162

## Uji Antagonis Jamur Tempe ( Rhizopus Sp ) terhadap Bakteri Patogen Enterik
Dewi Peti Virgianti STIKes Bakti Tunas Husada, Jl. Cilolohan 36 Tasikmalaya Jawa Barat. e-mail : dewivirgianti@gmail.com Abstract Indonesian tempeh is a food product made from soybeans fermented by Rhizopus oligosporus .
The role of R.oligosporus as the primary fungi in soybean is very important, that changing the composition of the substrate soybeans into food that is more nutritious and contains many enzymes and bioactive compounds, including antibacterial compounds. This study was aimed at testing the antibacterial activity of Rhizopus  sp fungus  isolated  from  commercial  tempeh  against  several  enteric  pathogen  bacteria Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 and Shigella flexneri ATCC 12022. The tests were conducted by the antagonism test agar diffusion method, by putting pieces of SDA that has grown Rhizopus sp on agar Muller Hinton which test bacteria was inoculated. The incubation period was 24 hours at 37 ° C. The results showed that Rhizopus sp has antagonistic to the bacteria, which produce inhibitory zone of 28 mm against the E.coli ATCC 25922, 26 mm against S.typhimurium ATCC 14028 and 39.5 mm against Shigella flexneri ATCC 12022. Based on these results it can be concluded that the Rhizopus sp isolated from tempeh is antagonistic against enteric pathogenic bacteria. The results of this study reinforce the benefits of tempeh as a functional food.
Keyword: tempeh, Rhizopus sp , enteric pathogen bacteria, antibacterial activity
Abstrak
Tempe merupakan produk pangan Indonesia berbahan kacang kedelai yang difermentasi oleh
Rhizopus oligosporus. Peranan Rhizopus oligosporus pada tempe sangat penting, yaitu sebagai jamur utama yang mengubah komposisi substrat kacang kedelai menjadi makanan yang lebih bernutrisi serta mengandung  banyak  enzim  dan  senyawa  bioktif,  diantaranya  senyawa  antibakteri.  Penelitian  ini bertujuan untuk menguji aktivitas antibakteri jamur Rhizopus sp yang diisolasi dari tempe komersial terhadap beberapa bakteri patogen enterik, yaitu Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 dan Shigella flexneri ATCC 12022. Pengujian dilakukan dengan uji antagonisme metode difusi agar, yaitu dengan meletakkan potongan SDA yang telah ditumbuhi Rhizopus sp pada agar Muller Hinton yang telah diinokulasikan bakteri uji. Masa inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37°C. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa Rhizopus  sp bersifat  antagonis  terhadap  bakteri  uji,  yaitu menghasilkan zona hambat sebesar 28 mm terhadap Escherichia coli ATCC 25922, 26 mm terhadap Salmonella typhimurium ATCC 14028 dan 39,5 mm terhadap Shigella flexneri ATCC 12022. Berdasarkan hasil  penelitian  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa Rhizopus  sp yang  diisolasi  dari  tempe  bersifat antagonis terhadap bakteri patogen enterik. Hasil penelitian ini menguatkan manfaat tempe sebagai pangan fungsional.
Kata kunci: tempe, Rhizopus sp , bakteri patogen enterik, aktivitas antibakteri

## Pendahuluan
Tempe merupakan pangan fungsional yang  sangat  bermanfaat  bagi  kesehatan karena  mengandung  banyak  nutrisi  dan komponen  bioaktif.  Banyak  penelitian menunjukkan bahwa nutrisi dan komponen bioaktif pada tempe dihasilkan dari kapang, kamir,  dan  bakteri  asam  laktat,  tetapi mikroorganisme  utama  yang  berperan dalam  fermentasi  kedelai  menjadi  tempe yaitu Rhizopus oligosporus (Nout dan Kiers 2005;  Nurdini et  al., 2015). Rhizopus oligosporus pada  tempe  berperan  sebagai pengepak  butiran  kacang  kedelai  menjadi
bentuk  padat  dengan  anyaman  miselium. Selain  itu  peranan  penting  dalam  proses enzimatik yang berfungsi dalam mengubah senyawa kompleks menjadi senyawa yang lebih  sederhana  sehingga  mudah  diserap oleh tubuh, yaitu mengandung semua asam amino  esensial,  kalsium,  asam  lemak, vitamin,  isoflavon,  serta  menurunkan kandungan zat anti gizi asam fitat (Babu et al., 2009). Penelitian  mengenai  aktivitas komponen  bioaktif  tempe  terhadap  bakteri telah  banyak  dilakukan,  di  antaranya penelitian Soka et al. (2014) menunjukkan
bahwa konsumsi tempe pada tikus Sprague- Dawley  dapat  meningkatkan  populasi Bacterioidetes, sehingga  mengindikasikan bahwa tempe dapat memodulasi komposisi mikrobiota  usus  menjadi  lebih  sehat. Berdasarkan  kultur in  vitro menunjukkan bahwa ekstrak tempe bersifat menghambat pertumbuhan Basilus subtilis , tetapi dapat menstimulasi pertumbuhan Bifidobacterium dan Lactobacillus yang  merupakan  flora normal  usus  (Kuligowski et  al., 2013). Ekstrak tempe mentah dapat menghambat pertumbuhan Basillus cereus dan sporanya (Roubous et  al., 2010)  dan  mampu menghambat pertumbuhan bakteri Basillus subtillis dan Staphylococcus  aureus (Mambang et al., 2014). Salah  satu  penyakit  yang  dapat dicegah dengan mengkonsumsi tempe yaitu penyakit diare (Kiers et al., 2003; Nout dan Kiers  2005;  Roubous et  al., 2011).  Pada penelitian  Karmini et  al. (1997)  dapat dibuktikan  bahwa  konsumsi  pangan berbahan  dasar  tempe  pada  tikus  jantan dapat  mengurangi  diare  yang  disebabkan oleh EPEC. Begitu pula dengan Kiers et al. (2003) yang membuktikan bahwa konsumsi tempe dapat mengurangi insiden diare pada babi. Kandungan senyawa aktif pada tempe yang  dihasilkan  dari  proses  metabolisme jamur Rhizopus  oligosporus dapat digunakan  sebagai  fermentor.  Pemurnian protein  yang  bersifat  antibiotik  dari  larutan hasil  fermentasi  biakan Rhizopus oligosporus salah  satunya  dilakukan  oleh Kobayasi et  al. (1992),  protein  sederhana dengan  berat  molekul  5.500  yang mengandung  komponen  asam  amino cystein  yang  tinggi  tersebut  sangat  aktif melawan  bakteri  Gram  positif.  Kajian mengenai  peranan  jamur  tempe Rhizopus sp dalam mengambat pertumbuhan bakteri patogen  enterik  belum  dilakukan.  Bakteri patogen enterik diantaranya adalah Entero Patogenic Escherichia  coli (EPEC) penyebab diare, Salmonella typhi penyebab demam  tifoid  dan Shigella  sp penyebab penyakit  disentri,  prevalensi  penyakit- penyakit tersebut di Indonesia masih sangat tinggi. Oleh  karena  itu  penelitian  ini dilakukan untuk melihat aktivitas antibakteri dari Rhizopus sp yang diisolasi dari tempe terhadap beberapa bakteri patogen enterik yaitu Escherichia  coli ATCC  25922,
Salmonella typhimurium ATCC 14028, dan
Shigella flexneri ATCC 12022.

