## POTENSI HIDROGEL EKSTRAK ETANOLIK DAUN PECUT KUDA (Stachytarpheta Jamaicensis [L.] Vahl) TERHADAP PROSES

## PENYEMBUHAN ULKUS DIABETIKUM PADA Rattus Novergicus GALUR WISTAR
POTENCY OF PECUT KUDA (Stachytarpheta Jamaicensis [L.] Vahl) EXTRACT AGAINST DIABETIC ULCUS IN RAT (Rattus Novergicus)
1 Paulina Maya Octasari*, 1 Septiana Laksmi Ramayani
1 Politeknik Katolik Mangunwijaya
Info Artikel Sejarah Artikel:
Submitted: 11 Mar 2020 Accepted : 19 Feb 2021 Publish  Online : 19
Feb 2021
Kata Kunci : Makrofag,  leukosit, diabetes mellitus
Keywords : Macrophage, leukocyte, diabetes mellitus

## Abstrak
Latar  belakang: Terapi  utama  pada  ulkus  diabetikum  adalah  perawatan  luka  dan pemberian antibakteri. Senyawa fenolik dan flavonoid bersifat antibakteri yang terdapat pada  tanaman.  Tanaman  pecut  kuda  ( Stachytarpheta  jamaicensis [L.]  Vahl)  memiliki senyawa  tersebut. Tujuan: Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  potensi hidrogel  ekstrak  daun  pecut  kuda  (EEDPK)  terhadap  proses  penyembuhan  ulkus diabetikum  pada  tikus. Metode: Pembuatan  hidrogel  EEDPK    menggunakan  bahan HPMC,  propilenglikol  dan  metil  paraben  dengan    konsentrasi  ekstrak  sebesar  1%,  3%, dan  5%.  Dilakukan  penetuan  kadar  total  fenolik  dan  flavonoid.  Tikus  diolesi  povidon iodine,  basis  hidrogel,  EEDPK  1%,  3%, dan  5%  pada  ulkus  diabetikum  pada  hari  ke-7 hingga  ke-21.  Proses  penyembuhan  luka  dilihat  dengan  pemeriksaan  leukosit  dan makrofag  pada  hari  ke-3,  7,  14,  21.  Analisis  data  menggunakan One  Way  Anova dilanjutkan  dengan Post  Hoc (taraf  kepercayaan    95%). Hasil: Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  hidrogel  EEDPK  mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid. Semakin tinggi  konsentrasi EEDPK memiliki kandungan  senyawa  yang semakin besar. Semua  tikus  mengalami  penyembuhan  luka  selama  21  hari.  Semua  sediaan  dapat menurunkan  kadar  leukosit  dan  makrofag  secara  signifikan  terhadap  kontrol  negatif (p<0.05) Simpulan dan saran: Hidrogel EEDPK dapat menurunkan kadar leukosit dan makrofag pada hari ke-21.

## Abstract
Background:  The main therapy in diabetic ulcers is wound care and administration of antibacterial. Phenolic and flavonoid compounds are antibacterial and found in plants. Pecut Kuda (Stachytarpheta jamaicensis [L.] Vahl) has this compound.  Objectives: The purpose  of  this  study  was  to  determine  the  potential  for  hydrogel  of  horse  pimp  leaf extract  (EEDPK)  on  the  healing  process  of  diabetic  ulcers  in  rats.  Methods:  The EEDPK hydrogel was prepared using HPMC, propylenglycol and methyl paraben with extract  concentrations  of  1%,  3%,  and  5%.  Determination  of  total  phenolic  and flavonoid levels was carried out. The mice were smeared with povidone iodine, hydrogel base, EEDPK 1%, 3%, and 5% on diabetic ulcers on days 7 to 21. The process of wound healing was seen by examining leucocytes and macrophages on days 3, 7, 14, 21.  Data analysis  used  One  Way  Anova  followed  by  Post  Hoc,  with  a  confidence  level  of  95%. Results: The results showed that the EEDPK hydrogel contained phenolic and flavonoid compounds.  The  higher  the  EEDPK  concentration,  the  greater  the  compound  content. All  rats  experienced  wound  healing  during  21  days.  All  preparations  can  significantly reduce  levels  of  leukocytes  and  macrophages  against  negative  control  (p  <0.05). Conclusions  and  suggestions:  EEDPK  hydrogel  can  reduce  levels  of  leukocytes  and macrophages on day 21. Can be examined for macrophages in the wound tissue.
Paulina Maya Octasari | Potensi Hidrogel Ekstrk Etanolik …. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021

