## Proporsi Spermatozoa Y Hasil Pemisahan Dengan Fraksi Albumen Telur dan Lama Penyimpanan Semen Domba Lokal
Tedi Akhdiat 1
1 Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian Universitas Bandung Raya

## Intisari
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kualitas dan proporsi spermatozoa Y  hasil pemisahan semen domba lokal dengan beberapa fraksi albumen telur dan lama penyimpanan yang berbeda. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap   (RAL) pola Faktorial yang terdiri dari 2 faktor dengan ulangan 4 kali. Faktor pertama F (fraksi albumen telur) dengan level :  f 1 =  5   dan  25  %,  f 2 =  10   dan  30  %, f 3 =  15    dan  35  %, faktor  kedua L  (lama  penyimpanan) dengan  level  :  l 0 =  0  jam,  l 2 =  2  jam,  l 4 =  4  jam.  Variabel  yang  diamati  yaitu  :  motilitas  (%), spermatozoa  hidup  (%),  abnormalitas  (%),  dan  proporsi  spermatozoa  Y  (%).  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa tidak ada interaksi  antara faktor F dan L terhadap keseluruhan variabel yang  diamati  (P  >  0,05).  Pengaruh  faktor  F  terhadap  motilitas,  spermatozoa  hidup,  dan abnormalitas tidak berbeda nyata (P > 0,05), tetapi terhadap proporsi spermatozoa Y berbeda nyata  (P  <  0,05).  Pengaruh  faktor  L  terhadap  motilitas  berbeda  sangat  nyata  (P  <  0,01)  dan terhadap  spermatozoa  hidup  berbeda  nyata  (P  <  0,05),  tetapi  terhadap  abnormalitas  sperma dan proporsi spermatozoa Y tidak berbeda nyata (P > 0,05). Penyimpanan spermatozoa Y hasil pemisahan  selama  4  jam,  menghasilkan  rataan  motilitas  dan  spermatozoa  hidup  masing- masing  sebesar  61,67  dan  63,25  %  dengan  konsentrasi  932,54  ±  76,34  juta  spermatozoa/ml semen, sedangkan fraksi albumen f 2 (10  dan 30 %) menghasilkan kualitas spermatozoa tertinggi dengan motilitas dan spermatozoa hidup   71,67 dan 74,79 %.
Kata kunci : Spermatozoa Y, fraksi albumen dan semen domba

## Abstract
This  research  was  conducted    to  determine  the    quality  and  proportion  of  Y- spermatozoa  with  more  fraction  of  egg  white  and  storage  period.  The  experimental  method with  completely  Randomized  Design  base  on  Factorial  consist    of  two  factor  were  used.  The first factor was F  (egg white) consist of level f 1 = 5  and 25 %;  f 2 = 10  and 30 %; f 3 = 15  and 35 %; and second factor is L (strorage period) consist of level l 0 = 0 hours; l 2 = 2 hours; l 4 = 4 hours. Each  treatment  was  replicated  four  times.  The  variable  measured  were    motility(%),  live spermatozoa (%), abnormality (%), and proportion of Y-spermatozoa.  The results showed that fraction and storage period had no significant interaction       (P > 0.05) on the all variable. The effect fraction of  egg white showed no significant (P > 0.05) difference on percentages motility, live  spermatozoa,  and  abnormality.  However  the  fraction  showed  significant  (P  <  0.05)  on difference   proportion of Y-spermatozoa. The effect of storage period showed highly significant (P  <  0.01)  difference  on  motility  and  significant  (P  <  0.05)  difference  on    live  spermatozoa. However, the storage periode showed no significant (P > 0.05) difference on abnormality, and proportion  of  Y-spermatozoa.  Kept  of  spermatozoa  for  four  hours  product  mean  of  motility 61.67  percent,  live  spermatozoa  63.25  percent,  consentration  were  932.54  ±  76.34  million spermatozoa/ml of semen, while albumen fraction of f 2 (10  and 30 %) gave the highest result in motility and live spermatozoa : 71.67 and 74.79 %, respectively.
Key words : Y-spermatozoa, fraction of egg white, ram semen
Pendahuluan Pemanfaatan teknologi pemisahan (separasi) spermatozoa merupakan salah satu pilihan yang tepat dalam  rangka  peningkatan  efisiensi reproduksi  yang  mampu  meningkatkan efisiensi  usaha  peternakan,  baik  dalam skala  usaha  peternakan  rakyat  maupun dalam skala komersial, sehingga peternak dalam usahanya dapat memilih jenis  kelamin  ternak  yang  sesuai  dengan keinginan  dalam  rangka  menyesuaikan tipikal usahanya.
