## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol.18, No.2, Desember 2021, Hal. 47-54 ISSN: 1693-7899  e-ISSN: 2716-3814

## UJI IRITASI DAN AKTIVITAS TABIR SURYA SECARA IN VITRO MINYAK BIJI PALA DALAM SISTEM MIKROEMULSI DENGAN VARIASI TWEEN 80-ETANOL
<satu spasi>
Sri Eka Rahmadany, Aza Zakiyatun Nida, Risha Fillah Fithria, Ayu Shabrina *
<satu spasi>
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang *Email: shabrina@unwahas.ac.id.
<satu spasi>

## INTISARI
<satu spasi>
Minyak  biji  pala  berpotensi  sebagai  tabir  surya.  Minyak  biji  pala  kurang  stabil  akibat  paparan cahaya dan udara sehingga dapat dibuat dalam sistem mikroemulsi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui nilai SPF secara in vitro dan indeks iritasi minyak biji pala dalam sistem mikroemulsi (MMBP) dengan Tween 80-etanol sebagai surfaktan dan kosurfaktan. Mikroemulsi dibuat dengan konsentrasi  minyak  biji  pala  6,4%  dan Tween  80-etanol  sebagai surfaktan-kosurfaktan  (1:1)  pada konsentrasi  45%  (F1),  50%  (F2),  55%  (F3).  Mikroemulsi  minyak  biji  pala  dilakukan  penentuan nilai  SPF  dengan  spektrofotometer  UV . Uji  iritasi  dilakukan  dengan  teknik patch  test pada  kulit kelinci  dengan  4  kelompok  perlakuan  yaitu  F1,  F2,  F3  dan  kontrol  negatif. Patch  test dilakukan dengan  mengoleskan  sediaan  pada  punggung  kelinci di  area  2  x  3 cm  dan  dilakukan  pengamatan pada jam ke 24, 48 dan 72. Data nilai SPF dianalisis secara deskriptif dan statistik dengan one way ANOVA dan data uji iritasi dijabarkan secara deskriptif. Hasil nilai SPF MMBP yaitu 8,9 ± 0,12 (F1);  9,2  ±  0,51  (F2);  dan  9,3  ±  0,32  (F3)  (p  >  0,05)  dan  seluruhnya  termasuk  kategori  proteksi maksimal.  Indeks  iritasi  primer  F1,  F2,  F3  secara  berturut-turut  yaitu  0,1±1;  0,3±2,5;  0,1±0; sehingga dapat disimpulkan sediaan mikroemulsi minyak biji pala mengiritasi sangat ringan. <satu spasi>
Kata kunci : aktivitas tabir surya, iritasi, mikroemulsi, minyak biji pala <dua spasi>

## ABSTRACT
<satu spasi>
Nutmeg oil contains of α-pinene that can be used as sunscreen but it is thermolable. It is necessary to form a microemulsion system for nutmeg oil. This study was to determine in vitro SPF value by and irritation index from nutmeg oil in microemulsion system with Tween 80-ethanol as surfactant and cosurfactant. The system were made with 6.4 %  of nutmeg oil and Tween 80-ethanol as with concentrations of 45% (F1), 50% (F2), 55% (F3). The nutmeg oil microemulsion was determined SPF value  using spectrophotometer UV. The irritation test was  done by the patch test  method on rabbit skin with 4 groups of negative control, F1, F2, and F3. The skin was observed at 24, 48 and 72  hours.  Quantitative  data  were  analyzed  using  one  way  Anova  while  irritation  test  data  were described descriptively. The results of the sunscreen activity on nutmeg oil microemulsion for F1, F2 and F3 were 8,9 ± 0,12; 9,2 ± 0,51; and 9,3 ± 0,32 (p > 0,05). This SPF value were categorized in  maximum  protection.  The  primary  irritation  index  values  for  F1,  F2  and  F3  were  0,1±1; 0,3±2,5;  0,1±0;  so  it  can  be  concluded  that  microemulsion  of  nutmeg  oil  were  very  mildly irritating.
<satu spasi> Keywords : irritation, microemulsion, nutmeg seed oil, sunscreen activity
Nama : Ayu Shabrina Institusi : Universitas Wahid Hasyim
Alamat institusi  : Jl Menoreh Tengah X/22 Sampangan E-mail : shabrina@unwahas.ac.id
dua spasi>

