Efektivitas Penggunaan Ozon Untuk Dekontaminasi Mikroba Pada Simplisia Herba  Sambiloto  ( Andrographis  paniculata (Burm.f.)  Nees)  di  Pasar Bringharjo Dengan Pengujian Angka Lempeng Total (ALT) dan Angka Kapang Khamir (AKK)
Effectiveness of Using Ozone for Microbial Decontamination on the Herba Simplicia Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) at Bringharjo Market by Testing Total Plate Count (TPC) and Total Yeast and Mold Count (TYMC)
Agnesia Cempaka 1 , Yosi Bayu Murti 2,3* , Indah Purwantini 2,3
1 Magister Ilmu Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
2 Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
3 Pusat Riset Tumbuhan Obat dan Bahan Alam, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada Corresponding author: Yosi Bayu Murti: Email: yosibayu.murti@ugm.ac.id
Submitted: 02-01-2024 Revised: 19-01-2024 Accepted: 22-01-2024

## ABSTRAK
Indonesia  secara  geografis  terletak  pada  daerah  tropis  yang  memiliki  kelembaban  relatif tinggi. Kelembaban yang tinggi dapat meningkatkan risiko kontaminasi mikroba. Mikroba tumbuh subur  pada  lingkungan  yang  memiliki  kadar  air  tinggi.  Produk  simplisia  merupakan  salah  satu produk  yang  dapat  terkontaminasi  pada  kondisi  tersebut.  Simplisia  sebagai  bahan  baku  obat tradisional/obat herbal biasanya disimpan dalam waktu yang cukup lama sebelum digunakan pada proses pembuatan obat. Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) merupakan tanaman yang  sering  digunakan  untuk  bahan  baku  obat  herbal.  Dekontaminasi  menggunakan  ozon merupakan  metode  untuk  menghilangkan  kontaminan  mikroba.  Dalam  penelitian  ini  dilakukan perlakuan  ozon  pada  50  g  sampel  herba  sambiloto  dilakukan  dengan  kekuatan  10  g/h  dengan interval 0; 30; 60; 90 dan 120 menit. Efektivitas ozon diukur dengan melakukan uji Angka Lempeng Total  (ALT)  dan  Angka  Kapang  Khamir  (AKK)  pada  sampel  yang  diberikan  perlakuan  dan  tanpa perlakuan (kontrol). Dekontaminasi mikroba menggunakan ozon 30;  60; 90;  dan 120 menit pada simplisia  herba  sambiloto  dapat  menurunkan  persentase  nilai  ALT  berturut-turut  sebesar  88%; 99%;  99,6%  dan  100%,  sedangkan  untuk  persentase  penurunan  nilai  AKK  berturut-turut  adalah 33%; 67%; 100% dan 100%.
Kata kunci: ozon; dekontaminasi mikroba; simplisia; Andrographis paniculata

## ABSTRACT
Indonesia is geographically located in a tropical region with a relatively high level of humidity. High  humidity  can  increase  the  risk  of  microbial  contamination,  as  microorganisms  thrive  in environments with high water content. Simplicia is one of the products that can be contaminated under  such  conditions.  Simplicia,  as  a  raw  material  for  traditional  medicine/herbal  medicine,  is typically  stored  for  a  considerable  amount  of  time  before  being  used  in  the  drug  manufacturing process.  Sambiloto (Andrographis  paniculata  (Burm.f.)  Nees) is  a  plant  commonly  used  as  a  raw material  for  herbal  medicine.  Ozone  decontamination  is  a  method  used  to  eliminate  microbial contaminants. In this study, ozone treatment was applied to 50 g sample of  sambiloto herbs at a strength of 10 g/h, with intervals of 0, 30, 60, 90, and 120 minutes. The effectiveness of ozone was measured by conducting tests for Total Plate Count (TPC) and Total Mold and Yeast Count (TMYC) tests on treated and untreated samples (control). The decontamination of microbes using ozone for 30; 60; 90; and 120 minutes on sambiloto herb simplicia can reduce the percentage of TPC values successively  by  88%,  99%,  99.6%,  and  100%,  meanwhile,  for  the  percentage  reduction  of  TMYC values successively is 33%, 67%, 100%, and 100%. Keywords: ozon; microbial decontamination; simplicia; Andrographis paniculate

## Efektivitas Penggunaan Ozon Untuk Dekontaminasi Mikroba Pada Simplisia

## PENDAHULUAN
Penggunaan  obat  dari  bahan  alam  sudah  dilakukan  sejak  zaman  nenek  moyang  bangsa Indonesia.  Perkembangan  sediaan  obat  dari  bahan  alam  semakin  berkembang  dan  meluas  di berbagai  kalangan  masyarakat.  Perkembangan  ini  didukung  dengan  keaneka  ragaman  hayati Indonesia yang merupakan negara yang berada di daerah tropis.
