## AKTIVITAS ANTIPLASMODIUM In vitro DAN IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA DARI EKSTRAK ETANOL BATANG MANURAN ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K.Heyne ) ASAL KALIMANTAN SELATAN
Arnida 1 , Eka Rahmawaty Sahi 1 , Sutomo 1
1 ) Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat KalSel Korespondensi, email: arnida01@unlam.ac.id

## ABSTRAK
Resistensi Plasmodium terhadap  obat  malaria  mengakibatkan  kegagalan pengobatan.  Hal  ini  merupakan  ancaman  terlebih  belum  ditemukannya  obat alternatif  yang  efektif  untuk  melawan  resistensi.    Oleh  karena  itu  ketersediaan antimalaria baru sangat diperlukan untuk melawan resistensi. Pencarian obat baru terus  dilakukan  melalui  berbagai  cara  termasuk  eksplorasi  dan  pengembangan bahan  alam.  Pemilihan  bahan  alam  biasanya  berdasarkan  penggunaan  secara empiris oleh masyarakat. Tanaman Manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K.Heyne )  digunakan  oleh  masyarakat  di  Kotabaru  Kalimantan  Selatan  untuk mengobati  malaria.  Penelitian  yang  dilaksanakan  adalah  melakukan  uji  aktivitas antiplasmodium in  vitro dengan  menentukan  nilai  konsentrasi  penghambatan (IC 50 ) dan melakukan identifikasi golongan senyawa dari ekstrak etanol batang C. tomentosa Valeton  ex  K.Heyne.  Berdasarkan  identifikasi  golongan  senyawa  kimia dengan  skrining  fitokimia  dan  Kromatografi  Lapis  Tipis  menunjukkan  adanya senyawa  flavonoid,  terpenoid,  saponin,  tanin  dan  antrakuinon  pada  batang C. tomentosa Valeton  ex  K.Heyne. Ekstrak  etanol  batang C.  tomentosa Valeton  ex K.Heyne mempunyai  aktivitas  antiplasmodium in  vitro tergolong  aktif  dengan IC 50 45,864 ± 0,76 µ g/mL.
Kata  Kunci :  manuran, Coptosapelta  tomentosa ,  antiplasmodium in  vitro, IC50, flavonoid

## ABSTRACT
The resistance of Plasmodium to antimalarial drugs resulted in treatment failure. It  posed  a  threat  in  the  absence  of  alternative  effective  drug  for  the  resistance. Therefore,  the  availability  of  new  antimalarial  drug  was  highly  required  to overcome  this  problem.  Exploration  of  new  antimalarial  drugs  was  conducted using  various  methods,  including  exploration  and  development  of  natural substance.  The  selection  of  the  natural  substance  was  usually  conducted  on  the basis  of  empirical  use  by  people.  Manuran  (Coptosapelta  tomentosa Valeton  ex K.Heyne )  was  used  by  people  living  in  Kotabaru  of  South  Kalimantan  to  treat malaria. An in vitro antiplasmodial activity test was carried out to the resulting ethanol  extracts  of  the  plant  using  candle  jar  method.  The  resulting  data  was processed using probit analysis to give the IC 50 value. Based on the identification of  chemical  content  with  phytochemical  screening  and  Thin  Layer  Chromatography shows the presence of flavonoids, terpenoids, saponins, tannins and anthraquinones in C. tomentosa Valeton ex K.Heyne ) stem. The in vitro antiplasmodial activity of the  ethanol  ekstract  of  C.  tomentosa Valeton  ex  K.Heyne )  were  classified  to  be active, the IC 50 values 45,864 ± 0,76 µ g/mL.
