## Jumlah Bakteri Pseudomonad fluoresen Isolat Cas dalam Berbagai Formula Media Tumbuh
Devi Aprillia Sary 1 , Linda Advinda *1 1,2 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negri Padang Jl. Prof.Dr. Hamka, Padang 60111 Indonesia e-mail korespondensi: linda_advinda@yahoo.com

## ABSTRACT
Fluorescent  pseudomonad  is  a  biological  agent  that  can  be  used  as  a  controlling  plant  disease, increasing plant growth and phosphate availability for plants, as well as producing compounds that are signals  for  plants  to  produce  secondary  metabolites  that  are  antimicrobial.    Pseudomonad  fluorescent can  be  grown  in  various  growing  media.  The  purpose  of  the  study  was  to  find  out  the  number  of pseudomonad  fluorescent  bacteria  in  Cas  isolates  grown  in  various  formulas.  This  research  is  an experimental study. The design used complete random design (RAL) with 5 treatments and 3 replays. The treatment is formula M1 (molasses 10 g/L+ ZA 5 g/L), M2 (molasses 10 g/L+ ZA 10 g/L), M3 (molasses 5 g/L+  ZA  5  g/L),  M4  (molasses  5  g/L+  ZA  10  g/L),  and  M5  (NB  8 g/).  The  data  obtained  was  analyzed with  Anova  and  DNMRT advanced  tests  at  a  real  rate  of  5%.  The  results  showed  that  pseudomonad fluorescent isolate Cas grown in formula M3 ( molasses 5g/L + ZA 5 g/L) produced the highest number of bacteria which is 118.3 x 10 8 while the lowest number of bacteria in formula M5 ( NB 8g/L) is 9.76 x 10 8 cfu/mL.
Keywords : Fluorescent pseudomonad, Formula, The Number of Bacteria, Molasses, ZA

## ABSTRAK
Pseudomonad  fluoresen  merupakan  agen  hayati  yang  dapat  digunakan  sebagai  pengendali  penyakit tanaman,  meningkatkan  pertumbuhan  tanaman  dan  ketersediaan  fosfat  bagi  tanaman,  serta menghasilkan  senyawa  yang  merupakan  sinyal  bagi  tanaman  untuk  memproduksi  metabolit  sekunder yang  bersifat  antimikroba.  Pseudomonad  fluoresen  dapat  ditumbuhkan  dalam  berbagai  media  tumbuh. Tujuan penelitian untuk mengetahui jumlah bakteri Pseudomonad fluoresen isolat Cas yang ditumbuhkan dalam  berbagai  formula.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen.  Rancangan  yang  digunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan tersebut adalah formula M1(molase  10  g/L+  ZA  5  g/L),  M2  (molase  10  g/L+  ZA  10  g/L),  M3  (molase  5  g/L+  ZA  5  g/L),  M4 (molase  5  g/L+  ZA  10  g/L),  dan  M5  (NB  8  g/).  Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  Anova  dan  uji lanjut DNMRT pada taraf nyata 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Pseudomonad fluoresen isolat Cas  yang  ditumbuhkan  pada  formula  M3  (  molase  5g/L  +  ZA  5  g/L  )  menghasilkan  jumlah  bakteri tertinggi yaitu 118,3 x 10 8 , sedangkan jumlah bakteri  terendah pada formula M5 ( NB 8g/L) yaitu 9,76 x 10 8 cfu/mL .
Kata Kunci : Pseudomonad Fluoresen, Formula, Jumlah Bakteri, Molase, Za
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-Sharealike 4.0 International License
SYMBIOTIC: Journal of Biological Education and Science Journal homepage: http://symbiotic.ftik-iainkerinci.ac.id/index.php/symbiotic
Published by: Jurusan Tadris Biologi, FTIK, IAIN Kerinci, Indonesia .
E-ISSN: 2721-8988  P-ISSN: 2721-8600

