JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi

## PERBANDINGAN PEMERIKSAAN IgM ANTI SALMONELLA TYPHI DENGAN METODE ICT DAN ELISA PADA PASIEN WIDAL POSITIF
Alpian Jayadi* 1 , Jusak Nugraha 2 , Marijam Purwanta 3
1 Departemen S2 Imunologi Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga Surabaya
2 Departemen Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya
3 Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya Email: js.js2017@gmail.com

## Abstrak
Salmonella  typhi  merupakan  bakteri  batang  Gram  negatif  yang  menjadi  penyebab enteric fever  atau  demam  tifoid.  Deteksi  dini  terhadap  adanya  IgM  anti  S.typhi  merupakan tantangan dalam penegakan diagnosis di laboratorium. Penelitian ini bertujuan mengetahui perbedaan hasil  dari pemeriksaan IgM  anti  Salmonella typhi dengan  menggunakan  metode ICT (Immunochromatogrhafi)  dan ELISA pada pasien Widal positif. Sampel dari penelitian ini sebanyak 45 yang diambil dari sisa serum pasien yang terdiagnosis Widal positif. Hasil dari  penelitian  ini  adanya  tingkat  kesesuaian  antara  uji  ICT  (Immunochromatogrhafi) dengan menggunakan Rapid Thypidot IgM Salmonella typhi dan ELISA menggunakan teknik indirect  ELISA  dengan  nilai  Kappa  0,509  sehingga  menunjukkan  tingkat  kesesuaian  yang sedang.
Kata kunci : Salmonella typhi, ICT, ELISA, Widal positif.
1. PENDAHULUAN
Salmonella  typhi merupakan  patogen fakultatif  intraseluler  yang  memerlukan  faktor virulensi  untuk  tetap  hidup  di  dalam  sel  agar berhasil  berkolonisasi  dan  bereplikasi  masuk ke  dalam  jaringan  (Cheminay et  al. ,  2005). Salmonella  typhi merupakan  salah  satu penyebab  penyakit  infeksi  tersering  di  daerah tropis (Hanna et al. , 2005).
Salmonella  typhi merupakan  bakteri batang  Gram  negatif  yang  menjadi  penyebab enteric  fever atau  demam  tifoid. Salmonella typhi bersifat  patogen  pada  manusia.  WHO mencatat  secara  global  bahwa  insidensi demam  tifoid  adalah  21  juta  kasus  setiap tahunnya.  Angka  kematian  insidensi  global tersebut  mencapai  1-4  %  dan  90%  kematian tersebut  terjadi  di  Asia.  Kasus-kasus  pada daerah  endemis  cenderung  untuk  mengalami kegagalan  pengobatan  terhadap  beberapa
antibiotik yang disebut Multi-Drugs Resistance (WHO, 2008).
Salmonella  typhi adalah  bakteri patogen  yang  khusus  menyerang  manusia  dan dalam  perkembangannya  demam  tifoid  telah menyebabkan  banyak  kematian  di  seluruh dunia,  terutama  pada  negara  berkembang seperti Indonesia.
Pemeriksaan laboratorium untuk menegakkan  diagnosis  demam  tifoid  secara garis  besar  dapat  dibedakan  menjadi  empat kelompok yaitu (1) pemeriksaan darah tepi, (2) pengisolasian  kuman  penyebab  demam  tifoid S.typhi dengan biakan kuman, (3) pemeriksaan serologi  untuk  mendeteksi  antibodi  terhadap antigen S. typhi dan penentuan adanya antigen spesifik  dari S.  typhi dan  (4)  pelacakan  DNA kuman S. typhi .
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
Diagnosis  pasti  dapat  dilakukan dengan  menggunakan  biakan  kuman  dari darah,  urin,  feses,  sumsum  tulang,  cairan duodenum atau dari rose spots . Pada beberapa penelitian didapatkan biakan darah terhadap S. typhi tergantung  dari  saat  pengambilan  pada perjalanan  penyakit.  Persentase  terdeteksinya kuman  antara  70-90%  pada  minggu  pertama sakit,  dan  positif  50%  pada  akhir  minggu ketiga.  Pada  pemeriksaan  kultur  darah, ketidakefektifan  ditemukan  pada  penderita demam tifoid yang sebelumnya telah mendapat  antibiotik,  sehingga  menghambat pertumbuhan  kuman  dalam  media  biakan  dan hasil  kultur  menjadi  negatif.  Volume  darah terlalu  sedikit  (kurang  dari  5  cc)  juga  dapat mengakibatkan pembacaan hasil kultur menjadi  negatif.  Riwayat  vaksinasi  dapat menimbulkan antibodi pada darah pasien yang dapat  menekan  bakteriemia  hingga  kultur darah menjadi negatif (Tumbelaka, 2003).
Walaupun spesifisitasnya tinggi, pemeriksaan  kultur  mempunyai  sensitivitas yang  rendah  dan  adanya  kendala  berupa lamanya  waktu  yang  dibutuhkan  (5-7  hari) serta  peralatan  yang  lebih  canggih  untuk identifikasi  bakteri  sehingga  tidak  praktis  dan tidak  tepat  untuk  dipakai  sebagai  metode diagnosis  baku  dalam  pelayanan  penderita (Hayat, 2011).
Pemeriksaan lain adalah pemeriksaan serologis
yaitu pemeriksaan
