e-ISSN: 2549-3116

## Jurnal Pendidikan Kimia
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/jpk
Uji aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli dan antioksidan dari ekstrak air tumbuhan binara (Artemisia vulgaris L.)
Activity antibacterial to Escherichia coli and antioxsidant of extract water of leaf binara plant (Artemisia vulgaris L.) after blanching
Lia Febrina; Ida Duma Riris*; Saronom Silaban *
1 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan, Medan-Indonesia *Korespondensi: dumariris@gmail.com; saronomsilaban@unimed.ac.id
Binara ( Artemisia vulgaris L.) merupakan salah satu jenis tumbuhan yang dimanfaatkan sebagai obat dan banyak terdapat di Kabanjahe, Kabupaten Karo, Sumatera Utara. Masyarakat Karo secara turun temurun menggunakan tanaman ini sebagai obat diare.Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat  antibakteri  dan  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  daun  binara  hasil blanching yang menggunakan  pelarut  air  dalam  proses  ekstraksi  secara  refluks.  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan terhadap bakteri Escherichia coli ATCC 25922 (gram negatif) menggunakan metode difusi. Ekstrak air daun  binara  yang  diuji  adalah  konsentrasi  0%;  2,5%;  5%.  Aktivitas  antibakteri  diukur  dari  luas diameter zona bening disekitar sumur. Hasil penelitian  menunjukkan ekstrak air daun binara memiliki aktivitas  antibakteri  berturut-turut  pada  konsentrasi  0%;  2,5%;  dan  5%  adalah  0  mm;  18  mm;  dan 25,2 mm. Sebagai kontrol positif digunakan kloramfenikol dan diperoleh daya hambat antibakterinya sebesar  28  mm.  Uji  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  peredaman  DPPH  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazil).  Hasil  penelitian  menunjukkan  aktivitas  antioksidan    ekstrak  air  daun  binara  termasuk sedang  (% inhibisi 45,24% dan IC 50 114,23 ppm) dan sebagai kontrol positif digunakan vitamin C (% inhibisi 56,27% dan IC 50 72,75 ppm).
Kata kunci: antibakteri, antioksidan, Artemisia vulgaris L. , Escherichia coli ATCC 25922, metode DPPH
Binara  (Artemisia  vulgaris  L.)  is  one  of  the  types  of  plant  sused  as  medicine  in  Kabanjahe,  Karo,  North Sumatera. Karo hereditary society use of this plant as a medicine for diarrhea. This research aims to know determine the ability of antibacterial and antioxidant activities from extracts of binara’s leaves blanching results that use water in the solvent extraction process in reflux. Testing of antibacterial activity against the bacteria Escherichia coli ATCC 25922 (gram negative) using diffusion method. Water extracts of binara’s leaves  tested  is  the  concentration  0%;  2.5%;  5%.  The  antibacterial  activity  was  measured  from  the diameter clear zone surrounding the well. The results showed antibacterial activity from water extract of binara’s leaves successively at concentrations of 0%; 2.5%; and 5% is 0 mm; 18 mm; and 25.2 mm. As positive controls used chloramphenicol and drag the ability of antibacterial obtainedby 28mm. Antioxidant test using the  DPPH method (1.1-diphenyl-2-picrylhydrazil). The results showed antioxidant activity from water extracts of binara’s leaves (% inhibition 45.24% and  IC 50 114.23 ppm) and as positive control used vitamin C (% inhibition and 56.27% and IC 50 72.75 ppm).
Key words : antibacterial, antioxidant, Artemisia vulgaris L., Escherichia coli ATCC 25922, DPPH method
DOI: https://doi.org/10.24114/jpkim.v9i2.7621
Bakteri  merupakan  agen  penyebab  infeksi yang  berarti  menyebabkan  terjadinya  proses invasi  dan  pembiakan  mikroorganisme  di  dalam jaringan  tubuh  (Darsana,  2012).  Berdasarkan  hal tersebut  dapat  diketahui  bakteri  sangat  merugi- kan  tubuh  penderitanya  apabila  pembiakan mikroorganisme  terjadi  melebihi  batas  normal.
