JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 3(1), 1-6, 2017

## IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER DAN UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL HERBA MENIRAN ( Phyllanthus niruri L.) TERHADAP CANDIDA ALBICANS MENGGUNAKAN

## METODE DIFUSI CAKRAM
Submitted : 26 Februari 2017
Edited : 15 Mei 2017 Accepted : 23 Mei 2017
Eko Kusumawati 1 , Anita Apriliana 2 , Selvitawati 2
1 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Mulawarman Samarinda
2 Akademi Farmasi Samarinda Email : eko.kusumawati11@gmail.com

## ABSTRACT
The  aim  of  this  research  is  to  know  the  ability  of  meniran  ethanol  extract  (Phyllanthus niruri L.) in inhibiting the growth of Candida albicans. The research design is an experimental study.  The  extract  used  was  herbal  meniran  extract  made  by  maceration  using  70%  ethanol solvent,  the  content  of  ethanol  extract  of  meniran  tested  against  Candida  albicans  using  disc diffusion  method  were  5%,  10%,  20%,  30%  and  40%.  Activity  test  conducted  on  Sabaraound Dextrose  agar  media  that  has  been  smeared  with  Candida  albicans  culture  which  has  been standardized  with  Mc  Farland  standard.  The  pre-tested  disc  paper  is  first  dipped  into  the extract  with  various  concentrations.  Incubated  at  30  °  C  for  24  hours  and  the  inhibit  zone formed  was  measured.  The  result  showed  that  herbal  ethanol  extract  of  meniran  resulted  in drag zone diameter at Candida albicans ie 8,5 mm; 10.3 mm; 12.6 mm; 14.1 mm and 14.3 mm, for negative control 0 mm and positive control 20.1 mm. Data obtained from the results of the study  were  analyzed  using  one  way  anova  method  showed  p  -  value  <0,05,  it  was  concluded that there  was significant difference between negative control, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% and positive control.
Keywords : Meniran (Phyllanthus niruri L.), Candida albicans, Disc diffusion

## PENDAHULUAN
Negara  beriklim  tropis,  mempunyai tumbuhan  obat  yang  sangat  beragam, sehingga  tradisi  penggunaan  tumbuhan  obat tradisional  sudah  ada  dari  nenek  moyang yang dipercaya dapat menyembuhkan berbagai  jenis  penyakit.  Obat  tradisional adalah ramuan dari tumbuhan yang berkhasiat  sebagai  obat  yang  diketahui  dari penuturan orang-orang tua
yang
berpengalaman,  meskipun  perkembangan obat modern maju pesat, namun pengobatan
tradisional  tidak  pernah  surut  dari  arus kemajuan teknologi.
Meniran ( Phyllanthus  niruri L.) merupakan  tanaman  yang  berasal  dari  Asia yang beriklim tropis yang tersebar di seluruh daratan  Asia  termasuk  Indonesia.  Menurut Wibowo  (2013),  tumbuhan  meniran  dapat dimanfaatkan sebagai obat hepatitis, malaria,  disentri,  diare,  peradangan  pada kelenjar  kemih (1) dan  menurut  Soejono (2006), tumbuhan meniran atau (Phyllanthus niruri L. ) juga  dapat  dimanfaatkan  sebagai pelancar  air  seni  dan  obat  sariawan (2) .
Candida  albicans merupakan  salah  satu mikroorganisme yang terdapat pada mukosa mulut dapat menyebabkan stomatitis apthosa atau  sariawan.  Kandidiasis  dapat  dicegah pertumbuhannya dengan menggunakan antiseptik atau  antifungi, untuk menghindari dan  mencegah  dari  penyakit  mukosa  mulut seperti  sariawan  ada  beberapa  langkah  yang bisa  kita  lakukan,  salah  satunya  dengan melakukan  pengobatan  tradisional  ekstrak dari  tumbuhan  meniran  hal  ini  dapat ditunjukan  karena  meniran  memiliki  efek antifungi.  Di  beberapa  daerah,  tumbuhan meniran (Phyllanthus  niruri L. ) digunakan sebagai  obat  sariawan  dengan  cara  merebus meniran  dan  meminum  rebusan  tersebut. Melsi dkk (2011) telah melakukan penelitian mengenai ekstrak meniran dengan pelarut air menggunakan  variasi  konsentrasi  5%,  10%, 20%  30%  dan  40% (3) .  Hasil  penelitian tersebut menunjukan adanya hambatan pada Candida  albicans dengan  rata-rata  zona hambat  lemah  sehingga  ini  menarik  minat peneliti  untuk  mengetahui  kemampuan ekstrak  herba  meniran  tetapi  menggunakan pelarut yang berbeda yaitu ethanol 70%.
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  di atas  maka  rumusan  masalah  dari  penelitian ini  adalah  apakah  ekstrak  etanol  herba meniran  ( Phyllanthus  niruri L.)  dapat menghambat pertumbuhan Candida albicans dan berapa  konsentrasi  efektif  dari  ekstrak etanol herba meniran ( Phyllanthus niruri L.) yang dapat menghambat pertumbuhan
Candida albicans .

