## Formulasi Dan Evaluasi Mikroemulsi Gel Minyak Chamomile Serta Uji Aktivitas Antioksidan
Sri Sulistiana 1 , Sasanti Tarini Darijanto 2
1,2 Sekolah Farmasi,Institut Teknologi Bandung, Bandung, Indonesia. * E-mail: srisulis151190@gmail.com
Article Info: Received: 16  Juli  2021 in revised form: 20  Desember 2021
Accepted: 27  Desember 2021 Available Online: 1 Januari 2022

## ABSTRACT
Chamomile  essential  oil  contains  various  kinds  of  chemical compounds that was useful for skin. One of them was capable to provided good protection against free radicals. The aim of this study was to develop topical antioxidant formulation in the form of microemulsion gel that had good stability and safe for skin. This study began with determined oil concentration to  incorporated  into  microemulsion  formula.Furthermore, optimization  of  the  surfactant,  cosurfactant  and  carrier  oil concentration  to  produced  clear  microemulsion.  The evaluation  of  microemulsion  include  of  organoleptic,  pH, viscosity, oil droplet size, oil droplet morphology, freeze thaw test  and  antioxidant  activity  test  for  28  days.  Then microemulsion  was  incorporated  into  gel  base  to  form microemulsion  gel.  The  evaluation  of  microemulsion  gel include  of  organoleptic,  pH,  viscosity,  freeze  thaw  test, antioxidant  activity  test  and  irritation  test.  Optimization results  of  surfactant,  cosurfactant  and  carrier  oil  which  can produced clear microemulsion were Tween 80 30%, PEG 400 10%  and  Virgin  Coconut  Oil  (VCO)  5%.  Microemulsion  had good  stability  indicated  by  pH  range  of  5  during  stored  at room  temperature  and  climatic  chamber  with  75%  Relative Humidity,  viscosity  range  from  11  to  12  cps,  stable  droplets size  below  50  nm,  and  no  phase  separation  observed  in centrifugation  and  freeze  thaw  test.  Chamomile  oil microemulsion  IC 50 value  of  84.223  ppm.  Chamomile  oil microemulsion gel was also had good stability indicated by pH value was remain in neutral pH range (7), viscosity from 903 to  967  cps,  and  no  phase  separation  in  freeze  thaw  test. microemulsion  gel  IC 50 value  of  80,785  ppm.  Chamomile  oil microemulsion  gel  was  not  irritated  the  skin  with  primary irritation  index  0.  The  results  in  this  study  showed  that Chamomile  oil  microemulsion  gel  had  good  stability,  had antioxidant activity and does not irritated. Keywords :
Chamomile oil Microemulsion Microemulsion gel
Antioxidant Corresponding Author: Sri Sulistiana Sekolah Farmasi,Institut
Teknologi  Bandung,  Bandung,
Indonesia.
E-mail:
sri_sulis151190.gmail.com
Copyright © 2022 IJPE-UNG
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6th Style): Sulistiana.S.,Darijanto.S.T. (2022). Formulasi Dan Evaluasi Mikroemulsi Gel Minyak Chamomile Serta Uji Aktivitas Antioksidan . Indonesian Journal of Pharmaceutical (e-Journal), 2 (1), 52-66.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2022; 2 (1): 52–66 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v2i1.11231

## ABSTRAK
Minyak esensial chamomile mengandung berbagai macam kandungan senyawa kimia yang bermanfaat  untuk  kulit.  Salah  satunya  yaitu  mampu  memberikan  perlindungan  yang  baik terhadap  radikal  bebas.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menghasilkan  formulasi antioksidan  topikal  dalam  bentuk  mikroemulsi  gel  yang  memiliki  stabilitas  yang  baik  dan aman  bagi  kulit.  Penelitian  diawali  dengan  penentuan  konsentrasi  minyak  yang  akan diinkorporasikan ke dalam formula mikroemulsi. Selanjutnya dilakukan optimasi konsentrasi surfaktan, kosurfaktan dan minyak pembawa untuk menghasilkan mikroemulsi yang jernih. Evaluasi  mikroemulsi  meliputi  organoleptik,  pH,  viskositas,  penentuan  ukuran  globul, pengamatan morfologi globul, uji Freeze thaw , sentrifugasi, dan uji aktivitas antioksidan selama 28  hari.  Kemudian  mikroemulsi  diinkorporasikan  ke  dalam  basis  gel  menjadi  sediaan mikroemulsi  gel.  Evaluasi  mikroemulsi  gel  meliputi  organoleptik,  pH,  viskositas,  uji freeze thaw , uji aktivitas antioksidan dan uji iritasi. Hasil optimasi surfaktan, kosurfaktan dan minyak pembawa yang dapat menghasilkan mikroemulsi yang jernih adalah Tween 80 30% PEG 400 10%  dan  VCO  5%.  Mikroemulsi  yang  dihasilkan  memiliki  stabilitas  yang  baik  ditunjukkan dengan pH sediaan yang berada di rentang pH 5 selama penyimpanan pada suhu kamar dan Climatic chamber kelembapan relatif 75%, viskositas berkisar 11 – 12 cps, ukuran globul stabil di bawah 50 nm, pada uji sentrifugasi dan freeze thaw tidak terjadi pemisahan fase. Nilai IC 50 mikroemulsi  minyak  chamomile  adalah  84,223  ppm.  Mikroemulsi  gel  Chamomile  oil  yang dihasilkan juga memiliki stabilitas yang baik ditunjukkan dengan nilai pH tetap berada pada rentang pH netral (7), viskositas berkisar 903 – 967 cps, pada pengujian freeze thaw tidak ada pemisahan  fase.  Nilai  IC 50 mikroemulsi  gel  adalah  80,785  ppm.  Mikroemulsi  gel  tidak mengiritasi  kulit  dengan  indeks  iritasi  primer  0.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa mikroemulsi  gel  dari  minyak  Chamomile  memiliki  stabilitas  yang  baik,  memiliki  aktivitas antioksidan serta tidak mengiritasi kulit.
Kata Kunci: Minyak chamomile; Mikroemulsi; Mikroemulsi gel; Antioksidan

