*)   Peneliti pada  Balai Besar  Riset  Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi Kelautan  dan Perikanan,  KKP; Email: aminisri@yahoo.com

## PRODUKSI BIODIESEL DARI MIKROALGA Botryococcus braunii
Sri Amini *) dan Rini Susilowati *)

## ABSTRAK
Kebutuhan  energi  yang  semakin  meningkat  menyebabkan  sumber  energi  semakin  berkurang. Hal  ini  mendorong  pencarian  sumber  energi  terbarukan  untuk  mengantisipasi  kelangkaan tersebut.  Salah  satu  sumber  energi  baru  ialah  mikroalga.  Mikroalga  memiliki  variasi  jenis  yang tinggi  dan  memiliki  potensi  besar  yang  dapat  dikembangkan  sebagai  bahan  pangan  dan  produk kimia  lainnya.  Mikroalga  sedang  dik embangk an  sebagai  penghasil  biodiesel  yang  dapat diandalkan  menggantikan  bahan  bakar  minyak  yang  bersumber  dari  fosil.  Beberapa  hasil penelitian  melapork an  bahwa  spesies  mik roalga  seperti  Botry oc oc c us   braunii  dapat menghasilkan  kandungan  minyak  sebesar  75%  berat  kering.  Pada  makalah  ini  dipaparkan langkah-langkah  dalam  menghasilkan  minyak  dari  B.  braunii  yang  meliputi  persiapan  biomassa mikroalga,  pemanenan  biomassa,  dan  ekstraksi  minyak.  Kandungan  minyak  dari  B.  braunii sebagian  besar terdiri  atas hidrokarbon  (±15–76% dari berat kering), yang  disebut botryococcene. Jenis  hidrokarbon  ini  sangat  potensial  sebagai  sumber  energi  biodiesel.
ABSTRACT: Biodiesel  production  from  microalgae  Botryococcus  braunii.  By:  Sri  Amini and Rini Susilowati.
Increasing  energy  needs  cause  diminishing  energy  resources.  This  encourages  the  search for renewable energy sources to anticipate scarcity. One of the new energy source is microalgae. Microalgae have  a high variation  of species and have  a  great potential  to be developed  as food and  other chemical  products.  Microalgae  has  been  developed  as a  potential  source  of  biodiesel to  replace  petroleum  fuels  derived  from  foss ils.  Of  several  microalgae  s pecies  studied, Botryococcus braunii produces the largest oil content, i.e. 75% dry weight. This paper describes steps  of    producing  oil    from  B.  braunii  which  includes    preparation  of  microalgae  biomass, biomass    harvesting,    and    extraction  of  oil.  Oil  content  of  B.  braunii  is  composed  mostly  of hydrocarbons    (±  15–76%  by  dry  weight),  called  botryococcene.  This  type  of  hydrocarbon  is potential  as  an  energy  source  of  biodiesel.
KEYWORDS: biodiesel, Botryococcus braunii, microalgae,  hydrocarbon

## PENDAHULUAN
Energi saat ini menjadi kebutuhan yang mutlak dan  harus  dipenuhi.  Hampir  semua  sarana  dan prasarana penunjang kehidupan manusia digerakkan oleh energi. Sampai saat ini, energi sebagai penggerak roda  perekonomian  manusia masih dipasok dari fossil fuel. Energi fosil merupakan energi yang terbatas dan kurang ramah lingkungan. Proses pembakarannya menghasilkan efek yang kurang baik bagi lingkungan dan kesehatan seperti efek green house, dikarenakan kandungan  karbon  dioksida  (CO 2 ),  sulfur  dioksida (SO 2 ), dan oksida nitrogen (NO x ) (Patil et al., 2008).
Isu perubahan iklim global telah melatarbelakangi negara-negara industri maju untuk melakukan upaya diversifikasi  energi  dengan  menciptakan  sumber- sumber  energi  baru  dan  lebih  meningkatkan penggunaan energi surya, air, angin, serta sumber- sumber energi terbarukan (renewable) lain yang ramah lingkungan. Salah satu bahan baku penghasil biodiesel
yang  cukup  potensial  adalah  mikroalga.  Berbagai keuntungan untuk pengembangan mikroalga sebagai sumber energi alternatif telah dikemukaan oleh Verma et al., (2010) diantaranya yaitu: a). Memiliki struktur sel   yang  seder hana  dan  k em am puan  untuk mengendalikan sel tanpa mengurangi produktifitasnya, b). Kemampuan berfotosintesis sangat tinggi, sekitar 3–8% sinar matahari mampu dikonversikan menjadi energi dibanding tanaman tingkat tinggi lainnya yang hanya sekitar 0,5%, c). Memiliki siklus hidup yang pendek  (±1–10  hari),  d).  Kemam puan  untuk mensintesis  lemak  sangat  tinggi  (±  40–86%  berat kering  biomassa),  e).  Kemampuan  bertahan  pada kondisi lingkungan yang ekstrim (salinitas tinggi atau lingkungan  yang  tercemar),  f).  Tidak  banyak membutuhkan pupuk dan nutrisi, g). Tidak bersaing dengan produk pangan.
Banyak  penelitian  yang  mengkaji  keuntungan biodiesel  dibandingkan  dengan  bahan  bakar konvensional (fossil fuel). Menurut Hoffman (2003)
dalam Gao et al. (2009), perbedaan yang mendasar dalam penggunaan bahan bakar biodiesel dan fossil fuel  adalah  kemampuan  dalam  melumasi  mesin. Bahan bakar konvensional (fossil fuel)   membutuhkan sulfur untuk melumasi mesin sedangkan biodiesel tidak  membutuhkan  kandungan  sulfur,  karena  itu biodiesel lebih ramah lingkungan.

