INNOVATIVE: Journal Of Social Science Research Volume 4 Nomor 1 Tahun 2024 Page 10877-10885 E-ISSN 2807-4238 and P-ISSN 2807-4246
Website: https://j-innovative.org/index.php/Innovative

## Hasil Pewarnaan Sediaan Jaringan dengan Fiksatif Normal Buffer Formalin 10% dan Madu Selama Selama 1, 3, dan 7 Hari
Siti Nuryani 1 ✉ , Menik Kasiyati 2 , Sujono 3 , Ririh Jatmi Wikandari 4 , Surati 5 , Ratih Hardisari 6
(1,2,3,6) Poltekkes Kemenkes Yogyakarta, (4,5) Poltekkes Kemenkes Semarang
Email: siti.nuryani@poltekkesjogja.ac.id 1 ✉

## Abstrak
Pendahuluan: Pelayanan Patologi Anatomi merupakan pelayanan diagnostik dan laboratorium terhadap jaringan dan/atau cairan tubuh, di dalamnya terdapat teknik sitologi dan histologi yaitu fiksasi. Fiksasi selama ini menggunakan bahan formalin  yang berbahaya,  sehingga fiksatif lain seperti madu akan menjadi alternatif pilihan. Perlu kajian dan penelitian yang mendalam terkait madu sebagai bahan fiksatif sebelum digunakan dalam praktek sehari-hari di Laboratorium. Tujuan: Mengetahui pengaruh fiksatif madu  terhadap hasil pewarnaan sediaan, pada konsentrasi  10, 15 dan 20% selama 1, 3 dan 7 hari. Metode:    Objek  adalah  data  primer  yang  didapat  dari  pengamatan  gambaran  mikroskopis  sediaan jaringan yang dibuat dengan cara fiksasi menggunakan dua macam fiksatif yaitu Normal buffer formalin 10% sebagai control dan madu 10, 15, dan 20% dengan perendaman selama 1 , 3 dan 7 hari. Pewarnaan yang digunakan adalah Hematoksilin-Eosin. Binatang coba yang  dipakai adalah tikus jantan dewasa, dan organ yang dikai adalah   hepar, intertinal, limpa,  ginjal dan testis. Data  berupa skor gambaran histologis dianalisis secara diskriptif. Hasil : Organ lambung, Intestinal, Limpa, Ginjal, hepar dan testis menggunakan fiksatif kontrol NBF 10% masing-masing menunjukkan t skor 3. Madu 10% 1  hari  skor rata-rata 1,5 ; dengan 15% 1 hari  rata-sata skor 1,9: dengan 20% 1 hari  rata-sata skor 1,3: dengan 20% 3 hari  rata-sata skor 10.6 dan dengan 20% 7 hari  rata-sata skor 0,4. Kesimpulan : Penggunaan madu 10, 15, dan 20% sebagai fiksatif dengan perendaman 1 hari, 3 hari dan 7 hari dari gambarab inti sel, sitoplasma dan kerusakan sel  rata-rata menghasilkan skor dibawah NBF 10%.
Kata Kunci: Madu, Fiksatif, Skor, Gambaran Histologi
Abstract
Introduction: Anatomic Pathology Services are diagnostic and laboratory services for tissue and/or body  fluids,  including  cytology  and  histology  techniques,  namely  fixation.  Fixatives  currently  use formaldehyde which is dangerous, so other fixatives such as honey would be an alternative choice. In- depth study and research is needed regarding honey as a fixative before it is used in daily practice in the  laboratory.Objective:  To  determine  the  effect  of  honey  fixative  on  the  results  of  staining preparations, at concentrations of 10, 15 and 20% for 1, 3 and 7 days. Method: The object is primary data obtained from observing microscopic images of tissue preparations made by fixation using two types of fixative, namely Normal buffer formalin 10% as a control and honey 10, 15 and 20% by soaking for 1, 3 and 7 days. The stain used is Hematoxylin-Eosin. The experimental animals used were adult male rats, and the organs used were the liver, intestines, spleen, kidneys and testes. Data in the form of histological picture scores were analyzed descriptively. Results: Gastric, intestinal, spleen, kidney, liver and testicular organs using 10% NBF control fixative each showed a t score of 3. Honey 10% 1 day average score 1.5; with 15% 1 day average score 1.9: with 20% 1 day average score 1.3: with 20% 3 day average score 10.6 and with 20% 7 day average score 0.4. Conclusion: The use of 10, 15, and 20% honey as a fixative by soaking for 1 day, 3 days and 7 days from images of cell nuclei, cytoplasm and cell damage on average produces scores below NBF 10%.

