## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN TOTAL FENOLIK DARI HASIL PARTISI PETROLEUM ETER, ETIL ASETAT DAN AIR DAUN TIGA ( Allophylus cobbe
L.)
Lidya Hutabalian 1 ) , Vanda S. Kamu 1 ) , Max R.J. Runtuwene 1 )
1) Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Sam Ratulangi, Manado

## ABSTRACT
A research aimed to determine total phenolic and antioxidant activity of methanol extract and  fractions  obtained  from  partition of tiga leaves  (Allophylus  cobbe  L.)  using  petroleum  ether, ethyl acetate and water had been done. The results showed that total phenolic content in methanol extract  was  50,905  mg/g  and  in  petroleum  ether,  ethyl  acetate,  and  water  fraction  were  47,572; 121,064;  and  62,968  mg/g  respectively.  Antioxidant  activity  which  expressed  ini  IC 50 value  of methanol  extract  was  683.318  g/mL  and  of  petroleum  ether,  ethyl  acetate,  and  water  fraction were 593,235; 462,872; and 508,297  g/mL respectively.
Keywords : Tiga leaves, phenolic, antioxidant, DPPH.

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  untuk  menentukan  kandungan  total  fenolik  dan  aktivitas antioksidan  ekstrak  metanol,  hasil  partisi  petroleum  eter,  etil  asetat  dan  air  daun  tiga  ( Allophylus cobbe L.). Hasilnya menunjukkan bahwa ekstrak metanol memiliki kandungan total fenolik dengan nilai sebesar 50,905 mg/g  dan hasil partisi petroleum eter, etil asetat dan air memiliki kandungan total fenolik, dengan nilai berturut-turut 47,572; 121,064; dan 62,968 mg/g. Aktivitas antioksidan ekstrak  metanol  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  683,318  g/mL  dan  hasil  partisi  petroleum  eter,  etil asetat dan air memiliki nilai IC 50 berturut-turut 593,235; 462,872; dan 508,297  g/mL.
Kata kunci : Daun Tiga, fenolik, antioksidan, DPPH.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang memiliki  berbagai  jenis  tumbuhan  yang berguna untuk menjaga daya tahan tubuh dari  serangan  penyakit.  Salah  satu penyebab  adanya  penyakit  dalam  tubuh adalah  radikal  bebas.  Radikal  bebas adalah  atom  atau  gugus  yang  memiliki satu atau lebih elektron tidak berpasangan (Droge,  2002).  Radikal  bebas  yang terbentuk dalam tubuh akan menghasilkan  radikal  bebas  baru  melalui reaksi  berantai  yang  akhirnya  jumlahnya terus  bertambah  dan  menyerang  sel-sel tubuh (Khlifi  dkk.,  2005). Dalam melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal bebas,  diperlukan  suatu  bahan  baku  obat tradisional dari luar tubuh yang berfungsi sebagai  antioksidan  untuk  menangkal radikal bebas dengan melengkapi kekurangan  elektron  dari  radikal  bebas sehingga  menghambat  terjadinya  reaksi berantai (Windono dkk ., 2001).
Antioksidan bertindak sebagai penyumbang radikal hidrogen atau bertindak  sebagai  akseptor  radikal  bebas (Jadhav  dkk.,  1996).  Sumber-sumber antioksidan  dapat  berupa  antioksidan alami maupun antioksidan sintetik. Contoh  antioksidan  alami  yaitu  fenolik, flavonoid, tanin, dan vitamin E sedangkan  contoh  antioksidan  sintetik yaitu  BHA  ( butylated  hidroxyanisole ) dan  BHT  ( butylated  hydroxytoluene ) (Takashi dan Takayuki, 1997).
Tumbuh-tumbuhan  dapat  dijadikan sebagai bahan baku obat tradisional  yang digunakan oleh masyarakat untuk berbagai  macam  tujuan  seperti  menjaga kesehatan  tubuh  secara  keseluruhan  dan menyembuhkan  penyakit  tertentu  (Liu, 1999).  Salah  satu  tumbuhan  obat  yang mempunyai  aktivitas  antioksidan  yaitu
daun tiga. Daun tiga merupakan tumbuhan yang diyakini oleh masyarakat
Minahasa  Tenggara  sebagai  obat  yang dapat menyembuhkan gangguan kesehatan seperti panas dan batuk.
Najoan  dkk  (2016),  melaporkan bahwa  daun  tiga  mengandung  senyawa fenolik,  flavonoid,  steroid,  dan  saponin yang  diekstraksi  secara  maserasi  dan sokletasi dengan pelarut etanol 60% serta 80%.  Selain  itu,  telah  diuji  aktivitas antioksidannya, didapatkan bahwa ekstrak  etanol  80%  daun  tiga  yang dimaserasi memiliki nilai  IC 50 lebih kecil yaitu 255,77  g/mL dibandingkan dengan ekstrak etanol 60% yang dimaserasi, serta ekstrak  etanol  60%  dan  80%  yang disokletasi.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 , semakin besar aktivitas antioksidannya.
Dari  penelitian  tersebut  dapat menjadi informasi awal untuk melakukan penelitian  lebih  lanjut,  maka  dilakukan penelitian  kandungan  fenolik  secara kuantitatif  dan  uji  aktivitas  antioksidan terhadap  daun  tiga  ( Allophylus  cobbe L.) yang di ekstraksi maserasi dengan pelarut metanol serta partisi dengan menggunakan  pelarut  yang  kepolarannya bertingkat  yaitu  pelarut  petroleum  eter, etil  asetat  dan  air.  Metode  uji  aktivitas antioksidan yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  metode  DPPH  ( 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl ).

