ANTIBACTERIAL POTENTIAL AND EKSTRACTS AND FROM MARINE SPONGE ORGANISM Stylissa carteri AGAINTS THE GROWTH OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli bacteria.
POTENSI ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN FRAKSI DARI ORGANISME LAUT Stylissa carteri TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphyloccus aureus DAN Escherichia coli.
Viska Fadila Tompunu 1)* , Defny S. Wewengkang 1) ,  Erladys M. Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA Unsrat Manado, 95115 *viska.tompunu@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges  are  multicellular  metazoan  animals  belonging  to  the  phylum  Porifera.  Sponges  have antibacterial,  anticancer  and  anti-parasitic  activity.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine whether  Stylissa  carteri  sponge  obtained  from  the  waters  of  Manado  Bay  have  the  potential  of antibacterial  activity  against  Staphyloccous  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria.  The  extraction method used is maceration using 95% ethanol as solvent and the fractionation method used is liquid- liquid fractionation. Testing of antibacterial activity using disk diffusion agar method (kirby-bauer). The results obtained from the antibacterial activity test against Staphylococcus aureus bacteria, the methanol  fraction  obtained  an  average  yield  of  10.21  mm,  and  the  n-hexane  fraction  obtained  an average  yield  of  6.93  mm.  Against  Escherichia  coli  bacteria,  the  methanol  fraction  obtained  an average yield of 7.96 mm and the n-hexane fraction averaged 8.62 mm, while the ethanol extract and chloroform fraction did not shown antibacterial activity against the two test bacteria. The methanol fraction  had  strong  inhibition  against  Staphylococcus  aureus  and  moderate  inhibition  against Escherichia coli, while the n-hexane fraction had moderate inhibition against the two test bacteria.
Keywords : Stylissa carteri, antibacterial, Staphylococcous aureus, Escherichia coli.

## ABSTRAK
Spons merupakan hewan metazoa multiseluler yang tergolong dalam filum porifera. Spons  memiliki aktivitas  antibakteri,  anti  kanker  dan  anti  parasit.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  apakah spons Stylissa  carteri yang  diperoleh  dari  perairan  Teluk  Manado  memiliki  potensi  aktivitasi antibakteri  terhadap  bakteri Staphyloccous  aureus dan Escherichia  coli .  Metode  ekstraksi  yang digunakan  adalah  maserasi  dengan  menggunakan  pelarut  etanol  95%  dan  metode  fraksinasi  yang digunakan yaitu fraksinasi cair-cair. Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar ( disc  diffusion  kirby ).  Hasil  yang  didapat  dari  pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Staphyloccous aureus, fraksi metanol mendapatkan hasil rata-rata 10,21 mm, dan pada fraksi n-hexan hasil  rata-rata  6,93  mm.  Pada  bakteri Escherichia  coli ,  fraksi  metanol  mendapatkan  hasil  rata-rata 7,96  mm  dan  pada  fraksi  n-hexan  hasil  rata-rata  8,62  mm,  sedangkan  ekstrak  etanol  dan  fraksi kloroform tidak memiliki aktivitas antibakteri pada kedua bakteri uji. Fraksi metanol memiliki daya hambat kuat terhadap bakteri Staphyloccous aureus dan daya hambat sedang pada bakteri Escherichia coli , sementara fraksi n hexan memiliki daya hambat sedang terhadap kedua bakteri uji.
Kata Kunci : Stylissa carteri, antibakteri, Staphylococcous aureus, Escherichia coli
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Organisme  laut  merupakan  sumber  yang kaya  akan  senyawa  aktif  biologis  (Zhang et  al ., 2009).  Senyawa  bioaktif  yang  berasal  dari invertebrata  laut  memiliki  kemiripan  dengan metabolit  yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme simbionnya  (Radjasa et  al .,  2007).  Kemungkinan besar  produsen  asli  dari  senyawa  bioaktif  pada spon  adalah  mikroorganisme  simbion  dari  spons tersebut  (Thomas et  al .,  2010).  Spons  laut diketahui  menjadi  tempat  hidup  beberapa  jenis bakteri  yang  jumlahnya  mencapai  40  %  dari biomassa  spons.  Simbiosis  antara  bakteri  dengan spons  laut  berpotensi  menghasilkan  antibakteri (Kanagasabhapathy et al ., 2005).
Spons  memiliki  aktivitas  antimikroba, antiparasit  dan  antikangker.  Spons  merupakan salah  satu  komponen  biota  penyusun  terumbu karang  yang  mempunyai  potensi  bioaktif  yang belum  banyak  dimanfaatkan.  Hewan  laut  ini mengandung  senyawa  aktif  yang  persentase keaktifannya  lebih  besar  dibandingkan  dengan senyawa-senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan darat (Suparno, 2005).
