Menara Perkebunan, 2002, 70(1), 20-34
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim dan protein  batang atas  pada okulasi tanaman karet ( Hevea brasiliensis Muell Arg.)
The effect of root stocks on  isozymes and protein partterns of scion the budgrafting of rubber plant (Hevea brasiliensis Muell Arg.)
N. TORUAN-MATHIUS 1) , LIZAWATI 2) , H. ASWIDINNOOR 3) & I. BOERHENDY 4)
1) Unit Penelitian Bioteknologi Perkebunan,  Bogor 16151, Indonesia
2) Jurusan  Agronomi, Universitas Jambi, Jambi.
3) Jurusan Pemuliaan Tanaman, Fakultas Pertanian, IPB, Bogor 16151.
4) Balai Penelitian Karet Sembawa, Palembang 300001.

## Ringkasan
Heterogenitas batang bawah pada sistem okulasi Hevea brasiliensis dapat menyebabkan interaksi batang bawah dengan batang atas dapat menimbulkan berbagai tingkat keragaman respons antar individu batang atas dari klon yang sama. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh berbagai jenis batang bawah terhadap respons batang atas dari klon karet yang sama pada okulasi, berdasarkan perubahan pola pita protein, dan isoenzim esterase (EST), asam fospatase (AP), malat dehidrogenase (MDH), fosfogluko oksaloasetat (PGD), fosfo glukosa  isomerase (PGI), peroksidase (PER), sikimik dehidrogenase (SKD), glutamat oksaloasetat (GOT) dan leusin aminopeptidase (LAP) dari daun atau lateks batang atas. Kombinasi diuji adalah klon  (a) batang atas klon PB260 yang dikombinasikan dengan PR255, BPM1, LCB1320, PR300, AVROS2037, RRIM712 dan GT1, sebagai kontrol GT1/GT1. (b) sebagai batang atas adalah BPM1, BPM24, RRIC100 dan RRIC102 yang dikombinasikan dengan batang bawah BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC101, RRIC102 dan RRIC110. Hasil yang diperoleh menunjukkan adanya perubahan pola pita protein lateks PB260 yang diokulasikan pada PR255, BPM1, LCB1320, PR300, AVROS2037, RRIM712 sebagai   batang          bawah.  BPM1,    BPM24,
RRIC100, RRIC102 sebagai batang atas dengan BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC101, RRIC102 dan RRIC110 menyebabkan terjadinya perubahan pola pita protein lateks dari klon yang sama. Terjadi  induksi  pembentukan protein baru dengan BM 24 kDa pada kombinasi okulasi PB260/ PR255, BPM1/RRIC100, BPM24/ RRIC100, BPM24/RRIC102 dan BPM24/ RRIC110. Hasil analisis  isoenzim pada lateks dan daun batang atas menunjukkan bahwa isoenzim MDH, PGD, PGI, PER, SKD, GOT dan LAP menghasilkan pita yang monomorfik untuk seluruh kombinasi okulasi yang diuji. Polimorfisme EST ditemukan pada PR255/PB260, LCB1320/ PB260, GT1/PB260, BPM24/ RRIC100 dan BPM24/RRIC101. Sedang polimorfisme  AP ditemukan pada PR255/ PB260, LCB1320/PB260, GT1/ PB260, BPM24/ RRIC101, BPM24/ RRIC102, dan RRIC100/RRIC110. Polimorfisme untuk MDH dan SKD juga ditemukan pada PR255/PB260, LCB1320/PB260 dan GT1/ PB260. Berdasarkan sidik gerombol dan UPGMA dari penggabungan data analisis SDS-PAGE protein dan isoenzim menunjukkan bahwa batang atas dari klon yang sama yang diokulasikan pada berbagai batang bawah yang berbeda, umumnya berada dalam satu sub kelompok yang sama.  Namun  tingkat kesamaan genetiknya  beragam, hal ini menunjukkan adanya perbedaan pengaruh batang bawah terhadap batang atas yang sama.
Toruan-Mathius et al.

## Summary
The heterogenity of root stocks leads to stock-scion interactions resulting in consi- derable variation at different level among the population of a single clone . The aim of this research is  to study the effect of several rootstock on  scion of the rubber clone, based on the changes on budding patterns   of  leaf  or latex  protein and isozymes esterase (EST, acid phosphatase (AP), malat dehydrogenase (MDH), phosphogluco oxaloacetate (PGD), phospho glucose isomerase (PGI), peroxidase (PER), shikimic dehydrogenase (SKD), glutamate oxaloacetate (GOT) and leucyne aminopeptidase (LAP),  bands pattern. The combinations stocks/scions  tested were  (a) scion PB260 clone combined with  PR255, BPM1, LCB1320, PR300, AVROS2037, RRIM712 and GT1. Control  combinations used were GT1/GT1 and (b) as a scion BPM1, BPM24, RRIC100 dan RRIC102 combined with BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC101, RRIC102 and RRIC110. The results showed that  latex protein bands pattern  of PB 260 as a scion were changed in combination with PR255, BPM1, LCB1320, PR300, AVROS2037, RRIM712 as a rootstocks. BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC101, RRIC102 and RRIC110 as a rootstocks caused the changes of the latex protein patterns of BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC102 as a scion. The interaction among stock/scion showed by the changes on the levels proteins  or the prsence of new proteins with MW 24-63 kDa especially in combination of  BPM1/ RRIC100, BPM24/ RRIC100, BPM24/ RRIC102 and BPM24/ RRIC110. BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC102 and PB260 in combined with  all the stocks were tested. Analyses of leaf and latex  isozymes showed that MDH, PGD, PGI, PER, SKD, GOT and LAP produced monomorphic isozyme bands. The polymorphism were found on  EST of PR255/PB260, LCB1320/PB260, GT1/PB260, BPM24/RRIC100 and BPM24/ RRIC101. While the combination of PR255/ PB260, LCB1320/ PB260, GT1/ PB260, BPM24/RRIC101, BPM24/ RIC102, and RRIC100/RRIC110 produced AP polymorphism. Polymorphism for MDH and SKD were also found in   PR255/ PB260, LCB1320/PB260 and GT1/PB260. Cluster and
UPGMA analyses of  protein and isozyme pattern  showed combinations of a scion with several different rootstocks belong to the same sub group. However, genetic symilarities among individuals were varieties, it showed that the differences  effect of rootstock to the scion from the same clone.
[ Key words: Hevea brasiliensis , rubber plant, budding incompatibility, iso- enzym patterns, SDS-PAGE protein,  latex rubber.]

