Hasil Penelitian                                                        Jurnal. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIII, No. 3 Th. 2002

## DETEKSI ERGOSTEROL SEBAGAI INDIKATOR KONTAMINASI CENDAWAN PADA TEPUNG TERIGU

## [Ergosterol Detection as an Indicator of Fungal Contamination in Wheat Flour]
A. Rika Pratiwi 1) , dan   Anjarsari 2)
1) Jurusan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian, Unika Soegijapranata
2) Alumni Jurusan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian, Unika Soegijapranata

## ABSTRACT
Fungal contamination of foodstuffs or foods during the storage period is becoming a serious matter. Quantification method is needed for qualifyng  storage  method  and  its  evaluating  contaminant  so  that  a  quick  fungal  and  its  metabolite  detection  can  be  used  to  prevent  further contaminantion.  One  detecting  method  was  measuring  ergosterol  content.  Ergosterol  is  a  sterol  group  compound,  which  is  a  contituting component of specific membrane on fungi and it does not exist on other microorganisms. The objective of the research is to describe fungi contamination in wheat flour during the storage period based on its ergosterol content. Ergosterol evaluation and microbiological evaluation are aimed to determine the content of ergosterol and to determine fungal species. Ergosterol content is measured by HPLC and fungal species is determined by the isolation and microscopic identification. The result of this research is fungal contamination can be detected by ergosterol eveluation and microbiological. The lowest detected ergosterol content was 0.211 ppm. Ergosterol content increased significanly during storage period which indicates that fungal contaminant level increased is well. The determined fungi species were found in high and low gluten of wheat flour which were potential to produce mycotoxin.

## Key words : Ergosterol, fungi,  and mycotoxin

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia,  tepung  terigu  sudah  merupakan bahan baku makanan yang sangat diterima di masyarakat luas  sebagai  bahan  pembuat  aneka  makanan,  terutama produk bakery .  Oleh  karena  sifat  kimia,  biologis  dan fisiknya  maka  sangat  memungkinkan  berbagai  macam mikroorganisme  dapat  tumbuh  dengan  baik  dan  pada bahan pangan  yang biasanya bersifat sangat spesifik dan sangat  tergantung  jenis  bahan    serta  kondisi  tertentu  dari penyimpanannya.
Adanya  mikroorganisme  yang  tumbuh  di  suatu bahan  pangan  sangat  berpengaruh  pada  kualitas produknya. Secara spesifik dikatakan bahwa tepung terigu yang  terkontaminasi fungi akan  berpengaruh  pada  produk olahannya  seperti  roti  dan pastry karena  akan menyebabkan  penurunan  kualitas.  Meskipun fungi biasanya mati dengan proses baking , namun rekontaminasi tersebut  biasanya  terjadi  setelah baking, (Bullerman  & Hartung,  1973 op  cit Weidenbörner,  et  al.,  2000). Sedangkan  pada  saat  mencampur  adonan,  kontaminasi fungi dapat  berasal  dari  lingkungannya  dan  lebih  lanjut pertumbuhan fungi pada  tepung,  roti  dan pastr y  dapat menyebabkan  kontaminasi  mikotoksin  (Hesseltine,  1976; Spicher, 1984 op cit Weidenbörner, et al., 2000).
