JiiP Volume 5 Nomor 2: 108-119, Desember 2019 Jurnal Ilmu dan Industri Peternakan pISSN 2355-0732, eISSN 2716-2222 http://journal.uin-alauddin.ac.id/index.php/jiip/index DOI https://doi.org/10.24252/jiip.v5i2.11887

## Pengaruh Kitosan Iradiasi Terhadap Fermentabilitas
dan Kecernaan ( In Vitro )
The Effect of Irradiated Chitosan on Fermentability and Digestability
I.R. Rumata*, D. Darwis 1 , K.A.Kamil 2 *Mahasiswa Magister Ilmu Ternak, Program Pascasarjana, Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran Kampus Jatinangor Jl. Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Sumedang, Jawa Barat, 45363
1 Pusat Aplikasi Isotop dan Radiasi (PAIR), Badan Tenaga  Nuklir Nasional, Jl. Lebak Bulus Raya No. 49, Jakarta 12440
2 Departemen Nutrisi Ternak dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran Kampus Jatinangor Jl. Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Sumedang, Jawa Barat, 45363
* Korespondensi E-mail : rumata_ir67@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian  pengaruh  kitosan  iradiasi  terhadap  kinerja  fermentabiltas  dan kecernaan  bahan  organik  dan  bahan  kering  telah  dilakukan  teknik  in  vitro. Seperangkat  alat  dan  bahan  in  invitro  telah  disiapkan  untuk  menguji  level pemberian  kitosan  iradiasi  dalam  ransum  konsentrat.  Level  kitosan  telah  diuji dengan 6 pelakuan, yaitu tanpa kotosan, 300 ppm; 350 ppm, 400 ppm, 450 ppm dan 500 ppm kitosan iradiasi dalam ransum. Data yang diperoleh telah dianalisis dengan  mengguanakan  uji  polinomial  orthohonal  dan  kontras  orthogonal, menggunakan  SPPS  IBM  21.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  laju fermentabilitas  dan  kecernaan  bahan  keriang  dan  organik  berbeda  nyata  lebih tinggi hingga panambahan kitosan iradiasi 450 ppm. Disimpulkan bahwa kitosan hingga  450  ppm  mampu  mensimulasi  kerja  mikro  rumen  dalam  profes biokomiawi fermentasi dan kecernaan di dalam rumen secara in vitro.
Kata kunci :  Rumen, Kitosan Iradiasi, In vitro

## ABSTRACT
The Experiment obout the effect  of irradiated chiotosan (IC) on the fermentabilty and digestibility were conducted by in vitro tecnique. In Vitro equipments were prepared to determination levels of irradited chitosan in the ration. Six levels of irradited chitosan were assigned at without IC, 300 ppm IC, 350 IC, 400 ppm IC, 450  IC  and  500  ppm  IC,  with  five  replication,  respectively.  All  of  data  were collected and analized by polynomial orthogonal and contrast orthogonal test, by using SPPS IBM 21. Based on the result in this experiment showed that additional IC of 450 ppm was optimum level for rasing rumen microbes metabolism in the biochemistry  proses  of  fermentabilities  and  digestibilities  at  rumen  fluid  by  in vitro.
Keywords : Rumen, Irradiated Chitosan, In Vitro

## PENDAHULUAN
Produktivitas  ternak  sangat  ditentukan  oleh  faktor  eksternak  dan  internalnya. Optimalisasi faktor internal ternak sesungguhnya merupakan manifestasi dari kemampuan genetik ternak tersebut dalam berekspresi dalam merespon seluruh faktor-faktor lingkungan dan pakan yang dikonsumsinya. Oleh karena itu, tahap pencernaan merupakan tahap yang penting sebelum nutrien tersebut diabsorpsi masuk kedalam darah dan sel-sel.
Bagi  ternak ruminansia, fisiologi pencernaannya unik dibandingkan ternak unggas.
Ternak  ruminansia  memeliki  rumen  yang  di  dalamnya  dikandung  sangat  banyak  species mikroba.  Secara  parsial,  rumen  ini  adalah  sebuah  ekosistem  yang  sangat  kompleks (Mushawwir  dan  Latipudin,  2013)  dan  secara  mandiri  harus  mampu  mempertahankan kondisi idealnya. Kebutuhan serat kasar bagi mikroba rumen adalah sangat esensial. Dalam kenyataannya  ternak  ruminansia  adalah  induk  semang  yang  memanfaatkan  produk fermentasi  dari  mikroba  sebagai  prekursor  metabolismenya  dalam  mendukung pertumbuhan dan produksinya.
