Pemberian Pupuk Organik Cair Duckweed terhadap Populasi Sel dalam Kultur Nannochloropsis oculata
The Application of Duckweed Liquid Organic Fertilizer to Cell Populations in the Culture of Nannochloropsis oculata
Nina Ariany 1 , Mustahal 1  , Mas Bayu Syamsunarno 1
1 Program Studi Ilmu Perikanan, Fakultas Pertanian, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Jln. Raya Palka Km 3 Sindangsari, Pabuaran, Kab. Serang, Prov. Banten, 42163
 correspondent author: mustahal13@gmail.com

## Abstrak
Nannochloropsis oculata merupakan salah satu mikroalga bersel satu yang telah umum dikultur pada sektor pembernihan ikan laut sebagai pakan zooplankton yang memiliki kandungan nutrisi tinggi. Untuk menunjang pertumbuhan  dan  perkembangbiakannya,  ketersediaan  nutrien  dalam  media  kultur N.  oculata perlu diperhatikan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  pengaruh  pemberian  pupuk  organik  cair  (POC) duckweed ( L.  minor )  terbaik  terhadap  pertumbuhan  populasi  sel  dalam  kultur N.  oculata .  Metode  yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimental menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan yaitu P0 (TSP 10 mg + ZA 40 mg + urea 45 mg) sebagai perlakuan kontrol, P1 (POC duckweed 5%), P2 (POC duckweed 10%), P3 (POC duckweed 15%), dan P4 (POC duckweed 20%) diulang sebanyak  3  kali  pada  masing-masing  perlakuan.  Kepadatan  awal  sel N.oculata yaitu  2  x  10 6 sel/ml  dalam volume  media  kultur  1000  ml,  diamati  pertumbuhannya  setiap  hari  selama  14  hari.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  konsentrasi  POC duckweed 10%  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  pengganti  pupuk anorganik (TSP, ZA, dan urea) karena dapat meningkatkan pertumbuhan populasi sel sebanyak 30,92±1,84 x 10 6 sel/ml pada puncak fase eksponensial, serta nilai laju pertumbuhan sel 0,38±0,03 sel/ml/hari dan waktu generasi  sel  43,88±3,24 jam yang tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan perlakuan P0 (TSP, ZA, dan urea). Kisaran  parameter  kualitas  air  dalam  media  kultur  selama  penelitian  yaitu  suhu  25-33 o C,  pH  4,89-8,40, salinitas  25-38,33  ppt,  dan  DO  4,07-7,27  ml/l.    Nilai  kualitas  air  dalam  media  kultur  yang  terukur  masih dalam batas toleransi sel N. oculata sehingga sel masih dapat tumbuh dan membelah.
Kata kunci: Duckweed ; Nannochloropsis oculata ; POC duckweed ; pertumbuhan populasi sel

## Abstract
Nannochloropsis  oculata is  one  of  the  single-celled  microalgae  that  has  been  commonly  cultured  in  the marine  fish  culture  sector  as  zooplankton  feed  which  has  high  nutritional  content.  To  support  growth  and reproduction, the availability of nutrients in N. oculata culture media needs to be considered. This study aims to  determine  the  effect  of  the  best  liquid  organic  fertilizer (POC)  duckweed  ( L.  minor )  on  cell  population growth in N. oculata culture. The method used in this research is an experimental method using Completely Randomized  Design  (CRD)  with  5  treatments,  namely  P0  (TSP  10  mg  +  ZA  40  mg  +  urea  45  mg)  as  a control  treatment,  P1 (POC  duckweed  5%),  P2  (POC  duckweed  10%),  P3  (POC  duckweed  15%),  and  P4 (POC duckweed 20%) were repeated 3 times in each treatment. The initial density of N.oculata cells was 2 x 10 6 cells.ml -1 in a culture media volume of 1000 ml. Growth was observed every day for 14 days. The results showed that the POC concentration of 10% duckweed can be used as an alternative to inorganic fertilizers (TSP, ZA, and urea) because it can increase cell population growth by 30,92±1,84 x 10 6 cells.ml -1 at the peak of  the  exponential  phase,  as  well  as  the  value  of  the  growth  rate  cells  0,38±0,03  cells.ml -1 .day -1 and  cell generation time of 43,88±3,24 hours were not significantly different (p>0.05) with P0 treatment (TSP, ZA, and urea). The range of water quality parameters in the culture media during the study were temperature 25- 33 o C, pH 4,89-8,40, salinity 25-38,33 ppt, and DO 4,07-7,27 ml.l -1 . The measured value of water quality in culture media was still within the tolerance limits of N. oculata cells so that cells could still grow and divide. Keywords: Cell population growth; Duckweed ; Nannochloropsis oculata ; POC duckweed
Volume 4 (2) June 2021: 58-71

