UJI TOKSISITAS EKSTRAK TANAMAN PATAH TULANG ( Euphorbia tirucalli L.) TERHADAP Artemia salina DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) SEBAGAI STUDI PENDAHULUAN POTENSI ANTI KANKER
Sandriani A. Oratmangun 1) , Fatimawali 1) , dan Widdhi Bodhi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.) is one of the plants that has been widely known by the world's  population  for  a  long  time  and  was  used  as  a  traditional  medicine,  one  of  them  as anti-cancer.  The  purpose  of  this  study  is  to  prove  the  existence  of  anti-cancer  potential  of methanol  and  chloroform  extracts  of  Patah  Tulang,  and  continued  with  the  screening  of phytochemical  compounds.  This  study  was  an  experimental  study  with  Post  Test  Only Control Group Design. The used method is Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Based on the result, the LC 50 of methanol and chloroform extracts of Patah Tulang, Determined by simple linear  regression  analysis  using  Microsoft  Office  Exel  2010.  Results  of  linear  regression analysis  showed  LC 50 values  of  methanol extracts of  Patah Tulang  is 332.2489  mg/mL  and chloroform extracts of Patah Tulang is 240.6432 mg / mL. The results of this study indicate that the methanol and chloroform extracts of Patah Tulang are toxic, it is marked with LC 50 values <1000 mg/mL. The content of phytochemical compounds from the methanol extract of Patah Tulang are flavonoids, alkaloids and tannins.
Key  words  : Euphorbia  tirucalli Linn, Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT),  LC50, Phytochemical Compounds

## ABSTRAK
Tanaman  Patah  Tulang (Euphorbia  tirucalli L.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  telah banyak  dikenal  oleh  penduduk  dunia  sejak  lama  dan  digunakan  sebagai  pengobatan tradisional, salah satunya sebagai anti kanker. Tujuan penelitian ini adalah membuktikan ada tidaknya  potensi  anti  kanker  dari  ekstrak  metanol  dan  kloroform  tanaman  patah  tulang,  dan dilanjutkan  dengan  skrining  senyawa  fitokimia.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan Post Test Only Control Group Design . Metode yang digunakan adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Berdasarkan data, LC 50 ekstrak metanol dan kloroform patah  tulang,  ditentukan  dengan  analisis  regresi  linier  sederhana  menggunakan  Microsoft Office  Exel  2010.  Hasil  dari  analisis  regresi  linier  menunjukan  nilai  LC 50 dari  ekstrak metanol tanaman patah tulang adalah 332,2489 μg/mL dan ekstrak kloroform tanaman patah tulang adalah 240,6432 μg/mL. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol dan kloroform  tanaman  patah  tulang  bersifat  toksik,  hal  ini  ditandai  dengan  nilai  LC 50 < 1000 μg/mL, dan senyawa fitokimia yang diduga bersifat toksik terhadap Artemia salina L. adalah alkaloid, flavonoid dan tanin
Kata  kunci  : Euphorbia  tirucalli Linn,  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT),  LC 50 ,
Artemia salina Leach, Senyawa Fitokimia

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  sekitar  30.000
spesies tanaman, 940 di antaranya digunakan sebagai tanaman obat. Penggunaan tanaman obat sebagai pengobatan  tradisional  merupakan  pilihan pengobatan  yang  kini  makin  diminati, terlebih  lagi  dengan  kesadaran  untuk kembali  ke  alam  dan  juga  karena  relatif aman dan murah, bahkan dengan perkembangan  yang  kini  ada  makin mendapat perhatian bagi alternatif pelayanan kesehatan. Dari berbagai penelitian,  obat  tradisional  telah  diakui keberadaannya  oleh  masyarakat,  dengan demikian  meningkatkan  manfaat  tanaman bagi  kesehatan  dan  menciptakan  kondisi yang  mendorong  pengembangan  obat tradisional (Hendrawati, 2009).
Salah  satu  tanaman  obat  yang sering  digunakan  oleh  masyarakat  secara turun temurun ialah tanaman Patah tulang. Tanaman  Patah  tulang  telah  dimanfaatkan oleh  masyarakat  untuk  mengobati  nyeri lambung,  tukak  rongga  hidung,  rematik, tulang  terasa  sakit,  nyeri  syaraf,  wasir, sifilis,  penyakit  kulit,  kusta,  kaki  dan tangan  yang mati rasa dan juga digunakan sebagai obat antikanker (Dalimartha, 2003; Taylor, 2002).
