IDENTIFIKASI BAKTERI Azospirillum DAN Azotobacter PADA RHIZOSFER ASAL KOMBA-KOMBA (Chromolaena odorata)
Erfin 1 , Natsir Sandiah 2 , La Malesi 2
1) Alumnus Fakultas Peternakan UHO
2) Staf Pengajar Fakultas Peternakan UHO e-mail : ace-sandiah@yahoo.com

## Abstrak
Tingginya  kandungan  N  pada  komba-komba (Chromolaena  odorata) yang  dapat tumbuh  pada  tanah  yang  miskin  hara  menguatkan  dugaan  adanya  bakteri  nonsimbiotik pemfiksasi  N  yang  berasosiasi  dengan  akarnya.  Tujuan  dilaksanakan  penelitian  ini  antara  lain untuk  mengetahui  ada  tidaknya  bakteri Azospirillum dan Azotobecter pada rhizosfer  asal komba-komba  (Chromolaena  odorata).  Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi Departemen  Biologi  Fakultas  Matematika  dan  IPA  Institut  Pertanian  Bogor.  Sampel  tanah diambil dari rhizosfer tanaman komba-komba pada daerah yang berbeda di Kecamatan Kambu, Kota Kendari, Sulawesi Tenggara, masing-masing 1 sampel. Isolat yang berasal pada rhizosfer asal  komba-komba  (Chromolaena  odorata)  dari  kelurahan  Mokoau  dan  Lalolara,  bakteri Azospirillum memiliki bentuk koloni lengkung atau setengah spiral dan vibrinoid dan termasuk bakteri  gram  negatif,  bakteri Azotobacter memiliki  koloni  bakteri  berbentuk  oval,  batang pendek, batang dan terdapat kista serta termasuk bakteri gram negatif.
Kata Kunci; Komba-Komba (Chromolaena odorata), Azospirillum, Azotobacter

## Abstract
The  high  content  of  N  in  komba-komba  (Chromolaena  odorata),  which  can  grow in poor soil nutrient, corroborate allegations of non-symbiotic N fixation bacteria associated with the  roots.  The  purpose  of  this  study was to  determine the  presence  of Azospirillum  and Azotobecter  in  the  rhizosphere  of  komba-komba  (Chromolaena  odorata).  Research was conducted  at  the  Laboratory  of  Microbiology  Department  of  Biology,  Faculty  of  Mathematics and  Natural  Sciences,  Bogor  Agricultural  University.  Soil  samples  were  collected  from  the rhizosphere  of  komba-komba plants  in  different  areas in Kambu District,  Kendari City, Southeast Sulawesi, one sample from each area. Isolates from the rhizosphere of komba-komba (Chromolaena odorata) plant which were derived from Mokoau and Lalolara subdistrict, have Azospirillum bacteria which form  curved  or  half  spiral  colonies and  vibrinoid, and belong  to gram-negatif bacteria, while the Azotobacter bacteria have oval colonies, short stem, stem and cysts form, and belong to gram-negatif bacteria.
Keywords: Komba-Komba (Chromolaena odorata), Azospirillum, Azotobacter

## PENDAHULUAN
Komba-komba (Chromolaena
odorata) adalah leguminosa berbentuk semak  berkayu  yang  dapat  berkembang cepat  sehingga  sulit  dikendalikan. Menurut Marthen  (2007),  tumbuhan ini  berpotensi sebagai  pakan  ternak  karena  memiliki kandungan  protein  cukup  tinggi  (21-36%), setara  dengan  daun  lamtoro,  turi,  dan gamal.  Produksi  protein  kasar  dapat mencapai  15  ton/ha/tahun,  degradibilitas efektif  dalam  rumen  lebih  dari  80%  , palatabilitas lebih baik dari gamal, penelitian  di  Afrika  menunjukan  adanya senyawa antihelmintik serta potensi pertumbuhan  dengan  laju  1,5-2,5  cm/hari dan  membentuk  semak  yang  mampu mencapai tinggi sampai 3 meter. Meskipun menurut  Marthen  (2007) Chromolaena odorata mempunyai  potensi  sebagai  pakan ternak,  namun  menurut  Ikhimioya  (2003), Chromolaena  odorata  mengandung  zat antinutrisi.
