POTENSI  DAUN SALAM ( Syzigium polyanthum Walp.) DAN BIJI JINTEN HITAM ( Nigella Sativa Linn) SEBAGAI  KANDIDAT OBAT HERBAL TERSTANDAR ASAM URAT
THE POTENTIAL OF SALAM LEAVES ( Syzigium polyanthum Walp.) AND BLACK CUMIN SEED ( Nigella sativa Linn) AS A CANDIDATE STANDARIZED HERBAL MEDICINE OF URIC ACID
Muhtadi * , Andi Suhendi, Nurcahyanti W., dan EM. Sutrisna Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta pmuhtadi@gmail.com

## ABSTRAK
Pengujian aktivitas antihiperurisemia secara in vivo dari ekstrak tunggal dan kombinasi ekstrak serta standarisasi  ekstrak  dari  daun  Salam  ( Syzigium  polyanthum Walp)  dan  biji  Jinten  Hitam  ( Nigella  sativa Linn)  telah  dilakukan.  Ekstraksi  daun  Salam  dan  Jinten  Hitam  dilakukan  metode  infundasi.  Ekstrak  dari masing-masing  bahan,    diuji  antihiperurisemia  secara  in  vivo  terhadap  mencit  putih  jantan  galur  Balb-C yang  diinduksi  dengan  potasium  oksonat  dosis  250  mg/kgBB.  Kadar  asam  urat  setelah  pemberian  ekstrak tunggal  daun  Salam  dan  Jinten  Hitam  dosis  200  mg/kgBB  masing-masing  adalah  sebesar  0,640  dan  1,20 mg/dL. Sedangkan kombinasi ekstrak daun Salam-Jinten Hitam adalah sebesar 0,840 mg/dL. Ekstrak Secara keseluruhan berdasarkan hasil pemeriksaan standar umum ekstrak tumbuhan obat, kedua bahan yang diteliti telah memenuhi persyaratan yang dipersyaratkan oleh Badan POM RI
Kata kunci : Syzigium polyanthum Walp, Nigella sativa Linn , antihiperurisemia, standarisasi ekstrak

## ABSTRACT
Determination  of  antihyperuricemia  in  vivo  activity  from  a  single  and  combination  of  aqueous extracts, also standardization of extracts Salam leaves ( Syzigium polyanthum Walp) and Nigella sativa Linn seed has been performed. Antihiperuricemia activity performed on male white mice Balb-C strain induced by potassium oxonate with dose of 250 mg/kg BW. Uric acid content in blood serum after oral administrations single  extract  of  Salam  and  black  cumin  with  a  dose  of  200  mg/kg  BW  were  0.640  and  1.20  mg  /dL, respectively.  While  the  combination  of  extracts  uric  acid  level  was  0.840  mg/dL.  Overall  parameters  on general standard of medicinal plant extracts, both materials under study have met the NFDA requirements.
Keywords: Syzigium polyanthum Walp., Nigella sativa Linn , antihyperuricemia, standardized extract

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara mega  diversity untuk  tumbuhan  obat  di  dunia. Wilayah hutan tropika Indonesia memiliki keanekaragaman  hayati  tertinggi  ke-2  di  dunia setelah  Brasil.  Dari  40.000  jenis  flora  yang  ada  di dunia  sebanyak  30.000  jenis  dijumpai  di  Indonesia dan  940  jenis  di  antaranya  diketahui  berkhasiat sebagai  obat  yang  telah  dipergunakan  dalam pengobatan  tradisional  secara  turun-temurun  oleh berbagai  etnis  di  Indonesia.  Jumlah  tumbuhan  obat tersebut meliputi sekitar 90% dari jumlah tumbuhan obat  yang  terdapat  di  kawasan  Asia  (Puslitbangtri, 1992).
