Identifikasi Tipe Sel Hemosit Larva Serangga Trigona Sp ( Hymenoptera : Apidae ) dan Fungsinya Terhadap Pertahanan Tubuh
Maria Marselina Bay a,b* , Tjandra Anggraeni b a Fakultas Ilmu Pendidikan, Universitas Timor, Kefamenanu, TTU – NTT, 85613, Indonesia, email : marselinabay@gmail.com
b Sekolah Ilmu dan Tekhnologi Hayati, Institut Teknologi Bandung, Jawa Barat 40123 Indonesia,

## Article Info

## Abstrak
Tipe  hemosit  serangga  telah  banyak  digambarkan,  namun  pengklasifikasian  secara  komperhensif  masih  sulit  untuk  dilakukan  karena setiap individu serangga memiliki bentuk yang sangat berbeda pada berbagai kondisi. Secara umum tipe hemosit seranga dikelompokkan ke dalam enam jenis utama. Sel-sel itu adalah: prohemosit, plasmatosit, granulosit (yang mungkin sama seperti sistosit atau koagulosit), sel-sel spherule (spherulosit), oenositoid dan adipohemosit. Berdasarkan  hal tersebut maka tujuan dilakukan penelitian  ini adalah  untuk mengetahui  tipe  sel  hemosit  larva  serangga Trigona sp  yang  telah  dilaporkan  berperan  sebagai  vektor  penyebab  penyakit  darah  pada tanaman pisang. Penelitian dilaksanakan di  Laboratorium Uji  Hayati  Serangga, Sekolah  Ilmu  dan Teknologi  Hayati, Institut  Teknologi Bandung.  Hemolimf  diambil  dari  pembuluh  darah  pada  bagian  punggung  menggunakan  jarum  yang  halus  (Haemotokrit-Kapillaren). Kemudian  sampel  hemolimf  diteteskan  pada  kaca  objek  yang  telah  diberi  larutan  turk.  Untuk  penghitungan  total  hemosit  ( Total Hemocytes  Count (THC))  dihitung  menggunakan  mikroskop  cahaya  (pembesaran  40  X).  Hasil  identifikasi  menunjukkan  bahwa  larva Trigona sp  memiliki  5  jenis  hemosit,  yaitu  :  Plasmatosit,  Prohemosit,  Oenositoid,  Sel  sperul  dan  Granulosit.  Berdasarkan  penelitian dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  lima  jenis  tipe  hemosit  larva  serangga Trigona sp,  yaitu  :  plasmatosit,  prohemosit,  oenositoid,  sel sperul dan granulosit.
Keywords: Identifikasi, Hemosit, Trigona sp, Pertahanan Tubuh

## 1. Pendahuluan
Banyak  jenis  hemosit  telah  digambarkan,  tetapi  klasifikasi  komprehensif sulit  karena  sel-sel  individu  dapat  memiliki  bentuk  yang  sangat  berbeda  pada berbagai kondisi dan berbagai teknik telah digunakan untuk mempelajari hal ini. Chapman,  1998  berusaha  menyamakan  tipe  sel-sel  ini  dan  dikelompokkan  ke dalam enam jenis utama. Sel-sel itu adalah: prohemosit, plasmatosit, granulosit (yang  mungkin  sama  seperti  sistosit  atau  koagulosit),  sel-sel  spherule (spherulosit), oenositoid dan adipohemosit.
Darah  atau  hemolimf  beredar  mengelilingi  seluruh  tubuh  serangga  dan memenuhi  seluruh  jaringan  secara  penuh.  Hemolimf  sendiri  terdiri  dari  cairan plasma,  dimana  sel-sel  darah  tersuspensi.  Disebut  plasma  karena  fungsinya mempertahankan  jaringan  pada  seluruh  tubuh  serangga  dan  mengandung banyak bahan kimia. Pada kebanyakan serangga, hemolimf terdiri dari 20-25 % air  tubuh  pada  serangga  dewasa,  tapi  pada  larva  hemolimf  terdiri  dari  hampir 50%.
