## ANTHOYCANIN  TOTAL AND ANTIOXIDANT ACTIVITY
OF RURUHI ( Syzygium polycephalum Merr.) FRUITS
Irnawati 1) , Wa Ode Sitti Zubaydah 1) , Arifah 1)
1) Jurusan Farmasi Fakultas Farmasi Halu Oleo University, Kendari

## ABSTRACT
The  aims  of  the  study  were  to  determine  the  best  extraction  method  and  to  evaluation  of antioxidant activity of the ruruhi (Syzygium polycephalum Merr.) fruits extract.  Different extraction methods were evaluated for  total anthocyanin content of ruruhi fruits. The conventional maceration method and modified maceration method with ethanol acidified with HCl provided better anthocyanin and  its  stability.    The  highest  levels  of  the  total  anthocyanin  content  that  found  in  the  modified maceration method were 5.69 and 1.53 g/L of ruruhi peels and whole ruruhi fruits, respectively. The antioxidant activity was increasing by following the total anthocyanin levels.
Keywords : maceration, anthocyanin, antioxidant, ruruhi fruits, Syzygium polycephalum Merr.

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  metode ekstraksi  yang  cocok  untuk buah  ruruhi ( Syzygium polycephalum Merr.) dan menguji aktifitas antioksidannya. Metode ekstraksi yang berbeda digunakan untuk menentukan kandungan antosianin total buah ruruhi.  Metode maserasi konvensional dan  metode  maserasi  termodifikasi  dengan  menggunakan  etanol  yang  asamkan  dengan  HCl  untuk menjaga  antosianin  dan  stabilitasnya.    Total  antosianin  tertinggi  didapatkan  pada  metode  maserasi termodifikasi yaitu 5,69 dan 1,53 g/L pada kulit buah ruruhi dan buah utuh  ruruhi, secara berturut- turut.  Aktifitas antioksidan meningkat seiring dengan peningkatan jumLah antosianin total.
Kata kunci : maserasi, antosianin, antioksidan, buah ruruhi, Syzygium polycephalum Merr.

## PENDAHULUAN
Buah ruruhi ( Syzygium polycephalum Merr.)  (Gambar  1)  adalah buah  dari  tanaman  liar  suku  jambu- jambuan atau Myrtaceae. Kulit buah ruruhi berwarna  merah  hingga  ungu.  Antosianin adalah  pigmen  yang  masuk  dalam  kelas flavonoid yang berperan dalam munculnya warna  merah,  biru  dan  ungu  pada  banyak bunga  dan  buah  (Lima,et  al.  2011). Antosianin  berpotensi  sebagai  pewarna alami (Lee dkk. 2005; Amelia et al. 2013) dan sebagai antioksidan (Lee dkk. 2005).
Antosianin  stabil  dan  memberikan warna cerah pada pH asam  dan perlahan- lahan    akan  kehilangan  warna  seiring dengan  meningkatnya  pH,  menjadi  tak bewarna pada pH berkisar 4  –  5 (Ramos, et  al.  2000).  Kestabilan  warna  senyawa antosianin  dipengaruhi  oleh  pH  atau tingkat  keasaman,  dan  akan  lebih  stabil apabila dalam suasana asam atau pH  yang rendah (Belitz dan Grosch, 1999). Antosianin  ditemukan  stabil  pada  pH  1-3 dan berubah pada  pH 5-9 untuk suhu 30 o C (Arja  dkk.  2013).    Stabilitas  antosianin dipengaruhi  oleh  suhu  dan  pH  (Amelia  et al. 2013).
Gambar 1. Buah Ruruhi
Antosianin
diekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dengan
pelarut  metanol  yang  di  asamkan  dengan HCl  dan    dengan  asam  sitrat  hingga  pH  1 (Arja,  dkk.  2013),  Amelia  et  al.  (2013) menggunakan  aquades  and    etanol  70% yang  diasamkan  dengan  HCl    1%  dan dengan    asam  sitrat  3%,  Inácio  et  al. (2013)  menggunakan  buffer    potassium chloride 0,025 M (pH1) dan buffer sodium acetate 0,4 M (pH 4,5).
Olehkarena  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mendapatkan  metode ekstraksi  yang  cocok  untuk  buah  ruruhi ( Syzygium polycephalum Merr.) dan menguji aktifitas antioksidannya.