## Pendahuluan
Okulasi adalah salah satu cara  per- banyakan secara vegetatif yang dilakukan dengan menempelkan mata tunas entres dari satu tanaman ketanaman sejenis dengan tujuan mendapatkan sifat unggul. Menurut Boerhendhy (1990) dan Lasminingsih (1990) perbanyakan tanaman karet dengan okulasi bertujuan untuk mendapatkan kombinasi genetik yang lebih baik yaitu produksi yang tinggi, tahan terhadap penya- kit daun dan akar, serta tahan  terhadap lingkungan yang kurang menguntungkan. Sedang Lubis et al. (1981) menyatakan bahwa apabila okulasi adalah kompatibel dapat mempercepat pertumbuhan dan meningkatkan produksi batang atas.
Madjid (1974) mengemukakan bahwa okulasi tanaman karet yang inkompatibel dapat menurunkan produksi sampai 40%, yang baru dapat diketahui setelah tanaman menghasilkan yaitu sekitar 5 tahun setelah tanam. Hal tersebut sangat merugikan pekebun karena produktivitas tanaman tidak mencapai kemampuan produksi sesungguhnya.  Menurut  Boerhendhy (1989) inkompatibilitas pada okulasi karet dapat berupa pembengkakan batang di sekitar tempat pertautan, penghambatan pertumbuhan dan tingkat produksi yang rendah. Krisnakumar et al. (1992)
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim…
menemukan bahwan penggunaan batang bawah dari klon karet yang berbeda yang diokulasikan dengan batang atas dari klon RRII 105, menyebabkan terjadinya variasi yang cukup besar pada pola pita isoenzim aspartat aminotransferase (AAT), LAP, AP, alkalin fosfatase (ALP) dan PGI yang beperan penting dalam proses metabolisme.
Beberapa penelitian telah memper lihatkan terjadinya perubahan struktur anatomi kulit batang akibat inkompatibilitas pada okulasi. Inkompatibilitas pada okulasi apel menyebabkan penyatuan kulit kayu yang tidak mulus akibat digantinya pembu- luh xilem oleh jaringan parenkhim di daerah pertautan (Warmund et al. , 1993). Prawoto et al. (1987) menemukan adanya perbedaan anatomi kulit batang pada daerah pertautan antar okulasi yang kompatibel dengan yang inkompatibel pada tanaman kakao. Okulasi yang kompatibel ditunjuk- kan dengan batas pertautan yang tidak kelihatan, sedang okulasi yang inkompa- tibel ditunjukkan dengan banyak-nya akumulasi lignin pada daerah pertautan. Hal tersebut berpengaruh terhadap translokasi air dan unsur hara dari batang bawah ke atas serta terhambatnya translokasi hasil asimilat ke akar. Prawoto et al. (1990a & 1990b) juga menemukan bahwa batang bawah mempengaruhi daya hasil batang atas namun tidak mempengaruhi mutu hasil batang atas kakao.
Inkompatibilitas pada okulasi juga dapat menyebabkan berbagai efek fisiolo- gis. Pada okulasi peach dengan plum terjadi penurunan kandungan protein dan asam amino di seluruh organ (Moreno et al. , 1994). Sedang Yagishita et al. (1990) melaporkan bahwa pada okulasi Capsicum annum kul. Yatsubusa dengan paprika Spanyol manis, terjadi penurunan kemampuan biosintesis kapsisin secara genetik dan mengubah bentuk dan warna buah secara konsisten. Agbaria et al. (1997)
menemukan pembentukan pita protein baru yang disebut heat shock proteins (HSP) dalam daun bunga ros kultivar Mercedes yang disambungkan pada berbagai jenis batang bawah. Agbaria et al. (1998) juga menemukan bahwa  penyambungan  mem- pengaruhi aktivitas enzim untuk pembunga- an pada bunga ros yaitu nitrat reduktase dan glutamin sintetase dalam daun.
Toruan-Mathius et al. (1999 & 2000) menemukan bahwa batang atas PB260 yang diokulasikan pada berbagai klon batang bawah menyebabkan polimorfisme pita protein lateks batang atas dan terbentuknya protein baru dengan berat molekul 20-25 kDa. Hal ini menunjukkan bahwa pada sistem okulasi tanaman karet, batang bawah yang berbeda-beda mem- pengaruhi metabolisme batang atas dari klon yang sama. Di samping itu ditemukan juga adanya lapisan sel-sel baru antar pertautan batang bawah dan batang atas yang inkompatibel.
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh berbagai klon batang bawah terhadap pola pita protein dan beberapa isoenzim lateks batang atas dari klon  yang sama pada sistem okulasi tanaman karet.