## Pendahuluan
Keberhasilan  dalam  sektor  pembenihan  organisme  akuatik  tergantung  pada aksesibilitas pakan benih yang  konsisten dan memadai pada waktu yang bersamaan, baik kualitas  maupun  jumlahnya  (Nisa et  al .,  2020).  Ketersediaan  pakan  dalam  kegiatan pembenihan  ikan  sangatlah  dibutuhkan  khususnya  pakan  alami.  Pakan  alami  memiliki keunggulan dibandingkan pakan buatan terutama dilihat dari komposisi nutrien yang tinggi dan  dampaknya  terhadap  kualitas  air. Nannochloropsis  oculata merupakan  salah  satu mikroalga dari golongan fitoplankton yang digunakan sebagai pakan alami.
N.  oculata telah  banyak  digunakan  sebagai  pakan  pada  stadia  awal  pembenihan organisme  akuatik  dan  umumnya  dibudidayakan  baik  sebagai  pakan  zooplankton  seperti rotifera, larva udang maupun sebagai pakan larva pada berbagai pembenihan ikan (Arfah et al ., 2019). Mikroalga ini memiliki kandungan nutrisi yang cukup tinggi yaitu kandungan protein 50-55%, lemak 28,3%, klorofil- α 0,05%, dan karbohidrat 16%, (Paes et al ., 2016), serta pertumbuhan yang cepat, dikarenakan N. oculata mudah dikultivasi dan dalam waktu 24 jam mikroalga ini dapat bertambah banyak menjadi dua kali lipat.
Pertumbuhan N.  oculata sangat  dipengaruhi  oleh  tingginya  unsur  nutrien  dalam media  kultur  yang  sangat  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan  dan  kelangsungan  hidupnya. Pupuk  sebagai  sumber  nutrien  yang  diberikan  dalam  kultur N.  oculata biasanya menggunakan  pupuk  anorganik  (urea,  TSP,  dan  ZA)  (Ahmadi et  al .,  2019).  Penggunaan pupuk anorganik berlebihan ini menghasilkan residu berupa limbah yang dapat mencemari sekaligus membahayakan organisme diperairan. Oleh karena itu, perlu alternatif pemakaian pupuk  organik  yang  memiliki  unsur  nutrien  sesuai  untuk  pertumbuhan N.  oculata serta tidak  berbahaya  bagi  ekosistem  perairan  dengan  biaya  yang  relatif  murah  dan  mudah diperoleh.
Salah satu alternatifnya yaitu menggunakan pupuk organik cair (POC) dari tumbuhan air, antara lain tumbuhan duckweed ( Lemna minor ). Duckweed memiliki kandungan nutrisi yang cukup tinggi yaitu unsur N sebanyak 0,8-7,8% dan P sebanyak 0,03-2,8% dari total berat  keringnya  serta  beberapa  kandungan  nutrien  lainnya,  telah  memenuhi  kebutuhan nutrien  dalam  media  kultur N.  oculata dan  diharapkan  dapat  meningkatkan  pertumbuhan sel mikroalga ini (Astrid et al ., 2013).
Hasil penelitian pemanfaatan POC tanaman duckweed pada media kultur mikroalga dapat  digunakan  sebagai  alternatif  pengganti  pupuk  anorganik  dan  meningkatkan pertumbuhan mikroalga. Pada penelitian Indriana et al ., (2020) menunjukkan konsentrasi
POC  lemna  5%  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  pengganti  pupuk  komersial  media  f/2 yang memberikan hasil berat kering dan produktivitas yang sedikit lebih tinggi pada hari ke-6  dan  ke-8  dengan  nilai  berturut-turut  yaitu  3,33  g/l  dan  0,580  g/l  dari  konsentrasi lainnya, serta produksi biomassa pada hari ke-8 dengan nilai 14 x 10 4 sel/ml. Selanjutnya Astrid et al . (2013) menyatakan bahwa konsentrasi pupuk L. minor 0,75 ml/l merupakan konsentrasi optimal yang dapat menghasilkan populasi D. salina tertinggi sebesar 36,18 x 10 4 sel/ml  pada  hari  ke-5.  Namun  demikian,  belum  diketahui  pengaruh  pemberian  POC duckweed terhadap  pertumbuhan  populasi  sel  pada  kultur  mikroalga N.  oculata .  Oleh karena  itu,  penelitian  ini  dirancang  dengan  tujuan  untuk  menentukan  pemberian  POC duckweed ( L. minor ) terbaik terhadap pertumbuhan populasi sel dalam kultur N. oculata .

## Bahan dan Metode

## Bahan yang Digunakan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  bibit  stater  mikroalga N.  oculata yang  diperoleh  dari  Balai  Besar  Perikanan  Budidaya  Laut  (BBPBL)  Lampung,  tanaman duckweed segar  yang  diperoleh  dari  pembudidaya duckweed di  Periuk,  Kota  Tangerang- Banten, dan pupuk anorganik (TSP, ZA, urea).

## Tahapan Penelitian

## 1. Sterilisasi Alat dan Media Kultur
Sterilisasi  alat  mengacu  pada  Rahmadan  (2019),  yaitu  peralatan  yang  terbuat dari  kaca  dicuci  bersih  kemudian  dikeringkan  dan  dibungkus  dengan  kertas  buram. Selanjutnya  disterilisasi  menggunakan autoclave bersuhu  121 o C  (15-20  menit). Sterilisasi  peralatan  kaca  berukuran  besar  dan  peralatan  non  kaca  dilakukan perendaman menggunakan klorin yang dilarutkan dalam air (masing-maisng 150 mg/l dan  20  mg/l)  selama  24  jam.  Setelah  itu  dibilas  menggunakan  air  tawar  dan dikeringkan.  Sterilisasi  media  kultur  mengacu  pada  Indriana et  al .  (2020),  yaitu  air laut  bersalinitas  30  ppt  (Ermavitalini et  al .,  2019)  disaring  dan  disterilkan menggunakan autoclave dengan  suhu  121ºC  (30  menit).  Apabila  terjadi  kenaikan salinitas, dilakukan pengenceran dengan menambahkan air tawar steril menggunakan rumus Arrokhman et al . (2012) :
V 1 . N 1 = V 2 .N 2
Keterangan  :  V 1 =  Volume  air  laut  (ml);  N 1 =  Salinitas  air  laut  awal  (ppt);  V 2 = Volume  total  air  media  yang  dikehendaki  (ml);  N 2 =  Salinitas  air  yang  dikehendaki (ppt)

## 2. Pembuatan Pupuk Organik Cair (POC) Duckweed
Proses ini mengacu pada prosedur Indriana et al . (2020), yaitu duckweed segar dicuci  bersih,  kemudian  dikeringkan  dibawah  sinar  matahari.  Setelah  kering, duckweed dihaluskan,  setelah  itu  ditimbang  sebanyak  200  g  dan  dilarutkan  dalam akuades  1000  ml,  gula  pasir  sebanyak  20  g,  serta  EM4  (probiotik)  sebanyak  20  ml.
Kemudian dilakukan proses fermentasi selama 7 hari secara anaerob. Pupuk duckweed fermentasi selanjutnya disaring untuk mendapatkan pupuk dalam bentuk cair kedalam erlenmeyer 1000 ml dan disterilkan menggunakan autoclave dengan suhu 121 o C (30 menit). POC duckweed ditiriskan kemudian disaring kembali untuk memisahkan serat duckweed yang masih mengendap.

