p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAUN GULMA SIAM
( Chromoleana odorata L.) DENGAN METODE
1,1-DIFENIL-2-PIKRILHIDRAZIL
Ajmi Saputra*, Abdul Gani, dan Erlidawati
Prodi Kimia FKIP Universitas Syiah Kuala, Darussalam Banda Aceh 23111
*Corresponding Author: ajmi19sp@gmail.com
Abstrak. Telah  dilakukan  penelitian  uji  aktivitas  antioksidan  daun  gulma  siam  ( Chromoleana odorata L.)  dengan  metode  1,1-difenil-2-pikrilhidrazil  (DPPH).  Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder, golongan flavonoid dan aktivitas antioksidan yang  terdapat  dalam  daun  gulma  siam.  Sebanyak  315  g  daun  gulma  siam  kering  yang  sudah dihaluskan, dimaserasi dengan etanol 95% diperoleh 100 g ekstrak kental etanol. Sebanyak 70 g ekstrak  kental  etanol  difraksinasi  dengan  pelarut  metanol  dan  n-heksana  menghasilkan  fraksi kental  metanol  30,72  g  dan  n-heksana  14,62  g.  Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol menunjukkan  positif  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin  dan  steroid.  Fraksi metanol  positif  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan  tanin.  Fraksi  metanol dilakukan isolasi dengan metode kromatografi kolom menggunakan eluen n-heksana : etil asetat : diklorometana  (1:1:1)  sebagai  fase  gerak  pertama,  kemudian  ditingkatkan  gradien  kepolarannya untuk menghasilkan pemisahan secara sempurna. Hasil isolasi diperoleh 8 fraksi (A, B, C, D, E, F, G,  H)  dan  hasil  analisis  secara  KLT  menunjukkan  fraksi  A  dan  B  positif  mengandung  senyawa flavonoid. Senyawa flavonoid yang terkandung dalam fraksi A diperkirakan golongan isoflavon dan fraksi  B  diperkirakan  golongan  isoflavon,  flavon,  flavonol  dan  kalkon.  Analisis  FTIR  menunjukkan fraksi A dan B mengandung gugus fungsi N-H, O-H (asam karboksilat), C=O (aldehid  dan ester), C=C, C-H, C-X (flourida), C-O dan C-N. Hasil pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH,  diperoleh Inhibitor  concentrasi (IC 50 )  untuk  ekstrak  etanol  15,5067  ppm,  fraksi  metanol 9,5671  ppm,  fraksi  A  82,7808  ppm  dan  fraksi  B  16,2336  ppm,  sedangkan  untuk  pembanding (asam  askorbat)  0,8913  ppm.  Dengan  demikian,  dapat  disimpulkan  aktivitas  antioksidan  yang paling kuat terdapat pada  fraksi metanol.
Kata kunci : daun gulma siam, Chromoleana odorata L., flavonoid, DPPH.
Abstract. The antioxidant activity of siam weed leaf ( Chromoleana odorata L.) has been done with 1,1-diphenyl-2-picrilhidrazil  (DPPH)  method.  This  study  is  intended  to  know  the  the  content  of secondary  metabolite  compounds,  the  group  of  flavonoid  and  antioxidant  activity  that  found  in siam  weed  leaf.  The  315  g  dry  siam  weed  leaf  that  was  refined,  macerated  with  ethanol  96% produced 100 g of ethanol viscous extract. The 70 of ethanol viscous extract was fractionated with methanol  and  n-hexane  solvent  produced  30,72  g  of  methanol  viscous  fraction  and  14,62  g  n- hexane. The results of phytochemical screening of ethanol extract showed positive  that contained compound  of  alkaloids,  flavonoids,  saponins,  tannins  and  steroids.  Methanol  fraction  showed positive  that  contained  compound  of  alkaloids,  flavonoids,  saponins  and  tannins.  The  isolation  in methanol fraction was made by coloumn chomatography method using eluent n-hexene : acetate ethyl : dichloromethane (1:1:1) as first mation phase. Then the polarity gradient was increased to produce complete separation. The result of  isolation produced 8 fractions (A, B, C, D, E, F, G, H) and  the  analysis  results  with  TLC  showed  fraction  of  A  and  B  was  positive  contain  flavonoids compound.  Flaconoids  compound  that  was  contained  in  fraction  A  was  estimated  isoflvone  group and  fraction  B  was  estimated  group  os  isoflavone,  flavone,  flavonol  and  chalcone.  Analysis  FTIR showed  that  the  fraction  of  A  and  B  containing  function  group  N-H,  O-H  (carboxylic  acid),  C=O (aldehyde  and  ester),  C=C,  C-H,  C-X  (flouride),  C-O  and    C-N.  The  result  of  antioxidant  activity test used DPPH method, obtained inhibitor concentration (IC 50 ) for 15,5067 ppm of ethanol extract, 9,5671 of methanol fraction, 82,7808 ppm of fraction A and 16,2336 ppm of fraction B, while for comparison  (ascorbic  acid)  is  0,8913  ppm.  This,  it  can  be  concluded  that  strongert  antioxidant activity was found in methanol fraction.
Keywords: siam weed leaf, Chromoleana odorata L., DPPH.
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500
www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  gulma  siam  adalah  tumbuhan  yang  mudah  ditemukan  di  mana  saja karena sifatnya yang dapat tumbuh di sembarang tempat, seperti di pinggir jalan, pinggir sungai, pinggir gunung, hutan dan daerah tanaman perkebunan. Penamaan gulma siam sekarang adalah Chromoleana odorata bersinonim dengan nama sebelumnya Eupatorium odoratum famili  Asteraceae  (Ngozi,  dkk.,  2009).  Di  Indonesia,  selain  dikenal  dengan nama  gulma  siam  juga  disebutkan  dengan  nama  kurinyuh,  laruna,  kopasanda,  pokok selaput tunggul dan tekelan. Khususnya di Aceh sering disebutkan dengan nama sikhoh- khoh, seurapok dan serunei.
