## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI UMBI BAWANG DAYAK
(Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb) DENGAN METODE DPPH (1,1-difenil-
2-pikrilhidrazil)
ANTIOXIDANT ACTIVITY OF FRACTIONS DAYAK ONION BULBS (Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb) BY DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhidrazil)

## METHOD
1 Oktariani Pramiastuti * , 2 Devi Ika Kurnianingtyas Solikhati, 3 Aprilia Suryani
1 Prodi  S1 Farmasi  STIKes Bhakti Mandala Husada Slawi
Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel : Latar  Belakang: Bawang  dayak  ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  yang  berkhasiat  bagi  kesehatan.  Umbi bawang  dayak  ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb)  diketahui  memiliki kandungan  metabolit  sekunder  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin,  fenolik, dan  steroid/triterpenoid.  Kandungan  metabolit  sekunder  tersebut  diyakini memiliki  aktivitas  antioksidan  atau  anti  radikal  bebas. Tujuan: Untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  fraksi-fraksi  umbi  bawang  dayak ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb)  dengan  metode  DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) . Metode: Umbi  bawang  dayak  ( Eleutherine  bulbosa (Mill.) Urb)  diekstraksi  dengan  cara  panas  yaitu  metode  infundasi  kemudian difraksinasi berdasarkan tingkat kepolaran dengan pelarut air, etil asetat, dan n-heksan. Penetapan aktivitas antioksidan dengan metode peredaman DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang 516,5  nm.  Konsentrasi  sampel  yang  digunakan  yaitu  10  ppm,  30  ppm,  50 ppm, 70 ppm, dan 90 ppm. Hasil: pengukuran aktivitas antioksidan fraksi- fraksi umbi bawang dayak ( Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb) masing-masing menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang  baik  dengan  nilai  IC 50 (inhibition concentration) dari  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksan  secara berturut-turut  yaitu  96,24±3,754  ppm;  26,98±0,507  ppm;  dan  10,7±0,681
ppm.
Submitted: 22 Jun 2020 Accepted : 7 Mei 2021 Publish Online : 10 Mei 2021
Kata Kunci: Bawang dayak, infusa,KLT, IC 50

## Keywords:
Dayak onion, infusion, TLC, IC 50

## Abstract
Background:  Dayak  onion  (Eleutherine  bulbosa  (Mill.)  Urb)  is  one  of  type  of plants  that  is  beneficial  for  health.  Dayak  onion  bulbs  (Eleutherine  bulbosa (Mill.) Urb) are known to contain secondary metabolites of flavonoids, alkaloids, tannins,  saponnins,  phenolics,  and  steroids/triterpenoids.  The  content  of secondary  metobolites  is  believed  to  have  antioxidant  activity  or  anti-free radicals.    Aim:  To  determine  the  antioxidant  activity  of  Dayak  onion  tubers (Eleutherine  bulbosa  (Mill.)  Urb)  fractions  by  DPPH  method  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl).  Method:  Dayak  onion    bulbs  (Eleutherine  bulbosa  (Mill.)  Urb) were  extracted  by  infundation  method  and  then  fractioned based  on  the  level  of polarity  with  solvents  of  water,  ethyl  acetate,  and  n-hexane.  Determination  of antioxidant  activity  with  DPPH  (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil)  method  and measured its absorption at a wavelength of 516.5 nm. The sample concentrations used were 10 ppm, 30 ppm, 50 ppm, 70 ppm, and 90 ppm. Result: The results of antioxidant activity of fractions of dayak onion bulbs (Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb)  showed  good  antioxidant  activity  respectively  with  IC 50 value  (inhibition concentration) from water fraction, ethyl acetate fraction, and n-hexane fraction respectively 96.24±3.754 ppm, 26.98±0.507 ppm, and 10.7±0.681 ppm.

## PENDAHULUAN
Radikal bebas merupakan faktor penyebab terjadinya berbagai macam penyakit dalam tubuh manusia. Kerusakan  pada  sel  dan  jaringan  yang  merupakan  akar  dari  sebagian  besar  penyakit  disebabkan  oleh radikal  bebas.  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  mampu  menetralisir  radikal  bebas  dalam  tubuh manusia  sehingga  kerusakan  sel  dapat  dicegah  (Pramiastuti  2016).  Sistem  antioksidan  didalam  tubuh manusia  memiliki  keterbatasan,  sementara  pembentukan  radikal  bebas  berlangsung  terus-  menerus, sehingga  tubuh  memerlukan  asupan  antioksidan  yang  berasal  dari  luar  (Soares  2009).  Penggunaan antioksidan sintetik dikhawatirkan dapat memberi efek samping yang berbahaya bagi kesehatan manusia karena  bersifat  karsinogenik.  Salah  satu  alternatif  antioksidan  alami  adalah  tanaman  bawang  dayak. Umbi bawang dayak mengandung senyawa flavonoid, fenolik, alkaloid, saponin, steroid, dan triterpenoid (Setiawan and Febriyanti 2017).
Saat ini penggunaan tanaman sebagai alternatif pengobatan di masyarakat semakin meningkat, namun penggunaan produk-produk bahan alam umumnya  masih menggunakan cara tradisional. Secara empiris khasiat  tanaman  bawang  dayak  diantaranya  sebagai  antikanker  payudara,  antidiabetes  melitus, antihipertensi,  menurunkan  kolesterol,  mencegah  penyakit  jantung, stroke ,  dan  pengobatan  kista  (Nur 2011).  DPPH  merupakan  radikal  bebas  yang  stabil  pada  suhu  kamar  yang  menerima  elektron  atau hidrogen,  dan  membentuk  molekul  yang  stabil.  Adanya  serapan  warna  violet  pada  panjang  gelombang 517  nm  ditimbulkan  oleh  delokalisasi  elektron.  Ketika  seluruh  DPPH  telah  berikatan  dengan    senyawa antioksidan dalam ekstrak yang dapat memberikan atom hidrogen, maka larutan akan kehilangan warna ungu dan berubah menjadi warna kuning terang (Alam, Bristi, and Rafiquzzaman 2013).
Fraksinasi  dengan  ekstraksi  cair-cair  merupakan  teknik  pemisahan  yang  sering  digunakan  karena memiliki  karakteristik  yang  sesuai  dengan  zat  yang  akan  dipisahkan.  Pemilihan  pelarut  dalam  teknik pemisahan  secara  fraksinasi  dimaksudkan  agar  senyawa-  senyawa  tersebut  dapat  larut  dalam  pelarut berdasarkan tingkat kepolarannya (Setiawan and Febriyanti 2017). Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan penting dilakukan penelitian tentang aktivitas antioksidan infusa dan fraksi umbi bawang dayak dengan metode DPPH, penelitian ini belum pernah dilakukan sehingga perlu dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari fraksi-fraksi umbi bawang dayak (Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb. ) .

