## ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST OF EXSTRACTS AND FRACTIONS OF ASCIDIAN Herdmania momus FROM BANGKA ISLAND WATERS LIKUPANG AGAINST THE
GROWTH OF Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, AND Candida albicans
UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI EKSTRAK DAN FRAKSI ASCIDIAN Herdmania momus DARI PERAIRAN PULAU BANGKA LIKUPANG TERHADAP PERTUMBUHAN MIKROBA Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium DAN Candida albicans
Novira Vita Wendersteyt 1) , Defny S Wewengkang 1) , Surya Sumantri Abdullah 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *nwendersteyt@gmail.com

## ABSTRACT
Ascidian is one of the components of coral reefs known as a potential source of exploration for the search for new bioactive compounds as potential drugs for the pharmaceutical world. This study aims to determine the antimicrobial activity of the extracts and fractions of Ascidian Herdmania momus collected from the waters of  Bangka  Island  Likupang  against  the  microbial  growth  of  Staphylococcus  aureus,  Salmonella typhimurium,  and  Candida  albicans.  Samples  were  extracted  by  maceration  using  ethanol  and  then fractionated using n-hexane, chloroform and methanol solvent, respectively. Antimicrobial activity test was carried  out  by  agar  diffusion  method  (Kirby  and  Bauer).  The  results  showed  that  the  ethanol  extract,  n- hexane  fraction,  chloroform  fraction,  and  methanol  fraction  were  not  active  in  inhibiting  the  growth  of Staphylococcus  aureus  and  Salmonella  typhimurium  but  were  quite  active  in  inhibiting  the  growth  of Candida albicans in the chloroform and methanol fraction based on the Davis and Stout category.
Keywords :  Ascidian  Herdmania  momus,  antimicrobial  activity,  Staphylococcus  aureus,  Salmonella typhimurium, Candida albicans

## ABSTRAK
Ascidian  merupakan  salah  satu  biota  penyusun  terumbu  karang  yang  diketahui  berpotensi  sebagai  sumber eksplorasi pencarian senyawa bioaktif baru sebagai calon obat untuk dunia Farmasi. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak  dan  fraksi  Ascidian Herdmania  momus yang  diambil dari  perairan  Pulau  Bangka  Likupang  terhadap  pertumbuhan  mikroba Staphylococcus  aureus , Salmonella typhimurium , dan Candida albicans . Sampel diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan pelarut Etanol. Fraksinasi  menggunakan  pelarut  n-Heksan,  Kloroform  dan  Metanol.  Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan dengan metode difusi agar (Kirby dan Bauer). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak Etanol, fraksi n- Heksan,  fraksi  Kloroform,  dan  Fraksi  Metanol  tidak  efektif  menghambat  pertumbuhan  mikroba Staphylococcus  aureus dan Salmonella  typhimurium namun  cukup  efektif  menghambat  pertumbuhan mikroba Candida  albicans pada  fraksi  Kloroform  dan  Metanol  dengan  kategori  sedang  berdasarkan  teori Davis dan Stout .
Kata  Kunci :  Ascidian Herdmania  momus ,  aktivitas  antimikroba, Staphylococcus  aureus , Salmonella typhimurium , Candida albicans

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara yang memiliki  kekayaan  dan  keanekaragaman  sumber daya  alam  melimpah  khususnya  keanekaragaman hayati  laut  (Marzuki,  2018).  Keanekaragaman hayati  laut  juga  mempunyai  arti  keanekaragaman senyawa kimia yang terkandung dalam organisme laut sehingga memberi peluang untuk memanfaatkan  senyawa-senyawa  aktif  dari  biota laut  sebagai  sumber  pengobatan  (Dahuri,  2001). Terdapat beberapa biota laut yang diketahui dapat menghasilkan  bahan  yang  memiliki  aktivitas biologis  di  antaranya  yaitu  bryozoa,  spons, moluska dan ascidian (Proksch et al., 2002).
