POTENSI Bacillus licheniformis DAN Streptomyces olivaceoviridis SEBAGAI PENGHAMBAT PERTUMBUHAN JAMUR Saprolegnia sp, PENYEBAB SAPROLEGNIASIS PADA IKAN SECARA IN VITRO
POTENTIAL OF Bacillus licheniformis AND Streptomyces olivaceoviridis AS INHIBITING THE GROWTH OF FUNGUS Saprolegnia sp, CAUSE SAPROLEGNIASIS ON FISH BY USING IN VITRO
Oktantia Frenny Anggani, Rahayu Kusdarwati dan Hari Suprapto
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Saprolegniasis  is  a  fungal  disease  on  fish  caused  by Saprolegnia sp,  which  is  saprophyte, damaging  healthy  tissue  and  makes  the  immune  system  in  fish  deacreased.  The  uniquennes  of Saprolegnia sp  has  the  main  components  of  the  cell  wall  in  the  form  of  chitin  that  was  instrumental  in shaping the structure of the tip growth of fungal hyphae. Control of fungal pathogenic Saprolegnia sp can use chitinolytic microorganisms based on ability to produce chitinase for example using bacteria.
This  study  aims to  potential  of Bacillus licheniformis and Streptomyces olivaceoviridis as inhibiting  the  growth  of  fungus Saprolegnia sp,  cause  saprolegniasis  on  fish  by  using  in  vitro. The research  method  is  experimental  with  completely  randomized  design  (CRD),  which  consists of    four treatments  with  five    replications . The  experimental  used  is  A  ( Saprolegnia sp  and Bacillus licheniformis ), B ( Saprolegnia sp and Streptomyces olivaceoviridis ), C negative control ( Saprolegnia sp) and  D  positive  control  ( Saprolegnia sp  and  Ketokonazol  2  %).  The  main  parameters  measured  were observed  inhibition  zone  on  each  treatment.  Supporting  parameters  were  observed  is  an  observation  of abnormal  hpyphae  structure  after  being  induced  by  bacteria Bacillus licheniformis dan Streptomyces olivaceoviridis. Data  were  analyzed  using  analysis  of  variants  (ANOVA)  and  to  know  the  difference between  treatments were determined by Tukey honestly significant difference (Tukey HSD) Test. The  results  showed  that the  potential  of  chitinolytic Bacillus  licheniformis can  provide  a  good barrier  of  4,62  cm  by  5,48  cm  compared Streptomyces  olivaceoviridis in  inhibiting  the  growth Saprolegnia sp.  Suggestions  in  this  research  is  the  need  to  further  research  on  the  value  of  chitinase Bacillus licheniformis and Streptomyces olivaceoviridis . Further research by using in vivo.
Keywords : Bacillus licheniformis , Streptomyces olivaceoviridis , Saprolegnia sp, Inhibition Zone
Pendahuluan Sebagai negara megabiodiversitas,
Indonesia  mempunyai  potensi  besar  isolat  yang dapat  dimanfaatkan  untuk  kegiatan  ilmu pengetahuan dan industri dengan memanfaatkan enzim-enzim  kitinase  yang  tersebar  mulai  dari bakteri,  fungi,  serangga,  tumbuhan,  dan  hewan yang  sangat  berpotensi  menghasilkan  kitin  dan produk  turunannya  seperti  kitosan  (Haliza  dan Suhartono,  2012).  Kitin  merupakan  biopolimer alami kedua terbanyak setelah selulosa, merupakan komponen utama penyusun eksoskeleton  Arthropoda  dan  dinding  sel  fungi (Kusumaningsih  dkk,  2004) . Kadar  kitin  dalam kulit udang dan kepiting diperkirakan mencapai 40-60 persen (Rahayu dan Purnavita, 2007) dan 22- 44 persen pada dinding sel fungi (Patil dkk 2000).