## 1.   Pendahuluan
Selain bermanfaat untuk pengobatan, tanaman Chamomile ( Matricaria  recutita ) juga berpotensi digunakan sebagai zat berkhasiat dalam formulasi kosmetik. Penelitian terdahulu  yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  minyak  esensial  dari  bunga tanaman  chamomile  mengandung  senyawa  yang  sangat  bermanfaat  untuk  kulit, diantaranya  mampu  memberikan  perlindungan  yang  sangat  baik  terhadap  radikal bebas [1].
Kulit merupakan salah satu organ tubuh yang rentan terhadap paparan radikal bebas, sehingga diperlukan suatu sediaan antioksidan topikal alami untuk melindungi kulit. Melihat potensi minyak chamomile sebagai antioksidan maka minyak ini dapat digunakan  sebagai  bahan  dalam  pembuatan  sediaan  topikal  untuk  kulit.  Namun, penggunaan minyak esensial memiliki masalah yaitu usia simpan ( Shelf life ) yang relatif buruk serta ketidakstabilan secara termodinamika yang menghasilkan pemisahan fase selama masa penyimpanan. Dalam penggunaannya secara topikal, minyak esensial juga memiliki  masalah  lain  yaitu  ketidaknyamanan  dalam  penggunaan  pada  kulit  dan penguapan minyak yang relatif cepat.
Dalam  upaya  mencapai  efek  optimum  dari  minyak  chamomile  diperlukan sistem  penghantaran  yang  baik,  misalnya  sistem  mikroemulsi.  Mikroemulsi  sebagai suatu  sistem  penghantaran  telah  banyak  dipakai  selama  beberapa  tahun  belakangan untuk meningkatkan penghantaran obat perkutan [2]. Sediaan mikroemulsi diketahui lebih baik dibandingkan sediaan emulsi dalam menghantarkan obat secara dermal bagi senyawa  obat  hidrofilik  dan  lipofilik  [3].  Sediaan  ini  juga  dapat  menjaga  kestabilan senyawa  obat,  mengontrol  pelepasan  obat,  serta  meningkatkan  kelarutan  dan bioavailabilitas dalam tubuh. Sistem ini dapat diaplikasikan pada berbagai rute sediaan, seperti oral, topikal, okular, pulmonar dan intravena [4].
Mikroemulsi  merupakan  sediaan  dengan  viskositas  yang  rendah.  Sehingga viskositasnya  perlu  ditingkatkan  untuk  kemudahan  pengaplikasian  sediaan  secara topikal. Karena itu, mikroemulsi dapat dibuat dalam bentuk mikroemulsi gel. Sediaan mikroemulsi dapat digabungkan dengan gelling agent membentuk sediaan mikroemulsi gel  untuk  meningkatkan  viskositasnya,  sehingga  waktu  kontak  pada  kulit  bisa meningkat [5].
Berdasarkan hal-hal yang telah dipaparkan tersebut, maka pada penelitian ini akan  dikembangkan  suatu  sistem  penghantaran  minyak  chamomile  dalam  bentuk mikroemulsi  gel  sebagai  sediaan  antioksidan  topikal  selanjutnya  dilakukan  evaluasi stabilitas  sediaan  secara  kimia  dan  fisika,  pengujian  aktivitas  antioksidan  melalui %peredaman dan IC 50 , serta pengujian keamanan sediaan melalui uji iritasi. 2.  Metode
Penelitian  diawali  dengan  penentuan  konsentrasi  minyak  yang  akan diinkorporasikan  ke  dalam  formula  mikroemulsi.  Selanjutnya  dilakukan  optimasi konsentrasi  surfaktan,  kosurfaktan  dan  minyak  pembawa  untuk  menghasilkan mikroemulsi yang jernih. Evaluasi mikroemulsi meliputi organoleptik, pH, viskositas, penentuan ukuran globul, pengamatan morfologi globul, uji Freeze thaw , sentrifugasi, dan uji aktivitas antioksidan selama 28 hari. Kemudian mikroemulsi diinkorporasikan ke dalam basis gel menjadi sediaan mikroemulsi gel. Evaluasi mikroemulsi gel meliputi organoleptik, pH, viskositas, uji freeze thaw dan uji aktivitas antioksidan mikroemulsi gel. Uji iritasi sebagai evaluasi in vivo dilakukan dengan menggunakan kelinci albino jantan.
Bahan
Minyak  chamomile  (Eteris  Nusantara), Virgin  Coconut  Oil (VCO)  (SITH  ITB), Tween 80 (Brataco), Polietilen glikol (PEG) 400 (Brataco), Viscolam (Brataco), Propilen glikol  (Kuadrant),  HPMC  (SF  ITB),  Na  CMC  (SF  ITB),  Karbopol  (SF  ITB),    Gliserin (Kuadrant),  Dimethyloldimethyl  hydantoin  (Kuadrant), DPPH (2,2-Diphenyl-1- picrylhydrazyl) (Sigma-Aldrich), Alpha tokoferol (Vitamin E) (SF ITB), Metanol p.a (SF ITB), aquades (SF ITB), aqua deion (SF ITB), kasa steril, plester hipoalergik, dan perban.