## PENDAHULUAN
Diabetes  Mellitus  (DM)  merupakan  penyakit  metabolik  yang  ditandai  dengan hiperglikemia  kronik  akibat  gangguan  metabolisme  karbohidrat,  lemak  dan  protein  yang disebabkan oleh kelainan pada sekresi insulin, kerja insulin, atau keduanya. Klasifikasi DM ada 4  macam,  yaitu  DM  tipe  1,  DM  tipe  2,  DM  gestasional  dan  DM  tipe  lain.  Kasus  DM  paling banyak dijumpai adalah DM tipe 2, yaitu sekitar 90% kasus (ADA, 2018).
Pada  tahun  2014,  jumlah  pasien  DM  di  dunia  sebanyak  244  juta  (WHO,  2016).  Di Indonesia, jumlah pasien DM menduduki peringkat ke-6 di dunia setelah China, India, Amerika Serikat,  Brazil  dan  Meksiko. International  Diabetes  Federation (IDF)  memprediksi  kenaikan jumlah pasien DM di Indonesia tahun 2017 dari 10,3 juta menjadi sekitar 16,7 juta pada tahun 2045  (IDF,  2017).  Riset  Kesehatan  Dasar  menunjukkan  bahwa  prevalensi  DM  di  Indonesia sebesar  8,5%.  Jumlah  ini  mengalami  kenaikan  dari  tahun  2013  yaitu  6,9%.  Prevalensi  DM  di Provinsi Jawa Tengah pada penduduk usia ≥ 15 tahun sebesar 2,1% (Kemenkes RI, 2018).
Penyakit  DM  berhubungan  dengan  kerusakan  jangka  panjang,  disfungsi  dan  kegagalan berbagai  organ  terutama  mata,  ginjal,  jantung  dan  pembuluh  darah,  serta  saraf 1 .  Komplikasi neuropati terjadi pada 1 / 3 – 1 / 2 populasi DM (NIDDK, 2019). Risiko komplikasi neuropati pada pasien DM akan meningkat pada pasien yang telah lama  menderita DM.  Lama menderita  DM dengan  rata-rata  8,5±7,0  tahun  sebanyak  97,5%  pada  pasien  DM  tipe  2  menimbulkan komplikasi  neuropati  sebesar  67,2%  (Aghniya,  2017).  Sebanyak  54%  pasien  yang  dirawat  di RSCM Jakarta mengalami neuropati (Kemenkes RI, 2014).
Neuropati dan iskemia tungkai merupakan patogensis utama ulkus diabetikum. Lebih dari 60% ulkus diabetikum disebabkan oleh neuropati (Langi, 2011). Ulkus diabetikum terjadi pada 15% pasien DM. Ulkus diabetikum dapat berkembang menjadi kematian jaringan, apabila tidak ditangani  dengan  baik  secara  intensif  dapat  menyebabkan  infeksi  lebih  lanjut  sehingga menimbulkan gangrene (Aumiller and Dollahite, 2015).
Salah  satu  upaya  terapi  pengobatan  gangren  adalah  perawatan  luka  dan  pemberian antibakteri  (Choices,  2015;  Says,  2012).  Pengembangan  agen  topikal  melalui  penelitian terutama yang berasal dari bahan alam sebagai terapi alternatif terus dilakukan. Jenis salep dan hidrogel  sebagai  terapi  topikal  terbukti  mampu  menyembuhkan  luka  pada  pasien  DM. Pemilihan terapi topikal bertujuan untuk menciptakan suatu kondisi lingkungan fisiologis untuk proses penyembuhan luka (Langi, 2011).
Eksplorasi  obat  tradisional  dilakukan  karena  obat  tradisional  dapat  memberikan  hasil yang  efektif  dan  ekonomis.  Obat  tradisional  dapat  ditanam  sendiri  maupun  dapat  berupa tanaman liar yang belum pernah dimanfaatkan. Salah satu jenis tanaman yang digunakan dalam perawatan luka adalah tanaman yang mengandung senyawa flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan saponin.  Senyawa  fenolik  dan  flavonoid  juga  dapat  digunakan  sebagai  antibakteri  karena mampu  menghambat  pertumbuhan  berbagai  bakteri  baik  gram  positif  maupun  gram  negatif (Soeprama,  2006).  Salah  satu  tanaman  liar  yang  mengandung  senyawa  –  senyawa  berkhasiat tersebut adalah tanaman pecut kuda ( Stachytarpheta jamaicensis [L.] Vahl) (Saravanakumar, et al, 2009).
Ekstrak  akar  dan  daun  pecut  kuda  dapat  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida albicans penyebab  kandidiasi  vaginalis  (Syahril,  2015).  Ekstrak  daun  pecut  kuda  melalui metode  maserasi,  juga  mampu  memberikan  hambatan  pada  perkembangan  bakteri Staphylococcus  aureus (Sufitri,  et  al,  2015).  Ekstrak  etanol  pecut  kuda  juga  telah  terbukti memiliki efek analgesik dan antiinflamasi pada hewan uji (Sulaiman, 2007). Nilai LD 50 ekstrak air herba pecut kuda lebih besar dari 5.000 mg/kgbb (Sutjiatmo, et al., 2015). Gel ekstrak etanol daun  pecut  kuda  dapat  menyembuhkan  luka  bakar  pada  derajat  II  pada  punggung  kelinci (Anggriawan, et al 2018). Oleh karena itu perlu dilakukan pengujian efektivitas hidrogel ekstrak etanolik daun pecut kuda (EEDPK) terhadap proses penyembuhan ulkus diabetikum.

