## EFEKTIVITAS FORMULASI STERILAN TERHADAP JENIS EKSPLAN PADA
KULTUR DURIAN LAHUNG ( Durio dulcis )
Effectiveness of Sterilant Formulation on Type of Explant in Durian Lahung Tissue

## Culture
Nofia Hardarani * dan Chatimatun Nisa
Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat, Kalimantan Selatan-Indonesia * Email : hardaraninofia@gmail.com; Kontak WhatsApp: 081348071023

## Abstract
Durian lahung is a type of endemic durian to Kalimantan which has a unique characteristic, namely its red skin. The existence of this plant is almost extinct so that conservation needs to be  done  and  one  way  is  to  use  tissue  culture  techniques.  As  first  step,  it  is  necessary  to conduct  experiments  to  obtain  the  right  sterilization  method  in  order  to  obtain  aseptic planting material. This study aims to determine the effectiveness of sterilant formulation on type of explant for lahung durian culture. This study was designed using two factors factorial Completely  Randomized  Design  (CRD)  and  was  repeated  four  times.  The  first  factor  was formulation of sterilant which consists of five levels and the second factor was type of explant which  consists  of  two  levels,  i.e  leaf  and  node.  The  results  showed  that  the  combination  of sterilant  formulation tween  20,  fungicide,  bactericide, Bayclin  20%,  alcohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2 17,6%  with  leaf  explant  produced  the  highest  percentage  of  browning  until  4 wap. There was no browning in all combinations of sterilant formulations with node explant. The sterilant formulation tween 20, fungicide, baktericide, alcohol 70% gave the longest time to  appear  contamination  and  browning,  smaller  percentage  of  contamination  and  greater percentage of live explants at 2 and 3 wap, while at 4 wap it was obtained from the sterilant formulation tween 20, fungicide, bactericide, Bayclin 20%, alcohol 70%, HgCl 2 0,05%. Leaf explants had lower percentage of contamination and higher percentage of live explants than node explants.

## Keywords : explant, durian, lahung, sterilization

## Abstrak
Durian  lahung  merupakan  salah  satu  jenis  durian  endemik  Kalimantan  yang  memiliki  ciri yang unik yaitu kulitnya yang berwarna merah. Keberadaan tanaman ini sudah hampir punah sehingga  perlu  dilakukan  konservasi  dan  salah  satu  caranya  adalah  menggunakan  teknik kultur jaringan. Sebagai langkah awal, perlu dilakukan penelitian untuk memperoleh metode sterilisasi  yang  tepat  sehingga  diperoleh  bahan  tanam  yang  aseptik.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  efektivitas  formulasi  sterilan  terhadap  jenis  eksplan  untuk  kultur  durian lahung. Penelitian ini didesain menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial dua faktor dan diulang sebanyak empat kali. Faktor pertama adalah formulasi sterilan yang terdiri dari lima taraf dan  faktor kedua berupa jenis ekpslan  yang terdiri  atas dua taraf,  yaitu daun dan buku. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi antara formulasi sterilan tween 20, fungisida,  bakterisida,  Bayclin  20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2 17,6%  dengan
eksplan  daun  menghasilkan  persentase browning yang  terbesar  hingga  umur  4  mst.  Pada semua  kombinasi  antara  formulasi  sterilan  dengan  eksplan  buku  tidak  terjadi browning . Formulasi sterilan tween 20, fungisida, bakterisida, alkohol 70% memberikan waktu muncul kontaminasi  dan browning yang  terlama,  persentase  kontaminasi  yang  lebih  kecil  dan persentase  eksplan  hidup  yang  lebih  besar  pada  umur  2  dan  3 mst, sedangkan  pada  umur  4 mst diperoleh dari formulasi sterilan tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%,  HgCl 2 0,05%.  Eksplan  daun  memiliki  persentase  kontaminasi  yang  lebih  kecil  dan persentase eksplan hidup yang lebih besar dibandingkan dengan eksplan buku.
Kata kunci : eksplan, durian, lahung, sterilisasi

## PENDAHULUAN
Durian ( Durio zibethinus )
merupakan salah satu buah yang mempunyai  nilai  ekonomis  yang  cukup tinggi  karena  sangat  digemari  masyarakat Indonesia.  Durian  menjadi  salah  satu komoditas  hortikultura  yang  ditargetkan untuk  terus  ditingkatkan  produksi  dan kualitasnya (Sugiyarto & Kuswandi,
2013).
Tirtawinata et al. (2016) menyatakan bahwa  20  dari  29  spesies  liar  durian  di dunia,  terdapat  di  Indonesia.  Dari  20 spesies  yang  ada  di  Indonesia,  tujuh spesies  ditemukan  di  Kalimantan,  tujuh spesies  ditemukan  di  Sumatera  dan  satu spesies ditemukan masing-masing di Jawa, Bali,  Sulawesi,  Maluku  dan  Papua. Sebagian besar spesies durian yang berada di Kalimantan merupakan spesies endemik yang  umumnya  tumbuh  liar  dan  hanya ditemukan di hutan Kalimantan.
Pulau Kalimantan dinyatakan sebagai  pusat  persebaran Durio terpenting di  dunia  karena  tingginya  jumlah  jenis
Durio yang  endemik  di  pulau  ini.    Di Kalimantan  ditemukan  sembilan  jenis Durio yang dapat dimakan buahnya ( edible fruits ).  Sembilan  jenis  tersebut,  yaitu
Durio  zibethinus (durian), Durio  dulcis (lahung), Durio  excelsus (apun), Durio grandiflorus (sukang), Durio  graveolens (tuwala), Durio  kutejensis (lai), Durio lowianus (teruntung), Durio  oxleyanus (kerantungan),  dan Durio  testudinarum (sekura) (Uji, 2005).
