UJI TOKSISITAS FRAKSI DAUN PEDADA ( SONNERATIA CASEOLARIS L. ) TEHADAP  LARVA UDANG ( ARTEMIA SALINA LEACH ) DENGAN MENGGUNAKAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Muh. Fitrah 1 , Nurshalati Tahar 2 , Husniar 3 123 Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Alauddin Makassar
1 Email: muhfitrah@uin-alauddin.ac.id
Abstrak
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  Uji  Toksisitas  Fraksi  Daun  Pedada  ( Sonneratia  caseolaris L.) Terhadap  Larva  Udang  ( Artemia  Salina Leach)  Dengan  Menggunakan  Metode Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT).Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek toksisitas dan identifikasi golongan senyawa dari  fraksi  aktifDaun  Pedada  ( Sonneratia  caseolaris L.)  dengan  metode Brine  ShrimpLethality  Test terhadap Artemia salina Leach. Penelitian diawali dengan pengambilan sampel, pengeringan sampel dan ekstraksi dengan  maserasi  bertingkat menggunakan pelarut n-heksan, etil  asetat, etanol dan air. Ekstrak kemudian  dipekatkan  dengan Rotary  evaporator .  Ekstrak  yang  diperoleh  selanjutnyadiuji  toksisitasnya dan diperoleh hasil ekstrak etanol memiliki tingkat toksik yang lebih besar dibandingkan ekstrak lainnya dengan  nilai  LC 50 sebesar  28.18  μg/ml.  Ekstrakkemudian  difraksinasi  dengan  kromatografikolom sehingga diperoleh 12 fraksi.Masing-masing fraksi diuji toksisitasnya dan diperoleh hasil fraksi F11 yang memilikitingkat  toksik  yang  lebih  besar  di  bandingkan  fraksi  lainnya  dengan  nilai  LC 50 sebesar  46.77 μg/ml.  Hasil  identifikasi  fraksi  F11  menunjukkan  adanya  golongan  senyawasteroid,  flavanoid  dan fenolik.
Kata kunci : Brine Shrimp Letality Test (BSLT), Daun Pedada ( Sonneratia caseolaris L.), Flavanoid, Steroid, dan Fenolik
1. Pendahuluan
Toksisitas adalah kemampuan suatu zat kimia  dalam  menimbulkan  kerusakan  pada organisme  baik  saat  digunakan  atau  saat berada dalam lingkungan. [1] Uji toksisitas merupakan uji
pendahuluan  untuk  mengamati  aktivitas farmakologi  suatu  senyawa.  Prinsip  uji toksisitas  adalah  bahwa  komponen  bioaktif selalu  bersifat  toksik  jika  diberikan  dengan dosis  tinggi  dan  menjadi  obat  pada  dosisi rendah.  Uji  toksisitas  dilakukan  untuk memperkirakan  resiko  yang  berkaitan dengan  pemaparan  zat  kimia  dalam  kondisi khusus karena kita ketahui bahwa tidak ada satupun  zat  kimia  yang  dikatakan  aman (bebas resiko) sepenuhnya, karena zat kimia akan  bersifat  toksik  pada  tingkat  dosis tertentu. [2]
Uji toksisitas digunakan untuk
mengetahui pengaruh racun yang dihasilkan oleh  dosis  tunggal  dari  suatu  campuran  zat kimia  pada  hewan  coba  sebagai  uji praskrining  senyawa  antikanker.  Sebagai skrining  awal  senyawa  antikanker,  metode yang  dapat  dipergunakan  adalah  metode
Brine Shrimp lethality Test (BSLT) yaitu uji toksisitas  senyawa  terhadap  larva  udang Artemia salina . Metode ini telah dibuktikan memiliki  kolerasi  dengan  adanya  daya sitotoksik  senyawa-senyawa  antikanker. Selain  itu  metode  ini  mudah,  murah,  cepat dan  cukup  akurat.  Metode  ini  dilakukan dengan  menentukan  besarnya  LC 50 selama 24  jam.  Suatu  ekstrak  tanaman  atau senyawa  hasil  isolasi  dikatakan  toksik  jika memiliki nilai LC 50 < 1000 µg/mL. [3]
Salah satu tumbuhan yang dimanfaatkan oleh masyarakat yaitu tumbuhan  pedada  ( Sonneratia  caseolaris ). Secara tradisional masyarakat menggunakan daun pedada untuk mengobati luka, memar, keseleo,  dan  bengkak.  Daun-daunnya  yang dihaluskan  juga  dapat  digunakan  untuk mengobati  cacar.  Penggunaan  kulit  kayu pedada  untuk  merangsang  nafsu  makan anak-anak  telah  umum  dikenal  penduduk Makiyan  di  Maluku  Utara  dan  hasilnya sangat efektif.