Pada  masa  sekarang,  kitinase  kembali menjadi  perhatian  karena  adanya  kemungkinan
penggunaan  enzim  ini  dalam  pengendalian biologi  organisme  yang  mengandung  kitin seperti  jamur  salah  satunya Saprolegnia sp.
Pengendalian
hayati jamur dengan
menggunakan mikroorganisme kitinolitik
didasarkan  pada  kemampuan  mikroorganisme menghasilkan  kitinase  dan
1,4-glukanase yang  dapat  melisiskan  sel  jamur  (El-Katatny et al ., 2000). Bakteri kitinolitik dapat memecahkan  dan mendegradasi kitin penyusun dinding  sel  fungi  sehingga  bakteri  ini  sangat potensial untuk menghambat pertumbuhan fungi patogen  pada  ikan (Muharni  dan  Widjajanti, 2011).
Penelitian penggunaan bakteri kitinolitik Bacillus licheniformis dan
Streptomyces olivaceoviridis untuk  mencari solusi  dalam  mengatasi  permasalahan  akibat serangan jamur. Salah satunya dengan mengetahui  potensi  daya  hambat Bacillus
licheniformis dan Streptomyces olivaceoviridis yang  mengandung  aktivitas  enzim  kitinase dalam menghambat pertumbuhan jamur Saprolegnia sp yang dilakukan secara in vitro.

## Materi dan Metode
Tempat dan Waktu Pelaksanaan Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium mikrobiologi  Balai  Karantina  Ikan  Juanda Surabaya  pada  tanggal  05  Agustus  sampai  10 September 2014.
Materi Penelitian Alat-alat yang diperlukan dalam penelitian  ini  adalah laminary  air  flow , refrigerator, inkubator, autoclave , labu erlenmeyer ,  tabung  reaksi, hotplate  stirer , cawan  Petri  atau Petri  disk , obyek  glass, sectio kit , cover  glass ,  bunsen,  ose,  mikroskop,  pipet tetes,  spatula,  timbangan  analitik, alumunium foil ,  kapas,  alat  tulis,  kertas  label  dan  kamera digital.
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  alkohol  70%,  minyak emersi, NaCl fisiologis, lactophenol cotton blue . Bahan pembuatan media PDA ( Potato Dextrose Agar )  adalah  kentang,  dextrose,  agar-agar, akuades.  Pembuatan  media  TSA  ( Trypton  Soya Agar )  adalah  bubuk  TSA  dan  akuades, sedangkan  untuk  pembuatan  medium  garam minimum  kitin  (MGMK)  adalah  K 2 PO 4 , KH 2 PO 4 ,
MgSO 4 .7H2O, FeSO 4 .7H2O, ZnSO 4 .7H2O,  MnCl 2 ,  akuades,  bacto  agar, ekstrak khamir ( yeast extract ).
Metode Penelitian Rancangan Penelitian Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimental.  Rancangan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  rancangan  acak lengkap  (RAL)  dengan  empat  perlakuan  dan lima  kali  ulangan.  Perlakuan  yang  digunakan yaitu A ( Saprolegnia sp dan Bacillus licheniformis ), B ( Saprolegnia sp dan Streptomyces olivaceoviridis ), C kontrol negatif ( Saprolegnia sp)  dan  D  kontrol  positif ( Saprolegnia sp dan Ketokonazol 2 %).
Prosedur Kerja Tahap  Pembuatan  Medium  Garam  Minimum Kitin (MGMK)
Menurut Sembiring (2012), pembuatan medium  garam  minimum  kitin  adalah  dengan mencampurkan  0,7  gram  K 2 PO 4 ,  0,3  gram KH 2 PO 4 ,  0,5  gram  MgSO 4 .7H2O,0,01  gram FeSO 4 .7H2O,  0,001  gram  ZnSO 4 .7H2O,  0,001 gram MnCl 2 , 20 gram agar, 2 % ekstrak khamir ( yeast extract ) ke dalam Erlenmeyer yang berisi
1000  ml  akuades  kemudian  media  tersebut dihomogenkan dengan cara diaduk dan dipanaskan  pada hot  plate  stirer .  Erlenmeyer tersebut  di  tutup  dengan  kertas  aluminium  foil dan karet gelang  untuk di sterilkan.  Media agar disterilkan  dengan  autoklaf  selama  15  menit pada suhu 121 0 C dan tekanan satu atm.

