## PRODUKSI MASAL INOKULUM AZOTOBACTER

## , AZOSPIRILLUM DAN BAKTERI PELARUT FOSFAT DENGAN MENGGUNAKAN MEDIA ALTERNATIF

## Mass Production of Azotobacter, Azospirillum and Phosphate Solubilizing Bacterial Innoculant Using Alternative Media

## Richard Gunawan, Iswandi Anas*, Fahrizal Hazra
Laboratorium Bioteknologi Tanah, Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian IPB Jl. Meranti Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680

## ABSTRACT
Azotobacter,  Azospirillum  and  phosphate  solubilizing    bacteria  are  the  most  common    microbial  inoculants  used  as biofertilizer.  To  have  good  quality  of  biofertilizer,  the    high  number  of  inoculant  cells  and  suitable  carriers  as  well  as  the method  of  carrier  sterilization  are  among  the  most    important  factors  determined  the  quality  of  biofertilizer.  Related  to  the number of  inoculant cells in carriers, the growing medium used  to cultivate the microbial cells play very important role. For mass production of microbial cells,  the medium should  be able to support fast growth  of microbial cells. The price of medium should be  reasonably  cheap and the materials used in medium should be available easily.  The purpose of this study was   to obtain a cheap growing medium that can support high number of microbial inoculant cells and the components of the  medium should be easyly obtain and the price is not expensive.  The study was conducted at the Department of Soil Science and Land Resources,  Faculty  of  Agriculture,  Bogor  Agricultural  University  (IPB).  The  results  showed  that  the  medium  IPB  RI-1  was able  to  support  the  growth  of    10 10 cfu  ml -1 Azotobacter,  10 8 cfu  ml -1 Azospirillum  and  10 9 cfu  ml -1 Phosphate  Solubilizing Bacteria.  The  number  of    bacterial  cells  in  Nutrient  Broth  medium  was    only    10 8 cfu  ml -1 .  This  means  that  the  IPB  RI-1 medium was able to produce  100-fold population of Azotobacter compared to the growth of this bacterium  in Nutrient Broth and Phosphate Solubilizing Bacteria was  10-fold higher than population in Nutrient Broth medium. The costs of the IPB RI-1 and  IPB RI-2 were  much  cheaper compared to the cost of Nutrient Broth medium. The cost of medium  IPB RI-1 only 3% (IDR  945) and IPB RI-2 about 2% (IDR   690) of the cost of Nutrient Broth medium  (IDR  27,752) per liter medium  in the year of 2010.
Keywords : Alternative media, Azotobacter, Azospirillum, Nutrient Broth, Phosphate Solubilizing Bacteria

## ABSTRAK
Azotobacter, Azospirillum dan bakteri pelarut fosfat adalah mikroba yang paling banyak digunakan  dalam pembuatan pupuk hayati.  Untuk pembuatan pupuk hayati yang berkualitas yang mengandung  mikroba yang tinggi dan  bahan pembawa yang  sesuai,  metoda  sterilisasi  bahan  pembawa  sangat  menentukan  kualitas  pupuk  hayati.    Berkaitan  dengan  kepadatan  sel inokulan  dalam  bahan  pembawa,  medium  yang  digunakan  untuk  perbanyakan  mikroba  memegang  peranan  yang  sangat penting. Untuk produksi inokulan dalam jumlah yang banyak, medium yang digunakan harus dapat menyokong pertumbuhan sel yang cepat dalam jumlah sel mikroba yang tinggi namun harga medium tersebut harus cukup murah agar pupuk hayati yang diproduksi  tidak  mahal.    Peneltian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  yang  mampu  menghasilkan  sel  inokulan  yang  banyak, bahan  medium  yang  digunakan  harus  mudah  diperoleh  dan  harganya  murah.    Penelitian  ini  dilakukan  di  Departemen  Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan Fakultas Pertanian IPB. Hasil penelitian menunjukkan bahwa medium IPB RI-1 (IPB Richard Iswandi-1) mampu menyokong pertumbuhan  sel bakteri yang paling  tinggi yaitu  10 10 cfu ml -1 untuk Azotobacter , 10 8 cfu ml - 1 Azospirillum and 10 9 cfu ml -1 bakteri pelarut fosfat. Media Nutrient Broth  hanya mampu menghasilkan inokulan 10 8 cfu ml -1 . Ini berarti bahwa medium tumbuh IPB RI-1meningkatkan populasi Azotobacter 100-kali lipat dibandingkan dengan populasi Azotobacter yang ditumbuhkan di dalam medium Nutrient Broth dan bakteri pelarut fosfat meningkat jumlah selnya sebanyak 10  kali  lipat  dari  jumlah  sel  yang  terdapat  dalam  media  Nutrient  Broth.    Harga    medium  IPB  RI-1  dan  IPB  RI-2  jauh  lebih murah dibandingkan dengan harga  medium Nutrient Broth. Untuk pembuatan satu   liter medium IPB RI-1  diperlukan dana sebesar Rp 945 (3% harga Nutrient Broth)  dan harga media IPB RI-2  sebesar Rp 690 (2% harga Nutrient Broth) sedangkan harga  medium Nutrienth Broth  adalah Rp 27,752) pada tahun 2010.
