## PENDAHULUAN
Bakteri  patogen  menyebabkan  penyakit  bahkan  dapat mengakibatkan  kematian  pada  inang  yang  terinfeksi. Staphylococcus aureus dan Eschericia coli termasuk bakteri patogen. Staphylococcus  aureus merupakan  penyebab utama infeksi kulit dan jaringan lunak, sedangkan strain patogenik Eschericia  coli dapat  menyebabkan  beberapa infeksi  antara  lain  infeksi  saluran  kemih,  meningitis neonatal, dan infeksi saluran pencernaan (Wilson, 2004; Todar, 2008).
Penanganan  penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri patogen  salah  satunya  dengan  mengendalikan pertumbuhan bakteri tersebut. Pengobatan menggunakan  suatu  senyawa  kimia  bersifat  antibakteri merupakan salah satu upaya pengendalian pertumbuhan bakteri tersebut (Madigan & Martinko, 2006). Antibiotik yang  selama  ini  digunakan  antara  lain  penisilin  dan streptomisin. (Projan & Shlaes, 2004).
Penggunaan antibiotik sebagai pengendali pertumbuhan bakteri memiliki dampak negatif yaitu resistensi. Kondisi
Uji Antibakteri Ekstrak Etanol Akar Tawas Ut ( Ampelocissus Rubiginosa Lauterb ) pada Eschericia Coli dan Staphylococcus aureus Secara In Vitro
In Vitro Antibacterial Test of Ethanol Extract of Ut Tawas Root (Ampelocissus Rubiginosa Lauterb) on Eschericia Coli and Staphylococcus aureus
Eka Khaharap 1*
Magister Farmasi, Universitas
Sanata Dharma, Yogyakarta,
Daerah Istimewa Yogyakarta, Indonesia *email: ekakhaharap@gmail.com

## Abstrak
Penggunaan  antibiotik  sebagai  pengendali  pertumbuhan  bakteri  memiliki  dampak negatif yaitu resistensi. Dimulailah untuk mencari bahan alternatif dari alam antara lain Saponin, flavonoid, katekin dan tanin diketahui terkandung pada akar tawas ut ( Ampelocissus rubiginosa Lauterb). Tanaman ini telah dimanfaatkan secara empiris oleh masyarakat Kalimantan Tengah yakni sebagai obat luka dan diare Khasiat akar tawas ut secara ilmiah belum dibuktikan.Khasiat antibakteri tanaman tersebut berpotensi sebagai sumber senyawa antibakteri pertumbuhan E. coli dan S. aureus secara in vitro. Metode penelitian yang dgunakan menggunakan metode Pengujian Antibakteri Kirby Bauer . Ekstrak etanol akar tawas ut memiliki daya antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus , dengan perlakuan konsentrasi ekstrak 250 mg∙ml -1 memberikan nilai rata-rata zona bening tertinggi sebesar 12,33 mm pada E. coli maupun S. aureus , serta mampu memberikan zona bening dengan konsentrasi terendah 12,5 mg∙ml -1 sebesar 11,33 mm pada E. coli dan 11,67 mm pada S. aureus. Konsentrasi hambat minimum (MIC) ekstrak etanol akar tawas ut pada E. coli maupun S. aureus yaitu sebesar 15,6 mg∙ml - 1 .

## Kata Kunci:
Uji Antibakteri
Akar Tawas Ut Eschericia Coli Staphylococcus Aureus
In Vitro
Keywords : Antibacterial Test
Ut Tawas Root Eschericia Coli Staphylococcus Aureus In Vitro

## Abstract
The used of antibiotics to control bacterial growth has a negative impact such as antibiotics resistance.  Began  to  look  for  alternative  materials  from  nature,  including  saponins, flavonoids, catechins and tannins which are known to be contained in the roots of Tawas Ut (Ampelocissus rubiginosa Lauterb). This plant has been used empirically by the people of Central Kalimantan, namely as a medicine for wounds and diarrhea. The efficacy of alum root has not been scientifically proven. The antibacterial properties of this plant have the potential as a source of antibacterial compounds for the growth of E. coli and S. aureus in vitro. The research method used was the Kirby Bauer Antibacterial Testing method. The ethanol extract of alum ut root has antibacterial activity against E. coli and S. aureus, with an extract concentration of 250 mg∙ml-1 giving the highest average clear zone value of 12.33  mm  in  E.  coli  and  S.  aureus,  and  was  able  to  give  a  clear  zone  with  the  lowest concentration of 12.5 mg∙ml-1 of 11.33 mm in E. coli and 11.67 mm in S. aureus. The minimum inhibitory concentration (MIC) of ut alum root ethanol extract on E. coli and S. aureus was 15.6 mg∙ml-1.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i1.5197.
resistensi bakteri tidak sensitif lagi terhadap antibiotik. Hal ini ditandai antibiotik tidak lagi dapat menghambat pertumbuhan  bakteri  (Martin,  2008).  Penggunaan antibiotik  secara  tepat  diperlukan  untuk  menghindari resistensi. Tindak lanjut jangka panjang dapat dilakukan dengan  penelitian  untuk  mendapatkan  obat-obat antibakteri  baru  selain  antibiotik  yang  lebih  efektif (Madigan & Martinko, 2006).