Gulma siam merupakan tumbuhan penganggu yang sangat merugikan tanaman di sekitarnya,  karena  kompetitor  dalam  penyerapan  air  dan  unsur  hara.  Ia  menjadi  salah satu  penyebab  turunnya  hasil  panen  pada  tanaman  perkebunan,  seperti  cabai,  tebu, kelapa,  kelapa  sawit  dan  lain-lain.  Namun,  di  sisi  lain  tumbuhan  gulma  siam  memiliki berbagai  potensi  bermanfaat  bagi  kehidupan  manusia,  di  bidang  pertanian  dapat digunakan  sebagai  pupuk  organik,  biopestisida  serta  herbisida  dan  di  bidang  medis secara  tradisional  dapat  digunakan  sebagai  obat  luka,  diabetes,  batuk  serta menghentikan pendarahan.
Daun  gulma  siam  kaya  akan  polifenol,  tanin,  saponin,  terpenoid,  flavonoid (kalkon,  flavon,  flavonol  dan  auron),  alkaloid  dan  glikosida  sianogenik  (Rofida  dan Nurwahdaniati,  2015;  Ngozi,  dkk.,  2009).  Senyawa  polifenol  dan  flavonoid  merupakan antioksidan alami yang banyak terdapat di tumbuhan. Golongan flavonoid yang memiliki aktivitas  antioksidan  meliputi  flavon,  flavonol,  isoflavon,  kateksin,  flavonol  dan  kalkon (Hermiati, dkk., 2013).
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  menyumbang  satu  atau  lebih elektron  kepada  radikal  bebas,  sehingga  radikal  bebas  dapat  distabilkan  dan  proses oksidasi  berkelanjutan  dapat  dihentikan.  Tubuh  manusia  secara  alami  mampu memproduksi  antioksidan,  seperti  glutation  peroksidase,  superoksida  dismutase  dan gluation  s-tranferase  (Ramdani,  dkk.,  2013).  Namun,  kemampuan  ini  terbatas  dan semakin  berkurang  seiring  bertambah  usia,  sedangkan  reaksi  oksidasi  yang  mengawali munculnya  radikal  bebas  terjadi  setiap  saat.  Keadaan  ini  semakin  bertambah  buruk ketika  tubuh  mengalami  stres  oksidatif,  yaitu  dimana  jumlah  radikal  bebas  melebihi kapasitas kemampuan netralisasi antioksidan.
Terbentuknya radikal bebas pada organisme hidup secara endogenus yang berasal dari  proses  metabolik  tubuh,  seperti  respirasi  aerobik,  leukosit  polimorfonuleus, makrofag dan peroksisom, sedangkan secara eksogenus yang berasal dari lingkungan di luar tubuh organisme, yaitu radikal bebas dapat berasal dari asap rokok, radiasi ionisasi, polusi, larutan  organik  dan  pestisida  (Mu’nisa,  dkk.,  2012).  Radikal  bebas  adalah  suatu atom, gugus atau molekul yang memiliki satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luar. Radikal bebas dapat memicu berbagai penyakit degeneratif seperti diabetes, artritis, hipertensi, jantung dan aterosklerosis (Tapan, 2005 dalam Ramdani dkk., 2013).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini  dilakukan  di Laboratorium  Pendidikan  Kimia  Fakultas  Keguruan  dan Ilmu Pendidikan dan Teknik Kimia Univeritas Syiah Kuala Darussalam Banda Aceh, pada bulan  Februari  sampai  dengan  Juni  2017.  Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500
www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
adalah  daun  gulma  siam  segar  sebanyak  1,3  kg  yang  didapatkan  di  Gampong  Bugak Krueng Kecamatan Jangka Kabupaten Bireuen Provinsi Aceh.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  gelas  kimia,  gelas  ukur, corong kaca, corong pisah, tabung reaksi, labu ukur, neraca analitik, neraca tiga lengan, rotary evaporator, kertas saring, spatula, chamber , pipet mikro, pipet tetes, seperangkat alat  kromatogrofi kolom, spektronic 20D+ dan spektrofotometer FTIR.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  gulma  siam, metanol,  etanol,  n-heksana,  etil  asetat,  diklorometana,  HCl,  NaOH,  Mg,  FeCl 3 ,  AlCl 3 , pereaksi  Liebermant    Burchard,  pereaksi  Mayer,  Pereaksi  Hager,  Pereaksi  Dragendorf, pereaksi  Wagner,  pereaksi  Borchard,  plat  silika  gel  60 F 254 ,  silika  gel  60  (0,2-0,5  mm), asam askorbat dan 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH).

## Preparasi Sampel dan Ekstraksi
Tumbuhan  gulma  siam  yang  telah  dipanen,  disortir  untuk  diambil  daunnya  saja sebanyak  1,3  kg,  diracang  kecil-kecil  dan  dikering-anginkan  selama  11  hari  dalam keadaaan terkontrol dan tanpa terkena sinar matahari langsung. Daun gulma siam yang sudah  kering  dihancurkan  dengan  blender,  sehingga  diperoleh  berbentuk  bubuk. Selanjutnya, dimaserasi menggunakan pelarut etanol 95% selama 3x24 jam, setiap 1x24 jam pelarut diganti. Filtrat dikumpulkan, dievaporasi pada suhu 50 o C dengan kecepatan 45 rpm, sehingga diperoleh ekstrak kental etanol daun gulma siam.

