Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.11, No.1, Mei 2022, pp. 12-16 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302-8610 (Print)

## Antibacterial Activity of Edible Film with the Addition of Betel Leaf Extract ( Piper betle ) againts Streptococcus mutans
Aktivitas Antibakteri Edible Film dengan Penambahan Ekstrak Daun Sirih (Piper betle) terhadap Streptococcus mutans
Azlaini Yus Nasution 1 , Isna Wardaniati 2 , Sintia Ayu Lestari 3
1,2,3 Fakultas Farmasi dan Ilmu Kesehatan Universitas Abdurrab, Pekanbaru, Indonesia Email azlaini.yus@univrab.ac.id

## Abstract
Edible films are generally used as packaging materials to protect food and can be eaten with the packaged product. In addition, the edible film can be affixed to the tongue, so that it immediately melts in the mouth. Products like this can be added to betel leaf extract which can function as an oral antiseptic, that can inhibit the growth of Streptococcus mutans. The purpose of this study was to obtain the results of  the  inhibition  of  edible  film  added  with  water  extract  of  betel  leaf  with concentrations of 30%, 50%, and 70%. The research was conducted through experiments in the  laboratory by  measuring the  diameter of the inhibition zone that occurred. The diameter of the average inhibition zone against Streptococcus mutans produced by edible film added 30%, 50%, and 70% aqueous extract of betel leaf, respectively, was 14.36 mm, 18.17 mm, and 24.74 mm. An edible film added water extract of betel leaf can inhibit Streptococcus mutans. Keywords: edible film , betel leaf, oral antiseptic, Streptococcus mutans

## Abstrak
Edible  film umumnya  digunakan  sebagai  bahan  pengemas  untuk  melindungi pangan  serta  dapat  ikut  dimakan  bersama  produk  yang  dikemas  tersebut. Selain  itu, edible  film dapat  dimanfaatkan  menjadi  produk  alternatif    yaitu dengan cara menempelkannya pada lidah, sehingga langsung lumer di mulut. Produk seperti ini bisa ditambahkan ekstrak daun sirih yang dapat berfungsi sebagai  antiseptik  mulut,  yang  nantinya  diharapkan  dapat  menghambat pertumbuhan Sreptococcus  mutans penyebab  bau  mulut.  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk memperoleh hasil  daya hambat edible film yang ditambahkan ekstrak  air  daun  sirih  dengan  konsentrasi  30%,  50%,  dan  70%.  Penelitian dilakukan melalui eksperimen di laboratorium dengan mengukur diameter zona hambat yang terjadi.  Diameter zona hambat rata-rata terhadap Sreptococcus mutans yang dihasilkan  oleh edible  film yang  ditambahkan  ekstrak  air  daun sirih 30%, 50%, dan 70% berturut-turut adalah  sebesar 14,36 mm, 18,17 mm ,dan  24,74  mm. Edible  film yang  ditambahkan  ekstrak  air  daun  sirih  dapat menghambat Streptococcus mutans.
Kata Kunci edible film, daun sirih, antiseptik mulut, Streptococcus mutans

## Article Info

## Article history
Received date: 2022-06-19 Revised date: 2022-07-03 Accepted date: 2022-07-04
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.11, No.1, Mei 2022, pp. 12-16 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302-8610 (Print)

