## KARAKTERISTIK MIKROKAPSUL MINYAK KAYA ASAM LEMAK  -3 DARI HASIL SAMPING PENEPUNGAN LEMURU
[Characteristics of Microcapsule of  -3 Fatty Acids Enriched Oil from Lemuru Meal Processing]
Teti Estiasih 1) , Kgs. Ahmadi 2) , dan Fithri Choirun Nisa 1)
1) Jurusan Teknologi Hasil Pertanian – FTP – Universitas Brawijaya - Jl. Veteran - Malang
2) Jurusan Teknologi Industri Pertanian - FP – Univ. Tribhuwana - Jl. Tlogowarna – Tlogomas - Malang
Diterima 10  Juli   2008 / Disetujui  15  Desember   2008

## ABSTRACT
Omega-3  fatty  acids  enriched  fish  oil  from  lemuru  fishmeal  processing  met  the  quality  standard  of  food  grade  fish  oil,  but  it  was susceptible to oxidation. Microencapsulation by spray drying was one method that could protect this oil against oxidation and the microcapsule could be applied more widely and easier to handle. The important factor that affected microencapsulation process by spray drying method was encapsulant to core ratio. The objective of research was to elucidate the effect of encapsulant to core ratio (2:1; 3:1; 4:1; 5:1; and 6:1 (w/w)) on characteristics of  -3 fatty acids enriched fish oil microcapsule.
The increase of microencapsulation efficiency and the decrease of surface oil   proportion were related to better emulsion stability prior to spray drying and film forming ability around oil globule as the sodium caseinate proportion increased.  Emulsification and heating during spray drying could induce hydrolysis of triglycerides in fish oil. Therefore, the quantity of free fatty acids relatively unchanged although the proportion of encapsulated oil decreased. The decrease of oxidation degree is caused by better protective effect of sodium caseinate during emulsification and spray drying due to better film forming ability as proportion of encapsulant increased.  However, it was followed by the decrease of  -3 fatty acids content that  related to  decreasing proportion of fish oil. This phenomenon was supported by unchanging  -3 fatty acids retention that showed protective  effect  of  sodium  caseinate  on  oxidation  during  microencapsulation.  Different  encapsulant  to  core  ratio  did  not  change  yield  of microcapsule.  Different proportion of surface oil did not affect microcapsule recovery.
Key words : fish oil from by product of lemuru meal processing,  -3 fatty acids enriched oil, microencapsulation, spray drying,   encapsulant to core ratio.

## PENDAHULUAN
Minyak  ikan  sampai  saat  ini  masih  merupakan sumber  utama  asam  lemak  -3  terutama  EPA ( eicosapentaenoic  acid )  dan  DHA  ( dokosahexaenoic  acid ) yang penting bagi kesehatan.  Pengaruh positif asam lemak  -3  terhadap  kesehatan  melalui  modulasi  fungsi  platelet, menurunkan  aktivitas  koagulasi  monosit,  menekan  adhesi leukosit,  dan  menurunkan  tekanan  darah  sehingga  dapat digunakan untuk terapi penyakit jantung koroner (Basu et al . 2006).  Asam  lemak  -3  dilaporkan  dapat  memperbaiki massa tulang pada kadar asupan DHA rendah (Mollard et al . 2005;  Högström et  al. 2007).  Asam  lemak  ini  merupakan asam  lemak  yang  paling  penting  pada  otak,  retina,  dan spermatozoa,  serta  diperlukan  bagi  ketajaman  penglihatan, kemampuan  kognitif  (Hashimoto et  al. 2005),  dan  motilitas sperma (Connor dan Connor, 2007).  Asam lemak  -3 juga berperan positif terhadap Alzheimer dan demensia (Schaefer et  al. (2006)  serta  menurunkan  gejala  depresi  (Su et  al . 2000; Tiemeier et al. 2003) serta memperbaiki harapan hidup penderita penyakit autoimun seperti lupus dan atritis (Jolly et al. 2001).  Pada penderita diabetes, asam lemak  -3 dapat memperbaiki  toleransi  terhadap  glukosa  (Mori et  al .  1999) serta  mencegah  dan  menurunkan  resistensi  insulin (Ghafoorunnisa et al. 2005).
Berbeda  dengan  asam  lemak  -6  yang  dapat memicu insiden kanker prostat (Leitzmann et al. 2004), asam lemak  -3  menghambat  perkembangan  kanker  prostat, payudara,  dan  kanker  terkait  hormon  lainnya  (Terry et  al. 2003; Sauer et al. 2005).  Sebelumnya, Tavani et al .(2003) membuktikan  bahwa  asam  lemak  -3  menghambat perkembangan  terhadap  kanker  mulut,  termasuk  kanker kelenjar  ludah.  Konsumsi  asam  lemak  -3  dapat memperlambat pertumbuhan kanker, meningkatkan keberhasilan  kemoterapi,  dan  menurunkan  efek  samping kemoterapi (Hardman et al. 2002; Hardman et al. 2004). Sayangnya  Indonesia  masih  mengimpor  minyak ikan  yang  digunakan  untuk  pemanfaatan  asam  lemak  -3 dalam  bidang  pangan  dan  kesehatan.    Hasil  penelitian sebelumnya  (Estiasih et  al. 2006)  menunjukkan  bahwa minyak  kaya  asam  lemak  -3  dari  hasil  samping penepungan  lemuru  memenuhi  standar  mutu  minyak  ikan untuk  konsumsi  sehingga  dapat  diaplikasikan  untuk  produk pangan.  Minyak kaya asam lemak  -3 dihasilkan dari teknik pemadatan  cepat  (Moffat et  al. 1993).    Teknik  ini  dapat memperkaya  meningkatkan  kadar  asam  lemak  -3  dalam minyak hasil samping penepungan lemuru sebesar 1.81 kali (Estiasih et al. 2006).
Akan  tetapi,  penggabungan  asam  lemak  -3  ke dalam produk pangan dibatasi oleh kerentanannya terhadap
Hasil Penelitian                                                                        J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIX No. 2 Th. 2008
oksidasi  (Djordjovic et  al. 2004)  sehingga  asam  lemak  -3 memerlukan perlindungan dari proses oksidasi (Lyberg et al. 2005).  Untuk  industri  pangan,  sebagian  besar  asam  lemak  -3 digunakan dalam bentuk mikrokapsul. Mikrokapsul asam lemak  -3 masih diimpor dan belum diproduksi di Indonesia, padahal  menurut  Baik et  al. (2004)  permintaan  industri terhadap  mikrokapsul  minyak  ikan  terus  mengalami peningkatan seiring dengan meningkatnya kesadaran publik tentang pentingnya asam lemak tersebut.