Sebagian  besar  dari  jenis  Durio  di atas  sudah  mulai  jarang  ditemukan  yang menunjukkan terjadinya pengikisan plasma nutfah  terhadap  jenis  buah  ini.  Tantra
(1983) dalam Antarlina (2009)
menjelaskan bahwa faktor penyebab terjadinya pengikisan plasma nutfah terjadi pada  buah-buahan  lokal  di  Kalimantan khususnya  dari  jenis  durian  adalah teknologi  budidaya  yang  tidak  memadai. Mengingat pada umumnya durian merupakan tanaman tahunan yang memiliki  umur  berbuah  yang  terlalu  lama, sehingga  orang  enggan  menanamnya.
Dampaknya  populasi  menjadi  semakin berkurang  akibat  pohon  yang  telah  tua tanpa  regenerasi  tanaman.  Kelangkaan keberadaan tanaman ini yang mengakibatkan kelestarian tanaman durian lokal menjadi terancam.
Lahung  ( Durio  dulcis )  merupakan salah satu jenis durian endemik Kalimantan.  Jenis  durian  ini  memiliki warna  yang  menarik  dan  rasa  yang  sangat manis, sehingga berpotensi untuk dikembangkan di masa mendatang (Maysyarah et  al. ,  2019).  Oleh  sebab  itu,
perlu  upaya  untuk  pengembangan  durian jenis  ini  sebagai  buah  unggulan  lokal Kalimantan Selatan. Hal ini untuk mengurangi  semakin  tergerusnya  produk buah  lokal  yang  sampai  saat  ini  masih merupakan buah hutan dan belum dibudidayakan  akibat  semakin  gencarnya buah impor membanjiri Indonesia, termasuk  di  Kalimantan  Selatan  (Susi, 2017).
Berdasarkan  data  IUCN Redlist status  keberadaan  durian  lahung  di  alam adalah  rawan  atau  genting.  Saat  ini keberadaannya sudah sulit dijumpai bahkan tergolong hampir punah. Salah satu penyebabnya  adalah  penebangan  pohon untuk  diambil  kayunya.  Kayu  durian lahung  banyak  dimanfaatkan  sebagai bahan  bangunan  karena  kualitasnya  yang
bagus. Hal ini menyebabkan saat ini pohon dewasa semakin sulit ditemukan.
Ditambah lagi habitatnya semakin terganggu  akibat  degradasi  hutan  untuk berbagai kepentingan ( World Conservation Monitoring Centre (WCMC ) dalam
Aprilianti, 2019).
Kenyataan ini memerlukan perhatian  dari  semua  pihak  dalam  rangka pelestarian  plasma  nutfah  khususnya durian  dan  kerabatnya  yang  spesifik  di Kalimantan.  Upaya  konservasi  ini  dapat dilakukan dengan cara menanam komoditas  tersebut  pada  kebun  koleksi
(Antarlina, 2009). Namun, terdapat kelemahan  dari  konservasi ex  situ di lapangan,  yaitu  terjadinya  kehilangan plasma  nutfah  akibat  serangan  organisme pengganggu  tanaman  (OPT),  seperti  hama dan  penyakit,  selain  cekaman  lingkungan abiotik  (Towill  &  Jarret,  2005).  Untuk mengatasi masalah tersebut, pengembangan  koleksi  plasma  nutfah secara in vitro merupakan strategi alternatif  sebagai  cadangan  plasma  nutfah yang  dikonservasi  di  lapangan.  Teknologi in  vitro saat  ini  sudah  menjadi  kebutuhan dalam  strategi  pemeliharaan  diversitas tanaman dalam bentuk koleksi aktif ( active collections )  dan  koleksi  dasar  ( base collections ) (Keller et al. , 2006).
Salah  satu  faktor  keberhasilan dalam  kultur  jaringan  adalah  pemilihan jenis  dan  bagian  eksplan  (bahan  tanam) yang  tepat  untuk  dapat  membentuk  tunas atau  kalus  secara in  vitro .  Eksplan  yang dapat  digunakan  untuk  kultur  jaringan yaitu  berasal  dari  jaringan  meristematic, salah  satunya  adalah  daun  (Widiastuti et al. , 2019). Penggunaan daun sering dipilih sebagai  eksplan  dibandingkan  dengan organ  tanaman  yang  lain  adalah  karena ketersediaan  daun  yang  melimpah  pada bahan induknya (Budiarti, 2017).
Faktor pembatas dalam
keberhasilan kultur jaringan adalah kontaminasi.    Salah  satu  penyebab kontaminasi  adalah  sumber  kontaminan hidup  yang  melekat  pada  permukaan eksplan  dan  terbawa  saat  pengambilan eksplan dari luar (Handayani et al. , 2018), yang  umumnya  berupa  spora  jamur  dan bakteri  (Fauzan et  al ,  2017).  Pencegahan terhadap  kontaminasi  dapat  dilakukan dengan  menggunakan  metode  sterilisasi yang  tepat  (Handayani et  al. ,  2018).
Penggunaan kombinasi bahan-bahan sterilan, diantaranya fungisida dan bakterisida  ditambahkan  dengan  berbagai jenis  desinfektan  dapat  digunakan  untuk membunuh  jamur  dan  bakteri  pada sterilisasi permukaan.
Pengujian  terkait  formulasi  sterilan yang  tepat  untuk  tanaman  yang  baru pertama kali dikulturkan umumnya diperlukan.  Begitu  pula  halnya  dengan tanaman  lahung  yang  belum  pernah  ada laporan  penelitian  sebelumnya  tentang kultur jaringan pada tanaman ini.
Tanaman  lahung  sudah  jarang sekali  ditemui  di  hutan.    Masyarakat  pun tidak  ada  yang  membudidayakan  sehingga keberadaan  pohon  ini  terancam  punah. Alasan inilah  yang membuat penelitian ini penting  untuk  dilakukan,  agar  plasma nutfah  tanaman  endemik  Kalimantan (khususnya  durian  lahung)  tidak  punah. Maka  dari  itu  perlu  adanya  upaya konservasi  terhadap  tanaman  ini.    Jenis perbanyakan  yang  dipilih  adalah  kultur jaringan  dengan  menggunakan  beberapa jenis  eksplan.    Dikarenakan  hal  ini  baru pertama  kali  dilakukan  maka  perlu  diteliti prosedur sterilisasinya.

## BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  selama dua  bulan  yaitu  pada  bulan  Juli-Agustus 2022  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan Tanaman  Fakultas  Pertanian  Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru.
Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  berupa  botol kultur,  peralatan  dalam  pembuatan  media MS  dan  peralatan  tanam  secara in  vitro .
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini terdiri  dari  daun  muda  dan  buku  yang diambil  dari  bibit  durian  lahung,  bahan kimia  dalam  media  MS,  (zat  pengatur tumbuh) ZPT, aquades dan sterilan.

## Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan percobaan di laboratorium yang didesain menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  faktorial  dua  faktor.    Faktor pertama adalah formulasi sterilan (S) yang terdiri dari 5 taraf, yaitu: s 1 : tween 20, Bayclin 20%, alkohol 70% s 2 :  tween  20,  fungisida,  bakterisida, alkohol 70%
s 3 :  tween  20,  fungisida,  bakterisida,
Bayclin 20%, alkohol 70%
s 4 :  tween  20,  fungisida,  bakterisida,
Bayclin  20%,  alkohol  70%,  HgCl 2
0,05%
s 5 :  tween  20,  fungisida,  bakterisida,
Bayclin  20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%, H 2 O 2 17,6%.
Faktor kedua berupa jenis eksplan (J) yang terdiri  dari  2  taraf,  yaitu  j 1 :  daun  dan  j 2 : buku.
Eksplan  yang  digunakan  berupa daun  muda  dan  buku  pertama  dan  kedua dari  pucuk.  Eksplan  kemudian  disterilisasi
sesuai  dengan  perlakuan  lalu  di  media tanam.  Media  yang  digunakan  adalah media  MS  dengan  penambahan  ZPT  BAP 5  ppm  dan  2,4D  1  ppm.  Variabel  yang diamati terdiri dari waktu muncul kontaminasi (hst), waktu muncul browning
(hst),  persentase  kontaminasi  eksplan  (%), persentase browning (%)  dan  persentase eksplan  hidup  (%)  hingga  umur  4  mst. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Tanaman Fakultas  Pertanian  Universitas  Lambung Mangkurat Banjarbaru.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil pengamatan diuji kehomogenannya dengan uji  Bartlett.    Jika  data  homogen  maka dilakukan  analisis  ragam  (ANOVA)  pada taraf  nyata  5%.  Namun,  jika  data  tidak homogen, maka perlu dilakukan transformasi  data.  Apabila  analisis  ragam berpengaruh  nyata,  dilakukan  uji  Duncan (DMRT)  pada  taraf  nyata  5%  apabila interaksi  atau  faktor  tunggal  formulasi sterilan  berpengaruh  nyata.  Sedangkan apabila faktor jenis eksplan yang berpengaruh  nyata,  akan  dilakukan  uji  t. Pengujian  statistik  menggunakan software Genstat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Waktu Muncul Kontaminasi dan

## Browning
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  formulasi  sterilan  berpengaruh nyata  terhadap  waktu  muncul  kontaminasi
dan  waktu  muncul browning .  Rata-rata pengaruh formulasi sterilan terhadap waktu muncul  kontaminasi  (hst)  dan  waktu muncul browning (hst)  tersaji  pada  Tabel
1.
Tabel 1. Rata-rata pengaruh formulasi sterilan terhadap waktu muncul kontaminasi (hst) dan waktu muncul browning (hst) Formulasi sterilan Waktu muncul kontaminasi (hst) Waktu muncul browning (hst) s 1 (tween 20, Bayclin 20%, alkohol 70%) 6,94 b 19,03 b s 2 (tween 20, fungisida, bakterisida, alkohol 70%) 9,98 a 27,94 a s 3 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%) 8,49 ab 19,86 b
s 4 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%,
alkohol 70%, HgCl 2 0,05%) 10,17 a 17,42 b
s 5 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%, HgCl 2 0,05%, H 2 O 2 17,6%) 8,49 ab 11,20 c
Keterangan :  angka yang diikuti dengan huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji DMRT taraf nyata 5%
Tabel 1 menunjukkan bahwa kontaminasi  muncul  paling  cepat  pada perlakuan tween 20, Bayclin 20%, alkohol 70%  (6,94  hst)  dan  paling  lama  pada perlakuan tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin  20%,  alkohol  70%  (9,98  hst) namun  tidak  berbeda  nyata  dengan formulasi  sterilan  tween  20,  fungisida, bakterisida,  alkohol  70%  HgCl 2 0,05%.
Sedangkan browning muncul  paling  cepat pada  perlakuan  tween  20,  fungisida, bakterisida,  Bayclin  20%,  alkohol  70%, HgCl 2 0,05%, H 2 O 2 17,6% (11,20 hst) dan
paling lama  pada  perlakuan  tween  20,  fungisida, bakterisida, alkohol 70% (27,94 hst).

## Persentase Kontaminasi
Analisis ragam menunjukkan bahwa  faktor  tunggal  formulasi  sterilan berpengaruh  nyata  terhadap  persentase kontaminasi pada umur 2-3 mst. Sedangkan  faktor  tunggal  jenis  eksplan berpengaruh  nyata  terhadap  persentase kontaminasi  umur  1-4  mst.  Rata-rata pengaruh  formulasi  sterilan  dan  jenis eksplan  terhadap  persentase  kontaminasi (%) dapat dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan  Tabel  2,  persentase kontaminasi  pada  umur  1  mst  berkisar antara 36,25-55,00  (%).  Formulasi sterilan yang  memberikan  persentase  kontaminasi yang  lebih  kecil  pada  umur  2  dan  3  mst adalah  tween  20,  fungisida,  bakterisida, Bayclin  20%,  alkohol  70%  berturut-turut yaitu 58,75 dan 71,25% yang tidak berbeda nyata  dengan  persentase  kontaminasi  dari formulasi  sterilan  tween  20,  fungisida, bakterisida,  Bayclin  20%,  alkohol  70%, HgCl 2 0,05% dimana formulasi sterilan ini
memberikan  persentase  kontaminasi  yang lebih kecil pada umur 4 mst, yaitu sebesar 68,75%  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan yang  dihasilkan  dari  perlakuan  tween  20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2 17,6%. Sementara  persentase  kontaminasi  pada eksplan  daun  lebih  kecil  dibandingkan dengan  eksplan  buku  pada  umur  1-4  mst masing-masing  32,0;  45,0;  48,0  dan 49,5%.
