## Medika Kartika

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN POLIFENOL ASAM GALAT TEH HIJAU GAMBUNG MELALUI PENURUNAN KADAR MALONDIALDEHID TIKUS DIABETES MELITUS
Iis Inayati Rakhmat 1 , Euis Reni Yuslianti 1,2 , Fahrauk Faramayuda 3
1 Bagian Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, 2 Bagian Biologi Oral Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, 3 Fakultas Farmasi Universitas Jenderal Achmad Yani e-mail:  iis_inayati@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Teh hijau dilaporkan mempunyai efek sebagai antidiabetes karena kandungan antioksidannya. Komplikasi diabetes berkaitan dengan terjadinya stres oksidatif akibat hiperglikemi persisten yang  ditandai  dengan  peningkatan  kadar  malondialdehid.  Aktivitas  antioksidan  selular  dan kandungan  polifenol  terutama  asam  galat  teh  hijau  asal  Gambung  Ciwidey  Bandung  masih belum  banyak  diketahui.  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  kandungan  antioksidan  asam galat  serta  penurunan  malondialdehid  teh  hijau  tikus  diabetes.  Metode  penelitian  adalah laboratorium eksperimental. Pengujian kandungan antioksidan kualitatif dengan uji fitokimia, pengujian  kandungan  asam  galat  kuantitatif  metode  pH  diferensial  ekivalen  antosianin  total, dan  pengujian  aktivitas  antioksidan  melalui  penurunan  kadar  malondialdehid  tikus  diabetes metode  TBARs.  Tikus  dibagi  kedalam  5  kelompok  (n=5)  diberi  perlakuan  selama  14  hari peroral:  Tikus  kelompok  I  sebagai  kontrol  negatif,  tikus  kelompok  II  kontrol  diabetes,  tikus diabetes  kelompok  III  dan  IV  diberi  ekstrak  etanol  teh  hijau  14,4  mg/hari  dan  28,8  mg/hari serta tikus diabetes kelompok V diberi Vitamin C 3,6 mg/hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  teh  hijau  Gambung  memiliki  kandungan  alkaloid,  tanin,  saponin, katekin,  flavonoid,  kuinon,  dan  asam  galat  12,19  mg/L  TAC.  Kadar  rerata  malondialdehid darah  kelompok  teh  hijau  28,8  mg/hari  berbeda  signifikan  (P=0,012)  dengan  kelompok Vitamin  C  3,6  mg/hari  akan  tetapi  tidak  ada  perbedaan  signifikan  (P=0,087)  apabila dibandingkan dengan kelompok yang diberi teh hijau 14,4 mg/hari. Pemberian teh hijau 28,8 mg/hari memberikan efek menguntungkan dibanding Vitamin C 3,6 mg/hari yang dibuktikan dengan  penurunan  kadar  MDA  kemungkinan  karena  kandungan  antioksidan  polifenol  asam galat teh hijau sebagai scavenger radikal peroksil stres oksidatif pada tikus diabetes.
Kata kunci : asam galat, malondialdehid, teh hijau

## ARTIKEL PENELITIAN

## ABSTRACT
Green  tea  is  reported  to  have  an  antidiabetic  effect  due  to  its  antioxidant  content.  Diabetic complications  are  associated  with  the  occurrence  of  oxidative  stress  due  to  persistent hyperglycemia  characterized  by  increased  malondialdehyde  levels.  Cellular  antioxidant activity and polyphenol content of green tea gallic acid from Gambung Ciwidey Bandung is still  unknown.  This  study  aims  to  determine  the  antioxidant content  of  gallic  acid green  tea and  malondialdehyde  inhibition  in  diabetic  rats.  The  research  method  was  an  experimental laboratory. Qualitative antioxidant content with phytochemical tests, quantitative gallic acid content  pH  differential  methods,  and  antioxidant  activity  with  malondialdehyde  levels  of diabetic rats inhibition (TBARs method). Rats were divided into 5 groups (n = 5) treated for 14  days  orally:  Group  I  as  negative  control,  group  II  as  positive  control,  group  III  and  IV diabetic rats were given 14.4 mg /day and 28.8 mg/day green tea ethanol extract and group V diabetic rats were given 3.6 mg/day Vitamin C. The results showed that Gambung green tea ethanol  extract  contained  alcaloids , tannins,  saponins,  catechins,  flavonoids,  quinon,  and 12.19 mg/L TAC gallic acid. The malondialdehyde level of 28.8 mg/day green tea group was significantly  different  (P  =  0.012)  with  3.6  mg/day  Vitamin  C  group  but  there  was  no significant difference (P = 0.087) compared to the group given 14.4 mg/day green tea. Green tea  28.8  mg/day  has  a  beneficial  effect  compared  to  3.6  mg/day  Vitamin  C.  MDA  levels decreased  possibly  due  to  green  tea  acid  polyphenol  antioxidant  content  as  peroxyl  radical scavenger oxidative stress in diabetic rats.
