Stannum : Jurnal Sains dan Terapan Kimia, 6(1) (2024) 28-35
Stannum : Jurnal Sains dan Terapan Kimia
Website: https://journal.ubb.ac.id/index.php/stannum doi: 10.33019/jstk.v6i1.4564 Research paper
Analysis of Caffeine in Packaged Drinks Using Thin Layer Chromatography (TLC) and Spectrophotometry Method
Analisis Kafein pada Minuman Kemasan Menggunakan Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Spektrofotometri
Nurhidayanti Nurhidayanti, Muhammad Abdurrahman Munir * , Emelda Emelda, dan Annisa Fatmawati
Department Of Pharmacy, Faculty of Health Sciences, Alma Ata University, Jl. Brawijaya No.99, Jadan, Tamantirto, Kec. Kasihan, Bantul Regency, Special Region of Yogyakarta 55184
* Corresponding author: muhammad@almaata.ac.id
Received: October 31, 2023  Accepted: April 26, 2024  Published: April 30, 2024

## ABSTRACT
Caffeine is a natural alkaloid compound found in plants in the leaves, seeds, and fruit. The decision of the Food and Drug Supervisory Agency regarding provisions for the supervision of supplements in Chapter VIII Article 18 paragraph two states that caffeine levels must not exceed 150 mg/day. This research aimed to find out the caffeine level in energy beverages. This research method applied the UV-Vis spectrophotometry method and the TLC method. The maximum wavelength obtained in this study was 272.55 nm and the linear results and correlation coefficient obtained were obtained. The  linearity  value  obtained  at  y=  0.0381x  +  0.3285  with  the  correlation  equation  R 2 =  0.9389. Caffeine levels were obtained from “ bran d A” energy drink powder samples for the first replicate at 49.59 mg/g, the second replicate was 48.78 mg/g, the third replicate was 47.15 mg/g, and the “ brand B ” sample for the first replicate was 31.5625 mg/g, second replicate at 32.375 mg/g. The caffeine levels obtained in the “ brand C ” sample from the first replicate at 59.43 mg/g, the second replicate was 60.28 mg/g, and the third replicate was 60.09 mg/g. The results of the standard Rf value  for  caffeine  standard  were  0.7,  the “ brand  A ” energy  drink  powder  sample  was  0.75,  the “ brand B ” sample was 0.75, and the “brand C ” was 0.75. The conclusion from this research was that the  maximum  wavelength  was  272.55  nm,  which  was  slightly  different  from  the  theoretical maximum wavelength of pure caffeine, namely 273 nm. The caffeine levels obtained for samples of energy drink powder from brands A and B met the requirements because it was <50 mg/package and brand C did not meet the requirements because it was >50mg/package. The Rf value results are satisfactory because they were in the range of 0.2-0.8.
Keywords : Caffeine, validation, TLC, spectrophotometry.

## PENDAHULUAN
Kafein merupakan senyawa alkaloid alami yang  terdapat  dalam  tumbuhan  pada  bagian daun, biji, dan buah (Riyanti et.al, 2020). Kafein banyak  terdapat  dalam  minuman  ringan sebagai  penyedap  dan  dapat  membuat  orang kecanduan.  Kafein  (Gambar  1)  berbentuk
kristal,  penyusun  utama  kafein  yaitu  senyawa turunan  protein  disebut  purin  xantin  (Inayah et.al, 2019). Efek samping senyawa kafein yang ditambah ke  dalam  minuman  dalam  jumlah  tertentu memiliki dampak negatif berupa gugup, gelisah, tremor, insomnia, hipertensi, kejang, dan mual
(Tsai & Jioe, 2021). Konsumsi kafein sebaiknya tidak lebih dari 150 mg sehari. Mengkonsumsi kafein  sebanyak  100  mg/hari  menyebabkan ketergantungan pada kafein (Rodak et.al, 2022).
Gambar 1. Strukur kafein Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan  (BPOM)  Republik  Indonesia  Nomor HK.00.05.23.3644  tentang  Ketentuan  Pokok Pengawasan Suplemen Makanan Bab VIII Pasal 18  ayat  dua  berbunyi  :  “Suplemen  makanan dilarang  mengandung  bahan  yang  melebihi batas maksimum sebagaimana tercantum pada Lampiran 1 dan atau mengandung bahan yang ditetapkan Pasal sebagaimana tercantum pada Lampiran  3”.  Dalam regulasi  pemerintah Indonesia dinyatakan, bahwa kadar kafein tidak boleh lebih dari 150 mg/hari (BPOM RI, 2020). Pada  proses  pembuatan  minuman  berenergi terdapat  penambahan  zat-zat  stimulan,  salah satunya adalah kafein. Kafein dapat menghilangkan  kantuk,  kafein  juga  dapat menambah  stamina  tubuh.  Kafein  merupakan senyawa kimia terdapat dalam teh, biji kopi, dan buah  kola  ( cola  nitide ) (Novita  &  Aritonang, 2019).
