APLIKASI SITOGENETIKA UNTUK MENDETEKSI ABNORMALITAS KROMOSOM PADA  Benign Barrett’s EPITHELIUM YANG MENGALAMI TRANSFORMASI MALIGNA

## Alvi Milliana
Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maliki Malang Email: alvimilliana@yahoo.com

## Abstract
Barrett’s  esophagus  is  a  metaplastic  alteration  of  the  normal  distal  esophageal epithelium.  Barrett’s  esophagus  is  present  in  10%–20%  of  patients  with gastroesophageal  reflux  disease  (GERD).  Its  major  significance  is  as  a predisposing  factor  for  esophageal  adenocarcinoma,  which  carries  a  high mortality rate and a rapidly growing incidence in the United States.  Esophageal adenocarcinoma carries a grave prognosis, with a relative 3-year survival rate of only  20%  in  the  United  States  from  1995–1998.    Cancer  arises  in  BE  through  a multistep  sequence  of events initiated  by chronic  GERD  that  leads to  metaplasia, dysplasia,  and    adenocarcinoma  sequence.  Primary  pathogenetic  changes  in cancer  result  from  balanced  rearrangements  of  chromosome.  Losses  of chromosomes  4,  18,  21,  and  Y  were  the  most  frequent  numeric  changes.  The chromosome arms most frequently rearranged were 1p, 3q, 11p and 22p. Evidence of  chromosomal  rearrangements  [t(10;16)  and  dup  (11q)]  appeared  during  the early  stages  of  the  BEC  model.  After  further  validation,  in-vivo,  they  may  be clinically  useful  for  diagnosis  of  BE,  progressing  to  dysplasia  or  esophageal adenocarcinoma.
Keywords:    Barrett’s  esophagus,  esophageal  adenocarcinoma,  chromosome instability, cytogenetics

## Pendahuluan
Barrett’s  Esophagus  (BE)  merupakan gangguan  metaplastik  intestinal  dari  epitel esophagus  bagian  distal,  terjadi  akibat  dari komplikasi  Gastroesofageal  Reflux  Disease (GERD)  dan  merupakan  kondisi  terbanyak yang mendahului keganasan Esopagheal Adenokarsinoma  (EAC)  (Jenses  et  al.,  2011). EAC    memiliki  prognosis  yang  buruk,  dengan angka harapan hidup 3 tahun di Amerika adalah 20%  dari  tahun  1995-1998  (Modiano  and Gerson,  2007).  Di  Eropa  dan  Amerika,  insiden EAC  meningkat  6  kali  lipat  pada  25  tahun terakhir  ini  (Oryu,  et  al,  2013).  Trend prevalensi  GERD  di  Asia  meningkat.  Di Hongkong  meningkat  dari  29,8%  (2002) menjadi  35%  (2003).  Sedangkan  berdasarkan data salah satu rumah sakit di Indonesia, RSCM menunjukkan  peningkatan  signifikan  dari  6% menjadi  26%  dalam  kurun  waktu  5  tahun (Renoat, 2013). BE lebih banyak dijumpai pada laki-laki  (10:1).  GERD  dapat  terjadi  di  segala usia, namun prevalensinya meningkat pada usia diatas 40 tahun (Ndraha, 2014)
Penyebab pasti dari BE belum diketahui,  tetapi  GERD  merupakan  faktor resiko  terbesar.  BE  telah  nampak  beberapa tahun  sebelum  berkembang  menjadi  kanker. Biasanya  sebelum  kanker  tampak,  sel  pre- kanker telah ditemukan pada jaringan Barrett’s, yaitu displasia, dan hanya terlihat dengan biopsi (NIDDK, 2008).
Pada  tahun  1960,  Peter  Nowell  dan David  Hungerford  menemukan  untuk  pertama kalinya adanya hubungan abnormalitas kromosom    dengan  kanker  menggunakan sitogenetik. Abnormalitas kromosom ini merupakan  tanda  deregulasi  gen  pada  kanker dan  menyebabkan  adanya  instabilitas  genom. Para  peneliti  membuat  sebuah  hipotesis  bahwa patogenesa  kanker  merupakan  hasil  dari rearrangement  chromosome.  Kanker  adalah suatu  keadaan  yang  bertahap,  progresif,  dan menyebabkan  perubahan  pada  kromosom. Abnormalitas  kromosom  ini  menyebabkan perubahan proliferasi sel (Lobo, 2008).