## Tahap Isolasi Bakteri Kitinolitik
Isolat  bakteri Bacillus licheniformis dan Streptomyces olivaceoviridis diperoleh di
Laboratorium  Bakteriologi  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Universitas  Airlangga.  Bakteri  yang didapat  diremajakan  ke  dalam  media Trypton Soya  Agar (TSA)  selama  24  jam  kemudian digunakan  dalam  perlakuan  penelitian  dan  uji biokimia. Isolasi
bakteri dilakukan menggunakan  metode  cawan  gores.  Satu  Ose suspensi  bakteri  digoreskan  pada  media  uji  dan diinkubasikan pada suhu 35 0 C.
Tahap Proses Pemurnian dan Pembiakan Jamur Jamur  yang  diuji  yaitu  berupa  jamur Saprolegnia sp  di  Laboratorium  Mikrobiologi Balai  Karantina  Ikan  Juanda  Surabaya.  Tahap pemurnian  jamur  yaitu  dengan  memotong sedikit  bagian  sampel  agar  cawan  PDA  yang telah ditumbuhi Saprolegnia sp yang teridentifikasi  dengan  menggunakan  gunting. Sampel  jamur Saprolegnia sp  yang  telah terpotong  lalu  ditanam  pada  media  PDA  dan diinkubasi  selama  satu  hari  untuk  dibiakkan sebagai  media  uji  dalam  proses  penghambatan menggunakan  bakteri  kitinolitik  dengan  cara inokulasi.
Tahap Uji Antagonis Biakan fungi Saprolegnia sp diinokulasi  di  tengah  medium  garam  minimum kitin (MGMK) dengan jarak 3,5 cm dari cakram tempat  inokulum  bakteri,  kemudian  biakan tersebut  diinkubasi  selama  72  jam  pada  suhu 30 0 C. Suspensi bakteri kitinolitik yang diberikan  berjumlah  2,700x10 9 CFU/mL  sesuai Standar  McFarland  (Kusdarwati  dkk,  2014). Suspensi bakteri tersebut diberikan pada cakram setelah  inokulasi  jamur  dilakukan.  Inokulasi bakteri diberikan dalam cakram dengan diameter  0,6  cm  dan  diletakkan  di  bagian  tepi media,  pengulangan  dibuat  sebanyak  lima  kali. Aktivitas penghambatan ditentukan berdasarkan zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  koloni. Pengukuran zona hambat jamur dilakukan pada hari ke tujuh (Suryanto dkk, 2011).
Parameter Penelitian Utama Zona  hambat  Saprolegnia  sp  terhadap  Setiap Perlakuan
Biakan Saprolegnia sp  yang  telah diidentifikasi  kemudian  diinokulasi  di  tengah medium  garam  minimum  kitin  (MGMK) dengan  jarak  3,5  cm  dari  cakram  tempat inokulum bakteri. Biakan bakteri yang digunakan  adalah Bacillus  licheniformis dan Streptomyces  olivaceoviridis .  Suspensi  bakteri yang akan digunakan terlebih dahulu disetarakan  dengan  larutan  McFarland  dengan jumlah  kepadatan  koloni  bakteri  di  dalam suspensi berjumlah 2,700x10 9
CFU/mL
(Kusdarwati dkk, 2014). Medai uji yang digunakan adalah Medium
Garam  Minimum  Kitin  (MGMK)  yang  telah diletakkan cakram yang berisi supernatan dalam satu cawan Petri berisi dua buah kertas cakram, dan masing-masing jarak antara cakram tersebut diletakkan  pada  ujung  medium  cawan  Petri yang  telah  ditumbuhi Saprolegnia sp  di  bagian tengah.  Medium  uji  yang  telah  ditanam  bakteri dan jamur diinkubasi pada suhu 35 0 C. Aktivitas penghambatan  ditentukan  berdasarkan  zona hambat  yang  terbentuk  disekitar  koloni  pada hari ke tujuh dengan cara mengukur menggunakan penggaris batas
akhir
pertumbuhan  dari  jamur  patogen  terhadap bakteri  kitinolitik  pada  sumbu  X  (secara horizontal).  Pengukuran  sumbu  X  batas  akhir jamur  patogen  yang  dilakukan  yaitu  dari  mulai ujung  pertumbuhan  akhir  jamur  patogen terhadap  inokulan  bakteri  yang  diberikan  di bagian tepi kedua ujung cawan Petri.
