AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN INHIBITOR NITRIT OKSIDA EKSTRAK ETANOL KULIT BIJI KACANG HIJAU ( Vigna radiata L.)

## ANTIOXIDANT ACTIVITY AND NITRIC OXIDE INHIBITION OF ETHANOL EXTRACT FROM MUNG BEAN (Vigna radiata L.) SEED COAT
Suryani 1* , Rizanty Amalia 1 , Julia Rahma Fajriati 1 , Yudhistira Eko Febrianto 1 , Retno Nuur Aziizah 1 , Mutia Ghaida Kahla 1 , Rd. Isma Zikra Hanifa 1 , Inayatus Syahra Anjali 1
1 Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Indonesia
*Corresponding author email: suryani@lecture.unjani.ac.id

## Abstrak
Kulit biji kacang hijau ( Vigna radiata L .) saat ini tidak dimanfaatkan dan menjadi limbah sisa produksi makanan, salah satunya sebagai limbah dari tauge. Kulit biji kacang hijau diketahui  kaya  akan  flavonoid  sehingga  besar  peluang  untuk  memanfaatkan  limbah menjadi  salah  satu  komponen  yang  baik  untuk  kesehatan  tubuh  yaitu  sebagai  sumber antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  aktivitas  antioksidan  dan potensi inhibisi nitrit oksida dari ekstrak etanol kulit biji kacang hijau. Ekstrak diperoleh melalui metode maserasi menggunakan etanol 96% dengan rendemen sebesar 0,9947%. Aktivitas  antioksidan  diuji  menggunakan  metode  DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), sedangkan potensi inhibisi nitrit oksida diukur melalui penguraian SNP menjadi NO yang diukur dengan pereaksi Griess. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit biji kacang hijau memiliki aktivitas antioksidan yang kuat dengan nilai IC 50 sebesar 91,36 μg/mL terhadap radikal bebas DPPH. Selain itu, ekstrak juga menunjukkan kemampuan yang signifikan dalam menghambat pembentukan nitrit oksida dengan nilai IC 50 sebesar 88,05 μg/mL. Aktivitas ini diduga berkaitan dengan kandungan senyawa flavonoid dalam ekstrak,  terutama  vitexin  dan  luteolin.  Hasil  penelitian  ini  mengindikasikan  bahwa ekstrak etanol kulit biji kacang hijau berpotensi sebagai sumber antioksidan alami dan dapat  dikembangkan  lebih  lanjut  untuk  pencegahan  penyakit  degeneratif  terkait  stres oksidatif.
Kata kunci :  antioksidan, dpph, nitrit oksida, Vigna radiata (L.)

## Abstract
Mung bean (Vigna radiata L.) seed coats are currently underutilized and become waste from food production, including as a waste product of bean sprouts. Mung bean  seed coats are known rich in flavonoids compound. It was presenting a significant opportunity to utilize this waste as a beneficial component for human health as antioxidant. This study aimed to evaluate the antioxidant activity and potential nitric oxide inhibition of ethanol extracts from mung bean seed coats. The extract was obtained through maceration using 96% ethanol, yielding 0.9947%. Antioxidant activity was assessed using the DPPH (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl) method, while nitric oxide inhibition potential was measured through the decomposition of SNP into NO, quantified using  Griess  reagent.    Results
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712
showed that the ethanol extract of mung bean seed coats exhibited strong antioxidant activity with an IC 50 91.36 μg/mL against DPPH free radicals. Additionally, the extract demonstrated  significant  ability  to  inhibit  nitric  oxide  formation  with  an  IC 50 88.05 μg/mL. This activity is likely related to the flavonoid content in the extract, particularly vitexin and luteolin. These findings indicate that the ethanol extract of mung bean seed coats has potential as a natural antioxidant source and could be further developed for the prevention of degenerative diseases associated with oxidative stress.
Keywords : antioxidant, dpph, nitrite oxide, Vigna radiata (L.) .

