## PENGARUH PENAMBAHAN ENZIM FITASE PADA RANSUM DENGAN LEVEL PROTEIN BERBEDA TERHADAP RETENSI NITROGEN DAN
PENGGUNAAN PROTEIN NETTO (PPN) AYAM BROILER
(PHYTASE ENZYMES SUPLEMENTED IN THE DIETARY PROTEIN LEVEL DIET ON NITROGEN RETENTION AND NET PROTEIN UTILIZATION (NPU) OF BROILER
CHICKENS)
Kartika Tris Apriliyana*), Edjeng Suprijatna** dan Umiyati Atmomarsono** Laboratorium Ternak Unggas Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro Jln. Kampus drh. R. Soejono Kusumowardojo Tembalang, Semarang 50275 E-mail : teeka.tries@gmail.com
*)Mahasiswa Pasca Sarjana Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro **)Staff Pengajar Pasca Sarjana Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji penggunaan enzim fitase dalam ransum pada level protein yang tepat untuk meningkatkan retensi nitrogen dan penggunaan protein netto (PPN) ayam broiler.  Materi yang digunakan dalam penelitian adalah ayam broiler dengan bobot badan 108,14 ± 11,44 g (CV 10,58%) umur 1 minggu sebanyak 128 ekor (unsex) yang dipelihara dalam 16 unit kandang selama 6 minggu, masing-masing unit berisi 8 ekor ayam.  Penambahan fitase dilakukan pada minggu kedua pemeliharaan.   Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan 4 perlakuan dan 4 ulangan yaitu   T0 (Ransum protein 23%), T1 (Ransum protein 21% + fitase 1000 FTU/kg), T2 (Ransum protein 23% + enzim fitase 1000 FTU/kg), T3 (Ransum protein 23% + mineral 1%).  Data dianalisis ragam menggunakan uji F pada level 5%. Uji Duncan dilakukan untuk melihat perbedaan antar perlakuan apabila terdapat pengaruh perlakuan. Parameter penelitian meliputi konsumsi nitrogen, retensi nitrogen dan penggunaan protein netto (PPN).  Hasil penelitian perlakuan menunjukkan berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap konsumsi nitrogen dan retensi nitrogen, tetapi tidak berpengaruh (P>0,05) terhadap penggunaan protein netto (PPN). Kesimpulan dalam penelitian penambahan fitase dalam ransum protein rendah dan tinggi  belum  meningkatkan  retensi  nitrogen,  tetapi  mampu  menghasilkan  penggunaan  protein netto (PPN) yang lebih baik.
Kata kunci : enzim fitase, level protein, retensi nitrogen, broiler

## ABSTRACT
The research was conducted to studying the effect of phytase enzymes suplemented in the dietary protein level diet on nitrogen retention and net protein utilization (NPU) of broiler chickens. Material the research used were 128 broiler chickens at 8 days old   initial body weight 108,14 ± 11,44  g  (CV  10,58%)  housed  in  16  pen  for  6  weeks.  Completely  Randomized  Design  (CRD) involving 4 treatments with 4 replications were used in this study.  They were T0 (23% protein diet), T1 (21% protein diet + 1000 FTU phytase enzymes), T2 (23% protein diet + 1000 FTU phytase enzymes),  T3  (23%  protein  ration  +  1%  bone  meal).  The  data  was  analyzed  using  F  test  to determine the effect of treatment, continued by Duncan's multiple range test with probability level at 5% if any significant effect was found.  Parameters research were nitrogen consumption, nitrogen retention and net protein utilization (NPU).   The results showed that the suplemented of phytase enzymes in the diet that there was significant effect (P<0,05) on the nitrogen consumption and nitrogen retention, but net protein utilization (NPU) did not affected (P<0,05).  The conclusion of this phytase enzymes suplemented in the 21% and 23% protein ration results have not affected in nitrogen retention with better net protein utilization (NPU).
Key words : phytase enzymes, protein level, nitrogen retention, broiler chickens.

