## Jurnal Agrotek Tropika
Journal homepage: https://jurnal.fp.unila.ac.id/index.php/JA
P-ISSN: 2337-4993 E-ISSN: 2620-3138 PENGARUH

## PENAMBAHAN
PEPTON

## DALAM
MEMPERCEPAT
PERKECAMBAHAN Grammatophyllum stapeliiflorum J.J. Smith SECARA IN VITRO
EFFECT  OF  ADDING  PEPTONE  IN  ACCELERATING  GERMINATION  OF Grammatophyllum stapeliiflorum J.J. Smith IN VITRO
Media, Zozy Aneloi Noli * dan  Suwirmen
Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Andalas * Corresponding Author. E-mail address: zozynoli@sci.unand.ac.id

## PERKEMBANGAN ARTIKEL:
Diterima: 11 Agustus 2023 Direvisi:  14 September 2023 Disetujui: 27 November 2023
KEYWORDS: Embryo, Grammatophyllum stapeliiflorum, peptone, germination

## KATA KUNCI:
Embrio, Grammatophyllum stapeliiflorum, pepton, perkecambahan
© 2024 The Author(s). Published by Department of Agrotechnology, Faculty of Agriculture, University of Lampung.

## ABSTRACT
Grammatophyllum  stapeliiflorum is  listed  in  Appendix  II  of  the  CITES.  The  population  of  this orchid has decreased due to human activities and germination in nature is low. The tissue culture technique is one solution for propagating orchids using seeds as a source of explants. Pepton is an  organic  compound  that  can  increase  germination  and  protocorm  development  because containing  amino  acid,  protein  biotin,  pyridoxine,  thiamin  and  nitrogen.  The  research  was conducted to determine the effect of peptone on seed germination and protocorm development of G. stapeliiflorum through tissue culture technique. The method used a Completely Randomized Design (CRD) with 6 treatments and 4 replications. The mature seed from sterilized capsule was sown  on  MS  medium  without  peptone  as  a  control  treatment  and  added  with  various concentrations of peptone (0.5; 1; 1.5; 2; and 2.5 g/L). The statistical analysis results showed that peptone  had  a  significant  effect  in  accelerating  germination.  The  highest  percentage  of  seed germination  (88.59%),  protocorm  formation  (61.02%),  and  protocorm  with  SAM  and  RAM
(22.43%) was observed in  MS medium containing 2 g/L peptone.

## ABSTRAK
Grammatophyllum  stapeliiflorum termasuk  kedalam  daftar  appendix  II  CITES.  Populasi anggrek ini menurun disebabkan karena aktivitas manusia dan tingkat perkecambahan yang rendah  di  alam.  Teknik  kultur  jaringan  merupakan  salah  satu  solusi  perbanyakan  anggrek menggunakan  biji  sebagai  sumber  eksplan.  Pepton  merupakan  senyawa  organik  yang  bisa meningkatkan  perkecambahan  dan  perkembangan  protokorm  karena  mengandung  asam amino,  protein  biotin,  piridoksin,  tiamin  dan  nitrogen.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui pengaruh pepton terhadap perkecambahan biji dan perkembangan protokorm G. stapeliiflorum melalui  teknik  kultur  jaringan.  Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) dengan  6 perlakuan dan 4 ulangan. Biji yang sudah matang dari kapsul steril ditaburkan pada media MS tanpa pepton sebagai perlakuan kontrol  dan dengan penambahan berbagai konsentrasi pepton (0, 5; 1; 1,5; 2; dan 2,5 g/L). Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa  pepton  memiliki  pengaruh  yang  signifikan  dalam  mempercepat  perkecambahan. Persentase tertinggi perkecambahan biji (88,59%), pembentukan protokorm (61,02%) dan protokorm yang memiliki SAM dan RAM (22,43%) diamati pada media MS yang mengandung 2 g/L pepton.

