Morfogenesis dan Induksi Kalus Tanaman Tin (Ficus carica L.) … Jurnal Agroteknologi Vol. 13 No. 02 (2019)
MORFOGENESIS DAN INDUKSI KALUS TIN ( Ficus carica L.) PADA MEDIA MURASHIGE DAN SKOOG (MS) DENGAN

## PENAMBAHAN BENZYLAMINOPURINE
Morphogenesis and Callus Induction of Fig (Ficus carica L.) in MS Medium Supplemented with Benzylaminopurine
Pangesti Nugrahani 1) * , Didik Utomo Pribadi 1)
1) Jurusan Agroteknologi, UPN “Veteran” Jawa Timur Jl. Raya Rungkut Madya, Gunung Anyar,  Surabaya * Korespodensi Penulis: pangesti_n@upnjatim.ac.id

## ABSTRACT
Fig is one of the introduced fruit trees, which became popular in Indonesia. Its leave and fruit can be used as medicine and healthy food. The effect of different combination concentration of BAP (Benzylaminopurine) and 2,4-D (2,4-dicholophenoxy acetic acid) on callus induction from leaf segment of  Ficus  carica  L.  were  studied.  The  effect  of  differrent  combination  of  BAP  and  coconut  water  on morphogenesis of single node of Fig was also investigated. The study was arranged as factorial design in completely randomized design in two experiments with 5 repetitions for each treatment. The factors of experiment I were the concentration of BAP (0,1, and 2 mg/L) and the concentration of 2,4-D (0,1, and 2 mg/L). And the factors of experiment II were the concentration of BAP (1 and 2 mg/L) and the concentration of coconut water (100 and 150 mL/L). Each treatment consisted of 10 replicates (bottles). The result showed that MS (Murashige and Skoog) medium supplement with 100 mL/L coconut water, enhanced shoot development. MS medium supplemented with 2,4-D 2 mg/L, enhanced callus induction of Ficus carica L.
Keywords : 2,4-D, morphogenesis, BAP, callus, Ficus carica L.

## PENDAHULUAN
Tanaman  buah  Tin  atau  sering disebut juga dengan buah Ara ( Ficus carica L.)  termasuk  dalam  keluarga  Moraceae. Tanaman ini bukan tanaman asli Indonesia, tetapi sekarang banyak dibudidayakan dan dikembangkan  di  Indonesia.  Buah  Tin dipergunakan  sebagai  bahan  obat  herbal yang  dikonsumsi  segar,  kering  maupun olahan.  Daun  tanaman  Tin  juga  diolah menjadi  teh  sebagai  bahan  minuman  yang bermanfaat  bagi  kesehatan.  Daun  Tin diseduh  dengan  air  bersuhu  70 o C sebagai minuman  hangat  mengandung  fenolik sebagai antioksidan (Putri dan Wuryandari, 2018).
Keyakinan masyarakat akan manfaat tanaman Tin untuk kesehatan ini menyebabkan permintaan produk dan bibit tanaman Tin semakin meningkat. Biasanya
perbanyakan tanaman Tin dilakukan dengan metode stek dan cangkok. Beberapa peneliti mengembangkan propagasi tanaman Tin melalui kultur jaringan (Taha et al ., 2013). Mikropropagasi tanaman Tin secara  morfogenesis  langsung,  dilaporkan dapat  berhasil  dengan  baik,  dengan menggunakan  eksplan  tunas  pucuk  dan buku.  Induksi  kalus  dilakukan  dengan eksplan daun  (Danial et  al ., 2014;  Fadilah et al ., 2014) dan juga batang (Mahadi, et al ., 2016).
Komposisi  media  tanam  bagi  kultur in-vitro  tanaman  Tin,  pada  umumnya mempergunakan  media  Murashige  dan Skoog (MS) dengan penambahan berbagai kombinsi zat pengatur tumbuh (Bayoudh et al .,  2015),  GA 3 (Darwesh et  al .,  2014), kinetin dan BAP (Singh et al ., 2016), serta berbagai  sumber  karbon  (Qrunfleh et  al. , 2013).