## METODE PENELITIAN

## Preparasi Sampel
Buah  ruruhi  diperoleh  dari  Desa Puday Kabupaten Konawe Selatan. Sampel buah dibagi atas bagian kulit buah dan  buah  secara  utuh  kecuali  biji.  Setiap bagian sampel dihaluskan dengan  blender.

## Ekstraksi
Sampel yang telah dihaluskan, masing-masing  diekstraksi  dengan  kedua metode  yang  digunakan  yaitu  metode maserasi konvensional dan metode maserasi termodifikasi (pengadukan stirer).    Metode  maserasi  konvensional dilakukan  selama  3x24  jam  dan  metode maserasi termodifikasi dilakukan 2x1 jam, masing-masing metode menggunakan pelarut etanol yang diasamkan dengan HCl 1%.

## Penetapan Antosianin Total
Menurut Suzery dkk., (2010),
penetapan  kadar  antosianin  dilakukan dengan menggunakan metode pH differensial. Sebanyak masing-masing 0,05 mL  sampel  dimasukkan  ke  dalam  2  buah
tabung  reaksi.  Tabung  reaksi  pertama ditambah  larutan  buffer  potasium  klorida (0,025  M)  pH  1  sebanyak  4,95  mL  dan tabung  reaksi  kedua  ditambahkan  larutan buffer  sodium  asetat  (0,4  M)  pH  4,5 sebanyak  4,95  mL.  Pengaturan  pH  dalam pembuatan  buffer  potasium  klorida  dan sodium  asetat  menggunakan  HCl  pekat. Absorbansi  dari  kedua  perlakuan  pH diukur  dengan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  520  nm  dan  700  nm pada masing-masing larutan setelah didiamkan selama 15 menit. Nilai absorbansi sampel ekstrak dihitung dengan menggunakan persamaan:
A = [( A 520 - A 700 )pH1– ( A 520 - A 700 ) pH4.5 ].
Konsentrasi antosianin dihitung sebagai  sianidin-3-glikosida  menggunakan koefisien ekstingsi molar sebesar 26.900 L cm -1 dan  berat  molekul  sebesar  448,8 g/mol.
Konsentrasi antosianin ( mg L -1 )
dimana:
A = absorbansi BM = berat molekul ( 448.8 ) FP = faktor pengenceran ( 5 mL / 0.05 mL ) ε = koefisien ekstingsi molar ( 26
900 L cm -1 )
Konsentrasi  antosianin  selanjutnya dinyatakan dalam mg CyE/g sampel (CyE = sianidin equivalen)

## Uji Aktifitas Antioksidan
Metode DPPH merupakan metode pengujian aktifitas antioksidan yang mudah  dan  cepat  (Garcia  et  al.  2012). Pengukuran  peredaman  radikal  DPPH berdasarkan  metode  Brand-Williams  et  al. (1995).    Sebanyak  1  mL  larutan  sampel direaksikan dengan 1 mL DPPH, kemudian  ditambahkan  lagi  2  mL  etanol. Dikocok hingga homogen kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  30 menit.  Absobansi  diukur  pada  panjang gelombang 517 nm.  Persentase peredaman radikal DPPH dihitung berdasarkan persamaan Ohkawa, et al. (1979)
Persen peredaman DPPH (% ) =

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi Antosianin
Ekstraksi  antosianin  sampel  buah  ruruhi menggunakan metode maserasi konvensional dan metode maserasi termodifikasi.
Metode
maserasi termodifikasi menghasilkan rendamen ekstrak lebih banyak dibandingkan metode maserasi konvensional, walaupun perbedaannya  cukup  kecil.    Rendamen ekstrak  untuk  semua  sampel  dapat  dilihat pada Tabel 1. Tabel 1. Rendamen Ekstrak Sampel % Rendemen Ekstrak (b/b) Maserasi Konvensional Maserasi Dengan Pengadukan Kulit Buah 5,05 5,46 Buah utuh 5,31 5,61

