Jurnal Ilmu dan Industri Peternakan pISSN 2355-0732, eISSN 2716-2222 http://journal.uin-alauddin.ac.id/index.php/jiip/index Volume 9 Nomor 1: 20-30, Juni 2023 DOI: https://doi.org/10.24252/jiip.v9v1.35393
Kualitas Semen Beku Sapi Bali ( Bos sondaicus ) Pada Lama Thawing yang Berbeda di Dinas Pertanian Provinsi Gorontalo
Quality of Frozen Semen for Bali Cattle (Bos sondaicus) at Different Thawing Periods at the Gorontalo Province Agriculture Service
Hayati Nur Istiqomah 1 , Mohamad Ervandi 1 *, Ishak Korompot 1 , Terri Repi 1 , Idiamin S Buhang 2
1 Program Studi Peternakan, Fakultas Sains & Teknologi, Universitas Muhammadiyah Gorontalo Jl. Prof. Dr. Mansoer Pateda, Gorontalo-97181, Gorontalo, Indonesia
2 Dinas Pertanian Provinsi Gorontalo Jl. Moh. Taeb Gobel Kopleks Perkantoran Provinsi Gorontalo, Gorontalo, Indonesia *Korespondensi E-mail: ervandi_husain@yahoo.co.id
Diterima 19 Januari 2023; Disetujui 17 April 2023

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kualitas  semen  beku  sapi  bali pada  lama thawing yang  berbeda  di  Dinas  Pertanian  Provinsi  Gorontalo. Peubah  yang  diamati  motilitas,  viabilitas  dan  abnormalitas  spermatozoa yang di thawing pada  suhu  30°C  selama  8, 10 dan 12  detik.  Penelitian  ini menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  media  percobaan semen  beku  sapi  bali  yang  didapatkan  dari  Dinas  Pertanian  Provinsi Gorontalo . Data yang diperoleh dianalisis menggunakan ANOVA Apabila menunjukkan  perbedaan,  dilanjutkan  dengan  pengujian  Beda  Nyata Terkecil  dengan  bantuan software SPSS  21.  Hasil  penelitan  menunjukkan bahwa  lama thawing 10  detik  menghasilkan  motilitas  dan  viabilitas  yang lebih  baik  serta  tingkat  abnormalitas  yang  lebih  rendah  pada  suhu  30°C. Lama thawing 10  detik  pada  suhu  30°C  masih  bisa  digunakan  untuk keperluan pelaksanaan IB di lapangan karena kualitas semen beku sapi bali yang dihasilkan masih dapat dipertahankan.
Kata kunci: Inseminasi Buatan, Sapi Bali, Semen Beku, Thawing .

## ABSTRACT
This research aims to determine the quality of frozen semen of Bali cattle at different thawing times at the Department of Agriculture of the Province of Gorontalo.  The  observed  variables  were  motility,  viability  and abnormalities of spermatozoa which were thawed at 30°C for 8, 10 and 12 seconds.  The  data  obtained  were  analyzed  using  ANOVA  If  there  are differences of opinion, proceed with testing the Least Significant Difference with the help of SPSS 21 Software. The results showed that a thawing time of  10  resulted  in  better  motility  and  viability  and  a  lower  level  of abnormality  at 30°C. The thawing time of 10 at a temperature of 30°C can
still  be  used  for  the  purpose  of  implementing  AI  in  the  field  because  the quality of frozen cement produced by Bali cattle can still be maintained.
Keywords: Artificial Insemination, Bali Cattle, Frozen Semen, Thawing .