Dapat  dikatakan  bahwa  performa  ternak  ruminansia  yang  kurang  optimal menunjukkan  kinerja  rumen  yang  tidak  optimal  pula.  Berbagai  penelitian  telah  dilakukan untuk meningkatkan  dan mengoptimalkna fungsional rumen. Penelitian defaunasi hingga rekayasa bahan pakan sebelum dikonsumsi ternak telah banyak dilaporkan. Beberapa kajian menunjukkan belum optimumnya kecernaan bahan pakan meskipun kadar ligninnya telah dikurangi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  peran  mikroba  menduduki  fungsi  esensial  jika dikaitkan dengan kecernaan bahan-bahan organik.
Strategi  peningkatan  kinerja  mikroba  perlu  terus  dikaji  dan  dilakukan.  Pemberian kitosan  sebagai  feed  additif  bagi  ternak  ruminansia  juga  telah  banyak  dilakukan.  Namun belum  menunjukkan  hasil  yang  memuaskan.  Salah  Satu  penyebabnya  adalah  ukuran molekul kitosan yang mungkin tdak dapat diabsorpsi secara optimal oleh mikroba dan villi- villi rumen.
Terkait dengan hal ini, maka dalam penelitian telah dilakukan upaya pengurangan ukuran  molekul  kitosan,  dengan  mengaplikasikan  teknik  radiasi  sinar  gamma  dari  nuklir. Berat  molekul  kitosan  yang  jauh  lebih  rendah  <30  kD,  diharapkan  mampu  diabsorbsi  ke dalam sel-sel mikroba dan mampu mensitimulasi ekpresi gen (atau DNA) mikroba. Ekspresi DNA  mikroba  yang  tinggi  diharapakan  dapat  menghasilkan  protein-protein  (enzim)  yang mampu menginduksi fermentasi protein maupun serat kasar atau secara keseluruhan bahan-
bahan organik di dalam cairan rumen. Dengan demikian potensi pemanfaatan nutrien bagi ternak semakin tinggi.
Oleh  sebab  itu  peneliti  tertarik  mangkaji  damapk  pemberian  kitosan  hasil  iradiasi nuklir  terhadap  kemampuan  fermentabilitas  dan  kecernaan  bahan  organik  dan  kecernaan bahan kering di dalam cairan rumen secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat Penelitian
Bahan  penelitian  adalah  kitosan  iradiasi  dalam  bentuk  liquid.  Kitosan  hasil  radiasi dalam  bentuk  cairan  ini  diperoleh  dari  Pusat  Aplikasi  Isotop  dan  Radiasi  (PAIR),  Badan Tenaga Nuklir Indonesia (BATAN), Pasar Jumat Jakarta. Kitosan terelebuh dahulu diisiolasi dari  kulit  udang  dengan  teknik  kimiawi  untuk  memisahkan  gugus  amin  dan  mineralnya.
Kemudian  diiradiasi  sinar  gamma  75  kilogray  (Darwis  dkk.,  2014).  Konsentrasi  kitosan induk adalah 5% atau 50.000 ppm. Larutan tersebut diencerkan sesuai dengan konsentrasi kitosan perlakuan yang telah ditetapkan.
Cairan  rumen  sapi  pasundan  untuk  proses in  vitro diperoleh  dari  Rumah  Potong Hewan  (RPH)  Banjaran,  Kabupaten  Bandung.  Saliva  buatan  (larutan  McDougall),  larutan HgCl 2 jenuh,  asam  borat  (H 3 BO 3 )  berindikator  (merah    metil/MR    dan    hijau    bromo kresol/BCG),  gas CO 2 , vaselin, H 2 SO 4 0,005 N, H 2 SO 4 15 %, larutan pepsin 0,2 %, Na 2 CO 3 jenuh,  NaOH 0,5 N, HCl 0,5 N, phenolptalein,  aquadest,  larutan  garam  formalin  (formal saline).
Peralatan penelitian meliputi tabung fermentor, shaker waterbath inkubator, cawan Conway,      pipet,      buret,      labu      Erlenmeyer,  pendingin    Leibig,  sentrifuge,      tabung sentrifuge,        seperangkat    alat    destilasi,  oven  105 0 C,  cawan    porselin,    kertas  saring, eksikator, timbangan digital dan tanur.

