AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BIJI KOPI ROBUSTA ( Coffea canephora ) TERHADAP BAKTERI Escherichia coli
Hizkia Alesta Tanauma 1) , Gayatri Citraningtyas 1) , Widya Astuty Lolo 1)
1) Progam Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The purpose of this study is to test the antibacterial activity of robusta coffee seed extract against bacterium  Escherchia  coli.  The  extraction  method  using  maceration  with  solvent  ethanol  96%. Antibacterial activity test was done by using pitting method. The results showed that robusta coffee seed extract has antibacterial activity. Effective concentration to inhibit bacterium  Escherchia coli extract at concentration of 10%, 50% and 100%. The results showed that the  geater concentration, the geater the inhibitory zones are formed.
Keywords : Caffea canephora, Escherchia coli, antibacterial, and agar diffusion

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  yang  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  biji  kopi robusta terhadap bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 10%, 50% dan 100%. Ekstraksi menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%.  Pengujian  antibakteri  menggunakan  metode  difusi  agar dengan  cara  sumuran.  Berdasarkan  hasil penelitian,  ekstrak  biji  kopi robusta dapat  menghambat  bakteri Escherichia  coli .  Konsentrasi  10%,  50%  dan  100%  ketiganya  memberikan  zona  hambat  yang  berbeda. yaitu  semakin  besar  konsentrasi  eksrak  biji  kopi  robusta  maka  semakin  besar  zona  hambat  yang terbentuk.
Kata kunci : Coffea canephora, Escherichia coli , antibakteri, difusi agar.
.

## PENDAHULUAN
Bakteri  merupakan  mikroorganisme yang  tidak  dapat  dilihat  dengan  mata telanjang,  tetapi  hanya  dapat  dilihat  dengan bantuan  mikroskop  (Radji,  2011).  Bakteri patogen  lebih  berbahaya  dan  menyebabkan infeksi  baik  secara  sporadik  maupun endemik, antara lain Staphylococcus aureus , Escherichia coli dan Pseudomonas
aeruginosa (Djide, dkk. 2008).
Penelitian zat yang berkhasiat sebagai  antibakteri  perlu  dilakukan  untuk menemukan  produk  antibiotik  baru  yang berpotensi untuk menghambat atau membunuh  bakteri  yang  resisten  antibiotik dengan  harga  yang  terjangkau.  Salah  satu alternatif  yang  dapat  ditempuh  adalah memanfaatkan  zat  aktif  pembunuh  bakteri yang  terkandung  dalam  tanaman  obat. Widjayanti  (1999) dalam Nur  Iman  (2009) menjelaskan salah satu tanaman yang secara empiris  digunakan  sebagai  obat  antibakteri adalah kopi.
Kopi  robusta  ( Coffea  canephora ) banyak  ditanam  di  Afrika,  India  dan Indonesia,  komoditas  kopi  robusta  di Indonesia  sendiri  sangat  tinggi  hingga menguasai  pasar  nasional,  tapi  hanya menguasai 30% pasar dunia jika dibandingkan  dengan  komoditas    kopi arabika yang menguasai 70% pasar dunia. Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh Yaqin  dan  Nurmilawati  (2015)  tentang pengaruh  ekstrak  kopi  robusta  ( Coffea canephora ) sebagai penghambat
pertumbuhan  bakteri Staphylococus  aureus menyatakan  pertumbuhan Staphylococcus aureus akan  terhambat  setelah  pemberian ekstrak  kopi  robusta  ( Coffea  canephora )
dengan  konsentrasi  minimal  sebesar  12,5% dan daya hambat  yang paling  efektif adalah dengan  konsentrasi  100%.  Penelitian  yang dilakukan oleh Chamidah (2012), menyatakan  ekstrak  biji  kopi  robusta mempunyai daya antibakteri terhadap pertumbuhan Porphyromonas gingivalis pada konsentrasi 100%, 50%, dan 25%. Atas dasar  latar  belakang  tersebut  maka  pelu dilalkukan  penelitian  tentang  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Biji  Kopi  Robusta ( Coffea canephora ) terhadap bakteri Escherichia coli .
Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu menguji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  biji kopi  robusta  terhadap  bakteri Escherchia coli pada konsentrasi 10%, 50%, dan 100%.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain : erlenmeyer, gelas ukur, gelas kimia, tabung reaksi,  rak  tabung  reaksi,  pipet  tetes, penangas air, blender, ayakan mesh 65, kaca arloji,  timbangan  analitik,  labu  ekstraksi, batang  pengaduk,  cawan  petri,  jarum  ose, pinset, inkubator, laminair air flow , termometer, pencadang, autoklaf, mikropipet, mistar berskala, rotary evaporator , dan alat fotogafi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu biji  kopi  robusta,  bakteri  uji  ( Escherichia coli ), akuades steril, etanol 96%, tetrasiklin, Nutrient  Agar  (NA),  H 2 SO 4 0,36  N, BaCl 2 .2H 2 O  1,175%,  NaCl  0,9%,  kertas saring, kertas label dan aluminium foil.

## Pengambilan dan perlakuan sampel
Sampel  kopi  robusta  diambil  dari Kabupaten  Kepulauan  Talaud  kemudian selanjutnya dibawa ke laboratoium. Biji kopi yang  telah  dikumpulkan  dibersihkan  dari pengotor,  selanjutnya  dicuci  di  bawah  air mengalir  sampai  bersih,  ditiriskan,  lalu dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan. Sampel  yang  telah  kering  diserbukkan dengan  menggunakan  blender,  serbuk  yang dihasilkan  diayak  menggunakan  ayakan mesh 65 hingga diperoleh serbuk yang halus dan  seragam.  Hasilnya  dimasukkan  ke dalam wadah gelas tertutup.
Ekstraksi sampel
Ekstraksi biji kopi robusta dilakukan dengan  metode  maserasi.  Sebanyak  120  g serbuk  simplisia  biji  kopi  dimasukkan  ke dalam  erlenmeyer,  kemudian  direndam dengan  larutan  etanol  96%  sebanyak  225 mL,  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan dibiarkan  selama  5  hari  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  5  hari,  sampel  yang direndam  tersebut  disaring  menggunakan kertas  saring  menghasilkan  filtrat  1  dan ampas  1.  Ampas  yang  ada  kemudian dimaserasi  dengan  larutan  etanol  96% sebanyak 75 mL, ditutup dengan aluminium foil  dan  dibiarkan  selama  2  hari  sambil sesekali  diaduk.  Setelah  2  hari,  sampel tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan ampas 2. Filtrat 1 dan  2  digabungkan,  lalu  dievaporasi menggunakan rotary  evaporator ,  sehingga diperoleh  ekstrak  biji  kopi  robusta.  Ekstrak kental  yang  dihasilkan  dibiarkan  pada  suhu ruangan  hingga  seluruh  pelarut  etanol menguap.  Ekstrak  ditimbang  dan  disimpan
dalam  wadah  gelas  tertutup  sebelum digunakan untuk pengujian.

## Pembuatan larutan kontrol
Larutan kontrol positif dibuat dengan cara  ditimbang  tetrasiklin  500  mg  sebanyak 0,02 g, kemudian dilarutkan dengan akuades dan dicukupkan volumenya hingga 100 mL.

## Pembuatan larutan uji
Dibuat  larutan  uji  10%;  50%;  dan 100%  dengan  cara  ditimbang  0,1  g;  0,5g; dan  1  g  ekstrak  biji  kopi  robusta  kemudian dicukupkan dengan akuades sampai 10 mL.

## Pembuatan media
Nutrient Agar (NA) sebanyak 0,56 g dilarutkan dalam 20 mL akuades (28 g/1000 mL)  menggunakan  erlenmeyer.  Setelah  itu dihomogenkan  dengan  stirrer  di  atas penangas  air  sampai  larut.  Media  tersebut disterilkan dalam autoklaf  pada suhu 121 o C selama  15  menit.  Media  Agar  digunakan untuk inokulasi bakteri.
Media  dasar  dibuat  dengan  cara ditimbang Nutrient Agar (NA) sebanyak 2,3 g lalu dilarutkan dalam 100 mL akuades (23 g  /  1000  mL)  menggunakan  erlenmeyer. Sedangkan media pembenihan dibuat dengan  cara  ditimbang  5,75  g  NA,  lalu dilarutkan  dalam  250  mL  akuades  (23  g  /
1000 mL) menggunakan erlenmeyer. Setelah itu, masing-masing media dihomogenkan  dengan  stirrer  di  atas penangas  air  sampai  mendidih.  Media  yang sudah  homogen  ini  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121 o C  selama  15  menit. Media  dasar  dan  media  pembenihan digunakan dalam pembuatan media pengujian  sebagai  lapisan  dasar  dan  lapisan kedua.