## PENDAHULUAN
Asam fitat merupakan zat antinutrisi yang  terdapat  dalam  kacang-kacangan yang  dapat  bervalensi  dengan  mineral (Ca,  Mg,  Zn,  Fe)  dan  protein  sehingga menyebabkan  terjadinya  gangguan kecernaan  yang  dapat  menurunkan  nilai gizi.    Ketersediaan  protein  sebagai substrat  dalam  tubuh  berhubungan  erat dengan  metabolisme  protein  khususnya proses deposisi protein yang menunjang pertumbuhan  (Suzuki  et  al.,  1987). Terbentuknya senyawa fitat-mineral atau fitat-protein  yang  tidak  larut  dapat menyebabkan  penurunan  ketersediaan mineral  dan  nilai  gizi  protein  pakan. Mineral-mineral  dan  protein  yang membentuk komplek dengan fitat tersebut tidak dapat diserap oleh dinding usus bagi ternak (Kornegay et al., 1999). Trisiwi et a l .   ( 2 0 0 4 )   m e n y e b u t k a n   b a h w a ketidakseimbangan  asam-asam  amino b e r p e n g a r u h   t e r h a d a p   e f i s i e n s i penggunaan  protein.    Tillman  et  al. (1998),  menyatakan  bahwa  konsumsi energi  yang  cukup  penting  untuk m e n g e v a l u a s i   k u a l i t a s   p r o t e i n berdasarkan retensi nitrogen, jika retensi nitrogen  menurun  maka  kualitas  protein ransum rendah, yaitu jumlah asam amino kurang atau komposisi asam amino tidak seimbang.  Asam  fitat  yang  berinteraksi dengan  protein  dan  mineral  perlu  diurai karena  ayam  tidak  dapat  mengkatalis asam  fitat,  sehingga  diberikan  enzim fitase  untuk  meningkatkan  kecernaan nutrisi, dalam hal ini yaitu retensi nitrogen dan penggunaan protein netto ransum.
Enzim  fitase  merupakan  enzim yang dapat mengkatalisis reaksi hidrolisis asam  fitat  dan  menghasilkan  ortofosfat anorganik  serta  senyawa  inositol  fosfat yang  lebih  rendah.    Enzim  fitase  dapat mengatasi  efek  negatif  dari  asam  fitat terhadap performan ternak.  Penggunaan enzim  sebagai  suplementasi  dalam ransum  dapat  menguntungkan  secara ekonomi bila dapat meningkatkan secara nyata  efisiensi  ransum  dan  menekan harga ransum. Suplementasi enzim fitase
Natuphos  sebanyak  500  fitase  total  unit (FTU)/kg pada ransum ayam broiler yang mengandung  P-tersedia  rendah  (0.22% untuk  umur  1  hari–3  minggu  dan  0.14% untuk  ayam  umur  3–6  minggu),  mampu m e m p e r b a i k i   p e r f o r m a n   d a n meningkatkan penggunaan mineral P, Ca, Mg dan Zn (Viveros et al., 2002).  Retensi nitrogen  pada  penelitian  Yusriani  (2011) sebesar 76,73% pada perlakuan bungkil b i j i   j a r a k   p a g a r   f e r m e n t a s i   5 % ditambahkan  1000  FTU  lebih  baik dibandingkan  dengan  perlakuan  bungkil biji  jarak  pagar  fermentasi  ditambahkan enzim  selulase.    Unggas  tidak  dapat menghasilkan  enzim  fitase  pemecah asam fitat sehingga perlu diberikan enzim fitase dalam pakan, hal ini bertujuan untuk meningkatkan penyerapan nutrisi protein ransum dan penggunaan protein netto.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk mengkaji penggunaan enzim fitase dalam  ransum  pada  level  protein  yang tepat untuk meningkatkan retensi nitrogen dan  penggunaan  protein  netto  (PPN) ayam  broiler.    Hasil  penelitian  ini bermanfaat  untuk  memberikan  informasi serta  mengetahui  retensi  nitrogen  dan penggunaan  protein  netto  (PPN)  ayam broiler  akibat  pengaruh  penambahan enzim  fitase  pada  ransum  level  protein berbeda.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  dilakukan  di  kandang Fakultas  Peternakan  dan  Pertanian Universitas  Diponegoro  pada  bulan Desember  2013-Januari  2014.  Materi yang digunakan dalam penelitian adalah ayam broiler dengan bobot badan 108,14 g ± 11,44 g (CV 10,58%) umur 1 minggu sebanyak  128  ekor,  enzim  fitase  merk Natuphos 5000®, vaksin gumboro, vaksin NDIB dan vaksin ND Lasota.   Komposisi dan kandungan nutrisi penyusun ransum terdapat  pada  Tabel  1  yang  terdiri  dari jagung  kuning,  bekatul,  bungkil  kedelai, PMM  (Poultry  Meat  Meal),  tepung  ikan, tepung  tulang  steam.  Ransum  dalam bentuk  mash.    Kandang  perlakuan
kecernaan  menggunakan  kandang  cage sejumlah 16 buah.
