Juni 2024, Vol. 11 No. 1: 57 – 68
pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi
Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI
S.K. No. 105/E/KPT/2022

## PENGARUH PENAMBAHAN ASTAXANTHIN DALAM PENGENCER AIR KELAPA MUDA KUNING TELUR TERHADAP KUALITAS SEMEN CAIR SAPI ANGUS
( Effect of adding astaxanthin in egg yolk young coconut water on the quality of liquid semen of angus bull )
Mario S. Kurouma, Henderiana L. L. Belli, Johny N. Kihe, Wilmientje M. Nalley Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan, Kelautan dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana Jl. Adisucipto, Penfui Kota Pos 104 Kupang 8500 Telp (038) 881580. Fax (0380)
881674
* Correspondent author, email: mario.saturninus11@gmail.com

## ABSTRAK
Inseminasi  buatan  (IB)  adalah  salah  satu  teknologi  tepat  guna  yang  bisa  dimanfaatkan  untuk  peningkatan produktivitas ternak sapi. Penerapan teknologi IB dapat menggunakan semen beku, semen segar maupun semen cair.  Sebagai  salah  satu  faktor  mendasar  untuk  keberhasilan  IB  kualitas  semen  dipengaruhi  oleh  proses pengelolaan  semen  mulai  dari  penampungan,  pengenceran,  hingga  preservasi  semen.  Dilakukannya  penelitian guna  mengetahui  efektivitas  pengencer  air  kelapa  muda-kuning  telur  yang  ditambahkan  astaxanthin  dalam mempertahankan  motilitas,  viabilitas,  abnormalitas  dan  daya  tahan  hidup  spermatozoa  sapi  angus.  Semen ditampung dari satu ekor sapi angus jantan berusia tiga tahun yang sebelumnya telah dilatih untuk penampungan semen  dengan  vagina  buatan.  Semen  yang  berkualitas  baik  diencerkan  dengan  Air  kelapa-kuning  telur    (AK- KT) dengan penambahan astaxanthin (As) pada dosis: 0  (P0), 0,25g (P1), 0,50g (P2), dan 0,75g (P3). Semen disimpan pada suhu 3-5ºC setelah diencerkan, dan evaluasi  terhadap kualitas spermatozoa  dilakukan setiap 24 jam.  Perlakuan  masing-masing  diulang  lima  kali  hingga  membentuk  20  unit  percobaan.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  spermatozoa  dalam  pengencer  AK-KT  dengan  penambahan  As  0,25g  (P1)  dibandingkan dengan  ketiga  perlakuan  lain  memiliki  kualitas  yang  lebih  tinggi  (P<0,05),  yaitu  dengan  motilitas  mencapai (35,50  ±  2,12%),  viabilitas  (47,41  ±  3,26%),  abnormalitas  (6.16  ±  1,51%)  dan  daya  tahan  hidup  (DTH) (5,00±0.00 hari).  Kesimpulan  pada  penelitian  ini  adalah penambahan  astaxanthin  0,25g dalam  pengencer  AK- KT efektif mempertahankan kualitas semen cair sapi angus.
Keywords: air kelapa, kuning telur, astaxanthin, spermatozoa, sapi angus

## ABSTRACT
Artificial insemination (AI) is an appropriate technology that can be used to increase the productivity of cattle. The  application  of  AI  technology  can  use  frozen  semen,  fresh  semen  or  liquid  semen.  Semen  quality  as  an important factor in the success of AI is influenced by the cement processing process starting from the collection, dilution, and preservation of cement. This study was conducted to determine the effectiveness of young coconut water-egg yolk diluent added with astaxanthin in maintaining motility, viability, abnormalities and survival of Angus cattle spermatozoa. Semen was collected from an angus bull about three years old who had previously been trained to collect semen with an artificial vagina. Semen of good quality is diluted with coconut water-egg yolk (CW-EY) with the addition of astaxanthin (As) at doses: 0 (T0), 0.25g (T1), 0.50g (T2), and 0.75g (T3) ). Semen  was  stored  at  3-5ºC  after  being  diluted,  and  evaluation  of  the  quality  of  spermatozoa  was  carried  out every 24 hours. Each treatment was repeated five times to form 20 experimental units. The results showed that spermatozoa in CW-EY diluent with the addition of As 0.25g (T1) compared to the other three treatments had higher quality (P<0.05), namely with motility reaching (35.50 ± 2.12% ), viability (47.41 ± 3.26%), abnormality (6.16 ± 1.51%) and survival (5.00 ± 0.00 days). The conclusion in this study was that the addition of 0.25g of astaxanthin in CW-EY diluent was effective in maintaining the quality of liquid semen of Angus cattle.
Keywords: coconut water, egg yolk, astaxanthin, spermatozoa, angus bull

