## Pengaruh Pemberian Jus Tomat (Solanum lycopersicum) terhadap Jumlah Sel Radang di Alveolus Tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang Dipapar Asap Rokok Kretek Subkronik
Dewi Mustika 1 , Subandi 2
1 Laboratorium Fisiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya
2 Laboratorium Anatomi Histologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya Email: dewimustika@ub.ac.id , subandi@ub.ac.id

## ABSTRAK
Asap rokok mengandung radikal bebas yang dapat menyebabkan proses inflamasi pada saluran nafas. Peningkatan jumlah sel radang pada alveolus paru dapat semakin meningkatkan kondisi stres  oksidatif  dikarenakan  sel  radang  juga  memicu  timbulnya  radikal  bebas.  Oleh  karena  itu, pemberian  antioksidan  diharapkan  dapat  mengurangi  proses  keradangan  pada  alveolus  paru. Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  membuktikan  pengaruh  pemberian  jus  tomat,  yang mengandung  likopen,  betakaroten,  dan  vitamin  c,  terhadap  penurunan  jumlah  sel  radang alveolus  tikus  Wistar  jantan  yang  dipapar  asap  rokok  subkronik.  Pemaparan  asap  rokok dilakukan  selama  9  minggu  menggunakan smoking  pump ,  dilanjutkan  dengan  pemberian  jus tomat  dengan  dosis  1,15;  2,3;  dan  4,6  ml/tikus  perhari  selama  3  minggu.  Setelah  12  minggu, jaringan  paru  setiap  tikus diambil,  kemudian  dibuat sediaan  histopatologi  dengan  pengecatan HE.  Sediaan  diamati  menggunakan  mikroskop  pada  10  lapang  pandang  untuk  dilakukan penghitungan  jumlah  sel  radang  (neutrofil,  limfosit,  makrofag)  yang  terdapat  pada  septa interalveolaris.  Data  dianalisis  menggunakan One-Way  ANOVA dilanjutkan  uji Post  hoc  Tukey . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian  jus  tomat  dapat  menyebabkan  penurunan jumlah  sel  radang  di  alveolus  pada  ketiga  dosis  yang  diberikan  (p=0,000).  Hasil  uji  korelasi Pearson menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  dosis  jus  tomat  (0;  1,15;  2,3;  4,6  ml/hari)  maka akan semakin menurunkan jumlah sel radang di alveolus (r= -0,868; p=0,000). Dari penelitian ini  dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  jus  tomat    setelah  paparan  asap  rokok    dapat menurunkan jumlah sel radang di alveolus.
Kata kunci: alveolus, asap rokok subkronik, jumlah sel radang, jus tomat (likopen).

## ABSTRACT
Cigarette  smoke  contains  free  radicals  that  cause  inflammation  of  respiratory  tract.  The increased  numbers  of  alveolar  inflammatory  cells  may  amplify  the  level  of  oxidative  stress, because  inflammatory  cells  also  induce  free  radicals.  Therefore,  antioxidant  administration  is expected  to  reduce  the  inflammatory  process  in  the  lung.  The  objective  of  this  research  is  to prove  the  effect  of  tomato  juice  supplementation  which  contains  lycopene, ß -carotene and vitamin C on the numbers of alveolar inflammatory cells in the rat which previously is exposed to  sub  chronic  cigarette  smoke.  Exposure  to  cigarette  smoke  conducted  for  9  weeks  using  a smoking pump followed by supplementation of tomatoes juice with a dose of 1.15; 2.3; and 4.6 ml/rat  per  day  for  3  weeks.  After  12  weeks,  every  mouse  was  euthanized  and  the  lung  was removed  to  made  histopathologic  preparations  with  HE  staining.  The  preparations  were observed on microscope and were selected 10 fields for calculating the number of inflammatory cells  (neutrophils,  lymphocytes,  macrophages)  in  the  interalveolar  septa.  Data  analysis  using One-Way ANOVA method followed by Post hoc Tukey test. The result showed that tomato juice could cause decrease of inflammation cell numbers in alveolus at three doses given (p = 0,000).
Pearson correlation test results showed that the higher the dose of tomato juice (0, 1.15, 2.3, 4.6 ml / day) will further decrease the number of inflammatory cells in the alveoli (r =  -0,868; p = 0,000). It is concluded that the administration of tomato juice after exposure to cigarette smoke can reduce the number of inflammatory cells in the alveoli.
Keywords : tomato juice (lycopene), sub chronic cigarette smoke, alveolar inflammatory cells.