## Materi dan metode
Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah autoklaf, inkubator, cawan petri, erlenmeyer, gelas kimia, laminar air flow cabinet , jangka sorong,  pinset,  kaca  objek,  kaca  penutup, timbangan analitik, tabung durham. Bahan- bahan  yang  digunakan  adalah  tempe komersial yang dibeli di kec. Cineam Kab. Tasikmalaya,  Sabouraud  Dextrose  Agar (SDA), medium agar Muller Hinton. Bakteri uji yang digunakan adalah Escherichia coli ATCC  25922 ,  Salmonella  typhimurium ATCC  14028  dan Shigella  flexneri ATCC 12022  yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi Prodi Analis Kesehatan STIKes BTH Tasikmalaya. Isolasi jamur tempe Tempe dipotong dengan ukuran 5 cm x 5  cm,  kemudian  menggunakan  jarum  ose lurus steril diambil jamurnya dan diletakkan pada SDA. Inkubasi dilakukan dalam waktu 7 hari pada suhu ruangan.
Pengujian aktivitas antibakteri Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan uji antagonisme metode difusi agar. Disediakan  medium  agar  Muller  Hinton. Diinokulasikan  bakteri  uji  dengan membentuk goresan padat pada agar. Pada isolat jamur tempe yang telah tumbuh pada media SDA, diambil sedikit bagian agar yang telah ditumbuhi fungi dengan menggunakan lingkaran  tabung  durham  steril,  kemudian bagian agar tersebut diletakkan pada bagian tengah  medium  Muller  Hinton  yang  telah diinokulasikan  bakteri  uji.  Dilakukan pengujian  secara  duplo.  Kontrol  perlakuan dilakukan dengan cara yang sama terhadap agar  yang  tidak  diinokulasikan  fungi  yang diletakkan pada medium Muller Hinton yang telah  diinokulasikan  bakteri  uji.  Inkubasi dilakukan  selama  24  jam,  untuk  kemudian diamati  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.

## Karakterisasi jamur tempe secara makroskopik  dan mikroskopik
Isolat  jamur  tempe  yang  diperoleh dikarakterisasi  secara  makroskopik  pada m e d i u m   S D A ,   d e n g a n   d i l a k u k a n pengamatan  terhadap  morfologi  fungi meliputi bentuk koloni, warna koloni, warna
Biosfera 32 (3) September 2015
162

## Uji Antagonis Jamur Tempe ( Rhizopus Sp ) terhadap Bakteri Patogen Enterik

## Dewi Peti Virgianti
STIKes Bakti Tunas Husada, Jl. Cilolohan 36 Tasikmalaya Jawa Barat. e-mail : dewivirgianti@gmail.com

## Abstract
Indonesian tempeh is a food product made from soybeans fermented by Rhizopus oligosporus . The role of R.oligosporus as the primary fungi in soybean is very important, that changing the composition of the substrate soybeans into food that is more nutritious and contains many enzymes and bioactive compounds, including antibacterial compounds. This study was aimed at testing the antibacterial activity of Rhizopus  sp fungus  isolated  from  commercial  tempeh  against  several  enteric  pathogen  bacteria Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 and Shigella flexneri ATCC 12022. The tests were conducted by the antagonism test agar diffusion method, by putting pieces of SDA that has grown Rhizopus sp on agar Muller Hinton which test bacteria was inoculated. The incubation period was 24 hours at 37 ° C. The results showed that Rhizopus sp has antagonistic to the bacteria, which produce inhibitory zone of 28 mm against the E.coli ATCC 25922, 26 mm against S.typhimurium ATCC 14028 and 39.5 mm against Shigella flexneri ATCC 12022. Based on these results it can be concluded that the Rhizopus sp isolated from tempeh is antagonistic against enteric pathogenic bacteria. The results of this study reinforce the benefits of tempeh as a functional food.
Keyword: tempeh, Rhizopus sp , enteric pathogen bacteria, antibacterial activity
Abstrak
Tempe merupakan produk pangan Indonesia berbahan kacang kedelai yang difermentasi oleh Rhizopus oligosporus. Peranan Rhizopus oligosporus pada tempe sangat penting, yaitu sebagai jamur utama yang mengubah komposisi substrat kacang kedelai menjadi makanan yang lebih bernutrisi serta mengandung  banyak  enzim  dan  senyawa  bioktif,  diantaranya  senyawa  antibakteri.  Penelitian  ini bertujuan untuk menguji aktivitas antibakteri jamur Rhizopus sp yang diisolasi dari tempe komersial terhadap beberapa bakteri patogen enterik, yaitu Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 dan Shigella flexneri ATCC 12022. Pengujian dilakukan dengan uji antagonisme metode difusi agar, yaitu dengan meletakkan potongan SDA yang telah ditumbuhi Rhizopus sp pada agar Muller Hinton yang telah diinokulasikan bakteri uji. Masa inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37°C. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa Rhizopus  sp bersifat  antagonis  terhadap  bakteri  uji,  yaitu menghasilkan zona hambat sebesar 28 mm terhadap Escherichia coli ATCC 25922, 26 mm terhadap Salmonella typhimurium ATCC 14028 dan 39,5 mm terhadap Shigella flexneri ATCC 12022. Berdasarkan hasil  penelitian  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa Rhizopus  sp yang  diisolasi  dari  tempe  bersifat antagonis terhadap bakteri patogen enterik. Hasil penelitian ini menguatkan manfaat tempe sebagai pangan fungsional.
Kata kunci: tempe, Rhizopus sp , bakteri patogen enterik, aktivitas antibakteri