Kondisi wilayah tropis memiliki keuntungan yaitu tingginya keaneka ragaman hayati. Namun, hal  tersebut  menimbulkan  masalah  tersendiri  yaitu  kelembaban  yang  tinggi  yang  dapat meningkatkan  jumlah  kontaminasi  mikroba.  Kelembaban  optimum  yang  dibutuhkan  oleh  bakteri untuk hidup yaitu di atas 85%, pada kelembaban di bawah 85% maka bakteri mengalami penurunan daya  tahan.  Oleh  karena  itu,  semakin  lembab  kondisi  udara  akan  menyebabkan  semakin  banyak partikel  air  yang  dapat  membawa  sel-sel  bakteri  yang  berada  di  permukaan  bergerak  ke  udara (Ginting et al., 2022).
Penjaminan mutu obat tradisional diperlukan untuk menjaga khasiat dan keamanan produk. Dalam Peraturan Badan Pengawas Obat dan Makanan Nomor 32 Tahun 2019 tentang Persyaratan Keamanan  dan  Mutu  Obat  Tradisional,  dipersyaratkan  pada  simplisia  (dalam  bentuk  rajangan maupun serbuk) mengenai batas cemaran yang diterima, yakni: Angka Lempeng Total (ALT) ≤ 5 x 10 7 koloni/g dan Angka Kapang Khamir (AKK) ≤ 5 x 10 5 koloni/g.
Upaya mengurangi kontaminasi mikroba dapat dilakukan dengan berbagai metode. Upaya yang biasa  digunakan  untuk  mengurangi  kontaminasi  pada  simplisia  diantaranya  dengan  melakukan pencucian,  pengeringan,  dan  pengemasan,  namun  pada  saat  simplisia  telah  disimpan  beberapa waktu,  akan  tetap  ada  pertumbuhan  mikroba.  Dekontaminasi  pada  simplisia  tersebut  diperlukan sebelum digunakan sebagai bahan baku obat herbal.
Metode  pencucian  simplisia  dapat  digunakan  untuk  proses  dekontaminasi,  namun  terdapat beberapa  kelemahan  dalam  metode  pencucian  ini,  yaitu  membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama, karena setelah dicuci perlu dikeringkan kembali, selain itu membutuhkan biaya yang besar untuk proses pencucian dan pengeringannya.
Dewasa ini dikembangkan metode dekontaminasi produk pertanian dengan menggunakan gas ozon. Metode dekontaminasi mikroba menggunakan gas ozon ini terbukti efektif dalam mereduksi jumlah mikroba yang ada pada produk pertanian dan pangan. FDA (Food and Drug Administration US) telah memberikan izin terhadap penggunaan ozon sebagai agen anti-mikrobial pada makanan (Rice & Graham, 2001).
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Cabello et  al., (2021)  diketahui  bahwa  ozon  dapat digunakan untuk mendekontaminasi mikroba pada produk pangan yaitu bee polen . Pada penelitian tersebut diberikan paparan ozon selama 30 menit dan 60 menit pada bee polen hasilnya diketahui bahwa  perlakuan  ozon  dapat  mengurangi  kontaminasi  bakteri  Enterobacteriaceae  80,0 – 90,9%; bakteri aerob mesofilik 69,1 – 83,1%, dan 89,4 – 89,5% kapang-khamir. Selain itu produk bee polen yang  dihasilkan  aman  untuk  dikonsumsi  manusia,  dan  komposisi  polifenolnya  pun  dapat dipertahankan dengan baik.