## PENDAHULUAN
Sapi  bali ( Bos  sondaicus )  adalah jenis  sapi  asli  serta murni khas  indonesia,  yang memiliki karakteristik genetik khas serta keunggulan yang tidak kalah dengan bangsa sapi yang lain (Hoesni, 2015). Sapi bali memiliki performa produksi yang bermacam- macam  serta  efisiensi  reproduksi  yang  baik,  sehingga  sumberdaya  genetik  sapi  bali harus  dipertahankan  keberadaannya  serta  dimanfaatkan  secara  lestari  (Hikmawaty dkk.,  2014).  Peningkatan  populasi  dan  produktivitas  sapi  bali  dibutuhkan  sentuhan teknologi  di  bindang  reproduksi  khusunya  inseminasi  buatan  (IB)  untuk memaksimalkan  potensi  penjatan  unggul  di  daerah.  IB  merupakan  suatu  program teknologi  reproduksi  yang  sudah  lama diterapkan  dalam  bidang  peternakan  dengan tujuan untuk meningkatkan kualitas genetik dan meningkatkan populasi ternak secara merata  serta  mencegah  penularan  penyakit kelamin  (Ervandi et  al ., 2020 a ). Ketetapan waktu  pelaksanaan  IB  bertujuan  agar  supaya  terjadi  fertilisasi  langsung  antara  sel spermatozoa  dengan  sel  telur  untuk  terjadi  pembuahan  dengan  sempurna  sehingga terjadi kebuntingan (Ervandi et al ., 2019; Ervandi dkk., 2022).
Rangkaian  kegiatan  dalam  tahap  IB  dengan  menggunakan  semen  beku  salah satunya  adalah  proses handling semen  beku  seperti thawing . Thawing dimaksudkan untuk  melakukan  pencairan  terhadap  semen  sapi  bali  dengan  memakai  media  serta durasi tertentu yang kemudian diinseminasikan pada saluran organ reproduksi ternak betina  (Salim  dkk.,  2012).  Kegagalan  kebuntingan  sering  terjadi  diakibatkan penurunan kualitas semen beku setelah proses thawing . Kualitas semen beku yang di produksi harus mempunyai Post Thawing Motility (PTM) lebih dari 40% serta gerakan individu  2-  3  (SNI  4869.  1:  2008);  Susilawati,  (2011).  Teknik thawing yang  digunakan oleh inseminator merupakan salah satu cara untuk mengevaluasi kualitas semen yang telah  dibekukan.  Kualitas  spermatozoa  yang  dibekukan  dapat  menurun  akibat kerusakan sel spermatozoa yang disebabkan oleh prosedur pencairan yang tidak tepat (Utomo,  2010).  Pelakasanan handling straw  di  lapang  yang  dapat  berpengaruh terhadap  keberhasilan IB  terutama  angka  CR  diantaranya  (1)  jarak  antara  puncak tangki setinggi 3 inci;  (2) waktu dan temperatur thawing (Foote and Kaproth, 2002).

## Kualitas semen beku sapi bali
Temperatur serta lama thawing memiliki dampak yang cukup besar pada kualitas semen yang dihasilkan. Thawing baik yakni yang dapat menghindari kerusakan semen, sehingga  memiliki  kapabilitas  untuk  membuahi  ovum  yang  tinggi  (Ervandi, et  al ., 2020 b ).  Perbedaan  kualitas  semen  beku  pada  proses thawing tersebut  menunjukkan bahwa lama waktu thawing yang berbeda memeberikan pengaruh berbeda pula pada kualitas  semen  beku thawing pada  sapi  bali.  Novita,  (2020)  mengemukakan  bawa indikator  rendahnya  kualitas  semen  beku thawing antara  lain  rendahnya  motilitas massa  dan  individu,  viabilitas  dan  tingginya  angka  abnormalitas  yang  dihasilkan. Berdasarkan hasil survey di lapangan yang dilakukan inseminator di daerah dimana lama thawing yang  sering  digunakan  antara  8-12  detik  kemudian  menggunakan  air biasa dengan suhu lingkungan 30°C serta juga seringkali inseminator melakukan IB di tempat  seperti  pegunungan  yang  jauh  dari  pemukiman  warga  sehingga  sulit  untuk mendapatkan air  hangat   dengan  suhu 37°C.  Perbedaan  metode  waktu thawing yang tidak  sesuai  dengan  standart  SNI  ini  menjadi  salah  satu  faktor  yang  dapat mempengaruhi keberhasilan IB di lapangan. Berdasarkan pemikiran inilah maka perlu dilakukan penelitian yang lebih spesifik terkait dengan lama thawing yang baik dalam menjaga  kualitas  semen  beku  sapi  bali  di  Dinas  Pertanian  Provinsi  Gorontalo  yang masih  memenuhi  syarat  untuk  keperluan  IB.  Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk mengetahui kualitas  semen  beku  sapi  bali  pada  lama thawing yang berbeda di Dinas Pertanian Provinsi Gorontalo.