## Skrining Fitokimia
Uji Alkaloid dilakukan dengan cara sebanyak 4 mL ekstrak etanol ditambah 4 mL NH 3 10%  dan  4  mL  CHCl 3 .  Digojok,  didiamkan  sampai  terbentuk  2  lapisan.  Dipipet lapisan atas (lapisan CHCl 3 ), ditambah 1 mL HCl 2 N, digojok dan didiamkan. Kemudian dibagi 6 bagian dalam plat tetes. Satu bagian sebagai pembanding dan 5 bagian lainnya diuji dengan pereaksi Dragendorf, Lieberman Burchard, Wagner, Hager dan Mayer. Hasil positif  alkaloid  jika  dengan  pereaksi  Dragendorf  akan  terbentuk  endapan  coklat  jingga atau  merah  jingga,  dengan  pereaksi  Borchard  dan  Wagner  terbentuk  endapan  coklat, dengan pereaksi Hager mengalami perubahan warna larutan dan dengan pereaksi Mayer terbentuk endapan putih kekuningan/keruh.
Uji  flavonoid  dilakukan  dengan  cara  tiga  bagian  plat  tetes  masing-masing dimasukkan  1  mL  ekstrak  etanol.  Bagian  1  ditambahkan  larutan  NaOH  10%  beberapa tetes,  terjadinya  perubahan  warna  menunjukan  positif  fenol.  Bagian  2  ditambahkan sedikit  serbuk  magnesium  dan  1-2  tetes  HCl  pekat,  terbentuknya  warna  jingga menunjukan  adanya  flavonoid  golongan  flavonol  dan  flavanon.  Bagian  3  ditambahkan dengan  HCl  pekat  beberapa  tetes,  terbentuknya  warna  merah  menunjukan  adanya flavonoid golongan antosianidin. Uji tanin dilakukan dengan cara sebanyak 1 mL ekstrak etanol ditambahkan 1-2 tetes FeCl 3 1%. Terbentuk larutan hijau kehitaman positif tanin katekol dan biru kehitaman positif tanin galat.
Uji steroid dan triterpenoid dilakukan dengan cara sebanyak 1 mL ekstrak etanol ditambahkan  1-2  tetes  pereaksi  Liebermant  Burchard.  Terbentuk  larutan  hijau-biru menunjukkan positif steroid dan merah-ungu menunjukkan positif triterpenoid.
Uji saponin dilakukan dengan cara sebanyak 2 mL ekstrak etanol  dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  2  mL  H 2 O,  dikocok  kuat  secara  vertikal.  Terbentuk buih/busa dan bertahan sampai 15 menit menunjukkan positif saponin.

## Fraksinasi dengan Pelarut
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
Sebanyak 10 gram ekstrak kental etanol dilarutkan dalam 100 mL metanol teknis, kemudian  dipartisi  dengan  100  mL  n-heksana  teknis.  Digojok,  didiamkan  sampai terbentuk  2  lapisan,  dipisahkan.  Lapisan  bawah  (metanol)  dipartisi  ulang  dengan heksana teknis sampai lapisan n-heksana tidak berwarna lagi. Hasil fraksinasi dipekatkan dengan  rotary  evaporator  (Sembiring,  dkk.,  2016;    Sariningsih,  dkk.,  2015;  Anastasia, dkk., 2016). Selanjutnya, kedua fraksi dilakukan uji flavonoid dengan tiga jenis uji, yaitu NaOH  10%,  Wilstatter  dan  Bate-Smith.  Fraksi  yang  menunjukkan  paling  banyak  positif dilakukan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT),  kromatografi  kolom  dan  diuji  aktivitas antioksidan.

## Kromatografi Lapis Tipis
Fase diam yang digunakan adalah plat silika gel 60 F 254 dan eluen yang digunakan adalah  pelarut  n-heksana,  etil  asetat,  diklorometana  dan  metanol  serta  campuran  dari pelarut-pelarut  tersebut.  Hasil  KLT  yang  didapatkan  diamati  pola  pemisahan  yang terbentuk  secara  langsung.  Jika  pola  tidak  terlihat  maka  digunakan  lampu  UV  254  nm dan 365 nm, kemudian dihitung harga R f . Perbandingan eluen yang memiliki pemisahan noda terbaik akan digunakan pada kromatografi kolom.

## Kromatografi Kolom
Sebanyak 5 gram sampel dimasukkan dengan hati-hati ke dalam kolom, kemudian dielusi  dengan  eluen  yang  memiliki  pemisahan  terbaik  pada  KLT.  Eluen  diatur  terus- menerus  sampai  terjadi  pemisahan.  Eluat  ditampung  pada  tiap  botol  penampung  fraksi sebanyak  10  mL/fraksi.  Fraksi  tersebut  dilakukan  KLT  penggabungan  serta  sekaligus diidentifikasi  senyawa  flavonoid.  Fraksi  yang  menunjukkan  positif  flavonoid  dilanjutkan ke FTIR dan dilakukan uji aktivitas antioksidan.

## Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Larutan  DPPH  dibuat  1  mM  sebagai  larutan  induk,  kemudian  diencerkan  sampai 0,05 mM dalam labu 10 mL sebagai larutan kontrol. Diukur arsobansinya pada panjang gelombang  500-560  nm.  Ditentukan  panjang  gelombang  maksimum,  digunakan  untuk pengukuran  absorbansi  larutan  uji.  Sampel  yang  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan adalah ekstrak etanol dan fraksi positif flavonoid. Larutan uji sampel divariasikan 5, 10, 15 dan 20 ppm. Dibuat dengan cara mengambil larutan induk 100 ppm sebanyak 0,5; 1; 1,5  dan  2  mL,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  mL.  Ke  dalam  labu  ukur masing-masing ditambahkan 0,5 mL larutan DPPH  1 mM, kemudian dicukupkan dengan metanol  sampai  tanda  batas.  Campuran  tersebut  digojok  hingga  homogen,  diinkubasi selama  30  menit.  Digunakan  asam  askorbat  sebagai  pembanding  dengan  konsentrasi divariasikan 1, 2, 3 dan 4 ppm, dilakukan dengan perlakuan yang sama (Anastasia, dkk., 2016;  Katrin,  dkk.,  2012;  Sembiring,  dkk.,  2012).  Setelah  didapatkan  absorbansi ditentukan persen inhibisi menggunakan persamaan berikut:
% Inhibisi = A 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 −A 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 A 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100
Selanjutnya,  dibuat  kurva  dan  ditentukan  persamaan  garis  linearnya.  Kemudian ditentukan harga IC 50 , dimana Y = 50.