Keywords: gallic acid, malondialdehyde, green tea

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan suatu  kelompok  penyakit  metabolik  dengan karakteristik  hiperglikemia  yang  terjadi karena  kelainan  sekresi  insulin,  gangguan kerja  insulin  atau  kedua-duanya.  Penderita DM  mengalami  kegagalan  fungsi  dalam metabolisme  karbohidrat,  lipid,  dan  protein yang  memicu  komplikasi  dalam  jangka panjang. 1,2 Prevalensi  DM  di  dunia  telah meningkat  secara  dramatis  selama  dua
dekade  terakhir,  dari  perkiraan  sebanyak  30 juta kasus pada tahun 1985 menjadi 285 juta kasus  pada  tahun  2010. 3 Di  Indonesia diperkirakan pada tahun 2030 prevalensi DM akan mencapai 21,3 juta orang. 4
Hiperglikemia  pada  diabetes  akan menyebabkan peningkatan pembentukan radikal  bebas  terutama reactive  oxygen species (ROS) sehingga menimbulkan keadaan  stres  oksidatif. 5,6 Keadaan  stres oksidatif  ini  berasal  dari  autooksidasi
glukosa,  perubahan  keseimbangan  redoks, penurunan  konsentrasi  antioksidan  jaringan, serta  kegagalan  aktivitas  enzim  antioksidan. Peningkatan  ROS  menimbulkan  peroksidasi lipid  yang  merupakan  hasil  reaksi  antara radikal bebas dengan asam lemak tidak jenuh atau poly  unsaturated  fatty  acid (PUFA)  di membran  sel  dan  akan  terurai  menjadi senyawa  malondialdehid  (MDA).  Selain  itu, peningkatan  ROS  juga  merusak  protein melalui  proses  oksidasi, cross  linking ,  dan fragmentasi  yang  kemudian  memfasilitasi pembentukan  produk  glikasi.  Proses  glikasi ini  yang  selanjutnya  akan  menyebabkan komplikasi  kronik  DM  seperti  retinopati, nefropati,  neuropati,  aterosklerosis,  dan penyakit jantung koroner. 2,5,7
Dalam  proses  fisiologis,  timbulnya radikal  bebas  dalam  tubuh  yang  kemudian disebut  prooksidan  akan  selalu  diimbangi dengan  mekanisme  pertahanan  endogen dengan  memproduksi  zat  yang  mempunyai pengaruh  sebagai  anti  radikal  bebas  yang disebut  antioksidan  endogen.  Antioksidan endogen  seperti  superoksida  dismutase, glutathione  peroksidase,  dan  katalase  dapat disintesis  oleh  tubuh  jika  didukung  oleh nutrisi  atau  mineral  yang  disebut  juga  ko- faktor.  Pada  keadaan  tertentu  keseimbangan prooksidan  dan  antioksidan  dapat  terganggu. Keadaan  ini  disebut  stres  oksidatif  sehingga untuk  meredam  stres  oksidatif  tersebut diperlukan  antioksidan  eksogen.  Antioksidan
eksogen  dapat  diperoleh  dari  makanan  adan minuman termasuk dari teh hijau. 8
Penapisan  kandungan  kimia  meliputi pemeriksaan  golongan  alkaloid,  flavonoid, saponin, tanin, kuinon, steroid, dan triterpenoid  menggunakan  metode  Materia Medika  Indonesia  dari  Dirjen  POM  Depkes RI,  1995. Uji  kandungan  kimia  merupakan tahap awal untuk mengidentifikasi kandungan  kimia  dan  keberadaan  senyawa- senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  madu. Uji  kandungan  kimia  yang  biasa  dilakukan yaitu  pada  senyawa  fenol,  terpenoid,  dan senyawa  nitrogen.  Senyawa  fenol  ditandai dengan  struktur  cincin  aromatik  yang mengandung  satu  atau  dua  hidroksil  dan cenderung  mudah  larut  dalam  air,  contoh senyawa  fenol  yaitu:  polifenol,  flavonoid, tanin, dan kuinon. 9
Secara  klinis,  terapi  DM  diawali dengan  perubahan  gaya  hidup  namun  jika perubahan gaya hidup ini gagal mengendalikan  hiperglikemi  maka  perlu intervensi farmakoterapi agar dapat mencegah komplikasi DM atau paling sedikit menghambatnya. 10 Terapi  farmakologi  ini harus dilakukan dalam jangka panjang karena DM  merupakan  penyakit  degeneratif  yang bersifat ireversibel. Keadaan tersebut membuat  masyarakat  mencari  pengobatan alternatif  berupa  terapi  herbal  karena  terapi herbal dinilai masyarakat sebagai pengobatan yang  memiliki  sedikit  efek  samping,  lebih murah,  dan  mudah  didapat.  Tanaman  obat
yang  dipakai  untuk  terapi  DM  diantaranya mimba,  sambiloto,  dan  teh  hijau.  Effendi  R melaporkan  pemberian  teh  hijau  pada  tikus diabetes menunjukan penurunan kadar glukosa darah dari baseline secara nyata pada pengukuran  glukosa  darah  hari  ke-8,  12,  dan 16. 11,12
Teh hijau merupakan teh non- fermentasi  yang  mengandung  lebih  banyak katekin  dibanding  teh  hitam,  teh  merah,  dan teh  oolong.  Katekin  baik  secara in  vitro maupun in vivo merupakan antioksidan kuat 13
Hasil  studi  menunjukkan  antioksidan  pada teh hijau mensupresi proses lipid peroksidasi di  jaringan  dan  fraksi  subselular. 14 Dosis ekstrak  teh  hijau  yang  disarankan  pada manusia adalah 800 mg/hari dan secara umun dosis  1600  mg/hari  dapat  ditoleransi  dengan baik dan tidak terdapat efek samping. 15
Keadaan stres oksidatif pada DM dapat meningkatkan  kadar  MDA  yang  merupakan hasil dari peroksidasi lipid oleh radikal bebas secara  signifikan. 16 Untuk  mengukur  kadar MDA  digunakan  metode thiobarbituric  acid reactive    like  substances (TBARs).  Metode ini  merupakan  metode  yang  paling  sering digunakan sebagai indikator peroksidasi lipid karena  produk  tersebut  mempunyai  waktu paruh  yang  lebih  lama  dibandingkan  ROS dan mudah dilakukan pengukuran. 8,17
Kandungan  teh  hijau  asal  Gambung Ciwidey  Bandung  dikenal  tinggi  khasiat termasuk antioksidan. Penelitian ini
membuktikan  kandungan  antioksidan  secara kualitatif  dan  kuantitatif  (asam  galat)  serta aktivitas  antioksidannya  terhadap  penurunan kadar  MDA  tikus  diabetes  yang  diinduksi aloksan.