## PENDAHULUAN
Edible  film merupakan  suatu  kemasan  primer yang  berfungsi  untuk  mengemas  dan melindungi  pangan  serta  dapat  langsung dimakan  bersama  produk  yang  dikemas karena  terbuat  dari  bahan  pangan  tertentu, sehingga bersifat ramah lingkungan. Biasanya edible  film bersifat transparan , sehingga produk  yang  dikemas    dapat  langsung kelihatan . jadi  bisa  menampakkan  produk pangan  di  dalamnya.  Selain  itu, edible  film juga  sering  ditambahkan  bahan  lain  seperti senyawa  antibakteri,  antioksidan,  flavor maupun  zat  warna    [1].  Aplikasi  senyawa antioksidan pada edible film memiliki 2 fungsi, yaitu  dapat  melindungi  produk  yang dikemas dari  proses  oksidasi  dan  menangkal  radikal bebas yang masuk ke dalam tubuh [2]. Aplikasi edible  film dapat  dikembangkan  menjadi produk penyegar mulut yang dapat menghilangkan bau mulut.
Bau  mulut  atau  halitosis  berupa  nafas  tidak sedap yang berasal dari rongga mulut maupun di luar rongga mulut. Halitosis ini terjadi karena adanya  penumpukan  bakteri  yang  tumbuh  di sekitar area minim oksigen, seperti di belakang lidah  dan  celah  gigi.  Penumpukan  bakteri biasanya  bersumber  dari  kopi,  rokok,  sisa makanan,  juga  karang  gigi.  Membiarkan bakteri  menumpuk  di  dalam  mulut  akan mengakibatkan gangguan keseimbangan asam mulut, sehingga menghasilkan gas sulfur pemicu aroma tak sedap [3].
Kondisi  yang  dapat  memicu  bau  mulut  ialah meningkatnya bakteri dalam mulut, kurangnya aliran  saliva,  pH  rongga  mulut  yang  bersifat alkali  dan  adanya  sisa  makanan  yang tertinggal  yang  diproses  oleh  flora  normal mulut. Selain itu, koloni bakteri yang ditemukan pada awal pembentukan plak adalah bekteri Streptococcus  mutans(S.mutans) yang  diyakini sebagai  penyebab  utama  karies  pada  gigi. Pertumbuhan S.  mutans harus  dihambat  agar tidak    menjadi  patogen  dan  menyebabkan karies  dengan  pemberian  bahan  antibakteri [3].
Sirih (Piper  betle) adalah  salah  satu  tanaman yang  diketahui  berkhasiat  sebagai  antiseptik. Penggunaan  secara  tradisional  biasanya
dengan  merebus  daun  sirih  kemudian  air rebusan  digunakan  untuk kumur atau membersihkan bagian tubuh lain,atau daun sirih dilumatkan  kemudian  ditempelkan  pada  luka [4]. Daun sirih memiliki aroma yang khas yaitu rasa  pedas  dan  tajam.  Rasa  dan  aroma khas tersebut  disebabkan  oleh  kavinol  dan bethelpenol  yang  terkandung  dalam  minyak atsiri  [3],  [5].  Ekstrak  daun  sirih  dapat ditambahkan  ke  dalam edible  film ,  sehingga edible film ini ketika ditempelkan di lidah dapat berfungsi sebagai antiseptik pada mulut.

## METODE
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  oven,  autoklaf,  inkubator,  timbangan analitik,  cawan  petri,  pipet  mikro,  gunting, kawat  ose,  lampu  bunsen,  labu  ukur,  jangka sorong, pinset, dan alat-alat gelas.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah daun sirih, HCl, NaOH, aquades,  kertas pH,  NaCl fisiologis steril, spiritus, etanol 96%, alkohol 70%, cakram kosong, cakram antibiotik amoksilin, strain S. mutans, media NA, kapas lidi steril.
Prosedur Kerja [2] 1. Pembuatan Ekstrak Air Daun Sirih Sebanyak 100 ml air dipanaskan hingga suhu 90 o C dalam beaker glass . Daun sirih ditimbang 25  g,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  air  tadi  dan diaduk  selama 30  menit. Air rebusan  disaring dan didinginkan pada suhu ruang.

## 2. Pembuatan Edible Film
Gelatin  sapi  ditimbang  3  gram,  dilarutkan dengan  air  suhu  45 o C  sebanyak  25  mL kemudian  ditambahkan  gliserol  0,3  gram, diaduk hingga homogen. Kemudian ditambahkan CMC dengan konsentrasi 0,25% (b/v  total).  Lalu  ditambahkan  air  hingga  100 mL. Kemudian larutan tetap dipanaskan sambil diaduk  pada  suhu  45 o C  dan  dipertahankan selama 10 menit. Suspensi didinginkan sampai suhu  ruang,  kemudian  dituang  ke  dalam cetakan. Edible  film didinginkan  pada  suhu ruang (25 o C) selama 24 jam, lalu dilepas dari cetakan.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.11, No.1, Mei 2022, pp. 12-16 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302-8610 (Print)
3. Pembuatan Edible Film dengan Penambahan Ekstrak Daun Sirih (EF-EDS)
Gelatin  sapi  ditimbang  15  gram,  dilarutkan dengan  air  suhu  45 o C  sebanyak  25  mL kemudian  ditambahkan  gliserol  1,5  gram, diaduk hingga homogen. Kemudian ditambahkan CMC dengan konsentrasi 0,25% (b/v total). Lalu ditambahkan ekstrak daun sirih sesuai dengan konsentrasi masing-masing yang diinginkan,  yaitu  30%,  50%,  dan  70%. Terakhir ditambahkan sisa air hingga 100 mL. Kemudian  larutan  tetap  dipanaskan  sambil diaduk  pada  suhu  45 o C  dan  dipertahankan selama 10 menit. Suspensi didinginkan sampai suhu  ruang,  kemudian  dituang  ke  dalam cetakan. Edible  film didinginkan  pada  suhu ruang (25 o C) selama 24 jam, lalu dilepas dari cetakan.