Menurut  Badan  POM  (1991)  ada  283 spesies  tumbuhan  obat  yang  sudah  terdaftar digunakan  oleh  industri  Obat  Tradisional  di Indonesia,  di  antaranya  180  spesies  tumbuhan  obat yang  berasal  dari  hutan  tropika.  Kekayaan  alam Indonesia  telah  terbukti  mampu menghidupi masyarakat penghuninya. Masyarakat lokal memiliki pengertian  yang  dalam  akan  manfaat  berbagai  jenis
tumbuhan  lokal.  Tidak  kurang  dari  400  etnis masyarakat  Indonesia  erat  kehidupannya  dengan alam  dan  memiliki  pengetahuan  tradisional  yang tinggi  dalam  memanfaatkan  tumbuhan  obat  untuk perawatan  kesehatan.  Diantaranya,  yang  mayoritas menggunakan  tumbuhan  obat  untuk  penyembuhan berbagai  macam  penyakit  seperti  malaria,  diare, demam,  sakit  perut,  dan  sakit  kuning  yaitu  etnis Sunda  yang  diketahui  telah  memanfatkan  305  jenis tumbuhan,  etnis  Jawa  memanfaatkan  114  jenis tumbuhan,  etnis  Melayu  mengenal  131  jenis tumbuhan,  dan  etnis  Bali  mengenal  105  jenis tumbuhan (Darusman et al , 2004).
Penyakit  asam  urat  adalah  jenis  artritis yang  sangat  menyakitkan  yang  disebabkan  oleh penumpukan kristal pada persendian, akibat tingginya  kadar  asam  urat  di  dalam  tubuh.  Sendi- sendi  yang  seringkali  diserang  terutama  adalah  jari- jari  kaki,  dengkul,  tumit,  pergelangan  tangan,  jari tangan  dan  siku.  Selain  nyeri,  penyakit  asam  urat juga  dapat  membuat  persendian  membengkak, meradang,  panas  dan  kaku.  Sekitar  90%  penyakit
asam  urat  disebabkan  oleh  ketidakmampuan  ginjal membuang  asam  urat  secara  tuntas  dari  tubuh melalui air seni. Sebagian kecil lainnya karena tubuh memproduksi asam  urat  secara berlebihan. Penyakit asam  urat  kebanyakan  diderita  oleh  pria  di  atas  40 tahun  dan  wanita  yang  telah  menopause.  Penderita asam  urat  biasanya  juga  memiliki  keluhan  lain seperti  tekanan  darah  tinggi,  penyakit  ginjal, diabetes  dan  aterosklerosis.  Separuh  dari  penderita asam  urat  adalah  orang  yang  kegemukan.  Bila dibiarkan,  penyakit  asam  urat  bisa  berkembang menjadi  batu  ginjal  dan  mengakibatkan  gagal  ginja (Martin, 1987).
Hasil  penelitian  pendahuluan,  terbukti bahwa dekokta daun salam pada dosis 1,25 g/kg BB mampu  menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  darah mencit putih jantan secara efektif (Handadari, 2007) dan  infusa  daun  Salam  pada  dosis  2,5  g/kg  BB mampu  menurunkan  kadar  asam  urat  yang  setara dengan  allopurinol  dosis  10  mg/kg  BB  (Ariyanti, 2007).  Aktivitas  biologis  jinten  hitam  yang diantaranya  adalah  antiinflamasi  (Subijanto  & Diding, 2008), antioxidan ( Thippeswamy and Naidu, 2005),  menurunkan  kadar  kalsium  oksalat  dalam urin  (Hadjzadeh et  al ,  2007),  dan  antiartritis  (El Dakhakhny et al , 2006).
Penggunaan  obat  tradisional  (jamu)  di Indonesia  pada  hakekatnya  merupakan  bagian kebudayaan  bangsa  Indonesia.  Keuntungan  dari penggunaan  obat  tradisional  pada  prinsipnya  adalah efek  samping  yang  relatif  kecil  dibandingkan  obat modern.  Meskipun  secara  empiris  obat  tradisional mampu  menyembuhkan  berbagai  macam  penyakit, tetapi  khasiat  dan  kemampuannya  belum  banyak dibuktikan  secara  ilmiah  maupun  klinis.  Selain  itu, belum  banyak  diketahui  senyawa  kimia  apa  yang bertanggung jawab terhadap khasiat obat tradisional tersebut (Wijayakusuma, 2002).
Salah satu tanaman yang banyak digunakan dalam  pengobatan  tradisional  adalah  Jinten  Hitam yang  memiliki  kandungan  kimia  yang  kurang  lebih sama  dengan  salam  meskipun  belum  ada  penelitian tentang  aktivitas  penurunan  terhadap  kadar  asam urat  darah  mencit  putih.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui  aktivitas ekstrak Jinten Hitam dalam menurunkan kadar asam urat darah  mencit putih dan juga penelitian lanjutan untuk  mengungkapkan  ekstrak  daun  salam  dan Jinten  Hitam  sebagai  obat  herbal  terstandar  (OHT) khususnya  dalam  pengobatan  asam  urat,  dengan mengikuti metodologi penelitian yang direkomendasi oleh BPOM RI.