## Aktivitas antioksidan Minyak Chamomile
Sampel  yang  diuji  berupa  minyak  chamomile  dan  vitamin  E  sebagai pembanding. Dibuat larutan stok DPPH dalam metanol dengan konsentrasi  50 ppm. Kemudian  2  ml  larutan  diukur  serapannya  dengan  spektrofotometer  hingga menunjukkan  absorbansi  tertentu  pada  panjang  gelombang  516  nm.  Absorbansi  ini merupakan absorbansi DPPH (Abs DPPH). Kemudian untuk menentukan peredaman dari  DPPH,  sampel  berupa  minyak  chamomile  dan  vitamin  E  diencerkan  dengan metanol  dalam  berbagai  konsentrasi.  Minyak  chamomile  dengan  seri  konsentrasi  25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, 100 ppm dan 180 ppm dan  vitamin E dengan seri konsentrasi 4 ppm,  8  ppm,  12  ppm,  16  ppm  dan  20  ppm.  Absorbansi  masing-masing  konsentrasi diukur pada panjang gelombang 516 nm sebagai koreksi. Selanjutnya masing-masing sampel ditambahkan kedalam larutan DPPH dengan perbandingan 1 : 1, dan diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  ruang  di  tempat  gelap,  sebelum  dilakukan  pengukuran absorbansi pada panjang gelombang 516 nm. Kemudian persen peredaman ditentukan dengan membandingkan nilai serapan yang diberikan oleh sampel dengan DPPH (Abs sampel) yang dibandingkan dengan nilai serapan DPPH (Abs DPPH).

## Optimasi jumlah surfaktan, kosurfaktan dan minyak pembawa
Formula mikroemulsi dibuat dengan menggunakan Virgin coconut oil (VCO) 5%, Tween 80 dan PEG 400. Perbandingan surfaktan dan kosurfaktan dibuat dalam berbagai variasi  yaitu  1:1,  2:1,  3:1  dan  4:1.  Dipilih  perbandingan  yang  dapat  menghasilkan mikroemulsi  yang  jernih.  Setelah  diperoleh  perbandingan  yang  tepat,  selanjutnya dilakukan penentuan jumlah keduanya dalam sediaan.
Formula mikroemulsi dibuat dengan konsentrasi Tween 80 dan PEG 400 yang diperoleh dari optimasi di atas, sedangkan VCO ditambahkan dalam berbagai variasi konsentrasi yaitu 5%, 10%, dan 15%.

## Pembuatan mikroemulsi minyak chamomile
Prosedur pembuatan mikroemulsi adalah Tween 80, Polietilen Glikol (PEG) 400 sebagai fase air dimasukkan ke dalam cawan I dan Virgin coconut oil (VCO) dan minyak chamomile sebagai fase minyak ke dalam cawan II. Sebagian fase air dan seluruh fase minyak dicampurkan dan dihomogenkan menggunakan homogenizer ultra turrax pada kecepatan 10000 rpm selama 5 menit. Selama penghomogenan ditambahkan air sedikit demi sedikit. Hasil sediaan yang diperoleh disimpan selama 24 jam pada suhu kamar agar terjadi keseimbangan. Mikroemulsi  ditandai  dengan terbentuknya sediaan yang jernih.

## Evaluasi mikroemulsi minyak chamomile

## Efek tyndall
Sediaan  dilewatkan  dengan  sinar  laser  (dari  pointer)  untuk  mengamati  efek tyndall [6]
Uji Organoleptik
Meliputi  pengamatan  terhadap  perubahan  warna,  bau  dan  kejernihan  dari mikroemulsi pada suhu kamar (25 o C) selama 28 hari.

## Uji Sentrifugasi
Sebanyak 10 gram sediaan dimasukkan ke dalam tabung sentrifuga kemudian di sentrifugasi dengan kecepatan 3750 rpm selama 5 jam. Setiap interval waktu 1 jam diamati ada tidaknya pemisahan pada sediaan.

## Uji Freeze Thaw
Sediaan sebanyak 100 ml diuji kestabilannya pada dua kondisi yaitu pada suhu 40 o C dan pada suhu 4 o C selama 6 siklus. Dalam satu siklus terdiri dari 48 jam pada suhu 4 o C  dan  48  jam  pada  suhu  40 o C,  pada  akhir  setiap  siklus  diamati  ada  tidaknya pemisahan fase.

## Uji Viskositas
Pengukuran  viskositas  dilakukan  terhadap  mikroemulsi  yang  disimpan  pada suhu kamar (25 o C) maupun yang disimpan di dalam climatic chamber pada suhu 40 o C dengan menggunakan viskometer brookfield DV-1 pada hari ke-0, 3, 7, 14, 21 dan 28. Uji pH
Pengukuran  pH  dilakukan  terhadap  mikroemulsi  yang  disimpan  pada  suhu kamar (25 o C) maupun yang disimpan di dalam climatic chamber pada suhu 40 o C dengan menggunakan pH meter pada hari ke-0, 3, 7, 14, 21 dan 28.

## Penentuan ukuran globul mikroemulsi
Penentuan ukuran globul menggunakan alat Particle Size Analyzer . Sebanyak 5 gram sediaan dilarutkan dalam 5 ml aqua deion. Kemudian dimasukkan ke dalam kuvet yang akan diukur serapannya yang digunakan untuk mengukur besar diameter globul. Penentuan dilakukan pada sediaan yang disimpan pada suhu kamar dan pada masing- masing bets tiap akhir siklus freeze-thaw .

## Pengamatan morfologi globul fase terdispersi
Morfologi  globul  fase  terdispersi  dari  mikroemulsi  dianalisis  menggunakan TEM. Pengujian dilakukan pada Lembaga Biologi Molekular Eijkman, Jakarta.

## Pengujian aktivitas antioksidan mikroemulsi
Sebanyak 100 mg mikroemulsi dilarutkan dalam metanol p.a hingga volumenya menjadi 100 ml, dimana konsentrasi yang diperoleh adalah 1000 ppm. Setelah itu, dibuat larutan sampel dengan konsentrasi yaitu 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm dan 100 ppm. Dipipet masing-masing 1 mL larutan sampel lalu ditambahkan 1 mL DPPH 50 ppm. Campuran  selanjutnya  didiamkan  selama  30  menit  di  tempat  gelap.  Diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  maksimum.  Ditentukan  %  inhibisi  dan  IC 50 . Evaluasi aktivitas antioksidan dilakukan pada sediaan yang disimpan pada suhu kamar (25 o C)  dan pada climatic chamber (40 o C, kelembapan relatif 75%). Evaluasi dilakukan selama rentang waktu 4 minggu yaitu pada hari ke-0, 3, 7, 14, 21 dan 28.
Formulasi mikroemulsi gel

