## Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis

## Factor Alpha
Evi Liliek Wulandari 1* , Arief Nurudhin 2 , Arifin 2 , Zainal Arifin Adnan 2
1. Rumah Sakit Universitas Sebelas Maret, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret 2. SMF Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Korespondensi : evililiek@gmail.com

## ABSTRAK
Pendahuluan : Systemic  Lupus  Erythematosus (SLE)  adalah  penyakit  inflamasi  autoimun kronis  yang  belum  jelas  penyebabnya  dengan  gambaran  klinis  dan  tampilan  perjalanan penyakit beragam. Sitokin seperti IL-17 dan TNFα sangat terkait dengan pathogenesis SLE. Sel  punca  mensekresikan  sejumlah  protein  ( secretome )  termasuk growth  factor ,  kemokin, sitokin,  metabolit  dan  lipid  bioaktif  yang  mengatur  secara  autokrin  atau  parakrin  sambil merekayasa  interaksi  dengan  lingkungan  mikro  sekitarnya.  Penelitian  ini  bertujuan mengetahui pengaruh secretome sel punca mesenkimal terhadap ekspresi Interleukin 17 (IL- 17) dan Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) pada mencit model lupus. Metode Penelitian :Penelitian merupakan penelitian eksperimental dengan metode post test only  control  group  design dengan  randomisasi,  sampel  21  mencit  Balb/c  betina,  dibagi menjadi kelompok kontrol (injeksi NaCl 0,9% 0,5ml intraperitoneal), pristan (injeksi pristane 0,5ml  intraperitoneal)  dan  pristan+ secretome (injeksi  pristan  0,5ml  + secretome 0,45  ml intraperitoneal).  Dilakukan  pemeriksaan  ekspresi  IL-17  dan  TNF-  α  jaringan  ginjal  ketiga kelompok.  Analisa  statistik  menggunakan  SPSS  22 for  windows .  Uji  beda  rerata  antara kelompok  menggunakan  uji  F  Anova  bila  distribusi  data  normal  dan  bila  signifikan  akan dilanjutkan dengan LSD Post Hoc Test . P bermakna jika p<0,05. Hasil Penelitian : Hasil penelitian menunjukkan didapatkan hasil bermakna antara kelompok kontrol,  pristan  dan  pristan+ secretome baik  pada  kadar  IL-17  (kontrol  6,9±1,95;  pristan 9,9±2,27;  pristan+ secretome 6,1±1,95;    p=0,016),  dan  TNF-α  (kontrol  6,9±1,95;  pristan 11,7±3,40; pristan+ secretome 7,9±2,03; p=0,005). Kesimpulan : Penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian secretome sel punca mesenkimal berpengaruh menurunkan ekspresi IL-17 dan TNF- α pada mencit model lupus.
Kata kunci: secretome; interleukin 17; tumor necrosis factor alpha; lupus

## ABSTRACT
Introduction : Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a chronic autoimmune inflammatory disease of unknown cause with diversity of clinical manifestations. Certain cytokines such as IL-17 and TNFα are strongly associated with SLE pathogenesis. Stem cells secrete proteins (secretome)  including  growth  factors,  chemokines,  cytokines,  metabolites,  and  bioactive lipids  that  regulate  autocrine  or  paracrine  while  engineering  interactions  with  the surrounding microenvironment. This study aims to determine the effect of mesenchymal stem cell secretome on the expression of IL-17 and TNFα in the lupus mice model.
Methods  :  This  study  is  an  experimental  study  with  a  post-test  only  control  method randomized  group  design,  a  sample  of  21    male  Balb/c  mice,  divided  into  groups  control (0.9%  0.5  ml  intraperitoneal  NaCl  injection),  pristan  (0.5  ml  pristan  injection intraperitoneal),  and  pristan+secretome  (injection  of  pristan  0.5  ml  +  secretome  0.45  ml intraperitoneal).  The  kidney  tissue  expression  of  IL-17  and  TNF-α  from  all  groups  is examined. Statistical analysis using SPSS 22 for windows. The mean difference test between
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
groups used the ANOVA F test when the data distribution is normal and significant it will be followed by the LSD Post Hoc Test. P is significant if p <0.05.
Results:  The  results  showed  that  there  were  significant  results  between  groups  control, pristan  and  pristan  +  secretome  both  IL-17  (control  6,9±1,95;  pristan  9,9±2,27; pristan+secretome  6,1±1,95;   p=0,016)  and  TNF-α  (control  6,9±1,95;  pristan  11,7±3,40; pristan+secretome 7,9±2,03; p=0,005).
