Seleksi dan Karakterisasi Bakteri Endofit dari Tumbuhan Raru ( Cotilelobium melanoxylon ) Pendegradasi Selulosa
1 Sirma Lubis 2 Riwayati 3 Idramsa Biologi, FMIPA UNIMED

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menyeleksi  dan  mengisolasi  isolat  bakteri  endofit  pada  kulit  batang tumbuhan raru ( Cotilelobium melanoxylon ) yang mampu mendegrasi selulosa, dan mengkarakterisasikan  bakteri  tersebut  berdasarkan  karakter  morfologi,  Fisiologi  dan  biokimianya. Penelitian ini dilaksanakan di laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam, Universitas  Negeri  Medan  selama  tiga  bulan  yaitu  mulai  bulan  Mei  sampai  Juli  2015.  Sampel  isolat bakteri  endofit  pada  kulit  batang  tumbuhan  Raru  ( Cotilelobium melanoxylon )  merupakan  koleksi  dari laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan. Isolat bakteri  pendegradasi  selulosa  dilakukan  secara  analisis  kuantitatif  dengan  melihat  zona  bening  pada media CMC agar  yang telah diinokulasikan bakteri endofit setelah diinkubasi selama 10 hari pada suhu 30 o C.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  dari  24  isolat  diperoleh  1  isolat  yang  mampu  untuk mendegradasi selulosa yaitu ER 11.  Memiliki koloni bulat dengan tepi koloni rata, warna koloni putih kekuningan  dengan  permukaan  licin  dan  elevasi  rata,  bakteri  tersebut  termasuk  bakteri  Gram  positif. Suhu  optimum  untuk  pertumbuhan  isolat  ER  11  adalah  35 o C.  Dan  pH  optimum  untuk  pertumbuhan isolat bakteri ER 11 adalah 6.5 sampai 7.2
Kata Kunci : Bakteri, Endofit, CMC, Raru, Pendegradasi Selulosa
Selection and Karakterisasi Bacteria Endofit from bark of The Raru (Cotilelobium Melanoxylon) Cellulose in degradate

## ABSTRACT
This  study  aimed  to  selection  and  isolate  isolate  endophyttic  bacteria  on  plant  stem  bark  raru ( Cotilelobium  melanoxylon )  capable  of  cellulose  in  degradate,  and  characterize  bacteria  based  on morphology  character,  Physiology  and  bichemistry.  The  research  was  conducted  in  the  laboratory  of Biology, Faculty Mathematics and Natural Sciences, University of Medan for three months, ie from May to  july  2015.  The  sample  isolate  of  endophytic  bacteria  on  plant  stem  bark  raru  ( Cotilelobium melanoxylon )  is  a  collection  of  lab  Biology  Faculty  of  mathematics  and  Science  Nature,  University  of Medan. Isolation of bacterial cellulose in degradate performed a quantitative analysis by looking at the clear zone that has been inoculated media CMC the bacteria. The result showed that of the 24 isolates obtained 1 isolates were capable of cellulose in degradate ER 11 ie. has a rounded character bacterial colonies  with  flat  edges,  translucent  white  colony  color,  whit  a  smooth  surface  and  a  flat  elevation, including both Gram positive bacteria. The optimum temperature for growth of isolates bacteria ER 11 is. And the optimum pH for growth of bacterial isolates ER 11 is 6.5 to 7.2.
Keywords : Bacteria, Endophytic, CMC, Raru, in degradate.