## Barrett’s Esophagus Carcinogenesis
Barrett’s esophagus (BE) adalah kondisi  dimana  epitel  squamous  esophagus digantikan  oleh  epitel  kolumnar  metaplastik yang  terdiri  dari  sel  kolumnar  dan  sel  goblet (McPhee and Papadakis, 2007). Faktor etiologi utama  terjadinya  BE  adalah  gastroesofageal refluks  disease  (GERD)  yang  kronis.  GERD mempunyai dua komponen  utama yang bekerja sinergi menginduksi terjadinya luka pada epitel mukosa,  yaitu  asam  dan  empedu  (Das  et  al., 2011). Hal ini menyebabkan terjadinya perbaikan  epitel,  berupa  penggantian  epitel squamous  dengan  epitel  kolumner.  Epitel kolumner lebih tahan terhadap pH rendah tetapi juga  merupakan  tendensi  terhadap  perubahan dysplasia yang merupakan predisposisi esophageal adenocarsinoma (EAC). Pergantian epitel  normal  pada  esophagus  bagian  distal dengan  epitel  kolumnar  disebut  dengan  proses metaplastik,  yang  ditandai  dengan  adanya histologi kolumnar pada jaringan yang terganggu,  dan  disebut  sebagai  metaplasia intestinal  special  yang  terdiri  dari  kripta intestine  dan  sel  goblet  (Modiano  and  Gerson, 2007). Perubahan keganasan pada BE
merupakan perubahan morfologi yang berurutan  dari  metaplasia  menjadi  dysplasia, lalu menjadi carcinoma (Das et al., 2011).
Paparan  sel  terhadap  bahan-bahan genotoksik  dan  sitotoksik  memiliki  potensi untuk  menimbulkan  perubahan  pada  stabilitas genom seluler. Beberapa perubahan ini menginduksi  kerusakan  DNA  baik  secara langsung  maupun  tidak  langsung,  sehingga menyebabkan peningkatan mutasi gen, amplifikasi dan abnormalitas karyotype multiple. Kerusakan DNA ini merupakan faktor penting  yang  berperan  pada  manifestasi instabilitas kromosom (Limoli, 2003).
Perkembangan  progresifitas  keganasan diduga  merupakan  akibat  dari  instabilitas kromosom  yang  didapat  dan  evolusi  pada populasi  klonal  dengan  akumulasi  kesalahan genetik. Kanker pada manusia dan beberapa lesi premaligna memiliki abnormalitas genetik yang multiple.  BE  adalah  kondisi  premaligna  yang merupakan  predisposisi  EAC.  Untuk  deteksi dini  kanker  EAC  diperlukan  biopsi  melalui endoskopi (Barrett’s, 1999).
Progresi neoplastik pada BE berhubungan dengan gangguan TP53 (p53) dan CDKN2A  (p16)  (Barrett’s,  1999).  Sebuah penelitian telah menganalisa peran abnormalitas genetik berupa allelic loss dan mutasi pada gen p16  dan  p53  pada  progresi  BE  menjadi  EAC.
Sel  epitel  normal  memiliki  dua  kopi  p53.  Pada pasien  yang  mengalami  displasia  epitel  kedua kopi  p53  diinaktifkan  melalui  allelic  loss  dan mutasi. Gangguan gen p53, baik berupa loss of heterozygosity (LOH) atau mutasi pada exon 5- 8,  sering  terjadi  pada  kanker  manusia. Terjadinya LOH pada gen ini sebesar 92% pada adenokarsinoma  dan  27%  pada  low  grade dysplasia.  Tumor  supressor  gene  yang  lain, p16/CDKN2/MTS  1,  sering  terlibat  pada perkembangan kanker manusia. Gen ini terletak pada  kromosom  9p21,  daerah  yang  sering mengalami  delesi  pada  beberapa  tipe  kanker, termasuk  EAC.  CDKN2  adalah  protein  yang membentuk kompleks dengan Cdk 4 dan Cdk6, sehingga menghambat fosforilasi protein retinoblastoma (pRB). pRB yang tidak terfosforilasi  mencegah  sel  melanjutkan  siklus sel.  Jadi,  hilangnya  gen  p16  menyebabkan  sel terus tumbuh dan membelah. Hal ini merupakan sebuah  karakteristik  dari  kanker.  Hilangnya fungsi p16 terjadi melalui 3 mekanisme mayor, yaitu  mutasi  nukleotida,  delesi  gen  dan hilangnya  ekspresi  setelah  metilasi  pada  CpG island yang terletak pada ujung 5’ (Gonzales et al., 1997).
