## 1. Pendahuluan
Sinar  ultraviolet,  asap  pabrik,  asap kendaraan,  asap  rokok  maupun  efek  dari pemanasan  global  merupakan  faktor  yang mempengaruhi  proses  metabolisme  sel normal manusia maupun respon imun yang menyebabkan  terbentuknya  radikal  bebas dalam  tubuh  manusia  (Prakash,  2001). Radikal bebas akan bereaksi dengan molekul disekitarnya  untuk  memperoleh  pasangan elektron  sehingga  tercapai  kestabilan  atom atau  molekul.  Reaksi  ini  akan  berlangsung terus  menerus  dalam  tubuh  dan  bila  tidak dihentikan  akan  menimbulkan  berbagai penyakit  seperti  kanker,  jantung,  katarak, penuaan  dini,  serta  penyakit  degeneratif lainnya. Oleh karena itu, tubuh memerlukan suatu  substansi  penting,  yaitu  antioksidan yang  mampu  menangkap  radikal  bebas tersebut  sehingga  tidak  dapat  menginduksi suatu penyakit (Kikuzaki dkk., 2002).
Antioksidan  terdapat  di  dalam  tubuh, selain  itu  juga  dapat  diperoleh  dari  luar tubuh,  yaitu  antioksidan  sintetis  dan antioksidan alami yang banyak berasal dari tumbuhan.  Usaha  untuk  mencari  senyawa antioksidan  baru  yang  aman  dan  efektif berkembang selama beberapa tahun terakhir. Banyak penelitian yang menunjukkan bahwa senyawa antioksidan dalam tumbuhan dapat dihubungkan  dengan  pencegahan  stres oksidatif dan penyakit karena penuaan (Zou, Lu,  dan  Wei,  2004).  Buah  anggur  dengan berbagai  jenis  yang  beredar  di  pasaran diketahui memiliki aktivitas antioksidan dan banyak  penelitian  tentang  khasiat  buah anggur  yang  telah  dilakukan.  Masyarakat sering  mengkonsumsinya  karena  rasa  yang manis  pada  buah  tersebut.  Di  tanah  Bali terdapat  buah  anggur  lokal  dengan  rasa manis  selain  itu  terdapat  rasa  yang  sangat masam, tetapi peneliti menduga kandungan
JURNAL FARMASI SAINS DAN KOMUNITAS, November 2013, hlm. 109-120
ISSN : 1693-5683

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN RADIKAL 1,1-DIFENIL-2- PIKRILHIDRAZIL DAN PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL
FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL BUAH ANGGUR BALI ( Vitis vinifera L.)

## MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO

## Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
Abstract: This  research  was  conducted  to  determine  the  antioxidant  activity  of  ethyl  acetat fraction of extract of Balinesse grape (Vitis vinifera L.) using free radical and determine the total phenolic content. Balinesse grape was extracted with ethanol and then fractionated using ethyl acetate. Free radical scavenging activity was tested by measuring the DPPH radical scavenging activity. Total phenolic content was determined using the Folin-Ciocalteau method measured the concentration of phenolic content in gallic acid total equivalents using unit's mg/g. The mean IC 50 value for DPPH radical scavenging activity of the ethyl acetat fraction of ethanolic extract of ​​ Balinesse grape was found to be 36.55 ± 0.09 µg/mL. The phenolic content was ranging from 3.23 ±  0.02  mg  gallic  acid  equivalents  per  gram  of  ethyl  acetat  fraction  of  ethanolic  extract  of Balinesse grape.
Keywords: antioxidants, Balinesse grape (Vitis vinifera L.), fraction of ethyl acetat, DPPH, total phenolic content.
antioksidan yang terdapat pada anggur Bali yang  tidak  kalah  berkhasiat  dibanding anggur-anggur  import  maupun  buah-buah l a i n n y a . G r a p e a t a u   b u a h   a n g g u r mengandung  serat  dan  resveratrol  yang merupakan  salah  satu  sumber  antioksidan, yaitu  flavonoid.  Flavonoid  terdiri  dari kuersetin, prosiadin, katekin, dan antosianin. Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa resveratrol sangat bermanfaat bagi kesehatan karena  bisa  mencegah  resiko  kanker  dan membuat  awet  muda  (Anonim  2010).  Pada peneltian  ini  digunakan  semua  bagian  dari buah  anggur  karena  pola  konsumsi masyarakat  luas  yang  mengkonsumsi  buah anggur  secara  langsung  maupun  dalam sediaan lain, seperti wine , kismis, selai, dan lain-lain.
Salah satu uji untuk menentukan aktivitas a n t i o k s i d a n   a d a l a h   m e t o d e   D P P H (1,1Difenil-2-pikrilhidrazil).  Pada  metode ini  penangkap  radikal  bebas  menyebabkan elektron  menjadi  berpasangan  yang kemudian  menyebabkan  penghilangan warna. Nilai aktivitas antioksidan diketahui melalui  nilai IC yang  merupakan 5 0 konsentrasi  yang  menyebabkan  penurunan 50% dari konsentrasi DPPH awal (Sunarni, 2005).  Salah  satu  keuntungan  uji  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  adalah dapat dikerjakan dengan cepat dan sederhana dibanding  metode  lain.  Oleh  karena  itu, penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  buah  anggur  Bali dengan  metode  DPPH  yang  didapat  dari fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur Bali.  Digunakan  etanol  untuk  ekstraksi
karena  merupakan  pelarut  universal  dan digunakan pelarut etil asetat untuk fraksinasi karena  akan  diambil  senyawa  golongan aglikon  yang  bersifat  non-polar.  Dalam penelitian  ini  juga  dilakukan  penetapan kandungan  fenolik  total  dengan  metode Folin-Ciocalteau.  Metode  ini  umum digunakan  sebagai  standar  penentuan kandungan  fenolik  total  setara  massa ekivalen  asam  galat  pada  uji  aktivitas antioksidan  sumber  tumbuhan  (Aqil et  al ., 2006).
Permasalahan  yang  dapat  dirumuskan berdasarkan  latar  belakang  tersebut  adalah berapakah  nilai  aktivitas  antioksidan  fraksi etil  asetat  ekstrak  etanol  buah  anggur  Bali dengan  menggunakan  radikal  bebas  DPPH yang dinyatakan dengan IC dan berapakah 50 kandungan  fenolik  total  fraksi  etil  asetat ekstrak  etanol  buah  anggur  Bali  yang dinyatakan  dengan  massa  ekivalen  asam galat ?

## 2. Metode Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah:  buah  anggur  Bali  ( Vitis  vinifera L. ) yang berasal dari daerah Buleleng Bali, akuades  (Laboratorium  Kimia  Analisis Instrumental  Fakultas  Farmasi  Universitas Sanata  Dharma);  bahan  kualitas p.a. E. Merck,  yaitu:  metanol,  bahan  kualitas p.a. Sigma  Chem.  Co.,  USA,  yaitu:  DPPH, reagen  Folin-Ciocalteu,  asam  galat,  dan kuersetin  kualitas  Sigma  Chem.  Co.,  USA; bahan  kualitas  teknis  Brataco  Chemica, yaitu:  etil  asetat;  bahan  kualitas  teknis  CV. General  Labora,  yaitu:  metanol;  dan
MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO 110
aluminium foil .
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah: neraca analitik (Scaltec SBC 22, BP 160P), vacuum rotary evaporator (Junke & Kunkel), waterbath (labo-tech,  Heraeus), vortex (Janke  &  Kunkel),  spektrofotometer UV-Vis  (Perkin  Elmer  Lamda  20),  blender, corong Buchner , oven ,  mikropipet  10- 1000 μ L;  1-10  mL  (Acura  825,  Socorex), tabung  reaksi  bertutup,  dan  alat-alat  gelas yang  lazim  digunakan  di  laboratorium analisis (Pyrex-Germany dan Iwaki).