Salah  satu  contoh  spons  yang  banyak ditemukan  di  perairan  Indonesia  khususnya  di Teluk  Manado  adalah Stylissa  carterri. Spons Stylissa  carteri dapat  menghasilkan  metabolit sekunder dari proses metabolisme dalam sel yang ada  pada  tubuhnya.  Adapun  metabolit  sekunder yang  dihasilkan  memiliki  struktur  yang  khas dibandingkan  spesies-spesies  organisme  laut lainnya,  karena  bergantung  pada  lingkungan  dan interaksi  (simbiosis)  dengan  organisme  lainnya. Dari  berbagai  penelitian  spesies  ini  memiliki senyawa  metabolit  sekunder  seperti  golongan alkaloid,  steroid  daan  terpenoid  (Gozcelioglu  dan Konuklugil, 2012).
Antibakteri  diperlukan  untuk  mengobati infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri,  contoh beberapa bakteri yang dapat menyebabkan infeksi diantaranya Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli adalah  flora  normal  yang  dapat ditemukan pada manusia, tetapi dapat menyebabkan  penyakit  infeksi. Staphylococcus aureus dapat  menyebabkan  pembentukan  nanah pada luka yang sering dijumpai pada kulit, selaput lender,  bisul-bisul,  dan  luka. Escherichia  coli adalah  bakteri  yang  secara  normal  hidup  di saluran pencernaan manusia dan hewan. Meskipun  bakteri Escherichia  coli secara  normal hidup disaluran pencernaan, tapi dapat menyebabkan  infeksi  saluran  kemih,  diare terutama  pada  bayi  dan  anak,  pneumonia,
meningitis  pada  bayi,  dan  infeksi  luka  di  dalam abdomen (Irianto, 2006).
Pada penelitian sebelumnya telah ditemukan hasil bahwa spons Stylissa carteri yang diambil  di  Pulau  Lembeh  Bunaken  hanya memiliki  aktivitas  antimikroba  pada  senyawa polar saja,  pada ekstrak etanol dan fraksi metanol. Aktivitas  yang  dihasilkan  sedang  dan  kuat  untuk bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli. Sedangkan  untuk  senyawa  non  polar  dan semi  polar  fraksi  n-hexane  dan  fraksi  kloroform tidak ada kepekaan aktivitas antimikroba (Cavieta, 2019).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bentuk penelitian
Penelitian  ini  berbentuk  eksperimen laboratorium  yang  akan  dilakukan  dengan  cara menguji  komponen  yang  diekstrak  dari  spons Stylissa carteri yang diperoleh dari perairan Teluk Manadosebagai  antibakteri  pada Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  akan  dilaksanakan  pada bulan  April  sampai  Juli  2021  di  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  dan  Laboratorium Mikrobiologi  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.

## Alat dan Bahan

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu scuba diving , sarung tangan, gunting, botol 600  ml,  talenan, cool  box ,  pisau,  snorkel,  fins, zipper  lock  bag, Erlenmeyer  (Pyrex),  corong, oven, timbangan  analitik,  corong  pisah,  gelas ukur,  gelaskimia  (Pyrex),  cawan  petri,  autoklaf, pinset,  pembakar  spritus, magnetic  stirrer ,  pipet tetes, micro  tubes , hot plate,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi,  lemari  pendingin,  inkubator,  cakram ( paper disc) , mikropipet, mistar berskala.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  spons Stylissa  carteri bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , etanol 95%, akuades, metanol, n-heksan, kloroform , pepton,  natrium  klorida , media  agar
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
B1  ( meat  extract ),  nutrient  agar,  kloramfenikol, paper disc , aluminium foil , kertas saring.

