## PENGARUH METODE EKSTRAKSI TERHADAP AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK METANOL DAUN MIMBA
( Azadirachta indica Juss )
Gemy Nastity Handayany*
*) Dosen pada Jurusan Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri (UIN) Alauddin Makassar
E-mail: ………………………….
Abstract : An  investigation  of  the  influence  of  extraction  method  on  the antimicrobial  activity  of  methanol  extract  of  leaves  of  neem  (Azhadirachta indica  Juss)  against  multiple  microbes.  This  study  aims  to  determine  the extraction  method  that  produces  extracts  that  can  provide  the  best antimicrobial  activity.  Extraction  methods  used  include  maceration, soxhletasi, and reflux using methanol solvent. Tests conducted by inhibition screening  test,  the  maceration  method  inhibits  Staphylococcus  aurus, thyposa  Salmonella,  Staphylococcus  epidermidis,  Streptococcus  mutans,
Vibrio sp, Escherichia coli, Bacillus Subtilis and Pseudomonas aeroginosa, whereas  Staphylococcus  aurus  soxhlet  method,  thyposa  Salmonella, Staphylococcus  epidermidis,  Streptococcus  mutans,  Vibrio  sp,  Escherichia coli,  and  Pseudomonas  aeroginosa,  and  reflux  methods  aurus Staphylococcus, Staphylococcus epidermidis, Vibrio sp, Escherichia coli and Pseudomonas  aeroginosa.  Minimum  inhibitory  concentration  test,  the methods  of  maceration,  soxhlet  and  reflux  in  a  row  that  the  bacterium Escherichia  coli  to  produce  0.05%,  0.1%,  and  0.2%,  while  the  bacterium Staphylococcus aureus, 0.05%, 0.2% and 0.2%. Minimum kill concentration test, the methods of maceration, reflux, and Soxhlet, respectively, namely the bacterium Escherichia coli and Staphylococcus aureus produce 0.2%, 0.4% and 0.4%. Test medium agar diffusion method using Glucose Nutrient Agar (GNA).  Antimicrobial  activity  test  results  show  that  the  largest  amount  of inhibition  zone  on  the  test  bacteria  Escherichia  coli  and  Staphylococcus aureus maceration method .
Keywords : method of maceration, neem leaf, antimicrobial

## PENDAHULUAN
umbuhan  merupakan  faktor  yang  senantiasa  dipersoalkan  oleh manusia  karena  sangat  berkaitan  dengan  kehidupan.  Untuk  itu diperlukan pengamatan  yang  serius  atas  berbagai  macam  tumbuhan, baik  dilihat  dari  kegunaan  yang  dimiliki,  sifat -sifat,  kandungan  kimia maupun  kegunaan tumbuhan. Tumbuh - tumbuhan tersebut memiliki fungsi atau kegunaan  yang  sangat  bermamfaat  bagi  manusia  sehingga  mendorong  para  ahli untuk meneliti kandungan serta cara ekstraksi dan isolasi senyawa aktif.
T
212 _ Jurnal Teknosains, Volume 10, Nomor 2, Juli-Desember 2016 , hlm. 211 – 222
Salah satu tumbuhan yang digunakan sebagai obat tradisional adalah daun mimba  ( Azadirachta  indica Juss ) dari  suku  Meliaceae  yang  menurut  para  ahli merupakan  tanaman  asli  India,  digunakan  untuk  membersihkan  gigi, mengobati  penyakit  kulit.  Secara  empiris  banyak  digunakan  untuk  obat antimalaria,  antiseptik  kulit,  dan  potensial  untuk  mencegah  kanker  sedangkan menurut  literatur  digunakan  sebagai  antimalaria,  antipiretik,  borok  dan  bijinya bermafaat sebagai intektisida, fungisida dan, antibakteri (Sukarsono, 2003).
Penelitian  aktivitas  antibakteri  terhadap  tumbuhan  mimba  ( Azadirachta indica Juss)  telah  dilakukan  sebelumnya  diantaranya  fraksi  kloroform  daun  mimba dengan  menggunakan  metode  difusi  padat  diketahui  mempunyai  aktivitas anti  bakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Salmonella  typhi (Pramularsih,  2001).
Ekstrak kulit batang dan daun mimba telah teruji dapat melawan 105 galur bakteri  dari  tujuh  genus,  yaitu Staphylococcus,  Enterococcus,  Pseudomonas, Escherichia , Klebsiella, Salmonella , dan Mycobacterium (Fabry et al ., 1998).
Hal inilah yang mendasari perlunya dilakukan penelitian tentang pengaruh metode  ekstraksi  terhadap  aktivitas  antimikroba  ekstrak  metanol  daun  mimba (Azadirachta indica Juss).

