## Aplikasi Bakteri Penambat N (BPN) dan Pupuk Kotoran Sapi (PKS) pada Fitoremediasi Tanah Tercemar Minyak Bumi

## Ibnu Rizki Perdana, Tualar Simarmata, Pujawati Suryatmana
Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran, Jl. Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Bandung, Indonesia
Korespondensi: rizkiibnu083@gmail.com Abstract. N-fixing bacteria (BNF) and cow manure (CM) were known to function as biostimulants on polluted soils by hydrocarbon compounds through rhizodegradation processes.  This  rhizodegradation  mechanism  can  be  helped  by  one  of  the hyperaccumulating  plants  of  ramie.  The  study  was  aimed  to  identify  how  the  best possible combinations of (BNF) and (CM) could improve polluted soils by using hemp plants (ramie). The experimental method used a randomized group-design, consisting four treatment combinations that are without the BNF + without the CM (control) , azotobacter sp. + without the CM, without the BNF + CM 100% dose and azotobacter sp.4% + BNF 100% dose. The results showed that a combination of BNF and CM treatment had not significant difference to control, except a combination without the BNF + dose 100% combination that could increase the population of azotobacter sp. 4.8  x  108  cfu/g,  while  azotobacter  sp.  +  without  the  CM  could  increased  the degradation of hydrocarbons and the dry weight of hemp plants 0.1047 ppm/day and 40.433 g.
Keywords: BNF, Cow Manure, Hydrocarbon, Phytoremediation, Ramie
Abstrak . Bakteri Penambat N (BPN) dan Pupuk Kotoran Sapi (PKS) diketahui dapat berfungsi sebagai biostimulan pada tanah tercemar minyak bumi dengan merombak senyawa  hidrokarbon  melalui  proses  rhizodegradasi.  Proses  mekanisme rhizodegradasi ini dapat dibantu dengan salah satu tanaman hyperakumulator yaitu rami. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perlakuan kombinasi terbaik antara (BPN)  dan  (PKS)  yang  dapat  memperbaiki  tanah  tercemar  minyak  bumi  dengan menggunakan tanaman rami. Metode percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak  Kelompok  (RAK),  yang  terdiri  dari  empat  kombinasi  perlakuan  yaitu  tanpa BPN + tanpa PKS (kontrol), Azotobacter sp. + tanpa PKS, tanpa BPN + PKS dosis 100%  dan Azotobacter sp.  4%  +  PKS  dosis  100%.  Hasil  percobaan  menunjukkan bahwa kombinasi perlakuan BPN dan PKS memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata terhadap kontrol, kecuali kombinasi tanpa BPN + PKS dosis 100% yang dapat meningkatkan populasi Azotobacter sp. 4.8 x 108 CFU / g, sedangkan Azotobacter sp. + tanpa PKS dapat meningkatkan degradasi hidrokarbon dan berat kering tanaman rami 0.1047 ppm / hari dan 40.433 g.
Kata Kunci : BPN, fitoremediasi, hidrokarbon, pupuk kotoran sapi rami.

## PENDAHULUAN
Kebutuhan manusia akan energi minyak bumi mengalami peningkatan tiap  tahunnya. Konsumsi dan produksi rata-rata minyak bumi di Indonesia pada bulan Juni tahun 2016 berturut-turut meningkat sebanyak 1.615 juta barel perhari dan 834.4 ribu barel perhari (Kementerian Energi dan Sumber Daya Mineral. 2016). Hal ini sejalan dengan bertambahnya kasus pencemaran tanah akibat tumpahan limbah minyak  bumi  di  berbagai  daerah  Indonesia.  Pencemaran  tanah  akibat  aktivitas  pabrik  menyebabkan tanah seluas 2.2 Ha di PT. Unilever Jakarta dan 8 Ha di PT. Caltex telah terdegradasi minyak bumi, selain itu kebocoran pipa minyak di PT. Connoco Phillips sepanjang 300 m telah memberikan dampak
terhadap  lingkungan,  dan  banyak  kasus  pencemaran  lain  akibat  tumpahan  limbah  minyak  bumi  di Indonesia (Walhi 2007).
Fitoremediasi  merupakan  metode  pengolahan  limbah  secara  biologis  dengan  meminimalkan volume, mobilitas, dan atau toksisitas di dalam tanah, air tanah, atau media lain yang terkontaminasi (USEPA 2002), dengan syarat konsentrasi maksimal limbah minyak bumi yang dapat difitoremediasi yaitu 15% (Kepmen LH 2003). Tanaman rami diketahui sebagai tanaman hyperacumulator yang toleran pada lingkungan stress, seperti tanah tercemar logam berat dan hidrokarbon minyak bumi (Wei et al . 2015). Fitostimulasi atau rhizodegradasi merupakan salah satu mekanisme tanaman hyperacumulator dalam  memperbaiki  tanah  terkontaminasi  polutan  yaitu  dengan  memproduksi  eksudat  akar  berupa senyawa protein, asam-asam organik, atau senyawa lain yang diperlukan oleh aktivitas mikroba tanah untuk mendegradasi senyawa toksik hidrokarbon (Widyati 2009).