Bentuk mikrokapsul minyak ikan dapat memperluas  penggunaan  asam  lemak  -3.    Dalam  bentuk mikrokapsul, asam lemak  -3 ada dalam bentuk terlindungi dan  dapat  meminimalkan  pengaruh  oksidasi  terhadap kualitas  sensoris  produk  (Howe et  al. 2002). Mikroenkapsulasi  juga  dapat  membantu  menutup  bau  amis pada produk akhir (Garg et  al. 2006). Mikrokapsul dihasilkan melalui proses mikroenkapsulasi  yaitu  teknik  penyalutan  droplet  cair  atau partikel  padat.  Ada  beberapa  metode  mikroenkapsulasi bahan  isian  yang  peka  seperti  asam  lemak  -3. Pengeringan semprot merupakan metode yang paling umum karena  biaya  operasionalnya  30-50  kali  lebih  rendah  dari pengeringan beku.  Pada proses pengeringan semprot terjadi peningkatan  luas  permukaan  yang  tajam  yang  dapat meningkatkan  oksidasi,  jika  enkapsulan  tidak  cukup  tebal atau  padat  untuk  menghambat  oksigen.  Pemilihan enkapsulan menjadi penting karena mempengaruhi stabilitas emulsi  sebelum  pengeringan  (Cerdeira et  al. 2007). Beberapa  enkapsulan  mempunyai  kapasitas  pengemulsian dan  kemampuan  penyalutan  yang  baik.    Natrium  kaseinat merupakan penstabil emulsi yang baik untuk  lemak (Hogan et  al. 2001),  sehingga  digunakan  sebagai  enkapsulan  pada penelitian ini.
Beberapa faktor mempengaruhi proses mikroenkapsulasi  dengan  pengeringan  semprot  yaitu stabilitas  emulsi  sebelum  pengeringan  (Magdassi  dan Vinetsky,  1996),  viskositas  emulsi  (Rosenberg et  al. 1990), nisbah enkapsulan:bahan isian (Sheu dan Rosenberg, 1995), dan  kondisi  pengeringan  (Pauletti  dan  Amestoy,  1999). Emulsi  yang  stabil  menghasilkan  mikrokapsul  yang  bersifat mengalir ( free flowing ).  Efisiensi mikroenkapsulasi menurun pada  konsentrasi  lemak  >50  %  yang  disebabkan ketidakstabilan  emulsi  (Onwulata et  al. 1994).    Hasil penelitian  sebelumnya  (Estiasih et  al. 2005)  menunjukkan bahwa  efisiensi  mikroenkapsulasi  ini  mempengaruhi stabilitas oksidasi.
Salah  satu  faktor  penting  yang  mempengaruhi mikroenkapsulasi  adalah  nisbah  penyalut:bahan  isian. Menurut  Young et  al. (1993a)  peningkatan  konsentrasi penyalut menyebabkan
peningkatan efisiensi mikroenkapsulasi. Sheu
dan Rosenberg (1995) menambahkan  bahwa  nisbah  penyalut:bahan  isian  yang tinggi  menyebabkan  retensi  bahan  isian    yang  tinggi  dan menguntungkan.  Menurut  Kagami et  al. (2003)  nisbah natrium  kaseinat:minyak  ikan  harus  optimum  untuk mendapatkan  mikrokapsul  yang  stabil  terhadap  oksidasi. Hasil  penelitian  Hogan et  al. (2001)  menunjukkan  bahwa
pada  nisbah  minyak:penyalut  kurang  dari  0.75  kerentanan terhadap  destabilisasi  selama  pengeringan  semprot  paling rendah.
Nisbah penyalut:minyak ikan yang digunakan pada penelitian sebelumnya  adalah 2:1 dan belum menghasilkan karakteristik  mikrokapsul  yang  baik  (Estiasih et  al. 2005) sehingga  harus  dikaji  lebih  lanjut.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menjelaskan  pengaruh  nisbah  penyalut:bahan  isian terhadap karakteristik mikrokapsul minyak kaya asam lemak  -3.

## METODOLOGI
Bahan dan alat Bahan  baku  yang  digunakan  adalah  minyak  kaya asam lemak  -3 yang dibuat dari hasil samping penepungan ikan lemuru dengan metode pemadatan cepat pada kondisi optimum  dari  hasil  penelitian  sebelumnya  (Estiasih et  al . 2006).  Minyak  hasil  samping  penepungan  ikan  lemuru diperoleh pada Bulan Desember dari PT Blambangan Raya – Muncar  –  Banyuwangi.  Bahan  penyalut  yang  digunakan adalah natrium kaseinat teknis (Sigma Co.).
Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan  adalah standar asam lemak (C12:0, C14:0, C16:0, C18:0, C18:1  -9, C18:2  -6, C18:3  -3, C20:0, C20:4  -6, C20:5  -3, C22:6  - 3), standar internal asam lemak (C21:0) (Sigma Co.), aseton (teknis); etanol,  kloroform,  petroleum eter, heksana, asam asetat  glasial,  metanol  (p.a.)  dari  T.J.  Baker,  HCl  (p.a. Merck),  NaOH,  KOH,  asam  oksalat,  KI,  pati,  p-anisidin, natrium tiosulfat (p.a.) dari Sigma Co., akuades, kertas saring Whatman No.1, gas hidrogen, gas nitrogen, gas helium (PT Aneka  Gas–Yogyakarta),  dan  es  kering  (PT  Fujigas- Surabaya).
Peralatan  yang  digunakan  adalah homogenizer , pengering semprot (Buchi mini spray dryer 190), termometer digital (Barigo Thermo Chip 905), vortex (Hettich EBA-8), hot plat (Labinco  132),  pengaduk  magnet  LH  (Velp  Scientica), sentrifusa  (TSSU), freezer (Deaby),  kromatografi  gas  (GC- 14B,  Shimadzu), integrator (Chromatopac  C-RGA, Shimadzu),  neraca  analitik,  alat-alat  gelas,  pengaduk magnet, rotavapor (Buchi), dan spektrofotometer.
Preparasi mikrokapsul Pembuatan mikrokapsul dilakukan sebagai berikut: natirum  kaseinat  dilarutkan  dalam  air  panas  (100  C) sehingga  diperoleh  konsentrasi  10  %  (b/v).  Setelah didinginkan,  minyak  kaya  asam  lemak  -3  dicampurkan sehingga diperoleh nisbah penyalut:bahan isian 2:1; 3:1; 4:1; 5:1, dan 6:1 (b/b) dan kemudian dihomogenisasi pada 2000 rpm selama 15 menit.  Emulsi kemudian dikeringkan dengan pengeringan semprot pada suhu inlet 130  C dan suhu outlet 72  C dengan kecepatan aliran 5 ml/detik.
