## KEMAMPUAN BAKTERI DIAZOTROF ENDOFIT UNTUK MENINGKATKAN PERTUMBUHAN VEGETATIF BIBIT KELAPA SAWIT ( Elaeis guineensis jacq )
Ability of Endophytic Diazotrophic Bacteria in Stimulating Growth of Oil Palm Seedlings (Elaeis guineensis Jacq)
Andreas Panjaitan 1)* , Iswandi Anas 2) , Rahayu Widyastuti 2) , dan Wiwik Eko Widayati 3)
1) Staff Riset and Development Department, PT. Swakarsa Sinarsentosa, Jakarta
2) Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian IPB, Jl. Meranti Kampus IPB Darmaga Bogor 16680
3) Pusat Penelitian Perkebunan Gula Indonesia, Jl. Pahlawan, Pasuruan-Jawa Timur

## ABSTRACT
Endophytic  diazotrophic  bacteria  are  free-living  atmospheric  dinitrogen  fixing  bacteria  that  lived  and  colonized between living plant cells and do not contribute phatogenic effects to its host. The ability of endophytic diazotrophic bacteria in providing nitrogen as nutrient for crop plays an important role in reducing dependency of inorganic nitrogen fertilizer. The aim of this experiment was to study the ability of endophytic diazotrophic bacteria isolate to stimulate vegetative growth of oil palm  seedlings    at  four  levels  inorganic  nitrogen  fertilizer  application.  Experiment  was  conducted    at  the  greenhouse  IPB Campus, Cikabayan, Darmaga with the altitude of 250 m above sea level and at the Soil Fertility Laboratory, the Departement of Soil Science and Land Resources, Faculty of Agriculture, Bogor Agricultural zuniversity (IPB)  and at the   Laboratorry of Biotechnology,  Indonesian  Sugarcane  Research  Centre  (P3GI)  Pasuruan,  East  Java.  This  experiment  using  Completely Randomized  Block  Design  (CRBD)  consisted  of  two  factors  with  three  replications.  The  first  factor  was    inorganic  nitrgen levels    consisted  of  four  levels  (0,  50%,  75%  and  100%  of  recommended    dose).  Second  factor  was  inoculation  with endophytic diazotrophic bacterial isolates consisted of four levels; without inoculation, inoculated with isolate 1, isolate 2 and isolate 3. The results of the experiment showed that the innoculation with bacterial isolate 2 without N fertilizer appllication gave  the  best  results  to  increase  the  diameter  of  the  palm  weevil,  palm  height,  and  dry  weight.  In  addition  to  that,  the application of endophytic diazotrophic bacteria isolate was able to promote vegetative growth of palm oil seedling.
Keywords: Endophytic diazotrophic bacteria, nutrient up-take, oil palm seedling, vegetative growth

## ABSTRAK
Bakteri  diazotrof  endofit  adalah  bakteri  penambat  N 2 yang  hidup  berkoloni  di  dalam  jaringan  tanaman  tetapi  tidak memberikan  efek  patogenik  terhadap  tanaman  inangnya.  Kemampuan  bakteri  diazotrof  endofit  dalam  menyumbangkan  hara nitrogen  bagi  tanaman  diharapkan  akan  sangat  berperan  dalam  mengurangi  ketergantungan  aterhadap  pupuk  nitrogen anorganik. Percobaan ini bertujuan untuk mempelajari kemampuan isolat bakteri diazotrof endofit yang diaplikasikan dengan pupuk nitrogen  terhadap pertumbuhan tanaman dan bobot kering bibit kelapa sawit. Percobaan dilakukan di rumah kaca kebun Percobaan IPB, Cikabayan, Darmaga dengan ketinggian sekitar 250 m dpl dan di Laboratorium Kesuburan Tanah, Departemen Ilmu  Tanah  dan  Sumberdaya  Lahan  IPB  serta  di  Laboratorium  Bioteknologi  Pusat  Penelitian  Perkebunan  Gula  Indonesia (P3GI) Pasuruan, Jawa Timur. Percobaan ini menggunakan metode Rancangan Acak Kelompok (RAK) terdiri dari dua faktor dengan tiga ulangan. Faktor pertama yaitu dosis N yang terdiri dari empat taraf (0, 50%, 75% dan 100% standar  pemupukan). Faktor kedua yaitu aplikasi isolat bakteri diazotrof endofit terdiri atas 4 taraf yaitu tanpa inokulasi, diinokulasi dengan  isolat 1, isolat 2 dan isolat 3.  Hasil penelitian  menunjukkan bahwa  kombinasi  inokulasi   isolat bakteri diazotrof endofit dengan tanpa pemupukan nitrogen memberikan hasil pertumbuhan vegetatif terbaik untuk bibit kelapa sawit yaitu  diameter bonggol,  tinggi bibit, dan berat kering bibit kelapa sawit.
Kata kunci : Endofit bakteri diazotrof, pengambilan hara, bibit kelapa sawit, pertumbuhan vegetatif

