EFEKTIVITAS VAKSINASI Crude DAN Soluble Protein SPORA Myxobolus koi TERHADAP TINGKAT KERUSAKAN USUS IKAN KOI ( Cyprinus carpio Koi)
THE EFFECTIVETY Crude and Soluble Protein of Myxobolus koi SPORE AGAINTS INTESTINE DIFFERENT DEGREES IN KOI ( Cyprinus carpio koi).
Rachma Woro Anggarani, Gunanti Mahasri dan Lucia Tri Suwanti
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Myxobolus  koi is  one  species  of  Myxobolus  sp  that  can  cause  parasitic  diseases  in  fish  called Myxobolusis. Based on the Decree of the Minister of Marine and Fisheries No: KEP.03/MEN/2010 that Myxobolus koi in the list of Fish Quarantine Pests group I. Myxosporean diseases are most numerous in the water can cause Proliferative Kidney Disease (PKD) and Whirling Disease (WD).
The  aim  of  this  research  is  to  finding,  analyzing  and  determining  the  protein  of  spores Myxobolus koi that can effectively reduce the level of damage to the intestinal organs as well as for the prevention  myxobolusis  on  Koi’s.  Then  for  finding,  analyzing  and  determining  the  protein  of  spores Myxobolus koi do isolation of spore proteins .
The  study  consisted  of  three  phases  examination  to  preparation  and  identification  of  spores, isolation  and  analyze  of  crude  and  soluble  protein  spores  for  obtain  dose  and  molecular  weight  each protein  and  histopathological  test.  This  research  uses  descriptive  method.  The  data  presented  may  be narratives, images, tables or charts for each group. Intestinal histopathology test results of research carried scoring Koi’s were analyzed using the Kruskal-Wallis.
The  results  showed  a  profile  crude  protein  and  soluble  proteins  from  spores Myxobolus  koi showed that the molecular weight of crude protein Myxobolus koi in this study was 150 kDa and 72 kDa and  for  soluble  protein  was  73  kDa.  Results  scoring  the  degree  of  infection  caused  by  exposure  to Myxobolus koi then statistically processed with an average yield of scoring in a sequence of 0; 1.6; 0.64 and 0.32. Statistical analysis showed no significant difference in the treatment of K + with crude protein, and  K  +  with  soluble  proteins.  Statistical  analysis  showed  that  there  were  significant  differences  in treatment  with  K+  and  K-,  K-  with  soluble  protein  and  crude  protein  and  soluble  protein. Histopathological  changes  in  the  intestine  in  the  form  of  inflammatory  cell  infiltration,  necrosis  and haemorage
Keywords : Myxobolus, crude protein, soluble protein, histopathology, intestines, koi fish

## Pendahuluan
Myxobolus  koi merupakan  salah  satu spesies  dari Myxobolus  sp yang  dapat menyebabkan penyakit parasiter pada ikan yang disebut Myxobolusis . Pada umumnya organisme penyebab  penyakit  ini  bersifat  sistemik  serta dikenali dari morfologi spora, jumlah dan lokasi filamen polar (Mahasri, 2004).
Mahasri dan Kismiyati (2011)
menjelaskan  bahwa Myxobolus  koi membentuk nodul  pada  insang  yang  berisi  ribuan  spora sehingga  dapat  menghalangi  proses  penyerapan oksigen  serta  sering  menyebabkan  operculum selalu terbuka. Jika nodul ini pecah, maka spora menyebar  ke  perairan  sehingga  tertelan  oleh ikan  akibat  ukuran  spora  yang  relatif  kecil. Spora  yang  tertelan  oleh  ikan  akan  masuk kedalam  usus  kemudian  melepaskan  filamen polar  untuk  menancap  pada  dinding  usus  serta
mengeluarkan  sporoplasma  untuk  melakukan penetrasi  pada  mukosa  usus  dan  mengikuti aliran darah menuju organ target yakni insang.
Usus  adalah  organ  utama  pencernaan makanan  dan  penyerapan  nutrisi.  Takashima and Hibiya (1995) menjelaskan bahwa struktur histologi  dari  dinding  saluran  pencernaan  ikan terdiri  dari  empat  lapisan  dasar  yakni  mukosa, submukosa,  muskularis  dan  serosa.  Menurut Deloshoub et  al (2010)  lapisan  mukosa  usus memiliki  banyak  vili  sepanjang  anterior  hingga posterior  usus  dan  pada  bagian  mukosa  inilah banyak ditemukan infeksi parasit.
