## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL UMBI
BAWANG PUTIH ( Allium sativum L.) TERHADAP BAKTERI Klebsiella pneumoniae ISOLAT SPUTUM PENDERITA BRONKITIS SECARA IN VIVO
Lovenia Morient Rotty 1) , Fatimawali 1) , Heedy Tjitrosantoso 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Garlic has been shown to have in vitro antibacterial activity. This research aims to investigate the  in  vivo  antibacterial  activity  of  Garlic  bulbs  ( Allium  sativum L.)  ethanol  extract  against Klebsiella pneumoniae .  18 Balb/c strain  mice were divided into 6  groups. Group 1 (normal control) was not infected with bacteria, group 2 (negative control), group 3 (positive control), group 4,5,6 (treatment groups) were  treated by fresh garlic bulbs with each dose 0,01456 g / 20 g body weight, 0,02912 g / 20 g body weight, and  0,05824 g / 20 g body weight in form of  viscous  extract.  After  3  days  of  treatment,  mice  blood  were  isolated  and  cultured  for  24 hours.  As  the  result,  fresh  garlic  bulbs  with  different  doses  such  as  0,01456  g  /  20  g  body weight, 0,02912 g / 20 g body weight, and  0,05824 g / 20 g body weight in form of viscous extract  was  indicated  to  have  in  vivo  antibacterial  activity  against K.  pneumoniae ,  the percentages were 3,55%, 15,34%, and 22,25%.
Key words : Garlic bulbs, Antibacterial, in vivo, K.pneumoniae

## ABSTRAK
Bawang  putih  telah  terbukti  memiliki  aktivitas  antibakteri  secara in  vitro .  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol umbi Bawang Putih terhadap Klebsiella  pneumoniae secara in  vivo .  18  ekor  mencit  jantan  galur  Balb/c  dibagi  menjadi  6 kelompok.  Kelompok  1  (kontrol  normal)  tidak  diinfeksi  bakteri,  kelompok  2  (kontrol negatif), kelompok 3 (kontrol positif), kelompok 4,5,6 (kelompok perlakuan) diberikan dosis umbi  bawang  putih  segar  masing-masing  0,01456  g  /  20  g  BB,  0,02912  g  /  20  g  BB,  dan 0,05824  g  /  20  g  BB  dalam  bentuk  ekstrak  kental.  Setelah  3  hari  perlakuan,  dilakukan pengambilan darah mencit dan dikulturkan selama 24 jam. Kemudian dihitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh dengan metode plate count . Hasil penelitian menunjukkan bahwa dosis umbi bawang putih segar 0,01456 g / 20 g BB, 0,02912 g / 20 g BB, dan  0,05824 g / 20 g dalam  bentuk  ekstrak  kental  memiliki  aktivitas  antibakteri  secara in  vivo terhadap K.pneumoniae dengan persentase sebesar 3,55%, 15,34%, dan 22,25%.
Kata kunci : Umbi Bawang Putih, Antibakteri, in vivo, K.pneumoniae .

## PENDAHULUAN
Infeksi  pada  saluran  pernapasan merupakan  penyakit  yang  umum  terjadi pada masyarakat. Menurut wilayah infeksinya,  infeksi  saluran  pernapasan terbagi menjadi infeksi saluran pernapasan atas dan infeksi saluran pernapasan bawah (DepKes  RI,  2005).  Berdasarkan  data WHO tahun 2012, infeksi saluran pernapasan  bawah  merupakan  salah  satu penyakit  yang  menyebabkan  kematian terbanyak di dunia.
Bronkitis merupakan penyakit Infeksi  saluran  pernapasan  bawah  yang ditandai  dengan    adanya  peradangan  pada daerah  trakheobronkhial  (DepKes  RI, 2005). Secara umum penyebab dari infeksi saluran pernapasan adalah berbagai mikroorganisme, diantaranya adalah akibat infeksi bakteri. Salah satu bakteri penyebab bronkitis yaitu Klebsiella pneumoniae (Ikawati, 2011).
Pada sebagian kasus infeksi pengunaan  antibiotik  sangat  diperlukan, tetapi  bila  berlebihan  dapat  menyebabkan beberapa  bakteri  resisten  atau  bertahan hidup  karena  adanya  perubahan  genetik (Brooks et al ., 2005). Penggunaan antibiotik  juga  dapat  menimbulkan  efek samping seperti reaksi alergi, reaksi toksik, dan perubahan biologik maupun metabolik (Setiabudy  dan  Gan,  1995).  Oleh  karena itu,  perlu  dicari  alternatif  lain  untuk memanfaatkan  kembali  bahan  alami  bagi kesehatan,  terutama  obat-obatan  yang berasal  dari  tumbuhan,  karena  pengobatan tradisional  dengan  menggunakan  bahan alam  harganya  lebih  terjangkau,  mudah didapat dan efek samping yang rendah.
Salah  satu  antibakteri  dari  alam yang dapat  digunakan sebagai  obat adalah bawang  putih  ( Allium  sativum L.).
Senyawa  yang  berperan  sebagai  antibiotik alami  pada  bawang  putih  adalah allicin (Lingga, 2012).
Dari  berbagai  penelitian  secara in vitro dapat  dilihat  bahwa  bawang  putih memiliki efek antibakteri dengan spektrum yang  luas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari
ekstrak etanol umbi bawang putih terhadap Klebsiella  pneumoniae isolat  sputum penderita bronkitis secara in vivo .

