ISSN: 1410-8917 e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (2) (2019): 29 – 37

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa

## Validasi Metode Penentuan Tablet Allopurinol Menggunakan Spektrofotometri Ultraviolet dalam Larutan Asam
Suprianto a,* , Ihsanul Hafiz a , Hendri Faisal a , Hasrat Masa Harefa a
a Institut Kesehatan Helvetia, Jl. Kapten Sumarsono No. 107 Medan 20124, Indonesia
* Corresponding author: ekahasbi@gmail.com
https://doi.org/10.14710/jksa.22.2.29-37
A r t i c l e   I n fo

## A b s t r a c t
Article history: Received: 28 August 2018
Revised: 29 January 2019 Accepted: 4 March 2019 Online: 31 March 2019
Keywords: allopurinol; spectrophotometry; validation Title: Validation  of  Allopurinol  Tablet  Determination  Methods  Using  Ultraviolet

## Spectrophotometry in Acid Solution
Allopurinol as a tablet drug is widely available in the market, hence allopurinol levels must meet the requirements so that the quality of the drug is guaranteed. In this study, validation  of  the  method  of  determining  allopurinol  tablet  drugs  in  three  HCl concentrations, namely 0.05 N; 0.10 N; and 0.15 N using ultraviolet spectrophotometry has been carried out. Validation parameters included test linearity, accuracy, repetitive precision, and intermediate and specific precision. Determination of content carried out  in  0.10 N HCl  solution  produced  the  best  accuracy.  The results  showed  that  the maximum wavelength was at 251 nm where linearity, accuracy, repeated precision and the precision on 0.10 N HCl solvents was 0.9995; 100.1%-100.6%; 0.076%; 0.057% - 0.127%  respectively.  Specificity  tests  showed  good  results.  The  average  content  of allopurinol in tablets is 100.7% -102.3% so that the average content of allopurinol in tablets meets the standards that refer to the Indonesian Pharmacopoeia V Edition.

## A b s t r a k
Kata Kunci: allopurinol; spektrofotometri; validasi Allopurinol sebagai obat tablet banyak beredar di pasaran, sehingga kadar allopurinol haruslah  memenuhi  persyaratan  agar  kualitas  obat  dijamin.  Pada  penelitian  ini, validasi metode penentuan obat tablet allopurinol dalam tiga konsentrasi HCl, yaitu 0,05 N; 0,10 N; dan 0,15 N menggunakan spektrofotometri ultraviolet telah dilakukan.
Parameter  validasi  meliputi  uji  linieritas,  akurasi,  presisi  berulang,  dan  presisi menengah dan spesifik. Penentuan konten yang dilakukan dalam larutan HCl 0,10 N menghasilkan  akurasi  terbaik.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  panjang gelombang maksimum adalah pada 251 nm di mana linearitas, akurasi, presisi ulang, presisi  pada  pelarut  HCl  0,10  N  masing-masing  adalah  0,9995;  100.1%  -  100.6%; 0,076%; 0,057% - 0,127%. Tes spesifisitas menunjukkan hasil yang baik. Kandungan rata-rata allopurinol dalam tablet adalah 100,7% -102,3%. Sehingga kandungan rata- rata  allopurinol  dalam  tablet  memenuhi  standart  yang  mengacu  Indonesian Pharmacopoeia V Edition.

## 1. Pendahuluan
Allopurinol,  1H-pyrazolo  [3,4-d]  pyrimidin-4-ol (Gambar  1)  [1],  menghambat  enzim xanthine  oxidase secara  kompetitif  sehingga  senyawa  guanin  dan  basa
purin  lain  tidak  dioksidasi  menjadi  asam  urat  [2]. Allopurinol cepat diserap dari saluran pencernaan bagian atas dan memiliki paruh plasma sekitar 1 hingga 2 jam, mempunyai harga pKa sekitar 9,4 [3]. Allopurinol sukar
larut dalam air dan etanol, larut dalam larutan alkali dan praktis tidak larut dalam kloroform dan eter [1].
Gambar 1. Struktur Allopurinol [1]
Validasi  adalah  penilaian  terhadap  parameter metode pada prosedur penetapan kadar yang digunakan untuk  membuktikan  bahwa  parameter  tersebut memenuhi  persyaratan  [4,  5].  Validasi  meliputi instrumen  dan  metode.  Suatu  metode  harus  divalidasi untuk  membuktikan  bahwa  parameter-parameter mampu mengatasi problem analisis [6-8].
Metode analisis dapat digunakan jika telah dilakukan validasi meskipun metode tersebut telah dipublikasikan [9, 10]. Validasi disesuaikan kondisi dengan laboratorium dan  peralatan  yang  tersedia  [4,  6].  Validitas  metode meliputi uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali,  uji  presisi  dengan  parameter  simpangan  baku relatif,  selektivitas,  linieritas  dan  batas  deteksi  serta batas kuantitasi [4, 6-8, 11, 12].
Zat  aktif  sebagai  obat  sudah  banyak  dibuat  dalam berbagai bentuk sediaan, misalnya tablet [13, 14]. Tablet harus mengandung zat aktif sesuai dengan komposisi [1]. Allopurinol  merupakan  salah  satu  obat  dalam  sediaan tablet [10, 15]. Sediaan obat yang berkualitas menunjang tercapainya efek terapeutik yang diharapkan [6, 16-19]. Kadar  merupakan  salah  satu  persyaratan  mutu  yang harus dipenuhi seperti yang tercantum dalam Farmakope Indonesia [1].
Allopurinol  dapat  ditentukan  kadarnya  dengan menggunakan  metode  titrasi  dalam  medium  bebas  air (DMF)  menggunakan  NaOCH 3 [2],  spektrofotometri ultraviolet  pada  panjang  gelombang  250  nm  dengan menggunakan pelarut asam dan pada panjang gelombang 257 nm dengan pelarut basa [10, 15, 20]. Kadar allopurinol ditetapkan  secara  spektrofotometri  ultraviolet  dengan pelarut HCl 0,1N dan NaOH 0,05 N [21].
Keuntungan dari metode spektrofotometri ultraviolet  adalah  pemakaian  yang  cukup  luas, sensitivitas  yang  tinggi,  selektivitas  yang  tinggi,  biaya yang relatif murah, serta mudah digunakan [11, 22-26]. Berdasarkan  hal  tersebut  diatas,  penulis  tertarik  untuk melakukan  validasi  metode  analisis  penetapan  kadar allopurinol  sediaan  tablet  secara  spektrofotometri ultraviolet dalam konsentrasi terbaik pelarut HCl.