Tabel 2. Rata-rata  pengaruh  formulasi  sterilan  dan  jenis  eksplan  terhadap  persentase kontaminasi (%) pada umur 1-4 mst
Formulasi sterilan Persentase kontaminasi (%) 1 mst 2 mst 3 mst 4 mst s 1 (tween 20, Bayclin 20%, alkohol 70%) 55,00 71,25 a 76,25 a 76,25 a s 2 (tween 20, fungisida, bakterisida, alkohol 70%) 40,00 68,75 a 78,75 a 82,50 a
s 3 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%) 46,25 58,75 ab 71,25 ab 76,25 a
s 4 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol
70%, HgCl 2 0,05%) 36,25 50,00 b 61,25 b 68,75 ab
s 5 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%, HgCl 2 0,05%, H 2 O 2 17,6%) 36,25 52,50 b 61,25 b 61,25 b j 1 : daun 32,00 45,00 48,00 49,50 j 2 : buku 53,50 75,50 91,50 96,50
Keterangan :   angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama  untuk  formulasi sterilan  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  menurut  uji  DMRT  taraf  nyata  5%.  Untuk jenis eksplan berbeda nyata menurut uji t
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  interaksi  antara  formulasi  sterilan dengan  jenis  eksplan  berpengaruh  nyata terhadap  persentase browning .  Rata-rata
pengaruh interaksi antara formulasi sterilan dengan  jenis  eksplan  berpengaruh  nyata terhadap persentase browning (%) disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3.   Rata-rata  pengaruh  interaksi  antara  formulasi  sterilan  dengan  jenis  eksplan  berpengaruh
nyata terhadap persentase browning (%) pada umur 1-4 mst Formulasi sterilan Jenis eksplan Persentase browning (%) 1 mst 2 mst 3 mst 4 mst s 1 (tween 20, Bayclin 20%, alkohol 70%) Daun Buku 5,0 bc 0,0 c 7,5 bc
0,0 c
7,5 bc 0,0 c
22,5 b 0,0 c s 2 (tween 20, fungisida, bakterisida, alkohol 70%) Daun Buku 0,0 c
0,0 c 0,0 c 0,0 c 0,0 c 0,0 c 5,0 c 0,0 c s 3 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%) Daun Buku 2,5 bc 0,0 c 10,0 b 0,0 c 10,0 b 0,0 c 20,0 b 0,0 c s 4 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%, HgCl 2 0,05%) Daun Buku 12,5 b 0,0 c 17,5 b 0,0 c 17,5 b 0,0 c 37,5 b 0,0 c s 5 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%, HgCl 2 0,05%, H 2 O 2 17,6%) Daun Buku 22,5 a 0,0 c 42,5 a 0,0 c 42,5 a 0,0 c 60,5 a 0,0 c
Keterangan : angka yang diikuti dengan huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji DMRT taraf nyata 5%
Tabel 3 menunjukkan bahwa persentase browning terbesar  diperoleh dari  kombinasi  perlakuan  tween  20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2 17,6% dengan  eksplan  daun  pada  umur  1-4  mst berturut-turut  22,5;  42,5;  42,5  dan  60,5%. Semua  kombinasi  perlakuan  formulasi sterilan  dengan  eksplan  buku  tidak  terjadi browning (0%) pada umur 1-4 mst.

## Persentase Eksplan Hidup
Analisis ragam menunjukkan bahwa  faktor  tunggal  formulasi  sterilan
berpengaruh  nyata  terhadap  persentase eksplan  hidup  pada  umur  2-3  mst. Sedangkan  faktor  tunggal  jenis  eksplan berpengaruh  nyata  terhadap  persentase eksplan  hidup  umur  1-4  mst.  Rata-rata pengaruh  formulasi  sterilan  dan  jenis eksplan  terhadap  persentase  eksplan  hidup (%) dapat dilihat pada Tabel 4.
Berdasarkan  Tabel  4,  persentase eksplan  hidup  pada  umur  1  mst  berkisar antara 45,00-63,75  (%).  Formulasi sterilan yang  memberikan  persentase  eksplan hidup yang lebih besar pada umur 2 dan 3
mst adalah tween 20, fungisida, bakterisida,  Bayclin  20%,  alkohol  70% masing-masing  sebesar  41,25  dan  28,75% yang tidak berbeda nyata dengan persentase  kontaminasi  dari  formulasi sterilan  tween  20,  fungisida,  bakterisida, Bayclin  20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05% dimana  formulasi  sterilan  ini  memberikan persentase  eksplan  hidup  yang  lebih  besar pada  umur  4  mst,  yaitu  sebesar  31,25%
yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  yang dihasilkan  dari  perlakuan  tween  20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2 17,6%. Sementara  persentase  eksplan  hidup  pada eksplan  daun  lebih  besar  dibandingkan dengan  eksplan  buku  pada  umur  1-4  mst masing-masing  68,0;  55,0;  52,0  dan 50,0%.
Tabel 4.   Rata-rata  pengaruh  formulasi  sterilan  dan  jenis  eksplan  terhadap  persentase  eksplan  hidup (%) pada umur 2-4 mst
Formulasi sterilan Persentase eksplan hidup (%) 1 mst 2 mst 3 mst 4 mst s 1 (tween 20, Bayclin 20%, alkohol 70%) 45,00 28,75 b 23,75 b 23,75 bc s 2 (tween 20, fungisida, bakterisida, alkohol 70%) 60,00 31,25 b 21,25 b 17,50 c
s 3 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%) 53,75 41,25 ab 28,75 ab 23,75 bc
s 4 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol
70%, HgCl 2 0,05%) 63,75 50,00 a 38,75 a 31,25 ab
s 5 (tween 20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol 70%, HgCl 2 0,05%, H 2 O 2 17,6%) 63,75 47,50 a 30,75 ab 38,75 a j 1 : daun 68,00 55,00 52,00 50,50 j 2 : buku 46,50 24,50 8,50 3,50
Keterangan :   angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama  untuk  formulasi sterilan menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji DMRT taraf nyata 5%.