## Pendahuluan
Sumber  daya  hayati  Indonesia,  khususnya mikroorganisme  belum  banyak  diteliti  dan
dimanfaatkan,  padahal  potensi  sebagai  sumber bahan  aktif  dan  senyawa  berharga  yang terkandung  di  dalamnya  sangatlah  besar (Sugijanto et al , 2009). Beberapa
mikroorganisme  dapat  dimanfaatkan  dalam bidang  pertanian  dan  industri. Mikroorganisme tersebut    berupa  jamur,  protozoa  dan  bakteri (Acharya et  al, 2008).  Peningkatan  hasil  –  hasil pertanian diikuti pula oleh meningkatnya limbah hasil  pertanian  seperti  jerami,  tongkol  jagung, batang  kedelai,  dan  lain-lain  (Meryandini et  al, 2009).
Limbah  tersebut  memiliki  komponen  utama lignoselulosa, terdiri atas tiga polimer yang saling berikatan yaitu hemiselulosa,  lignin dan selulosa (Supardjo,  2008).  Selulosa  adalah  karbohidrat berpolimer  berantai  lurus  (1,4)-ß-Dglukosa berbentuk seperti serabut, liat, tidak larut dalam air.  Selulosa  tersebut  ditemukan  dalam  dinding sel pelindung tumbuhan, terutama pada tangkai, batang,  dahan,  dan  semua  bagian  berkayu jaringan tumbuhan (Lehninger, 1982).
Diperkirakan 50% dari biomassa adalah selulosa, jumlahnya sekitar 50 milyar ton (Cailliez, 1993).
Selulosa  terbungkus  dan  terikat  secara ikatan  kovalen  maupun  non-kovalen  pada  lignin dan  hemiselulosa,  ikatan  tersebut  akan mengganggu aktivitas enzim selulase yang hanya spesifik  memotong  ikatan  β-1,4-glikosidik  pada selulosa.  Aktivitas  enzim  selulase  pada  substrat avicel  yaitu  substrat  selulosa  yang  berbentuk kristalin,  menunjukkan  adanya  aktivitas  enzim ekso-1,4-β-  glukanase,  yang  memotong  ujung rantai oligo-sakarida menjadi selobiosa, yaitu dua molekul  glukosa  yang  berikatan  secara  β-1,4- glikosidik (Meryandini et al, 2009). Pemecahan  senyawa  selulosa  ini  dapat dilakukan  dengan  bantuan  bakteri  pendegradasi selulosa. Bakteri pendegradasi selulosa merupakan salah satu mikroorganisme pendegradasi  bahan  organik  dan  memiliki peranan penting dalam biosfir dengan mendaur- ulang  selulosa  (Leschine et  al ,  2006). Limbah selulosa  tersebut  dapat  didegradasi  oleh mikroorganisme  selulolitik  dengan  bantuan enzim selulosa dengan cara mengidrolisis ikatan β -1,4  glikosidik  menjadi  bentuk  yang  lebih sederhana  yaitu  monomer  glukosa dan menjadikannya  sebagai  sumber  karbon  dan sumber  energi  yang  menghasilkan  selobiosa (Hardjo, 1994).
Bakteri  endofit  merupakan  bakteri  sap-rofit yang  hidup  dan  berasosiasi  dengan  jaringan tanaman  tanpa  menimbulkan  suatu  gejala penyakit  pada  tanaman  tersebut.  memiliki
kemampuan  untuk  menghasilkan  metabolit sekunder  (Simarmata,  2007)  dan  menghasilkan enzim  ekstraseluler  seperti  inulinase,  kitinase dan amilase (Yasinok et al, 2008). (Purba, 2013) melakukan  penelitian  mengenai  bakteri  endofit yamg  mampu  untuk  mendegradasi  selulosa terdapat  enam  isolat,  tiga  jenis  bakteri  endofit yang  mampu  untuk  mendegradasi  selulosa diantaranya, Pseudomonas  stutzeri,  Pseudomonas cepacia, dan Acinobacter  antratus dalam penelitian (Marlinda, 2013).
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, peneliti  ingin  meneliti  isolat  bakteri  endofit pendegradasi selulosa dari tumbuhan Cotylelobium melanoxylon . Cotylelobium melanoxylon merupakan  tumbuhan  endemik  di Kabupaten  Tapanuli  dan  hidup  liar  di  dalam hutan  dengan  berbagai  tumbuhan  lain  di sekitarnya (Pasaribu, 2011). Tumbuhan ini telah banyak  dimanfaatkan  sehingga  keberadaannya dikategorikan  langka. Atas  dasar  inilah  peneliti ingin  menyeleksi  dan  mengkarakterisasi  isolat bakteri  endofit  pendegradasi  selulosa  dari tumbuhan Cotylelobium melanoxylon .

## Bahan dan Metode
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium Mikrobiologi  FMIPA  Unimed.  Waktu  penelitian dilakukan pada bulan Mei - Juli  2015.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  adalah  Autoklaf  (TOMY  ES-315),  Laminar Air  Flow  (Streamline®  Model  SHC-4A1), Inkubator,  Magnetik  Stirer  (BIOSAN  MHS-300), Cawan  Petri  (HERMA),  Jarum  Ose,  Lampu Bunsen,  Mikroskop  (ZEISS  Axio  Imager  Al  dan OLIMPUS®),  Kamera  (OLYMPUS),  Erlenmeyer ukuran  250ml  dan  500ml  (PYREX),  Gelas  ukur ukuran 500ml (PYREX), pH meter, Tabung Reaksi (PYREX),  Timbangan  Digital  (AND  HR-200),  Rak tabung,  Objek  glass,  Cover  glass,  Pipet  tetes, Masker,  Sarung  Tangan,  Sikat  gigi,  dan  Botol Semprot.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah Isolat Bakteri Endofit dari Kulit batang tumbuhan Raru ( Cotylelobium melanoxylon ) yang diperoleh  dari  koleksi  di  Laboratorium Mikrobiologi  FMIPA  Unimed,  Aquades  Steril, Nutrien  Agar  (NA),  Alkohol  70%,  NaCl,  Nutrient gelatin,  powder,  Methyl  red,  alcohol,  Potassium hydroxide,  Simmons  citrate  agar,  Trypticase  soy
agar, Carboxy methyl celulosa (CMC), Congo-red, Gram  iodine,  Safranin,  Sabun,  Spritus,  Kertas Pembungkus,  Kertas  Label,  Kertas  Aluminium Foil,  Plastik  Seal/isolatip,  Kapas,  Plastik  Kaca, Karet dan Kertas Tissue.