Kata Kunci: Azotobacter, Azospirillum , Bakteri Pelarut Fosfat, Media alternatif, Nutrient Broth
* Penulis Korespondensi:   Telp. +6281310750540;  Email. Iswandi742@yahoo.com
Produksi Masal Inokulum Azotobacter, Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat (Gunawan, R., I. Anas, dan F. Hazra)

## PENDAHULUAN
Pupuk  hayati  ( biofertilizer )  adalah  bahan  yang mengandung  mikroba  hidup,  yang  ketika  diaplikasikan pada  benih,  tanah  atau  permukaan  akar  tanaman  dapat memacu  pertumbuhan  tanaman  (Vessey,  2003).  Pupuk hayati dapat digunakan sebagai agen biokontrol yang  aman terhadap  lingkungan.  Mikroba  yang  sering  dilaporkan sebagai  pupuk  hayati  antara  lain  adalah  Rhizobium  yang menambat  N 2 udara  melalui  proses  simbiosis  dengan kacang-kacangan, Azospirillum dan Azotobacter untuk menambat  N 2 udara  tanpa  harus  bersimbiosis  dengan tanaman. Beberapa mikroba yang sering digunakan sebagai pupuk hayati adalah mikroba pelarut fosfat sukar larut baik bakteri  maupun  fungi.  Berdasarkan  penelitian  Hidayati (2009),  aplikasi  pupuk  hayati  yang  mengandung  mikoriza dan  bakteri    penambat  N 2 ,  bakteri  pelarut  P  dan  bakteri pelarut  K  mampu    meningkatkan  pertumbuhan  jagung secara nyata.
Ada  berbagai  cara  dalam  memproduksi  inokulum bakteri,  namun  cara  yang  paling  umum  dipakai  adalah dengan  menumbuhkan  inokulan dalam   media YEM  untuk Rhizobium dan  media Nutrient  Broth  (NB) untuk  mikroba lainnya.  Penggunaan  media Nutrient  Broth efektif  dalam menyokong  pertumbuhan  berbagai  mikroba,  akan  tetapi harganya  sangat  mahal  (Rp  3,400,000  kg -1 )  pada  tahun 2010. Selain itu media ini sulit diperoleh.  Oleh karena itu, dibutuhkan  suatu  media  alternatif  yang  dapat  menyokong pertumbuhan  mikroba  dengan  baik,  harga  murah,  mudah diperoleh  dan  dibuat  dengan  menggunakan  bahan-bahan yang mudah diperoleh.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mencari  media  tumbuh mikroba  yang  mampu  mendukung  pertumbuhan  mikroba yang  cepat  dengan  jumlah  sel  yang  banyak,  mudah didapatkan dan harganya murah.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  di  Departemen  Ilmu  Tanah  dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian IPB.