## PENDAHULUAN
Inseminasi  buatan  (IB)  adalah  salah  satu teknologi  tepat  guna  yang  bisa  dimanfaatkan untuk  peningkatan  produktivitas  ternak  sapi. Penerapan  teknologi  IB  dapat  menggunakan semen  segar,  semen  cair  maupun  semen  beku. Selama ini semen beku banyak digunakan untuk IB, tetapi karena ketersediaan akan straw (semen beku)  yang  minim  dan  kelanjutan  ketersediaan nitrogen  cair  yang  masih  bergantung  pada pengiriman/pengadaan  dari  luar  wilayah  serta harganya  yang  cukup  mahal,  maka  upaya maksimalitas pelayanan IB seringkali terkendala.  Sebab  itu,  semen  cair  adalah  salah satu  solusi  dalam  implementasi  IB  bagi  usaha meningkatkan produktivitas dan populasi ternak sapi.  Namun,  untuk  mencapai  tujuan  dari program  IB  bergantung  pada  beberapa  faktor yakni  faktor  kesuburan  betina,  kualitas  semen yang  baik,  dan  keterampilan  inseminator (Ardhani et al. , 2020).
Sebagai salah satu faktor mendasar untuk keberhasilan IB kualitas semen dipengaruhi oleh proses pengelolaan semen mulai dari penampungan,  pengenceran,  hingga  preservasi semen.  Kualitas  semen  mampu  dipertahankan apabila ditambahkan pengencer yang di dalamnya  terdapat  berbagai  nutrisi,  anti cold shock, penyangga, dan beberapa bahan lain yang secara menyeluruh selama berada pada kawasan in vitro bisa menunjang kehidupan spermatozoa. Salah  satu  bahan  pengencer  semen  yang  biasa dipakai  dalam  pengawetan  semen  sapi  ialah  air kelapa  muda.  Air  kelapa  muda  didalamnya terkandung  vitamin,  mineral,  glukosa,  dan protein. Sehingga pada ternak sapi dan kambing air  kelapa  muda  sering  digunakan  sebagai pengencer semen. Rizal et al . (2018) melaporkan  bahwa  air  kelapa  muda  terkandung karbohidrat  dan  juga  protein  asam  amino  yang ternyata dapat menyediakan kebutuhan fisik dan kimiawi  bagi  spermatozoa.  Namun  demikian, untuk  melindungi  spermatozoa  pada  temperatur rendah  maka  air  kelapa  perlu  ditambahkan kuning  telur  yang  memiliki  fungsi  untuk melindungi  spermatozoa  dari  kejutan  dingin (Wulansari dan Ducha, 2019).
Komponen yang paling umum dimanfaatkan  menjadi  bahan  pengencer  ialah kuning  telur.  Karena  kuning  telur  mengandung air, mineral, lemak, protein, vitamin, karbohidrat dan  berbagai  bentuk  asam  amino  esensial dengan  kuantitas  yang  lumayan  tinggi  dan efeknya  menguntungkan  sebagai  pelindung  dari
akrosom  dan  membran  plasma  terhadap cold shock (Harbin et  al .,  2016).  Lesitin  dan lipoprotein  yang terkandung  dalam  kuning  telur mampu menjaga dan mempertahankan intensitas sel spermatozoa, menstabilkan membran plasma terhadap suhu dingin yang turun secara tiba-tiba (Anwar et al., 2014).
Menggunakan  bahan  pengencer  dan menyimpan semen cair dalam suhu tertentu pada kurun  waktu  yang  lama  bisa  berpengaruh  pada persentase  motilitas  spermatozoa.  Selama  masa penyimpanan sperma bisa mengalami kerusakan membran  akibat  dari reactive  oxygen  species (ROS ) atau  stress  oksidatif.  Stres  oksidatif adalah  penyebab  mendasar  rusaknnya  sperma, yang membatasi terjadinya fosforilasi. Fosforilasi oksidatif yang terganggu menyebabkan  meningkatnya  ROS,  taraf  ROS yang  tinggi  didalam  sel  mampu  mengoksidasi DNA,  protein,  dan  lipid.  Membran  plasma sperma  mempunyai  fosfolipid  pada  taraf  yang tinggi mengakibatkan spermatozoa sangat rentan terhadap reactive  oxygen  species (Pian et  al., 2019).  Untuk  mengurangi  kerusakan  sel  selama penyimpanan maka perlu ditambahkan antioksidan.  Penggunaan  antioksidan  pada pengencer  semen  sudah  sering  dilaporkan, seperti penggunaan astaxanthin mampu melindungi  membran  plasma  sperma.  Octa (2014)  menjelaskan bahwa diantara astaxanthin dan jenis karoten yang lain, astaxanthin terbukti mempunyai  operasi  antioksidan  sepuluh  kali lebih  kuat  dibandingkan  dengan  himpunan karoten  lain  seperti  beta  karoten.  Astaxanthin merupakan pigmen karotenoid golongan xantofil yang  dikenal  sebagai  antioksidan  biologis  yang baik.  Astaxanthin  terdapat  dalam  mikroalga yang hidup di perairan seluruh dunia, serta pada fauna  laut  seperti  udang,  lobster,  dan  salmon segar  (Utari,  2016).  Astaxanthin  merupakan antioksidan paling kuat saat ini, menurut Bagchi et  al. (1997)  astaxanthin  memiliki  kemampuan dalam  memblokir  radikal  bebas  65  kali  lebih besar daripada Vitamin C, 14 kali lebih kuat dari Vitamin  E,  dan  54  kali  lebih  kuat  dari  beta karoten.
Astaxanthin  juga  adalah  salah  satu pigmen  karotenoid  (seperti  β-karoten),  yang diekstrak  dari  mikroalga  strain tropic dan seringkali disebut dengan haematococcus pluvialis . Senyawa ini mempunyai gugus radikal yang  dapat  membuat  tubuh  terlindung  dari proses  peroksidasi  lemak  dan  kerusakan  yang
diakibatkan oleh proses oksidatif dalam membrane sel  pada  jaringan  tubuh  (Winarsi, 2007).  Somoyani  (2012)  menyatakan  bahwa astaxanthin merupakan antioksidan yang bersifat alami,  kuat,  serta  mempunyai  elektron  yang mampu menetralkan radikal bebas.
Tujuan  dilakukannya  penelitian  ini  untuk mengetahui  pengaruh  penambahan  astaxanthin dalam  pengencer  air  kelapa  muda  kuning  telur terhadap kualitas semen cair sapi angus.

## METHODE PENELITIAN

## Materi penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  semen  segar dari  1  ekor  sapi  angus  jantan  berusia tiga  tahun yang  sudah  terlatih  untuk  ditampung  semennya dan dalam kondisi sehat.

## Metode Penelitian
Penelitian
ini menggunakan metodeaeksperimen
dengan rancangan
percobaan  adalah  rancangan  acak  lengkap (RAL),  terdiri  dari  4  perlakuan  dan  5  kali penampungan sebagai ulangan sehingga membentuk  20  satuan  percobaan.  Keempat perlakuan yang dimaksud ialah: P0: Air kelapa- kuning  telur  (AK-KT)  100mL+  astaxanthin  0g (As), P1: AK-KT + As 0,25g, P2: AK-KT + As 0,50g,  P3: K-KT + As 0,75g

## Penyiapan Bahan Pengencer
Pada  tahap  persiapan  pengencer  semen sapi  angus,  bahan  pengencer  astaxanthin ditimbang sesuai perlakuan yakni P0 sebanyak 0 gram  (sebagai  kontrol),  P1  0,25  gram,  P2  0,50 gram,  dan  P3  0,75  gram.  Dalam  penelitian  ini ada  3  jenis  bahan  pengencer  yang  digunakan yakni  bahan  pengencer  astaxanthin,  air  kelapa muda dan kuning telur.
Penyiapan  bahan  pengencer  air  kelapa muda  dengan  cara:  kulit  buah  kelapa  di  kupas menggunakan parang yang steril hingga menemukan  isi  buah  kelapa  bagian  luar  lalu dilubangi    Kemudian  dengan  menggunakan spuit  yang  steril,  air  kelapa  muda  disedot  lalu dimasukkan  kedalam  gelas  ukur  dan  ditutup menggunakan kertas alumunium foil.
Penyiapan  bahan.pengencer.kuning.telur yakni : a). Bersihkan telur menggunakan alcohol 70%  agar  steril  dan  bersih  kemudian  pecahkan telur  di  bagian  yang  lancip  lalu  pisahkan  putih telur dengan kuning telur dengan cara ditiriskan. b).  Kuning  telur  yang  hanya  dibungkus  selaput vitellin  ditaruh  pada  kertas  saring  sambil digerakkan supaya sisa-sisa putih telur yang ada terserap. c). Pecahkan kuning telur
dengan.cara.jaringan.vitellin  disobek  perlahan- lahan  menggunakan  ujung  pipet  lalu  tuangkan kuning  telur  kedalam  gelas  ukur.  d).  Kuning telur telah siap untuk dipakai.
Pengencer  air  kelapa  muda-kuning  telur ditambahkan  astaxanthin  sesuai  dosis  perlakuan lalu  dihomogenkan,  ditambahkan penicillin 1000  IU  dan streptomycin 1mg/mL.pengencer kemudian dihomogenkan kembali secara perlahan.

## Penampungan  Semen  dan  Evaluasi  Semen Segar
Semen  ditampung  menggunakan  metoda vagina  buatan.  Setelah  penampungan  semen segar dievaluasi secara makroskopis.dan.mikroskopis.  pada  evaluasi makroskopis  semen  segar  mencakup  warna, konsistensi,  volume,  dan  derajat  keasaman semen.  Sedangkan,  pada  evaluasi  mikroskopis semen  segar  mencakup  gerakan  massa  melalui mikroskop pada pembesaran 10×10, konsentrasi, motilitas,  viabilitas  dan  abnormalitas  sperma melalui  mikroskop  electron  pada  pembesaran 40×10.