## 2.1. Determinasi tanaman
Determinasi  buah  anggur  Bali  ( Vitis vinifera L. ) dilakukan  di  Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia,  Fakultas  Farmasi Universitas Sanata Dharma menurut pustaka Backer & Bahhuizen van den Brink (1965).

## 2.2. Pengumpulan bahan
Buah  anggur  diperoleh  dari  daerah Kecamatan  Buleleng  Bali,  dikumpulkan pada  musim  kemarau  bulan Agustus  2012. Buah yang diambil adalah buah yang sudah matang  dan  diambil  saat  pagi  hari.  Buah anggur  yang  akan  diteliti  di  laboratorium farmasi USD Yogyakarta di simpan didalam lemari  pendingin,  lalu  pada  hari  ketiga dilakukan preparasi.

## 2.3. Preparasi sampel
Buah  anggur  Bali  dipilih  yang  matang, seragam  warna  hitam  keunguan  kemudian dicuci  dengan  akuades.  Buah  lalu dibersihkan  dan  dipisahkan  dari  ranting- rantingnya,  kemudian  dipotong-potong,
ditiriskan,  ditimbang  sebanyak 150  g. Selanjutnya  buah  dihaluskan  dengan menggunakan blender .  Setelah  dihaluskan, simplisia  tersebut  dimasukan  ke  dalam erlenmeyer 500 ml dan ditambahkan larutan 300  ml  etanol  96%  sampai  seluruh  sampel terendam. Pelarut dilebihkan setinggi kurang lebih  2  cm  di  atas  permukaan  simplisia, ditutup dan dibiarkan selama 3  kali 24  jam dan dilakukan proses maserasi.
Maserat  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring.  Filtrat  diperoleh  melalui penyaringan  dengan  corong Buchner , kemudian ampas dimaserasi kembali dengan etanol selama 3 kali 24 jam, sehingga filtrat hampir  tidak  berwarna.  Semua  filtrat d i s a t u k a n   d a n   d i p e k a t k a n   d e n g a n menggunakan vacuum  rotary  evaporator sampai  tidak  ada  lagi  cairan  yang  menetes sehingga  diperoleh  ekstrak  etanol  buah anggur.  Ekstrak  kental  buah  anggur ditambahkan  100  ml  air  hangat  dan diekstraksi cair-cair menggunakan etil asetat dengan perbandingan larutan fraksi air - etil asetat (1:3 v/v) sehingga didapatkan fraksi air dan  etil  asetat.  Setelah  dipisahkan,  pelarut dari fraksi etil asetat diuapkan menggunakan vacuum  rotary  evaporator .  Hasil  fraksi tersebut  kemudian  ditutup  dengan  plastik serta aluminium foil lalu disimpan di dalam desikator.  Hasil  fraksi  yang  didapatkan digunakan untuk dianalisis lebih lanjut.
2.  4.  Pembuatan  larutan  pembanding  dan larutan uji
2.4.1.  Pembuatan  larutan  DPPH. 15,8  mg DPPH (BM: 394,33) dilarutkan ke dalam 100
MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO
mL  metanol p.a sehingga  diperoleh  larutan DPPH dengan konsentrasi 0,4 mM. Larutan tersebut ditutup dengan alumunium foil dan harus selalu dibuat baru.
2.4.2.  Pembuatan  larutan  stok  kuersetin. Sebanyak  2,5  mg  kuersetin  dilarutkan dengan metanol p.a sampai 10,0 mL.
2.4.3.  Pembuatan  larutan  pembanding. Diambil sebanyak 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 mL l a r u t a n   s t o k   k u e r s e t i n ,   k e m u d i a n ditambahkan  metanol p.a sampai  10,0  mL, sehingga  diperoleh  konsentrasi  larutan standar kuersetin sebesar 5; 7,5; 10; 12,5; dan 15 μ g/mL.