Kanker  menjadi  masalah  utama kesehatan  di  seluruh  dunia  dan  penyakit pembunuh terbesar kedua setelah kardiovaskuler.  Pengobatan  konvensional yang  umum  dilakukan  pada  penyakit kanker ialah dengan pembedahan, kemoterapi  dan  radioterapi  (Apantaku, 2002).  Namun,  terapi  kanker  secara pembedahan tidak dapat dilakukan khususnya  pada  sel  kanker  yang  telah menyebar (metastasis), sementara
pengobatan  kemoterapi  dan  radiasi  dapat menimbulkan  efek  samping  meskipun pengobatan
kemoterapi mampu mengeluarkan keseluruhan tumor (Hawariah, 1998). Saat ini kanker merupakan penyakit yang paling mematikan.  Oleh  karena  itu  peneliti tertarik  untuk  menemukan  senyawa  yang
baru  yang  dapat  digunakan  sebagai antikanker.
Sebagai  skrining  awal  senyawa antikanker, metode yang dapat dipergunakan adalah metode Brine Shrimp lethality  Test (BSLT)  yaitu  uji  toksisitas senyawa  terhadap  larva  udang Artemia salina .  Metode  ini  telah  dibuktikan memiliki  korelasi  dengan  daya  sitotoksik senyawa-senyawa  antikanker  (Meyer et al .,  1982).  Selain  itu,  metode  ini  mudah, murah, cepat dan cukup akurat. Metode ini dilakukan  dengan  menentukan  besarnya LC 50 selama  24  jam  (Meyer et  al .,  1982).
Suatu  ekstrak  tanaman  atau  senyawa  hasil isolasi  yang  memiliki  nilai  LC 50 <  1000 µg/mL  dapat  diduga  memiliki  efek sitotoksis (Dwiatmaka, 2000)

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  tanaman  Patah Tulang  ( Euphorbia  tirucalli L.),  air  laut, larva Artemia  salina Leach,  aquades, Metanol  ( Merck ),  kloroform  ( Merck ), ammonia  ( Merck ),  asam  sulfat  ( Merck ), pereaksi  mayer  ( Merck ),  asam  klorida ( Merck ),  besi  klorida  ( Merck ),  serbuk magnesium ( Merck ), asetat anhidrat ( Merck ), DMSO (Dimetil sulfoksida) .
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu, alat-alat gelas Laboratorium  (Pyrex),  rak  tabung  reaksi, blender  ( laboratory  blender ), aluminium foil , timbangan analitik (AND), mikropipet, loop, kertas saring, aerator, hot plate, lampu pijar, ayakan mesh 200, oven
(Memmert),  vortex, water  bath,  vacum rotary evaporator (Steroglass 3000).

## Pengambilan dan Persiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  ialah Ranting Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.)  yang  akan  diambil  di  daerah  sekitar Universitas  Sam  Ratulangi  Kota  Manado. Selanjutnya sampel dibersihkan dan dikering  anginkan  hingga  sampel  kering. Setelah  kering  sampel  di  blender  hingga
sampel  menjadi  halus  lalu  diayak  dengan ayakan mesh 200.

## Pembuatan Ekstrak Pelarut Polar
Ekstraksi  sampel  menggunakan pelarut metanol. Pembuatan ekstrak dilakukan  dengan  metode  maserasi,  yaitu sebanyak  100  g  serbuk  patah  tulang  yang diperoleh  dimasukkan  ke  dalam beaker gelas  kemudian  ditambahkan  pelarut metanol sebanyak 500 mL, ditutup dengan alumunium  foil dan  dibiarkan  terendam selama  3  hari  terlindung  dari  cahaya (setiap hari digojok).
Setelah  3  hari,  sampel  yang direndam tersebut disaring dengan menggunakan  kertas  saring  sehingga didapat  maserat  (Filtrat  I)  dan  residunya diremaserasi  dengan  metanol  sebanyak 200  mL,  ditutup  dengan alumunium  foil dan  dibiarkan  selama  2  hari,  sampel tersebut  disaring  menggunakan  kertas saring, sehingga diperoleh ekstrak maserat (Filtrat  II).  Selanjutnya  semua  maserat metanol digabungkan (Filtrat I + Filtrat II) dan  diuapkan  dengan  menggunakan  alat penguap Rotary evaporator pada temperatur 40 0 C sampai volumenya menjadi  ¼  dari  volume  awal  dan dilanjutkan  dengan  pengeringan  dengan menggunakan water  bath pada  suhu  40 0 C sehingga  menghasilkan  ekstrak  kental metanol.