## METODE PENELITIAN
Pengambilan Sampel Sampel yang digunakan dalam
penelitian ini adalah seluruh bagian tumbuhan  meniran  ( Phyllanthus  niruri L.) yang dipetik pada sore hari. Sampel diambil dari Desa Teluk Dalam Kecamatan Tenggarong  Seberang  Kabupaten  Kutai Kartanegara, Kalimantan Timur. Pembuatan Simplisia Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  tumbuhan  meniran yang  telah  disortir,  bagian  tumbuhan  yang bagus  kemudian  dibersihkan  dengan  air mengalir  dan  ditiriskan  lalu  dikeringkan anginkan.  Setelah  proses  pengeringan  lalu disortasi  kering,  selanjutnya  dihaluskan  dan diayak  menggunakan  ayakan  mesh  40  dan ditimbang.

## Pembuatan Ekstrak
Ekstraksi  herba  meniran  ( Phyllanthus niruri L.)  dilakukan  menggunakan  metode maserasi dengan cara kerja 100 gram serbuk simplisia  meniran  dimasukkan  ke  dalam bejana kaca lalu ditambahkan 500 ml etanol 70%, kemudian didiamkan selama 3 hari dan di  aduk  menggunakan  maserator  selama  2 jam.  Hasil  ekstraksi  disaring,  kemudian dilakukan  remaserasi  dengan  500  ml  etanol 70% diaduk menggunakan maserator selama 2  jam,  setelah  itu  diremaserasi  kembali dengan  250  ml  etanol  70%  selama  2  jam diaduk menggunakan maserator. Hasil filtrat yang  diperoleh  dari  maserasi  kemudian dipisahkan  dari  pelarutnya  menggunakan rotary  epavorator dan  dipekatkan  dengan menggunakan  alat  penangas  air,  setelah dipekatkan dengan cara diuapkan.

## Identifikasi Golongan Senyawa Kimia
Identifikasi  golongan  senyawa  kimia dilakukan pada ekstrak herba etanol meniran dengan prosedur sebagai berikut:

## Uji Alkaloid
Pereaksi Mayer
Sebanyak  3  tetes  ekstrak  etanol  herba meniran  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Mayer menghasilkan endapan putih atau kuning. Pereaksi Bouchardat
Sebanyak  3  tetes  ekstrak  etanol  herba meniran  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  ditambahkan  2  tetes  pereaksi Bouchardat  menghasilkan  endapan  coklat sampai hitam.
Pereaksi Dragendrof
Sebanyak  3  tetes  ekstrak  etanol  herba meniran  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  ditambahkan  pereaksi  Dragendrof menghasilkan  endapan  merah  bata.  Uji Alkoloid  dianggap  positif  jika  terjadi endapan  paling  sedikit  dua  dari  tiga percobaan diatas.