## PENDAHULUAN
Penuaan  didefinisikan  sebagai proses  penurunan  fungsi  fisiologis secara  bertahap  yang  berpengaruh terhadap  kesehatan  dan  penurunan kualitas  hidup  individu,  sehingga  dapat mengakibatkan mortalitas dan morbiditas  (Chen et  al. 2021).  Penuaan menjadi  salah  satu  kontributor  utama yang berkaitan erat dengan patofisologi beberapa  penyakit  degeneratif  kronis seperti  diabetes  melitus,  alzheimer, parkinson, aterosklerosis, infark
miokard,  stroke,  dan  gagal  jantung (Cruz-Almeida et al. 2019). Berdasarkan data  WHO  pada  tahun  2020,  tingkat kematian akibat penyakit degeneratif di Indonesia  mencapai  73%  dari  total populasi  (World  Health  Organization 2020).  Pada  tahun  2018  prevalensi penyakit  tidak  menular  di  Indonesia mengalami  peningkatan  sejak  tahun 2013  yaitu  sebesar  34,1%  untuk hipertensi;  10,9%  untuk  stroke;  8,5% untuk diabetes; 3,8% untuk gagal ginjal; dan  1,8  %  untuk  penyakit  kanker. Program  pemerintah  saat  ini  adalah menurunkan prevalensi penyakit
degeneratif  (Kemenkes RI, 2018), Oleh karena itu, peningkatan pola hidup sehat dapat menjadi cara untuk meningkatkan taraf  kesehatan  penduduk  Indonesia. Penggunaan  suplemen  kesehatan  yang
bersifat anti-aging yang  kaya  akan antioksidan  adalah  salah  satu  strategi mencegah  penyakit  degeneratif  akibat penuaan,  karena  dapat  mencegah kerusakan sel dan organ penyusun tubuh. Hal  tersebut  diharapkan  akan  menekan angka  mortalitas  serta  prevalensi penyakit degeneratif di Indonesia.
Antioksidan merupakan zat yang dapat  melindungi  sistem  biologis  dari toksisitas radikal bebas melalui penghambatan reaksi oksidasi, sehingga mencegah  terjadinya  kondisi  stres oksidatif yang berakhir dengan penuaan sel.  Stress  oksidatif  merupakan  suatu kondisi  yang  terjadi  karena  adanya ketidakseimbangan  antara  produksi radikal bebas dengan sistem pertahanan antioksidan  di  dalam  tubuh.  Radikal bebas  dapat  diklasifikasikan  menjadi Spesies  Oksigen  Reaktif  (ROS)  dan Spesies Nitrogen Reaktif (RNS) (Agarwal  and  Majzoub,  2017).  ROS dapat bereaksi dengan Nitric Oxide (NO) yang  dapat  menyebabkan  disfungsi endotel.  NO  cepat  berinteraksi  dengan banyak  ROS  lain,  terutama  O2-,  untuk menghasilkan ONOO- dan menyebabkan  peningkatan  produksi RNA dapat menyebabkan stress nitrosative  dan  mengganggu  fungsi fisiologis  normal   tubuh. Nitric  oxide (NO)   adalah    radikal   RNS.      Target
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712
antioksidan  didalam  tubuh  adalah mampu  menghambat  ROS  dan  RNS
(Gulcin, 2020) Berdasarkan sumbernya
antioksidan  terdiri  dari  antioksidan endogen  dan  eksogen.  Antioksidan endogen  merupakan  antioksidan  alami yang  dihasilkan  oleh  tubuh  secara intraseluler maupun ekstraseluler, seperti superoxide  dismutase (SOD),
glutation  peroksidase (GPx)  dan Catalase (Cat).  Untuk  memenuhi kebutuhan  jumlah  antioksidan  tubuh dalam  menangkal  radikal  bebas  tubuh memerlukan  antioksidan  tambahan  dari luar  tubuh  yang  disebut  antioksidan eksogen (Ardalan 2014).
Antioksidan eksogen dapat
berasal  dari  antioksidan  alami  yang berasal  dari  hewan  atau  tumbuhan. Penggunaan  bahan  alam  dan  obat tradisional  di  Indonesia  semakin digemari masyarakat. Indonesia dikenal sebagai  negara  tropis  yang  kaya  akan sumber  daya  alam  dan  biodiversitas hayati  yang  tinggi,  banyak  tumbuhan khas  Indonesia  yang  berpotensi  dan dapat dimanfaatkan sebagai antioksidan alami. Salah  satu  tanaman  yang berpotensi sebagai antioksidan alami di Indonesia  adalah  kacang  hijau  ( Vigna radiata (L. ). R. Wilczek). Kacang hijau kaya  akan  kandungan  polifenol  dengan konstituen  utama  adalah  asam  fenolat, flavonoid,  dan  tannin.  Hasil  penelitian menunjukkan,  ekstrak  etanol  dari  biji kacang  hijau  memiliki  kadar  flavonoid total yang lebih besar dari daun (Singh et al. 2015) . Kacang  hijau  merupakan  salah satu  komoditi  pangan  nasional  yang sudah banyak dikonsumsi oleh
masyarakat  Indonesia  dan  banyak dibudidaya  (Kepmentan  RI  2020).