## Prosedur Penelitian
Media  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  media  NA  (Nutrien  Agar),  CMC ( Carbohymethil celullosa ), Nutrien gelatin, MR-VP broth,  Simmons  citrate,  trypticase  soy  agar  dan H 2 O 2 . Pembuatan  Media Carboxy  methylcelulosa
( CMC) Media Carboxymethil selulosa yang digunakan  dalam  medium  ini  merupakan  media campuran  antara  beberapa  senyawa  yang digunakan  untuk  melihat  kemampuan  bakteri mendegradasi  selulosa.    Pembuatan  media Carboxymethil  selulosa  ini  mengikuti  metode pembuatan  media  oleh  Singh  (2013)  : Menyediakan  bahan  dan  alat  yang  digunakan dalam  pembuatan  CMC  agar  seperti  :  CMC  1  % sebanyak 3 gr, Agar powder 1,5 g rdan kemudian bahan-bahan  tersebut  ditimbang  satu  persatu sesuai  dengan  yang  ditentukan  (Philippidis, 1991). Kemudian  memasukkan  semua  bahan kedalam
Erlenmeyer dan kemu dian menambahkan  aquadest  sebanyak  1  liter, kemudian mengaduknya hingga homogen dan pH 7,  setelah  homogeny  memanaskan  media Carboxymethil  celulosa  menggunakan  Hot  Plate hingga  mendidih,  setelah  mendidih  kemudian dimasukkan  kedalam  alat  sterilisasi  yaitu autoklaf  kemudian  disterilkan  pada  suhu  121°C selama 15 menit. Setelah itu menuangkan media CMC  kedalam  cawan  petri  steril  sebanyak  24 pasang cawan petri denagan menuangkan 15-20 ml media Carhboxymethil celulosa pada suhu +/- 45°C,  kemudian  membiarkannya  memadat  dan kemudian  dibungkus  dengan  menggunakan kertas  pembungkus  setelah  siap  dibungkus dimsukkan  kedalam  lemari  pendingin  sebelum digunakan  1 kali  pengulangan  (Noverita,  et  all. 2009).
Uji selulosa pada Bakteri Endofit Seleksi Isolat Bakteri Endofit yang pendegradasi  Selulosa Isolat  bakteri  endofit  yang  dikulturkan  di inokulasikan kedalam nutrient agar plate dengan penambahan  0,2  %  carboxymethyl  cellulose
(CMC), Menginkubasi pada suhu 30 0 C selama 3 – 5  hari,  Mencuci  permukaan  plate  dengan NaCl  1 M,  adanya  zona  bening  disekitar  koloni merupakan indikator produksi selulosa.
Karakterisasi    Bakteri  Endofit  yang  Mampu Mendegradasi Selulosa
Isolat  bakteri  endofit  yang  positif mampu  mendegradasi  selulosa  kemudian diidentifikasi berdasarkan karakterisasi
morfologi  bakteri  (Koloni  bakteri),  uji  biokimia dan  karakterisasi  fisiologi  bakteri  yang  telah dilakukan oleh Singh, dkk (2013).
Karakterisasi Morfologi Bakteri.