Untuk jenis eksplan berbeda nyata menurut uji t
Pembahasan
Hasil penelitian menunjukkan kisaran  munculnya  kontaminasi  antara  1-2 mst  dimana  pada  formulasi  sterilan  tween 20,  fungisida,  bakterisida,  alkohol  70%, kontaminasi  baru  muncul  di  atas  satu minggu.  Pada  umumnya,  kontaminasi permukaan  yang  disebabkan  oleh  jamur
akan  muncul  di  bawah  umur  satu  minggu apabila  prosedur  sterilisasinya  belum sesuai.  Sementara  apabila  baru  terjadi kontaminasi  lebih  dari  satu  minggu, kemungkinan disebabkan oleh kontaminan internal  seperti  bakteri  atau  spora  jamur yang  pada  awalnya  dalam  keadaan dorman. Sesuai dengan pernyataan Santoso
dan  Nursandi  (2002)  bahwa  sumber kontaminan  tidak  hanya  berada  pada bagian  permukaan  eksplan  saja  namun juga  ada  pada  bagian  dalam  eksplan. Respon  kontaminasi  yang  berasal  dari permukaan  eksplan  biasanya  sangat  cepat yaitu  2  x  24  jam.  Namun,  bila  bersifat internal  respon  muncul  setelah  beberapa hari bahkan 1 bulan setelah tanam.
Kontaminasi  muncul  lebih  cepat pada formulasi sterilan yang tidak menggunakan  fungisida  dan  bakterisida. Hal  ini  menunjukkan  fungisida  dan bakterisida  memang  diperlukan  dalam rangkaian  sterilisasi  eksplan  tanaman lahung.  Di  lain  sisi  penggunaan  agen sterilan  kuat  seperti  HgCl 2 (merkuri klorida)  dan  H 2 O 2 (hidrogen  peroksida) tidak  cukup  kuat  untuk  memperlambat kemunculan  kontaminasi.  Hal  ini  diduga konsentrasi  dan  waktu  yang  digunakan dalam penelitian ini  yang belum mencapai level  optimum,  dimana  konsentrasi  HgCl 2 yang  digunakan  sebesar  0,05%  dengan waktu  perendaman  selama  satu  menit. Sedangkan  untuk  konsentrasi  H 2 O 2 yang digunakan sebesar 17,6% dengan
perendaman  selama  lima  menit.  Menurut
Gunawan (1992) HgCl 2 merupakan disinfektan  yang  sangat  efektif  untuk membunuh  jamur  dan  bakteri  pada sterilisasi permukaan dalam kisaran
konsentrasi  0,1-0,2  %  dengan  lama perendaman  10-20  menit.  Sementara kisaran  konsentrasi  H 2 O 2 yang  dapat meniadakan  kontaminasi  pada  kultur embrio  kepel  diperoleh  antara  5-15  % dengan  perendaman  selama  10  dan  15 menit (Handayani, 2019).
Kontaminasi  yang  terjadi  dalam perbanyakan  secara in  vitro umumnya disebabkan  oleh  mikroorganisme  dari golongan  jamur  dan  bakteri.  Patogen penyebab kontaminan akan mudah tumbuh di media tanam yang mengandung sukrosa dan hara yang tinggi serta kondisi suhu dan kelembaban  yang  umumnya  sesuai  bagi pertumbuhan  mikroorganisme.  Hal  ini yang  menyebabkan  kontaminan  dapat berkembang sangat cepat dan mengalahkan pertumbuhan  eksplan  (Henuhili,  2013). Oleh sebab itu diperlukan percobaan untuk memperoleh prosedur sterilisasi yang tepat bagi  suatu  jenis  tanaman.  Kunci  utama sterilisasi adalah membunuh atau menghilangkan
penyebab
kontaminasitetapi  tidak  merusak  atau mematikan jaringan tanaman yang diinisiasi. Kunci tersebut seringkali menjadi kendala tersendiri untuk mendapatkan  bahan  kultur  yang  benar- benar  aseptik,  terutama  untuk  jenis-jenis tanaman  berkayu  dan  tahunan  (Fauzan et al. ,  2017).  Sterilisasi  tanaman  berkayu
umumnya  memiliki  kendala  yang  lebih besar  atau  lebih  sulit  daripada  tanaman semusim (Antony et al. , 2015).
Hasil pengujian menunjukkan persentase  kontaminasi  mulai  umur  2-4 mst masih tergololong tinggi (di atas 50%). Persentase  kontaminasi  yang  lebih  rendah pada  umur  4  mst,  yaitu  sebesar  68,75% terjadi  pada  formulasi  sterilan  tween  20, fungisida, bakterisida, Bayclin 20%, alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%  yang  tidak berbeda nyata dengan persentase kontaminasi  pada  kombinasi  perlakuan tween  20,  fungisida,  bakterisida,  Bayclin 20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2 17,6%.  Namun,  persentase  kontaminasi dalam  penelitian  ini  lebih  kecil  jika dibandingkan  dengan  hasil  dari  penelitian Widiastuti et al. (2019) yang menunjukkan bahwa eksplan yang berasal dari daun yang diperlakukan  dengan  Clorox  20%,  Clorox 10%,  alkohol  70%,  antibiotik  50  mg  L -1 , fungisida dan bakterisida 2% dan Betadine 5%  mengalami  kontaminasi  jamur  paling kecil  (75%)  pada  kultur  durian  merah secara in vitro .