## 3. Inokulasi dan Kultur Bibit N. oculata
Inokulan N. oculata dihitung menggunakan haemocytometer (Gambar 1) dengan alat  bantu hand  counter .  Leksono et  al .  (2017)  menjelaskan, haemocytometer dibersihkan  menggunakan  alkohol  70%  dan  dikeringkan,  lalu  ditutup  dengan cover glass. Bibit N.  oculata diambil  menggunakan  pipet  tetes  dan  dimasukan  kedalam haemocytometer pada  bagian  parit  melintang,  satu  tetes  diasumsikan  mewakili  1 ml.
Selanjutnya  diamati  dibawah  mikroskop  menggunakan  perbesaran  10  x  10,  dicari bidang  berkotak-kotak  yang  memiliki  sisi  1  mm.  Setiap  sel  yang  terhitung  dikalikan 10 4 . Nilai kepadatan N. oculata dihitung berdasarkan Arfah et al . (2019).
(Sumber : Ochtreeani et al ., 2014)
Gambar 1. Haemocytometer .
Selanjutnya  menentukan  volume  inokulum N.  oculata yang  dibutuhkan. Kepadatan awal yang digunakan mengacu pada Muhklis et al . (2017) yaitu sebanyak 2 x  10 6 sel/ml.  Untuk  menentukan  volume  biakan N.  oculata yang  ditambahkan menggunakan rumus yang mengacu pada Yulina et al . (2020), sebagai berikut :
V 1 . N 1 = V 2 . N 2
Keterangan : V 1 = Volume stater N. oculata yang dibutuhkan (ml); N 1 = Kepadatan sel stok bibit (sel/ml); V 2 = Volume media kultur yang dikehendaki (ml); N 2 = Kepadatan sel awal yang dikehendaki (2 x 10 6 sel/ml)
Media  kultur  yang  digunakan  bervolume  1000  ml  (Juniantari et  al .,  2015). Tahap persiapan kultur dilakukan dengan mencampurkan air laut steril bersalinitas 30 ppt,  kemudian  menambahkan  pupuk  sesuai  perlakuan,  dan  inokulum N.  oculata dengan  kepadatan  awal  2  x  10 6 sel/ml  yang  telah  dihitung  volumenya. N.  oculata dikultur  selama  14  hari  (Maynardo et  al .,  2015).  Menggunakan  fotoperiode  16  jam terang  dan  8  jam  gelap  (Ermavitalini et  al .,  2019).  Pencahayaan  pada  media  kultur menggunakan  lampu tubular  lamp (TL)  berdaya  40  Watt  dengan  intensitas  cahaya berkisar 4.500 lux (Nisa et al . 2020).

## Parameter Pengamatan
1. Perhitungan  kepadatan  sel  (N)  (Arfah et  al .,  2019),  dihitung  menggunakan haemocytometer dengan perhitungan 5 titik sampling pada kotak sedang.
N = ( n 5 ) x 25 x 10 4
Keterangan:  N  =  Kepadatan  sel  (sel/ml); n =  Jumlah  seluruh  amatan  sel  di haemocytometer ; 25 = Jumlah chamber sedang; 5 = Titik sampling pengambilan data;
10 4 = Volume kotak (ml)
2. Laju pertumbuhan spesifik sel ( specific growth rate ,  ) (Durmaz dan Ebil, 2017)
 = ln Nt - ln N 0 Tt - T 0
Keterangan  :  =  Laju  pertumbuhan  spesifik  sel  (sel/ml/hari);  Nt  =  Populasi  sel  pada puncak  fase  eksponensial  (sel/ml);  N 0 =  Populasi  sel  pada  awal  kultur  (sel/ml);  Tt  = Waktu  pengamatan  pada  puncak  fase  eksponensial  (hari);  T 0 =  Waktu  awal  kultivasi (hari)
3. Perhitungan waktu generasi sel ( duoble time , DT) (Mukhlis et al ., 2017)
DT = Log (2) x Δ t (Log C t - Log C 0 )
Keterangan:  DT  =  Waktu  generasi  sel  (jam);  C t =  Populasi  sel  pada  puncak  fase eksponensial  (sel/ml);  C 0 =  Populasi  sel  pada  awal  kultur  (sel/ml); Δ t =  Lama  waktu untuk mencapai puncak fase eksponensial (jam)

## 4. Kualitas Air Media Kultur
Pengontrolan  kualitas  air  pada  media  kultur N.  oculata dilakukan  setiap  hari selama  masa  kultur,  parameter  kualitas  air  yang  diukur  yaitu  suhu,  pH,  salinitas,  dan DO (Jadid et al ., 2017).

## Rancangan Percobaan
Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  dan  didesain  dengan  Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 5 perlakuan dengan 3 kali ulangan. Perlakuan yang digunakan yaitu : P0 (Kontrol) = Pupuk (TSP 10 mg + ZA 40 mg + urea 45 mg) per 1000 ml air laut (Arfah et al ., 2019), P1 = 5% POC duckweed per 1000 ml air laut, P2 = 10% POC duckweed per 1000 ml air laut, P3 = 15% POC duckweed per 1000 ml air laut, P4 = 20% POC duckweed per 1000 ml air laut (Indriana et al ., 2020).