## Bahan dan Metode
Kombinasi okulasi tanam karet yang digunakan dalam penelitian ini berumur lima tahun diperlihara di kebun percobaan (a) Ciomas, Unit Penelitian Bioteknologi Perkebunan Bogor dan (b) Balai Penelitian Karet Sembawa, Palembang  (Tabel 1).
Untuk mengetahui pengaruh berbagai jenis batang bawah terhadap klon batang atas yang sama dilakukan analisis terhadap (i) pola pita protein lateks batang atas  dan (ii) analisis isoenzim lateks atau daun muda batang atas. Isoenzim yang diuji adalah
Toruan-Mathius et al.
isoenzim esterase (EST), asam fospatase (AP), malat dehidrogenase (MDH), fosfo- gluko oksaloasetat (PGD), fosfo glukosa isomerase (PGI), peroksidase (PER), sikimik dehidrogenase (SKD), glutamat oksaloasetat (GOT) dan leusin amino- peptidase (LAP).

## Analisis SDS - PAGE protein lateks
Protein untuk analisis SDS - PAGE diekstraksi dari sebanyak 10 mL lateks segar untuk klon batang atas yang diuji, menggunakan metode pembekuan pada suhu -20 o C selama 24 jam. Serum dikeluar- kan dengan cara menekan gumpalan karet
dengan batang porselein, kemudian dipipet ke dalam tabung.  Konsentrasi protein dalam serum lateks ditetapkan menurut prosedur Bradford (1976). Sedang protein dalam serum lateks dipisahkan dengan SDS-PAGE gel poliakrilamida menurut prosedur Laemmli (1970).
Elektroforesis SDS-PAGE  dilakukan menggunakan gel pemisah yaitu 10% gel poliakrilamida (Tris-HCL 1,5 M, pH 8,8, 10% SDS, 10% bisakrilamida,10% amo- nium sulfat dan 0,25% TEMED), sedang stacking gel berupa 4% akrilamida (Tris HCl 0,5%, pH 6,8, 10% SDS, 4% akrilamida, 10% amonium persulfat dan 0,4% TEMED). Elektroforesis dilakukan
Tabel 1. Kombinasi batang atas dengan batang bawah tanaman karet yang digunakan dalam percobaan serta lokasi tempat tumbuh.
Table 1. Rootstocks and scions combination of rubber plant were used in the experiment and location of  plant growth.
No Batang atas Scions Batang bawah Rootstocks Lokasi Location 1. 2.
3. 4. 5. 6. PB 260
GT1 BPM1 BPM 24
RRIC 100
RRIC 102
PR 255 BPM1
LCB 1320
AVROS 2037 RRIM 712 GT 1
BPM1 BPM 24 RRIC 100
RRIC 102
BPM1 BPM 24 RRIC 100 RRIC 102 BPM1 BPM 24 RRIC 100 RRIC 102
BPM1 BPM 24 RRIC 100 RRIC 102 Ciomas, Bogor Ciomas, Bogor
Sembawa, Palembang
Sembawa, Palembang
Sembawa, Palembang
Sembawa, Palembang
Toruan-Mathius et al.
dalam Mini Protean I (Biorad). Sebanyak 75 µL contoh protein dimasukkan ke dalam gel poliakrilamida, menggunakan bufer elektroda Tris base, glisin dan SDS pH 8,3 pada 100 V selama 90 menit. Standar protein menggunakan MW-SDS-200 KIT SIGMA. Pewarnaan yang digunakan adalah komasi biru,  hasil elektroforesis kemudian diawetkan menggunakan selopan. Berat molekul pita-pita protein dari masing- masing contoh dianalisis langsung dari gel poliakrilamida berdasarkan Rf.

## Analisis isoenzim daun dan lateks
Isoenzim diekstraksi dari lateks dan daun  muda  untuk percobaan  (a),  sedang untuk percobaan (b) hanya dilakukan analisis isoenzim dari lateks batang atas dari kombinasi okulasi yang diuji. Isoenzim yang dianalisis berasal  dari serum C didinginkan pada suhu 4 o C. Ekstrak serum C lateks kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 12.000 x g pada  4 o C  selama 10 menit. Sebelum dilakukan analisis, ke dalam 30 µL ekstrak daun maupun serum C lateks ditambahkan 15 µL bromofenol biru.

## Elektroforesis isoenzim
Cetakan gel yang berisi 35 µL contoh diletakkan pada alat elektroforesis yang bagian bawahnya telah diisi dengan penyangga elektroda yang diencerkan 1/10 kalinya sampai dengan 3/4 bagian bejana dan bagian atas juga diisi dengan larutan penyangga elektroda. Isoenzim dielektro- foresis selama 4 jam dengan tegangan listrik awal 70 Volt, dan setelah satu jam tegangan listrik dinaikkan menjadi 90 Volt. Elektroforesis dilaksanakan dalam ruang pada suhu 4 o C, elektroforesis dihentikan apabila indikator mobilitas telah hampir mencapai ujung gel.
Pewarnaan masing-masing isoenzim
sangat spesifik yang dilakukan menurut metode Lebrun & Chevallier (1980). Sebelum dimasukkan ke dalam larutan pewarna, dilakukan penandaan posisi awal dari masing-masing individu gel dengan cara memotong salah satu bagian ujung dari gel separasi. Gel yang telah ditandai segera dimasukkan ke dalam bak pewarna sistem enzim dan diinkubasi sampai terbentuk pita isoenzim. Gel dicuci beberapa kali untuk menghilangkan sisa pewarnaan dan diawet- kan menggunakan selopan.

