Pengaruh  Kombinasi  2.4  D  ( Dichlorophenoxyacetic )  dan  BAP  ( Benzyl  Amino  Purine ) pada  Media  MS  ( Murashige  Skoog )  Terhadap  Induksi  Kalus  Tanaman  Tebu ( Saccharum officinarum L.) Varietas AAS Agribun
Rizky Fatahillah 1* , Hayatul Rahmi 2 , Nurcahyo Widyodaru Saputro 3 , Sri Suhesti 4
1,2,3 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Singaperbangsa Karawang, Jl. HS.RonggoWaluyo, Karawang, Jawa Barat 41361, Indonesia
4 BSIP Perkebunan, Jalan Tentara Pelajar No. 1 Bogor, Jawa Barat 16111, Indonesia
* Corresponding author, email: rizkyfatahillah879@gmail.com

## ABSTRACT
Sugarcane  (Saccharum  officinarum  L.)  is  a  plant  that  is  used  as  the  main  ingredient  in making sugar. Sugar consumption in Indonesia increases from year to year due to population growth. One of the efforts to provide superior seeds in a short time and in large quantities is through  tissue  culture.  This  study  aims  to  determine  the  effect  of  a  combination  of  2,4  D (Dichlorophenoxyacetic) and BAP (Benzyl  Amino Purine) and determine the best  treatment. The research method  used is an experimental method  using a completely randomized design (CRD)  combination  with  3  replicates  and  9  treatments  consisting  of:  (A);  1  ppm  2,4  D  +  0 ppm BAP (B); 2 ppm 2,4 D + 0 ppm BAP (C); 3 ppm 2,4 D + 0 ppm BAP (D); 1 ppm 2,4 D + 0.1 ppm BAP (E); 2 ppm 2,4 D + 0. 1 ppm BAP (F); 3 ppm 2,4 D + 0.1 ppm BAP (G); 1 ppm 2,4 D + 0.2 ppm BAP (H); 2 ppm 2,4 D + 0.2 ppm BAP (I); 3 ppm 2,4 D + 0.2 ppm BAP. The results showed that there was a significant effect of the combination of 2,4-D and BAP on the time  of  callus  appearance  and  callus  diameter  in  callus  induction  of  Sugarcane (Saccharumofficinarum L.) variety AAS Agribun. The treatment  of  C (2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm)  produces  the  highest  percentage  of  live  explants  which  is  100%,  the  fastest  callus emergence  time  which  is  15.67  hsi,  the  largest  diameter  which  is  2.04  cm  and  the  heaviest callus fresh weight with a value of 0.86 grams.
Keywords: sugarcane, 2,4 D, BAP, callus induction

## ABSTRAK
Tebu  (Saccharum  officinarum  L.)  merupakan  tanaman  yang  dijadikan  bahan  utama  dalam pembuatan  gula.Konsumsi  gula  di  Indonesia  meningkat  dari  tahun  ke  tahun  karena pertumbuhan  populasi.  Upaya  dalam  menyediakan  bibit  yang  unggul  dalam  waktu  singkat dan  dalam  jumlah  banyak  salah  satunya  melalui  kultur  jaringan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  kombinasi  2,4  D  (Dichlorophenoxyacetic)  dan  BAP  (Benzyl Amino  Purine)  serta  mengetahui  perlakuan  terbaiknya.  Metode  penelitian  yang  digunakan adalah  metode  eksperimental  dengan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) kombinasi  dengan 3 ulangan  dan 9 perlakuan yang terdiri dari: (A); 1 ppm 2,4 D + 0 ppm BAP (B); 2 ppm 2,4 D + 0 ppm BAP (C); 3 ppm 2,4 D + 0 ppm BAP (D); 1 ppm 2,4 D + 0.1 ppm BAP (E); 2 ppm 2,4 D + 0.1 ppm BAP (F); 3 ppm 2,4 D + 0.1 ppm BAP (G); 1 ppm 2,4 D + 0.2 ppm BAP (H); 2 ppm 2,4 D + 0.2 ppm BAP (I); 3 ppm 2,4 D + 0.2 ppm BAP. Hasil penelitian  menunjukan  terdapat  pengaruh  nyata  pemberian  kombinasi  2,4-D  dan  BAP terhadap  waktu  muncul  kalus  dan  diameter  kalus  pada  induksi  kalus  tanaman  tebu (Saccharum officinarum L.) varietas AAS Agribun. Perlakuan C (2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm) menghasilkan  persentase  eksplan  hidup  tertinggi  yaitu  100%,  waktu  kemunculan  kalus
tercepat  yaitu  15,67  hsi,  diameter  terbesaryaitu  2,04  cm  dan  bobot  segar  kalus  terberat dengan nilai 0,86 gram.