Hal  tersebut  sesuai  dengan  kekuatiran  yang dikemukakan  Syarief  dan  Halid  (1993)  bahwa fungi yang
tumbuh  dalam  tepung  terigu  sangat  memungkinkan mengeluarkan  mikotoksin  pada  kondisi  tertentu  atau selama  penyimpanan.  Mikotoksin  merupakan  bagian  dari metabolit sekunder pada fungi yang dapat mengkontaminasi  makanan  dan  dapat  menyebabkan keracunan  pada  manusia  (Moss,  1992).  Beberapa  sistem organ  yang  dapat  terserang  akibat  toksin  dari fungi misalnya central nervous system, gastro intestinal system, liver, ginjal dan kulit (Hsieh, 1989 op cit Natori, et al., 1989). Dengan  demikian  penentuan  tingkat  kontaminasi fungi pada bahan makanan atau makanan terutama selama penyimpanan  menjadi  masalah  serius,  yaitu  masalah kerusakan  produk,  produksi  mikotoksin  dan  kemungkinan besar  dihasilkannya  spora  penyebab  alergi.  Menurut Schnurer  (1992),  metode  kuantifikasi  yang  dapat diandalkan  dan  terpercaya  sangat  dibutuhkan  untuk memperbaiki teknik penyimpanan dan untuk mengevaluasi produk mengenai tingkat kontaminasi fungi . Artinya bahwa sangat  diperlukan  metode  yang  tepat  dan  cepat    untuk mendeteksi  sedini  mungkin  keberadaan fungi dan metabolitnya  pada  bahan  pangan  untuk  mencegah kontaminasi lebih lanjut.
Salah satu metode untuk mendeteksi ada tidaknya fungi serta seberapa besar keberadaannya adalah dengan mengukur  ergosterol.  Ergosterol  adalah  komponen predominan sterol pada sebagian fungi (Weete, 1974 op cit Seitz, et al., 1977). Ergosterol adalah golongan sterol yang
merupakan  komponen  penyusun  membran  spesifik  pada fungi dan tidak terdapat pada mikroorganisme lain. Hal itu karena secara alamiah ergosterol adalah tujuan akhir jalur primer  dari  sterol  yang  merupakan  komponen  penyusun membran (Nes, 1974 op cit Seitz, et al., 1977), yaitu suatu membran lipid yang spesifik pada fungi (Weete, 1974 op cit Schnurer,  1992).  Sterol  berfungsi  sebagai  komponen membran,  dan  mempunyai  efek  yang  berarti  pada permeabilitas  dari fungi (Elliott,  1977 op  cit Griffin,  1981). Selain  dengan  mengukur  kandungan  ergosterol, sebenarnya  telah  ada  metode  untuk  mengetahui  adanya fungi dalam  makanan  secara  konvensional  yang  telah banyak  dilakukan  selama  ini,  yaitu  dengan  menggunakan metode  mikrobiologis,  namun  metode  ini  hanya  dapat mendeteksi fungi dalam  keadaan  hidup  dan  memerlukan waktu  inkubasi  beberapa  hari  (Seitz,  et  al.,  1977). Sedangkan  pada  analisa  ergosterol  dapat  mendeteksi secara  menyeluruh,  cepat,  akurat  dan  sensifitasnya  dapat mencapai  hingga  skala  ppm  ( part  per  million ).  Adanya kandungan  ergosterol  pada  beberapa  kapang  telah dibuktikan pada penelitian yang dilakukan Schnurer (1992) yaitu  yang  menunjukkan  bahwa  kandungan  ergosterol dalam  miselium  kapang  (b/b  dari  berat  kering)  pada Fusarium  culmorum 0,14%, Penicillium  rugulosum 0,14% dan Rhizopus  stolonifer 0,014%.  Penelitian  lain  yang dilakukan Wibowo, et al. (1995) menunjukkan bahwa kadar ergosterol Aspergillus  flavus 0,5-0,8%  dan Penicillium citrinum 1,9-2,4%b/b.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  memberikan gambaran  bahwa  kontaminasi fungi pada tepung  terigu selama  penyimpanan  dapat  terdeteksi  berdasarkan kandungan ergosterolnya.

## METODOLOGI

## Bahan dan Alat
Sampel  tepung  terigu  menggunakan  tepung  terigu gluten tinggi (kadar protein 12%, kadar air 14%) dan tepung terigu  gluten  rendah  (kadar  protein  8-9%,  kadar  air  14%) dengan masa penyimpanan selama 140 hari. Penyimpanan tepung  terigu  dilakukan  pada  kondisi  penyimpanan  suhu 26-27 C  dan  RH  79-80%.  Tepung  tersebut  disimpan dengan menggunakan kantong plastik jenis polycello yang terdiri atas OPP ( Oriented Polypropilene ) dengan ketebalan 20  m berlapis PE ( Polyethilene ) dengan ketebalan 35  m. Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk  analisa  ergosterol adalah  metanol,  heksana,  KOH,  aquades  dan  ergosterol standart.  Bahan  yang  digunakan  untuk  uji  mikrobiologi adalah PDA ( Potato Dextrose Agar ), asam laktat 50% dan PGYA ( Pepton Glucose Yeast Extract Agar ).