## Optimasi basis gel
Pemilihan basis  gel  dilakukan dengan memvariasikan jenis Gelling agent yang digunakan. Pada penelitian ini digunakan 4 jenis Gelling agent yaitu HPMC, Na CMC, Karbopol dan Viskolam. Optimasi basis gel dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Optimasi basis gel
HPMC didispersikan dalam air suling panas (80 o C). Kemudian diamkan selama 24  jam.  Setelah  24  jam,  dilakukan  pengadukan  menggunakan  pengaduk  mekanik dengan kecepatan 500 rpm selama 10 menit. Selanjutnya ditambahkan eksipien lain lalu diaduk dengan kecepatan 500 rpm selama 5 menit. Na  CMC  dilarutkan  dalam  air  suling  panas  (80 o C)  kemudian  diaduk  menggunakan pengaduk mekanik dengan kecepatan 500 rpm selama 15 menit hingga tercampur secara homogen.  Selanjutnya  ditambahkan  eksipien  lain  lalu  diaduk  dengan  kecepatan  500 rpm selama 5 menit. Diamkan selama 24 jam.
Karbopol  didispersikan  dalam  aquades  selama  24  jam.  Setelah  itu,  dilakukan pengadukan menggunakan pengaduk mekanik dengan kecepatan 500 rpm selama 30 menit. Selanjutnya ditambahkan eksipien lain lalu diaduk dengan kecepatan 500 rpm selama  5  menit.  Kemudian  dilakukan adjustment pH  menggunakan  TEA  hingga diperoleh basis yang kental dan dilakukan pengadukan kembali dengan kecepatan 500 rpm selama 5 menit.
Viskolam  dicampur  dengan  aquades  kemudian  diaduk  menggunakan pengaduk  mekanik  dengan  kecepatan  500  rpm  selama  10  menit.  Selanjutnya ditambahkan  eksipien  lain  lalu  diaduk  dengan  kecepatan  500  rpm  selama  5  menit. Kemudian  dilakukan adjustment pH  menggunakan  TEA hingga  diperoleh  basis  yang jernih  serta  kental  dan  dilakukan  pengadukan  kembali  dengan  kecepatan  500  rpm selama 5 menit. Setelah itu, dilakukan pengukuran terhadap pH dan viskositas basis gel pada hari pembuatan (hari ke-0). Evaluasi stabilitas dari basis gel dilakukan pada suhu
Bahan (%b/b) Basis 1 Basis 2 Basis 3 Basis 4 HPMC 7 - - - Na CMC - 7 - - Karbopol - - 1 - Viskolam - - - 8 Gliserin 5 5 5 5 Propilen glikol 15 15 15 15 Dimethyloldimethyl hydantoin 0,2 0,2 0,2 0,2 Aquades hingga 100 100 100 100
kamar  (25 o C)    dan  pada climatic  chamber (40 o C,  kelembapan  relatif  75%)  untuk  uji stabilitas dipercepat. Pengukuran pH dan viskositas basis gel dilakukan selama 6 hari.

## Pembuatan mikroemulsi gel
Setelah  diperoleh  basis  yang  optimum,  maka  selanjutnya  dibuat  mikroemulsi gel.  Mikroemulsi  dan  basis  gel  dibuat  sesuai  prosedur  yang  diuraikan  sebelumnya. Selanjutnya    mikroemulsi  di  inkorporasikan  ke  dalam  basis  gel  dengan  pengadukan terus-menerus. Mikroemulsi dan basis gel ditambahkan dengan perbandingan 1:1.

## Evaluasi mikroemulsi gel
Uji organoleptik
Pengamatan  organoleptik  sediaan  meliputi  perubahan  warna,  bau  dan pertumbuhan mikroba selama penyimpanan yang dilakukan selama rentang waktu 4 minggu yaitu pada hari ke-0, 3, 7, 14, 21 dan 28.

## Uji pH
Pengukuran pH sediaan dilakukan menggunakan pH meter. Evaluasi dilakukan selama rentang waktu 4 minggu yaitu pada hari ke-0, 3, 7, 14, 21 dan 28.

## Uji viskositas
Pengukuran viskositas sediaan dilakukan menggunakan viskometer brookfield DV-II pada kecepatan 50 rpm. Evaluasi dilakukan selama rentang waktu 4 minggu yaitu pada hari ke-0, 3, 7, 14, 21 dan 28.
Uji Freeze Thaw Sediaan diuji kestabilannya pada dua kondisi yaitu pada suhu 40 o C dan pada suhu 4 o C selama 7 siklus. Dalam satu siklus terdiri dari 48 jam pada suhu 4 o C dan 48 jam pada suhu 40 o C, pada akhir setiap siklus diamati ada tidaknya pemisahan fase dan perubahan warna.

## Uji aktivitas antioksidan
Sebanyak  100  mg  mikroemulsi  gel  dilarutkan  dengan  metanol  p.a  dan diencerkan sampai 100 ml sehingga di dapatkan larutan induk dengan konsentrasi 1000 ppm. Setelah itu, dibuat larutan sampel dengan konsentrasi yaitu 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm,  100  ppm  dan  200  ppm.  Dipipet  masing-masing  1  ml  larutan  sampel  lalu ditambahkan 1 ml DPPH 50 ppm. Campuran selanjutnya didiamkan selama 30 menit di tempat gelap. Diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum. Ditentukan % inhibisi dan IC 50 .