## BAHAN DAN METODE
Uji Praklinis Bahan: Ekstrak air daun salam dan biji Jinten hitam, Potasium oksonat p.a (Aldrich Chemical Company), Allopurinol p.a (Sigma), NaCl 0,9 %, Aquadest dan reagen kit uric acid FS*TBHBA (DyaSys).
Hewan percobaan : mencit putih jantan galur Balb- C  dengan  berat  badan  rata-rata  30-40  gram  dan berumur 2-3 bulan.

## Standarisasi Ekstrak
Bahan: Ekstrak  air  daun  salam  dan  Biji  Jinten hitam,  toluen  p.a,  n-heksana  p.a,  etil  asetat  p.a, aseton  p.a  etanol  p.a,  kloroform  p.a  (merck),  HNO 3 pekat  (merck),  HClO 4 (merck),  HCl  2N,  H 2 SO 4 encer,  folin  ciocalteu  (merck),  Na 2 CO 3 7%,  AlCl 3 10%,  Kalium  Asetat  1  M,  aqua  destilata,  aqua bidestilata (Ikapharmindo), kertas saring (Sartorius), larutan  Pb  dan  Cd  standar  1000  ppm  (merck),  baku aflatoksin  campuran  (B1,B2,G1  dan  G2)  (Sigma Chemical  Company),  asam  galat  p.a  (  Sigma), Quercetin  p.a  (sigma),  plat  silika  gel  GF254 (merck),

## Metode Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  serbuk daun  salam  atau  Jinten  Hitam  direbus  dengan  air sampai  volume  menjadi  separoh  dari  volume  awal, kemudian  disaring  dan  filtrat  dievaporasi  dengan rotary  evaporator (RE)  sehingga  diperoleh  ekstrak kental.  Kemudian  ekstrak  kental  yang  diperoleh dikeringkan dalam Vaccum Dryer dan Vaccum Oven sampai kering.

## Uji Praklinis
1. Pembuatan Hiperurisemia
Kadar  asam  urat  tinggi  (hiperurisemia)  dibuat dengan cara menginjeksikan secara intraperitonial potasium oksonat 250 mg/kg BB atau  5  mg/20  g  BB  pada  mencit  (Zhao et  al ., 2005).
2. Uji Pendahuluan Praklinis Uji  pendahuluan  ini  dilakukan  untuk  tujuan mendapatkan  data  tentang  dosis  ekstrak,  waktu pengambilan  darah,  dan  ekstrak  tunggal  yang aktif dalam menurunkan kadar asam urat.
3. Perlakuan pada Hewan Uji Hewan  uji  dibagi  menjadi  beberapa  kelompok perlakuan,  yaitu  meliputi:  kelompok  kontrol negatif / hiperurisemia (potassium oksonat dosis 250 mg/kgBB), kontrol positif (allopurinol dosis 10 mg/kgBB), ekstrak air daun salam dan Jinten Hitam dosis tunggal (200 mg/kgBB). Pemberian sediaan  uji  dilakukan  satu  jam  setelah  induksi hiperurisemia  (potassium  oksonat  dosis  250 mg/kgBB).
4. Pengambilan Darah Pengambilan  darah  dilakukan  dua  jam  setelah induksi  hiperurisemia  (potassium  oksonat  dosis 250  mg/kgBB),  darah  diambil  lewat  mata mencit  melalui  cabang  vena opthalmicus yang terletak pada saccus medianus orbitales dengan pipa  kapiler.  Darah  ditampung  dalam  tabung ependorf, setelah darah menggumpal disentrifus sehingga didapatkan serum.
5. Penetapan Kadar Asam Urat
Kadar  asam  urat  ditetapkan  berdasarkan  reaksi enzimatik  menggunakan  reagen uric  acid FS* TBHBA.  Serum  darah  yang  telah  dicampur homogen  dengan  pereaksi uric  acid FS* TBHBA  diinkubasi  selama  10  menit  pada  suhu 37º C. Selanjutnya larutan sampel, standart dan blangko dibaca absorbansinya dengan
menggunakan
spektrofotometer StartDust FC*15 pada panjang gelombang 546 nm.

