PENGARUH KONSENTRASI NATRIUM ALGINAT SEBAGAI PENJERAT SEL Lactobacillus acidophilus FNCC 0051 DAN LAMA PENYIMPANAN TERHADAP JUMLAH SEL YANG TERLEPAS DAN KARAKTER CARRIER
(Effect of sodium alginate concentration in Lactobacillus acidophilus FNCC 0051 entrapment and storage period on the number of released cells and carrier’s character)
Nike Ratnasari a* , Netty Kusumawati a , Indah Kuswardani a
a Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Indonesia
*Penulis korespondensi Email: nix_v0n@yahoo.com

## ABSTRACT
The aim of this study  is to  know the  effect  of sodium  alginate concentration  in  Lactobacillus acidophilus FNCC 0051 entrapment, refrigeration storage (±5 o C) period and interaction of both factors on the number of  released  cells and  carrier’s  character  (UHT  milk).  The  experimental  design  used  was  factorial  RBD (Randomized Block Design) design with two factors, sodium alginate concentration (1%, 1,5%, 2%) and storage  period  (0,10,  20  days).  The  parameters  observed  are  the  number  of  released  cells  (Total  Plate Count  /  TPC),  pH  and  total  lactic  acid  of  the  carrier  (UHT  milk).  The  obtained  data  are  statistically analyzed  by  ANOVA  ( Analysis  of  Variance)  at  α=5%  and  continued  with  Duncan’s  Real  Difference Distance  test  (Duncan's  Multiple  Range  Test)  to  determine  which  level  of  the  treatment  that  gives  a significant  differences.  Sodium  alginate  concentration  and  storage  period  had  significant  effect  on  the number  of  released  cells  and  carrier’s  character  (pH  and  total  lactic  acid  of  UHT  milk)  and  there  is interaction between both factors. The lower level of sodium alginate concentration increased the number of released cells, decreased pH value and increased total lactic acid. During 20 days storage, the amount of  released  cells  and  acidity  of  carrier  increased  than  0  and  10  days.  Interaction  between  both  factors which give the less number of released cells (3,7948 log cfu/ml) and carrier’s character changes  (pH = 6,4767  and  total  lactic  acid=  0,0741  %)  is  combination  of  2%  sodium  alginate  concentration  in  0  days storage .
Keywords : immobilized, alginate, isomalt

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh konsentrasi natrium alginat (Na-alginat) sebagai penjerat sel Lactobacillus acidophilus FNCC 0051 dan lama penyimpanan pada suhu refrigerator (±5 o C) serta  interaksi  kedua  faktor  tersebut  terhadap  jumlah  sel  yang  terlepas  dan  karakter  carrier  yang digunakan (susu UHT). Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) desain  faktorial  yang  terdiri  dari  dua  faktor  yaitu  konsentrasi  Na-alginat  (1%,  1,5%,  2%)  dan  lama penyimpanan (hari ke-0, 10, 20). Pengulangan yang dilakukan sebanyak 3(tiga) kali. Parameter yang diuji yaitu  jumlah  sel  yang  terlepas  (ALT),  pH  dan  total  asam  laktat  carrier  (susu  UHT).  Data  yang  diperoleh dianalisa secara statistik dengan uji ANOVA (Analysis of Varians) pada α = 5% dan dilanjutkan dengan uji Beda Jarak Nyata Duncan (Duncan’s Multiple Range Test) untuk menentukan taraf perlakuan mana yang memberikan  beda  nyata.  Konsentrasi  Na-alginat  dan  lama  penyimpanan  masing-masing  memberikan pengaruh  nyata  serta  terdapat  pengaruh  interaksi  antara  kedua  faktor  perlakuan  terhadap  jumlah  sel yang  terlepas  dan  karakter  carrier  (pH  dan  total  asam  susu  UHT).  Sampai  pada  konsentrasi  Na-alginat 2%,  semakin  rendah  konsentrasi  Na-alginat  yang  digunakan  maka  semakin  besar  jumlah  sel  yang terlepas,  nilai  pH  menurun  dan  total  asam  meningkat.  Selama  20  hari  penyimpanan,  jumlah  sel  yang
terlepas  dan  keasaman  carrier  meningkat  dibandingkan  hari  ke-0  dan  10.  Interaksi  antara  kedua  faktor yang  memberikan  nilai  terkecil  terhadap  jumlah  sel  yang  terlepas  (3,7948  log  cfu/ml)  dan  perubahan terhadap  karakter  carrier  (nilai  pH  =  6,4767  dan  total  asam  =  0,0741  %)  adalah  kombinasi  antara penggunaan 2% konsentrasi Na-alginat selama penyimpanan pada hari ke-0.