## Uji iritasi
Punggung kelinci dicukur dan dibersihkan 24 jam sebelum dilakukan pengujian. Uji pendahuluan perlu dilakukan untuk mengetahui keamanan dari sediaan yang akan diuji.  Pengujian  ini  dilakukan  menggunakan  satu  ekor  kelinci.  Sebanyak  0,5  gram sediaan  mikroemulsi  gel  dioleskan  pada  kulit  kelinci  lalu  ditempelkan  dengan  kasa steril dan plester hipoalergik. Kasa dibuka setelah 3 menit dan amati reaksi kulit yang terjadi. Jika tidak ada reaksi kulit, sediaan kembali dioleskan pada tempat yang berbeda dengan cara seperti pada tahap pertama kemudian dibiarkan selama 1 jam dan amati reaksi kulit yang ada. Jika tidak terdapat reaksi kulit yang serius, sediaan dapat kembali dioleskan  pada  tempat yang  berbeda  dan  dibiarkan  selama  4 jam.  Setelah  pelepasan kasa amati reaksi kulit yang terjadi.
Jika  tidak  terdapat  efek  korosif  yang  teramati  pada  uji  pendahuluan,  maka selanjutnya dilakukan uji konfirmasi. Uji konfirmasi dilakukan pada dua kelinci lainnya. Pengujian  dilakukan  dengan  mengoleskan  0,5  gram  sediaan  pada  kulit  kelinci kemudian direkatkan dengan kasa dan plester hipoalergik kemudian dibalut. Dibiarkan selama  4  jam.  Perban  dilepas  kemudian  diamati  efek  eritema  dan  udem  pada  kulit setelah 1, 24, 48, dan 72 jam setelah pembukaan tempelan. Hasil pengamatan diberi nilai sesuai dengan tabel pedoman penilaian skor eritema dan udem pada uji iritasi kutan.

## Analisis data
Semua  data  yang  ditampilkan  disajikan  dalam  bentuk  rata-rata  ±  simpangan baku (SB). Pengambilan data dilakukan secara triplo (n=3). Analisis statistik dilakukan menggunakan uji One way Anova .

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Aktivitas antioksidan minyak chamomile
Pada penelitian ini, tahap pertama yang dilakukan adalah pengujian aktivitas antioksidan minyak chamomile dan vitamin E sebagai pembanding. Tujuannya yaitu agar diketahui konsentrasi minyak chamomile yang akan diinkorporasikan ke dalam formula  mikroemulsi  berdasarkan  %  Peredaman  minyak  chamomile  terhadap DPPH sehingga diperoleh nilai IC 50 dari minyak chamomile, sebagaimana yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Nilai IC 50 minyak chamomile dan pembanding vitamin E
Nilai  IC 50 minyak  chamomile  adalah  101,504  ppm.  Berdasarkan  jurnal  ilmiah, Nilai IC 50 minyak chamomile adalah 137,2 ppm [7]. Berdasarkan IC 50 hasil pengujian dan jurnal, minyak chamomile masuk dalam kategori memiliki aktivitas antioksidan sedang. Perbedaan aktivitas antioksidan dipengaruhi oleh berbagai faktor diantaranya adalah oksigen, cahaya, suhu tinggi dan pengeringan. Melihat sampel yang digunakan berupa minyak esensial, maka paparan suhu yang berubah – ubah selama penyimpanan dapat mempengaruhi aktivitas antioksidan dari sampel minyak chamomile.
Nilai  IC 50 vitamin  E  adalah  11,665  ppm.  Berdasarkan  jurnal  ilmiah,  vitamin  E merupakan  antioksidan  kuat  dengan  nilai  IC 50 di  bawah  50  ppm  [8].  Dibandingkan dengan vitamin E, minyak chamomile memiliki aktivitas antioksidan 8,702 kali lebih lemah.
Nilai IC 50 minyak chamomile adalah 101,504 ppm. Konsentrasi minyak yang digunakan dalam formula adalah 100 kali dari IC 50 yaitu 10150,4 ppm. Jika diubah ke dalam persen, maka jumlah minyak chamomile yang ditambahkan adalah 1,01%.

## Formulasi mikroemulsi
Langkah  awal  yang  dilakukan  adalah  optimasi  jumlah  surfaktan  dan kosurfaktan  yang  dapat  menghasilkan  mikroemulsi  yang  jernih.  Optimasi  ini merupakan  hal  yang  kritis  dalam  formulasi.  Mikroemulsi  membutuhkan  surfaktan dalam jumlah besar sehingga penting untuk memilih surfaktan yang tidak mengiritasi. Surfaktan  yang  dipilih  adalah  surfaktan  non-  ionik  Tween-80  karena  sifatnya  tidak toksik dan tidak mengiritasi dibandingkan dengan surfaktan bermuatan seperti anionik dan kationik. Alasan lain penggunaan surfaktan yang tidak bermuatan adalah karena dapat  meminimalisir  terjadinya  gangguan  keseimbangan  pada  sistem  mikroemulsi
Sampel Konsentrasi sampel (ppm) % peredaman Persamaan garis regresi linear Kategori Minyak chamomile 25 50 75 100 180 28,212 36,38 42,454 49,321 65,543 Y = 0,2367x + 24,026 r = 0,9906 IC 50 = 101,504 ppm Sedang (100 – 150 μg/mL ) Vitamin E 4 8 12 16 20 21,985 35,437 48,543 65,32 85,253 Y = 3,9105x + 4,3819 r = 0,9914 IC 50 =11,665 ppm Sangat kuat (< 50 μg/mL )
karena  sifatnya  yang  tidak  memiliki  muatan  dapat  mencegah  terjadinya  fluktuasi muatan  pada  sistem.  Selain  itu,  karena  mikroemulsi  yang  akan  dibuat  adalah mikroemulsi tipe minyak dalam air maka penggunaan Tween 80 yang memiliki nilai HLB 15 sesuai untuk tipe tersebut karena untuk membentuk sistem mikroemulsi minyak dalam  air  yang  stabil  dibutuhkan  surfaktan  yang  memiliki  rentang  HLB  9-20. Kosurfaktan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  PEG  400.  PEG  400  tidak mengiritasi kulit serta dapat berpenetrasi pada lapisan surfaktan dan minyak sehingga menurunkan  tegangan  antarmuka  hingga  ke  nilai  terendah.  Sebagian  besar  minyak esensial terlalu kuat untuk langsung digunakan pada kulit. Karena itu esensial oil perlu dilarutkan terlebih dahulu pada minyak pembawa. Salah satu minyak pembawa yang dapat  digunakan  adalah Virgin  coconut  oil (VCO)  karena  dapat  melarutkan  hampir sebagian  besar  minyak  esensial,  tidak  mengiritasi  kulit,  sekaligus  mampu menghaluskan kulit.
Berdasarkan  hasil  optimasi,  maka  formula  akhir  mikroemulsi  yang  dipilih adalah yang ditunjukkan pada tabel 3.

