Copyright © 2019, JPLP, e ISSN 2654-251X
Pemanfaatan Penggunaan Darah Donor Yang Telah Kadaluwarsa Untuk Pembuatan Agar Darah Pada Pertumbuhan Staphylococcus aureus
Rr.Irma Dewi Novita a , Indah Febrianti b
ab Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang E-mail : irmadewinovita.mi@gmail.com
Received:10th July 2019; Revised: 2nd July 2019; Accepted: 10th July 2019; Available online: 19th July 2019; Published regularly: July 2019

## Abstract
The use of media so that sheep's blood for the growth of Staphylococcus aureus bacteria is still difficult to get the sheep's blood. Therefore, a way to find alternatives to sheep blood is sought, namely by using donor blood that has expired. In this study using blood agar media using blood donors and blood agar media using sheep blood as a control. Using a blood donor with a presentation of 4% and 5% of the colony diameter, zone of hemolysis, the color of the colony of Staphylococcus aureus is almost the same as supported grown in 4% sheep blood agar media. While 6%, 7% and 8% blood donors are not supported for the growth of Staphylococcus aureus because the hemolysis zone and colony color are different from controls using sheep blood agar media
Key worsd : Sheep blood Agar Media ; Blood  donors ; Staphylocoocus aureus

## Abstrak
Penggunaan media agar darah domba untuk pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dirasa masih sulit untuk mendapatkan darah dombanya. Oleh sebab itu dicari cara untuk mencari alternatif selain  darah domba yaitu dengan menggunakan darah donor yang telah kadaluarsa. Dalam penelitian ini menggunakan media agar darah yang menggunakan darah donor dan media agar darah dengan menggunakan darah domba sebagai kontrol. Hasilnya yaitu penggunaan darah donor dengan presentasi 4% dan 5% menunjukkan diameter koloni, zona hemolisa, warna koloni Staphylococcus  aureus    hampir  sama  dengan  apabila  ditumbuhkan  di  media  agar  darah  domba  4%.  Sedangkan penggunaan  darah  donor  sebanyak  6%,7%  dan  8%  tidak  disarankan  untuk  pertumbuhan  Staphylococcus  aureus karena zona hemolisa dan warna koloni berbeda dengan kontrol yang menggunakan media agar darah domba

## Kata Kunci: Media agar darah domba ; darah donor ; Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Media agar darah digunakan untuk menumbuhkan dan mengisolasi terutama mikroorganisme patogen yang pertumbuhannya  membutuhkan  darah  seperti Staphylococcus  aureus Agar  darah  juga  digunakan untuk mendeteksi dan membedakan kemampuan hemolisa bakteri seperti Streptococcus sp. (Mims, 1982; Carter, 1986; Cheesbrough, 1991). Medium agar darah dibuat dari medium basal dengan penambahan darah 5 -10% . Darah yang biasa digunakan untuk mengisolasi dan menumbuhkan bakteri patogen adalah darah kuda, domba, kambing dan kelinci yang mengalami proses defebrinasi (Cheesbrough, 1991)
Untuk kebutuhan praktikum dan penelitian  di  Fakultas Kedokteran Undip kebutuhan akan penggunaan media    agar darah cukup sering.  Oleh karena itu mahasiswa dan peneliti harus mencari
kebutuhan darah domba untuk pembuatan  media  agar darah.  Hal ini agak menyusahkan mahasiswa dan peneliti karena di Undip tidak menyediakan domba yang biasa rutin untuk diambil darahnya.
Karena itu maka peneliti mencoba untuk menggunakan darah donor yang sudah kedaluwarsa yang didapatkan dari Rumah Sakit Nasional Diponegoro  (RSND)  untuk pembuatan media agar darah dengan darah domba sebagai kontrol kwalitasnya.
Media agar  darah yang  digunakan untuk kontrol adalah menggunakan darah domba 5%  dan dibandingkan dengan pembuatan agar darah dengan menggunakan darah donor yang sudah kedaluwarsa sebanyak 4%, 5%, 6%, 7% dan 8% dan diamati untuk pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan ATCC 25925 dan Stapylococcus aureus yang didapat dari material klinis.
Darah donor yang kadaluarsa dengan seluruh komponen yang dikandungnya masih memperlihatkan warna seperti darah segar,namun secara hematologic tidak boleh ditransfusikan kepada pasien. Darah donor yang  sudah kadaluarsa telah sangat berkurang faktor pembekuannya dan ini memenuhi syarat untuk pembuatan medium biakan, karena darah yang mengandung faktor pembekuan harus didefibrinasi.

