JBE 6 (2) (2021) 113-121

## BIO-EDU: Jurnal Pendidikan Biologi
https://jurnal.unimor.ac.id/JBE/index
Etty Handayani 1,* , Muhammad Burhanuddin Irsyadi 1,2 , Irfan Aris 1 , Riffa Leshia Muhvi Nur Alawiyah 1 , Nandini Ayuningtias 3 , Fany Permatasari 1 , Innaka Ageng Rineksane 1
1 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Muhammadiyah Yogyakarta Jl. Brawijaya, Tamantirto, Kasihan, Bantul, 55676, D. I. Yogyakarta,
Indonesia
2 Departemen PemuliaanTanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada Jl. Flora, Bulaksumur, Depok, Sleman, 55281, D. I. Yogyakarta, Indonesi
3 Departemen Ilmu Hama Tanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada Jl. Flora, Bulaksumur, Depok, Sleman, 55281, D. I. Yogyakarta, Indonesia
Email: etty@umy.ac.id
DOI: https://doi.org/10.32938/jbe.v6i2.1179

## Abstrak
Kepel  ( Stelechocarpus  burahol [Bl]  Hook  F.  &  Th.)  merupakan  buah  asli  Indonesia  berbiji  banyak dengan  ukuran  yang  besar.  Bagian  buah  yang  dapat  dikonsumsi  hanya  49%  dengan  bagian  lain  berupa biji.  Perbanyakan  kepel  secara  konvensional  masih  sulit  dilakukan  dengan  hasil  yang  rendah.  Kultur endosperma  secara  in  vitro  adalah  metode  perbanyakan  yang  tepat  untuk  memperoleh  tanaman  triploid dengan buah tanpa biji.  Sterilisasi merupakan tahap awal yang menjadi kunci keberhasilan kultur in vitro. Hingga kini belum dilaporkan metode sterilisasi  endosperma kepel secara in vitro yang tepat. Penelitian ini  bertujuan  untuk  memperoleh  metode  sterilisasi  eksplan  yang  tepat  untuk  kultur  endosperma  kepel. Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  pada  bulan  September  2018  –  Januari  2019  di  Laboratorium  Kultur  In Vitro,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Muhammadiyah  Yogyakarta.  Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimen  disusun  dalam  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  faktor  tunggal  dengan  perlakuan  berbagai konsentrasi  bahan  sterilan  yang  terbagi  8  aras:  H 2 O 2 (3%10’,  3%15’,  5%10’,  5%15’)  NaOCl  (5%5’, 5%10’, 10%5’, 10%10’) dengan 3 kali ulangan dan 3  sempel. Parameter yang diamati yaitu: persentase kontaminasi,  browning,  hidup,  vitrifikasi,  jenis  kontaminasi,  waktu  kontaminasi  dan  waktu  browning. Hasil  penelitian  diperoleh  bahwa  perlakuan  NaOCl  10%  selama  10  menit  merupakan  metode  sterilisasi paling  tepat  dengan  presentase  ekplan  hidup  44,44%,  persentase  eksplan  vitrifikasi  66,66%,  serta  tidak terjadi kontaminasi dan browning.
Kata Kunci: Clorox; Endospermaa; Hidrogen peroxida, Kepel; Sterilisasi

## Abstract
Kepel (Stelechocarpus burahol [Bl] Hook F. & Th.) is an Indonesian original fruit with large seeds and only  49%  of  the  fruit  can  be  consumed.  Conventional  propagation  of  kepel  is  still  difficult  with  low yields.  Endosperma  culture  in  vitro  is  an  appropriate  propagation  method  for  obtaining  triploid  plants with seedless fruit. Furthermore, sterilization is an early stage to successful in vitro culture. Until now, the appropriate method of sterilization of endosperm kepel in vitro has not been reported. This study aims to obtain the appropriate sterilization method for endosperm culture kepel. This research was conducted in September 2018 - January 2019 at the Laboratory of In Vitro Culture, Faculty of Agriculture, Universitas Muhammadiyah  Yogyakarta.  This  study  used  an  experimental  method  arranged  in  a  single  factor

## Optimasi Sterilisasi Endosperma Kepel (Stelecthocarpus burahol [Bl]
Hook F. & Th) Secara In Vitro
Completely Randomized Design (CRD) with the treatment of various concentrations of sterilant divided into  8  levels:  H 2 O 2 (3%10  ',  3%15',  5%10  ',  5%15')  NaOCl  (5%5  ',  5%10',  10%5  ',  10%10')  with  3 repetitions  and  3  samples.  The  parameters  observed  were:  percentage  of  contamination,  browning,  life and vitrification, type of contamination, time of contamination and time of browning. The results showed that concentration of NaOCl 10% for 10 minutes was the most appropriate sterilization method with a live explant  percentage  of  44.44%,  percentage  of  66.66%  vitrified  explants,  and  not  contamination  and browning.