Kultur bakteri
Bakteri uji diambil dengan jarum ose steril,  lalu  ditanamkan  pada  media  agar dengan cara menggores. Selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37 o C selama 24 jam.
Pembuatan larutan McFarland
Larutan H 2 SO 4 0,36 N sebanyak 99,5 mL dicampurkan dengan larutan BaCl 2 .2H 2 O  1,175%  sebanyak  0,5  mL dalam  erlenmeyer.  Kemudian  dikocok sampai  terbentuk  larutan  yang  keruh. Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai  standar kekeruhan suspensi bakteri uji.
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil  dengan  jarum  ose  steril  lalu disuspensikan  kedalam  tabung  yang  berisi 10 mL larutan NaCl 0,9% hingga di peroleh kekeruhan  yang  sama  dengan  standar kekeruhan larutan Mc. Farland.
Lapisan dasar dibuat dengan menuangkan masing-masing 10 mL NA dari media  dasar  ke  dalam  9  cawan  petri,  lalu dibiarkan sampai memadat. Setelah memadat,  pada  permukaan  lapisan  dasar diletakkan  3  pencadang  baja  yang  diatur sedemikian  rupa  jaraknya  agar  daerah pengamatan tidak saling bertumpuh. Kemudian, suspensi bakteri dicampurkan ke dalam  media  pembenihan  NA.  Setelah  itu, dituangkan  15  mL  campuran  suspensi  dan media  pembenihan  tersebut  ke  dalam  tiap cawan  petri  yang  diletakkan  pencadang sebagai lapisan kedua. Selanjutnya, pencadang  diangkat  secara  aseptik  dari cawan petri, sehingga akhirnya terbentuklah sumur-sumur  yang  akan  digunakan  dalam uji antibakteri.

## Pengujian ekstrak terhadap bakteri
Larutan  uji  ekstrak  biji  kopi  robusta dengan  berbagai  konsentrasi  (10%,  50%,
dan 100%); aquades sebagai kontrol negatif; larutan  tetrasiklin  sebagai  kontrol  positif, masing-masing  diteteskan  pada  sumur  yang berbeda.  Kemudian  cawan  petri  diinkubasi dalam  inkubator  pada  suhu  37 o C  selama  24 jam.
Pengamtan dan pengukuran zona hambat Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam masa inkubasi. Daerah bening merupakan petunjuk kepekaan bakteri terhadap  antibiotik  atau  bahan  antibakteri lainnya  yang  digunakan  sebagai  bahan  uji yang dinyatakan dengan lebar diameter zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur dalam satuan milimeter (mm) menggunakan mistar  berskala  dengan  cara  diameter keseluruhan  dikurangi  diameter  sumuran  7 mm.  Kemudian  diameter  zona  hambat tersebut dikategorikan kekuatan daya antibakterinya  berdasarkan  penggolongan menurut David & Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Serbuk simplisia biji kopi dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kemudian direndam  dengan  larutan  etanol  96%
sebanyak 225 mL, ditutup dengan aluminium  foil  dan  dibiarkan  selama  5  hari sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  5  hari, sampel  yang  direndam  tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  1  dan  ampas  1.  Ampas  yang  ada kemudian  diekstraksi.  Proses  ekstraksi dalam  penelitian  ini  menggunakan  metode maserasi. Metode maserasi sangat menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa bahan  alam  maupun  bahan  laut,  karena dengan  perendaman  sampel  akan  terjadi pemecahan  dinding  sel  dan  membran  sel
karena  perbedaan  tekanan  antara  di  dalam dan  luar  sel,  sehingga  metabolit  sekunder akan  terlarut  dalam  pelarut  organik  dan ekstraksi  senyawa  akan  sempurna    karena dapat  di  atur  perendaman  yang  dilakukan. Kelebihan metode ini, yaitu untuk menghindari  kerusakan  zat  aktif  akibat pemanasan yang berlebih (Dwijendra, 2014).
Menurut  Suryanto  (2012),  pemilihan pelarut  pada  umumnya  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  antara  lain,  selektivitas, kelarutan,  dan  titik  didih.  Untuk  pelarut ekstraksi  sendiri  digunakan  etanol.  Pelarut etanol  merupakan  pelarut  yang  tidak beracun,  dan  bersifat  universal  yang  cocok untuk mengekstrak semua golongan senyawa  metabolit  sekunder.  Selain  itu pelarut  etanol  mempunyai  sifat  selektif, dapat  bercampur  dengan  air  dengan  segala perbandingan, ekonomis, mampu mengekstrak  sebagian  besar  senyawa  kimia yang  terkandung  dalam  simplisia  seperti alkaloid, minyak atsiri, glikosida, kurkumin, klorofil, steroid, dan flavonoid.