Minuman  berenergi  yang  mengandung kafein banyak digemari masyarakat Indonesia. Di  Indonesia  terdapat  88.9%  masyarakat mengonsumsi  minuman  berenergi  untuk menambah  semangat  menjalankan  aktifitas pekerjaan  karena  terdapat  kandungan  kafein sehingga  tidak  mudah  ngantuk  dan  badan terasa  lebih  segar  (Putriastuti  &  Kustiyah, 2019).  Pada  penelitian  yang  dikakukan  oleh Kusnandar  Anggadiredja  dan  kawan-kawan tentang  potensi  ketergantungan  mahasiswa terhadap  konsumsi  minuman  berenergi  tahun 2021  didapatkan  bahwa  persentasi  jumlah mahasiswa  laki-laki  mengonsumsi  minuman berenergi  lebih  banyak  61%  dari  persentasi jumlah  perempuan  mengonsumsi  minuman berenergi  39%  dalam  bentuk  sediaan  botolan (Anggadiredja et.al, 2021).
Kafein  termasuk  senyawa  yang  bekerja dengan  cara  menstimulasi  sistem  saraf  pusat (Zarwinda & Sartika, 2020). Setelah dikonsumsi, kafein diserap dari darah ke dalam jaringan  tubuh  lainnya.  Konsentrasi  tinggi
kafein dalam plasma darah yaitu 15-120 menit setelah kafein dicerna di dalam tubuh (Jee et.al, 2020).  Cara  kerja  kafein  terhubung  dengan kerja adenosin, senyawa yang berfungsi untuk neurotransmiter  inhibitor  dan  berikatan dengan  reseptor  yang  berada  di  otak  (Tinggi et.al, 2023).
Pada analisis kafein ini dapat menggunakan metode  analisis  yang  dikembangkan  untuk menganalisis kadar kafein seperti spektrofotometri  (Supartiningsih et.al, 2020). Metode  spektrofotometri  dapat  digunakan untuk  penentuan  kandungan  kafein  dalam minuman  kemasan  karena  relatif  cepat, sederhana, dan relatif murah. Spektrofotometri dapat  di  berbagai  penelitian  dalam  bidang analisis suatu senyawa kimia terutama farmasi dalam  mengukur  absorbansi  sampel  pada panjang gelombang tertentu (Milek et.al, 2021). Pada penelitian yang dilakukan oleh Ina Inayah dan  kawan-kawan  tahun  2019  dilakukan penetapan  kadar  kafein  pada  beberapa minuman  berenergi  yang  beredar  di  kota Serang  dengan  metode  KCKT  dengan  panjang gelombang maksimum 275 nm pada spektrofotometri  UV.  Menggunakan  sampel kukubima  dan  menggunakan  pelarut  air, metanol,  dan  asam  asetat  glasial.  Pada penelitian terdahu menggunakan 5 sampel yang akan di teliti dan hasil dari penelitian sampel 1 sampai  4  tidak  memenuhi  syarat  batas maksimum  kafein  sedangkan  sampel  5 memenuhi  syarat  karena  kadar  kafein  masi dibawah  50  mg  menurut  SNI  01-7152-2006 batas  kafein  maksimum  dalam  minuman  dan makanan yaitu 150 mg/hari dan 50 mg/sajian (Gracia-Lor et.al, 2019).  Sedangkan  pada penelitian ini menganalisis kadar kafein dalam minuman berenergi dengan metode spektrofotometri  UV-Vis  dan  metode  KLT. Menggunakan tiga sampel dan melakukan tiga kali  replikasi  sehingga  memperoleh  data absorbansi  panjang  gelombang  maksimum kurva  baku  pada  panjang  gelombang maksimum 200 nm-400 nm (Inayah et.al, 2019). Sepekrofotometri  memberi  jumlah  data  pada komponen dalam membaca sampel. Parameter diukur  pada  tiap  sampel  dihasilkan  data univariate
(Risa Umami1, Bambang
Kusmanadhi1,  Dwi  Erwin  Kusbianto1,  2022) . Spektrofotometri  UV-Vis  menyerap  sinar tampak dari molekul dan menyebabkan eksitasi elektron  dari  tingkat  energi  dasar  ke  tingkat energi  yang  lebih  tinggi  (Hoang et.al, 2020). Analisis  menggunakan  KLT  adalah  pemisahan