Berdasarkan  data  Badan  Pusat  Statistik pada tahun 2018, produksi kacang hijau di  Indonesia  terus  meningkat  dan mencapai 234,718 ton. Secara tradisional masyarakat Indonesia sering memanfaatkan biji kacang hijau sebagai bahan  olahan  pangan  seperti  isian  kue, bubur  kacang  hijau,  dan  sayur  (tauge). Saat ini, masyarakat memanfaatkan kulit biji  kacang  hijau  sebagai  campuran pakan  ternak,  industri  tepung,  dan adjuvan  olahan  panga.  Hal  ini menunjukan  bahwa  kulit  biji  kacang hijau terutama yang terbuang dari tauge, belum  dimanfaatkan  secara  optimal sehingga  menjadi  limbah  dan  terbuang (Handayani 2009).
Kulit biji kacang hijau memiliki potensi besar sebagai antioksidan dalam menghambat  kondisi  stress  oksidatif sehingga  dapat  dimanfaatkan  untuk meningkatkan kesehatan. Pada pengujian in vivo menunjukan,
pemberian  ekstrak  etanol  biji  kacang hijau  dapat  meningkatkan  status antioksidan  pada  mencit  dengan peningkatan  aktivitas  SOD,  katalase, dan GPx di hati (Jang et al. 2014) .  Hal ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan Hou et  al .  (2019)  yaitu  uji pada  tikus  yang  diinduksi  hidrogen peroksida (H 2 O 2 ), menunjukan hidrolisat  protein  biji  kacang  hijau memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan menghambat pembentukan LDH, mengurangi kadar malonaldehid, meningkatkan  tingkat glutathione ,  dan meminimalkan jumlah ROS dari 58,3% hingga 26,6% (Hou et al. 2019) .
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119
DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712 Pada penelitian ini mengembangkan  potensi  kulit  biji kacang  hijau  yang  berasal  dari  limbah tauge  dimana  memiliki  kandungan fitokimia  yang  bermanfaat  untuk tubuh yaitu flavonoid sebagau sumber antioksidan alami. Potensi yang
dihasilkan  oleh  kulit  biji  kacang  hijau dapat  menjadi  pilihan  alternatif  dalam upaya  pencegahan  terjadinya  penyakit degeneratif akibat stres oksidatif dengan menjadi  sumber  antioksidan  eksogen dengan memanfaatkan limbah makanan yang  saat  ini  belum  dikelola. Namun potensi dan mekanisme kerja
antioksidan yang dimiliki oleh kulit biji kacang  hijau  sendiri  belum  diketahui maka  perlu  dilakukan  pengujian  secara ilmiah salah satunya dengan pembuktian aktivitas  antioksidan  terhadap  radikal bebas  secara  langsung  yaitu  melalui pengamatan aktivitas terhadap pencegahan  pembentukan  nitrit  oksida (NO)  melalui  pendekatan  NOS  dan aktivitas  terhadap  radikal  bebas 2,2- diphenyl  -  1  -  picrylhydrazyl  ( DPPH) dalam mencegah stres oksidatif.

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  kulit    biji    kacang hijau  yang  diperoleh  dari  petani  taoge di    Pasar    Antri,  Cimahi,  Jawa  Barat, Indonesia. Pelarut ekstraksi yaitu etanol 96% (CV. Fadillah, Cimahi).  Bahan uji aktivitas  yaitu  DPPH  (Sigma),  metanol (Mercks),  sodium  nitropusid  (SNP) (Mercks),  dapar  fosfat  (Mercks),  asam klorida  (HCl)  (Mercks),  natrium hidroksida  (NaOH)  (Mercks),  kalium dihidrogen  fosfat  (KH 2 PO 4 )  (Mercks),
asam  sulfanilat  (C 6 H 7 NO 3 S)  (Mercks), asam  fosfat  (H 3 PO 4 )  (Mercks),  N-(1- Napthil)  etilendiamin  dihidroklorid (NEDD),  aquadest, water  for  injection (WFI).

## Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Biji Kacang Hijau
Pembuatan  ekstrak  etanol  kulit biji kacang hijau dilakukan dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut  etanol  96%.  Dimasukan  500  g simplisia  yang  telah  menjadi  serbuk  ke dalam  alat  maserator  dan  ditambahkan 2,5  L  etanol  96%.  Direndam  sambil sesekali  diaduk  pada  6  jam  pertama, kemudian  didiamkan  selama  18  jam. Proses  maserasi  diulang  sebanyak  tiga kali dengan komposisi simplisia berbanding  etanol  96%  adalah  1:5.
Dikumpulkan  semua  maserat  dan diuapkan  menggunakan  alat  penguap vakum  putar (Rotary  evaporator) hingga  diperoleh ekstrak kental.
