## POTENSI BAKTERI KITINOLITIK SUMBER AIR PANAS SEBAGAI PENGENDALI
HAYATI LARVA Aedes aegypti L.
Potential of Isolate Chitinolitic Bacteria from Hot springs, as Biological Control of Aedes aegypti L larva.
Fitria Ardani, Yekki Yasmin, Lenni Fitri
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Syiah Kuala e-mail: v13_4@ymail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  bakteri  kitinolitik  isolat  asal  air  panas sebagai  pengendali  hayati  larva Aedes  aegypti L.  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak lengkap  (RAL)  faktorial,  yang  terdiri  dari  dua  faktor  yaitu  jenis  isolat  dan  konsentrasi  bakteri kitinolitik  isolat  lokal.  Adapun  prosedur  penelitian  meliputi  pemeliharaan  larva Aedes  aegypti L., isolasi dan seleksi bakteri kitinolitik dan uji hayati. Data diolah dengan menggunakan Analisis Varian (ANAVA).  Hasil  penelitian  diperoleh  empat  isolat  untuk  diuji  pada  larva  nyamuk Aedes  aegypti L. instar II. Pemberian isolat dan konsentrasi bakteri berbeda menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata  dalam  menyebabkan  kematian  larva  (P>0,05).  Rata-rata  kematian  larva  tertinggi  yaitu  pada perlakuan  isolat  bakteri  IS  2  dan  IS  3  dengan  konsentrasi  1%.  Pemberian  isolat  bakteri  kitinolitik mempengaruhi  proses  pembentukan  pupa,  hal  ini  terlihat  dari  tidak  terbentuknya  pupa  dari  masing- masing konsentrasi  maupun isolat. Pemberian isolat bakteri kitinolitik juga  mengakibatkan kematian pada  larva  yang  diawali  bagian  tubuh  dan  siphon  larva  memucat  serta  menghitamnya  saluran pencernaan.
Kata kunci: Bakteri kitinolitik, Larva Aedes aegypti L., Sumber Air Panas.

## Abstract
The  purpose  of  this  study  was  to  discover  the  potential  of  isolate  chitinolitic  bacteria,  hot springs,  as  biological  control  of Aedes  aegypti L.  larva.  This  research  used  Completed  Randomized Designed  (RAL)  factorial  with  two  factor,  isolate  types  and  concentration  of  isolatechitinolitic bacteria.  The  research  procedure  includes  the  maintenances  of Aedes  aegypti L.  larva,  isolation  and selection of  chitinolitic  bacteria,  and  biological  test.  Data  were  processed  by  using  Varian  Analysis (ANAVA). The result of this study indicated that four isolates were test on larva of Aedes aegypti L. masquito, instar II. Giving different isolat chitinolitic bacteria and concentration showed no significant differences in larva death (P>0,05). The highest average of larva death was exhibited at the treatments of 1% of IS 2 and IS 3 isolate. The occurance of chitinolitic bacteria influenced the growth of pupa, it can be showed that the pupa was not formed from each consentration and isolate that caused the death in larva signed by the part of body and larva siphon were pale and digestive tract was dark.
Keywords: Chitinolitic bacteria, Aedes aegypti L. larva, Hot Springs.