Tumbuhan  ini  memiliki  banyak cabang yang berpotensi untuk pertumbuhan daun  serta  tumbuh  dalam  jarak  rapat. Pertumbuhan cepat menyebar karena
produksi  biji  sangat  tinggi  (>93.000 biji/pohon/tahun). Pengembangan tumbuhan  legum ini tumbuh  cepat  akan berdampak pada perbaikan tingkat kesuburan  tanah  secara  cepat  pula.  Selain itu  tumbuhan ini  mampu  beradaptasi  pada tanah  yang  miskin  hara  dan  tahan  terhadap kekeringan. Tingkat kesuburan tanah dipengaruhi  beberapa  faktor  antara  lain keanekaragaman  mikroba  tanah,  faktor iklim seperti suhu, curah hujan, kelembaban,  faktor  nutrisi  dan  lingkungan, serta  populasi  mikroba  yang  merupakan indikator  tingkat  kesuburan  tanah  (Allen dan Allen, 1981).
Keberadaan  bakteri  penambat  N bebas  pada  daerah  perakaran  tanaman menguntungkan  karena  dapat  membantu mencukupi  kebutuhan  N  tanaman  tersebut. Hubungan  antara  bakteri  penambat  N seperti  ini  diduga  juga  terjadi  pada
perakaran  komba-komba (Chromolaena odorata).  Chandrasekar  and  Gajanana (1996), melaporkan bahwa Biomassa komba-komba  memiliki  kandungan  hara  N 2.65  %,  P  0.53  %  dan  K  1.9  %  sehingga dapat  dimanfaatkan  sebagai  sumber  bahan organik  yang  potensial  untuk  perbaikan kesuburan  tanah  dan  komba-komba  sangat potensial  untuk  dikembangkan  sebagai sumber  pupuk  organik  dalam  perbaikan sifat  fisik  dan  kimia tanah.  Tingginya kandungan N pada komba-komba (Chromolaena odorata) yang dapat tumbuh pada  tanah  yang  miskin  hara  menguatkan dugaan adanya bakteri nonsimbiotik pemfiksasi  N  yang  berasosiasi  dengan akarnya.
Lingkungan  rhizosfir  yang  sangat mempengaruhi kehidupan bakteri penambat N  adalah  ketersediaan  senyawa  karbon  (C) yang  dibutuhkan  (Curl  dan  Bryan,  1985). Aktivitas  mikroorganisme  dalam  rhizosfir dipengaruhi  oleh  eksudat  yang  ada  pada rhizosfir  (Bais  dkk., 2006),  kandungan eksudat  akar  inilah  yang  merupakan  salah satu faktor pertumbuhan bagi mikroorganisme  (Vlastimil  dan  Kunc, 1988).
Bakteri Azospirillum  sp. adalah salah  satu  mikroorganisme  yang  dapat memfiksasi  N  dari  udara  yang  bersifat mikroaerobik  dan  mampu  berasosiasi dengan  tanaman  tingkat  tinggi.  Dalam proses fiksasi N atmosfer, bakteri Azospirillum  sp. menambat  N  bebas  dan mengubahnya  menjadi  sebuah  jaringan yang  kemudian  melalui  proses  pelapukan, amonifikasi dan nitrifikasi akan memberikan sebagian nitrogen udara sebagai  nitrogen  yang  tersedia  bagi tanaman tingkat tinggi (Garner dkk., 1995)
Berdasarkan  latar  belakang  perlu diadakan  penelitian  mengenai  identifikasi bakteri Azospirillum dan Azotobacter pada rhizosfer asal komba-komba (Chromolaena odorata). Apakah ada bakteri Azospirillum dan Azotobacter yang  terdapat  pada
rhizosfer asal komba-komba (Chromolaena odorata.)