Pengujian Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode peredaman radikal bebas
2,2-difenil-1-Pikril  Hidrasil  (DPPH) bertujuan  untuk  mengukur  kapasitas antioksidan  total  sampel  menggunakan spektrofotometri  UV-sinar  tampak. Prinsip  pengujian  adalah  mengukur absorbansi  larutan  DPPH  yang  berisi sampel  uji,  kemudian  dihitung  aktivitas antioksidan dengan menghitung persentase  peredaman,  yaitu  banyaknya aktivitas  senyawa  antioksidan  yang dapat  menangkap  radikal  bebas  DPPH (Blois  1958,  Liu et  al. 2013). Pembanding  yang  digunakan  adalah vitamin C yang diuji dengan konsentrasi 1- 10 μg/mL sedangkan   ekstrak  dibuat
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712
dalam  konsentrasi  10- 100  μg/mL. Sampel uji dilarutkan dalam metanol dan direaksikan  dengan  DPPH  50  μg/mL dengan  perbandingan  volume  1:1. Campuran larutan diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit dan tanpa cahaya.
Absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang 516 nm. Aktivitas antioksidan  diukur  sebagai  persen penurunan  absorban  (abs)  DPPH  pada sampel  uji  yang  dihitung  dengan menggunakan rumus:
Aktivitas antioksidan (%) = 𝐴𝑏𝑠 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100% Pengujian  Inhibitor  Nitrit  Oksida (NOI) Pengujian sebagai inhibitor pembentukan  nitrit  oksida  dilakukan dengan  pembuatan  larutan  sampel konsentrasi 10- 100 μg/mL
dan menggunakan  Vitamin  C  (1- 10μg/mL) sebagai  pembanding.  Penghambatan  NO diuji  dengan  menambahkan  pada  setiap konsentrasi  uji  (0,1  mL)  dengan  0,1  mL larutan  10  mM  natrium  nitroprusside (SNP) dalam 20 mM buffer fosfat pH 7,4, kemudian  diinkubasi  selama  1  jam  pada suhu  37°C.  Nitrit  oksida  dihasilkan  dari larutan  sodium  nitroprusside  (SNP) berinteraksi  dengan  oksigen  sehingga menghasilkan  ion  nitrit.  Hasil  direaksi dideteksi  dengan  penambahan  reagen Griess  (0,1  mL).  Serapan  kromofor  NO kemudian diukur menggunakan microplate  reader  pada  λ  540  nm.
Aktivitas  NOI  diukur  sebagai  persen penurunan  absorban  (abs)  SNP  pada sampel  uji  yang  dihitung  dengan menggunakan rumus:
Aktivitas NOI (%) = 𝐴𝑏𝑠 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100%

## Analisis Hasil
Kekuatan  suatu  sampel  dalam menghambat radikal bebas digambarkan dengan nilai IC 50 . Nilai IC 50 ditentukan dengan pembuatan kurva antara persentase penghambatan terhadap konsentrasi  sampel  melalui  persamaan regresi liniernya  (Quintans-Júnior et  al. 2013).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bahan  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah bagian limbah kulit dari biji kacang hijau ( Vigna radiata (L.) dari tauge.
Gambar 1. Kulit biji kacang hijau (Vigna Radiata (L.))
Kulit biji kacang hijau diperoleh dari Pasar Antri Cimahi, yang bertempat di  Jalan  Sriwijaya,  Kota  Cimahi,  Jawa Barat.  Pembuatan  ekstrak  dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%  menghasilkan rendemen  ekstrak  sebesar  0,9947%. Berdasarkan  hasil  tersebut  ditunjukkan bahwa senyawa dalam kulit biji kacang hijau  yang  tersari  oleh  pelarut  sangat kecil sehingga diperlukan optimasi jenis pelarut dan metode ekstraksi yang dapat
menarik kandungan senyawa dalam kulit biji  kacang  hijau  secara  lebih  optimal melalui  penggunaan  pelarut  yang memiliki  perbedaan  kepolaran,  durasi ekstraksi dan penggunaan suhu ekstraksi pada  berbagai  kondisi  (Dhanani et  al. 2017). Komponen fitokimia utama yang terdapat  dalam  kacang  hijau  meliputi flavonoid  (kuersetin , mirisetin ,  dan kaemferol)  dan  asam  fenolat  (asam galat)  yang  memiliki  sifat  semipolar (Jang et al. 2014, Hou et al. 2019).