## MIKROALGA
Mikroalga  pada  umumnya  merupakan tumbuhan renik  berukuran  mikroskopik  (diameter  antara 3-30 μ m)  yang  termasuk  dalam  kelas  alga  dan  hidup sebagai koloni maupun sel tunggal di seluruh perairan tawar maupun laut. Morfologi mikroalga berbentuk uniseluler  atau  multiseluler  tetapi  belum  ada pembagian  fungsi  organ  yang  jelas  pada  sel-sel komponennya.  Hal  itulah  yang  membedakan mikroalga dari tumbuhan tingkat tinggi (Romimohtarto, 2004).
Mikroalga  diklasifikasikan  menjadi  em pat kelompok antara lain: diatom (Bacillariophyceae), alga hijau (Chlorophyceae), alga emas (Chrysophyceae) dan  alga  biru  (Cyanophyceae)  (Isnansetyo  & Kurniastuty,  1995).  Eryanto  et  al.  (2003)  dalam Harsanto (2009)  menyatakan  bahwa penyebaran habitat mikroalga biasanya di air tawar (limpoplankton) dan air  laut (haloplankton).  Berdasarkan  distribusi vertikal di perairan, mikroalga dikelompokkan menjadi tiga yaitu hidup di zona euphotik (ephiplankton), hidup di  zona  disphotik  (mesoplankton),  hidup  di  zona aphotik  (bathyplankton)  dan  yang  hidup  di  dasar perairan/ bentik (hypoplankton).
Mikroalga merupakan kelompok organisme yang sangat beragam dan memiliki berbagai potensi yang dapat dikembangkan sebagai sumber pakan, pangan, dan bahan kimia lainnya. Kandungan senyawa pada mikroalga bervariasi tergantung dari jenisnya, faktor lingkungan dan nutrisinya. Pada Spirulina platensis yang dikultur dengan menggunakan media Walne
kandungan  kadar  protein,  karbohidrat,  dan  lemak berturut-turut  adalah  50,05%;  15,48%;  0,5% (Widianingsih et al., 2008). Kandungan lemak rata- rata sel mikroalga bervariasi antara 1–70% tetapi dapat mencapai 90% berat kering dalam kondisi tertentu (Spolaore et al., 2006).
Beberapa  jar ingan  sel   m ik roalga  dapat dipergunakan dalam pembedaan dan klasifikasi sesuai divisinya.  Menurut  Graham  &  Wilcox  (2000),  ada em pat  karakteristi k  yang  di gunak an  untuk membedakan divisi mikroalga yaitu tipe jaringan sel, ada tidaknya flagella, tipe komponen fotosintesa, dan jenis pigmen sel. Selain itu, morfologi sel dan sifat sel  yang  menempel  baik  yang  berkoloni  ataupun filamen merupakan informasi yang dapat digunakan untuk mengklasifikasikan masing-masing kelompok mikroalga.
Selain dari karakteristik morfologi (morphological characteristics), komposisi biokimia dan asam lemak pada  setiap  sel  mikroalga  dapat  juga  digunakan sebagai  pembeda  dari  masing-masing  spesies. Menurut  Li  &  Watanabe  (2001),  karakter-karakter taksonomi  seperti  wujud  filamen  dan  sel  akinete bersifat tidak mutlak untuk identifikasi karena akinete adakalanya tidak ada dan wujud filamen mungkin bisa berubah karena lingkungan pada kondisi kultur.
Salah satu spesies mikroalga yang cukup dikenal sebagai bahan biodiesel adalah Botryococcus braunii. B. braunii  merupakan tanaman  sel  tunggal berwarna hijau,  banyak  dijumpai di  perairan danau,  tambak ataupun  perairan  payau  sampai  laut  (Metzger  & Largeau, 2005). Kandungan klorofil (zat hijau daun) B. braunii mencapai ±1,5–2,8%, terdiri dari klorofil a, b, dan c, sehingga di permukaan perairan tampak berwarna hijau-coklat kekuningan (Kabinawa, 2008). B. braunii memiliki inti sel dengan ukuran ±15–20 µm dan  berkoloni,  bersif at  non  motil  dan  setiap pergerakannya sangat dipengaruhi oleh arus perairan (Kabinawa, 2008).