Bahan yang digunakan untuk membuat media IPB RI- 1  adalah:    pupuk  Urea,  pupuk  SP-36,  limbah  ikan  teri, terasi,  dedak,  MSG,  gula  merah  dan  air  mineral.Inokulan bakteri  yang  digunakan Azotobacter , Azospirillum dan Bakteri  Pelarut  Fosfat,  koleksi  Prof.  Dr  Iswandi  Anas, Laboratoriu Bioteknologi Tanah IPB. Jumlah inokulan yang digunakan  adalah  sebanyak  2%  dari  volume  media.  Bahan yang digunakan membuat  media IPB RI-2 adalah molases dan    air  mineral.  Sebagai  pembanding  digunakan  media Nutrient Broth produksi Difco™.
Hasil  analisis  unsur  N,  P  dan  K    media  IPB  RI-1, media  IPB  RI-2  dan  media Nutrient  Broth disajikan  pada Tabel  1  sedangkan  analisis  unsur  hara  makro  lainnya  dan unsur  mikro  yang  tersedia  di  dalam  masing-masing  mdia tidak dianalisis.
Tabel 1.  Kandungan unsur makro N, P dan K dalam  media  IPB
RI-1, IPB RI-2 dan Nutrient Broth. Media N P K …….......%.............. Media IPB RI-1 0.13 0.07 0.02 Media IPB RI-2 0.05 0.02 0.13 Media Nutrient Broth 0.05 0.03 0.02
Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri  Pelarut  Fosfat yang  diinokulasikan  ke  dalam  media  alternatif,    dibiakkan dengan  menggunakan    mesin  pengocok    selama  4  hari dengan menumbuhkan pada  media Nutrient Broth Difco™ . Dalam  menyiapkan  media  IPB  RI-1,  semua  bahan- bahan  dihaluskan,    dicampur  dalam  satu  wadah,  lalu disaring  dan  kemudian  disterilisasi  dengan  menggunakan autoklaf  pada suhu 121 o C selama 15 menit. Hal yang sama dilakukan  pada  media  IPB  RI-2.  Untuk  media Nutrient Broth , digunakan Nutrient Broth produksi Difco™  dengan melarutkan  10  g  media  dalam  500  ml  air  mineral,    lalu disterilisasi  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121 o C selama 15 menit.
Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri  Pelarut  Fosfat ditumbuhkan pada  media IPB RI-1, IPB RI-2 dan Nutrient Broth dalam  kemasan  air  mineral  15  liter    yang  telah dimodifikasi  sebagai  fermentor  untuk  memperbanyak mikroba dan untuk perlakuan pemberian aerasi, udara yang steril  dialirkan  dengan  menggunakan  pompa  akuarium dengan  laju  alir  2  liter  menit -1 .    Sebanyak  2%  v/v  masing- masing  inokulan  digunakan  untuk  menginukulasi  masing- masing media.
Inokulan Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri Pelarut  Fosfat  diinokulasikan  ke  dalam  12  kemasan  air mineral. Ada 18 kemasan air mineral  yang masing-masing berisi 5 liter media IPB RI-1, dan IPB RI-2. Hal yang sama dilakukan  pada  media Nutrient  Broth yakni  dengan menginokulasikan Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat ke dalam  6 erlenmeyer  yang  masing-masing berisi 500  ml  media Nutrient  Broth . Setelah itu  tiap  media diberikan  perlakuan  yakni  dengan  diberikan  aerasi  dan tidak  diberikan  aerasi.  Jumlah  semua  perlakuan  adalah sebanyak  18  (Tabel 2).