Penapisan awal dalam penentuan aktivitas  antioksidan  ekstrak  kulit  biji kacang  hijau  dilakukan  dengan  metode DPPH.  Hal  tersebut  dilakukan  karena metode  uji  antioksidan  terhadap  DPPH adalah  salah  satu  mekanisme  yang diterima  untuk  memeriksa  aktivitas antioksidan dari suatu ekstrak tanaman. Dalam  analisis  DPPH,  larutan  DPPH berwarna  ungu  dan  mengalami  reaksi kolorimetri  menjadi  produk  berwarna kuning  yaitu  reaksi  yang  didasarkan pada  pengurangan  elektron  yang  tidak berpasangan  pada  atom  nitrogen  oleh atom  hidrogen  dari  antioksidan  dan membentuk kelompok hydrazine
kuning.  Dengan metode ini, perubahan dalam  penyerapan  DPPH  yang  belum bereaksi  dengan  antioksidan  dapat diukur.  Metode  ini  telah  banyak digunakan  untuk memprediksi  aktivitas antioksidan  karena  waktu  yang  relatif singkat  yang  dibutuhkan  untuk  analisis (Rahman et al. 2015).
Hasil uji aktivitas ekstrak etanol
kulit  biji  kacang  hijau  (Tabel  1  dan Gambar 1) terhadap radikal bebas DPPH memiliki  aktivitas  yang  kuat  karena memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  100 µg/mL  yaitu  sebesar  89,10 μg/mL (y=0,5625x-0,1237, r=0,994) yang didapat  dengan  replikasi  sebanyak  tiga kali.  Sedangkan  Vitamin  C  memiliki nilai  IC 50 sebesar  5,24 μg/mL (y=10,552x-5,3072,  r=0,997).  Aktivitas antioksidan  yang  dimiliki  EVR  tidak sekuat vitamin C namun untuk kategori ekstrak yang berasal dari tanaman EVR menunjukkan aktivitas yang kuat. Kulit pada  biji  kacang  hijau  mengandung senyawa  polifenol  yang  lebih  tinggi dibandingkan dengan bagian daging biji. Senyawa utama yang telah teridentifikasi  dalam  kulit  biji  kacang hijau adalah vitexin dan isovitexin (Cao et  al. 2011) .  Selain  itu,  penelitian  lain menunjukkan  bahwa  dalam  biji  kacang hijau  mengandung  luteolin  dan  dari ekstrak  aseton  kulit  biji  kacang  hijau memiliki  aktivitas  antioksidan  total dengan  penghambatan  radikal  bebas menggunakan  metode  DPPH  sebesar 86,31 ± 0,57 % (Singh et al. 2017) .
Kandungan  senyawa  flavonoid memiliki  peranan  penting  terhadap aktivitas  antioksidan  terhadap  DPPH yang  ditunjukkan  oleh  EVR  karena flavonoid adalah antioksidan alami yang kuat dan dapat secara efektif menetralisir radikal bebas seperti DPPH melalui donasi atom hidrogen, dengan
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712
Gambar 2. Kurva regresi linier aktivitas inhibisi (a) vitamin C dan (b) ekstrak etanol kulit biji kacang hijau (EVR) terhadap radikal Bebas DPPH (n=3)
Tabel 1 . Aktivitas terhadap radikal bebas DPPH Sampel Konsentrasi (μg/mL ) Absorbansi % Aktivitas IC 50 Ekstrak Kulit Biji Kacang Hijau (EVR) 10 0,7013±0,0254 4,93±0,026 91,36 μg/mL 20 0,6623±0,0285 11,17±0,88 40 0,5584±0,0130 23,95±1,65 80 0,4305±0,0280 42,51±1,08 100 0,3098±0,0371 58,37±1,68 Vitamin C 1 0,7147±0,0266 3,14±0,01 5,24 μg/mL 2 0,6177±0,0370 16,29±0,34 4 0,4427±0,0232 40,01±0,65 7,5 0,2042±0,0435 72,32±0,52 n=3
aktivitas  yang  tergantung  pada  struktur kimia  dan  konsentrasi.  Hasil  uji menunjukkan  peningkatan  konsentrasi seiring  dengan  adanya  peningkatan aktivitas terhadap penghambatan radikal  bebas  (Tsimogiannis  and Oreopoulou 2006). Salah satu mekanisme antioksidan  didalam  tubuh  adalah menghambat pembentukan radikal bebas nitrit  oksida  pada  jalur  RNS.  Nitrit oksida  (NO)  adalah  molekul  reaktif
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119
DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712 radikal  bebas  dan  gas  larut  dalam  air yang dapat melewati membran lipoprotein sel. NO adalah mediator pro- inflamasi  yang  berpartisipasi  dalam berbagai  proses  fisiologis,  oleh  karena itu  produksinya  sangat  penting  untuk pemeliharaan  tubuh.  Namun,  produksi NO yang berlebihan dapat menyebabkan Nitrit  Oksida  yang  berperan  sebagai radikal  bebas  dalam  tubuh  yang  dapat berinteraksi  dengan  O2  dan  H+/H- membentuk  peroksinitrit  serta  radikal hidrogen, sehingga menyebabkan kerusakan substansi dalam jaringan dan sel  yang  berujung  pada  penuaan  sel.