Kata kunci : imobil, alginat, isomalt

## PENDAHULUAN
Sinbiotik  merupakan  gabungan  dari prebiotik dan probiotik yang masing-masing komponennya dapat memberikan keuntungan  bagi  kesehatan  manusia  jika dikonsumsi  (Crittenden,  1999).  Produk sinbiotik  biasanya  adalah  produk  berbasis susu  ( fermented  dan  non-fermented  food ). Probiotik  dapat  memberikan  manfaat  bagi tubuh ketika dibawa masuk ke dalam tubuh dan  mampu  bertahan  melewati  saluran pencernaan  dan  berkolonisasi.  Tujuan tersebut  dicapai  apabila  jumlah  probiotik dalam  produk  minimal  106-107  cfu/ml produk  (ISAPP,  2005).  Teknik  imobilisasi diterapkan  pada  produk carrier sinbiotik untuk  melindungi  probiotik  dari  lingkungan yang  tidak  menguntungkan  dengan  cara menjerat sel dalam suatu matriks hidrokoloid.  Bahan  yang  biasa  digunakan sebagai  penjerat  sel  adalah  natrium  alginat (Na-alginat).
Kombinasi alginat dengan karbohidrat dapat meningkatkan
kemampuan
perlindungan  terhadap  sel-sel  bakteri  yang dijerat  dan  memberikan  kemampuan  difusi mikronutrien dan metabolit ke dalam dan ke luar beads (matriks  penjerat),  sehingga menghasilkan beads yang mengandung sel- sel  bakteri  yang  aktif  bermetabolisme (Jankowski et  al .,  1997).  Karbohidrat  ini dapat juga berperan sebagai agen prebiotik, salah  satunya  adalah  golongan  polyol  yaitu isomalt (Livesey, 2003). Penggunaan prebiotik dalam penelitian ini adalah isomalt 3%  karena  menurut  Harti,  dkk.,  (2012), bahwa pertumbuhan Lactobacillus acidophilus menggunakan prebiotik
Chitosan-oligosakarida (COS) dengan kisaran  1%,  2%  dan  3%  paling  tinggi pertumbuhannya  adalah  pada  konsentrasi COS  3%.  Menurut  Dewi  (2005),  jumlah  sel
yang  terlepas  dari  dalam beads semakin besar  selama  penyimpanan.  Penggunaan konsentrasi  Na-alginat  yang  berbeda  akan berpengaruh terhadap kekuatan perlindungan  matriks  dalam  menahan  sel keluar  dari beads serta  berpengaruh terhadap  karakter  dari  produk carrier sinbiotik  selama  penyimpanan.  Menurut Chandramouli et  al .  (2004),  penggunaan konsentrasi  larutan  alginat  lebih  dari  2% tidak  memungkinkan  untuk  menghasilkan beads yang  homogen  karena  peningkatan viskositas larutan dan penurunan difusivitas massa.  Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini digunakan konsentrasi Na-alginat 1%, 1,5% dan  2%  dengan  penambahan  prebiotik isomalt  sebesar  3%  pada  susu  UHT sebagai  produk carrier sinbiotik  selama  0, 10  dan  20  hari  penyimpanan.  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui pengaruh  konsentrasi  Na-alginat  sebagai penjerat sel Lactobacillus acidophilus FNCC 0051 dan lama penyimpanan serta interaksi antara  kedua  faktor  terhadap  jumlah  sel yang terlepas dan karakter carrier .