## Analisis Data
Analisis  terhadap  data  menggunakan Analysis  of  Variance (ANOVA)  untuk mengetahui  tingkat  signifikansi  pengaruh  perlakuan  terhadap  pertumbuhan  populasi N. oculata .  Jika  hasilnya  berbeda  nyata  (p<0,05),  maka  diuji lanjut  menggunakan Duncan’s Multiple  Range  Test (DMRT)  (Kusriningrum  2010).  Keseluruhan  analisis  statistik dilakukan  dengan  program  SPSS  versi  23  dan  penyajian  grafik  menggunakan Microsoft Excel 2019.

## Hasil dan Pembahasan
Pertumbuhan Populasi Sel Nannochloropsis oculata
Pertumbuhan populasi sel N. oculata diamati dan dihitung setiap hari selama 14 hari. Data  rata-rata  pertumbuhan  populasi  tersaji  pada  Tabel  1  dan  kurva  pertumbuhan N. oculata tersaji pada Gambar 2.
Tabel 1. Rata-rata Pertumbuhan Populasi Sel N. oculata
Masa Kultur Kepadatan Sel (Rata-rata±SDx10 6 sel/ml) P0 P1 P2 P3 P4 Hari ke-0 2,00±0,00 2,00±0,00 2,00±0,00 2,00±0,00 2,00±0,00 Hari ke-1 4,35±0,05 b 4,25±0,05 b 4,57±0,12 a 3,20±0,10 c 2,95±0,13 d Hari ke-2 6,75±0,50 a 5,20±0,25 b 5,75±0,15 b 4,23±0,43 c 3,53±0,40 d Hari ke-3 9,35±0,50 a 7,87±0,63 b 7,37±0,78 b 4,70±0,65 c 4,13±0,48 c Hari ke-4 15,10±2,45 a 10,88±2,23 b 13,68±1,01 ab 5,64±0,07 c 4,93±0,78 c Hari ke-5 20,03±0,68 a 13,65±1,95 b 17,22±3,08 a 6,37±0,13 c 5,73±0,75 c Hari ke-6 25,20±4,15 a 16,87±1,13 b 21,60±5,65 ab 8,15±0,05 c 7,35±0,48 c Hari ke-7 26,43±6,32 a 19,13±0,41 b 30,92±1,84 a 9,77±0,18 c 8,38±0,93 c Hari ke-8 22,83±3,53 b 15,45±3,70 c 29,25±3,45 a 11,27±0,83 cd 9,08±0,73 d Hari ke-9 20,37±1,13 a 10,50±1,55 c 21,90±4,60 a 13,15±0,18 b 6,57±0,23 d Hari ke-10 18,90±1,55 a 8,05±3,20 b 19,35±6,35 a 14,85±0,30 a 1,43±0,28 c Hari ke-11 18,05±1,85 a 5,31±2,54 c 12,15±4,75 b 10,15±0,43 b 0,45±0,13 d Hari ke-12 14,70±1,00 a 3,65±1,10 c 8,57±1,88 b 5,02±1,08 c 0,00±0,00 d Hari ke-13 6,10±1,59 a 2,76±0,36 b 5,68±0,28 a 1,58±0,55 c 0,00±0,00 d Hari ke-14 5,53±0,18 a 2,33±0,63 b 5,00±0,05 a 0,57±0,50 c 0,00±0,00 c
Keterangan : SD = Standar Deviasi superscript yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (p<0,05).
Gambar 2. Kurva pertumbuhan N. oculata hasil penelitian.
Data pertumbuhan populasi sel N. oculata setelah dianalisis menggunakan Analysis of  Variance (ANOVA)  menunjukkan  perlakuan  POC duckweed dengan  konsentrasi  yang berbeda  memberikan  pengaruh  yang  berbeda  nyata  (p<0,05)  terhadap  pertumbuhan populasi  sel N.  oculata .  Pertumbuhan  populasi  tertinggi  dapat  dilihat  dari  fase  puncak pertumbuhan  dengan  kepadatan  maksimum  rata-rata  untuk  perlakuan  P0  sebanyak 26,43±6,32 x 10 6 sel/ml, P1 sebanyak 19,13±0,41 x 10 6 sel/ml, P2 sebanyak 30,92±1,84 x 10 6 sel/ml, P3 sebanyak 14,85±0,30 x 10 6 sel/ml, dan P4 sebanyak 9,08±0,73 x 10 6 sel/ml. Pertumbuhan populasi tertinggi yaitu pada perlakuan P2 sebanyak 30,92±1,84 x 10 6 sel/ml. Nutrien yang berperan besar pada pertumbuhan N. oculata adalah nitrogen (N) dan fosfor (P). Fery et al . (2020) menjelaskan, unsur N dalam media kultur berfungsi sebagai pembentuk  protein,  lemak,  dan  klorofil.  Arfah et  al .  (2019)  menambahkan,  unsur  P
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 K ep ad at an S el 10 6 se l/m l) Hari ke- P0 P1 P2 P3 P4
merupakan  salah  satu  makronutrien  utama  dalam  proses  metabolisme  sel  sebagai pembentuk  berbagai  komponen  struktural  dan  fungsional  yang  diperlukan  oleh  sel  untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroalga.
Perlakuan P2 memiliki pertumbuhan paling baik dibandingkan dengan perlakuan P1, P3, dan P4. Hal ini diduga nutrien pada perlakuan P2 dapat diserap dengan baik dan berada pada konsentrasi yang sesuai untuk mendukung pertumbuhan sel N. oculata dibandingkan perlakuan  P1.  Pada  perlakuan  P3  dan  P4,  pemberian  POC duckweed kurang  dapat dioptimalkan dengan baik oleh sel-sel N. oculata , diduga karena konsentrasi nutrien pada media kultur melebihi kebutuhan sel sehingga pertumbuhan yang dihasilkan lebih rendah dibandingkan perlakuan P2 dan P1. Arfah et al . (2019) mengemukakan bahwa penggunaan nutrien dalam medium kultur mikroalga memiliki batas maksimum yang dapat diserap oleh sel,  apabila  melebihi  batas  maksimumnya  maka  akan  terjadi  penghambatan  proses biosintesis terutama biosintesis protein.
