## EFEK INOKULASI TRYPANOSOMA EVANSI  TERHADAP HISTOPATOLOGI JARINGAN SYARAF  MENCIT (MUS MUSCULUS)
Epry Setiawan Program Profesi Kedokteran Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya Email : evrysetia1@gmail.com

## ABSTRACT
The alms of this was analized  research aims to analyze the damage of nerve tissue in the brain of mice (Mus  Musculus)  inoculated  with  Trypanosoma  evansi.  The  animal  used  in  this  research  was  27  male mice.  The  plan  used  in  this research  was  the  random  complete  plan  (RAL)  with  one  control  group  and two  experimental  groups  used  nine  repetitions.  Control  group  (PO)  was  given  aquades,  P1  group  was inoculated  with  Trypanosoma  evensi  0,2x104  ml  by  intraperitoneal,  and  then  P2  group  was  inoculated with  Trypanosma  evansi  0,2x104  ml  by  subcutan.  In  the  fourth  day  after  inoculated  the  mice  were sacrificed and taken the brain organ to make histopathology blood smear. The lesi result was analyzed by using scoring Kennedy method, it showed the result, there was a change of histopathology of nerve tissue in the brain organ of mice (Mus Musculus), it was lesion meningitis 33% was in the control group, 100% was in the experimental group 1 (P1), 100% was in the experimental group 2 (P2). Perivascullar cuffing was 0% in the control group, 100% was in  the experimental group 1, and 88% was in the experimental group 2. The gained data was processed by using Statistical Program For Science (SPSS) with Krusskall- Wallis Test method and then with Mann-Whitney Test method. The result showed the real differences (P≤0,01) between control group and experimental group 2.
Keyword : Trypanosoma evansi, surra, meningitis, perivascular cuffing, gliosis,mice (Mus musculus).

## PENDAHULUAN
Trypanosomiasis atau surra yang disebabkan  oleh Trypanosoma  evansi adalah merupakan  salah  satu  penyakit  hewan  menular pada ternak kuda danruminansia besar, khususnya  ternak  sapi  dan  kerbau.  Penyebaran Trypanosomaevansi ( T.evansi )  sangat  luas hampir  di  seluruh  pulau  besar  di  Indonesia  dan dapatmenyerang berbagai jenis ternak dan satwa liar  (Mastra,  2011).  Protozoa  ini  mengeluarkan sejenis  racun  yang  disebut trypanotoksin yang dapat  mengganggu  hewan  yang  terinfeksi (Tjahayati  dan  Husniyati,  2012).  Kasus  surra pertama kali dilaporkan di Indonesia pada tahun 1897  pada  seekor  kuda  di  Semarang,  Provinsi Jawa Tengah. Kemudian pada tahun 1898 terjadi wabah  penyakit  surra  di  Karesidenan  Tegal, yang  memakan  korban  sebanyak  500  ekor kerbau dari 7000 populasi dan pada tahun 1900- 1901 terjadi wabah penyakit surra di
Karesidenan  Pasuruan  provinsi  Jawa  Timur. Setelah itu dalam kurun waktu 60 tahun penyakit berlangsung  secara  sporadis  dan  dilaporkan berbagai  kasus  berdasarkan  pemeriksaaan  klinis (Mastra, 2011). Trypanosoma evansi mempunyai inang yang beragam dari hewan liar sampai  hewan  domestik  yang  mempunyai  nilai ekonomi  yang  penting  dengan  berbagai  tingkat kerentanan  yang  berbeda.  Diantara  hewan domestik yang rentan adalah kuda, sapi, kerbau, kambing,  anjing,  dan  kucing.  Sedangkan  pada hewan  liar  yang  rentan  adalah  badak  dan  rusa. Hewan coba seperti tikus dan mencit juga sangat peka  terhadap  infeksi Trypanosoma  evansi (Fahrimal, 2013). Inokulasi pada  mencit ( mouse inoculation ) sebagai salah satu hewan coba yang sensitif  terhadap  surra  merupakan  metode  yang sensitif  untuk  mendeteksi  penyakit  surra  kronis dan sudah  dibuktikan  oleh para ahli. Disamping itu, mouse  inoculation juga  dipakai  untuk