Pembuatan Ekstrak Pelarut Non Polar Ekstraksi  sampel  menggunakan pelarut  kloroform.  Pembuatan  ekstraksi dilakukan  dengan  metode  maserasi,  yaitu sebanyak  100  g  serbuk  patah  tulang  yang diperoleh  dimasukkan  ke  dalam beaker gelas  kemudian  ditambahkan  pelarut kloroform  sebanyak  500  mL,  ditutup dengan alumunium  foil dan  dibiarkan terendam  selama  3  hari  terlindung  dari cahaya (setiap hari digojok).
Setelah  3  hari,  sampel  yang direndam tersebut disaring dengan menggunakan  kertas  saring  sehingga didapat  maserat  (Filtrat  I)  dan  residunya diremaserasi  dengan  kloroform  sebanyak 200  mL,  ditutup  dengan alumunium  foil dan  dibiarkan  selama  2  hari,  sampel
tersebut  disaring  menggunakan  kertas saring, sehingga diperoleh ekstrak maserat (Filtrat  II).  Selanjutnya  semua  maserat kloroform  digabungkan  (Filtrat  I  +  Filtrat II) dan diuapkan dengan menggunakan alat penguap Rotary evaporator pada temperatur 40 0 C sampai volumenya menjadi  ¼  dari  volume  awal  dan dilanjutkan  dengan  pengeringan  dengan menggunakan water  bath pada  suhu  40 0 C sehingga  menghasilkan  ekstrak  kental kloroform.
Pemilihan telur Artemia salina Leach
Pemilihan  telur  udang  dilakukan dengan  merendam  telur  dalam  aquades selama  satu  jam.  Telur  yang  baik  akan mengendap  sedangkan  telur  yang  kurang baik akan mengapung.
Penyiapan Larva Artemia salina Leach Penetasan  telur Artemia  salina dilakukan dengan cara merendam sebanyak  50  mg  telur Artemia  salina dalam  wadah  yang  berisi  air  laut  dibawah cahaya  lampu  25  watt  dan  dilengkapi dengan aerator.  Telur Artemia  salina akan menetas  dan  menjadi  larva  setelah  24  jam (Mudjiman,  1988).  Larva Artemia  salina yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur 48 jam sebab jika lebih dari 48  jam  dikhawatirkan  kematian Artemia salina bukan disebabkan toksisitas ekstrak melainkan  oleh  terbatasnya  persediaan makanan (Meyer et al., 1982).

## Pembuatan Konsentrasi sampel uji
Prosedur  berdasarkan  McLaughlin, et al. (1991). Konsentrasi larutan uji untuk BSLT adalah 500 μg/mL, 250 μg/mL, 100 μg/mL, 50 μg/mL, 10 μg/mL dan 0 μg/mL (sebagai control negatif). Untuk pembuatan  larutan  stok  ekstrak  kental metanol dan kloroform ditimbang sebanyak  20mg,  kemudian  dilarutkan dengan  kedalam  air  laut  sebanyak  20  mL, hingga  diperoleh  konsentrasi  larutan  stok 1000  μg/ml.  Sampel  yang  kurang  laut ditambahkan  DMSO  0,5  mL.  Dari  larutan stok ini, selanjutnya dibuat lagi konsentrasi  500  μg/mL,  250  μg/mL,  100 μg/mL, 50 μg/mL 10 μg/mL dan 0 μg/mL,
dengan cara pengenceran. Untuk konsentrasi  500  μg/mL  larutan  induk dipipet  5  mL  ke  dalam  vial  uji ditambahkan  air  laut  sebanyak  5  ml. Konsentrasi  250  μg/mL  larutan  induk dipipet  2,5  mL  ke  dalam  vial  uji ditambahkan  air  laut  sebanyak  7,5  mL. Konsentrasi  100  μg/mL  larutan  induk dipipet  1  mL  ke  dalam  vial  uji ditambahkan  air  laut  sebanyak  9  mL. Konsentrasi  50  μg/mL  larutan  induk dipipet  0,5  mL  ke  dalam  vial  uji ditambahkan  air  laut  sebanyak  9,5  mL. Untuk konsentrasi 10 μg/mL larutan induk dipipet  0,1  mL  ke  dalam  vial  uji ditambahkan air laut sebanyak 9,9 mL dan untuk  konsentrasi  0  μg/mL  (kontrol) dilakukan tanpa penambahan ekstrak.