## MATERI DAN METODE

## Materi
Materi  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini,  yaitu  mini  straw  volume  0,25  ml semen  beku  sapi  bali  sebanyak  25  straw,  air, eosin  negrosin ,  N ₂ cair,  termometer, mikroskop, object  glass , cover  glass ,  pemanas,  gelas  kaca, stopwactch , hand  counter , kontainer, gunting, dan tissue .

## Metode
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  media  percobaan  semen  beku sapi  bali  dengan  3  perlakuan  dan  5  ulangan.  Perlakuan  lama thawing pada  suhu  air
biasa  yaitu  suhu  30°C  terdiri  dari:  T ₁ =  Lama thawing 8  detik,  T ₂ =  Lama thawing 10 detik dan T ₃ = Lama thawing 12 detik.

## Variabel Penelitian
Peubah  yang  diamati  adalah  motilitas,  viabilitas  dan  abnormalitas post  thawing sesuai dengan perlakuan yang ada.

## 1. Motilitas Spermatozoa
Motilitas  spermatozoa  diamati  dengan  meneteskan  semen  pada object  glass , kemudian  ditutup dengan cover  glass ,  selanjutnya  diamati di  bawah  mikroskop pada perbesaran  10  X  40  (Kusumawati,  dkk.,  2018).  Menghitung  motilitas  spermatozoa berdasarkan rumus (Azzahra dkk., 2016).
M = [(Y - X) / Y] x 100% Keterangan: X = Spermatozoa tidak motil
Y = Konsentrasi total spermatozoa

## 2. Viabilitas Spermatozoa
Viabilitas diamati dengan pewarnaan dengan eosin-negrosin . Semen diteteskan ke objeck  glass .  Setelah  dihomogenkan,  Usap  menggunakan objeck  glass .  Mengeringkan preparat  menggunakan  pemanas  sampai  kering.  Mikroskop  digunakan  untuk memeriksa objek dengan pembesaran 10 X 40. Spermatozoa berwarna terang dianggap hidup serta merah tua dianggap mati. Jumlah spermatozoa hidup dapat dihitung dari 200  pengamatan  sel  spermatozoa  serta  hasilnya  dinyatakan  pada  persentase (Kusumawati, dkk.,2018).
𝑋 = 𝑎 𝑏 𝑥 100%
Keterangan: X = daya tahan hidup spermatozoa a = jumlah spermatozoa hidup b = total spermatozoa diamati

## 3. Abnormalitas Spermatozoa
Preparat  untuk  pengamatan  abnormalitas  seperti  preparat  pengamatan  hidup- mati  yang  diamati  bentuk  morfologinya.  Pengamatan  dilakukan  dengan  mikroskop pemesaran  10  x  40.  Hitung  jumlah  spermatozoa  abnormal  dari  200  sel  spermatozoa, hasilnya dinyatakan dalam persentase (Kusumawati, dkk., 2018).
𝑦 = 𝑐 𝑑 𝑥 100%
Kualitas semen beku sapi bali
Keterangan: y = abnormalitas spermatozoa c = jumlah spermatozoa abnormal, d = jumlah spermatozoa diamati

