## Penentuan Aktivitas Antikanker Fraksi Etil Asetat Daun Bandotan (ageratum conyzoides linn.) Terhadap Cell Line Kanker Kolon WiDr
Linda Ayu Lusiantika 1* , Esti Wahyu Widowati 2 , Miranda Adihimawati 3
1,2,3 Linda Ayu Lusiantika, Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga, Jl. Marsda Adisucipto, Yogyakarta 55281 *ayu.lusiantika@gmail.com

## ABSTRAK
Telah dilakukan isolasi, dan uji antikanker secara in vitro terhadap cell line kanker kolon WiDr pada  daun Ageratum  conyzoides Linn.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  aktivitas antikanker  dengan  metode  microtetrazolium  (MTT assay ).  Metode  yang  digunakan  yaitu ekstraksi metabolit sekunder menggunakan maserasi dengan pelarut n -heksana, etil asetat dan etanol,  dilanjutkan  dengan  KLT. Crude  extract hasil  maserasi  yang  memiliki  rendemen tertinggi    dipilih  dan  dipisahkan  dengan  fraksi-fraksinya  menggunakan  KKV.  Fraksi-fraksi dengan  berat  terbesar  dipilih  untuk  diuji  aktivitas  antikanker  terhadap cell  line WiDr  dengan MTT assay.  Skrining fitokimia dan identifikasi senyawa dengan GC-MS dilakukan pada fraksi yang memiliki nilai IC 50 terendah. Hasil maserasi menunjukkan bahwa crude extract etil asetat memiliki jumlah rendemen tertinggi sebesar 7,31 % dan memiliki pemisahan terbaik hasil KLT ditandai  dengan  jumlah  noda  terbanyak.  Pemisahan  dengan  KKV  menghasilkan  21  fraksi,  4 fraksi  yang  dipilih  berdasarkan  berat  terbesar  yaitu  fraksi  6,  13,  14  dan  15.  Uji  aktivitas antikanker  dengan  konsentrasi  62,5;  125;  250;  500  dan  1000  µg  mL -1 menunjukkan  fraksi  6 memiliki nilai IC 50 terendah yaitu 251,48 µg mL -1. Berdasarkan hal tersebut, fraksi 6 memiliki aktivitas yang rendah sebagai senyawa antikanker. Meskipun, skrining fitokimia menunjukkan golongan  alkaloid  dan  terpenoid  serta  hasil  identifikasi  dengan  GC-MS  mengindikasikan adanya senyawa 2H-benzopyran dan neophytadiene
Kata  Kunci:  Ageratum conyzoides Linn; Kromatografi Kolom Vakum; Antikanker; Skrining Fitokimia, GC-MS.

## ABSTRACT
A research to test the anticancer activity of in vitro anticancer activity against colon cancer cell line WiDr Ageratum conyzoides Linn.leafs. The aims of this study are to determine anticancer activity using MTT method. The method used is the extraction of secondary metabolites using maceration  with  n-hexane,  ethyl  acetate  and  ethanol,  followed  by  TLC.  Crude  extract maceration results that have the highest yield selected and separated by fractions using KKV. Fractions with the greatest weight was chosen to be tested anticancer activity against WiDr cell line  by  MTT  assay.  Phytochemical  screening  and  identification  of  compounds  by  GC-MS carried  out  on  the  fraction  which  has  the  lowest  IC50  value.  Maceration  results  showed  that crude ethyl acetate extract had the highest amount of yield at 7.31% and has the best separation
results of TLC is characterized by the highest number of stains. Separation by KKV produce 21 fractions, 4 fractions were selected based on the weight of the total of the fraction 6, 13, 14 and 15. Test anticancer activity with a concentration of 62.5; 125; 250; 500 and 1000 mg mL-1 shows the fraction 6 has the lowest IC50 value is 251.48 mg mL-1. Based on this, the fraction 6  has  low  anticancer  activity.  Although,  the  phytochemical  screening  showed  alkaloids  and terpenoids  as  well  as  the  result  of  identification  with  GC-MS  indicated  the  presence  of compounds 2Hbenzopyran and neophytadiene.
