## EFEK SUPLEMENTASI EKSTRAK PROTEIN KECAMBAH KEDELAI TERHADAP KADAR IL-1BETA PENDERITA DIABETES TIPE-2
[The Effect of Soy Germ Protein Extract Supplementation on the Level of IL-1 Beta of Type-2 Diabetic Woman]
Hery Winarsi 1) * dan Agus Purwanto 2)
1) Fakultas Biologi, Universitas Soedirman Purwokerto
2) RSUD Margono Soekarjo Purwokerto
Diterima  5 April  2009 / Disetujui  30  Desember 2009

## ABSTRACT
The  research  was  conducted  to  determine  the  effect  of  soy  germ  protein  extract  supplementation  on  the  IL-1beta  level  of  type-2  diabetic women.  Research  subjects  were  32  type-2  diabetic  women,  outpatients  of  Diabetic  Clinics  of  Margono  Soekarjo  General  Hospital-Purwokerto. These women had blood glucose level above  normal, BMI > 23 kg/m 2 , over 40 years old, lived in Purwokerto, and signed the informed consent. Group A (n=8) was given milk containing soy germ protein extract plus Zinc, Group B (n=8) was given milk containing soy germ  protein extract without Zinc, Group C (n=8) was given placebo, and Group D (n=8) was given glibenclamide for 8 weeks. Blood samples ware taken 3 times: 0, 4 and 8 weeks after intervention. The plasma IL-1beta level was analyzed using Elisa. After 8 weeks, the IL-1beta level decreased from 6.01 pg/mL to 2.63 pg/mL (p=0.022) in group A.  However, the IL-1beta level in Group A was not different from the Group B (p=0.51). Soy germ protein extract decreased cytokine inflammatory production of type-2 dibetic. Soy germ protein extract with or without Zn had similar effects to glibenclamide in reducing the IL-1beta level (p=0.76).
Key words: IL-1beta, soy germ protein, Zn, type-2 diabetic.

## PENDAHULUAN
Tingginya kejadian Diabetes Mellitus (DM) berdampak pada tingginya  kejadian  Diabetes  mellitus  Tipe-2  (DMT-2).  Selain karena  resistensi  insulin,  pada  kasus  DMT-2  juga  ditemukan defect sel-β. Salah satu penyebab defect ini adalah kegagalan sel-β  pankreas  (Pick et  al .,  1998;  Donath et  al .,  1999),  yang berpengaruh pada produksi IL-1 (Heitmeier et al ., 2001), dan IL- 1beta (Dinarello, 1996), serta C-reactive protein (Larsen et al ., 2007).  IL-1beta  yang  ditemukan  dalam  pankreas  penderita DMT-2 (Maedler et al ., 2002), merupakan sitokin inflamasi yang berimplikasi pada kehancuran sel-β, menekan fungsi sel-β dan mempromosikan apoptosisnya.
Tingginya kadar glukosa darah (hiperglikemia) juga memacu sel-β  memproduksi  IL-1beta  dan  melepaskannya,  diikuti  oleh menurunnya  fungsi  sel  (Maedler et  al .,  2004;  Welsh et  al ., 2005).  Hiperglikemia  merupakan  salah  satu  faktor  yang menyebabkan  komplikasinya  penderita  diabetes  (Shanmugam et al ., 2003). 1 Hal ini membuktikan bahwa sitokin inflamasi islet berperan  dalam  patogenesis  DMT-2.  Sebagai  akibatnya pankreas  tidak  mampu  memproduksi  cukup  insulin  untuk mengkompensasikan  kadar  gula  yang  tinggi.  Massa  sel-  β berkurang  (Sakuraba et  al .,  2002),  tetapi  apoptosisnya meningkat  (Kahn,  2003).  Protein  kedelai  memiliki  fungsi mengontrol  kadar  gula  darah  (Hermansen et  al .,  2001;  del Carmen  Crespillo et  al .,  2003),  dengan  cara  memacu  sel pankreas  hipertropi,  kemudian  merangsang  sekresinya  insulin. Diduga protein dari kedelai yang telah dikecambahkan memiliki
*Korespondensi penulis : 08161488133 E-mail : winarsi@yahoo.com
potensi  yang  lebih  besar  dibanding  kedelai  yang  belum dikecambahkan, karena sebagian besar komponen didalamnya terhidrolisis  selama  proses  perkecambahan.  Daidzein  dan glisitein  yang  merupakan  komponen  isoflavon  utama  dalam kecambah kedelai juga meningkat (Song et al ., 2003; Winarsi et al .,  2009),  dan  telah  terbukti  sebagai  antioksidan  dan imunostimulan  (Winarsi et  al .,  2005a;  Winarsi et  al .,  2005b). Winarsi et  al .  (2005a)  juga  berpendapat  bahwa  wanita  usia diatas  40  tahun,  umumnya  status  Zn  menurun,  karenanya  Zn diperlukan  pada  penderita  DMT-2.  Chausmer  (1998) menambahkan  bahwa  pemberian  Zn  dapat    memperbaiki sensitivitas  insulin  dan  menekan  beberapa  penyakit komplikasinya.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  pemberian susu  yang  mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai terhadap kadar IL-1beta wanita penderita diabetes mellitus tipe- 2.