Widal, pemeriksaan metode Dot Enzym Immunoassay (Typhidot), metode Enzymelinked Immunosorbent  Assay (ELISA),  pemeriksaan Dipstik  dan  pemeriksaan  Tubex.  Pemeriksaan Widal  merupakan  metode  serologi  yang banyak  dilakukan  di  Indonesia  namun  sulit untuk  dijadikan  pegangan  karena  belum  ada kesepakatan  standar  aglutinasi  ( cut-off  point ). Belum  ditemukan  adanya  kesamaan  pendapat tentang  titer  aglutinin  yang  bermakna  untuk diagnosis  demam  tifoid.  Batas  titer  aglutinin yang  sering  digunakan  hanya  kesepakatan saja,  berlaku  setempat,  dan  bahkan  dapat berbeda  di  berbagai  laboratorium.  Selain  itu, sensitivitas pemeriksaan Widal hanya 74% dan spesifisitas 17 % (Marleni, 2012).
Berbagai  metode  diagnostik  sebagai pengganti pemeriksaan Widal dan kultur darah sebagai metode konvensional masih memerlukan  penelitian  lebih  lanjut.  Beberapa metode  diagnostik  yang  lebih  cepat,  mudah dilakukan  dan  terjangkau  harganya  untuk negara  berkembang  dengan  sensitivitas  dan spesifisitas yang cukup baik, seperti pemeriksaan  Tubex,  Typhidot  dan  Dipstik mulai  dapat  dikembangkan  penggunaannya  di Indonesia (Tumbelaka, 2003).
Pendeteksian dini antibodi anti S.typhi masih  belum  maksimal,  penyebabnya adalah  titer  antibodi  yang  rendah  saat pemeriksaan laboratorium sehingga berdampak  pada  kurang  maksimalnya  hasil diagnosis yang didapat. Berbagai metode yang dipergunakan dengan mempertimbangkan sensitivitas  dan  spesifitas  yaitu  dengan  uji imunokromatografi
(ICT)
dengan menggunakan  Typhidot  IgM  anti Salmonella typhi dan  uji  ELISA  ( Enzyme  Linked
Immunosorbent Assay ). Dimana imunokromatografi (ICT) menggunakan Typhidot IgM anti Salmonella typhi merupakan Pemeriksaan Typhidot yang dimodifikasi.  Pada  kasus  reinfeksi,  respon imun  sekunder  (IgG)  teraktivasi  berlebihan dan  IgM  sulit  terdeteksi.  IgG  dapat  bertahan sampai  2  tahun  sehingga  pendeteksian  IgG saja tidak dapat digunakan untuk membedakan antara  infeksi  akut  dengan  kasus  reinfeksi pada  kasus  pemeriksaan  primer.  Untuk mengatasi  masalah  tersebut,  pemeriksaan Typhidot  IgM  anti Salmonella  typhi mampu menginaktivasi  total  IgG  pada  sampel  serum. Pemeriksaan  Typhidot  IgM  anti Salmonella typhi ,  memungkinkan  ikatan  antara  antigen dengan  IgM  spesifik  yang  ada  pada  serum pasien (Hayat, 2011).
Typhidot  telah  dievaluasi  di  banyak daerah endemik demam tifoid di seluruh dunia seperti  Indonesia,  Malaysia,  Pakistan  dan Philipina. Pada penelitian Gopalakhrisnan dkk (2002) didapatkan sensitivitas pemeriksaan ini sebesar  98%,  spesifisitas  sebesar  76,6%  dan efisiensi  pemeriksaan  sebesar  84%.  Pada penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Karen  H dkk  di  tahun  2011  sensitivitas  dan  spesifisitas
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
Typhidot  yaitu  75%  dan  67%  (Tumbelaka, 2003; WHO, 2003).
Sedangkan uji ELISA ( Enzyme Linked  Immunosorbent  Assay )  merupakan pemeriksaan  serologis  yang  sering  dipakai untuk  menganalisis  adanya  interaksi  antigen- antibodi  di  dalam  suatu  sampel  dengan menggunakan  enzim  (WHO,  2003).  Menurut Ismail  dalam  penelitiannya  tahun  2000 pemeriksaan  ini  memiliki  spesifisitas  95%, namun  memiliki  kelemahan  dimana  besar kemungkinan  terjadinya false  positive karena adanya  reaksi  silang  antara  antigen  yang  satu dengan  yang  lain,  sedangkan  hasil false negative terjadi jika pemeriksaan ini dilakukan pada window period (waktu  pembentukan antibodi  baru  dimulai  sehingga  jumlah antibodi tersebut masih sedikit dan kemungkinan tidak dapat terdeteksi). Walaupun hasil pemeriksaan ELISA lebih baik dari  Widal,  namun  perlu  dipertimbangkan karena  adanya  nilai  positif  pada  kasus brusellosis (Marleni, 2012).
Berbagai
penelitian
mengenai
sensitifitas  dan  spesifisitas  pemeriksaan  yang bervariasi mendorong keinginan penulis untuk mengetahui  perbandingan  pemeriksaan  IgM Anti Salmonella typhi dengan  metode  ICT ( Imunochromatogrraphy ) dan ELISA ( Enzyme-linked  Immunosorbent  Assay )  pada pasien Widal positif.
Tujuan penelitian ini adalah menjelaskan perbandingkan  hasil pemeriksaan metode  ICT  dan  ELISA  pada  demam  tifoid dan mengetahui perbedaan hasil antara metode ICT  dengan  ELISA  pada  pemeriksaan  IgM anti Salmonella  typhi pada  pasien  Widal positif.
Dengan menggunkan metode ICT dan ELISA  tidak  ada  perbedaan  hasil  dalam pemeriksaan  IgM  anti Salmonella  typhi pada pasien dengan Widal positif.