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  amoniak,  H 2 SO 4 2M,  pereaksi  Mayer,  pereaksi Dragendorff,  pereaksi  Wagner,  HCl  2M,  Magnesium,  HCl  1N,  FeCl 3 10%,  H 2 SO 4 1N,  pereaksi Liebermann-Buchard, asam asetat, etanol 96%, n-heksan, etil asetat, kloroform, serbuk DPPH, akuades, asam formiat, n-butanol dan metanol.

## Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah Spektrofotometer UV-Vis mini 1240 (Shimadzu), panci infundasi,  termometer  laboratorium,  kompor  listrik,  neraca  analitik  ketelitian  0,1  mg  (Mettler  Toledo), corong pisah, eksikator, tabung reaksi (pyrex), labu ukur 100 mL (pyrex), moisture analyzer , labu ukur 10 mL  (pyrex),  cawan  porselen,  pipet  ukur,  batang  pengaduk,  pipa  kapiler,  kain  flanel,  kertas  saring,  krus dan furnace ,  bejana  kromatografi  ( chamber ),  oven  YNC-OV  Yenaco,  lampu  UV 254 nm  dan  UV 366 nm, dan silica gel 60 F 254 .

## Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel  umbi  bawang  dayak  diambil  di  desa  Harjosari  Lor, Kecamatan  Adiwerna,  Kabupaten Tegal kemudian determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Bahan Alam Prodi S1 Farmasi STIKes Bhakti Mandala Husada Slawi. Determinasi tanaman bertujuan untuk memastikan kebenaran tanaman yang akan digunakan dalam penelitian.

## Fraksinasi
Proses fraksinasi dilakukan dengan cara ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut n- heksan, etil asetat,
dan air. Infusa kental umbi bawang dayak diambil sebanyak 10 g dan dilarutkan dalam 100 mL air yang selanjutnya  akan  dilakukan  pemisahan  menggunakan  corong  pisah  dengan  pelarut  yang  tidak  saling campur  satu  sama  lain  yaitu  dengan  n-heksan  kemudian  dilanjutkan  dengan  etil  asetat  perbandingan ekstrak cair : pelarut = 1 : 1 (Setiawan and Febriyanti 2017).
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

## 1. Identifikasi Senyawa Flavonoid
Fase  gerak  yang  digunakan  etil  asetat  :  asam  formiat  :  air  (10:2:3)  dideteksi  dengan  penampak noda menggunakan uap amoniak, fase diam yang digunakan silica gel F 254 . Hasil positif ditunjukkan dengan adanya noda berwarna kuning yang cepat memudar (Wigati and Rahardian 2018).