## PENDAHULUAN
Nyamuk Aedes  aegypti L.  merupakan vektor  dari    beberapa  penyakit  salah  satunya demam  berdarah  dengue.  Tindakan  pencegahan yang  biasa  dilakukan  dengan  memberantas sarang  nyamuk  dan  membunuh  larva  serta nyamuk dewasa.  Pengendalian larva merupakan kunci  strategi  program  pengendalian  vektor  di seluruh dunia (Okumu et al., 2007).
Pemberantasan  yang  dilakukan  dapat  meliputi modifikasi  pada  habitat-habitat  larva  atau pengendalian  dengan  menggunakan  pestisida kimiawi  atau  sintetik.  Penggunaan  pestisida kimiawi membutuhkan biaya yang tinggi. Selain itu  penggunaan  pestisida  ini  mengakibatkan munculnya  resistensi  dari  berbagai  macam spesies  nyamuk  yang  menjadi  vektor  penyakit (Ndione et  al.,  2007).  Adanya  dampak  negatif yang  ditimbulkan  dari  penggunaan  pestisida
kimiawi  menyebabkan  perlu dicari  alternatif larvasida yang lebih ramah terhadap lingkungan. Larvasida  yang  mulai  dikembangkan  adalah dengan  memanfaatkan  larvasida  hayati,  yaitu makhluk  hidup  yang  mampu  mengendalikan populasi larva nyamuk.
Bakteri  juga  diketahui  dapat  dijadikan larvasida  hayati  yaitu  dari  kelompok  bakteri kitinolitik.  Bakteri  kitinolitik  merupakan  bakteri yang  mampu  menghasilkan  enzim  kitinase  untuk mengurai  zat  kitin  (Yuniarti  dan  Blondine,  2005). Enzim  kitinase  yang  dihasilkan  oleh  bakteri kitinolitik  mempunyai  potensi  tinggi  untuk mendegradasi  zat  kitin  yang  terdapat  pada eksoskeleton nyamuk dewasa dan larva.
Di  Indonesia,  Isolat  bakteri  kitinolitik yang berasal dari air dilaporkan mampu mematikan 86%  larva Aedes  aegypti L.  (Diptera:  Culicidae) dalam waktu 7 hari (Pujiyanto et al., 2008). Namun pemanfaatan  bakteri  kitinolitik  isolat  air  panas belum  banyak  dilakukan,  khususnya  sebagai pengendali  hayati  larva Aedes  aegypti L.  Melihat besarnya potensi sumber air panas yang terdapat di Aceh,  maka  perlu dilakukan  penelitian  tentang penggunaan  bakteri  kitinolitik  sebagai  pengendali hayati bagi larva Aedes aegypti L.

## METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dimulai  dari  bulan November 2011 sampai Agustus 2012. Penelitian ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi Jurusan  Biologi  Fakultas  MIPA  Universitas Syiah Kuala.

## Bahan dan Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  alat pengaduk, autoklaf, botol sampel, bunsen, cawan petri,  corong  glass,  erlenmeyer,  gelas  ukur, gunting, hot  plate,  inkubator,  jarum  inokulasi, jarum  inokulasi,  kaca  objek,  keranjang  alat, mistar, masker, mikroskop, oven, pipet tetes, rak tabung  reaksi,  kulkas,  sarung  tangan, vortex, magnetic  stirer,  tabung  reaksi,  timbangan, termometer, pH meter, sentrifuse, inkubator, alat penciduk,  wadah  pemeliharaan  larva,  kandang pemeliharaan  imago,  mikroskop,  kamera  digital, alat  tulis,  air  dari  sumber  air  panas  Ie  Seeum sebagai  sumber  pengambilan  isolat,  larva nyamuk Aedes  aegypti L.,  air,  ragi,  aquadest, larutan  gula  10%,  darah mencit,  kulit  udang, aluminium  foil,  kapas,  kertas  label,  kertas pembungkus,  kertas  saring,  plastik  wrap, MgSO 4 .7H 2 O, K 2 HPO 4 , ekstrak yeast, agar, HCl, dan NaOH.
Metode Penelitian Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksperimental dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan pola Faktorial. Sebagai perlakuan adalah  jenis  isolat  dan  konsentrasi  bakteri kitinolitik  isolat  lokal  dari  sumber  air  panas  Ie Seuum,  Aceh  Besar.  Waktu  pengamatan  adalah selama tujuh hari setelah perlakuan.

## Prosedur Penelitian Pemeliharaan Larva Aedes aegypti L.
Pengumpulan larva nyamuk dari lapangan dilakukan dengan menggunakan perangkap  berupa  kaleng  kecil  yang  dicat  hitam (ovitrap)  yang  diberi  papan  sebagai  tempat meletakkan  telur.  Larva  yang didapat  dari lapangan dimasukkan ke dalam wadah pemeliharaan  yang  berisi  air  sebanyak  10  ml. Larva  dipelihara  sampai  menjadi  pupa.  Selama dipelihara,  larva  diberi  pakan  berupa  ragi  tape sebanyak  1  gram  yang  dimasukkan  ke  dalam wadah  pemeliharaan.  Setiap  dua  hari  sekali  air diganti  dengan  yang  baru.  Ketika  masa  pupa, wadah pemeliharaan larva dimasukkan ke dalam kandang  pemeliharaan  imago.  Setelah  menjadi imago,  maka  imago  jantan  diberi  pakan  berupa campuran  larutan  gula  10%  sedangkan  imago betina  diberi  darah  mencit.  Pemberian  darah mencit  dilakukan  dengan  memasukkan  mencit yang  telah  dicukur  bulunya  dan  diletakkan kedalam  kandang  pemeliharaan  nyamuk  selama 1 jam (Yasmin dan Fitri,  2010).
Setelah  3  hari,  ke  dalam  kandang pemeliharaan  imago  dimasukkan  kertas saring yang telah dibasahi dan dibentuk seperti kerucut. Kertas  saring  ini  diletakkan  pada  wadah  yang berisi  air.  Kertas  saring  ini  digunakan  sebagai tempat peletakan telur oleh nyamuk betina Aedes aegypti.  Telur  yang  telah  diletakkan  oleh nyamuk  betina,  dimasukkan  kembali  ke  dalam wadah  pemeliharaan  larva.  Telur  dibiarkan hingga menetas. Setelah menetas, larva dipelihara  hingga  mencapai  larva  instar  II. Sebagian larva instar II diambil untuk perlakuan, dan sebagian lagi digunakan untuk pemeliharaan selanjutnya (Yasmin dan Fitri, 2010).

