_____________________________
* Korespondensi :
Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Hasanuddin Jalan Perintis Kemerdekaan Km 10, Tamalanrea, Makassar 90245 Telp./Fax: (0411) 586025. E-mail: asmi_citra@yahoo.com; hidayah_triana@yahoo.co.id
Penggunaan  Marka  DNA  dalam  Seleksi  Induk  Ikan  Kerapu  Macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus )  yang  Tahan Terhadap Bakteri Vibrio alginolyticus
PENGGUNAAN MARKA DNA DALAM SELEKSI INDUK IKAN KERAPU MACAN ( Epinephelus fuscoguttatus ) YANG TAHAN TERHADAP

## BAKTERI Vibrio alginolyticus
The Application of DNA Markers in Selection to The Bacterial Vibrio alginolyticus Resistance in Tiger Grouper (Epinephelus fuscoguttatus)
St. Hidayah Triana* 1 , Mahir S. Gani 2 , Asmi Citra Malina A.R. Tassakka* 3 dan Hamka 4
1) Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,  UMI Makassar
2) Jurusan Budidaya Pertanian Fakultas Pertanian UMI Makassar
3) Jurusan Perikanan Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan UNHAS, Makassar
4) Balai Penelitian dan Pengembangan Budidaya Air Payau Takalar
Diterima: 25 Januari 2014; Disetujui: 1 Maret 2014

## ABSTRACT
The objective of the present study was to use selected RAPD markers (Primer UBC-122 and YNZ-22) in  parental  selection  to  the  bacterial  Vibrio  alginolyticus  resistance  in  Tiger  groupers  (Epinephelus fuscoguttatus).  Eighteen fish parent samples were challenged with Vibrio alginolyticus and parental selection was  examined  by  a  PCR-RAPD  method.    The  results  showed  that  from  18  fish  samples,  primer  YNZ-22 generated 18 fragments while primer UBC-122 generated 8 fragments only (KHP, KB, HB, PB, MKH, MH, K and  MK).    In  addition,  the  average  number of  fragments  from  each  samples  generated  from  primer-YNZ  was higher (3,2) than from UBC-122 (2,3). This indicates that primer YNZ-22 is better than primer UBC-122 to use in parental selection to the Vibrio alginolyticus resistance in Tiger groupers.  From the parental selection, five fish  parents  (KHP,  PB,  MH,  K  and  MK)  were  selected  for  their  high  resistance  to  the  bacterial  Vibrio alginolyticus.
Keywords :  Tiger Groupers, Vibrio alginolyticus , PCR, RAPD, Selection

## PENDAHULUAN
Ikan kerapu macan merupakan salah satu spesies kerapu berekonomis tinggi dan mempunyai prospek  yang  baik  untuk  dikembangkan  sebagai  ikan  budidaya  karena  mempunyai  harga  jual  yang cukup tinggi.  Disamping merupakan komoditas perikanan laut yang bernilai tinggi dan menjadi salah satu komoditas unggulan di Indonesia, juga mempunyai pertumbuhan yang cepat
Usaha  budidaya  ikan  kerapu  ini  dianggap  memiliki  prospek  yang  cerah,  karena  didukung adanya teknologi pembenihan yang kini telah mulai dikuasai oleh para petani ikan ataupun nelayan. Akan tetapi budidaya ikan kerapu terkendala adanya keterbatasan benih baik dalam kualitas, kuantitas maupun  kontinyuitas.  Akibat  rendahnya  sintasan  (Survival  Rate)  pada  pembenihan  karena  adanya infeksi  bakteri  pathogen  yang  pada  kondisi  puncak  wabah  dapat  menyebabkan  mortalitas  sampai 100% (Murjani, 1997).
Menurut Wijayati dan Hamid (1997), bakteri yang mampu menyebabkan penyakit pada ikan (pathogen)  adalah  terdiri  dari Vibrio  anguillarum,  V.  alginolyticus,  V.  parahaemolyticus dan V. marinus. Sedang  menurut  Khasonchandra  (1999)  bakteri V.parahaemolyticus dan V.  alginolyticus adalah yang berperan sebagai penyebab kematian pada ikan laut hingga mencapai 80 - 90%.