Usaha  untuk  mendapatkan  obat  antibakteri  baru salah satunya  dengan  pendekatan  mikrobiologi  melalui metode  uji  kerentanan  bakteri  terhadap  suatu  bahan. Bahan uji dapat berasal dari tanaman yang diekstrak dan kemudian  diuji  terhadap  bakteri  patogen.  Bahan  dari Phyllanthus amarus yakni ekstrak etanol daun, dilaporkan memiliki daya antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli dengan  nilai  MIC  masing-masing  10  mg∙ml -1 dan  50 mg∙ml -1 (Adegoke et  al .,  2010).  Ekstrak  etanol  daun Phyllanthus  amarus teruji  positif  mengandung  senyawa saponin  dan  tanin.  Pada  pengujian  antibakteri  ekstrak metanol kulit batang Croton zambesicus oleh Reuben et al ., (2008) didapatkan bahwa nilai MIC untuk S. aureus dan E. coli sebesar 1,560 mg∙ml -1 . Ekstrak metanol kulit batang Croton  zambesicus positif  mengandung  senyawa saponin dan flavonoid.
Saponin,  flavonoid,  katekin  dan  tanin  diketahui terkandung pada akar tawas ut ( Ampelocissus rubiginosa Lauterb.)  (Latifah,  2011).  Tanaman  ini  telah dimanfaatkan  secara  empiris  oleh  masyarakat Kalimantan  Tengah  yakni  sebagai  obat  luka  dan  diare. Paparan  bakteri  dapat  terjadi  pada  luka  maupun  diare sehingga dimungkinkan tawas ut berkhasiat menghambat pertumbuhan bakteri.
Khasiat  akar  tawas  ut  secara  ilmiah  belum  dibuktikan, khususnya  khasiat  antibakteri.  Tanaman  tersebut berpotensi  sebagai  sumber  senyawa  antibakteri  dan perlu  dikaji  secara  ilmiah  sehingga  penggunaannya sebagai  obat  dapat  dikembangkan.  Gambaran  khasiat antibakteri ekstrak etanol akar tawas ut pertumbuhan E. coli dan S. aureus secara in vitro dibahas secara khusus
sebagai  inovasi  pada  tulisan  ini  guna  mendukung  data- data ilmiah tanaman tersebut.
Berdasarkan  penjabaran  tersebut  penulis  menuangkan kedalam  2  (dua)  topik  kajian  yaitu  sifat  antibakteri ekstrak  etanol  akar  tawas  ut  ( Ampelocissus  rubiginosa Lauterb) memiliki terhadap E. coli dan S. aureus secara in  vitro  dan  konsentrasi  hambat  minimum  (MIC: minimum  inhibitory  concentration )  ekstrak  etanol  akar tawas ut yang efektif menghambat pertumbuhan E. coli dan S. aureus secara in vitro.

## METODOLOGI
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah batang  pengaduk,  bunsen,  petri,  corong  kaca,  gelas arloji, gelas beker, gelas ukur, kaca objek, tabung reaksi, rak  tabung, spreader ,  ose, magnetic  stirer ,  penggaris, penjepit  kayu,  jarum Ose ,  pinset,  pisau,  pipet  mikro Eppendorf®  1000  µl  &  200  µl,  pipet  volumetrik, hemasitometer, bejana maserasi, blender , neraca analitik Ohaus®, hot plate stirer Cimarex®, otoklaf All American 25X®, oven Thermoline®, inkubator Labline®, kamera digital, laminary air flow ESCO® horizontal , mikroskop Olympus®, refrigerator Lab-Line, vacuum rotary evapavorator , vortex mixer VM300® dan waterbath .
Bahan uji yang digunakan yakni akar tanaman tawas ut yang diperoleh dari Palangka Raya, Kalimantan Tengah. Bagian  tanaman  yang  diambil  yakni  akar  tanaman sebanyak  0,5  kg.  Bahan  lainnya  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah biakan bakteri E. coli dan S. aureus , media  Nutrien  Agar  (NA)  Merck®,  media  Nutrien Broth  (NB)  Merck®,  media  Mueller  Hinton  Agar (MHA)  Oxoin®, carboxymethyl  cellulose (CMC) Brataco®,  alkohol  70%,  cakram  kertas  antibiotik ( oxacillin 1 μ g,  ampisilin  10 μ g,  siprofloksasin  5 μ g; kloramfenikol 30 μ g), cakram kertas kosong diameter 6 mm,  etanol  96%,  detergen,  alumunium  foil,  plastik pembungkus  ( seal ),  kertas  saring,  kertas  label,  kertas pembungkus dan akuades.

## Prosedur Kerja

## Metode ekstraksi
Akar  tawas  ut  disortasi,  kemudian  dicuci  bersih. Akar yang telah bersih dipotong menjadi haksel dan dikering- anginkan setiap pagi sebelum pukul 10.00 WITA sampai kering. Haksel kering disortasi. Haksel akar tawas ut ini kemudian  diserbukkan  hingga  didapatkan  serbuk  akar tawas ut yang akan diekstraksi.
Serbuk simplisia akar tawas ut dimasukkan dalam bejana maserasi,  kemudian  ditambahkan  pelarut  etanol  96% hingga  sampel  terendam  setinggi                2  cm.  Larutan ekstraksi didiamkan selama 3 hari sambil sesekali diaduk. Cairan penyari diganti setiap 24 jam. Penggantian pelarut dengan  menyaring  campuran  sehingga  didapatkan ekstrak etanol cair. Ekstrak etanol cair yang terkumpul diuapkan  dengan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu 50 o C . Ekstrak hasil penguapan tersebut disebut dengan ekstrak kental yang kemudian diuapkan di atas waterbath sampai diperoleh ekstrak kering disebut dengan ekstrak etanol.