Volume  hemolimf  juga  dipengaruhi  oleh  faktor-faktor  lain.  Dalam Locusta ,  volume  hemolimf  berkurang  setelah  makan,  disebabkan  karena  air yang  bergerak  ke  dalam  usus.  Perubahan  volume  hemolimf  juga  merupakan hasil dari pengeringan karena kondisi lingkungan yang ekstrim. Fungsi penting dari  hemolimf  adalah  sebagai  cadangan  air  untuk  mempertahankan  tingkat  air di jaringan. Sejumlah air pada jaringan diambil dari darah, sisanya berasal dari metabolisme lemak (Nicolson, 1980).
Respon pertahanan tubuh  serangga  sendiri terdiri  dari  respon  selular  dan respon humoral. Respon selular meliputi fagositosis, enkapsulasi, pembentukan nodul/kapsul dan koagulasi sedangkan respon humoral meliputi sintesis peptide antimikroba,  enzim  prophenoloksidase  dan  sintesis  protein  lektin.  Kedua bentuk  respon  pertahanan  ini  akan  diaktifkan  ketika  ada  benda  asing  yang masuk ke dalam tubuh.
Serangga Trigona sp  merupakan  serangga  yang  hidup  berkelompok  dan membentuk  koloni.  Jenis  lebah  ini  termasuk  dalam  golongan stingless  bee karena  lebah  ini  menggigit  namun  tidak  memiliki  sengat.  Lebah  ini  mudah dijumpai  di  daerah  tropis  dan  subtropis  di  daerah  Amerika  Selatan,  Afrika Selatan  dan  Asia  Tenggara  (Sihombing,  2005).  Lebah  ini  telah  dilaporkan berperan sebagai vektor penyebar penyakit darah ( blood disease) pada tanaman pisang di beberapa daerah diantaranya di daerah dataran tinggi Tabek Panjang, Kecamatan  Baso,  Kabupaten  Agam,  Propinsi  Sumatera  Barat  (Mairawita  dkk, 2012), di daerah Lampung (Leiwakabessy, 1999).
Sebagai    serangga  vektor  penyebar  penyakit  darah,  serangga  ini berinteraksi  dengan  bakteri  penyebab  penyakit  darah  yaitu Blood  Disease Bacterium (BDB).  Interaksi  ini  akan  berpengaruh  terhadap  mekanisme pertahanan  tubuh  serangga  tersebut,  sehingga  sangat  diperlukan  untuk mengetahui tipe-tipe sel hemosit yang berperan dalam sistem pertahanan selular maupun humoral serangga Trigona sp.
2. Metode
2.1 Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Uji  Hayati  Serangga,  Sekolah Ilmu  dan  Teknologi  Hayati,  Institut  Teknologi  Bandung,  pada  bulan  Januari 2016 - Agustus 2016.
2.2 Bahan Penelitian ini menggunakan serangga Trigona sp. (Apidae) yang diperoleh dari  Peternakan Trigona Kampung  Cibeusi,  Ciater  Subang,  Jawa  Barat. Serangga  kemudian  dibiarkan  dalam  koloninya  dan  diberikan  pakan  cairan berupa larutan sukrosa 10 % (Neyen, 2014).
2.3 Prosedur Penelitian Hemolimf  diambil  dari  pembuluh  darah  pada  bagian  punggung menggunakan  jarum  yang  halus  (Haemotokrit-Kapillaren).  Kemudian  sampel hemolimf  diteteskan  pada  kaca  objek  yang  telah  diberi  larutan  turk.  Larutan
turk terdiri dari gentian violet dan asam asetat glasial. Untuk penghitungan total hemosit  ( Total  Hemocytes  Count (THC))  dihitung  menggunakan  mikroskop cahaya  (pembesaran  40  X)  (Hwang,  2015).  Untuk  tiap  sampel,  jumlah  larva yang cukup untuk menghasilkan 1μL aliquot dari hemolimf bervariasi antara 4- 10 larva (Nelson, 2002).
2.4. Analisis data
Jumlah  konsentrasi  total  hemosit  dihitung  menggunakan  hemositometer dibawah mikroskop. Hemosit yang teramati ditentukan tipe dan presentasenya. Pengulangan dilakukan sebanyak 3 kali.

## 3. Hasil
Berdasarkan hasil identifikasi diperoleh bahwa larva Trigona sp memiliki 5  jenis  hemosit,  yaitu  :  Plasmatosit,  Prohemosit,  Oenositoid,  Sel  sperul  dan Granulosit  terlihat  pada  gambar  1.  Kelima  sel  yang  ditemukan  ini  memiliki karakteristik yang sesuai dengan Anggraeni (Anggraeni, 2011).