Gangguan  jumlah  kromosom,  baik penambahan  maupun  pengurangan,  terjadi melalui beberapa mekanisme, termasuk  mitosis non-disjuction, kelainan spindle checkpoint atau gangguan  polaritas  pembelahan  sel.  Pada kanker,  sering  dijumpai  kelainan  jumlah sentrosom yang dapat menyebabkan pembentukan  spindle  mitosis  multipolar  yang meningkatkan pembelahan sel asimetri sehingga  meningkatan  resiko  penambahan  atau pengurangan  jumlah  kromosom.  Beberapa protein  kinase,  termasuk  cyclin  E/CDK2  dan cyclin  A/CDK2  yang  menentukan  progresi siklus  sel  juga  ikut  meregulasi  duplikasi sentrosom  pada  sel  mamalia  pada  saat  transisi G1/S. Duplikasi sentrosom diikuti oleh duplikasi sentriol sehingga menyebabkan kelainan  mitosis  terkait  sentrosom  (Duensing, 2003).
Pada BE juga terjadi abnormalitas pada kromosom 7 yaitu berupa trisomi 7. Kromosom 7 memiliki protoonkogen c-erb-B yang mengkode  epidermal  growth  factor  receptor (EGFR).  Trisomy  kromosom  7  pada  BE menyebabkan overekspresi EGFR. Overekspresi  EGFR  dapat  ditemukan  pada kondisi pre-maligna (Garewall, 1990). Populasi sel  4N  (tetraploid)  merupakan  predisposisi perkembangan  aneuplodi  selama  progresi
neoplastik.  Inaktivasi  p53  berhubungan  dengan perkembangan  aneuploidi  dan  instabilitas genetik. Adanya spindle checkpoint pada siklus sel  dapat  mencegah  instabilitas  genetik  akibat paparan bahan genotoksik dengan cara menghentikan siklus sel (Galipeau et al., 1996).

## Sitogenetika pada Barret’s Esophagus
Dua  peneliti  utama  yang  melakukan studi  model  dinamis  BE  carcinogenesis  (BEC) in-vitro adalah  Das  et  al  (2011) serta  Bajpai et al  (2012).  Keduanya  melakukan  studi  pada model dinamis BEC in-vitro yang dikembangkan dari naïve sel BAR-T jinak yang mendapat  paparan  asam  (pH  4)  dan  empedu glycochenodeoxycolic  acid  (GCDA)  selama  5 menit setiap hari selama sekitar satu tahun. Sel BAR-T  merupakan  hTERT  immortal  dari Barrett’s  epithelium  cell  line.    Bajpai  et  al memberikan  paparan  asam  dan  empedu, glycochenodeoxycholic  acid  pada  pH  4  (B4),
selama  5  menit  setiap  hari  pada  sel  BAR-T. Perlakuan  ini  dilakukan  selama  lebih  dari  65 minggu  untuk  membuat  model  BEC.  Sel  tanpa perlakuan  ditumbuhkan  paralel  sebagai  kontrol .  Setiap  8-10  minggu  sel  dari  grup  kontrol  dan perlakuan  dilakukan  karyotyping.  Analisis sitogenetik dilakukan pada berbagai titik waktu, dimulai  dengan  sel  BAR-T  naïve  atau  yang belum  mendapat  perlakuan  sampai  dengan  78 minggu  perlakuan.  Analisis  sitogenetik  juga dilakukan  pada  kontrol  dan  9  koloni  yang dikembangkan pada soft agar yang diambil dari sel BAR-T yang dipapar B4 selama 78 minggu. Karyotyping  dilakukan  dengan  menggunaan pewarnaan  Trypsin  G-binding  yang  merupakan modifikasi  dari  metode  Seabright’s.  Hasil karyotipe pada perlakuan 18 minggu didapatkan 5 variasi klonal berdasarkan perbedaan karyotipe (Gambar 1).
Gambar 1. Analisis karyotype sel BAR-T yang dipapar asam dan empedu pada berbagai ttik waktu yang berbeda (Bajpai et al., 2012)
Hasil  perubahan  profil  sitogenetika  sel line BAR-T dari gambar 1 diperjelas pada tabel 1.  Sel  BAR-T  pada  model  BEC  mempunyai abnormalitas kromosom, yaitu hilangnya
kromosom  Y,  translokasi  diantara  lengan panjang kromosom
10
dan 16
[t(10;16)(q24;q24)],  duplikasi  lengan  panjang kromosom  11,  dup(11)  (q13q25)  dan  trisomy 19 dan 20 tetapi mempertahankan
isokromosom 8q. Sel kontrol tidak menunjukkan  abnormalitas  ini.  Perubahan kromosom  yang  diobservasi  pada  sel  BEC merupakan  akibat  dari  paparan  asam  dan
empedu  jangka  lama  yang  menyebabkan kerusakan DNA (Bajpai et al., 2012).