Pengendalian  jenis  kelamin anak sebelum  lahir  dapat  dilakukan  melalui pemisahan  spermatozoa    X  dan  Y  pada domba  yaitu  dalam  upaya  mengubah proporsi  50  :  50  anak  yang  dilahirkan jantan  dan  betina  secara  alamiah. Pemisahan  kromosom  ini  salah  satunya dapat dilakukan dengan metode sedimentasi  dengan  albumen  telur
(putih telur). Metode ini didasarkan atas perbedaan  motilitas  spermatozoa  X  dan Y  sebagai  implikasi  dari  perbedaan massa  dan  ukuran  spermatozoa  Y  lebih kecil  dibandingkan  spermatozoa    X, sehingga sperma Y lebih cepat bergerak atau  mempunyai  daya  penetrasi  yang tinggi  untuk  masuk  ke  suatu  larutan seperti albumen telur (putih telur).
Pemisahan  spermatozoa  salah satunya yaitu pembuatan fraksi albumen telur  yang  berbeda  konsentrasinya, sehingga spermatozoa Y yang mempunyai  motilitas  tinggi  akan mampu menembus konsentrasi medium yang lebih pekat, sedangkan spermatozoa  X  akan  tetap  berada  pada medium  yang  mempunyai  konsentrasi rendah.
Menurut  Maxwell et  al .  (1984) efisiensi  dari  usaha  mengubah  ratio sperma  X  dan  Y  dipengaruhi  oleh
konsentrasi albumen dan lamanyawaktu sperma  domba  tersebut  menembus cairan albumen serta konsentrasi sperma dalam pengencer yang akan dipisahkan. Medium yang optimal untuk menghasilkan spermatozoa yang membawa  kromosom  X  dan  Y  serta memiliki  motilitas  yang  tinggi  yaitu dengan  kombinasi    medium  putih  telur 10  dan  30  %.  Lamanya  waktu  masa inkubasi  (masuknya  spermatozoa  ke dalam fraksi albumen) pada semen sapi potong yaitu selama 20 menit pada suhu 5 0 C (Pamungkas, dkk ., 2004).
Spermatozoa  X  dan  Y  dalam pergerakan  atau  motilitas,  memerlukan energi  dari  metabolisme  yang  hasil ikutannya  bisa  sebagai    asam  laktat sehingga  pH  lingkungan  spermatozoa akan  turun  yang  akhirnya  dapat menurunkan kualitas spermatozoa seperti  motilitas,  daya  hidup,  dan abnormalitas. Hasil pemisahan (separasi) spermatozoa pada semen domba dengan menggunakan  berbagai  fraksi  albumen telur  kemudian  hasil  pemisahannya ditambahkan  bahan  pengencer  dan disimpan selama 4 jam pada temperatur 5 0 C,  ini  akan  memperlambat  proses metabolisme spermatozoa yang akhirnya  akan  menekan  penurunan kualitas spermatozoa X dan Y. Berdasarkan atas masalah perbedaan motilitas, ukuran spermatozoa, konsentrasi albumen telur, dan  pemisahan  dengan  menggunakan semen  domba  belum  dilakukan,  maka akan  dikaji  mengenai  kualitas  dan proporsi spermatozoa Y hasil pemisahan  dari  semen  domba  yang disimpan  pada  temperatur  5 0 C  dengan menggunakan fraksi putih telur (albumen) dan lamanya penyimpanan.

## Metode Penelitian
Materi  percobaan  adalah  semen dari  domba  lokal  berumur  sekitar  dua tahun  sejumlah  tiga  ekor  berasal  dari
Eksperimental Farm Fakultas Peternakan Unsoed.  Bahan-bahan  percobaan  yang digunakan  meliputi  :  fruktosa,  alkohol, larutan  eosin-negrosin,  vaslin,  aquades, larutan Tris, dan putih telur.
Alat-alat    Percobaan  :  satu  set vagina  tiruan,  gelas  ukur,  mikroskop monitor, objeck glass dan cover glass , pipet Haemocytometer  dan  kamar  hitung Neubauer,  gelas  penampung  semen, termos  es,  batang  pengaduk,  gelas erlemeyer,  timbangan  elektrik,  tabung reaksi,  sentrifuge  digital  dan  tabungnya, termometer,  dan  peralatan  lainnya  yang menunjang untuk percobaan.

## Metode Penelitian
Metode penenilitan adalah eksperimen dengan rancangan percobaan Rancangan Acak Lengkap   pola Faktorial yang terdiri dari 2 faktor dengan ulangan empat  kali  berupa  penyadapan.  Faktor pertama F (fraksi albumen telur) dengan level : f 1 = 5  dan 25 %; f 2 = 10  dan 30 %; f 3 =  15    dan 35  %.  Faktor  kedua  L  (lama penyimpanan) dengan level : l 0 = 0 jam; l 2 = 2 jam, l 4 = 4 jam.