## 2. Identifikasi Senyawa Alkaloid
Fase  gerak  yang  digunakan  kloroform  :  etil  asetat  (70:30)  dideteksi  dengan  penampak  noda menggunakan  pereaksi Dragendorff ,  fase  diam  yang  digunakan silica  gel F 254 .  Hasil  positif ditunjukkan terbentuknya noda berwarna jingga (Wigati and Rahardian 2018).
3. Identifikasi Senyawa Tanin
Fase gerak yang digunakan n-butanol : asam asetat : air (3:1:1) dideteksi dengan penampak noda menggunakan pereaksi FeCl 3 , fase diam yang digunakan silica gel F 254 . Hasil positif menghasilkan noda berwarna biru kehitaman (Wigati and Rahardian 2018).
4. Identifikasi Senyawa Saponin
Fase gerak yang digunakan kloroform : metanol : air (64:50:10) fase diam yang digunakan silica gel F 254 (Wigati and Rahardian 2018).
5. Identifikasi Senyawa Fenolik
Fase  gerak  yang  digunakan  etil  asetat  :  n-heksan  (6:4)  dideteksi  dengan  penampak  noda menggunakan  pereaksi  FeCl 3 ,  fase  diam  yang  digunakan silica  gel F 254 .  Hasil  positif  ditunjukkan terbentuk noda berwarna hijau, merah, ungu, biru kelabu, atau hitam (Putri and Haryoto 2018)
6. Identifikasi Senyawa Steroid/ Terpenoid
Fase  gerak  yang  digunakan  etil  asetat  :  n-heksan  (1:9)  dideteksi  dengan  penampak  bercak menggunakan  pereaksi Liebermann-  Burchard ,  fase  diam  yang  digunakan silica  gel F 254 .  Hasil positif ditunjukkan adanya noda berwarna hijau kebiruan pada UV 366 nm (Putri and Haryoto 2018). Uji Aktivitas Antioksidan
1. Pembuatan Larutan Stok DPPH 0,1 mM
Pembuatan larutan stok DPPH dilakukan dengan  menimbang  serbuk  DPPH  sebanyak  3,9  mg kemudian  dimasukkan  kedalam  labu  takar  100  mL  dilarutkan  dengan  etanol  96  %  sampai  garis tanda sehingga diperoleh larutan DPPH  0,1mM (Hidayati et al. 2017).
2. Penentuan Panjang Gelombang Larutan DPPH 0,1 mM
Penentuan  panjang  gelombang  (λ)  maksimal  dilakukan  dengan  cara  mengukur  4  mL  larutan DPPH 0,1 mM pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 400-600 nm untuk mendapatkan absorbansi ± 0,2-0,8 (Nugraheni 2007).
3. Penentuan Operating Time
Sampel sebanyak 1 mL ditambah dengan 3 mL larutan DPPH 0,1 mM selanjutnya dihomogenkan selama 1 menit menggunakan vortex dan diukur absorbansinya tiap 5 menit selama 1 jam. Dimulai dari menit ke-0 sampai menit 60 pada λ maksimal yang diperoleh. Waktu peredaman radikal DPPH yang menghasilkan absorbansi paling stabil merupakan operating time (Hidayati et al. 2017).
4. Pembuatan Seri Konsentrasi Larutan Uji
Sebanyak  masing-masing  10  mg  fraksi-  fraksi  umbi  bawang  dayak  dilarutkan  dalam  10  mL etanol 96 % sehingga diperoleh larutan stok dengan konsentrasi 1000 ppm. Setiap sampel dibuat pengenceran dengan konsentrasi 10 ppm, 30 ppm, 50 ppm, 70 ppm, dan 90 ppm (Setiawan and Febriyanti 2017).
5. Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan cara 3 mL larutan DPPH 0,1 mM dimasukan kedalam tabung  reaksi  kemudian  ditambah  1  mL  larutan  uji  dengan  berbagai  konsentrasi.  Selanjutnya dihomogenkan  selama  1  menit  menggunakan vortex dan  didiamkan  selama operating  time yang didapatkan  masing-  masing  sampel  uji.  Setelah  itu  dibaca  absorbansinya  pada  panjang  gelombang
maksimal  DPPH  0,1  mM  yang  sudah  diperoleh.  Sebagai  kontrol  digunakan  larutan  DPPH  0,1  mM tanpa penambahan larutan uji (Molyneux 2004).

## HASIL PENELITIAN

## 1. Hasil Fraksinasi
Hasil  fraksi  n-heksan  merupakan  larutan  berwarna  kuning  0,08  g  dengan  nilai  rendemen  0,8  %. Fraksi etil asetat yang diperoleh berawarna merah jingga kemudian diuapkan sampai terbentuk fraksi etil asetat pekat  seberat 0,33  g  dengan  nilai  rendemen  3,3  %.  Fraksi  air  yang  tersisa  mengandung  senyawa polar  dengan  warna  larutan  coklat  pekat,  kemudian  diuapkan  untuk  menghilangkan  pelarut  yang digunakan. Didapatkan hasil fraksi air pekat seberat 5,36 g dengan nilai rendemen 53,6 %.

## 2. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Hasil identifikasi metabolit sekunder pada fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan umbi bawang dayak dengan metode kromatografi lapis tipis dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Identifikasi Metabolit Sekunder pada Fraksi Air, Fraksi Etil Asetat, dan Fraksi N-