## METODE PENELITIAN
A. Alat dan bahan yang digunakan

## 1. Alat yang digunakan
Seperangkat  alat  soxhlet,  refluks,  bejana  maserasi,  cawan  petri  (Iwaki Pyrex ® ),  gelas  Erlenmeyer  (Iwaki  Pyrex ® ),  ose  bulat,  otoklaf  (Smic  model  YX- 280  B ® ),  oven  (Memmert ® ),  timbangan  analitik  (AND),  Enkas,  inkubator (Memmert ® ),  lemari  pendingin,  mikropipet  (Huawei) disc  blanc ,  ratovapor,  dan spoit (One Med ® ).

## 2. Bahan yang digunakan
Agar, Air suling, benzen, biakan murni ( Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella thypi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis,  Streptococcus  mutans , Vibrio  sp dan Candida  albicans ),  medium
Nutrien  Agar  (NA),  medium  Glukosa  Nutrien  Broth  (GNB),  medium  Glukosa Nutrien  Agar  (GNA)  metanol,  Dimetil  Sulfoksida  (DMSO),  kapas,  larutan fisiologis NaCl 0,9%, dan sampel daun mimba ( Azadirachta indica Juss).
Gemy Nastity H. , Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap Aktivitas Antimikroba Ekstrak …_ 213

## B. Prosedur kerja

## 1. Penyiapan Simplisia
Daun  mimba  yang  diambil  diperoleh  dari  halaman  mesjid  Al-Markas  Al- Islami Kota Makassar. Pengambilan sampel dilakukan secara manual dengan cara memetik mulai dari daun kelima dari pucuk. Daun yang diambil adalah daun yang sehat, berwarna hijau dan tidak berjamur.

## 2. Pengolahan sampel
Daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss)  yang  telah  dipetik  dibersihkan dengan cara dicuci dengan air bersih, lalu dipisahkan semua kotoran-kotoran yang melekat.  Kemudian  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  ditempat  yang tidak terkena sinar matahari secara langsung. Setelah kering daun diserbukkan dan sampel siap untuk diekstraksi.
3. Pembuatan ekstrak
a. Metode Maserasi
Sebanyak  100g  serbuk  sampel  daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss) dimasukkan  kedalam  bejana  maserasi  dan  ditambahkan  dengan  metanol  sampai semua bahan sampel terendam. Dibiarkan selama 3 hari dalam tempat terlindung cahaya  matahari  sambil  sesekali  diaduk,  kemudian  filtratnya  disaring  dan ampasnya  diremaserasi  sebanyak  2  kali  dengan  perlakuan  seperti  yang  baru. Filtrat yang diperoleh dikisatkan dengan retavapor, ekstrak yang diperoleh kemudian diangin-anginkan hingga diperoleh ekstrak kental.

## b. Metode Soxletasi
Sebanyak  100g  serbuk  sampel  daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss) dimasukkan  kedalam  klonsong  yang  telah  dilapisi  kertas  saring  (tinggi  sampel dalam  klongsong  tidak  boleh  dari  pipa  sifon).  Selanjutnya  labu  alas  bulat  diisi dengan  cairan  penyari  (metanol)  kemudian  ditempatkan  di  atas water  bath dan diklem  dengan  kuat  kemudian  klongsong  yang  telah  diisi  sampel  dipasang  pada labu  alas  bulat  yang  dikuatkan  dengan  klem  dan  cairan  penyari  (metanol) ditambahkan untuk pembasahan dan klem pada statif dengan kuat. Aliran air dan pemanas dijalankan hingga terjadi proses ekstraksi zat aktif sampai sempurna (21 kali  sirkulasi).  Filtrat  yang  diperoleh  dikisatkan  dengan  rotavapor,  ekstrak  yang diperoleh kemudian diangin- anginkan diperoleh ekstrak kental.

