Potensi buah okra ( Abelmoschus esculentus (L.) Moench) sebagai inhibitor alfa-glukosidase
Soraya Riyanti, Julia Ratnawati, Sofi Aprilianti
Kelompok Keilmuan Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani Corresponding author email: anti.piper81@gmail.com

## ABSTRAK
Buah okra ( Abelmoschus esculentus (L.) Moench) termasuk dalam suku  Malvaceae, berasal dari Afrika, dan kini tersebar luas di seluruh dunia. Masyarakat menggunakan air rendaman buah  okra  sebagai  obat  tradisional  untuk  menangani  diabetes  mellitus  tipe  2.  Penggunaan obat  antidiabetes  oleh  penderita  dilakukan  sepanjang  hidupnya,  dan  sering  menimbulkan beberapa efek samping, diantaranya kembung, mual, dan diare. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui  potensi  buah  okra  sebagai  inhibitor  alfa  glukosidase.  Buah  okra  diekstraksi dengan  dua  metode,  yaitu  secara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%  dan  dilakukan perendaman  dalam  air  suling  selama  4  jam.  Pengujian  aktivitas  inhibitor  alfa-glukosidase dilakukan  secara in  vitro menggunakan  metode  kolorimetri  pada  panjang  gelombang  400,5 nm,  akarbose  digunakan  sebagai  pembanding.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak air dan ekstrak etanol buah okra mampu menghambat aktivitas enzim α-glukosidase dengan nilai  IC 50 berturut-turut  sebesar  32,607  g/ml,  dan  57,502  g/ml.  Nilai  IC 50 zat  aktif Akarbose  adalah  10,95  g/ml.  Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  air  dan ekstrak  etanol  buah  okra  berpotensi  dikembangkan  sebagai  obat  herbal  penurun  kadar  gula darah.
Kata Kunci: Okra,  ( Abelmoschus  esculentus (L.)  Moench),  Inhibitor,  alfa-glukosidase, akarbose
Alpha-glucosidase inhibitory activity of okra fruit (Abelmoschus esculentus (L.) Moench)

## Abstract
Okra fruit (Abelmoschus esculentus (L.) Moench) included in the Malvaceae tribe, originated in  Africa,  and  is  now  widespread  throughout  the  world.  People  use  okra  fruit  water  as traditional  medicine  to  treat  type  2  diabetes  mellitus.  The  use  of  antidiabetic  drugs  by patients is carried out throughout their lives, and often causes several side effects, including bloating, nausea and diarrhea. This study was conducted to determine the potential of okra fruit  as  alpha  glucosidase  inhibitors.  Okra  fruit  was  extracted  with  two  methods,  namely maceration using 96% ethanol and immersion in distilled water for 4 hours. Testing of alpha- glucosidase  inhibitor  activity  was  carried  out  in  vitro  using  the  colorimetric  method  at  a wavelength  of  400.5  nm,  akarbose  was  used  as  a  comparison.  The  results  showed  that  the water  extract  and  ethanol  extract  of  okra  fruit  were  able  to  inhibit  the  activity  of  the  α- glucosidase  enzyme  with  IC50  values  of  32.607  g/ml  and  57,502  g/ml  respectively.  The IC50 value of Akarbose active substance is 10.95  g/ml. From this study it can be concluded that the water extract and ethanol extract of okra fruit have the potential to be developed as herbal medicines to reduce blood sugar levels.
Key words: Okra,  (Abelmoschus  esculentus  (L.)  Moench).  alfa-glucosidase  inhibitor, acarbose

## Pendahuluan
Diabetes  mellitus  termasuk  salah  satu penyakit  tidak  menular  yang  membutuhkan perhatian dalam penanganannya, baik tingkat kepatuhan dalam mengkonsumsi obat, menjaga pola hidup, serta memerlukan biaya yang  cukup  tinggi.  Prevalensi  penderita diabetes  mellitus  tipe  2  mencapai  90-95%. Penderita diabetes mellitus harus mengkonsumsi obat  antidiabetes oral selama hidupnya.  Salah  satu  terapi  farmakologi untuk  pengobatan  diabetes  mellitus  tipe  2 yaitu dengan mengkonsumsi obat hipoglikemik  oral  golongan  inhibitor  enzim alfa-glukosidase.