## 2.4.4. Pembuatan larutan uji.
Larutan  uji  untuk  aktivitas  antioksidan dibuat  dari  12,5  mg  hasil  fraksi  etil  asetat ditimbang,  lalu  di  tambahkan metanol p.a sampai 25,0 mL. Diambil sebanyak 1; 2; 3; 4; 5   m L  l a r u t a n   t e r s e b u t ,   k e m u d i a n ditambahkan  metanol p.a sampai  10,0  mL, sehingga  diperoleh  konsentrasi  larutan  uji sebesar 10; 20; 30; 40; 50 μ g/mL.
Lautan  uji  untuk  penentuan  kandungan fenolik total dibuat dari 3 mg hasil fraksi etil asetat  ditimbang,  lalu  ditambahkan  10  mL metanol p.a dan  diperoleh  konsentrasi larutan uji sebesar 300,0 µg/mL.
2.4.5. Pembuatan larutan asam galat. Dibuat larutan  asam  galat  dengan  konsetrasi  500 µg/mL dalam akuades : methanol p.a (1:1).
Diambil sebanyak 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; dan 3,0 mL larutan tersebut, kemudian ditambahkan akuades : metanol p.a (1:1) sampai 10,0 mL, sehingga diperoleh konsentrasi larutan baku asam galat sebesar 50; 75; 100; 125; dan 150 µg/mL.

## 2.5. Uji aktivitas antioksidan
2.5.1.  Pengukuran  absorbansi  larutan DPPH  (kontrol). Pada  labu  ukur  10  mL dimasukan  sebanyak  2  mL  larutan  DPPH, lalu  ditambahkan  larutan  tersebut  dengan metanol p.a hingga  tanda  batas.  Larutan tersebut  kemudian  dibaca  absorbansinya pada  saat OT dan  panjang  gelombang maksimum. Pengerjaan dilakukan sebanyak 3 kali. Larutan ini digunakan sebagai kontrol untuk menguji larutan pembanding dan uji. 2.5.2.  Pengukuran  absorbansi  larutan pembanding dan uji . Sebanyak 1 mL larutan DPPH  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi bertutup  kemudian  ditambah  dengan  1  mL larutan  pembanding  dan  uji  pada  berbagai seri  konsentrasi  yang  telah  dibuat, selanjutnya  ditambah  dengan  metanol p.a hingga  tanda  batas.  Larutan  tersebut kemudian  di vortex selama  30  detik  dan diamkan  selama OT .  Larutan  dibaca absorbansinya  dengan  spektrofotometer visibel pada panjang gelombang maksimum hasil optimasi. Pengujian dilakukan dengan 3 kali replikasi.
2.5.3. Validasi metode uji aktivitas antioksidan . Hasil divalidasi presisi (% CV ) spesifisitas (spektra kontrol), dan linearitas (nilai r).

## 2.6. Penetapan kandungan fenolik total
Pembuatan  kurva  baku  asam  galat dilakukan  dengan  menambahkan  sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 50; 75; 100; 125; dan 150 μ g/mL dengan 5 mL reagen Folin- Ciocalteu yang telah diencerkan dengan air
% CV= Standar Deviasi (SD) konsentrasi terukur rata-rata konsentrasi terukur x 100%
MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO 112
(1:1  v/v).  Larutan  selanjutnya  ditambah dengan 4,0 mL natrium karbonat 1M. Setelah OT, absorbansinya dibaca pada λ maksimum terhadap  blanko  yang  terdiri  atas  akuades  : metanol p.a (1:1),  reagen  Folin-Ciocalteu dan  larutan  natrium  karbonat  1  M. Pengerjaan  dilakukan  tiga  kali.  Hasil divalidasi  presisi  (% CV ),  spesifisitas (spektra kontrol), dan linearitas (nilai r).
Pengujian kandungan fenolik total larutan uji  dilakukan  dengan  mengambil  0,5  mL larutan  uji  300 μ g/mL,  lalu  masing-masing dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilanjutkan  sebagaimana  perlakuan  pada pembuatan  kurva  baku  asam  galat. Kandungan fenolik total dinyatakan sebagai gram ekivalen asam galat (mg ekivalen asam galat per g fraksi etil asetat). Lakukan 3 kali replikasi.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Hasil Determinasi Tanaman
Determinasi  merupakan  syarat  pertama dan  langkah  awal  yang  dilakukan  dalam suatu  penelitian  dengan  menggunakan tanaman. Determinasi tanaman ini bertujuan untuk  mengetahui  dan  memastikan kebenaran  identitas  tanaman  yang  akan digunakan  dalam  penelitian  serta  untuk menghindari  terjadinya  kesalahan  dalam pengambilan  sampel  untuk  analisis fitokimia.  Berdasarkan  hasil  determinasi tanaman  anggur  yang  dilakukan  di Laboratorium  Farmakognosi-Fitokimia, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
telah  dibuktikan  bahwa  tanaman  yang digunakan  untuk  penelitian  adalah Vitis vinifera L. Menurut balai penelitian tanaman jeruk  dan  buah  subtropika  dan  SK  Menteri Pertanian 361/Kpts/LB.240/6/2004 tanaman anggur  yang  digunakan  ini  dikenal  dengan nama “anggur Bali” (Gambar 1).
Gambar 1. Buah Anggur Bali