## BAHAN DAN METODE

## Analisis  Kandungan  Antioksidan  Teh Hijau
Pengujian  kandungan  antioksidan  teh hijau  Gambung  secara  kualitatif  dengan penapisan  fitokimia  dan  secara  kuantitaf dengan  penetapan  kadar  asam  galat  melalui metode  kolorimetri.  Penapisan  fitokimia dengan  melakukan  identifikasi  kandungan alkaloid,  tanin,  saponin,  katekin,  flavonoid, dan kuinon. Kadar total asam galat dilakukan dengan  menggunakan  metode  kolorimetri terdiri  atas  pembuatan  kurva  standar  asam galat,  pembuatan  larutan  uji  teh  hijau,  dan penentuan  kadar  asam  galat.  Analisis dilanjutkan  sebagaimana  perlakuan  pada pembuatan kurva baku asam galat. Kandungan  total  asam  galat  teh  hijau dinyatakan  sebagai  gram  ekivalen  total antosianin.  (mg/L TAC).

## Analisis  Aktivitas  Antioksidan  Teh  Hijau pada Tikus Diabetes
Pengujian  aktivitas  antioksidan  teh hijau  terhadap  putih  ( Rattus  norvegicus ) bergalur  Wistar  jantan,  berumur  2–3  bulan, berat  badan  150–250  gram,  kadar  gula  darah
sewaktu  tikus  lebih  dari  200mg/dl  setelah diinduksi aloksan.Daun teh hijau didapat dari perkebunan  teh  Pusat  Penelitian  Kina  dan Teh  Gambung  Bandung.    Pembuatan  ekstrak etanol  teh  hijau  dilakukan  di  Laboratorium Hayati  ITB.  Ekstrak  etanol  teh  hijau diperoleh  dengan  cara  maserasi.  Sebelum dilakukan maserasi, daun teh hijau dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  50°C selama 2-3 hari. Pada ekstraksi pertama, 1 kg serbuk  teh  hijau  direndam  dengan  larutan etanol di dalam maserator yang alasnya telah diberi  kapas  dan  didiamkan  selama  24  jam. Setelah  24  jam,  larutan  dikeluarkan  melalui outlet bawah. Larutan yang keluar ini disebut dengan ekstrak encer. Apabila masih terdapat serbuk  yang  terbawa  maka  larutan  disaring. Hasil saringan berupa ampas.  Ekstraksi kedua  sama  dengan  ekstraksi  pertama  akan tetapi  pada  ekstraksi  kedua  ditambahkan etanol  baru  ke  dalam  ampas  ekstraksi sebelumnya.  Ekstraksi  dilakukan  beberapa kali  sampai  pelarut  yang  keluar  dari outlet maserator  tidak  berwarna.  Kemudian  semua ekstrak  dari  beberapa  ekstraksi  tersebut disatukan dan dipekatkan untuk mendapatkan ekstrak pekat.Pemekatan ekstrak encer
dilakukan  dengan  menggunakan  alat rotary evaporator . Hasilnya dalam bentuk pasta.
