## DAYA HAMBAT EKSTRAK HEKSAN, ETIL ASETAT DAN ETANOL DARI DAUN ASAM KANDIS (Garcinia parvifolia (Miq.) Miq.) TERHADAP

## AKTIVITAS ENZIM α-GLUKOSIDASE SECARA IN VITRO
Min Rahminiwati, Ike Yulia Wiendarlina, Ceristianto Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan, Bogor
Email: minrahminiwati@yahoo.com

## ABSTRAK
Salah  satu  penyebab  peningkatan  kadar  gula  darah  pada  penderita  penyakit diabetes mellitus adalah tingginya aktivitas pemecahan karbohidrat menjadi glukosa oleh enzim  α-glukosidase.  Beberapa  penelitian  menunjukan  bahwa  daun  asam  kandis diketahui  memiliki  kandungan  senyawa xanthone yang  mampu  menghambat  aktivitas enzim α-glukosidase. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antidiabetes ekstrak heksan, etil asetat dan etanol daun asam kandis ( Garcinia parvifolia (Miq.) Miq.) dengan  mengukur  daya  hambat  ekstrak  daun  asam  kandis  terhadap  aktivitas  enzim  α- glukosidase  secara in  vitro. Pengujian  daya  hambat  terhadap  aktivitas  α-glukosidase dihitung berdasarkan nilai IC 50 dengan  senyawa acarbose sebagai pembanding (kontrol positif).  Hasil  uji  daya  hambat  ekstrak  daun  asam  kandis  terhadap  aktivitas  enzim  α- glukosidase menunjukan bahwa aktivitas inhibisi (IC 50 ) dicapai pada pemberian  ekstrak heksan, etil asetat dan etanol daun asam kandis berturut-turut sebesar 226,4 ± 24,18 ppm, 46,96 ± 10,48 ppm, dan  7,32 ± 2,14 ppm. Dari hasil penelitian  dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol berpotensi paling tinggi sebagai inhibitor enzim α-Glukosidase.
Kata Kunci: Antidiabetes, asam kandis, inhibitor α-glukosidase

## INHIBITORY CAPACITY OF HEXANE, ETHYL ACETATE AND ETHANOL EXTRACTS OF ASAM KANDIS LEAF  (Garcinia parvifolia (Miq.) Miq.)   ON α- GLUCOSIDASE ENZIME  IN VITRO