## METODOLOGI
Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental  dengan rancangan percobaan acak lengkap. Sebagai responden adalah 32  wanita  yang  tercatat  sebagai  pasien  rawat  jalan  Poli Diabetes  RSUD  Margono  Soekarjo  Purwokerto,  kadar  gula darahnya lebih dari normal (puasa > 100 mg/dl; 2 jam p.p>126 mg/dl; sewaktu > 200 mg/dl), Body Mass Index > 23 kg/m 2 , usia >  40  tahun,  tinggal  di  Purwokerto,  dan  bersedia menandatangani informed consent. Responden dibagi kedalam 4  kelompok  secara  acak,  A,  B,  C,  dan  D  masing-masing  8 orang.
Produk suplemen tersusun atas  susu skim, ekstrak protein kecambah  kedelai  plus  Zn,  pemanis,  dan  flavor  (Winarsi  & Purwanto, 2009), dikemas dalam sachet @ 25 gram. Kelompok A  diberi  susu  yang  mengandung  ekstrak  protein  kecambah kedelai  plus  Zn,  kelompok  B  diberi  susu  yang  mengandung ekstrak protein kecambah kedelai (tanpa Zn), kelompok C diberi susu  tanpa  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  ataupun  Zn (sebagai plasebo atau kontrol negatif), dan kelompok D hanya diberi  obat  glibenklamid  sebagai  kontrol  positif.  Intervensi dilakukan  selama  8  minggu,  dengan  dosis  sekali  minum. Pengambilan  sampel  darah  dilakukan  3  kali,  yaitu  baseline, dilanjutkan 4 dan 8 minggu setelah intervensi. Darah sebanyak 1  mL  diambil  secara  intravena  menggunakan  venojek  ber- EDTA, kemudian dilakukan pemisahan bagian plasmanya.

## Separasi plasma
Darah  dalam  tabung  venojeck  yang  mengandung  EDTA disentrifuge  dengan  kecepatan  3.000  rpm  selama  10  menit, sehingga  terjadi  2  lapisan.  Lapisan  atas  adalah  plasma, sedangkan  lapisan  bawah  adalah  eritrosit,  kemudian dipisahkan.  Dari  bagian  plasma  ditentukan  kadar  IL-1beta menggunakan kit RayBio R Human IL-1beta ELISA.

## Penentuan kadar IL-1beta
Secara singkat ditambahkan 100 uL  standar  dan plasma kedalam well , kemudian  ditutup, dan diinkubasi semalam pada suhu  4 C.  Setelah  larutan  dibuang,  kemudian plate dicuci. Ditambahkan  100  uL  antibodi  ke  setiap well ,  lalu  diinkubasi selama  1  jam  suhu  kamar.  Setelah plate dicuci,  ditambahkan 100 uL larutan Streptavidin, dan diinkubasikan selama 45 menit pada suhu kamar. Ditambahkan 100 uL Reagen TMB, sesudah plate dicuci, kemudian  diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar  dan  gelap.  Diakhiri  dengan  penambahan  50  uL  stop solution,  kemudian  dibaca  pada  450  nm,  menggunakan  Elisa reader (Biorad 11565).