## PENDAHULUAN
Peningkatan  luas  areal  perkebunan  kelapa  sawit berakibat  kebutuhan  pupuk  anorganik  terus  meningkat. Belakangan  ini  harga  bahan  baku  pupuk  meningkat  pesat yang  menyebabkan  harga  pupuk  anorganik  semakin mahal.  Di  sisi  lain,  penggunaan  pupuk  anorganik  dengan
takaran  yang  berlebihan  akan  mencemari  lingkungan, dapat mengganggu kesehatan tanaman serta meningkatkan biaya produksi.
Upaya  pemanfaatan  bakteri  diazotrof  (penambat N 2 )  sebagai  pupuk  hayati  telah  banyak  dilakukan    namun karena  pemahaman  ekologi  mikrob  yang  diaplikasikan belum memadai maka hingga saat ini upaya tersebut belum
*) Penulis Korespondensi: Telp. +6281381980111; Email. panjaitanandreas@yahoo.com
memberikan  hasil  yang  konsisten.  Salah  satu  hal  yang patut  dicermati  dalam  upaya  pemanfaatan  pupuk  hayati adalah  pola  interaksi  yang  terjadi  antara  bakteri  diazotrof dengan tanaman inangnya (Zinniel et al ., 2002;  Widayati, 2005).
Beberapa bakteri  diazotrof  diketahui  mampu  hidup dan  menyumbangkan  sekitar  70% kebutuhan total N pada beberapa  varietas  tanaman  tebu  (Urquiaga et  al .,  1992). Bakteri  diazotrof  tersebut  diketahui  mampu  hidup  secara endofit dalam tanaman tebu dan berkolonisasi pada xylem tebu (James et al ., 2001).
Istilah  endofit  digunakan  untuk  menunjukkan adanya kolonisasi mikrob di dalam jaringan tanaman tetapi tidak  memberikan  efek  patogenik  terhadap  tanaman inangnya  (Zinniel et  al .,  2002).  Beberapa  jenis  bakteri endofit  diketahui  berperan  penting  dalam  menunjang vitalitas  tanaman.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa bakteri endofit berfungsi sebagai penambat  N 2 (Lee et al ., 2000),  penghasil  fitohormon  dan  siderofor  (Feng et  al ., 2006),  agen  pengendali  hayati,  meningkatkan  daya  tahan terhadap serangan patogen dan parasit (Reiter et al., 2002), pendegradasi  polutan  pada  rizosfir  serta  memproduksi antibiotik (Barac et al ., 2004).
Lee et  al .  (2000)  menyebutkan  bahwa  bentuk interaksi  endofit  merupakan prototype interaksi  mikrob dengan  tanaman  yang  perlu  dipelajari  karena  terbentuk kondisi  yang  lebih  sesuai  untuk  transfer  nutrien  di  antara keduanya.  Keberadaan  bakteri  endofit  di  dalam  jaringan tanaman lebih menguntungkan terutama dalam hal proteksi aktifitas nitrogenase terhadap O 2 (James et al ., 2001).
Sampai  saat  ini  belum  banyak  informasi  tentang interaksi  mikrob  endofit  dengan  tanaman  kelapa  sawit. Oleh karena itu, untuk mengupayakan pemanfaatan bakteri endofit  tersebut  perlu  segera  dilakukan  eksplorasi  peran mikrob  endofit  untuk  mengoptimalkan  pertumbuhan tanaman  kelapa  sawit.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  kemampuan  asosiasi  isolat  bakteri  diazotrof endofit  dengan  bibit  kelapa  sawit  dan  pengaruhnya  dalam meningkatkan pertumbuhan bibit kelapa sawit pada empat taraf pemupukan nitrogen.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  rumah  kaca  IPB, Cikabayan  –  Darmaga,  Bogor.  Analisa  tanah  dan  hara jaringan  tanaman  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia  dan Kesuburan Tanah, Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya  Lahan,  Fakultas  Pertanian,  Institut  Pertanian Bogor.  Pengamatan  keberadaan  isolat  bakteri  diazotrof endofit  di  dalam  jaringan  tanaman  dilakukan  di Laboratorium  Biologi,  Pusat  Penelitian  Perkebunan  Gula Indonesia (P3GI), Pasuruan.

## Alat dan Bahan
Bahan dan alat yang digunakan adalah isolat bakteri diazotrof  endofit  hasil  isolasi  dari  jaringan  akar,  batang dan  daun  kelapa  sawit  yang  tumbuh  liar  di  perkebunan Kalimantan Tengah, tanah Latosol Dramaga, benih kelapa sawit  varietas  DxP  Simalungun-PPKS  Medan, gen  gfp E. coli PFAJ  1819,  antibiotik kanamicin , ampicilin dan rifampicin ,    pupuk  Urea,  SP-36,  KCl  dan  Kieserit, mikroskop fluorescence merk Nikon type 026327.