Ransum dan air minum diberikan ad libitum.  Ransum  perlakuan  dengan penambahan enzim fitase diberikan mulai hari ke-8 sampai hari ke-42. Setiap akhir minggu  dilakukan  penimbangan  bobot badan  untuk  mengetahui  pertambahan b o b o t  b a d a n .  Pe n g a mb i l a n   d a ta konsumsi  protein  dilakukan  setiap  hari dengan  menimbang  jumlah  konsumsi ransum  dikalikan  dengan  kadar  protein ransum.  Untuk  pengambilan  data
kecernaan  protein  diambil  1  ekor  ayam kemudian  ditempatkan  pada  kandang cage  dan  dipuasakan  selama  24  jam namun  air  minum  tersedia  ad  libitum. Ayam  diberi  pakan  sebanyak  70  g  per ekor dengan metode force feeding setelah pemuasaan selesai. Metode force feeding tidak  dilakukan  dengan  memasukkan pakan  langsung  ke  tembolok,  namun dengan membentuk pakan menjadi bolus (gumpalan)  lalu  dimasukkan  ke  mulut ayam, pakan harus habis dalam waktu 1 - 2 jam, namun air minum tetap disediakan
T0 T1 T 2 T3 Bahan Pakan : ----------------------------------(%)----------------------------------------------------- Jagung 42,50 47,50 42,50 41,50 Bekatul 20,50 20,50 20,50 20,50 Tepung ikan 8,00 8,00 8,00 8,00 Bungkil kedelai 23,00 15,50 23,00 22,00 PMM 6,00 8,50 6,00 7,00 Tepung tulang steam 0 0 0 1,00 Enzim Fitase 0 1.000 F TU 1.000 FTU 0 Jumlah 100 100 100 100 Kandungan : EM (k kal/kg)* 3.163,40 3.155,98 3.163,40 3.126,21 Protein (%)* 23,17 21,36 23,17 23,14 Serat Kasar (%)* 5,08 4,84 5,08 5,04 Lemak Kasar (%)* 7,64 8,94 7,64 8,47 Ca (%)* 0,79 0,90 0,79 1,07 P-tersedia (%)* 0,53 0,57 0,53 0,67 Lysin* 1,53 1,42 1,53 1,54 Metionin* 0,50 0,49 0,50 0,50 Arginin* 1,80 1,69 1,80 1,81 Triptofan* 0,29 0,26 0,29 0,29 Vitamin B5** 4,74 5,25 4,74 4,77 Vitamin B6** 5,09 4,90 5,09 4,95 Fitase (U/kg) 0 1.000,00 1.000,00 0
Sumber :   *   Kandungan nutrisi bahan pakan ransum dianalisis di Laboratorium Ilmu Nutrisi dan Pakan.