## Standarisasi Ekstrak
Standarisasi  ekstrak  (bahan)  mengikuti prosedur baku berdasarkan Materia Medika Indonesia  dan  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat  yang  direkomendasikan  oleh BPOM  RI,  meliputi  parameter  spesifik  dan  non spesifik.

## Parameter spesifik:
1. Penetapan kadar senyawa larut air. Sebanyak 1,0 g ekstrak  direndam 25,0 mL air- kloroform  LP  selama  24  jam,  disaring. Kemudian  filtrat  diuapkan,  residu  dipanaskan pada suhu 105 o C hingga bobot tetap. Kadar sari larut air dihitung dalam persen terhadap ekstrak awal.
2. Penetapan kadar kandungan total kimia (Chang et al , 2002)
a. Kadar kandungan flavonoid total
Penetapan kandungan total flavonoid
dilakukan secara kolorimetri dengan spektrofotometri  visibel.  Kurva  kalibrasi quercetin  dibuat  dengan  seri  kadar  4;  6;  8; 10;  12;  14  μg/ml.  Absorbansi  larutan standar  dibaca  pada  spektrofotometer  yang sebelumnya  direaksikan  dengan  0,1  ml alumunium klorida 10% dan 0,1 ml kalium asetat  1  M.  Inkubasi  dilakukan  pada  ruang gelap  selama  85  menit  pada  suhu  kamar, absorbansi diukur pada panjang  gelombang 437 nm.
b. Kadar kandungan fenolat total Penetapan  kadar  fenolik  total  dihitung sebagai Gallic  Acid  Equivalent (%).  Kurva kalibrasi  dibuat  dengan  menggunakan  seri konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 μg/ml. Reagen yang  dipakai  adalah  folin  ciocalteu. Absorbansi diukur pada panjang gelombang maksimum 745 nm dengan spektrofotometer.

## Parameter non spesifik (Anonim, 2000)
1. Penetapan bobot penyusutan
Lebih  kurang  timbang  2,0  g  ekstrak  dalam botol timbang dangkal bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 105 0 C selama 30 menit dan hingga bobot tetap.
2. Penetepan kadar air Penetapan  kadar  air  ditetapkan  dengan  cara distilasi  toluene.  Labu  dipanaskan  hati-hati
selama  15  menit,  setelah  toluene  mulai mendidih, penyulingan diatur 2 tetes/detik, lalu 4  tetes/detik.  Setelah  semua  toluene  mendidih. Setelah  lapisan  air  dan  toluene  memisah sempurna,  volume  air  dibaca  dan  dihitung kadar  air  dalam  persen  terhadap  berat  ekstrak semula.
3. Penetapan kadar abu total Lebih kurang 2,0 g ekstrak ditimbang seksama dimasukkan  ke  dalam  krus  silikat  yang  telah dipijarkan, hingga bobot tetap dan ditimbang.
4. Penetapan kadar abu tidak larut asam Hitung  kadar  abu  yang  tidak  larut  dalam  asam terhadap bahan yang telah dikeringkan.
5. Penetapan cemaran aflatoksin Menggunakan  metode  KLT  (Kromatografi Lapis  Tipis)  dengan  membandingkan  baku
aflatoksin campuran.
6. Penetapan  kadar  cemaran  logam  berat  (Pb  dan Cd)
Dengan  metode  digesti  basah  menggunakan asam  nitrat  dan  asam  perklorat  sebagai katalisator.  Kadar  Pb  dan  Cd  dibaca  dengan metode spektrofotometri Serapan Atom.

## Uji Kandungan Kimia Ekstrak (Depkes RI, 1978)
1. Uji Pendahuluan a. Uji alkaloid Reaksi Meyer dan Bouchardat
b. Uji Fenolik
c. Uji Flavonoid (Uji Taubeck)
2. Profil KLT
Larutan  10  %  ekstrak  dalam  aseton  di  KLT menggunakan  fase  diam:  silika  gel  GF 254 dengan  dielusi  fase  gerak:  n-heksana  :  etil asetat  (9  :  1),  deteksi  dengan  lampu  UV  254 nm dan 366 nm.
Masing-masing  analisis  parameter  tersebut, mengikuti prosedur yang telah disarankan oleh BPOM RI.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Uji Pendahuluan
Uji pendahuluan dilakukan untuk mengetahui  bagaimana  model  hiperurisemia  pada mencit  putih  jantan,  yaitu  dengan  mencari  dosis efektif  potasium  oksonat  dalam  menaikkan  kadar asam urat dari kondisi normal.
