Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup Volume 18, Nomor 2, Oktober 2018, Hal. 63-71
https://journal.unpak.ac.id/index.php/ekologia
e-ISSN: -  ; p-ISSN: 1411-9447

## IDENTIFIKASI BAKTERI DARI PUPUK ORGANIK CAIR ISI RUMEN SAPI
Sri Suci Damayanti 1 , Oom Komala 1* , E.Mulyati Effendi 1
1 Program Studi Biologi  FMIPA Universitas Pakuan, Bogor.
* e-mail: oomkomala@unpak.ac.id
diterima: 16 Juli 2018; direvisi: 23 Agustus 2018; disetujui: 4 September 2018

## ABSTRAK
Teknologi  pengolahan  limbah  merupakan  hal  yang  tidak  kalah  penting  bagi  usaha  Rumah  Potong Hewan  (RPH).  Berbagai  usaha  dan  teknologi  telah  dilakukan  untuk  menangani  masalah  limbah  ini, terutama  untuk  limbah  rumen  di  RPH.  Salah  satunya  adalah  memanfaatkan  limbah  tersebut  sebagai bahan pupuk organik. Bakteri rumen sapi adalah bakteri yang bersumber dari isi rumen sapi, dengan teknis  pengembangan  secara  sederhana  dan  murah.  Bakteri  ini  sangat  membantu  petani  dalam peningkatan  dan  pengembangan  pertanian  yang  berwawasan  pada  pelestarian  kesuburan  tanah  dan sumber  daya  alam.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  bakteri  dan  mengetahui keanekaragaman, sifat, dan karakteristik bakteri dari pupuk organik cair isi rumen sapi. Metode yang dilakukan dengan cara mengamati morfologi koloni, seleksi dan pemurnian koloni, pewarnaan Gram, pewarnaan  Spora,  dan  pengujian  biokimia.  Dari  empat  isolat  yang  teridentifikasi  terdapat  dua  genus bakteri yaitu tiga isolat RS1a, RS2a, RS2b termasuk genus Bacillus sp. yang bersifat aerobik dan satu isolat RS1b termasuk genus Lactobacillus sp. yang bersifat fakultatif anaerob. Keempat isolat bakteri mampu tumbuh optimum pada pH 6,5 dan suhu 37 0 C yang bersifat homofermentatif.
Kata Kunci: Bakteri, pupuk organik cair, rumen sapi

## IDENTIFICATION BACTERI OF LIQUID ORGANIC FERTILIZER THE CONTENTS OF COW RUMEN

## ABSTRACT
Waste treatment technology is not less important  for the business of Slaughterhouse (RPH). Various businesses  and  technologies  have  been  done  to  handle  this  waste  problem,  especially  for  the  rumen waste in RPH. One of them is utilizing the waste as an organic fertilizer. Bovine rumen bacteria are bacteria that originate from the contents of bovine rumen, with simple and inexpensive development techniques. This bacterium helps farmers in improving and developing an insightful agriculture on the preservation of soil fertility and natural resources. The study aims to identify bacteria and find out the diversity,  properties,  and  characteristics  of  bacteria  from  the  liquid  organic  content  of  rumen  cows. Methods  undertaken  by  observing  colony  morphology,  colony  selection  and  purification,  Gram staining, spores staining, and biochemical testing. Of the four isolates identified there are two bacterial genus,  three  isolates  RS1a,  RS2a,  RS2b  including  the  genus Bacillus sp.  aerobic  and  an  isolates  of RS1b including the genus Lactobacillus sp. the facultative of anaerobic. The four isolates of bacteria are able to grow optimum at pH 6.5 and the temperature of 37 0 C is homofermentative.
Key words : bacteria, cow rumen, liquid organic fertilizer

