Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah, Imra et al. Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI EKSTRAK NIPAH
( Nypa fruticans ) TERHADAP Vibrio sp. ISOLAT KEPITING BAKAU ( Scylla sp.)
Antioxidant and Atibacterial Activities of Nipah (Nypa fruticans) against Vibrio sp. Isolated From Mud Crab (Scylla sp.)
1 Imra*, Kustiariyah Tarman 1,2 , Desniar 1 1 Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Darmaga, Jalan Agatis, Bogor 16680 Jawa Barat
Telepon (0251) 8622909-8622906, Faks. (0251) 8622915
2 Divisi Bioteknologi Kelautan, Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Baranangsiang, Bogor 16680, Telepon (0251) 8374726, Faks. (0251) 8374839 *Korespodensi: imranmomo@gmail.com
Diterima: 02 Oktober 2016/ Review: 28 November 2016/ Disetujui:  15 Desember 2016
Cara sitasi: Imra, Kustiariyah, Desniar. 2016. Aktivitas antioksidan dan antibakteri nipah ( Nypa fruticans ) terhadap Vibrio sp. isolat kepiting bakau ( Scylla sp.). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 19(3): 241-250.
Abstrak
Nipah ( Nypa fruticans ) potensial  sebagai sumber senyawa  aktif antioksidan dan antibakteri. Tanaman ini banyak tersebar di pesisir pulau Sumatera, Kalimantan, Sulawesi, Maluku dan Papua. Penelitian ini bertujuan  menentukan aktivitas antioksidan dan antibakteri dari nipah buah dan daun yang diekstraksi dengan metanol serta toksisitas dan komponen aktif yang terkandung di dalamnya. Metode difusi dan DPPH digunakan masing-masing pada pengujian antibakteri dan antikosidan ekstrak nipah. Aktivitas antioksidan ekstrak daun nipah lebih efektif (22,50 µg/mL) dibandingkan dengan ekstrak buah (415,00 µg/ mL) dan diklasifikasikan sebagai antioksidan yang sangat kuat (IC 50 <50 µg/mL). Ekstrak daun memiliki aktivitas antibakteri lebih tinggi dengan zona penghambatan bakteri Vibrio sp. (8,75 mm) dibandingkan dengan buah (5,25 mm) pada ekstrak 2 mg. Ekstrak kasar terpilih daun nipah memiliki toksisitas yaitu 663,598 µg/mL dan termasuk kategori toksik. Ekstrak kasar terpilih daun nipah mengandung senyawa flavonoid, steroid, tanin, saponin, dan fenol hidroquinon.
Kata kunci: bioaktif, fitokimia, fraksinasi, toksisitas
Abstract
Nipah ( Nypa fruticans ) is the potential plant for source of active compound such as antioksidant and antibacterial substances. The plants are dispersed in Sumatera, Kalimantan, Sulawesi, Maluku and Papua Island. The aim of this research were determine the antioxidant and antibacterial activity from of nipah (fruit and leaf) that it extraction with methanol, and than determine toxicity and active compound contained in this extract. Diffusion agar and DPPH method were use for antibacterial and antioxsidant assay, respectively. Antioxsidant activity from nipah’s leaf extract was more effective (22,5 µg/mL) than nipah’s fruit extract (415 µg/mL). This activity to be classified to the strong antioxidant activity (IC 50 <50 µg/mL). The antibacterial activity from leaf extract was strong to inhibited Vibrio sp. with inhibition  zone 8,75 mm. The crude extract of nipah’s leaf was toxic with toxicity value is 663,598 µg/mL. Flavonoids, steroids, tanin, saponin and phenol hidroquinon  were the active compounds contained in the extract of nipah’s leaf.
Keywords: bioactive, fitochemical, fractionation, toxicity
PENDAHULUAN Nipah ( Nypa fruticans ) merupakan salah satu jenis tanaman bakau berbentuk palem yang umumnya tumbuh di lingkungan hutan
bakau di perairan payau (daerah pasang surut). Luas hutan nipah alami di Indonesia mencapai 4.237.000 hektar (Dinas kehutanan 2012). Hutan nipah tersebar di pesisir pulau
Sumatera, Kalimantan, Sulawesi, Maluku dan Papua. Nipah telah banyak dimanfaatkan oleh masyarakat diantaranya untuk membuat atap rumah, berbagai kerajinan, kayu bakar dan sapu lidi, serta beberapa produk misalnya gula nira, tepung dan makanan olahan. Bagian tanaman nipah juga telah dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional diantaranya obat sakit perut, diabetes dan obat penurun panas dalam oleh masyarakat pesisir perairan Banyuasin Sumatera Selatan. Masyarakat pesisir Aceh mempercayai air rebusan daun nipah berkhasiat sebagai obat sariawan dan sakit gigi. Air rebusan arang akar dan daun nipah di Kalimantan digunakan sebagai  obat  sakit  gigi  dan  sakit  kepala (Mangrove Information Center 2009).