## Uji Flavonoid
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  etanol herba meniran dimasukkan  ke dalam tabung reaksi,  ditambahkan  0,1  g  serbuk  Mg  dan  2 tetes Asam Klorida Pekat dan 2-3 tetes Amil Alkohol,  dikocok  dan  dibiarkan  memisah. Flavonoid  positif  jika  terjadi  warna  merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol.

## Uji Saponin
Sebanyak  5  tetes  ekstrak  etanol  herba meniran  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  ditambahkan  air  panas  dan  dikocok selama 15 menit dan 1 tetes Asam klorida 2 N. jika terbentuk busa permanen memberikan indikasi adanya saponin.

## Uji Tanin
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  etanol herba  meniran  ditambahkan  2  tetes  FeCl 3 1%.  Warna  biru  tua  atau  hijau  kehitaman menunjukan adanya tanin.
Uji  Aktivitas  Ekstrak  Herba  Meniran ( Phylanthus niruri L.)
Biakan  fungi Candida  albicans yang digunakan  dalam  penelitian  ini  merupakan biakan  yang  sudah  diremajakan  pada  media agar  miring,  sebelum  dilakukan  perlakuan terlebih  dahulu  biakan Candida  albicans diambil satu ose dan disuspensikan ke dalam larutan  NaCl  0,9  %  steril  lalu  di vortex hingga homogen sampai kekeruhannya sama dengan  standar Mc  Farland ,  selanjutnya dilakukan  uji  aktivitas.  Uji  aktivitas  ekstrak etanol herba meniran dilakukan
menggunakan  metode  difusi  cakram  dengan konsentrasi  5%,  10%,  20%,  30%  sebagai perlakuan, ketoconazol 0,1% sebagai kontrol positif dan air suling sebagai kontrol negatif. Pertama-tama  disterilkan  kedua  tangan dengan menyemprotkan alkohol 70%, disiapkan  tujuh  cawan  perti  dan  diberi  label untuk  masing-masing  konsentasi  ekstrak. Dipanaskan  pinggiran  cawan  petri  dengan lampu  spiritus,  dituang  media  SDA  15 sampai  20  ml  ke  dalam  cawan  petri  dan dibiarkan  menjadi  padat.  Lidi  kapas  steril dicelupkan  pada  suspensi  fungi Candida albicans ditunggu  sejenak  agar  cairan meresap  ke  dalam  kapas,  kemudian  lidi diangkat  dan  diperas  dengan  menekan  pada dinding tabung sambil diputar-putar. Diusapkan  pada  permukaan  media  SDA sampai  seluruh  permukaan  tertutup  rapat, dibiarkan  selama  1-5  menit  agar  suspensi masuk ke dalam agar. Selanjutnya dilakukan perendaman kertas cakram pada media yang akan  diuji  yaitu  ekstrak  etanol  herba meniran dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%, 30%  dan  40%.  Dicelupkan  juga  kertas cakram  pada  larutan  kontrol  positif  dan larutan  kontrol  negatif.  Diangkat  kertas cakram  menggunakan  pinset  steril,  tunggu sampai  air  ekstrak  etanol  herba  meniran konsentrasi  5%,  10%,  20%,  30%,  40%, kontrol  positif  dan  kontrol  negatif  tidak menetes  lagi  dari  cakram,  kemudian diletakkan  kertas  cakram  diatas  media Sabouraud  Dextrosa  Agar (SDA).  Di inkubasi  pada  suhu  30 o C  selama  24  jam. Zona  hambat  yang  terbentuk  diukur  dengan menggunakan jangka sorong ( Caliver TM ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Golongan Senyawa Kimia
Hasil  identifikasi  golongan  senyawa kimia  yang  dilakukan  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  herba  meniran  mengandung senyawa dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Kimia
No. Uji Fitokimia Pereaksi Hasil Keterangan 1 Alkaloid Mayer Bouchardat Dragendrof Endapan putih / kuning Endapan coklat - hitam Endapan merah bata + - + 2 Flavonoid HCl pekat serbuk mg Amil Alkohol Terbentuk lapisan pada amil alkohol berwarna merah, kuning atau jingga + 3 Saponin HCl 2 N Busa tidak permanen - 4 Tanin FeCl 3 1% Terbentuk larutan biru / hijau kehitaman +