Plasmatosit  merupakan  tipe  sel  yang  penting  dalam  reaksi  pertahanan selular  serangga,  sangat  aktif  dalam  fagositosis,  pembentukan  kapsul  dan pembentukan  nodul,  serta  dapat  mengandung  zat  antimikrobial.  Sel  ini mempunyai bentuk yang sangat berubah-ubah (bulat, lonjong, memanjang, dan sebagainya)  dan  biasanya  mempunyai  inti  ditengah  yang  besar  yang ditunjukkan  pada  gambar  1.A.  Prohemosit  kemungkinan  merupakan  stem  sel untuk  tipe  hemosit  yang  lain  (Brehelin  dan  Zachary,  1986).  Sel  ini  berukuran kecil, bulat  sampai  lonjong, memiliki  perbandingan inti-sitoplasma  yang  besar dan mengandung banyak ribosom bebas (gambar 1.B).
A. (Plasmatosit)         B. (Prohemosit)
C. (Oenositoid)             D. (Sel sperul)

## E.(Granulosit)
Gambar 1. Tipe Hemosit Trigona sp
Sel oenositoid memiliki sitoplasma yang mengandung aktifitas phenoloksidase  yang  dapat  dideteksi setelah  inkubasi dengan tyrosine,  DOPA, Dopamine (Anggraeni, 2011). Sel ini berukuran besar, inti dapat ditengah tetapi seringkali  eksentrik  dan  dapat  mengandung  kristal  (gambar  1.C).  Sel  sperul memiliki  karakteristik  :    sangat  stabil  dalam  keadaan  in  vitro.  Secara  umum bentuk  sel  ini  berbentuk  ovoid,  ada  yang  berbentuk  butiran  yang  bulat  atau lonjong (gambar 1.D). Fungsi dan hubungan sperul sel dengan tipe sel yang lain tidak diketahui. Sel granulosit kebanyakan berbentuk bulat sampai lonjong dan mempunyai granul bulat yang kecil (gambar 1.E).
Sel  granulosit  sangat  tidak  stabil,  dapat  membentuk  pseudopodia  seperti duri,  tetapi  kemudian  akan  segera  berdegranulasi.  Proses  degranulasi  ini merupakan  pusat  dari  banyak  mekanisme  imunologi,  seperti  aktifasi  PPO, pembentukan plasma gel dan kemudian pelapisan dan pengenalan partikel asing sebelum terjadi fagositosis dan pembentukan kapsul.
Gambar 2. Persentase tipe hemosit Trigona sp
Gambar  2  menunjukkan  presentase  jumlah  sel  hemosit  larva  serangga Trigona sp. Berdasarkan  gambar  2  terlihat bahwa  sel  granulosit  larva Trigona sp  memiliki jumlah tertinggi  dibandingkan dengan  jumlah  sel  hemosit  lainnya yaitu  sebesar    44  %.  Granulosit  memegang  peranan  penting  dalam  respon pertahanan  yaitu  sebagai  pengenalan  awal  terhadap  masuknya  patogen  ke dalam  tubuh  serangga  (Anggraeni,  2011)  dan  seperti  yang  dinyatakan  oleh Chapman bahwa sel ini akan melepaskan isinya (degranulate) pada permukaan sehingga  mengganggu  organisme  sebagai  bagian  awal  dari  respon  pertahanan (Chapman,  1995). Trigona sp  memiliki  jumlah  sel  prohemosit  sebesar  26  %. Sel ini merupakan sel yang aktif bermitosis dan melakukan diferensiasi menjadi bentuk  sel  hemosit  lainnya  seperti  yang  dinyatakan  oleh  Qamar  dan  Jamal (2009) dalam Maulina  (2013)  bahwa  prohemosit  meningkat  jumlahnya  saat diinduksi  oleh  benda  asing,  sel  akan  melakukan  aktifitas  mitosis  yang  tinggi. Sel  plasmatosit  memiliki  jumlah  sebesar  5,8  %.  Plasmatosit  sendiri  berperan dalam aktifitas fagositosis serangga.