## PENDAHULUAN
Limbah  ternak  adalah  sisa  buangan  dari suatu  kegiatan  usaha  peternakan  seperti usaha  pemeliharaan  ternak,  rumah  potong hewan,  pengolahan  produk  ternak,  dll. Limbah  tersebut  meliputi  limbah  padat  dan limbah  cair  seperti  feses,  urine,  sisa makanan,  embrio,  kulit  telur,  lemak,  darah, bulu,  kuku,  tulang,  tanduk,  isi  rumen,  dll (Sihombing, 2000).
Berbagai  manfaat  dari  limbah  ternak, apalagi  limbah  tersebut  dapat  diperbaharui (renewable)  selama  ada  ternak.  Limbah ternak  masih  mengandung  nutrisi  atau  zat padat  yang  potensial  untuk  dimanfaatkan. Limbah  ternak  kaya  akan  nutrient  (zat makanan)  seperti  protein,  lemak,  bahan ekstrak  tanpa  nitrogen  (BETN),  vitamin, mineral,  mikroba  atau  biota,  dan  zat-zat yang lain. Limbah ternak dapat dimanfaatkan  untuk  bahan  makanan  ternak, pupuk  organik,  energi  dan  media  berbagai tujuan (Sihombing, 2000).
Rumen  termasuk  sistem  pencernaan berbentuk  seperti  sebuah  kantung,  yang berfungsi  sebagai  tempat  untuk  mengolah pakan  dengan  bantuan  mikroba.  Mikroba rumen  terdiri  dari  bakteri,  protozoa  dan jamur/fungi  (Czerkawski,  1986),  yang mayoritas hidup dalam suasana anaerob dan sebagian  dalam  suasana  fakultatif  anaerob. Isi  rumen  merupakan  salah  satu  limbah rumah potong hewan yang belum dimanfaatkan  secara  optimal  bahkan  ada yang dibuang begitu saja sehingga menimbulkan pencemaran lingkungan. Limbah ini sebenarnya sangat potensial bila dimanfaatkan  sebagai  bahan  pakan  ternak, pupuk organik.
Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi  bakteri  dan  mengetahui keanekaragaman,  sifat,  dan  karakteristik bakteri  dari  pupuk  organik  cair  isi  rumen sapi.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan adalah isi rumen sapi,  glukosa,  air  cucian  beras,  air  mineral, metilen  blue,  iodin,  alkohol  95%,  safranin,
fuchsin,  kristal  violet,  aquades,  NaCl fisiologis, media agar darah, Nutrient Broth, Nutrien  Agar,  media  SIM  (Sulfit  Indol Motility), H 2 O 2 3%.
Alat yang digunakan adalah ember/drum  plastik  berukuran  10  liter  1 buah, kertas ukuran 1 m, bunsen, korek api, tabung  reaksi  dan  raknya,  tabung  durham, ose,  objek  glass  dan  penutupnya,  kapas, kertas  alumunium  foil,  kassa,    karet,  cawan petri,  neraca  analitik,  kertas  saring,  spatula, labu erlenmeyer, pipet tetes, magnetic sterer, pH  meter,  thermometer,  beker  glass,  kertas label,  pinset,  kompor  pemanas,  oven autoklaf,  inkubator,  laminar  air  flow, mikroskop, buku identifikasi.

## Metode Pembuatan pupuk organik cair
Isi  rumen  sapi  sebanyak  5kg  dicampur dengan  1/2kg  glukosa,  5L  air  cucian  beras, dan  3L  air  mineral  di  dalam  di  ember  yang berukuran  10L,  diaduk  sampai  merata. Ember  yang  berisi  isi  rumen  sapi  dan kombinasinya ditutup  dengan menggunakan kertas  yang  berukuran  1  m,  dan  dibiarkan selama  15  hari  pada  ruangan  terbuka (difermentasi).

## Sterilisasi Alat
Sebelum  penelitian, dilakukan  sterilisasi alat-alat  terlebih  dahulu,  yaitu  dengan  cara alat-alat  dicuci  dengan  detergen,  dibilas dengan  air,  dikeringkan,  dibungkus  dengan menggunakan  kertas,  dan  disterilisasi  di autoklaf dengan suhu 121 0 C dan tekanan 15 psi  (per  square  inchi)  selama  15  menit. Kemudian  dikeringkan  di  dalam  oven  pada suhu  120 o C  selama  1  jam.  Untuk  alat  yang tidak  tahan  terhadap  panas  tinggi  cukup disterilisasi dengan alkohol 70%.

## Pembuatan Media Isolasi Media NB
Nutrient  Broth  powder  13  g  dilarutkan dengan  1000  ml  aquadest  dalam  labu erlenmeyer,  kemudian  dipanaskan  sambil digoyang hingga mendidih selama 1-2 menit dan  membentuk  larutan  yang  sempurna. Dituangkan dalam tabung reaksi @ 8 ml dan
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
disterilkan  di  dalam  autoklaf  pada  suhu 121 0 C dan tekanan 15 Ibs selama 15 menit.

