Tersedia online di http://journal.ipb.ac.id/index.php/jhi

## Studi Pendahuluan Metode Biohidrolisis Kulit Buah Durian untuk Pembentukan Gula Reduksi dalam Produksi Bioetanol
Preliminary Study of Biohydrolysis Method of Durian Rind for Reducing Sugar Determination on Bioethanol Production
Eko Darma Husada 1* , I Made Sudiana 2 , Idris 2 , Ni Luh Putu Indriyani 1 , Panca Jarot Santoso 1

## Diterima 14 Januari 2021/Disetujui 16 Agustus 2021

## ABSTRACT
Biohydrolysis  is  an  enzymatic  process  using  microorganism  as  biological  agent  for lignoselulose biomass hydrolysis/delignification. Isolate collection of fungi  Trametes polyzona  and Aspergillus sp. has an ability as ligninolytic fungi for hydrolysis process on bioethanol production. This  study  analyzed  the  potential  fungi  isolate  for  biohydrolysis  method  for  reducing  sugar determination on durian rind. Optimization of biohydrolysis method  were conducted by  treatments namely  direct biohydrolysis, combination  of chemical pretreatment (1% NaOH) and biohydrolysis, the combination of heat pretreatment (microwave) and biohydrolysis, and alkali delignification using 5% NaOH as control. Fungi isolate of Trametes polyzona showed a better result as the best potential ligninolytic  fungi  than  Aspergillus  sp.  Biohydrolysis  process  with  Trametes  polyzona  both  on  10 minutes heat pretreatment combination and direct biohydrolysis methods within 7 days of incubation resulted the best available reducing  sugar on  hyrolysate  were 0.38% and 0.32% respectively. The direct hydrolysis method with  Trametes polyzona result was not significantly different than control (0.32%).  Both  method  of  these  biohydrolysis  optimization  can  be  conducted  as  an  alternative  for bioethanol  production  on  durian  rind.  Trametes  polyzona  biohydrolisis  method  needs  a  further experiments with other influence parameters to get an effective method for more available reducing sugar on durian rind for bioetanol production.
Keywords: delignification, lignocellulose, optimazitation, Trametes polyzona

## ABSTRAK
Biohidrolisis  merupakan  proses  hidrolisis  atau  delignifikasi  biomasa  lignoselulosa  secara enzimatik  dengan  bantuan  mikroorganisme.  Koleksi  isolat  cendawan Trametes  polyzona dan Aspergillus sp. memiliki potensi untuk digunakan pada proses biohidrolisis dalam produksi bioetanol. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui potensi isolat cendawan dalam metode biohidrolisis kulit buah durian untuk pembentukan gula reduksi dalam produksi bioetanol. Optimasi metode dilakukan dengan  perlakuan  biohidrolisis  langsung  dengan  cendawan,  kombinasi  praperlakuan  kimiawi  (1% NaOH)  dan  biohidrolisis,  kombinasi  praperlakuan  panas  ( microwave )  dan  biohidrolisis,  serta delignifikasi  alkali  (5% NaOH)  sebagai  kontrol.  Isolat  cendawan Trametes  polyzona secara  umum memperlihatkan  potensi  terbaik  pada  perlakuan  biohidrolisis  langsung  maupun  kombinasi  dengan praperlakuan  kimia  dan  panas  dibandingkan  dengan  isolat Aspergillus sp. Proses  biohidrolisis Trametes polyzona dengan kombinasi praperlakuan panas selama 10 menit dengan inkubasi selama 7 hari  menghasilkan  0.38%  atau  setara  3.83  g  L -1 gula  reduksi  pada  hidrolisat.  Metode  biohidrolisis langsung memberikan hasil 0.32% dan tidak berbeda nyata dengan kontrol (0.32%). Kedua modifikasi dalam proses hidrolisis biomasa lignoselulosa ini dapat digunakan sebagai metode alternatif produksi bioetanol di samping menggunakan senyawa kimia. Metode biohidrolisis dengan cendawan Trametes polyzona ini masih perlu dikaji lebih dalam terkait beberapa parameter lainnya yang berpengaruh agar diperoleh gula reduksi yang lebih baik dalam produksi bioetanol yang lebih efektif.
Kata kunci: delignifikasi, lignoselulosa, optimasi, Trametes polyzona
1 Balai Penelitian Tanaman Buah Tropika, Kementerian Pertanian Jl. Raya Solok -  Aripan KM 8 Po Box 5, 27301, Solok, Sumatera Barat
2 Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Jl. Raya Jakarta -  Bogor KM 46, 16911, Cibinong, Bogor, Jawa Barat E-mail : ekodarmahusada@gmail.com (*penulis korespondensi)

## PENDAHULUAN
Buah  durian  merupakan  salah  satu jenis  buah  yang  digemari  oleh  penduduk Indonesia.  Rata-rata  dalam  satu  tahun konsumsi  nasional  buah  durian  mencapai 282  930  ton  (BPS,  2016).  Porsi  edibel  dari angka  konsumsi  buah  durian  tersebut  paling banyak  hanya  45%  pada  beberapa  varietas durian  sedangkan  beberapa  varietas  lainnya hanya  berkisar  15  –  25%  (Santoso,  2009). Limbah  kulit  durian  menjadi  masalah  besar yang dihadapi setiap musim durian, tumpukan kulit  dapat  ditemukan  hampir  di  setiap  sudut jalan di seluruh Indonesia. Potensi limbah kulit buah durian yang dihasilkan berkisar 60 – 80% dari  total  konsumsi  tersebut  yang  dibiarkan menumpuk menjadi sampah.