Pemberian berbagai kombinasi konsentrasi Indole Buteric Acid (IBA) dan kinetin  berpengaruh  terhadap  induksi  dan pertumbuhan  kalus  daun  Tin  pada  media MS secara in vitro. Kombinasi konsentrasi konsentrasi zat pengatur  tumbuh 0,5 mg/L IBA  dan  1,5  mg/L  kinetin  merupakan kombinasi  konsentrasi  yang  terbaik  untuk induksi  dan  pertumbuhan    kalus  daun  Tin yang  ditanam  pada  media  MS  secara  in vitro,  dengan  waktu  induksi  20  hari, biomassa  kalus  (0,712  g),  tekstur  kalus kompak dan berwarna hijau (Fadilah et al ., 2014).
Penelitian  terdahulu  tentang  induksi kalus  tanaman  Tin,  diantaranya  dilakukan dengan  menggunakan  kombinasi  IBA  dan Kinetin  (Fadilah et  al. ,  2014),  BAP  dan Zeatin  (Ling et  al. ,  2018).    Penelitian  ini menggunakan  kombinasi  BAP  dengan  air kelapa untuk morfogenesis tunas, dan BAP dengan  2,4-D  untuk  induksi  kalus.    Air kelapa  dipergunakan  sebagai  sumber sitokinin  (Yong et  al .,  2009;  Lazim et  al ., 2015). Tujuan penelitian adalah menyiapkan protokol mikropropagasi tanaman Tin untuk memperoleh bibit steril dari hasil induksi kalus maupun morfogenesis  langsung,  guna  penelitian lebih lanjut.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah timbangan  analitik,  alat-alat  gelas,  botol kultur, autoklaf (Kaipu®), laminar air flow cabinet (Thermo  Scientific®),  pinset, scalpel,  pisau  scalpel,  serta  lampu  TL  20 watt.  Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  bahan  tanam  (eksplan) tunas pucuk dan daun, yang diperoleh dari tanaman Tin berumur dua tahun, unsur hara untuk  media  Murashige  dan  Skoog  (MS) (Merck®),  zat  pengatur  tumbuh  BAP (benzyaminopurine-Merck®)  dan  2,4-D (Merck®), air kelapa, alkohol 70%, larutan tween,  Clorox  (Bayclin ® ),  sabun  cair,
bethadine,  bakterisida  (Agrept®),  kertas saring, kertas label, plastik penutup.

## Tahapan Penelitian
Sterilisasi Bahan Tanam (Eksplan)
Sterilisasi permukaan dilakukan dengan  membersihkan  eksplan  dalam  air mengalir  selama  satu  jam.  Selanjutnya sterilisasi  permukaan  dilakukan  dengan alkohol  70%  selama  10  menit  dan  dengan larutan natriumhipoklorit (Clorox) 10% dan 1%  berturut-turut  selama  10  menit, kemudian dicuci tiga kali dengan air suling yang disterilkan. Sebelum ditanam, eksplan dicelupkan  ke  dalam  larutan  Bethadine selama 2 detik.

## Pembuatan Media Tanam
Media  dasar  yang  digunakan  adalah media  MS  (Murashige  dan  Skoog) ditambah dengan sukrosa (30 g/L), inositol (100  mg/L),  tiamin  HCl  (0,4  mg/L).  pH diatur  ke  pada  5,7  +  0,1  kemudian dilakukan  penambahan  agar  7  g/L.  Media dimasukkan  ke  dalam  botol  kultur  dan disterilisasi dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 o C dan tekanan 1,04 kg/cm 2 . Penambahan zat pengatur tumbuh dilakukan sesuai dengan perlakuan.

