## DETEKSI KADAR ETANOL PADA MAKANAN TRADISIONAL LEMANG TAPAI MENGGUNAKAN MIKROBIAL BIOSENSOR
Nadratul Hanifah, Rahmondia Nanda Setiadi, Yanuar, Vira Annisa Rosandi, Lazuardi Umar* Jurusan Fisika, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Riau, Indonesia
* email: lazuardi@unri.ac.id

## ABSTRAK
Konsumsi  etanol  memiliki  konsekuensi  bagi  kesehatan,  dimana  penentuan  etanol  sangat  relevan  dengan  uji  toksikologi  klinis  yang mempengaruhi  sistem  saraf,  sistem  peredaran  darah,  sistem  pencernaan  sehingga  perlu  dideteksi.  Biosensor  amperometris  merupakan alternatif untuk deteksi etanol dalam makanan yang diamati melalui nilai tegangan output, diperoleh dari oksigen terlarut yang tertinggal dari  hasil  metabolisme  sel.  Pada  penelitian  ini  dilakukan  deteksi  etanol  secara  kuantitatif  memanfaatkan  biosensor  berbasis  sel  ragi Saccharomyces  cerevisiae  untuk  mengetahui  kadar  etanol  yang  terdapat  pada  makanan  tradisional  lemang  tapai  dengan  nilai  <5%. Larutan etanol standar dengan konsentrasi 1.2%, 2.43%, 3.64% dan 4.86% v/v sebagai kalibrasi sensor yang menunjukkan korelasi (r) yang  baik  yaitu  0.9937.  Hasil  pengukuran  lemang  tapai  yang  dideteksi  oleh  biosensor  menunjukkan  konsentrasi  etanol  2.79%. Pengolahan  data  konsentrasi  yang  dihasilkan  kemudian  diuji  menggunakan  metode  statistik  Analysis  of  Variance  (ANOVA)  untuk mengetahui signifikansi perbedaan data yang dihasilkan untuk tiap konsentrasi etanol yang diuji. Hasil penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan  kesadaran  dan  kewaspadaan  masyarakat  terhadap  adanya  etanol  dalam  makanan  tradisional  yang  berbahaya  ketika dikosumsi secara berlebih.
Kata Kunci: ANOVA; Biosensor amperometris: Etanol; Lemang tapai; Saccharomyses cerevisiae.

## Abstract
[Title: Ethanol Detection in Traditional Lemang Tapai Food Using Microbial Biosensors] Consumption of ethanol has consequences for health, and the determination of ethanol is relevant to clinical toxicology tests that affect the nervous system, circulatory system, and digestive system, so it needs to be detected. The amperometric biosensor is an alternative for the detection of ethanol in food, which is observed through the output potential value obtained from dissolved oxygen remaining from the results of cell metabolism. In this research, quantitative detection of ethanol was carried out using a biosensor based on the yeast cell Saccharomyces cerevisiae to determine the ethanol content found in traditional lemang tapai food with a value of <5%. Standard ethanol solution with concentrations of 1.2%, 2.43%, 3.64%, and 4.86% v/v as sensor calibration, which shows a good correlation (r) of 0.9937. The measurement results of Lemang Tapai detected by the biosensor showed an ethanol concentration of 2.79%. The processing of the resulting concentration data was then tested using the Analysis of Variance (ANOVA) statistical method to determine the significance of the differences in the resulting data for each tested ethanol concentration. The results of this study are expected to increase public awareness and vigilance about the presence of ethanol in traditional foods, which is dangerous when consumed in excess.
Keywords: Amperometric biosensor; ANOVA; ethanol; lemang tapai; Saccharomyces cerevisiae.

## Pendahuluan
Etanol  (C 2 H 6 O)  merupakan  senyawa  yang banyak terdapat pada berbagai produk makanan dan minuman, termasuk makanan tradisional (Destanoglu  &  Ates,  2019).  Keberadaan  dan konsentrasinya  dapat  sangat  memengaruhi  atribut sensorik, komposisi kimia, dan kualitas keseluruhan dari  bahan  makanan  ini  (Febriani,  2020).  Oleh karena itu, kuantifikasi etanol yang akurat dan andal dalam  makanan  tradisional  sangat  penting  untuk memastikan  keamanan  pangan,  kepatuhan  terhadap
standar  peraturan,  dan  menjaga  kepuasan konsumen.  Penentuan  kadar  etanol  dalam  makanan fermentasi  tradisional  sangat  diperlukan  untuk meningkatkan kesadaran dan kewaspadaan masyarakat  akan  adanya  etanol  dalam  makanan tradisional  yang  berbahaya  bila  dikonsumsi  secara berlebihan (Grand, 2018).
