## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM ( Syzygium polyanthum ) PADA MENCIT GALUR DDY ( Mus musculus )
( ACUTE TOXICITY TEST OF ETHANOL EXTRACT BAY LEAF (Syzygium polyanthum) AGAINST MICE (Mus musculus) DDY STRAIN)
Maman Djamaludin 1 , Ris Kristiana 2 , Bagus Yuda Permana 3
1 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
2 Laboratorium Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani,
Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
3 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran,  Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
Email Korespondensi: kristiana1980@gmail.com

## ABSTRAK
Daun  salam  ( Syzygium  polyanthum )  adalah  salah  satu  tanaman  di  Indonesia  yang dipergunakan  sebagai  tanaman  obat  alternatif  seperti  obat  antidiare,  antiinflamasi,  dan antidiabetes.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  toksisitas  akut  ekstrak  etanol  daun salam  (EEDS)  terhadap  mencit  galur  DDY  yang  dilihat  dari  kematian  mencit,  perubahan perilaku,  perubahan  berat  badan,  dan  nilai  indeks  organ.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan metode  eksperimental  menggunakan  24  mencit  putih  jantan  dan  24  mencit  betina (Mus musculus) galur  DDY yang  dibagi  menjadi  4  kelompok  di  setiap  jenis  dengan  variasi  dosis 1250 mg/kgBB, 2500 mg/kgBB, 5000 mg/kgBB, dan kelompok kontrol negatif. Pengamatan yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  yaitu  kematian  mencit,  perubahan  perilaku,  perubahan berat badan, dan nilai indeks organ. Indeks organ yang dinilai adalah jantung, paru-paru, hati, limpa,  ginjal,  testis,  vesica  seminalis  pada  mencit  jantan,  serta  ditambah  organ  ovarium, uterus pada mencit betina. Data dianalisis secara statistik menggunakan uji one way ANOVA . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  daun  salam  tidak  menyebabkan  kematian  mencit, perubahan perilaku, perubahan berat badan, dan perubahan indeks organ mencit. Berdasarkan hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  daun  salam  termasuk  kategori  praktis  tidak  toksik menurut klasifikasi dari BPOM tahun 2014.
Kata kunci: daun salam, indeks organ, perubahan berat badan, toksisitas akut

## ABSTRACT
Bay  leaves  (Syzygium  polyanthum)  is  one  of  the  plants  in  Indonesia  used  as  an  alternative medicinal  plant  such  as  antidiarrheal,  anti-inflammatory,  and  antidiabetic  drugs.  This

## DOI
DOI

## ARTIKEL PENELITIAN
research aims to determine acute toxicity of bay leaves on DDY strain mice as seen from the death  of  mice, changes in  behaviour,  changes in  body weight, and organ  index values. This research was conducted by an experimental method using 24 male white mice and 24 female mice  (Mus  musculus)  DDY  strain  divided  into  4  groups  in  each  type  with  varying  doses  of 1250  mg  /  kgBW,  2500  mg  /  kgBW,  5000  mg  /  kgBW,  and  negative  control  groups. Observation  in this study include  the death of mice, changes in behaviour,body weight, and organ index values. Organ index that measured were heart, lung, liver, spleen, kidney, testes, seminal  vesicle  in  male  mice,  and    ovaries,  uterus  in  female  mice.  Data  were  analyzed statistically using the one way ANOVA test. The results showed that bay leaves did not cause mice  death,  behaviour  changes,  weight  changes,  and  organ  index  of  mice.  Based  on  these results  it  can  be  concluded  that  bay  leaves  is  practically  non-toxic  according  to  the classification of the BPOM 2014 .
Keywords: acute toxicity, bay leaf, organ index, weight change