## 2. METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian observasional  analisis  dengan  rancangan penelitian cross  sectional  study .  Populasi dalam penelitian ini adalah semua pasien yang
terdiagnosis  Widal  positif.  Sampel  penelitian ini  adalah  spesimen  dari  pasien  terdiagnosis Widal  positif.  Dengan  kriteria  inklusi  yaitu Widal  positif  dengan  titer  1/80,  1/160,  1/320 dan semua umur < 50 tahun. Sedangkan untuk kriteria  eksklusi  yaitu  RA,  SLE,  dan  penyakit Autoimun  lainnya.  Jumlah  sampel  dalam penelitian  ini  sebanyak  45  sampel  serum pasien  yang  terdiagnosis  Widal  positif. Pengambilan sampel dilakukan secara consecutive  sampling. Pengambilan  sampel akan  dihentikan  bila  telah  mencapai  sejumlah sampel penelitian atau jumlah sampel minimal terpenuhi.
Bahan yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  serum  dari  pasien  yang terdiagnosis  Widal  positif,  pemeriksaan  ICT menggunakan Typhidot  Rapid IgM  50  kDa S. typhi dan  kit  ELISA  merupakan  sampel larutan  pengencer  (diluents),  larutan  buffer ( wash  concentrate ),  konjugat  enzim,  substrat TMB,  kalibrator,  kontrol  positif,  kontrol negatif, dan stop solution .
Instrument  penelitian  ini  adalah tabung  sentrifuge,  tabung  eppendorf  1  ml, mikropipet dan tips, sentrifuge, freezer/refrigator ,  timer,  washer  ELISA  dan ELISA reader (450 nm).
Penelitian ini dilaksanakan di laboratorium  patologi  klinik  RSUD  Dr. Soetomo  Surabaya.  Penelitian  dilaksanakan pada bulan Mei-Juli 2015.

## 2.1. Pengumpulan spesimen
Serum untuk pemeriksaan didapatkan dari  pasien  dengan  Widal  positif  (1/80,  1/160 dan  1/320)  yang  sudah  diterima  oleh laboratorium rumah sakit  Soewandi Surabaya. Kemudian  darah  vena  disentrifus  dengan kecepatan  5000  rpm  selama  10  menit  dengan suhu ruangan. Supernatant diambil secara hati- hati  sehingga  jika  terjadi  resuspensi  maka dilakukan  sentrifugasi  lagi.  Supernatant  yang telah  diambil  langsung  dapat  digunakan  atau disimpan  pada  -20 o C  atau  disimpan  pada temperature  4 o C  dengan  ditambahkan  sodium azide 0,02%.
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
2.2. Prosedur  pengumpulan  data  dari pemeriksaan ICT
ICT  yang  digunakan  pada  penelitian ini  yaitu  untuk  pemeriksaan  IgM  anti Salmonella typhi ( Typhidot Rapit IgM Salmonella typhi ). Adapun
cara pemeriksaannya  yaitu  meneteskan  30-35µl spesimen  di  sumuran  persegi. Selanjutnya meneteskan  Buffer  di  sumuran  oval,  dan terakhir  menarik  plastik  untuk  melihat  hasil dalam  15  menit.  Hasil  dinyatakan  positif  bila terdapat  dua  garis  dan  dinyatakan  negatif  bila terdapat  satu  garis  yang  langsung  dilihat  pada alat tersebut.