Conclusions  : This study shows that the administration of mesenchymal stem cell secretome reduces IL-17 and TNF-α expression in the lupus mice model.
Keywords: secretome; IL-17; TNF-α; lupus

## PENDAHULUAN
Systemic  Lupus  Erythematosus (SLE) adalah  penyakit  inflamasi  autoimun  kronis yang  ditandai  dengan  keterlibatan  organ multipel  dan  produksi  yang  berlebihan  dari autoantibodi  dengan  proses  patofisiologi kompleks melibatkan genetik, lingkungan dan kemungkinan infeksi 1, 2, 3, 4 .
Manifestasi  klinis  SLE  luas,  meliputi keterlibatan  kulit  dan  mukosa,  sendi,  darah, jantung,  paru,  ginjal,  susunan  saraf  pusat  dan sistem  imun.  Untuk  penegakkan  diagnosis diperlukan  4  kriteria  dari  11  kriteria. Manifestasi  klinis  tersebut  mayoritas  terjadi pada  wanita  usia  reproduksi.  Keadaan  ini menyebabkan  pentingnya  meneliti  berbagai macam  sarana  diagnostik  dan  terapi  yang semakin berkembang 5, 6 .
Etiopatologi SLE melibatkan interaksi kompleks  dan  multifaktorial  antara  variasi genetik  dan  faktor  lingkungan 4 .  Komponen utama  dari  sistem  imun innate dan  humoral mempengaruhi penyakit dan melibatkan organ dan jaringan dengan berbagai cara berbeda 1 . Sitokin tertentu seperti IL-6, IL-10, IL- 17, BLys, IFN type 1, dan TNFα terkait dengan patogenesis  SLE 7,  8 .  Angka  kematian  karena SLE bervariasi dari 6,8% hingga 20% dengan survival rate pada tahun 5, 10 dan 15 berturut- turut  adalah  96%,  93%,  dan  76%.  Angka kematian  pasien  SLE  5  kali  lipat  lebih  tinggi dibandingkan  populasi  umum.  Hal  ini  terkait dengan penyakit infeksi pada tahun tahun awal dan  dalam  jangka  panjang  terkait  penyakit vaskuler aterosklerosis 9 .
Sitokin berperan penting dalam patogenesis SLE, keseimbangannya
menentukan  aktifitas  penyakit.  Frekuensi  dari sel  T  memproduksi  IL-17  meningkat  pada darah perifer pasien SLE, dan produksi IL-17 abnormal  pada  pasien  SLE.  Kadar  IL-17 meningkat pada SLE dewasa dan berhubungan dengan aktivitas penyakit 10, 11 . TNF- α merupakan  sitokin  pleiotrofik yang diproduksi oleh banyak tipe sel, termasuk makrofag,  monosit,  limfosit,  keratinosit,  dan fibroblas,  dalam  respon  terhadap  inflamasi, infeksi,  luka,  dan  tantangan  lingkungan lainnya. TNF- α bukan hanya sitokin proinflamasi yang kuat tetapi juga memainkan peran  penting  dalam  aktivasi  dan  migrasi lekosit,  demam,  respon  fase  akut,  proliferasi sel,  diferensiasi,  dan  apoptosis.  TNF- α merupakan sitokin proinflamasi dan immunoregulator 7,  12 .  Pada  SLE,  TNF- α memiliki  dua  aksi  yang  berbeda.  Pertama, TNF- α dapat menjadi mediator imunosupresif dari  sintesa  autoantibodi.  Kedua,  TNF- α sebagai  faktor  proinflamasi  yang  secara  akut dilepaskan  ke  jaringan  lokal 8,  13 .  Pada kebanyakan  penelitian,  TNF- α ditemukan meningkat  tajam  dan  menjadi  bioaktif  dalam serum  pasien  SLE  aktif,  dan  kadar  TNF- α berhubungan dengan aktivitas penyakit SLE 12 . Sel punca mesenkimal dewasa
merupakan sel multipoten yang dapat berdiferensiasi  menjadi  beberapa  tipe  sel mesenkimal  khusus  tahap  akhir  seperti osteoblas, kondrosit, adiposit, tenosit, dan lain- lain 14 .  Sel  punca  mesenkimal  memiliki  efek imunomodulasi  yang  berpengaruh  pada  sel
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
limfosit  T  dan  B, natural  killer dan antigen precenting cells (APC). Sel punca mesenkimal bersifat  hipoimmunogenik  karena  sedikit mengekspresikan Major  Histocompatibility (MHC)  kelas  I  dan  tidak  mengekspresikan MHC  kelas  II  atau  molekul  ko-stimulasi (CD40,  CD40L,  CD80  atau  CD86),  sehingga penggunaan  alogenik  tidak  memerlukan pencocokan dengan Host Leukocyte
Antigen /HLAs 15 .  Sel  punca  mesenkimal sangat potensial dalam terapi regeneratif 16 . Sel  punca  mensekresikan  sejumlah
protein ( secretome ) termasuk faktor pertumbuhan, kemokin, sitokin, metabolit dan lipid  bioaktif  yang  mengatur  secara  autokrin atau  parakrin  serta  merekayasa  interaksi dengan  lingkungan  mikro  sekitarnya 17 . Berbagai  aktivitas  sel  punca  mesenkimal terbukti berasal dari produk yang disekresikan oleh  sel  punca  mesenkimal  tersebut 18 . Penelitian  Song  (2014)  pada  tikus  model kandung  kemih  hiperaktif  menunjukkan  efek parakrin  sel  punca  mesenkimal.  Penelitian Yang (2008) menyebutkan efek secretome sel punca  mesenkimal  pada  tikus  model spinal cord  injury .  Penelitian  Sun  (2010)  dan  Liang (2010)  menunjukkan  perbaikan  pada  pasien SLE berat refrakter 17 .