## 2. Metode

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan meliputi Spektrofotometer UV-VIS (Agilent 8453), neraca analitik , labu ukur, pipet volum,  beaker  gelas  1000  mL,  mat  pipet,  erlenmeyer, stamper,  mortir,  spatula,  pipet  tetes,  kuvet,  batang pengaduk dan corong.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian terdiri  dari  aquades  bebas  CO 2 ,  larutan  pereaksi  HCl  pa (Merck), kertas saring, baku allopurinol (Nanjing Pharma Chemical  Plant)  dan  sediaan  tablet  allopurinol  100  mg (PT. Hexpharm Jaya dan PT. First Medipharma).

## 2.2. Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  dengan  purposif. Sampel  yang  digunakan  merupakan  sediaan  tablet allopurinol 100 mg  yang  diproduksi oleh  PT. Hexpharm Jaya dan PT. First Medipharma [27-29].

## 2.3. Pembuatan Larutan Induk Baku
Ditimbang  seksama  sejumlah  100  mg  baku allopurinol,  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  100  mL, ditambahkan 10 mL larutan HCl 0,1 N, dikocok. Kemudian diencerkan  dengan  HCl  0,1  N  sampai  garis  tanda, sehingga  diperoleh  larutan  dengan  konsentrasi  1000 µg/mL, yang disebut Larutan Induk Baku I (LIB I). LIB I dipipet  10  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  100 mL,  diencerkan  dengan  HCl  0,1  N  sampai  garis  tanda, sehingga  diperoleh  larutan  dengan  konsentrasi  100 µg/mL  atau  disebut  Larutan  Induk  Baku  II  (LIB  II).  Hal yang sama dilakukan pada pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0, 15 N [1, 30].

## 2.4. Pembuatan Larutan Induk Sampel
Ditimbang  dan  diserbukkan  tidak  kurang  dari  20 tablet  (tablet  allupurinol  100  mg).  Kemudian  ditimbang seksama  sejumlah  serbuk  setara  dengan  100  mg allopurinol, dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Lalu ditambahkan  10  mL  larutan  HCl  0,10  N;  dikocok  dan diencerkan  dengan  HCl  0,10  N  sampai  garis  tanda, sehingga  diperoleh  Larutan  Induk  Sampel  I  (LIS  I). Kemudian disaring dan 10 mL filtrat pertama dibuang. LIS I dipipet 10 mL dan dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL, ditambahkan 10 mL larutan HCl 0,10 N, dikocok, lalu diencerkan  dengan  HCl  0,10  N  sampai  garis  tanda  dan dihomogenkan,  sehingga  diperoleh  Larutan  Induk Sampel II (LIS II). Hal yang sama dilakukan pada pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0,15 N [1].

## 2.5. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan  Induk  Baku  (LIB)  II  (100  µg/mL)  dipipet sebanyak  4  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50 mL,  diencerkan  dengan  HCl  0,10  N  sampai  garis  tanda, dikocok  sampai  homogen  sehingga  diperoleh  larutan dengan  konsentrasi  8  µg/mL,  diukur  serapannya  pada panjang  gelombang  200-400.  Kemudian  dilakukan dengan prosedur yang sama pada pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0,15 N [1, 12].

## 2.6. Pembuatan Kurva Kalibrasi
LIB II (100 µg/mL) dipipet sebanyak 2,0 mL; 3,0 mL; 4,0 mL; 5,0 mL dan 6,0 mL; masing-masing dimasukkan ke  dalam  labu  ukur  50  mL,  kemudian ditambahkan HCl 0,10 N sampai garis tanda, dikocok sampai homogen dan diperoleh larutan dengan konsentrasi 4 µg/mL; 6 µg/mL; 8  µg/mL;  10  µg/mL;  dan  12  µg/mL.  Kemudian  diukur serapan  pada  panjang  gelombang  maksimum,  sebagai blangko  digunakan  HCl  0,10  N.  Selanjutnya  dilakukan dengan prosedur yang sama untuk pelarut HCl 0,05 N dan 0,15 N [1, 12, 31].