## Heksan dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Senyawa Rf (cm) Fraksi Air Fraksi Etil Asetat Fraksi n-Heksan Literatur Flavonoid 0,93 0,93 - 0,94 (Wigati and Rahardian 2018) Alkaloid - 0,93 0,93 0,94 (Wigati and Rahardian 2018) Tanin 0,92 0,92 0,93 0,93 (Wigati and Rahardian 2018) Saponin 0,81 - - 0,86 (Wigati and Rahardian 2018) Fenolik - 0,83 - 0,87 (Putri and Haryoto 2018) Steroid/ Terpenoid - 0,77 0,77 0,77 (Putri and Haryoto 2018)
Hasil kromatogram identifikasi senyawa flavonoid dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Hasil KLT senyawa flavonoid menggunakan plat silica gel F254 dengan fase gerak yang digunakan etil asetat : asam formiat : air (10:2:3) dideteksi dengan penampak noda menggunakan uap amoniak
Keterangan Gambar :
a) Fraksi Air
Dideteksi pada lampu UV 254 nm dan 366 nm terdapat noda dengan nilai Rf 0,93 yang merupakan senyawa Flavonoid
b) Fraksi Etil Asetat
Dideteksi pada lampu UV 254 nm dan 366 nm terdapat noda dengan nilai Rf 0,93 yang merupakan senyawa Flavonoid
Hasil kromatogram  identifikasi senyawa alkaloid dapat dilihat pada gambar 2.
(a)
(b)
Oktariani Pramiastuti | Aktivitas Antioksidan Fraksi Umbi….. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Gambar 2. Hasil KLT senyawa alkaloid menggunakan plat silica gel F 254 dengan fase gerak yang digunakan kloroform : etil asetat (70:30) dideteksi dengan penampak noda menggunakan pereaksi Dragendorff
Keterangan Gambar:
a) Fraksi Etil Asetat
Dideteksi pada lampu UV 254 nm dan 366 nm terdapat bercak dengan nilai Rf : - Noda 1 = Rf 0,25 - Noda 2 = Rf 0,37 - Noda 3 = Rf 0,52 - Noda 4 = Rf 0,62
- Noda 5 = Rf 0,93 (atas)  merupakan senyawa alkaloid
b) Fraksi N-Heksan
Dideteksi pada lampu UV 254 nm dan 366 nm terdapat bercak dengan nilai Rf : - Noda 1 = Rf 0,72 (bawah) - Noda 2 = Rf 0,81 - Noda 3 = Rf 0,87
- Noda 4 = Rf 0,93 (atas) merupakan senyawa alkaloid
Hasil kromatogram identifikasi senyawa tanin dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar 3. Hasil KLT senyawa tanin menggunakan plat silica gel F 254 dengan fase gerak yang digunakan n-butanol : asam asetat : air (3:1:1) dideteksi dengan penampak noda menggunakan pereaksi FeCl 3
Keterangan Gambar:
a) Fraksi Air = Rf 0,92 merupakan senyawa tanin
b) Fraksi Etil Asetat  = Rf 0,92 merupakan senyawa tanin c) Fraksi N-Heksan = Rf 0,93 merupakan senyawa tanin
Hasil kromatogram  identifikasi senyawa saponin dapat dilihat pada gambar 4.
(a) (b)
(a )
(b ) (c)
Gambar 4. Hasil KLT senyawa saponin menggunakan plat silica gel F 254 dengan fase gerak yang digunakan kloroform : metanol : air (64:50:10)
Keterangan gambar : Fraksi Air = Rf 0,81 merupakan senyawa saponin
Hasil kromatogram identifikasi senyawa fenolik dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar 5. Hasil KLT senyawa fenolik menggunakan plat silica gel F 254 dengan fase gerak yang digunakan etil asetat : n-heksan (6:4) dideteksi dengan penampak noda menggunakan pereaksi FeCl 3 Keterangan Gambar:
a) Fraksi Etil Asetat
- Noda 1 = Rf 0,53 (bawah)
- Noda 2 = Rf 0,62
- Noda 3 = Rf 0,75
- Noda 4 = 0,83
- Noda 5 = Rf 0,93 (atas) merupakan senyawa fenolik
b) Fraksi N-Heksan
- Noda 1 = Rf 0,56 (bawah)
- Noda 2 = Rf 0,75
- Noda 3 = Rf 0,83
- Noda 4 = Rf 0,93 (atas) merupakan senyawa fenolik
Hasil kromatogram identifikasi senyawa steroid/triterpenoid dapat dilihat pada gambar 6.
(a) (b)
Oktariani Pramiastuti | Aktivitas Antioksidan Fraksi Umbi….. Jurnal Wiyata, Vol. 8 No. 1 Tahun 2021
Gambar 6. Hasil KLT senyawa steroid/ triterpenoid menggunakan fase diam plat silica gel F 254 dengan fase gerak yang digunakan etil asetat : n-heksan (1:9) dideteksi dengan penampak bercak menggunakan pereaksi Liebermann- Burchard Keterangan Gambar:
a) Fraksi Etil Asetat
- Noda 1 = Rf 0,1 (bawah)
- Noda 2 = Rf 0,33
- Noda 3 = Rf 0,77 (atas) merupakan senyawa steroid/triterpenoid
b) Fraksi N-Heksan
- Noda 1 = Rf 0,1 (bawah)
- Noda 2 = Rf 0,77 (atas) merupakan senyawa steroid/triterpenoid

## 3. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
Hasil pengujian aktivitas antioksidan pada fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Nilai IC 50 Fraksi Air, Fraksi Etil Asetat, dan Fraksi N-Heksan
Replikasi Fraksi Air Fraksi Etil Asetat Fraksi N-Heksan 1 92,82 ppm 27,23 ppm 11,43 ppm 2 95,66 ppm 26,40 ppm 10,59 ppm 3 100,26 ppm 27,32 ppm 10,08 ppm Rata-rata 96,24 ppm 26,98 ppm 10,7 ppm SD 3,754 0,507 0,681 Kategori Kuat Sangat Kuat Sangat Kuat