Kerusakan  jaringan  dan  mengaktifkan mediator  pro-inflamasi  yang  terkait dengan  peradangan  akut  dan  kronis (Mfotie Njoya et al., 2017).
Hasil uji aktivitas EVR terhadap pembentukan ion nitrit oksida dari SNP (Tabel  2)  menunjukkan  potensi  yang kuat  karena  mendapatkan  nilai  IC 50 sebesar  88,05 μg/mL  (y=  0,2669x  + 26,499, r = 0,982) sedangkan vitamin C sebesar  66,83%  pada  konsentrasi  1 μg/mL. Hasil  penelitian  menunjukan bahwa  persentase  kadar  ion  nitrit  yang terukur  menunjukka  seberapa  besar aktivitas sampel sebagai inhibitor NO.
Tabel 2. Aktivitas inhibitor nitrit oksida ekstrak etanol kulit biji kacang hijau
Konsentrasi (μg/mL ) Absorbansi Kadar NO (%) Aktivitas Inhibisi (NO) (%) IC 50 10 0,2979±0,0148 73,41±0,50 28,67 88,05 μg/mL 20 0,2924±0,0100 70,12±3,18 31,08 40 0,2654±0,0299 60,20±9,07 39,79 80 0,2420±0,0091 61,02±2,85 45,29 100 0,2028±0,0371 56,32±4,19 54,40 n=3
Hal  ini  diperkuat  dengan  adanya berbagai kandungan senyawa flavonoid yang terkandung dalam EVR yang dapat berperan  sebagai  antioksidan  seperti mekanisme  terhadap  DPPH.  Selain  itu, salah  satu  mekanisme  antioksidan didalam tubuh tidak terlepas dari peran enzim  katalase  sebagai  antioksidan endogen  yang  dapat  melindungi  tubuh dari kerusakan oksidatif dengan bekerja memecah  hidrogen  peroksida  (H2O2)
menjadi O 2 dan H 2 O (Nandi et al. 2019). Hasil  pengujian  menunjukkan  EVR mampu  menghambat  radikal  bebas  NO secara kuat.
Vitexin  dan  luteolin,  dua flavonoid yang kuat yang dimiliki dalam EVR,  menunjukkan  sifat  antioksidan dan  anti-inflamasi  yang  luar  biasa melalui  beberapa  mekanisme  yang secara efektif menghambat radikal bebas spesies nitrogen reaktif (RNS). Senyawa
ini  secara  langsung  menghancurkan
spesies  oksigen  reaktif  (ROS)  karena adanya  gugus  hidroksil  pada  cincin
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712
flavonoid.  Kandungan  flavonoid  dalam suatu tanaman meningkatkan pertahanan antioksidan alami tubuh dengan
meningkatkan  aktivitas  enzim  seperti superoxide  dismutase  (SOD),  katalase, dan  glutathione  peroxidase  (GPx), sementara juga mengatur protein respon antioksidan  seperti  Nrf2  (Al-Khayri et al. 2022). Selain itu, vitexin dan luteolin menghambat enzim pro-oksidasi seperti xanthine oxidase dan NADPH oksidase, mengurangi  produksi  ROS  melalui aktivasi  jalur  sinyal  MAPK  untuk meningkatkan  pertahanan  antioksidan dan menghambat jalur inflamasi seperti NF- κB (Babaei et  al. 2020).  Adanya luteolin  dalam  EVR  dapat  membuat EVR  mampu  menghelat  ion  logam transisi  mencegah  generasi  ROS (Almatroodi et  al. 2024).  Vitexin mampu  menghancurkan  oksida  nitrat intracellular  dan  radikal  peroksinitrit, dan  luteolin  menghalangi  ekspresi sintase oksida nitrat (Babaei et al. 2020). Selain  itu,  penelitian  menunjukkan flavonoid dalam suatu tanaman mampu melindungi  komponen  seluler  dari kerusakan oksidatif dan mempertahankan  fungsi  mitokondria. Efek  antioksidan  vitexin  dan  luteolin sering  ditingkatkan  secara  sinergis ketika dikombinasikan dengan antioksidan lain atau hadir dalam ekstrak tanaman,  menjadikannya  kombinasi yang  kuat  dalam  memerangi  stres oksidatif dan masalah kesehatan (Singh et al. 2017).