Tabel 2.  Media, mikroba dan perlakuan aerasi pada media
No Perlakuan Kode /Nama Media Nama Bakteri Aerasi 1 IPB RI-1 Azotobacter Ya 2 IPB RI-1 Azotobacter tanpa 3 IPB RI-1 Azospirillum Ya 4 IPB RI-1 Azospirillum tanpa 5 IPB RI-1 Bakteri Pelarut Fosfat Ya 6 IPB RI-1 Bakteri Pelarut Fosfat tanpa 7 IPB RI-2 Azotobacter Ya 8 IPB RI-2 Azotobacter tanpa 9 IPB RI-2 Azospirillum Ya 10 IPB RI-2 Azospirillum tanpa 11 IPB RI-2 Bakteri Pelarut Fosfat Ya 12 IPB RI-2 Bakteri Pelarut Fosfat tanpa 13 Nutrient Broth Azotobacter Ya 14 Nutrient Broth Azotobacter tanpa 15 Nutrient Broth Azospirillum Ya 16 Nutrient Broth Azospirillum tanpa 17 Nutrient Broth Bakteri Pelarut Fosfat Ya 18 Nutrient Broth Bakteri Pelarut Fosfat tanpa
Pengambilan  sampel  kultur  inokulan    dilakukan  pada hari ke-0, 5, 10 dan 15. Sebanyak 10 ml  sampel kultur dari media IPB RI-1, media IPB RI-2 dan media Nutrient Broth , lalu  dipipet  sebanyak    10  ml  ke  dalam  90  ml  larutan fisiologi  untuk  membuat  pengenceran  10 -1 dan  serial pengenceran diteruskan  hingga 10 -8 . Sebanyak 1 ml larutan dari  masing-masing  seri  pengenceran  dipindahkan  ke cawan  petri  yang  kemudian  dituang  ke  media  yang  sudah disiapkan sesuai dengan mikroba yang dihitung populasinya  yaitu  media Nitrogen  Free  Media (NFM) untuk Azotobacter dan  media  Pikovskaya  untuk  Bakteri Pelarut  Fosfat.  Sedangkan  untuk Azospirillum mengguna- kan media Nitrogen Free Bromthymol Blue atau  NFB.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Media IPB RI-1
Pada  media  IPB  RI-1  dilakukan  penghitungan populasi Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri  Pelarut Fosfat  (BPF).  Pertumbuhan    populasi    mikroba  dalam media IPB RI-1disajikan pada Gambar 1.
Populasi Azotobacter tertinggi diperoleh pada hari ke- 10  pada  media  yang  diberikan  aerasi.  Sedangkan  untuk Azospirillum dan  Bakteri  Pelarut  Fosfat  populasi  tertinggi diperoleh  pada  hari  ke-5.  Dari  berbagai  mikroba  yang diisolasi pada media IPB RI-1 dapat terlihat bahwa populasi Azotobacter adalah  yang  tertinggi  diantara  mikroba  yang lain. Azotobacter merupakan  bakteri  non  simbiotik  yang bersifat  aerobik. Azotobacter mampu  menambat  nitrogen dalam jumlah yang cukup tinggi, bervariasi ± 2-15 mg N g -1 sumber karbon yang digunakan (Rao, 1982). Kemungkinan juga  kandungan  hara  makro  lainnya  dan  juga  hara  mikro
juga lebih banyak mengingat bahan dasar medium IPB RI-1 adalah  limbah  ikan  teri,  terasi,  dedak,  MSG,  dan    gula merah.
Ketersediaan  unsur  hara  merupakan  salah  satu  faktor penting  untuk  pertumbuhan  mikroba.  Unsur  hara  yang cukup  akan  diikuti  dengan  pertumbuhan  mikroba  yang baik.  Ketersediaan  unsur  hara    yang    kurang  akan  menjadi penghambat pertumbuhan sel mikroba.
Unsur  hara    yang  terpenting  untuk  mikroba  adalah karbon  dan  nitrogen.  Hampir  50%  bobot  kering  sel  terdiri atas  karbon,  oleh  karena  itu karbon merupakan makronutrien  yang  paling  utama  dibutuhkan.  Prokariot autotrof  menggunakan  CO 2 sebagai  satu-satunya  sumber karbon,  sedangkan  yang  bersifat  heterotrof  menggunakan molekul organik sebagai sumber karbon untuk pertumbuhan (Madigan et al ., 2000). Nitrogen memainkan peran penting dalam metabolisme  seluler  khususnya  dalam  pembelahan  sel, sehingga  apabila  kandungan  nitrogennya  semakin  sedikit maka  kemampuan  bakteri  untuk  membelah  menjadi semakin  lambat.  Akibatnya  pertumbuhan  bakteri  pun menjadi rendah.
Bakteri  dapat  mengasimilasi  senyawa  nitrogen organik maupun  anorganik  untuk  pertumbuhannya. Senyawa  nitrogen  dalam  bentuk  tersebut  akan  direduksi atau  dikatabolisasi  oleh  bakteri  menjadi  ammonia  (White, 1995).