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Kandang  hewan,  sarung  tangan, tempat  air  minum  dan  tempat  makan hewan,  timbangan  analitik  (ADAM), disposable  syringe 1  mL  (Terumo)  , mikropipet (Ecopipette), labu takar (Pyrex ) ,  tabung  reaksi  (Pyrex),  corong kaca  (Pyrex),  gelas  ukur  (Pyrex),  beker gelas  (Pyrex),  kertas  saring,  Erlenmeyer (Pyrex), jarum Ose, batang L, cawan petri, pisau,  NGT  ( Naso  Gastric  Tube) ukuran 3,5  (Terumo),  tabung  darah  Na-EDTA, rotary  evaporator (Strike  300), laminar air flow (Biotek) , autoklaf, vortex (Benchmark) , hot plate, inkubator (Ecocell),  mikroskop, coloni  counter (HEALTH), lampu bunsen dan oven .

## Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini  adalah  umbi  bawang  putih  ( Allium sativum L.)  yang  diperoleh  dari  Pasar Segar  Paal  Dua  Manado,  mencit  jantan galur Balb/c ( Mus musculus) , bakteri isolat sputum  penderita  bronkitis  ( Klebsiella pneumonia) , media nutrient agar
(MERCK),  cairan  fisiologis  NaCl  0,9  % (Otsuka),  standar  McFarland  no.  0,5, etanol  96%,  aquades  steril  (Otsuka), siprofloksasin.

## Prosedur Kerja
1. Determinasi tanaman
Identifikasi  Tanaman  dilakukan  di laboratorium Taksonomi Tumbuhan Program Studi Biologi Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Sam  Ratulangi,  Manado, Dengan nama tanaman Allium sativum L.

## 2. Persiapan Sampel
Umbi  bawang  putih  sebanyak  500 g  dikupas  kulitnya,  dicuci  bersih  dengan air mengalir, ditiriskan kemudian dihancurkan  dengan  cara  dikeprok  dengan pisau,  selanjutnya  umbi  bawang  putih diblender hingga halus.

## 3. Ekstraksi
Pembuatan  ekstrak  etanol  umbi bawang  putih  dilakukan  dengan  metode maserasi. Proses maserasi dilakukan dengan menggunakan perbandingan 1 : 4. Ekstrak  kemudian  disaring  dengan  kertas saring  (filtrat  1)  dan  sisanya  diremaserasi lalu disaring (filtrat  2).  Filtrat  1 dan filtrat 2 dikumpulkan kemudian diuapkan dengan menggunakan rotary  evaporator pada kecepatan  50  rpm  dan  suhu  40 C hingga diperoleh  ektrak  kental  umbi  bawang putih.

## 4. Sterilisasi Alat
Alat-alat gelas yang akan digunakan  dicuci  terlebih  dahulu  hingga bersih.  Kemudian  dibungkus  dengan aluminium foil. Setelah itu  dimasukkan ke dalam  autoklaf  untuk  sterilisasi  dengan suhu 121 C selama 15 menit.

## 5. Pembuatan Suspensi Bakteri
Bakteri  diambil  dengan  jarum Ose dan disuspensikan dengan cara dimasukkan  ke  dalam  tabung  berisi  5  ml larutan  NaCl  fisiologis  steril  0,9%. Suspensi yang terbentuk disetarakan dengan  standard  McFarland  No.  0,5  yaitu
CFU/ml.