## Rancangan Percobaan
Penelitian  ini  menggunakan  metode rancangan  acak  lengkap  (RAL)  faktor tunggal  yaitu  penambahan  zat  pengatur tumbuh, terdiri dari 8 perlakuan yaitu BAP 1 mg/L + air kelapa (AK) 100 mL/L; BAP 2 mg/L + AK 100 mL/L; BAP 1 mg + AK 150 mL/L; BAP 2 mg/L + AK 150 mL/L; BAP 1 mg/L + 1 mL 2,4-D; BAP 1 mg/L + 2  mg  2,4-D;  BAP  2  mg/L  +  1  mg  2,4  D; BAP 2 mg/L + 2 mg 2,4-D. Masing- masing perlakuan  diulang  lima  kali.  Data  panjang tunas, jumlah tunas, jumlah daun, panjang tunas,  inisisasi  kalus,  dan  nilai  skor pertumbuhan  dan  perkembangan  kalus dianalisis  sebagai  nilai  rata-rata  +  SE (standar  eror).  Perbedaan  nilai  rata-rata statistik diperkirakan pada Uji Duncan 5%.

## Metode Analisis
Data eksplan hidup dinyatakan dalam persen  (%),  yang  dihitung  berdasarkan jumlah  eksplan  yang  tumbuh  terhadap eksplan  yang  mati  dan  stagnan  (Dhage et al .,  2015),  panjang  tunas  diukur  dengan menggunakan  penggaris,  jumlah  tunas ditentukan  dengan  menghitung  banyaknya tunas  yang  tumbuh  pada  setiap  eksplan, jumlah  daun  ditentukan  dari  daun  yang tumbuh pada setiap eksplan, inisisasi kalus ditentukan  berdasarkan  jumlah  hari  saat kalus mulai muncul pada eksplan, nilai skor pertumbuhan  dan  perkembangan  kalus ditentukan berdasarkan standar skor pertumbuhan  dan  perkembangan  kalus (Dewi et al ., 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Morfogenesis Tunas Tanaman Tin
Perkembangan tunas pucuk tanaman Tin pada perlakuan penambahan BAP dan air  kelapa,  masih  menunjukkan  hasil  yang kurang  baik.  Pengamatan  pada  10  hari setelah  tanam  memperlihatkan  banyaknya eksplan  yang  mati,  terkontaminasi  dan stagnan. Persentase eksplan hidup, stagnan dan mati,  ditunjukkan pada Tabel 1 .
Tabel 1 . Persentase eksplan hidup (%)
Perlakuan Hidup Stagnan Mati BAP 1 0,0 100,0 0,0 BAP 2 0,0 100,0 0,0 BAP 1  + arang 3,3 66,7 30,0 BAP 2  + arang 3,3 76,7 20,0 AK 100 30,0 70,0 0,0 AK 150 13,3 76,7 10,0 AK 100 + arang 3,3 86,7 10,0 AK 150  + arang 13,3 76,7 10,0
Keterangan: BAP 1: BAP 1 mg/L; BAP 2: 2 mg/L;
AK 100: air kelapa 100 mL/L; AK 150:
air kelapa 150 mL/L
Tingginya  tingkat  kematian  eksplan sebagian besar dikarenakan terjadi kontaminasi  yang  disebabkan  oleh  fungi dan ada juga yang terserang bakteri. Tabel
1 memperlihatkan  bahwa  lebih  dari  50% eksplan  mengalami  stagnan,  dan  mati karena terkontaminasi.
Eksplan lain juga mengalami pencoklatan ( browning ). Perlakuan dengan penambahan arang pada media dimaksudkan  untuk  menurunkan  jumlah eksplan yang mengalami browning. Perlakuan penambahan arang pada Tabel 1 masih  menunjukkan  adanya  eksplan  mati dan  eksplan  stagnan.    Inisiasi  tunas  pucuk kultur jaringan tanaman Tin pada penelitian Dhage et  al. (2015)  juga  menunjukkan pertumbuhan  yang  kurang  baik.    Eksplan tunas  pucuk  tanaman  Tin  varietas  Pona, yang tumbuh hanya 11% hingga13%.