Penelitian  ini  menggunakan  35  ekor tikus jantan wistar  dibagi menjadi  kelompok I  sebagai  kontrol  negatif,  tikus  kelompok  II kontrol  diabetes,  tikus  diabetes  kelompok  III dan  IV  diberi  ekstrak  etanol  teh  hijau  14,4 mg/hari dan 28,8 mg/hari serta tikus diabetes kelompok  V  diberi  Vitamin  C  3,6  mg/hari. Sebelum  penelitian  dilakukan,  semua  tikus dihabituasi  selama  7  hari  dengan  cara ditempatkan  dalam  situasi  yang  sama  yaitu dalam  kandang  hewan  percobaan  akultas Kedokteran  Universitas  Jenderal  Achmad Yani  kemudian  tikus  kelompok  II,  III,  IV, dan  V  diinduksi  aloksan  120  mg/kg  BB subkutan.  Setelah  3  hari  pemberian  aloksan, dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa  darah sewaktu  tikus  dengan  glukosameter.  Pada hari  ke-15  setelah  perlakuan,  dilakukan pengambilan darah pada masing-masing tikus tersebut sesuai kelompoknya untuk dilakukan pengukuran  kadar  MDA  di  Laboratorium Biokimia  Fakultas  Kedokteran  Universitas Jenderal Achmad Yani Cimahi.
Perhitungan : Kadar Peroksidasi Lipid (MDA) =    Abs Sampel X Kadar Standar (mg/dl).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  secara univariat  untuk  kandungan  antioksidan  dan
bivariat  untuk  aktivitas  antioksidan  tikus diabetes  dengan  dengan  uji  One  Way ANOVA  untuk  mengetahui  perbedaan  kadar MDA  antara  kelompok  dengan  p  <  0,05
Abs Standar
dilanjutkan  dengan  Post  Hoc  LSD  untuk  uji beda masing-masing kelompok percobaan.

## Aspek Etika Penelitian
Penelitian  in  vivo  mendapat  persetujuan etik  dari  Komisi  Etik  Penelitian  Kesehatan Fakultas  Kedokteran  Universitas  Padjadjaran yang berafiliasi dengan Komisi Nasional Etik Penelitian Kesehatan dengan surat No.151/UN6.C1.3.2/KEPK/PN/2016.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Kandungan Antioksidan Teh Hijau
Penapisan  fitokimia  bertujuan  untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder yang  terdapat  dalam  simplisia,  hal  ini berkaitan  dengan  khasiat  dan  aktivitas farmakologinya.  Hasil  penapisan  fitokimia
menunjukan  bahwa  simplisia  teh  hijau gambung  mengandung  senyawa  alkaloid, tanin, polifenol saponin, katekin, kuinon, dan flavonoid seperti pada Tabel 1.
Adanya  senyawa  alkaloid,  yaitu dengan  terbentuknya  endapan  merah  dengan penambahan  reaksi  Dragendorf.  Adanya senyawa  flavonoid  ditunjukkan  dengan terbentuknya  warna  merah  pada lapisan amil alkohol  setelah  sebelumnya  direaksikan dengan  serbuk  magnesium  dan  asam  klorida 2  N.  Warna  merah  ini  terbentuk  akibat adanya  reaksi  reduksi  pada  gugus  karbonil menjadi  gugus  alkohol  membentuk  senyawa hidroksi  yang  berwarna  dan  warna  yang terbentuk  kemudian  akan  tertarik  oleh  amil alkohol.

## Tabel 1 Hasil penapisan fitokimia teh hijau
Golongan Senyawa Simplisia Alkaloid + Flavonoid + Tanin + Polifenol + Saponin + Kuinon + Flavonoid +
Keterangan :
(+) Menunjukkan senyawa yang diuji positif (-) Menunjukkan senyawa yang diuji negatif
Adanya senyawa saponin ditunjukkan dengan terbentuknya busa yang stabil setelah dilakukan pengocokan selama waktu tertentu dan  penambahan  asam.  Busa  yang  terbentuk menunjukkan adanya saponin karena saponin merupakan  senyawa  yang  memiliki  sifat seperti  sabun  yaitu  kemampuannya  dalam membentuk  busa.  Adanya  senyawa  kuinon ditunjukkan dengan kemampuannya membentuk  garam  berwarna  yaitu  kuning sampai merah. Garam berwarna ini terbentuk antara hidrokuinon dengan larutan alkali kuat (NaOH  atau  KOH).  Adanya  senyawa polifenol  ditunjukkan  dengan  terbentuknya warna  biru  kehitaman  sebagai  hasil  reaksi antara gugus fenol dengan larutan besi(III)klorida.  Senyawa  tanin  tidak  mudah
terdeteksi  dengan  pereaksi  gelatin  1% sehingga  dilakukan  metode  lainnya  untuk pemeriksaan  senyawa  gelatin  pada  simplisia yaitu  dengan  menggunakan  pereaksi  steasny dan  pereaksi  H 2 SO 4 pekat.  Hasil  yang didapatkan  dengan  menggunakan  pereaksi H 2 SO 4 pekat,  yaitu  terbentuk  endapan berwarna  merah  bata  sedangkan  dengan penambahan pereaksi steasny endapan merah muda  yang  dihasilkan  menunjukkan  adanya senyawa tanin katekat dan penambahan FeCl 3 setelah  penjenuhan  dengan  natrium  asetat menunjukan  adanya  tanin  galat  dengan berubahnya warna larutan menjadi biru tinta. Gambaran  penapisan  fitokimia  bisa  dilihat pada Gambar 1.

