p-ISSN 2354-6565 /e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v5i2.113
Aktivitas ekstrak etanol daun singawalang ( Petiveria alliacea L.) dan fraksinya sebagai antidiabetes
Elis Susilawati 1 , I Ketut Adnyana 2 , Neng Fisheri 2
1 Sekolah Tinggi Farmasi Bandung, Jl. Soekarno Hatta No. 754 Cibiru, Bandung
2 Sekolah Farmasi, ITB, Jl. Ganesha No. 10 Bandung Corresponding author email : elis.susilawati@stfb.ac.id

## Abstrak
Diabetes melitus (DM) adalah sekelompok gangguan metabolik yang ditandai dengan hiperglikemia. Salah  satu  tanaman  yang  mempunyai  efek  antidiabetes  adalah  daun  singawalang  ( Petiveria  alliacea L.).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antidiabetes  dengan  model  hewan  defisiensi insulin  dan  penghambatan  enzim  alfa  glukosidase.  Pengujian  defisiensi  insulin  dilakukan menggunakan  mencit  induksi    aloksan.  Mencit  dikelompokkan  menjadi  11  kelompok,  yaitu  normal, kontrol  negatif,  kontrol  positif  (glibenklamid  0,65  mg/kgbb),  ekstrak  etanol  (dosis  80  dan  160 mg/kgbb),  fraksi  n-heksana  (dosis  80  dan  160  mg/kgbb),    fraksi  etil  asetat  (dosis  80  dan  160 mg/kgbb), dan fraksi air (dosis 80 dan 160 mg/kgbb). Pemberian bahan uji dilakukan berulang setiap hari selama 14 hari dan kadar glukosa darah diukur  pada hari ke-7, 14, 17, dan 19. Kemudian hewan dikorbankan, dilakukan isolasi pankreas, dan dihitung luas pulau Langerhans, jumlah sel alfa dan beta pankreas. Pada uji hambat enzim alfa glukosidase, dilakukan penentuan nilai IC50 tiap fraksi terhadap aktivitas  enzim,  dan  akarbose  digunakan  sebagai  pembanding.  Hasil  uji  defisiensi  insulin menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dosis  80  dan  160  mg/kgbb  memiliki  kemampuan  untuk menurunkan  kadar  glukosa  darah.  Berdasarkan  hasil  histologi  pankreas  juga  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  dosis  80  dan  160  mg/kgbb  mengurangi  jumlah  sel  alfa  pankreas,  diperkirakan  dapat menurunkan  sekresi  glukagon.  Pada  metode  penghambatan  enzim  alfa  glukosidase  fraksi n -heksana dan  fraksi  air  menunjukkan  adanya  penghambatan  aktivitas  enzim  alfa  glukosidase  yang  lebih  baik dibandingkan  akarbose.  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  ektrak  etanol  daun  singawalang  dan fraksinya mempunyai aktivitas sebagai antidiabetes.
Kata kunci: Daun singawalang, defisiensi insulin, enzim alfa glukosidase.
In vivo and in vitro activity of ethanol extracts from the leaves of singawalang (Petiveria alliacea l.) and its fractions as antidiabetic

## Abstract
Diabetes mellitus (DM) is a group of metabolic disorders characterized by hyperglycemia. One of the plants that has antidiabetic effect is the leaves of singawalang (Petitiia alliacea L.). This study aims to examine  antidiabetic  activity  with  animal  model  of  insulin  deficiency  and  inhibition  of  alpha glucosidase  enzyme.  Tests  of  insulin  deficiency  were  performed  using  alloxan  induction  mice.  The mice  were  grouped  into  11  groups,  normal,  negative  control,  positive  control  (glibenclamide  0.65 mg/kgbw),  ethanol  extract  (doses  80  and  160  mg/kgbw),  n-hexane  fractions  (doses  80  and  160 mg/kgbw),  ethyl  acetate  doses  80  and  160  mg/kgbw),  and  water  fractions  (doses  of  80  and  160 mg/kgbw). Testing was performed daily for 14 days and blood glucose was measured on days  7, 14, 17, and 19. Later animals were sacrificed, isolated pancreas, and calculated the area of  Langerhans Island, the number of alpha and beta cells of the pancreas. In the alpha glucosidase enzyme inhibition test, IC50 values were determined for each fraction of enzyme activity, and the acarbose was used as a comparison. Insulin deficiency  test results  showed that ethanol extract dose 80 and 160 mg/kg bw has  the  ability  to  lower  blood  glucose  levels.  Based  on  histological  results  of  the  pancreas  also showed that ethanol extract dose 80 and 160 mg/kgbw reduce the number of pancreatic alpha cells, is expected  to  decrease  glucagon  secretion.  In  the  inhibition  method  of  alpha  glucosidase  enzyme  n- hexane fraction and water fraction showed the inhibition of  alpha glucosidase enzyme activity better
than  akarbose.  The  conclusion  of  this  research  is  the  ethanol  extract  of  singawalang  leaves  and fraction has activity as antidiabetes .