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500
www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebanyak 1,3 kg daun gulma siam segar dikering-anginkan, diperoleh daun gulma siam  kering  315  gram.  Kemudian  ukurannya  dihaluskan  dengan  blender,  sehingga menjadi bubuk. Tujuan dihaluskan untuk memperbesar luas permukaan sentuh, supaya interaksi zat cairan saat ekstraksi semakin besar. Dimaserasi dengan pelarut etanol 95% selama  3x24  jam,  setiap  1x24  jam  pelarut  diganti.  Filtrat yang  didapatkan  dievaporasi, sehingga diperoleh ekstrak kental etanol daun gulma siam 100 gram dengan persentase rendemennya 31,746. Ekstrak etanol daun gulma siam dilakukan skrining fitokimia untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  dalam  sampel  sebelum  melakukan  analisis lebih mendalam. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol dapat dilihat pada Tabel 1.
Fraksinasi ekstrak etanol dengan pelarut metanol dan n-heksana bertujuan untuk memisahkan  senyawa  polar  dengan  non  polar.  Sebanyak  70  g  ekstrak  etanol difraksinasikan  dengan pelarut metanol dan n-heksana. Hasil fraksinasi yang didapatkan setelah dipekatkan adalah 30,72 gram untuk fraksi metanol dan 14,62 gram untuk fraksi n-heksana. Selanjutnya, kedua fraksi tersebut dilakukan uji flavonoid dengan 3 jenis uji, yaitu uji NaOH, uji Wistatter dan uji Bate-Smith. Fraksi yang menunjukkan paling banyak positif flavonoid adalah fraksi metanol, sedangkan fraksi n-heksana semua negatif. Fraksi metanol  dipilih  untuk  dilakukan  kromatografi  kolom  dan  uji  aktivitas  antioksidan. Mengingat  adanya  uji  aktivitas  antioksidan  dan  senyawa  yang  berfungsi  sebagai antioksidan  bukan  flavonoid  saja,  maka  fraksi  metanol  dilakukan  identifikasi  senyawa metabolit  sekunder  lainnya.  Hasil  skrining  fitokimia  fraksi  metanol  dapat  dilihat  pada Tabel 1. Hasil skrining menunjukkan golongan senyawa yang terdapat di dalam ekstrak etanol  maupun  fraksi  metanol  dengan  tingkatan  indikasinya  berdasarkan  pereaksi- pereaksi  warna  yang  digunakan.    Dari data  Tabel  1  diketahui  bahwa  baik  pada  ekstrak etanol  maupun  fraksi  metanol  terdapat  indikasi  kuat  akan  adanya  senyawa  alkaloid, flavonoid, saponin, dan tannin.

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak etanol dan Fraksi Metanol
Uji Hasil Uji Ekstrak Etanol Hasil Uji Fraksi Metanol Alkaloid - Dragendorf (+) Endapan coklat jingga, larutan kuning (+) Endapan coklat jingga, larutan kuning - Borchard (-)  Larutan keruh (-)  Larutan keruh - Wagner (+) Endapan coklat, larutan kuning (+) Endapan coklat, larutan kuning - Hager (+) Larutan kuning semakin pekat (+) Larutan kuning semakin pekat - Mayer (+) Endapan putih kekuningan (+) Endapan putih kekuningan Flavonoid - NaOH (+) Larutan merah jingga (+) Larutan merah-jingga - Bate Smith (+) Larutan merah jingga (+) Larutan merah-jingga - Wistatter (+) Larutan merah-jingga (+) Larutan merah-jingga Saponin (+) Berbusa (+) Berbusa Tanin (+) Larutan hijau kehitaman (+) Larutan hijau kehitaman Steroid (+) Larutan hijau biru (-)  Larutan hijau/tetap Triterpenoid (-)  Larutan hijau biru (-)  Larutan hijau/tetap Keterangan: (+) terdeteksi dan (-) tidak terdeteksi
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500
www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
KLT  merupakan  tahap  pertama  yang  harus  dilakukan  sebelum  dilakukan kromatografi  kolom.  Tujuan  dilakukan  KLT  sebelum  kromatografi  kolom  adalah  untuk mengetahui  eluen  terbaik.  Menurut  Day  dan  Underwood,  (2002)  KLT  dapat  digunakan untuk isolasi senyawa murni dalam skala kecil, identifikasi senyawa secara kromatografi, pencarian eluen terbaik untuk kromatografi kolom dan analisis fraksi hasil kromatografi kolom.  Fase  diam  KLT  yang  digunakan  adalah  plat  silika  gel  60  F 254 .  Ia  bersifat  polar, sehingga pelarut yang mempunyai kepolarannya rendah akan merambat terlebih dahulu mendahului pelarut yang kepolarannya lebih tinggi darinya (Markham, 1988). Eluen (fase gerak)  yang  digunakan  secara  berturut-turut  adalah  n-heksana  (n-Hex)  (1),  etil  asetat (EtOAc)  (2),  diklorometatana  (DCM)  (3),  metanol  (MeOH)  (4),  MeOH-n-Hex  (8:2)  (5), MeOH-EtOAC-n-Hex (2:1:1) (6), MeOH-EtOAc (1:1) (7), EtOAc-n-Hex (3:1) (8), EtOAc- n-Hex  (2:1)  (9),  EtOAc-n-Hex  (1:2)  (10),  EtOAc-n-Hex  (3:2)  (11),  EtOAc-n-Hex  (1:1) (12)  dan  EtOAc-DCM-n-Hex  (1:1:1)  (13).  Hasil  KLT  dengan  eluen  tersebut  secara berturut-turut dapat dilihat pada Gambar 1.