## Pendahuluan
Tempe merupakan pangan fungsional yang  sangat  bermanfaat  bagi  kesehatan karena  mengandung  banyak  nutrisi  dan komponen  bioaktif.  Banyak  penelitian menunjukkan bahwa nutrisi dan komponen bioaktif pada tempe dihasilkan dari kapang, kamir,  dan  bakteri  asam  laktat,  tetapi mikroorganisme  utama  yang  berperan dalam  fermentasi  kedelai  menjadi  tempe yaitu Rhizopus oligosporus (Nout dan Kiers 2005;  Nurdini et  al., 2015). Rhizopus oligosporus pada  tempe  berperan  sebagai pengepak  butiran  kacang  kedelai  menjadi
bentuk  padat  dengan  anyaman  miselium. Selain  itu  peranan  penting  dalam  proses enzimatik yang berfungsi dalam mengubah senyawa kompleks menjadi senyawa yang lebih  sederhana  sehingga  mudah  diserap oleh tubuh, yaitu mengandung semua asam amino  esensial,  kalsium,  asam  lemak, vitamin,  isoflavon,  serta  menurunkan kandungan zat anti gizi asam fitat (Babu et al., 2009). Penelitian  mengenai  aktivitas komponen  bioaktif  tempe  terhadap  bakteri telah  banyak  dilakukan,  di  antaranya penelitian Soka et al. (2014) menunjukkan
bahwa konsumsi tempe pada tikus Sprague- Dawley  dapat  meningkatkan  populasi Bacterioidetes, sehingga  mengindikasikan bahwa tempe dapat memodulasi komposisi mikrobiota  usus  menjadi  lebih  sehat. Berdasarkan  kultur in  vitro menunjukkan bahwa ekstrak tempe bersifat menghambat pertumbuhan Basilus subtilis , tetapi dapat menstimulasi pertumbuhan Bifidobacterium dan Lactobacillus yang  merupakan  flora normal  usus  (Kuligowski et  al., 2013).
Ekstrak tempe mentah dapat menghambat pertumbuhan Basillus cereus dan sporanya (Roubous et  al., 2010)  dan  mampu menghambat pertumbuhan bakteri Basillus subtillis dan Staphylococcus  aureus (Mambang et al., 2014).
Salah  satu  penyakit  yang  dapat dicegah dengan mengkonsumsi tempe yaitu penyakit diare (Kiers et al., 2003; Nout dan Kiers  2005;  Roubous et  al., 2011).  Pada penelitian  Karmini et  al. (1997)  dapat dibuktikan  bahwa  konsumsi  pangan berbahan  dasar  tempe  pada  tikus  jantan dapat  mengurangi  diare  yang  disebabkan oleh EPEC. Begitu pula dengan Kiers et al.
(2003) yang membuktikan bahwa konsumsi tempe dapat mengurangi insiden diare pada babi. Kandungan senyawa aktif pada tempe yang  dihasilkan  dari  proses  metabolisme jamur Rhizopus  oligosporus dapat digunakan  sebagai  fermentor.  Pemurnian protein  yang  bersifat  antibiotik  dari  larutan hasil  fermentasi  biakan Rhizopus oligosporus salah  satunya  dilakukan  oleh Kobayasi et  al. (1992),  protein  sederhana dengan  berat  molekul  5.500  yang mengandung  komponen  asam  amino cystein  yang  tinggi  tersebut  sangat  aktif melawan  bakteri  Gram  positif.  Kajian mengenai  peranan  jamur  tempe Rhizopus sp dalam mengambat pertumbuhan bakteri patogen  enterik  belum  dilakukan.  Bakteri patogen enterik diantaranya adalah Entero Patogenic Escherichia  coli (EPEC) penyebab diare, Salmonella typhi penyebab demam  tifoid  dan Shigella  sp penyebab penyakit  disentri,  prevalensi  penyakit- penyakit tersebut di Indonesia masih sangat tinggi. Oleh  karena  itu  penelitian  ini dilakukan untuk melihat aktivitas antibakteri dari Rhizopus sp yang diisolasi dari tempe terhadap beberapa bakteri patogen enterik yaitu Escherichia  coli ATCC  25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028, dan
Shigella flexneri ATCC 12022.

## Materi dan metode
Alat dan Bahan Alat-alat  yang  digunakan  adalah autoklaf, inkubator, cawan petri, erlenmeyer, gelas kimia, laminar air flow cabinet , jangka sorong,  pinset,  kaca  objek,  kaca  penutup, timbangan analitik, tabung durham. Bahan- bahan  yang  digunakan  adalah  tempe komersial yang dibeli di kec. Cineam Kab. Tasikmalaya,  Sabouraud  Dextrose  Agar (SDA), medium agar Muller Hinton. Bakteri uji yang digunakan adalah Escherichia coli ATCC  25922 ,  Salmonella  typhimurium ATCC  14028  dan Shigella  flexneri ATCC 12022  yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi Prodi Analis Kesehatan STIKes BTH Tasikmalaya.
Isolasi jamur tempe Tempe dipotong dengan ukuran 5 cm x 5  cm,  kemudian  menggunakan  jarum  ose lurus steril diambil jamurnya dan diletakkan pada SDA. Inkubasi dilakukan dalam waktu 7 hari pada suhu ruangan.
Pengujian aktivitas antibakteri Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan uji antagonisme metode difusi agar. Disediakan  medium  agar  Muller  Hinton. Diinokulasikan  bakteri  uji  dengan membentuk goresan padat pada agar. Pada isolat jamur tempe yang telah tumbuh pada media SDA, diambil sedikit bagian agar yang telah ditumbuhi fungi dengan menggunakan lingkaran  tabung  durham  steril,  kemudian bagian agar tersebut diletakkan pada bagian tengah  medium  Muller  Hinton  yang  telah diinokulasikan  bakteri  uji.  Dilakukan pengujian  secara  duplo.  Kontrol  perlakuan dilakukan dengan cara yang sama terhadap agar  yang  tidak  diinokulasikan  fungi  yang diletakkan pada medium Muller Hinton yang telah  diinokulasikan  bakteri  uji.  Inkubasi dilakukan  selama  24  jam,  untuk  kemudian diamati  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.