Kendala  utama  dari  sifat  tanah  tercemar  minyak  bumi  adalah  kelarutan  tanah  yang  rendah, konsentrasi  polutan  yang terlalu  tinggi,  serta  kurangnya  daya  adaptabilitas  tanaman  terhadap  kondisi lingkungan tercemar, sehingga menyebabkan hasil degradasi polutan menjadi kurang efektif (Allen et al .  1998).  Faktor  lain  yang  dapat  menghambat  terjadinya  proses  degradasi  hidrokarbon  antaralain, pengaruh  oksigen,  kelembaban  tanah  yang  kurang  optimal,  suhu  dan  intensitas  cahaya  yang  terlalu tinggi,  ketersediaan  nutrisi  yang  terlalu  rendah,  kondisi  pH  terlalu  tinggi,  maupun  jumlah  populasi mikroba  yang  sangat  rendah  pada  tanah  tersebut  (Pratiwi et  al .  2017).  Salah  satu  ordo  tanah  yang memiliki luasan yang cukup besar dan memiliki sifat tanah yang berpotensi sulit dalam mendegradsi tumpahan minyak bumi secara alami adalah Inceptisols.
Inceptisols asal Jatinangor memiliki kandungan  N  total sebesar  0.15 %, jumlah ini  belum  dapat memenuhi kebutuhan nitrogen utama tanaman pada tanah tercemar minyak bumi (Fauzi 2017). Oleh karena itu dibutuhkan rekayasa yang dapat meningkatkan nutrisi dan kondisi perakaran yang baik pada tanah  Inceptisols.  Bakteri  Penambat  Nitrogen  (BPN)  merupakan  agen  hayati  yang  dapat  menambat nitrogen bebas (N2) dari udara dan merubahnya menjadi amonia (NH3), yang dapat disintesis menjadi asam amino, sehingga bisa digunakan tanaman untuk tumbuh dan berkembang (Alexander 1977). Pupuk kotoran sapi diketahui sebagai salah satu jenis bahan organik yang dapat digunakan pada tanah tercemar minyak bumi  karena  bisa memperbaiki  sifat fisik,  kimia  dan  biologi tanah melalui  perannya sebagai sumber  nutrisi  mikroba  tanah  (Sugito et  al .  1995).  Aplikasi  BPN  ( Azospirillum sp.  dan Azotobacter sp.)serta  pupuk  kotoran  sapi  diharapkan  mampu  meningkatkan  populasi  penambat  N,  degradasi hidrokarbon dan pertumbuhan tanaman rami pada tanah tercemar minyak bumi.

## MATERI DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi Tanah, Laboratorium Kesuburan Tanah dan Nutrisi  Tanaman,  serta  Rumah  Kaca  Kebun  Percobaan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Padjadjaran. Penelitian ini dilaksanakan dari bulan Januari 2019 hingga April 2019.

## Materi Penelitian
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  : laminar  air  flow , autoclave , incubator , mikroskop, tabung reaksi, erlenmeyer 250 ml, botol vial ukuran 25 ml dan 100 ml, petridish, oven, polybag kapasitas 10 kg, Inceptisols Jatinangor, crude oil yang berasal dari Pertamina Balongan Indramayu, tanaman rami klon Lembang, inokulan Bakteri Penambat N (BPN) ( Azotobacter sp. ) koleksi Laboratorium Biologi Tanah Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran, media Ashby’s, pupuk kotoran sapi  (PKS),  pupuk  anorganik  (urea,  SP-36,  KCl),  dan  bahan-bahan  kimia  untuk  penghitungan Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) (n-heksan, akuades, dan natrium sulfat).

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  rumah  kaca  menggunakan  metode  percobaan  Rancangan  Acak Kelompok (RAK) dengan kombinasi perlakuan sebagai berikut :
a 0 b 0 = tanpa BPN + tanpa PKS (kontrol) a 2 b 0 = Azotobacter sp. + tanpa PKS a 0 b 2 = tanpa BPN + PKS dosis 100%
a 2 b 2 = Azotobacter sp. 4% + PKS dosis 100%.
Dari empat kombinasi perlakuan tersebut  diulang tiga kali, sehingga didapat total perlakuan sebanyak 12 satuan percobaan. Setiap unit percobaan terdiri dari satu tanaman/ polybag , sehingga total tanaman yang dibutuhkan pada penelitian ini sebanyak 12 tanaman yang ditempatkan sesuai dengan tata letak percobaan RAK.
