## ISOLASI DAN SELEKSI ENZIMATIS BAKTERI SELULOLITIK DARI LIMBAH
MEDIA TANAM JAMUR TIRAM PUTIH ( Pleurotus ostreatus ) BERBAHAN SERBUK GERGAJI KAYU KARET ( Hevea brasiliensis Muell. Arg)
Marlina Kamelia 1) , Bambang Sri Anggoro 2) , dan Deffi Novitasari 3)
1,2,3 FTK, UIN Raden Intan Lampung e-mail: marlinakamelia@radenintan.ac.id
Diterima : 15 Oktober 2018. Disetujui: 22 Novemver 2018. Dipublikasikan: 29 Desember 2018

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini yakni melakukan isolasi dan seleksi secara enzimatis dari limbah media tanam jamur tiram putih berbahan serbuk gergaji kayu karet ( Hevea brasiliensis Muell. Arg). Dari hasil isolasi diperoleh 60 isolat bakteri yang berasal dari tiga jenis usia baglog yakni, 0, 2  dan  4  bulan.  Isolat  tersebut  selanjutnya  dikarakterisasi  dengan screening pada  media differensial  CMC  guna  melihat  aktivitas  degradasi  terhadap  selulosa.  Hasil screening diperoleh  23  isolat  yang  merupakan  positif  selulolitik  ditandai  dengan  adanya  zona  bening yang terbentuk pada media CMC. Zona bening yang terbentuk merupakan indikasi aktivitas bakteri  yang  dapat  mengunakan  sumber  karbon  pada  CMC  dan  mendegradasi  komponen selulosa.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  limbah  media  tanam  jamur  tiram  putih berbahan  kayu  karet  memiliki  potensi  selulolitik.  Isolat  yang  mendominasi  hasil  pada penelitian  ini  memiliki  bentuk undulate dengan  tepi irreguler berwarna  putih  serta  tekstur makrokopisnya  yang  licin.  Sedangkan,  hasil  pengamatan  mikrokopis  menunjukkan  bahwa bentuk sel coccus dengan jenis G rampositif mendominasi isolat bakteri.
Kata kunci: Selulosa,  Selulolitik,  CMC,  Media  Tanam  Jamur  (Baglog),  Zona  Bening, Undulate, Coccus

## ABSTRACT
The purpose of this research is to isolate and enzymatically select from the waste of planting media of white oyster mushroom from rubber sawdust (Hevea brasiliensis Muell, Arg). From the isolation result, 60 bacteria isolates were obtained from three types of baglog age ie 0, 2 and  4  months.  The  isolates  were  then  characterized  by  screening  on  CMC  differentiation media  to  see  degradation  activity  against  cellulose.  Screening  results  obtained  23  isolates which  is  a  positive  cellulolitik  characterized  by  a  clear  zone  formed  on  CMC  media.  The clear zone formed is an indication of the activity of bacteria that can use carbon sources in CMC and degrade cellulose components. The results of this study indicate that waste media planting white oyster mushroom rubber wood has the potential cellulolitik. The isolate that dominates the results in this study has an undulate shape with a white irregular edge and a slick macrocoptic texture. Meanwhile, the results of microcyst observation showed that the form of coccus cells with Gram-positive species dominate bacterial isolates.
Keywords: Cellulose,  Cellulolytics,  CMC,  Mushroom  Cultivation  Media  (Baglog),  Zone Bening, Undulate, Coccus.

## PENDAHULUAN
Jamur  tiram  atau hiratake ( Pleurotus sp.)  termasuk  ke  dalam  golongan  jamur  kayu. Jamur  merupakan  tumbuhan  saprofit  yang  hidup  pada  kayu-kayu  lapuk  dan  memperoleh bahan  makanan  dengan  memanfaatkan  sisa-sisa  bahan  organik  di  habitat  alaminya (Susilawati  dan  Raharjo,  2010).  Jamur  tiram  adalah  jenis  jamur  kayu  yang  memiliki kandungan  nutrisi  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  jenis  jamur  lainnya.  Jamur  tiram mengandung  protein,  lemak,  fosfor,  besi,  biotin,  niasin,  thiamin  (vitamin  B1),  dan riboflavin (vitamin B2).  Terdapat  20 asam  amino menyerupai  derivat  protein pada daging hewan  yang  dibutuhkan  manusia  namun  tidak  mengandung  kolestrol  antaralain  lysine, methionine, tryphtofan, theonin, valin, leusin, isoleusin, histidin, dan fenilalanin (Maulana, 2012).