## PENDAHULUAN
Sinar matahari yang secara terus-menerus dipaparkan pada kulit dapat menimbulkan kelainan pada  kulit  diantaranya  peradangan  kulit  berupa  kemerahan  ( sunburn ),  warna  kulit  yang  menjadi lebih gelap ( tanning ), penuaan dini ( photoaging ) hingga kanker kulit (Kusmarinah, 2014). Hal ini dapat  dicegah  dan  dipulihkan  dengan  tabir  surya  (Baumann,  2009).  Tabir  surya  umumnya mengandung oxybenzone,  alfa  benzene,  octinoxate dan para  amino  benzene yang  dapat  diserap kulit hingga sistemik dan mengganggu sistem hormon (FDA, 2019). Minyak atsiri dapat digunakan sebagai alternatif tabir surya, salah satunya adalah minyak biji pala.
Minyak  biji  pala  memiliki  potensi  sebagai  tabir  surya  dengan  menyerap  sinar  UVB  dan memulihkan kulit akibat paparan sinar UV secara molekuler (Ansory dkk., 2019 dan Matulyte dkk., 2020).  Kemampuan  minyak  biji  pala  yang  mampu  mengabsorbsi  sinar  UVB disebabkan  oleh miristisin  yang  memiliki  gugus  kromofor,  auksokrom,  aromatik,  gugus  metilen  dioksi  dan  ikatan rangkap  terkonjugasi.  Nilai Sun  Protection  Factor (SPF)  yang  menunjukkan  kemampuan  produk tabir surya untuk melindungi kulit dari paparan sinar UV (Wood dan Murphy, 2000).
Mikroemulsi  memiliki  beberapa  keunggulan  diantaranya  stabil  dalam  jangka  waktu  yang lama, jernih dan transparan,  memiliki ukuran partikel yang kecil yaitu 10-100 nm sehingga dapat meningkatkan penyerapan minyak biji pala pada kulit  (Elfiyani dkk., 2017). Mikroemulsi minyak biji  pala  menunjukkan  stabilitas  fisik  dan  aktivitas  antioksidan  setelah  6  siklus  penyimpanan (Shabrina dkk., 2021).  Salah satu surfaktan yang digunakan dalam  mikroemulsi adalah Tween 80 dan  kosurfaktan  adalah  etanol.  Kombinasi  Tween  80  dan  etanol-fosfolipid  sebagai  surfaktan- kosurfaktan  mampu  meningkatkan  stabilitas  serta  absorbsi  obat  ke  dalam  kulit  serta  tidak menimbulkan iritasi (Sharma dkk., 2016).
Iritasi kulit dapat terjadi akibat penggunaan minyak atsiri (Tisseran, 2020). Tween 80 dalam sediaan  nanoemulsi  biji  karika  tidak  menimbulkan  eritema  dan  edema  (Kusumawardani,  2019). Iritasi  dapat  ditandai  dengan  reaksi  kemerahan  (eritema)  dan  pembengkakan  (edema).  Penelitian Widiyastuti  dkk.,  (2018)  menyatakan  bahwa  minyak  biji  pala  memiliki  indeks  iritasi  kulit  pada konsentrasi 10% dan tidak menimbulkan eritema dan edema pada konsentrasi 4%, 6% dan 8%.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Minyak  biji  pala  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  didapatkan  dari  PT.  Nusaroma Essential  Indonesia.  Bahan  lain  yang  digunakan  adalah  metanol  ( analytical  grade ),  Tween  80, benzil alkohol dan etanol didapatkan dari CV. Multi Kimia Raya ( technical grade ). Parasol cooling mist sun spray SPF 25+ PA++ digunakan sebagai faktor koreksi. Hewan uji yang digunakan yaitu kelinci New Zealand berwarna putih dengan berat badan 2-3 kg berjenis kelamin jantan sebanyak 3 ekor yang didapatkan dari peternakan kelinci Aza Akmal Rabbit Farm, Kendal.
Alat
Alat-alat  gelas  (Pyrex®), magnetic  heater  stirrer (Scilogex®) , spektrofotometer  UV  1800 (Shimadzu®), particle  size  analyzer SZ-100,  mikropipet  (Scilogex®),  perban  non-iritan (Hypafic®), kasa steril (Onemed®).