Tabel 1- Data uji pendahuluan pembuatan model hiperurisemia Perlakuan Kadar Asam Urat (mg/dL) Rata-rata SD Kontrol normal (Tanpa Perlakuan) 1.3 1.433 0.231 1.7 1.3 Potasium oksonat Dosis 250 mg/kgBB 3.1 3.067 0.950 4 2.1
Mencit  dikatakan  hiperurisemia  jika  kadar asam  urat  darahnya  berkisar  antara  1,7-3,0  mg/  dL.
Hasil  uji  pendahuluan  tersebut  menunjukkan  bahwa dengan potassium dosis 250 mg/kg BB telah mampu menaikkan  kadar  asam  urat  mencit  yaitu  dari  kadar normal dengan rata-rata 1,433 mg/dL menjadi 3,067 mg/kg  BB.  Secara  statistik  kadar  asam  urat kelompok  kontrol  dan  kelompok  potassium  oksonat sangat  berbeda  signifikan  yaitu  dengan  nilai signifikansi sebesar 0,205 (p > 0,05).

## Hasil Uji Praklinik dari Ekstrak
Hewan  uji  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  mencit  putih  jantan  ( Mus  muculus )  yang memiliki  enzim  urikase  yang  dapat  memecah  asam urat dengan membentuk produk akhir allantoin yang bersifat mudah larut dalam air (Martin, 1987). Untuk memperkecil variasi biologis, maka peneliti melakukan pengendalian terhadap beberapa variabel antara  lain  dengan  cara  menggunakan  hewan  uji yang  kurang  lebih  sama  variasi  biologisnya  yaitu diantaranya  dengan  berat  badan  sekitar  30  –  40 gram,  umur  2-3  bulan,  galur  Balb-C,  jenis  kelamin jantan  dan  diperlakukan  sama  yaitu  ditempatkan dalam  kandang  dengan  jumlah  tiap  kandangnya sama  dan  diberi  makanan  yang  sama  serta  sebelum diberi  perlakuan  hewan  uji  dipuasakan  terlebih dahulu  selama  ±  2  jam  dengan  tetap  diberi  minum ad libitum . Hal ini dilakukan agar kondisi hewan uji sama  dan  untuk  mengurangi  pengaruh  makanan yang  dikonsumsi  terhadap  sediaan  uji  yang diberikan  dalam  penelitian.  Dan  untuk  mengurangi tingkat  kestresan  hewan  uji  diadaptasikan  dengan kondisi laboratorium selama 7 hari.
Pemilihan  jenis  kelamin  jantan  lebih didasarkan  pada  pertimbangan  bahwa  mencit  jantan tidak  mempunyai  hormone  estrogen,  jikalaupun  ada hanya  dalam  jumlah  yang  relative  sedikit  serta kondisi  hormonal  pada  jantan  lebih  stabil  jika dibandingkan  dengan  mencit  betina  karena  pada mencit  betina  mengalami  perubahan  hormonal  pada masa-masa  tertentu  seperti  pada  masa  siklus  estrus, masa  kehamilan  dan  menyusui  dimana  kondisi tersebut  dapat  mempengaruhi  kondisi  psikologis hewan  uji  tersebut.  Selain  itu  tingkat  stress  pada mencit  betina  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan mencit  jantan  yang  mungkin  dapat  mengganggu pada saat pengujian.
Potasium oksonat digunakan sebagai induktor  hiperurisemia  karena  potasium  oksonat merupakan inhibitor  urikase yang  kompetitif  untuk meningkatkan  kadar  asam  urat  dengan  jalan mencegah  perubahan  asam  urat  menjadi  allantoin. Dimana  allantoin  bersifat  larut  air  dan  dapat diekskresi lewat urin, sehingga dengan dihambatnya enzim rikase oleh potassium oksonat maka asam urat akan tertumpuk dan tidak tereliminasi dalam bentuk urin.
