## KARAKTERISTIK SPERMATOZOA SAPI BALI SETELAH SEXING MENGGUNAKAN METODE KOLOM ALBUMIN DENGAN LAMA WAKTU SEXING YANG BERBEDA
Sunarti 1) , Takdir Saili 2) dan La Ode Nafiu 2)
1) Alumnus Fakultas Peternakan UHO
2) Dosen Fakultas Peternakan UHO

## ABSTRAK
Penelitian  ini  menggunakan  Racangan  Acak  Lekap  (RAL)  dengan  tiga  perlakuan dan  enam ulangan.  Perlakuan  dalam  penelitian  ini  adalah waktu  sexing  yang  terdiri  atas 20  menit  (W1),  35 menit (W2) dan 50 menit (W3), sedangkan ulangannya adalah penampungan semen sebanyak enam kali. Parameter makroskopis yang diukur meliputi volume, warna, derajat Keasaman (pH), sedangkan parameter mikroskopis meliputikonsentrasi,  gerakan  massa,  persentase  motilitas, persentase spermatozoa  hidup dan  persentase  membran  plasma  utuh  serta  non  return  rate.Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa secara  makroskopis  dan  mikroskopis  yaitu  volume  (ml)  (5,5 ± 0,53), warna (putih krem), pH (7 ± 0,00), konsentrasi (1185,57± 392,09), persentase motilitas (80 ± 0.0), persentase spermatozoa  hidup  (94,71 ±  1,38)  dan  persentase  membran  plasma  utuh  (96,14  ±  1,46).Hasil penelitian  setelah  sexing  kualitas  spermatozoa  tidak  menunjukkan  perbedaan  pada  inkubasi  yang berbeda  baik  pada  lapisan  atas  maupun  lapisan  bawah.  Hasil IB  menggunakan  semen  pasca  sexing didapatkan non  return  rate sebesar  79%.  Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  kualiatas spermatozoa  sapi  Bali hasil sexing  masih  layak  untuk  diinseminasikan  pada  induk sapi  untuk menghasilkan anak ternak.

## Kata Kunci: Sapi Bali, spermatozoa, kolom albumin, sexing, kualitas

## ABSTRACT
The  objective  of  this  research  was  to  evaluate  characteristic  and  quality  of  bali  cattle spermatozoa  after  sexing  and  to  evaluate  fertility  of  sexed  spermatozoa  following  artificial insemination in bali cow. Randomized completely design was used with three treatments of sexing period: 20 min. (W1), 35 min. (W2)and 50 min. (W3) and six replications. Collecting semen was considered  as  replication.    Parameter  measured  consisted  of  macroscopic  parameter  (volume, color, and pH) for fresh semen, microscopic parameter (concentration, mass movement, motility, viability,  and  intact  membrane  of  spermatozoa)  for  both  fresh  and  after  sexing,  and  non  return rate. The  results  showed  that  fresh  semen  had  quality  as  followed:  volume  (5,5  ±  0,53  ml),  color (white),  concentration (1185,57± 392,09  x  10 6 /ml),  motility(80  ±  0.0%),  viability (94,71 ±  1,38%), and  intact  membrane  (96,14  ±  1,46%).The  quality  of  spermatozoa  after  sexing  had  no  significant differences  among  treatments  for  both  spermatozoa  in upper  layer  or  bottom  later  of  the  albumin column.  While  the  non  return  rate  was  79%.    Based  on  the  results  it  was  concluded  that  quality  of spermatozoa of Bali cattle following sexing could be used in artificial insemination for producing calf.
Keywords: Bali cattle, spermatozoa, column albumin, sexing, quality