## Analisis pita SDS-PAGE protein dan isoenzim
Pengaruh interaksi batang bawah terhadap batang atas dipelajari berdasarkan ada tidaknya pita protein dan isoenzim yang dimiliki bersama berdasarkan berat molekul dan Rf. Di samping itu juga diamati tebal tipisnya pita protein dan isoenzim yang menunjukkan perbedaan konsentrasinya. Perubahan pola pita protein dari hasil analisis SDS-PAGE untuk tiap kombinasi okulasi, ditetapkan berdasarkan ada tidak- nya pita protein yang tidak dimiliki secara bersama pada tiap individu dari klon yang sama dengan berbagai batang bawah yang berbeda.  Pembacaan pita terhadap pita tegas dan tipis dilakukan secara konsisten. Pita hasil elektroforesis yang dimiliki secara bersama diberi skor 1 (ada) atau tidak ada pita diberi skor 0. Hal yang sama juga dilakukan terhadap hasil elektroforesis isoenzim.
Analisis data untuk percobaan SDS- PAGE protein dan isoenzim menggunakan analisis gerombol, dengan teknik ber- hierarki, yang dalam program NTSYS dipilih metode SAHN (Rohlf, 1993). Pengelompokan dengan teknik berhierarki dapat digambarkan dalam bentuk den- dogram. Ukuran derajat kedekatan genetik antar genotipe berdasarkan koefisien
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim…
kesamaan atau jarak genetik dengan metode rataan yang dalam program NTSYS dipilih metode UPGMA. Pengelompokan data matriks dan pembuatan dendogram dilakukan dengan metode UPGMA, fungsi SIMQUAL program NTSYS (Rohlf, 1993). Data matriks dihitung melalui koefisien Dice (S).

## Hasil dan Pembahasan
Analisis SDS - PAGE protein (a). PB 260 sebagai batang atas
Hasil  elektroforesis  lateks  yang diperoleh menunjukkan bahwa  PB 260 sebagai batang atas yang diokulasikan dengan tujuh jenis  batang bawah yang berbeda memiliki protein dengan  berat molekul 15-205 kDa.  Tampak adanya perbedaan intensitas ketebalan pita protein terutama pada protein dengan berat molekul sekitar 24 kDa. Pita protein lateks PB260 yang tampak lebih tebal diperoleh dari kombinasi okulasi PB260/PR255, PB260/
AVROS2037, dan PB260/ LCB1320 khususnya pada protein dengan BM sekitar 24 kDa. Sedangkan pada kombinasi okluasi lainnya menghasilkan pita-pita protein yang relatif lebih tipis. Polimorfisme pola pita protein kulit batang atas PB260 terutama diperoleh dari kombinasi PB260/PR255 (Gambar 1).

## (b). BPM1, BPM24, RRIC100 dan RRIC102  sebagai batang atas
Hasil elektroforesis lateks batang atas klon BPM1 yang dikombinasikan dengan berbagai batang bawah menghasilkan pita- pita protein yang relatif sama, namun terjadi induksi protein baru dengan BM 24 KDa pada kombinasi okulasi BPM1/ RRIC100, BPM24/RRIC100, BPM24/ RRIC102, dan BPM24/RRIC 110. Protein tersebut tidak ditemukan pada kombinasi okulasi BPM24/BPM1, BPM24/RRIC101 dan BPM24/BPM24  sebagai kontrol (Gambar 2).
Gambar 1.  Elektroforegram protein lateks batang atas klon PB260 dikombinasikan dengan   batang bawah (1)PR255,  (2) BPM1, (3) PR300, (4)GT1, M: standar rotein,  (5)AVROS2037, (6)LCB1320, (7)BPM712, dan (8)GT1/GT1.
Figure 1. Electrophoregram protein latex of scion PB260 clone combination with rootstock (1)PR255,  (2) BPM1, (3) PR300, (4)GT1, M: standard prtein,  (5)AVROS2037, (6)LCB1320,  (7)BPM712, and(8)GT1/GT1.
.
Gambar 2. Elektroforegram protein lateks batang atas klon (A)BPM1, (B)BPM24, (C)RRIC100, (D)RRIC102 yang dikombinasikan dengan  batang bawah (1)BPM1, (2)BPM24, (3)RRIC100, (4)RRIC101, (5)RRIC102, (6) RRIC110, dan (M)standar protein.
Figure 2.   Electrophoregram protein latex of scion (A)BPM1, (B)BPM24,(C )RRIC100, (D)RRIC102 clones, combination with rootstocks of (1)BPM1, (2)BPM24, (3)RRIC100, (4)RRIC101, (5)RRIC102, (6)RRIC110, and (M) standard protein.
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim…
Toruan-Mathius et al . (2000) pada kombinasi okulasi karet yang sama yaitu PB260/PR255, PB260/AVROS2037, dan PB260/LCB1320  juga menemukan adanya polimorfisme pola pita protein kulit batang dengan BM 24 kDa. Viestra (1993) menjelaskan bahwa tebal tipisnya pola pita protein kemungkinan merupakan salah satu bentuk reaksi tanaman terhadap perubahan keadaan yang tidak menguntungkan yaitu sebagai protektan kerusakan jaringan dan juga menjaga agar tidak terjadinya kerusak- an protein. Menurut  Hartman et al. (1997)
penyatuan dua tanaman yang diokulasikan dapat mengakibatkan perubahan respons fisiologis pada tanaman hasil okulasi. Sedang Moreno et al. (1994) menemukan terjadinya perubahan aktivitas biosintesis protein di seluruh organ pada peach yang diokulasikan dengan pulm sebagai batang bawah. Hal tersebut terjadi disebabkan adanya interaksi batang bawah dengan batang atas akibat kombinasi okulasi yang tidak kompatibel.
Agbaria et al. (1997) menemukan adanya pita-pita protein baru dalam daun
Gambar 2. Elektroforegram protein lateks batang atas klon (A) BPM1, (B) BPM24, (C) RRIC100, (D) RRIC102 yang dikombinasikan dengan batang bawah (1)BPM1, (2)BPM24, (3) RRIC100, (4) RRIC 101, (5)RRIC 102, (6)RRIC110 dan (M) Standar protein.
Figure 2. Electrophoregram protein latex of scion(A) BPM1, (B) BPM24, (C) RRIC100, (D) RRIC102 clones combination with rootstock of bawah (1)BPM1, (2)BPM24, (3) RRIC100, (4) RRIC101, (5)RRIC 102, (6)RRIC110 and (M) Standar protein.