Keyword :  manuran,  Coptosapelta  tomentosa Valeton  ex  K.Heyne ,  in  vitro antiplasmodial, IC50, flavonoide

## PENDAHULUAN
Penyebab gagalnya pemberantasan malaria adalah munculnya  resistensi Plasmodium
terhadap  antimalaria  dan  resistensi vektor  terhadap  insektisida.  Nyamuk Anopheles (vektor)  telah  resisten terhadap  insektisida  seperti  DDT sehingga  mengakibatkan  peningkatan jumlah  kasus  penyakit  malaria  di beberapa  negara  tropis  (Sherman  & Irwin, 2011; WHO, 2012). Penggunaan  artemisinin  sebagai  obat malaria  akhirnya  terkendala  juga dengan    timbulnya  resistensi    yang dilaporkan  terjadi  di  perbatasan Kamboja-Thailand  (WHO,  2011;
Satimai et  al .,  2012).  Penggunaan obat dengan intensitas tinggi merupakan  salah  satu  faktor  pemicu terjadinya  resistensi.    Resistensi  pada kloroquin dan sulfadoksin- pirimetamin  yang  sangat  cepat penyebarannya memberikan gambaran  kemungkinan  meluasnya resistensi. Oleh karena itu ketersediaan antimalaria baru dibutuhkan untuk melawan resistensi. Berbagai strategi dilakukan para
peneliti  dalam  menemukan  dan mengembangkan  antimalaria  baru, diantaranya  melalui  eksplorasi  dan pengembangan  bahan  alam  serta melalui  sintesis  senyawa  baru  untuk
meningkatkan  aktivitas  dan  menekan efek samping (Ridley, 2002;
Rosenthal,  2003).  Uji  aktivitas antiplasmodium in vitro dimaksudkan sebagai  penyelidikan  awal  terhadap aktivitas antimalaria dari suatu bahan. Banyak  senyawa  alam  berhasil diisolasi  dan  dibuktikan  aktivitas antiplasmodium  baik  secara in  vitro maupun in  vivo .  Aktivitas  tersebut ditimbulkan  oleh  adanya  metabolit sekunder  yang  bertanggung  jawab
pada aktivitas tersebut berupa
golongan  alkaloid,  terpen,  flavonoid,
glokosida, saponin, tanin, dan beberapa  antimalaria  bahan  alam lainnya  (Mustofa,  2009).  Beberapa tanaman yang secara empirik digunakan  oleh  masyarakat  untuk mengobati  malaria  telah  diteliti  dan dilaporkan mempunyai aktivitas
antiplasmodium antara lain sambiloto
( Tinospora  crispa )  (Muktiningsih,
2005), pepaya ( Carica papaya ) (Hadi,
2003),  dan  Umbi  Hati  tanah
( Angiopteris  evecta )  (Arnida et  al ,
2015). Coptosapelta
tomentosa
Valeton ex K.Heyne ( Manuran) merupakan  tumbuhan  asli  Indonesia yang  banyak  ditemukan  di  Kotabaru Kalimantan  Selatan,  secara  empirik
digunakan sebagai antimalaria. Penelitian  ini  dimaksudkan  untuk memberi  data  ilmiah  tentang  aktivitas antiplasmodium in  vitro dari  ekstrak etanol  batang C.  tomentosa Valeton  ex K.Heyne.

## METODE PENELITIAN
1.  Bahan untuk Ekstraksi
Bahan-bahan  yang  digunakan untuk  ekstraksi  adalah  etanol  96%, untuk uji aktivitas antiplasmodium in vitro digunakan  RPMI,  HEPES,
NaHCO 3 ,  gentamisin,  RBC  ( Red Blood  Cell )  golongan  darah  O, P. falciparum strain  FCR3,  natrium klorida  0,9%;  1,6%;  12%,  serum darah  manusia  golongan  darah  O, lilin,  gliserol  10%,  sorbitol  5%, metanol,  DMSO,  klorokuin,  air suling,  alkohol,  dekstrosa  0,2%, gliserol,  medium  freezing  (28  mL gliserol;  72  mL  sorbitol  4,2%  dalam NaCl  0,9%),  giemsa,  dan  minyak imersi.