Salah  satu  agen  penyebab  infeksi  bakterial adalah  bakteri Escherichia  coli ( E.  coli )  Bakteri  ini merupakan bakteri yang berada di dalam saluran pencernaan  bagian  bawah  dan  dapat  berubah menjadi patogen jika perkembangannya di dalam tubuh  melebihi  batas  normal.  Bakteri  ini  dapat menyebar  melalui  kontaminasi  debu  atau  melalui
makanan  dan  minuman  yang  terkontaminasi  feses (Darsana,  2012).  Penyakit  yang  umumnya disebabkannya  adalah  penyakit  diare.  Metabolit sekunder  dari  ekstrak  tumbuhan    umumnya  yang memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  yaitu flavonoid  dan  saponin  dan  digunakan  sebagai obat  herbal  (Thavaranjit,  2016).  Flavonoid  dapat berperan sebagai antibakteri dengan mengganggu  fungsi  dari  mikroorganisme  bakteri. Flavonoid  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan  menyebabkan  terjadinya  kerusakan permeabilitas  dinding  sel  bakteri,  mikrosom  dan lisosom  (Yunikawati,  2013).  Sedangkan  saponin memiliki  mekanisme  kerja  yang  mengakibatkan kerusakan  membran  sel  sehingga  keluarnya berbagai komponen penting dari dalam sel bakteri yaitu  protein,  asam  nukleat  dan  nukleotida (Darsana,  2012).  Selain  itu  juga  terdapat  tanin yaitu  senyawa  metabolit  sekunder  yang  berfungsi sebagai  antibakteri.  Tanin  merupakan  komponen zat  organik  yang  sangat  kompleks  terdiri  dari senyawa  fenolik  yang  sukar  dipisah  dan  sukar mengkristal, mengendapkan protein dari larutannya  dan  bersenyawa  dengan  protein tersebut (Malangngi, 2012).
Senyawa  seperti  flavonoid  dan  tanin  juga mampu  menghambat  reaksi  oksidasi  melalui mekanisme penangkapan radikal ( radical scavenging )  dengan  cara  menyumbangkan  satu elektron  pada  elektron  yang  tidak  berpasangan dalam radikal bebas, sehingga banyaknya radikal bebas  menjadi  berkurang  (Pokorny et  al. ,  2001). Sehingga  selain  berfungsi  sebagai  antibakteri, tumbuhan binara juga berfungsi sebagai antioksidan  karena  dapat  menangkal  radikal bebas.  Radikal  bebas  adalah  suatu  molekul  yang relatif  tidak  stabil  dengan  atom  yang  pada  orbit terluarnya  memiliki  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan (Kumar, 2012). Radikal bebas pada konsentrasi  yang  tinggi  dapat  menghasilkan  stress oksidatif  yang  menyebabkan  kerusakan  struktur sel,  termasuk  kerusakan  lipid,  protein  dan  DNA. Adanya  radikal  bebas  dalam  tubuh  menjadi penyebab  dari  berbagai  penyakit  kronis  dan degeneratif (Pham-Huy et al. , 2008).
Antioksidan adalah substansi yang diperlukan tubuh  menetralisir  radikal  bebas  dan  mencegah kerusakan  yang  ditimbulkan  oleh  radikal  bebas, melengkapi  kekurangan  elektrolit  yang  dimiliki radikal  bebas  dan  menghambat  terjadinya  reaksi berantai  dari  pembentukan  radikal  bebas  yang dapat menimbulkan stress oksidatif (Prakash et al. , 2001).  Ketidakseimbangan  antara  radikal  bebas dan  antioksidan  dapat  menyebabkan  keadaan stress oksidatif yang mengakibatkan kerusakan sel, jaringan hingga  organ tubuh. Langkah tepat untuk mengurangi  stres  oksidatif  adalah  mengurangi
paparan  radikal  bebas  (Khaira,  2010).  Tubuh tidak  mempunyai  sistem  pertahanan  antioksidan yang  berlebih,  sehingga  jika  terjadi  paparan radikal  berlebih  maka  dibutuhkan  antioksidan eksogen (Sunarni dkk., 2007).