## Gambar 1 Penapisan fitokimia
Penetapan kadar flavonoid asam galat kuantitatif  metode  pH  diferensial  terdiri  atas pembuatan  kurva  standar  asam  galat, pembuatan  larutan  uji  teh  hijau,  dan penentuan kadar asam galat. Hasil absorbansi
yang diukur pada kisaran panjang gelombang 400-800  nm  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  seperti  pada  Gambar  2  didapatkan hasil  kadar  total  asam  galat  teh  hijau  adalah 12,19 mg/L TAC.
Gambar 2 Kurva baku antosianin ekivalen asam galat pada panjang gelombang 532 nm
Antioksidan  flavonoid  berfungsi  sebagai pembersih radikal bebas  hidroksil (pirogalol) pada  cincin  B. Reactive  oxygen  species ( ROS) yang dihasilkan dalam proses fagositosis  dapat  merusak  sel.  Metabolit oksigen reaktif yang dihasilkan oleh neutrofil dan  makrofag  dapat  menyebabkan  reaksi inflamasi  yang  berakhir  pada  kerusakan  sel. Flavonoid  diketahui  dapat  menghambat pelepasan ROS pada  sel  neutrofil.  Flavonoid diketahui dapat menghambat reaksi peroksidasi  lipid  secara  enzimatis  dan nonenzimatis.  Flavonoid  diketahui  aktif menghambat  radikal  bebas  pada  proses
inisiasi  dan  terminasi.  Flavonoid  rutin  dapat menghambat reaksi autooksidasi rantai lemak pada proses terminasi. 18

## Aktivitas  Antioksidan  Teh  Hijau  pada Tikus Diabetes
Setelah  mengalami  adaptasi  selama tujuh  hari,  tikus  kelompok  II–V  dilakukan induksi  aloksan  secara  subkutan  kemudian dilakukan  pengukuran  gula  darah  sewaktu tiga  hari  setelah  induksi  aloksan.  Tikus diabetes ditandai dengan kadar glukosa darah sewaktu ≥ 200 mg/dl.
nm . 400.00
500.00 600.00 700.00 800.00 A bs. 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 1 2 3 4
Setelah  dilakukan  pengukuran,  seluruh tikus  yang  diinduksi  aloksan  memiliki  kadar glukosa darah sewaktu ≥ 200 mg/dl, sehingga seluruh  tikus  dapat  dilakukan  perlakuan
sesuai  dengan  kelompok  masing-masing. Gambar 3 menunjukkan kadar rerata glukosa darah  tikus  pada  masing-masing  kelompok perlakuan.
Gambar 3 Kadar rerata glukosa darah sewaktu tikus setelah induksi aloksan.
Aloksan  secara  spesifik  dapat  merusak sel  β  Langerhans  melalui  pembentukkan oksigen reaktif (ROS) yang akan menimbulkan  kerusakan  DNA  sel  β Langerhans  dan  mencetuskan  peroksidasi lipid.  Faktor  selain  pembentukan  oksigen reaktif  adalah  gangguan  pada  homeostatis kalsium intraseluler. Aloksan dapat meningkatkan  konsentrasi  ion  kalsium  bebas sitosolik  pada  sel  β  Langerhans.  Kerusakan pada  sel  β  Langerhans  menyebabkan produksi insulin berkurang sehingga
menimbulkan  keadaan  diabetes  melitus  yang ditandai dengan hiperglikemi. 19,20
Hiperglikemi  pada  diabetes  akan menyebabkan keadaan stres oksidatif. Keadaan  stres  oksidatif  ini  berasal  dari  auto- oksidasi  glukosa,  perubahan  keseimbangan redox,  penurunan  konsentrasi  antioksidan jaringan BM rendah; seperti glutation (GSH) dan  vitamin  E,  serta  kegagalan  aktivitas enzim antioksidan; seperti superoksida dismutase  (SOD)  dan  katalase  (CAT). Keadaan  stres  oksidatif  akan  menimbulkan peroksidasi  lipid    yang  merupakan  hasil
0 100 200 300 400 500 600 700 800 Kelompok II Kelompok III Kelompok IV Kelompok V
Kadar Glukosa (mg/dl)
reaksi  antara  radikal  bebas  dengan  asam lemak tidak jenuh atau PUFA di membran sel dan akan terurai menjadi senyawa malondialdehid (MDA). 5-7
Uji  One  Way  ANOVA  yang  dilakukan menunjukkan hasil bermakna (P=0,024) yang artinya paling tidak terdapat perbedaan kadar MDA  darah  yang  bermakna  pada  dua kelompok  untuk  mengetahui  pada  kelompok
mana  terdapat  perbedaan  bermakna,  maka dilakkukan  uji  Post  Hoc  LSD.  Tabel  2 menyajikan  nilai  rerata  MDA    tikus  diabetes induksi  aloksan.Konsentrasi  rerata  MDA darah pada kelompok kontrol negatif sebesar 368,403±48,43  nmol/ml,  sedangkan  pada kelompok  kontrol  diabetes  tanpa  perlakuan menunjukkan  kadar  rerata  MDA  darah sebesar  314,056±96,33 nmol/ml.