Analisa  data  menggunakan  Anova.  Bila  terdapat signifikansi ( P ≤ 0,05) dilanjutkan uji Duncan. Untuk mengetahui potensi  suplemen  terhadap  obat  yang  biasa  digunakan  para penderita  DMT-2,  maka  kelompok  perlakuan  yang  signifikan dibandingkan  dengan  kelompok  yang  mengkonsumsi glibenklamid.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Gambaran  umum  wanita  penderita  diabetes  mellitus Tipe-2
Wanita    penderita  Diabetes  Mellitus  Tipe-2  yang  terlibat sebagai responden dalam penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 1.  Hasil  analisis  varian  diantara  kelompok  perlakuan  tidak berbeda nyata untuk  umur ( P =0,81), BMI ( P =0,76), dan kadar gula  darah  ( P =0,99).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kondisi responden  kelompok  A,  B,  C,  dan  D  adalah  homogen.  Oleh sebab  itu  bila  terjadi  perubahan  selama  intervensi  itu  karena pengaruh produk suplemen yang diberikan.
Table 1.  Baseline  Gambaran  umum  wanita  penderita  Diabetes melitus Tipe-2 A (n=8) B (n=8) C (n=8)  D (n=8) Umur (tahun) 57,88 59 61,19 60,25 BMI (kg/m 2 ) 25,57 25,62 25,88 27,12 Gula darah (mg/dL) 313 324,5 329,25 318,88
A:  responden  yang  mengkonsumsi  susu  yang  mengandung  ekstrak protein kecambah kedelai plus Zn; B: responden yang mengkonsumsi susu yang mengandung ekstrak protein kecambah kedelai (tanpa Zn); C:  responden  yang  mengkonsumsi  susu  tanpa  ekstrak  protein kecambah  kedelai  maupun  Zn;  D:  responden  yang  hanya mengkonsumsi glibenklamid.

## Produk  susu  yang  mengandung  ekstrak  protein kecambah kedelai yang diberikan kepada responden
Tepung protein kecambah kedelai diekstrak dari kecambah kedelai  Slamet.  Kandungan  protein  ekstrak  kecambah  kedelai sebesar  42,0%,  lebih  tinggi  dibanding  protein  ekstrak kedelainya  (36,5%),  demikian  pula  terhadap  tepung  protein kedelai  komersial (39,4%). Kandungan isoflavonnya juga lebih tinggi  pada  protein  kecambah  kedelai  (39,1  ppm),  dibanding dengan protein kedelainya (26,7 ppm), maupun protein kedelai yang  telah  dikomersialkan  (34,3  ppm)  (Winarsi et  al .,  2009). Nampaknya  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  Slamet  dapat diandalkan  sebagai  sumber  protein  yang  potensial,  dan memungkinkan sebagai komponen pangan fungsional.
Responden  diberikan  produk  berupa  susu  yang mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  plus  Zn. Adapun  kandungan  gizi  produk  yang  diberikan  kepada responden  dipaparkan  dalam  Tabel  2.  Ketiga  produk  tersebut mengandung  zat-zat  gizi  yang  hampir  sama,  seperti    air,  abu, lemak, protein, dan karbohidrat. Komponen utama pada produk A adalah ekstrak protein kecambah kedelai plus Zn, sedangkan produk B mengandung ekstrak protein kecambah kedelai tanpa Zn, dan produk C tidak mengandung ekstrak protein kecambah kedelai ataupun Zn.
Table 2.  Kandungan gizi  produk yang diberikan kepada responden.
A B C Air (%) 4,8 4,6 4,5 Abu (%) 22,7 22,6 22,4 Lemak (%) 1,11 1,02 1,04 Protein (%) 42,0 39,5 36,7 Karbohidrat (%) 29,39 32,28 35,36 Total (%) 100 100 100
A: susu yang mengandung ekstrak protein kecambah kedelai plus Zn; B:  susu  yang  mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  (tanpa Zn); C: susu tanpa ekstrak protein kecambah kedelai maupun Zn.
Produk  tersebut  memiliki  kelebihan  dibanding  susu  kedelai pada  umumnya.    Untuk  mendapatkan  informasi  kelebihannya, produk  diberikan  kepada  wanita  penderita  Diabetes  Mellitus Tipe-2  selama  8  minggu,  untuk  diketahui  efeknya  terhadap kadar IL-1beta plasmanya.
Kadar IL-1 beta wanita penderita diabetes mellitus Tipe-2.
