Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol. 8 No.1  Juni 2022 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p -ISSN : 2442-6032 e -ISSN :  2598-9979
Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Fraksi Etil Asetat dan Fraksi N- Heksan Daun Pegagan ( Centella Asiatica L.)

## Ella Yunita, Dyah Ratna Ayu Puspita Sari
Program Studi D3 Farmasi, Akademi Kesehatan Bintang Persada

## ABSTRAK
Antioksidan  berperan  penting  untuk  melindungi sel  terhadap  pengaruh  radikal  bebas.  Tumbuhan yang  berperan  sebagai  antioksidan  alami  adalah pegagan ( Centella asiatica ) dan banyak digunakan dalam  pengobatan  tradisional.  Tujuan  penelitian ini adalah mengetahui aktivitas antioksidan (IC 50 ) dari fraksi etil asetat dan n-heksan daun pegagan dan toksisitasnya (LC 50 ) terhadap Artemia salina Leach.  Pengujian  antioksidan  dilakukan  dengan metode  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ) menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan uji
toksisitas  dengan  metode  BSLT  ( Brine  Shrimp Lethality  Test) .  Hasil  penelitian  menunjukkan nilai  IC 50 fraksi  etil  asetat  sebesar  325  mg/L (kategori  lemah)  dan  fraksi  n-heksan  731  mg/L (kategori  tidak  aktif)  sedangkan  nilai  LC 50 pada fraksi  etil  asetat  yaitu  1202  mg/L  (kategori  tidak toksik)  dan  fraksi  n-heksan  yaitu  2818  mg/L (kategori tidak toksik).
Kata Kunci : BSLT , C. asiatica, DPPH, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan

## ABSTRACT
Antioxidants play an important role in protecting cell  against  the  effect  of  free  radicals.  The    plant that  act  as  a  natural  antioxidants  is  pegagan ( Centella  asiatica )  and  widely  used  in  traditional medicine.  This  study  aims  to  examine  of antioxidant activity (IC 50 ) of the ethyl acetate and n-hexane  fraction  of C.  asiatica leaves  and  their toxicity (LC 50 ) against Artemia salina Leach. The antioxidant  activity  test  used  the  DPPH  (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl)  method  by  a  UV-Vis spectrophotometer  and  the  toxicity  test  used  the
BSLT  (Brine  Shrimp  Lethality  Test)  method.  The results of the IC 50 value of ethyl acetate fraction was 325  mg/L  (weak  category)  and  n-hexane  fraction 731 mg/L (inactive category) while the LC 50 value of ethyl acetate fraction was 1202 mg/L (non toxic category)  and  n-hexane  fraction  is  2818  mg/L (non-toxic category.)
Keywords: BSLT, C. asiatica , DPPH, ethyl acetate fraction, n-hexane fraction.
Penulis Korespondensi : Informasi Artikel Dyah Ratna Ayu Puspita Sari Submitted : 17  Maret 2022 Program Studi D3 Farmasi,  Akademi Kesehatan Bintang Persada Accepted : 18 Mei 2022 Published : 30 Juni 2022 E-mail : ayupuspitadyah8@gmail.com

## PENDAHULUAN
Antioksidan  berperan  penting  bagi kesehatan.  Senyawa  antioksidan  dapat menghambat  terjadinya  reaksi  oksidasi yang  diakibatkan  oleh  senyawa  radikal bebas.  Radikal  bebas  dan  ROS  ( Reactive Oxygen  Spesies )  yang  berlebihan  dapat menyerang molekul biologis seperti lipid, protein dan asam nukleat yang mengarah ke  cedera  jaringan  (Phaniendra  et  al., 2015).  Stres  oksidatif  juga  terlibat  dalam terjadinya penyakit aterosklerosis, kanker, diabetes,  arthritis,  cedera  reperfusi, penuaan  dini  dan  inflamasi.  Antioksidan diperlukan  untuk  mencegah  terjadinya kerusakan oksidatif oleh radikal bebas (M. Rahman et al., 2013).