Media  tanah  yang  digunakan  untuk  bahan  penelitian  ini  merupakan  Inceptisols  asal  Jatinangor dengan kebutuhan tanah total sekitar 5 kg x 36 unit = 180 kg. Bahan organik berasal dari pengomposan kotoran sapi yang sudah matang di kandang Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran. Kebutuhan total pupuk kotoran sapi yang dibutuhkan dalam penelitian ini sebanyak 0.45 Kg.
Pengambilan contoh tanah dilakukan secara komposit pada lima titik sampel menggunakan cangkul dengan metode sampling diagonal di kedalaman 0-20 cm dari permukaan tanah. Tanah dibersihkan dari sisa tanaman dengan cara disaringdan dikering anginkan selama satu hari, kemudian dilakukan analisis sifat kimia tanah (pH, N-total, P-tersedia, dll) dan biologi tanah awal (populasi mikroba). Kebutuhan sampel tanah yang digunakan untuk analisis masing-masing 500 g. Sampel pupuk kotoran sapi yang dianalisis  merupakan  hasil  pengomposan  yang  dibutuhkan  sebanyak  500  g  untuk  analisis  kimia  (C- organik, N-total, C/N, P, K) dan biologi yaitu populasi BPN.
Media pembibitan terdiri dari tanah dan kompos dengan perbandingan 1 : 1 (tanah dan kompos) yang dicampur menggunakan sekop pada wadah baki bervolume 50 x 30 x 25 cm. Perbandingan 1:1 dipilih untuk pembibitan agar mengoptimalkan pertumbuhan akar tanaman, serta tidak merusak media perakaran ketika dilakukan pindah tanam di media polybag dengan berat tanah dan kompos masing- masing 1 Kg. Media yang sudah tercampur dimasukkan ke baki pembibitan sebanyak ¾ dari volume baki yang selanjutnya disiram dengan air hingga lembap. Rhizome tanaman rami yang digunakan dalam penelitian ini sudah dibibit selama 12 minggu (180 hari) pada media pembibitan dengan ukuran bibit rami sekitar ± 10 cm.
Bioagen  diperbanyak  dengan  metode refresh yaitu  memperbanyak  biakan  murni  mikroba menggunakan media miring selektif BPN yang dalam penelitian ini menggunakan bioagen dari jenis Azotobacter sp. dan Azospirillum sp. Media miring selektif Ashbys padat digunakan  untuk perbanyakan Azotobacter sp., dan NFB ( Nitrogen FreBromthymol Blue ) digunakan untuk perbanyakan Azospirillum sp. Persiapan inokulan BPN dilakukan di dalam laminar flow dengan menuangkan 10 mL larutan NaCl 0.85%  untuk  melarutkan  inokulan  BPN  hasil  perbanyakan  pada  agar  miring  yang  kemudian diinokulasikan  ke  dalam  media  selektif  cair Azotobacter sp.  (Ashbys)  dan Azospirillum sp.  (NFB). Kepadatan  mikroba  dihitung  untuk  mengetahui  populasi  terbaik  yang  akan  digunakan  pada  aplikasi perlakuan.
Limbah minyak bumi seberat 378 g atau setara dengan 7% dari TPH awal diencerkan dengan oli 2%  yaitu  2  mL,  agar  mudah  dihomogenkan  dengan  media  tanah.  Total  limbah  minyak  bumi  yang dibutuhkan dalam penelitian ini sebanyak 378 g x 36 unit = 13.608 g sedangkan total oli yang dibutuhkan sebanyak 2 mL x 36 unit = 72 mL. Tanah yang sudah terkontaminasi minyak bumi dimasukkan ke dalam polybag. Aplikasi pupuk kotoran sapi ditaburkan disekitar rhizosfer tanah yang sudah terkontaminasi minyak bumi sesuai perlakuan. Media tanam yang sudah diberi perlakuan diinkubasi selama seminggu agar C/N pupuk kotoran sapi dapat turun sehingga mikroba dan tanaman dapat tetap eksis ketika ditanam pada tanah tercemar minyak bumi.
Aplikasi  BPN Azotobacter sp.  dari  hasil  perbanyakan  yang  diambil  sebanyak  4%  (15.12  mL) menggunakan suntikan bervolume 50 mL. Kebutuhan total inokulan BPN sebanyak 3 x 9 x 15.12 mL= 408.24 mL.  Isolat BPN diinokulasikan ke dalam media tanah dengan cara dituangkan disekitar rhizosfer tanah yang telah tercampur dengan pupuk kotoran sapi dan minyak bumi.
