## POTENSI FRAKSI ETIL ASETAT KULIT BATANG KESAMBI SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP Escherichia coli

## (THE POTENTIAL OF ETHYL ACETATE FRACTION OF KESAMBI STEM AS ANTIBACTERIAL AGAINST Escherichia coli )
Afif Hidayatul Mustafid 1,2 , Yeyen Maryani 1* , Sri Agustina 1,3 , Boima Situmeang 2
1 Magister Teknik Kimia, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Jl. Jendral Sudirman km 03 Cilegon, 42435, Banten
2 Department of Chemistry, Sekolah Tinggi Analis Kimia Cilegon, 42161, Indonesia 3 Laboratorium Biomaterial Terapan dan Rekayasa Produk, Fakultas Teknik Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Jl. Jendral Sudirman km 03 Cilegon, 42435, Banten
* Corresponding author:  yeyen.maryani@untirta.ac.id
DOI: http://dx.doi.org/10.26418/indonesian.v6i2.63497
ARTICLE INFO

## ABSTRACT
Article history: Received 1 March 2023 Accepted 21 August 2023 Available online 31 August 2023
Keywords: kesambi , Schleichera oleosa , antibacterial , E. coli
In our previous research, ethyl acetate extract of kesambi stem bark has  the  highest  antibacterial  activity  against Escherichia  coli compared  with n -hexane  and  methanol  extract.  In  our  present study,  we  report  the  antibacterial  activity  of  fractions  from  ethyl acetate extract against Escherichia coli . The method of fractionation used  column  and  thin-layer  chromatography.  The  Antibacterial activity  uses  Kirby  Bauer  methods.  The  characterization  of  active fractions used spectrometer infrared. The result showed fractions 6 and 7 have the highest antibacterial activity with inhibition zones 11.65 and 7.1 mm. The characterization of fractions 6 and 7 showed functional groups C=O, O-H, and C=C. The ethyl acetate fraction has the potential as an antibacterial material.
© 2023 IJoPAC. All rights reserved

## 1. Pendahuluan
Di Indonesia prevalensi kematian akibat penyakit diare masih tergolong tinggi sehingga perlu dilakukan pencarian obat baru dari bahan alam yang lebih aman dari obat sintetik yang memiliki beberapa efek samping [1] . Tumbuhan kesambi ( schleichera oleosa ) banyak tersebar di Asia salah satunya di negara Indonesia [2,3] . Di Indonesia kesambi banyak tumbuh di daerah Cilegon, Jember dan  Bali [4] .  Tumbuhan  Kesambi  merupakan  tumbuhan  yang  dikenal  kaya  akan  manfaat.  Di Indonesia,  khususnya  daerah  Cilegon  Banten  tumbuhan  kesambi  dimanfaatkan  sebagai  obat penyakit  kulit  dengan  cara  merendam  bagian  kulit  yang  sakit  dengan  air  rebusan  kulit  batang kesambi [1,5] .  Selain  itu  air  rebusan  kulit  batang  kesambi  juga  telah  dimanfaatkan  sebagai  obat penyakit diare dengan cara meminum air rebusan kulit batang kesambi [6] .
Senyawa  metabolit  sekunder  merupakan  senyawa  yang  terdapat  dalam  bagian-bagian tumbuhan dan memiliki beragam aktivitas [7] . Senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada tumbuhan  seperti  flavonoid,  terpenoid,  tanin,  dan  saponin  diduga  mempunyai  kemampuan menghambat  pertumbuhan  bakteri [8] .  Berdasarkan  penelusuran  pustaka,  belum  ada  penelitian

## Indonesian Journal of Pure and Applied Chemistry
journal homepage: http://jurnal.untan.ac.id/index.php/IJoPAC
Indo. J . Pure App. Chem. 6 (2), pp. 45-51, 2023
yang melaporkan struktur senyawa metabolit sekunder dari kulit batang tumbuhan kesambi yang berasal dari Indonesia. Ekplorasi senyawa kimia yang terkandung pada kulit batang tumbuhan kesambi  masih  perlu  dilakukan.  Mengingat  potensi  dari  tumbuhan  kesambi  yang  sangat  besar sebagai antibakteri, maka dalam penelitian ini dilakukan karakterisasi fraksi aktif antibakteri dari ekstrak  EAK  yang  memiliki  potensi  sebagai  material  enkapsulasi  kapsul  antibakteri  terhadap bakteri Escherichia coli .