## 2.3. Prosedur pengumpulan data dari pemeriksaan ELISA
Teknik ELISA yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  untuk  pemeriksaan  IgM anti Salmonella typhi . Adapun cara pemeriksaan IgM anti Salmonella typhi adalah semua  spesimen  dan  kit  ELISA  ke  suhu ruangan (18 0 - 26 0 C) secara perlahan. Selanjutnya  diberi  nomer  atau  kode  sampel, kontrol  positif,  kontrol  negatif  pada  sisi pegangan  dari  lapisan  strip  sumur  masing- masing.  Setelah  itu,  kontrol  negatif,  kontrol positif  dan  kalibrator  siap  untuk  digunakan. Selanjutnya  siapkan  1:101  larutan  sampel, dengan  menambahkan  5  µl  serum  ke  dalam 0,5  ml  larutan  pengencer  sampel  (sampel diluent),  lalu  campur  rata.  Kemudian  larutan sampel, kalibrator, kontrol positif, dan kontrol negatif,  masing-masing  dipipet  100  µl, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  sumur  sesuai kode  masing-masing.  Kemudian  untuk  blanko reagen  dipipet  100  µl  larutan  pengencer sampel  dimasukkan  ke  dalam  sumur  1A, setelah  itu  diinkubasi  selama  20  menit  pada suhu ruang. Selanjutnya kelebihan cairan pada seluruh  sumur  dibuang.  Kemudian  masing- masing  sumur  dicuci  sebanyak  tiga  kali masing-masing  dengan  300  µl  buffer,  setelah itu  cairannya  dibuang  dengan  membalikkan posisi  plate  dan  menekan-nekannya  diatas bantalan tisu. Kemudian masing-masing sumur ditambahkan 100 µl konjugat enzim. Kemudian  diinkubasi  selama  20  menit  pada suhu ruang. Selanjutnya kelebihan cairan pada seluruh  sumur  dibuang,  kemudian  masing-
masing  sumur  dicuci  sebanyak  tiga  kali masing-masing  dengan  300  µl  buffer,  setelah itu cairannya dibuang dengan membalik posisi plate  dan  menekan-nekannya  diatas  bantalan tissue. Kemudian masing-masing sumur ditambahkan 100 µl substrat  TMB, setelah itu diinkubasi  selama  10  menit  pada  suhu  ruang. Selanjutnya masing-masing sumur ditambahkan  100  µl stop  solution .  Kemudian baca  OD  pada  panjang  gelombang  450  nm menggunakan  ELISA reader dalam  15  menit. Hasil  dinyatakan  sebagai  negatif  dan  positif berdasarkan  indeks  antibodi  yaitu  nilai  hasil dari  OD  sampel  dibagi  dengan  nilai cut  off . Nilai cut  off ditentukan  berdasarkan  OD kalibrator  dikali  dengan  kalibrator  faktor. Indeks  antibodi  ELISA  berkisar  dari  <  0,9 (negatif)  dan  >  1,1  (positif)  (Calbiotech, 2014).
Data  yang  diperoleh  pada  masing- masing variabel disajikan secara deskriptif dan dalam bentuk table dan  grafik. Data dianalisis dengan menggunakan uji Kappa.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Data Penelitian
Pada  tahap  awal  penelitian  dilakukan pengumpulan  sampel  sebanyak  45  sampel, yang  terdiri  dari  laki-laki  sebanyak  17  orang dan  perempuan  sebanyak  28  orang  dengan rentang usia 1-49 tahun.
Tahap  berikutnya  yaitu  pemeriksaan IgM  anti S.typhi dengan  metode  ICT  dengan menggunakan kit Rapid Typidot IgM Salmonella  typhi dari  PT  NELTA  MULTI GRACIA  bekerja  sama  dengan Reszon Diagnostics  Internasional .  Hasil  pemeriksaan dinyatakan  berdasarkan  garis  yang  terlihat, dimana  dinyatakan  negatif  bila  terdapat  satu garis  saja  dan  positif  bila  terdapat  dua  garis. Selanjutnya  dilakukan  pemeriksaan  yang kedua  dengan  metode  ELISA  menggunakan teknik Indirect ELISA  yang  terdapat  di  kit ELISA S.typhi IgM  human  dari  Calbiotech, dimana  hasilnya  dinyatakan  dengan  indeks antibodi (indeks Ab), dimana indeks Ab < 0,9 dikatakan  negatif  dan  indeks  Ab  >  1,1 dinyatakan positif.
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
3.2. Analisis dan Hasil Penelitian 3.2.1. Hasil Analisis Deskriptif Usia Pasien
Hasil  analisis  statistik  deskriptif  usia pasien dapat dilihat pada tabel 5.1 dibawah ini, sebagai berikut:
Tabel 5.1 Hasil Analisis Statistik Deskriptif
Usia Pasien N Mi n Ma k Mean SD Umu r 4 5 1 49 17,337 1 10,9948 2
Jumlah  pasien  sebanyak  45  dengan umur pasien termuda adalah 1 tahun dan umur pasien  tertua  adalah  49  tahun    dengan  umur rata-rata 17 tahun  ±11 tahun.

