Available  online  at BIOMA: Jurnal Ilmiah Biologi Website: http://journal.upgris.ac.id/index.php/bioma/index
BIOMA: Jurnal Ilmiah Biologi, 10(2), Oktober 2021, 217-228 Doi:  https://doi.org/10.26877/bioma.v10i2.8236

## OPTIMASI  DAN UJI EFEKTIVITAS  EKTRAK Ganoderma lucidum
SEBAGAI  ANTI- Helicobacter pylori
Intan  Chairun  Nisa 1* , Brilliant Margalin 2
1 Program  Studi Bioteknologi,  Fakultas Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Negeri  Malang Jl.  Semarang No.5,  Kota Malang
2 Program  Studi Teknologi Laboratorium  Medis, Fakultas Ilmu  Kesehatan, Universitas Maarif  Hasyim  Latif  Sidoarjo Jl.  Raya Ngelom  Megare No.30,  Kabupaten Sidoarjo *Corresponding author:intan.chairun.nisa.fmipa@um.ac.id
Naskah diterima:  1April  2021;  Direvisi:  11 Juni 2021;  Disetujui:  25 Juli  2021

## ABSTRAK
Helicobacter  pylori diketahui  sebagai  penyebab  utama  tukak  lambung  dengan melemahkan  lapisan  pelindung  pada lambung  dan  duodenum.  Sejumlah  obat anti tukak  lambung  yang  sering  digunakan  dapat  menyebabkan  resistensi  pada H. pylori . Ganoderma  lucidum diketahui  dapat  menghambat  dan  mendukung penyembuhan  tukak  lambung  yang  disebabkan  oleh  asam  asetat.  Akan  tetapi, kemampuan G. lucidum dalam  menghambat  tukak  lambung  yang  disebabkan H. pylori belum  banyak  diungkap.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui efektivitas  ekstrak G. lucidum dalam  menghambat  pertumbuhan H. pylori penyebab tukak lambung.  Penelitian  merupakan  ekperimental  dua faktorial  yaitu  jenis  pelarut fraksinasi  dan  konsentrasi  ektrak G.  lucidum .  Ekstrak G.  lucidum difraksinas i menggunakan  dua jenis  pelarut  yaitu  etanol  60% dan akuades.  Konsentrasi  ekstrak G. lucidum yang  digunakan  adalah  1, 5, 10, 20, 30 mg/mL.  Efektivitas  ekstrak G. lucidum diuji  dengan  metode  difusi  cakram.  Berdasarkan  analisis  statistik  didapat bahwa  jenis  pelarut  berpengaruh  terhadap  aktivitas  daya  hambat H. pylori dengan nilai  pada  pelarut  etanol  60%  signifikan  lebih  tinggi  dibandingkan  akuades. Konsentrasi  ekstrak G.  lucidum baik  etanol  maupun  akuades  berpengaruh signifikan  terhadap  aktivitas  daya  hambat.  Aktivitas  daya  hambat  tertinggi  adalah pada perlakuan  ekstrak  etanol G. lucidum konsentrasi  20 mg/ml.
Kata  kunci :  akuades;  difusi  cakram;  etanol; Helicobacter  pylori ; Ganoderma lucidum

## ABSTRACT
Optimization and  effectiveness  assay  of  Ganoderma  lucidum  extract  as  Anti- Helicobactor pylori. Helicobacter  pylori  is known to be the main cause of gastric ulcers  by weakening the protective lining  of the stomach and duodenal. A number of gastric anti-ulcer  drugs can cause resistance  to H. pylori.  Ganoderma lucidum is known to inhibit and support the healing of gastric ulcers caused by acetic acid. G. lucidum's  ability to inhibit  H. pylori  growth has  not been revealed much. This research  aims to find out the effectiveness of G. lucidum extract in inhibiting  the growth of H. pylori which causes gastric ulcers.  This study is an experimental two factorial  namely  the  type  of  fractionation  solvent  and  the  concentration  of  G.
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
lucidum extract. Ganoderma lucidum extract is  diffractionated using two types of solvents namely 60% ethanol and akuades. The concentration of G. lucidum extract used is 1, 5, 10, 20, 30 mg/mL. The effectiveness of G. lucidum is  tested using the disc  diffusion method. Based  on  statistical analysis  found that the type of solvent affects the activity of H.  pylori's  resistance  with a value in  ethanol solvents 60% significantly  higher  than  akuades  On  the  other  hand  the  concentration  of  G. lucidum extract in both ethanol and aquades has a significant effect on the activity of the slave. The highest inhibitory activity is in the treatment of ethanol extract G. lucidum concentration 20 mg / ml.
Keywords :  aquades;  diffusion  disc;  ethanol;  Helicobacter  pylori;  Ganoderma lucidum