Semakin lama masa inkubasi
menunjukkan semakin efektifnya penggunaan HgCl 2 dalam formulasi sterilan dalam menekan terjadinya kontaminasi. Menurut Fauzan et al. (2017) HgCl 2 merupakan  bahan  sterilan  yang
memiliki sifat sangat kuat untuk membunuh  jamur  dan  bakteri  pada konsentrasi  rendah.  Hal  yang  perlu diperhatikan bahwa sterilisasi menggunakan  HgCl 2 umumnya  memiliki konsentrasi  dan  lama  perendaman  yang berbeda-beda, tergantung dari jenis tanaman  dan  eksplan  yang  disterilisasi. Baghel et  al. (2008)  melakukan  sterilisasi eksplan kotiledon jati menggunakan HgCl 2
0,1% selama 3 menit sedangkan Fauzan et al. (2017)  memperoleh  hasil  bahwa perlakuan  HgCl 2 300  mg  L -1 selama  3 menit merupakan konsentrasi terbaik untuk sterilisasi  kultur  tunas  samping  jati  yang dapat  menghasilkan  kultur  dengan  tingkat aseptik tertinggi (85%). Sementara Phulwaria et  al. (2011)  melakukan sterilisasi pada tanaman Salvadora persica menggunakan  HgCl 2 0,1%  selama  5  –  7 menit dan Daud et al. (2012) menggunakan  waktu  yang  lebih  singkat, yaitu  15  –  30  detik  dengan  konsentrasi  2 0,1%,  dan  persentase  kontaminasi  pada eksplan  daun  dan  ruas  batang Aquilaria malaccensis sebesar 10-17 %.
Jenis  eksplan  juga  memberikan pengaruh  yang berbeda  pada penelitian ini terhadap  persentase  kontaminasi.  Hasil pengujian  menunjukkan  eksplan  buku lebih tinggi tingkat kontaminasinya dibandingkan dengan eksplan daun. Hal ini
diduga  pada  eksplan  buku  lahung,  larutan sterilan  tidak  seluruhnya  menjangkau bagian  lipatan  pada  buku  sehingga kontaminan di bagian tersebut masih dapat hidup.  Di  satu  sisi,  pada  eksplan  daun terjadi  kontak  permukaan  yang  sempurna antara  bahan  sterilan  dengan  eksplan sebagai  dampak  penggunaan  tween  20 sehingga  sterilan  dapat  lebih  efektif bekerja  pada  eksplan  daun.  Sesuai  dengan pendapat  Prayoga  (2016)  bahwa  tween  20 digunakan dengan tujuan untuk memperluas  kontak  permukaan  antara bahan sterilan dan eksplan.
Selain kontaminasi, penyebab kematian  eksplan  pada  kultur  jaringan dapat  disebabkan  oleh  adanya browning .
Peristiwa browning atau  pencoklatan eksplan  terjadi  karena  adanya  pelukaan pada  bagian  tanaman  yang  dijadikan eksplan  seperti  pemotongan  eksplan  daun. Pelukaan  tersebut  menyebabkan  keluarnya senyawa fenolik yang kemudian teroksidasi  dan  menghasilkan  senyawa yang berwarna coklat. Walaupun browning merupakan  peristiwa  alamiah  yang  umum terjadi  saat  tanaman  terluka,  namun  di dalam kultur jaringan apabila terlalu tinggi akan  meracuni  jaringan  tanaman  dan menyebabkan kematian pada eksplan.
Tanaman  berkayu  pada  umumnya memiliki  kandungan  fenolik  yang  tinggi
sehingga  menyebabkan  tingkat browning yang  tinggi.  Oleh  sebab  itu,  diperlukan penambahan  senyawa  antioksidan  ke dalam media untuk meminimalisir browning yang  terjadi.  Salah  satu  bahan yang dapat diberikan dan berfungsi sebagai senyawa antioksidan adalah PVP (polivinil pirolidon)  (Dwiyani,  2015).  Senyawa antioksidan akan menyerap senyawa fenolik  yang  keluar  sehingga  mencegah terjadinya browning (Antony et al. , 2015).
Pemberian  PVP  dalam  media  pada penelitian  ini  cukup  dapat  menekan terjadinya browning hingga  umur  4  mst pada  eksplan  yang  disterilisasi  tanpa menggunakan  senyawa  desinfektan  yang kuat  seperti  HgCl 2 dengan  persentase browning sebesar  22,5%  yang  didapatkan dari  formulasi  sterilan  tween  20,  Bayclin 20%,  alkohol  70%.  Penggunaan  agen sterilan  seperti  HgCl 2 apabila  dalam konsentrasi  dan  dengan  lama  perendaman yang  tidak  tepat  justru  dapat  mematikan jaringan  tanaman.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  Kariena et  al. (2020)  yang mendapati  eksplan  daun  stevia  menjadi berwarna  coklat  pada  perlakuan  fungisida, bakterisida,  HgCl 2 0,1%,  alkohol  70%, Bayclin 5%. Menurut Fauzan et al. (2017)
penggunaan  HgCl 2 juga  berpengaruh terhadap  kerusakan  jaringan  tanaman.  Hal ini  didukung  oleh  hsil  penelitian  yang
dilakukan oleh Tiwari et al. (2012) dimana sterilisasi eksplan tanaman tebu ( Saccharum  officinarum )  menggunakan
HgCl 2 0,2% selama 12 menit menyebabkan eksplan mengalami
browning dan mati pada hari ke 4 sampai 7 setelah tanam.
Dalam  penelitian  ini,  eksplan  buku lahung  tidak  mengalami browning selain disebabkan  efek  penggunaan  PVP,  juga karena  ukuran  eksplan  yang  cukup  kecil yaitu  panjang  buku  1  cm.  Hal  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  Fauzan et  al.
