## KARAKTERISASI AKSESI DURIAN LOKAL KOLEKSI HORTIMART AGRO CENTRE JAWA TENGAH MENGGUNAKAN PENANDA MOLEKULER INTER SIMPLE SEQUENCE REPEATS (ISSR)
Ahmad Solikin, Amin Retnoningsih & Enni S. Rahayu Jurusan Biologi, Universitas Negeri Semarang, Semarang, Indonesia Korespondensi: aminretnoningsih2016@mail.unnes.ac.id
Ahmad Solikin, Amin Retnoningsih & Enni S. Rahayu. 2017. Characterization of Local Durian Accession Collected Hortimart Agro Centre, Central Java Using Molecular Markers Inter Simple Sequence Repeats (ISSR). Floribunda 5(7): 267 –276. — The lack of morphological markers encourage the use of other mar- kers that are considered more accurate, i.e molecular markers. The purpose of this study is to analyze the genetic diversity as well as determine the identity of the local durian accession collection of Hortimart Agro Centre, Central Java. Leaves of 41 durian accessions were isolated using CTAB method. DNA amplification was conducted with four primers of ISSR PKBT and the results were separated by agarose gel. Data were analyzed using NTSYSpc program version 2: 02. The results showed that DNA amplification using four pri- mers of ISSR BKPT yielded 66 polymorphic bands. The results of the analysis showed that the genetic di- versity of local durians of Hortimart collection is high because 100% of polymorphic DNA bands with varia- tions of size 250 – 1500 bp. No local durian accession was found to have the same DNA100% profile, al- though four pairs of accessions were known to have a 96% high similarity. Five accessions, namely Petruk 2, Ontoseno, Semar, Arjuno, and Gondomono have specific DNA bands. The only accession of durian apart from the other group is Gondomono because it has only one band on ISSR PKBT 8 with size 750 bp which is not owned by other accession. However, dendrograms showed that no identities that are 100% equal so that each DNA band profile can be the identity of each durian accession.
Keywords: Durio zibethinus , molecular marker, genetic diversity.
Ahmad Solikin, Amin Retnoningsih & Enni S. Rahayu. 2017. Karakterisasi Aksesi Durian Lokal Koleksi Hortimart Agro Centre Jawa Tengah Menggunakan Penanda Molekuler Inter Simple Sequence Repeats (ISSR). Floribunda 5(7): 267 –276. — Keterbatasan ciri morfologi mendorong penggunaan penanda lain yang dipandang lebih akurat, yaitu penanda molekuler. Tujuan penelitian ini adalah menganalisis keane- karagaman genetika sekaligus menentukan identitas aksesi durian lokal koleksi Hortimart Agro Centre, Bawen, Jawa Tengah. Daun 41 aksesi durian diisolasi menggunakan metode CTAB. Amplifikasi DNA dilakukan dengan empat primer ISSR PKBT dan hasilnya dipisahkan melalui gel agarose. Data dianalisis menggunakan program NTSYSpc versi 2:02. Hasil penelitian menunjukkan bahwa amplifikasi DNA menggunakan empat primer ISSR BKPT menghasilkan 66 pita polimorfik. Hasil analisis menunjukkan bahwa keanekaragaman genetika durian lokal koleksi Hortimart tergolong tinggi karena 100% pita DNA polimorfik dengan variasi ukuran 250 – 1500 bp. Tidak ditemukan aksesi durian lokal yang memiliki profil DNA100% sama, meskipun empat pasang aksesi diketahui memiliki kemiripan tinggi 96%. Lima aksesi, yakni Petruk 2, Ontoseno, Semar, Arjuno, dan Gondomono memiliki pita DNA spesifik. Satu-satunya aksesi durian yang terpisah dari kelompok lainnya adalah Gondomono karena hanya memiliki satu pita pada ISSR PKBT 8 dengan ukuran 750 bp yang tidak dimiliki aksesi yang lain. Meskipun demikian, dendrogram memperlihatkan tidak ada identitas yang 100% sama sehingga setiap profil pita DNA dapat menjadi identitas setiap aksesi durian.
Kata kunci: Durio zibethinus , penanda molekuler, keanekaragaman genetika.
Indonesia memiliki keanekaragaman jenis durian terbesar di dunia. Sebanyak 30 jenis durian telah diidentifikasi di seluruh dunia, 14 jenis di antaranya merupakan endemik Kalimantan (Kim- man 2002). Beberapa jenis durian tersebut dapat dikomsumsi dan salah satu durian konsumsi yang sangat dikenal masyarakat adalah Durio zibethinus .
Lebih dari 90 varietas/kultivar dari D . zibethinus merupakan durian unggul (Tirtawinata dkk. 2016). Jenis durian ini tersebar luas di seluruh  wilayah Indonesia dan berkembang menjadi varietas du- rian dengan berbagai karakteristik fenotipe dan ge- notipe yang khas (Uji 2005).