## PENDAHULUAN
Helicobacter  pylori diketahui  sebagai  penyebab  utama  tukak  lambung, disamping  NSAID,  alkohol,  dan  sindrom  Zollinger  Ellison  (Feldman et al ., 2020.
Kurang  lebih  95% tukak  duodenum  dan  70%  tukak  lambung  disebabkan  oleh H. pylori .  Bakteri  tersebut  banyak  ditemukan  pada mukosa  lambung  dan  permukaan epitel  di  antrum  lambung.  Organisme  ini  mampu  melemahkan  lapisan  pelindung pada lambung  dan duodenum  serta dapat meningkatkan  asam  lambung  yang  dapat berbahaya  bagi  lapisan  lambung  (Graham,  2014)  .  Berdasarkan  data  dari  Badan Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan  (BPPK)  Depkes   pada  tahun  2005-2008 tukak  lambung  menyebabkan  kematian  pada  2,7%  penduduk  laki-laki  Indonesia dengan  umur  45-54  tahun.  Jumlah  tersebut  membuat  Indonesia  menempat i peringkat  ke-10 dengan  kematian  terbanyak  yang  disebabkan  tukak lambung  (Koto et al ., 2016).
Sejumlah  obat  anti  tukak  lambung  seperti H 2 receptor  antagonist,  proton pump  inhibitor dan cytoprotectants sering  digunakan  untuk  mengatasi  tukak lambung,  akan  tetapi  efek  samping  muncul  akibat  mengkonsumsi  obat-obat tersebut  (Gao et  al .,  2004).  Pengobatan  untuk  mengatasi H.  pylori umumnya menggunakan  antibiotik  akan tetapi H. pylori resisten  terhadap  beberapa perlakuan antibiotik  (Mégraud,  2004). Alternatif  penanganan  tukak  lambung  dengan  ekstrak bahan  alam  telah  lama  digunakan  untuk  mengobati  dan mencegah  tukak  lambung. Komponen  bahan  alam  seperti  flavonoid  (quercetin,  naringin,  and  silymar in), saponins  dari Panax  japonicus dan Kochia  scoparia ,  tannins  ( Linderae umbellatae ), gums  dan mucilage,  licorice,  aloe  gel,  capsicum  ( chili ),  dan  beberapa
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
fraksi  polisakarida  (PS)  dari  berbagai  bahan  alami  seperti  danshen  dan Cistus laurifolius diduga  efektif  mengatasi  tukak  lambung.  Polisakarida  dari G. lucidum ( Reishi  mushroom ) dapat menghambat  terbentuknya  tukak  lambung  dan fraksinas i polisakarida Ganoderma lucidum mendukung  penyembuhan  tukak  lambung  pada mencit  yang  disebabkan  oleh  asam  asetat  dengan  indikasi  meningkatnya  mucus lambung  (Bi et al ., 2014). Ganoderma lucidum dapat secara signifikan  melind ungi mukosa  lambung  dari  etanol  asam  yang  menyebabkan  tukak  lambung  akut  (Paerk et  al .,  2014).  Penelitian  lain  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol G.  lucidum memiliki  efek penghambatan  pertumbuhan H. pylori (Shang et al. , 2013).
Aktivitas  penghambatan H.  pylori oleh G.a lucidum belum  diungkap  lebih dalam  terutama  mengenai  efektivitas  penghambatan  dan  efektivitas  dalam mengatasi  tukak  lambung  yang  disebabkan  oleh H.  pylori .  Urgensi  dalam mengungkap  efektifitas G. lucidum dalam  mengatasi  infeksi H.  pylori di  dukung oleh  riset  di  Amerika  dimana  sekitar  6500  kematian  penduduk  disebabkan  tukak lambung  per  tahunnya  (Garrow  and  Delegge,  2010).  Alternatif  pengobatan  yang aman  dan  efektif  sangat  dibutuhkan  mengingat  jumlah  penderita  yang  banyak. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektifitas  ekstrak G. lucidum dalam  menghambat  pertumbuhan H.  pylori serta  sebagai  anti  tukak  lambung. Penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan  alternatif  baru  yang  efektif  dalam mengatasi  tukak lambung  dengan  aman  melalui  penggunaan  bahan  alami.