komponen berdasarkan prinsip absorbansi dan partisi dientukan oleh fase gerak dan fase diam .Kelebihan  dari  KLT  densitometri  adalah penentuan kadar analit berdasarkan area noda pada  plat  KLT,  proses  pemisahan  fase  relatif cepat,  dan  volume  pelarut  yang  digunakan sedikit (Alen et.al , 2020).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian  analisis kadar  kafein  pada  minuman  kemasan  dengan menggunakan  metode  spektofotometri  dan KLT. Pada menelitian ini menggunakan metode spektrofotometri  dengan  sampel  larutan standar  yaitu  kafein  murni  dengan  pelarut akuades menggunakan  sampel  minuman kemasan  berupa  minuman  berenergi  yang terjual  bebas  di  pasar  Tamantirto,  kasihan, Bantul. Tujuan dilakukannya penelitian ini yaitu memperoleh  hasil  analisis  kadar  kafein  yang terdapat  dalam  minuman  kemasan  dengen batas kafein persachet yaitu 50 mg sesuai atau dari suatu perusahaan melakukan penambahan komposisi  dosis  kadar  kafein  dalam  minuman yang  dpat  merugikan  masyarakat  apabila dikonsumsi secara berlebihan.

## METODOLOGI
Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi minuman  kemasan  seperti  serbuk minuman  berenergi  merek  kuku  bima, ekstrajoss,  dan  hemaviton  yang  terjual  di Kelurahan Tamantirto, Kasihan Bantul
Yogyakarta.  Bahan  tambahan  lain  yaitu akuades,  metanol,  etanol  70%,  kalsium karbonat, kloroform, dan kafein murni.
Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu Spektrofotometer UV-Vis, lampu UV, gelas piala 100 mL, pemanas listrik, pipet volume 10 mL, pipet tetes, labu ukur 100 mL, 50 mL, dan 25 mL, mikropipet, rotari evaporator, plat silika gel GF 254, chamber, oven, corong, kaca arloji, kertas  saring,  timbangan  analitik,  batang pengaduk,  tabung  reaksi  dan  rak,  kuvet, gunting,  tisu,pensil,  penggaris,  label,  sarung tangan, dan masker.

## Prosedur
Preparasi sampel
Sampel serbuk minuman berenergi masing- masing sebanyak 1 g, larutkan dengan 150 mL akuades  panas  sambil  diaduk.  Larutan minuman  berenergi  disaring  dengan  kertas perkamen ke dalam erlemeyer. sebanyak 1,5 g serbuk  kalsium  karbonat  (CaCO 3 ),  dilarutkan
dalam  larutan  yang  telah  dibuat  aduk  hingga homogen.  Larutan  yang  Telah  dibuat dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  lalu ekstraksi  sebanyak  3  kali,  masing-masing sampel  ditambahkan  sebanyak  25  mL kloroform. Lapisan bawah diambil, lalu diektrak (fase  kloroform)  uapkan  dengan  rotari evaporator hingga kloroform menguap. Ekstrak kafein bebas pelarut di masukkan ke labu takar 100  mL,  diencerkan  dengan  akuades  sampai tanda batas dan diaduk hingga homogen larutan kemudian  dilabel  dan  kemudian  ditentukan kadar kafein.

## Pembuatan Larutan Baku Kafein 100 ppm
Timbang  serbuk  kafein  sebanyak  10  mg secara seksama dimasukkan ke dalam labu ukur 100  mL,  tambahkan  akuades  sampai  tanda batas, gojok larutan hingga homogen lalu diberi label larutan baku kafein 100 ppm.
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan  baku  kadar  kafein  100  ppm  pipet sebanyak 25 mL kemudian masukkan ke dalam labu  ukur  50  mL,  tambahkan  aquades  sampai tanda  batas  digojok  hingga  homogen  dan didapatkan  konsentrasi  4  ppm.  Kemudian penentuan  panjang  gelombang  maksimum  di ukur pada panjang gelombang 200-400 nm dan dicatat panjang gelombang.
