EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Isolasi Glukosamin dari Limbah Cangkang Rajungan Portunus pelagicus
(Linnaeus,1758) (Malacostraca:Portunidae) dengan Hidrolisis Asam Klorida
Miftahul Akhyar Ghofari*, Ali Ridlo, Rini Pramesti Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof.H.Soedarto S.H, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia * Corresponding author, e-mail : Akhyar.gho@gmail.com
ABSTRAK: Glukosamin  merupakan  monomer  dari  kitosan  yang  dapat  diperoleh  dari    limbah cangkang  rajungan P.  pelagicus .  Glukosamin  dibutuhkan    dalam  pembentukan  dan  perbaikan tulang rawan dan jaringan tubuh  lainnya. Penelitian  ini bertujuan untuk  mengetahui karakteristik glukosamin  dari  limbah  cangkang  rajungan.  Proses  isolasi  kitosan  rajungan  terdiri  dari deproteinasi  dengan  NaOH  3N,  demineralisasi  dengan  HCl  1N,  dan  deasetilasi  dengan  NaOH 50%.  Kitosan  yang  diperoleh  dianalisis  karakteristik  dan  derajat  deasetilasinya,  selanjutnya kitosan  dihidrolisis  secara  kimia  dengan  larutan  HCl  20%  pada  suhu  kamar  selama  4  jam. Glukosamin  yang  dihasilkan  dihitung  rendemen, loss  on  drying (LoD),  tingkat  kelarutan  dan derajat deasetilasinya. Hasil penelitian menunjukan rendemen kitosan cangkang rajungan adalah 11,3%,  berwarna  putih,  tidak  berbau,  kadar  air  9,2%,  kadar  abu  5,4%, dan  derajat  deasetilisasi 90,8%.  Rendemen  glukosamin  sebesar  8,6%,  dengan  nilai  Loss  on  Drying  1,3%,  kelarutan sebesar  72%  dan  derajat  deasetilisasi  sebesar  96,95%.  Spektra  infrared  menunjukan  adanya gugus -NH, -OH, -CH dan –C=O yang sesuai dengan yang terdapat pada glukosamin.
Kata Kunci : Glukosamin, P pelagicus, Hidrolisis, asam klorida.
Glucosamine Isolation from Portunus pelagicus, Linnaeus,1758 (Malacostraca:Portunidae) Shell waste With Chemical Hydrolysis Method
ABSTRACT: Glucosamine  is  a  monomer  from  chitosan  which  can  be  obtained  from  small  crab shell (P pelagicus) waste. Glucosamine is needed in the formation and repair of cartilage and other body tissues. This study aims to determine the characteristics of glucosamine from small crab shell waste. The process of isolating chitosan from small crab shells consisted of deproteination with 3N NaOH,  demineralization  with  1N  HCl,  and  deacetylation  with  50%  NaOH.  The  chitosan  obtained was  analyzed  its  characteristics  and  degrees  of  deacetylation,  then  chitosan  was  chemically hydrolyzed with 20% HCl solution at room temperature for 4 hours. The resulting glucosamine  is then calculated yield, loss on drying (LoD), solubility level and degree of deacetylation. The results showed that the yield of chitosan crab shells was 11.3%, white, odorless, 9.2% moisture content, 5.4%  ash  content,  and  90.8%  deacetylation  rate.  Glucosamine  yield  was  8.6%,  with  a  Loss  on Drying value of 1.3%, solubility of 72% and the degree of deacetylation of 96.95%. Infrared spectra show the presence of -NH, -OH, -CH and -C = O groups that match those found in glucosamine.
Keywords: Glucosamine, P pelagicus, Hydrolysis, hydrochloric acid.

