## AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE TIKUS DIABETES  YANG  DIBERI EKSTRAK BATANG KAPULAGA  DAN GLIBENKLAMID
G ISTI R AHMAWATI 1 , F ARIDA N UR R ACHMAWATI 1 , H ERY W INARSI 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122
2 Jurusan Ilmu Gizi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Jenderal Soedirman

## A B S T R A C T
Superoxide Dismutase (SOD) is an antioxidant enzyme which reduce anion superoxide radicals as well as known caused of diabetes. There are  many  natural  additive  was  believed  having  capacity  to  repaired  an  antioxidant  celluler  status.  Cardamom’s  stem  were  reported containing flavonoid and vitamin C which have been proven as in vitro antioxidant. There was no data showing its in vivo potency. This study  aims to  knoe the  SOD  activity  of  diabetes  rats  which  were  given cardamom  stem  extract  (CSE)  and glibenclamide.  The  research carried out with the use of experimentally Randomized Design Complete (RAL) by administering treatment on diabetes rat without CSE and glibenclamide as a control, consist of 100 mg/kg bodymass CSE and 2 mg/kg bodymass glibenclamide. The experiment consists  of 3 treatments with 7 repetitions, blood sampling carried out experiments as much as 3 times with intervals of 7 days once. The data was analyzed using a variety of analysis (ANOVA). The result showed that the SOD activity increased from 4261 Unit/mg protein to  6604,668 Unit/mg protein (P < 0.01) in diabetes rats treatment by CSE for 14 days.
K EY W ORDS : SOD, Cardamom, Diabetes-Rat
Penulis korespondensi: G ISTI R AHMAWATI | email: gistirahmawati@gmail.com

## P E N D A H U L U A N
Diabetes  merupakan  kelompok  penyakit  gangguan metabolisme yang ditandai dengan peningkatan kadar glukosa  darah  (hiperglikemia)  yang  disebabkan  oleh kelainan  sekresi  insulin,  kerja  insulin,  atau  keduanya (American  Diabetes  Assossiation,  2006).  Indonesia merupakan  salah  satu  negara  dengan  jumlah penderita diabetes cukup tinggi didunia yang terbukti dengan menempati peringkat keempat, setelah China, India  dan  Amerika  Serikat  (Siburian et  al .,  2010). Salah  satu  faktor  yang  memicu  penyakit  ini  adalah banyaknya  radikal  bebas  ataupun  Reactive  Oxigen Species  (ROS)  (Dominguez et  al .,  1998;  Winarsi  dan Purwanto,  2010).  ROS  adalah  senyawa  oksigen  yang tidak  stabil  dan  sangat  reaktif  karena  mengandung satu  elektron  atau  yang  tidak  berpasangan  pada orbital  terluarnya.  Demi  mencapai  kestabilan  atom atau  molekulnya,  ROS  cenderung  menarik  elektron dari  molekul-molekul  penting  disekitarnya  seperti protein,  lipid,  dan  DNA  untuk  memperoleh  pasangan elektron  (Yang et  al .,  2002;  Winarsi,  2005).  Hal  ini dapat  membahayakan  jaringan  dan  menyebabkan kematian  sel  (Winarsi,  2007).  Tubuh  memiliki penangkal  untuk  menanggulangi  radikal  bebas tersebut,  yaitu  enzim  antioksidan  (Wresdiyati et  al ., 2008; Astuti et al ., 2009).
Antioksidan  merupakan  suatu  substansi  yang dapat menghambat oksidasi molekul- molekul penting seperti protein, lemak, dan DNA yang diakibatkan oleh radikal  bebas,  yaitu  dengan  cara  mendonorkan elektronnya  atau  berperan  sebagai  reduktan  (Lim et al ., 2006; Winarsi, 2007). Radikal bebas memicu stres oksidatif, yaitu suatu kondisi ketika produksi oksidan atau ROS melebihi kapasitas antioksidan dalam tubuh sehingga  akan  mengarahkan  pada  oksidasi  molekul- molekul  penting  dalam  tubuh  (Bowen-Forbes et  al ., 2008). Superoksida dismutase merupakan
antioksidan  primer  yang  memegang  peranan  dalam menanggulangi radikal bebas, yaitu anion superoksida.