Karakterisasi mikrokapsu l
Mikrokapsul yang diperoleh dikarakterisasi meliputi rendemen;  efisiensi  mikroenkapsulasi  dan  proporsi  minyak
permukaan  (Young et  al. 1993ab);  tingkat  oksidasi  yaitu bilangan peroksida (AOCS, 1989), bilangan anisidin (IUPAC, 1979),  dan  bilangan  total  oksidasi  (IUPAC,  1979);  kadar asam  lemak  bebas  (AOCS,  1989);  kadar  asam  lemak  -3 (kadar  EPA,  DHA,  EPA+DHA),  retensi  asam  lemak  -3 (retensi  EPA,  DHA,  EPA+DHA)  dengan  metilasi  dilakukan sesuai  metode  Christopherson  dan  Glass  (1969) menggunakan standar internal C21:0.
Penentuan  retensi  asam  lemak  -3  ditentukan  dengan perhitungan sebagai berikut:
x 100% apsul dimikroenk y ang miny ak dalam 3 - lemak asam Berat l mikrokapsu dalam 3 - lemak asam Berat  

## Analisis data
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  satu  faktor  dengan  tiga  kali ulangan.  Data  yang  diperoleh  dilakukan  analisis  ragam dilanjutkan dengan uji Duncan jika diperlukan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Minyak kaya asam lemak  -3 Minyak  kaya  asam  lemak  -3  dibuat  dari  minyak hasil  samping  penepungan  ikan  lemuru  dengan  komposisi asam  lemak  dan  karakteristik  kedua  minyak  tersebut  dapat dilihat pada Tabel 1.
Dibandingkan  dengan  standar  minyak  ikan  untuk konsumsi  ( food  grade  fish  oil )  dari International  Association of  Fishmeals  and  Oils  Manufacturers ,  parameter  mutu minyak  kaya  asam  lemak  -3  yang  menunjukkan  tingkat oksidasi yaitu bilangan peroksida, anisidin, dan total oksidasi telah  memenuhi  standar  mutu.  Bilangan  peroksida menunjukkan  tingkat  oksidasi  yang  baru  terjadi  sebagai produk oksidasi primer (Dugan Jr., 1996).  Bilangan anisidin menunjukkan  tingkat  oksidasi  yang  telah  lalu  yang merupakan  produk  oksidasi  sekunder  hasil  degradasi  dari produk  oksidasi  primer  (IUPAC,  1979).    Bilangan  totoks merupakan indikator dari tingkat total oksidasi baik yang baru terjadi  maupun  yang  telah  lalu  (IUPAC,  1979).    Dapat disimpulkan  bahwa  minyak  kaya  asam  lemak  -3  yang diproses  dari  hasil  samping  penepungan  ikan  lemuru  layak untuk dikonsumsi berdasarkan standar mutu tersebut.
Tabel 1 Karakteristik minyak dan minyak kaya asam lemak  -3  dari hasil samping penepungan ikan lemuru Karakteristik Minyak hasil samping penepungan Minyak kaya asam lemak  -3 Komposisi asam lemak (%)* C14:0 C14:1 C16:0
C16:1 C18:0 C18:1 C18:2 C18:3 C20:0 EPA C20:1 DHA C22:0 C22:1
EPA+DHA Kadar EPA (mg/g) b Kadar DHA (mg/g) b Kadar EPA+DHA (mg/g) b Kadar asam lemak bebas c Bilangan peroksida (mek/kg) d
Bilangan anisidin e Bilangan totoks f 13.20
0.84
27.00 15.70 5.63 4.76 6.34 0.90 0.47 14.82 1.44 7.00
1.60 0.32
21.82 54.43 31.80 86.23
3.89
5.37 34.46
45.20 8.58
0.55 17.28
18.83 5.48
4.42 4.53 1.01 0.62
20.51
3.39
9.49 0.16 1.98 29.99 119.97 55.31 175.48 6.02 7.58 32.67 47.83
a Persentase relatif luas area puncak asam lemak terhadap total luas area puncak  asam lemak yang teridentifikasi dalam kromatogram
b Kuantifikasi berdasarkan standar internal C21:0 Standar mutu International Association of Fishmeals and Oils Manufacturers untuk asam lemak bebas 1-7%(c), bilangan peroksida 3-20  meq/kg (d), bilangan anisidin 4-60 (e), dan bilangan total oksidasi 10-60.
Proses  pemadatan  cepat  meningkatkan  kadar EPA+DHA  dari  86.23  menjadi  175.48  mg/g.    Berbeda dengan  penelitian  sebelumnya  (Estiasih et  al. 2006),  pada penelitian ini dilakukan pengukuran kadar EPA+DHA secara kuantitatif  dengan  menggunakan  standar  internal  asam lemak C21:0.   Dengan membandingkan jumlah  C21:0 yang diinjeksikan  pada    kromatografi  gas  dan  luas  area  puncak asam lemak tersebut, kadar EPA dan DHA dapat ditentukan. Tingkat  pengayaan  EPA+DHA  adalah  2.04  kali  sedangkan penelitian  sebelumnya  (Estiasih et  al. 2006)  tingkat pengayaan berdasarkan kuantitas relatif (metode normalisasi standar)  adalah  1.81  kali.  Penentuan  secara  kuantitatif berdasarkan  standar  internal  lebih  akurat  karena menentukan jumlah EPA dan DHA sesungguhnya yang ada dalam sampel.

## Efisiensi mikroenkapsulasi
Efisiensi  mikroenkapsulasi  merupakan  metode untuk  mengukur  keefektifan  proses  mikroenkapsulasi. Peningkatan konsentrasi penyalut menyebabkan peningkatan  efisiensi  mikroenkapsulasi  (Gambar  1a)  yang berkaitan  dengan  pembentukan  lapisan  penyalut  pada permukaan bahan isian sebelum pembentukan lapisan yang mengeras  ( crust )  selama  pengeringan  yang  lebih  tebal (Young et  al. 1993a).    Menurut  Garg et  al. (2006),  selama pengeringan  semprot  sejumlah  minyak  dapat  bermigrasi pada permukaan partikel mikrokapsul.   Konsentrasi penyalut yang  tinggi  menyebabkan  migrasi  bahan  isian  menuju permukaan mikrokapsul menjadi rendah.