## Tabel 1. Perubahan profil sitogenetik cell line BAR-T akibat paparan asam dan empedu (pH4) kronis
intermiten (Bajpai et al., 2012)
Bajpai et al. juga melakukan analisa sitogenetik pada 9 koloni sel BAR-T. Sekitar 11% dari sel  BAR-T  yang  dipapar  dengan  B4  selama  78  minggu  membentuk  koloni  pada  soft  agar (110 dari 1000  sel  pada  plate).  Hasilnya  menunjukkan  bahwa  masing-masing  koloni  yang  tumbuh  pada  soft agar  tersebut  merepresentasikan  transformasi  klon  yang  independen.  Karena  masing-masing  koloni tidak  menggambarkan  kesamaan  kariotipe  dengan  sel  induk  B4  78  minggu  (gambar  4).  Koloni  ini memiliki  karyotipe:  48,  X,-Y,  +7,  i(8)(q10),  t(10;16)(q24;q24),  dup(11)(q13q25),  +19,  +20.  Dapat dilihat  adanya  karakteristik  tambahan  berupa  trisomi  7  yang  tidak  ditemukan  pada  sel  induk  B4  78 minggu.  Sehingga  trisomi  7  diduga  berperan  penting  dalam  pembentukan  koloni  pada  soft  agar (Bajpai et al., 2011).

## Tabel  2.  Profil  sitogenetik  koloni  yang  diturunkan  dari  sel  BAR-T  yang  mendapat  paparan  A+B
selama 78 minggu (Bajpai et al., 2012)
Analisis  sitogenetik  yang  dilakukan  oleh  Bajpai  et  al.  pada  sel  kontrol,  didapatkan  hasil adanya  kesamaan  kariotipe  dengan  sel  naïve  (tabel  3).  Pada  kontrol  76  minggu  sel  BAR-T mempertahankan kromosom Y, tetapi pada model BEC terjadi kehilangan kromosom Y pada awal 18 minggu. Penambahan segmen kromosom add (7p) dan add (20q) dan perkembangan poliploidi pada kontrol  tidak  merubah  bentuk  sel  karena  sel  tidak  mampu  membentuk  koloni  pada  soft  agar  dan dianggap sebagai sel non-neoplastik (Bajpai et al., 2012).
Tabel 3. Profil sitogenetik pada sel BAR-T kontrol selama kultur jangka panjang (Bajpai et al., 2012)
Bajpai  et  al.  kemudian  melakukan analisis  STR  (small  tandem  repeat)  pada  sel naïve  dan  sel  BAR-T  78  minggu  untuk menghilangkan  kontaminasi  cell  line  selama kultur jangka  panjang.  STR  dilakukan  dengan menggunakan  10  marker  untuk  menganalisa kedua  grup  sel.  Cell  line  BAR-T  diturunkan dari pasien laki-laki yang memiliki kromosom X  dan  Y  seperti  pada  sel  naïve  dan  kontrol. Amelogenin Y tidak terdeteksi pada sel BAR- T  78  minggu.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa telah  terjadi  kehilangan  kromosom  Y  selama transformasi sel (tabel 4) (Bajpai et al., 2012). Tabel  4.  Profil  STR  pada  cell  line  BAR-T (Bajpai et al., 2012)
Das  et  al.  melakukan  penumbuhan koloni  dari    sel  BAR-T  yang  telah  dipapar Hydrochloric acid dan glycochenodeoxycholic acid    selama  5  menit  setiap  hari  pada  special supplemented  keratinocyte  medium  2.    Dari penelitian sebelumnya dikatakan bahwa waktu 5 menit cukup untuk menginduksi jalur sinyal tranduksi  sebagai  regulasi  sel  tanpa  merusak sel.  Sel  BAR-T  pada  78  minggu  paparan  B4 ditumbuhkan  pada  soft  agar  untuk  dilihat pertumbuhan koloninya. Dilakukan penumbuhan  koloni  sebanyak  9  koloni independen  pada  soft  agar  yang  diambil  dari 78  minggu  paparan  B4  pada  sel  BAR-T. Pertumbuhan koloni sel BAR-T mulai tampak pada  minggu  ke  58.  Jumlah  koloni,  baik  pada koloni  kecil  (<1mm)  maupun  besar  (>1mm), secara  progresif  meningkat  sejalan  dengan makin  lamanya  paparan  dengan  asam  dan empedu (gambar 2) Sekitar 11% dari sel BAR- T  yang  dipapar  dengan  B4  selama  78  minggu membentuk  koloni  pada  soft  agar  (110  dari 1000 sel pada plate) (Das et al., 2011).