Pembuatan cakram kertas uji Ekstrak etanol akar tawas ut sebanyak 2,5 g dilarutkan dengan  larutan  CMC  0,1%  hingga  10  mL  sehingga diperoleh ekstrak dengan konsentrasi          250 mg∙ml -
1 .  Selanjutnya  dilakukan  pengenceran  bertingkat sehingga didapatkan larutan konsentrasi 250, 200, 150, 100,  50,  25  dan  12,5  (mg∙ml -1 )  yang  masingmasing diteteskan  dengan  pipet  mikro  sebanyak  60 μ L  ke cakram kertas kosong berdiameter 6 mm dalam tabung reaksi  steril.  Cakram  kertas  berisi  zat  uji  didiamkan selama 24 jam sebelum digunakan.
1.3 Pengujian antibakteri metode Kirby Bauer Kultur bakteri  disuspensikan  dengan  aquades  steril hingga  keenceran  menyamai  standar  Mc  Farland  0,5 (suspensi mengandung 1 hingga 2 × 10 8 CFU tiap mL).
Suspensi  digoreskan  pada  media  MHA  dalam  cawan petri  hingga  rata.  Cakram  kertas  uji  diletakkan  pada media dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 16-18 jam. Interpretasi hasil pengujian yakni ada atau tidaknya zona bening  disekitar  cakram  kertas.  Diameter  zona  yang
terjadi  diukur  dalam  skala  milimeter  menggunakan penggaris  ( Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute , 2006). Hasil pengukuran rerata zona bening perlakuan ekstrak dan kontrol dihitung rasio penghambatan.
1.4 Pengujian antibakteri metode macro broth dilution Larutan ekstrak konsentrasi 125; 62,5; 31,25 dan 15,6 (mg∙ml -1 ) dibuat secara pengenceran bertingkat dengan pelarut  CMC  0,1%.  Biakan  bakteri  dari  agar  miring disuspensikan  dengan  aquades  steril  hingga  keenceran menyamai standar Mc Farland 0,5 (suspensi mengandung 1 hingga 2 × 10 8 CFU tiap mL). Larutan ekstrak masing- masing  sebanyak  0,5  mL  dicampurkan  dengan  0,4  mL media NB dan 0,1 mL suspensi bakteri. Kontrol positif yakni media NB. Kontrol negatif dari campuran 0,1 mL suspensi bakteri dan 0,9 mL media NB. Kontrol ekstrak yakni  larutan  ekstrak  masing-masing  konsentrasi sebanyak  0,5  mL  ditambahkan  0,5  mL  media  NB. Inkubasi dilakukan selama 18 jam pada suhu 37ºC (Dwi, 2007).
Pengamatan  dilakukan  melalui  perhitungan  jumlah bakteri  dengan  alat  hemasitometer  (lampiran  6). Parameter perhitungan dengan metode TPC ( total plate count ) yakni sebanyak 0,1 mL tiap larutan diinokulasi dan diinkubasi dengan media MHA.
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  percobaan dengan metode Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan beberapa  faktor  yaitu  terdiri  atas                      7  variabel perlakuan konsentrasi ekstrak 250, 200, 150, 100, 50, 25  dan  12,5  (mg∙ml-1).  Kontrol  negatif  menggunakan cakram kertas yang ditetesi 60 µL larutan CMC 0,1%. Kontrol positif menggunakan cakram kertas antibiotik. Sifat  antibakteri  kontrol  positif  dijabarkan susceptible , intermediate , atau resistant sesuai dengan jenis bakteri uji menurut standar Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI)  (2011).  Tiap  perlakuan  dilakukan  pengulangan sebanyak  3  kali  dan  masing-masing  ulangan  dilakukan secara duplo.
Tabel 1. Perlakuan kontrol positif antibiotik E. coli S. aureus Siprofloksasin 5 μ g
Siprofloksasin 5 μ g Ampisilin 10 μ g Oxacillin 1 μ g
Kloramfenikol 30 μ g Kloramfenikol 30 μ g
Analisis data menggunakan SPSS Statistic 17. Data yang diperoleh  dari  perlakuan  7  konsentrasi  ekstrak  dan kontrol pada masing-masing bakteri diuji kehomogenan ragam dengan uji ragam statistik Levene. Data homogen dianalisis one way anova dengan taraf kepercayaan 95%
( α =  5%).  Data  tidak  homogen  diuji  secara  non parametrik  metode  Kruskal-Wallis.  Analisis  yang memberikan  perbedaan  secara  nyata  antara  perlakuan dilakukan  uji  lanjutan  untuk  menyatakan  kelompok perlakuan menggunakan uji jarak berganda Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil ekstraksi
Ekstrak  kering  yang  didapatkan  dari  metode  ekstraksi sebanyak  147  gram.  Rendemen  ekstrak  etanol  akar tawas ut yang didapatkan sebesar 25,88%. 1.2 Hasil pengujian antibakteri metode Kirby Bauer Hasil pengujian antibakteri ekstrak etanol akar tawas ut terhadap  bakteri E.coli dan S.  aureus (lampiran  2) memperlihatkan  sifat  antibakteri  yaitu  adanya  zona bening  yang  terbentuk  pada  uji  masing-masing  bakteri (gambar 1).