## Tabel 2 Nilai rerata kadar MDA darah tikus perlakuan
Kelompok n Rerata ± SD (nmol/ml) P Kontrol Negatif 5 368,403±48,43 <0,05 Kontrol Positif (diabetes) 5 314,056±96,33 Diabetes  +  Ekstrak  Etanol  Teh  Hijau  14,4 mg/hari 5 228,105±103,71 Diabetes  +  Ekstrak  Etanol  Teh  Hijau  28,8 mg/hari 5 166,734±102,68 Diabetes + Vitamin C 3,6 mg/hari 5 341,407±128,77
Perbedaan  antara  kelompok  kontrol  negatif dengan  kelompok  diabetes  tanpa  perlakuan secara  statistik  tidak  signifikan  (P=0,398). Hal ini tidak konsisten dengan dua studi yang dilakukan oleh Dallatu et al yang menemukan  adanya  perbedaan  signifikan kadar  MDA  darah  tikus  diabetes  induksi
aloksan  antara  kelompok  kontrol  negatif dengan kelompok diabetes tanpa perlakuan. 21,22 Perbandingan  kadar  MDA hanya  dilakukan  pada  kelompok  teh  hijau dengan  kelompok  Vitamin  C  seperti  terlihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Perbedaan kadar MDA antar kelompok perlakuan tikus diabetes
Studi  ini  menunjukkan  bahwa  kadar rerata MDA darah kelompok diabetes dengan perlakuan  Vitamin  C  3,6  mg/hari  sebesar 341,407±128,77  nmol/ml  berbeda  signifikan (P=0,012)  dengan  kadar  rerata  MDA  darah kelompok  diabetes  dengan  perlakuan  ekstrak etanol  teh  hijau  28,8  mg/hari  sebesar 166,734±102,68  nmol/ml.  Namun  tidak  ada perbedaan signifikan (P=0,087) jika kelompok diabetes dengan perlakuan Vitamin C 3,6 mg/hari dibandingkan dengan kelompok  diabetes  perlakuan  ekstrak  etanol teh hijau 14,4 mg/hari.
Konsentrasi  MDA  darah  kelompok diabetes  dengan  perlakuan  ekstrak  etanol  teh hijau  14,4  mg/hari  sebesar  228,105±103,71 nmol/ml  tidak  berbeda  signifikan  (P=0,341) dengan  kelompok  diabetes  dengan  perlakuan ekstrak  etanol  teh  hijau  28,8  mg/hari  yang memiliki kadar rerata MDA sebesar 166,734±102,68 nmol/ml.
Peningkatan stres oksidatif telah diusulkan sebagai penyebab utama komplikasi  diabetes  diinduksi  hiperglikemi. Stres oksidatif tersebut berasal dari dari auto- oksidasi  glukosa,  perubahan  keseimbangan redox,  penurunan  konsentrasi  antioksidan jaringan BM rendah; seperti glutation (GSH) dan  vitamin  E,  serta  kegagalan  aktivitas enzim antioksidan; seperti superoksida dismutase  (SOD)  dan  katalase  (CAT).  Pada studi  yang  dilakukan  Kalaivanam et  al disimpulkan  bahwa  peningkatan  kadar  MDA merupakan  penanda  ( marker )  yang  paling berguna  untuk  mengetahui  keadaan  stres oksidatif pada pasien DM. 5-7, 21,22
Studi  ini  menunjukkan  pemberian ekstrak  etanol  teh  hijau  memiliki  efek  pada kadar MDA secara signifikan. Penelitian lain yang dilakukan oleh Coimbra et al menunjukkan  bahwa  konsumsi  teh  hijau selama  4  pekan    pada  manusia  sehat  secara
signifikan  meningkatkan  kapasitas  total antioksidan  plasma  dan  menurunkan  produk peroksidasi lipid, malondialdehid (MDA) dan malondialdehid+4-hidroksi-2(E)-nonenal (MDA+-HNE). 23 Ohmori et  al melaporkan bahwa  konsumsi  teh  hijau  selama  2  pekan menurunkan  konsentrasi  malondialdehid- LDL  termodifikasi  (MDA-LDL)  serum  pada laki-laki  sehat  bukan  perokok. 24 Penelitian lain  yang  dilakukan  Babu et  al menemukan bahwa ekstrak teh hijau menurunkan aktivitas lipid  peroksidase  pada jantung  dan  hati tikus diabetes. 25 Lebih lanjut, studi yang dilakukan Sabu et al menunjukkan pemberian green tea polyphenols selama  15  hari  menurunkan kadar  peroksidasi  lipid  serum  pada  tikus diabetes induksi aloksan secara signifikan. 26
Senyawa polifenol (termasuk di dalamnya asam galat, katekin, theaflavin, dan thearubugins) merupakan salah satu senyawa terpenting  yang  terdapat  pada  tumbuhan  teh.