## PENDAHULUAN
Obat    tradisional  adalah  bahan  atau ramuan  berupa  tumbuhan,  bagian  hewan, mineral,  atau  campuran  dari  bahan-bahan tersebut  yang  digunakan  secara  turun- temurun untuk pengobatan. Obat tradisional juga sering disebut Obat Bahan Alam. 1 Penggunaan  obat  tradisional  terus mengalami  kenaikan,  namun  bukti  ilmiah efektivitas dan keamanannya masih terbatas. 1 Menurut  data  dari  Susenas (Survey  Sosial  Ekonomi  Nasional)  Maret 2017  yang  melakukan  survei  disetiap provinsi  di  Indonesia  tentang  Popularitas
Pengobatan Tradisional Alternatif menunjukkan kurang lebih 50% masyarakat  Indonesia  masih  melakukan pengobatan tradisional
alternatif menggunakan  obat  tradisional  atau  sering disebut obat bahan alam. 2
Salah  satu  dari  sekian  banyaknya tanaman  yang  digunakan  sebagai  obat
tradisional adalah daun salam. Daun salam merupakan  tanaman  yang  telah  banyak dikenal  oleh  masyarakat,  dan  biasanya banyak dimanfaatkan sebagai bumbu dapur atau  rempah-rempah  penyedap  masakan karena  memiliki  aroma  yang  khas.  Selain itu,  daun  salam  sering  dimanfaatkan masyarakat  untuk  pengobatan  alternatif karena  tumbuhan  ini  banyak  terdapat  di masyarakat  dan  mudah  didapatkan.  Daun salam dikenal dengan nama salam di Jawa, Madura,  dan  Sunda, kastolam di  Kangean dan Sumenep, manting di Jawa, meselengan di  Sumatra  dan ubar  serai di daerah  melayu. 3,4 Daun  salam  memiliki kandungan  yang  kaya  dengan  senyawa kimia,  daun  salam  sering  digunakan  untuk mengobati penyakit gastritis, diare, tekanan  darah  tinggi,  dan  kolesterol dengan  menurunkan  kadar  kolesterol  total dan  masih  banyak  penyakit  lainnya. 5 Berdasarkan penelitian yang telah
dilakukan, daun salam mengandung senyawa steroid, fenolik, saponin, flavonoid,  alkaloid,  dan  minyak  atsiri. 6
Senyawa utama  yang terkandung di  dalam daun salam adalah flavonoid.
Berdasarkan data diatas peneliti bermaksud  melakukan  uji  tahap  preklinik yang  berupa  uji  toksisitas  akut  ekstrak daun  salam,  mengingat    uji  toksisitas  ini sangat penting untuk mendeteksi toksisitas intrinsik  suatu  zat,  menentukan  organ sasaran,  kepekaan  spesies,  memperoleh informasi  bahaya  setelah  pemaparan  suatu zat  secara  akut,  memperoleh  informasi awal yang dapat digunakan untuk menetapkan  tingkat  dosis,  merancang  uji toksisitas  selanjutnya,  memperoleh  nilai LD50 suatu bahan/ sediaan, serta penentuan  penggolongan  bahan/  sediaan dan pelabelan. 7

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  ekstrak  daun  salam. Penelitian ini merupakan penelitian laboratorium eksperimental dengan menggunakan  subjek  penelitian  hewan coba  yang secara  acak dipisahkan menjadi empat kelompok dengan desain Rancangan Acak  Lengkap  (RAL) untuk  melihat  efek toksik  ekstrak  etanol  daun  salam  (EEDS). Penelitian tersebut dilakukan di Laboratorium  Hewan  dan  Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran
Universitas  Jenderal  A.  Yani  untuk menguji  toksisitas  akut    ekstrak  etanol daun  salam  dengan  variasi  dosis  1250 mg/kgBB,  2500  mg/kgBB  dan  5000 mg/kgBB. Penilaian terhadap efek toksisitas  akut  meliputi  perubahan  berat badan mencit, indeks organ mencit (ginjal, hati,  paru,  jantung,  limpa)  dan  kematian pada hewan percobaan.

## Pembuatan EEDS
Simplisia  bahan  baku  1kg  basah  yang telah  dihaluskan  dimasukkan  ke  dalam maserator  yang  telah  diberi  kapas  alasnya dan  didiamkan  selama  24  jam.  Pelarut etanol  ditambahkan  ke  dalam  ampas  yang ada  di  dalam  maserator  begitu  seterusnya sampai  pelarut  yang  ke  luar outlet maserator tidak berwarna lagi (biasanya 5- 6 kali redaman).

## Perlakuan Hewan Coba
Semua mencit dilakukan masa adaptasi selama tujuh hari dengan cara ditempatkan di kandang mencit dan diberi serutan kayu, dengan  suhu  ruangan  22°±3°  C,  ventilasi terdapat  pada  sekeliling  kandang  dengan harapan  mencit  mendapatkan  rasa  nyaman selama  penelitian  dan  diberi  pakan  (pellet 511)  dan  air  minum  (akuabides)  serta diperhatikan  kesehatannya.  Mencit  yang dibagi  menjadi  4  kelompok  diberikan perlakuan sebagai berikut:
1. Kelompok 1 (K) :  sebagai kelompok kontrol negatif, tidak diberikan
perlakuan  apapun  kecuali  air  dan pelet selama 14  hari.
2. Kelompok  2  (P1)  :    diberikan  EEDS dosis 1250 mg/kgBB.
3. Kelompok  3  (P2)  :    diberikan  EEDS dosis 2500 mg/kgBB.
4. Kelompok  4  (P3)    :  diberikan  EEDS dosis 5000 mg/kgBB.