## METODE PENELITIAN
Alat-alat  yang  digunakan  adalah neraca  analitik,  alat-alat  gelas,  oven, blender,  ayakan  65 mesh ,  kertas saring, rotary  evaporator ,  corong pisah,  cawan  petri,  rak  tabung  reaksi, vortex,  aluminium  foil,  desikator, mikropipet, botol vial dan spektrofotometer UV-Vis.
Bahan  yang  digunakan  adalah daun  tiga  ( Allophylus  cobbe L.)  yang diperoleh  dari  Desa  Molompar  Satu, Kecamatan  Tombatu  Timur,  Kabupaten Minahasa  Tenggara,  Provinsi  Sulawesi Utara,  bahan  kimia  yang  digunakan adalah  pelarut  organik  teknis  (petroleum eter,  etil  asetat  dan  metanol  yang redestilasi),  aquades.  Reagen  Folin- Ciocalteu,  natrium  karbonat,  asam  galat dan DPPH.

## Preparasi Sampel
Sampel  daun  tiga  ( Allophylus  cobbe L. )  dikering-anginkan  selama  1  minggu.
Setelah  itu,  dimasukkan  ke  dalam  oven bersuhu 40 0 C hingga benar-benar kering.
Setelah  kering  sampel  diblender  hingga berbentuk  serbuk  lalu  diayak  dengan ayakan 65 mesh .

## Ekstraksi Maserasi
Sebanyak  50  g  serbuk  daun  tiga ( Allophylus  cobbe L . )  diekstraksi  dengan cara  maserasi  selama  3  x  24  jam menggunakan  pelarut  metanol  sebanyak 600  mL.  Selanjutnya  disaring  hingga diperoleh  filtrat.  Filtrat  yang  diperoleh kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator . Kemudian
dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  40 0 C hingga diperoleh ekstrak pekat.

