Pengaruh Perbedaan Jenis Pelarut Terhadap Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata L .)
The Effect of Different Types of Solvents on Total Levels of Flavonoid Extract (Annona muricata L .)
Ni Ketut Linda Puspa Yani 1*
Kunti Nastiti 2
Noval 3
Pharmacy Department, Helath Faculty, Sari Mulia University, Banjarmasin City, South Borneo 70238, Indonesia
*email:
niketutlyndapuspa8111@gmail.com

## Abstrak
Salah satu tanaman yang berkhasiat untuk mencegah suatu penyakit yaitu daun sirsak  ( Annona  muricata  L .).  Tanaman  ini  mengandung  senyawa  saponin, terpenoid,  steroid,  flavonoid,  tannin  dan  alkaloid.  Senyawa  yang  paling berperan  dalam  menimbulkan  efek  farmakologi  adalah  senyawa  flavonoid sebagai sumber antioksidan. Tingkat kepolaran pelarut dalam penyarian akan mempengaruhi  kandungan  senyawa  yang  diekstrak  berdasarkan  prinsip  like dissolve like. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui berapa kadar flavonoid total  pada  tingkatan  jenis  pelarut    yang  berbeda  dan    pengaruh  perbedaan pelarut etanol 96%, etil asetat dan n-heksan terhadap kadar flavonoid total. Selain  itu  dilakukan  pengujian  secara  kualitatif  untuk  mengetaui  senyawa flavonoid.  Jenis  penelitian  yang  digunakan  yaitu  secara  Pre-eksperimental, ekstraksi dengan metode maserasi terkendali suhu, cahaya, lama waktu dan pengadukan.  Analisis  kualitatif  dengan  uji  pereksi  warna  dan  Kromatografi Lapis  Tipis.  Penetapan  kadar  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis.  Hasil penelitian pada identifikasi dengan uji warna dan Kromatografi Lapis Tipis pada ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L .) menggunakan pelarut etanol 96%, etil asetat dan n-heksan positif mengandung flavonoid dan hasil penetapan kadar flavonoid  pada  masing-masing  pelarut  adalah  68,9048  mgQE/g,  97,2381 mgQE/g dan 73,6667 mgQE/g. Analisis statistic ANOVA pada setiap kelompok mempunyai perbedaan yang signifikan dengan nilai p=<0,001(<0,05). Senyawa flavonoid  dipengaruhi  oleh  tingkat  kepolaran  pelarut,  terdapat  perbedaan signifikan  antar  kelompok  perlakuan  dengan  jenis  pelarut  yang  berbeda terhadap kadar  flavonoid  total. Kadar  flavonoid  terbesar  terdapat pada  etil asetat diikuti n-heksan dan etanol 96%.

## Kata Kunci:
Annona muricata Flavonoid total Jenis pelarut
Keywords : Annona muricata Total flavonoid Type of solvent

## Abstract
One of the plants that is efficacious to prevent a disease is the leaf Annona muricata L. This plant contains contains saponins, terpenoids, steroids, flavonoids, tannins and alkaloids. Compounds that have the most role in causing pharmacological effects are flavonoid compounds as a source of antioxidants. The level of polarity of the solvent in the study will affect the content of the compound extracted based on the principle  of  like  dissolves  like.  This  study  was  conducted  to  determine  the  total flavonoid  content  at  different  levels  of  solvent  types  and  the  effect  of  different solvents of 96% ethanol, ethyl acetate and n-hexane on total flavonoid content. In addition, qualitative tests were carried out to determine the flavonoid compounds. The type of research used is pre-experimental, extraction with controlled maceration method of temperature, light, length of time and stirring. Qualitative analysis with color  correction  test  and  Thin  Layer  Chromatography.  Assay  using  UV-Vis spectrophotometry. The results of the research on identification by color test and Thin Layer Chromatography on the extract Annona muricata L. using 96% ethanol, ethyl acetate and n-hexane as solvents were positive for flavonoids and the results of  the  determination  of  flavonoid  levels  in  each  solvent  were  68,9048  mgQE/g, 97,2381 mgQE /g and 73,6667 mgQE/g. ANOVA statistical analysis in each group had  a  significant  difference  with  p=  <0.001  (<0.05).  Flavonoid  compounds  are influenced by the level of solvent polarity, there are significant differences between treatment groups with different types of solvents on total flavonoid levels. The highest flavonoid content was found in ethyl acetate followed by n-hexane and 96% ethanol.
©  2023  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya. This is Open Access article under the CC-BY-SA License (http://creativecommons.org/licenses/by- sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i1.5131.