Keywords: Clorox; Endosperm; Hydrogen peroxide; Kepel; Sterilization

## PENDAHULUAN
Kepel  ( Stelechocarpus  burahol [Bl]  Hook  F.  &  Th)  atau  burahol  merupakan salah  satu  tanaman  buah  asli  Indonesia.  Kepel  menjadi  tanaman  identitas  Daerah Istimewa  Yogyakarta  pada  tahun  1992  (Batubara  dkk.,  2010).  Buah  kepel  berbentuk bulat  oval,  berukuran  sebesar  genggaman  tangan  dengan  warna  kecoklatan.  Buah  dan daun  kepel  mengandung  antioksidan  dan  flavonoid  cukup  tinggi.  Buah  kepel  dapat dimanfaatkan untuk menghilangkan bau mulut,  mengharumkan bau mulut  dan sebagai deodoran  oral.  Selain  itu,  kepel  berkhasiat  sebagai  pencegah  kanker,  radang  ginjal, peluruh  air  kencing  dan  penurun  kadar  kolestrol  (Elfasyari,  2020;  Fiani  dan  Yuliah, 2018).
Pada  saat  ini,  tanaman  kepel  mengalami  kelangkaan,  sehingga  keberadaannya sulit  ditemukan.  Apabila  kondisi  ini  dibiarkan  tanaman  kepel  akan  mengalami kepunahan. Kondisi terebut dapat disebabkan karena pertumbuhan tanaman lambat dan sulit  dibudidayakan  secara  konvensional.  Selain  itu,  kelangkaan  disebabkan  oleh masyarakat  yang  enggan  untuk  menanam  karena  buah  kepel  memiliki  nilai  ekonomis yang rendah (Handayani dkk., 2020; Haryjanto, 2012). Hal ini dikarenakan bagian buah kepel yang dapat dikomsumsi hanya 49%, sementara bagian lainnya hanya berupa biji. Biji  kepel  berukuran  besar  dan  melintang  dalam  buah  (Tisnadjaja  dkk.,  2006).  Untuk meningkatkan nilai ekonimis kepel, dapat dilakukan pemuliaan tanaman melalui kultur endosperma untuk memperoleh buah tanpa biji.
Endosperma  merupakan  massa  sel  parenkim  yang  homogen  tanpa  jaringan pembuluh dan pembelahan yang berada di dalam biji yang berfungsi sebagai cadangan makanan embrio. Kultur endosperma  yaitu metode perbanyakan secara in vitro dengan menggunakan  eksplan  endosperma  dari  biji  untuk  mendapatkan  tanaman  triploid  dan buah  tanpa  biji  (Sukamto  2010).  Metode  ini  dilakukan  secara  in  vitro  dengan lingkungan  terkendali  dalam  kondisi  yang  aseptis.  Kelebihan  perbanyakan  secara  in vitro  yaitu  memperoleh  bibit  dalam  jumlah  yang  banyak  dengan  waktu  relative  cepat. Selain itu bibit yang dihasilkan bebas dari serangan hama atau penyakit (Irsyadi, 2021). Faktor keberhasilan dalam kultur endosperma secara in vitro yaitu pada tahap sterilisasi. Sterilisasi merupakan tahap pembersihan eksplan dari kotoran, hama dan mikroba yang masih  menempel  pada  eksplan.  Tahapan  ini  pada  umumnya  dilakukan  dengan pencucian  ekplan  pada  air  mengalir  serta  penambahan  bahan  sterilan  seperti  deterjen, bakterisida,  fungisida,  Sodium  hipoklorit  (NaOCl)  dan  Hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ). Kondisi eksplan tidak steril dapat mengakibatkan kontaminasi yang dapat menghambat pertumbuhan  eksplan.  Selain  itu,  sterilisasi  kurang  tepat  dapat  memicu  muncul browning pada permukaan eksplan (Suratman dan Mulyani, 2013).
Hingga kini, metode sterilisasi eksplan endosperma kepel optimal belum pernah dilaporkan.  Maka  perlu  dilakukan  pengujian  terhadap  bahan  sterilan  untuk  sterilisasi endosperma kepel. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh metode sterilisasi ekplan
endoperm kepel yang tepat pada kultur endosperma secara in vitro.

## METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini telah terlaksana pada bulan September 2018 hingga Januari 2019 di  Laboratorium  Kultur  In  Vitro,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Muhammadiyah Yogyakarta. Jl. Brawijaya, Tamantirto, Kasihan, Bantul, D. I. Yogyakarta, Indonesia. Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  yaitu  biji  kepel.  aquades,  larutan  deterjen  2  g/l,  larutan bakterisida 2 g/l dan fungisida 2 g/l, alkohol 70%, NaOCl, H 2 O 2 , Media Murashige and Skoog + 2,4 D 2 ppm + BAP  0,5 ppm.  Alat  yang digunakan  yaitu:  autoclave, laminar air  flow,  scalpel,  pinset,  petridisk,  erlenmeyer,  botol  kultur,  gelas  ukur,  timbangan analitik dan lampu UV serta bunsen.

## Prosedur Penelitian
Penelitian  ini  telah  dilakukan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) faktor tunggal dengan perlakuan berbagai konsentrasi bahan sterilan yang terdiri dari 8 aras: H 2 O 2 (3% 10’, 3% 15’, 5% 10’ dan 5% 15’), NaOCl (5% 5’, 5% 10’, 10% 5’ dan 10%  10’),  setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  3  kali  dan  setiap  ulangan  terdiri  dari  3 sempel.
Pra  sterilisasi:  Buah  kepel  yang  telah  masak  diperoleh  dari  sekitar  Yogyakarta dicuci  menggunakan  air  mengalir.  Setelah  itu  biji  kepel  dipisahkan  dari    daging  buah. Biji  kemudian  dicuci  hingga  bersih  menggunakan  air  mengalir.  Selanjutnya  biji dilakukan Pra-sterilisasi dengan direndam dalam larutan deterjen 2 g/l selama 10 menit. Setela  itu,  biji  dibilas  menggunakan  aquades  3  kali  kemudian  direndam  dalam  larutan bakterisida dan fungisida masing-masing 2 g/l selama 60 menit sambil digojok. Setelah itu biji dibilas menggunakan aquades 3 kali di dalam laminar air flow. Setelah itu, biji dicelupkan ke dalam alkohol 70% selama 3 detik. Selanjutnya biji ditirskan diatas tisu steril kemudian biji dibelah menggunakan scalpel untuk mengambil endosperma kepel.
Sterilisasi: endosperma kepel disterilisasi sesuai dengan perlakuan masing-masing menggunakan H 2 O 2 3% selama 10 menit, 3% selama 15 menit, 5% selama 10 menit dan 5% selama 15 menit,  NaOCl 5% selama 5 menit,  5% selama 10 menit,  10% selama 5 menit dan 10% selama 10 menit. Setelah itu endosperma dibilas menggunakan aquades 3  kali  kemudian  dipotong  persegi  dalam  larutan  antiseptik.  Selanjutnya  endosperma diinokulasi pada media Murashige and Skoog + 2,4 D 2 ppm + BAP 0,5 ppm. Eksplan disimpan di ruang inkubasi selama 60 hari pada suhu 23 o C. Parameter yang diamati antara lain: persentase kontaminasi, persentase browning, persentase eksplan hidup, persentase vitrifikasi, jenis kontamin, waktu kontaminasi dan waktu browning. Data persentase dianalisis menggunakan sidik ragam (ANOVA) pada software  R  studio,  apabila  terdapat  beda  nyata  antar  perlakuan  dilakukan  uji  lanjut DMRT dengan taraf α = 5%. Sementara data pada parameter jenis kontaminan, waktu kontaminasi dan waktu browning dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persentase Kontaminasi
Hasil analisis sidik ragam (ANOVA) yang signifikan menunjukan bahwa berbagai konsentasi H 2 O 2 dan NaOCl berpengaruh nyata terhadap persentase kontaminasi (Tabel 1). Kontaminasi hanya terjadi pada 2 pelakuan yaitu H 2 O 2 3% selama 10 menit sebesar 100%  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  H 2 O 2 3%  selama  15  menit  sebesar  88,88%,
sementa pada perlakuan lainnya tidak terjadi kontaminasi. Perlakuan konsentrasi NaOCl 5%,  10%  dan  H 2 O 2 5%  dapat  menekan  kontaminasi  pada  eksplan.  Keberadaan endosperma  di  dalam  biji  kondisinya  steril  sehingga  tidak  terdapat  mikroba  endogen. Kontaminasi  dapat  disebabkan  karena  kondisi  eksplan  atau  media  yang  kurang  steril. Nasution  (2013)  menjelaskan  bahwa  kontaminan  dapat  berasal  dari  sumber  eksplan, peralatan  yang  digunakan,  lingkungan  dan  tangan  yang  kurang  steril  saat  di  dalam laminar air flow.