Keterangan:   (-)   : Tidak mengandung senyawa kimia (+)   : Mengandung senyawa kimia
Identifikasi  golongan  senyawa  kimia dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak etanol  herba  meniran.  Hasil  identifikasi menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  herba meniran  mengandung  alkaloid,  flavonoid dan tanin. Senyawa metabolit sekunder yang terkandung  di  dalam  ekstrak  etanol  herba meniran memiliki aktivitas sebagai antimikroba.  Menurut  Wibowo  dkk  (2009) aktivitas  antimikroba  dapat  diketahui  dari kemampuan  penghambatan  terhadap  bakteri dan  khamir (4) .  Penghambatan  pertumbuhan mikroba terjadi karena penghambatan dinding  sel,  pengubahan  permeabilitas membran sel, penghambatan sintesis protein dan penghambatan sintesis asam nukleat.
Uji  Aktivitas  Antifungi  Ekstrak  Etanol Herba Meniran ( Phylanthus ninuri L.) Hasil uji aktivitas ekstrak etanol herba meniran dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%, 30%  dan  40%  serta  ketoconazol  0,1% sebagai kontrol positif dan air suling sebagai kontrol  negatif  terhadap Candida  albicans dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel  2  menunjukan  bahwa  air  suling sebagai  kontrol  negatif  tidak  memiliki  zona hambat, hal ini terjadi karena air suling tidak
mengandung  senyawa  apapun  dan  tidak mempengaruhi ekstrak etanol herba meniran melainkan  hanya  sebagai  pelarut  untuk mengencerkan ekstrak sehingga tidak mengganggu  hasil  dari  pengamatan  uji aktivitas terhadap pertumbuhan fungi
Candida albicans .
David  Stout  (1971) dalam Christiani dkk  (2015)  menjelaskan  apabila  diameter zona  hambat  yang  terbentuk  <5  mm  maka aktivitasnya  lemah,  apabila  zona  hambat yang  terbentuk  5-10  mm  maka  aktivitasnya sedang,  sedangkan  zona  hambat  10-20  mm aktivitasnya  kuat  dan  jika  >20  mm  maka aktivitasnya  sangat  kuat (5) .  Pada  pengujian aktivitas  ekstrak  etanol  herba  meniran terhadap Candida  albicans konsentrasi  5% memberikan  zona  hambat  sebesar  8,5  mm, konsentrasi  10%  memberikan  zona  hambat sebesar 10,3 mm, konsentrasi 20% memberikan  zona  hambat  sebesar  12,6  mm, konsentrasi  30%  memberikan  zona  hambat sebesar  14,1  mm  dan  konsentrasi  40% memberikan  zona  hambat  sebesar  14,3  mm. Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dapat dilihat  bahwa  yang  memiliki  aktivitas sedang  adalah  konsentrasi  5%  dan  aktivitas kuat  terdapat  pada  konsentrasi  10%,  20%, 30% dan 40%.
Tabel 2. Hasil Pengukuran zona  hambat  ekstrak etanol herba meniran  terhadap fungi Candida albicans Replikasi Diameter Zona Hambat Fungi Candida albicans Ekstrak Etanol Herba Meniran (mm) K (-) 5% 10% 20% 30% 40% K (+) 1 0 8,7 11 13 13,6 14,2 21 2 0 8,2 10 12,5 14,1 15,4 20 3 0 8,7 10 12,5 14,6 13,5 19,5 Rata - rata 0 8,5 10,3 12,6 14,1 14,3 20,1