(2017)  dimana  ukuran  eksplan  yang  kecil, yaitu  panjang  1  cm  dan  diameter  0,2  mm dapat  mendukung  proses  sterilisasi  dan mengurangi  tingkat browning pada  kultur in  vitro .  Hasil  ini  diperkuat  oleh  hasil penelitian  Singh  dan  Patel  (2016)  pada tanaman  delima  ( Punica  granatum L.) dimana ukuran eksplan berpengaruh terhadap tingkat browning . Hasil penelitian tersebut diperoleh bahwa semakin panjang ukuran  eksplan  (>  1,5  cm)  maka  tingkat browning juga  semakin  tinggi,  sehingga terdapat  hubungan  intensitas browning yang  dihasilkan  terhadap  ukuran  tunas yang  ditanam.  Sementara  ukuran  eksplan daun  yang  ditanam  dalam  penelitian  ini sebesar 1x1 cm. persentase browning yang lebih  tinggi  pada  eksplan  daun  diduga karena  luasan  bagian  eksplan  daun  yang
mengalami pelukaan lebih besar dibandingkan dengan eksplan buku sehingga senyawa fenolik yang keluar juga semakin banyak.
Persentase  hidup  eksplan  akan berbanding  terbalik  dengan  persentase kontaminasi.  Pada  semua  formula  sterilan cenderung  terjadi  penurunan  persentase eksplan  hidup  setiap  minggunya  hingga umur 4 mst dimana persentase hidup  yang lebih  tinggi  diperoleh  pada  formulasi sterilan  tween  20,  fungisida,  bakterisida, Bayclin  20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%
(31,25%) yang tidak berbeda nyata dengan persentase hidup pada perlakuan tween 20, Bayclin  20%,  alkohol  70%,  H 2 O 2 17,6%. Hal ini menunjukkan untuk sterilisasi daun dan buku durian lahung yang meningkatkan persentase hidup maka perlu penggunaan  HgCl 2 .  Walaupun  HgCl 2 termasuk  agen  sterilan  dengan  toksisitas yang tinggi, namun dapat efektif mematikan  jamur  dan  bakteri  penyebab kontaminasi.  Tentunya  dengan  batasan konsentrasi  dan  lama  perendaman  yang sesuai. Oleh sebab itu, diperlukan pengujian terlebih dahulu terhadap konsentrasi  dan  waktu  perendaman  yang tepat  untuk  menekan  kontaminasi  tanpa merusak jaringan eksplan sehingga memperbesar  persentase  hidup  eksplan. Seperti  halnya  hasil  penelitian  yang
dilakukan  Antony et  al. (2015),  dimana menggunakan  HgCl 2 pada  konsentrasi 0,15%  selama  15  menit  pada  eksplan  jati menunjukkan  tingkat  keberhasilan  kultur yang rendah (41,68%). Hal ini diduga lama perendaman  yang  terlalu  lama  sehingga jaringan eksplan justru mengalami kerusakan.  Hasil  yang  berbeda  diperoleh Mekonnen et  al. (2013)  menggunakan HgCl2  0,1%  dengan  waktu  10  menit  pada tanaman  tebu  ( Saccharum  officinarum ) dapat  menghasilkan  tingkat  hidup  sebesar 73,33%.
Eksplan daun menunjukkan
persentase hidup yang lebih besar dibandingkan dengan eksplan buku. Hal ini disebabkan pada bagian buku kemungkinan  besar  masih  terdapat  bagian yang  tidak  terjangkau  larutan  sterilan sehingga mikroorganisme penyebab kontaminasi  pada  bagian  tersebut  tidak mati.  Akibatnya  tingkat  kontaminasi  pada eksplan daun menjadi tinggi dan menyebabkan  kematian  eksplan.  Hal  ini dikarenakan kontaminan baik fungi maupun bakteri bersifat kompetitor terhadap perebutan nutrisi pada media dan parasit bagi eksplan dikarenakan kontaminan  menghambat  perkembangan eksplan  sehingga  eksplan  mati  (Imanudin, 2016).  Selain  itu,  beberapa  kontaminan baik bakteri maupun fungi dapat
mengeluarkan persenyawaan semacam eksudat  yang  bersifat  racun  bagi  eksplan sehingga  eksplan  mati  (Shofiyani  & Hajoeningtijas, 2011). Sejalan dengan hasil penelitian  Kariena et  al. (2020)  dimana rata-rata  kombinasi  jenis  sterilan  dengan eksplan  daun  (38,89%)  lebih  besar daripada  yang  dengan  eksplan  buku (11,11%) pada kultur tanaman stevia.

## KESIMPULAN
Kombinasi antara formulasi sterilan tween  20,  fungisida,  bakterisida,  Bayclin 20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  H 2 O 2
17,6% dengan eksplan daun menghasilkan persentase browning yang  terbesar  hingga umur  4  mst  yaitu  sebesar  60,5%.  Pada semua  kombinasi  antara  formulasi  sterilan dengan eksplan buku tidak terjadi browning .  Formulasi  sterilan  tween  20,
fungisida, bakterisida, alkohol 70%
memberikan  waktu  muncul  kontaminasi dan browning yang terlama masing-masing sebesar  9,98  dan  27,94  hst,  persentase kontaminasi  yang  lebih  kecil  pada  umur  2 dan  3  mst  (58,75  dan  71,25%)  dan persentase  eksplan  hidup  yang  lebih  besar (41,25 dan 28,75%), sedangkan pada umur 4  mst  diperoleh  dari  formulasi  sterilan tween  20,  fungisida,  bakterisida,  Bayclin 20%,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,05%,  yaitu persentase kontaminasi 68,75% dan
persentase  hidup  sebesar  31,25%.  Eksplan daun  memiliki  persentase  kontaminasi yang  lebih  kecil  dan  persentase  eksplan hidup  yang  lebih  besar  dibandingkan dengan eksplan buku.

## DAFTAR PUSTAKA
Antarlina, S.S. 2009. Identifikasi sifat fisik dan kimia buah-buahan lokal Kalimantan. Buletin  Plasma  Nutfah , 15(2): 80-90.
Aprilianti,  P.  2019.  Konservasi  ex-situ Durio spp.  di  Kebun  Raya  Bogor (Jawa  Barat)  dan  Kebun  Raya Katingan (Kalimantan Tengah). Prosiding Seminar Nasional Masyarakat  Biodiversitas  Indonesia
5(1), 123-128.