Lin et  al. (1995)  menyatakan  bahwa  stabilitas emulsi sebelum pengeringan mempengaruhi struktur dinding mikrokapsul,  sehingga  mempengaruhi  migrasi  minyak menuju  permukaan  mikrokapsul.  Struktur  dinding  yang kompak dapat mencegah minyak dari oksidasi.  Rosenberg et  al. (1985)  menyatakan  bahwa  proteksi  terhadap  bahan isian  berhubungan  dengan  porositas  dan  integritas  dinding mikrokapsul.  Konsentrasi  enkapsulan  yang  tinggi menyebabkan  migrasi  bahan  isian  menuju  permukaan mikrokapsul  menjadi  rendah.  Peningkatan  efisiensi mikroenkapsulasi karena peningkatan konsentrasi
enkapsulan  ini  disebabkan  oleh  pembentukan  dinding mikrokapsul di sekeliling bahan isian yang lebih tebal (Young et al. 1993a).
Natrium  kaseinat  berfungsi  sebagai  pengemulsi yang menyalut globula lemak selama proses homogenisasi. Berbagai faktor mempengaruhi kestabilan emulsi diantaranya fraksi  minyak  (Srinivasan et  al. 1996).    Fraksi  minyak  yang semakin rendah dengan meningkatnya nisbah penyalut:bahan  isian  diduga  menyebabkan  emulsi  lebih stabil. Menurut Srinivasan et al. (1996) lapisan ganda protein dapat  terbentuk  dalam  sistem  emulsi  dengan  konsentrasi minyak rendah. Peningkatan konsentrasi minyak menyebabkan  protein  yang  teradsorpsi  menyebar membentuk  lapisan  yang  lebih  tipis  (Young et  al. 1993a). Akibatnya  minyak  lebih  mudah  mengalami  migrasi  menuju permukaan mikrokapsul.
Pada  penelitian  ini,  proporsi  minyak  pada permukaan  mikrokapsul  berkisar  10-19%  (Gambar  1b). Adanya  minyak  pada  permukaan  mikrokapsul  menurunkan daya hidrasi mikrokapsul, dispersibilitasnya dalam air (Faldt dan Bergenstahl, 1995), dan stabilitas mikrokapsul (Wagner dan  Warthesen,  1995).  Minyak  yang  ada  di  permukaan mikrokapsul bersifat rentan terhadap oksidasi karena kontak langsung  dengan  oksigen  dan  tidak  ada  matriks  penyalut yang  melindungi.  Minyak  yang  ada  di  permukaan mikrokapsul  bersifat  lebih  tidak  jenuh  dibandingkan  minyak pada bagian dalam mikrokapsul (Estiasih, 2003).
Pada  saat  pengeringan  semprot,  droplet  emulsi yang  berisi  globula-globula  lemak  yang  disalut  natrium kaseinat  mengalami  proses  pengerasan  atau  pembentukan lapisan  yang  mengeras  ( crust ).  Menurut  Young et  al. (1993ab),  peningkatan  konsentrasi  penyalut  menyebabkan peningkatan  efisiensi  mikroenkapsulasi  yang  disebabkan pengaruh  ketebalan  lapisan  di  sekeliling  droplet  selama pengeringan. Kadar penyalut yang lebih tinggi juga berkaitan dengan  lebih  sedikit  bahan  isian  yang  bermigrasi  menuju permukaan  mikrokapsul  pada  tahap  awal  pengeringan. Akibatnya  peningkatan  nisbah  penyalut:bahan  isian menyebabkan peningkatan efisiensi mikroenkapsulasi.
89.89d 88.00c 83.99c 82.89b 81.14a 76 80 84 88 92 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian E fi si ens i M ikroe nka ps ul as i (%) 18.86a 17.11ab 16.01b 12.00c 10.11c 0 5 10 15 20 25 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian P rop ors i M iny ak P er m uk aa n (%) A B
Gambar 1  Efisiensi mikroenkapsulasi (A) dan proporsi minyak permukaan mikrokapsul (B) pada berbagai nisbah penyalut:bahan isian (Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  =0.05)

## Kadar asam lemak bebas
Kadar  asam  lemak  bebas  merupakan  indikator tingkat hidrolisis trigliserida dalam minyak ikan.  Asam lemak bebas  mempunyai  stabilitas  terhadap  oksidasi  yang  lebih rendah  dibandingkan  bentuk  trigliserida  sehingga keberadaannya  dalam  produk  berlemak  biasa  diukur. Peningkatan asam  lemak bebas menyebabkan peningkatan kerentanan  terhadap  oksidasi  dan  produk  oksidasi  yang terbentuk berpotensi menimbulkan bau.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa peningkatan nisbah penyalut bahan isian tidak menyebabkan perubahan  kadar asam lemak bebas mikrokapsul (Gambar 2).  Kadar  asam  lemak  bebas  dalam  minyak  kaya  asam lemak  -3  yang  dimikroenkapsulasi  adalah  6.02  %. Semakin tinggi nisbah penyalut:bahan isian proporsi minyak yang  digunakan  semakin  rendah  tetapi  tidak  menyebabkan penurunan kadar asam lemak bebas.
Gambar  2    Kadar asam lemak bebas mikrokapsul pada berbagai nisbah  penyalut:  bahan  isian  (Huruf  yang  sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada  taraf  =0.05)
Asam lemak bebas dapat terhidrolisis dari struktur trigliserida  dengan  adanya  air,  kondisi  tertentu  seperti adanya enzim, panas, dan bahan kimia tertentu (Dugan Jr., 1996;  Gunstone,  1996).    Selama  emulsifikasi  terjadi  kontak minyak  dengan  air  dan  pada  proses  pengeringan  semprot terjadi proses pemanasan yang diduga dapat  menyebabkan hidrolisis  asam  lemak  dari  struktur  trigliserida.    Akibatnya kadar  asam  lemak  bebas  mikrokapsul  tidak  berubah walaupun proporsi minyak yang digunakan menurun.

## Tingkat oksidasi
Tingkat  oksidasi  mikrokapsul  yang  dianalisis mengacu  pada  standar International  Association  of Fishmeals  and  Oils  Manufacturers untuk  minyak  ikan  untuk konsumsi  yaitu  bilangan  peroksida,  bilangan  anisidin,  dan bilangan total oksidasi (totoks) (Bimbo, 1998).
Bilangan  peroksida  menunjukkan  produk  oksidasi primer  sedangkan  bilangan  anisidin  menunjukkan  produk oksidasi sekunder.  Menurut Moreau dan Rosenberg (1996) pembentukan produk oksidasi sekunder berasal dari produk oksidasi  primer  yang  sebelumnya  telah  ada  dan  selama preparasi  mikrokapsul  terdekomposisi  menjadi  produk oksidasi sekunder.  Minyak hasil samping penepungan yang
dibuat  mikrokapsul  selama  penepungan  mengalami pemanasan  sehingga  mengalami  oksidasi  dengan  tingkat oksidasi  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.    Menurut  Lin et  al. (1995),  minyak  yang  telah  teroksidasi  lebih  mudah terdegradasi dibandingkan minyak segar.