## 6. Perlakuan Hewan Uji
Hewan  uji  yaitu  mencit  jantan galur  Balb/c  ( Mus  musculus) berumur  2-3 bulan  dikelompokkan  dalam  6  kelompok, masing-masing  kelompok  terdiri  dari  3 mencit  dan  diaklimatisasikan  selama  14 hari untuk penyesuaian dengan lingkungan.
Kemudian  kelompok  2,3,4,5,dan  6 diinfeksikan  dengan  0,5  ml  suspensi bakteri  isolat  sputum  penderita  bronkitis ( K. pneumoniae) secara intraperitoneal dan kelompok  1  tidak  diinfeksi.  24  jam kemudian, masing-masing kelompok menerima perlakuan berbeda. Kelompok 1 (kontrol  normal)  dan  kelompok  2  (kontrol negatif)  mendapatkan  0,5  ml  aquades, kelompok  3  (kontrol  positif)  mendapatkan pengobatan dengan antibiotik dengan dosis yang sudah ditentukan, dan kelompok 4, 5, dan  kelompok  6  (kelompok  perlakuan) mendapatkan  ekstrak  etanol  umbi  bawang putih dengan dosis berturut-turut :
0,01456 g umbi bawang putih segar / 20 g BB mencit,  0,02912  g  umbi bawang putih segar  /  20  g  BB  mencit,  dan    0,05824  g umbi bawang putih segar / 20 g BB mencit dalam bentuk ekstrak kental.
Pemberian  dilakukan  secara  oral  1 kali  sehari  sebanyak  0,5  ml  selama  3  hari berturut-turut.  Pada  hari  ke-4  dilakukan pengambilan  darah  mencit  dengan  cara dekapitasi  (dipotong  ujung  ekornya)  . Selanjutnya  diadakan  perhitungan  bakteri dengan  metode plate  count .  Selanjutnya koloni yang terbentuk dihitung dengan alat coloni counter.
7. Analisis Data
Data dianalisis dengan uji One Way ANOVA menggunakan  SPSS  versi  22.0. Bila P-value kurang  dari  0,05  artinya pemberian  ekstrak  etanol  umbi  bawang putih dengan berbagai dosis mempengaruhi penghambatan bakteri isolat  sputum  penderita  bronkitis  dengan cara in vivo secara signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  diperoleh  dengan perhitungan  koloni  yang  terbentuk  pada masing-masing  cawan  petri.  Adapun  data hasil perhitungan koloni dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Tabel 1. Hasil Perhitungan koloni dengan coloni counter (CFU/ml).
Keterangan  :  K1  :  kontrol  normal,  K2  :  kontrol  negatif,  K3  :  kontrol  positif,  K4  :  EEUBP dengan  dosis  0,01456  g  umbi  bawang  putih  segar  /  20  g  BB,  K5  :  EEUBP  dengan  dosis 0,02912 g umbi bawang putih segar /  20 g  BB,  K6 :  EEUBP dengan dosis 0,05824  g umbi bawang putih segar / 20 g BB.
Tabel 2. Hasil Logaritma Perhitungan Koloni
Tabel 3. Persentase Aktivitas Antibakteri (%)
Persentase aktivitas antibakteri diperoleh dengan menggunakan rumus perhitungan:
(Kumala et al , 2009)
Dari hasil pengamatan yang diperoleh,  pada  kelompok  kontrol  normal tidak  terdapat  pertumbuhan  jumlah  koloni bakteri Klebsiella  pneumoniae .  Dalam keadaan normal, darah bersifat steril. Oleh karena  itu  pada  kelompok  kontrol  normal tidak  terdapat  pertumbuhan  koloni  bakteri
karena  kelompok  ini  tidak  diberi  infeksi bakteri.
Pada  kelompok  kontrol  negatif, terjadi  pertumbuhan  koloni  bakteri  yang paling  banyak.  Hal  ini  disebabkan  karena setelah 24 jam terinfeksi dan selama 3 hari berturut-turut kelompok ini hanya diberikan  aquades  steril.  Aquades  steril
tidak memiliki potensi sebagai antibakteri, sehingga  bakteri  yang  disuntikkan  pada mencit terus bertumbuh.
Kelompok-kelompok perlakuan yang  diberikan  ekstrak  etanol  umbi bawang  putih  dengan  berbagai  dosis menunjukan  adanya  penurunan  jumlah koloni bakteri dibandingkan dengan jumlah  koloni  bakteri  pada  kelompok kontrol  negatif.  Pada  kelompok  perlakuan 1  dengan  dosis  lazim  (0,01456  g  umbi bawang  putih  segar  /  20  g  BB  mencit dalam  bentuk  ekstrak  kental)  terjadi penurunan  jumlah  koloni  bakteri  dengan persentase  sebesar  3,55%.  Kelompok perlakuan 2  yang diberikan dosis  2x dosis lazim (0,02912 g umbi bawang putih segar /  20  g  BB  mencit  dalam  bentuk  ekstrak kental)  terjadi  penurunan  jumlah  koloni bakteri sebesar 15,34%. Kelompok perlakuan 3  yang diberikan dosis  4x dosis lazim (0,05824 g umbi bawang putih segar /  20  g  BB  mencit  dalam  bentuk  ekstrak kental)    menunjukkan  penurunan  jumlah koloni bakteri sebesar 22,25%.
Aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak etanol  umbi  bawang  putih  diduga  karena adanya kandungan senyawa allicin . Allicin yang  diberikan  secara  per  oral  akan diabsorpsi  di  usus  halus  yang  kemudian didistribusikan  melalui  darah.  Dalam proses  distribusi, allicin yang  tidak berikatan dengan protein akan memberikan efek farmakologis yaitu sebagai antibakteri (Ronals and Victor, 2013).
Mekanisme  antibakteri  dari allicin adalah  dengan  cara  menghalangi  produksi RNA  pada  bakteri.  Ketika  RNA  tidak dapat diproduksi, maka sintesis DNA akan ikut terhalangi. Allicin juga mempengaruhi sintesis  lipid  pada  bakteri,  sehingga lapisan  fosfolipid  pada  dinding  sel  pada bakteri  gram  positif  maupun  gram  negatif tidak  dapat  terbentuk  dengan  benar.  Hal inilah yang kemudian menyebabkan bakteri  tidak  dapat  membelah  diri  dan pertumbuhan bakteri pun terhambat (Andualem, 2013).
Semakin tinggi dosis ekstrak etanol umbi  bawang  putih  yang  diberikan  maka
persentase aktivitas antibakterinya semakin  besar.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Pelczar  dan  Chan  (1988)  yang menyatakan bahwa semakin tinggi konsentrasi  suatu  zat  antibiotik  maka semakin  cepat  mikroorganisme  terbunuh dan terhambat pertumbuhannya.
Pada  pengujian  dengan  metode ANOVA  One  Way didapatkan  nilai signifikansi  sebesar  0,000  (Sig.<  0,05) yang  menunjukkan  terdapat  perbedaan yang bermakna pada jumlah koloni kontrol negatif  dan  jumlah  koloni  kelompok perlakuan  dengan  ekstrak  etanol  umbi bawang putih dan kontrol positif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol umbi bawang putih ( Allium sativum L. ) dengan  dosis  0,01456  g  umbi bawang  putih  segar  /  20  g  BB  mencit; 0,02912 g umbi bawang putih segar / 20 g BB mencit;  0,05824 g umbi bawang putih segar / 20 g BB mencit, memiliki aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Klebsiella pneumoniae isolat sputum penderita bronkitis  secara in  vivo dengan  persentase berturut-turut 3,55%, 15,34%, dan 22,25%.  Semakin  tinggi  dosis  yang diberikan  maka  semakin  besar  persentasi aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol umbi bawang putih ( Allium sativum L . ).