Keywords: Diabetes mellitus, leaf singawalang, insulin deficiency, the enzyme alpha-glucosidase.

## Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  adalah  sekelompok gangguan  metabolik  yang  ditandai  dengan hiperglikemia  dan  kelainan  pada  metabolisme protein,  lemak  dan  karbohidrat  (Dipiro,  2015). Kejadian  diabetes  melitus  terus  meningkat  tiap tahunnya di tiap negara dan berdasarkan data dari International Diabetes Federation (IDF) diperkirakan  terdapat  sekitar  382  juta  orang  di dunia  menderita  diabetes  pada  tahun  2013. Jumlah  penderita  DM  di  Indonesia  menempati diposisi  ketujuh  berada  dibawah  China,  India, USA, Brazil, Rusia dan Meksiko (IDF, 2013).
Diabetes melitus ditandai oleh adanya resisten insulin,  disregulasi  produksi  glukosa  hati, toleransi  glukosa  terganggu  (TGT)    dan penurunan    fungsi    sel    beta    pankreas.  Bila  sel beta  tidak  lagi  dapat  menghasilkan  sekresi insulin  yang  cukup  tinggi  untuk  mengimbangi resistensi  insulin  akan    muncul    hiperglikemia saat  puasa  dan  diabetes (DeFronzo, 1988).
Untuk  menjaga  agar  tidak  terjadi  diabetes, seseorang harus dapat  menjaga kadar gula darah tetap normal dengan cara meningkatkan produksi insulin  dan    menghambat  aktivitas    alfa glukosidase  pada  organ  pencernaan  sehingga akan  terjadi  penghambatan  secara  kompetitif enzim-enzim pencernaan karbohidrat di usus
halus  seperti  maltase,  isomaltase,  sukrase,  dan glukoamilase (Dipiro dkk., 2005). Penghambatan enzim-enzim tersebut akan menghambat penyerapan karbohidrat pada  saluran pencernaan sehingga  dapat  mencegah  meningkatnya  kadar glukosa darah (Chisholm-Burns dkk., 2008).
Salah  satu  tanaman  yang  dapat  digunakan sebagai  antidiabetes  adalah  daun  singalawang. Susilawati  dkk.  (2016)  telah  membuktikan  efek ekstrak  etanol  daun  singawalang  dan  fraksinya sebagai  antidiabetes  pada  model  hewan  uji toleransi  glukosa.  Oleh  karena  itu,  untuk melengkapi penelitian sebelumnya, maka penelitian  ini  bertujuan  menguji  efek  ekstrak etanol  daun  singawalang  dan  fraksinya  dengan metode    defisiensi  insulin  dan    penghambatan aktivitas  alfa glukosidase.

## Metode penelitian
Alat. Alat    maserasi,  penangas    air,      rotary evaporator,    timbangan    analitik,  timbangan hewan,    glukometer  Easy  Touch®,  inkubator, micro-reader , dan peralatan gelas yang digunakan di laboratorium.
Bahan. Bahan  uji    daun    singawalang ( P.alliacea L) diperoleh  dari  Kampung  Cijahe, Kelurahan    Curug    Mekar,    Kecamatan  Bogor Barat,  Kota  Bogor.
Bahan  lain  yang  digunakan  adalah  etanol 96%, aquadest, etil asetat, n -heksana, glibenklamid,  aloksan  monohidrat,  larutan  NaCl 0,9%,  carboxy  methyl  cellulosa    (CMC),    dapar formalin, asam asetat, kloroform, metanol, enzim alfa  glukosidase  (rekombinan  S accharomyces cerevisiae )  yang  berasal  dari  Sigma-Aldrich, substrat  p-nitrofenil-α-D-glukosidase  (PNPG), larutan  bufer  fosfat pH 7,  akarbose,  dan  natrium karbonat.