Sampel  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas  ini  adalah  ekstrak  etanol  herba meniran  yang  memiliki  daya  antifungi karena  memiliki  senyawa  kimia  berupa alkaloid,  flavonoid  dan  tanin.  Mekanisme kerja  alkaloid  sebagai  antibakteri  yaitu dengan cara mengganggu komponen penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri sehingga  lapisan  dinding  sel  tidak  terbentuk secara  utuh  dan  menyebabkan  kematian  sel tersebut. Mekanisme lain antibakteri alkaloid  yaitu  komponen  alkaloid  diketahui sebagai  interkelator  DNA  dan  menghambat enzim  topoisomerase  sel  bakteri (6) .  Salah satu  peran  flavonoid  bagi  tumbuhan  adalah sebagai  antimikroba  dan  antivirus,  sehingga tumbuhan  yang  mengandung  flavonoid banyak digunakan dalam pengobatan tradisional (7) . Senyawa flavonoid merupakan kelompok  senyawa  fenol  yang  menghambat mikroba dengan cara meracuni protoplasma, merusak  dan  menembus  dinding  sel,  serta mengendapkan protein sel mikroba. Komponen  fenol  pada  flavonoid  juga  dapat mendenaturasi  enzim  yang  bertanggung jawab  terhadap  germinasi  spora  atau berpengaruh  terhadap  asam  amino  yang terlibat  dalam  proses  germinasi.  Senyawa fenolik bermolekul besar mampu menginaktifkan  enzim  esensial  di  dalam  sel mikroba  meskipun  pada  konsentrasi  yang sangat  rendah (8) .  Pernyataan  ini  didukung oleh  Prindle  (1983) dalam Darmawi  dkk (2013),  bahwa  senyawa  fenol  mampu memutuskan  ikatan  peptidoglikan  dalam
usahanya  menerobos  dinding  sel (8) .  Setelah menerobos  dinding  sel,  senyawa  fenol  akan menyebabkan  kebocoran  nutrien  sel  dengan cara  merusak  ikatan  hidrofobik  komponen membran sel  (seperti protein dan fosfolipid) sehingga terjadinya kerusakan pada membran  sel  mikroba  yang  mengakibatkan terhambatnya aktivitas dan biosintesa enzim-enzim spesifik yang diperlukan dalam reaksi  metabolism  bakteri.  Mekanisme antimikroba  yang  dimiliki  senyawa  tanin yaitu  kemampuannya  menghambat  sintesis khitin  yang  digunakan  untuk  pembentukan dinding  sel  pada  jamur  dan  merusak membran  sel  sehingga  pertumbuhan  jamur terhambat.  Tanin  juga  bersifat  lipofilik sehingga mudah terikat pada dinding sel dan mengakibatkan kerusakan dinding sel (9) .
Pada  pengujian  terhadap  kontrol positif  yaitu  ketoconazol  0,1%  memberikan zona  hambat  sebesar  20,1  mm  termasuk dalam  aktivitas  sangat  kuat.  Ketoconazol adalah  golongan  Azole  derivate  Imidazole yang  memiliki  mekanisme  kerja  dalam menghambat fungi adalah dengan menghambat  enzim  sitokrom  fungi,  dengan mengganggu sintesa ergosterol yang merupakan komponen penting dalam
membran sel fungi (10) .
Zona  hambat  adalah  daerah  jernih  di sekitar  kertas  cakram  yang  tidak  ditumbuhi oleh  fungi Candida  albicans. Berdasarkan hasil  pengujian  dari  ekstrak  etanol  herba meniran  zona  hambat  yang  efektif  terdapat pada  konsentrasi  10%.  Hal  ini  didasarkan
pada analisa statistik menggunakan Shapiro- wilk test menunjukan p-value atau signifikasi  lebih  dari  0,05,  ini  menunjukan bahwa  data  yang  diperoleh  berdistribusi normal sehingga dilanjutkan dengan analisis One  Way ANOVA.  Berdasarkan uji ANOVA menunjukan p-value atau signifikasi kurang dari 0,05 dengan
keputusan yang menunjukkan bahwa konsentrasi 10% memiliki perbedaan bermakna dengan k (-), 20%, 30%, 40% dan k  (+)  dan  tidak  berbeda  bermakna  dengan konsentrasi  5%  yang  dapat  dikategorikan sedang. Konsentrasi 10% adalah konsentrasi hambat  minimum  yang  termasuk  kategori kuat.  Penentuan  konsentrasi  ekstrak  etanol herba  meniran  sangat  berpengaruh  pada hasil  yang  diperoleh,  semakin  tinggi konsentrasi  maka  semakin  besar  zona hambatnya,  hal  ini  disebabkan  karena meningkatnya  komponen  senyawa  kimia yang  bersifat  antifungi  pada  ekstrak  etanol herba  meniran  yang  berguna  sebagai antifungi.