## Tabel 2. Komposisi kandungan minyak beberapa spesies mikroalga pada fase stationery
Tabel 1. Komposisi kandungan minyak pada beberapa spesies mikroalga
Sumber: *Banerjee et al., 2002; Gouveia & Oliveira, 2009.
Tabel 2. Komposisi kandungan minyak beberapa spesies mikroalga pada fase stationery dan eksponensial Nitzschia cf. ovalis Thalassiosira
sp. Synechococcus sp. Dictiosphaerium pulchellum Stichococcus sp. Synechocystis sp. Scenedesmus sp. As. miristat 3,15* 6,37* 26,09* 2,45* 1,54* 28,24* 1,03* (C14:0) 2,67 4,59 25,96 2,38 2,12 13,34 1,12 As. palmitat 18,83* 20.67* 16,81* 11,41* 20,03* 5,70* 17,30* (C16:0) 13,25 19,61 13,94 12,56 17,61 5,89 5,76 As. stearat 0,24* 0,27* 0,45* 0,61* 0,68* 0,36* 1,73* (C18:0) 16,37 0,35 0,58 0,77 0,54 1,17 0,33
Jenis asam lemak Kandungan asam lemak  (%)
Sumber:  Pratoomyot  et  al.,  (2005),  Keterangan: *  =  fase  stationery.
Mikroalga penghasil biodiesel
Kandungan minyak mikroalga yang cukup tinggi merupakan  salah  satu  alasan  pengembangan biodiesel dari mikroalga oleh negara-negara maju di Eropa, selain alasan yang terkait dengan lingkungan. Komposisi asam lemak pada mikroalga yang sangat bervariasi menyebabkan karakteristik biodiesel yang dihasilkan  juga  beragam.  Kandungan  minyak  dari beberapa spesies telah banyak diteliti, seperti yang dikemukaan Gouveia & Oliveira (2009) pada Tabel 1.
Menurut  Pratoomyot  et  al.  (2005),  keragaman spesies mikroalga akan membuat kandungan asam lemak pada mikroalga juga bervariasi. Penelitiannya lebih  lanjut  menunjukkan  bahwa  pada  umumnya
terdapat perbedaan kandungan  asam lemak pada mikroalga pada saat fase eksponensial dan fase sta- tionery,  seperti  yang  terlihat  pada  Tabel  2.  Pada penelitian  Amini  (2005a),  profil  kandungan  asam lemak pada beberapa spesies mikroalga dapat dilihat pada Tabel 3.
Asam lemak yang bervariasi pada mikroalga salah satunya dapat dimanfaatkan untuk biodiesel. Biodiesel merupakan campuran dari alkali ether dan asam lemak yang diperoleh dari proses transesterifikasi minyak nabati atau minyak hewani (Shahzad et al., 2010). Bahan  baku  diesel  adalah  hidrokarbon  yang mengandung  8–10  atom  karbon  per  molekul sementara hidrokarbon yang terkandung pada minyak
Spesies Kandungan minyak (% berat kering) Scenedesmus obliquus 35–55 Scenedesmus dimorphus 16–40 Chlorella vulgaris 56 Chlorella emersonii 63 Chlorella protothecoides 23–55 Chlorella sorokiana 22 Chlorella minutissima 57 Dunaliella bioculata 8 Dunaliella salina 14–20 Neochloris oleoabundans 35–65 Spirulina maxima 4–9 Botryococcus braunii* 75

## S. Amini  dan  R. Susilowati

## Tabel 3. Profil kandungan asam lemak pada beberapa spesies mikroalga
Chlorella sp Dunaliella sp Nannocloropsis Porphyridium Spirulina sp Tetraselmis B.braunii As. miristat (C14:0) 6,71 8,12 87,35 6,90 11,64 5,37 3,04 As. palmitat (C16:0) 5,95 6,43 20,05 6,04 10,34 6, 82 14,11 As. stearat (C18:0) 4,25 8,21 16,68 7,82 8,74 2,17 9,06 As. oleat  (C18:1) 24,27 64,20 101,50 26,64 32,76 24,21 14,04 As. linoleat (C18:2) 5,58 32,48 49,02 10,76 21,27 21,07 0,27
Jenis asam lemak
Kandungan asam lemak  (%)
Sumber:   Amini  (2005a).
Gambar 2. Proses transesterifikasi biodiesel (Zhang et al., 2003).
nabati rata-rata adalah 16–20 atom karbon per molekul sehingga  minyak  nabati  viskositasnya  lebih  tinggi (lebih kental) dan daya pembakarannya sebagai bahan bakar masih rendah (Mursanti, 2007). Oleh sebab itu agar  minyak  mikroalga  dapat  digunakan  sebagai bahan bakar (biodiesel) maka perlu dilakukan proses transesterifikasi.    Proses  transesterifikasi  secara kimiawi dapat dilihat pada Gambar 2.