Penelitian yang pernah ada, diantaranya adalah penelitian dekontaminasi dengan ozon yang dilakukan terhadap sampel buah-buahan yaitu stroberi dan rasberi yang dilakukan oleh  Bialka & Demirci (2007), diketahui bahwa stroberi dan rasberi yang telah dikontaminasi secara artifisial oleh Salmonella dan E. coli setelah diberi perlakuan ozon, terjadi pengurangan jumlah koloni Salmonella sebesar 3,98 x 10 2 CFU/g dan sebesar E. coli 9,12 x 10 2 CFU/g pada stroberi dan pada raspberry, pengurangan Salmonella sebesar 3,55 x  10 3 dan sebesar 5,6 x 10 3 diperoleh untuk E. coli . Pengamatan dosis perlakuan ozon yang diperlukan sebagai agen dekontaminan yang pernah ada yaitu penelitian yang dilakukan oleh (Farajzadeh et al., 2013)  pada buah kurma, Penelitian ini menunjukkan bahwa perlakuan ozon dengan kekuatan 5 g/h selama 3 jam; 5 g/h selama 5 jam; 10 g/h selama 3 jam; dan 10 g/h selama 5 jam menghasilkan penurunan sekitar 25%, 25%, 53%, dan 46% angka kapang dan khamir pada kurma, serta penurunan sekitar 6%, 9%, 76%, dan 74,7% pada bakteri. Konsentrasi dan durasi ozon yang tepat dapat mengurangi mikroba pada kurma adalah 10 g/h selama 3 jam.
Produk makanan relatif lebih rendah jumlah kontaminannya dibandingkan dengan simplisia, oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  penelitian  dekontaminasi  ozon  pada  produk  simplisia.  Herba sambiloto merupakan bahan baku obat tradisional/obat herbal yang sering digunakan pada proses
produksi obat. Kontaminasi pada simplisia herba sambiloto ini rentan terjadi, sehingga sambiloto dapat digunakan untuk mengukur efektivitas ozon dalam mengeliminasi mikroba. Pengujian yang diperlukan  untuk  mengukur  efektivitas  dekontaminasi  ozon  adalah  dengan  mengukur  Angka Lempeng Total (ALT) dan Angka Kapang Khamir (AKK) pada sampel sebelum dan setelah perlakuan ozon  untuk  mengetahui  kemampuannya  dalam  mendekontaminasi  cemaranbaktaeri  pada  herba sambiloto.
Berdasarkan  paparan  di  atas,  meminimalkan  cemaran  mikroba  menggunakan  ozon  pada simplisia diharapkan dapat menjadi alternatif metode dekontaminasi yang lebih efektif dan cepat karena  tidak  memerlukan  pencucian  dan  pengeringan  kembali;  lebih  murah  karena  tidak memerlukan penggunaan cairan kimia tertentu namun hanya membutuhkan ruangan yang besar dan ozon generator; serta aman bagi simplisia yang akan digunakan sebagai bahan baku obat.
Metode dekontaminasi simplisia dengan ozon diharapkan dapat diterapkan pada Usaha Kecil Obat  Tradisional  (UKOT),  Usaha  Menengah  Obat  Tradisional  (UMOT),  Industri  Obat  Tradisional (IOT) maupun pelaku penyedia simplisia. Metode dekontaminasi ozon ini merupakan metode yang sederhana  dengan  biaya  modal  maupun  operasional  yang  terjangkau,  karena  hanya  memerlukan ruangan dan ozon generator, selain itu cara mengoperasikannya juga relatif mudah.

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental yang dan dilaksanakan pada Laboratorium Advanced  Pharmaceutical  Sciences  Learning  Center  (APSLC) dan  Laboratorium  Mikrobiologi  dan Biologi Sel, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada. Variabel bebas dalam penelitian yaitu lama paparan ozon pada simplisia herba sambiloto. dan tempat pengambilan sampel. Variabel tergantung pada  penelitian  ini  adalah  Angka  Lempeng  Total  (ALT),  Angka  Kapang  Khamir  (AKK)  serbuk simplisia sebelum  perlakuan dan setelah  perlakuan. Variabel terkontrol pada penelitian ini yakni power atau kekuatan yang digunakan ozon generator, ketebalan sampel ketika dekontaminasi dan ukuran kompartemen ozon.