Senyawa  antioksidan  alami  dapat ditemui  pada  tanaman  obat  tradisional, yaitu pegagan (Centella asiatica) . Pegagan merupakan tanaman yang banyak dimanfaatkan untuk mengobati beberapa penyakit seperti penyakit jantung, penyakit  kulit,  antiepilepsi,  obat  luka, ulser,  dan  asma.  Kandungan  kimia pegagan  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin, steroid, dan terpenoid. Senyawa terpenoid yang terkandung dalam pegagan adalah glikosida triterpen seperti centella
saponin, asiatikosida, madekasosida, d an  sentelosida,  serta asam  asiatik  dan  asam  madasiatik (Sutardi,  2017).  Salamah  &  Farahana, (2014)  membuktikan  bahwa  kandungan flavonoid  pada  ekstrak  etanol  daun pegagan dapat menghambat terbentuknya
reaksi  oksidasi.  Fraksi  etil  asetat  herba pegagan  juga  menunjukkan  adanya kandungan  senyawa  polifenol  seperti flavonoid  dan  tannin.  Ekstrak  etanol herba  pegagan  juga  terbukti  sebagai antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar 78,20 ppm (Yahya & Nurrosyidah, 2020). Aktivitas farmakologi pegagan ini disebabkan oleh adanya kandungan kimia yang  terkandung  didalamnya.  Efektivitas kandungan  kimia  tersebut  sebagai  bahan obat  dari  alam  dapat  ditentukan  melalui analisis  awal  yaitu  uji  toksisitas. Berdasarkan  potensi  yang  dimiliki  oleh pegagan  maka,  pada  penelitian  ini dilakukan pengujian aktivitas antioksidan dan  toksisitas  menggunakan  fraksi  etil asetat  dan  n-heksan  daun  pegagan. Metode  uji  antioksidan  yang  digunakan adalah DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) dan metode uji toksisitas  dengan metode BSLT.  Metode  BSLT (Brine  Shrimp Lethality  Test) adalah  metode  uji toksisitas yang sering digunakan. Metode BSLT  dipilih  karena  cepat,  sederhana, ekonomis dan hasilnya dapat diulang (R. Hamidi et al., 2014).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Spektrofotometri UV-VIS (Shimadzu UV-2600®), Rotary evaporator (Buchi®),  corong  pisah,  tabung  reaksi, alat-alat  gelas,  water  bath  (Memmert®), timbangan digital (Kenko®). Bahan yang digunakan adalah simplisia daun pegagan,
akuades,etanol 96%,  etil asetat, n-heksan,
Tween 80, DPPH (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl), Vitamin C, etanol p.a.

## Prosedur Penelitian
1. Pengumpulan dan Preparasi Sampel
Sampel daun pegagan diperoleh dari daerah Tabanan, Bali yang telah dilakukan determinasi  sebelumnya  oleh  Balai Konservasi  Tumbuhan  Kebun  Raya  “Eka Karya”  Bali  (LIPI).  Daun  pegagan disortasi basah, kemudian dicuci menggunakan  air  mengalir.  Selanjutnya daun  ditiriskan,  lalu  dikeringkan  dengan cara  diangin-anginkan  selama  7  hari. Daun  yang  telah  kering  dibuat  serbuk dengan blender

## 2. Ekstraksi Sampel dan Fraksinasi
Ekstraksi  serbuk  simplisia  daun pegagan  dilakukan  dengan  metode maserasi.  Sebanyak  200  g  serbuk simplisia direndam dalam 2 L etanol 96%. Proses  maserasi  berlangsung  selama  3 hari  dan  dilakukan  remaserasi  selama  2 hari. Filtrat kemudian diuapkan pelarutnya menggunakan rotavapor pada suhu  60 o C  sehingga  diperoleh  ekstrak kental.  Setelah  itu  dilakukan  partisi  cai- cair terhadap ekstrak kental daun pegagan dengan  pelarut  n-heksan  dan  etil  asetat.
Ekstrak kental terlebih dahulu
ditambahkan dengan akuades lalu dipisahkan  dengan  pelarut  n-heksan menggunakan  corong  pisah.  Setelah  itu dilakukan penambahan pelarut etil asetat kedalam  fase  air,  dan  corong  pisah digojog.  Proses  ini  dilakukan  hingga  n-
heksan maupun etil asetat menjadi jernih agar  dapat  menyari  komponen  senyawa aktif  yang  dikehendaki  secara  maksimal. Kedua  fraksi  yang  diperoleh  diuapkan pelarutnya  untuk  memperoleh  fraksi kental  kemudian  ditimbang  beratnya (Nuari et al., 2017).