Parameter Pendukung Pengamatan Hifa Abnormal
Pengamatan struktur hifa secara mikroskopis  dilakukan  dengan  cara  mengamati ujung miselium pada daerah zona hambat fungi patogen.  Ujung  miselium Saprolegnia sp  yang tumbuh  pada  permukaan  media  dipotong dengan  bentuk  bujur  sangkar,  kemudian diletakkan pada gelas objek. Abnormalitas pada pertumbuhan  miselium  jamur  patogen  seperti pembengkokan  ujung  miselium,  miselium pecah,  miselium  berbelah,  miselium  bercabang,
miselium lisis dan miselium tumbuh kerdil yang diamati dibawah mikroskop (Hanif dkk, 2012).
Analisis Data Hasil dari pengujian antagonis
Saprolegnia sp  terhadap  setiap  perlakuan  diuji dengan Analisis Varian (ANAVA) dengan taraf kepercayaan  95%.  Menurut  Kusriningrum (2010),  perlakuan  yang  diberikan  menunjukkan pengaruh  yang  nyata,  maka  dilanjutkan  dengan uji  Tukey honestly  significant  difference (uji Tukey HSD) untuk mengetahui perbedaan antar perlakuan.

## Hasil dan Pembahasan
Uji  Antagonis  Jamur Saprolegnia sp  terhadap Setiap Perlakuan Hasil  uji  antagonis  jamur Saprolegnia sp  setelah  diberi  inokulasi  ketokonazol  2  %, bakteri Bacillus licheniformis dan Streptomyces olivaceoviridis yang mengandung enzim
kitinase sebagai agen biokontrol untuk menghambat  pertumbuhan  fungi  patogen  dapat dilihat pada Tabel 1. Pengamatan perlakuan B
( Streptomyces  olivacoviridis )  dan  perlakuan  D (Ketokonazol  2  %)  memiliki  pengaruh  yang tidak  berbeda  nyata  (p>0,05).  Hal  tersebut menandakan  bahwa  perlakuan  B  ( Streptomyces olivacoviridis )  memberikan    pengaruh  yang sama  dengan  perlakuan  D  (Ketokonazol  2  %), dan  berbeda  nyata  (p<0,05)    dengan  perlakuan A ( Bacillus licehniformis ). Nilai rerata hambatan jamur terhadap perlakuan B ( Streptomyces  olivacoviridis )  dan  perlakuan  D (Ketokonazol 2 %) adalah 5,48 cm dan 5,50 cm. Hasil  uji  antagonisme  yang  terbentuk  berupa cekungan maupun penipisan pada sekitar koloni Saprolegnia sp dapat dilihat pada Gambar 1.