Metode  konvensional  untuk  kuantifikasi etanol  dalam  makanan  seringkali  melibatkan prosedur  yang  rumit  dan  memakan  waktu, membutuhkan  peralatan  laboratorium  yang  canggih
dan  personel  yang  terlatih  seperti,  titrasi winkler , versatile lab fermentor, spektrofotometri (Gonchar et al. , 2017). Perkembangan teknologi biosensor telah memberikan  alternatif  yang  menjanjikan  untuk analisis  etanol  yang  cepat  dan  efisien  dengan berbagai macam metode seperti, biosensor berbasis sel Gluconobacter (Reshetilov et  al. ,  2012)  dan biosensor berbasis PANI/AOX untuk deteksi etanol pada  minuman  kemasan  (Kuswandi et  al. ,  2014). Selain itu, Cinti (2017) juga mendeteksi etanol pada minuman bir menggunakan metode biosensor siklik voltametri  dengan  memanfaatkan  enzim,  dimana penggunaan  enzim  dalam  penelitian  memiliki kekurangan  seperti treatment yang  rumit  serta  biaya yang cukup mahal.
Penggunaan  ragi  dalam  penelitian  telah banyak  dilakukan  karena  genetiknya  mudah dimanipulasi,  penumbuhan  kultur  yang  cepat  serta tahan  terhadap  berbagai  kondisi  lingkungan ( Ż yma ń czyk-Duda et  al. ,  2016).  Ragi  adalah  jenis mikroorganisme  eukariotik  yang  sering  digunakan dalam  proses  fermentasi,  termasuk  fermentasi alkohol  yang  mengubah  gula  menjadi  etanol. Namun,  ragi  juga  dapat  menjadi  sensitif  terhadap etanol  dalam  konsentrasi  tertentu.  Ketika  ragi berada  dalam  lingkungan  yang  mengandung  etanol dengan  konsentrasi  yang  tinggi,  etanol  dapat menembus  dinding  sel  ragi  dan  merusak  membran sel, mengganggu fungsi seluler dan struktur sel ragi.
Penelitian  ini  melakukan  deteksi  etanol dengan menggunakan metode biosensor amperometris  berdasarkan  sel  ragi Saccharomyces cerevisiae, dimana  telah  mendapat  perhatian  karena spesifisitas  dan  kepekaannya  yang  tinggi  terhadap etanol,  membuatnya  sangat  cocok  untuk  aplikasi yang  berhubungan  dengan  makanan  (Martin-Yken, 2020).  Biosensor  amperometris,  khususnya, menawarkan  pendekatan  yang  kuat  untuk  deteksi etanol dengan mengukur arus listrik yang dihasilkan selama  reaksi  enzimatik  antara  etanol  dan  sel  ragi. Untuk  meningkatkan  sensitivitas  dan  akurasi biosensor  amperometris,  integrasi  komponen penguat  trans-impedansi  telah  diimplementasikan. Penguat ini mengubah sinyal arus menjadi tegangan output proporsional,  memungkinkan  pengukuran konsentrasi etanol yang lebih akurat dan kuantitatif. Sel  ragi  mengalami  asimilasi  etanol  selama  proses respirasi, yang menyebabkan konsumsi oksigen (O 2 ) di  sekitar  membran  sel.  Akibatnya,  terjadi perubahan  sinyal output .  Perubahan  tegangan output ini  berhubungan  dengan  perubahan  konsentrasi oksigen yang tersisa diambil sebagai indikator untuk mengukur konsentrasi etanol dalam sampel (Rotariu et  al. ,  2004). Analysis  of  variance (ANOVA) kemudian  digunakan  untuk  menilai  signifikansi  dari
data  yang  diperoleh,  menjelaskan  pengaruh konsentrasi  etanol  yang  berbeda  dari  sampel makanan tradisional.