** Perhitungan menurut tabel Kearl (1982) dan Wahju (2004)
Percobaan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  4  perlakuan  dan  4 ulangan, setiap unit percobaan diisi 8 ekor DOC. Ransum perlakuan terdiri dari:
T0 : Ransum protein 23% T1 : Ransum protein 21% + enzim fitase 1000 FTU/kg T2 : Ransum protein 23% + enzim fitase 1000 FTU/kg T3 : Ransum protein 23% + tepung tulang 1%

## Tabel 1. Bahan Ransum dan Kandungan Nutrisi Ransum Penelitian
hingga saat penyembelihan.   Empat jam setelah  pakan  habis  dikonsumsi,  ayam d i s e m b e l i h   d a n   o r g a n   d a l a m n y a dikeluarkan.    Digesta  diambil  dari  usus halus  bagian  ileum,  yaitu  1  cm  setelah Meckel's diverticulum hingga batas 1 cm sebelum  ileo-ceca  junction.    Digesta diletakkan  dalam  nampan  dan  dijemur selama  4  hari,  setelah  itu  dianalisis kandungan  nitrogennya  dengan  metode mikro  Kjehldahl  di  Laboratorium  Ilmu Nutrisi  dan  Pakan  Fakultas  Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro.
Data  diolah  menggunakan  sidik ragam  dan  apabila  menunjukkan p e n g a r u h   n y a t a   ( P < 0 , 0 5 )   a k i b a t perlakuan dilanjutkan dengan uji wilayah ganda  Duncan  untuk  mengetahui perbedaan antar perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  penambahan  enzim fitase pada ransum ayam broiler dengan level protein berbeda terhadap konsumsi n i t r o g e n ,   r e t e n s i   n i t r o g e n   d a n penggunaan  protein  netto    ayam  broiler disajikan dalam Tabel 2.

## Konsumsi Nitrogen
Pengaruh  penambahan  enzim fitase pada ransum dengan level protein berbeda pada ayam broiler berpengaruh nyata  (P<0,05)  terhadap  konsumsi nitrogen  (g/ekor/hari)  disajikan  dalam Tabel  2.    Berdasarkan  uji  Duncan, diperoleh  bahwa  konsumsi  nitrogen perlakuan T3 (protein 23% + mineral 1%) meningkat  secara  nyata  dibandingkan
perlakuan T0, T1 dan T2 yang disebabkan konsumsi  ransum  perlakuan  berbeda nyata.    Konsumsi  nitrogen  dipengaruhi oleh  konsumsi  ransum,  semakin  baik metabolisme  zat-zat  makanan  dalam tubuh maka akan berpengaruh konsumsi ransumnya. Hal ini sejalan dengan Wahju (2004),  besarnya  konsumsi  ransum mencerminkan  besarnya  protein  yang dikonsumsi.    Konsumsi  ransum  yang tinggi,  maka  konsumsi  protein  juga semakin tinggi, begitu juga sebaliknya jika konsumsi ransum rendah maka konsumsi protein  juga  rendah.    Perlakuan  T3 (protein  23%+mineral  1%)  mengalami peningkatan    ketersediaan    fosfor    bagi tubuh    ternak    akibat    penambahan mineral. Menurut Anggorodi (1994), fosfor mempunyai  peran  dalam  metabolisme karbohidrat.  Sesuai  dengan  penelitian Suthama  (2006),  yang  menyatakan bahawa  perbaikan  kualitas  ransum dengan  menggunakan  dedak  padi fermentasi  dan  penambahan  sumber mineral  Ca  dan  P  ternyata  dapat meningkatkan retensi nitrogen. Penelitian ketersediaan fosfor dalam defluorionated fosfat  dengan  solubilitas  fosfor  yang berbeda oleh Coffey et al., (1994), secara nyata  meningkatkan  konsumsi  ransum, pertambahan  bobot  badan,  konversi ransum,  kekuatan  tulang  tibia  ayam broiler.