Pembuatan Kurva Kalibrasi Dari  larutan  baku  kadar  kafein  100  ppm dibuat  larutan  konsentrasi  2  ppm,  4  ppm,  6 ppm, 8 ppm, dan 10 ppm. Pipetkan larutan baku kafein sebanyak 0,5 mL, 1 mL, 1,5 mL, 2 mL, dan 2,5  mL,  masukkan  ke  dalam  labu  ukur  25  mL tambahkan  aquades  sampai  tanda  batas  gojok hingga  homogen  lalu  diberi  label.  diukur serapan  masing-masing  larutan  pada  panjang gelombang maksimum.
Penentuan  Kadar  Senyawa  Kafein  Pada serbuk  Minuman  Kemasan  Berenergi Dengan Metode Spektrofotometri Larutan  baku  kadar  kafein  100  ppm  pipet sebanyak 2 mL kemudian masukkan ke dalam labu  ukur  50  mL,  tambahkan  aquades  sampai tanda  batas  digojok  hingga  homogen  dan didapatkan  konsentrasi  4  ppm.  Kemudian penentuan  panjang  gelombang  maksimum  di ukur pada panjang gelombang 200-400 nm dan dicatat panjang gelombang. dihitung menggunakan  rumus  berikut  (Mulyani et.al, 2019).
Kadar kafein =
konsentrasi  ( mg
L ) × vol (L) × Fp Berat sampel (g) Keterangan: Konsentrasi mg/L =  Hasil  dari  regresi linier (y= bx+a) Volume (L) =  Volume Pengenceran Fp =  Faktor Pengenceran
Analisis  Kualitatif  Menggunakan  Metode KLT
Pipet  sebanyak  10  mL  eluen  metanol  : akuades (1:1) sebagai fase gerak, masukkan ke dalam  chamber  dan  jenuhkan  dengan memasukkan  kertas  saring    ke  dalam  eluen selama  30  menit.  Kemudian  timbang  serbuk kafein murni sebagai larutan standar sebanyak 50 mg dan sampel serbuk minuman berenergi yang mengandung setara dengan 50 mg kafein, larutkan  dengan  etanol  70%  sebanyak  4  mL masukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan  diberi label. Setelah itu siapkan plat silika gel GF 254 dengan  ukuran  10  ×  5  cm  dan  panaskan  plat silika  gel  di  dalam  oven  dengan  suhu  105 °C selama 1 jam. Kemudian totolkan sampel yang sudah  dilarukan  pada  plat  KLT  dengan menggunakan  pipa  kapiler  dan  pentotolan dilakukan pada batas garis yang dibuat dengan jarak atas dan bawah dengan ukuran 1 cm pada plat  dengan  menggunakan  pensil.  Masukkan plat  silika  gel  GF  254  ke  dalam  chamber  yang berisi eluen tunggu hingga pelarut naik ke atas sampai  tanda  garis  angkat  plat  KLT  dari chamber  dan  keringkan  selanjutnya  baca bercak noda dimasukkan ke dalam sinar UV 254 nm dan hitung nilai Rf dengan rumus (Savitri & Megantara, 2019):

## Rf = Jarak yang ditempuh analit Jarak yang ditempuh eluen

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Panjang gelombang maksimum
Gambar  2  menunjukkan  kurva  panjang gelombang  maksimum  yang  didapatkan  yaitu 272,55  nm.  Panjang  gelombang  yang  didapat peneliti  berbeda  dengan  panjang  gelombang teori.  Panjang  gelombang  maksimum  teoritis yaitu 273 nm (Suaniti et.al, 2022).
Gambar  1. Panjang  gelombang  maksimum kafein
Senyawa  kafein  dapat  ditentukan  kadar dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis apabila memiliki gugus kromofor dan autokrom (Misto  et.al,  2021).  Pada  struktur  senyawa kafein  terdapa  gugus  kromofor  yang  dapat menyerap  radiasi  UV  pada  spektrofotometri UV-Vis  dan  gugus  autokrom  yang  dapat menyerap radiasi UV jika terikat dengan gugus kromofor  (Abriyani  et.al,  2022).  Pada penyerapan  radiasi  Blanko  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  akuades.  Panjang gelombang maksimum menggunakan konsentrasi 50 ppm.