Penentuan identitas setiap varietas durian cukup sulit dilakukan karena banyaknya varietas durian lokal. Kesulitan ini antara lain disebabkan minimnya ciri yang dapat digunakan sebagai pe- nanda.  Kekeliruan penentuan identitas varietas du- rian dapat terjadi baik pada fase vegetatif maupun generatif.  Ciri yang paling umum dan mudah di- gunakan sebagai pembeda adalah ciri morfologi buah. Ciri morfologi organ yang lain, seperti daun, percabangan, dan bunga digunakan sebagai ciri yang menguatkan (Uji 2005).
Keterbatasan ciri morfologi mendorong penggunaan penanda lain yang dipandang lebih akurat, yaitu penanda molekuler. Kelebihan penan- da molekuler dibandingkan penanda morfologi adalah  lebih stabil, lebih banyak ciri dan dapat dideteksi pada semua fase pertumbuhan pada semua jenis jaringan, serta tidak dipengaruhi oleh lingkungan (Kumar et al. 2009). Salah satu pe- nanda molekuler yang lazim digunakan untuk mengidentifikasi takson di bawah jenis adalah penanda Inter simple sequence repeat (ISSR). Keunggulan ISSR adalah secara teknis analisisnya cepat, murah, jumlah DNA yang digunakan sedikit, dan mampu mendeteksi genetic polimor- fism tanpa perlu mengetahui susunan basa genom yang dianalisis (Kumar et al. 2009). Penanda molekuler ISSR telah  digunakan untuk membuat sidik jari ( fingerprint ) plasma nutfah Garcinia mangostana (Widiastuti dkk. 2013), identifikasi kerapatan hubungan kekerabatan kultivar jeruk keprok (Yulianti dkk. 2010), identifikasi keaneka- ragaman genetika durian lokal Thailand (Vani- jajiva 2012), dan keanekaragaman genetika durian D . kutejensis (Handayani & Rahayu 2017). Sebe-
lumnya, Vanijajiva (2011) melaporkan keanekara- gaman genetika D . zibethinus menggunakan pe- nanda RAPD. Karakterisasi durian menggunakan RAPD juga telah dilaporkan oleh Mursyidin & Daryono  (2016).
Hortimart Agro Centre yang terletak di Kecamatan Bawen, Kabupaten Semarang, Provinsi Jawa Tengah memiliki koleksi lebih dari 100 aksesi durian lokal. Koleksi berbagai aksesi durian lokal tersebut diberi nama tokoh pewayangan, seperti durian Janoko dan durian Suryo. Hingga saat ini kepastian jumlah kultivar/varietas yang dimiliki Hortimart belum dapat ditentukan mengi- ngat sulitnya membedakan antar aksesi durian tersebut hanya berdasarkan penanda morfologi. Penanda molekuler diharapkan dapat mengungkap keanekaragaman genetika dan identitas setiap ak- sesi durian lokal tersebut. Karakterisasi molekuler menggunakan penanda ISSR perlu dilakukan untuk mengungkap keanekaragaman genetika durian ka- rena kemampuannya dalam membedakan individu dalam satu jenis yang sama. Hasil karakterisasi ter- sebut dapat digunakan untuk menentukan identitas dan menyediakan informasi terkait bibit unggul untuk mendukung upaya  perbanyakan durian yang lebih terarah.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi Molekuler dan Laboratorium Riset, Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Negeri Semarang mulai Januari sampai September 2016. Aksesi durian yang diteliti sebanyak 41 durian lokal koleksi Hortimart Agro Centre (Tabel 1).
Tabel 1.  Aksesi durian koleksi Hortimart Agro Centre
No. Aksesi  Hanca
No. Aksesi  Hanca No.  Aksesi  Hanca 1  Jagal Bilowo 7 15  Sugriwo 9 29  Ngalengko 7 2 Ajimah 1 16 Bismo 5 30 Abiyoso 11 3 Pancasona 4 17 Tirtonoto 11  31 Betorokolo 11 4 Ponconoko 9 18 Romowijoyo 10  32 Gondomono 11 5 Suryo 9 19 Ngastino 12  33 Lembusuro 11 6 Pasopati 9 20 Janoko 4 34 Rahwono 11 7 Pendowo 7 21 Dewi Sinto 9 35 Arjuno 12 8 Ontoseno 2 22 Pancatnyono 7 36 Jangkarbumi 12 9 Surtikanti 9 23 Petruk 10  37 Duryudono 12
No. Aksesi  Hanca No. Aksesi  Hanca No.  Aksesi  Hanca 10 Bima 2 24  Ontorejo 2 38 Anjani 13 11 Yomodipati 2 25  Trijoto 2 39 Kolosrenggi 13 12 Mustiko 4 26  Semar 4 40 Noroyono 13 13 Banowati 2 27  Gareng 4 41 Monthong 9 14 Cokro 4 28  Mahesosuro 7
Lanjutan Tabel 1.  Aksesi durian koleksi Hortimart Agro Centre
Isolasi DNA dilakukan dengan metode CTAB yang telah dimodifikasi (Vanijajiva 2011). Prosedur isolasi DNA meliputi empat tahapan utama, yaitu (1) pengambilan sampel daun dan ekstraksi, (2) pemurnian, (3) presipitasi DNA, dan (4) uji kualitas DNA.