## Tabel 3. Formula akhir mikroemulsi
Formula  akhir  mikroemulsi  kemudian  dibuat  dalam  3  batch  untuk  kemudian dilakukan  evaluasi  sediaan.  Foto  sediaan  mikroemulsi  yang  dihasilkan  dapat  dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1. Sediaan mikroemulsi

## Evaluasi mikroemulsi
Efek tyndall
Efek tyndall adalah gejala  penghamburan berkas sinar (cahaya) oleh partikel- partikel  koloid.  Metode  penghamburan  cahaya  ini  merupakan  salah  satu  cara  untuk mengidentifikasi sediaan mikroemulsi.
Pengujian  efek  tyndall  dilakukan  dengan  cara  melewatkan  sinar  laser  (dari  pointer) pada sediaan mikroemulsi. Sediaan mikroemulsi yang dihasilkan memiliki efek tyndall yang ditandai dengan sinar laser yang dapat menembus sediaan. Hasil pengujian efek tyndall dapat dilihat pada gambar 2.
Nama bahan Jumlah bahan dalam formula (%b/b) Minyak chamomile 1,01* VCO 5 Tween 80 30 PEG 400 10 Dimethyloldimethyl hydantoin 0,2 Aquades 100
Gambar 2 . Pengujian efek Tyndall

## Uji organoleptik
Hasil  pengamatan  organoleptik  selama  28  hari  ditunjukkan  pada  tabel  4, menunjukkan  sediaan  mikroemulsi  tidak  mengalami  perubahan  bentuk,  warna,  bau dan tidak terdapat pertumbuhan mikroba (ditandai dengan sediaan tetap jernih selama penyimpanan).
Tabel 4. Hasil pengamatan organoleptik mikroemulsi

## Uji sentrifugasi
Uji sentrifugasi dilakukan selama 5 jam pada kecepatan 3750 rpm. Pengujian ini bertujuan untuk melihat apakah terjadi pemisahan fase selama sentrifugasi dan menjadi indikasi  kestabilan  sediaan  selama  1  tahun  bila  disimpan  pada  suhu  kamar.  Setelah sentrifugasi selama 5 jam, sediaan tetap stabil tanpa ada pemisahan fase. Gambar hasil uji sentrifugasi dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar 3. Pengujian sentrifugasi ( Sebelum dan setelah )
Uji Freeze Thaw
Uji Freeze  thaw dilakukan  untuk  mengetahui  kestabilan  sediaan  terhadap pengaruh  suhu  yang  berubah-  ubah.  Selama  pengujian  tidak  ditemukan  adanya pemisahan fase dan perubahan kejernihan mikroemulsi. Hal ini menunjukkan sediaan mikroemulsi  tetap  stabil  secara  fisik  walaupun  suhu  disekitarnya  berubah-ubah. Gambar sediaan mikroemulsi setelah Freeze thaw dapat dilihat pada gambar 4.
Hari Organoleptik Bentuk Warna Bau 0 Sedikit kental Kuning jernih Khas aromatik 3 Sedikit kental Kuning jernih Khas aromatik 7 Sedikit kental Kuning jernih Khas aromatik 14 Sedikit kental Kuning jernih Khas aromatik 21 Sedikit kental Kuning jernih Khas aromatik 28 Sedikit kental Kuning jernih Khas aromatik
Gambar 4 . Mikroemulsi setelah pengujian freeze thaw

## Uji Viskositas
Hasil pengamatan viskositas menunjukkan sediaan mikroemulsi yang disimpan pada suhu  kamar  memiliki  viskositas  yang  tidak  berubah  selama  28  hari  penyimpanan sementara  yang  disimpan  pada  c limatic  chamber mengalami  sedikit  peningkatan viskositas. Hasil pengukuran viskositas menunjukkan sediaan memiliki viskositas yang relatif stabil. Hasil pengukuran viskositas dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil pengukuran viskositas mikroemulsi

## Uji pH
Berdasarkan pengujian pH seperti yang ditunjukkan pada tabel 6, Pengukuran pH mikroemulsi selama 28 hari menunjukkan pH sediaan mengalami penurunan setiap pengukuran. Namun, nilai pH mikroemulsi masih memenuhi syarat sediaan kulit yaitu 4,5 – 6,5.

## Tabel 6. Hasil pengukuran pH mikroemulsi
Dengan  pengujian  secara  statistika,  tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna antara  pH  sediaan  pada  setiap  hari  pengukuran  baik  pada  suhu  25 o C maupun  pada suhu 40 o C. Hal ini menunjukkan sediaan relatif stabil selama penyimpanan..