## Prosedur Penelitian
Persiapan  penelitian  meliputi  : persiapan  bahan  kimia,  perlengkapan laboratorium,  pemberian  obat  cacing, latihan penyadapan, dan evaluasi semen. Pelaksanaan Penelitian :
1) Menampung  dan  mengevaluasi semen  segar  secara  makrokopis dan mikrokopis. Untuk memenuhi volume semen penelitian maka dilakukan komposit dan penambahan pengencer  dengan  Tris  fruktosa, sehingga volume menjadi 3 ml.
2) Meyediakan  3  tabung  reaksi, tabung reaksi pertama diisi fraksi albumen  telur  f 1 =  5   dan 25  %    ; kedua diisi fraksi  albumen f 2 = 10 dan 30 % ; yang ketiga diisi fraksi albumen  f 3 =  15  dan  35  %.    Isi
tabung  reaksi  f 1 dengan  25  %
albumen telur yang telah dicampur  Tris-fruktosa  sebanyak 2  ml,  kemudian  disusul  dengan yang  5  %  sebanyak  2  ml    secara perlahan-lahan  melalui  dinding tabung  sehingga  pada  masing- masing tabung terjadi dua lapisan (volume  4  ml).  Pembuatan  fraksi albumen telur untuk f 2 dan f 3 sama dengan pembuatan perlakuan f 1. 3) Memasukan  semen  yang  telah dievaluasi  ke  masing-masing tabung  reaksi  yang  telah  berisi fraksi  albumen  telur  sebanyak  1 ml,  kemudian  diinkubasi  selama 20 menit pada suhu 5
0 C. 4) Tabung reaksi yang telah diinkubasi,  bagian  atasnya  3  ml dibuang sedangkan bagian bawahnya  diambil  2  ml  dan dimasukan  ke  dalam  tabung sentrifuge  dan  ditambahkan  Tris- fruktosa 2 ml kemudian disentrifugasi  1500  rpm  selama  5 menit. 5) Hasil  sentrifugasi  masing-masing bagian atasnya dibuang dan yang bawahnya disisakan 1 ml kemudian ditambahkan pengencer  Tris-fruktosa    1  ml. Pengamatan dilakukan setiap 0, 2, dan  4  jam  mengenai  motilitas, abnormalitas,  hidup  dan  matinya spermatozoa,  pH,  dan  ukuran kepala spermatozoa Y. Pengamatan  konsentrasi  hanya dilakukan pada saat penyimpanan 0 jam. 6) Fraksi  albumen  10    dan  30  %;  15 dan 35 % prosedur kerjanya sama seperti nomor 4 sampai dengan 6. Peubah yang Diamati a. Motilitas Spermatozoa (%) Diamati  di  bawah  mikroskop dengan  pembesaran  10  x  10  dan  10  x 40,  spermatozoa  bergerak  dan  yang tidak bergerak, kemudian dibandingkan  dengan  keseluruhan dalam satu bidang pandang. b. Spermatatozoa hidup (%) Penghitungan  spermatatozoa hidup  dengan  preparat  ulas  langsung dilakukan dengan mikroskop
pembesaran  10  x  40.  Dihitung spermatozoa  hidup  (tidak  menyerap warna)  dan  yang  mati  (menyerap warna merah) sejumlah 200 spermatozoa. c. Abnormalitas Spermatozoa  (%) Penghitungan abnormalitas spermatozoa dilihat dengan mikroskop pembesaran  10  x  40  berdasarkan abnormalitas  primer  dan  sekunder. Sebelumnya  dibuat  preparat  ulas seperti untuk menghitung spermatozoa yang hidup dan mati. e. Proporsi spermatozoa Y (%) Pengukuran luas kepala spermatozoa  dengan  membuat  preparat ulas  dari  semen  segar  sebagai  standar
dengan cara mengukur panjang dan lebar kepala  spermatozoa.  Jumlah  sampel sebanyak  200  sel  spermatozoa  dengan menggunakan mikroskop pembesaran 10 x  40  yang  dilengkapi  monitor,  sehingga diperoleh  rata-ratanya.  Masing-masing perlakuan  hasil  pemisahan  kemudian dihitung  ukuran  kepala  spermatozoa sejumlah  200  sel  spermatozoa  dan dibandingkan  dengan    rata-rata  ukuran spermatozoa  yang  belum  dilakukan perlakuan  (standar).  Diatas  atau  lebih besar  sama  dengan  rata-rata    standar masuk  kedalam  sperma  X  dan  dibawah standar masuk kedalam sperma Y. Jml Sperma Y
Lapisan bawah =                                             x     100 %
(sperma Y) Jml Sperma X dan Y

## Analisis Data
Mengunakan  Anava,  BNJ,  dan regresi sederhana (Gaspersz, 1991).

## Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  selama bulan Mei 2006 di Laboratorium Fisiologi dan Reproduksi Ternak Fakultas Peternakan Universitas Jenderal Soedirman. Hasil Dan Pembahasan

## Evaluasi Semen Segar Domba
Hasil evaluasi semen segar secara makroskopis  dan  mikroskopis    dapat memenuhi  syarat  untuk  dilakukan penelitian lebih lanjut (Tabel 1).