## Pengamatan Hewan Coba
Pengamatan  dilakukan  24  jam  setelah pemberian EEDS kemudian mencit diamati meliputi perubahan berat badan, perubahan perilaku,  indeks  organ  dan  kematian mencit. 21
1. Penimbangan  berat  badan  dilakukan pada  awal  dan  akhir  pada  masa adaptasi.    mulai  dari  hari  ke-1  hingga hari  ke-14.  Pada  hari  ke-15  mencit  di anestesi  dengan  CO 2 secara  inhalasi dengan konsentrasi 30% untuk dilakukan  eutanasia  dan  pembedahan untuk mendapatkan organ-organ mencit.
2. Index  organ  didapat  dengan  cara menghitung berat masing-masing organ  (paru,  limpa,  jantung,  hati,  dan ginjal)  dikalikan 100 dan dibagi berat badan  pada  hari  ke  14.  Berat  organ relatif  mencit  yang  dihitung  dengan
rumus  ROW=  Berat  organ  vital  (g)  : BB mecit (g) x 100.
3. Perubahan  perilaku  mencit  berkaitan dengan  gejala  toksik  yang  diobservasi sebelum dan setelah diberikan perlakuan  yaitu  aktivitas  lokomotors, fenomena  Straub,  piloereksi,  ptosis, refleks kornea, refleks pineal, lakrimasi, vasodilatasi, katalepsi, menggantung, reestabilishment , fleksi, haffner ,  regangan, grooming ,  tremor, vokalisasi, saliva, defekasi, dan urinasi
4. Kematian  mencit  diamati  pada  saat penelitian  berlangsung,  yaitu  mulai hari  ke-1  sampai  hari  ke-14  setelah perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengaruh Daun Salam terhadap Jumlah Kematian Mencit
Hasil  pengamatan  kematian  hewan coba  selama  empat  belas  hari  perlakuan menunjukkan  tidak  ada  hewan  coba  pada kelompok  jantan  dan  betina  galur  DDY yang  mati  baik  pada  kelompok  kontrol maupun  kelompok  perlakuan  atau  0% kematian.    Hal  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  dosis  tunggal  secara  oral ekstrak  etanol  daun  salam  sampai  dengan dosis  maksimum  yang  masih  dapat diberikan  secara  teknis  pada  hewan  uji (5000  mg/kgBB)  atau  sekitar  200  kali dosis  yang  lazim  dipakai  pada  manusia
tidak  menimbulkan  kematian  pada  hewan coba.  Dosis  tertinggi  tersebut  dinyatakan sebagai  DL 50 semu,  sementara  DL 50 oral ekstrak  etanol  daun  salam  untuk  mencit lebih besar dari 5000 mg/kgBB. Berdasarkan kriteria Generally Recognized As Safe (GRAS) hasil tersebut mempunyai  makna  toksikologi  bahwa potensi  ketoksikan  akut  ekstrak  etanol daun  salam  termasuk  dalam  kategori praktis  tidak  toksik  atau  ekstrak  etanol daun salam pada dosis pemberian tertinggi tidak  memberikan  efek  toksik atau terkategori  NOAEL  ( no  observed  adverse effects level ). 8,15
Pengaruh Daun Salam terhadap