## PENDAHULUAN
Indonesia  berpotensi  dibidang  angroindustri  sebagai  penghasil  biota  laut  seperti  rajungan. Rajungan (P  pelagicus) merupakan  komoditas  sektor  perikanan  yang  dijual  dalam  bentuk kemasan.  Tahun  2016  ekspor  rajungan  hasil  pengalengan  mencapai  19,4  ribu  ton  (APRI  2017). Jika diasumsikan ± 50% dari total berat adalah limbah maka berat limbah mencapai ± 9 ribu ton. Pemanfaatan limbah cangkang rajungan yang belum maksimal menimbulkan penumpukan limbah di tepi pantai dan bau busuk bercampur amis. Salah satu alternatif pemanfaatan limbah cangkang rajungan  agar  memiliki  nilai  dan  daya  guna  adalah  dengan  mengubah  menjadi  produk  yang
bernilai  ekonomis  tinggi  seperti  kitosan  dan  glukosamin,  yang  dapat  dijadikan  berbagai  bahan industri.
Glukosamin C 6 H 13 NO 5 merupakan monomer kitosan yang terdapat pada cangkang rajungan, berfungsi sebagai prekursor dalam biosintesis protein glikosilat dan lipid untuk memproduksi cairan synovia,l sebagai  pelumas  pada  tulang  rawan  (Syukron, et  al., 2016).  Pemanfaatan  limbah cangkang  rajungan  menjadi  glukosamin  terdiri  dari  dua  tahap  yaitu  proses  pembuatan  kitosan dilanjutkan  hidrolisis  kitosan  menjadi  glukosamin.  Proses  pembuatan  kitosan  dilakukan  melalui beberapa tahap yaitu deproteinasi, demineralisasi, dan deasetilasi. Proses pembuatan glukosamin dilakukan  dengan  hidrolisis  kimiawi  dengan  ion  hidrogen  sebagai  katalis  (Wanichpongpan  & Attasat, 2016).
Hidrolisis kitosan menjadi glukosamin dapat dilakukan dengan beberapa metode antara lain hidrolisis  kimiawi,  enzimatik,  fermentasi  dan  variasi  campuran  dari  beberapa  metode  tersebut (Cahyono et.  al .,  2014).  Produksi  glukosamin  secara  enzimatik  lebih  ramah  lingkungan,  namun memiliki  keterbatasan  pada  stabilitas  enzim  dan  biaya  ekstraksi  enzim  yang  cukup  mahal. Produksi glukosamin secara kimiawi memiliki keunggulan, yaitu bahan yang dibutuhkan cenderung lebih  mudah  diperoleh,  produksi  glukosamin  relatif  cepat  dan  produksi  dapat  dilakukan  dalam skala  besar.  Kelemahan  hidrolisis  secara  kimiawi  adalah  bahan  bahan  kimia  yang  digunakan dapat mencemari lingkungan (Dutta et al., 2004).
Metode  hidrolisis  glukosamin  secara  kimiawi  dengan  menggunakan  asam  kuat  seperti  HCl dan  H 2 SO 4 menghasilkan  rendemen  yang  lebih  banyak  (Mojarrad et  al., 2007).  Beberapa  jenis asam seperti HCl dan H 2 SO 4 dengan berbagai konsentrasi telah digunakan untuk mengekstraksi glukosamin  dari  kitin.  Pengolahan  glukosamin  hidroklorida  dari  kitin  dilakukan  melalui  reaksi hidrolisis  sederhana.  Selama  reaksi  tersebut,  kitin  akan  melewati  proses  deasetilasi  dan depolimerisasi  untuk  menjadi  glukosamin  hidrolorida  sebagai  hasil  dari  perendaman  didalam larutan asam hidroklorida (Mojarrad et al., 2007).

## MATERI DAN METODE
Materi  pada  penelitian  ini  adalah  limbah  cangkang  rajungan (Portunus  pelagicus) yang  di ambil di Desa Gegunung Kabupaten Rembang. Limbah cangkang rajungan dicuci  dan dipanaskan pada  suhu  60 o C  selama  10  menit,  kemudian  di  jemur  dibawah  sinar  matahari  selama  3  hari, selanjutnya dihaluskan dan diayak dengan ukuran 100 mesh / 0,149 mm.