Hasil  pengamatan  tipe  sel  hemosit  serangga Trigona sp,  diketahui  terdapat tiga  tipe  sel  hemosit  dengan  presentase  terbanyak,  yaitu  :  plasmatosit, prohemosit  dan  sel  granulosit  (Gambar  12).  Tingginya  jumlah  ketiga  sel tersebut  berkaitan  dengan  fungsi  dan  peranan  dari  ketiga  sel  tersebut.  Sesuai dengan  pernyataan  Chapman  bahwa  plasmatosit,  granulosit  dan  prohemosit adalah  jenis  sel  yang  paling  berlimpah  dari  jumlah  total  hemosit.  Secara  aktif ketiga  jenis  sel  tersebut  terlibat  dalam  mekanisme  pertahanan  serangga (Chapman, 1998).

## 4. Pembahasan
Umumnya  serangga  memiliki  tujuh  jenis  tipe  sel  hemosit  yang  berbeda, yaitu  :  sel  granular,  plasmatosit,  oenositoid,  prohemosit,  koagulosit,  sel  sperul dan adipohemosit (Ribeiro dan Brehelin, 2006). Tipe sel hemosit setiap spesies serangga  tidak  hanya  beragam,  namun  memiliki  jumlah  yang  berbeda-beda. Perbedaan tipe hemosit ini bergantung pada aktifitas dan proses fisiologis yang terjadi  pada  tubuh  serangga.  Banyak  faktor  yang  mempengaruhi  jumlah  dari setiap  tipe  sel  diantaranya  :  perbedaan  akan  pola  eclosion  pada  serangga,  usia dan  tingkatan  stadia,  jenis  kelamin  dan  peristiwa  perkawinan  yang  menandai adanya peningkatan jumlah hormon saat perkawinan (Maulina, 2013).
Plasmatosit  mengandung  sejumlah  moderat  reticulum  endoplasma  kasar, kompleks  Golgi  dan  mungkin  mengandung  butiran  membran  yang  terikat. Plasmatosit  adalah  yang  paling  berlimpah  dan  tercatat  sebanyak  30%  dari jumlah  total  hemosit.  Plasmatosit  terlibat  dalam  fagositosis  dan  enkapsulasi organisme asing yang menyerang hemosol (Chapman, 1998).
Spherule  sel  dijumpai  pada  hemosit  sejumlah  spesies  serangga,  secara umum  berbentuk  ovoid  (diameter  6-16  μm),  dengan  beberapa  sampai  banyak butiran  yang  bulat  atau  lonjong.  Reticulum  endoplasma  kasar  biasanya berkembang  dengan  baik.  Spherule  sel  sangat  stabil  dalam  keadaan in  vitro . Persentase keberadaannyya biasanya sangat rendah, dibawah 5 % dari populasi hemosit (Anggraeni, 1992).
Sel  oenositoid  berukuran  relatif  besar  dengan  diameter  lebih  dari  20  μm, perbandingan  inti  sitoplasma  rendah,  hanya  terdapat  pada  beberapa  jenis serangga.  Letak  intinya  sentris  dan  eksentris,  kadang  mengandung  kristal. Oenositoid  dijumpai  dalam  jumlah  kecil  sekitar  1-2  %  dari  total  populasi hemosit (Ribeiro dan Brehe´ lin, 2006).
Granulosit berisi sejumlah besar endoplasma yang secara ekstensif melebar. Kompleks  Golgi  juga  berlimpah  dan  sel-sel  mengandung  butiran  membran yang  terikat  dalam  jumlah  besar.  Granulosit  memiliki  proporsi  jumlah  yang cukup besar, biasanya lebih dari 30% dari populasi hemosit. Sel ini melepaskan isinya (degranulate) pada permukaan sehingga mengganggu organisme sebagai bagian  awal  dari  respon  pertahanan.  Granulosit  mungkin  berasal  dari plasmatosit  dan  zat  antara  dari  kedua  jenis  sel  ini.  Sistosit  mungkin  adalah granulosit dimana  mereka  mengandung butiran berlimpah,  tapi  biasanya berisi jumlah  yang  lebih  kecil  kompleks  golgi  dan  endoplasma  kasar  daripada granulosit.  Mereka  memiliki  inti  relatif  tinggi  dibandingkan  rasio  sitoplasma (Chapman, 1998).