Jamur  tiram  pada  habitat  alaminya  hanya  dijumpai  pada  musim  tertentu  dengan jumlah  terbatas.  Tumpukan  kayu  dan  tunggul-tunggul  pohon  yang  relatif  lunak  seperti sengon, karet,  kapuk randu, dadap, kayu duren, dan kidamar pada musim penghujan akan banyak  ditumbuhi  jamur  tiram.  Serbuk  gergaji  adalah  bahan  sisa  yang  kurang dimanfaatkan,  namun  menjadi  bahan  utama  pada  budidaya  jamur  tiram.  Bekatul  (dedak) dan tepung jagung juga  ditambahkan sebagai  sumber karbohidrat,  lemak, protein, vitamin dan  mineral.  Kapur  (Calsium  carbonat)  sebagai  sumber  mineral  dan  pengatur  keasaman media  tanam  (pH),  serta  air  agar  miselia  jamur  dapat  tumbuh  dan  menyerap  makanannya (Armawi, 2009; Hayati, 2011).
Industri  banyak  menggunakan  kayu  ini  sehingga  limbah  berupa  serbuk  kayu  juga melimpah. Kayu karet merupakan jenis kayu yang mudah untuk di gergaji karena memiliki permukaan  yang  halus,  sehingga  baik  untuk  pertumbuhan  jamur.  Budidaya  jamur  tiram tidak hanya memberi aspek positif terhadap bidang pangan, ekonomi dan kesehatan. Aspek negatif  pun  timbul  seperti  meningkatnya  jumlah  limbah  pasca  panen  jamur  tiram  berupa baglog.Baglog  yaitu  media  tanam  yang  dimasukkan  ke  dalam  plastik  lalu  dibentuk menyerupai  potongan  kayu  gelondongan.  Baglog  jamur  terdiri  dari  komposisi  serbuk gergaji  68,5%,  dedak  halus  13,5%,  gypsum  (CaSO 4 )  0,5%,  kapur  (CaCO 3 )  3,5%,  TSP 0,5%, pupuk kandang 13,5%, dan air (Rahmah, Wahdianto, & Hidayat, 2015).
Limbah  media  tanam  jamur  tiram  terbentuk  akibat  bahan  yang  tidak  habis  terpakai saat  memproduksi  jamur  tiram,  sehingga  meninggalkan  sisa-sisa  tidak  efektif  untuk pertumbuhan  jamur  tiram.  Serbuk  gergaji  sebagai  komposisi  utama  budidaya  jamur  tiram merupakan salah satu substrat yang kaya akan selulosa.
Selulosa  merupakan  polimer  linier  terdiri  dari  D-glukosa  yang  terikat  pada  1,4- glikosidik  serta  sangat  erat  berasosiasi  dengan  hemiselulosa  dan  lignin.  Selulosa, hemiselulosa dan lignin membentuk komponen lignoselulosa yang berfungsi sebagai unsur struktural  kekuatan  fisik  pada  dinding  sel  tumbuhan  tingkat  tinggi.  Tumbuhan  berkayu merupakan  tempat  yang  paling  banyak  ditemukannya  selulosa.  Selulosa  dengan  struktur yang  demikian  kompleks  membuat  konversinya  menjadi  glukosa  membutuhkan  biaya cukup besar.  Biaya produksi untuk  konversi selulosa menjadi  glukosa dapat  diminimalisir dengan  pemanfaatan  enzim.  Enzim  tersebut  diperoleh  dengan  mencari  mikroorganisme yang efisien mengkonversi selulosa. Mikroorganisme yang dimaksud salah satunya adalah bakteri selulolitik (Melati, Mulyasari, Sunarno, Bintang, & Kurniasih, 2014).
Bakteri  selulolitik  merupakan  mikroorganisme  yang  mampu  mendegradasi  selulosa. Kelompok  bakteri  selulolitik  menjadikan  komponen  selulosa  tersebut  sebagai  sumber karbon  utama  bagi  pertumbuhannya.  Bakteri  selulolitik  secara  konvensional  dapat dimanfaatkan  menjadi  produk  yang  memiliki  nilai  tambah,  seperti  bahan  bakar  nabati ( biofuel ),  bahan  kimia  organik  dan  sumber  nutris  berkualitas  baik  untuk  pakan  ternak ataupun sumber pangan (Agustini, Irianto, Turjaman, & Santoso, 2011). Bakteri selulolitik pada  limbah,  mulai  banyak  diteliti  dan  dikembangkan.  Lingkungan  dapat  terjaga ekosistemnya  dengan  pengelolaan  lebih  lanjut  bakteri  ini.  Bakteri  ini  makin  memberi manfaat  dalam  segala  bidang  baik  dalam  segi  lingkungan  ataupun  ekonomi,  sehingga penelitiannya terus dikembangkan.
Masalah-masalah  yang  telah  diuraikan  di  atas  melatar  belakangi  penulis  melakukan penelitian  mengenai  isolasi  dan  seleksi  enzimatis  bakteri  selulolitik  dari  limbah  media tanam  jamur tiram  putih ( Pleurotus  ostreatus ) berbahan serbuk  gergaji kayu karet  ( Hevea brasiliensis Muell. Arg).