Demineralisasi  dilakukan  dengan  memanaskan  bubuk  cangkang  rajungan  sebanyak  290  g dengan  campuran  HCl  1N  sebanyak  2  liter  (1:7)  pada  suhu  90  °C  selama  1  jam,  kemudian disaring  dan  di  ambil  residunya.  Residu  dicuci  dengan  aquadest  hingga  pH  netral,  selanjutnya dipanaskan  pada  suhu  70 o C  selama  24  jam.  Serbuk  hasil  demineralisasi  dideproteinisasi menggunakan  NaOH  3N  sebanyak  1,6  l  (1:10  g/ml)  pada  suhu  90  °C  selama  1  jam,  setelah  itu disaring, residu dicuci kembali hingga pH netral dan dipanaskan pada suhu 70 o C selama 24 jam. Setelah itu residu direndam dalam larutan NaOH 50% sebanyak 1,7 liter (1:20 b/v) dan dipanaskan pada  suhu  100  ºC  selama  2  jam  sambil  diaduk,  kemudian  dicuci  dengan  air  sampai  pH  netral, dijemur  sehingga  diperoleh  kitosan.  Sebanyak  4  gr  kitosan  direndam  HCl  20%  sebanyak  36  ml (1:9  b/v).  Larutan  diaduk  pada  suhu  ruangan  selama  6  jam,  selanjutnya  larutan  diendapkan, kemudian disaring menggunakan kain kasa. Disaring dipanaskan pada suhu 70 o C selama 4 jam. Glukosamin  dianalisis  rendemen,  warna,  kadar  air,  kadar  abu,  mengacu  pada  AOAC  (2005). Analisis infrared dilakukan menurut (Swann & Patwardhan 2011). Less On Drying mengacu pada Ileleji et al. (2010).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Cangkang  rajungan  yang  diperoleh  berwarna  putih  kecoklatan  kemudian  dihaluskan didemineralisasi,  dideproteinasi  dan  dideasetilisasi  yang  menghasilkan  kitosan.  Kualitas  kitosan dari  limbah  cangkang  rajungan  (Tabel  1).  Kitosan  yang  diperoleh  berwarna  putih  kecoklatan dimana sesuai  standar GRAS (2012), namun kitosan yang baik umumnya berwarna putih. Warna kecoklatan  pada  kitosan  disebabkan  karena  pada  proses  demineralisasi  dan  deproteinasi masih terdapat bahan – bahan organik yang belum hilang secara maksimal.
Kitosan  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  sebesar  33  g  atau  11,3%,  lebih  rendah  dari penelitian  Mohanasrinivasan et  al. (2013)  17%;  Sari  dan  Abidin  (2015)  46,30  %.  Rendemen kitosan  dipengaruhi  berbagai  proses  pada  saat  pembuatanya,  seperti  konsentrasi  HCl  saat demineralisasi,  waktu  reaksi demineralisasi  deproteinasi  dan  deasetilisasi.  Konsentrasi  HCl  yang tinggi akan meningkatkan jumlah mineral atau protein yang terlepas. Temperatur yang tinggi akan mempercepat  laju  reaksi,  hal  ini  dikarenakan temperatur  yang  tinggi dapat  menyebabkan rantai molekul  pada  kitosan  terdepolimerisasi  dan  mengakibatkan  terjadinya  penurunan  berat  molekul dan rendemen kitosan (Patria, 2013).
Kadar  air  kitosan  pada  penelitian  ini  sebesar  9,2%.  Nilai  kadar  air  tersebut  masih  berada didalam  standar  mutu  kadar  air  kitosan  yaitu  <10%.  Air  merupakan  parameter  penting  dalam bahan,  karena  dapat  mempengaruhi  tekstur  dan  penampakkan.  Kadar  air  mempunyai  peranan penting dalam menentukan daya awet bahan, karena dapat mempengaruhi sifat fisik, perubahan fisik,  perubahan  mikrobiologi  dan  perubahan  enzimatis  (Buckle,  1987).  Menurut  Nielsen  (1998), penentuan  kadar  air  suatu  bahan  sangat  tergantung  pada  tipe  oven  yang  digunakan,  kondisi dalam oven, suhu, dan waktu pengeringan.