Pemanfaatan limbah kulit buah durian dengan fermentasi menjadi  salah  satu pendekatan  yang  dapat  dilakukan  dalam masalah  penanggulangan  limbah.  Beberapa bioproduk  dari  kandungan  kulit  buah  durian dapat dihasilkan dengan memanfaatkan teknologi  pengolahan  limbah  diantaranya sebagai edible  film (Amaliyah,  2014), biopestisida  (Kusumaningtyas et  al. ,  2018), senyawa  antimikroba  (Anggraeni  dan  Anam, 2016), dan substrat dalam  produksi bioetanol (Anggoro et  al. ,  2015;  Ginting et  al. ,  2018). Kulit buah durian sebagian besar tersusun oleh polisakarida  yakni  selulosa  (40  –  60%)  dan hemiselulosa  (15  –  25%),  kemudian    diikuti lignin (15 – 30%), abu/ ash (5 – 10%) (Jana et al. ,  2010),  protein  (5  –  10%)  (Nuraini et  al. , 2015), dan pektin (3 – 10%) (Wai et al. , 2009). Pemanfaatan  mikroba  pendegradasi gula banyak digunakan dalam proses fermentasi  dalam  upaya  penanganan  limbah kulit buah-buahan. Saccharomyces cerevisiae merupakan mikoorganisme  yang  umum digunakan  dalam  fermentasi,  pada  beberapa penelitian fermentasi limbah kulit buah durian dihasilkan  bioetanol  hingga  3%  dengan perlakuan  asam  kuat  (Anggoro et  al. ,  2015) serta  8.5%  dengan  perlakuan  hidrolisis  asam pekat dan suhu tinggi (Ginting et al. , 2018). Praperlakuan bertujuan untuk menghancurkan  struktur  lignin  sehingga selulosa  dan  hemiselulosa  pada  biomasa lignoselulosa  dapat  diakses  saat  proses hidrolisis  secara  enzimatik  (Mosier et  al. , 2005).  Praperlakuan  dapat  dilakukan  secara kimiawi  dan  mekanik.  Praperlakuan  alkali
merupakan  perlakuan  menggunakan  larutan alkali seperti NaOH, Ca(OH) 2 , atau ammonia. NaOH  merupakan  alkali  yang  paling  banyak digunakan  untuk  delignifikasi  residu  atau limbah  pertanian  (Iglesias et  al. ,  1996),  pada limbah jerami gandum praperlakuan alkali dan panas  mampu  menurunkan  kadar  lignin  dan hemiselulosa serta meningkatkan kadar selulosa (Kim, 2018).
Pendekatan  hidrolisis  secara  biologis menjadi  salah  satu  cara  untuk  mengurangi rendemen residu kimia dari kegiatan fermentasi serta diharapkan dapat meningkatkan hasil fermentasi yang didapatkan.  Pada  limbah  jerami  gandum, potensi  produksi  bioetanol  dengan Irpex lacteus dalam  kondisi  optimalnya  dapat mencapai 74% (López-Abelairas et al., 2013).
Pada  limbah  batang  tebu,  kadar  rasio  C/N menurun  akibat  degradasi  selulosa  dengan menggunakan Aspergillus  terreus (61%), Cellulomonas uda (52%), Trichoderma reesei dan Zymomonas  mobilis (49%)  sehingga memudahkan  akses  gula  untuk  proses hidrolisis  hingga  ke  tahapan  produksi  etanol (Singh et al. , 2008).
Cendawan  dikenal  sebagai  penghasil enzim selulase yang potensial (Panpatte et al ., 2018). Cendawan penghasil selulase (selulolitik) banyak digunakan dalam biotreatment limbah pertanian, karena kemampuanya  dalam  menguraikan  selulosa menjadi  gula  sederhana  secara  selektif  yang nantinya  dapat  dikonversi  menjadi  bioetanol (Ramarajan et  al .,  2017). Aspergillus sp. merupakan  penghasil  selulase  yang  banyak dimanfaatkan  dalam  produksi  enzim  selulase komersial (Mosier et al ., 2005). Trametes sp. tergolong dalam white-rot fungi yang memiliki aktivitas  enzim  selulase  yang  tinggi  dimana banyak  dimanfaatkan  sebagai  agen  hidrolisis beberapa  substrat,  diantaranya  batang  pohon Tilia  vulgaris dan Pinus  sylvestris (Mswaka and Magan, 1998), dan sekam padi (Nurjannah et al. , 2014). Peranan  cendawan  dalam  fermentasi diharapkan  mampu  menjadi  salah  satu pendekatan dalam mengolah limbah kulit buah durian  serta  menghasilkan  bioetanol  yang dapat  dimanfaatkan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui potensi cendawan Trametes polyzona dan Aspergillus sp.  dalam  metode biohidrolisis kulit buah durian untuk
pembentukan  gula  reduksi  dalam  produksi bioetanol.