## Pembuatan Minyak Biji Pala dalam Sistem Mikroemulsi
Sistem  dibuat  dengan  cara  pemanasan  aquades  hingga  suhu  30°C.  Tween  80,  etanol,  dan benzil  alkohol  dicampurkan  ke  dalam  aquadest  hingga  larut  dan  jernih.  Pengadukan  dilakukan menggunakan magnetic  stirrer pada  kecepatan  700  rpm  dan  suhu  30°C.  Minyak  biji  pala ditambahkan sedikit demi sedikit agar sediaan dapat dipertahankan kejernihannya. Hasil campuran
kemudian diuji ukuran partikelnya menggunakan Particle Size Analyzer untuk memastikan sistem yang terbentuk adalah mikroemulsi (Shabrina dkk., 2020). Formula mikroemulsi minyak biji dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I. Formula minyak biji pala dalam sistem mikroemulsi
Bahan Konsentrasi (%) Fungsi F1 (45) F2 (50) F3 (55) Minyak biji pala 6,4 ml 6,4 ml 6,4 ml Zat aktif Tween 80 22,5ml 25ml 27,5ml Surfaktan Etanol 22,5 ml 25 ml 27,5 ml Kosurfaktan Benzil alkohol 1 ml 1 ml 1 ml Pengawet Aquades 47,6 ml 42,6 ml 37,6 ml Pelarut

## Uji Aktivitas Tabir Surya Minyak Biji Pala dalam Sistem Mikroemulsi Penentuan faktor koreksi
Penentuan faktor koreksi dilakukan dengan mengukur serapan produk tabir surya yang sudah beredar  dengan  bentuk  sediaan  yang  sama  atau  serupa  dengan  sistem  mikroemulsi.  Pengukuran serapan  dilakukan  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  sinar  UV-B.  Nilai absorbansi yang sudah didapat kemudian dimasukkan ke dalam rumus Mansur dengan CF sebagai variabel yang ditentukan (Artini, 2020). Rumus perhitungan berdasarkan persamaan Mansur dapat dilihat sebagai berikut.
Keterangan  :
CF : Correction Factor atau Faktor Koreksi
Abs : Serapan sampel EE : Efektifitas eritema yang disebabkan sinar UV pada panjang gelombang I : Intensitas sinar UV pada panjang gelombang

## Penentuan nilai SPF
Mikroemulsi  minyak  biji  pala  sebanyak  0,5  ml  diambil  pada  masing-masing  konsentrasi, kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  hingga  10  ml  dan  dihomogenkan  dengan  vortex.  Sampel diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang  290-320  nm  dengan  spektrofotometer  UV-Vis. Serapan  sampel  dicatat  setiap  interval  5  nm  (Ismail  dkk.,  2014).  Hasil  serapan  yang  didapat kemudian  dihitung  dan  dicatat  dengan  menggunakan  persamaan  Mansur,  sehingga  didapat  nilai SPF (Mansur dkk., 1986).

## Uji Iritasi
Pengujian dilakukan dengan patch test method . Pengujian ini berdasarkan persetujuan komite etik  FKIK  UMY  dengan  nomor  034/EC/KEPK  FKIK  UMY/V/2021  pada  tanggal  3  Mei  2021. Total  hewan  uji  yang  digunakan  yaitu  3  ekor.  Kelinci  yang  sudah  diaklimatisasi  dilakukan pencukuran  pada  punggung  kelinci  1  hari  sebelum  percobaan.Punggung  kelinci  dibagi  menjadi  4 area  berukuran  2  x  3  cm  dengan  kode  F1,  F2,  F3,  dan  KN  yaitu  kontrol  negatif  berupa  sistem mikroemulsi tanpa minyak biji pala serta satu area lainnya dengan kode (-) yaitu kulit normal tanpa perlakuan.  Sediaan  uji  sebanyak  0,5  ml  diletakkan  pada  kasa  steril  dan  ditempelkan  pada  kulit punggung  kelinci  yang  bulunya  telah  dicukur.  Kemudian daerah  uji  ditutup  menggunakan  perban bersifat  non-iritan  (ISO  10993.10, 2010) kemudian didiamkan selama 4 jam. Setelah 4 jam, kasa dibuka  dan  residu  sediaan  uji  dihilangkan  dari  punggung  kelinci  dengan  menggunakan  air.  Kulit punggung  kelinci  diamati  pada  jam  ke-1,  24,  48  dan  72  jam  setelah  pemberian  sediaan  (BPOM, 2014). Kulit punggung hewan uji dinyatakan iritasi apabila terdapat eritema dan edema. Kategori iritasi  yaitu  0-0,04  termasuk  iritasi  sangat  ringan;  0,5-1,9  termasuk  iritasi  ringan;  2-4,9  termasuk iritasi sedang dan 5-8 termasuk iritasi kuat.