## Pengamatan Morfologi Bakteri
Pengamatan  karakteristik  morfologi bakteri  endofit  yang  tumbuh  pada  media  NA dilakukan  menggunakan  mikroskop.  Adapun metode  yang  digunakan  untuk  mengidentifikasi bakteri  endofit  adalah  metode  yang  digunakan oleh Anggara, dkk (2010) dan Ngoma, dkk (2014), dan  Ali, dkk (2014)  yang  meliputi  pengamatan  : Warna koloni di NA miring, Bentuk koloni di NA miring  (Filiform,  Echinulate,  Beaded,  Effuse, Arborescent,dan  Rhizoid),  Tepi  koloni  di  NA miring  (Entire,  lobate,  undulate,  serrate  atau filament),  Permukaan  koloni  (licin  atau  kasar), Elevasi ( Flat, raised, convex atau umbonate)

## Pewarnaan Gram.
Adapun  tujuan  dari  pewarnaan  gram adalah  untuk  membedakan  bakteri  gram  positif dan  bakteri  gram  negatife.  Metode  pewarnaan yang  digunakan  adalah  metode  yang  dilakukan oleh Zahidah et al., (2013) yaitu :
Menyiapkan  objek  gelas  bersih,  secara  aseptik mengambil  isolat  bakteri  endofit  dengan menggunakan  jarum  ose  sebanyak  1  ose  dan meletakkan inokulum diatas objek glas  tersebut, Menetesi  sediaan  tersebut  dengan  Kristal  violet, membiarkan  selama  1  menit,  membilas  dengan air  mengalir  dengan  menggunakan  botol semprot,  Menuangi  alkohol  96%  setetes  demi setetes  hingga  Kristal  violet  hilang,  setelah  itu dibilas dengan air mengalir dengan menggunakan botol semprot kemudian Menuangi sediaan  dengan  safranin,  kemudian  biarkan
selama  45  detik,  Membilas  dengan  air  mengalir dengan  menggunakan  botol  semprot,  kemudian keringkan  seediaan  dengan  kertas  hisap  secara hati  –  hati,  Mengamati    sediaan  dibawah mikroskop,  beri  minyak  imersi  supaya  hasilnya lebih jelas ketika diamati dibawah mikroskop. Uji Biokimia Bakteri Adapun  metode  yang  digunakan  untuk uji  biokimia  bakteri  adalah  metode  yang digunakan oleh (Capucino dan Sherman, 2001). Uji Pencairan Gelatin
Menginokulasikan bakteri kedalam media Nutrien gelatin, kemudian diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 3 hari, Mengamati perubahan pada media kultur. Uji Pemanfaatan Sitrat Menginokulasikan biakan bakteri kedalam  media  simmon  sitrat  agar,  kemudian menginkubasi biakan bakteri selama 24 – 48 jam pada  suhu  37 0 C,  Mengamati  perubahan  pada media,  dimana  warna  biru  merupakan  indikator positif  dan  hijau  merupakan  indikator  negatife pada uji pemanfaatan sitrat.

## Uji Aktivitas Katalase
Menginokulasikan  biakan  baktei kedalam  media  yeast  exstract  trytone  broth kemudian  di  inkubasi  selama  3  hari  pada  suhu 30 0 C,  Aktivas  katalase  dapat  diamati  dengan meneteskan beberapa tetes H 2 O 2 3 % pada media kultur  kemudian  meletakkan  pada  glass  slide , Adanya  pembentukan  gelembung  oksigen merupakan  indikator  fositif  terjadinya  aktivitas katalase.

## Karakterisasi Fisiologi pH dan Temperatur
Untuk  mengetahui  sifat  fisiologi  bakteri yaitu meliputi kisaran suhu dan pH  untuk dapat tumbuh  dengan  baik  dilakukan  perlakuan  suhu dan  pH  yang  berbeda  pada  setiap  media pertumbuhan  yang  telah  diinokulasikan  biakan bakteri.  Adapaun  meteode  pengamatan  fisiologi bakteri  mengikuti  metode  yang  dilakukan  oleh Saha dan Subhas (2014) yaitu : Menginokulasikan bakteri  pada  media  NA  yang  memiliki  pH  yang berbeda – beda antara lain dengan pH 5, 6,7, 7,5, 8,  9  dan  10.    Menginkubasi  biakan  bakteri  pada suhu  yang  berbeda  –  beda  antara  lain  dengan suhu 20 0 C, 25 0 C, 30 0 C , 35 0 C dan 40 0 C selama 6
–  72  jam,  Kemudian  mengamati  pertumbuhan koloni bakteri pada setiap medium.

## Hasil dan Pembahasan
Uji Bakteri Pendegradasi Selulosa Terhdap 24 Isolat Bakteri Endofit Penelitian  ini  menggunakan  24  isolat bakteri  endofit  yang  diambil  dari  kulit  batang tumbuhan  raru (Cotylelobium  melanoxylon) yang merupakan  koleksi  di  Laboratorium  Biologi Universitas  Negeri  Medan.  Berdasarkan  hasil penelitian  yang  telah  dilakukan  terhadap  24 isolat  bakteri  endofit  diperoleh  1  isolat  yang mampu  untuk  mendegradasi  selulosa,  yaitu  ER
11. Isolat tersebut dikatakan sebagai pendegradasi selulosa dikarenakan isolat bakteri yang  ditumbuhkan  pada  media  Carboxymethil Selulosa terdapat zona bening disekitar koloni.

