ISSN: 1410-8917
e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 21 (2) (2018): 54 – 58
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi

## Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Activity Test of Suji Leaf Extract ( Dracaena angustifolia Roxb .) on in vitro cholesterol lowering
Devina Ingrid Anggraini a* , Lily Fathrah Nabillah b
a Program Studi D3 Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan (STIKES) Nasional Surakarta, Jl. Yos Sudarso No. 338 Dawung, Serengan, Surakarta 57155 b Fakultas Kesehatan Universitas MH Thamrin Jakarta
* Corresponding author: devina.ia@gmail.com A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Cholesterol,
Flavonoids, Suji
Leaves ( Dracaena angustifolia Roxb .), Lieberman- Burchard, Remaseration
Cholesterol  is  a  natural  substance  with  physical  characteristic  similar  to  fat  but  has  a steroidal group. The body requires cholesterol in normal amount; however, it will harm the body in excess amount. High cholesterol levels in the blood are dangerous because of the  precipitation  of  cholesterol  and  other  fatty  substances resulting  in atherosclerosis. Suji leaf ( Dracaena angustifolia Roxb. ) used as a natural dye has a high flavonoid content that is inferred to have cholesterol-lowering activity. This study aims to test the in vitro activity of suji leaf ( Dracaena angustifolia Roxb. ) extract in decreasing cholesterol level with various  concentrations  and  to  find  the  effective  concentration  (EC 50 ).  The  method  of extraction  used  was  remaceration  method  with  70%  ethanol  solvent.  Analysis  of cholesterol-lowering  activity  was  done  by  Lieberman-Burchard  method  by  making variation of ethanol extract 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, and 800 ppm. The results  showed  the  percentage  of  cholesterol-lowering  activity  by  33.62%,  36.15%, 46.61%,  56.39%  and  64.05%  respectively.  Value  of  EC 50 activity  of  suji  leaf  extract  is 632.50 ppm.

## A b s t r a k
Kata Kunci:
Kolesterol,
Flavonoid, Daun Suji ( Dracaena angustifolia Roxb .), Lieberman- Burchard, Remaserasi Kolesterol  merupakan  zat  alamiah  dengan  sifat  fisik  serupa  lemak  tetapi  mempunyai gugus steroida. Kolesterol dalam jumlah normal dibutuhkan oleh tubuh, namun dalam jumlah berlebih akan membahayakan tubuh. Kadar kolesterol yang tinggi di dalam darah berbahaya  karena  terjadi  pengendapan kolesterol  dan  zat-zat  lemak  lainnya  sehingga mengakibatkan  aterosklerosis.  Daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  yang  digunakan sebagai  pewarna  alami  mempunyai  kandungan  flavonoid  yang  cukup  tinggi  sehingga diduga  mempunyai  aktivitas  penurun  kolesterol.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  uji aktivitas  ekstrak  daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  terhadap  penurunan  kadar kolesterol dengan berbagai  variasi  konsentrasi dan mencari  nilai effective  concentration (EC 50 ). Metode ekstraksi yang digunakan adalah metode remaserasi dengan pelarut etanol 70%.  Analisis  aktivitas  penurunan  kolesterol  dilakukan  dengan  metode  Lieberman- Burchard dengan membuat variasi ekstrak etanol 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, dan  800  ppm.  Hasil  penelitian  menunjukkan  persentase  aktivitas  penurunan  kadar kolesterol secara berturut-turut sebesar 33,62%, 36,15%, 46,61%, 56,39% dan 64,05%. Nilai EC 50 aktivitas ekstrak daun suji yaitu 632,50 ppm.

## 1. Pendahuluan
Gaya  hidup  masyarakat  saat  ini  berubah  sangat signifikan. Hal itu disebabkan karena semakin rendahnya
keseimbangan  antara  aktivitas  dan  olah  raga  terhadap pola  makan  masyarakat  sehingga  masalah  kesehatan sering  timbul.  Salah  satu  perubahan  gaya  hidup  yang
terjadi  yaitu  perubahan  pola  makan  masyarakat  yang seharusnya  dijaga  dengan  mengkonsumsi  makan- makanan yang sehat, namun saat ini banyak masyarakat yang lebih suka mengkonsumsi makanan cepat saji ( fast food ) yang banyak mengandung lemak jenuh [1].