## 3.2.2. Hasil analisis deskriptif jenis kelamin
Presentase  jenis  kelamin  pada  pasien dapat  dilihat  pada  tabel  5.2  dibawah  ini, sebagai berikut:
Tabel 5.2 Presentase Jenis Kelamin Pasien Frekuensi Persentase Laki-laki 17 37,8 Perempuan 28 62,2 Total 45 100
Jenis  kelamin  pada  pasien  adalah laki-laki sebanyak 17 orang dengan persentase (37,8%)  dan  perempuan  sebanyak  28  orang dengan presentae (62,2%).

## 3.2.3. Hasil analisis deskriptif Antigen O
Presentase untuk hasil analisis Antigen  O  dapat  dilihat  pada  table  5.3 dibawah ini, sebagai berikut:

## Tabel 5.3 Hasil Analisis Deskriptif Antigen
O Frekuensi  Persentase Negatif 12 26,7 80 15 33,3 160 12 26,7 320 6 13,3 Total 45 100
Berdasarkan  data  pada  tabel  5.3 diatas  dapat  dijelaskan  untuk  hasil  deskriptif Antigen  O  yaitu  hasil  dari  titer  yang  negatif dan titer 160 sebanyak 12 (26,7%), dan titer 80 sebanyak  15  (33,3%),  sedangkan  titer  320 sebanyak 6 (13,3%).

## 3.2.4. Hasil analisis deskriptif Antigen H
Persentase untuk hasil analisis Antigen  H  dapat  dilihat  pada  tabel  5.4 dibawah ini, sebagai berikut:
Tabel 5.4 Hasil Analisis Deskriptif Antigen
H Frekuensi Persentase Negatif 15 33,3 80 10 22,2 160 7 15,6 320 13 28,9 Total 45 100
Berdasarkan  data  pada  tabel  5.4 diatas  dapat  dijelaskan  untuk  hasil  deskriptif antigen  H  yaitu  hasil  dari  titer  yang  negatif sebanyak  15  (33,3%),  untuk  titer  80  sebanyak 10 (22,2%) dan titer 160 sebanyak 7 (15,6%), serta pada titer 320 sebanyak 13 (28,9%).
3.2.5. Analisis  hasil  pemeriksaan  IgM  anti S.typhi dengan menggunakan kit ICT
Hasil  pemeriksaan  IgM  anti S.typhi dengan  menggunakan  kit  ICT  dapat  dilihat pada tabel 5.5 dibawah ini, sebagai berikut:
Tabel 5.5 Hasil Analisis Pemeriksaan IgM anti S.typhi menggunakan kit ICT ICT Persentase Positif 26 57,8 Negatif 19 42,2 Total 45 100 Berdasarkan tabel 5.5 diatas didapatkan  hasil  pemeriksaan  menggunakan kit  ICT  dari  sampel  serum  45  orang  dengan Widal positif menunjukkan 26 (57,8%) sampel positif dan 19 (42,2%) sampel negatif.
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
3.2.6. Hasil Analisis Pemeriksaan IgM Anti S.typhi Menggunakan Kit ELISA
Hasil  pemeriksaan  IgM  anti S.typhi dengan  menggunakan  kit  ELISA  dapat  dilihat pada tabel 5.6 dibawah ini, sebagai berikut:

## Tabel 5.6 Hasil Analisis Pemeriksaan IgM
Anti S.typhi Menggunakan kit ELISA ELISA Persentase Negatif 22 48,9 Borderline positif 4 8,9 Positif 19 42,2 Total 45 100 Berdasarkan tabel 5.6 diatas
didapatkan  hasil  pemeriksaan  dengan  kit ELISA  menunjukkan  19  (42,2%)  sampel positif  dan  22  (48,9%)  sampel  negatif  serta  4 (8,9%)  diantaranya  menunjukkan  hasil  BLP (Borderline Positif).