## Pengambilan dan preparasi sampel
Sampel  spons Stylissa  carteri diambil dari  perairan  Teluk  Manado  menggunakan  scuba (masker,  snorkel,  fins  dan  tabung  oksigen). Sampel  dibersihkan  dari  kotoran  yang  menempel di  sekitarnya,  difoto  lalu  dimasukkan  ke  dalam zipper lock bag dan diletakkan di dalam cool box , kemudian  langsung  dibawa  ke  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi.  Sampel difoto dan diberi label serta nomor sampel, untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi dengan Metode Maserasi
Spons Stylissa  carteri diekstraksi  dengan menggunakan  cara  maserasi  sebanyak  300  g kemudian sampel dibersihkan dan dipotong kecil- kecil  dengan  ukuran  1  cm²  lalu  dimasukkan  ke dalam  botol  dan  direndam  dengan  larutan  etanol 95%  sampai  sampel  terendam  secara  keseluruhan dan  dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel  yang direndam  disaring  dengan  menggunakan  kertas saring menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris 1  direndam  dengan  larutan  etanol  95%  sampai sampel  terendam  secara  keseluruhan  kemudian dibiarkan selama 24 jam. Sampel tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan debris 2. Debris 2 kemudian direndam dalam larutan  etanol  95%  sampai  sampel  terendam secara  keseluruhan  dan  dibiarkan  selama  24  jam, sampel  tersebut  disaring  menggunakan  kertas saring  menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3.  Filtrat 1,  2  dan  3  dicampur  menjadi  satu  kemudian disaring,  lalu  dievaporasi  menggunakan oven hingga  kering  sehingga  didapat  ekstrak  kasar Spons  Stylissa  carteri.,  kemudian  ditimbang menggunakan  timbangan  analitik,  diperoleh ekstrak  etanol  sebanyak  13,84  g.  Selanjutnya ekstrak  etanol  Spons  Stylissa  carteri  digunakan dalam fraksinasi dan pengujian antimikroba.

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak  kasar  Spons Stylissa  carteri yang diperoleh  Sebanyak  7  g  dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer  kemudian  dilarutkan  dengan  metanol 80%  sebanyak  200mL.  Setelah  sampel  larut, sampel  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  200  mL. Sampel  kemudian  dikocok  berulangkali  dalam
corong  pisah  hingga  homogen.  Sample  dibiarkan hingga  membentuk  lapisan  metanol  (MeOH)  dan lapisan n-heksan. Masing-masing lapisan metanol dan  lapisan  n-heksan  ditampung  di  dalam  wadah yang  berbeda.  Lapisan  n-heksan  selanjutnya diuapkann menggunakan oven hingga kering, lalu ditimbang dengan timbangan analitik dan diperoleh  fraksi  n-heksan  sebanyak  1,84  g. Selanjutnya  lapisan  metanol  ditambahkan  dengan akuades  200  mL,  kemudian  dipartisi  dengan pelarut kloroform menggunakan perbandingan 1:1 v/v setelah itu dikocok dalam corong pisah hingga homogen.  Lapisan  metanol  dibiarkan  hingga membentuk dua lapisan yaitu lapisan metanol dan lapisan kloroform. Masing-masing lapisan metanol  dan  lapisan  kloroform  ditampung  ke dalam  wadah  yang  berbeda.Lapisan  kloroform diuapkan  menggunakan  oven  hingga  kering  lalu ditimbang dengan timbangan analitik dan diperoleh  fraksi  kloroform  sebanyak  0,4  g. Lapisan metanol yang ditampung pada wadah lain diuapkan  menggunakan  roven  hingga  kering  lalu ditimbang dengan timbangan analitik dan diperoleh  fraksi  metanol  sebanyak  4  g.  Ketiga fraksi  yang  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian antibakteri. Rendemen-rendemen ekstrak  dan  fraksi  dihitung  dengan  persamaan berat  hasil  ekstrak/fraksi  dibagikan  dengan  berat awal  ekstrak/fraksi  kemudian  dikalikan  dengan 100%.

## Sterilisasi
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  potensi  antibakteri  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf pada  121˚C  selama  15  menit,  pinset  dibakar dengan  pembakaran  diatas  api  langsung  dan media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g,  natrium klorida 0,3 g dan akuades sebanyak 100 ml diaduk sampai  homogen  kemudian  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15  menit  dan setelah itu didinginkan. Setelah dingin, media cair B1 di tutup dengan aluminium foil media cair B1 siap  digunakan  sebagai  media  kultur  bakteri (Dwijendra et al , 2014).
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = Berat hasil ekstrak Berat ekstrak awal 𝑥 100%
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian  aktivitas antibakteri ini menggunakan kloramfenikol paper disc .  Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu menggunakan pelarut metanol, dengan  cara  membuat  larutan  stok  metanol dengan  mengambil  sebanyak  50  μL  metanol kemudian di totolkan pada paper disc (Lalamentik, 2017).