## 2. Metode

## 2.1. Bahan dan alat
Sampel yang digunakan yaitu kulit batang kesambi, etil asetat, aquades, silika Gel G60, plat KLT G254, H 2 SO 4 pekat, HCl pekat, NaOH 10%, etanol 70%, dragendroff, kloroform, strain bakteri escerichia coli , nutrient broth , dan nutrient agar.
Alat yang digunakan yaitu alat gelas beaker, gelas ukur, magnetic stirrer , pipet ukur, FTIR, plat  KLT,  kromatografi  kolom,  lampu  UV,  neraca  analitik,  evaporator, incubator  memmert dan laminar air flow .
2.2. Prosedur Kerja Preparasi Sampel EAK
Sampel  yang  digunakan  yaitu  kulit  batang  kesambi  yang  didapat  dari  Jombang,  Cilegon- Banten. Sampel dikeringkan pada suhu ruang 25 o C selama 7x24 jam. Sampel kulit batang kesambi ditumbuk menggunakan lumping sampai berbebentuk halus.

## Ekstraksi
Serbuk  halus  kulit  batang  kesambi  yang  telah  kering  sebanyak  1800  g  diekstraksi  dengan metode  maserasi  menggunakan  etil  asetat  selama  3  x  48  jam  sebanyaj  4  L.  Terhadap  sampel dilakukan pengadukan, lalu disaring dengan kertas saring [9] . Ekstrak yang dihasilkan sebanyak ± 2,5 L kemudian dievaporasi pada suhu 40ºC untuk memperoleh ekstrak etil asetat kulit batang kesambi (EAK) [10] .

## Skrining Fitokimia EAK
Uji  skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap  senyawa  golongan  alkaloid,  flavonoid,  fenolik, saponin  dan  triterpenoid.  Uji skrining  alkaloid  merujuk  pada  penelitian  Situmeang  dkk  (2019) dan Sukadana (2007) dengan menggunakan pereaksi Dragendorff [1,11] . Srining fitokimia senyawa flavonoid  merujuk  pada  penelitian  Cahyadi  (2017)  dengan  menggunakan  reagent  AlCl 3 [12] . Skrining fitokimia terhadap senyawa saponin juga merujuk pada penelitian Situmeang dkk (2019) dengan menggunakan akuades panas dan pengocokan. Skrining fitokimia senyawa triterpenoid merujuk pada penelitian Creswell et al ., (2005) menggunakan reagent Lieberman Burchart [13] .

## Isolasi dan Karakterisasi
Isolasi dan pemurnian dilakukan dengan teknik kromatografi. Eluen yang di gunakan adalah n -heksana/EA.  Selanjutnya  dilakukan  pemisahan  dengan  KKG  dengan  fasa  diam  silika  gel  G60 sampai  diproleh  fraksi  yang  aktif.  Selanjutnya  dilakukan  analisis  pola  noda  dengan  KLT.  Eluen yang  digunakan  adalah  kombinasi  pelarut n -heksana/EA.  Fraksi  hasil  kromatografi  kolom kemudian ditotolkan pada plat KLT yang sudah di siapkan menggunakan pipa kapiler lalu dielusi pada chamber .

## Uji Aktivitas Antibakteri
Aktivitas  antibakteri  diuji  dengan  menggunakan  metode Kirby  Bauer. Tahapan  pertama dilakukan peremajaan bakteri. Tahapan kedua yaitu pengujian sampel. Pada tahapan pengujian
sampel,  kapas  lidi  dicelupkan  dalam media cair  yang  berisi  bakteri  dengan  kekeruhan  0,5 Mac Farland kemudian dioleskan pada media padat menggunakan kapas lidi. Selanjutnya sebanyak 15 µL  sampel,  kontrol  positif  (amoksilin),  kontrol  negatif  diteteskan  pada  kertas  samir  kemudian diletakkan di atas media padat yang berisi bakteri. Setelah diinkubasi selama 24 jam, diameter zona bening disekitar kertas samir diamati dan diukur menggunakan jangka sorong.

