Abstrak —Ekosistem mangrove merupakan ekosistem peralihan antara  darat  dan  laut.  Keanekaragaman  bakteri  pada  ekosistem mangrove  sangat  bervariasi  termasuk  resisten  terhadap antibiotik.  Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui  apakah  isolat bakteri  yang  diisolasi  dari  kawasan  mangrove  Wonorejo Surabaya resisten terhadap antibiotik. Isolasi bakteri menggunakan metode komposit tanah daerah pasang surut, isolat ditumbuhkan  pada  medium  nutrient  agar  dengan  metode  pour plate. Uji resistensi antibiotik menggunakan antibiotik kloramfenikol,  tetrasiklin,  dan  ampisilin  (30  µg).  Berdasarkan warna,  bentuk,  dan  ukuran  koloni  didapatkan  11  isolat  bakteri. Seluruh  isolat  bakteri  resisten  terhadap  30  µg  antibiotik kloramfenikol,  tetrasiklin,  dan  ampisilin,  kecuali  pada  isolat  BW 10 bersifat susceptible terhadap tetrasiklin.
Kata Kunci — Antibiotik, Bakteri, Resisten, Wonorejo.

## I. PENDAHULUAN
KOSISTEM  mangrove  merupakan  ekosistem  peralihan antara darat, sungai dan laut [1], yang mampu beradaptasi pada kondisi lingkungan yang bervariasi seperti salinitas yang fluktuatif,  perubahan  temperatur,  nutrien,  dan  kadar  oksigen [2]. Kondisi lingkungan tersebut akan menyebabkan terjadinya keanekaragaman organisme termasuk bakteri.
Keanekaragaman  bakteri  pada  ekosistem  mangrove  sangat bervariasi,  diantaranya  sebagai  bakteri  pemfiksasi  nitrogen, bakteri  metanogenik,  bakteri  pelarut  fosfat  [1],  bakteri pendegradasi  senyawa  organik  [3],  juga  dapat  sebagai  bakteri resisten  terhadap  logam  berat  [4]  dan  resisten  tehadap antibiotik [5].
Resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik  di  lingkungannya berhubungan dengan sifat resistensi terhadap logam berat yang mencemari  lingkungan  tersebut  [6].  Antibiotik  banyak digunakan untuk keperluan medis, makanan dan pengendalian lingkungan    [7].  Selain  itu,  antibiotik  saat  ini  banyak  juga digunakan dalam pertanian ataupun budidaya  di perairan [8]. Penggunaan  antibiotik  yang  berlebihan  dapat  menyebabkan kondisi  lingkungan  memiliki  keanekaragaman  bakteri  yang resisten terhadap antibiotik [5].
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mendapatkan  isolat bakteri  yang  resisten  antibiotik  dari  kawasan  mangrove Wonorejo Surabaya.
II. METODOLOGI

## A. Isolasi Bakteri
Sampel tanah didapatkan dari kawasan mangrove Wonorejo Surabaya  pada  daerah  pasang-surut  menggunakan  metode
komposit  dengan  kedalaman  ±  10  cm.  Titik  koordinat  S  070 18’ 54.8” E 1120 49’ 36.7” dan S 070 19’ 21.5” E 1120 50’ 15.9”,  tanah  diambil  5  sampel  secara  acak,  kemudian sampel dicampur sampai homogen.
Isolasi  bakteri  dilakukan  dengan  cara  menimbang  1  gram sampel  tanah dan dimasukkan kedalam 9 cc aquades steril, di homogenkan. Sebanyak 100 μl diinokulasikan ke dalam media nutrient agar dengan metode pour plate, diinkubasi pada suhu ruang  selama  24  jam  [9].  Koloni  yang  tumbuh  adalah  isolat bakteri  endogenik  dari  kawasan  mangrove  Wonorejo Surabaya.

## B. Purifikasi Isolat Bakteri
Koloni  terpilih  dipurifikasi  sampai  diperoleh  kultur  murni. Satu  ose  isolat  bakteri  diambil  secara  aseptis,  diinokulasikan ke  permukaan  media  padat  nutrient  agar  dengan  metode  16 goresan dan diinkubasikan pada suhu ruang ± 24 jam. Koloni yang  tumbuh  diamati  sampai  diperoleh  koloni  yang  seragam. Untuk  meyakinkan  kemurnian  isolat  dilakukan  pengamatan bentuk  sel  secara  mikroskopis  dengan  metode  preparat  apus dan  pewarnaan  methylene  blue.  Pengamatan  sel  bakteri dilakukan  dibawah  mikroskop  dengan  perbesaran  1000X dengan  menggunakan  minyak  imersi  [10]  .  Jika  bentuk  sel sudah seragam, diasumsikan isolat bakteri telah murni.