## METODE
Kultivasi sel ragi Saccharomyses cerevisiae Strain ragi yang digunakan dalam penelitian ini  adalah Saccharomyses  cerevisiae FNCC-3049  dari Universitas  Gadjah  Mada  yang  terlihat  pada Gambar  1 ,  kemudian  ditumbuhkan  menggunakan media Potato  Dextrose  Agar (PDA)  dalam  bentuk kultur  agar  miring.  Medium Potato  Dextrose  Broth (PDB)  sebagai  medium  penyedia  nutrisi  bagi perkembangbiakkan  sel  ragi S.cerevisiae di dalam skala  laboratorium,  hal  ini  dikarenakan  medium PDB  kaya  akan  karbohidrat  berkualitas  tinggi  yang dibutuhkan untuk perkembangan sel ragi (Rosandi et al. , 2021).
Gambar 1. Sel ragi S.cerevisiae yang terlihat melalui mikroskop (Britannica, 2023).
Proses  perpindahan  kultur  murni  sel  ragi dilakukan  dengan  cara  diinokulasikan  secara  aseptis ke  dalam  tabung  reaksi  yang  mengandung  15  mL medium PDA dalam kondisi anaerobik mempergunakan  loop  inokulasi  (jarum  ose) sebanyak  1  ose  pada  suhu  ruang  28°C  dan  pH  6. Campuran  kultur  murni  sel  ragi  dalam  media  PDA kemudian diinkubasi dan ditutup dengan aluminium foil untuk meminimalisir kontaminasi.
Pertumbuhan sel ragi juga dihitung densitas sel  menggunakan  hemasitometer  dan  diobservasi menggunakan  mikroskop.  Densitas  sel  ragi sebanyak  26,8  x  10 6 sel/mL  diimobilisasi  ke  dalam chamber elektroda  sensor  menggunakan  mikropipet Eppendorf  untuk  diukur  nilai  tegangan output yang dihasilkan dari tingkat oksigen yang tertinggal dalam larutan setelah proses metabolisme sel ragi. Derajat keasaman  (pH)  ragi  diketahui  menggunakan  kertas indicator pH Merck.

## Preparasi sampel analit
Sampel uji penelitian ini adalah lemang tapai (terlihat  pada Gambar  2 )  yang  didistilasi  terlebih dahulu  untuk  mendapat  larutan  etanol  yang dikandungnya,  dimana  distilasi  dilakukan  selama  8
jam  dengan  volume  larutan  sebanyak  300  mL  pada suhu penguapan dipertahankan tidak lebih dari 80ºC.
Hasil  distilasi  lemang  tapai  dimasukkan kedalam labu takar 20 mL dan ditambahkan dengan akuades  hingga  volume  larutan  mencapai  batas  20 mL pada labu takar.
Gambar 2. Makanan tradisional lemang tapai.
Larutan  etanol  yang  digunakan  yaitu  etanol 96%  Merck  100971  Emprove.  Kalibrasi  sensor dilakukan  untuk  mendeteksi  etanol,  digunakan larutan etanol standar dengan variasi konsentrasi 0,2 M;  0,4  M;  0,6  M  dan  0,8  M  memiliki  nilai  yang setara dengan 1,2%; 2,43%; 3,64% dan 4,86% v/v, didapat  menggunakan  metode  pengenceran  larutan etanol  murni    (96%).  Pengukuran  nilai  tegangan output biosensor  dengan  konsentasi  etanol  terkecil dan  terbesar  dari  kalibrasi  sensor  juga  digunakan sebagai perbandingan terhadap hasil pengukuran dari sampel uji lemang tapai.
(a) (b)
Gambar 3. (a) Set up pengukuran biosensor dan (b) Antarmuka software Biosensor
Biosensor amperometris Biosensor amperometris  dengan berdasarkan prinsip  potensiostat  yang  terintegrasi  sirkuit trans- impedance  amplifier (TIA),  dimana  dalam  sirkuit  ini terdapat  hambatan feedback yang  dipasang  dalam konfigurasi inverting sehingga  mengubah  arus masukan  menjadi  tegangan output ,  dimana  arus masukan  berbanding  terbalik  dengan  tegangan output .  Potensiostat  bekerja  dengan  menggunakan tiga  elektroda,  yaitu  elektroda  kerja  ( working electrode /WE),  elektroda  referensi  ( reference electrode /RE)  dan  elektroda  pendamping  ( auxiliary electrode /AE). Elektroda
sensor
didesain
dengan
menggunakan  elektroda  platina  (Pt)  sebagai elektroda  kerja  dan  elektroda  Ag/AgCl  sebagai elektroda  referensi  dan  elektroda  pendamping (Umar et  al., 2017).  Elektroda  sensor  terhubung dengan  modul  elektronik  biosensor  untuk mendapatkan  data  hasil  pengukuran  dalam  bentuk grafik  tegangan output terhadap  waktu  yang ditampilkan oleh perangkat lunak komputer.