Keywords : Ageratum  conyzoides Linn.  Leaves;  Column  Cromatography  Vacuum;  anticancer; phytochemical, GC-MS.

## PENDAHULUAN
Kanker  adalah  penyakit    yang disebabkan  oleh  perubahan  sifat  dari    sel normal yang pembelahannya tidak terkendali.  beberapa  jenis  kanker  yang  ada di  Indonesia,  kanker  kolon  masuk  pada urutan  ke-10  (2,75%)  setelah  kanker  rahim, payudara,  kelenjar  getah  bening,  kulit, nasofaring, ovarium , rectum , jaringan lunak, dan  tiroid  (Haryanto,  2009).  Kanker  kolon disebut  juga  kanker  kolorektal  yang merupakan  salah  satu  jenis  kanker  ganas yang  tumbuh  pada  permukaan  usus  besar (kolon)  atau  anus  ( rectum )  (Cassidy,  dkk., 2006).
Beberapa metode pengobatan kanker yang    banyak    digunakan    saat    ini    adalah metode  operasi,  radiasi,  kemoterapi,  dan metode  imunoterapi  (Foye,  1996).  Pada dasarnya metode-metode tersebut  bertujuan untuk  mengangkat  jaringan  kanker  atau mematikan sel kanker dan memberikan efek samping. Berdasarkan hal tersebut, pengembangan metode pengobatan antikanker dengan efek samping yang relatif lebih kecil perlu dilakukan.
Agen  antikanker  dari  bahan  alam mampu  mengobati  pada  sumber  penyakit dengan  memperbaiki  sel-sel,  jaringan,  dan organ tubuh yang rusak dengan meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh. Berbagai  metode  pengobatan  kanker  terus dikembangkan  saat  ini,  salah  satunya
dengan  mengeksplorasi  bahan  alam  sebagai agen antikanker. Bahkan apabila
penggunaannya  tepat,  agen  antikanker  dari bahan alam kemungkinan tidak memberikan  efek  samping  sehingga  dapat dicerna  oleh  tubuh  (Harvey,  2008).  Agen antikanker  memiliki  toksisitas  selektif  yaitu mampu  menghambat  sel  kanker  tanpa merusak  sel  normal  Rahmawati,  dkk., 2008).
Melihat  potensi  keragaman  bahan alam  di  Indonesia,  salah  satu  bahan  alam yang  diperkirakan  mempunyai  aktivitas sebagai  agen  antikanker  adalah  Bandotan ( Ageratum  conyzoides Linn.).  Bandotan merupakan  tanaman  Indonesia  yang  dapat tumbuh  di  daerah  yang  beriklim  tropis  dan subtropis.    Bandotan  dapat  berkhasiat sebagai  obat  malaria,  rematik,  kejang,  luka bakar,  radang,  pendarahan  rahim,  diare, tumor,  kanker  dan  sebagainya  (Pamilih, 2009).
Berbagai  penelitian  tentang  herba Bandotan  sebelumnya telah  dilakukan  salah satunya  menggunkan  ekstrak  etanol  namun tidak  memiliki  efek  sitotoksik  terhadap  sel HeLa,  dibuktikan  dengan  nilai    IC 50 yang dihasilkan  yaitu  sebesar  855  µg  mL -1 Rahmawati,  dkk.,  2008).  Uji  sitotoksisitas menngunakan  ekstrak  etil  asetat  herba Bandotan  telah  dilakukan  terhadap  sel kanker  payudara  T47D  dan  hasilnya menunjukkan  bahwa  herba  Bandotan  tidak memiliki  efek  sitotoksisitas.  Hal  ini, dibuktikan dengan jumlah sel hidup > 50 %
yaitu  sebesar  86,50  %  sehingga  nilai  IC 50 tidak dapat dihitung Delimartha, 2000.