Upaya
pengobatan
dengan
menggunakan  perendaman  air  laut  maupun penggunaan  bahan  kimia  seperti formalin , methylen blue , pottasium permanganate , glacial acetic  acid atau phenol tidak  efektif  untuk
mengobati  penyakit  yang  diakibatkan  oleh parasit Myxobolus koi (Schaperlaus, 1992).

## Materi dan Metode
Tempat Pengambilan Sampel Lokasi  pengambilan  sampel  diambil dari kolam budidaya koi di Sentra Budidaya Koi Desa  Kemloko  Kecamatan  Nglegok  Kabupaten Blitar Propinsi Jawa Timur .
Pengambilan Sampel Sampel  ikan  koi  diperoleh  dari  kolam budidaya  sebanyak  4200  ekor  dengan  kisaran panjang  5-7  cm  dengan  umur  2  bulan.  Sampel diambil  dari  populasi  ikan  koi  yang  terinfeksi Myxobolus dengan  berbagai  tingkat  infeksi  dan ukuran nodul. Pembuatan preparat histopatologi diambil dari 5 ekor ikan untuk setiap perlakuan (Klinger and Floyd, 2002).
Identifikasi Spora Myxobolus koi Karakteristik
morfologi
spora Myxobolus  koi dapat  dikenali  berdasarkan bentuk  spora,  bagian  spora  dan  jumlah  kapsul polar. Cara identifikasi adalah dengan melakukan  pengamatan  terhadap  spora  yang terdapat  dalam  nodul  pada  insang  ikan  koi dengan  metode  natif  melalui  mikroskop  cahaya dengan  perbesaran  400x  (Lom  and  Dykova, 1995)
Perhitungan Spora Myxobolus koi
Perhitungan  spora  dilakukan  dengan menggunakan haemocytometer dan untuk memudahkan  perhitungan  digunakan hand counter . Perhitungan spora menggunakan metode  “ Big  Block ”  karena  ukuran  spora Myxobolus  koi yang  lebih  dari  6µm  (Satyantini dkk., 2012).
Isolasi crude dan soluble    protein spora

## Myxobolus koi
Spora  yang  telah  dihitung  kemudian dicuci  dengan  PBS  dan  disentrifugasi  dengan kecepatan  5000  rpm  selama  10  menit.  Proses pencucian  diulang  sebanyak  2  kali.  Pelet diresuspensi dengan buffer lisis (0,32 M scrose ( sucrosa )  54,8  gram,  1%  v/v Triton X-100  0,5 ml,  10  mM Tris  HCL pH  7,4  sebanyak  10  ml) sehingga  mendapatkan  konsentrasi  sebanyak  ± 11ml. Kemudian pada suspensi pellet ditambahkan  0,5  ml EDTA 1µM  dan  PMSF ( phenylmethylsulfonyl fluoride ) 5 mM sebanyak 0,5  ml.  Kemudian  dilakukan  sonikasi  dengan waterbath sonicator dalam es (1 menit sonikasi ½  menit  istirahat),  dilakukan  berulang  10  kali. Hasil sonikasi tersebut divortex (½ menit vortex 1  menit  istirahat)  dalam  es,  dilakukan  berulang
15 kali. Larutan hasil sonikasi merupakan crude protein (Ratnasari dan Wijayanto, 2005).
Setengah  bagian  (3cc)  dari crude protein tersebut  diproses  dengan  sentrifuge berkecepatan    10000  rpm  dalam  20  menit dengan  temperatur  yang  rendah  (4 0 C)  untuk mendapatkan soluble protein sedangkan pelletnya  merupakan Outer  Membrane  Protein (Ratnasari dan Wijayanto, 2005).
Respons  imun  ikan  Koi  terhadap  vaksinasi crude dan soluble protein spora Myxobolus koi. Respons  imun  ikan  Koi  setelah  di imunisasi  dengan crude dan  s oluble  protein spora Myxobolus  koi diamati  melalui  tingkat kerusakan  usus  setelah  pemaparan Myxobolus koi .  Penelitian  ini  menggunakan  5  perlakuan.