Tujuan  dilaksanakan  penelitian  ini antara  lain  untuk  mengetahui  ada  tidaknya bakteri Azospirillum dan Azotobecter pada rhizosfer asal komba-komba (Chromolaena odorata).

## METODE PENELITIAN
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium  Mikrobiologi  Departemen
Biologi  Fakultas  Matematika  dan  IPA Institut Pertanian Bogor.
Sampel tanah diambil dari rhizosfer tanaman  komba-komba  pada  daerah  yang berbeda  di  Kecamatan  Kambu,  Kota Kendari, Sulawesi Tenggara. Tanah rhizosfer  diambil dari dua  kelurahan  yaitu Lalolara  dan  Mokoau,  masing-masing daerah diambil 1 sampel.
Alat – alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  antara  lain:  Sekop, gunting, kantung  sampel,  aluminium  foil,  kertas label,  parang,  botol  duran  besar  2  buah, Gelas ukur, sudip, neraca analitik, timbangan  digital,  sendok  plastik,  tabung reaksi, pipet tetes,  pemanas, pump, mikroskop,  kaca  objek,  dispenser,  magnet stiring,  oven,  cawan  petri,  jarum  ose, batang  sebar,  mikro  pipet,  laminar  flow, vortex mixer, Bunsen, tabung uril, keranjang,  kertas  bekas,  kamera,  buku, folpen.
Bahan – bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  antara  lain  sebagai berikut:  Asam  malat,  KOH,  K2HPO4, FeSO4,  MgSO4,  NaCL,  CaCl2,  Sodium molidat,  Bromtimol  Blue,  Agar,  sukrosa, KH2PO4,  NaMO4.7H2O,  MgSO4.7H2O, FeCl2,  CaCO3,  Garam  fisiologis,  garam mineral dan alkohol.
Penelitian ini terdiri dari beberapa tahapan yaitu (1) Pengambilan Sampel Tanah Rhizosfer dan Akar Tanaman Komba-Komba,
Sampel tanah diambil dari rhizosfer tanaman  komba-komba  pada  daerah  yang bebeda  di  kecamatan  kambu,  kota  kendari, sulawesi  tenggara.  Tanah  rhizosfer  diambil
di  dua  kelurahan  yaitu  Lalolara  dan Mokoau dan masing-masing daerah diambil 1  sampel.  Selanjutnya  akar  komba-komba tersebut  di  cabut  dengan  cara  dipacul selanjutnya  tanah  yang  melekat  pada  akar dibongkar  kemudian  dikompositkan  dan dibawa  ke  laboratorium  Mikrobiologi Departemen  Biologi  Fakultas  Matematika dan  IPA  Institut  Pertanian  Bogor  untuk diisolasi dan diidentifikasi. (2) Tahap Isolasi Bakteri,
Sampel  tanah  diisolasi  dengan menggunakan media selektif,  yaitu : media NFB untuk bakteri Azospirillum dan media LGI  untuk  bakteri Azotobacter.  Pembuatan media dilakukan dengan menimbang semua bahan yang disediakan kemudian dilarutkan kedalam  500  ml  air  dengan  menggunakan pengaduk atau magnet stirer yang disimpan diatas pemanas. Kemudian setelah bahannya  larut  diukur  pHnya.  Setelah  itu media yang sudah jadi dinkubasi selama 20 menit.