## Metode Penelitian
Pengujian  kemampuan  asosiasi  isolat  bakteri diazotrof  endofit  dengan  bibit  kelapa  sawit  dilakukan melalui  pengamatan  keberadaan  isolat  bakteri  tersebut pada  jaringan  akar,  batang  dan  daun  tanaman  dengan menggunakan mikroskop fluorescence . Metode penelitian percobaan rumah kaca menggunakan  rancangan  acak  kelompok  (RAK)  faktorial dengan 2 faktor yaitu :
Faktor I. Dosis hara Nitrogen N 0 =  Tanpa pemupukan N N 1 =  Dosis  pupuk  N  sebesar    50%  dari  dosis  standard
PPKS
N 2 =  Dosis pupuk N sebesar  75% dari dosis PPKS
N 3 =  Dosis  pupuk  N  sebesar  100%  dari  dosis  standard PPKS
Faktor II. Jenis Isolat Bakteri Diazotrof Endofit I 0 =  Tanpa isolat
I 1 =  Isolat  1  (diisolasi  dari  jaringan  akar  kelapa  sawit yang tumbuh liar)
I 2 =  Isolat  2  (diisolasi  dari  jaringan  batang  kelapa sawit yang tumbuh liar)
I 3 =  Isolat  3  (diisolasi  dari  jaringan  daun  kelapa  sawit yang tumbuh liar)
Isolat  yang  digunakan  adalah  isolat  bakteri diazotrof wild  type (isolat  tanpa  penanda  gen gfp )  koleksi PT  Swakarsa  Sinar  Sentosa,  Jakarta  dan  P3GI  Pasuruan yang  berasal  dari  daerah  Kalimantan  Tengah.  Perlakuan yang diuji terdiri dari 16 kombinasi perlakuan yaitu:
1. N0I0 5. N0I1 9. N0I2 13. N0I3 2. N1I0 6. N1I1 10. N1I2 14. N1I3 3. N2I0 7. N2I1 11. N2I2 15. N2I3 4. N3I0 8. N3I1 12. N3I2 16. N3I3
Setiap  unit  percobaan  diulang  sebanyak  tiga  kali sehingga  terdapat  48  satuan  percobaan.  Satu  satuan percobaan terdiri dari empat bibit kelapa sawit.

## Pelaksanaan Penelitian

## Percobaan I. Pengujian Kemampuan Asosiasi Bakteri
Diazotrof Endofit dengan Bibit Kelapa Sawit
1.   Penandaan  bakteri  diazotrof  endofit  menggunakan  gen gfp
Tahap  trans  konyugasi  gen  dimulai  dengan menumbuhkan  bakteri E.  coli PFAJ  1819  ysng  memiliki gen  gfp  pada  media  5  ml  Lactose  Broth  (LB)  cair  yang mengandung  50  µg  ml -1 kanamicin dan  50  µg  ml -1 ampicilin . Bakteri target ditumbuhkan pada 5 ml media LB cair  yang  mengandung rifampicin 50  µg  ml -1 dan diinkubasi  selama  semalam.  Dari  masing-masing  suspensi bakteri  diambil  1  ml  kemudian  dicampurkan  dan disentrifugasi  pada  kecepatan  3000  g  selama  15  menit. Supernatannya  dibuang,  kemudian  ke  dalam  sel  bakteri ditambahkan 500 µl 10 mM MgSO 4 . Selanjutnya suspensi bakteri  disentrifugasi  kembali  pada  kecepatan  3000  g selama 15 menit. Pelet yang terbentuk disuspensi dalam 30 µl 10 mM MgSO 4.
2.   Pengujian  sifat  asosiasi  endofitik  bakteri  pada  bibit kelapa sawit
Bakteri  transkonyugan  yang  mengandung gen  gfp ditumbuhkan  dalam  media  LB  cair  yang  mengandung  50 µg  ml -1 kanamicin selama  semalam dan diinokulasikan  ke bibit  kelapa  sawit  dengan  cara  menyiramkan  media  LB cair ke permukaan tanah sebanyak 10 ml polibag -1 .
3.  Visualisasi  keberadaan  bakteri  diazotrof  endofit  dalam jaringan  kecambah  kelapa  sawit  dengan  menggunakan Mikroskop Fluorescence merk Canon
Irisan  jaringan  kecambah  kelapa  sawit  yang  telah diinokulasi  dengan  bakteri  diazotrof  endofit  rekombinan diamati  dengan  menggunakan  mikroskop fluorescence pada perbesaran 100x.