Hiperglikemia  menyebabkan  stres  oksidatif  lebih lanjut,  karena  mampu  menghasilkan  radikal  bebas lebih  banyak,  dan  menurunkan  kerja  antioksidan dalam  tubuh  (Wiyono,  2003).  Anion  superoksida merupakan  radikal  bebas  yang  dikatalisis  SOD menjadi  hidrogen  peroksida  dan  molekul  oksigen (Mates et al ., 1999). Menurut Ruwiastuti (2001) kadar SOD  dalam  jaringan  hati  tikus  yang  berada  dibawah kondisi  stres  menunjukkan  adanya  penurunan. Penurunan  kadar  SOD  dibawah  kondisi  stres  sangat tidak  diharapkan,  mengingat  fungsi  SOD  sebagai antioksidan  penangkal  radikal  superoksida  yang jumlahnya  meningkat  pada  kondisi  stres  oksidatif. Oleh  karena  itu,  diperlukan  adanya  upaya  untuk meningkatkan kadar SOD dengan cara mengkonsumsi bahan  makanan  yang  mengandung  antioksidan. Selama  ini  diabetes  diobati  dengan  glibenklamid, namun perlu disadari bahwa penggunaan obat dalam jangka  panjang  sering  menimbulkan  efek  yang membahayakan tubuh.
Kapulaga  merupakan  komoditas  rempah-rempah Familia  Zingiberaceae  yang  cukup  diperhitungkan  di Indonesia. Bagian kapulaga yang sering dimanfaatkan adalah  bijinya  baik  untuk  obat  maupun  bumbu masakan.  Batang  kapulaga  yang  selama  ini  kurang dimanfaatkan ternyata memiliki kandungan antioksidan  (Winarsi  dan  Arinton  2012).  Ekstrak batang kapulaga yang diekstrak menggunakan ethanol 96%  memiliki  kandungan  flavonoid  sebesar  21,46 mg/gr  ekstrak  dan  vitamin  C  sebesar  5,6  mg/gr ekstrak  (Winarsi  dan  Arinton,  2012).  Flavonoid  dan vitamin  C  merupakan  senyawa  antioksidan  (Noorozi et  al .,  1998).  Pemberian  ekstrak  batang  kapulaga (EBK)  diharapkan  dapat  meningkatkan  aktivitas  SOD pada tikus diabetes yang di induksi aloksan, sehingga
dapat  menurunkan  kadar  radikal  bebas  yang mengarahkan pada penyembuhan.
Berdasarkan uraian di atas diperoleh permasalahan,  apakah  aktivitas  SOD  tikus  diabetes dapat  dipengaruhi  oleh  pemberian  EBK  dan glibenklamid.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  aktivitas  SOD  tikus  diabetes  yang  diberi EBK  dan  glibenklamid.  Penelitian  ini  diharapkan mampu  memberikan  informasi  ilmiah  tentang aktivitas  SOD  tikus  diabetes  yang  diberi  EBK  dan glibenklamid.  Berdasarkan  informasi  ini  diharapkan menambah  daftar  functional  food  yang  baik  untuk penderita diabetes.

## M E T O D E
Obyek  yang  akan  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah tikus putih ( Rattus norvegitus strain sprague dawley) betina berumur  2-3  bulan.  Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  dispossible  syringe,  timbanga  digital, timbangan  analitik,  timbangan,  kandang  tikus,  gelas  ukur, kertas  whatman  no.  41,  pisau,  botol  gelap,  erlenmeyer, tabung  mikrosentrifuse, sentrifuse,  gunting, sarung tangan, pipet  kapiler  haematokrit,  alumunium  foil,  glucotest, glucostrip,  sonde,  vorteks,  spektrofotometer,  rotary evaporator, pipet ukur, dan filler.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah aloksan monohidrat, NaCl fisiologis, aquades, batang kapulaga,  glibenklamid,  pakan,  air,  kapas  streril,  sekam, EDTA  10%,  xantin,  sitokrom  C,  etanol  96%,  buffer  fosfat tanpa  EDTA,  xantin  oksidase,  buffer  fosfat  dengan  EDTA, aquabides, dan Superoksida Dismutase (SOD).
Penelitian  dilakukan di  Laboratorium Mikrobiologi  dan Fisiologi  Tumbuhan,  Animal  House  serta  Laboratorium Lingkungan  Fakultas  Biologi  Universitas  Jenderal Soedirman. Waktu pelaksanaan penelitian dilakukan selama 3  bulan  yang  berlangsung  selama  bulan  Oktober  2012– Januari 2013.
Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental  dengan menggunakan  rancangan  dasar,  yaitu  rancangan  acak lengkap (RAL). Percobaan terdiri dari 3 perlakuan dengan 7 kali pengulangan, pengambilan sampel dilakukan sebanyak 3 kali.
Perlakuan yang dicobakan meliputi tikus diabetes tanpa pemberian  Ekstrak  Batang  Kapulaga  (EBK)  dan glibenklamid,  tikus  diabetes  yang  diberi  EBK,  dan  tikus diabetes yang diberi Glibenklamid.
Pembuatan  EBK  dilakukan  dengan  cara  menggiling  hingga halus batang kapulaga yang telah dikeringkan dibawah sinar matahari kemudian direndam dengan etanol 96% selama 24 jam.  Dilanjutkan  penyaringan  untuk  mendapatkan  filtrat batang kapulaga. Filtrat diuapkan menggunakan alat rotary evaporator untuk mendapatkan ektrak kental.
Tikus putih yang baru didatangkan kemudian ditimbang bobot  badannya  dan  dikelompokkan.  Selama  proses aklimasi  tikus  diberi  pakan  sebanyak  10%  dari  bobotnya, dan air secara ad libitum. Tikus yang akan diinduksi aloksan terlebih  dahulu  dipuasakan  selama  24  jam.  Aloksan monohidrat  dilarutkan  dalam  NaCl  fisiologis  dengan  dosis tunggal  120  mg/kg  bobot  tikus  yang  diinjeksikan  secara intraperitonial  (Kim et  al .,  2006).  Setelah  4–7  hari,  kadar glukosa  darah  diukur  menggunakan  glucotest.  Darah  tikus diambil dari vena lateralis ekor. Tikus dengan kadar glukosa darah  puasa  ≥  126  mg/dl,  dapat  dinyatakan  diabetes (Mansjoer et  al .,  2007).  Tikus  yang  telah  mengalami hiperglikemia  kemudian  dikelompokkan  sesuai  perlakuan. Komposisi  Pemberian  EBK  dan  glibenklamid  dilakukan
selama 14 hari dengan dosis EBK sebesar 100 mg/kg bobot badan,  sedangkan  glibenklamid  sebesar  2  mg/kg  bobot badan yang diberikan secara oral.
Pengambilan  sampel  darah  tikus  dilakukan  dengan menggunakan  pipet  kapiler  hematokrit  yang  diambil melalui  vena  pada  pembuluh  darah di  mata.  Sampel darah dimasukkan  kedalam  tabung  mikrosentrifuse  yang didalamnya telah terdapat antikoagulan berupa EDTA 10%. Sampel  darah  yang  telah  terkumpul  kemudian  disentrifuse selama  10  menit  dengan  kecepatan  3000  rpm.  Setelah terpisah antara plasma dan korpuskula, kemudian keduanya dipisahkan  pada  tabung  mikrosentrifuse  yang  berbeda. Pengambilan  sampel darah  tikus dilakukan pada  saat  tikus dinyatakan  diabetes  (sebagai  kontrol),  7  hari  setelah perlakuan dan 14 hari setelah perlakuan.
Plasma sebanyak 20 μl plasma ditambahkan reagen BPA ( Bradford Protein Assay )  sebanyak 200 μl  dan  H2O 780 μl. Blanko  yang  digunakan  adalah  800  μl  H2O.  Pembacaan absorbansi  dilakukan  menggunakan  Spektrofotometer dengan panjang gelombang 595 nm.
Pengukuran aktivitas SOD didasarkan pada penghambatan  reduksi  ferrisitokrom  c  oleh  anion superoksida  yang  berasal  dari  oksidasi  xantin/xantin oksidase yang tergantung pada anion superoksida. Reduksi ferisitokrom  c  menjadi  sitokrom  C,  diamati  berdasarkan nilai absorbansi pada panjang gelombang 550 nm. Data yang diperoleh  dianalisis  menggunakan  uji  F  yang  kemudian dilanjutkan  dengan  uji  BNT  dengan  tingkat  kesalahan  5% dan 1%.