Peralatan  yang  digunakan  untuk  analisa  ergosterol terdiri  atas  timbangan  analitik, shaker ,  labu  bundar,
kondensor,  pemanas  listrik,  corong  pisah/ separatory funnel ,  alat-alat  gelas,  Whatman Millipore -0,45  m Nylon filter, HPLC  ( High  Performance  Liquid  Chromatography ) dan  kolom  phenumenox  RP  18-5 .  Peralatan  untuk  uji mikrobiologi  terdiri atas petridis, inkubator, autoclave , LAF ( Laminar Air Flow ), kaca preparat dan mikroskop.
Metode Penelitian ini terdiri atas dua tahap pengujian yaitu analisis ergosterol dan uji mikrobiologi. Pengujian dilakukan selama 140 hari setiap 2 minggu sekali. Analisis ergosterol, terdiri  atas  ekstraksi  yang  dilanjutkan  dengan  pengukuran kadar  ergosterol  menggunakan  HPLC.  Pengujian  setiap  2 minggu  sekali.  Sampel  sebanyak  25  gram  dan ditambahkan  metanol  :  heksana  (80:20,  v/v)  dan  dikocok menggunakan shaker . Cairan disaring kemudian dilakukan saponifikasi dengan penambahan 2 gram KOH pada 20 ml ekstrak  jernih.  Cairan  dididihkan  selama  20  menit  dalam labu  bundar  yang  dilengkapi  kondensor.  Setelah  ekstrak dingin ditambah dengan 5 ml aquades dan dipindahkan ke dalam  corong  pisah  kemudian  dikocok  kuat  selama  15 detik.  Ekstraksi  dilakukan  lagi  dengan  2  x  5  ml  heksana. Lapisan  heksana  diambil  dan  dikumpulkan,  kemudian diuapkan  hingga  kering  dan  residu  dilarutkan  dalam  1  ml metanol.  Residu  yang  sudah  dilarutkan  dalam  metanol tersebut  disaring  dengan  Whatman  Millipore  -  0,45  m Nylon  filter.  Hasil  ekstraksi  yang  diperoleh  disuntikkan  ke dalam HPLC. Sebelum hasil ekstraksi sampel disuntikkan, terlebih  dahulu  menyuntikkan  ergosterol  standar  dengan metanol  dengan  konsentrasi  tertentu  hingga  didapatkan peak yang  menunjukkan  terdeteksinya  kadar  ergosterol. Fase gerak yang digunakan metanol : air (95:5 v/v) dengan flow  rate 0,7  ml/  menit.  Kolom  yang  digunakan  adalah phenumenox  RP  18-5 ,  dan  detektor  diatur  dengan panjang gelombang 282 nm (Seitz et al., 1977).
Uji mikrobiologi, terdiri atas isolasi yang dilanjutkan identifikasi  mikroskopik.  Isolasi  kapang  dan  khamir menggunakan  metode  langsung  dengan  media  tanam kapang  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar )  yang  mengandung asam  laktat  50%  dan  khamir  dengan  PGYA  ( Pepton Glucose  Yeast  Extract  Agar ).  Kemudian  diinkubasikan selama 1-4 hari pada suhu 30 C.  Identifikasi kapang dan khamir  dengan  cara  dibuat slide  culture (Lay,  1994)  lalu dicocokkan  sifat  morfologinya  secara  mikroskopik berdasarkan  Cappuccino  &  Sherman  (1983),  Lay  (1994) dan Samson, et al., (1995).
Analisa  data  hasil  pengukuran  kandungan ergosterol tepung terigu dengan menggunakan anova satu arah. Anova satu arah untuk menganalisa pengaruh waktu penyimpanan masing-masing tepung terigu terhadap kadar ergosterolnya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  Tabel  1  dan  Tabel  2  menggambarkan  data tentang  jenis fungi dan  konsentrasi  ergosterol  yang ditemukan selama penyimpanan 14 hari hingga 140 hari.