Gambar  1. Zona  bening  yang  terbentuk  pada E.  coli yang diberikan cakram kertas berisi 60 µL ekstrak tawas ut 12,5 mg∙ml -1
Data  zona  bening  bervariasi  untuk  masing-masing konsentrasi (gambar 2). Rerata zona bening untuk E.coli menunjukkan diameter terbesar pada konsentrasi 250 mg∙ml -1 yaitu  12,33  mm;  sedangkan  rerata  diameter zona  bening  terkecil  pada  konsentrasi  ekstrak  150 mg∙ml -1 yaitu  10,33  mm.  Rerata  zona  bening  untuk S. aureus menunjukkan  diameter  terbesar  pada konsentrasi  250  mg∙ml -1 yaitu  12,33  mm;  sedangkan rerata diameter zona bening terkecil pada konsentrasi ekstrak 25 mg∙ml -1 yaitu 10,33 mm.
Gambar  2 Grafik  zona  bening  yang  terbentuk terhadap  perlakuan  ekstrak  dan  kontrol dengan bakteri uji E. coli dan S. aureus . Bar pada masingmasing kolom menunjukkan standar deviasi (*: kontrol  ampisilin/ oxacillin (amp/ox) , siprofloksasin (cip) ,
kloramfenikol (C)).
Perhitungan  rasio  penghambatan  bervariasi  untuk masing-masing  perlakuan  ekstrak  (gambar  9).  Rasio penghambatan pada E. coli menunjukkan nilai terbesar pada konsentrasi 250 mg∙ml -1 yaitu 1,06; sedangkan nilai terkecil  rasio  penghambatan  pada  konsentrasi  150 mg∙ml -1 yaitu 0,72. Rasio penghambatan pada S. aureus menunjukkan nilai terbesar pada konsentrasi        250 mg∙ml -1 yaitu  1,06;  sedangkan  nilai  terkecil  rasio penghambatan pada konsentrasi 25 mg∙ml -1 yaitu 0,72.
Z ona bening 1 cm Cakram kertas
Gambar  3. Grafik  rasio  penghambatan  terhadap perlakuan  ekstrak  dan  kontrol  dengan bakteri  uji E.  coli dan S.  aureus (*: kontrol  ampisilin/ oxacillin (amp/ox) , siprofloksasin (cip) , kloramfenikol (C))
Berdasarkan  hasil  pengukuran  zona  bening  pengujian kontrol  (tabel  2),  diketahui  bahwa S.  aureus telah resisten  (R: resistant )  terhadap oxacillin yaitu  tidak memberikan  zona  bening.  Kloramfenikol  dan siprofloksasin  memberikan  sifat  rentan  (S: susceptible ) pada S. aureus . Hasil yang didapatkan yaitu E. coli pada kerentanan  sedang  (I: intermediate )  terhadap  ampisilin serta rentan (S: susceptible ) terhadap kloramfenikol dan siprofloksasin.
Tabel 2. Sifat Kerentanan Antibiotik Kontrol terhadap Standar CLSI
Diameter zona Diameter rata-rata Sifat  bening  standar  CLSI zona bening kerentanan Antibiotik (mm) (mm) kontrol antibiotik Oxacillin 1µg ≥ 13   11-12   ≤ 10 R Kloramfenikol 30µg ≥ 18   13-17   ≤ 12   S/S
Siprofloksasin 5µg ≥ 21   16-20   ≤ 15   S/S
Keterangan:  S: susceptible (rentan);  I: intermediate (sedang); R: resistant (resisten) Data zona bening E. coli diuji kehomogenan ragam statistik Levene dengan hasil nilai  signifikan  0,009.  Nilai  0,009<0,05  menyatakan ragam data tidak homogen. Analisis dilanjutkan dengan analisis  non  parametrik  KruskalWallis.  Nilai  signifikan 0,004<0,01  menyatakan  data  homogen  dan  ada perbedaan  nyata  antara  kelompok  perlakuan  ekstrak dan  kontrol.  Uji  dilanjutkan  dengan  uji  jarak  berganda Duncan dan diketahui perlakuan dapat dikelompokkan menjadi  empat  kelompok  perlakuan,  terdiri  atas  dua kelompok perlakuan ekstrak dan dua kelompok kontrol positif. Perlakuan ekstrak 12,5, 25, 50, 100, 200 dan 250 mg∙ml -1 dikelompokkan  pada  kelompok  perlakuan ekstrak dengan nilai rata-rata zona bening tertinggi Pengujian  kehomogenan  ragam  statistik  Levene  pada data  zona  bening S.  aureus memberikan  hasil  nilai signifikan  0,059.  Nilai  0,059>0,05  menyatakan  data ragam  data  homogen.  Analisis  dilanjutkan  dengan one way  anova dan  didapatkan  nilai  signifikan  0,000.  Nilai signifikan 0,000<0,05 sehingga diketahui ada perbedaan nyata antara kelompok perlakuan ekstrak dan kontrol. Pada  uji  jarak  berganda  Duncan  diketahui  perlakuan dapat dikelompokkan menjadi lima kelompok yaitu tiga kelompok perlakuan ekstrak dan dua kelompok kontrol positif.  Perlakuan  ekstrak  12,5,  50,  150,  200  dan  250 mg∙ml -1 dikelompokkan  pada  kelompok  perlakuan ekstrak dengan nilai rata-rata zona bening tertinggi .
Hasil pengujian antibakteri metode macro broth dilution Perhitungan  jumlah  bakteri  dengan  hemositometer (lampiran  5)  diketahui  pada  perlakuan  ekstrak konsentrasi  15,6  dan  31,25  mg∙ml -1 telah  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  baik  pada E.  coli maupun S.  aureus .  Jumlah  sel E.  coli dan S.  aureus menurun dengan bertambahnya konsentrasi ekstrak.