Kata kunci: tebu, 2,4 D, BAP, induksi kalus

## PENDAHULUAN
Tanaman  tebu  ( Saccharum  officinarum  L .)  merupakan  salah  satu  komoditas  penting dalam  pembangunan  sub-sektor  perkebunan  untuk  memenuhi  kebutuhan  dalam  negeri  dan sebagai bahan ekspor untuk menghasilkan devisa dari Negara (Durroh, 2019). Tanaman tebu adalah  tanaman  yang  dijadikan  bahan  utama  dalam  pembuatan  gula,  hal  ini  dikarenakan  di dalam batang tebu terkandung cairan gula (Amir et al ., 2017).
Konsumsi  gula  di  Indonesia  meningkat  dari  tahun  ke  tahun  karena  pertumbuhan populasi. Produksi gula nasional pada tahun 2021 mencapai 2,35  juta ton, di  mana 1,06 juta ton berasal dari pabrik gula milik negara dan 1,29 juta ton dari pabrik gula swasta. Sementara itu,  jumlah  gula  yang  dikonsumsi  pada  tahun  2022  sekitar  6,48  juta  ton,  (Kementerian Perindustrian,  2022).  Menurut  data  dari  Badan  Pusat  Statistik  (2021),  konsumsi  gula  pasir perkapita perminggu pada tahun 2021  mencapai  1,123 Kg per kapita per minggu. Konsumsi gula pasir itu lebih tinggi dari rerata tahun sebelumnya yang mencapai 1,105 kg per kapita per minggu.  Merespon  hal  ini,  Pemerintah  memiliki  agenda  berdasarkan  peningkatan  konsumsi gula,  Menjalankan  program  swasembada  gula  dengan  tujuan  memasok  kebutuhan  gula nasional tanpa mengimpor dari negara lain (Kementerian Perindustrian, 2022).
Perbanyakan  tanaman  tebu  umumnya  dilakukan  secara  vegetatif  melalui  setek.  Di beberapa  negara  tropis,  2-3  bagian  buku  (nodus)  batang  tebu  digunakan  sebagai  bahan tanaman baru (Sukmadjaja &Mulyana, 2011). Perbanyakan tebu secara konvensional memliki kekurangan  yakni  memerlukan  lahan  yang  luas,  memerlukan  tanaman  induk  yang  banyak, tenaga  kerja  yang  banyak,  waktu  tanam  dipengerahi  musim,  dan  mudah  terserang  penyakit (Hidayah et  al .,  2023).  Upaya  peningkatan  kualitas  dan  kuantitas  tebu  diantaranya  dengan perbanyakan  bibit  berkualitas  yang  sehat  dalam  skala  besar  yakni  melalui  kultur  jaringan. Penggunaan teknik kultur jaringan dapat mengatasi keterbatasan pengadaan benih tebu secara konvensional.  Hal  ini  dikarenakan  faktor  penggandaannya  yang  tinggi  sehingga  varietas unggul  cepat  diperbanyak,  benih  lebih  terjamin  kesehatannya,  membutuhkan  ruang  yang relatif kecil, bahan tanam dan pohon induk sedikit, dan eksplan dapat diproduksi secara cepat dan banyak (Lutfiani, 2022).