(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9)  (10)  (11)  (12)  (13)
Gambar 1 . Hasil KLT dengan Beberapa Eluen
Berdasarkan  hasil  KLT  menggunakan  beberapa  eluen  tersebut  (Gambar  1)  yang diamati  secara  langsung,  terdapat  3  eluen  yang  menghasilkan  pemisahan  noda  paling banyak  yaitu  EtOAc-n-Hex  (1:1),  EtOAc-n-Hex  (3:2)  dan  EtOAc-DCM-n-Hex  (1:1:1). Hasil KLT ketiga eluen tersebut dipilih untuk diamati dibawah lampu UV 254 nm dan 365 nm dan dihitung harga R f , sehingga dapat ditentukan eluen mana yang terbaik. Menurut Day  dan  Underwood,  (2002)  eluen  terbaik  adalah  eluen  yang  menghasilkan  paling banyak noda yang tidak berekor dan mempunyai perbedaan harga R f yang cukup lebar. Harga R f hasil KLT fraksi metanol dengan eluen kategori baik dapat dilihat pada Tabel 2.
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
Tabel 2 . Harga R f Hasil KLT Fraksi Metanol dengan Eluen Kategori Baik
No EtOAc-n-Hex (1:1) EtOAc-n-Hex (3:2) EtOAc-DCM-n-Hex (1:1:1) Jarak noda (cm) R f λ (nm) Jarak noda (cm) R f λ (nm) Jarak noda (cm) R f λ (nm) 1. 1,9 0,38 365 1,9 0,38 254 0,6 0,12 365 2. 1,9 0,38 254 1,9 0,38 365 0,7 0,14 254 3. 2,4 0,48 365 2,3 0,46 254 1,1 0,22 254 4. 2,7 0,54 254 2,7 0,54 254 1,7 0,34 254 5. 3,7 0.74 254 2,8 0,56 365 1,9 0,38 365 6. 4,6 0,92 254 3,0 0,6 254 2,2 0,44 254 7. - - - 3,4 0,68 254 2,9 0,58 365 8. - - - 3,8 0,76 254 2,9 0,58 254 9. - - - 4,1 0,82 254 3,8 0,76 254 10. - - - 4,6 0,92 365 4,3 0,86 254 11. - - - 4,8 0,96 254 4,5 0,90 254 12. - - - - - - 4,8 0,96 254
Berdasarkan  data  pada  Tabel  2 menunjukkan  eluen  terbaik  yaitu EtOAc- DCM-n- Hex  (1:1:1).  Walaupun  eluen  tersebut  mempunyai  pemisahan  yang  terbaik  pada  KLT, tapi  untuk  menghasilkan  pemisahan  secara  sempurna  pada  kromatografi  kolom  perlu ditambah eluen-eluen lain dengan meningkatkan gradien kepolaran dari rendah ke tinggi. Penambahan  eluen  yang  lain  dilakukan  setelah  dipastikan  tidak  lagi  pemisahan  yang berikan  terhadap  cuplikan  oleh  eluen  tersebut.  Eluen-eluen  yang  digunakan  secara berturut-turut  adalah  EtOAc-DCM-n-Hex  (10:10:10),  dan  EtOAc-DCM-n-Hex  (8:10:12), dan EtOAc-DCM (18:12), EtOAc-DCM (17:13), EtOAc-DCM (16:14), EtOAc:DCM (12:18), DCM  100%,  DCM-MeOH  (8:2),  DCM-MeOH  (7,5:2,5),  DCM-MeOH  (7:3),  DCM-MeOH (6:4), MeOH 100%, MeOH-H 2 O (8:2), MeOH-H 2 O (5:5) dan H 2 O 100%. Hasil pemisahan kromatografi  kolom  diperoleh  43  fraksi,  kemudian  dilakukan  KLT  penggabungan  dan diidentifikasi senyawa flavonoid.
Berdasarkan  hasil  perlakuan  kromatografi  kolom,  KLT  penggabungan  terhadap fraksi dilakukan dengan menggunakan empat macam eluen yang berbeda, yaitu EtOAc- DCM-n-Hex  (1:1:1)  untuk  fraksi  1-8,  EtOAc-DCM  (1:1)  untuk  fraksi  8-17,  DCM-MeOH (1:1) untuk fraksi 16-35 dan MeOH-H 2 O (8:2) untuk fraksi 34-43. Hasil analisis KLT dari 43  fraksi  dapat  digabungkan  menjadi  8  fraksi  (A,  B,  C,  D,  E,  F,  G,  H).  Penggabungan fraksi ini di dasarkan pada bercak noda yang sama dan jarak yang sama. Fraksi A (F1- F4), B (F 5 -F 8 ), C (F 9 -F 15 ), D (F 16 -F 22 ), E (F 23 -F 26 ), F (F 27 -F 33 ), G (F 34 -F 40 ) dan H (F 41 -F 43 ). Bercak  noda  hasil  KLT  mempunyai  tafsiran  sendiri  dalam  mendeteksi  suatu senyawa.  Penafsiran  warna  bercak  dari  struktur  flavonoid  dapat  diidentifikasi  dengan cara  diamati  di  bawah  lampu  UV  365  nm.  Pengamatan  dapat  dilakukan  pada  saat sebelum disemprot NH 3 dan setelah disemprot NH 3 (Markham, 1988). Berdasarkan hasil pengamatan  semua  fraksi,  yang  menunjukkan  adanya  senyawa  senyawa  flavonoid adalah fraksi A dan B.