## PENDAHULUAN
Penemuan teknologi  di berbagai bidang
reproduksiternak
dapat dimanfaatkan
untuk mengatasi masalahsubsektor peternakan terutama dalam upaya meningkatkan  produktivitas ternak.Salah  satu  teknologi  tersebut  adalah sexing  sperma.Melalui  teknologi  ini,    kita dapat mengontrol jenis kelamin anak ternak yang  akan  diproduksi.  Teknologi  sexing sangat  bermanfaat  bagi  para  peternak  sapi potong karena melalui teknik sexing mereka dapat  memproduksi  lebih  banyak anak jantansesuai keinginannya. Demikian halnyapeternak  sapi  perah yang lebih menginginkan  kelahiran  anak  betina (untuk produksi  susu) dalam  suatu  kelahiraan dibandingkan anak jantan, dapat menggunakan teknik sexing
untuk meningkatkan efisiensi usahanya.
Berbagai  teknik  dan  metode  sexing sperma telah  diperkenalkan dan  diterapkan pada berbagai  hewan  ternak,  antara  lain metode kolum albumin, sentrifugasi dengan gradient  densitas  percoll, motilitas dan pemisahan elektroforesis, isoelectric focusing,  teknik  manipulasi  hormonal,  H-Y antigen, flow sorting, dan metode penyaringan menggunakan kolom Sephadex(Saili dkk., 2000).
Penerapkan metode  kolum  albumin untuk  sexing  sperma pada  sapi  FH,  telah dilakukan oleh Saili (1999). Medium sexing yang  digunakan adalah  campuran  antara putih  telur  dan  medium  Bracket-Oliphant (BO)  yang merupakan  hasil  modifikasi mediumBovine Serum Albumin (BSA).Metode  ini  mudah  sekali  diterapkan di  lapangan karena  putih  telur  mudah diperoleh  dan harganya terjangkau. Pada penelitian  tersebut  kombinasi  medium pemisah yang digunakan adalah konsentrasi 10  persen  albumin  telur  pada  lapisan  atas dan  30  persen  pada  lapisan  bawah,  dan hasilnyamenunjukkan  konsentrasi  albumin 10 persen dan 30 persen mampu mengubah proporsi perolehan spermatozoa dari kondisi alamiah.
Upaya memodifikasi medium sexing terus dilakukan untuk mendapatkan kualitas dan kuantitas sperma yang memenuhi syarat untuk digunakan pada program IB. Penggunaan konsentrasi medium albumensebagai  medium sexing    dan  lama waktu sexing  yang  tepat  diprediksi  akan dapat  memberikan  hasil  sexing yang optimal. Sexing sperma sapi Bali khususnya di Sulawesi  Tenggara    belum  pernah dilakukan. Demikian halnya dengan informasi tentang pemanfaatan spermatozoa hasil  sexing  juga  belum pernah  dilakukan, oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  penelitian untuk mengetahui karakteristik spermatozoa sapi  Bali  baik  sebelum  maupun  sesudah proses sexing.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini dilaksanakan di Laboratorium, di  Unit  Pelayanan  Teknis
Daerah  Peternakan  Sulawesi  Tenggara  di
Desa Morome, Kecamatan Konda,
Kabupaten  Konawe Selatan,  Sulawesi
Tenggara. Penelitian  ini  akandilaksanakan pada bulan Maret 2015 sampai Mei 2015.
Materi yang  digunakan  adalah semen  sapi yang  diperolehsecara  teratur dari pejantan sapi bali yang berumur 3 tahun dengan  bobot  badan lebih  kurang  350 kg . Pakansapi berupa rumput  lapangan ±10% dari  berat  badan  dan  makanan penguat  (konsentrat)  sebanyak 4 – 5 kg per ekor per hari.
Materi utama  medium sexing yang digunakan adalah bagian cair dari putih telur (albumen), dan sebagai pelarutnya digunakan medium modifikasiBrackett- Oliphant (m-BO) (Saili,  2014). Medium tersebut  juga  digunakan sebagai  medium pencuci  semen  baik  sebelum  proses sexingmaupun  setelah proses sexing dan sebagai  medium  penambah volume  semen dalam upayamendapatkan konsentrasi spermatozoa yang ideal pada proses sexing. Selain  itu,  juga  dibutuhkan  pelarut  semen Tris-Kuning telur yang digunakan pada saat menyimpan  semen  cair  setelah  proses sexing.
Peralatan  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah seperangkat alat vagina buatan yang digunakan untuk menampung semen. Tabung yang digunakan pada proses sexing spermatozoa  adalah  tabung  reaksi  dengan diameter 1 cm dan tinggi10  cm. Untuk membuat dan menyimpan medium digunakan  gelas  ukur,  gelas  erlemeyer  dan gelas  beaker  dalam  berbagai  ukuran.  Glass penutup  dan  glass  obyek  digunakan  untuk membuat preparat spermatozoa bagi berbagai keperluan pengamatan.
Haemocytometer dan sentrifus (Centra – MP4RModel, International
Equipment
Company,  USA) masing-masing  digunakan sebagai  alat  untuk  menghitung konsentrasi spermatozoa dan membersihkan spermatozoa.  Selain  itu  juga, digunakan water bath, magnetik  stirer, stopwatch , corong  karet,tabung  gelas  penampung berskala,  pipet  Pasteur,mikroskop, pH indicator paper, pemanas bunsen, timbangan elektronik,rak tabung, counter, dan lain-lain.
Penelitian ini menggunakan Racangan  Acak  Lekap  (RAL)  dengan  tiga perlakuan dan  enam  ulangan.  Perlakuan dalam  penelitian  ini  adalah waktu  sexing yang  terdiri  atas 20  menit  (W1), 35  menit (W2)  dan  50  menit  (W3),  sedangkan ulangannya adalah  penampungan  semen sebanyak enam kali.
Penampungan semen dilakukan dengan menggunakan vagina  buatan  yang terbuat  dari  rangkaian tabung  karet  yang berlubang  pentil,  karet  inner  liner,  karet pengikat, corong karet, dan tabung penampung  berskala.Air  panas  (40-52  C) dimasukkan  ke  dalam  vagina  buatan melalui  lubang  pentil  hingga  mencapai setengah  bagian,  kemudian  lubang  pentil ditutup  dan  dipompa.Kekenyalan  vagina buatan  diukur  dengan  jari  jika  dirasakan cukup,  karet  bagian  luar  vagina  buatan diberi vaselin hingga 1/3 bagian panjangnya.Sapi betina  pemancing  (teaser) dimasukkan  ke  dalam  service  create, selanjutnya sapi pejantan dibiarkan mendekati sapi betina  pemancing  beberapa kali  untuk meningkatkan  libido  dan setelah
sapi pejantan  menaiki  pemancing,  bagian preputium  dipegang,  ujung  penis  diarahkan ke  lubang  vagina  buatan  dengan  posisi miring.  Semen  yang  tertampung  segera dievaluasi secara makroskopis dan mikroskopis.
Metode  pemisahan  menurut  Saili
(1999),yaitu  semen  sapi  yang  ditampung (ejakulat)dicuci dengan penambahan medium