Penanaman tanaman rami dilakukan dengan melubangi media hingga kedalaman 5–7 cm dan jarak tanam sebesar 30 x 30 cm dari antar pangkal batang tanaman rami. Aplikasi pupuk anorganik dilakukan seminggu setelah tanam pada tiga lubang yang terpisah. Jenis pupuk anorganik yang digunakan adalah pupuk N, P, K, tunggal. Pemupukan pada percobaan ini dilakukan dengan aplikasi ½ dosis anjuran dari Balai Penelitian Tanaman Tembakau dan Serat yaitu  dengan pemberian pupuk Urea (46% N) 120 kg,
pupuk SP-36 (36% P2O5) 20 kg, dan pupuk KCl (60% K2O) 60 kg per hektar, sehingga kebutuhan pupuk per polybag menjadi 0.15 g Urea, 0.025 g SP-36, dan 0.075 g KCl. Berdasarkan angka tersebut maka total kebutuhan pupuk urea sebanyak 5.4 g, SP-36 sebanyak 0.9 g dan KCl 2.7 g.

## 1. Laju degradasi hidrokarbon
Laju degradasi hidrokarbon dianalisis dengan metode gravimetri menggunakan pelarut n-Heksan. Analsis TPH dilakukan selama dua bulan, pada tujuh titik pengamatan yaitu t0 (0 HSA), t1 (7 HSA),t2 (14  HSA),  t3  (28  HSA),  t4  (42  HSA),  t5  (56  HSA)  dan  t6  (70  HSA).  Tahap  awal  dilakukan  proses ekstraksi tanah terkontaminasi minyak bumi dengan menimbang 5 g sampel tanah dan menambahkan 10  mL  pelarut  n-Heksan  ke  dalam  botol  vial  ukuran  50  mL.  Selanjutnya  dilakukan  pengocokan menggunakan alat pengocok dengan kecepatan 7 rpm selama 30 menit.
Tahap  kedua  adalah  tahap  pemisahan,  yaitu  proses  ekstrasksi  yang  dilakukan  tiga  kali  dengan menggunakan n-heksan ke botol vial ukuran 25 mL sampai larutan menjadi bening Kemudian dilakukan penimbangan botol vial awal. Pada tahap ini hidrokarbon akan terpisah dan mengendap di dasar botol vial.  Tahap  ketiga  adalah  tahap  penguapan,  TPH  dan  n-Heksan  yang  sudah  dipisahkan  pada  tahap pemisahan  diuapkan  selama  3-5  hari  untuk  memperoleh  residu  TPH.  Tahap  keempat  adalah  tahap gravimetri, yaitu penimbangan TPH pada botol vial akhir setelah n-heksan menguap total. Kemudian dilakukan  perhitungan  konsentrasi  TPH  untuk  mengetahui  jumlah  persentase  minyak  bumi  yang berhasil terdegradasi.

## 2. Populasi Azotobacter sp.
Total Populasi Azotobacter sp. dihitung berdasarkan hasil analisis populasi Azotobacter sp. dengan metode TPC ( Total Plate Count ), yaitu menghitung isolat mikroba pada tujuh titik pengamatan t0 (0 HSA), t1 (7 HSA), t2 (14 HSA), t3 (28 HSA), t4 (42 HSA), t5 (56 HSA) dan t6 (70 HSA) di media selektif.  Analisis  TPC Azotobacter sp.  dapat  dilakukan  dengan  menimbang  10  g  sampel  tanah  yang disuspensikan ke dalam 90 mL larutan garam fisiologis steril, kemudian dilakukan pengenceran serial dengan menggunakan 9 mL garam fisiologis steril hingga pengenceran 10-7. Sebanyak 1 mL dari setiap seri pengenceran kemudian diinokulasikan ke dalam medium seleksi Azotobacter sp. (Ashbys padat), yang diinkubasi pada temperatur 30oC. Koloni Azotobacter sp. akan tampak setelah 24 jam inkubasi dengan ciri putih basah berubah menjadi coklat gelap setelah 3-5 hari.

## 3. Bobot Kering Tanaman
Pengukuran bobot kering tanaman dilakukan secara destruktif pada umur 77 HST. Bobot kering tanaman  ditimbang  setelah  tanaman  dikeringkan  di  dalam  oven  selama  2  x 24 jam  hingga mencapai berat konstan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Populasi Azotobacter sp.
Azotobacter sp. adalah spesies rhizobakteria yang telah dikenal sebagai agen biologis penambat N2 diazotrof,  yang  menkonversi  dinitrogen  ke  amonium  melalui  reduksi  elektron  dan  protonasi  gas dinitrogen. Berdasarkan hasil analisis (Tabel 1) diketahui bahwa kombinasi BPN dan pupuk kotoran sapi  pada  keempat  perlakuan  memberikan  pengaruh  yang  tidak  berbeda  nyata  terhadap  populasi Azotobacter sp. pada 0 Hari Setelah Aplikasi (HSA), namun cenderung meningkat pada perlakuan tanpa BPN + PKS dosis 100% dengan jumlah populasi Azotobacter sp. sebanyak 0.0120 x 108 CFU/g.