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah allopurinol yaitu salah satu obat pirai atau gout yang sering  digunakan  dalam  pengobatan.  Allopurinol merupakan satu-satunya urikostatikum  yang saat ini digunakan  secara  terapeutik,  yang  bekerja  untuk
mengurangi  pembentukan  asam  urat.  Sedangkan yang  bekerja  untuk  meningkatkan  eliminasi  asam urat disebut urikosurika (Mutschler, 1991). Allopurinol merupakan substrat ksantin oksidase dan dieliminasi melalui ginjal terutama sebagai oksipurinol (sering juga disebut dengan istilah  yang salah  yaitu  aloksantin)  (Schunack et  al ,  1990). Allopurinol  maupun  oksipurinol,  menghambat ksantin  dan  asam  urat,  dimana  dalam  dosis  rendah mekanisme penghambatan berlangsung secara kompetitif  dan  dalam  dosis  tinggi  bekerja  secara tidak  kompetitif.  Allopurinol  yang  memiliki  waktu paroh  dalam  plasma  sekitar  40  menit,  dihidrolisis oleh ksantin oksidase menjadi metabolit (Mutschler, 1991).  Metabolit  allopurinol-1-ribonukleotida,  yang dapat  dinyatakan  kecil  dalam  ekstrak  organ, mungkin bertanggung jawab untuk inhibisi tambahan  dari  sintesis de  novo purin  (Schunack et al ,  1990).  Melalui  penghambatan  ksantin  oksidase maka  hipoksantin  dan  ksantin  diekskresi  lebih banyak  dalam  urin  sehingga  kadar  asam  urat  dalam darah dan urin menurun (Mutschler, 1991).
Sediaan uji yang digunakan untuk menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  penelitian  ini adalah ekstrak air dari daun  salam dan jinten hitam. Metode  penyarian  yang  digunakan  adalah  ekstraksi dengan  pelarut  air,  dimana  metode  tersebut  mirip dengan  penggunaan  bahan  nabati  sebagai  obat tradisional  (jamu)  yaitu  dengan  merebus  bahan  dan mengambil  konsentratnya  untuk  diminum  sehingga kesetaraan perlakuan secara tradisional dan perlakuan  dalam  penelitian  identik.  Bedanya  dalam penelitian  ini  konsentrat  yang  diperoleh  setelah perebusan  diuapkan  dalam vacuum  dryer sampai tebentuk ekstrak kering.
Penetapan  kadar  asam  urat  ditetapkan dengan  metode  enzimatik  dengan  menggunakan reagen Uric  acid FS*TBHBA  ( 2,4,6-tribromo- 3hydroxybenzoic  acid )  dengan  menggunakan  alat spektrofotometer StarDust  FC  15 .  Mekanisme  yang terjadi  adalah  asam  urat  dioksidasi  oleh  enzim urikase  dengan  bantuan  H 2 O  dan  O 2 menjadi allantoin,  karbondioksida  dan  hidrogen  peroksida. Hidrogen peroksida yang terbentuk akan
bereaksi  dengan  4-aminoantipirin  dan  TBHBA menjadi  kuinonimin  yang  berwarna  merah  muda dimana  reaksi  tersebut  dikatalisis  oleh  enzim peroksidase  (POD).  Besarnya  intensitas  warna  yang dihasilkan  oleh  kuinonimin  tersebut  ekuivalen dengan  kadar  asam  urat  dalam  darah.  Mekanisme reaksi tersebut dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar  1- Mekanisme  Reaksi  Pembentukan  Senyawa Kuinonimin (Schunack et al. , 1990)
Data  kadar  asam  urat  dalam  serum  mencit setelah  diinduksi  dengan  potasium  oksonat  dan pemberian  sediaan  uji  ekstrak  dosis  tunggal  200 mg/kgBB tersaji pada Tabel 2.
Tabel 2- Kadar Asam Urat Dalam Serum Setelah Perlakuan dengan Ekstrak dan Persen Penuruanannya
Kelompok Perlakuan Kadar Asam Urat (n=5) + SD mg/ dL Persentase Penurunan (%) Kontrol Negatif (Potasium Oksonat 250 mg/kgBB) 3,100 + 0,346* - Kontrol Positif (Allopurinol 10 mg/kgBB) 0,200 + 0,100 93,55 Ekstrak Daun Salam (200 mg/kgBB) 0,640 + 0,167 79,35 Ekstrak Biji Jinten hitam (200 mg/kgBB) 1,200 + 0,561* 61,29 Ekstrak  Salam – Jinten hitam (200 mg/kgBB) 0,840 + 0,358* 72,90
keterangan * : menunjukkan perbedaan signifikan terhadap kontrol positif p< 0,05
Berdasarkan  Tabel  2.  maka  allopurinol, ekstrak daun salam, Jinten Hitam maupun kombinasi ekstrak salam dan Jinten Hitam mampu menurunkan kadar  asam  urat  dalam  darah  mencit  putih  jantan galur  Balb-C  jika  dibandingkan  dengan  kontrol negatif (Potasium oksonat). Hasil uji anova terhadap kadar asam urat dari kelompok hewan uji didapatkan bahwa kadar asam urat antara kontrol positif dengan kontrol positif, ekstrak jinten dan kombinasi ekstrak menununjukkan perbedaan signifikan. Namun kelompok perlakuan ekstrak daun salam menunjukkan  perbedaan  yang  tidak  signifikan, sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  kemampuan menurunkan  kadar  asam  urat  antara  alopurinol dengan ekstrak daun salam adalah sama.