## Analisis Data
Data nilai SPF mikroemulsi minyak biji pala dianalisis secara deskriptif berdasarkan kategori aktivitas tabir surya serta secara statistik menggunakan one way ANOVA. Data uji iritasi dianalisis secara deskriptif berdasarkan kategori iritasi.
<satu spasi>

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Minyak  biji  pala  dalam  sistem  mikroemulsi  menunjukkan  warna  kuning  muda,  jernih, homogen, dan aroma khas minyak biji. Hasil ukuran partikel menunjukkan bahwa ukuran partikel mikroemulsi minyak biji pala adalah 22,6 nm (F1), 20,7 nm (F2) dan 14,4 nm (F3). Penelitian ini sejalan dengan penelitian Faradisa (2019) bahwa mikroemulsi dengan Tween 80 dan etanol sebagai surfaktan dan kosurfaktan menghasilan sistem yang jernih dan stabil. Mikroemulsi dengan Tween 80  dan  etanol  sebagai  surfaktan-kosurfaktan  menghasilkan  sistem  dengan  ukuran  droplet  kurang dari 50 nm (Amalia, 2015). Hasil mikroemulsi minyak biji pala dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1. Hasil mikroemulsi minyak biji pala F1 (a), F2 (b) dan F3 (c)
Penentuan  faktor  koreksi  dalam  rangka  penetapan  nilai  SPF  dilakukan  untuk  mengetahui toleransi  penggunaan  spektrofotometer  dan  pelarut,  sehingga  pengukuran  tetap  akurat  dengan kondisi, alat dan bahan yang digunakan. Serapan diukur pada panjang gelombang UVB yaitu 290- 320 nm (Karina, 2015). Data absorbansi dari sediaan parasol cooling mist sun spray SPF 25+ PA++ dapat dilihat pada gambar II . i>
Hasil  penentuan  faktor  koreksi  dari  produk  Parasol cooling  mist  sun  spray SPF  25+  PA++ didapatkan  nilai  sebesar  6,681.  Nilai  faktor  koreksi  ini  selanjutnya  digunakan  untuk  menghitung nilai  SPF  pada  sediaan  mikroemulsi  minyak  biji  pala.  Hasil  nilai  SPF  Parasol cooling  mist  sun spray tidak sesuai yang tertera pada etiket produk. Hal ini  dapat terjadi dikarenakan tidak adanya penerapan  metode  yang  baku  untuk  melakukan  evaluasi  aktivitas  tabir  surya  dan  penggunaan pelarut atau metode yang mungkin berbeda diantara produk komersial (Artini, 2020).
Gambar 2. Absorbansi sediaan Parasol cooling mist sun spray SPF 25+ PA++
a b c
Data absorbansi sediaan parasol cooling mist sun spray SPF 25+ PA++ yang dimasukkan ke dalam rumus Mansur dkk., (1986) sebagai berikut:
= 3,742