Kultur in  vitro merupakan  perbanyakan  tanaman  yang  dilakukan  dengan  cara mengisolasi  bagian  tanaman  kemudian  menumbuhkannya  dalam  media  aseptik  sehingga dapat  menghasilkan  tanaman  baru  yang  dapat  ditanam  pada  lingkungan  (Budisantoso et  al ., 2019). Metode kultur jaringan dilakukan dengan mengambil jaringan pada tanaman induk dan diberi  nutrisi  serta  zat  pengatur  tumbuh  yang  sesuai  sehingga  dapat  menjadi  tanaman  yang lengkap  (Yustisia et  al .,  2019).  Perbanyakan  tanaman  dengan  metode  kultur  jaringan membutuhkan  lingkungan  yang  aseptik  agar  tehindar  dari  kontaminasi.  Lingkungan  aseptik adalah lingkungan yang steril dan terbebas dari mikroorganisme (Samanhudi et al .,2020). Keberhasilan  kultur  jaringan  dapat  dipengaruhi  karena  beberapa  faktor  yaitu, kemampuan  tanaman  yang  diisolasi  untuk tumbuh,  media  serta  zpt  yang  sesuai,  dan  kondisi tempat kultur (Wulannanda et  al ., 2023). Media  yang digunakan dalam penelitian  ini adalah media  Murashige  and  Skoog  (MS).  Media  ini  banyak  digunakan  dalam  perbanyakan  kultur jaringan  dibandingan  dengan  media  dasar  lainnya.  Kandungan  media  MS  terdiri  dari  unsur hara  makro,  unsur  hara  mikro  serta  zat  besi.  Penambahan  zat  pengatur  tumbuh  pada  media MS  dapat  menunjang  pertumbuhan  eksplan  (Fauziah et  al .,  2019).  Selain  media,  salah  satu faktor  eksternal  untuk  mendukung  pertumbuhan  eksplan  adalah  zat  pengatur  tumbuh (Wahyuni et  al .,  2020).  Zat  pengatur tumbuh  (ZPT)  memiliki  peranan  penting  dalam  kultur jaringan karena memberikan pengaruh nyata (Budi, 2020).
ZPT merupakan senyawa organik bukan hara yang dapat mempengaruhi pertumbuhan dan  perkembangan  tanaman  apabila  diberikan  dalam  konsentrasi  rendah.  ZPT  yang  banyak digunakan dalam kultur jaringan yaitu golongan auksin dan sitokinin (Anggraeni et al ., 2022). ZPT  2.4  D  (2.4-Dichlorophenoxy  Acid)  adalah  salah  satu  ZPT  golongan  auksin  senyawa kimia yang termasuk dalam golongan auksin sedangkan BAP (Benzyl Amino Purin) termasuk dalam golongan sitokinin yang berperan dalam pertumbuhan tunas. Perimbangan konsentrasi dan  interaksi  antara  ZPT  yang  diberikan  dalam  media  dan  yang  diproduksi  oleh  sel  secara endogen akan menentukan arah perkembangan suatu kultur Apabila perbandingan konsentrasi sitokinin  lebih  besar  dari  auksin,  maka  pertumbuhan  tunas  dan  daun  akan  terstimulasi. Sebaliknya  apabila  sitokinin  lebih  rendah  dari  auksin,  maka  mengakibatkan  menstimulasi pada  pertumbuhan  akar.  Apabila  perbandingan  sitokinin  dan  auksin  berimbang,  maka  akan terbentuk  kalus  (Karjadi  &  Buchory,  2007).  Penelitian  (Hidayah et  al .,  2023)  perlakuan dengan konsentrasi BAP 0 ppm dan 2,4 D 3.5 ppm serta perlakuan BAP 0 ppm dan 2,4 D 3 ppm tercepat dalam pembengkakan eksplan dan pembentukan kalus terbaik. Berdasarkan hal tersebut,  tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  Pengaruh  Kombinasi  2.4  D ( Dichlorophenoxyacetic ) dan BAP ( Benzyl Amino Purine ) Pada Media MS ( Murashige Skoog ) Terhadap Induksi Kalus Tanaman Tebu ( Saccharum officinarum L.) Varietas AAS Agribun.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Unit  Pengelola  Benih  Unggul  Pertanian, BadanStandardisasiInstrumenPertanian  (BSIP)  Perkebunan  yang  bertempat  di  Jalan  Tentara Pelajar,  RT  01/  RW  11,  Ciwaringin,  Kecamatan  Bogor  Tengah,  Kota  Bogor,  Jawa  Barat 16124. Waktu penelitian dilaksanakan mulai Oktober hingga Desember 2023.
Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial dan terdiri dari 9 perlakuan yaitu (A); 2,4-D 1 ppm + BAP 0 ppm (B); 2,4-D 2 ppm + BAP 0 ppm (C); 2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm (D); 2,4-D 1 ppm + BAP 0,1 ppm (E); 2,4-D 2 ppm + BAP 0,1 ppm (F); 2,4-D 3 ppm + BAP 0,1 ppm (G); 2,4-D 1 ppm + BAP 0,2 ppm (H); 2,4-D 2 ppm + BAP 0.2 ppm dan (I); 2,4-D 3 ppm + BAP 0,2 ppm  dengan diulang  sebanyak 3 kali sehingga terdapat  27 unit percobaan.  Apabila  hasil analisis sidik ragam  menunjukan adanya  pengaruh  nyata  yang signifikan  pada  taraf α = 5%, maka  untuk  mengetahui  perlakuan  yang  memberikan  hasil  tertinggi,  data  kemudian  diuji lanjut dengan menggunakan uji lanjut Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada taraf 5%.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  eksplan  dari  tunas  tebu  varietas AAS  Agribun,  larutan  stok  MS0,  larutan  stok  2,4-D,  larutan  stok  BAP,  gula,  agar  swallow dan  aquades.  Sedangkan  alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Autoclave ,  oven, timbangan, magnetic stirrer , pH meter, peristaltic pump , labuerlenmeyer, labuakar, Laminar Air Flow (LAF), botol kultur, pinset, scalpel, bunsen, petri disk, kertas steril dan plastic wrap .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persentase eksplan hidup
Hasil  rata-rata  persentase  eksplan  hidup  berdasarkan  tabel  terdapat  perbedaan persentase eksplan hidup pada perlakuan  A (2,4-D 1 ppm + BAP 0 ppm), D (2,4-D 1 ppm + BAP 0.1 ppm), G (2,4-D 1 ppm + BAP 0.2 ppm) dan I (2,4-D 3 ppm + BAP 0.2 ppm) (Tabel 1).
Tabel 1. Persentase eksplan hidup Kode Perlakuan Persentase eksplan hidup A 2,4-D 1 ppm + BAP 0 ppm 93% B 2,4-D 2 ppm + BAP 0 ppm 100% C 2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm 100%
D 2,4-D 1 ppm + BAP 0.1 ppm 93% E 2,4-D 2 ppm + BAP 0.1 ppm 100% F 2,4-D 3 ppm + BAP 0.1 ppm 100% G 2,4-D 1 ppm + BAP 0.2 ppm 87% H 2,4-D 2 ppm + BAP 0.2 ppm 100% I 2,4-D 3 ppm + BAP 0.2 ppm 93%
Perlakuan  dengan tingkat  keberhasilan eksplan  hidup terendah  terjadi pada perlakuan G  (2,4-D  1  ppm  +  BAP  0.2  ppm)  dengan  tingkat  persentase  eksplan  hidup  yakni  87%. Eksplan mengalami browning dan terjadi kontaminasi bakteri dan cendawan.
Kontaminasi  pada  eksplan  yang  ditanam  secara in  vitro dapat terjadi  karena  infenksi secara  eksternal  maupun  internal  (Rodinah  dkk.,  2016).  Eksplan  yang  terkontaminasi dapatdiamati  dengan  melihat  ada  atau  tidaknya  bakteri  ataupun  jamur  yang  tumbuh  pada eksplan  maupun  media tumbuh.Menurut Fogh (1973) menyatakan bahwa prinsip dasar  yang dapat mencegah terjadinya kontaminasi pada eksplan yaitu penggunaan prosedur yang sesuai dengan  standar  serta  selalu  menjaga  sterilisasi  dalam  proses  kegiatan  sehingga  kegiatan pemindahan eksplan tetap dalam prosedur kerja.