Usaha pengendalian penyakit bakterial pada kegiatan budidaya ikan kerapu dapat dilakukan dengan  menggunakan  obat-obatan  atau  antibiotik,  pemberian  vaksin  (Kamiso,  2005)  dan imunostimulan (Alifuddin, 1999), juga dengan menghasilkan strain ikan kerapu yang tahan terhadap serangan penyakit seperti bakteri dalam hal ini Vibrio alginolyticus (Triana dkk., 2006)
Untuk  mendapatkan  ikan  kerapu  macan  yang  tahan  Vibrio  maka  telah  dilakukan  penelitian tentang profil DNA ikan kerapu macan yang tahan dan rentan terhadap Vibrio alginolyticus (Triana dkk.,  2007),  yang  dilanjutkan  dengan  pengamatan  tentang  keragaman  genetik  jenis  ikan  kerapu macan  tersebut  pada tahun  2008.    Berdasarkan    hasil  yang  diperoleh  pada tahun  sebelumnya,  maka pada penelitian ini  telah dilakukan seleksi induk ikan kerapu tahan Vibrio alginolyticus berdasarkan marka DNA  ukuran 1,5-2 kb.
Hasil yang diharapkan dari penelitian ini yaitu untuk mendapatkan induk ikan kerapu macan tahan Vibrio alginolyticus berdasarkan marka DNA dalam rangka untuk  menghasilkan benih kerapu macan tahan terhadap serangan penyakit yang disebabkan bakteri Vibrio alginolyticus ) .
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menyeleksi  induk  ikan  kerapu  macan  yang  tahan  terhadap Vibrio alginolyticus , berdasarkan marka DNA yang telah didapatkan pada penelitian terdahulu.  Induk yang  lolos  seleksi  selanjutnya  disilangkan  dalam  rangka  mendapatkan  benih  ikan  kerapu  macan unggul (tahan Vibrio alginolyticus ).
Manfaat  penelitian  ini  adalah  dapat  memberikan  kontribusi  terhadap  ilmu  pengetahuan  dan teknologi (IPTEK) serta terhadap pembangunan perikanan.  Dengan diperolehnya  induk ikan kerapu macan  yang  tahan  ,  maka  hal ini  dapat  digunakan  sebagai  pedoman  dalam  program breeding untuk menghasilkan strain ikan kerapu macan unggul (tahan Vibrio khususnya Vibrio alginolyticus ).

## METODE PENELITIAN
Pemeliharaan  induk  ikan  kerapu  macan  dilaksanakan  di  Balai  Riset    Budidaya  Air  Payau Takalar  (Sul-Sel),  sedangkan  untuk    ekstraksi  dan  isolasi  DNA,  PCR-RAPD  dan  elektroforesis dilakukan  di  Laboratorium  Genetika  Ikan  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  IPB  Bogor.    Ikan yang  digunakan  adalah  induk  ikan  kerapu  macan  yang  diperoleh  dari  Balai  Budidaya  Air  Payau (BBAP) Takalar (Sul-Sel). Pakan yang digunakan adalah pellet ikan yang diberikan secara ad libitum , frekuensi  pemberian  pakan  dilakukan  tiga  kali  sehari.    Wadah  yang  digunakan dalam  percobaan ini adalah  bak  semen  sebanyak  3  buah.  Sebelum  digunakan  wadah  tersebut  terlebih  dahulu  diisuci hamakan  dengan  menggunakan  kaporit  (Ca(OCl) 2 )  dengan  konsentrasi  150  ppm  selama  24  jam, kemudian dinetralkan dengan Natrium Thiosulfat (Na 2 S 2 O 3 ) dengan konsentrasi 75 ppm.