Tumbuhan  yang  digunakan  sebagai obat  dan  terbukti  secara  empiris  sebagai obat  dapat  dikembangkan  menjadi  obat
herbal  terstandar.  Namun,  pengembangan obat tersebut  harus dilengkapi dengan bukti dari  data  klinik  dan  nonklinik.  Obat  yang akan  diuji  secara  nonklinik  dan  klinik memerlukan data uji toksisitas. Oleh karena itu,  penelitian  ini  dilakukan  untuk  menguji toksisitas daun pedada ( Sonneratia caseolaris . L) dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Tes (BSLT).
Senyawa bioaktif yang akan digunakan sebagai  produk  farmasi  untuk  antikanker harus  diuji  bioaktivitasnya  terlebih  dahulu. Salah  satu  metode  uji  sitotoksisitas  adalah Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  yang dapat digunakan untuk praskrining terhadap senyawa-  senyawa  yang  diduga  berkhasiat sebagai  antikanker [4] dan [5] .  Bioindikator yang  digunakan  uji  toksisitas  tersebut adalah  larva  udang  Artemia  salina  Leach. Toksisitas  yang  tinggi  dari  senyawa  uji sangat berkorelasi dengan aktivitas senyawa sebagai antikanker. [6]
2. Metode Penelitian
a. Alat dan Bahan Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah chamber, erlenmeyer ®(Pyrex),  gelas  ukur  ®(Pyrex),  hot  plat ®(Cimareg), lampu UV 254 dan 366 nm, mikropipet  ®(Socorex),  penangas  air ®(Memmert),  pipa  kapiler,  rotavapor ®(Heidolph),  seperangkatalat  uji  BSLT, seperangkat  alat  kromatografi  kolom, timbangan  analitik  ®(Kern),    timbangan kasar  ®(O’Hauss),  vortex  ®(VM-300) dan wadah maserasi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah air laut, aquadest , daun pedada ( Sonneratia  caseolaris L.), etanol 96%, etil  asetat ,  H 2 SO 4 10%,  larva  udang ( Artemia  salina Leach),  lempeng silica gel  F 254 , n-heksan ,pereaksi  AlCl 3 5%, pereaksi  dragendorf,  pereaksi  FeCl 3 5%, pereaksi  KOH,  pereaksi Lieberman - Bouchard ,  selit,  serium  sulfat,  silica  gel 60 GF 254 .
b. Ekstraksi Simplisia  daun  Pedada  ( Sonneratia caseolaris L.) diperoleh dari Jl. Sukawati, Kab.  Paros,  Sulawesi  Selatan.  Serbuk yang telah kering ditimbang sebanyak 600 guntuk di maserasi
bertingkat
menggunakan  4  pelarut  yaitu  n-heksan, etil  asetat,  etanol  96% dan  air.  Penyarian dilakukan sebanyak 3 kali. Hasil maserasi dirotavapor  hingga  diperoleh  ekstrak kental.  Ekstrak  yang  diperoleh  ditimbang untuk dihitung rendamen.
c. Penyiapan Larva Uji
Kista Artemia salina direndam dalam aquades (±1 jam), lalu ditiriskan.Kemudian kista ditetaskan dalam  wadah  kerucut  dilengkapi  dengan aerator  dan  lampu  penerangan  selama  24 jam.  Setelah  larva  menetas  kemudian dipindahkan  ke    wadah  2  bilik  (gelap- terang)  dengan  sekat  berlubang-lubang yang berisi air laut. Bilik penetasan diberi kondisi  gelap  sedangkan  bilik  satunya dilengkapi dengan lampu sebagai  sumber cahaya  dan  diberi  aerator  yang  berfungsi sebagai  oksigen  dan  menjaga  agar  kista tidak  mengendap.  Larva  yang  baik  akan berenang  menuju  ruang  yang  terang karena  bersifat  fototropik.  Larva  udang akan siap untukdigunakan dalam pengujian setelah berumur 48 jam.