## BAHAN DAN METODE
Kegiatan ini dilaksanakan pada bulan Oktober  2019  hingga  Mei  2020  di Screen house dan  Laboratorium  Proteksi  Tanaman,
Instalasi Penelitian dan Pengembangan Teknologi  Pertanian  (IP2TP)  Aripan,  Balai Penelitian Tanaman Buah Tropika, Kabupaten Solok,  Sumatera  Barat.  Bahan  dan  alat  yang digunakan  adalah  limbah  kulit  buah  durian, isolat  mikroba  potensial  koleksi  InaCC  LIPI Biologi  (cendawan Trametes  polyzona dan Aspergillus sp.), Agar for microbiolgy , NaOH, HCl,  NaCl,  medium  PDB  ( Potato  Dextrose Broth ),  1x Phosphate-Buffered  Saline /PBS (Vivantis),  bufer  sodium  sitrat  (pH  6), Cellulose  Basal  Media (50  g  L -1 (C 4 H 12 N 2 ) 6 , 10 g L -1 KH 2 PO 4 , 5 g L -1 MgSO 4 .7H 2 O, 1 g L - 1 yeast ekstrak,  dan  0.01  g  L -1 CaCl 2 .2H 2 O), Carboxymethyl Cellulose (CMC), 0.1% congo red , aqudest steril,  kertas  saring,  alumunium foil,  shaking  incubator,  pisau,  scalpel,  alas potong, blender, cawan petri, erlenmeyer 250 ml, pH meter, pipet, ayakan (mesh 4), dan alat tulis.

## Persiapan Sampel dan Karakterisasi Kadar Proksimat Kulit Buah Durian
Limbah  kulit buah durian didapatkan selama masa panen pada bulan Oktober 2019 yang  terdiri  atas  beberapa  aksesi  baik  lokal maupun  introduksi  dari  tanaman  koleksi IP2TP  Aripan  Balitbu  Tropika.  Kulit  durian yang  telah  terkumpul  dikarakterisasi  kadar proksimatnya  yakni  total  karbohidrat,  total protein,  kadar  air,  dan  kadar  abu  di Laboratorium  Kimia  IP2TP  Aripan.  Setiap parameter  pengamatan  diulang  sebanyak  tiga kali ( triplo ). Persiapan sampel dimulai dengan cara limbah kulit buah durian dicuci bersih dan dikeringkan  di screen  house selama  dua minggu  kemudian  dipotong  kecil  (±  10  cm) dengan menggunakan parang  kemudian dihancurkan  pada  alat grinder .  Sampel diblender hingga halus (2 – 3 kali) dan diayak dengan ayakan (mesh 4). Sampel dimasukkan pada  plastik  kaca  dan  disterilisasi  di  autoklaf dengan suhu 121 o C selama 15 menit.
Peremajaan dan Persiapan Isolat Cendawan Cendawan Trametes  polyzona dan Aspergillus sp. didapatkan  dari  koleksi  isolat di Indonesian  Culture  Collection (InaCC)
Pusat  Penelitian  Biologi  LIPI.  Peremajaan cendawan  dilakukan  dengan  menumbuhkan kembali isolat yang didapatkan pada petridish dengan  media  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar ). Potongan  cendawan  (diameter  0.5  cm) diletakkan  pada  media  dan  diinkubasi  pada suhu  ruang  selama  satu  minggu.  Preparasi kultur  cair  dilakukan  dengan  menumbuhkan cendawan (diameter 0.5 cm) dari kultur padat yang  telah  disiapkan  ke  dalam  medium  cair PDB  sebanyak  100  mL  selama  7  hari  pada shaker dengan  suhu  ruang  (28  –  30 o C)  dan kecepatan  120  rpm.  Miselium  yang  tumbuh kemudian  disaring  dan  ditempatkan  dalam erlenmeyer  250  mL  yang  berisi  50  mL  bufer sodium  sitrat  untuk  selanjutnya  dilakukan proses  biohidrolisis  dengan  substrat  limbah kulit buah durian.