## Media IPB RI-2
Pada  media  IPB  RI-2  dilakukan  penghitungan populasi Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri  Pelarut Fosfat (BPF). Pertumbuhan populasi mikroba dalam media IPB RI-2 disajikan pada Gambar 2.
Gambar 1.  Populasi Azotobacter, Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat pada media IPB RI-1 selama 15 hari pembiakan
Pop u lasi -Log (x) (Cfu m l -1 )
Produksi Masal Inokulum Azotobacter, Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat (Gunawan, R., I. Anas, dan F. Hazra)
Gambar 2.  Populasi Azotobacter, Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat pada media IPB RI-2 selama 15 hari pembiakan
Pola  pertumbuhan  populasi Azotobacter pada  media IPB  RI-2  hampir  sama  dengan  pola  pertumbuhan  populasi Azotobacter pada  media  IPB  RI-1.  Hanya  saja  pada  media IPB  RI-2,  populasi Azotobacter pada  media  yang  tidak diberikan  aerasi  mengalami  penurunan  pada  hari  ke-10, sedangkan  pada  media  IPB  RI-1,  populasi Azotobacter masih stasioner.
Populasi Bakteri Pelarut
Fosfat mengalami peningkatan dari hari ke-0 hingga hari ke-5 selanjutnya dari hari  ke-5  hingga  hari  ke-15  Bakteri  Pelarut  Fosfat mengalami fase stasioner, di mana tidak terjadi peningkatan atau  penurunan  pada  populasi  mikroba.  Fase  stasioner merupakan fase dimana sel-sel mulai tidak tumbuh lagi. Hal ini  disebabkan  oleh  menyusutnya  nutrien  dalam  media, keterbatasan  oksigen  dan  akumulasi  produk  metabolisme yang  toksik  bagi  organisme.  Akumulasi  produk  toksik  ini seringkali  menjadi  masalah  dalam  fermentasi  sel  karena sebagian besar nutrisi tidak diubah menjadi bahan bahan sel tetapi disekresikan  sebagai produk buangan (White, 1995). Laju  pertumbuhan  bakteri  pada  fase  ini  melambat  atau terhenti sedangkan jumlah mikroba yang hidup konstan.
Populasi Azospirillum mengalami  peningkatan  dari hari  ke-0  hingga  hari  ke-5,  selanjutnya  pada  hari  ke-10 populasinya  menurun,  baik  pada  media  yang  tidak diberikan  aerasi  maupun  yang  diberikan  aerasi.  Lalu  pada hari  ke-15  populasi Azospirillum pada  media  yang  tidak diberikan  aerasi  stasioner  sedangkan  pada  media  yang diberikan aerasi mengalami penurunan.
Setiap  mikroba  memerlukan  sumber  karbon  bagi pertumbuhannya  dengan  cara  mengubah  karbon  tersebut menjadi  material  sel  melalui  proses  asimilasi.  Bakteri heterotrof  menggunakan  senyawa  organik  sebagai  sumber karbonnya  (Lim,  1998).  Sumber  karbon  yang  dapat digunakan  oleh  bakteri  ini  diantaranya  terdapat  pada molases.  Molases  mengandung  kadar  gula  sekitar  45-58% yang  tersusun  dari  sukrosa,  glukosa,  fruktosa  dan
komponen lainnya sehingga masih dapat digunakan sebagai sumber  karbon  yang  baik  bagi  pertumbuhan  bakteri (Novita, 2001).
Kemampuan  mikroba  untuk  memperoleh  energi  pada kondisi heterotrof bergantung pada kemampuan metabolismenya  untuk  mengoksidasi  senyawa  karbon (bahan  organik)  sebagai  sumber  energi  utama.  Senyawa karbon  dalam  metabolismenya  berperan  penting  untuk menghasilkan energi melalui oksidasi senyawa tersebut dan menyediakan  unsur  C  untuk  pembentukan  material  sel (Prescott et al ., 2000).