Berdasarkan  hal  tersebut,  sangat menarik apabila pemanfaatan daun
Bandotan sebagai agen antikanker dikembangkan lebih lanjut dengan menggunakan  sel  kanker  lainnya,  bagian simplisia  dan  penyari  metabolit  sekunder yang  berbeda  untuk  mengetahui  efek antikanker.  Oleh  karena  itu,  dilakukan penelitian  terhadap  sel  kanker  kolon  WiDr dengan penyari etil asetat untuk mengetahui apakah fraksi hasil pemisahan daun Bandotan    memiliki  aktivitas  antikanker terhadap cell  line kanker  kolon  WiDr dengan  menggunakan  metode  MTT assay serta  diketahui  profil  metabolit  sekunder yang dihasilkannya.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian bahan teknis yaitu n -heksana, etil asetat  dan  etanol, n -heksana  (C 6 H 14 )  ( p.a ) Merck,  etanol  96%  (C 2 H 6 O)  Merck,  etil asetat  (C 4 H 8 O 2 )  ( p.a )  Merck,  silica  gel  60 GF 254, silika gel 60 F 254 Merck, cell line WiDr  koleksi  laboratorium  Parasitologi UGM,  media Roswell  Park  Memorial Institute (RPMI  1640), fetal  bovine  serum (FBS)  10%  (v/v),  akuades, dimethyl sulfoxide (DMSO)  Merck, reagen  stopper (natrium  dodesil  sulfat  10%  dalam  HCl), MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5 diphenyltetrazolium  bromide) 5  mg  mL -1 dalam FBS dan tripsin.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas, oven listrik, blender, maserator, neraca analitik (Sartorius
BP  160  P),  seperangkat  alat  gelas,  Kolom Vakum  (IWAKI),  mikropipet  (Gibson),
tabung conical  steril , microplate 96 -well (IWAKI),  ELISA reader ( Benchmark ), vacuum rotary evaporator (Heidolph- Labora  4000  efficient),  falcon  flask ,  vortex (Tropmed),  inkubator  37°C  5%  CO 2 (Heraeus), lemari es, laminar air flow (LABCONCO Purfer Class II Biosafety Cabinet ), tangki nitrogen cair, tissue culture flask ,  bilik  hitung,  dan  mikroskop inverted (OLYMPUS) , satu set alat GC-MS (Agilent GC 6890N 5975 B MSD).

## Metode Isolasi Metabolit Sekunder
Sebanyak  350  g  sampel  daun Ageratum  conyzoides Linn.  yang  telah dihaluskan, dimaserasi menggunakan pelarut  organik  dengan  tingkat  kepolaran berbeda,  yaitu n -heksana,  etil  asetat  dan etanol.  Hasil  maserasi  dipekatkan  dengan vacuum rotary evaporator sehingga dihasilkan  ekstrak n heksana,  etil  asetat  dan etanol  kemudian  dilihat  pemisahan  terbaik dengan KLT. .Ekstrak yang akan diteruskan selanjutnya adalah ekstrak etil asetat.
Pemisahan ekstrak etil asetat  dilanjutkan  dengan  Kromatografi Kolom Vakum (KKV) menggunakan variasi eluen n heksana:etil asetat (3:1), n - heksana:etil  asetat    (1:3), n -heksana:etil asetat  (3:2), n -heksana:etil  asetat  (2;3),  etil asetat:etanol  (1:3),  etil  asetat:etanol  (3:1), etil  asetat:etanol  (2:3),  etil  asetat:etanol (3:2), etil asetat 100 %, etil asetat 100 % dan etanol  100  %.  Fraksi  hasil  pemisahan ditampung setiap 50 mL, sehingga diperoleh 21 fraksi. Fraksi - fraksi tersebut dilanjutkan ke  tahap  profiling  KLT.  Hasil  profiling dipilih  empat  fraksi  yaitu  F6,  F13,  F14  dan F15 dilanjutkan untuk uji antikanker dengan metode MTT.