Hiperglikemia  yang  terjadi  pada  DMT-2  merupakan  salah satu  faktor  kunci  penyebab  komplikasi  diabet.  Kondisi  ini berkaitan  dengan  teraktivasinya  sistem  imun  pada  penderita DMT-2,  obesitas,  dan  resistensi  insulin  yang  dicirikan  oleh tingginya kadar sitokin, kemokin, dan protein fase akut ( Well en & Hotamisligil, 2005; Kolb & Mandrup-Poulsen, 2005).
IL-1beta  merupakan  sitokin  yang  diproduksi  oleh  berbagai sel  monosit  dan  limfosit  T,  yang  kemudian  melepaskan  signal inflamasi.  Sitokin  inflamasi  ini  memiliki  aktivitas  prokoagulan, yang  menstimulir  sel  monosit  melakukan  adhesi  ke  endotel. Setelah  melewati  permukaan  endotel,  sel  inflamasi  tersebut kemudian  bermigrasi  ke  sub  endotel,  sehingga  menyebabkan kerusakan  endotel.  Kerusakan  lapisan  endotel  menyebabkan sel  endotel  menghasilkan  molekul  sel  adhesi,  seperti  halnya sitokin  IL-1beta,  TNF-α,  kemokin  ( monocyte  chemoattractant factor  1,  MCP-1), dan platelet-derived  growth  factor (PDGF) (Eizirik & Mandrup-Poulsen, 2001).
Saat baseline kadar IL-1beta tinggi, yaitu 8,83 pg/mL, 11,53 pg/mL,  13,30  pg/mL,  dan  9,19  pg/mL  berturut-turut  untuk kelompok yang mengkonsumsi susu yang mengandung ekstrak protein  kecambah  kedelai  plus  Zn,  susu  yang  mengandung ekstrak protein kecambah kedelai tanpa Zn, plasebo, dan yang hanya mengkonsumsi glibenklamid (Gambar 1).
Gambar 1.  Kadar IL-1 beta wanita penderita DMT-2 selama intervensi
Temuan  ini  mendukung  studi  Ghanim et  al .  (2004)  dan Devaraj et al . (2006) yang menyatakan bahwa pada penderita obesitas  dan  resistensi  insulin,  kadar  sitokin  proinflamasi  sel mononuklear  meningkat.  Hal  ini  terjadi  karena  pada  DMT-2 terjadi  peningkatan  pengiriman  glukosa ke jaringan adiposa. Sel endotel pada jaringan adiposa memicu peningkatan uptake glukosa  melalui  glukosa  transporter,  sehingga  terjadi hiperglikemia  pada  sel  endotel  dan  meningkatkan  aktivitas NADPH  oxidase,  serta  produksi Reactive  Oxygen  Species (ROS)  mitokondrial.  Peningkatan  ROS  menyebabkan  stres oksidatif  dan  mengaktivasi  signal  inflamasi,  sehingga  endotel teraktivasi dan menarik sel proinflamasi makrofag (Dandona et al ., 2005).
Peningkatan stres oksidatif juga terjadi dalam tubuh wanita usia  diatas  40  tahun  (Winarsi et  al .,  2005a;  Winarsi et  al ., 2005b;  Winarsi et  al .,  2006).  Tentunya  kondisi  stres  oksidatif juga  dialami  para  penderita  DMT-2,  mengingat  usia  rata-rata responden 59,5 tahun. Stres oksidatif yang berkelanjutan akan
memicu terjadinya gangguan metabolisme, baik uptake glukosa pada otot maupun jaringan adiposa, yang akhirnya berdampak pada  penurunan  sekresi  insulin.  Peningkatan  stres  oksidatif juga  meningkatkan  risiko  penyakit  kardiovaskuler  (PKV) (Winarsi, 2007).  Oleh sebab itu penderita DMT-2 berisiko tinggi terkena  PKV,  sehingga  status  antioksidannya  harus ditingkatkan atau kadar sitokinnya harus diturunkan.