## H A S I L
D A N P E M B A H AS A N
Berdasarkan  pengukuran  aktivitas  SOD  didapatkan bahwa  kelompok  tikus  diabetes  yang  diberi  Ekstrak Batang Kapulaga (EBK) selama 2 minggu menunjukkan  nilai  tertinggi  yaitu  sebesar  6604,668 unit/mg  protein  sedangkan  nilai  terendah  pada kontrol  (tikus  diabetes  sebelum  diberi  EBK  ataupun glibenklamid)  yaitu  sebesar  4261,279  Unit/mg protein.
Analisis  data  menggunakan  uji  F  aktivitas  SOD tikus  kontrol  dengan  kelompok  yang  diberikan perlakuan  (EBK  dan  glibenklamid)  selama  7  hari menunjukkan  bahwa  tidak  ada  pengaruh  nyata  (P  > 0.05).  Namun  demikian  ketika  dibandingkan  dengan kelompok  tikus  yang  diberikan  perlakuan  selama  14 hari,  ternyata  aktivitas  SOD  meningkat  nyata  (P  < 0.05).  Kemudian  dilakukan  uji  lanjut  BNT  untuk mengetahui  perbedaan  antar  perlakuan.  Uji  Lanjut BNT antara kelompok kontrol dengan kelompok yang diberi glibenklamid menunjukkan tidak berbeda nyata (P > 0.05).
Uji  BNT  aktivitas  SOD  antara  kelompok  kontrol dengan  kelompok  yang  diberi  EBK  menunjukkan perbedaan  yang  sangat  nyata  (P  <  0.01).  Uji  lanjut BNT  antara  kelompok  tikus  yang  diberi  EBK  dengan kelompok tikus yang diberi glibenklamid menunjukkan  perbedaan  nyata  (P  <  0.05).  Aktivitas Superoksida  Dismutase  (SOD)  tikus  diabetes  selama percobaan disajikan pada Gambar 1.
Menurut  Winarsi  dan  Arinton.  (2012),  aktivitas SOD  tikus  normal  (non-diabetes)  yaitu  sebesar 5043,92  unit/mg  protein.  Aktivitas  tersebut  lebih tinggi  bila  dibandingkan  dengan  aktivitas  tikus
diabetes saat awal (kontrol). Tingginya aktivitas SOD tikus  normal  dikarenakan  kadar  glukosa  darahnya yang normal sehingga tidak memicu produksi radikal bebas  yang  berlebih.  Sebaliknya,  rendahnya  aktivitas SOD  kelompok  tikus  diabetes  (kontrol)  berhubungan dengan kondisi stres oksidatif akibat induksi aloksan.
Gambar 1 . Aktivitas SOD tikus diabetes selama diberi EBK dan glibenklamid.
Menurut  Ruhe  &  McDonald  (2001)  penderita diabetes  mengalami  stres  oksidatif  berkelanjutan dikarenakan tingginya kadar glukosa darah (hiperglikemia).  Tingginya  kadar  glukosa  darah meningkatkan  pembentukan  ROS,  melalui  reaksi oksidasi  reduksi  sehingga  mendorong  lebih  banyak donor  elektron  NADH  dan  FADH2  masuk  ke  dalam rantai transport elektron (Wiyono, 2003; Suarsana et al .,  2011).  Peningkatan  laju  transport  elektron  turut berkontribusi dalam pembentukan anion superoksida.
Stres  oksidatif  yang  terjadi  menyebabkan peningkatan laju peroksidasi lipid yang berkontribusi dalam produksi radikal bebas, termasuk terbentuknya anion superoksida, sehingga menyebabkan modifikasi oksidatif  yang  mengakibatkan  terinaktivasinya  SOD (Gupta  &  Chari,  2005).  Peroksidasi  lipid  adalah peristiwa  teroksidasinya  lipid  yang  berlangsung secara  cepat  (Pasaoglu et  al .,  2004).  Lipid  yang teroksidasi merupakan bagian fosfolipid membran sel β  pankreas  pada  penderita  diabetes  sehingga mempengaruhi kestabilan strukturnya. Demikian pula fungsi vital sel sebagai penyedia hormon insulin turut terganggu,  karena  peroksidasi  lipid  menyebabkan peningkatan  permeabilitas  membran  sel  (Yuriska, 2009).  Produksi  hormon  insulin  menjadi  berkurang, demikian  pula  fungsinya,  sehingga  tidak  mampu mengarahkan pemasukan glukosa ke jaringan. Kondisi tersebut  menyebabkan  kadar  glukosa  dalam  darah menjadi  tinggi,  yang  berkontribusi  dalam  penurunan aktivitas  SOD  (Robertson et  al .,  2004),  dengan  cara membangkitkan  metabolisme  glukosa  alternatif  dan menghasilkan radikal bebas lebih banyak.