## 3.2.7. Hasil Tabulasi Silang antara Antigen O dengan kit ICT
Hasil tabulasi silang antara Antigen O dengan  kit  ICT  dapat  dilihat  pada  tabel  5.7 dibawah ini, sebagai berikut:

## Tabel 5.7. Hasil Tabulasi Silang Antara
Antigen O dengan kit ICT ICT T ot al Per sent ase Ne ga tif Per sent ase P os iti f Per sent ase An tig en O Ne ga tif
4 21,1 8 30,8 1 2 26,7 1/ 80 9 47,4 6 23,1 1 5 33,3 1/ 16 0
5 26,3 7 26,9 1 2 26,7 1/ 32 0
1 5,3 5 19,2 6 13,3 To tal 19 100 26 100 4 5 100
Regresi logistik sederhana; p = 0,390
Dari tabel 5.7 dapat dijelaskan bahwa hasil  analisis  tabulasi  silang  antara  Antigen  O dan  kit  ICT  (Rapid  Thypidot  IgM Salmonella typhi )  yaitu  untuk  titer  1/80  sebanyak  9 (47,4%)  negatif  dan  6  (23,1%)  positif,  untuk titer yang 160 sebanyak 5 (26,3%) negatif dan 7  (26,9%)  positif,  untuk  titer  320  sebanyak  1 (5,3%)  negatif  dan  5  (19,2%)  positif, sedangkan  untuk  yang  negatif  terdapat  4 (21,1%)  negatif  dan  8  (30,8%)  positif  serta dengan  nilai  p  =  0,390  sehingga  tidak signifikan.
3.2.8. Hasil Tabulasi Silang Antara