## Pengamatan Perilaku Mencit
Pada  pengamatan  farmakologi  hewan coba  setelah  perlakuan  didapatkan  hasil bahwa  tidak  terdapat  gejala-gejala  toksik berarti  yang  timbul  setelah  pemberian ekstrak  etanol  daun  salam  ( Syzygium polyanthum )  terhadap  mencit  jantan  dan betina pada menit ke-30, ke-60, ke-120 dan ke-240 seperti terlihat pada Tabel 1 dan 2 .
Berdasarkan Tabel 1 dan 2
menunjukkan data hasil pengamatan perubahan perilaku terhadap mencit jantan dan  betina  galur  DDY.  Pengamatan terhadap  adanya  gejala  toksik  untuk mengetahui  organ  dan  sistem  yang
dipengaruhi oleh sediaan uji. Gejala toksik ditandai  dengan  perubahan  perilaku  pada hewan  uji.  Gejala  toksik  terhadap  susunan saraf  pusat  dilakukan  dengan  mengamati ada  atau  tidaknya  sedasi,  konvulsi,  dan tremor.  Gejala  toksik  terhadap  susunan saraf  sensoris  dilakukan  mengamati  ada tidaknya  refleks  pineal,  refleks  korneal, fleksi  dan  haffner.  Pengamatan  susunan saraf  otonom  dilakukan  mengamati  ada atau  tidaknya  salivasi,  lakrimasi,  dan urinasi.  Pengamatan sistem neuromuskular dilakukan  aktivitas  motorik  dan  fenomena Straub.  Pengamatan  sistem  pencernaan dilakukan  dengan  pengamatan  defekasi. Ptosis  merupakan  gejala  yang  timbul  pada organ  mata  dan  piloereksi  gejala  yang timbul pada organ kulit. 9,10
Pengamatan dilakukan pada titik waktu pengamatan  T0,  T30  menit,  T60  menit, T120 menit, dan T240 menit dengan durasi pengamatan  selama  dua  menit  untuk masing-masing  titik  waktu  kecuali  untuk gelantung, retablishment ,  refleks  korneal, refleks  pineal,  fleksi,  dan  haffner.  Hasil pengamatan  secara  umum  terlihat  tidak mempengaruhi  refleks  korneal.  refleks pineal.  fleksi  dan  haffner  terhadap  hewan uji jantan maupun betina yang mengindikasikan  bahwa  ekstrak  etanol daun  salam  tidak  mempengaruhi  sistem organ susunan saraf pusat. 9,10
Tabel 1 Rerata persentase nilai pengamatan farmakologi gejala toksisitas mencit jantan
Pada  hewan  coba  yang  diberi  sediaan ekstrak etanol daun salam terjadi peningkatan  jumlah  jengukan  pada  mencit jantan  mulai  mencit  jantan  pada platform mulai dosis 1250 mg/kgBB pada T30, T60. T120  dan  T240  menit  yang  menunjukkan adanya peningkatan rasa ingin tahu mencit sedangkan  pada  mencit  betina  tidak  ada perubahan jumlah jengukan. 9,10
Perubahan  lain  yang  cukup  signifikan adalah  adanya  penurunan  gejala grooming baik  pada  mencit  jantan  maupun  betina dibanding  kontrol.  Gejala grooming yang terjadi  kemungkinan  disebabkan  oleh adanya depresi sistem saraf pusat terutama pada  mencit  betina  terlihat  penurunan sikap tubuh. 9,10
Gejala diamati Pengamatan Farmakologi (%) Kontrol 1250 mg/kgBB 2500 mg/kgBB 5000 mg/kgBB Jumlah jengukan ↑ 4,5 4,1 3,5 4,8 ↓ 4 4,3 3,7 4,5 Aktivitas motorik (Normal) 100 96 100 80 Diam 30 45 20 35 Fenomena Straub 0 0 0 0 Piloereksi 0 0 0 0 Ptosis 0 0 0 0 Refleks Corneal 100 100 100 100 Refleks Pineal 100 100 100 100 Lakrimasi 0 0 0 0 Vasodilatasi 0 0 0 0 Katalepsi 0 0 0 0 Gelantungan 100 100 96 100 Retablishment 100 100 96 100 Fleksi 100 100 100 100 Grooming 55 45 35 32 Tremor 0 0 0 0 Vokalisasi 0 0 0 0 Saliva 0 0 0 0 Mortilitas 0 0 0 0 Sikap tubuh 100 100 96 96 Defekasi 42 20 28 20 Urinasi 20 21 16 20
Tabel 2 Rerata persentase nilai pengamatan farmakologi gejala toksisitas mencit betina