## 1. PENDAHULUAN
Anggrek  dapat  tumbuh  dengan  baik  dinegara  yang  memiliki  iklim  tropis  seperti  Indonesia. Anggrek memiliki nilai estetika dengan bentuk bunga yang beragam serta menarik untuk dikoleksi. Hal ini mengakibatkan tingginya nilai jual anggrek (Fandani et al ., 2018). Di dunia terdapat sekitar 25.000 jenis anggrek, sekitar 5000 jenis tersebar di wilayah Indonesia (Purwanto, 2016). Salah satu jenis anggrek yang terdapat di pulau Sumatera adalah Grammatophyllum stapeliiflorum . Anggrek ini disebut juga dengan nama anggrek sendu.
Anggrek G. stapeliiflorum sudah sulit ditemukan dihabitat aslinya dikarenakan kerusahan habitat dan  perburuan  liar  (Isda  &  Fatonah,  2014).  Anggrek G.  stapeliiflorum termasuk  ke  dalam  daftar Appendix II CITES ( Convention on International Trades on Endangered Species of Wild Flora and Fauna ). Hal itu menandakan bahwa anggrek G. stapeliiflorum tidak terlalu terancam punah tetapi perdagangan- nya perlu dibatasi agar tidak mengganggu kelangsungan hidup anggrek tersebut (CITES, 2017).
Perkecambahan anggrek di alam relatif rendah yakni kurang dari 5% (Vudala dan Ribas, 2017). Hal ini disebabkan karena tidak adanya endosperm pada biji. Endosperm merupakan sumber nutrisi yang dibutuhkan untuk perkembangan embrio. Perkecambahan anggrek secara alami membutuhkan simbiosis  dengan  mikoriza.  Perkecambahan  anggrek  di  alam  memiliki  tingkat  keberhasilan  yang rendah sehingga perkecambahan  secara in vitro lebih sering digunakan karena lebih mudah dan menguntungkan (Huh et al ., 2016). Perkecambahan secara in vitro dilakukan dengan cara menyemai biji anggrek pada media yang mengandung nutrisi yang sesuai untuk pertumbuhan anggrek.
Menurut  Isda  dan  Fatonah  (2014),  media  MS  dan  MS  setengah  komposisi  lebih  cocok digunakan  untuk  media  perkecambahan  biji.  Media  MS    sering  digunakan  dalam  kultur  jaringan karena  mengandung  hampir  semua  unsur  yang  dibutuhkan  oleh  tanaman  (Silalahi,  2015).  Pada Media MS terdapat nitrogen dalam bentuk amonium nitrat (NH 4 NO 3 ). Amonium nitrat merupakan jenis  nitrogen  yang    optimum  untuk  perkembangan  dan  pertumbuhan  biji  anggrek Dendrobium lanxiflorum secara in vitro (Mukaromah et al ., 2013). Penggunaan media VW untuk perkecambahan anggrek Grammatophyllum sp.  menghasilkan  persentase  terbentuknya  protokorm    yang  rendah yaitu sekitar 3%  (Kartikaningrum et al ., 2017).
Penambahan  senyawa  organik  juga  diperlukan  untuk  meningkatkan  keberhasilan perkecambahan  anggrek  secara in  vitro .  Beberapa  senyawa  organik  yang  dapat  digunakan diantaranya  pepton,  yeast,  air  kelapa  maupun  homogenat  seperti  pisang,  jagung  dan  tomat (Tharapan et al ., 2014). Pada penelitian ini senyawa organik yang digunakan adalah pepton. Pepton merupakan sumber nitrogen yang berperan penting dalam perkecambahan biji (Utami et al ., 2017) Persentase  perkecambahan  maksimum  anggrek Phalaenopsis terjadi  pada  media  MS  yang diberi 1 g/L pepton yaitu sebesar 94,7%, dan pada media MS setengah komposisi yang mengandung 1  g/L  dan  2  g/L  pepton  masing-masing  sebesar  90,0%  dan  91,7%  (Abbaszadeh et  al .,  2018). Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Shekarriz et  al. (2014)  menunjukkan  bahwa  penambahan  2  g/L pepton  yang  dikombinasikan  dengan  15%  air  kelapa  pada  media  VW    menghasilkan  persentase perkecambahan  anggrek  hibrid Phalaenopsis ‘Manchester’  tertinggi  yaitu  sebesar  74,5%.  Pada anggrek Grammatophyllum speciosum persentase perkecambahan tertinggi terjadi pada media MS yang mengandung 1,5 g/L pepton sebesar 70%, dan persentase terendah pada perlakuan kontrol sebesar 4,5% (Alimah, 2020). Berdasarkan penelitian tersebut dapat diketahui bahwa penambahan senyawa  organik  berupa  pepton    pada  media  kultur  dapat  meningkatkan  keberhasilkan perkecambahan anggrek.
Penelitian  mengenai  penggunaan  pepton  untuk  mempercepat  perkecambahan  anggrek G. stapeliiflorum secara in vitro belum pernah dilakukan. Anggrek G. stapeliiflorum saat ini sudah mulai berkurang  dihabitat  aslinya  yang  disebabkan  oleh  aktivitas  manusia.  Oleh  karena  itu  diperlukan upaya  konservasi  melalui  perbanyakan  secara in  vitro .  Berdasarkan  hal  tersebut  perlu  dilakukan
penelitian  untuk  mengetahui  konsentrasi  pepton  yang  optimum    dalam  mempercepat perkecambahan anggrek G. stapeliiflorum secara in vitro .