## Media agar darah
Blood  Agar  sebanyak  40  g  dilarutkan dengan 1L air suling dan dipanaskan sampai mendidih  sambil  diaduk,  disterilkan  dengan autoklaf  pada  suhu  121 ⁰ C,  tekanan  15  lbs selama  15  menit.  Setelah  disterilkan tambahkan  darah  domba  segar  sebanyak  50 mL,  dicampur  rata,  dituang  ke  cawan  petri sebanyak 15 mL.

## Media NA
Nutrient  Agar  powder  23  g  dilarutkan pada  1000  ml  aquadest  dalam  labu erlenmeyer,  kemudian  dipanaskan  sambil digoyang hingga mendidih selama 1-2 menit dan  membentuk  larutan  yang  sempurna. Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 0 C dan tekanan 15 lbs selama 15 menit. Setelah steril  dituangkan  dalam  tabung  reaksi  @  5 ml  dan  tabung  reaksi  diletakkan  dalam posisi  miring  15 o atau  ditungkan  ke  dalam cawan petri @ 20 ml. Setelah Nutrient Agar dalam kemasan tersebut membeku, untuk uji sterilitas  di  masukkan  lebih  dulu  ke  dalam inkubator  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam sebelum media tersebut digunakan.

## Medium Sulfit Indol Motility (SIM).
Media  SIM  sebanyak  30  g  dilarutkan dengan  1  L  air  suling,  dipanaskan  hingga melarut,  setelah  itu  dimasukkan  ke  tabung reaksi  sebanyak  10  mL,  disterilkan  dengan autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 ⁰ C tekanan 15 lbs.

## Isolasi
Proses  isolasi  dengan  metode  gores, yaitu  dengan  cara  1  ose  pupuk  cair digoreskan  ke  dalam  media  Agar  Darah setelah  sampel  digoreskan,  cawan  petri dibungkus  dengan  menggunakan  kertas  dan diinkubasi  pada suhu  37 0 C selama 1-3 x 24 jam.

## Identifikasi
Identifikasi jenis-jenis bakteri ini dilakukan  dengan  beberapa  pengujian,
diantaranya  pengamatan  morfologi  koloni, seleksi  dan  pemurnian  bakteri,  pewarnaan Gram,  pewarnaan  endospora,  pengujian katalase,  motilitas,  oksidase,  ketahanan  pH, ketahanan suhu, fermentasi, penggunaan O 2 .

## Pengamatan Morfologi Koloni
Pengamatan ini dilakukan setelah bakteri  pada  media  Agar  Darah  diinkubasi selama  48  jam.  Pengamatan  dilakukan dengan  melihat  beberapa  aspek  seperti warna,  tepi,  dan  permukaan  koloni  pada media Agar Darah.

## Seleksi dan Pemurnian Bakteri
Seleksi dan pemurnian bakteri bertujuan untuk  memisahkan  dan  memperbanyak bakteri  yang  secara  makroskopis  terdapat perbedaan  pada  warna  koloni  yang  telah diinkubasi  selama  48  jam.  Kemudian dilakukan pemurnian dengan cara mengambil  isolat  dengan  ose  pada  cawan petri  kemudian  ditanam  pada  media  NA agar  miring  pada  tabung  reaksi  dengan metode  gores.  Diinkubasi  pada  suhu  37 0 C selama 24 jam.

## Pewarnaan Gram
Pewarnaan  Gram  digunakan  untuk menentukan  jenis  bakteri  Gram  positif  dan bakteri Gram negatif. Kaca objek dibersihkan  dengan  alkohol  sehingga  bebas dari  lemak,  difiksasi  di  atas  api  spirtus sampai  kering,  diberi  satu  tetes  NaCl fisiologis.  Bakteri  dari  media  NA  diambil dengan  jarum  ose,  diletakkan  pada  tetesan NaCl  fisiologis,  dicampur  hingga  merata. Dibiarkan mengering diudara  dan fiksasi di atas  api.  Diteteskan  2-3  tetes  larutan  kristal violet,  biarkan  selama  3  menit,  dibuang larutan kristal violet diteteskan larutan lugol satu  tetes  dan  dibiarkan  selama  1  menit. Preparat dibilas dengan alkohol 96% sampai jernih,  dicuci  dengan  air  mengalir  sampai bersih. Terakhir ditetesi dengan safranin dan dibiarkan selama 2 menit lalu dibilas dengan air  mengalir  dan  dikeringkan.  Diamati  di bawah  mikroskop.  Warna  ungu  untuk bakteri Gram positif dan warna merah untuk bakteri Gram negatif.