Ascidian  termasuk  ke  dalam  kelompok hewan  invertebrata  di  ekosistem  terumbu  karang yang  banyak  menghasilkan  senyawa  bioaktif. Senyawa  bioaktif  ascidian  berfungsi  sebagai pertahanan diri dan juga berfungsi bagi kehidupan manusia,  yaitu  sebagai  antikanker,  antiinflamasi, dan antimikroba (Khoeri, 2009). Senyawa bioaktif yang disintesis oleh ascidian merupakan metabolit sekunder, yaitu metabolit turunan secara biosintetik  dari  metabolit  primer  yang  digunakan dalam  sistem  pertahanan  diri,  yaitu  untuk mempertahankan hidup dan menghindari gangguan  dari  organisme  lain  di  lingkungan tempat hidupnya (Sumilat et al., 2018).
Penelitian terhadap aktivitas suatu senyawa  sebagai  antimikroba  merupakan  suatu langkah  awal  untuk  mengetahui  kegunaan senyawa tersebut. Adanya senyawa aktif antimikroba  di  bidang  kesehatan  merupakan informasi  penting  untuk  penanggulangan  suatu penyakit yang disebabkan oleh mikroba (Dwijendra et al ., 2014).
Antimikroba  merupakan  zat-zat  kimia yang  memiliki  khasiat  atau  kemampuan  untuk mematikan/menghambat pertumbuhan kuman sedangkan  toksisitas  terhadap  manusia  relatif kecil.  Antimikroba  merupakan  suatu  zat  kimia yang  diperoleh/dibentuk  dan  dihasilkan  oleh mikroorganisme yang mempunyai daya penghambatan  aktivitas  mikororganisme  lain meskipun dalam jumlah sedikit (Waluyo, 2005).
Berdasarkan  penelusuran  pustaka  di  atas, maka peneliti tertarik untuk melakukan penelitian aktivitas  antimikroba  dari  ascidian Herdmania momus yang terdapat di Teluk Manado.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Pengambilan  sampel  dilakukan  di  perairan  Pulau Bangka, Kecamatan Likupang, Kabupaten Minahasa Utara. Sedangkan preparasi sampel dan pengujian  dilakukan  di  Laboratorium  Farmasi
Lanjut, Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  pada  bulan November 2019 hingga Juni 2020.

## Alat dan Bahan Alat
Scuba  diving ,  ziplok,  gunting,  sarung tangan, botol air kemasan 600 mL, pisau, telenan, corong  pisah,  corong  gelas,  wadah  kaca, erlenmeyer,  gelas  ukur,  gelas  kimia,  tabung reaksi, rak tabung reaksi, micro tubes , cawan petri, timbangan  analitik, vortex ,  spatula,oven,  pinset, batang  pengaduk,  pembakar  spritus,  pipet  tetesl, lemari  pendingin, incubatorincucell , laminary  air flow ,  autoklaf  (autoklaf  KT-30S),  mikropipet, jangka  sorong, digital  caliper ,  jas  laboratorium, kamera,  kertas  label,  spidol  permanen,  kertas saring, kapas, aluminium foil dan tissue, pot salep. Bahan
Herdmania momus, Staphylococcus aureus, Salmonella thypimurium, Candida albicans, aquades,  etanol,  n-Heksan,  kloroform, metanol, pepton, ekstrak, natrium klorida, nutrient agar dan kloramfenikol.

## Prosedur Penelitian Pengambilan dan Preparasi Sampel
Sampel  Ascidian Herdmania  momus diperoleh dari perairan Pulau Bangka, Kecamatan Likupang  Timur,  Kabupaten  Minahasa  Utara. Sampel  diambil  dengan  menggunakan  alat  bantu, kemudian difoto dan dimasukkan dalam zipperbag dan diberikan label. Sampel yang telah didapat dibersihkan dari pengotor dengan menggunakan  air  laut,  dan  dimasukan  kedalam kotak pendingin ( cool box ) yang berisi es batu dan tidak  terkena  sinar  matahari  secara  langsung  lalu di  bawah  ke  Laboratorium  Farmakognosi  dan Fitokimia Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.