Penelitian ini terdiri dari dua tahap yaitu tahap pemeliharaan induk ikan kerapu macan dalam bak selama dua bulan, dan tahap kedua adalah analisis profil DNA.  Parameter yang diamati meliputi ekstraksi dan pengukuran konsentrasi DNA, analisa PCR-RAPD dan elektroforesis. Sirip ekor dari18 ekor  induk  kerapu  macan  dipotong  untuk  diekstraksi  DNA  genomnya  dengan  menggunakan  Kit (Puregene, Minneapolis, USA) sesuai dengan prosedur yang ada.  Sirip ekor ikan dengan berat sekitar 20  mg  dimasukkan  ke  dalam  tabung  mikro  bervolume  1,5  ml.  Larutan  lisis  sebanyak  300  µl  dan Proteinase  K  1,5  µl  ditambahkan  ke  dalam  tabung  mikro  berisi  potongan  sirip  ekor.    Inkubasi dilakukan  pada  suhu  55 o C  hingga  semua  sel  terlisis.  Setelah  suhu  tabung  mikro  mendekati  suhu ruang, enzim RNase ditambahkan sebanyak 1,5 µl dan kemudian tabung mikro tersebut dimasukkan ke inkubator dengan suhu 37 o C selama 60 menit.  Larutan presipitasi protein ditambahkan sebanyak 100 µl, divorteks, dan kemudian disentrifus pada kecepatan 13.000 rpm dengan suhu 4 o C selama 10 menit. Supernatan dipindahkan ke tabung mikro yang telah diisi dengan 300 µl isopropanol absolut. Setelah  dibolak-balik  sekitar  50  kali,  tabung  mikro  tersebut  dibiarkan  sekitar  10  menit  pada  suhu ruang.  Sentrifus  dilakukan  pada  kecepatan,  suhu,  dan  lama  waktu  yang  sama  seperti  sebelumnya. Supernatan  dibuang  dan  diganti  dengan  etanol  70%  dingin  sebanyak  300  µl.  Tabung  disentrifus kembali dengan kecepatan dan suhu yang sama dengan sebelumnya, selama 5 menit.  Etanol dibuang, tabung dikering-udarakan, dan kemudian DNA dilarutkan dengan 50 µl akuabides.  Konsentrasi DNA diukur  menggunakan  mesin  kuantifikasi  DNA/RNA.  Sebanyak  1  l  reaksi  dielektroforesis menggunakan  gel  agarose  0,7%,  DNA  divisualisasi  dengan  etidium  bromida  yang  disinari  dengan UV.    Foto  diambil  menggunakan  kamera  digital  dan  kemudian  diproses  menggunakan  metode
standar.    Selanjutnya,  tabung  berisi  DNA  disimpan  dalam  freezer  hingga  akan  digunakan  untuk proses PCR.
Pada  tahap  awal,  2  jenis  primer  diuji  dalam  proses  PCR  untuk  mengamplifikasi  DNA  ikan kerapu macan.yaitu primer UBC-122 dan YNZ-22. Amplifikasi PCR dilakukan dengan volume reaksi 15  l  yang  mengandung  1x Ex  Taq Buffer,  200  M  dNTP  mix, Ex  Taq polymerase  (Takara  Bio, Shiga,  Japan)  0,125U,    1  l  DNA  dan  1,5  l  primer.    Program  PCR  memiliki  40  siklus  dengan denaturasi selama 30 detik pada suhu 94 o C, annealing selama 30 detik pada suhu 30 o C, dan ekstensi pada  suhu  72 o C  selama  2  menit.    Sebanyak  5  l  reaksi  dielektroforesis  menggunakan  gel  agarose 0,7%,  DNA  divisualisasi  dengan  etidium  bromida  yang  disinari  dengan  UV.    Foto  diambil menggunakan kamera digital dan kemudian diproses menggunakan metode standar.