Sampel  yang  digunakan  yaitu  herba  sambiloto  yang  dibeli  dari  Pasar  Beringharjo,  Kota Yogyakarta, Provinsi Daerah Istimewa Yogyakarta, Indonesia. Herba sambiloto yang sudah disortasi kemudian  diberikan  perlakuan  ozon.  dengan  kekuatan  ozon  generator  10  g/h  untuk  sampel sebanyak 50 g selama 0; 30; 60; 90 dan 120 menit. Proses dekontaminasi dihitung saat kondisi alat ozon generator mencapai konsentrasi yang sudah  stabil yaitu 2 jam dari waktu dinyalakan. Simplisia dihaluskan dengan blender agar menjadi serbuk. Serbuk simplisia disimpan pada plastik klip yang dilengkapi silica gel pack di dalam lemari es sebelum dilanjutkan dengan pengujian ALT dan AKK. Uji  AKK  dan  ALT  menggunakan  serial  pengenceran  dengan  lima  kali  pengenceran,  yaitu pengenceran 10 -1 hingga10 -5 dan setiap pengenceran dilakukan tiga kali replikasi. Sampel serbuk ditimbang sebanyak 1 g dan dimasukkan ke tabung reaksi pertama, ditambahkan 9 ml pengencer saline water , lalu encerkan sesuai dengan serial pengencerannya. Sampel diinokulasikan ke dalam cawan petri menggunakan spreader sebanyak 100 µL. Media yang digunakan pada AKK yaitu PDA (Potato Dextrose Agar) yang ditambahkan antibiotik kloramfenikol 50 mg/L . Cawan petri diinkubasi pada  suhu  25⁰  C  selama  4  hari  pada  posisi  terbalik.  Pada  pengujian  ALT,  media  yang  digunakan adalah Tryptic Soy Agar (TSA) . Cawan petri di inkubasi pada suhu 36⁰ C selama 24 jam dengan posisi cawan  petri  terbalik.  Pada  uji  ALT  maupun  AKK  dilakukan  uji  sterilitas  media  dan  uji  sterilitas pengencer. Pada cawan kontrol pengencer diberi media dan pengencer saline water (uji sterilitas pengencer). Pada cawan kontrol media hanya diberikan media saja (uji sterilitas media).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian Angka Lempeng Total (ALT) pada herba sambiloto menunjukkan bahwa pada  sampel yang diperoleh dari Pasar Bringharjo, menunjukkan bahwa terjadinya penurunan Angka Lempeng Total hingga 0 CFU/g pada perlakuan ozon 120 menit (Tabel I). Sebelum perlakuan ozon, sampel menunjukkan nilai ALT yaitu 24.900 CFU/g (Gambar 1), setelah diberi perlakuan ozon 30 menurun sebanyak 88% menjadi 3.000 CFU/g (Gambar 2). Pada perlakuan ozon selama 60 menit  diketahui terjadi penurunan Angka Lempeng Total sebanyak 99%. Pada perlakuan 90 menit menurunkan nilai ALT sebesar 99,6% dan pada perlakuan120 menit memberikan efek penurunan Angka Lempeng

## Efektivitas Penggunaan Ozon Untuk Dekontaminasi Mikroba Pada Simplisia
Gambar 1. Nilai Angka Lempeng Total Simplisia Sambiloto Selama Perlakuan Ozon Tabel I. Nilai Angka Lempeng Total (ALT) Simplisia Herba Sambiloto Selama Perlakuan Ozon
Pengenceran Jumlah Koloni Rata-Rata ALT (koloni/g) Cawan A Cawan B Perlakuan Ozon 0 menit 10 −1 257 241 249 24.900 10 −2 3 1 2 10 −3 1 3 2 10 −4 0 1 1 10 −5 0 0 0 Total Nilai ALT (koloni/g) 24.900 Perlakuan Ozon 30 menit 10 −1 30 30 30 3.000 10 −2 8 5 7 10 −3 0 1 1 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai ALT (koloni/g) 3.000 Perlakuan Ozon 60 menit 10 −1 3 3 3 300 10 −2 2 0 1 10 −3 0 3 2 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai ALT (koloni/g) 300 Perlakuan Ozon 90 menit 10 −1 1 1 1 100 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai ALT (koloni/g) 100 Perlakuan Ozon 120 menit 10 −1 0 0 0 0 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0
0
Total Nilai ALT (koloni/g)
0
24900 3000 300 100 0 0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 0' 30' 60' 90' 120' N ilai A LT Lama Perlakuan Ozon (menit)
Total hingga 100%. Dalam hal ini, Angka Lempeng Total pada perlakuan 120 menit tidak ditemukan adanya koloni bakteri.