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1  Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan dari bulan Desember 2021 sampai bulan Maret 2022.

## 2.2  Bahan Tanaman
Anggrek G.  stapeliiflorum sebagai  sumber  eksplan  dikoleksi  dari  kawasan  hutan  Lembah Harau, Kabupaten Lima Puluh Kota, Sumatera Barat.

## 2.3  Media Kultur
Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah Murashige ang Skoog (MS). Media MS dibuat sebanyak  1  liter  dengan  menambahkan  gula  dan  agar  sebanyak  30  gram  dan  7  gram  dan penambahan  pepton  sesuai  dengan  konsentrasi  perlakuan.  Media  disterilisasikan  menggunakan autoclav e pada tekanan 17,5 psi dan temperature 121°C.

## 2.4  Penanaman Eksplan
Penanaman eksplan dilakukan setelah terlebih dahulu dilakukan tahapan sterilisasi. Sterilisasi eksplan dilakukan dengan mencelupkan buah ke dalam gelas Beaker yang berisi larutan detergen selama 15  menit, dan dibersihkan  menggunakan aquadest steril. Buah direndam dengan larutan fungisida dan bakterisida masing-masing selama 20 menit selanjutnya dibersihkan menggunakan aquadest  steril.  Setelah  itu    buah  dimasukkan  kedalam  larutan  bayclin  20%  selama  5  menit  dan dibersihkan  menggunakan  aquadest  steril.  Dalam  kondisi  aseptis  (dalam  LAF),  buah  disemprot alkohol 70% lalu dibakar seluruh permukaannya sebanyak 2 sampai 3 kali. Buah diletakkan di atas cawan Petri dan dipotong menggunakan scalpel. Biji kemudian dimasukkan ke dalam botol kultur dan diratakan di atas permukaan media

## 2.5  Rancangan Percobaan
Perlakuan berupa penambahan pepton pada media MS dengan konsentrasi 0, 0,5 g/L; 1g/L; 1,5 g/L; 2 g/L; 2,5 g/L. Percobaan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan dan 4 ulangan. Pengamatan terhadap parameter waktu munculnya protokorm diamati setiap hari sampai  protokorm  muncul  disetiap  botol  perlakuan  dan  datanya  dianalisis  secara  statistik menggunakan ANOVA pada program SPSS versi 20, apabila terdapat pengaruh yang berbeda nyata dilanjutkan  dengan  uji  DNMRT  ( Duncan  New  Multiple  Range  Test )  pada  taraf  5%.  Pengamatan parameter  persentase  tahap-tahap  perkecambahan  dilakukan  menggunakan  mikroskop  stereo setelah 10 minggu persemaian dan datanya dianalisis secara deskriptif

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1  Waktu Munculnya Protokorm
Protokorm  merupakan  bentuk  peralihan  dari  embrio  yang  belum  mengalami  diferensiasi. Protokorm  memiliki  dua  sumbu  (bipolar)  yang  terdapat  pada  bagian  anterior  dan  posterior. Protokorm  merupakan  embrio  yang  tidak  memiliki  testa.  Selama  proses    perkembangannya
protokorm akan mengalami perubahan warna yakni dari kuning menjadi hijau. Perubahan warna pada prokorm disebabkan karena adanya pembentukan klorofil (Yusuf dan Indrianto, 2016).