## ABSTRACT
Diabetes  mellitus  is  a  metabolic  disorder resulting  from  defects  in  insulin secretion, and/or insulin action. The disease characterized by a chronic hyperglycaemia with  long-term  damage,  dysfunction,  and  failure  of  various  organs.  Previous  studies reported  that  the  leaves  of  asam  kandis  ( Garcinia  parvifolia (Miq.)  Miq.) contain xanthone compound which could act as an  inhibitor of α-glukosidase enzyme. The aim of this study was to determine the antidiabetic activity of hexane, ethyl acetate and ethanol extract  of  asam  kandis  leaf  by  measuring  an  the  inhibitory  effect  of  asam  kandis  leaf extracs  on  α-glucosidase  activity in  vitro .  The  inhibitory  activity  of  asam  kandis  leaf extracts was calculated based on value of IC 50. The acarbose was used as a positif control. The present results showed that the IC 50 was achieved at addition of 226.4 ± 24.18 ppm, 46.96 ± 10,48 ppm, and 7.32 ± 2.14 ppm hexane, ethyl acetate and ethanol extracts of asam  kandis  leaf  respectively.  This  results  confirmed  that  the  ethanol  extract  had  the highest potential antidiabetic activity as an inhibitor of α-glucosidase activity.
Keywords : Antidiabetic, Garcinia parvifolia , α-glucosidase inhibitor
PENDAHULUAN
Diabetes  Mellitus  atau  penyakit kencing manis adalah kelainan metabolik y ang  disebabkan  oleh  banyak faktor seperti kurangnya insulin atau ketidakmampuan tubuh untuk memanfaatkan insulin. Penyakit ini
ditandai  oleh  hiperglikemia  kronis  berupa gangguan metabolisme karbohidrat, lemak dan  protein.  Efek  dari  Diabetes  Mellitus meliputi kerusakan jangka panjang, disfungsi  dan  kegagalan  berbagai  organ. Penyakit  ini  dapat  muncul  dengan  gejala khas  seperti  haus,  poliuria,  penglihatan kabur  dan  penurunan  berat  badan  (WHO, 1999).
Pengobatan Diabetes Mellitus biasanya  dilakukan  dengan  pemberian suntikan  insulin  atau  dengan  obat-obat Oral  Anti  Diabetik  (OAD)  yang  meliputi golongan sulfonilurea,
biguanid, thiazolidinedion, dan inhibitor alfa- glukosidase  (Silva,  2004).  Inhibitor  alfa- glukosidase telah digunakan dalam pengobatan  untuk  mengatasi  Diabetes Mellitus  tipe  2.  Obat  ini  bekerja  melalui penghambatan kerja alfa-glukosidase secara  reversibel,  suatu  enzim  yang  ada dalam  dinding  usus  halus.  Penyerapan karbohidrat kompleks ditunda oleh obat ini dan  dengan  demikian  puncak  glukosa postprandial menjadi  terhambat  (Laar et.al.,. 2005).
Berbagai jenis obat antidiabetik oral banyak ditemukan di apotek dan biasanya tergolong  obat  yang  mahal.  Penggunaan obat  ini  dilakukan  terus  menerus,  hingga bagi yang tidak mampu sulit memperolehnya.  Disamping  itu  di  daerah yang tidak mempunyai apotek, obat untuk penyakit  ini  sulit  ditemukan.  Untuk  itu perlu dicarikan alternatif yang salahsatunya adalah menggunakan tanaman obat (Widowati et al.,. 1997). Asam  kandis  ( Garcinia  parvifolia (Miq.)  Miq.)  termasuk  ke  dalam  famili Clusiaceae .  Tumbuhan  ini  merupakan spesies tropis yang ditemukan liar di hutan rawa  gambut.  Di    Indonesia daun  muda
kemerahan  asam  kandis  dimakan  sebagai lalap dan karena memiliki rasa asam sering digunakan  dalam  sayur  sebagai  pengganti asam.  Tanaman  yang  termasuk  ke  dalam genus Garcinia ini  diketahui  banyak mengandung  senyawa xanthone (Lim,
2012) . Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa turunan xanthone mampu menghambat α-glukosidase secara in Vitro dengan aktivitas sedang hingga baik (Liu et al.,. 2006).
Penelitian ini bertujuan mempelajari aktivitas  penghambatan  berbagai  ekstrak daun  kandis  terhadap  aktivitas  α- glukosidase yang dilakukan secara in vitro . Aktivitas  inhibisi  α-glukosidase  dari berbagai  ekstrak  daun  asam  kandis  untuk membuktikan manfaatnya sebagai antidiabetes  dinyatakan  dalam  IC 50 yaitu konsentrasi  yang  dapat  menghambat  50% aktivitas enzim.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun Garcinia parvifolia (Miq.)  Miq.,  akuades,  etanol 96%,  etil  asetat,  heksan,  enzim  α- glukosidase (Sigma), Substrat p -nitrofenil- α-D-glukopiranosida  (PNG)  (Sigma), larutan buffer fosfat (pH 7), serum bovine albumin  (Merck), acarbose (Bayer), dimetilsulfoksida  (DMSO),  HCl  2N,  dan Na 2 CO 3 . Bahan-bahan yang dipakai untuk uji  fitokimia  adalah  kloroform,  ammonia, H 2 SO 4 2M, pereaksi (Dragendorff, Mayer &  Wagner),  serbuk  Mg,  HCl  pekat,  amil alkohol, asam asetat anhidrat, H 2 SO 4 pekat dan FeCl 3 1%.
Alat-alat  yang  digunakan  adalah penangas  air,  neraca  analitik, rotary evaporator ,  corong  pisah,  pipet  mikro, pipet volumetrik, pipet tetes, labu Erlenmeyer,  tabung  reaksi,  gelas  piala, gelas  ukur,  bulp,  batang  pengaduk,  sudip, corong  gelas,  kertas  saring,  sentrifus, microplate  96  well dan microplate reader (Epoch) .