## Isolasi dan Seleksi Bakteri Kitinolitik
Bakteri  kitinolitik  diisolasi  dari  sampel air  panas  Ie  Seuum  di  kawasan  Aceh  Besar. Sampel  diambil  di  sumber  air  panas  pada  tiga titik  yang  berbeda.  Kemudian  disimpan  dalam botol sampel yang telah disterilkan.
Sampel  yang  diperoleh  sebanyak  1  ml lalu  dicawankan  pada  media  agar  kitin  dan diinkubasi  selama  48-72  jam  pada  suhu  60 o C. Koloni  yang  tumbuh  dan  membentuk  zona
bening  disekitar  koloni  merupakan  isolat  bakteri kitinolitik.  Isolat yang  diperoleh  kemudian disimpan  pada  suhu  4 o C  untuk  pemeliharaan (Pujiyanto et  al.,  2008).  Bakteri  kitinolitik ditumbuhkan  kembali  pada  media  agar  kitin untuk  diperoleh  biakan  murni.  Isolat  murni diinkubasi pada suhu 60 o C selama 1-5 hari. Zona bening  yang  terbentuk  kemudian  diukur  dengan menggunakan jangka sorong (Dewi, 2008).

## Pembuatan Media Agar Kitin
Media  agar  kitin  terdiri  dari  0,1% MgSO 4 .7H 2 O,  0,02%  K 2 HPO 4 ,  0,1%  ekstrak yeast, dan 1,5% agar. Bahan media agar kitin dan 0,5  %  koloid  kitin  di  sterilisasi  dengan menggunakan autoclave selama  15  menit  pada suhu  121 o C  tetapi  dalam  wadah  yang  berbeda. Setelah  dingin  kemudian  koloid  kitin  dicampur dengan  bahan  media agar  kitin  dalam  keadaan steril.  Media  agar  kitin  steril  dituang  ke  dalam cawan  petri.  Media  kemudian  disimpan  dalam inkubator  dengan  posisi  terbalik  sebelum digunakan (Pujiyanto et al., 2008).

## Uji Hayati
Larva Aedes  aegypti L. dimasukkan dalam wadah pemeliharaan sebanyak 20 individu dalam  200  ml  air  untuk  tiap  perlakuan.  Biakkan bakteri yang sudah didapat dimasukkan kedalam tabung  reaksi  yang  telah  berisi  aquadest kemudian divortex sampai tingkat kekeruhan 0,5 Mc  Farland.  Larutan  yang  telah  berisi  bakteri tersebut kemudian dimasukkan dengan konsentrasi  1%,  2%  dan  3%  ke  dalam  wadah pemeliharaan larva dan diamati selama tujuh hari setelah perlakuan.

## Parameter Penelitian
Adapun  parameter  dari  penelitian  ini adalah sebagai berikut : 1. Rata-rata jumlah kematian larva
2. Rata-rata larva yang mampu menjadi pupa
3. Morfologi  larva  sebelum  dan  sesudah perlakuan