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Susu  UHT Full  Cream “Ultra  Milk” Ultra  Jaya,  kultur  bakteri Lactobacillus acidophillus FNCC  0051,  akuades,  larutan NaCl 0,85% (Riedelde Haën 31434), larutan Na-sitrat  0,1  M  teknis,  Na-Alginat  murni (Zigma  A2033-100G),  larutan  CaCl 2 1% teknis, air pepton 0,1% (Peptone from meat merk “MERCK 1.07224.1000”), NaOH 0,1 N (p.a.),  asam  oksalat  0,1  N,  indikator phenolphthalein 1%,  alkohol  96%,  larutan Crystal  Violet modifikasi  Hucker,  larutan iodin,  larutan  alkohol  aseton,  larutan Safranin  Gram  Stain ,  minyak immerse , kertas  lensa,  sumbat kapas, aluminium  foil ,
Jurnal Teknologi Pangan dan Gizi Journal of Food Technology and Nutrition Vol 13 (2): 81-86, 2014.
kertas  coklat  dan  korek  api, deMan, Rogosa,  Sharpe  bouillon (yang  selanjutnya disebut  MRS) Broth (Pronadisa  Cat. 1215.00), Bacto  Agar (MERCK  214010), dan MRS Agar (Pronadisa Cat. 1043.00).

## Pembuatan Sel Imobil
5  ml  kultur L.acidophilus FNCC  0051 dalam  resuspensi  MRSB  diambil  dan dimasukkan ke dalam masing-masing larutan Na-alginat steril dengan konsentrasi 1%  (b/v),  1,5%  (b/v)  dan  2%  (b/v)  yang sudah ditambahkan prebiotik isomalt sebanyak  3%  (b/v).  Larutan  kemudian dihomogenkan  dan  setelah  itu  diambil menggunakan  syrink  dengan  diameter jarum  sebesar  1,2  mm  untuk  diteteskan dalam 300 ml larutan CaCl 2 1% suhu 4-7 o C. Setelah  semua  larutan  selesai  diteteskan, maka disimpan pada suhu ± 5 o C selama 15 menit. Setelah 15 menit, beads yang sudak terbentuk  dicuci  dengan  100  larutan  garam NaCl 0,85% sebanyak tiga kali pencucian.

## Pembuatan Susu Probiotik
Sel  imobil  yang  sudah  terbentuk ditimbang  sebanyak  ±30  gram.  Setelah  itu sel  imobil  tersebut  dimasukkan  ke  dalam 100 ml susu UHT full cream secara aseptis. Setelah itu dimasukkan ke dalam refrigerator
(4-7 o C) dan dilakukan penyimpanan 0, 10 dan 20 hari.
Pemisahan  Sel  yang  Terlepas  (Sel Bebas) dengan Sel yang Terimobil
Susu yang telah dilakukan penyimpanan  disaring  secara  aseptis  untuk memisahkan  susu  dan beads .  Susu  yang telah  terpisah mengandung  sel  bebas  yang merupakan  sel  yang  terlepas  dari  dalam beads dan siap dilakukan pengujian. Beads yang  terpisah  kemudian  dicuci  dengan  100 ml  larutan  NaCl  0,85%  sebanyak  tiga  kali, setelah itu beads siap dilakukan pengujian.
Pengujian  Angka  Lempeng  Total  (ALT) Sel Bebas pada Susu UHT
Media MRS Agar (agar 1,2%) dicairkan  dengan  memanaskan  dalam
penangas  air.  Setelah  media  mencair, media  didinginkan  sampai  mencapai  suhu 50ºC.  Setelah  itu,  dilakukan  pembuatan pepton from meat 0,1% dan dipipet masing- masing  4,5  mL  ke  dalam  satu  seri  tabung reaksi  dari  pengenceran  10 -1 sampai  10 -5 (untuk pengenceran 10 -1 dipipet sebanyak 9 ml). Sampel susu yang telah dipisahkan dari beads dipipet sebanyak 1 ml dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi pengenceran  10 -1 ,  kemudian  dilanjutkan dengan  pemipetan  sebanyak  0,5  ml  dari pengenceran 10 -1 ke pengenceran berikutnya  sampai  10 -5 dan  dihomogenkan. Pada pengenceran 10 -2 sampai dengan 10- 5, dilakukan pemipetan 1 mL pada masing- masing pengenceran kemudian dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  steril.  Media  MRS Agar  yang  telah  bersuhu  50ºC  dituang  ke dalam  masing-masing  cawan  petri,  lalu dihomogenkan dengan rotasi angka delapan.  Setelah  media  dalam  cawan  petri memadat,  maka  dilakukan  inkubasi  selama 48 jam dengan suhu 37 o C. Setelah 48 jam, dilakukan penghitungan jumlah ALT.