## Ekstraksi
Sampel  Ascidian Herdmania  momus 130 gram diekstraksi  dengan  menggunakan  cara maserasi.  Sampel  dipotong  kecil-kecil  dengan ukuran  ±1  cm²  kemudian  dimasukan  kedalam botol  dan  direndam  dengan  menggunakan  larutan etanol  96%.  Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan cara  merendam  sampel  dengan  larutan  penyari selama 3 kali 24 jam pada temperatur kamar yang dilindungi  dari  cahaya  dan  sesekali  dikocok. Kemudian  hasil  ekstraksi  disaring  dan  diambil filtratnya dan residu diremaserasi sebanyak 2 kali. Setelah  proses  ekstraksi  menghasilkan  3  filtrat yang  kemudian  dicampur  menjadi  satu  dan
pisahkan dari residu. Filtrat kemudian dievaporasi dengan menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh  ekstrak  kasar  Ascidian  kemudian ditimbang.  Selanjutnya  ekstrak  etanol  Ascidian digunakan  dalam  fraksinasi  dan  pengujian antimikroba.

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak Herdmania momus sebanyak 5,03 gram dimasukkan kedalam Erlenmeyer, kemudian dilarutkan  dengan  metanol  80%  sebanyak  100 mL.  Setelah  larut,  dimasukan  kedalam  corong pisah dan ditambahkan pelarut n-heksan sebanyak 100  mL.  Setelah  itu  dikocok  sampai  homogen. Dibiarkan  hingga  terbentuk  lapisan  metanol  dan lapisan n-heksan. Masing-masing lapisan ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan n- heksan  selanjutnya  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang dan  diperoleh  fraksi  n-heksan  sebanyak  0,21 gram.
Selanjutnya  lapisan  metanol  ditambahkan akuades  100  mL,  dipartisi  dengan  pelarut kloroform  dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam corong pisah dikocok sampai homogen. Dibiarkan hingga  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan metanol  dan  lapisan  kloroform.  Masing-masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering lalu  ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  kloroform sebanyak 0,12 gram.  Lapisan metanol dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering lalu  ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  metanol sebanyak  4,32.  Ketiga  fraksi  yang  diperoleh digunakan  dalam  pengujian  antimikroba  dan dihitung nilai rendemen dari masing-masing fraksi dengan persamaan:
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑥 100%

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antimikroba  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit, pinset dibakar dengan  pembakaran  di  atas  api  langsung  dan media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair
Ditimbang  Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging 0,3  g  ( beef  extract ),  Natrium  klorida  0,3  g dilarutkan  dalam  aquades  sebanyak  100  mL menggunakan Erlenmeyer, dikocok sampai homogen.  Media  yang  telah  homogen  kemudian
disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf  pada suhu 121˚C selama 15 menit. Dipipet 1 mL media cair, kemudian masukkan dalam tabung reaksi dan tutup  dengan  aluminium  foil.  Media  cair  siap digunakan  sebagai  media  kultur  mikroba  (Ortez, 2005).

## Kultur Mikroba
Masing  –  masing  mikroba  yang  sudah dikultur  ( Staphylococcus  aureus,  Salmonella typhimurium , dan Candida albicans ) ditambahkan sebanyak  100  µL kedalam masing-masing tabung reaksi yang sudah diisi media cair sebanyak 1 mL. Masing-masing   tabung   reaksi   ditutup dengan aluminium      foil dan  dimasukkan  kedalam inkubator selama 1x24 jam dengan suhu 37 oC.