Terapi  SLE  yang  efektif  dengan  efek samping  ringan  dibandingkan  dengan  terapi glukokortikoid  dan  sitotoksik  hingga  saat  ini masih  dibutuhkan.  Penelitian  untuk  mencari strategi  terapi  baru  dengan  efektivitas  lebih tinggi  dan  komorbiditas  lebih  rendah  terus dilakukan 19 . Berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui banyak manfaat secretome sel punca mesenkimal. Hingga saat ini  belum  ada  penelitian  yang  menggunakan secretome sel  punca  mesenkimal  pada  SLE sehingga  peneliti  ingin  meneliti  pengaruh secretome sel  punca  mesenkimal  pada  kultur medium terkondisi hipoksia terhadap ekspresi IL-17  dan  TNF- α pada  mencit  model  lupus dengan induksi pristan.

## METODE
Penelitian ini menggunakan rancangan penelitian  eksperimental  dengan  metode post test  only  control  group  design. Tempat pemeliharaan dan induksi hewan dilakukan di unit  pemeliharaan  hewan  coba  Laboratorium Histologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Sebelas  Maret.  Pemeriksaan  imunohistokimia dilakukan  di  Laboratorium  Patologi  Anatomi Fakultas  Kedokteran  Universitas  Sebelas Maret.
Mencit  betina  sub  spesies Mus musculus galur  Balb/C  umur  3-4  bulan  yang berasal  dari  satu  induk,  berat  badan  20–30 gram,  diperoleh  dari  Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas  Gajah  Mada.  Sampel mencit Balb/c betina usia 3-4 bulan berat badan 20-30  gram  diambil  sebanyak  21  ekor  secara acak dengan metode simple random sampling kemudian dibagi menjadi tiga
kelompok  yaitu  kelompok  kontrol,  kelompok pristan  dengan  injeksi  pristan  0,5  ml intraperitoneal,  dan  kelompok  pristan  + secretome yang  diberi  injeksi  intraperitoneal pristan  0,5  ml  dan secretome sel  punca mesenkimal  0,45  ml.  Perlakuan  pada  hewan coba dilakukan sesuai dengan ethical clearance .
Ekspresi IL-17 dan TNF- α didapatkan dari  preparat  imunohistokimia  sampel  ginjal mencit secara  kuantitatif, dimana jumlah area positif pewarnaan dan intensitas pewarnaannya pada  lima  lapang  pandang  dihitung  rata- ratanya.
Data  disajikan  dalam  bentuk mean  ± SD kemudian dianalisis menggunakan SPSS 22 for  windows dengan  nilai  p  <0,05  dianggap signifikan  secara  statistik.  Untuk  mengetahui beda rata-rata antara kelompok kontrol, pristan dan secretome sel  punca  mesenkimal, digunakan  uji  F  Anova  bila  distribusi  data normal  dan  bila  signifikan  akan  dilanjutkan dengan  LSD Post  Hoc  Test .  Sedangkan  bila datanya tidak normal digunakan uji
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
KruskalWallis yang  akan  dilanjutkan  dengan Mann whitney .
Kelaikan  etik  penelitian  ini  telah disetujui oleh Komisi Etik Penelitian Kesehatan  RSUD  Dr.  Moewardi/Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret.