## Kultur Bakteri Uji
Bakteri  yang  digunakan  yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  Masing-masing bakteri  dipipet  sebanyak  100  μL  kemudian dimasukkan  ke  dalam  masing-masing  tabung reaksi yang sudah berisi  media cair B1 sebanyak 1ml dan kemudian ditutup menggunakan Aluminium  foil dan  diinkubasi  dalam  inkubator pada suhu 37˚C selama 1x24jam (Ortes, 2005).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara 2 mg ekstrak kasar Spons Stylissa carteri . dilarutkan dalam 400 μL  metanol  sehingga  menghasilkan  kosentrasi larutan  uji  sebesar  250  μg/  50  μL  kemudian dikocok  hingga  homogen  menggunakan  vortex. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada  fraksi  n- heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g,  natrium klorida  0,3  g,  agar  1,5  g  dan  akuades  sebanyak 100  mL  diaduk  sampai  homogen  kemudian disterilkan di autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit.  Media  agar  siap  digunakan  untuk  uji aktivitas antibakteri (Dwijendra et al , 2014).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and Bauer ).  Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  ini, cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan  berukuran 6 mm  dengan  daya  serap  50  μL  tiap  cakram. Sebanyak  300  μL  mikroba  yang  telah  dikultur, dipipet dan diinokulasi pada 30 ml media agar lalu diaduk hingga homogen dan kemudian dituangkan ke  dalam  cawan  petri  dan  tunggu  sampai  media agar  mengeras.  Kemudian,  larutan  uji  yang  telah
disiapkan  ditotolkan  pada  masing-masing  cakram dengan  menggunakan  mikropipet.  Setelah  agar mengeras,  kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel Spons Stylissa carteri. , kontrol positif dan kontrol  negatif  diletakkan  ke  dalam  cawan  petri dengan  menggunakan  pinset.  Selanjutnya,  cawan petri  diberi  label  dan  diinkubasi  dalam  inkubator pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 Jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitar  cakram menunjukkan kepekaan mikroba terhadap antibiotik  atau  bahan  antibakteri  yang  digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan diameter  zona  hambat..  Diameter  zona  hambat diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakan mistar berskala dengan cara diukue diameter  total  zona  bening  cakram.  Diameter  ≤5 mm  memiliki  kekuatan  daya  hambat  lemah,  5-10 mm daya hambat sedang, 10-20 mm daya hambat kuat  20  mm  atau  lebih  daya  hambat  sangat  kuat (Davis dan stout, 1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi spons Stylissa carteri dilakukan  di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Program  Studi  Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi  Manado.  Determinasi dilakukan  dengan  tujuan  untuk  memastikan sampel  yang  diambil  dan  dilakukan  pengujian aktivitas  antimikroba  adalah  sampel  yang  sesuai yaitu spons Stylissa carteri.

## Ekstraksi Spons Stylissa carteri
Sebelum  dilakukan  ekstraksi,  sampel spons Stylissa  carteri dipotong  kecil-kecil  untuk memperluas  ukuran  sampel  sehingga  proses ekstraksi  dapat  berjalan  optimal  karena  semakin luas  permukaan  sampel  maka  interaksi  antara pelarut dan sampel semakin baik, semakin banyak senyawa aktif yang akan tertarik ke dalam pelarut (Kristianti et  al ,  2008).  Sampel  kemudian diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi. Penggunaan metode maserasi digunakan selain mudah dan
sederhana  juga  paling  menguntungkan  pada isolasi senyawa bahan alam laut, karena pada saat perendaman  sampel  akan  terjadi  pemecahan dinding sel dan membran sel pada sampel, karena
terdapat perbedaan tekanan didalam dan diluar sel sehingga  metabolit  sekunder  akan  terlarut  dalam pelarut  organik  dan  ekstrak  senyawa  yang dihasilkan  akan  sempurna  karena  mudah  diatur
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
melalui  proses  perendaman.  Maserasi  agar  lebih efisien  dilakukan  berulang  kali  dari  pada  hanya dilakukan  sekali  (Mujiprahdana,  2018)  Sampel spons Stylissa  carteri dilakukan  dengan  etanol 95%  sampai  semuai  sampel  terendam,  karena pelarut  etanol  95%  memiliki  sifat  selektif,  tidak beracun  dan  bersifar  universal  yang  cocok  untuk mengekstrak  semua  golongan  senyawa  metabolit sekunder (Kristianti et al., 2018).
Proses  ekstraksi  dilakukan  selama  3x24 jam  dan  setiap  1x24  jam  ekstraks  disaring kemudian  diremaserasi  menggunakan  pelarut yang  baru.  Remaserasi  dilakukan  agar  senyawa
aktif  dalam  sampel  ditarik  secara  optimal (Huliselan et al , 2015).