## PENDAHULUAN
Merokok  merupakan  faktor  resiko  terbesar  kedua  yang  menyebabkan  mortalitas dan morbiditas di usia yang lebih muda (1). Rokok membunuh satu orang setiap 6 detik dan  sekitar  6  juta  orang  per  tahun  di  seluruh  dunia  (2).  Diperkirakan  1,25  milyar perokok  di  seluruh  dunia  dimana  800  juta  diantaranya  tinggal  di  negara  berkembang (3).  Asap  rokok  merupakan  aerosol  yang  mengandung  10 10 partikel/mL  dan  3500 kompenen  kimia  didalamnya  bersifat  toksik  dan  mutagen  (4).  Sekali  hisap,  terdapat 10 15 radikal  bebas  yang  dapat  dipertahankan  dalam  waktu  cukup  lama  (>10  menit). Partikel  dari  asap  rokok  ini  berukuran  sangat  kecil  (0,1-1,0  μm)  sehingga  dapat melakukan penetrasi hingga ke alveoli (4).
Dalam  kaitannya  dengan  inflamasi,  radikal  bebas  dalam  asap  rokok  mengiritasi secara langsung melalui partikel-partikelnya yang iritatif maupun melalui efek lanjutan dari  kerusakan  sel.  Efek  kerusakan  jaringan  ini  terjadi  karena  proses  stress  oksidatif. Radikal  bebas  dalam  rokok  akan  menyebabkan  materi  biologis  mudah  teroksidasi. Termasuk  didalamnya  adalah  membran  sel  epithel  saluran  pernafasan  dan  alveolus yang banyak mengandung poliunsaturated lipid . Keadaan inilah yang menjadi salah satu penyebab rusaknya sel epithel dan alveolus (4,5). Sel yang rusak ini akan mengeluarkan mediator inflamasi yang pada akhirnya menarik datangnya sel-sel radang (6).
Selain  melalui  proses  oksidasi  lemak,  radikal  bebas  juga  mampu  menyebabkan peningkatan  aktivasi  faktor  transduksi  dan  transkripsi  gen  inflamasi  yang  pada akhirnya menyebabkan peningkatan sel radang. Keradangan yang diakibatkan oleh asap rokok secara khas ditandai dengan peningkatan jumlah makrofag, neutrofil, dan limfosit T  serta  pelepasan  berbagai  mediator  inflamasi  (lipid,  kemokin,  sitokin growth  factor) (7) . Merokok memiliki efek stimulator langsung terhadap produksi granulosit terutama meningkatkan  retensi  neutrofil  di  paru.  Selain  itu  makrofag  perokok  memiliki  waktu hidup  lebih  lama  dikarenakan  peningkatan  ekspresi  protein  anti  apoptosis  Bcl-X L dan peningkatan ekspresi p21 CIP/WAF1 pada sitoplasmanya. Peningkatan jumlah total limfosit T pada parenkim paru telah terbukti berhubungan dengan kerusakan alveolus (6,8,9).
Akibat  dari  proses  inflamasi,  saluran  nafas  mengalami  hambatan  karena  deposisi kolagen,  hipersekresi  mukus  dan  penambahan  eksudat  inflamasi  termasuk  juga  sel radang.  Kedatangan  sel  radang  akan  semakin  meningkatkan  kondisi  stres  oksidatif karena  sel  radang  juga  menghasilkan  radikal  bebas.  Keadaan  ini  pada  akhirnya  dapat memunculkan penyakit paru obstruktif menahun (10).
Dalam  kondisi  stres  oksidatif  yang  meningkat  akibat  asap  rokok,  dibutuhkan tambahan  antioksidan  dari  luar  tubuh  sebagai  penyeimbang  meningkatnya  radikal bebas (11). Kecenderungan masyarakat saat ini adalah memilih mengkonsumsi bahan- bahan  yang  alami  karena  diyakini  lebih  aman  dari  kemungkinan-kemungkinan  efek samping. Salah satu tanaman yang mengandung antioksidan adalah tomat (12).
Tomat  relatif  kaya  akan  antioksidan,  diantaranya  adalah  likopen  (59  mg/kg), vitamin  C  (160-240  mg/kg),  provitamin  A  karoten  (6-9  mg/kg)    dan  komponen phenolic:  flavonoids  (5-50  mg/kg)    dan  phenolic  acids  (10-50  mg/kg).  Selain  itu  juga terdapat  sedikit  vitamin  E  (5-20  mg/kg),  flavonoids  (5-50  mg/kg)  dan trace  elements
copper (0.1-0.9 mg/kg), manganese (1-1.5 mg/kg) dan zinc (1-2.4 mg/kg). Tomat telah dikenal  sebagai  sumber  utama  likopen.  Likopen  termasuk  senyawa  karotenoid  yang memberikan  warna  merah  pada  tomat.  Telah  dibuktikan  bahwa  likopen  merupakan penangkap  radikal  bebas  yang  paling  efektif  diantara  karotenoid  yang  lain,  termasuk jika dibandingkan dengan β-caroten (12–14).