Penelitian sebelumnya diketahui tanaman nipah memiliki kandungan senyawa bahan aktif antioksidan dan antibakteri.
Putri et al. (2013) menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun nipah dengan pelarut polar metanol 1:5 (b/v) memiliki nilai IC 50
17,72 ppm. Effendi dan Suhardi (1998) menyebutkan bahwa Nypa fruticans memiliki aktivitas antibakteri terhadap Vibrio harveyi pada udang windu ( Penaeus monodon ). Lestari et al. (2016) mendapatkan adanya zona penghambatan fraksi etil asetat ekstrak daun nipah terhadap bakteri Eschericia coli
(9,39 mm) dan Bacillus cereus (9,01 mm) pada kosentrasi 1000 ppm. Senyawa-senyawa aktif yang umumnya berperan dalam aktivitas antioksidan yaitu tanin, flavonoid, fenolik, saponin, dan terpenoid. Margaretta et al. (2011) menyatakan senyawa fenolik memiliki gugus hidroksil pada struktur molekulnya yang mempunyai aktivitas penangkap radikal bebas dan apabila gugus hidroksilnya lebih dari satu maka aktivitas antioksidannya semakin kuat. Ajizat (2004) mengatakan senyawa flavonoid, saponin, terpenoid, fenolik dan tanin juga merupakan senyawa aktif yang berfungsi sebagai senyawa antimikroba. Nypa fruticans diduga mengandung komponen yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri.
Kepiting bakau ( Scylla sp.) merupakan salah satu komoditas perikanan yang hidup di perairan pantai khususnya di hutan bakau.
Scylla sp. memiliki nilai ekonomis tinggi dan banyak diminati di pasaran baik di dalam maupun luar negeri. Selama ini kebutuhan konsumen akan kepiting bakau sebagian besar masih dari hasil penangkapan di alam yakni di kawasan mangrove dengan substrat berlumpur, yang memungkinkan terjadinya kontaminasi mikroorganisme dari lingkungan habitatnya. Aftabuddin et al. (2014) mengemukakan spesies mikroorganisme yang disolasi dari kepiting Scylla sp. yakni dari jenis Vibrio diantaranya V. cholerae , V. harveyi , V. fluvialis , V. parahaemolyticus dan V. mimicus . V. harveyi adalah spesies yang dominan terisolasi. Ashofa et al. (2014) menyatakan Vibrio merupakan patogen yang mengakibatkan kematian kepiting bakau di lingkungan perairan. Nypa fruticans mampu menghasilkan senyawa antimikroba dan antioksidan yang turut berperan mengendalikan populasi mikroorganisme dan kerusakan bahan sehingga diharapkan penggunaan N. fruticans dapat menjadi alternatif untuk mengatasi kontaminan kepiting bakau oleh Vibrio sp. dan dapat mempertahankan kelangsungan hidup kepiting bakau tersebut. Kajian tentang senyawa antibakteri untuk menanggulangi infeksi bakteri yang menginfeksi Scylla sp. sangat diperlukan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antioksidan dan antibakteri N. fruticans terhadap bakteri Vibrio sp. isolat  kepiting bakau ( Scylla sp.) serta menentukan toksisitas ekstrak dan komponen dari fraksi senyawa aktif.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan utama yang digunakan adalah buah dan daun N. fruticans serta bakteri Vibrio sp. isolat kepiting bakau ( Scylla sp.). Bahan-bahan lain yang digunakan meliputi bahan kimia untuk ekstraksi dan fraksinasi senyawa aktif, analisis kimia (kadar air dan kadar abu), pengujian antioksidan, fitokimia dan toksisitas. Peralatan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah shaker, vaccum rotary evaporator IKA RV 05 basic, Spektrofotometer UV-Vis mini 1240, kromatografi lapis tipis (KLT), dan kolom kromatografi (Merck).
Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah, Imra et al.

## Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan dalam dua tahap percobaan. Tahap pertama adalah preparasi dan ekstraksi meliputi analisis kimia (kadar air dan kadar abu), pengujian aktivitas antioksidan dan antibakteri, pengujian fitokimia dan toksisitas dari ekstrak terpilih. Tahap dua adalah fraksinasi senyawa aktif ekstrak terpilih.

## Preparasi dan Ekstraksi Daun dan Buah Nipah
Preparasi sampel daun nipah dilakukan dengan membuang tulang daun, kemudian memotong kecil-kecil lalu diblender. Sampel buah nipah dipreparasi dengan mengupas kulit buah, kemudian daging buah yang didapatkan dihaluskan dengan menggunakan blender. Daun dan buah yang telah halus kemudian ditentukan komposisi kimianya, antara lain: kadar air dan abu dengan mengunakan metode AOAC (2005).