## 3.2  Persentase Tahap-Tahap Perkembangan Embrio
Proses perkecambahan anggrek terdiri atas 7 tahapan. Tahap 0 ditandai dengan embrio belum berkembang. Tahap 1 ditandai dengan pembengkakan biji karena proses imbibisi, dan testa masih utuh. Tahap 2 adalah tahap membesarnya  embrio sehingga sebagian embrio keluar dari testa. Tahap 2 merupakan tahap terjadinya germinasi (Perkecambahan). Tahap 3 merupakan tahap terbentuknya protokorm  dan  embrio  lepas  sepenuhnya  dari  testa.  Tahap  4  merupakan  tahap  terbentuknya protokorm sudah membentuk promeristem (SAM dan RAM). SAM merupakan shoot apical meristem dan RAM merupakan root apical meristem . Tahap 5 merupakan tahap terbentuknya daun pertama. Tahap 6 merupakan tahap pemanjangan daun serta tahap 7 merupakan tahap terbentuknya daun kedua dan diikuti oleh pembentukan akar (Arcidiacono et al , 2021).
Penelitian ini dilakukan selama 10 minggu sehingga perkecambahan anggrek G. stapeliiflorum hanya  mencapai  tahap  4.  Pemberian  pepton  dapat  mempercepat  waktu  munculnya  protokorm anggrek G. stapeliiflorum dibandingkan dengan kontrol. Pemberian dari konsentrasi 1 g/L sampai 2,5 g/L pepton memberikan pengaruh yang sama dalam mempercepat waktu munculnya protokorm (Tabel  1).  Pepton  merupakan  senyawa  organik  yang  menjadi  sumber  nitrogen  sehingga  dapat mempercepat  germinasi  biji  (Utami et  al., 2017).  Pemberian  2  g/L  pepton  dapat  meningkatkan perkecambahan benih anggrek Phalaenopsis dibandingkan kontrol. Pepton mengandung ammonium nitrat,  asam  aspartat,  glisin,  amida  nitrogen,  dan  asam  amino  yang  berperan  dalam  menginduksi perkecambahan dan pertumbuhan biji anggrek (Shekarriz et al., 2014).
Pemberian  pepton  berpengaruh  terhadap  perkembangan  embrio  anggrek.  Persentase perkembangan biji anggrek tahap 0 dan tahap 1 tertinggi terdapat pada perlakuan kontrol. Tingginya persentase  biji  anggrek  yang  tidak  berkecambah  disebabkan  karena  tidak  adanya    pepton  dalam media sehingga belum mampu mendorong persentase perkecambahan dalam jumlah yang maksimal (Tabel 1). Menurut Zeng, et al ., (2016) kegagalan perkecambahan pada anggrek dapat disebabkan dikarena  dormansi  morfologis,  dormansi  fisiologis,  dan  dormansi  fisik.  Dormansi  morfologis disebabkan karena embrio yang kurang berkembang. Dormansi fisiologis disebabkan karena adanya inhibitor pada biji yang sudah matang. Dormansi fisik disebabkan karena testa memiliki struktur yang tidak dapat ditembus air. Kandungan hormon asam absisat (ABA) pada biji dapat mengakibatkan dormansi  (Ma et  al .,  2018).  Nitrogen  diduga  dapat  menghambat  dormansi  dengan menurunkan kandungan ABA pada biji. Barokah et al (2017) menyebutkan bahwa pepton merupakan sumber karbon, nitrogen, asam amino tirosin dan asam amino triptofan. Rendahnya persentase
Tabel  1.  Waktu  muncul  protokorm  dan  persentase  tahap-tahap  perkecambahan  anggrek Grammatophyllum stapeliiflorum dengan pemberian beberapa konsentrasi pepton selama 10 minggu setelah penyemaian