## Analisis Data
Data  besarnya  kematian  (mortalitas) larva Aedes  aegypti L. diolah  dengan  Analisis Varian (ANAVA) menggunakan SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri Kitinolitik Termofilik
Isolat  bakteri  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  berasal  dari  sampel  air  panas  Ie Seuum,  Aceh  Besar.  Jumlah  isolat  yang  mampu tumbuh  pada  media  agar  kitin  sebanyak  empat
isolat. Dua isolat bakteri dari titik satu (IS 1 dan IS  2),  satu  isolat  bakteri  dari  titik  kedua  (IS  3) serta  satu  isolat  bakteri  dari  titik  ketiga  (IS  4). Isolat  bakteri  yang  didapat  membentuk  zona bening dengan luas diameter yang berbeda-beda, IS 1 (4,3 mm), IS 2 (5,0 mm), IS 3 (3,0 mm), dan IS  4  (5,5  mm).  Wijaya  (2002)  menyatakan bahwa  besarnya  zona  bening  yang  dihasilkan tergantung pada jumlah monomer N- asetilglukosamin  yang  dihasilkan  dari  proses hidrolisis  kitin  dengan  memutus  ikatan  β  1,  4 homopolimer N-Asetilglukosamin. Semakin besar jumlah  monomer N-asetilglukosamin  yang dihasilkan maka akan semakin besar zona bening yang  terbentuk  di  sekitar  koloni.  Zona  bening yang  terbentuk  dapat  dilihat  dari  perubahan warna  medium  menjadi  bening  pada  sekeliling bakteri.

## Kematian Larva Aedes aegypti L.
Hasil  analisis  varian  yang  didapat setelah  perlakuan  selama  7  hari  menunjukkan bahwa  pemberian  jenis  isolat  dan  konsentrasi yang  berbeda  tidak  menunjukkan  perbedaan yang  nyata  dalam  menyebabkan  kematian  larva (P<0,05).  Tabel 1    memperlihatkan bahwa  tidak terdapat  perbedaan  yang  nyata  terhadap  jumlah larva  nyamuk  yang  mengalami  kematian,  pada perlakuan  berbagai  jenis  isolat  bakteri.  Hal  ini diduga  karena  masing-masing  isolat  mempunyai nilai  parameter  fisik  (suhu,  pH)  yang  tidak  jauh berbeda.  Menurut  Lehninger  (1997)  aktivitas enzim  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  yaitu, pH,  suhu,  konsentrasi  substrat  dan  enzim  serta adanya aktivator dan inhibitor.
Tabel 1 Rata-rata  jumlah  kematian  larva Aedes aegypti L. dengan berbagai isolat
Isolat Rata-rata kematian larva Aedes aegypti L. (individu) IS 1 17,74 a IS 2 18,74 a IS 3 18,65 a IS 4 17,62 a
Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata
Berdasarkan  hasil  pengamatan  selama dilakukan  penelitian,  kematian  larva  nyamuk Aedes aegypti L. pada masing- masing perlakuan isolat  sudah  mulai  terjadi  pada  hari  pertama. Larva  yang  diberi  perlakuan  dengan  isolat  IS  2 menunjukkan  rata-rata  kematian  yang lebih tinggi  yaitu  18,74  individu  (93,7%).  Pada  hari kelima,  isolat  ini  telah  dapat  menyebabkan mortalitas  larva  sebesar  16,4  individu  (82,1%), lebih  banyak  dibandingkan  isolat  lainnya.
Kematian  larva  seterusnya  meningkat  mencapai 18,77  individu  (93,7%)  pada  hari  ketujuh. Berdasarkan hal tersebut, terlihat bahwa isolat IS 2  berpotensi  digunakan  sebagai  bioinsektisida. Hasil  penelitian  didapatkan  jumlah  rata-rata kematian  larva  pada  penelitian  ini  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  penelitian  yang  dilakukan Pujiyanto et  al.,  (2008)  dari  sepuluh  isolat  yang diuji  cobakan  pada  larva  nyamuk Aedes  aegypti L.,  terdapat  satu  isolat  bakteri  kitinolitik berpotensi menyebabkan kematian larva nyamuk yaitu 86,7% selama tujuh hari pengamatan.
Tabel  2 Hubungan  isolat  (I) dan  konsentrasi  (K)
terhadap rata-rata jumlah kematian - larva Aedes  aegypti L.  dengan  berbagai isolat. I/K Rata-rata kematian larva Aedes aegypti L. (individu) I 1 K 1 17,66 a I 1 K 2
17,33 a I 1 K 3
18,00 a I 2 K 1 19,66 a I 2 K 2
17,33 a I 2 K 3
19,33 a I 3 K 1
19,66 a I 3 K 2
18,66 a I 3 K 3
17,66 a I 4 K 1
16,66 a I 4 K 2
18,00 a
I 4 K 3 18,33 a
Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata; I 1 = Isolat IS1, I 2 = Isolat IS2, I 3 = Isolat IS3, I 4 = Isolat IS 4, K 1 = Konsentrasi 1, K 2 = Konsentrasi 2, K 3 = Konsentrasi 3
Hubungan  antara  jenis  isolat  dan konsentrasi terhadap jumlah rata-rata kematian  larva  nyamuk Aedes  aegypti L. juga  tidak  berbeda  nyata.  Interaksi  yang paling  baik  yaitu  pada  isolat  IS  2  dan    IS  3 dengan  konsentrasi  1%  (19,66  individu) (Tabel 2).  IS  4  memiliki  zona  bening  yang lebih  besar  dibandingkan  dengan  isolat  IS  2 dan IS 3,  tetapi  aktivitas enzim  kitinase IS 2 dan IS 3 lebih besar dibandingkan dengan IS 4  terlihat  dari  besarnya  rata-rata  kematian larva Aedes  aegypti L. (Tabel 2).  Diduga zona  bening  yang  terbentuk  saat  itu  kecil disebabkan karena kondisi suhu yang diinginkan  isolat  IS  2  dan  IS  3  tidak optimum.  Hal  ini  sama  dengan  hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Dewi  (2008) bahwa  isolat  TR3  yang  memiliki  zona bening  besar  ternyata  memiliki  kemampuan menghasilkan  enzim  kasar  yang  rendah,
sebaliknya  isolat  TR1  memiliki  zona  bening yang  relatif  kecil  jika  dibandingkan  TR3, tetapi  memiliki enzim  yang tinggi pada  suhu diatas 70 o C.