## Pengaruh Daun Salam terhadap Berat Badan Mencit
Tabel 3 Pengaruh ekstrak daun salam berbagai dosis terhadap berat badan mencit jantan sebelum dan setelah perlakuan
Perlakuan Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan Selisih Nilai P* Kontrol 24,00±2,17 34,17±0,98 10,17±2,58 0,200 EDS 1250mg/kgBB 26,67±1,97 40,33±3,93 13,67±4,46 EDS 2500mg/kgBB 27,67±2,42 39,33±4,46 11,67±5,43 EDS 5000mg/kgBB 25,67±2,16 40,00±6,75 14,33±5,61 Keterangan : kruskal wallis test, , p>0, 05 (Tidak Terdapat perbedaan yang bermakna)
Gejala diamati Pengamatan Farmakologi (%) Kontrol 1250 mg/kgBB 2500 mg/kgBB 5000 mg/kgBB Jumlah jengukan ↑ 4 4,2 4,7 5,8 ↓ 2,4 2,9 3,2 4,6 Aktivitas motorik (Normal) 100 75 80 100 Diam 13,5 15,7 20,1 10 Fenomena Straub 0 0 0 0 Piloereksi 0 0 0 0 Ptosis 0 0 0 0 Refleks Corneal 100 100 100 100 Refleks Pineal 100 100 100 100 Katalepsi 0 0 0 0 Gelantungan 100 100 100 100 Retablishment 100 100 100 100 Fleksi 100 100 100 100 Hafner 100 100 100 100 Gliat 0 0 0 0 Grooing 60 20 39 35 Tremor 0 0 0 0 Vokalisasi 0 0 0 0 Saliva 0 0 0 0 Mortilitas 0 0 0 0 Sikap tubuh 100 100 100 100 Defekasi 20 26,3 40 45 Urinasi 10 15 30 25
Tabel 3 menunjukkan data berat badan mencit jantan sebelum dan setelah perlakuan tidak  adanya  perbedaan  yang  bermakna karena  didapatkan  nilai  p  =  0,200  (P>0,05).
Artinya,  peningkatan  berat  badan  mencit jantan  pada  ke-4  kelompok  yang  berbeda memiliki peningkatan yang hampir sama.