Augspurger  et  al.  (2003),  yang menyatakan  bahwa  enzim  fitase  aktif didalam  saluran  pencernaan  unggas. Ikatan  fitat  dengan  fosfor  lepas  akibat kerja enzim fitase sehingga meningkatkan
Tabel  2.  Pengaruh  Penambahan  Enzim  Fitase  pada  Level  Protein  Berbeda  terhadap Konsumsi Nitrogen, Retensi Nitrogen dan Penggunaan Protein Netto Ayam Broiler
Parameter Perlakuan T0 T1 T2 T3 Konsumsi Nitrogen (g/ek or) 2,00±0,01 b 2,19±0,02 b 2,42±0,04 b 2,88±0,03 a Retensi Nitrogen (g/ekor) 2,99±0,01 a 2,72±0,02 b 2,96±0,4 a 2,97±0,02 a Penggunaan Protein Netto 0,99±0,005 0,98±0,008 0,98±0,014 0,99±0,009
Keterangan : Superskrip berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05)
Kartika Tris Apriliyana*, Edjeng Suprijatna** dan Umiyati Atmomarsono** : Pengaruh Penambahan Enzim Fitase
ketersediaan  mineral  fosfor,  protein  dan energi.  Ahmed et al., (2004), menyatakan bahwa  konsumsi  ransum,  konversi ransum,  bobot  badan  ayam  broiler meningkat  akibat  suplementasi  fitase pada ransum berbasis tepung kedelai.

## Retensi Nitrogen
Berdasarkan  analisis  ragam, perlakuan penambahan enzim fitase pada ransum  dengan  level  protein  berbeda memberikan  pengaruh  nyata  (P<0,05) terhadap  retensi  nitrogen  ayam  broiler yang  disajikan  dalam  Tabel  2.    Menurut McLeod  et  al.  (1988)  yang  disitasi  oleh Mirnawati (2013) bahwa retensi nitrogen pada  ayam  pedaging  dapat  mencapai 1,50-1,73 g.   Menurut penelitian Yusriani et  al.  (2011),  enzim  fitase  memberikan efek  yang  lebih  baik  dari  pada  enzim selulase  atau  campuran  fitase+selulase dalam kombinasi dengan bungkil biji jarak pagar  fermentasi  dalam  meningkatkan energi termetabolis dan retensi nitrogen. Hal ini disebabkan konsumsi protein dan kecernaan protein yang juga berpengaruh nyata  dengan  adanya  penambahan enzim  fitase  dalam  ransum  yang menunjukkan  semakin  banyaknya nitrogen  yang  tertahan  dalam  tubuh karena  adanya  tambahan  protein  dari enzim  fitase.    Enzim  fitase  dapat memecah  ikatan  antara  fitat  dengan p r o t e i n   d a n   m i n e r a l   s e h i n g g a ketersediaan  nutrisi  protein  dan  mineral meningkat. Lim et al. (2003) menyatakan suplementasi  enzim  fitase  selain  dapat meningkatkan  kecernaan  bahan  kering, lemak kasar dan mineral-mineral penting juga  secara  nyata  dapat  meningkatkan retensi nitrogen.   Menurut Wahju (2004), meningkatnya  konsumsi  nitrogen  diikuti dengan  meningkatnya  retensi  nitrogen tetapi  tidak  selalu  disertai  dengan peningkatan  bobot  badan  bila  energi ransum rendah.