## Morfologi Larva Aedes aegypti L.
Gejala keracunan oleh bakteri kitinolitik yang  terjadi  pada  larva Aedes  aegypti L.  dapat dilihat melalui pengamatan morfologi pada tubuh larva  sebelum  dan  sesudah  perlakuan.  Sebelum diberikan  perlakuan,  larva  bergerak  aktif, pengamatan  dengan  menggunakan  mikroskop tubuh  larva  terlihat  segar  dan  berwarna  hitam, siphon  (alat  pernapasan),  caput  dan  saluran pencernaan  terlihat  normal.  Setelah  pemberian isolat  bakteri  pergerakan  larva  mulai  lambat. Pengamatan  dengan  mikroskop,  bagian  tubuh dan  siphon  memucat,  dan  saluran  pencernaan menghitam.  Hari  pertama  setelah  diberikan perlakuan  sudah  mulai  terdapat  larva  yang  mati walaupun dalam jumlah yang sedikit.
Pemberian  isolat  bakteri  kitinolitik menyebabkan kematian pada larva nyamuk yang dimulai dengan menghitamnya saluran pencernaan  dan  akhirnya  alat  pencernaan  larva lepas  (Gambar  1).  Diduga  isolat  bakteri  bersifat sebagai  racun  perut.  Menurut  Puri  (2006) makanan  larva  di  alam  adalah  mikroorganisme yang  terdapat  pada  habitatnya  seperti  alga, protozoa,  bakteri,  atau spora  jamur.  Widarto (2009)  menyatakan  bahwa  racun  lambung  atau racun  perut  adalah  insektisida  yang  membunuh serangga  sasaran  dengan  cara  masuk  ke pencernaan  melalui  makanan  yang  dimakan. Insektisida masuk ke organ pencernaan serangga dan  diserap  oleh  dinding  usus  kemudian ditranslokasikan ke tempat sasaran yang mematikan  sesuai  dengan  jenis  bahan  aktif insektisida.
Melalui  pengamatan  dengan  mikroskop setelah  mengalami  kerusakan  pada  saluran pencernaan,  bakteri  mulai  menyerang  struktur eksoskeleton  larva yang  tersusun  dari  kitin. Menurut  Pujiyanto et  al. (2008)  kerusakan eksoskleton pada larva diakibatkan oleh terdegradasinya  kitin  yang  merupakan  polimer utama  eksoskeleton  oleh  aktivitas  kitinase  yang dihasilkan  bakteri  kitinolitik.  Hal  ini  diperkuat dengan  pernyataan  Gooday  (1990),  bahwa degradasi kitin terutama dilakukan oleh mikroorganisme,  dimana  kitin  dapat  merupakan sumber karbon dan nitrogen untuk pertumbuhannya.
Hasil  pengamatan yang  dilakukan menunjukkan  tidak  terdapatnya  larva  yang mampu  menjadi pupa  meskipun  sudah  melewati tujuh  hari  pengamatan.  Pemberian  bakteri kitinolitik  terhadap  larva  diketahui  berpengaruh
pada  proses  pergantian  dari  stadium  larva menjadi pupa. Bakteri kitinolitik diduga mempengaruhi proses pembentukan pupa, hal ini terlihat dari tidak terbentuknya pupa dari masing- masing konsentrasi maupun isolat. Hal ini sesuai dengan  yang  dilaporkan  oleh  Pujiyanto et  al. (2008) bahwa bakteri kitinolitik selain berpengaruh  terhadap  kematian  larva  juga mempengaruhi  proses  perubahan  morfologi larva, yaitu pada saat terbentuknya pupa.
A B Gambar 1. Larva Aedes aegypti L. instar II; (A) Larva  sebelum  diberikan  perlakuan bakteri  kitinolitik,  (B) Larva  setelah diberikan perlakuan bakteri kitinolitik