Uji Antikanker dengan MTT
Sel didistribusikan ke dalam sumuran  dan  diinkubasi  selama  24  jam  di dalam  inkubator  CO 2 agar  sel  beradaptasi
dan menempel di sumuran. Selanjutnya pada tiap  sumuran  ditambahkan  100  µL  media RPMI  1640  yang  mengandung  sampel dengan  variasi  konsentrasi  62,5;  125;  250; 500  dan  1000  µL  mL -1 ,  diinkubasi  kembali selama 48 jam.
Pada  akhir  inkubasi,  media  kultur yang  mengandung  sampel  dibuang  dan dicuci  dengan  100  µL  FBS.  Kemudian ditambahkan  100  µL  media  kultur  yang mengandung  MTT  dan  diinkubasi  kembali selama  4  jam  pada  suhu  37  °C  ke  dalam masing-masing  sumuran.  Sel  yang  hidup akan  bereaksi  dengan  MTT  membentuk formazan  yang  berwarna  ungu.  Setelah  4 jam, pada tiap sumuran ditambahkan reagen stopper untuk membunuh sel dan melarutkan  kristal  formazan,  kemudian diinkubasi  pada  suhu  kamar  dalam  ruang gelap selama semalam. Selanjutnya, absorbansi  tiap  sumuran  dibaca  dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm (Peng dan Zhao, 2009).
Data   yang   diperoleh berupa absorbansi dari masing-masing sumuran dikonversi ke dalam % sel hidup dan dianalisis menggunakan rumus:
𝐴𝑏𝑠 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛 − 𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎 𝐴𝑏𝑠 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎 × 100%
Nilai  IC 50 ditentukan  dengan  perhitungan menggunakan  persamaan  garis  hubungan log  konsentrasi  terhadap  prosentase  sel hidup (Mursyidi, 1985). Skrining

## Fitokimia
Fraksi   potensial diidentifikasi golongan senyawanya menggunakan uji fitokimia. Uji fitokimia dapat dilakukan dengan menggunakan pereaksi pendeteksi golongan senyawa (Cannell, 1998).

## Identifikasi dengan GC-MS
Fraksi  potensial  yang  sudah  diuji antikanker  dan  uji  fitokimia  diidentifikasi senyawanya  menggunakan  kromatografi gas-spektrometri massa agilent GC 6890N 5975B  MSD.  Eluen  berupa  gas  helium (He) dengan tekanan 8,67 psi -1 , aliran total 13,7  mL  menit -1 .  Rentang  suhu  pada  oven yaitu  70°-325°C  dengan  mode splitless . Kolom  yang  digunakan  yaitu  kolom kapiler  (Agilent  19091S-433)  berisi  fase diam  berupa  HP-5MS  5  %  fenil  metil siloksan  dengan  suhu  maksimal  kolom 325°C  panjang  30  m,  diameter  250  µm. Mode  aliran  gas  pembawa  dan  komponen yang  dipisahkan  1  mL  menit -1 ,  tekanan 8,68  psi  dan  kecepatan  rata-rata  37  cm detik -1 .  Senyawa  yang  terpisahkan  dalam kolom  kemudian  masuk  ke  detektor  yang MS.  Senyawa  dianalisis  menggunkan electron  impact (EI)  pada  rentang    massa antara 30 hingga 600 mz -1 dan  dihasilkan fragmen  massa  spektra  yang    kemudian dibandingkan  dengan  spektra    massa standar library (Wiley7Nist05.L .)
berdasarkan similary  index (SI)  (Pavia, dkk., 2009).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  metabolit  sekunder  yang terkandung dalam daun Bandotan ( Ageratum  conyzoides Linn.)  dilakukan menggunakan metode ekstraksi, yaitu melalui proses maserasi. Maserasi ini dipilih karena memiliki keuntungan yaitu menggunakan  peralatan  sederhana,  lebih mudah  jika  dibandingkan  dengan  metode lain dan untuk mencegah terjadinya kerusakan  pada  senyawa  yang  tidak  tahan panas,  sehingga  senyawa-senyawa  yang terkandung  dalam  suatu  ekstrak  biasanya cenderung  tidak  stabil  pada  suhu  tinggi sehingga  pemanasan  dalam  suhu  tinggi
dihindari  untuk  mencegah  dekomposisi senyawa tersebut.