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian  berupa  motilitas,  viabilitas  dan abnormalitas  dianalisis  dengan  menggunakan  ANOVA.  Apabila  menunjukkan perbedaan,  dilanjutkan  dengan  pengujian  Beda  Nyata  Terkecil  dengan  bantuan software SPSS 21 (Sudarwati dkk., 2019)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengamatan kualitas semen beku sapi bali pada lama thawing yang berbeda disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  Pengamatan  Motilitas,  Viabilitas,  Abnormalitas  Semen  Beku  Sapi  Bali pada Lama Thawing yang Berbeda Perlakuan (detik) Rata-rata ± SEM Motilitas (%) Viabilitas (%) Abnormalitas (%) 8 39,41±1,58 69,42±6,11 13,74±3,71 10 40,42±1,41 73,84±3,88 9,63±0,87 12 40,25±2,28 71,09±8,85 14,13±5,33
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  motilitas  spermatozoa  yang  tertinggi  diperoleh pada  lama thawing 10  detik  yaitu  40,42±1,41%  sedang  terendah  pada  lama thawing 8 detik  yaitu  39,41±1,58%.  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan  waktu  pencairan  semen sangat singkat, sehingga kristal es tidak dapat mencair seluruhnya dan menghambat pergerakan spermatozoa selama proses penelitian. Pratama dkk., (2018) kristal es yang ada dalam semen beku disebabkan oleh suhu penyimpanan dalam nitrogen cair -196°C yang  sangat  rendah,  yang  menyebabkan  sel  spermatozoa  dehidrasi  dan menghancurkan mitokondria serta lisosomnya dapat mengganggu proses metabolisme sehingga  spermatozoa  berhenti  tidak  bergerak  karena  kekurangan  energi.  Feradis (2010), mendefinisikan bahwa kejutan dingin ( cold shock ), memiliki efek kematian pada spermatozoa post  thawing karena  kontraksi  yang  tinggi  dari  selubung  lipoprotein dinding sel, sehingga menyebabkan penurunan motilitas.
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  tidak  berpengaruh  nyata  pada  lama thawing terhadap  motilitas  spermatozoa  semen  beku  sapi  bali  (P>0,05).  Hal  ini kemungkinan disebabkan  oleh  waktu thawing yang  terlalu  cepat  sehingga  kristal  es  tidak  dapat mencair  seutuhnya  dan  juga  kemungkinan  air  yang  digunakan  pada  proses thawing bersuhu  30 0 C  sehingga  menyebabkan  spermatozoa  mengalami  penurunan  kualitas. Hasil  penelitian  Aprilina  dkk.,  (2014)  mengemukakan  bahwa  suhu thawing ideal adalah  37 0 C  untuk  mempertahankan  kualitas  semen,  karena  suhu  tersebut  tidak menunjukkan penuruan yang drastis secara konduksi, konveksi dan evaporasi ke suhu lingkungan,  sehingga  pada  saat thawing menyebabkan  spermatozoa  mencair  secara sempurana dan belum menyebabkan terjadinya tekanan osmotic secara ekstrim pada merman spermatozoa. Susilawati, (2013) mengemukakan bahwa durasi thawing belum secara signifikan merubah daya gerak individu antar perlakuan, walaupun disebutkan juga  bahwa thawing akan  menghasilkan motilitas yang  baik  jika  dilakukan dalam air bersuhu  37°C  selama 30  detik.  Samsudewa dan  Suryawijaya  (2008);  Chaiprasat et  al. ,