Hewan  Uji. Hewan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  mencit  jantan  galur  Swiss Webster  dengan    bobot    badan    20-30    gram, berumur    2-3    bulan,    sehat    dan  memiliki aktivitas normal yang diperoleh dari Laboratorium  Hewan,  Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung.
Prosedur  Penelitian. Tahapan  penelitian  ini dibagi  dalam  dua    metode,  yaitu    metode defisiensi  insulin  ( in  vivo )  dan  penghambatan pada enzim alfa glukosidase ( in vitro ). Pengujian secara in  vivo dengan  menggunakan  model hewan  defisiensi  insulin  menggunakan  induksi aloksan (Etuk, 2010). Sedangkan metode in vitro terhadap  penghambatan  aktivitas  enzim  α- glukosidase  dengan  menggunakan  subtrat  p- nitrofenil-α-D-glukosidase  (PNPG)  (Kaskoos, 2013).
Pengujian in vivo metode defisiensi insulin
a. Setiap hewan uji menggunakan aloksan 50-55 mg/kg bb, kecuali kelompok normal
b. Setelah  3  hari  pemberian  aloksan,  diukur kadar glukosa darah setiap hewan uji. Hewan uji  dinyatakan  diabetes  jika  kadar  glukosa darah lebih dari 200 mg/dL.
DOI: 10.26874/kjif.v5i2.113
c. Hewan  uji  yang  dinyatakan  diabetes  dibagi menjadi 11 kelompok:
- Kelompok normal (tidak diinduksi aloksan  dan  menerima  suspensi  CMC 0,5%),
- Kontrol  negatif  (diinduksi  aloksan,    dan menerima suspensi CMC 0,5%)
- Kontrol  positif  (diinduksi  aloksan  dan menerima  suspensi  glibenklamid  0,65 mg/kg bb)
- 2  kelompok  ekstrak  etanol  (diinduksi aloksan  dan  menerima  ekstrak  etanol singalawang dosis 80 dan 160 mg/kg bb)
- 2  kelompok  fraksi  n-heksana  (diinduksi aloksan  dan  menerima  fraksi  n-heksana dosis 80 dan 160 mg/kg bb)
- 2  kelompok  fraksi  etil  asetat  (diinduksi aloksan  dan  menerima  fraksi  etil  asetat dosis 80 dan 160 mg/kg bb)
- 2  kelompok  fraksi  air  (diinduksi  aloksan dan menerima fraksi air dosis 80 dan 160 mg/kg bb)
d. Pemberian  bahan  uji  dilakukan  secara berulang setiap hari selama 14 hari dan kadar glukosa darah mencit diukur  pada hari ke- 7, 14, 17 dan 19.
e. Hewan  yang  telah  diuji  selama  19  hari dikorbankan  kemudian  pankreasnya  diisolasi dan  dilakukan  pewarnaan  Gomori  (Fitriani, N.H.N. 2014)
Pengujian in  vitro metode  penghambatan aktivitas alfa glukosidase
Pada  metode  secara in  vitro terhadap penghambatan  aktivitas  enzim  α-glukosidase dilakukan  pada  kondisi  optimum  yang  meliputi pH 6,8 dan suhu 37°C.
a. Ekstrak  etanol  dan  fraksi  di  buat  dalam beberapa  konsentrasi  yang  dilarutkan  dalam dafar  fosfat  0,1  M  (pH  6,8),  dengan menggunakan pembanding akarbose.
b. Enzim  ditimbang  sebanyak  1,2  mg  yang kemudian  dilarutkan  dengan  dapar  fosfat  0,1 M  (pH  6,8)  menghasilkan  konsentrasi  enzim sebesar 27,84 U/mL. Kemudian larutan induk enzim  diencerkan  hingga  konsentrasinya menjadi 0,078 U/mL.
c. Sebanyak  60  µL  sampel  uji  ditambahkan  50 µL dapar fosfat 0,1 M (pH 6,8) dan diinkubasi dalam micro  plate 96 well pada  suhu  37 o C
selama 20 menit.Pembuatan blangko dilakukan  dengan  mengganti  60  µL  sampel uji dengan dapar fostat.