Perlakuan pepton (g/L) Waktu muncul protokorm (HSP) Rata-rata persentase tahap-tahap perkecambahan biji (%) 0 d-an 1 2 3 4 A (Kontrol) 39,75 a 95,40 0,25 4,34 0,00 B (0,5) 28,75 b 87,20 5,90 6,88 0,00 C (1,0) 27,50 c 90,23 4,05 1,31 4,14 D (1,5) 27,25 c 72,82 3,66 9,66 13,84 E (2,0) 27,00 c 11,40 5,14 61,02 22,43 F (2,5) 28,00 bc 83,22 3,05 8,28 5,42
Keterangan:   Angka yang diikuti oleh huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata berdasarkan uji DMRT pada α = 5%, HSP = Hari setelah penyemaian.
perkecambahan pada perlakuan kontrol diduga disebabkan karena kandungan nitrogen pada media MS belum mampu menurunkan kandungan ABA pada biji.
Persentase perkembangan biji anggrek tahap 2 (germinasi) terendah terdapat pada perlakuan kontrol. Rendahnya persentase perkembangan biji pada perlakuan kontrol menunjukkan bahwa laju perkecambahan  pada  perlakuan  kontrol  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  penambahan  pepton. Rendahnya  persentase  biji  pada  tahap  2  disebabkan  karena  dalam  waktu  10  minggu  setelah penyemaian, biji sudah berkembang mencapai tahap 3 dan tahap 4 (Tabel 1). Shekarriz et al (2014), menyebutkan bahwa pepton berperan dalam menginduksi germinasi dan pertumbuhan biji anggrek Phalaenopsis karena mengandung ammonium nitrat, asam aspartat, glisin, amida nitrogen, dan asam amino. Pepton merupakan sumber asam amino triptofan,  Asam amino triptofan berperan sebagai prekursor auksin jenis IAA ( Indol Acetic Acid ) (Setiawan dan Wahyudi, 2014). IAA berperan dalam pembesaran,  pembelahan  dan  diferensiasi  sel  serta  jaringan.  Kandungan  IAA  yang  tinggi  akan mendorong pembentukan embrio zigotik menjadi embrio globular (Ningsih dan Sudiyono, 2018). Perkecambahan tertinggi terjadi ketika embrio globular terbentuk (Xu et al ., 2020).
Persentase terbentuknya protokorm (tahap 3) tertinggi adalah pada perlakuan 2 g/L pepton (61,02%)  dan    terendah  adalah  pada  perlakuan  1  g/L  pepton  (1,31%).  Rendahnya  persentase terbentuknya  protokorm  pada  perlakuan  1  g/L  pepton  dibandingkan  kontrol  disebabkan  karena sebagian  protokorm  pada  perlakuan  1  g/L  sudah  mencapai  tahap  4  yaitu  (Tabel  1).  Menurut Abbazadeh et  al (2018),  pepton  merupakan  sumber  nitrogen  organik  dan  penyusun  asam  amino yang memiliki peran dalam perkembangan embrio. Hasil yang sama ditunjukkan oleh Andayani et al (2013),  persentase  biji Phalaenopsis  amboinensis yang  berkecambah  tertinggi  yaitu  pada penambahan 2 g/L pepton. Pembentukan protokorm pada penambahan 2,5 g/L pepton lebih rendah dibandingkan dengan penambahan 2 g/L pepton. Puspasari et al (2018) menyebutkan bahwa setiap sel memiliki batasan dalam menyerap unsur- unsur yang terkandung dalam media tanam. Pemberian pepton pada konsentrasi tinggi menyebabkan terjadinya persaingan dalam penyerapan unsur-unsur yang menghambat pertumbuhan protokorm.