Tabel 1. Kualitas Semen Segar dan Ukuran Kepala Spermatozoa Domba  Lokal No.          Parameter Rataan 1.  Volume (ml) 0,98 ± 0,01 2.  Warna Kream 3.  Konsistensi Kental 4.  pH 6,24 ± 0,02 5.  Gerakan Massa +++ 6.  Konsentrasi (juta spermatozoa /ml semen) 2600,00 ± 130,59 7.  Motilitas (%) 82,50 ± 1,61 8.  Spermatozoa hidup (%) 87,96 ± 2,59 9.  Abnormalitas (%) 3,31 ± 0,71 10.  Ukuran kepala spermatozoa : panjang 7,30 ±  0,23 µm lebar 4,25 ±  0,13 µm luas 31,01 ± 2,00 µm 2
Perbedaan  dari  beberapa  hasil penelitian  terdahulu  diduga  pengaruh faktor  umur,  kondisi  hewan  percobaan, bangsa,  pakan,  frekuensi  ejakulat,  umur, bobot  badan,  rekuensi  penampungan, bangsa  atau  jefnis  ternak,  dan  metode penampungan.
Interaksi  Faktor  F  dan  L  Terhadap Motilitas, Spermatozoa Hidup, Abnormalitas, pH,  dan Proporsi Sperma Y Tidak  ada  interaksi  (P  >  0,05) antara  faktor  F  (fraksi  albumen)  dan  L (lama  penyimpanan)  spermatozoa  hasil pemisahan terhadap motilitas, spermatozoa  hidup,  abnormalitas,  pH, dan  proporsi  sperma  Y.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  F  dan  L  tidak mempunyai  pengaruh  bersama  terhadap variable yang diamati.

## Pengaruh  Lama  Penyimpanan  terhadap Motilitas Spermatozoa
Efek  mandiri  F  berbeda  tidak nyata  (P  >  0,05)  terhadap  motilitas spermatozoa,  diduga  media  albumen yang  digunakan  hanya  mempengaruhi jumlah    spermatozoa  yang  dipisahkan serta ketersediaan energi yang dikandung Tris-fruktosa yang ditambahkan  pada  proses  pemisahan relatif  sama.  Sesuai  pendapat  Hafez (1993),  bahwa  salah  satu  faktor  utama yang mempengaruhi motilitas spermatozoa  adalah  ketersediaan  energi ATP.  Namun  secara  numerik  perlakuan f 2 (10  dan 30 %) menghasilkan motilitas tertinggi,  yaitu  71,67  %  dibandingkan  f 1 (70,42 %), dan f 3 (65,83 %).
Efek mandiri L terhadap motilitas berbeda  nyata  (P  <  0,05).  Uji  BNJ  (Tabel 2),
Tabel 2.  Pengaruh Lama Penyimpanan  terhadap Rataan  Motilitas Spermatozoa (%) Lama Rataan Penyimpanan (jam) Motilitas (%) l 0 (0 jam) 80,00 a l 2 (2 jam) 66,25 b l 4 (4 jam) 61,67 b
Keterangan : Superskrip yang sama kearah kolom menunjukkan tidak berbeda    nyata (P > 0,05) Superskrip yang berbeda kearah kolom menunjukkan perberbedaan nyata (P < 0,05)
Faktor  tunggal  L  terhadap motilitas,  ternyata  rataan  motilitas spermatozoa  yang  disimpan    0  jam berbeda  nyata  (P  <  0,05)  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  disimpan pada 2 jam  dan  4  jam,  sedangkan  untuk  yang disimpan  2  dan  4  jam  menunjukkan perberbedaan yang tidak nyata (P > 0,05). Ini  berarti  lama  penyimpanan  dapat mempengaruhi  menurunkan  motilitas
spermatozoa  dari 0 jam ke 2 dan 4 jam, adapun mulai dari 2 ke 4 jam tidak begitu berpengaruh.  Tidak  berpengaruhnya lama  penyimpanan  dari  2  ke  4  jam terhadap  rataan  motilitas  spermatozoa diduga  interval  waktu  pengamatan terlalu  pendek,  namun  demikian  dari angka  rataan  persentase  motilitas  masih tetap mengalami penurunan. Berpengaruhnya lama penyimpanan dari 0 ke 2 jam dan 0 ke  4 jam  disebabkan  adanya  penurunan  zat makanan  bagi  spermatozoa dan adanya peningkatan  jumlah  spermatazoa  yang mati pada saat penyimpanan spermatozoa  dari  temperatur  ruang  ke temperatur    dingin  (±  5 0 C).  Sesuai dengan  pendapat  Shukla  et  al.  (1992) bahwa salah satu faktor yang mempengaruhi  motilitas  sperma  adalah perubahan  temperatur.  Spermatozoa domba  yang  telah  mengalami  proses separasi  kemudian  disimpan  selama  4
jam pada suhu 5 0 C rataan motilitas yaitu 61,67  %,  ternyata  masih  bisa  digunakan untuk  IB.  Sesuai  pendapat  Toelihere (1993)  bahwa  standar  minimum  bagi kualitas semen yang dapat dipakai untuk IB adalah minimal mengandung 500 juta sel per ml ejakulat dan 50 % sperma yang hidup dan motil.