## Keywords: Honey, Fixative, Score, Histology

## PENDAHULUAN
Pelayanan  Patologi  Anatomi  merupakan  pelayanan  diagnostik  dan  laboratorium terhadap jaringan dan/atau cairan tubuh. Pelayanan ini berperan sebagai baku emas ( Gold standard) dalam penegakkan diagnosis yang berbasis perubahan morfologi sel dan jaringan sampai  pemeriksaan  imunologik  dan  molekuler.  Patologi  anatomi  berperan  dalam mendeteksi  kelainan  jaringan  tubuh  dan  melakukan  penapisan  suatu  penyakit.  Peran Patologi  Anatomi  semakin  meluas  mencakup  penentuan  pilihan  terapi  dan  prediksi prognosis sejalan dengan perkembangan ilmu dan teknologi
Preparat yang baik dapat memberikan hasil   yang akurat untuk menjawab pertanyaan klinisi.  Untuk mencapai tujuan   tersebut,  preparat  harus  dapat  memberikan gambaran tentang bentuk, besar, dan susunan sebagaimana sel/ jaringan tersebut hidup. Hal ini diawali oleh proses fiksasi yang baik. Diantara bahan fiksatif adalah formalin.
.Bahan-bahan kimia untuk reagen dapat membahayakan dan menurunkan kesehatan.
Penggunaan di laboratorium seperti formalin yang toksik dapat membahayakan diri pekerja di Laboratorium dan bisa berakibat fatal. Formalin dapat menyebabkan kanker, iritasi kulit dan mata, gangguan saluran pernapasan dan pencernaan, neurotoksin, anomali reproduksi serta kecacatan perkembangan (Udonkang dkk., 2018).
Tujuan  utama  dari  fiksasi  adalah  untuk  menyajikan  jaringan  sesuai  bentuk  aslinya, mencegah  pembusukan  oleh  bakteri,  mencegah  autolisis  dan  meningkatkan  indeks  bias jaringan  (Bancroft,2019 14). Kebanyakan dari agen  fiksatif mampu mengeraskan jaringan sehingga  membantu  proses  pemotongan  jaring.  Formalin  dipilih  karena  murah,  mudah disiapkan, memiliki  pH mendekati netral dan sifatnya  stabil (terutama jika  dalam bentuk buffered).  Selain  itu,  formalin  mampu  memudahkan  pemotongan  jaringan,  pewarnaan lemak dan enzim serta tidak menyebabkan pengerasan berlebihan pada jaringan (Khristian dan Inderiati, 2017).
Banyak penelitian sebagai usaha untuk mengganti fiksatif formalin. Diantaranya adalah madu  yang    memiliki  sifat  anti-bakteri  karena  beberapa  sifat  yang  dimilikinya,  seperti aktivitas air yang sedikit, kandungan hidrogen  peroksida, keasaman, faktor fitokimia dan faktor senyawa organik non-peroksida (Maemunah S,dkk, 2021).
Pada penelitin ini mencoba untuk menggali kemampuan madu sebagai fiksatif dengan variasi  waktu  sebagaimana  kemampuan  Buffer  Formalin  10%  yang  dapat  merendam jaringan  sampai  dengan  7  hari.  Madu  yang  dipakai  adalah  10,  15  dan  20%,  dengan perendaman 1, 3 dan 7 hari.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  observasional  cross- sectional . Objek penelitian adalah data primer yang didapat dari pengamatan gambaran mikroskopis sediaan jaringan yang dibuat dengan cara fiksasi menggunakan dua macam fiksatif yaituNormal buffer formalin 10% dan madu 10, 15 dan 20% dengan perendaman selama 1 , 3 dan 7 hari.
Sampel diambil dari  organ binatang coba ( mencit ) yang dewasa dan sehat, jenis kelamin jantan. Variabel Bebas adalah jenis fiksatif ( Normal buffer formalin 10% dan madu) dan lama perendaman (1, 3 dan 7 hari) Variabel Terikat  adalah  skor pewarnaan pada inti, sitoplasma  dan  kerusakan  sel.  Madu  yang  dipakai  adalah  madu  jenis  klanceng  hasil langsung dari petani.  Skor didapatkan dari menilai warna inti sel dan  warna sitoplasma (Brilian, 2021), kerusakan sel (Fadita, 2020)
Alur Penelitian
.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Penelitian
Gambar 1. Fiksasi Jaringan dengan Larutan Madu 20%
Dalam wadah kelompok  7 hari  yang berisi   hepar, ginjal, limpa, lambung, usus halus ) terlihat keruh dan organ tidak utuh. Kelompok 3 hari (A) berisi hepar, ginjal, limpa terlihat agak  keruh  dan  karena    jaringan  dalam  kaset  maka  tidak  bisa  diketahui  keutuhannya.
fiksasi NBF 10% Analisa madu Proses jaringan Preparat Pengamatan 1 hari
3 hari 7 hari 1 hari 3 hari 7 hari Pewarnaan HE 7 hari 3 hari (A) 3 hari (B)
Kelompok 3 hari (B) berisi  lambung,   lambung, usus terlihat agak keruh, terlihat adanya gelembung-gelembung  gas  dari  larutan,  dan  jaringan  dalam  kaset  maka    tidak  dapat mengamati langsung secara makroskopis.
Gambar 2. Fiksasi Satu Malam fengan Madu Konsentrasi 10%, 15%, 20% dan NBF 10%