Polifenol  berasal  dari  metabolisme  sekunder tumbuhan teh. Secara kimia, polifenol adalah senyawa  yang  memiliki  sebuah  cincin aromatik  yang  mengandung  satu  atau  lebih gugus hidrosil serta derivat fungsional (ester, metil ether, glikosid, dan lain-lain). 8
Fenol  berperan  sebagai scavenger (pemakan)  radikal  peroksil  karena  fenol memiliki  struktur  molekul  penting  yaitu cincin  aromatik  dan  gugus  hidroksil  yang mengandung hidrogen  yang dapat berpindah. Selain  itu,  kemampuan  fenol  juga  diketahui
dapat  mengurangi  radikal  bebas  melalui pembentukan chelate dengan  ion-ion  yang bervalensi dua seperti logam Cu, Fe, Zn, dan Mn yang menyebabkan terjadinya peroksidasi lipid. 8
Antioksidan fenolik (ArOH) berperan dalam  memutus  reaksi  inisiasi  radikal  bebas oleh transfer atom hidrogen atau oleh transfer elektron  dengan  cara  membentuk  kation radikal  fenoksil  (Ar • OH + )  yang  secara  cepat dan  reversibel  mengalami  deprotonasi  dan membentuk  radikal  fenoksil  (ArO • ).  Suatu radikal  fenoksil  dapat  bergabung  dengan radikal  peroksil  (ROO • )  membentuk  produk yang  non-radikal.  Antioksidan  fenolik  juga dapat  bereaksi  dengan  radikal  hidroksil  atau berperan  sebagai  agen  penangkap  terhadap senyawa genotoksik  elektrofilik  seperti benz[α]pyrene. 8

## KESIMPULAN
Kadar  rerata  MDA  darah  kelompok  tikus diabetes  yang  diberi  ekstrak  etanol  teh  hijau 14,4  mg/hari  adalah  sebesar  228,105±103,71 nmol/ml, sedangkan kelompok tikus diabetes yang  diberi    ekstrak  etanol  teh  hijau  28,8 mg/hari  adalah  sebesar  166,734±102,68 nmol/ml. Kadar rerata MDA darah kelompok tikus  diabetes  yang  diberi  Vitamin  C  3,6 mg/hari berbeda signifikan dengan kelompok tikus diabetes  yang diberi   ekstrak etanol teh hijau  28,8  mg/hari,  akan  tetapi  tidak  ada perbedaan  signifikan  jika  dibandingkan
dengan  kelompok  tikus  diabetes  yang  diberi ekstrak  etanol  teh  hijau  14,4  mg/hari. Pemeriksaan  kadar  MDA  darah  dilakukan juga sebelum diberi perlakuan, sehingga pada analisa  statistik  dapat  dilakukan  uji  beda kadar  MDA  darah  sebelum  dan  sesudah diberi  perlakuan.  Pemeriksaan  kadar  MDA tidak  hanya  darah  tapi  diperiksa  kadar  MDA jaringan,  seperti  retina  dan  ginjal  karena  2 organ  tersebut  berkaitan  dengan  komplikasi DM.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti ingin menyampaikan terimakasih  kepada  Pusat  Penelitian  Teh dan Kina  Gambung  atas  simplisia  teh  hijau  dan LPPM  Unjani  atas  dana  penelitian  yang diberikan.  Terimakasih  kepada  Pera  untuk bantuan  analisis  kualitatif  antioksidan  teh hijau  dan  Roy  untuk  analisis  aktivitas antioksidan tikus diabetes.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Purnamasari D. Diagnosis dan klasifikasi diabetes melitus. In:
Sudoyo  AW,  Setiyohadi  B,  Alwi  I, Simadibrata  MK,  Setiati  S,  editors. Buku  ajar  ilmu  penyakit  dalam.  Edisi kelima.  Jakarta:  InternaPublishing; 2009. p.1880.
2. Matough  FA,  Budin  SB,  Hamid  ZA,
Alwahaibi N, Mohamed J. The role of oxidative  stress  and  antioxidants  in
diabetic  complication.  Sultan  Qaboos Univ Med J. 2012; 12(1): 5-18.
3. Powers  AC.  Diabetes  mellitus.  In: Longo  DL,  Kasper  DL,  Jameson  JL, Fauci  AS,  Hauser  SL,  Loscalzo  J, editors.  Harrison’s  principles  of internal  medicine.  18 th edition.  New York  Chicago  San  Fransisco  Lisbon London  Madrid  Mexico  City  Milan New Delhi San Juan Seoul Singapore Sydney Toronto: McGraw-Hill; 2012. p.2959.
4. Departemen Kesehatan (Depkes). Tahun  2030  prevalensi  diabetes melitus  di  Indonesia  mencapai  21,3 juta orang. Depkes. 2009.
5. Moussa  SA.  Oxidative  stress  in diabetes mellitus. Romanian J. Biophys. 2008; 18(3): 225-36.
6. Johansen  JS,  Harris  AK,  Rychly  DJ,
Ergul  A. Oxidative stress and the use of  antioxidants  in  diabetes:  linking basic  science  to  clinical  practice. http://www.cardiab.com/content/4/1/5 (verified @ 29 April 2005)
7. Waspadji S. Komplikasi kronik diabetes: mekanisme terjadinya, diagnosis dan strategi pengelolaan. In: Sudoyo  AW,  Setiyohadi  B,  Alwi  I, Simadibrata  MK,  Setiati  S,  editors. Buku ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi kelima.  Jakarta:  InternaPublishing; 2009. p.1924.