Aktivitas SOD pada hari ke-14 yang menunjukkan tidak  ada  perbedaan  nyata  antara  kelompok  kontrol dengan glibenklamid membuktikan bahwa glibenklamid  tidak  memberikan  pengaruh  nyata terhadap  peningkatan  aktivitas  SOD.  Glibenklamid merupakan obat diabetes generasi kedua sulfunylurea yang  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah
sehingga  kondisi  hiperglikemia  dapat  dikendalikan. Mekanisme penurunan kadar glukosa darah dilakukan dengan  cara  merangsang  sekresi  hormon  insulin, meningkatkan  pengambilan  glukosa  dari  darah  ke jaringan,  oksidasi  glukosa,  dan  aktivasi  sintesis glikogen  di  hati  dan  jaringan  adiposa.  Harapannya, pemberian glibenklamid dapat meningkatkan aktivitas SOD tikus diabetes, mengingat kemampuannya  dalam  menurunkan  kadar  glukosa. Namun  ternyata,  aktivitas  SOD  tikus  diabetes  yang diberi glibenklamid tidak meningkat.
Kemungkinannya  kerja  glibenklamid  lebih  terfokus pada  stimulasi  hormon  insulin  untuk  menurunkan kadar glukosa darah pada tahap awal, sehingga belum dapat  menghentikan  jalur-jalur  alternatif  seperti tersebut diatas (autooksidasi, glikasi, ataupun poliol). Oleh  sebab  itu,  perlu  diamati  jalur  metabolisme setelah 14 hari observasi.
Peningkatan  aktivitas  SOD  secara  signifikan  pada kelompok perlakuan EBK selama 14 hari membuktikan  bahwa  pemberian  EBK  mampu meningkatkan aktivitas SOD tikus diabetes. Peningkatan  aktivitas  tersebut  berkaitan  dengan kandungan  flavonoid  sebesar  21,46  mg/gr  dan vitamin  C  sebesar  5,6  mg/gr  di  dalam  EBK  (Winarsi dan  Arinton,  2012).  Temuan  ini  mendukung  Quine (2005)  yang  mengemukakan  bahwa  aktivitas  enzim SOD  tikus  yang  diberi  epicatechin  (salah  satu  jenis flavonoid dalam teh) juga meningkat.
Beberapa  peneliti  melaporkan  bahwa  flavonoid bekerja  sebagai  antioksidan.  Dembinska-Kiec et  al . (2008)  menyatakan  bahwa flavonoid  bekerja  sebagai antioksidan dengan cara meningkatkan aktivitas SOD. Dilaporkan  pula  bahwa  flavonoid  bekerja  sebagai radical  scavenger,  untuk  radikal  oxygen  singlet  dan lipid  peroksidasi  (Ahmed,  2005;  Astuti et  al .,  2009; Zhang et  al .,  2011).  Flavonoid  menekan  kerja peroksidase,  sehingga  menghambat  pembentukan ROS  oleh  neutrofil  (Nijveldt et  al .,  2001).  Flavonoid juga  menghambat  pembentukan  ROS  dengan menekan kerja beberapa enzim yang memproduksinya  (Lukacinova et  al .,  2008).  Sebagai antioksidan potensial, flavonoid mengkelat logam dan menstabilkannya sehingga logam tersebut tidak dapat mengkatalisis  reaksi  oksidasi  radikal  bebas  (Song et al .,  2005).  Flavonoid  meredam  reaktivitas  radikal bebas,  sehingga  mengarahkan  molekul  tersebut menjadi  lebih  stabil.  Flavonoid  juga  bekerja mendonorkan  ion  hidrogen  atau  elektron  kepada anion  superoksida  sehingga  melindungi  lipoprotein, protein,  dan  DNA  dari  oksidasi  (Nijveldt et  al .,  2001; Dembinska-Keic et  al .,  2008;  Norshazila et  al .,  2010; Winarsi, 2007).