Hasil  analisis  regresi  (Gambar  1) terlihat bahwa semakin lama penyimpanan  sperma  pada  suhu  5 0 C
maka motilitas spermatozoa domba akan semakin  menurun  dengan  mengikuti
persamaan garis regresi Y = 62,399 - 2,983 X.      Keeratan  hubungan  antara  lama penyimpanan  dan  motilitas  spermatozoa ditunjukkan  oleh  koefisien  determinasi (r 2 )  sebesar  0,5321,  ini  berarti  lama penyimpanan dapat mempengaruhi motilitas  spermatozoa  domba  sebesar 53,21 %, sedangkan  sisanya dipengaruhi oleh faktor-faktor lain misalnya frekuensi ejakulat,  pakan,  metode  penampungan, penanganan  dan  perawatan  sesudah penampungan,  umur,  bangsa  dan  lain sebagainya.
50 53 56 59 62 65 0 2 4 Lama Penyimpanan (jam) M o ti li ta s S p e r m a to z o a (%) Y = 62,399 - 2,983X
Gambar 1. Hubungan antara Lama Penyimpanan dan Motilitas

## Spermatozoa Domba
Pengaruh  Lama  Penyimpanan  terhadap Spermatozoa Hidup Efek mandiri pengaruh F
terhadap  spermatozoa  hidup  tidak berbeda  nyata  (P  >  0,05).  Pengaruh  efek mandiri    untuk  L  berbeda  nyata    (P  < 0,05) terhadap spermatozoa hidup. Tidak berpengaruhnya F terhadap spermatozoa hidup,  diduga  kandungan-kandungan pada  putih  telur  serta  penggunaan  Tris sebagai buffer dan pencuci plasma semen ini  bisa    digunakan  sebagai  bahan mempertahankan kehidupan spermatozoa  selama  proses  separasi.
Sesuai  dengan  pendapat  Martin  et  al.
(1983)  yang  disitir  oleh  Pancahastana
(1999)  dalam  albumen  terdapat  zat lysozim,  merupakan  senyawa  protein mengandung  antibiotika  yang  dapat menghancurkan  beberapa  bakteri  dalam hal  ini  zat  yang  dapat  membunuh spermatozoa  yang  telah  dipisahkan (pada  lapisan  30  %  putih  telur).  Namun secara  numerik  perlakuan  f 2 (10    dan  30 %)  menghasilkan  spermatozoa  tertinggi (74,79 %) dibandingkan  f 1 (70,54 %) dan f 3 (71,33 %). Efek mandiri L terhadap spermatozoa  hidup  berbeda  nyata  (P  < 0,05). Uji BNJ (Tabel 3).
Tabel  3. Pengaruh Lama Penyimpanan terhadap Rataan Spermatozoa Hidup (%)
Lama Penyimpanan (jam) Rataan Spermatozoa Hidup (%) l 0 (0 jam) 79,38 a l 2 (2 jam) 74,04 ab l 4 (4 jam) 63,25 b
Keterangan :
Superskrip yang sama kearah kolom menunjukkan tidak berbeda    nyata (P > 0,05) Superskrip yang berbeda kearah kolom menunjukkan perberbedaan nyata (P < 0,05)
Rataan  spermatozoa  hidup  yang disimpan 0 jam berbeda nyata (P < 0,05) lebih tinggi dibandingkan yang disimpan 4 jam, sedangkan dibandingkan dengan 2 jam  berbeda  tidak  nyata  (P  >  0,05). Adapun  spermatozoa  hidup  yang disimpan 2 jam berbeda tidak nyata (P > 0,05) dibandingkan dengan yang disimpan 4 jam. Lama  penyimpanan  berpengaruh menurunkan spermatozoa hidup terutama yang disimpan dari 0 ke-4 jam, sedangkan dari 0 ke-2 jam dan dari 2 jam ke-4  jam  tidak  begitu    berpengaruh menurunkan spermatozoa hidup.