## c. Metode Refluks
Sebanyak  100g  serbuk  sampel  daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss) dimasukkan  kedalam  labu  alas  bulat  yang  diisi  dengan  cairan  penyari  metanol
214 _ Jurnal Teknosains, Volume 10, Nomor 2, Juli-Desember 2016 , hlm. 211 – 222
sampai serbuk simplisia terendam kurang lebih 2 cm di atas permukaan simplisia, atau  2/3  volume  labu  kemudian  labu  alas  bulat  dipasang  kuat  pada  statif  dan ditempatkan diatas water bath, lalu dipasang kondensor pada labu alas bulat yang dikuatkan pada klem dan statif. Aliran air dan pemanas dijalankan sesuai dengan suhu pelarut  yang digunakan. Setelah 4 jam dilakukan penyaringan,  filtrat ditampung dalam wadah penampung dan ampasnya ditambah lagi dengan metanol dan  dikerjakan  seperti  semula.  Ekstraksi  dilakukan  selama  3-4  jam.  Filtrat  yang diperoleh dipekatkan dengan rotavapor.
4. Penyiapan Medium
a. Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dicuci dengan deterjen, dibilas dengan air sampai bersih,  dikeringkan  dengan  posisi  terbalik  diudara  terbuka  setelah  kering dibungkus  dengan  kertas  perkamen.  Alat  gelas  disterilkan  menggunakan  oven pada suhu  180 ⁰ C selama 2 jam. Ose dan pinset  disterilkan dengan pemijaran di atas api spritus, sedangkan alat-alat yang terbuat dari karet dan plastik yang tidak tahan pemanasan disterilkan dalam atoklaf pada suhu 121 °C selama 15 menit.
b. Pembuatan medium
1) Medium NA (Nutrien Agar)
Ekstrak daging 3,0 g Pepton 5,0 g Agar 15,0 g Air suling hingga 1000 ml Pembuatan :
Semua bahan dimasukkan ke dalam gelas erlenmeyer dilarutkan dengan air suling  hingga  1000  ml,  dipanaskan  sampai  larut,  kemudian  disterilkan dalam atoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit.
2) Medium Glukosa Nutrien Agar (GNA)
Glukosa 10 gram Ekstrak beef 3,0 gram Pepton 5,0 gram Agar 15,0 gram Air suling hingga 1000 ml Pembuatan :
Semua bahan dimasukkan ke dalam gelas erlenmeyer dilarutkan dalam air suling  hingga  1000  ml,  dipanaskan  sampai  larut,  kemudian  disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit (Djide, 2008).
3) Medium Glukosa Nutrien Broth (GNB) suling hingga 1000 ml
Ekstrak beef 3,0 gram
Glukosa 10,0 gram Pepton 5,0 gram Air Pembuatan :
Semua  bahan  dimasukkan  ke  dalam  gelas  erlenmeyer  dilarutkan  dalam  air suling  hingga  1000  ml,  dipanaskan  sampai  larut,  kemudian  disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit (Djide, 2008).

## 5. Penyiapan Bakteri Uji
Bakteri  uji  berupa Escherichia  coli,  Bacillus  subtilis,  Pseudomonas aeruginosa,  Salmonella  thypi,  Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus  epidermidis, Streptococcus mutans , Vibrio sp dan Candida albicans dari biakan murni, masing- masing  diambil  satu  ose  kemudian  diremajakan  dalam  medium  Glukosa  Nutrien Broth (GNB) selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 ⁰ C selama 24 jam.
Jamur  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Candida  albicans diambil satu ose lalu diinokulasikan pada suhu kamar selama 3 x 24 jam.

## 6. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Kultur  bakteri  yang  berumur  1x  24  jam  yang  telah  diremajakan  dalam medium  GNB  miring  disuspensikan  dengan  NaCl  fisiologis  (NaCl  0,9%) kemudian  diukur  kekeruhannya  25%  T  pada  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang gelombang 580 nm. Sedangkan untuk mikroba uji jamur dibuat suspensi dengan cara yang sama tapi dengan pengukuran transmitan pada 75% T.