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  Negara  kedua  setelah  Brazil  yang memiliki keanekaragaman flora fauna yang sangat tinggi. Persebaran spesies tumbuhan  dan hewan di Indonesia sangat  unik  (Hasanuddin  &  Mulyadi,  2014). Keanekaragaman hayati yang ada di Indonesia ini tidak hanya  digunakan  sebagai  bahan  pangan  ataupun  untuk dinikmati keindahannya saja, tetapi dapat juga digunakan untuk mengobati berbagai jenis penyakit. Masyarakat di Indonesia  banyak  menggunakan  tanaman  berkhasiat untuk  mengobati  berbagai  penyakit  secara  tradisional seperti  jamu  dan  berbagai  olahan  tradisional  lainnya. Salah  satu  tanaman  yang  berkhasiat  untuk  mencegah suatu penyakit yaitu daun sirsak ( Annona muricata L .).
Daun sirsak ( Annona muricata L .) merupakan salah satu tanaman  yang  bisa  dimanfaatkan  sebagai  obat  dimana secara  empiris  atau  secara  tradisional  masyarakat  di Kabupaten  Tanah  Bumbu  menggunakan  daun  sirsak untuk  mengobati  kolesterol  dan  asam  urat. Penggunaannya dengan cara merebus lima lembar daun sirsak  kemudian  air  rebusannya  diminum  secara  rutin satu  kali  dalam  sehari.  Sirsak  ( Annona  muricata L .) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  dari  familia Annonaceae  dan  banyak  tumbuh  di  Pulau  Kalimantan. Tanaman  ini  merupakan  tanaman  bahan  obat  nasional yang  memiliki  multi  khasiat  (Mukhriani  et  al.,  2015). Selain  itu,  masyarakat  juga  punya  keyakinan  bahwa penggunaan  daun  sirsak  secara  rutin  dapat  mencegah dan  mengobati  penyakit  kanker,  mengobati  demam, sakit pinggang, hipertensi, kejang-kejang dan tumor. Hal ini dapat didukung pula dengan penelitian bahwa ektrak daun  sirsak  ( Annona  muricata L .)  memberikan  efek menurunkan kadar asam urat (Aditya et al., 2020) dan menurunkan kadar kolesterol total plasma (Rochim et al., 2021).
Berdasarkan  penelitian  (Rahman  et  al.,  2017)  ekstrak etanol  daun  sirsak  ( Annona  muricata L .)  mengandung senyawa  saponin,  terpenoid,  steroid, flavonoid, tannin dan  alkaloid.  Senyawa  yang  paling  berperan  dalam menimbulkan  efek  farmakologi  adalah  senyawa
flavonoid. Flavonoid hampir terdapat pada semua bagian tumbuhan yaitu pada bagian akar, batang, kulit batang, daun,  bunga  bahkan  dapat  ditemukan  pada  buahnya. Flavonoid  termasuk  senyawa  fenolik  yang  kaya  akan gugus  hidroksil  dan  diketahui  memiliki  aktivitas  yang besar sebagai antioksidan yaitu dengan cara menangkal radikal  bebas  yang  berperan  pada  timbulnya  penyakit degeneratif  melalui  mekanisme  perusakan  sistem imunitas  tubuh,  oksidasi  lipid  dan  protein  (Rao  et  al., 2020), sebagai antimikroba dan antiinflamasi (Errayes et al., 2020).
Proses  pengambilan  senyawa  aktif  tumbuhan  dapat disebut sebagai proses ekstraksi. Ekstraksi merupakan tahap  yang  dilakukan  untuk  memisahkan  suatu  zat menggunakan pelarut tertentu. Pelarut mempunyai tiga tingkatan sifat kelarutan yaitu non polar, semi polar dan polar. Tingkat kepolaran pelarut dalam penelitian akan mempengaruhi  kandungan  senyawa  yang  di  ekstrak berdasarkan prinsip like dissolve like yaitu senyawa yang bersifat  polar  akan  larut  dalam  pelarut  polar  dan senyawa  yang  bersifat  non  polar  akan  larut  dalam pelarut non polar (Arifianti et al., 2014). Pada penelitian (Rivai  et  al.,  2020)  penetapan  kadar  flavonoid  daun sirsak dengan perbedaan pelarut yaitu etanol 70% dan air,  hasil  penelitian  menunjukan  terdapat  perbedaan kadar flavonoid. Begitu pula pada penelitian (Mukhriani et  al.,  2015)  penetapan  kadar  flavonoid  daun  sirsak dengan  perbedaan  pelarut  etanol  70%  dan  n-heksan, hasil  menunjukan  terdapat  perbedaan  kadar  flavonoid dimana kadar flavonoid yang lebih besar yaitu pada n- heksan,  namun  pada  penelitian  (Vifta  &  Advistasari, 2018) penetapan kadar flavonoid pada tanaman parijoto ( Medinilla  speciosa B .)  dengan  perbedaan  pelarut  yaitu etanol  96%,  n-heksan  dan  etil  asetat,  ternyata  pada etanol  96%  menunjukan  kadar  flavonoid  paling  besar, dan  pada  penelitian  lainnya  penetapan  kadar  flavonoid daun  saliara  ( Lantana  camara L .)  menggunakan  pelarut etanol 70%, etil asetat dan n-hekan, hasilnya pelarut etil asetat  yang  menunjukan  kadar  flavonoid  tertinggi (Rahmati  et  al.,  2020).  Hal  itu  menunjukan  bahwa
terdapat  pengaruh  pelarut  terhadap  hasil  Flavonoid totalnya. Sehingga peneliti ingin mengetahui perbedaan pelarut  etanol  96%,  etil  asetat  dan  n-heksan  terhadap kadar flavonoid pada daun sirsak ( Annona muricata L .).
Berdasarkan  hal  tersebut  peneliti  ingin  melihat perbedaan kadar flavonoid daun sirsak ( Annona muricata L .)  dari  proses  ekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut yang berbeda tingkat kepolarannya.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  yaitu  batang pengaduk,  bejana  maserasi,  toples,  cawan  porselin, ayakan  ( Siever  Shake  SS-200 ),  corong  ( Pyrex ),  kertas saring, gelas erlenmeyer ( Pyrex ), gelas kimia ( Pyrex ), labu ukur  ( Pyrex ),  pipet  volume  ( Pyrex ),  rotary  evaporator ( DLAB RE100-Pro ),  spektrofotometer  UV-Vis  ( Pharo 300 ) dan timbangan analitik ( Shimadzu Corporation ATX 224 ).
Bahan yang digunakan pada penelitian yaitu daun sirsak ( Annona muricata L .), etanol 96% ( teknis ), etil asetat (pro analisis,  Merck),  n-heksan  ( Merck ),  alumunium  klorida (AlCl 3 ) 10%, asam asetat 5% ( Merck ), kuersetin ( Sigma- aldrich ),  FeCl 3 ,  HCl  pekat,  serbuk  Mg,  n-butanol, aquadest dan etanol 70% ( Merck ).