Fraksi A yang diamati di bawah lampu UV 365 nm tanpa NH 3 tidak terdapat bercak dan  dengan  NH 3 terdapat  satu  bercak  yaitu  merah  lembayung.  Berdasarkan  kajian literatur  (Markham,  1988),  jenis  flavonoid  yang  mungkin  terdapat  pada  fraksi  A  adalah isoflavon. Fraksi B yang diamati di bawah lampu UV 365 nm tanpa NH 3 terdapat 2 bercak dan dengan NH 3 terdapat 3 bercak. Bercak pertama tanpa NH 3 berwarna biru muda dan dengan  NH 3 warnanya  biru  muda  dengan  perubahan  yang  sedikit  namun  masih  dapat
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
dianggap tanpa perubahan. Bercak kedua yang berada diatas bercak pertama tanpa NH 3 berwarna  merah  lembayung  dan  dengan  NH 3 berwarna  merah  lembayung  lebih  terang dari warna tanpa NH 3 . Bercak ketiga yang berada di atas bercak kedua tanpa NH 3 tidak terlihat  dan  dengan  NH 3 berwarna  biru  muda  berflourensensi.  Berdasarkan  kajian literatur  (Markham,  1988),  jenis  flavonoid  yang  mungkin  ada  pada  fraksi  B  adalah isoflavon  (ditunjukkan  oleh  bercak  pertama  dan  ketiga)  dan  flavon,  flavonol,  isoflavon dan kalkon (ditunjukkan oleh bercak kedua).
Fraksi  A  dan  B  yang  sudah  dipastikan  adanya  senyawa  flavonoid  secara  KLT dilakukan analisis FTIR untuk memperkuat bahwa fraksi tersebut benar adanya senyawa flavonoid.  Analisis  FTIR  dilakukan  untuk  mendeteksi  gugus  fungsional  yang  ada  dalam suatu sampel. Spektrum hasil FTIR fraksi A dan B dapat dilihat pada Gambar  2.
(i) (ii)
Gambar 2. (i) Spektrum IR Fraksi A; (ii) Spektrum IR Fraksi B
Berdasarkan  Gambar  2,  menunjukkan  bahwa  fraksi  A  dan  B  memiliki  gugus fungsional NH dengan jenis senyawa amina yang muncul pada bilangan gelombang 3466 cm -1 dan  diperkuat  dengan  gugus  CN  yang  muncul  pada  bilangan  gelombang  1300, 1236,  1161,  1097,  dan  1043  cm -1 .  Gugus  OH  dengan  jenis  senyawa  asam  karboksilat yang  muncul  pada  bilangan  gelombang  2983  cm -1 dan  diperkuat  dengan  munculnya serapan  pada  bilangan  gelombang  1300,  1236,  1161,  1097,  dan  1043  cm -1 yang menunjukkan  ulur  gugus  CO  dari  senyawa  karboksilat.  Gugus  C=C  alkena  ditunjukkan pada  bilangan  gelombang  1660  cm -1 dan  diperkuat  dengan  munculnya  serapan  pada bilangan  gelombang  846  dan  786  cm -1 (pada  fraksi  A)  846,  736  dan  704  cm -1 (pada fraksi B)  yang menunjukan ulur gugus CH aromatik. Gugus CH alkana ditunjukkan pada bilangan gelombang 1465 cm -1 . Gugus C=O jenis senyawa aldehid dan ester ditunjukkan pada bilangan gelombang 1734 cm -1 . Gugus CX flourida ditunjukkan pada bilangan 1465 cm -1 (Pavia, dkk., 2009).
Karakteristik  senyawa  flavonoid  memiliki  gugus  fungsi  OH  fenol,  CH,  CO,  C=C, C=O, dan C-C. Ciri khas senyawa flavonoid ditandai dengan adanya gugus C=O (keton) yang  muncul  pada  rentang  bilangan  gelombang 1700-1725  cm -1 (Maulana,  dkk.,  2016; Darmawati,  dkk.,  2015).  Hasil  analisis  FTIR  fraksi  A  dan  B  tidak  menunjukkan  adanya serapan  terhadap  gugus  C=O  keton  dan  gugus  OH  fenol.  Dengan  demikian,  dapat disimpulkan bahwa fraksi A dan B tidak mengandung senyawa flavonoid.
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  sampel  dalam meredam suatu radikal bebas. Larutan DPPH berwarna ungu, kemampuan suatu sampel dalam meredam radikal DPPH ditandai dengan berkurangnya intensitas warna ungu dan
p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
bila  kemampuan  peredaman  kuat  akan  berubah  menjadi  kuning  (Katrin,  dkk.,  2016). Berubahnya  warna  ungu  menjadi  kuning  akibat  tereduksinya  DPPH  oleh  antioksidan dengan mendonorkan atom hidrogen sehingga terbentuk DPPH-H.