## Peubah dan Metode Analisis
1. Kadar NH 3 Cairan Rumen
Teknik Mikrodifusi Conway telah digunakan untuk menentkan Kadar NH 3 (General Laboratory  Procedure,  1966).    1  mL  supernatan  serta  Na 2 CO 3 jenuh  juga  telah  digunakan digunakan dalam pengujian ini, masing-masing ditempatkan di sisi kiri  dan kanan cawan Conway.  Asam  borat  dan  brom  kresol  masing-masing  sebanyak  1  ml,  diisikan  ke  dalam
sekat tengah cawan.  Cawan Conway (berisi Na 2 CO 3 ) dengan suhu kamar dibiarkan selama 24  jam,  setelah  ditutup  rapat  menggunakan  vaselin.    Untuk  menentukan  kandungan amonianya  ,  telah  dilakukan  titrasi  menggunakan  H 2 SO 4 0,005  N.    Kadar  NH 3 ditentukan dengan rumus berikut :
NH 3 =  (mL titrasi x N H 2 SO 4 x 1000) mM
Keterangan :
ml : volume asam sulfat yang terpakai titrasi

## N : Normalitas asam sulfat

## 2. Kadar Asam Lemak Terbang Total (VFA total)
Kadar  Teknik  destilasi uap  telah  digunakan  untuk  menenutkan  kadar  VFA  sampel (General  Laboratory  Procedure,  1966).    Supernatan  yang  diperoleh,  ditampung  dan ditambahkan  1  ml  larutan  H 2 SO 4 15%,  kemudian  ditutup  dengan  rapat.  VFA  ditampung hingga  300  mL  menggunakan  erlemeyer  yang  berisi    NaOH  0,5  N  5  mL.    Dua  tetes phenolpthalein telah ditambahkan, kemudian larutan HCl 0,5 N digunakan sebagai titrator, hingga larutan menjadi bening.
Konsentrasi VFA ditentukan dengan formula berikut :

## VFA total  =  (b  -  s)  x  N HCl  x  1000/5
Dimana  b    adalah  volume  titrasi  blanko;  s  adalah  volume  titran  sampel,;  dan  N  adalah normalitas larutan HCl

## 3. Pengukuran Kecernaan Bahan Kering dan Bahan Organik in Vitro
Metode  Tilley  dan  Terry  (1969)  telah  digunakan  untuk  menentukan  tingkat kecernaan  bahan  kering  serta  bahan  organik.    Sebanyak  1  mL  larutan  kitosan  (sesuai perlakuan)  dan  1  g  ransum  dimasukan  dalam  tabung  fermentor  berisi  cairan  rumen  dan larutan saliva buatan (McDougall) masing-masing 10 dan 40 mL, kemudian telah digunakan gas CO 2 agar lingkungan lingkungan larutan menjadi anaerob dengan pH 6,5 - 6,9. Tabung yan  gberisi  larutan  sampel  telah  diinkubasikan  dengan  suhu  39 o C  selama  24  jam menggunakan waterbath.  0,2 mL  larutan HgCl 2 jenuh telah digunakan untuk mematikan mikroba,  kemudian  disentrifuse  (10.000  rpm;  10  m).    50  mL  pepsisn  0,2%  ditambhkan  ke dalam  endapan  setelah  dibuang  supernantannya.  Larutan  diinkubalsi  lagi  selama  24  jam (suasana aerob). Selanjutnya dengan kertas Whatman 41, endapan disaring.
Blanko  ditetapkan  dengan  cairan  rumen  tanpa  perlakuan.    Koefisien  kecernaan  BK dan BO dihitung dengan formula:
KcBK (%) =   BK awal -  (BK residu - BK blanko)   x  100
BK awal
KcBO (%) =  BO awal -  (BO residu - BO blanko)   x  100

## BO awal
Keterangan : KcBK = Kecernaan bahan kering; KcBO = Kecernaan bahan organik

## Rancangan Percobaan dan Analisis Data
Penelitian ini dilaksanakan dengan menggunakan teknik rancangan acak kelompok. Terdiri dari enam (6) perlakuan tanpa dan dengan penambahan kitosan iradiasi dengan tiga (5) ulangan. Keenam  perlakuan tersebut, yaitu:
Perlakuan A :  Ransum tanpa pemberian kitosan
Perlakuan B :  Kitosan iradiasi 300 ppm dalam ransum Perlakuan C : Kitosan iradiasi 350 ppm dalam ransum Perlakuan D : Kitosan iradiasi 400 ppm dalam ransum Perlakuan E : Kitosan iradiasi 450 ppm dalam ransum Perlakuan F : Kitosan iradiasi 500 ppm dalam ransum
Data  fermentabilitas  dan  kecernaan  in  vitro    yang  telah  diperoleh  kemudian dianalisis  dengan  teknik  statistika  menggunakan  Uji  Polinomial  Otrhogonal  dan  Kontras Orthogonal, serta Uji Korelasi Regresi. Analisis dan interpretasi data telah dilakukan dengan menggunakan software SPSS IBM 21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian dan analisis statistika menunjukkan bahwa terdapat pengaruh yang nyata  pemberian  kitosan  iradiasi  terhadap  fermentabilitas  dan  kecernaan  secara  in  vitro. Pada  Tabel  1,  tampak  bahwa  secara  keseluruhan    lajur  fermentabilitas  (VFA  dan  NH 3 ) maupun  laju  kecernaan,  baik  bahan  kering  dan  organik  menunjukkan  peningkatan  yang nyata  berbeda  seriirng  dengan  penambahan  level  kitosan  iradiasi,  hingga  450  ppm  dalam
ransum.  Tampaknya  pemberian  450  ppm  dalam  ransum  adalah  pemberian  yang  optimal, terutama terhadap KCBK dan KCBO (Tabel 2 dan Gambar 1).