Bakteri  memerlukan  kalsium  terutama  dalam  bentuk ion  Ca 2+ sebagai  kofaktor  enzim  tertentu  dan  fosfor terutama  dalam  bentuk  fosfat  yang  diperlukan  oleh  bakteri sebagai  komponen  struktur  sel  dan  simpanan  energi  (Volk dan  Wheeler, 1984).
Asam amino merupakan salah satu faktor penting bagi pertumbuhan  bakteri.  Asam  amino  ini  disintesis  oleh bakteri  atau  disediakan  sebagai  nutrisi  eksogenus. Kebutuhan  asam  amino  dapat  disediakan  sebagai  asam amino  bebas  atau peptide kecil  yang  dapat  didegrasi  oleh bakteri  protease  sebelum  atau  setelah  masuk  ke  dalam  sel. Di  dalam  sel,  asam  amino  pertama  kali  diaminasi  untuk menghasilkan  asam  organik  yang  masuk  kedalam  siklus Tricarboxylic (TCA).  Amonia  yang  dihasilkan  dari diaminasi  akan  bertindak  sebagai  sumber  nitrogen  untuk biosintesis (Lim, 1998).

## Media Nutrient Broth
Pada  media Nutrient  Broth dilakukan  penghitungan populasi Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri  Pelarut Fosfat (BPF). Pertumbuhan populasi mikroba dalam media Nutrient  Broth dari  hari  ke-0  hingga  hari  ke-15  disajikan pada Gambar 3.
Pop u lasi -Log (x) (Cfu m l -1 )
Gambar 3.  Populasi Azotobacter, Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat pada media Nutrient Broth selama 15 hari pembiakan
Populasi Azotobacter pada  media  yang  diberikan aerasi  mencapai  populasi  tertingginya  pada  hari  ke-10  dan selanjutnya  memasuki  fase  stasioner  hingga  hari  ke-15. Populasi Azotobacter pada  media  yang  tidak  diberikan aerasi  memiliki  populasi  yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan  populasi Azotobacter pada  media  yang  diberikan aerasi. Populasi Bakteri Pelarut Fosfat tertinggi terjadi pada hari  ke-10  lalu  pada  hari  ke-15  mengalami  penurunan. Populasi Azospirillum pada  media  yang  tidak  diberikan aerasi  mencapai  pertumbuhan  tertinggi  pada  hari  ke-5 sedangkan  populasi Azospirillum pada  media  yang diberikan aerasi baru mencapai pertumbuhan tertinggi  pada hari  ke-10.  Populasi Azospirillum pada  media  yang  tidak diberikan  aerasi  lebih  tinggi  dibandingkan  populasi Azospirillum yang diberikan aerasi.
Perbandingan  Populasi Azotobacter,  Azospirillum dan Bakteri  Pelarut  Fosfat  pada  Media  IPB  RI-1,  Media IPB RI-2 dan Media Nutrient Broth

## Azotobacter
Pertumbuhan  populasi Azotobacter pada  media  IPB RI-1,  media  IPB  RI-2  dan  media Nutrient  Broth disajikan pada Gambar 4.
Populasi Azotobacter pada  media  IPB  RI-1  yang diberikan  aerasi  menunjukkan  populasi  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  media  lain  dan    terendah  terdapat pada  media  IPB  RI-2  tanpa  aerasi.  Perubahan    populasi Azotobacter dari hari ke-0 hingga hari ke-15 menunjukkan bahwa  terdapat  banyak  faktor  yang  menyebabkan terjadinya  dinamika  perbedaan  populasi  pada  tiap  media. Faktor-faktor  tersebut  antara  lain:  kandungan  nutrisi  pada media,  pemberian  aerasi,    pH,  ketersediaan  oksigen  dan suhu.  Faktor-faktor  ini  mempengaruhi  populasi  mikroba dalam media.