Pengamatan  Hifa  Normal  dan  Abnormal Saprolegnia sp Pengamatan Hifa Normal Saprolegnia sp Pengamatan  hifa  normal Saprolegnia sp  dilakukan  dengan  metode  konvensional
Tabel 1. Hasil uji hambatan jamur Saprolegnia sp terhadap setiap perlakuan
Keterangan:  A: Bacillus  licheniformis ,    B: Streptomyces  olivaceoviridis ,  C: Saprolegnia sp  (kontrol negatif), D: Ketokonazol 2 %, Notasi yang berbeda pada koloni yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (p<0,05)
secara  mikroskopis  menggunakan Lacthopenol Cotton  Blue sebagai  bahan  dalam  mewarnai koloni  jamur  kemudian  diamati  di  bawah mikroskop  dengan  perbesaran  100X.  Hifa normal Saprolegnia sp  dapat  dilihat  pada Gambar 2. Saprolegnia sp memiliki hifa membulat dengan sporulasi  tanpa  membentuk  kista  dimulut sporangium  dan  zoospora  langsung  menyebar. Hifa Saprolegnia sp  tidak  mempunyai  sekat pemisah  (septa)  tetapi  bercabang  banyak menjadi miselium (Ratnaningtyas, 2013).
Pengamatan  Hifa  Abnormal  Saprolegnia  sp terhadap Setiap Perlakuan
Miselium  jamur  yang  tumbuh  di  media MGMK  pada  daerah  zona  hambat  batas  akhir pertumbuhan  fungi  terhadap  inokulan  bakteri diambil  dengan  cara  memotong  sedikit  bagian agar tersebut kemudian diletakkan di atas objek glass . Potongan miselium jamur Saprolegnia sp ditetesi  menggunakan Lacthopenol  Cotton  Blue
dan ditutup menggunakan cover glass kemudian diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 100X.
A. Hifa  Abnormal Saprolegnia sp  terhadap Bacillus licheniformis Hifa  abnormal Saprolegnia sp  terhadap B. licheniformis yaitu  terlihat  adanya  hambatan pertumbuhan  miselium  jamur  patogen  setelah diberi  inokulasi  bakteri  kitinolitik.  Struktur pertumbuhan  miselium  jamur Saprolegnia sp yang diujikan terlihat sporangiofor tidak mampu membentuk sporangium sebagai tempat dihasilkannya  spora  jamur,  miselium  terlihat pecah, dan dinding sel jamur lisis.Hifa abnormal Saprolegnia sp  terhadap Bacillus  licheniformis dapat dilihat pada Gambar 3.
B. Hifa  Abnormal Saprolegnia sp  terhadap Streptomyces olivaceoviridis Hifa  abnormal Saprolegnia sp  terhadap S. Olivaceoviridis yaitu  terlihat  adanya  hambatan
Gambar 1. Hasil uji antagonisme Saprolegnia sp terhadap setiap perlakuan berupa cekungan maupun penipisan pada sekitar koloni jamur Keterangan: Uji antagonis A: Bacillus licheniformis , B: Streptomyces olivaceoviridis , C: Saprolegnia sp (kontrol negatif), D: Ketokonazol 2 %,  Zona hambat (Tanda Panah)
Gambar 2. Hifa normal Saprolegnia sp Keterangan: 1. Hifa, 2. Sporangium, 3. Sporangiofor
pertumbuhan  miselium  jamur  patogen  setelah diberi  inokulasi  bakteri  kitinolitik.  Struktur pertumbuhan  miselium  jamur Saprolegnia sp yang diujikan terlihat sporangiofor tidak mampu membentuk sporangium sebagai tempat dihasilkannya spora jamur,  miselium bercabang dimana  miselium  masih  mampu  berusaha membentuk
percabangan
lain untuk menghasilkan  spora  dan  dinding  sel  jamur terlihat  lisis.  Hifa  abnormal Saprolegnia sp terhadap Streptomyces  olivaceoviridis dapat dilihat pada Gambar 4.
C. Hifa  Abnormal Saprolegnia sp  terhadap Ketokonazol 2 %
Hifa  abnormal Saprolegnia sp  terhadap ketokonazol 2 % yaitu terlihat adanya hambatan pertumbuhan  miselium  jamur  patogen  setelah diberi  inokulasi  bakteri  kitinolitik.  Struktur pertumbuhan  miselium  jamur Saprolegnia sp
yang diujikan terlihat sporangiofor tidak mampu membentuk sporangium sebagai tempat dihasilkannya  spora  jamur,  miselium  dan dinding  sel  jamur  terlihat  lisis.  Hifa  abnormal Saprolegnia sp terhadap Ketokonazol 2 % dapat dilihat pada Gambar 5.