Ikan  Koi  di  pelihara  pada  5  akuarium  dengan kapasitas  5  lt  air.  Tiap-tiap  perlakuan  dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan (A1, A2, hingga C1).
Pemeriksaan Histopatologi Pemeriksaan  derajat  kerusakan  usus akibat  infestasi Myxobolus  koi dilakukan sebanyak  25  preparat  histopatologi.  Preparat diperiksa  secara  mikroskopis  untuk  mengetahui derajat kerusakan dengan skoring pada perubahan  histopatologi  yang  terjadi  untuk menentukan  jenis  dan  tingkat  kerusakan  pada organ  usus,  dengan  nilai  0,  1,  2,  3  dan  4 (Mahasri,  2007).  Dasar  skoring  adalah  nilai  0 diberikan  pada  preparat  yang  belum  terjadi kerusakan  pada  satu  lapang  pandang  (tidak  ada perubahan  patologi),  nilai  1  diberikan  pada preparat yang mengalami kerusakan kurang dari atau  sama  dengan  25  persen  pada  satu  lapang pandang  (tingkat  kerusakan  ringan),  nilai  2 diberikan  pada  preparat  yang  mengalami kerusakan  sebesar  26-50  persen  pada  satu lapang  pandang  (tingkat  kerusakan  sedang), nilai 3 diberikan pada preparat yang mengalami kerusakan  sebesar  51-75  persen  pada  satu lapang  pandang  (tingkat  kerusakan  berat),  nilai 4  diberikan  pada  preparat  yang  mengalami kerusakan lebih dari 75 persen pada satu lapang pandang (tingkat kerusakan sangat berat).

## Hasil dan Pembahasan
Identifikasi
Myxobolus secara mikroskopis  dilakukan  terhadap  spora  yang terdapat  pada  nodul  di  insang  ikan  koi  dengan metode natif. Hasil pengamatan di laboratorium menunjukkan  bahwa  morfologi  spora  yang diamati  sesuai  dengan  kunci  identifikasi  dari Lom and Dykova (2006) yaitu spora Myxobolus berbentuk  elips  atau  oval.  Di  dalam  spora Myxobolus terdapat  dua  kapsul  polar  berbentuk
pyriform yang  terletak  di  bagian  anterior.
Pengamatan gejala
klinis di kolam menunjukkan ikan koi yang terinfeksi Myxobolus antara lain ikan berenang mendekati permukaan air dan sulit bernafas akibat terdapat nodul  berwarna  putih  kemerahan  di  filamen insang  sehingga  menyebabkan  operkulum  tidak dapat menutup.
Gambaran  profil  crude  protein  dan soluble  protein  dari  spora Myxobolus  koi menunjukkan  bahwa  berat  molekul  dari  crude protein M.koi dalam  penelitian  ini  adalah  150 kDa  dan  72  kDa  dan  untuk  soluble  protein M.koi adalah  73  kDa  serta  konsentrasi  protein crude  protein  sebesar  10,36  µg/ml  dan  soluble protein sebesar 8,68 µg/ml.
Berdasarkan  pengamatan  histopatologi usus  ikan  mas  yang  terinfestasi M.  koi dengan perlakuan yang berbeda yaitu terdapat kerusakan histopatologi berupa nekrosis, infiltrasi sel radang, dan ditandai dengan adanya spora M. koi pada jaringan usus .
Daur  hidup  dari Myxobolus  koi antara lain  masuknya  spora  ke  dalam  saluran pencernaan  ikan  koi.  Berdasarkan  pemeriksaan yang  telah  dilakukan  secara  mikroskopis  telah terbukti  adanya  spora  yang  ditemukan  dalam usus  ikan  koi  dengan  jumlah  berbeda  pada  tiap vaksinasi  protein  dan  diperiksa  pada  hari  ke  4 pasca pemaparan spora. Derajat kerusakan usus ikan  koi  tiap  perlakuan  ditentukan  dengan  cara skoring untuk semua jenis kerusakan. Perubahan  histopatologi  usus  dengan  skoring. Hasil  skoring  derajat  infeksi  akibat  pemaparan Myxobolus  koi kemudian  diolah  secara  statistik dengan  hasil  rata-rata  skoring  secara  berurutan yaitu  0;  1,6;  0,64    dan  0,32.  Analisis  statistik menunjukkan  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan  pada  perlakuan  K+  dengan  crude protein, dan K+ dengan soluble protein. Analisis statistik  menunjukkan  terdapat  perbedaan  yang signifikan  pada  perlakuan  K+  dengan  K-,  K- dengan  soluble  protein  serta  crude  protein  dan soluble protein.