Untuk analisis profil DNA dilakuan dengan menjumlahkan pita DNA hasil amplifikasi PCR lalu  dirata-ratakan  dengan  semua  sample.    Perbedaan  jumlah  rataan  dan  pola  pita  DNA  hasil amplifikasi  PCR  dianalisis  secara  deskriptif.  Begitu  pula  dengan  analisis  kualitas  airnya  juga dilakukan secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisis Profil DNA
Pada tahap awal, sampel DNA induk ikan kerapu diuji dengan menggunakan dua jenis primer yang terdiri dari primer UBC-122 dan YNZ-22  karena kedua primer inilah yang menghasilkan pola pita  spesifik  pada  penelitian  sebelumnya  pada  ikan  kerapu  macan  (masing-masing  Gambar  2  dan Gambar 3).  Hal ini dapat terjadi karena antara primer-primer tersebut dengan DNA cetakan (template DNA)  terdapat  kesamaan  urutan  basa  diantara  keduanya,  karena  apabila  terdapat  kesamaan  urutan basa  diantara  ke  duanya  maka  primer  akan  menempel  pada  ke  dua  utas  DNA  cetakan  di  dua  situs (sites)  yang  berbeda.  Kalau  ke  dua  situs  penempelan  primer  berada  dalam  jarak  yang  dapat diamplifikasi maka akan diperoleh produk PCR berupa fragmen DNA (Tingey et al ., 1992; Sambrook et  al .,  1989).  Didukung  oleh  pernyataan  Tingey et  al .  (1992)  bahwa  keberhasilan  suatu  primer mengamplifikasi  DNA  cetakan  ditentukan  oleh  ada  tidaknya  homologi  sekuens  nukleotida  primer dengan  DNA  cetakan.  Selain  itu,  pada  kolom  yang  memiliki  fragmen  DNA  yang  jelas  terlihat menunjukkan  pola  yang  bervariasi  antar  primer,  mengindikasikan  spesifitas  sekuen  DNA  tempat masing-masing primer tersebut melekat. Adapun sekuen daripada primer-primer tersebut dan jumlah fragmennya masing-masing dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.  Sekuen DNA Primer yang Menghasilkan Pola Fragmen DNA yang Spesifik
Jenis Primer Sekuen DNA Sumber Pustaka Ukuran Fragmen yang Spesifik (kb) UBC-122 GTA GAC GAG C Khetpu et al ., (2005) 1,5 – 2,0 YNZ-22 CTCTGG GTG TCG TGC Diaz et al ., (2007) 1,2 – 2,0
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan  pada  penelitian  terdahulu  yang  menggunakan  primer UBC-122  pada  ikan  kerapu  macan  didapat  ukuran  marker  spesifik  dengan  panjang  fragmen  1,5-2,0 kb  untuk  ikan  yang  tahan  (Triana  dkk.,  2007).      Didukung  oleh  peneliti  lainnya  yang  mendukung bahwa  primer  UBC-122  merupakan  primer  yang  baik  dalam  mendapatkan  marker  spesifik  pada beberapa jenis ikan (Thaewnon et al ., 2003 dan 2005).
Begitu  pula  dengan  primer  YNZ-22,  merupakan genetic  marker yang  terbaik  untuk menganalisa  keragaman  genetik  ikan  kerapu  macan,  karena  primer  inilah  yang  dapat  membedakan antara ikan yang tahan dan rentan dan diperoleh marker spesifik untuk ikan tahan yaitu pada ukuran 1,2 - 2,0 kb (Triana dkk., 2008).
Hasil elektroforesis PCR untuk semua sampel (jumlah induk 18 ekor) dengan menggunakan primer UBC-122 dapat dilihat pada Gambar 4.  Sedangkan jumlah pita DNA yang dihasilkan masing- masing dapat dilihat pada Tabel 2.