Meski telah banyak penelitian yang menjelaskan efek antioksidan dan antiinflamasi dari likopen, namun pemberian tomat  dalam bentuk jus tanpa proses ekstraksi masih perlu  diteliti  efektifitasnya.  Suplementasi  dalam  bentuk  jus  tomat  yang  relatif  lebih murah dan mudah pembuatannya diharapkan dapat menjadi alternatif antioksidan dan antiinflamasi  setelah  paparan  asap  rokok.    Oleh  karena  itu,  tujuan  dari  penelitian  ini untuk  membuktikan  adanya  pengaruh  pemberian  jus  tomat  terhadap  penurunan jumlah sel radang di alveolus tikus strain wistar setelah mengalami peningkatan akibat dipapar asap rokok subkronik.

## METODE
Penelitian  dilakukan  dengan  metode  eksperimental  laboratorik  menggunakan hewan  coba  tikus Rattus  norvegicus  Strain  Wistar sejumlah  20  ekor  yang  didapatkan dari  Laboratorium  Farmakologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Brawijaya.  Sebelum penelitian dimulai, tikus diaklimatisasi terlebih dahulu selama 1 minggu.  Penelitian ini telah dinyatakan memenuhi syarat atau laik etik oleh Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.
Desain penelitian yang dilakukan adalah randomized post test control group design . Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan 2 macam perlakuan yaitu paparan dengan asap rokok dan jus tomat dalam berbagai dosis. Hewan coba  dibagi  menjadi  5  kelompok  yaitu  kontrol  negatif,  kontrol  positif  (dipapar  asap rokok),  dan  3  kelompok  perlakuan  (dipapar  asap  rokok  dan  diberi  jus  tomat  dengan dosis 1,15; 2,3; 4,6 ml/hari). Masing-masing kelompok terdiri dari 4 tikus.
Pada penelitian ini pemaparan asap rokok jenis kretek menggunakan bantuan alat smoking  pump .  Dosis  pemaparan  setiap  3  ekor  tikus  adalah  satu  batang  rokok  kretek per hari  selama 9 minggu. Selanjutnya kelompok perlakuan diberi jus tomat (1,15; 2,3; 4,6 ml/hari) dengan cara disonde. Dosis jus tomat ditentukan berdasarkan perhitungan kandungan likopen yang telah terbukti pada penelitian sebelumnya memiliki efektifitas sebagai  antioksidan  (12,15,16).  Jus  tomat  dibuat  dari  tomat  yang  masak  berwarna merah  diambil  sarinya  dengan  menggunakan  jusser.  Tomat  yang  digunakan  adalah tomat merah segar (diharapkan mengandung kadar likopen yang tinggi) yang biasa ada di pasar tradisional ( Lycopersicum commune).
Setelah  12  minggu,  tikus  dieuthanasia  dengan  menggunakan  eter  secara  inhalasi. Tikus  dibedah  untuk  dikeluarkan  jaringan  parunya  dengan  membuka  bagian  leher secara  vertikal  dimulai  dengan  irisan  melalui  peritoneum  ke  arah  atas.  Sediaan histopatologi  dibuat  dengan  cara  jaringan  paru  didehidrasi  terlebih  dahulu menggunakan  alkohol  konsentrasi  bertingkat.  Dilanjutkan  dengan  proses  pencucian menggunakan  xylol  dan  proses  infiltrasi  dengan  paraffin  lunak  pada  suhu  42-46 o C. Setelah  dilakukan  bloking  menggunakan  parafin  keras  pada  suhu  46-52 o C,  sediaan dipotong  menggunakan mikrotom  rotary dengan  ukuran  4-6  mm.  Sediaan  yang  telah dideparafinasi menggunakan xylol dan direndam dalam alkohol konsentrasi bertingkat selanjutnya diwarna menggunakan Hematoxylin Eosin (HE).