Hasil  penelitian  menunjukkan  T0 (ransum  kontrol  protein  23%)  tidak berbeda dengan T2 (protein 23%+ 1000
FTU/kg)  dan  T3  (protein  23%+mineral 1%)  tetapi  berbeda  dengan  T1  (protein 21%+fitase 1000 FTU/kg).   Penambahan enzim  fitase  pada  protein  rendah menunjukkan  retensi  yang  lebih  kecil dibandingkan  dengan  retensi  ransum kontrol, penambahan fitase pada protein tinggi  dan  ransum  yang  ditambahkan mineral.  Akibat  penambahan  mineral, ketersediaan  dan  absorbsi  mineral meningkat.  Metabolisme  mineral  selalu membutuhkan  senyawa  lain  seperti protein, semakin banyak asupan Ca maka semakin tinggi pula aktivitas CANP yang dapat  meningkatkan  degradasi  protein. Sorensen  dan  Tribe  (1983)  menyatakan kalsium  yang  berperan  dalam  proses deposisi  protein  berasal  dari  kalsium ransum  yang  diabsorbsi  di  usus  halus. Kalsium  yang  diserap  masuk  ke  dalam darah  dan  ditransportasikan  ke  jaringan yang  membutuhkan  (tulang  dan  daging) berada dalam tiga bentuk yaitu berupa ion bebas,  terikat  dengan  protein,  dan  ion yang tidak dapat larut (Pond et al., 1995). Enzim  protease  yang  disebut  dengan CANP  dapat  bersifat  proteolitik  apabila tersedia  cukup  kalsium  (Suzuki  et  al., 1987).

## Penggunaan Protein Netto (PPN)
Penggunaan  Protein  Netto  (PPN) menggambarkan kecepatan dan efisiensi penyerapan  protein  dalam  ileum. Berdasarkan  analisis  ragam,  perlakuan penambahan  enzim  fitase  pada  ransum dengan  level  protein  berbeda  tidak memberikan  pengaruh  nyata  (P>0,05) terhadap penggunaan protein netto ayam broiler  pada  ransum  protein  rendah maupun  tinggi  yang  disajikan  dalam Tabel2. Efisiensi penyerapan protein dari ransum  bertaraf  protein  rendah  yang ditambahkan fitase (T1) dapat menyamai ransum  bertaraf  protein  tinggi  (T0), protein  tinggi  yang  ditambahkan  fitase (T2) dan protein tinggi ditambah mineral (T3). Rerata PPN pada penelitian ini yaitu 0,98±0,003, yang menunjukkan nilai lebih
tinggi  dibandingkan  penelitian  menurut Nasoetion (2001), yang menyatakan PPN pada ayam broiler umur 21 hari sebesar 0,80.  Peningkatan  kecepatan  dan efisiensi  penyerapan  protein  ditunjukkan dengan  adanya  peningkatan  nilai penggunaan protein netto.  Ransum yang memiliki keseimbangan asam amino lebih efisien untuk diserap dalam dinding usus. Trisiwi et al. (2004) menyebutkan bahwa ketidakseimbangan  asam-asam  amino b e r p e n g a r u h   t e r h a d a p   e f i s i e n s i penggunaan  protein.    Ransum  dalam penelitian  ini  memiliki  imbangan  lisin  : arginin  yang  sama  antar  perlakuan sehingga  tidak  berdampak  pada penurunan  penyerapan  satu  sama  lain. Menurut  de  Carvalho  et  al.  (2012),  lisin d a n   a r g i n i n   m e m i l i k i   h u b u n g a n a n t a g o n i s m e ,   k e d u a n y a   b e r s i f a t kompetitif  dalam  penyerapannya. Menurut  McDonald  et  al.  (2002),  asam a m i n o   y a n g   m e l e b i h i   k e b u t u h a n didegradasi  dalam  hati  dan  dihasilkan amonia  yang  bersifat  toksik,  sebagian besar amonia pada unggas diekskresikan dalam bentuk asam urat.