Tahap  pengerjaan  sampel yaitu  10  gram tanah  rhizosfer  dan  akar  tanaman  komba- komba yang akan diisolasi bakteri Azospirillumnya  dilarutkan  dalam  90  ml larutan  fisiologis  (larutan  NaCl  0,85%), selanjutnya diencerkan secara serial sampai tingkat  pengenceran  10 -5 .  Satu  ml  suspensi dari  pengenceran  10 -2 ,20 -3 ,10 -4 dan  10 -5 tanah  rhizosfer  dan  akar  dibiakkan  ke dalam  tabung  reaksi  yang  mengandung  9 ml media NFB semi padat. Masing-masing pengenceran  diulang  sebanyak  5  kali kemudian  biakan  diinkubasi  selama  4-7 hari  dalam  suhu  kamar.  Biakan  yang menunjukkan  adanya  pelikel  putih  di goreskan  pada  media  NFB  padat  yang mengandung  5  ml  NH4Cl,  20  mg/l  ekstrat agar dan congo red. Koloni yang menyerap warna  merah  kemudian  dibiakan  kembali ke  media  NFB  semi  padat.  Kultur  yang menunjukkan  adanya  pelikel  dimurnikan pada media NFB padat tanpa bromtimoblue.  Selanjutnya  koloni  kecil berwarna merah muda disimpan dalam agar miring untuk selanjutnya didentifikasi.
(3) Identifikasi Bakteri,
Sebanyak 1 gram sampel padat atau 1  ml  sampel  cair  dimasukkan  pada tabung reaksi  berisi  9  ml  garam  fisiologis (pengenceran  pertama  10 -1 ),  pengenceran kemudian  dilanjutkan  dengan  mengambil 1000μl larutan dari pengenceran sebelumnya  ke  tabung  reaksi  berisi  9  ml garam  fisiologis  berikutnya,  tahap  ini merupakan pengenceran kedua 10 -2 .
Pengenceran dapat dilanjutkan dengan cara yang  sama  hingga  tingkat  pengenceran yang  diinginkan.  Sebanyak  1ml  suspensi pada  tiga  tingkat  pengenceran  terakhir, masing-masing  diinokulasikan  ke  dalam media  NFB  di  dalam  tabung.  Biakan kemudian  diinkubasi  selama  4-72  jam, adanya  pelikel  atau  cincin  pada  medium menunjukkan  pertumbuhan  Azospirillum. Kemudian  tabung  yang  ada  pellicle dimurnikan  menggunakan  media  NFB  + Congo red. Penentuan Azospirillum dilakukan  lebih  detail  dengan  pengamatan menggunakan mikroskop. Sel Azospirillum memiliki  bentuk  vibrioid,  Gram  negatif, memiliki tipe flagella polar.
Sebanyak 1 gram sampel padat atau 1  ml  sampel  cair  dimasukkan  pada  tabung reaksi  berisi  9  ml  garam  fisiologis (pengenceran  pertama  10 -1 - ),  pengenceran kemudian  dilanjutkan  dengan  mengambil 1000μl larutan
dari
pengenceran sebelumnya  ke  tabung  reaksi  berisi  9  ml garam  fisiologis  berikutnya,  tahap  ini merupakan pengenceran kedua 10 -2 .
Pengenceran dapat dilanjutkan dengan  cara  yang  sama  hingga  tingkat pengenceran yang  diinginkan.  Sebanyak 1ml suspensi pada tiga tingkat pengenceran terakhir,  masing-masing  diinokulasikan  ke dalam  media  Sukrosa  Garam  Mineral  di dalam tabung. Biakan kemudian diinkubasi selama  48-72  jam.Koloni  yang  muncul dipurifikasi kembali pada media LGI agar.
Pengamatan  sel  dilakukan  dengan menggunakan mikroskop, koloni berbentuk batang  pendek,  batang  dan  oval.  Sel bersifat gram negatif.

## HASIL PENELITIAN

## A. Hasil Pengamatan Morfologis Bakteri Azospirillum
Hasil isolasi dan purifikasi bakteri Azospirillum didapatkan  3  jenis  koloni dengan  kode  M1,  M3,  L3.  Isolat  M1 memiliki  bentuk  koloni  yang  lengkung atau  setengah  spiral  dan  berwarna  merah muda yang menujukkan bahwa bakteri ini termasuk gram negatif (Gambar 2).