Gambar 1. Elektroforesis DNA produk PCR-RAPD ikan kerapu macan yang tahan/hidup (no. 1- 7)  dan  yang  rentan/mati  (no.  8-14)  setelah  diuji  tantang  dengan  bakteri V.alginolyticus .    Proses  PCR  menggunakan primer  UBC-122. M:  penanda  dengan panjang  fragmen  DNA  ditunjukkan  di  sebelah  kiri  gambar  dalam  unit  kilobase  (kb) (Sumber : Triana dkk., 2007)
M  R1  R3  R3  R4  R5  R6  R7  M  T1  T2  T3  T4  T5  T6  T7
Gambar  2.    Elektroforesis  DNA  produk  PCR-RAPD  ikan  kerapu  macan  yang  rentan  (R1-R7)  dan yang tahan (T1-T7) dengan menggunakan primer YNZ-22. M : penanda dengan panjang fragmen DNA ditunjukkan di sebelah kiri gambar dalam unit kilobase (kb)
(Sumber : Triana dkk., 2008)
Hasil  elektroforesis  PCR-RAPD  lainnya  yang  menggunakan  primer  YNZ-22  dapat  dilihat pada Gambar 5. Adapun jumlah fragmen yang dihasilkan dapat pula dilihat pada Tabel 2.
Dari  Gambar  4  dan  Gambar  5  serta  Tabel  2  terlihat  bahwa  primer  YNZ-22  menghasilkan fragmen  pada  setiap  sampel  yang  diamati  (18  sample)  sementara  primer  UBC-122  hanya menghasilkan fragmen pada 8 sampel dari 18 sampel yang diamati yaitu KHP, KB, HB, PB, MKH, MH, K, MK).  Disamping itu, yang  menggunakan primer YNZ-22 pada umumnya jumlah dan rata- rata fragmen yang dihasilkan setiap sampel lebih  banyak (3,2 buah) dibandingkan dengan UBC-122 (2,3 buah).   Hal ini mengindikasikan bahwa penggunaan primer YNZ-22 lebih baik dalam program seleksi ikan kerapu macan yang tahan terhadap Vibrio alginolyticus.
Gambar 3. Elektroforesis  DNA  produk  PCR-RAPD induk ikan kerapu macan menggunakan  primer UBC-122; M: penanda dengan panjang fragmen DNA ditunjukkan di sebelah kiri gambar dalam unit kilobase (kb) (P--- M: kode sampel)
Hasil  elektroforesis  PCR-RAPD  lainnya  yang  menggunakan  primer  YNZ-22  dapat  dilihat pada Gambar 5. Adapun jumlah fragmen yang dihasilkan dapat pula dilihat pada Tabel 2.
Gambar  4.        Elektroforesis    DNA    produk    PCR-RAPD    induk  ikan  kerapu  macan  menggunakan primer  YNZ-22;  M: penanda dengan  panjang   fragmen DNA ditunjukkan di sebelah kiri gambar dalam unit kilobase (kb) (P--- K :  kode sampel)
Dari  Gambar  4  dan  Gambar  5  serta  Tabel  2  terlihat  bahwa  primer  YNZ-22  menghasilkan fragmen  pada  setiap  sampel  yang  diamati  (18  sample)  sementara  primer  UBC-122  hanya menghasilkan fragmen pada 8 sampel dari 18 sampel yang diamati yaitu KHP, KB, HB, PB, MKH, MH, K, MK).  Disamping itu, yang menggunakan primer YNZ-22 pada umumnya  jumlah dan rata- rata fragmen yang dihasilkan setiap sampel lebih banyak (3,2 buah) dibandingkan dengan UBC-122 (2,3  buah).  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  penggunaan  primer  YNZ-22  lebih  baik  dalam  program seleksi ikan kerapu macan yang tahan terhadap Vibrio alginolyticus.