Gambar 2. Pembentukan koloni sel BAR-T pada soft agar akibat paparan B4 selama 65
minggu (Das et al., 2011)
Das el al. melakukan injeksi sel BAR- T  10 7 yang  telah  diberi  perlakuan  dengan Hydrochloric acid dan glycochenodeoxycholic acid. Hasilnya menunjukkan adanya
pertumbuhan tumor pada tikus setelah diinjeksi  selama  3  minggu.  Sebagai  kontrol adalah  tikus  yang  mendapatkan  injeksi  sel BAR-T tanpa perlakuan (gambar 3).
Gambar 3. Injeksi sel BAR-T yang telah dipapar dengan Hydrochloric acid dan glycochenodeoxycholic acid  selama 67 minggu dapat menumbuhkan tumor pada tikus setelah mendapat injeksi selama 3 minggu
Laboratorium NeoGenomics menggunakan  FISH  (Fluoresence  in  situ Hybridization),  salah  satu  bentuk  sitogenetika yang  menggunakan  teknik  fluoresen,  untuk mengidentifikasi  pasien  BE  yang  memiliki resiko  tinggi  menjadi  EAC.  FISH  memiliki  4 penanda (probe) terhadap adanya penambahan maupun  kehilangan    MYC  (8q24),  p16 (CDKN2A  at  9p21),  HER2  (ERBB2  at 17q12), dan ZNF217 (20q13) yang merupakan penanda  BE  dengan  resiko  tinggi  menjadi EAC.  NeOSITE  BE  merupakan  pemeriksaan
FISH  menggunakan  sampel  yang  berasal  dari bilasan  sitologi  Barrett’s  esophagus  untuk membedakan  kasus  dengan  resiko  tinggi kanker  dengan  resiko  rendah.  FISH  juga memiliki  keunggulan  dibanding  biopsi  dalam hal teknik pengumpulan sampel, dimana FISH dapat dilakukan dengan cepat dan menjangkau area pemeriksaan yang luas karena pengumpulan  sampel  FISH  dilakukan  dengan menggunakan  bilasan  esofagus.  Pemeriksaan ini  dapat  membandingkan  adanya  kelebihan ataupun  kehilangan  kromosom  dari  sampel pasien  yang  diduga  mengalami  EAC  atau
high-grade displasia dengan low-grade dysplasia  dan  non-dysplasia.  Tes  ini  juga dapat  menentukan  prognosis  BE.  NeoSITE B.E.  mampu  mengidentifikasi  abnormalitas genetik pada pasien dengan BE sehingga dapat ditentukan  penanganan  tambahan  selanjutnya maupun  terapi  yang  akan  diberikan.Tes  ini memiliki  sensitivitas  86%  dan  spesifitas  67% untuk  membedakan  kelompok  dengan  resiko tinggi  dan  resiko  rendah  (NeoGenomic Laboratory, 2013).
Gambar 4. Perbedaaan sel esofagus normal dan abnormal dengan menggunakan FISH (NeoGenomic Laboratory, 2013).
Berbagai  penelitian  pada  dekade terakhir  telah  membuktikan  hubungan  antara keempat  marker  yang  dijadikan  sebagai probe dengan progresifitas BE. Kemampuan keempat  probe  untuk  membedakan  berbagai derajat  BE  pertama  kali  diperkenalkan  oleh Brankley  pada  tahun  2006  (NeoGenomic Laboratory, 2013).
.
Analisis  Hasil  Sitogenetika  pada  Barret’s

## Esophagus
Penelitian  sitogenetik  yang  dilakukan oleh  Menke  Pluymers  et  al.  pada  tahun  1996
terhadap 37 kasus adenokarsinoma esophagus, menunjukkan  bahwa  terdapat  abnormalitas karyotipe,  yaitu  11  kasus  menunjukkan perubahan  yang  kompleks  dan  multiple;  8 kasus menunjukan satu atau sedikit perubahan. Perubahan jumlah kromosom yang paling  sering  terjadi  adalah  akibat  kehilangan kromosom  4,18,  21,  dan  Y.  Sedangkan perubahan  struktur  nampak  pada  13  kasus. Perubahan  struktur  paling  sering  terjadi  pada lengan 1p, 3q, 11q dan 22p. Kehilangan lengan kromosom  paling  sering  terjadi  pada  1p, sedangkan  lengan  kromosom  yang  sering
mengalami  penambahan  adalah  11p,  22p  dan i(3q) (Pluymers et al., 1996).