Beberapa hasil
penelitian menyebutkan  bahwa  eksplan  yang  berasal dari  alam,  biasanya  memiliki  tingkat kontaminasi tinggi (Sahu dan Sahu, 2013). Menurut  Prabhuling  dan  Huchesh  (2018), sterilisasi  dengan  HgCl 2 0.10%  selama  10 menit  cukup  efektif  untuk  menurunkan tingkat  kontaminasi  pada  kultur in  vitro tanaman Tin ( Ficus carica ).
Tunas  yang  telah  berhasil  tumbuh ( Tabel  1 ),  menunjukan  kondisi  yang  baik hingga  tumbuh  tunas  pucuk  dan  tunas aksilar.  Hasil pengamatan terhadap kultur pucuk  tanaman  Tin,  menunjukkan  tunas Tin  pada  awal  tanam  ( Gambar  1a )  dan setelah 60 hari setelah tanam ( Gambar 1b ).
Proses  morfogenesis  langsung  dengan menggunakan  eksplan  tunas  pucuk  dan buku  dapat  terjadi  dengan  baik  dengan pemberian zat pengatur tumbuh yang dapat merangsang pertumbuhan tunas, merangsang pembelahan sel, dan mengatur morfogenesis (Lestari, 2011; Fadilah et al. , 2014).

## (a)
(b)
Gambar  1 .  Morfogenesis  tunas  tanaman  tin  pada awal tanam (a) dan umur 60 hari setelah tanam (b)
Hasil pengamatan ( Tabel 1 ) menunjukkan  bahwa  pertumbuhan  tunas tanaman  Tin  sebesar  34%  sedangkan jumlah tunas per eksplan mencapai 6,50 + 0,33.    Rendahnya  jumlah  tunas  tumbuh pada penelitian ini kemungkinan disebabkan  media  MS  yang  digunakan kurang  sesuai.    Al-Shomali et  al .  (2017) menunjukkan  bahwa  media  OM  ( Olive Medium )  pada  kultur  jaringan  Tin  ( Ficus carica )  memiliki  komposisi  unsur  hara yang lebih sesuai untuk pertumbuhan tunas daripada  media  MS  dan  WPM  ( Woody Plant Medium ).
Keragaman  pertumbuhan  tunas  ini, selain disebabkan oleh perbedaan konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT), kemungkinan  juga  disebabkan  oleh  faktor lain seperti jenis klon dan media dasar yang digunakan  (Taha et  al .,  2013;  Qrunfleh et al .,  2013,  Bayoudh et  al .,  2015). Penggunaan eksplan, media dasar, lingkungan  tumbuh,  dan  sistem  regenarasi yang tepat diduga dapat meningkatkan daya multiplikasi tunas.
Tabel 2 . Pertumbuhan tunas pucuk tanaman Tin Perlakuan Tunas tumbuh (%) Jumlah tunas per eksplan BAP 1 + AK 100 20,0 0,70 ± 0,17 BAP 1 + AK 150 34,0 1,40 ± 0,33 BAP 2 + AK 100 30,0 1,80 ± 0,33 BAP 2 + AK 150 28,0 1,20 ± 0,08
Keterangan: BAP 1: BAP 1 mg/L; BAP 2: 2 mg/L; AK 100: air kelapa 100 mL/L; AK 150: air kelapa 150 mL/L
Hasil  pengamatan  jumlah  daun  dan panjang tunas menunjukkan nilai yang baik dan selaras pada perlakuan BAP 2 mg/L + air kelapa 100 mL/L  ( Tabel  2 ). Perlakuan tunggal  BAP  dengan  konsentrasi  2  mg/L pada  penelitian  Ling et  al .  (2018),  juga menunjukkan  jumlah  tunas  dan  panjang tunas tanaman Tin yang paling baik.
Air kelapa diketahui memiliki kandungan fitohormon antara lain golongan sitokinin yang dapat memacu pertumbuhan vegetatif  tanaman in  vitro (Yong et  al, 2009;  Lazim et  al., 2015).    Selain mengandung  fitohormon,  air  kelapa  juga mengandung  gula,  vitamin,  mineral  dan asam amino (Yong, 2009).