## METODE PENELITIAN
Paulina Maya Octasari | Potensi Hidrogel Ekstrk Etanolik …. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental.  Penelitian  dilakukan  melalui  2 tahapan,  yaitu  (1)  tahap  pembuatan  hidrogel  ekstrak  etanol  daun  pecut  kuda  (EEDPK);  (2) pengujian  kandungan  dan  potensi  hidrogel  EEDPK  terhadap  proses  penyembuhan  ulkus diabetikum tikus Wistar.
1. Tahap pembuatan hidrogel EEDPK
a. Ekstraksi daun pecut kuda
Serbuk  simplisia  pecut  kuda  di  ekstraksi  secara re maserasi  selama  5x24  jam,  dengan menggunakan pelarut etanol 96%.  Larutan di shaker selama 1 jam setiap pagi dan sore. Filtrate  yang  dihasilkan  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  70°C dengan kecepatan 100 rpm. Ekstrak yang dihasilkan dilakukan kontrol kualitas meliputi organolpetis, rendemen, susut pengeringan dan skrining fitokimia.
b. Pembuatan hidrogel EEDPK
Formula  hidrogel  dilakukan  dengan  menggunakan  3  formula  yaitu  membedakan konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  sebagai  zat  aktif,  yaitu  1%,  3%  dan  5%.  Formula dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Formula Hidrogel Ekstrak Daun Pecut Kuda Komponen (%) Formula 1 Formula 2 Formula 3 EDPK 1 3 5 HPMC 1 1 1 Propilenglikol 9 9 9 Metil paraben 0,1 0,1 0,1 Aquadest ad 100 100 100
2. Tahap pengujian kandungan dan aktivitas hidrogel EEDPK
a. Penentuan kadar total fenolik dan flavonoid Larutan sampel sediaan hidrogel EEDPK yang digunakan adalah 100ppm. Laruta baku asam  galat  (kadar  total  fenolik)  adalah  20,  30,  40,  50  dan  60  ppm  sedangkan  larutan baku  kuersetin  (kadar  total  flavonoid)  yang  digunakan  adalah  20,  40,  60,  80  dan  100 ppm.  Uji  kadar  fenolik  menggunakan  pereaksi Follin  Ciocalteau dan  kadar  total flavonoid  menggunakan  pereaksi  AlCl 3 .  Kurva  kalbrasi  dibuat  dengan  menghubungka antara konsentrasi larutan baku dengan absorbansi, hingga diperoleh persamaan y = bx +  a. Kandungan  kadar  total  fenolik  dan  flavonoid  pada  sediaan  hidrogel  EEDPK dinyatakan sebagai mgGAE/g.ekstrak dan mgQE/g ekstrak. Rumus penetuan kadar total fenolik dan flavonoid adalah sebagai berikut (Ahmad, A.R; Juwita; Ratulangi, S. A. D.; Malik 2015):
b. Pembuatan ulkus diabetes pada tikus
Tikus Wistar diinduksi dengan aloksan monohidrat dengan dosis 120 mg/kgBB secara intraperitoneal  untuk  meningkatkan  kadar  glukosa  darah.  Pemeriksaan  kadar  glukosa dilakukan menggunakan sampel darah yang diambil dari ekor tikus dan diteteskan pada stik  glukosa  yang  telah  dipasang  di  glucometer.  Pengukuran  kadar  glukosa  dilakukan sebelum dan 2 x 24 jam setelah pemberian aloksan monohidrat. Ulkus diabetikum pada tikus  dilakukan  dengan  mencukur  bulu  tikus  sampai  sekitar ±  4cm  disekitar  area  kulit yang akan dilukai. Area area kulit yang telah dicukur diolesi dengan alkohol 70%. Area kulit yang telah dibersihkan kemudian diberi 2 – 3 tetes HCl pekat untuk menghasilkan ulkus selama 3 hari.
c. Pengujian potensi hidrogel EEDPK
Dilakukan  pengamatan  dan  pemeriksaan  leukosit  dan  makrofag  pada  hari  ke-3 ( pretest ). Ulkus diabetikum dibersihkan menggunakan NaCl 0,9%. Setelah dibersihkan,
Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
ulkus diabetikum diolesi povidine iodine, basis hidrogel, hidrogel EEDPK 1%, 3% dan 5%  pada  ulkus  setiap  hari.  Dilakukan  pemeriksaan  leukosit  dan  makrofag  serta pengamatan  penutupan  luka  sesuai  dengan  kelompok  perlakuan  masing-masing  pada hari ke 7, 14, dan 21.
Analisis  data  dilakukan  dengan  membandingkan  jumlah  leukosit  dan  makrofag  pada hari ke 7, 14, dan 21. Analisis data menggunakan One Way Anova dilanjutkan dengan Post Hoc. Potensi hidrogel EEDPK ditunjukkan dengan nilai signifikansi dengan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL PENELITIAN
Kontrol  kualitas  suatu  simplisa  dan  ekstrak  merupakan  parameter  untuk  menjamin keajegan  kualitas  danefikasi  sediaan  fitofarmasi.  Simplisia  akan  diekstraksi  dengan  pelarut tertentu  sehingga  menjadi  suatu  ekstrak  yang  akan  menjadi  bahan  baku  sediaan  fitofarmasi. Kontrol kualitas serbuk simplisa dan ekstrak daun pecut kuda dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Kontrol Kualitas Serbuk Simplisa dan EEDPK Parameter Serbuk  Simplisia  Daun Pecut Kuda EEDPK Organoleptis Bentuk Bau Warna Rasa Serbuk Hijau Khas pahit Ekstrak kental Cokelat Khas Pahit Susut pengeringan (%) 7,83 1,73 Rendemen (%) - 28,09
Ekstrak yang telah diperoleh selanjutnya dilakukan skrining fitokimia untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung pada EEDPK. Skrining Fitokimia merupakan metode yang sederhana,  cepat  serta  sangat  selektif  yang  dapat  diguanakan  untuk  mengidentifikasi  golongan senyawa  dan  mengetahui  keberadaan  senyawa  aktif  biologis  yang  teristribusi  dalam  tanaman (Windarini 2013). Hasil skrining fitokimia EEDPK dapat dilihat di tabel 3.