Hasil  isolasi  metabolit  sekunder didapatkan rendemen crude   extract
Ageratum
conyzoides Linn.  terbesar diperoleh  yaitu  pelarut  etil  asetat  sebesar 7,31  %    diikuti  oleh  etanol  (7,20  %)  dan n - heksana  (6,32  %,)  yang  selanjutnya  di  KLT untuk  diketahui  pemisahan  serta  banyaknya spot yang dihasilkan.
Gambar  1.  KLT  hasil  pemisahan crude  extracy n-heksana  (1),  etil  asetat  (2), dan etanol (3) daun Bandotan
Berdasarkan Gambar  1 ,  dapat dilihat  bahwa  pemisahan  terbaik  dapat diamati crude  extract etil  asetat.  Hal  ini ditunjukkan  dengan  jumlah  noda  yang banyak  serta  jarak  noda  yang  tidak berdekatan satu sama lain. Sehingga  ekstrak etil  asetat  dipilih  untuk  fraksinasi  lebih lanjut  dengan  KKV.  Pada  penelitian  ini, tidak semua fraksi etil asetat dapat diujikan, karena untuk analisis sampel perlu mempertimbangkan  faktor  kuantitas  fraksi yang  dihasilkan  dan  jumlah  spot  hasil profiling dengan  KLT.  Fraksi-fraksi  dengan jumlah  yang  relatif  sedikit  sebaiknya  tidak dilanjutkan  untuk  analisis.  Warna  fraksi yang dihasilkan juga perlu dipertimbangkan, karena warna fraksi dapat menjadi gambaran jenis  metabolit  sekunder  yang  terkandung dalam  fraksi  tersebut.  Fraksi  yang  berwarna
kuning  mengindikasikan  adanya  golongan senyawa flavonoid (Freshney, 2000).
Flavonoid  merupakan  salah  satu golongan  senyawa  metabolit  sekunder  yang telah  diketahui  berguna  dalam  bidang farmakologi  karena  potensi  bioaktivitasnya sebagai antikanker (Sukadana, 2010). Kemampuan  flavonoid  sebagai  antikanker karena adanya gugus hidroksi yang tersubstitusi  pada  flavonoid,  adanya  rantai samping gugus prenil, dan terjadi resonansi. Berdasarkan hal tersebut, dari 21 fraksi hasil KKV maka dipilih empat fraksi yaitu fraksi 6,  13,  14  dan  fraksi  15  yang  selanjutnya digunakan  untuk  uji  aktivitas  antikanker sehingga  dapat  diketahui  fraksi  yang potensial.
Gambar  2 KLT  extract  etil  asetat  setelah dilakukan pemisahan menggunakan kromatografi kolom vakum (KKV)
Hasil  uji  antikanker  dengan  MTT terhadap  empat  fraksi  menunjukkan  bahwa fraksi  6  etil  asetat Ageratum  conyzoides Linn.  Memiliki  nilai  IC 50 terkecil  sebesar 251.48  µg  mL -1 .  Metode  MTT  digunakan untuk  mengetahui  jumlah  sel  hidup    pada sampel.  Reaksi  MTT  dapat  menghasilkan formazan berwarna ungu yang mengindikasikan banyaknya sel yang hidup. Semakin  banyak  kristal  formazan  maka semakin  besar  intensitas  warna  ungu  yang tampak.  Reaksi  dengan  MTT  kemudian dihentikan dengan stopper reagent ( Natrium Dodecyl  Sulphate ).  Intensitas  warna  yang muncul  dideteksi  menggunakan  ELISA
reader λ  595  nm  (Feri,  2003).  Besar kecilnya absorbansi yang teramati memberikan  gambaran  banyak  sedikitnya cell  line WiDr  yang  bertahan  hidup. Semakin  kecil  nilai  absorbansi  maka semakin  berkurang  warna  ungu  yang terbentuk.  Sehingga,  tingkat  ketoksikan sampel  semakin  tinggi  terhadap cell  line kanker kolon WiDr.