Mbo dan disentrifugasi padakecepatan  3000  rpm  selama  10  menit. Medium m BO  ditambahkan  kembali  pada endapansemen  sampai  konsentrasi  menjadi 150  juta  selper  mililiter.  Satu  mililiter sampel  dimasukkanke  dalam  tabung  yang telah terisi medium  sexing 10%  dan  30%, kemudiandibiarkan  selama 20  menit,  35 menit,  dan  50  menit sesuai  perlakuan pada suhu  kamar.Fraksi  semen  bagian  atas selanjutnya dipisahkan  dari  fraksisemen bagian  bawah  dengan  menyedotmasing- masing fraksi menggunakan pipet danditampung  dalam  tabung centrifuge, kemudian ditambahkan medium mBO sebelum dicuci cara dengansentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama10 menit.
Variabel yang diukur pada penelitian ini adalah kualitas semen segar dan  kualitas  spermatozoa  sebelum  dan sesudah  sexing  yang  meliputipengamatan secara makroskopis dan mikroskopis. Pengamatan kualitas semen secara makroskopis terdiri atas :
1. Volume
Volume  sapi  yang  dihasilkan  oleh seekor  sapi  jantan dalam  satu  ejakulasi sangat  bervariasi.  Hal  ini  dipengaruhi, antara  lain  oleh  umur  sapi,  besar  tubuh, status  kesehatan,  status  reproduksi,  kualitas makanan,  dan  frekuensi  penampungan. Selain itu, teknik dan metode penampungan serta  persiapan  alat  penampungan  akan mempengaruhi volume semen yang dihasilkan (Saili, 1999).
2. Warna
Warna semen dapat dijadikan indikator  untuk  memprediksi  kosentrasi spermatozoa  yang  berada  di  dalam  semen secara  cepat.  Warna  pada  semen  dapat
diamati  secara  visual  setelahpenampungan, semen yang baik adalah krem
3. Derajat Keasaman (pH) Derajat Keasaman (pH)diukur dengan  cara  mengambil  sedikit  semensegar menggunakan ose dan diletakkan padakertas  lakmus,  selanjutnya  dilihat  pH semendengan  menggunakan  pH  indicator paper, pH normalsemen 6,4-7,8 (Garner dan Hafez, 2008). pH sangat menentukan status kehidupan spermatozoa di dalam semen.
Sedangkan evaluasi kualitas spermatozoa secara mikroskopis baik sebelum maupun sesudah sexing terdiri atas
:
1. Konsentrasi
Evaluasi terhadap
konsentrasi dilakukan  dengan  menggunakan  pipet haemocytometer dan kamar hitung Neubauer.  Semen  diisap  sampai  skala  0,5 kemudian  ditambah  dengan  larutan  NaCl 3% dan diisap sampai mencapai angka 1,01. Larutan  dalam  pipet  digoyang-goyang membentuk angka delapan selama2-3 menit agar  larutan  homogen,  selanjutnya  larutan tersebut dibuang beberapa tetes. Setelah itu semen  diteteskan  pada  kamar  hitung Neubauer  yang  ditutup  dengan  gelas penutup, kemudian diamati dengan mikroskop cahaya pembesaran 400x. Menghitung  spermatozoa  yang terdapat  di dalam  lima  kotak  dengan  arah  diagonal. Hasil  perhitungan  konsentrasi  spermatozoa dalam  jumlah  kamar  yang  dihitung  lima kotak dengan 80 ruangan kecil di dalamnya dikalikan  107  per  milliliter (Susilawati, 2011). 2. Gerakan massa
Gerakan massa  diamati  dengan menggunakanmikroskop  cahaya.  Semen diletakkan  di  atasgelas  objek  tanpa cover glass dengan  perbesaran100×.  Kriteria penilaian  massa  spermatozoasangat  baik (+++)  terlihat  adanya  gelombangbesar, banyak, gelap, tebal dan aktif bergerak.Baik (++)  terdapat  gelombang-gelombangkecil tipis, jarang, kurang jelas dan bergeraklamban.  Cukup  (+),  bila  tidak terlihat  gelombang  melainkan  gerakan –
gerakan individual aktif progresif dan buruk (-)  ,  bila  tidak  ada  gerakan  sama  sekali (Susilawati,2011).
3. Persentase motilitas
Persentase motilitas dapat dipengaruhi  serangkaian  perlakuan  mulai proses  pencucian  hingga  proses  pemisahan spermatozoa. Proses pencucian yang berakibat  pada  pengurangan  kosentrasi plasma semen dan menggantikannya dengan  BO  mungkin  merupakan  salah satu faktor yang menyebabkan menurunnya nilai motilitas  spermatozoa,  bila  dihubungkan dengan  ketersediaan  sumber  energi  bagi spermatozoa,  walaupun  di  dalam  medium BO  itu  sendiri  terdapat  glukosa  (Saili, 1999).
4. Persentase membran plasma utuh.
Untuk mengetahui keutuhan membran  plasma  spermatozoa  sapi  yang sangat  erat  kaitannya  dengan  kondisi hidup-mati spermatozoa digunakan prosedur Hypoosmotic  Swelling  Test (HOS-Test) (Correa  dan  Zavos,  1994). Sampel semen dimasukkan kedalam larutan  hipo-osmotik  0,032  M  NaCl (0,179  g  NaCl  dalam  100  ml  akuabides), kemudian  diinkubasi  selama  satu  jam pada  suhu  37  C.  Spermatozoa  dengan membran  plasma  utuh  ditandai  dengan ekor  yang  melingkar.  Evaluasi  dilakukan dengan menggunakan mikroskop pembesaran  10  x  40,  sedangkan  jumlah minimal sampel spermatozoa yang diamati  adalah  100  spermatozoa (Saili, 1999).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Kualitas Semen Segar Sapi Bali
Kualitas  semen  dan  spermatozoa sapi Bali  yang  dievaluasi  meliputi  kualitas makroskopis  (volume,  warna  dan  pH)  dan mikroskopis (konsentrasi, persentase motilitas, persentase spermatozoa hidup dan persentase  membran  plasma  utuh).Data selengkapnya  disajikan  pada  Tabel  1.
Tabel 1. Rataan Kualitas Semen dan Spermatozoa Segar Sapi Bali
Variabel Nilai Volume (ml) 5,5 ± 0,53 Warna Putih krem pH 7 ± 0,00 Konsentrasi (x 10 6 /ml) 1185,57± 392,09 Persentase Motilitas (%) 80 ± 0.0 Persentase Spermatozoa Hidup (%) 94,71 ± 1,38 Persentase Membran Plasma Utuh (%) 96,14 ± 1,46
Data  pada  Tabel  1  menunjukkan bahwa rataan volume semen segar sapi Bali yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  adalah 5,5±0,53  ml.  Volume  semen  sapi  yang diperoleh  masih  dalam  kisaran  normal sesuai  pendapat  Toelihere  (1985)  yang menyatakan  bahwa  volume  semen  sapi bervariasi antara 1 – 15 ml.Adanya perbedaan  volume  semen setiap  ejakulasi disebabkan  oleh  perbedaan  bangsa,  umur, ukuran badan, pakan, frekuensi penampungan dan berbagai faktor lain.
Volume  semen  sapi Bali  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  sedikit  lebih tinggi dibandingkan dengan hasil penelitian Nursalmah (2014)  yang  menyatakan bahwa rataan  volume  semen  segar  sapi Bali  yakni sebesar  5,26±0,99  ml.  Demikian  halnya dengan  hasil  penelitian  Ratnawati  dkk. (2008)  yang  hanya  memperoleh  rataan volume  semen  segar  sapi  bali  sebanyak 4,5±2,3    ml.  Toelihere  (1993)  menyatakan bahwa  volume  semen  yang  dihasilkan seekor  pejantan  sapi  dalam  satu  ejakulasi cukup bervariasi dan sangat tergantung dari umur, berat, status kesehatan, dan reproduksi,  kualitas  makanan,  frekuensi penampungan dan bangsa sapi.