## Karakterisasi jamur tempe secara makroskopik  dan mikroskopik
Isolat  jamur  tempe  yang  diperoleh dikarakterisasi  secara  makroskopik  pada m e d i u m   S D A ,   d e n g a n   d i l a k u k a n pengamatan  terhadap  morfologi  fungi meliputi bentuk koloni, warna koloni, warna
164
sebalik  koloni  ( reverse  side ),  ada  tidaknya tetes eksudat, garis radial, garis konsentris dan karakteristik khusus yang dimiliki. Pengamatan  morfologi  mikroskopis dilakukan dengan teknik moist chamber (de La  Maza et  al., 1997),  yaitu  dengan meneteskan  SDA  cair  ke  atas  permukaan kaca objek steril, dan diinokulasikan dengan spora    fungi  yang  akan  diamati  kemudian ditutup  dengan  kaca  penutup,  kaca  objek tersebut diletakkan pada cawan petri steril yang telah didasari oleh kapas basah steril dan kaca yang dibengkokkan sebagai dasar agar kaca objek tidak bersentuhan langsung dengan kapas basah. Cawan petri tersebut ditutup  dan  diinkubasi  pada  suhu  ruangan selama  7  hari.  Setelah  fungi  tumbuh kemudian  kaca  penutup  pada moist chamber tersebut  diletakkan  pada  kaca o b j e k   b a r u ,   k e m u d i a n   d i l a k u k a n pengamatan  dengan  menggunakan mikroskop  perbesaran  100x  dan  400x. Pengamatan  mikroskopik  yang  dilakukan
meliputi  ada  tidaknya  septat  pada  hifa, warna  hifa,  percabangan  hifa,  struktur reproduksi  (bentuk  spora,  warna  spora) serta  tangkai  penghasil  spora  atau sporangiofor.
Hasil  dan  Pembahasan Berdasarkan  hasil pengujian  aktivitas  antagonis  antibakteri jamur tempe yang dilakukan dengan metode difusi  agar  diperoleh  hasil  bahwa  jamur tempe  yang  diisolasi  menghasilkan  zona hambat  yang  cukup  besar  terhadap pertumbuhan  bakteri  uji,  yaitu  mempunyai diameter zona hambat sebesar rata-rata 28 mm terhadap Escherichia coli ATCC 25922, 26  mm  terhadap Salmonella  typhimurium ATCC  14028,  dan  39,5  mm  terhadap Shigella  flexneri ATCC 12022  (tabel  1; gambar  1).  Sedangkan  pada  kontrol,  yaitu SDA  tanpa  jamur  tempe  yang  diletakkan pada  bakteri  uji  tidak  menghasilkan  zona hambat. Tabel 1. Diameter  zona  hambat  uji  aktivitas  antagonism  antibakteri  jamur  tempe  terhadap bakteri uji Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 dan Shigella flexneri ATCC 12022 . Bakteri uji Diameter Zona Hambat Rata-rata (mm) Ulangan 1 Ulangan 2 Escherichia coli ATCC 25922 28 28 28 Salmonella typhimurium ATCC 14028 27 25 26 Shigella flexneri ATCC 12022 40 39 39,5
Gambar 1. Diameter zona hambat yang dihasilkan oleh isolat jamur tempe terhadap bakteri uji Escherichia coli ATCC 25922 (A), Salmonella typhimurium ATCC 14028 (B), dan Shigella flexneri ATCC 12022 (C) pada agar Muller Hinton dengan metode difusi agar. Diameter zona hambat yang diperoleh pada  pengujian  relatif  kuat  karena mempunyai  diameter  yang  cukup  besar.
Interpretasi zona hambat antibiotik terhadap bakteri  uji  dapat  dikategorikan  antara rentang  resisten,  intermediet  dan susceptible .  Berdasarkan  NCCLS  (2002) bahwa  untuk  bakteri Enterobacteriaceae dapat  dikatakan susceptible apabila  zona hambat  yang  dihasilkan  pada  pengujian dengan  metoda  difusi  agar  oleh  antibiotik ampicillin  ≥17  mm,  dengan  antibiotik kloramfenikol  ≥  18  mm,  dengan  antibiotik cotrimoxazol  ≥16  mm,  dengan  antibiotik ciprofloxacin ≥21 mm, dan dengan antibiotic nalidixic acid ≥19 mm. Berdasarkan  besarnya  zona  hambat yang  terbentuk  dari  uji  antagonis  metode difusi  agar  yang  dilakukan  jamur  tempe terhadap  bakteri  patogen  enterik Escherichia  coli ATCC  25922, Salmonella typhimurium ATCC  14028  dan Shigella flexneri ATCC 12022 maka besarnya zona hambat tersebut dapat dikategorikan dalam rentang susceptible .  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  isolat Rhizopus  sp tersebut  menghasilkan  suatu  senyawa bioaktif yang bersifat antibakteri   terhadap bakteri uji. Beberapa  penelitian  mengenai kemampuan Rhizopus  oligosporus dalam menghasilkan  senyawa  antibakteri  telah dilaporkan  diantaranya  oleh  Nout  (1989) yaitu  mampu  menghambat  pertumbuhan beberapa  mikroba  uji  diantaranya  mampu penghambat  pertumbuhan Aspergillus flavus dan Aspergillus  parasiticus serta menghambat  akumulasi Aflatoxin  B1  yang dihasilkannya.  Protein  yang  bersifat antibakteri  dapat  dihasilkan  oleh Rhizopus oligosporus dan  telah  berhasil  dimurnikan oleh Kobayashi et al (1992), protein tersebut aktif  dalam  melawan Basillus  subtillis , Staphyllococcus aureus dan Streptococcus cremoris . Karakteristik jamur tempe Setelah  dilakukan  penanaman kembali isolat jamur tempe pada SDA dan diinkubasi selama satu minggu, didapatkan beberapa  koloni  jamur,  tetapi  isolat  yang mendominasi adalah isolat jamur berwarna putih  yang  diduga  jamur Rhizopus  sp . Kemudian  dilakukan  penanaman  kembali isolat  tersebut  sebagai  tahap  pemurnian untuk  pengujian . Ciri-ciri  koloninya mempunyai  miselium  seperti  kapas, berwarna  putih  keabuan  menyebar menutupi  cawan  petri,  tetapi  terjadi pemusatan  ketebalan  pada  bagian  tengah koloni, sedangkan miselium bagian pinggir koloni  lebih  tipis.  Warna  sebalik  koloni berwarna putih krem.   Tidak terdapat tetes eksudat  dan  tidak  terdapat  garis  radial (gambar 2). A B Gambar 2. Morfologi koloni jamur tempe bagian atas (A), dan bagian sebalik koloni (B). Pada pengamatan mikroskopik dengan menggunakan  metoda moist  chamber diperoleh  ciri-ciri  isolat  jamur  tempe mempunyai hifa yang tipis tidak berseptat,