Alfa-glukosidase merupakan enzim yang terdapat di usus yang mengkatalisis pemecahan kelompok polisakarida  untuk  dapat  diabsorpsi  dalam bentuk  monosakarida  (Palanuvej,    2009). Alfa glucosidase inhibitor memiliki mekanisme  kerja  secara  efektif  mengurangi pencernaan karbohidrat kompleks dan absorpsinya,  sehingga  dapat  mengurangi kadar  glukosa  pada  penderita  diabetes mellitus (WHO, 1999; Saha dkk, 2011).
Beberapa  tumbuhan  yang  telah  terbukti memiliki  aktivitas  inhibitor  alfa-glukosidase diantaranya adalah daun bungur ( Lagerstroemia  speciosa )  yang  mengandung asam  korosolat  (Hou  et  al,  2009).  Daun bungur  yang  berasal  dari  jenis L.loudonii T.&B.  telah  diteliti  pula  sebagai  inhibitor alfa-glukosidase  dengan  nilai  IC 50 74,0563 μg/ml  (Novi  Anggraeni,  2015).  Daun  kelor memiliki  nilai  IC 50 sebesar  198.,78  μg/ml sedangkan  fraksi  etil  asetat  daun  kelor memiliki  aktivitas  terkuat  dengan  nilai  IC 50 sebesar  16,842  μg/ml  (Putu  Agnesia  Putri, 2016).  Selain  tumbuhan  tersebut,  okra  juga digunakan untuk pengobatan antidiabetes.
Di  India,  buah  okra  ( Abelmoschus esculentus (L.) Moench) merupakan tanaman yang menduduki peringkat nomor satu untuk dikonsumsi  (Saha  dkk,  2011).  Penelitian pada  beberapa  jenis  tanaman  yang  berasal dari marga Abelmoschus, hasilnya menunjukkan bahwa beberapa tanaman yang berasal  dari  marga  tersebut  memiliki aktivitas  sebagai  antimikroba,  antioksidan dan antidiabetes (Gates & Onakpa, 2013).
Bagian tanaman okra  yang paling banyak digunakan  adalah  buahnya.  Buah  okra dikenal  juga  dengan  sebutan lady’s  finger dan  merupakan  tanaman  sayuran  yang penting  di  Nigeria.  Okra  terdistribusi  sangat luas  mulai  dari  Afrika,  AsiaEropa  Selatan dan  Amerika  (Sabitha,  2012).  Buah  okra biasa  digunakan  sehari-hari  sebagai  sayuran dan  dapat  diolah  menjadi  berbagai  jenis masakan.  Selain  diolah  menjadi  masakan, saat  ini  dapat  dijumpai  minuman  dari  buah okra  yang  diolah  dengan  cara  dibuat infus water. Masyarakat Indonesia masih mengkonsumsi  karbohidrat  dalam  jumlah besar,  hal  ini  menjadi  salah  satu  faktor penyebab  peningkatan  jumlah  penderita diabetes melitus. Didalam tubuh, sukrosa dan karbohidrat  kompleks  akan  terurai  menjadi glukosa.  Jika  proses  ini  tidak  dihambat, kemungkinan  akan  terjadi  peningkatan glukosa  di dalam darah  dan resiko mengalami  diabetes  mellitus  pun  akan semakin meningkat (Watanabe dkk, 1997).
Penelitian terdahulu pada ekstrak air kulit dan biji buah okra  sebagai penghambat alfa- glukosidase  memberikan  nilai  IC 50 berturut- turut  142,69±0,32  μg/mL;  150,47±0,28  dan penghambat alfa-amilase berturut-turut 132,63±0,16  μg/mL;  147,021±0,21  μg/mL (Sabitha  dkk.,  2012).  Proses  pengolahan buah  okra  baik  yang  dikonsumsi  segar sebagai  salad  ataupun  yang  dimasak  dengan pemanasan  pada  suhu  100 o C  dan  180 o C selama 10 menit masih memberikan aktivitas penghambatan  terhadap  alfa-amilase  dan alfa-glukosidase,  serta  kandungan  senyawa fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  masih  ada meskipun  menurun  jumlah  dan  aktivitasnya (Karim M.R, dkk, 2014). Penggunaan 100  g buah  okra  sebagai  salad  secara  teratur  dapat membantu  mempertahankan  kadar  gula darah  pada  pasien  diabetes  tipe  2  (Karim M.R  dkk,  2014).  Studi  pustaka  pengujian efektivitas  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  air buah  okra  sebagai  inhibitor  alfa-glukosidase belum  ditemukan,  oleh  karena  itu  penelitian ini bertujuan meneliti efek ekstrak etanol dan ekstrak  air  buah  okra  sebagai  inhibitor  alfa- glukosidase.