## CF
Data hasil nilai SPF sediaan minyak biji pala  dalam sistem mikroemulsi dengan Tween 80- etanol dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II. N ilai SPF minyak biji pala dalam sistem mikroemulsi
dengan variasi Tween 80-etanol Formula NIlai SPF (X ± SD) Kategori F1 8,9 ± 0,12 Maksimal F2 9,2 ± 0,51 Maksimal F3 9,3 ± 0,32 Maksimal
Hasil  uji  aktivitas  tabir  surya  mikroemulsi  minyak  biji  pala  menunjukkan  tidak  adanya perbedaan  nilai  SPF  pada  masing-masing  formula  sehingga  surfaktan  dan  kosurfaktan  tidak mempengaruhi  aktivitas  tabir  surya  dari  sistem  mikroemulsi.  Nilai  SPF  mikroemulsi  minyak  biji pala termasuk ke dalam kategori perlindungan maksimal. Aktivitas tabir surya ini disebabkan oleh adanya senyawa miristisin yang terkandung dalam minyak biji pala. Aktivitas penyerapan sinar UV juga didukung oleh komponen monoterpen yaitu α-pinen dan β-pinen (Gupta dkk., 2013).
Senyawa  ini  selain  memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan,  juga  mampu  mendukung mekanisme  aktivitas  tabir  surya.  Komponen  tersebut  dapat  berkompetisi  dengan  senyawa  yang dirusak  oleh  sinar  matahari  dan  mampu  mengurangi  ataupun  mengacaukan  efek  yang  merugikan dari radikal bebas (Pratama dan Zulkarnain, 2015). Penelitian ini sejalan dengan penelitian Ansory tahun 2019 bahwa minyak biji pala memiliki aktivitas tabir surya. Aktivitas tabir surya minyak biji pala  dapat  dipertahankan  dalam  sistem  mikroemulsi  akibat  adanya  pembentukan  misel  oleh surfaktan dan kosurfaktan (Maryam dan Balaji, 2015).
Pengamatan  iritasi  pada  kulit  kelinci  dilakukan  oleh  dokter  hewan  (SIP:  DRH  NO. 503/15/IDHP/XII/2020). Hasil uji iritasi dapat dilihat pada gambar 3.
a b c

## Gambar 3. Hasil uji iritasi (a) pengamatan pada jam ke 24, (b) pengamatan pada jam ke 48 dan pengamatan pada jam ke 72 (c)
Hasil pengamatan iritasi minyak biji pala dalam sistem mikroemulsi dengan variasi Tween 80-etanol dapat dilihat pada Tabel III.

## =

## Tabel III. Hasil pengamatan iritasi mikroemulsi minyak biji pala dengan variasi Tween 80-etanol sebagai surfaktan dan kosurfaktan
Formula Keterangan Jam ke 24 Jam ke 48 Jam ke 72 Eritema  Edema  Eritema  Edema   Eritema  Edema F1 (40%) Replikasi 1 0 0 0 0 0 0 Replikasi 2 1 0 1 0 0 0 Replikasi 3 1 0 0 0 0 0 F2 (45%) Replikasi 1 0 0 0 0 0 0 Replikasi 2 1 2 1 1 0 0 Replikasi 3 1 1 0 0 0 0 F3 (50%) Replikasi 1 0 0 0 0 0 0 Replikasi 2 0 0 0 0 0 0 Replikasi 3 0 1 0 1 0 1 KN (Tanpa perlakuan) F1 0 0 0 0 0 0 F2 0 0 0 0 0 0 F3 0 0 0 0 0 0
Berdasarkan  skor  iritasi  dapat  dilihat  untuk  kulit  yang  tidak  diberi  perlakuan  apapun memiliki  nilai  yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  kulit  yang  diberikan  mikroemulsi  minyak biji  pala.  Hasil indeks iritasi primer  mikroemulsi  minyak  biji pala  dengan  Tween  80-etanol  dapat dilihat pada Tabel IV.

## Tabel IV.  Indeks iritasi primer minyak biji pala dalam sistem mikroemulsi
Formula Indeks Iritasi Primer Kategori respon F1 (40%) 0,1 Sangat ringan F2 (45%) 0,3 Sangat ringan F3 (50%) 0,1 Sangat ringan
Hasil  indeks  iritasi  primer  untuk  ketiga  formula  menunjukkan  bahwa  iritasi  bersifat  sangat ringan.  Hasil  uji  iritasi  kulit pada  F2 jam  ke  24  memiliki  skor  edema  tertinggi  yang  dapat  dilihat pada gambar 4.