d. Setelah prainkubasi, 50 µL p-nitrophenil-α-D- glukopyranoside (PNPG)  5  mM  dimasukkan kedalam mikro plate , dan selanjutnya diinkubasi kembali pada suhu 37°C selama 20 menit.
e. Pada  tahap  akhir,  reaksi  dihentikan  dengan penambahan 160 µL larutan Na 2 CO 3 0,2 M ke dalam well dan  absorban  dibaca  dengan menggunakan micro-reader pada  panjang gelombang 425 nm.
f. Persentase penghambatan aktivitas α- glukosidase  dapat  dihitung    menggunakan persamaan :
Keterangan:A co = Absorbansi kontrol A t = Absorbansi sampel
g. Perhitungan  IC 50 Aktivitas  Inhibisi  Enzim  α- glukosidase  melalui  persamaan  regresi  linear y  =  a  +  bx,  dimana  sumbu  x  adalah konsentrasi  sampel  dan  sumbu  y  adalah  % inhibisi,  maka  nilai  IC 50 dapat  dihitung menggunakan rumus :
IC 50 (Kaskoos , 2013)

## Hasil dan pembahasan
Uji  antidiabetes in  vivo metode  defisiensi insulin. Hasil  pengujian  antidiabetes  in  vivo metode  defisiensi  insulin  dapat  dilihat  pada Tabel  1.  Hasil  menunjukkan  penurunan  kadar glukosa  darah  yang  cukup  bervariasi  sehingga memberikan  standar  deviasi  yang  cukup  besar. Secara umum seluruh kelompok uji menunjukkan  adanya  penurunan  kadar  glukosa darah di hari ke-19 di bandingkan dengan kondisi awal,  kecuali  fraksi  n-heksan  80  dan  160  mg/kg bb  juga  fraksi  etil  asetat  80  mg/kg  bb menunjukkan  terjadinya  kenaikan  kadar  glukosa darah.  Berdasarkan  data  kelompok  kontrol positif,  hewan  uji  masih  menunjukkan  keadaaan hiperglikemia  hingga  akhir  hari  ke-17  sehingga metode  diabetes  aloksan  ini  cocok  untuk digunakan sebagai model hewan untuk pengujian aktivitas antidiabetes.
Tabel 1.  Kadar Glukosa Darah Mencit  Hari ke 7- 19 pada Uji Defisiensi Insulin
Kelompok Kadar glukosa darah (mg/dL) hari ke- 7 14 17 19 Kontrol normal 103,40±9,65* 137,60±20,47* 139,40±10,92* 110,60±15,32* Kontrol negatif 458,80±92,77 477,60±89,92 500,20±106,62 455,00±97,10 Kontrol positif (Glibenklamid 0,65 mg/kg bb) 252,00±112,91 248,40±101,92* 242,60±80,11* 205,80±89,73* Ekstrak etanol 80 mg/kg bb 311,40±185,17 287,40±144,25 259,40±178,57* 203,20±86,03* Ekstrak etanol 160 mg/kg bb 244,40±165,09 227,00±112,16* 252,60±161,68* 226,80±89,77* Fraksi n-heksan 80 mg/kg bb 359,60±172,93 309,80±142,60 303,00±180,48 356,20±173,34 Fraksi n-heksan 160 mg/kg bb 342,40±151,14 306,40±187,90 348,40±205,76 414,20±187,48 Fraksi etil asetat 80 mg/kg bb 440,60±195,84 372,60±217,56 349,40±134,32 373,80±160,02 Fraksi etil asetat 160 mg/kg bb 431,80±166,81 428,40±192,13 333,20±185,19 292,80±147,98 Fraksi Air 80 mg/kg bb 308,60±164,56 288,40±197,47 311,00±189,77 368,20±227,10 Fraksi Air 160   mg/kg bb 494,20±155,36 492,40±166,37 555,00±72,10 454,20±160,02
* = Berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kontrol positif
Berdasarkan    Tabel  1,  pada  hari  ke  14 menunjukkan  kelompok  ekstrak  etanol      160 mg/kgbb  dan  glibenklamid  0,65  mg/kg  bb  dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  berbeda bermakna  (p<0,05)  terhadap  kelompok  kontrol positif.  Pada hari ke 17 dan 19 kelompok ekstrak etanol  80  dan  160  mg/kg  bb  juga  glibenklamid 0,65  mg/kg  bb  dapat  menurunkan  kadar  glukosa darah  berbeda  bermakna  (p<0,05)  terhadap kelompok kontrol positif.