Saat baseline, kadar IL-1beta antar kelompok tidak berbeda (p=0,97), demikian pula setelah 4 minggu intervensi juga tidak ada  perbedaan  (p=0,34).  Namun  setelah  8  minggu  intervensi kadar IL-1beta menurun dari 6,01 pg/ml menjadi 2,63 pg/ml (p= 0,022),  terjadi  pada  kelompok  yang  mengkonsumsi  susu  yang mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  plus  Zn. Kenyataannya  kadar  IL-1beta  pada  kelompok  tersebut  tidak berbeda  dengan  kelompok  yang  mengkonsumsi  susu  yang mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  tanpa  Zn (p=0,51).  Penurunan  kadar  IL-1beta  ini  membuktikan  bahwa kerja  sistem  imun  penderita  DMT-2  dapat  diperbaiki  oleh ekstrak protein kecambah kedelai plus Zn maupun tanpa Zn.
IL-1beta  juga  disekresikan  oleh  makrofag  yang  teraktivasi (termasuk sel Kupffer dan netrofil). Melalui kaskade intraseluler, IL-1beta  menyebabkan  penurunan  bisosintesis  dan  sekresi insulin yang distimulir glukosa (Xenos et al ., 1994) dan tingginya apoptosis  islet  pankreas.  Sel  Kupffer  merupakan  mediator inflamasi  penting  dalam  sinusoid  hepatic,  yang  merupakan tempat  bersarangnya  makrofag  dalam  liver.  Ketika  teraktivasi, sel Kupffer dapat merusak sel lain dengan melepaskan radikal bebas  dan  mensekresikan  sitokin  inflamasi.  Berbagai  molekul dapat  disekresikan  sel  Kupffer  yang  teraktivasi,  seperti metabolit  toksik  (IL-1beta,  IL-6,  TNF-α,  IFN-γ),  enzim (kolagenase,  elastase),  faktor  angiogenesis,  faktor  koagulasi, komplemen,  metabolit  asam  arakidonat  (TXA2,  lekotrien, plate let-activating factor, PGs), ROS dan Nitric Oxyde Syntase (NOS:  O 2- ,  H 2 O 2 ,  dan  NO)  (Decker,  1990).  Dengan  demikian banyaknya sel kupffer yang teraktivasi menyebabkan sitokin IL- 1beta  yang  disekresi  sel  tersebut    juga  bertambah.  Kondisi seperti  ini  tidak  dapat  dibiarkan  begitu  lama,  karena  dapat berimplikasi ke berbagai penyakit.
Di  sisi  lain,  keberadaan  makrofag  dalam  sel  pankreas merupakan  penyebab  terjadinya  kerusakan  dan  kehancuran islet  pankreas.  Dalam  merespons  stimulus  proinflamasi, makrofag-makrofag  tersebut  memproduksi  IL-1    dalam  islet (Arnush et  al .,  1998).  Meskipun  keberadaan  makrofag merupakan  sumber  IL-1,  namun  baru-baru  ini  Heitmeier et  al . (1999)  melaporkan  bahwa  sel-β  islet  pankreas  dapat memproduksi IL-1 ketika merespons stimulan IFN-γ yang tidak bergantung  pada  keberadaan  makrofag.  Oleh  sebab  itu penurunan  jumlah  makrofag  (monosit)  harus  diupayakan  guna mencegah terjadinya peningkatan sitokin IL-1beta.
Pada  kenyataannya  penurunan  kadar  IL-1beta  dalam penelitian  ini,  didukung  penurunan  jumlah  monosit,  dari  704 sel/mm 3 menjadi  634  sel/mm 3 (p=0,27)  (Tabel  3).  Meskipun penurunan jumlah monosit tersebut tidak signifikan, akan tetapi jumlah  tersebut  memasuki  kisaran  normal.  Tentunya  akan berdampak  positif  bagi  penderita  DMT-2,  karena  tingginya jumlah  monosit  (lebih  dari  jumlah  normal)  mampu  melakukan infiltrasi  ke  dalam  islet  pankreas,  yang  selanjutnya mengakibatkan reaksi inflamasi.
Monosit  adalah  sel  fagosit  yang  selalu  siap  mengakses kedalam  dinding  arteri  dan  menyebabkan  atherosclerosis. Temuan  ini  juga  meyakinkan  bahwa  aktivitas  sel  monosit  juga terhambat,  sehingga  tidak  akan  menyebabkan  kerusakan endotel.