## 2.7. Validasi Metode

## 2.7.1. Linieritas
Koefisien  korelasi  merupakan  indikator  linieritas yang  menunjukkan  proporsionalitas  respon  absorbansi terhadap  konsentrasi  yang  diukur.  Linieritas  diukur sebagai  koefisien  korelasi  (R)  dengan  koefisien determinasi  R 2 yang  diperoleh  dari  statistika  kurva kalibrasi. Nilai linearitas yang baik adalah 0,995 ≤ r ≤ 1. Koefisien korelasi dihitung dengan persamaan di bawah ini [4, 6, 8]:
Di  mana  X  =  Konsentrasi  baku  allopurinol,  Y  = Absorbansi baku allopurinol, dan n = Ulangan percobaan
2.7.2. Batas Deteksi dan Batas Kuantitatif
Batas deteksi, Limit of Detection (LOD) sebagai ukuran konsentrasi  terkecil  senyawa  dalam  sampel  yang  dapat dideteksi.  Batas  kuantitatif, Limit  of  Quantitation (LOQ) sebagai  ukuran  terkecil  senyawa  dalam  sampel  yang dapat  diukur  kadarnya  dengan  tingkat  ketelitian  dan ketepatan  yang  baik.  Batas  kuantitatif  merupakan parameter  uji  kuantitatif  untuk  konsentrasi  senyawa terendah  dalam  matriks.  Batas  deteksi  dan  kuantitasi dihitung secara statistik melalui garis regresi linier dari kurva  kalibrasi.  Batas  deteksi  dan  kuantitasi  dihitung dengan persamaan di bawah ini [4]:
𝑆𝐷 =   √ ∑(𝑋 − 𝑋̅) 2 𝑛 − 1 𝐿𝑂𝐷 = 3𝑆𝐷 𝑏 𝐿𝑂𝑄 = 10𝑆𝐷 𝑏
Di mana SD = Standar deviasi, X = Kadar rata-rata yang diperoleh dari percobaan, dan n = Jumlah ulangan percobaan  dan b = Slope persamaan  regresi  dari  kurva kalibrasi.

## 2.7.3. Uji Akurasi (Kecermatan)
Akurasi  merupakan  kemampuan  alat  memberi respon  nilai  dekat  dengan  sebenarnya  saat  mengukur sampel.  Uji  akurasi  dilakukan  dengan  metode penambahan  baku,  yaitu  dengan  membuat  tiga konsentrasi analit sampel dengan rentang spesifik 80%, 100%  dan  120%,  di  mana  masing-masing  dilakukan sebanyak  tiga  kali  pengulangan.  Akurasi  dinyatakan sebagai  persen  perolehan  kembali  ( recovery )  yang ditambahkan dan dapat ditentukan dengan persamaan di nawah ini [4, 6, 8, 10]:
%𝑅𝑒𝑐𝑜𝑣𝑒𝑟𝑦 = 𝐶 1 − 𝐶 2 𝐶 3 × 100%
Di mana C 1 = Konsentrasi senyawa dalam sampel dan standar, C 2 = Konsentrasi senyawa dalam sampel, dan C 3 = Konsentrasi senyawa standar yang ditambahkan.

## 2.7.4. Uji akurasi 80%.
Larutan sampel dari LIS II dipipet sebanyak 5,6 mL dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  pertama  dan ditambahkan  larutan  baku  allopurinol  sebanyak  2,4  mL yang dipipet dari LIB  II dan dicukupkan dengan  pelarut HCl  0,10  N  sampai  garis  tanda  100  mL.  Larutan  sampel dari LIS II dipipet sebanyak 5,6 mL dimasukkan ke dalam labu ukur kedua dan dicukupkan dengan pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL. Larutan sampel dari LIS II dipipet sebanyak 2,4 mL dimasukkan ke dalam labu yang ketiga dan dicukupkan dengan pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL dan diukur pada panjang gelombang maksimum.
a. Uji akurasi 100%
Larutan  sampel  dari  LIS  II  dipipet  sebanyak  7  mL dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  pertama  dan ditambahkan  larutan  baku  allopurinol  sebanyak  3  mL
yang  dipipet  dari  LIB  II,  kemudian  dicukupkan  dengan pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL.
Larutan  sampel  dari  LIS  II  dipipet  sebanyak  7  mL dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  kedua  dan  dicukupkan dengan pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL.
Larutan sampel dari LIS II dipipet sebanyak 3 mL ke dalam  labu  ukur  ketiga  dan  dicukupkan  dengan  pelarut HCl  0,10 N  sampai  garis  tanda  100 mL dan  diukur  pada panjang gelombang maksimum.
b. Uji akurasi 120%
Larutan  sampel  dari  LIS  II  sebanyak  8,4  mL dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  pertama  dan ditambahkan  larutan  baku  allopurinol  sebanyak  3,6  mL yang dipipet dari LIB  II dan dicukupkan dengan  pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL.
Larutan  sampel  dari  LIS  II  sebanyak  8,4  mL dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  kedua  dan  dicukupkan dengan pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL.
Larutan  sampel  dari  LIS  II  sebanyak  3,6  mL dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  ketiga  dan  dicukupkan dengan pelarut HCl 0,10 N sampai garis tanda 100 mL dan ukur  pada  panjang  gelombang  maksimum.Uji  akurasi dengan menggunakan pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0,15 N dilakukan dengan prosedur sama.