## Konfirmasi  Aktivitas  Selulolitik  Isolat Cendawan
Aktivitas  selulolitik  isolat  cendawan yang  akan  digunakan  dikonfirmasi  secara kuantitatif  menggunakan  media uji selulolitik (Pointing,  1999).  Media  uji  selulolitik  dibuat dengan terlebih dahulu menyiapkan Cellulose Basal Media (CBM) yang terdiri dari 50 g L -1 (C 4 H 12 N 2 ) 6 ,  10  g  L -1 KH 2 PO 4 ,  5  g  L -1 MgSO 4 .7H 2 O, 1 g L -1 yeast ekstrak, dan 0.01 g L -1 CaCl 2 .2H 2 O yang dilarutkan menggunakan akuades  steril.  Kemudian  10%  (v/v)  CBM dicampurkan dengan 2% (w/v) CMC dan 1.6% (w/v) agar kemudian dilarutkan menggunakan akuades  steril.  Media  CBM  disterilisasi  di autoklaf dengan suhu 121 o C selama 15 menit dan  selanjutnya  dituang  pada  cawan  petri steril.
Uji  aktivitas  selulolitik  dilakukan dengan  menginokulasikan  cetakan  miselia cendawan  (diameter  0.5  cm)  pada  bagian tengah  media  uji  secara  aseptik.  Pengujian dilakukan  dengan  tiga  kali  ulangan.  Kultur kemudian  diinkubasi  pada  inkubator  suhu  30 ℃  selama  3  hari.  Adanya  aktivitas  selulase diketahui melalui teknik pewarnaan menggunaan 0.1% larutan congo red . Seluruh permukaan  medium  ditetesi  dengan  larutan 0.1%  larutan congo  red sampai  permukaan miselia  terendam  dan  diinkubasi  selama  15
menit.  Kemudian  larutan congo  red dibuang dan  ditambahkan  larutan  1  M  NaCl  serta diinkubasi  selama  15  menit.  Larutan  NaCl dibuang  dan  adanya  aktivitas  selulolitik  akan terlihat  dengan  zona  bening  yang  terbentuk pada media di sekitar koloni cendawan.

## Optimasi  Metode  Biohidrolisis  Limbah
Kulit Buah Durian Hidrolisis secara biologis (biohidrolisis) dimana proses mikrobial delignifikasi  berlangsung pada  biomasa lignoselulosa  untuk  mendegradasi  lignin sehingga  selulosa  dapat  dipecah  secara enzimatik menjadi gula sederhana. Percobaan dilakukan  dengan  3  ulangan  pada  optimasi beberapa metode praperlakuan dan biohidrolisis seperti yang tertera pada Tabel 1 dengan delignifikasi alkali sebagai kontrol.
Praperlakuan menggunakan 1%
NaOH dilakukan dengan memasukkan substrat sebanyak 10% (w/v) ke dalam 50 mL 1%  NaOH,  kemudian  diinkubasi  pada waterbath suhu 100 o C selama 2 jam. Setelah inkubasi,  substrat  dan  larutan  dipisahkan kemudian  substrat  dicuci  dengan  akuades steril.
Proses hidrolisis dilakukan menggunakan  5%  NaOH,  substrat  hasil praperlakuan dimasukkan ke dalam 50 ml 5% NaOH  dan  diinkubasi  pada waterbath suhu 100 o C  selama  4  jam.  Supernatan  kemudian dipisahkan  dari  sisa  substrat  dan  dilakukan analisis kadar gula reduksi.
Praperlakuan mekanik / panas dilakukan  dengan  memasukkan  substrat limbah sebanyak 10% (w/v) ke dalam 50 mL akuades  steril,  kemudian  dipanaskan  pada microwave dengan medium  heat selama  10 menit.  Substrat  kemudian  dipindahkan  ke dalam erlenmeyer baru untuk proses biohidrolisis.  Biohidrolisis  dilakukan  dengan memasukkan 10% (w/v) substrat limbah kulit buah durian ke dalam 50 ml bufer sodium sitrat (pH  6)  di  erlenmeyer  yang  berisi  miselium
cendawan  yang  telah  disiapkan.  Sampel kemudian  diinkubasi  pada shaker di  suhu ruang (28 – 30 o C) dengan kecepatan 120 rpm selama 7 hari. Supernatan kemudian dipisahkan  dari  sisa  substrat  dan  dilakukan analisis kadar gula reduksi atau dapat disimpan pada suhu 4 o C hingga saat akan digunakan.

## Uji  Kandungan  Gula  Reduksi  yang Terbentuk dan Analisis Data
Kadar gula reduksi yang tersedia pada hidrolisat  (hasil  hidrolisis)  sebagai  parameter yang  menentukan  potensi  substrat  yang  diuji dalam  menghasilkan bioetanol dan efektivitas metode  perlakuan  yang  digunakan.  Sampel dianalisis  di  Laboratorium  Kimia  IP2TP Aripan Balitbu Tropika dengan menggunakan metode  Anthrone.  Data  yang  diperoleh dianalisis dengan sidik ragam, apabila berbeda nyata  dilanjutkan  dengan  uji  lanjut  DNMRT ( Duncan's new multiple range test ) pada taraf nyata 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dinding  sel  tanaman  tersusun  atas lignoselulosa  yang  terdiri  dari  komponen lignin dan polisakarida (selulosa dan hemiselulosa).  Hasil  analisis  menunjukkan limbah  kulit  buah  durian  mengandung  total karbohidrat sebesar 24.13%  –  40.25% (Tabel 2).  Karbohidrat  terdiri  atas  monosakarida, disakarida, dan polisakarida yang diantaranya merupakan  gula  reduksi  (monosakarida, laktosa,  dan  maltosa)  dan  gula  non  reduksi (sukrosa  dan  pati).  Gula  reduksi  merupakan gula  yang  dapat  dipecah  pada  proses fermentasi  oleh  mikroorganisme  sehingga semakin  banyak  gula  reduksi  yang  tersedia pada  substrat/biomasa  maka  semakin  besar potensi  bioetanol  yang  dapat  dihasilkan (Power, 2003).