3. Identifikasi Flavonoid
Ekstrak etanol 96%, fraksi  n-heksan, dan  fraksi  etil  asetat,    diuji  kandungan flavonoidnya dengan menambahkan 0,3 g serbuk  Mg,  alkohol  klorhidrat,  dan  2  ml amil alkohol lalu dikocok kuat. Terbentuknya warna kuning, merah, atau jingga  menandakan  adanya  flavonoid dalam sampel (Syafitri et al., 2014).
4. Pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dan penentuan IC 50
Sebanyak 0,04 mg DPPH dilarutkan dengan  100  mL  etanol  absolut  untuk membuat  larutan  DPPH  0,1  mM. Kemudian dibuat larutan uji dengan cara menimbang fraksi n heksan dan etil asetat masing-masing  sebanyak  0,1  g  dan dilarutkan dengan etanol absolut sebanyak  5  mL.  Larutan  dihomogenkan dan  disentrifugasi  3000  rpm  selama  15 menit.  Kemudian  dibuat  larutan  uji dengan  variasi  konsentrasi  sebesar 2,4,6,8,10  mg/L.  Selanjutnya  dilakukan pengukuran  absorbansi  larutan  DPPH yang  telah  diinkubasi  pada  suhu  37⁰C diruang  gelap,  pada  panjang  gelombang 517  nm  menggunakan  spektrofotometer UV-Visible . Dilakukan pengukuran absorbansi larutan sampel  ekstrak etanol
96%, fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat dari  berbagai  konsentrasi  yang  telah ditambahkan dengan larutan DPPH pada panjang  gelombang  517  nm.  Baku pembanding  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  vitamin  c  yang diperlakukan sama dengan larutan sampel (Setiawan et al., 2018).
5. Uji Toksisitas dan Penentuan LC
50
Sebanyak  10  ekor  larva  udang A.salina dimasukkan ke dalam larutan uji yang  memiliki  variasi  konsentrasi  1000, 500,  100,  50,  dan  10  mg/L  dan  pada kontrol.  Pengujian  dilakukan  sebanyak  3 kali  pengulangan.  Pengamatan  terhadap udang A.salina dilakukan setelah 24 jam.
Nilai  LC 50 ditentukan  dengan  metode analisis  probit  menggunakan  Microsoft Excel (Muaja et al., 2013).
6. Analisis Data
Perhitungan nilai IC 50 menggunakan analisis  regresi  linear  :  y=  a+bx  dan
perhitungan  nilai  LC 50 menggunakan analisis probit dengan Microsoft Excel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  kental  daun  pegagan  yang diperoleh  adalah  sebesar  30,7  gram dengan rendemen sebesar 15,35%. Ekstrak  berwarna  coklat.  Pengujian fitokimia  yang  dilakukan  adalah  uji kandungan flavonoid pada ekstrak etanol, fraksi n-heksan, dan fraksi etil asetat daun pegagan  sebagai  uji  pendahuluan  untuk mengidentifikasi adanya kandungan flavonoid.  Identifikasi  flavonoid  pada fraksi n-heksan dan etil asetat menunjukkan adanya kandungan senyawa  flavonoid  (tabel  1).  Flavonoid ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna merah-orange (Mojab et al., 2010). Warna merah-orange  ini  terbentuk  karena flavonoid  bereaksi  dengan  magnesium dan  asam  klorida  pekat  (Sangi  et  al., 2019).