## Percobaan II. Pengujian Kemampuan Bakteri Diazotrof Endofit untuk Meningkatkan Pertumbuhan Bibit Kelapa Sawit
Pengujian  dimulai  dengan  membuat  media  tanah dalam  kondisi  kering  udara,  kemudian  ditimbang  masing- masing  sebanyak  1.5  kg  dan  dimasukkan  ke  dalam polibag.  Sebelum  penanaman  kecambah  kelapa  sawit, tanah  di  dalam  polibag  disiram  dengan  air    sampai kapasitas  lapang.  Kecambah  diseleksi  hanya  yang kondisinya  normal  (plumula  dan  radikula  lurus)  dan ditanam  pada  kedalaman  1.5  cm  di  bawah  permukaan tanah.
Bibit kelapa sawit disiram setiap pagi dan sore hari sampai  kapasitas  lapang  ditandai  dengan  air  yang disiramkan  mulai  keluar  dari  media  tanam  bagian  bawah. Pada  saat  aplikasi  pemupukan,  penyiraman  dilakukan setelah aplikasi pemupukan.
Isolat  bakteri  diazotrof  endofit  dikulturkan  dalam media LB cair dan diinkubasi selama 1 malam (populasi ± 10 6 CFU  ml -1 )  sebelum  diaplikasikan.  Aplikasi  isolat bakteri  dilakukan  dengan  menyiramkan  kultur  isolat bakteri  ke  media  tanah  di  sekitar  pangkal  batang  bibit umur 1 bulan sebanyak 10 ml polibag -1 .
Pemupukan bibit kelapa sawit dilakukan menggunakan  pupuk  anorganik  urea,  SP-36,  KCl  dan kieserit.  Frekuensi,  waktu  dan  dosis  aplikasi  pupuk anorganik  dilakukan  sesuai  standar  pemupukan  bibit kelapa sawit. Dosis standar pupuk anorganik (urea, SP-36, KCl dan Kieserit) untuk bibit kelapa sawit umur 0-18 MST masing-masing adalah 11.95 g bibit -1 , 13.72 g bibit -1 , 6.48 g bibit -1 dan 4.77 g bibit -1 .  Dosis penggunaan  pupuk Urea sebagai  sumber  hara  nitrogen  disesuaikan  dengan  taraf dosis  perlakuan  (0%,  50%,  75%  dan  100%  dari  dosis standar  pemupukan),  sedangkan  dosis  pupuk  SP-36,  KCl dan  kieserit  diberikan  sesuai  dosis  standar  pemupukan (100%) untuk seluruh perlakuan.
Peubah yang diamati pada penelitian ini adalah :
a. Kemampuan  asosiasi  bakteri  diazotrof  endofit  dengan bibit kelapa sawit dilakukan dengan pengamatan waktu tercepat  ditemukannya  bakteri  diazotrof  endofit  trans konjugan pada jaringan daun bibit kelapa sawit umur 1 bulan,
b. Peubah  pertumbuhan  tanaman  berupa  diameter bonggol,  tinggi  dan  berat  kering  total  tanaman. Diameter  bonggol  diukur  pada  pangkal  batang  yang membengkak.  Tinggi  tanaman  diukur  mulai  dari pangkal  batang  sampai  ujung  daun  tertinggi.  Bobot kering  tanaman  dihitung  setelah  jaringan  tanaman kering  oven.  Pengukuran  diameter  bonggol  dan  tinggi tanaman  dilakukan  setiap  2  minggu  mulai  4  MST sampai  18  MST,  sedangkan  bobot  kering  diukur  pada akhir penelitian (18 MST).

## Analisis Data
Data dianalisa secara statistik dengan menggunakan analisa  sidik  ragam  pada  selang  kepercayaan  95%. Pengaruh  perlakuan  dianalisis  dengan  uji  Duncan  pada taraf 5% (Mattjik dan Sumertajaya, 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengujian Kemampuan Asosiasi Bakteri Diazotrof Endofit dengan Bibit Kelapa Sawit
Kemampuan asosiasi isolat bakteri diazotrof endofit dengan  bibit  kelapa  sawit  ditandai  dengan  keberadaan bakteri  diazotrof  endofit  yang  telah  diberi  gen  penanda (bakteri rekombinan) pada jaringan tanaman yang diamati. Pengukuran  kecepatan  asosiasi  bakteri  diazotrof  endofit dilakukan pada jaringan  daun 1 jam setelah aplikasi (JSA) dan 3 JSA dengan bantuan mikroskop fluorescence dengan perbesaran  100x.  Keberadaan  bakteri  rekombinan  dapat dilihat  dengan  adanya  cahaya  yang  berpendar  berwarna hijau di dalam jaringan bibit kelapa sawit tersebut.
Keberadaan  koloni  bakteri  diazotrof  endofit  yang diuji  pada  jaringan  daun  bibit  kelapa  sawit  terlihat  pada Gambar  1.  (ditunjukkan  dengan  tanda  panah).  Seluruh isolat  bakteri  yang  diuji  sudah  ditemukan  di  dalam jaringan  daun  bibit  kelapa  sawit  pada  1  JSA,  sehingga kecepatan asosiasi masing-masing isolat yang diuji dengan bibit kelapa sawit adalah 1 JSA.
Dari  metode  inokulasi  isolat  ke  bibit  kelapa  sawit yaitu  dengan  cara  disiramkan  ke  media  tanah  di  sekitar pangkal  batang  diyakini  sebagian  besar  isolat  bakteri tersebut  masuk  melalui  jaringan  akar  bibit  kelapa  sawit. Hal ini sesuai dengan yang disampaikan oleh Muthukumarasamy et  al. (2002)  bahwa  bakteri  diazotrof endofit  dapat  masuk  ke  dalam  jaringan  tanaman  melalui akar  lateral  dan  rambut  akar.  Kecepatan  masuknya  isolat bakteri  diazotrof  endofit  ke  dalam  jaringan  bibit  diyakini berhubungan  dengan  kesesuaian  senyawa  penyusun eksudat  akar  dan  asal  bakteri  diazotrof  endofit.  Bakteri diazotrof  endofit  yang  diuji  seluruhnya  diisolasi  dari jaringan tanaman kelapa sawit sehingga eksudat akar bibit kelapa sawit lebih sesuai sebagai sumber nutrisinya.
Gambar 1.  Keberadaan koloni bakteri diazotrof endofit di jaringan daun bibit kelapa sawit Keterangan : (a) koloni isolat 1 pada jaringan daun 1 JSA; (b) koloni isolat 1 pada jaringan daun 3 JSA;  (c) koloni isolat 2 pada jaringan daun 1 JSA (d) koloni isolat 2 pada jaringan daun 3 JSA (e) koloni isolat 3 pada jaringan daun 1 JSA (f) koloni isolat 3 pada jaringan daun 3 JSA.