## Pembuatan Simplisia
Daun  asam  kandis  sebanyak  1.5  kg dibersihkan  dari  kotoran  yang  menempel, kemudian dicuci bersih dan dikeringkan di bawah sinar matahari secara tidak langsung sampai  kering  kemudian  digiling  dan diayak  menggunakan  ayakan  mesh  20 (DepKes RI, 1985).

## Analisis Karakteristik Serbuk Simplisia
Analisis karakteristik
serbuk simplisia  dilakukan  dengan  mengukur kadar air dan kadar abu, dilakukan dengan dua kali pengulangan.

## Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  dibuat  dengan metode maserasi  bertingkat  menggunakan  pelarut heksan,  etil  asetat  dan  etanol.  Sebanyak 500  g  serbuk  simplisia  daun  asam  kandis dimasukkan  ke  dalam  bejana,  kemudian dituangi 75% bagian pelarut heksan setara dengan  3,5  liter.  Campuran  didiamkan selama 1 hari sambil dilakukan pengocokan 3 jam sekali agar terdistribusi merata, disaring dan diperas. Ampas dicuci dengan  pelarut  heksan  25%  bagian  setara dengan  1,5  liter,  dipindahkan  ke  dalam bejana  tertutup,  dibiarkan  ditempat  sejuk dan terlindung dari cahaya selama 24 jam. Endapan  kemudian  dipisahkan,  maserat yang  diperoleh  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental daun  asam kandis. Rendemen  yang diperoleh ditimbang dan dicatat.
Rendemen = Bobot ektrak Bobot simplisia x 100 % (1) Setelah didapatkan ekstrak, selanjutnya dilakukan uji fitokimia berdasarkan metoda Rajendra et al., (2011) meliputi  uji  senyawa  alkaloida,  uji senyawa  flavonoid,  uji  senyawa  saponin, uji  steroid-triterpenoid,  dan  uji  senyawa tanin.

## Uji Senyawa Alkaloida
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  diencerkan dengan  asam  alkohol  hingga  10  mL, direbus dan disaring. Filtrat sebanyak 5 mL ditambahkan  2  mL  ammonia  dan  5  ml kloroform dikocok perlahan untuk mengekstrak alkaloid. Campuran diekstraksi  dengan  10  mL  asam  asetat. Lapisan  kloroform  dibagi  menjadi  3 bagian.
a. Uji Dragendroff: Beberapa tetes pereaksi Dragendroff yang ditambahkan ke dalam larutan kloroform,  endapan  coklat  kemerahan menunjukkan adanya alkaloid.
b. Uji  Mayer:  Beberapa  tetes  pereaksi Mayer  ditambahkan  ke  dalam  larutan kloroform, endapan putih menunjukkan adanya alkaloid. c. Uji  Wagner:  Beberapa  tetes  pereaksi Wagner ditambahkan ke dalam larutan kloroform, endapan coklat menunjukkan adanya alkaloid. Uji Senyawa Flavonoid Tiga metode digunakan untuk menguji flavonoid. Pertama, beberapa tetes FeCl 3 1%  ditambahkan  pada  sampel. Warna  hijau  kehitaman  yang  dihasilkan menunjukkan adanya kandungan flavonoid.  Kedua,  beberapa  tetes  larutan timbal  asetat  10%  ditambahkan  pada sampel.  Terbentuknya  endapan  kuning menunjukkan  adanya  flavonoid.  Ketiga, sampel dilarutkan dalam metanol, ditambahkan  serbuk  magnesium,  1  mL HCl  pekat  ditambahkan  dari  sisi  tabung reaksi.  Warna  magenta  menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji Senyawa Saponin
Sebanyak 0.5 g sampel ditambahkan 5  mL  aquades  dalam  tabung  reaksi. Dikocok kuat-kuat, adanya saponin ditandai dengan terbentuk busa yang stabil. Busa tersebut jika dicampur dengan 3 tetes minyak zaitun akan terbentuk emulsi.