## Metode
Buah  okra  ( A.  esculentus (L.)  Moench) diperoleh dari OISCA

## INDONESIA
Training  Center,  Cikembar,  Kota  Sukabumi. Buah  yang  dikumpulkan  diambil  secara acak.  Pembuatan  ekstrak  etanol  dan  ekstrak air dilakukan menggunakan metode maserasi.  Pada  pembuatan  ekstrak  air, pengeringan ekstrak dilakukan menggunakan alat  pengering  beku  ( freeze  dryer )  sampai diperoleh  ekstrak  kering,  sedangkan  pada pembuatan ekstrak etanol dilakukan pemekatan  dengan  alat  penguap  vakum putar.  Pengujian  aktivitas  inhibitor  enzim alfa-glukosidase menggunakan metode kromogenik  yang  merujuk  pada  metode Watanabe  tahun  1997  dengan  sedikit modifikasi. Bahan yang digunakan diantaranya  enzim  alfa-glukosidase  yang berasal dari Saccharomyces cerevisiae (Sigma  Aldrich),  substrat  para  nitrofenil  α- D-glukopiranosida  (Sigma  Aldrich), bovine serum  albumin (Sigma  Aldrich),  dan akarbose  (PT.  Dexa  Medica)  sebagai pembanding inhibitor alfa-glukosidase.
Dibuat  variasi  konsentrasi  untuk  ekstrak air  dan  ekstrak  etanol.  Sebanyak  10  µL larutan  ekstrak ditambah  dengan  500  µL dapar fosfat pH 7 dan 250 µL PNPG dengan konsentrasi 0.625 mM serta 250 µL enzim α- glukosidase konsentrasi 0,2 U/mL.
Campuran  diinkubasi  selama  30  menit  pada suhu  37º  C.  2000  µL  200  mM  natrium karbonat  ditambahkan  untuk  menghentikan rekasi enzimatis. Sampel diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang  gelombang  400,5  nm  (Sabitha  dkk., 2012; Anggraeni, 2015)
Aktivitas  inhibitor  alfa-glukosidase  dapat diamati  dari  warna  larutan,  semakin  bening larutan  maka  aktivitas  penghambatan  enzim alfa-glukosidase  semakin  besar.  Pengukuran aktivitas  ekstrak  buah  okra  sebagai  inhibitor enzim  alfa-glukosidase  dengan  mengukur absorbansi  larutan  pada  panjang  gelombang 400,5  nm,  dan  dilakukan  perhitungan  % inhibisi  dengan  menggunakan  persamaan dibawah ini
(                    )   (                   ) (                    ) Hasil Dan Pembahasan Enzim
α-glukosidase merupakan kelompok  enzim  hidrolase  yang  berperan dalam reaksi hidrolisis, enzim α-glukosidase akan  mengkatalisis pemotongan  ikatan glikosidik  pada  oligosakarida  pada  dinding usus  halus.  Enzim  α-glukosidase  memiliki nomor  E.C.3.2.1.20  yang  berperan  dalam metabolisme pati dan glikogen pada jaringan tumbuhan  dan  hewan  (Kim  dan  Kwon, 2000).
Ekstrak  air  dan  etanol  dari  buah  okra menunjukan  aktivitas  sebagai  inhibitor  alfa- glukosidase. Aktivitas inhibitor alfa- glukosidase  dinyatakan  dengan  nilai  IC 50 . Data  persen  penghambatan  dari  ekstrak  air dan etanol dapat dilihat pada tabel 1.