## B. Warna Semen
Warna  semen umumnya  dijadikan indikator  untuk  memprediksi  konsentrasi spermatozoa  yang  terdapat  dalam  semen secara cepat. Hasil pemeriksaan makroskopis  menunjukkan  bahwa  semen segar  pada  penelitian  ini  berwarna  putih krem.  Hal ini berarti bahwa semen tersebut normal, sesuai pendapat  Feradis (2010) dan Nursyam  (2007)  bahwa  semen  sapi  normal berwarna  putih  susu  atau  krem  keputihan
dan  keruh.  Menurut  Gardner  dan  Hafez (2008),  rata-rata  warna  semen  adalah  putih kekuningan atau krem.Jika semen berwarna hijau  kekuning-kuningan  berarti  semen mengandung kuman Pseudomonas aeruginosa, sedangkan semen yang berwarna  merah  berarti  mengandung  darah dan  semen  yang  berwarna  coklat  berarti semen  tersebut  mengandung  darah  yang telah  membusuk.    Warna  semen  pada penelitian  ini  sama  dengan  warna  semen yang  dilaporkan  oleh  Nursalamah  (2014) dan  Ratnawati  dkk.  (2008)  pada  sapi  bali yaitu berwarna putih kekuningan (krem).

## C. Derajat Keasaman (pH) Semen
Derajat  keasaman (pH)  semen merupakan  salah  satu  faktor  pembatas kelangsungan  hidup  spermatozoa  di  dalam semen.Perubahan  pH  ke  arah  yang  lebih asam  (angka  lebih  kecil  dari  7)  akibat penimbunan  asam  laktat  hasil  metabolisme anaerob dapat menurunkan tingkat kelangsungan hidup spermatozoa (Toelihere,  1993).    Derajat  keasaman  (pH) semen  sapi Bali  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  masih  berkisar  pada  pH normal,  yaitu  7,00±0,00.    Feradis  (2011) menyatakan  bahwa  setiap  bangsa  sapi mempunyai  nilai  pH  semen  segar  yang berbeda-beda.  Beberapa  hasil  penelitian menyatakan  pH  semen  yang  berbeda-beda tetapi  masih  dalam  kisaran  yang  normal, seperti  Butar  (2009)  menyatakan  bahwa semen segar mempunyai pH antara 6,4-7,8, Nursyam  (2007)  melaporkan  bahwa  pH semen yang berkualitas baik adalah 6,8-6,7. Nursalamah(2014)  melaporkan  bahwa  pH semen  sapi  yang  segar  berkisar 6,8±0,45, Ratnawati dkk. (2008) memperoleh nilai pH
semen  segar  sebesar  6,5,  sedangkan Gardner  dan  Hafez  (2008)  menyatakan bahwa rata-rata pH semen sapi yang normal adalah 6,4-7,8.

## D. Konsentrasi Spermatozoa
Konsentrasi spermatozoa yang diperoleh  pada  penelitian  ini  sebesar 1185,57±392,09x10 6 /ml. Konsentrasi tersebut  masih  tergolong  normal  karena menurut Gardner dan Hafez (2000) konsentrasi  spermatozoa  sapi  berkisar antara  800x10 6 – 2000  x10 6 /ml.  Akan tetapi,  hasil  penelitian  ini  agak  berbeda dibanding  hasil penelitian  yang  dilakukan oleh  Ratnawati  (2008)  pada  sapi Bali  yang melaporkan bahwa konsentrasi spermatozoa semen segar sapi bali sebesar 1309,3 ± 21,4 x 10 6 /ml.

## E. Persentase Motilitas Spermatozoa
Persentase  motilitas  spermatozoa merupakan  salah  satu  indikator  utama dalam proses evaluasi spermatozoa. Variabel  ini  sangat  erat  hubungannya dengan  daya  fertilisasi  spermatozoa.  Nilai rata-rata  persentase  motilitas  spermatozoa sapi bali yang digunakan pada penelitian ini adalah  80±0,0%.    Nilai  ini  masih  pada kisaran  persentase  motilitas  spermatozoa yang layak digunakan untuk fertilisasi, baik secara in  vivo dan  maupun in  vitro.    Pada umumnya dan yang terbaik adalah pergerakan  progresif  atau  gerakan  aktif maju  ke  depan.    Hasil  penelitian  ini  jauh berbeda  dengan  penelitian  Rahmah  (2007) yang  memperlihatkan  motilitas  individu 71,75%,  dan  penelitian  Nursalamah  (2014) yang  mendapatkan  persentase  motilitas sebesar 68%±8,37.

## F. Persentase Spermatozoa Hidup
Persentase  spermatozoa  hidup  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  adalah 94,71±1,38%.    Nilai  ini  masih  termasuk dalam  kisaran  normal  dan  tidak  jauh berbeda dengan hasil penelitian Pratiwi dkk. (2006)  yaitu  93,5%±2,1.    Persentase spermatozoa hidup yang sama juga dilaporkan  oleh    Pamungkas  dkk.  (2006) yaitu sebesar 93,5±2,1%.