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil penelitian,  maka didapat  pemberian  isolat  bakteri  dan  konsentrasi yang  berbeda  menunjukkan  tidak  adanya perbedaan  yang  nyata  dalam  menyebabkan kematian  larva  (P>0,05).  Rata-rata  kematian larva  tertinggi  terjadi  pada  perlakuan  isolat bakteri  IS  2  dan  IS  3  dengan  konsentrasi  1%.
Pemberian
isolat bakteri kitinolitik
mempengaruhi proses pembentukan pupa.

## DAFTAR PUSTAKA
Dewi,  I.  M.  2008.  Isolasi  Bakteri  dan  Uji Aktivitas Kitinase Termofilik Kasar dari Sumber Air Panas Tinggi Raja, Simalungun  Sumatra  Utara. Tesis. Universitas Sumatra Utara, Medan.
Gooday,  G.W.  1990.  Physiology  of  Microbial Degradation  of  Chitin  and  Chitosan. Biodegradation 1 (2-3): 177-190.
Lehninger,  A.  L.  1997. Dasar-dasar  Biokimia,
Jilid  1.  Terjemahan  dari  Principles  of Biochemestry
oleh
Maggy Thenawijaya. Erlangga, Jakarta.
Ndione,  R.  D.,  O.  Faye,  M.  Ndiaye,  A.  Dieye,
and  J.M.  Afoutou. 2007. Toxic  Effects of  Neem  Products  (Azadirachta  indica A.  Juss)  on Aedes  aegypti Linnaeus 1762  Larvae. Biotechnology 6  (24): 2846-2854.
Okumu,  F.  O.,  B.  G.  J.  Knols  and  U. Fillinger.  2007.  Larvacidal  Effect  of a  Neem  (Azadirachta  indica)  Oil Formulation  on  the  Malaria  Vector Anophleles gambiae. Malaria 6 : 63. Pujiyanto, S., E. Kusdiyantini, dan M. Hadi. 2008. Isolasi  dan  Seleksi  Bakteri  Kitinolitik Isolat  Lokal  yang  Berpotensi  untuk Mengendalikan  Larva  Nyamuk Aedes aegypti L. Biodiversitas 9(1):5-8.
Puri,  E.  R.  2006.  Isolasi  ,  Karakterisasi,  dan
Penapisan sianobakteria
sebagai
Pakan Larva Aedes  aegypti. Skripsi. Bogor: Institut pertanian Bogor. Widarto,  H.  2009.  Uji  aktivitas  Minyak Atsiri  Kulit  Durian  (Durio  zibethinus Murr) sebagai Obat Nyamuk Elektrik  Terhadap  Nyamuk Aedes aegypti. Skripsi. Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta. Wijaya, S. 2002. Isolasi Kitinase dari Scleroderma columnare dan Trichoderma harzarium. Ilmu Dasar 3(1): 30-35.
Yasmin,  Y.  dan  L.  Fitri.  2010.  The  Effect  of Metharrizium  anisopliae Fungi  on Mortality of Aedes  aegypti L.  Larvae.
Natural 10(1): 32-35.
Yuniarti,  R.  A.  dan  Ch.  P.  Blondine.  2005. Efektivitas  Vectobac  dan  Predator Mesocyclops aspericornis sebagai
Jasad  Pengedali  Hayati  Jentik Aedes aegypti
dalam Gentong Air. Kedokteran Yarsi 13(1): 102-110.