## Uji Senyawa Steroid – Triterpenoid
Sebanyak  25  mg  ekstrak  dilarutkan dalam  kloroform,  disaring  dan  filtrat ditambah  beberapa  tetes  anhidrida  asetat lalu  dikocok  dengan  baik.  1  mL  H 2 SO 4 pekat  ditambahkan  dengan  hati-hati  pada dinding  wadah,  bila  dihasilkan  warna coklat  kemerahan  menandakan  adanya steroid, sedangkan cincin berwarna merah menandakan adanya triterpenoid.

## Uji Senyawa Tanin
Sebanyak  0.5  g  sampel  direbus dengan 10 ml aquades dalam tabung reaksi, kemudian disaring.
a. Uji  FeCl 3 :  Beberapa  tetes  FeCl 3 0,1% ditambahkan  pada  filtrat,  warna  hijau kecoklatan atau biru kehitaman menandakan adanya tanin.
b. Uji  Gelatin:  Beberapa  ml  larutan gelatin 1% dalam natrium klorida 10% ditambahkan pada filtrat, terbentuknya endapan  putih  menunjukkan  adanya tanin.
Uji Aktivitas α-Glukosidase Aktivitas α-Glukosidase diuji berdasarkan metode Irwan (2011). Campuran pereaksi (sampel) terdiri atas 25 μL p -nitrofenil-α-D-glukopiranosida (PNG)  20  mM  sebagai  substrat,  25  μL larutan bufer fosfat (pH 7) 100 mM, dan 50 μL  larutan  contoh  dengan  berbagai konsentrasi dalam DMSO (b/v). Campuran tersebut diinkubasi pada suhu 37°C selama 5  menit,  setelah  itu  ditambahkan  larutan enzim  sebanyak  25  μL  dan  diinkubasi kembali  selama  15  menit.  Reaksi  enzim dihentikan dengan  menambahkan Na 2 CO 3 200  mM  sebanyak  100  μL.  Kemudian larutan  diukur  pada  panjang  gelombang 400 nm dengan microplate reader .
Blanko  dibuat  dari  campuran  bufer fosfat  (pH  7)  dengan  p-NPG,  larutan blanko dan standar disentrifus, supernatan diambil  sebanyak  50  μL  dan  dimasukkan ke  dalam  campuran  reaksi  seperti  dalam sampel.  Hasil  campuran  (sampel,  blanko
dan  standar)  tersebut  diukur  dengan microplate reader pada panjang gelombang 400 nm. Masing-masing pengujian daya hambat  sampel  terhadap  aktivitas  α- glukosidase dihitung dalam persen inhibisi dengan rumus sebagai berikut.
% inhibisi = K−(S1−S0) K x 100 % (2)
Keterangan : K  =  Absorbansi  terkoreksi  dari  kontrol  positif (enzim + substrat)
S1  = Absorbansi terkoreksi dari enzim + substrat
+ inhibitor
S0  =  Absorbansi  terkoreksi  dari  substrat  + inhibitor
Nilai  IC 50 ( Inhibition  Concentration 50) diperoleh dari perpotongan garis antara 50%  daya    hambat    dengan    sumbu konsentrasi  menggunakan persamaan (y = bx + a), dimana y = 50 dan x menunjukkan nilai IC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Karakteristik Serbuk Simplisia
Dari 1,5 kg daun segar asam kandis diperoleh  serbuk  simplisia  daun  sebanyak 534,8 gram atau sebesar 35,65% dari berat basah.  Serbuk  kering  daun  asam  kandis memiiki  warna  hijau  tua  (Gambar  1)  dan cendrung tidak berbau.   Rata-rata kadar air serbuk simplisia adalah 5,61 % (Tabel 1). Nilai ini menunjukan bahwa kadar air yang terkandung  dalam  serbuk  simplisia  realtif rendah,  dibawah  10%  sehingga  waktu simpannya  relatif  lama  dan  tidak  mudah ditumbuhi mikroorganisme. Kadar air yang rendah  juga  akan  menghindari  reaksi enzimatis yang dapat menguraikan zat aktif penyebab penurunan  mutu atau perusakan simplisia.
Gambar 1. Serbuk Simplisia Asam
Kandis
Kadar  abu  serbuk  daun  kandis  yang diperoleh  rata-rata  sebesar  5,54  %  (Tabel 1).  Hal  ini  menunjukkan  rendahnya  kadar zat  organik  dan  mineral  yang  terdapat dalam  serbuk  simplisia.          Rendahnya kadar  abu  juga  menunjukkan  rendahnya cemaran  bahan-bahan  anorganik  yang terdapat dalam simplisia yang terjadi pada saat pengolahan ataupun dalam pengemasan simplisia. Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Kadar Air dan Kadar Abu Total Ulangan Kadar Abu (%) Kadar Air (%) 1 5,29 5,34 2 5,79 5,87 Rerata 5,54 5,61