Paparan  kronis  sel  terhadap  stres oksidatif  meningkatkan  instabilitas  genomik yang  ditandai  dengan  perubahan  jumlah  atau struktur kromosom. Beberapa hipotesis mendukung  peranan  abnormalitas  kromosom terhadap  progresi  keganasan.  Kombinasi instabilitas genetik dan ekpansi klonal mempunyai  peran  terhadap  progresifitas  BE menjadi  EAC.  Model  BEC  menunjukkan adanya instabilitas genomik dan seleksi/ekspansi klonal selama evolusi karyotipe.  Hal  ini  merupakan  perbedaan karakteristik  dari  sel  BAR-T  kontrol.  Model BEC  juga  menunjukkan  perubahan  morfologi dan neoplastik (Bajpai et al., 2012; Das et al., 2011).
Kebanyakan  sel  tumor  menunjukkan perubahan  atau  evolusi  karyotype  selama kultur jangka panjang. Tahap awal establishment  pada  cell  line  ditandai  dengan heterogenitas  karyotipik  akibat  instabilitas genomik. Klon yang beradaptasi untuk tumbuh pada kondisi paparan terseleksi sebagai sel line yang  mencapai  tahap  stabilisasi  dengan heterogenitas karyotype minimal (Bajpai et al., 2012; Das et al., 2011). Kebanyakan spesimen sel  yang  diambil  dari  biopsi  pasien  BE menunjukkan hilangnya kromosom Y. Abnormalitas  kromosom  dan  fenotip  ini dianggap sebagai karakteristik patogenesis BE berupa  sekuen  metaplasia-displasia-karsinoma (Bajpai  et  al.,  2012;  Schneider  and  Martin, 2004).
Pada  biopsi  Barrett’s  epithelium tampak trisomi 7 dengan disertai  peningkatan ekspresi gen epidermal growth factor receptor (EGFR)  yang  berlokasi  pada  kromosom  7. Peningkatan EGFR menyebabkan peningkatan ikatan  EGF.  Peningkatan  EGFR  mungkin berkaitan  dengan  peningkatan  pertumbuhan tumor  jaringan  padat.  Trisomi  7  yang didapatkan pada cell line dari koloni soft agar memperburuk    potensi  tumorigenik.  Hanya 11%  pada  78  minggu  sel  model  BEC  yang menunjukkan  abnormalitas  ini  (Garewall, 1990).
Pengulangan atau amplifikasi kromosom regio 11q13 sering ditemukan pada keganasan  payudara  dan  daerah  kepala-leher. Pada  keganasan  ini,  amplifikasi  daerah  11q13 memiliki  marker  prognostic  yang  dapat mengidentifikasi  subgroup  pasien  dengan resiko  tinggi  keganasan.  Gen  yang  terdapat
pada  kromosom  11,    INT2-FGFR3,  HSR1- FGF4 dan CCND1 (cyclin D1) merupakan gen yang  meregulasi transisi G1/S pada siklus sel. Karsinoma  sel  skuamosa  pada  esophagus dengan amplifikasi kromosom 11q13
mengindikasikan  amplifikasi  gen  CCNDI secara  simultan.  Duplikasi  lengan  panjang kromosom  11  menunjukkan  adanya  duplikasi beberapa tumor promoting gene yang berlokasi pada kromosom 11. Duplikasi daerah pada  lengan  panjang  kromosom  11  mungkin merupakan  tahap  awal  proses  transformasi (Bajpai et al., 2012).
Gangguan  siklus  sel  G1-S-G2-M menyebabkan terjadinya replikasi genom tanpa disertai  pembelahan  sel.  Endoreplikasi  sering tampak  pada  sel  kanker  dan  dianggap  sebagai precursor  aneuploidy  yang  menyebabkan onkogenesis. Poliploidi (populasi 4n) dianggap berhubungan  dengan  keadaan  pre-maligna epitelium  yaitu  sebagai  penanda  prediksi progresifitas.  Instabilitas  genom  meningkat dengan  bertambahnya  usia  pada  mamalia. Populasi 4n pada sel BAR-T menunjukkan ciri khas  fenomena  penuaan.  Belum  diketahui apakah  perkembangan  poliploidi  memang biasa  terjadi  pada  sel  imortal  hTERT  setelah kultur  jangka  lama  (1  tahun)  dan  dapat memberikan  keuntungan  sebagai  pertahanan hidup  bagi  sel.  Tetapi  pada  kelompok  kontrol tidak didapatkan tumorigenic karena sedikitnya jumlah gangguan pada gen spesifik kanker  atau  tekanan  seleksi  (Galipeau  et  al., 1996).