propagasi Trypanosoma  evansi untuk  keperluan lebih lanjut seperti uji patogenesitas, pembuatan vaksin,  dan  uji  imunologi  (Fahrimal,  2013). Parasit  ini  memanfaatkan  glukosa  dan  oksigen untuk  multiplikasi  mengakibatkan  penipisan metabolit yang mengakibatkan perubahan degenaratif  pada  host.  Perubahan  selanjutnya berkembang  diorgan  baik  karena  kerusakan  sel yang  disebabkan  oleh  racun  yang  dikeluarkan oleh  parasit,  atau  karena  reaksi  imunologi. Meskipun T.evansi adalah sebuah haemoprotozoa, akan tetapi bentuk visceral juga ditemukan  dalam  hati,  lobus  optik,  hati,  ginjal, paru-paru,  dan  otak  (Singh  bal, et  all ,  2012). Sistem  syaraf  termasuk  sistem  syaraf  pusat (otak-sumsum  tulang  belakang)  dan  syaraf perifer. Sistem syaraf pusat terdiri atas milyaran sel  neuron  (sel  syaraf)  yang  menerima  dan menyalurkan  rangsangan  ke  otot  dan  organ. Sistem  syaraf  pusat  (SSP)  memiliki  sel  yang khas,  dan  terminologi  yang  digunakan  untuk menggambarkan perubahan cytopathogical berbeda  dengan  jaringan  lain.  Sel-sel  saraf dengan  mempunyai  kerentatan  terhadap  cidera (Solfaine,  2013).  Oleh  sebab  itu,  bila  sel  saraf mengalami  kerusakan  maka  terjadi  gangguan penerimaan rangsangan ke otot dan organ, maka terjadi inkoordinasi. Pada penelitian ini digunakan  sampel  otak  untuk  melihat  gambaran histopatologi  mencit  ( mus  musculus )  yang  telah diinokulasi Trypanosoma  evansi karena  otak termasuk  dalam  sistem  saraf  pusat  yang mengalami  gangguan  syaraf  pada  gejala  klinis yang  ditimbulkan  oleh Trypanosoma  evansi . Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian untuk melihat  gambaran  histopatologi  jaringan  syaraf pada  organ  otak  mencit  yang  telah  diinokulasi Trypanosoma evansi

## METODE PENELITIAN
Hewan  coba  yang  digumakan  dalam penelitian  ini  adalah  mencit  ( Mus  musculus ) dengan  jenis  kelamin  jantan,  sebanyak  27  ekor, dengan kisaran umur 2-3 bulan, dan berat badan 25-30 gram. Bahan yang digunakan adalah NaCl fisiologis dan mencit yang terinfeksi Trypanosoma  evansi dari  BBalivet,  Bogor sebanyak 0,2x104 trip/ml. Kholoform digunakan untuk  melakukan  euthanasi  sebelum  dilakukan
nekropsi  dan  buffer  formalin  10%  digunakan untuk  mengawetkan  sampel  otak  setelah dilakukan  nekropsi  yang  akan  dibuat  preparat. Pengambilan  otak  mencit  dilakukan  pada  hari ke-4  pasca  infeksi  parasite T.evansi dilakukan euthanasi  menggunakan  khloroform  secara inhalasi. Sampel otak dikumpulkan dari masing- masing  perlakuan.  Sampel  otak  kemudian dimasukan  kedalam  pot  plastik  ukuran  50  cc yang  sudah  berisi  larutan  buffer  formalin  10%, selanjutnya dilakukan pembuatan preparat histologi  dengan  teknik  pewarnaan Haemoxylin dan Eosin (HE). Mencit yang sebelumnya sudah terinfeksi oleh Trypanosoma evansi dari Balitvet Bogor  diambil  sampel  darah,  lewat vena  lateral dari  ekor.  Teknik  pengambilan  darah  dengan sebelumnya  mencit  dihandling,  pegang  mencit pada  ekornya  dengan  tangan  kanan,  biarkan mereka  mencengkram  lantai  dengan  kaki depannya.  Dengan  tangan  kiri  dijepit  tengkuk mencit  diantara  jari  telunjuk  dan  jari  tengah (bisa  dengan  jari  telunjuk  atau  ibu  jari).  Potong bagian  1/3  pangkal  ekor  lalu  masukan  pada tabung heparin . Dapat dilakukan lewat jantung/ intracardiac diantara  costai  ke  dua  dan ketiga.  Sampling  diawali  dengan  nekropsi hewan coba dan dilanjutkan pengambilan organ. Organ  yang  diambil  adalah  otak  (cerebrum  dan cerebellum).