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian  aktivitas antimikroba  ini  menggunakan  kloramfenikol paper disc . Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian  ini  menggunakan  metanol  untuk menguji  apakah  pelarut  metanol  memberikan pengaruh  terhadap  aktivitas  daya  hambat  atau digunakan sebagai pembanding.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara melarutkan ekstrak  etanol Herdmania momus sebanyak  1  mg ke dalam metanol 200  μL sehingga menghasilkan konsentrasi  larutan  uji  sebesar  250  μg/50  μL. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  untuk  fraksi  n- Heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar
Pepton 0,5 g, ekstrak daging ( beef extract ) 0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g, nutrient  agar 1,5  g dan  dilarutkan  dalam  akuades  sebanyak  100  mL menggunakan Erlenmeyer, dikocok sampai homogen.  Media  yang  telah  homogen  kemudian disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf  pada suhu  121˚C  selama  15  menit.  Media  agar  siap digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc  diffusion  Kirby and Bauer ). Pada pengujian aktivitas antimikroba digunakan  kertas  cakram  yang  berukuran  6  mm dengan  daya  serap  50  μL  tiap  cakram.  Suspensi mikroba kemudian diinokulasikan ke dalam media dan  dihomogenkan.  Kemudian  media  yang  telah diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke  dalam  cawan petri  sebanyak  100  mL  dan  ditunggu  hingga
media  mengeras.  Sampel  yang  telah  ditentukan konsentrasinya  (250  μg/50  μL)  ditotolkan  pada masing-masing  cakram  dengan  menggunakan mikropipet.  Masing-masing  cawan  petri  diberi label  dan  nomor  sampel  yang  sesuai.  Kertas cakram yang telah ditotolkan sampel uji Ascidian Herdmania  momus diletakkan  ke  dalam  cawan petri  dengan pinset  lalu  diinkubasi selama  1  x  24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran  cakram menunjukkan kepekaan mikroba terhadap antibiotik atau bahan antimikroba yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan diameter  zona  bening.  Diameter  zona  bening diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakkan  jangka  sorong.  Kemudian  zona bening yang telah diukur, dibandingkan berdasarkan pedoman Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  Ascidian Herdmania  momus yang  diambil  dari  Perairan  Pulau  Bangka, Kecamatan  Likupang  Timur,  Minahasa  Utara, Sulawesi  Utara.  Sampel  diambil  menggunakan alat  bantu Scuba  Diving .  Sampel  lalu  dibersikan kemudian  dipotong  kecil-kecil.  Sampel  dipotong kecil-kecil  dengan  tujuan  untuk  memperbesar ukuran  permukaan  sampel  karena  semakin  luas permukaan  sampel  maka  interaksi  antara  sampel dan  pelarut  semakin  besar  sehingga  proses ekstraksi  berjalan  optimal  (Ncube et  al .,  2008). Sampel kemudian diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi.  Metode ekstraksi secara maserasi dipilih karena cara pengerjaan dan peralatannya  yang  sederhana,  tidak  menggunakan pemanasan  sehingga  dapat  mencegah  terjadinya penguraian  zat  aktif  yang  terkandung  dalam sampel  akibat  pengaruh  suhu  dan  senyawa  yang tidak  tahan  pemanasan  (Sa’adah et  al .,  2015). Metode  maserasi  sangat  menguntungkan  dalam isolasi  senyawa  bahan  alam  maupun  bahan  laut karena  dengan  perendaman  sampel,  terjadi pemecahan  dinding  sel  akibat  adanya  perbedaan tekanan didalam dan diluar sel sehingga metabolit sekunder  dalam  sitoplasma  larut  dalam  pelarut organik  dan  ekstraksi  senyawa  akan  sempurna (Lenny,  2006).  Proses  maserasi  dilakukan  3x24 jam  dengan  dua  kali  remaserasi  atau  pergantian pelarut  baru  yang  bertujuan  agar  senyawa  yang terdapat  didalam  sampel  dapat  terekstrak  secara menyeluruh. Proses maserasi dilakukan berulangkali  dengan  jumlah  pelarut  yang  lebih kecil, lebih  efisien  dibandingkan  dilakukan  sekali
dengan  jumlah  pelarut  yang  banyak  (Khopkar, 2008).
Maserasi dilakukan dengan  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Menurut  Trifani  (2012), etanol  digunakan  sebagai  pelarut  karena  bersifat universal,  polar  dan  mudah  didapat.  Etanol  96% dipilih  karena  selektif,  tidak  toksik,  absorbsinya baik  dan  kemampuan  penyariannya  yang  tinggi sehingga  dapat  menyari  senyawa  yang  bersifat non-polar,  semi  polar  dan  polar.  Pelarut  etanol 96%  lebih  mudah  masuk  berpenetrasi  ke  dalam dinding sel sampel daripada pelarut etanol dengan kosentrasi  lebih  rendah,  sehingga  menghasilkan ekstrak  yang  pekat.  Hasil  maserasi  selanjutnya diuapkan  menggunakan  oven  dengan  suhu  40°C sehingga didapat ekstrak etanol.