Tidak berpengaruhnya lama penyimpanan  0  dengan  2  jam  dan  2 dengan  4  jam  terhadap  spermatozoa hidup diduga interval waktu pengamatan terlalu pendek dan
spermatozoa hasil separasi untuk l 2 dan l 4 disimpan pada temperatur 5 0 C, sehingga akan  menghambat  aktifitas  metabolisme yang  selanjutnya  akan  mengurangi  hasil ikutan  metabolisme    sperma.  Namun demikian dari angka rataan spermatozoa hidup masih tetap mengalami penurunan . Adanya pengaruh lama penyimpanan terhadap penurunan
rataan  spermatozoa  hidup,  diduga  tidak ditambahkannya  kuning  telur  pada  Tris- fruktosa.  Kuning  telur  bisa  mengurangi cold  sock  juga  mengandung  sumber  zat makanan  seperti  fruktosa,  laktosa, rafinosa,  asam-asam  amino  dan  vitamin- vitamin    serta  sperma  hasil  pemisahan yang  disimpan    pada  temperatur  5 0 C selama  4  jam  masih  mengalami  proses
metabolisme,
dan hasil ikutan metabolisme  ini  dapat  membunuh spermatozoa.
Hasil  penelitian  dari  Tabel  3, terlihat  spermatozoa  domba  yang  telah mengalami  proses  separasi  kemudian disimpan  selama  4  jam  pada  suhu  5 0 C diperoleh  rataan  spermatozoa  hidup 63,25  %,    ternyata  masih  bisa  digunakan untuk IB. Hasil penelitian Susilawati dkk. (2002)  separasi  sperma  sapi  Brahman dengan  menggunakan  pengencer  Tris Aminomethan  kuning  telur  dan  Tris Aminomethan  tanpa  kuning  telur diperoleh  persentase  spermatozoa  hidup pada fraksi bawah masing-masing 76,84 ± 12,62  %  dan  66  ±  16,79  %.  Sedangkan menurut Memon dan Ott (1981) cepatnya penurunan  kualitas  semen  ini  tidak terlepas dari tingginya tingkat konsentrasi spermatozoa pada pengencer. Berdasarkan  Gambar  2,  semakin lama  spermatozoa  hidup  hasil  separasi yang  disimpan  selama  4  jam  pada  suhu 5 0 C  maka  spermatozoa      akan  semakin menurun  kualitasnya  dengan  mengikuti persamaan garis regresi linier Y = 64,284 – 2,683 X.. Koefisen determinasi (r 2 ) spermatozoa hidup adalah 0,2380, berarti lama penyimpanan dapat mempengaruhi spermatozoa  hidup    sebesar  23,80  %, sisanya  dipengaruhi  oleh  faktor-faktor lain misalnya penanganan dan perawatan semen sesudah penampungan.
50 53 56 59 62 65 0 2 4 Lama Penyimpanan (jam) Sp er m at oz oa H id up (%) Y = 64,284 - 2,683 X
Gambar 2. Hubungan antara Lama Penyimpanan dan Spermatozoa Hidup
Pengaruh Perlakuan terhadap Abnormalitas Spermatozoa Efek  mandiri    F  dan  L  terhadap abnormalitas  sperma  tidak  berpengaruh nyata  (P  >  0,05).    diduga  kandungan albumen, bahan pengencer, dan penyimpanan  sperma  hasil  pemisahan pada temperatur 5 0 C selama 4 jam tidak merubah keadaan morfologis spermatozoa domba. Kerusakan morfologis  spermatozoa  bisa  disebabkan adanya gangguan  pada  tubuli  seminiferi dan  pada  testis,  gangguan  selama perjalanan  dalam  saluran  reproduksi jantan,  dan  gangguan  selama  pasca ejakulasi,  sesuai  menurut  Toelihere (1993),  bahwa  penyimpanan  semen untuk  waktu  yang  memadai  tidak menyebabkan abnormalitas primer.
Kombinasi  level  f  dan  l  dari persentase  abnormalitas  spermatozoa domba  berkisar  antara  2,50  –  7,38  %. Pamungkas  dkk.  (2004)  melakukan penelitian  pada  semen  sapi  PO  dengan menggunakan  bahan  pemisah  albumen dari    putih  telur,  ternyata  diperoleh persentase  abnormalitas  sperma  Y  yang dihasilkan 8,81 % pada pasca sentrifugasi (1500  rpm  selama  5  menit),  dan  10,32  % pada pasca ekulibrasi (3 jam, suhu 5 0 C). Sesuai  pendapat  Toelihere,  (1993)  bahwa semen  domba  yang  fertil  tidak  boleh
mengandung  lebih  dari  5  sampai  15  % spermatozoa  abnormal  atau  kelainan morfologik  di  bawah  20  %  masih dianggap  normal.  Menurut  Hafez  (1993) semen domba mengandung spermatozoa normal antara 80 sampai 95
%.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Proporsi Spermatozoa Y
Efek  mandiri  faktor  F  terhadap proporsi  spermatozoa  Y  berpengaruh nyata  (P  <  0,05),    Adapun    tidak berpengaruhnya  efek  mandiri  faktor  L terhadap  proporsi  spermatozoa  (P  > 0,05), artinya lama penyimpanan spermatozoa  hasil  pemisahan  yang disimpan    selama  4  jam  dalam temperatur  5 0 C  tidak  akan  merubah proporsi  spermatozoa  Y.  Proporsi spermatozoa Y hasil pemisahan berkaitan  erat  dengan  proses  perlakuan saat  pelaksanaan  pemisahan  semen domba. Sesuai  pendapat  Maxwell et  al.