Tabel 1. Pengaruh Chitosan Iradiasi terhadap Fermentabilitasn dan Kecernaan Invitro
Peubah Kitosan iradiasi dalam ransum (ppm) 0 300 350 400 450 500 VFA (mM/L) 158,70 a 177,10 b 183,33 c 182,00 d 186,50 e 124,50 f NH 3 (mM/L) 2,32 a 3,70 b 4,20 c 4,55 d 4,40 d 2,65 e KCBK (%) 51,28 a 53,68 a 56,69 b 60,82 c 64,03 d 62,22 d KCBO (%) 46,99 a 50,62 b 52,71 b 57,21 c 61,50 d 60,64 d
Rata-rata perubah yang diikuti dengan abjad yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05) VFA = Volatile fatty acid; KCBK = Kecernaan bahan kering; KCBO= Kecernaan bahan organik
Kitosan  iriadiasi  yang  ditambahkan  dalam  ransum  tampaknya  mampu meningkatkan kinerja fermentasi oleh mikro-mikroba yang terdapat di dalam cairan rumen (Chiu  dkk.,  2015;  Gwase  dkk.,  2015).  Peningkatan  kinerja  fermentasi  tampak  dengan meningkatnya proporsi atau volume VFA dan NH 3 . Peningkatan VFA menunjukkan bahwa mikroba terutama bakteri di dalam cairan rumen mampu mendegradasi sumber karbohidrat ransum  mejadi  glukosa  (Huang  dkk.,  2005;  Adriani  dan  Mushawwir,  2008;  Araujo  dkk., 2015),  selanjutnya  menjadi  prekursor  dan  menghasilkan  VFA  dengan  volume  yang  tinggi. Meskipun pada Tabel 2 ditunjukkan koefisien determinasi dan korealsi yang cukup rendah, namun  penambahan  kitoasan  hingga  450  ppm  merupakan  penambahan  yang  paling optimal. Pendugaan volume VFA berdasarkan pengaruh kitosan adalah  y = 183,10 + 4,11x .
Begitu  pula  dengan  kinerja  fermentatif  terhadap  degradasi  protein,  ditunjukkan dengan besarnya volume byproduct -nya yaitu kadar NH 3 (Jeon dkk., 2003; Kittiwongwattana, 2015;  Mushawwir,  2015) , menunjukkan  alur  yang  sama  dengan  VFA,  dengan  persamaan model  pendugaan  yaitu    y  (NH 3 )  =  3,23  +  01,12x.  Hasil  penelitian  terdahulu  dengan menggunakan kitosan produksi Polymar, Fortaleza Brazil, pada sapi perah dengan dosis 150 mg/kg berat badan, menunjukkan peningkatan performa dan efisiensi pemanfaatan nutrient (Valle  dkk.,  2017).  Valle  juga  melaporkan  peningkatan  konsentrasi  asam  lemak  rantai panjang dan rantai pendek termasuk kelompok asam-asam VFA. Hasil yang sama juga telah ditunjukkan  oleh  Kong  dkk.  (2010)  dan  .  Pada  ternak  domba,  asam  lemak  terbang propionate  menunjukkan  peningkatan  (Goiri  dkk.,  2010),  Mingoti  dkk.  (2016),  meskipun
disertai dengan penurunan ammonia dengan bertambahnya konsentrasi pemberian kitosan (Syinowiecki  dan Al-Kateeb, 2003; Oresanya dkk., 2008; Pearce dkk., 2013).
Pemberian kitosan, dilaporkan juga telah meningkatkan nitrogen urea darah (blood urea  nitrogen  =  BUN),  menurunkan  sekresi  nitrogen  (N)  feces  tanpa  mempengaruhi keseimbangan  N  dan  sintesis  protein  oleh  mikroba  (Mingoti  dkk.,  2016).  Fakta  ini berhubungan atau disebabkan bahwa pemberian kitosan mampu meningkatkan kecernaan protein, serta terkait dan berdampak terhadap metabolisme N di hati.
Hasil penelitian terdahulu menunjukkan juga bahwa bila propionat meningkat, maka produksi  metan  menurun  (Tang  dkk.,  2005;  Xu  dan  Wang,  2005;  Tanuwiria  dkk.,  2007), sehingga kehilangan energi akan berkurang, dan akan kehilangan energi ini akan minimal bila  asam  propionat  tinggi  (Tankson  dkk.,  2001;  Tao  dkk.,  2006;  Soeharsono  dkk.,  2010; Rhoads  dkk.,  2013)  .  Meskipun  hasil  penelitian  ini  tidak  sepenuhnya  sama  dengan  hasil penelitian sekarang ini dengan penambahan kitosan. Dengan demikian, setiap bahan pakan mempunyai  efisiensi  tersendiri.  Dengan  menggunakan  teknik  stoichiometri  maka  nilai efisiensi  fermentasi  bahan  pakan  yang  digunakan  lebih  akurat  (Javaid  dkk.,  2011; Mushawwir, 2015).