## Metode Penelitian
Pengolahan Daun Sirsak ( Annona muricata L .)
Pengolahan daun sirsak mulai dari pengumpulan bahan, sortasi basah, Pencucian untuk menghilangkan kotoran atau benda asing yang masih menempel pada  tanaman setelah sortasi basah, perajangan yang dilakukan secara manual  yaitu  menggunakan  alat  pemotong  gunting, Pengeringan  dilakukan  dibawah  sinar  matahari  ditutup dengan  kain  hitam  agar  tidak  terkena  sinar  matahari langsung,  Sortasi  kering  untuk  memisahkan  kotoran atau  benda  asing  yang  masih  menempel  sehingga
diperoleh  simplisia  kering  daun  sirsak  yang  baik  (R. Wahyuni et al., 2014).
Pembuatan Ekstrak
Sebanyak  250  gram  serbuk  daun  sirsak  dimasukan kedalam  bejana  kemudian  masing-masing  bejana  yang berisi serbuk daun sirsak di tambahkan pelarut etanol 96%,  etil  asetat  dan  n-heksan  sebanyak  2,5  liter. Dibiarkan selama 24 jam terlindung dari cahaya, diaduk 2  kali  sehari,  pengadukan  harus  konstan  waktu  dan jumlah  pengaduk  pada  masing-masing  bejana  10  kali. Kemudian larutan pada masing-masing tingkatan pelarut disaring, dipisahkan filtrat dengan ampas menggunakan kertas  saring,  kemudian  hasil  ampas  di  remaserasi dengan perlakuan yang sama menggunakan pelarut yang baru  dilakukan  sebanyak  3  kali.  Filtrat  yang  dihasilkan pada  masing-masing  pelarut  dipekatkan  dengan  alat rotary evaporator.
Anallisis Kualitatif Uji senyawa flavonoid dengan reaksi warna
1. Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan Mg
Sebanyak 10 mg ekstrak ditambahkan beberapa tetes HCl  pekat,  kemudian  ditambahkan  sedikit  serbuk Mg.  Reaksi  positif  mengandung  flavonoid  ditandai dengan  perubahan  warna  menjadi  merah-orange (Asmorowati & Lindawati, 2019)
2. Identifikasi senyawa flavonoid dengan HCl Sebanyak 10 mg ekstrak ditambahkan beberapa tetes HCl  pekat  kemudian  dipanaskan.  Reaksi  positif mengandung flavonoid jika memberikan hasil warna putih (Asmorowati & Lindawati, 2019).
Uji senyawa fenolik dengan reaksi warna FeCl 3 Sebanyak  10  tetes  ekstrak,  ditambah  3-4  tetes  FeCl 3 . Reaksi  positif  mengandung  fenolik  ditandai  dengan perubahan  warna  menjadi  hijau  hingga  biru  kehitaman (Rivai et al., 2019).
Uji senyawa flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Fase  diam  yang  digunakan  pada  identifikasi  flavonoid dengan  KLT  yaitu  silica  gel  GF 254 ,  sebelum  digunakan lempeng diaktifkan terlebih dahulu dengan cara di oven
selama  30  menit  pada  suhu  100 o C.  Fase  gerak  yang digunakan yaitu campuran n-butanol: asam asetat : air dengan perbandingan (4:1:5) untuk mengelusi plat yang ditotolkan  dengan  pembanding  kuersetin  dan  ekstrak etanol  96%  dan  campuran  n-heksan:etil  asetat  dengan perbandingan (3:5) untuk mengelusi plat yang ditotolkan dengan ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksan. Larutan ekstrak ditotolkan pada plat KLT lalu di letakkan dalam bejana yang telah jenuh dibiarkan hingga eluen  sampai pada  tanda  batas  yang  telah  ditentukan.  Plat  KLT dikeluarkan  dari  bejana  dan  dikeringkan  lalu  diamati bercak  dibawah  lampu  ultraviolet  pada  panjang gelombang  254  nm  dan  366  nm  (Ferdinand  &  Rizki, 2021).  Selanjutnya  dilakukan  penyemprotan  dengan AlCl 3 5%  jika  bercak  yang  dihasilkan  menjadi  warna kuning  intensif  menunjukan  positif  mengandung flavonoid (Asmorowati & Lindawati, 2019).
Analisis Kuantitatif
1. Pembuatan larutan baku induk kuersetin 1000 ppm. Ditimbang sebanyak 100 mg baku standar kuersetin kemudian  dilarutkan  dengan  etanol  70%  sampai dengan 100 ml (Asmorowati & Lindawati, 2019).
2. Pembuatan larutan baku standar kuersetin 100 ppm. Larutan baku induk dipipet sebanyak 1 ml kemudian dicukupkan volumenya sampai 10 ml dengan etanol 70%  sehingga  diperoleh  konsentrasi  100  ppm (Asmorowati & Lindawati, 2019).
3. Pembuatan larutan blangko. Pipet  1  ml  AlCl 3 10  %  dan  8  ml  asam  asetat  5% tambahkan  etanol  70%  sampai  volumenya  10  ml (Asmorowati & Lindawati, 2019).
4. Penentuan panjang gelombang maksimum ( λ maks) kuersetin.
Larutan  baku  kerja  kuersetin  100  ppm  diambil sebanyak 1 ml ditambahkan dengan AlCl 3 10% dan 8 ml  asam  asetat  5%.  Lakukan  pembacaan  dengan spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 400-800  nm  (Rahmati  et  al.,  2020).  Hasil  panjang gelombang  maksimum  tersebut  digunakan  untuk mengukur serapan dari sampel ekstrak etanol 96%,
ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksan daun sirsak ( Annona  muricata L .)  (Asmorowati  &  Lindawati, 2019).
5. Pembuatan operating time
Larutan  baku  standar  kuersetin  100  ppm  diambil sebanyak 1 ml ditambahkan dengan 1 ml AlCl 3 10 % dan 8 ml asam asetat 5%, kemudian larutan tersebut diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  yang  dihasilkan  dari  penetapan  panjang gelombang  maksimum  dengan  interval  waktu  2 menit  hingga  diperoleh  absorbansi  yang  stabil. Diamati  kurva  hubungan  antara  absorbansi,  waktu, dan  tentukan operating  time (Asmorowati  & Lindawati, 2019).
6. Pembuatan kurva baku kuersetin.
Larutan  baku  induk  kuersetin  1000  ppm  dipipet sebanyak  0,2  ml;  0,3  ml;  0,4  ml;  0,5  ml;  0,6  ml kemudian  masing-masing  ditambahkan  etanol  70% sampai  volumenya  5  ml  sehingga  diperoleh konsentrasi 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, 100 ppm dan 120 ppm. Masing-masing konsentrasi dari seri baku kuersetin dipipet 1 ml kemudian ditambahkan 1 ml AlCl 3 10%  dan  8  ml  asam  asetat  5%,  didiamkan selama operating  time ,  absorbansi  ditentukan menggunakan  metode  spektrofotometri  UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh (Asmorowati & Lindawati, 2019).
7. Penentuan kadar flavonoid total ekstrak daun sirsak ( Annona muricat a L .).
Ditimbang  100  mg  masing-masing  ekstrak  etanol 96%, ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksan daun sirsak ( Annona muricata L .) dilarutkan dengan etanol 70%  sampai  volumenya  100  ml,  larutan  tersebut dipipet masing-masing 1 ml kemudian ditambahkan 1 ml  larutan  AlCl 3 10%  dan  8  ml  asam  asetat  5%, sampel didiamkan selama operating time . Absorbansi ditentukan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis  dengan  replikasi  3  kali  setiap  pelarut  pada panjang  gelombang  maksimum  yang  diperoleh (Asmorowati & Lindawati, 2019).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel yang digunakan pada penelitian ini yaitu tanaman sirsak  ( Annona  muricata L .)  pada  bagian  daun  yang  tua yang  dilihat  dari  warna  daun  yaitu  berwarna  hijau  tua dengan ukuran daun yang lebih besar yaitu pada panjang helaian daun sekitar 10-18 cm dan lebar sekitar 4-7 cm. Berdasarkan hasil pengolahan diperoleh simplisia kering daun sirsak dengan bobot 800 g. Simplisia kering daun sirsak  kemudian  dilakukan  penyerbukan  dengan menggunakan  blender,  serbuk  yang  telah  di  blender diayak  dengan  ukuran  partikel  40/80  mesh    agar menghasilkan serbuk yang halus dan seragam.