Pengecatan  HE  dimulai  dengan  memberian  Hematoxylin,  dilanjutkan  dengan direndam  pada  alcohol  asam  dan  diberi  cairan  ammonium.  Setelah  itu  pemberian
counter  staining menggunakan Eosin dilanjutkan  dengan  dehidrasi  menggunakan alcohol konsentrasi bertingkat. Sebelum diamati, dilakukan mounting terhadap sediaan menggunakan  etelan.  Sediaan  diamati  pada  10  lapang  pandang  menggunakan mikroskop  perbesaran  400x.  Sediaan  difoto  menggunakan  kamera  digital  tanpa pembesaran  sehingga  didapatkan  gambaran  yang  sama  dengan  yang  tampak  di mikroskop.  Selanjutnya  dilakukan  penghitungan  terhadap  jumlah  sel  radang  yang sesuai  dengan  morfologi  neutrofil,  limfosit,  atau  makrofag  yang  terdapat  pada  septa interalveolaris.
Adanya  signifikansi  perbedaan  antar  masing-masing  kelompok  dianalisis menggunakan  metode One  Way  Anova dan  uji Tukey  HSD (post  –  hoc  test)  kemudian dilanjutkan dengan uji korelasi Pearson untuk melihat  pengaruh pemberian jus tomat terhadap  jumlah  sel  radang  pada  masing-masing  perlakuan.  Analisis  hasil  penelitian menggunakan bantuan software SPSS 16.00 for window .

## HASIL
Gambar  1. Gambaran  histopatologi  jaringan  paru  tikus  dengan  pewarnaan  HE, perbesaran 400x. (a)kontrol negatif (b)kontrol positif (c)dosis 1, tomat 1,15 ml/hari (d)dosis 2, tomat 2,3 ml/hari (e)dosis 3, tomat 4,6 ml/hari. Nampak adanya perbedaan antar kelompok, dimana  gambaran  sel  radang  paling  padat  terlihat  pada  kelompok  yang  dipapar  asap  rokok subkronik tanpa diberi jus tomat (b). Kelompok yang mendapatkan jus tomat setelah paparan asap rokok (c; d; e) mengalami penurunan ketebalan dinding septa interalveolaris dan jumlah sel radang. *)Tanda panah menunjukkan sel radang.
Berdasarkan gambaran histopatologi dari jaringan paru (gambar 1), penghitungan jumlah  sel  radang  menunjukkan  adanya  peningkatan  pada  kelompok  kontrol  positif yang dipapar asap rokok saja dibanding kelompok kontrol negatif (kelompok yang tidak dipapar  asap  rokok  maupun  jus  tomat).  Sedangkan  pada    ketiga  kelompok  perlakuan (kelompok yang dipapar asap rokok dan jus tomat dosis 1,15; 2,3; 4,6 ml/hari) tampak penurunan  jumlah  sel  radang  di  alveolus  dibanding  dengan  kelompok  kontrol  positif (gambar 2.A).
Analisis  rata-rata  jumlah  sel  radang  di  alveolus    menggunakan  uji  Oneway  Anova diperoleh nilai p=0,000 (p<0,05). Hasil uji Tukey HSD menunjukkan bahwa perbedaan
bermakna  terlihat  diantara  semua  kelompok  (p<0,05)  kecuali  antara  kelompok perlakuan dosis 2,3 ml/hari dengan dosis 4,6 ml/hari (p=0,408).
Selanjutnya uji  korelasi Pearson menunjukkan nilai signifikansi 0,000, yang  dapat diartikan bahwa  korelasi antara dosis jus tomat dengan jumlah sel radang di alveolus adalah  bermakna.  Nilai  korelasi  Pearson  r  =  -0,868  memiliki  interpretasi  bahwa semakin  tinggi  dosis  maka  akan  membuat  jumlah  sel  radang  alveolus  menurun mendekati kontrol negatif jika dibandingkan dengan kontrol positif (gambar 2.B).
Gambar 2. Pengaruh pemberian jus tomat terhadap jumlah sel radang di alveolus tikus yang  dipapar  asap  rokok  subkronik. (A)  Grafik    rata-rata  jumlah  sel  radang  di  alveolus jaringan  paru  tikus  dan  (B)  Grafik  linieritas  jumlah  sel  radang  pada  alveolus  terhadap pemberian jus tomat berbagai dosis (0; 1,15; 2,3; 4,6 ml/hari). Terdapat perbedaan jumlah sel radang  di  alveolus  yang  signifikan  antara  kelompok  yang  mendapatkan  paparan  asap  rokok tanpa jus tomat (kontrol +) dibandingkan dengan kelompok perlakuan yang mendapatkan jus tomat  (1,15;  2,3;  4,6  ml/tikus).  Grafik  linearitas  menunjukkan  semakin  tinggi  dosis jus  tomat yang diberikan akan diikuti dengan semakin sedikit jumlah sel radang di alveolus. *) Huruf yang berbeda menunjukkan signifikansi < 0.05

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini,  dilakukan  pengamatan  pengaruh  pemberian  jus  tomat  dalam beberapa  dosis  terhadap  jumlah  sel  radang  pada  alveolus  tikus  Wistar  yang  telah dipapar asap rokok subkronik. Dosis jus tomat yang dicobakan yaitu: 1,15 ml/hari, 2,3 ml/hari, dan 4,6 ml/hari. Ketiga dosis tersebut setara dengan dosis likopen 7,5 mg/hari, 15 mg/hari, dan 30 mg/hari pada manusia. Penentuan dosis jus tomat berdasarkan data kebutuhan  harian  likopen  yaitu  6-10  mg  perhari  pada  manusia  dan  berdasarkan penelitian  sebelumnya  yang  membuktikan  bahwa  dosis  15  mg  likopen  per  hari  pada manusia memiliki efek proteksi yang tinggi dalam menangkap radikal bebas (12,15,16).