Panjang gelombang maksimum untuk larutan berwarna ungu berada pada rentang 500-560  nm  (Day  dan  Underwood,  2002).  Berdasarkan  kajian  literatur  yang  telah dilakukan  panjang  gelombang  maksimum  DPPH  adalah  berada  pada  rentang  510-520 nm, kebanyakan didapatkan pada 517, 516 dan 515 nm. Panjang gelombang maksimum yang  didapatkan  berdasarkan  hasil  penentuan  yaitu  510  nm,  dengan  absorbansi  0,47 dan  %T  33,8,  digunakan  untuk  mengukur  absorbansi  sampel  (ekstrak  etanol,  fraksi metanol  dan fraksi  positif  flavonoid  (fraksi  A  dan  B)  dan  pembanding  (asam askorbat). Hasil  pengukuran  absorbansi  dan  besarnya  nilai  persen  inhibisi  setiap  larutan  uji  DPPH disajikan dalam Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Pengukuran Absorbansi dan Persentase Inhibisi Larutan Uji DPPH
Larutan Uji Konsentrasi (ppm) A rata-rata Inhibisi (%) Ekstrak Etanol 5 0,410 12,837 10 0,363 22,837 15 0,220 53,121 20 0,161 65,745 Fraksi Metanol 5 0,268 43,050 10 0,229 51,865 15 0,193 58,865 20 0,178 62,057 Fraksi A 5 0,415 11,773 10 0,402 14,468 15 0,395 15,887 20 0,378 19,504 Fraksi B 5 0,393 16,383 10 0,291 38,156 15 0,224 52,270 20 0,210 55,319 Asam Askorbat 1 0,236 49,787 2 0,152 67,730 3 0,100 78,652 4 0,039 91,631
Besarnya  kemampuan  peredaman  radikal  bebas  oleh  suatu  sampel  dinyatakan dalam  persen  inhibisi.  Parameter  yang  digunakan  untuk  menunjukkan  aktivitas antioksidan  disebut Inhibitor  concentration (IC 50 ),  ia  merupakan  nilai  yang menggambarkan  konsentrasi  sampel  paling  efektif  meredam  radikal  bebas  50% (Anastasia,  dkk.,  2016).  Persen  inhibisi  yang  telah  didapatkan,  digunakan  untuk membuat kurva persamaan linear (Y =  ax ± b) dengan cara  diplot konsentrasi sebagai absis  (sumbu  X)  dan  persen  inhibisi  sebagai  ordinat  (sumbu  Y).  Kurva  hubungan konsentrasi dengan persen inhibisi dapat dilihat pada Gambar 3 dan 4.
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500
www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
Gambar 3. Kurva Hubungan Konsentrasi Sampel dengan Persen Inhibisi
Gambar 4. Kurva Hubungan Konsentrasi Asam Askorbat dengan Persen Inhibisi
Persamaan linear yang didapatkan dari setiap kurva digunakan untuk menentukan IC 50 . Hasil penentuan IC 50 disajikan dalam Tabel 4.

## Tabel 4. Hasil Penentuan IC 50
Uji DPPH Persamaan Linear R 2 Y IC 50 (x (ppm)) Ekstrak Etanol Y=3,7801x – 8,617 0,9604 50 15,5067 Fraksi Metanol Y=1,2936x + 37,624 0,9678 50 9,5671 Fraksi A Y=0,4922x + 9,1553 0,9737 50 82,7808 Fraksi B Y=2,6184x + 7,8014 0,9067 50 16,1162 Asam Askorbat Y=13,645x + 37,837 0,989 50 0,8914
Besarnya  aktivitas  antioksidan  berbanding  terbalik  dengan  nilai  IC 50 ,  artinya semakin  besar  aktivitas  antioksidan  maka  semakin  kecil  nilai  IC 50 yang  didapatkan. Berdasarkan data pada Tabel 5, besarnya aktivitas antioksidan sampel secara berurutan dari  besar  ke  kecil yaitu fraksi  metanol  >  ekstrak  etanol  > fraksi  B  >  fraksi  A.  Esktrak etanol,  fraksi  metanol  dan  fraksi  B  mempunyai  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat terhadap radikal DPPH 0,05 mM,  dengan nilai IC 50 yang diperoleh lebih kecil daripada 50 ppm.  Fraksi  A  mempunyai  aktivitas  antioksidan  kuat  terhadap  radikal  DPPH  0,05  mM, dengan  nilai  IC 50 yang  diperoleh  82,7808  ppm.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Putri
y = 3,7802x - 8,617 R² = 0,9604 y = 1,2804x + 37,954 R² = 0,962 y = 0,4922x + 9,255 R² = 0,9738 y = 2,6184x + 7,8015 R² = 0,9067 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 5 10 15 20 25 Inhi bi si (%) Konsentrasi (ppm) Inhibisi Ekstrak Etanol (%) Inhibisi Fraksi Metanol (%) Inhibisi Fraksi A (%) Inhibisi Fraksi B (%) Linear (Inhibisi Ekstrak Etanol
(%))
Linear (Inhibisi Fraksi Metanol (%))
Linear (Inhibisi Fraksi A (%))
Linear (Inhibisi Fraksi B (%)) y = 13,645x + 37,837 R² = 0,9891 0,000 20,000 40,000 60,000 80,000 100,000 0 1 2 3 4 5 A bs orba ns i (%) konsentrasi (ppm) Inhibisi Asam Askorbat (%) Linear (Inhibisi Asam Askorbat
(%))
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
dan  Nurul,  (2015) kuat lemahnya  kekuatan  aktivitas  antioksidan  dapat  dilihat  dari  nilai IC 50 .  Intesitas  antioksidan  sangat  kuat  jika  nilai  IC 50 lebih  kecil  daripada  50  ppm, intesitas antioksidan kuat jika nilai IC 50 50-100 ppm,  Intesitas antioksidan sedang jika nilai IC 50 100-250 ppm dan  Intesitas antioksidan lemah jika nilai IC 50 250-500 ppm.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang didapatkan, dapat disimpulkan bahwa:
1) Ekstrak  etanol  daun  gulma  siam  positif  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin  dan  steroid,  sedangkan  fraksi  metanol  positif senyawa alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin.