## Tabel 4 Pengaruh EEDS berbagai dosis terhadap berat badan mencit betina sbelum dan setelah perlakuan
Perlakuan Seb. Perlakuan Set. Perlakuan Selisih Nilai P* Kontrol 23,67±2,42 34,00±2,53 10,33±3,14 0,997 EEDS 1250mg/kgBB 28,08±3,32 38,33±4,63 10,25±5,74 EEDS 2500mg/kgBB 30,50±2,07 40,33±2,80 9,83±4,12 EEDS 5000mg/kgBB 31,00±1,26 41,00±3,35 10,00±3,63 Keterangan : Kruskal wallis test, p>0, 05 (Tidak Terdapat perbedaan yang bermakna)
Tabel 4 menunjukkan data berat badan mencit betina sebelum dan setelah perlakuan  tidak  adanya  perbedaan  yang bermakna karena didapatkan nilai p= 0,997 (P>0,05). Artinya, peningkatan berat badan mencit  betina  pada  ke-4  kelompok  yang berbeda memiliki peningkatan yang hampir sama.
Penimbangan  berat  badan  hewan  uji dilakukan  setiap  hari  selama  14  hari,  hal ini dilakukan untuk mengetahui perubahan berat  badan  hewan  uji.  Hasilnya  tidak terjadi  perubahan  berat  badan  pada kelompok  jantan  maupun  betina  sebelum dan  setelah  perlakuan  yang  bermakna. Adapun  perubahan  berat  badan  mencit jantan  maupun  betina  dapat  dipengaruhi oleh  beberapa  faktor.  Seperti,  kandungan senyawa  pada  sediaan  uji  dan  faktor
internal dan eksternal dari hewan percobaan.
Daun  salam  mengandung  beberapa senyawa  seperti  flavonoid,  saponin  dan tanin.  Senyawa  tanin  bersifat  mudah berikatan  dengan  protein  sehingga  dapat menyebabkan  protein  yang  berada  di permukaan  usus  mengendap  sehingga mengurangi penyerapan makanan. Menurut penelitian Utomo (2008)
menyatakan  bahwa  senyawa  tanin  yang terkandung  dalam  tumbuhan  dengan  dosis 2000  mg/kgBB  efektif  dapat  menurunkan berat badan. 11,12
Perubahan  berat  badan  hewan  coba juga  dapat  dipengaruhi  oleh  faktor  dari hewan  coba  tersebut.  Faktor-faktor  yang dapat  mempengaruhi  yaitu,  faktor  internal gen  yang  merupakan  faktor  penentu  sifat
yang  diturunkan  dari  induk  dan  hormon yang  akan  mengatur  seluruh  aktivitas  di dalam  tubuh.  Selain  itu,  terdapat  faktor eksternal  seperti  makanan,  sinar  matahari, aktivitas, suhu dan lingkungan. 13,16,17
Pengaruh  Daun  Salam  terhadap  Indeks Organ
Selain  dilakukan  pengamatan  berat badan, dilakukan pembedahan dan pengamatan  organ-organ  dalam  pada seluruh  kelompok  mencit  pada  hari  ke-15. Secara  makroskopik  organ  mencit  ketiga
kelompok  tidak  menunjukkan  perbedaan warna, bentuk antar perlakuan. Selanjutnya dilakukan penghitungan berat organ relatif. Data  berat  organ  relatif terdistribusi normal  (p  >0,05),  kecuali  organ  testis.  Uji statistik yang digunakan selanjutnya adalah uji  parametrik ANOVA  Test dan  uji  lanjut untuk  menguji  kelompok  yang  paling toksik digunakan Post hoc dan untuk yang tidak terdistribusi normal maka menggunakan  uji  Kruskal  wallis , dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5 Pengaruh ekstrak daun salam berbagai dosis terhadap indeks organ mencit jantan sebelum dan setelah perlakuan Indeks Organ Perlakuan Nilai P Kontrol EDS 1250mg/kgBB EDS 2500mg/kgBB EDS 5000mg/kgBB Hati 1,85±0,23 2,03±0,27 1,61±0,45 2,07±0,37 0,107* Jantung 0,22±0,04 0,19±0,04 0,21±0,03 0,25±0,07 0,180* Paru-paru 0,25±0,08 0,28±0,08 0,33±0,06 0,29±0,02 0,206* Ginjal 0,55±0,05 0,52±0,12 0,52±0,12 0,59±0,12 0,567* Limpa 0,34±0,08 0,44±0,07 0,44±0,20 0,43±0,08 0,453* Testis 0,89±0,23 0,77±0,28 0,80±0,40 0,85±0,27 0,869** Vesica Seminalis 0,13±0,05 0,20±0,07 0,13±0,07 0,11±0,07 0,146*
Keterangan :  *=Oneway  Anova  test,**=kruskal  wallis,  p>0, 05  (Tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna)
Berdasarkan  Tabel  5  pada  semua  data berat organ relatif hati, jantung, paru-paru, ginjal,  limpa,  testis,  dan vesica  seminalis didapatkan  nilai  p>0,05,  hasil  tersebut menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan berat organ relatif yang bermakna.  Dari  hasil  analisis  tersebut dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol
daun salam tidak memengaruhi berat organ relatif  hati,  jantung,  paru-paru,  ginjal, limpa,  testis  dan vesica  seminalis pada mencit jantan.
Pada  mencit  betina,  berat  organ  relatif berdistribusi  normal  (p  >0,05),  kecuali organ  jantung,  paru-paru  dan  ginjal.  Uji statistik yang digunakan selanjutnya adalah