## Antigen H dengan kit ICT
Hasil tabulasi silang antara Antigen H dengan  kit  ICT  dapat  dilihat  pada  tabel  5.8 dibawah ini, sebagai berikut:
Tabel 5.8. Hasil tabulasi silang antara Antigen H dengan kit ICT
ICT T ot al Per sent ase Ne ga tif Per sent ase P os iti f Per sent ase An tig en H Ne ga tif 11 57,9 4 15,4 1 5 33,3 1/ 80 4 21,1 6 23,1 1 0 22,2 1/ 16 0 2 10,5 5 19,2 7 15,6 1/ 32 0 2 10,5 11 42,3 1 3 28,9 To tal 19 100 26 100 4 5 100
Dari tabel 5.8 dapat dijelaskan bahwa hasil  analisis  tabulasi  silang  antara  Antigen  O dan  kit  ICT  (Rapid  Thypidot  IgM Salmonella typhi ) yaitu untuk titer 80 sebanyak 4 (21,1%) negatif dan 6 (23,1%) positif, untuk titer yang 160 sebanyak 2 (10,5%) negatif dan 5 (19,2%) positif,  untuk  titer  320  sebanyak  2  (10,5%)
Regresi logistik sederhana; p = 0,006
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
negatif  dan  11  (42,3%)  positif,  sedangkan untuk yang negatif terdapat 11 (57,9%) negatif dan  4  (15,4%)  positif    serta  dengan  nilai  p  = 0,006  sehingga  ada  keterkaitan  hubungan (signifikan).
3.2.9. Analisis  statistik  hasil  positif  dan negatif pemeriksaan IgM anti S.typhi menggunkan kit ICT dan ELISA
Dengan  melakukan  tabulasi  silang dari  hasil  pemeriksaan  IgM  anti S.typhi menggunakan  kit  ICT  (Rapid  Thypidot  IgM Salmonella typhi ) dan ELISA didapatkan hasil seperti  yang  dilihat  pada  tabel  5.9,  sebagai berikut:
Tabel  5.9. Analisis  Statistik  Hasil  Positif dan  Negatif  Pemeriksaan  IgM  anti S.typhi menggunkan  kit ICT (Rapid Thypidot IgM Salmonella typhi ) dan ELISA ICT T ot al Pers enta se P o si Pers enta se N eg a Pers enta se EL IS A P 1 9 42,2 4 8,9 23 51,1 N 7 15,6 15 33,3 22 48,9 Total 2 6 57,8 19 42,2 45 100 Kappa = 0,509 ;  p = 0,001 Dari  hasil  uji  kesesuaian  Kappa dilakukan untuk
mengetahui tingkat kesesuaian  antara  hasil  kit  ICT  dan  ELISA. Nilai  Kappa  yang  didapatkan  adalah  0,509. Nilai  ini  menunjukkan  bahwa  hasil  ICT  dan ELISA  memiliki  tingkat  kesesuaian  yang sedang.  Sedangkan  nilai  p  didapatkan  0,001 (<0,05),  menunjukkan  bahwa  hasil  ICT  dan ELISA  memiliki  tingkat  kesesuaian  secara bermakna (signifikan).
Pendeteksi  dini  terhadap  adanya  IgM anti S.typhi merupakan  tantangan  dalam penegakan  diagnosis  di  laboratorium  pada kasus  demam  tifoid.  Salah  satu  penyebabnya adalah  masih  rendahnya  kadar  antibodi  IgM saat pemeriksaan di laboratorium.
Pada penelitian ini dilakukan perbandingan  pemeriksaan  IgM  anti S.typhi dengan menggunakan kit ICT yang mendeteksi  IgM  anti  OMP S.typhi dengan Rapid  Thypidot  IgM Salmonella  typhi dan ELISA yang mendeteksi IgM anti LPS S.typhi dengan metode Indirect ELISA.
Dari  total  sampel  yang  diujikan  pada penelitian  ini  didapatkan  hasil  bahwa  sampel yang berasal dari pasien laki-laki sebanyak 17 (37,8%)  dan  perempuan  sebanyak  28  (62,2%) dengan  rentang  usia  bervariasi  yakni  umur termuda  1  tahun  dan  yang  tertua  49  tahun, dengan umur rata-rata 17 tahun ± 11 tahun.
Dari hasil penelitian ini juga diperoleh  antigen  O  dan  H,  dimana  hasil  dari antigen  O  dengan  titer  yang  negatif  dan  titer 160  sebanyak  12  (26,7%),  dan  titer  80 sebanyak  15  (33,3%),  sedangkan  titer  320 sebanyak  6  (13,3%).  Sedangkan  hasil  dari antigen  H  dengan  titer  yang  negatif  sebanyak 15  (33,3%),  untuk  titer  80  sebanyak  10 (22,2%)  dan  titer  160  sebanyak  7  (15,6%), serta pada titer 320 sebanyak 13 (28,9%).
Dari pemeriksaan yang sudah dilakukan  dengan  menggunakan  kit  ICT (Rapid  Thypidot  IgM Salmonella  typhi )  pada pemeriksaaan  IgM  anti S.typhi didapatkan hasil  yang  menunjukkan  26  (57,8%)  sampel positif  dan  19  (42,2%)  sampel  negatif. Sedangkan hasil pemeriksaan dengan menggunkan kit ELISA didapatkan hasil yang menunjukkan  19  (42,2%)  sampel  positif  dan 22  (48,9%)  sampel  negatif  serta  sisanya  4 (8,9%) mengalami Borderline positif.
Hasil  yang  diperoleh  antara  kedua pemeriksaan ini tidak sesuai dengan pemeriksaan  serupa  yang  pernah  dilakukan oleh  peneliti  lain,  dimana  terdapat  kesesuaian yang  sangat  baik  antara  hasil  pemeriksaaan ICT  dan  ELISA  dengan  hasil  sensitifitas  dan spesifitas yang sama (Lim et all .,1998).
Dengan  gambaran  hasil  pemeriksaan uji  ELISA  nampak  bahwa  persentase  yang positif  demam  tifoid  cukup  banyak  yaitu  19 (42,2%)  sampel.  Hal  ini  mungkin  disebabkan oleh  nilai  cut  off  tinggi  dan  sampel  yang diperiksa kadar antibdi IgG anti S.typhi tinggi.
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi
Menurut  Suwarno  (2010),  absorbsi  antigen terlalrut  pada  fase  padat  merupakan  faktor utama yang menentukan sensitivitas suatu asai ELISA. Indonesia  merupakan daerah endemik tifoid,  dimana  kadar  IgG  anti S.typhi pada populasi cukup tinggi. Tingginya kadar IgG ini dapat menghambat reaksi IgM dengan antigen S.typhi pada ELISA. Jadi untuk desain ELISA sebaiknya  dipakai  metode Indirect Capture ELISA  IgG  diikat  terlebih  dahulu  pada  fase padat.
Pada  uji  ELISA  hasil  positif  atau negatif  ditentukan  dari  besar  kecilnya  indeks antibodi.  Deteksi  pada  ELISA  menggunkan ELISA reader dengan detektor khusus sehingga  menghasilkan  nilai  yang  akurat. Munculnya hasil angka yang pasti ini menjadi kelebihan uji ELISA jika dibandingkan dengan uji  ICT.  Hasil  pemeriksaan  positif  pada  ICT bisa menghasilkan negatif pada uji ELISA, hal ini  memungkinkan  disebabkan  ICT  memiliki keterbatasan  akurasi  karena  pembacaan  hanya memerlukan mata sehingga bisa menghasilkan positif  palsu.  Hal  ini  terjadi  terutama  pada kadar  IgM  rendah  yang  hanya  memunculkan garis.
Selain itu hasil positif pada pemeriksaan ICT juga dapat disebabkan akibat infeksi  bakteri Salmonella non  tifoid  seperti infeksi Salmonella enterica serotype enteridis ,
spesies  bakteri  lain  dan  pada  kondisi  lain seperti malaria, gangguan imunologis, penyakit hati kronik serta hasil dari pengobatan  antibiotik  yang  tidak  tepat  (Dong, 2007; Olsen, 2004).
Reaksi  dasar  dari  ICT  dan  ELISA adalah  reaksi  imunologis  antara  antibodi dalam  serum  dengan  antigen  spesifik  dalam alat. Reaksi imunologis yang terjadi dalam alat ICT  yaitu  Rapid  Thypidot Salmonella  typhi . Sedangkan  reaksi  imunologis  yang  terjadi dalam  alat  ELISA  adalah Indirect ELISA. Walupun  kedua  alat  tersebut  sama-sama menggunakan antigen spesifik terhadap antibodi  IgM,  namun  setiap  pabrik  tentu mengembangkan  sendiri  antigennya  sehingga dapat  memiliki  tingkat  sensitivitas  dan spesifisitas tertentu. Terjadinya hambatan pada reaksi imunologis sangat mempengaruhi hasil.
Menurut Suwarno (2010), yang dapat menyebabkan terjadinya hambatan pada reaksi imunologis  antara  lain  adalah  adanya  antibodi heterofil,  antibodi  non  spesifik  lain,  faktor rheumatoid. Hal ini bisa  menimbulkan negatif palsu atau positif palsu.
Dari  uji  Kappa  didapatkan  tingkat kesesuaian  yang  sedang  yaitu  0,509.  Menurut Dahlan  (2014),  interpretasi  nilai  Kappa  dan tingkat kesesuaian bervariasi dari 0,02 (sangat rendah) ,0,2-0,4 (rendah), .0,4-0,6 (sedang).0,6-0,8  (kuat)  dan  .0,8-1  (sangat kuat). Dengan tingkat kesesuaian yang sedang menunjukkan uji ICT dan uji ELISA memiliki tingkat  kesesuaian  secara  bermakna  atau signifikan.
4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan, sebagai berikut:
1. Ada perbedaan hasil antara pemeriksaan IgM  anti Salmonella  typhi dengan menggunkan  metode  ICT  dan  ELISA pada pasien Widal positif.
2. Terdapat  tingkat  kesesuaian  yang  baik antara hasil uji ICT menggunkan Rapid Thypidot  IgM Salmonella  typhi dan ELISA  pada  pemeriksaan  IgM  anti Salmonella  typhi dengan  pasien  Widal positif.