## Pelaksanaan Uji Toksisitas
Uji  toksisitas  pada  masing-masing ekstrak  sampel.  Disiapkan  wadah  untuk pengujian, untuk masing-masing konsentrasi  ekstrak  sampel  membutuhkan 3  wadah  dan  1  wadah  sebagai  kontrol. Selanjutnya  pada  tiap  konsentrasi  larutan dimasukkan  10  ekor  larva Artemia  salina . Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam terhadap  kematian  larva Artemia  salina dimana  setiap  konsentrasi  dilakukan  tiga kali pengulangan dan dibandingkan dengan  kontrol.  Kriteria  standar  untuk menilai  kematian  larva Artemia  salina yaitu  bila  larva Artemia  salina tidak menunjukkan  pergerakan  selama  beberapa detik observasi.
Uji Fitokimia (Harborne, 1987)
Uji  fitokimia  kandungan  senyawa aktif  dengan  uji  reagen  dari  ekstrak  pekat metanol dan kloroform dari tanaman patah tulang  dilarutkan  dengan  sedikit  masing- masing  pelarutnya.  Kemudian  dilakukan terhadap  uji  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin dan steroid.
Uji Alkaloid Ekstrak diambil 2 g dan ditambahkan  1  mL  kloroform  dan  5  mL ammonia 10 %, lalu ditambahkan 10 tetes asam  sulfat  2  M  untuk  memperjelas pemisahan  terbentuknya  2  fase  yang
berbeda.  Fase  bagian  atas  diambil, kemudian  ditambahkan  reagen  mayer. Keberadaan alkaloid dalam sampel ditandai  dengan  terbentuknya  endapan merah.

## Uji Flavonoid
Ekstrak  diambil  2  g  dan  ditambahkan serbuk  magnesium  secukupnya  untuk mengoksidasi  sampel.  Ditambahkan  10 tetes  asam  klorida  5  M.  Keberadaan flavonoid  ditandai  dengan  terbentuknya warna hitam kemerahan pada larutan.
Uji Tanin
Ekstrak diambil 2 g dan ditambahkan  dengan  10  mL  air  panas, kemudian  ditetesi  menggunakan  besi  (III) klorida, keberadaan tanin dalam sampel di tandai  dengan  timbulnya  warna  hijau kehitaman.
Uji Saponin Ekstrak diambil 2 g dan ditambahkan  dengan  10  mL  akuades kemudian  dikocok  kuat  selama  kurang lebih  1  menit.  Selanjutnya  didiamkan selama  10  menit  dan  diamati  buih  atau busa yang terbentuk. Keberadaan senyawa saponin  dalam  sampel  ditandai  dengan terbentuknya  buih  yang  stabil  selama  10 menit dengan tinggi 3 cm.
Uji Steroid Ekstrak diambil 2 g dan ditambahkan  dengan  1  mL  kloroform. Setelah  itu  campuran  dikocok.  Masing- masing  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat pekat  sebanyak  2  tetes  ditambahkan  pada filtrat,  perubahan  warna  merah  pada larutan  pertama  kali  kemudian  berubah menjadi  biru  dan  hijau  menunjukkan reaksi positif.
Analisa Data Data hasil penelitian akan diolah dan disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  grafik. Data  dari  uji  toksisitas  tersebut  akan dianalisis  dengan  analisis  regresi  linier sederhana  menggunakan  Microsoft  office exel 2010 untuk menentukan nilai LC 50.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Pembuatan Ekstrak Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.)