## METODE PENELITIAN
Sampel  limbah  media  tanam  jamur  tiram  putih  diambil  di  Kecamatan  Karanganyar, Kabupaten  Lampung  Selatan.  Alat  dan  bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu: blender,  oven,  timbang  analitik,  pipet  tetes,  spluid  (alat  suntik),  cawan  petri,  autoclave, kompor, dandang, labu erlenmeyer, gelas beker, gelas ukur, tabung reaksi, rak tabung raksi, mikroskop, object glass, rak pewarnaan, pembakar spirtus, nampan, inkubator, spatula, dan kawat ose, NA ( Nutrent Agar ), alkohol 70%, CMC ( Carboxy Methyl Cellulose )-agar media, congo  red 0,5%,  aquades,  pewarna  Gram  (Gentian  violet,  Lugol,  Etil  Alkohol  96%,  dan
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
Safrarin), oil imersi, spirtus, plastik sampel, dan kartu label. CMC-agar perlu ditambahkan dengan bahan lain seperti KH 2 SO 4 , MgSO 4 .7H 2 O, yeast ekstrak, dan agar bubuk.
Prosedur  penelitian  ini  dibagi  menjadi:  (1)  persiapan  dan  pengambilan  sampel;  (2) pengenceran dan inokulasi isolat bakteri; (3) Uji Screening Enzimatis, terdiri dari persiapan media CMC-agar ( Carboxy Methyl Cellulose ) dan uji enzim selulase; (4) pewarnaan Gram . Teknik pengumpulan data menggunakan observasi dan dokumentasi.
Analisis data dilakukan dengan membandingkan secara deskriptif tingkat kelimpahan bakteri  yang  diperoleh  dari  sampel  limbah  baglog  pada  media NA .  Kelimpahan  tersebut dibedakan berdasarkan usia limbah baglog yang nantinya hasil tersebut dipaparkan dengan hasil screening .  Hasil screening dilakukan  pada  media  CMC  guna  melihat  kemampuan isolat  bakteri  terpilih  mendegradasi  selulosa.  Data  yang  diperoleh  dideskripsikan  sesuai dengan  kemampuan  setiap  isolat  positif  bersifat  selulolitik.  Sehingga,  dapat  diperoleh analisis  bahwa  limbah  baglog  pada  penelitian  ini  memberi  peluang  terhadap  kelimpahan bakteri selulolitik.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## Isolasi dan Perhitungan Bakteri
Hasil  rata-rata  kelimpahan  bakteri  dari  limbah  media  tanam  jamur  tiram  putih ( Pleurotus ostreatus ) pada media Nutrient Agar (NA) ditampilkan pada Tabel berikut ini:
Tabel 1 Hasil Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
Kelimpahan  bakteri  pada  masing-masing  sampel  diberikan  kode  berbeda  agar memudahkan dalam pembacaan. Sampel A merupakan limbah usia 0 bulan denganrata-rata kelimpahan  bakteri  mencapai  53,  83.  Sampel  B  adalah  limbah  usia  2  bulan  dengan kelimpahan 61, 96. Sedangkan,  angka rata-rata tertinggi  ditunjukkan oleh sampel C  yakni mencapai 94, 6.

## Screening Isolat Bakteri
Karakterisasi  isolat  bakteri meliputi  uji selulolitik (screening) dan pewarnaan Gram. Uji  selulolitik  dilakukan  dengan  mengkarakterisasi  isolat  menggunakan  media pertumbuhan differensial yakni CMC ( Carboxyl Methyl Cellulose ). Isolat bakteri dikatakan sebagai  pendegradasi  selulosa  apabila  dapat  membentuk  zona  bening  pada  media  CMC tersebut.  Isolat  positif  terhadap  selulosa  selanjutnya  dikarakterisasi  dengan  pewarnaan Gram. Data pengamatan makrokopis sebelumnya diketahui bahwa terdapat 7 isolat dengan morfologi berbeda pada warna, bentuk, tepi serta tekstur koloni bakteri.
Tabel  1  mengakumulasi  data  hasil  pengamatan  tersebut.  Hasil  pengamatan  secara makrokopis  tersebut  kemudian  dijadikan  dasar  melakukan screening terhadap  60  isolat. Karakterisasi pada 60 isolat tersebut menunjukkan terdapat 23 isolat  yang positif terhadap selulosa.