Daun durian digerus di dalam buffer ekstraksi yang terdiri atas CTAB 2 %; EDTA 0,02 M pH 8,0; Tris-HCl 0,1 M pH 8.0; NaCl 1.4 M; dan β -mercaptoetanol 0,3%. Hasil gerusan diin- kubasi dalam waterbath pada suhu 60 o C selama 30 menit. Setelah diangkat kemudian ditambahkan larutan phenol:chloroform:isoamyl-alcohol (PCI). Larutan PCI digunakan untuk memisahkan protein yang telah terdegradasi  agar terpisah dari larutan buffer yang mengandung DNA. Larutan yang telah ditambah PCI kemudian dibolak-balik hingga terjadi perubahan warna pada lapisan bawah yang semula berwarna bening menjadi hijau. Larutan disentrifugasi dengan kecepatan 10.000 rpm selama 15 menit menghasilkan tiga lapisan, yaitu supernatan pada lapisan atas, debris sel pada
lapisan tengah, dan kloroform pada lapisan bawah. Supernatan dipindahkan ke dalam microtube baru, kemudian ditambahkan isopropanol dingin 100% sebanyak 0,6 x volume. Larutan dibolak-balik hingga DNA mengendap. Tahapan selanjutnya la- rutan disentrifugasi 4000 rpm selama 5 menit. Supernatan yang terbentuk dibuang sehingga ter- sisa pelet di ujung microtube . Pelet DNA dicuci dengan 70% etanol dingin kemudian disentrifugasi 4000 rpm selama 5 menit.  Pencucian dengan eta- nol dingin dilakukan sebanyak 3 kali. Supernatan dibuang kemudian pelet DNA dikeringkan pada suhu ruang selama satu malam. Pelet DNA yang kering kemudian dilarutkan dengan buffer TE. Kualitas dan kuantitas DNA hasil isolasi dilihat pada gel agarose 0,8%.
Amplifikasi DNA dilakukan dengan mesin PCR peqSTAR 2X Thermocycler menggunakan  4 primer ISSR Pusat Kajian Buah Tropika (PKBT)- IPB. Primer ini telah dioptimasi untuk memperoleh suhu annealing yang tepat (Tabel 2).

## Tabel 2. Susunan basa primer ISSR PKBT-IPB
No. Nama primer  Sekuen  Suhu Annealing ( o C) 1 2 3
4 PKBT-2 PKBT-3 PKBT-8 PKBT-9 (AC)8TT (AG)8T (GA)9C (GA)9T 53 53 54 54
Komposisi larutan yang diamplifikasi terdiri atas DNA, primer ISSR, dan PCR Mix Go Tag Green Master Promega dan nuclease free water . Konsentrasi DNA yang digunakan 10 – 50 ng/ μ l. Tahapan PCR meliputi predenaturation 94 o C se- lama 4 menit , denaturation 94 o C selama 30 detik , annealing 36 – 54 o C selama 30 detik , extension 72 o C selama 30 detik , dan final extention 72 o C
selama 5 menit. Jumlah siklus PCR yang digu- nakan sebanyak 35 siklus.
Produk amplifikasi DNA dipisahkan pada gel agarose 1,2 %. Ukuran setiap pita DNA di- bandingkan dengan DNA Ladder 50 basepair (bp) DNA. Pita yang muncul merupakan satu alel ter- tentu. Kenekaragaman genetika dianalisis melalui dendogram yang dihasilkan. Identitas setiap aksesi
ditentukan berdasarkan adanya profil pita spesifik yang menjadi ciri khas aksesi. Matriks keaneka- ragaman genetika diolah menggunakan program s imilarity for qualitative (SIMQUAL) data dengan koefisien Dice dari Nei & Li (1979). Analisis den- drogram dilakukan berdasarkan unweighted pair group with arithmetical averages (UPGMA) pro- gram NTSYS-pc versi 2.02 (Rohlf 1998).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Amplifikasi DNA 41 aksesi durian menggunakan empat primer ISSR PKBT mengha- silkan semua profil pita polimorfik. Ukuran pita yang dihasilkan berkisar antara 250 – 1500 bp (Tabel 3).