Terlihat  pada  Gambar  3  bahwa  pada  cawan  perlakuan  ozon  0  menit  terlihat  banyak  koloni mikroba yang tumbuh pada media, sedangkan pada cawan yang berisi sampel perlakuan ozon 30 menit hingga 90 menit, tampak jumlah koloni mikroba yang semakin sedikit, hingga akhirnya pada perlakuan ozon 120 menit, koloni mikroba sudah tidak ditemukan lagi.
Pada penetapan nilai Angka Kapang Khamir diketahui bahwa jumlah angka kapang khamir yang awalnya  pada  perlakuan  0  menit  terdapat  150  koloni  kapang  dan  khamir,  setelah  mendapat perlakuan  ozon,  terjadi  penurunan  menjadi  100  koloni  (Tabel  II)  atau  terjadi  penurunan  jumlah angka kapang khamir sebanyak 33% (Gambar 5). Pada perlakuan ozon 60 menit diketahui terjadi penurunan jumlah koloni menjadi 50 atau sebesar 67% dibandingkan dengan AKK pada perlakuan 0 menit. Penurunan AKK tertinggi, yaitu 100% terjadi pada perlakuan ozon 90 menit dan 120 menit, atau sudah tidak ditemukan lagi koloni yang tumbuh.
Pada  Gambar  6,  cawan  perlakuan  ozon  0  menit  terlihat  memiliki  jumlah  koloni  kapang  dan khamir yang relatif lebih banyak dibandingkan pada cawan perlakuan ozon 30 menit. Pertumbuhan koloni  kapang  maupun  khamir  pada  cawan  perlakuan  30  menit  hingga  90  menit  terlihat  jumlah koloni kapang khamir yang semakin sedikit, hingga akhirnya pada perlakuan ozon 120 menit, koloni kapang khamir sudah tidak ditemukan pada media.
Terdapat perbedaan waktu yang diperlukan dalam mencapai hasil 0 CFU/g pada koloni uji ALT dan  AKK,  yaitu  pada  ALT  diperlukan  waktu  paparan  selama  120  menit  sedangkan  pada  AKK diperlukan 90 menit paparan ozon dengan kekuatan yang sama yaitu 10 g/h. Perbedaan lama waktu paparan ozon yang diperlukan untuk menginaktivasi mikroba ini dipengaruhi beberapa faktor, yaitu faktor  intrinsik  (jumlah  awal  mikroba;  karakteristik  dari  strain  mikroba  yang  berbeda;  keadaan fisiologis sel mikroorganisme; dan asal mikroorganisme alami atau yang diinokulasi secara artifisial) dan  faktor  ekstrinsik  (jenis  bahan,  misalnya,  buah,  sayuran,  daging,  dan  biji-bijian;  karakteristik permukaan bahan, yaitu ukuran permukaan, permukaan utuh, retakan, celah-celah, hidrofobisitas, dan tekstur; bobot bahan; dan aktivitas air/ water activity (aW) dari bahan itu sendiri) (Xue et al., 2023).
Dekontaminasi ini merupakan proses yang dilakukan untuk meminimalkan kontaminan yang ada  pada  permukaan  simplisia.  Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Epelle, et  al., 2023),  ozon mendekontaminasi  simplisia  dengan  mekanisme  inaktivasi  mikroba  secara  langsung  (inaktivasi elektrofilik  langsung)  maupun  tidak  langsung,  Inaktivasi  secara  tidak  langsung  terbentuknya Reactive Oxidative Species (ROS) yaitu OH*, HO 2 *, O 2 ‾ *, O 3 ‾ *, HO 3 ‾ *, H 2 O 2 , O‾), yang dapat terbentuk selama dekomposisi ozon spontan di air atau udara. Radikal hidroksil (OH*) sangat tidak stabil dan mudah bereaksi dengan senyawa lain untuk mendapatkan elektron yang hilang. Radikal ini memiliki potensi oksidasi yang lebih tinggi (2,80 V) dibandingkan dengan ozon itu sendiri (2,07 V). Selama
Gambar 2. Persentase Penurunan Nilai Angka Lempeng Total  Simplisia Sambiloto Selama Perlakuan Ozon
0% 88% 99% 99,6% 100% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% 0' 30' 60' 90' 120' Pe nur na n N ilai A LT Lama Perlakuan Ozon (menit)
perlakuan ozon, spesies reaktif ini menghancurkan  membran sel mikroorganisme, yang  akhirnya menyebabkan inaktivasinya bakteri.