Kadar abu kitosan (5,4%) lebih besar jika dibandingkan dengan standar EFSA (2010) ≤ 3 % dan GRAS (2012) ≤ 0,05%, hal menunjukkan bahwa proses reaksi demineralisasi, deproteinisasi dan deastilasi belum dapat mengurangi komponen senyawa anorganik secara maksimal. Jumlah dan komposisi abu dalam mineral tergantung pada jenis bahan. Kadar abu bisa digunakan sebagai indikasi kandungan mineral dalam sampel.
Tabel 1. Karakteristik Kitosan  dari Limbah Cangkang Rajungan Spesifikasi Hasil EFSA 2010 GRAS 2012 Rendemen 11,3% - - Warna Putih Kecoklatan - White to off white powder Bau Tidak Berbau - Netral Ukuran 100 mesh - 18-120 Mesh Kadar Air 9,2% ≤ 10% ≤ 10 % Kadar Abu 5,4% ≤ 3 ≤ 0,5% Derajat Deasetilisasi 90,8% ≥90% 75-95  % Keterangan : EFSA (European Food Safety Authority); GRAS ( General recognition of safety)
Gambar 2. Spektra infrared kitosan dari limbah cangkang rajungan.
4000 450 3500
3000 2500
2000 1500 1000 500 19.1 13.0 13.5 14.0 14.5 15.0 15.5 16.0 16.5 17.0 17.5 18.0 18.5 Bilangan Gelombang cm -1 3446.38cm-1, 13.18%T 1074.93cm-1, 14.25%T 1643.48cm-1, 14.64%T 1555.06cm-1, 14.77%T 1433.31cm-1, 14.77%T 2926.57cm-1, 15.18%T 1317.75cm-1, 16.00%T 3845.43cm-1, 16.52%T 576.95cm-1, 17.34%T 2347.75cm-1, 18.28%T 3109.6 1258.8 1153.8
Spektra  infrared  kitosan  (Gambar  2)  diduga  menunjukan  adanya  puncak  puncak  yang sesuai  dengan  kitosan  yaitu  mengandung  gugus  fungsi  O-H,  C-H,  C=O  dan  N-H  selengkapnya Tabel  2.  Derajat  deasetilasi  kitosan  pada  penelitian  ini  sebesar  90,8%,  Penelitian    Walke et  al. (2014)  75-85%;  Mohanasrinivasan et  al. (2013)  74,82%;  Trung  dan  Phuong  (2012)  82,3±05%. Derajat  deasetilisasi  menunjukan  tingkat  keberhasilan  proses  deasetilisasi  kitosan  dari  kitin dengan katalis basa. Derajat deasetilasi (DD) merupakan suatu parameter lepasnya gugus asetil dari kitosan. Derajat deasetilasi diketahui dengan perhitungan persentase banyaknya gugus asetil yang  hilang  dan  digantikan  dengan  –H  saat  proses  deasetilasi.  Erika et  al. (2005), menyatakan bahwa semakin tinggi derajat deasetilasi kitosan menunjukkan semakin banyak gugus asetil yang dilepaskan dan semakin banyak gugus amina bebas (-NH 2 ) yang terbentuk. Vibrasi regangan  pada  bilangan  gelombang 1643,48  cm -1 merupakan  pita serapan gugus ikatan  C=O  yang  menunjukkan  adanya  gugus  amida  sekunder,    pita  serapan  pada  bilangan gelombang  3446,39  cm -1 merupakan  vibrasi  pembengkokan  gugus  –OH  dan  gugus  -NH. Berdasarkan  analisis  karakteristik  spektrum  inframerah,  adanya    spektrum  utama    pada  daerah panjang  gelombang  tertentu  yang  menunjukkan  adanya  gugus  fungsi  utama  yang mengindikasikan bahwa senyawa hasil reaksi deastilasi dalam penelitian adalah kitosan.