## G. Persentase Membran Plasma Utuh (MPU)
Keutuhan  membran  plasma  bagi spermatozoa  mutlak  diperlukan  untuk memenuhi  fungsinya  sebagai  pelindung organel  di  dalam  sel  dan  penyaring  bagi pertukaran zat intraseluler dan ekstraseluler. Rataan  persentase  membran  plasma  utuh spermatozoa yang diperoleh pada penelitian ini  adalah  96,14±1,46  %.    Persentase spermatozoa  yang  mempunyai  plasma membrane  utuh  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  masih  dalam  kisaran  normal jika  dihubungkan  dengan  kemampuan fertilisasi  seperti  yang  dikemukakan  oleh Revell  dan  Mrode  (1994)  bahwa  nilai persentase  keutuhan  membran  plasma  yang kurang  dari  60%  dikategorikan  sebagai spermatozoa yang infertil dan tidak memenuhi  syarat  untuk  diproses  lebih lanjut.  Saili dkk.(2000) menyatakan bahwa salah satu  kriteria  kualitas  spermatozoa yang  baik  adalah  apabila  memiliki  nilai persentase  keutuhan  membrane  lebih  dari 80%.

## H. Kualitas Spermatozoa Sapi Bali Setelah Sexing
Sebelum  proses  sexing  dilakukan, konsentrasi awal spermatozoa harus ditentukan  agar  secara  teknis  semen  tetap berada  di  lapisan  atas  kolom  sexing. Berdasarkan hasil uji coba diperoleh bahwa pengenceran semen sampai dengan konsentrasi  200  juta  per  mili  liter  masih memenuhi  syarat  secara  teknis  untuk digunakan pada proses sexing (Saili, 2000).
Proses sexing
spermatozoa berlangsung selama 20 menit, 35 menit dan 50 menit (sesuai perlakuan).Hal ini dimaksudkan untuk mengetahui waktu yang paling  efektif  dalam  upaya  memperoleh konsentrasi spermatozoa yang tinggi dengan motilitas  yang  masih  tetap  terjaga  pada kisaran motilitas yang dipersyaratkan untuk pengelolaan semen cair atau semen beku.

## I. Konsentrasi Spermatozoa Sapi Bali Setelah Sexing
Konsentrasi  spermatozoa  setelah sexing  diperoleh  dari  dua  bagian  yaitu spermatozoa  pada  lapisan  atas  (medium albumen  10%)  dan  spermatozoa  pada lapisan  bawah  (medium  albumen  30%). Pada  saat  sexing,  semen  sebanyak    1  ml dengan  konsentrasi  200  juta/ml  diletakkan
pada  lapisan  atas  kolom  dan  dibiarkan bergerak  ke  lapisan  albumen  baik  lapisan atas  maupun  lapisan  bawah. Setelah  proses sexing  selama  masih-masing  20,  35  dan  50 menit  maka  diperoleh  hasil  hitungan konsentrasi  spermatozoa  pada  masing- masing lapisan albumen seperti tertera pada Tabel 2.
Tabel 2. Rataan Konsentrasi Spermatozoa Sapi Bali Setelah Sexing
Perlakuan Lapisan Atas Bawah 20 130,29± 10,11 71,43± 25,58 35 125,43± 2,51 68,57± 24,63 50 121,29± 4,61 65,00± 23,43 Tabel 2 menunjukkan bahwa, rataan nilai  konsentrasi  spermatozoa  sapi Bali setelah  sexing  pada  lapisan  atas  pada inkubasi  20  menit,  35  menit, dan  50  menit adalah berturut-turut 130,29±10,11%, 125,43±2,51% dan 121,29±4,61%,
sementara  nilai  pada  lapisan  bawah  pada inkubasi  20  menit,  35  menit  dan  50  menit berturut-turut yaitu 71,43±25,58%, 68,57±24,63%, dan 65±23,43%.
Data  pada  Tabel  5  menunjukkan bahwa lapisan atas pada inkubasi 20, 35 dan 50  menit  tidak  ada  yang  berbeda  nyata (P>0,05).    Begitu  pula  di  lapisan  bawah pada inkubasi 20, 35 dan 50 menit tidak ada yang  berbeda  nyata  (P>0,05).    Konsentrasi pada  lapisan  atas  pada  inkubasi  20  menit lebih tinggi dari pada inkubasi 35 menit dan inkubasi  50  menit  lebih  rendah  dari  pada inkubasi 20 menit dan 35 menit, sedangkan konsentarsi lapisan bawah pada inkubasi 20 menit  lebih  rendah  dari  35  menit  namun pada  inkubasi  50  menit  lebih  tinggi  dari pada  inkubasi  35  dan  20  menit. Nilai konsentrasi  spermatozoa  pada  lapisan  atas terjadi  kecenderungan  penurunan  begitu pula  pada  lapisan  bawah.  Hal  ini  diduga karena  perbedaan  motilitas  spermatozoa yang meyebabkan menyebabkan ketidaksamaan distribusi spermatozoa.
Konsentrasi  spermatozoa  sapi  Bali hasil sexing menunjukkan  bahwa  gradien gradien  albumin mampu  mempertahankkan konsentrasi  spermatozoa  sapi  Bali.Hal  ini
sesuai  dengan  penelitian Ervandi et al,(2013) yang menyatakan bahwa konsentrasi spermatozoa pada lapisan atas (X) lebih tinggi dibandingkan dengan konsentrasi spermatozoa  pada  lapisan  bawah  (Y). Hasil penelitian  ini jauh  berbeda  dengan  hasil penelitian Sianturi et al. (2004), sexingmenggunakan  pengencer  trissitrat buferditambah  kuning  telur  menghasilkan konsentrasi  spermatozoa  pada  lapisan  atas dan  lapisan  bawah  masing-masing  sebesar 640,5±331,2  (106/ml)  dan  522,2±312,9 (106/ml).