## 4. Sterilisasi
Peralatan disterilkan menggunakan oven pada suhu  170 0 C  selama  1  jam.  Tempat  kerja dibersihkan dari debu, lalu disterilisasi dengan alkohol 70%, dan tangan dicuci bersih dengan menggunakan  sabun,  lalu  disemprot  dengan alkohol  70%,  serta  menggunakan glove steril saat melakukan penelitian.

## 5. Pembuatan Medium NA
Media  NA  ditimbang  sebanyak  20  gram, dilarutkan  dengan  aquadest  1000  ml  dalam elenmeyer.  Setelah  itu  dipanaskan  sampai medium  mendidih,  lalu  ditutup  dengan  kapas yang  telah  dibungkus  dengan  kain  kasa  di sterilkan dalam autoclave.
6. Pengujian Daya Hambat EF-EDS Suspensi  bakteri S.  mutans dioleskan  pada permukaan media secara zigzag menggunakan  kapas  lidi  steril,  sampai  semua bagian  media  rata  terolesi. Edible  film yang ditambahkan ekstrak daun sirih masing-masing dengan  konsentrasi  30%,  50%,  dan  70% dipotong  berbentuk  bulat  menggunakan pembolong  kertas,  lalu  ditempelkan  pada media dan diberi tekanan. Kertas disk kosong diletakkan  juga  pada  permukaan  media  dan diteteskan  dengan  aquadest  steril  sebagai kontrol  negarif  (-).  Kertas disk  amoxicillin
diletakkan  pada  permukaan  mudia  sebagai kontrol  positif  (+).  Pengulangan  dilakukan sebanyak 3 kali kemudian diinkubasi selama 1 x  24  jam  pada  suhu  37 o C  dan  diukur  zona bening yang terbentuk disekitar disk.

## Analisis Data
Data yang diperoleh pada penelitian ini yaitu diameter  zona  hambat.  Pengukuran  zona hambat  dilakukan  dengan  menggunakan jangka sorong, dan data yang diperoleh dari hasil penelitian di laboratorium akan disajikan dalam  bentuk  tabel  dan  dijelaskan  secara deskriptif .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  EF-EDS  terhadap  bakteri S.  mutans .  Ekstrak  daun  sirih  yang  digunakan adalah ekstrak air yang dibuat dengan m etode dekokta,  yaitu  sediaan  cair  yang  dibuat dengan cara menyari simplisia nabati dengan air pada suhu 90 ⁰ C selama 30 menit [6]. Media mikrobiologi yang digunakan  pada  pengujian ini  adalah  media  NA  ( Nutrient  Agar )  yang mana  media  ini  merupakan  media  universal yang  kaya  akan  nutrisi  untuk  pertumbuhan bakteri [7].
Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap S.  mutans dilakukan  dengan  metode  difusi.  Aktivitas antibakteri dilihat dari zona hambat pertumbuhan  bakteri  yang  terjadi  yaitu terbentuknya zona  bening di media  NA  yang telah  ditumbuhi  bakteri.  Zona  bening merupakan petunjuk kepekaan bakteri terhadap  bahan  antibakteri  yang  digunakan sebagai  bahan  uji  dan  dinyatakan  dengan diameter  zona  hambat    [8].  Kontrol  negatif berfungsi  untuk  mengontrol  pekerjaan  uji mikrobiologi yang dilakukan yaitu harus dalam keadaan steril, sehingga seharusnya tidak ada zona bening yang terbentuk. Dengan  adanya kontrol  negatif  ini  dapat  diketahui  adanya pengaruh  pelarut  terhadap  pertumbuhan bakteri S.  mutans ,  adanya  pengganggu yang dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri. Kontrol  positif  yang  dipakai  adalah disk amoxicillin , disk ini berisi antibiotik yang peka terhadap S. mutans [9] .
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.11, No.1, Mei 2022, pp. 12-16 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302-8610 (Print)
Berdasarkan penelitian yang dilakukan, maka didapatkan hasil rata-rata zona hambat edible film pada setiap konsentrasi ekstrak daun sirih pada Tabel 1 berikut:
Tabel 1. Hasil pengukuran rata-rata diameter zona hambat edible film Perlakuan Rata-rata diameter zona hambat (mm) Ekstrak daun sirih 30% 14,36 Ekstrak daun sirih 50% 18,17 Ekstrak daun sirih 70% 24,74 Disk amoxicillin (Kontrol +) 37,17 Aquadest (Kontrol -) 0
Dari  data  hasil  pengukuran  diameter  zona hambat  tersebut  dapat  dilihat  bahwa  disk amoxicillin  memberikan  daya  hambat  yang paling  tinggi  yaitu  37,17  mm.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  antibiotik amoxicillin merupakan antibiotik yang sensitif terhadap S. mutans dan  daya  hambat  EF-EDS masih  jauh lebih kecil dibandingkan dengan antibiotik ini. Antibiotik lain yang sensitif terhadap S. mutans adalah sefalosporin, eritromisin, dan azitromisin.  Antibiotik  merupakan  senyawa semisintetis yang memang dapat menghambat atau membunuh bakteri patogen [10]. Edible film yang ditambahkan ekstrak daun sirih memberikan zona hambat yang semakin lebar seiring dengan bertambah besarnya konsentrasi ekstrak daun sirih yang ditambahkan. Daun sirih mengandung senyawa fenol  dan  kavikol  yang  bersifat  sebagai antibakteri [11]. Diameter zona hambat pada penambahan ekstrak daun sirih 30% diperoleh rata-rata  14,36  mm;  pada  konsentrasi  50% sebesar  18,17  mm;  dan  70%  sebesar  24,74 mm.  Faktor  yang  mempengaruhi  ukuran  zona hambat pada metode difusi adalah perbedaan  besar  kecilnya  konsentrasi  atau sedikit  banyaknya  kandungan  zat  aktif antibakteri  yang  terkandung  di  dalam  fraksi, kepekaan pertumbuhan bakteri, reaksi antara bahan  aktif  dengan  medium  dan  temperatur inkubasi,  pH,  waktu  inkubasi  dan  aktivitas metabolik mikroorganisme [10].
Berdasarkan  penelitian  ini,  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  menandakan  bahwa
semakin  tinggi  pula  daya  hambat  yang dihasilkan  sehingga  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  yang  ditandai  dengan terbentuknya  diameter  zona  hambat.  Hal  ini disebabkan  karena semakin  banyak  senyawa aktif  yang  terkandung  pada  ekstrak  tersebut [12].