NaOCl merupakan disinfektan yang bersifat hipertonis yang dapat mengakibatkan mikroorganisme  mengalami  hidrolisis  secara  osmosis  (Permatasari  2013).  Singh  dkk., (2011)  menambahkan  bahwa  NaOCl  merupakan  desinfektan  derajat  tinggi  yang  aktif mengendalikan  mikroba.  Hasil  penelitian  Rineksane  dkk.,  (2012)  bahwa  sterilisasi  biji Manggis Gracinea  mangostana L.  menggunakan  NaOCl  5%  mampu  menekan  tingkat kontaminasi sebanyak 9,75%. Srivastava dkk., (2010) melaporkan bahwa H 2 O 2 mampu menggumpalkan protein mikroba sehingga akan kehilangan fungsinya. Hasil penelitian Farooq  dkk.,  (2002)  bahwa penggunaan  H 2 O 2 12% selama 15 menit  mampu  mencegah kontaminsi  pada  sterilisasi  permukaan  pada  biji  srikaya Annona  Squamosa sebanyak 50%.  Selain  itu,  Martiansyah  dkk.,  (2013)  melaporkan  bahwa  penggunaan  konsentrasi H 2 O 2 yang umum digunakan untuk sterilisasi permukaan eksplan berkisar 3-20%. Akan tetapi,  pada  konsentrasi  3%  belum  mampu  mengendalikan  kontaminasi  diduga  waktu yang  dibutuhkan  terlalu  cepat  dibanding  perlakuan  lainnya  karena  jumlah  konsentrasi sedikit  memerlukan  waktu  lebih  lama  untuk  mengendalikan  mikroba  dalam  jaringan tanaman.
Table 1. Pengaruh Konsentrasi NaOCl dan H 2 O 2 Terhadap Sterilisasi Endosperma Kepel Perlakuan Persentase Kontaminasi (%) Jenis Kontaminan Waktu Kontaminasi (HST) H 2 O 2 3% 10 menit 100 a Bakteri 11 H 2 O 2 3% 15 menit 88,89 a Bakteri 8,6 H 2 O 2 5% 10 menit 0 b - - H 2 O 2 5% 15 menit 0 b - - NaOCl 5% 5 menit 0 b - - NaOCl 5% 10 menit 0 b - - NaOCl 10% 5 menit 0 b - - NaOCl 10% 10 menit 0 b - - CV % 28,81 - - Keterangan:  Angka-angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  tidak  berbeda  nyata antar  perlakuan  pada  uji  lanjut  DMRT  dengan  taraf  α  =  5%,  HST  =  hari setelah tanam.

## Jenis dan Waktu Kontaminasi
Berdasarkan pada tabel  1, dapat  diketahui bahwa jenis kontaminan  yang muncul pada perlakuan H 2 O 2 3% 10 menit dan 15 menit berupa bakteri pada hari ke 11 dan 8,6 setelah tanam. NaOCl sebagai bahan sterilan mampu menghilangkan dan membersihkan sumber  kontaminan  berupa  bakteri  atau  jamur  pada  eksplan.  Kontaminasi  bakteri ditandai  dengan  munculnya  lendir  putih  kekuningan  yang  menyelimuti  permukaan eksplan hingga media. Semakin lama waktu  yang digunakan maka seluruh permukaan eksplan  dan  media  akan  tertutupi  oleh  bakteri.  Nasution,  (2013)  melaporkan  bahwa
bakteri  mengandung glycocalyx yang  mampu  untuk  menetralisir  senyawa  antibakteri untuk melindungi diri. Oleh karena itu, pada konsentrasi sterilant rendah, diduga bakteri dapat menetralisir untuk bertahan hidup.
Rismayani  dan  Hamzah  (2010)  melaporkan  bahwa  kontaminasi  pada  eksplan dapat menghambat pertumbuhan hingga dapat mengakibatkan kematian eksplan. Hal ini dikarenakan terjadi persaingan penyerapan nutrisi media antara eksplan dengan bakteri atau  jamur.  Lama  waktu  kontaminasi  lebih  dari  seminggu  setelah  tanam  diduga disebabkan  oleh  mikroba  endogen  yang  tertinggal  dalam  eksplan,  sehingga membutuhkan  waktu  lebih  lama  untuk  muncul.  Shofiyani  dan  Damajanti  (2017) melaporkan bahwa kontaminasi internal yang disebabkan mikroba endogen terjadi lebih dari  10  hari  setelah  tanam,  sedangkan  kontaminasi  eksternal  (eksogen)  dapat  terjadi beberapa hari setelah tanaman.