Peningkatan  aktivitas  SOD  tikus  diabetes  lebih tinggi  terjadi  pada  kelompok  yang  diberi  EBK daripada kelompok glibenkamid. Hal ini menggambarkan  bahwa  flavonoid  lebih  berpotensi dalam  meningkatkan  aktivitas  SOD  dibandingkan glibenklamid.  Dengan  demikian  tampak  adanya perbedaan  aksi  antara  EBK  dan  glibenklamid.  EBK
langsung  meningkatkan  aktivitas  SOD  melalui mekanisme kerja antioksidannya, sedangkan glibenklamid  langsung  mengendalikan  kadar  glukosa darahnya.  Kedepannya,  akan  lebih  tepat  bila  EBK dikombinasikan dengan glibenklamid untuk penderita diabetes.
Peningkatan  aktivitas  SOD  tikus  diabetes  yang diberi  EBK  berkaitan  dengan  penurunan  laju peroksidasi  lipid.  Demikian  pula  yang  terjadi  dengan penurunan  jumlah  radikal  anion  superoksida  juga karena  aktivitas  SOD  yang  mengalami  peningkatan. Penurunan  laju  peroksidasi  lipid  akibat  kerja flavonoid  mencegah  kerusakan  sel  β  pankreas. Menurut  Dene et  al .  (2005)  flavonoid  dapat menurunkan  kadar  gula  darah.  Kenyataannya,  fungsi sel  β  tikus  diabetes  dapat  diperbaiki  dengan pemberian EBK, yang ditunjukkan dengan menurunnya  kadar  gula  darah  (Winarsi  dan  Arinton, 2012).  Dengan  demikian,  kerja  flavonoid  yang terkandung dalam  EBK dapat meningkatkan  aktivitas SOD  dengan  cara  berperan  sebagai  scavenger  anion superoksida, pengkelat logam, dan menghambat kerja enzim penghasil radikal superoksida.
Selain  flavonoid,  Winarsi  dan  Arinton  (2012) melaporkan  adanya  vitamin  C  sebesar  5,6  mg/g eksrak dalam EBK. Vitamin C merupakan antioksidan penting yang memiliki kemampuan sebagai kemampuan  vitamin  C  sebagai  scavenger  radikal bebas  dengan  cara  mendonorkan  elektronnya.  Lebih dari  itu  vitamin  C  juga  dapat  melindungi  lipid membrane  sel  dari  peroksidasi  sehingga  mengurangi pembentukan radikal bebas (Darko et al ., 2002). Oleh karena  itu,  vitamin  C  turut  berkontribusi  dalam mencegah  kerusakan  jaringan  yang  diakibatkan  oleh efek negatif radikal bebas (Arifin et al ., 2007). Proses glikasi  protein  plasma  penderita  diabetes  dapat dihambat  secara  signifikan  oleh  vitamin  C  melalui binding.  Penghambatan  proses  glikasi  protein  oleh vitamin  C  turut  mengurangi  jumlah  radikal  anion superoksida  dan  sebaliknya  meningkatkan  aktivitas SOD.  Dengan  demikian,  vitamin  C  dalam  EBK meningkatkan aktivitas SOD melalui mekanisme kerja sebagai  scavenger  radikal  anion  superoksida, meregenerasi vitamin E teroksidasi, serta menghambat  glikasi  protein.  Jelas  bahwa  aktivitas SOD  tikus  diabetes  tidak  hanya  diperankan  oleh flavonoid  dalam  EBK  saja,  melainkan  juga  didukung oleh vitamin C didalamnya.

## K E S I M P U L A N
Aktivitas  SOD  tikus  sprague  dawley  diabetes  dapat ditingkatkan  oleh  pemberian.  Ekstrak  Batang Kapulaga (EBK) selama 14 hari, sedangkan pemberian glibenklamid  dalam  waktu  yang  sama  belum menunjukkan peningkatan yang nyata.

## D A F T AR R E F E R E N S I
Ahmed  RG.  2005.  The  physiological  and  biochemical  effects  of diabetes  on  the  balance  between  oxidative  stress  and antioxidant  defense  system.  Medical  Journal  of  Islamic  World Academy of Sciences. 15(1):31–42.
American  Diabetes  Association.  2006.  Diagnosis  and  classification of diabetes mellitus. Diabetes Care. 29(1):543–548.