Peningkatan  populasi Azotobacter sp.  selama  proses  fitoremediasi  tanah  tercemar  minyak  bumi diduga terjadi karena jenis bakteri indigenous yang terdapat pada tanah tercemar minyak bumi mampu beradaptasi dengan baik pada kondisi lingkungan toksik, diduga bakteri tersebut bersifat heterotrofik sehingga lebih toleran pada lingkungan asam, dan tumbuh lebih cepat dengan hasil yang lebih tinggi pada kondisi dengan konsentrasi DO rendah (Zhao et al . 1999).
Populasi Azotobacter sp. terus mengalami peningkatan hingga 70 HSA, dengan perlakuan terbaik terdapat  pada  kombinasi  tanpa  BPN  +  PKS  dosis  100%  yang  memberikan  pengaruh  berbeda  nyata dibandingkan Azotobacter sp. + tanpa PKS dengan populasi Azotobacter sp. sebanyak 4.8 x 108 CFU/g.
Peningkatan  jumlah  sel  bakteri  yang  terjadi  merupakan  fase  log  karena  bakteri  indigenous  telah beradaptasi  dengan  lingkungan  toksik  sehingga  dapat  memanfaatkan  minyak  bumi  sebagai  sumber karbon  utama  untuk  pertumbuhannya  sehingga  bakteri  dapat  melakukan  pembelahan  sel  yang ditunjukkan dengan populasi Azotobacter sp. yang meningkat.
Tabel 1. Pengaruh mandiri penambahan BPN dan pupuk kotoran sapi terhadap populasi Azotobacter sp. pada 0 HSA dan 70 HSA
Perlakuan Populasi Azotobacter sp. (108CFU/g) 0 HSA 70 HSA a 0 b 0 = control 0.0071 a 4.5000 ab a 2 b 0 = Azotobacter sp. + tanpa PKS 0.0060 a 2.1333 b a 0 b 2 = tanpa BPN + PKS dosis 100% 0.0120 a 4.8000 a a 2 b 2 = Azotobacter sp. 4% + PKS dosis 100% 0.0064 a 3.7333 ab
Keterangan : Angka yang diikuti notasi yang sama tidak berbeda nyata menurut uji lanjut (DMRT) Duncan Multiple Range Test pada taraf kepercayaan 95%. HSA : Hari Setelah Aplikasi
Menurut (Thiel 1999) fase log adalah fase meningkatnya jumlah sel bakteri secara eksponensial karena sel terus membelah dengan laju yang konstan. Pertumbuhan yang lambat pada perlakuan tanpa BPN  saat  inkubasi  0  HSA  diduga  karena Azotobacter sp.  tidak  dapat  menggunakan  senyawa  dalam minyak bumi untuk pertumbuhannya, namun demikian peningkatan jumlah sel bakteri tetap terjadi pada 70  HSA  karena  diduga  hampir  sebahagian Azotobacter sp.  telah  lisis  yang  isi  selnya  dapat  menjadi nutrisi bagi Azotobacter sp. yang masih hidup. Adanya peningkatan jumlah sel bakteri pada perlakuan tanpa BPN menunjukkan bahwa bakteri indigenous yang terdapat pada penelitian ini merupakan bakteri hidrokarbonoklastik.
Penambahan PKS dosis 100% juga memberikan peranan penting dalam menyediakan C/N yang cukup untuk perumbuhan sel Azotobacter sp. sehingga sumber C sebagai energi dan N untuk sintesis protein  menjadi  tersedia.  Rasio  C/N  yang  terlalu  tinggi  menyebabkan  mikroba  kekurangan  N  untuk sintesis protein sehingga dekomposisi berjalan lambat (Isroi 2008), sedangkan C/N rendah juga dapat menyebabkan amoniak (NH3) yang dihasilkan oleh bakteri amoniak menjadi terlalu banyak di dalam tanah.  Senyawa  ini  dapat  dioksidasi  lebih  lanjut  menjadi  nitrit  dan  nitrat  yang  mudah  diserap  oleh tanaman. Perbandingan C/N terlalu rendah juga akan membentuk gas amoniak sehingga nitrogen mudah hilang ke udara (Harada et al . 1993).