d. Penyiapan Sampel Uji
Ekstrak  daun  Pedada  (ekstrak  n- heksan, etil asetat, etanol 90% dan ekstrak air)  ditimbang  masing-masing  sebanyak 30  mg.  Kemudian  ekstrak  tersebut dilarutkan  dalam  pelarut  sesuai  dengan jenis  ekstrak  sebanyak  3  ml  sehingga diperoleh  konsentrasi  10000  μg/ml sebagai  larutan  stok.    Untuk  membuat konsentrasi  10  μg/ml,  100  μg/ml  dan 1000  μg/ml,  maka  dari  larutan  stok tersebut  dipipet  ke  dalam  vial  masing- masing  5  μl,  50  μl,  dan  500  μl menggunakan mikropipet, kemudian pelarutnya diuapkan.
e. Uji Toksisitas Konsentrasi  larutan  uji  yaitu  1000 ppm,  100  ppm  dan  10  ppm,  masing- masing  dibuat  dalam  3  vial.  Sebagai kontrol  negatif  digunakan  pelarut  saja Selanjutnya  vial  diisi  air  laut  1  ml,  lalu sepuluh ekor Artemia salina Leach. umur 48 jam yang sehat (bergerak aktif) dipilih secara  acak,  dimasukkan  ke  dalam  vial yang  berisi  sampel  yang  bebas  pelarut, kemudian  ditambahkan  air  laut  sampai  5 ml. Setelah 24 jam dihitung  jumlah  larva
yang  hidup  pada  masing-masing  vial. Kemudian  dihitung  %  kematian  larva, data-data  yang  diperoleh  dianalisis dengan  analisis  probit  untuk  menentukan LC 50 .
f. Kromatografi Kolom Ekstrak  etanol  90%  ditimbang sebanyak 15 gram, kemudian difraksinasi dengan menggunakan kromatografi kolom.  Kolom  kromatografi  disiapkan dengan  membuat  bubur  silika  yang dimasukkan ke dalam kolom kromatografi secara perlahan-lahan.
Ekstrak dilarutkan dengan pelarutnya lalu dihomogenkan  dengan  selit  kemudian dimasukkan  ke  dalam  kolom.  Kemudian dibuat  sistem  fase  gerak  dengan  gradien kepolaran  yang  semakin  meningkat  yaitu berturut-turut  heksan  :  etil  asetat  {(10:1),
(7:1),  (5:1),  (3:1),  (1:1)},  kloroform, kloroform:metanol  {(10:1),  (5:1),  (3:1), (1:1)},  metanol.  Penggantian  gradient fase  gerak  dilakukan  ketika  fase  gerak gradien sebelumnya telah habis digunakan untuk mengaliri kolom. Fraksi-fraksi hasil pengoloman ditampung  dan  diuapkan.  Seluruh  fraksi yang diperoleh diidentifikasi menggunakan KLT. Fraksi yang mempunyai kemiripan bercak digabungkan.  Kemudian  dilakukan  uji toksisitas. g. Identifikasi Golongan Senyawa Kimia Fraksi F11 ditotolkan pada lempeng KLT  kemudian  dielusi  dengan  eluen kloroform:metanol (10:1). Kromatogramnya  diamati  di  bawah  UV
254  dan  366  nm  kemudian  disemprot dengan menggunakan pereaksi penampak noda antara lain sebagai berikut :
1) Alkaloid Pereaksi  yang  digunakan  yaitu Dragendorf, jika sampel positif mengandung  alkaloid,  maka  timbul warna  jingga  dengan  latar  belakang kuning. 2) Steroid Pereaksi yang digunakan Liebermann-Burchard. Kromatogram terlebih dahulu dipanaskan,  kemudian  diamati  di  lampu UV 366 nm, munculnya noda berflouresensi coklat atau biru menunjukkan adanya triterpen, sedangkan  munculnya  warna  hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid.