## Botryococcus braunii SEBAGAI BIODIESEL MASA DEPAN
Di antara mikroalga yang lain, spesies B. braunii memiliki kandungan hirokarbon yang sangat tinggi yang mencapai ±15–76% dari berat kering (Metzger et al., 1985). Hidrokarbon rantai panjang dalam bentuk minyak atau triterpen tak bercabang dari spesies ini dikenal  dengan  nama  botryococcene  (Metzger  & Largeau, 2005; Rao et  al.,  2007)  sangat potensial
sebagai  sumber  energi  atau  biodiesel.  Menurut Dayananda et al. (2005) produksi hidrokarbon dari B. braunii    berkisar  antara  2–8%  (berat  kering) tergantung  dari  kondisi  kultivasi  selama  proses pemeliharaannya.
Persiapan Biomassa Botryococcus braunii Kultur biomassa B. braunii pada prinsipnya tidak berbeda  jauh  dengan  kegiatan  kultur  mikroalga spesies  lainnya.  Pada  kegiatan  kultur  mikroalga diperlukan beberapa tahapan kultivasi indoor dan semi outdoor sebelum dilakukan kultur massal di sistem outdoor. Kultivasi indoor dapat dilakukan di media padat (agar). Tahapan selanjutnya adalah kultur di media cair yang diawali dengan mengkultur mikroalga dalam   tabung  reaksi  steril  dan  diberi  pupuk. Selanjutnya  apabila  kepadatan  mikroalga  dalam tabung meningkat, kultur dapat dipindahkan dalam media  dengan  volume  lebih  besar  (100–300  mL). Setelah  satu  minggu kultur dapat dipindahkan ke volume yang lebih besar lagi (500–1000 mL). Demikian seterusnya kultur  dilakukan  secara bertahap dari volume kecil ke volume yang lebih besar yaitu sampai 5000 mL. Kultur semi outdoor menggunakan wadah
kultur  dengan  kapasitas  40  L  atau  100  L  dengan pencahayaan yang  tidak terlalu kuat.  Kultur dapat dilanjutkan dengan wadah yang kapasitasnya 1000 L. Selanjutnya dengan volume yang lebih besar yaitu 10–1000 m 3 yang dikenal dengan kultur skala massal.
Mikroalga B. braunii dapat tumbuh dalam berbagai media yang mengandung cukup unsur hara makro seperti N, P, K dan unsur mikro lainnya dalam jumlah relatif sedikit yaitu besi (Fe), tembaga (Cu), mangan (Mn), seng (Zn), silicon (Si), boron (B), molibdenum (Mo), vanadium (V), dan kobalt (Co) (Manahan,1984; Chumaidi  et  al.,  1992).  Pupuk  sebagai  faktor penunjang  pertum buhan  sel  secar a  nor m al memerlukan minimal 16 unsur hara di dalamnya dan harus ada 3 unsur mutlak, yaitu nitrogen, fosfor, dan kalium  (Adhikari,  2004;  Higgins,  2004;  Manahan, 1984).
Seperti  jenis  mikroalga  lainnya,  budidaya  B. braunii membutuhkan air, cahaya, CO 2 dan bahan- bahan  anorganik  sebagai  nutrisi.  Selain  itu, peningkatan  produktiv itas  budidaya  B.  braunii dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain pH, suhu, kadar  CO 2 ,  cahaya,  dan  salinitas  yang  optimum (Banerjee et al., 2002). Salinitas merupakan faktor lingkungan  yang  sangat  berpengaruh  terhadap pertumbuhan dan komponen biokimia mikroalga laut (Ghezelbesh  et  al.,  2008).  Menurut  Susilowati  & Amini (2009),  B. braunii  dapat tumbuh  pada kisaran kadar garam 0–25 ppt dan tumbuh subur pada 10 ppt. Dalam  penelitian  lebih  lanjut  dikemukakan  bahwa kelimpahan dan laju pertumbuhan B. braunii tertinggi terjadi pada salinitas 5 ppt yaitu dengan kelimpahan 6,9 log sel/mL dan laju pertumbuhan 1,9/hari. Untuk memacu peningkatan pertumbuhan sel dan kandungan minyaknya,  B.  braunii  dikultur  didalam  bioreaktor dengan penambahan  CO 2 (Gambar 3)  pada skala laboratorium. Sedangkan kultur massal  B. braunii dilakukan  di  luar  ruangan  atau  ditambak  dengan penyinaran cahaya matahari langsung untuk proses sintesis (Gambar  3b).

## Pemanenan Biomassa
Pemanenan mikroalga seringkali masih menjadi kendala. Pada industri komersial, panen biomassa yang  terbaik  dapat  dicapai  antara 0,3–0,5 g sel kering/L atau 5 g sel kering/L; hal ini membuat panen mikroalga sangat sulit dan mahal (Wang et al., 2008). Hulteberg et al. (2008), mengemukakan bahwa panen pada  mikroalga  spesies  B.  braunii  paling  efisien menggunakan  flokulan  kimia  atau  modif ikasi penggunaan flokulan kimia, karena spesies ini memiliki ukuran sel <10 µm. Penggunaan flokulan kimia mampu mengendapkan biomassa sebanyak 80% (Andrews et  al.,  2008).  Ludwig  (2006)  melaporkan  bahwa penggunaan flokulan mampu menghasilkan biomassa sebesar 1–3% dan biaya operasional yang murah. Flokulan kimia dapat digunakan dengan menambah pH  pada  media  panen,  misalnya  penambahan potassium hidroksida yang mampu menambah pH sampai  mencapai  nilai  11  dan  natrium  hidroksida menambah pH menjadi 9 (Hulteberg et al., 2008).
Pemanenan biomassa B. braunii dilakukan dengan modifikasi metode flokulan yaitu metode pengendapan dengan menggunakan bahan kimia NaOH dengan perbandingan 1:1 (1 L mikroalga: 1 g NaOH) (Amini, 2005b).  Pengendapan  dilakukan  selama  24  jam, kemudian baru dilakukan pemisahan biomassa dan cairan jernihnya. Selanjutnya biomassa dapat dicuci dengan air tawar beberapa kali untuk menghilangkan kandungan garamnya, kemudian dilakukan penirisan menggunakan  kain  satin  selama  24  jam.  Pada metode ini hasil yang diperoleh berkisar antara 3 g biomassa basah/L. Pengeringan biomassa dilakukan dengan sinar matahari selama 3–4 hari tergantung cuaca dan  selanjutnya biomassa bisa  disimpan di suhu  chilling  untuk  nantinya  dilakukan  proses
Gambar 3. Media kultivasi biomassa mikroalga: (a) dengan bioreaktor (Anon., 2007); (b) kultur massal mikroalga pada bak beton.
(a)                                                                (b)
Gambar 4. Panen  biomassa mikroalga dengan flokulan.
ekstraksi.  Pada  Gambar  4  dapat  dilihat  panen  B. braunii dengan menggunakan flokulan.