terdapat hifa horizontal berupa stolon yang dari  stolon  tersebut  merupakan  tempat munculnya  percabangan  sporangiofor dimana terbentuk juga rizoid (seperti akar), warna  hifa  putih  transparan.  Struktur
reproduksi  berupa  sporangium  yang ditopang oleh sporangiofor, spora berwarna abu kehitaman berbentuk bulat berisi spora (gambar 3).
Berdasarkan ciri-ciri mikroskopik yang diamati,  jamur  tempe  sesuai  dengan Zygomycetes genera Rhizopus sp (gambar 4). Virgianti, Dewi Peti, Uji Antagonis Jamur Tempe (Rhizopus Sp) terhadap Bakteri Patogen Enterik : 162 - 168
Biosfera 32 (3) September 2015
164
sebalik  koloni  ( reverse  side ),  ada  tidaknya tetes eksudat, garis radial, garis konsentris dan karakteristik khusus yang dimiliki. Pengamatan  morfologi  mikroskopis dilakukan dengan teknik moist chamber (de La  Maza et  al., 1997),  yaitu  dengan meneteskan  SDA  cair  ke  atas  permukaan kaca objek steril, dan diinokulasikan dengan spora    fungi  yang  akan  diamati  kemudian ditutup  dengan  kaca  penutup,  kaca  objek tersebut diletakkan pada cawan petri steril yang telah didasari oleh kapas basah steril dan kaca yang dibengkokkan sebagai dasar agar kaca objek tidak bersentuhan langsung dengan kapas basah. Cawan petri tersebut ditutup  dan  diinkubasi  pada  suhu  ruangan selama  7  hari.  Setelah  fungi  tumbuh kemudian  kaca  penutup  pada moist chamber tersebut  diletakkan  pada  kaca o b j e k   b a r u ,   k e m u d i a n   d i l a k u k a n pengamatan  dengan  menggunakan mikroskop  perbesaran  100x  dan  400x. Pengamatan  mikroskopik  yang  dilakukan
meliputi  ada  tidaknya  septat  pada  hifa, warna  hifa,  percabangan  hifa,  struktur reproduksi  (bentuk  spora,  warna  spora) serta  tangkai  penghasil  spora  atau sporangiofor.
Hasil  dan  Pembahasan Berdasarkan  hasil pengujian  aktivitas  antagonis  antibakteri jamur tempe yang dilakukan dengan metode difusi  agar  diperoleh  hasil  bahwa  jamur tempe  yang  diisolasi  menghasilkan  zona hambat  yang  cukup  besar  terhadap pertumbuhan  bakteri  uji,  yaitu  mempunyai diameter zona hambat sebesar rata-rata 28 mm terhadap Escherichia coli ATCC 25922, 26  mm  terhadap Salmonella  typhimurium ATCC  14028,  dan  39,5  mm  terhadap Shigella  flexneri ATCC 12022  (tabel  1; gambar  1).  Sedangkan  pada  kontrol,  yaitu SDA  tanpa  jamur  tempe  yang  diletakkan pada  bakteri  uji  tidak  menghasilkan  zona hambat.
Tabel 1. Diameter  zona  hambat  uji  aktivitas  antagonism  antibakteri  jamur  tempe  terhadap bakteri uji Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 dan Shigella flexneri ATCC 12022 . Bakteri uji Diameter Zona Hambat Rata-rata (mm) Ulangan 1 Ulangan 2 Escherichia coli ATCC 25922 28 28 28 Salmonella typhimurium ATCC 14028 27 25 26 Shigella flexneri ATCC 12022 40 39 39,5
Gambar 1. Diameter zona hambat yang dihasilkan oleh isolat jamur tempe terhadap bakteri uji Escherichia coli ATCC 25922 (A), Salmonella typhimurium ATCC 14028 (B), dan Shigella flexneri ATCC 12022 (C) pada agar Muller Hinton dengan metode difusi agar.
Diameter zona hambat yang diperoleh pada  pengujian  relatif  kuat  karena mempunyai  diameter  yang  cukup  besar. Interpretasi zona hambat antibiotik terhadap bakteri  uji  dapat  dikategorikan  antara rentang  resisten,  intermediet  dan susceptible .  Berdasarkan  NCCLS  (2002) bahwa  untuk  bakteri Enterobacteriaceae dapat  dikatakan susceptible apabila  zona hambat  yang  dihasilkan  pada  pengujian dengan  metoda  difusi  agar  oleh  antibiotik ampicillin  ≥17  mm,  dengan  antibiotik kloramfenikol  ≥  18  mm,  dengan  antibiotik cotrimoxazol  ≥16  mm,  dengan  antibiotik ciprofloxacin ≥21 mm, dan dengan antibiotic nalidixic acid ≥19 mm. Berdasarkan  besarnya  zona  hambat yang  terbentuk  dari  uji  antagonis  metode difusi  agar  yang  dilakukan  jamur  tempe terhadap  bakteri  patogen  enterik Escherichia  coli ATCC  25922, Salmonella typhimurium ATCC  14028  dan Shigella flexneri ATCC 12022 maka besarnya zona hambat tersebut dapat dikategorikan dalam rentang susceptible .  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  isolat Rhizopus  sp tersebut  menghasilkan  suatu  senyawa bioaktif yang bersifat antibakteri   terhadap bakteri uji. Beberapa  penelitian  mengenai kemampuan Rhizopus  oligosporus dalam menghasilkan  senyawa  antibakteri  telah dilaporkan  diantaranya  oleh  Nout  (1989)
yaitu  mampu  menghambat  pertumbuhan beberapa  mikroba  uji  diantaranya  mampu penghambat  pertumbuhan Aspergillus flavus dan Aspergillus  parasiticus serta menghambat  akumulasi Aflatoxin  B1  yang dihasilkannya.  Protein  yang  bersifat antibakteri  dapat  dihasilkan  oleh Rhizopus oligosporus dan  telah  berhasil  dimurnikan oleh Kobayashi et al (1992), protein tersebut aktif  dalam  melawan Basillus  subtillis , Staphyllococcus aureus dan Streptococcus cremoris .
Karakteristik jamur tempe Setelah  dilakukan  penanaman kembali isolat jamur tempe pada SDA dan diinkubasi selama satu minggu, didapatkan beberapa  koloni  jamur,  tetapi  isolat  yang mendominasi adalah isolat jamur berwarna putih  yang  diduga  jamur Rhizopus  sp . Kemudian  dilakukan  penanaman  kembali isolat  tersebut  sebagai  tahap  pemurnian untuk  pengujian . Ciri-ciri  koloninya mempunyai  miselium  seperti  kapas, berwarna  putih  keabuan  menyebar menutupi  cawan  petri,  tetapi  terjadi pemusatan  ketebalan  pada  bagian  tengah koloni, sedangkan miselium bagian pinggir koloni  lebih  tipis.  Warna  sebalik  koloni berwarna putih krem.   Tidak terdapat tetes eksudat  dan  tidak  terdapat  garis  radial (gambar 2).