## SIMPULAN
Edible film yang ditambahkan ekstrak air daun sirih 30%, 50%, dan 70% mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. mutans.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  A.  Manab,  M.  E.  Sawitri,  and  K.  U.  A. Awwaly, Edible  Film  Protein  Whey . Malang: UB Press, 2017.
[2] D.  Huri  and  C.  N.  Fithri,  “Pengaruh Konsentrasi  Gliserol  dan  Ekstrak  Ampas Kulit  Apel  terhadap  Karakteristik  Fisik dan  Kimia  Edible  Film,” J.  Pangan  dan Agroindustri ,  vol.  2,  no.  4,  pp.  20 – 40, 2014.
[3] W.  D.  Agus,  “Perbedaan  Kh asiat Antibakteri Bahan Ligasi Antara Hydrogen Peroksida 3% dan Infusa Daun Sirih  20%  terhadap  Bakteri  Mix,” Maj. Kedokt. Gigi , vol. 38, no. 1, 2005.
[4]  M.  R.  Darmayanti, Khasiat  dan  Manfaat Daun Sirih . Jakarta: Agromedia Pustaka, 2003.
[5]  A. Gunawan and Z. Eriawati., “Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Sirih (Piper sp.) terhadap  Pertumbuhan  Jamur  Candida albicans,” Proseding  Semin.  Nas.  Biot. ,
2015.
[6]  R.  Marjoni, Dasar-Dasar  Fitokimia  untuk Diploma  III  Farmasi .  Jakarta:  Trans  Info Media, 2016.
[7]  T. Yuniarti, Media dan Regensia . Kendari: Poltekkes Kendari, 2014.
[8]  D.  Kurniawati,  I.  Rukmi,  and  A.  L.  Tri,
“Aktivitas Antimikroba Kombinasi
Rebusan  Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle) dan  Daun  Sirih  Merah  (Piper  crocatium)
Terhadap Candida albicans,” J. Biol. , vol.
2, no. 1, pp. 55 – 62, 2014.
[9] R.  Iqhasari,  “Uji  Daya  Hambat  Rebusan
Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  Segar
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.11, No.1, Mei 2022, pp. 12-16 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302-8610 (Print)
terhadap Pertumbuhan Candida albicans,”  Politeknik  Kesehatan  Kendari, 2017.
[10]  M. Radji, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa  Farmasi  dan  Kedokteran .
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC, 2011.
[11] D.  Saraswati,  “Pengaruh Konsentrasi Ekstrak  Daun  Sirih  Terhadap  Daya Hambat  Escherichia  Coli ,” J.  Heal.  Sport , vol. 3, no. 2, 2011.
[12]  G.  F.  Brook,  S.  B.  Janet,  and  A.  M. Stephen, Medical  Microbiology .  Jakarta:
Salemba Medika, 2005.