S I R E. coli S. aureus - 0 24 22 25 23
Gambar  5 Kurva  logaritmik  jumlah  sel  bakteri (perhitungan  hemositometer)  dengan perlakuan ekstrak
Perhitungan  jumlah  bakteri  berdasarkan  jumlah  koloni dengan  metode  TPC  diketahui  ada  penghambatan pertumbuhan  bakteri.  Pada E.  coli terjadi  penurunan jumlah  sel  secara  nyata,  sedangkan  pada S.  Aureus penurunan jumlah sel fluktuatif.
Gambar  6 .  Kurva  logaritmik  jumlah  sel  bakteri (perhitungan  TPC)  dengan  perlakuan ekstrak
Simplisia akar tawas ut ( Ampelocissus rubiginosa Lauterb.) yang  digunakan  pada  penelitian  ini  berasal  dari Palangkaraya, Kalimantan Tengah. Bagian tanaman yang digunakan  adalah  akar  tanaman,  seperti  oleh  Latifah (2011)  pada  suatu  penelitian  untuk  meninjau  tanaman tersebut  secara  ilmiah  menurut  bidang  farmakognosi. Simplisia  kemudian  diolah  menjadi  serbuk  yang kemudian diekstraksi menggunakan etanol 96%. Etanol  sebagai  pelarut  semipolar  diharapkan  dapat mengekstrak kandungan senyawa dalam akar tawas ut. Ekstraksi dilakukan secara maserasi, untuk menghindari pemanasan yang dapat merusak senyawa. Jumlah ekstrak yang didapatkan sebanyak 147 gram dengan rendemen
ekstrak sebesar 25,88%. Rendemen ekstrak menunjukkan  jumlah  ekstrak  yang  didapatkan  dari sejumlah  simplisia.  Metode  ekstraksi  Latifah  (2011) memberikan nilai rendemen 26,6825 %.
Ekstrak  yang  digunakan  pada  pengujian  antibakteri berupa  larutan  konsentrasi  ekstrak  sehingga  ekstrak harus dilarutkan. Nilai kelarutan ekstrak dapat diketahui dari perbandingan kadar sari larut etanol dan kadar sari larut air.       Latifah (2011) melaporkan kadar sari larut etanol akar tawas ut yaitu 23,47% sedangkan kadar sari larut  air  sebesar  17,07%.  Nilai  kadar  sari  larut  etanol lebih besar dari kadar sari larut air menyatakan ekstrak etanol  akar  tawas  ut  sukar  larut  dalam  air,  sehingga diperlukan  suatu  agen  pelarut  yang  mampu mensuspensikan ekstrak.
Pelarut  yang  digunakan  yaitu  CMC  0,1%.  Pelarut tersebut memenuhi persyaratan antara lain mampu mensuspensikan ekstrak serta tidak bersifat antibakteri. CMC merupakan salah satu bahan yang  dapat digunakan sehubungan  sifatnya dapat membentuk sistem dispersi koloid, meningkatkan viskositas  sehingga  partikel-partikel  ekstrak  yang tersuspensi akan tertangkap dalam sistem tersebut dan tidak mengendap (Potter & Norman dalam Sumardikan, 2007). Pelarut karboksimetil selulosa (CMC) 0,1% telah digunakan oleh Dewi (2010) sebagai agen pelarut pada ekstrak  etanol  buah  mengkudu.  CMC  diketahui  tidak mempengaruhi hasil uji karena tidak bersifat antibakteri. Uji  kontrol  negatif  CMC  0,1%  dengan  difusi  cakram metode Kirby Bauer memberikan hasil negatif di mana tidak ada zona bening yang terbentuk.
Pelarutan dengan  CMC  diharapkan  dapat memberikan kelarutan  optimal    ekstrak  etanol  akar  tawas  ut,  yang diketahui mengandung senyawa katekol, tanin, saponin dan flavonoid. Senyawa-senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol akar tawas ut ini berpotensi antibakteri. Sifat  kelarutan  akan  mempengaruhi  kemampuan  difusi dan  dilusi  senyawa-senyawa  tersebut.  Sebagaimana
17 , 5 18 5 18 , 19 5 , 19 20 0 1 2 3
4 konsentrasi ekstrak ( mg∙ml - 1 ) E. coli S. aureus 15 , 6 31 , 25 kontrol ( - ) 6 5 , 6 7 7 5 , 8 , 8 5 9 5 , 9 0 5 1 1 E. S. Konsentrasi m - 1 ) kontro - ) , 1 6 2 , 3 5 , 6 12
diketahui  bahwa  kelarutan  dan  difusi  mempengaruhi profil antibakteri senyawa (Madigan & Martinko, 2006) .
Akar  tawas  ut  telah  digunakan  sebagai  obat  luka  dan obat  diare.  Paparan  bakteri  dapat  terjadi  pada  luka maupun  diare  sehingga  akar  tawas  ut  mungkin berkhasiat menghambat pertumbuhan bakteri. Penggunaan  secara  empiris  ini  diperlukan  pembuktian secara  ilmiah  sehingga  digunakan  bakteri E.  coli yang umumnya dapat menyebabkan diare serta S. aureus yang seringkali menginfeksi luka.