Serbuk patah tulang yang digunakan  sebesar  100  g  untuk  masing masing  pelarut,  kemudian  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  metanol  dan  kloroform  masing- masing 700 mL. Proses maserasi dilakukan  selama  3  hari  dan  remaserasi
selama  2  hari.  Hasil  maserat  (Filtrat  I  + Filtrat  II)  kemudian  diuapkan  dengan menggunakan rotary  evaporator pada suhu  40 0 C.  Sehingga  diperoleh  ekstrak kental  metanol  10,49  g  dan  ekstrak  kental klorofrom  5,33  g.  Hasil  ekstraksi  bahan aktif  dan  besar  rendemen  tanaman  patah tulang  ( Euphorbia  tirucalli L.)  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Bahan Aktif Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.) NO Jenis Pelarut Berat Sampel (g) Berat Ekstrak (g) Rendemen Ekstrak(%) 1 Metanol 100 10,49 10,49 2 Kloroform 100 5,33 5,33

## Hasil Uji Toksisitas
Penelitian  ini  menunjukkan  beban konsentrasi  ekstrak  dalam  media  dapat membunuh  larva Artemia  salina Leach secara  berturut-turut  dengan  konsentrasi 500  μg/ml,  250  μg/ml,  100  μg/ml,  50 μg/ml  dan  10  μg/ml.  Jumlah  kematian larva Artemia  salina Leach  pada  setiap tabung  uji  dalam  berbagai  konsentrasi perlakuan ekstrak patah tulang ditunjukkan pada  tabel  2  dan  3  dan  gambar  9  dan  10. Dari  tabel  dan  gambar  tersebut  dapat diketahui  bahwa  berbagai  konsentrasi ekstrak  metanol  dan  kloroform  tanaman patah tulang pada percobaan ini memperlihatkan  pengaruh  yang  berbeda
terhadap  kematian  larva Artemia  salina Leach.
P ersentase  kematian  larva Artemia  salina sebesar  6  –  70  %.  Pada  konsentrasi  0 μg/mL  persentase  kematiannya  sebesar  0 %,  10  μg/mL  persentase  kematiannya sebesar  6  %,  50  μg/mL  persentase kematian  sebesar  10  %,  100  μg/mL persentase kematiannya sebesar 23 %, 250 μg/mL  persentase  kematian  sebesar  43  % dan  500  μg/mL  persentase  kematian sekitar 70 %.
Hasil  yang  diperoleh  dibuat  grafik  yang terlihat pada Gambar 9 yang menunjukkan hubungan antara persentase kematian larva Artemia salina dengan konsentrasi ekstrak yang larut dalam metanol.
Gambar 9. Grafik Hubungan Antara Konsentrasi dan Persentase Kematian
Artemia salina Leach y = 0.1366x + 4.6148 R² = 0.9798 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 100 200 300 400 500 600 P er se n tase K em at ian (% ) Konsentrasi
Persamaan regresi linear dari grafik pada  Gambar  9  di  atas  digunakan  untuk mencari  LC 50 dengan  mensubstitusikan angka  50  %  sebagai ,  sehingga  didapat nilai = 0.1366x + 4.6148.
Dari hasil tersebut didapat konsentrasi ekstrak metanol adalah 332,2489. Hal ini berarti mortalitas hewan uji mencapai 50% saat konsentrasi ekstrak senyawa mencapai 332,2489 μg/ml. Persentase  kematian  larva Artemia  salina sebesar  13  –  90  %.  Pada  konsentrasi  0 μg/mL  persentase  kematiannya  sebesar
0%,  10  μg/mL  persentase  kematiannya sebesar  13  %,  50  μg/mL  persentase kematiannya  sebesar  20  %,  100  μg/mL persentase kematiannya sebesar 36 %, 250 μg/mL  persentase  kematian  sebesar  53% dan  500  μg/mL  persentase  kematiannya sebesar 90%.
Hasil  yang  diperoleh  dibuat  grafik yang  terlihat  pada  Gambar  10  yang menunjukkan  hubungan  antara  persentase kematian  larva Artemia  salina dengan konsentrasi  ekstrak  yang  larut  dalam kloroform.

## Gambar 10. Grafik Hubungan Antara Konsentrasi dan Persentase Kematian
Artemia Salina Leach
Persamaan regresi linear dari grafik pada  Gambar  10  di  atas  digunakan  untuk mencari  LC 50 dengan  mensubstitusikan angka  50  %  sebagai ,  sehingga  didapat nilai =  0.1648 +  10.342.  Dari  hasil tersebut didapatkan nilai dalam persamaan  ini  adalah  240,6432.  Hal  ini berarti  kematian  hewan  uji  mencapai  50% saat konsentrasi ekstrak senyawa mencapai 240,6432 μg/mL.