Tabel  1. Nilai  IC 50 fraksi  hasil  pemisahan crude extract etil asetat Ageratum conyzoides Linn.  terhadap cell  line kanker kolon WiDr
Fraksi   IC 50 ( µg mL -1 )
6 251,48
13 6068,28
Bandotan.
Skrining  fitokimia  telah  dilakukan menggunakan  pereaksi-peraksi  yang  khas karena  metode  ini  cukup  sederhana  untuk menentukaan  metabolit  sekunder  dalam sampel  dan  hasil  negatif,  ditunjukkan dengan  tidak  adanya  warna  kuning  yaitu ketika pereaksi FeCl 3 dan pereaksi sitroborat diaplikasikan.  Hal  ini  kemungkinan  karena fraksi  etil  asetat  merupakan  jenis  senyawa semi  polar  sehingga  senyawa  yang  tertarik oleh fraksi etil asetat bisa senyawa non polar atau  senyawa  polar.  Namun,  untuk  uji terpenoid fraksi 6 etil asetat didapatkan hasil
positif,  yang  ditandai  dengan  adanya  warna biru  dan  nilai  Rf  sebesar  0,212.  Selain  itu, hasil  positif  mengandung  senyawa  alkaloid dengan  nilai  Rf  sebesar  0,875  dan  adanya warna coklat saat diaplikasikan.
Tabel 4. Hasil skrining terhadap fraksi 6 etil asetat daun Ageratum conyzoides Linn.menggunakan KLT dengan fasa diam Metabolit Sekunder Pereaksi Ket Alkaloid Dragendorf + Terpenoid    Anisaldehid asam sulfat + Flavonoid Sitroborat - Fenolik FeCl 3 -
Berdasarkan  hal  tersebut,  senyawa yang  diduga  terkandung  dan  memiliki aktivitas  antikanker  terhadap cell  line kanker kolon WiDr dalam fraksi 6 etil asetat Ageratum  conyzoides Linn.  yaitu  golongan terpenoid  dan  alkaloid.  Senyawa  terpenoid mempunyai  kemampuan  untuk  memblok siklus  sel  pada  fase  G2/M  dengan  cara menstabilkan  benang-benang  spindel  pada fase  mitosis  sehingga  proses  mitosis  akan terhambat.  Begitupula  dengan  senyawa alkaloid  merupakan  senyawa  yang  berperan penting  dalam  penghambatan  pertumbuhan sel  kanker,  seperti  senyawa  vinkristin    dan vinblastin yang merupakan senyawa golongan  alkaloid  vinka.  Senyawa  tersebut berperan  sebagai antimitotic  agent dengan mengikat  dimer  tubulin  yang  mengganggu munculnya mikrotubul dan dapat menghancurkan  benang  spindel  sehingga pembelahan  sel  dapat  terhenti  pada  saat metafase  Meiyanto,  dkk.,  2008.  Identifikasi senyawa  lebih  lanjut  dilakukan  dengan instrumen GC-MS.
Berdasarkan  analisis  kromatogram GC,  terdapat  2  puncak  dominan  yang muncul dengan waktu retensi yang berbeda-
14 295,70 15 314,28 Gambar 3 2 . H ubungan log konsentrasi dengan daun prosentase sel hidup fraksi 6 etil asetat
beda  bergantung  waktu  yang  dibutuhkan oleh  suatu  senyawa  untuk  berubah  menjadi fasa  gas  nya.  Hasil  analisis  spektra  massa menunjukkan  bahwa  2  puncak  dominan dengan  prosentase  senyawa  dalam  sampel yaitu senyawa 2H-1-benzopyran-2-one sebesar 25,40 % dan neophytadiene sebesar 32,88 %.