Tabel 3.  Ukuran pita hasil amplifikasi menggunakan primer ISSR PKBT 2, PKBT 3, PKBT 8, dan PKBT 9
No. Primer Monomorfik (bp) Polimorfik (bp) 1 2 3 4 PKBT 2 PKBT 3 PKBT 8 PKBT 9 - - - - 330, 375, 400, 430, 450, 500, 575, 600, 625, 675, 700, 800, 875, 1000, 1250 250, 300, 330, 375, 400, 450, 475, 500, 515, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 750, 800, 875, 900, 1000, 1030, 1250 313, 376, 400, 439, 500, 575, 600, 625, 700, 750, 800, 900, 1000, 1250 250, 300, 330, 375, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 875, 900, 1000, 1250, 1500
Profil sebagian pita DNA hasil ampifikasi menggunakan primer ISSR PKBT 2 disajikan pada Gambar 1, PKBT 3 pada Gambar 2, PKBT 8 pada Gambar 3, dan PKBT 9 pada Gambar 4.
Mark er Betor okolo Gondo m ono
L em busur o Rahwono Ar juno Jangkar bu m i
Dur yudono Anjani Kolosr enggi Nor oy ono M onthong Mark er 1000 bp 500 bp 250 bp 50 bp Mark er Betor okolo Gondo m ono L em busur o
Rahwono Ar juno Jangkar bu m i Dur yudono Anjani Kolosr enggi Nor oy ono M onthong Mark er 1000 bp 500 bp 250 bp 50 bp Mark er Betor okolo
Gondo m ono L em busur o Rahwono Ar juno Jangkar bu m i Dur yudono Anjani Kolosr enggi Nor oy ono
M onthong Mark er 1000 bp 500 bp 250 bp 50 bp Mark er Betor okolo Gondo m ono L em busur o Rahwono Ar juno Jangkar bu m i
Dur yudono Anjani Kolosr enggi Nor oy ono M onthong Mark er 1000 bp 500 bp 250 bp 50 bp
Gambar 1.  Profil pita DNA PKBT 2. Gambar 2.  Profil pita DNA PKBT 3.
Gambar 3.  Profil pita DNA PKBT 8.
Gambar 4.  Profil pita DNA PKBT 9.
Amplifikasi DNA menggunakan primer ISSR PKBT dengan panjang 17 – 19 bp meng- hasilkan 66 pita DNA polimorfik (Tabel 4). Am- plifikasi DNA setiap primer dipengaruhi oleh dis- tribusi situs annealing pada DNA. Pita DNA yang dihasilkan menunjukkan ketebalan yang berbeda beda karena adanya perbedaan intensitas penem- pelan primer pada DNA, sehingga satu fragmen DNA dengan panjang tertentu diamplifikasi lebih banyak dibandingkan fragmen yang lain (Kumar et al. 2009). Selain itu, penanda ISSR juga memiliki
tingkat keterulangan tinggi, berbeda dengan penan- da RAPD yang sering menghasilkan pita berbeda meskipun menggunakan primer yang sama (Se- magn et al . 2006).  Oleh karena itu, penanda ISSR dipandang lebih informatif daripada RAPD se- hingga banyak digunakan untuk menganalisis ke- anekaragaman genetika di dalam jenis tertentu, seperti pada Lobelia rhychopetalum (Geleta & Bryngelsson 2009), Myrcia lundiana (Alves et al . 2016), Curcuma sp. (Saha et al . 2016), dan Hyptis pectinata (Feitosa-Alcantara et al . 2017).
Tabel 4.  Polimorfisme empat primer ISSR PKBT pada 41 aksesi durian
Primer Ukuran relatif (bp) Jumlah pita Total jumlah pita polimorfik Total jumlah pita monomorfik Persentase polimorfisme (%) PKBT 2 PKBT 3 PKBT 8 PKBT 9 330–1250 250–1250 313–1500 250–1500 15 22 14 15 15 22 14 15 0 0 0 0 100 100 100 100 Total 66 66 (100  %) 0 (0 %) 100%
Hasil penelitian keanekaragaman genetika 41 aksesi durian koleksi Hortimart menunjukkan bahwa tingkat polimorfisme durian lokal tersebut maksimal (100%). Maknanya adalah berdasarkan penanda molekuler ISSR tidak ditemukan sino- nima pada 41 aksesi durian tersebut, setiap aksesi merupakan cultivar/varietas yang berbeda. Per- sentase polimorfisme yang maksimal juga menun- jukkan bahwa tingkat keanekaragaman genetika durian koleksi Hortimart sangat tinggi. Hal ini dapat dipahami karena koleksi durian lokal Horti- mart ditanam menggunakan bibit durian yang berasal dari berbagai wilayah di Indonesia (komu- nikasi pribadi). Berdasarkan morfologi buahnya, aksesi koleksi durian tersebut juga diidentifikasi tidak terdapat duplikasi (Retnoningsih et al . 2017). Secara teknis, penggunaan penanda morfologi jauh lebih mudah dibandingkan dengan penanda mole- kuler karena sifat dan ciri morfologi mudah dia- mati dengan mata telanjang. Kelemahan penanda morfologi sebagai sifat dan ciri yang baik atau pembeda yang stabil adalah harus ditunggu relatif lama hingga durian menghasilkan bunga dan buah. Durian merupakan tanaman semusim yang secara umum di Indonesia berbunga dan berbuah hanya
satu kali dalam setahun (Tirtawinata dkk. 2016). Selain itu, sifat dan ciri morfologi durian pada saat fase vegetatif, seperti bibit durian dipandang ku- rang memadai untuk menentukan identitas durian mengingat jumlah sifat dan cirinya yang sangat terbatas, sehingga penggunaan penanda molekuler menjadi mutlak diperlukan.