(1984)  efisiensi  dari  usaha  mengubah ratio  sperma  X  dan  Y  dipengaruhi  oleh konsentrasi albumen dan lamanya waktu sperma  domba  tersebut  menembus cairan albumen serta konsentrasi sperma dalam pengencer yang akan dipisahkan.
Hasil BNJ (Tabel 4).
Tabel  4. Pengaruh Fraksi Albumen  terhadap Proporsi  Spermatozoa  Y (%) Fraksi Albumen Rataan Proporsi (%) Spermatozoa Y (%) f 2 (10  dan 30 %) 63,58 a f 3 (15  dan 35 %) 58,33 ab f 1 (  5  dan 25 %) 38,63 b
Keterangan :
Superskrip yang sama kearah kolom menunjukkan tidak berbeda  nyata (P > 0,05) Superskrip yang berbeda kearah kolom menunjukkan  perberbedaan nyata (P < 0,05)
Rataan  proporsi  spermatozoa  Y pada  fraksi  albumen  bagian  bawah  f 2 berbeda  nyata  (P  <  0,05)  lebih  tinggi dibandingkan  dengan    f 1 ,  sedangkan dibandingkan  dengan      f 3 berbeda  tidak nyata  (P  >  0,05).  Adapun    pada  fraksi albumen f 3 berbeda tidak nyata (P > 0,05) dibandingkan dengan f 1 . Tidak  berpengaruhnya  fraksi albumen telur f 2 dengan f 3 dan f 3 dengan f 1 terhadap  proporsi  spermatozoa  Y, diduga  vikositas  albumen  pada  lapisan atas berkaitan erat dengan menembusnya sperma  X  dan  Y.    Hasil  dari  Tabel  4, terlihat  rataan  proporsi  spermatozoa  Y tertinggi    pada  fraksi  albumen  lapisan bawah  10  dan  30  %  (f 2 ) sebesar  63,58  %. Penelitian sebelumnya
dilaporkan
Susilawati  (2003)  diperoleh  spermatozoa
X pada lapisan atas 75 %; demikian pula spermatozoa Y pada lapisan bawah 75 %, kemudian  oleh  Pancahastana  (1999) diperoleh  rata-rata  spermatozoa  Y  pada lapisan  atas  36,80  ±  8,06  %  dan  untuk lapisan bawah  77,20 ± 4,09 %.
Hasil dari penelitian ternyata dari Gambar  3  di  atas  diperoleh  proporsi spermatozoa  Y    tertinggi  (63,58  %)  dari
lapisan bawah  pada f 2 yaitu albumen 10 dan  30  %.  Hal  ini  disebakan  oleh perbedaan  motilitas  spermatozoa  X  dan Y, sehingga spermatozoa yang mempunyai  motilitis  tinggi  (Y)  akan mampu  menembus  konsentrasi  fraksi albumen  pekat,  sedangkan  spermatozoa
X  akan  tetap  berada  pada  mediun albumen konsentrasi rendah.
Menurut  Sumner  dan  Robinson (1976)  kandungan  DNA  kepala  sperma berhubungan dengan berat massa kepala. Sedangkan  menurut  Mohri et  al. (1987), berat  dan  ukuran  kepala  spermatozoa  X disebabkan  oleh  adanya  kandungan DNA  pada  kepala  spermatozoa  X sebanyak  3  –  4  %  lebih  besar  dari  pada DNA  yang  terkandung  di  dalam  kepala spermatozoa  Y.  Perbedaan  tersebut menyebabkan  sperma  Y  mengandung materi  genetik  yang  lebih  sedikit, akibatnya  sperma  Y  lebih  ringan  dan mpunyai  gerakan  yang    lebih  cepat dibaemndingkan  dengan  sperma  X, sehingga  memudahkan  spermatozoa  Y untuk  menembus  fraksi  albumen  yang pekat.
58,33 63,58 38,63 f1 f2 f3 Fraksi Albumen (%) Propors i S pe rm at ozoa Y (%)
Gambar 3. Proporsi Spermatozoa Y pada Berbagai Fraksi Albumen Telur
Hasil yang diperoleh dari penelitian  ini  lebih  kecil  dibandingkan dengan yang dilaporkan  peneliti-peneliti sebelumnya  diduga  adanya  perbedaan motilitas,  jenis  semen,  konsentrasi  fraksi albumen, waktu dan temperatur inkubasi. Sesuai menurut pendapat Broer et  al .  (1977),  daya  migrasi  atau  penetrasi dari  sperma  Y  dapat  dipengaruhi  oleh pH,  temperatur,  waktu  atau  lama penetrasi,  tingkat  motilitas  sperma sebelum perlakuan, dan faktor-faktor lain dalam cairan  serviks dan uterus.