Senyawa  yang  memiliki  potensi  antibakteri  pada  akar tawas ut diketahui antara lain katekol, tanin, saponin dan flavonoid.  Keempat  senyawa  tersebut  diketahui  dapat bersifat antibakteri (Cowan, 1999). Tanin dapat bersifat antibakteri dengan membentuk kompleks dengan enzim atau  substrat.  Toksisitas  tanin  juga  dapat  dihubungkan dengan  hubungan  aktivitasnya  terhadap  membran  sel dan  kemampuan  membentuk  kompleks  ion  logam (Akiyama et  al .,  2001;  Tiwari et  al .,  2011).  Mekanisme kerja  saponin  yaitu  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan  mengganggu  proses  terbentuknya  dinding  sel (Wogan  &  Marletta  dalam  Evrizal,  2001).  Saponin memiliki sifat seperti deterjen dan dapat meningkatkan permeabilitas  membran  sel  bakteri  tanpa  merusaknya (Arabski et al ., 2010). Cushnie et al ., (2005) melaporkan flavonoid  dapat  berkhasiat  antibakteri  dengan mekanisme  menghambat  sintesis  asam  nukleat, menghambat  fungsi  membran  sel,  dan  menghambat metabolisme  energi.  Katekol  dapat  berkhasiat  sebagai antibakteri dengan mekanisme terutama pada membran sel  dengan  merusaknya  (Akiyama et  al .,  2001).
Kandungan  senyawa  tersebut  diharapkan  memberikan daya antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus .
Pengujian antibakteri metode difusi cakram Kirby Bauer dipilih  karena  dapat  menggambarkan  sifat  antibakteri senyawa,  yaitu  penghambatan  terhadap  pertumbuhan bakteri  melalui  terbentuknya  zona  bening.  Metode macro  broth  dilution memberikan  data  konsentrasi penghambatan terendah (MIC) pada bakteri. Metode ini merupakan  metode  yang  sering  digunakan  pada
pengujian antibakteri karena memberikan jumlah nyata konsentrasi  terendah  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri (Andrews, 2006).
Sifat antibakteri ekstrak etanol tawas ut teramati dengan adanya zona bening pada hasil uji dengan difusi cakram setelah  masa  inkubasi  optimal.  Zona  bening  dianalisis secara  statistik  untuk  mengetahui  adanya  pengaruh pemberian  ekstrak  etanol  akar  tawas  ut  pada pertumbuhan E. coli dan S. aureus secara in vitro. Hasil perhitungan secara statistik juga memberikan informasi pengaruh konsentrasi terhadap daya antibakteri ekstrak. Daya  antibakteri  yang  dipengaruhi  oleh  sifat  difusi senyawa  tergambar  pada  nilai  rasio  penghambatan. Perhitungan    rasio  penghambatan  adalah  zona  bening dibandingkan  terhadap  diameter  cakram  yang digunakan.  Nilai  terbesar  rasio  penghambatan  hingga 1,06  kali  dari  diameter  cakram  terjadi  pada  perlakuan konsentrasi ekstrak 250 mg∙ml -1 , pada E. coli maupun S. aureus .  Sedangkan  nilai  terkecil  rasio  penghambatan sebesar  0,72  masing-masing  pada  konsentrasi  150 mg∙ml -1 ( E.  coli )  dan  25  mg∙ml -1 ( S.  aureus ).  Rasio penghambatan  yang  besar  mencapai  nilai  2-3  pada kontrol  antibiotik.  Hal  tersebut  disebabkan  oleh senyawa  antibiotik  memiliki  sifat  difusi  yang  tinggi  dan telah  dimodifikasi  dalam  bentuk  garam  sehingga  lebih mudah berdifusi (Hacker et al ., 2009)
Analisis statistik Kruskal-Wallis data zona bening pada E.  coli memberikan  hasil  ada  perbedaan  nyata  antara kelompok perlakuan ekstrak dan kontrol, dengan nilai signifikan 0,009. Nilai signifikan 0,009<0,01 menyatakan ada pengaruh pemberian ekstrak pada pertumbuhan E. coli secara  in  vitro  dibandingkan  terhadap  kontrol positif.  Pada  Uji  lanjutan  Duncan  terdapat  suatu kelompok  perlakuan  ekstrak  yaitu  konsentrasi  12,5, 250, 50, 100, 200 dan 250
(mg∙ml -1 ). Hal ini menyatakan tidak ada perbedaan sifat antibakteri yang bermakna antara perlakuan konsentrasi ekstrak.
Analisis  ANOVA  data  zona  bening  uji  pada S.  aureus memberikan hasil ada perbedaan nyata antara kelompok perlakuan ekstrak dan kontrol, dengan nilai signifikan 0. Nilai  signifikan  0<0,05  menyatakan  ada  pengaruh pemberian ekstrak pada pertumbuhan S. aureus secara in  vitro  dibandingkan  terhadap  kontrol  positif. Pengelompokkan  perlakuan  ekstrak  pada  uji  lanjutan Duncan  yaitu  perlakuan  ekstrak  konsentrasi  12,5,  50, 150, 200 dan 250 (mg∙ml -1 ). Hal ini menyatakan tidak ada perbedaan  daya  antibakteri  yang  bermakna  antara perlakuan konsentrasi ekstrak.