## Karakter Morfologi bakteri endofit tumbuhan raru pendegradasi selulosa
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  untuk  mengetahui  karakter  morfologi bakteri  pada  ER  11  yang  mampu  untuk mendegradasi  selulosa.  Pada  koloni  ER  11 berwarna putih kekuningan dengan tepi rata, dan berbentuk  bulat.  Warna  koloni  bakteri  ER  11 yang  ditumbuhkan  pada  NA  miring  berwarna putih  dan  menyerupai  pedang.  Pada  pengujian pewarnaan  Gram,  isolat  yang  diuji  yaitu  ER  11 bersifat  Gram  positif. Bakteri  ER  11  barwarna ungu,  Warna  ungu  tersebut  dikarenakan  Kristal violet  yang  ada  pada  dingding  sel,  dan  adanya warba  ungu  tersebut  merupakan  indikator  dri bakteri Gram positif.

## Karakter Fisiologi Bakteri Endofit Tumbuhan
Raru Pendegradasi Selulosa Uji pH Optimum Pada  pengujian  pH  pada  isolat  bakteri ER11  yang  mampu  mendegradasi  selulosa didapatkan  hasil  pertumbuhan  bakteri  yang beragam  pada  beberapa  rentang  pH.  Kisaran  pH optimum untuk tumbuh yaitu pada pH 6.5 – 7.2. Sedangkan  pada  pH  5.2,  8.9  dan  10.2  tumbuh tetapi  tingkat  pertumbuhannya  tidak  bagus. Menurut  (Hasanah  2013)  kebanyakan  bakteri tumbuh  pada  kisaran  pH  6.6  sampai  7.5. Berdasarkan  hasil  pengujian  tersebut  bakteri ini tumbuh dengan baik yaitu pada pH netral.
Bakteri  ER  11  mampu  tumbuh  dengan optimal  pada  kisaran  pH  6,5  sampai  7,2.  Hal  ini ditandai dengan koloni yang mampu tumbuh jika mampu  tumbuh  lebih  tebal  jika  dibandingkan denga pH yang berbeda.