Pada    perlakuan  kontrol  dan  konsentrasi  0,5  g/L  pepton  tidak  terdapat  perkembangan protokorm  anggrek  membentuk  SAM  dan  RAM  (Tabel  1).  Hal  ini  disebabkan  karena  kandungan nutrisi yang terdapat pada media  belum mampu mendorong perkembangan protokorm. Persentase protokorm yang membentuk SAM dan RAM tertinggi yaitu pada perlakuan 2 g/L pepton (Tabel 1). Konsentrasi sitokinin pada tunas apikal berkorelasi positif dengan kandungan nitrogen dan asam amino yang terdapat pada pepton (Setiaji et al ., 2018). Sitokinin berperan dalam pertumbuhan tunas dan  akar  sehingga  penambahan  pepton  dapat  memicu  perkembangan  tunas  dan  akar.  Sitokinin berperan dalam mengatur pembelahan sel, diferensiasi sel dan pembentukan kloroplas (Aremu et al. , 2012). Kaur dan Bhutani (2016) menyebutkan bahwa pepton mampu menginduksi tunas anggrek Paphiopedilum venustum . Alimah (2020) juga menyebutkan bahwa penambahan pepton sebesar 1,5 g/L dan  2 g/L pada media MS mampu menghasilkan protokorm yang memiliki SAM dan RAM yang lebih banyak dibandingkan dengan perlakuan lainnya.
Pada anggrek Spathoglottis plicata pembelahan mitosis secara aktif terjadi pada kutub apikal protokorm. Setelah itu sel-sel akan membentuk SAM. SAM akan terlihat dengan jelas karena sel mulai berbentuk  persegi  hingga  bersudut  (Yeung,  2017).  Setiaji et  al (2018)  juga  menyebutkan  bahwa massa  meristematik  tersebut  akan  menghasilkan  tonjolan  dan  menghasilkan  daun  pertama.  SAM akan berkembang membentuk batang dan daun (Puspasari et al. , 2018). Protokorm yang berwarna hijau pada bagian yang bersentuhan dengan media kultur akan menghasilkan rhizoid (Setiaji et al ., 2018).  Pada  protokorm  juga  terdapat absorbing  hair yang  merupakan  struktur  yang  menyerupai rambut yang berperan dalam penyerapan nutrisi (Puspasari et al ., 2018).
Biji anggrek yang belum berkecambah terdiri atas 2 tahap yaitu tahap 0 dan tahap 1. Tahap 0 ditandai dengan embrio masih belum berkembang dan warna embrio terlihat gelap. Diameter rata-rata
Gambar 1. Perkembangan perkecambahan biji anggrek G. stapeliiflorum dengan pemberian beberapa konsentrasi pepton setelah 10 minggu pada media persemaian. (A) Tahap 0. (B) Tahap 1. (C)  Tahap 2. (D) Tahap 3. (E) Tahap 4. e = embrio, t = testa, p = protokorm, SAM = Shoot Apical Meristem, RAM = Root Apical Meristem .
Gambar 2.  Anggrek G. stapelliflorum setelah 7 bulan semai Keterangan: a = daun, b= akar
embrio tahap 0 adalah 163,04 µm. Sifat permeabilitas dari testa akan memudahkan  penyerapan air sehingga embrio membengkak. Diameter rata-rata embrio tahap 1 adalah 295,05 µm. Biji anggrek tahap  1  juga  ditandai  dengan  adanya  perubahan  warna  embrio  menjadi  bening.  Pembengkakan embrio  mengakibatkan  robeknya  testa  (berkecambah).  Pada  tahap  2  sebagian  embrio  masih diselubungi  oleh  testa  dan  terjadi  perubahan  warna  pada  embrio  menjadi  hijau  karena  adanya pembentukan klorofil. Rata-rata diameter embrio tahap 2 adalah 871,31 µm. Tahap 3 merupakan tahap terbentuknya protokorm dan testa telah terlepas sepenuhnya. Rata-rata diameter protokorm adalah  2507,58 µm. Pada tahap 4 protokorm anggrek sudah berkembang membentuk SAM dan RAM yang akan berkembang menjadi plantlet. Rata-rata diameter protokorm pada tahap 4 adalah 2526,34 µm (Gambar 1).