Seluruh  otak  dimasukkan  dalam  cairan fiksatif Buffered  Neutral  Formalin (BNF)  10%, setelah  2  hari  organ  otak  akan  mengeras. Dilakukan  pemotongan  jaringan  dimasukan kembali  ke  BNF  10%  selama  3x4  jam, kemudian  dipotong  lebih  tipis  dengan  ketebalan sama,  lalu  dimasukan  kedalam  kaset  dan  siap diproses dalam Tissue Processor
Seluruh  kelompok  diadaptasi  selama  seminggu sebelum  dilakukan  perlakuan.  Setiap  kelompok dipelihara dalam  kandang terpisah  diberi  makan dan  minum secara adlibitum . Kelompok  kontrol sebagai  plasebo  tidak  diberi  perlakuan,  hanya diberi  Nacl  fisiologis.  Kelompok  P1  diinokulasi Trypanosoma evansi injeksi secara intraperitoneal dengan  dosis  0,2x104  trip/ml. Sedangkan  P2  diinokulasi Trypanosoma  evansi injeksi  secara subcutan dengan  dosis  0,2x104 trip/ ml.
Inokulasi Trypanosoma  evansi secara intraperitoneal dan subcutan menggunakan spuit  1  cc.  Setelah  dilakukan  adaptasi  inokulasi
dilakukan pengambilan darah untuk pengamatan derajat  infeksi Trypanosoma  evansi pada  hari ke-1 dan hari ke-3 pasca inokulasi. Darah yang diambil  diteteskan  pada objek  glass ditambah larutan  NaCl  fisiologis  ditutup  dengan cover glas lalu  dilakukan  pengamatan  menggunakan mikroskop.  Mencit  dilakukan  euthanasi  setelah hari  ke-4  berpatokan  pada  derajat  infeksi parasitemia  4+  pasca  inokulasi  menggunakan kholoform  secara  inhalasi  dan  dinekropsi  untuk semua  populasi  mencit.  Kemudian  diambil organ  otaknya  dimasukan  kedalam  pot  plastik ukuran  50  cc  yang  sudah  diisi  dengan  bufer formalin 10%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengambilan  sampel  organ  otak  dan sediaan  histopathologi  organ  otak  yang  telah  di inokulasi Trypanosoma  evansi telah  dilakukan, selanjutnya  dilakukan  pembacaan  gambaran histopatologi  menggunakan  mikroskop  cahaya dengan  merk Nikon  600L yang  dilengkapi dengan  digital  kamera  DS  Fi2  300  megapixel dan soft  ware pengolah  gambar nikon  image system .  Metode  skoring  derajat  kerusakan  otak pada pemeriksaan ini dilakukan menurut metode (Kennedy et  al ,  1997).  Adapun  hasil  analisis, rerata, dan presentase hasil skoring pemeriksaan histopatologi  kelmpok  kontrol(P0),  perlakuan  1 (P), perlakuan 2 (P2) terlampir di bawah ini.