Tabel 1. Perlakuan pada optimasi metode biohidrolisis dalam pembentukan gula reduksi
Perlakuan Metode Praperlakuan Hidrolisis A Alkali delignifikasi (kontrol) 1% NaOH 5% NaOH B Alkali treatment dan biohidrolisis 1% NaOH Cendawan Trametes polyzona C Heat treatment dan biohidrolisis Microwave Cendawan Trametes polyzona D Biohidrolisis langsung - Cendawan Trametes polyzona E Alkali treatment dan biohidrolisis 1% NaOH Cendawan Aspergillus sp. F Heat treatment dan biohidrolisis Microwave Cendawan Aspergillus sp. G Biohidrolisis langsung - Cendawan Aspergillus sp.
Tabel 2. Kandungan proksimat pada kulit buah durian Parameter Hasil (%) Kadar Air 66.85 – 78.37 Total Protein 4.02 – 5.30 Total Karbohidrat 24.13 – 40.25 Kadar abu/ ash 3.74 – 6.21 Selulosa sebagai komponen polisakarida  terbesar  dalam  substrat  harus dipecah  menjadi  gula  sederhana  untuk  dapat diakses mikroorganisme dalam proses fermentasi  alkohol  atau  yang  biasa  dikenal sebagai  gula  reduksi  ( reduction  sugar/ fermentable sugar ). Ketersediaan gula reduksi pada  substrat  yang  digunakan  menentukan potensi  bioetanol  yang  dapat  dihasilkan (Abbas,  2003).  Beberapa  penelitian  pada limbah kulit buah durian menunjukkan potensi yang dimilikinya dalam menghasilkan bioetanol  dimana  salah  satunya  dalam perlakuan hidrolisis menggunakan asam pekat mampu  menghasilkan  gula  reduksi  sebesar 50.71 g L -1 dari 10% (w/v) limbah kulit durian yang digunakan (Unhasirikul et al. , 2013). Polisakarida kompleks
seperti
selulosa  dapat  dipecah  oleh  enzim  selulase. Enzim  ini  cukup  umum  ditemukan  pada berbagai jenis mikroorganisme dengan aktivitas  yang  berbeda-beda  (Karthika et  al ., 2020). Hasil uji konfirmasi aktivitas selulolitik pada  dua  cendawan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  keduanya memiliki aktivitas selulolitik. Aktivitas selulolitik ditandai dengan adanya zona bening (kuning-buram) di sekitar koloni. Zona bening muncul  disebabkan  karena  selulosa  telah terurai  sehingga  zat  warna congo  red yang awalnya terikat pada selulosa menjadi terlepas (Pointing, 1999).
Kedua  isolat  cendawan  mampu menggunakan  selulosa  untuk  tumbuh  dan merupakan  sumber  karbon  satu-satunya  yang terdapat dalam media uji. Berdasarkan ukuran diameter  zona  bening  yang  dihasilkan Trametes  polyzona memiliki  aktivitas  yang relatif  lebih  besar  dibandingkan Aspergillus sp.  (Tabel  3).  Mikroorganisme  di  alam  pada umumnya  mampu  mendegradasi selulosa dan hemiselulosa, salah satunya golongan cendawan white-rot dan soft-rot yang  biasa digunakan untuk degradasi biomasa lignoselulosa (Belkacemi et al. , 1998).
Dari hasil biohidrolisis terlihat bahwa isolat  cendawan Trametes  polyzona secara umum  memperlihatkan  potensi  terbaik  pada perlakuan  biohidrolisis  langsung  maupun kombinasi  dengan  praperlakuan  kimia  dan mekanik  dibandingkan  dengan  cendawan Aspergillus sp.  Hasil  gula  reduksi  terbaik diperoleh pada kombinasi perlakuan biohidrolisis cendawan Trametes polyzona dan panas  selama  10  menit  yakni  sebesar  0.38% atau  setara  3.83  g  L -1 gula  reduksi  yang tersedia pada hidrolisat (Tabel 4).
Perlakuan biohidrolisis langsung dengan cendawan Trametes polyzona memberikan  hasil terbaik kedua yakni 0.32% gula  reduksi  yang  tersedia  pada  hidrolisat dimana  hasil  ini  tidak  berbeda  nyata  dengan perlakuan kontrol yang menggunakan kombinasi  NaOH  1%  dan  5%  (0.32%). Perlakuan  hidrolisis  secara  biologis  mampu mengakses komponen selulosa dan hemiselulosa dengan lebih baik sehingga dapat memberikan  hasil  yang  lebih  optimal  dalam proses  hidrolisis  biomasa  (Mussatto  and Teixeira, 2010).