## 7. Skrining Aktivitas Antibakteri
Pada tahap skrining aktivitas, sebanyak 10 mg ekstrak metanol, dilarutkan dalam  0,2  ml  DMSO  dengan  menggunakan  mikropipet,  kemudian  dicampurkan dengan  9,8  ml  medium  NA  yang  telah  dicairkan  dengan  konsentrasi  1  mg/ml hingga  volume  akhir  10  ml,  campuran  dituangkan  kedalam  cawan  petri  dan digoyang-goyangkan agar rata dan dibiarkan memadat. Biakan mikrobiologi uji yang telah diencerkan diratakan dengan menggunakan metode goresan (metode Streak plate ), kemudian cawan petri diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 jam.
8. Pengujian Ekstrak
a. Uji Kadar Hambat Minimum (KHM)
Medium GNB dituang  secara aseptik kedalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 5 ml, kemudian disterilkan. Dibuat konsentrasi sampel yaitu 0,025%; 0,5;
216 _ Jurnal Teknosains, Volume 10, Nomor 2, Juli-Desember 2016 , hlm. 211 – 222
0,1%; 0,2%; 0,4%; 0,8%; 1,6 % dan 3,2% lalu disterilkan dengan DMSO sebanyak 0,5 ml hingga homogen. Setelah itu larutan sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi medium GNB 5 ml lalu dihomogenkan. Kemudian ditambahkan suspensi  bakteri  sebanyak  200  µl  (0,2  ml)  kedalam  masing  masing  tabung. Dihomogenkan  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  1×  24  jam.  Nilai  KHM ditunjukan dengan medium tetap jernih pada konsentrasi terendah sampel.

## b. Uji Kadar Bunuh Minimum (KBM)
Hasil  inkubasi  pada  uji  KHM  kemudian  digoreskan  pada  medium  GNA dalam cawan petri steril, lalu diinkubasi pada suhu kamar 37 0 C selama 1× 24 jam. Nilai  KBM  ditunjukan  dengan  tidak  adanya  pertumbuhan  mikroba  pada konsentrasi terendah sampel.