Salah  satu  tumbuhan  yang  dimanfaatkan sebagai  obat diare  oleh masyarakat  Karo  secara turun  temurun  adalah  tumbuhan  binara  ( Artemisia vulgaris L .). Tumbuhan binara (Artemisia vulgaris L.) merupakan  tumbuhan  liar  yang  tumbuh  liar  di ladang  dan  pinggir  jalan  disekitar  daerah Kbanjahe, Karo, Sumatera Utara. Tumbuhan binara ( Artemisia  vulgaris  L. )  juga  telah  digunakan  untuk mengatasi  sakit  haid,  analgesik,  keguguran, diuretika,  nyeri  ulu  hati,  disentri,  muntah  darah, batuk berdahak, keputihan, mimisan dan pendarahan  usus  karena  mengandung  senyawa bioaktif yang berkhasiat untuk mengatasi penyakit (Bangol,  dkk.,  2014).  Berdasarkan  laporan penelitian  yang  telah  dilakukan,  tumbuhan  binara ( Artemisia  vulgaris  L. )  mengandung  senyawa bioaktif  berupa  minyak  atsiri,  saponin  dan flavonoid (Bunrathep et al. , 2005).
Aktivitas  antioksidan  kobis  meningkat  9% yang  dibandingkan  dengan  tanpa blanching . Blanching gandum  setelah  pemanenan  pada  suhu 100  °C  menunjukkan  peningkatan  fenol  total tepung gandum. Demikian juga pengaruh blanching jagung  dapat  meningkatkan  kadar  fenol  total (Pujimulyani dkk., 2010).
Aktivitas  antioksidan  pada  kacang-kacangan, jagung,  dan  tomat  yang  diukur  dengan  metode 1,1-dihenyl-2-picrylhydrazil  meningkat  setelah dilakukan blanching (Kwan,  2007).  Peningkatan aktivitas  antioksidan  tersebut  diduga  karena perlakuan blanching dapat menyebabkan komponen antioksidan mudah lepas dari matrik sel, sehingga  meningkatkan  hasil  ekstraksi  (Pujimulyani dkk., 2010).

## Metode

## Bahan
Bahan-bahan  yang  dipakai  pada  penelitian ini  adalah  tumbuhan  binara  ( Artemisia  vulgarisL. ) yang  diperoleh  dari  daerah  Sumbul,  Kabanjahe, Kabupaten  Karo.  Tumbuhan  binara  diperoleh  dari ladang  karena  merupakan  tumbuhan  liar.  Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kertas saring, kertas label, aluminium foil, asam askorbat yaitu  vitamin  C  yang  berfungsi  sebagai  kontrol positif  uji  antioksidan,  serbuk  DPPH,  metanol  (p.a), HCl  (100%,  1%,  2N),  H 2 SO 4 2  N,  serbuk  Mg, kloroform, NH 3 10%, FeCl 3 1%, KI, bismutsubnitrat, HgCl 2 , I 2 , etanol 70%, aquades, NA (Nutrient Agar) dengan komposisi ekstrak daging sapi 0,5% (b/v);
pepton 0,5% (b/v); agar 1,5% (b/v); isolat bakteri E.  coli ATCC  25922,  yang  diperoleh  dari  Asean Farmasi  Jakarta , kloramfenikol  yang  berfungsi sebagai kontrol positif uji antibakteri.
Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah  1  set  refluks,  erlenmeyer  250  mL,  gelas ukur  10  mL,  beaker  gelas  250  mL,  batang pengaduk,  cawan  porselen,  kaca  arloji,  tabung reaksi,  pipet  ukur  5  mL, pipet  tetes,  labu  ukur  (10 mL,  50  mL,  250  mL),    rak  tabung,  corong  kaca, neraca analitik, hot plate , autoclave , spiritus, cawan petri, evaporator ,  mikropipet  10  µL,  kuvet, spektroskopi  UV-Vis  (Thermo),  dan  inkubator (Thermo), dan jarum ose.
Preparasi sampel Sebanyak  2  Kg  daun  tumbuhan  binara ( Artemisia  vulgaris  L. )  segar  dipisahkan  dari tangkainya kemudian dilakukan pencucian. Tumbuhan  binara  dilakukan blanching selama  1 menit  dengan  media  larutan  asam  sitrat  0,05% ditiriskan,  dikeringkan  dalam  ruangan  sambil dikipas  sekali-sekali  dan  dibalik-balikkan.  Proses pengeringan  dilakukan  di  tempat  yang  teduh, terlindung  dari  sinar  matahari  selama  proses pengeringan.  Pengeringan  dilakukan  di  tempat yang  teduh  dimaksudkan  untuk  menghindari rusaknya  kandungan  metabolit  sampel  akibat
rusaknya  kandungan  metabolit  sampel  akibat adanya  kontak  langsung  dengan  sinar  matahari. Dengan  kondisi  pengeringan  yang  demikian, diharapkan  kandungan  metabolit  sekunder  yang terdapat  dalam  sampel  tidak  akan  rusak,  setelah kering  daun dipotong  kecil-kecil untuk  memperluas permukaan  agar  serbuk  daun  dapat  secara maksimal dapat diekstrak.
Warna  sampel  semula  adalah  hijau  segar, setelah kering hijau kehitaman. Berat sampel yang diperoleh  setelah  proses  pengeringan  1  kg  daun binara  ( Artemisia  vulgaris L.)  diperoleh  sebanyak 356  gram  (35,60%)  dengan  pengurangan  kadar air sekitar 64,40%.

## Ekstraksi
Daun  binara  yang  telah  halus  dicampur dengan  pelarut  aquades.  Ekstraksi  dilakukan dengan  cara  refluks  selama  3  jam,  kemudian disaring  dengan  kertas saring .  Filtrat  yang diperoleh  diuapkan  dengan  vakum  rotatory evaporator sampai  semua  pelarut  terpisah  dari ekstrak.
Daun  binara  ( Artemisia  vulgar is  L.)  sebanyak 50  gram  direfluks  dan  dievaporator  sehingga diperoleh  berat  ekstrak  daun  binara  dengan blanching  sebanyak  3,3550  gram.  Ekstrak  yang diperoleh kemudian dilakukan uji fitokimia, uji anti- oksidan dan uji antibakteri .

## Tabel 2
Hasil uji antioksidan dari ekstrak air daun binara ( Artemisia vulgaris L.) Ekstrak (ppm) Konsentrasi Absorbansi Rata-rata (%) % Hambat (ppm) IC 50 A1 A2 A3 Air 5 0,3410 0,3504 0,3400 0,3438 25,62% 114, 23 10 0,3373 0,3370 0,3404 0,3382 26,83% 25 0,3135 0,3217 0,3185 0,3179 31,22% 50 0,2671 0,2705 0,2600 0,2659 42,47% 100 0,2452 0,2575 0,2565 0,2531 45,24%

## Tabel 3
Hasil antioksidan dari kontrol positif (Vitamin C) Sampel (ppm) Konsentrasi Absorbansi Rata-rata (%) % Hambat (ppm) IC 50 A1 A2 Vit C 5 0,3216  0,3294 0,3255 29,58% 72,75 10 0,3194  0,3119 0,3157 31,70% 25 0,2803  0,2844 0,2824 38,90% 50 0,2489  0,2527 0,2508 45,74% 100 0,1989  0,2052 0,2021 56,27%

## Tabel 4
Diameter hambat ekstrak daun binara ( Artemisa vulgaris L.)