Trametes polyzona merupakan white- rot fungi yang  mampu  menghasilkan  enzim ligninolitik Manganese peroxidase (MnP) dan laccase (Lueangjaroenkit et al. , 2018). Proses ligninolitik yang terjadi selama hidrolisis dapat mempengaruhi jumlah etanol, jumlah konversi gula,  dan  persentase  delignifikasi  yang  sama atau bahkan lebih baik dari metode delignifikasi konvensional (Plácido  and Capareda, 2015).
Secara umum
kombinasi praperlakuan  biohidrolisis  cendawan  dengan alkali  memberikan  hasil  gula  reduksi  yang paling kecil pada kedua isolat cendawan yang digunakan.  Gula  reduksi  yang  dihasilkan berkurang  hingga  50%  (0.1600%)  baik  pada perlakuan  biohidrolisis  langsung  maupun dengan kombinasi. Perlakuan alkali mengakibatkan  pembengkakan  yang  akan meningkatkan permukaan area internal, penurunan derajat polimerasi dan kemampuan kristalisasi, pemisahan struktur linkages antara lignin  dan  karbohidrat,  serta  menghilangkan struktur  lignin  pada  biomasa  lignoselulosa (Fan et al. , 1987), dan juga memberikan efek inhibitor  pada  mikroorganisme  sehingga mempengaruhi  gula  reduksi  yang  terbentuk (Hendriks and Zeeman, 2009).
Tabel 3. Konfirmasi aktivitas selulolitik isolat cendawan pada media uji selulolitik Isolat cendawan Diameter miselia (cm) Diameter zona bening (cm) Trametes polyzona 5.62 ± 0.10 5.07 ± 0.06 Aspergillus sp. 5.23 ± 0.50 4.90 ± 0.40 Tabel 4. Gula reduksi yang dihasilkan dari optimasi metode biohidrolisis Perlakuan Gula reduksi (%) 1%NaOH + 5%NaOH (A/Kontrol) 0.3200 ± 0.046 a 1%NaOH + cendawan Trametes polyzona (B) 0.1600 ± 0.000 b Microwave + cendawan Trametes polyzona (C) 0.3833 ± 0.011 c Cendawan Trametes polyzona (D) 0.3233 ± 0.005 a 1%NaOH + cendawan Aspergillus sp. (E) 0.0867 ± 0.011 d Microwave + cendawan Aspergillus sp. (F) 0.2300 ± 0.017 e Cendawan Aspergillus sp. (G) 0.2067 ± 0.006 e
Keterangan: Nilai dengan konotasi huruf yang berbeda, signifikan pada uji DMRT taraf nyata 5% (0.05).
Dalam  penelitian  ini  dilakukan  studi awal  untuk  melihat  potensi  isolat  cendawan dalam  biohidrolisis  sehingga  belum  terkait kondisi  optimal  cendawan  yang  digunakan. Kondisi  optimal  bagi  mikroba  dalam  proses fermentasi meliputi waktu inkubasi, temparatur,  kadar  air,  konsentrasi  inokulum, ukuran  biomasa  (Sindhu et  al. ,  2016),  dan media  pertumbuhan  (Elisashvili et  al. ,2008). Proses  hidrolisis  idealnya  harus  mampu menghasilkan jumlah gula reduksi yang tinggi, terhindar  dari  kehilangan  gula  total,  dan terbentuknya inhibitor yang dapat mengganggu  fermentasi,  serta  membutuhkan energi,  senyawa  kimiawi,  dan  peralatan  yang minimal (Hamelinck et al. , 2005).

## KESIMPULAN
Isolat  cendawan Trametes  polyzona secara umum  memperlihatkan potensi terbaik pada perlakuan biohidrolisis langsung maupun kombinasi  dengan  praperlakuan  kimia  dan panas  dibandingkan Aspergillus sp.  Hasil terbaik didapatkan pada perlakuan biohidrolisis Trametes  polyzona dengan kombinasi  praperlakuan  panas  ( microwave ) selama 10  menit  dengan  gula reduksi sebesar 0.38% atau setara 3.83 g L -1 . Modifikasi proses biohidrolisis  dengan  cendawan Trametes polyzona perlu  dilakukan  lebih  dalam berkaitan  dengan  kondisi  optimal  bagi cendawan seperti waktu inkubasi, temparatur, kadar  air,  konsentrasi  inokulum,  dan  ukuran
biomasa  untuk  dihasilkannya  gula  reduksi yang lebih optimal dalam produksi bioetanol.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada
Kepala PUI Sumberdaya
Mikroorganisme Nasional LIPI Dr. Atit Kanti,
M.Sc.  dan Indonesian  Culture  Collection (InaCC),  Pusat  Penelitian  Biologi,  LIPI  atas bantuan  isolat  cendawan  yang  digunakan dalam penelitian ini. Penelitian ini dilaksanakan  atas  kerjasama  PUI  Buah
Tropika dan PUI Sumberdaya Mikroorganisme Nasional LIPI dengan dibiayai  dari  dana  PUI  Buah  Tropika  T.A 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas, C.A. 2003. Lignocellulosics to ethanol: meeting ethanol demand in the future. p.  41-58. In Jacques,  K.A.,  T.P. Lyons, D.R. Kelsall (eds) The Alcohol Textbook:  A  reference  for  the beverage,  fuel  and  industrial  alcohol industries. Nottingham:
Nottingham University Press.