## 2.7.5. Uji Presisi (Keseksamaan)
Kesalahan  acak  analisis  dilakukan  uji  presisi  yang dapat digunakan untuk mengevaluasi tingkat kedekatan antara  hasil  analisis.  Uji  presisi  dapat  berupa  uji keterulangan  [4,  6,  8].  Presisi  keterulangan  dilakukan sebanyak  enam  kali  oleh  seorang  analis  pada  panjang gelombang  maksimum.  Presisi  antara  dilakukan sebanyak enam kali pada panjang gelombang maksimum oleh analis yang berbeda. Prosedur yang sama dilakukan pada ketiga konsentrasi pelarut HCl yaitu HCl 0,05 N; 0,10 N; dan 0,15 N [10]. LIB II dipipet 4 mL dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL dan dicukupkan dengan HCl sampai  garis  tanda  [1].  Kemudian  dilakukan  uji  presisi yang meliputi presisi keterulangan dan presisi antara [4- 6].
𝑆𝐷 =   √ ∑(𝑋 − 𝑋̅) 2 𝑛 − 1 𝑅𝑆𝐷 = 𝑆𝐷 𝑋̅ × 100%
Di mana SD = Standar deviasi, RSD = Relative standard deviation, dan 𝑋̅ =  Kadar  rata-rata  yang  diperoleh  dari percobaan.

## 2.8. Uji Selektivitas
Perubahan  bentuk  kurva  atau  pergeseran  panjang gelombang digunakan  sebagai  indikator  uji  selektivitas, karena  perubahan  tersebut  dapat  terjadi  akibat penambahan  senyawa  yang  ada  dalam  sampel  obat sediaan  tablet  [4,  6].  Uji  selektivitas  dilakukan  dengan cara melihat pergeseran panjang gelombang maksimum pada  larutan  baku,  larutan  baku  setelah  penambahan sampel dan larutan blanko [11].

## 2.9. Penetapan Kadar Allopurinol
Ditimbang  dan  diserbukkan  tidak  kurang  dari  20 tablet.  Kemudian  ditimbang  seksama  sejumlah  serbuk setara dengan 100 mg allopurinol, dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Lalu ditambahkan 10 mL larutan HCl 0,10 N, kocok dan diencerkan dengan HCl 0,10 N sampai
( ) ( )( ) ( ) ( )   ( ) ( )   2 2 2 2 Y - Y n X - X n Y X - XY n R        =
garis  tanda  (LIS  I).  Kemudian  disaring,  10  mL  filtrat pertama dibuang. LIS I dipipet 10 mL dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL, ditambahkan 10 mL larutan HCl 0,10 N, dikocok, lalu diencerkan dengan HCl 0,10 N sampai garis tanda dan dihomogenkan (LIS II) [1]. LIS II dipipet 4 mL dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL dan  dicukupkan dengan HCl  0,10  N  sampai  garis  tanda, dikocok  sampai  homogen  dan  diukur  pada  panjang gelombang maksimum [31].

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Panjang Gelombang
Penelitian dilakukan dengan tiga konsentrasi pelarut yaitu  HCl  0,05  N;  0,1  N  dan  0,15  N.  Panjang  gelombang maksimum dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Panjang Gelombang Maksimum Allopurinol (A=HCl 0,05 N; B= HCl 0,10 N; C= HCl 0,15 N
Panjang  gelombang  maksimum  digunakan  untuk mendeteksi  allopurinol  karena  perubahan  absorbansi paling  besar  pada  panjang  gelombang  maksimum, sehingga  diperoleh  kepekaan  analisis  yang  maksimum [11].  Pengukuran  dilakukan  dengan  larutan  standar  8 µg/mL,  setelah  dihitung  dengan  persamaan  hukum Lambert-Beer dengan harga A yang diambil adalah 0,434
karena merupakan harga optimal dalam rentang A: 0,2- 0,8;  sebab  kesalahannya  paling  kecil  [20].  Panjang gelombang  maksimum  penelitian  (251  nm)  yang diperoleh relatif sama dengan literatur (250 nm). Gambar 2  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  pelarut  tidak menyebabkan pergeseran panjang gelombang [10, 11, 20].