## 3.2. Hasil Pengumpulan Bahan
Buah  anggur  diperoleh  dari  daerah Buleleng,  Bali  pada  bulan  Agustus  2012. Pengambilan bahan berasal dari satu tempat, hal ini untuk menghindari variasi kandungan senyawa  aktif  tanaman.  Buah  anggur  yang digunakan  adalah  buah  yang  matang berwarna  ungu  kehitaman  bergerombol dalam  satu  tangkai.  Buah  yang  diperoleh memiliki  diameter  antara  1,5-2  cm.  Buah anggur dipetik pada pagi hari agar senyawa fenolik  yang  terdapat  pada  tanaman  belum termetabolisme  menjadi  bentuk  metabolit sekunder lain.

## 3.3. Hasil Preparasi Sampel
Preparasi  sampel  ini  dilakukan  untuk mendapatkan fraksi etil asetat ekstrak etanol buah  anggur  yang  diduga  dalam  fraksi tersebut  mengandung  senyawa  antioksidan.
% CV= Standar Deviasi (SD) konsentrasi terukur rata-rata konsentrasi terukur x 100% MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas 113
Sampel  yang  digunakan  merupakan  buah anggur  segar  bertujuan  untuk  menjaga stabilitas  senyawa  fenolik  pada  tanaman. M e n u r u t   H a n d a y a n i   ( 2 0 11 )   p r o s e s pengeringan  dapat  memicu  terjadinya peristiwa browning dan blackening . Peristiwa  tersebut  terjadi  karena  reaksi oksidasi  akibat  adanya  pemanasan  yang dikatalis  oleh  enzim  fenol  oksidase  atau polifenol  oksidase  sehingga  menyebabkan senyawa fenolik berubah menjadi quinon dan kemudian  dipolimerasi  menjadi  pigmen melaniadin.  Senyawa  fenolik  dalam  bentuk polimer  tersebut  tidak  memiliki  aktivitas antioksidan.
Seluruh  bagian  dari  buah  anggur d i h a l u s k a n   t e r l e b i h   d a h u l u   u n t u k memperkecil ukuran pemukaan agar penyari dapat  kontak  lebih  luas  dengan  simplisia. Lalu dilakukan proses maserasi 150 g buah anggur  dengan  etanol  96%  maserasi  ini dilakukan  dengan  tiga  replikasi.  Dipilih metode  ekstraksi  dengan  maserasi  karena ekstraksi  ini  tidak  melibatkan  pemanasan sehingga  perubahan-perubahan  senyawa dapat  dihindari.  Selain  itu,  proses  maserasi sangat  menguntungkan  untuk  isolasi senyawa  bahan  alam  karena  selain  dengan perendaman  ekstrak  tumbuhan  digunakan juga shaker sebagai  alat  untuk  membantu penggojogan  yang  dapat  meningkatkan kontak antara cairan penyari yang digunakan dengan sampel, sehingga terjadi pemecahan dinding  sel  dan  membran  sel  akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel yang mengakibatkan metabolit sekunder yang  ada  di  dalam  sitoplasma  akan  terlarut
dalam pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna.