## Tabel 3. Skrining Fitokimia EEDPK
Uji Senyawa Warna  larutan ekstrak awal Pereaksi Warna larutan ekstrak setelah direaksikan keterangan Polifenol Coklat FeCl3 Hitam Tanin Coklat Larutan  gelatin  +  NaCl 10% Endapan putih Flavonoid Coklat HCl pekat merah + Alkaloid Coklat Mayer Dragendorf Endapan putih Endapan orange + + Triterpenoid Coklat Asam  asetat  anhidrat  + H2SO4p Larutan hijau - Saponin Coklat Asam  asetat  anhidrat  + H2SO4p Larutan hijau + Antrakuinon Coklat Amonia Merah +
EEDPK  selanjutnya  dilakukan  formulasi  dengan  menggunakan  tiga  konsentrasi  ekstrak yang  berbeda  yaitu  1%,  3%  dan  5%.  Perbedaan  konsentrasi  ekstrak  pada  pembuatan  sediaan sediaan hidrogel EEDPK menghasilkan borganoleptis, homogenitas, dan pH yang sama namun pada  uji  daya  sebar,  daya  lekat,  daya  proteksi  dan  viskositas  yang  berbeda-beda.  Hasil pengujian karakteristik sediaan hidrogel EEDPK dapat dilihat pada tabel 4.
Paulina Maya Octasari | Potensi Hidrogel Ekstrk Etanolik …. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Tabel 4. Karakteristik fisik Formula Hidrogel Ekstrak Daun Pecut Kuda Karakteristik Formula 1 (EEDPK 1%) Formula 2 (EEDPK 3%) Formula 3 (EEDPK 5%) Organoleptis Bentuk cairan kental Warna hijau Bau khas pecut kuda Terasa  dingin  saat diaplikasikan Bentuk cairan kental Warna hijau Bau khas pecut kuda Terasa  dingin  saat diaplikasikan Bentuk cairan kental Warna hijau Bau khas pecut kuda Terasa  dingin  saat diaplikasikan Homogenitas Homogen Homogen Homogen pH 6 6 6 Daya Lekat (detik) 1,12 1,15 1,4 Daya Sebar (cm) 202,01 – 188,59 114,93 – 151,66 69,36 – 124,62 Daya Proteksi (detik) 1,63 2,7 4 Viskositas (cps) 9100 9330 9740
Penetapan  kadar  total  fenolik  dan  flavonoid  dilakukan  secara  kolorimetri  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Kadar total fenolik menggunakan larutan standar baku asam  galat.  Asam  galat  termasuk  dalam  senyawa  fenolik  turunan  asam  hidroksibenzoat  yang tergolong  asam  fenol  sederhana  (Ahmad,  A.R;  Juwita;  Ratulangi,  S.  A.  D.;  Malik  2015). Sedangkan penetapan kadar flavonoid digunakan standar baku kuersetin. Kuersetin merupakan flavonoid golongan flavonol yang memiliki gugus keto pada atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga (Markham 1988). Hasil penentuan kadar total fenolik dan kadar total flavonoid sediaan hidrogel EDPK dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Kadar Total Fenolik dan Kadar Total Flavonoid Hidrogel EEDPK
Konsentrasi EEDPK (%) Kadar Total Fenolik (mg GAE/g ekstrak) Kadar Total Flavonoid (mg QE /g ekstrak) 1 0,2058 a 0,3716 a 3 0,4952 b 0,5886 b 5 0,7602 c 0,7114 c
Subscribe yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan signifikan (p<0.05)
Untuk  mengetahui pengaruh perbedaan formula pada kadar total fenolik dan kadar total flavonoid  dilakukan  analisis  statistik.  Hasil  uji  normalitas  dan  homogenitas  diperoleh  nilai p>0,05 sehingga  data  yang  diperoleh  normal  dan  homogen  dan  selanjutnya  dapat  dilanjutkan dengan  analisis  secara one  way ANOVA.  Hasil  analisis one  way ANOVA  menunjukkan  baik pada  kadar  total  fenolik  maupun  flavonoid  menunjukkan  nilai  signifikansi p<0,05 sehingga formula  yang  digunakan  memberikan  pengaruh  signifikan  terhadap  kadar  total  fenolik  dan kadar  total  flavonoid  yang  dihasilkan.  Hasil  tertinggi  terdapat  pada  formula  3  dengan  kadar ekstrak EEDPK 5%.
Pada  tahap pengujian  senyawa,  dilakukan  terhadap  25  ekor  tikus  yang  telah  dipuasakan sebelumnya.  Seluruh  tikus  juga  diberi  aloksan  monohidrat  sebagai  penginduksi  diabetes mellitus.  Seluruh  tikus  mengalami  peningkatan  glukosa  darah  setelah  2  x  24  jam  pemberian aloksan monohidrat. Hasil peningkatan glukosa darah puasa dapat dilihat pada tabel 6.
Tabel 6. Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Wistar
Kelompok  Rata – rata GDP (mg/dL) Sebelum Sesudah I 113.4 + 6.99 140.2 + 9.93 II 84.4 + 7.23 139.8 + 9.01
III 84.2 + 6.02 141.2 + 8.89 IV 108.2 + 5.22 153.2 + 7.05 V 101.4 + 5.73 136 + 8.97
Setelah seluruh tikus mengalami DM, maka diinduksi dengan 2 – 3 tetes HCl pekat untuk menghasilkan luka bakar. Hasil luka bakar dapat dilihat pada gambar 1.

## Luka bakar akibat HCl pekat

## Gambar 1. Hasil Luka Bakar Tikus Galur Wistar
Pada  hari  ketiga,  tujuh,  empat  belas  dan  dua  puluh  satu,  dilakukan  pengambilan  darah melalui vena orbitalis menggunakan pipa kapiler sebanyak 1 ml. Sampel darah tikus ditampung dalam  tabung  eppendorf  yang  telah  diberi  NaEDTA.  Senyawa  ini  diteteskan  ke  tabung eppendorf  sebanyak  3  tetes  untuk  sampel  darah  sebanyak  1  ml.  Hasil  pemeriksaan  kadar leukosit selama 21 hari pengamatan, dapat dilihat pada gambar 2.

## Gambar 2. Grafik Kadar Leukosit Tikus Selama 21 Hari Pengamatan
Pada gambar 2 menunjukkan bahwa selama 21 hari pengamatan, kadar leukosit pada hari ketiga  merupakan  kadar  leukosit  tertinggi.  Kadar  leukosit  tikus  mengalami  penurunan  mulai dari hari ke – 3 hingga hari ke – 21. Pada hari ke-7, kelompok I menunjukkan adanya penurunan yang paling besar, sedangkan pada hari ke-14, kelompok V yang menunjukkan penurunan yang paling besar. Pada pengamatan hari terakhir, kelompok III yang menunjukkan penurunan yang paling tajam.
Paulina Maya Octasari | Potensi Hidrogel Ekstrk Etanolik …. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Selain kadar leukosit, paramater lain yang digunakan dalam penelitian untuk mengetahui proses  penyembuhan  luka  pada  tikus  pengamatan  adalah  menggunakan  paramater  makrofag. Makrofag  merupakan  jenis  leukosit  yang  berada  dalam  jaringan.  Nilai  kadar  makrofag  dapat diinterpretasikan  dengan  kadar  monosit  dalam  darah.  Nilai  kadar  makrofag  dapat  dilihat  pada gambar 3.