uji  parametrik ANOVA  Test dan  uji  lanjut untuk  menguji  kelompok  yang  paling toksik digunakan Post hoc dan untuk yang tidak  berdistribusi  normal  menggunakan uji Kruskal wallis , dapat dilihat pada Tabel 6.
Pada  semua  data  berat  organ  relatif hati,  jantung,  ginjal,  limpa,ovarium  dan uterus  didapatkan  nilai  p>0,05,  hasil tersebut menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan berat organ relatif yang bermakna.  Dari  hasil  analisis  tersebut
dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol daun salam tidak memengaruhi berat organ relatif hati, jantung, ginjal, limpa, ovarium dan uterus. Sedangkan pada data perbandingan  organ  paru-paru,  terlihat bahwa ekstrak etanol daun salam mempengaruhi berat organ secara signifikan (p0,015<0,05). Selanjutnya untuk  melihat  manakah  yang  memiliki perbedaan  signifikan,  maka  dilakukan  uji lanjut dengan Mann Whitney .
Tabel 6 Pengaruh ekstrak daun salam berbagai dosis terhadap indeks organ mencit betina sebelum dan setelah perlakuan Indeks Organ Perlakuan Nilai P Kontrol EDS 1250mg/kgBB EDS 2500mg/kgBB EDS 5000mg/kgBB Hati 2,06±0,41 2,37±0,44 2,27±0,59 2,51±0,30 0,377* Jantung 0,16±0,06 0,24±0,08 0,23±0,04 0,25±0,06 0,076** Paru-Paru 0,24±0,03 0,38±0,11 0,35±0,06 0,32±0,01 0,015** Ginjal 0,41±0,10 0,48±0,13 0,46±0,10 0,51±0,03 0,262** Limpa 0,38±0,08 0,57±0,24 0,44±0,09 0,43±0,10 0,154* Ovarium 0,23±0,07 0,44±0,20 0,46±0,28 0,57±0,16 0,051* Uterus 0,09±0,04 0,13±0,08 0,13±0,05 0,13 0,01 0,507*
Keterangan :  *=Oneway  Anova  test,**=kruskal  wallis,  p>0, 05  (Tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna)
Dari Uji lanjut Mann Whitney menunjukkan  nilai p  < 0,05  pada  EDS 1250  mg/kgBB,  2500  mg/kgBB  dan  5000 mg/kgBB  terhadap  kontrol  negatif  maka memiliki perbedaan yang bermakna, sedangkan perbandingan antar dosis ekstrak daun salam tidak memiliki perbedaan bermakna.
Hasil  penilaian  berat  organ  relatif mencit  jantan  dan  betina  yang  diberi sediaan  ekstrak  etanol  daun  salam  di semua  dosis  tidak  ditemukan  perubahan warna,  ukuran,  dan  bentuk  dibandingkan dengan kelompok kontrol. Persentase berat organ  kemudian  diuji  secara  statistik dengan menggunakan uji Kruskall Wallis .
Berat  organ  relatif  hati,  paru,  jantung, ginjal,  limpa, vesica  seminalis ,  dan  testis pada  kelompok  hewan  uji  jantan  pada dosis  tidak  terjadi  perubahan  makroskopis atau  tidak  terdapat  perbedaan  bermakna (p>0,05) dibandingkan dengan kontrol. Hal tersebut  menunjukkan  ekstrak  daun  salam tidak  berefek  toksik  pada  organ  vital mencit  jantan  terutama  hepar  dan  ginjai sebagai  sasaran  utama  dari  efek  toksik. Hasil  berat  organ  relatif  mencit  betina yaitu jantung, ginjal, hati, limfa, uterus dan ovarium tidak  mengalami perubahan (normal) dan tidak menunjukkan perbedaan bermakna (p>0,05)
dibandingkan  kelompok  kontrol  pada pemberian  sediaan  uji  ekstrak  etanol  daun salam pada setiap tingkatan dosis.
Sedangkan  pada  EDS  1250  mg/kgBB, 2500  mg/kgBB  dan  5000  mg/kgBB terhadap  kelompok  kontrol  organ  paru- paru menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna, kemungkinan penyebab peningkatan  berat  organ  relatif  paru  yang bermakna  terjadi  karena  adanya  respons inflamasi  yang  disebabkan  dari  pemberian ekstrak daun salam. 18,19
Berdasarkan hasil penelitian uji toksisitas  subkronis  ekstrak  etanol  daun salam  yang  dilakukan  Sri  Adi  Sumiwi  et al, tahun 2018 pada tikus Wistar diketahui sampai 1000 mg/kgBB tidak menunjukkan toksis. 14 Hasil  penelitian  ini  menunjukkan
bahwa  sampai  dosis  5000  mg/kgBB ekstrak etanol daun salam tidak menimbulkan  efek  toksik  terhadap  hewan uji  serta  tidak  menyebabkan  kematian selama 14 hari pengamatan. Ini mengindikasikan  bahwa  ekstrak  etanol daun  salam  sampai  dosis  5000  mg/kgBB aman untuk digunakan sesuai dengan batas uji  keamanan  yang  dikeluarkan  Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  (BPOM). 13
Berdasarkan  hasil  tersebut  juga  dapat diketahui  derajat  toksisitas  untuk  ekstrak daun  salam  menurut  klasifikasi  praktis tidak toksik sebab tidak ditemukan adanya kematian pada tingkat dosis 5000 mg/kgBB.

