dibandingkan kontrol. Persentase  penghambatan  isolat  bakteri lainnya  seperti  B2,  B4,  dan  B6  juga menunjukkan  tren  yang  positif  namun secara statistik tidak signifikan (p>0.05).
Hal yang serupa juga terlihat pada 6 dan 8 hari setelah inokulasi, dimana semua isolat  bakteri  menunjukkan  persentase penghambatan yang lebih tinggi dibandingkan  kontrol.  Namun  pada  6  HSI, isolat  bakteri  B2,  B3,  B4,  dan  B7 menunjukkan  hasil  yang  signifikan  (p< 0,05).  Sedangkan  pada  pengamatan  8  HSI, hanya  isolat  bakteri  B2  dan  B5  yang menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan (p< 0,05) terhadap kontrol.
Gambar 2. Dual culture isolat bakteri dan jamur R. microporus pada 8 hari setelah inokulasi Beberapa  fenomena  terlihat  pada isolat bakteri yang diamati diantaranya: (1) munculnya  zona  bening,  (2)  pertumbuhan bakteri yang mendominasi, (3) dan jamur R. microporus yang  mengering/menghitam.
Zona  bening  atau  zona  hambat  merupakan salah  satu  tanda  terbentuknya  antiobiotik yang dapat menekan pertumbuhan jamur R. microporus. Antibiotik merupakan senyawa yang tergolong metabolit sekunder. Senyawa  ini  sebetulnya  tidak  diperlukan dalam  pertumbuhan  dan  perkembangan  sel
(Haidar  et  al.,  2016;  Krasilnikov,  1960). Selain menghasilkan antibiotik yang menghambat pertumbuhan patogen, ciri lain dari  mikroorganisme  antagonis  adalah pertumbuhan yang mendominasi pertumbuhan  pathogen  (Shehata  &  El- Borollosy,  2008).  Kondisi  tersebut  muncul pada isolat B2, B3, B4, dan B7, dimana pada 2 HSI daya hambatnya sudah melebihi 30%. Isolat jamur R. microporus yang menghitam diduga  karena  senyawa  antibiotik  yang dihasilkan oleh isolat B2 dan B6. Kami juga
menduga  bahwa  selain  dapat  menghambat pertumbuhan jamur R. microporus, senyawa yang dihasilkan tersebut juga bersifat toksin yang dapat menyebabkan kematian jamur R. microporus.
Dinamika  perkembangan  jamur  R.
microporus Dinamika perkembangan R.
microporus ditampilkan pada Gambar 1.
Gambar 1. Dinamika perkembangan jamur R. microporus
Pada  Gambar  1  di  atas  dapat  dilihat bahwa  dinamika  perkembangan  diameter jamur R.  microporus menunjukkan  suatu pola/tipe  tertentu.  Berdasarkan  pola  yang muncul  tersebut  kami  mengelompokannya ke  dalam  4  tipe  dinamika  penghambatan perkembangan  jamur R.  microporus oleh isolat bakteri sebagai berikut:
Tipe 1
Isolat bakteri yang sejak awal hingga akhir masa inokulasi tidak dapat menghambat  perkembangan  jamur R. microporus .  Pola  seperti  ini  menyerupai pola  yang  terlihat  pada  kontrol.  Besar kemungkinan bakteri tersebut tidak bersifat anatagonis terhadap R. microporus. Pola ini terlihat pada isolat B1.
Tipe 2
Isolat  bakteri  pada  awal  inokulasi  (2 hari pertama) sudah menunjukkan kemampuan untuk menghambat perkembangan jamur R. microporus sehingga tidak  berkembang  sama  sekali. Tipe ini terlihat pada isolat B2 dan B6.