Bakteri Bacillus licheniformis dan Streptomyces  olivaceoviridis memiliki  aktivitas kitinase  yang  mampu  menjadi  agen  biokontrol fungi. Aktivitas kitinase yang diproduksi bakteri dapat  menghidrolisis  struktur  kitin,  senyawa utama  penyusun  dinding  sel  tabung  spora  dan miselia,  sehingga  jamur  tidak  mampu  tumbuh dengan  baik  atau  terdegradasi  (Priyanto  dkk, 2001).  Hal  ini  terbukti  dengan  terhambatnya pertumbuhan miselium jamur patogen Saprolegnia sp  setelah  diberi  inokulasi  bakteri kitinolitik.  Struktur  pertumbuhan  miselium jamur Saprolegnia sp  yang  diujikan  memiliki
Gambar 3. Hifa abnormal Saprolegnia sp terhadap B. Licheniformis
Gambar 4. Hifa abnormal Saprolegnia sp terhadap S. olivaceoviridis
Gambar 5. Hifa abnormal Saprolegnia sp terhadap Ketokonazol 2 %
karakteristik yang berbeda-beda setiap perlakuan yang diberikan.
Bentuk  miselium Saprolegnia sp  yang diberikan  perlakuan Bacillus  licheniformis terlihat  miselium  terlihat  pecah,    miselium Saprolegnia sp  yang  diberikan  perlakuan Streptomyces  olivaceoviridis terlihat  miselium bercabang  dimana  miselium  masih  mampu berusaha membentuk percabangan lain, miselium Saprolegnia sp  yang  diberikan perlakuan  ketokonazol  2  %  terlihat  lisis. Miselium  jamur  yang  diberikan  perlakuan menggunakan Bacillus
licheniformis ,
Streptomyces olivaceoviridis , dan ketokonazol 2 %  umumnya  terlihat  tidak  mampu  membentuk pertumbuhan  spora  sedangkan  miselium  jamur yang tanpa diberikan perlakuan terlihat sporangiofor  mampu  membentuk  sporangium sebagai tempat dihasilkannya spora jamur.
Pengujian antagonis pada setiap perlakuan  terlihat  adanya  zona  hambat  pada perlakuan  A  ( Bacillus  licheniformis )  terlihat adanya  aktivitas  hambatan  yang  terbentuk berupa cekungan maupun penipisan pada sekitar koloni Saprolegnia sp. Perlakuan B ( Streptomyces olivaceoviridis ) dan D
(ketokonazol  2  %),  tidak  terbentuk  adanya cekungan  namun  masih  dapat  terbentuk  adanya hambatan  terhadap Saprolegnia pada  hari ketujuh.  Perlakuan  C  (tanpa  perlakuan)  tidak memberikan  pengaruh  yang  nyata  dalam menghambat Saprolegnia sp. Zona hambat pada setiap  perlakuan  yang  diberikan  ada  yang  terus bertambah dan adapula yang semakin berkurang hingga  hari  ketujuh.  Hal  ini  bisa  disebabkan oleh  jenis  strain  bakteri,  jumlah  senyawa antimikroba,  konsentrasi  dan  kualitas  senyawa antimikroba serta adanya
mekanisme penghambatan yang berbeda dari jamur patogen (Papuangan, 2009). Uji antagonis menunjukkan penghambatan
paling besar
terhadap Saprolegnia sp  pada  hari  ketujuh  adalah  isolat Bacillus licheniformis dengan zona hambat 4,62 cm.  Aktivitas  hambatan  bakteri  kitinolitik  pada penelitian  ini  berpengaruh  nyata  (p<0,05) terhadap pertumbuhan Saprolegnia sp. Perlakuan  B  ( Streptomyces  olivacoviridis )  dan perlakuan  D  (ketokonazol  2  %)    memiliki pengaruh  yang  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05)
artinya Perlakuan
B ( Streptomyces olivacoviridis )    mampu  memberikan  pengaruh yang sama dengan perlakuan D (Ketokonazol 2
%).  Perlakuan  B  ( Streptomyces  olivacoviridis ) dan  perlakuan  D  (ketokonazol  2  %)  masih mampu memiliki aktivitas penghambatan terhadap Saprolegnia sp  dibandingkan  dengan perlakuan  C  (sebelum perlakuan ),  sehingga
pemberian perlakuan tersebut masih layak untuk agen  biokontrol  jamur.  Hal  ini  terbukti  setelah Saprolegnia sp  diinduksi  dengan  perlakuan tersebut  terlihat  adanya  zona  hambat  sehingga terjadi abnormalitas pertumbuhan hifa.