## 3. Subyek Penelitian
Penelitian  menggunakan  batang C.  tomentosa Valeton  ex  K.Heyne yang diambil dari Kotabaru Kalimantan  Selatan.  Parasit  yang digunakan  adalah P.  falciparum strain FCR3 diperoleh dari
Laboratorium  Farmakologi  Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
4. Peralatan Alat-alat  yang  digunakan  untuk ekstraksi  adalah  alat-alat  gelas,  oven, grinder, ayakan, timbangan, seperangkat  alat  maserasi, rotary evaporator (Buchi  Rotavapor),
cawan,  waterbath,  pompa  vakum. Alat-alat  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas  antiplasmodium in  vitro adalah mikroplate 96 well ,  flask kultur,  pipet  mikro,  tip  biru,  tip kuning,  mikroskop,  objek  glass, mikro  tube , culture  tube , chryo  tube , membran  filter 0,20 µ m, laminar  air flow (LAF),  almari  pendingin, autoclave , oven, candle jar , inkubator, penangas air, pipet pasteur. 5. Jalannya Penelitian
a. Determinasi dan ethical clearance
Determinasi  tanaman  dilakukan di  Herbarium  Bogoriense, Balitbang Botani-Puslitbang Biologi LIPI Bogor. Ethical clearance dilakukan di Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. b. Pengolahan tanaman C. tomentosa
Valeton ex K. Heyne
Tanaman C.  tomentosa Valeton ex K.Heyne diambil dari desa Sungai Buah  kecamatan  Pulau  Laut  Timur Kabupaten Kotabaru Provinsi Kalimantan  Selatan.  Sebanyak  400 gram  serbuk  kasar  batang C.
tomentosa Valeton  ex  K.  Heyne direndam menggunakan pelarut etanol dengan  perbandingan  sampel  dan pelarut  1:3  yaitu  sebanyak  1,2  L pelarut. Ekstrak cair diuapkan sehingga  diperoleh  ekstrak  kental, ekstrak diuji aktivitas antiplasmodium in  vitro dan  dilakukan  identifikasi golongan senyawa dari bahan.
c. Uji aktivitas antiplasmodium in vitro
Uji  aktivitas  antiplasmodium in vitro dilakukan  terhadap  ekstrak etanol  batang C.  tomentosa Valeton ex  K.  Heyne,  uji  ini  menggunakan metode candle  jar (Trager  &  Jansen,
1976; Moll et al. , 2008).
1) Preparasi bahan Bahan ditimbang lalu
ditambahkan 100 µ L DMSO dan 900 µ L  larutan  RPMI  disterilkan  dengan filtrasi menggunakan membrane filter 0,20 µ m.  Bahan  (ekstrak)  dibuat
peringkat  konsentrasi  500,  250,  50, 25,  5,  0,5 µ g/mL.  Klorokuin
digunakan  sebagai  kontrol  positif dibuat  dengan  peringkat  konsentrasi
20, 16, 12, 8, dan 4 µ g/mL.
2) Pengujian
Bahan  uji  dan Plasmodium telah  siap  selanjutnya  menyediakan mikroplate (96 sumuran) dan mapping untuk  pengujian.  Ke  dalam mikroplate (sesuai mapping )
dimasukkan:    100 µ L  media  RPMI sebagai  kontrol  negatif,  100 µ L larutan  uji  dan  klorokuin  sebagai kontrol positif. Campuran Plasmodium 100 µ L (hasil
sinkronisasi)  ditambahkan  ke  dalam mikroplate yang  telah  berisi  kontrol negatif,  larutan  uji,  dan  kontrol positif. Mikroplate dimasukkan dalam candle jar , diinkubasi pada suhu 37 o C selama  72  jam.  Pada    masa  inkubasi selesai mikroplate dikeluarkan  dari candle jar kemudian dilakukan panen dengan  cara  campuran  dari  setiap lubang  dipindahkan  ke  dalam mikro tube , disentrifus, supernatan dibuang.