## Gambar 3. Grafik Kadar Makrofag Tikus Selama 21 Hari Pengamatan
Pada gambar 3 juga menunjukkan bahwa selama 21 hari pengamatan memiliki trend yang mirip  dengan  kadar  leukosit  tikus  pengamatan.  Hasil  menunjukkan  bahwa  pada  hari  ketiga merupakan  kadar  makrofag  tertinggi.  Kadar  makrofag  tikus  mengalami  penurunan  mulai  dari hari  ke  –  3  hingga  hari  ke  –  21.  Pada  hari  ke-7,  kelompok  I  (kontrol  positif)  menunjukkan adanya  penurunan  yang  paling  besar,  sedangkan  pada  hari  ke-14,  kelompok  V  (EEDPK  5%) yang menunjukkan penurunan yang paling besar. Pada pengamatan hari terakhir, kelompok III (EEDPK 1%) yang menunjukkan penurunan yang paling tajam.
Besarnya  penurunan  paramater  kadar  leukosit  dan  makrofag  setiap  tahapan  pengamatan dianalisis menggunakan statistik. Hasil pengolahan statistik kadar leukosit dan makrofag selama 21 hari pengamatan dapat dilihat pada tabel 7.
Tabel 7. Hasil Pengolahan Statistik Kadar Leukosit dan Makrofag Selama 21 Hari
Pengamatan Kelompok Nilai signifikansi kadar Leukosit pada hari ke- Nilai signifikansi kadar Makrofag pada hari ke- 3 7 14 21 3 7 14 21 I 0.000* 0.000* 0.000* 0.000* 1.000 0.000* 0.000* 0.000* III 0.000* 1.000 1.000 0.000* 1.000 1.000 1.000 0.000*
IV 0.140 0.000* 0.000* 0.000* 1.000 0.000* 0.000* 0.000* V 0.000* 0.000* 0.000* 0.000* 0.288 0.000* 0.000* 0.000*
*signifikan (nilai p<0.05)
Pada  tabel  7  menunjukkan  bahwa  terdapat  hasil  yang  signifikan  untuk  kadar  leukosit maupun  makrofag antara kelompok  I,  III,  IV, dan V terhadap kontrol negatif pada hari ke-21. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sediaan  EEDPK  kadar  1%,  3%,  dan  5%  dapat  menyembuhkan ulkus  diabetikum  pada  tikus.  Pada  kelompok  I,  IV,  dan  V telah  memberikan  penurunan  kadar leukosit  dan  makrofag  yang  signifikan  pada  hari  ke-7  sedangkan  pada  kelompok  III memberikan nilai yang signifikan pada hari ke-21. Pada hari ke-21 ulkus diabetik yang terjadi di tikus  Wistar  mengalami  penyembuhan.  Perbandingan  ulkus  pada  hari  ke-3  dengan  hari  ke-21 dapat dilihat pada gambar 4 dan gambar 5.
Kontrol Positif Kontrol Negatif EEDPK 1% EEDPK 2% EEDPK 3%

## Gambar 4. Gambaran ulkus diabetikum tikus Wistar pada hari ke-3
Pada  gambar  4  menunjukkan  bahwa  semua  tikus  mengalami  ulkus  yang  sama,  yaitu  dengan ukuran + 4 cm. Ulkus yang terbentuk merupakan hasil dari pemberian HCl pekat sebanyak 2 – 3 tetes.
Kontrol Positif Kontrol Negatif
EEDPK 1% EEDPK 2% EEDPK 3%
Gambar 5. Gambaran penyembuhan ulkus diabetikum tikus Wistar pada hari ke-21
Pada  gambar  5  menunjukkan  bahwa  semua  tikus  mengalami  proses  penyembuhan  luka ulkus  pada  hari  ke-21.  Jaringan  kulit  juga  telah  mengalami  perbaikan  sehingga  daerah  ulkus yang  telah  sembuh  ditumbuhi  rambut  kembali.  Penutupan  ulkus  diabetikum  pada  tikus  paling baik adalah kelompok V (EEDPK 5%).