Gambar  2.  Bakteri Azospirilum M1
pembesaran 1000x Hasil Analisis Laboratorium Mikrobiologi Departemen Biologi  Fakultas Matematika Dan IPA IPB Isolat M3, dengan hasil pengamatan  bakteri  berbentuk  vibrinoid dan  berwarna  merah  muda  dan  termasuk gram negatif (Gambar 3).
Gambar 3. BakteriAzospirillum M3pembesaran 1000x Analisis Laboratorium Mikrobiologi Departemen Biologi  Fakultas Matematika Dan IPA IPB Gambar 2, 3 dan 4
memperlihatkan bahwa isolat yang
berasal  pada  rhizosferasalkomba-komba (Chromolaenaodorata)  dari  kelurahan
Mokoau dan Lalolara,
bakteri
Azospirillum memiliki  bentuk  koloni lengkung  atau  setengah  spiral  dan vibrinoid  dan  termasuk  bakteri  gram negatif    hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Haran  dan  Ansori  (1992),  yang  bahwa Azospirilum mempunyai  ciri  berupa  sel yang  berbentuk  setengah  spiral  yang padat  dan  bergetar  dengan  sebuah  flagel polar sehingga bergerak secara berputar.
Bakteri  ini  adalah  gram  negatif dan  mengandung  butir-butir  Poli- β - hidroksibutirat.
Isolat  L3,  hasil  pengamatan juga menunjukan bentuk bakteri vibrinoid dan termasuk gram negatif (Gambar 4).
Gambar 4. Bakteri
AzospirillumL3 pembesaran 1000x
B. Hasil Pengamatan Morologis Bakteri Azotobacter
Hasil isolasi dan purifikasi bakteri Azotobacter didapatkan  4  jenis  koloni dengan  kode  M1,  M2,  L1,  L2.Isolat  M1, dengan  hasil  pengamatan  morfologis bakteri  berbentuk  kokus  atau  bulat, berwarna merah muda menunjukan bahwa  bakteri  ini  termasuk  gram  negatif (Gambar  5).  Koloni  bakteri  memiliki pigmen  hitam coklat  yang  tidak  larut sehingga  bakteri  ini  termasuk  spesies Azotobacterchroococum. Hal  ini  sesuai dengan  pendapat    Rao,  (1994)  bahwa
beberapa  spesies  dari  genus Azotobacter antara lain Azotobacterchroococum mempunyai flagelperitrikha, lender sedang dan memiliki pigmen hitam coklat yang tidak larut
Isolat
M2, dengan hasil pengamatan morfologis bakteri berbentuk batang , berwarna merah muda menunjukan  bahwa  bakteri  ini  termasuk gram  negatif  (Gambar  6). Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Brock,  dkk.(1994), mengemukakan bahwa Genus
Azotobacter dicirikan dengan sel
berbentuk batang, gram negatif,
Gambar 5. Bakteri Azotobacter M1
pembesaran 1000x
bersifat aerobik obligat  dan  mempunyai ukuran  sel  yang  lebih  panjang  dari prokariot lainnya dengan diameter sel 2-4 µm atau lebih.
Gambar 6. Bakteri Azotobacter M2 pembesaran 1000x Isolat    L1,  hasil  pengamatan  juga menunjukan  bentuk  bakteri  batang  dan terdapat  kista  dan  termasuk  gram  negatif (Gambar  7).    Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Brock,  dkk.,  (1994),  bakteri  ini
memiliki  struktur  khusus  yang  disebut kista.  Kista  ini  bersifat  seperti  endospora yakni  tubuh  berdinding  tebal,  sangat reaktif dan resisten, tahan terhadap proses pengeringan pemecahan mekanik, ultraviolet  dan  radiasi  ionik.  Menurut M.T. Madigan, dkk.,(1997) dalam Puspitasari, F.D., (2012),  kista berfungsi untuk melindungi dari keadaan lingkungan yang ekstrim, misalnya kekeringan,  sinar  ultraviolet  dan  radiasi ion.