Pada  alveolus  paru  tikus  wistar  kontrol  negatif,  didapatkan  rata-rata  jumlah  sel radang  di  alveolus  tikus  kelompok  kontrol  negatif  sebanyak  418,8±29,24  per  lapang pandang.  Jumlah  ini  menggambarkan  jumlah  sel  radang  pada  septa  alveolus  tikus normal yang lebih sedikit dibandingkan dengan kelompok lain. Pada kondisi normal sel radang  yang  ditemukan  pada  septa  alveoli  paru  berperan  dalam  proteksi  tubuh  (17). Jika  keberadaan  sel  radang  ini  dihubungkan  dengan  radikal  bebas,  secara  normal radikal  bebas  terdapat  dalam  tubuh  yang  disebut  sebagai endogenous  free  radical . Secara  alami,  tubuh  juga  telah  memiliki  antioksidan  sebagai  inhibitor  yang  bekerja
B

## A
menghambat  oksidasi  dengan  cara  bereaksi  dengan  radikal  bebas  yang  reaktif membentuk radikal bebas yang relatif stabil (18).
Setelah paparan asap rokok subkronik,  rata-rata jumlah sel radang di alveolus tikus kelompok  kontrol  positif  meningkat  hingga  1250,3±82,51.  Kondisi  ini  dikarenakan radikal  bebas  dalam  saluran  nafas  yang  meningkat  tidak  dapat  diimbangi  oleh antioksidan  tubuh  sehingga  terjadi  keadaan  stres  oksidatif.  Radikal  bebas  secara langsung  bekerja  pada  target  sel  di  saluran  pernafasan  melalui  lipid  peroksida  (4). Komponen  lipid  membran  sel  akan  mengalami  peroksidasi  menghasilkan  radikal karbon yang dapat bereaksi dengan oksigen menjadi radikal peroksil. Radikal peroksil ini  yang  menyerang  ulang  rantai  samping PUFA menghasilkan  radikal  karbon  dan peroksida  lipid  baru.  Peroksida  lipid  mengakibatkan  penurunan  fungsi  membran plasma dan permeabilitas. Hal ini mendorong terjadinya influks Ca 2+ dari ekstraseluler yang  menyebabkan  peningkatan  aktifitas  enzim  ATP-ase,  protease,  fosfolipase,  dan endonuklease (19,20). Peningkatan aktivitas enzim-enzim ini akan menyebabkan jejas pada  sel  epithel  saluran  pernafasan  dan  alveolus.  Jejas  pada  sel  akan  menyebabkan pengeluaran mediator-mediator inflamasi sehingga menarik dan meningkatkan jumlah makrofag, neutrofil dan limfosit (6,8).
Inflamasi  lokal  pada  paru-paru  yang  diinisiasi  ROS  pada  asap  rokok  tetap  terjadi walaupun  telah  berhenti  merokok.  Terjadinya smoking-independent  oxidant  stress ini menjelaskan  kenapa  jumlah  sel  radang  pada  kelompok  kontrol  positif  tetap  tinggi walaupun paparan asap rokok telah dihentikan selama 3 minggu (21). Sel radang yang meningkat pada saluran pernafasan dan alveolus akan semakin meningkatkan kondisi stres  oksidatif  karena  sel  radang  juga  menghasilkan  oksidan.  Peningkatan  yang berlebihan  dari  proses  keradangan  ini  dapat  berdampak  kerusakan  yang  luas  pada jaringan yang mengalami keradangan kronik (8,21).