## 9. Uji Aktivitas Antimikroba
Medium  GNA  steril  sebanyak  10  ml  dicampur  dengan  1  ml  suspense bakteri  uji  yang  telah  disiapkan.  Setelah  itu  dituang  secara  aseptik  ke  dalam cawan  petri  dan  dibiarkan  hingga  memadat.  Sampel  dari  masing-masing  variasi konsentrasi  0,8  %,  3,2  %,  dan  12,8  %  dicukupkan  dengan  DMSO  0,5  ml  dan aquadest steril 4,5 ml. Kemudian disc blank dengan diameter 6 mm dan dibiarkan beberapa  menit  sampai  terserap  sempurna.  Setelah  itu  diletakkan  3  buah  disc blank  yang  telah  disiapkan  pada  masing-masing  cawan  petri  yang  telah  diberi medium.  Kemudian  diinkubasikan  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam,  lalu  diukur daerah  hambatannya.  Dilakukan  pengerjaan  yang  sama  untuk  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Hasil Penelitian
Hasil  pengujian  daya  hambat  metode  ekstraksi  terhadap  ekstrak  metanol daun  mimba  ( Azadirachta  indica  Juss) terhadap  pertumbuhan  beberapa  bakteri setelah masa inkubasi 1x24 jam adalah sebagai berikut:
Tabel 1.   Hasil Uji Skrining Antimikroba Ekstrak Metanol Daun Mimba dengan Metode Ekstraksi Terhadap Beberapa Mikroba Patogen
Sampel Metode Ekstraksi Mikroba Uji SA ST SE
SM VS EC BS PA CA Ekstrak Maserasi ++ ++ ++
+ ++ ++ + ++ - Methanol daun  Refluks + - + - ++ ++ - ++ - Mimba Soxhlet ++ + ++ ++ ++ ++ - ++ -
Gemy Nastity H. , Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap Aktivitas Antimikroba Ekstrak …_ 217
Keterangan :
SA = Staphylococcus aureus ST   = Salmonella thyposa SE = Staphylococcus epidermidis SM = Streptococcus mutans VS = Vibrio sp EC  = Escherichia coli BS = Bacillus Subtilis PA  = Pseudomonas aeroginosa CA = Candida albicans
++   =   Tidak ada pertumbuhan mikroba
+ = Sedikit pertumbuhan mikroba
−   =   Banyak pertumbuhan mikroba
Tabel 2.   Hasil Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Metode Ekstraksi Daun Mimba Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. No. Mikroba Uji Metode Ekstraksi Konsentrasi 3,2%  1,6%  0,8%  0,4%  0,2%  0,1%  0,05% 0,052% 1.  Escherichia Coli Maserasi + + + + + + + - Refluks + + + + + + - - Soxhlet + + + + + - - - 2.  Staphylococcus aureus Maserasi + + + + + + + - Refluks + + + + + - - - Soxhlet + + + + + - - -
Keterangan:
+   =   Medium jernih
-   =   Medium keruh
Tabel 3.   Hasil Uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Metode Ekstraksi Daun Mimba Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. No. Bakteri Metode Ekstraksi Konsentrasi 3,2%  1,6%  0,8%  0,4%  0,2%  0,1%  0,05% 0,052% 1.  Escherichia Coli Maserasi + + + + + - - - Refluks + + + + - - - - Soxhlet + + + + - - - - 2.  Staphylococcus aureus Maserasi + + + + + - - - Refluks + + + + - - - - Soxhlet + + + + - - - -
Keterangan :
+   =   Tidak ada pertumbuhan bakteri -   =   Ada pertumbuhan bakteri
218 _ Jurnal Teknosains, Volume 10, Nomor 2, Juli-Desember 2016 , hlm. 211 – 222
Tabel 4.   Diameter  Daerah  Hambatan  Metode  Ekstraksi  Terhadap  Ekstrak Metanol  Daun  Mimba  pada  Bakteri Escherichia  coli Menggunakan Metode Difusi Agar Mikroba Metode  Reflikasi Diameter daerah hambatan (mm) Jumlah 0,8% 3,2% 12,9% Escherichia coli Maserasi 1 9,9 11,8 12,9 2 11,1 11,7 13,5 3 8,5 9,6 11,6  29,5 33,1 38,0 100,6 9,8 11,0 12,6 Soxhlet 1 11,5 12,9 14,0 2 8,1 10,3 12,0 3 7,5 9,0 13,3  27,1 32,2 39,3 98,6 9,0 10,7 13,1 Refluks 1 9,9 11,6 13,0 2 9,0 9,5 12,6 3 8,5 9,6 10,6  27,4 30,7 36,2 94,3 9,1 10,2 12,0
Tabel 5.   Diameter Daerah Hambatan Metode Ekstraksi Terhadap Ekstrak Metanol Daun  Mimba  pada  Bakteri Staphylococcus  aureus Menggunakan Metode Difusi Agar Mikroba Metode  Reflikasi Diameter daerah hambatan (mm) Jumlah 0,8% 3,2% 12,9% Staphylococcus aureus Maserasi 1 12,8 16,0 18,0 2 17,5 18,3 25,3 3 11,4 14,6 18,0  41,6 48,9 61,3 151,8 13,8 16,3 20,4 Soxhlet 1 13,5 15,6 16,6 2 18,3 21,3 22,6 3 13,0 14,6 15,5  44,8 51,5 54,7 151,0 14,9 17,1 18,2 Refluks 1 10,3 15,3 17,0 2 8,5 12,3 17,8 3 14,0 21,0 23,6  32,8 48,6 58,4 139,8 10,9 16,2 19,4
Gemy Nastity H. , Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap Aktivitas Antimikroba Ekstrak …_ 219