Gambar  7.  Bakteri Azotobacter L1 pembesaran 1000x
Isolat  L2,  hasil  pengamatan  juga menunjukan bentuk bakteri oval, bergerombol  dan  termasuk  gram  negatif (Gambar 8).
Gambar  8.  Bakteri Azotobacter L2 pembesaran 1000x Gambar    5,  6,  7  dan  8 memperlihatkan bahwa isolat yang berasal  pada  rhizosferasalkomba-komba
(Chromolaenaodorata)  dari  Kelurahan Mokoau dan
Lalolara, bakteri Azotobacter memiliki  koloni  bakteri berbentuk  oval,  batang  pendek,  batang dan  terdapat  kista  serta  termasuk  bakteri gram  negatif.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Brock,  dkk.(1994),  bahwa Genus Azotobacter dicirikan  dengan  sel berbentuk  batang,  gram  negatif,  bersifat aerobik obligat  dan  mempunyai  ukuran sel  yang  lebih  panjang  dari  prokariot lainnya  dengan  diameter  sel  2-4  µm  atau lebih.  Beberapa  strain  motil  dengan flagelperitrikha. Pada media mengandung karbohidrat, bakteri ini membentuk kapsul yang berfungsi melindunginya dari lingkungan  luar.Bakteri  ini  memiliki struktur  khusus  yang  disebut  kista.Kista ini bersifat seperti endospora yakni tubuh berdinding  tebal,  sangat  reaktif  dan resisten, tahan terhadap proses pengeringan pemecahan mekanik, ultraviolet dan radiasi ionik. Warna  isolat  berbeda  beda  hal  ini dipengaruhi oleh proses perwanaan gram.
Preparat  ditambahkan  safranin  berwarna merah untuk memudahkan proses identifikasi sehingga gram negatif berwarna merah dan yang tidak berwarna mengambil warna kontras. Sesuai dengan pendapat  yang  dikemukakan  oleh  H.C.J. Gram,  seorang  histologist  berkebangsaan Denmark  pada  tahun  1884,  menyatakan bahwa prosedur pewarnaan gram dimulai dengan  pemberian  warna  basa,  Kristal violet.Larutan  iodin  yang  kemudian ditambahkan menyebabkan semua bakteri terwarnai  biru  pada  fase  ini.Kemudian preparat  diberi  alkohol.  Sel  gram  positif akan  tetap  mengikat  senyawa  Kristal violet-iodine,  sehingga  berwarna  biru sedangkan  gram  negatif  akan  hilang warnanya  oleh  alkohol.  Setelah  itu ditambahkan  safranin  yang  bewarna merah  sehingga  gram  negatif,  berwarna merah  dan    yang  tidak  berwarna  akan
mengambil  warna  kontras,  sedangkan gram positif berwarna ungu.
Tanaman
komba-komba
(Chromolaenaodorata), memiliki kandungan  nitrogen  (N)  yang  cukup tinggi  karena  pada  rhizosfer  tanaman  ini terdapat bakteri Azospirillum
dan Azotobacter yang  berfungsi  sebagai penambat nitrogen yang sangat menguntungkan  karena  dapat  mencukupi kebutuhan nitrogen tanaman tersebut. Hal ini  sesuai  dengan  pendapat  Fallikdkk., (1994)  bahwa Azospirillumsp.merupakan bakteri yang tergolong sebagai Rhizobacteriapemacu pertumbuhan tanaman
(plantgrowthpromotingrhizobacteria) yaitu bakteri tanaman yang dapat menghasilkan  hormon  tumbuh  berupa auksin yang berfungsi memacu pertumbuhan  akar  dan  rambut-rambut akar  sehingga  daerah  serapan  akar terhadap hara seperti N, P, K dan air.