## kDa      M       1        2        3       4        5        6
205 - 116 - 97,4 - 66 - 45 - 29 -
kDa M      1        2         3       4        5 6 205 - 116 - 97,4- 66,0 -
45- 29- 205 -
116 - 97,4 - 66 - 45- 29 -
205 - 116 - 97,4 - 66 -
45-
29 -
kDa      M         1         2         3        4         5        6        kDa      M       1         2         3       4        5        6
Toruan-Mathius et al.
tanaman batang atas Rosa hybrida cv
Mercedes, yang dikenal sebagai heat-shock proteins (HSP) sebagai respons terhadap batang bawah dari kultivar yang berbeda Sedang menurut Ohta (1991) di antara beberapa karakteristik akibat penyam- bungan terhadap perubahan secara genetis adalah perubahan alel secara simultan, atau perubahan secara simultan pada gen yang komplemen, serta terjadinya khimeras.

## Elektroforesis  isoenzim
(a). PB 260 sebagai batang atas
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa penggunaan batang bawah PR255, LCB1320 dan GT 1 menyebabkan terjadi- nya perubahan pola pita isoenzim dari daun muda klon PB 260 yaitu EST-05, EST-0,58, dan EST 0,70. Di samping itu tampak adanya perbedaan ketebalan pita isoenzim daun batang atas dengan Rf tertentu sebagai akibat pengaruh batang bawah (Gambar 3). Kombinasi okulasi yang sama juga menyebabkan terjadinya polimorfisme pada pita isoenzim AP, MDH, dan SKD. Khususnya pada kombinasi PB260/PR255 menyebabkan terjadinya hambatan terhadap aktivitas keempat isoenzim yang diuji. Hal tersebut terlihat dari tipis atau tidak adanya pita dari keempat isoenzim yang diperoleh (Gambar 3). Pengaruh batang bawah terhadap pola pita isoenzim lateks berbeda dengan pola pita daun muda dari batang atas yang sama yaitu klon PB260. Dari hasil elektroforesis keempat isoenzim lateks yang diuji tampak bahwa hanya isoenzim EST yang menghasilkan polimorfisme pada EST-0,50 dan EST-0,58 yaitu pada kombinasi PB260/BPM1, PB260/PR300 dan PB260/AVROS2037 (Gambar 3).
(b). BPM1, BPM24, RRIC100 dan RRIC102 sebagai batang atas
Pada percobaan ini hanya dua sistem
isoenzim yang menghasilkan pita, sedang yang lainnya tidak menghasilkan pita. Hasil elektroforesis isoenzim EST menunjukkan bahwa batang bawah klon RRIC101 dan RRIC102 menyebabkan terjadinya poli- morfisme khususnya untuk pita EST-0,53 pada kombinasi BPM1/RRIC102, BPM24/ RRIC101 dan BPM24/RRIC102. Poli- morfisme juga terjadi pada EST-0,46 dari kombinasi okulasi RRIC100 dengan batang bawah BPM1, BPM24, RRIC101 dan RRIC102  (Gambar 4 & Tabel 1). Sedang kombinasi keenam batang bawah dengan batang atas klon RRIC102 tidak menyebab- kan terjadinya perubahan pada pola pita EST.
Polimorfisme isoenzim AP-0,55,   AP- 0,52, dan AP 0,58 masing-masing dari kombinasi BPM24/RRIC101 dan BPM24/ RRIC102, RRIC100/BPM24 dan RRIC 100/BPM24, serta RRIC102/BPM24 (Gambar 4 & Tabel 2). Menurut Bertrand & Etienna (2001) okulasi yang kurang sesuai pada tanaman kopi ( Coffea arabica ) terjadi karena adanya hambatan dalam proses translokasi berbagai senyawa yang diperlu- kan dalam proses metabolisme tanaman. Kemungkinan lainnya adalah t erbentuknya jaringan parenkhima secara berlebihan pada daerah pertautan, menyebabkan terhambat- nya hubungan vaskular antar batang bawah dengan batang atas yang dapat menimbul- kan masalah translokasi unsur hara dan asimilat sehingga menghambat aktivitas biologis tanaman.
Krishnakumar et al. (1992) menemu- kan keragaman yang cukup besar pada pola pita isoenzim aspartat aminotransferase (AAT), LAP, AP,  fosfatase alkalin (ALP) dan PGI pada tunas batang atas tanaman karet klon RRII105 yang dikombinasikan dengan 22 jenis batang bawah yang berbeda. Keragaman ini diduga akibat
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim…
Gambar 3.  Elektroforegram isoenzim (A)esterase, (B)asam fosfatase, (C)malat dehidrogenase, dan (D)sikimat dehidrogenase dari daun dan lateks batang atas klon PB260 berkombinasi dengan (1)PR255, (2)BPMI, (3)PR300, (4)LCB1320, (5) AVROS2037, (6)GT1, (7)RRIM712 dan GT1/GT1.
Figure 3.      Electrophoregram of isoenzyme (A)estrase, (B)Acid phosphatase, (C)malat   dehydrogenase, and (D)sikimic  dehydrogenase  of   scion  latex PB260  clone   combination  with (1)PR255, (2)BPMI, (3)PR300, (4) LCB1320, (5) AVROS2037, (6)GT1, (7) RRIM712 and GT1/GT1.
1       2        3       4      5       6        7 8 1     2       3        4      5        6       7       8 0,78- 0,66- 0,58- C D
1       2        3       4      5       6        7 8 1      2       3       4      5       6       7
8 A
B
0,78- 0,68- 0,58- 0,50- 0,46 0,58- 0,56 - 0,58- 0,56- 0,46- 0,40-
0,50- 0,45-
0,40- 1      2      3      4       5     6      7      8 Rf A Rf B
Rf C Rf D
0,50- 1     2       3       4      5      6      7     8 1      2       3      4      5       6      7      8 1      2        3      4       5       6       7      8
Gambar 4.  Elektroforegram  isoenzim  esterase  dan asam   fosfatase lateks batang atas klon, (A)BPM1, (B)BPM24, (C)RRIC100, dan (D)RRIC102 berkombinasi dengan  batang bawah, (1)BPM1, (2)BPM24, (3)RRIC100, (4)RRIC101, (5)RRIC102 dan (6)RRIC110
Figure 4. Electrophoregram  isoenzym esterase and acid phosphatase of scion latex  (A)BPM1, (B)BPM24,
(C)RRIC100, and (D)RRIC102  combination with rootstock, (1)BPM1, (2)BPM24, (3)RRIC100,
(4)RRIC101, (5)RRIC102 and (6)RRIC110
Toruan-Mathius et al.
Tabel 2. Kombinasi okulasi yang menyebabkan terjadinya polimorfisme pada pola pita isoenzim esterase dan asam fosfatase.
Table 2.  Budding combination which was caused polymorphism on band  patterns of esterase and acids phosphatase isozymes.
adanya interaksi antara batang atas dari klon yang sama  dengan batang bawah yang
berbeda-beda. Sedang Degani et al. (1990) mempelajari pola pita isoenzim Akotinase (AKT), Isositrat Dehidrogenase (ISD), LAP, dan GPI pada okulasi kultivar mangga. Hasil yang diperoleh menunjuk- kan bahwa adanya perubahan pola isoenzim pada setiap perubahan genomik batang atas maupun batang bawah yang diokulasikan. Perubahan pola pita protein maupun isoenzim pada batang atas dari klon yang sama tampaknya erat kaitannya dengan
aktivitas metabolisme batang atas yang mungkin disebabkan adanya pengaruh genetik atau faktor lingkungan. Pada okulasi, dua individu tanaman dengan latar belakang sifat genetik yang berbeda digabungkan menjadi satu tanaman baru. Adanya perbedaan yang besar antar mitraklonal mungkin disebabkan adanya perbedaan antar tanaman batang bawah
No. Sistem isoenzim Isozymes system Kombinasi batang bawah/batang atas Combination of rootstock.scion
1.
2.
3. 4. 5. 6. 7. 8. EST-0,46 EST-0,50 EST-0,53 EST-0,58 EST-0,70 AP-0,52 AP-0,55
AP-0,58 BPM1/RRIC100 BPM24/RRIC100
RRIC101/RRIC100 RRIC102/RRIC100
PR255/PB260 PR300/PB260 BPM1/PB260
BPM1/RRIC101
BPM1/RRIC102
BPM24/RRIC101 BPM24/RRIC102
LCB1320/PB260 BPM1/PB260 AVROS2037/PB260 PR300/PB260
GT1/PB260
BPM24/RRIC102
RRIC100/BPM24
RRIC100/RRIC102
RRIC102/BPM24
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim…
yang secara genetik bersifat heterogeneous sedang batang atas umumnya klonal yang
memiliki sifat genetik yang homogeneous. Di samping  itu simpangan baku yang cukup besar antar tanaman batang bawah dengan batang atas menunjukkan adanya pengaruh terhadap batang atas. Agbaria et al. (1998) melaporkan bahwa aktivitas nitrat reduktase dan glutamin sintetase dalam daun Rosa hybrida cv  Ilseta  & Mercedes yang diokulasikan pada berbagai batang bawah lebih rendah dibandingkan dengan tanaman yang tidak diokulasi. Sedang Huang et al. (1994) menemukan bahwa ternyata
aktivitas isoenzim isoperoksidase dari kambium batang atas tidak dapat digunakan sebagai indikator kompatibilitas batang atas/batang bawah pada sistem okulasi tanaman Castanea mollissima, C. dentata dan C. crenata yang dikombinasikan dengan dua nomor C. crenata.