Belum  ada  hasil  penelitian  yang dilaporkan  tentang  pengaruh  air  kelapa pada  kultur  jaringan  Tin.      Namun  stek tanaman Tin pada penelitian Marpaung dan Hutabarat  (2015),  juga  menunjukkan pertumbuhan  yang  baik  dengan  perlakuan perendaman air kelapa 50%.
Penambahan  air  kelapa  100  mL/L pada media MS dengan BAP 2 mg/L pada penelitian  ini  menunjukkan  hasil  jumlah daun dan panjang tunas tertinggi ( Tabel 3 ).
Penambahan  air  kelapa  100  mL/L  pada media  MS  dengan  BAP  1  mg/L,  hanya menunjukkan  pertumbuhan  daun  sebanya 2,4 helai dan panjang tunas 1,8 cm.
Tabel 3 . Jumlah daun dan panjang tunas Perlakuan Jumlah daun /eksplan Panjang tunas  (cm) BAP 1 + AK 100 2,40 ± 0,20 1,80 ± 0,15 BAP 1 + AK 150 3,80 ± 0,41 2,30 ± 0,21 BAP 2 + AK 100 7,20 ± 0,33 6,50 ± 0,33 BAP 2 + AK 150 4,10 ± 0,32 3,20 ± 0,25 Keterangan: BAP 1: BAP 1 mg/L; BAP 2: 2 mg/L; AK 100: air kelapa 100 mL/L; AK 150: air kelapa 150 mL/L

## Induksi Kalus Tanaman Tin
Indusksi  kalus  tanaman  tin,  diamati secara  visual  pada  eksplan  daun  yang diinokulasi  dalam  media  MS  dengan penambahan  BAP  dan  2,4  D.  Pengamatan induksi  kalus  tanaman  Tin  pada  awal
Morfogenesis dan Induksi Kalus Tanaman Tin (Ficus carica L.) … Jurnal Agroteknologi Vol. 13 No. 02 (2019)
tanaman  hingga  umur  8  minggu  setelah tanam  memperlihatkan  bahwa  proses pembentukan  kalus  belum  terjadi  dengan maksimal ( Gambar
3 ). Perlakuan penambahan  BAP  1mg/L  dengan  2,4  D 1mg/L  maupun  2,4  D  2  mg/L  pada  media MS  untuk  inisiasi  kalus,  hanya  mampu mencapai  skor  1  ( Gambar  3a  dan  3b ). Sedangkan  perlakuan  penambahan  BAP 2mg/L  dengan  2,4  D  1  mg/L  maupun  2 mg/L,  hanya  mampu  mencapai  skor  2 ( Gambar 3c dan 3d ).
Kultur  kalus  tanaman  Tin  pada penelitian  Al-Shomali et  al .  (2017),  juga tidak menunjukkan hasil yang baik.  Namun dari  tiga  media  yang  diteliti,  media  WPM menunjukkan  perkembangan  kalus  yang paling baik.
Kultur  jaringan  pada  tanaman  Tin dengan  melalui  induksi  kalus,  jarang dilakukan  disebabkan  keberhasilan  yang masih  rendah.    Beberapa  penelitian  kultur jaringan  tanaman  Tin,  dilakukan  melalui morfogenesis langsung.
Gambar  3 .  Induksi  kalus  pada  umur  8  minggu setelah  tanam:  Perlakuan  BAP  1  + 2,4-D 1 (a), Perlakuan BAP 1 + 2,4-D 2 (b), Perlakuan BAP 2 + 2,4-D 1 (c), Perlakuan BAP 2 + 2,4-D 2 (d)
Hasil  pengamatan  rerata  saat  inisiasi kalus  terjadi  pada  hari  ke-20  sampai  21 ( Tabel  4 )  dan  rata-rata  tidak  mengalami peningkatan.  Sesuai  dengan  pendapat Lestari et  al .  (2011)  dan  Fadilah et  al .