## 3.2. Kurva Kalibrasi
Pembuatan  kurva  kalibrasi  baku  allopurinol  dari masing-masing  pelarut,  yaitu:  HCl  0,05  N;  0,01  N  dan 0,15 N dengan konsentrasi 4 µg/mL, 6 µg/mL, 8 µg/mL, 10 µg/mL, dan 12 µg/mL; diukur pada panjang gelombang maksimum (251 nm). Data uji dapat dilihat pada Tabel 1, dan kurva kalibrasi dapat dilihat pada Gambar 3.
Tabel 1. Absorbansi Kurva Kalibrasi Allopurinol dalam HCl
Data  pengukuran  menunjukkan  bahwa  semakin besar  konsentrasi  larutan  baku  allopurinol  yang  diukur maka semakin besar absorbansi yang diperoleh (Tabel 1) dengan peningkatan yang linier (Gambar 3).
Gambar 3. Kurva Kalibrasi Allopurinol dalam HCl
3.3. Uji Validasi Metode

## 3.3.1. Linieritas
Linieritas  menunjukkan  proporsionalitas  respon absorbansi  terhadap  konsentrasi  yang  diukur  pada pengujian  sesuai  dengan  konsentrasi  senyawa  dalam sampel  pada  rentang  konsentrasi  tertentu  [4,  6].  Uji dilakukan  dengan  membuat  kurva  kalibrasi  dari  seri larutan senyawa baku yang diketahui konsentrasinya [8].
Koefisien  korelasi  hasil  penelitian  sebesar  0,9991 (HCl 0,05 N); 0,9995 (HCl 0,10 N) dan 0,9993 (HCl 0,15 N). Hal ini menunjukkan bahwa penelitian validasi ketiga pelarut memberikan linieritas baik. Suatu metode analisis yang valid mempunyai harga koefisien korelasi lebih dari 0,999 [4, 8].
No. Baku Konsentrasi (µg/mL) Absobansi dalam HCl 0,05 N 0,10 N 0,15 N 1 Standard 1 4 0,18279 0,22042 0,18548 2  Standard 2 6 0,27677 0,32179 0,26137 3 Standard 3 8 0,37108 0,43468  0,35306 4  Standard 4 10 0,45613 0,52404  0,44035 5  Standard 5 12 0,56904  0,63566  0,53625
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (2) (2019): 29 – 37
Koefisien  korelasi  memberi  informasi  hubungan antara  konsentrasi  allopurinol  dengan  absorbansi  yaitu telah memenuhi kriteria linier [8]. Nilai range linier yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  dalam  kurva  kalibrasi tersebut  berlaku  hukum  Lambert-Beer,  sehingga persamaan  garis  tersebut  dapat  digunakan  untuk menentukan kadar parasetamol secara spektrofotometri UV [11].

## 3.3.2. Batas Deteksi dan Batas Kuantitatif
Data hasil uji batas deteksi dan batas kuantitasi dapat dilihat  pada  Tabel  2.  Kurva  kalibrasi  memenuhi persyaratan  analisis  [4,  6,  8],  selanjutnya  data  diolah untuk  menentukan  batas  deteksi  (LOD)  dan  batas kuantitasi  (LOQ).  Harga  LOD  (Tabel  2)  yang  diperoleh memberikan  informasi  bahwa  penggunaan  pelarut  HCl 0,05  N  dan  0,15  N  kurang  sensitif  untuk  mendeteksi allopurinol dalam sampel dibandingkan pelarut HCl 0,10 N.  Pelarut  HCl  0,10  N  merupakan  pelarut  yang mempunyai  sensitivitas  paling  tinggi  dibandingkan konsentrasi yang lain (Tabel 2). Harga LOD 0,345  g/mL pada  penggunaan  pelarut  HCl  0,10  N  memberikan informasi  bahwa  pada  konsentrasi  tersebut  merupakan batas  terendah  dilakukan  deteksi  sampel.  Sedangkan harga LOQ sebesar 1,149  g/mL pada pelarut HCl 0,10 N merupakan  batas  konsentrasi  terendah  yang  dapat digunakan  untuk  penetapan  kadar  dan  masih  dapat memberikan kecermatan analisis [4].
Tabel 2. Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Parameter Konsentrasi HCl 0,05 N 0,10 N 0,15 N B 0,048 0,052 0,044 SD 0,007 0,006 0,006 LOD (  g/mL) 0,468 0,345 0,416 LOQ (  g/mL) 1,560 1,149 1,385