## Pewarnaan Spora
Pewarnaan  spora  digunakan  untuk mengamati  bakteri  yang  berspora  Menurut Waluyo  (2004)  endospora  tidak  mudah diwarnai dengan zat pewarna pada umumnya.
Prosedur  pewarnaan  spora  menurut Klein adalah sebagai berikut:
1. Disediakan  suspensi  biakan  mikroba berumur  48-72  jam  dalam  larutan  garam fisiologis.
2. Ditambahkan  ke  dalam  suspensi  tersbut sama banyaknya larutan karbol fuchsin.
3. Dipanaskan dalam pemanas air pada suhu 80 o C selama 10 menit.
4. Dibuat  preparat  dari  campuran  tersebut dan difiksasi.
5. Dicelupkan  ke  dalam  asam  sulfat  1% selama 1-2 detik.
6. Dicuci dengan air.
7. Dicat  dengan  larutan  methylene  blue selama 3 menit.
8. Dicuci  kembali  dengan  air  kemudian dikeringkan  dan  diamati  di  bawah mikroskop.
Diperhatikan  bagaimana  letaknya  spora itu  dalam  sel,  kemungkinannya  adalah terminal,  sub  terminal,  dan  sentral.  Bentuk spora  bulat  atau  lonjong.  Spora  berwarna merah dan badan bakteri berwarna biru.

## Uji Katalase
Uji katalase berguna dalam mengidentifikasi  kelompok  bakteri    yang dapat menghasilkan enzim katalase. Dilakukan  dengan  cara  di  atas  kaca  objek ditetesi  satu  tetes  H 2 O 2 3%,  ditambahkan koloni  bakteri  dan  langsung  diamati terjadinya  penguraian  hidrogen  peroksida. Dinyatakan positif bila menghasilkan enzim katalase  yang  ditandai  dengan  terbentuknya gelembung  udara  dan  negatif  bila  tidak  ada gelembung  udara.  Ini  terjadi  karena  bakteri tersebut  apabila  ditambahkan  hidrogen peroksida menghasilkan peroksida.

## Uji Motilitas
Uji  motilitas  digunakan  untuk  melihat pergerakan  bakteri.  Dilakukan  dengan  cara
satu  ose jarum  bakteri  ditanam  secara tegak lurus  di  tengah  Medium  SIM  (Sulfit  Indol Motility) dengan cara ditusukkan, diinkubasi  pada  suhu  37 ⁰ C  selama  24  jam. Bila  pertumbuhan  koloni  menyebar  dan timbul kekeruhan seperti kabut menandakan bakteri bergerak.

## Uji Oksidase
Uji  oksidase  ini  dilakukan  dengan  cara dibuat preparat ulas pada glass objek ditutup dengan  tissue  atau  kertas  saring  kemudian diteteskan  larutan  reagen  oksidase.  Hasil positif    warna  violet,  dan  negatif  tidak berwarna.

## Uji Ketahanan pH
Isolat  murni  dari  media  NA  miring diinokulasi ke dalam cawan petri yang berisi media  NA  sebanyak  3  medium  padat  yaitu pada  cawan  petri  P1  (pH  4,5),  P2  (pH  5,5), P3 (pH 6,5) kemudian diinkubasi pada suhu 37 0 C  selama  48  jam.  Isolat  pada  ketiga cawan  petri  tersebut  diamati  pertumbuhan koloninya,  pada  pH  mana  yang  lebih  baik tumbuh.

## Uji Ketahanan Suhu
Isolat  murni  dari  media  NA  miring diinokulasikan  ke  dalam  tabung  yang  berisi media  cair  sebanyak  2  tabung  yaitu  suhu pada  tabung  S1  (10 0 C)  dan  S2  (37 0 C), kemudian  diinkubasi  selama  1-3  hari. Diamati  perubahan  kekeruhan  media  pada masing-masing  tabung  dan  dicatat  tabung mana  yang  tingkat  kekeruhannya  paling tinggi  dan  paling  rendah.  Kekeruhan  paling tinggi  menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut mampu  bertahan  dan  berkembangbiak  pada suhu tersebut.