Kolesterol merupakan zat alamiah dengan sifat fisik serupa  lemak  tetapi  mempunyai  gugus  steroida  [2]. Kolesterol merupakan bahan bangun esensial bagi tubuh untuk sintesis zat-zat penting, seperti membran sel dan bahan  isolasi  sekitar  serat  saraf,  begitu  pula  hormon kelamin dan anak ginjal, vitamin D, serta asam empedu [3].  Kolesterol  di  angkut  sebagai  bagian  dari  struktur yang  bernama  lipoprotein.  Ada  beberapa  jenis lipoprotein, tetapi dua jenis lipoprotein utama yang perlu kita  perhatikan  adalah  lipoprotein  berdensitas  rendah atau Low  Density  Lipoprotein (LDL)  dan  lipoprotein berdensitas tinggi atau High Density Lipoprotein (HDL).
Kadar kolesterol total yang tinggi akan membentuk aterosklerosis  yang  dapat  menyebabkan  hipertensi  dan penyumbatan  pada  pembuluh  darah  otak,  jantung,  dan pembuluh darah tungkai  [4]. Aterosklerosis merupakan suatu  penyakit  terbentuknya  plak  di  dinding  pembuluh arteri besar yang mengakibatkan menyempitnya rongga pembuluh darah dan menurunkan elastisitas pembuluh darah tersebut. Penyumbatan pada pembuluh darah otak akan  menyebabkan  penyakit  serebrovaskular  seperti stroke.  Penyumbatan  pada  pembuluh  darah  jantung dapat  menyebabkan  penyakit  kardiovaskular  seperti jantung  koroner.  Sedangkan  penyumbatan  pembuluh darah  tungkai  menyebabkan  penyakit  pembuluh  darah tepi  yang  sering  terjadi  pada  kaki  yang  dapat menimbulkan keluhan nyeri, kram, dan ganren [5, 6].
Selama  ini,  pengobatan  yang  dilakukan  untuk menurunkan kadar kolesterol adalah dengan menggunakan  obat-obatan  sintetik.  Obat  sintetik cenderung  harganya  mahal  dan  memiliki  efek  samping bila dikonsumsi. Hal tersebut mendorong berbagai usaha mencari  alternatif  penggunaan  obat  tradisional  yang berasal dari tanaman obat.
Tanaman  yang  mengandung  flavonoid  berkhasiat untuk  menurunkan  kolesterol.  Ochani  dan  D'Mello  [7] meneliti tentang aktivitas antioksidan dan antihiperlipid (antikolesterol). Hasilnya ekstrak etanol calyces dan daun H.  Sabdariffa mengandung  polifenol  dan  flavonol  yang secara  signifikan  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dan antihiperlipid  (antikolesterol).  Kandungan  aktif  yang diduga  terdapat  dalam  daun  suji  adalah  saponin  dan flavonoid seperti kandungan yang terdapat pada ekstrak daun  dan calyces pada H.  Sabdariffa  Linn sehingga diharapkan mampu menurunkan kolesterol.
Senyawa  aktif  flavonoid  banyak  manfaatnya  bagi tubuh.  Salah  satunya  yaitu  flavonoid  dapat  digunakan sebagai  penurun  kolesterol  dalam  tubuh,  flavonoid mampu  mengikis  endapan  kolesterol  pada  dinding pembuluh darah koroner. Dengan terkikisnya kolesterol pada dinding pembuluh darah, maka tidak akan memicu timbulnya  penyakit  lain  yang  di  akibatkan  oleh kolesterol, seperti hipertensi, stroke dan jantung [8].