(2006)  mendefinisikan  bahwa  suhu thawing rendah  serta  tinggi  menyebabkan hilangnya  kemampuan  spermatozoa  untuk  bergerak  adanya  tekanan  osmotik  pada spermatozoa  yang  menyebabkan  konfigurasi  lipid  protein  membran  spermatozoa menjadi  tidak  seimbang  dan  tidak  sejalan  dengan  kondisi  fisiologis  motilitas spermatozoa  selama thawing sehingga  mengakibatkan  penurunan  motilitas spermatozoa.  Menurut  Pratama  dkk.,  (2018),  motilitas  spermatozoa  pada  suhu  37°C dan  waktu thawing 10-20  detik  adalah  58,40%  dan adalah  yang  terbaik karena  dapat membantu  motilitas  spermatozoa  lebih  banyak  karena  pada  suhu  37°C  tidak menunjukkan  penurunan  konduksi,  konveksi,  dan  penguapan  yang  nyata  ke lingkungan,  sehingga  selama thawing spermatozoa  mencair  sempurna  dan  dapat meningkatkan  motilitas  spermatozoa.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  waktu thawing 10  dan  12  detik  masih  dapat  digunakan  untuk  keperluan  IB  di  lapangan karena  kualitas  semen  beku  yang  dihasilkan  memiliki Post  Thawing  Motility (PTM) lebih >40%.
Persentase  viabilitas  spermatozoa  yang  disajikan  pada  Tabel  1  menunjukkan bahwa  viabilitas  spermatozoa  yang  tertinggi  diperoleh  pada  lama thawing 10  detik yaitu 73,84±3,88 % sedang terendah pada lama thawing 8 detik yaitu  69,42±6,11%.  Hal ini  kemungkinan  disebabkan  tingkat  viabilitas  yang  tinggi  dicapai  karena  dinding
membran  spermatozoa  terus  berfungsi  normal    serta  utuh  dan  zat  pewarna  tidak masuk  ke  spermatozoa,  sehingga  spermatozoa  tampak  transparan.  Pratama  dkk., (2018) menyatakan bahwa permeabilitas membran spermatozoa yang masih utuh, zat warnanya tidak dapat masuk ke dalam spermatozoa saat berfungsi dengan baik. Hasil terendah dengan rata–rata 69,42±6,11% pada  perlakuan lama thawing 8 detik.  Hasil ini kemungkinan  disebabkan  waktu  pencairan  semen  yang  singkat  8  detik  dapat mempengaruhi  stabilitas  membran  spermatozoa,  sehingga  komponen  intraseluler seperti  mitokondria  dan  lisosom  dengan  cepat  berubah  menjadi  kristal  es.  Pratama, dkk., (2018) mengemukkan bahwa permeabilitas dinding membran spermatozoa tidak stabil  dan  tidak  berfungsi,  sehingga  zat  warna  dapat  masuk  ke  dalam  spermatozoa tanpa  terkendali  dan  juga  kemungkinan  disebabkan  karena  perubahan  suhu  di  atas permukaan  nitrogen  cair  disaat  proses  penelitian . Datta  dkk.,  (2009)  menyatakan  sel spermatozoa bisa mati jika fluiditas membran terganggu dan permeabilitas fosfolipid rusak  akibat  fluktuasi  suhu  ekstraseluler  yang  tidak  sesuai.  Hasil  pengamatan viabilitas spermatozoa semen beku sapi bali yang tertera pada Gambar 1.
Tabel 1 menunjukkan  bahwa durasi thawing tidak berpengaruh  nyata (P>0,05) terhadap  viabilitas  spermatozoa  semen  beku  sapi  bali.  Hal  ini  kemungkinan disebabkan  membran  spermatozoa  berada  dalam  kondisi  yang  cukup  rentan  karena sifat  semen  beku  yang  sangat  rapuh.  Perubahan  suhu  yang  ekstrim  bisa  sangat berbahaya bagi spermatozoa dan membuatnya tidak stabil, akan mengalami kerusakan bahkan  oleh  perubahan  suhu  yang  kecil  (Kusumawati  dkk.,  2018).  Selain  itu,  waktu thawing yang  singkat  dapat  meningkatkan  aktivitas  metabolisme  spermatozoa  yang menyebabkan  menurunnya  daya  tahan  hidup  spermatozoa.  Hal  ini  sejalan  dengan