## Persentase Hidup
Berdasarkan hasil analisis sidik ragam (ANOVA) tidak signifikan maka perlakuan berbagai  konsentrasi  NaOCl  dan  H 2 O 2 tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  persentase eksplan hidup (Tabel 2). Perolehan persentase eksplan hidup cenderung lebih baik pada perlakuan  NaOCl  10%  selama  10  menit  sebesar  44,44%  dibanding  dengan  perlakuan lainnya.  Pada  perlakuan  H 2 O 2 3%  persentase  eksplan  hidup  0%  karena  mengalami kontaminasi  dan  browning.  Tingkat  persentase  hidup  rendah  dikarenakan  banyaknya eksplan  yang  mengalami  vitrifikasi.    Ekplan  hidup  ditandai  dengan  perkembangan eksplan  yang  tidak  mengalami  kontaminasi  dan  browning.  Kultur  endosperma  tanpa penyertaan  embrio  sulit  untuk  pembentukan  kalus.  Hasil  penelitian  Sukamto  (2010) menyatakan  bahwa  kultur  endosperma  alpukad Persea  americana Mill.  tanpa penyertaan  embrio  tidak  terjadi  pertumbuhan  kalus,  tetapi  eksplan  endosperma  yang disertai  embrio  memperoleh  persentase  terbentuk  kalus  mencapai  44,85%  pada  15 minggu setelah tanam.
Umur  endosperma  muda  pada  fase  meristemik  merespon  baik  bila  dikulturkan. Umur endosperma tua juga dapat digunakan untuk kultur endosperma (Tao dkk., 1996). Menurut  Nair  dkk.,  (1986)  bahwa  penggunaan  endosperma  srikaya Annona  squamosa Linn  tua  dapat  digunakan  untuk  kultur  endosperma.  Eksplan  yang  tidak  dilakukan sterilisasi  lebih  lanjut  dapat  menurunkan  hasil  kultur  endosperma.  Hasil  penelitian Prabakti  dkk.,  (2017)  sterilisasi  endosperma  kluwek Pangium  edule Reinw  hanya menggunakan  aquades  steril  ditambah  antiseptik  selama  3  menit  diperoleh  persentase berkalus  hanya  mencapai  18,8%.  Kundu  dkk.,  (2017)  melaporkan  bahwa  penggunaan bahan  sterilant  NaOCl  dengan  konsentrasi  5  -  10%  selama  5  –  10  menit  dapat digunakan untuk sterilisasi permukaan biji.

## Persentase Vitrifikasi
Berdasarkan  hasil  analisis  sidik  ragam  (ANOVA)  yang  signifikan  menunjukkan bahwa  perlakuan  berbagai  konsentrasi  NaOCl  dan  H 2 O 2 berpengaruh  nyata  terhadap persentase  eksplan  vitrifikasi  (Tabel  2).  Perolehan  persentase  vitrifikasi  tertinggi  pada perlakuan  NaOCl  10%  selama  10  menit  sebesar  66,66%  yang  berbeda  nyata  dengan perlakuan  lainnya.  Vitrifikasi  ditandai  dengan  kondisi  eksplan  staknasi  yang  tidak mengalami  pertumbuhan dan berwarna putih bening. Kondisi ini apabila berlakngsung lama akan mengalami kematian. Menurut Karyanti dan Ida (2013) vitrifikasi disebabkan oleh kerusakan sel  secara fisiologis pada eksplan karena kandungan air dalam medium yang tinggi dan defisiensi klorofil. Kandungan air terlalu tinggi menyebabkan terjadinya
difusi  air  ke  dalam  sel  eksplan.  Selain  itu,  vitrifikasi  dipengaruhi  oleh  kandungan sitokinin pada medium dan uap air yang berlebihan hasil respirasi di dalam botol kultur.

## Persentase Browning
Berdasarkan  hasil  analisis  sidik  ragam  (ANOVA)  yang  signifikan  menunjukkan bahwa  perlakuan  berbagai  konsentrasi  NaOCl  dan  H 2 O 2 berpengaruh  nyata  terhadap persentase  eksplan  browning.  Konsentrasi  NaOCl  10%  10  menit  dan  H 2 O 2 3%  selama 10 menit merupakan perlakuan paling baik dengan ditandai tidak mengalami browning, tetapi tidak bebeda nyata dengan perlakuan sterilisasi H 2 O 2 3% selama 15 menit dengan perolehan  sebesar  11,11%.    Perolehan  persentase  browning  cenderung  tertinggi  pada perlakuan  NaOCl  5%  selama  5  menit  sebesar  88,89%.  Browning  ditandai  perubahan warna  eksplan  menjadi  kecoklatan  di  permukaan  eksplan.  Hal  ini  dapat  menghambat pertumbuhan  hingga  mengakibatkan  kematian  eksplan.  Browning  dapat  disebabkan adanya  luka  pada  eksplan  yang  mengakibatkan  keluarnya  senyawa  fenolik.  Senyawa yang  keluar  mengaktifkan  enzim polifenol  oksidase (PPO)  yang  teroksidasi  oleh oksigen menyebabkan pencoklatan atau browning pada eksplan.