## Uji suhu optimum
Setiap  bakteri  mempunyai  kisaran  suhu yang  berbeda  untuk  dapat  tumbuh.  Pada pengujian suhu yang dilakukan pada isolate ER11 didapatkan  beberapa  rentangan  suhu  optimum untuk  tumbuh  optimal  pada  suhu  35 o C. Berdasarkan  kisaran  suhu  pertumbuhan  bakteri dapat    digolongkan  kedalam  bakteri  mesofil. Menurut  (Hasanah,  2013)  kisaran  suhu pertumbuhan  bakteri 10  -  45°C  dengan  suhu optimum  pertumbuhan20  -  40°C,  termasuk kedalam bakteri mesofil karena berada dikisaran suhu 35 o C .
Karakter Biokimia Bakteri Endofit tumbuhan Raru Pendegrasasi Selulosa
Hasil  penelitian  dari  uji  biokimia  pada bakteri  ER  11  yang  mampu  mendegradasi selulosa  didapatkan  hasil  yang  beragam  untuk setiap uji pada isolat.
Uji Hidrolisis Gelatin Uji  ini  dilakukan  untuk  melihat  apakah bakteri  tersebut  mempunyai  enzim  gelatinase yang  mampu  untuk  menghidrolisis  gelatin, permukaan  media  yang  telah  diinokulasikan bakteri  ER11  dan  dimasukkan  kedalam  kulkas mengalami  perubahan  yaitu  permukaan  media menjadi  mencair,  dan  merupakan  indikator positif dari hidrolisis gelatin.
Uji Katalase Uji katalase dilakukan untuk mengetahui kemampuan  bakteri  dalam  mengubah  hydrogen peroksida menjadi air dan oksigen. Koloni ER 11 mengalami  perubahan  setelah  ditetesi  dengan yaitu terjadinya gelembung atau buih. Hall ini merupakan indikator positif dari katalase. Uji Sitrat
Uji  sitrat  dilakukan  untuk  melihat kemampuan mikroorganisme menggunakan sitrat  sebagai  satu-satunya  sumber  karbon  dan energy,  bakteri  ER11  tidak  mengalalami perubahan warna, dan tetap sama seperti media kontrol. Hal ini merupakan indikator negatif dari uji sitrat.
Pembahasan Karakter Morfologi warna  atas  koloni  bakteri  ER  11 berwarna  putih  kekuningan  sedangkan  warna
koloni di NA miring berwarna putih. Koloni ER 11 berbentuk  bulat  dengan  tepian  rata,  permukaan koloni  utuh  dengan  elevasi  koloni  yang  rata, tekstur  koloni  menyerupai  cairan  dan  transmisi cahaya  sebagian  tembus.  Serta  bentuk  koloni  di NA miring berbentuk menyerupai pedang.
Sesuai  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Silitonga  (2013)  bahwa  pada media  padat,  pertumbuhan  mikroorganisme ditandai  dengan  bentuk  koloni  yang  berbeda- beda seperti circular, irregular dan yang lainnya. Sedangkan  menurut  Fardiaz  (1992)  Karakter morfologi  juga  dapat  dilihat  dari  morfologi  sel bakteri, berdasarkan hasil pewarnaan Gram yang dilakukan  pada  isolate  ER  11  didapatkan  hasil sebagai  bakteri  Gram  positif.  Hasil  Gram  positif menunjukkan  bahwa  Kristal  violet  dapat  diikat dengan  baik  oleh  sel  bakteri  ER  11  ,  dan  tidak dapat  dilunturkan  oleh  alkohol.    Hal  ini menandakan  bahwa  struktur  sel  bakteri  ER  11 memiliki struktur sel yang tebal. Menurut Pastra (2012) dan Sutrisna (2013) bakteri Gram positif mempunayai  dingding  sel  yang  tebal,  yaitu sekitar  15-80nm,  dan  berlapis  tunggal  dengan komposisi  peptidoglikan  yang  tebal  dan  lipid yang tipis.
pH Optimum Pertumbuhan Hasil penelitian menunjukkan bahwa pH optimum bagi pertumbuhan ER 11 adalah dengan kisaran  pH  6.5  -  7.2.  Hal  ini  dilihat  dari pertumbuhan  koloni  yang  tebal  dan  subur  jika dibandingkan pada media NA dengan pH 7.2, 8.9 dan  10.2.  Menurut  Saha  (2014)  pH  merupakan kunci  pertumbuhan  bakteri  pada  media. Sedangkan menurut Peclar  dan Chan (1986).

## Uji Hidrolisis Gelatin
Uji  ini  dilakukan  untuk  mengetahui apakan  bakteri  tersebut  dapat  menghasilkan enzim  gelatinase  yang  mampu  menghidrolisis gelatin.  Hidrolisis  gelatin  terjadi  karena  bakteri menghasilkan  gelatinase  untuk  menghidrolisis polimer  protein,  gelatin,  untuk  asam  amino (Anonim 2012). Menurut Capucino dan Sherman
(2001) berdasarkan hasil uji tersebut kemungkinan  bakteri  ER  11  adalah Escherchia coli, Bacillus cereus, Pseudomonas aureginosa dan Staphylococus aureus.