Gambar 1.  Identifikasi Myxobolus koi pada insang ikan koi
Hasil  skoring  derajat  infeksi  akibat pemaparan Myxobolus  koi kemudian  diolah secara  statistik  dengan  hasil  rata-rata  skoring secara  berurutan  yaitu  0;  1,6;  0,64    dan  0,32. Analisis  statistik  menunjukkan  tidak  terdapat perbedaan  yang  signifikan  pada  perlakuan  K+ dengan  crude  protein,  dan  K+  dengan  soluble protein. Analisis statistik  menunjukkan terdapat perbedaan  yang  signifikan  pada  perlakuan  K+ dengan  K-,  K-  dengan  soluble  protein  serta crude  protein  dan  soluble  protein.  Skoring Histopatologi dapat dilihat pada tabel.1
Tabel 1. Pengamatan  Histopatologi  Usus  Ikan Koi Akibat Infeksi Myxobolus koi pada tiap perlakuan Perlakuan Median Skoring Rata- Rata Skoring A1 (K-) 0 0 a A2 (K+) 2 1,6 b B1 1 0,64 c C1 0 0,32 d Data  pengukuran  kualitas  air  pada kolam  budidaya  saat  pengambilan  sampel  di Desa Kemloko,
Kecamatan Nglegok, Kabupaten  Blitar  menunjukkan  suhu  rata-rata kolam  adalah  28 0 C,  pH  rata-rata  air  kolam adalah  6,  kadar  ammonia  0  mg/l,  salinitas  satu ppm,  dan  oksigen  terlarut  9  mg/l.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kondisi  kualitas  air  kolam ikan  koi di Desa Kemloko Kecamatan Nglegok Kabupaten Blitar dalam kondisi normal meskipun  beberapa  kondisi  kualitas  air  pada kolam  ikan  koi  tersebut  tidak  sesuai  atau  tidak berada dalam kisaran normal bagi kelangsungan hidup ikan koi.
Kualitas  air  yang  baik  sangat  penting dalam  budidaya  ikan  sebab  kualitas  air  yang baik dapat memberikan hasil yang optimal pada budidaya  ikan.  Kualitas  air  dipengaruhi  oleh berbagai  zat-zat  kimia  yang  terlarut  dalam  air antara lain suhu, pH,  dan oksigen terlarut. Data kualitas  air  media  pemeliharaan  sebelum  dan sesudah perlakuan disajikan pada Tabel 3.
Data  hasil  pengukuran  suhu,  pH  dan oksigen  terlarut  pada  media  pemeliharaan  ikan koi sebelum dan sesudah perlakuan menunjukkan  sedikit  perbedaan  yakni  pH  air
Gambar 2. Histologi usus ikan koi. A adalah K-(normal), B adalah K+ , C adalah B1, D adalah C1. Panah  kuning  ( )  menunjukkan  nekrosis  (kariolisis),  panah  orange  ( )
menunjukkan nekrosis (piknosis), panah biru ( ) menunjukkan nekrosis (karioreksis), panah  merah    ( )  menunjukkan  infiltrasi  sel  radang  (IR),  panah  hitam  ( ) menunjukkan kista M.koi ,. Pewarnaan HE, Pembesaran 400x. Bar: 40µm.
sebelum  perlakuan  sebesar  8  sedangkan  setelah perlakuan  sebesar  6,5  dan  oksigen  terlarut sebelum  perlakuan  sebesar  5  ppm  sedangkan setelah perlakuan sebesar 4,2 ppm.

## Kesimpulan
Kondisi kualitas air media
pemeliharaan  sebelum  dan  setelah  perlakuan berubah dikarenakan adanya kontaminasi lingkungan  akibat  pemaparan  spora Myxobolus koi dan adanya hasil ekskresi metabolisme ikan setelah  pemberian  protein  crude  dan  soluble melalui injeksi.

## Daftar Pustaka
Chavda,  D.,  S.  Bhatt.,  R.A.  Sreepada  and  A.