Arifin H, Delvita V, Almahdy A. 2007. Pengaruh pemberian vitamin c terhadap  fetus  pada  mencit  diabetes.  Journal  Sains  dan Teknologi Farmasi. 12(1):32–40.
Astuti S, Muchtadi D, Astawan M, Purwantara B, Wresdiyati T. 2009. Pengaruh  pemberian  tepung  kedelai  kaya  isoflavon  terhadap kadar  Malonaldehid  (MDA),  aktivitas  Superoksida  Dismutase (SOD) testis dan profil Cu, Zn-SOD tubuli seminiferi testis tikus jantan. J. Teknol. dan Industri Pangan. 20(2):129–134.
Bowen–Forbes  CS,  Zhang  Y,  Nair  MG.  2010.  Anthocyanin  content, antioxidant,  anti–inflammatory  and  anticancer  properties  of blackberry  and  raspberry  fruits.  Journal  of  food  composition and analysis. 23(6):554–60.
Bradford  MM.  1976.  A  rapid  and  sensitive  method  for  the quantitation  of  microgram  quantities  of  protein  utilizing  the principle of protein dye binding. Anal Biochem. 72:248–254.
Darko  D,  Dornhorst  A,  Kelly  FJ,  Ritter  JM,  Chowlenczyk  PJ.  2002.
Lack  of  effect  of  oral  vitamin  c  on  blood  pressure,  oxidative stress,  and  endothelial  function  in  type  II  diabetes.  Clinical science. 103:339–344.
Dembinska-kiec  A,  Mykkanen  D,  Kiec-Wilk  B,  Mykkanen  H.  2008. Antioxidant  phytochemicals  againts  type-2  diabetes.  British Journal of Nutrition. 99(1):109–117.
Dene  BA,  Maritim  HC,  Sanders  A,  Watkins  JB.  2005.  Effect  of Antioxidant  treatment  on  normal  and  diabetic  rat  retinal enzyme  activities.  Journal  of  Ocular  Pharmacology  and Therapeutics. 2(1):28–35.
Dominguez  C,  Ruiz  E,  Gussinye  M,  Carrascosa  A.  1998.  Oxidative stress at onset and in early stages of type 1 diabetes in children and adolescents. Diabetes Care. 21(10):1736–1742.
Gupta MM, Chari S. 2005. Lipid peroxidation and antioxidant status in  patients  with  diabetic  retinopathy.  Indian  journal  of physiology and pharmacology. 49(2):187.
Kim  JS,  Ju  JB,  Choi  CW,  Kim  SC.  2006.  Hypoglycemic  and Antihyperlipidemic  Effect  of  Four  Korean  Medicinal  Plants  in Alloxan Induced Diabetic Rats. Am J Biochem & Biotech: 2(4) : 154–160
Lim YY, Lim TT, Tee JJ. 2006. Antioxidant properties of guava fruit: comparison  with  some  local  fruits.  Sunway  Academic  Journal. 3:9–20.
Lukačínová  A,  Mojžiš  J,  Beňačka  R,  Keller  J,  Maguth  T,  Kurila  P, Vaško L, Rácz O, Ništiar F. 2008. Preventive effects of flavonoids on  alloxan–induced  diabetes  mellitus  in  rats.  Acta  Veterinaria Brno. 77(2):175–82.
Mansjoer A, Triyani K, Savitri R, Wardhani WI, Setyowulan W. 2007. Kapita  Selekta  Kedokteran  Edisi  3  Jilid  1.  Media  Aesculapius Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, JakartaMantiara, D. 2011.  Pengertian  oksigen.  URL:http  ://www.do  na  ma  ntiara.b lo gspo t.co m. Diakses pada: 2 Desember 2012.
Mates  JM,  Gomez  CP,  Castro  LN.  1999.  Antioxidant  enzymes  and human diseases. Clin.Biochem. 32(8):595–603.
Nijveldt R, van Nood E, van Hoorn DEC, Boelens PG, van Norren K, van  Leeuwen  AM.  2001.  Flavonoids:  a  Review  of  probable mechanisms  of  action  and  potential  applications.  Am.  J.  Clin. Nutr. 74:418–425.
Noorozi  M,  Angerson  WJ,  Lean  MEJ.  1998.  Effect  of  flavonoids  and vitamin C on oxidative DNA damage to human lymphocyte. Am. J. Clin. Nutr. 67:1210–1218.