Gambar 2. Kurva Kalibrasi Kafein
Pada  Gambar  3  menunjukkan  linieritas kurva  kalibrasi  larutan  kafein  yang  telah diencerkan dari larutan 100 ppm. Larutan 100 ppm dibuat konsentrasi 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, dan 10 ppm. Dengan pemipetan 0,5 mL, 1 mL, 1,5 mL, 2 mL, dan 2,5 mL. Pengukuran kurva kalibrasi  digunakan  untuk  mendapatkan  hasil nilai  regresi  linearitas.  Nilai  linearitas  yang didapatkan  yaitu  y=  0.0381x  +  0.3285  dengan persamaan  korelasi  r 2 =  0.9389  nilai  linearitas yang  didapatkan  akan  digunakan  untuk
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 200 250 300 350 Ab so rb ansi Panjang Gelombang (nm) 272,55 nm y = 0,0381x + 0,3285 R² = 0,9389 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 2,00 4,00 6,00 8,00 Ab so rb ansi Konsentrasi (ppm)
menghitung kadar kafein pada sampel. Semakin tinggi  konsenrasi  maka  semakin  tinggi  nilai absorbansi  yang  didapatkan  (Aryadi et.al, 2020).  Berikut  adalah  nilai  konsentrasi  dan absorbansi yang di dapatkan dapa dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Hasil Penentuan Kurva Kalibrasi Konsentrasi (ppm) Absorbansi Nilai Regresi 2 0.434 Y = 0.0381x + 0.3285 R 2 = 0.9389 4 0.443 6 0.538 8 0.66 10 0.703
Hasil dari sampel serbuk minuman kemasan berenergi  yang  dianalisis  dengan  metode spektrofotometri UV-Vis terdapat pada Tabel 2. Dari Tabel 2 dapat dilihat hasil nilai konsentrasi didapat dari perhitungan yang didapat dari nilai persamaan  linearitas.  Dari  nilai  konsentrasi yang didapat didapatkan nilai rata-rata sampel A 1.5523, sampel sampel B 1.0360, dan sampel C  1.9286.  Table  3  menunjukakn  kadar  kafein yang  terdapat  pada  sampel  sebuk  minuman berenergi.
Tabel  1 . Hasil  Analisis  Sampel  Minuman Berenergi Sampel  Rep. Abs. Kons. (ppm) Rata- rata S.D. A I 0.268 1.587 1.5523 0.0324 II 0.269 1.561 III 0.271 1.509 B I 0.290 1.010 1.0360 0.0212 II 0.289 1.036 III 0.288 1.062 C I 0.256 1.902 1.9286 0.0216 II 0.255 1.929 III 0.254 1.955
Penetuan  kadar  kafein  dilakukan  proses ekstrasi  dengan  dilakukan  preparasi  sampel. Preparasi  sampel  adalah  pemisahan  suatu senyawa  dengan  senyawa  yang  lain.  Dalam penelitian  ini  dilakukan  preparasi  unutk memisahkan  senyawa  kafein  dengan  senyawa lainnya (Latunra et.al, 2021). Preparasi sampel pada  penelitian  ini  menggunakan  CaCO 3. Berfungsi  sebagai  pemutus  ikatan  kafein dengan  senyawa  lain.  Kloroform  pelarut berfungsi  mengikat  senyawa  kafein  dalam minuman  berenergi.    Pemilihan  pelarut kloroform  digunakan  karena  kafein  mudah
larut  dalam  kloroform  dibandingkan  pelarut lain seperti dietil eter, karbon tetrakloroda, dan n-Heksana (Yusuf et.al, 2022).
Tabel 2 . Kadar Kafein Dalam Sampel Serbuk
Minuman Berenergi Sampel  Rep. Kadar Kafein (mg/g) Rata-Rata (mg/g) A I 49.59 48.51 II 48.78 III 47.15 B I 31.5625 32.38 II 32.375 III 33.1875 C I 59.43 59.93 II 60.28 III 60.09
Pada  penelitian  Rina  Widhyani  dkk  tahun 2021 tentang penetapan kadar kafein pada teh kering  kemasan  produk  industri  teh  di pekalongan  menggunakan  10  sampel  teh berdasarkan  hasil  yang  didapatkan  memenuhi syarat  karena  pada  sampel  teh  yang  diteliti kadar  kafein  yang  didapatkan  kurang  dari  50 mg/g  kemasan  yang  artinya  memnuhi  syarat standar batas kafein dalam minuman kemasan. Sedangkan pada penelitian ini dilihat dari Tabel 3 menunjukkan bahwa sampel serbuk minuman berenergi  merk  A  replikasi  pertama  49.59 mg/g,  replikasi  kedua  48.78  mg/g,  replikasi ketiga  47.15  mg/g,  dan  sampel  merk  B  untuk replikasi  pertama  31.5625  mg/g,  replikasi kedua 32.375 mg/g dan replikasi ketiga adalah 33.18  mg/g,  dan  kadar  ini  memenuhi  syarat karena  <50  mg/sajian.  Kadar  kafein  yang didapat pada sampel merk C  replikasi pertama yaitu 59.43 mg/g, replikasi kedua 60.28 mg/g, dan  replikasi  ketiga  adalah  60.09  mg/g  tidak memenuhi  syarat  batas  persajian/kemasan karena  >50  mg/sajian.  Syarat  batas  kafein dalam  minuman  kemasan  menurut  SNI  01- 7152-2006  batas  kafein  maksimum  dalam minuman dan makanan yaitu 150 mg/hari dan 50 mg/sajian (Widhyani et.al, 2021).