Tabel  3.  Jumlah monosit wanita penderita Diabetes melitus tipe-2 selama intervensi Minggu A B C D Nilai Normal (sel/mm 3 ) 0 612 619 585 636 260-650 4 583 606 555 609 260-650 8 634 573 704 531 260-650
A: susu yang mengandung ekstrak protein kecambah kedelai plus Zn; B:  susu  yang  mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  (tanpa Zn); C: plasebo; D: glibenklamid
Kirii et al ., (2003) menyebutkan bahwa rendahnya kadar IL- 1beta  menurunkan  bahaya  atherosclerosis.  Hasil  penelitian  ini sangat bermanfaat bagi penderita DMT-2, mengingat salah satu akibat  perkembangan  penyakitnya  adalah  berisiko  tinggi terkena  penyakit  kardiovaskuler  (PKV),  yang  diawali  oleh kerusakan  endotel,  dan  berlanjut  pada  terjadinya  disfungsi endotel  serta  atherosclerosis  (Wellen  &  Hotamisligil,  2005; Winarsi,  2007).  Diduga  protein  kecambah  kedelai  melindungi membran  sel-β  pankreas,  sehingga  monosit  mengalami kesulitan  ketika  akan  infiltrasi  kedalamnya.  Secara  statistik, penambahan  Zn  kedalam  produk  tersebut  tidak  memberikan efek nyata terhadap penurunan  kadar IL-1beta, namun karena Zn merupakan komponen struktural sel, diduga penambahannya  bersinergi  dengan  protein  kecambah  kedelai dalam mempertahankan keutuhan sel-β, sehingga tidak mudah ditembus monosit.
Venugopal et  al .,  (2002)  menyebutkan  bahwa  peningkatan stres oksidatif monosit dalam kondisi hiperglikemia diperantarai melalui aktivasi protein kinase-C.  Protein kinase adalah protein onkogenik  yang  mengalami  fosforilasi  katalitik  dari  tirosin. Peningkatan  tirosin  fosforilase  pada  platelet  berhubungan dengan  aktivasi  platelet  yang  menstimulir  trombin.  Protein tirosin  inhibitor  (diperankan  isoflavon  dalam  protein  kecambah kedelai) (Winarsi, 2007) mampu menurunkan tirosin fosforilase yang  akan  menghambat  aktivasi  platelet,  mengurangi  deposit, serta  agregasi  platelet.  Sebagai  akibatnya  akan  menurunkan kecepatan  pembentukan  atherosclerosis.  Nakashima et  al ., (1991)  menuturkan  bahwa  daidzein  (banyak  terdapat  pada protein  kecambah  kedelai)  tidak  memiliki  aktivitas  inhibisi terhadap protein tirosin kinase, tetapi mampu menekan respons platelet terhadap kolagen dan tromboksan A2, sehingga produk susu  berbasis  ekstrak  protein  kecambah    kedelai  ini  mampu mencegah  atherosclerosis  pada  penderita  DMT-2.  Yang  lebih menarik lagi, bahwa potensi ekstrak protein kecambah kedelai plus  Zn  maupun  tanpa  Zn  dalam  menurunkan  IL-1beta  tidak berbeda  dengan  glibenklamid  (p=0,76),  obat  yang  biasa digunakan  oleh  penderita  DMT-2.  Dengan  demikian  produk  ini sangat  bermanfaat  bagi  penderita  DMT-2  seperti  halnya  obat glibenklamid.

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  susu  yang mengandung  ekstrak  protein  kecambah  kedelai  dapat menurunkan  produksi  sitokin  inflamasi  (IL-1beta)  pada penderita  DMT-2.  Dengan  demikian  produk  susu  berbasis ekstrak protein kecambah  kedelai dengan ataupun tanpa Zn ini mampu  mencegah  perkembangan  penyakit  DMT-2,  yaitu dengan  menekan  terjadinya  atherosclerosis  dan  memperbaiki fungsi imunnya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis berterima kasih kepada Dirjen Dikti atas pendanaan penelitian ini melalui proyek Hibah Kompetensi Tahun 2009, No. 248/SP2H/PP/DP2M/V/2009.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnush M, Heitmeier MR, Scarim AL, Marino MH, Manning PT, Corbett JA. 1998. IL-1 produced and released endogenously within  human  islets  inhibits  ß  cell  function  J.  Clin.  Invest, 102:516-526
Chausmer AB. 1998.  Zinc, insulin and diabetes. Am Coll Nutr, 17: 109-115.
