## SPECIFIC AND NON SPECIFIC PARAMETERS TEST OF ZIZIPHUS NUMMULARIA (Burm.f.) Wight & Arn. LEAF AND SECONDARY METABOLIT COMPOUND
Noviyanti, Novriza Sativa, Farid Perdana

## Fakultas MIPA Universitas Garut, Jl. Jati no 42B, Tarogong Kaler, Garut
Corresponding Author: Noviyanti (noviyanti@uniga.ac.id)

## ARTICLE HISTORY
Received: 24 September 2019                   Revised: 16 Oktober 2019              Accepted: 5 November 2019

## Abstract
Ziziphus  nummularia (Burm.f.)  Wight  &  Arn.  ,belongs  of  the  family  Rhamnaceae, called  bidara  leaves  usually  used  for  traditional  medicine.  This  research  to determine the content of chemical compounds, specific and non-specific parameters tests of bidara leaves. This results from the non-specific parameters showed that the bidara  leaves  had  a  water  content  of  4%,  a  total  ash  content  of  5.06%,  a  water- soluble ash content of 2.54%, an acid insoluble ash content of 0.58%. For specific parameters  it  has  a  water  soluble  extract  rate  of  4.4%,  ethanol  soluble  extract content  of  1.8%,  drying  losses  of  14.3%.  Phytochemical  screening  results  that bidara  leaves  contain  alkaloids,  flavonoids,  saponins,  phenols  and  steroids  / triperpenoids.  While  the  results  of  Thin-layer  Chromatography  (TLC)  methanol extract’s  showed  the  presence  of  flavonoid  compounds,  alkaloids,  steroids, triterpenoids, and phenols .
Key words: Parametric test, specific, non specific,secondary metabolis, Ziziphus nummularia

## UJI PARAMETER SPESIFIK DAN NON SPESIFIK DAUN ZIZIPHUS NUMMULARIA  (Burm.F.) Wight&Arn SERTA KANDUNGAN SENYAWA METABOLIT SEKUNDER

## Abstrak
Ziziphus  nummularia (Burm.f.)  Wight&Arn.  merupakan    tanaman  yang  termasuk familia  rhamnaceae  atau  dikenal  daun  bidara  biasanya  dimanfaatkan  untuk  obat tradisional.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  kimia serta  uji  parameter  spesifik  serta  non  spesifik  dari  daun  bidara  melalui  metode standarisasi  mutu.  Hasil  parameter  non  spesifik    menunjukkan  bahwa  daun  bidara memiliki kadar air 4%, kadar abu total 5,06%, kadar abu larut air 2,54%, kadar abu tidak larut asam 0,58%. Untuk parameter spesifik memiliki kadar sari larut air 4,4%, kadar  sari  larut  etanol  1,8%,  susut  pengeringan  14,3%.  Hasil  penafisan  fitokimia simplisia  daun  bidara  juga  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  fenol  dan steroid/triperpenoid.  Sedangkan  dari  hasil  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  ekstrak
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204
metanol  menunjukan adanya  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  steroid,  triterpenoid,  dan fenol.
Kata kunci: Uji parametrik, spesifik, non spesifik, metabolit sekunder, Ziziphus nummularia