Tabel  2  mengakumulasi  data  isolat  positif  mendegradasi  selulosa  pada  CMC.  Data pada  pengamatan  screening  disajikan  dengan  membedakan  usia  sampel  berupa  limbah baglog. Hasil pengamatan tersebut dapat di lihat pada data tabel sebagai berikut:
Tabel 2 Isolat Positif Selulolitik pada Sampel A

## Tabel 3 Isolat Positif Selulolitik pada Sampel B
Tabel 4. Isolat Positif Selulolitik pada Sampel C
Isolat positif selulolitik pada Tabel 2 didominasi oleh bakteri golongan Gram positif berbentuk coccus . Bentuk coccus Gram positif pada sampel A di tunjukkan oleh isolat AA 3 - 5 ,  CA 2 -4 ,  dan  BA 2 -5 .  Namun,  isolat-isolat  tersebut  memiliki  morfologi  makrokopis  yang berbeda-beda.Isolat  positif  selulolitik  pada  sampel  A  diketahui  berjumlah  tujuh  isolat dengan berbagai variasi morfologinya masing-masing. Sampel limbah baglog usia 2 bulan pada  Tabel  3  juga  menawarkan  hasil  isolat  positif  tehadap  selulolitik.  Hasil  pengamatan yang dilakukan pada sampel ini menghasilkan sembilan isolat mampu melakukan degradasi selulosa pada media differensial CMC.
Kelompok  bakteri  selulolitik  pada  sampel  B  pada  Tabel  3  nampak  didominasi  oleh bakteri  dengan  sel Gram positif.  Hasil  yang  beragam  juga  ditunjukkan  oleh  isolat  positif pada  Tabel  4  sampel  C.  Bentuk coccus merupakan  sel  bakteri  yang  mendominasi  hasil pengamatan secara mikrokopis sampel C.
Isolat bakteri positif terhadap selulolitik dapat ditemukan pada masing-masing sampel limbah  baglog  namun  lebih  banyak  di  peroleh  pada  baglog  usia  2  bulan.  Koloni  bakteri yang  mampu  mendegradasi  selulosa  pada  media  CMC  tersebut  membuktikan  bahwa adanya  aktivitas  enzimatis.  Ukuran  besar  kecil  serta  jelas  tidaknya  zona  bening  pada permukaan  media  merupakan  indikator  aktivitas  bakteri  selulolitik  merombak  selulosa. Zona  bening  yang  diperoleh  dari  aktivitas  bakteri  selulolitik  dapat  dilihat  pada  gambar berikut.

## Gambar 1 Zona bening pada media CMC
Isolat terbanyak yang mampu mendegradasi selulosa merupakan isolat putih undulate dengan  bentuk  selnya  adalah coccus positif.  Koloni  bakteri  tersebut  berada  pada  masing- masing usia sampel limbah baglog, baik 0, 2 hingga 4 bulan.

## Tabel 5 Total isolat positif selulolitik
Keterangan: Blok  warna  kuning  menunjukkan  isolat  terbanyak  yang  mampu mendegradasi selulosa.
Kandungan  selulosa  mempunyai  kecenderungan  semakin  lama  masa  inkubasi  maka semakin  banyak  terdegradasi.  Selulosa  yang  terdegradasi  selanjutnya  berguna  untuk pertumbuhan  jamur  tiram  putih.  Data  pada  sebuah  penelitian  menyatakan  degradasi selulosa mencapai puncaknya saat jamur tiram putih membentuk tubuh buah. Kelimpahan mikroba  pada  usia  limbah  4  bulan  yang  tinggi  membuktikan  hal  tersebut.  Sampel  limbah baglog usia 4 bulan merupakan media tanam jamur tiram yang memasuki fase produktivitas akhir.  Baglog  tersebut  dikatakan  sebagai  baglog  tua  dengan  karakteristik  bobot  yang semakin  ringan.  Bobot  baglog  yang  ringan  ini  disebabkan  sustrat  berupa  serbuk  gergaji kayu banyak digunakan bagi pertumbuhan miselium.
Masa  baglog  produktif  yakni  2  bulan  ditandai  dengan  penebalan  pada  miselium belum  merata.  Baglog  usia  2  bulan  memiliki  bobot  yang  cukup  berat  dibanding  sampel  4 bulan.  Kelimpahan  mikroorganisme  seperti  bakteri  pada  sampel  2  bulan  terbilangcukup besar  dibanding  baglog  0  bulan.  Sampel  baglog  usia  0  bulan  menunjukkan  kelimpahan bakteri terendah setelah inokulasi pada media NA padat. Kelimpahan bakteri berhubungan dengan  kualitas  lingkungan  yang  terdiri  atas  faktor  fisika  dan  kimia.  Faktor  fisika  yang dapat  mempengaruhi  kelimpahan  bakteri  misalnya  suhu  dan  pH,  sedangkan  jumlah  unsur seperti nitrogen (N) dan karbon (C) merupakan faktor kimia. Bakteri sangat beragam baik dalam persyaratan nutrisi maupun faktor fisiknya. Kelompok bakteri tertentu membutuhkan
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
persyaratan yang sederhana, dan sebagian lainnya memiliki kebutuhan lebih kompleks dan sulit untuk proses pertumbuhannya  (Pelczar, Chan, & Hadioetomo, 1988).
