Efek Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit (Curcuma longa) terhadap Struktur Histologi Rektum Tikus Putih (Rattus norvegicus) yang Diinduksi Dextran Sodium Sulphate (DSS)
The Effect of Ethanol Extract Turmeric Rhizome (Curcuma Longa) to Histologycal Structure of Rat Rectum Induced Dextran Sodium Sulphate (DSS)
Lidia Maziyyatun Nikmah, Susantin Fajariyah, Mahriani *)
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember
* E-mail: yani_hendro@yahoo.com

## ABSTRACT
Turmeric  (Curcuma  longa)  is  a  plant  that  people  use  as  a  traditional  medicine  to  treat  some diseases such as: anti-inflammatory, antidiarrhea, antioxidants, hepatoprotector, and others. One of the  main chemical  compounds  contained  in  turmeric  and  has  a  role  as  anti-inflammatory  is curcumin. This study was conducted to determine the effect of ethanol extract of turmeric rhizome (Curcuma longa) on the histologycal structure of rat rectum induced by Dextran Sodium Sulphate (DSS).  Wistar  strain  rats  was  divided  into  three  groups:  negative  control  group,  positive  control group  (1%  DSS),  and  DSS  treatment  group  1%  +  ethanol  extract  of  turmeric  rhizome  dose 200mg/KgBB. DSS is given ad libitum, while ethanol extract of turmeric rhizome is given orally. We  used  paraffin  method  and  Haematoxilyn  Eosin  staining  to  make  the  preparation  organ.  The data were analyzed using One Way ANOVA test, Duncan Multiple Range Test (DMRT) test, and correlation test. The result of this study is DSS administration has an effect on decreasing average of crypt, number of Goblet cell, and depletion of rectal mucous layer. While treatment of extract turmeric rhizome can increase height of crypt and number of Goblet cell in rectal mucosal layer of rat.
Keywords: Exctract of turmeric rhizome, DSS, rectum, Rattus norvegicus

## PENDAHULUAN
Kunyit  (Curcuma  longa)  merupakan  tanaman yang  digunakan  masyarakat  sebagai obat tradisional  untuk menyembuhkan  beberapa penyakit  dan  berperan sebagai  antioksidan (Ruby et al., 1995), dan antiinflamasi (Bastaki et  al.,  2016). Kurkumin  merupakan  senyawa kimia utama dalam kunyit yang dapat diperoleh dari hasil  ekstraksi  rimpang  kunyit  (Araujo  & Leon,  2001).  Kurkumin  merupakan  zat pemberi  warna  kuning  pada  kunyit  yang  juga berfungsi  sebagai  anti inflamasi,  antioksidan, hepatoprotektif,  dan  antikanker (Krup et  al., 2013).
Inflamasi  atau  peradangan  tidak  hanya menyerang  bagian  luar  tubuh,  namun  juga dapat  menyerang  organ  dalam  tubuh  misalnya organ  saluran  pencernaan  seperti  kolon  dan rektum.  Inflamasi  pada  saluran  pencernaan disebut  juga  dengan Inflamatory  Bowel Disease (IBD).  Inflamasi  dari  IBD  yang menyerang saluran pencernaan dapat disebabkan  oleh  beberapa  faktor,  yaitu:  faktor genetik, lingkungan, dan imunotoksik. Inflamatory  Bowel  Disease (IBD)  terbagi menjadi  2  yaitu:  Kolitis  Ulseratif  (KU)  dan Chron ’s Disease (CD) (Sugiarto, 2016) . Kolitis
ulseratif  merupakan  penyakit  inflamasi  kronik yang  menyerang  mukosa  usus  besar  manusia. Secara  histologi, kolitis  ulseratif  ditandai dengan  adanya  inflamasi  pada  mukosa  dan submukosa  kolon,  pemendekan  kripta,  infiltasi sel  inflamasi  pada  lamina  propria,  dan berkurangnya produksi musin (Sugiarto, 2016), (Yan et al., 2009). Kolitis ulseratif menyebabkan inflamasi  pada  kolon  dan  dapat berkembang menjadi kanker kolon (Propivanova et  al., 2008).  Kanker  kolon ditandai  dengan  polip  pada  lapisan  mukosa kolon  yang  berkembang  menembus  dinding kolon  dan kelenjar  getah  bening (Alteri et  al., 2014).
Model  induksi  kolitis  pada  tikus  dapat dilakukan  dengan  pemberian Dextran  Sodium Sulphate (DSS) (Yan et  al.,  2009). Pemberian DSS  pada  tikus  menyebabkan  kolitis  yang hampir  sama  dengan  kolitis  ulseratif  pada manusia (Gaudio et  al.,  1999).Pemberian  DSS sebanyak  3%  secara ad  libitum selama  tujuh hari  pada  distal  kolon  tikus  menunjukkan kerusakan epitel, kerusakan kripta, berkurangnya  sel  Goblet  dan  infiltrasi  sel inflamasi (Rayudu & Raju, 2014).
Rektum  merupakan organ  lanjutan  dari kolon (Standring,  2008). Kolitis  ulseratif dimulai  dari  rektum  dan  menyebar  ke  arah proksimal  kolon (Geboes,  2003). Pemberian kunyit diduga dapat menurunkan efek inflamasi  yang  disebabkan  oleh  DSS.  Oleh karena  itu,  perlu  adanya  penelitian  untuk mengetahui  efek  ekstrak  rimpang  kunyit sebagai  antiinflamasi  pada mukosa rektum tikus putih Strain Wistar yang diinduksi dengan DSS.