## 4. KESIMPULAN
Penambahan  pepton  pada  media  MS  dapat  mempercepat    waktu  munculnya  protokorm. Protokorm muncul pada hari ke-27 setelah penyemaian dengan penambahan 1 g/L sampai 2 g/L pepton. Pada perlakuan kontrol waktu munculnya protokorm lebih lambat yaitu pada hari ke-39 setelah  penyemaian.  Penambahan  2  g/L  pepton    merupakan  konsentrasi  yang  optimum  dalam meningkatkan persentase terbentuknya protokorm dan perkembangan protokorm membentuk SAM dan RAM dengan persentase secara berturut-turut sebesar  61,02% dan 22,43%.
a b

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  penulis  tujukan  kepada  Departemen  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Andalas yang telah mensupport penelitian ini.

## 6. DASTAR  PUSTAKA
Abbaszadeh, S. M., S. M. Miri & R. Naderi. 2018. An Effective Nutrient Media  for Asymbiotic Seed Germination  and In  Vitro Seedling  Development  of Phalaenopsis  ‘ Bahia  Blanca ’.  Journal  of Ornamental Plants. 8(3): 183–192.
Alimah,  A.  N.  ’U.  2020.  Pengaruh  Konsentrasi  Pepton  terhadap  Perkecambahan  Biji  dan Perkembangan  Protocorm  Anggrek  Grammatophyllum  speciosum. Skripsi. FMIPA  Universitas Airlangga. Surabaya.
Andayani, D., E. S. W. Utami & H. Purnobasuki. 2013. Pengaruh Pepton terhadap Perkecambahan Biji Phalaenopsis amboinensis secara In Vitro. Jurnal Sains Teknologi. 1(1): 1–10. Arcidiacono , M., C. Catalano., A. Motisi., M. Sajeva., F. Carimi & A. Carra. 2021. Influence of Culture Conditions  on  In  Vitro Asymbiotic  Germination of Anacamptis  longicornu and Ophrys panormitana (Orchidaceae). Plant 10(11) : 2543–2554
Aremu, A. O.,  M. W. Bairu., K. Dolezal., J. F. Finnie & J. V. Staden. 2012. Topolins: A Panacea to Plant Tissue Culture Challenges? Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108(1): 1–16. Barokah, G. R., B. Ibrahim & T. Nurhayati. 2017. Characterization Microencapsul Pepton from Spoiled By  Catch  Fish  Using  Spray  Drying  Methods. Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia. 20(2): 401–412.
CITES. 2017. Grammatophyllum stapeliiflorum. https://checklist.cites.org. Diakses pada 23 Maret 2022. Fandani, H. S., S. N. Mallomasang & I. N. Korja. 2018. Keanekaragaman Jenis Anggrek pada Beberapa Penangkaran  di  Desa  Ampera  dan  Desa  Karunia  Kecamatan  Palolo  Kabupaten  Sigi. Jurnal Warta Rimba. 6(3): 14–20.
Huh,  Y.  S.,  J.  K.  Lee.,  S.  Y.  Nam.,  K.  Y.  Paek  &  G.  U.  Suh.  2016.  Improvement    of  Asymbiotic  Seed Germination  and  Seedling  Development  of Cypripedium    macranthos Sw.  with  Organic Additives. Journal Plant Biotechnol. 43(1): 138–145. Isda, M. N & S. Fatonah. 2014. Induksi Akar pada Eksplan Tunas Anggrek Grammatophylum scriptum var. citrinum secara In Vitro pada Media MS  dengan Penambahan NAA dan BAP. Al-Kauniyah Jurnal Biologi. 7(2): 53–57.
Kartikaningrum, S., D. Pramanik., M. Dewanti., R. Seohandi & M.P. Yufdy. 2017. Konservasi Anggrek Spesies Alam Menggunakan Eksplan Biji pada Media Vacin & Went. Plasma Nutfah. 23(2): 109–118.
Kaur, S. & K. K Bhutani. 2016. Asymbiotic Seed Germination and Multiplication of an Endangered Orchid– Paphiopedilum venustum (Wall. ex Sims.). Acta Societatis Botanicorum Poloniae. 85(2): 3494–3504.
Ma, Y., J. Cao., J. He., Q. Chen., X. Li & X. F. Y. Yang. 2018. Molecular Mechanism for the Regulation of ABA  Homeostasis During Plant Development and Stress Responses. Internationnal Journal of Molecul  Sciences. 19(11): 3643–3656.