## Laju Degradasi Hidrokarbon
Laju  degradasi  hidrokarbon  adalah  besarnya  berat  molekul  hidrokarbon  yang  dapat  didegradasi oleh  mikroba  pendegradasi  hidrokarbon  dalam  waktu  tertentu.  Berdasarkan  hasil  analisis  (Tabel  2), perlakuan bakteri Azotobacter sp. 4% + tanpa PKS menghasilkan laju degradasi hidrokarbon tertinggi
Gambar 1. Grafik Pertumbuhan Bakteri
dibandingkan dengan perlakuan Azotobacter sp. 4% + PKS dosis 100% dengan nilai laju sebesar 0.1047 ppm/hari.
Komponen  hidrokarbon  minyak  bumi  yang  terdegradasi  pada  70  HSA  memiliki  nilai  laju  yang lebih  kecil  dibandingkan  tahap  awal  inkubasi,  hal  ini  diduga  karena  senyawa  hidrokarbon  yang terdegradasi  masih  dalam  bentuk  senyawa  aromatik  atau  senyawa  hasil  metabolisme  yang  bersifat toksik.  Menurut  (Astuti  2012)  tidak  semua  bakteri  mampu  menggunakan  senyawa  aromatik  atau senyawa hasil metabolismenya sebagai sumber karbon untuk tumbuh.
Tabel 2. Pengaruh penambahan BPN dan pupuk kotoran sapi terhadap laju degradasi hidrokarbon pada 0-70 HSA
Perlakuan Laju Degradasi Hidrokarbon (ppm/hari) 0-70 HAS a 0 b 0 = control 0.0838 ab a 2 b 0 = Azotobacter sp. + tanpa PKS 0.1047 a a 0 b 2 = tanpa BPN + PKS dosis 100% 0.0838 ab a 2 b 2 = Azotobacter sp. 4% + PKS dosis 100%
0.0628 b
Keterangan : Angka yang diikuti notasi yang sama tidak berbeda nyata menurut uji lanjut (DMRT) Duncan Multiple Range Test pada taraf kepercayaan 95%. HSA : Hari Setelah Aplikasi
Penurunan  hidrokarbon  minyak  bumi  juga  dapat  disebabkan  oleh  peran Azotobacter sp.  yang memiliki  kemampuan  untuk  menghasilkan  biosurfaktan  yang  berfungsi  sebagai  pengemulsi  limbah minyak  bumi  sehingga  mendukung  kinerja  mikroorganisme  indigenous  dalam  menyisihkan  senyawa hidrokarbon (Suryatmana 2006).
Ketersediaan  nutrien  yang  semakin  berkurang  sedangkan  jumlah  sel  bakteri  yang  tinggi  akan menyebabkan  terjadinya  kompetisi.  Kompetisi  yang  semakin  besar  dalam  memanfaatkan  nutirien menyebabkan penyerapan hara oleh bakteri semakin terhambat dan tidak optimal. Pertumbuhan bakteri yang  terhambat  akan  menyebabkan  proses  degradasi  hidrokarbon  menjadi  lambat  bahkan  cenderung menurun.  Menurut  (Atlas  1981)  semakin  banyak  sel  bakteri  akan  menyebabkan  defisiensi  nutrien semakin cepat. Konsentrasi nutrien yang menurun dapat menjadi penghambat mikroorganisme dalam melakukan proses degradasi (Ghazali et al. 2004). Senyawa yang tidak terdegradasi lebih lanjut akan terakumulasi dan menjadi lebih toksik untuk mikroba (Hee et al. 1997).
Adanya  persaingan  antar  mikroba  dalam  mendapatkan  ruang  di  permukaan  akar  untuk mendapatkan  nutrisi  yang  dikeluarkan  oleh  eksudat  akar  dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroba dalam jumlah besar (Prayitno 2017).Selain itu perubahan kondisi kultur yang disebabkan oleh terjadinya transformasi  substrat,  terkadang  juga  dapat  menyebabkan  konsentrasi  larutan  yang  lebih  toksik  bagi kultur  agen  hayati  sehingga  bakteri  sulit  untuk  beradaptasi.  Menurut  Allen et  al .  (1998)  dalam Suryatmana  (2006)  tingkat  kelarutan  minyak  bumi  adalah  salah  satu  faktor  penting  yang  perlu diperhatikan  untuk  memenuhi  kesiapan  substrat  agar  dapat  segera  digunakan  oleh  mikroorganisme tanah.
Penambahan bahan organik penting untuk memperbaiki struktur tanah karena dapat menstimulasi mikroagregasi tanah tercemar melalui interaksi arganomineral (Yuan, 2016). Penambahan PKS dosis 100%  diduga  memiliki  peran  sebagai  sumber  C  bagi  mikroba.  Beberapa  senyawa  organik  yang dikeluarkan  melalui  eksudat  akar  (misalnya  fenolik,  asam  organik,  alkohol,  protein)  dapat  menjadi sumber  karbon  dan  nitrogen  sebagai  sumber  pertumbuhan  mikroba  yang  dapat  membantu  proses degradasi senyawa organik (Barokah et al. 2011).