Penelitian  ini  memperkuat  fakta  yang ada  di  klinik  bahwa  perubahan  karyotipe  bisa dideteksi  sebelum  adanya  displasia  pada  BE. Beberapa  abnormalitas  genetik,  seperti  mutasi gen,  delesi  gen,  kehilangan  heterozigositas, penyimpangan metilasi, penyimpangan ekspresi  gen,  dan  penyimpangan  kromosom dianggap  sebagai  marker  untuk  diagnosis progresifitas BE (Bajpai et al., 2012).

## Kesimpulan
Paparan  asam  dan  empedu  jangka lama  menginduksi  gangguan  kromosom  dan seleksi  klonal  pada  sel  Barrett’s  epithelial (BAR-T)  dan  menyebabkan  perkembangan neoplasia  pada  model  BEC.  Perubahan kromosom  pada  BEC  mengawali  perubahan morfologi berupa displasia. Gangguan kromosom  bisa  dijadikan  penanda  awal progresifitas
Barrett’s Esophagus.
Kebanyakan gangguan kromosom yang
diidentifikasi berhubungan dengan kanker lain dan  berkaitan  dengan  progresifitas  neoplastik pada  model  BEC.  Perlu  dilakukan  validasi lebih lanjut secara in-vivo agar berguna secara klinik  untuk  diagnosis  BE  dan  progresifitas menjadi Adenocarcinoma Esophagus.

## Daftar Pustaka
Bajpai  M.,  Aviv  H.,  Das  K.M.,  2012.
Prolonged Exposure to Acid and Bile Induces  Chromosome  Abnormalities That Precede Malignant Transformation  of  Benign  Barrett’s Epithelium.  Molecular  Cytogenetics Journal 2012, 5:43. Diakses 20 April
2013
Barrett, M.T., Sanchez C.A., Prevo L.J., Wong D.J.,  Galipeau  P.C.,  Paulson  T.G.,
Rabinovitch  P.S.,  Reid  B.J.  1999. Evolution of Neoplastic Cell Lineages in Barrett Oesophagus.http://www.researchgate .net/publication/12978533_Evolution _of_neoplastic_cell_lineages_in_Bar rett_oesophagus.  Diakses  10  Mei
2013
Das,  K.M.,  Kong  Y.,  Bajpai  M.,  Kulkarni  D., Geng  X.,  Mishra  P.,  Banerjee  D.,
Hirshfield  K.  2011.  Transformation of  Benign  Barrett's  Epithelium  by
Repeated  Acid  and  Bile  Exposure Over  65  Weeks:  a  Novel  In  Vitro Model.  Int  J  Cancer.  2011  Jan 15;128(2):274-82.  Diakses  12  Mei
2013
Garewall,  H.,  Meltzer,  P.,  Trent,  J.,  Prabhala,
R., Sampliner, R., Korc, M. Epidermal  Growth  Factor  Receptor Overexpression  and  Trisomy  in  a Case of Barrett’s Esophagus. Digestive  Disease  and  Science,  Vol.
35 No. 9
Gonzales,  M,V.,  Artimez  M,L.,  Rodrigo  L., Lopez-Larrea  C.,  Menendez  M,J., Alvarez  V.,  Perez  R.,  Fresno  M,F.,
Perez  M,J.,  Sampedro  A.,  Coto  E.
1997. Mutation Analysis of  the p53,
APC, and p 16 Genes in the Barrett's Oesophagus, Dysplasia,
and
Adenocarcinoma.             J  Clin  Pathol 1997;50:212-217
Hvid-Jensen,  F.,  Pedersen,  L.,  Drewes,  AM., Sorensen,  HT.,  Funch-Jensen,  P. 2011.  Incidence  of  Adenocarcinoma
Among Patients with Barrett's Esophagus.  NEJM.  Diakses  12  Mei
2013 Galipeau,  PC.,  Cowan,  DS.,  Sanchez,  CA., Barret,  MT.,  Emond,  MJ.  1996.  17p (p53) Allelic Losses, 4N (G2/tetraploid) Populations, and Progression to Aneuploidy in Barrett's  Esophagus.  Proc.  Natl. Acad.  Sci.  USA  Vol.  93,  pp.  7081- 7084, July 1996.