PPN  berkaitan  dengan  retensi kalsium,  dalam  penelitian  ini  PPN  dan retensi  Ca  tidak  berbeda  nyata  antar perlakuan.  PPN  menentukan  banyaknya protein  yang  diserap  usus  untuk  dapat dimanfaatkan  oleh  ayam.  Protein  yang diserap  dalam  usus  juga  dimanfaatkan dalam  transportasi  kalsium,  yaitu  untuk mengikat  kalsium  pada  mukosa  usus yang  dikenal  sebagai  calcium  binding protein  (CaBP).  Menurut  Guyton  (1997), protein berperan dalam pengikat Ca saat proses  transportasi  Ca  secara  difusi dalam sel usus.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  penambahan  fitase 1000  FTU/kg  dalam  ransum  protein rendah  dan  tinggi  belum  meningkatkan konsumsi  ransum.  Penambahan  fitase pada protein rendah dapat menghasilkan
nilai  PPN  yang  sama  dengan  ransum protein  tinggi  yang  ditambahkan  fitase dan mineral dengan retensi nitrogen yang lebih  kecil.  Pada  ransum  protein  21% yang  ditambahkan  fitase  menunjukkan kualitas  protein  yang  diretensi  T1  lebih baik  dibandingkan  ransum  kontrol, ransum  23%  yang  ditambah  fitase maupun ransum 23% yang ditambahkan mineral.
D a p a t   d i s a r a n k a n   b a h w a penambahan  fitase  dan  mineral  dalam r a n s u m   d a p a t   d i g u n a k a n   u n t u k meningkatkan  penggunaan  protein  netto ayam broiler.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed, F., M. S. Rahman, S. U. Ahmed and M. Y. Miah. 2004. Performance of broiler on phytase supplemented soybean  meal  based  diet.  Poultry Sci. 3 (4) :266-271.
Anggorodi, R. 1995. Nutrisi Aneka Ternak Unggas.  PT.  Gramedia  Pustaka Utama, Jakarta.
Augspurger. N. R., D. M. Webel., X.G. Lei and  D.  H.  Baker.  2003.  Efficacy  of an  E.  Coli  phytase  expressed  in yeast  for  releasing  phytate-bound phosphorus  in  young  chick  and pigs. J. Anim. Sci. 81 : 474-483.
Caldwell, R.A. 1992. Effect of calcium and phytic  acid  on  the  activation  of trypsinogen  and  the  stability  of trypsin. J. Agric. A Food Chem. 40 : 406-413.
Coffey,  R.  D.,  K.  W.  Mooney,  G.  L. Cromwell  and  D.  K.  Aaron.  1994. Biological availability of phosphorus in  defluorinated  phosphates  with different  phosphorus  solubilities  in neutral ammonium citrate for chicks and  pigs.  J. Anim.  Sci.  72  :  2653- 2660.
Kartika Tris Apriliyana*, Edjeng Suprijatna** dan Umiyati Atmomarsono** : Pengaruh Penambahan Enzim Fitase
de  Carvalho,  F.B.,  J.H.  Stringhini,  M.S. Matos,  R.M.J.  Filho,  M.B.  Cafe, N.S.M. Leandro, and M.A. Andrade. 2012.  Performance  and  nitrogen balance  of  laying  hens  fed increasing levels of digestible lysine and  arginine.  R.  Bras.  Zootec.  41 (10) : 2183 - 2188.
Guyton, A . C. and J. E. Hall. 1997. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi ke- 9.  EGC.  Penerbit  Kedokteran, Jakarta.  (Diterjemahkan  Oleh  :  I Setiawan  K.A.  Tengadi  dan  A. Santoso).
Kearl, L. C. 1982. Nutrient Requirements of  Ruminants  in  Developing Countries.  International  Feedstuffs I n s t i t u t e   U t a h   A g r i c u l t u r a l Experiment  Station  Utah  State University, Logan Utah.
Kornegay  E.T.,  Z.  Yi,  and  D.H  Baker. 1999.    Effect  of  supplemental natuphos phytase on trace mineral availability  for  poultry.    Di  dalam: Coelho MB, Kornegay ET. Phytase in  Animal  Nutrition  and  Waste Management.   A  BASF  Reference M a n u a l .     E d   k e - 2 .     B A S F Corporation. Hlm 497 - 506.
Lim,  H.S.,  H.,  Namkung  and  I.K.,  Paik. 2 0 0 3 .   E f f e c t s   o f   p h y t a s e s u p p l e m e n t a t i o n   o n   t h e performance,  egg  qua  lity,  and phosphorus excretion of laying hens fed differet levels of dietary calcium and  nonphytate  phosphorus. Poultry Sci. 82: 92-99.