Pada hasil pengujian dengan metode defisiensi insulin ekstrak etanol daun singawalang memiliki aktivitas antidiabetes lebih baik  di  bandingkan  dengan  fraksinya,  dengan ditunjukan  penurunan  penurunan  glukosa  darah mencit pada hari ke 14 sama dengan pembanding glibenklamid.
Hewan  yang  telah  diuji  selama  19  hari dikorbankan  dua  ekor  dari  tiap  kelompok,
kemudian  pankreasnya  diisolasi  dan  dilakukan pewarnaan Gomori dengan menggunakan pewarna victoria  blue dan  floksin.  Hasil pewarnaan Gomori  (Gambar 1).
Parameter  yang  diamati  untuk  menilai keberhasilan  terapi  dapat  dilihat  dari  luas  rata- rata pulau langerhans, jumlah sel alfa dan jumlah sel  beta  dalam  pulau  Langerhans    pada  satuan luas  yang  sama.  Sel  alfa  memiliki  porsi  sekitar 20%    sedangkan  sel  beta  memilik  porsi  sekitar 75% dari  pulau Langerhans (Katzung, 2009). Sel alfa  merupakan  sel  yang  memproduksi  hormon glukagon  sedangkan  sel  beta  memproduksi hormon insulin (Martini, 2009). Adanya perbaikan  terapi  ditunjukkan  oleh  tingginya  sel beta, sebaliknya jumlah sel alfa yang tinggi akan memperparah  keadaan  diabetes  melitus.  Hasil pengamatan  histolongi  dapat  dilihat  pada  Tabel 2.
Kontrol normal Kontrol negatif Kontrol positif (Glibenklamid 0,65 mg/kg bb) Ekstrak etanol 80 mg/kg bb Ekstrak etanol 160 mg/kg bb Fraksi n-heksan 80 mg/kg bb Fraksi n-heksan 160 mg/kg bb raksi etil asetat 80 mg/kg bb Fraksi etil asetat 160 mg/kg bb Fraksi Air 80 mg/kg bb Fraksi Air 160   mg/kg bb Gambar 1.  Hasil histologi pankreas dengan pembesaran 40 kali Keterangan :
1 : Pulau langerhans 2 : Sel alfa 3 : Sel beta
Tabel 2. Luas Pulau  Langerhans, Jumlah Sel Alfa dan Jumlah Sel Beta
Kelompok Luas pulau langerhans (mm 2 ) Sel Alfa Sel Beta Kontrol normal 1,10±0,10 9,50±0,50 47,50±2,50 Kontrol negatif 0,10±0,00 51,00±3,00 16,50±6,50 Kontrol positif (Glibenklamid 0,65 mg/kg bb) 0,20±0,04 28,00±5,00 43,50±0,50 Ekstrak etanol 80 mg/kg bb 0,12±0,04 29,50±6,50 15,00±3,00 Ekstrak etanol 160 mg/kg bb 0,20±0,01 34,00±5,00 19,00±1,00 Fraksi n-heksan 80 mg/kg bb 0,12±0,01 43,50±7,50 32,00±3,00 Fraksi n-heksan 160 mg/kg bb 0,15±0,07 47,50±12,50 32,00±4,50 Fraksi etil asetat 80 mg/kg bb 0,01±0,00 11,00±0,00 5,00±1,00 Fraksi etil asetat 160 mg/kg bb 0,12±0,06 43,00±14,00 24,00±5,00 Fraksi air 80 mg/kg bb 0,04±0,03 59,50±9,50 5,00±1,00 Fraksi air 160 mg/kg bb 0,16±0,05 17,50±2,50 7,50±1,50 2
Berdasarkan  Tabel  2,  kelompok  kontrol negatif  menunjukkan    adanya  perbedaan  antara luas  pulau  langerhans,    jumlah  sel  alfa  dan  sel beta dibandingkan dengan kontrol positif. Hal ini membuktikan  bahwa  pemodelan  uji  defisiensi insulin  dengan  aloksan  berhasil.  Sedangkan perbedaan  antar  kelompok  uji  dengan  kontrol positif hanya di tunjukkan oleh ekstrak etanol 80 dan  160  mg/kg  bb  pada  jumlah  sel  alfa,  yaitu berkurangnya  jumlah sel alfa pankreas, sehingga diperkirakan      dapat  menurunkan  kadar  glukosa darah dengan menekan sekresi glukagon.