Kitosan iradiasi dengan ukuran berat molekul yang lebih rendah mampu berinterkais langsung  ke  dalam  sel-sel  mikroba  (Goiri  dkk.  2010).  Kenyataan  ini  menunjukkan  kinerja mikroba  yang  lebih  baik,  meskipun  dalam  keadaan  ekosistem  cairan  rumen  kurang menguntungkan, dengan ketidak seimbangan mineral kation anion (Crini, 2005; Adriani dan Mushawwir,  2008;  Nguyen  dkk.,  2016),  cekaman  panas  lingkungan  ekstrernal  (Latipudin dan Mushawwir, 2011; Mushawwir dan Latipudin, 2011 dan 2012; Loyau dkk., 2014), profil metabolisme yang tidak seimbang (Mushawwir dkk. 2010 dan 2011; Mushawwir dkk., 2019). Keadaan ini dapat dikurang dengan pemberian kitosan, yang ditandai peningkatan volume VFA dan NH 3 .
Kecernaan  bahan  kering  (KcBK)  dan  bahan  organik  (KcBO)  tampaknya  mengalami peningkatan (P<0,05) seiring dengan peningkatan level kitosan iradiasi (Tabel 1 dan Gambar 1).  Pengaruh  kitosan  terhadap  kedua  indikator  kecernaan  in  vitro  tersebut  sangat  besar, yaitu  masing-masing  0,90  dan  0,94,  serta  model  pendugaan  masing-masing  KcBK  =  49,13 +0,57x dan KcBO = 44,41 +3,01x (Tabel 2).
Tabel 2.  Koefisien Deteminasi (R 2 ), Koefisien Korelasi (r) Pengaruh Chitosan Iradiasi dan Model Regrasinya terhadap Fermentabiltas dan Kecernaan
Peubah Koefisien Deteminasi (R 2 ), Koefisien Korelasi (r) dan Model Pendugaan Kitosan Iradiasi dalam ransum R 2 r Model Pendugaan VFA 0,10 0,32 y = 183,10 + 4,11x NH 3 0,10 0,32 y = 3,23 + 01,12x KCBK 0,90 0,95 y = 49,13 +0,57x KCBO 0,94 0,97 y = 44,41 +3,01x
Gambar 1. Profil Fermentabilitas dan Kecernaan dengan Berbagai Level Penambahan Kitosan Iradiasi
Peningkatan  kecernaan  seiring  dengan  penambahan  level  kitosan  hingga  450  ppm dalam  ransum  menunjukkan  bahwa  terdapat  interaksi  positif  kitosan  dengan  mikroba- mikroba cairan rumen. Berdasarkan beberapa penelitian  terdahulu diketahui  bahwa  setiap
158,70 177,10 183,33 182,00 186,50 124,50 2,32 3,70 4,20
4,55 4,40 2,65 51,28 53,68 56,69 60,82 64,03 62,22 46,99 50,62 52,71 57,21
61,50 60,64 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 0 300 350 400
450 500 Kitosan Iradiasi (ppm) VFA NH3 KCBK KCBO
saat  dalam  rumen  terjadi  perubahan-perubahan  kimiawi  akibat  proses  fermentasi  yang terjadi  karena  kegiatan  mikroorganisme  (Gyliene  dkk.,  2003;  Mushawwir  dan  Latipudin, 2013; Paiva dkk., 2016).
Reaksi kimia yang terjadi dalam rumen  sangat bervariasi bergantung kepada bahan makanan yang masuk dan jumlah serta jenis mikroorganisme yang terlibat di dalam proses fermentasi  tersebut.  Secara  garis  besar  mikroorganisme  dalam  rumen  berfungsi  sebagai penyelenggara  fermentasi,  pembentuk  vitamin  B  kompleks  dan  vitamin  K,  sumber  zat makanan  bagi  induk  semang.  Kemampuan  ini  meningkat  dengan  pemberian  kirosan  (El- Seed dkk., 2002; Goiri dkk., 2010). Sekitar 50% - 60% nitrogen yang diperlukan oleh induk semang dapat dipenuhi dari mikroba rumen yang mati. Nilai hayati protein mikroba rumen cukup tinggi,  sehingga adanya mikroba dalam rumen sangat penting pada keadaan kadar dan  kualitas  protein  pakan  rendah  (Renaudeau  dkk.,  2012;  Wiradimadja  dkk.,  2014).  Pada kondisi  kadar  dan  kualitas  protein  ransum  tinggi,  seringkali  kehadiran  mikroba  dapat mengganggu (Vie dkk., 2001; Wang dan Zhang, 2004), karena protein pakan tersebut akan dirombak  terlebih  dahulu  oleh  mikroba.  Kondisi  ini  sangat  merugikan,  sehingga  banyak peneliti berusaha mencari bahan yang dapat menimbulkan "protein bypass" (Tan dkk., 2010;
Tian dkk., 2015).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  disimpulkan  bahwa  kitosan  iradasi  mampu mempengaruhi  fermentabiltas  dan  kecernaan  secara  invitro.  Pemberian  hingga  450  ppm dalam  ransum  merupakan  level  yang  paling  optimum  dalam  mensimulasi  kerja  mikro rumen dalam profes biokomiawi fermentasi dan kecernaan di dalam rumen.