Maserasi  dilakukan  selama  tiga  kali  24 jam  dalam  tabung  erlenmeyer  500  mL. Penyaringan  hasil  maserasi  dilakukan dengan bantuan pompa vakum karena jumlah bahan  banyak,  sehingga  membutuhkan waktu yang lama jika disaring secara biasa. Remaserasi  dilakukan  bertujuan  untuk memaksimalkan  proses  penyarian  agar diperoleh  lebih  banyak  senyawa  fenolik. Filtrat yang diperoleh dari hasil penyaringan tersebut  diuapkan  pelarutnya  menggunakan vacuum rotary evaporator ( rotavapor ) pada suhu 65°C. Hasil penguapan ini selanjutnya disebut  ekstrak  etanol  buah  anggur.  Hasil ektsrak  etanol  buah  anggur  yang  diperoleh dari proses maserasi adalah sebesar 45,10 g sehingga diperoleh rendemen ekstrak etanol sebesar 10,022%.
Etanol  merupakan  salah  satu  pelarut universal  yang  dapat  menyari  banyak senyawa  kimia  seperti  klorofil,  minyak, vitamin dan mineral. Oleh sebab itu, dalam penelitian  ini  dilakukan  fraksinasi  yang bertujuan  untuk  memisahkan  senyawa- senyawa  didalam  ekstrak  sehingga  yang didapat adalah senyawa-senyawa yang dituju yaitu  senyawa  fenolik.  Bentuk  glikosida senyawa  fenolik  bersifat  polar,  sedangkan bentuk  aglikonnya  bersifat  cenderung  non polar, sehingga tidak menutup kemungkinan adanya  senyawa  tersebut  larut  dalam  air maupun  etil  asetat  (Bruneton,  1999). Fraksinasi  dilakukan  secara  berulang sebanyak  tiga  kali  karena  menurut  Gandjar dan  Rohman  (2007)  ekstraksi  berulang
MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO 114
dengan volume yang sama akan lebih efektif dibanding  melakukan  ekstraksi  tunggal dengan volume yang besar. Fraksi kemudian diuapkan  menggunakan vacuum  rotary evaporator untuk meminimalkan pemaparan pemanasan supaya stabilitas senyawa fenolik tetap  terjaga.  Bobot  fraksi  etil  asetat  yang didapat sebesar 0,7299 g dan rendemen fraksi etil  asetat  yang  didapat  adalah  0,162
Gambar 2. Pengujian menggunakan DPPH.
Keterangan:A = kuersetin, B = blanko DPPH, C = larutan uji + DPPH
Pengujian juga dilakukan secara kualitatif kandungan senyawa fenolik dalam fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur. Prinsip uji ini  adalah  reaksi  oksidasi  reduksi  dari  ion fenolik  senyawa  uji  dengan  pereaksi  fenol Folin-Ciocalteu.  Dengan  adanya  natrium karbonat yang bersifat basa akan mengubah senyawa  fenolik  dari  senyawa  uji  menjadi ion  fenolik.  Ion  fenolik  dapat  mereduksi reagen  fenol  Folin-Ciocalteu  sehingga menyebabkan  terbentuknya  senyawa berwarna biru (Abdul-Fadl,1949).
Pengujian  menunjukan  hasil  positif dengan terbentuknya warna biru pada larutan uji (Gambar 3). Hal ini menunjukkan bahwa
fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur mengandung senyawa fenolik.
Penentuan  panjang  gelombang  serapan maksimum ini dilakukan untuk menentukan panjang  gelombang  dimana  senyawa  yang ingin  diukur  memberikan  absorbansi  yang paling  optimum.  Hasil  scanning  tiga konsentrasi  diperoleh λ maksimum  DPPH, yaitu  515,5  nm.  Lalu  untuk  pengukuran kandungan  fenolik  total,  didapatkan  hasil panjang  gelombang  maksimum  rata-rata adalah  750  nm  hasil  dari scanning tiga konsentrasi  asam  galat  yang  sudah direaksikan  dengan  pereaksi  Folin- Ciocalteu.