Jumlah larva Artemia salina Leach diuji  dengan  tiga  kali  replikasi  yaitu  30 ekor.  Jumlah  total  larva Artemia  salina Leach  yang  digunakan  yaitu  180  ekor larva.  Total  kematian  diperoleh  dengan menjumlahkan larva yang mati pada setiap konsentrasi,  sedangkan  rata-rata  kematian larva  diperoleh  dengan  membagi  total kematian  larva  pada  tiap  konsentrasi dengan  jumlah  replikasi  yang  dilakukan
yaitu  tiga  kali. Kemudian  dihitung persentase  kematian  larva  dari  rata-rata kematian  pada  tiap  konsentrasi.  Hasil  dari analisis dengan menggunakan regresi linier sederhana  menunjukan  nilai  LC 50 dari ekstrak  metanol  patah  tulang  adalah 332,2489  μg/mL  dan  ekstrak  kloroform patah tulang adalah 240,6432 μg/mL.
BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality Test ) merupakan salah satu uji praskrining atau  pendahuluan  untuk  mendapatkan aktivitas  biologis  yang  sederhana  untuk menentukan  tingkat  toksisitas  akut  suatu senyawa atau ekstrak dengan menggunakan Artemia  salina sebagai hewan uji. Artemia salina yang digunakan pada  pengujian  toksisitas  ialah Artemia salina yang berada pada tahap nauplii atau tahap  larva.  Hal  ini  dikarenakan Artemia
y = 0.1648x + 10.342
R² = 0.9614 0 20 40 60 80 100 0 100 200 300 400 500 600 P er se ntas e K em at ian (% ) Konsentrasi
salina pada  tahap  nauplii  sangat  mirip dengan sel manusia (Meyer, 1982).
Korelasi  antara  uji  toksisitas  akut ini  dengan  uji  aktivitas  sitotoksik  adalah jika  motalitas  terhadap Artemia  salina yang  ditimbulkan  memiliki  nilai  LC 50 < 1000  µg/mL.  LC 50 (Lethal  Concentration 50)  merupakan  konsentrasi  zat  yang menyebabkan  terjadinya  kematian  pada 50% hewan uji. Parameter yang ditunjukkan  untuk  mengetahui  adanya aktivitas  sitotoksik,  menurut  McLaughlin (1991)  nilai  LC 50 <  30  μg/mL  berpotensi sebagai  antikanker  (sitotoksik),  nilai  LC 50 dari  30-200  μg/mL  berpotensi  sebagai antimikroba  dan  nilai  LC 50 200-1000 μg/mL berpotensi sebagai pestisida.
Dari  Tabel  2  dan  3  di  atas  terlihat bahwa  semakin  besar  nilai  konsentrasi ekstrak,  mortalitas  pada Artemia  salina juga  semakin  besar.  Hal  ini  sesuai  dengan Harborne  (1994), yang  menyebutkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak maka  sifat  toksiknya  akan  semakin  tinggi. Kematian Artemia  salina dalam  tabung percobaan  karena  perlakuan,  mengalami disorientasi gerak (gerakannya tidak teratur). Artemia  salina dalam  tabung  ini tetap  aktif  bergerak,  akan  tetapi  tetap berputar-putar  pada  satu  titik,  sedangkan Artemia  salina yang  berada  dalam  tabung percobaan 0ppm (Kontrol)
tidak memberikan  kematian  sama  sekali  dalam waktu  24  jam  pengamatan.  Hal  ini membuktikan  bahwa Artemia  salina yang mati  disebabkan  oleh  sifat  toksik  dari
kedua  ekstrak  patah  tulang  ( Euphorbia tirucalli L) tersebut.
Suatu ekstrak menunjukkan aktivitas  ketoksikan  dalam  BSLT  jika ekstrak dapat menyebabkan kematian 50% hewan  uji  pada  konsentrasi  kurang  dari 1000  μg/ml  (Meyer,  1982  ;  Anderson, 1991).  Berdasarkan  dari  pernyataan  di atas,  maka  ekstrak  patah  tulang  bersifat toksik. Hal  ini ditunjukkan oleh perolehan data  yang  berasal  dari  kedua  pelarut  baik metanol maupun kloroform. Ekstrak metanol  memiliki  nilai  LC 50 sebesar 332,2489  μg/ml  dan  ekstrak  kloroform memiliki  LC 50 pada  sebesar  240,6432 μg/ml,  menurut  McLaughlin  berpotensi sebagai pestisida.