Dandona  P,  Aljada  A,  Chaudhuri  A,  Mohnty,  Garg  R.  2005. Metabolic  syndrome  :  a  comprehensive  perspective  based on  interaction  between  obesity,  diabetes  and  inflammation. Circulation, 111: 1448 – 1454.
Decker K. 1990. Biologically active products of stimulated liver macrophages (Kupffer cells) Eur. J. Biochem. 192,245-261. del  Carmen  Crespillo  M,  Olveira  G,  de  Adana  MS,  Rojo- Martinez G, Garcia-Aleman J, Olvera P, Soriguer F, Munoz A. 2003. Metabolic effects of an enteral nutrition formula for diabetes: comparison with standard formulas in patients with type 1 diabetes. Clin Nutr, 22:483–487.
Devaraj  S,  Venugopal  SK,  Singh  U,  Jialal  I.  2006.
Hyperglycemia  induces  monocytic  release  of  interleukin-6 via induction of protein kinase C-alfa and -beta. Diabetes 54: 85–91.
Dinarello  CA.  1996.  Biologic  basis  for  interleukin-1  disease. Blood, 87: 2095-2147.
Donath  MY,  Gross  DJ,  Cerasi  E,  Kaiser  N.  1999. Hyperglycemia-induced  beta-cell  apoptosis  in  pancreatic islets  of  Psammomys  obesus  during  development  of diabetes. Diabetes, 48:738-744.
Eizirik  DL,  Mandrup-Poulsen  T.  2001.  A  choice  of  death-the signal-transduction of immune-mediated beta-cell apoptosis. Diabetologia 44: 2115–2133.
Ghanim H, Aljada A, Hofmeyer D, Syed T, Mohanty P, Dandona P. 2004. Circulating mononuclear cells in the obese are in a proinflammatory state. Circulation 110: 1564–1571.
Heitmeier  MR,  Arnush  M,  Scarim  AL,  Corbett  JA.  2001. Pancreatic  β-cell  damage  mediated  by  β-cell  production  of Interleukin-1. J Biol Chem, 276 (14):11151-11158.
Heitmeier  MR,  Scarim  AL,  Corbett  JA.  1999.  Double-stranded RNA  inhibits  ß-cell  function  and  induces  islet  damage  by stimulating  ß-cell  production  of  nitric  oxide  J.  Biol.  Chem. 274:12531-12536.
Hermansen K, Sondergaard M, Hoie L, Carstensen M, Brock B.
2001. Beneficial effects of a soy-based dietary supplement on  lipid  levels  and  cardiovascular  risk  markers  in  type  2 diabetic subjects. Diabetes Care, 24:228-233.
Kahn SE. 2003.  The relative contributions of insulin resistance and  β-cell  dysfunction  to  the  pathophysiology  of  type2 diabetes. Diabetologia, 46: 3-19.
Kirii H, Niwa T, Yamada Y, Wada H, Saito K, Iwakura Y, Asano M,  Moriwaki  H,  Seishima  M.  2003.  Lack  of  interleukin-1β decreases  the  severity  of  atherosclerosis  in  ApoE-deficient mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 23: 656–660.
Kolb H, Mandrup-Poulsen T. 2005. An immune origin of type 2 diabetes? Diabetologia, 48:1038–1050.
Larsen CM, Faulenbach M, Vaag A, Volund A, Ehses JA, Seifert B,  Mandrup-Poulsen  T,  Donath  MY.  2007.  Interleukin-1- Receptor  antagonist  in  Type-2  Diabetes  mellitus.  The  New England Journal of Medicine, 356(15): 1517-1526.
Nakashima  S,  Koike  T,  Nozawa  Y.  1991.  Genistein, a  protein tyrosine kinase inhibitor,  inhibits  thromboxane A2-mediated human plate let responses. Mol Pharmacol, 39:475-480.
Maedler K, Sergeev P, Ris F, Oberholzer J, Joller-Jemelka HI,
Spinas  GA,  Kaiser  N,  Halban  PA,  Donath  MY.  2002. Glucose-induced beta cell production of IL-1beta contributes to glucotoxicity in human pancreatic islets. J Clin Invest 110: 851–860.