Amaliyah,  D.M.  2014.  Pemanfaatan  limbah kulit  durian  ( Durio  zibethinus )  dan kulit cempedak ( Artocarpus integer )  sebagai  edible  film.  Jurnal Riset  Industri  Hasil  Hutan.  6(1):  27.
Doi: 10.24111/jrihh.v6i1.1222.
Anggoro,  D.,  H.  Pampang,  L.Yunita.  2015. Potensi  limbah  kulit  durian  sebagai bahan   baku pembuatan energi alternatif. Senatek, p. 843–850.
Anggraeni, E.V., K. Anam. 2016. Identifikasi kandungan  kimia  dan  uji  aktivitas antimikroba  kulit  durian  ( Durio zibethinus Murr.). Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi.  19(3):  87–93.  Doi:
10.14710/jksa.19.3.87-93.
Belkacemi, K., G. Turcotte, D. De Halleux, P.
Savoie.  1998.  Ethanol  production from AFEX-treated  forages  and agricultural residues. Applied Biochemistry and Biotechnology  -  Part  A  Enzyme Engineering  and  Biotechnology.  pp. 441–462. Doi: 10.1007/BF02920159. Badan  Pusat  Statistika.  2016.  Data  konsumsi nasional buah-buahan. http://www.bps.go.id [18 Januari
2020].
Elisashvili, V., E. Kachlishvili, M. Penninckx.
2008.  Effect  of  growth  substrate, method  of fermentation, and nitrogen source  on  lignocellulose-degrading enzymes production by white- rot basidiomycetes. J. Industr.
Microbiol. Biotechnol. 35(11): 1531– 1538. Doi: 10.1007/s10295-008- 0454-2.
Fan,  L.,  M.M.  Gharpuray,  Y.H.  Lee.  1987.
Cellulose hydrolysis, Biochimie . Edited by S. Aiba et al.
Springer-Verlag. Doi: 10.1007/978-3- 642-72575-3.
Ginting,  S.N.,  E.K.  Simanullang,  L.P. Simanullang,  B.  Nainggolan,  S. Silaban. 2018.   The  optimization  of acid hydrolysis on bioethanol production from durian peel waste ( Durio zibethinus murr). Jurnal
Pendidikan  Kimia.  10(2):  382–386.
Doi:10.24114/jpkim.v10i2.10917.
Hamelinck,  C.N.,  G.  Van  Hooijdonk,  A.P.C.
Faaij. 2005. Ethanol from lignocellulosic biomass: Techno- economic  performance  in  short-, middle-  and  long-term.  Biomass  and Bioenergy.  28(4):  384–410.  Doi: 10.1016/j.biombioe.2004.09.002.
Hendriks,  A.T.W.M.,  G.  Zeeman.  2009.
Pretreatments to enhance the digestibility of lignocellulosic biomass, Biores. Tech. 100(1): 10–18. Doi: 10.1016/j.biortech.
2008.05.027.
Iglesias, G., M. Bao, J. Lamas, A. Vega. 1996. Soda pulping of Miscanthus sinensis . Effects  of  operational  variables  on pulp  yield  and  lignin  solubilization, Biores.  Tech.  58(1):  17–23.  Doi: 10.1016/S0960-8524(96)00087-9.
Jana, L., N. Oktavia, D. Wulandari. 2010. The using  of  durian  peels  trashes  as  a potential  source  of  fiber  to  prevent colorectal  cancer.  Thesis.  Medical Faculty  Sebelas  Maret  University. Surakarta. 22 hal.
Karthika,  A.,  R.  Seenivasagan,  R.  Kasimani, O.O.  Babalola,  M.  Vasanthy.  2020.
Cellulolytic bacteria isolation, screening and optimization of enzyme production from  vermicompost of paper cup waste. Waste Management. 116: 58–65. Doi:10.1016/j.wasman.2020.06.036 Kim, S. 2018. Evaluation  of alkali-pretreated soybean  straw  for  lignocellulosic bioethanol production. Intl. J. Polymer Sci. Doi: 10.1155/2018/5241748
Kusumaningtyas, R.D., H. Suyitno, R.Wulansarie. 2018. Pengolahan limbah kulit durian  di  wilayah Gunung  Pati  menjadi  biopestisida yang  ramah  lingkungan.  Rekayasa. 15(1): 38–43. Doi: 10.15294/rekayasa.v15i1.12576.
López-Abelairas,  M.,  M.  Álvarez  Pallín.,  D.