## Gambar 4. Hasil uji iritasi kulit F2 pada jam ke 24 yang mengalami eritema dan edema
Terjadinya  eritema  dan  edema  pada  kulit  kelinci  dapat  juga  disebabkan  oleh  pencukuran yang dilakukan, yaitu adanya goresan pada area yang dicukur (Zulkarnain dkk., 2013). Kulit hewan coba  khususnya  kelinci  memiliki  tingkat  sensitivitas  yang  sedikit  berbeda  dengan  kulit  manusia. Tingkat iritasi pada kulit kelinci mudah terlihat jika dibandingkan dengan kulit manusia, maka hal ini  perlu  diperhatikan,  sehingga  potensi  iritasi  pada  kulit  manusia  dapat  lebih  diwaspadai (Fatmawaty, 2016).
Eritema
Edema

## KESIMPULAN
Minyak  biji  pala  dalam  sistem  mikroemulsi  dengan  variasi  Tween  80-etanol  sebagai  surfaktan- kosurfaktan memiliki aktivitas tabir surya proteksi maksimal dengan nilai SPF (X̄±SD) sebesar 8,9 ± 0,12 (F1); 9,2 ± 0,51 (F2); dan 9,3 ± 0,32 (F3). Skor indeks iritasi primer dengan kategori iritasi sangat ringan. Nilai skor indeks iritasi primer yang dihasilkan yaitu 0,1±1 (F1); 0,3±2,5 (F2); 0,1±0 (F3).