## Ekstraksi Minyak dari Mikroalga
Menurut  McMichens  (2009)  terdapat  beberapa metode  ekstraksi  yang  dapat  digunakan  dalam ekstraksi minyak dari mikroalga antara lain:
1.  Metode mekanik
Metode mekanik terdiri dari metode pengepresen (expeller/press) dan ultrasonic-assisted extraction. Pada metode pengepresan (expeller/press) alga yang sudah siap panen dikeringkan terlebih dahulu untuk mengurangi kadar air yang masih pada biomassa. Selanjutnya dilakukan pengepresan biomassa dengan alat  pengepres  untuk  mengekstraksi  minyak  yang terkandung dalam alga. Dengan menggunakan alat pengepres  ini,  dapat  di  ekstrasi  sekitar  70–75% minyak yang terkandung dalam alga (Andrews, 2008).
Pada  prinsipnya     metode   ultrasonic-assisted extrac tion  m enggunakan  reaktor   ultrasonik. Gelombang  ultrasonik  digunakan  untuk  membuat gelembung kavitasi (cavitation bubbles) pada mate- rial larutan. Ketika gelembung pecah dekat dengan dinding sel maka akan terbentuk gelombang kejut dan pancaran  cairan  (liquid  jets)  yang  akan  membuat dinding  sel  pecah.  Pecahnya  dinding  sel  akan membuat komponen di dalam sel keluar bercampur dengan larutan.
2.  Metode pelarut kimia
Minyak  dari   alga  dapat  di am bi l  dengan menggunakan  larutan  kimia,  misalnya  dengan m enggunakan  benzena,  ether,  dan  heksana. Penggunaan  larutan  kimia  heksana  lebih  banyak digunakan sebab harganya tidak terlalu mahal.
Menurut Amini  (2005b),  larutan  heksana  dapat digunakan langsung untuk mengekstraksi minyak dari
alga (Gambar 4) atau dikombinasikan dengan alat pengepres dengan tahapan sebagai berikut: setelah proses    ekstraksi  dengan  metode  pengepresan, ampas  (pulp)  biomassa  dicampur  dengan  larutan heksana untuk mengambil sisa minyak alga. Proses selanjutnya, ampas alga disaring dari larutan yang berisi  minyak  dan  heksana.  Untuk  memisahkan minyak  dan  heksana dapat dilakukan proses distilasi. Kombinasi metode pengepresan dan larutan kimia dapat  mengekstraksi  lebih  dari  95%  minyak  yang terkandung  dalam  biomassa  (McMichens,  2009). Menurut Chaiklahana et al. (2008) proses ekstraksi minyak tergantung pada kepolaran pelarut, ukuran partikel, rasio pelarut dan partikel, temperatur  dan waktu  ekstraksi.  Sebagai    catatan,    penggunaan larutan  kimia  untuk  mengekstraksi  minyak  dari tumbuhan sangat beresiko. Misalnya larutan benzena dapat menyebabkan penyakit kanker, dan beberapa larutan kimia juga mudah meledak.

## 3.  Supercritical Fluid Extraction
Pada metode ini, CO 2 dicairkan di bawah tekanan normal kemudian dipanaskan sampai mencapai titik kesetimbangan antara fase cair dan gas. Pencairan fluida  inilah  yang  bertindak sebagai larutan yang akan mengekstraksi minyak dari alga.
Metode  ini  dapat  mengekstraksi  hampir  100% minyak yang terkandung dalam biomassa (Andrews, 2008).  Namun  begitu,  metode  ini  memerlukan peralatan khusus untuk penahanan tekanan.
4.  Osmotic Shock
Dengan  menggunakan  osmotic  shock  maka tekanan osmotik  dalam sel akan berkurang sehingga akan  membuat sel pecah dan komponen di dalam sel  akan  keluar.  Metode  osmotic  shock  memang banyak digunakan untuk mengeluarkan komponen- komponen dalam sel, seperti minyak alga ini.
Tabel 4. Kandungan hidrokarbon B. braunii
Sumber: Hillen et al., 1982.
Jenis  komponen Nilai (%) Isobotryococcene 4 Botryococcene 9 C 34 H 58
11 C 36 H 62
34
C 36 H 62
4 C 37 H 64 20 Other hydrocarbons 18
Gambar 5. Diagram alir ekstraksi minyak dengan pelarut heksana (Amini, 2005b).
Maserasi selama 24 jam dalam suhu ruang Tambahkan pelarut hexane (1 : 1) Sentrifugasi 3000 rpm selama 10 menit. Pisahkan supernatan dengan pellet Uapkan supernatan dengan rotary evaparator (pemisahan pelarut dan minyak nabati) Simpan minyak nabati dalam katalis methanol & NaOH (0,25 g NaOH dilarutkan dalam 24 mL methanol)