## J. Rataan Persentase Motilitas Spermatozoa Sapi Bali Setelah Sexing
Pada  lapisan  atas,  perlakuan  lama  waktu sexing  20  menit  memiliki  nilai  persentase motilitas  spermatozoa  yang  lebih  tinggi 68,50±24,72%,  dibanding  dengan  lapisan atas  pada  perlakuan  lama  waktu  sexing  35 menit  dengan  nilai  persentase  motilitas sebesar  66,25±23,57%,  sedangkan  nilai persentase  motilitas  terendah  didapatkan pada perlakuan lama waktu sexing 50 menit dengan  persentase  65,00±23,19%.    Pada lapisan  bawah,  perlakuan  lama  waktu sexing  20  menit  memiliki  nilai  persentase motilitas sebesar 60,27±1,15% disusul lama waktu sexing 35 menit sebesar 60,00±21,31% dan nilai terendah ditunjukkan  oleh  perlakuan  lama  waktu sexing  50  menit  dengan  nilai  persentase 52,50±21,21%,.
Tabel 3. Rataan Persentase Motilitas SpermatozoaSapi Bali Setelah Sexing (%)
Perlakuan Lapisan Atas Bawah 20 68,50± 24,72 60,27± 1,15 35 66,25± 23,57 60,00± 21,31 50 65,00± 23,19 52,50± 21,21
Keterangan: Data pengamatan Diolah (2016).
Data  pada  Tabel  3  menunjukkan bahwa  perlakuan tidak berpengaruh  nyata terhadap motilitas spermatozoa pada lapisan bawah  (P>0.05).tetapi  tidak  berpengaruh terhadap motilitas spermatozoa pada lapisan atas.Secara  umum  dapat  dikatakan  bahwa semakin lama waktu sexing maka persentase  motilitas  spermatozoa  semakin menurun.  Hal ini sangat logis terjadi karena semakin  lama  spermatozoa  bergerak  akan semakin  banyak  energi  yang dibutuhkan sehingga  pada  akhirnya  akan  mengurangi kemampuannya bergerak.
Hasil penelitian ini masih lebih baik dari hasil penelitian Susilawati (2002) yang melaporkan  bahwa  motilitas  spermatozoa hasil sexing menggunakan medium albumin putih telur dan pengencer Tris aminomethan    kuning  telur  menghasilkan motilitas  spermatozoa  50,5%  pada  lapisan atas  dan  41%  pada  lapisan  bawah. Menurunnya persentase spermatozoa diduga  karena  semakin  lamanya  proses inkubasi  sehingga  membuat  spermatozoa bergerak  lebih  lama  dan  membutuhkan energi  lebih  banyak  untuk  menembus albumin  telur.  Spermatozoa  yang  banyak menggunakan  energi  maka  akan  menurun pula  nilai  persentase  motilitasnya  bahkan tidak bergerak sama sekali (Saili, 1999).
Hasil yang didapatkan pada persentase  motilitas  spermatozoa  sapi Bali setelah  sexing  pada  lapisan  atas  memiliki rataan  yang lebih tinggi  dari pada rataan di lapisan  bawah  hal  ini  disebabkan  kesulitan bergerak  spermatozoa  melewati  albumin putih telur di lapisan bawah. Menurut (Putra et  al., 2012)  mengatakan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  albumin  putih  telur menyebabkan  viskositas  larutan  meningkat yang  menyebabkan  gerak  spermatozoa
terhambat  dan  membutuhkan  tenaga  ekstra untuk  menembus  gradien  yang  berisi konsentrasi albumin putih telur.

## K. Rataan Persentase Spermatozoa Hidup Sapi Bali Setelah Sexing
Rataan persentase spermatozoa hidup  setelah  proses  sexing  menggunakan gradien  densitas  albumin  putih  telur disajikan pada Tabel 4 .
Data  pada  Tabel  4  menunjukkan bahwa perlakuan lama sexing tidak berpengaruh  (P>0.05)  terhadap  persentase spermatozoa  hidup  baik  pada  spermatozoa pada  lapisan  atas  maupun  pada  lapisan bawah.Nilai  rataan  persentase  spermatozoa hidup  lapisan  atas  semakin  lama  semakin rendah  yaitu  pada  inkubasi  20  menit memiliki  nilai  persentase  83,50±29,68%, inkubasi  35  memiliki  nilai  persentase 81,25±28,74%  dan  inkubasi  50  menit memiliki  nilai  persentase  81,01±2,26%. Begitu  juga  dengan  rataan  persentase spermatozoa  hidup  lapisan  bawah  semakin lama semakin rendah yaitu pada lama waktu sexing 20 menit memiliki nilai persentase76,88±1,83,  lama  waktu  sexing 35 menit memiliki nilai persentase 73,38±25,98%  dan  lama  waktu  sexing  50 menit memiliki nilai persentase 72,14±25,56%.
Tabel 4. Rataan Persentase Spermatozoa Hidup Sapi Bali Setelah Sexing (%)
Perlakuan
Lapisan
Atas Bawah 20 83,50± 29,68 76,88± 1,83 35 81,25± 28,74 73,38± 25,98 50 81,01± 2,26 72,14± 25.56 Hasil  penelitian  ini  lebih  kecil dibanding  penelitian  sexing    menggunakan pengencer andromed menghasilkan persentase  spermatozoa hidup  pada  lapisan atas  dan    lapisan  bawah  masing-masing adalah  91,91±3,88%  dan  92,12±1,78%. Kondisi  ini  sama  seperti  pengencer  CEP-2 ditambah  kuning  telur  10%  pada  lapisan atas  dan  lapisan  bawah  yakni  masing- masing  adalah  93,3±4,03  dan  92,9±2,04% (Purwoistri dkk., 2013).  Hasil penelitian ini masih  dikatakan  normal  seperti  hasil penelitian Pratiwi dkk. (2006) bahwa sexing menggunakan
pengencer Trisaminomethane kuning telur
menghasilkan persentase spermatozoa hidup  pada  lapisan  atas  85%  dan  lapisan bawah 84,7%  sedangkan  dalam  penelitian ini  masih  dalam  kisaran  di  atas  >80%. Keadaan ini diduga karena pengencer CEP- 2  ditambah  kuning  telur  10%  mampu menyediakan lingkungan yang optimal bagi spermatozoa  dan  melindungi  membran
sehingga  permeabilitas  membran  tetap normal  dan  tidak  rusak.Pengencer  CEP-2 mengandung sorbitol, yang berperan meningkatkan osmolaritas media pengencer dan  sebagai  sumber  energi  cadangan  yang baik  layaknya  cauda  epididimis  sapi,  yang mampu menyimpan spermatozoa selama 45 hari (Verberckmoes et al., 2004).