Aktivitas  antagonis  kedua  bakteri  dan ketokonazol  tersebut  menyebabkan  hifa  tidak mampu  berkembang  dengan  baik  serta  tidak mampu  menghasilkan  zoospora  secara  normal. Hal ini disebabkan bakteri Bacillus licheniformis dan Streptomyces  olivaceoviridis termasuk  bakteri  kitinolitik.  Bakteri  kitinolitik dapat  menghidrolisis  senyawa  kitin  penyusun utama  dinding  sel  jamur  patogen  yang  dapat didegradasi  oleh  enzim  kitinase  yang  terdapat pada bakteri (Herdyastuti dkk, 2009).
Menurut Muharni dan Widjajanti (2011), aktivitas  kitinase  dari  bakteri  kitinolitik  sangat potensial  digunakan  sebagai  agen  pengendali hayati terhadap jamur patogen maupun serangan hama,  karena  kedua  organisme  ini  mempunyai komponen  kitin  pada  dinding  selnya.  Enzim kitinase yang disekresikan oleh isolat bakteri ini kemungkinan  menjadi  salah  satu  mekanisme dalam  penghambatan  terhadap Saprolegnia sp.
Berdasarkan kemampuannya dalam
mendegradasi  kitin  sebagai  penyusun  dinding sel Saprolegnia sp,  sehingga  dinding  sel  jamur tidak  mampu  tumbuh  dengan  baik  atau mengalami lisis.

## Kesimpulan
Bakteri  kitinolitik  yang  digunakan  pada penelitian  ini,  dapat  menghambat  pertumbuhan jamur Saprolegnia sp,  penyebab  saprolegniasis pada  ikan  secara  in  vitro.  Zona  hambat  yang dihasilkan  pada Bacillus licheniformis terhadap koloni  jamur  sebesar  4,62  cm  lebih  baik dibandingkan Streptomyces olivaceoviridis sebesar  5,48  cm  yang  memberikan  efektifitas hambatan yang sama dengan ketokonazol. Perlu dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai  nilai kitinase yang dihasilkan oleh Bacillus licheniformis dan Streptomyces  olivaceoviridis . Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai potensi Bacillus licheniformis dan Streptomyces olivaceoviridis terhadap pertumbuhan Saprolegnia sp secara in vivo.

## Daftar Pustaka
El-Katatny,  M.  H.,  W.  Somitsch.,  K.H.  Robra.,
M. S. El-Katatny and G.M. Gilbitz.  2000. Production of Chitinase and glucanase by Trichoderma harzianum for Control of the Phytopathogenic Fungus Sclerotium rolfsii . Food Technol Biotechnol 38 (3) : 173.