## Penentuan ukuran globul mikroemulsi
Pengukuran ukuran globul fase terdispersi dari mikroemulsi menggunakan alat Particle Size Analyzer . Pengukuran dilakukan pada sediaan yang disimpan pada suhu
Hari Viskositas (cps) 25 o C 40 o C 0 11,0±0,05 11,0±0,02 3 11,2±0,05 11,7±0,03 7 11,2±0,05 11,8±0,05 14 11,2±0,05 11,8±0,05 21 11,2±0,05 12,1±0,07 28 11,2±0,05 12,2±0,07 Hari pH 25 o C 40 o C 0 5,93±0,03 5,90±0,02 3 5,91±0,01 5,89±0,01 7 5,88±0,05 5,85±0,05 14 5,78±0,01 5,70±0,01 21 5,68±0,01 5,65±0,02 28 5,59±0,01 5,58±0,02
ruang  pada  ke-0,  3,  7,  14,  21  dan  28    dan  pada  akhir  setiap  siklus freeze  thaw .  Hasil pengukuran globul dapat dilihat pada tabel 7 dan tabel 8.
Tabel 7. Hasil pengukuran globul mikroemulsi suhu 25 o C
Tabel 8. Hasil pengukuran globul mikroemulsi ( Freeze Thaw )
Berdasarkan data ukuran globul mikroemulsi pada suhu kamar dan pengujian Freeze thaw tidak terdapat perubahan diameter globul yang signifikan. Diameter rata- rata globul masih berada dalam rentang ukuran normal mikroemulsi (10 – 100 nm). Hal ini menunjukkan bahwa mikroemulsi stabil terhadap pengaruh suhu yang berubah – ubah. Lapisan film antar muka yang fleksibel menjaga agar tidak terjadi penggabungan globul mikroemulsi. Namun, ukuran globul pada pengujian Freeze thaw cenderung lebih stabil dibandingkan sediaan yang disimpan pada suhu kamar. Hal ini dapat disebabkan karena  pada  suhu  40 o C  terjadi  peningkatan  viskositas  pada  sistem  mikroemulsi. Peningkatan  viskositas  ini  dapat  menyebabkan  kemungkinan  globul  fase  terdispersi untuk bergabung lebih rendah.

## Pengamatan morfologi globul fase terdispersi
Hasil  analisis  TEM  pada  gambar  5  menunjukkan  bahwa  globul  mikroemulsi memiliki  ukuran  globul  kurang  dari  50  nm  dengan  bentuk  sferis.  Pada  gambar  juga terlihat bahwa globul minyak dalam sediaan mikroemulsi terdistribusi cukup merata meskipun  beberapa  globul  terlihat  menyatu  atau  hampir  menyatu.  Hal  ini  dapat disebabkan  viskositas  fase  pendispersi  yang  terlalu  rendah.  Namun,  ukuran  globul terlihat cukup seragam. Hal ini sesuai dengan hasil sebelumnya yang menyatakan nilai indeks polidispersitas yang rendah (< 0,5).
Waktu (hari) Ukuran globul (nm) Indeks polidispersitas 0 29,46±4,66 0,336±0,05 3 28,26±1,96 0,348±0,05 7 28,83±2,48 0,344±0,04 14 31,3±0,52 0,337±0,06 21 30,4±1,15 0,355±0,02 28 25,53±2,61 0,383±0,08 Siklus Ukuran globul (nm) Indeks polidispersitas 1 25,1±1,76 0,277±0,08 2 21,6±2,25 0,352±0,02 3 24,1±1,79 0,28±0,04 4 25,6±1,09 0,327±0,30 5 25,3±3,62 0,398±0,06 6 25,9±3,30 0,362±0,06
Gambar 5. Morfologi globul mikroemulsi

## Pengujian aktivitas antioksidan mikroemulsi
Rata  –  rata  IC 50 mikroemulsi  minyak  chamomile  adalah  84,223±0,51  ppm. Aktivitas antioksidan naik sebesar 1,205 dibandingkan minyak chamomile sebelum di formulasi.  Kenaikan  aktivitas  ini  kemungkinan  disebabkan  karena  pada  sediaan mikroemulsi terdapat VCO yang diketahui juga memiliki aktivitas antioksidan. Hasil pengujian antioksidan mikroemulsi ditunjukkan pada tabel 9.
Tabel 9. Hasil pengujian antioksidan mikroemulsi

## Pembuatan mikroemulsi gel
Berdasarkan hasil optimasi, gelling agent yang memiliki viskositas terbaik adalah viskolam karena berada pada rentang viskositas gel serta stabil baik pada penyimpanan di suhu kamar maupun climatic chamber. Pada pengujian pH, viskolam juga memiliki stabilitas yang cukup baik. pH basis gel viskolam berada dalam rentang 6 – 6,5. Karena itu  viskolam  dipilih  sebagai  basis  sediaan  mikroemulsi  gel.  Mikroemulsi  gel  yang dihasilkan  tidak  berwarna  jernih  seperti  mikroemulsi,  namun  berwarna  putih kekuningan. Mikroemulsi gel yang dihasilkan dapat dilihat pada gambar 6.
Hari IC 50 Kategori 0 84,058 ppm Kuat (50 – 100 μg/ml ) 3 83,712 ppm Kuat (50 – 100 μg/ml ) 7 84,832 ppm Kuat (50 – 100 μg/ml ) 14 84,798 ppm Kuat (50 – 100 μg/ml ) 21 84,542 ppm Kuat (50 – 100 μg/ml ) 28 83,643 ppm Kuat (50 – 100 μg/ml )
Gambar 6. Mikroemulsi gel

## Evaluasi mikroemulsi gel

## Uji organoleptik
Hasil pengamatan organoleptik selama 28 hari seperti yang ditunjukkan pada tabel 10 menunjukkan sediaan mikroemulsi gel tidak mengalami perubahan konsistensi, warna, dan bau.
Tabel 10. Hasil pengujian organoleptik mikroemulsi gel