## Pendahuluan
Ziziphus  nummularia (Brum.f.)  Wight  &  Arn  atau  dikenal  memiliki  nama  daun bidara  merupakan  tanaman  asli  asia  tengah.  Secara  morfologi  genus  Ziziphus  ini memliki  tinggi  hingga  sekitar  2  m,  diameter  batang  40  cm  atau  lebih,  kulit  batang abu-abu gelap atau hitam. Daun tunggal dan berselang seling, memiliki panjang 4-6 cm  dan  lebar  2,5-4,5  cm,  tangkai  daun  berbulu  dan  pada  pinggiran  daun  terdapat gigi  yang  sangat  halus,  buah  berbiji  satu,  bulat  sampai  bulat  telur,  ukuran kira-kira 6x4  cm.  Kulit  buah  halus  atau  kasar,  mengkilap,  berwarna  kekuningan  sampai kemerahan  atau  kehitaman,  daging  buah  putih,  renyah,  agak  asam  hingga  manis. Kulit batang berwarna merah dan memiliki banyak duri pada batang. 1
Bidara biasanya dapat tumbuh liar diseluruh Jawa dan Bali pada ketinggian 400 meter  diatas  permukaan  laut.  Tanaman  ini  juga  tumbuh  di  daerah  dengan  suhu ekstrim dan tumbuh subur di daerah dengan kondisi kering. 2
Tanaman  ini  dikenal  oleh  masyarakat  sebagai  tanaman  obat.  Daunnya  biasa digunakan  untuk  gangguan  pencernaan,  masalah  kemih,  diabetes,  infeksi  kulit, diare,  demam,  bronkhitis,  keluhan  hati,  anemia,  antiobesitas,  dan  sumber antioksidan. 2 Dalam  penelitian  sebelumnya  juga  diketahui  bagian  daunnya  memiliki efek anthelmentik, analgesik, imflamantory, antifungi. 3,4
Dalam penggunaan tanaman sebagai obat diperlukan suatu standarisasi. Hal ini dilakukan  agar khasiat  dan  stabilitas  dari  suatu ekstrak dan  simplisia  dapat  terjaga maka  diperlukan  suatu  standarisasi.  Standarisasi  suatu  simplisia  merupakan  suatu persyaratan  sebagai  bahan  dan  penetapan  nilai  berbagai  parameter  dari  produk seperti  yang  ditetapkan  sebelumnya.  Adapun  persyaratan  yang  diperlukan  yaitu parameter  spesifik  dan  non  spesifik.  Parameter  spesifik  untuk  simplisia  meliputi identitas,  organoleptik,  kadar  sari  larut  air  dan  kadar  sari  larut  etanol.  Untuk parameter  non  spesifik  meliputi  kadar  air,  kadar  abu  total,  kadar  abu  larut  air,  dan kadar  abu  tidak  larut  asam  (depkes  RI).  Penetapan  parameter  spesifik  dan  non spesifik  untuk  daun  bidara  belum  ada  standarisasi  yang  baku.  Sehingga  penulis mencoba  menambahkan  beberapa  parameter  yang  belum  pernah  diteliti sebelumnya.

## Metode
Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adala  furnace  (B-One  B-F-7-12),  ala destilasi, Heating mantle (B-one 1000ml), krus, tang, elemenyer (pyrex), labu bulat, cawan, oven (Kirrin KBO 190 Lw).
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  simplisia  daun  bidara,  toluen, aquades, kloroform, etanol PA, plastik wrap, alumunium foil, kertas saring (whatman no1).
Prosedur Rinci Metode  yang dilakukan pada penelitian ini yaitu:
1)Parameter Spesifik

## Pemeriksaan Makroskopis
Pemeriksaan ini untuk meliputi bentuk, warna, bau, dan rasa dari simplisia. 6

## Pemeriksaan Kadar Sari Larut Air
Pemeriksaan  ini  dilakukan  dengan  cara  menimbang  5  gram  simplisiaditambah dengan  100  ml  kloroform  jenih  air  dan  dikocok  selama  6  jam  serta  dibiarkan selama  18    jam  sampai  menghasilkan  filtrat.  Filtrat  diuapkan  dalan  cawan dangkal higga bobot tetap. 7,8

## Pemeriksaan Kadar Sari Larut Etanol
Prosedur  pertama  pada  pemeriksaan  ini  diawali  dengan  menimbang  5  gram simplisia  kemudian  ditambahkan  100ml  etanol  absolut.  Selanjutnya  dikocok selama  6  jam  dan  dibiarkan  selama  18  jam.  Filtrat  yang  diperoleh  diuapkan sampai berat konstan. 7,8

## 2)Parameter Non Spesifik

## Pemeriksaan Kadar Air
Pemeriksaan kadar air dilakukan dengan cara destilasi toluen. Toluen dijenuhkan dengan  aquades  selama  1x24  jam  kemudian  dipisahkan.  Setelah  itu  simplisia sebanyak  10  gram  dimasukan  kedalam  labu  yang  diisi  toluen  lalu  dipanaskan selama  15  menit.  Penyulingan  diatur  dengan  dinaikan  kecepatannya  sampai toluen memisah sempurna kemdian ditung kadar airnya. 7,8