Mukaromah, L., T. Nurhidayati & S. Nurfadilah. 2013. Pengaruh Sumber dan Konsentrasi Nitrogen terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Biji Dendrobium laxiflorum J.J Smith secara In Vitro . Jurnal Sains dan Seni Institut Teknologi Sepuluh November. 2(1): 2337–2340. Ningsih, E. M & Sudiyono. 2018. Penambahan Triptofan pada Limbah Air  Kelapa sebagai Sumber PGR Auksin,  Seminar Nasional Hasil Riset CIASTEC,  Universitas Widyagama Malang, Malang  12 September 2018. pp 401–408.
Purwanto, A. W. 2016. Anggrek Budidaya dan Perbanyakan . LPPM UPN Veteran Yogyakarta Press. Daerah Istimewa Yogyakarta. Indonesia.
Puspasari,  R.  R.,  I.  N.  Rosyidi.,  E.  F.  C.  Ningrum  &  E.  Semiarti.  2018.  Pengaruh    Pepton  terhadap Pertumbuhan Embrio Anggrek Vanda tricolor lindley var.  Suavis Asal Merapi secara In Vitro .
Jurnal Scripta Biologica 5(1): 47–50.
Setiaji,  A.,  N.  Setiari.,  &  E.  Semiarti.  2018.  Induksi  Tunas  dari  Protokorm  Intak  dan  Fase  Awal Perkembangan Dendrobium phalaenopsis secara In Vitro. Dalam: Setyawan, A. D., Sugiarto., A. Pitoyo.,  Sutomo.,  A.  Widiastuti.,  G.  Windarsih.,  Supatmi.  Prosiding  Seminar  Nasional Masyarakat  Biodiversitas  Indonesia.  Universitas  Sebelas  Maret.  18  September  2021. Masyarakat Bioriversitas Indonesia 4(1): 20–27.
Setiawan & A. Wahyudi. 2014. Pengaruh Giberelin Terhadap Pertumbuhan Beberapa Varietas Lada untuk Penyediaan  Benih Secara Cepat. Buletin Penelitian Tanaman Rempah dan Obat 25(2): 111–118.
Shekarriz, P., M. Kafi., S. D. Deilany & M. Mirmasouri. 2014. Coconut Water  and Peptone Improve Seed  Germination  and Protocorm  Like  Body Formation    of  Hybrid Phalaenopsis . Agriculture Science Developments 3(10): 317–322.
Silalahi, M. 2015. Pengaruh Modifikasi Media Murashige-Skoog (MS) Dan Zat Pengatur Tumbuh BAP terhadap Pertumbuhan Kalus Centella asiatica L. (Urban.). Jurnal ProLife 2(1):14–23. Tharapan, S., C. Thepsithar & K. Obsuwan. 2014. An Effect of Organic  Supplement of Dendrobium Protocorms  and  Seedlings. International    Journal  of  Bioengineering  and  Life  Sciences . 8 (7) : 699–704.
Utami,  E.  S.  W.,  S.  Hariyanto  &  Y.  S.  W.  Manuhara.  2017. In  Vitro Propagation  of  the  Endangered Medical  Orchid, Dendrobium  lasianthera J.J.Sm  Through  Mature  Seed  Culture. Asian  Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 7(5): 406–410.
Vudala, S.M., & Ribas L.L.F. 2017. Seed Storage and Asymbiotic Germination of Hadrolaelia grandis (Orchidaceae). South AfrIcan Journal of Botany. 108: 1-7.
Xu, X., L. Fangn., L. Li., G. Ma., K. Wu & S. Zeng. 2020. Abscisic Acid Inhibits Asymbiotic Germination of  Immature  Seeds  of Paphiopedilum  armeniacu . International  journal  of  Molecul  Science. 21(24): 9561-9573.
Yeung,  E.  C.  2017.  A  Perspective  on  Orchid  Seed  and  Protocorm  Development. Botanical  Studies . 58(1): 33-46.
Yusuf,  Y  &  A.  Indrianto.  2016.  Pengaruh  Medium  Pupuk  Organik  Cair  (POC)  Terhadap  Karakter Morfologi dan Jumlah Tunas Protokorm Anggrek Vanda limbata Blume x Vanda tricolor Lindl. Jurnal Bionature. 17(1):14-23.
Zeng,  S.,  W.  Huang.,  K.  Wu.,  J.  Zhang.,  J.  A.  T.  da  Silva.  &  J.  Duan.  2016.  In  vitro  propagation  of paphiopedilum orchids. Critical Reviews Biotechnology. 36 (3): 521–534.