Ekstraksi pada serbuk dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol dengan perbandingan 1:5
(b/v), selanjutnya ekstrak difiltrasi untuk memisahkan pelarut dengan sampel. Filtrat yang terkumpul dipisahkan antara pelarut dan ekstraknya menggunakan vacum rotary evaporator pada suhu 40-50 o C hingga diperoleh ekstrak kasar berbentuk pasta. Hasil ekstraksi menghasilkan ekstrak kasar, yang kemudian ditimbang untuk mendapatkan rendemen ekstraknya. Rendemen ekstrak kasar adalah persentase bobot ekstrak kasar yang diperoleh dalam sampel kering. Hasil ekstraksi tersebut selanjutnya diuji aktivitas antioksidan dan antibakteri sehingga diperoleh kondisi ekstrak terbaik yang menunjukkan aktivitas antioksidan dan daya hambat tertinggi. Uji aktivitas antioksidan dilakukan menggunakan metode 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazil (DPPH). Ekstrak kasar terpilih  selanjutnya dianalisis fitokimia untuk mengetahui komponen senyawa aktif pada ekstrak tersebut dan diuji toksisitas.
Pengujian Antioksidan (Hanani et al. 2005 yang dimodifikasi) Uji aktivitas antioksidan ekstrak kasar daun dan buah nipah dilakukan dengan
menggunakan metode 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazil (DPPH) pada konsentrasi 250, 500, 750, dan 1000 ppm. Asam askorbat digunakan sebagai kontrol positif, dan untuk pembanding dengan masing masing kosentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 µg/mL. Aktivitas antioksidan masing-masing sampel dinyatakan dengan persentase penghambatan radikal bebas yang dihitung dengan rumus:
Inhibisi (%) =
Nilai konsentrasi dan hambatan ekstrak diplot masing-masing pada sumbu x dan y. Persamaan garis yang diperoleh dalam bentuk y= b Ln(x) + a digunakan untuk mencari nilai IC ( Inhibitory concentration ) dengan menyatakan nilai y sebesar 50 dan nilai x sebagai IC 50 .
Pengujian Antibakteri (Moorthy et al.
2007)
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode difusi sumur agar. Konsentrasi yang digunakan adalah 0,5; 1,0 dan 2,0 mg masing-masing sebanyak 20 μL. Kontrol positif menggunakan antibiotik kloramfenikol 300 μg/sumur dan kontrol negatif menggunakan pelarut metanol.
Pengujian Fitokimia (Harbone 1984) dan Toksisitas (Mayer et al. 1982) Ekstrak kasar yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri terbaik kemudian dilakukan analisis fitokimia untuk mengetahui golongan senyawa aktif pada ekstrak tersebut serta uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) (Mayer et al. 1982) dengan konsentrasi masing-masing 50 ppm, 100 ppm, 500 ppm dan 1000 ppm dan ditambahkan air laut sampai volume 5 mL.

## Fraksinasi Komponen Aktif dengan
Kromatografi Lapis Tipis dan Kromatografi Kolom
Fraksinasi senyawa aktif ekstrak N. fruticans terpilih dilakukan dalam dua tahap pemisahan. Tahap pertama adalah
Inhibisi (%) = Absorbansi blanko − absorbansi sampel Absorbansi blanko x100%
pemisahan dengan dengan kromatografi lapis tipis menggunakan eluen heksana, diklorometana dan etil asetat yang bertujuan untuk mengetahui rasio eluen terbaik yang dapat memisahkan senyawa aktif pada ekstrak kasar terpilih. Tahap kedua adalah pemisahan dengan kolom kromatografi untuk memperoleh fraksi-fraksi senyawa aktif yang kemudian dianalisis aktivitas antioksidan dan antibakterinya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Daun dan Buah Nipah
Nipah ( Nypa fruticans ) merupakan tanaman dari subfamili Nipoideae yang tumbuh di lingkungan hutan bakau atau daerah pasang surut dekat tepi laut. Nipah mempunyai akar serabut yang menjalar, batang sangat pendek, kulit tangkai mengkilap dan keras, sedangkan dibagian dalamnya berupa empular atau gabus. Bunga nipah berwarna kuning jingga. Bagian buah dan daun nipah umumnya digunakan masyarakat baik dikonsumsi langsung, sebagai obat alami, maupun digunakan sebagai bahan baku kerajinan.
Buah nipah berbentuk berbulat telur dan gepeng dengan 2-3 rusuk, berwarna coklat kemerahan. Buah berkelompok membentuk bola berdiameter sekitar 30 cm. Buah nipah yang muda teksturnya lembek, berwarna bening sedikit keruh pada bagian dalamnya dan berwarna putih seperti kelapa jika sudah tua. Daun nipah mempunyai bentuk seperti janur kelapa, daun muda berwarna kuning dan daun yang sudah tua berwarna hijau (Gambar 1). Hasil pengukuran menunjukkan bahwa daun dan buah nipah memiliki kadar air masing-masing sebesar 57,85% dan 58,02%. Ristiana et al. (2012) menyatakan buah nipah yang sudah tua memiliki kadar air yang cukup tinggi sebesar 89,05 %. Herman et al.