Untuk mendapatkan senyawa kimia flavonoid daun suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  dilakukan  cara mengekstraksi dari simplisia daun tersebut menggunakan pelarut yang sesuai. Kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan. Dengan alasan tersebut maka  penelitian  ini  dilakukan  untuk  membuktikan bahwa  daun  suji  dapat  digunakan  sebagai  penurun kolesterol.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat  gelas  laboratorium  dan  instrumen  yang digunakan  meliputi:  gelas  kimia,  gelas  ukur,  labu erlenmeyer bertutup asah, blender, tabung reaksi, cawan porselen,  kuvet,  pipet  tetes,  pipet  volume,  bulp,  kertas saring,  corong  kaca,  labu  ukur,  waterbath,  rotary eveporator, neraca analitik Quadruple Beam Balance MB- 311, dan Spektrofotometer UV-Vis Shimadzu UV-Vis 1600 Double Beam.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah simplisia daun suji kering, baku kolesterol 92,5%, etanol  p.a.,  metanol,  akuades,  eter,  etil  asetat,  serbuk seng, asam klorida pekat 37%, serbuk magnesium, asam asetat anhidrat, asam sulfat pekat,

## Persiapan Simplisia
Daun  suji  dipilih  yang  masih  utuh  atau  tidak kemudian dibersihkan. Daun dicuci dengan air mengalir, setelah itu dikeringkan, dan dihancurkan menggunakan blender.

## Penyarian Simplisia
Simplisia  daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .) yang sudah diblender, ditimbang kurang lebih 50 gram, kemudian  dimasukkan  dalam  bejana  tertutup,  lalu ditambahkan etanol 70% sebagai cairan penyari hingga simplisia  terendam  seluruhnya.  Perendaman  dilakukan selama 5 hari, sambil diaduk 3-4 jam perhari kemudian disaring.  Filtrat  yang  diperoleh,  dikumpulkan  untuk penyarian  berikutnya.  Serbuk  simplisia  disari  kembali menggunakan  cairan penyari baru  dengan  jumlah  yang sama  seperti  yang  pertama,  hal  tersebut  dilakukan berulang selama 5 hari. Filtrat yang dihasilkan dijadikan satu dan dienapkan selama 1 hari. Setelah dienapkan dan disaring,  filtrat  dikumpulkan  dan  dipekatkan  sampai diperoleh ekstrak kental.

## Identifikasi Flavonoid

## Uji Flavonoid
Larutan  diambil  0,5  ml  ditambah  dengan  5  ml amonia  encer  dan  5  ml  asam  sulfat  pekat.  Adanya senyawa flavonoid ditunjukkan dengan perubahan warna dari  kuning  kehijauan  menjadi  kuning  karena penambahan asam sulfat pekat [9].

## Uji Shinoda
Pada serbuk dan ekstrak kental daun suji ( Dracaena angustifolia Roxb .) dilarutkan dalam etanol, untuk larutan serbuk disaring terlebih dahulu. Kemudian ditambahkan sedikit  serbuk  magnesium  dan  beberapa  tetes  asam
klorida  pekat.  Perhatikan  terjadi  perubahan  warna jingga, merah muda atau merah [10].

## Penentuan Penurunan Kolesterol
Dalam penelitian ini langkah pertama yaitu, ekstrak etanol  daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  dibuat variasi  konsentrasi  400  ppm,  500  ppm,  600  ppm,  700 ppm,  dan  800  ppm.  Dari  masing-masing  konsentrasi diambil  2,0  ml  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi, kemudian  ditambahkan  dengan  5,0  ml  baku  kolesterol 140  ppm.  Setelah  itu  direaksikan  dengan  2,0  ml  asam asetat  anhidrat  dan  0,1  ml  asam  sulfat  pekat.  Larutan didiamkan  ditempat  gelap  selama  15  menit  hingga terbentuk  perubahan  warna  menjadi  hijau.  Hasil  warna yang diperoleh, dibaca dengan spektrofotometer visibel pada panjang gelombang maksimal.