## Kadar Antosianin Total Buah Ruruhi
Penetapan  kadar  antosianin  total buah  ruruhi dilakukan  menggunakan metode  pH  differensial  dengan  alat spektrofotometer  Uv-Vis  pada  panjang gelombang  520  dan  700.    Panjang gelombang  520  nm  merupakan  panjang gelombang  maksimum  dari  sianidin-3- glukosida,  sedangkan  panjang  gelombang 700  nm  untuk  mengoreksi  sampel.  Jika sampel benar-benar jernih maka
absorbansi  pada  panjang  gelombang  700 nm adalah 0. Penggunaan panjang gelombang  sianidin-3-glukosida  sebagai acuan karena sianidin-3-glukosida merupakan jenis antosianin yang jumLahnya paling melimpah di alam.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  kadar antosianin  total  masing-masing  sampel maka  didapatkan  hasil  seperti  yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Kadar Antosianin Total Masing-masing Sampel
Sampel Kadar Antosianin Total Sampel Maserasi Konvensional (g/L) Maserasi Dengan Pengadukan (g/L) Kulit Buah 0,87 5,69 Buah utuh 0,84 1,53
Berdasarkan  data  Tabel  2,  kadar antosianin pada kulit buah lebih tinggi dari pada buah utuh, hal  ini  disebabkan  karena pigmen  warna  banyak  terdapat  pada  kulit buah.  Daging  buah  ruruhi  berwarna  putih, kecuali  pada  daerah  dekat  kulit  yang berwarna agak kemerahan akibat pengaruh dari  kulit  buah,  sehingga  kadar  antosianin pada  buah  utuh  lebih  rendah  jika dibandingkan dengan kulit buah.
Berdasarkan  metode  ekstraksi  yang digunakan, kadar antosianin yang diperoleh  juga  berbeda.  Kadar  antosianin sampel dengan metode maserasi termodifikasi lebih tinggi dibanding metode  maserasi  konvensional.  Metode maserasi  termodifikasi  memakan  waktu yang  lebih  singkat  dibandingkan  metode maserasi  konvensional.  Menurut Harborne (2005), degradasi  antosianin  salah satunya terjadi selama ekstraksi. Stabilitas antosianin  dipengaruhi  oleh  pH,  suhu, cahaya  dan  oksigen,  sehingga  dengan
proses  ekstraksi  yang  lebih  singkat  dapat meminimalkan proses degradasi antosianin akibat faktor-faktor tersebut. Selain itu,pengadukan  yang  terus  menerus  pada metode  maserasi  termodifikasi  dapat menambah efektifitas dari proses ekstraksi, dibandingkan  dengan  proses  maserasi konvensional yang hanya diaduk sesekali.

## Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Buah Ruruhi
Uji aktivitas antioksidan pada penelitian ini menggunakan metode
DPPH.  Metode  uji  antioksidan  dengan DPPH ( 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazil ) dipilih  karena  metode  ini  adalah  metode yang  sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka serta  hanya  memerlukan  sedikit  sampel untuk  evaluasi  aktivitas  antioksidan  dari senyawa  bahan  alam  sehingga  digunakan secara  luas  untuk  menguji  kemampuan senyawa  yang  berperan  sebagai  pendonor elektron  (Molyneux,  2004).  Pengukuran
terhadap radikal DPPH dilakukan berdasarkan motode  Brand-Williams  et  al. (1995)
Suatu  senyawa  dapat    dikatakan memiliki aktivitas antioksidan jika mampu mendonorkan elektronnya sehingga membuat  DPPH  menjadi  stabil.  Peristiwa tersebut menyebabkan penurunan intensitas  warna  DPPH  dari  warna  ungu menjadi  kuning,  hal  ini  menandakan bahwa  sifat  DPPH  sebagai  radikal  bebas menurun  atau  bahkan  hilang.  Pada pengukuran dengan spektrofotometer
visibel  nilai  absorbansi  yang  terbaca adalah  nilai  warna  ungu  DPPH  yang tersisa. Menurut Molyneux (2004),
penurunan  warna  DPPH  ini  juga  diikuti oleh penurunan absorbansi DPPH sehingga  aktivitas  antioksidan  penangkal radikal dapat diketahui dengan menghitung rasio  penurunan  absorbansi  DPPH.  Makin kuat  suatu  senyawa  antioksidan  yang  ada dalam  senyawa  uji  dapat  menyebabkan warna  DPPH  makin  memudar.    Hasil pengukuran  aktifitas  antioksidan  sampel dapat diliat padat diliat pada Tabel 3.
Tabel 3. Kadar antosianin total dan
aktivitas antioksidan sampel Sampel Antosiani n Total (g/L) IC 50 (mg/L) Kulit buah Maserasi konvensional 0,87 7,92 Maserasi dengan pengadukan 5,69 2,89 Buah Utuh Maserasi konvensional 0,84 31,59 Maserasi dengan pengadukan 1,53 8,27
Berdasarkan  nilai  IC 50 dari  masing- masing  sampel  buah  ruruhi  diketahui bahwa  buah  ruruhi  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat.  Molyneux (2004),  menyatakan  bahwa  suatu  zat memiliki  sifat  antioksidan  sangat  kuat apabila  memiliki  nilai  IC 50 di  bawah  50 ppm.    Sampel  kulit  buah  yang  diekstraksi dengan pengadukan memiliki kadar
antosianin total tertinggi juga menunjukkan aktivitas
antioksidan tertinggi.  Dari  data  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  aktifitas  antioksidan
sampel meningkat seiring dengan peningkatan kadar antosianin total.
Pigmen  antosianin  merupakan  salah satu polifenol  yang masuk kelas flavonoid yang banyak terdapat dalam buah. Antosianin merupakan pigmen yang memberikan  warna  merah,  biru  dan  ungu pada  buah  dan  bunga  (Lima  et  al.,  2008).
Aktivitas antioksidan
blueberry berkorelasi dekat dengan kandungan fenolat  (Gil  dkk.,  2002).    Heim  et  al.
(2002),  menyatakan  bahwa  senyawa  fenol memegang peran dalam aktifitas antioksidan  buah,  dimana  kulit  buah menunjukkan  aktifitas  antioksidan  yang tinggi  dan  memiliki  senyawa  fenol  yang tinggi.

## KESIMPULAN
1. Metode maserasi termodifikasi merupakan  metode  yang  baik  untuk ekstraksi antosianin buah ruruhi dengan kadar  antosianin  total  sebesar  5,69  g/L (kulit  buah),  dan  1,53  g/L  (buah keseluruhan).
2. Buah ruruhi memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
3. Aktifitas  antioksidan  meningkat  seiring dengan  peningkatan  kadar  antosianin total buah ruruhi