(2011) mendapatkan buah nipah tua dan muda yang berasal dari Kaliwanggu Teluk Kendari Sulawesi Tenggara memiliki kadar air masing-masing 41,86% dan 33,49%. Rahman (1991) menyatakan kadar air pada nira nipah berkisar 60-70%. Semakin besar kadar air suatu bahan maka semakin mudah bahan terebut menyerap air. Hasil penetapan yang diperoleh diketahui bahwa kadar abu daun lebih kecil (0,08%) dibandingkan buah nipah (3,72%). Buah memiliki kadar abu yang cukup tinggi dimungkinkan karena kandungan mineral yang terkandung pada buah nipah. Hasil penelitian Herman et al. (2011) mendapatkan kandungan mineral pada buah nipah cukup tinggi yakni 1,38; 7,92; 3,79; dan 9.24 ppm masing-masing untuk kandungan Fe, Mg, K dan Na. Ristiana et al. (2012) mendapatkan kadar abu buah nipah yaitu 0,57%. Herman et al. (2011) kadar abu buah nipah muda dan buah  tua masing-masing 0,88% dan 1,01%. Heriyanto et al. (2011) Tepung buah nipah kering memiliki kadar abu 1,14 persen.

## Rendemen Ekstrak Kasar
Rendemen ekstrak merupakan perbandingan berat hasil akhir ekstrak dengan berat bahan awal sebelum diekstraksi. Ekstraksi dilakukan untuk memisahkan
Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah, Imra et al.
komponen senyawa aktif dari suatu bahan campuran dan dapat dilakukan menggunakan pelarut. Putri et al. (2013) melaporkan bahwa dimana ekstrak daun nipah dengan pelarut metanol memiliki rendemen ekstrak terbesar yakni 6,6% terbaik dibandingkan pelarut lain. Hasil ekstraksi daun dan buah nipah didapatkan rendemen ekstrak pada buah dan daun masing-masing sebesar 2,67% dan 7,62%.  Danata dan Yamindago (2014) melaporkan daun mangrove Avicennia marina yang diekstrak dengan pelarut metanol mendapatkan rendemen ekstrak sebesar 5,38%. Trianto et al. (2004) menyebutkan daun mangrove Aegiceras corniculatum yang di ekstrak dengan metanol didapat rendemen ekstrak sebesar 13,25%. Trianto et al. (2004) menyebutkan daun mangrove Aegiceras corniculatum yang di ekstrak dengan metanol didapat rendemen ekstrak sebesar 13,25%.
Harbone (1984) menyatakan hasil ekstrak akan sangat bergantung pada beberapa faktor, yaitu jenis pelarut, metode ekstraksi yang digunakan, ukuran partikel sampel, kondisi dan waktu penyimpanan, lama waktu ekstraksi, serta perbandingan jumlah pelarut terhadap jumlah sampel. Harbone (1987) menyatakan hasil ekstrak yang diperoleh akan sangat bergantung pada beberapa faktor, yaitu jenis pelarut, metode ekstraksi yang digunakan, ukuran partikel sampel, lama waktu ekstraksi, serta perbandingan jumlah pelarut terhadap jumlah sampel. Harbone (1987) juga menyatakan bahwa metanol merupakan pelarut dari golongan alkohol yang baik digunakan untuk ekstraksi karena dapat mengekstraksi habis komponen aktif. Menurut Lapornik et al. (2005) pelarut metanol mampu mengekstrak komponen yang berasal dari golongan alkaloid, fenolik, karotenoid, tanin, asam amino dan glikosida, selain itu pelarut metanol juga memiliki sifat kurang polar dibandingkan dengan air,
dengan demikian pelarut metanol mampu untuk menghancurkan dinding sel dan menyebabkan komponen-komponen dalam sel hancur dan larut dalam pelarut metanol.

## Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar
Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode 1,1-difenil-2 pikrilhidrazil (DPPH). Antioksidan asam askorbat digunakan sebagai pembanding dan kontrol positif. Parameter yang umum digunakan untuk menginterpretasikan hasil pengujian DPPH adalah nilai IC 50 . Hasil analisis  nilai aktivitas antioksidan asam askorbat, ekstrak kasar daun dan buah nipah dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel 1 menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat  yaitu dengan nilai IC 50 22,5 µg/mL, sedangkan ekstrak buah memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dengan nilai IC 50 415 µg/mL. Molyneux (2004) menyatakan Nilai IC 50 merupakan konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk mereduksi DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti aktivitas antioksidannya semakin tinggi, suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC 50 kurang dari 50 µg/mL, kuat apabila nilai IC 50 antara 50-100 µg/mL, sedang apabila nilai IC 50 berkisar 100-150 µg/mL, dan lemah apabila nilai IC 50 berkisar antara 150-200 µg/mL. Hasil yang tertera pada tabel 1 menunjukkan ekstrak daun dan asam askorbat memiliki nilai IC 50 >50. Ekstrak daun dan asam askorbat memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Ekstrak daun memiliki aktivitas mendekati asam askorbat. Putri et al. (2013) juga menyatakan bahwa aktivitas antioksidan yang kuat pada ekstrak daun nipah dengan pelarut bertingkat metanol dengan nilai IC 50 17,72 µg/mL. Beberapa vegetasi mangrove juga diketahui memiliki aktivitas antioksidan
Tabel 1 Nilai IC 50 ekstrak nipah dan standar asam askorbat dengan metode DPPH Sampel Garis linear IC 50 ( µg/mL) Antioxidan Ekstrak Kasar Daun y=0,040x + 49,1 22,50 Sangat kuat Buah y=0,049x - 6,78 415,00 sangat lemah Asam askorbat y=4,101x+5,033 10,97 sangat kuat
yang sangat kuat. Sudirman et al. (2014) melaporkan ekstrak kasar buah bakau berdaun besar ( Bruguiera gymnorrhiza ) memiliki
IC 50 pada buah tua dan muda masing- masing  yakni  13,46  µg/mL  dan  81,60  µg/mL. Nurjanah et al. (2015) mendapatkan IC 50 yaitu 56,93 µg/mL pada ekstrak metanol kulit batang ( B. gymnorrhiza ). Haq et al. (2014) melaporkan ekstrak metanol kulit batang Sonneratia alba memiliki IC 50 yaitu 38 µg/mL ppm.
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Hasil pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar menunjukkan bahwa ekstrak kasar daun nipah menghasilkan penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri
Vibrio sp. yang diisolasi dari kepiting bakau ( Scylla sp.) pada Gambar 2 dan Tabel 2.
Tabel 2 menunjukkan bahwa aktivitas ekstrak kasar daun dan buah menggunakan pelarut metanol terjadi penghambatan pertumbuhan bakteri Vibrio sp. Aktivitas antibakteri dari ekstrak daun dan buah tergolong sedang pada konsentrasi ekstrak 2 mg yakni 8,75 mm pada ekstrak daun dan 5,5 pada ekstrak buah nipah. Davis dan Stout (1971) menyatakan bahwa diameter zona hambat  >10 mm termasuk kuat, 5-10 mm termasuk kategori sedang dan lemah jika <5 mm. Hasil penelitian lain dimana Danata dan Yamindago (2014) melaporkan ekstrak metanol daun Avicennia marina memiliki zona
hambat bakteri Vibrio alginolyticus sebesar 5,48 mm. Saptiani et al. (2012) menyebutkan ekstrak daun jeruji dengan pelarut metanol dapat menghambat bakteri Vibrio harveyi dengan zona hambat sebesar (7,00-7,67 mm) pada konsentrasi 50-800 µg/mL. Hasil pengamatan pada Gambar 2 menunjukkan penghambatan pertumbuhan Vibrio sp. sangat dipengaruhi oleh konsentarasi zat aktif yang terlarut dalam ekstrak daun dan buah nipah. Zona hambat semakin tinggi sejalan dengan meningkatnya kosentrasi ekstrak. Ajizat (2004) menyatakan bahwa aktivitas antibakteri dari suatu ekstrak sangat tergantung pada kosentrasi dan komponen yang terkandung dalam ekstrak. Ekstrak daun mempunyai daya hambat terhadap bakteri Vibrio sp., sehingga dapat dikembangkan untuk  fungsi  aktivitas  yang  lainnya.
Vibrio sp. digunakan untuk uji potensi antibakteri ekstrak daun dan buah nipah, karena bakteri ini yang paling sering menimbulkan penyakit pada budidaya di tambak. Menurut Saptiani et al. (2012), Vibrio adalah golongan bakteri gram negatif yang ada di perairan laut yang menyebabkan penyakit serius pada budidaya.

## Komponen Aktif Ekstrak Terpilih
Uji fi tokimia dilakukan terhadap sampel yang menunjukkan hasil terbaik pada uji antioksidan dan antibakteri. Berdasarkan kedua pengujian tersebut, ekstrak daun
Tabel 2 Diameter hambat ekstrak daun dan buah nipah terhadap Vibrio sp. (Ekstrak kasar) Diameter zona hambat (mm) 2 mg 1 mg 0,5 mg (+) (-) Daun nipah 8,75 7,50 6,50 25,00 0,00 Buah nipah 5,50 1,63 1,00 22,50 0,00
Gambar 2 Uji antibakteri ekstrak daun (a) dan buah (b) nipah terhadap bakteri Vibrio sp.
Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah, Imra et al.
nipah merupakan ekstrak terbaik yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri dibandingkan dengan ekstrak buah nipah. Penentuan komponen aktif pada ekstrak daun nipah dilakukan melalui uji fitokimia. Uji fitokimia yang dilakukan meliputi uji alkaloid, steroid, flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan tanin. Hasil skrining fitokimia ekstrak daun nipah dapat dilihat pada Tabel 3.
Berdasarkan uji fitokimia (Tabel 3) menunjukkan bahwa ekstrak daun nipah mengandung senyawa kimia aktif antara lain; flavonoid, tanin, fenol hidrokuinon, diterpen, steroid dan saponin. Senyawa-senyawa aktif yang umumnya berperan dalam antioksidan dan antibakteri yakni tanin, flavonoid, saponin dan steroid. Ajizat (2004) menyatakan bahwa senyawa flavonoid, saponin, terpenoid, fenolik dan tanin juga merupakan senyawa aktif yang berfungsi sebagai bahan antimikroba. Mekanisme kerja bahan aktif dalam mematikan bakteri dilakukan dengan cara mendenaturasi protein dan merusak membran sel bakteri dengan cara melarutkan lemak yang terdapat pada dinding sel.

## Toksisitas Ekstrak Terpilih
BSLT adalah suatu metode yang digunakan untuk menentukan toksisitas suatu senyawa. Metode ini bersifat sederhana, mudah dilakukan, murah, cepat, dan
membutuhkan ekstrak dalam jumlah sedikit (Pisutthanan et al. 2004). Uji toksisitas ekstrak kasar terpilih daun nipah dengan metode BSLT termasuk dalam kategori toksik dengan nilai LC 50 663,60 µg/mL. Suatu zat dikatakan aktif atau toksik bila nilai LC 50 30-1000 µg/mL untuk ekstrak (Carballo et al. 2002). Toksisitas tanaman berkaitan erat dengan senyawa- senyawa metabolit sekunder yang ada didalamnya. Hasil uji fitokimia sebelumnya menunjukkan bahwa pada ekstrak daun nipah positif mengandung senyawa aktif flavonoid, steroid, tanin, saponin dan terpenoid. Senyawa-senyawa aktif tersebut diduga toksik pada kadar-kadar tertentu. Harbone (1987) menyatakan senyawa saponin merupakan salah satu senyawa yang bersifat toksik dapat menyebabkan iritasi pada selaput lendir, bersifat toksis pada binatang berdarah dingin termasuk A. salina yang digunakan sebagai hewan percobaan pada uji toksisitas. Tomayahu et al. (2013) menyatakan bahwa metabolit sekunder dari tumbuhan dapat digunakan untuk mengobati berbagai macam penyakit pada manusia dan senyawa aktif umumnya bersifat toksik pada dosis tinggi.

## Senyawa Aktif Fraksi
Pemisahan senyawa ekstrak kasar terpilih daun nipah meliputi fraksinasi ekstrak kasar dengan pelarut metanol Tabel 3 Komponen bioaktif daun nipah Ekstrak Parameter Senyawa Hasil Antioksidan Daun nipah Fitokimia Alkaloid Negatif Fenol hidroquinon Positif Tanin Positif Flavonoid Positif Saponin Positif Diterpen Positif Steroid Positif Tabel 4 Nilai Rf  KLT dengan eluen heksana : diklorometana : etil asetat (3:1:3) Bercak pada KLT Jarak tempuh pelarut (cm) Jarak tempuh komponen (cm) Nilai Rf I 8 3,8 0,475 II 8 7,5 0,938 III 8 7,8 0,975
menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kolom. Pemisahan senyawa dilakukan dengan beberapa perbandingan pelarut. Fraksinasi senyawa menggunakan teknik kromatografi lapis tipis dilakukan untuk memisahkan senyawa yang ada pada ekstrak kasar terpilih daun nipah. Kromatografi ini digunakan untuk mencari eluen yang sesuai untuk memisahkan komponen yang terdapat dalam ekstrak. Ekstrak kasar yang digunakan yaitu ekstrak daun nipah yang memiliki aktivitas antioksidan terbaik dengan nilai IC 50 22,5 µg/mL. Eluen yang diperoleh, yaitu n-heksana : diklorometana : etil asetat (3:1:3).
Eluen terbaik pada pemisahan KLT kemudian digunakan sebagai pelarut dalam kromatografi kolom. Pemisahan dengan kombinasi eluen terbaik tersebut pada plat KLT menghasilkan 3 spot fraksi dengan nilai Rf yang berbeda
Tabel 4 dan Gambar 3.
Hasil fraksinasi tersebut menggambarkan bahwa ekstrak kasar daun nipah dengan pelarut metanol diduga memiliki 3 fraksi yang terdeteksi. Pengukuran nilai Rf berdasarkan pada jarak tempuh larutan pengembang (pelarut) dan jarak tempuh bercak masing- masing komponen.