## Analisis Data
Absorbansi yang diperoleh dari pengukuran sampel ekstrak  etanol  daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .) dibandingkan  dengan  larutan  baku  kolesterol  untuk mengetahui  persen  kadar  penurunan  kolesterol. Perhitungan  persentase  kadar  penurunan  kolesterol menggunakan rumus berikut:
𝐴 = 𝐶 − 𝐵 𝐵 × 100%
Keterangan:
A = % penurunan kolesterol
B  =  Absorbansi  sampel  setelah  perlakuan  (ekstrak etanol+baku)
C = Absorbansi baku kolesterol awal

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  uji aktivitas senyawa kimia flavonoid yang terdapat di dalam ekstrak daun suji ( Dracaena angustifolia Roxb .) terhadap penurunan  kadar  kolesterol  secara  in-vitro.  Senyawa aktif  flavonoid  banyak  manfaatnya  bagi  tubuh.  Salah satunya  yaitu  flavonoid  dapat  digunakan  sebagai penurun  kolesterol  dalam  tubuh,  flavonoid  mampu mengikis  endapan  kolesterol  pada  dinding  pembuluh darah koroner [8].
Tanaman  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari  daerah Tambun,  Kabupaten  Bekasi.  Bagian  tanaman  yang digunakan adalah daun. Adapun teknik sampling dengan acak  atau random  sampling .  Sebelum  digunakan,  daun suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  dicuci  terlebih  dahulu sampai  bersih,  untuk  meminimalkan  jumlah  pengotor yang  menempel  pada  daun.  Daun  suji  ( Dracaena angustifolia  Roxb .)  yang  telah  dicuci  kemudian dikeringkan  dibawah  sinar  matahari,  ditutup  kain berwarna hitam atau gelap selama beberapa hari sampai daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  benar-benar kering. Proses pengeringan dilakukan agar meminimalkan kadar air yang dapat digunakan sebagai media tumbuh mikroorganisme, sehingga menyebabkan penurunan  kualitas  senyawa  aktif  yang  terkandung didalam  simplisia.  Setelah  daun  suji  ( Dracaena
angustifolia Roxb .) benar-benar kering, daun dihaluskan menggunakan blender.
Proses penarikan senyawa dilakukan dengan metode remaserasi.  Maserasi  merupakan  cara  ekstraksi menggunakan  prinsip  perendaman  simplisia  dengan cairan penyari yang cocok. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan  penambahan  pelarut  setelah  dilakukan penyaringan  maserat  pertama  dan  seterusnya,  dimana setiap  hari  cairan  penyari  diganti  baru.  Dilakukan pengadukan yang kontinyu agar zat aktif dapat masuk ke dalam  rongga  sel  dan  mencegah  adanya  konsentrasi setempat  pada  sekitar  sel  tersebut.  Pada  saat perendaman  simplisia,  cairan  penyari  akan  menembus dinding  sel  kemudian masuk ke  dalam  rongga  sel  yang mengandung  zat  aktif,  kemudian  melarutkannya.  Zat aktif yang telah larut dapat keluar karena adanya proses difusi  yang  disebabkan  perbedaan  konsentrasi  antara larutan yang ada di dalam rongga sel dan di luar sel [11].
Cairan penyari yang digunakan adalah etanol 70%. Etanol  bersifat  universal  yaitu  dapat  melarutkan berbagai macam kandungan zat aktif. Etanol 70% sangat efektif  dalam  menghasilkan  jumlah  bahan  aktif  yang optimal.  Hasil  ekstraksi  yang  didapat  kemudian dipekatkan  dengan rotary  evaporator sampai  diperoleh ekstrak  kental.  Pada  serbuk  dan  ekstrak  dilakukan  uji pendahuluan fitokimia. Tujuan dilakukan uji pendahuluan  fitokimia  pada  serbuk  dan  ekstrak  untuk mengetahui apakah pada daun suji ( Dracaena angustifolia Roxb .)  terdapat  senyawa  kimia  flavonoid.  Uji pendahuluan  fitokimia  yang  dilakukan  antara  lain  uji flavonoid dan uji shinoda seperti yang terlihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Pendahuluan Fitokimia pada Serbuk dan Ekstrak Daun Suji ( Dracaena angustifolia Roxb .) Jenis Uji Pereaksi dan Perlakuan Teoritis Hasil Percobaan Keterangan Uji flavonoid Amonia encer + asam sulfat pekat Warna kuning kuning Serbuk Positif Ekstrak Positif Uji shinoda Serbuk Mg + beberapa tetes HCl pekat Terjadi warna jingga, merah muda atau merah Larutan orange ke kuningan Serbuk Positif Ekstrak Positif
Setelah dilakukan uji pendahuluan pada serbuk dan ekstrak  daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .) didapatkan  hasil  bahwa  pada  serbuk  dan  ekstrak  daun suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  terdapat  senyawa flavonoid (Himesh, 2011).