Tabel 2.   Jumlah dan Ukuran  Fragmen DNA Induk Ikan Kerapu Macan yang Diseleksi
Kode Primer Sampel UBC-122 YNZ-22 Jumlah Fragmen Kisaran Ukuran Fragmen Jumlah Fragmen Kisaran Ukuran Fragmen P KP HP MP KHP B KB HB MB HPB PB H KH MKH MH K MK M - - - - 3 - 3 1 - - 1 - - 1 2 6 1 - - - - - 1,0 – 3,0 - 1,0 – 1,5 2 - - 1,5 – 2,0 - 1,0 1,0 – 2,0 0,5 – 3,0 1,0 – 2,0 2,0 - 5 5 5 1 5 1 2 2 2 1 4 3 2 2 4 4 6 4 0,7 – 1,5 0,2 – 1,5 0,2 – 1,5 0,7 0,2 – 2,0 0,7 – 1,0 0,7 – 1,0 0,7 – 1,0 0,7 – 1,0 0,7 0,2 – 1,5 0,7 – 1,5 0,7 – 1,5 0,7 – 1,0 0,2 – 1,5 0,2 – 1,5 0,2 – 2,0 0,2 – 1,5 Jumlah Rata-rata 18 2,3 58 3,2

## Proses Seleksi
Tabel 3. Kode Sampel yang Lolos Seleksi dengan Menggunakan Primer UBC-122 dan YNZ-22
Primer UBC-122 Primer YNZ-22 Kode Sample Ukuran Fragmen Kode Sample Ukuran Fragmen KHP KB HB PB MKH MH MK K 1,0-3,0 1,0-1,5 2,0 1,5-2,0 1,0-2,0 0,5-3,0 2,0 1,0-2,0 P KP HP KHP PB H KH MH M MK K 0,7-1,5 0,2-1,5 0,2-1,5 0,2-2,0 0,2-1,5 0,7-1,5 0,7-1,5 0,2-1,5 0,2-1,5 0,2-2,0 0,2-1,5
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  dari  18  ekor  induk  ikan  kerapu  terdapat  8  ekor  ikan yang lolos seleksi yang menggunakan primer UBC-122, diantaranya yang memiliki kode  KHP, KB, HB, PB, MKH, MH, MK dan H.  Sedangkan  yang  menggunakan primer YNZ-22 terdapat 11 ekor yang lolos seleksi diantaranya  P, KP, HP, KHP, PB, H, KH, MH, M, MK dan K (Tabel 2).  Apabila digabungkan penggunaan primer UBC-122 dan YNZ-22 maka yang lolos seleksi hanya 5 ekor induk yaitu induk kerapu macan dengan kode KHP, PB, MH, K dan MK.  (Tabel 3).  Hasil seleksi induk ini bertujuan untuk menghasilkan benih ikan kerapu tahan Vibrio alginolyticus .  Dengan demikian, induk ikan yang lolos seleksi ini ikan  selanjutnya akan disilangkan.
Tabel  4.  Jumlah  dan  Ukuran    Fragmen  DNA  Induk  Ikan  Kerapu  Macan  yang  Lolos  Seleksi Menggunakan Primer UBC-122 dan YNZ-22 Kode Primer Sampel UBC-122 YNZ-22 Jumlah Fragmen Kisaran Ukuran Fragmen Jumlah Fragmen Kisaran Ukuran Fragmen KHP PB MH K MK 3 1 2 6 1 1,0 – 3,0 1,5 – 2,0 0,5 – 3,0 1,0 – 2,0 2,0 5 4 4 4 6 0,2 – 2,0 0,2 – 1,5 0,2 – 1,5 0,2 – 1,5 0,2 – 2,0

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  maka  dapat  disimpulkan  beberapa  hal  diantaranya  yaitu  Induk ikan kerapu macan yang lolos seleksi dengan menggunakan primer UBC-122 sebanyak 8 ekor dengan kode KHP, KB, HB, PB, MKH, MH, K dan MK; Induk ikan kerapu macan yang lolos seleksi dengan menggunakan primer YNZ-22 sebanyak 11 ekor dengan kode P, KP, HP, KHP, PB, H, KH, MH,   K, MK dan  M; Induk ikan kerapu macan yang lolos seleksi berdasarkan primer UBC-122 dan YNZ-22 adalah    KHP,  PB,  MH,  MK  dan  K;  Penggunaan  primer  YNZ-22  lebih  baik  dalam  program  seleksi induk ikan kerapu macan tahan Vibrio alginolyticus .