## Pembuatan Ekstrak
Daun  sirsak  dibuat  simplisia  yang  dilakukan  dengan tahapan yang sesuai sehingga diperoleh simplisia kering. Sebelum dilakukan ekstraksi, simplisia kering diserbukan terlebih dahulu menggunakan blender kemudian diayak menggunakan pengayakan dengan ukuran partikel 40/80 mesh  untuk  menghasilkan  serbuk  yang  halus  dan seragam. Ekstraksi serbuk simplisia daun sirsak ( Annona muricata  L .)  dilakukan  dengan  menggunakan  metode maserasi yang berlangsung selama 3x24 jam, Sebanyak 250 gram serbuk simplisia masing-masing ditambahkan pelarut  etanol  96%,  etil  asetat  dan  n-heksan  sebanyak 2,5 liter didiamkan selama proses maserasi, terlindung dari  cahaya,  diaduk  2  kali  sehari  dengan  waktu  yang konstan  dan  jumlah  yang  sama  pada  masing-masing bejana  yaitu  sebanyak  10  kali  hingga  diperoleh  filtrat. Filtrat  yang  dihasilkan  pada  masing-masing  pelarut dipekatkan  dengan  alat  rotary  evaporator  suhu  yang digunakan  50oC  agar  senyawa  yang  terkandung  pada ekstrak  tidak  rusak  dan  tidak  mengalami  penguraian, sehingga diperoleh ekstrak kental yang baik.
Tabel I. Hasil  Ekstraksi  Daun  Sirsak  ( Annona muricata L .) Simplisia Pelarut Ekstrak kental Randemen Ekstrak 250 gram Etanol 96% 17,67 gram 7,068 % 250 gram Etil Asetat 16,01 gram 6,404 % 250 gram N-heksan 14,60gram 5, 840 %

## Gambar I. Grafik Hubungan Pelarut dengan Randemen Ekstrak
Ekstrak kental yang diperoleh pada pelarut etanol 96%, etil  asetat  dan  n-heksan  masing-masing  adalah  17,67; 16,01;  14,60  gram  sehingga  diperoleh  perhitungan randemen ekstrak sebesar 7,068; 6,404; 5,840%. Hasil yang  diperoleh  ekstrak  kental  yang  paling  banyak didapatkan yaitu pada etanol 96%.
Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  dengan  reaksi warna
Identifikasi senyawa flavonoid pada daun sirsak ( Annona muricata L .) dilakukan uji dengan menggunakan pereaksi warna  Mg  dan  HCl  kemudian  dilakukan  identifikasi senyawa fenolik menggunakan pereaksi FeCl 3 hasil yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel II dan Tabel III.
Tabel II. Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid
N o Pereaksi Hasil Keterangan Ekstrak etanol 96% Ekstrak etil asetat Ekstrak n- heksan 1 Ekstrak + HCl Pekat + Mg (+) (+) (+) (+) terbentuk warna merah orange 2 Ekstrak + HCl Pekat (+) (+) (+) (+) terbentuk warna putih kekuningan (+) = positif mengandung senyawa (-) = tidak mengandung senyawa
7,068 6,404 5,840 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 7% 8% Etanol 96% Etil Asetat N-heksan Ra n d e m e n E kst ra k (% ) Pelarut
Jarak elusi 7 cm Keterangan : (a) : sebelum disemprot (b) : setelah disemprot AlCl3 Fase gerak: n-butanol : asam asetat : air 6,5 4,7 Keterangan : (a) : sebelum disemprot (b) : setelah disemprot AlCl3
Fase gerak: n-butanol : asam asetat : air