Sel  prohemosit  berukuran  kecil  (diameter  6-13  μm),  bentuk  bulat  hingga lonjong,  dengan  perbandingan  inti  sitoplasma  yang  besar,  dikelilingi  oleh lapisan sitoplasma yang homogeni dan tipis serta mengandung banyak ribosom bebas,  sedikit  reticulum  endoplasma  kasar  dan  beberapa  mitokondria
(Anggraeni, 1992). Prohemosit memiliki indeks mitosis besar, merupakan stem sel untuk tipe hemosit yang lain (Brehelin and Zachary, 1986). Jumlahnya 5 % atau kurang dari total populasi.
Perbedaan jumlah sel hemosit ini juga dinyatakan oleh Laughton dkk (2011) pada  pea  aphid Acyrthosiphon  pisum dimana  persentase  tipe  hemosit  tertinggi yaitu  sel  prohemosit  dengan  jumlah  56  %  dari  total  populasi  hemosit,  sel granulosit sebesar 35 % dan sel oenositoid sebesar 9 %.
Pada Drosophila ,  jumlah  sel  hemosit  terbesar  adalah  plasmatosit  dengan total  95  %  dari  jumlah  hemosit,  lebih  tinggi  dibandingakan  dengan  sel lamellosit  dan  kristal  sel.  Jika  dibandingkan  dengan  keragaman  tipe  sel  pada serangga Trigona sp  dimana  sel  granulosit  memiliki  persentase  tertinggi sebanyak  44  %,  sel  prohemosit 26 %,  sel  plasmatosit  13  %  dan  sel  oenositoid 8  %,  maka  dapat  dikatakan  bahwa,  masing-masing  spesies  serangga  memiliki keragaman  tipe  hemosit.  Keragaman  tipe  hemosit  tiap  spesies  serangga berkaitan dengan kemampuan masing-masing spesies dalam sistem pertahanan tubuhnya.
Keragaman  pada  tipe  hemosit  juga  terlihat  dari  setiap  spesies  serangga, misalnya  pada  beberapa  serangga  berikut  ini,  seperti  pada  pea  aphid Acyrthosiphon  pisum memiliki  3  jenis  hemosit,  yaitu  :  prohemosit,  granulosit dan  oenositoid  (Laughton  dkk,  2011)  ; Drosophilla  melanogaster memiliki  3 tipe  hemosit,  yaitu  :  plasmatosit,  lamellosit  dan  crystal  sel  (Goto  dkk,  2003)  ; kumbang  Japanese Rhinoceros  Allomyrina  dichotoma L  memiliki  6  tipe hemosit, yaitu : granulosit, plasmotosit, oenositoid, spherulosit, prohemosit dan adipohemosits  (Hwang,  2015)  ;  belalang Oxya  japonica memiliki  5  tipe hemosit,  yaitu  :  plasmatosit,  granulosit,  koagulosit,  prohemosit  dan  oenositoid (Melanie, 2004) : Spodoptera litura memiliki 5 tipe hemosit, yaitu : plasmatosit, prohemosit,  oenositoid,  sel  granular  dan  sel  sperul  (Maulina,  2013)  ; Spodoptera  exigua memiliki  5  tipe  hemosit,  yaitu  :  granulosit,  plasmatosit, oenositoid, sel sperul dan prohemosit (Suryani, 2013).
Setiap  tipe  sel  hemosit  serangga  memiliki  fungsi  dan  perannya  tersendiri dalam sistem pertahanan tubuh. Keragaman tipe hemosit juga akan dipengaruhi oleh  berbagai  macam  faktor  dalam  siklus  hidup  serangga  tersebut,  aktivitas serangga, dan lain sebagainya. Hemosit melakukan berbagai fungsi diantaranya adalah  perbaikan  luka  dan  pertahanan  melawan  patogen  dan  parasit,  tetapi mereka  memiliki  peran  dalam  banyak  aspek  dalam  fungsi  normal  serangga. Granulosit  dan  sel-sel  spherule  dari  larva Calpodes akan  mensintesis  proline yang  dikeluarkan  menjadi  hemolimf  dan  kemudian  dimasukkan  ke  dalam kutikula. Peptida lain yang diproduksi oleh hemosite mungkin ditambahkan  ke lamina basal (Chapman, 1998).

## 5. Simpulan
Berdasarkan  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  lima  jenis  tipe hemosit larva serangga Trigona sp, yaitu : plasmatosit, prohemosit, oenositoid, sel sperul dan granulosit.