## HASIL
Variabel  penelitian  yang  diteliti  pada penelitian ini yaitu IL-17 dan TNF- α bersifat kuantitatif  dengan  skala  data  rasio.  Deskripsi variabel  ekspresi  IL-17  dan  TNF-  α  yang bersifat kuantitatif dibatasi pengungkapan nilai statistik rata-rata dan standar deviasi.
Pengujian normalitas data variabel ekspresi IL-
17 pada kelompok kontrol dan kelompok terapi berdistribusi normal, sedangkan pada
kelompok perlakuan berdistribusi tidak normal.  Sementara  untuk  data  variabel ekspresi  TNF-  α  untuk  kelompok  kontrol berdistribusi normal, sedangkan pada kelompok  perlakuan  dan  kelompok  terapi berdistribusi tidak normal. Identifikasi normalitas  data  secara  keseluruhan  untuk masing-masing  variabel  (tidak  per kelompok) baik  ekspresi  IL-17  maupun  ekspresi  TNF-α berdistribusi normal.
Deskripsi
obyek penelitian berdasarkan nilai rata-rata dan standar deviasi serta  hasil  pengujian  normalitas  data atas variabel ekspresi IL-17 adalah sebagai berikut:
Gambar 1. Alur penelitian
Gambar 2. Perbandingan Nilai Rata-rata Ekspresi IL-17  (ekspresi  sel/100  sel  makrofag) antar Kelompok Sampel
Hasil  analisis  beda  2 rata-rata sampel independen  menggunakan  penelusuran Post Hoc  Test dengan  LSD  diatas  menunjukkan bahwa  uji  terhadap  variabel  IL-17  antara kelompok  kontrol  dan  pristan  signifikan  pada derajat  signifikansi  sebesar  0.042  (p  <  0,05). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pada  mencit kelompok  pristan  rata-rata  variabel  IL-17 meningkat secara statistik signifikan dibandingkan  kelompok  kontrol. Setelah diberikan  terapi secretome maka  rata-rata variabel IL-17 lebih rendah dibandingkan pada kelompok  pristan  dengan  tingkat  signifikansi sebesar  0.005  (p  <  0,05).  Penurunan  rata-rata kadar IL-17 akibat terapi secretome mendekati kelompok  kontrol  dengan  derajat  signifikansi sebesar 0,245 (p > 0,05). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian secretome mampu menurunkan  kadar  IL-17  hingga  menyamai kadar IL-17 kelompok kontrol.
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
Gambar  3.  Gambar  Imunohistokimia  Ekspresi  IL- 17 dalam perbesaran 400x. A. Kelompok kontrol,  B.  Kelompok  pristan,  C. Kelompok pristan+ secretome .
Kemudian  dilakukan  uji  variasi  atau beda k rata-rata berdasarkan kelompok sampel untuk variabel ekspresi TNF-α. Distribusi data variabel  ekspresi  TNF-α  semua  berdistribusi normal dan homogen, maka pengujian variasi atau  beda  3  rata-rata  itu  menggunakan ANOVA atau uji F. Hasil analisis variasi atau beda 3 rata-rata ekspresi TNF- α menunjukkan bahwa perbedaan 3 rata-rata variabel ekspresi TNF-α tersebut menghasilkan nilai F hitung = 7.076  dengan  tingkat  signifikansi  sebesar 0.005  (p  <  0,05).  Hal  ini  menunjukkan  beda rata-rata  variable  ekspresi  TNF-α  pada kelompok kontrol, pristan, dan pristan+ secretome benar-benar berbeda secara statistik signifikan. Jika dibandingkan dengan rata-rata  ekspresi  TNF-α  pada kelompok kontrol, kelompok pristan memiliki kecenderungan rata-rata ekspresi TNF-α lebih tinggi, kemudian rata-rata kelompok pristan +secretome memiliki  rata-rata  lebih rendah. Ini menunjukkan ekspresi TNF-α dapat ditekan dengan pemberian secretome .
Perbedaan  rata-rata  ekspresi  TNF-α antar kelompok sampel itu dapat digambarkan sebagai berikut:
Gambar  4.  Perbandingan  Nilai  Rata-rata  Ekspresi TNF-α  (ekpresi  sel/100  sel  makrofag) antar Kelompok Sampel (P=0.005).