Peningkatan nisbah penyalut:bahan isian menyebakan  penurunan  tingkat  oksidasi  mikrokapsul (Gambar  3).  Penurunan  tersebut  terutama  disebabkan penurunan  proporsi  minyak  yang  dimikroenkapsulasi sehingga  produk  oksidasi  lemak  mengalami  penurunan karena  minyak  yang  dimikroenkapsulasi  telah  mengandung produk  oksidasi  lemak.    Selama  proses  mikroenkapsulasi ada  kemungkinan  terjadi  proses  oksidasi.  Homogenisasi yang dilakukan sebelum pengeringan semprot menyebabkan sejumlah  oksigen  terperangkap  dalam  sistem  emulsi  akibat agitasi mekanis selama homogenisasi.
Minyak  dalam  sistem  emulsi  berbentuk  globula lemak yang diselubungi oleh protein yang berfungsi sebagai pengemulsi.  Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa proses  oksidasi  pada  sistem  emulsi  dipengaruhi  oleh konsentrasi  protein  (Shen et  al .  2005)  dan  struktur  emulsi (Ambrosone et  al .  2006).    Dalam      bentuk  emulsi  minyak lebih  terproteksi  dari  proses  oksidasi  dibandingkan  dalam bentuk  curah  (Shen et  al. 2005).      Proses    oksidasi  terjadi sebelum globula lemak disalut oleh protein yang ditunjukkan pada Tabel 1.
Semakin  rendah  proporsi  minyak  dalam  sistem emulsi  (nisbah  penyalut:bahan  isian  semakin  meningkat) jumlah  globula  minyak  yang  terbentuk  semakin  sedikit sehingga ketersediaan protein untuk menyalut globula lemak tersebut semakin tinggi.  Hasil penelitian Shen et al. (2005) menunjukkan  bahwa  konsentrasi    protein  dalam  sistem emulsi  yang  lebih  tinggi  lebih  mampu  memproteksi  minyak ikan  dari  proses  oksidasi  dibandingkan  konsentrasi  protein rendah.  Hal  ini  berkaitan  dengan  ketebalan  dinding mikrokapsul  yang  lebih  tebal.  Proses  pengeringan  semprot menggunakan  suhu  tinggi  yang  dapat  memacu  proses oksidasi.    Semakin  tebal  dinding  mikrokapsul,  minyak  ikan lebih terlindungi dari proses oksidasi.
Menurut  Kagami et  al. (2003)  nisbah  natrium kaseinat:minyak  ikan  harus  optimum  untuk  mendapatkan mikrokapsul yang stabil terhadap oksidasi.  Porositas matriks dinding mikrokapsul dipengaruhi oleh nisbah penyalut:bahan isian yang digunakan.  Porositas tersebut berkorelasi dengan stabilitas  oksidasi  mikrokapsul.    Diduga  peningkatan  nisbah penyalut:bahan isian menyebabkan struktur matriks kaseinat dalam dinding mikrokapsul lebih kompak dan kurang porous sehingga sifat protektif dinding mikrokapsul meningkat.
Kadar dan retensi asam lemak  -3 Semakin tinggi nisbah penyalut:bahan isian, kadar asam lemak  -3 mikrokapsul semakin menurun (Gambar 4). Penurunan  tersebut  disebabkan  proporsi  minyak  yang dimikroenkapsulasi semakin menurun.
Kerusakan minyak selama proses mikroenkapsulasi  terutama  terjadi  pada  asam  lemak  -3 sebagai asam lemak yang paling tidak jenuh dalam minyak
2.63a 2.91a 2.64a 2.52a 2.05a 0 1 2 3 4 5 6 7 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian Ka da r a s a m l e m a k be ba s (% )
ikan.  Walaupun  tingkat  oksidasi  menurun  dengan meningkatnya  nisbah  penyalut:bahan  isian  sehingga  asam lemak  -3 lebih terproteksi dari proses oksidasi, tetapi faktor yang  lebih  mempengaruhi  penurunan  kadar  asam  lemak tersebut  adalah  proporsi  minyak    kaya  asam  lemak  -3 dalam  mikrokapsul.  Fenomena  ini  didukung  oleh  retensi asam  lemak  -3  dalam  mikrokapsul  yang  tidak  berubah akibat peningkatan nisbah penyalut:bahan isian (Gambar 5) . Jika  dibandingkan  antar  jenis  asam  lemak  -3, kadar  EPA  dalam  mikrokapsul  lebih  tinggi  dibandingkan DHA.    Hal  ini  disebabkan  kadar  EPA  dalam  minyak  kaya asam lemak  -3 jauh lebih tinggi dibandingkan kadar DHA. Pada proses pemadatan cepat tingkat pengayaan EPA lebih tinggi dari DHA (Estiasih et al. 2006) dan kadar EPA dalam minyak ikan lemuru lebih tinggi dari DHA.  Menurut Howe et al. (2002),  umumnya  minyak  ikan  mempunyai  kadar  EPA yang lebih tinggi dari DHA kecuali minyak ikan tuna.
Proses mikroenkapsulasi menyebabkan penurunan kadar  EPA  dan  DHA  mikrokapsul  yang  ditunjukkan  oleh parameter retensi asam lemak  -3. Nilai retensi asam lemak  -3  tidak  dapat  mencapai  100%  sebagai  nilai  retensi  ideal yang berarti tidak ada pengurangan jumlah asam lemak  -3 selama  proses  mikroenkapsulasi.  Proses  mikroenkapsulasi yang  ideal  harus  dapat  mencegah  kehilangan  bahan  isian selama proses (Young et al. 1993a).
Retensi EPA lebih tinggi dibandingkan DHA yang disebabkan  DHA  lebih  banyak  teroksidasi  atau  mengalami pelepasan  menuju  permukaan  mikrokapsul  dibandingkan
EPA akibat ketidakjenuhan yang lebih tinggi.  Hasil penelitian Faldt  dan  Bergenstahl  (1995)  menunjukkan  bahwa  lemak yang  lebih  tidak  jenuh  lebih  mudah  mengalami  pelepasan menuju  permukaan  mikrokapsul  dibandingan  minyak  yang lebih  jenuh.  Menurut  Shen et  al.  ( 2005)  mobilitas  minyak yang  lebih  tidak  jenuh  lebih  tinggi  dibandingkan  minyak jenuh.    Akibatnya  DHA  kemungkinan  lebih  mudah  menuju permukaan  mikrokapsul  dan  mengalami  proses  oksidasi sehingga retensi EPA lebih tinggi dibandingkan DHA.