Pengujian  antibakteri  ekstrak  dengan  metode  Kirby Bauer  diketahui  tidak  ada  pengaruh  yang  bermakna antara konsentrasi. Hal ini berlaku pada E. coli maupun S.  aureus ,  dengan  tujuh  perlakuan  konsentrasi  yang berbeda  yaitu  250,  200,  150,  100,  50,  25  dan  12,5 (mg∙ml -1 ).  Faktor  fisis  senyawa  yang  mungkin menyebabkan  hal  ini  adalah  jumlah  senyawa  yang terdapat  pada  ekstrak  etanol.  Selain  saponin,  terdapat katekol,  tanin  dan  flavonoid  yang  juga  dapat  bersifat antibakteri.  Kemampuan  difusi  suatu  senyawa  pada tingkat konsentrasi tertentu berbeda sesuai kelarutannya  sehingga  mungkin  mempengaruhi  daya antibakteri  ekstrak.  Contohnya  kelarutan  flavonoid dipengaruhi  oleh  tingkat  kepolaran  senyawa  flavonoid tersebut  (Kashani,  2012).  Selain  itu  mungkin  terdapat senyawa lainnya yang tidak bersifat antibakteri, namun dapat  mengganggu  difusi  ekstrak  pada  media  agar. Jumlah  senyawa  yang  terekstraksi  cenderung  banyak karena  menggunakan  pelarut  etanol  yang  sifatnya mengekstraksi banyak senyawa (Kristanti et al ., 2008).
Pengujian  standar  antibakteri  dengan  kontrol  positif menggunakan tiga jenis antibiotik untuk masing-masing bakteri uji. Perlakuan ini dimaksudkan memberikan data zona bening yang dihubungkan dengan mekanisme kerja antibakteri. Rentang nilai zona bening yang tidak terlalu jauh memungkinkan mekanisme kerja yang sama antara perlakuan ekstrak dan kontrol.  Berdasarkan data zona bening E. coli maupun S. aureus , perbandingan perlakuan
siprofloksasin  dan  kloramfenikol  terhadap  perlakuan ekstrak  tidak  memungkinkan  kesamaan  mekanisme karena rentang data berbeda jauh. Perbandingan ditinjau dari  perhitungan  statistik  uji  jarak  berganda  Duncan memberikan perbedaan kelompok juga menyatakan ada perbedaan  nyata  antara  kedua  kelompok  perlakuan tersebut.  Hal  tersebut  wajar  terjadi  karena  antibiotik yang  digunakan  sebagai  kontrol  sudah  teruji  daya antibakterinya.
Kloramfenikol  memberikan  daya  antibakteri  dengan menghambat  sintesis  protein  pada  jalur  enzimatik. Siprofloksasin  memberikan  daya  antibakteri  dengan menghambat  fungsi  DNA.  Kloramfenikol  dan siprofloksasin diketahui lebih efektif sehubungan fungsi penghambatannya  yang  lebih  kompleks.  Golongan betalaktam  yaitu  ampisilin  dan oxacillin diketahui menghambat  sintesis  dinding  sel  pada  jalur  enzim transpeptidase  (Lullmann et  al .,  2000).  Banyak  bakteri telah  resisten  terhadap  golongan  betalaktam. Sehubungan  hal  tersebut, Clinical  and  Laboratory Standards  Institute (2011)  memberikan  standar perlakuan  uji  kerentanan E.  coli dengan  generasi aminopenisilin yaitu ampisilin sedangkan pada S. aureus dengan generasi penisilin antistaphylococal yaitu oxacillin . Kedua  bakteri  uji  menunjukkkan  kemampuan  yang berbeda  terhadap  masing-masing  antibiotik. E.  coli rentan  terhadap  antibiotik  golongan  betalaktam sedangkan S.  aureus bersifat  resisten. S.  aureus dapat mengembangkan resistensi dengan menghasilkan enzim laktamase yang  mampu  merusak  struktur  betalaktam oxacillin sehingga  tidak  rentan  terhadap  antibiotik tersebut.  Strain S.  aureus ini  disebut oxacillin - resistant Staphylococcus aureus (ORSA)  dan  umumnya  juga resisten pada hampir semua golongan penisilin (Islam et al., 2008).
Daya  antibakteri  terukur  yaitu  konsentrasi  hambat minimum  (MIC)  sebesar  15,6  mg∙ml -1 pada E.  coli maupun S. aureus . Ekstrak pada konsentrasi 15,6 mg∙ml -
1 telah dapat menghambat pertumbuhan kedua bakteri tersebut  berdasarkan  perhitungan  jumlah  bakteri
dengan hemasitometer dan metode TPC. Jumlah bakteri yang tumbuh pada kontrol positif dibandingkan terhadap jumlah bakteri dengan perlakuan ekstrak. Penghambatan yang  teramati  secara  nyata  yaitu  penurunan  jumlah bakteri  setelah  masa  inkubasi  menggambarkan  daya antibakteri ekstrak.
Nilai konsentrasi hambat minimum ekstrak etanol tawas ut yang terukur sebesar 15,6 mg∙ml -1 menyatakan dalam konsentrasi  yang  rendah  ekstrak  sudah  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  secara  signifikan. Adegoke et  al .,  (2010)  melaporkan  nilai  MIC  ekstrak etanol daun Phyllanthus amarus pada S. aureus dan E. coli masing-masing  sebesar  10  mg∙ml -1 dan  50  mg∙ml -1 . Kedua  bahan  uji  diketahui  mengandung  jenis  senyawa yang sama yaitu saponin dan tanin.