Temuan menarik dari penelitian ini adalah semua aksesi menghasilkan pita DNA yang poli- morfik meskipun hanya menggunakan empat primer ISSR. Hasil penelitian ini memperkuat dan membuktikan bahwa Indonesia merupakan pusat keanekaragaman durian. Hasilnya sangat berbeda dengan analisis keanekaragaman genetika menggu- nakan penanda ISSR pada 14 aksesi D. zibethinus di Thailand yang hanya menghasilkan pita poli- morfik 30% – 42 %. Selain itu, analisis menggu- nakan penanda RAPD yang bersifat acak pada aksesi yang sama  juga hanya menghasilkan pita polimorfik 23% – 50% (Vanijajiva 2011).
Hasil amplifikasi pita DNA menggunakan primer ISSR PKBT2, PKBT3, PKBT8 dan PKBT9 menunjukkan bahwa hanya lima aksesi durian yang memiliki pita spesifik (Tabel 5).
Tabel 5.  Pita DNA spesifik pada aksesi durian koleksi Hortimart
Aksesi Ukuran pita (bp) PKBT 2 PKBT 3 PKBT 8 PKBT 9 Petruk 2 Ontoseno Semar Arjuno Gondomono 450 - - - - - 900 400 - - - - - 875 750 700 - - - -
Keberadaan pita spesifik dapat digunakan sebagai identitas aksesi  yang ideal karena pita spesifik tersebut masing-masing hanya ditemukan pada satu aksesi saja. Meskipun demikian, profil pita DNA secara menyeluruh dan khas pada setiap aksesi dapat menjadi DNA fingerprinting untuk membedakan aksesi satu dengan aksesi yang lain. Profil pita DNA spesifik yang dihasilkan dari  am- plifikasi DNA tumbuhan dapat digunakan sebagai identitas tumbuhan (Zulfahmi 2013). Keberadaan pita DNA spesifik tertentu selain menjamin akurasi hasil identifikasi juga akan mempercepat proses identifikasi. Identifikasi molekuler terbukti jauh lebih cepat dibandingkan dengan identifikasi me- nggunakan penanda morfologi yang membutuhkan pengamatan intensif cukup lama hingga per- kembangan tumbuhan pada fase generatif. Kele- bihan identifikasi molekuler adalah dapat dila- kukan pada semua fase pertumbuhan tanaman (Semagn et al. 2006).
Pengelompokan aksesi ke dalam kluster dilakukan secara acak berdasarkan profil pita yang diberi skor sesuai ukuran pita DNA. Keberadaan aksesi pada kluster yang sama menunjukkan bahwa aksesi tersebut memiliki tingkat kemiripan profil pita DNA (Yulita & Murnianjari 2010). Penge- lompokan pada dendrogram berdasarkan empat primer ISSR PKBT menunjukkan bahwa semua aksesi berbeda kecuali pada empat pasang aksesi yang memiliki kemiripan sangat tinggi hingga 96% (Gambar 5). Aksesi yang sangat mirip ini secara molekuler diindikasi berasal dari tetua varietas yang sama yang mungkin mengalami mutasi akibat perbedaan lingkungan pada fase pertumbuhannya (Syahruddin 2012).
Karakterisasi menggunakan penanda molekuler ISSR terbukti memiliki tingkat kete- litian yang tinggi mengingat berdasarkan penanda morfologi, aksesi durian yang berbeda (Ret- noningsih et al . 2017), secara molekuler ternyata diketahui sangat mirip. Hal ini mungkin terjadi karena genotipe secara umum tidak dipengaruhi
oleh faktor lingkungan, kecuali jika lingkungan bersifat ekstrim.
Dendrogram memperlihatkan aksesi durian yang diteliti mengelompok menjadi dua. Aksesi Gondomono menjadi satu-satunya anggota kelom- pok B yang memisah  dari aksesi yang lain. Hal ini disebabkan aksesi Gondomono memiliki hanya satu pita yang spesifik berukuran 750 bp yang ti- dak dimiliki aksesi yang lain.