(2014),  bahwa  jenis  zat  pengatur  tumbuh yang  berbeda  dari  golongan  yang  sama seperti  kinetin,  zeatin  dan  2-iP  kadang dibutuhkan  untuk  memacu  pertumbuhan yang lebih optimal.
Tabel 4 . Rerata saat inisiasi kalus
Perlakuan Inisiasi kalus (hari) BAP 1 + 2,4-D 1 20,20 ± 0,03 BAP 1 + 2,4-D 2 20,00 ± 0,03 BAP 2 + 2,4-D 1 21,20 ± 0,03 BAP 2 + 2,4-D 2 20,80 ± 0,03 Keterangan:  BAP  1: BAP  1 mg/L;  BAP  2:  2  mg/L; 2,4-D 1: 2,4-D 1 mg/L; 2,4-D 2: 2,4-D 2 mg/L
Pada tahap pertumbuhan dan perkembangan kalus tanaman Tin, terdapat skor  yang  dipergunakan  sebagai  dasar penilaian  pertumbuhan  dan  perkembangan kalus ( Tabel 5 ) berdasarkan hasil penelitian Dewi et  al. (2012). Penentuan  skor  ini dilakukan  untuk  mempermudah  penilaian dengan  membandingkan  hasil  penelitian berdasarkan pada referensi skor oleh Dewi et al. (2012).
Tabel 5 . Standar skor pertumbuhan dan perkembangan kalus Skor  Pertumbuhan kalus Perkembangan kalus 1 Inisiasi kalus Inisiasi kalus yang berwarna putih 2 10-25% kalus menutupi eksplan 76-100% kalus berwarna coklat 3 26-50% kalus menutupi eksplan 21-75% kalus berwarna coklat 4 51-75% kalus menutupi eksplan Kalus tidak berwarna atau bening 5 76-100% kalus menutupi eksplan Kalus berwarna hijau bening Sumber: Dewi et al. (2012)
Hasil penilaian terhadap kalus tanaman  tin  menunjukkan  bahwa  kalus yang diperoleh dari eksplan daun Tin belum mampu  mencapai  skor  lebih  dari  dua ( Tabel  6 ).  Skor  1  dicapai  pada  perlakuan BAP  1  +  2,4-D  1  dan  perlakuan  BAP  1  + 2,4-D 2, yaitu terjadi inisiasi kalus.  Skor 2 dicapai  pada  perlakuan  BAP  2  +  2,4-D 1 maupun perlakuan BAP 2 + 2,4-D 2, yaitu terdapat 10-25% kalus menutupi eksplan.
Morfogenesis dan Induksi Kalus Tanaman Tin (Ficus carica L.) … Jurnal Agroteknologi Vol. 13 No. 02 (2019)
Tabel 6 . Nilai skor pertumbuhan dan perkembangan kalus Perlakuan Skor Pertumbuhan  Perkembangan BAP 1 + 2,4-D 1 1.0 1.0 BAP 1 + 2,4-D 2 1.0 1.0 BAP 2 + 2,4-D 1 2.0 1.0 BAP 2 + 2,4-D 2 2.0 2.0
Keterangan:  BAP  1:  BAP  1 mg/L;  BAP  2:  2  mg/L;
2,4-D 1: 2,4-D 1 mg/L; 2,4-D 2: 2,4-D 2 mg/L
Pertumbuhan  dan  perkembangan kalus  dengan  eksplan  helai  daun  pada penelitian ini, berdasarkan Tabel 6 , masih tergolong  sangat  rendah.    Hal  ini diperkirakan  perlakuan  penambahan  BAP pada media MS dengan 2,4 D, kurang tepat untuk  pertumbuhan  dan  perkembangan kalus tanaman Tin.  Penelitian Patah et al . (2018)  berhasil  melakukan  inisiasi  kalus tanaman Tin dengan berbagai ekplan, yaitu batang, akar, tunas pucuk dan tangkai daun, dengan  perlakuan  kombinasi  BAP  dan NAA pada media MS.