## C. Uji Resistensi Antibiotik
Uji  resistensi  terhadap  antibiotik  menggunakan  ampisilin, tetrasiklin  dan  kloramfenikol  dengan  metode  swab.  Bakteri ditumbuhkan pada medium nutrient agar, kemudian dilakukan difusi kertas cakram dalam larutan yang berisi masing-masing 30  µg  antibiotik.  Selanjutnya  kertas  cakram  diletakkan  diatas permukaan  medium  yang  telah  di  swab  inokulan.  Diinkubasi selama  14-16  jam  dalam  suhu  ruang.  Zona  hambat  yang terlihat menunjukkan bakteri tidak resisten terhadap antibiotik [11], dan diukur lebar zona hambatnya.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Isolat Terpilih
Berdasarkan    warna,  ukuran,  dan  bentuk  koloni  yang berbeda terseleksi sebanyak 11 koloni bakteri yaitu BW 2, BW 3, BW 4, BW 5, BW 6, BW 8, BW 10, BW 10a, BW 10b, BW 11, dan BW 12.
Koloni  bakteri  terseleksi  di  purifikasi  sehingga  diperoleh isolat  murni  dari  tiap  koloni.    Berdasarkan  pewarnaan

## Isolasi Bakteri Resisten Antibiotik dari Kawasan Mangrove Wonorejo Surabaya
Lericka Mei Permadi dan Enny Zulaika
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : Enny@bio.its.ac.id
E
Tabel 1.
Hasil Pewarnaan Sederhana dan Pewarnaan Gram pada Isolat Terpilih
Tabel 2. Hasil Uji Resistensi Antibiotik
sederhana dan pewarnaan Gram didapatkan bentuk sel bakteri yaitu  batang,  bulat,  dan  ovoid  dengan  sifat  Gram  positif  dan negatif (Tabel 1).

## B. Resistensi Antibiotik
Semua  isolat  terpilih  dari  kawasan  mangrove  Wonorejo Surabaya resisten
terhadap
antibiotik tetrasiklin, kloramfenikol, dan ampisilin dengan konsentrasi 30 μg (Tabel 2).
Sifat  resistensi  antibiotik  ditunjukkan  dengan  adanya diameter zona bening yang terbentuk berukuran ≤ 12 mm pada kloramfenikol,  diameter  ≤14  mm  pada  tetrasiklin,  dan diameter  ≤16  mm  pada  ampisilin.    Isolat  BW  10  bersifat susceptible  terhadap  tetrasiklin  30  μg,  ditunjukkan  dengan adanya zona bening ≥ 19 mm (Gambar 1).
Resistensi  terhadap  antibiotik  dimungkinkan  sebab  gen  yang berperan  untuk  mengatasi  cekaman  lingkungan  biasanya terletak  di  plasmid.  Menurut  [12],  bakteri  mempunyai  gen yang  digunakan  untuk  mempertahankan  diri  dari  cekaman lingkungan,  termasuk  cekaman  antibiotik.  Gen  tersebut biasanya terletak didalam plasmid.
Menurut  [13],  bakteri  yang  tahan  terhadap  cekaman lingkungan  termasuk  logam  berat  memiliki  R-plasmid  yang dapat  mengubah  sifat  resistensi  dari  logam  berat  menjadi resisten terhadap beberapa antibiotik.
Gambar 1. Hasil Uji Resistensi Isolat Bakteri Terhadap Antibiotik (Tanda panah adalah zona bening yang terbentuk)
Bakteri  yang  resisten  antibiotik  mempunyai  mekanisme antara  lain  dengan  transfer  resisten  gen  antar  bakteri  dan transfer  gen  resisten  antar  elemen  genetik didalam transposon bakteri [14].