## Tabel III. Hasil Identifikasi Senyawa Fenolik
No  Pereaksi Hasil Keterangan Ekstrak etanol 96% Ekstrak etil asetat Ekstrak n- heksan 1 Ekstrak + FeCl 3 (+) (+) (+) (+) terbentuk warna hijau- biru kehitaman
(+) = positif mengandung snyawa (-) = tidak mengandung senyawa
Identifikasi  yang  pertama  menggunakan  pereaksi Wilstater yaitu penambahan  HCl pekat dan serbuk Mg pada larutan ekstrak daun sirsak. Hasil yang diperoleh menunjukan reaksi positif dengan terbentuknya warna merah-orange.  Penambahan  larutan  HCl  berfungsi untuk  mendeteksi  senyawa  yang  mengandung  inti benzopiranon,  sehingga  akan  menghasilkan  garam benzopirilium  yang  disebut  juga  garam  flavilium. Penambahan  Mg  dan  HCl  terjadi  reaksi  reduksi menghasilkan senyawa kompleks yang berwarna orange pada flavonol (Asmorowati & Lindawati, 2019).
Pada reaksi warna kedua menggunakan pereaksi Smith- Metcalf  yaitu  dengan  penambahan  HCl  pekat  pada larutan ekstrak daun sirsak kemudian dipanaskan. Hasil yang  diperoleh  menunjukan  reaksi  positif  dengan terbentuknya  warna  putih  kekuningan  setelah pemanasan yang serupa dengan pembanding kuersetin. Penambahan  larutan  HCl  pekat  berfungsi  untuk menghidrolisis dan memutus ikatan glikosida. Dilakukan pemanasan  berfungsi  untuk  mempercepat  reaksi hidrolisis yang terjadi, sehingga terjadi perubahan warna menjadi putih (Asmorowati & Lindawati, 2019).
Pada  reaksi  warna  ketiga  menggunakan  pereaksi  ferri klorida  untuk  mengidentifikasi  keberadaan  senyawa fenolik, dilakukannya identifikasi karena senyawa fenolik banyak terdapat pada berbagai tumbuhan yang memiliki aktivitas  sebagai  antioksidan.  FeCl 3 ditambahkan  pada larutan ekstrak daun sirsak, reaksi positif yang dihasilkan ditandai  dengan  terbentuknya  warna  hijau-biru kehitaman. Penambahan larutan FeCl 3 bertujuan untuk membentuk reaksi kompleks antara logam Fe dari FeCl 3
dengan gugus hidroksil yang ada pada fenol  (Putri et al., 2019).  Hasil  yang  diperoleh  yaitu  terbentuk  reaksi positif  yang  ditandai  dengan  perubahan  warna  larutan dari  hijau  terang  menjadi  hijau  hingga  biru  kehitaman (Rivai et al., 2019).

## Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan KLT
Reaksi positif flavonoid dilakukan iji lebih lanjut dengan Identifikasi  menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT)  untuk  memastikan  adanya  senyawa  flavonoid pada  sampel  sebelum  dilakukan  penetapan  kadar flavonoid. Fase gerak yang digunakan adalah campuran n-butanol : asam asetat : air dengan perbandingan (4:1:5) untuk  mengelusi  plat  yang  ditotolkan  dengan pembanding  kuersetin  dan  ekstrak  etanol  96%  dan campuran  n-heksan  :  etil  asetat  dengan  perbandingan (3:5)  untuk  mengelusi  plat  yang  ditotolkan  dengan ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksan.
Gambar I1. Hasil KLT Pada Pembanding Kuersetin
Gambar I1I. Hasil KLT Pada Etanol 96%
Hasil KLT ekstrak etanol 96% pada sinar tampak setelah disemprot AlCl 3 terbentuk warna kuning intensif yang serupa  dengan  pembanding  kuersetin  menunjukan positif flavonoid.
a b Jarak elusi 7 cm a b
Jarak elusi 7 cm Keterangan :
(a) : sebelum disemprot
(b) : setelah disemprot AlCl 3 Fase gerak: n-heksan : Etil Asetat 5,6 4,5 6,5 Keterangan : (a) : sebelum disemprot (b) : setelah disemprot AlCl 3
Fase gerak:
n-heksan : Etil Asetat

## Gambar IV. Hasil KLT Pada Etil Asetat
Hasil KLT ekstrak Etil Asetat pada sinar tampak setelah disemprot AlCl 3 terbentuk warna kuning intensif yang serupa  dengan  pembanding  kuersetin  menunjukan positif flavonoid.
Gambar V. Hasil KLT Pada N-heksan
Hasil KLT ekstrak n-heksan pada sinar tampak setelah disemprot AlCl 3 terbentuk warna kuning intensif yang serupa  dengan  pembanding  kuersetin  menunjukan positif flavonoid.
Hasil positif yang diperoleh kemudian dihitung nilai Rf- nya dengan menggunakan rumus:

## 𝑅𝑓 = Jarak yang ditempuh oleh komponen Jarak yang ditempuh oleh pelarut
Penggunaan  fase  gerak  yang  berbeda  bertujuan  untuk dapat  memberikan  pemisahan  sesuai  dengan  sifat kepolaran  pelarut  yang  digunakan.  Eluen  yang  baik adalah  eluen  yang  dapat  memisahkan  senyawa  dalam jumlah  yang  banyak  yang  ditandai  dengan  munculnya noda (Ferdinand & Rizki, 2021). Hasil KLT menunjukan munculnya  bercak  yang  dapat  dilihat  pada  penyinaran dengan sinar ultraviolet pada panjang gelombang 254 nm dan  366  nm.  Setelah  disemprot  reagen  AlCl 3 bercak yang  dihasilkan  menunjukan  warna  kuning  intensif
serupa  dengan  standar  kuersetin  yang  menunjukan positif mengandung flavonoid (Asmorowati & Lindawati, 2019).  Bercak  noda  flavonoid  dihitung  nilai  Rf  pada masing-masing  pelarut,  didapatkan  nilai  Rf    0,7  pada etanol 96%, Rf 0,8 dan Rf 0,6 pada etil asetat dan 0,9 pada n-heksan.

## Analisis Kuantitatif
Sampel  yang  telah  dilakukan  identifikasi  flavonoid  dan telah  diyakini  keberadaan  flavonoid  selanjutnya dilakukan  identifikasi  kuantitatif  untuk  melihat  kadar flavonoid  pada  masing-masing  sampel  dengan menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis,  metode  ini merupakan metode yang sederhana untuk mendapatkan kuantitas  zat  yang  sangat  kecil  dimana  angka  yang terbaca  langsung  dicatat  oleh  detector  dan  tercetak dalam bentuk angka digital ataupun grafik. Penggunaan metode  spektrofotometri  UV-Vis  pada  analisis flavonoid  yaitu  karena  flavonoid  memiliki  sistem aromatic yang terkonjugasi sehingga dapat menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum sinar ultraviolet dan spektrum sinar tampak (Aminah et al., 2017).
Pertama  dilakukan  pengukuran  panjang  gelombang maksimum kuersetin yaitu bertujuan untuk mengetahui panjang  gelombang  saat  mencapai  serapan  maksimum. Penggunaan  kuarsetin  dipilih  sebagai  larutan  standar karena  kuersetin  merupakan  flavonoid  golongan flavonol  yang  memiliki  gugus  keto  pada  (C-4)  dan mempunyai gugus hidroksil pada atom (C-3) atau (C-5) yang bertetangga dari flavon dan flavonol (Aminah et al., 2017).  Penambahan  AlCl 3 dalam  sampel  dapat membentuk kompleks antara aluminium klorida dengan kuersetin  sehingga  akan  terjadi  pergeseran  panjang gelombang  ke  arah  visibel  (tampak)  dan  menghasilkan larutan berwarna lebih kuning, fungsi penambahan asam asetat yaitu untuk mempertahankan panjang gelombang pada daerah visibel (Asmorowati & Lindawati, 2019). Penetapan  panjang  gelombang  maksimum  kuersetin dilakukan  dengan  cara  membaca  serapan  larutan  baku standar  kuersetin  100  ppm  pada  rentang  panjang
a b Jarak elusi 7 cm a b
gelombang  400-800  nm.  Hasil  panjang  gelombang maksimum  yang  diperoleh  yaitu  414  nm.  Langkah selanjutnya  yaitu  penentuan operating  time yang bertujuan  untuk  mengetahui  lama  waktu  yang diperlukan larutan untuk mencapai absorbansi konstan atau  waktu  ketika  sampel  bereaksi  sempurna  dan membentuk senyawa kompleks. Pengukuran dilakukan pada interval waktu 2 menit selama 60 menit. Hasil yang diperoleh pada penentuan operating time yaitu konstan pada menit ke 34.
Selanjutnya  membuat  kurva  baku  kuersetin  dengan masing-masing  konsentrasi  yaitu  40  ppm,  60  ppm,  80 ppm,  100  ppm  dan  120  ppm  yang  kemudian  diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum yang dihasilkan yaitu 414 nm.

## Tabel IV. Absorbansi Kurva Baku Kuersetin
Konsentrasi (ppm) Absorbansi Rata- rata R1 R2 R3 40 0,310 0,311 0,311 0,311 60 0,361 0,362 0,362 0,362 80 0,455 0,456 0,456 0,456 100 0,550 0,551 0,551 0,551 120 0,640 0,641 0,641 0,641
Hasil  yang  diperoleh  menunjukan  konsentrasi berbanding lurus dengan nilai absorbansi yaitu semakin besar konsentrasi kurva baku kuersetin maka semakin tinggi  juga  nilai  absorbansi  yang  dihasilkan.  Sehingga diperoleh  persamaan  regresi  linier  y=0,0042x+0,1246 dan nilai koefisien korelasi (r) yaitu 0,9905.
Gambar VI. Kurva Baku Kuersetin
Nilai  koefisien  korelasi  (r)  yang  diperoleh  yaitu mendekati angka 1 yang menunjukan bahwa persamaan regresi  tersebut  adalah  linier,  dapat  dikatakan  bahwa konsentrasi  dan  absorbansi  memiliki  korelasi  yang sangat kuat (Asmorowati & Lindawati, 2019).