## Ekstrak Serbuk Simplisia
Hasil rendemen yang diperoleh dari ekstrak heksan, etil asetat dan etanol daun
asam  kandis  adalah    4,07%  3,97%  dan 12,31%.  Tingginya  rendemen  ekstrak etanol  menunjukan    hadirnya  senyawa- senyawa    fitokimia  bersifat  polar  pada serbuk daun asam kandis yang larut dalam etanol.  Selain  itu,  polaritas  etanol  yang tinggi  menyebabkan  pelarut  ini  dapat mengekstrak bahan lebih banyak
dibandingkan  jenis  pelarut  organik  yang lain. Ekstrak  kental  dari  masing-masing pelarut  yang  diperoleh  akan  digunakan dalam  tahap  uji  selanjutnya,  yaitu  uji fitokimia dan uji daya hambat enzim untuk mengetahui ekstrak yang mempunyai daya hambat terbaik terhadap aktivitas enzim α- glukosidase.

## Hasil Uji Fitokimia
Dari hasil penelitian diketahui bahwa ekstrak etanol menunjukkan positif mengandung  senyawa  flavonoid,  saponin, tanin,  alkaloid,  dan  steroid. Ekstrak  etil asetat  menunjukkan  positif  mengandung senyawa  flavonoid,  tanin,  alkaloid,  dan steroid,  sedangkan  pada  ekstrak  heksan hanya  terdapat  alkaloid  dan  steroid. Pengujian  triterpenoid  menunjukkan  hasil negatif  untuk  semua  sampel.  Terlihat bahwa  pelarut  etanol  paling  banyak melarutkan senyawa-senyawa bioaktif termasuk  flavonoid  dan  saponin  yang berdasarkan penelitian-penelitian sebelumnya diketahui memiliki kemampuan menurunkan kadar gula dalam darah (Hsieh et al., 2010).
Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia Sampel Sampel Golongan senyawa kimia A B C D E F - Serbuk Simplisia
- Ekstrak heksan
- Ekstrak etil asetat
- Ekstrak etanol + - + + + - - + + - + + + + + + + + + + - - -
-
Keterangan: A = flavonoid, B = saponin, C = tanin, D = alkaloid, E = steroid, F =  triterpenoid + = terdapat, - = tidak terdapat