Inokulum  yang  tumbuh  dapat  diindikasikan  bahwa  sampel  berupa  limbah  baglog jamur  tiram  putih  menawarkan  peluang  untuk  memperoleh  isolat  bakteri  selulolitik. Nitrogen dan karbon berdasarkan keterangan sebuah penelitian memiliki kandungan cukup tinggi pada sampel limbah baglog. Komponen nitrogen dan karbon tersebut dihasilkan oleh hidolisis kelompok bakteri yang terindikasi selulolitik (Setiarto & Saskiawan, 2013). Oleh karena itu, berdasarkan keterangan yang dipaparkan indikasi isolat pada penelitian kali ini nantinya  akan  dikonfirmasikan  dengan  data  hasil screening .Sampel  limbah  baglog  juga menyajikan data bahwa terdapat perbedaan pada koloni yang tumbuh mendominasi media. Perbedaan  tersebut  menjadi  indikasi  dilakukannya  pemurnian.  Pemurnian  pada  isolat bakteri  ini  merupakan  rangkaian  kegiatan  yang  dilakukan  untuk  proses  isolasi.  Isolasi dilakukan untuk  memisahkan mikroorganisme seperti bakteri  agar diperoleh biakan murni secara in  vitro dalammedia kultur. Warna, bentuk, tepi dan tekstur merupakan dasar  yang digunakan untuk membedakan koloni bakteri (Harti, 2015; Sri Harti, 2015).
Nilai  kelimpahan  pada  setiap  sampel  limbah  baglog  setelah  diinokulasikan  pada media  NA  menunjukkan  kenaikan.  Isolat  yang  tumbuh  mendominasi  setiap  sampel memiliki  morfologi  berbentuk undulate berwarna  putih  serta  bertekstur  licin.  Kelimpahan isolat  ini  mencapai  527  koloni  yang  tersebar  di  masing-masing  sampel  limbah  baglog. Sedangkan,  isolat  dengan  kelimpahan  terendah  yakni  berbentuk  bulat  dan  tepi  irreguler berwarna putih serta bertekstur halus yang berjumlah 82 koloni. Isolat ini hanya ditemukan pada sampel limbah berusia 4 bulan.
Penghitungan  bakteri  yang  diambil  dari  limbah  baglog  jamur  tiram  putih menggunakan standar Total Plate Count (TPC). Total Plate Coun t (TPC) merupakan salah satu  metode  perhitungan  bakteri  tanpa  menggunakan  mikroskop.  Hasil  perhitungan menggunakan  metode  TPC  ini  tidak  menunjukkan  jumlah  sel  yang  sebenarnya,  karena beberapa  sel  yang  berdekatan  mungkin  membentuk  satu  koloni.  Mikroorganisme  yang diperoleh  dengan  menggunakan  metode  TPC  hanya  merupakan  jumlah  perkiraan  dan terdapat  kemungkinan  bahwa  jumlah  mikroorganisme  yang  diperoleh  lebih  banyak dibandingkan dengan mikroorganisme sesungguhnya.
Hasil  perhitungan  kelimpahan  bakteri  tinggi  tidak  selalu  mendapatkan  koloni selulolitik  yang  tinggi  pula.  Kelimpahan  bakteri  dihubungkan  dengan  beberapa  kualitas lingkungan  yang  meliputi  faktor  fisika  dan  faktor  kimia.  Faktor  fisika  yang  diukur  antara
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
lain suhu, pH sedangkan, jumlah unsur nitrogen dan karbon merupakan faktor kimia yang diukur.  Hasil  penelitian  menyebutkan  bahwa  tingginya  kandungan  karbon  dan  nitrogen pada limbah baglog merupakan hasil degradasi mikroba. Namun, penelitian dengan sampel yang  sama  menunjukkan  bahwa  aktivitas  degradasi  tertinggi  adalah  kelompok  jamur dibanding  bakteri  (Sinatryani,  2014).  Unsur  karbon  pada  organisme  dalam  hal  ini  adalah bakteri,  merupakan  bahan  dasar  materi  sel  organik  sebagai  sumber  energi  yang  penting dalam proses metabolisme dan perbanyakan sel. Sedangkan, musdalifah menyatakan bahwa nitrogen merupakan bahan dasar pokok dalam membentuk protein, asam nukleat (DNA dan RNA)  serta  senyawa  lain  seperti  koenzim  (Saputri,  Widyorini,  &  Purnomo,  2017; Sinatryani, Sudarno, & Pursetyo, 2019).