Selain  kontaminasi  juga  terdapat browning.  Browning diawali  dengan  adanya perubahan  warna  eksplan  dari  hijau  dan  kemudian  berubah  menjadi  coklat  pada  daerah pelukaan. Eksplan yang berwarna kecoklatan menandakan bahwa sel-selnya telah mengalami kematian  (Sitinjak,  2015)  kemudian  Ozyigit  (2008)  menambahkan  bahwa  eksplan  yang terpotong  menyebabkan  kandungan  sitoplasma  dan  vakuola  tercampur  dan  keluar  sehingga senyawa fenol dapat teroksidasi oleh udara.

## Waktu muncul kalus
Hasil  uji  lanjut rata-rata waktu  muncul kalus  menggunakan uji DMRT pada taraf 5% pada tabel menunjukan perlakuan C (2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm) memberikan hasil rata-rata waktu  muncul  kalus  tercepat  yaitu  15,67  his  dan  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  B (2,4-D 2 ppm + BAP 0 ppm), E (2,4-D 2 ppm + BAP 0.1 ppm), F (2,4-D 3 ppm + BAP 0.1 ppm) (Tabel 2).
Tabel 2.Waktu muncul kalus Kode Perlakuan Waktu muncul kalus (hsi) A 2,4-D 1 ppm + BAP 0 ppm 23,33 b B 2,4-D 2 ppm + BAP 0 ppm 16,33 a C 2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm 15,67 a D 2,4-D 1 ppm + BAP 0.1 ppm 25,67 c E 2,4-D 2 ppm + BAP 0.1 ppm 16,67 a F 2,4-D 3 ppm + BAP 0.1 ppm 16,33 a G 2,4-D 1 ppm + BAP 0.2 ppm 31,67 e H 2,4-D 2 ppm + BAP 0.2 ppm 29,00 d I 2,4-D 3 ppm + BAP 0.2 ppm 31,33 e KK (%) 3,76
Perlakuan C (2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm) merupakan konsentrasi yang optimum untuk pertumbuhan  dan  perkembangan  kalus  dapat  terlihat  dengan  nilai  waktu  muncul  kalus tercepat. Penggunaan auksin secara mandiri tanpa sitokinin dengan konsentrasi 3 ppm cukup untuk menginduksi kalus. Hal ini sejalan dengan penelitian Suhesti (2015) yang menjelaskan bahwa penggunaan 2,4-D secara tunggal memberikan pengaruh inisiasi kalus yag lebih cepat, baik pada varietas Kidang Kencana maupun PSJT 941.
Perlakuan  dengan  kombinasi  2.4  D  dan  BAP  tertinggi  justru  memberikan  hasil kemunculan kalus terlama. Hal ini disebabkan oleh ketidakseimbangan ( Not Balanced ) antara
pemberian  hormon  eksogen  dengan  ketersediaan  hormon  endogen  pada  tanaman  sehingga pertumbuhan  kalus  terhambat  karena  kontaminasi  dan browning (pencoklatan)  dan  akhirnya eksplan  mengalami  perlambatan  pertumbuhan  bahkan  mengalami  kematian.  Menurut Sainawal (2017) beberapa faktor penyebab browning diantaranya seperti penggunaan eksplan berasal dari jaringan dewasa, tindakan sterilisasi berlebihan, dan media atau  lingkungan yang tidak mendukung.

## Diameter kalus
Hasil  uji  lanjut  rata-rata  diameter  kalus  menggunakan  uji  DMRT  pada  taraf  5% menunjukan  perlakuan  B  (2,4-D  2  ppm  +  BAP  0  ppm)  memberikan  hasil  rata-rata  diameter kalus  terbesar  yaitu  2,06  cm.  Berbeda  nyata  dengan  perlakuan  lainnya  namun  tidak  berbeda nyata dengan perlakuan C (2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm), E (2,4-D 2 ppm + BAP 0.1 ppm) dan F (2,4-D 3 ppm + BAP 0.1 ppm) (Tabel 3). Hal ini menunjukan bahwa senyawa 2.4D sebagai ZPT tunggal mampu menghasilkan diameter kalus terbaik.