Hasil maserasi  terhadap kopi  robusta berupa  filtrat  berwarna  coklat  kehitaman sebanyak 100 g. Selanjutnya filtrat diuapkan menggunakan rotary  evaporator hingga memperoleh ekstrak kental sebanyak 83,3  g berwarna coklat kehitaman.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pada uji aktivitas  antibakteri ekstrak biji kopi robusta yang menggunakan metode difusi  agar  (difusi  Kirby-Bauer  yang  telah dimodifikasi)  dengan  cara  sumuran  menjadi pilihan  dalam  mencapai  tujuan  klinis  yang sering  digunakan  dalam  uji  kepekaan
antibiotik  (Loing,  2016).  Hasil  uji  aktivitas antibakteri    diperoleh  melalui  pengamatan yang  dilakukan  selama  1×24  jam  masa inkubasi  dengan  3  kali  pengulangan  untuk masing-masing bakteri. Setelah masa inkubasi  terbentuk  daerah  bening  di  sekitar sumuran  yang  berbentuk  lingkaran.  Daerah bening merupakan petunjuk kepekaan bakteri  terhadap  antibiotik  yang  digunakan sebagai kontrol positif atau bahan antibakteri  lainnya  yang  digunakan  sebagai bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan  lebar diameter  zona  hambat.  Kontol  positif  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu tetrasiklin  .  Fungsi  dari  tetrasiklin  ialah sebagai  kontrol  dari  zat  uji  dengan membandingkan  diameter  daerah  hambat yang  terbentuk,  sedangkan  kontrol  negatif yang  digunakan  ialah  air.  Fungsi  dari kontrol  negatif  ialah  untuk  mengetahui  ada tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertubuhan  bakteri E.coli sehingga  dapat diketahui  bahwa  yang  mempunyai  aktivitas antibakteri adalah zat uji bukan pelarut.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dan hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat ekstrak kopi robusta Coffea robusta terhadap  bakteri Escherchia  coli dapat dilihat pada Tabel 1.
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat  melalui  pengukuran  dengan  mistar berskala  dapat  diketahui  bahwa  ekstrak  biji kopi  robusta  memiliki  diameter  yang  sama dengan tetrasiklin dalam menghambat bakteri Escherchia coli . Hal ini dapat dilihat pada  Tabel  1  dengan  perhitungan  rata-rata diameter  antara  tetrasiklin  dengan  kopi robusta.
Tabel 1. Hasil pengukuran rata-rata diameter zona hambat (mm) terhadap bakteri uji E.  coli Konsentrasi (%) Kontrol Negatif (-) (mm) Kontrol Positif (+) (mm) Ekstrak Biji Kopi (mm) 10 0 21 22,5 50 0 25 24 100 0 30 27 Rata-rata 0 25 24
Menurut  Davis  (1971),  kriteria kekuatan  daya  antibakteri  sebagai  berikut  : diameter  zona  hambat  5  mm  atau  kurang dikategorikan lemah, zona hambat 5-10 mm dikategorikan  sedang,  zona  hambat  10-20 mm dikategorikan kuat dan zona hambat 20 mm  atau  lebih  dikategorikan  sangat  kuat. Berdasarkan  kriteria  tersebut,  maka  daya antibakteri ekstrak kopi robusta pada bakteri E.coli dengan konsentrasi ekstrak 10% (22,5 mm),  50%  (24  mm),  100%  (27  mm) termasuk  sangat  kuat.  Sehingga  dapat diketahui  bahwa  konsentrasi  ekstrak  10%, 50%  dan  100%  merupakan  konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri E.coli .