## MATERIAL  DAN METODE

## Subyek Penelitian
Subyek  penelitian  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  jamur  lingzhi ( G. lucidum ) dan bakteri H. pylori strain  AATC.

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Hematologi  Universitas  Maarif  Hasyim Latif  Sidoarjo  dan  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Univers itas Kristen  Maranatha  Bandung  pada bulan  Juni  hingga  Agustus  2020.

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  yaitu:  Oxoid ® Anaerobic  jar  3.5  L, laminar  air flow , autoclave , mikroskop  cahaya  Olympus ® CX 23, dan  inkubator.  Bahan-bahan
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
yang  digunakan  yaitu:  akuades steril,  jamur  lingzhi  ( G. lucidum ), bakteri H. pylori strain  AATC, Campygen  pack 3.5L, Ampicilin  10µg  (Sigma ® ,  misal),  darah kuda, Brucella  broth,  Brucella  agar  base, dan alkohol  60%

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan rancangan  acak lengkap  (RAL)  2 faktorial  dengan  variable  bebas pelarut  fraksinas i dan  konsentrasi  ekstrak.  Jenis  pelarut  yang  digunakan  adalah  akuades  dan  etanol 60%. Konsentrasi  ekstrak G. lucidum yang  digunakan  adalah  10, 50, 100, 150, dan 200 mg/ml  ( Tabel 1 ).
Tabel 1. Perlakuan  penelitian  dengan  variabel  konsentrasi  ekstrak G. lucidum
Konsentrasi/Pelarut Akuades Etanol 60% 10 mg/ml P1 P6 50 mg/ml P2 P7 100 mg/ml P3 P8 150 mg/ml P4 P9 200 mg/ml P5 P10
Keterangan:  Kontrol  negatif  menggunakan  akuades dan  etanol  60%  sedangkan  kontrol positif  menggunakan ampicillin  100 ppm.

## Pembuatan ekstrak G. lucidum
Pembuatan  ekstrak mengikuti  metode  Yulianingtyas  dan Kusmartono  (2016) yang  dimodifikasi.  Sebanyak  2  kg  jamur  segar G.  lucidum dihaluskan  dengan lumpang  dan  difilter  menggunakan  40  mesh  lalu  dikeringkan  selama  4  jam. Sebanyak  20 gram  hasil  pengeringan  diekstraksi  di dalam  maserator  dengan  pelarut akuades  selama  3 hari  (72 jam),  kemudian  dievaporasi  dengan rotary evaporator dan  dikeringkan  dengan  oven  lalu  ditimba ng  berat  keringnya.  Ekstrak G. lucidum difraksinasi  menjadi  beberapa  konsentrasi  yaitu  10, 50, 100, 150, dan  200 mg/mL dengan  cara  dilarutkan  secara  berurutan  0,1;  0,5;  1;  1,5;  dan  2  gram  ekstrak G. lucidum ke dalam  etanol  60% dan akuades.

## Pembuatan media
Sebanyak  45  gram Brucella  medium  agar  base dilarutkan  dalam  1  liter akuades kemudian  disterilkan  dengan  autoklaf  pada suhu  121°C dan tekanan  1 atm selama  20 menit.  Medium  didinginkan  hingga  40°C dan  dimasukkan  10 %  darah kuda steril  lalu  dihomegenkan  dan sekitar  15 mL  medium  dituangkan  dalam  cawan petri  steril  secara aseptik  lalu  dibiarkan  hingga  memadat  (Mobley et al ., 2001).
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...

## Optimasi lama inkubasi bakteri H. pylori
Sebanyak  1  ose  bakteri H.  pylori dikultur  pada  media  agar  dalam  petri selanjutnya  petri  dan campygen  pack diinkubasi  dalam anaerob  jar 3,5  L  yang kemudian  dimasukkan  ke inkubator  pada suhu  37°C selama  3, 4, dan 5 hari.   Setelah diinkubasi  pada waktu 3-5 hari,  masing- masing  koloni  diwarnai  dengan  pengecatan Gram  lalu  diamati  di  bawah  mikroskop  cahaya.  Isolat  yang  memiliki  keseragaman tinggi  dan  bentuk  yang  masih  bacil  dilanjutkan  untuk  digunakan  pada  uji antibakteri.