## Skrining Fitokimia
Analisis fitokimia merupakan salah satu  cara  untuk  mengetahui  kandungan metabolit  sekunder  pada  suatu  tanaman secara  kualitatif.  Analisis  fitokimia  Pada penelitian  ini  dilakukan  terhadap  tanaman patah  tulang  yang  sudah  dimaserasi menggunakan pelarut metanol dan kloroform. Pengujiannya dilakukan dengan cara mengambil  sedikit  sampel dari  kedua ekstrak  tersebut,  lalu  ditambahkan  reagen sesuai dengan senyawa yang akan diidentifikasi. Senyawa-senyawa yang diperiksa  keberadaannya  adalah  alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan steroid.
Hasil analisis fitokimia pada ekstrak  patah  tulang  ( Euphorbia  tirucalli
L.) dapat dilihat pada Tabel 4 berikut ini:
Tabel 4. Hasil uji fitokimia pada ekstrak ( Euphorbia tirucalli L.)
Keterangan : +  : Terdapat dalam sampel -  : Tidak terdapat dalam sampel
Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan adanya  kandungan  alkaloid,  tanin  dan saponin.  Dari  hasil  tersebut  berkaitan dengan  kematian  (mortalitas) Artemia salina pada  larutan  ekstrak  patah  tulang ( Euphorbia tirucalli L.) yang terlarut pada metanol  dan  kloroform,  membuktikan adanya metabolisme sekunder yang bersifat  polar  dan  nonpolar.  Senyawa metabolit  sekunder  dari  patah  tulang  yang bersifat  polar  yaitu  flavonoid,  tanin  dan saponi,  dan  yang  bersifat  nonpolar  yaitu alkaloid.
Senyawa fitokimia yang memberikan  efek  toksik  yaitu  flavonoid, dimana  pada  kadar  tertentu  memiliki potensi  toksisitas  akut.  Adanya  flavonoid dalam lingkungan sel, menyebabkan gugus OH - pada  flavonoid  berikatan  dengan protein  integral  membran  sel.  Hal  ini menyebabkan  terbendungnya  transport aktif  Na + -  K + .  Transpor  aktif  yang berhenti menyebabkan pemasukan ion Na + yang tidak  terkendali ke  dalam sel,  hal  ini menyebabkan  pecahnya  membran  sel. (Scheuer,  1994).  Pecahnya  membran  sel inilah yang menyebabkan kematian sel.
Senyawa  flavonoid dan  tanin mempunyai  mekanisme  efek  antikanker masing-masing.  Menurut  Woo  et  al.,
(2013),  Mekanisme  flavonoid  sebagai antikanker ada beberapa teori:
1. Flavonoid  sebagai  antioksidan yaitu melalui mekanisme pengaktifan  jalur  apoptosis  sel kanker.  Mekanisme  apoptosis sel  pada  teori  ini  akibat fragmentasi  DNA.  Fragmentasi ini  diawali  dengan  dilepasnya rantai  proksimal  DNA  oleh senyawa oksigen reaktif seperti radikal hidroksil.
2. Flavonoid  sebagai  penghambat proliferasi  tumor/kanker  yang salah satunya dengan menghibisi  aktivitas  protein kinase  sehingga  menghambat jalur  transduksi  sinyal  dari membran ke sel inti.
3. Dengan  menghambat  aktivitas reseptor  tirosin  kinase.  Karena aktivitas  reseptor  tirosin  kinase yang meningkat berperan dalam pertumbuhan keganasan.
4. Flavonoid berfungsi juga untuk mengurangi  resistensi  tumor terhadap agen kemoterapi.
Mekanisme  kematian  larva  juga berhubungan  dengan  fungsi  senyawa alkaloid dan tanin dalam patah tulang yang dapat  menghambat  daya  makan  larva (antifedant). Menurut Cahyadi (2009) Cara kerja  senyawa-senyawa  tersebut  adalah dengan bertindak sebagai stomach poisoning  atau  racun  perut.  Oleh  karena itu,  bila  senyawa-senyawa  ini  masuk  ke dalam  tubuh  larva,  alat  pencernaannya akan  terganggu.  Selain  itu,  senyawa  ini menghambat  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva.  Hal  ini  mengakibatkan  larva gagal mendapatkan stimulus rasa, sehingga tidak  mampu  mengenali  makanannya sehingga larva mati kelaparan.