Perlakuan  P0  memiliki  pertumbuhan  populasi  sel  lebih  rendah  dari  perlakuan  P2, diduga karena P0 (pupuk anorganik TSP, ZA, dan urea) tidak memiliki kandungan unsur hara  mikro  yang  dapat  menunjang  proses  pembelahan  sel N.  oculata .  Pernyataan  ini didukung  oleh  Susanto  (2002)  yang  menjelaskan  bahwa  pemakaian  pupuk  organik  pada dasarnya  memiliki  kelebihan  yang  lebih  unggul  selain  kandungan  unsur  N,  P,  dan  K, pupuk organik juga mengandung unsur hara lain yang melengkapi kebutuhan nutrien untuk menunjang pertumbuhan mikroalga.
Kurva pertumbuhan populasi N. oculata (Gambar 2) menunjukkan pertumbuhan sel yang terdiri dari fase adaptasi ( lag phase ), fase eksponensial ( logarithmic phase ), dan fase kematian ( death phase ). Fase adaptasi pada perlakuan P0 dimulai dari hari pertama hingga hari  ke-2.  P1,  P2,  dan  P3  mengalami  fase  adaptasi  dari  hari  pertama  hingga  hari  ke-3. Sedangkan P4 mengalami fase adaptasi dari hari pertama hingga hari ke-4. Proses adaptasi yang berbeda pada setiap perlakuan diduga karena perbedaan pemberian konsentrasi pada media  kultur.  Pada  fase  ini  sel N.  oculata mengalami  penyesuaian  diri  dengan  media barunya,  seperti  pernyataan  Kurniastuty  (1995)  pada  masa  penyesuaian  diri  (adaptasi) mikroalga mengalami metabolisme dalam selnya, akan tetapi pembelahan sel belum terjadi sehingga belum terdapat peningkatan dalam populasi sel.
Fase eksponensial pada perlakuan P0 dimulai pada hari ke-3 hingga hari ke-7. P1 dan P2  mengalami  fase  eksponensial  pada  hari  ke-4  hingga  hari  ke-7.  P3  mengalami  fase eksponensial pada hari ke-4 hingga hari ke-10. Sedangkan P4 mengalami fase eksponensial pada  hari  ke-5  hingga  hari  ke-8.  Fase  eksponensial  yang  berbeda  pada  masing-masing
perlakuan diduga karena adanya perbedaan selang waktu pada fase adaptasi dimana pada perlakuan dengan konsentrasi pemberian POC ducweed yang tinggi (P3 dan P4) sehingga memiliki  kandungan  nutrien  yang  lebih  banyak,  mengakibatkan  sel  mikroalga membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama  untuk  beradaptasi  terhadap  media  kultur.  Hal  ini sesuai  dengan  pernyataan  Afriza et  al .  (2015),  bahwa  konsentrasi  nutrien  yang  terlalu tinggi  membuat  nutrien  itu  sendiri  sulit untuk  diserap  oleh  sel  mikroalga. Wibowo et  al . (2017)  menyatakan  bahwa  fase  logaritmik  (eksponensial)  ditandai  dengan  terjadinya pembelahan sel dan laju pertumbuhan yang terus meningkat, fase logaritmik terjadi sampai pertumbuhan populasi sel mencapai puncak maksimalnya.
Fase kematian terjadi pada setiap perlakuan P0, P1, P2, P3, dan P4 setelah melalui fase eksponensial yang ditandai dengan menurunya kurva pertumbuhan N. oculata . Arfah et al . (2019) menjelaskan fase kematian ditandai dengan populasi sel yang memiliki pola pertumbuhan  cenderung  menurun  secara  konstan.  Ru’yatin et  al .  (2015)  menambahkan, pada fase ini mikroalga memperebutkan ruang pada media kultur serta terjadi penurunan nutrien dalam media kultur secara signifikan karena tidak dilakukan penambahan nutrien.
Laju Pertumbuhan Spesifik Sel (  ) dan Waktu Generasi Sel (DT) N. oculata
Grafik rata-rata laju pertumbuhan spesifik sel (  ) N. oculata disajikan pada Gambar 3, sedangkan kurva rata-rata waktu generasi sel (DT) N. oculata disajikan pada Gambar 4.
Gambar 3. Grafik rata-rata laju pertumbuhan spesifik sel (  ) N. oculata . Gambar 4. Grafik rata-rata waktu generasi sel (DT)
Nilai rata-rata laju pertumbuhan spesifik sel N. oculata (Gambar 3) tertinggi terdapat pada perlakuan P0 dengan nili 0,41 sel/ml/hari selanjutnya berturut-turut P2, P1, P4 dan P3 dengan  nilai  0,38  sel/ml/hari;  0,31  sel/ml/hari;  0,20  sel/ml/hari  dan  0,20  sel/ml/hari. Sedangkan  nilai  rata-rata  waktu  generasi  sel N.  oculata (Gambar  4)  tersingkat  terdapat
0,41 ± 0,03a