## Suspensi bakteri H. pylori
Kultur H. pylori pada cawan  petri  diambil  dan  disuspensikan  dalam  larutan garam  fisiologis  0,8% hingga  didapatkan  kekeruhan  yang  sama  dengan  standar  Mc. Farland  bernilai  1 (Wiegand et al ., 2008)

## Uji aktivitas antibakteri dengan cakram disk
Larutan  uji  yang  digunakan  adalah  ekstrak  etanol  dan  akuades jamur  lingzhi dengan  fraksinasi  pada  beberapa konsentrasi  (10, 50, 100, 150, dan  200 mg/mL); etanol  60% dan akuades sebagai  kontrol  negatif;  serta ampicilin  disc  10 µg  sebagai kontrol  positif.  Cakram  disk  ditetesi  masing- masing  larutan  uji  dan kemudian  disk tersebut  diletakkan  di  medium  agar  pada petri.  Kemudian  cawan  petri  diinkubas i dalam anaerobic jar dengan campygen pack 3,5 L dan dimasukkan  dalam  inkubator dengan  suhu  37°C selama  72 jam.

## Pengamatan dan pengukuran diameter zona bening
Setelah  72 jam masa  inkubasi  kemudian  dilakukan  pengamatan.  Zona  bening di  sekitar  cakram  disk disebut  menunjukkan  sensitivitas  bakteri  terhadap  bahan  uji yang  digunakan.  Diameter  zona  bening  tersebut  disebut  diameter  zona  hambat (Jorgensen and Turnidge,  2015).  Diameter  zona  bening  diukur  menggunaka n jangka  sorong  dan dinyatakan  dalam  satuan  milimeter  (mm).  Daya  hambat  dihitung dengan  cara  mengurangi  besar  diameter  keseluruhan  dengan  diameter  kertas cakram.  Kemudian  daya  hambat  masing-masing  perlakuan  digolongkan  kekuatan daya hambatnya  berdasarkan  standar  penggolongan  Finch  (2010).

## Analisis Data
Data hasil  pengujian  aktivitas  ekstrak etanol  dan akuades  jamur  lingzhi  ( G. lucidum )  terhadap  diameter  zona  bening  pertumbuhan  bakteri H.  pylori dianalis is
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
statistik  menggunakan  One  Way  ANOVA  dengan  taraf  kepercayaan  95%  yang dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  dan Mann  Whitney.

## HASIL  DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Ekstrak G. lucidum
Morfologi  jamur  lingzhi (G.  lucidum) berbentuk  seperti  kipas,  tekstur berkayu,  berwarna  coklat  dan permukaan  tidak rata  ( Gambar  1a ). Pada penelit ia n, sebanyak  500 gram  jamur  lingzhi  ( G. lucidum ) segar  dapat menghasilkan  40 gram ekstrak dengan  penyusutan  mencapai  92 %. Hal  ini  disebabkan  jamur  tersusun  atas 90%  air  dari  total  beratnya  (Hennicke et  al .,  2016).  Ekstrak  jamur  lingzhi  ( G. lucidum ) difraksinasi  dengan  2 macam  pelarut  yaitu  etanol  60% dan akuades.  Hasil ekstraksi  berbentuk  serbuk  halus  ( Gambar  1b ).
Gambar  1. a) Morfologi  jamur  lingzhi  ( G. lucidum); b) Hasil  ekstrak jamur  lingzhi ( G. lucidum)

## Optimasi Pertumbuhan H. pylori
Gambar  2. Morfologi  koloni  saat inkubasi  3 hari  (a), 4 hari  (b) dan 5 hari  (c). Hasil pewarnaan  Gram  inkubasi  3 hari  (d), 4 hari  (e) dan 5 hari  (f).
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
Helicobacter  pylori strain  ATCC  ditumbuhkan  pada  media Brucella  agar base yang  ditambahkan  7 % darah kuda dan diinkubasi  pada kondisi  mikroaerofil ik dengan  menggunakan anaerobic jar yang  dilengkapi  dengan Campygen pack 3,5 L selama  3-5 hari.
Pertumbuhan H. pylori ( Gambar  2 ) terbaik  didapatkan  pada waktu  inkubas i pada  hari  ke-3  dimana  pertumbuhan  koloni  sudah  mulai  padat  dan  sel  seragam berbentuk  batang.  Keseragaman  bentuk  bertujuan  menseragamkan  perlakuan. Helicobacter  pylori memiliki  karakter  mudah  berubah  bentuk  sel  pada  umur tertentu.  Heterogenitas  bentuk  sel H. pylori sangat  tinggi,  telah  dilaporkan  Sycuro LK et  al .  (2010)  bahwa H.  pylori dapat  berbentuk  batang,  spiral,  dan  kokus. Martinez et  al. (2016)  menyebutkan  bahwa  bentuk  sel  yang  bervariasi  dapat membantu  bakteri untuk  berkolonisasi  dan beradaptasi  pada kondisi  berbeda seperti pada  bentuk  spiral H.  pylori yang  dapat  meningkatkan  motilitas.  Berdasarkan pengamatan  makroskopis, H.  pylori memiliki  koloni  yang  cenderung  kecil, transparan  dan  permukaan  rata. Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Ruiz-Rico et al.
(2020) bahwa  koloni H. pylori berukuran  0.5 sampai  1.5 mm,  berwarna  transparan hingga  kekuningan,  berbentuk  bulat  dan  convex  pada  media  agar  dengan  10  % darah  kuda.