## PENUTUP Kesimpulan
1.  Ekstrak  metanol  dan  kloroform  dari tanaman  Patah  Tulang  ( Euphorbia tirucalli L.)  bersifat  toksik  dan berpotensi  sebagai  pestisida. Nilai  LC 50 ekstrak  metanol  tanaman  Patah  Tulang ialah  332,2489  μg/ml, sedangkan  LC 50 dari  ekstrak  kloroform  tanaman  Patah Tulang ialah 240,6432 μg/ml.
2.  Senyawa  yang  terkandung  didalam ekstrak tanaman Patah Tulang ( Euphorbia  tirucalli L.)  yang  diduga bersifat toksik yaitu Flavonoid, Alkaloid dan Tanin.
Saran
1 . Hasil uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT) menunjukkan ekstrak
metanol  dan  kloroform  tanaman  patah tulang  memiliki  potensi  toksisitas, sehingga  perlu  dilakukan  pengujian
bioaktivitas lebih lanjut terhadap tanaman ini.
2.  Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan mengenai kandungan kimia yang
memiliki  potensi  toksisitas,  dengan mengisolasi dan mengidentifikasi
senyawa sitotoksik yang terdapat dalam tanaman patah tulang sampai menentukan  struktur  molekul/senyawa aktif.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson, J. E., Goetz C.M., Mc Laughlin J.  L.  1991. A  Blind  Comparison  of Simple   Bench-top  Bioassay  and Human Tumor Cell Cytotoxicities as Antitumor Prescrenss, Natural Product Chemistry, Elseiver, Amsterdam. Apantaku,  L.M.,  2002, Breast-conseving
surgery for breast cancer , Am.Fam.Physician ,  Vol.66 , No.12, 2271-2278.
Cahyadi,  R.  2009. Uji  toksisitas  akut ekstrak etanol buah pare (Momordica charantia L) Terhadap  larva  Artemia  salina Leachdengan  metodeBrine  shrimp lethality test (BST). Universitas Dipenogoro Repository .5: 1-8. Dalimartha S. 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia.  Jilid  II .  Jakarta:  Trubus Agriwidya.
Dwiatmaka,  Y.,  2000, Skrining  tanaman Berkhasiat Antikanker Dengan
Metode “BST” ,  dalam Yuswanto,
Ag.  dan  Sinaradi  (Eds.), Kanker.
Penerbitan Universitas Sanata  Dharma,  Yogyakarta  110- 113
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia . Edisi ke dua, ITB, Bandung. Harborne,  J.  B.  1994. The  Flavonoids . Chapman and Hall. London. Hawariah,  L.P.,  1998, Kanker  Payudara , Penerbit universiti Putra Malaysia, Serdang. Hendrawati  A.  R.  S.  2009. Uji  Toksisitas Akut  Ekstrak  Etanol  Daun  Kemangi ( Ocimum sanctum Linn. ) Terhadap Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp   Lethality Test (BSLT . Skripsi. Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Semarang. Meyer, B.N., et al., 1982. Brine Shrimp : A Convenient General Bioassay   for Active Plant Constituent. Drug Information Journal, Vol. 32,
513-524. Mc.  Laughlin,  J.  L.,  Chang,  C.  J.,  and Smith,  D.  L.  1991. Bench-Top,
Bioassay for The
Discovery  of Bioactive  Naturals  Products,  An Update,  Natural  Product  Chemistry. Elseiveir, Amsterdam. Mudjiman, A. 1988. Udang Renik Air Asin (Artemia  salina) .  Bhatara  Karya Aksara,  Jakarta.
Scheuer, J. S. 1994. Produk Alami Lautan . Cetakan pertama. IKIP  Semarang Press.   Semarang.
Taylor  L.  2002. The  healing  power  of rainforest herbs . http//www.raintree.com/aveloz.htm Woo,  H.  D  dan  Kim,  J.  2013. Dietary Flavonoid  Intake  and  Risk  of Stomach and Colorectal Cancer . World Journal of Gastroenterology .  7: 1011-1019.