3) Flavanoid
Pereaksi  yang  digunakan  yaitu Aluminium Klorida diamati di lampu UV 366  nm,  jika  sampel  mengandung senyawa  flavanoid  maka  noda  akan berfluoresensi kuning.
4) Fenol
Pereaksi  yang  digunakan  Besi  (III) Klorida, jika sampel positif mengandung fenol  akan  dihasilkan  warna  hijau  atau biru.
5) Khumarin
Pereaksi  yang  digunakan  KOH etanolik, jika sampel positif mengandung senyawa  khumarin  akan  dihasilkan warna merah terang.

## 3. Hasil Dan Pembahasan
Tabel 1. Hasil Ekstraksi No. Sampel Berat Sampel Pelarut Berat Ekstrak % Rendemen 1. Daun Pedada 600 gram N-heksan 8,3 gram 1,38% Etil Asetat 19,05 gram 3,17% Etanol 96% 24 gram 4% Air 4,15 gram 0,69% Total - 55,5 gram 9,25%
Tabel 2. Uji Brine Shrimp Lethality Test Ekstrak Daun Pedada  ( Sonneratia caseolaris )
Tabel 3. Fraksinasi
No Fraksi Vial Berat  (gram) 1 F1 1-15 130 mg 2 F2 16-32 90 mg 3 F3 33-73 100 mg 4 F4 74-83 70 mg 5 F5 90-116 120 mg 6 F6 117-134 100 mg 7 F7 135-193 390 mg 8 F8 194-208 80 mg 9 F9 209-219 80 mg 10 F10 220-239 400 mg 11 F11 240-285 650 mg 12 F12 286-365 650 mg
Tabel 4. Brine Shrimp Lethality Test Fraksi Daun Pedada  ( Sonneratia caseolaris )
Ekstrak Kematian larva (%) Konsentrasi (μg/ml) NilaiProbit LC 50 (μg/ml ) Persamaan Regresi R 2 1000 100 10 1000 100 10 Heksan 43% 37% 23% 4,82 4,6 7 4,26 3.019 y = 0,28x + 4,0233 0,933 Etil Asetat 37% 27% 23% 4,67 4,3 9 4,26 53.703 y = 0,205x + 4,03 0,9573 Etanol 67% 60% 43% 5,44 5,2 5 4,82 28,18 y = 0,31x + 4,55 0,9524 Air 63% 57% 23% 5,33 5,1 8 4,26 138,03 y = 0,535x + 3,8533 0,8528 Fraksi Kematian larva (%) Konsentrasi (μg/ml) NilaiProbit LC 50 (μg/ml) Persamaan Regresi R 2 1000 100 10 1000 100 10 F1 77% 33% 23% 5,74 4,56  4,26  154,88 y= 0,74x + 3,3733 0,8946 F2 67% 43% 27% 5,44 4,82  4,16  200,44 y=0,64x + 3,5267 0,9997 F3 63% 40% 17% 5,33 4,75  4,05  281,83 y= 0,64x + 3,43 0,9971 F4 70% 53% 13% 5,52 5,08  4,36  162,18 y= 0,825x + 3,1733 0,9323 F5 60% 50% 10% 5,25 5 3,72 74,13 y= 0,765x + 3,1267 0,8688 F6 73% 50% 17% 5,61 5 4,05  138,03 y= 0,78x + 3,3267 0,9844 F7 83% 57% 23% 5,95 5,18  4,20 74,13 y= 0,875x +3,36 0,9952 F8 70% 27% 7% 5,52 4,39  3,52  333,65 y= x + 2,4767 0,9944 F9 77% 63% 13% 5,74 5,33  3,87  104,71 y= 0,935x + 3,11 0,9049 F10 80% 53% 17% 5,84 5,08  4,05  102,32 y= 0,895x + 3,2 0,9925 F11 90% 67% 23% 6,28 5,44  4,26 46,77 y= 1,01x + 3,3067 0,9906 F12 73% 33% 13% 5,61 4,56  3,87  229,08 y= 0,87x + 2,94 0,9859
Serbuk  daun  pedada  ( Sonneratia caseolaris L.)  yang  telah  kering  ditimbang sebanyak 600 g untuk di maserasi bertingkat menggunakan  4  pelarut  yaitu  n-heksan,  etil asetat,  etanol  96%  dan  air.  Berdasarkan pada  Tabel  1.  Hasil  ekstraksi  daun  pedada ( Sonneratia  caseolaris ),  ekstrak  dari  daun pedada yang diperoleh masing-masing yaitu ekstrak n-heksan sebanyak 8.3 gram dengan persen  rendemen  1.38%,  ekstrak  etil  asetat sebanyak 19.05 gramdengan persen rendemen  3.17%,  ekstrak  etanol  96% sebanyak 24 gram dengan persen rendemen 4%, ekstrak air sebanyak 4.15 gram dengan persen  rendemen  0.69%.  Kemudian  hasil ekstraksi dilakukan uji toksisitas.