Uji  antidiabetes  secara in  vitro metode penghambatan enzim α-glukosidase.
Penelitian  ini  dilakukan  pada  pH  6,8  dan  suhu 37°C,  disesuaikan  dengan  suhu  optimum  reaksi enzimatis.  Pengurangan  aktivitas  enzim  dapat disebabkan  oleh  faktor  penyimpanan  setelah produksi  yang  tidak  sesuai  kriteria  yang tercantum  pada  label  enzim,  seperti  terpapar cahaya  matahari,  suhu  penyimpaan  yang  terlalu tinggi  dan  hal-hal  lain  yang  dapat  memicu hilangnya  aktivitas  enzim.  Aktivitas  enzim ditetapkan dalam internasional unit, yaitu jumlah enzim  yang  dapat  mengkatalisis  pembentukan 1,0  µmol  D-glukosa  dari  p-nitrofenil-α-D- glukosidase  pada  pH  6,8  dan  suhu  37 o C  selama satu menit (Sigma, 1996).
Inkubasi  dilakukan  dua  tahap,  pertama  di inkubasi  selama  20  menit  untuk  memberikan waktu  agar  larutan  uji  mencapai  suhu  37 o C  dan inkubasi  tahap  kedua  selama  20  menit  yang merupakan  inkubasi  untuk  reaksi  enzimatis kemudian  reaksi  dihentikan  dengan  penambahan natrium  karbonat.  Produk  hasil  reaksi  antara  α- glukosidase  dan  p-nitrofenil-α-D-glukosidase adalah p-nitrofenil yang berwarna kuning (Cihan, et  al .,  2010),  sehingga  produk  ini  dapat  diukur serapannya  dengan microreader pada  panjang gelombang  425  nm.  Untuk  mengkoreksi  serapan yang  dihasilkan,  maka  dilakukan  pengukuran serapan  blanko  dengan  menggantikan  posisi enzim  dengan  dapar.  Hal  ini  bertujuan  untuk melihat  serapan  yang  diberikan  sampel  uji  tanpa adanya  reaksi  enzimatis.  Berdasarkan  pengujian didapat absorban sebesar 0,779.
Besarnya  penghambatan  aktivitas  enzim dilihat  dari  berkurangnya    p-nitrofenil  yang terbentuk  bila  dibandingkan  dengan  aktivitas enzim  awal.  Besarnya  aktivitas  inhibisi  dari setiap  rentang  konsentrasi  dilihat  dari  persen inhibisi  yang  dihasilkan,  dimana  semakin  besar persen  inhibisi  yang  dihasilkan  makan  semakin banyak aktivitas enzim yang dihambat.Pengujian
ini  dilakukan  terhadap  ekstrak  dan  fraksi  daun singawalang  dengan  beberapa  konsentrasi  yang berbeda,  hal  ini  tergantung  pada  persen  inhibisi yang  dihasilkan  oleh  setiap  sampel  uji  yang berbeda-beda  pula.  Pengujian  juga  dilakukan terhadap akarbose sebagai obat pembanding yang mempunyai  mekanisme  menghambat  enzim  α- glukosidase.