## Uji Penghambatan H. pylori oleh G. lucidum
Zona  hambat  merupakan  keseluruhan  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar kertas cakram.  Zona bening  yang  nampak  memiliki  ukuran  yang  berbeda-beda pada perlakuan  yang  berbeda  ( Gambar  3 ).  Zona  bening  ini  menunjukkan  kemampuan ekstrak G.  lucidum dalam  menghambat  pertumbuhan H.  pylori .  Daya  hambat merupakan  rata-rata dari  hasil  pengurangan  diameter  zona  hambat  dengan  diameter cakram  disk.  Ekstrak G.  lucidum memiliki  kemampuan  menghambat H.  pylori dengan  sangat  kuat  berdasarkan  ukuran  diameter  zona  bening  yang  terbentuk ( Tabel  2 ). Klasifikasi  daya  hambat  pertumbuhan  bakteri  mengikuti  Finch  (2010) yaitu  diameter  zona  bening  >20 mm  berarti  kuat,  16–20 mm  berarti  sedang,  10–15 mm  berarti  lemah,  dan <10 mm  berarti  tidak  ada penghambatan.
Perbedaan  perlakuan  konsentrasi  ekstrak G.  lucidum mempengaruhi  daya hambat.  Larutan  fraksinasi  berpengaruh  signifikan  terhadap  daya  hambat pertumbuhan H.  pylori .  Etanol  60%  dapat  memfraksinasi G. lucidum lebih  baik
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
dibandingkan  dengan  akuades. Daya  hambat  tertinggi  terdapat  pada konsentrasi  20 mg/ml  dengan  kategori  penggolongan  daya  hambat  sedang.  Pada perlakuan  tidak ditemukan  perlakuan  dengan  kategori  daya  hambat  kuat.  Daya  hambat  sedang nampak  pada  perlakuan  dengan  fraksinasi  etanol  60% dengan  konsentrasi  10, 20 dan  30 mg/ml.  Sedangkan,  pada  fraksinasi  akuades,  seluruh  perlakuan  tergolong tidak  menunjukkan  adanya  daya  hambat.
Gambar  3. Penampakan  contoh  zona  hambat  yang  terbentuk.  A  =  Salah  satu perlakuan;  B = Kontrol  negatif;  dan C = Kontrol  positif.
Tabel 2. Daya  hambat  berbagai  konsentrasi  ekstrak G. lucidum pada pertumbuha n
H. pylori
Pelarut Konsentrasi G.lucidum (mg/mL) Daya Hambat ± SD (mm) Penggolongan Daya Hambat Etanol 60% KP 42.45 ± 0.15 a Kuat KN 0 f Tidak ada 1 7.5 ± 0.3 e Tidak ada 5 8.83 ± 0.32 d Tidak ada 10 10.49 ± 0.2 c Sedang 20 11.53 ± 0.99 b Sedang 30 10.3 ± 0.025 bc Sedang Akuades KP 42.45 ± 0.15 Kuat KN 0 Tidak ada 1 6.5 ± 0.1 Tidak ada 5 6.83 ± 0.07 Tidak ada 10 6.88 ± 0.04 Tidak ada 20 6.89 ± 0.03 Tidak ada 30 6.71 ± 0.075 Tidak ada Keterangan:
a. Huruf subscript yang berbeda dalam satu satu kolom  menunjukkan  perbedaan  nyata (p < 0.05) dengan menggunakan uji  Duncan.
b. SD= Standard Devisiasi;  KP= Kontrol Positif; KN= Kontrol Negatif
Berdasarkan  analisis  statistik  Duncan,  pada  fraksinasi  etanol,  perlakuan ekstrak G. lucidum dengan  konsentrasi  20 dan  30 mg/ml  tidak  berbeda nyata,  dan
A B C
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