Setelah  diketahui  jenis  flavonoid  yang  terdapat dalam daun suji ( Dracaena angustifolia Roxb .), kemudian dilanjutkan  dengan  pengukuran  sampel  dari  ekstrak etanol  terhadap  penurunan  kadar  kolesterol  dengan menggunakan metode Lieberman-Burchard. Metode ini merupakan  metode  yang  sangat  spesifik  untuk mengukur  senyawa  golongan  steroid  salah  satunya adalah  kolesterol.  Baku  kolesterol  dilarutkan  dalam kloroform  karena  1  bagian  kolesterol  yang  bersifat  non
polar  larut  dalam  pelarut  non  polar  yaitu  4,5  bagian kloroform  [12].  Reaksi  yang  dilakukan  pada  metode  ini harus  bebas  dari  air  karena  reaksi  akan  sangat  sensitif dan  tidak  stabil  terhadap  air.  Pada  metode  ini  perlu ditambahkan  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat pekat. Asam asetat anhidrat ditambahkan dengan tujuan untuk  mengekstraksi  kolesterol,  memastikan  media bebas air dan membentuk turunan asetil dari steroid yang kemudian  ditetesi  dengan  asam  sulfat  pekat  melalui dindingnya  akan  menghasilkan  warna  hijau  untuk senyawa steroid termasuk kolesterol [13].
Gambar 1. Reaksi Pembentukan Warna Hijau antara Kolesterol dengan Pereaksi Lieberman-Burchard [14]
Aktivitas  ekstrak  daun  suji  terhadap  penurunan kadar kolesterol diketahui dengan cara membandingkan absorbansi  senyawa  berwarna  hasil  reaksi  antara kolesterol bebas dengan asam asetat anhidrat dan asam sulfat  pekat  dari  larutan  kontrol  positif dengan  larutan uji, kemudian dihitung persen penurunan kolesterolnya [15].  Konsentrasi  kolesterol  untuk  membuat  larutan kontrol  positif  yang  digunakan  pada  penelitian  ini berdasarkan orientasi yaitu 140 ppm.