Endapan  dibuat  apusan  pada objek  gelas,  setelah  kering  apusan diviksasi  dengan  metanol.  Apusan dalam  keadaan  kering  dicat  dengan pewarna    Giemsa  5%,  didiamkan sampai  30  menit,  dicuci  dengan  air
kran mengalir. Biarkan kering, setelah itu  ditambahkan  minyak  imersi.  Pada mikroskop  dapat  dilihat  dan  dihitung jumlah  eritrosit  dan  parasitemia  dari apusan.  Persen  parasitemia  dihitung dengan  cara  membandingkan  jumlah eritrosit  terinfeksi  dari  sekitar  1000 eritrosit.
6.  Identifikasi  Golongan  Senyawa dari  Ekstrak  Etanol  Batang C. tomentosa Valeton ex K. Heyne Identifikasi golongan senyawa yang dilakukan dengan metode reaksi kimia,  meliputi  golongan  senyawa alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin, steroid,  terpenoid,  dan  antrakuinon (Harborne, 2006).

## 7. Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  uji aktivitas  antiplasmodium in  vitro ditampilkan  dalam  bentuk  kurva hubungan antara konsentrasi senyawa uji  dengan  persen  penghambatan pertumbuhan  parasit.  Nilai  IC 50 ditentukan  dengan  analisa  probit  dari persen penghambatan dengan logaritma  konsentrasi  uji.  Aktivitas antiplasmodium in vitro dikategorikan  berdasarkan  nilai  IC 50 yang diperoleh. Aktivitas antiplasmodium in  vitro dinyatakan
sangat aktif jika memiliki nilai IC 50 < 5 µ g/mL (Gessler et al ., 1994; Munoz et al. 1999; Karov et al ., 2003; Bickii et al., 2007),  tergolong aktif jika nilai IC 50 berkisar  5-50 µ g/mL  (Karov et al ., 2003, Bickii et al., 2007), kurang aktif  bila  IC 50 50  –  100  µg/mL  dan tidak  aktif  jika  IC 50 >  100  µg/mL
(Bickii et al., 2007).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak yang sudah diuapkan di
waterbath sampai bobot tetap diperoleh ekstrak  kental  sebanyak
42,78  gram.  Rendemen  yang  didapat adalah  10,695%.  Hasil  pengujian aktivitas  antiplasmodium in  vitro ekstrak  etanol  batang C. tomentosa
Valeton  ex  K.Heyne  secara triplet diperoleh rerata persentase parasitemia,  penghambatan,  dan  nilai IC 50 (Tabel  1).  Persen    parasitemia diperoleh    dari      persentase      jumlah eritrosit    terinfeksi    per    seribu eritrosit.    Persentase  parasitemia diperoleh  semakin  kecil  dengan meningkatnya  konsentrasi  dari  ketiga fraksi  uji.  Aktivitas  antiplasmodium
C. tomentosa Valeton  ex  K.Heyne dinyatakan dalam konsentrasi penghambatan  50%  (IC 50 )  yang dihitung dengan menggunakan analisis  probit  pada  program  SPSS 16. Hasil uji aktivitas antiplasmodium in  vitro C. tomentosa Valeton  ex
K.Heyne rerata  nilai  IC 50 45,864 ± 0,76 µ g/mL. Aktivitas antiplasmodium in  vitro ekstrak etanol  batang C. tomentosa Valeton ex  K.Heyne  dinyatakan  aktif  atau potensial.  Aktivitas  ini  dikategorikan berdasarkan nilai IC 50 yang diperoleh, tergolong aktif jika nilai IC 50 berkisar 5-50 µ g/mL  (Karov et  al .,  2003,
Bickii et  al., 2007).    Kategori  sangat aktif  dengan    IC 50 ≤ 5  µg/mL diperoleh  dari  skrining  terhadap  43 tanaman  di  Afrika  Selatan  diperoleh 10  tanaman  yang  memiliki  aktivitas antiplasmodium in  vitro kuat.  Dua  di
antara tanaman tersebut yaitu Tabernaemontana elegans Stapf (Apocynaceae) dan Vangueria infausta Burch  memiliki  IC 50 <  2 µg/mL (Bapela et al ., 2014).