## Pemeriksaan Susut Pengeringan
Pemeriksaan  ini  dilakukan  dengan  cara  menimbang  2gram  simplisia  kemudian dimasukkan kedalam oven dengan suhu 105o C selama 30 menit. Setelah dingin kemudian  ditimbang  apabila  beratnya  belum  konstan,  diulagi  kembali pemanasannya. 7,8

## Pemeriksaan Kadar Abu Total
Pemeriksaan kadar abu total dilakukan dengan cara menimbang 3 gram simplisa selanjutnya  dipijarkan  dan  ditara  hingga  arang  habis.  Selanjutnya  arang  yang tidak hilang disaring dengan kertas saring bebas abu dan ditimbang hingga bobot konstan. 7,8

## Pemeriksaan Kadar Abu Tidak Larut Air
Abu  yang  diperoleh  dari  pemeriksaan  kadar  abu  total  selanjutnya  ditambahkan 25ml  air  dan  dipanaskan  selama  5  mnenit.  Tahpap  selanjutnya  disaring kemudian filtrat diuapkan hingga bobot tetap. 7,8

## Kadar Abu Tidak Larut Asam
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204
Abu  hasil  pemeriksaan  kadar  abu  total  ditambahkan  25ml  HCl  encer  kemudian didihkan  selama  5 menit.  Bagian  yang  tidak  larut  disaring  dengan  kertas  saring bebas abu. Filtratnya diuapkan dan ditimbang hingga bobot konstan 7,8

## 3)Penafisan Fitokimia

## Alkaloid
Pengujian  ini  dilakukan  dengan  cara  menggerus  2  gram  simplisia  yang dilembabkan  dalam  5ml  amonia  30%  kemudian  ditambahkan  20  ml  kloroform, disaring  sampai  mendaptkan  filtrat.  Filtrat  dibagi  menjadi  A1  dan  A2.  Filtrat  A1 diekstraksi dengan 10 l larutan hcl kemudian dikocok dan diambil bagian atasnya (Larutan B). Larutan B dibagi menjadi dua, B1 ditambahkan pereaksi dragendroff sedangakn larutan B2 ditambahkan perekasi mayer.  Apabila endapan berwarna merah  bata  untuk  perekasi  dragendroff  dan  putih  untuk  pereaksi  mayer  maka psitif mengandung alkaloid.
. 9,11,14

## Flavonoid
Pemeriksaan  ini  dilakukan  dengan  cara  air  panas  sebanyak  100  ml  dengan simplisia  sebanyak  2  gram  didihkan  selama  5  menit  kemdian  disaring  dan diperoleh  filtrat.  Filtrat  tersebut  ditambahkan  magnesium  secukupnya,  alkohol, dan asam klorida (perbandingan 1:1). selanjutnya ditambahkan 5ml amil alkohol dikocok  sampai  terpisah.  Apabila  terbentuk  warna  kuning,  merah  atau  jingga menunjukkan adanya senyawa flavonoid. 9,11,14

## Saponin
Sebanyak 2  gram  simplisia  ditambahkan  100 ml  air  panas  kemudian  dididihkan smapi mendapat filtrat. Filtrat tersebut dikocok selama 10 menit sampai terbentuk busa stabil. 9,11,14

## Tanin
Pemeriksaan  tanin  diawali  dengan  cara  mendidihkan  simplisia  sebanyak  2gram dalam  air  100ml  kemdian  disaring  sampai  terbentuk  filtrat.  Filtrat  dibagi  menjadi dua  bagian.  Filtrat  pertamab  diberi  FeCl  3  1%  sedangkan  filtrat  kedua ditambhakan  perekasi  steasny.  Terbentuknya  warna  biru  menunjukkan  adanya senyawa  tanin  sedangkan  warna  merah  muda  menunjukkan  adanya  tanin katekat. Apabila filtrat tersebut dijenuhkan dengan natrium asetat  dan beberapa tetes fecl3 menghasilkan warna biru tinta maka menunjukkan adanya tanin galat. 9,11,14