## METODE

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Zoologi, Jurusan  Biologi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Jember,  pada  bulan Februari 2017 sampai dengan bulan April 2017.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  terdiri dari:  kandang  metabolik,  wadah  penampung  urin, wadah  penampung  pakan  tikus  dan  botol  minum tikus,  jarum  sonde  tikus,  kamera  digital, beaker glass 600  ml  (Duran),  botol scott 100  ml  (Duran), botol scott 1000 ml  (Duran),  corong  plastik  kecil, spatula,  cawan  porselen,  saringan  tepung,  rotary evaporator,  waterbath,  baki stainless  steel,  baki plastik,  pisau,  talenan,  sendok  plastik  dan  sendok stainless  steel,  kain  saring,  cup  ekstrak  kecil, timbangan analitik (Ohaus), cawan petri, silet, botol reagen,  mikrotom,  mikroskop  (Olympus), OptiLab, staining  jar,  scalpel, hot  plate,  botol  falkon,  oven (incucell), dan bunsen.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini terdiri  dari:  hewan  uji  berupa  tikus  putih  (Rattus norvegicus)  Strain  Wistar  umur  dua  bulan  dengan berat  badan  ±200  gram  sebanyak  6  ekor  yang diperoleh  dari  LPPT4  Yogyakarta,  pakan  pelet broiler  (BR1  plus),  aquadest, Dextran  Sodium Sulphate (DSS)  merek  Sigma  Aldrich,  rimpang kunyit yang dibeli dari pasar Tanjung Jember, kertas saring,  gelas  penutup,  gelas  objek,  etanol  70%, larutan  PBS  (Phospat  Buffer  Saline)  formalin  10%, NaCl  0,9%,  alkohol  bertingkat,  alkohol  absolut, parafin,  gliserin,  albumin,  xylol,  entelan,  dan pewarna HE (Haematoxylin Eosin).

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL).  Pada  penelitian  ini  digunakan  6 ekor tikus putih (Rattus norvegicus) betian umur dua bulan  dengan  berat  badan  ±200  gram.  Hewan  uji diberikan  perlakuan  DSS  1%  secara ad  libitum dan ekstrak etanol rimpang kunyit 200 mg/KgBB secara oral.  Pemberian  DSS  dilakukan  selama  tiga  hari yaitu  hari  pertama  sampai  hari  ketiga,  kemudian dilanjutkan  dengan  pemberian  ekstrak  etanol rimpang  kunyit  selama  tiga  hari  yaitu  pada  hari keempat  sampai hari  keenam.  Perlakuan  yang diberikan  dibagi  menjadi  tiga  kelompok  dan
dilakukan dua kali pengulangan pada setiap individu kelompok dengan pemberian dosis sebagai berikut: Kelompok 1: Kontrol  negatif  (tanpa  perlakuan  / tanpa  pemberian  DSS  1%  dan  tanpa pemberian  ektrak  etanol  rimpang kunyit).
Kelompok  2: Kontrol  positif  (pemberian  DSS  1% dantanpa  pemberian  ekstrak  etanol rimpang kunyit).
Kelompok  3:  Perlakuan  dosis  (pemberian  DSS  1% dan  ekstrak  etanol  rimpang  kunyit 200mg/KgBB).