Tabel 1.   Hasil identifikasi flavonoid ekstrak etanol 96%, fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat  daun pegagan
No. Sampel Hasil Identifikasi Flavonoid Keterangan 1 Ekstrak Etanol 96 % Terbentuk warna orange kemerahan Positif Flavonoid 2 Fraksi n-heksan Terbentuk warna orange kemerahan Positif Flavonoid 3 Fraksi etil asetat Terbentuk warna orange kemerahan Positif Flavonoid Hasil pengujian antioksidan
terhadap kedua fraksi menunjukkan nilai IC 50 fraksi n-heksan sebesar 731 mg/L dan fraksi etil asetat sebesar 325 mg/L (Tabel II). Nilai IC 50 merupakan konsentrasi yang dibutuhkan  untuk  menghambat  radikal bebas  sebesar  50%.  Semakin  kecil  nilai
IC 50 maka  semakin  tinggi  aktivitas antioksidannya (N. Rahman et al., 2014). Senyawa antioksidan akan mendonasikan atom  hidrogen  terhadap  radikal  DPPH sehingga  terjadi  perubahan  warna  DPPH dari  ungu  menjadi  kuning  (Salazar- Aranda et al., 2011). Kandungan flavonoid
pada fraksi n-heksan dan etil asetat inilah yang  berpengaruh  terhadap  aktivitas antioksidan. Flavonoid merupakan komponen  kimia  yang  dikenal  sebagai antioksidan  pada  berbagai  tanaman termasuk pada pegagan (Ghasemzadeh & Jaafar, 2011). Efek perlindungan flavonoid dalam  sistem  biologis  dianggap  berasal dari kemampuannya untuk mendonorkan elektron radikal bebas dan sebagai katalis pengkelat logam (M. Rahman et al., 2013). Beberapa  flavonoid  diketahui  memiliki sifat  lebih  polar,  sehingga  digunakan pelarut  etil  asetat  yang  bersifat  polar untuk menarik metabolit  seperti alkaloid, sterol,  terpenoid,  dan  flavonoid  (Sri Widyawati  et  al.,  2014).  Sedangkan  n- heksan  merupakan  pelarut  yang  bersifat non  polar  yang  dapat  menarik  metabolit yang bersifat non polar (Romadanu et al., 2014).  Terdapat  flavonoid  yang  bersifat non polar yaitu isoflavon, flavanon, flavon, dan  flavanol  (Hendryani  et  al.,  2015). Sehingga diduga, senyawa flavonoid yang teridentifikasi pada pelarut n-heksan dan etil asetat  merupakan senyawa flavonoid
dengan  fungsi  yang  berbeda  (Iffah  et  al., 2018).
Klasifikasi aktivitas antioksidan senyawa,  berdasarkan  nilai  IC 50 yaitu sangat  kuat  (<  50  mg/L),  kuat  (50-100 mg/L),  sedang  (101-250  mg/L),  lemah (250-500  mg/L),  dan  tidak  aktif  (>500 mg/L)  (Jun  et  al.,  2003).  Berdasarkan klasifikasi tersebut, maka fraksi etil asetat dikategorikan memiliki aktivitas antioksidan  yang  lemah,  sedangkan aktivitas  antioksidan  fraksi  n-heksan dikategorikan  tidak  aktif.  Aktivitas antioksidan fraksi etil asetat daun pegagan ini  disebabkan  oleh  adanya  kandungan kimia  seperti  flavonoid  dan  senyawa fenolik lainnya.Flavonoid bersifat sebagai antioksidan    yang  dapat  menangkap radikal  bebas.  Hal  ini  disebabkan  oleh adanya    gugus  hidroksil  fenolik  pada struktur  molekul  flvanonoid  yang  juga bersifat sebagai pengkhelat logam (Romadanu  et  al.,  2014).  Flavonoid mampu mendonorkan satu atom hidrogen dari  gugus  hidroksil  (OH)  fenolik  pada saat  bereaksi  dengan  radikal  bebas (Kamilatussaniah et al., 2015).
Tabel 2. Nilai IC 50 fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan daun pegagan No. Sampel Absorbansi IC (%) Nilai IC 50 (mg/L) 1 Fraksi etil asetat 0.671 0.00%
325 0.580 13.56% 0.486 27.57% 0.392 41.58% 0.292 56.48% 2 Fraksi n-heksan 0.765 0.00%
731 0.659 13.86% 0.553 27.71% 0.428 44.05% 0.349 54.38% 0.227 70.33%
Hasil  uji  toksisitas  dengan  BSLT fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat daun pegagan terhadap udang A.salina terlihat pada Tabel III. Data
tersebut menunjukkan  bahwa  jumlah  kematian udang A.salina berbanding lurus dengan tingginya  konsentrasi  larutan.  Nilai  LC 50 pada fraksi etil asetat lebih kecil yaitu 1202 mg/L dibandingkan fraksi n-heksan yaitu 2818  mg/L.  Nilai  LC 50 merupakan konsentrasi senyawa yang dapat membunuh    50%  larva  udang A.  salina .
Semakin rendah nilai LC 50 maka semakin tinggi  efek  sitotoksisitasnya  semakin
(Pusat  et  al.,  2018).  Kedua  fraksi  yang diujikan  menunjukkan  bahwa  nilai  LC 50 fraksi etil asetat lebih rendah dibandingkan fraksi n-heksan (Gambar 1). Namun demikian kedua fraksi dinyatakan tidak  aktif  atau  tidak  toksik  karena memiliki  nilai  LC 50 >  1000  mg/L.  R. Hamidi et al., (2014) menyatakan tingkat toksisitas  suatu  ekstrak  dikategorikan sebagai  berikut:  LC 50 >1000  mg/L,  tidak toksik (Non toxic), LC 50 500-1000 mg/L, toksik  rendah  (Low  toxic),  LC 50 100-500 mg/L, toksik sedang (Medium toxic), LC 50 0-100 mg/L, toksik tinggi (High toxic).