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia,  A.R.,  2015,  Efek  Perbandingan  Surfaktan  dan  Kosurfaktan  pada  Sistem  Mikroemulsi Terhadap Pelepasan Ovalbumin (Mikroemulsi Tipe W/O dengan Surfaktan (Span 80 -Tween 80) : Kosurfaktan (Etanol), Skripsi , Surabaya: Universitas Airlangga.
Ansory,  H.M.,  Sari,  E.  N.,  Nilawati,  A.,  Handayani,  S.,  dan  Aznan,  N.,  2019  Sunscreen  and Antioxidant Potential of Myristicin in Nutmeg Essential Oils ( Myristica fragrans), 2nd Bakti Tunas Husada-Health Science International Conference , 138-142. Artini, N.P.R., 2020, Validasi dan Verifikasi Hasil Uji Sun Protection Factor (SPF) pada Sediaan Sunblock  dan  Sunscreen  Bermerk  dengan  Metode  Spektrofotometri, The  Journal  of Muhammadiyah Medical Laboratory Technologist , 3 , 29-38. Baumann, L., 2009, Cosmetic Dermatology Principles and Practice, second edition , The Mc Graw- Hill Book Companies inc, New York.
Elfiyani, R., Amalia, A., dan Pratama, S.Y., 2017, Effect of Using the Combination of  Tween 80 and  Ethanol  on  the  Forming  and  Physical  Stability  of  Microemulsion  of  Eucalyptus  Oil  as Antibacterial, JYoung Pharm , 1 , 51-54.
Faradisa, H., 2019, Optimasi Tween 80 Dan Etanol dalam Nanoemulsi Minyak Atsiri Jahe Gajah ( Zingiber  Officinale Var.  Officinale)  Sebagai  Antioksidan, Skripsi ,  Jember:  Universitas Jember.
Fatmawaty,  A.,  Manggau,  M.A.,  Tayeb,  R.,  dan  Adawiah,  R.A.,  2016,  Uji  Iritasi  Krim  Hasil Fermentasi  Bunga  Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  dengan  Variasi  Konsentrasi  Emulgator Novemer  pada  Kulit  Kelinci (Oryctolagus  cuniculus), Journal  of  Pharmaceutical  and Medicinal Sciences, 1, 65.
FDA,  2019, FDA  Advances  New  Proposed  Regulation  To  Make  Sure  That  Sunscreens  Are  Safe And  Effective , https://www.fda.gov/news events/press-announcements/fda-advances-new- proposed-regulation-make sure sunscreens-are-safe-and-effective, (diakses pada 14 desember 2020)
Gupta,  A.D.,  Bansal,  V.K.,  Babu,  V.,  dan  Maithil,  N,  2013,  Chemistry,  antioxidant  and antimicrobial potential of nutmeg (MyristicafragransHoutt), Journal of Genetic Engineering and Biotechnology , 11 , 25-31.
Ismail, I., Handayany, G.N., Wahyuni, D., dan Juliandri, 2014, Formulasi dan Penentuan Nilai SPF ( Sun Protecting Factor ) Sediaan Krim Tabir Surya Ekstrak Etanol Daun Kemangi ( Ocimum sanctum L .), Jurnal Farmasi FIK UINAM, 2 , 8.
ISO  10993-10,  2010, International  Standard  Tests  for  irritation  and  skin  sensitization ,  ISO, Switzerland.
Karina,  N.,  2015,  Penentuan  Nilai Sun  Protection  Factor (SPF)  Ekstrak  dan  Fraksi  Rimpang Lengkuas (Alpinia Galanga) sebagai Tabir Surya dengan Metode Spektrofotometri Uv-Vis, Naskah Publikasi , Universitas Tanjungpura Pontianak. Kusmarinah, B., 2014, Manifestasi Akut Photodamage : Sutan dan Sunburn, National Simposium Skin Photodamage Up Date, Jakarta.
Kusumawardani, G.P., 2019, Optimasi Dan Karakterisasi Nanoemulsi Ekstrak Daun Karika (Lenne K. Koch) Sebagai Kandidat Skin Anti Aging , Skripsi , Univeristas Ngudi Waluyo Semarang. Mansur,  J.S.,  Breeder,  M.N.,  dan  Azulay,  R.D.,  1986,  Determination  of  sun  protection  factor  for spectrophotometry, An Bras. Dermatol, 61 , 121-24.
Maryam, T., dan Balaji, 2015, Formulation and In-Vitro Evaluation of Vincristine  Microemulsion by using Nigella Sativa Oil, International Journal of  Farmacia , 1(2) , 81-83.
Matulyte,  I.  J.  (2020).  The  Essential  Oil  and  Hydrolats  from  Myristica  fragrans  Seeds  with Magnesium  Aluminometasilicate  as  Excipient:  Antioxidant,  Antibacterial,  and  Anti- inflammatory Activity. Foods, 9 (1), 8-11.
Pratama,  W.,A.,  dan  Zulkarnain,  A.,K.,  2015,  Uji  SPF  In  Vitro  dan  Sifat  Fisik  Beberapa  Produk Tabir Surya yang Beredar di Pasaran, Majalah Farmaseutik , 1 ,275-283.
Shabrina,  A.,  Pratiwi,  A.R.,  Murrukmihadi,  M.,  2020,  Stabilitas  dan  Antioksidan  Mikroemulsi Minyak Nilam dengan Variasi Tween 80 dan PEG 400, Media Farmasi, XVI, 2 , 185-192. Shabrina, A., Safitri, E. I., & Pratiwi, I. (2021). Uji Stabilitas Fisik dan Antioksidan Mikroemulsi Minyak Biji Pala dengan Variasi Tween 80 – PEG 400. Media Farmasi, 17 (1), 25-30. Sharma,  G.,  Dhankar,  G.,  Thakur,  K.,  Raza,  K.,  dan  Katare,  O.,  2016,  Benzyl  Benzoate-Loaded Microemulsion  for  Topical  Applications:  Enhanced  Dermatokinetic  Profile  and  Better Delivery Promises, AAPS PharmSciTech, 5, 12-29. Tisseran,  2020, Irritation  and  Allergic  Reaction , https://tisserandinstitute.org/ safety/irritation- allergic-reactions/, (Diakses pada 9 September 2021).
Widiyastuti,  L.,  Ikhsanudin,  A.,  dan  Noorlina,  2018,  Aktivitas  Repelan  Minyak  Atsiri  Pala ( Myristica fragans Houtt.) pada Nyamuk Aedes aegypti, Media Farmasi, 15 , 19-20. Wood, C. dan Murphy, E., 2000, Sunscreen Efficacy, Glob.Cosmet. Ind., Duluth , 167 , 38-44.
Zulkarnain,  A.K.,  Susanti,  M.,  dan  Lathifa,  A.N.,  2013,  Stabilitas  Fisik  Lotion  O/W  dan  W/O Ekstrak  Buah  Mahkota  Dewa  sebagai  Tabir  Surya  dan  Uji  Iritasi  Primer  pada  Kelinci, Traditional Medicine Journal , 18 , 149.