## Uji Katalase
Bakteri  pada  kondisi  tertentu  akan menghasilkan  hidrogen  peroksida.  Hidrogen peroksida merupakan racun yang dapat merusak system  metabolisme  bakteri.  Bakteri  akan
mengalami  kematian  apabila  tidak  dapat memecah  hidrogen  peroksida  menjadi  senyawa lain  yang  tidak  berbahaya  pemecahan  tersebut dapat dilakukan apabila terdapat enzim katalase (Capucino dan Sherman, 2001).
Menurut  hadioetomo  (1993)  enzim katalase  akan  mengubah  hidrogden  peroksida menjadi  air  dan  oksigen  sehingga  tidak berbahaya.  Isolate  bakteri  ER  11  mampu menghasilkan  enzim  katalase  sehingga  bakteri dapat  bertahan  hidup  pada  lingkungan  yang terdapat  hidrogen  peroksida. Hal  tersebut  dapat dilihat    pada  koloni  bakteri  yang  menghasilkan gelembung setelah ditetesi dengan H 2 O 2 . Menurut Capucino dan Sherman (2001) berdasarkan hasil uji  tersebut  kemungkinan  jenis  bakteri  ER  11 adalah Escherchua coli, Bacillus cereus, Pseudomonas  aeruginosa  dan  Staphylococcus aureus. Uji Sitrat
Uji  Sitrat  dilakukan  untuk  melihat kemampuan mikroorganisme menggunakan sitrat  sebagai  satu-satunya  sumber  karbon  dan energy. Simson’s citrate agar merupakan medium sintetik  dengan  Na  sitrat  sebagai  satu-satunya sumber  karbon,  NH 4+ sebagai  sumber  N  dan brom thymol blue sebagai indikator pH (Capucino dan  Sherman,  2001).  Pada  hasil  pengujian  sitrat didapatkan  hasil  yang  negative  karena  sitrat tetap  berwarna  hijau.  Bila  mikroorganisme mampu  menggunakan  sitrat,  maka  asam  akan dihilangkan  dari  medium  biakan  ,sehingga menyebabkan  peningkatan  pH  dan  mengubah warna medium dari hijau ke biru (Saha, 2013).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan maka dapat dibuat kesimpulan yaitu:
Isolat  bakteri  endofit  dari  kulit  batang  raru ada  yang  mampu  mendegradasi  selulosa,  yaitu dari  ke  24 isolat  bakteri  endofit  yang  telah  diuji kemampuannya  didapatkan  satu  isolat  yaitu  ER 11,  Isolat  bakteri  endofit  yang  positif mendegradasi selulosa memiliki karakter sebagai berikut: ER 11 memiliki bentuk bulat dengan tepi koloni  rata,  warna  koloni  putih  kekuningan dengan  permukaan  licin  dan  elevasi  yang  rata, termasuk  kedalam  bakteri  Gram  positif.  Mampu menghasilkan  enzim  katalase,  gelatinase,  namun tidak  mampu  menjadikan  sitrat  sebagai  satu- satunya  sumber  karbon.  Suhu  optimum  untuk pertumbuhan  ER  11  adalah  35 o C  dan  pH
optimum  untuk  pertumbuhan  isolat  bakteri endofit adalah 6.5 sampai 7.2.

## Ucapan terimakasih
Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada Dra.  Riwayati,  M.Si  selaku  pembimbing  penulis dan  kepada  Bapak  Idramsayah  yang  telah menyediakan waktu serta ilmu yang membantu untuk penulis serta Tim Laboratorium Fakultas Matematika  dan  Ilmu  pengetahuan  Alam Universitas Negeri Medan.