Tabel  1 Persentase  (%)  lesi meningitis (M), perivascular  cuffing (PC), gliosis (G)  Kontrol  (P0), Perlakuan 1 (P1), Perlakuan 2 (P2)
Kelompok Lesi M PC G P0 33 0 0 P1 100 100 100 P2 100 88 88
Berdasarkan  tabel  dan  diagram  diatas presentase  lesi  pada  jaringan  otak  mencit  pada P0  yang  tidak  diberi  perlakuan  terdapat meningitis  33%  tetapi  tidak  terdapat  kerusakan pada perivascullar  cuffing (PC)  dan gliosis (G). Pada  P1  yang  di  inokulasi Trypanosoma  evansi melalui intraperitoneal terdapat meningitis 100%, perivascullar  cuffing 100%  dan gliosis
100%  di  jaringan  otak  mencit,  sedangkan  pada P2  yang  di  inokulasi Trypanosoma  evansi melalui subcutan mengalami meningitis 100%, perivascullar  cuffing 88%,  dan gliosis 88%.
Tabel  2. Hasil  rerata  Skoring Meningitis (M), Perivascullar  cuffing (PC),  dan gliosis (G). Berdasarkan Analisis statistic Kruskal-WallisTest .
Kelompok Lesi M PC G P0 5,3 5,50 5,50 P1 21,4 21,3 20,7 P2 15,2 15,17 15,72
Trypanosoma  evansi dapat  memberikan perubahan gambaran histopatologi pada jaringan otak pada mencit. Perubahan tersebut mengalami Meningitis , Perivascular cuffing , dan Gliosis .  Hasil  presentase  lesi  pada  gambaran histopatologi  organ  otak  mencit ( Mus musculus ) yang  di  inokulasikan Trypanosoma  evansi menunjukan  hasil  nilai  presentase meningitis pada  kelompok  P0  (33%),  pada  perlakuan  P1 dan perlakuan P2 (100%) (tabel 1).Dari delapan belas  sampel  tingkat  keradangan  berbeda berdasarkan  rerata  hasil  skoring,  karena  nilai kerusakan  pada  perlakuan  P1  yang  di  injeksi secara intraperitoneal hasil  rerata  skoring  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan  P2  yang di injeksi melaui subcutan .
Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan pendapat Biswas. D, (2010) ditemukan keradangan  lesi  nekrotik  pada  meninges  dari tikus  yang  di infeksi Trypanosoma evansi . Pada kelompok  control  yang  tidak  di  inokulasi trypanosoma  juga  mengalami  peradangan  dari meninges,  hal  ini  terjadi  dikarenakan  beberapa faktor.  Faktor  penyebab  terjadinya  peradangan dari  meninges  tersebut  menurut  (Israr,  2008) salah  satu  penyebabnya  oleh  bakteri,  virus, riketsia,  atau  protozoa.  Anoxia,  racun  mercury, manganase,  carbon  monoksid,  alkohol,  sodium klorid,  kekurangan  vitamin  B1,  vitamin  E  dan gangguan  metabolik  juga  merupakan  salah  satu faktor  penyebab  keradangan  (Solfaine,  2013). Presentase  rata-rata Perivascular  cuffing pada kelompok  P0  (0),  perlakuan  P1  (100%), perlakuan P2 (88%). Rata-rata hasil skoring dan presentase antara perlakuan P1 dan perlakuan P2
terjadi  perbedaan  sangat  nyata.  Kelompok perlakuan  P1  mengalami  tingkat  kerusakan Perivascular  cuffing lebih  tinggi  dari  perlakuan P2  dilihat  dari  nilai  scoring  dan  presentase. Perivascular cuffing dari pembuluh darah jaringan  otak  di  tunjukan  pada  (Gambar  4.5), terlihat  jelas  ilfiltrasi  sel-sel  limfosit  di  dalam pembuluh  darah.  Terjadi  kerusakan  ringan  pada sel  glia  (gliosis)  dan  ilfiltrasi  sel  limfosit  yang sangat  sedikit  pada  perlakuan  2  (Smuts.  C, 2009).