Menurut  Benavente  (2015)  proses  hidrolisis  melibatkan  dua  reaksi  hidrolisis  yang  dikatalis asam:  ikatan  glikosidik  (depolimerisasi)  dan  ikatan  N-acetil  (deasetilisasi).  Sebagian  besar degradasi ikatan kitin terjadi selama beberapa menit pertama, dan produk yang terbentuk adalah oligosakarida. Gambar 2. menunjukan mekanisme reaksi yang paling dapat diterima untuk reaksi hidrolisis  yang dikatalis oleh  asam  pada  ikatan  glikosida  dan  reaksi hidrolisis  yang  dikatalis  oleh asam pada ikatan N-acetil (Benavente, 2015)
Tabel 2 . Gugus  fungsi kitosan dari limbah cangkang rajungan berdasarkan spektra FTIR
Gugus fungsi Bilangan gelombang (cm- 1 ) O-H 3446,38 (stretching); 1317,75 (bend) C-H non aromatic 2926,57 C=O karbonil amida 1643,48; 1074,93 (stretching) N-H  amina 3109,6 (stretching); 1555,06; 1153,8
Gambar 3. Reaksi deasetilisiasi pada kitin (Basuki & Sanjaya, 2009)
Hasil  penelitian  tahap  2  berupa  glukosamin.  Kualitas  glukosamin  dari  hidrolisis  kitosan dengan HCl  20% pada  suhu  ruangan (Tabel 3). Konsentrasi asam yang  digunakan penelitian  ini sebesar 20% selama 6 jam tanpa adanya pemanasan, rendemen glukosamina hidroklorida yang dihasilkan sebesar 8,6% dari berat serbuk cangkang rajungan sedangkan Kraisangsri et al. (2018) 36%;  Nurjannah et  al. (2016)  menghidrolisis  dengan  HCl  27%  pada  suhu  90 o C  selama  4  jam menghasilkan  rendemen  sebesar  18.39%.    Banyak  faktor  yang  dapat  mempengaruhi  jumlah rendemen yang dihasilkan antara lain konsentrasi asam, rasio asam/sampel (v/w), tekanan, waktu (Mojarrad et  al., 2007).  Menurut  Suptijah  (2014),  konsentrasi  asam  8%  dengan  penambahan perlakuan dengan tekanan 1  atm  telah mampu menghidrolisis  glukosamin dengan  karakter yang cukup baik. Hal ini terjadi karena adanya faktor tekanan yang diberikan saat hidrolisis. Kombinasi perlakuan  antara  tekanan  dan  suhu  mempercepat  proses  depolimerisasi  kitosan  menjadi glukosamin  sehingga  waktu  pemanasan  menjadi  lebih  singkat  dengan  konsentrasi  asam  yang cukup rendah.
Kelarutan  gluksamin  pada  penelitian  ini  sebesar  72%.  Kralovec  &  Barrow  (2008), menyatakan glukosamin hidroklorida dapat  larut sempurna dalam air. Suatu zat yang larut dengan mudah  pada  pelarut  yang  bersuhu  rendah  mengindikasikan  bahwa  zat  tersebut  memiliki  tingkat kelarutan  yang  baik.  Hasil  penelitian  yang  diperoleh  menunjukkan  glukosamin  yang  diproduksi belum  sesuai  dengan  standar  baku  yang  ditetapkan  EFSA  (2009)  yaitu  90%.  Tingkat  kelarutan yang  kurang  tinggi  pada  penelitian  ini  diduga  beberapa  faktor,  salah  satunya  suhu.  Suhu  yang digunakan diduga terlalu rendah sehingga belum dapat menghidrolisis kitosan menjadi glukosamin secara sempurna sehingga masih terdapat polimer kitosan yang belum terhidrolisis.
Nilai  LoD  glukosamin  pada  penelitian  sebesar  1,3%.  (USP,  2006).  Derajat  deasetilasi glukosamin yang diukur dalam penelitian ini adalah 96,95% lebih tinggi dibandingkan dengan baku mutu  glukosamin  standar  (Cargill,  2006)    yaitu  75-95  %  namun  belum memenuhi  standar  EFSA (2009) sebesar 98%.