perlakuan  pada konsentrasi  30 mg/ml  juga  tidak  berbeda nyata  dengan  konsentrasi 20 mg/ml  namun  berbeda nyata  dengan  konsentrasi  1 dan  5 mg/ml.  Sementara  itu, pada  fraksinasi  dengan  akuades,  data  tidak  berdistribusi  normal  sehingga  pada analisis  statistik  menggunakan  Mann  Whitney.  Berdasarkan  analisis  statistik, perlakuan  konsentrasi  berpengaruh  nyata  terhadap  daya  hambat  pertumbuhan H. pylori .  Hasil  penelitian  menunjukkan  daya  hambat  tertinggi  pada  kategori  sedang sedangkan  Handrianto  (2017)  melaporkan  bahwa  ektrak  etanol G. lucidum aktif sebagai  antibakteri  untuk E. coli pada konsentrasi  60 µg/ml.
Li et  al. (2017)  menyatakan  bahwa  terdapat  beberapa  faktor  yang mempengaruhi  aktivitas  daya hambat  mikroba  antara  lain  kondisi  bakteri  (resisten, toleran,  atau persisten),  ukuran  inokulum  bakteri,  konsentrasi  zat  antimikroba,  dan jenis  inang.  Salah  satu faktor yang  diduga  mempengaruhi  hasil  penelitian  ini  adalah konsentrasi  zat  antimikroba  yang  sangat  bergantung  pada  jenis  pelarut  dalam ekstraksi G.  lucidum yang  digunakan.  Suatu  pelarut  akan  melarutkan  senyawa dengan  tingkat  kepolaran  yang  sama.  Kemampuan  anti H.  pylori oleh  ekstrak G. lucidum disebabkan  oleh  adanya  senyawa  antibakteri  yang  terkandung  yaitu triterpen  dan  asam  ganoderat  yang  merupakan  turunan  dari  triterpen.  Triterpen dapat  merusak  struktur  lipid  membran  pada  sitoplasma,  sehingga  proses perbentukan  membran  dan  atau  dinding  sel  terhambat  (Liantari,  2014).  Etanol memiliki  kepolaran  yang  sama  dengan  triterpen,  sehingga  diduga  triterpen terekstraksi  dengan  menggunakan  etanol.  Akan  tetapi  daya  hambat  pertumbuha n bakteri H.  pylori pada  penelitian  ini  tergolong  sedang  ( Tabel  2 ).  Hal  tersebut diduga  karena  kurangnya  optimasi  dari  larutan  ekstraksi  yang  mengikat  senyawa triterpen.
Menurut Fernández-Agulló et  al .  (2015),  beberapa  faktor dapat mempengaruhi  optimasi  proses  ekstraksi  yaitu  jenis  dan  konsentrasi  larutan ekstraksi,  waktu  dan  suhu  ekstraksi.  Penggunaan  senyawa  pelarut  lain  pada penelitian  selanjutnya  perlu  dilakukan  untuk  mengoptimasi  kemampuan  ektrak G. lucidum dalam  menghambat  pertumbuhan H.  pylori. Quereshi et  al. (2010) membandingkan  beberapa  pelarut  organik  seperti  metanol,  aseton,  etanol  dan akuades  untuk  ekstraksi G.  lucidum sebagai  antimikroba  dengan  hasil  yaitu ekstraksi  aseton  meningkatkan  kemampuan G.  lucidum dalam  mengha mbat
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
pertumbuhan  bakteri Bacillus  subtilis,  Staphylococcus  aureus,  Salmonella  thypii, Escherichia  coli,  Klebsiela  pneumoniae, dan Pseudomonas  aeruginosa .  Hal  ini menunjukkan  beberapa  optimasi  baik  dari  jenis  dan  konsentrasi  pelarut  organik serta  kondisi  ekstraksi  perlu  dilakukan  pada  penelitian  selanjutnya  untuk meningkatkan  daya hambat  ekstrak G. lucidum terhadap H. pylori .