Penentuan  kadar  ergosterol  dapat  dijadikan indikator  kontaminasi fungi (kapang  dan  khamir), diperlihatkan  pada  Tabel  1  dan  2.  Pada  tabel  tersebut terlihat  bahwa  pada  semua  sampel  yang  diuji  dengan analisa  ergosterol  dan  uji  mikrobiologi  (hasil  isolasi  dan identifikasi)  terdeteksi  sejumlah  ergosterol,  dan  juga mengandung  kapang  dan  khamir.  Artinya,  kedua  analisa tersebut  menunjukkan  hasil  positif.  Hal  ini  seperti  yang dijelaskan  dalam  Deacon  (1980)  bahwa  ergosterol  adalah golongan  sterol  yang  mempunyai  komponen  plasmalema kapang.  Ditambahkan  oleh  Seitz,  et  al.,  (1977)  bahwa ergosterol  dapat  digunakan  sebagai  indikator  efektif  untuk dasar  kontaminasi fungi dan  berkorelasi  dengan pertumbuhannya  karena  konsentrasinya  dalam  miselium kapang  pada  umumnya  tetap  dan  merupakan  komponen utama.
Kadar  terkecil  ergosterol  yang  dapat  terdeteksi terlihat  sangat  kecil  yakni  0,211  ppm  (Tabel  1). Terdeteksinya hingga skala bpj (bagian per sejuta = ppm) karena  ergosterol  dapat  menyerap  sinar  ultraviolet  antara 300-240  nm,  sehingga  sangat  memungkinkan  dilakukan analisis  secara  spektrofotometri.  Dengan  menggunakan HPLC  maka  hal  tersebut  sangat  memungkinkan mendeteksi  kontaminan fungi secara  tepat  dan  cepat. Meskipun  rumit,  namun  metode  pengukuran    ergosterol dengan HPLC dapat dengan cepat dan sensitif mendeteksi ergosterol  sebagai  suatu  penanda    biokimia  dari kontaminasi fungi pada makanan berupa biji-bijian (Rao, et al., 1989).
Pada  Tabel  1  dan  Tabel  2  juga  terlihat  bahwa selama penyimpanan, dari umur simpan 14 hari hinga 140 hari  kandungan  ergosterolnya  semakin  tinggi,  artinya tingkat  kontaminasi fungi juga  semakin  tinggi.  Hal  ini dikarenakan  kadar  ergosterol  memang  berkorelasi  positif terhadap  berat  kering  dan  panjang  hifa fungi ,  demikian seperti yang diungkapkan Schnurer (1992). Pada penelitian ini tepung terigu disimpan pada suhu dan kelembaban yang biasa  terdapat  pada  kondisi  penyimpanan  rumah  tangga. Meskipun  masih  pada  awal  penyimpanan  tetapi  tepung terigu  tersebut  sudah  terkontaminasi.  Hal  ini  dikarenakan, tepung  terigu merupakan produk yang berasal dari serealia dan  telah  mengalami  beberapa  tahapan  pengolahan tertentu. Fungi dapat hadir ketika masih dalam bentuk bulir gandum  yang  bisa  sebagai  penyakit  atau  hama  pada tanaman  gandum  itu  sendiri,  kemudian  dapat  terikut sporanya  ketika  pada  proses  penggilingan,  selanjutnya terdapat  dalam  tepung  terigu.  Seperti  yang  diungkapakan oleh  Christen  &  Cohen  (1950) op  cit Weidenbörner,  et  al.
(2000)  bahwa  spora fungi dapat  tertinggal  dalam  tepung terigi  selama  beberapa  tahun  terutama  selama  proses penyimpanan karena miselium kapang yang sudah berada dalam bulir gandum akan menempel pada lapisan perikarp gandum  dan  konidianya  akan  melekat  erat  pada permukaan  biji  sehingga  akan  terikut  dalam  proses penggilingan.  Spora  selanjutnya  akan  tumbuh  sesuai kondisi penyimpanannya.