## Biomassa kering mikroalga (x gram)
Kandungan Minyak dan Mutu Biodiesel
Minyak biodiesel dari B. braunii merupakan iso- prenoid triterpenes dengan rumus Cn H2n-10 turunan dari  asam lemak. Nilai n mempunyai kisaran angka 30–37  sebagai  biodiesel  dari  unsur  hydrocracking gasoline  type  hydrokarbon  (Frenz  et  al.,1989). Kandungan hidrokarbon pada B. braunii seperti pada Tabel 4 (Hillen et al.,1982).
Biodiesel  sebagai  sumber  energi  terbarukan memiliki beberapa keuntungan, antara lain (i) bahan
baku biodiesel dapat diperbarui (renewable), sehingga kontinuitasnya dapat terjamin (ii) biodiesel lebih aman dalam penyimpanan, (iii) mampu melindungi mesin dan dapat digunakan pada semua mesin diesel tanpa atau dengan modifikasi. Biodiesel dapat mengurangi emisi udara beracun dan bersifat mudah terurai atau biodegradable  (Knothe  et  al.,  2006).  Penggunaan biodiesel sebagai bahan bakar memiliki keuntungan antara  lain  tidak  memerlukan  modifikasi  mesin, memiliki  angka  setana  tinggi,  ramah  lingkungan, memiliki daya pelumas tinggi, aman dan tidak beracun

## S. Amini  dan  R. Susilowati

## Tabel 5. Perbandingan emisi biodiesel, campuran biodiesel 10%, dan petrodiesel
Sumber: Reksowardojo et al., (2005).
No Parameter 1 Konsumsi bahan bakar (400 kPa) 0.39 Kg/kW. jam 0.4 Kg/kW. Jam 0.4 Kg/kW.jam 2 Emisi Gas CO 800% 400 ppm 2300% 3 Emisi Gas Nox 70 ppm 180 ppm 95 ppm 4 Indeks Bosch 5.5 6 6.5 5 Perbedaan pengikisan pada alat nozzle 0.081 g 0.059 g 0.084 g 6 Perbedaan pengikisan pada alat piston 2.000 g 4.000 g 22.000 g 7 Deposit piston 42 µm 50 µm 102 µm 8 Deposit pada kepala silinder 30 µm 24 µm 46 µm 9 Lubrikasi total 10.9 mg 10.6 mg 9.25 mg 10 Lubrikasi (jelaga) 0.024 Abs/cm 0.007Abs/cm 0.006 Abs/cm 11 Lubrikasi (oksidasi) 0.018 Abs/cm 0.007 Abs/cm 0.004 Abs/cm Biodiesel 10% Biodiesel 100% Petrodiesel
(Sudrajat & Setiawan, 2003). Selain itu juga, menurut Prihandana & Roy  (2006) emisi karbon monoksida (CO) yang dihasilkan cukup rendah. Perbandingan emisi  biodiesel   dengan  petrodiesel  pada mesin diesel dapat dilihat pada Tabel 5.
Persyaratan mutu biodiesel  di Indonesia sudah dibakukan  dalam  SNI-04-7182-2006,  yang  telah disahkan  dan  diterbitkan  oleh  Badan  Standarisasi Nasional (BSN) tanggal 22 Februari 2006.