Pop u lasi -Log (x) (Cfu m l -1 ) Waktu (hari) Pop u lasi -Log (x) (Cfu m l -1 )
Produksi Masal Inokulum Azotobacter, Azospirillum dan Bakteri Pelarut Fosfat (Gunawan, R., I. Anas, dan F. Hazra)
Populasi Azotobacter mencapai titik tertinggi pertumbuhannya  pada  hari  ke-10  pada  media  IPB  RI-1, media  IPB  RI-2  yang  diberikan  aerasi  dan  media Nutrient Broth yang  diberikan  aerasi,  hal  ini  menunjukkan  semua faktor  tumbuh  yang  diperlukan  oleh Azotobacter dalam keadaan tersedia pada media tersebut. Selanjutnya pada hari ke-15,  populasi Azotobacter menurun,  hal  ini  diakibatkan karena  kandungan  nutrien  dalam  media  yang  sudah  mulai berkurang.

## Azospirillum
Pertumbuhan  populasi Azospirillum pada  media  IPB RI-1,  media  IPB  RI-2  dan  media Nutrient  Broth disajikan pada Gambar 5.
Pada  media  IPB  RI-1,  IPB  RI-2  dan  media Nutrient Broth yang  tidak  diberikan  aerasi  Azospirillum  mencapai titik  pertumbuhan  tertingginya  pada  hari  ke-5.  Sedangkan media Nutrient  Broth yang  diberikan  aerasi  mencapai populasi  tertingginya  pada  hari  ke-10.  Selanjutnya  pada
hari  ke-15,  populasi Azospirillum pada  ketiga  media mengalami penurunan.
Azospirillum hidup  pada  lingkungan  dengan  pH  6.8- 7.9  (Alexander,  1977). Azospirillum termasuk  dalam  ke dalam  grup  bakteri  Gram  negatif,  erobik/mikroaerofilik, motil  (Holt et  al .,  1994).  Bakteri  mikroaerofilik  adalah bakteri  yang  tumbuh  bila  ada  oksigen  bebas  dalam  jumlah sedikit.  Oleh  karena  itu,  seperti  terlihat  pada  Gambar  5, populasi Azospirillum pada  media  IPB  RI-1,  IPB  RI-2  dan Nutrient  Broth yang  tidak  diberi  aerasi  lebih  tinggi dibandingkan dengan media yang diberikan aerasi.

## Bakteri Pelarut Fosfat
Pada  hari  ke-0  hingga  hari  ke-5  populasi  Bakteri Pelarut  Fosfat  mengalami  peningkatan  (Gambar  6).      Pada selang masa tersebut populasi Bakteri Pelarut Fosfat berada pada fase eksponensial. Pada fase tersebut ditandai dengan periode pembelahan yang cepat.
Gambar 5.  Populasi Azospirillum pada media IPB RI-1, media IPB RI-2 dan media Nutrient Broth selama 15 hari pembiakan
Pop u lasi -Log (x) (Cfu m l -1 ) Pop u lasi -Log (x) (Cfu m l -1 )
Populasi Bakteri Pelarut Fosfat pada media IPB RI-1, media  IPB  RI-2  dan  media Nutrient  Broth memiliki  pola yang  sama  hingga  hari  ke-5,  namun  pada  hari  ke-10, populasi  Bakteri  Pelarut  Fosfat  pada  media Nutrient  Broth meningkat  melebihi  populasi  dari  media  IPB  RI-1  dan media IPB RI-2.   Pada hari  ke-15 populasi Bakteri Pelarut Fosfat  pada  ketiga  media  berada  pada  jumlah  yang  sama, kecuali  media  IPB  RI-1  yang  tidak  diberikan  aerasi, populasi  Bakteri  Pelarut  Fosfat  lebih  rendah  dibandingkan dengan media yang lain.
Harga Bahan Media IPB RI-1, IPB RI-2 dan Nutrient Broth
Harga  bahan-bahan  yang  dibutuhkan  untuk  membuat 1 liter media IPB RI-1 adalah Rp. 945 (Tabel 3).