## PENUTUP
Kesimpulan Hasil penelitian identifikasi bakteri Azospirillumdan Azotobacterpada rhizosferasalkomba-komba (Chromolaenaodorata), ditemukan bakteri Azospirillum dan Azotobacter. Ciri-ciri morfologi bakteri Azospirillumberbentuk lengkung, vibrinoid  dan  termasuk  bakteri  gram negatif.Ciri morfologi bakteriAzotobacterberbentukkokkus  atau bulat, termasuk spesies Azospirillumchroococum, berbentuk batang, terdapat kista dan berbentuk oval serta termasuk bakteri gram negatif.

## DAFTAR PUSTAKA
Allen,  O.N.  and  E.K.  Allen.  1981. The
Leguminosae. A  source  book  of characteristics.
Uses and Nodulation.: The University ofWinconsin Press.Winconsin
Anonim.  2002. Azotobacter Isolation.
http://www.geocities.com/Wateros eTest/labs15.html.
(Diakses
tanggal 28 Mey 2015).
Bais,  H.P.,T.L.  Weir,  L.G.  Perry,  S. Gilroy  and  J.M.  Vivanco.  2006. The role  of  rootexudates  in rhizosphere interactions with plants and other organisms. Annu . Rev. Plant Biol. 572:33-66.
Barea, J.M., M.J. Pozo, R. Azcón and C. Azcón-Aguilar.  2005.  Microbial cooperation  in  therhizosphere.  J. of  Exp.  Botany,  56  (417)  :  1761- 1778.
Brock  T.D.,  dkk.  1994.  Biology  of Microorganism,  seventh  edition.
Prentice – Hall.New Jersey.
Curl,  E  dan  T.  Bryan.  1985.  The
Rhizosphere.
Springer-
Verlag.Berlin  Heidelberg  New
York. Tokyo. Departmen  ofNatural  Resources,  Mines
And  Water.  2006.  Siam  Weed Declared no. 1. Natural Resources,  Mines  and  Water, Pesr. Series, Queensland, Australia pp 1-4. Dompi,  Mariam.  2006.  Uji  Beberapa IsolateAzospirillumsp Asal tanaman Komba-komba pada PertumbuhanTanaman Jagung.
Universitas  Haluoleo.  Kendari (Skripsi, tidak dipublikasikan).
FAO,  2006.  Alien  spesies:  impacts  on forets  and  foresty – a  review. http://www.fao.org//docrep//008/j 6854e/jn854e00.htm.  25  oktober 2007 .
Fallik  E., Y.  Okon,  and  M.  Fischer. 1988.1994.  Growth  respone  of maize to Azospirilluminoculation : effect  of  soil  organic  matter
content,  number  of  rhizosphere bacteria and timing of inoculation. Soil  Biol.  Biochem.  21  :  147 – 153.
Franche,  C.,  K.  Lindström  and  C.
Elmerich.  2009.  Nitrogen-fixing bacteria associated
with leguminous  and  non-leguminous plants. Plant Soil 321:35-59.
Garner,  F.P,  R.B.  Pearce  dan  R.I.
Mirchel.  1995.  Phyciology  of Crop  Plants.  The  Lowa  States University Press, Ames. Lowa.
Gunarto,  L.,  Lestari,  Supadmo  dan
Marzuki. 2002. Dekomposisi jerami padi, inokulasiAzospirillumdan pengaruhnya  terhadap  efisiensi penggunaan  pupuk  P  pada  padi sawah. Penelitian Pertanian
Tanaman  Pangan.Volume  21  No.
10.
Gram,H.C.J.1884    dalam  Al  Hanif,  M.S.
2009.  Pola  Resistensi.  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Halbeib CM, Ludden PW. 2000.
Regulation of  Biological Nitrogen Fixation. J Nutr 130:1081-1084.
Hamdi,  Y.A.  1982.  Application  of nitrogen-fixing  system  in  soil improvement  and  management. Rome.  Food  and  Agriculture Organization of The United Nation.
Hanafiah,dan    K.  Ali.  2005.  Dasar-dasar Ilmu  Tanah.  PT.  Rajagrafindo Persada. Jakarta.