Berdasarkan  pada  Tabel  2.  Hasil  uji toksisitas  ekstrak  daun  pedada  ( Sonneratia caseolaris )  dengan  menggunakan  metode BSLT,  hasil dari uji BSLT pada ekstrak n- heksan diperoleh nilai LC 50 yaitu 3.019μg/ml, pada ekstrak etil
asetatdiperoleh  nilai  LC 50 =  53.703μg/ml, pada  ekstrak  etanol  96%  diperoleh  nilai LC 50 =  28.18μg/ml,  pada  ekstrak  air diperoleh  nilai  LC 50 =  138.03  μg/ml.  Hasil pengujianmenunjukkan bahwa ekstrak etanol  96%  dan  ekstrak  air  memiliki aktivitas  toksik  terhadap  larva Artemia salina Leach  karena  memiliki  nilai LC 50 <1000μg/ml,  sedangkan  ekstrak  n- heksan  dan  etil  asetat  tidak  memiliki aktivitas  toksik  terhadap  larva  udang  karna LC 50 >1000μg/ml.  Ekstrak  yang  mempunyai toksistas  yang  paling  tinggi  yaitu  ekstrak etanol 96%, selanjutnya difraksinasi menggunakan kromatografi kolom.
Berdasarkan  pada  tabel  3.  Hasil fraksinasi  ekstrak  etanol  daun  pedada ( Seonneratia  caseolaris ),  diperoleh  12 fraksi yaitu fraksi F1  (vial ke 1-15 ), fraksi F2 (vial ke 16-32), fraksi F3 (vial ke 33-73), fraksi  F4  (vial  ke  74-83),fraksi  F5  (vial  ke 90-116), fraksi  F6  (vial  ke  117-134), fraksi F7 (vial ke 135-193), fraksi F8 (vial ke 194- 208), fraksi F9 (vial ke 209-219), fraksi F10 (vial  ke  220-239),  fraksi  F11  (vial  ke  240- 285)  dan  fraksi  F12  (vial  ke  286-365). Semua  fraksi  yang  telah  digabungkan kemudian  diuji  aktivitas  toksik  terhadap larva  udang  ( Artemia  salina Leach)  dengan metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test )
dengan konsentrasi 10 μg/ml, 100 μg/ml dan 1000  μg/ml.  Hal  ini  dilakukan  untuk mengetahui efek toksik hasil fraksinasi.
Berdasarkan  pada  Tabel  4.  Hasil  uji toksisitas  fraksi  ekstrak  etanol  daun  pedada ( Sonneratia caseolaris ) dengan
menggunakan  metode  BSLT,  fraksi  F1 memiliki  nilai  LC 50 =  154,88  μg/ml,  fraksi F2  memiliki  nilai  LC 50 =  200,44  μg/ml, fraksi  F3  memiliki  nilai  LC 50 =  281,83 μg/ml,  fraksi  F4  memiliki  nilai  LC 50 = 162,18 μg/ml, fraksi F5 memiliki  nilai LC 50 = 74,13 μg/ml, fraksi F6 memiliki nilai LC 50 =  138,03  μg/ml,  fraksi  F7  memiliki  nilai LC 50 = 74,13 μg/ml, fraksi F8 memiliki nilai LC 50 =  333,65  μg/ml  ,  fraksi  F9  memiliki nilai  LC 50 =  104,71μg/ml,  fraksi  F10 memiliki  nilai  LC 50 =  102,32  μg/ml,  fraksi F11 memiliki nilai LC 50 = 46,77 μg/ml, dan fraksi  F12  memiliki  nilai  LC 50 =  229,08 μg/ml.