Proses inaktivasi bakteri terjadi ozon menyerang banyak konstituen seluler termasuk protein, lipid tak jenuh dan enzim pernapasan di membran sel, peptidoglikan dalam amplop sel, enzim dan asam  nukleat  dalam  sitoplasma,  dan  protein  dan  peptidoglikan  (Khadre, et  al., 2001).  Proses inaktivasi  kapang  khamir  yang  merupakan  fungi,  berkaitan  juga  dengan  proses  metabolisme  sel jamur,  yang  menyebabkan  apoptosis  dan  stres  oksidatif,  dan  hal  ini  terbukti  efektif  dalam
Perlakuan Ozon 0 menit 30 menit 60 menit 90 menit 120 menit
Gambar 3. Visual koloni mikroba yang tumbuh pada cawan pengujian ALT sambiloto tanpa perlakuan ozon dan setelah perlakuan ozon 30; 60; 90 dan 120 menit pada pengenceran 𝟏𝟎 −𝟏 .
Tabel II. Nilai Angka Kapang Khamir (AKK) Simplisia Herba Sambiloto Selama Perlakuan Ozon
Pengenceran Jumlah Koloni Rata-Rata AKK (koloni/g) Cawan A Cawan B Perlakuan Ozon 0 menit 10 −1 2 1 1.5 150 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai AKK (koloni/g) 150 Perlakuan Ozon 30 menit 10 −1 2 0 1 100 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai AKK (koloni/g) 100 Perlakuan Ozon 60 menit 10 −1 1 0 0.5 50 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai AKK (koloni/g) 50 Perlakuan Ozon 90 menit 10 −1 0 0 0 0 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai AKK (koloni/g) 0 Perlakuan Ozon 120 menit 10 −1 0 0 0 0 10 −2 0 0 0 10 −3 0 0 0 10 −4 0 0 0 10 −5 0 0 0 Total Nilai AKK (koloni/g) 0
mengendalikan  perkembangan  jamur  toksogenik  (Savi, et  al., 2014).  Mekanisme-mekanisme tersebut  kemungkinan  yang  bertanggung  jawab  terhadap  terjadinya  penurunan  Angka  Lempeng Total  maupun  Angka  Kapang  Khamir  pada  proses  dekontaminasi  ozon  pada  simplisia  herba sambiloto.
ROS  yang  terbentuk  pada  proses  perlakuan  ozon  juga  dapat  menghancurkan  dinding  sel tumbuhan,  sehingga  dengan  sifat  ozon  sebagai  oksidator  ini,  dapat  mempengaruhi  komponen senyawa  kimia  yang  terkandung  di  dalam  sel  tumbahan  tersebut,  sehingga  perlu  dilakukan
Gambar 4. Nilai Angka Kapang Khamir Simplisia Sambiloto Selama Perlakuan Ozon
Gambar 5. Persentase Penurunan Nilai Angka Kapang Khamir Simplisia Sambiloto
Selama Perlakuan Ozon Perlakuan Ozon 0 menit 30 menit 60 menit 90 menit 120 menit
Gambar 6. Visual koloni mikroba yang tumbuh pada cawan pengujian AKK sambiloto tanpa perlakuan ozon dan setelah perlakuan ozon 30; 60; 90; dan 120 menit pada pengenceran 𝟏𝟎 −𝟏 .
150 100 50 0 0 0 20 40 60 80 100 120 140 160 0' 30' 60' 90' 120' N ilai A KK Lama Perlakuan Ozon (menit) 0% 33% 67% 100% 100% 0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% 0' 30' 60' 90' 120' Pe nur un an N ilai A KK Lama Perlakuan Ozon (menit)
penelitian  lebih  lanjut  mengenai  pengaruh  dekontaminasi  ozon  terhadap  senyawa  kimia  yang terkandung pada simplisia ini.