## Tabel V. Absorbansi Sampel
Ekstrak Absorbansi Rata- rata R1 R2 R3 Etanol 96% 0,413 0,414 0,415 0,414 Etil asetat 0,532 0,533 0,534 0,533 N-heksan 0,433 0,434 0,435 0,434
Penentuan kadar flavonoid ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L .) dengan perbedaan jenis pelarut yaitu etanol 96%,  etil  asetat  dan  n-heksan  masing-masing  sampel yang akan diuji ditunggu selama operating time setelah itu dilakukan  pengukuran  absorbansi  pada  panjang gelombang  maksimum  yang  diperoleh  yaitu  414  nm, absorbansi  dilakukan  pengulangan  sebanyak  tiga  kali sehingga diperoleh absorbansi rata-rata pada etanol 96% yaitu 0,414; etil asetat yaitu 0,533; n-heksan yaitu 0,434. Absorbansi  yang  diperoleh  dilakukan  perhitungan dengan memasukan ke dalam persamaan regresi  linier yang  kemudian  digunakan  untuk  menghitung  kadar flavonoid total.
Tabel VI. Penentuan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Sirsak ( Annona muricata L .)
Ekstrak Konsentras i ekivalen (mg/ml) Kadar Flavonoid Total (mgQE/g) Kadar Flavonoid Total (rata- rata)(mgQ E/g) SD 0,0686667 68,6667 Etanol 96% 0,0689048 68,9048 68,9048 ±0,2381 0,0691429 69,1429 0,097 97 Etil asetat 0,0972381 97,2381 97,2381 ±0,2381 0,0974762 97,4762 0,0734286 73,4286 N- heksan 0,0736667 73,6667 73,6667 ±0,2381 0,0739048 73,9048
y = 0,0042x + 0,1246 R² = 0.9952 0 0,2 0,4 0,6 0,8 0 50 100 150 A b so rb an si Konsentrasi Kurva Baku Kuersetin

## Gambar VII. Kurva Baku Kuersetin
Hasil  kadar  flavonoid  total  yang  diperoleh  yaitu  pada ekstrak  etanol  96%  yaitu  68,9048  mgQE/g,  etil  asetat 97,2381 mgQE/g dan n-heksan 73,6667 mgQE/g. Hasil yang  diperoleh  pada  penetapan  kadar  flavonoid menggunakan perbandingan jenis pelarut yang berbeda menunjukan  kadar  flavonoid  tertinggi  yaitu  etil  asetat sebesar  97,2381  mgQE/g  kemudian  n-heksan  sebesar 73,6667 mgQE/g dan kadar flavonoid paling rendah yaitu pada etanol 96% sebesar 68,9048 mgQE/g.
Pada  pelarut  etil  asetat  yang  merupakan  pelarut  semi polar  yang  dapat  menarik  senyawa  flavonoid  yang bersifat  polar  maupun  non  polar.  Pada  tumbuhan terdapat  beberapa  flavonoid  bebas  seperti  flavon, flavonon dan flavonol yang mudah larut dalam pelarut semi polar (Rahmati et al., 2020). Kadar flavonoid pada ekstrak  n-heksan  lebih  kecil  dari  etanol,  dimana  n- heksan merupakan senyawa yang bersifat non polar hal ini menunjukan bahwa jumlah senyawa yang bersifat non polar yang dapat larut  dalam n-heksan lebih kecil dari senyawa  yang  dapat  larut  oleh  pelarut  semi  polar. Terdapat  beberapa  jenis  flavonoid  yang  dapat  larut dalam  pelarut  non  polar  seperti  aglikon  polimetoksi atau isoflavon yang gugus gula atau bentuk glikosidanya sudah terlepas sehingga hanya dapat larut dalam pelarut non  polar  (Rahmati  et  al.,  2020).  Ekstrak  etanol  96% menunjukan  kadar  flavonoid  yang  paling  kecil,  etanol merupakan  pelarut  yang  bersifat  polar,  hal  ini menunjukan  pada  penelitian  jumlah  senyawa  yang
bersifat polar yang dapat larut dalam etanol 96% lebih kecil daripada jumlah senyawa yang dapat terlarut dalam etil asetat dan n-heksan.
Tabel VII. Hasil Uji Normalitas
Tests of Normality jenis pelarut Kolmogorov- Smirnov a Shapiro-Wilk Statistic Df Sig . Statistic  df Sig. kadar (%) etanol 96% .175 3 . 1.000 3  1.000 etil asetat .175 3 . 1.000 3  1.000 n-heksan .175 3 . 1.000 3  1.000
Analisis  Data  dilakukan  pengujian  statistika  untuk mengetahui  perbedaan  pada  tiap  kelompok.  Tahap pertama  dilakukan  uji  normalitas  untuk  melihat  data telah terdistribusi normal atau tidak, nilai p > α (0,05) maka data terdistribusi normal. Hasil menunjukan nilai p=1,000 (>0,05) yang berarti data terdistribusi normal sehingga penelitian ini dilanjutkan ke pengujian ANOVA.
Tabel VIII. Hasil Uji One Way Anova
ANOVA kadar (%) Sum of Squares  df  Mean Square F Sig. Between Groups 1381.066  2 690.533  12181.000  <,001 Within Groups .340  6 .057 Total 1381.406  8
Nilai  p  <  0,05  maka  ada  perbedaan  signifikan  pada kelompok perlakuan tersebut. Pada penelitian ini hasil menunjukan  nilai  signifikan  p=<0,001(<0,05)  artinya antar kelompok perlakuan ini ada perbedaan signifikan yang  membuktikan  adanya  pengaruh  pelarut  terhadap kadar flavonoid total.

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bawa  ekstrak  daun sirsak ( Annona muricata L .) menggunakan pelarut etanol 96%,  etil  asetat  dan  n-heksan  pada  analisisis  kualitatif menggunakan  uji  reaksi  warna  dan  KLT  menunjukan
68,90476 19 97,23809 524 73,66666 667 0 20 40 60 80 100 120 Etanol 96% Etil asetat N-heksan K ad ar Fl av on oi d T ot al
(m gQ E/ g) Ekstrak
positif  mengandung  flavonoid.  Pada  penetapan  kadar flavonoid kadar terbesar terdapat pada etil asetat diikuti n-heksan  dan  etanol  96%  yang  masing-masing  sebesar 97,2381  mgQE/g,  73,6667  mgQE/g  dan  68,9048 mgQE/g.  Secara  Analisis  statistik  ANOVA  terdapat perbedaan signifikan antar kelompok perlakuan dengan jenis  pelarut  yang  berbeda  terhadap  kadar  flavonoid total.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada  apt.  Kunti Nastiti, S.Far., M.Sc. dan apt. Noval, M.Farm. yang telah memberikan arahan dan bimbingan dalam penyelesaian penelitian ini serta semua pihak yang membantu dalam penyelesaian pelaksanaan kegiatan ini.