Kandungan nitrogen terendah terdapat pada masa inkubasi 1 bulan, hal ini disebabkan miselium  pada  baglog  tersebut  masih  rendah.  Nitrogen  mengalami  peningkatan  sampai pada  masa  inkubasi  4  bulan,  dikarenakan  miselium  pada  baglog  menebal  sehingga meningkatkan  kandungan  nitrogen  pada  baglog.  Jamur  tiram  putih  menggunakan  karbon serta  nitrogen  untuk  komponen  sel  tubuh,  sehingga  konsentrasi  miselium  semakin  padat. Unsur  nitrogen  dan  karbon  yang  meningkat  memberi  pengaruh  terhadap  asam  amino, sehingga  persentase  protein  pada  limbah  baglog  meningkat.  Data  sebuah  penelitian menyebutkan  bahwa  protein  mengalami  kenaikan  hingga  22,4% ( Kusuma,  2014).  Hasil analisis kimia pada sebuah penelitian menyatakan bahwa limbah media tanam jamur tiram putih  pada  masa  panen  memiliki  kandungan  protein  yang  tinggi.Sintesis  protein  oleh mikroorganisme  dalam  hal  ini  bakteri  menjadi  salah  satu  penyebab  peningkatan  tersebut. Protein  merupakan  senyawa  organik  yang  mengandung  unsur  karbon,  hidrogen,  nitrogen, oksigen, sulfur dan fosfor yang merupakan zat makanan utama bagi bakteri. Limbah media tanam  jamur  tiram  putih  memiliki  mutu  sedikit  lebih  tinggi  karena  kadar  proteinnya bertambah dibanding jerami segar (ES & Susilo, 2003).
Data hasil sebuah penelitian menyatakan bahwa adanya pelapukan pada media tanam jamur  tiram  (baglog)  menjadi  keuntungan  dibanding  substrat  segar  seperti  jerami. Pelapukan  pada  media  tanam  jamur  dapat  menyederhanakan  bahan  organik  menjadi senyawa yang mudah untuk diserap. Senyawa tersebut antaralain seperti sejenis gula, asam organik,  dan  asam  amino.  Selain  itu,  pelapukan  oleh  media  mampu  mengaktifkan mikroflora termofolik, misalnya bakteri yang akan merombak selulosa.
Gambar 1 menunjukkan bahwa zona bening yang terbentuk pada medium differensial CMC berukuran sangat  kecil. Zona bening pada gambar diatas tersebar hampir memenuhi
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
permukaan media.  Zona  bening tersebut  dapat  terlihat  jelas pada hari ke delapan inkubasi setelah  direndam  pewarna congo  red 0,1%.  Luas  zona  beningpada  sebuah  penelitian dijelaskan bahwa berkaitan dengan konsentrasi CMC atau agar yang digunakan.Konsentrasi media  yang  tidak  sesuai  membuat  enzim  selulase  sulit  untuk  disekresikan  sehingga menghambat  proses  degradasi.  CMC  dan  agar  dengan  komposisi  yang  tinggi  membuat kepadatan  dan  pori-pori  media  menjadi  lebih  kecil.  Media  dengan  keadaan  seperti  ini membuat  sulit  dilintasi  oleh  selulosa  untuk  proses  degradasi.  Demikian  sebaliknya, penambahan  CMC  dan  agar  yang  terlalu  sedikit  menyebabkan  media  menjadi  lebih  lunak sehingga proses isolasi dan inokulasi terhambat (Ambriyanto, 2010) .
Zona  bening  yang  terbentuk  juga  berkaitan  dengan  kelarutan  dari  enzim  selulase. Teori  pada  sebuah  penelitian  menyatakan  bahwa  enzim  selulase  yang  memiliki  tingkat kelarutan  tinggi,  akan  membentuk  zona  bening  yang  berukuran  besar.  Data  penelitian  ini memiliki  keterbatasan  di  mana  zona  bening  yang  dihasilkan  oleh  aktivitas  bakteri  tidak dapat  diukur  diameternya.  Diameter  zona  bening  yang  dihasilkan  pada  penelitian  yang dilakukan memiliki ukuran sangat kecil dan tipis sehingga sulit dilakukan pengukuran.
Media  differensial  CMC  yang  digunakan  untuk  pertumbuhan  bakteri  selulolitik  ini memiliki  ikatan  selulosa  dapat  larut  (amorf).  Koloni  bakteri  yang  tumbuh  lebih  cepat  dan lebih luas pada CMC dikarenakan lebih banyak menghasilkan enzim ekso-β-1,4-glukanase daripada  enzim  endo-  β-1,4-glukanase.  Selulosa  merupakan  enzim  kompleks  yang  terdiri dari  enzim  ekso-β-1,4-glukanase  (selobiohidrolase),  enzim  endo-  β-1,4-glukanase (endoselulase) dan β-glukosidase (selobiase). Koloni yang tumbuh pada media CMC dapat di lihat pada gambar berikut ini:

## Gambar 2 Pertumbuhan koloni bakteri pada media CMC
Hasil  sebuah  penelitian  menjelaskan  bahwa  kuantitas  enzim  ekso-β-1,4-glukanase mempengaruhi  kecepatan  degradasi  selulosa.  Selulosa  yang  terdegradasi  dengan  cepat diakibatkan  kemampuan  enzim  ekso-β-1,4-glukanase  mengkatalis  pembentukan  selobiosa dihidrolisis  menjadi  glukosa.  Laju  degradasi  selulosa  yang  rendah  terjadi  apabila  enzim
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
endo- β-1,4-glukanase lebih banyak dihasilkan sehingga menghambat penbentukan glukosa sebagai  produk  akhir  (Nugraha,  2012).  Enzim  endo-  β-1,4-glukanase  pada  sebuah  teori penelitian  menyatakan  bahwa,  secara  serentak  ikatan  β-1,4  mempengaruhi  makromolekul dan  menghasilkan  potongan  besar  berbentuk  rantai  yang  ujungnya  bebas.  Rantai  tersebut kemudian  dipotong  oleh  enzim  ekso-  β-1,4-glukanase  menjadi  disakarida  selobiosa. Selobiosa yang terbentuk akan dihidrolisis oleh enzim β-glukosidase menjadi glukosa.