Tabel  5 .  Hasil  analisa  spektra  massa  dari fraksi  6 crude  extract etil  asetat  daun
Bandotan Pe ak Perkiraan struktur Nam a Seny awa Pers en seny awa (%) SI (%) 1 2H- 1- Benz opyr an- 2- one
11,8 0 98 2 Neo phyt adie ne 16,0 5 99
Gambar 4. Kromatogram GC dari fraksi 6 crude extract etil asetat daun Bandotan
Senyawa  pada  puncak  ke-1  yaitu 2H1-benzopyran-2-one yang  merupakan golongan  senyawa  kumarin  dan  termasuk
senyawa  fenolik.  Kumarin  adalah  senyawa fenilpropanoid  yang  memiliki  cincin  lakton lingkar  enam  dan  bagian  initinya  adalah 2H-benzopyran-2-one. Senyawa  tersebut termasuk  kelompok  senyawa  1- benzopyran yang ditemukan pada tanaman  Sarker, dkk., 2007.  Senyawa 2H-benzopyran-2-one yaitu komponen  utama  pada  ekstrak Artemisia annua L. yang memiliki aktivitas antikanker (Isnawati, dkk., 2008).
Senyawa  pada  puncak  ke-2,  yaitu neophytadiene yang  merupakan  senyawa golongan diterpen. Diterpen termasuk kelompok  senyawa  terpenoid.  Senyawa golongan  diterpen  tersusun  dari  20  atom karbon  yang  diturunkan  dari  2E,  6E,  10E  - geranilgeranilpirofosfat  (GGPP)  (Sarker, dkk., 2007). Berdasarkan penelitian sebelumnya  telah  dikatahui  bahwa  senyawa neophytadiene juga ditemukan dalam ekstrak  etil  asetat  daun Monoica  Roxb, senyawa  bioaktif  hasil  analisa  dengan  GC- MS, senyawa ini memiliki aktivitas antikanker  Sivakumar  dan  Dhiyya,  2015. Senyawa neophytadiene juga terbukti memiliki  aktivitas  antikanker  terhadap terhadap ekstrak Tiliacora acuminate (Madhuyanthi, dkk., 2014).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan bahwa:
1. Fraksi  6  etil  asetat  daun Ageratum conyzoides Linn.  Memiliki  potensi yang  lemah  sebagai  agen  antikanker terhadap cell line kanker kolon WiDr dengan nilai IC 50 251,48 µg mL -1 .
2. Uji  fitokimia  yang  diperoleh  positif mengandung  golongan  alkaloid  dan terpenoid.
3. Hasil identifikasi GC-MS menunjukkan bahwa senyawa
bioaktif  yang  terdapat  pada  fraksi  6 etil asetat daun Ageratum conyzoides
Linn.  yang  diduga  menunjukkan aktivitas  antikanker  yaitu  senyawa 2H-benzopyran dan neophytadiene.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan  terimakasih  kepada  semua pihak yang telah membantu penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Cannell,  Richard,  J.P.  1998. Natural Product Isolations . New Jersey: Humana Press.
Cassidy, Jim. P., Johnston, E., Van Custem. 2006. Colorectal  Cancer ,  New  York: Informa Healthcare USA. Inc.
Delimartha,  S.  2000. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia Jilid II .Pustaka Pembangunan Swadaya Nusantara.
Feri,  Ari.  B.  S.,  Johni,  A.,  Lenny,  Anwar.,
2003. Senyawa Flavonoid Dari Ekstrak  Etil  Asetat  Kulit  Batang Tumbuhan  Bauhinia  hullettii  Prain Dan  Uji  In  Vitro  Sel  Murine Leukemia  P388.  Skripsi.  Program Studi  Pendidikan  Kimia  Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Riau.