## 5. Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap  sampel  darah  pasien  Widal  positif dengan  uji  ICT  menggunkan  Rapid  Thypidot IgM Salmonella  typhi dan  ELISA  dengan menggunakan  kultur darah sebagai baku emas untuk  mendapatkan  hasil  sensitivitas  dan spesifisitas yang maksimal terhadap kedua tes.
JBP Vol. 17, No. 2, Agustus 2015—Alpian Jayadi

## DAFTAR PUSTAKA
Cheminay,  C.,  A.  Mohlenbrink.,  and  M. Hansel, 2005. ”Intracelluler Salmonela inhibit antigen
presentation  by  dendritic  cells.”
J. Immunol. 174 :2892-2899 .
Hanna,  Endah  T.,  dan  Hana  R,  2005.
“Pengaruh
pH terhadap Pertumbuhan Salmonella typhi In Vitro.” Artikel  penelitian.  JKM, Vol. 5 No. 1.
Hayat  AS.,  2011.  “Evaluation  of  Typhidot
(IgM) in early and rapid diagnosis of typhoid  fever.” Professional  Med. 18(2): 259-264.
L i m , P a k L e o n g . , e t   a l . ” O n e S t e p   2 M i n u t e   T e s t   t o   D e t e c t   T y p h o i d S p e s i f i c Antibo dies Based on Particle Separation in Tube.” Journal
of Clinical
Microbiology.1998: 2271-2278.
Marleni  M.,  2012. Ketepatan  pemeriksaan Tubex TF dibandingkan Nested-PCR dalam  mendiagnosis  demam  tifoid pada  anak  pada  demam  hari  ke-4. Palembang:  Fakultas  Kedokteran Universitas Sriwijaya.
Olsen,  S.J.,  et  al.,  2004.  ”Evaluation  of  Rapid Diagnostic  Test  for  Tyhoid  Fever.”
J. Clin. Microbiol 42(5): 1885-1889.
Suwarno, Rantam, F.A., Ernawati, R., Sianita, N.,  Rahardjo,  A.P.  and  Rahmahani,
J., 2010. ELISA Teori dan Protokol.
Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya. Tumbelaka.,  2003.  “Tata  Laksana  Demam Tifoid Pada Anak. Pediatrics Update.” Naskah lengkap Pendidikan Kedokteran Berkelanjutan  Ilmu  Kesehatan  Anak IDAI Jaya.
World  Health  Organization  (WHO).  2008. Typhoid fever.http://www.who.int.
WHO. The Diagnosis, Treatment, and Prevention of Thypoid Fever. Geneva : 2003. p. 11-16.