Sedangkan  setelah  dikombinasikan  ekstrak Salam-Jinten  Hitam  penurunan  yang  dihasilkan hampir sama dengan penurunan oleh ekstrak tunggal
Salam meskipun masih lebih rendah penurunan yang dihasilkan  oleh  ekstrak  tunggal  daun  salam.  Oleh karena  itu  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  Jinten Hitam kurang poten dalam  menurunkan  kadar asam urat  darah  mencit  putih  jantan  jika  dibandingkan dengan ekstrak tunggal daun salam.

## Hasil dan Pembahasan Uji Standarisasi Ekstrak
Parameter standarisasi ekstrak yang dilakukan  antara  lain  meliputi  analisis  non-spesifik yaitu  analisis  susut  pengeringan,  bobot  jenis,  kadar air,  kadar  abu,  cemaran  aflatoksin,  cemaran  logam berat,  dan  analisis  spesifik  yang  meliputi  identitas ekstrak, senyawa terlarut dalam pelarut tertentu, juga uji  kandungan  kimia  ekstrak.  Hasil  uji  standarisasi ekstrak daun  salam  selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3- Hasil pengujian standarisasi ekstrak parameter non-spesifik
Ekstrak Parameter non-spesifik Susut pengeringan Kadar air Kadar abu Kadar abu tidak larut asam Cemaran logam berat (µg/kg) Cemaran aflatoksin Salam 12,287 6,733 28,537 22,110 2,782    (Pb) Ttd        (Cd) ttd Biji Jinten hitam 14,969 7,100 7,147 5,374 6,405    (Pb) 0,0096  (Cd) ttd
Keterangan: ttd: tidak terdeteksi
Tabel 4- Hasil pengujian standarisasi ekstrak parameter spesifik
Ekstrak Parameter spesifik Sari larut air Fenolat total Flavonoid total
Salam 64,656 1,083 0,196 Biji Jinten hitam 28,651 0,664 0,400 Senyawa Identitas
Senyawa identitas : Fluoretin (Salam) dan Luteolin (Biji Jinten hitam)
Rumus bangun :
Gambar 3 - Rumus bangun dari Fluoretin
Gambar 4 - Rumus bangun dari Luteolin
Pola Kromatogram KLT Ekstrak
a. Ekstrak Daun Salam Fase gerak : n-Heksana – etil asetat ( 9 : 1 ) Fase diam :  Silika  gel  GF 254, jarak elusi 5 cm Larutan uji : 10 % dalam aseton Volume penotolan : Totolkan 20 µL Larutan Uji S : Sampel ekstrak Daun Salam Rf  sampel 0,55 pada:
1. UV 254, pemadaman
2. UV  366,  tampak  berfluoresensi  kuning
b. Ekstrak Biji Jinten hitam
Fase gerak : n-Heksana – etil asetat ( 9 : 1 ) Fase diam : Silika gel GF 254, jarak elusi 5 cm Larutan uji : 10 % dalam aseton Volume penotolan : Totolkan 20 µL Larutan Uji
S : Sampel ekstrak Biji Jinten hitam
Rf  sampel 0,76 pada:
1. UV 254, pemadaman
2. UV 366, tampak berfluoresensi kuning

## KESIMPULAN
1. Berdasarkan data uji praklinik antihiperurisemia,  ekstrak  daun  Salam  dan Jinten  Hitam  dan  kombinasinya  dengan  dosis tunggal  200  mg/kgBB  terbukti  berpotensi menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  darah mencit putih jantan galur Balb-C yang dinduksi potassium oksonat dengan prosentase penurunan kadar asam urat berturut-turut adalah kurang  lebih  sebesar  79,35%,  61,29%  dan 72,90%.  Sedangkan  penurunan  oleh  allopurinol sebesar 93,55%.