Perubahan  yang  terjadi  di  dalam pembuluh  darah  otak  disebabkan  karena  zat-zat beracun  yang  dikeluarkan  oleh Trypanosoma evansi .  Perubahan  patologis  di  otak  disebabkan iritasi  konstan  yang  oleh  adanya  parasit  atau racun  yang  di  keluarkan  oleh  Trypanosoma (Singh  Bal et  all ,  2012).  Hasil  presentase  rata- rata yang  mengalami Gliosis pada kelompok P0 (0%),  kelompok  perlakuan  P1  (100%)  dan kelompok  perlakuan  P2  (88%).  Kelompok  P0 yang tidak di  inokulasi tidak  mengalami  gliosis, sedangkan  pada  kelompok  perlakuan  P1  dan perlakuan  P2  terdapat  gliosis  yang  ditimbulkan oleh  parasit.  Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan pendapat  Damayanti  (1994)  terdapat  kerusakan pada  otak  anjing  yang  di  infeksi Trypanosoma evansi berupa gliosis yang  di  tandai  dengan perivascullar  cuffing dengan  infiltrasi  oleh  sel- sel limfosit (Gambar 4.6).
Encephalitis atau gliosis juga  telah ditemukan  pada  kambing  dan  kerbau  yang terinfeksi Trypanosoma  evansi (Singh  bal et  all , 2012).  Hasil  inokulasi  trypanosoma  evansi antara kelompok perlakuan P1 yang melalui rute intraperitoneal lebih cepat tingkat parasitemianya  dibandingkan  dengan  perlakuan P2  yang  melalui  rute subcutan .  Tikus  yang diinokulasi Trypanosoma  evansi melalui  rute subcutan menunjukan  jangka  waktu  parasitemia lebih lama dibandingkan dengan rute intraperitoneal yang terlihat dalam waktu lima  hari.  Hal  ini  disebabkan  perbedaan  karena perbedaan  daya  absorbsi.  Pada intraperitoneal permukaan  absorbsi  lebih  luas  dan  banyak pembuluh  darah  di  mesenterium,  sedangkan pada subcutan daya  absorbsi  lebih  lama dikarenakan  harus  melalui  lapisan  kulit  terlebih dahulu  sebelum  masuk  kepembuluh  darah (D’Archivio, 2013).
Gambar Histopatologi Otak Yang Mengalami m eningitis ,Tampak Sel-Sel Radang Limfosit Pada Piamater, kelompok perlakuan 1(HE: 400x)
Gambar  histopatologi  perivascular  Cuffing ,Tampak  Jelas Infiltrasi  Sel-Sel  Limfosit  Didalam  Pembuluh  Darah  pada kelompok perlakuan 2 (HE: 400x).
Gambar  histopatologi  le si  keradagan  pada  sel-sel  glia (gliosis) pada kelompok perlakuan 1 (HE: 400x).
Perjalanan penyakit trypanosoma terjadi dengan  cara  Trypomastigot  masuk  ke  dalam tubuh  hospes  melalui  gigitan  lalat.  Berkembang biak  sehingga  menyebabkan  inflamasi  lokal pada  tempat  gigitan.  Parasit  tersebar  melalui aliran darah, sampai pada semua jaringan. Mula- mula  akan  tampak  perbesaran  kelenjar  limfe  ini dikenal  dengan  stadium  akut,  jika  tidak  terobati akan  masuk  pada  stadium  kronis,  parasit  sudah
menginvasi  pada  susunan  saraf  pusat.  Stadium akut diawali dengan gejala prodormal yang tidak spesifik, demam tidak teratur, sakit kepala, sakit sendi  dan  otot serta kerusakan (rash) pada kulit. Pada stadium  kronis sudah  mulai serangan pada susunan saraf pusat berupa meningo encephalitis difussa dan meningomyelitis (Natadisastra, 2009).  Pada  penelitian  ini,  mencit  yang digunakan  sebagai  hewan  coba  penelitian  juga mengalami  gejala  yang  sama  antara  lain inkoordinasi  gerak,  anemia  dan  nafas  berat. Mekanisme Trypanosoma  evansi menginvasi jaringan  otak,  pertama  kali Trypanosoma evansi masuk  ke  dalam  tubuh  melalui  pembuluh kapiler, masuk  ke pembuluh darah besar (Vena) dan  akan  di  pompa  oleh  jantung  ke  seluruh tubuh termasuk ke jaringan otak. Pada pembuluh darah  otak Trypanosoma  evansi akan  keluar untuk  bermigrasi  ke  jaringan  otak  dengan melewati  membran  endotel,  ruang  perivascular dan  membran  parenkim  untuk  menyerang parenkim otak (D’Archivio, 2013).