## REFERENSI
Aditya, Nuari, D. A., & Hasyul, S.  F. P.  2020. Review: Aktivitas  Antihiperurisemia  Dari Famili Annonaceae . Jurnal Pharmascience, 7(2), 12.
Aminah, Tomayahu, N., & Abidin, Z. 2017. Penetapan Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol  Kulit Buah Alpukat ( Persea americana Mill .) Dengan Metode  Spektrofotometri  UV-VIS.  Jurnal Fitofarmaka Indonesia, 4(2), 226–230.
Arifianti,  L.,  Oktarina,  R.  D.,  Kusumawati,  I., Farmakognosi, D., Farmasi, F., & Airlangga, U. 2014.  Pengaruh  Jenis  Pelarut  Pengektraksi Terhadap  Kadar  Sinensetin  Dalam  Ekstrak Daun Orthosiphon stamineus Benth. Journal Planta  Husada  Vol.2,No.1  April  2014.  E- Journal Planta Husada, 2(1), 3–6.
Asmorowati,  H.,  &  Lindawati,  N.  Y.  2019. Determination of total flavonoid content in avocado  ( Persea  americana  Mill .)  using spectrofotometry  method  Penetapan  kadar flavonoid total alpukat ( Persea americana Mill .)  dengan  metode  spektrofotometri.  15(2), 51–63.
Errayes,  A.  O.,  Abdussalam-mohammed,  W.,  & Darwish,  M.  omar.  2020. Review  of Phytochemical  and  Medical  Applications  of Annona  Muricata  Fruits . Journal  of  Chemical Reviews , 2(1), 70–79.
Ferdinand, A., & Rizki, F. S. 2021. Isolasi Dan Identifikasi Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Etanol  Pandan Hutan Jenis Baru Freycinetia Sessiliflora Rizki. Jurnal Insan Farmasi Indonesia, 4(1), 1–6.
Hasanuddin,  &  Mulyadi.  2014.  Botani  Tumbuhan Rendah.  Botani  Tumbuhan  Rendah,  Aceh: Syiah Kuala University Press.
Mukhriani,  Nonci,  F.,  &  Munawarah,  S.  2015.  Analisis Kadar  Flavonoid  Total  Pada  Ekstrak  Daun Sirsak  ( Annona  muricata  L .)  Dengan  Metode Spektrometri  UV-Vis.  Jf  Fkik  Uinam,  3(2), 37–42.
Putri, H. D., Sumpono, S., & Nurhamidah, N. 2019. Uji Aktivitas  Asap  Cair  Cangkang  Buah  Karet ( Hevea  brassiliensis )  Dan  Aplikasinya  Dalam Penghambatan  Ketengikan  Daging  Sapi. Alotrop, 2(2), 97–105.
Rahman,  F.  A.,  Haniastuti,  T.,  &  Utami,  T.  W.  2017. Skrining  fitokimia  dan  aktivitas  antibakteri ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata
L .) pada Streptococcus mutans ATCC 35668. Majalah Kedokteran Gigi Indonesia, 3(1), 1.
Rahmati,  R.  A.,  Lestari,  T.,  &  Ruswanto.  2020.
Penetapan  Kadar  Total  Flavonoid  Ekstrak Etanol  Dan  Fraksi  Daun  Saliara  ( Lantana camara L .) Dengan Metode Spektrofotometri. Rao, M. J., Xu, Y., Tang, X., Huang, Y., Liu, J., Deng, X., &  Xu,  Q.  2020. CSCYT75B1,  a  citrus CYTOCHROME  P450  gene,  is  involved  in accumulation  of  antioxidant  flavonoids  and induces  drought  tolerance  in  transgenic arabidopsis. Antioxidants , 9(2), 1–21.
Rivai,  H.,  Afriati,  A.,  &  Zulharmita.  2020.  Analisis Kualitatif dan Kuantitatif dari Ekstrak Heksan, Aseton,  Etanol,  dan  Air  Dari  Akar  Anting- Anting ( Achalypha indica L .). March , 1–14.
Rochim,  N.  A.,  Hakim,  R.,  &  Damayanti,  D.  S.  2021. Ekstrak Etanol Daun Sirsak ( Annona muricata L .)  Sebagai  Pengaktif  LDL  Receptor  dan Penghambat  HMG-CoA  Reductase  secara insilico. Jurnal Kedokteran Komunitas, 1–11.
Vifta, R. L., & Advistasari, Y. D. 2018. Skrining Fitokimia,
Karakterisasi, dan Penentuan Kadar Flavonoid  Total  Ekstrak  dan  Fraksi-Fraksi Buah  Parijoto  ( Medinilla  speciosa  B .). Prosiding Seminar Nasional Unimus, 1, 8–14.
Wahyuni,  R.,  Guswandi,  &  Rivai,  H.  2014.  Pengaruh Cara  Pengeringan  Dengan  Oven,  Kering

## Angin  dan  Cahaya  Matahari  Langsung
Terhadap  Mutu  Simplisia Herba  Sambiloto .
Fakultas  Farmasi  Universitas  Andalas (UNAND)  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi (STIFARM) Padang, 6(2), 126–133.