Ekstrak  etanol  diperoleh  17,52  g dengan  rendemen  13,47%  dan  fraksi  berwarna kuning  kecoklatan.  Selanjutnya  ekstrak  etanol difraksinasi  dengan  menggunakan  tiga  pelarut yang  berbeda  berdasarkan  tingkat  kepolaran. Pelarut yang digunakan yaitu n-Heksan, kloroform  dan  metanol.  Penggunaan  pelarut  n- Heksan  untuk  melarutkan  senyawa  yang  bersifat non  polar,  pelarut  kloroform  untuk  melarutkan senyawa  yang  bersifat  semi  polar  dan  pelarut metanol  untuk  melarutkan  senyawa  yang  bersifat polar. Selanjutnya, ekstrak etanol sebanyak 5,03 g dilarutkan  dengan  menggunakan  pelarut  metanol sebanyak 100 mL, lalu dipartisi dengan pelarut n- Heksan  100  mL  kemudian  lapisan  n-Heksan ditampung ke dalam wadah, lalu diuapkan dengan oven dan diperoleh fraksi n-Heksan 0,21 g dengan rendemen  4,17%  dan  fraksi  berwarna  coklat kehijauan. Lapisan Metanol kemudian ditambahkan  akuades  100 mL  yang  dimaksudkan untuk  memperjelas  batas  lapisan  tiap  pelarut kemudian  dipartisi  kembali  dengan  pelarut kloroform  sebanyak  100  mL.  Selanjutnya  lapisan kloroform  dan  lapisan  metanol  ditampung kedalam wadah berbeda dan diuapkan menggunakan  oven.    Fraksi  kloroform  diperoleh 0,12  g  dengan  rendemen  2,39%  dan  berwarna coklat  pekat,  fraksi  metanol  diperoleh  4,32  g dengan  rendemen  85,88%  berwarna  coklat kekuningan.

## Tabel 1. Rendemen Fraksi
Keterangan :
EE : Ekstrak Etanol FH : Fraksi n-Heksan FK
: Fraksi Kloroform
FM : Fraksi metanol
Perbedaan  nilai  rendemen  ini  disebabkan oleh  perbedaan  jenis  pelarut  yang  digunakan. Pelarut  yang  berbeda  akan  melarutkan  senyawa- senyawa yang berbeda tergantung tingkat kepolarannya.  Sehingga,  jumlah  ekstrak  yang dihasilkan  pun  juga  tergantung  jenis  pelarutnya. Jumlah  rendemen  ekstrak  bergantung  pada kondisi  alamiah  senyawa,  metode  ekstraksi, ukuran  partikel  sampel,  kondisi  dan  waktu ekstraksi,  serta  perbandingan  sampel  dengan pelarut  (Harbone,  1987).  Jumlah  rendemen terbesar  ditunjukkan  pada  fraksi  metanol  dengan nilai  sebesar  85,88%.  Tinginya  rendemen  yang terdapat  pada  pelarut  menunjukkan  pelarut tersebut  mampu  mengekstrak  lebih  banyak komponen  bioaktif  yang  memiliki  sifat  kepolaran yang  lebih  tinggi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa terdapat  banyak  komponen  bioaktif  yang  bersifat polar dalam Ascidian Herdmania momus.
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dari ekstrak  etanol,  fraksi  metanol,  fraksi  n-heksan, dan fraksi kloroform pada mikroba uji Staphylococcus  aureus,  Salmonella  typhimurium dan Candida  albicans menggunakan  metode difusi  agar  (difusi  Kirby  dan  Bauer).  Metode  ini menjadi pilihan karena untuk tujuan klinis dengan mempertimbangkan kesederhanaan teknik,
ketelitian,  metode  serbaguna  bagi  semua  bakteri patogen yang tumbuh cepat dan sering digunakan dalam  uji  kepekaan  antibiotik  dalam  program pengendalian mutu. Metode ini juga dipilih karena mudah, murah dan tidak memerlukan alat khusus. Metode difusi agar adalah metode yang dilakukan dengan  pengukuran  dan  pengamatan      diameter zona  bening  yang  terbentuk  disekitar  cakram yang  berisi  antimikroba  yang  telah  diinokulasi mikroba.