## Sebagai Kontrol
Berdasarkan  gambar di atas, terlihat kejernihannya sesuai dengan konsentrasi dari madu, semakin tinggi konsentrasi madu semakin pekat warnanya atau sebaliknya. Fiksasi atau perendaman dalam NBF 10% terlihat larutan jernih , hal ini juga sesuai dengan warna larutan  fiksatif tersebut.
Gambar 3.  sediaan jaringan dalam perendaman NBF 10% dan Madu 20% selama 1 hari, 3 dan 7 hari
Secara makroskopis, sediaan jaringan  yang paling jelas warna dan irisannya adalah sediaan yang terfiksasi dengan NBF 10% . Jaringan dengan fiksasi madu 20% selama 1 hari masih agak jelas , akan tetapi yang terfiksasi selama 3 hari dan 7 hari  sudah terlihat tidak jelas baik  irisannya maupun warnanya.
Gambar 4. Sediaan dengan perendaman satu hari dengan NBF10% dan madu 20%, 15%,
10%
Gambar diatas adalah kejelasan irisan maupun warna tampak pada perendaman 1 hari dengan NBF 10% lebih bagus dari yang lainnya. Kemudian pada madu 10% , 15% dan 20%.
Tabel 1. Hasil Skor Secara Mikroskopis Kelompok Nama organ inti sitoplasma Kerusakan sel NBF 10% Lambung Intestinal Limpa Ginjal hepar testis 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Madu10% 1 hari Lambung Intestinal Limpa Ginjal hepar testis 1 2 2 2 2 1 1 2 2 2 2 2 0 1 1 1 1 1 Madu15% 1 hari Lambung Intestinal Limpa Ginjal hepar testis 1 2 2 3 2 2 2 2 1 2 3 3 1 1 2 2 2 3 Madu20% 1 hari Lambung Intestinal Limpa Ginjal 1 1 2 2 1 1 1 1 0 0 2 1
hepar testis 2 1 2 1 1 0 Madu20% 3 hari Lambung Intestinal Limpa Ginjal hepar testis 1 1 1 Tt Tt 1 1 2 1 Tt Tt 1 0 0 0 Tt Tt 0 Madu20% 7 hari Lambung Intestinal Limpa Ginjal hepar testis 1 1 Tt Tt 1 tt 1 1 Tt Tt 1 tt 0 0 Tt Tt 0 Tt
Keterangan Tt=tidak ditemukan
Neutral-buffered formalin (NBF) 10% telah menjadi standar baku emas untuk fiksasi pada laboratorium patologi anatomi selama puluhan tahun (DeJarnatt and Criswell, 2021). Formalin dipilih karena murah, mudah disiapkan, memiliki pH mendekati netral dan sifatnya stabil (terutama jika dalam bentuk buffered). Formalin mampu memudahkan pemotongan jaringan,  pewarnaan  lemak  dan  enzim  serta  tidak  menyebabkan  pengerasan  berlebihan pada jaringan (Khristian dan Inderiati, 2017).
Pemakaian madu yang sudah diencerkan menjadi 10%, 15%, dan20% sebagai fiksatif semuanya  tidak  menunjukkan  hasil  yang  sempurna  seperti  halnya  NBF  10%.  Penelitian Avwioro dkk (2010) memberikan hasil yang membuktikan bahwa selain sifat antibiotiknya, madu juga mampu mengeraskan jaringan serta mencegah autolisis dan pembusukan, tetapi hal  ini  tergantung  dari  konsentrasi  madu  yang  digunakan,  serta  bukti  jaringan  secara mikroskopis belum dibuktikan.Penelitian sebelumnya juga tidak menyebutkan  secara jelas jenis madu yang dipakai. Udonkang pada penelitiannya menyebutkan bahwa sifat fiksasi madu dapat dikaitkan pada beberapa faktor salah satunya keasaman pH (Udonkang dkk., 2018).  Madu  memiliki  sifat  anti-bakteri  yang  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  yang dimilikinya,  seperti  aktivitas  air  yang  sedikit,  kandungan  hidrogen  peroksida,  keasaman, faktor  fitokimia  dan  faktor  senyawa  organik  non-peroksida  (Werang,  2018). Berdasarkan kandungan diatas kemungkinan madu dapat dipakai sebagai fiksatif, tetapi jika madu itu diencerkan  maka  akan  banyak  kandungan  air.  Kandungan  air  yang  lebih  banyak  dari jaringan yang fiksasi akan menimbukan akibat pada jaringan itu misalnya terjadi difusi air
ke sel atau jaringan menyebabkan berubahnya struktur sel misalnya bengkak atau dapat menjadi lisis. Madu yang diencerkan dapat menjadi hipotonis terhadap sel sehingga sel akan bengkak dan lisis. Hal ini terbukti ketika jaringan hati dan ginjal dimasukkan kedalam larutan Madu  10%  15%  dan  20%  terlihat  warna  merah  pada  larutan  madu  tersebut.    Hidrogen peroksida  dalam  madu  yang  bersifat  antibakteri  yang  mencegah  terjadinya  nekrosis jaringan akibat mikroba. Meskipun demikian Madu yang diencerkan menjadi konsentrasi diatas justru akan menjadi media bakteri atau jamur sehingga akan menggangu jaringan yang difiksasi.. Hal ini dibuktikan dengan keruhnya larutan madu setelah 3 hari dan 7 hari karena  tumbuhnya bakteri.  Keruhnya  larutan madu selain bakteri  juga disebabkan  oleh karena lisisnya jaringan sehingga pada pemeriksaan mikroskopis tidak ditemukan sebagian organ.  Penelitian  ini  tidak  menambahkan  Kristal  tymol  seperti  yang  dilakukan  dalam penelitiannya guna mencegah pertumbuhan jamur pada fiksatif madu.
Berdasarkan pengamatan ketika berlangsung fiksasi hari ke 3 pada jaringan intestinal terjadi  gelembung-gelembung udara pada larutan madu. Hal ini dapat disebabkan oleh adanya kuman yang berasal dari kotoran di intestinal, meskipun organ tersebut telah dicuci dengan  NaCl  fisiologis  berkali-kali.  Berdasarkan  pengalaman  itu  maka  untuk  penelitian selanjutnya perlu dipertimbangkan kesterilan dari jaringan ataupun madu sebagai fiksatif. Perlu dilakukan kontrol dahulu untuk  membuktikan bahwa madu yang diencerkan bukan menjadi media mertumbuhan kuman dan jamur.