## Pengenceran dan Penyimpanan Semen
Laos et  al. (2021)  menjelaskan  bahwa semen.yang akan dipergunakan harus mempunyai motilitas >70%, konsentrasi >800×10 6 ,  dan  abnormalitas  <15%.  Semen  lalu diencerkan.menggunakan AK-KT.dengan penambahan  As  dalam  berbagai  konsentrasi. Setelah  pengenceran  semen,  semen  dipreservasi dalam  suhu  3–5 o C  dan  dilakukan  penghitungan terhadap  motilitas,  viabilitas,aabnormalitas,  dan dayaatahan hidup (DTH) sperma setiap 24 jam.

## Variabel Penelitian
Variabel  yang  diukur  pada  penelitian.ini ialah  motilitas  sperma  (%),  viabilitas  sperma (%),  abnormalitas  sperma  (%)  dan  daya  tahan hidup sperma (hari).
Analisis Data Data hasil penelitian dihitung menggunakan  analysis  of  variance  (ANOVA) dan  dilanjutkan  denganauji  Duncan.  Analisis
menggunakan  MS  office  Excell  2019  dan software SPSS 25.0 for windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Semen Segar Sapi Angus
Karakteristik semen segar yang diperoleh  dari  penelitian  ini  akan  di  sajikan dalam  Tabel  1.  Karakteristik  semen  segar  yang
dipakai  pada  penelitian  ini  mempunyai  kualitas motilitas  76,00±2,23,  viabilitas  84,62±2,17, abnormalitas 4,87±1,10.
Tabel 1. Karakteristik semen segar sapi angus
Karakteristik semen Rerata±standar deviasi Makroskopis Warna Krem Volume (mL) 3,30±0,90 pH 6,40±0,00 Konsistensi Sedang Mikroskopis Konsentrasi (×10 6 sel/ml) 1010,00±88,60 Gerakan Massa ++ - +++ Motilitas (%) 76,00±2,23 Viabilitas (%) 84,62±2,17 Abnormalitas (%) 4,87±1,10
Warna  semen  sapi  angus  yang  diperoleh pada  penelitian  ialah  krem  dan  dikategorikan normal,  situasi  ini  sepaham  dengan  pernyataan Toelihere  (1993)  yang  menjelaskan  kalau  sapi normal  umumnya  memiliki  semen  berwarna putih  susu dan  yang memiliki  warna  krem 10% saja. Dari hasil observasi diperoleh volume rata- rata  dari  semen  sapi  angus  dan  dipakai  dalam penelitian ialah 3,30±0,90mL. Hasil ini tergolong  rendah  apabila  dicocokkan  dengan penjelasan  Garner  dan  Hafez  (2000)  yang menyatakan  jikalau  kisaran  volume  semen  sapi pada saat ditampung kurang lebih 5-8mL.
Semen  hasil  penelitian  konsistensinya tergolong  sedang.  Suyadi  (2012)  menyatakan bahwa makin encer semen akan membuat makin sedikit  konsentrasi  sperma  sehingga  warna semenpun  akan  makin  pucat  yang  artinya bahwa  warna,  konsentrasi  dan  konsistensi sperma  mempunyai  keterkaitan  yang  kuat  satu sama  lain.  Konsentrasi  spermatozoa  yang diperoleh yaitu 1010,00 ± 88,60.  10 6 /mL. Maka perolehan  ini  selaras  dengan  hasil  kajian Romadhoni et al . (2014)
yang menjelaskan.bahwa konsistensi merupakan derajat  kekentalan  yang  bertaut  kuat  dengan
konsentrasi  sperma,  semen  sapi  yang  memiliki konsistensi  sedang  -  kental  mempunyai  warna krem  dan  memiliki  1000  hingga  2000  juta sperma/mL konsentrasi.
Observasi terhadap pH (derajat keasaman) semen pada penelitian memperoleh rata-rata 6,4 ±  0,00.  Perolehan  ini  menunjukkan  bahwa derajat  keasaman  semen  yang  dipakai  dalam penelitian  dikategorikan  normal.  Sesuai  dengan pendapat  Ax et  al .  (2008)  menyatakan  bahwa kisaran  derajat  keasaman  (pH)  semen  sapi mencapai    6,4  hingga  7,8.  Gerakan    massa semen  segar  sapi  angus  hasil  penelitian  sebesar ++ - +++.
Motilitas sperma sapi angus yang diperoleh  76,00±2,23  %.  Hasil  yang  diperoleh sudah  memenuhi  syarat  untuk  dilakukannya pengenceran semen dimana berdasarkan pernyataan  Garner  dan  Hafez  (2000)  yang mengemukakan  jikalau  motilitas  sperma  ternak sapi  mencapai  kisaran  40–75%,  sehingga  agar bisa  dilakukannya  proses  pengenceran  maka ketentuan minimal motilitas semen segar 70%.
Viabilitas sperma sapi angus yang dipakai dalam  penelitian  ialah  84,62±2,17%.  Dapat diartikan  bahwa  pada  penelitian  ini  semen  sapi
angus yang dipakai tergolong memenuhi syarat. Ducha et  al. (2013)  menjelaskan  bahwa  semen dapat  diencerkan  apabila  persentase  sperma hidup minimal 70%.
Rataan  nilai  abnormal  sperma  yang diperoleh  4,87±1,10  %.  Angka  ini  sesuai pernyataan  Garner  and  Hafez  (2000)  masih berada  dalam  kisaran  normal  dimana  abnormal spermatozoa tidak boleh lebih dari 20%.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Motilitas Spermatozoa
Motilitas sperma atau kemampuan sperma untuk  bergerak  adalah  salah  satu  penentu keberhasilan  spermatozoa  agar  bisa  menggapai sel telur dalam saluran tuba fallopi serta metode yang  sangat  simpel  pada  evaluasi  spermatozoa untuk  IB  (Garner  dan  Hafez,  2000).  Setelah pengenceran, evaluasi terhadap motilitas spermatozoa  adalah  parameter  yang  paling penting  untuk  dievaluasi  sebelum  semen digunakan dalam IB.
Rerata  nilai  motilitas  sperma  sapi  angus dari  masing-masing  perlakuan  bisa  diamati dalam Tabel 2.
Tabel 2. Pengaruh perlakuan terhadap motilitas spermatozoa
Hari ke Perlakuan P Value P0 P1 P2 P3 0 75,50±1,11 a 76,50±2,23 a 76,50±2,23 a 76,50±2,23 a 0,89 1 63,40±4,15 ab 71,80±2,48 c 64,80±3,56 b 59,60±3,64 a 0,00 2 52,80±2,16 b 66,40±2,19 c 56,60±5,94 b 43,00±4,47 a 0,00 3 40,20±2,86 b 60.00±0,00 d 48,60±2,19 c 30,60±5,63 a 0,00 4 30,80±5,35 b 50,80±1,78 d 40,60±2,60 c 22,00±4,47 a 0,00 5 21,20±5,01 b 41,60±2,30 d 30,20±0,44 c 12,00±4,47 a 0,00 6 12,00±4,47 a 35,50±2,12 b 20,40±6,18 c 5,00±0,00 d 0,00
Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05). P0 = AK-KT100%, P1 = AK- KT+As 0,25g, P2 = AK-KT+As 0,50g, P3 = AK-KT+As 0,75g
Sperma  sapi  angus  pada  pengencer  AK- KT dengan penambahan As selama penyimpanan,  motilitas  spermatozoa  mampu dipertahankan. Hasil terbaik dalam penelitian ini teramati  pada  perlakuan  AK-KT-As  0,25g  (P1) dengan  motilitas  41,60±2,30%  selama  5  hari penyimpanan  jika  dibandingkan  dengan  kontrol AK-KT  100%  (P0)  dengan  nilai  motilitas 40,20±2,86%  teramati  pada  hari  ke-  3 preservasi,  perbedaan  ini  diduga  karena  adanya penambahan  As  yang  mengandung  antioksidan dan  berfungsi  sebagai  pelindung  bagi  sperma terhadap  peroksidasi  lipid  karena  munculnya oksidan (radikal bebas). Astaxanthin melindungi sperma  terhadap  peroksidasi  lipid  dengan  cara memblokir  reaksi  tali  peroksidasi  lipid  dan membuat membrane lemak  terlindung  dari reaksi terhadap O- (singlet oksigen). Disampaikan oleh Indrawati et al. (2013) bahwa astaxanthin  mempunyai  aktivitas  antioksidan 10x  lebih  kuat  daripada  fraksi  beta  karoten lainnya.
Perlakuan AK-KT100% terjadi degradasi, selama  penyimpanan  dan  nilai  motilitas  40% dicapai  pada  hari  ke-  3  menunjukkan  bahwa tanpa  penambahan  As  sehingga  sperma  banyak
yang  mati  dan  menjadi toxic bagi  sperma  lain yang masih bergerak progresif. Rosmaidar et al. (2013)  mengatakan  bahwa  degradasi  kualitas spermatozoa  dalam  masa  preservasi,  tidak terkecuali  nilai  motilitas  bisa  terjadi  diduga karena akibat dari jumlah sperma yang mati lalu menjadi toxic buat spermatozoa lain yang masih bergerak  progresif  sangat  signifikan,  sehingga secara harafiah kualitas spermatozoa menurun.
Hasil  penelitian  memperlihatkan  bahwa terjadi  penurunan  motilitas  sperma  selama penyimpanan, rentang penurunan motilitas pada setiap  perlakuan  tidak  sama.  Hingga  hari  ke-5 preservasi,  perlakuan  P1  masih  menunjukkan nilai  motilitas  >40%,  sementara  hingga  masa preservasi  yang  sama  perlakuan  P0,  P2,  dan  P3 menunjukkan  nilai  pergerakan  progresif  <40%. Perbedaan  ini  diduga  karena  level  As  yang diberikan melebihi  kebutuhan  sehingga menjadi toxic bagi  sperma.  Selama  masa  preservasi persentase  pergerakan  progresif  spermatozoa sapi angus menurun, peristiwa ini diduga terjadi karena selama masa preservasi persediaan energi dalam  pengencer  semakin  menyusut,  terjadi reaksi  oksidasi  selama  masa  preservasi  yang mengakibatkan  zat-zat  nutrisi  dalam  pengencer
menjadi toxic ,  bertambahnya  radikal  bebas menyebabkan kerusakan dalam keutuhan membran  plasma  sperma,  terdapat  sperma  yang rusak  dan  mati  akibat  suhu  rendah  sehingga menjadi  racun  terhadap  sperma  lain  serta meningkatnya  konsentrasi  asam  laktat  sehingga pH semen meningkat (Kusumawati et al ., 2017; Wiyanti et al ., 2013).
Hasil  analisis  statistik  pada  gerakan progresif spermatozoa setelah diencerkan memperlihatkan  perbedaan  yang  tidak  nyata (P>0,05) antar perlakuan. Namun memperlihatkan  perbedaan  yang  nyata  antar perlakuan  (P<0,05)  setelah  preservasi  1-5  hari. Peristiwa  ini  dapat  diartikan  bahwa  perlakuan menunjukkan respon positif terhadap spermatozoa  sapi  angus.  Hingga  5  hari  masa penyimpanan,  perlakuan  P0  memperlihatkan nilai motil spermatozo lebih rendah secara nyata (P<0,05)  daripada  perlakuan  P1,  P2,  dan  P3. Kurangnya  nilai  gerakan  progresif  sperma  pada perlakuan kontrol diduga timbul akibat pengencer  kuning  telur  dan  air  kelapa  hanya bersifat sebagai buffer serta anti cold shock dan berfungsi  sebagai  sumber  nutrisi  tapi  tidak bersifat sebagai antioksidan yang bisa melindungi  sperma  terhadap  radikal  bebas. Kuning telur berperan dalam melindungi sperma dari  ancaman  kejutan  dingin  dan  kuning  telur juga  selaku  penyumbang  energi  yang  dapat menunjang  sperma  untuk  dapat  bergerak. Kandungan pokok dalam kuning telur diantaranya terdapat vitamin, air, lemak, protein, mineral,  dan  karbohidrat,  yang  tergolong kompleks  karena  mengandung  berbagai  asam amino  esensial  dengan  besaran  yang  lumayan signifikan.  selain  dari  itu,  kuning  telur  juga terkandung  lipoprotein  sebagai  sumber  nutrisi bagi  keberlangsungan  hidup  sperma  dan terhindar  dari  terjadinya  kejutan  dingin  (Harbin et al ., 2016).
Namun  tidak  stabilnya membrane dan pertukaran  dalam  konsentrasi  susunan  matrik lipid  bisa  berlangsung  apabila  terdapat  kuning telur dalam pengencer, sehingga dapat mengakibatkan  terjadinya hydrolysis lesitin daripada  kuning  telur  ke  isolilesitin  kemudian asam.lipid yang dirangsang oleh enzim fosfolipase-A  yang  disekresikan  oleh  kelenjar
bulbouretral  (Ndeta et  al., 2015).  Untuk menghambat  reaksi  peroksida  lipid  maka  perlu ditambahkan  antioksidan,  yaitu  salah.satu  zat yang  bisa  melawan  radikal  bebas.  Astaxanthin merupakan antioksidan yang menggunakan cara scavenge  O 2 dalam  mengatasi  radikal  bebas, bereaksi  secara  spontan.dengan  radikal.peroksil (Hussein et  al., 2006).  Astaxanthin  bisa membentengi dan mencegah peroksidasi membrane lipid seperti protein, PUFA, pengaruh sinar  ultra  violet,  kerusakan  DNA,  dan  secara esensial  melindungi  fungsi  biologis  serta memiliki peran yang vital didalam respon imune dan  dapat  membuat membrane sel  mitokondria terlindungi  dari  ancaman  radikal  bebas  (Bebas dan Gorda, 2017).