## L. Rataan Persentase Membran Plasma Utuh (MPU) Spermatozoa Sapi Bali Setelah   Sexing
Rataan persentase MPUspermatozoa sapi Bali  setelah  sexing  menggunakan gradien  densitas  albumin  putih  telur disajikan  pada  Tabel  5.Data  pada  Tabel  5 menunjukkan bahwa lapisan atas dan bawah pada persentase MPU spermatozoa sapi bali setelah  sexing  pada  masing-masing  lama waktu  sexing  20  menit,  35  menit,  dan  50 menit tidak berpengaruh nyata (P>0,05).
Tabel5. Rataan Persentase MPU Spermatozoa Setelah Sexing (%)
Perlakuan Lapisan Atas Bawah 20 81,63± 28,93 74,50±26,43 35 81,14± 28,77 72,43± 25,90 50 80,57± 28,91 70,00± 24,79
Keterangan: Data pengamatan Diolah (2016).
Nilai rataan persentase MPU lapisan atas makin rendah yaitu inkubasi 20 menit memiliki nilai persentase 81,14±28,77%, inkumasi 35 menit memiliki nilai  persentase  81,14±28,77%  sedangkan nilai  terendah  didapatkan  pada  lama inkubasi  50  menit  yaitu  80,57±28,91%. Sedangkan  pada  lapisan  bawah  memiliki nilai  rataan  persentase  MPU  yang  semakin lama semakin tinggi yaitu pada lama waktu sexing  20  menit  memiliki  nilai  persentase 74,50±26,43%, lama waktu sexing 35 menit
memiliki  nilai  persentase  72,43±25,90% sedangkan  nilai  terendah  didapatkan  pada lama  waktu  sexing  50  menit  yaitu 70,00±24,79%.
Menurut  Aireset al., (2003), kuning telur mengandung substansi protektif berupa  lesitin  dan  lipoprotein  (Aku et  al., 2007).  Lesitin  dan  lipoprotein  di  dalam kuning telur memilikimolekul-molekul besar yang tidak dapat menembus membran sel  spermatozoa  dan  berfungsi  untuk melindungi  dan  mempertahankan  integritas lipoprotein penyusun membran
spermatozoa (Susilawati, 2002).

## M. Hasil Inseminasi Buatan
Persentase non return rate (NRR) sapi
Bali  setelah  diinseminasi  buatan  dengan
sperma hasil sexing dalam observasi 21 hari disajikan pada Tabel 6
.
Tabel.  6  Persentase NonReturn RateSapi Bali Setelah Diinseminasi Buatan DenganSperma
Hasil Sexing Dalam Observasi 21 Hari (%) Umur Sapi (tahun) Sinkronisasi Inseminasi Buatan (IB) Jml sapi (ekor) Sapi yg estrus (ekor) EPPG (jam) Kualitas estrus (skor) Sapi yg di- IB (ekor) MKK (ekor) NRR (%) 3.0 – 4.9 32 17 72.68 2.4 32 4 88 5.0 – 6.9 20 15 68.32 2.5 20 3 85 ≥ 7 11 7 73.22 2.6 11 4 64 Jumlah 63 39 63 11 Rataan 71 2.5 79 Keterangan:
EPPG = estrus post PG (prostaglandin), lama waktu munculnya estrus setelah penyuntikan hormon prostaglandin
MKK = Minta kawin kembali, jumlah sapi yang minta kawin kembali dalam waktu 21 hari setelah di IB NRR= Non return rate, persentase sapi yang tidak minta kawin lagi dalam waktu 21 setelah di IB
Jumlah  sapi  yang  menjadi  resipien pada  penelitian  ini  adalah  63  ekor  yang dibagi ke dalam tiga kelompok umur,  yaitu 3.0 – 4.9  tahun  (32  ekor),  5.0 – 6.9  tahun (20 ekor), dan sapi dengan umur tujuh tahun atau lebih (7 ekor). Semua sapi disinkronisasi menggunakan preparat hormon  prostaglandin  (PGF2α)  dengan merk dagang capriglandin.Selanjutnya dilakukan  pengamatan  estrus  dan  diperoleh 39  ekor  (62%)  yang  memberikan  respon estrus  nyata  terhadap  sinkronisasi  dengan rataan  kualitas  estrus  2.5.  Hal  ini  mungkin disebabkan beberapa faktor, antara lain skor kondisi tubuh ternak yang sangat bervariasi dari 1,5 – 4.0 (skor penilaian 1-5).
Berdasarkan kelompok umur, kelompok sapi dengan kisaran umur 5.0 – 6.9 tahun  menunjukkan  respon  estrus  lebih awal  yaitu  68.32  jam  setelah  penyuntikan, disusul kelompok sapi dengan kisaran umur 3.0 – 4.9 yaitu 72,68 jam dan kelompok sapi dengan  kisaran  umur  7  tahun  atau  lebih yaitu 73,22 jam. Data tersebut menunjukkan bahwa  ada  kecenderungan  semakin  tua umur  sapi,  maka  respon  estrus  akibat penyuntikan hormon  PGF2α akan semakin lama.  Walaupun  hanya  62%  (39  ekor)  sapi
yang menunjukkan gejala estrus yang nyata, tetapi  inseminasi  buatan  tetap  dilakukan pada semua sapi resipien.Pengamatan estrus dilakukan  sampai  dengan  21  hari  setelah kegiatan  inseminasi.Sapi  yang  kembali estrus  dalam  kurun  waktu  setelah  estrus dicatat  sebagai  kelompok  sapi  yang  gagal bunting  pada  inseminasi  pertama  dan selanjutnya diinseminasi kembali.
Non  return  rate (NRR)  merupakan alat  deteksi  kebuntingan  berupa  persentase jumlah  betina yang  tidak  menunjukkan birahi  kembali  setelah  di-IB  dengan sexed sperm dalam  observasi  21  hari  setelah penginseminasian.  Berdasarkan  Tabel  6. Hasil  pengamatan  estrus  menunjukkan bahwa  ada  11  ekor  sapi  dari  63  ekor  sapi yang  estrus  kembali/minta  kawin  kembali setelah  inseminasi  pertama,  sedangkan jumlah  sapi  yang  tidak  estrus  kembali adalah 52 ekor (79%). Sapi-sapi  yang tidak menunjukkan gejala estrus setelah penyuntikan  pertama  dapat  dikategorikan sebagai  sapi  yang  diprediksi  bunting.Hasil penelitian  ini  masih  lebih  baik  dibanding penelitian  (Pamungkas  dkk,  2005)  yang menyatakan aplikasi inseminasi semen hasil sexing  pada  sapi  induk  peranakan  ongole
didapatkan  hasil  NRR  nya  sebesar  70%. Terkait  dengan  deteksi  kebuntingan  pada sapi  akseptor  IB  hasil  sexing,  Susilawati (2004)  melaporkan  bahwa  berdasarkan NRR  pada  21  dan  41  hari  keberhasilan kebuntingan  IB  hasil  sexing  tampak  lebih rendah  dibandingkan  IB  dengan  semen beku/control.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil dapat pembahasan maka disimpulkan bahwa:
1. Evaluasi terhadap kualitas spermatozoa sapi Bali dalam kondisi segar menunjukkan  hasil  yang  sesuai  dengan standar  untuk  diproses  lebih  lanjut menjadi  semen  sexing  dalam  bentuk cair.
2. Kualitas  spermatozoa sapi  Bali hasil sexing  dalam  penyimpanan  20  menit, 35  menit  dan  50  menit  menunjukkan penurunan dari kondisi segar baik pada persentase kosentrasi, persentase motilitas, persentase spermatozoa hidup dan  persentase  membran  plasma  utuh. Namun  penurunannya  itu  masih  diatas batas normal dan layak untuk diinseminasikan pada sapi induk.
3. Aplikasi  semen  hasil  sexing  pada  sapi Bali  menunjukkan  persentase non return  rate yang  baik  yaitu  sebesar
79%.