## A B
Gambar 2. Morfologi koloni jamur tempe bagian atas (A), dan bagian sebalik koloni (B).
Pada pengamatan mikroskopik dengan menggunakan  metoda moist  chamber diperoleh  ciri-ciri  isolat  jamur  tempe mempunyai hifa yang tipis tidak berseptat, terdapat hifa horizontal berupa stolon yang dari  stolon  tersebut  merupakan  tempat munculnya  percabangan  sporangiofor dimana terbentuk juga rizoid (seperti akar), warna  hifa  putih  transparan.  Struktur
reproduksi  berupa  sporangium  yang ditopang oleh sporangiofor, spora berwarna abu kehitaman berbentuk bulat berisi spora (gambar 3). Berdasarkan ciri-ciri mikroskopik yang diamati,  jamur  tempe  sesuai  dengan Zygomycetes genera Rhizopus sp (gambar 4).

## 166
Genera Rhizopus  sp digunakan sebagai  jamur  utama  dalam  fermentasi tempe,  pada  starter  tempe  yang  di  jual komersial dengan merk tertentu dan secara umum  digunakan  sebagai  starter p e m b u a t a n   t e m p e   s e c a r a   u m u m mengandung  jamur Rhizopus  oligosporus .
Dari  sekian  banyak  mikroba  yang  terlibat para  ahli  bersepakat  bahwa  fakta membuktikan bahwa yang utama berperan dalam  proses  fermentasi  adalah Rhizopus oligosphorus (Babu,  2009).  Hal  tersebut sesuai dengan hasil penelitian Dewi dan Aziz (2011) yang melakukan isolasi Rhizopus sp dari inokulum ragi tempe pada sentra tempe di 4 desa di Kabupaten Banyumas, usar daur waru, usar daun jati dan usar daun pisang yang  biasa  digunakan  dalam  pembuatan tempe, diperoleh beberapa isolat jamur, dari 55  isolat  yang  diperoleh  19  isolat diidentifikasi sebagai Rhizopus oligosporus . Isolat jamur Rhizopus sp pada penelitian ini belum  diidentifikasi  sampai  penentuan spesies,  tetapi  dari  ciri-ciri    koloni  dengan
miselium  putih  keabuan  dan  spora  abu kehitaman,  serta  mempunyai  hifa  halus dengan  sporangiosfor  yang  tidak  terlalu panjang  dan  sporangium  berbentuk  bulat ( globossa) maka  sesuai  dengan  ciri-ciri Rhizopus  oligosporus namun  harus dipastikan dengan penelitian lebih lanjut.
Rhizopus  sp dapat  menghasilkan senyawa  bioaktif  yang  bersifat  antibakteri terhadap  beberapa  bakteri  gram  positif.
Ekstrak  tempe  1%  dalam  media  BHI diantataranya  dapat  menghambat pertumbuhan Lactobacillus  bulgaricus,
Streptococcus  thermophillus,  Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Listeria innocua dan Listeria  monocytogenes, namun  tidak mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram  negatif E.coli dan Salmonella enteriditis .  Namun  pada  penelitian- penelitian dengan perlakuan yang berbeda dapat  menunjukkan  aktivitas  antibakteri berspektrum luas pada bakteri Gram positif dan  Gram  negatif B.  cereus,  E.  coli,  B.
subtillis,  Proteus  vulgaris,  S.  aureus  dan
Salmonella  typhi (Roubous  2011). Penggunaan  ekstrak  tempe  1%  yang dilakukan oleh Roubous (2011) tidak dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri E.coli dan Salmonella  enteriditis pada  BHI dimungkinkan  karena  kandungan  zat antimikroba  terlarutnya  sedikit  sehingga tidak  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan bakteri  uji.  Pada  penelitian  ini  digunakan biakan jamur Rhizopus sp secara langsung yang diletakkan pada media agar yang telah diinokulasikan  bakteri  uji  sehingga  zat antibakteri yang dihasilkan oleh Rhizopus sp dapat  terdifusi  secara  langsung  terhadap bakteri uji sehingga sifat antagonis melawan bakteri  uji  dapat  terlihat.  Penggunaan Rhizopus  sp secara  langsung  pada  uji antagonis yang dilakukan berdasarkan pada kenyataan  bahwa  masyarakat  Indonesia melakukan  konsumsi  tempe  dalam  jumlah yang  cukup  banyak,  dan  pada  tempe tersebut  tentu  saja  mengandung  jamur Rhizopus  sp dan  produk-produk  metabolit yang  tersimpan  pada  substrat  yang difermentasinya. Simpulan Bedasarkan hasil uji antagonis jamur tempe Rhizopus sp yang diisolasi dari tempe komersial  yang  dijual  di  Tasikmalaya terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC 25922, Salmonella  typhimurium ATCC 14028,  dan Shigella  flexneri ATCC  12022, diperoleh diameter zona hambat yang cukup besar  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa jamur Rhizopus  sp tersebut  bersifat antagonis terhadap bakteri patogen enterik.
Hasil  tersebut  dapat  menguatkan  manfaat tempe sebagai pangan fungsional.

## Ucapan terimakasih
Peneliti  mengucapkan  terimakasih kepada tim laboratorium Mikrobiologi yang telah  banyak  membantu  terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Babu  PD,  Bhakyaraj  R,  Vidhyalakshmi  R.
2009. A low cost nutritious “Tempe” – A Review. World J Dairy Food Sci 4(1):
22-27. de La Maza LM, Pezzlo MT, Baron EJ. 1997. Color Atlas of Diagnostic Microbiology. Mosby-Year  Book,  Inc.  St.Louis Missouri. Dewi RS & Aziz S. 2011. Isolasi Rhizopus oligosporus pada beberapa inokulum tempe  di  Kabupaten  Banyumas. Molekul 6(2): 93-104. Karmini M, Affandi E, Hermana, Karyadi D, Winarno F. 1997. The inhibitory effect of tempe on Escherichia coli infection. In: International  Tempe  Symposium , Bali, Indonesia: 157-162. Kiers JL, Meijer JC, Nout MJR., Rombouts FM, Nabuurs MJA and Van der Meulen J.  2003.  Effect  of  fermented  soya beans on diarrhoea and feed efficiency in weaned piglets. Journal of Applied Microbiology  95,  545–552.  DOI: 10.1046/j.1365-2672.2003.02011.x. Kobayasi SY,, Okazaki   N, Koseki T. 1992. Purification and characterization of an antibiotic  substance  produced  from Rhizopus  oligosporus IFO  8631. Bioscienc,  Biotechnology  and Biochemistry 56 (1): 94-98. Kuligowski M, Kuligowska IJ, Nowak J. 2013. Evaluation of Bean and Soy Tempeh Influence  on  Intestinal  Bacteria  and Estimation  of Antibacterial  Properties of  Bean  Tempeh.  Polish  Journal  of Microbiology. 62(2): 189-194. Kuligowski M, Kuligowska IJ, Nowak J. 2013. Evaluation of Bean and Soy Tempeh Influence  on  Intestinal  Bacteria  and Estimation  of Antibacterial  Properties of  Bean  Tempeh.  Polish  Journal  of Microbiology. 62(2): 189-194. Mambang DEP, Rosidah, Suryanto D. 2014. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  tempe terhadap bakteri Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus . J teknol dan Industri Pangan 25(1): 115-118. DOI: 10.6066/jtip.2014.25.1.115. NCCLS  [National  Committee  for  Clinical Laboratory  Standards.  2002. P e r f o r m a n c e   S t a n d a r d s   f o r Antimicrobial  Susceptibility  Testing; Twelfth  Informational  Supplement . NCCLS document M100-S12 [ISBN 1- 56238-454-6].  NCCLS  940  West Valley  Road,  Suite  1400,Wayne,  PA 19087 USA. Nout  MJR  &  Kiers  JL.  2005.  Tempe fermentation,  innovation  and functionality:  update  into  the  third millennium. J Appl Microbiol 98: 789- 8 0 5 .   D O I :   1 0 . 1111 / j . 1 3 6 5 - 2672.2004.02471.x. Nout  MJR.  1989.  Effect  of  Rhizopus  and A B Gambar 3. Morfologi  mikroskopik  jamur  tempe,  hifa/stolon,  sporangiofor    dan  rizoid  (A), Sporangium dan spora (B). Gambar 4. Ciri-ciri Zygomycetes, Rhizopus sp. (A), Mucor sp. (B), pembentukan sporangiofor internodal. (de La Maza et al., 1997).
Virgianti, Dewi Peti, Uji Antagonis Jamur Tempe (Rhizopus Sp) terhadap Bakteri Patogen Enterik : 162 - 168
166 Genera Rhizopus  sp digunakan sebagai  jamur  utama  dalam  fermentasi tempe,  pada  starter  tempe  yang  di  jual komersial dengan merk tertentu dan secara umum  digunakan  sebagai  starter p e m b u a t a n   t e m p e   s e c a r a   u m u m mengandung  jamur Rhizopus  oligosporus . Dari  sekian  banyak  mikroba  yang  terlibat para  ahli  bersepakat  bahwa  fakta membuktikan bahwa yang utama berperan dalam  proses  fermentasi  adalah Rhizopus oligosphorus (Babu,  2009).  Hal  tersebut sesuai dengan hasil penelitian Dewi dan Aziz (2011) yang melakukan isolasi Rhizopus sp dari inokulum ragi tempe pada sentra tempe di 4 desa di Kabupaten Banyumas, usar daur waru, usar daun jati dan usar daun pisang yang  biasa  digunakan  dalam  pembuatan tempe, diperoleh beberapa isolat jamur, dari 55  isolat  yang  diperoleh  19  isolat diidentifikasi sebagai Rhizopus oligosporus . Isolat jamur Rhizopus sp pada penelitian ini belum  diidentifikasi  sampai  penentuan spesies,  tetapi  dari  ciri-ciri    koloni  dengan
miselium  putih  keabuan  dan  spora  abu kehitaman,  serta  mempunyai  hifa  halus dengan  sporangiosfor  yang  tidak  terlalu panjang  dan  sporangium  berbentuk  bulat ( globossa) maka  sesuai  dengan  ciri-ciri Rhizopus  oligosporus namun  harus dipastikan dengan penelitian lebih lanjut.
Rhizopus  sp dapat  menghasilkan senyawa  bioaktif  yang  bersifat  antibakteri terhadap  beberapa  bakteri  gram  positif. Ekstrak  tempe  1%  dalam  media  BHI diantataranya  dapat  menghambat pertumbuhan Lactobacillus  bulgaricus, Streptococcus  thermophillus,  Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Listeria innocua dan Listeria  monocytogenes, namun  tidak mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram  negatif E.coli dan Salmonella enteriditis .  Namun  pada  penelitian- penelitian dengan perlakuan yang berbeda dapat  menunjukkan  aktivitas  antibakteri berspektrum luas pada bakteri Gram positif dan  Gram  negatif B.  cereus,  E.  coli,  B. subtillis,  Proteus  vulgaris,  S.  aureus  dan
Salmonella  typhi (Roubous  2011). Penggunaan  ekstrak  tempe  1%  yang dilakukan oleh Roubous (2011) tidak dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri E.coli dan Salmonella  enteriditis pada  BHI dimungkinkan  karena  kandungan  zat antimikroba  terlarutnya  sedikit  sehingga tidak  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan bakteri  uji.  Pada  penelitian  ini  digunakan biakan jamur Rhizopus sp secara langsung yang diletakkan pada media agar yang telah diinokulasikan  bakteri  uji  sehingga  zat antibakteri yang dihasilkan oleh Rhizopus sp dapat  terdifusi  secara  langsung  terhadap bakteri uji sehingga sifat antagonis melawan bakteri  uji  dapat  terlihat.  Penggunaan Rhizopus  sp secara  langsung  pada  uji antagonis yang dilakukan berdasarkan pada kenyataan  bahwa  masyarakat  Indonesia melakukan  konsumsi  tempe  dalam  jumlah yang  cukup  banyak,  dan  pada  tempe tersebut  tentu  saja  mengandung  jamur Rhizopus  sp dan  produk-produk  metabolit yang  tersimpan  pada  substrat  yang difermentasinya.