## Pengelompokan kombinasi okulasi
UPGMA berdasarkan penggabungan hasil elektroforesis protein dan isoenzim PB260 yang diokulasikan pada tujuh batang bawah yang berbeda, menghasilkan pengelompokan yang cenderung mengikuti pola pita berdasarkan hasil elektroforesis isoenzim daun. Diperoleh dua kelompok, kelompok I yaitu PB260/ PR255, PB260/ GT1, PB260/RRIM712. Sedang kelompok II terdiri dari dua sub kelompok yaitu PB260/BPM1, PB260/ AVROS2037 dan GT1/GT1 serta PB260/ PR300 dalam sub kelompok lainnya pada koefisien kesamaan 80% (Gambar 5). Berdasarkan hasil analisis
Gambar 5.  Dendogram kombinasi okulasi batang atas PB260 klon dengan  batang bawah PR255, BPM1, PR300, AVROS2037, LCB1320,  RRIM712 dan GT1 berdasarkan pola pita SDS- PAGE protein  dan isoenzim EST, AP, MDH dan SKD.
Figure 5.    Dendogram  the combination grafting of scion PB260 clone with PR255, BPM1,    PR300, AVROS2037, LCB1320, RRIM712 and GT1 based on the pattern of SDS-PAGE protein and isozymes EST,  AP, MDH  and SKD bands.
PB260/PR265 PR260/GT1
PB260/RRIM712
PB260/LCB1320
PB260/BPM1
PB260/AVROS2037 GT1/GT1 PB260/PR300 0,90 0,92                           0,95                0,97                            100 Koefisien kesamaan genetik
Coefficient of  genetics imilarities
Toruan-Mathius et al.
matriks kesamaan ternyata diperoleh korelasi antara matriks berdasarkan pola pita protein dan  pola pita isoenzim, yang tidak nyata  (r = 0,19; p = 0,87).   Hal  ini disebabkan hanya sedikit jenis isoenzim yang mampu menunjukkan polimorfisme, sehingga tidak mampu mengungkapkan keragaman sifat isoenzim dari setiap kombinasi okulasi yang diuji.
UPGMA gabungan dari hasil elektro- foresis protein dan isoenzim BPM1, BPM24, RRIC 100 dan RRIC 102 yang diokulasikan pada enam batang bawah yang berbeda menghasilkan pengelompokan yang cenderung mengikuti pengelompokan berdasarkan pola pita protein.  Nilai korelasi kesamaan antar matriks yang berdasarkan pola pita protein dan isoenzim adalah tidak
nyata dengan nilai r = 0,45; p = 1,00. Dari hasil UPGMA tampak bahwa umumnya batang atas yang sama berkombinasi dengan ber-bagai batang bawah berada dalam kelompok yang sama, kecuali pada kombinasi RRIC110/RRIC100, BPM24/ RRIC101 dan PB260/PR300 (Gambar 6). Dari hasil yang diperoleh menunjuk-kan bahwa adanya pengaruh berbagai jenis batang bawah yang digunakan terhadap batang atas dari klon yang sama.
Premakumari et al. (2001) menemukan bahwa benih monoklonal ternyata lebih seragam daripada benih komersial. Hal tersebut menunjukkan bahwa penggunaan benih monoklonal merupakan salah satu alternatif untuk menjamin keseragaman kecambah batang bawah untuk menekan
Gambar 6.  Dendogram  kombinasi okulasi batang atas  BPM1, BPM24, RRIC100, dan RRIC102 dengan batang bawah BPM1, BPM24, RRIC100,  RRIC101, RRIC102,  dan  RRIC 110   berdasarkan gabungan pola pita   SDS-PAGE protein dan isoenzim EST dan AP
Figure 6.  Dendogram  the combination grafting of scion BPM1, BPM24, RRIC100,  and RRIC102clones With  rootstocks  BPM1, BPM24, RRIC100, RRIC101,  RRIC102, and RRIC 110 based on  the pattern of  of SDS-PAGE protein  and  isozymes EST and  AP bands.