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian  ini,  dapat ditarik kesimpulan bahwa :
1. Inokulasi trypanosome sp. intraperitoneal menyebabkan lesi histologis berupa
meningitis,
perivascular cuffing dan encephalitis .

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  Rr.U,  Rismawati,  D.,Hidayati,  S.,
Suntoro,  S.H.2007. Pemanfaatan  Mindi  (Melia Azedarach L.) Sebagai Anti Parasit Trypanosoma  evansi  dan  Dampakya  Terhadap Struktur Jaringan Hepar dan Ginjal Mencit .
Kemajuan  terkini  penelitian  klaster  sains- teknologi : Fak.biologi UGM. . Biswas, D., A.Choudhury  dan K. Kumar Misra. 2010. Histophatology Of Trypanosoma (Trypanozoon)  Evansi  Infection  In  Bandicot Rat.II. Brains And Choroid Plexus . Departemen Of Zoology, University of Calcuta. 27 - 37 Cahyaningsih, U. 2013. Buku Ajar Parasitologi .
Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan
Kesmavet  Fakultas  Kedokteran  Hewan  Institut Pertanian Bogor.
D’Archivio,  S.,  A.  Cosson.,  M.  Medina.,  T. Loug.,  D.  Minoprio  and  S.  Goyard.  2013. Non- Invasif In Vivo Study Of The Trypanosona Vivax Infection  Proses  Consolidates  The  Brain Comitment In Late Infections . Plos negl trop dis. 7(1): E 1976 Dellman,  H.D  dan  Brown,  E.M.  1989. Buku Teks  Histologi  Veteriner .  Edisi  ke-3.Universitas Indonesia Press : Jakarta.
Dongga, R.E. 2013. Adopsi Teknologi Pengendalian  Penyakit  Surra  Oleh  Peternak Kuda  di  Kabupaten  Sumba  Timur,  Nusa Tenggara  Timur.  Tesis .Universitas  Udayana: Denpasar.
Dyce,  R.D.  2002. Tekt  Book  Of  Veterinary Anatomy. 3rd . Philadelphia: Saunders.
Fahrimal,  Y.,M.D. Saad dan H. Budiman. 2013. Inokulasi  Trypanosoma  Evansi  Pada  Mencit (MusMusculus)  Strain  BALB.C  Yang  Berasal Dari  Sapi  Lokal .  Jurnal  Medika  Veterinaria: Banda Aceh. Gatner, L.P, Hiatt, J.L, Strum, J.M. 2012. iologi Sel Dan Histologi . Edisi Ke-6. Alih Bahasa Dr. Fajar Arifin Guna Wijaya. Tangerang: Binarupa Aksara.
Smuts., C.M. 2009.thesis. Development Of Todis To Inprove The Detection Of Trypanosoma Evansi In Australia . Murdoch University: australia. Hal:124 Solfaine, Rondius. 2013. Pengantar Patologi Veteriner II . Proyeksi Indonesia:Yogyakarta. Subronto. 2006. Penyakit Infeksi Parasit Dan Mikroba Pada Anjing dan Kucing . Gadjah Mada University Press: Yogyakarta. Sutanto I, Ismid I.S, Sjarifuddi P.K, dan Sungkar. 2008. Buku Ajar Parasitologi Kedokteran .Edisi Ke-4, Balai Penerbit FK UI: Jakarta.