KESIMPULAN Ozon terbukti dapat  mendekontaminasi mikroba  pada simplisia herba sambiloto  diketahui dari nilai Angka Lempeng Total dan Angka Kapang Khamir selama perlakuan 30; 60; 90; dan 120 menit dapat menurunkan persentase nilai ALT berturut-turut sebesar 88%; 99%; 99,6% dan 100%, sedangkan  untuk  persentase  penurunan  nilai  AKK  berturut-turut  adalah  33%;  67%;  100%  dan 100%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  atas  bantuan  dana  dari  Beasiswa  LPDP  (Lembaga Pengelola Dana Pendidikan) Kementerian Keuangan sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Bialka, K.I., Demirci, A. 2007, Utilization of Gaseous Ozone for the Decontamination of Escherichia coli O157:H7 and Salmonella on Raspberries and Strawberries . Journal of Food Protection , Vol. 70, No. 5, 2007, Pages 1093 – 1098.
BPOM  RI.  2019, Peraturan  Badan  Pengawas  Obat  Dan  Makanan  Nomor  32  Tahun  2019  tentang Persyaratan  Keamanan  Dan  Mutu  Obat  Tradisional ,  Jakarta,  Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan Republik Indonesia.
Cabello,  J.R.,  Serrano,  S.,  Rodriguez,  I.,  García-Valcárcel,  A.I . ,    Hernando,  M.D.,  Flores,  J.M.  2021, Microbial Decontamination of Bee Pollen by Direct Ozone Exposure. Foods 2021, 10, 2593. https://doi.org/10.3390/foods10112593.
Epelle, E.I, Macfarlane, A., Cusack, M., Burns, A., Thissera, B., Mackay, W., Rateb, M.E., Yaseen, M. 2022,
Bacterial  and  fungal  disinfection  via  ozonation  in  air, Journal  of  Microbiological  Methods , Volume 194, 2022, 106431, ISSN 0167-7012, https://doi.org/10.1016/j.mimet.2022.106431. Epelle, E.I., Macfarlane, A., Cusack, M., Burns, A., Okolie, J.A., Mackay, W., Rateb, M., Yaseen, M. 2023,
Ozone  application  in  different  industries:  A  review  of  recent  developments, Chemical Engineering  Journal ,  Volume  454,  Part  2,  2023,  140188,  ISSN  1385  8947, https://doi.org/10.1016/j.cej.2022.140188.
Farajzadeh D., Qorbanpoor A., Rafati H., Isfeedvajani M.S. 2013, Reduction of date microbial load with ozone. Journal of Research in Medical Sciences 2013; 18:330-34. Ginting, D., Santosa, I., Trigunarso, S. 2022, Jurnal Analis Kesehatan : Volume 11, Nomor 1, Juni 2022. DOI:10.30821/kfl:jibt.v1i2.1598. Khadre, M. A., Yousef, A. E., & Kim, J.-G. 2001, Microbiological Aspects of Ozone Applications in Food: A  Review.  Journal  of  Food  Science,  66(9),  1242 – 1252.  doi:10.1111/j.1365- 2621.2001.tb15196.
Rice, R.G. & Graham, D.M. 2001, US FDA regulatory approval of ozone as an antimicrobial agent – what is allowed and what needs to be understood. Ozone News 2001, 29, 22 – 31.
Savi,  G.  D.,  &  Scussel,  V.  M.  2014,  Effects  of  Ozone  Gas  Exposure  on  Toxigenic  Fungi  Species fromFusarium, Aspergillus, andPenicilliumGenera. Ozone: Science  Engineering, 36(2), 144 – 152. https://doi.org/10.1080/01919512.2013.846824.
Xue, W., Macleod, J., & Blaxland, J. 2023,  The Use of  Ozone Technology to Control  Microorganism Growth,  Enhance  Food  Safety  and  Extend  Shelf  Life:  A  Promising  Food  Decontamination Technology. Foods (Basel, Switzerland), 12(4), 814. https://doi.org/10.3390/foods1204081