## Uji Fermentasi
Uji  fermentasi  dilakukan  berbarengan dengan  uji  produksi  gas  dengan  cara menumbuhkan  kultur  isolat  dalam  media cair dalam tabung reaksi yang diberi tabung durham  dalam  keadaan  terbalik  untuk menangkap gas yang dihasilkan oleh bakteri selama  dalam  pertumbuhannya,  kemudian diinkubasi  pada  suhu  30 0 C  selama  2-3  hari
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
(Yoni  S,  dkk,  2010).  Uji  fermentasi  positif jika pada tabung durham tertangkap gas dan hasil  negatif  jika  pada  tabung  durham  tidak terdapat gas.
Uji Penggunaan O 2 Isolat  murni  dari  media  NA  miring diinokulasi  ke  dalam  media  NA  tegak sebanyak  3  tabung.  Bakteri  diinokulasi  di bagian  permukaan  media  pada  tabung pertama  O1,  di  bagian  tengah  media  O2,  di bagian dasar media O3, kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  1-3  hari. Isolat  pada  ketiga  tabung  tersebut  diamati pertumbuhannya.  Aerob  jika  biakan  hanya berada  di  permukaan  media  agar,  anaerob jika  biakan  hanya  berada  di  dasar,  dan fakultatif  anaerob  jika  biakan  berada dipermukaan  dan  tengah  (Nesti  Dwiyani, 2010).

## Parameter Penelitian
Mengidentifikasi  bakteri  pupuk  organik cair  isi  rumen  sapi  melalui  pengamatan morfologi  koloni,  seleksi  dan  pemurnian bakteri, pewarnaan gram, pewarnaan endospora,  pengujian  katalase,  motilitas, oksidase,  ketahanan  pH,  ketahanan  suhu, fermentasi, dan penggunaan O 2 .

## Analisis Deskriptif
Data  yang  telah  diperoleh  dari  berbagai pengujian yang telah dilaksanakan kemudian  dilakukan  analisis  data  secara deskriptif  untuk  mengidentifikasi  bakteri hingga tingkat genera dan berpedoman pada buku  Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology (Holt et al , 1997).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi Bakteri
Berdasarkan  hasil  isolasi  terhadap bakteri  dari  sampel  pupuk  organik  cair  isi rumen sapi didapatkan beberapa koloni yang tumbuh  setelah  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama  1-3  hari.  Koloni  yang  diambil  pada sampel  sebanyak  empat  koloni,  dua  koloni dari  plat  Agar  Darah  1  dan  dua  koloninya lagi  dari  plat  Agar  Darah  2  yang  bertujuan
untuk  mendapatkan  jenis  sel  bakteri  yang berbeda.

## Identifikasi Genera Bakteri Morfologi Koloni
Pertama  dilakukan  identifikasi  melihat morfologi  koloni.  Ciri-ciri  koloni  yang terdapat  pada  plat  Agar  Darah  1  berwarna putih  susu,  pinggir  rata  dan  jernih,  bentuk elavasi cembung, dan untuk plat Agar Darah 2  ciri-ciri  koloninya  adalah  berwarna  putih agak krem, mengkilat, pinggir agak keriput.

## Pemurnian Bakteri
Keempat    koloni  bakteri  dimurnikan pada  media  agar  miring  NA  dan  diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Koloni yang tumbuh kemudian diidentifikasi dan ditentukan karakteristiknya.
Identifikasi  dan  karakterisasi  koloni bakteri yang tumbuh pada plat media Blood Agar  sampel  pupuk  organik  cair  isi  rumen sapi  yang  diberi  tanda  RS1a,  RS1b,  RS2a, RS2b yang telah diinkubasi pada suhu 37 o C selama  1-3  hari  ini  merupakan  kunci  awal untuk pengujian selanjutnya.

## Pewarnaan Gram
Berdasarkan  hasil  pengamatan  dan pengujian terhadap 4 isolat yang dimurnikan, didapatkan  bahwa bakteri  yang teridentifikasi  dari  3  isolat  yaitu  RS1a, RS2a,  RS2b  memiliki  ciri-ciri  berbentuk basil  pendek,  tunggal,  sepasang/berantai, Gram  positif.  Sedangkan  pada  isolat  RS1b yang  memiliki  ciri-ciri  bentuk  sel  basil pendek, tunggal/berantai, Gram positif.