## Simpulan
Bedasarkan hasil uji antagonis jamur tempe Rhizopus sp yang diisolasi dari tempe komersial  yang  dijual  di  Tasikmalaya terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC 25922, Salmonella  typhimurium ATCC 14028,  dan Shigella  flexneri ATCC  12022, diperoleh diameter zona hambat yang cukup besar  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa jamur Rhizopus  sp tersebut  bersifat antagonis terhadap bakteri patogen enterik. Hasil  tersebut  dapat  menguatkan  manfaat tempe sebagai pangan fungsional.

## Ucapan terimakasih
Peneliti  mengucapkan  terimakasih kepada tim laboratorium Mikrobiologi yang telah  banyak  membantu  terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Babu  PD,  Bhakyaraj  R,  Vidhyalakshmi  R.
2009. A low cost nutritious “Tempe” – A Review. World J Dairy Food Sci 4(1): 22-27. de La Maza LM, Pezzlo MT, Baron EJ. 1997. Color Atlas of Diagnostic Microbiology. Mosby-Year  Book,  Inc.  St.Louis Missouri.
Dewi RS & Aziz S. 2011. Isolasi Rhizopus oligosporus pada beberapa inokulum tempe  di  Kabupaten  Banyumas. Molekul 6(2): 93-104.
Karmini M, Affandi E, Hermana, Karyadi D, Winarno F. 1997. The inhibitory effect of tempe on Escherichia coli infection. In: International  Tempe  Symposium , Bali, Indonesia: 157-162. Kiers JL, Meijer JC, Nout MJR., Rombouts FM, Nabuurs MJA and Van der Meulen J.  2003.  Effect  of  fermented  soya beans on diarrhoea and feed efficiency in weaned piglets. Journal of Applied Microbiology  95,  545–552.  DOI: 10.1046/j.1365-2672.2003.02011.x.
Kobayasi SY,, Okazaki   N, Koseki T. 1992. Purification and characterization of an antibiotic  substance  produced  from Rhizopus  oligosporus IFO  8631. Bioscienc,  Biotechnology  and Biochemistry 56 (1): 94-98.
Kuligowski M, Kuligowska IJ, Nowak J. 2013. Evaluation of Bean and Soy Tempeh Influence  on  Intestinal  Bacteria  and Estimation  of Antibacterial  Properties of  Bean  Tempeh.  Polish  Journal  of Microbiology. 62(2): 189-194.
Kuligowski M, Kuligowska IJ, Nowak J. 2013.
Evaluation of Bean and Soy Tempeh Influence  on  Intestinal  Bacteria  and Estimation  of Antibacterial  Properties of  Bean  Tempeh.  Polish  Journal  of Microbiology. 62(2): 189-194.
Mambang DEP, Rosidah, Suryanto D. 2014. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  tempe terhadap bakteri Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus . J teknol dan Industri Pangan 25(1): 115-118. DOI: 10.6066/jtip.2014.25.1.115.
NCCLS  [National  Committee  for  Clinical Laboratory  Standards.  2002. P e r f o r m a n c e   S t a n d a r d s   f o r Antimicrobial  Susceptibility  Testing; Twelfth  Informational  Supplement . NCCLS document M100-S12 [ISBN 1- 56238-454-6].  NCCLS  940  West Valley  Road,  Suite  1400,Wayne,  PA 19087 USA.
Nout  MJR  &  Kiers  JL.  2005.  Tempe fermentation,  innovation  and functionality:  update  into  the  third millennium. J Appl Microbiol 98: 789- 8 0 5 .   D O I :   1 0 . 1111 / j . 1 3 6 5 - 2672.2004.02471.x.
Nout  MJR.  1989.  Effect  of  Rhizopus  and
A B
Gambar 3. Morfologi  mikroskopik  jamur  tempe,  hifa/stolon,  sporangiofor    dan  rizoid  (A), Sporangium dan spora (B).
Gambar 4. Ciri-ciri Zygomycetes, Rhizopus sp. (A), Mucor sp. (B), pembentukan sporangiofor internodal. (de La Maza et al., 1997).