## Aktivitas Antioksidan Fraksi
Fraksi yang terbentuk selama proses
kromatografi kemudian diuji aktivitas antioksidannya untuk menentukan fraksi terbaik yang memiliki aktivitas antioksidan paling efektif. Metode pengujian sama dengan pengujian aktivitas antioksidan pada ekstrak kasar. Hasil pengujian aktivitas antioksidan fraksi dapat dilihat pada Tabel 5. Hasil pengujian memperlihatkan fraksi II sebagai fraksi yang aktivitas antioksidan terbaik yaitu 8,42 µg/mL (Tabel 5). Pengujian antioksidan  fraksi - fraksi  dilakukan dengan metode  penangkap  radikal DPPH. DPPH merupakan  radikal  sintetik  yang  stabil. Senyawa  ini mudah  larut  dalam  pelarut  polar seperti  metanol  dan  mempunyai  intensitas warna  ungu  yang  dapat  diukur  pada panjang  gelombang  517  nm (Pokorny et al. 2001). Interaksi  antara  antioksidan  dengan DPPH  dapat  berupa  transfer  elektron atau donor  hidrogen,  kedua  interaksi  tersebut akan  menetralkan  karakter  radikal bebas dari DPPH. Pengujian  antioksidan fraksi-fraksi dari  hasil  pemisahan  degan kroamtografi kolom ditandai dengan perubahan warna pada larutan DPPH yang semula berwarna ungu menjadi kuning (Gambar 4). Perubahan warna  ini  terjadi  akibat DPPH tereduksi menjadi  DPPH-H karena adanya donor atom hidrogen dari  senyawa  hidroksil  yang  diduga terdapat dalam masing-masing fraksi.
Gambar 3 Kromatogram KLT ekstrak kasar daun nipah Tabel 5 Aktivitas antioksidan fraksi Sampel Persamaan linear IC 50 ( µg/mL) Antioksidan Fraksi I y=0,032x + 49,24 23,75 Sangat kuat Fraksi II y=0,038x + 49,68 8,42 Sangat kuat Fraksi III y=0,038x + 49,31 18,18 Sangat kuat
Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Nipah, Imra et al.

## 1907-9931.
Darsana IGO, Besung INK, Mahatmi H.
2012. Potensi daun binahong ( Anredera cordifolia ) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli secara In Vitro. Indonesia Medicus Veterinus 1(3): 337-351. Davis WW, Stout TR. 1971. Disc plate method of microbiologial antibiotic assay. Journal Applied Microbiology 18(3): 403-414. Dinas Kehutanan [Dishut]. Potensi hutan nipah Indonesia. Jakarta: Dinas Kehutanan.
Effendi I, Suhardi. 1998. Studi pendahuluan tumbuhan mangrove sebagai antibakteri terhadap bakteri penyakit udang V. parahaemolyticus dan V. harveyi . Prosiding, Seminar VI Ekosistem Mangrove, Pekanbaru 15-18 September 1998.
Haq I, Hosain ABMS, Khandaker MM,
Merican AF, Faruq G, Boyce N, Azirun MS. 2014. Antioxidant and antibacterial activities of different extracts and fractions of mangrove plant Sonneratia alba. Journal International of Agriculture and Biology 16(4): 707-714.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Edisi kedua. Padmawinata K, Soediro I, penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari : Phytochemical Methods.
Heriyanto NM, Subiandono E, Karlina E.
2011. Potensi dan sebaran Nipah ( Nypa fructicans (Thunb.) Wurmb) sebagai sumberdaya pangan. Jurnal Penelitian dan Konservasi Alam 8 (4): 327-337. Herman, Rusli R, Ilimu E, Hamid R, Haeruddin. 2011. Analisis kadar mineral dalam abu buah nipa ( Nypa fruticans ) Kaliwanggu Teluk Kendari Sulawesi Tenggara. Jurnal Tropical Pharmacy Chem 1(2) : 107-113. Lapornik B, Prosek, Wondra AG. 2005.
Comparison of extract prepared from plant by – product using different solvents and extraction time. Journal of Food Engineering 71(2): 214-222. Mangrove Information Center [MIC]. 2009.
Nypa fruticans . Bali. Denpasar. www. mangrovecenter.or.id Margaretta S dan Handayani SD. 2011.

## KESIMPULAN
Ekstrak kasar daun nipah memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri terhadap Vibrio sp. isolat kepiting bakau ( Scylla sp.) lebih tinggi dibandingkan ekstrak kasar buah, tetapi aktivitas antibakteri keduanya termasuk dalam aktivitas sedang. Ekstrak terpilih daun nipah mengandung senyawa flavonoid, steroid, tanin, saponin, fenol hidroquinon dan diterpen serta memiliki toksisitas kuat. Fraksi hasil pemisahan memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dimana fraksi II memiliki aktivitas antioksidan paling kuat (IC 50 8,42  µg/mL) dibandingkan fraksi I (IC 50 23,75 8,42 µg/mL) dan III (IC 50 18,18 µg/mL).