Inisiasi kalus dalam rangka pembentukan  embrio  secara  somatik  pada kultur  in  vitro  tanaman  Tin,  jarang dilakukan karena pertumbuhan dan perkembangan kalus tidak secepat morfogenesis.  Regenerasi secara kultur in vitro  tanaman  Tin  masih  banyak  yang dilakukan  melalui  morfogenesis  langsung, daripada melalui somatik embryogenesis.
Menurut  Lestari  (2011),  regenerasi melalui jalur somatik embriogenesis memerlukan  beberapa  tahapan  dengan menggunakan  konsentrasi  zat  pengatur tumbuh yang berbeda, sedangkan pembentukan kalus embriogenik umumnya digunakan auksin kuat seperti 2,4-D. Tahap berikutnya  konsentrasi  auksin  diturunkan dan  pada  tahap  pendewasaan  digunakan sitokinin.

## KESIMPULAN
Perlakuan  kombinasi  konsentrasi BAP  dan  air  kelapa  berpengaruh  terhadap morfogenesis tunas berupa jumlah tunas per eksplan,  jumlah  daun,  dan  panjang  tunas dengan  perlakuan  terbaik  BAP  2  mL/L  + AK  100  mL/L.  Jumlah  tunas  per  eksplan sebesar  1,8;  tunas  tumbuh  sebesar  30%, jumlah daun 7,2; dan panjang tunas 6,5 cm. Perlakuan konsentrasi BAP dan 2,4-D tidak cukup  berpengaruh  terhadap  induksi  kalus berupa  rerata  saat  inisiasi  kalus  dan  rerata nilai skor pertumbuhan dan perkembangan kalus yang ditanam pada media MS secara in-vitro.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih ditujukan kepada  UPN  “Veteran”  Jawa  Timur  atas Dana  Riset  Inovasi  dan  Penerapan  Iptek (RISTI)  tahun  2018/2019.  Makalah  ini dipresentasikan pada  The  International Conference  on  Agriculture  and  Life Sciences (ICALS) pada 31 Juli - 2 Agustus 2019 di Jember, Indonesia.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Shomali, I., Sadder, M.T., dan Ateyyeha, A. 2017. Culture media comparative assessment of common fig ( Ficus carica L.) and carry over effect. Jordan Journal of Biological Sciences, 10(1): 13-18.
Bayoudh,  C.,  Labidi,  R.,  Majdoub,  A.,  dan Mars,  M.  2015.  In  Vitro  Propagation  of Capri  Fig  and  Female  Fig  Varieties ( Ficus  carica L.)  From  Shoot-Tips. J. Agr. Sci. Tech ., 17: 1597-1608.
Danial,  G.H.,  Ibrahim,  D.A.,  Brkat,  S.A.,  dan Khalil,  B.M.  2014.  Multiple  shoots production  from  shoot  tips  of  fig  tree ( Ficus  carica L.)  and  callus  induction from leaf segments. Int. J. Pure Appl. Sci. Technol ., 20 (1): 117-124.
Dhage, S.S.,  Chimote, V.P., Pawar, B.D., Kale, A.A.,  Pawar.  S.V.  , Jadhav,  A.S.    2015. Development  of  an  efficient  in  vitro regeneration protocol in fig ( Ficus carica
L.). Journal of Applied Horticulture , 17
(2): 160-164.
Dewi,  I.S.,  Nindita,  A.,  Purwoko,  B.S.,  dan Efendi,  D.  2016. Induksi  tunas  pada kotiledon  dan  hipokotil  tanaman  jarak pagar  ( Jatropha  curcas L.)  melalui organogenesis  tak  langsung. Jurnal AgroBiogen, 8 (3): 89-96.
Fadilah, R., Ratnasari, E., dan Isnawati.  2014.