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih
kepada Kemristek-Dikti yang telah membiayai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amelia,  F.,  Galih,  N.A.,  Arini,  M.,  Alia N.F.,  Sisca  U.  and  Mimiek  M., 2013,  Extraction  and  Stability
Test  of  Anthocyanin  from  Buni Fruits  (Antidesma  Bunius  L)  as an  Alternatsive  Natural  and  Safe Food Colorants, J.Food Pharm.Sci. 1:49-53
Arja, S.F.,  Djaswir D.  dan Adlis S., 2013. Isolasi,  Identifikasi,  dan  Uji Antioksidan  Senyawa  Antosianin dari  Bauh  Sikaduduk  (Melastoma malabathricum  L.)  Serta  Aplikasi Sebagai  Pewarna  Alami,  Jurnal Kimia  Unand  (ISSN  No.  2303- 3401), Volume 2 Nomor 1
Belitz,  H.    D  dan    Grosch,  W.,    1999, Food  Chemistry,  2nd  Edition.  Germany, Springer.
Brand-Williams W., Cuvelier M.E., Berset
C.,  1995,  Use  of  a  free  radical method  to  evaluate  antioxidant activity.  Lebenson  Wiss  Technol 28:25-30.
Garcia,  E.J.,Tatiane,  L.C.O.,Severino,  M.
D.A.,  Alessandra,  R.,  Alessandro D.  L.  And  Rosa,  H.M.G.,  2012.
Antioxidant  Activity  by  DPPH Assay of Potential Solutions to be
Applied  on  Bleached  Teeth,  Braz Dent J  23(1): 22-27
Gil,  M.I,  Tomás-Barberán,  F.A,  Hess- Pierce  B.,  and  Kader  A.A.  2002.
Antioxidant  capacities,  phenolic compounds, carotenoids, and vitamin  C  contents  of  nectarine, peach,  and  plum  cultivars  from California.  J  Agric  Food  Chem. Aug 14;50(17):4976-82
Harborne,  J.  B.,  2005, Encyclopedia  of Food  and  Colour  Additive, New
York CRC Press Inc.
Heim, K.E., Tagliaferro,A.R. dan Bobilya,
D. J. 2002 Flavonoids antioxidants: chemistry, metabolism  and  struture  activity relationships.  The  Journal  of Nutritional Biochemistry,
Stonelam, v. 13, n. 9, p. 572-584
Inácioa,  C.R.M.,  Kássio  M.G.de  L.,
Valquiria,  G.L.,  José,  D.C.P.  and
Gustavo, H. de A. T., 2013, Total anthocyanin content
determination in intact açaí
(Euterpe oleraceaMart.) and palmitero-juçara (Euterpe
edulisMart.)  fruit  using  near infrared  spectroscopy  (NIR)  and multivariate calibration, Food Chemistry 136:1160–1164
Lee,  J.,  Durst,  R.W.  dan  Wrolstad,  R.E.
2005.  Determination  of  Total Monomeric Anthocyanin Pigment Content Of Fruit Juices, Beverages, Natural Colorants, and
Wines  by  the  pH  Differential Method. Collaborative study. Journal  of  Association  of  Offiial Analytical  Chemists  International 88(5): 1269-1278
Lima,  A.  J.  B,  Correa,  A.  D,  Alves,  A.
P.C,  Abreu,  C.  M.  P,  Dantas-
Barros, A. M.2008.Caracterização química do fruto jabuticaba (Myr- ciaria  caulifloraBerg)  e  de  suas frações. Archivos
Latinoamericanos  de  Nutrición, Caracas, v. 58, n.4, p.416-421
Lima, B. J. De A., Angelita D.C., ADELIR
A.S.,Mariana,  P.M.,  RACHEL, and Oliveira C., 2011. Anthocyanins,  Pigment  Stability and Antioxidant Activity in Jabuticaba [Myrciaria
cauliflora(Mart.)  O.  Berg].  Rev. Bras.  Frutic.,  Jaboticabal  -  SP,  v. 33, n. 3, p. 877-887
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  The  Stable Free Radical Diphenylpicryl- hydrazil  (DPPH)  for  Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin J. Science
Technology 26 (2):201-209
Ohkawa, H., Ohisini, N., Yagi K., Assay lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal. Biochem. 95: 353-358.
Ramos,  L.vA.,   Lupetti,  K.vO., Carvalho, E.T.,    and  Fatibello-Filho,    O., 2000,    Utilização  do  extrato  bruto de  frutos  de    Solanum  nigrum    L. no  ensino  de  química.    Ecllética
Química, 25:110-120.
Suzery,  M.,  Lestari,  S.,  dan  Cahyono,  B., 2010, Penentuan Total Antosianin dari Kelopak Bunga Rosela (Hibiscus  Sabdariffa  L)  Dengan Metode Maserasi Dan
Sokshletasi,  Jurnal  Sains  dan
Matematika, 18(1) : 1-6