Mikroba  uji  yang  digunakan  yaitu Staphylococcus  aureus mewakili  bakteri  Gram positif, Salmonella  typhimurium mewakili  bakteri Gram  negatif,  dan Candida  albicans mewakili jamur. Tujuan penggunaan mikroba tersebut untuk mengetahui bahwa apakah ekstrak dan fraksi dari Herdmania momus memiliki aktivitas antimikroba dan  untuk  mengetahui  spektrum  dari  aktivitas antimikroba Herdmania  momus apakah  memiliki spektrum  luas,  yaitu  dapat  membunuh  banyak jenis  mikroba  yaitu  bakteri  Gram  positif  dan Gram  negatif,  atau  spektrum  sempit  yaitu  yang hanya  membunuh  salah  satu  dari  Gram  positif atau Gram negatif.
Dalam pengujian, hasil yang didapat yaitu adanya zona hambat disekeliling cakram berukuran  6  mm  yang  ditandai  dengan  zona bening,  hal  ini  menunjukkan  adanya  kepekaan mikroba terhadap ekstrak atau fraksi dari Ascidian Herdmania momus . Pengamatan dilakukan setelah inkubasi pada suhu 37°C selama 1x24 jam dengan pengulangan  sebanyak  tiga  kali  pada  masing- masing  mikroba.  Dilakukan  pengulangan  untuk lebih mengakuratkan hasil yang diperoleh.
Konsentrasi yang digunakan yaitu 250 µg dalam  setiap  kertas  cakram  yang  memiliki  daya serap  50  µg  dari  sampel  Ascidian Herdmania momus terhadap  mikroba  uji Staphylococcus aureus,  Salmonella  typhimurium dan Candida albicans . Hasil pengukuran diameter zona hambat dari  ekstrak  etanol,  fraksi  n-Heksan,  fraksi kloroform  dan  fraksi  methanol  terhadap  mikroba uji Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium dan Candida  albicans ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2.  Hasil pengujian ekstrak dan fraksi Ascidian Herdmania momus terhadap mikroba uji Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium dan Candida albicans
Diameter Zona Hambat (mm) Mikroba Ulangan EE FH FK FM Kontrol K+ K- Staphylococcus aureus I - - - - 30,08  0,00 II - - - - III - - - - Jumlah - - - -
No  Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1. EE 17,52 13,47 Kuning kecoklatan 2. FH 0,21 4,17 Coklat kehijauan 3. FK 0,12 2,39 Coklat pekat 4. FM 4,32 85,88 Coklat kekuningan
Rata-rata - - - - Salmonella typhimurium I - - - - 21,12  0,00 II - - - - III - - - - Jumlah - - - - Rata-rata - - - - Candida Albicans I - - 10,85  10,77  31,98  0,00 II - - 10,07 9,61 III - - 9,84 11,58 Jumlah - - 30,76  31,96 Rata-rata - - 10,25  10,65
Dalam  pengujian  digunakan  kontrol positif  dan  kontrol  negatif.  Kontrol  positifnya menggunakan  Kloramfenikol paper  disc .  Kontrol positif merupakan larutan pembanding efek antara obat  antimikroba  baku  dengan  larutan  ekstrak  uji dalam hal ini ascidian Herdmania momus . Kontrol positif  berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  daerah  hambat yang  terbentuk  (Dwijendra,  2014).  Pemilihan antibiotik  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif karena  memiliki  aktivitas  antimikroba  dengan spektrum luas yaitu dapat menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif,  Gram  positif dan  jamur.  Kloramfenikol  memiliki  aktivitas antimikroba yang lebih besar terhadap mikroba uji dibandingkan  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol.  Diameter zona  bening  yang  dihasilkan  kloramfenikol  pada Staphylococcus  aureus 30,08  mm, Salmonella typhimurium 21,12  dan Candida  albicans 31,98. Kontrol negatif digunakan untuk  mengetahui ada tidaknya  pengaruh  pelarut  terhadap  pertumbuhan mikroba  uji  sehingga  dapat  diketahui  bahwa aktivitas  yang  ditunjukan  oleh  ekstrak  dan  fraksi ialah  zat  yang  terkandung  dalam  sampel  bukan berasal  dari  pelarut  yang  digunakan.  Kontrol negatif  yang  digunakan  yaitu  metanol.  Dari  hasil yang  diperoleh,  kontrol  negatif  tidak  memiliki daya hambat antimikroba terhadap ketiga mikroba uji.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  aktivitas  yang ditunjukkan  oleh  ekstrak  dan  fraksi  ascidian Herdmania momus , murni dari senyawa yang ada dalam sampel dan bukan dari pelarut.