Nisbah  penyalut:bahan  isian  tidak  mempengaruhi retensi asam lemak  -3 baik EPA, DHA, maupun EPA+DHA (Gambar 5).  Jika dibandingkan dengan jumlah asam lemak  -3  awal yang dibuat mikrokapsul, jumlah asam lemak  -3 yang  dapat  dipertahankan  (retensi)  tersebut  tidak dipengaruhi oleh nisbah penyalut:bahan isian.  Retensi asam lemak  -3  menunjukkan  besarnya  penurunan  asam  lemak tersebut.
Jika  dibandingkan  dengan  tingkat  oksidasi, peningkatan  nisbah  penyalut:bahan  isian  menyebabkan penurunan  tingkat  oksidasi  sehingga  kemungkinan  proses oksidasi  terhadap  asam  lemak  -3  menjadi  menurun  pula. Menurut Young et al. ( 1993a) retensi bahan isian dipengaruhi oleh  sifat-sifat  emulsi  dan  kondisi  pengeringan.    Kecepatan pengeringan yang tinggi menyebabkan pembentukan lapisan yang mengeras disekeliling droplet bahan isian berlangsung secara cepat sehingga retensi bahan isian menjadi tinggi.
14.07a 11.45b 9.07c 7.31c 5.52d 0 4 8 12 16 20 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian Bi lan g an p ero k sid a (me q /k g ) B 21.83e 28.42d 36.17c 44.14b 54.40a 0 10 20 30 40 50 60 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian Bi lan g an t o to k s C
Gambar 3 Tingkat oksidasi mikrokapsul berdasarkan bilangan anisidin (A), bilangan peroksida (B) dan bilangan total oksidasi (C) pada berbagai nisbah penyalut:bahan isian (Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  =0.05) 10.79e 13.56d 18.03c 21.23b 26.27a 0 10 20 30 40 50 60 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian Bi lan g an an isid in A
4.90b 6.83ab 8.16ab 9.29ab 10.57a 0 2 4 6 8 10 12 14 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian K ad ar DH A (m g /g ) 25.87a 22.78ab 21.43ab 16.90ab 12.73b 0 5 10 15 20 25 30 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian Ka d a r E PA (m g /g ) 36.44a 32.07ab 29.59ab 23.28ab 17.63b 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian K ad ar EP A +D H A (m g /g )
Gambar 4 Kadar DHA (A), EPA (B), dan EPA+DHA (C)mikrokapsul pada berbagai nisbah penyalut:bahan isian (Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  =0.05)
Pada kenyataannya retensi asam lemak  -3 tidak berubah.  Diduga  walaupun  peningkatan  nisbah  penyalut: bahan  isian  menurunkan  peluang  oksidasi  terhadap  asam lemak  -3,  oksidasi  tetap  terjadi  dan  jika  dibandingkan dengan  jumlah  asam  lemak  -3  awal  perubahan  tersebut tidak signifikan. Selain itu, faktor-faktor yang mempengaruhi retensi bahan isian seperti kecepatan pengeringan dan suhu proses tidak berbeda sehingga retensi asam lemak  -3 tidak berubah.

## Rendemen
Rendemen  diukur  sebagai  persentase  berat mikrokapsul  yang  dihasilkan  terhadap  berat  penyalut  dan bahan  isian.  Parameter  rendemen  perlu  diukur  sebagai variabel  yang  menentukan  kelayakan  ekonomi  proses produksi  mikrokapsul  minyak  kaya  asam  lemak  -3.    Nilai rendemen  yang  ideal  adalah  100  %  tetapi  pada kenyataannya rendemen yang diperoleh dari berbagai nisbah penyalut:bahan  isian  berkisar  antara  70.83-75.16  %.    Pada proses mikroenkapsulasi menurut Young et al. (1993a) dapat terjadi kehilangan bahan isian selama pengeringan.  Bahan isian  yang  ada  di  permukaan  globula  minyak  dalam  emulsi meninggalkan atomizer atau  bahan  isian  yang  bermigrasi menuju  permukaan  meninggalkan  permukaan  partikel sebelum pembentukan lapisan yang mengeras.
Kemungkinan  terjadi  pergerakan  internal  bahan  isian sebelum pembentukan lapisan yang mengeras.
Peningkatan  nisbah  penyalut:bahan  isian  tidak menyebabkan  perubahan  rendemen  mikrokapsul  yang diperoleh  (Gambar  6).  Walaupun    peningkatan  nisbah penyalut:bahan  isian  menyebabkan  penurunan  proporsi minyak  permukaan,  proporsi  minyak  pada  permukaan mikrokapsul  ini  ternyata  tidak  mempengaruhi  rendemen. Padahal menurut Young et al. (1993a) peningkatan proporsi lemak  menyebabkan  rekoveri  mikrokapsul  dari  pengering semprot  menjadi  sulit  karena  bersifat  lengket.  Pada penelitian  ini  proporsi  minyak  permukaan  mikrokapsul berkisar  antara  10.11–18.86  %.    Kisaran  proporsi  tersebut kemungkinan tidak menyebabkan perbedaan tingkat rekoveri mikrokapsul seinhgga rendemen tidak berbeda nyata.
A B C
64.69a 75.96a 89.33a 84.54a 74.28a 0 20 40 60 80 100 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian Re ten si E P A ( %) 57.33a 67.18a 73.77a 74.09a 62.01a 0 20 40 60 80 100 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian R et en si D H A ( %) 70.42a 79.70a 84.41a 73.19a 62.37a 0 20 40 60 80 100 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyalut:bahan isian R et en si EPA + D H A (%) Gambar 5 Retensi EPA (A), DHA (B), dan EPA+DHA (C) pada berbagai nisbah penyalut:bahan isian (Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  =0.05) 70.83a 71.75a 70.98a 72.63a 75.16a 60 65 70 75 80 2:1 3:1 4:1 5:1 6:1 Nisbah penyaut:bahan isian R en d eme n ( %) Gambar  6   Rendemen  mikrokapsul  pada  berbagai  nisbah penyalut:bahan isian (Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  =0.05 )

## KESIMPULAN
Peningkatan  nisbah  penyalut:  bahan  isian menyebabkan  peningkatan  efisiensi  mikroenkapsulasi sedangkan  proporsi  minyak  permukaan,  kadar  asam  lemak  -3,  dan  tingkat  oksidasi  menurun.    Perlakuan  nisbah penyalut:bahan  isian  tidak  mempengaruhi  retensi  asam lemak  -3,  rendemen,  dan  kadar  asam  lemak  bebas.