## Pewarnaan Endospora
Keempat  sampel  bakteri  yang  telah teridentifikasi kemudian dilakukan uji lanjut dengan  pengujian  pewarnaan  spora  yang bertujuan  untuk  mengetahui  bahwa  bakteri yang  telah  berhasil  diisolasi  ada  tidaknya spora.  Menurut  Waluyo  (2008)  spora  pada bakteri  merupakan  struktur  yang  tahan panas  dan  tahan  bahan  kimia.  Spora  sulit untuk  diwarnai  karena  struktur  lapisan  luar spora yang kuat terhadap zat kimia sehingga dalam  proses  pewarnaan  diperlukan  teknik
pewanaan  pada  suhu  80 0 C.  Pemanasan tersebut  bertujuan  untuk  mengembangkan lapisan luar spora sehingga zat warna karbol fuchsin  dapat  masuk  dan  mewarnai  spora menjadi  merah.  Dari  hasil  pengujian endospora  dihasilkan  bahwa  tiga  isolat
bakteri  RS1a,  RS2a,  RS2b  yang  telah diwarnai dengan pewarnaan spora menunjukan  adanya  spora  dan  satu  isolat bakteri  RS1b  tidak  menunjukan  adanya spora.
Tabel 1. Identifikasi Koloni dan Bentuk Sel
Kode Ciri Koloni Ciri Sel Pewarnaan Gram Spora RS1a  Bentuk bulat kecil
 Warna putih susu agak krem
 Pinggir rata dan jernih
 Bentuk elavasi cembung
 Permukaan mengkilat
 Basil/batang  Pendek  Berantai + + RS1b  Bentuk bulat kecil
 Warna putih susu agak krem
 Pinggir rata dan jernih
 Bentuk elavasi cembung
 Permukaan mengkilat
 Basil/batang  Pendek  Berantai + - RS2a  Bentuk bulat kecil
 Warna putih agak krem
 Pinggir  keriput dan jernih
 Bentuk elavasi cembung
 Permukaan mengkilat
 Basil/batang  Pendek  Berantai + + RS2b  Bentuk bulat kecil
 Warna putih agak krem
 Pinggir keriput dan jernih
 Bentuk elavasi cembung
 Permukaan mengkilat
 Basil/batang  Pendek  Berantai + +
Keterangan:
Gram : (+) mengikat kristal violet, (-) tidak mengikat kristal violet Spora : (+) membentuk spora, (-) tidak membentuk spora

## Tabel 2. Pengujian biokimia dan pengamatan fisiologi isolat bakteri
Kode Katalase Motilitas PH Suhu Tipe Fermentasi Gas Sifat Sel 4,5 5,5 6,5 10 0 C 37 0 C RS1a + + + ++ +++ -
+ Homofermentatif - Aerobik RS1b - - + ++ +++ - + Homofermentatif - Fakultatif. anaerob RS2a + + + ++ +++ -
+ Homofermentatif - Aerobik RS2b + + + ++ +++ - + Homofermentatif - Aerobik
Keterangan :
Katalase : (+) membentuk gelembung udara, (-) tidak membentuk gelembung udara Motilitas : (+) motil, (-) non motil pH : (+) kurang baik, (++) cukup baik, (+++) sangat baik Suhu : (-) tidak ada pertumbuhan, (+) ada pertumbuhan

## Uji Katalase
Uji  katalase  yang  telah  dilakukan  pada keempat isolat yaitu tiga isolat menghasilkan  gelembung  setelah  ditetesi
larutan  H 2 O 2 3%  dan  satu  isolat  tidak menghasilkan  gelembung.  Menurut  Yoni  S dkk .,  (2010)  reaksi  positif  uji  katalase ditunjukkan dengan membentuk gelembung-
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
gelembung  yang  berarti  ada  pembentukan gas  oksigen  (O 2 )  sebagai  hasil  pemecah H 2 O 2 oleh  enzim  katalase  yang  diproduksi oleh  bakteri  tersebut.  Ketiga  isolat  bakteri RS1a,  RS2a,  RS2b  menunjukan  hasil  uji katalase  positif    karena  adanya  pemecahan H 2 O 2 menjadi  O 2 .  Sedangkan  pada  satu isolat  bakteri  RS1b  menunjukkan  hasil  uji katalase  negatif  karena  tidak  adanya pemecahan H 2 O 2 menjadi O 2 .

## Uji Motilitas
Uji  motilitas  merupakan  salah  satu aspek  yang  dilihat  untuk  membuktikan  ada tidaknya pergerakan dari isolat bakteri yang diinokulasi  pada  media  SIM  agar  tegak  di bagian  tengah.  Berdasarkan  pengujian  yang telah  dilakukan  keempat  isolat  bakteri  yaitu tiga  isolat  RS1a,  RS2a,  RS2b  menunjukan adanya  penyebaran  koloni  lebih  luas  ke bagian  lainnya,  dan  satu  isolat  RS1b menunjukkan  tidak  adanya  penyebaran koloni,  terlihat  bakteri  koloni  menumpuk pada bagian tengah dan hanya tumbuh pada bagian tengah agar tegak saja.