## PENUTUP
Kondisi  iklim  tropis  Indonesia  dengan  cahaya matahari  sepanjang  tahun  sangat  sesuai  untuk kehidupan  mikroalga  dan  pengembangannya. Mikroalga,  yang  tidak  bersaing  dengan  produk pangan,  sangat  prospektif  dikembangkan  sebagai bahan baku biodiesel  di Indonesia.  Salah satunya adalah  spesies  B.  braunii  yang  sangat  berpotensi sebagai  bahan  baku  biofuel.  Hidrokarbon  rantai panjang  dalam  bentuk  minyak  atau  triterpen  tak bercabang  dari  spesies  ini  dikenal  dengan  nama botryococcene  sangat  potensial  sebagai  sumber energi  atau  biodiesel.  Namun  demikian  beberapa tahapan yang perlu diperhatikan yaitu pemanenanan biomassa seringkali masih menjadi kendala. Selain
itu,  pengambilan  minyak  dari  mikroalga  masih merupakan  proses  yang  sangat  mahal    sehingga diperlukan  alternatif  metode  ekstraksi  yang  lebih ekonomis.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2007.  Could  microalgae  hold  the  secret  to  the future sustainable transport fuel?.http:// www.climaticoanalysis.org/post/could-microalgae- hold-the-secret-to-the-transport-fuel-of-the-future/. Accessed  on   Agustus  27, 2010.
Adhikari.  2004.  Fertilization,  soil  and  water  quality  man- agement  in  small  scale  ponds:  Fertilization  require- ments  and  soil  properties.  http://library.enaca.org/ A q u a c u l t u r e A s i a / A r t i c l e s / O c t - D e c - 2 0 0 3 / 9fertilization.pdf. Accessed  on   Agustus  27,  2010.
Amini.  S.  2005a.  Sk rining  mik roalga-penghasil kandungan    asam      lemak    omega    3.    Prosiding Seminar  Nasional  Perikanan  Indonesia  2005.  STP. Jakarta.  269–275
Amini,    S.    2005b.    Budidaya    Chlorella  sp.  Prosiding Seminar  Nasional  Perikanan  Indonesia  2005.  STP. Jakarta.  322–330
Andrews, R., Kunlei L., Mark C., Czarena C., and Aubrey
S.  2008.  Feasibility  of  capture  and  utilization  of  C0 2 from    kentucky      power    plants  by  algae  systems. Technical    Review  of  the  Literature  Related  to  the
Cultivation  and Harvesting of Algae for CO 2 Fixation and    the    Co-Production    of  Fuels  and  Chemicals. University of Kentucky. USA. 21 pp.
Banerjee, A., Sharma, R.,  Chisty, Y., and  Banerjee,  U.C.
2002.    Botryococcus  braunii: A  renewable  source  of hydrocarbons  and  other  chemicals.  Critical  Reviews in Biotechnology. (22) 3: 245–279.
Chaik lahana,  R.,  Chirasuwana,  N.,  Loha,  V.,  and Bunnag, B. 2008. Lipid and fatty acids extraction from the cyanobacterium Spirulina. Science Asia. 34: 299– 305.
Chumaidi,    Ilyaas,  S.,  Yunus,  M.,  Sahlan,  R.,  Utami, A., Priyadi,  P.T.,  Imanto,  S.,  Hartati,  Bastiawan,  Z., Jangkaru,  dan  Arifudin,  R.1992.  Pedoman  Teknis Budidaya  Pak an  Alami  Ikan  dan  Udang.  Pusat Pengembangan  Perikanan.  Jakarta.  84  pp. Dayananda, C., Sarada, R.,  Komar, V., and Ravishankar,
G.A.  2007.  Isolation    and  characterization  of  hydro- carbon  producing  green  alga  Botryococcus  braunii from  Indian  freshwater  bodies.  Electronic  Journal  of B i o t e c h n o l o g y . 1 ( 1 0 ) : 8 0 – 9 1 . h t t p : / / w w w . ejbiotechnology.  info/content/vol10/issue1/full/11/ 11.pdf. Accessed  on Agustus  27,  2010.
Frenz,  J.,  Largeau, C.,  Casadevall, E.,  Kollerup, F.,  and Daugulis, A.J .  1989.  Hydroc arbon  recovery  and biocompatibility  of    solvents    for    extraction  from  cul- tures  of    Botryococcus  braunii.  Biotechnology  and Bioengineering.  34  (6):  755–762.
Gao, Y.,  Gregor, C., Liang,  Y.,  Tang, D., and Tweed, C. 2009.  Algae Biodiesel. A Feasibility Report on BPRO 29000. 43 pp.
Ghezelbesh, F.,  Farboodnia, T., Heidari,  R., and Agh,  N. 2008.  Effects of different salinities  and  luminance  on growth  of  the  green  microalgae  Tetraselmis  chuii. Research Journal of Biological Sciences. 3 (3): 311– 314.
Gouveia, L. and Oliveira, A.N. 2009.  Microalgae as a raw material  for  biofuels  production.  J.  Ind  Microbiol Biotechnol.  36:  269–274.
Graham,  L.E.  and  W ilcox,  L.W.  2000.  Algae.  Prentice- Hall, USA. p. 78–89.
Harsonto,  S.  2009.  Analisis  asam  lemak  mikroalga Nannochloropsis  oculata.  Tesis.  Program  Magister Bidang  Keahlian  Kimia  Organik   Jurusan  Kimia FMIPA .  Institut  Tek nologi  Sepuluh  Nopember. Surabaya. 72  pp.
Higgins,    J.    2004.    Are    fertilizers  polluting  our  water supply.  http://www.agosa.org/agcsaarticles  4.htm. Accessed  on  Juli  26,  2004.
Hillen,  L.W.,  Pollard, G., Wake, L.V., and White, N. 1982. Hydrocracking of the oils of  Botryococcus braunii  to transport  fuel.  Biotechnology and  Bioengineering  24: 193–205.  http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/ abstract/107620334/. Accessed on Agustus 27, 2010. Hulteberg, C., Karlsson, H.T.,   Børresen, B.T., and Eklund,
H.  2008. Final  Report on  Biodiesel  Production from Microalgae.    Presented    to    StatoilHydro ASA  Oslo, Norway May 16, 2008. 88 pp.
Isnansetyo,  A.  dan  Kurniastuty.  1995.  Teknik  Kultur Fitoplankton dan  Zooplankton.  Kanisius. Yogyakarta. Kabinawa,  I.N.K.  2008.  Biodiesel  energi  terbarukan  dari mikroalga.  Warta  Pertamina.  (9):  31–35.
Knothe,  G.  2006.  Analyzing  biodiesel:  standards  and pother  methods.  Journal  American  Oil  Chemical Society. 83 (10): 823–833.
Li, R. and Watanabe, M.M.  2001. Fatty acid profiles and their    chemotaxonomy    in    planktonic    species    of Anabaena  (Cyanobacteria)  with  straight  trichomes.