Hasil  analisis  beda  2 rata-rata sampel independen  menggunakan  penelusuran Post Hoc  Test dengan  LSD  diatas  menunjukkan bahwa  uji  terhadap  variabel  ekspresi  TNF-α antara kelompok kontrol dan pristan signifikan pada  derajat  signifikansi  sebesar  0.002  (p  < 0,05). Hal ini menunjukkan bahwa pada mencit kelompok  pristan  rata-rata  ekspresi  TNF-α meningkat secara statistik signifikan dibandingkan  kelompok  kontrol.  Setelah diberikan  terapi secretome maka  rata-rata variabel ekspresi TNF-α menurun
dibandingkan  pada  kelompok  pristan  dengan tingkat  signifikansi  sebesar  0.011  (p  <  0,05). Penurunan rata-rata kadar TNF-α akibat terapi secretome mendekati kelompok kontrol dengan derajat signifikansi sebesar 0.473 (p > 0,05). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian secretome mampu  menurunkan  kadar  TNF-α hingga  menyamai  kadar  TNF-α  kelompok kontrol.
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
Gambar  5.  Gambar  Imunohistokimia  Ekspresi TNF-α  dalam  perbesaran  400x.  A. Kelompok kontrol, B. Kelompok pristan, C. Kelompok pristan+secretome.

## PEMBAHASAN
Pemberian secretome sel punca mesenkimal  akan  menurunkan  ekspresi  IL-17 dan  TNF-α  pada  mencit  model  lupus  yang sebelumnya  telah  diinduksi  menggunakan pristan. Hal ini dapat dilihat dari ekspresi IL- 17  dan  TNF-  α  yang  lebih  rendah  pada kelompok  pristan +secretome dibandingkan dengan  kelompok  pristan.  Penelitian  ini menggunakan  sampel  mencit  yang  diinduksi dengan pristan.
Penelitian  ini  mengunakan  sampel mencit  karena  adanya  gen susceptible pada mencit dan manusia 20 . SLE yang terjadi pada mencit sangat mirip dengan yang terjadi pada manusia  dalam  hal  produksi  autoantibodi  dan keterlibatan  penyakit  ginjal.  Mencit  betina lebih  mudah  menderita  SLE.  Salah  satu  cara menginduksi  mencit strain normal  menjadi lupus  adalah  dengan  injeksi  pristan  (minyak hidrokarbon) dosis tunggal yang menyebabkan mencit  memberikan  gambaran  klinis  seperti pada manusia penderita SLE. Gambaran klinis tersebut  adalah  artritis,  serositis,  nefritis, vaskulitis, antigen anti smith, anti dsDNA, anti ribosomal  P,  dan anti  small  nuclear ribonucleoprotein 20, 21 .  Injeksi  pristan intraperitoneal  pada  mencit  normal memicu timbulnya  sindrom  autoimun  seperti  lupus. Pristan  dengan  dosis  tunggal  0,5  ml
intraperitoneal menginduksi apoptosis in vitro
dan in  vivo pada  sel-sel  limfoid  kavum peritoneal yang menjadi inti autoantigen 22 .
Interleukin-17  (IL-17)  merupakan sitokin proinflamasi yang kuat yang diproduksi oleh limfosit T yang teraktivasi. Frekuensi dari sel  T  memproduksi  IL-17  meningkat  pada darah perifer pasien SLE, dan produksi IL-17 abnormal  pada  pasien  SLE.  Kadar  IL-17 meningkat pada SLE dewasa dan berhubungan dengan aktivitas penyakit 10, 11 . TNF- α merupakan sitokin proinflamasi dan imunoregulator 12 . Pada SLE, TNF- α memiliki  dua  aksi  yang  berbeda. Pertama,  TNF- α dapat  menjadi  mediator imunosupresif  dari  sintesa  autoantibodi. Kedua,  TNF- α sebagai  faktor  proinflamasi yang secara akut dilepaskan ke jaringan lokal 13 .
Pada penelitian menggunakan biomarker IL-17 dan TNF- α sebagai penanda aktivitas  inflamasi  pada  lupus.  Kedua  sitokin proinflamasi  tersebut  meningkat  pada  lupus. Pada penelitian ini ekspresi IL-17 dan TNF- α meningkat  pada  kelompok  pristan  atau kelompok mencit model  lupus.  Hal ini  sesuai dengan  teori  sebelumnya  yang  mengatakan bahwa IL-17 dan TNF- α pada SLE meningkat. Secretome merupakan  protein  yang disekresi oleh sel punca. Secretome mengandung growth factor , kemokin, sitokin,
metabolit  dan  lipid  bioaktif  yang  mengatur secara autokrin atau parakrin sambil merekayasa  interaksi  dengan  lingkungan mikro  sekitarnya 17 .  Pada  penelitian  ini secretome diperoleh dari sel punca mesenkimal cairan  amnion  manusia  yang  dikondisikan hipoksia  (O2  1-2%).  Kondisi  hipoksia  akan meningkatkan  produksi  faktor  pertumbuhan dan  molekul-molekul  anti  inflamasi,  antara lain FGF, VEGF, IGF, HGF, dan menurunkan proliferasi sel T 18 . Pemberian secara sistemik akan  menimbulkan  efek  jauh  atau  efek  lokal (parakrin)  meliputi  angiogenesis,  diferensiasi dan  pertumbuhan  sel,  hambatan  fibrosis  dan hambatan  apoptosis.  Efek  imunomodulasi yaitu : supresi sel T dan sel B, diferensiasi sel
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
T,  inhibisi  sel  NK,  inhibisi  maturasi  sel dendritic 15 .  VEGF  bekerja  sebagai  anti apoptosis.