## Uji Oksidase
Uji  oksidase  ini  dilakukan  untuk menentukan adanya sitokrom oksidase yang dapat  ditemukan  pada  mikroorganisme tertentu. Mikroorganisme aerobik dan anaerobik fakultatif memiliki enzim sitokrom  oksidase  dan  oksigen  sebagai akseptor  elektronnya  sehingga  dalam  uji  ini akan  memberikan  hasil  uji  positif  yang ditunjukkan dengan perubahan warna koloni bakteri  menjadi  biru  violet  dalam  waktu  60 detik  setelah  penambahan  reagen  uji. Perubahan  warna  ini  disebabkan  sitokrom oksidase  mengoksidasikan  larutan  reagen oksidase.  Pada  mikroorganisme  anaerobik obligat  akan  memberikan  hasil  uji  negatif yang ditandai dengan tidak terjadi peruabahn warna (Lay, 1994).
Berdasarkan  hasil  uji  oksidase  pada keempat    isolat  bakteri  menunjukkan  hasil positif  yang  ditandai  adanya  perubahan warna biru violet.

## Uji Fermentasi
Menurut  Nilam  (2005)  bakteri  asam laktat  tipe  homofermentatif  yaitu  bakteri yang  menggunakan  hampir  85%  gula  untuk menghasilkan asam laktat, dan tipe heterofermentatif  menghasilkan  etanol  CO 2 selain  asam  laktat.  Keempat  isolat  yang telah teridentifikasi memiliki tipe fermentasi homofermentatif  yang  menunjukkan  hasil negatif  dengan  tidak  adanya  pembentukan gelembung gas C0 2 di dalam tabung durham yang  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  48 jam.  Berdasarkan  pengujian  tipe  fermentasi pada keempat isolat bakteri bersifat homofermentatif  yaitu  bakteri  dengan  tipe yang  hanya  mampu  untuk  memproduksi asam laktat dan fermentasi gula (Mandingan et al., 2003).
Uji Penggunaan O 2 Beberapa bakteri dalam
pertumbuhannya ada yang tidak memerlukan oksigen dan ada yang memerlukan oksigen. Pengujian penggunaan O 2 ini dilakukan untuk mengetahui sifat dari masing-masing isolat. Berdasarkan pengujian  yang  telah  dilakukan  terhadap keempat isolat bakteri, didapat Isolat bakteri RS1b  bersifat  fakultatif  anaerob  hidup  dan berkembang  biak  tanpa  atau  dengan  sedikit oksigen,  tumbuh  pada  bagian  tengah  dan permukaan media NA tegak yang diinkubasi pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam.  dan  isolat bakteri  RS1a,  RS2a,  RS2b  bersifat  aerob disebut  juga  aerobic  sporeformes  yang biakan bakterinya hanya tumbuh dipermukaan.

## Uji Ketahanan pH
Umumnya bakteri tumbuh baik pada pH 7,0 meskipun dapat tumbuh pada kisaran pH 5,0 – 8,0 (Lay et al., 1999). Berdasarkan pH minimun,  optimum,  dan  maksimum  untuk pertumbuhannya,  mikroba  digolongkan  ke dalam  mikroba  asidofilik,  neutrofilik,  dan alkalinofilik  (Theresia dkk., 2008). Mikroba asidofilik tumbuh pada pH optimal 1,0 - 5,5, mikroba  neutrofilik  tumbuh  pada  pH optimal  antara  5,5  –  8,0  ,  dan  mikroba alkalofilik  tumbuh  pada  pH  optimal  antara
8,5  –  11,5.  Secara  keseluruhan  isolat  yang berhasil  diidentifikasi  mampu  tumbuh  pada pH 4,5, pH 5,5 dan pH 6,5. Pada pengujian pH  ini  bakteri  pertumbuhan  tertinggi  dan baik pada perlakuan 6,5.