(a)
(b)
Gambar 4. Mekanisme  reaksi  hidrolisis  ikatan  (a)  glikosida  pada  karbohidrat  dan  (b)  N-acetil dengan asam  (Benavante et al., 2015).
Tabel 3. Karakteristik glukosamin dari limbah cangkang rajungan
Karakteristik Hasil Analisis Standar EFSA Rendemen 8,6 % - Kelarutan 72 % 90 % LoD 1,3 % 1 % Derajat Deasetilisasi 96,95 % 98 %
Gambar 5. Spektra infrared glukosamin dari limbah cangkang rajungan Tabel 4. Gugus  Fungsi Glukosamin Berdasarkan Spektra FTIR.
Gugus Fungsi Bilangan gelombang (cm -1 ) O-H 3446,38 (Stretch); 1380,24 (Bend) N-H 1632,97( bend); 1576,39 (amina sekunder) C-H Non aromatic 2931,44 (Stretch); 897,89 C-O Stretch, 1155,91
Spektra  infrared  Gambar  4  menunjukan  adanya  gugus  O-H,  N-H,  C-H  dan  C-O  yang dibuktikan  dengan  puncak  pada  bilangan  gelombang  3446.38,  (Tabel  4).  Menurut  Cahyono et.al 2015,  glukosamin  mengandung  gugus  O-H  dan  N-H  pada  3450-3350  jika  bilangan  gelombang mendekati 3450 menunjukan hasil masih berbentuk polimer dan 3350 sudah berbentuk monomer.
Spektrum  infrared  menunjukan  proses  deasetilisasi,  karena  bilangan  gelombang  pada ~1700  cm -1 yang  menunjukan  C=O  telah  menghilang  (Mojarrad,  2007).  Derajat  deasetilisasi glukosamin yang dihasilkan lebih besar dibandingkan dengan kitosan. Hal ini diduga saat proses hidrolisis  ikatan  glikosida    dengan  HCl  20%,  terjadi  juga  proses  pemutusan  ikatan  amida.  Asam berfungsi  sebagai  katalis  yang  membantu  kerja  air  dalam  proses  hidrolisis  ikatan  glikosida, Semakin  tinggi konsentrasi asam yang digunakan sampai pada konsentrasi  yang optimum maka hasil akan bertambah besar (Mardina et. al ., 2014). Banyaknya hasil reaksi juga dipengaruhi oleh lamanya waktu reaksi, suhu, dan tekanan. Rendemen akan semakin meningkat dengan semakin lamanya waktu reaksi sampai pada waktu optimum (Groggins, 1958).
Glukosamin  yang  dihasilkan  terlihat  masih  belum  murni,  sehingga  ada  potensi  spektum FTIR  yang  dihasilkan  juga  terinterferensi  dengan  adanya  gugus  –  gugus  pengganggu.  Pita serapan  pada  glukosamin  menunjukan  puncak  serapan  1576,39  cm -1 yang  menunjukan  adanya amina  sekunder  pada  glukosamin  dari  limbah  cangkang  rajungan.  Ikatan  N-H  Stretching  tidak terlihat, hal ini diduga ditutupi oleh peak O-H Stretching yang melebar.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  glukosamin  dapat  diperoleh  dari limbah  cangkang  rajungan  dengan  cara  hidrolisis  kimiawi  menggunakan  HCl  20%  pada  suhu kamar. Karakteristik glukosamin yang diperoleh yaitu; rendemen 8,6%, derajat deasetilisasi 96,95 %, kelarutan 72%, Less on Drying 1,3 %.

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC [Association of Official Analytical and Chemistry]. 2005. Officials Methods of Analysis. 18th Ed. Marylan: Association of Official Analytical and Chemistry Inc.