## Koefisien kesamaan genetik
Coefficient of genetic similarities
0,52                          0,64                          0,76                           0,88                         100

## Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim
…
pengaruh negatif yang mungkin ditimbulkan dari interaksi batang bawah dengan batang atasnya. Huang et al . (1994) melaporkan bahwa kompatibilitas penyambungan antar spesies Castanea tidak sepenuhnya disebabkan oleh inkompatibilitas karena adanya perbedaan genetik antar spesies. Dilaporkan juga bahwa isoenzim isoperoksidase tidak dapat digunakan sebagai penanda kesesuaian atau ketidak-sesuaian penyambungan antar spesies Castanea . Menurut Almansa et al. (2002) kombinasi tertentu antar batang bawah/ batang atas tanaman Citrus limonum ber-pengaruh terhadap aktivitas isoenzim superoksida dismutase (SOD) yang ber- peran dalam toleransi tanaman tersebut terhadap salinitas. Namun pada kombinasi yang berbeda aktivitas isoenzim tersebut tidak berpengaruh. Xu et al. (2002) melaporkan bahwa pada tanaman apel ada hubungan antar aktivitas isoenzim POD dan IOD yang berfungsi untuk mengontrol akumulasi IAA pada akar tanaman batang bawah dengan vigor batang atas. Pada kom-binasi batang  bawah/batang  atas tertentu aktivitas POD dan IOD meningkat yang menyebabkan akumulasi IAA pada daerah akar juga meningkat. Selanjutnya IAA akan ditransmisikan ke batang bagian atas yang dapat meningkatkan pertumbuhannya.
Untuk mendapatkan gambaran yang lebih jelas mengenai pengaruh batang bawah terhadap batang atas  peubah  berupa perubahan pola pita protein dan isoenzim perlu dihubungkan dengan peubah  agro-nomis lainnya a.l. kualitas lateks, pertambahan lilit batang, dan hasil lateks.

## Kesimpulan
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim dan protein  batang atas  pada okulasi tanaman karet yang  menunjukkan adanya interaksi batang bawah terhadap batang atas adalah :
(i) Terbentuknya protein lateks dengan BM 24 kDa pada beberapa kombinasi  batang bawah terhadap batang atas dari klon tertentu yang sama.
(ii) Terjadi polimorfisme Isoenzim AP dan Est  pada beberapa  kombinasi batang bawah terhadap batang atas dari klon-klon tertentu yang sama.
(iii) Tingkat polimorfisme  pola pita protein dan isoenzim tertinggi  diperoleh dari kombinasi okulasi RRIC100/RRIC110, PM24/RRIC101 dan PB260/PR255. Sedangkan kombinasi okulasi yang tidak memberikan perubahan baik terhadap  pola pita protein dan isoenzim yang diuji adalah RRIC 102/RRIC101 dan PB260/GT1.