## 3.3.3. Akurasi
Data  hasil  pengujian  persen  perolehan  kembali allopurinol  dengan  metode  penambahan  baku  dapat dilihat  pada  Tabel  3  sampai  Tabel  5.  Hasil  perolehan kembali  pada  pelarut  HCl  0,15  N  (Tabel  5)  nilai  persen perolehan  kembali  tidak  memenuhi  syarat  karena  nilai yang  diperoleh  tidak  berada  pada  rentang  persen perolehan kembali dengan analit 1% (95%-102%) [4, 7]. Sedangkan pada pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0,10 N (Tabel 3 dan Tabel 4) memenuhi persyaratan dengan analit 1% (95%-102%) dan persen perolehan kembali pada pelarut HCl 0,10 N terbaik dengan rata-rata sebesar 100,4%.
Tabel 3. Hasil Perolehan Kembali dalam HCl 0,05N
Akurasi Konsentrasi Recovery Rata- Rata Rara- rata (%) Sampel + Baku  Sampel  Baku (%) (%) 80% 9,473 6,085 3,420 99,1
99,7
99,6
9,488 6,065 3,423 99,9 9,475 6,061 3,414 100,0 100% 10,258 7,212 3,055 99,7 99,6 10,260 7,208 3,050 100,0 10,252 7,222 3,056 99,2 120% 12,150 8,510 3,620 99,9 99,8 12,121 8,520 3,616 99,0 12,150 8,490 3,620 100,4
Tabel 4. Hasil Perolehan Kembali dalam HCl 0,10N
Akurasi Konsentrasi Recovery Rata- Rata Rara- rata (%) Sampel + Baku  Sampel  Baku (%) (%) 80% 8,113 5,635 2,464 100,6 100,6
100,4
8,126 5,624 2,465 100,7 8,115 5,633 2,468 100,6 100% 10,107 7,093 2,990 100,8 100,6 10,126 7,125 2,989 100,4 10,130 7,114 2,993 100,7 120% 12,132 8,520 3,607 100,1 100,1 12,151 8,522 3,627 100,1 12,133 8,498 3,634 100,0
Tabel 5. Hasil Perolehan Kembali dalam HCl 0,15N Akurasi Konsentrasi Recovery  Rata- Rata Rara- rata (%) Sampel + Baku Sampel  Baku (%) (%) 80% 8,339 5,935 2,417 99,4 98,8 100,6
8,340
5,951 2,419 98,7 8,338 5,966 2,418 98,1 100% 10,825 7,403 3,216 106,4 106,1 10,835 7,403 3,226 106,4 10,835 7,409 3,218 106,5 120% 12,575 8,727 3,969 96,9 97,1 12,591 8,723 3,967 97,5 12,573 8,730 3,959 97,1

## 3.3.4. Presisi
Penelitian  uji  presisi  dilakukan  dengan  dua parameter  presisi  yaitu  presisi  keterulangan  perlakuan dan  presisi  antara  analis  [4]  [4].  Hasil  uji  presisi keterulangan  dapat  dilihat  pada  Tabel  6.  Presisi  antar analis dapat dilihat pada Tabel 7 sampai 9.
Presisi  diukur  sebagai  simpangan  baku  relatif  (% RSD)  replikasi  sampel  homogen  [4,  6].  Kesalahan  acak analisis dilakukan uji presisi yang dapat digunakan untuk mengevaluasi tingkat kedekatan antar hasil analisis [4]. Penelitian  menunjukkan  presisi  keterulangan  dan antar analis dalam tiga konsentrasi pelarut HCl dan nilai presisi antara  memenuhi  persyaratan  %  RSD  yaitu  tidak  lebih dari 2 % [4, 8].
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (2) (2019): 29 – 37
Tabel 6. Presisi Keterulangan dalam Pelarut HCl
Tabel 7. Presisi Antar Analis dalam HCl 0,05 N
No Replikasi Analis 1 Analis 2 Absorbansi (Y) Konsentrasi (X) Absorbansi (Y) Konsentrasi (X) 1 Ulangan 1 0,38416 8,330 0,38334 8,312 2 Ulangan 2 0,38415 8,330 0,38316 8,310 3 Ulangan 3 0,38500 8,348 0,38343 8,314 4 Ulangan 4 0,38462 8,340 0,38355 8,316 5 Ulangan 5 0,38468 8,341 0,38353 8,316 6 Ulangan 6 0,38446 8,336 0,38339 8,313 SD 0,007 0,003 % RSD 0,085 0,037 Tabel 8. Presisi Antar Analis dalam HCl 0,10 N No Replikasi Analis 1 Analis 2 Absorbansi (Y) Konsentrasi (X) Absorbansi (Y) Konsentrasi (X) 1 Ulangan 1 0,42064 7,933 0,38334 8,312 2 Ulangan 2 0,42064 7,933 0,38316 8,310 3 Ulangan 3 0,42016 7,924 0,38343 8,314 4 Ulangan 4 0,42024 7,925 0,38355 8,316 5 Ulangan 5 0,42099 7,939 0,38353 8,316 6 Ulangan 6 0,42161 7,951 0,38339 8,313 SD 0,010 0,004 % RSD 0,127 0,057
Tabel 9. Presisi Antar Analis dalam HCl 0,15 N No  Replikasi Analis 1 Analis 2 Absor- bansi (Y) Konsen-trasi (X)  Absor- bansi (Y) Konsen- trasi (X) 1  Ulangan 1  0,35748 8,047 0,35671 8,075 2  Ulangan 2  0,35752 8,048 0,35762 8,095 3  Ulangan 3  0,35716 8,040 0,35716 8,085 4  Ulangan 4  0,35721 8,041 0,35743 8,091 5  Ulangan 5  0,35720 8,041 0,35744 8,091 6  Ulangan 6  0,35714 8,040 0,35734 8,089 SD 0,004 0,007 % RSD 0,047 0,089