## SIMPULAN
Setelah  melakukan  penelitian  ini diperoleh  kesimpulan  bahwa  ekstrak  etanol herba meniran dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%,  30%  dan  40%  dapat  menghambat pertumbuhan fungi Candida albicans, hal ini ditunjukan dengan terbentuknya zona hambat.  Konsentrasi  yang  paling  efektif adalah  konsentrasi  10%,  dimana  pada konsentrasi  10%  adalah  konsentrasi  hambat minimum yang mampu menghambat pertumbuhan Candida  albicans dengan kategori kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wibowo, S. 2013. Herbal Ajaib . Pustaka Makmur: Perpustakaan Nasional RI. Hal: 110
2. Soejono, T. 2006 . Gulma dalam Agroekosistem  Peranan,  Masalah,  dan
Pengelolaannya.. Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada. Hal: 27 3. Melsi  P.Y.,  Gustina  I.,  dan  Irdawati. 2011. Uji Daya Hambat Ekstrak Meniran (Phyllanthus niruri L.) terhadap Pertumbuhan Candida albicans . Sumbar: Sekolah  Tinggi  Keguruan  dan  Ilmu
Pendidikan
4. Wibowo,  M.,  Eni  C.,  dan  Tepy  U.  2009.
Ekstraksi dan Identifikasi Senyawa Antimikroba Herba Meniran (Phyllanthus niruri L.) . Depok: Departemen  Biologi,  Fakultas  MIPA Universitas Indonesia 5. Christiani,  S.,  A.  Fridayanti,  R.  Rusli. 2015. Aktivitas Antibakteri Akar Karamunting (Melastoma malabathricum) . Prosiding Seminar
Nasional Kefarmasian Ke-1. Samarinda.
6. Karou,  D.,  Savadogo,  A.,  Canini,  A., Yameogo,  S.,  Montesano,  C.,  Simpore, J.,  Traore,  A.  S.  2005. Antibacterial activity  of  alkaloids  from  Sida  acuta . African  Journal  of  Biotechnology,  4(12), 195-200.
7. Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan  Tinggi .  diterjemahkan  oleh Kosasih,  P.  Edisi  Keenam.  Bandung  :
ITB
8. Darmawi, Zakiyah H.M., Fahri P.,. 2013.
Daya Hambat Getah Jarak Cina ( Jatropha multifida L . ) terhadap
Staphylococcus  aureus Secara In  Vitro . Jurnal Medika Veterinaria. Banda Aceh : Universitas Syiah Kuala.
9. Sudira,  I.  W.,  Merdana,  I.,  Wibawa,  I.
2011. Uji  daya  hambat  ekstrak  daun kedondong (Lannea Grandis Engl)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Erwinia  carotovora .  Buletin  Veteriner
Udayana, 3(1), 45-50.
10. Tjay,  TH.,  Raharja,  K.  2008. Obat-obat
Penting . Edisi 6. Jakarta: PT Elex Media
Komputindo.