## Partisi
Sebanyak  2  g  ekstrak  pekat  yang dihasilkan dari proses maserasi dilarutkan dalam 50 ml aquades. Larutan selanjutnya dipartisi dengan
menambahkan  25  mL  petroleum  eter, dikocok dalam corong pisah dan didiamkan  hingga  terdapat  dua  lapisan (aquades pada bagian bawah dan petroleum  eter  dibagian  atas).  Kedua lapisan yang terbentuk kemudian
dipisahkan,  diambil  lapisan  petroleum eter. Proses penambahan pelarut petroleum  eter  yang  terbentuk  dalam  air diulangi  sampai  petroleum  eter  menjadi bening. Lapisan aquades kemudian dipartisi  kembali  dengan  cara  yang  sama menggunakan  pelarut  etil  asetat.  Hasil partisi diuapkan menggunakan alat rotary evaporator pada  suhu  40 0 C  hingga diperoleh hasil partisi pekat .
Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik (Conde et al , 1997)
Kandungan  total  fenolik  ekstrak dan  hasil  partisi  daun  tiga  ( Allophylus cobbe L . )  ditentukan  dengan  metode Folin  Ciocalteu.  Sebanyak  0,1  mL larutan ekstrak dan hasil partisi ditambahkan  0,1  mL  reagen  Folin Ciocalteu 50%. Kemudian divortex, lalu ditambahkan  2  mL  larutan  natrium karbonat  (Na 2 CO 3 )  2%.  Selanjutnya, campuran  diinkubasi  dalam  ruangan gelap selama 30 menit. Diukur absorbansi  pada  panjang  gelombang 750 nm  menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Kandungan total fenolik dinyatakan  sebagai  mg  ekuivalen  asam galat/g ekstrak.
Pengujian
Aktivitas Antioksidan (Muaja dkk, 2017)
Larutan  ekstrak,  hasil  partisi  dan
DPPH  dibuat  terlebih  dahulu.  Ekstrak dan  hasil  partisi  sampel  dilarutkan dalam metanol dan larutan DPPH dibuat dengan  konsentrasi  0,4  mM.  Larutan sampel  yang  telah  dibuat  diencerkan dengan  berbagai  variasi  konsentrasi dengan  total  volume  1  mL  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi sebagai  larutan  uji  dan  dibuat  juga untuk  blanko.  Selanjutnya,  ke  dalam tabung  reaksi  larutan  uji  ditambahkan 0,2  mL  larutan  DPPH  dan  diinkubasi
selama  30  menit  dalam  kondisi  gelap. Setelah 30 menit, blanko dan larutan uji diukur
absorbansinya dengan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang  gelombang 517 nm.  Nilai absorbansi dari setiap variasi konsentrasi  dicatat  dan  dihitung  % scavenging nya dan nilai  IC 50. Pengujian dilakukan sebanyak dua kali.
Perhitungan  nilai  IC 50 dinyatakan dengan  persamaan  regresi  linear  dan perhitungan  % scavenging dinyatakan dengan persamaan sebagai berikut :
( )
Keterangan:
A kontrol = Absorbansi DPPH A sampel = Absorbansi DPPH + sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Sampel  daun  tiga  dijadikan  sebagai serbuk  dalam  proses  ekstraksi.  Serbuk diperoleh dengan dihaluskan menggunakan  blender,  yang  bertujuan untuk memperkecil ukuran sampel.
Semakin  kecil  ukuran  sampel,  semakin besar  luas  permukaan  sehingga  dapat mempengaruhi  interaksi  sampel  dengan pelarut  maka  proses  ekstraksi  secara maserasi berlangsung optimal dan menghasilkan  ekstrak  yang  maksimal. Hasil  proses  ekstraksi  maserasi  serbuk daun  tiga,  diperoleh  ekstrak  5,8199  g dengan rendemen 11,6398 %.
Pada  proses  maserasi,  sampel mengalami  pemecahan  dinding  sel  dan membran  sel  akibat  perbedaan  tekanan
antara di dalam dan di luar sel sehingga metabolit  sekunder  yang  ada  dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut atau  terjadi  proses  difusi.  Penggunaan pelarut  metanol  pada  proses  maserasi, bertujuan  untuk  mengekstrak  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung dalam  daun  tiga.    Menurut  Harborne (1987), pelarut metanol diduga mempunyai sifat yang dapat melarutkan semua  jenis  komponen  yang  berupa senyawa  polar,  non  polar  dan  semi polar.

## Partisi
Dalam  ekstrak  metanol  masih terdapat  berbagai  kelompok  senyawa metabolit sekunder sehingga perlu dilakukan  pemisahan  senyawa  melalui proses  partisi.  Dalam  proses  partisi ekstrak  metanol  daun  tiga  dilakukan dengan  menggunakan  pelarut  petroleum eter, etil asetat dan air. Hasil partisi yang diperoleh dapat dilihat dalam Tabel 2.
Tabel 2 . Rendemen hasil partisi daun tiga Hasil Partisi Massa (g) Rendemen (%) PE 0,3246 16,23 EA 0,0723 3,615 A 0,3238 16,19