## Aktivitas Inhibisi α-Glukosidase
Aktivitas  inhibisi  (IC 50 )  ekstrak heksan,  etil  asetat  dan  etanol  daun  asam kandis berturut-turut sebesar 226,4 ± 24,18 ppm,  etil  asetat  46,96  ±  10,48  ppm,  dan etanol  7,32  ±  2,14  ppm.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol memiliki  aktivitas  inhibisi  paling  tinggi diikuti  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak heksan  (Gambar  2).  Hal  ini  menunjukkan bahwa,  senyawa  metabolit  sekunder  yang berperan sebagai inhibitor alfa- glukosidase,  memiliki  kelarutan  tertinggi pada  pelarut  polar  (etanol)  diikuti  pelarut semipolar (etil asetat) dan pelarut non polar (heksan).  Aktivitas  inhibisi  yang  tinggi dari pelarut etanol sejalan dengan hasil uji fitokimia  dimana  hampir  semua  senyawa aktif  termasuk  golongan  flavonoid  dan saponin  larut  dalam  pelarut  etanol. Menurut  Smith  dan  Adanlawo  (2012), saponin  memiliki  aktivitas  hipoglikemik melalui  stimulasi,  sekresi  dan  pelepasan insulin, regenerasi sel beta pulau langerhans  dan  aktivasi  enzim  yang bertanggung  jawab  untuk  penggunaan glukosa,  sementara    fungsi  dari  flavonoid adalah untuk menghambat aktivitas enzim α-glukosidase sehingga menunda penyerapan glukosa (Havsteen 2002).
Dari  hasil  uji  fitokimia  dan  uji aktivitas    inhibisi  enzim  α-glukosidase, penurunan kadar glukosa darah pada tikus yang  diberi  ekstrak  etanol  daun  asam kandis  kemungkinan  disebabkan    adanya senyawa  saponin  dan  flavonoid  dalam ekstrak  etanol  tersebut.    Hasil-hasil  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  asam kandis berpotensi sebagai sumber senyawa alami  untuk  mengatasi  penyakit  diabetes mellitus.
Acarbose sebagai pembanding
mempunyai  daya  inhibisi  paling  tinggi yaitu  IC 50 =  0,37  ±  0,11  ppm.  Tingginya aktivitas  inhibisi acarbose membuktikan bahwa  senyawa  aktif acarbose sebagai obat  antidiabetes  secara  efektif  dapat menghambat  kerja  enzim  α-glukosidase. Berbeda dengan ekstrak asam kandis yang
masih  isinya  masih  merupakan  campuran berbagai senyawa aktif, termasuk senyawa-senyawa  metabolit  primer  dan penggangu  lainnya  berupa  senyawa- senyawa  aktivator  enzim  α-Glukosidase seperti  senyawa  sakarida  yang  berbentuk disakarida  dan  oligosakarida  (Sugiwati, 2005). Adanya senyawa-senyawa pengotor dapat  menghambat  kerja  senyawa  aktif inhibitor  enzim    α-Glukosidase  karena pembentukan  substrat  yang  jauh  lebih tinggi.  Pemurnian  lebih  lanjut  terhadap ekstrak daun asam kandis diperlukan untuk mengisolasi  senyawa-senyawa  aktif  yang khusus bertanggung jawab dalam menghambat aktivitas enzin α-
Glukosidase.
Gambar 2. Rerata Aktivitas Inhibisi Enzim α-glukosidase (IC 50 ) Ekstrak Daun Asam Kandis

## SIMPULAN DAN SARAN Simpulan
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun asam kandis memiliki daya hambat  paling tinggi terhadap aktivitas enzim α- glukosidase dengan  nilai  IC 50 7,32 ± 2,14 ppm sedangkan ekstrak etil asetat memiliki dan ekstrak heksan memiliki daya hambat lebih rendah yaitu masing-masing 46,96 ± 10,48 ppm dan  226,47 ± 24,18 ppm.  Hasil ini juga menunjukan bahwa ekstrak  etanol daun  asam  kandis  memiliki  potensi  untuk dikembangkan  menjadi  obat  antidiabetes
0 50 100 150 200 250 300 Acarbose Etanol Etil Asetat Heksan Sampel IC 50
dengan mekanisme kerja sebagai inhibitor α-glukosidase.