## A
B
Gambar 1. Hasil Pengamatan Viabilitas Spermatozoa Sapi Bali Keterangan: A. Spermatozoa mati (Menyerap Zat Pewarna) B. Spermatozoa hidup (Tidak Menyerap Zat Pewarna)
1µm
pendapat  Salim  dkk.,  (2012)  bahwa  suhu  dan  lama thawing yang  tidak  tepat menyebabkan  kerusakan  pada  membran  spermatozoa  akibat  cekaman  panas  dan interaksi  oksigen.  Malinda  dkk.,  (2021)  mengemukakan  bahwa  suhu  dan  waktu thawing memiliki  pengaruh  yang  signifikan  terhadap  keadaan  spermatozoa, khususnya  integritas  spermatozoa  dalam  semen.  Kombinasi  suhu  dan  lama thawing yang baik adalah yang dapat menyebabkan sedikit atau tidak ada kerusakan pada sel spermatozoa,  sehingga  memiliki  kemampuan  untuk  mebuahi  ovum  yang  tinggi. Menurunnya  viabilitas  spermatozoa  tidak  bisa  dihindari  karena  selama  preparasi semen,  spermatozoa  mengalami  perubahan  kondisi  lingkungan yang  sangat  ekstrim. Hal ini diperkuat oleh pernyataan Anwar dkk., (2014), bahwa spermatozoa secara aktif berpartisipasi  dalam  proses  kimia  dan  biomolekuler  metabolisme  substrat,  yang diperlukan  untuk  pergerakan  dan  menghasilkan  peningkatan  asam  laktat  dan  kadar asam  laktat  sangat  tinggi  menyebabkan  pH  mengencer  menurun  yang  beracun  bagi spermatozoa.
Persentase abnormalitas spermatozoa yang disajikan pada Tabel 1 menunjukkan bahwa abnormalitas spermatozoa yang tertinggi diperoleh pada lama thawing 12 detik yaitu 14,13±5,33% sedang terendah pada lama thawing 10 detik yaitu 9,63±0,87%. Hasil penelitian  dikatagorikan  sangat  baik  karena  masing-masing  perlakuan  memiliki abnormalitas  dibawah  20%  sehingga  masih  bisa  digunakan  untuk  keperluan  IB  di lapangan. Ihsan (2009) spermatozoa abnormal tidak boleh lebih dari 20% untuk dapat dimanfaatkan untuk IB dan jika abnormal >20% maka daya fertilitas akan berkurang. Abnormalitas semakin tinggi kemungkinan disebabkan karena pengaruh lama waktu thawing pada  semen  beku  sapi  bali  dilokasi  penelitian.  Abnormalitas  spermatozoa merupakan  penyimpangan  morfologi  pada  kerangka  normal  spermatozoa  (Adnyani dkk.,  2018).  Struktur  sel  yang  menyimpang  atau  abnormal  dapat  mengganggu pembuahan serta menimbulkan hambatan pada saat fertilisasi dan tingkat implantasi maupun  kebuntingan  akan  menurun  (Afiati  dkk.,  2015).  Hasil  pengamatan abnormalitas spermatozoa semen beku sapi bali dengan membedakan membran dari spermatozoa yang masih utuh dan membran spermatozoa yang tidak baik tertera pada Gambar 2.
Tabel  1  menunjukkan    bahwa  lama thawing tidak  berpengaruh  nyata  (P>0,05) terhadap  abnormalitas  spermatozoa  semen  beku  sapi  bali.  Hal  ini  kemungkinan
disebabkan  karena  Abnomalitas  spermatozoa    akibat  perlakuan thawing maupun proses  preparasi  semen  selama  penelitian.  Kualitas  semen  yang  baik  akan  mampu membuahi sel ovum dan terjadi fertilisasi dimana sel spermatozoa yang normal akan sangat berhubungan erat terkait dengan fertilitas ternak (Susilawati, 2011; Triadi dkk., 2022).    Pendapat  Ariantie  dkk.  (2013),  semen  beku  dengan  persentase  kelainan  yang tinggi  lebih  cenderung  memiliki  kesuburan  yang  rendah  karena  mempengaruhi kemampuan  untuk  membuahi  atau  mempertahankan  pertumbuhan  embrio.  Hal  ini sesuai dengan Pedoman SNI Semen Beku 2008, yang menyatakan bahwa spermatozoa abnormal kurang dari 20% layak untuk IB (Adnyani dkk., 2018).
Spermatozoa abnormal dengan ciri-ciri seperti  ekor putus dan kepala serta ekor bengkok adalah yang paling sering ditemukan pada proses penelitian. Hal ini sejalan dengan  Salim  dkk.,  (2012)  terputusnya  ekor  atau  kepala  merupakan  salah  satu  ciri spermatozoa dengan abnormalitas tersier. Sesuai hasil pengamatan penelitian, thawing bukan  penyebab  dari  kondisi  ini,  melainkan  proses  persiapan  termasuk  pada  saat pembuatan  preparat  ulas  dianggap  sebagai  penyebabnya.  Kerusakan  membran spermatozoa juga terjadi disebabkan selama atau setelah ejakulasi serta juga pada saat penaganan  semen  yang  salah  pada  proses  IB  yang  dapat  disebut  juga  abnormalitas tersier (Hafez and Hafez, 2008).
A B
Gambar 2. Hasil Pengamatan Abnormalitas Spermatozoa Sapi Bali Keterangan: A. Spermatozoa Normal B. Spermatozoa Abnormal (Kelainan Pada ekor putus)
1µm