## DAFTAR PUSTAKA
Adriani, L. dan Mushawwir, A. 2008. Kadar glukosa darah, laktosa dan produksi susu sapi perah  pada  berbagai  tingkat  suplementasi  mineral  makro. Artkel  ilmiah .  Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran.
Araujo,  A.P.C.,  Venturelli,  B.C.,  Santos,  M.C.B.,  Gardinal,  R.,  Consolo,  N.R.B.,  Calomeni, G.D.,  Freitas,  J.E.,  Barletta,  R.V.,  Gandra,  J.R.,  Paiva,  P.G.,  and  Renno,  F.P.  2015. Chitosan  affects  total  nutrient  digestion  and  ruminal  fermentation  in  Nellore  steers. Animal Feed Science and Technology, 206 , 114-118.
Chiu,  C.Y.,  Chan,  I.L.,  Yang,  T.H.,  Liu    S.H.,  and  Chiang,  M.Y.  2015.  Supplementation  of chitosan  alleviates  high-fat  diet-enhanced  lipogenesis  in  rats  via  adenosine monophosphate  (amp)-activated  protein  kinase  activation  and  inhibition  of lipogenesis-associated genes. J. Agric. Food. Chem, 63( 11), 2979-2988. Crini, G. 2005, Recent Developments in Polysaccharide-based Materials Used As Adsorbents in Wastewater Treatment . Progress in Polymer Science, 30 (1), 38-70.
Darwis, D., Puspitasari, T., Iramani, D., Susilowati, S., dan Pangerteni, D.S. 2014. Preparation of  low  molecular  weight  chitosan  by  radiation  and  its  application  for  plant  growth promoter.  IAEA  Tecdoc  Series:  Radiation  processed  materials  in  products  from polymers for agricultural applications . International Atomic Energy Agenc , 86-98.
El-Seed,  A.N.M.A.F.,  Kamel,  H.E.M.  .,  Sekine,  J.,  Hishinuma,  M.,    and  Hamana,  K.  2002. Chitin and chitosan as possible novel nitrogen sources for ruminants. Canadian Journal Animal Science, 83 (1), 161-163.
Goiri, I., Oregui, L.M.,  and Garcia-Rodriguez, A. 2010. Use of chitosan to modulate ruminal fermentation of a 50:50 forage-to-concentrate diets in sheep. Journal of Animal Science, 88 , 749-755.
Gwaze,  F.  Rand  Mwale,  M..  2015  The  Prospect  of  Duckweed  in  Pig  Nutrition:  A  Review.
Journal of Agricultural Science, 7 (11), 189-199.
Gyliene, O., Razmute, I., Taro zaite, R., dan Nivinskiene, O. 2003. Chemical Composition and Sorption Properties of chitosan Produced from Fly larva Shells. Chemija, 14 (3),  121-127. Huang, R. L. , Lin, Y. L.,  Wu, G. Y Li, .,  T. J ., Li, L. L ., Yang, C. B. ., Zhang, J.., Wang, B. ., Deng, Z. Y., Zhang, Y. G.., Tang, Z. R. ., Kang, P. and Guo, Y. M. 2005 . Effect of Dietary Oligochitosan Suplementation on Ileal Digestibility of Nutrients and Performance In Broilers . China Agricultural Univ. Press, Beijing, China.
Javaid,A.M, Shahzad, A., Nisa. M.,  and Sarwar. M.  2011.  Ruminal dynamics   of ad   libitum feeding   in   buffalo   bulls receiving  different  level  of  rumen  degradable  protein. Livestock  Science, 135 , 98-102.
Jeon, T. I., Hwang, S .G. ., Park, N. G. ., Jung, Y. R.., Shin, S. I., Choi, S. D., and Park, D. K. 2003. Antioxidative effect of chitosan on chronic carbon tetrachloride induced hepatic injury in rats. Toxicology, 187, 67-73.