## 3. Hasil dan pembahasan

## Ekstraksi
Kulit  batang  kesambi  kering  sebanyak  1,8  kg  dipotong  dengan  diameter  ±1cm  dan dikeringkan  pada  suhu  ruang.  Setelah  kering  dihaluskan  menggunakan  lumpang.  Tujuan  dari penghalusan  adalah  untuk  memperluas  permukaan  sehingga  memudahkan  proses  ekstraksi senyawa-senyawa kimia yang berada dalam kulit batang kesambi dengan baik. Kemudian setelah kulit batang kesambi halus dimaserasi menggunakan etil asetat sebanyak 4 L selama 2 × 24 jam menghasilkan  ekstrak  sebanyak  2,5  L  kemudian  di  evaporasi  dengan  suhu  50 o C,  hasil  dari evaporasi ini menghasilkan EAK 5,35 g.

## Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia ekstrak EAK kesambi dengan menggunakan berbagai jenis pereaksi yang dapat nenunjukkan adanya senyawa metabolit sekunder ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji fitokimia sampel ekstrak EAK
Jenis Uji Pereaksi Hasil Alkaloid Dragendorff Positif Flavonoid H 2 SO 4 2N Positif Fenolik FeCl 3 5% Positif Saponin Akuades Negatif Triterpenoid Lieberman Buchard Positif