Set up eksperimen Pengukuran  nilai  tegangan output stasioner menggunakan  biosensor  dengan  skema  pengukuran seperti pada Gambar 3(a) . Sel ragi dan sampel uji (larutan etanol standar / lemang tapai) diimobilisasi dengan volume 150 µL ke dalam chamber elektroda sensor  menggunakan  mikropipet  Eppendorf  untuk setiap pengukuran biosensor. Pengulangan pengukuran dilakukan sebanyak 5 kali (n=5) dengan perlakuan  yang  sama.  Data  hasil  pengukuran ditampilkan real-time seperti  pada Gambar  3(b) , yang  menunjukkan  hasil  tegangan output terhadap waktu.
Analysis of  Variance (ANOVA) Analysis  of  Variance (ANOVA)  adalah  teknik statistik  yang  biasa  digunakan  untuk  menguji kesetaraan  antara  beberapa  rata-rata  dengan membandingkan  varian  antar  kelompok  relatif terhadap  varian  dalam  kelompok  ( random  error ). ANOVA  sangat  efisien  untuk  analisis  data eksperimen  yang  memiliki  beberapa  variasi  yang
disesuaikan dengan konteks eksperimental tertentu. Semakin  besar  F-statistik  maka  perbedaan  antar kelompok  analit  juga  semakin  besar.  Nilai-p merupakan  perbandingan  F-statistik  dengan  derajat kebebasan,  jika  nilai-p  <0,001  maka  data  dapat disimpulkan terbedakan secara signifikan (Connelly, 2021)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Kalibrasi sensor
Kurva  respon  pengukuran  etanol  dalam rentang  konsentrasi  1,2  –  4,86  %  v/v  digunakan sebab  mempertimbangkan  konsentrasi  etanol  yang terdapat  dalam  sampel  uji  lemang  tapai  yang fermentasi setelah 2 hari menghasilkan etanol <5% (Marniza,  2020).  Respon  pengukuran  telah  dicatat dan  grafik  tegangan output stasioner  terhadap konsentrasi  etanol  pada  suhu  28°C  terlihat  pada Gambar  4.  Masing-masing  titik  merepresentasikan rata-rata  dari  lima  kali  pengukuran  biosensor  dan diperoleh plot kalibrasi regresi linear. Kurva standar kalibrasi  sensor  menghasilkan  persamaan  regresi linear seperti dalam Persamaan (1).
Gambar 4. Kurva standar kalibrasi sensor
U(mV)= 1909,45-14,59(%etanol)          (1)
Persamaan  ini  menunjukkan  bahwa  nilai sensitivitas  biosensor  sebesar  14,59  mV/%  etanol dan  koefisien  korelasi  (r)  sebesar  0,9937.  Hasil  ini mengindikasikan bahwa biosensor memiliki sensitivitas yang baik untuk mendeteksi etanol dalam sampel  uji.  Persamaan  (1)  digunakan  untuk menghitung  kadar  etanol  dalam  sampel  uji  lemang tapai  setelah  diperoleh  nilai  pengukuran  tegangan output stasioner.

## Deteksi etanol dalam sampel Lemang Tapai
Pengujian  deteksi  etanol  pada  sampel  uji lemang  tapai  dilakukan  selama  kurun  waktu  20 menit  dan  dihentikan  ketika  kurva  tegangan output mencapai  keadaaan  stasioner. Pengukuran  nilai
tegangan output menuju  stasioner  dengan  waktu respon  tersebut  diakibatkan  oleh  penyesuaian elektroda  sensor  terhadap  kondisi  lingkungan elektroda.  Hasil  pengukuran  nilai  tegangan output pada  sampel  uji  lemang  tapai  untuk  mengetahui perbedaan kadar etanol yang dikandungnya, terlihat pada Gambar 5 dan dalam Tabel 1 .