Tabel 3. Hasil uji toksisitas fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan daun pegagan
No. Sampel Konsentrasi (mg/L) % Mortalitas LC 50
1 Fraksi Etil asetat
10 6
1202 mg/L 50 23 100 36 500 40 1000 40 2 Fraksi N-heksan
10 3
2818 mg/L 50 6 100 10
500 30 1000 36 Tingkat toksisitas suatu ekstrak dipengaruhi  oleh  kandungan  zat  aktifnya yang  berpengaruh  terhadap  aktivitas farmakologi  tanaman  (Saxena  et  al., 2013).  Kandungan  zat  aktif  seperti alkaloid,  flavonoid,  tanin,  terpenoid  dan saponin  dapat  membunuh A.salina (Panggabean  et  al.,  2020).  Berdasarkan penelitian  oleh  Sieberi  et  al.,  (2020) menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun pegagan  memiliki  kandungan  kimia antara  lain  alkaloid,flavonoid,  tanin, saponin,  fenol  dan  terpenoid.  Senyawa
flavonoid  dan  tanin  dapat  membunuh larva A.salina dengan mekanisme apoptosis. Senyawa alkaloid dapat membunuh A.salina dengan
menyebabkan  gangguan  pencernaan. Alkaloid  berperan  sebagai  racun  melalui mulut  larva  yang  mengakibatkan  larva gagal mendapatkan stimulus rasa sehingga tidak mampu mengenali makanannya sehingga larva mati kelaparan (Panggabean et al., 2020).
Metode  dan  jenis  pelarut  dalam
ekstraksi berpengaruh terhadap
kandungan zat aktif yang ditarik sehingga akan berbeda pula bioaktivitasnya (Azmir et al., 2013). Uji toksisitas dengan metode BSLT  merupakan  uji  pendahuluan  yang dapat  dilakukan  untuk  mengidentifikasi adanya  bioaktivitas  dari  sampel.    seperti efek  sitotoksik,  fototoksik,  pestisida, inhibisi enzim, dan regulasi ion (Thangapandi & Pushpanathan, 2014).

## KESIMPULAN
Fraksi  n-heksan  dan  etil  asetat daun pegagan terbukti memiliki kandungan flavonoid. Aktivitas
antioksidan  fraksi  etil  asetat  tergolong lemah  dengan  nilai  IC 50 325  mg/L sedangkan  fraksi  n-heksan  dikategorikan tidak aktif dengan nilai IC 50 sebesar 2818 mg/L.  Pada  uji  toksisitas  menunjukkan nilai  LC 50 fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  n- heksan  berturut-turut  adalah  1202  mg/L dan  2818  mg/L  dan  dikategorikan  tidak toksik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Masyarakat  (DRPM)  Kemenristek  Dikti atas  dukungan  dana  penelitian  dosen pemula yang diberikan .

## DAFTAR PUSTAKA
Azmir, J., Zaidul, I. S. M., Rahman, M. M., Sharif, K. M., Mohamed, A., Sahena, F.,  Jahurul,  M.  H.  A.,  Ghafoor,  K., Norulaini, N. A. N., & Omar, A. K. M. (2013). Techniques for extraction of bioactive  compounds  from  plant materials: A review. Journal of Food
Engineering , 117 (4), 426–436.
https://doi.org/10.1016/J.JFOODE
NG.2013.01.014
Ghasemzadeh,  A.,  &  Jaafar,  H.  Z.  (2011). Effects  of  solvent  type  on  phenolics and flavonoids content and antioxidant activities in two varieties of  young  ginger  (Zingiber  officinale Roscoe) extracts. Journal of Medicinal  Plant  Research , 5 ,  1147– 1154.
Hendryani,  R.,  Lutfi,  M.,  &  Hawa,  L.  C. (2015).  Antioxidant  Extraction  from Dried Red Betel Leaf (Piper crotatum) using  Ultrasonic  Assisted  Extraction as Pre-Treatment (Study Comparative of Solvent and Extraction Time). Journal of Bioprocess  Commodities  Tropical ,
3 (2), 33–38.