## Isolasi dan Karakterisasi
Ekstrak  EAK  sebanyak  5 g  dilakukan  pemisahan  dengan cara  kromatografi kolom gravitasi secara bergradien 10%. Pelarut n -heksana dimasukan ke dalam kolom dan dialirkan kedinding kolom secara perlahan menggunakan pipet tetes dengan keadaan kran terbuka.  Fasa diam (silika gel)  dimasukan  ke  dalam  kolom  dengan  panjang  silika  gel  30  cm.  Sampel  EAK  yang  sudah  di impregnasi  sebanyak  5  g  dimasukan  ke  dalam  kolom.  Selanjutnya  dielusi  menggunakan kombinasi  pelarut n -heksana:  etil  asetat  secara  bergradien  10%  (9:1),  (8:2),  (7:3),  (6:4),  (5:5), (4:6), (3:7), (2:8), (1:9). Kromatografi kolom sampel EAK menghasilkan F1-F9. Hasil KLT F1-F9 dapat dilihat pada Gambar 1.
(A) (B)                                (C) Gambar 1. Hasil KLT F2-F9 menggunakan eluen n -heksana/EA (7:3). Kromatogram dilihat pada UV ʎ254 (A), UV ʎ365 (B), penampak noda H 2 SO 4 10% dalam etanol (C)
Dari hasil KLT fraksi 2-9 dapat dilihat bahwa fraksi 6 dan 7 memiliki aktivitas antibakteri yang paling tinggi sehingga dapat dilakukan pengukuran spektrum inframerah F6 dan F7.
Gambar 2. Spekrum Inframerah (IR) Fraksi 6
Spektrum  inframerah  pada  Gambar  2  di  atas  menunjukan  bahwa  fraksi  6  menunjukan  ʎ 3408,16 cm -1 dengan dugaan merupakan gugus -OH. Absorbsi -OH terikat hidrogen terlihat pada daerah 3000-3750 cm -1 menunjukan sebagai pita yang lebar dan kuat [5] . Bilangan gelombang ʎ 2916,88  cm -1 dan  2849,32  cm -1 diduga  gugus  C-H,  jika  dibandingkan  dengan  literatur  serapan panjang gelombang tersebut tidak jauh beda [8] . Bilangan gelombang ʎ 1707,91 cm -1 menunjukan gugus -C=O keton. Selanjutnya pada ʎ 1463,77 cm -1 , 1410,28 cm -1 , dan 1377,35 cm -1 menunjukan gugus -CH [6] . Pada bilangan gelombang1247,84 cm -1 menunjukan gugus C-O. Kulit batang kesambi diduga mengandung senyawa golongan triterpenoid karena memiliki gugus samping OH dan hasil uji fitokimia EAK positif triterpenoid serta tidak berpendar di bawah lampur UV 254 dan 365 nm [14,15] . .
Tabel 2. Bilangan Gelombang Fraksi 6 (cm -1 ) No Isolat Pustaka [13] Pustaka [14] Bentuk Pita Intensitas Dugaan 1 3408,16 3435-3000 3000-3750 Melebar Kuat -OH 2 2916,88 2850-2921 2700-3000 Tajam Kuat C-H 3 1707,91 1717-1654 1650-1900 Tajam Kuat C=O 4 1463,77 1495-1457 1300-1475 Tajam Lemah C=C 5 1377,35 - 1330-1420 Tajam Lemah C-H
Gambar 3. Spekrum Inframerah (IR) Fraksi 7
Spektrum inframerah pada Gambar 3 menunjukan bahwa fraksi 7 menunjukan serapan pada ʎ 3436.00 cm -1 yang diduga gugus -OH. Bilangan gelombang pada ʎ 2916,95 cm -1 dan 2849,55 cm - 1 diduga  menunjukan  gugus  C-H  alifatik,  jika  dibandingkan  dengan  literatur  yang  ada,  maka serapan  panjang gelombang  tersebut  tidak  jauh  beda [10] .  Selanjutnya  pada ʎ  1465,39  cm -1 dan 1383,89 cm -1 menunjukan gugus C-H [5] . Pada ʎ 1113,99 cm -1 menunjukan gugus C-O. Diduga kulit batang kesambi mengandung senyawa golongan triterpenoid karena memiliki gugus samping OH dan pada saat uji fitokimia ekstrak kulit batang kesambi positif terpenoid karena terbentuknya perubahan warna menjadi merah kecoklatan serta tidak berpendar di bawah lampur UV 254 dan 365 nm [16] .
Tabel 3. Bilangan Gelombang Fraksi 7 (cm -1 ) No Isolat Pustaka [8] Pustaka [10] Bentuk Pita Intensitas Dugaan 1 3436,00 3435-3000 3000-3750 Melebar Kuat -OH 2 2916,95 2850-2921 2700-3000 Tajam Kuat C-H 3 1707,91 1717-1654 1650-1900 Tajam Kuat C=O 4 1465,89 1495-1457 1300-1475 Tajam Lemah C=C 5 1113,99 - 1330-1420 Tajam Lemah C-H
Dari  interprestasi  data  fraksi  6  dan  fraksi  7  dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  6  dan  7 merupakan senyawa golongan griterpenoid.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli dilakukan  dengan  menggunakan  metode Kirby-Bauer . Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak EAK ditujukkan pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Kesambi
Fraksi Kontrol (+) 1.000 ppm 10.000 ppm 5.000 ppm 1.000 ppm Kontrol (-) Etil Asetat 20,3 16,5 13,9 13,7 0
Ekstrak aktif terdapat pada ekstrak etil asetat dengan hasil rata-rata uji antibakteri ekstrak etil asetat pada konsentrasi 1000; 5000; dan 10.000 ppm berturut-turut sebesar 13,7; 13,9; 16,5 mm. Kontrol positif menggunakan amoksilin dengan konsentrasi 1000 ppm memiliki zona bening
sebesar 20,3 mm dan kontrol negatif menggunakan metanol 96 % dengan nilai zona hambat 0. Hasil uji aktivitas antibakteri F2-F9 ditunjukkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri F2-F9
Sampel Zona hambat pada konsentrasi 5000 ppm (mm) F2 0 F3 0 F4 0 F5 0 F6 11,65 F7 7,1 F8 0 F9 0 Kontrol positif 6,9 Kontrol negatif 0
Dari pengujian aktivitas antibakteri yang telah dilakukan, fraksi 6 dan 7 (11,65 mm dan 7,1 mm) merupakan fraksi aktif yang dapat digunakan untuk menghambat aktivitas bakteri E. coli . Kontrol  positif  memiliki  nilai  zona  hambat  sebesar  6,9  mm  dan  kontrol  negatif  menggunakan metanol 96 % dengan nilai zona hambat 0. Dilihat dari hasil uji aktivitas antibakteri bahwa F6 dan F7 memiliki aktivitas zona hambat melebihi kontrol positif sehingga dapat disimpulkan bahwa F6 dan F7 memiliki aktivitas kuat dan memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai material obat antibakteri terhadap bakteri E. coli .

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  Spekrum  Inframerah  (IR)  fraksi  6  dan  7  diduga  merupakan  senyawa triterpenoid. Fraksi 6 dan 7 yang memiliki zona hambat melampaui kontrol positif. Fraksi 6 dan 7 berpotensi  untuk  dikembangkan  menjadi  bahan  enkapsulasi cangkang  kapsul  antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli .

## Daftar Pustaka
[1]   Situmeang,  B.,  Ibrahim,  A.M.,  Bialangi,  N.,  Musa,  W.J.A.,  Silaban,  S.  (2019).  Antibacterial activity and phytochemical screening of Kesambi ( Sapindaceae ) against Eschericia coli and Staphylococcus aureus . J. Pend. Kimia . 11 (1): 14-17.
[2] Alim,  N.,  Tahirah,  H.,  Rusman,  Jasmiadi,  dan  Zulfitri.  (2022).  Phytochemical  Screening, Relationship of Total Phenolic with Antioxidant Activity of Ethanol and Methanol Extracts of Kesambi ( Schleichera oleosa (Lour.) Oken) Bark. Jurnal Ilmiah Sains . 22 (2): 118-122.
[3] Ghosh,  P.,  Chakraborty,  P.,  Mandal,  A.,  Rasul,  M.G.,  Chakraborty,  M.,  dan  Saha,  A.  (2011). Triterpenoids  from Schleichera  oleosa of  Darjeeling  Foothills  and  Their  Antimicrobial Activity. Indian Journal of Pharmaceutical Sciences . 73 (1): 231-233.
[4] Goswami,  S.,  Singh,  R.P.  (2019).  Antidiabetic  Potential  and  HPTLC  Fingerprinting  of Schleichera oleosa (Lour) Oken. J. Pharmacogn . 11 (3): 469-474
[5] Mustaffa,  F.,  Indurkar,  J.,  Ismail,  S.,  Shah,  M.,  and  Mansor,  S.  (2011).  An  Antimicrobial Compounds  Isolated  from Cinnamoum  iners Leaves  with  Activity  Agains  Metichilin- Resistant S. Aureus . Molecules. 1420-3049.
[6] Jose,  S.,  Dandapat,  S.,  and  Sinha,  M.P.  (2019).  Anti-hypertensive  activity  of  aqueous  and methanolic leaf extracts of Schleichera oleosa (Lour.) Merr. J. Anal. Pharm. Res . (3): 94-97.
[7] Agustina, W.E.S., Retno, S.D.A., Ashadi, Mulyani, B., & Puti, C.R. (2014). Skrining Fitokimia dan  Identifikasi  Komponen  Utama  Ekstrak  Metanol  Kulit  Durian  ( Durio  zlbethinus Murr) Varietas  Petruk.  Prosiding  Seminar  Nasional  Kimia  dan  Pendidikian  Kimia  IV,  Surakarta, 2014:271-280.
[8] Ajileye,  O.O.,  Obuotor,  E.M.,  Akinkunmi,  E.O.,  &  Aderogba,  M.A.  (2015).  Isolation  and characterization of antioxidant and antimicrobial compounds from Anacardium occidentale L. ( Anacardiaceae ) leaf extract. King Saud University, 27:244-252.
[9] Trisharyanti,  I.,  Melannisa,  R.,  &  Ratri,  K.  (2011).  Korelasi  Kandungan  dan  Aktivitas Antioksidan Daun Jambu Mete. Biomedika, 3(2):25-29.
[10]  Marlinda, M., Sangi, M.S., & Wuntu, A.D. (2012). Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Biji Buah Alpukat ( Persea americana Mill.). Jurnal Mipa Unsrat Online, 1(1):24-28.
[11]  Sukadana,  (2007).  Isolasi  dan  identifikasi  senyawa  antimakan  dari  batang  tumbuhan brotowali. undergraduate research . Universitas Udayana, Bukit Jimbaran.
[12]  Cahyadi. F. (2017). Isolasi dan Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder dari Kulit Batang Kesambi ( Schleichera oleosa ). undergraduate research. Cilegon: Sekolah tinggi Analis Kimia Cilegon.
[13]  Creswell, Runquist, Campbell. (2005). Analisis Spektrum Senyawa Organik. Bandung ITB.
[14]  Harborne, J. B, (1987). Metode Fitokimia Penentuan Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Edisi kedua: ITB Press, Bandung.
[15]  Endang. (2013). Uji Efektivitas Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana I) Sebagai Antibakteri terhadap Acinetobacter baumannii Secara in vitro . Jurnal Kedokteran Brawijaya. Pp. 29 (11):1_13.
[16]  Fessenden  and  Fessenden.  (1986).  Kimia  Organik.  Edisi  Ketiga,  Jilid  1,  Erlangga,  Jakarta, Gilbert. 1989. Cryptograms: Fern and Fern Allies. Jakarta: Pustaka Utama.