Ekstrak  daun  suji  dibuat  5  konsentrasi  yaitu  400, 500,  600,  600,  700  dan  800  ppm.  Masing-masing konsentrasi sampel ditambahkan dengan baku kolesterol 140  ppm  didalam  tabung  reaksi.  Campuran  tersebut direaksikan dengan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat. Larutan didiamkan di tempat gelap terlindung dari cahaya selama 15 menit. Hal ini dilakukan karena larutan kolesterol  bersifat  fotodegradasi  tidak  stabil  terhadap cahaya  dan  akan  berubah  menjadi  kolestenon. Pendiaman selama 15 menit dilakukan juga agar larutan membentuk kompleks warna hijau kemudian dibaca nilai absorbansinya pada panjang gelombang maksimal yaitu 668  nm  pada  menit  ke-15.  Hasil  pengukuran  nilai absorbansi  dan  %  penurunan  kadar  kolesterol  dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Data Penurunan Kadar Kolesterol pada Ekstrak Daun Suji ( Dracaena angustifolia Roxb .) Absorbansi Baku Konsentrasi Ekstrak (ppm) Absorbansi Sampel % Penurunan Kolesterol Rata- rata 0,344 400 ppm 0,228 33,72 % 33,62 % 0,230 33,14 % 0,227 34,01 % 0,344 500 ppm 0.221 35,76 % 36,15 % 0,220 36,05 % 0,218 36,63 % 0,344 600 ppm 0,185 46,22 % 46,61 % 0,183 46,80 % 0,183 46,80 % 0,344 700ppm 0,153 55,52 % 56,39 % 0,148 56,98 % 0,149 56,68 % 0,344 800 ppm 0,126 63,37 % 64,05 % 0,120 65,12 % 0,125 63,66 %
Nilai  absorbansi  yang  ditunjukkan  oleh  masing- masing konsentrasi berbeda. Semakin tinggi konsentrasi sampel maka nilai absorbansinya semakin menurun. Hal ini  terjadi  karena  dengan  tingginya  konsentrasi  sampel maka dapat  menurunkan  kadar  kolesterol dengan  baik, sehingga nilai absorbansinya lebih kecil dan persentase aktivitas  antikolesterolnya  besar  [16].  Pengukuran dilakukan secara triplo dan rata-rata persen penurunan kadar kolesterol digambarkan dalam kurva pada gambar 2.
Gambar 2. Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Ekstrak
Daun Suji dengan Penurunan Kolesterol Nilai EC
50 merupakan suatu nilai untuk menggambarkan besarnya konsentrasi ekstrak daun suji ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  yang  dapat  menurunkan kadar  kolesterol  total  sebesar  50%.  Perhitungan  nilai EC 50 menggunakan  persamaan  garis  regresi  linier  yang menyatakan hubungan antara konsentrasi sampel uji (X) dengan  aktivitas  penurunan  kadar  kolesterol  rata-rata (Y)  dari  seri  pengukuran  sampel  secara  triplo.
Berdasarkan persamaan regresi linier y = 0,0811x – 1,296 diperoleh  nilai  EC 50 sebesar  632,50  ppm.  Nilai  EC 50 berbanding  terbalik  dengan  kemampuan  senyawa  yang bersifat  sebagai  antikolesterol.  Semakin  kecil  nilai  EC 50 berarti semakin kuat daya antikolesterolnya [17].
Senyawa-senyawa  yang  diduga  berperan  dalam menurunkan  kadar  kolesterol  yaitu  fenolik,  flavonoid, dan vitamin C. Gugus hidroksil pada kolesterol bereaksi dengan  gugus  keton  pada  flavonoid  membentuk hemiasetal. Penelitian ini menggunakan alat spektrofotometer  untuk  mengukur  kolesterol  bebas, bukan kolesterol yang terikat oleh flavonoid [18]. Gugus karbonil  pada  flavonoid  akan  bereaksi  dengan  gugus hidroksil  pada  kolesterol  membentuk  ikatan  hidrogen. Senyawa  yang  tidak  terikat  oleh  sampel  inilah  atau disebut  dengan  kolesterol  bebas  yang  bereaksi  dengan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat [19].
Gambar 3. Ikatan Kimia antara Kolesterol dengan Senyawa Flavonoid

## 4. Kesimpulan
Daun  suji  ( Dracaena  angustifolia  Roxb .)  mempunyai aktivitas  sebagai  penurun  kolesterol  secara in-vitro dengan nilai EC 50 yaitu 632,50 ppm.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Sri  Nilawati,  Diah Krisnatuti,  B.  Mahendra,  Oei  Gin Djing,  Care  Yourself.  kolesterol,  Penerbar  Plus+, 2008.
[2]  A.  Ghanaim  Fasya,  Potensi  Antikanker  dan Antioksidan  serta  Identifikasi  Isolat  Steroid Mikroalga  Chlorella  sp,  in,  UIN  Maulana  Malik Ibrahim, Malang, 2015, pp. 86.
[3]  Tan Hoan Tjay, Kirana Rahardja, Obat-Obat Penting: Khasiat,  Penggunaan  dan  Efek-Efek  Sampingnya, 6th ed., Elex Media Komputindo, Jakarta, 2007.