Pada  penelitian  ini,  ekstrak  etanol,  fraksi kloroform,  fraksi  n-Heksan  dan  fraksi  metanol menunjukkan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi  kurang efektif  untuk  menghambat  pertumbuhan  mikroba. Dimana  respon  yang  sama  diperoleh  dari  kedua bakteri  uji  terhadap  senyawa  antimikroba  yang dapat  dilihat  hasilnya  pada  tabel  2.  Dapat disimpulkan  bahwa  Ascidian Herdmania  momus yang  diambil  dari  Perairan  Pulau  Bangka Likupang  tidak  memiliki  aktivitas  menghambat
pertumbuhan  mikroba  terhadap  bakteri  uji  baik Gram positif maupun Gram negatif.
Berbeda  dengan  bakteri  uji  yang  tidak terdapat  aktivitas  antimikroba  yang  ditandai dengan  tidak  adanya  zona  bening  disekeliling paper  disk ,  pada  jamur  uji Candida  albicans terdapat  zona  bening  pada  sekitar paper  disk untuk fraksi metanol dan kloroform. Dapat dilihat dari  tabel  2  bahwa  diameter  zona  bening  dari fraksi  metanol  sedikit  lebih  besar  dibanding diameter  zona  bening  fraksi  kloroform.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  metabolit  sekunder  pada ascidian Herdmania  momus cenderung  bersifat polar.
Berbeda dengan bakteri, jamur mempunyai  struktur  dinding  sel  yang  sangat kompleks  dengan  rangka  dasar  yang  terdiri  dari polisakarida  kristalin,  kitin,  dan  ß-glukan,  dan suatu matriks yang terdiri dari polisakarida amorf dan kompleks proteinsakarida. Kitin dan ß-glukan bertanggung  jawab  terhadap  mekanismedinding sel jamur (Siswandono dan Bambang,1995).
Hasil penelitian yang menunjukkan bahwa senyawa antimikroba khususnya antijamur dari  ascidian  termasuk  dalam  golongan  sedang merupakan  petunjuk  bahwa  di lingkungan  tempat hidupnya,  ascidian  hanya  mengeluarkan  sedikit energi  sehingga  hanya  menghasilkan  senyawa antimikroba yang sedikit.
Selain  itu,  tekanan  lingkungannya  juga berpengaruh  dalam  hal  produksi  metabolit sekunder  antimikroba  dari  Ascidian Herdmania momus. Apabila  tekanan  lingkungannya  relatif rendah maka senyawa yang akan dihasilkan juga pasti sedikit, sebaliknya apabila tekanan lingkungannya  relatif tinggi  maka  senyawa  yang dihasilkan  akan  banyak  (Rinehart,  1992).  Bisa dikatakan  dari  hasil  penelitian  ini  ascidian Herdmania  momus yang  dijadikan  sampel  hidup pada  area  dengan  tekanan  lingkungan  yang rendah sehingga memproduksi senyawa metabolit  sekunder  dengan  aktivitas  antimikroba yang sedang.
Ekstrak  kasar  etanol,  fraksin  kloroform, fraksi metanol dan fraksi n-heksan dari Ascidian Herdmania  momus berdasarkan  kriteria  Davis dan  Stout  (1971)  menunjukkan  senyawa  yang terkandung didalamnya memiliki aktiviitas antimikroba  yang  kurang  efektif  atau  berdaya hambat  lemah  kecuali  untuk  fraksi  metanol  dan fraksi  kloroform  pada  jamur  uji Candida albicans dikategorikan  memiliki  daya  hambat sedang.