## PEMBAHASAN
Umbi bawang dayak ( Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb.) yang digunakan adalah umbi yang berumur 3 bulan atau yang sudah mengeluarkan bunga, umbi berbentuk bulat telur memanjang, dan berwarna merah dengan panjang ± 5 cm. Pemilihan bahan uji pada kondisi tersebut karena produksi metabolit sekunder diharapkan  sudah  maksimal  dengan  kadar  yang  seragam  (Puspadewi,  Adirestuti,  and  Menawati  2013). Hal  ini  didukung  oleh  penelitian  sebelumnya  yang  menyatakan  bahwa  bawang  dayak  yang  ditanam  di tempat terbuka menunjukkan peningkatan kandungan  metabolit sekunder (bioaktif) pada umbi berumur 12  minggu.  Semakin  banyak  metabolit  sekunder  yang  dikandung  maka  akan  semakin  kuat  aktivitas antioksidannya (Kuntorini 2013).
Metode fraksinasi yang digunakan yaitu metode partisi cair-cair dengan tujuan untuk memisahkan zat aktif  berdasarkan  tingkat  polaritasnya,  sehingga  senyawa  yang  bersifat  polar  akan  tertarik  ke  pelarut polar, senyawa yang bersifat semipolar akan tertarik dalam pelarut semipolar, begitu pula pada senyawa nonpolar  akan  tertarik  ke  pelarut  nonpolar  (Harborne  1987) . Prinsip  pemisahan  pada  proses  fraksinasi
(a)
(b)
adalah  didasarkan  pada  perbedaan  tingkat  kepolaran  dan  perbedaan  bobot  jenis  antara  dua  fraksi  (D. Pratiwi, Wahdaningsih, and Isnindar 2013).
Identifikasi  flavonoid  menggunakan  uap  amoniak  menunjukkan  hasil  positif  yaitu  adanya  noda berwarna kuning yang cepat memudar. Berdasarkan hasil pengamatan diperoleh noda pada  fraksi air, dan fraksi etil asetat, sedangkan pada fraksi n-heksan tidak terdeteksi. Penelitian yang dilakukan Wigati dan Rahardian (2018) menunjukkan bahwa identifikasi senyawa flavonoid yang dilakukan memperoleh nilai Rf  0,94  hal  ini  sesuai  dengan  bercak  yang  diperoleh  pada  identifikasi  kromatografi  lapis  tipis  senyawa flavonoid fraksi air, dan fraksi etil asetat. Hasil kromatogram dapat dilihat pada gambar 1.
Pada identifikasi senyawa alkaloid, plat silika gel disemprot dengan pereaksi Dragendorff hasil positif ditandai  dengan  terbentuknya  noda  berwarna  jingga  (Wigati  and  Rahardian  2018).  Berdasarkan  hasil penelitian  diperoleh  hasil  kromatogram  fraksi  etil  asetat  diperoleh  5  noda  dengan  nilai  Rf  0,93  (atas); 0,62; 0,52; 0,37; dan 0,25 (bawah), diduga noda yang identik senyawa alkaloid berada pada noda kelima (atas)  dengan  nilai  Rf  0,93.  Pada  kromatogram  fraksi  n-heksan  diperoleh  4  noda  dengan  nilai  Rf  0,93 (atas);  0,87;  0,81;  dan  0,72  (bawah),  diduga  noda  yang  identik  senyawa  alkaloid  berada  pada  noda keempat  dengan  nilai  Rf  0,93.  Hasil  yang  diperoleh  didukung  penelitian  Wigati  dan  Rahardian  (2018) dengan  perolehan  nilai  Rf  0,94  pada  identifikasi  kromatografi  lapis  tipis  senyawa  alkaloid.  Hasil kromatogram dapat dilihat pada gambar 2.
Tanin  merupakan  senyawa  golongan  fenolik  dengan  kerangka  cincin  aromatik  yang  mengandung gugus  hidroksil  (-OH).  Identifikasi  tannin  menggunakan  FeCl 3 sebagai  penampak  bercak  kemudian dideteksi  dibawah  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm,  hasil  positif  pada  plat  KLT  terdapat  noda  berwarna biru  kehitaman  yang  berarti  menunjukkan  adanya  reaksi  antara  FeCl 3 dengan  gugus  hidroksil  pada senyawa  tannin  (Wigati  and  Rahardian  2018).  Hasil  pengamatan  masing-masing  sampel  fraksi  air memperoleh noda pada Rf 0,92, fraksi etil asetat dengan nilai Rf 0,92 dan fraksi n-heksan pada nilai Rf 0,93.  Diduga  pada  Rf  tersebut  adalah  senyawa  tanin  karena  noda  berwarna  biru  kehitaman  setelah disemprot  dengan  FeCl 3 yang  disebabkan  adanya  reaksi  dengan  gugus  hidroksil  pada  senyawa  tanin. Hasil  yang  diperoleh  didukung  oleh  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wigati  dan  Rahardian  (2018)  yang memperoleh  nilai  Rf  0,93  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa,  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  n- heksan  umbi  bawang  dayak  ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb)  mengandung  senyawa  tanin.  Hasil kromatogram dapat dilihat pada gambar 3.
Identifikasi senyawa saponin dideteksi dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm nampak noda berwarna biru.  Berdasarkan  hasil  pengamatan  diperoleh  pada  fraksi  air  diperoleh  nilai  Rf  0,81  sedangkan  pada fraksi etil asetat diperoleh nilai Rf 0,93 dan fraksi n-heksan dengan nilai Rf 0,9. Nilai Rf pada fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan melebihi nilai Rf penelitian yang dilakukan oleh Wigati dan Rahardian (2018) pada  identifikasi  kromatografi  lapis  tipis  senyawa  saponin  yaitu  0,86.  Pada  fraksi  air  dapat  dinyatakan mengandung  senyawa  saponin  karena  nilai  Rf  fraksi  air  identik  dengan  nilai  Rf  yang  diperoleh  pada penelitan Wigati dan Rahardian (2018). Hasil kromatogram dapat dilihat pada gambar 4.