Perubahan  karakteristik  mikrokapsul  berkaitan  dengan pelapisan  natrium  kaseinat  yang  lebih  baik  pada  nisbah penyalut:bahan isian yang tinggi.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada  DP2M- Dikti atas dana Penelitian Hibah Bersaing XIII(2) tahun 2006, Sdri.  Amalia  Farra  Sabrina  atas  bantuannya  selama penelitian,  dan  Prof.  Mien  A.  Rifai  atas  pendampingannya pada Pelatihan Penulisan Artikel Ilmiah Terpusat  – DP2M – Dikti Tahun 2007.

## DAFTAR  PUSTAKA
Ambrosone  L,  Cinelli  G,  Mosca  M  and  Ceglie  A.      2006. Susceptibility  of  water-emulsified  extra  virgin  olive oils to oxidation. J Am Oil Chem Soc 83: 165-170.
AOCS.  1989. Official Methods and Recommended Practices of  the  American  Oil  Chemistry  Society .  Ed  ke-4.
Champaign, Illinois: Broadmaker Drive.
Baik MY, Suhendro EL, Nawar WW, McClements DJ, Decker EA  and  Chinachoti  P.    2004.    Effects  of
A B

## C
Hasil Penelitian                                                                        J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIX No. 2 Th. 2008
antioxidants and humidity on the oxidative stability of microencapsulated fish oil. J Am Oil Chem Soc 81(4): 355-360.
Basu  H,  Pernecky  S,  Sengupta  A  and  Liepa  GU.    2006. Coronary heart disease: how do the benefits of  -3 fatty  avids  compare  with  those  of  aspirin, alcohol/red wine, and statin drugs?. J Am Oil Chem Soc 83(12): 985-997.
Bimbo AP.  1998.  Guidelines for characterizing food-grade fish oil . INFORM 9(5): 473-483.
Cerdeira M, Palazolo GG, Candal RJ and Herera ML.  2007 . Factors  affecting  initial  retention  of  a microencapsulated  sunflower  seed  oil/milk  fat fraction blend . J Am. Oil Chem Soc 84: 523-531.
Christopherson LW and Glass RL.  1969.  Preparation of milk fat methyl ester by alcoholysis in an essentially non alcoholic solution. J Dairy Sci 52: 1289.
Connor  WE  and  Connor  SL.    2007.  The  importance  of  fish and  docosahexaenoic  acid  in  Alzheimer  disease . Am J Clin Nutr 85(4): 929-930.
Crawford  MA.,  Bloom  M,  Broadhurst  CI,  Schmidt  WF, Cunnane SC, Galli C, Gehbremeskel K, Linseisen F,  Llyod-Smith  J  and  Parkington  J.    1999 . Evidence for the unique function of docosahexaenoic  acid  during  the  evolution  of  the modern hominid brain. Lipids 34: S39-S45.
Djordjevic  D,  McClements  DJ  and  Decjer  EA.    2004. Oxidative  stability  of  whey  protein-stabilized  oil-in- water  emulsions  at  pH  3:  Potential  omega-3  fatty acid  delivery  systems  (Part  B) . J  Food  Sci 69(5): C356-362.
Dugan Jr, LR. 1996.  Lipids.  In: Fennema OR,  editor. Food Science:  A  Series  of  Monographs .    USA:  Marcel Dekker Inc.
Estiasih  T.  2003.    Peran  natrium  kaseinat  dan  fosfolipida dalam emulsifikasi dan mikroenkapsulasi trigliserida  kaya  asam  lemak  -3  [disertasi]., Yogyakarta:  Program  Pascasarjana,  Universitas Gadjah Mada.
Estiasih T dan Ahmadi K. 2004. Hubungan antara sifat-sifat emulsifikasi dengan stabilitas oksidasi mikrokapsul yang  dihasilkan  dengan  metode  pengeringan semprot . Jurnal Teknologi Pertanian 5(1): 35 – 47.
Estiasih  T,  Adnan  M,  Tranggono,  dan  Suparmo.    2005.
Pengaruh  komposisi  lapisan  pada  permukaan globula  minyak  emulsi  sebelum  pengeringan semprot terhadap sifat-sifat mikrokapsul trigliserida kaya  asam  lemak  -3. Jurnal  Teknolologi  dan Industri Pangan XVI(1): 13-23.
Estiasih  T,  Nisa  FC,  dan  Ahmadi  K.    2006.    Optimasi pemadatan  cepat  pada  pembuatan  minyak  kaya
asam  lemak  -3  dari  hasil  samping  penepungan ikan  lemuru  ( Sardinella  longiceps ). Agritek 14(3):
681-694.
Faldt  P  and  Bergenstahl  B.    1995.    Fat  encapsulated  in spray-dried  food  powders. J  Am  Oil  Chem  Soc 72(2): 171-176.
Garg  ML,  Wood  LG,  Singh  H  and  Moughan  PJ.    2006. Means  of  delivering  recommended  levels  of  long chain  n-3  polyunsaturated  fatty  acids  in  human diets . J Food Sci 71(5): R66.
Ghafoorunissa  AI,  Rajkumar  L  and  Acharya  V.    2005.
Dietary (n-3) long chain polyunsaturated fatty acids prevent sucrose-induced insulin resistance in rats . J Nutrition 135:2634-2638.
Gunstone FD. 1996. Fatty Acid and Lipids Chemistry .  Great Britain: Blackie Academic & Professional.
Hardman  WE.    2002.    Omega-3  fatty  acids  to  augment cancer therapy .  J Nutrition 132: 3508S-3512S.
Hardman WE.  2004 . (n-3) fatty acids and cancer therapy. J Nutrition 134: 3427S-3430S.
Hashimoto  M,  Tanabe  Y,  Fujii  Y,  Kikuta  T,  and  Shido  HO. 2005.  Chronic administration of docosahexaenoic acid ameliorates the impairment of spatial cognition learning  ability  in  amyloid  ß–infused  rats. J Nutrition 135: 549-555.
Hogan  SA,  McNamee  BF,  O’Riordan  ED  and  O’Sullivan  M.
2001.    Microencapsulating  properties  of  whey protein concentrate 75. J Food Sci 66(5): 675-680.
Högström  M,  Nordström  P  and  Nordström  A.  2007.    n–3 Fatty  acids  are  positively  associated  with  peak bone  mineral  density  and  bone  accrual  in  healthy men: the NO 2 Study . Am J Clin Nutr 85(12): 803– 807.