## SIMPULAN
Penggunaan madu 10, 15, dan 20% sebagai fiksatif dengan perendaman 1 hari, 3 hari dan 7 hari dari gambarab inti sel, sitoplasma dan kerusakan sel  rata-rata menghasilkan skor dibawah NBF 10%.

## DAFTAR PUSTAKA
Ainun  JF,  KSyamsu  R,  Andi  SFA,  Indah  LDK,Fendy  D,  Pengaruh  Pemberian  Madu  dari Lebah (Apis Mellifera) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia Coli, Fakumi Medical Journal, Vol.2 No.10 (Oktober,  2022): E-ISSN: 2808-9146
Arumsari A, Herawati D, Afriza M , uji aktivitas antibakteri beberapa jenis madu terhadap Pseudomonas aeruginosa DAN Staphylococcus aureus dengan metode difusi agar, Jurnal Ilmiah Farmasi Farmasyifa Volume 2 No 1 halaman 26 – 32
Bancroft  JD  dan  Gamble  M.  2019. Theory  and  Practice  of  Histological  Techniques: Immunohistochemical Techniques. United State: Churchill Livingstone Elsevier Brilian, T. V. (2021). Mikroskopis Jaringan Ginjal Mencit ( Mus Musculus ) yang Difiksasi
dengan Madu Konsentrasi 10 % Selama 24 Jam. Jurnal   Laboratorium Medis,
03(02), 127 – 133.
Khristian E & Inderiati D., 2017. Sitohistoteknologi. Pusat pendidikan sumber daya manusia kesehatan. Jakarta
Maimunah s, Supartiningsih, Marpaung JK,Cinthya Eriwaty Silalahi, cha
Wahyuni Turnip, Uji Aktivitas madu hitam terhadap Bakteri Bacllus cereus, Faemanesia Vol. 8, No. 1, 06/2021
Udonkang,  M.,  Ubi,  K.,  Inyang,  I.  2018. International  Journal  of  Medical  Laboratory Research. https://doi.org/10.35503/IJMLR.2018.0303.