Hartman  A.,  dan  J.I.  Baldani.  2006.  The Genus Azospirillum.  Di  dalam  : Dworkin M, Falkow S, Rosenberg
E,  Schleifer  KH,  Stackebrandt  E,
editor.
The
Prokaryotes,
Proteobacteria:  Alpha  And  Beta
Subclasses.  Volume  ke-5.Ed  ke- 3.Springer.New York.
Hindersah  R,  Simamarta  T.  2004.
RizobakteriAzotobacterdalam Meningkatkan Kesehatan Tanah.Naturindones 5:127-133. Haran,  S  dan  Ansori,  N  (Eds).  1992. Bioteknologi pertanian bogor.pusat antar universitas.
bioteknologi.  Institut  Pertanian
Bogor. Bogor.
Ladha,  J.  K.  ,  T.  George  dan  B.B.
Bohlool. 1992. Biological Nitrogen  Fixation  for  Sustainable
Agriculture. London. Kluwer Academic (Publishers).
Martinez-Romero  E.  2006.  Dinitrogen- fixing  prokaryotes.  Di  dalam: Dworkin  M,Falkow  S,  Rosenberg E,  Schleifer  KH,  Stackebrandt  E, editor.
TheProkaryotes.Ecophysiology and Biochemistry.Volume ke-2.Ed ke-3.  NewYork:  Springer.  hlm 793 – 817.
Madigan,  M.T.  1997 dalam  Puspitasari F.D.  2012.  Isolasi  Karakteristik Bakteri
AerobProteolitik dan Tangki  Septik.  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember (ITS). Surabaya. Prawiradiputra, B.R. 2007.Kirinyu (Chromolaenaodorata(L) R.M. King  dan  H.  Robinson):  Gulma padang  rumput  yang  merugikan. Bulletin Ilmu Peternakan Indonesia ( WARTAZOA), Volume 17 No. 1. Rao, N.B., dan Subba.
1994. Mikroorganisme Tanah Dan Pertumbuhan Tanaman. Terjemahan  oleh  HerawatiSusilo UI- Pres, Jakarta.
Razie  F.,  dan  I.  Anas.2005.  Potensi Azotobacterspp.
(dari lahan pasang  surutKalimantan  Selatan) dalam  menghasilkan indole  acetic acid (IAA).J  TanahLingkungan 7: 35-39.
Simarmata, T., Hindersah, R. 2004.PotensiRizobakteriAzotobact erdalam  Meningkatkan  Kesehatan
Tanah.  Jurnal  Natur  Indonesia 5(2): 127-133.
Sipayung,  A.,  R.D.  De  ChenonAnd  P.S. Sudharto.  1991.  Observations  on Chromolaenaodorata  (L.) R.M.
King and H. Robinson in
Indonesia.  Second  International Workshop  on  the  Biological Control  and  Management  of
Chromolaenaodorata. Biotrop,
Bogor.
Sutanto,  R.  2002. Penerapan  pertanian organic, kanisius.Yogyakarta.
Tejera N, Lluch C, Martinez-Toledo MV,
Lopez JG. 2005. Isolation andcharacterization of Azotobacterand Azospirillumstrains from the sugarcanerhizosphere. Plant  Soil 270: 223 – 232.
Vlastimil,  V  dan  F.  Kunc.  1988.  Soil Microbial  Associations.  Prague.
Institut  of  Microbiology  of  the Czechoslovakia Academy
of Sciences. Czechoslovakia.
Wedastri,  S.  2002.  Isolasi  dan  Seleksi Azotobacter spp. Penghasil Faktor Tumbuh  dan  Penambat  Nitrogen dari Tanah Masam. J.  Ilmu Tanah dan lingkungan 3: 45-51
Yadav, A.S. and Tripathi. 1981. Population  Dynamic  Of  The Rudel Weed Eupatorium Odoratum And Its Natural
Regulation. Oikos no. 36. Copenhagen