Semua aksesi durian yang dikenali unggul berdasarkan kajian morfologi buah (Retnoningsih et al 2017) berada pada kelompok A. Temuan yang menarik adalah durian unggul pada aksesi yang secara molekuler memiliki kemiripan tinggi, yaitu Trijoto dan Ontorejo berturut-turut mirip dengan aksesi Romowijoyo dan Ngastino yang tidak dike- nali sebagai durian unggul. Keunggulan durian antara lain ditentukan oleh kulit buah yang tipis, rasa yang manis sedikit pahit dengan tekstur arilus lembut dan sedikit berserat, serta warna arilus yang kekuningan, orange hingga kemerahan (Tirtawi- nata dkk. 2016). Posisi penanda ISSR yang digunakan dalam penelitian ini diduga tidak lin- kage dengan gen yang mengekpresikan sifat dan ciri durian unggul. Pemilihan penanda molekuler yang linkage dengan gen tertentu perlu dipri- oritaskan untuk memastikan penanda spesifik un- tuk durian yang unggul. Penanda seperti ini dapat membantu meminimalkan kekeliruan dalam pe- milihan benih/bibit durian khususnya untuk tujuan pengembangan kebun durian komersial (Ret- noningsih 2016). Penggunaan penanda lain seperti mikrosatelit perlu diupayakan mengingat posisi mikrosatelit sering lingkage dengan gen tertentu (Retnoningsih et al. 2010, Arya et al. 2014, Begum et al. 2014). Meskipun demikian, peluang menda- patkan penanda ISSR spesifik juga masih terbuka lebar karena penambahan jumlah primer ber- peluang meningkatkan jumlah pita sehingga mungkin akan diperoleh pita spesifik yang linkage gen unggul tertentu.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa D . zibethinus memiliki keanekaragaman genetika yang tinggi. Menurut Bumrungsri et al. (2009), faktor yang mempengaruhi keanekaragaman durian adalah biologi polinasi tumbuhan tersebut. Bunga durian adalah cauliflorous yang memiliki sifat hermaphrodite , sehingga self-pollination mungkin terjadi. Durian dengan sifat self-compatible mem- beri peluang kepada polen dari bunga yang sama atau bunga yang berbeda pada pohon yang sama menyerbuki stigma bunga dari pohon yang sama. Keanekaragaman yang terbentuk dari hasil polinasi yang bersifat self-compatible ini lebih rendah dibandingkan keanekaragaman hasil penyerbukan polen dari pohon durian yang berbeda. Faktor yang mempengaruhi keanekaragaman lainnya adalah posisi tangkai putik durian yang lebih tinggi dari tangkai sari dan faktor fisiologi waktu kesiapan
stigma dan dehisen kepala sari yang berbeda sehingga tidak memungkinkan terjadi self-po- llination . Bunga durian mulai mekar sore hari sekitar pukul 16.00 – 16.45, namun sebelum mekar putik biasanya sudah muncul dari kuncup bunga dan reseptif dari pukul 13.00 hingga pagi hari, sedangkan anther baru mengalami dehisen pada pukul 19.30 – 20.00. Kedua faktor tersebut menye- babkan terjadinya self-incompatibilitas pada duri- an. Hasil penelitian lain menunjukkan bahwa per- silangan buatan menghasilkan buah 31 % dengan kualitas lebih baik dibandingkan dengan pem- bentukan buah melalui penyerbukan sendiri yang menghasilkan <10 %.  Biologi polinasi durian ada tiga, yaitu self-compatible, semi self-incompatibel dan self-incompatible . Karena faktor biologi poli- nasi tersebut, durian memiliki keanekaragaman yang tinggi (Lim & Luders 2009).
Gambar 5. Dendrogram 41 aksesi durian berdasarkan penanda ISSR,  A dan B adalah kelompok, A1 dan A2 adalah sub kelompok, adalah aksesi durian unggul.
Keanekaragaman genetika durian dapat juga akibat peristiwa mutasi. Genom tumbuhan memi- liki daerah berulang yang sangat banyak dalam jumlah dan distribusinya. Salah satu sifat penting sekuen DNA berulang adalah cenderung menga- lami mutasi yang tinggi (Udupa & Baum 2001). Mutasi tidak selalu diikuti perubahan morfologi. Namun demikian,  fenotipe mengandung unsur ge- notipe, deviasi lingkungan, dan interaksi genetika dan lingkungan. Oleh karena itu, sifat dan ciri mor- fologi baik sifat dan ciri kuantitatif maupun kua- litatif tidak hanya merupakan ekspresi genetika karena dipengaruhi juga oleh lingkungan. Keadaan lingkungan yang berbeda memberikan penampilan morfologi yang berbeda (Wang et al. 2012).