## Keterangan : PE = Petroleum Eter; EA
= Etil Asetat; A = Air
Berdasarkan  data  pada  Tabel  2, hasil  partisi  petroleum  eter  mempunyai rendemen  tertinggi  kemudian  diikuti hasil  partisi  air,  dan  hasil  partisi  etil asetat. Tingginya rendemen menunjukkan  bahwa  pelarut  petroleum eter  mampu  mengekstrak  lebih  banyak
47.572 121.064 62.968 0 20 40 60 80 100 120 140 FPE FEA FA K and un gan T ot al F enol ik (m g/ g)
komponen  bioaktif  dari  sampel  daun tiga.  Hal  ini  disebabkan  banyaknya jumlah  senyawa  metabolit  sekunder bersifat  non  polar  yang  terkandung dalam  daun  tiga.  Tingginya  rendemen hasil  partisi  petroleum  eter  mungkin disebabkan  adanya  komponen  klorofil yang terdapat pada daun tiga. Petroleum eter  merupakan  pelarut  non  polar  yang mampu  melarutkan  senyawa-senyawa yang tak larut air seperti lipida, klorofil, dan karotenoid (Wala dkk., 2015).

## Kandungan Total Fenolik
Uji kandungan total fenolik dengan metode
Folin-Ciocalteu bertujuan  untuk  mengetahui  jumlah
fenol  yang  terkandung  dalam  ekstrak metanol, hasil partisi petroleum eter, etil asetat  dan  air  daun  tiga.  Metode  ini didasarkan  pada  kemampuan  ekstrak dan hasil partisi untuk mereduksi reagen Folin-Ciocalteu (kuning) yang
mengandung  senyawa  fosfomolibdat dan  asam  fosfotungstat  menghasilkan senyawa kompleks molibdenum- tungstat  berwarna  biru  (Julkunen-Tiito, 1985).  Semakin  biru  intensitas  warna larutan  menunjukkan  kandungan  total fenol  dalam  sampel  semakin  besar (Larson,  1988).  Hasil  kandungan  total fenolik  hasil  partisi  petroleum  eter,  etil asetat  dan  air  dengan  konsentrasi  1000
 g/mL dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Kandungan total fenolik dari hasil partisi daun tiga (FPE = Hasil Partisi Petroleum Eter; FEA = Hasil Partisi Etil Asetat; dan FA = Hasil Partisi Air)
Hasil  kandungan  total  fenolik untuk  ekstrak  metanol  sebesar  50,905 mg/g.  Berdasarkan  Gambar  1,  dapat diketahui bahwa kandungan total fenolik  tertinggi  yaitu  hasil  partisi  etil asetat  (FEA)  sebesar  121,064  mg/g diikuti  dengan  hasil  partisi  air  (FA) 62,968 mg/g, dan hasil partisi petroleum eter  (FPE)  47,572  mg/g.    Hal  ini dikarenakan  pelarut  etil  asetat  dapat melarutkan  senyawa  fenolik  yang  lebih banyak sehingga menunjukkan sebagian besar  senyawa  fenolik  yang  terdapat
pada  daun  tiga  merupakan  senyawa yang  bersifat  semipolar.  Rohman  dkk (2006)  melaporkan  bahwa  pelarut  etil asetat sangat  cocok untuk  mengektraksi senyawa  fenolik.  Hasil  kandungan  total fenolik  dalam  ekstrak  metanol  (EM) memiliki  nilai  yang  rendah,  diduga komponen-komponen yang bersifat polar  seperti  karbohidrat  ikut  terekstrak dan  menyebabkan  total  fenol  per  berat sampel  menjadi  rendah  (Septiana  dan Asnani, 2012).
593.235 462.872 508.297 0 100 200 300 400 500 600 700 FPE FEA FA IC 50 (µg/ m l) OH H 2 O H 3 PO 4 (MoO 3 ) 12 O O H 6 (PMo 12 O 40 ) Senyawa Fenol Reagen Folin - Ciocalteu Kuinon Kompleks Molybdenum - blue
Gambar 2. Reaksi Senyawa Fenol dengan Reagen Folin-Ciocalteu (Hardiana dkk., 2012)