## B. Pembahasan
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengujian  pengaruh  metode  ekstraksi terhadap  aktivitas  antimikroba  ekstrak  metanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss ) terhadap  beberapa  mikroba  patogen  antara  lain Escherichia  coli,  Bacillus subtilis,  Pseudomonas  aeruginosa,  Salmonella  thypi,  Staphylococcus  aureus, Staphylococcus  epidermidis,  Streptococcus  mutans , Vibrio  sp dan Candida albicans ).  Ekstrak  metanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss)  digunakan sebagai sampel karena bersifat sebagai antimikroba.
Uji skrining antimikroba dilakukan pada metode ekstraksi terhadap ekstrak metanol  daun  mimba  dengan  masa  inkubasi  selama  1x24  jam  untuk  bakteri  uji dan untuk jamur selama 3x24 jam. Tujuan dilakukan skrining antimikroba untuk mengetahui  mikroba  uji  apa  yang  dihambat.  Dari  hasil  pengujian  skrining menunjukkan  ekstrak  metanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica Juss) menghambat  bakteri  pada  metode  maserasi  yaitu  8  bakteri  uji  yang  dihambat adalah Staphylococcus  aurus,  Salmonella  thyposa,  Staphylococcus  epidermidis, Streptococcus  mutans,  Vibrio  sp,  Escherichia  coli,  Bacillus  Subtilis  dan Pseudomonas  aeroginosa ,  sedangkan  metode  soxhlet  menghambat  7  bakteri  uji yaitu Staphylococcus  aurus,  Salmonella  thyposa,  Staphylococcus  epidermidis, Streptococcus mutans, Vibrio sp, Escherichia coli, dan Pseudomonas aeroginosa, dan  metode  refluks  ada  5  bakteri  yang  dihambat Staphylococcus  aurus, Staphylococcus  epidermidis,  Vibrio  sp,  Escherichia  coli dan Pseudomonas aeroginosa .  Adanya  perbedaan  jumlah  mikroba  uji  yang dihambat  diasumsikan komponen  kimia  yang  memberikan  aktivitas  antimikroba  tidak  tahan  terhadap proses pemanasan.
Dari hasil pengujian nilai KHM yang paling kecil adalah metodemaserasi pada  bakteri  uji Escherichia  coli dan Staphylococcus  aurus yaitu  0,05%, sedangkan  pada  metode  refluks  untuk  bakteri Escherichia  coli 0,1%  dan Staphylococcus aurus 0,2%, dan metode soxhlet pada bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aurus yaitu  0,2%.  Hasil  ini  mendukung  data  pada  uji  skrining dimana  metode  maserasi  menunjukkan  pada  konsentrasi  0,05%  sudah  mampu memberikan penghambatan bakteri uji.
Dari  hasil  pengujian  KBM  menunjukkan  pada  metode  maserasi  pada bakteri Escherichia  coli yaitu  0,2%  dan Staphylococcus  aurus 0,1%,  sedangkan pada metode refluks dan soxhlet untuk kedua bakteri yang diujikan adalah 0,4 %. Ini menunjukkan bahwa kemampuan membunuh bakteri uji pada ekstrak metanol dengan  metode  maserasi  lebih  baik  karena  dengan  konsentrasi  lebih  kecil  sudah membunuh bakteri uji dibanding metode refluks dan soxhlet.
220 _ Jurnal Teknosains, Volume 10, Nomor 2, Juli-Desember 2016 , hlm. 211 – 222
Dilakukan  pengujian  aktivitas  antimikroba  dengan  metode  difusi  agar. Metode difusi  agar dipilih karena metode ini dapat  dilakukan variasi  konsentrasi dengan  parameter  zona  hambatan  ekstrak  metanol  daun  mimba  dari  konsentrasi yang  dilakukan  yaitu  0,8%,  3,2%  dan  12,8  dicelupkan disc  blanc untuk  diujikan pada mikroba uji.
Dari  hasil  pengujian  aktivitas  antimikroba  menunjukkan  jumlah  zona hambatan  terbesar  pada  masing-masing  konsentrasi  dengan  kedua  mikroba  uji, bakteri Escherichia  coli pada  metode  maserasi  100,6  mm,  metode  soxhlet  98,6 mm dan metode refluks  94,3 mm, sedangkan pada bakteri Staphylococcus aurus pada  metode  maserasi  menghasilkan  151,8  mm,  metode  soxhlet  151,0  mm  dan metode  refluks  139,8  mm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  yang sama  dengan  bakteri  uji yang  sama  kemampuan  ekstrak  metanol  dengan  metode maserasi lebih baik dibanding metode soxhlet dan refluks.
Ini  menunjukkan  bahwa  metode  ekstraksi  yang  lebih  baik  adalah  metode maserasi karena pada setiap pengujian metode maserasi yang banyak menghambat pertumbuhan  antimikroba.  Penggunaan  metode  refluks,  maserasi,  mewakili metode  panas  dan  dingin,  tetapi  dipilih  metode  soxhlet  karena  ada  asumsi  yang menyatakan  bahwa  metode  soxhlet  adalah  metode  panas  dan  ada  juga  yang menyatakan  bahwa  metode  soxhlet  adalah  metode  dingin.  Sehingga  mau  dilihat apakah dengan adanya proses pemanasan memberikan aktivitas antimikroba.
Dari hasil nilai statistik menghasilkan untuk sumber keragaman kelompok pada  bakteri  uji Escherichia  coli dan Staphylococcus  aurus menunjukkan  hasil non  signifikan  pada  metode  dan  untuk  konsentrasi  sangat  signifikan  karena Fhitung  lebih  besar  dari  Ftabel  pada  taraf  kepercayaan  5  %  maka  di  lanjutkan dengan  menggunakan  cara  tukei.  Dari  hasil  uji  tukei  menunjukkan  bahwa  pada masing-masing  konsentrasi  terhadap  metode  ekstraksi  yang  digunakan  sangat signifikan  hal  ini  berarti  adanya  perbedaan  konsentrasi  memberikan  zona penghambatan yang sangat nyata terhadap metode ekstraksi yang digunakan.