Tabel 3. Diameter kalus Kode Perlakuan Diameter kalus (cm) A 2,4-D 1 ppm + BAP 0 ppm 1,77 c B 2,4-D 2 ppm + BAP 0 ppm 2,06 d C 2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm 2,04 d D 2,4-D 1 ppm + BAP 0.1 ppm 1,71 bc E 2,4-D 2 ppm + BAP 0.1 ppm 1,97 d F 2,4-D 3 ppm + BAP 0.1 ppm 2,04 d G 2,4-D 1 ppm + BAP 0.2 ppm 1,59 a H 2,4-D 2 ppm + BAP 0.2 ppm 1,69 a I 2,4-D 3 ppm + BAP 0.2 ppm 1,63 a KK (%) 3,40
Hasil  ini  sesuai  dengan  Pierik  (1984)  yang  menyatakan  bahwa  2.4D  merupakan golongan  auksin  kuat  yang  sering  digunakan  secara  tunggal  untuk  menduksi  terbentuknya kalus dari berbagai jaringan tanaman serta sangat efektif untuk inisiasi kalus.

## Bobot segar kalus
Berdasarkan tabel 4, perlakuan  C (2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm)  memiliki bobot segar kalus tertinggi dengan nilai 0.86 gram dan tidak berbeda nyata dengan perlakuan yang lain.
Tabel 4. Bobot segar kalus
Kode Perlakuan Bobot segar kalus (g) A 2,4-D 1 ppm + BAP 0 ppm 0.78 a B 2,4-D 2 ppm + BAP 0 ppm 0,75 a C 2,4-D 3 ppm + BAP 0 ppm 0.86 a D 2,4-D 1 ppm + BAP 0.1 ppm 0,71 a E 2,4-D 2 ppm + BAP 0.1 ppm 0.83 a F 2,4-D 3 ppm + BAP 0.1 ppm 0,81 a G 2,4-D 1 ppm + BAP 0.2 ppm 0.74 a H 2,4-D 2 ppm + BAP 0.2 ppm 0,73 a I 2,4-D 3 ppm + BAP 0.2 ppm 0,76 a
Menurut  Fitriani  (2019)  berat  segar  kalus  yang  tinggi  didukung  oleh  besarnya diameter  kalus  yang  dihasilkan  dan  seluruh  variabel  tersebut  saling  berkaitan,  selain  itu diameter kalus dipengaruhi oleh besar atau tidaknya rongga pada kalus. Perlakuan D (2,4-D 1 ppm  +  BAP  0.1  ppm)  memiliki  berat  segar  kalus  terendah  dengan  nilai  0.71  hal  ini  diduga
dikarenakan  kandungan  air  yang  rendah  pada  kalus.  Berat  segar  kalus  berhubungan  dengan tekstur  kalus.  Kalus  yang  memiliki  kepadatan  tinggi  berbanding  lurus  dengan  berat  segar kalus.Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Ruswaningsih  (2007),  berat  segar  kalus  dari segifisiologi terdiri dari dua komponen utama, yaitu air dan karbohidrat. Hasil penelitian oleh Indah  dan  Ermavitalini  (2013)  menyatakan  bahwa  berat  segar  kalus  yang  signifikan  pada kalus disebabkan oleh adanya kandungan air yang tinggi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan,  maka  dapat  diambil  kesimpulan. Terdapat  pengaruh  nyata  pemberian  kombinasi  2,4-D  ( Dichlorophenoxyacetic )  dan  BAP ( Benzyl  Amino  Purine ) terhadap  waktu  muncul  kalus  dan  diameter  kalus  pada  induksi  kalus tanaman tebu ( Saccharum officinarum L.) varietas AAS Agribun. Perlakuan C (2,4-D 3 ppm +  BAP  0  ppm)  menghasilkan  persentase  eksplan  hidup  tertinggi  yaitu  100%,  waktu kemunculan  kalus  tercepat  yaitu  15,67  hsi,  diameter terbesar  yaitu  2,04  cm  dan  bobot  segar kalus terberat dengan nilai 0,86 gram.