Hatmi dan Widyayanti (2014) melaporkan bahwa biji kepel mengandung senyawa saponin, flavoid, polifenol dan alkaloid. Senyawa Polifenol tersebut yang menyebabkan browning.  Penggunaan  bahan  eksplan  yang  telah  masak  dapat  memicu  terjadinya browning karena kandungan polifenol semakin meningkat. Eksplan yang telah tua akan mengeluarkan  hasil  oksidasi  yang  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  eksplan  muda. Hasil  penelitian  Setiani  dkk.  (2018)  bahwa  sterilisasi  eksplan  daun  sukun Artocarpus altilis menggunakan NaOCl 5,25% selama 10 menit mengakibatkan browning mencapai 90%.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Yang  (2009)  bahwa  clorox  dan  etanol  dengan konsentrasi  yang  cukup  tinggi  dapat  merusak  jaringan  eksplan  sehingga  dapat menyebabkan kerusakan jaringan dan terjadinya browning.
Table 2. Pengaruh NaOCl dan H 2 O 2 Terhadap Persentase Hidup, Vitrifikasi, Browning dan Waktu Browning Perlakuan Persentase Eksplan Waktu Muncul Browning (HST) Hidup (%) Vitrifikasi (%) Browning (%) H 2 O 2 3% 10 menit 0 a 0 b 0 c - H 2 O 2 3% 15 menit 0 a 0 b 11,11 bc 5 H 2 O 2 5% 10 menit 33,33 a 22,22 b 44,45 ab 5,3 H 2 O 2 5% 15 menit 22,22 a 11,11 b 66,67 a 3 NaOCl 5% 5 menit 11,11 a 0 b 88,89 a 15 NaOCl 5% 10 menit 33,33 a 11,11 b 55,56 ab 16,33 NaOCl 10% 5 menit 33,33 a 22,22 b 44,45 ab 24 NaOCl 10% 10 menit 44,44 a 66,66 a 0 c - CV % 65,7 76,45 45,17 -
Keterangan:  Angka-angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  tidak  berbeda  nyata antar  perlakuan  pada  uji  lanjut  DMRT  dengan  taraf  α  =  5%,  HST  =  hari setelah tanam.

## Waktu Muncul Browning
Waktu  muncul  browning  merupakan  parameter  untuk  mengetahui  kecepatan eksplan  mengalami  browning.  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  NaOCl
10%  selama  5  menit  dengan  waktu  paling  lama  24  HST  untuk  muncul  browning, sedangkan  waktu  muncul  browning  cenderung  cepat  pada  perlakuan  H 2 O 2 3%  selama 15 menit dan 5% selama 10 dan 15 menit pada hari ke 3 – 5,3 setelah tanam (Tabel 2). Pada  sterilisasi  yang  optimal  dapat  menghilangkan  senyawa  fenol  yang  berada  di permukaan  eksplan.  Kecepatan  browning  diduga  dapat  dipengaruhi  oleh  tingkat kematangan biji kepel. Hal ini sesuai dengan pernyataan Hatmi dan Widyayanti (2014) bahwa  semakin  tua  umur  eksplan  akan  meningkatkan  kandungan  senyawa  polifenol, sehingga waktu  browning lebih cepat  dibanding eksplan  yang masih muda.  Rismayani dan  Hamzah  (2010)  menambahkan  bahwa  proses  pembilasan  pada  tahap  sterilisasi membantu  mengeluarkan  fenol  pada  eksplan  sehingga  dapat  menghambat  proses browning.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  beda  nyata  antar perlakuan  pada  persentase  eksplan  kontaminasi,  browning  dan  vitrifikasi.  Sterilisasi endosperma  kepel  paling  optimal  menggunakan  konsentrasi  NaOCl  10%  selama  10 menit  dengan  perolehan  persentase  eksplan  hidup  44,44%  dan  persentase  vitrifikasi 66,66% serta tidak mengalami kontaminasi dan browning.

## Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut munggunakan bahan sterilan lain dan jenis ekplan yang berbeda pada kultur in vitro kepel.

## DAFTAR RUJUKAN
Batubara,  Irmanida,  Latifah  K.  Darusman,  Edy  Djauhari,  and  Tohru  Mitsunaga.  2010. “Potency  of  Kepel  ( Stelechocarpus  Burahol )  as  Cyclooxigenase-2  Inhibitor.” Indonesian Journal of Plant Medicine 3(2):110–14.
Elfasyari,  Trie  Yuni.  2020.  “Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total  Pada  Beberapa  Bagian Tanaman  Kepel  ( Stelecocharpus  Burahol Hook  F.  &  Th).” Jurnal  Farmasi Udayana; Vol. 8, No. 2, Tahun 2019. DOI  - 10.24843/JFU.2019.V08.I02.P08 .
Farooq,  S.  A.,  T.  T.  Farooq,  and  T.  V  Rao.  2002.  “Micropropagation  of Annona Squamosa L.  Using  Nodal  Explants.” Pakistan  Journal  of  Biological  Sciences 5(1):43–46. DOI: 10.3923/pjbs.2002.43.46.
Fiani,  A.,  and  Yuliah.  2018.  “Pertumbuhan  Kepel  ( Stelechocarpus  Burahol (Blume) Hook  &  Thomson)  Dari  Dua  Populasi  Di  Mangunan,  Bantul.”  Pp.  301–6  in Prosiding  SEMINAR  NASIONAL  PENDIDIKAN  BIOLOGI  DAN  SAINTEK  III.  5 Mei . Sukoharjo.
Handayani,  E.,  Nandariyah,  V.  R.  Cahyani,  and  Parjanto.  2020.  “Morphological Characters  of  Kepel  ( Stelechocarpus  Burahol )  from  Kulon  Progo,  Yogyakarta, Indonesia.”  in IOP  Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science .  Vol. 458.
Haryjanto,  L.  2012.  “Konservasi  Kepel  ( Stelechocarpus  Burahol (Blume)  Hook.  f  & Thomson): Jenis Yang Telah Langka.” Mitra Hutan Tanaman 7(1):11-17.
Hatmi,  Retno  Utami,  and  Setyorini  Sudarmaji  Widyayanti.  2014.  “Potensi  Kepel ( Stelechocarpus  Burahol [Blume]  Hook.F  &  Th.)  Sebagai  Sumber  Pangan Fungsional.”  Pp.  248–57  in Prosiding  Seminar  Nasional  Sumber  Daya  Genetik Pertanian, .
Irsyadi,  Muhammad  Burhanuddin.  2021.  “Factors  That  Effect  of  the  Optimal  Plantlet Growth  from  Tissue  Culture  on  the  Acclimatization  Stage.”  Pp.  100–104  in Proceeding  International  Conference  on  Science  and  Engineering,  23  October . Yogyakarta, Oktober 23.
Karyanti,  J.,  and  R.  Ida.  2013.  “Pemanfaatan  Bahan  Teknis  KNO3,  CACL2,  MGSO4, KH2PO4  Sebagai  Hara  Makro  Dan  Benzil  Adenin  Dalam  Perbanyakan  Jati ( Tectona  Grandis L)  Secara  In  Vitro.” Jurnal  Sains  Dan  Teknologi  Indonesia 14(3):203–8.
Kundu,  Monoj,  Jayesh  Pathak,  and  Sangita  Sahni.  2017.  “ Embryo  Culture  and Endosperm Culture .” Pp. 125–40 in Plant Biotechnologi .
Martiansyah,  I.,  D.  D.  Eris,  H.  Nurhaimi,  and  D.  Taniwiryono.  2013.  “Optimasi Prosedur  Sterilisasi  Permukaan  Eksplan  Stek  Mikro  Karet  ( Hevea  Brasiliensis Muell. Arg).” Menara Perkebunan 81:9–14.