Keanekaragaman tumbuhan bergantung ke- pada wilayah penyebarannya. Tumbuhan yang se- cara geografis memiliki wilayah penyebaran yang luas memiliki tingkat keanekaragaman lebih tinggi daripada tumbuhan dengan penyebaran yang sem- pit/endemik (Stuessy et al. 2014). Selain memiliki wilayah penyebaran geografis yang cukup luas (Uji 2005) dan merupakan jenis tumbuhan berumur sangat panjang, buah durian merupakan favorit beberapa vertebrata. Kondisi ini juga menyebabkan durian memiliki tingkat keanekaragaman yang tinggi. Tumbuhan akan beradaptasi pada lingkung- an tempat hidupnya. Adaptasi ini dapat memacu terjadinya perubahan biokimia maupun fisiologis sehingga mempengaruhi keanekaragaman tum- buhan tersebut (Indriani dkk. 2008).
Penanda molekuler penting untuk meng- evaluasi keanekaragaman genetika suatu tumbuhan karena relatif tidak dipengaruhi oleh lingkungan. Penanda molekuler diwariskan dari satu generasi ke generasi selanjutnya, tidak berkaitan langsung dengan ekspresi suatu gen, namun dapat menjadi petunjuk yang stabil dalam genom. Penanda molekuler dapat digunakan secara tidak langsung untuk menentukan gen spesifik pada kromosom tertentu jika posisinya linkage sehingga cenderung diwariskan kepada generasi berikutnya (Semagn et al. 2006).

## KESIMPULAN
Keanekaragaman genetika durian lokal koleksi Hortimart Agro Centre, Jawa Tengah berdasarkan 4 primer ISSR BKPT tergolong tinggi karena 100% pita DNA yang dihasilkan poli- morfik. Analisis 41 aksesi durian lokal menun- jukkan tidak satupun aksesi memiliki profil DNA yang 100% sama, meskipun terdapat 4 pasang aksesi yang memiliki kemiripan 96%.  Pita DNA
spesifik ditemukan pada lima aksesi, yakni Petruk 2, Ontoseno, Semar, Arjuno, dan Gondomono. Aksesi Gondomono menjadi satu-satunya aksesi yang terpisah dari aksesi lainnya karena memiliki hanya 1 pita pada penanda ISSR PKBT 8 dengan ukuran 750 bp yang tidak dimiliki aksesi lainnya. Pada dendrogram, tidak ditemukan identitas yang 100% sama sehingga profil pita DNA dapat menjadi identitas setiap aksesi durian.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Direktorat Jenderal Kementrian Riset Teknologi dan Pendidikan Tinggi Republik Indonesia yang telah memberikan pendanaan untuk skema pene- litian hibah kompetensi ini. Ucapan yang sama juga disampaikan kepada Kepala laboratorium Biologi Universitas Negeri Semarang dan penge- lola Hortimart Agro Centre Jawa Tengah yang telah memberikan fasilitas alat maupun bahan sehingga penelitian ini dapat diselesaikan tepat waktu.

## DAFTAR PUSTAKA
Alves MS, Nizio DAC, Brito FA, SampaioTS, Silva AVC,  Arrigoni-Blank MF,  Carvalho FVA & Blank AF. 2016. Analysis of genetic diversity of a native population of Myrcia lundiana Kiaersk. plants using ISSR mar- kers. Genetic and Molecular Research 15 (4):1 – 10.
Arya L, Verma M & Lakhanpaul S. 2014. Diagnostic set of microsatellite markers for hybrid purity testing and molecular identi- fication of hybrids and parental lines in sorghum. Journal of Plant Science & Re- search 1(1):1 – 4.
Begum H, Reddy MT, Malathi S, Reddy BP,
Narshimulu G, Nagaraju J & Siddiq EA. 2014.  Morphological and microsatellite ana- lysis of intravarietal heterogeneity in ‘Be- neshan’ mango ( Mangifera indica L.). Inter- national Journal of Agricultural and Food Research 3 (2):16 – 33.
Bumrungsri S, Sripaoraya E, Chongsiri T, Sridith K & Racey PA. 2009. The pollination eco- logy of durian ( Durio zibethinus , Bomba- caceae ) in southern Thailand. Journal of Tropical Ecology 25: 85 – 92.
Feitosa-Alcantara RB, Silva AVC, Blank AF, Almeida CS, Alvares-Carvalho CV & Arrigoni-Blank MF. 2017. Analysis of gene-
tic diversity of Hyptis pectinata (L.) Poit. plants using ISSR markers. Genetic Mole- cular Research 16(3):1 – 10.
Geleta  M & Bryngelsson T. 2009.  Inter simple sequence repeat (ISSR) based analysis of genetic diversity of Lobelia rhynchopetalum (Campanulaceae). Hereditas 146:122 – 130.
Handayani F & Rahayu SP. 2017. Assessment of genetic diversity in lai ( Durio kutejensis ) local cultivars of Batuah (Indonesia) using ISSR marker. Biodiversitas 18(2): 525 – 528. Indriani FC, Sudjindro AN, Sugiharto & Soetopo L. 2008. Keragaman genetik plasma nutfah kenaf ( Hibiscus cannabinus L.) dan bebe- rapa spesies yang sekerabat berdasarkan analisis isozim. Agritek 6(9): 1793 – 1802. Kimman P. 2002. Biodiversity survey of the pro- posed Kelian protection Forest . PT. Kelian Equatiroal mining.