## Kuinon
Pemeriksaan senyawa kuinon dengan cara ditambahkan ditambahkan beberapa tetes  larutan  NaOH  pada  filtrat.  Apabila  terbentuk  warna  merah  menunjukkan adanya kuinon. 9,11,14

## Steroid dan Triterpenoid
Pengujian  ini  diawali  dengan  dilakukan  maserasi  antara  eter  dengan  simplisia kemudian  diambil  filtratnya.  Filtrat  diambil  sebanyak  5ml  kemudian  diuapkan hingga  menhasilkan  residu.  Residu  tersebut  ditambahkan  2  tetes  asam  asetat anhidrat  dan 1  tetes  asam sulfat  pekat  (pereaksi  Lieberman-Bourchard). Warna
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204
hijau atau merah menunjukan adanya senyawa golongan
steroid/triterpenoid. 9,11,14

## 4)Pengujian KLT (Kromatografi Lapis Tipis)
Dipilih  fase  gerak  dipilih  berdasarkan  optimasi  beberapa)  pelarut  pelarut  organik tunggal  maupun  campuran(menentukan  eluen  yang  optimal).  Eluen  ditotolkan sampai menunjukkan spot noda yang dihasilkan kemudian dilihat pada sinar tampak dan disemprot menggunakan H 2 SO 4 sebagai pelarut universal. 14
Hasil
Tabel 1 Hasil Pemeriksaan Makroskopik Simplisia Daun Bidara Ziziphus Nummularia (Burm.F.) Wight& Arn N0 Parameter Simplisia 1 Bentuk Serbuk halus daun kering 2 Warna Hijau tua 3 Bau Bau khas daun 4 Rasa Pahit 5 Ukuran Panjang 5,5 cm, lebar 3,5 cm
Tabel 2 Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Daun Bidara Ziziphus nummularia (Burm.f.) Wight& Arn No Parameter Hasil Jurnal 1 FHI 1 Kadar abu total 5,06% 3,6% - 2 Kadar abu larut air 2,54% 1,7% - 3 Kadar abu tidak larut asam 0,58% 0,8% - 4 Kadar air 4% - <10% 5 Kadar sari larut air 4,4% - - 6 Kadar sari larut etanol 1,8% - - 7 Susut pengeringan 14,03% - -

## Tabel 3
Hasil Penafisan Fitokimia Simplisia Dan Ekstrak Daun Bidara Ziziphus nummularia (Burm.f.) Wight& Arn No Senyawa Hasil penapisan Simplisia Jurnal 1 Alkaloid + + 2 Flavonoid + 3 Saponin + + 4 Tanin - 5 Kuinon - 6 Fenol + 7 Steroid/Triterpenoid +
Keterangan : (+) = terdeteksi (-) = tidak terdekteksi
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204
Gambar 1 Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) tanaman daun bidara