## Peubah Keragaan Tanaman

## Diameter Bonggol
Hasil  analisis  statistik  terhadap  diameter  bonggol bibit  kelapa  sawit  menunjukkan  setiap  perlakuan  berbeda nyata  dalam  meningkatkan  diameter  bonggol  bibit  kelapa sawit sejak bibit berumur 12 MST hingga 18 MST (Tabel 1).  Corley  (1976)  menyatakan  bahwa  proses  fotosintesis bibit  kelapa  sawit  mulai  efektif  sekitar  45  hari  setelah perkecambahan,  sehingga  perbedaan  pertumbuhan  bibit kelapa sawit akibat perbedaan perlakuan akan terlihat pada periode setelahnya.
Hasil  terbaik  diameter  bonggol  bibit  kelapa  sawit dominan  ditunjukkan  oleh  kombinasi  perlakuan  aplikasi isolat  bakteri  diazotrof  endofit  tanpa  pemberian  pupuk  N (N0).  Diameter  bonggol  bibit  kelapa  sawit  yang  terbesar dicapai  pada  perlakuan  isolat  3  (N0I3)  diikuti  oleh perlakuan  isolat  2  (N0I2)  dan  isolat  1  (N0I1).  Sementara diameter  bonggol  terendah  ditunjukkan  oleh  perlakuan tanpa  aplikasi  isolat  bakteri  dan  tanpa  pemupukan  N (N0I0).  Di  sisi  lain  terlihat  kecenderungan  diameter bonggol  bibit  kelapa  sawit  yang  diberi  perlakuan  isolat bakteri diazotrof endofit semakin  menurun seiring dengan penambahan  dosis  pupuk  N.  Hal  ini  menunjukkan efektivitas  asosiasi  bakteri  diazotrof  endofit  semakin menurun  dengan  keberadaan  pupuk  N.  Berdasarkan percobaannya,  Triplett  (1996)  membuktikan  bahwa tanaman  tebu  yang  mendapat  perlakuan  pupuk  nitrogen dalam  jumlah  yang  tinggi  kehilangan  kemampuannya dalam berasosiasi dengan bakteri diazotrof endofit ditandai
dengan  menurunnya  jumlah  populasi  bakteri  diazotrof endofit di dalam jaringan tanaman. Penurunan kemampuan asosiasi  bakteri  diazotrof  endofit  dengan  tanaman  diduga menjadi  penyebab  menurunnya  peran  bakteri  diazotrof endofit  sebagai  penambat  dan  penghasil  nitrogen  (Lee et al .,  2000;  Cruz et  al .,  2001)  serta  penghasil  fitohormon (Feng et al ., 2006) bagi bibit kelapa sawit.