## Pembuatan Ekstrak Etanol Rimpang Kunyit
Rimpang  kunyit  dicuci  bersih  dengan  air  kemudian ditiriskan.  Setelah  itu  diirisi  tipis  dan  dioven  pada suhu  50ºC,  selanjutnya  digiling  dan  diayak  hingga diperoleh  serbuk  simplisia.  Serbuk  simplisia dimaserasi  dengan  etanol  70%    selama  2x24  jam. Perbandingan  simplisia  rimpang  kunyit  dengan etanol  adalah  1:10.  Hasil  maserasi  disaring  dan dimasukkan  ke  dalam rotary  evaporator dengan suhu  80 º C  sampai  diperoleh  filtrat  rimpang  kunyit. Setelah  itu  dimasukkan  dalam waterbath untuk menghilangkan kandungan etanol dan air  (Maharani & Bachri, 2015).

## Pembuatan Preparat Histologi Rektum
Pengambilan  organ  rektum  dilakukan  sebelum pembuatan preparat histologi rektum ketiga kelompok  perlakuan  pada  hari  ke  tujuh.  Pembuatan preparat  histologi  dilakukan  dengan  tahapan (Suntoro, 1983): (a) Fiksasi, Dehidrasi dan Clearing, (b) Infiltrasi dan Embedding (penanaman),  (c) Penyayatan  (Sectioning)  dan  perekatan  (Affixing),
(d) Pewarnaan (Staining)
menggunakan Haematoxylin  dan Eosin, (e) Penutupan  (Mounting) dan Pengamatan menggunakan mikroskop OptiLab.