Identifikasi senyawa golongan fenolik diperoleh noda pada plat KLT yang terpisah dengan cukup baik ditandai dengan nilai Rf pada kromatogram fraksi etil asetat diperoleh sebanyak 5 noda dengan nilai Rf 0,93 (atas); 0,83;  0,75; 0,62 dan 0,53 (bawah). Nilai Rf yang identik dengan senyawa fenolik pada fraksi etil asetat berada pada noda kelima dengan nilai Rf 0,93. Pada kromatogram fraksi n-heksan diperoleh 4 noda  dengan  nilai  Rf  0,93  (atas);  0,83;  0,75;  dan  0,56  (bawah).  Nilai  Rf  yang  identik  dengan  senyawa fenolik pada fraksi n-heksan berada pada noda ketiga dengan nilai Rf 0,83. Semua noda yang terdeteksi berwarna  biru  dibawah  lampu  UV  366  nm.  Hasil  positif  pada  plat  KLT  terdapat    noda    berwarna    biru kehitaman  yang  berarti  menunjukkan  adanya  reaksi  antara  FeCl 3 dengan  gugus  hidroksil  pada  senyawa golongan fenol (Ariyani, 2008 didalam Wigati & Rahardian, 2018). Diduga nilai Rf yang identik tersebut
senyawa fenolik, hasil ini didukung oleh penelitian  yang dilakukan oleh  Putri dan Haryoto (2018) yang menyatakan  nilai  Rf  pada  identifikasi  kromatografi  lapis  tipis  senyawa  fenolik  sebesar  0,87  sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksan  mengandung  senyawa  fenolik.  Hasil kromatogram dapat dilihat pada gambar 5.
Identifikasi senyawa steroid/triterpenoid pada fraksi etil asetat terdeteksi 3 noda dengan nilai Rf 0,77 (atas);  0,33;  dan  0,1  (bawah).  Hasil  kromatogram  fraksi  n-heksan  terdapat  2  noda  dengan  nilai  Rf  0,77 dan  0,1.  Nilai  Rf  yang  identik  dengan  senyawa  steroid/triterpenoid  berada  pada  noda  dengan  nilai  Rf 0,77. Noda yang identik  diduga  senyawa  steroid/triterpenoid,  hasil  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Putri  dan  Haryoto  (2018)    yang  mendapatkan  nilai  Rf  0,77.  Hasil  kromatogram  dapat dilihat pada gambar 6.
Pemilihan  metode  DPPH  untuk  penentuan  aktivitas  antioksidan  didasarkan  pada  keunggulannnya seperti  mudah,  cepat,  sederhana,  reprodusibel,  baik  untuk  sampel  dengan  polaritas  tertentu,  sensitif  dan hanya  membutuhkan  sedikit  sampel  (Isnindar,  Wahyuono,  and  Setyowati  2011).  Dalam  penelitian  uji aktivitas  antioksidan  infusa  umbi  bawang  dayak  ( Eleutherine  bulbosa )  diawali  dengan  menentukan panjang gelombang maksimal DPPH terlebih dahulu. Penentuan panjang gelombang maksimal bertujuan untuk mengetahui panjang gelombang yang mempunyai serapan maksimal, yaitu saat senyawa berwarna yang  terbentuk  telah  optimal  sehingga  diperoleh  kepekaan  yang  maksimal  (Rastuti  and  Purwati  2012). Hasil pengukuran absorbansi  pada larutan DPPH 0,1 mM adalah sesuai dengan range absorbansi yaitu ± 0,2 – 0,8 (Nugraheni 2007). Panjang gelombang maksimal yang didapatkan sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Nadhira et al (2018) yaitu 516,5 nm.
Penentuan operating  time (OT)  digunakan  untuk  menentukan  waktu  yang  paling  tepat  larutan  uji dalam  meredam  radikal  DPPH,  operating  time  ini  menunjukkan  bahwa  reaksi  antara  larutan  uji  dan DPPH  telah  stabil  yang  dapat  ditunjukkan  dengan  tidak  terjadinya  penurunan  absorbansi.  Pengukuran operating time yang sesuai akan diperoleh keterulangan yang tinggi. Hal ini disebabkan karena pada awal reaksi,  absorbansi  pada  senyawa  yang  berwarna  ini  akan  meningkat  sampai  waktu  tertentu  hingga diperoleh absorbansi yang stabil (Gandjar and Rohman 2007). Pada penentuan operating time dilakukan pengamatan 5 menit dalam interval waktu 60 menit. Hasil penentuan operating time pada fraksi air adalah menit ke 25 dan menit ke 30 sehingga diperoleh operating time selama 27 menit 30 detik. Pada fraksi etil asetat operating time terjadi pada menit ke 5, menit ke 10, dan menit ke 15 sehingga diperoleh operating time selama 10 menit. Sedangkan pada fraksi n-heksan operating time terjadi pada menit ke 5 dan menit ke 10 sehingga diperoleh operating time selama 7 menit 30 detik.
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  seri  konsentrasi  10 ppm,  30  ppm,  50  ppm,  70  ppm,  dan  90  ppm  dengan  tiga  kali  replikasi.  Pengujian  ini  dilakukan  untuk mengetahui absorbansi DPPH yang tersisa setelah ditambahkan sampel (Setiawan and Febriyanti 2017). Penurunan absorbansi diukur terhadap absorbansi kontrol yaitu absorbansi DPPH dalam etanol 96% tanpa penambahan sampel uji, nilai absorbansi kontrol yang diperoleh yaitu 0,583. Penurunan absorbansi DPPH ditunjukkan  dengan  terjadinya  degradasi  warna  DPPH  dari  ungu  menjadi  kuning  pucat  (Kuntorini  and Astuti 2010).