## DAFTAR PUSTAKA
Ervandi, M., T Susilawati, dan  S.
Wahyuningsi.2013. Pengaruh Pengencer yang Berbeda Terhadap Kualitas  Spermatozoa  Sapi  Hasil Sexing  dengan  Gradien  Albumin (Putih Telur). Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya.
Garner,  D.L. dan  E.S,EHafez.  1987. Spermatozoa  and  seminal  plasma. In:  Hafez  ESE,  Hafez  B,  editors.
Reproduction  in  farm  animal.  7th ed.  Philadelphia  (PA):  Lippincott
Williams and Wilkins. p. 962109. Pamugkas,  D.,  L.  Affandhy,  A.  Rasyid, D.B.  Wijono  dan  T.  Susilawati.
2003. Teknologi Pemisahan Spermatozoa X dan Y Sapi Potong Skala Laboratorium. Laporan Penelitian.  Loka  Penelitian  Sapi Potong. Pamugkas,  D.,  L.  Affandhy,  D.B.  Wijono dan Hartati. 2005.Aplikasi Inseminasi  Semen  hasil  Sexing Pada Sapi Induk Peranakan Ongole. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner.  Loka  Penelitian  Sapi Potong Saili,  T.  1999. Efektifitas  penggunaan
albumin  sebagai  medium  separasi dalam  upaya mengubah rasio alamiah  spermatozoa  pembawa kromosom X dan Y pada sapi.Tesis.Program  Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor
Saili, T., M.R. Toelihere, A. Boediono, dan B.  Tappa.  2000.  Keefektifan albumin  sebagai  media  pemisah spermatozoa sapi pembawa kromosom X dan Y. Jurnal Hayati. 7(4):106-109.
Saili, T., A. Bain, AS. Aku, M. Rusdin dan R.  Aka.  2011. Sinkronisasi  estrus melalui manipulasi hormon  agen luteolitik untuk meningkatkan efisiensi  reproduksi  Sapi  Bali  dan Peranakan  Ongole  di  Sulawesi Tenggara. Agriplus 21(1):50-54
Saili,  T.,  MR. Toelihere,  A.  Boediono  dan B. Tappa. 2000. Keefektifan albumen  sebagai media pemisah spermatozoa sapi pembawa kromosom  X  dan  Y. Hayati7:106- 109
Saili,  T.  1999.  Efektifitas  Penggunaan Albumin sebagai Medium Separasi  dalam  Upaya Mengubah Rasio Alamiah Spermatozoa Pembawa  Kromosom  X  dan  Y pada Sapi. Tesis. Program Pascasarjana,  Institut  Pertanian
Bogor.
Sianturi,
R.G, P. Situmorang, E.
Triwulaningsih, dan D.A.
Kusumaningrum.  2007.  Pengaruh
penambahan glutathione dan kolesterol pada pemisahan spermatozoa  X  dan  Y  dengan metode  kolom  albumin  telur. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner.  Bogor,  21222  Agustus 2007. Bogor. Sianturi, R.G., P. Situmorang, E.
Triwulanningsih,  T.  Sugiarti,  dan
D.A. Kusumaningrum. 2004. Pengaruh  isobutil  metilxantina
(IMX)  dan  waktu  pemisahan terhadap  kualitas  dan  efektivitas pemisahan  spermatozoa  dengan metode  kolom  albumin  telur. JITV. 9(4):246-251
Susilawati,  T.  2011. Spermatologi.  UB Press.Malang.
Susilawati,  T.  2003.  Tingkat  Keberhasilan Inseminasi  Buatan  Pada  Sapi peranakan  Ongole  Menggunakan Semen  Beku  Hasil  Sexing  dengan Gradien  Kosentrasi  Putih Telur. Protein,  Jurnal  Ilmiah  dan  Ilmu Peternakan  dan  Perikanan,  Juli- Desember.20 :1431-1438.
Susilawati, T., Hermanto, P. Srianto, dan E.
Yuliani. 2002. Pemisahan spermatozoa  X  dan  Y  pada  sapi brahman  menggunakan  gradien putih telur pada pengencer tris dan tris kuning telur. Jurnal Ilmu-Ilmu Hayati 14(2):176-181.