Pada pengujian in vivo menunjukan,  pemberian  ekstrak  etanol biji  kacang  hijau  dapat  meningkatkan status  antioksidan  pada  mencit  dengan
peningkatan  aktivitas  SOD,  katalase, dan GPx di hati (Jang et al. 2014) . Hal ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan Xie et al, 2020 yaitu uji pada tikus yang diinduksi hidrogen peroksida (H 2 O 2 ),  menunjukan  biji  kacang  hijau memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan menghambat pembentukan LDH, mengurangi kadar malonaldehid, meningkatkan  tingkat glutathione ,  dan meminimalkan jumlah ROS dari 58,3% hingga 26,6% (Xie et al. 2019) .

## KESIMPULAN
Penelitian  ini menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  dari  kulit  biji kacang  hijau  memiliki  aktivitas  dalam menangkal  radikal  DPPH  secara  kuat dan secara efektif menghambat produksi oksida nitrat. Hasil ini diduga dihasilkan dari kandungan senyawa flavonoid yang terkandung dalam kulit biji, yaitu seperti viteksin,  isoviteksin  dan  luteolin Penelitian lebih lanjut  diperlukan untuk mengeksplorasi berbagai senyawa bioaktif yang ada dan aplikasi potensial dalam makanan fungsional dan nutraceuticals.  Temuan  ini  mendukung penggunaan  tradisional  kacang  hijau dalam promosi kesehatan dan pencegahan  penyakit  dan  membuka jalan  untuk  mengembangkan  produk- produk suplemen kesehatan baru.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis menyatakan bahwa tidak terdapat  konflik  kepentingan  dalam artikel ilmiah yang ditulis.

## UCAPAN TERIMAKASIH
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119
DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712 Ucapan terima kasih disampaikan kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat (LPPM dan Fakultas  Farmasi,  Universitas  Jenderal Achmad  Yani,  Cimahi,  Jawa  Barat, Indonesia yang telah membantu pelaksanaan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Agarwal,  A.  and  Majzoub,  A.,  2017. Role  of  Antioxidants  in  Assisted Reproductive  Techniques. The World Journal of Men’s Health , 35 (2), 77. Al-Khayri, J.M., Sahana, G.R., Nagella, P., Joseph, B.V., Alessa, F.M., and Al-Mssallem, M.Q., 2022. Flavonoids  as  Potential  Anti- Inflammatory Molecules: A Review. Molecules , 27 (9), 2901.
Almatroodi,  S.A.,  Almatroudi,  A., Alharbi,  H.O.A.,  Khan,  A.A.,  and Rahmani,  A.H.,  2024.  Effects  and Mechanisms  of  Luteolin,  a  Plant- Based Flavonoid, in the Prevention of  Cancers  via  Modulation  of Inflammation  and  Cell  Signaling Molecules. Molecules , 29 (5), 1093.
Ardalan,  M.R.,  2014.  Antioxidant supplementation  in  hypertension.
Antioxidant  supplementation  in hypertension , (2).
Babaei,  F.,  Moafizad,  A.,  Darvishvand, Z., Mirzababaei, M., Hosseinzadeh, H.,  and  Nassiri‐Asl,  M.,  2020. Review  of  the  effects  of  vitexin  in oxidative  stress‐related  diseases. Food  Science  &  Nutrition ,  8  (6),
2569 – 2580. Blois, M.S., 1958. Antioxidant Determinations  by  the  Use  of  a Stable  Free  Radical. Nature ,  181 (4617), 1199 – 1200. Cao, D., Li, H., Yi, J., Zhang, J., Che, H.,
Cao, J., Yang, L., Zhu, C., and Jiang, W., 2011. Antioxidant Properties of
the  Mung  Bean  Flavonoids  on Alleviating Heat Stress. PLoS ONE , 6 (6), e21071.
Chen,  G.,  Huang,  C.,  Shi,  P.,  Xu,  H.,
Gao, S., Luo, D., Chen, T., Xie, Y., Huang,  R.,  Song,  H.,  Xu,  H.,  and
Xu, F., 2021. Mechanism of Chinese yam  for  the  treatment  of  aging- related  diseases  based  on  network pharmacology. European Journal of
Integrative Medicine , 41, 101254.