terhadap Eschericia coli Sampel Antioksidan Inhibisi (%) IC 50 (ppm) Ekstrak air 45,24 114,23 Vit C 56,27 72,75

## Tabel 5
Inhibisi dan IC 50 dari ekstrak air daun binara ( Artemisia vulgaris L.) dan Vitamin C Ekstrak (ppm) Konsentrasi (%) Diameter daerah bening d1 (mm) d2 (mm) d3 (mm) d4 (mm) Vit C 0 0 0 0 0 2,5 18 ± 0 17 ± 0,2 18 ± 0 18 ± 0 5 24 ± 0,5 25 ± 0,2  25 ± 0,2 25 ± 0,2 0,02 28 ± 0 28 ± 0 28 ± 0 28 ± 0
Uji antioksidan dan antibakteri Uji  antioksidan  menggunakan  DPPH  mengacu pada  metode  Molyneux  (2004)  dengan  sedikit modifikasi.  Metode  DPPH  menggunakan  1,1- difenil-2-pikrilhidrazil  sebagai  sumber  radikal bebas.  Reaksi  ini  menyebabkan  terjadinya perubahan warna dari ungu ke kuning yang dapat diukur  dengan  spektrofotometer  sinar  tampak pada λ 517 nm.
Penelitan uji antibakteri menggunakan metode difusi  mengacu  pada  metode  Davis  dan  Stout (1971)  dengan  sedikit  modifikasi.  Metode  difusi merupakan pengujian  aktivitas  antibakteri  dengan menentukan  kerentangan  bakteri.  Ekstrak  sampel akan  membentuk  zona  bening  (daya  hambat) sehingga  diketahui  bersifat  sebagai  antibakteri. Kontrol  positif  digunakan  sebagai  tolak  acuan pada  penentuan  keaktivan  ekstrak  sebagai antibakteri.

## Hasil dan Pembahasan
Randemen  ekstrak  air  dari  daun  binara  (Artemisia vulgaris L).
Untuk mendapatkan uji aktivitas yang maksimum lebih  dahulu  diblanching  dengan  menggunakan asam  asetat  0,5  %.  Randemen  ekstrak  air  daun Binara  ( Artemisia  vulgaris L)  setelah  dilakukan blanching adalah 6,71%.
Uji fitokimia Uji  fitokimia  dilakukan  pada  ekstrak  daun binara  dengan  pelarut  air.  Uji  dilakukan  untuk mengidentifikasi  alkaloid,  flavonoid,  saponin  dan tanin dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1
Hasil uji fitokimia Uji Fitokimia Hasil Alkaloid - Flavonoid + Saponin + Tanin +
Uji aktivitas antioksidan Penentuan  nilai  aktivitas  antioksidan  pada penelitian ini menggunakan metode DPPH. Metode
uji  antioksidan  dengan  DPPH  (2,2-difenil-1- pikrilhidrazil)  dipilih  karena  metode  ini  adalah metode  sederhana,  mudah,  cepat  dan  hanya memerlukan  sedikit  sampel  untuk  evaluasi  aktivitas antioksidan  dari  senyawa  bahan  alam  sehingga digunakan  secara  luas  untuk  menguji  kemampuan senyawa  yang  berperan  sebagai  pendonor elektron.Aktivitas  diukur  denganmenghitung  jumlah pengurangan  intensitas  warna  ungu  DPPH  yang sebanding  dengan  pengurangan  konsentrasi larutan  DPPH.  Peredaman tersebut  dihasilkan  oleh bereaksinya  molekul DPPH  dengan atom  hidrogen yang  dilepaskan  satu  molekul  komponen  sampel yang  menyebabkan  terjadinya  peluruhan  warna DPPH  dari  ungu  ke  kuning,  Hasil  uji  Antioksidan dari  Ekstrak  air  daun  Binara  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Pada  saat  pengujian,  warna  dari  larutan yang  sudah  diberikan  DPPH  yang  semula berwarna  ungu,  kemudian  perlahan  berubah menjadi  kuning,  terutama  pada  konsentrasi  yang besar. Hal ini menunjukkan terjadinya reaksi antara DPPH  dan  ekstrak  daun  binara  yang  dapat meredam  radikal  bebas  (DPPH).  Sebagai  kontrol digunakan vitamin C, hasil antioksidan dari vitamin C dapat dilihat pada Tabel 3.