Kittiwongwattana, C and Vuttipongchaikij, S .  2013.  Effect of nutrient media on vegetative growth  of Lemna  minor and Landoltia  punctata during in  vitro and ex  vitro cultivation. Maejo International J of Sci and Technol. 7(01):60-69
Kong, M., Che, X.G. ., Xing, K.., and Park, H.J. 2010. Antimicrobial properties of chitosan and mode  of  action:  a  state  of  the  art  review. International    Journal  of  Food  Microbialogy 144( 1), 51-63.
Latipudin,  D.  Dan  Mushawwir,  A.  2011.  Regulasi  Panas  Tubuh  Ayam  Ras  Petelur  Fase Grower dan Layer. Jurnal Sains Peternakan Indonesia, 6 (2), 77-82.
Loyau, T., S. Metayer-Coustard, S., Berri, C.,   Crochet, S., Cailleau-Audouin, E.., Sannier, M., Chartrin,  P.,  Praud,  C.,  Hennequet-Antier,  C.,  Rideau,  N.,  Courousse,  N.,  Mignon- Grasteau, S., Everaert, N., Duclos, M.J., Yahav, S., Tesseraud, S.,  and Collin, A. 2014. Thermal  manipulation  during  embryogenesis  has  longterm  effects  on  muscle  and liver metabolism in fast-growing chickens. PLoS One, 9 (9), e105339.
Mingoti,  R.D.,  Freitas,  J.E.,  Gandra,  J.R.,  Gardinal,  R.,  Calomeni,  G.D.,  Barletta,  R.V., Vendramini, T.H.A., Paiva, P.G., and Renno, F.P. 2016. Dose response of chitosan on nutrient  digestibility,  blood  metabolites  abd  lactation  performance  in  Holstein  dairy cows . Livestock Science, 187 , 35-39.
Mushawwir A. dan Latipuddin, D. 2013. Biologi Sintesis Telur, perspektif Fisologi, Biokimia dan Molekuler Produksi Telur . Penerbit Graha Ilmu, Yogyakarta. Mushawwir, A. 2015. Biokimi Nutrisi . Widya Padjadjaran, Bandung.
Mushawwir,  A.  Dan  Latipudin,  D.  2011.  Beberapa  Parameter  Biokimia  Darah  Ayam  Ras Petelur  Fase  Grower  dan  Layer  dalam  Lingkungan  “Upper  Zonathermoneutral . Jurnal Peternakan Indonesia , 13 (3), 191-198.
Mushawwir,  A.  dan  Latipudin,  D.  2012.  Respon  fisiologi  thermoregulasi  ayam  ras  petelur fase grower dan layer. Proseding seminar zootechniques for Indogeneous resources development,  ISAA  Fakultas  Petenakan  Universitas  Diponegoro. Proceeding  of National Seminar on Zootechniques , 1 (1), 23-27.
Mushawwir, A., Adriani, L., and Kamil. K.A.  2011. prediction models for olfactory metabolic and sows %rnareticulocyt (rnart) by measurement of atmospheric ammonia exposure and microclimate level. Journal of the Indonoseain Tropical Animal Agriculture , 36, 14-20.
Mushawwir,  A.,  Suwarno,  N.,  dan  Yulianti,  A.A.  2019.  profil malondialdehyde  ( MDA)  dan kreatinin  itik  fase  layer  yang  diberi  minyak  atsiri  garlic  dalam  kondisi  cekaman panas. Jurnal Ilmu dan Industri Peternakan , 5 (1), 1-11.
Mushawwir, A., Yong, Y.K., Adriani, L., Hernawan, E., and Kamil, K.A. 2010. the fluctuation effect  of  atmospheric  ammonia (NH 3 )  exposure  and  microclimate  on  hereford  bulls hematochemical. Journal of the Indonesian Tropical Animal Agriculture, 35 , 232-238. Nguyen,  T.T.,  Bowman,  P.J.,  Haile-Mariam,  M.,  Pryce,  J.E.,  and  Hayes,  B.J.  2016.  Genomic selection for tolerance to heat stress in Australian dairy cattle. Journal of Dairy Science, 99 , 2849-62.
Oresanya,  T.  F.,  Beaulieu,  A.  D.,    and  Patience,  J.  F.,  2008.  Investigations  of  energy metabolism in weanling barrows: The interaction of dietary energy concentration and daily feed (energy) intake. Journal of Animal Science , 86, 348 – 363.
Paiva,  P.G.,  de  Jesus,  E.F.,  Valle,  .,    T.  A.  D.,    del  Almeida,  G.  F.,    Costa,  A.G.B.V.B., Consentini, C.E.C., F.Zanferari, F., Takiya, C.S., da Silva Bueno, I.C., and Renno, F.P., 2016. Effects of chitosan on ruminal fermentation, nutrient digestibility, and milk yield and composition of dairy cows. Animal  Production Science, 53 , 231-236.