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Viabilitas Spermatozoa
Persentase viabilitas (daya hidup) spermatozoa  adalah  salah  satu  parameter  untuk mengukur  kualitas  spermatozoa.  Viabilitas sperma seringkali dinilai berdasarkan pemeriksaan  motilitas  dan  rasio    hidup    atau mati.  Daya  hidup  sperma  sungguh  berpengaruh dalam  keberhasilan    IB    juga  dalam  proses fertilisasi pada organ reproduksi betina. Semakin bertambah  nilai  viabilitas  spermatozoa  maka semakin  baik  pula  mutu  spermatozoa  tersebut. Persentase  viabilitas  sperma  hasil  penelitian tersajikan  dalam  Tabel  3,  dari  data  pada  tabel bisa  diamati  bahwa  persentase  daya  hidup sperma  menurun,  akan  tetapi  menurunnya persentase viabilitas pada setiap perlakuan tidak sama.
Dapat dilihat pada tabel.bahwa penurunan viabilitas  sperma  berlangsung    bersamaan dengan lamanya waktu preservasi. Penurunan ini diduga  dapat  berlangsung  karena  turunnya  nilai motilitas  dan  daya  hidup  sperma  dipengaruhi oleh  lama  masa  preservasi  juga  diduga  terjadi karena  penyimpanan  membuat  cadangan  energi semakin  berkurang  dan  konsentrasi  asam  laktat meningkat  sehingga  kondisi  medium  menjadi asam.  Persentase  viabilitas  spermatozoa  sapi angus  pasca  pengenceran  pada  P1  sebesar 85,18%  lebih  tinggi  daripada  P0  sebesar 84,09%,  P2  sebesar  83,31%  dan  P3  sebesar 84,20%.