## Tipe 3
Isolat bakteri yang tergolong ke dalam tipe ke 3 memiliki kemampuan penghambatan  perkembangan  jamur R. Microporus yang  mirip  dengan  tipe  2. Namun  pada  tipe  ini,  jamur R.  microporus masih memiliki kesempatan untuk berkembang walaupun sangat kecil (pada 2 hari  ketiga)  dan  pada  hari  berikutnya mengalami  staknasi  perkembangan  karena terhambat.  Isolat  bakteri  yang  termasuk  ke dalam ini adalah B3, B4, dan B7.

## Tipe 4
Isolat  bakteri  B5  dan  B8  yang termasuk kedalam tipe ini. Berbeda dengan ketiga  pola  sebelumnya,  dalam  tipe  ini perkembangan  jamur R.  microporus tidak menunjukkan suatu pola yang beraturan.

## KESIMPULAN
Terdapat beberapa isolat bakteri yang hidup  di  permukaan  TKKS  dan  bersifat anatagonis  terhadap  jamur R.  microporus , penyebab  penyakit  akar  putih  (JAP).  Isolat bakteri  B2,  B3,  B4,  B6,  dan  B7  dapat menghambat pertumbuhan jamur R. microporus. Isolat  B3  dan  B4  memiliki kemampuan antagonisme yang paling baik. Keberadaan bakteri-bakteri ini membuktikan bahwa aplikasi TKKS sangat berpeluang untuk diterapkan pada skala luas di  perkebunan  karet.  Tindakan  preventif, seperti penyemprotan biofungisida berbasis bakteri  dan  jamur  antagonis  JAP  pada TKKS yang diaplikasikan masih diperlukan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul  Rahman,  Z.,  &  Lim,  K.  (2000).  Oil palm empty fruit bunch as a source of nutrients  and  soil  ameliorant  in  oil palm plantation. Malaysian Journal of Soil Science , 4 (June), 51–66.
Farrasati,  R.,  Pradiko,  I.,  Rahutomo,  S., Sutarta, E. S., Santoso, H., & Hidayat, F. (2020). C-organik tanah di perkebunan  kelapa  sawit  Sumatera Utara:  status  dan  hubungan  dengan beberapa  sifat  kimia  tanah. Jurnal Tanah Dan Iklim , 43 (2), 157.
https://doi.org/10.21082/jti.v43n2.201
9.157-165.
Haidar, R., Roudet, J., Bonnard, O., Dufour, M.  C.,  Corio-Costet,  M.  F.,  Fert,  M., Gautier,  T.,  Deschamps,  A.,  & Fermaud,  M.  (2016).  Screening  and modes  of  action  of  antagonistic bacteria to control the fungal pathogen Phaeomoniella chlamydospora involved  in  grapevine  trunk  diseases. Microbiological  Research , 192 ,  172– 184.
https://doi.org/10.1016/j.micres.2016.
07.003.
Hardiyanti,  S.,  Soekarno,  B.  P.  W.,  & Yuliani,  T.  S.  (2018).  Kemampuan mikrob  endofit  dan  rizosfer  tanaman karet dalam mengendalikan Rigidoporus microporus . Jurnal Fitopatologi  Indonesia , 13 (5),  153. https://doi.org/10.14692/jfi.13.5.153.
Hastuti, R. D., & Ginting, R. C. B. (2007). Enumerasi  Bakteri,  Cendawan,  dan Aktinomisetes.  In  R.  Saraswati,  E. Husen,  &  R.  D.  M.  Simanungkalit (Eds.), Metode Analisis Biologi Tanah
(p.  271).  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Sumberdaya  Lahan Pertanian.
IBM Corp. (2017). IBM SPSS Statistics for Windows version 25.0, Armonk, NY .
Krasilnikov,  N.  A.  (1960).  The  biological role of microbes-antagonists, producers of antibiotic substances. Soil Science and Plant Nutrition , 5 (4), 184–
193.
https://doi.org/10.1080/00380768.196 0.10430915.
Nugroho,  P.  A.,  Istianto,    &  Munthe,  H. (2012).  Aplikasi  tandan  kosong  sawit pada areal tanaman karet Menghasilkan dan pengaruhnya terhadap beberapa sifat tanah. Agroscientiae , 19 (2), 87–93.