Haliza,  W  dan  M.  T.  Suhartono.  2012. Karakteristik    Kitinase  dari  Mikroba. Buletin Teknologi
Pascapanen
Pertanian.  Bogor.  Institut  Pertanian Bogor. 8  (1) : 1-14. Hanif,  A.,  D.  Suryanto  dan  I.  Nurwahyuni. 2012.  Pemanfaatan  Bakteri  Kitinolitik Dalam Menghambat Pertumbuhan Curvularia  sp.  Penyebab  Penyakit Bercak   Daun Pada Tanaman Mentimun. Skripsi. Departemen
Biologi. Fakultas  MIPA. Universitas
Sumatera Utara. Padang Bulan. Medan.
1 (1) : 1-7.
Herdyastuti,  N.,  J.T.  Raharjo.,  Mudasir  dan  S. Matsjeh. 2009. Kitinase dan
Mikroorganisme  Kitinolitik:  Isolasi,
Karakterisasi  dan  Manfaatnya.  Indo  J
Chem  9 (1) : 37-38, 40. Kusdarwati,  R.,  Sudarno  dan  Rozi.  2014. Petunjuk  Praktikum  Analisis  Penyakit Ikan  I.  Program  Studi  Budidaya
Perairan. Fakultas Perikanan dan
Kelautan. Universitas Airlangga.
Surabaya. hal 22-23.
Kusriningrum.  2010.  Perancangan  Percobaan. Airlangga  University  Press.  Surabaya. hal. 10.
Kusumaningsih,  T.,  A.  Masykur    dan  U.  Arief.
2004. Pembuatan Kitosan dari Kitin  Cangkang  Bekicot  ( Achatina fulica ). Biofarmasi 2 (2) : 1693-2242.
Muharni  dan  H.  Widjajanti.  2011.  Skrining
Bakteri  Kitinolitik  Antagonis  terhadap Pertumbuhan Jamur Akar Putih
( Rigidoporus  lignosus )  dari  Rizosfir Tanaman  Karet.  Jurnal  Penelitian Sains. Jurusan Biologi FMIPA. Universitas Sriwijaya. Sumatera Selatan. 14 (1) : 51-56. Papuangan,  N.  2009.  Aktivitas  Penghambatan
Senyawa  Antimikroba Streptomyces spp.  Terhadap  Mikroba  Patogen  Tular
Tanah  Secara  In  Vitro  dan  In Planta.Tesis. IPB. Bogor. hal : 22. Patil,  R.  S.,  V.  Chormade,  dan  M.  V. Desphande. 2000. Chitinolytic enzymes  an  Exploration.  Enz  Microb Technol . 26:473-483. Priyanto,  T.P.,  M.S.  Sudjono,  Y.  Chaerani,
Suryadi  dan  M.  Sudjadi.  2001.  Teknik Produksi dan Formulasi Bakteri Kitinolitik Untuk Pengendalian Penyakit Karat  Kedelai.  Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan. Bogor. Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman. hal : 229. Rahayu,  I.H  dan  S.Purnavita.  2007.  Optimasi Pembuatan  Kitosan  dari  Kitin  Limbah Cangkang Rajungan (Portunus pelagicus) Untuk Absorben Ion Logam Merkuri.  Akademi  Kimia  Industri  St.
Paulus Semarang. Reaktor. 11 (1) : 45- 49.
Ratnaningtyas, A. 2013. Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak Rimpang Kencur   (Kaemferia galanga  L.)  terhadap Saprolegnia sp secara in vitro. Program Studi Budidaya  Perairan.  Fakultas  Perikanan
dan Kelautan. Universitas  Airlangga. Surabaya. hal : 8, 9-10. Sembiring,  A.  2012.  Kemampuan  Bakteri Antagonistik dalam Menghadapi Infeksi Saprolegnia sp. pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ).   Departemen Biologi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sumatera Utara. Medan. hal : 4-5. Suryanto,  D.,  N.  Irawati  and  E.  Munir.  2011. Isolation  and  Characterization  of Chitinolytic Bacteria and Their
Potential  to  Inhibit  Plant  Pathogenic Fungi .   Departemen  Biologi.  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam.   Universitas  Sumatera  Utara. Microbiology Indonesia 5(3) : 144-148.