## Uji pH dan viskositas
Pengukuran  pH  sediaan  dilakukan  menggunakan  pH  meter.  Pada  pengujian pH, pH sediaan berkisar pada pH 7. Aplikasi sediaan yang memiliki pH hingga rentang pH netral (7) ternyata tidak menimbulkan iritasi pada kulit [9].
Pengukuran  viskositas  sediaan  dilakukan  menggunakan  viskometer  brookfield  DV-I dengan spindel no.21 pada kecepatan 5 rpm Pada pengujian viskositas, nilai viskositas mikroemulsi  gel  mengalami  penurunan  dibandingkan  dengan  basis  gel  sebelum penambahan  mikroemulsi.  Hal  ini  disebabkan  karena  sediaan  mikroemulsi  memiliki viskositas cukup rendah, sehingga pada saat diinkorporasikan kedalam basis gel maka viskositas basis gel akan berkurang. Hasil pengujian pH dan viskositas mikroemulsi gel dapat dilihat pada tabel 11.
Tabel 11. Hasil pengujian pH dan viskositas mikroemulsi gel Hari Organoleptik Konsistensi Warna Bau 0 Kental Putih kekuningan Khas aromatik 3 Kental Putih kekuningan Khas aromatik 7 Kental Putih kekuningan Khas aromatik 14 Kental Putih kekuningan Khas aromatik 21 Kental Putih kekuningan Khas aromatik 28 Kental Putih kekuningan Khas aromatik Hari pH Viskositas (cps) 25 o C 40 o C 25 o C 40 o C 0 7,36±0,02 7,35±0,02 935±4,04 916±2,64 3 7,35±0,02 7,35±0,05 930±13,22 917±4,16 7 7,37±0,05 7,33±0,02 955±2,64 915±4,04 14 7,33±0,08 7,31±0,02 959±19,29 911±10,01 21 7,32±0,02 7,30±0,08 967±6,24 907±8,50 28 7,30±0,03 7,29±0,07 940±25,81 903±4,58
Dengan  pengujian  secara  statistika,  tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna antara  pH  sediaan  pada  setiap  hari  pengukuran  baik  pada  suhu  25 o C maupun  pada suhu  40 o C.  Begitu  juga  pada  viskositas  sediaan.  Hal  ini  menunjukkan  sediaan mikroemulsi gel relatif stabil selama penyimpanan.
Uji Freeze Thaw Pengujian Freeze  thaw selama  6  siklus  menunjukkan  tidak  adanya  pemisahan fase. Hal ini menunjukkan sediaan tetap stabil pada suhu yang berubah-ubah.

## Uji aktivitas antioksidan
Hasil pengujian aktivitas antioksidan mikroemulsi gel ditunjukkan pada tabel 12.  Nilai  IC 50 yang  diperoleh adalah  80,785  ppm.  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan tidak ada perubahan yang signifikan dari aktivitas mikroemulsi gel dan mikroemulsi. Hal ini menunjukkan bahwa basis gel tidak mempengaruhi aktivitas antioksidan dari zat aktif.

## Tabel 12. Hasil pengujian antioksidan mikroemulsi gel
Uji iritasi
Berdasarkan  hasil  pengamatan  dan  perhitungan,  dapat  dinyatakan  bahwa sediaan mikroemulsi gel tidak mengiritasi kelinci dengan indeks iritasi primer (OECD) 0.

## 4.  Kesimpulan
Formulasi mikroemulsi minyak dalam air dari minyak chamomile diformulasi menggunakan Tween 80 sebagai surfaktan sebanyak 30%, PEG 400 sebagai kosurfaktan sebanyak  10%  dan  VCO  sebagai  minyak  pembawa  sebanyak  5%.  Formulasi mikroemulsi yang dihasilkan memiliki stabilitas yang baik berdasarkan pengujian pH, viskositas, ukuran globul, sentrifugasi, freeze thaw dan aktivitas antioksidan. Aktivitas antioksidan minyak chamomile adalah 101,504 ppm sementara mikroemulsi minyak chamomile adalah 84,223 ppm. Hal ini berarti, aktivitas antioksidan minyak chamomile naik sebesar 1,205 kali dibandingkan minyak chamomile sebelum diformulasi.
Penambahan  basis  gel  pada  mikroemulsi  menjadikan  warna  sediaan  menjadi  putih kekuningan, namun sediaan tetap menunjukkan kestabilan yang baik pada suhu kamar maupun suhu ruang, tidak mengiritasi, dan menunjukkan aktivitas antioksidan yang tidak berbeda jauh dengan mikroemulsi yaitu 80,785 ppm.

## Referensi
[1]   Janmejai, K., Srivastava., Shankar, E. ( 2010 ) : Chamomile: a herbal medicine of the past with a bright future. Molecular Medicine Reports 3, Department of Urology and Nutrition , university hospitals case medical center, Cleveland - USA.
[2]   Luciana,  B.  L.  (2014)  :  Overcoming  the  cutaneous  barrier  with  microemulsions, Institute of Biomedical Science University of Sao Paulo , Sao Paulo - Brazil. Konsentrasi (ppm) % peredaman Persamaan garis regresi linear 25 32,786 Y = 0,3043x +25,417 r = 0,9947
IC 50 = 80,785 ppm 50 39,453 75 47,928 100 58,432 200 85,436
[3]   Nagarajan, R., Ruckenstein. E. (2000) : Molecular theory of microemulsion, American Chemical Society . 16, 6400–6415.
[4]   Muzaffar F., Lalit, C. (2013) : Review on microemulsion as futuristic drug delivery, Department of Pharmaceutics, Kharvel Subharti College of Pharmacy, Swami Vivekanand Subharti University , India.
[5]   Ashara,  K.C.,  Paun,  J.S.,  Soniwala,  M.  M.,  Chavada  J.  R.,  Mori  M.  (2014)  : Microemulsion based emulgel : a novel topical drug delivery system, Asian Pac J Trop Dis .
[6]   Suciati, T., Lisa,P. (2012). Formulasi Natrium Ascorbyl phosphate dalam mikroemulsi A/M VCO. Acta Pharmaceutica Indonesia, Vol. XXXVII, No.3.
[7]   Farhoudi, R. (2012) : Chemical constituents and antioxidant properties of Matricaria recutita and Chamaemelum nobile essential oil growing wild in the South West of Iran, Journal of Essential Oil Bearing Plants , 16, 531-537.
[8]   Jackie,  K.S.,  Dika  P.D.  (2017)  :  Uji  aktivitas  antioksidan  vitamin  A,  C,  E  dengan metode  DPPH,  Suplemen  farmaka  Departemen  Farmakologi  dan  Farmasi  Klinik Fakultas Farmasi Universitas Padjajaran, Jatinangor – Bandung.
[9]   Pranjal, S., Iqubal, M., Shukla., Vikesh., Shuaib, M. (2014) : Microemulsions: current trends  in  novel  drug  delivery  systems, Journal  of  Pharmaceutical,  Chemical  and Biological Sciences ,1, 39-51.