## KESIMPULAN
Lama  inkubasi H. pylori terbaik  adalah  pada hari  ke-3. Pelarut  fraksinasi  dan konsentrasi  ekstrak G. lucidum berpengaruh  nyata  terhadap  daya  hambat  ekstrak pada pertumbuhan  bakteri H. pylori . Ekstrak  etanol G. lucidum dengan  konsentrasi 20 mg/mL  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri H. pylori pada kategori  sedang.

## UCAPAN  TERIMA KASIH
Terima  kasih  diucapkan  kepada Direktorat  Jenderal  Bidang  Penguatan  Riset dan  Pengembanga,  Kementerian  Riset  dan  Teknologi  Pendidikan  Tinggi  yang mendanai  penelitian  ini  melalui  program  PDP  (Penelitian  Dosen  Pemula)  tahun anggaran  2019 serta  kepada  seluruh  pihak  yang  terlibat  dalam  membantu  hingga terselesaikannya  penelitian  ini.

## DAFTAR  PUSTAKA
Bi,  W.  P.,  Man,  H.  B.,  &  Man,  M.  Q.  (2014).  Efficacy  and  safety  of  herbal medicines  in  treating  gastric  ulcer:  A  review . World  Journal  of Gastroenterology, 20 (45), 17020.
http://doi.org/10.3748/wjg.v20.i45.17020
Feldman,  M.,  Friedman,  L.  S.,  &  Brandt,  L.  J.  (Eds.).  (2020).  Sleisenger  and Fordtran's  gastrointestinal  and  liver  disease.  E-book:  Pathophysiolo gy, Piagnosis,  Management.  Elsevier.
Fernández-Agulló,  A., Freire,  M. S., & González-Álvarez,  J. (2015). Effect  of  the extraction  technique  on  the  recovery  of  bioactive  compounds  from eucalyptus  (Eucalyptus  globulus)  wood industrial  wastes . Industrial Crops and Products , 64 , 105-113. https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2014.11.031
Finch,  R. G., Greenwood,  D., Whitley,  R. J., & Norrby, S. R. (2010). Antibiotic  and chemotherapy  e-book . Elsevier  Health  Sciences.
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
Gao Yihuai,Wenbo  Tang,  He Gao,  Eli  Chan,  Jin  Lan,  and  Shufeng  Zhou.  (2004).
Ganoderma lucidum polysaccharide  fractions  accelerate  healing  of  acetic acid-induced  ulcers  in  rats . Journal  of  Medicinal  Food , 7 (4),  417–421. https://doi.org/10.1089/jmf.2004.7.417
Garrow, D., & Delegge,  M. H. (2010). Risk factors  for gastrointestinal  ulcer  disease in  the  US  population. Digestive  Diseases  and  Sciences , 55 (1),  66. https://doi.org/10.1007/s10620-008-0708-x
Graham,  D. Y. (2014). History  of Helicobacter pylori, duodenal  ulcer,  gastric  ulcer and  gastric  cancer . World  Journal  of  Gastroenterology , 20 (18),  5191. http://doi.org/  10.3748/wjg.v20.i18.5191
Handrianto,  P. (2017). Aktivitas  antibakteri  ekstrak  jamur  lingzhi (Gano lucidum)
menggunakan  pelarut  etanol  terhadap Escherichia  coli. Journal  of Pharmacy and Science , 2 (1), 33-35. http://ejournal.akfarsurabaya.ac.id/index.php/jps/article/view/64
Hennicke,  F., Cheikh-Ali,  Z.,  Liebisch,  T.,  Maciá-Vicente,  J. G.,  Bode,  H.  B.,  & Piepenbring,  M.  (2016).  Distinguishing  commercially  grown Ganoderma lucidum from Ganoderma lingzhi from  Europe  and  East  Asia  on  the  basis of  morphology,  molecular  phylogeny,  and  triterpenic  acid  profiles . Phytochemistry , 127 , 29-37. http://doi.org/10.1016/j.phytoc he m. 2016.03.012
Jorgensen,  J. H., & Turnidge,  J. D. (2015). Susceptibility  test methods:  dilution  and disk  diffusion  methods. Manual  of Clinical  Microbiology , 71 , 1253-1273. https://doi.org/10.1128/9781555817381.ch71
Koto, K., Asrul,  A., & Muradi,  A. (2016).  Characteristic  of  gastric  perforation  type and  the  histopathology  at  Haji  Adam  Malik  general  hospital  Medan- Indonesia . Bali Medical Journal, 5 (1), 186-8. https://doi.or g/ 10.15562/bmj.v5i1.325