## Uji Ketahanan Suhu
Uji  ketahanan suhu  ini dilakukan untuk melihat  kemampuan  bakteri  tumbuh.  Lay (1999)  menyatakan  bahwa  bakteri  terbagi menjadi  tiga,  yaitu  bakteri  bersifat  psikrofil yang  dapat  tumbuh  pada  suhu  0 0 C  –  20 0 C, mesofil  pada  kisaran  20 0 C  -  50 0 C,  dan termofil  yang  dapat  tumbuh  di  atas  suhu 50 0 C.  Bakteri  yang  telah  teridentifikasi  dari keempat isolat memiliki kemampuan bertahan  pada  suhu  37 0 C.  Menurut  Buckle (1987)  pada  fase  logaritmik  sel-sel  bakteri akan  tumbuh  dan  membelah  diri  secara eksponensial sampai jumlah maksimum dan dapat dibantu oleh faktor lingkungan seperti pH,  media  tumbuh,  nutrisi,  tempratur,  dan kelembaban udara.
Berdasarkan pengamatan morfologi koloni,  pewarnaan  gram,  pewarnaan  spora dan  uji  katalase,  uji  motilitas,  uji  oksidase, uji  fermentsi,  uji  ketahanan  pH,  uji ketahanan  suhu,  dan  uji  penggunaan  O 2. Bakteri  yang  teridendifikasi  disesuaikan dengan buku Bergey’s Manual of Determinative
Bacteriology,
dapat disimpulkan  bahwa  bakteri  isolat  RS1a, RS2a,  RS2b  merupakan  bakteri  genus Bacillus sp.  dan  isolat  RS1b  merupakan genus Lactobacillus sp.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan:  Pada  sampel pupuk organik cair isi rumen sapi ditemukan bakteri genus Bacillus yang bersifat aerobik aerobik  dan  bakteri  genus Lactobacillus yang bersifat fakultatif anaerobik.
Karakteristik  keempat  isolat  bakteri  mampu tumbuh  pada  pH  6,5  dan  suhu  37 0 C  dan bersifat homofermentatif.
Saran Perlu  dilakukan  pengujian  lebih  lanjut untuk  mendapatkan  karakteristik  bakteri
hingga tingkat species, dan aplikasi penggunaan  bakteri  tersebut  sebagai  bahan pupuk organik.

## DAFTAR PUSTAKA
Buckle,  KA,  RA,  Edwards,  GH  Fleet  dan M.Wootton. (1987). Ilmu Pangan . UI- Press, Jakarta.
Czerkawski, J.W. (1986). An Introduction to Rumen  Studies.  1st  Ed.  Pergamon Press, New York.
Holt.  J.  G.,  Kreig,  N.R.,  Bryant  M.P., Lapage  S.P.,  Lautrop  H.,  Liston  J., Murray  R.G.E.,  Ravin  A.  W.  And Staley,  J.  T.  (1997). The  Shorter Bergey’s  Manual  of  Determinative
Bacteriology. Eight Edition.
Baltimore.  The  Williams  and  Wilkins Baltimore. 184-218.
Lay,  B.  W.  (1994).  Analisis  Mikroba  di Laboratorium.  PT  Raja  Grafindo Persada: Jakarta.
Lay, B. W. (1999). Analisis mikrobiologi di lboratorium. PT. Raja Grafindo Persada: Jakarta.
Mandingan T. M., Martinko M. J and Parker J. (2003). Brock Biology of Microorganisms.
Tent Edition,
Prentice Hall. New York.
Nesti  Dwiyani  S.P.  (2010).  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  dari Usus Ayam . Chanlight’s Blog. 12 Juli 2010.
Nilam  Fadmaulida  Wulandari.  (2005). Identifikasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Asam  Laktat  (BAL)  dari  Makanan Fermentasi . Jurnal  Laporan  Teknik Bidang Mikrobiologi  Pusat  Penelitian Bogor -LIPI. Hlm 107.
Sihombing  D  T  H.  (2000).  Teknik
Pengelolaan  Limbah  Kegiatan/Usaha Peternakan. Pusat Penelitian Lingkungan
Hidup Lembaga Penelitian, Institut Pertanian Bogor.
Theresia,  T.S.,  Juni  N  dan  A.  Endang,  S. (2008). Microbiologi  Umum . Penerbit Universitas  Atma  Jaya  Yogyakarta Hlm 200.
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
Waluyo,  L.  (2004).  Mikrobiologi  Umum.
Penerbit  Universitas  Muhamadiyah Press, Malang
Waluyo  Lud.  (2008).  Teknik  Metode  Dasar dalam Mikrobiologi. Universitas Muhamaadiyah  Malang  Pres.  Hlm
203.
Yoni  Suryani  ,  Astuti,  Bernadeta  Oktavia dan  Siti  Umniyati.  (2010).  Isolasi  dan Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat dari  Limbah  Kotorab  Ayam  sebagai agen  Probiotik  dan  Enzim  Kolesterol Reduktase. Prosiding Seminar Nasional  Biologi  3  Juli  2010.  Biologi FMIPA UNY. Hlm 138-147