## PENDAHULUAN
Pseudomonad  fluoresen merupakan  agen  hayati  yang  dapat  digunakan  sebagai  pengendali penyakit  tanaman.  Advinda et  al .,  (2013)  menyatakan,  disamping  dapat  mengendalikan  penyakit tanaman, Pseudomonad  fluoresen dapat  meningkatkan  pertumbuhan  tanaman,  meningkatkan ketersediaan  fosfat  bagi  tanaman,  dan  menghasilkan  senyawa  yang  merupakan  sinyal  bagi  tanaman untuk memproduksi metabolit sekunder yang bersifat antimikroba (fitoaleksin).
Pseudomonad fluoresen mampu menghasilkan enzim kitinase, siderofor dan antimikroba yang dapat  menghambat  pertumbuhan  patogen  (Jatnika et  al .,  2013).  Produksi  dari  senyawa  antimikroba dapat  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor,  diantaranya  media  tumbuh.  Pertumbuhan Pseudomonad fluoresen sebagai  agen  hayati  dipengaruhi  oleh  komposisi  nutrisi  yang  terkandung  dalam  media tumbuh (Advinda et al ., 2018). Di dalam media tumbuh terdapat sumber karbon yang berbeda-beda, dan akan mempengaruhi pertumbuhan serta aktivitas antagonis suatu agen hayati (Addy, 2008).
Penelitian  yang  berkembang  saat  ini  tentang  perbanyakan Pseudomonad  fluoresen secara massal,  masih  menggunakan  media  padat  dalam  cawan  petri.  Bahan  dasar  media  ini  dibuat  oleh pabrik- pabrik sedemikian rupa sehingga harganya cukup mahal. Pseudomonad fluoresen yang masih berada dalam cawan petri tidak mempunyai masa simpan yang panjang. Disamping itu, untuk aplikasi Pseudomonad  fluoresen dalam  jumlah  banyak  mengalami  kesulitan  karena  harus  menunggu perbanyakan  dari  laboratorium  terlebih  dahulu.  Berdasarkan  hal  tersebut Pseudomonad  fluoresen harus diproduksi dalam bahan pembawa tertentu, agar mudah diaplikasi, disimpan, dikomersilkan dan digunakan di lapangan (Advinda et al ., 2020).
Molase  adalah  salah  satu  bahan  pembawa  yang  dapat  digunakan  untuk  menumbuhkan pseudomonad  fluoresen.  Menurut  Advinda et  al .,  (2020)  jumlah  bakteri  terbanyak  ditemukan  pada medium molase setelah 2 minggu inkubasi. Disamping molase, perbanyakan Pseudomonad fluoresen juga  dapat  menggunakan  air  kelapa,  alginat  dan  tepung  tapioka.  Molase  sering  dijadikan  bahan alternatif  sebagai  sumber  karbon  dalam  media  fermentasi  karena  molase  mengandung  nutrisi  yang cukup  tinggi  untuk  kebutuhan  bakteri.  Pramana  (2006)  menyatakan  molase  merupakan  hasil sampingan  dari  pembuataan  gula  tebu,  dan  masih  mengandung  gula  48-56%  dengan  kandungan sukrosa 30-40% serta glukosa 4-9% .
Pupuk  ZA  (Amonium  sulfat)  dapat  ditambahkan  ke  dalam  media  tumbuh  bakteri  untuk memenuhi kebutuhan nitrogen. Menurut Sumantha et al., (2006), nitrogen merupakan faktor penting yang  mempengaruhi  pertumbuhan  mikroorganisme  dan  sangat  diperlukan  dalam  pertumbuhan  sel. Nitrogen adalah unsur hara utama untuk pertumbuhan yang berperan untuk menyusun protein.
Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas  merupakan  salah  satu  agen  hayati  yang  memiliki kemampuan sebagai penghasil senyawa antimikroba, dan mempunyai sifat antagonis terhadap patogen (Advinda et al ., 2018). Penelitian ini melaporkan tentang jumlah bakteri Pseudomonad fluoresen isolat Cas yang ditumbuhkan dalam berbagai formula media tumbuh.

## METODE
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  ialah petridish , beaker  glas s,  tabung  reaksi,  rak tabung  reaksi,  batang  pengaduk,  spatula,  pinset,  gelas  ukur,  kompor  listrik,  lampu  spritus, vortex , setrifus, timbangan digital, waterbath , mikropipet, tip, jarum ose, erlenmeyer , oven, shaker , autoclave , kertas label, spidol, plastik wrap, gelas ukur, alumunium foil, kertas cakram, kamera digital, alat alat tulis,  dan  botol  balsem  100  mL.  Bahan  yang  diperlukan  adalah Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas (koleksi Advinda), medium NA, medium NB, molase, sukrosa, ZA, dan akuades steril.
Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimen. Isolat yang digunakan adalah Pseudomonad fluoresen isolat Cas. Perlakuan terdiri dari formula M1 (molase 10 g/L + ZA 5 g/L), M2 (molase 10 g/L + ZA 10 g/L), M3 (molase 5 g/L + ZA 5 g/L), M4 (molase 5 g/L + ZA 10 g/L), dan M5 (NB 8 g/L). Pengamatan dilakukan terhadap jumlah bakteri yang tumbuh dalam setiap formula. Penelitian ini dilaksanakan di Laboraturium Fisiologi Tumbuhan Jurusan Biologi FMIPA UNP.