## Pengukuran pH
Pertama-tama, dilakukan kalibrasi alat pH-meter dengan cara mencelupkan elektroda  pH-meter  ke  dalam  larutan buffer pH  4,0  atau buffer pH  7,0.  Setelah dicelupkan ke dalam larutan buffer,
elektroda
dicuci dengan akuades
menggunakan  botol  semprot.  Sisa  akuades yang  masih  menempel  pada  elektroda dikeringkan  dengan  menggunakan tissue . Elektroda yang sudah dikeringkan, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  sampel susu  dan  dibiarkan  beberapa  saat  untuk memperoleh hasil pembacaan nilai pH yang stabil.

## Pengukuran Total Asam
Pengukuran total asam yang dilakukan  adalah  dengan  metode  titrasi. Sampel  susu  sebanyak  10  ml  dipipet dengan  pipet  volume  dan  dimasukkan  ke dalam  labu  takar  100  ml.  Kemudian ditambahkan  akuades  sampai  tanda  batas
di  labu  takar.  Susu  diambil  10  ml  dari  labu takar  dan  dipipet  dengan  pipet  volume  ke erlenmeyer  250  mL,  serta  ditambahkan  2 sampai 3 tetes indikator PP 1%. Setelah itu, larutan dititrasi dengan menggunakan NaOH  0,1  N  yang  sudah  distandarisasi dengan  larutan  H 2 C 2 O 4 0,1  N.  Titrasi sampel  dengan  NaOH  0,1  N  dilakukan sampai  tepat  timbul  warna  merah  muda. Total  asam  dinyatakan  sebagai  %  asam dominan dan pada penelitian ini dinyatakan dengan  total  asam  laktat  (BM=90).  Rumus perhitungan total asam (5) adalah:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Angka Lempeng Total (ALT) merupakan salah satu
metode penghitungan  jumlah  mikroorganisme  yang hidup  dengan  cara menghitung koloni  yang ditumbuhkan  pada  media  agar.  Pada penelitian  ini,  dilakukan  pengujian  ALT terhadap sel bebas karena selama penyimpanan carrier ada  sel  dalam beads yang  terlepas  keluar  dan  dihitung  sebagai sel  bebas.  Rerata  nilai  ALT  sel  bebas  dan pengaruh  interaksi  perbedaan  konsentrasi Na-alginat  dengan  lama  penyimpanan terhadap jumlah ALT sel bebas (log cfu/ml) dalam  susu  UHT  selama  penyimpanan dapat
dilihat
pada Gambar 1. Gambar 1. Pengaruh Interaksi Perbedaan
Konsentrasi Na-alginat dengan Lama Penyimpanan terhadap jumlah ALT sel bebas (log cfu/ mL) Selama  masa  penyimpanan,  terjadi peningkatan  jumlah  sel  bebas  yang  tidak sama  pada beads dengan  konsentrasi  Na- alginat yang berbeda. Hal ini terlihat selama
20  hari  penyimpanan  pada beads dengan konsentrasi Naalginat 1% mengalami peningkatan  jumlah  sel  bebas  sebanyak 1,0552 log cycle, Na-alginat 1,5% sebanyak 0,4928  log  cycle  dan  Na-alginat  2% sebanyak  0,1859  log  cycle.  Peningkatan jumlah  sel  bebas  selama  penyimpanan disebabkan  karena  adanya  perubahan kekuatan  dan  kekokohan  matriks beads selama penyimpanan.