Induksi dan pertumbuhan kalus daun tin ( Ficus  carica )  dengan  penambahan berbagai kombinasi konsentrasi IBA dan kinetin  pada  media  MS  secara in  vitro . Lenterabio, 3 (3): 141–146.
Lazim, M.I.M., Badruzaman, N.A., Peng, K.S., Long,  K.    2015.  Quantification  of cytokinins  in  coconut  water  from different maturation stages of Malaysia’s Coconut ( Cocos nucifera L.) varieties. J.  Food  Process  Technol. ,  6 (11): 515-520
Lestari,  E.G.    2011.    Peranan  zat  pengatur tumbuh  dalam  perbanyakan  tanaman melalui kultur jaringan .
Jurnal AgroBiogen, 7 (1): 63-68.
Ling, W.T., Liew, F.C., Lim, W.Y., Subramaniam, S., and Chew, B.L.  2018. Shoot  induction  from  axillary  shoot  tip explant of fig ( Ficus carica) cv. Japanese BTM  6. Tropical  Life  Sciences Research, 29 (2): 165-174
Mahadi,  I.,  Syafi’I,  W.,  dan  Sari,  Y.    2016.
Induksi  kalus  jeruk  Kasturi  ( Citrus microcarpa ) menggunakan hormon 2,4- D  dan  BAP  dengan  metode  in  vitro.
Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia (JIPI),
21 (2): 84  89
Patah,  F.K.A.,  Hasbullah,  N.A.,  Idris,  H.,
Radzuan,  N.S.,  Mohammad,    M.L. 2018.  Micropropagation of Ficus carica
L.  through  tissue  culture  system.    12th International  Conference  on  Advances in Agricultural, Chemical, Biological & Medical Sciences (AACBMS-18), August 6-8, 2018 Pattaya (Thailand).
Prabhuling, G., and Huchesh, H.  2018.  Direct in vitro regenaration in fig ( Ficus carica ) CV. Brown Turkey. Res. J. Biotech, 13 (5): 77-83.
Putri,  O.K.,  dan  Wuryandari,  W.  2018.  Efek suhu  penyeduhan  daun  Tin  ( Ficus carica ) segar dan kering terhadap kadar fenolik total. Jurnal Teknologi Pangan, 12 (2): 1-6
Qrunfleh,  I.M.,  M.M.  Shatnawi,  Z.I.,  and  Al- Ajlouni.    2013.    Effect  of  different concentrations of carbon source, salinity and  gelling  agent  on  in  vitro  growth  of fig ( Ficus carica L.). African Journal of Biotechnology, 12 (9): 936-940.
Sahu, J., and Sahu, R.K. 2013.  A review on low cost methods for in vitro micropropagation of plant through tissue culture  technique. UK  Journal  of Pharmaceutical  and  Biosciences, 1  (1): 38-41.
Taha,  R.A,  Mustafa,  dan  Hassan,  S.A.  2013. Protocol  for  micropropagation  of  two ficus  carica cultivars. World  Journal  of Agricultural Sciences, 9 (5): 383-388.
Sen, D.K., and Patel, R.M.  2018.  In vitro mass multiplication  of  fig  ( Ficus  carica L.) through nodal segment explants. Journal of  Cell  and  Tissue  Research, 18  (2):
6435-6440.
Singh,  B.M.,  Rajoriya,  C.M.,  Wani,  I.A., Rawat, R.S., and Lal Jat, B. 2016. In vitro studies  of Ficus  carica and  its application in crop improvement. International  Journal  for  Research  in
Applied Science & Engineering Technology (IJRASET), 4 (11): 135-148
Soliman, H.I., Gabr, M. and Abdallah, N.  2010.
Efficient
transformation and
regeneration of fig ( Ficus carica L.) via Somatic  Embryogenesis. Gm  Crops, 1 (1): 47-58.
Yong,  W.H.,  Ge,  L.,  Fei  Hg,  Y.,  Tan,  S.N. 2009.    The  Chemical  Composition  and Biological Properties of Coconut ( Cocos nucifera L.) Water. Molecules, 14: 5144- 5164.