## Uji aktivitas antibakteri
Uji Aktivitas antibakteri menggunakan metode sumur  difusi.  Sumur  difusi  adalah  uji  untuk menunjukkan  daya  hambat  ekstrak  daun  binara ( Artemisia  vulgaris L.)  terhadap  bakteri  E.Coli. Aktivitas  antibakteri  diukur  dari  diameter  zona bening  (mm)  pada  media  NA  untuk  ekstrak  air yang  dibandingkan  dengan  senyawa  standar antibakteri  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif dan pelarut yangdigunakan dalam proses ekstraksi sebagai  kontrol  negatif.Ekstrak  daun  binara ( Artemisia  vulgaris L.)  dibuat  variasi  konsentrasi yaitu  2,5%  dan  5%  untuk  ekstrak  air.  Hasil diameter  hambat  ekstrak  daun  binara  ( Artemisia vulgaris L.)  terhadap E.coli dapat  dilihat  pada Tabel 4.

## Uji aktivitas antioksidan
Prinsip  dari  metode  uji  aktivitas  antioksidan adalah  pengukuran  aktivitas  antoksidan  secara
kuantitatif  yaitu  dengan  melakukan  pengukuran penangkapan  radikal  bebas  DPPH  oleh  suatu senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan dengan  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis sehingga  dengan  demikian  akan  diketahui  nilai aktivitas  peredaman  radikal  bebas  yang dinyatakan  dengan  nilai  IC 50 .  Semakin  kecil  nilai IC 50 maka  aktivitas  peredaman  radikal  bebas semakin  tinggi.  Prinsip  kerja  dari  pengukuran  ini adalah  adanya  radikal  bebas  stabil  yaitu  DPPH yang  dicampurkan  dengan  senyawa  antioksidan yang  memiliki kemampuan mendonorkan hidrogen, sehingga  radikal  bebas  dapat  diredam  (Wijaya, 2014).  Inhibisi  dan  IC 50 dari  Ekstrak  air  daun Binara  ( Artemisia  vulgaris  L) dapat  dilihat padaTabel 5. Nilai IC 50 (Inhibition Concentration 50) adalah konsentrasi  antioksidan  (µg/mL)  yang  mampu menghambat  50%  radikal  bebas.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari  perpotongan  garis  antara  50% daya  hambatan  dengan  sumbu  konsentrasi, kemudian dimasukkan ke dalam persamaan Y = a + bX dimana Y = 50 dan nilai X menunjukkan IC 50 (Molyneux, 2004). Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin tinggi aktivitas  antioksidan,  secara  spesifik  auatu senyawa  dikatakan  sebagai  antioksidan  sangat kuat jika  nilai IC 50 kurang  dari 50ppm, kuat untuk IC 50 bernilai  50-100ppm,  sedang  jika  bernilai 100-150ppm,  dan  lemah  jika  nilai  IC 50 bernilai 151-200ppm (Molyneux, 2004).
Ekstrak  air  daun  binara  mempunyai  aktivitas antioksidan yang sedang dengan (% Inhibisi 45,24 dan  IC 50 114,23ppm)  karena  nilai  IC 50 berada dalam  range  100-150  ppm.  Antioksidan  dapat membantu  melindungi  tubuh  manusia  melawan kerusakan yang disebabkan oleh senyawa oksigen reaktif (ROS, Reactive Oxygen Species ) dan radikal bebas  lainnya  (Khaira,  2010).  Grafik  konsentrasi daun binara setelah blanching terhadap hambatan dapat dilihat pada Gbr 1.