Semakin  tinggi  tingkat  kontaminasi fungi yang ditunjukkan  dengan  semakin  tingginya  kadar  ergosterol selama  penyimpanan  merupakan  petunjuk  bahwa  ada peningkatan  jumlah,  jenisnya  maupun  kelimpahannya. Menurut Robinson & Howell (1985) dikatakan bahwa jenis mikroorganisme  yang  tumbuh  dan  berkembang  biak  di dalam  bahan  pangan  dipengaruhi  oleh  faktor  kimia,  fisik dan  biologi  dari  bahan  pangan  itu  sendiri  dan  faktor  lain sesuai  kondisi  penyimpanan.  Faktor-faktor  tersebut  juga menjadi  penyebab  adanya  kemunculan  jenis fungi yang berbeda-beda pada setiap umur simpan (lihat Tabel 1 dan 2).  Meskipun  berbeda-beda  namun  secara  keseluruhan jenis  kapang  yang  ditemukan  didominasi  oleh Aspergillus dan Penicillium yang  keduanya  ternyata  merupakan mikoflora  gandum  disamping Alternaria , Fusarium , Cladospora , Diplodia ,  dan Mucor .  Selain  itu  juga merupakan fungi yang dominan pada tepung baru terutama P.  citrinum dan P.  roqueforti yang  dapat  menyebabkan kerusakan  produk  adonan  pada  proses  pendinginan (Groves  &  Hesseltine,  1996;  Hesseltine,  1969  dalam Makfoeld  (1993).  Sedangkan Rhizopus yang  ditemukan menurut  Syarief  &  Halid  (1993)  merupakan  kapang intermedier  disamping Fusarium , Cladosporium dan Culvuraria .  Kapang  intermedier  adalah  kapang  prapanen yang  berkembang  pada  awal  penyimpanan  dan  bertahan untuk  beberapa  waktu  selama  penyimpanan  kemudian perkembangannya akan menurun sangat tajam.
Pada  Tabel  3  dan  Tabel  4  menunjukkan  bahwa pada  berbagai  umur  simpan  ternyata  ditemukan  berbagai jenis  kapang  yang  memproduksi  toksin.  Dengan  adanya data tersebut maka deteksi sedini mungkin yang akurat dan cepat  memang  sangat  diperlukan.  Hal  tersebut  juga  akan berguna  agar  teknik  penyimpanan  serta  penetapan  angka bagi  faktor-faktor  yang  menjadi  pendukung  timbulnya kontaminasi fungi (terutama  kadar  air)  sungguh diperhatikan  oleh  para  produsen.  Terlebih  telah  diketahui bahwa kontaminasi kapang pada tepung jarang terlihat oleh mata,  sehingga  dapat  menimbulkan  masalah  yang  besar bila  ternyata  kapang  tersebut  memproduksi  mikotoksin yang merupakan bentuk kontaminasi lebih lanjut dari fungi .