## Tabel 1.  Data  %  penghambatan  ekstrak  air  dan etanol buah okra
Ekstrak Air Ekstrak Etanol Konsentrasi (µg/ml) % Inhibisi Konsentrasi (µg/ml) % Inhibisi 8 10 20 30 40 50 39,21 40,08 46,46 55,18 56,71 59,32 20 40 60 80 100 150 40,80 48,94 52,77 54,16 55,58 65,68
Ekstrak  air  dan  etanol  memberikan  nilai IC 50 berturut-turut  32,61  µg/ml;  dan  57,50 µg/ml,  sedangkan  akarbose  yang  digunakan sebagai pembanding inhibitor alfa- glukosedase adalah 10,95 µg/ml.  Ekstrak air buah  okra  memberikan  aktivitas  yang  lebih kuat  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol, dilihat  dari  nilai  IC 50 yang  lebih  kecil. Masayarakat Indonesia melakukan pengolahan  buah  okra  secara  sederhana, dengan merendam irisan buah okra dalam air minumnya  dan  didiamkan  selama  3  jam, kemudian diminum. Air rendaman buah okra memiliki  viskositas  yang  tinggi  dan  berbeda dengan  ekstrak  etanol  70%.  Dalam  air terdapat banyak mucilago yang menyebabkan larutan menjadi kental.
Prinsip  pengujian aktivitas penghambatan enzim  alfa-glukosidase  adalah  enzim  alfa-
glukosidase  akan  menghidrolisis  substrat  p- nitrofenol-α-D-glukopiraniosida  menjadi  p- nitrofenol  yang  berwarna  kuning  dan glukosa.  Di  dalam  ekstrak  air  dan  ekstrak etanol buah okra mengandung flavonoid dan polifenol  yang  secara  teoritis  dan  dalam beberapa  penelitian  telah  membuktikan bahwa  metabolit  sekunder  tersebut  memiliki kemampuan  untuk  menghambat  kerja  enzim alfa-glukosidase.  Alfa-glukosidase  secara efektif  dihambat  golongan  fenolik  dan flavonoid (Dewi dkk, 2007), dan antara lain disebutkan  juga  bahwa  α-glukosidase  secara efektif dihambat oleh flavonol, luteolin (Kim dan  Kwon,  2000),  myricetin  dan  quersetin. Senyawa  flavonoid  dan  polifenol  memiliki struktur  kimia  yang  mirip  dengan  substrat glukosidase alami, sehingga diduga mekanisme  penghambatannya  adalah  berupa penghambatan  kompetitif,  dimana  senyawa inhibitor akan bersaing dengan substrat alami dalam  menempati  sisi  aktif  enzim.  Dengan demikian  kemampuan  aktivitas  inhibitor enzim  alfa-glukosidase  yang  dimiliki  oleh ekstrak air dan ekstrak etanol buah okra tidak terlepas  dari  kandungan  senyawa  metabolit sekunder.  Selain  itu,  pada  tanaman A. esculentus (L.)  Moench . yang  memiliki kandungan alfa-selulosa, hemiselulosa, lignin dan pektin yang merupakan polisakarida  larut  air  dan  serat  pangan, dimana  kandungan  polisakarida  larut  air tersebut  dapat  berfungsi  menurunkan  kadar gula  darah  dengan  menunda  pengosongan makanan dari lambung, menghambat pencampuran isi saluran cerna dengan enzim pencernaan  yang  menyebabkan  terjadinya pengurangan  penyerapan  zat  makanan, sedangkan kandungan serat pangan berfungsi menurunkan  kadar  gula  darah  dengan menghambat  penyerapan  gula  ke  dalam darah  (Gates,  Onakpa,  2013).  Kelompok glikosida  flavon  tidak  semuanya  dapat menghambat enzim alfa-gluksidase, tergantung  kepada  kemampuanya  dalam berikatan  dengan  enzim  alfa-glukosidase. Struktur flavonoid  yang  memiliki  gugus OH bebas  pada  posisi  C7,  C4  dan  C4’  memiliki aktivitas penghambatan terhadap enzim alfa- glukosidase.  Berdasarkan  hubungan  struktur
dengan  aktivitas,  bahwa  gugus  polihidroksi dalam  kerangka  flavonoid  memiliki  peranan penting  dalam  menghambat  aktivitas  enzim alfa-glukosidase (Kim dan Kwon, 2000).
Pengujian secara in  vitro dari ekstrak air dan  sekstrak  etanol  buah  okra,  masih  perlu dikembangkan  untuk  mendapatkan  hasil yang  dapat  menguatkan  buah  okra    dapat menurunkan kadar gula darah pada penderita diabetes  mellitus  dengan  mekanismenya sebagai  penghambat  enzim  alfa-glukosidase dengan melakukan uji secara in vivo .