Asosiasi  Pengelolaan  Rajungan  Indonesia  Kab.  Pemalang.  2017. Pemalang  Bertekad    Pelihara Laut  Pertahankan  Kelestarian  Rajungan .  Diakses  dari  https://babel.antaranews.com
4000
400 3500 3000
2500
2000 1500 1000 500 18 6 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Bilangan gelombang cm -1 % T ra n sm ita n 3435.59cm-1, 6.00%T 1074.93cm-1, 8.94%T 1632.97cm-1, 9.87%T 1029.54cm-1, 10.30%T 1155.91cm-1, 10.91%T 2931.44cm-1, 12.15%T 1576.39cm-1, 12.29%T 1380.24cm-1, 12.63%T 578.65cm-1, 13.42%T 1314.76cm-1, 13.91%T 1412.91cm-1, 14.19%T 954.61cm-1, 14.80%T 897.89cm-1, 16.56%T 2067.53cm-1, 16.90%T 2346.59cm-1, 17.60%T
/berita/54269/pemalang-bertekad-pelihara-laut-pertahankan-kelestarian-rajungan.  Tanggal  20 April 2019 pukul 21.00 WIB.
Benavente,  M.,  Arias,  S.  &  Morena,  L.,  2015. Production  of  Glucosamine  Hydrochloride  from Crustacean Shell, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 3:20-26.
Buckle, K.A.1987, Ilmu pangan . Universitas Indonesia Press. Jakarta
Cahyono,  E.,  Suptijah,  P.  and  Wientarsih,  I.,  2014.  Development  of  a  pressurized  hydrolysis method for producing glucosamine. Asian Journal of Agriculture and Food Sciences
Cargill. 2006, Application for the Approval of the use REGENASURE® Non Shellfish Glucosamine Hydrochloride  from  Aspergillus  Niger  (RGHAN)  for  use  in  Certain  Foods  Products  under Regulation  (EC)  No  258/97  for  the  European  Parliament  and  of  the  Council  of  27  January 1997  Concerning  Novel  foods  and  Novel  Food  Ingredients,  Eddyville,  USA:  Cargill Incorporated.
Dutta, P., Dutta, J. & Tripathi, V., 2004. Chitin and chitosan: chemistry, properties and applications . Journal of Scientific & Industrial Research , 63:20-31.
Erika, I., Rojas, D., Waldo, M., Arguelles, M., Inocencio, H.C., Javier, H., Jaime, L.M. & Francisco, M.G., 2005, Determination Of Chitin and Protein Contents During The Isolation of Chitin from Shrimp Waste . Macromolecular Bioscience, 6:340–347.
European Food Safety Authority, 2009, Scientific Opinion on the Substantiation of a Health Claim Related  to  Glucosamine  Hydrochloride  and  Reduced  Rate  of  Cartilage  Degeneration  and Reduced  risk  of  development  of  osteoarthritis  pursuant. European  Food  Safety  Authority , 7(10):1-9.
European Food Safety Authority, 2010 , Scientific opinion on the safety of chitin-glucan as a novel food ingredient, European Food Safety Authority , 8(7):1-17. GRAS  (General  recognition  of  safety),  2012, Chitoclear®  Shrimp-Derived  Chitosan:  Food  Usage Conditions For General Recognition Of Safety, Iceland (IL): GRAS Groggins,  P.H.,  1958,  Unit  Processes  in  Organic  Synthesis,  5th  ed.,  p.  775–777.  McGraw–Hill Book Company. New York
Ileleji,  K.E.,  Gracia,  A.A.,  Kingsly,  A.R.P.  &  Clemetson,  C.L.,  2010,  Comparison  of  Standard Moisture  Loss  on  Drying  Methods  for  Determination  of  Moisture  Content  of  Corn  Distillers Dried Drains with Solubles. Journal of Association of Official Analytical Chemists International . 93(3):825-831
Kraisangsri, J., Nalinanon, S., Riebroy, S., Yarnpakdee, S. & Ganesan, P. 2018. Physicochemical characteristics of  glucosamine from blue swimming crab (Portunus pelagicus) shell prepared by acid hydrolysis . Walailak Journal of Science and Technology, 15: 869-877
Kralovec,  J.A.,  Barrow,  J.C.,  2008,  Marine  Neutraceticals  and  Functional  Foods,  London.  New York: CRC Press. .