Perhitungan  metode  TPC  memberikan  jumlah  bakteri hidup setelah masa inkubasi tersebut. Perlakuan ekstrak pada E.  coli diketahui  bahwa  peningkatan  konsentrasi ekstrak  berbanding  lurus  terhadap  sifat  antibakteri. Berdasarkan  hasil  uji,  ekstrak  125  mg∙ml -1 cenderung bersifat bakterisidal terhadap E. coli dengan tidak adanya jumlah  bakteri  ditemukan  ( null ).  Ekstrak  dapat digolongkan  cenderung  bakterostatik  terhadap S. aureus ,  di  mana  kemampuan  antibakteri  kurang dipengaruhi  oleh  peningkatan  konsentrasi  ekstrak (Madigan & Martinko, 2006; Lullmann et al ., 2000). Efek bakterisidal merupakan hasil perusakan dinding sel atau membran.  Sel  pecah  ketika  cairan  berdifusi  pada sitoplasma  bakteri  yang  bersifat  osmolaritas  tinggi, melalui  celah  oleh  antibakteri  pada  membran, menyebabkan sel bakteri mengembang dan pecah. Efek bakterisidal  juga  dapat  terjadi  akibat  penghambatan fungsi DNA (Craig & Stitzel, 2005).
Daya antibakteri dipengaruhi oleh sifat difusi ekstrak ke dalam  sel  bakteri. S.  aureus termasuk  bakteri  Gram positif sedangkan E. coli termasuk bakteri Gram negatif.
Dinding  sel  bakteri  Gram  positif  terdiri  dari  lapisan peptidoglikan  yang  tebal,  sehingga  senyawa  sukar berdifusi  ke  dalam  sel  dan  daya  antibakterinya terhambat.  Dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  memiliki
lapisan peptidoglikan yang lebih tipis. Hal ini membuat bakteri  bakteri  Gram  negatif  yaitu E.  coli lebih  rentan terhadap sifat antibakteri ekstrak (Madigan & Martinko, 2006; Anonim, 2012).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian tersebut dapat disimpulkan bahwa:  Ekstrak  etanol  akar  tawas  ut  memiliki  daya antibakteri  terhadap  E.  coli  dan          S.  aureus,  dengan perlakuan konsentrasi ekstrak 250 mg∙ml-1 memberikan nilai rata-rata zona bening tertinggi sebesar 12,33 mm pada E. coli maupun S. aureus, serta mampu memberikan zona bening dengan konsentrasi terendah 12,5 mg∙ml-1 sebesar 11,33 mm pada E. coli dan 11,67 mm  pada  S.  aureus;  Konsentrasi  hambat  minimum (MIC) ekstrak etanol akar tawas ut pada E. coli maupun S. aureus yaitu sebesar 15,6 mg∙ml-1.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada  Progam  Studi Magister  Farmasi  Universitas  Sanata  Dharma  dan Program  Studi  Farmasi  S1  Universitas  Lambung Mangkurat sebagai almamater penulis yang telah banyak membantu  penulis  dalam  menyelesaikan  penelitian  ini sampai pada tahap publikasi.

## REFERENSI
Anonim. 2012. Comparative Characteristics of Gram- Positive  and  Gram-Negative  Bacteria. http://www.life.umd.edu/classroom/bsci42
4/BSCI223WebSiteFiles/GramPo svsGramNeg.htm Diakses  tanggal  15
Oktober 2011
Arabski, M. A. Lankoff, A. Wegierek-Ciuk & W. Kaca. 2012. Effects of Saponins against Clinical E. coli  Strains  and  Eukaryotic  Cell  Line. Journal of Biomedicine and Biotechnology. Volume 2012, Article ID 286216, 6 pages.
Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute.  2011.
Performance  Standards  for  Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-First
Informational  Supplement.  Clinical  and
Laboratory  Standards  Institute,  940  West Valley  Road,  Suite  1400,  Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA.
Cushnie, T.P.T. &  A.J. Lamb. Antimicrobial Activity of Flavonoids.  2005.  International  Journal  of Antimicrobial Agents. 26 (2005), 343–356.
Dewi, F. K. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah  Mengkudu  (Morinda  citrifolia, Linnaeus)  terhadap  Bakteri  Pembusuk Daging  Segar.  Skripsi.  Universitas  Sebelas Maret, Surakarta.
Latifah, A. 2011. Kajian Farmakognostik Akar Tawas Ut (Ampelocissus rubiginosa L.) asal Kalimantan  Tengah.  Skripsi.  FMIPA Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru (tidak dipublikasikan).
Lullmann,  H.,  A.  Ziegler,  K.  Mohr,  D.  Bieger.  2000. Color  Atlas  of  Pharmacology.  Second Edition. Thieme Stuttgard. USA.
Madappa,  T.  2011.  Escherichia  coli  Infections.
http://emedicine.medscape.com/article/217 485-overview Diakses tanggal 15 Oktober 2011
Tiwari, P., B. Kumar, M. Kaur, G. Kaur & H. Kaur. 2011. Phytochemical Screening and Extraction: A Review. Intern Pharm Sci. 1(1): 98-106.
Venkatakrishna,  I.R.,  G.B.  Kishore,  S.K.  Manohar,  P. Vidya  &  S.  Manjula.  2011.  Detection  of Methicillin  Resistance  in  Staphylococcus aureus:  Comparison  of Disc  diffusion  and MIC  with  mecA  gene  detection  by  PCR. IJPBS. 1(4): 518-521.
Wilson,  R.P.A.  2004.  Management  of  Glycopeptide- Resistant Staphylococcus aureus Infections. Dalam  Gillespie,  H.S.  Management  of Multiple DrugResistant Infections. Humana Press, USA.