## DAFTAR PUSTAKA
Aftabuddin S, Sikder MNA, Rahman MA,
Zafar M. 2014. Antibiotic resistance of Vibrio bacteria isolated from mud crab Scylla serrata of Chakoria Coast, Bangladesh. Journal Pharmaceutical, Biological and Chemical Scineces 4(3): 325.
Ajizat A. 2004. Sensitivitas Salmonella typhirium terhadap ekstrak daun Psidium Guajava. Journal Bioscientive 1: 31-38.
Association of Official Analytical chemist [AOAC]. 2005. Official Method of The Association Official Agriculture Chemist. Washington DC: AOAC.
Ashofa EA, Sarjito, Prayitno SB. 2014.
Identifikasi bakteri Vibrio yang berasosiasi dengan penyakit bakterial pada kepiting bakau ( Scylla serrata ) yang berasal dari Rembang. Journal of Aquaculture Management and Technology 3(2): 118-125.
Carballo JL. Hernandez-Inda ZL, Perez P,
Garcia Gravalos MD. 2002. A comparison between two brine shrimp assay to detect in vitro cytotoxicity in marine natural product. Journal Bioorganic and Medicinal Chemistry Biotechnology 2: 17.
Danata RH, YAmindago A. 2014. Analisis aktivitas antibakteri ekstrak daun mangrove Avicennia marina dari Kabupaten Trenggalek dan Kabupaten
Pasuruan terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Vibrio alginolyticus . Jurnal Kelautan 7(1). ISSN:
Ekstraksi senyawa phenolik Pandanus amaryllifolius ROXB sebagai antioksidan alami. Jurnal Widya Teknik 10: 21-30. Mayer BN, Ferrigni NR, Putnam JE, Jacobsen
LB, Nichols DE, Mclauchlin JL. 1982.
Brine Shrimp: a convenient general bioassay for active plant constituets. Journal of Medical Plants Research 45:31 – 34. Molyneux P. 2004. The use of stable free radical diphenylpicrylhydrazil (DPPH) for estimating antioksidan activity. Songklanakarin Journal Science Technology 26(2): 211-219. Moorthy K, Srinivasan K, Subramanian C, Palaniswamy M. 2007. Phytochemical screening and antibacterial evaluation of stem bark of Mallotus philippinensis var. Tomentosus. African Journal of Biotechnology 6(3): 1521-1523. Nurjanah N, Jacoeb AM, Hidayat T, Shylina A. 2015. Bioactive compuonds and antioxidant activities of Lindur Stem Bark ( Bruguiera gmnorrhiza ). Journal International of Plant Science and Ecology 1(5): 182-189. Pokorny, Jan, Yanishlieva, Nedyalka dan Gordon, MIchael. 2001. Antioxidants in Food Practical Applications. New York: CRC Press. Pisutthanan S, Plianbangchang, Ruanruay S, Muanrit O. 2004. Brine shrimp lethality activity of Thai Medicinal plants in the family Meliaceae. Naresuan University Journal 12(2): 13-8. Putri IJ, Fauziyah, Elfita. 2013. Aktivitas antioksidan daun dan biji buah nipah ( Nypa fruticans ) asal pesisir Banyuasin
Sumatera Selatan dengan metode DPPH. Maspari Journal 5(1): 16-21. Rahman AK, Sudarto Y. 1991. Nipah Sumber Pemanis Baru. Yogyakarta: Kanisius.
Ristiana L, Wijana S, Putri WI. 2012.
Studi proses pengolahan koktail dari tanaman nipah ( Nypa fruticans ). Jurnal
Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya . Saptiani G, Prayitno SB. Anggoro S. 2012. Aktivitas antibakteri ekstrak Jeruju ( Acanthus ilicifolius ) terhadap pertumbuhan Vibrio harveyi secara in vitro. Journal Vetriner 13(3): 257-262. Sudirman S, Nurjanah, Jacoeb. AM. 2014. Proximate compositions, bioactive compounds and antioxidant activity from large-leafed mangrove ( Bruguiera gymnorrhiza ) fruit. Journal International Food Research 21(6): 2387-2391. Tomayahu R, Bialang N. Salimi YK. 2014. Identifikasi senyawa aktif dan uji toksisitas ekstrak daun binahong ( Anredera cordifilia ) dengan metode BSLT. Jurnal Fakultas MIPA . Universitas
Negeri Gorontalo. Trianto A, Wibowo E, Suryono, Sapta RS. 2004. Ekstrak daun mangrove Aegiceras corniculatum sebagai antibakteri Vibrio harveyi dan Vibrio parahaemolyticus. Jurnal Ilmu Kelautan 9(4): 186-189. .