8. Yuslianti ER. Pengantar stress oksidatif. Bandung: Fakultas
Kedokteran Unjani; 2012. p.1-94.
9. Ditjen  POM  Depkes  RI.  Materia
Medika Indonesia, Jilid 6, Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta;1995.15-23.
10. Soegondo  S.  Farmakoterapi  pada pengendalian glikemia diabetes melitus  tipe  2.  In:  Sudoyo  AW, Setiyohadi  B,  Alwi  I,  Simadibrata MK, Setiati S, editors. Buku ajar ilmu penyakit dalam. Edisi kelima. Jakarta: InternaPublishing; 2009. p.1884.
11. Utami  P.  Tanaman  obat  untuk mengatasi  diabetes  melitus.  Jakarta: AgroMedia; 2003. p.25-32.
12. Effendi R. Pengendalian kadar glukosa darah oleh teh hijau dan atau teh  daun  murbei  pada  tikus  diabetes. Bogor:  Program  Studi  Ilmu  Gizi Masyarakat dan
Sumberdaya
Keluarga  Institut  Pertanian  Bogor.
2008.
13. Cabrera  C,  Artacho  R,  Gimenez  R. Beneficial  effects  of  green  tea-a review.  Journal  of  the  American College of Nutrition. 2006; 25(2): 79- 99.
14. Yokozawa T, Cho EJ, Hara Y, Kitani
K.  Antioxidative  activity  of  green  tea treated  with  radical  initiator  2,2’- azobis (2-amidinopropane)
dihydrochloride. J. Agric. Food
Chem. 2000; 48: 5068-73.
15. Wibowo  JT.  Pemberian  ekstrak  teh hijau  menurunkan  berat  badan  dan berat  lemak  abdominal  pada  tikus jantan yang diberi diet tinggi karbohidrat  dan  lemak.  Denpasar: Program  Magister  Program  Studi Ilmu  Biomedik Program Pascasarjana Universitas Udayana. 2011.
16. Matsunami  T,  Sato  Y,  Sato  T,
Yukawa  M.  Antioxidant  status  and lipid  peroxidation  in  diabetic  rats under  hyperbaric  oxygen  exposure. Physiol. Res. 2010; 59: 97-104.
17. Nielsen F, Mikkelsen BB, Nielsen JB, Andersen  HR,  Grandjean  P.  Plasma Malondialdehyde  as  biomarker  for oxidative  stress:  reference  interval and  effects  of  life-style  factors. Clinical  Chemistry.  1997;  43(7):
1209-14.
18. Middleton  Elliot,  Jr.,  Kandaswami  C, theoharides C.C. The Effects of Plant Flavonoids  on  Mammalian  Cells: Implications  for  Inflammation,  Heart Disease,  and  Cancer. Pharmacol  Rev
52:4  673–751,  2000  diunduh  23 Pebruari 2014 <http://www.pharmrev.org> 19. Nugroho  AE.  Hewan  percobaan diabetes melitus: patologi dan
mekanisme aksi
diabetogenik.
Biodiversitas. 2006, 7(4): 378-82.
20. Suarsana  IN, Priosoeryanto BP,
Bintang  M,  Wresdiyati  T.  Profil glukosa  darah  dan  ultrastruktur  sel beta  pankreas  tikus  yang  diinduksi senyawa  aloksan.  JITV.  2010;  15(2): 118-23.
21. Dallatu  MK,  Anaja  PO,  Bilbis  LS,
Mojiminiyi  FBO,  Mohammed  A,
Tanko Y. Haematological and antioxidant  properties  of  alloxan- induced  diabetes  rats  supplemented with antioxidant micronutrients.
Nigerian Journal and /applied Science. 2010; 18(1): 106-11.
22. Kalaivanam  KN,  Dharmalingam  M, Marcus  SR.  Lipid  peroxidation  in type  2  diabetes  mellitus.  Int  J  Diab Dev Ctries. 2006; 26: 30-2.
23. Coimbra  S,  Castro  E,  Rocha-Pereira P, Rebelo I, Rocha S, Santos-Silva A.
The  effect  of  green  tea  in  oxidative stress. Clin. Nutr. 2006;25: 790-6.
24. Hirano-Ohmori  R,  Takahashi  R,
Momiyama Y, Tanaquchi H,
Yonemura  A,  Tamai  S,  Umeqaki  K, Nakamura  H,  Kondo  K,  Ohsuzu  F. Green  tea  consumption  and  serum malondialdehyde-modified LDL concentration  in  healthy  subjects.  J. Am. Coll. Nutr. 2005; 24:342-6.
25. Babu  P,  Sabitha  K,  Shyamaladevi  C. Therapeutic effect of green tea extract on  oxidative  stress  in  aorta  and  heart of streptozotocin diabetics rats. Chem. Biol. Interact. 2006; 162: 114-20. 26. Sabu MC, Smithha K, Kuttan R. Anti- diabetic activity of green tea polyphenols and their role in reducing oxidative stress in  experimental diabetes. Journal of ethnopharmacology. 2002; 83: 109-16