Adanya peningkatan degradasi hidrokarbon menunjukkan bahwa bakteri yang digunakan mampu memanfaatkan  hidrokarbon  yang  terdapat  pada  tanah  tercemar  minyak  bumi  sebagai  sumber  karbon untuk pertumbuhan bakteri yang disertai dengan tingginya laju pertumbuhan bakteri, namun demikian laju degradasi hidrokarbon yang semakin menurun disebabkan karena konsentrasi minyak bumi yang terlalu tinggi maupun toksisitas yang dihasilkan selama proses degradasi serta bentuk atau struktur kimia yang terdapat pada minyak bumi tersebut.

## Bobot Kering Tanaman Rami
Pengamatan  bobot  kering  tanaman  sangat  dipengaruhi  oleh  faktor  fisiologi  dan  lingkungan, sehingga  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  vegetatif  tanaman.  Bobot  kering  tanaman  merupakan parameter  yang  menggambarkan  berlangsungnya  pertumbuhan  tanaman  sebagai  hasil  dari  proses fotosintesis tanaman. Berdasarkan (Tabel 3.) kombinasi BPN dan PKS pada Azotobacter sp. + tanpa PKS memberikan pengaruh yang berbea nyata dibandingkan dengan perlakuan tanpa BPN + PKS dosis 100% yang memiliki bobot kering tertinggi sebesar 40.433 g. Hal ini diduga karena bakteri indigenous yang terdapat pada tanah tercemar minyak bumi tersebut mampu beradaptasi dengan pada lingkungan yang toksik.
Tabel 3. Pengaruh mandiri penambahan BPN dan pupuk kotoran sapi terhadap bobot kering tanaman
Perlakuan Bobot Kering Tanaman (g) 0-70 HAS a 0 b 0 = control 28.157 ab a 2 b 0 = Azotobacter sp. + tanpa PKS 40.443 a a 0 b 2 = tanpa BPN + PKS dosis 100% 22.543 b a 2 b 2 = Azotobacter sp. 4% + PKS dosis 100%
33.613 ab
Keterangan : Angka yang diikuti notasi yang sama tidak berbeda nyata menurut uji lanjut (DMRT) Duncan Multiple Range Test pada taraf kepercayaan 95%.
Azotobacter sp.  dapat  berperan  dalam  peningkatan  kadar  air  tanaman  melalui  peningkatan perakaran  yang  difasilitasi  oleh  fitohormon  dan  eksopolisakarida  yang  dihasilkannya  (Patel  2010) , sedangkan penambahan  bahan  organik  pada  dosis  tertentu  dapat  menyebabkan  tanaman  tidak  dapat menjaga kadar airnya sehingga dapat menurunkan berat kering tanaman (Hindersah 2018). Penambahan pupuk kotoran sapi juga  dapat meningkatkan pertumbuhan tanaman dikarenakan sifatnya yang dapat memperbaiki  struktur  tanah,  meningkatkan  daya  serap  terhadap  air,  dan  juga  dapat  meningkatkan kandungan  unsur  hara  makro  dan  mikro  (Samekto  2006).  Perakaran  yang  lebih  masif  dapat meningkatkan serapan air dan nutrisi (Mursito & Kawiji 2002).

## SIMPULAN
Kombinasi tebaik terdapat pada perlakuan tanpa BPN + PKS dosis 100% yang dapat meningkatkan populasi Azotobacter sp.  sebesar  4,8  x  108  CFU/g,  serta  penambahan Azotobacter sp.  +  tanpa  PKS mampu  meningkatkan  laju  degradasi  hidrokarbon  dan  bobot  kering  tanaman  masing-masing  sebesar 0,1047 ppm/hari dan 40,433 g.

## DAFTAR PUSTAKA
Alexander M. 1977. Soil Microbiology. 2Nd edition. New York: John Wiley and Sons, Inc. Allen CCR, DR Boyd, F Hempenstall, MJ Franklin, ND Sarma. 1998. Contrasting effect of a nonionic surfactant on  the  biotransformation  of  polysiclic  aromatic  hydrocarbon  to  cis-dihydrodiols  by  soil  bacterial. Appl. Environ. Microbiol . 65 : 1335-1339.
Astuti  D.  2012.  Pengaruh  variasi  jumlah  inokuum  konsorsium  bakteri  terhadap  degradasi  hidrokarbon  minyak bumi. Skripsi. FMIPA Universitas Indonesia, Depok.
Atlas RM. 1981. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons: an environmental perspective. Microbiol. Rev. 45(1): 180-209.
Barokah A, LO Sumarlin, AS Mujab. 2011. Penggunaan biokompos dalam bioremediasi lahan termar libah minyak bumi. Valensi . 2(3) : 430-443.