Hasil pengamatan tersebut
menunjukkan  bahwa  fraksi  F11  memiliki efek toksik yang paling besar terhadap larva Artemia salina Leach. Berdasarkan  pada  Tabel  5.  Hasil identifikasi  golongan  senyawa  kimia  daun pedada  ( Sonneratia  caseolaris ),  pada  uji menggunakan  H 2 SO 4 menunjukkan  4  noda. Pada  uji  menggunakan  preaksi  Dragendorf hasilnya  negatif  karena  tidak  terdapat  noda berwarna  jingga  dengan  latar  kuning, sedangkan  pereaksi  Liebermann-Burchard memberikan  hasil  positif  dengan  adanya noda berwarna hijau kebiruan menunjukkan adanya  komponen  kimia  golongan  steroid. Pada  uji  menggunakan  pereaksi  FeCl 3 5% hasilnya  positif  dengan  adanya  noda berwarna  hitam  dan  memberikan  hasil positif  terhadap  pereaksi  AlCl 3 dengan adanya  noda  berwarna  kuning  yang menunjukkan  adanya  senyawa  golongan flavonoid.  Pada  uji  menggunakan  pereaksi KOH  hasilnya  negatif  karena  noda  tidak berwarna merah.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan : a. Ekstrak etanol daun pedada ( Sonneratia caseolaris ) memiliki aktivitas  toksik  yang  lebih  besar dengan  nilai  LC 50 28,18  μg/ml
dibandingkan  dengan  ekstrak  n-heksan dengan nilai LC 50 3.019 μg/ml, ekstrak etil  asetat  dengan  nilai  LC 50 53.703 μg/ml,  dan  ekstrak  air  dengan  nilai LC 50 138,03 μg/ml. b. Fraksi  F11  dari  hasil  fraksinasi daundaun pedada ( Sonneratia caseolaris L.)  lebih  toksik  terhadap larva udang Artemia salina Leachdengannilai  LC 50 46,77  μg/ml dibandingkan fraksi lainnya.
c. Hasil  identifikasi  golongan  senyawa daun  pedada  mengandung  senyawa steroid, flavonoid dan fenolik.
5. Daftar Pustaka
[1] Priyanto. Toksikologi:  Mekanisme,
Terapi  Antidotum  dan  Penilaian Resiko Lembaga Studi Dan Konsultasi  Farmakologi  Indonesia
LESKONFI, 2009.
[2] Lu,  Frank  C .  Toksikologi  Dasar . Jakarta: UI-Press, 2006.
[3] Oratmangun,  Sandriani  A.  dkk. Uji Toksisitas  Ekstrak  Tanaman  Patah Tulang  (Euphorbia  tirucalli L. ) terhadap  Artemia  salina  dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  sebagai  Studi  Pendahuluan Potensi  Antikanker .  Jurnal  Ilmiah Farmasi  Pharmacon.  Vol.3  No.3. ISSN 2302-2493, 2014.
[4] Sukardiman,  Rahman  A,  Pratiwi  FN. 2004.  Uji  Praskrining  Aktivitas Antikanker  Ekstrak  Eter  dan  Ekstrak Metanol  Marchantia  cf.  planiloba Steph.
[5] Widyastuti,  S.  2008.  “Uji  Toksisitas Ekstrak  Daun  Iprih  (Ficus  Glabella
Blume)  Terhadap  Artemia  salina Leach Dan Profil Kromatografi Lapis Tipis”.  (Skripsi).  Surakarta:  Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah .
[6] Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Putman,
J.E.,  Jacobsen,  L.B.,  Nichols,  D.E., dan  McLaughin,  J.L.,  1982,  Brine
Shrimp:  A  Convenient  General Bioassay for Active Lant Constituents. Planta Medica, 45 : 31-
34.