## 168
Neurospora  spp.  on  growth  of Aspergillus  flavus and A.  parasiticus and  accumulation  of  aflatoxin  B1  in groundnut. Mycological Research, 93: 518-523. Nurdini  AL,  Nuraida  L,  Suwanto  A  dan Suliantari.  2015.  Microbial  growth dynamics  during  tempe  fermentation in  two  different  home  industries. International  Food  Research  Journal 22(4): 1668-1674. Journal homepage: http://www.ifrj.upm.edu.my. Roubous-van  de  Hil  PJ,  Dalmas  E,  Nout MJR, Abee T. 2010. Soya bean tempe extract  show  antibacterial  activity against  Bacillus  cereus  cells  and spore. Journal of Applied Microbiology (109):  137-145.  DOI:  10.1111/j.1365- 2672.2009.04637.x. Roubus-van  de  Hill  PJ,  Nout  MJR.  2011. Anti-Diarrhoeal  aspect  of  fermented soya beans. Soybean and health. El- Shemy  H  (Ed).  ISBN:  978-953-307- 535-8.  In Tech.  DOI:  10.5772/17997. [internet][cited 12 Nov 2015]. Available from  http://cdn.intechopen.com/pdfs- wm  19757.pdf / Soka S, Suwanto A, Sajuthi D, Rusmana I. 2 0 1 4 .   I m p a c t   o f   Te m p e h Supplementation  on  Gut  Microbiota Composition in Sprague-Dawley Rats. Research  Journal  of  Microbiology. DOI: 10.3923/jm.2014. [internet] [cited 13  Nov  2015].  Available  from: http://docsdrive.com/pdfs/academicjo urnals/jm/0000/64126-64126.pdf

## Kelimpahan dan Potensi Biofuel Mikrofitobenthos dari Perairan Sungai Pekacangan yang terkena Limbah Cair Tapioka
Christiani; A. Ilalqisny Insan; dan Dwi Sunu Widyartini Fakultas Biologi Unsoed Jl. Dr Soepano Purwokerto 53122 email: hj.christiani@yahoo.com ; insan.illal@yahoo.com;dwisunuwidyartini@yahoo.co.id

## Abstract
Microphytobenthic a benthic plants, found in the waters of the sunlight reaching the bottom waters. In addition to acting as a primary producer also has the potential to produce renewable biofuels   The purpose of this study was to determine the microphyitobenthic abundance of river Pekacangan affected tapioca liquid industrial waste and to estimate its potential as a biofuels. This research used survey method with the sampling technique is purposive sampling based on existing environmental setting. As the main parameters are the types of microphytobenthic, while supporting research parameters are temperature,  light  penetration,  pH,  dissolved  O ,  BOD 5 ,  current  velocity,  TSS,  TDS,  nitrate, 2
orthophosphate and silica. Microphytobenthic obtained at stations affected by the waste, in screening to determine its oil content.Abundance of microphytobenthic at a station directly exposed tapioca liquid
-2 waste 620 ind.mm .Isolated microphytobenthic River Pekacangan affected tapioca liquid waste had 22 isolates of microphytobenthos and after screened allegedly 7 isolates potential as a biofuel, namely Navicula sp., Amphora libyca , Ulothrix sp., Anabaena sp. , Planctonema sp. , Cymbella sp., and Eunotia sp. Keywords: Tapioca liquid waste;microphytobenthic; abundance; screening; Pekacangan river Abstrak Mikrofitobenthos merupakan benthos tumbuhan, terdapat pada perairan dengan cahaya matahari mencapai bagian dasar perairan. Mikrofitobenthos berperan sebagai produsen primer perairan, juga memiliki potensi untuk menghasilkan biofuel . Tujuan penelitian ini untuk mengetahui kelimpahan mikrofitobenthos dari Sungai Pekacangan yang terkena limbah cair industri tapioka dan untuk mengetahui  potensinya  sebagai  bahan  bakar  nabati. Penelitian  ini  menggunakan metode  survai dengan  teknik  pengambilan  sampel  secara purposive  sampling . Parameterutama  yang  diamati adalah kelimpahan mikrofitobenthos, sedangkan parameter pendukung penelitian adalah suhu, penetrasi cahaya, pH, O terlarut, BOD , kecepatan arus, TSS, TDS, nitrat, ortofosfat dan silika. 2 5 Mikrofotobenthos yang  diperoleh  pada  stasiun  yang  terkena  limbah,  diskrining  untuk  mengetahui kandungan minyaknya. Kelimpahan mikrofitobenthos pada stasiun yang langsung terkena limbah cair
2 tapioka 620 ind/ mm . Hasil isolasi diperoleh 22 isolat mikrofitobenthos dan setelah diskrining 7 isolat berpotensi sebagai biofuel , yaitu Navicula sp., Amphora libyca , Ulothrix sp., Anabaena sp. , Planctonema sp. , Cymbella sp., dan Eunotia sp. Katakunci: Limbah cair tapioka; Mikrofitobenthos; kelimpahan, skrining; Sungai Pekacangan . Pendahuluan Pada  Industri  tapioka  selain menghasilkan  tepung  yang  bermanfaat,  di sisi lain menghasilkan limbah. Limbah pada dasarnya suatu bahan yang terbuang atau dibuang  dari  suatu  sumber  hasil  aktivitas manusia, maupun proses-proses alam dan tidak atau belum mempunyai nilai ekonomis (Murtadho dan Said, 1988). Limbah industri tapiokaberupa limbah padat dan limbah cair. Limbah cairyang masuk ke badan air sungai dapat  menimbulkan  gangguan,  baik terhadap  lingkungan  maupun  kehidupan disekitar aliran limbah. Industri  tapioka  ”Pabrik Aci  55”  yang
berada  di  Desa  Timbang  Kecamatan Kejobong  Kabupaten  Purbalingga, merupakan  salah  satu  industri  yang memanfaatkan Sungai Pekacangan sebagai tempat  pembuangan  limbah  cair  tapioka, sehingga  akan  mempengaruhi  kualitas  air sungai. Kualitas air sungai dapat menurun akibat  masuknya  limbah  cair  ke  badan  air sungai, sehingga mempengaruhi ekosistem perairan  sungai  termasuk  kualitas  fisik- kimia,  yang  pada  akhirnya  akan  mem- pengaruhi  biota  yang  hidup  di  dalamnya (Agustira, 2013).
Mikrofitobenthos  merupakan  salah satu  biota  yang  hidup  di  perairan  sungai