## IV. KESIMPULAN/ RINGKASAN
Isolasi  bakteri  resisten  antibiotik  dari  kawasan  mangrove Wonorejo  Surabaya  menghasilkan  11  isolat  yaitu  BW  2,  BW 3, BW 4, BW 5, BW 6, BW 8, BW 10, BW 10a, BW 10b, BW 11,  dan  BW  12.  Isolat  tersebut  memiliki  sifat  multi  resisten terhadap  30  µg  antibiotik  kloramfenikol,  tetrasiklin,  dan ampisilin.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  L.M.Permadi  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Dr. Enny  Zulaika,  MP  melalui  roadmap  penelitian  dengan pendanaan BOPTN ITS dengan nomor kontrak 01711/IT2.11/PN.08/2016.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] N. K. Dhal, dan K. Sahoo, “Potential Microbial Diversity in Mangrove Ecosystem:  A  Review”,  Indian  Journal  of  Marine  Sciences,  Vol.38 (2009) 249-256.
[2] Ghizelini,  A.  Michelato,  C.  S.  Leda,  dan  M.  Andrew,  “Microbial Diversity  in  Brazilian  Mangrove  Sediment-  A Mini Review”, Brazilian Journal of Microbiology, (2012) 1242-1254.
[3] K.  Kathiresan,  “Polythene  and  Plastic  Degrading  Microbes  from  the Mangrove Soil”, Revista de Biologia Tropical, (2003) 629-634.
[4] M.  R.  Bhat,  dan  L.  Shewade,  “Isolation  and  Characterization  of Microorganisms  from  Mangrove  Soil  of  CBD  Belapur  Creek,  Navi Mumbai,  MS  India”,  International  Journal  of  Environmental  Sciences vol 3, (2013) no.6.
[5] K.  C.  A.  Jalal,  F.  U.  T.  Nur,  M.  A.  Mardiana,  J.  B.  Akbar,  Y.  B. Kamaruzzaman,  S.  Shahbudin,  dan  N.  O.  Muhammad,  “Antibiotic
Isolat Bakteri B W 2 B W 3 B W 4 B W 5 B W 6 B W 8 B W 1 0 B W 1 0 a B W 1 0 b B W 1 1 B W 1 2
Pewarnaan Sederhana Sel Batang + + - - - + + - + + + Sel Bulat - - + - - - - + - - - Sel Ovoid - - - + + - - - - - - Pewarnaan Gram Gram Positif + + + - - + - + + + + Gram Negatif - - - + + - + - - - - Isolat Bakteri B W 2 B W 3 B W 4 B W 5 B W 6 B W 8 B W 1 0 B W 1 0 a B W 1 0 b B W 1 1 B W 1 2
Kloramfenikol 30 µg Resisten (≤12 mm) + + + + + + + + + + + Tetrasiklin 30 µg Resisten (≤14 mm) + + + + + + - + + + + Susceptible (≥19 mm) - - - - - - + - - - - Ampisilin 30 µg Resisten (≤16 mm) + + + + + + + + + + +
BW 2 BW 3
BW 4 BW 5 BW 6 BW 8 BW 10 BW 10a BW 11 BW 12 BW 10b
Resistance  Microbes  in  Tropical  Mangrove  Sediments  in  East  Coast Peninsular, Malaysia”, African Journal of Microbiology Research, Vol. 4 (2010) 640-645.
[6] J.  V.  Mc  Arthur,  dan  R.  C.  Tuckfield,  “Spatial  Patterns  in  Antibiotics Resistance  Among  Stream  Bacteria:  Effects  of  Industrial  Pollution”,
Appl Environ Microbiol,  (2000) 3722–6.
[7] L. B. Jensen, S. Baloda, M. Boye, dan F. M. Aarestrup,. “Antimicrobial
Resistance  Among  Pseudomonas  spp.  and  the  Bacillus  cereus  Group Isolated  from  Danish  Agricultural  Soil”,  Environ.  Int.,  26  (2001)  581- 587.
[8] Z.  J.  Mudryk,  “Occurrence  and  Distribution  Antibiotic  Resistance  of Heterotrophic  Bacteria  Isolated  from  A  Marine  Beach”  Marine  Pollu. Bull., (2004) 80-86.
[9] A.  Saha,  dan  C.  S.  Subhas,  “Isolation  and  Characterization  of  Bacteria Isolated  from  Municipal  Solid  Waste  for  Production  of  Industrial Enzymes  and  Waste  Degradation”,  Journal  of  Microbiology  & Experimentation, Volume 1 Issue 1 (2014).
[10] J. P. Harley, dan L. M. Prescott, Laboratory Exercises in Microbiology, Fifth Edition,  USA : The McGraw−Hil Companies (2002).
[11] K.  P.  Jain,  S.  R.  Shukla,  V.  Deepti,  dan  B.  K.  V.  Sanjay, “Characterization  of  Metal  and  Antibiotik  Resistance  in  A  Bacterial Population  Isolated  from  A  Copper  Mining  Industry”,    International Journal of Integrative Biology IJIB vol.6 No.2 (2009).
[12] E.  Zulaika,  A.  Sogianto,  dan  L.  Sembiring,  “Characterization  and Identification  of  Mercury-resistant  Bacteria  from  Kalimas  River Surabaya-Indonesia  by  Numerical  Phenetic  Taxonomy”,  Journal  of Basic and Applied Scientific Research, 2 (7) 7263-7269 (2012).
[13] W. N. Eugene, G. Denise, C. E. Aderson, N. N. Jr. Roberts, S. Pear, T. Martha, dan H. David, “Microbiology: A Human Perspective”, Bacteria Pathogens, Mcgraw-Hill, (2004)  616-617.
[14] H.  P.  Rang,  M.  M.  Dale,  J.  M.  Ritter,  dan  R.  J.  Flower,
“Pharmacology”,Churchill Livingstone, (2007) ISBN: 0443069115 / 0- 443-06911-5.