## Pembahasan
Hasil  pemeriksaan  makroskopik  daun  bidara  meliputi  bentuk  daun  yang  hampir bebentuk bulat dan ujung daun tidak runcing dengan panjang 5,5 cm, sedikit lebar 3,5 cm,  di  sekitar  daun  terdapat  bulu-bulu  halus  dan  dibagian  pinggir  daun  terdapat  gigi- gigi  yang  sangat  halus,  kemudian  batang  dan  ranting  yang  dipenuhi  duri,  berwarna hijau  tua,  bau  khas  daun,  dan  rasa  yang  khas  pahit.  Ciri  khas  dari  ordo  rosidae  ini adalah memiliki bulu daun serta adanya duri pada batangnya.1
Tahap  selanjutnya  melakukan  melakukan  pengujian  parametrik  dan  non parametrik dari  daun bidara. Uji parametrik yang pertama dengan pemeriksaan kadar abu. Kadar abu bertujuan untuk mengetahui kandungan mineral baik eksternal maupun internal  dalam  simplisia  yang  akan  kita  uji.  Prosesnya  melalui  pemanasan  sampai terbentuk  abu  yang  mengindikasikan  yang  tersisa  adalah  bagiat  zat  anorganik  saja. Kadar  abu  yang  diuji  yaiu  kadar  abu  total,  kadar  abu  larut  air,  kadar  abu  tidak  larut asam  yang  bertujuan  untuk  mengetahui  senyawa  anorganik  dari  simplisia  dan mengetahui  jumlah  logam  alkali  tanah.  Kadar  abu  total  yang  diperoleh  dari  hasil penelitian  ini  kadar  abu  total    5,06%, kadar  abu  larut  air  2,54%,  kadar  abu  tidak larut asam  0,58%.  Sedangkan  dari  penelitian  sebeumnya  diperoleh  data  nilai  kadar  abu total yang diperoleh sebesar 3,6%, kadar abu larut air 1,7%, kadar abu tidak larut asam 0,8%. 1 Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kandungan  organik  yang  terdapat  pada  simplisia tergantung pada lingkungannya. 13
Pemeriksaan  selanjutnya  yaitu  kadar  air.  Pemeriksaan  ini  bertujuan  untuk memberikan  batasan  maksimal  rentang  kadar  air  dalam  simplisia  sehingga  simplisia dapat  disimpan  dalam  jangka  waktu  yang  sangat  lama,  kadar  air  yang  diperoleh sebesar  4%,  dari  hasil  kadar  air  yang  dilakukan  menunjukan  bahwa  kadar  air  telah memenuhi persyaran kadar air simplisia yaitu <10%. Kadar air simplisia dibawah 10%
R f5 0.85 R f3 0.64 R f2 0.57 R f1 0.28 R f4 0.78
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204
bertujuan agar mencegah terjadinya reaksi hidrolisis dan pertumbuhan mikroorganisme pada serbuk simplisia. 12
Pemeriksaan  susut  pengeringan  bertujuan  untuk mengetahui  batasan maksimal berapa besarnya senyawa yang hilang pada saat proses susut pengeringan, dari hasil susut  pengeringan  diperoleh  hasil  sebesar  14,03%.  Berarti  di  dalam  simplisia  ini terdapat  sejumlah  zat  termasuk  air,  minyak  atsiri  dan  bagian  lain  yang  ikut  menguap sebesar 14,03%. 13
Selanjutnya  pemeriksaan  kadar  sari  larut  air  dan  kadar  sari  larut  etanol  yang bertujuan  untuk  mengetahui  banyaknya  komponen  simplisia  yang  dapat  tersari  oleh pelarut  air  dan etanol,  hasil  kadar  sari  larut  air  sebesar 4,4%,  dan  pada  pemeriksaan kadar  sari  larut  etanol  yang  tersari  sebesar  1,8%.  Hal  ini  berarti  bagian  yang  dapat larut  pada  pelarut  air  sebesar  4,4%  sedangkan  yang  larut  dalam  pelarut  etanol sebnyak 4,4%. 13
Hasil  penapisan  fitokimia  pada  simplisia  dilakukan  untuk  mengetahui  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  simplisia.  Dari  hasil  pemeriksaan  yang dilakukan  bahwa  pada  daun  bidara  terdapat  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin, steroid, dan fenol. Untuk lebih memperjelas kandungan senyawa  yang terdapat dalam daun  bidara  dapat  dilakukan  dengan  pengujian  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Dari eluen  optimal  yang  telah  diperoleh  dengan  perbandingan  etil  asetat  :  n-heksan  (6:4). Hasil  dari  sinar  tampak  dan  penampang  bercak  H 2 S0 4 menunjukan  bercak  berwarna kuning  yang  menandakan  adanya  senyawa  flavonoid,  hijau  muda  alkaloid,  hijau  tua menunjukan  adanya  steroid,  dan  ungu  menunjukan  adanya  triterpenoid.  Apabila dibandingkan  dengan  data  sebelumnya hanya  diperoleh  dua  jenis  senyawa metabolit sekunder yang terdeteksi yaitu alkaloid dan saponin. 1

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  simplisia  daun  bidara memiliki  hasil untuk parameter spesifik memiliki kadar sari larut air 4,4%, kadar sari larut etanol 1,8%, susut  pengeringan 14,3%.    Untuk  parameter  non  spesifik  mengandung  kadar  air  4%, kadar  abu  total  5,06%,  kadar  abu  larut  air  2,54%,  kadar  abu  tidak  larut  asam  0,58% Hasil  penafisan  fitokimia  simplisia  daun  bidara  juga  mengandung  alkaloid,  flavonoid, saponin, fenol dan steroid/triperpenoid. Sedangkan dari hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT)  dari  ekstrak  metanol  menunjukan  adanya  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  steroid, triterpenoid, dan fenol.