## Saran
Perlu dilakukan fraksinasi dan isolasi terhadap  ekstrak  etanol  daun  asam  kandis menggunakan metoda GC-MS atau HPLC untuk  mendapatkan  senyawa  aktif  yang lebih  murni,    dilanjutkan  dengan  uji toksisitas  dan  uji  efektifitasnya  secara in vitro dan in vivo .

## DAFTAR PUSTAKA
Departemen  Kesehatan  RI.  1985. Cara
Pembuatan  Simplisia .  Direktorat
Jenderal  Pengawasan  Obat  Dan Makanan. Jakarta.
Guevara,  B.Q.  dan  B.V.  Recio.  1985. Phytochemical, Microbiological
and Pharmacological Screening of Medical  Plant. Research  Center University of Santo Tomas. Manila- Philippine. Havsteen B.H. 2002. The biochemistry and medical significance of the flavonoids. Pharmacol  Ther .  96(2- 3):67-202.
Hsieh,  P.C.,  H.J.  Huang,  Y.L.  Ho,  Y.H. Lin, S.S. Huang, Y.C. Chiang, M.C.
Tseng  dan  Y.S.  Chang.  2010. Activities of antioxidants,α- glucosidase  inhibitors  and  aldose reductase  inhibitors  of  the  aqueous extracts of four Flemingia species in Taiwan. Botanical Studies . 51(3):293-302 Irwan, F. 2011.  Aktivitas antidiabetes dan analisis  fitokimia  ekstrak  air  dan etanol daun wungu . Skripsi.   Bogor. Lim, T.K. 2012. Edible Medical and Non- Medical  Plants: Volume  2,  Fruits. Springer Science+Springer Business B V.
Liu,  Y.,  L.  Zou,  L.  Ma,  W.H.  Chen,  B. Wang dan Z.L. Xu. 2006. Synthesis and  pharmacological  activities  of xanthone derivatives as α- glucosidase inhibitors. Bioorganic &
Medicinal  Chemistry. 14(16): 5683-
5690. Oussama,  M.N.  2006. Guidelines  for  The Prevention,  Management  and  Care of  Diabetes  Mellitus Ed.  Oussama M.N.  Khatib.  EMRO  Technical Publications Series 32. WHO Regional  Office  for  the  Eastern Mediterranean. Rajendra,  C.E.,  G.S.  Magadum,  M.A. Nadaf,  S.V.  Yashoda  dan  M. Manjula.  Phytochemical  Screening of  The  Rhizome  of Kaemferia galanga. 2011 . International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical  Research. 3(3):  61-
63.
Silva, M.L. 2004. Diabetes Means Siphon Insulin  Comes  From  The  Island. http://www.dightonrock.
com/diabetes_history.htm.  Diunduh pada 10 Juni 2012.
Smith A, Adanlawo. 2012. Hypoglycaemic effect  of  saponin  from  the  root  of garcinia  kola  (Bitter  Kola)  on alloxan-induced diabetic rats.
Journal of Drug Delivery & Therapeutics. 2(6):9-12 Sugiwati, S. 2005. Aktivitas antihiperglikemik  dari  ekstrak  buah mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl.) sebagai  Inhibitor  alfa-glukosidase . Tesis. Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor, Bogor.
Laar,  F.A.V.,  P.L.B.J.  Lucassen,  R.P. Akkermans,  E.H.  Van  de  Lisdonk, G.E.H.M.  Rutten  dan  C.  Van  Weel. 2005.  Alpha-glucosidase  Inhibitors for  Tipe  2  Diabetes  Melitus:  A Systematic  Review. Diabetes  Care. 28:154-163.
Widowati,  L.,  B.  Dzulkarnain  dan  S. Sa’roni. 1997. Tanaman Obat untuk Diabetes  Mellitus. Cermin  Dunia Kedokteran. 116:53-60.
World Health Organization. 1999. Definition, Diagnosis and Classification  of  Diabetes  Mellitus and  its  Complications . Part  1: Diagnosis  and  Classification  of Diabetes Mellitus. WHO, Geneva.