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan,  dapat  disimpulkan  sebagai berikut : 1. Fraksi  albumen  telur  dan  lama penyimpanan  tidak  mempunyai pengaruh bersama terhadap motilitas, abnormalitas, spermatozoa  hidup,  dan  proporsi spermatozoa  Y  hasil  pemisahan dari semen domba. 2. Fraksi albumen tidak mempengaruhi motilitas, spermatozoa hidup, dan abnormalitas tetapi mempengaruhi perolehan proporsi  spermatozoa  Y  yaitu tertinggi  sebesar  63,58  %  pada fraksi albumen 10 dan 30 %. 3. Lama penyimpanan tidak mempengaruhi abnormalitas, dan proporsi  spermatozoa  Y,  namun dapat  menurunkan  motilitas  dan spermatozoa hidup. Penyimpanan  spermatozoa  Y hasil  pemisahan  menghasilkan rataan  motilitas  dan  spermatozoa hidup  masing-masing  sebesar 61,67  %  dan  63,25  %  dengan konsentrasi  932,54  ±  76,34  juta spermatozoa/ml semen.

## Saran
Spermatozoa  Y  hasil  separasi dengan fraksi albumen 10 dan 30 % yang disimpan  selama  4  jam  pada  temperatur 5 0 C  dapat  diaplikasikan  dilapangan dengan  Inseminasi  Buatan  dan  dapat diproses lebih lanjut sebagai semen beku.

## Daftar Pustaka
Broer,  K.H,  D.  Weber,  and  R.  Kaiser. 1977.  The  Pregnancy  of  Y- Chromatine positive Spermatozoa during  In-Vitro  Penetration  Test under Various Experimental Conditions. Fert. Steril . 28 : 1077 –
1091 Gaspersz V., 1991. Teknik Analisis dalam Penelitian . Tarsito. Bandung.
Hafez, E.S.E., 1993. Reproduction in Farm
Animals . 6 th . Ed Lea & Febiger, Philadelphia.
Maxwell,  W.M.C.,  G.  Mendoza  and  I.G. White,  1984.  Posthawing  Survival of  Motile  Rams  Sperm  After Isolation  by  Layering  on  Protein Colums. Theriogenology , 21 (24).
Memon,  M.A.  and  R.S.  Ott.  1981. Methods  of  Semen  Preservation and  Artificial  Insemination  in Sheep  and  Goats. Word. Rev. Anim. Prod ., 17 : 19 – 25. Pamungkas, D., Affandhy, I., Sriyana dan Hartati, 2004. Pemisahan Spermatozoa  Pada  Sapi  Potong Menggunakan  Gradien  Putih Telur. Loka  Penelitian  Sapi  Potong Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan Peternakan . Badan Litbang Pertanian. Departemen Pertanian. Pancahastana  H.,  1999. Upaya  Merubah Sex  Rasio  Spermatozoa  dengan Melakukan  Pemisahan  Spermatozoa
X  dan  Y  Menggunakan  Putih  Telur pada  Sapi  Bali . Skripsi .  Fakultas Peternakan. Universitas Brawijaya. Malang. Salisbury,  G.W.  and  N.L.  VanDemark, 1985.  Fisiologi  Reproduksi  dan
Inseminasi Buatan pada Sapi. Alih bahasa : R. Djanuar. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta. Shukla, S.N., B.B. Singh, N.S. Tomar and B.S. Misra. 1992. Factors Affecting Prematozoon Motility in Preserved Semen. Indian Vet J. 69 : 856 – 857.
Sumner,  AT.  and  JA.  Robinson.  1976.  A difference  in  Dry  Mass  between the  Head  of  X-  andY-  Bearing Human  Spermatozoa. J.  Reprod Fert ., 8 : 9 – 14.
Susilawati  P.,  Hermanto,  P.  Srianto,  dan E.  Yuliani.  2002.  Pemisahan Spermatozoa  X  dan  Y  pada  Sapi Brahman  menggunakan  Gradien Putih  Telur  pada  Pengencer  Tris dan Tris Kuning Telur. Jurnal Ilmu Hayati  (Life  Sciences). Vol.  14.  No. 2. Desember. Hal. 176 – 183 .
Susilawati  T.  2003.  Inseminasi  Buatan dengan  Spermatozoa  Beku  Hasil Sexing  pada  Sapi.  Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya. Makalah  pada  Kongres  Persatuan Teknologi  Reproduksi  Indonesia . Denpasar Bali. Hal 1 – 20.
Toelihere,  M.R.,  1993. Inseminasi  Buatan Pada  Ternak .  Penerbit  Angkasa. Bandung. White,  I.G.,  1980.  Secretion  of  Male Reproductive Tract Seminal Plasma. In E.S.E.  Hafez.  ed.
Reproduction  in  Farm  Animals .  Lea & Febiger. Philadelphia. .