Tabel 1. Rerata Persentase Parasitemia dan Penghambatan serta nilai IC 50 ekstrak etanol dari batang C. tomentosa Valeton ex K.Heyne
Konsentrasi ( µ g/mL) Rerata Parasitemia ±SD Rerata Persen Penghambatan ±SD Rerata IC 50 ±SD ( µ g/mL) 500 96,670 ± 0,67 0,500 ± 0,10 45,864 ± 0,76
250
50 25 5 0,5 68,625 ± 4,30 58,050 ± 0,71 22,360 ± 1,06 15,688 ± 0,35 3,972 ± 0,84 4,710 ± 0,65 6,298 ± 0,11 11,656 ± 0,16 12,657 ± 0,05 14,416 ± 0,13 2. Identifikasi golongan senyawa Identifikasi golongan senyawa yang diperoleh adalah menunjukkan
hasil yang positif untuk senyawa golongan flavonoid, tanin, saponin, antrakuinon dan terpenoid (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil identifikasi golongan senyawa ekstrak etanol batang C. tomentosa Valeton ex K.Heyne Golongan Senyawa Jenis pereaksi Hasil Alkaloid Dragendroff Mayer - - Flavonoid Uap amoniak + Tanin FeCl3 + Saponin Tes buih + Steroid Lieberman Burchard - Terpenoid Salkowski’s Test + Antrakuinon Amoninak + Masing-masing senyawa
memiliki  aktivitas  antiplasmodium. Senyawa golongan terpenoid, fenol dan sterol  berinteraksi  dengan  sistem elektronik  hem  dan  terjadinya  ikatan antara senyawa-senyawa yang memiliki gugus  hidroksil  dalam  ekstrak  dengan ion  besi  hem  (Basilico et  al .,  1998
dalam Purwanto, 2011). Gugus hidroksil  juga  terdapat  pada  senyawa golongan  tanin,  saponin  dan  terpenoid. Golongan flavonoid memiliki mekanisme  aksi  dengan  menghambat transport  nutrisi  yang  dibutuhkan Plasmodium serta menghambat degradasi hemoglobin dan detoksifikasi hem (Bilia et al., 2006).

## KESIMPULAN
Aktivitas  antiplasmodium in vitro C. tomentosa Valeton  ex
K.Heyne  memiliki  rerata    nilai    IC 50 45,864  ±  0,76 µ g/mL.  Aktivitas  ini dikategorikan  serta  dinyatakan  aktif atau  potensial. Ekstrak  etanol  batang C.  tomentosa Valeton  ex  K.Heyne mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin, saponin, antrakuinon dan terpenoid.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima kasih  atas  segala  bantuan  dan dukungan  kepada  semua  pihak. Kepada DRPM Kemenristekdikti atas bantuan  pembiayaan  melalui  hibah penelitian Penelitian Produk Terapan.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnida,  Wahyono,  Mustofa,  &
Susidarti, R.A., 2015, In vitro antiplasmodial activity of ethanol  extracts  of  Borneo medicinal  plants  ( Hydrolea spinosa; Ampelocissus rubiginosa;  Uraria  crinite; Angiopteris  evecta ), Int  J  of Pharm  and  Pharma  Sci. 7(5): 72-75. Bapela, J.M., Meyer, M., & Kaiser, M., 2014, In vitro antiplasmodial screening of ethnopharmacologically selected South African plant species used for the treatment of malaria, J Ethnopharmacol,
3: 245-248 Basilico,  N.,  E.  Pagani,  D.  Monti,  P. Olliaro,  &  D.  Taramelli.  1998. A  Microtitre-Based  Method  for Measuring the Haem Polymerization Inhibitory Activity (HPIA) of Antimalarial Drugs. Journal of Antimicrobial
Chemotherapy . 42 : 55–60. Bickii, J., Tchouya, G.R.F., Tchouankeu, J.C., & Tsamo, E., 2007,  Antimalarial  activity  in crude extracts of some cameroonian  medicinal  plants,