Selama penyimpanan, terjadi
akumulasi  metabolit  dari  hasil  metabolisme sel  yang  terimobil  maupun  sel  bebas menghasilkan  asam  dan  menyebabkan penurunan  pH.  Adanya  H + dari  asam  akan mensubstitusi  Ca 2+ sehingga  matriks  gel Ca-alginat  terdegradasi  dan  menjadi  lebih longgar  menyebabkan  jumlah  sel  bebas meningkat  (Krasaekoopt et  al. ,  2003). Selain  itu,  terjadi  kenaikan  diameter beads selama  penyimpanan  karena  adanya  difusi nutrien ke dalam beads. Kenaikan diameter beads menyebabkan  penurunan  kerapatan dan  kekokohan  matriks gel.  Semakin  besar konsentrasi bahan pembuat matriks penjerat maka karakteristik fisik beads yang dihasilkan  juga  semakin  kuat  dan  lebih dapat  bertahan  dari  perubahan-perubahan yang terjadi selama penyimpanan sehingga dapat mengurangi jumlah sel bebas Chandramouli et al . (2004).
Keasaman susu sebagai carrier produk dinyatakan berdasarkan nilai pH dan total asam. pH merupakan derajat keasaman  atau  alkalinitas  suatu  bahan, yang  dinyatakan  sebagai  konsentrasi  H + dan  memiliki  kisaran  nilai  antara  1  sampai dengan  14  (Considine  dan  Considine, 1982).Total asam susu diuji dengan metode titrasi  total  asam  laktat  dan  dinyatakan sebagai  %  asam  laktat  karena  asam  yang dihasilkan oleh sel bakteri sebagai metabolit selama  penyimpanan  adalah  asam  laktat. Hubungan  antara  pH  dan  total  asam  (%) adalah  semakin  rendah  pH  maka  semakin tinggi  total  asam  karena  semakin  banyak asam laktat yang dihasilkan untuk menurunkan pH.
Rerata nilai pH dan pengaruh interaksi  perbedaan  konsentrasi  Na-alginat dengan  lama  penyimpanan  terhadap  pH
Jurnal Teknologi Pangan dan Gizi Journal of Food Technology and Nutrition Vol 13 (2): 81-86, 2014.
susu  selama  penyimpanan  dapat  dilihat pada  Gambar  2.  Sedangkan  rerata  nilai total  asam  (%)  dan  pengaruh  interaksi perbedaan  konsentrasi  Na-alginat  dengan lama  penyimpanan  terhadap  total  asam susu  selama  penyimpanan  dapat  dilihat pada Gambar 3.
Selama penyimpanan, terjadi penurunan  pH  dan  kenaikan  total  asam yang  tidak  sama  pada beads dengan konsentrasi  Na-alginat  yang  berbeda.  Hal ini  terlihat  selama  20  hari  penyimpanan pada beads dengan  konsentrasi  Na-alginat 1%  mengalami  penurunan  pH  sebesar 0,3127,  Na-alginat  1,5%  sebesar  0,1913 dan  Na-alginat  2%  sebesar  0,1544.  Pada penelitian  ini,  penurunan  pH  diikuti  juga dengan  kenaikan  total  asam  susu  selama penyimpanan.  Tetapi,  penurunan  pH  tidak selalu  sebanding  dengan  kenaikan  total asam (%), karena nilai pH tergantung pada derajat  ionisasi  asam  yang  terdapat  dalam produk  sedangkan  total  asam  tergantung dari  banyaknya  konsentrasi  asam  yang paling dominan dalam suatu produk.
Gambar 2. Pengaruh Interaksi Perbedaan Konsentrasi Na-alginat dengan Lama Penyimpanan terhadap pH Susu selama Penyimpanan Kenaikan  total  asam  (%)  selama
penyimpanan  juga  tidak  sama  pada beads dengan konsentrasi Na-alginat yang berbeda (Gambar 3). Hal ini terlihat selama 20  hari  penyimpanan,  pada beads dengan konsentrasi Na-alginat 1% mengalami peningkatan  total  asam  laktat  sebesar 0,0797%, Na-alginat 1,5% sebesar 0,0598%  dan  Na-alginat  2%  sebesar 0,0448%.