Tabel  1. Hasil  pengukuran  tegangan output stasioner, kadar etanol dan nilai pH
Sampel uji Tegangan (mV) Kadar Etanol (% v/v) pH Lemang Tapai 1869 0,005 2,79 5 Kalibrasi minimum 1891,5±0,002 1,2 6 Kalibrasi maksimum 1836,5±0,002 4,86 5
Gambar 5. Hasil pengukuran kadar etanol pada sampel uji lemang tapai
Pada Tabel  1 menunjukkan  terjadi perubahan  nilai  tegangan output dari  sampel  uji lemang  tapai  yang  dibandingkan  dengan  nilai tegangan output dari  larutan  etanol  standar,  terlihat pada Gambar  5 .  Pada  konsentrasi  larutan  etanol standar 1,2% v/v kurva pada grafik terus meningkat hingga  stasioner  yang  menunjukkan  bahwa penambahan etanol pada konsentrasi ini pada sel ragi dapat berfungsi untuk membantu meningkatkan laju pertumbuhan ragi. Kemudian pada konsentrasi yang lebih  tinggi  seperti,  2,79%  v/v  hingga  4,86%  v/v terjadi  penurunan  tegangan output pada  tahap  akhir pengukuran  ketika  mencapai  kondisi  stasioner  yang menunjukkan  laju  pertumbuhan  sel  ragi  menurun secara linear seiring dengan peningkatan konsentrasi etanol  yang  ditambahkan,  dimana  sel  ragi  tidak mampu  bertahan  hidup  dalam  konsentrasi  etanol yang lebih tinggi dari 2% (Nguyen et al. , 2017). Hal ini dikarenakan ketika ragi berada dalam lingkungan  yang  mengandung  etanol  dengan konsentrasi  tinggi,  etanol  dapat  menembus  dinding sel  ragi  dan  merusak  membran  sel,  mengganggu fungsi  seluler  dan  struktur  sel  ragi  yang
mengakibatkan  kematian  sel  dan  mempengaruhi kemampuan  sel  ragi  untuk  mengonsumsi  O 2 dalam melakukan aktivitas metabolisme, sehingga kadar O 2 tersisa  yang  dideteksi  oleh  elektroda  biosensor semakin  besar  dan  tegangan output yang  terbaca semakin  kecil  akibat  adanya  struktur  dalam  sirkuit TIA  modul  elektronik  biosensor. Nilai  tegangan output juga dipengaruhi oleh faktor lain seperti, nilai pH  yang  dihasilkan  saat  konsentrasi  etanol ditambahkan.  Saat  konsentrasi  etanol  meningkat, tingkat  produksi  CO 2 juga  meningkat,  yang menyebabkan  larutan  menjadi  lebih  asam.  Kondisi asam  ini  dapat  menghambat  pertumbuhan  sel  ragi. Oleh  karena  itu,  nilai  pH  adalah  salah  satu  faktor penting  yang  mempengaruhi  kecepatan  proses fermentasi ragi.
Hasil data ini mengindikasikan bahwa metode biosensor  amperometris  berbasis  sel  ragi Saccharomyses cerevisiae dapat mendeteksi kadar etanol dalam  makanan  tradisional  yang  difermentasi.  Hasil data  pengukuran  setiap  variasi  kadar  etanol  dalam sampel uji kemudian diujikan menggunakan one-way ANOVA,  menunjukkan  nilai  f-statistik  sebesar 11121,78 dan nilai-p sebesar <0,001,
mengindikasikan  bahwa  setiap  variasi  sampel  uji terbedakan secara signifikan.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Biosensor
amperometris
yang
mempergunakan  sel  ragi S.cerevisiae memiliki kemampuan untuk mendeteksi etanol dalam rentang konsentrasi etanol yang kecil dan dapat diaplikasikan untuk  mengukur  kadar  etanol  pada  makanan tradisional.  Didapatkan  kadar  etanol  dalam  sampel uji  lemang  tapai  sebesar  2,79%  v/v,  dimana  dari hasil  pengukuran  kalibrasi  sensor  diketahui  bahwa semakin  besar  konsentrasi  etanol  maka  tegangan output akan  semakin  menurun.  Hasil  analisis  data menggunakan  ANOVA  juga  menunjukkan  bahwa hasil data dapat dierima dan setiap variasi sampel uji memiliki perbedaan yang signifikan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada pihak  penyelenggara  PIU-AKSI  ADB  Universitas Riau. 12810.29/UN19/KM.05.01/2023.

## DAFTAR PUSTAKA
Britannica. 2013, 22 Juli. Saccharomyces . Diakses dari https://www.britannica.com/science/Sac charomyces.