Tabel 3.  Harga  bahan  untuk  membuat  satu  liter  media  IPB  RI-1
(Tahun 2010) Bahan Jumlah (g atau liter) Harga kg -1 (Rp) Biaya (Rp) Pupuk Urea 10 1,300 13 Pupuk SP-36 5 10,100 50 Terasi 2.50 100,000 250 MSG 1 30,000 30 Kepala ikan teri 10 1,000 10 Air mineral 1 552 552 Dedak padi 10 1,000 10 Gula merah 10 3,000 30 Total   harga  bahan untuk 1 liter media IPB RI-1 945
Total  harga  bahan-bahan  yang  dibutuhkan  untuk membuat  1  liter  media  IPB  RI-2  adalah  Rp  690  (Tabel  4). Harga bahan-bahan yang dibutuhkan untuk membuat 1 liter media Nutrient Broth adalah Rp 27,752 (Tabel 5). Nutrient Broth yang  dipakai  pada  penelitian  ini  adalah Nutrient Broth yang  diproduksi  oleh  Difco™.  Harga  bahan  yang diperlukan  untuk  membuat  media Nutrient  Broth sangat mahal  jika  dibandingkan  dengan  total  harga  bahan  untuk membuat media IPB RI-1 maupun media IPB RI-2.
Tabel 4.  Harga bahan untuk membuat satu liter media IPB RI-2
Bahan Jumlah (ml) Harga (Rp) Biaya (Rp) Air mineral 1,000 552 552 Molases (5%) 50 2,750 138 Total biaya untk 1 liter 690
Tabel 5.  Harga  bahan untuk membuat satu  liter media Nutrient Broth. Bahan Jumlah (ml atau g) Harga (Rp) Biaya (Rp) Air mineral 1,000 552 552 Nutrient Broth 8 3,400,000  kg -1 27,200 Total  harga 27,752

## SIMPULAN
Media  IPB  RI-1  mampu  menghasilkan  populasi Azotobacter 100  kali  lipat  dan  Bakteri  Pelarut  Fosfat meningkat  10  kali  lipat  dari  populasi  mereka  di  dalam media Nutrient  Broth .  Sedangkan  media  IPB  RI-2  mampu menghasilkan  sel Azotobacter 10  kali  lipat  dibandingkan dengan media Nutrient Broth .
Harga bahan untuk membuat media IPB RI-1 dan IPB RI-2 sangat murah dibandingkan dengan harga bahan untuk membuat  media Nutrient  Broth .  Total  biaya  bahan  media IPB  RI-1  hanya  3%  (Rp  945)  dan  IPB  RI-2  hanya  2% (Rp  690)  dari  total  biaya  bahan  media Nutrient  Broth (Rp 27,752).

## DAFTAR PUSTAKA
Alexander, M. 1977. Introduction to Soil Microbiology . 2 nd
Ed. John Wiley and Sons, New York.
Hidayati,  N.  2009.  Efektivitas  pupuk  hayati  pada  berbagai lama  simpan  terhadap  pertumbuhan  tanaman  padi ( Oryza  sativa )  dan  jagung  ( Zea  mays )  [skripsi]. Fakultas Pertanian. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams.  1994. Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology .  Lippincott  Williams  &  Wilkins, Phalidelpia.
Lim,  D.  1998 .  Microbiology .  Ed  ke-2.  McGraw-Hill Companies, USA.
Madigan,  M.T.,  J.M.  Martinko,  and  J.  Parker.  2000. Biology  of  Microorganism .  Ed  ke-9.  Prentice  Hall, New Jersey.
Novita,  E.  2001.  Optimasi  proses  koagulasi  flokulasi  pada limbah  cair  yang  mengandung  melanoidin. J . Ilmu Dasar, 2:61-67.
Prescott,    L.M.,  J.P.  Harley,  and  D.A.  Klein.  2000.
Microbiology. Ed  ke-5.  McGraw-Hill  Companies, USA.
Rao,  N.S.  1982. Biofertilizers  in  Agriculture .  Oxford  & IBH Publishing Co. Oxford.
Vessey, J.K. 2003. Plant growth promoting rhizobacteria as biofertilizer. Plant Soil, 255: 571-586.
Volk, W.A, and M.F. Wheeler. 1984. Mikrobiologi Dasar . Ed  ke-5.  Markham,  penerjemah;  Adisoemarto  S, editor.  Hasrper  &  Row  Publisher  Inc.,  USA. Terjemahan dari : Basic Microbiology .
White,  D.  1995. The  Physiology  and  Biochemistry  of Procaryotes . Oxford University Press, USA.