## KESIMPULAN
Pemberian EEDS dengan dosis bertingkat (1250 mg/kgBB, 2500 mg/kgBB  dan  5000  mg/kgBb)  tidak menyebabkan kematian, tidak menimbulkan  gejala  toksik  (perubahan perilaku)  dan  perubahan  berat  badan  baik pada  mencit  jantan  maupun  betina. Pembesaran  organ  hanya  terjadi  pada mencit betina yaitu organ paru.
Dari kesimpulan di atas dapat disarankan  kepada  masyarakat  untuk memperhatikan  dosis  pemakaian,  karena dari  hasil  EEDS  seluruh  kelompok perlakuan betina memengaruhi organ paru- paru.  Selain  itu  diperlukan  penelitian
selanjutnya (uji toksisitas subkronik) untuk melihat  ada  atau  tidaknya  perubahan struktur jaringan dari organ-organ terkait.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak ada

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan    terima  kasih  disampaikan kepada  para  profesional  yang  telah membantu  penelitian  dan  penyusunan makalah,  pemberi  dana,  bahan  dan  sarana penelitian, serta sponsor yang terkait .

## DAFTAR PUSTAKA
1. Katno.  Tingkat    Manfaat  Keamanan  dan
Efektifitas  Tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional.  Karanganyar:  Balai  Besar Penelitian  dan  Pengembangan  Obat  dan Obat  Tradisional  (B2P2TO-OT)  Badan Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan Departemen Kesehatan RI;2008. Hal 1.
2. Survey Sosial Ekonimi Nasional (Susenas),  Badan  Pusat  Statistik  (BPS).
Popularitas Pengobatan Tradisional Alternatif. Susenas. BPS. Jakarta.2017.
3. Kementrian  Perdagangan  RI.  Warta Ekspor  Obat  Herbal  Tradisional.Jakarta: Ditjen PEN.2014.hal.2-5.
4. Dalimartha,  S.  Atlat  Tumbuhan  Obat indonesia  Jilid  2.  Jakarta:  Trubus Agriwidya; 2000. Hal. 162-163.
5. Kemenkes,  RI.,  2011.  100  Top  Tanaman Obat. Jakarta: Kementrian Kesehatan RI.
6. Liliwirianis,  et  al  .  2011.  Preliminary Studies  On  Phytochemical  Screening  Of Ulam  And  Fruit  From  Malaysia. E- journal Of Chemistry , Volume VIII.
7. Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas  Obat
Dan  Makanan  Nomor  7  Tahun  2014 Tentang Pedoman Uji Toksisitas
Nonklinik Secara In Vivo. 2014.
8. Darelanko, Michael J., Hollinger, Manfred A . Handbook of Toxicology . 2nd edition. CRC Press,2002.
9. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  Cara  pembuatan  simplisia. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan makanan. Jakarta.1985.
10. Hau  J,  Gerald  L  Van  Hoosier  JR.
Handbook of Laboratory Animal
Science.Vol.2;
2005.
doi:10.1201/9781420040913.
11. Utomo  AW.  Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak  Alkohol  Daun  Jati  Belanda ( Guazuma  ulmifolia LAMK)  pada  Tikus Wistar.  Semarang:  Fakultas  Kedokteran Universitas Diponogor.2008.
12. MilsS, Bone K. Principles and Practice of Phytotherapy Modern Herbal
Medicine. Edinburg:
Churchill Livingstone.2000. 13. Ikalot. Pertumbuhan dan
Perkembangan.  Jurnal  Pertumbuhan  dan Perkembangan 2013;7:1-6.
14. Sumiwi SA, Zuhrotun A, Hendriani R, Rizal  M,  Levita  J,  Megantara  S.
Subchronic  Toxicity  of  Ethanol  Extract of. 2019;11(1):30-35.
doi:10.18585/inabj.v11i1.458.
15. Harismah,  K.  dan  Chusniatun,  2016.
Pemanfaatan  Daun  Salam  ( Eugenia polyantha )  Sebagai  Obat  Herbal  Dan Rempah Penyedap Makanan. Warta Lpm
, Pp. Vol .19 No. 2.Hal.110-118.
16. Evendi  A.  Uji  fitokimia  dan  anti bakteri  ekstrak  daun  salam  ( Syzygium polyanthum ) terhadap bakteri  Salmonella typhi  dan  Escherichia  coli  secara  In Vitro.  Mahakam  Med  Lab  Technol  J.
2017;2(1).Hal.1-9
17. Habibi AI, Firmansyah RA, Setyawati
SM.  Indonesian  Journal  of  Chemical
Science  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  n  -
Heksan Korteks Batang Salam
(Syzygium polyanthum). Indones J Chem
Sci. 2018;7(1).Hal.1-4.
18. Agustina  R,  Indrawati  DT,  Masruhin
MA.  Aktivitas  ekstrak  daun  salam
( Eugenia
polyantha ) sebagai
antiinflamasi  pada  tikus  putih  ( Rattus Norvegicus ).  Lab  Penelit  dan  Pengemb FARMAKA  Trop  Fak  Farm  Univ Mulawarman,  Samarinda,  Kalimantan Timur. 2015.Hal.120-123.
19. Ambari,  Y.  Uji  aktivitas  antidiare ekstrak  etanol  daun  salam  ( Eugenia polyantha Wight ) pada mencit putih ( Mus musculus )  jantan  Galur  BALB-C. J Pharm Care Anwar Med . 2018;1(1).
20. Nurlaila,  Donatus  IA,  Sugiyanto,
Wahyono  D,  Suhardjono  D.  Petunjuk Praktikum Toksikologi, 1st ed.
Yogyakarta:  Laboratorium  Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi, Universitas  Gajah  Mada;  1992.  hal.3-5, 16-30.
21. Yusliani  ER,  Bachtiar  BM,  Suniarti
DF,  Sutiatmojo  AB. Effect  of  Rambutan Honey  (Nephelium  lappaceum)  Acute Administration on Mortality, Body Weight,  Toxicity  Symptoms  and  Relative Organ  Weight  of  Swiss  Websters  Mice . Res. J. Toxinns 2015; 1.p.1-9.