## PENUTUP

## A. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dan  analisis  statistik yang diperoleh maka dapat disimpulkan bahwa:
1. Aktivitas  antimikroba  ekstrak  metanol  daun  mimba  tidak  dipengaruhi  oleh metode ekstraksi karena antara metode satu dan lainya tidak ada perbedaan.
2. Metode  ekstraksi  yang  memberikan  aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak metanol daun mimba adalah metode maserasi
Gemy Nastity H. , Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap Aktivitas Antimikroba Ekstrak …_ 221

## B. Implikasi penelitian
Bila  ekstrak  ingin  dibuat  dalam  bentuk  sediaan,  sebaiknya  menggunakan ekstrak yang diperoleh dengan menggunakan metode maserasi

## DAFTAR RUJUKAN
Al Qur’an dan Terjemahan Depertemen Agama RI., 1996. PT Karya Toha Putra:
Semarang.
Ali  al-Ju’aisin,  Abdullah.,  2001 Kado  untuk  Orang  Sakit .  Yokyakarta:  Mitra Pustaka.
Al-  Bukhari,  Abu’  Abd  Allah  Muhammad  Bin  Ismail  Bin  Ibrahim  Bin  Al- Mugirah  Bin  Bardazbah  Al-Jafi.  Sahih  AL-Bukhari,  Jilid,  1-VII, Semarang, Maktabah Ba’ah Karya Toha Putra
Alam,  G.,  Rahim  A.,  2006. Buku  Pegangan  Laboratorium  Fitokimia  I, Laboratoriu Farmakognosi-Fitokimia. Makassar: Universitas islam Negeri Alauddin.
Backer, C.A V brink R.C.B., 1968. Flora Of Java. The Natherlands.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.,  1995. Farmakope  Indonesia,  Edisi IV . Jakarta : Derektoral Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.,  1979. Farmakope  Indonesia,  Edisi II1. Jaarta : Derektoral Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan.
Djide,  M.N,  Sartini.,  2006. Dasar-Dasar  Mikrobiologi  Farmasi. Makassar: Universitas Hasanuddin.
Fabry,  W.,  P.O.  Okemo,end  R.Ansrorg.,  1998.  Antibacterial  Activiti  Of  East African Medicinal Plants. Jurnal Of Ethnopharmacology.
Ganiswara,  Sulistia  G.,  1995. Farmakologi  Dan  Terapi.  Edisi  IV, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran. Jakarta: Universitas Indonesia.
Garrty.  G.M.,  Bell.  J.  A  and  Lilburn.  T.G.,  2004. Taxonomic  Outline  Of  The Prakaryotes  Bergey’s  Manual  Of  Sistematic  Bacteriology,  2th  Edition, Spinger, New York Berlin Hendelberg. United States Of Amerika.
Heyne.  K.,  1987. Tumbuhan  Berguna  Indonesia  III. Jakarta:  Terjemahan  Badan Peneliti dan Pengembangan Kehutanan RI,Yayasan Sarana Wana Jaya
Pramularsih,  E.D.  2001.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Daun  Mimba  (Azadirachta indica Juss.) terhadap Staphylococcus aureusdan Salmonella typhi beserta Profil  KLTnya.  [Skripsi].  Yogyakarta:  Fakultas  Farmasi  Universitas Gadjah Mada.
222 _ Jurnal Teknosains, Volume 10, Nomor 2, Juli-Desember 2016 , hlm. 211 – 222
Suwandi.  U. Mekanisme  Kerja  Antibiotik,. Pusat  Penelitian  Dan  Pengembangan P.T.  Kalbe  Farma.  Jakarta.  (On  Line).  http;www.kalbe.co.id  (Diakses  20 Oktober 2009).
Sukarsono.,  2003. Mimba  Tanaman  Obat  multifungsi , Cetakan  1 .  Jakarta: Agromedia Pustaka.
Sudewo, B., 2004. Penggempur Aneka Penyakit, Cetakan 1 . Jakarta : Agromedia Pustaka