Kafein  merupakan  senyawa  alkaloid yang  berwujud  kristal  berwarna  putih. Kafein  adalah  satu  kandungan  dalam  biji kopi yang mampu menghambat pertumbuhan  bakteri,  dimana  kopi  robusta mempunyai  kandungan  sebanyak  1,6%- 2,4% (Widyotomo, dkk. 2007). Kemampuan senyawa  alkaloid  sangat  dipengaruhi  oleh keaktifan  biologis  senyawa  tersebut,  yang disebabkan  oleh  adanya  gugus  basa  yang
mengandung  nitrogen.  Adanya  gugus  basa ini  apabila  mengalami  kontak  dengan bakteri akan bereaksi dengan senyawa asam amino yang menyusun dinding sel dan DNA bakteri  yang  merupakan  penyusun  utama inti sel, dimana merupakan pusat pengaturan segala kegiatan sel. Reaksi ini terjadi karena secara  kimia  suatu  senyawa  yang  bersifat basa  akan  bereaksi  dengan  senyawa  asam, dalam hal ini adalah asam amino. Reaksi ini mengakibatkan terjadinya perubahan struktur  dan  susunan  asam  amino  karena sebagian  besar  asam  amino  telah  bereaksi dengan  gugus  basa  dari  senyawa  alkaloid. Perubahan  susunan  asam  amino  ini  jelas akan merubah susunan rantai DNA pada inti sel yang semula memiliki susunan asam dan basa  yang  saling  berpasangan.  Perubahan susunan rantai asam amino pada DNA akan menimbulkan perubahan keseimbangan genetik sehingga DNA bakteri akan mengalami  kerusakan.  Dengan  adanya kerusakan pada DNA tersebut inti sel bakteri akan  mengalami  kerusakan.  Hal  ini  karena DNA merupakan komponen utama penyusun inti sel. Kerusakan DNA pada inti
sel  bakteri  ini  juga  akan  mendorong terjadinya lisis pada inti sel bakteri. Lisisnya inti  sel  bakteri  akan  menyebabkan  juga kerusakan  sel  pada  bakteri  karena  inti  sel merupakan pusat kegiatan sel. Kerusakan sel pada  bakteri  ini  lama  kelamaan  akan membuat  sel-sel  bakteri  tidak  mampu melakukan metabolisme sehingga juga akan mengalami  lisis.  Dengan  demikian  bakteri akan menjadi  inaktif dan hancur (Gunawan, 2009). Hal ini diasumsikan bahwa cara kerja kafein murni dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  sama  dengan  kafein yang berada dalam ekstrak biji kopi robusta.
Asam volatil merupakan asam lemak rantai  pendek  dan  memiliki  aktivitas meningkatkan  daya  hambat  pertumbuhan bakteri,  karena  lebih  mampu  menembus dinding  sel  bakteri  daripada  asam  lemak rantai panjang (Widyotomo, dkk. 2007).
Komponen  lain  selain  kafein  yang terdapat  dalam  biji  kopi  Robusta  yang dilaporkan juga memiliki aktifitas antibakteri adalah senyawa fenol, trigonelline  dan  asam  klorogenik  (Fardiaz, 1995).  Senyawa  fenol  merupakan  flavonoid yang  terdapat  dalam  biji  kopi.  Aktifitas biologis senyawa flavonoid dilakukan dengan merusak dinding sel bakteri, melalui perbedaan  kepolaran  antara  lipid  penyusun DNA  dengan  gugus  alkohol  pada  senyawa flavonoid  sehingga  dinding  sel  akan  rusak dan senyawa tersebut dapat masuk ke dalam inti sel bakteri. Mekanisme aktifitas biologis oleh  senyawa  flavonoid  ini  berbeda  dengan yang  dilakukan  oleh  senyawa  alkaloid, dimana  senyawa  flavonoid  dalam  merusak sel bakteri memanfaatkan perbedaan kepolaran  antara  lipid  penyusun  sel  bakteri
dengan  gugus  alkohol  pada  senyawa flavonoid. Sedangkan pada senyawa alkaloid  memanfaatkan  sifat  reaktif  gugus basa  pada  senyawa  alkaloid  untuk  bereaksi dengan  gugus  asam  amino  pada  sel  bakteri (Gunawan, 2009).

## KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak  biji  kopi  robusta  dapat  menghambat bakteri Escherichia coli. Aktivitas antibakteri  ekstrak  biji  kopi  robusta  dengan konsentrasi  10%  menghasilkan  diameter zona  hambat  sebesar  22,5  mm,  Aktivitas antibakteri  ekstrak  biji  kopi  robusta  dengan konsentrasi  50%  menghasilkan  diameter zona  hambat  sebesar  24  mm  dan  Aktivitas antibakteri  ekstrak  biji  kopi  robusta  dengan konsentrasi  100%  menghasilkan  diameter zona  hambat  sebesar  27  mm.  Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa semakin besar  konsentrasi  ekstrak  biji  kopi  robusta maka  zona  hambat  yang  terbentuk  akan semakin besar.