Mardina,  P.,  Phratama,  H.A.  &  Hayati,  D.M.,  2014,  Pengaruh  Waktu  Hidrolisis  dan  Konsentrasi Katalisator Asam Sulfat Terhadap Sintesis Furfural dari Jerami Padi. Konversi, 3:1–8. Mohanasrinivasan, V., Mishra, M., Paliwal, J.S., Singh, S.K., Selvarajan, E., Suganthi, V.,  & Devi C.S., 2013, Studies on Heavy Metal Removal Efficiency and Antibacterial Activity of Chitosan Prepared From Shrimp Shell Waste, Journal Biotechnology , 1(3):01-09 Mojarrad,  J.S.,  Nemati,  M.,  Valizadeh,  H.,  Ansarin,  M.  &  Bourbour,  S.,2007, Preparation  of Glucosamine  from  Exoskeleton  of  Shrimp  and  Predicting  Production  Yield  by  Response Surface  Methodology , Journal  of Agricultural  Food Chemistry , 55(6): 2246-2250.
Nielsen, S.S., 1998, Food Analysis Second Edition, Aspen Publisher Inc. Maryland.
Nurjannah,  A.,  Darmanto,  D.  &  Wijayanti,  I.,  2016.  Optimization  Making  Glucosamine Hydrochloride  (HCl  GlcN)  of  Crab  Shell  Waste  through  Chemical  Hydrolysis. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 19(1):26-35. DOI: 10.17844/jphpi.2016.19.1.26. Patria,  A,  2013,  Production  And  Characterization  Of  Chitosan  From  Shrimp  Shells  Waste. International Journal of The Bioflux Society , 6(4):339-344.
Sari, D.P. & Abdiani, I.M. 2015, Pemanfaatan Kulit Udang dan Cangkang Kepiting sebagai Bahan Baku Kitosan. Jurnal Harpondon Borneo, 8(2):142–147. Suptijah,  P.,  Bustami,  I.  &  Ernawati.  2014,  Pemanfaatan  Limbah  Krustasea  dalam  Pembuatan Glukosamin Hidroklorida (Glcn Hcl) dengan Metode Autoklaf, Jurnal Teknologi Perikanan dan Kelautan, 5(2):171-179.
Swann,  G.E.A.,  Patwardhan,  S.V.,  2011,  Application  of  Fourier  Transform  Infrared  Spectroscopy (FTIR)  for  Assessing  Biogenic  Silica  Sample  Purity  in  Geochemical  Analyses  and Palaeoenvironmental Research . Journal Climate of the Past , 10(7):65-74. Syukron, F., Karnila, R. & Hasan, B., 2016, Karakteristik Glukosamin Hidroklorida ( Hcl Glcn) dari Kitin  dan  Kepiting  Chitosan  Biru  Kolam  (Portunus  Pelagicus). Berkala  Perikanan  Terubuk , 44(2):22–35.
Trung, T.S. & Phuong, P.T.D., 2012, Bioactive Compounds from by-Products of Shrimp Processing Industry in Vietnam, Journal of Food and Drug Analysis , 20(1):194-197.
Walke,  S.,  Srivastava,  G.,  Nikalje,  M.,  Doshi,  J.,  Kumar,  R.,  Ravetkar,  S.  &  Doshi,  P.,  2014, Physicochemical  and  Functional  Characterization  of  Chitosan  Prepared  from  Shrimp  Shells and  Investigation  of  its  Antibacterial,  Antioxidant  and  Tetanus  Toxoid  Entrapment  Efficiency , International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 26(2):215-225.
Wanichpongpan,  P.  &  Attasat,  S.,  2016,  Optimum  Conditions  for  Preparation  of  Glucosamine Hydrochloride  and  Glucosamine  Sulfate  from  Shrimp-Shell  Chitin. International  Journal  of Applied Science and Technology, 6;24-29.