Iffah, A. A. D., Rani, C., & Samawi, M. F. (2018).  Skrining  Metabolit  Sekunder pada  Sirip  Ekor  Hiu  Carcharhinus melanopterus. Prosiding  Simposium Nasional Kelautan Dan Perikanan , 5 SE -.
https://journal.unhas.ac.id/index.ph p/proceedingsimnaskp/article/view/ 4634
Jun,  M.,  Fu,  H.  Y.,  Hong,  J.,  Wan,  X., Yang,  C.  S.,  &  Ho,  C.  T.  (2003). Comparison of Antioxidant Activities of  Isoflavones  from  Kudzu  Root (Pueraria  lobata  Ohwi). Journal  of Food  Science , 68 (6),  2117–2122. https://doi.org/10.1111/J.1365- 2621.2003.TB07029.X
Kamilatussaniah,  K.,  Yuniastuti,  A.,  & Iswari,
R. (2015). Pengaruh Suplementasi Madu Kelengkeng Terhadap  Kadar  Tsa  Dan  Mda  Tikus Putih  Yang  Diinduksi  Timbal  (Pb). Indonesian  Journal  of  Mathematics and  Natural  Sciences , 38 (2),  108– 114.
https://doi.org/10.15294/IJMNS.V3 8I2.5779
Mojab, F., Kamalinejad, M., Ghaderi, N., & Vahidipour, H. R. (2010).
Phytochemical  Screening  of  Some Species  of  Iranian  Plants. Iranian
Journal of Pharmaceutical Research ,
Volume 2 (Number 2), 77–82. https://doi.org/10.22037/ijpr.2010.1 6 Muaja,  A.  D.,  Koleangan,  H.  S.  J.,  & Runtuwene,  M.  R.  J.  (2013).  Uji Toksisitas  dengan  Metode  BSLT  dan Analisis Kandungan Fitokimia
Ekstrak  Daun  Soyogik  (Saurauia bracteosa  DC)  dengan  Metode Soxhletasi. Jurnal  MIPA , 2 (2),  115– 118. https://doi.org/10.35799/JM.2.2.20 13.3000
Nuari,  S.,  Anam,  S.,  &  Khumaidi,  A. (2017).  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Etanol Buah  Naga  Merah  (Hylocereus polyrhizus  (F.A.C.Weber)  Briton  & Rose). Jurnal  Farmasi  Galenika (Galenika  Journal  of  Pharmacy)  (e- Journal) ,
3 (2), 118–125. https://doi.org/10.22487/j24428744 .0.v0.i0.8771 Panggabean,  L.,  Nurhamidah,  N.,  & Handayani, D. (2020). Profil Fitokimia Dan Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol Tumbuhan Zanthoxylum acanthopodium Dc (Andaliman) Menggunakan Metode BSLT. ALOTROP , 4 (1). https://doi.org/10.33369/ATP.V4I1.
13711
Phaniendra,  A.,  Jestadi,  D.  B.,  & Periyasamy,  L.  (2015).  Free  radicals: properties, sources, targets, and their implication  in  various    diseases. Indian Journal of Clinical Biochemistry :  IJCB , 30 (1),  11–26. https://doi.org/10.1007/s12291-014- 0446-0
Pusat,  Z.,  Dan,  P.,  Hutan,  P.,  &  Gunung Batu,  J.  (2018).  Analisis  Toksisitas Beberapa  Tumbuhan  Hutan  Dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Jurnal  Penelitian  Hasil Hutan , 36 (3), 239–246.
https://doi.org/10.20886/JPHH.201 8.36.3.239-246
R. Hamidi, M., Jovanova, B., & Kadifkova Panovska,  T.  (2014).  Toxicological
evaluation of the plant products using Brine  Shrimp  (Artemia  salina  L.) model. Macedonian  Pharmaceutical Bulletin , 60 (01), 9–18. https://doi.org/10.33320/maced.pha rm.bull.2014.60.01.002
Rahman,  M.,  Hossain,  S.,  Rahaman,  K., Fatima,  N.,  Nahar,  T.,  Uddin,  B.,  & Basunia,  M.  A.  (2013).  Antioxidant activity  of  Centella  asiatica  (Linn.) urban:  impact  of  extraction  solvent polarity. J.  Pharm.  Phytochem. , 1 , 27–32.