## KESIMPULAN
Lama thawing 10  detik  menghasilkan  motilitas  dan  viabilitas  yang  lebih  baik serta tingkat abnormalitas yang lebih rendah pada suhu 30°C. Lama thawing 10 detik pada  suhu  30°C  masih  bisa  digunakan  untuk  keperluan  pelaksanaan  IB  di  lapangan karena kualitas semen beku sapi bali yang dihasilkan masih dapat dipertahankan.

## DAFTAR PUSTAKA
Adnyani, N. L. A., Sumardani, N. L. G. dan Sarini, N. P. 2018. Pengaruh lama thawing pada  uji  kualitas  semen  beku  sapi  bali  produksi  upt  bibd  baturiti  sebelum didistribusikan. Jurnal Peternakan Tropika , 6(3), 626-636.
Anwar,  P.,  Ondho,  Y.  S.,  dan  Samsudewa,  D.  2014.  Pengaruh  pengencer  ekstrak  air tebu  dengan  penambahan  kuning  telur  terhadap  kualitas  spermatozoa  sapi bali. Jurnal Peternakan , 11(2), 48-58
Aprina, N., Suharyatib, S., dan Santosab, S. E. 2014. Pengaruh suhu dan lama thawing di dataran rendah terhadap kualitas semen beku sapi simmental. Jurnal Ilmiah Peternakan Terpadu , 2(3), 96-102
Ariantie,  O.  S.,  Yusuf.  T.  L.,  Sajuthi,  D.,  dan  Arifiantini,  R.  I.  2013.  Pengaruh krioprotektan  gliserol  dan  dimethilformamida  dalam  pembekuan  semen kambing  pe  menggunakan  pengencer  tris  modifikasi. Jurnal  Ilmu  Ternak  dan Veteriner , 18(4), 239-250.
Azzahra,  F.  Y.,  Setiatin,  E.  T.,  dan  Samsudewa,  D.  2016.  Evaluasi  motilitas  dan persentase  hidup  semen  segar  sapi  po  kebumen  pejantan  muda. Jurnal  Sain Peternakan Indonesia , 11 (2), 99-107.
Chaiprasat, S., Benjakul, W., Chartchue, A., Joemplang, P and Punyapornwithaya, V.,
2006.  Effect  of  bull  semen  thawing  methods  on  sperm  progressive  motility. Chiang Veterinary Journal , 4(1), 25–29
Ervandi, M., Ihsan, M.N., Wahjuningsih, S., & Susilawati, T. 2020 a . Pregnancy rate and reproductive  disorders  examination  of  inseminated  brahman  cross  by  rectal palpation  and  ultrasonography. American  Journal  of  Animal  and  Veterinary Sciences, 15(1), 73-80
Ervandi,  M.,  Ihsan,  M.N.,  Wahjuningsih,  S.,  Yekti,  A.P.A.,  &  Susilawati,  T.  2020 b . Relationship between body condition score on the service per conception and conception rate of Brahman Cross cows. Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan, 30(1), 80- 85.
Ervandi,  M.,  Ihsan,  M.N.,  Wahjuningsih,  S.,  Yekti,  A.  P.  A.,  &  Susilawati,  T.  2019. Reprodutive performance of brahman cross cows on difference time intervals of artificial insemination. Asian Jr. of Microbiol. Biotech. Env. Sc. 21(4), 915-919. Ervandi, M., Ardiansyah, W., Reppi, T., Mokoolang, S., Korompot, I., &  Pomolango, R. 2022.  edukasi  masyarakat  peternak  dalam  pemanfaatan  teknologi  ib  untuk mendukung  produksi  bibit  sapi  bali.  HUIDU: Jurnal  Pengabdian  Masyarakat Geoscience, 1(2), 73-79. Feradis. 2010. Bioteknologi Reproduksi pada Ternak . Alfabeta. Bandung