Salvachúa, T. Lú-Chau, M.J. Martínez, J.M. Lema. 2013.
Optimisation of the biological pretreatment  of  wheat  straw  with white-rot fungi for ethanol production. Bioprocess and Biosystems Engineering.  36(9): 1251–1260.  Doi:  10.1007/s00449- 012-0869-z. Lueangjaroenkit,  P.,  C.  Teerapatsakul,  L.
Chitradon. 2018. Morphological characteristic regulation of ligninolytic  enzyme  produced  by Trametes polyzona. Mycobiology.  46(4):  396–406.  Doi: 10.1080/12298093.2018.1537586. Mosier,  N.,  C.  Wyman,  B.  Dale,  R.  Elander,
Y.Y. Lee, M. Holtzapple, M. Ladisch.
2005. Features of promising technologies  for  pretreatment  of lignocellulosic   biomass. Biores. Tech. 96(6): 673–686. Doi:
10.1016/j.biortech.2004.06.025.
Mswaka,  AY.,  N.  Magan.  1998.  Wood degradation, and cellulose and ligninase production, Trametes  and  other  wood-inhabiting basiodiomycetes from indigenous forest  of  Zimbabwe.  Mycol.  Res. 102(11): 1399-1404. Doi: 10.1017/S0953756298006789.
Mussatto, S., J. Teixeira. 2010. Lignocellulose as  raw  material  in  fermentation processes.  Applied  Microbiology  an Microbial  Biotechnology.  2(4):  897– 907.
Nuraini, N., A. Djulardi, Mahata, M. E. 2015. Improving  the  nutrient  quality  of durian   ( Durio zibethinus ) fruit waste through fermentation by using phanerochaete   chrysosporium  and Neurospora  crassa  for  poultry  diet. Intl.  J.  Poultry  Sci.  14(6):  354–358.
Doi: 10.3923/ijps.2015.354.358.
Nurjannah,  L.,  S.  Falah,  A.  Azhari,  Suryani,
I.M. Artika. 2014. Trametes versicolor as agent for delignification  of  rice  husk.  Current Biochemistry. 1(1): 37-44.
Panpatte, D.G., Y.K. Jhala, H.N. Shelat, R.V.
Vyas. 2018. Fungal cellulases production for  biodegradation
of  agriculture  waste.  Microorganism for  Green  Revolution.7(4):  75–89. Doi:10.1007/978-981-10-7146-1
Plácido,  J.,  S.  Capareda.  2015.  Ligninolytic enzymes: a biotechnological alternative  for bioethanol  production. Bioresources and Bioprocessing. 2(1). Doi:10.1186/s40643-015-00495.
Pointing,  S.B.  1999.  Qualitative  methods  for the  determination  of lignocellulolytic enzyme production by tropical fungi. Fungal Diversity. 2: 17-33.
Power,  R.F.  2003.  Enzymatic  conversion  of starch to fermentable sugars. p. 23-32. In Jacques,  K.A.,  T.P.  Lyons, D.R.  Kelsall  (eds)  The  Alcohol Textbook: A reference  for  the beverage,  fuel  and  industrial  alcohol industries. Nottingham   University Press.
Ramarajan, R., C.S. Manohar. 2017. Biological pretreatment and bioconversion   of agricultural wastes, using ligninolytic and cellulolytic fungal consortia. Bioremediation J. 1–11. Doi:10.1080/10889868.2017.128293 7
Santoso,  P.J.  2009.  Kualitas  rasa  dan  porsi edibel sebagai karakter kunci menonjolkan  keunggulan  varietas durian  lokal  nusantara.  hal.  687-694.
Prosiding  Kongres  dan  Seminar
Ilmiah Perhimpunan  Hortikultura
Indonesia (PERHORTI).
Bogor, 21-22 Oktober 2009.
Sindhu,  R.,  P.  Binod,  A.  Pandey.    2016.
Biological pretreatment of lignocellulosic   biomass – An
overview.  Biores.  Techn.  199:76–82. Doi: 10.1016/j.biortech.2015.08.030.
Singh,  P.,  A.  Suman,  P.  Tiwari,  N.  Arya,  A.
Gaur,  Shrivastava,  A.  K.  2008. Biological pretreatment of sugarcane  trash  for  its  conversion  to fermentable sugars. World J. Microbiol.  Biotechnol.  24(5):  667–
673. Doi:
10.1007/s11274-
007-9522-4.
Unhasirikul, M., W. Narkrugsa, N. Naranong. 2013.  Sugar  production  from  durian ( Durio  zibethinus Murray)  peel  by acid hydrolysis. Afr. J.   Biotechnol.
12(33): 5244–5251. Doi: 10.5897/ajb2013.12141.
Wai,  W.W.,  A.F.M.  Alkarkhi,  A.M.  Easa. 2009. Optimization of pectin extraction
from  durian  rind ( Durio  zibethinus )  using  response surface  methodology.  J.  Food  Sci. 74(8): 637–641. Doi: 10.1111/j.1750- 3841.2009.01331.x.