2. Hasil standarisasi ekstrak air daun salam adalah parameter  kadar  fenolat  total  dalam  ekstrak daun Salam sebesar 1,083% dan total flavonoid kadarnya  sebesar 0,196%.  Dan hasil esktrak air Jinten Hitam kadar fenolat total sebesar 0,664% dan kadar flavonoid total sebesar 0,400%.
3. Senyawa  identitas  dari  ekstrak  daun  salam adalah fluoretin sedangkan ekstrak Jinten Hitam adalah  luteolin.  Perbedaan  senyawa  aktif tersebutlah yang membedakan potensiasi
S S
Gambar 5 - Profil KLT
Gambar 6 - Profil KLT
penurunan  kadar  asam  urat  darah  mencit  putih jantan.  Dari  hasil  yang  diperoleh  lebih  poten senyawa fluoretin dari ekstrak daun salam.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada DP2M  Dikti  yang  telah  memberikan  bantuan  dana
penelitian RAPID tahun 2010, Rektor dan Pimpinan LPPM  UMS  yang  memfasilitasi  pelaksanaan  dan penyelesaian  penelitian,  serta  mitra  UMKM  CV. Almanar  Herbafit  yang  bersedia  bekerjasama  dan memproduksi OHT hasil penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat , Dirjen POM Depkes RI, Jakarta.
Ariyanti,  R.,  2007,  Pengaruh  Pemberian    Infusa  Daun  Salam (Eugenia  polyantha Wight .) Terhadap Penurunan  Kadar  Asam  Urat  dalam  Darah  Mencit  Putih  Jantan  hiperurisemia, Skripsi ,  Fakultas  Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Chang, C., Yang, M., Wen, H., Chern, J., 2002, Estimation of Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Methods, Journal of Food and Drug Analysis , Vol. 10, No. 3, 178-182.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1978. Materia Medika Indonesia . Jilid 4.  Jakarta. 109-111.
Hadjzadeh,  M  A  R.,  Khoei,  A.,  Hadzadeh,  Z.,  Parizady,  M.,  2007,  Ethanolic  Extract  of Nigella  sativa L Seeds on Ethylene Glycol-Induced Kidney Calculi in Rats, Urology Journal , 4 (2),86-90
Handadari, H. R., 2007, Efek Decocta Daun Salam ( Eugenia polyantha Wight.) Terhadap Penurunan Kadar Asam  Urat  dalam  Darah  Mencit  Putih  ( Mus  muculus )  Jantan  hiperurisemia, Skripsi ,  Fakultas  Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
El  Dakhakhny,  M.,  Darwish,  I  E.,  El  Sakkar,  M  G.,  and  Gumei,  A  A.,  2006,  Role  of Nigella  sativa Oil, Thymoquinone  With  and  Without    Pyrimethamine  in  Freund’s  Adjuvant  Arthritis  in  Rat, Bull.  Alex.Fac. med .,42(1), 191-197
Martin,  D.  W.,  1987, Metabolisme  Nukleotida  Purin  dan  Pirimidin  dalam  Biokimia  Harper ,  Edisi  20, diterjemahkan oleh Darmawan, Iyan, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Mutschler, E., 1991, Dinamika Obat, Buku Ajar Farmakologi dan Toksikologi , Edisi Kelima, ITB, Bandung, 217-221.
Schunack, W., Mayer, and K., Manfred, H., 1990, Senyawa Obat Kimia Farmasi , diterjemahkan oleh Joke, Witlmena dan Soebita, S., Gajah Mada University Press, Yogyakarta.
Subijanto,  A  A.,  &  Diding,  H  P.,  2008,  Pengaruh  Minyak  Biji  Jinten  Hitam  ( Nigella  Sativa L.)  terhadap Derajat Inflamasi Saluran Napas, Majalah Kedokteran Indonesia ,58(6); 200-204
Thippeswamy, N B., & Naidu, K A., 2005, Antioxidant potency of cumin varieties—cumin, black cumin and bitter cumin—on antioxidant systems, Eur Food Res Technol (220); 472–476
Wijayakusuma,  H.,  2002, Tumbuhan  Berkhasiat  Obat  Indonesia  Rempah,  Rimpang  dan  Umbi. Prestasi Instan Indonesia, Jakarta.