## Nilai Rf menggunakan metode KLT
Analisis  kualitatif  kafein  menggunakan minuman serbuk berenergi yang terjual  bebas di  pasar  Kelurahan  Tamantirto,  Kecamatan Kasihan,  Kabupaten  Bantul,  Daerah  Istimewa Yogyakarta  menggunakan  meode  KLT.  Hasil analisis menggunakan lampu UV 254 nm dapat dilihat dari bawah sinar lampu UV. Jarak eluen
yang  diukur  berjarak  8  cm  dan  jarak  analit untuk  standar  kafein  yaitu  5,6  cm  jarak  analit sampel A yang didapat yaitu 6 cm, analit sampel B 6 cm, dan sampel C 6 cm. berikut nilai Rf dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabe  3 . Hasil nilai  Rf  metode  KLT  Pada minuman Kemasan Berenergi Sampel Nilai Rf (cm) Hasil KLT Standar Kafein (SK) 0,7 Baik A 0,75 Baik B 0,75 Baik C 0,75 Baik
Uji  kualitatif  dengan  metode  Kromatografi Lapis  Tipis  (KLT)  mengunakan  eluen metanol:akuades  sebagai  fase  gerak  dengan perbandingan  1:1  dan  fase  diam  yang digunakan adalah  plat silika gel  GF 254.  Batas garis  atas  dan  bawah  berjarak  1  cm  dengan besar plat 10x5 cm. sebelum plat silika gel  GF 254  digunakan  dilakukan  pengovenan  dengan suhu  105 °C  selama 1 jam untuk aktivasi plat. Tujuan  dilakukan  pengaktivan  plat  KLT  untuk menghilangkan kelembapan dari plat. Kelembapan dapat mempengaruhi hasil dari uji KLT yang akan digunakan (Foudah et.al, 2022). Penjenuhan  camber  eluen  dilakukan  dengan memasukkan  kertas  saring  untuk  mengetahui apakah eluen dapat naik atau tidak. Penototolan sampel  dilakukan  sedikit  mungkin  agar  tidak melebar.  Penototolan  menggunakan  pipa kapiler dengan 4 (empat) totolan yaitu larutan standar kafein(SK), sampel A, B dan C.
Berdasarkan  Tabel  4,  bahwa  hasil  yang didapatkan hasil untuk standar kafein memiliki nilai 0.7 cm, sampel A 0.75, sampel B 0.75, dan sampel  C  0.75.  Nilai  Rf  yang  yang  baik  untuk deteksi dibawah sinar UV 254 yaitu antara 0.2- 0.8  karena  pada  nilai  <0,2  belum  terjadi kesetimbangan  antara  komponen  senyawa kafein yang diteliti dengan fase gerak sehingga fase  gerak  membentuk  noda  yang  kurang simetris.  Sedangkan  pada  nilai  Rf  >0,8  noda analit terganggu oleh penotolan plat/fase diam.

## KESIMPULAN
Kadar kafein yang didapatkan pada sampel A dan  sampel  B  masih  memenuhi  syarat  kadar kafein  yaitu  <50  mg/perkemasan.  Sedangkan
sampel  C  kadar  kafein  yang  didapatkan  pada penelitian > 50 mg/kemasan. Menurut SNI 01- 7152-2006  batas  kafein  maksimum  dalam minuman dan makanan yaitu 150 mg/hari. Jika sampel  serbuk  minuman  merk  C  dikonsumsi tiga kemasan perhari maka akan melebihi batas akan  menyebabkan  ketergantungan  dan berdampak buruk bagi tubuh.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada pihak Universitas Alma Ata karena telah memberi izin  kepada peneliti untuk melakukan penelitian.