Pengukuran operating  time (OT) bertujuan  untuk  mengetahui  waktu  yang tepat  untuk  pengukuran  suatu  senyawa, dimana  reaksi  terjadi  secara  optimal.  Pada rentang  waktu  tersebut  senyawa  berada dalam  keadaan  reaksi  sempurna.  Dari penentuan OT pada larutan pembanding dan larutan  uji    pada  tiga  tingkat  konsentrasi,
Gambar 3. Pengujian senyawa fenolik menggunakan reaksi fenol Folin-Ciocalteu. Keterangan: A = blanko reagen fenol Folin- Ciocalteu, B = larutan uji + reagen fenol Folin- Ciocalteu, C = asam galat + reagen fenol Folin-
Ciocalteu MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas 115
absorbansi  stabil  pada  menit  ke-30  hingga menit  ke-60.  Penentuan  OT    asam  galat menunjukan dari menit ke-10 sampai ke-30 absorbansi senyawa molybdenum blue yang merupakan senyawa hasil reaksi asam galat dengan  pereaksi  Folin-Ciocalteu  terbentuk secara  stabil.  Dapat  disimpulkan  secara praktis OT penetapan kadar adalah 10 menit, pengukuran  absorbansi  pada  penetapan kadar  kandungan  fenolat  total    agar mendapatkan  hasil  yang  reliabel  dan  valid dilakukan pada menit ke-10 sampai ke-30.
Hasil penelitian menunjukkan rerata nilai IC kuersetin  sebesar  11,3998  ±  0,1625 50 µg/mL,  nilai  ini  menunjukkan  bahwa dibutuhkan  kuersetin  dengan  konsentrasi 1 1 , 3 9 9 8   ±   0 , 1 6 2 5   µ g / m L   u n t u k menghasilkan penurunan 50% dari aktivitas DPPH.  sedangkan  fraksi  etil  asetat  sebesar 36,55  ±  0,09µg/mL.  Nilai  tersebut menunjukkan  bahwa  dibutuhkan  fraksi  etil asetat  ekstrak  etanol  buah  anggur  Bali dengan  konsentrasi  36,55  ±  0,09µg/mL µg/mL untuk menghasilkan penurunan 50% dari aktivitas DPPH.
Dari  hasil  nilai IC tersebut  diketahui 50 bahwa  kuersetin  memiliki  aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan dengan fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur. Tetapi bila didasarkan pada tingkat kekuatan
aktivitas antioksidan menurut Aryanto (2006 cit.  Winarsi,  2007),  kuersetin  berada  satu tingkat  dengan  fraksi  etil  asetat  ekstrak etanol buah anggur, yaitu antioksidan sangat kuat (< 50 µg/mL).
Kandungan  fenolik  total  diekspresikan sebagai  ekivalen  asam  galat.  Hubungan antara asam galat dan absorbansinya setelah direaksikan dengan pereaksi Folin-Ciocalteu digunakan  dari  replikasi  yang  ke-2  dengan persamaan y = 0,004x – 0,129; dengan nilai koefisien korelasi, r = 0,9999.
Dari  hasil  perhitungan  didapatkan  hasil kandungan  fenolik  total  rata-rata  pada sampel  sebesar  17,23  ±  0,10  mg  ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur.