Upaya untuk mencegah radikal bebas yang berlebih dalam tubuh dapat dilakukan dengan  mengkonsumsi  bahan-bahan  alam  yang  mengandung  antioksidan  sehingga dapat  memperkuat  proteksi  antioksidan  dalam  tubuh  (22,23).  Pemberian  tomat  yang mengandung antioksidan bertujuan untuk mengurangi kondisi stres oksidatif sehingga kondisi inflamasi juga berkurang. Pada penelitian ini telah dibuktikan bahwa pemberian jus  tomat  selama  3  minggu  dengan  dosis  1,15  ml/hari,  2,3  ml/hari  dan  4,6  ml/hari menyebabkan  penurunan  jumlah  sel  radang  yang  signifikan  dibandingkan  dengan kelompok yang hanya mendapatkan paparan asap rokok saja.
Studi epidemiologi menunjukkan bahwa  kapasitas antioksidan dapat ditingkatkan melalui konsumsi produk tomat, sehingga menurunkan resiko perkembangan penyakit terkait dengan stress oksidatif  (13,15,24). Kandungan antioksidan yang menonjol dari tomat  adalah  carotenoid,  terutama  likopen  dan  vitamin  C  serta  beberapa  antioksidan lain  yang  jumlahnya  relatif  lebih  kecil  yaitu  vitamin  E,  flavonoid  dan  asam  fenolat. Terdapat  pula trace  element yaitu copper , manganese dan zinc serta  selenium (13,14,25). Berdasarkan fungsinya, carotenoid dan vitamin C dapat digolongkan sebagai antioksidan sekunder yang berperan dalam menangkap radikal bebas serta  mencegah terjadinya  reaksi  berantai  sehingga  tidak  terjadi  kerusakan  yang  lebih  besar  (23). Diantara  berbagai  kandungan  tomat,  likopen  adalah  antioksidan  yang  paling dominan(13).  Kemampuan  likopen  dalam  meredam  oksigen  tunggal  bebas  dua  kali lebih baik dari betakaroten dan sepuluh kali lebih baik daripada alfa-tokoferol. Likopen memiliki kapasitas menangkap radikal bebas yang baik  karena strukturnya  yang unik berupa  banyaknya conjugated  double  bond (26) . Telah  terbukti  bahwa  kadar  likopen dalam  serum  dan  jaringan  berbanding  terbalik  dalam  hubungannya  dengan  resiko terjadinya penyakit kronis (15,27,28).
Pemberian jus tomat 1,15 ml/hari pada tikus, setara dengan suplementasi likopen 7,5  mg/hari,    sudah  dapat  menurunkan  jumlah  sel  radang  di  alveolus.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  sebelumnya    bahwa  dosis  likopen  6,5-30  mg/hari  pada  manusia sudah  cukup  memiliki  bioavailabilitas  sebagai  proteksi  melawan  stress  oksidatif (16,29). Pada pemberian jus tomat dengan dosis yang lebih besar jaitu 2,3 ml/hari dan 4,6  ml/hari,  jumlah  sel  radang  menurun  menjadi  lebih  sedikit,  namun  tidak  ada perbedaan atara kedua dosis ini. Hal ini  selaras dengan penelitian sebelumnya terkait dose response dari efek suplementasi likopen terhadap biomarker stress oksidatif yang menghasilkan peningkatan plasma likopen pada manusia sehat yang relatif sama pada dosis likopen 15 mg/hari dan 30 mg/hari (30).
Selain  itu,  jus  tomat  juga  mengandung  besi  (Fe)  sebanyak  5mg/kg  tomat  mentah. Kandungan  Fe  ini  dapat  bereaksi  dengan  vitamin  C  membentuk    Fe 2+ (Fe(III)+Asam Askorbat  Fe 2+ +askorbat ● ).  Fe 2+ akan  bereaksi  dengan  H 2 O 2 melalui  reaksi Fenton (Fe 2+ +  H 2 O 2  OH - +Fe 3+ +OH ● )  dimana  produknya  yaitu . OH ● dapat  merusak  integritas membran  (31).  Melalui  analisis  ini  terdapat  kemungkinan  pada  kelompok  dosis  4,6 ml/hari  terjadi  peningkatan  efek  antioksidan  likopen  bersamaan  dengan  peningkatan radikal hidroksil (OH ● )  yang menginisiasi peroksidasi lipid dan berpotensi merangsang inflamasi  (32).  Hal  ini  menyebabkan  peningkatan  dosis  tidak  diikuti  dengan peningkatan efek antioksidan dan antiinflamasi.
Pada penelitian ini pemberian jus tomat berhasil menurunkan jumlah sel radang di alveoli, namun jika dibandingkan dengan tikus yang sehat secara signifikan jumlah sel radang  masih  lebih  banyak.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  konsumsi  ketiga  dosis  jus tomat  (1,15;  2,3;  4,6  ml/hari)  selama  3  minggu  telah  dapat  mengurangi  kondisi inflamasi di alveolus, namun  belum dapat mengembalikan ke kondisi normal.