[4]  Ulfah Nurrahmani, Stop Kolesterol Tinggi, Familia, 2012.
[5]  Yudi Garnadi, Hidup Nyaman dengan Hiperkolesterol, AgroMedia Pustaka, Jakarta, 2012.
[6]  Gagas  Ulung,  Sehat  Alami  dengan  Herbal:  250 Tanaman Berkhasiat Obat, Gramedia Pustaka Utama Jakarta, 2014.
[7]  P.  C.  Ochani,  P.  D'Mello,  Antioxidant  and antihyperlipidemic  activity  of  Hibiscus  sabdariffa Linn.  leaves  and  calyces  extracts  in  rats, Indian journal of experimental biology , 47, 4, (2009) 276-282
[8]  R. Nalole, M. N. Djide, E. Wahyudin, A. I. Makhmud, Uji  In  Vitro  Penurunan  Kadar  Kolesterol  oleh  Sari Kedelai Hitam (Glycine max Merr), Majalah Farmasi dan Farmakologi , 13, 1, (2009) 17-20
[9]  K. R. Markham, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, K. Padmawinata, ITB, Bandung, 1988.
[10] Soni Himesh, Sharma Sarvesh, Patel Sita Sharan, K. Mishra,  A.  K.  Singhai,  Preliminary  Phytochemical Screening  and  HPLC  Analysis  of  Flavonoid  From Methanolic Extract of Leaves of Annona squamosa, International  Research  Journal  of  Pharmacy ,  2,  5,
(2011) 242-246
[11]  Republik Indonesia. Departemen Kesehatan, Sediaan galenik, Departemen Kesehatan, Republik Indonesia, 1986.
[12] R.C.  Rowe,  P.J.  Sheskey,  S.C.  Owen,  Handbook  of Pharmaceutical  Excipients,  Pharmaceutical  Press, 2006.
[13] Muhammad  Saiful  Amin,  Studi  in  vitro  ;  Efek Antikolesterol  dari  Ekstrak  Metanol  Buah  Parijoto (Medinilla  speciosa  Blume)  Terhadap  Kolesterol Total,  Program  Studi  Farmasi,  UIN  Syarif Hidayatullah, Jakarta
[14] James  M.  Orten,  Otto  Wilhelm  Neuhaus,  Human Biochemistry, Mosby, 1982.
[15] D.  Setyawan  Purwo  Handoko,  Kinetika  Hidrolisis Maltosa  pada  Variasi  Suhu  dan  Jenis  Asam  sebagai Katalis, SIGMA:  Jurnal  Sains  dan  Teknologi ,  9,  1,
(2006) 9
[16] Kurnia  Agustini,  Shanti  Marlina,  Azizahwati, Pengaruh  Lama  Pemberian  Formula  Ekstrak  Buah Labu  Siam  (Sechium  edule)  terhadap  Penurunan Kadar Kolesterol  Total dan  Trigliserida  Tikus Putih Jantan, Jurnal Bahan Alam Indonesia , 6, 2, (2007) 60- 64
[17] Muharram Priatna, Ade Irma Sartika, Ria Ambaryani, Uji  Banding  Aktivitas  Antikolesterol  Ekstrak Etanol Buah  Pepino  (Solanum  muricatum.  Ait)  dan  Buah Strawberry  (Fragaria  X  ananassa  duchesne)  pada Tikus  Putih  Jantan, Jurnal  Kesehatan  Bakti  Tunas Husada:  Jurnal  Ilmu-Ilmu  Keperawatan,  Analis Kesehatan dan Farmasi , 13, 1, (2015) 165-172
[18] R. W. Burke, B. I. Diamondstone, R. A. Velapoldi, O. Menis,  Mechanisms  of  the  Liebermann-Burchard and  Zak  color  reactions  for  cholesterol, Clinical Chemistry , 20, 7, (1974) 794-781
[19] Effendy,  Teori  VSEPR:  kepolaran,  dan  gaya antarmolekul, Bayumedia, Malang, 2006.