Sheth. 2010. Pathogenicity of Myxobolus  koi Infection  and  its  Effect on Protein Expression in Catla catla in Central Gujarat Region. Journal of Cell and  Tissue  Research  Vol  10(1):  2157- 2164.
Delashoub,  M.,  I.  Pousty  and  S.  M.  B. Khojasteh. 2010. Histology of Bighead Carp ( Hypophthalmichthys nobilis ) Intestine. J. Global Vet. 5(6):302-306. Fajriah,  A.  Karakterisasi  Protein  Lernea  sp.
Dengan  menggunakan  metode  SDS- PAGE. Surabaya. 2009. Hal. 38-40.
Klinger, R.E and R.F. Floyd. 2002. Introduction to  Freshwater  Fish  Parasites.  Institute of  Food  and  Agricultural  Sciences. University of Florida. Florida. 13p.
Lom, J and I. Dykova. 1995. Myxozoan Genera:
Definition  and  Notes  on  Taxonomy,
Life Cycle, Terminology and Pathogenic Species. J. Folia Parasitologica 53:1-36.
Mahasri, G. 2004.  Ilmu Penyakit Ikan Protozoa pad Ikan dan Udang. Fakultas Perikanan  dan  Kelautan  Universitas
Airlangga. Surabaya. Hal 25-29.
Mahasri, G. 2007. Protein Membran Imunogenik Zoothamnium penaei Sebagai Bahan Pengembangan Imunostimulan  pada  Udang  Windu terhadap Zoothamniosis. Disertasi Program Pascasarjana. Universitas Airlangga. Hal 284. Mahasri,  G.  dan  Kismiyati.  2011.  Buku  Ajar Parasit  dan  Penyakit  Ikan  I  (Ilmu Penyakit Protozoa dan Udang). Universitas  Airlangga,  Surabaya.  Hal 3-4. Noga,  E.  J.  2010.  Fish  Disease:  Diagnosis  and
Treatment.  Wiley-Blackwell;  Second edition. p.242-243 . Plumb  J.  A.  1994. Health  Maintenance  and principal Microbial Diseases of Cultured Fishes . Iowa State University CRC  Press,  Boca  Raton,  Florida. p.144.
Plumb,  J.  A.  and  Hanson,  L.  A.  2011.  Health Maintenance  and  Principal  Microbial Disease of Cultured Fishes. 3 th Edition. Blackwell. Singapore. p. 39-45. Ratnasari.,  R.  H.E.  Narumi,  dan  Wijayanto.,S. 2005.  Isolasi  dan  Pengukuran  Berat Molekul  Protein Outer  Membrane Protein (OMP)  Kuman Salmonella pullorum Isolat  Lapangan.  Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga. Hal 28. Rukyani, A. 1990. Histopathological Changes in The  Gill  of  Common  Carp  ( Cyprinus carpio L. ) Infected with the
Myxosporean  Parasite MyxobolusKoi Kudo,  1920.  Asian  Fisheries  Science (3):337-341.
Satyantini,  W.  H.,  E.  D.  Masithah,  M.  A. Alamsjah,  Prayogo  dan  S.  Andriyono. 2012.  Penuntun  Praktikum  Budidaya Pakan  Alami.  Universitas  Airlangga.
Surabaya. hal. 49.
Tabel 2. Data Kualitas Air Media Pemeliharaan Sebelum dan Sesudah Perlakuan
No. Media Pemeliharaan Parameter Sebelum Perlakuan Sesudah Perlakuan Suhu (°C) pH DO (ppm) NH 3 (ppm) Suhu (°C) pH DO (ppm) NH 3 (ppm) 1. A1 (K-) 27 8 5 0 27 7 4 0 2. A2 (K+) 27 8 5 0 27 8 5 0,5 3. B1 27 8 5 0 27 6 4 0,5 4. C1 27 8 5 0
27 6 4 0,5 Rerata 27 8 5 0 27 6,5 4,2 0,5
Schaperlaus,  W.  1992. Fish  Disease .  Vol.2. Schaperlaus,  W,  H.  Kulow,  K., Schereckenbach, K. (Eds.), A.A. Balkema. Rotterdam. p.245. Takashima, F. And T. Hibiya. 1995. An Atlas of Fish Histologi: Normal and Pathological Features. 2 nd Edition.
Kodansha. Tokyo. p.67-68, pp.88-90.