## REFERENSI
Abriyani,  E.,  Putri,  N.  S.,  Rosidah,  R.  S.  N.,  & Ismanita,  S.  S.  (2022).  Analisis  Kafein Menggunakan  Metode  Uv-Vis:  Tinjauan Literatur. Jurnal  Pendidikan  &  Konseling ,
4 (6), 12732 – 12739. Alen, Y., & , Fitria Lavita Agresa, & Y. Y. (2020).
Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) Dan  Aktivitas  Antihiperurisemia  Ekstrak Rebung  Schizostachyum  Brachycladum Kurz  (Kurz)  Pada  Mencit  Putih  Jantan. Jurnal  Sains  Farmasi  &  Klinis, 3 (2),  146 –
152. Anggadiredja,  K.,  Putri,  T.  K.,  &  Damayanti,  S. (2021). Potensi Ketergantungan Mahasiswa Terhadap Konsumsi Minuman Berenergi. Jurnal Sains Keolahragaan Dan Kesehatan , 6 (1), 47 – 60. Aryadi, M.  I., Arfi, F., & Harahap, M.  R. (2020). Perbandingan  Kadar  Kafein  dalam  Kopi Robusta (Coffea canephora), Kopi Arabika (Coffes arabica) dan Kopi Liberika (Coffea liberica) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Amina , 2 (2), 64 – 70. BPOM  RI.  (2020). Keputusan  Kepala  Badan Pengawasan  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia Nomor HK.00.05.23.3644 tentang Ketentuan  Pokok  Pengawasan  Suplemen Makanan . 26.
Emma  Gracia-Lor,  Nikolaos  I.  Rousis,  E.  Z.
(2019).  Estimation  Of  Caffeine  Intake From  Analysis  Of  Caffeine  Metabolites  In Wastewater. Taylor & Francis , 45 (4), 674 – 691.
Foudah, A. I., Shakeel, F., Salkini, M. A., Alshehri, S.,  Ghoneim,  M.  M.,  &  Alam,  P.  (2022).  A Green High-Performance Thin-Layer Chromatography Method for the Determination  of  Caffeine  in  Commercial Energy Drinks and Formulations.
Materials , 15 (9), 2965-2976.
Hoang,  V.D.,  Thu,  H.T.T., Ha,  L.D.T.  &  Mai,  H.N. (2020). RP-HPLC and UV Spectrophotometric Analysis of Paracetamol,  Ibuprofen,  and  Caffeine  in Solid  Pharmaceutical  Dosage  Forms  by Derivative, Fourier, and Wavelet Transforms: A Comparison Study. Journal of  Analytical  Methods  in  Chemistry ,
2020 (3), 1-13.
Inayah,  I.,  Hadisoebroto,  G.,  &  Kashuri,  M. (2019). Optimasi Metode Penetapan Kadar Kafein  Pada  Beberapa  Serbuk  Minuman Energi Yang Beredar Di Kota Serang. Jurnal Sabdariffarma , 1 (1), 22 – 27. Jee, H. J., Lee, S. G., Bormate,  K. J., & Jung, Y. S. (2020). Effect of caffeine consumption on the  risk  for  neurological  and  psychiatric disorders:  Sex  differences  in  human. Nutrients , 12 (10), 1 – 20.
Latunra, A. I., Johannes, E., Mulihardianti, B., & Sumule,  O.  (2021).  Analisis  kandungan kafein  kopi  (Coffea  arabica)  pada  tingkat kematangan berbeda menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Jurnal Ilmu Dan
Alama , 12 (1), 45 – 50. Milek,  M.,  Mlodecki,  L.  &  Dzugan,  M.  (2021). Caffeine Content And Antioxidant Activity Of Various  Brews  Of  Specialty  Grade  Coffee . Acta  Scientiarum  Polonorum  Technologia Alimentaria , 20(2), 179-188.
Misto,  Alawiyah,  K.,  Rohman,  L.,  Supriyadi, Mutmainnah,  &  Purwandari,  E.  (2021).
Spectrophotometric analysis of caffeine in local  product  of  Arabica:  observed  at different  roasted  temperatures. IOP
Conference  Series:  Materials  Science  and Engineering , 1173 (1), 012012. Mulyani, E., Tri, E., Cahyati, S., & Bengkulu, A. F.