McDonald,  P.,  R.  A.  Edward,  J.  F.  G. Greenhalgh  dan  C.  A.  Morgan. 2002.  Animal  Nutrition.  Ed  ke-6. Longmann  Singapore  Publishers (Pte) Ltd. Singapore.
McLeod,  M.G.,  C.  C.  Whitehead,  H.  D. Griffin  dan  T.  R.  Jewitt.  1988. Energy  and  nitrogen  retention  and
loss  in  broiler  chickens  genetically selected  for  leanness  and  fatness. Br. Poultry Sci. 67: 285-292
Mirnawati,  B.  Sukamto  dan  V.,  D. Yunianto. 2013. Kecernaan protein, retensi nitrogen dan massa protein daging  ayam  broiler  yang  diberi ransum daun murbei (Morus alba L) yang  difermentasi  dengan  cairan rumen. JITP 3 (1) : 25-32.
Nasoetion,  M.H.  2001.  Pengaruh Pemberian  Kelenjar  Tiroid  Sapi P a s c a   P e m b a t a s a n   P a k a n t e r h a d a p   P e n a m p i l a n   d a n Penggunaan Protein Ayam Broiler. Fakultas  Peternakan  Universitas Diponegoro, Semarang. (Tesis)
Pond, W. G., D. C. Church and K. R. Pond. 1995.  Basic  Animal  Nutrition  and Feeding.  Edisi  ke-4.  John  and
Willey, New York
Sorensen,  A.  N.  and  D.  E.  Tribe.  1983. Dynamic  Biochemistry  of  Animal Production. Elsevier, New York.
Steel,  R.G.D.  dan  J.H.  Torrie.  1995. Prinsip  dan  Prosedur  Statistika  : Suatu  Pendekatan  Biometrik Cetakan  ke-4.  PT  Gramedia P u s t a k a   U t a m a ,   J a k a r t a . (Diterjemahkan oleh B. Sumantri).
Suthama,  N.  2006.  Kajian  aspek  protein turnover  pada  ayam  Kedu  periode pertumbuhan.  Media  Peternakan Agustus 2006 : 47 – 53.
Suzuki,  K.  S.  Ohno,  Y.  Emori,  S.  Inaroh and  H.  Kawasaki.  1987.  Calsium activated  neutral  protease  (CANP) and  its  biological  implications. Progress Clin. Biochem. J. Medical.
5: 44-63
Tillman, A., H. Hartadi, S. Reksohadiprojo, S .   P r a w i r o k u s u m o ,   d a n   S . Lebdosoekojo. 1998. Ilmu Makanan Ternak  Dasar.  Universitas  Gadjah Mada Press, Yogyakarta.
Trisiwi,  H.F.,  Zuprizal,  dan  Supadmo. 2004.  Pengaruh  level  protein dengan  koreksi  asam  amino esensial  dalam  pakan  terhadap penampilan  dan  nitrogen  ekskreta ayam kampung. Buletin Peternakan 28 (3): 131 – 141.
Viveros  A,  A.  Brenes,  I.  Arija  and  C. Centeno. 2002. Effects of microbial
phytase suplementation on mineral utilization  and  serum  enzyme activities  in  broiler  chicks  fed different levels of phosphorus. Poult Sci 81:1172–1183.
Wahju,  J.  2004.  Ilmu  Nutrisi  Unggas. Gadjah  Mada  University  Press, Yogyakarta.
Yusriani, Y., T. Toharmat, Sumiati, E. Wina and  A.  Setiyono.  2011.  Effect  of fermented  Jatropha  curcas  meal combined  with  enzymes  on metabolizable  energy,  retention  of N, P, Ca and digesteble crude fiber. JITV 16(3): 163-172.
Kartika Tris Apriliyana*, Edjeng Suprijatna** dan Umiyati Atmomarsono** : Pengaruh Penambahan Enzim Fitase