## DAFTAR PUSTAKA
Amir,  N.,  Hawalid,  H.,  &  Nurhuda,  I.  A.  (2017).  Pengaruh  pupuk  kandang  terhadap pertumbuhan  beberapa  varietas  bibit  tanaman  tebu  ( Saccharum officinarum L.)  di polybag. Jurnal Klorofil , 9 (2), 68–72.
Anggraeni, D., Ismaini, L., Surya, M. I., Rahmi, H.,  & Saputro, N. W. (2022). Inisiasi  kalus daun Talinum triangulare ( Jacq .)  Willd  pada  beberapa  kombinasi  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh  2  ,  4- Dichlorophenoxyatic  Acid dan Benzyl  Adenine . Jurnal Agrikultura . 33 (3), 276–288.
Badan Pusat Statistik. (2021). Statistik Tebu Indonesia 2021 . Tersedia di https://www.bps.go.id/publication/2022/11/30/6392bf8e4265949485d85e72/statistik- tebu-indonesia-2021.
Budisantoso,  I.,  Hardiyati,  T.,  Dwiati,  M.,  &  Kamsinah.  (2019).  Teknologi  kultur  invitro anggrek  untuk  meningkatkan  keragaman  tanaman  di  agrowisata  Serang. Prosiding Seminar  Nasional Pengembangan  Sumber  Daya  Perdesaan  dan  Kearifan  Lokal Berkelanjutan IX”14-15 November 2019 Purwokerto. 9: 294-303.
Budi, RS. (2020). Uji komposisi zat pengatur tumbuh terhadap pertumbuhan eksplan pisang Barangan  ( Musa paradisiaca L.)  pada  media  MS  Secara in  vitro . BEST  Journal (Biology Education, Sains and Technology). 3: 101–111.
Durroh,  B.  (2019).  Efektivitas  air  kelapa  muda  sebagai  zpt  dan  pupukanorganik  dalam merangsang pertumbuhan bibit stek tebu G3 kultur jaringan. Bernas , 15 (1), 54–57. Fauziah,  RH,  F  Kusmiyati,  &  S  Anwar.  (2019).  Lilium  longiflorum  plant  growth  with  a combination of Naphthylacetic Acid (NAA) and 6-Benzylaminopurine (BAP) in vitro . Journal Tropical Crop Science and Technology . 1 : 7 –92.
Hidayah, V. N., Agroteknologi, P. S., Pertanian, F., Jember, U., Pertanian, F., Jember, U., & Author, C. (2023). Pengaruh  kombinasi  BAP ( 6- Benzylaminopurine ) dan 2 , 4-D ( Dichlorophenoxy acetic acid ) untuk pembentukan kalus tebu ( Saccharum officinarum L .) melalui metode thin Cell Layer ( Dichlor . 11 (1), 89–95.
Karjadi,  &  Buchory.  (2007).  Pengaruh  NAA  dan  BAP  terhadap  pertumbuhanjaringan meristem bawang putih pada media B5. Jurnal Hortikultura , 17 (3), 85148. Kementerian  Perindustrian.  (2022).  Tekan  Gap  kebutuhan  gula  konsumsi,  Kemenperin: produksi  terus  digenjot.  Tersedia  di  https://kemenperin.go.id/artikel/23444/Tekan- Gap-Kebutuhan-Gula-Konsumsi,-Kemenperin:-Produksi-Terus-Digenjot-
Kementerian  Pertanian.  (2018).  Laporan  kinerja  pusat  penelitian  dan  pengembangan perkebunan.