Rahman, N., Bahriul, P., & Diah, A. (2014). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun Salam (Syzygium Polyanthum) Dengan  Menggunanakan  1,1-Difenil- 2-Pikrilhidrazil. Jurnal  Akademika Kimia , 3 (3), 143–149.
Romadanu, R., Hanggita, S., & Lestari, S. D.  (2014).  Pengujian  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Bunga  Lotus (Nelumbo nucifera). Jurnal FishtecH ,
3 (1), 1–7.
https://doi.org/10.36706/FISHTEC H.V3I1.3523
Salamah,  N.,  &  Farahana,  L.  (2014).  Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Herba Pegagan (Centella asiatica (L.) Urb) Dengan Metode Fosfomolibdat. Pharmaciana;  Vol  4,  No  1  (2014): Pharmaciana . http://journal.uad.ac.id/index.php/P HARMACIANA/article/view/394
Salazar-Aranda,  R.,  Pérez-López,  L.  A.,
López-Arroyo, J., Alanís-Garza, B. A., &  Waksman  de  Torres,  N.  (2011). Antimicrobial and Antioxidant Activities of Plants from Northeast of Mexico. Evidence-Based Complementary  and  Alternative Medicine , 2011 , 536139. https://doi.org/10.1093/ecam/nep12
7
Sangi, M., Runtuwene, M. R. J., Simbala, H. E. I., & Makang, V. M. A. (2019). Analisis  Fitokimia  Tumbuhan  Obat Di  Kabupaten  Minahasa  Utara. CHEMISTRY  PROGRESS , 1 (1),  47– 53. https://doi.org/10.35799/CP.1.1.200
8.26
Saxena,  M.,  Jyoti,  S.,  Nema,  R., Dharmendra,  S.,  &  Abhishek,  G. (2013).  Phytochemistry  of  Medicinal Plants. J Pharm Phytochem , 1 , 168– 182.
Setiawan, F., Yunita, O., & Kurniawan, A. (2018).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Etanol Kayu Secang (Caesalpinia  sappan)  Menggunakan Metode DPPH, ABTS, dan FRAP. MPI (Media Pharmaceutica Indonesiana) , 2 (2 SE-Original Research Articles), 82–89. https://journal.ubaya.ac.id/index.ph p/MPI/article/view/1662 Sieberi, B. M., Omwenga, G. I., Wambua,
R.  K.,  Samoei,  J.  C.,  &  Ngugi,  M.  P. (2020). Screening of the Dichloromethane: Methanolic Extract  of Centella  asiatica for Antibacterial Activities against Salmonella  typhi , Escherichia  coli , Shigella sonnei , Bacillus subtilis , and Staphylococcus aureus . The Scientific World  Journal , 2020 ,  6378712. https://doi.org/10.1155/2020/63787 12
Sri  Widyawati,  P.,  Budianta,  T.  D.  W., Kusuma, F. A., & Wijaya, E. L. (2014).
Difference  of  solvent  polarity  to phytochemical content and antioxidant activity of Pluchea indicia less leaves extracts. International
Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemical Research , 6 (4), 850– 855.
Sutardi, S. (2017). Kandungan Bahan Aktif Tanaman  Pegagan  dan  Khasiatnya untuk  Meningkatkan  Sistem  Imun Tubuh. Jurnal  Penelitian  Dan Pengembangan  Pertanian , 35 (3), 121.
https://doi.org/10.21082/jp3.v35n3. 2016.p121-130
Syafitri,  N.  E.,  Bintang,  M.,  &  Falah,  S.
(2014).  Kandungan  Fitokimia,  Total Fenol,  dan  Total  Flavonoid  Ekstrak Buah  Harendong  (Melastoma  affine D. Don). Current Biochemistry , 1 (3), 105–115.
Thangapandi,  V.,  &  Pushpanathan,  T.
(2014).  Comparison  of  the  Artemia salina  and  Artemia  fransiscana bioassays  for  toxicity  of  Indian medicinal  plants. Journal  of  Coastal
Life Medicine , April . https://doi.org/10.12980/jclm.2.201
414j29
Yahya, M. A., & Nurrosyidah, I. H. (2020). Antioxidant activity ethanol extract of gotu  kola  (Centella  asiatica  (L.) Urban)  with  DPPH  method  (2,2- Diphenyl-1-Pikrilhidrazil). Journal of Halal Product and Research (JPHR) ,
3 (2), 106–112.
https://doi.org/10.20473/JHPR.VO L.3-ISSUE.2.106-112