## Pustaka
Anggraeni  T  ,  Melanie,  Ramadhani  Eka  Putra.  (2011)  :  Cellular  and  humoral immune  defenses  of  Oxya  japonica  (Orthoptera:  Acrididae)  to entomopathogenic  fungi  Metarhizium  anisopliae  ,  Entomological Research , 41: 1-6
Brehelin, M.,and  Zachary,  D.  (1986)  :  Insect  Hemocytes  :  A  New  Clssifiction to  Rule  Out  The  Controversy,  In  :  Brehelin,  M.  (ed)  Immunity  in Invertebrates. Springer-Verlag, Berlin, 36-48
Chapman,  R.F.  (1998)  :  The  Insect  Structure  and  Function  4th  Edition. Cambridge, Cambridge University Press
Hwang  S.  Kyeongrin  Bang,  Jiae  Lee  &  Saeyoull  Cho.  2015.  Circulating Hemocytes  from  Larvae  of  the  Japanese  Rhinoceros  Beetle  Allomyrina dichotoma  (Linnaeus)  (Coleoptera:  Scarabaeidae)  and  the  Cellular Immune  Response  to  Microorganisms.  Department  of  Applied  Biology, College  of  Agriculture  and  Life  Science,  Environment  Friendly Agriculture Center, Kangwon National University, Chuncheon. Republic of Korea
Laughton A.M, Justine R.Garcia, Boran Altincicek, Michael R. Strand, Nicole M.  Gerardo.  Characterisation  of  immune  responses  in  the  pea  aphid, Acyrthosiphon  pisum.  Biology  Department,  Emory  University,  O. Wayne Rollins Researcher Center. USA
Leiwakabessy,  C.  1999.  Potensi  Beberapa  Jenis  Serangga  Dalam  Penyebaran Penyakit  Layu  Ralstonia  (Pseudomonas)  Solanacearum  Yabuuchi  et  al. Pada  Pisang  Di  lampung.  Tesis  Bogor.  Program  Pascasarjana  Institut Pertanian Bogor
Maulina,  D.  2013.  Respon  Imun  Seluler  Spodoptera  litura  Terhadap biopestisida  Mirabilis  jalapa  Dan  Tingkat  Mortalitasnya  Ketika Dikombinasikan  Dengan  Bacillus  thuringiensis.  Tesis  Biologi.  Sekolah Ilmu Dan Tekhnologi Hayati. Institut Teknologi Bandung
Mairawita,  Trimurti  Habazar,  Ahsol  Hasyim  &  Nasril  Nasir.  2012.  Potensi Trigona  spp.  Sebagai  Agen  Penyebar  Bakteri    Ralstonia  Solanacearum Phylotipe IV Penyebab Penyakit Darah Pada Tanaman Pisang Nelson,  C.,Stephen  Hendy,  Kim  Reid  &  John  Cavanagh.  2002.  Quantitative Analysis  of  Phenol  Oxidase  Activity  in  Insect  Hemolymph.  Vancouver General Hospital, Vancouver, BC. BioTechniques 32:815-823. Canada Neyen, C, Andrew J.B, Olivier B, Bruno L. 2014. Methods to study Drosophila Immunity.  Global  Helath  Institute,  School  of  Life  Sciences,  Ecole
Polytechnique Federale de Lausanne (EPFL), Station 19, 1015 Laussane, Switzerland
Nicolson, S.W. 1980. Water Balance and Osmoregulation in Onymacris plana, a  Tenebrionid  Beetle  From  Namib  Desert.  Journal  of  Insect  Physiology 26, 315-320
Ribeiro C dan Michel Brehelin. 2006.  Insect haemocytes:  What type of cell is that?. Ecologie Microbienne des Insectes et Relations Hoˆte-Pathoge`ne (UMR  1133  INRA-UMII),  Pl.  E.  Bataillon  34095  Montpellier,  France. Journal of Insect Physiology 52 (2006) 417–429
Suryani,  A.I.  2013.  Respon  Imun  Humoral  dan  Mortalitas Spodoptera  exigua Terhadap Pemberian Kombinasi Biopestisida Daun Mirabilis jalapa Dan Jamur  Entomopatogen Metarhizium  anisoplae .  Tesis  Biologi.  Sekolah Ilmu Dan Tekhnologi Hayati. Institut Teknologi Bandung