## Parameter Penelitian
Pengamatan  histologi  rektum  pada  penelitian  ini meliputi  pengukuran  terhadap  tinggi  kripta,  dan penghitungan jumlah sel Goblet.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian  dianalisis menggunakan  uji One  Way ANOVA  dengan  taraf kepercayaan  99%  atau  α=0,01,  dilanjutkan  dengan Uji Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT)  untuk melihat beda nyata antar kelompok perlakuan dosis. Selanjutnya dilakukan uji korelasi untuk mengetahui korelasi  antar  parameter  yang  diuji  (Steel  &  Torrie, 1993).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Rimpang  Kunyit  dan  DSS  Terhadap  Rata- rata  Tinggi  Kripta dan  Jumlah  Sel  Goblet Mukosa Rektum Tikus
Pengamatan tinggi kripta dan jumlah sel Goblet dilakukan  pada  histologi  lapisan  mukosa rektum tikus kelompok kontrol negatif, kontrol
positif,  dan  perlakuan.  Hasil  pengukuran dan penghitungan
rata-rata  tinggi  kripta dan jumlah  sel  Goblet pada mukosa  rektum tikus putih betina Strain  Wistar  yang  diberi ekstrak kunyit  setelah  pemberian DSS  dapat  dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan  analisis One  Way  Anova diperoleh  nilai  signifikansi  p=0,000  <  0,01 yang menunjukkan  bahwa  perlakuan  ekstrak etanol  rimpang  kunyit  berpengaruh  terhadap
rata-rata  tinggi  kripta dan rata-rata  jumlah  sel Goblet mukosa  rektum tikus  putih  yang diinduksi  DSS. Hal  ini  didukung  dengan  hasil uji Duncan
yang menunjukkan  adanya perbedaan  antar  kelompok  perlakuan.  Pada hasil uji korelasi ekstrak etanol rimpang kunyit terhadap  rata-rata  tinggi  kripta dan jumlah  sel Goblet memiliki  nilai  signifikansi  0,00<0,01 yang menunjukkan adanya korelasi antara rata- rata  tinggi  kripta  dengan  jumlah  sel  Goblet.
Tabel 1. Rata-rata  tinggi  kripta  dan  jumlah  sel  Goblet  mukosa  rektum tikus  putih betina Strain
Wistar yang diberi ekstrak etanol rimpang kunyit pasca pemberian DSS Perlakuan Rata-rata tinggi kripta Rata-rata jumlah sel Goblet ( ± SD) ( ± SD) Kontrol Negatif 188,46 ± 7,98 a 29,73 ± 3,31 a Kontrol Positif (DSS 1%) 68,36 ± 8,14 b 9,07 ± 2,28 b DSS1%+ekstrak  rimpang  kunyit 200mg/KgBB 143,29 ± 19,68 c 15,28 ± 4,62 c
Angka yang diikuti huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan antar perlakuan.
Gambar 1. Penampang  melintang rektum tikus setelah pemberian ekstrak etanol rimpang  kunyit selama  3  hari  dengan  pewarnaan  HE,  perbesaran  100x.  Gambar  garis  hitam menunjukkan tinggi kripta pada mukosa rektum tikus. (a) kontrol negatif; (b) kontrol positif  (DSS  1%); (c)  perlakuan  dosis  (DSS  1%  dan  ekstrak  etanol  rimpang  kunyit 200mg/KgBB.
Gambar 2. Penampang  melintang rektum tikus setelah pemberian ekstrak etanol rimpang  kunyit selama 3 hari dengan pewarnaan HE, perbesaran 400x. Gambar panah menunjukkan sel  Goblet pada  mukosa  rektum  tikus. (a)  kontrol  negatif;  (b)  kontrol  positif  (DSS 1%); (c) perlakuan dosis (DSS 1% dan ekstrak etanol rimpang kunyit 200mg/KgBB.
Rata-rata  tinggi  kripta  pada  kelompok perlakuan
kontrol positif mengalami pemendekan.  Pemberian  DSS  menyebabkan terjadinya  pemendekan  kripta  pada  lapisan mukosa  kolon (Islam et  al.,  2008). Pada  hari ketiga  setelah  pemberian  DSS  5%  selama  2-6 hari  secara ad  libitum akan  menyebabkan terjadinya  pemendekan  kripta  pada  mukosa kolon  tikus (Breider et  al.,  1997). Sedangkan
pemberian  ekstrak  kunyit  diketahui  mampu mmperbaiki  tinggi  kripta  rektum  setelah induksi  DSS. Gambaran  histologi  tinggi  kripta terdapat pada Gambar 1.
Rata-rata  jumlah  sel  Goblet  mengalami penurunan setelah pemberian DSS. hal tersebut disebabkan  karena  pemberian  DSS  pada  tikus dapat  menyebabkan  terjadinya  penurunan jumlah  sel Goblet  pada  kripta  mukosa  kolon
(Breider et  al.,  1997),  (Islam et  al.,  2008), (Oliveira et al., 2014), (Rayudu & Raju, 2014). Pada  lapisan  mukosa  rektum,  terdapat  kripta Lieberkuhn  yang  mirip  dengan  kripta  pada kolon (Gartner  &  Hiatt,  2007).  Pada  kripta Lieberkuhn  rektum  terdapat  sel  Goblet  yang berfungsi  menghasilkan  musin.  Musin  yang dihasilkan  oleh  sel  Goblet  berperan  sebagai pelindung  lumen  pada  saluran  pencernaan (Rizkiantino,  2015;  Johansson et  al.,  2013) sedangkan  pemberian ektrak  kunyit  dengan dosis  200mg/KgBB  setelah  pemberian  DSS berpengaruh terhadap  rata-rata  jumlah sel Goblet  pada  kripta  rektum. Hal  ini  diduga karena  kandungan  kurkumin  pada kunyit menyebabkan  terjadinya  peningkatan  jumlah sel  Goblet  pada  kripta  tikus  yang  diberi  DSS. Kurkumin  yang  terkandung  dalam  kunyit berperan sebagai antiinflamasi dengan meningkatkan  jumlah  sel  Goblet  pada  kripta kolon.  Peran  antiinflamasi  kunyit  dengan  cara menghambat produksi COX-2 (Barquero et al., 2007).  Gambaran  histologi  sel  Goblet  dapat dilihat pada Gambar 2.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, diperoleh
kesimpulan bahwa pemberian DSS
berpengaruh  terhadap  penurunan  rata-rata tinggi  kripta,  jumlah  sel  Goblet  dan  penipisan lapisan  mukosa  rektum  tikus.  Sedangkan perlakuan  Ekstrak  etanol  rimpang  kunyit 200mg/KgBB dapat meningkatkan tinggi kripta dan jumlah sel Goblet mukosa rektum tikus.