Nugroho, P. A., & Wijaya, T. (2017). Leaf nutrient  status  of  rubber  tree  in
differrent  ecology  zone  of  north sumatra.  In  K.  Jacob,  A.  bin  Ibrahim, A.  M.  Kamarudin,  E.  Gohet,  J. Mathew, L. Rodrigo, D. Kim, & C. K. See  (Eds.), Proceedings  International Rubber  Conference (pp.  774–785). http://ejournal.puslitkaret.co.id/index. php/proc/article/view/501.
Saputra,  J.,  &  Stevanus,  C.  T.  (2019). Aplikasi kompos tandan kosong kelapa sawit pada tanaman karet menghasilkan. Warta Perkaretan , 38 (1),
1–10.
https://doi.org/10.22302/ppk.wp.v1i1. 587
Shehata,  S.  F.,  &  El-Borollosy,  A.  M.
(2008). Induction of resistance against Zucchini Yellow Mosaic Potyvirus and growth  enhancement  of  squash  plants using  some  plant  growth-promoting rhizobacteria. Australian  Journal  of
Basic and Applied Sciences , 2 (2), 174– 182.
Simbolon,  A.,  Hanum,  C.,  &  Lahay,  R. (2015).  Kandungan  hara  tanah  dan tanaman  karet  menghasilkan  terhadap pemberian tandan kosong kelapa sawit (TKKS)  dan  jumlah  lubang  biopori.
Jurnal  Agroekoteknologi  Universitas Sumatera Utara , 3 (3), 105229.
https://doi.org/10.32734/jaet.v3i3.109
43.
Singh,  G.,  Manharan,  S.,  &  Toh,  T.  S.
(1990).  United  Plantation  Aproach  to Oil Palm Mill by Product Management and Utilisation. In J. Sukaimi, G. Sigh, S.  Manharan,  &  T.  S.  Toh.  (Eds.), Procceding  of  International  Palm  Oil Development  Conference (pp.  225–
234).  Palm  Oil  Research  Institute  of
Malaysia.
Skidmore,  A.  M.,  &  Dickinson,  C.  H.
(1976). Colony interactions and hyphal interference between Septoria nodorum and phylloplane fungi. Transactions of the British Mycological Society . https://doi.org/10.1016/s0007-
1536(76)80092-7.
Syahputra,  E.,  Fauzi,  &  Razali.  (2015). Karakteristik sifat kimia sub grup tanah ultisol  di  beberapa  wilayah  Sumatera Utara. Agroekoteknologi , 4 (1),  1796– 1803.
Widawati,  S.  (2015).  Isolasi  dan  aktivitas plant  growth  promoting  rhizobacteria (rhizobium,  azospirillum,  azotobacter, pseudomonas)  dari  tanah  perkebunan karet  ,  Lampung. Berita  Biologi , 14 , 77–88.
Widiastuti, H., Prakoso, H. T., Suharyanto,
& Siswanto. (2015). Optimasi pengomposan  tandan  kosong  kelapa sawit menggunakan dekomposer bakteri lignoselulolitik skala komersial. Menara Perkebunan , 83 (2), 60–69.
Wijaya,  T.  (2010).  Pemanfaatan  tandan kosong  kelapa  sawit  untuk  pupuk organik  di  PT  Pinago  Utama.  In  T.
Wijaya,  Kuswanhadi,  S.  Hendratno, R.Susanto,  &  M.  Supriadi  (Eds.), Proceedings Seminar Nasional Teknologi Pemupukan 2010
Palembang  ,  27-28  Juli  2010 :
”Antisipasi  Mengatasi  Kelangkaan dan Kenaikan Harga Pupuk Menelisik Kesiapan dan Potensi Pupuk Organik” .  Balai  Penelitian  Sembawa, Pusat Penelitian Karet.