A. (2019). Analisis Kadar Kafein Pada Kopi
Bubuk  Di  Kota  Bengkulu  Menggunakan Spektrofotometri Ultraviolet . 5 (1), 59 – 64. Novita,  L.,  &  Aritonang,  B.  (2019).  Penetapan kadar  kafein  pada  minuman  berenergi sediaan  sachet  yang  beredar  di  sekitar pasar petisah medan. Jurnal Kimia Saintek Dan Pendidikan , I (1), 37 – 42. Putriastuti, R., & Kustiyah, L. (20019). Persepsi Konsumsi  Dan  Preferensi  Minuman Berenergi. Jurnal  Gizi  Dan  Pangan , 2 (3), 13 – 25. Risa  Umami1,  Bambang  Kusmanadhi1,  Dwi Erwin  Kusbianto1,  H.  M.  S.  (2022). Pengaruh Temperatur Dan Lama Penyangraian Terhadap Kandungan Kafein Dan  Sifat  Fisik  Kopi  Robusta  Asal
Banjarsengon Jember. 1 (2), 86 – 93. Riyanti,  E.,  Silviana,  E.,  &  Santika,  M.  (2020). Analisis  Kandungan  Kafein  Pada  Kopi Seduhan Warung Kopi Di Kota Banda Aceh. Lantanida Journal , 8 (1), 1.
Rodak,  K.,  Kokot,  I.,  Kryla,  A.,  &  Kratz,  E.  M. (2022). The Examination of the Influence of Caffeinated  Coffee  Consumption  on  the Concentrations  of  Serum  Prolactin  and Selected  Parameters  of  the  Oxidative- Antioxidant  Balance  in  Young  Adults :  A Preliminary  Report . Oxidative  Medicine  & Cellular Longevity, 2022 (12), 1-17. Sabarni,  S.,  &  Nurhayati,  N.  (2019).  Analisis Kadar Kafein Dalam Minuman Kopi Khop Aceh  Dengan  Metode  Spektroskopik. Lantanida Journal , 6 (2), 141. Savitri, A., & Megantara, S. (2019). Metode KLT- Densitometri  Sebagai  Penetapan  Kadar Bahan Aktif Sediaan Farmasi. Farmaka , 17 ,
455 – 463. Suaniti, N. M., Saraswati, A. A. S. D., & Putra, A. A. B.  (2022).  Analisis  Kafein  Dalam  Kopi Arabika (Coffea Arabica L.) Pada Berbagai Suhu  Penyangraian  Dengan  Metode Spektrofotometer  Uv-Vis  Dan  Gc-Ms. Jurnal Kimia , 16 (1), 115.
Supartiningsih, S., Zuhairiah, Z., Thaib, C. M., & Bahagia,  N.  (2020).  Penentuan  Kadar Kafein  Dalam  Kopi  Instan  Secara Spektrofotometri Ultraviolet. Jurnal Farmanesia , 7 (2), 50 – 54. https://doi.org/10.51544/jf.v7i2.2778
Tinggi, S., Mierza, V., Aenah, N., Fransiska, A. N.,
Malik, L. H., Wulanbirru, P., Karawang, U. S., Timur,  T.,  &  Jawa,  K.  (2023). Literature review : analisis kadar kafein menggunakan metode spektrofotometri uv-vis . 12 (1), 21 – 26.
Tsai, C. F., & Jioe, I. P. J. (2021). The analysis of chlorogenic acid and caffeine content and its  correlation  with  coffee  bean  color under  different  roasting  degree  and sources  of  coffee  (Coffea  arabica  typica). Processes , 9 (11).
Widhyani, R., Rahmasari, K. S., Kristiyanti, R., & Slamet.  (2021).  Penetapan  Kadar  Kafein Pada  Teh  Kering  Kemasan  Produksi Industri  Teh  di  Pekalongan. Jurnal  Ilmu Farmasi , 12 (1), 29 – 35. Yusuf,  Y.  K.,  Permatasari,  D.  A.  I.,  &  Weri,  V. (2022). Kopi Arabica Dari Kabupaten Tegal Dengan  Metode  Spektrofotometri  Uv-Vis .
2 (1), 49 – 60.
Zarwinda,  I.,  &  Sartika,  D.  (2020).  Pengaruh
Suhu  Dan  Waktu  Ekstraksi  Terhadap Kafein  Dalam  Kopi. Lantanida  Journal , 6 (2),103-202.