## Tabel 3. Pengaruh perlakuan pada daya hidup spermatozoa
Hari ke Perlakuan P Value P0 P1 P2 P3 0 84,09±2,60 a 85,18±3,00 a 83,31±3,70 a 84,20±2,94 a 0,82 1 75,55±3,54 b 81,07±2,67 c 74,15±1,08 b 66,02±1,89 a 0,00 2 66,60±4,55 b 74,53±4,31 c 65,88±3,92 b 51,80±4,86 a 0,00 3 53,68±2,90 b 71,93±1,82 c 58,42±2,44 b 39,54±6,87 a 0,00 4 42,57±5,69 b 63,41±3,22 d 52,25±3,44 c 29,73±6,40 a 0,00 5 33,93±7,70 b 52,81±4,80 c 41,01±3,02 b 20,46±4,65 a 0,00 6 23,06±4,42 a 47,41±3,26 b 31,57±6,00 c 13,87±3,67 d 0,00
Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05). P0 = AK-KT100%, P1 = AK- KT+As 0,25g, P2 = AK-KT+As 0,50g, P3 = AK-KT+As 0,75g
Persentase  daya  hidup  sperma  bisa  turun seiring  masa  waktu  preservasi.  Epriana et  al. (2020)  mengatakan  bahwa  rusaknya membrane akrosom dan membrane plasma karena pengaruh dari cold  shock menyebabkan  turunnya  nilai daya  hidup  sperma.  Muhammad et  al. (2019) menegaskan bahwa persentase yang menentukan kompleksnya membrane spermatozoa  adalah persentase  daya  hidup  spermatozoa. Membrane spermatozoa  yang  rusak  akan  berakibat  pada metabolisme intraseluler sperma yang terganggu sehingga  persentase  sperma  bisa  menurun  dan malah spermatozoa bisa mati. Muhammad et al. (2016)  juga  menambahkan  jikalau membrane adalah  bagian  paling  luar  dari  sperma  yang memiliki  fungsi  sebagai  pelindung  terhadap spermatozoa.  Oleh  karena  itu,  jika membrane rusak/melemah maka akan menyebabkan spermatozoa  mati  dan  fertilisasi  hanya  akan dapat  dilakukan  oleh  sperma  yang  mempunyai membrane utuh.  Kuning  telur  merupakan krioprotektan  ekstraseluler  yang  mengandung fosfolipid,  kolesterol  dan  fraksi  low-density lipoprotein  (LDL)  yang  tinggi      yang  berfungsi sebagai  komponen  pelindung  spermatozoa selama penyimpanan (Faizal , 2016).
Semen  sapi  angus  dalam  pengencer  AK- KT  As  viabilitas  atau  daya  hidup  spermatozoa mampu  dipertahankan.  Hasil  terbaik  teramati pada  perlakuan  AK-KT-As  0,25g  teramati sebagai  hasil  terbaik    selama  5  hari  masa preservasi.  Semakin  tinggi  dosis  astaxanthin maka motilitas dan daya hidup  semakin rendah. Peristiwa  ini  disebabkan  oleh  penggunaan antioksidan yang lebih tinggi bahkan bisa terjadi pro-oksidan. Dapat dilihat bahwa nilai viabilitas yang didapat dalam pengkajian ini, penambahan astaxanthin  pada  seluruh  kelompok  perlakuan memperlihatkan  bahwa  persentase  viabilitas dalam  perlakuan  P1  lebih  besar  daripada kelompok  perlakuan  lain  lalu  diikuti  oleh perlakuan  P2  kemudian  P3.  Peristiwa  ini
memperlihatkan  bahwa  jumlah  sperma  yang hidup  masih  banyak  tetapi  tidak  dapat  bergerak progresif  atau  hanya  bergetar.  Nilai  daya  hidup sperma  seringkali  10%  lebih  besar  ketimbang nilai motilitas sperma (Toelihere, 1993).
Hasil  pengkajian  data  pada  daya  hidup spermatozoa  dalam  masa  preservasi  hari pertama  hingga  hari  keenam  memperlihatkan perbedaan yang nyata  antar perlakuan (P<0,05). Peristiwa ini diperkirakan terjadi karena terdapat pengaruh  dari  antioksidan  berupa  astaxanthin yang  ketersediaannya  dalam  pengencer  sesuai, sehingga daya hidup spermatozoa dapat dipertahankan.  Pemberian  antioksidan  dengan dosis  yang  sesuai  memberikan  hasil  yang optimal  untuk  membendung  peroksidasi  lemak maka  caranya  adalah  reaksi-reaksi  oksidasi lipida  dalam membrane plasma  harus  diputus dan  dicegah,  agar  mampu  meminimalisir rusaknya membran plasma  semasa  metode pengenceran semen berjalan. Astaxanthin memiliki  partikel  molekul  yang  amat  khas  dan dengan  adanya  oksigen  selaku  gugus  karbonil (C=O)  dan  gugus  hidroksil  (OH),  atau perpaduan keduanya. Oleh karena itu, kehadiran kedua  gugus  fungsional  tersebut  pada  rantai poliena (ketokarotenoid) menjadikan anntioksidan  berkemampuan  sangat  baik  ada pada  astaxanthin  (Bebas  dan  Gorda,  2017). Adanya  gugus  keton  dan  hidroksil  dalam  tiap  – tiap  cincin  ion  astaxanthin  membuat  kekuatan aktivitas antioksidan dan esterifikasi astaxanthin lebih  bersifat  polar  dan  lebih  tinggi  dari antioksidan lain.
Operasi metabolism bisa  berlangsung lancar  karena  adanya Membrane plasma  yang utuh,  maka  produk  energi  berbentuk  ATP  tidak terhalang  sehingga  motilitas  serta  viabilitas spermatozoa  mampu  dipertahankan  (Indrawati, 2013).
Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Abnormalitas Spermatozoa
Hasil uji statistik pada persentase abnormalitas spermatozoa memperlihatkan terdapat  perbedaan.yang  tidak  nyata.(P>0,05) semenjak  pasca  pengenceran  sampai  hari keenam peyimpanan. Seluruh perlakuan memperlihatkan persentase abnormalitas dibawah  10%.  Hal  ini  membuktikan  bahwa pengencer AKKT yang ditambahkan astaxanthin dapat  mengurangi  peningkatan  abnormalitas
yang berlangsung akibat peroksidasi lipid secara serentak.  Ax et  al .  (2008)  mengatakan  bahwa nilai  abnormalitas  sperma  yang  telah  >20% maka  pejantan  itu  diragukan  fertilitasnya. Brillianti et  al .  (2021)  menambahkan  bahwa  1- 8,4% merupakan kisaran normal nilai abnormalitas sperma sapi pejantan.
Rata-rata  nilai  abnormalitas  sperma  pada masing-masing perlakuan yang diperoleh ditunjukkan dalam Tabel 4.
Tabel 4. Pengaruh perlakuan terhadap abnormalitas spermatozoa
Hari ke Perlakuan (%) P Value P0 P1 P2 P3 0 5,25±1,30 a 5,20±1.34 a 5,32±1,20 a 4,96±1,92 a 0,98 1 5,41±1,28 a 5,66±1,10 a 5,35±1,29 a 5,49±1,47 a 0,98 2 5,47±1,35 a 5,76±1,13 a 5,47±1,46 a 5,53±1,65 a 0,98 3 5,83±1,08 a 5,64±1,39 a 5,57±1,62 a 5,75±1,57 a 0,99 4 6,02±1,07 a 5,83±1,36 a 6,07±1,24 a 6,16±1,28 a 0,97 5 5,76±1,95 a 5,90±1,55 a 6,16±1,60 a 6,77±0,74 a 0,73 6 6,31±1,48 a 6,16±1,51 a 6,18±1,95 a 6,68±1,49 a 0,95