Hasil    ekstrak  spons Stylissa  carteri selanjutnya  diuapkan  menggunakan oven dengan suhu  40˚C,  penguapan  ekstrak  ini  dilakukan  agar air  dan  pelarut  yang  tersisa  dalam  ekstrak  akan menguap.  Menggunakan  suhu  40˚C  untuk  tetap menjaga  senyawa  bioaktif  dalam  fitrat  karena biasanya  senyawa-senyawa  bioaktiv  tidak  tahan terhadap  suhu  tinggi  (Kowal et  al ,2018).  Ekstrak kasar yang diperoleh setelah diuapkan menggunakan oven dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen ekstrak spons Stylissa carteri NO Sampel Massa ekstrak (g) Rendemen (%) Warna Sampel 1. Ekstrak Etanol 13,84 4,61 Orange kecoklatan Fraksi Spons Stylissa carteri Setelah proses maserasi selanjutnya dilakukan  proses  fraksinasi  dengan  menggunakan metode  fraksinasi  cair-cair  yang  merupakan metode  pemisahan  dengan  menggunakan  dua pelarut  dalam  satu  corong  pisah  sehingga  pelarut tidak  saling  bercampur  karena  memiliki  sifat kepolaran  yang  berbeda.  Pelarut  yang  digunakan ialah    metanol,  kloroform,  dan  n-hexan.  Dari proses  ini,  dapat  diketahui  sifat  kepolaran  dari senyawa yang akan dipisahkan, dimana  senyawa- senyawa yang bersifat non polar akan larut dalam pelarut  yang  non  polar  sebaliknya  senyawa-
senyawa  yang  bersifat  polar  akan  larut  dalam pelarut yang bersifat polar juga (Engka, 2016).
Pada  saat  fraksinasi  dengan  pelarut- pelarut yang berbeda kepolaran, akan terbentuk 2 lapisan,  pelarut  yang  memiliki  masa  jenis  yang lebih besar akan berada dibawah dan pelarut yang memiliki  masa  jenis  kecil  akan  berada  di  lapisan atas  (Mujiprahdana et  al ,2018).  Kemudian  fraksi yang diperoleh akan diuapkan dengan menggunakan oven pada  suhu  40˚C  dan digunakan  untuk  uji  antibakteri.  Massa  fraksi beserta  rendemen  yang  dihasilkan  ditunjukkan pada tabel 2.
Table 2 . Rendemen fraksi spons Stylissa carteri NO Sampel Massa Ekstrak (g) Rendemen (g) Warna Sampel 1 Fraksi n-hexan 1,84 g 26,28 % Orange pekat 2 Fraksi Kloroform 0,4 g 5,71 % Orange jernih 3 Fraksi Metanol 4 g 57,14 % Kuning Jernih
Perbedaan  nilai  rendemen  ini  disebabkan oleh perbedaan jenis pelarut yang digunakan yaitu polar  dan  non  polar.  Dalam  hal  ini  pelarut  yang digunakan  n-hexan,  methanol  dan  kloroform.
Pelarut  yang  berbeda  akan  melarutkan  senyawa- senyawa yang berbeda tergantung tingkat kepolarannya.  Oleh  karena  itu  jumlah  ekstrak
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
yang  dihasilkan  tegantung  jenis  pelarutnya (Mujiprahdana et al , 2018).
Dapat  dilihat  pada  Tabel  2  bahwa  hasil yang  didapat  berbeda-beda,  fraksi  methanol memiliki  hasil  rendemen  paling  tinggi.  Hal  ini menunjukkan bahwa spons Stylissa carteri banyak mengandung senyawa yang bersifat polar sehingga  pelarut  methanol  banyak  menarik senyawa  tersebut  dari  sampel.  Sedangkan  pada fraksi  n-hexan  memiliki  hasil  rendemen  yang lebih  sedikit  dari  methanol  hal  ini  menunjukkan bahwa  spons Stylissa  carteri bisa  larut  dalam senyawa  non  polar  meski  senyawa  yang  ditarik dari non polar tidak sebanyak dari pelarut polar.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Selanjutnya dilakukan pengujian Aktivitas  Antibakteri    spons Stylissa  carteri terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dari  ekstrak  etanol,  fraksi methanol,  fraksi  n-hexan,  dan  fraksi  kloroform
menggunakan  metode  difusi  agar.  Metode  difusi agar  yaitu  metode  yang  dilakukan  dengan pengukuran  dan  pengamatan  diameter  zona bening  yang  terbentuk  disekitar  cakram  yang berisi zat antimkiroba yang diletakkan pada media agar  yang  telah  diinokulasi  mikroba  (Lalamentik, 2017).