## Daftar Pustaka
Acharya, P. B., Modi, H. A. 2008. Optimization for cellulase  production  by Aspergillusniger using saw dust as substrate. African Journal of Biotechnology . Vol 7 (22) : 4147-4152.
Agaitha  U,  Situ  K,  Riza  L,  2014.kemampuan degradasi  selulosa  oleh  bakteri  selulolitik yang diisolasi dari tanah gambut. University Tanjung  Pura  Pontianak. Vol  3  (2) :  259  – 256 .
Anja  Meryandini,  Wahyu  Widosari,  Besty
Maranatha,  Titi  Candra  Sunarti,    Nisa Rachmania,  dan  Hasrul  Satria  2009.  isolasi bakteri selulolitik dankarakterisasi enzimnya.  Pusat  Penelitian  Sumberdaya Hayati dan  Bioteknologi, IPB, Darmaga 16680,  Bogor,  Indonesia VOL.  13 ,  NO.  1, APRIL 2009: 33-38 Anonim (2012) http://www.puji.peje.blogspot.com/../ Hidrolisis Gelatin. (Diakses pada tanggal 20 juli 2015). Arora.  Sanjay.,  Patel,  Purvi.,  Vanza,  Meghns  dan Rao,  G.G,  Isolation  and  characterization ofmendophytic bacteria colonizing halophyte  and  other    salt  tolerant  plant species from coastal  Gujarat.  African Journal  of  Microbiology  Research.  8  (17)
:1779-1788
Bhatt,  Shraddha.,  Vyas,  R.V.,  Shelat,  H.N  dan Mistry,  Shena.  2013.  Isolation  and identification  of  root  nodule  bacteria  of Mung  bean  ( Vigna  radiata L.)  for biofertilizer production.  International Jornal of  Research  in  Pure  and  Applied Micribiology 3(4) : 127-133
Cailliez, C. C., Benoit, L., Gelhaye, E., Petitdemange,
H.,  and  Raval,  G.  1993.  Solubilization  of
cellulose by mesophilic cellulolytic clostridia isolate  from  a  municipal  solid-waste digester. Bioresource Technology , 43:77-83. Cappuccino, James. G dan Sherman, Natalie, 2001.
Microbiology  a  laboratory  Manual.  San Francisco. Benjamin Cummings.
Hadiotomo R.S. (1993). Mikrobiologi dasar dalam praktek  teknik  dan  prosedur  dasar laboratorium. Jakarta: Gramedia
Han,  Y,  &  Chen,  HZ,  2007,  Synergism  between corn  stoverprotein  and  cellulose.  Enzyme and microbial technology, Journal Sains and Technology. vol. 41 , hal. 638-645 Hasanah,  Uswatun,  2013  Mikrobiologi.  Medan.
Fmipa Unimed. Kusnadi, Peristiwati, Syulasmi, A,. Purwianingsih, W.,  Rochitaniawati,  D.,  2003,  Common Mikrobiology, Textbook Edisi Revisi.Universitas Pendidikan Indonesia. Krispina,  Nofu,    Siti  Khotimah,  Irwan  Lovadi. 2014.  isolasi  dan  karakteristik  bakteri pendegradasi  selulosa  pada  ampas  tebu kuning  ( bagasse ).  universitas  tanjungpura:
Pontianak . vol 3 (1) : 25 - 33.
Leschine,  S.B.,1995,  Cellulose  degradation  in Anaerobic Environments, Annu. Rev. Microbiol , vol. 49 : 399-426.
Noverita,  Dinah  Fitria,  Ernawati  Sinaga.  2009. Isolasi Dari Uji Aktivitas Antibakteri Bakteri Endofit  Dari  Daun  dan  Rimpang  Zingiber ottensii val. Jurnal Farmasi Indonesia 4 (4) :
171 - 176. Pasaribu,  Gunawan,  2011.  Aktivitas  inhibisi  alfa glukosidase  pada  beberapa  jenis  kulit  kayu raru.    Jurnal  penelitian  Hasil  Hutan.  29(1)  :
10-19. Pasaribu.G,  Bonifasius  S,  dan  Gustan  P.  2007. Analisis Komponen Kimia Empat Jenis Kayu Asal  Sumatera  Utara.  Jurnal  Penelitian
Hasil Hutan Vol. 25 N0.4
Purba,  T.  M.,  Saryono.,  Puspita,  F.  2013.  Isolasi dan  karakterisasi  bakteri  endofit  dari  umbi tanaman  dahlia (Dahlia  variabilis) . Jurnal Ilmiah Sains Terapan. Vol 3 (2) : 91-95 Radu S, Kqueen CY. 2002. Preliminary Screening of  Endophytic  Bacteria  From  Medicinal Plants  In  Malaysia  For  Antimicrobial  and Antitumor  Activity.  Malaysian.  Journal  of
Medical Sciences 9 (2) : 23 – 33.
Saha, Amrita dan Santra, Subhas, 2014. Isolation and  characterization  of  bacteria    isolated from municipal  solid  waste  for
production of industrial enzymes and waste degradation. Journal microbiology 1(1)
Saraswati, R; Simanungkalit, R.D.M.; Suriadikarta, D.A.;  Setyorini,  D;  dan  Hartatik,  W,  2006, Pupuk  Organik  Dan  Pupuk  hayati:  Organic Fertilizer  And  Biofertilizer,  Balai  Besar Penelitian  dan  Pengembangan  Sumberdaya Lahan Pertanian, Bogor, Indonesia.
Simarmata,  R.  Lekatompessy,  S.  Sukiman,  H. 2007.  Isolasi mikroba  endofit  dari  tanaman obat  sambung  nyawa (Gynura  procumbens) dan analisis potensinya sebagai antimikroba. Berkas Penelitian Hayati . Vol 13: 85-90.
Strobel  GA.,  and  B.  Daisy  (2003),Bioprospecting for  microbial  endophytes  and  their  natural products.  Microbiol.  and  Mol.  Biology Rev. 67(4):491-502.
Sugijanto,N.E.,  Putra,  H,.  Pritayuni,  H.  F,.
Albathaty, N,. dan Noor, C.Z, 2009. Daya anti mikroba  ekstrak lecythophora  sp ,  endofit yang  diisolasi  dari Alyxia  reinwardtii ,  Berk. Panel Hayati 15: 37-44
Thiruneekalandan, G.,  Vidya,  S.,  Jenifer,  V., Babu,
V.,  Shanti.  V  dan  Kathiresan,  K,  2014. Identification  of  Lactobacilli  isolated from  Mangrove  Biotopes  of  Easr  Coast  of India. Global  Educational  Education Research Journal. 2(2) Waluyo,  L,  2008, Teknik  Metode  Dasar
Mikrobiologi ,  Universitas  Muhamadiyah Malang Press, Malang.
Yasinok,  A.E.,  Sahin,  F.I.,  Haberal,  M.  2008. Isolation of endophytic a xylanolityc Bacillus pumilus strain  from Zea  mays . Tarim Bilimleri Dergisi . Vol 14 (4) : 374-380.