## DAFTAR PUSTAKA
Alifuddin,  M.  1999.  Peran  Imunostimulan  (Lipopolisakarida, Saccharomyces  cereviceae dan Levamisol)  pada  Gambaran  respon  Imunitas  Ikan  Jambal  Siam  ( Pangasius  hypophthalmus Fowler). Program Studi Ilmu Perairan. Program Pasca Sarjana IPB. Bogor.  52 hal
Kamiso.  H.  N.,  A.  Isnansetyo,  Triyanto,  M.  Murdjani  dan  Murwantoko.  2005.  Produksi  Vaksin Vibrio  untuk  Mengatasi  Penyakit  Ikan  Kerapu.  Makalah  disampaikan  pada  seminar  Riset Unggulan Strategis Nasional (RUSNAS) Kerapu.  12 Agustus 2005. Jakarta. 16 hal.
Kasonchandra, J. 1999. Major Viral Bacterial Disease of Marine Fishes with Emphasions Seabass and Grouper. Paper Contributed to the Fourth Symposium on Disease in Asian Aquaulture. Cebu International Convension Centre, Water front Cebu City Hotel, Cebu City. Philiphines.
Murjani,  M.  1997.  Pembenihan  Ikan  Kerapu  Tikus  ( Cromileptes  altivelis )  dalam  Bak  Terkendali  di Loka BBAP Situbondo. Ditjen Perikanan. Deptan. 9 Hal.
Sambrook,  J.E.,  F.  Fritsch,  and  T.  Maniatis.    1989. Molecular  Cloning  :  A  Laboratory  Manual . CSH-New York : Cold Spring Harbour Laboratory.
Thaewnon-ngiw, B., Klinbunga, S., Phanwichien, K., Sangduen, N., Lauhacinda, N., and Menasveta, P.  2003.  Genetic diversity of  introduced ( Pomacea caniculata ) and native (Pila) apple snails in Thailand revealed  by Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) analysis. AJSTD Vol. 20 Issue 3 & 4 : 289-306.
Thaewnon-ngiw,  B.,  Prakongruk,  N.,  Sangdee,  A.,  and  Petchjul,  K.    2005.    Genetic  diversity  of Barbodes genera    employing  RAPD  technique. In : 31 st Conggress  on  Science  and Technology of Thailand at Suranaree University of Technology 18-20 Oktober 2005. 3 pp.
Tingey SV, JA. Rafalski, dan JGK. Williams, 1992. Genetic analysis with RAPD markers. Dalam : Proceedings  of  the  Symposium  Applications  of    RAPD  Technology  to  Plant  Breeding . Minneapolis, 1 Nov 1992. Hal 3 - 8.
Triana,  S.H.,  Ilmiah,  O.  Carman,  dan  Asmi  C.M.    2006.    Analisis  Profil  DNA  ( Deoxyribonucleic Acic )  kan  Kerapu  Macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus )  yang  Diberi  Imunostimulan Saccharomyces  cerevisiae dan  Vaksin Vibrio  alginolyticus .  Laporan  Penelitian  Hibah Pekerti IV/1.  DP2M-DIKTI.
Triana, S.H.,  O. Carman,  A.C. Malina, Alimuddin, Ilmiah dan M.S. Gani.  2007.   Analisis Profil DNA ( Deoxyribonucleic Acic ) kan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ) yang Tahan dan  Rentan  Terhadap  Serangan  Bakteri Vibrio  alginolyticus .  Laporan  Penelitian  Hibah Pekerti IV/2.  DP2M-DIKTI.
Triana,  S.H.  dan  M.S.  Gani.    2008.    Kajian Keragaman  Genetik  dalam  Seleksi Ikan  Kerapu  Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ) yang Tahan terhadap Penyakit yang Disebabkan Bakteri Vibrio alginolyticus .  Laporan Penelitian Fundamental.  DP2M-DIKTI. 50 hal.
Wijayati,  A.,  dan  N.  Hamid.  1997.  Identifikasi  Bakteri  pada  Pembenihan  Ikan  Kerapu  Tikus ( Cromiteptes altivelis ).  Dirjen Perikanan. Deptan.