Bakteri yang digunakan adalah Staphylococcus  aureus yang  mewakili  bakteri Gram  positif, Escherichia  coli yang  mewakili bakteri  Gram  negatif.  Hal  ini  dilakukan  untuk mengetahi apakah spons Stylissa carteri memiliki sifat  antibakteri  dengan  spektrum  luas  atau  tidak. Antibakteri  dikatakan  berspektrum  luas  apabila dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram positif dan Gram negatif. Sedangkan berspektrum sempit  yaitu  hanya  menghambat  pertumbuhan salah  satu  daari  Bakteri  Gram  postif  atau  Gram negati (WHO, 2014).
Berikut adalah gambar yang diperoleh setelah dilakukan pengujian terhadap bakteri uji
Gambar A. Staphyloccous aureus Gambar B. Escherichia coli
Gambar 1 . Hasil Uji Aktivitas Antimikroba dari Ekstrak dan Fraksi Spons Stylissa carteri
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Tabel  3 .  Hasil  rata-rata  Aktivitas  Antimikroba,  Keterangan;  (Ec) Escherichia  coli, (Sa) Staphylococcus aureus, , (EE) Ekstrak etnol, (FH) Fraksi n-heksan, (FK) Fraksi kloroform, (FM) Fraksi metanol, (+) kontrol positif, (-) kontrol negatif, ( Σ ) jumlah zona bening, ( 𝑋̅) jumlah rata-rata zona bening .
Bakteri Rata- Rata Diameter (mm) EE FH FK FM (+) (-) Ec I II III 𝚺 𝑿 ̅ - - - - - 7,15 6,34 7,32 20,81 8,62 - - - - - 8,07 7,78 8,03 23,88 7,96 32,83 - - - - - Sa I II III
𝚺 𝑿 ̅ - - - - - 7,51 6,34 7,32 20,81 6,93 - - - - - 10,12 10,84 9,68 30,64 10,21 39,72 - - - - -
Hasil  yang  diperoleh  pada  pengujian  ini, yaitu adanya zona bening yang terbentuk disekitar cakram  ( paper  disc) yang  berukuran  6mm, menunjukkan adanya aktivitas penghambat pertumbuhan  bakteri  yang  dihasilkan  oleh  spons Stylissa  carteri .  Pengamatan  dilakukan  setelah diinkubasi  selama  1x24  jam  pada  suhu  37˚C dengan tiga kali pengulangan untuk mengakuratkan hasil yang diperoleh (Mujipradana et al , 2018).
Hasil  yang  diperoleh  pada  ekstrak  etanol dan  fraksi  kloroform  tidak  menunjukkan  adanya zona bening yang terbentuk disekitar cakram, baik pada  bakteri Staphyloccous  aureus maupun bakteri Escherichia  coli. Ini  berarti  bahwa senyawa-senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol dan fraksi kloroform spons Stylissa carteri tidak memiliki aktivitas antibakteri.
Pada  penelitian  mengenai  uji  aktivitas antibakteri  fraksi  non  polar,  semipolar,  dan  polar ekstrak  etanol  yang  dilakukan  oleh  Akhil et  al , (2007) menyatakan bahwa hal ini memungkinkan kandungan  metabolit  sekunder  yang  berpotensi sebagai  antibakteri  pada  bahan  uji  ini  tidak  ada atau  masih  terkandung  banyak  pada  fraksi  polar sehingga  tidak  mampu  berpotensi  sebagai antibakteri  dan  beberapa  faktor  lingkungan  yang mempengaruhi  stabilitas  senyawa  aktiv  yaitu suhu,  radiasi  cahaya,  udara  (terutama  oksigen, karbondioksida,  dan  uap  air)  dan  kelembapan. Faktor-faktor  lain  yang  dapat  mempengaruhi stablitas yaitu : pH 7,0, sifat air dan kondisi biotik,
dan keberadaan bahan kimia lain yang merupakan kontaminan  stabilitas  senyawa  aktif.  Selain  itu kondisi lingkungan yang buruk dapat mempengaruhi  produksi  metabolit  sekunder  atau dipengaruhi  pula  oleh  organisme  asosiasi,  seperti ancaman  predator,  makro  dan  mikroorganisme patogen, kompetisi ruang dan makanan (Nurfadilah, 2013).