## BAHAN DAN METODE
Alat yang digunakan untuk pembuatan media agar adarah adalah neraca analitik, piring petri, jarum suntik, kapas, erlenmeyer. Gelas ukur, dan tabung reaksi. Sedangkan bahan yang digunakan adalah bubuk media  agar  darah,  aquadest  pH  +/- 7  (netral),  pH  meter,  aluminium  foil,  darah  domba/  darah  manusia, alkohol 70%.
Untuk  pembuatan  media  agar  darah  adalah  sebagai  berikut  :  Bubuk  Media  Blood  Agar  Base ditimbang sebanyak 40 gram kemudian dimasukkan ke dalam botol kaca. Lalu dilarutkan dengan aquadest pH 7 sebanyak 1000 ml kemudian dihomogenkan dengan magnetik stirer. Lalu botol kaca yang berisi media ditutup dengan tutup botol yang dilapisi dengan aluminium foil dan diikat dengan benang, kemudian media disterilkan dengan autoclave pada suhu 121 0 C selama 15  menit. Setelah selesai proses sterilisasi media dikeluarkan dan didinginkan hingga mencapai suhu 40-50 0 C. Setelah suhu tercapai lalu ditambahkan darah domba atau  darah manusia dan dihomogenkan hingga merata lalu media dituang ke dalam piring petri steril dan didiamkan hingga membeku (Jawetz,2002)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil dari penelitian ini menunjukan bahwa bakteri S. aureus ATCC 29231 yang ditanam dalam agar darah yang ditambahkan  darah domba sebanyak 5% terlihat berwarna kuning keemasan, diameter koloni 1 mm, dengan lebar zona hemolisa 1,5 mm dan koloni dapat tumbuh sampai dengan zona ke 4.
Gambar 1. S.aureus yang ditanam di media darah domba 4% dan 5%
Copyright © 2019, JPLP, e ISSN 2654-251X
Gambar 1. S.aureus yang ditanam di media darah manusia 4% /5% dan 6%/7%/8%
Sedangkan untuk pertumbuhan bakteri S. aureus yang diambil dari material klinis  pasien di RSND dan ditambahkan darah domba sebanyak 5% terlihat berwarna kuning keemasan, diameter koloni antara 0,5 – 1 ul , lebar zona hemolisa 1,5 mm dan koloni juga dapat tumbuh hingga zona ke 4. Ini menjadi acuan untuk pemeriksaan S.aureus yang ditanam di media agar darah dengan penembahan darah donor yang telah kedaluwarsa
Untuk  penanaman S.aureus di  media  agar  darah  dengan  penambahan  darah  donor  yang  telah kedaluwarsa sebanyak 4% dan 5% tidak ada perbedaan dengan kontrol. Diameter koloni dan lebar zona hemolisa juga masih sama dengan kontrol.
Sedangkan untuk pertumbuhan S.aureus dengan penambahan agar darah manusia sebanyak 6%,7% dan  8%  terlihat  warna  koloni  yang  muncul  adalah  warna  putih  abu-abu.  Hal  ini  terlihat  sangat  berbeda dengan kontrol yang berwarna kuning keemasan. Warna yang muncul terlihat lebih pucat disebabkan karena penambahan darah manusia yang lebih banyak menyebabkan media berwarna merah kehitaman.
Tabel 1. Kontrol S.aureus ATCC 29231  (Media Blood Agar + Darah Domba 5%)
S.aureus ATCC 29231 ATCC 1 ATCCC 2 ATCC 3 ATCC 4 ATCC 5 Warna koloni Kuning keemasan Kuning keemasan Kuning keemasan Kuning keemasan Kuning keemasan Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 2. Spesimen Klinis S.aureus (Media Blood Agar + Darah Domba 5%)
S.aureus specimen klinis Klinis 1 Klinis 2 Klinis 3 Klinis 4 Klinis  5 Warna koloni Kuning keemasan Kuning keemasan Kuning keemasan Kuning keemasan Kuning keemasan Diameter koloni 0,5 mm 1 mm 0,5 mm 1 mm 0,5 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 3. Kontrol S.aureus ATCC 29231  (Media Blood Agar +  Darah donor 4%)
S.aureus ATCC 29231 ATCC 1 ATCCC 2 ATCC 3 ATCC 4 ATCC 5 Warna koloni Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4
Copyright © 2019, JPLP, e ISSN 2654-251X