HGF
bekerja sebagai imunomodulator, antiinflamasi dan
melindungi dari apoptosis 18 . Pada SLE terjadi gangguan  pembersihan  sel-sel  apoptosis  dan kompleks  imun,  hilangnya  toleransi  imun, meningkatnya  beban  antigenik,  bantuan  sel  T yang  berlebihan,  gangguan  supresi  sel  B  dan peralihan  respon  imun  dari  Th1  ke  Th2 menyebabkan  hiperaktivitas  sel  B  sehingga muncul autoantibodi patogenik 4 . Secretome meningkatkan sel Treg dan menginduksi penurunan Th17 secara
signifikan, sehingga secretome akan
meningkatkan  rasio  sel  Treg/Th17.  Th17 menurun  kadarnya  menyebabkan  penurunan TNF-α 23 .  Sun et  al .  dan  Liang et  al ., mengungkapkan  bahwa  pada  lupus  manusia transplantasi  baik  sel  punca  mesenkimal  dari sumsum  tulang  belakang  baik  allogenik  atau autologous  juga  meningkatkan  sel  Treg, mengisyaratkan  bahwa  ini  merupakan  salah satu  mekanisme  dari secretome sel  punca mesenkimal memperbaiki penyakit 24, 25 . Penelitian sebelumnya oleh Sun et al . berupa  penelitian  pemberian  sel  punca mesenkimal  pada  pasien  lupus  aktif  dan nefritis lupus yang tidak respon terhadap terapi siklosporin  iv  dan  prednison  oral  (≥  20 mg/hari). Pada penelitian ini skor SLEDAI dan proteinuria  membaik  secara  signifikan  pada follow  up bulan  pertama, keenam  dan  ke  dua belas.  Kadar  sel  CD4+  meningkat  dan  terapi diturunkan dan ditunda 24, 25 .
Liang et  al .  meneliti  pemberian  sel punca  mesenkimal  dari  sumsum  tulang  pada pasien  lupus  yang  gagal  dalam  terapi mycophenolate  mophetil oral  (1-2  gr/hari selama  3  bulan)  dengan  skor  SLEDAI  yang tinggi walaupun menggunakan terapi glukokortioid  dan imunosupresan.  Proteinuria menurun secara signifikan satu minggu setelah terapi sel punca mesenkimal dengan penurunan antibodi anti-dsDNA yang signifikan pada satu bulan dan tiga bulan paska terapi 23, 25 .
Penelitian  akan  efek secretome pada lupus belum pernah diteliti sebelumnya. Akan tetapi  terdapat  beberapa  penelitian  akan  efek secretome terhadap keadaan lainnya.
Hoetzenecker et al . meneliti efek secretome sel punca  mesenkimal  terhadap  miokarditis  yang disebabkan oleh autoimun pada mencit. Mencit yang  telah  diinduksi  menjadi miokarditis autoimun  kemudian  diinjeksikan secretome secara  intraperitoneal  pada  waktu  yang berbeda  (hari  ke  0,  7,  dan  14).  Terjadi penurunan  kadar  IL-1,  TGF-β,  IL-6,  serta gambaran histologis yang membaik dibandingkan kelompok kontrol 26 . Chang et  al .  meneliti  efek secretome sel  punca  mesenkimal  yang  didapat  dalam kondisi normoksia dan hipoksia terhadap tikus model  cedera  otak.  Didapatkan  hasil  cedera otak  pada  tikus  dengan  terapi secretome hipoksia  lebih  baik  dibandingkan  dengan secretome normoksia. 27 . Wang et  al melaporkan  pemberian secretome sel  punca  embrionik  pada  mencit model  AKI  melindungi  proteinuria  serta menurunkan  kadar  BUN  dan  creatinin  serum 16 .