Foye,  W.  O.  1996. Prinsip-prinsip  Kimia Medisinal.  Jilid  II  Edisi  Kedua , Yogyakarta, UGM Press.
Freshney,  R.I.  2000. Culture  of  Animal Cells:  A  Manual  of  Basic  Technique, New  York:  John  Willey  &  sonc.  Inc Publication.
Harvey,  Alan.  L.  2008.  Natural  Product  in
Drug   Discovery. Elsavier. Haryanto, Sri. Nugroho,S.   2009.
Tumor  -  Kanker  -  Cara  Pengobatan .
Yogyakarta: Kanisius.
Isnawati, Ani.,
Mudahar, Harfia.,
Kamilatunisah.  2008.  Isolasi  dan
Identifikasi  Senyawa  Kumarin  dari
Tanaman Artemisia Annua (L). Artikel.  Media  Litbang  Kesehatan Volume XVIII. 3: 107-118. Jakarta: 1-6. Madhuvanthi,C., Santhosh Kumar,K., Antony  Ceasar,  S.,  Valivittan,  K., Srinivasan,K.,  Tamilselvi,  A.  2014. Antibacterial, Antioxidant and Antiproliferative  Activities  of  Solvent Extracts  of  Tiliacora  Acuminata. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 6 (9): 398403.
Meiyanto,  E.,  Susilowati,  S.,  Murwanti,  R.,
Sugiyanto,  2008.  Efek  Kemopreventif Ekstrak  Etanolik  Gynura  procumbens (Lour.)  Merr.  Pada  Karsinogenesis Kanker  Payudara  Tikus. Majalah Farmasi Indonesia. 18 (3): 154-161. Mursyidi,  A.  1985. Statistika  Farmasi  dan Biologi . Ghalia Indonesia: Jakarta. Pamilih, Heru. 2009. Uji Sitotoksik Ekstrak Etil Asetat Herba Bandotan ( Ageratum conyzoides L.)  terhadap  Sel  Kanker
Payudara (T47D)
dan Profil
Kromatografi  Lapis  Tipis .  Skripsi ,
UMS: Surakarta.
Pavia,  Donald  L.,  Gary  M.  Lampman, George  S.,  Kritz,  Randall  G.,  Engel. 2009. Introduction  to  Spectroscopy (4th  Ed.) .  Thomson  Brooks/Cole: 797– 817.
Peng, S. and Zhao, R. 2009. Pharmaceutical Bioassays . Published by John Wiley & Sons, Inc : Hoboken, New Jersey.
Rahmawati,  N.,  Katno.,  Triyono,  A.  2008.
Efek Sitotoksik Ekstrak Etanolik Daun Bandotan (Ageratum conyzoides Linn.) Terhadap  Sel  HeLa. Jurnal Balai  Besar  Tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional. Tawangmangu, Jawa Tengah. 1:  47-51.
Sarker, Satyajit D., and Nahar,Lutfun. 2007. Chemistry for Pharmacy.
Sivakumar,  R.,  and    Dhivya,  A.  2015.  GC-
MS Analysis Of Bioactive Compounds  on  Ethyl  Acetate  Extract of  Cordia  Monoica  Roxb.  Leaves.
International  Journal  of  Research  and Development  in  Pharmacy  and  Life Sciences. 4 (1): 1328-1333.
Strathclyde  Institute  of  Pharmacy  & Biomedical  Sciences, University  of Strathclyde.  13.  Student  General organic and Natural
product Chemistry.    John  Wiley  &  Sons  Ltd.: Chicester, West Sussex.
Sukadana,  I  M.  2010.  Aktivitas  Antibakteri Senyawa  Flavonoid  dari  Kulit  Awar- awar  ( Ficus  septia Burm  F), Jurnal
Kimia , Jurusan Kimia FMIPA
Universitas  Udayana,  Bukit  Jimbaran 4 (1): 63-70.