## KESIMPULAN
Fraksi Ascidian Herdmania momus memiliki aktivitas antimikroba. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa  pada  fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol terhadap  jamur Candida  albicans dikategorikan memiliki  daya  hambat  yang  sedang.  Sedangkan ekstrak  etanol,  fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan dan  fraksi  metanol  dari  Ascidian Herdmania momus tidak  memiliki  aktivitas  antimikroba terhadap  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Salmonella typhimurium .

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  senyawa  aktif  dalam  fraksi kloroform  dan  metanol  dari  Ascidian Herdmania momus.

## DAFTAR PUSTAKA
Dahuri,  R.,  Jacub  Rais.,  Sapta  Putra  Ginting,  & M.J.,  Sitepu.  2001. Pengelolaan  Sumber daya  Wilayah Pesisir  dan  Lautan  secara Terpadu . PT Pradnya Paramita, Jakarta.
Davis,  W.W.,  &  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Journal Microbiology . 22(4) : 659-
665.
Dwijendra,  I.,  Defny,  S.T.,  &  Frenly,  W.  2014. Aktivitas  Antimikroba  dan  Karakterisasi Senyawa  Fraksi  Spons  Lamellodysidea herbacea  yang  Diperoleh  dari  Teluk Manado. Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 3(4) :  1-
2.
Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan . Penerbit : ITB. Bandung.
Khoeri, M.M. 2009. Bioprospeksi Bakteri Simbion pada  Tunikata  Didemnum  molle  dari Perairan Pulau Sambangan Karimunjawa Jepara.
Universitas
Dipoengoro,
Semarang.
Khopkar,  SM.  2008. Konsep  Dasar  Kimia Analitik . UI Press, Jakarta.
Lenny, S. 2006.
Senyawa Flavonoida, Fenilpropanoida  dan  Alkaloida .  FMIPA Universitas Sumatera Utara, Medan.
Marzuki, I., Noor A., Nafie N. L., & Djide N. M. 2018.  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri Simbion  Spons  Penghasil Enzim  Amilase Asal  Pantai  Melawai  Balikpapan. Jurnal Ilmiah “dr. Aloei Saboe” . 1(2) : 11-12.
Ncube,  N.S.,  Afolayan,  A.J.,  &  Okoh,  A.I.  2008. Assesement  Techniques  of  Antimicrobial Properties of Natural Compounds of Plant Origin:  Current  Methods  and  Future Trends. Africa  Journal  of  Biotechnology. 7(12) : 30-32.
Ortez,  J.H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual  of  Antimicrobial  Susceptibility Testing.  Marie  B .  Coyle  (Coord.Ed).
American Society for Microbiology.
Proksch,  P.,  R.  Edrada.,  &R.  Ebel.  2002.  Drug from  the  Seas  –  Current  Status  and Microbiological Implications.
App. Microbiol. Biotechnol . 59: 125-134.
Rinehart, K.L. 1992.  Secondary  metabolites  from
marine organisms. Ciba.
Found.
Symp. 171 : 236-49.
Sa’adah,  H.,  &  Nurhasnawati,  H.  2015. Perbandingan Pelarut Etanol dan Air Pada Pembuatan  Ekstrak  Umbi  Bawang  Tiwai (Eleutherine  Americana  Merr). Jurnal Ilmiah Manuntung . 1(2) : 149-153.
Siswandono  &  Bambang,  S.  1995. Kimia Medisinal . Erlangga, Surabaya.
Sumilat D. A., Wewengkang D. S., Rotinsulu H., Yamazaki  H.,  Oda  T.,  Ukai  K.,  & Namikoshi  M.,  2018.  Bioactivity  of extracts from ascidians collected in North Sulawesi  as  seeds  of  marine-derived drugs. AACL Bioflux. 11(2) : 516-524.
Trifani.  2012.  Ekstraksi  Pelarut  Cair-Cair. http://awjee. Diakses pada tanggal 15 Juni 2020.
Waluyo,  L.  2005. Mikrobiologi  Umum .  Penerbit
Universitas Muhammadiyah Press, Malang.