Hasil yang diperoleh  pada fraksi metanol dan  fraksi  n-hexane  menunjukkan  adanya  zona bening  yang  terbentuk  disekitar  cakram  pada kedua  bakteri Staphyloccous  aureus dan  bakteri Escherichia  coli. Ini  berarti  bahwa  senyawa- senyawa  yang  terkandung  dalam  fraksi  n-hexan dan fraksi kloroform memiliki aktivitas antibakteri.  Aktivitas  yang  paling  baik  terjadi pada fraksi methanol dengan daya hambat sebesar 10,21mm  menghambat  bakteri Staphyloccous aureus dengan  kategori  kuat.  Sedangkan  untuk bakteri Escherichia coli aktivitas yang paling baik terjadi  pada  fraksi  methanol  dengan  daya  hambat sebesar  7,96mm  dengan  kategori  sedang.  Hal  ini berarti  spons Stylissa  carteri yang  diambil  di Teluk  Manado  terdapat  aktivitas  antibakteri  pada senyawa  yang  bersifat  polar  dan  non  polar, meskipun  senyawa  non  polar  tidak  sebanyak dengan senyawa polar.
Dari  hasil  yang  ditunjukkan  diatas, menunjukkan bahwa dari berbagai penelitian juga menyatakan    bahwa  spesies Stylissa  carteri ini memiliki  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder seperti  golongan  alkaloid,  steroid  dan  terpenoid,
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
yaitu  senyawa  yang  bersifat  semi  polar  dan  non polar (Gozcelioglu dan Konuklugil, 2012).
Dari  hasil  yang  ditunjukkan  diatas,  daya hambat  bakteri  disebabkan  karena  struktur dinding  sel  bakteri  gram  positif Staphyloccous aureus lebih  sederhana  sehingga  memudahkan senyawa antibakteri untuk masuk kedalam sel dan menemukan  sasaran  untuk  bekerja,  sedangkan struktur  dinding  sel  bakteri  gram  negatif Escherichia coli lebih kompleks dan berlapis tiga, yaitu lapisan luar lipoprotein, lapisan tengah yang berupa peptidoglikan dan lapisan dalam lippolisakarida.  Sehingga  daya  hambat  bakteri yang  terjadi  lebih  kuat  pada  bakteri  golongan gram positif (Kumayas dkk, 2015).
Dalam  pengujian  ini  digunakan  kontrol positif  dan  negatif  sebagai  pembanding.  Kontrol positif  yang  digunakan  dalam  pengujian  ini  yaitu kloramfenikol,  digunakan  kloramfenikol  sebagai kontrol positif dikarenakan kloramfenikol bersifat bakteriostatik  dan  memiliki  spektrum  yang  luas. Penggunaan  kontrol  positif  berfungsi  sebagai kontrol  dari  zat  uji,  dengan  membandingkan diameter daerah hambat yang terbentuk (Dwijendra et al ,  2014).
Hasil yang diperoleh menunjukkan kloramfenikol  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang jauh lebih besar terhadap bakteri uji dibandingkan ekstrak  dan  semua  fraksi  spons Stylissa  carteri . Diameter zona bening yang dihasilkan kloramfenikol  pada  bakteri Staphyloccous  aureus yaitu  sebesar  39,72mm  dan  pada  bakteri Escherichia coli yaitu sebesar 32,83mm.
Kontrol  negatif    yang  digunakan  dalam pengujian  ini  yaitu  methanol,  hal  ini  dikarenakan pelarut yang digunakan dalam melarutkan ekstrak dan  semua  fraksi  sebagai  sampel  uji  ialah metanol.  Kontrol  negatif  digunakan  untuk mengetahui bahwa aktivitas yang ditunjukan oleh ekstrak  atau  fraksi  ialah  zat  yang  terkandung dalam  sampel  bukan  berasal  dari  pelarut  yang digunakan.  Sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh metanol sebagai kontrol negatif tidak menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri  baik terhadap  bakteri Staphyloccous  aureus maupun bakteri Escherichia  coli. Ini  membuktikan  bahwa senyawa-senyawa  yang  terdapat  pada  spons Stylyssa  carteri lah  yang  terdapat  aktivitas antibakteri dan bukan dari pelarutnya

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasi penelitian dapat disimpulkan  bahwa  spons Stylissa  carteri yang diperoleh  dari  perairan  Teluk  Manado  memiliki aktivitas  antibakteri  pada  fraksi  metanol  dengan nilai  rata-rata  10,21  kategori  daya  hambat  kuat pada  bakteri Staphyloccous  aureus dan  daya hambat  sedang  pada  bakteri Escherichia  coli dengan  nilai  rata-rata  7,96.Dan  fraksi  n-hexan memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan  kategori sedang  pada  kedua  bakteri  uji  dengan  nilai  rata- rata 8,62 untuk bakteri Staphyloccous aureus dan 6,93  untuk  bakteri Escherichia  coli Sedangkan untuk  ekstrak  etanol  dan  fraksi  kloroform  tidak adanya  kepekaan  aktivitas  antibakteri  untuk  itu tidak terdapat zona bening pada saat pengujian.