Pearce,  S.  C.,  Gabler,  N.  K.,  Ross,  J.  W.,  Escobar,  J.,  Patience,  J.  F.,    Rhoads,  R.  P.,    and Baumgard, L. H., 2013. The effects of heat stress and plane of nutrition on metabolism in growing pigs. Journal of Animal Science . 91(5), 2108-2118.
Renaudeau, D., Collin, A., Yahav, S.,  De Basilio, V.,  Gourdine, J. L.,  and Collier, R. J. 2012.
Adaptation  to  hot  climate  and  strategies  to  alleviate  heat  stress  in  livestock production. Animal 6 , 707 – 728.
Rhoads,  R.P.,  Baumgard,  L.  H.,    and  Suagee,  J.  K.,  2013.  Metabolic  priorities  during  heat stress with an emphasis on skeletal muscle . Journal of Animal Science, 91 , 2492 – 2503. Soeharsono.,  Adriani,  L.,    Kamil,  K.A.,    Hernawan,  E.,  dan  Mushawwir,  A.  2010. Fisiologi Ternak : Fenomena  dan  Nomena  Fungsi  Jaringan  dan  Organ  pada  Hewan .  Widya Padjadjaran.
Syinowiecki, J and Al-Kateeb, N . 2003. Production properties and some new application of chitin  and  its  derivatives.  Critical  reviews  in  food  science  and  nutrition. Pro  Quest Medical Library, 43 (2), 145:171
Tan, G.Y.,  Yang, L.,  Fu, Y.-Q., Feng, J.H., and Zhang, M.H., 2010. Effects of different acute high  ambient  temperatures  on  function  of  hepatic  mitochondrial  respiration, antioxidative  enzymes,  and  oxidative  injury  in  broiler  chickens .  Poultry  Science,  89 , 115-122.
Tang, Z.R., Yin, Y.L., Nyachoti, C.M.,  Huang, R.L., Li, T.J., Yang, C.B.,  Yang, X.J., Gong, J., Peng,  J.,  Qi,  D.S.,  Xing,  J.J.,  Sun,  Z.H.,  and  Fan,  M.Z.  2005.  Effect  of  dietary supplementation  of  chitosan  and  galacto-mannan-oligosaccahride  on  serum parameters  and  the  insulin  like  factor-I  mRNA  expression  in  early-weaned  piglets. Domest. Anim. Endrocrinol. 28:430-441.
Tankson, J. D., Vizzier-Thaxton, Y., Thaxton, J. P., May, J. D.,  and Cameron, J. A., 2001. Stress and nutritional quality of broilers. Poult. Sci. 80:1384-1389.
Tanuwiria,  U.H.,  Mushawwir,  A.  dan  Yulianti,  A.  2007.  Potensi  pakan  serat  dan  daya dukungnya terhadap populasi ternak ruminansia di wilayah kabupaten garut.  Jurnal Ilmu Ternak, 7(2), 117 – 127.
Tao, X., Zhang, Z. Y., Dong, H., Zhang, H., and Xin, H. 2006. Responses of thyroid hormones of  market-size  broilers  to  thermoneutral  constant  and  warm  cyclic  temperatures. Poultry Science, 85 ,1520-1528.
Tian,  H.,  Wang,  W.,  and  Zheng,  N.  2015.  Identification  of  diagnostic  biomarkers  and metabolic  pathway  shifts  of  heat-stressed  lactating  dairy  cows Journal  of  Proteomics, 125 , 17-28.
Valle,  T.A.,  Paiva,  P.G.,  Jesus,  E.  F.,  Almeida,  G.F.,  Zanferari,  F.,  Costa, A.G.B.V.B.,  Bueno, I.G.S.,  and  Renno,  F.P.  2017.  Dietary  chitosan  improves  nitrogen  use  and  feed conversion in diets for mid-lactation dairy cows. Livestock Science, 201 , 22-29.
Wang,  S.  Q.,  and  Zhang,  C.  S.,  2004.  Chitin,  chitosan  and  their  application  in  aquaculture. Feed Research, 5, 25-28.
Wiradimadja,  R.,  Rusmana,  D.,  Widjastuti,  T.,  and  Mushawwir,  A.,  2014.  Chicken slaughterhouse waste utilization (chicken feather meal treated) as a source of protein animal feed ingredients in broiler chickens. Lucrări Ș tiin ț ifice - Universitatea de Ș tiin ț e Agricole ș i Medicin ă Veterinar ă , Seria Zootehnie, 62, 120-124.
Xie, W., Xu, P., and Liu, Q. 2001. Antioxidant activity of watersoluble chitosan derivatives. Bioorganic & Medical Chemistry  Letter, 11 (13), 1699-1701. Xu, Y.Q. and Wang, Y.Z. 2005. The application of chitin in aquaculture . China Feed. 7 , 30-32.