Fauzi M. 2017. Peran bioagen pada proses fitoremediasi minyak bumi menggunakan tanaman rami ( Boehmeria nivea . L). Universitas Padjadjaran,  Sumedang.
Ghazali  FM,  RNZA  Rahman,  AB  Salleh,  M  Basri. 2004. Biodegradation  of  hydrocarbons  in  soil by  microbial consortium. Int. Biodeter. Biodegr. 54: 61-67. Harada YK, T Haga, M Osada, M Kashinoa. 1993. Quality of Compost from Animal Waste. JAQR 26 (4):238- 246.
Hee  SB,  JM  Lee,  ST  Lee.  1997.  Biodegradation  of  the  mixture  of  2,4,6-  trichlorophenol,  4-chlorophenol,  and phenol by a defined mixed culture. J. Gen. Appl. Microbiol. 4:97-103
Hindersah R, M Kalay, A Talahaturuson. 2018. Bakteri Pemfiksasi Nitrogen Azotobacter sebagai pupuk hayati dan pengendalian penyakit pada tanaman kacang panjang. AGRIC . 30(1): 25-32.
Isroi. 2008. Kompos. Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Bogor. [KESDM] Kementerian Energi dan Sumber Daya Mineral. 2016.
Trend produksi minyabumiIndonesia.Online:http://migas.esdm.go.id/post/read/produksi-minyak-bumi-terus-meningkat. Kepmen LH No. 128 Tahun 2003 Tata Cara dan Persyaratan Teknis Pengolahan Tanah Terkontaminasi Minyak Bumi secara Biologis.
Mursito  D,Kawiji.  2002.  Pengaruh  kerapatan  tanam  dan  kedalaman  olah  tanah  terhadap  hasil  umbi  lobak ( Raphanus sativus L.). Agrosains . 4: 1-6
Patel  MJ,  NM  Patel,  RB  Patel,  RP  Patel.  2010,  Formulation  and  Evaluation  of  Self-Microemulsifying  Drug Delivery System of Lovastatin. Asian. J. Pharm. Sci. 5(6): 266-267. Pratiwi  GA,  D  Herdiyantoro,  P  Suryatmana.  2017.  Pengaruh  pupuk  hayati  dan  dosis Azotobacter sp.  dalam fitoremediasi  menggunakan  tanaman  rami  ( Boehmeria  nivea L.)  pada  tanah  tercemar  hidrokarbon  minyak bumi. Universitas Padjadjaran, Sumedang.
Prayitno  J.  2017.  Ujicoba  konsorsium  mikroba  dalam  upaya  bioremediasi  tanah  tercemar  minyak  dengan menggunakan  teknik  landfarming  skala  bangku.  Badan  Pengkajian  dan  Penerapan  Teknologi,  Tangerang Selatan.
Samekto R. 2006. Pupuk Kompos. Yogyakarta: PT Citra Aji Parama.
Sugito  Y,  Y  Nuraini,  E  Nihayati.  1995.  Sistem  pertanian  organik.  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Brawijaya. Malang.
Suryatmana  P.  2006.  Biodegradasi  hidrokarbon  minyak  bumi  dengan  penambahan Azotobacter  chroococcum AC04 sebagai bakteri penghasil biosurfaktan. Institute Teknologi Bandung, Bandung.
Thiel T. 1999. Introduction to bacteria. Departement of Biology. University of Missouri St. Louis, 9 hlm. [USEPA] United States Environmental Protection Agency. 2002. Introduction to Phytoremediation. EPA 600/R- 99/107, U.S.
Walhi.  2007.  Kompleksitaspersoalansampah.Online:http://www.walhi.or.id/kampanye/cemar/sampah/070528_ smph_cu
Wei SH, QX Zhou. 2006. Phytoremdiation of cadmium-contaminated soils by Rorippa globosa using two-phase planting. Environ. Sci. Pollut. Res. 13: 151–155.
Widyati  E.  2009.  Kajian  fitoremediasi  sebagai  salah  satu  upaya  menurunkan  akumulasi logam  akibat  air  asam tambang pada  lahan  bekas  tambang  batu  bara. J. Pusat  Litbang  Hutan  dan  Konservasi Alam.  Tekno  Hutan Tanaman 2(2): 67-75.
Yuan M, ZP Xu, T Baumgartil, L Huang. 2016. Organic mendment and plant growth improved aggregation in Cu/Pb-Zn Tailing. Soil. Sc. Soc. Am. J . 80(1): 27-37.
Zhao  HW,  DS  Mavinic,  WK  Oldham,  FA  Koch.  1999.  Controlling  factors  for  simultaneous  nitrification  and denitrifycation in a two-stage intermittent aeration process treating domestic sewage. Water Resour. 33(4):961- 970.