## 3.3.5. Selektivitas
Uji selektivitas dilakukan dengan melihat pergeseran panjang  gelombang  maksimum  allopurinol  dalam  tiga jenis konsentrasi pelarut (Gambar 4 sampai Gambar 6).
No  Replikasi Presisi Keterulangan HCl 0,05 N HCl 0,10 N HCl 0,15 N Absorbansi (Y)  Konsentrasi (X)  Absorbansi (Y)  Konsentrasi (X)  Absorbansi (Y)  Konsentrasi (X) 1  Ulangan 1 0,38572 8,363 0,42031 7,926 0,35689 8,043 2  Ulangan 2 0,38586 8,367 0,42115 7,942 0,35682 8,041 3  Ulangan 3 0,38575 8,364 0,42076 7,935 0,35672 8,039 4  Ulangan 4 0,38503 8,349 0,42054 7,931 0,35726 8,051 5  Ulangan 5 0,38528 8,354 0,42106 7,941 0,35706 8,047 6  Ulangan 6 0,38541 8,357 0,42092 7,938 0,35698 8,045 SD 0,007 0,006 0,004 % RSD 0,084 0,076 0,054
Gambar 3. Selektivitas Larutan (A= Blanko; B=Baku; C= Baku + Sampel) dalam HCl 0,05 N
Gambar 5. Selektivitas Larutan (G= Blanko; H=Baku; I= Baku + Sampel) dalam HCl 0,15 N
Validasi  metode  ketiga  pelarut  HCl  0,05  N;  0,10  N; dan  0,15  N  memenuhi  persyaratan  karena  tidak  ada pergeseran  panjang  gelombang,  baik  pada  sampel sebelum maupun setelah penambahan baku allopurinol. Sedangkan  pada  larutan blanko  tidak menunjukkan  ada serapan larutan pada panjang gelombang 251 nm. Hal ini membuktikan  bahwa  pelarut  yang  digunakan  tidak mempengaruhi  proses  pengukuran  larutan  sampel maupun baku allopurinol [10].

## 3.4. Penetapan Kadar
Penetapan  kadar  allopurinol  dalam  sediaan  tablet dilakukan  dengan  mengukur  absorbansi  sampel  pada panjang  gelombang  maksimum  251  nm  dengan  pelarut HCl  0,10  N  karena  memberikan  nilai  akurasi,  presisi, linieritas  dan  selektivitas  yang  terbaik  dibandingkan dengan pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0,15 N [4, 6, 10]. Hasil penelitian dapat dilihat pada Tabel 10.
Tabel 10 Hasil Penetapan Kadar Allopurinol dalam Sediaan Tablet No Sampel Absorbansi  Kadar %  Kadar Rata- rata (%) 1  PT. Hexpharm Jaya 0,42807 100,8 100,7 0,42749 100,6 0,42759 100,7 2 PT. First Medipharma 0,43365 102,0 102,3 0,43523 102,6 0,43448 102,3
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (2) (2019): 29 – 37
Penelitian  menunjukkan  bahwa  kadar  allopurinol dalam  sediaan  tablet  yang  diuji  berada  pada  rentang 100,7%-102,3%  dinyatakan  memenuhi  persyaratan Farmakope Indonesia, yaitu tidak kurang dari 93,0% dan tidak  lebih  dari  107,0%  dari  jumlah  yang  tertera  pada etiket [1].

## 4. Kesimpulan
Panjang  gelombang  maksimum  allopurinol  251  nm pada masing-masing pelarut HCl 0,05 N; 0,10 N dan 0,15 N.  Penetapan  kadar  allopurinol  dalam  sediaan  tablet dengan menggunakan pelarut HCl 0,05 N dan HCl 0,10 N karena  hasil  uji  validasi  metode  ini  menunjukkan  nilai akurasi,  presisi,  linieritas  dan  spesifisitas  yang  baik. Penggunaan  pelarut  HCl  0,10  N  menunjukkan  bahwa kadar  allopurinol  dalam  sediaan  tablet  memenuhi persyaratan menurut Farmakope Indonesia Edisi V Tahun 2014  (93,0%  -  107,0%)  dari  jumlah  yang  tertera  pada etiket.