Superskrip yang sama pada baris  yang sama menunjukkan perbedaan yang tidak nyata (P>0,05).   P0 = AK-KT100%, P1 = AK-KT+As 0,25g, P2 = AK-KT+As 0,50g, P3 = AK-KT+As 0,75g
Persentase abnormalitas semenasegar sapi angus yakni 4,87±1,10%  lalu setelah diilakukan pengenceran  5,20±1.34  -  6.16±1,51%  hal  ini terjadi  sebab  terdapat  mekanisme  pengenceran dan  penyimpanan  dalam  temperatur  3-5 o C. Dugaan terhadap meningkatnya nilai abnormalitas spermatozoa adalah karena adanya pengaruh dari lipoprotein pada kuning telur yang seiring  dengan  masa  waktu  preservasi  fungsi utama  yang  semestinya  melindungi  sperma terhadap cold shock kian menurun. Seperti yang disampaikan oleh Romadhoni et al. (2014) yang mengatakan  bahwa  penyebab  abnormalitas terjadi  karena  adanya  kejutan  dingin  dan  tidak seimbangnya  tekanan  osmotik  yang  merupakan efek dari operasi metabolik yang selalu berjalan semasa  preservasi  pada  temperatur  3-5 o C. Tenggang  waktu  preservasipun  memengaruhi persentase abnormal spermatozoa, sesuai pernyataan  (Kusumawati et  al., 2016)  nilai abnormalitas  sperma  akan  terus  meningkat seiring  dengan  lama  masa  preservasi.  Selain  itu Menurut  Saili  dan  Rahadi  (2014)  pembuatan preparat  yang  kurang  sesuai  juga  mampu menyebabkan terjadinya abnormalitas. Abnormalitas  spermatozoa  selama  penelitian merupakan  abnormalitas  sekunder  yang  terjadi akibat proses penyimpanan atau disaat
pembuatan  preparat  untuk  menilai  abnormalitas spermatozoa.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Daya  Tahan Hidup Spermatozoa
Kesanggupan  sperma  agar  bisa  terus bergerak  pada  masa  waktu  tertentu  sesudah penyimpanan in vitro merupakan yang dimaksud dari daya tahan hidup spermatozoa (Hine et al. , 2014).
Sperma  sapi  angus  di  perlakuan control menunjukkan.dayaatahannhidup (DTH) tak lebih  panjang    daripada  perlakuan  lain  yang menggunakan pengencer AKKT dengan penambahan As (Tabel 5). Hasil pengkajian data memperlihatkan  bahwa  terhadap  daya  tahan hidup  sperma,  perlakuan  memberi  pengaruh nyata  (P<0,05).  Peristiwa  ini  menunjukkan bahwa untuk menunjang kehidupan spermatozoa hingga tenggang waktu tertentu maka pengencer semen  sangat  dibutuhkan.  Pada  saat  sperma tidak tersuplementasi nutrisi serta adanya  bahan yang  mampu  membuat  sperma  terlindungi  dari kejutan  dingin  seperti  pada  perlakuan  kontrol, menyebabkan spermatozoa mudah mati dikarenakan  substrat  energi  yang  habis,  karena energi  yang  dipakai  hanya  mengunggulkan
nutrisi  yang  ada  dalam  pengencer  semen  dan dalam plasma semen.
Kelompok  perlakuan  pada  pengencer  AK-KT dengan  penambahan  As  berfungsi  menjaga morfologi spermatozoa agar tetap utuh dan juga dapat menjaga  daya  tahan hidup  sperma  hingga kurun waktu yang lebih panjang. Perlakuan AK- KT  As  0,25g  bisa  dipakai  untuk  inseminasi buatan  hingga  hari  kelima  masa  preservasi. Sementara,  pada  perlakuan  AK-KT  As  0,50g dan  AK-KT  As  0,75g  berturut-turut  dapat dipakai  hingga  hari  ketiga  dan  hari  kedua  masa
preservasi.  Mengacu  pada  hasil  kajian  Salim et al. (2012)  yang  mengungkapkan  bahwa  untuk menunjang  terbentuknya  fertilisasi  maka  suatu ejakulasi maupun semen cair yang dipakai wajib mempunyai  total  sperma  motil  yang  efektif. Peristiwa  ini  dapat  terjadi  karena  spermatozoa stres  pada  saat  pengenceran,  secara  alami  sel spermatozoa  akan  mengalami  kematian,  dan spermatozoa  segar  kualitasnya  turun  sehingga banyak  spermatozoa  yang  mati  dalam  masa preservasi 2-3 hari (Blegur et al., 2020).
Tabel 5. Pengaruh perlakuan terhadap daya tahan hidup spermatozoa
Perlakuan Daya tahan hidup (hari) P0 2,80±0.83 a P1 5,00±0.00 c P2 3,80±0,44 b P3 2,20±0.44 a P Value 0,00
Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05). P0 = AK-KT100%, P1 = AK- KT+As 0,25g, P2 = AK-KT+As 0,50g, P3 = AK-KT+As 0,75g
Beberapa faktor yang juga bisa mengakibatkan  daya  tahan  hidup  spermatozoa menurun  ialah  kestabilan  spermatozoa  saat berada dalam media pengencer, sebab metabolisme  dan  jumlah  spermatozoa  yang hidup berkaitan lekat. Dimana, apabila konsentrasi  spermatozoa  hidup  tinggi,  maka pergerakan akan bertambah dan metabolismepun akan  bertambah.  Spermatozoa  membutuhkan energi  untuk  bergerak.  Energi  yang  dibutuhkan lewat  aktivitas  enzim  pada  mitokondria  yang menggerakkan  siklus  creb  (Siklus  Asam Trikarboksilat), perpindahan elektronnfosforilasi oksidatif  demi  terbentuknya  energi  berupa  ATP atau  memiliki  fungsi  mengubah  fruktosa menjadi  asam  laktat.  Sebagai  hasil  dari mitokondria,  oksigen  radikal  mengakibatkan terjadinya  peroksidasi  lipid  yang  mampu membuat membrane plasma  rusak.  Salah  satu kendala  saat  mengawetkan  sperma  sehubungan dengan  turunnya  daya  gerak  ialah  munculnya peroksidasi  lipid  yang  menyebabkan membrane
plasma  sperma  menjadi  rusak.  Penggunaan antioksidan pada level yang sesuai dapat optimal dalam  pencegahan  serta  meminimalisir  reaksi peroksidasi  lipida  dari  aktivitas  radikal  bebas dalam membrane plasma  sperma  (Bebas et  al., 2016). Untuk menghambat terjadinya peroksidasi  lipid  maka  perlu  penambahan antioksidan.  Salah  satu  antioksidan  yang  bisa dipakai adalah astaxanthin.
Astaxanthin  adalah  golongan  pigmen seperti β-karoten, yang diekstrak dari  mikroalga strain tropic dan memiliki nama Haematococcus pluvialis . Haematococcus pluvialis dapat membuat  spermatozoa  terlindungi  dari  proses peroksida  lipida  dan  rusaknya membrane sel pada  jaringan  tubuh  karena  mempunyai  gugus radikal (Kardi, 2019).  Gugus  hidroksil  dan  keto memungkinkan  astaxanthin  menjadi  lebih  polar dan  mengalami  esterifikasi,  bahkan  aktifitas antioksidannya  lebih  tinggi  daripada  karotenoid lain (Aisoi, 2016).

## SIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  pengencer  air kelapa-kuning telur yang ditambahkan astaxanthin  kualitas  spermatozoa  sapi  angus
mampu
dipertahankan, denganndosis astaxanthin terbaik adalah 0,25gram.

## SARAN
Dari  uraian  diatas,  perlu  dilakukannya penelitian lebih lanjut dalam menguji keberhasilan  inseminasi  buatan  menggunakan
semen  yang  diencerkan  dengan  air  kelapa- kuning  telur  yang  ditambahkan  astaxanthin 0,25gram.

## DAFTAR PUSTAKA
Aisoi L. 2016. Karakteristik astaxanthin sebagai antioksidan. Novae Guinea Jurnal Biologi 7 (1): 43–51.
Anwar  P,  Ondho  Y,    Samsudewa  D.  2014.
Pengaruh  pengencer  ekstrak  air  tebu dengan penambahan kuning telur terhadap kualitas  spermatozoa  sapi  Bali. Jurnal Peternakan 11(2): 48–58.
Ardhani F, Mufidah H, Samsuriati R,  Putra HP.
2020.  Efek  lama  penyimpanan  semen beku sapi bali pada pos inseminasi buatan terhadap membran plasma, tudung akrosom utuh, dan DNA spermatozoa. Jurnal Ilmu Peternakan Terapan 3(2): 58-66. https://doi.org/10.25047/jipt.v3i2.1950
Ax  R,  Dally  M,  Didion  B,    Lenz  R,    Love  C, Varner  D,  Hafez  ND,    Bellin  M.  2008. Semen  Evaluation  in  Reproduction  in Farm  Animal.  Edited  by  Hafez,  ESE  Co. Director. Reproductive  Health  Kiawah Island. South Carolina. 65–70. Bagchi  D,  Garg  A,  Krohn  RL,  Bagchi  M,  Tran MX,  Stohs  SJ. 1997.  Oxygen  free  radical scavenging  abilities  of  vitamins  C  and  E, and a grape seed proanthocyanidin extract in  vitro. Research  Communications  in Molecular  Pathology  and  Pharmacology 95(2): 79–89.
Bebas  W,  Gorda  W.  2017.  Penambahan astaxanthin  pada  pengencer  kuning  /telur berbagai  jenis  unggas  dapat  memproteksi semen babi. Jurnal Veteriner 17 (4): 484-
491.
https://doi.org/10.19087/jveteriner.2016.1 7.4.484
Bebas  W,    Buyona  GL  ,  Budiasa  MK.  2016. Penambahan vitamin e pada pengencer bts terhadap  daya  hidup  dan  motilitas spermatozoa babi Landrace pada penyimpanan  15ºC. Buletin  Veteriner Udayana 8(1):  1–7.
Blegur J, Nalley WM, Hine TM. 2020. Pengaruh penambahan  virgin  coconut  oil  dalam pengencer  tris  kuning  telur  terhadap kualitas  spermatozoa  sapi  bali  selama
preservasi.  Jurnal  Nukleus  Peternakan . 7 (2): 30–38. https://doi.org/10.35508/nukleus.v7i2.299 7
Brillianti  FF,    Srianto  P,  Sardjito  T,  Suprayogi TW,  Triana  IN,  Rahardjo  D.  2021. Kualitas semen sapi pejantan berdasarkan umur,  suhu,  dan  kelembaban  di  Taman Ternak Pendidikan Universitas Airlangga. Journal  of  Animal  Reproduction 10(3): 81-89. https://doi.org/10.20473/ovz.v10i3.2021.8 1-89 .
Ducha  N,  Trinil  S,    Sri  W.  2013.  Motilitas  dan viabilitas  spermatozoa  sapi  limousin selama  penyimpanan  pada  refrigerator dalam pengencer CEP-2 dengan suplementasi  kuning  telur. Journal  of Veterinary Sciences 7(1): 6-8. https://doi.org/10.21157/j.ked.hewan.v7i1 .555 Epriana  AD,  Hine  TM,  Uly  K.  2020.  Pengaruh penambahan  vitamin  e  dalam  pengencer tris-kuning telur terhadap kualitas spermatozoa babi Duroc Jurnal
Peternakan Lahan Kering 2(4): 11–18. Faizal  M.  2016. Pengaruh  Penggunaan  Kuning Telur  Angsa  (Cignus  Olor)  Dan  Air
Kelapa  Muda  (Cocos  Nucifera)  Terhadap
Kualitas  Sperma  Kambing  Boer  Dengan Waktu Equilibrasi Yang Berbeda . Universitas  Islam  Negeri  Maulana  Malik Ibrahim.
Garner DL,  Hafez ESE. 2000. Spermatozoa and
Seminal  Plasma. Reproduction  in  Farm Animals . Pp: 96–109. https://doi.org/10.1002/9781119265306.c h7
Harbin  A,    Belli  HLL,  Nalley  WM.  2016. Motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  babi landrace  dalam  pengencer  sitrat  kuning telur  dengan  penambahan  level  sari  buah yang berbeda. Jurnal Nukleus Peternakan 3(2): 77–83.
Hussein  G,  Goto  H,    Oda  S,  Ushio  ,  Kinzo  M,
Hiroshi W. 2006. Antihypertensive
potential  and  mechanism  of  action  of astaxanthin: iii. antioxidant and histopathological effects in spontaneously hypertensive rats. Biological and
Pharmaceutical  Bulletin 29(4):  84–88. https://doi.org/10.1248/bpb.29.684
Indrawati  D,  Bebas  W,  Trilaksana  I.  2013.
Motilitas  dan  daya  hidup  spermatozoa ayam  kampung  dengan  penambahan astaxanthin  pada  suhu  3-5  ºC. Indonesia Medicus Veterinus 2(4): 45–52. Kardi ID. 2019. Pengaruh pemberian astaxanthin terhadap morfologi dan
motilitas  spermatozoa  mencit  jantan dewasa  (mus  musculus)  yang  diberikan pelatihan fisik berlebih. Jurnal
Sangkareang Mataram 5(4): 62–66. Kusumawati  ED,  Henny  L,  Aju  TNK,  Trinil  S, Nurul  I,    Romzatul  W.  2016.  Pengaruh suhu  dan  lama  simpan  semen  segar terhadap  motilitas dan abnormalitas spermatozoa  kambing  Peranakan  Etawa (Pe). Seminar  Nasional  Hasil  Penelitian 5(1): 409–412.
Kusumawati ED, Kris NU, Krisnaningsih ATN, Syam  R.  2017.  Kualitas  semen  kambing kacang dengan lama simpan yang berbeda pada  suhu  ruang  menggunakan  tris aminomethan  kuning  telur. Jurnal  Ilmu Dan  Teknologi  Peternakan  Tropis 4(3): 42-48. https://doi.org/10.33772/jitro.v4i3.3894 . Laos R, Marawali A,Kune P,  Belli HLL, Uly K.
2021. Pengaruh penambahan filtrat rosella (hibiscus  sabdariffa  linn)  ke  dalam pengencer  tris-kuning  telur  terhadap kualitas  spermatozoa  Kambing  Kacang. Jurnal  Nukleus  Peternakan 8(2):  24–35. https://doi.org/10.35508/nukleus.v8i2.487 2
Matahine  T,  Burhannudin,    Marawali  A.  2014. Efektivitas air buah lontar dalam mempertahankan  motilitas,  viabilitas  dan daya  tahan  hidup  spermatozoa  sapi  Bali. Jurnal Veteriner 15(2): 263-273.
Muhammad  D,  Nurul  I,  Kuswati  K,  Aulia  P  A Y,  Aryogi,  Muhammad  L,  Lukman  HY, Trinil  S.  2019.  Pengaruh  berbagai formulasi  pengencer  dasar  air  kelapa terhadap  kualitas  semen  cair  sapi  PO (Peranakan Ongole) selama simpan dingin. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 29(1): 1–8. https://doi.org/10.21776//ub.jiip.2019.029 .01.01 .
Muhammad D, Trinil S,  Sri W. 2016. Pengaruh penggunaan  cep-2  dengan  suplementasi kuning telur terhadap kualitas spermatozoa  sapi  fh  (frisian  holstein) kualitas rendah selama penyimpanan suhu 4-5ºC. Journal  of  Tropical  Animal Production 17(1): 66–76. https://doi.org/10.21776/ub.jtapro.2016.01 7.01.8 .
Ndeta  A  K,  Belli  HLL,  Uly  K.  2015.  Pengaruh sari  wortel  dengan  level  yang  berbeda pada  pengencer  sitrat  kuning  telur terhadap  motilitas,  viabilitas,  derajat keasaman  spermatozoa  Babi  Landrace. Jurnal Nukleus Peternakan 2(2): 17–28. Octa D T, Bagus IGN, Bebas W. 2014. Glukosa- astaxanthin  meningkatkan  motilitas  dan daya  hidup  spermatozoa  ayam  kampung yang disimpan pada suhu 3-5
C. Indonesia  Medicus  Veterinus 3(1):  9- 19.
Pian  AI,  Tophianong  TC,    Cyntia  DG.  2019. Ekstrak  etanol  daun  kelor  sebagai antioksidan  dalam  pengencer  semen  babi landrace  berbasis  air  buah  lontar.  Jurnal Veteriner Nusantara . 3(2): 68–75.
Rizal  M,  Riyadhi  M,  Irawan  B,  Wahdi  A, Habibah,    Herdis.  2018.  Daya  hidup spermatozoa  epididimis  sapi  persilangan yang dipreservasi dengan air kelapa muda pada  suhu  5ºC  (viability  of  epididymal spermatozoa  crossbreed  cattle  preserved with  coconut  water  at  5ºC). Jurnal Veteriner 18(4): 71-80. https://doi.org/10.19087/jveteriner.2017.1
8.4.571 .
Romadhoni  I,  Rachmawati  A,    Suyadi.  2014. Kualitas  semen  sapi  madura  setelah pengenceran  dengan  tris  aminomethane kuning  telur  yang  disuplementasi  α- tocopherol pada penyimpanan suhu ruang. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 24(1):  39– 44.
Rosmaidar  D,  Triva  M  L.  2013.  Pengaruh penambahan sari buah tomat dalam media pengencer terhadap motilitas dan viabilitas  spermatozoa  kambing  Boer yang  disimpan  pada  suhu  3–5  °C. Jurnal Ilmiah Peternakan 1(1): 7–17.
Saili  T,  Syam.  2014.  Membran  plasma  utuh sprmatozoa epididimis kambing perranakan  ettawa  dalam  natrium  klorida dengan  konsentrasi  berbeda. Jurnal  Ilmu Dan  Teknologi  Peternakan  Tropis 1(1):
79–87. https://doi.org/10.33772/jitro.v1i1.364
Salim  MA,  Trinil  S,    Sri  W.  2012.  Pengaruh
metode  thawing  terhadap  kualitas  semen beku sapi bali, sapi madura dan Sapi PO.
Jurnal Agripet 12(2): 14–19. https://doi.org/10.17969/agripet.v12i2.197 Somoyani NK. 2012. Astaxanthin oral mempertahankan jumlah sel spermatogenik  mencit  yang  mengalami aktivitas  fisik  maksimal. Jurnal  Skala Husada 9(1): 16-21.
Suyadi  A,  Rachmawati  IN.  2012.  Pengaruh  α- tocopherol yang berbeda dalam pengencer dasar  tris  aminomethane  kuning  telur terhadap  kualitas  semen  kambing  boer yang  disimpan  pada  suhu  5 o C. Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Peternakan 22(3): 1–8.
Toelihere  M  R.  1993.  Inseminasi  Buatan  Pada Ternak  Penerbit  Angkasa.  Bandung.  Pp: 52-57.
Utari  N.  2016.  Efek  astaxanthin  terhadap  kadar vascular endothelial growth factor plasma pada non proliferative diabetic retinopathy. SimdosUnud.Ac.Id.
Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami & Radikal
Bebas. Pustaka Poltekkes Padang.
Wiyanti  DC,    Isnaini  N,Trisunuwati  P.  2013.
Pengaruh  lama  simpan  semen  dalam pengencer nacl fisiologis pada suhu kamar terhadap  kualitas  spermatozoa  ayam kampung (Gallus Domesticus). Journal of Veterinary Sciences 7(1) 53-55. https://doi.org/10.21157/j.ked.hewan.v7i1
.566
Wulansari  A,  Ducha  N.  2019.  Pengaruh penambahan  kuning  telur  berbagai  jenis unggas  dalam  pengencer  dasar  air  kelapa terhadap  motilitas  spermatozoa  sapi limousin  pada  penyimpanan  suhu  4-5ºC. LenteraBio: Berkala  Ilmiah  Biologi 8(3): 273-277.