## Aktivitas Antioksidan
Pada pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode Muaja  dkk  (2017).  Data  hasil  dari aktivitas  antioksidan  dapat  dilihat  pada Gambar 3.
Gambar 3. IC 50 dari hasil partisi daun tiga (FPE = Hasil Partisi Petroleum Eter; FEA = Hasil Partisi Etil Asetat; dan FA = Hasil Partisi Air)
Hasil  nilai  IC 50 untuk  ekstrak metanol sebesar 683,318 µg/ml. Berdasarkan  Gambar  6,  menunjukkan bahwa  hasil  partisi  etil  asetat  (FEA) memiliki  nilai  IC 50 yang  paling  rendah yaitu  462,872  µg/ml,  diikuti  oleh  hasil partisi  air  (FA)  508,297  µg/ml,  dan hasil  partisi  petroleum  eter  (FPE) 593,235  µg/ml.  Semakin  rendah  nilai IC 50 ,  maka  semakin  besar  aktivitas antioksidan  dari  sampel.  Hasil  ini menunjukkan bahwa tingginya  aktivitas antioksidan  berbanding  lurus  dengan kandungan fenolik dari sampel.
Penentuan
nilai aktivitas
antioksidan menggunakan metode
DPPH.  Metode  DPPH  dipilih  karena metode  ini  merupakan  metode  yang sederhana, mudah, cepat dan peka serta hanya memerlukan sedikit sampel untuk uji  aktivitas  antioksidan.  Prinsip  dari metode  uji  aktivitas  antioksidan  ini adalah pengukuran penangkapan radikal DPPH  oleh  suatu  senyawa  yang mempunyai aktivitas antioksidan dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  sehingga  akan  diketahui  nilai aktivitas  peredaman  radikal  bebas  yang dinyatakan  dengan  IC 50 ( Inhibitory Concentration ).  Nilai  IC 50 didefinisikan sebagai  besarnya  konsentrasi  senyawa uji  yang  dapat  meredam  radikal  bebas sebanyak 50% (Molyneux, 2004). Hasil
reaksi  antara  penangkap  radikal  bebas DPPH  dengan  senyawa  antioksidan dapat  diketahui  melalui  perubahan
warna  dari  ungu  pekat  menjadi  kuning akibat terjadi resonansi struktur penangkap radikal bebas DPPH.
O 2 N NO 2 NO 2 N N AH O 2 N NO 2 NO 2 N N H A
DPPH (radikal bebas) (ungu) Senyawa fenolik
DPPH (kuning)
Gambar 4. Reaksi antara penangkal radikal (AH) dengan radikal bebas DPPH (Landeng dkk., 2017)

## KESIMPULAN
Kandungan  total  fenolik  tertinggi terdapat  pada  hasil  partisi  etil  asetat diikuti  dengan  hasil  partisi  air,  dan  hasil partisi  petroleum  eter.  Hasil  partisi  etil asetat  memiliki  aktivitas  antioksidan lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  hasil partisi air dan hasil partisi petroleum eter.