## Daftar Pustaka
1.  Raghvendra  Dubey,  Kushagra  Dubey,  Sumeet  Dwivedi,  Yasodha  Krishna Janapati,C.  Sridhar  and  K.N.Jayaveera.  Standardization  of  leaves  of Ziziphus nummularia Linn. - An effective herb for UTI infections. IJDDHR. 2011;1(1);5-7
2.  Utamiwati  NPM.  Identifikasi  Komponen  Fitokimia  Ekstrak  Bidara  ( ziziphus mauritiana )
3.  ManojGoyal a ManikGhosh b B.P.Nagori a .  Analgesic  and  anti-inflammatory  studies  of cyclopeptide alkaloid fraction of leaves of Ziziyphus nummularia. SJBS.2013, 365- 371
4. Hafiz  AllahBachaya a ZafarIqbal a Muhammad  NisarKhan a Zia-ud-DinSindhu a AbdulJabbar ab Anthelmintic  activity  of Ziziphus  nummularia (bark)  and Acacia  nilotica (fruit)
against Trichostrongylid nematodes of sheep. JOE. 2009;123-2;325-329
Vol. 10 ; No. 2  ; Tahun 2019 Halaman 197-204
5.  Departemen  Kesehatan  RI.  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan Obat;Ditjen BPOPM;20003-6P
6.  Paramita  NLPV,  Andiani  NMD,  Putri  IAPY,  Indriani  NKS,  Susanti  NMP. Karakteristik  Simplisia  teh  hitam  dari  tanaman camelia  sinensis var.Assam  mica dari  perkebunan  teh  bali  cahaya  amerta,  desa  angseri,  kecamatan  batu  riti, kabupaten tabanan, bali. Jurnal kimia(journal of chemistry). [serial online]. Januari 2019; 13(1);58-66p
7.  Handayani  S,  Wirasutisna  KR,  Insanu  M.  Penafisan  Fitokimia  dan  Karakteristik Simplisia  Daun  Jambu  Mawar  ( syxygium  jambos alston).  JF  FIK  UINAM.  [serial online].2017;Vol.5 No.3;174-182
8.  Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia  Suplemen  III  Farmakope  Herbal Indonesia. Edisi I. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia; 2013. 95- 102p
9.  Djamil  R,  Anelia  T.  Penafisan  Fitokimia,  Uji  BSLT  dan  Uji  Antioksidan  Ekstrak Metanol  beberapa  Spesies  Papilionaceae.  Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia. [serial online]. 2009; 65-71p
10.  Mutmainnah  PU,  Hakim  A,  Savalas  RT.  Identifikasi  Senyawa  Turunan  Hasil Fraksinasi  Akar Atrocarpus  Odoratissimus .  Jurnal  Penelitian  Pendidikan  IPA (JPPIPA). [serial online]. 2017; 3(2). 26-32p
11.  Budiana  W,  Suhardiman  A,  Roni  A,  Sumaiah  I,  Nara  TE.  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Daun  Tiga  Genus Artemisia  sp dengan  Metode  DPPH  serta  Penetapan Kadar  Fenol  total  Flavonoid  Fenol  dan  Karotenoid.  Jurnal  Ilmiah  Farmasi.  [serial online]. Desember 2017; 5(2); 38-43p
12.  Depatremen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Cara  Pembuatan  Simplisia.  Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 1985. 2-15p
13.  Iswahyudi,  Sembiring  I,  Isnindar.  dengan  Uji  aktivitas  Antioksidan  Fraksi  Etanol Daun Bawang Mekah Eleutherine americana Merr.  Metode DPPH. Program Studi Farmasi. Universitas Tanjungpura Pontianak.
14.  Saifudin, A., Rahayu, V. and Teruna, H.Y. 2011. Standardisasi Bahan Obat Alam . Yogyakarta: Graha Ilmu.