## SARAN
Dari  hasil  yang  didapat  maka  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap  spons Stylissa  carteri khususnya  untuk  ekstrak  dan fraksi  yang  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri kemungkinan memiliki aktivitas yang lain seperti antioksidan, antivirus dan lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhil  JS,  Syamjith,    Deepa,    Alwar  MC,  2007.
Acute toxicity studies and determination of median lethal dose. Science 93(7) :917-920.
Cavieta,W.2019.  Aktivitas  Antimikroba  dari Ekstrak  dan  Fraksi  Organisme  Laut  Spons Stylissa carteri yang dikoleksi dari Perairan Selat  Lembeh  Kota  Bitung [skripsi]
FMIPA UNSRAT,Manado.
Dwijendra,  I.  M.,  D.  S.  Wewengkang.,  dan  F. Wehantou. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea  herbacea yang  diperoleh dari Teluk Manado. Pharmacon . 3(4) : 1-9.
Engka,  T.  2016.  Aktivitas  Antioksidan  dan Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik  dan Flavonoid dari Umbi Kuso Mafola ( Drynariaquercifolia L.) [skripsi] . Program Studi  Farmasi  FMIPA  Universitas  Sam Ratulangi, Manado.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Gozcelioğlu,  B.,  Dan    Konuklugil,  B.,  2012,
Qualitative  Detection  of  Some  Secondary Metabolites  from  Three  Turkish  Marine Sponges, Fabad J. Pharm. Sci., 37 : 73-78.
Huliselan,  Y.  M.,  Runtuwene,  M.  R.  J.,  dan Wewengkang,  D.  S.  2015.  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol,  Etil,  Asetat, dan  n-heksan  dari  Daun  Sesewanua (Clerodendron  squamatum  Vahl.).  Jurnal Ilmiah Farmasi. 4(3) :155-163.
Irianto,  K.  2006. Mikrobiologi  Menguak  Denia Mikroorganisme  Jilid  I. Bandung  :  Yrama
Widya.
Kanagasabaphati, A., Kumari, S. 2005. Guidelines for  Good  Clinical  Laboratory  Practice Standards.  National  Institute  of  Health. Bethesda.
Kristanti,  A.  N.,  N.S.  Aminah.,  M.  Tanjung.,  B.
Kurniadi.  2008.  Buku  Ajar  Fitokimia.
Unair Press, Surabaya.
Lalamentik,  G.  2017.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Karang  Lunak  Klyxum  sp.  yang Diperoleh  dari  Teluk  Manado. [Skripsi] . Program  Studi  Farmasi  FMIPA  Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Mujipradana,  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,  dan  E.
Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba dari Ekstrak  Ascidian  Herdmania  momus  pada Mikroba  Patogen  Manusia.  Pharmacon. 7(3 ): 338-347.
Nurfadilah,  2013,  Uji  Bioaktivitas  antibakteri Ekstrak  dan  Fraksi  Lamun  dari  Kepulauan Spermonde, Kota Makasar, [Skripsi] Fakultas  Ilmu  Kelautan  dan  Perikanan, Universitas Hassanuddin Makasar.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed). American society for Microbiology,
America
Radjasa,  O.  K.,  Sabdono,  A.,  Junaidi,  J.,  &
Zocchi,  E.  (2007).  Richness  of  Secondary Metabolite-Producing Marine Bacteria Associated with Spon Haliclona sp.
Suparno  P.  2005.  Miskonsepsi  dan  Perubahan
Konsep Dalam Pendidikan Fisika.
Jakarta:Grasindo.
Tenover,  2006.  Mechanisms  of  Antimicrobial Resistance  in  Bacteria, The  American Journal of Medicine , 119(6): 3-10.
Thomas,  T.  R.  A.,  Kavlekar,  D.  P.,  & LokaBharathi,  P.  A.  (2010).  Marine  drugs from spon-microbe association—A review. Marine Drugs 8(4 ) : 1417-1468.
WHO.    2014.    Antmicrobial    resistance:  global report on survaillance 2014. World Health Organization. p 257.
Zhang, Y., Mu, J., Feng, Y., Kang, Y., Zhang, J., Gu,  P.  J.,  &  Zhu,  Y.  H.  (2009).  Broad- spectrum  antimicrobial  epiphytic  and endophytic fungi from  marine organisms: isolation, bioassay and taxonomy. Marine drugs, 7(2) : 97-112.