## DAFTAR PUSTAKA
Azizah,  D.N.,  Kumolowati,  E.,  dan Faramayuda,  F.  2014.  Penetapan Kadar  Flavonoid  Metode  AlCl 3 pada  Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah Kakao  ( Theobroma  cacao L.).
Kartika  Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 2(2) : 45-49
Cahyanta,  A.N.  2016.  Penetapan  Kadar Flavonoid  Total  Ekstrak  Daun Pare Metode Kompleks Kolorimetri dengan  Pengukuran Absorbansi secara Spektrofotometri. e-Journal Politeknik Tegal . 5(1) : 58-61
Conde,  E.,  Cadahia,  E.,  Garcia-Vallejo,
M. C., Simon, B. F., and Adrados,
J.  R.  G.  1997.  Low  Molecular
Weight  Polyphenols  in  Cork  of Quercus suber . Journal of Agricultural and Food Chemistry .
45(7) : 2695-2700
Droge,  W.  2002.  Free  Radicals  in  The Physiological  Control  of  Cell Function. Physical Review . 82(1) : 47-95
Grotewold,  E.  2006. The  Science  of Flavonoids . New York : Springer
Harborne,  J.  B.  1987. Uji  Fitokimia. Bandung  :  Institut  Teknologi Bandung
Hardiana, R., Rudiyansyah., dan Zaharah, T. A. 2012. Aktivitas Antioksidan Senyawa  Golongan  Fenol  dari Beberapa  Jenis  Tumbuhan  Famili Malvaceae. JKK . 1(1) : 8-13
Jadhav,  S.J.,  Nimbalkar,  S.S.,  Kulkarni, A.D.,  dan  Madhavi,  D.L.  1996. Lipid Oxidation in Biological and
Food  Systems.  Dalam  D.  L.
Madhavi, S.S. Deshpandeand D.K
Salunkhe (eds). Food
Antioxidants Technological, Toxicological, and Health, Drespectives. Marcel Dekker, Inc, New York
Khlifi, S., Hachimi, Y., Khalil, A., Essafi, N.,  dan  Abbouyi,  A.  2005.  In
Vitro Antioxidant Effect of Globularia alypum L. Hydromethanolic  Extract. Indian Journal  of  Pharmacology . 37(4) : 227-231
Landeng,  P.  J.,  Suryanto,  E.,  dan
Momuat,  L.  I.  2017.  Komposisi Proksimat dan Potensi Antioksidan  dari  Biji  Jagung Manado  Kuning  ( Zea  mays L.) Chemistry Progress. 10(1) : 36-44
Larson,  R.A.  1988.  The  Antioxidants  of Hinghest  Plants. Phytochemistry .
27(4) : 969-977
Liu,  K.  1999. Soybeans  :  Chemistry, Technology,  and  Utilization .  New York : Chapman and Hall
Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid (Terjemahan) .  Bandung  :  ITB Press Maukar, M. A., Runtuwene, M. R. J., dan Pontoh, J. 2013. Analisis Kandungan  Fitokimia  daru  Uji Toksisitas  Ekstrak  Metanol  Daun
Soyogik ( Sauraula bracteosa DC) dengan menggunakan Metode Maserasi. Jurnal  Ilmiah  Sains .
13(2) : 98-101
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  Stable Free Radical
diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Journal  of  Materials Science  &  Technology. 26(2) :
211- 219
Muaja,  M.  G.  D.,  Runtuwene,  M.  R.  J.,
dan  Kamu,  V.  S.  2017.  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  dari Daun Soyogik ( Saurauia bracteosa DC). Jurnal  Ilmiah Sains. 17(1) : 68-72
Najoan,  J.  J.,  Runtuwene,  M.  J.  R.,  dan
Wewengkang,  D.  S.  2016.  Uji Fitokimia dan Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun
Tiga ( Allophylus cobbe L.). Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 5(1) : 266-274
Rohman,  A.,  Riyanto,  S.,  dan  Utari,  D.
2006. Aktivitas Antioksidan, Kandungan  Fenolik  Total  dan Kandungan Flavonoid Total Ekstrak Etil Asetat Buah Mengkudu serta Fraksi-Fraksinya. Majalah Farmasi Indonesia .
17(3) : 136-142
Salunkhe,  D.K.,  Chavan,  J.K.,  dan
Kadam, S.S. 1990. Dietary Tannins Consequences and
Remedies .  Boca  Raton  :  CRC Press
Septiana,  A.T.,  dan  Asnani,  A.  2012. Kajian  Sifat  Fisikokimia  Ekstrak Rumput  Laut  Coklat Sargassum duplicatum Menggunakan Berbagai  Pelarut  dan  Metode Ekstraksi. AGROINTEK. 6(1) :
22-28
Takashi,  M.,  dan  Takayuki,  S.  1997.
Antioxidative Activities of Natural  Compounds  Found  in Plants. Journal  of  Agricultural and  Food  Chemistry . 45(5) :
1819-1822
Wala, M.E., Suryanto, E., dan Wewengkang, D.S. 2015. Aktivitas  Antioksidan  dan  Tabir Surya  Fraksi  dari  Ekstrak  Lamun ( Syringodium Isoetifolium ). Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 4(4) :
282-289
Windono,  T.,  Soediman,  S.,  Yudawati, U.,  Ermawati,  E.,  Srielita.,  dan Erowati, T. I. 2001. Uji Perendam Radikal  Bebas  terhadap  1,1-
Diphenyl-2 Picrylhydrazil
(DPPH)  dari  Ekstrak  Kulit  Buah
dan Biji Anggur ( Vitis vinitera L.)
Probolinggo Biru dan Bali. Artocarpus. 1(1) : 34-43