## Tinggi Tanaman
Hasil  analisis  statistik  terhadap  peubah  tinggi tanaman  bibit  kelapa  sawit  menunjukkan  setiap  perlakuan berbeda  nyata  dalam  meningkatkan  tinggi  bibit  kelapa sawit sejak bibit berumur 14 MST hingga 18 MST  (Tabel 2).  Pertumbuhan  tinggi  tanaman  menunjukkan  pola  yang sama dengan pertumbuhan diameter bonggol.
Tabel  2.  memperlihatkan  tinggi  bibit  kelapa  sawit terbaik  dominan  ditunjukkan  oleh  perlakuan  isolat  bakteri diazotrof  endofit  tanpa  pemberian  pupuk  N  yaitu perlakuan  aplikasi    isolat  1  (N0I1)  diikuti  oleh  perlakuan isolat  2  (N0I2)  dan  isolat  3  (N0I3).  Pertumbuhan  tinggi tanaman menunjukkan pola yang sama dengan pertumbuhan  diameter  bonggol  bibit  kelapa  sawit  yang diberi  perlakuan  isolat  bakteri  diazotrof  endofit  yaitu cenderung  semakin  menurun  seiring  dengan  penambahan dosis  pupuk  nitrogen.  Hal  ini  mendukung  dugaan  bahwa keberadaan  pupuk  N  dalam  jumlah  yang  besar  di  dalam jaringan  tanaman  akan  menurunkan  kemampuan  isolat bakteri  yang  diuji  untuk  berasosiasi  dengan  bibit  kelapa sawit.
e a b d c e f
Tabel 1. Pengaruh pemupukan N dan aplikasi isolat bakteri diazotrof endofit terhadap diameter bonggol bibit kelapa sawit
Perlakuan Umur tanaman (MST) 4 6 8 10 12 14 16 18 Dosis N Isolat --------------------     mm     -------------------- 0% Tanpa Isolat 3.35 a 4.78 a 6.05 a 8.10 a 9.50 i 12.13 f 13.91 j 15.58 m Isolat 1 3.77 a 4.72 a 6.85 a 9.31 a 11.06 b 13.98 b 17.88 b 20.15 c Isolat 2 3.55 a 4.74 a 6.73 a 8.98 a 10.61 cd 14.64 a 17.98 b 20.53 b Isolat 3 3.96 a 5.15 a 7.58 a 9.62 a 11.45 a 14.71 a 18.45 a 21.03 a Rerata 3.66 4.85 6.80 9.00 10.65 13.86 17.05 19.32 50% Tanpa Isolat 3.73 a 4.92 a 6.86 a 8.71 a 10.26 de 12.13 f 15.15 g 16.88 ij Isolat 1 3.68 a 5.12 a 7.48 a 9.42 a 10.37 de 14.02 b 17.54 c 19.45 d Isolat 2 3.48 a 4.88 a 6.37 a 8.14 a 9.98 g 13.05 de 16.47 e 18.78 f Isolat 3 3.63 a 4.90 a 7.59 a 9.06 a 10.68 c 13.53 c 16.98 d 19.20 de Rerata 3.63 4.95 7.07 8.83 10.32 13.18 16.53 18.58 75% Tanpa Isolat 3.47 a 4.58 a 6.65 a 8.21 a 10.44 cde 13.25 cd 16.25 e 18.24 g Isolat 1 3.67 a 4.97 a 6.50 a 8.87 a 10.42 de 12.12 f 15.09 gh 17.10 i Isolat 2 3.49 a 5.03 a 6.37 a 8.62 a 10.34 de 12.74 e 15.69 f 17.16 i Isolat 3 3.39 a 4.68 a 6.70 a 8.42 a 10.04 fg 12.85 e 15.67 f 17.80 h Rerata 3.50 4.81 6.55 8.53 10.31 12.74 15.68 17.58 100% Tanpa Isolat 3.59 a 4.79 a 6.52 a 8.00 a 9.79 gh 12.73 e 16.56 e 19.06 ef Isolat 1 3.39 a 4.95 a 6.46 a 8.42 a 9.64 hi 11.83 f 14.75 hi 16.28 kl Isolat 2 3.51 a 4.66 a 6.71 a 8.33 a 9.62 hi 12.08 f 14.48 i 16.06 l Isolat 3 3.50 a 4.66 a 6.39 a 8.14 a 9.25 j 12.02 f 14.88 gh 16.58 jk Rerata 3.50 4.77 6.52 8.22 9.58 12.17 15.16 16.99
* angka-angka yang diikuti oleh huruf kecil yang sama dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang tidak nyata menurut DMRT 5% N0 = 0% ; N1 = 50%; N2 = 75%; N3 = 100%
Tabel 2. Pengaruh pemupukan N dan aplikasi isolat bakteri diazotrof endofit terhadap tinggi bibit kelapa sawit
Perlakuan Umur tanaman (MST) 4 6 8 10 12 14 16 18 Dosis N Isolat -------------------- cm -------------------- 0% Tanpa Isolat 9.34 a 14.77 a 18.52 a 20.47 a 24.26 a 29.10 f 31.60 i 36.13 hi Isolat 1 9.83 a 15.65 a 19.69 a 22.48 a 27.97 a 32.71 ab 37.63 a 43.91 a Isolat 2 9.82 a 16.35 a 19.56 a 22.53 a 27.63 a 33.37 ab 36.66 b 42.98 b Isolat 3 9.26 a 15.95 a 20.02 a 22.68 a 27.69 a 33.08 ab 36.77 b 42.82 b Rerata 9.56 15.68 19.45 22.04 26.89 32.06 35.66 41.46 50% Tanpa Isolat 9.41 a 15.58 a 19.35 a 22.83 a 27.06 a 30.28 de 33.25 h 36.51 gh Isolat 1 9.92 a 15.66 a 19.07 a 22.43 a 27.53 a 33.24 ab 35.96 c 40.06 c Isolat 2 9.67 a 15.16 a 19.97 a 22.56 a 26.88 a 31.62 c 35.44 cd 38.77 d Isolat 3 9.73 a 15.27 a 19.10 a 22.54 a 27.22 a 31.82 c 35.27 cde 39.93 c Rerata 9.68 15.41 19.37 22.59 27.17 31.74 34.98 38.81 75% Tanpa Isolat 9.14 a 14.87 a 18.04 a 21.30 a 26.08 a 32.60 b 35.03 def 39.50 c Isolat 1 9.33 a 14.38 a 18.48 a 21.20 a 25.79 a 29.73 ef 34.84 defg 37.05 fg Isolat 2 9.86 a 15.53 a 19.05 a 22.23 a 27.23 a 31.61 c 34.76 defg 37.52 ef Isolat 3 9.58 a 14.47 a 18.68 a 21.85 a 26.80 a 30.90 d 34.31 fg 37.78 ef Rerata 9.48 14.81 18.56 21.64 26.48 31.21 34.74 37.96 100% Tanpa Isolat 8.81 a 15.10 a 18.33 a 21.40 a 26.80 a 30.41 de 34.09 g 40.08 c Isolat 1 9.33 a 15.32 a 18.47 a 21.93 a 26.37 a 30.73 d 33.36 h 35.56 i Isolat 2 8.78 a 14.76 a 17.97 a 21.72 a 26.07 a 29.37 f 33.18 h 35.60 i Isolat 3 9.44 a 15.29 a 18.52 a 21.88 a 26.56 a 30.81 d 34.52 efg 36.96 fg Rerata 9.09 15.12 18.32 21.73 26.45 30.33 33.79 37.05
* angka-angka yang diikuti oleh huruf kecil yang sama dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang tidak nyata menurut DMRT 5% N0 = 0% ; N1 = 50%; N2 = 75%; N3 = 100%