## DAFTAR PUSTAKA
Budiman,  H.  2012. Prospek  Tinggi Bertanam Kopi . Pustaka Baru Press. Yogykarta.
Chamidah,  S.  2012. Daya  Antibakteri Ekstrak  Biji  Kopi  Robusta  (Coffea canephora) Terhadap Pertumbuhan Porphyromonas
gingivalis
[Skripsi].  Fakultas  Kedokteran  Gigi Universitas Jember. Jember. Davis,  W.W.,  T.R.  Stout.  1971. Disc  Plate Methods of Microbiological
Antibiotic  Assay. Microbiology 22:
659-665.
Djide,  N.,  Sartini.  2008. Dasar-Dasar
Mikrobiologi Farmasi. Lephas UNHAS. Makassar. Dwijendra,  I.M.,  D.S.  Mewengkang,  F.S. Wehantow. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakteristik Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea herbacea yang
Diperoleh  dari  Teluk  Manado. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi .
4 : 2302 - 2493.
Fardiaz,  S.  1995. Antimicrobial  Activity  of Coffee  (Coffea  robusta)  Extract .
ASEAN Food Journal 10(3): 103 – 106.
Gunawan,  I.W.A.  2009. Potensi  Buah  Pare (Momordica  Charantia  L)  sebagai
Antibakteri   Salmonella
typhimurium .  Denpasar:  Progam Studi  Pendidikan  Biologi  Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Mahasaraswati.
Kusuma, S.A.F.. 2015. Makalah Escherichia coli. Fakultas  Farmasi  Universitas Padjadjaran. Bandung
Loing,  H.N.Q.  2016. Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Dan  Fraksi  Karang  Lunak (Lobophytum  sp)  Terhadap  Bakteri Escherichia coli Dan Staphylococcus  aureus [Skripsi].
Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi. Manado.
Najiyati., Danarti. 2004. Kopi Budidaya dan Penaganan  Pascapanen .  Penebar Swadaya. Jakarta
Nur,  I.M.  2009. Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Metanol  Bunga  Pepaya
Jantan (Carica papaya L) Terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus Multiresisten  Antibiotik [Skripsi]. Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Post, K.W., G.J. Songer. 2005. Microbiology: Bacterial and
Fungal  Agent  of  Animal  Disease . Elsevier  saunders.  Microbiology
19: 134-144.
Quinn,  P.J.,  B.K.  Markey.,  M.E.  Carter.,
W.J.  Donelly.,  F.C.  Leonard.  2002. Veterinary Microbiology and Microbial Disease . Iowa: Blackwell
Publishing.
Radji,  M.  2011 .  Mikrobiologi. Buku Kedokteran ECG. Jakarta.
Rahardjo,  P.  2012. Panduan  Budidaya  dan Pengolahan  Kopi  Arabika  dan Robusta. Penebar Swadaya. Jakarta Ridwansyah. 2003. Pengolahan Kopi . Jurusan Teknologi Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Sumatra  Utara  :  USU  Digital
Library. Sumatra Utara.
Songer,  J.G.,  K.W.  Post.  2005. Veterinary Microbiologi  Bacterial  and  Fungal Agent  of  Animal  Disease .  USA: Elsevier Saunders.
Suryanto,  E.  2012 .  Fitokimia  Antioksidan.
Penerbit  Putra  Media  Nusantara. Surabaya.
Suwanto.,  Y.  Octavianty.  2010. Budidaya Tanaman  Perkebunan  Unggulan. Penebar Swadaya. Jakarta.
Todar, K. 2008. Staphylococcus  aureus and Escherichia  coli .  University  of Wisconsin Madison   Department  of Bacteriology
Wahyono,  H.  2007. Peran  Mikrobiologi Klinik  Pada  Penanganan  Penyakit Infeksi. Makalah Pidato Pengukuhan  Guru  Besar  Dalam Ilmu Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Widyotomo,  S.,    M.  Sri.  (2007).  Kafein:
Senyawa  Penting  Pada  Biji  Kopi .
Warta Pusat   Penelitian  Kopi  dan
Kakao Indonesia. Vol 23 (1): 44-50.
Wise,  D.J.  2004. Essential  of  Veterinary
Bacteriology  and  Mycology.  6  th
Ed. Iowa: Blackwell Publishing.
Yaqin,  M.A.,  M.  Nurmilawati.  2015.
Pengaruh  Ekstrak  Kopi  Robusta (Coffea robusta) sebagai Penghambat Pertumbuhan . Seminar Nasional  XII  Pendidikan  Biologi FKIP UNS.