2) Isolasi dan karaketrisasi senyawa flavonoid pada daun gulma siam diperkirakan fraksi A  mengandung  senyawa  golongan  isoflavon  dan  fraksi  B  mengandung  senyawa golongan flavon, flavonol, isoflavon dan kalkon.
3) Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH,  diperoleh  IC 50 untuk  sampel  ekstrak  etanol  15,5067  ppm,  fraksi  metanol  9,5671  ppm,  fraksi  A 82,7808  ppm  dan  fraksi  B  16,2336  ppm,  sedangkan  untuk  pembanding  (asam askorbat) 0,8913 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada  para  laboran  laboratorium  Pendidikan Kimia FKIP Unsyiah dan laboratorium Teknik Kimia Unsyiah yang telah membantu selama penelitian. Kemudian kepada keluarga dan teman-teman yang telah membantu doa dan memberikan dukungan sehingga penulisan ini dapat diselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Anastasia, M.H., Santi, S.R., dan Manurung, M. 2016. Uji Aktivitas Antioksidan Flavonoid pada Kulit Batang Gayam ( I. fagiferus Fosb.). Jurnal Kimia , 10(1): 15-22.
Darmawati,  A.A.S.K.,  Bawa,  I.G.A.G.,  dan  Suirta,  I.W.  2015.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa Flavonoid pada Daun Nangka ( Artocapus hetererophyllus L.) dan Aktivitas Antibakterial terhadap Staphylococcus aureus . Jurnal Kimia , 9(2): 203-210.
Day,  R.A.,  dan  Underwood,  A.L.  2002. Analisis  Kimia  Kuantitatif .  Terjemahan  oleh Sopyan, I. Edisi keenam. Jakarta: Erlangga.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan . Terjemahan Kosasih, P. Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Hermiati,  Rusli,  Menalu,  N.Y.,  dan  Sinaga,  M.S.  2013.  Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  dan Merah sebagai Antioksidan pada Minyak Kelapa. Jurnal Teknik Kimia , 2(1): 37-43. Hidayah, N., Djoko, A.P., dan Isnaeni. 2014. Aktivitas Antioksidan Kombinasi Yogurt dan Jus Tomat Dibandingkan Vitamin C. Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, 3(1): 41-48. Katrin., Elya, B., dan Shodiq, A.M. 2012. Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Daun Cincau Hijau Rambat ( Cyclea barbataa Miers.) serta Identifikasi Golongan Senyawa dari Fraksi yang Paling Aktif. Jurnal Bahan Alam Indonesia , 8(2): 118-124.
Maulana,  E.A.,  Asih,  I.A.,  dan  Arsa,  M.  2016.  Isolasi  Senyawa  Flavonoid  dari  Ekstrak Daun Jambu Biji Putih ( Psidium guajava Linn). Jurnal Kimia , 10(1): 161-168. Markham,  K.R.  1988. Cara  Mengidentifikasi  Flavonoid .  Terjemahan  oleh  Kosasih  P. Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Mu’nisa, A., Wresdiyati, T., Kusunorinin, N., dan Manalu, W. 2012. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Cengkeh. Jurnal Veteriner , 13(3): 272-277.
Jurnal IPA dan Pembelajaran IPA (JIPI) , 1(2): 131-142, Desember 2017 p-ISSN: 2614-0500 www. jurnal.unsyiah.ac.id/jipi
Mukhriani.  2014.  Ekstraksi,  Pemisahan  Senyawa  dan  Identifikasi  Senyawa  Aktif. Jurnal Kesehatan , 7(2): 361–167.
Ngozi,  I.M.,  Jude,  I.C.,  dan  Catherine,  I.C.  2009.  Chemical  Profile  of Chromolaena L. (King and Robinson) Leaves . Pakistan Journal of Nutrition , 8(5): 521-524.
Pavia,  D.L.,  Lampman,  G.M.,  Kriz,  G.S.,  dan  Vyvyan,  J.R.  2009. Introdution  to Specctroscopy . Canada: Nelson Education. Prawiradipura, B.R. 2007. Kurinyuh ( Chromolaena odorata (L) R.M king dan H. Robinson) Gulma Padang Rumput yang Merugikan. Wartazoa , 17(1): 46-52.
Putri,  S.A.A.  dan  Nurul,  H.  2015.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Fenolik  Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Tumbuhan  Nyiri  Batu (Xylocarpus  moluccensis) . UNESA Journal of Chemistry, 4(1): 1-6.
Ramdani,  F.A.,  Dwiyanti,  G.,  dan  Siswaningsih,  W.  2013.  Penentuan  Antioksidan  Buah Pepaya  ( Carica  papaya L)  dan  Produk  Olahannya  Berupa  Manisan  Pepaya. Jurnal Sains dan Teknologi .  4(2): 115-124.
Rofida,  S.,  dan  Nurwahdaniati.  2015.  Antibacterial  Activity  of Chromolaena  Odorata (L) King Leaves With Bioautography. Pharmacy, 12(01): 29–36.
Sariningsih,  P.,  Rita,  W.S.,  dan  Puspawati,  N.M.  2015.Identifkasi  dan  Uji  Aktivitas Flavonoid dari Ekstrak  Daun Trenbesi ( S. santan (Jacq.) Merr) sebagai Pengendali Jamur Fusarium sp. pada Tanaman Buah Naga. Jurnal Kimia ,  9(1): 20-26.
Sembiring,  E.,  Sangi,  M.S.,  dan  Suryanto,  E.  2016.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  dan Fraksi Biji Jagung ( Zea mays L.). Chemistry Progress Journal UNSRAT , 9(1): 16-24. Zuhra,  C.F.,  Taringa,  J.B.,  dan  Sihotang,  H.  2008.  Aktivitas  Antioksidan  Flavonoid  dari Daun Katuk ( S. androgunus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatra , 3(1): 7-10.