Nair, S., Shirgukar, and Mascarenhas. 1986. “ Studies on Endosperm Culture of Annona Squamosal Linn.” Plant Cell Report 5:132–35. DOI: 10.1007/BF00269252
Nasution, S. 2013. “Pengaruh Teknik Strerilisasi Terhadap Keberhasilan Inisasi Eksplan Paulownia  ( Paulownia  Elongata SY.  Hu)  Secara  In  Vitro.”  [Thesis]  Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Permatasari,  I.  Z.  2013.  “Uji  Efektivitas  Natrium  Hipoklorit  Dalam  Menghambat Pertumbuhan  Pseudomonas  Aeruginosa  Secara  In  Vitro.”  [Skripsi]  Universitas Muhammadiyah Semarang. Semarang
Prabakti, Hendy D., Didik Pudji Restanto, and Sholeh Avivi. 2017. “Pengaruh Macam Eksplan  Dan  Konsentrasi  2,4  D  Terhadap  Induksi  Kalus  Kluwek  ( Pangiun  Edule Reinw.) Secara In Vitro.” Gontor AGROTECH Science Journal 3(2):39–58. DOI: 10.21111/agrotech.v3i2.930
Rineksane,  I.  A.,  A.  K.  Mihdzar,  K.  Saleh,  and  Q.  Z.  Faridah.  2012.  “ In  Vitro Development  of  Embryogenic  Calli  And  Embryogenic  Stages  In  Suspension Cultures  of  Mangosteen  (Garcinia  Mangostana L.” Journal  of  Medicinal  Plants Research 6(13):2548 – 2559.
Rismayani,  and  F.  Hamzah.  2010.  “Pengaruh  Pemberian  Chlorox  (NaOCl)  Pada Sterilisasi  Permukaan  Untuk  Perkembangan  Bibit  Aglaonema  ( Donna  Carmen ) Secara  In Vitro.” in Prosiding Seminar Ilmiah  dan Pertemuan Tahunan  PGJ dan PEJ XX . Maros, Sulawesi Selatan.
Setiani,  Nur  Asni,  Fitri  Nurwinda,  and  Dewi  Astriany.  2018.  “Pengaruh  Desinfektan Dan  Lama  Perendaman  Pada  Sterilisasi  Eksplan  Daun  Sukun  ( Artocarpus  Altilis (Parkinson Ex. F.A Zorn) Fosberg).” Biotropika: Journal of Tropical Biology; Vol 6, No 3 (2018). DOI - 10.21776/Ub.Biotropika.2018.006.03.01 .
Shofiyani,  Anis,  and  Neni  Damajanti.  2017.  “Pengembangan  Metode  Sterilisasi  Pada Berbagai  Eksplan  Guna  Meningkatkan  Keberhasilan  Kultur  Kalus  Kencur ( Kaemferia  Galangal L).” Agritech:  Jurnal  Fakultas  Pertanian  Universitas Muhammadiyah Purwokerto 17(1):55–64. doi: 10.30595/agritech.v17i1.1345.
Singh, V., A. Tyagi, P. K. Clrauhan, P. Kumari, and S. Kaushal. 2011. “ Idenrification And  Prevention  Of  Bacterial  Contimination  On  Explant  Used  In  Plant  Tissue Culture  Labs .” International  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences 3(4):160–63.
Srivastava, N., B. Kamal, V. Sharma, Y. K. Negi, A. K. Dobriyal, S. Gupta, and V. S. Jadon.  2010.  “ Standardization  of  Sterilization  Protocol  for  Micro-Propagation  of Aconitum  Heterophyllum  an  Endangered  Medicinal  Herb. ” Acad  Arena 6(2):62– 66.
Sukamto,  A.  2010.  “Kultur  In  Vitro  Endosperma,  Protokol  Yang  Efisien  Untuk Mendapatkan Tanaman Triploid Secara Langsung.” Jurnal Agro Biogen 6(2):107– 12. DOI: 10.21082/jbio.v6n2.2010.p107-112.
Suratman,  A.  P.,  and  S.  Mulyani.  2013.  “Keefektifan  Penggunaan  Bahan  Sterilisasi Dalam  Pengendalian  Kontaminasi  Eksplan  Pada  Perbanyakan  Tanaman  Sirsak (Annona Muricata L.) Secara In Vitro.” Publikasi Hasil Penelitian Hibah Bersaing Dikti 1–8.
Tao,  R.,  K.  Ozawa,  M.  Tamura,  and  A.  Sugiura.  1996.  “ Dodecaploid  Plant Regeneration  from  Endosperm  Culture  of  Persimmon  (Diospyros  Kaki L.).”  Pp. 119–28 in I International Persimmon Symposium .
Tisnadjaja, D., D. E. Saliman, Silvia, and P. Simanjuntak. 2006. “Pengkajian Burahol ( Stelechocarpus  Burahol (Blume)  Hook  &  Thomson)  Sebagai  Buah  Yang Memiliki  Kandungan  Senyawa  Antioksidan.” Biodiversitas 7(2):199–202.  DOI: 10.13057/biodiv/d070223.
Yang,  Z.  2009.  “ Vegetatif  Propagation  and  Genetic  Fingerprinting  OF  Eucalyptus Grandis and Eucalyptus Amplifolia .” University of Florida.