Selulosa  merupakan  material  organik  yang  sangat  melimpah  pada  tanaman  dan  siap untuk dipecah oleh berbagai mikroorganisme salah satunya adalah bakteri. Bakteritersebut akan  menggunakan  enzim  selulase  untuk  memecah  selulosa  menjadi  molekul  selobiosa yang merupakan disakarida yang terdiri dari dua unit glukosa (Sinatryani dkk., 2019). Hasil penelitian yang dilakukan membuktikan bahwa adanya kemampuan bakteri selulolitik dari sampel  berupa  limbah  baglog  jamur  tiram  putih  berbahan  serasah  kayu  karet  ( Hevea brasiliensis Muell. Arg).
Kelompok  bakteri  selulolitik  menghasilkan  kompleks  enzim  selulase  berbeda-beda, sesuai  dengan  gen  serta  sumber  karbon  yang  digunakan.  Hasil  penelitian  menggunakan sampel  berupa  jerami  dan  tongkol  jagung  menunjukkan  kemampuandegradasi  selulosa yang  rendah.  Substrat  sintetik  CMC  yang  digunakan  pada  sampel  tersebut  memiliki aktivitas  yang  rendah  sehingga  enzim  selulase  kurang  potensial  bekerja.  Selain  itu, komponen lignin  yang membungkus selulosa pada sampel jerami dan tongkol jagung juga berperan menghambat aktivitas enzim selulase (Meryandini dkk., 2010).
Hasil  persentase  selulolitik  yang  rendah  juga  ditunjukkan  oleh  penelitian menggunakan  sampel  serasah  daun Avicenia .  Degradasi  selulosa  tertinggi  dimiliki  oleh mikrooganisme  amilolitik,  proteolitik,  selulolitik  dan  terakhir  lipolitik.  Mikroorganisme selulolitik  pada  sampel  penelitian  tersebut  berada  pada  urutan  ketiga  untuk  aktivitas degradasi selulosa. Sehingga, perlu diketahui bahwa kandungan pada sampel berupa limbah baglog  memiliki  kemungkinan  terdiri  atas  mikroorganisme  lain  sehingga  menghambat aktivitas selulolitik (Sinatryani dkk., 2019).
Data  hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  tidak  adanya  keterkaitan  antara  nilai kelimpahan dengan kondisi selulolitik bakteri. Nilai kelimpahan limbah baglog usia 4 bulan memang  menunjukkan  jumlah  tertinggi,  namun  tidak  pada  hasil  screening.  Hasil  data screening nampak bahwa limbah usia 2 bulan memiliki kelimpahan selulolitik terbanyak di banding limbah baglog lainnya.
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
Organisme selulolitik yang banyak ditemukan pada limbah usia 2 bulan dipengaruhi oleh  kandungan  nutrisi  didalam  baglog.  Fase  inkubasi  pada  limbah  tersebut  belum  terlalu lama  sehingga  belum  banyak  selulosa  yang  didegradasi.  Ketersediaan  selulosa  tersebut membuat kelimpahan bakteri selulolitik cukup tinggi dibanding baglog usia inkubasi lebih lama.
Limbah baglog dengan fase inkubasi yang cukup lama membuat kandungan selulosa sebagai  komponen  utama  media  tanam  jamur  banyak  terdegradasi.  Kelimpahan  bakteri yang  diperoleh  bukan  menjadi  indikasi  selulolitik  sebab  adanya  kemungkinan  jenis oreganisme lain yang menghuni banglog tersebut.