Tabel 1. Jenis kapang dan khamir pada tepung terigu gluten rendah selama penyimpanan
Jenis Fungi Waktu Simpan (hari) yang ditemukan 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 1. Aspergillus fumigatus 2. Aspergillus niger 3. Aspergillus penicilloides 4. Penicillium citrinum 5. Penicillium frequentans 6. Penicillium roqueforti 7. Penicillium verrucosum 8. Mucor racemosus 9. Rhizopus oligosporus 10.Hansenula sp 11.Saccharomyces sp - - - + - + - + - + - - - + - + - - - - - + - - + - + - - - - - + - - + - + - - - - - + - - + - + - - - - - + - - + + - - - - - - + - - + - - + - - + + - + - + - - + - - - - + + + - - - - + + - - - + + + - - - + - - - + Total kadar ergosterol (ppm) 0,211 0,244 c 0,824 0,328 abc 0,454 0,214 c 0,820 0,710 abc 0,622 0,145 bc 1,218 0,193 ab 1,266 0,173 ab 1,532 0,122 a 1,737 0,060 a 1,047 0,588 abc
Keterangan :  +  :  terdapat fungi :  tidak terdapat fungi Huruf berbeda pada masing-masing perlakuan menunjukkan beda nyata pada tingkat kepercayaan 99% (p < 0,01)
Tabel 2. Jenis kapang dan khamir pada tepung terigu gluten tinggi selama penyimpanan
Jenis Fungi Waktu Simpan (hari) yang ditemukan 14 28 42 56 70 84 98 112 126 140 1. Aspergillus fumigatus 2. Aspergillus niger 3. Aspergillus penicilloides 4. Penicillium frequentans 5. Penicillium cammemberti 6. Penicillium citrinum 7. Hansenula sp 8. Saccharomyces sp - - - - + - + - + - + + - - - + - - + + - - - + - - + + - - - + - - + + - - - + - - + + - + - + - + + - - + - + - - + + - - - + + + + - + - + - + + + - + - - + Total kadar ergosterol (ppm) 0,733 0,136 abc 0,660 0,080 ab 0,753 0,155 abc 0,692 0,114 ab 0,644 0,148 a 1,566 0,854 bcd 1,037 0,517 abc 1,553 0,097 cd 2,104 0,081 d 2,818 0,493 d
Keterangan :  + :  terdapat fungi
-  :  tidak terdapat fungi Huruf berbeda pada masing-masing perlakuan menunjukkan beda nyata pada tingkat kepercayaan 99% (p < 0,01 )
Tabel  3.  Jenis  mikotoksin  yang  dihasilkan  joleh  cendawan  yang  ditemukan  pada  tepung  terigu  gluten  rendah  selama penyimpanan 14 hingga 140 hari
Jenis Fungi Waktu    Simpan (hari) Mikotoksin yang yang ditemukan 1 14 2 28 4 42 5 56 7 70 8 84 9 98 1 112 1
126 1 140 dihasilkan * 1. Aspergillus fumigatus - - - - - - - + + + Fumigaclavins, Fumagilin , Fumigatin, Fumitoxins, Fumitremorgin A & C, Gliotoxin, Spinulosin, Tryptoquivalins, Verrucologen 2. Aspergillus niger - - - - - - - - + + Malformins, Naphthoquinones, Nigragilin 3. Aspergillus penicilloides - +
+ + + + + +
- + - 4. Penicillium citrinum + - - - - + - - - - Citrinin 5. Penicillium frequentans - + + + + - - - - - - 6. Penicillium roqueforti + - - - - - + + - - Patulin, Requefortine 7. Penicillium verrucosum - - - - - - - - + + Citrinin, Ochratoxin A 8. Mucor racemosus + - - - - - - + - - - 9. Rhizopus oligosporus - - - - - + - - - - - 10.Hansenula sp + - - - - -+ - - - - - 11.Saccharomyces sp - +
+ + + - +
- + - -
Keterangan :  +  :  terdapat fungi - :  tidak terdapat fungi
*  :  berdasarkan Smith, et al., (1994)
Tabel 4. Jenis mikotoksin yang dihasilkan oleh cendawan yang ditemukan pada tepung terigu gluten tinggi selama penyimpanan 14 hingga 140 hari
Jenis Fungi Waktu    Simpan (hari) Mikotoksin yang yang ditemukan 1 14 2
28 4 42 5 56 7 70 8 84 9 98 1 112 1
126 1 140 dihasilkan * 1. Aspergillus fumigatus - + - - - - - - + + Fumigaclavins, Fumagilin , Fumigatin, Fumitoxins, Fumitremorgin A & C, Gliotoxin, Spinulosin, Tryptoquivalins, Verrucologen 2. Aspergillus niger - - - - - - + - + + Malformins, Naphthoquinones, Nigragilin 3. Aspergillus penicilloides - + + + + + + + -
+ - 4. Penicillium citrinum -
+ + + + + -
+ - - - 5. Penicillium frequentans + - - - - - - - + + Cylopia Zonic Acid 6. Penicillium roqueforti - - - - - + + - - - Citrin 7. Hasenula sp + - - - - - - + - - - 8. Saccharomyces sp -
+ + + + + + - -
+
-
Keterangan :  +  :  terdapat fungi - :  tidak terdapat fungi
*  :  berdasarkan Smith, et al., (1994)

## KESIMPULAN
Analisa  ergosterol  dapat  digunakan  untuk menentukan  kontaminasi fungi karena  dapat  terdeteksi sejumlah  ergosterol  dan  teridentifikasinya  kapang maupun  khamir  hasil  uji  mikrobiologi.  Kadar  ergosterol terkecil yang dapat terdeteksi adalah 0,211 ppm.