Cinti,  S.,  Basso,  M.,  Moscone,  D.,  &  Arduini,  F. 2017.  A  paper-based  nanomodified electrochemical  biosensor  for  ethanol detection  in  beers. Analytica  Chimica  Acta , 960 : 123–130.
Connelly,  L.  M.  2021.  Introduction  to  analysis  of variance  (ANOVA). Medsurg  Nursing , 30(3): 218.
Destanoglu, O. & Ates, I. 2019. Determination and evaluation of methanol , ethanol and higher alcohols  in  legally  and  illegally  produced alcoholic  beverages. Journal  of  the  Turkish Chemical Society Chemistry : A . 6(1):21–28. Febriani,  &  Ihsan,  E.  A.  2020.  Determination  of Ethanol  in  a  Distillate  Sample  of  Arenga pinnata by UV-Visible Spectrophotometry. Journal of Physics: Conference Series, 1539(1):
012002.
Gonchar, M., Smutok, O., Karkovska, M., Stasyuk, N.,  &  Gayda,  G.  2017.  Biotechnology  of yeasts  and  filamentous  fungi. Biotechnology of Yeasts and Filamentous Fungi . 1–412. Grand,  V.  R.  2018.    Halal  Food  And  Beverage Market  Size  Report  By  Product  (Meat  & Alternatives, Milk & Milk Products, Fruits & Vegetables, Grain Products), By Region, And  Segment  Forecasts.  Diakses  dari https://www.grandviewresearch.com/ind ustry-analysis/halal-food-market.
Kuswandi, B., Irmawati, T., Hidayat, M., Jayus, & Ahmad, M. 2014. A Simple Visual Ethanol Biosensor  Based  on  Alcohol  Oxidase Immobilized  onto  Polyaniline  Film  for Halal  Verification  of  Fermented  Beverage Samples. Sensors . 14(2): 2135–2149.
Marniza.  2020.  Characterization  of  Tapai  Ketan Hitam  with  Various  Cooking  Methods. Teknologi Agro-Industri .7(2): 112-120.
Martin-Yken,  H.  2020.  Yeast-Based  Biosensors : Current Applications and New
Developments. Biosensors , 10(51): 1–19. Nguyen, T. Y., Cai, C. M., Kumar, R., & Wyman, C.  E.  2017.  Overcoming  factors  limiting high-solids  fermentation  of  lignocellulosic biomass  to  ethanol. Proceedings  of  the National  Academy  of  Sciences, 114(44):
11673–11678.
Reshetilov, A. N., Kitova, A. E., Arkhipova, A.V.,
Kratasyuk,  V.A.,  Rai,  M.K.  2012. Determination  of  ethanol  in  acetic  acid
containing samples by a biosensor based on immobilized Gluconobacter cells. Nusantara Bioscience . 4: 97-100
Rosandi,  V.  A.,  Linda,  T,  M.,  Agustirandi,  B.,  & Umar,  L.  2021.  Simple  Amperometric Biosensor  for  Sucrose  Concentration
Measurement Based on Principal Component Analysis. Journal of physics:conference series. 2049: 012-048. Rotariu,  L.,  Bala,  C.,  &  Magearu,  V.  2004.  New potentiometric microbial 10 biosensor  for  ethanol  determination  in alcoholic beverages. Analytica
Chimica Acta . 513(1): 119–123. Umar, L., Setiadi, R. N., Hamzah, Y., & Linda, T. M. 2017. Biosensor based on biochip-G  for  dissolved  oxygen  detection from photosynthesis process of
green algae chlorella vulgaris. ICONSONICS 2017 . 131–134. Varelas,  V.,  Sotiropoulou,  E.,  Karambini,  X., Liouni,  M.  &  Id,  E.T.N.  2017.  Impact  of Glucose Concentration and NaCl Osmotic Stress  on  Yeast  Cell  Wall β -  D  -Glucan Formation  during  Anaerobic  Fermentation Process. Fermentation MDPI . 3 : 44. Ż yma ń czyk-Duda,  E.,  Brzezi ń ska-Rodak,  M., Klimek-Ochab,  M.,  Duda,  M.,  &  Zerka, A.  2017. Yeast  as  a  Versatile  Tool  in
Biotechnology. Yeast - Industrial
Applications. InTech, 8 Nov 2017.