## Peremajaan dan Perbanyakan Pseudomonad Fluoresen
Pseudomonad fluoresen isolat Cas diremajakan dalam cawan petri pada medium NA dengan metode  gores,  dan  diinkubasi  selama  2  x  24  jam.  Selanjutnya,  perbanyakan  inokulum  dilakukan dengan mengambil satu ose biakan murni dalam petri, kemudian dibiakkan dalam 25 mL medium NB, dan dishaker selama 24 jam dengan kecepatan 100 rpm.

## Perbanyakan Inokulum dalam Formula
Untuk  membuat  kepadatan  populasi  bakteri  3x10 8 cfu/mL  (skala  1  Mc.Farland’s)  dilakukan dengan cara mengambil suspensi Pseudomonad fluoresen isolat Cas sebanyak 1 mL, dimasukkan ke dalam  9  mL  akuades  steril,  kemudian  dibandingkan  dengan  skala  1  Mc.Farland’s  yang  sudah  ada. Mengambil  masing-masing  1  mL  suspensi,  dan  memasukkan  ke  dalam  setiap  formula  yang  telah dipersiapkan. Kemudian dishaker selama 2 x 24 jam dengan kecepatan 100 rpm.

## Jumlah Bakteri
Suspensi Pseudomonad  fluoresen yang  ada  dalam  setiap  formula,  diambil  sebanyak  1  mL (skala  1  Mc.Farland’s),  kemudian  memasukkannya  ke  dalam  petri  steril.  Selanjutnya  dituangkan medium  NA  ke  dalam  petri  tersebut,  dan  dihomogenkan  dengan  cara  memutar  petri  seperti  angka delapan. Inkubasi dilakukan selama 2 x 24 jam.
Jumlah  bakteri Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas  dihitung  dengan  menghitung bakteri  yang tumbuh  setelah  diinkubasi  selama  2  x  24  jam.  Jumlah  koloni  yang  tumbuh  dihitung  setelah  masa inkubasi dengan menggunakan rumus Klement et al ., (1990) sebagai berikut:
JB = A  x B JB = jumlah bakteri per Ml A  =  jumlah koloni bakteri B  =  faktor pengenceran

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  didapatkan  data  rata  rata  jumlah  bakteri.  Hasil  analisis  ragam menunjukkan  bahwa  pemberian  konsentrasi  molase  dengan  Za  yang  berbeda  tidak  berpengaruh terhadap jumlah bakteri Pseudomonad fluoresen isolate Cas (Tabel 1.).
Tabel  1. Rata-rata  jumlah  bakteri Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas  yang  ditumbuhkan  dalam berbagai formula.
No Formula Jumlah Bakteri (cfu/mL) 1. M1 (Molase 10 g/L + ZA 5 g/L) 41,6 x 10 8 2. M2 (Molase 10 g/L + ZA 10 g/L) 70 x 10 8 3. M3 (Molase 5 g/L + ZA 5 g/L) 118,3 x 10 8 4. M4 (Molase 5 g/L + ZA 10 g/L) 47 x 10 8 5 M5 (NB 8 g/L) 9,76 x 10 8
Untuk lebih jelasnya, jumlah bakteri yang tumbuh pada setiap formula dapt dilihat Gambar 1.
Gambar 1. Jumlah bakteri dalam formula M1, M2, M3, M4, dan M5.

## Pembahasan
Jumlah  bakteri Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas  tertinggi  dihasilkan  pada  formula  media tumbuh M3 (Molase 5 g/L + ZA 5 g/L) yaitu 118,3 x 10 8 cfu/mL, dan yang terendah M5 (NB 8 g/L) yaitu  9,76  x  10 8 cfu/mL.  Namun  setelah  data  dianalisis  secara  statistik,  terlihat    jumlah  bakteri Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas  yang  ditumbuhkan  dalam  berbagai  formula  tidak  berbeda  nyata. Kelima  formula  dapat  menumbuhkan Pseudomonad  fluoresen isolat  Cas  dengan  baik.  Perbanyakan bakteri  dengan  menggunakan  kombinasi  antara  molase  (sebagai  sumber  karbon)  dan  ZA  (sebagai sumber nitrogen) dapat digunakan untuk pertumbuhan pseudomonad fluoresen, walaupun konsentrasi pemberian  molase  dengan  ZA  berbeda  antara  yang  satu  dengan  lainnya.  Ashnaei et  al .,  (2008) melaporkan  formula  molase  dan  urea  (sebagai  sumber  nitrogen)  juga  dapat  memperbanyak Pseudomonad fluoresen P-5 dan Pseudomonad fluoresen P-6.
Pertumbuhan Acetobacter  xylinum dalam  pembuatan  nata  membutuhkan  sumber  nitrogen berupa  ZA.  Untuk  meningkatkan  polisakarida  yang  terbentuk,  diperlukan  peningkatan  ZA  yang
ditambahkan  pada  medium  tumbuh  bakteri  ini.  ZA  sebagai  sumber  nitrogen  merupakan  faktor  yang dapat  merangsang  pertumbuhan A.  xylinum sehingga  jumlah  bakteripun  meningkat.  Konsentrasi  ZA 0,8%  dalam  medium tumbuh  mampu meningkatkan  jumlah  bakteri A.  xylinum hingga 11,27  cfu/mL (Rossi  dkk,  2008).  Menurut  Patria et  al .,  (2013)  konsentrasi  ZA  0,7%  menghasilkan nata  de  soya paling tebal. Lapisan selulosa pada nata merupakan hasil sekresi sel bakteri A. xylinum.