Pada penelitian ini semua komponen dilarutkan  dalam  dapar  fosfat  pH  6,8,  termasuk didalamnya  enzim,  substrat  dan  sampel  uji.  Hal ini  bertujuan  agar  pH  larutan  tetap  terjaga  pada pH  6,8.  Hal  ini  penting  karena  merupakan  salah satu  faktor  yang  berpengaruh  terhadap  aktivitas enzim  sehingga  diharapkan  dengan  menjaga  pH enzim  maka  akan  menjaga  enzim  tetap  bereaksi secara  optimum.  Kekuatan  dari  suatu  sampel dalam menghambat aktivitas enzim digambarkan dengan  nilai  IC 50 ,  yaitu  konsentrasi  yang menghambat 50% aktivitas enzim. Semakin kecil nilai  IC 50 yang  diperoleh  maka  semakin  kuat sampel  tersebut  dalam  menghambat  aktivitas enzim α-glukosidase (Tabel 3)
Tabel 3.   Penghambatan Aktivitas Enzim α-glukosidase Kelompok IC 50 (mg/mL) Akarbose 1,28±31,07 Ekstrak etanol Tidak berefek Fraksi n-heksan 0,36±9,09 Fraksi etil asetat Tidak berefek Fraksi air 0,33±10,05
Persen  inhibisi  (IC50)  akarbose,  fraksi  n- heksana  dan  fraksi  air  berturut-turut  adalah  1,28 mg/mL, 0,36 mg/mL dan 0,33 mg/mL. Nilai IC 50 akarbose  yang  diperoleh  merupakan  IC 50 yang paling  besar  bila  dibandingkan  tehadap  sampel uji.  Penelitian  sebelumnya    menyebutkan  bahwa akarbose  mempunyai  aktivitas  yang  rendah terhadap  enzim  α-glukosidase  yang  berasal  dari mikroorganisme seperti Saccharomyces cereviceae ,  namun  akarbose  lebih  efektif  dalam menghambat  α-glukosidase  yang  berasal  dari mamalia  (Zhang,  2014).  Sedangkan  untuk ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  tidak  terjadi penghambatan  aktivitas  α-glukosidase.  Sehingga dapat disimpulkan bahwa hanya fraksi n-heksana dan fraksi air yang dapat menghambat kerja enzil alfa glukosidase.

## Kesimpulan
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  ekstrak etanol daun singawalang dan fraksinya mempunyai aktivitas sebagai antidiabetes.

## Daftar pustaka
Chisholm-Burns, Marie; Schwinghammer, Terry; Wells,  Barbara;  Malone,  Patrick;  Dipiro, Joseph;  Kolesar,  Jill;  John,  Rotschafer,  2008, Pharmacotherapy  Principles  and  Practice. New York: Mc Graw Hill.
DiPiro  J.T.,  Wells  B.G.,  Schwinghammer  T.L. and  DiPiro  C.  V.,  2015,  Pharmacotherapy Handbook, Ninth Edit., McGraw-Hill
Education Companies, Inggris, 161
DiPiro  J.T.,  Wells  B.G.,  Schwinghammer  T.L. and  DiPiro  C.  V,  2005. Pharmacoteraphy:  A Pathophysiologic  approach. New  York:  Mc Graw Hill.
IDF,  2013. IDF  Diabetes  Atlas. 6th  ed. s.l.:International Diabetes Federation.
DeFronzo,  R.A,  (1988)  . The  Triumvirate  of  β- cell,  muscle,  liver:  a  collusion  responsible for  NIDDM . Diabetes 37:667-687.
Fitriani,  N.H.N.  (2014)  :  Aktivitas  Antidiabetes Melitus Fraksi dari ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L.) terhadap Mencit Jantan Swiss  Webster,  Tesis, Institut  Teknologi Bandung , 14-19.
Gomori, G. (1939) : A Differential Stain for Cell Types in The Pancreatic Islets, Am. J. Pathol , 15(4), 497–499.
Etuk, E.U. (2010) : Animals Models for Studying Diabetes  Mellitus, Agric.  Biol.  J.  N.  Am .,
2010, 1(2): 130-134
International  Diabetes  Federation.  (2013)  :    IDF
Diabetes Atlas Sixth edition, 34
Katzung,  B.G.,  Masters,  S.B  and  Trevor,  A.J.
2009.  Basic  and  Clinical  Pharmacology  11th Ed. McGraw-Hill Companies, China.
Kaskoos  A,  R.,  2013. In-vitro  α-glucosidase inhibition and antioxidant activity of methanolic  extract  of  Centaurea  calcitrapa from Iraq. American Journal of Essential Oils and Natural Product, 1(1), pp. 122-125. Martini,  F.H.,  Nath,  J.L.,  Bartholomew,  E.F., 2012. Fundamentals of Anatomy & Physiology. 9th ed. US: Benjamin Cummings, 620-621
Susilawati E,  I  Ketut  Adnyana , Neng  Fisheri,
2016,  Kajian  Aktivitas  Antidiabetes  Dari Ekstrak  Etanol  dan  Fraksinya  dari  Daun Singawalang ( Petiveria alliacea L.), Bandung, STFB.
Zhang,  J.,  Wang,  G.,  Beta,  T,  and  Dong,  J.
(2014)  :  α-Glucosidase  Inhibitory  Activity  of Polyphenols  from  the  Burs  of  Castanea mollissima  Blume. Molecules, Volume  19, pp. 8373-8386.