Hubungan  antara  dosis  jus  tomat  dengan  jumlah  sel  radang  di  alveolus  diperkuat dengan hasil uji  korelasi  korelasi Pearson  r=-0,868 dengan signifikansi p=0,000. Hasil ini  dapat  diinterpretasikan  bahwa  semakin  tinggi  dosis  jus  tomat  maka  jumlah  sel radang  di  alveolus  akan  semakin  menurun  mendekati  tikus  normal.  Jika  didasarkan pada penelitian sebelumnya korelasi negatif ini hanya berlaku pada kandungan likopen dosis  rendah  yang  memberi  efek  antioksidan  (30).  Dibuktikan  pada  penelitian  ini bahwa  pengaruh  jus  tomat  terhadap  penurunan  jumlah  sel  radang  di  alveolus cenderung menetap antara dosis 2,3 ml/hari dan 4,6 ml/hari.

## KESIMPULAN
Berdasarkan fakta dan kajian teori dapat disimpulkan bahwa pemberian  jus tomat (1,15;  2,3;  4,6  ml/hari)  dapat  mengurangi  kondisi  inflamasi  pada  jaringan  paru  yang ditandai  dengan  penurunan  jumlah  sel  radang  di  alveolus  tikus  wistar  setelah mengalami peningkatan akibat dipapar asap rokok subkronik. Semakin tinggi dosis jus tomat  yang  diberikan  maka  semakin  sedikit  jumlah  sel  radang  pada  septum interalveolaris, namun dosis 2,3 ml/hari dan 4,6 ml/hari tidak berbeda signifikan.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Reitsma  MB,  Fullman  N,  Ng  M,  Salama  JS,  Abajobir  A,  Abate  KH,  et  al.  Smoking prevalence and attributable disease burden in 195 countries and territories, 1990– 2015: a systematic analysis from the Global Burden of Disease Study 2015. Lancet. 2017;389(10082):1885–906.
2.   Song Y, Zhao L, Palipudi KM, Asma S, Morton J, Talley B, et al. Tracking mpower in
14 countries: Results from the global adult tobacco survey, 2008–2010. Glob Health Promot. 2016;23(2):24–37.
3.   Taghavi  S,  Khashyarmanesh  Z,  Moalemzadeh-Haghighi  H,  Nassirli  H,  Eshraghi  P, Jalali N, et al. Nicotine content of domestic cigarettes, imported cigarettes and pipe tobacco in iran. Addict Heal [Internet]. 2012;4(1–2):28–35.
4.   Valavanidis A, Vlachogianni T, Fiotakis K. Tobacco smoke: Involvement  of reactive oxygen  species  and  stable  free  radicals  in  mechanisms  of  oxidative  damage, carcinogenesis and synergistic effects with other respirable particles. Int J Environ Res Public Health. 2009;6(2):445–62.
5.   Dizdaroglu M, Jaruga P. Mechanisms of free radical-induced damage to DNA. Vol. 46, Free Radical Research. 2012. p. 382–419.
6.   Lee  J,  Taneja  V,  Vassallo  R.  Cigarette  smoking  and  inflammation:  Cellular  and molecular mechanisms. J Dent Res. 2012;91(2):142–9.
7.   Bhalla DK, Hirata F, Rishi AK, Gairola CG. Cigarette smoke, inflammation, and lung injury: A mechanistic perspective. Vol. 12, Journal of Toxicology and Environmental Health - Part B: Critical Reviews. 2009. p. 45–64.
8.   Qiu F, Liang C-L, Liu H, Zeng Y-Q, Hou S, Huang S, et al. Impacts of cigarette smoking on  immune  responsiveness:  Up  and  down  or  upside  down?  Oncotarget. 2017;8(1):268–84.
9.   Maeno T, Houghton  a M, Quintero P a, Grumelli S, Owen C a, Shapiro SD. CD8+ T Cells  are  required  for  inflammation  and  destruction  in  cigarette  smoke-induced emphysema in mice. J Immunol. 2007;178:8090–6.
10.  Rovina  N,  Koutsoukou  A,  Koulouris  NG.  Inflammation  and  immune  response  in COPD: Where do we stand? Vol. 2013, Mediators of Inflammation. 2013.
11.  Kingwell K. Lung disease: antioxidant  protection  against cigarette smoke. Nat Rev Drug Discov. 2009;8(2):110.
12.  Ilahy  R,  Hdider  C,  Lenucci  MS,  Tlili  I,  Dalessandro  G.  Antioxidant  activity  and bioactive  compound  changes  during  fruit  ripening  of  high-lycopene  tomato cultivars. J Food Compos Anal. 2011;24(4–5):588–95.