Maedler  K,  Storling  J,  Sturis  J, et  al .  2004.  Glucose-and interleukin-1beta-induced beta-cell apoptosis requires Ca2+ influx  and  extracellular  signal-regulated  kinase  (ERK)  ½ activation  and  is  prevented  by  a  sulfonylurea  receptor 1/inwardly  rectifying  K+  channel  6.2  (SUR/Kir6.2)  selective potassium  channel  opener  in  human  islets.  Diabetes, 53:1706-1713.
Pick A, Clark J, Kubstrup C, Levisetti M, Pugh W, Bonner-weir S, Polonsky KS. 1998. Role of apoptosis in failure of beta- cell mass compensation for insulin resistance and beta-cell defects  in  the  male  Zucker  diabetic  fatty  rat.  Diabetes, 47:358-364.
Sakuraba  H,  Mizukami  H,  Yagihashi  N,  wada  R,  Hanyu  C, Yagihashi S. 2002. Reduced β-cell mass and expression of
oxidative stress-related DNA damage in the islet of japanese type-II diabetic patients. Diabetologia 45: 85-96.
Shanmugam N,  Reddy MA, Guha M, Natarajan R. 2003. High glucose-induced expression of proinflammatory cytokine and chemokine  genes  in  monocytic  cells.  Diabetes  52:  1256– 1264.
Song  T,  Lee  SO,  Murphy  PA,  Hendrich  S.  2003.  Soy  protein with or without isoflavones, soy germ and soy germ extract, and  daidzein  lessen  plasma  cholesterol  levels  in  golden Syrian hamsters. Exp. Biol. Med, 228: 1063–1068.
Venugopal  SK,  Devaraj  S,  Yang  T,  Jialal  I.  2002.  Alfa- tocopherol  decreases  superoxide  anion  release  in  human monocytes  under  hyperglycemic  conditions  via  inhibition  of protein kinase C-alfa. Diabetes 51: 3049–3054.
Wellen  KE,  Hotamisligil  GS.  2005.  Inflammation,  stress,  and diabetes. J Clin Invest 115:1111–1119.
Welsh  N,  Cnop  M,  Kharroubi  I, et  al .  2005.  Is  there  a  role  for locally  produced  interleukin-1  in  the  deleterious  effects  of high  glucose  or  the  type-2  diabetes  milieu  to  human pancreatic islets? Diabetes, 54:3238-3244.
Winarsi  H.  2007.  Isoflavon  kedelai  yang  diperkaya  dengan  Zn sebagai  antiaterosklerosis  pada  wanita    premenopause.  J Biota, 12 (2). 70-77 .
Winarsi  H,  Hernayanti,  Purwanto  A,  Sukanto.  2006.  Profil  dan status  antioksidan  wanita  penderita Candidiasis di Purwokerto. M Med Indones, 41(3): 108-112.
Winarsi H, Muchtadi D, Zakaria FR, Purwanto A. 2005a. Kajian tentang wanita perimenopause di Purwokerto dan beberapa permasalahan    dalam  sistem    imunnya.  J  Obstetri  & Ginekologi Indonesia, 29(3): 177-183.
Winarsi  H,  Muchtadi  D,  Zakaria  FR,  Purwanto  A.  2005b.  Efek suplementasi  Zn  terhadap  status  imun  wanita premenopause    yang  diintervensi    dengan  minuman berisoflavon. J Hayati, 12(2): 82-85.
Winarsi  H,  Purwanto  A.  2009.  Minuman  fungsional  berbasis protein  kecambah  kedelai  untuk  memperbaiki  profil  lipid penderita  diabetes  mellitus  tipe-2  yang  berisiko  tinggi penyakit jantung koroner. [Paten]. [in press]
Winarsi  H,  Purwanto  A,  Dwiyanti  H.  2009.  Studi  perbandingan kandungan  protein  dan  isoflavon  pada    kedelai  dan kecambah kedelai. J Biota. [in press]
Xenos  ES,  Stevens  RB,  Sutherland  DE,  Lokeh  A,  Ansite  JD, Casanova  D,  Gores  PF,  Platt  JL.  1994.  The  role  of  nitric oxide  in  IL-1beta-mediated  dysfunction  of  rodent  islets  of Langerhans. Implications for the function of intrahepatic islet grafts Transplantation, 57:1208-1212.