Kumar P, Gupta VK, Misra AK, Modi DR & Pandey BK. 2009. Potential of molecular markers in plant biotechnology. Plant Omics
Journal Southern Cross Journal 2(4): 141 –
162.
Lim TK & Luders L. 2009. Boosting Durian Pro- ductivity . Darwin. Rural Industries Research and Development Corporation.
Mursyidin DH & Daryono BS. 2016. Genetic diversity of local durian ( Durio zibethinus Murr.) Cultivars of South Kalimantan’s Pro- vince Based on RAPD Markers. Advances of Science and Technology for Society. AIP Conf. Proc. 1755:1–7.
Nei M & Li WH 1979. Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleasis. Proceedings of the
National Academy of Sciences of the USA 76: 5269 – 5273.
Retnoningsih A, Megia R & Hartana A. 2010. Molecular verification and diversity ana- lysis of Indonesian BB, AAB and ABB banana cultivars. Tree and Forestry Science and Biotechnology 4: 69 – 76.
Retnoningsih A. 2016. Kebun Benih Durian Ung- gul Indonesia: Menyediakan Benih Unggul Bersertifikat untuk Pengembangan Kawasan Durian Unggul. Dalam: Rumah Ilmu Inovatif dan Membumi . Mastur Z, Cahyono E, Sudarmin & Kurniawan C. (eds.). FMIPA UNNES.
Retnoningsih A, Rahayu ES & Sari IP. 2017. Characterization of local durian germplasm based on the morphology of fruit. Jurnal Sains dan Teknologi 14(2): 89 – 94.
Rohlf FJ. 1998. NTSYSpc. Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System. User Guide. Departement of Ecology and Evo- lution. State University of New York. New York.
Saha K, Sinha RK, Basak S & Sinha S. 2016. ISSR Fingerprinting to Ascertain the Genetic Re- lationship of Curcuma sp. of Tripura. Ame- rican Journal of Plant Science’s 7: 259 – 266. Semagn K, Bjornstad A & Ndjiondjop MN. 2006.
An overview of molecular marker methods for plants. African Journal of Biotechnology 5(25): 2540 – 2568.
Stuessy TF, Takayama K, Sepulveda PL & Craw- ford DJ. 2014. Interpretation of patterns of genetic variation in endemic plant species of oceanic islands. Botanical Journal of the Linnean Society 174: 276–288.
Syahruddin K. 2012. Analisis keragaman beberapa genotipe durian ( Durio zibethinus Murr.) menggunakan penanda morfologi dan mole- kuler (ISSR). Tesis . Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Tirtawinata MR, Santoso PJ & Apriyanti LH. 2016. Durian: Pengetahuan Dasar untuk Pecinta Durian. Agro Flo.
Udupa SM & Baum M. 2001. High mutation rate and mutational bias at microsatellite in loci chickpea ( Cicer arietium L.). Molecular Genet. Genomics 265: 1097 – 1103.
Uji T. 2005. Keanekaragaman jenis dan sumber plasma nutfah durian ( Durio spp. ) di Indonesia. Buletin Plasma Nutfah 11: 28 – 33. Vanijajiva O. 2011. Genetic variability among durian ( Durio zibethinus Murr.) cultivars in the Nonthaburi province, Thailand detected by RAPD analysis. Journal of Agricultural Technology 7(4): 1107 – 1116.
Vanijajiva O. 2012. The application of ISSR markers in genetic variance detection among durian ( Durio zibethinus Murr.) cultivars in the Nonthaburi Province, Thailand. Procedia Engineering 32: 155 – 159.
Wang Y, Wang X & Paterson AH. 2012. Genome and gene duplications and gene expression divergence: a view from plants. Annals of The New York Academy of Sciences 1: 1 – 14. Widiastuti A, Sobir & Suhartanto MR. 2013. Analisis keragaman genetik manggis (Gar- cinia mangostana) diradiasi dengan sinar gamma berdasarkan penanda ISSR. Bio- teknologi 10(1): 15 – 22.
Yulianti F, Marasari C, Karsinah & Hartono T.
2010. Variasi genetik jeruk keprok SoE
( Citrus reticulata Blanco) hasil radiasi sinar gamma menggunakan penanda ISSR.
Buletin Plasma Nutfah 16(2): 134 – 139.
Yulita KS & Murnianjari. 2010. Keragaman genetic beberapa klon durian ( Durio zibethinus Murray.) asal Jawa Barat ber-
dasarkan sidik jari random amplified
polymorphic DNA. Berita Biologi 10(3): 269
– 275.
Zulfahmi. 2013. Penanda DNA untuk analisis genetik tanaman. Jurnal Agroteknologi 3(2):
41 – 52.