Howe, PRC, Downing JA, Grenyer BFS, Grigonis-Deane EM and Bryden WL.  2002.  Tuna fishmeal as source of DHA  for  n-3  PUFA  enrichment  of  pork,  chicken, and eggs. Lipids 37: 1067-1076.
IUPAC.    1979. Standard  Methods  for  the  Analysis  of  Oils, Fats, and Derivatives .  Ed ke-6. British: Pergamon Press.
Jolly  CA,  Muthukumar  A,  Avula  CPR,  Troyer  D  and Fernandes  G.    2001.  Autoimmune-prone (NZBXNZW) (1) mice fed a diet enriched with (n-3) fatty acids. J Nutrition 131: 2753-2760.
Jónsdóttir  RM,  Bragadóttir  M  and  Arnarson  GÖ.    2005. Oxidatively  derived  Volatile  compounds  in microencapsulated  fish  oil  monitored  by  solid- phase  microextraction  (SPME) . J  Food  Sci 70(7): C433-440.
Kagami  YSS,  Fujishima  N,  Matsuda  K  and  Matsumura  Y. 2003.    Oxidative  stability,  structure,  and  physical characteristics  of  microcapsules  formed  by  spray drying  of  fish  oil  with  protein  and  dextrin  wall materials .  J  Food Sci 68(7): 2248-2255.
Leitzman MF et al .  2004.  Dietary intake of n-3 and n-6 fatty acids  and  the  risk  of  prostate  cancer . Am  Clin  J Nutr 80: 204-216.
Lin CC, Lin SY and Hwang LS.  1995.  Microencapsulation of squid  oil  with  hydrophilic  macromolecules  for oxidative  and  thermal  stabilization. J  Food  Sci 60(1): 36-39.
Lyberg  AM,  Fasoli  E  and  Adlercreutz  P.    2005.   Monitoring the  oxidation  of  docosahexaenoic  acid  in  lipids. Lipids 40: 969-979.
Moreau DL and Rosenberg M.  1996.  Oxidative stability of anhydrous  milkfat  microencapsulated  in  whey proteins. J  Food Sci 61(1): 39-43.
Mollard  RC,  Kovacs  HR,  Fitzpatrick-Wong  SC    and  Weiler HA.  2005.  Low Levels of Dietary Arachidonic and Docosahexaenoic  Acids  Improve  Bone  Mass  in Neonatal  Piglets,  but  Higher  Levels  Provide  No Benefit . J Nutrition 135:505-512.
Magdassi  S  and  Vinetsky  Y.    1996.    Microencapsulation  of Oil-in-Water  Emulsions  by  Proteins.  In:  Benita  S ,editor. Microencapsulation:  Methods  and Industrial  Application .    New  York:  Marcel  Dekker Inc.
Mori TA, Bao DQ, Burke V, Puddey IE, Watts GF and Beilin LJ. 1999.  Dietary fish as a major component of a weight-loss  diet:  effect  on  serum  lipids,  glucose, and insulin metabolism in overweight hypertensive subjects. Am J Clin Nutr 70(5): 817-825.
Onwulata CI, Smith PW and Holsinger VH.  1994 . Physical properties  of  encapsulated  spray-dried  milkfat. J Food Sci 59(2): 316-320.
Rosenberg  M,  Kopelman  IJ  and  Talmon  Y.    1985. A
scanning electron microscopy study of microencapsulation. J Food Sci 50: 139-144.
Rotstein NP, Avedalno MI and Politi LE.  1999.  Essentiality of  docosahexaenoic  acid  in  retina  photoreceptor cell development. Lipids 34: S115.
Sauer LA, Dauchy RT, Blask DE, Krause JA, Davidson LK, and  Dauchy  EM.  2005 . Eicosapentaenoic  acid suppresses  cell  proliferation  in  MCF-7  human breast  cancer  xenografts  in  nude  rats  via  a pertussis  toxin–sensitive  signal  transduction pathway . J Nutrition 135: 2124-2129.
Schaefer  EJ et  al. 2006.    Plasma  phosphatidylcholine docosahexaenoic acid content and risk of dementia and  Alzheimer  disease . Arch  Neurol 63:1545- 1550.
Su  KP,  Shen  WW  and  Huang  SY.    2000.    Effects  of polyunsaturated  fatty  acids  on  psychiatric  disorders . Am J Clin Nutr 72(5): 1241.
Shen  Z,  Udabage  P,  Burgar  L  and  Asgustin  MA.    2005. Characterization  of  fish  oil-in-water  emulsion  using light-scattering,    nuclear  magnetic  resonance,  and gas-chromatography  headspace  analysis . J  Am  Oil Chem Soc 82: 797-802.
Sheu TY and Rosenberg M.  1995.   Microencapsulation by spray  drying  ethyl  caprylate  in  whey  protein  and carbohydrate  wall  system. J    Food  Sci 60(1):  98-
103 .
Spector AA.  1999.  Essentiality of fatty acids. Lipids 34: S1- S3.
Srinivasan  M,  Singh  H  and  Munro  PA.    1996.    Sodium caseinate-stabilized  emulsions:  factors  affecting coverage  and  composition  of  surface  proteins. J
Agric Food Chem 44: 3807-3811.
Tavani A et al .  2003.  n-3 polyunsaturated fatty acids intake and cancer risk in Italy and Switzerland. Int J Cancer 105: 113-116.
Terry PD, Rohan TE and Wolk A.  2003 . Intakes of fish and marine  fatty  acids  and  the  risks  of  cancer  of  the breast  and  prostate  and  of  other  hormone-related cancers: A review of the epidemiologic evidence. Am J Clin Nutr 77(3): 532-543.
Tiemeier H, Tuije HR van, Hofman A, Kilian AJ and Breteler MMB.    2003.    Plasma  fatty  acid  composition  and depression  are  associated  in  the  elderly:  the Rotterdam study. Am J Clin Nutr 78(1): 40-46.
Uauy R and.Hoffman DR.  2000.  Essential fat requirements of preterm infants. Am J Clin Nutr 71(1): 245S-250S.
Wagner LA and Warthesen JJ.  1995 . Stability of spray-dried encapsulated  carrot  carotenes. J  Food  Sci 60(5): 1048-1053.
Young  SL,  Sarda  X  and  Rosenberg  M.    1993a. Microencapsulating  properties  of  whey  proteins.  1. Microencapsulation of anhydrous milkfat. J Dairy Sci 76: 2868-2877.
Young  SL,  Sarda  X  and  Rosenberg.    1993b.
Microencapsulating  properties  of  whey  proteins.  2. Combination of whey proteins with carbohydrates .  J Dairy Sci 76: 2878-2885.