## Phytochemistry.  57:  727–731.
Ludwig.  K.  2006. Algae  diesel.  A  preliminary  study  into the    feasibility  of  creating  biodiesel  from  algae.  Final Report.  Industrial  and  Operations  Engineering  Inter- disciplinary    Engineering.  University  of  Michigan-Ann Arbor. 33 pp.
Manahan,    E.S.  1984.    Environmental    chemistry.    4th Edition.  Brooks/Cole.Publishing  Company.  Monterey. 612  pp.
McMichens, R.B. 2009. Algae as a Source for Biodiesel. Paper  of  University  of  Maryland,  College  Park  library (unpublished).  40  pp.
Metzger,  P.,  Berkaloff,  C.,  Casadevall,  E.,  and  Coute, A.  1985.  Alkadeine-and  botryococcene-producing races  of    wild    strains    of    Botryococcus    braunii. Phytochemistry.  24:  2305–2312.
Metzger, P. and Largeau, C. 2005. Botryococcus braunii: a  rich    source    for    hydrocarbons    and  related  ether lipids.  Application  Microbiology  Biotechnology.  (66) 5:  486–496.
Mursanti,  E.  2007.  Proses  produksi  dan  subsidi biodiesel  dalam  mensubtitusi  solar  untuk mengurangi  ketergantungan  terhadap  solar.  Semi- nar  Energy,  Natural  Resource  and  Environment.  13 Desember  2007,  W isma  Mak ara,  Kampus  UI– Depok. 64 pp.
Patil,  V.,  Tran,  K.Q.,  and  Giselrod,  H.R.  2008.  Towards sustainable  production  of  biodiesels  from microalgae. Int.  J. Mol.  Sci. (9):  1158–1195.
Pratoomyot,  J.,  Srivilas, P., and Noiraksar, T. 2005. Fatty ac ids  composition  of  10  mic roalgal  spec ies. Songklanakarin  J. Sci.  Technol.  26  (6):  1179–1187.
Prihandana,  R.  dan  Roy  H.  2006.  Petunjuk  Budi  Daya Jarak Pagar. Agro  Media Pustaka, Jakarta. 72 pp. Rao,  A.R.,  Dayananda,  C.,  Sarada,  R.,  Shamala,  T.R.,
Ravishankar, G.A. 2007. Effect of salinity on growth of green alga Botryococcus braunii and its constituents. Bioresource  Technology.  (98):  560–564.
Reksowardojo, I.K., Buddy Kusuma, R.P., Mahendra, I.M., Brodjonegoro, T. P.,  Soerawidjaja, T.H., Syaharuddin, I., and Arismunandar, W.  2005. The  effect  of biodiesel fuel  from  physic  nut (Jatropha Curcas)  on an direct injection  (DI)  diesel  engine.  Proceeding  The  13th International    Pacific    Conference    on  Automotive Engineering.  2005,  Gyeongju-Korea.
Romimohtarto,  K.  2004.  Meroplank ton  Laut:Larv a Hewan  Laut  yang  Menjadi  Plankton.  Djambatan: Jakarta. 214 pp.
Shahzad,  I., Hussain, K., Nawaz, K., and Nisar, M.F. 2010. Review    algae    as    an  alternative    and  renewable resource  for  biodiesel  production.  The  Biol.  (E-Jour- nal  of  Life  Scienc es )  1  (1):  16–23.  http:// www.thebiol.com/Paper-3.pdf.  Accessed on Agustus 27,  2010.

## S. Amini  dan  R. Susilowati
Spolaore,  P.,  Joannis-Cassan,  C.,  Duran,  E.,  Isambert,
A.  2006.  Commercial  applications  of  microalgae. Journal  of  Bioscience  and  Bioenginering,  101:  87– 96.
Sudrajat  dan  Setiawan,  D.  2003.  Teknologi  pembuatan biodiesel  dari  minyak   bij i  jarak   pagar.  J urnal Penelitian  Hasil  Hutan.  23:  53–68.
Susilowati,  R.  dan  Amini,  S.  2009.  Optimalisasi  media kultivasi    Botryococcus  braunii  mikroalga  dalam salinitas  yang  berbeda.  Pros iding  Seminar Perikanan Indonesia, Jogyakarta,  25 Agustus.  6  pp. Verma, N.H., Mehrotra, S., Amitesh Shukla, A., and Mishra,
B.N.    2010.  Prospective    of    biodiesel    production
utilizing  microalgae  as  the  cell  factories:  A  compre- hensive  discussion.  African  Journal  of  Biotechnol- ogy. 9 (10): 1402–1411.
Wang,  B.,  Li,  Y.,  Wu,  N.,  and  Lan,  C.Q.  2008.  CO 2 bio- mitigation  using  mic roalgae.  Appl  Mic robiol Biotechnol  79:  707–718.
Widianingsih, A., Ridho, R., Hartati, dan Harmoko. 2008.
Kandungan  nutrisi  Spirulina  platensis  yang  dikultur pada media yang berbeda. Ilmu Kelautan. 13 (3) :167
Zhang,    Y.,    Dube,    M.A.,  McLean,  D.D.,  and  Kates,  M.
2003.  Biodiesel  production  from  waste  cooking  oil: proc ess  design  and  tec hnologic al  assesment.
Biosource Technology. 89: 1–16.