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan maka dapat disimpulkan bahwa limbah media  tanam  jamur  tiram  putih  ( Pleurotus  ostreatus )  berbahan  serbuk  gergaji  kayu  karet ( Hevea  brasiliensis Muell.  Arg)  memiliki  peluang  terhadap  bakteri  selulolitik,  limbah baglog usia 4 bulan memiliki kelimpahan bakteri tertinggi setelah ditumbuhkan pada media NA, akibat tinggi unsur pendukung pertumbuhan bakteri yakni karbon dan nitrogen, isolat bakteri  positif selulolitik  didominasi oleh bentuk undulate dengan tepi irregular berwarna putih dan bertekstur licin. Kelompok bakteri ini tumbuh pada semua sampel limbah baglog dengan variasi pada jumlah kelimpahannya, dan hasil pewarnaan Gram pada isolat positif selulolitik menunjukkan bentuk sel bakteri yang mendominasi adalah coccus positif.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustini,  L.,  Irianto,  R.  S.,  Turjaman,  M.,  &  Santoso,  E.  (2011).  Isolat  dan  Karakterisasi Enzimatis  Mikroba  Lignoselulolitik  di  Tiga  Tipe  Ekosistem  Taman  Nasional. Jurnal Penelitian Hutan dan Konservasi Alam , 8 (2), 197–210.
Ambriyanto, K. S. (2010). Isolasi dan karakterisasi bakteri aerob pendegradasi selulosa dari serasah  daun  rumput  gajah  (Pennisetum  purpureum  Schaum). Institut  Teknologi Sepuluh Nopember .
Armawi,  A.  (2009). Pengaruh  pemberian  air  kelapa  pada  media  tanam  terhadap pertumbuhan  jamur  tiram  putih  Pleurotus  ostreatus .  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim.
ES,  E.  Y.,  &  Susilo,  A.  (2003).  Studi  Kandungan  Nutrisi  Limbah  Media  Tanamjamur Tiram  Putih  (Pleurotus  Ostreatus)  Untuk  Pakan  Ternak  Ruminansia. Jurnal Matematika Sains dan Teknologi , 4 (1), 54–61.
http://ejournal.radenintan.ac.id/index.php/biosfer/index
Harti, A. S. (2015). Mikrobiologi Kesehatan. Andi, Yogyakarta .
Hayati, A. (2011). Pengaruh Frekuensi Dan Konsentrasi Pemberian Air Kelapa Terhadap Pertumbuhan Dan Hasil Jamur Merang (Volvariella volvaceae .
Maulana,  E.  (2012).  Panen  Jamur  Tiap  Musim  (Panduan  Lengkap  Bisnis  dan  Budidaya Jamur Tiram). Penerbit Andi. Yogyakarta .
Melati, I., Mulyasari, M., Sunarno, M. T. D., Bintang, M., & Kurniasih, T. (2014). Produksi Enzim  Selulase  Dari  Bakteri  Ts2b  Yang  Diisolasi  Dari  Rumput  Laut  Dan Pemanfaatannya  Dalam  Menghidrolisis  Kulit  Ubi  Kayu  Dan  Daun  Ubi  Kayu Sebagai Bahan Baku Pakan Ikan Irma. Jurnal Riset Akuakultur , 9 (2), 263–270.
Meryandini, A., Widosari, W., Maranatha, B., Sunarti, T. C., Rachmania, N., & Satria, H. (2010).  Isolasi  bakteri  selulolitik  dan  karakterisasi  enzimnya. Makara  Journal  of Science .
Pelczar,  M.  J.,  Chan,  E.  C.  S.,  &  Hadioetomo,  R.  S.  (1988). Dasar-dasar  mikrobiologi . Universitas Indonesia.
Rahmah,  N.  L.,  Wahdianto,  R.  W.,  &  Hidayat,  N.  (2015). Pemanfaatan  Limbah  Baglog Jamur  Tiram  dan  Kotoran  Kambing  sebagai  Bahan  Pembuatan  Pupuk  Kompos Berdasarkan Kajian Konsentrasi EM4 dan Jumlah Pembalikan .
Saputri,  R.  A.,  Widyorini,  N.,  &  Purnomo,  P.  W.  (2017).  Identifikasi  dan  kelimpahan bakteri  pada jenis  Karang  Acropora sp.  Di reef  flat terumbu  karang pulau panjang jepara Identification and Abundance of Bacteria In Acropora sp. at Coral Reef Flat Panjang  Island  Jepara. SAINTEK  PERIKANAN:  Indonesian  Journal  of  Fisheries Science and Technology , 12 (1), 35–39.
Setiarto,  R.  H.  B.,  &  Saskiawan,  I.  (2013).  Seleksi  Dan  Karakterisasi  Mikroba Lignoselulolitik Yang Diisolasi Dari Limbah Serbuk Gergaji Sebagai Media Tanam Jamur TiraM (Pleurotus ostreatus). Berita Biologi , 12 (1), 19–27.
Sinatryani,  D.,  Sudarno,  M.  A.  A.,  &  Pursetyo,  K.  T.  (2019).  Kelimpahan  Bakteri Selulolitik di Muara Sungai Gunung Anyar Surabaya dan Bancaran Bangkalan [The Total of Cellulolytic Bacteria in Gunung Anyar Surabaya and Bancaran Bangkalan Estuaries]. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan , 6 (2), 143–148.
Sri Harti, A. (2015). Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Andi Offset. Halaman , 25 .