0,31 ± 0,02b 0,380 ± 0,03a
0,20 ± 0,002c 0,20 ± 0,01c 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 P0 P1 P2 P3 P4 N ilai Rat a- rat a (  ) N. o cu la ta Perlakuan 41,03 ± 3,36c
53,91 ± 4,35b 43,88 ± 3,24c 82,99 ± 0,86a 82,11 ± 5,75a 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 P0 P1 P2 P3 P4 N ila i R ata -ra ta (DT ) N . ocul at a Perlakuan
pada  perlakuan  P0  dengan  nili  41,03  jam  selanjutnya  berturut-turut  P2,  P1,  P4  dan  P3 dengan  nilai  43,88  jam;  53,91  jam;  82,11  jam  dan  82,99  jam.  Data  laju  pertumbuhan spesifik sel dan waktu generasi sel N. oculata setelah dihitung menggunakan analisis sidik ragam ( Analysis of Variance , ANOVA) menunjukkan pemberian perlakuan POC duckweed yang berbeda memberikan pengaruh terhadap laju pertumbuhan spesifik sel N. oculata dan waktu  generasi  sel N.  oculata .  Hasil  uji  lanjut  menggunkanan Duncan’s  Multiple  R ange Test (DMRT) menunjukan perlakuan P2 berbeda nyata (p<0,05) dengan perlakuan P1, P3, dan P4 namun tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan perlakuan P0.
Hasil  penelitian  ini  menunjukan  laju  pertumbuhan  spesifik  sel  memiliki  korelasi positif  dengan  pertumbuhan  populasi  sel  namun  memiliki  korelasi  negatif  dengan  waktu generasi  sel.  Waktu  generasi  sel  yang  singkat  menghasilkan  laju  pertumbuhan  dan kepadaan sel yang tinggi. Perlakuan P2 memiliki hasil terbaik dibandingkan perlakuan P1, P3, dan P4 namun P0 memiliki hasil yang lebih baik dibandingkan perlakuan P2.
Nutrien  yang  terdapat  pada  POC duckweed menjadi  salah  satu  faktor  yang berpengaruh  pada  aktivitas  metabolisme.  Kandungan  unsur  hara  N  dan  P  POC ducweed yang  disebutkan  dalam  penelitian  Indriana et  al .  (2020)  yaitu  sebesar  22.500  mg/l  dan 46.200 mg/l, kandungan unsur hara ini masih dalam kondisi normal untuk pertumbuhan N. oculata . Boroh (2012) dalam penelitiannya menyatakan bahwa pertumbuhan fitoplankton akan melimpah ketika kadar nitrat dalam media hidup fitoplankton mencapai 3-15,5 mg/l dan kadar fosfat 0,27-5,5 mg/l.
Laju  pertumbuhan  spesifik  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  P0  sedangkan  laju pertumbuhan  spesifik  terendah  terdapat  pada  perlakuan  P3.  Pada  penelitian  ini  memiliki nilai laju pertumbuhan spesifik lebih baik dibandingkan dengan penelitian Indriana et al . (2020)  yang  memperoleh  hasil  laju  pertumbuhan  spesifik  tertinggi  pada  perlakuan  f/2 dengan nilai 0,360/hari. Hal ini diduga karena mikroalga N. oculata dapat menyerap nutrisi dalam pupuk lebih cepat dibandingkan dengan mikroalga Chlorella vulgaris , seperti yang dibuktikan  dalam  penelitian  Jadid et  al .  (2017)  bahwa Nannochloropsis sp.  mampu beradaptasi  dalam  media  kultur  buatan  pada  hari  ke-0  yang  menunjukkan  bahwa Nannochloropsis sp. cepat menyesuaikan diri terhadap media kultur yang baru.
Nilai  waktu  generasi  sel  pada  penelitian  ini  lebih  lama  dibandingkan  dengan penelitian  Viqran et  al .  (2018)  yang  memperoleh  hasil  waktu  generasi  sel  tercepat  yaitu pada  perlakuan  Guano  0,100  g/l  dengan  nilai  36,76  jam.  Perbedaan  ini  diduga  karena waktu  generasi  sel  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor.  Menurut  Suriawiria  (1986) waktu  generasi  sel  dapat  dipengaruhi  oleh  faktor  biologi  seperti  bentuk  dan  sifat  jasad
mikroalga,  dan  faktor  non  biologi  seperti  kandungan  nutrien,  cahaya,  serta  suhu  pada media kultur.
Menurut  Fery et  al .  (2020),  nilai  dari  laju  pertumbuhan  dapat  dijadikan  sebagai standar  untuk  mengetahui  kesesuaian  media  terhadap  pertumbuhan N.  oculata semakin cepat laju pertumbuhan maka semakin baik kesesuaian media pupuk terhadap pertumbuhan populasi sel tersebut. Afriza et al . (2015) menambahkan, waktu generasi yang lebih singkat menunjukkan  pertumbuhan  populasi  lebih  cepat,  hal  ini  dikarenakan  waktu  yang diperlukan  mikroalga  untuk  pembelahan  sel  lebih  singkat  sehingga  untuk  mencapai kepadatan maksimum lebih cepat.