## DAFTAR PUSTAKA
Alteri RB,Durado G, Ted H, Annemarie J, Eric K, Debbie K, Joan L, Bernard  M, Cathy M, Marji  P,  Anthony  S,  Mona  S,  Scott  S, Robert  T,  Brian  W,  Dana  W  &  Gregg. 2014. Colorectal  Cancer  Facts  &  Figure
2014-2016.  Atlanta:  American  Cancer Society.
Araujo  CAC,  &Leon  LL.  2001.  Biological Activities  of Curcuma  longa L. Mem  Inst
Oswaldo  Crus,  Rio  de  Janeiro.96(5):723- 728.
Bastaki  SMA,  Mohammed  MAA,  Ahmed  AZ, Naheed  A  &  Ernest  A.  2016. Effect  of Turmeric  on  Colon  Histology,  Body Weight, Ulcer, IL-23, MPO and Glutathione in Acetic-Acid-Induced Inflammatory Bowel Disease in Rats. BMC Complementary and
Alternative Medicine.16:72.
Barquero LC, Villegas I, Calvo JMS, Talero E, Fidalgo SS, Motilva V & Lastra CA. 2007.
Curcumin,  a Curcuma  longa Constituent, Acts  on  MAPK  p38  Pathway  Modulating COX-2  and  iNOS  Expression  in  Chronic Experimental Colitis. Int. Immunopharmacol.7:333-342. Breider  MA,  Eppinger  M  &  Gough  A.  1997. Intercellular Adhesion Molecul-1 Expression  in Dextran  Sodium  Sulfate Induced Colitis in Rats. Vet Pathol.34:598-
604.
Gaudio  E,  Taddei  G,  Vetuschi  A,  Sferra  R, Frieri  G,  Ricciardi  G  &  Caprilli  R.  1999.
Dextran  Sulfate  Sodium (DSS)  Colitis  in Rats. Digestive Disease and
Science.44(7):1-18.
Gartner  LP  &  Hiatt  JL.  2007. Buku  Ajar Berwarna  Histologi  Edisi  Ketiga.  Jakarta: Saunders Elsevier.
Geboes  K.  2003.  Histopathology  of  Crohn’s
Disease and Ulceratrive Colitis.
IBD4E.18:255-276.
Islam  MS,  Muratta  T,  Fujisawa  M,  Nagasaka R, Ushio H, Bari AM,        Hori M & Ozaki H.  2008.  Antiinflamatory  Effects  of Phytosteryl  Ferulates  in  Colitis  Induced  by Dextran  Sulphate  Sodium in  Mice. British Journal of Pharmacology. 154: 812-824.
Johansson  MEV,  Sjovall  H  &  Hansson  GC. 2013.  The  Gastrointestinal  Mucus  System in Health and Disease. Nat Rev Gastroenterol Hepatol.10(6): 352-361.
Krup  V,  Prakash  HL  &  Harini  A.  2013. Pharmacological  Activities  of  Turmeric (Curcuma  longa Linn.):  A  Review. J Homeop Ayurv Med.2(4).
Maharani  HW  &  Bachri  MS.  2015.  Efek Pemberian Subkronis Ekstrak Etanol Rimpang  Kunyit  (Curcuma  longa)  pada Tikus. Journal Farmasi.12(2): 213-224.
Oliveira LGD, Andre LDC, Amauri CD, Maria
CMNC,  Julio  MFC  &  Jair  AKKDA.  2014. Positive  Correlation  Between  Disease Activity Index And Matrix Metalloproteinases  Activity  In  A  Rat Model of Colitis. Arq Gastroenterol.51(2).
Propivanova BK, Kazuya K, Yu W, Toshikazu K,  Takashi  K,  Shiuchi  K,  Masanobo  O, Chifumi  F  &Naofumi  M.  2008. Blocking TNF- α  in  Mice  Reduces  Colorectal Carcinogenesis  Associated  With  Chronic Colitis. The Journal of Clinical
Inflamation.118(2).
Rayudu V & Raju AB. 2014. Effect of Triptala on  Dextran  Sulphate  Sodium  Induced Colitis in Rats.35:33.
Rizkiantino  R.  2015. Studi  Morfologi  Usus Musang  Luak.  Skripsi.  Bogor:  Fakultas
Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Ruby  AJ,  Kuttan  G,  Babu  KD,  Rajasekharan KR &  Kuttan  R.  1995.  Antitumour  and Antioxydant Activity of Natural Curcuminoids. Cancer Letters.94: 79-83.
Standring  S.  2008. Gray’s Anatomy  Fortieth Edition:  The  Anatomical  Basis  of  Clinical Practice. Edinburgh: Churchill Livingstone Elsevier.
Steel  RGD &  Torrie  JH.  1993. Prinsip  dan
Prosedur Statistika (Pendekatan Biometrik) Penerjemah B. Sumantri. Jakarta: Gramedia
Pustaka Utama.
Sugiarto.  2016.  Hubungan  Inflamatory  Bowel Disease  dengan  Kanker  Kolorektal. Jurnal
Kedokteran dan Kesehatan, Edisi Suplemen.61-74. Suntoro  SH.  1983. Metode  Pewarnaan (Histologi dan Histokimia). Jakarta: Bhratara Karya Aksara.
Yan  Y,  Kolachala  V,  Dalmasso  G,  Nguyen  H
&  Laroui  H.  2009.  Temporaland  Spatial Analysis of Clinical and Molecular
Parameters  in Dextran  Sodium  Sulfate Induced Colitis. PLoS One.4(6):1-8.