## PEMBAHASAN
Tanaman pecut kuda yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh daari Bandungan dan bagian yang digunakan adalah daun. Bagian daun mengandung senyawa fenolik dan flavonoid yang  lebih  tinggi  dari  bagian  batang  dan  herba  (E.  Astuti  2016;  Hermawati  2016).  Simplisa pecut  kuda  dilakukan  dengan  melakukan  pengeringan  menggunakan  oven  pada  suhu  50°C. pengeringan  dengan  oven  memberikan  keuntungan  yaitu  penggunaan  suhu  yang  dapat  diatur sesuai dengan  bahan yang akan dikeringkan dan waktu pengeringan yang relative lebih cepat (BPOM  RI  2013).    Ekstraksi  daun  pecut  kuda  dilakukan  secara  maserasi.  Metode  maserasi merupakan metode ekstrkasi dingin yang dilakukan dengan merendam serbuk simplisia dengan
Paulina Maya Octasari | Potensi Hidrogel Ekstrk Etanolik …. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
pelarut yang sesuai pada suhu kamar. Metode ekstraksi dingin dapat digunakan untuk menyari senyawa-senyawa  yang  tidak  tahan  pemanasan  seperti  senyawa  fenolik  dan  flavonoid  yang terdapat dalam daun pecut kuda. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96%. Etanol merupakan pelarut  universal  yang  dapat  menarik  senyawa  polar  maupun  senyawa  non  polar,  serta  dapat mempercepat  proses  penguapan  (Depkes  1986).  Ekstrak  daun  pecut  kuda  yang  dihasilkan berwarna coklat, bau khas, rasa pahit. Hasil rendemen dan susut pengeringan ekstrak pecut kuda adalah  28,09%  dan  1,73%.  Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak  pecut  kuda positif  mengandung  senyawa  polifenol,  tanin,  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  steroid  dan antrakuinon. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi dapat menarik senyawa polar maupun non polar.
Formula hidrogel dibuat dalam 3 formula dengan membedakan konsentrasi ekstrak pecut kuda, yaitu 1%, 3% dan 5%. Perbedaan konsentrasi ekstrak yang digunakan untuk mengetahui pengaruhnya  terhadap  uji  farmakologik  yang  akan  dilakukan.  Hasil  uji  karakteristik menunjukkan  bahwa  perbedaan  konsentrasi  ekstrak  menghasilkan  organoleptis,  homogenitas dan  pH  yang  sama.  Hasil  pengujian  pH  menunjukkan  bahwa  sediaan  hidrogel  EEDPK  aman digunakan karena masih masuk dalam rentang pH kulit normal yaitu 4,5 – 6,5. Nilai pH penting untuk  mengetahui  keasaman/kebasaaan  sediaan  sehingga  tidak  mengiritasi  kulit  saat diaplikasikan  (Yunas,  2016).  Peningkatan  konsentrasi  ekstrak  menyebabkan  daya  lekat  dan daya  proteksi  sediaan  semakin  lama  dan  viskositas  yang  semakin  besar.  Ekstrak  diketahui memiliki  daya  lekat  sehingga  dengan  semakin  tinggi  ekstrak  yang  digunakan  semakin  lama daya lekat sediaan dan daya proteksinya. Daya lekat merupakan kemampuan dari sediaan untuk melekat dalam jangka waktu lama saat dipakai. Semakin lama daya lekat suatu sediaan, semakin lama waktu penetrasi obat ke dalam kulit sehingga absorpsi obat menjadi optimal (Ansel, 1989). Viskositas  merupakan  pengukuran  dari  ketahanan  fluida  yang  diubah  baik  dengan  tekana maupun tegangan. Peningkatan konsetrasi ekstrak menyebabkan cairan semakin kental sehingga membutuhkan gaya yang lebih besar untuk mengalir (daya alir lambat). Peningkatan konsentrasi ekstrak  menyebabkan  daya  sebar  yang  semakin  kecil.  Hasil  ini  sesuai  dengan  viskositas  yang dihasilkan.  Semakin  besar  konsentrasi  ekstrak,  konsistensi  sediaan  semakin  kental,  viskositas semakin besar dan daya sebar semakin kecil.
Penentuan  kadar  total  fenolik  dilakukan  dengan  menggunakan  pereaski Follin Ciocalteau .  Senyawa  fenol  akan  bereaksi  dengan  pereaksi Follin  Ciocalteau menghasilkan warna  kuning  dan  selanjutnya  ditambahkan  dengan  larutan  Na 2 CO 3 sehingga  menghasilkan warna biru. Senyawa fenolik bereaksi dengan pereaksi Follin Ciocalteau hanya dalam suasana basa  sehingga  terjadi  disosiasi  proton  pada  senyawa  fenolik  menjadi  ion  fenolat  sehingga dilakukan  penambahan  larutan  Na 2 CO 3. .  penentuan  kadar  total  fenolik  dilakukan  dengan penambahan  AlCl 3 sehingga  membentuk  kompleks  dan  terjadi  pergeseran  panjang  gelombang ke arah visible yang ditandai dengan terbentuknya warna kining intensif (Ahmad, A.R; Juwita; Ratulangi, S. A. D.; Malik 2015).