Selama  penyimpanan  tepung  terigu  ditemukan bahwa kandungan ergosterol semakin tinggi sesuai umur simpannya  yang  berarti  semakin  tinggi  tingkat kontaminasi fungi .
Selama
penyimpanan telah ditemukan kontaminan kapang pada tepung terigu gluten tinggi dan gluten  rendah  yang  mempunyai  potensi  memproduksi mikotoksin.

## DAFTAR PUSTAKA
Deacon, J. W. (1980) . Introduction to Modern Mycology. Blackwell Scientific Publications. London.
Griffin,D.  H.  (1981). Fungal  Physiology.  John  Wiley  & Sons. New York.
Lay, B. W. (1994). Analisis Mikroba di Laboratorium. PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta.
Makfoeld,  D.  (1993). Mikotoksin  Pangan.  PAU  Pangan dan Gizi UGM. Kanisius. Yogyakarta.
Moss,  M.  O.  (1992). Microbial  Food  Poisoning. Chapman & Hall. London.
Natori,  S.,  K.  Hashomoto  &  Y.  Ueno  (ed.)(1989). Mycotoxins  and  Phycotoxins  '88.  Elsivier. Amsterdam.
Rao,  B.  S.,  V.  S.  Rao,  Y.  Ramakrishna,  R.V.  Bhat (1989 ).  Rapid  and  Specific  Method  for  Screening
Ergoterol  as  an  Index  of  Fungi  Contamination  in Cereal Grains. Food Chemistry 31 : 51-56.
Robinson, C. W. & J. A. Howell (1985). The Practice of Biotechnology  :  Speciality  Products  and  Service Activities.  In  M.  M.  Young  (eds.)  Comprehensive Biotechnology  :  The  Principles,  Aplication  and Regulation of  Biotechnology in Industry, Agriculture and Medicine.  Pergamon Press.  USA.
Samson,  R.  A.,  E.  S.  Hoekstra,  J.  C.  Frisvad,  &  O. Filtenborg  (eds.)  (1995 ).    Introduction  to  Food- Borne Fungi. Centraalbureau voor
Schimmelcultures.  Netherlands.
Schnurer,  J.  (1992). Comparison  of  Methods  for Estimating the Biomass of Three Food-Borne Fungi with  Different  Growth  Patterns.  Applied  and Environmental Microbiology. 59(2):552-555.
Seitz, L. M., H. E. Mohr, R. Burroughs, & D. B. Sauer.
(1977). Ergosterol as an Indicator of Fungal Invation in Grain. Cereal Chem. 54: 1207-1217.
Smith,  J.  E.,  C.  W.  Lewis,  J.  G.  Anderson,  G.  L. Salomons  (1994) .  Mycotoxins  in  Human  Nutrition and  Health.  European  Commission  Directorate- General XII for scientific research and development.
Syarief, R. & H. Halid (1993) .  Teknologi Penyimpanan Pangan. Arcan.  Jakarta.
Weidenbörner, M., C. Wieczorek, S. Appel & B. Kunz (2000 ).  Whole  Wheat  and  White  Wheat  Flour-The Mycobiota  and  Potential  Mycotoxins.  Food Microbiology. 17:103-107.
Wibowo,  S.  Marlia  &  E.  K.  Rahmana.  (1995). Penentuan Kuantitatif Biomassa Jamur Toksik pada Sampel  Makanan  Menggunakan  Metode  Analisis Ergosterol. Laporan Penelitian – ITB.