Gambar 3. Pengaruh Interaksi Perbedaan Konsentrasi Na-alginat dengan Lama Penyimpanan terhadap Total Asam (%) selama Penyimpanan Penurunan  pH  dan  peningkatan  total asam  selama  penyimpanan  pada  semua konsentrasi Na-alginat yang berbeda disebabkan  karena  selama  penyimpanan sel yang terimobil maupun sel bebas masih melakukan  metabolisme  meskipun  sangat lambat (suhu refrigerator ±5 o C) dan menghasilkan metabolit yang akan terakumulasi sehingga menyebabkan penurunan  pH  dan  peningkatan  total  asam (%). Pada kombinasi perlakuan konsentrasi Na-alginat  paling  besar  yaitu  2%  dan  lama penyimpanan  20  hari,  penurunan  pH  dan kenaikan total asam (%) paling kecil karena kekuatan  dan  kerapatan beads tinggi (kokoh)  sehingga  dapat mengurangi jumlah sel  yang  terlepas  dan  laju  difusi  nutrien serta akumulasi metabolit (asam laktat) oleh sel  (terimobil  dan  bebas)  (Lee  and  Heo, 2000; Chandramouli et al , 2004;. Sheu and Marshall,  1993).  Hal  ini  sesuai  dengan penyataan  Chandramouli et  al .  (2004), bahwa  semakin  besar  konsentrasi  bahan pembuat  matriks  penjerat  yang  digunakan maka karakteristik fisik beads juga semakin kuat.

## KESIMPULAN
Interaksi antara konsentrasi Na- alginat  sebagai  penjerat  sel Lactobacillus acidophilus FNCC 0051 dan lama penyimpanan  berpengaruh  nyata  terhadap jumlah  sel  yang  terlepas  dan  karakter carrier (pH dan total asam susu UHT). Perlu dilakukan  uji  kesukaan  terhadap  susu  UHT
sebagai carrier sinbiotik  untuk  mengetahui penerimaan konsumen.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi  Program  Penelitian  Desentralisasi 2014  yang  telah  membiayai  penelitian  ini sebagai  bagian  dari  Hibah  Bersaing  yang berjudul  “Penggunaan  Tepung  Pepaya  an akteri Probiotik Terimobilisasi dalam Pembuatan  Produk  Sinbiotik  :  Optimasi Formulasi,  Stabilitas  dalam  Sistem  Pangan dan Manfaatnya terhadap Kesehatan Usus”.

## DAFTAR PUSTAKA
Chandramouli, V., K. Kailasapathy, P. Peiris dan  M.Jones.  2004.  An  Improved Method  of  Microencapsulation  and  Its Evaluation  to  Protect Lactobacillus spp . In Simulated Gastric Condition, J of Microbiol Methods 56:27 –35.
Considine, D.M. dan G. D. Considine. 1982.
Food and Food Production Encyclopedia. New York: Van Nontrand Reinhold Co., Inc.
Crittenden,  R.G.  1999.  Prebiotics  In:
Probiotics:  A  Critical  Review.  Horizon Scientific Press, Wymondham pp. 141 – 156.
Harti, A.S, R.A. Samsumaharto dan Hosea. 2012. Efek Penambahan
ChitoOligosakarida  Sebagai  Prebiotik Terhadap  Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus FNCC  0051  Secara  In
Vitro.  Surakarta,  Jurnal  Biomedika Vol. 5(1): 2302-1306. ISAPP.  2005.  Establishing  Standards  for Probiotic Products. Retrieved Available at :www.isapp.net. [6 November 2013]. Jankowski, T., M.
Zielinska dan
Wysakowska.  1997.  Encapsulation  of Lactic  and  Bacteria  with  Alginate  or Starch  Capsules.  Biotechnol  Technol. 11:31-34.
Krasaekoopt  W.,  B.  Bhandari,  H.  Deeth. 2003.  Evaluation  of  Encapsulation Techniques  of  Probiotics  for  Yoghurt.
Int. Dairy J. 13: 3-13. Lee,  K.I.  dan  T.R.  Heo  T.R.  2000.  Survival of Bifudobacterium Longum Immobilized in Calcium Alginate Beads in Simulated Gastric Juicesand Bile  Salt  Solution.  Appl.  Environ. Microbiol. 66: 869-973.
Livesey,  G.,  2003.  Health  Potential  of Polyols  as  Sugar  Replacers,  with Emphasis on Low Glycaemic Properties. Nutrition Research Reviews 16:163-191. Sheu, T. Y., R.T. Marshall. 1993. Microentrapment  of Lactobacilli In Calcium  Alginate  Gel,  J.  Food  Sci. 54(3): 557-561.