## Daftar Pustaka
Agbaria, H., B. Heuer & N. Zieslin (1996). Root-shoot interaction effects on nitrate reductase and glutamine synthetase activities in rose ( Rosa hybrida cvs. Ilseta and Mercedes) graftings. J. Plant Physiol ., 149 , 559-563.
Agbaria, H., B. Heuer & N. Zieslin (1997). Rootstock imposed formation of proteins in leaves of rose ( Rosa hybrida cv Mercedes). Adv. Hort. Sci ., 11 , 159-160.
Agbaria, H., B. Heuer & N. Zieslin (1998). Rootstock-imposed alterations in nitrate reductase and glutamine synthetase activities in leaves of rose plants. Biol. Plant., 41 (1), 85-91.
Almansa, M.S., J.A. Hernandez,                A. Jimenez, M.A. Botella & F. Sevilla (2002). Effect of
salts stress on the superoxide dismutase activity in leaves of Citrus limonum in different rootstock-scion combinations. Biol. Plant., 45 (4), 545-549.
Betrand, B. & H. Etienne (2001). Growth, production and bean quality of Coffea
Toruan Mathius et al.
arabica as affected by interspecific grafting: Consequences for rootstock breeding. J. Hort. Sci ., 36 , 269-273.
Boerhendhy, I. (1989). Efek okulasi tajuk terhadap beberapa sifat anatomi dan fisiologi tanaman karet. Bull. Perkebunan Rakyat, 2 , 13-20.
Boerhendhy, I. (1990). Hubungan sifat anatomi, fisiologi dan morfologi tanaman karet okulasi tajuk dengan produksi. Bull. Perkebunan Rakyat, 6 , 70-72.
Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method fro the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principal of protein dye binding. Anal. Biochem ., 72, 248-254.
Degani, C., R. El-Bastari & S. Gazit (1990). Enzyme polymorphism in  Manggo. J. Am Soc. Hort. Sci., 115, 844-847.
Hartman, H.T., D.E. Keser, F.T. Davis Jr., & R.L. Geneve. (1997). Plant propagation. New Yersey, Prentice Hall Int. Inc. p, 392-435.
Huang, H., J.D. Noorton, G.E. Boyhan & B.R. Abrahams (1994). Graft compatibility among chesnut ( Castanea ) species. J. Amer. Soc. Hort. Sci ., 119 (6), 1127-1132.
Krishnakumar,  R.,  M.P.  Asokan  & M.R. Sethuraj (1992). Polymorphic isozyme expression caused stock- scion  interaction in Hevea brasiliensis clone RRII 105. Indian J. Nat. Rub.
Res ., 5 (1&2), 161-1.
Laemmli, U.K. (1970). Cleavage of
structural protein during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227 , 680-685.
Lasminingsih, M. (1990). Evaluasi beberapa pengujian lanjutan klon-klon karet harapan di Pusat Penelitian Perkebunan Sembawa. Bul. Perk. Rakyat , 6, 1-11.
Lebrun, P. & M.H. Chevallier (1980). Starch polyacrilamide gel electro- phoresis of Hevea brasiliensis. IRCA,
6-14.
Lubis, P., Basuki & T. Bastari (1981). Masalah batang bawah pada tanaman karet. Pusat Penelitian dan Pengembangan Perkebunan Tanjung Morawa .
Madjid, A. (1974). Bahan tanaman karet untuk peremajaan. Menara Perkebunan, 42 (5), 267-269.
Moreno, M.A., J.P. Gaudilere & A. Moing
(1994). Protein and amino acid content in compatible and incompatible peach/plum grafts.
J. Hort. Sci ., 69 (6), 955-962.
Prawoto, A.A. W. Soerodikoesoemo & J. Isbandi (1987). Kajian okulasi pada tanaman kakao ( Theobroma cacao L.). III. Anatomi pertautan batang bawah dan batang atas. Pelita Perkebunan , 3 (1), 23-30.
Prawoto, A.A. W. Soerodikoesoemo, S. Sastriowinoto & H. Hartiko (1990a). Kajian okulasi pada tanaman kakao ( Theobroma cacao L.)  V. Pengaruh batang bawah terhadap daya hasil batang atas. Pelita Perkebunan, 6 (1),
13-20. Prawoto, A.A. W. Soerodikoesoemo, S. Sastriowinoto & H. Hartiko (1990b). Kajian okulasi pada tanaman kakao ( Theobroma cacao L.) V. Pengaruh batang bawah terhadap mutu hasil
Pengaruh batang bawah terhadap pola pita  isoenzim…
batang atas. Pelita Perkebunan, 6 (2), 38-46.
Premakumari, D., K.M. Mary, T.A. Soman & M.A. Nazeer (2001). Estimates of variability and associations of characters of root stocks seeds and resultant seedlings and comparison of seed types in rubber. Indian J. of Nat. Rub. , 14 (2), 165-169.
Rohlf, J.R. (1993). NTSYS-pc. Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System. Version 1.80. New York, Exeter Software.
Toruan-Mathius, N., S.A.  Adimihardja  & I. Boerhendhy (1999). Rootstock-scion interaction in hevea. Bark protein patterns and anatomy in correlation with genetic similarities . J. Penelitian Bioteknologi Perkebunan , 67 (1), 1-12.
Toruan-Mathius, N., I. Boerhendhy, Moedji-Akbar & Kuswanhadi (2000). Rootstock-scion interaction induced the alterarion of protein banding patterns of scion, and its correlation with genetic similarities in Hevea brasiliensis Muell Arg. In Proc .
Indonesian Rubb. Conf. & IRRDB Symposium. Bogor, 12-14 September 2000. volume I .p. 169-179.
Warmund, M.R., B.H. Barritt, J.M. Brown, K.L. Schaffer & B.R. Jeong (1993). Detection of vascular discontinuity in bud union of  “Jonagold” apple on mark rootstock with magnetic resonance imaging. J. Amer. Soc. Hort. Sci., 118 , 92-96.
Viestra, R.D. (1993). Protein degradation in plants. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant
Mol. Biol ., 44 , 385- 410.
Xu, Ji-zhong, Shi,Bao-sheng, Ma, Bao-kun, Guo, Run-fang, Li, Xiao-dong & Zhang, Xian-bin (2002). Studies on the POD and IOD activites of the dwarfing stocks and the red fuji apple grafted on corresponding interstocks. Agric. Sciences in China, 1 (5), 562-567.
Yagashita, N., Y. Hirata, M. Mizukami, H. Ohashi & K. Yamashita (1990). Genetic nature of low capsaicin content in the variant strains induced by grafting in Capsicum annum L. Euphytica, 46 , 249-252.