## Tabel 4. Spesimen Klinis S.aureus (Media Blood Agar + Darah donor 4%)
S.aureus specimen klinis Klinis 1 Klinis 2 Klinis 3 Klinis 4 Klinis  5 Warna koloni Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Diameter koloni 0,5 mm 1 mm 0,5 mm 1 mm 0,5 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 5. Kontrol S.aureus ATCC 29231  (Media Blood Agar +  Darah Donor 5%)
S.aureus ATCC 29231 ATCC 1 ATCCC 2 ATCC 3 ATCC 4 ATCC 5 Warna koloni Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 6. Spesimen klinis S.aureus  (Media Blood Agar +  Darah Donor 5%)
S.aureus specimen klinis Klinis 1 Klinis 2 Klinis 3 Klinis 4 Klinis  5 Warna koloni Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Kuning keputihan Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 7. Kontrol S.aureus ATCC 29231  (Media Blood Agar +  Darah Donor 6%)
S.aureus ATCC 29231 ATCC 1 ATCCC 2 ATCC 3 ATCC 4 ATCC 5 Warna koloni Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 8. Spesimen klinis S.aureus (Media Blood Agar +  Darah Donor 6%)
S.aureus specimen klinis Klinis 1 Klinis 2 Klinis 3 Klinis 4 Klinis  5 Warna koloni Putihabu-abu Putihabu-abu Putihabu-abu Putihabu-abu Putihabu-abu Diameter koloni 1  mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm 1,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4
Copyright © 2019, JPLP, e ISSN 2654-251X
Tabel 9. Kontrol S.aureus ATCC 29231  (Media Blood Agar +  Darah Donor 7%)
S.aureus ATCC 29231 ATCC 1 ATCCC 2 ATCC 3 ATCC 4 ATCC 5 Warna koloni Putihabu-abu Putihabu-abu Putihabu-abu Putihabu-abu Putihabu-abu Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 10. Spesimen klinisS.aureus (Media Blood Agar +  Darah Donor 7%)
S.aureus specimen klinis Klinis 1 Klinis 2 Klinis 3 Klinis 4 Klinis 5 Warna koloni Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Diameter koloni 1  mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Tumbuhsd zona 4 4 4 4 4
Tabel 11. Kontrol S.aureus ATCC 29231  (Media Blood Agar +  Darah Donor 8%)
S.aureus ATCC 29231 ATCC 1 ATCCC 2 ATCC 3 ATCC 4 ATCC 5 Warna koloni Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Diameter koloni 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 0,5 mm 0,5 mm 1 mm 0,5 mm 0,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4