Proses  degradasi  warna  DPPH  berbanding  lurus  dengan  konsentrasi  sampel  yang  ditambahkan,  dari nilai absorbansi DPPH yang diperoleh dapat ditentukan persen pengahambatan terhadap radikal DPPH (% inhibisi).  Persentase  penghambatan  ini  diperoleh  dari  perbedaan  nilai  absorbansi  kontrol  dengan absorbansi  sampel  yang  diuji  pada  panjang  gelombang  maksimal.  Selanjutnya  persamaan  regresi  linier yang  diperoleh  dari  grafik  hubungan  antara  konsentrasi  sampel  dengan  persen  penghambatan  DPPH digunakan  untuk  mencari  nilai  IC 50 .  Besarnya  aktivitas  antioksidan  ditandai  dengan  nilai  IC 50 yaitu bilangan yang menunjukkan konsentrasi sampel (ppm) yang mampu menghambat proses oksidasi radikal
DPPH sebesar 50 %. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin  tinggi aktivitas antioksidannya  (Setiawan and Febriyanti 2017).
Penentuan nilai IC 50 dari infusa, fraksi air, fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan dilakukan dengan cara memasukkan nilai hasil perhitungan ke dalam persamaan regresi linier dengan konsentrasi (ppm) sebagai absis (x) dan nilai % inhibisi sebagai ordinat (y). Nilai IC 50 diperoleh dari nilai x setelah mengganti y= 50 pada  y  =  a  +  bx.  Berdasarkan  tingkat  kekuatan  antioksidan  dengan  metode  DPPH  senyawa  dikatakan memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 <  50  ppm,  dinyatakan  kuat  50  –  100  ppm, dinyatakan sedang jika nilai IC 50 101 – 250 ppm, dinyatakan lemah 250 – 500 ppm, dan dinyatakan tidak aktif jika nilai IC 50 > 500 ppm (Wahyu 2014).
Berdasarkan  tabel  2.  di  atas  dapat  disimpulkan  bahwa  tingkat  intensitas  aktivitas  antioksidan  yang diperoleh sampel fraksi air tergolong kuat dengan rata-rata nilai IC 50 > 50 ppm yaitu rata-rata nilai IC 50 96,24 ppm pada fraksi air. Sedangkan intensitas aktivitas antioksidan fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan tergolong  sangat  kuat  karena  rata-rata  nilai  IC 50 <  50  ppm  yaitu  26,98  ppm  pada  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi n-heksan memiliki nilai rata-rata IC 50 10,7 ppm (Armala 2009).
Hasil  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan  SPSS  dan  diuji  Kruskal-Wallis  diperoleh  nilai signifikansi sebesar 0,016 < 0,05 dan Mann- Whitney diperoleh nilai signifikansi ≤ 0,05 yang berarti ada perbedaan signifikan nilai IC 50 dari fraksi-fraksi umbi bawang dayak ( Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb).
Diduga  bahwa  golongan  senyawa  yang  memberikan  aktivitas  antioksidan  fraksi  air  adalah  senyawa tanin,  dan  flavonoid.  Senyawa  yang  diduga  memberikan  aktivitas  antioksidan  fraksi  etil  asetat  adalah golongan  senyawa  alkaloid,  fenolik,  tanin,  dan  flavonoid.  Senyawa  fenolik  dan  flavonoid  berperan sebagai  antioksidan  karena  memiliki  gugus  hidroksil  yang  dapat  melepaskan  proton  dalam  bentuk  ion Hidrogen.  Ion  Hidrogen  hanya  memiliki  satu  buah  proton  dan  tidak  memiliki  elektron,  sehingga  dalam elektron radikal yang terdapat pada atom nitrogen di senyawa DPPH berikatan dengan ion hidrogen dan menghasilkan  DPPH  tereduksi  (Gurav  et  al.  2007). Radikal  pada  DPPH  dapat tereduksi  ketika  bereaksi dengan donor hidrogen yang terdapat dalam senyawa fenolik (Arazo et al. 2011).
Pada  fraksi  n-heksan  diduga  senyawa  yang  memberikan  aktivitas  antioksidan  adalah  tanin, steroid/triterpenoid  dan  alkaloid  dengan  mekanisme  antioksidan  sekunder  yaitu  sebagai  penangkap radikal  bebas.  Alkaloid  juga  memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan  yang  kuat,  salah  satunya  adalah alkaloid jenis  quinolizidine  (Maiza  et  al.  2007).  Selain  itu  senyawa  golongan  steroid/triterpenoid  dalam fraksi  n-heksan  diduga  turut  berperan  dalam  memberikan  aktivitas  antioksidan.  Mekanisme  yang diperankan oleh steroid/triterpenoid sebagai penangkap radikal bebas (L. Pratiwi et al. 2016).
Perbedaan  nilai  IC 50 dari  3  sampel  uji  yaitu  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksan dikarenakan  ada  perbedaan  polaritas  pelarut  yang  digunakan.  Berdasarkan  hasil uji  hipotesis  yang  telah dilakukan  fraksi  air  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  paling  kuat  karena  memiliki  tingkat  kepolaran yang lebih besar daripada pelarut etil asetat dan pelarut n-heksan. Sedangkan karakteristik senyawa yang terdapat pada umbi bawang dayak sebagian besar merupakan senyawa polar seperti fenolik dan flavonoid sehingga kelarutannya lebih besar pada infusa dan fraksi air, hal ini memungkinkan memberikan aktivitas antioksidan yang baik (Setiawan and Febriyanti 2017).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  Fraksi  n-heksan  dan  fraksi  etil  asetat  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat  karena  nilai  IC 50 <  50  ppm  dengan  nilai  IC 50 berturut-turut  26,98  ppm dan 10,7 ppm, sedangkan fraksi air memiliki aktivitas antioksidan yang kuat dengan nilai IC 50 96,24 ppm  karena  nilai  IC 50 >  50  ppm.  Aktivitas  antioksidan  yang  dihasilkan  diduga  dari  kandungan
senyawa metabolit sekunder didalam infusa umbi bawang dayak ( Eleutherine bulbosa (Mill) Urb.).