Tersedia di
http://sakip.pertanian.go.id/admin/data2/Lakin%202017%20P-BUN.pdf
Lutfiani, I., Lestari, A., Widyodaru, N., dan Suhesti, S. (2022). Pengaruh pemberian berbagai konsentrasi NAA ( Naphthalene Acetic Acid ) dan BAP ( Benzyl Amino Purine ) terhadap multiplikasi  tunas  tanaman  tebu  ( Saccharum  officinarum  L. ). Jurnal  Agrotek Indonesia . 1 (7) : 49 - 57.
Ozyigit,  I.I.  (2008).  Phenolic  changes  during in  vitro organogenesis  of  cotton  ( Gossipium hirsutum L.) shoot tips, African Journal of Biotechnology 7(8): 1145-1150.
Pierik, R.L.M. (1984). Plant tissue culture: Theory and practice. Scientia Horticulturae . 24 (1) : 93.
Rodinah,  Razie,  F.,  Naemah,  D.,  &  Fitriani,  A.  (2016).  Respon  bahan  sterilan  pada  eksplan jelutung rawa ( Dyra lowii ). Jurnal Hutan Tropis , 4(3), 240-245.
Ruswaningsih,  F.  (2007).  Pengaruh  konsentrasi  ammonium  nitrat  dan  BAP  terhadap pertumbuhan eksplan pucuk Artemesia annua L. pada kultur in vitro. Skripsi . Fakultas pertanian, UNS, Surakarta.
Samanhudi,  S.,  Widijanto,  H.,  &  Yunus,  A.  (2020).  Sosialisasi  dan  penyuluhan  budidaya pisang  dengan  bibit  hasil  kultur  jaringan  di  Desa  Lempong,  Kecamatan  Jenawi, Kabupaten  Karanganyar. PRIMA:  Journal  of  Community  Empowering  and  Services , 4(2), 59-63.
Sainawal,  S.  B.,  Nugroho,  J.  D.,  &  Kesaulija,  F.  F.  (2017).  Kultur  embrio  merbau (Intsiabijuga  OK.)  pada  Media  Murashige  dan  Skoog  (MS)  siperkaya  dengan  Zat Pengatur Tumbuh BAP, GA3 dan IBA. Jurnal Kehutanan Papuasia . 3 (2) : 132 - 141. Sitinjak  MA,  Isda  MN,  Fatonah  S.  (2015).  Induksi  kalus  dari  eksplan  daun  In  Vitro  keladi tikus  ( Typhonium sp.)  dengan  perlakuan  2,4-D  dan  kinetin. AlKauniyah Jurnal Biologi . 8(1): 32  39.
Suhesti,  S.,  Khumaida,  N.,  Wattimena,  G.,  Syukur,  M.,  Husni,  A.,  Hadipoentyanti,  E.,  & Hartati,  R.  S.  (2015).  Induksi  kalus  dan  regenerasi  dua  varietas  tebu  ( Saccharum officinarum L.) Secara In vitro . In Jurnal Littri 21 (2) : 77-88.
Sukmadjaja, D., & Mulyana, A. (2011). Regenerasi dan  pertumbuhan beberapa varietas tebu
( Saccharum officinarum L.) secara In vitro . Jurnal AgroBiogen , 7 (2), 106.
Wahyuni,  A,  B  Satria,  dan  A  Zainal.  (2020).  Induksi  kalus  gaharu  dengan  NAA  dan  BAP secara in vitro . Agrosains: Jurnal Penelitian Agronomi . 22: 39-44.
Wulannanda,  A.,  Anwar,  S.,  &  Kusmiyati,  F. (2023).  Kajian  penambahan  kinetin  dan  2,4-D terhadap pertumbuhan kultur jaringan tanaman pisang barangan ( Musa paradisiaca L.) pada fase subkultur. Agroteknika , 6 (1), 1–12.
Yustisia,  D.,  Arsyad,  M.,  Wahid,  A.,  &  Asri,  J.  (2019).  Pengaruh  pemberian  zpt  alami  (air kelapa)  pada  media  ms  0  terhadap  pertumbuhan  planlet  tanaman  kentang  ( Solanum tuberosum . L.). Jurnal Agrominansia , 3(2), 130–140.zz