Norshazila  S,  Zahir  S,  Suleiman  M,  Aisyah  MR,  Rahim  K.  2010. Antioxidant  levels  activities  of  selected  seed  of  Malaysian tropical fruits. Mal J Nutr. 16(1):149–159.
Pasaoglu  H,  Sancak  B,  Bukan  N.  2004.  Lipid  peroxidation  and resistance to oxidation in patients with type 2 diabetes mellitus. The Tohoku journal of experimental medicine. 203(3):211–8.
Quine SD, Raghu PS. 2005. Effects of (-)-epicatechin, a flavonoid on lipid  peroxidation  and  antioxidants  in  streptozotocin–induced diabetic liver, kidney and heart. Pharmacol Rep. 57(5):610–5.
Robertson  RP,  Harmon  J,  Tran  PO,  Poitout  V.  2004.  Β-cell  glucose toxicity,  lipotoxicity,  and  chronic  oxidative  stress  in  type  2 diabetes. Diabetes. 53(1):S119–24.
Ruhe  RC,  McDonald  RB.  2001.  Use  of  antioxidant  nutrients  in  the prevention  and  treatment  of  type  2  diabetes.  Journal  of  the American College of Nutrition. 20(5):363S–369S.
Ruwiastuti  VD.  2001.  Deteksi  Secara  Imunohistokimia  Antioksidan Copper,Zinc–Superoxide  Dismutase  (Cu,Zn-SOD)  Pada  Hati
Tikus  Di  Bawah  Kondisi  Stres  [Skripsi].  Bogor:  Institut Pertanian Bogor.
Siburian  J,  Anggreini  E,  Hayati  SF.  2010.  Analisis  pola  sidik  jari tangan  dan  jumlah  sulur  besar  sudut  ATD  penderita  diabetes melitus  di  Rumah  Sakit  Umum  Daerah  Jambi.  Biospecies. 2(2):12–17.
Song Y, Manson JE, Buring JE, Sesso HD, Liv S. 2005. Associations of dietary  flavonoids  with  risk  of  type  2  diabetes  and markers  of insulin  resistance  and  systemic  inflamation  in  women  :  a prospective  study  and  cross–sectional  analysis.  Journal  of American Collage of Nutrition. 24(5):376–384.
Suarsana  IN,  Utama  IH,  Agung  IG,  Suartini  A.  2011.  Pengaruh hiperglikemia  dan  vitamin  E  pada  kadar  malonaldehida  dan enzim  antioksidan  intrasel  jaringan  pankreas  tikus.  MKB. 43(2):72–26.
Winarsi H, Arinton IG. 2012. Pengembangan ekstrak batang kapulga sebagai  minuman  kaya  antioksidan  yang  berpotensi  sebagai antidiabetes.  Laporan  Penelitian.  Universitas  Jenderal Soedirman. Purwokerto.
Winarsi  H,  Purwanto  A.  2010.  Efek  suplementasi  ekstrak  protein kecambah kedelai terhadap kadar IL-1 beta penderita diabetes tipe 2. J. Teknol & Industri Pangan. 21(11):6–10.
Winarsi H. 2005. Isoflavon Berbagai Sumber, Sifat dan Manfaatnya pada Penyakit Degeneratif. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta:
Kanisius.
Wiyono  P.  2003.  Peranan  hiperglikemia  terhadap  terjadinya komplikasi  kronik  diabetes  melitus.  Berkala  Ilmu  Kedokteran. 35(1):55–60.
Wresdiyati  T,  Astawan  M,  Fithriani  D,  Adyane  IKM,  Hidayati  M. 2008.  Pemanfaatan  α  tokoferol  untuk  meningkatkan  profil Superoksida  Dismutase  (SOD)  ginjal  tikus  dibawah  kondisi stres. Biota. 13(3):147–155.
Yang  J,  Lin  H,  Mau  J.  2002.  Antioxidant  properties  of  several comercial mushrooms.Food Chem. 7:229–235.
Yuriska  A.  2009.  Efek  aloksan  terhadap  kadar  glukosa  darah  tikus winstar [Skripsi]. Universitas Diponegoro–Semarang.
Zhang M, Cao J, Chen X, Wang Q. 2011. Flavonoid contents and free radical scavenging activity of extract from leaves, stem, rachis, and  roots  of  Dryopteris  erithrosora.  Iranian  Journal  of Pharmaceutical Research. 11(3):991–997