Baghel,  R.S.,  Tiwari,  S.,  Tripathi,  M.K. 2008.  Comparison  of  morphogenic and  plant  regeneration  ability  of some  explants  of  teak  ( Tectona grandis Linn.).  J. Agri.c  Technol .  4: 125-136.
Budiarti,  C.  2017.  Pengaruh  teknik sterilisasi  dan  zat  pengatur  tumbuh 2,4-D (2,4-diklorofenoksiasetat), BAP  (benzil  amino  purin)  terhadap induksi kalus nilam. Diploma Thesis , Universitas  Islam  Negeri  Sunan Gunung Djati.
Daud,  N.H.,  Jayaraman,  S.,  Mohamed,  R. 2012. Methods Paper:  An improved surface  sterilization  technique  for introducing  leaf,  nodal  and  seed explants  of Aquilaria  malaccensis from field sources into tissue culture.
Aspac  J.  Mol.  Biol.  Biotechnol .,  20:
55-58.
Fauzan,  Y.S.A.,  Supriyanto,  Tajuddin,  T.
2017.  Efektivitas  merkuri  klorida
(HgCl 2 ) pada sterilisasi tunas samping  jati  ( Tectona  grandis ) in vitro . Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia , 4(2); 78-84.
Handayani, R. S., Ismayadi, Sayuti, M., & Cici,  R.H.  2018.  Pengaruh  bahan sterilan  etanol  dan  merkuri  klorida terhadap  pertumbuhan  eksplan  tunas durian  ( Durio  zibethinus )  secara in vitro . Prosiding  Forum  Komunikasi
Perguruan Tinggi Pertanian Indonesia (FKPTPI) Universitas Syiah Kuala Banda Aceh , 271-276. Henuhili,  V.  2013.  Kultur  jaringan tanaman. Pelatihan Peningkatan Pengetahuan  dan  Skill  Guru  SMA Tentang Bioteknologi Tanaman Melalui  Metode  Kultur  Jaringan Anggrek Jurusan Pendidikan Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Yogyakarta . Imanudin. 2016. Pengaruh penambahan air rebusan kentang ( Solanum tuberosum L.),  BAP  dan  NAA terhadap  induksi  tunas  jati  emas ( Cordia  subcordata )  secara in  vitro . Thesis ,  Universitas  Muhammadiyah Yogyakarta.
Keller,  E.R.J.,  Senula,  A.,  Leunufna,  S.,
Grübe,  M.  2006.  Slow  growth storage and cryopreservation-tools to facilitate  germplasm  maintenance  of vegetatively  propagated  crops  in living  plant  collections. Int.  J. Refrig ., 29; 411-417.
Maysyarah, Rudiyansyah, Alimuddin,
A.H.  2019.  Karakteristik  senyawa triterpenoid dari fraksi diklorometana
kulit  batang  durian  merah  ( Durio dulcis Becc.). Jurnal Kimia
Khatulistiwa , 8(2): 22-27.
Mekonnen, T., Diro, M., Sharma, M. 2013. An  alternative  safer  and  cost effective surface sterilization method for sugarcane ( Saccharum officinarum L.)  explants. Afr.  J. Biol ., 1, 28-32.
Phulwaria,  M.,  Ram,  K.,  Gahlot,  P., Shekhawat, N.S. 2011. Micropropagation of Salvadora
persica -  A  tree  of  arid  horticulture and  forestry. New  Forests 42:  317-
327.
Prayoga,  L.  2016.  Proses  sterilisasi  dan penanganan  kontaminasi.  Jurusan Biologi.  Fakultas  Matematika  dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Soedirman. Semarang.
Santoso,  U.,  Nursandi,  F.  2003. Kultur
Jaringan Tanaman .
Malang, Universitas Muhammadiyah Press.
Shofiyani,  A.,  Hajoeningtijas,  O.D.  2011.
Pengaruh sterilan dan waktu perendaman  pada  eksplan  daun kencur  ( Kaempferia  galanga L.) untuk  meningkatkan  keberhasilan kultur  kalus. Jurnal  Agritech ,  12(1):
11-29.
Sugiyarto,  L.,  Kuswandi,  P.C.  2013. Eksplorasi  metode  sterilisasi  dan macam  media  untuk  perbanyakan durian  ( Durio  zibethinus )  secara in vitro . Jurnal  Sains  Dasar ,  2(1):  20-
24.
Towill, L.E., Jarret, R.L. 1992. Cryopreservation  of  sweet  potato
( Ipomoea  batatas [L.]  Lam.)  shoot by  vitrification. Plant  Cell  Rep .,  11:
175-178.
Singh  P.,  Patel,  R.M.  2016.  Factors affecting in vitro degree of browning
and culture establishment of pomegranate. Afr.  J.  Plant  Sci .,  10: 43-49.
Susi.  2017.  Identifikasi  komponen  kimia dan  fitokomia  durian  lahung  ( Durio dulcis ) indigenous Kalimantan. Jurnal Al Ulum Sains dan Teknologi , 3(1), 49-56.
Tirtawinata, M.R., Santoso, P.J., Apriyanti, L.H.  2016. Durian:  Pengetahuan Dasar untuk Pecinta Durian . Jakarta, Agriflo.
Tiwari A.K., Tripathi, S., Lal, M., Mishra,
S. 2012. Screening of chemical some disinfectants  for  media  sterilization during in  vitro micropropagation  of sugarcane. Sugar  Tech .,  14:  364- 369.
Uji,  T.  2005.  Keanekaragaman  jenis  dan sumber  plasma  nutfah  Durio  ( Durio spp.)  di  Indonesia. Buletin  Plasma
Nutfah , 11(1): 28-33.
Widiastuti, Y., Bariyyah, K., Istianingrum, P., Hartatik, S., Restanto, D.P. 2019. Eksplorasi bagian eksplan biji durian merah  untuk  pembentukan  kalus secara in vitro . Prosiding SEMNASDAL  (Seminar  Nasional
Sumber Daya Lokal) II, 372-379.