Li,  J., Xie,  S., Ahmed,  S., Wang,  F., Gu,  Y., Zhang,  C., Chai,  X., Wu,  Y., Cai,  J.,
&  Cheng,  G.  (2017).  Antimicrobial  activity  and  resistance:  Influenc ing factors . Frontiers in Pharmacology , 8 , 364. . https://doi.org/10.3389/fphar.2017.00364 Liantari,  D.  S.  (2014).  Effect  of  wuluh  starfruit  leaf  extract  for Streptococcus mutans growth . Jurnal Majority , 3 (7), 27-33. http://juke.kedokteran.unila.ac.id/index.php/majority/article/view/473
Martínez,  L. E., Hardcastle,  J. M., Wang,  J., Pincus,  Z., Tsang,  J., Hoover, T. Bansil, R., & Salama,  N. R. (2016). Helicobacter pylori strains  vary  cell  shape and flagellum  number  to  maintain  robust  motility  in  viscous  environme nts .
Molecular Microbiology , 99 (1), 88-110. https://doi.org/10.1111/mmi.13218
Nisa & Margalin,  Optimasi  dan  uji  efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum ...
Mégraud,  F. (2004). H.  pylori antibiotic  resistance:  Prevalence,  importance,  and advances in testing. Gut , 53 (9), 1374-1384.
http://dx.doi.org/10.1136/gut.2003.022111
Mobley,  H.  L.,  Mendz,  G.  L.,  &  Hazell,  S.  L.  (2001). Helicobacter  pylori : Physiology and genetics. Retrieved from https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21290711/
Park, J. H., Jang,  K. J., Kim,  C-H., Lee, Y. H., Lee,  S. J., Kim,  B. H., & Yoon,  H. M.  (2014). Ganoderma  lucidum pharmacopuncture  for  the  treatment  of acute  gastric  ulcers  in  rats. Journal  of  Pharmacopuncture , 17 (3),  40–49. http://doi.org/10.3831/KPI.2014.17.025
Quereshi,  S.,  Pandey,  A.  K., &  Sandhu,  S. S.  (2010).  Evaluation  of  antibacter ia l activity  of  different Ganoderma  lucidum extracts. Journal  of  Scientific Research , 3 (1), 9-13. https://www.researchgate.net/profile/Sard ul- Sandhu/publication/267240166_Evaluation_of_antibacterial_activity_of_d ifferent_Ganoderma_lucidum_extracts/links/55ed94da08ae65b6389f5ea7/ Evaluation-of-antibacterial-activity-of-different-Ganoderma- lucidum- extracts.pdf
Ruiz-Rico,  M., Moreno, Y., & Barat, J. M. (2020). In vitro  antimicrobial  activity  of immobilised  essential  oil  components  against Helicobacter  pylori.  World Journal of Microbiology and Biotechnology , 36 (1), 1-9. http://doi.org/10.1007/s11274-019-2782-y
Shang,  X.,  Tan,  Q., Liu,  R.,  Yu,  K.,  Li,  P., &  Zhao,  G.  P.  (2013).  In  vitro  anti- Helicobacter  pylori effects  of  medicinal  mushroom  extracts,  with  special emphasis  on  the  Lion's  Mane  mushroom ,  Hericium  erinaceus (higher Basidiomycetes) .  International  Journal  of  Medicinal  Mushrooms, 15 (2), 165-174. http://doi.org/ 10.1615/IntJMedMushr.v15.i2.50
Sycuro,  L. K., Pincus,  Z., Gutierrez,  K. D., Biboy,  J., Stern,  C. A., Vollmer,  W., & Salama,  N.  R.  (2010).  Peptidoglycan  crosslinking  relaxation  promotes Helicobacter  pylori's helical  shape and  stomach  colonization, Cell , 141 (5), 822-833. http://doi.org/10.1016/j.cell.2010.03.046
Wiegand,  I., Hilpert,  K., & Hancock,  R. E. (2008). Agar and broth dilution  methods to  determine  the  minimal  inhibitory  concentration  (MIC)  of  antimicrob ia l substances . Nature Protocols , 3 (2), 163-175. https://doi.org/10.1038/nprot.2007.521
Yulianingtyas,  A.,  & Kusmartono,  B. (2016).  Optimasi  volume  pelarut  dan waktu maserasi  pengambilan  flavonoid  daun  belimbing  wuluh (Averrhoa Bilimbi
L. ) . Jurnal Teknik Kimia , 10 (2), 61-67.
https://media.neliti.com/media/publications/142082-ID-optimasi- volume- pelarut-dan-waktu- masera.pdf