## SARAN
Perlu dilakukan pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode yang lain seperti metode Tiosianat, metode  FRAP    (Ferric  Reducing  Ability  of  Plasma),  ABTS    (2,2-Azinobic  3-ethilbenzothiazoli-6- Sulfoniacid)  terhadap  infusa  kental  umbi  bawang  dayak  (Eleutherine  bulbosa)  beserta  fraksi-fraksinya. Dilakukan penelitian lebih lanjut terkait isolasi dan analisis instrumen untuk mengetahui struktur senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan.

## REFERENSI
Alam,  Md  Nur,  Nusrat  Jahan  Bristi,  and  Md  Rafiquzzaman.  2013.  “Review  on  in  Vivo  and  in  Vitro Methods  Evaluation  of  Antioxidant  Activity.” Saudi  Pharmaceutical  Journal 21(2):  143–52. http://dx.doi.org/10.1016/j.jsps.2012.05.002.
Arazo,  Migdalia  et  al.  2011.  “Antioxidant  Properties  of  Pulp  and  Peel  of  Yellow  Mangosteen  Fruits.”
Emirates Journal of Food and Agriculture 23(6): 517–24.
Armala, M.M. 2009. “Daya Antioksidan Fraksi Air Ekstrak Herba Kenikir (Cosmos Caudatus H. B. K.) Dan Profil KLT.” Skripsi Universitas Islam Indonesia : 39.
Gandjar, Ibnu Gholib, and Abdul Rohman. 2007. Kimia Farmasi Analisis . Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Gurav,  Shailendra  S.  et  al.  2007.  “Free  Radical  Scavenging  Activity  of  Polygala  Chinensis  Linn.” Pharmacologyonline 2: 245–53.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia . Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Hidayati,  Devi  Nisa  et  al.  2017.  “Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Dan  Fraksi  Jantung  Pisang Mas (Musa Acuminata Colla) Menggunakan Meotode DPPH.” Journal of Pharmacy 14(1): 9–14.
Isnindar,  Subagus  Wahyuono,  and  Erna  Prawita  Setyowati.  2011.  “Isolation  and  Identification  of Antioxidant Compound of Persimmon Leaves (Diospyros Kaki Thunb.) Using DPPH (2,2 Diphenyl- 1-Pikrilhidrazil) Method.” Majalah Obat Tradisional 16(3): 161–69.
Kuntorini,  Evi  Mintowati.  2013.  “Kemampuan  Antioksidan  Bulbus  Bawang  Dayak  (  Eleutherine Americana  Merr  )  Pada  Umur  Berbeda.” Prosiding  Semirata  FMIPA  Universitas  Lampung :  297– 302.
Kuntorini,  Evi  Mintowati,  and  Maria  Dewi  Astuti.  2010.  “Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine Americana Merr.).” Sains dan Terapan Kimia 4(1): 15– 22. http://ppjp.unlam.ac.id/journal/index.php/jstk/article/download/2043/1790.
Maiza, B. F et al. 2007. “Antioxidant Activities Alkaloid Extract of Two Algerian Species of Fumaria.” Fumaria caapreolata and Fumaria bastardii 1(2–3): 28–35.
Molyneux,  Philip.  2004.  “The  Use  of  the  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl-Hydrazyl  (DPPH)  for Estimating  Anti-Oxidant  Activity.” Songklanakarin  Journal  of  Science  and  Technology 26(May): 211–19.
Nadhira,  Arina  Nisyya  et  al.  2018.  “Pengaruh  Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Jeruk  Purut  (  Citrus Hystrix Dc .) Dan Daun Jati Belanda ( Guazuma Ulmifolia L .) Terhadap Aktivitas Antioksidannya.” Annual Pharmacy Conference. : 103–7.
Nugraheni.  2007.  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi Perbandingan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Metanol Dan Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sunchus Arvensis L.) Serta Penentuan EC50 Dengan Metode
DPPH (1,1difenil-2-Pikrilhidrazil) . Semarang.
Nur, Alia Mustika. 2011. “Kapasitas Antioksidan Bawang Dayak (Eleutherine Palmifolia) Dalam Bentuk Segar,  Simplisia  Dan  Keripik,  Pada  Pelarut  Nonpolar,  Semipolar  Dan  Polar.” Institut  Pertanian Bogor : 1–109.
Pramiastuti, Oktariani. 2016. Isolasi Dan Identifikasi Pinostrobin Dan Pinocembrin Dari Rimpang Temu Kunci  (Bosenbergia  Pandurata  (Roxb).  (Schlecht)  Serta  Uji  Aktivitas  Antioksidannya .  Yogyakarta: Universitas Gadjahmada Press.
Pratiwi, Dina, Sri Wahdaningsih, and Isnindar. 2013. “The Test of Antioxidant Activity From Bawang Mekah  Leaves  (Eleutherine  Americana  Merr.)  Using  Dpph  (2,2-  Diphenyl-1-Picrylhydrazyl) Method.” Trad. Med. J 18(January): 10–11.
Pratiwi, Liza, Achmad Fudholi, Ronny Martien, and Suwidjiyo Pramono. 2016. “Ethanol Extract, Ethyl Acetate  Extract,  Ethyl  Acetate  Fraction,  and  n-Heksan  Fraction  Mangosteen  Peels  (Garcinia Mangostana  L.)  As  Source  of  Bioactive  Substance  Free-Radical  Scavengers.” JPSCR :  Journal  of Pharmaceutical Science and Clinical Research 1(2): 71.
Puspadewi,  Ririn,  Putranti  Adirestuti,  and  Rizka  Menawati.  2013.  “Khasiat  Umbi  Bawang  Dayak (Eleutherine  Palmifolia  (L.)  Merr.)  Sebagai  Herbal  Antimikroba  Kulit.” Kartika  Jurnal  Ilmiah Farmasi 1(1): 31–37.
Putri, Erika Nuur Anisa, and Haryoto. 2018. “Aktivitas Antikanker Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak (Eleutherine Americana Merr.) Terhadap Sel Kanker Payudara T47D.” Publikasi Ilmiah 4: 64–72.
Rastuti,  Undri,  and  Purwati  Purwati.  2012.  “Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Kalba  (Albizia Falcataria) Dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil) Dan Identifikasi Senyawa Metabolit Sekundernya.” Molekul 7(1): 33.
Setiawan,  Nur  Candra  Eka,  and  Aninda  Febriyanti.  2017.  “Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Dan Fraksi-Fraksi  Umbi  Eleutherine  Palmifolia  (L.)  Merr  Ddengan  Metode  DPPH  (The  Antioxidant Activity  Of  Extract  And  Factions  Eleutherine  Palmifolia  (  L.  )  Merr  Bulbs  By  DPPH  Method).” Journal of Current Pharmaceutical Sciences 1(1): 2598–2095.
Soares, S. 2009. “Cigarette Smoking and Fertility.” Reproductive Biology Insights 2(1): 39–46.
Wahyu,  I.  2014. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Daun  Jambu  Mete  (Anacardium  Occidentale  L.)  Dengan Metode DPPH . Surakarta: Akademi Farmasi Nasional.
Wigati,  Dyan,  and  Ryan  Radix  Rahardian.  2018.  “Penetapan  Standarisasi  Non  Spesifik  Ekstrak  Etanol Hasil  Perkolasi  Umbi  Bawang  Dayak  (Eleutherine  Palmifolia  (L.)Merr).” JIFFK :  Jurnal  Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik 15(2): 36.