Foote, R.H and Kaproth, M.T. 2002. Large batch freezing of bull semen: effect of time of freezing and fructose on fertility. Journal Dairy Sci . 85, 453 ‐ 456. Hafez,  E.S.E.,  and  Hafez,  B.  2008. Follicullogenesis,  Egg  Maturation,  and  Ovulation. Reproduction in Farm Animal . Edited by B. Hafez, and E.S.E. Hafez  7 th Edition. Blackweell Publishing. USA
Hikmawaty, A., Gunawan, R.R., Noer, & Jakaria. 2014. Identifikasi ukuran tubuh dan bentuk  tubuh  sapi  bali  di  beberapa  pusat  pembibitan  melalui  pendekatan analisis komponen utama. Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan,
02 (1), 231-237.
Hoesni,  F.  2015.  Pengaruh  keberhasilan  inseminasi  buatan  (IB)  antara  sapi  bali  dara dengan  sapi  bali  yang  pernah  beranak  di  kecamatan  pemayung  kabupaten batanghari. Jurnal Ilmiah Universitas Batanghari Jambi, 15(4), 20-27. Ihsan M. N. 2010. Ilmu Reproduksi Ternak Dasar . UB Press. Malang Kusumawati,  E.  D.,  Rahadi,  S.,  Santoso,  S.,  &  Yulianti,  D.  L.  2018.  pengaruh  lama thawing yang  berbeda  pada  suhu  25°C  terhadap  kualitas  semen  beku  sapi ongole. Jurnal Ilmu dan Teknologi Peternakan Tropis , 6 (1), 119-123.
Malinda D., Santoso, H., dan Latuconsina, H. 2021. Analisis viabilitas spermatozoa sapi friesian  holstein ( Bos  taurus ) post thawing semen  beku  dengan  pengaruh  suhu dan lama waktu thawing berbeda. Jurnal Ilmiah Biosaintropis (Bioscience-Tropic), 6(2), 46–51.
Novita,  R.  2020.  Pengaruh  lama  waktu  thawing  terhadap  kualitas  semen  beku  sapi simmental secara mikroskopis. Jurnal Tropical Animal Science , 2(2), 66-73.
Pratama, J. W. A., D. A. K. Sari, & M. Sigit. 2018. Pengaruh  beberapa metode thawing terhadap kualitas  semen  beku  sapi  simental. Jurnal  Ilmiah  Fillia  Cendekia ,  (2), 39-45.
Salim,  M.  A.,  Susilawati,  T  &  Wahyuningsih,  S.  2012.  Pengaruh  metode thawing terhadap  kualitas  semen  beku  sapi  bali,  sapi  madura  dan  sapi  PO. Jurnal Agripet, 12(2), 14-19.
Samsudewa, D. & Suryawijaya, A. 2008. Pengaruh berbagai metode thawing terhadap kualitas semen beku sapi. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner, 88-92.
Standar  Nasional  Inonesia.  2008.  Semen  beku-Bagian  1:  Sapi. Badan  Standarisasi Indonesia . 4869: 1
Sudarwati, H., Natsir, M. H., & Nurgiatiningsih, V. M. A. 2019. Statistika dan Rancangan Percobaan Penerapan dalam Bidang Peternakan . UB Press. Malang Susilawati T. 2011. Spermatologi . UB Press. Malang Susilawati  T.  2011.  Tingkat  Keberhasilan  inseminasi  buatan  dengan  kualitas  dan deposisi  semen  yang  berbeda  pada  sapi  peranakan  ongole. Jurnal  Ternak Tropika, 12(2), 15-24. Susilawati, T. 2013. Pedoman Inseminasi Buatan pada Ternak. UB Press. Malang
Triadi., Ervandi, M., Fahrullah, Repi, T., & Indrianti, M.A. 2022. Kualitas semen ayam kub menggunakan pengencer ringer dextrose dan ringer laktat pada suhu 5 ⁰ C. Jurnal Peternakan Sriwijaya , 11(1), 42-51.
Utomo  S.  &  E.  Boquifai.  2010.  Pengaruh  temperatur  dan  lama thawing terhadap kualitas spermatozoa dalam penyimpanan straw beku. Jurnal Sains Peternakan, 8(1), 22-25.