Cruz-Almeida,  Y.,  Fillingim,  R.B., Riley, J.L., Woods, A.J., Porges, E., Cohen,  R.,  and  Cole,  J.,  2019. Chronic  pain  is  associated  with  a brain aging biomarker in community-dwelling  older  adults. Pain , 160 (5), 1119 – 1130. Dhanani,  T.,  Shah,  S.,  Gajbhiye,  N.A., and  Kumar,  S.,  2017.  Effect  of extraction  methods  on  yield, phytochemical  constituents  and antioxidant  activity  of  Withania somnifera. Arabian  Journal  of Chemistry , 10, S1193 – S1199.
Gulcin,  İ.,  2020.  Antioxidants  and antioxidant  methods:  an  updated overview. Archives  of  Toxicology , 94 (3), 651 – 715.
Handayani, D., 2009. Studi Eksperimen Pemanfaatan  Tepung  Kulit  Tauge Kacang  Hijau  Sebagai  Bahan Campuran Serta Pengaruhnya Terhadap Kualitas Cookies. Hou, D., Yousaf, L., Xue, Y., Hu, J., Wu, J., Hu, X., Feng, N., and Shen,  Q., 2019.  Mung  Bean  (Vigna  radiata L.): Bioactive Polyphenols, Polysaccharides,  Peptides,  and Health  Benefits. Nutrients ,  11  (6),
1238.
Jang,  Y.-H.,  Kang,  M.-J.,  Choe,  E.-O.,
Shin,  M.,  and  Kim,  J.-I.,  2014. Mung  bean  coat  ameliorates hyperglycemia  and  the  antioxidant status in type 2 diabetic db/db mice. Food Science and Biotechnology , 23 (1), 247 – 252.

## KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Desember 2023, 8 (2), 109-119 DOI: 10.26874/kjif.v8i2.712
Kemenkes  RI,  2018.  Hasil  Utama Riskesdas 2018.
Kepmentan RI, 2020. Komoditas Binaan Kementerian Pertanian . Liu,  P.,  Gao,  Y.T.,  Yu,  J.J.,  Cha,  J.W., Zhao,  D.M.,  Li,  Y.H.,  and  Chen, J.H., 2013. DPPH radical scavenging  activity  of  kaempferol. Advanced Materials Research , 781 – 784, 1294 – 1297. Nandi,  A.,  Yan,  L.-J.,  Jana,  C.K.,  and Das,  N.,  2019.  Role  of  Catalase  in Oxidative Stress- and Age- Associated  Degenerative  Diseases. Oxidative  Medicine  and  Cellular Longevity , 2019, 1 – 19. Quintans-Júnior,  L.,  Moreira,  J.C.F., Pasquali,  M.A.B.,  Rabie,  S.M.S., Pires,  A.S.,  Schröder,  R.,  Rabelo, T.K.,  Santos,  J.P.A.,  Lima,  P.S.S., Cavalcanti, S.C.H., Araújo, A.A.S., Quintans,  J.S.S.,  and  Gelain,  D.P., 2013.  Antinociceptive  Activity  and Redox Profile of the Monoterpenes (+)-Camphene, p -Cymene,  and Geranyl  Acetate  in  Experimental Models. ISRN Toxicology , 2013, 1 – 11. Rahman, Md.M., Islam, Md.B., Biswas, M.,  and  Khurshid  Alam,  A.H.M., 2015.  In  vitro  antioxidant  and  free radical  scavenging  activity  of different  parts  of  Tabebuia  pallida growing  in  Bangladesh. BMC Research Notes , 8 (1), 621. Singh,  A.,  Nunes,  J.J.,  and  Ateeq,  B., 2015. Role and therapeutic potential of  G-protein  coupled  receptors  in breast  cancer  progression  and metastases. European  Journal  of Pharmacology , 763, 178 – 183.
Singh,  B.,  Singh,  J.P.,  Kaur,  A.,  and
Singh, N., 2017. Phenolic composition and antioxidant potential  of  grain  legume  seeds:  A review. Food Research International , 101, 1 – 16.
Tsimogiannis, D.I. and Oreopoulou, V., 2006. The contribution of flavonoid C-ring  on  the  DPPH  free  radical scavenging  efficiency.  A  kinetic approach  for  the  3′,4′ -hydroxy substituted  members. Innovative Food Science & Emerging Technologies , 7 (1 – 2), 140 – 146. World  Health  Organization,  2020. Noncommunicable diseases: progress  monitor  2020 .  Geneva: World Health Organization.
Xie, J., Ye, H., Du, M., Yu, Q., Chen, Y., and  Shen,  M.,  2019.  Mung  Bean Protein Hydrolysates Protect Mouse Liver Cell Line Nctc-1469 Cell from Hydrogen  Peroxide-Induced  Cell Injury. Foods , 9 (1), 14.