## Tabel 12. Spesimen klinis S.aureus (Media Blood Agar +  Darah Donor 8%)
S.aureus specimen klinis Klinis 1 Klinis 2 Klinis 3 Klinis 4 Klinis  5 Warna koloni Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Putih abu-abu Diameter koloni 1  mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm Lebar zona hemolisa 0,5 mm 1 mm 0,5 mm 1 mm 0,5 mm Tumbuh sd zona 4 4 4 4 4
Dari pengamatan  zona  hemolisa  di  prosentase  7%  terlihat  mulai  ada  penyempitan  zona  hemolisa menjadi 1 mm dari kontrol 1,5mm. Dan untuk prosentase darah 8% zona hemolisa menjadi 0,5 mm. Hal ini terjadi  disebabkan  karena  kepadatan  darah  yang  digunakan  menyebabkan  warna  media  menjadi  merah kehitaman dan zona hemolisa menjadi semakin  tidak nampak.

## KESIMPULAN
Media agar darah donor dengan konsentrasi 4% dan 5% dapat menggantikan media agar darah domba dengan konsentrasi 4% pada pertumbuhan S.aureuss Sedangkan agar darah donor dengan konsentrasi 6%, 7% dan 8% tidak dapat sebaga pengganti agar darah domba 4%

## SARAN
Adanya penelitian lanjutan untuk bakteri lainnya yang dapat ditumbuhkan di media agar darah yang manusia  yang  telah  kadaluarsa  untuk  kebutuhan  praktikum  di  Fakultas  Kedokteran  Undip. Dan  adanya penelitian lanjutan untuk penggunaan darah hewan lain yang mudah didapatkan seperti darah kambing atau darah sapi.

## DAFTAR PUSTAKA/REFERENCES
Anonymous 1982. The Oxoid Manual of Culture Media, Ingredients and other Laboratory Services. 5th ed.
UK. Oxoid Limited
Bisming W and Amstberg G 1993. Colour Atlas for the Diagnosis of Bacterial Pathogen in animals. Paul Parey Scientific Publisher. Hamburg.
Brooks GF, S. Butel and SA Morse 2002. Jawetz, Melnick & Adelberg’s Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology). Ed. 1. Penerjemah dan Editor Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Penerbit Salemba Medika.
Carter  GR  1986. Essentials  of  Veterinary  Bacteriology  and  Mycology.  3rd  Ed.  Lea  and  Febiger, Philadelphia, USA.
Chadwick PR and B.A. Oppenheim 1995. Neomycin Blood Agar As A selective Medium for Vancomycin Resistant Enterococcus faecium. J. of Clin. Pathol. 48(11): 1068-1070.
Cheesbrough M  1991. Medical  Laboratory  Manual  for  Tropical  Countries, volume  II:  Microbiology. Cambridge. ELBS.
Cottral GE 1978. Manual of Standardized Methods for Veterinary Microbiology. Cornell University Press. London.
Fallon D, K.J. Nye, B. Gee, S. Messer, R.E. Waren, and N. Andrew. 2000. A Comparison of Columbia Blood  Agar  With  Or  Without  Oxolinic  Acid/Metronidazole  for  The  Isolation  of  β -haemolytic Streptococcus from throat Swabs. J. med. Microbiol. (49): 941-942.
Hof H and R. Dörries 2002. Medizinische Mikrobiologie. 2., Korrigierte Auflage. Georg Thieme Verlag Stuttgart.
Jarp J 1990. Staphylococcus from Mastitis in Ruminants: Virulence Properties and Classification of species. Dissertation Abstracts International, C, Worlwide. (51): 2, 209 C.
Mims  CA  1982. The  Pathogenesis  of  Infectious  disease.  2nd  Ed.  Acad.  Press. London.  New  York.  San Francisco. Sao Paulo. Sydney. Tokyo. Toronto. Pp.56-81..
Wistreich GA 1997. Microbiology Laboratory: Fundamentals and Applications. New Jersey. Prentice Hall