Secara  keseluruhan  manfaat  dari penelitian ini adalah pemberian secretome sel punca mesenkimal akan berpengaruh menurunkan ekspresi IL-17 dan TNF- α pada mencit model lupus. Hal ini dapat dilihat dari pemberian secretome sel  punca  mesenkimal 0,45 ml intraperitoneal dosis tunggal berpengaruh  menurunkan  ekspresi  IL-17  dan TNF- α secara  statistik  bermakna  signifikan ketika dibandingkan dengan kelompok pristan. Sehingga  dapat  dipertimbangkan  penggunaan secretome sebagai terapi SLE potensial. Bukti manfaat secretome sebagai  terapi  alternatif pada  lupus  yang  refrakter  terhadap  terapi imunosupresan  yang  menghasilkan  perbaikan klinis dan penurunan anti dsDNA 23 .
Penelitian  ini  memiliki  keterbatasan dalam sitokin yang diperiksa terbatas pada IL- 17  dan  TNF- α, mengingat  SLE  tidak  hanya dipengaruhi oleh kedua sitokin tersebut. Selain
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
itu  penelitian  ini  masih  diujikan  ke  mencit model  lupus,  sehingga  dibutuhkan  penelitian lebih  lanjut  untuk  melihat  efek secretome sel punca mesenkimal terhadap manusia.

## KESIMPULAN
Pemberian secretome sel punca mesenkimal  menurunkan  ekspresi  IL-17  dan TNF- α pada mencit model lupus.
Saran untuk dilakukan penelitian lebih lanjut  akan  efek secretome sel  punca mesenkimal  pada  manusia  dengan  SLE  dan dibandingkan dengan terapi SLE lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Mocarzel  LOC,  Lanzieri  PG,  Montes  RA,
Gismondi  RAOC,  Mesquita  CT.  Systemic Lupus Erythematosus: Review of Cardiovascular Aspects. International Journal of  Cardiovascular  Science  2015;28(3):  251-
261.
2. Comte BH, Karampetsou MP, Tsokos GC. T cells  as  a  therapeutic  target  in  SLE.  Journal Lupus 2015;24:351-363.
3. Chen J, Wu M, Wang J, Li X.
Immunoregulation of NKT Cells in Systemic Lupus Erythematosus. Journal of Immunology Research 2015;20673:1-8.
4. Suarjana IN. Imunopatogenesis Lupus Eritematosus  Sistemik.  Dalam  :  Simadibrata
M,  Syam  AF,  Setiati  S,  Setyohadi  B,  Alwi  I
(edt).  Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam  Jilid
III. Edisi  VI.  Interna  Publishing  FK  UI, Jakarta. 2014 : 3331-3345.
5. Bertsias  G,  Cervera  R,  Boumpas  DT.
Systemic Lupus Erythematosus: Pathogenesis,  Clinical  Manifestations,  And Diagnosis.  Dalam  :  Cervera  R,  Espinosa  G, D’Cruz D (edt). Eular Textbook of Rheumatic
Disease. 2012: 476-505.
6. Tsokos GC. Mechanism of Disease Systemic Lupus  Erythematosus.  New  England  Journal of Medicine 2011; 365(22):2110-2121.
7. Hahn BH. The Pathogenesis of SLE. Dalam: Wallace DJ, Hahn BH (EDT). Dubois' Lupus Erythematosus  and  Related  Syndromes.
Eighth Edition. Saunders: Philadelphia. 2013:
25-35.
8. Yap  DYH  dan  Lai  KN.  Cytokines  and  Their
Roles  in  Pathogenesis  of  Systemic  Lupus Erythematosus:  From  Basics  to  Recent Advances.  Journal  of  Biomedicine  and
Biotechnology 2010:1-10.
9. Perhimpunan Reumatologi Indonesia. Rekomendasi Perhimpunan Reumatologi Indonesia  Untuk  Diagnosis  dan  Pengelolaan Lupus  Eritematosus  Sistemik.  Perhimpunan Reumatologi Indonesia. 2011. 10. Pelicari KO, Postal M, Sinicato NA, Peres FA, Fernandes  PT,  Marini  R,  et  al.  Serum interleukin-17  levels  are  associated  with nephritis  in  childhood-onset  systemic  lupus erythematosus. Clinics 2015;70(5):313-317.
11. Vincent FB, Northcott M, Hoi A, Mackay F,
Morand  EF.  Clinical  associations  of  serum interleukin-17 in systemic lupus erythematosus  clinical  associations  of  serum interleukin-17 in systemic lupus erythematosus. Arthritis Research & Therapy 2013;15:R97. 12. Zhu  LJ,  Yang  X,  Yu  XQ.  Anti-TNF- α Therapies in Systemic Lupus Erythematosus.