Limoli,  C.L.,  Giedzinski,  E.,  Morgan,  WF., Swarts, SG., Jones, GDD., Hyun, W. 2003.  Persistent  Oxydative  Stress  in
Chromosomally Unstable Cells.
aacrjournal.org.  Diakses  14  Mei 2013 Lobo,  I.  2008.  Chromosome  Abnormalities and  Cancer  Cytogenetics.  Nature
Education . http://www.nature.com/scitable/topic page/Chromosome-Abnormalities- and-Cancer-Cytogenetics-879 Masters,  JR.,  Thomson,  JA., Daly-Burnsa, B., Reid,  YA.,  Dirks,  WG.,  Packer,
P., Toji,  LH., Ohno,  T., Tanabe, H., Arlett, CF., Kelland, LR., Harrison, M., Virmani, A., Wardn, TH., Ayreso, KL., Debenham, PG. 2001. Short Tandem Repeat Profiling Provides an International  Refrence  Standard  for Human Cell Lines. http://www.pnas.org/content/98/14/8 012.long. Diakses 12 Mei 2013
Modiano,  N;  Gerson,  LB.  2007.  Barrett’s Esophagus: Incidence, Etiology,
Pathophysiology,  Prevention  and Treatment.  NCBI  Journal.  Diakses 12 Mei 2013
McPhee, S.J., Papadakis, M.A., 2007. Current Medical  Diagnosis  and  Treatment, Forty-sixth  Edition.  United  States  of America: McGraw Hill Companies Ndraha,  S.  2014.  Penyakit  Refluks  Esofageal. Medicinus Vol. 27, No. 1 April 2014 NIDDK.  2008.  Barrett’s  Esohagus.  US Department  of  Health  and  Human Service. http://digestive.niddk.nih.gov/ddiseas es/pubs/barretts/
NeoGenomic  Laboratory.  2013.  NeoSITE™ B.E.
Barrett’s  Esophagus  FISH  Panel:  A
Diagnostic  Tool  for  Assessment  of
Genetic  Abnormalities  As  Indicators of Malignancy. http://www.neogenomics.com/neosit e-barretts-esophagus-fish-panel.htm
Oryu,  M.,  Mori,  H.,  Kobara,  H.,  Nishiyama, N.,  Fujihara,  S.,  Kobayashi,  M., Yasuda,  M.,  Masaki,  T.  2013.
Review  Article:  Differences  in  the Characteristics of Barrett’s Esophagus and Barrett’s Adenocarcinoma between the United Stateds and Japan. ISRN Gastroenterology
Pluymers  M.,  Marian  B.  E.,  Van  Drunen, Ellen;  Vissers,  Kees  J.;  Mulder,
Andries  H.;  Tilanus,  Hugo  W.; Hagemeijer, Anna. 1996. Cytogenetic  Analysis  of Barretts Mucosa and Adenocarcinoma of the Distal
Esophagus  and  Cardia.  Cancer Genetics & Cytogenetics. 90(2): 109-
117 Renoat, H. 2013. Asuhan Keperawatan GERD. Fakultas Ilmu Keperawatan Universitas Indonesia Timur Makassar
Schneider,  B.,  L.  and  Martin  M.,  K.  2004.
Destructive  cycles:  the  Role  of
Genomic  Instability  and  Adaptation in  Carcinogenesis.  Carcinogenesis Vol.  25  No.11.  Oxford  University Press Shields  HM,  Nardone  G,  Zhao  J,  Wang  W, Xing  Z,  Fang  D,  Jacobson  BC, Romero  Y,  Dvorak  K,  Goldman  A, Pellegrini CA, Wiley EL, Peura DA, Tatum  RP,  Schnell  TG.  2011. Barrett’s  Esophagus:  Prevalence and  Incidence  of  Adenocarcinomas. Annals of the New York Academy of Science.Issue:Barrett’s Esophagus: The  10 th OESO  World  Congress Preceedings UF Pathlab. 2009. ISCN (2005) Nomenclature Discontinued. http://pathlabs.ufl.edu/news/cytogene tics-news-iscn-discontinued.  Diakses 15 mei 2013 Walch,  AK.,  Zitzelsberger,  HF.,  Bruch,  J., Keller,  G.,  Angermeier,  D.,  Aubele, MM., Mueller, J., Stein, H., Braselmann, H., Siewert, JR., Höfler,
H.,  Werner,  M.  2000.  Chromosomal
Imbalances in Barrett’s Adenocarcinoma and the Metaplasia-Dysplasia-Carcinoma Sequence. Am J Pathol.