## Kualitas Air Media Kultur Nannochloropsis oculata
Kisaran  nilai  kualitas  air  selama  penelitian  yaitu  suhu  25 o C-33 o C,  pH  4,89-8,40, salinitas  25-38,33  ppt,  dan  DO  4,07-7,27  ml/l  (Tabel  2).  Dari  hasil  penelitian  ini menunjukkan  kualitas  air  media  kultur  dengan  penambahan  pupuk  dari  masing-masing perlakuan  masih  dalam  batas  toleransi  sel N.  oculata sehingga  sel  mikroalga  ini  masih dapat  bereproduksi  dan  tumbuh.  Namun  demikian,  penambahan  POC duckweed sangat berpengaruh pada kadar derajat keasaman (pH) media kultur. Semakin tinggi konsentrasi yang  ditambahkan  kedalam  media,  maka  semakin  rendah  nilai  pH  pada  media  kultur tersebut. Rendahnya kadar pH pada POC duckweed disebabkan adanya proses fermentasi pada pembuatan pupuk, Fadilah et al . (2018) menjelaskan bahwa selama proses fermentasi akan menghasilkan gas CO 2 terlarut yang bersifat asam (H 2 CO 3 ).
Tabel 2. Baku mutu pengukuran kualitas air dalam kultur N. oculata No. Parameter Satuan Hasil Pengukuran Baku Mutu 1. Suhu o C 25-33 25-32* 2. pH - 4,89-8,40 7-9* 3. Salinitas mg/l 25-38,33 25-35** 4. DO mg/l 4,07-7,27 Minimal 5*
Keterangan:*  Berdasarkan  baku  mutu  air  laut  untuk  biota  laut  berdasarkan  KEPMEN  LH  No.  51  (2004); **Widyaningrum et al . (2013)
Kualitas air memegang peran penting dalam proses kultur N. oculata , karena selain faktor nutrien yang terdapat dalam media kultur, pertumbuhan N. oculata juga dipengaruhi oleh kualitas air. Seperti yang dinyatakan oleh Ahmadi et al . (2019) kualitas air yang tidak sesuai  dalam  media  kultur  mikroalga  akan  menghambat  metabolisme  sel  yang mengakibatkan sel mikroalga sulit membelah.

## Simpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  konsentrasi  POC duckweed 10% dapat digunakan sebagai alternatif pengganti pupuk anorganik (TSP, ZA, dan urea) karena dapat meningkatkan pertumbuhan populasi sel sebanyak 30,92±1,84 x 10 6 sel/ml  pada  puncak  fase  eksponensial,  serta  nilai  laju  pertumbuhan  sel  0,38±0,03 sel/ml/hari  dan  waktu  generasi  sel  43,88±3,24  jam  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan perlakuan P0 (TSP, ZA, dan urea).

## Daftar Pustaka
Afriza,  Z.,  G.  Diansyah,  dan  AI.  Sunaryo.  (2015).  Pengaruh  Pemberian  Pupuk  Urea (CH 4 N 2 O)  dengan  Dosis  Berbeda  Terhadap  Kepadatan  Sel  dan  Laju  Pertumbuhan Porphyridium sp.  pada  Kultur  Fitoplankton  Skala  Laboratorium.  Maspari  Journal. 7(2): 33-40.
Ahmadi, M., D. Ferdiansyah., dan Endang T.W. (2019). Pengaruh Penggunaan Pupuk Cair Azolla  pinnata terhadap  Kepadatan Spirulina sp.  pada  Kultur  Skala  Intermediate. Prosiding  SEMNASDAL  (Seminar  Nasional  Sumber  Daya  Lokal)  II.  Prodi  Ilmu Perikanan Fakultas Pertanian UIM Pamekasan. 100-109 hlm.
Arfah,  Y.,  Nunik  C.,  dan  Alis  M.  (2019).  Pengaruh  Konsentrasi  Pupuk  Urea  terhadap Pertumbuhan Populasi Sel Nannochloropsis sp. Jurnal Kelautan. 12(1): 45-51.
Arrokhman,  S.,  Nurlita  A.,  dan  Dewi  H.  (2012).  Survival  Rate  Ikan  Bawal  Bintang ( Trachinotus blochii ) dalam Media Pemeliharaan Menggunakan Rekayasa  Salinitas. Jurnal Sains dan Seni ITS. 1(1): 32-35.
Astrid,  T.S.,  Rahardja  B.S.,  dan  Masithah  E.D.  (2013).  Pengaruh  Konsentrasi  Pupuk Lemna  minor terhadap  Populasi Dunaliella  salina .  Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan Kelautan. 5(1): 61-66.
Boroh, R. (2012). Pengaruh Pertumbuhan Chlorella sp. pada Beberapa Kombinasi Media Kultur.  Skripsi.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Hasanuddin. Makassar. 53 hlm.
Durmaz, Y., and Erbil G.C. (2017). Effect of Light Path Length of Tubes on Growth Rate of Nannochloropsis  oculata Using  Industrial  Scale  Tubular  Photobioreactor  in  the Marine Hatchery . Fresenius Environmental Bulletin. 26(7): 4783-4789.
Ermavitalini,  D.,  Sumarni  D.,  Sri  N.,  dan  Triono  B.  S.  (2019).  Pengaruh  Kombinasi Cekaman  Nitrogen  dan  Fotoperiode  terhadap  Biomassa,  Kandungan  Kualitatif Triasilgliserol  dan  Profil  Asam  Lemak Mikroalga  Nannochloropsis  sp.  Jurnal  Akta Kimia Indonesia. 4(1): 32-49.
Fadilah, Umi., I Made Mahaputra Wijaya, dan N. Semadi Antara. (2018). Studi Pengaruh pH  awal  Media  dan  Lama  Fermentasi  pada  Proses  Produksi  Etanol  dari  Hidrolisis Tepung  Biji  Nangka  dengan  Menggunakan Saccharomycess  cerevisiae .  e-Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri. 6(2): 92-102.
Fery,  R.A.,  Syafruddin  N.,  dan  Sofyan  H.S.  (2020).  The  Effect  of  Ammonium  Sulphate (ZA)  Fertilizer  Concentration  on  ohe  Growth  of  Microalga  Population ( Nannochloropsis oculata ). Asian Journal of Aquatic Sciences. 3(2): 94-102.
Indriana, N., Wa I., M. Idris., Ruslaini., L.O Baytul A., dan L.O. Muhammad A. (2020). Pengaruh  Konsentrasi  Pupuk  Organik  Cair  Lemna  ( Lemna  minor) yang  Berbeda terhadap Pertumbuhan Mikroalga Chlorella vulgaris . Jurnal Ilmiah Jurusan Budidaya Perairan. 5(1): 1-12.
Jadid,  R.,  Irma  D.,  dan  Nurfadillah.  (2017).  Penambahan  Air  Kelapa  pada  Media Pertumbuhan  Populasi Nannochloropsis sp.  Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Kelautan  dan Perikanan Unsyiah. 2(1): 113-118.
Juniantari,  N.K.E.,  A.A.Md.  Dewi  A.,  dan  Ida  B.W.G.  (2015).  Pengaruh  Jenis  Media terhadap  Pertumbuhan Nannochloropsis sp.  Jurnal  Rekayasa  dan  Manajemen Agroindustri. 3(2): 1-9.
KEPMEN  LH  [Keputusan  Menteri  Lingkungan  Hidup].  (2004).  Keputusan  Menteri Lingkungan  Hidup  Republik  Indonesia  No.  51  tahun  2004  tentang  Baku  Mutu  Air Laut untuk Biota Laut. Jakarta. 13 hlm.
Kurniastuty, J.D. (1995). Kepadatan Populasi Alga Dunaliella sp. pada Media Kultur yang Berbeda. Lampung: Balai Budidaya Laut. Buletin Budidaya Laut No 9.
Kusriningrum, R.S. 2010. Perancangan Percobaan. Pusat Penerbitan dan Percetakan Unair. Surabaya. 274 hlm.
Leksono, A.W., Dian M., dan Indah A.Y. (2107). Penggunaan Pupuk Organik Cair Hasil Fermentasi  dari Azolla  pinnata terhadap  Kepadatan  Sel Spirulina sp.  Jurnal  Ilmu- ilmu Perikanan dan Budidaya Perairan. 12(1): 56-65.
Maynardo, J.J., Veena D., Jeevan R.R., and Rajesh R. (2015). The Optimization of Light Intensity and Drying Temperature on Lipid Content of Microalgae Nannochloropsis oculata . Journal of Engineering Science and Technology. 1(2): 112-121.
Mukhlis,  A.,  Zaenal  A.,  Abidin,  dan  Ibadur  R.  (2017).  Pengaruh  Konsentrasi  Pupuk Ammonium  Sulfat  terhadap  Pertumbuhan  Populasi  Sel Nannochloropsis sp.  Jurnal Ilmiah Ilmu Biologi. 3(3): 149-155.
Nisa,  K.,  Saberina  H.,  dan  Syarifriadiman.  (2020).  Pengaruh  salinitas  Berbeda  terhadap Kepadatan  dan  Kandungan  Karotenoid Dunaliella  salina .  Jurnal  Perikanan  dan Kelautan. 24(1): 27-35.
Nurfadillah., Damar, A., dan Adiwilaga, E. M. (2012). Komunitas Fitoplankton di Perairan Danau Laut Tawar Kabupaten Aceh Tengah, Provinsi Aceh. Depik. 1(2): 93-98.
Ochtreeani,  A.M.,  Supriharyono,  dan  Prijadi  S.  2014.  Pengaruh  Perbedaan  Jenis  Pupuk terhadap Pertumbuhan Nannochloropsis sp. Dilihat dari Kepadatan Sel dan Klorofil- α pada Skala Semi Massal. Dipenegoro Journal of Maquares. Vol. 3 (2): 102 -108.
Paes, C.R., Faria G.R., Tinoco N.A., Castro D.J., Barbarino E., and Lourenço S.O. (2016). Growth,  Nutrient  Uptake  and  Chemical  Composition  of Chlorella sp.  and Nannochloropsis  oculata Under  Nitrogen  Starvation.  Latin  American  Journal  of Aquatic Research. 44(2): 275-292.
Rahmadan,  R.Y.  (2019).  Pertumbuhan Nannochloropsis  oculata yang  Dikultur Menggunakan Pupuk Limbah Cair Tahu. Skripsi. Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga. Surabaya. 115 hlm.
Ru’yatin, I.S., Rohyani , dan L. Ali. (2015). Pertumbuhan Tetraselmis dan Nannochloropsis pada  Skala  Laboratorium.  Prosiding  Seminar  Nasional  Masyarakat  Biodiversitas Indonesia. 1(5): 296-299.
Suriawiria, Unus. 1986. Pengantar Mikrobiologi Umum. Angkasa. Bandung. 238 hlm. Susanto, R. 2002. Penerapan Pertanian Organik. Kanisius. Yogyakarta. 218 hlm.
Viqran, Zaenal A., dan Alis M. 2018. Pengaruh Pemberian Pupuk Organik Guano dengan Konsentrasi  yang  Berbeda  terhadap  Laju  Pertumbuhan Spirullina sp.  Jurnal Perikanan. 8(2): 58-65.
Wibowo A. L., Mutiara D., dan Anggraini I. Y. (2017). Penggunaan Pupuk Organik Cair Hasil  Fermentasi  dari Azolla Pinnata Terhadap  Kepadatan  Sel Spirulina sp.  Jurnal Ilmu-Ilmu Perikanan dan Budidaya Perairan. 12(1): 56-65.
Widyaningrum,  N.F.,  Bambang  S.M.,  dan  Bagus  H.  (2013).  Studi  Eksperimental Fotobioreaktor  Photovoltaic  untuk  Produksi  Mikroalga  ( Nannochloropsis  oculata ). Jurnal Bioproses Komoditas Tropis. 1(2): 30-38.
Yulina., Wa I., dan Muhaimin H. (2020). Pengaruh Konsentrasi Pupuk Organik Cair dari Eceng  Gondok  ( Eichhornia  crassipes )  yang  Berbeda  terhadap  Pertumbuhan  dan Kandungan  Protein Chlorella  vulgaris. Jurnal  Ilmiah  Jurusan  Budidaya  Perairan. 5(1): 34 – 42.