Afr  J  Trad  CAM .,  4  (1):  107-
111
Bilia,  A.R.,  P.  Melilo  de  Malgalhaes,
MC.  Berganzi  &  FF.  Vincieri. 2006.  Simultaneous  Analysis  of Artemisinin and Obtained from a Commercial Sample and SelectedCultivar. J  Phytomed . 13 :  487-493. Gessler,  M.C., Nkunya,  M.H.H.,  Mwasumbi, L.B.,  Heinrich,  M.,  &  Tanner,
M.,  1997,  Screening  Tanzanian medicinal plants for
antimalarial activity, Acta Tropica, 56(1): 65-77. Harborne, J.B. 2006. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Edisi ke-2. Penerbit ITB, Bandung. Karov,  D.,  Dicko,  M.H.,  Sanon,  S., Simpore,  J.,  &  Traore,  A.S., 2003,  Antimalarial  activity  of Sida acuta Burm.f (Malvaceae)  and Pterocarpus erinaceus Poir  (Fabaceae), J Ethnopharmacol , 89: 291-294. Moll,  K.,  Ljungstrom,  I.,  Perlmann,
H.,  Scherf,  A.,  &  Wahlgren, M., 2008, Methods in Malaria Research, University Boulevard, Manassas, 1-55. Muktiningsih,  S.R.,  Muhammad, H.S.,  Warsana,  I.W.,  Budhi, M.,  &  Panjaitan,  P.,  2005, Review  tanaman  obat  yang digunakan oleh pengobat tradisional  di  sumatra  utara, sumatra  selatan,  bali  dan sulawesi selatan, Media Litbang  Kesehatan XI,  4:  25-
36.
Munoz,  V.,  Sauvain,  M.,  Bourdy,  G, Callapa,  J.,  Bergeron,  S.,
Rojas, I., et al ., 1999, A search for natural bioavtive compounds in Bolivia through a  multidisciplinary  approach part  I.  evaluation  of  the antimalarial  activity  of  plants used  by  the  Chocobo  Indians, J Ethnopharmacol ., 000: 1-11. Mustofa.  2009. Obat  Antimalaria Baru:  Antara  Harapan  dan
Kenyataan .  Pidato  Pengukuhan Jabatan  Guru  Besar  pada Fakultas Kedokteran. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Purwanto. 2011. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Penghambat Polimerisasi Hemdari Fungi Endofit Tanaman Artemisia  annua  L . Tesis . Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Ridley,  R.G.,  2002,  Medical  need,
scientific  opportunity  and  the drive  for  antimalarial  drugs, Nature , 415: 686-693.
Rosenthal,  J.P.,    2003,  Antimalarial drug  discovery: old  and  new approaches, J  experiment Biol ,  206: 3735-3744
Satimai, W., Sudathip, P., Vijakadge,
S.,  Khamsiriwatchara,  A.,  & Sawang,  S.,  2012,  Artemisinin resistance  containment  project in  Thailand,  responses  to mefloquine-artesunate combination  therapy  among falciparum malaria  patients  in
provinces  bordering  Cambodia, J Malaria, 11(1): 300-303. Sherman  &  Irwin,  W.,  2011, Magic Bullet  to  conguer  malaria: from  quinine  to  Qinghaosu ,
ASM Press, US., p. 225
Trager,  W.,  &  Jensen,  J.B.,  1976,
Human  malaria  parasites  in continous  culture, Science,
193: 673-676. WHO,  2011 ,  Global  Plan  for Artemisinin Resistance Containment (GPARC) , WHO Press, Geneva, 19. WHO. 2012. Disease Burden in SEA Region. http:// www.searo.who.int/LinkFiles/ Malari a_in_the_SEAR_Map_SEAR_
Endemi  city_10.pdf.  Diakses tanggal 21 Maret 2012.