Nilai  IC 50 ekstrak  daun  binara  dari  hasil perhitungan  persamaan  regresi  linear,  dimana persamaan  regresi  linear  dari  ekstrak  air  yang didapat  adalah  y  =  0,215x  +  25,44  dan  R 2 = 0,847.  Koefisien  y  pada  persamaan  ini  adalah sebagai IC 50 , yaitu nilai Y = 50, sedangkan nilai X pada  persamaan  ini  adalah  konsentrasi  dari ekstrak  yang  akan  dicari  nilainya,  dimana  nilai dari  X  yang  didapat  merupakan  besarnya konsentrasi yang diperlukan untuk dapat meredam 50%  aktivitas  radikal  DPPH  atau  yang  disebut juga  dengan  nilai  IC 50 .  Dari  persamaan  tersebut maka  diperoleh  nilai  IC 5 dari  ekstrak  air  daun binara sebesar 114,23 ppm. Konsentrasi terhadap hambatan  dari  vitamin  C  sebagai  kntrol  dapat dilihat pada Gbr 2.
Nilai  IC 50 vitamin  C  didapat  dari  hasil persamaan  regresi  linear,  dimana  persamaan regresi linear dari vitamin C yang didapat adalah y  =  0,276x  +  29,92  dan  R 2 =  0,970.  Dari persamaan tersebut maka diperoleh nilai IC 50 dari vitamin C sebesar 72,75ppm.
Gbr  1. Grafik  konsentrasi  terhadap  hambatan  dari ekstrak binara dengan blanching
Gbr  2. Grafik  Konsentrasi  terhadap  Hambatan  dari Vitamin C

## Uji aktivitas antibakteri
Metode  dengan  difusi  sumur  didasarkan  dari kemampuan  senyawa-senyawa  antibakteri  sampel untuk  menghasilkan  zona  hambat  (zona  bening) disekeliling  sumur  uji  terhadap  bakteri  yang digunakan  sebagai  penguji  (Nurainy,  2008). Didalam  satu  cawan petri dibuat  tiga  sumur  yang ditetesi  ekstrak  dengan  konsentrasi  yang  sama. Dari  ketiga  daerah  bening  yang  dihasilkan  oleh lubang sumur yang diambil adalah diameter yang paling  luas.  Hal  ini  karena  ketiga  lubang  sumur berada dalamsatu cawan petri dengan perlakuan yang  sama.  Pada  tabel  dapat  dilihat  bahwa ekstrak air daun binara pada konsentrasi 0% tidak menghasilkan zona bening karena yang digunakan adalah pelarutnya  sebagai kontrol negatif, hal ini berarti  bahwa  pelarut  air  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri.  Zona  bening  ekstrak  air  daun  binara
2,5%  adalah  18  mm,  pada  konsentrasi  5% diameter  zona  beningnya  25,2  mm.  Zona  bening yang dihasilkan ekstrak air semakin luas sebanding dengan  semakin  tingginya  konsentrasi.  Semakin tinggi  konsentrasi  maka  zona  bening  yang dihasilkan  juga  semakin  luas  demikian  juga sebaliknya  semakin  rendah  konsentrasi  maka  luas zona bening yang dihasilkan juga semakin kecil.
Berdasarkan standar umum disebutkan bahwa diameter  zona  bening  10-20  mm  memiliki  daya hambat  kuat,  diameter  zona  bening  5-10  mm mempunyai  daya  hambat  sedang  dan  diameter zona  bening  <5  mm  memiliki  daya  hambat  lemah (Davis and Stout, 1971). Dari hasil yang diperoleh, diameter  hambat  oleh  semua  ekstrak  tergolong kuat karena memiliki zona hambat 10-20 mm dan diatas 20 mm. Sehingga berdasarkan hal tersebut ekstrak air daun binara konsentrasi 2,5% dan 5% sudah dapat dijadikan sebagai antibakteri.