Perbedaan konsentrasi ekstrak dalam pembuatan sediaan hidrogel  EEDPK menunjukkan perbedaan  signifikan  terhadap  kadar  total  fenolik  dan  kadar  total  flavonoid  EEDPK.  Semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang  ditambahkan  dalam  sediaan  maka  semakin  tinggi  pula  kadar senyawa yang dihasilkan (Astryani 2019). Kadar total fenolik dan kadar total flavonoid tertinggi ditunjukkan pada formula 3 yaitu formula yang menggunakan konsentrasi EEDPK paling tinggi yaitu  5%.  Peningkatan  kadar  total  fenolik  dan  kadar  total  flavonoid  berpengaruh  terhadap aktivitas antioksidan dari suatu ekstrak (p,0.05) (Werdiningsih dan Zahro, 2020)
Pada pengujian potensi hidrogel EEDPK dilakukan dengan pembuatan ulkus diabetikum menggunakan senyawa HCl pekat. Senyawa HCl pekat dapat memberikan dampak luka bakar. Senyawa HCl bersifat korosif, mengiritasi dan tidak bersifat mudah terbakar. Luka terbuka yang dihasilkan  dapat  meningkatkan  kadar  leukosit  dan  makrofag  dari  tikus.  Leukosit  berhubungan erat dengan sistem pertahanan  tubuh.  Monosit, eosinofil,  dan basofil  dalam  kondisi  normal jumlahnya sangat sedikit, akan meningkat oleh kondisi  patologis (Fitria and Sarto 2014). Ulkus dapat menurunkan aktivitas dan berat badan hewan uji sehingga perlu adanya penanganan yang tepat (Wahyuni dan Saban, 2018)
Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Sediaan  EEDPK  mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid.  Flavonoid  merupakan bahan  aktif  yang  mempunyai  efek  anti  inflamasi  dan  anti  bakteri.    Flavanoid  memiliki  cincin bensopiron  sehingga  dapat  menghambat  jalur    siklooksigenase  (COX)    dan    lipooksigenase (LOX)  dari  metabolisme  asam    arakidonat.  Proses  ini  menyebabkan  penghambatan  sintesis mediator  peradangan  seperti  prostaglandin  dan  tromboksan  sehingga  dapat  menurunkan inflamasi.  Konsentrasi  rendah  dari  senyawa  flavanoid  yang  dimiliki  oleh  EEDPK  1%,  dapat menghambat  jalur  LOX  tanpa  menghambat  jalur  COX.  (Wijonarko  2016).  Hal  ini  berdampak pada lama waktu penyembuhan luka pada kelompok tersebut.
Flavonoid  mempunyai  kemampuan  untuk  menghambat  pelepasan asam  arakhidonat  dan sekresi enzim lisosim dari sel neutrofil dan sel endotelial dan menghambat fase proliferasi dan fase  eksudasi  dari  proses  inflamasi  (Sundaryono  2011).  Flavonoid juga  menghambat  leukotrin dan    hidroksi    asam    lemak  sehingga  menghambat  produksi  mediator  LTB4.  Senyawa  ini berperan  sebagai  kemotaktik  leukosit,  polimorfonuklear,  eosinophil,  dan  monosit  sehingga jumlahnya berkurang (Miladiyah and Prabowo 2012).
Penurunan    migrasi    monosit    yang  diakibatkan   oleh    diblokirnya   jalur lipooksigenase mengakibatkan    penurunan  jumlah    makrofag.    Efek    tersebut  mempengaruhi    lama    waktu peradangan,  sehingga    akan    diikuti    dengan    kecepatan  proses    penyebuhan    dan    pemulihan yang ditandai  dengan  menurunya  jumlah makrofag (Wijonarko 2016).
Penggunaan    hidrogel  EEDPK  secara  topikal    memberikan  kelembaban  pada  luka sehingga  mendorong  luka    untuk    mempercepat    proses    granulasi  dan    kandungan    dari flavanoid    sendiri    yang  berfungsi    antioksidan    dan    antimikroba,  sehingga    membantu meningkatkan  sistem imun  serta  mencegah  berkembangnya mikroba. Hal  ini  sesuai  fungsi makrofag  adalah  membersihkan  luka  dari  bakteri,  sel-  sel  mati  dan  debris  dengan  cara fagositosies.  kandungan    dari    flavanoid    dan    fenolik  dari  pecut  kuda  dapat    menghambat perusakan jaringan dan sebagai antimikroba (S. M. Astuti et al. 2011)