13.  Erge  HS,  Karadeniz  F.  Bioactive  compounds  and  antioxidant  activity  of  tomato cultivars. Int J Food Prop. 2011;14(5):968–77.
14.  García-Valverde  V,  Navarro-González  I,  García-Alonso  J,  Periago  MJ.  Antioxidant Bioactive  Compounds  in  Selected  Industrial  Processing  and  Fresh  Consumption Tomato Cultivars. Food Bioprocess Technol. 2013;6(2):391–402.
15.  Story  EN,  Kopec  RE,  Schwartz  SJ,  Harris  GK.  An  Update  on  the  Health  Effects  of Tomato Lycopene. Annu Rev Food Sci Technol. 2010;1(1):189–210.
16.  Rao A V., Shen H. Effect of low dose lycopene intake on lycopene bioavailability and oxidative stress. Nutr Res. 2002;22(10):1125–31.
17.  Grommes J, Soehnlein O. Contribution of neutrophils to acute lung injury. Mol Med. 2011;17(3–4):293–307.
18.  Amir Aslani B, Ghobadi S. Studies on oxidants and antioxidants with a brief glance at their relevance to the immune system. Vol. 146, Life Sciences. 2016. p. 163–73.
19.  Görlach  A,  Bertram  K,  Hudecova  S,  Krizanova  O.  Calcium  and  ROS:  A  mutual interplay. Vol. 6, Redox Biology. 2015. p. 260–71.
20.  Hempel  N,  Trebak  M.  Crosstalk  between  calcium  and  reactive  oxygen  species signaling in cancer. Vol. 63, Cell Calcium. 2017. p. 70–96.
21.  Adcock IM, Caramori G, Barnes PJ. Chronic obstructive pulmonary disease and lung cancer: new molecular insights. Respiration. 2011;81(4):265–84.
22.  Van Den Ende W, Peshev D, De Gara L. Disease prevention by natural antioxidants
and prebiotics acting as ROS scavengers in the gastrointestinal tract. Vol. 22, Trends in Food Science and Technology. 2011. p. 689–97.
23.  Nimse, SB, Pal D. Free radicals, natural antioxidants, and their reaction mechanisms. RSC Adv. 2015;5:27986–8006.
24.  Erdman JW, Ford NA, Lindshield BL. Are the health attributes of lycopene related to its antioxidant function? Vol. 483, Archives of Biochemistry and Biophysics. 2009. p. 229–35.
25.  Periago  MJ,  García-Alonso  J,  Jacob  K,  Olivares  AB,  Bernal  MJ,  Iniesta  MD,  et  al. Bioactive  compounds,  folates  and  antioxidant  properties  of  tomatoes (Lycopersicum  esculentum)  during  vine  ripening.  Int  J  Food  Sci  Nutr. 2009;60(8):694–708.
26.  Kaur  A,  Dhari  J,  Sharma  OP,  Gupta  GD,  Kharb  V.  Lycopene.  Int  J  Pharm  Technol. 2011;3(4):1605–22.
27.  Tanumihardjo SA. Carotenoids and human health. Carotenoids and Human Health. 2013. 1-331 p.
28.  Agarwal  S,  Rao  A  V.  Tomato  lycopene  and  its  role  in  human  health  and  chronic diseases. CMAJ [Internet]. 2000;163(6):739–44.
29.  Kamiloglu  S,  Boyacioglu  D,  Capanoglu  E.  The  effect  of  food  processing  on bioavailability of tomato antioxidants. Vol. 3, Journal of Berry Research. 2013. p. 65– 77.
30.  Devaraj  S,  Mathur  S,  Basu  A,  Meyers  S,  Jialal  I,  Aung  HH,  et  al.  A  Dose-Response Study  on  the  Effects  of  Purified  Lycopene  Supplementation  on  Biomarkers  of Oxidative Stress. J Am Coll Nutr. 2008;27(2):267–73.
31.  Rahal A, Kumar A, Singh V, Yadav B, Tiwari R, Chakraborty S, et al. Oxidative stress, prooxidants,  and  antioxidants:  The  interplay.  Vol.  2014,  BioMed  Research International. 2014.
32.  Bouayed  J,  Bohn  T.  Exogenous  Antioxidants—Double-Edged  Swords  in  Cellular Redox  State:  Health  Beneficial  Effects  at  Physiologic  Doses  versus  Deleterious Effects at High Doses. Oxid Med Cell Longev. 2010;3(4):228–37.