## KESIMPULAN
Formula  media  tumbuh  M3  (Molase  5  g/L  +  ZA  5  g/L)  menghasilkan  jumlah  bakteri Pseudomonad fluoresen isolat Cas tertinggi yaitu 118,3 x 10 8 cfu/mL, dan yang terendah M5 (NB 8 g/L) yaitu 9,76 x 10 8 cfu/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  diucapkan  kepada  ibu  Dr.  Linda  Advinda,  M.  Kes.  yang  telah  membimbing dalam penelitian ini dan juga kepada semua pihak yang telah membantu kelancaran penelitian.

## DAFTAR RUJUKAN
Addy,  H.  S.  (2008).  Pengaruh  Sumber  Karbon  Terhadap  Daya  Antagonistik  Bakteri  Psudomonas Pendar-fluor Terhadap Erwinia carotovora . Jurnal Pengendalian Hayati . Vol 1(12-16).
Advinda,  L.,  Fifendy,   M.,  Anhar,  A. (2018).  The  Addition  of  Several Mineral Sources  on  Growing Media of Fluorescent Pseudomonad for the Biosynthesis of Hydrogen Cyanide. IOP Conf . Ser .: Mater . Sci . Eng . 335 012016.
Advinda, L., Fifendy, M., dan Iryani. (2013). Penyimpanan Bakteri Pseudomonad Berfluoresensi Pada Beberapa  Bahan  Pembawa  dan  Uji  Potensinya  Sebagai  Pengendali Blood  Disease  Bacteria (BDB)  Tanaman  Pisang.  Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan    Alam.  Padang  : Universitas Negeri Padang.
Advinda,  L.,  Fifendy,  M.,  Irdawati,  dan  Anhar,  A.(2020).  The  Utilization  of  Coconut  Water  and Molasses  as  Fluorescent  Pseudomonad  Propagation  Medium. International  Journal  of Progressive Sciences and Technologies (IJPSAT) , 19 (2): 25-28.
Afreen, S. S. dan Lokeshappa B. (2014). Production of Bacterial Cellulose from Acetobacter xylinum using Fruit Wastes as Substrate. The Internasional Journal of Science and Technoledge , 2(8):57- 64.
Jatnika,  Wiwik.  Abadi,  Abdul  Latief.  Aini,  Luqman  Qurata.  (2013).  Pengaruh  Aplikasi Bacillus sp. dan Pseudomonas sp.  Terhadap  Perkembangan  Penyakit  Bulai  Yang  Disebabkan  Oleh  Jamur Patogen Peronosclerospora Maydis Pada Tanaman Jagung. Jurnal HPT .Vol 1(4).
Klement, Z., Rudolph, K., and Sands, D.C. (1990). Methods in Phytobacteriology. Akademia Kiado. Budapest.
Patria,  A.,  Muzaifa,  M.,  dan  Zurrahma.  (2013).  Pengaruh  penambahan  gula  dan  amonium  sulfat terhadap kualitas nata de soya . Jurnal Teknologi dan Industri Pertanian Indonesia . Vol.  5(3): 1- 5.
Pramana. (2006). Potensi molases di Indonesia Beserta Klasifikasi Penggunaannya. Bandung: Pustaka Karya.
Purwaningsih, S., Salamah, E., dan Setiani, A. (2007). Pengaruh Konsentrasi Sukrosa dan Ammonium Sulfat terhadap Mutu Nata Gracilaria Sp. Buletin Teknologi Pertanian , X (2): 30-36.
Rossi, E., Pato, U., dan Damanik, S. R. (2008). Optimalisasi Pemberian Ammonium Sulfat terhadap Produksi Nata de Banana Skin. Sagu. 7 (2): 30-36.
Sumantha, A., C. Larroche, dan A.Pandey. (2006). Microbiology and Industrial of foodgrade protease : A Perspectiv. Food.Tecnology, Bioteknology .44,2, 211-220.