Journal  of  Biomedicine  and  Biotechnology 2010:1-7. 13. Hirankarn N, Avihingsanon Y, Wongpiyabovorn  J.  Genetic  susceptibility  to
SLE  is  associated  with  TNF-alpha  gene polymorphism  –863,  but not  –308  and  –238, in Thai  population.  International  Journal  of Immunogenetics 2007;34:425–430.
14. Meirelles  LDS,  Fontes  AM,  Covas  DT, Caplan  AI.  Mechanism  Involved  in  the Therapeutic Properties of Mesenchymal Stem Cells. Cytokine Growth Factor Review 2009; 20: 419-427.
15. Carrion FA, Figueroa FE. Mesenchymal Stem Cells  for  the  Treatment  of  Systemic  Lupus Erythematosus:  Is  the  Cure  for  Connective Tissue Disease Within Connective  Tissue?.  Stem  Cell  Research  & Therapy 2011;2(23):1-8. 16. Wang  Y,  Bakota  E,  Chang  BHJ,  Entman  M,
Hartgerink JD, Danesh FR. Peptide Nanofibers  Preconditioned  with  Stem  Cell Secretome Are Renoprotective. Journal of The American Society Nephrology ,
2011; 22: 704–717.
17. Drago D, Cossetti C, Iraci N, Gaude E, Musco G,  Bachi  A,  Pluchino  S.  The  Stem  Cell Secretome  and  It’s  Role  in  Brain  Repair. Biochimie, 2013;95: 2271-2285.
18. Madrigal M, Rao KS, Riordan NH. A Review of Therapeutic Effects of Mesenchymal Stem Cell  Secretions  and  Induction  of  Secretory Modification  by  Different  Culture  Methods.
Journal of Translational Medicine, 2014;12(260):1-14.
19. Musai M. Terapi Lupus Eritematosus Sistemik dengan  Penghambatan  Kostimulasi  Sel  T.
Wulandari et. al., Efek Secretome Sel Punca Mesenkimal Terhadap Ekspresi Interleukin 17 Dan Tumor Necrosis Factor Alpha
SMART MEDICAL JOURNAL (2022) Vol. 5 No. 1. eISSN : 2621-0916
Majalah  Kedokteran  Indonesia,  2010;60(10): 1-6.
20. Rottman JB dan Willis CR. Mouse Models of Systemic  Lupus  Erythematosus  Reveal  a Complex Pathogenesis. Veterinary Pathology,
2010; 47(4): 664- 676.
21. Reeves WH, Lee PY, Weinstein JS, Satoh M, Lu L. Induction of Autoimmunity by Pristane and Other Naturally Occurring Hydrocarbons. Trends in Immunology, 2009;30(9): 455–464.
22. Calvani  N,  Caricchio  R,  Tucci  M,  Sobel  E, Silvestris  P,  Tartaglia  P,  Richards    HB. Induction  of  Apoptosis  by  the  Hydrocarbon Oil  Pristane:  Implications  for  Pristane-
Induced Lupus. The Journal  of Immunology, 2007;2005(175): 4777-4782.
23. Figueroa FE , Carrión F, Villanueva S, Khoury M.  Mesenchymal  Stem  Cell  treatment  for autoimmune  diseases:  a  critical  review. Biological Research, 2012;2012(5):269-277.
24. Sun  L,  Wang  D,  Liang  J,  Zhang  H,  Feng  X, Wang H. Umbilical Cord Mesenchymal Stem
Cell Transplantation in Severe and Refractory Systemic  Lupus  Erythematosus.  Arthritis  &
Rheumatism, 2010;62(8): 2467-2475.
25. Liang J, Zhang H, Hua B, Wang H, Lu L, Shi S,  et  al.  Allogenic  Mesenchymal  Stem  Cell Transplantation in Refractory Systemic Lupus Erythematosus: A Pilot Clinical Study. Annals of  the  Rheumatic  Disease,  2010;2010(69): 1423-1429. 26. Hoetzenecker K, Zimmermann
M, Hoetzenecker W, Schweiger T, Kollmann D, Mildner M, et al. Mononuclear cell secretome protects  from  experimental  autoimmune myocarditis. European Heart Journal,
2013;2013(10):1-11.
27. Chang CP, Chio CC, Cheong CU, Chao CM, Cheng  BC,  Lin  M.  Hypoxic  preconditioning enhances  the  therapeutic  potential  of  the secretome from cultured human mesenchymal stem  cells  in  experimental  traumatic  brain injury.  Clinical  Science , 2013;2013(124): 165–176.