## 4. Kesimpulan dan Saran

## 4.1. Kesimpulan
Nilai aktivitas antioksidan fraksi etil asetat  ekstrak  etanol  buah  anggur  dengan menggunakan  radikal  bebas  DPPH  yang dinyatakan  sebagai IC sebesar  (36,55 ± 50 0,09) μ g/mL. Kandungan fenolik total pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur yang  dinyatakan  dengan  massa  ekivalen asam  galat  sebesar  (17,23  ±  0,10)  mg ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur.
Bahan Uji IC 50 (µg/mL) Rata- rata (µg/mL) SD % CV Replikasi 1 Replikasi 2  Replikasi 3 Kuersetin 11,5929 11,2783 11,4429 11,3998 0,1625 1,4222 Fraksi etil asetat 36,46 36,63 36,56 36,55 0,085 0,234 Tabel I. Hasil perhitungan IC kuersetin dan fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur Bali 50
MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO 116

## 4.2. Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  metode yang lain maupun fraksi air. Perlu dilakukan isolasi  lebih  lanjut  untuk  mengetahui senyawa  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan  dalam  buah  anggur.  Perlu dilakukan  uji  antioksdan  dari  perasan  buah anggur segar dan perasan buah anggur yang difermentasi.

## DAFTAR PUSTAKA
A b d u l - F a d l ,   M . A . M . ,   1 9 4 9 , C o l o r i m e t r i c Determination  of  Potassium  by  Folin-Ciocalteu Phenol  Reagen ,  Postgraduate Medical  School, London, pp. 44, 282.
Anonim,  2010,  Kandungan  dan  Manfaat  anggur http://www.necturajuice.com/  kandungan-dan- manfaat-grape-skin-kulit-anggur/, diakses tanggal
15 maret 2013.
Aqil,  F.,  Ahmad,I.,  dan  Mehmood,  Z.,  2006,
Antioxidant  and  Free  Radical  Scavenging Propertis  of  Tweleve  Traditionally  Used  Indian Medical Plants , Turk J Biol , 30, pp. 177-183.
Backer CA, dan Bakhuizen van den Brink RC, 1965.
Flora of Java, Vol. 2. Noordhoff, Groningen, The Netherland, pp. 626–628.
Balijestro, 2008, Balai Penelitian Jeruk dan Tanaman S u b t r o p i k a , http://balitjestro.litbang.deptan.go.id/id/bs6- bali.html, diakses tanggal 3 Juni 2013.
Bruneton,  J.,  1999, Pharmacognoie,Phytochimie, Plantes  Medicales ,  diterjemahkan  oleh  Hatton,
C.K., Lavosie Publising, Paris, pp. 2998-2999.
Dahlan, M.S., 2012, Statistik Untuk Kedokteran dan Kesehatan , Salemba Medika, Jakarta, pp. 37, 42- 49.
Gandjar, I. G., dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp: 46-48 , 465-472.
Handayani,  2011,  Proses  Pencoklatan  pada  Buah A p e l ,   h t t p : / / t e k n o l o g i . k o m p a s i a n a . c o m / terapan/2011/05/13/prosespencokelatan  -pada- buah-apel/, diakses pada tanggal 5 Januari 2013.
Kikuzaki, H., Hisamoto, M., dkk. 2002 , Antioxidants Properties  of  Ferulic  Acid  and  Its  Related Compound, J.  Agric.Food  Chem ,  pp.  50:2161- 2168.
Prakash, A.,  2001, Antioxidant  Activity ,  Editor  oleh DeVries,  J. A  publication  of  Medalion Laboratories, Analitical Progress, pp. 1-4.
Prior,  R.L.,  Wu,  X.,  and    Schaich,  L.,  2005,
Standarized  for  the  determination  of  antioxidant capacity  and  phenolics  in  food  and  dietary supplements, J. Agric. Food Chem. , pp 55: 2698 A-J.
Sunarni,  T.,  2005,  Aktivitas  Antioksidan  Penangkal Radikal  Bebas  Beberapa  Kecambah  dari  Biji Tanaman Familia papilionacear, JFI 2(2), Jakarta, pp. 53-61.
Winarsi,  H.,  2007, Antioksidan  Alami  dan  Radikal , Kanisius, Yogyakarta, p. 22.
Zou,  Y.,  Lu,  Y.,  dan  Wei,  D.,  2004,  Antioxidant Activity of Flavonoid-Rich Extract of Hypericum perforatum L in vitro, J. Agric Food Chem ., pp. 52:
5032-5039.
Tabel II. Hasil penentuan jumlah fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanol buah anggur Bali
Sampel Kandungan fenolik total rata-rata SD CV Replikasi 1 17,13 17,23 0,087 0,507 Replikasi 2 17,25 Replikasi 3 17,3 MIKHAEL GUSTANDY, C.J. SOEGIHARDJO Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas 117