## Bobot Kering Jaringan Tanaman
Hasil  analisis  statistik  terhadap  bobot  kering jaringan  tanaman  kelapa  sawit  menunjukkan  setiap perlakuan berbeda nyata dalam meningkatkan bobot kering jaringan  tanaman  bibit  kelapa  sawit  seperti  terlihat  pada Tabel 3.
Tabel  3.  Berat  kering  jaringan  tanaman  bibit  kelapa  sawit  pada interaksi perlakuan pemberian empat taraf dosis pupuk Nitrogen dengan empat isolat bakteri diazotrof endofit.
Perlakuan Berat kering jaringan Akar Tajuk Total Dosis N Isolat -------------------- g -------------------- 0%
Tanpa Isolat 0.77 j 4.00 j 4.77 j Isolat 1 3.23 a 6.87 a 10.10 a Isolat 2 3.14 a 6.50 b 9.63 b Isolat 3 3.06 b 6.86 a 9.92 a Rerata 2.55 6.06 8.61 50% Tanpa Isolat 1.03 g 4.50 h 5.52 h Isolat 1 1.42 d 5.96 c 7.38 d Isolat 2 1.29 e 5.49 e 6.78 e Isolat 3 1.39 d 5.81 d 7.19 d Rerata 1.28 5.44 6.72 75% Tanpa Isolat 1.13 f 5.27 f 6.39 f Isolat 1 1.05 g 4.69 gh 5.73 gh Isolat 2 1.00 h 4.96 g 5.96 g Isolat 3 1.00 h 4.98 g 5.98 g Rerata 1.04 4.97 6.02 100% Tanpa Isolat 2.67 c 5.51 e 8.18 c Isolat 1 0.95 i 4.27 i 5.22 i Isolat 2 0.93 i 4.30 i 5.23 i Isolat 3 1.01 h 4.48 hi 5.49 hi Rerata 1.39 4.64 6.03
* angka-angka yang diikuti oleh huruf kecil yang sama dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang tidak nyata menurut DMRT 5% N0 = 0% ; N1 = 50%; N2 = 75%; N3 = 100%
Data  menunjukkan  perlakuan  isolat  berpengaruh signifikan  pada  bobot  kering  akar,  bobot  kering  tajuk  dan bobot  kering  total.  Hasil  terbaik  bobot  kering  akar,  tajuk dan  total  didapat  dari  perlakuan  pemberian  isolat  tanpa pemupukan  N.  Peningkatan  bobot  kering  tanaman  lebih disebabkan  adanya  keseimbangan  kadar  hara  dan  hormon dalam jaringan tanaman. Kehadiran isolat bakteri diazotrof endofit  dalam  jaringan  tanaman  mampu  memberikan asupan  N  dalam  jumlah  yang  optimum  dan  stabil, menghasilkan  fitohormon  yang  juga  meningkatkan  daya tahan  terhadap  patogen.  Keberadaan  N  sangat  penting dalam pertumbuhan tanaman  karena  kedudukannya dalam proses  biokimia  tanaman  sebagai  unsur  esensial  pada pembentukan sel, penyusunan protein, sitoplasma, klorofil, dan komponen sel lainnya.
Kecenderungan  penurunan  pertumbuhan  berat kering akar, berat kering tajuk dan berat kering total bibit kelapa sawit yang diberi perlakuan isolat bakteri diazotrof
endofit  akibat  penambahan  pupuk  nitrogen  juga  semakin memperkuat dugaan bahwa seluruh isolat bakteri diazotrof endofit  yang  diuji  cukup  sensitif  terhadap  keberadaan  N yang tinggi di dalam jaringan tanaman.