## Kesimpulan
Buah  okra  yang  secara  tradisional  telah digunakan  oleh  masyarakat  dapat  mengobati beberapa penyakit, terutama untuk menurunkan  kadar  gula  darah,  telah  terbukti secara  ilmiah  melalui  percobaan  secara in vitro memiliki aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase  dengan  nilai  IC 50 untuk ekstrak  air  dan  etanol  berturut-turut  32,607  g/ml, dan 57,502  g/ml. Nilai IC 50 zat aktif Akarbose sebagai pembanding inhibitor alfa- glukosidase adalah 10,95  g/ml.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  kepada  LPPM  Universitas Jenderal Achmad Yani atas pendanaan Hibah Penelitian  Kompetitif  UNJANI  tahun  2016. Terima kasih kami ucapkan kepada PT. Dexa Medica  Tbk.  Yang  telah  membantu  dalam menyediakan pembanding zat aktif akarbosa.

## Daftar Pustaka
Dewi T Rizna, Iskandar M Yetty, Hanafi M, Kardono L.B.S, Angelina Marisa,
Dewijanti  D.  Indah,  B.  D.  S.  S.  (2007). Inhibitory  Effect  of  Koji Aspergillus terrus on  alpha-glucosidase  Activity  and Posprandial Hyperglycemia. Pakistan Journal  of  Biological  Sciences , 10 (18), 3131–3135.
Gates,  J.,  &  Onakpa,  M.  M.  (2013). Ethnomedicinal  ,  phytochemical  and pharmacological profile of genus Abelmoschus
Ethnomedicinal , phytochemical and pharmacological profile  of  genus. Phytopharmacology ,
4 (3), 648–663.
Karim,  M.  R.,  Islam,  M.  S.,  Sarkar,  S.  M., Murugan, A. C., Makky, E. A., Rashid, S. S.,  &  Yusoff,  M.  M.  (2014).  Anti- amylolytic  activity  of  fresh  and  cooked okra ( Hibiscus esculentus L.) pod extract. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology , 3 (4), 373–377. https://doi.org/10.1016/j.bcab.2014.07.00 6
Kim Jong Sang, Kwon Chong-Suk, S. K. H. (2000).  Inhibition  of  Alpha-glucosidase and  Amylase  by  Luteolin,  a  Flavonoid. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry , 64 (11), 2458–2461.
Novi  Anggraeni.  (2015). Aktivitas  Inhibitor α-Glukosidase Daun Bungur (Lagerstroemia  loudonii  Teijsm.&Binn.) Secara In Vitro . Skripsi, Fakultas Farmasi, UNJANI
Palanuvej,  C.,  Hokputsa,  S.,  Tunsaringkarn, T.,  &  Ruangrungsi,  N.  (2009).  In  vitro glucose entrapment and alpha-glucosidase inhibition  of  mucilaginous  substances from  selected  Thai  medicinal  plants. Scientia Pharmaceutica , 77 (4), 837–849. Putu  Agnesia  Putri.  (2016). Aktivitas Inhibitor  α-Glukosidase  Ekstrak  dan
Fraksi  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera Lamk)  Secara  In  Vitro. Skripsi,  Fakultas Farmasi, UNJANI
Sabitha, V., Panneerselvam, K., &
Ramachandran,  S.  (2012).  In  vitro  α- glucosidase  and  α-amylase  enzyme inhibitory  effects  in  aqueous  extracts  of Abelmoscus  esculentus (L.)  Moench. Asian Pacific  Journal  of Tropical Biomedicine , 2 (1  SUPPL.),  S162–S164. https://doi.org/10.1016/S2221-
1691(12)60150-6
Saha,  D.,  Jain,  B.,  &  Jain,  V.  K.  (2011). Phytochemical evaluation and
characterization  of  hypoglycemic  activity of  various  extracts  of Abelmoschus esculentus linn. fruit. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 3 (SUPPL. 2), 183–185.
Watanabe,  J.,  Kawabata,  J.,  Kurihara,  H.,  &
Niki, R. (1997). Isolation and identification of alpha-glucosidase inhibitors  from  tochu-cha  ( Eucommia ulmoides ). Bioscience,  Biotechnology, and Biochemistry , 61 (1), 177–178.
https://doi.org/10.1271/bbb.61.177
WHO.  (1999). Definition,  Diagnosis  and Classification of Diabetes Mellitus and its Complications .  Geneva:  Department  of Noncommunicable  Disease  Surveilance. https://doi.org/WHO/NCD/NCS/99.2