## DAFTAR PUSTAKA
Andualem,
B. 2013. Synergistic
Antimicrobial  Effect  of  Tenegn Honey  ( Trigona  iridipennis )  and Garlic Against Standard and Clinical
Pathogenic Bacterial Isolates. International Journal of Microbiological  Research , 4  (4) :
16-22
Brooks  G.F.,  Butel  J.S.,  dan  Morse  S.A. 2005. Mikrobiologi kedokteran .
Terjemahan  Mudihardi  E.,  dan Kuntaman,Wasito,  E.B.  Salemba Medika, Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 2005. Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Infeksi Saluran Pernapasan. Depkes RI, Jakarta. Ikawati, Z. 2011. Penyakit Sistem Pernafasan dan Tatalaksana Terapinya. Bursa Ilmu, Yogyakarta.
Kumala,  S.,  Yuliani,  dan  D.  Tulus.  2009. Pengaruh  Pemberian  Rebusan  Kayu Secang  ( Caesalpinia  sappan L.) terhadap  mencit  yang  diinfeksi bakteri Escherichia  coli . Jurnal Farmasi Indonesia , 4 (4) : 188-198.
Lingga,  L.  2012. Terapi  Bawang  Putih untuk  Kesehatan. PT  Elex  Media Komputindo, Jakarta.
Pelczar,  J.M.,  dan  Chan,  E.  1988. Dasar-
Dasar Mikrobiologi. Universitas
Indonesia, Jakarta.
Ronals,  R.W.,  and  Victor,  R.  2013.
Bioactive food as dietary interventions for
the aging
population .  Academic  Press,  United
States of America.
Setiabudy,  R.,  dan  Gan  H.S.V.  1995.
Antimikroba  : Farmakologi  dan Terapi. Edisi  ke-4.  Gaya  Baru,
Jakarta