## SIMPULAN
Aplikasi  isolat  bakteri  diazotrof  endofit  tanpa pemupukan N pada bibit kelapa sawit mampu meningkatkan pertumbuhan diameter bonggol, tinggi bibit dan  berat  kering  bibit  kelapa  sawit.  Kemampuan  asosiasi isolat  bakteri  diazotrof  endofit  yang  diuji  semakin menurun  dengan  keberadaan  pupuk  N  dalam  dosis  tinggi ditandai  dengan  penurunan  pertumbuhan  vegetatif  bibit kelapa sawit.

## DAFTAR PUSTAKA
Barac,  T.,  S.  Taghavi,  B.  Borremann,  A.  Provoost,  L. Oeyen, J.V. Colpaert, J. Vangronsveld, and D.  van der  Lelie.  2004.  Enginered  endophytic  bacteria improve phytoremediation of water-soluble, volatile,  organic  pollutants. Nature  Biotechnology, 22: 583 – 588.
Corley,  R.H.V.  1976. Oil  Palm  Research .  Elsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam. p. 25- 30.
Cruz,  L.M.,  E.M.  Souza,  O.B.  Weber,  J.I.  Baldani,  J. Dobereiner, and F.O. Pedrosa. 2001. 16S ribosomal DNA  characterization  of  nitrogen-fixing  bacteria isolated  from  Banana    ( Musa  spp .)  and  Pineapple
( Ananas  comosus (L)  Merril). Applied  and Environmental Microbiology, 2375-2379.
Feng,  Y.,  D.  Shen,  dan  W.  Song.  2006.  Rice  endophyte Pantoea  agglomerans YS19  promotes  host  plant growth and affects allocations of host photosynthates. J.  App.  Microbiology., 100:  938- 945.
James,  E.K.,  F.L.  Olivares,  A.L.M.  de  Oliveira,  F.B.  dos Reis Jr, L.G. da Silva, and V.M. Reis. 2001. Further observations on the interaction between sugar cane and gluconacetobacter diazotrophicus under laboratory  and  greenhouse  conditions. Journal  of Experimental Botany ,  52: 747-760.
Lee,  Sunhee,  A.  Reth,  D.  Meletzus,  M.  Sevilla,  and  C. Kennedy. 2000. Characterization of a major cluster of  nif,  fix  and  associated  genes  in  a  sugarcane endophyte, Acetobacter  diazotrophicus . Journal Bacteriology, 182: 7088-7091.
Mattjik,  A.A.,  dan  I.M.  Sumertajaya.  2006. Perancangan Percobaan  dengan  Aplikasi  SAS  dan  Minitab .  IPB Pr., Bogor. 271 hlm.
Muthukumarasamy,  R.  G.  Revathi,  S.  Seshadri,  and  C. Lakshminarasimhan. 2002. Gluconacetobacter diazotrophicus (syn. Acetobacter  diazotrophicus ),  a
promising  diazotrophic  endophyte  in  tropic . Current Science, 83: 137–145.
Reiter, B., U. Pfeifer, H. Schwab, and A. Sessitsch. 2002. Response  of  endophytic  bacterial  communities  in potato plants to infections with  erwinia carotovora subsp.  atroseptica. Applied  and  Environmental Microbiology , 68 : 2261-2268.
Triplett,  E.W.  1996.    Diazotrophic  endophytes:  progress and  prospects  for  nitrogen  fixation  in  monocots. Plant and Soil , 186:  29 – 38.
Urquiaga,  S.,  K.H.S.  Cruz,  and  R.M.  Boddey.  1992. Contribution  of  nitrogen  fixation  to  sugarcane:
nitrogen-15  and  nitrogen  balance  estimates. Soil Science Society of America Journal, 56: 105 – 114.
Widayati,  W.E.  2005.  Bakteri  diazotrof  endofit  pada tanaman  tebu  ( Saccharum  officinarum L.)  – identifikasi  dan  mekanisme  asosiasi  [Disertasi].
Universitas Gadjah Mada. Hal: 2-3, 41-44.
Zinniel,  D.K.,  P.  Lambrecht,  N.B.  Harris,  Z.  Feng,  D. Kuczmarski,  P.  Higley,    C.A.  Ishimaru,  A. Arunakumari,  R.G.  Barletta,  and  A.K.  Vidaver. 2002.  Isolation  and  characterization  of  endophytic colonizing  bacteria  from  agronomic  crops  and prairie plants. Applied and Environmental Microbiology, 68: 2198-2208.