## Daftar Pustaka
[1]  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Farmakope  Indonesia,  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 2017.
[2]  Siegfried  Ebel,  Mathilda  B  Widianto,  H  Samhoedi, Obat Sintetik: buku ajar dan buku pegangan, Gajdah Mada University Press, Yogyakarta, 1992.
[3]  C.O.  Wilson,  O.  Gisvold,  J.N.  Delgado,  W.A.  Remers, Wilson and Gisvold's Textbook of Organic Medicinal and  Pharmaceutical  Chemistry,  Lippincott-Raven, 1998.
[4]  Harmita  Harmita,  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi Metode  dan  Cara  Perhitungannya, Pharmaceutical Sciences  and  Research  (PSR) ,  1,  3,  (2004)  117-135 http://dx.doi.org/10.7454/psr.v1i3.3375
[5]  Michael  W.  Dong,  Modern  HPLC  for  Practicing Scientists, Wiley, 2016.
[6]  Abdul  Rohman,  Validasi  Penjaminan  Mutu  Metode Analisis  Kimia,  Gadjah  Mada  University  Press, Yogyakarta, 2018.
[7]  Joseph  M.  Betz,  Paula  N.  Brown,  Mark  C.  Roman, Accuracy,  precision,  and  reliability  of  chemical measurements  in  natural  products  research, Fitoterapia , 82, 1, (2011) 44-52 https://doi.org/10.1016/j.fitote.2010.09.011
[8]  Suprianto, Pengembangan Metode Penetapan Kadar Campuran  Pemanis,  Pengawet  dan  Pewarna  secara Simultan  dalam  Sirup  Esen  dengan  Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, Magister Farmasi, Fakultas  Farmasi,  Universitas  Sumatera  Utara, Medan
[9]  G. Indrayanto, Metoda validasi pada analisis dengan kromatografi, Medika-Jurnal  Kedokteran  &  Farmasi , 20, 2, (1994) 49-51
[10] Meta  Kartika  Sari,  Optimasi dan  validasi  penetapan kadar  alopurinol  dalam  matriks  tablet  obat  secara spektrofotometri UV dan matriks sampel jamu asam urat secara kromatografi cair kinerja tinggi, Program Studi  Ilmu  Farmasi,  Sanata  Dharma  University, Yogyakarta
[11]  James W. Munson, Analisis farmasi : metode modern, Harjana, Airlangga University Press, Surabaya, 1991.
[12] Suprianto, Effendy De Lux Putra, Siti Morin Sinaga, Optimization  of  Volume  Void  and  Wavelengths  at Simultaneous  Determination  Method  Development of  Sweeteners,  Preservatives  and  Dyes  by  UFLC, International  Journal  of  ChemTech  Research ,  10,  1,
(2017) 89-97
[13] Howard C. Ansel, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, 4th  edition  ed.,  Universitas  Indonesia  (UI  Press), Jakarta, 2008.
[14] H.  A.  Syamsuni,  Ilmu  Resep,  Penerbit  Buku Kedokteran EGC, Jakarta, 2006.
[15] Martina  Rotua  MS,  Penetapan  Kadar  Allopurinol Dalam  Omeric  Tablet  Produksi  PT.  Mutifa  Medan Secara  Spektrofotometri  Ultraviolet,  Program Diploma 3 Analis Farmasi Dan Makanan, Universitas Sumatera Utara, Medan
[16] Suprianto  Suprianto,  Optimasi  Formula  Matriks Kitosan  dengan  Metilselulosa  pada  Pelepasan Terkendali  Sediaan  Granul  Teofilin, Jurnal  Ilmiah Manuntung , 1, 2, (2017) 114-120
[17] Suprianto, Formulasi dan Penentuan Orde Pelepasan Teofilin  Sediaan  Granul  Campuran  Kitosan  dengan Metilselulosa, Akademia , 17, 2, (2013) 58-62
[18] Tan Hoan Tjay, Kirana Rahardja, Obat-obat penting: khasiat,  penggunaan  dan  efek-efek  sampingnya, Elex Media Komputindo, 2015.
[19] Bertram  G.  Katzung,  B.H.  Kotualubun,  Farmakologi dasar dan klinik, EGC, Jakarta, 1989.
[20] Eustace George Coverley Clarke, Clarke's Analysis of Drugs  and  Poisons  2004,  Pharmaceutical  Press, 2004.
[21] The Stationery Office, Pharmacopoeia of the People's Republic of China 2015, Stationary Office, 2017.
[22] Sandra Ayu Apriliyani, Yohanes Martono, Cucun Alep Riyanto, Mutmainah Mutmainah, Kusmita Kusmita, Validation  of  UV-VIS  Spectrophotometric  Methods for Determination of Inulin Levels from Lesser Yam (Dioscorea  esculenta  L.), Jurnal  Kimia  Sains  dan
Aplikasi , 21, 4, (2018) 161-165 https://doi.org/10.14710/jksa.21.4.161-165 .
[23] Dachriyanus,  Analisis  Struktur  Senyawa  Organik Secara  Spektroskopi,  Lembaga  Pengembangan Teknologi  Infomasi  dan  Komunikasi,  Universitas Andalas, Padang, 2004.
[24] Ibnu Gholib Gandjar, Abdul Rohman, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, 2007.
[25] SM Khopkar, Konsep Dasar Kimia Analitik, UI Press, Jakarta, 1990.
[26] David  Watson,  Analisis  Farmasi,  Penerbit  Buku Kedokteran EGC, Jakarta, 2005.
[27] M.  Toha  Anggoro,  Metode  Penelitian,  Universitas Terbuka, Jakarta, 2011.
[28] Fathnur  Sani  K,  Metodologi  Penelitian  Farmasi Komunitas dan Eksperimental, Penerbit Deepublish, Yogyakarta, 2016.
[29] J.  Supranto,  Teknik  Sampling  untuk  Survei  Dan Eksperimen,  Penerbit  Rineka  Cipta,  Yogyakarta, 2007.
[30] Suprianto,  Optimization  of  Mobile  Phase  for Simultaneous Determination of Sweeteners,
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (2) (2019): 29 – 37
Preservatives and Dyes by UFLC, International Journal of ChemTech Research , 11, 1, (2018) 56-63
[31] Suprianto  Suprianto,  Analisis  Kinetika  Pelepasan Teofilin  dari  Granul  Matriks  Kitosan, Jurnal  Ilmiah Manuntung , 2, 1, (2017) 70-80