## SIMPULAN
Hidrogel EEDPK mengandung senyawa fenolik dan flavonoid. Semua sediaan EEDPK (konsentrasi  1%,  3%,  dan  5%)  dapat  menurunkan  kadar  leukosit  dan  makrofag  dalam  range normal pada hari ke-21.

## SARAN
Dapat dilakukan pemeriksaan makrofag di jaringan sehinggaPerlu dilakukan penelitian lebih  lanjut  khususnya  Dapat  dilanjutkan  penelitian  dengan  mengukur  Saran  yang  diberikan disesuaikan dengan hasil penelitian dan berupa rekomendasi penelitian selanjutnya.

## REFERENSI
ADA. 2018. Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care . 35: S64–S71 Aghniya,  R.,  2017.  Hubungan  Lamanya  Menderita  Diabetes  Melitus  Dengan  Terjadinya Diabetic  Peripheral  Neuropathy (DPN)  Pada  Pasien  Diabetes  Mellitus  tipe  2  Di  Graha Diabetika Surakarta. Skripsi . Universitas Muhammadiyah Surakarta: Surakarta Ahmad, A.R; Juwita; Ratulangi, S. A. D.; Malik, Abdul. 2015. “Penetapan Kadar Fenolik Dan Flavonoid  Total  Ekstrak  Metanol  Buah  Dan  Daun  Patikala  ( Etlingea  Elatior (Jack)
R.M.M).” Pharmaceutical Sciences and Research 2(1).
Anggriawan,  M.,  Yuliet,  dan  Khaerati,  K.,  2018.  Pengaruh  Pemberian Topikal Ekstrak  Etanol Daun  Pecut  Kuda  ( Stachytarpheta  jamaicensis (L.)  Vahl)  Terhadap  Penyembuhan  Luka Bakar Derajat II Pada Punggung Kelinci ( Oryctolagus cuniculus ). Biocelebes, Vol 12 No 2, 44-51
Astryani, Regina. 2019. “Formulasi Dan Uji Antioksidan Dengan Metode DPPH Sediaan Gel Ekstrak  Etanol  Daun  Kopi  Robusta  ( Coffea  Canephora )  Berbasis  HPMC  60SH.”
Paulina Maya Octasari | Potensi Hidrogel Ekstrk Etanolik …. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Universitas Sriwijaya.
Astuti,  E.  2016.  “Kadar  Total  Flavonoid  Pada  Berbagai  Organ  Tanaman  Pecut  Kuda ( Stachytarpheta Jamaicnsis (L).” Akademi Farmasi Theresiana.
Astuti,  Sri  Murni,  Mimi  Sakinah  A.M,  Retno  Andayani  B.M,  and  Awalludin  Risch.  2011. “Determination  of  Saponin  Compound  from  Anredera  Cordifolia  (Ten)  Steenis  Plant (Binahong) to Potential Treatment for Several Diseases.” Journal of Agricultural Science 3(4): 224–32.
Aumiller,  W.D.  and  Dollahite,  H.A.,  2015.  Pathogenesis  and  management  of  diabetic  foot ulcers, American Academy of Physician Assistants , Volume 28 No 5.
BPOM  RI.  2013. Pedoman  Cara  Pembuatan  Simplisa  Yang  Baik .  Jakarta:  Badan  Pengawas
Obat dan Makanan Republik Indonesia. Choices, N.H.S., 2015. 'Gangrene - Causes - NHS Choices' . URL:
http://www.nhs.uk/conditions/Gangrene/Pages/Causes.aspx. (diakses tanggal 09/08/2019).
Depkes. 1986. Sediaan Galenik . Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Dipiro,  J.T.,  Wells  B.G.,  Schwinghammer,  T.L.,  Dipiro  C.V.,  2009. Pharmacotherapy Handbook . 7ed. McGraw-Hill Companies. United States Fitria, L, and M Sarto. 2014. “Galur Wistar Jantan Dan Betina Umur 4 , 6 , Dan 8 Minggu.” jurnal iIlmiah Biologi 2(2): 94–100.
Hermawati,  H.  2016.  “Pengaruh  Perbedaan  Organ  Tanaman  Pecut  Kuda  ( Stachytarpheta Jamaicnsis (L) Terhadap Kadar Total Fenol.” Akademi Farmasi Theresiana, Semarang. International Diabetes Federation (IDF), 2017. IDF Diabetes Atlas. 8th Edition. IDF: Belgium Kementrian  Kesehatan,  2018. Riset  Kesehatan  Dasar  (Riskesdas) 2018.  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan Kementerian RI: Jakarta. Kemenkes RI, 2014. Pusat data dan informasi, Situasi dan analisis diabetes mellitus , Jakarta Langi,  Y.A  (2011),  Penatalaksanaan  Ulkus  Kaki  Diabetes  Secara  Terpadu, Jurnal  Biomedik , Volume 3, Nomor 2. 95-101 Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid . Penerbit ITB, Bandung.
Miladiyah, Isnatin, and Bayu Rizky Prabowo. 2012. “Ethanolic Extract of Anredera Cordifolia (Ten.)  Steenis  Leaves  Improved  Wound  Healing  in  Guinea  Pigs.” Universa  Medicina 31(1): 4–11.
NIDDK, 2019. What is diabetic neurophaty, https://www.niddk.nih.gov/health- information/diabetes/overview/preventing-problems/nerve-damage-diabetic- neuropathies/what-is-diabetic-neuropathy, diakses tanggal 8 Agustus 2019 Saravanakumar,  A.,  Venkateshwaran,  K.,  Vanitha,  J.,  Ganesh,  M.,  Vasudevan,  M.,  dan Sivakumar, T., 2009. Evaluation of antibacterial activity, phenol and flavonoid contents of Thespesia  populnea flower  extracts. Pakistan  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences ,  22: 282–286
Says,  A.D.,  2012. 'Diagnosis  and  treatment  of  gangrene' News-Medical.net .  URL: http://www.news-medical.net/health/Diagnosis-and-treatment-of-gangrene.aspx.  (diakses tanggal 09/08/2019).
Sundaryono, Agus. 2011. “Uji Aktivitas Senyawa Flavonoid Total Dari Gynura Segetum (Lour) Terhadap  Peningkatan  Eritrosit  Dan  Penurunan  Leukosit  Padamencit  ( Mus  Musculus ).” Jurnal Exacta IX(2): 8–16. Soeprema,  S.  2006. Compotion  Natural  Products  for  treatment  of  Diabetes . PATENSCOPE ,
36:185
Syahril,  A.,  2015.  'Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Dalam  Ekstrak  Metanol  Daun Pecut Kuda', Skripsi , Universitas Negeri Gorontalo, Gorontalo.
Sufitri  RA.,  Nurdiana,  Krismayanti,  L.,  2015,  Uji  Ekstrak  Daun  Pecut  Kuda  (Stachytarpheta jamaicencis L) sebagai penghambat bakteri Staphylococcus aureus , BIOTA: Jurnal Tadris IPA Biologi , Vol VII NO 2 Juli – Des 2015 Sulaiman, M R, et al., 2007. Antinociceptive and anti-inflammatory effects of Stachyartarpheta jamaicensis  (L.)  Vahl  (Verbebaceae)  in  Experimental  Animal  Models. Medical  Principle and Practise , Vol. 19, hal. 272-279
Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Sutjiatmo, A.B., Sukandar, E.Y, Candra, Vikasari, S.N., 2015. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Air Herba  Pecut  Kuda  (Stachytarpheta  jamaicensis  (L)  VAHL)  Pada  Mencit  Swiss  Webster.
Kartika-Jurnal Ilmiah Farmasi , 3(2), 32-37 32 Wahyuni, I.N dan Sabban,  I.F. 2018. Gambaran Berat Badan Tikus Putih ( Rattus Novergicus ) Akibat  Ulkus  Traumatik  Dengan  Paparan  Ekstrak  Jamur  Tiram  ( Pleurotus  ostreatus ). J urnal Wiyata, Vol. 5 No. 2. 61 - 68 Werdiningsih, W dan Zahro, A. 2020. Penetapan Kadar Flavonoid Dan Fenoldari Daun Srikaya ( Annona squamosal L) Serta Aktivitas Sebagai Antioksidan. Jurnal Wiyata , Vol. 7 No. 2. 157 - 170.
Wijonarko,  Bangun.  2016.  “Efektvitas  Topikal  Salep  Ekstrak  Binahong  ( Anredera  Cordifolia (Tenore) Steenis) Terhadap Proses Penyembuhan Luka Ulkus Diabetik Pada Tikus Wistar ( Rattus Novergicus ).” Jurnal Ilmiah Kesehatan (JIK) IX(2).
Windarini,  L.G.E ;  Astuti  K.W ;  Warditiani  N.K.  2013.  “Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Metanol Kulit Buah Manggis ( Garcinia Mangostana L.).” Jurnal Farmasi Udayana 2(4). World Health Organization (WHO). 2016. Global Report On Diabetes. WHO: France