Dari  hasil  penelitian  daun  binara  ( Artemisia vulgaris L.)  yang  memiliki  aktifitas  antimikroba yang  paling  baik  adalah  ekstrak  air  5%  dengan daerah  bening  25,2  mm.Diameter  zona  hambat yang  dihasilkan  semakin  besar  ketika  konsentrasi ekstrak yang digunakan juga besar. Hal ini karena bakteri Escherichia  coli merupakan  bakteri  gram negatif  yang  banyak  mengandung  lipid,  sedikit peptigoglikan,  membran  luar  berupa  bilayer (berfungsi  sebagai  pertahanan  selektif  senyawa- senyawa  yang  keluar  atau  masuk  sel  dan menyebabkan  efek  toksik).  Membran  luar  terdiri dari  fosfolipid  (lapisan  dalam),  lipopolisakarida (lapisan  luar)  tersusun  atas  lipid  A.  Peptidoglikan pada  E.coli  bersifat  polar  sehingga  antibakteri pada ekstrak air yang bersifat polar dapat masuk kedalam sel E.coli sehingga aktifitas antibakterinya kuat (Nuraini e t al ., 2008).
Gbr  3. Zona  bening  ekstrak  daun  binara  ( Artemisia vulgaris L.),  pelarut  dan  kloramfenikol  terhadap E.coli selama  24  Jam.  EDBAB 1 :  ekstrak  air  daun  binara  hasil blanching  konsentrasi  2,5%,  EDBAB 2 :  ekstrak  air  daun binara hasil blanching konsentrasi 5%, K : kloramfenikol
Pada  penelitian  aktifitas  antibakteri  dari ekstrak  daun  binara  digunakan  antibiotik  standar yang biasa digunakan dalam pengobatan sebagai kontrol  positif  yaitu  kloramfenikol.  Respon  yang diberikan oleh bakteri E.coli terhadap ekstrak dan kloramfenikol berbeda. Dimana bakteri E.coli yang digunakan aktifitasnya lebih efektif dihambat oleh
kloramfenikol dengan diameter zona hambat yang dihasilkan  adalah  28  mm  dibandingkan  dengan ekstrak  daun  binara  ( Artemisia  vulgaris L.).  Hal  itu berarti bahwa kloramfenikol memiliki spectrum luas dengan kekuatan daya hambat yang tinggi dalam menghambat dan membunuh bakteri. Potensi daya hambat ekstrak daun binara dibandingkan dengan kontrol  positif  (kloramfenikol)  dapat  dilihat  pada Tabel 6.

## Tabel 6
Potensi  ekstrak  daun  binara  ( Artemisia  vulgaris L.)
terhadap kloramfenikol Ekstrak  daun bunara Konsentrasi (%) Potensi  daya  hambat terhadap kloramfenikol (%) Ekstrak air 2,5 64,29 5 90
Potensi  ekstrak  daun  binara  semakin  tinggi dengan semakin meningkatnya konsentrasi. Artinya semakin  tinggi  konsentrasi  semakin  banyak antibakteri  yang  berperan  dalam  penghambatan bakteri.

## Ucapan terima kasih
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada  dekan FMIPA yang memberi izin penelitian, dan reviewer yang telah menelaah tulisan ini.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpul- kan  bahwa:  (1)  ekstrak  air  daun  binara mengandung golongan senyawa flavonoid, saponin dan  tannin;  (2)  hasil  uji  antioksidan  menunjukkan bahwa  ekstrak  air  daun  binara  memiliki  tingkat antioksidan  yang  sedang  karenanilai  IC 50 berada diantara  100-150  ppm;  dan  (3)  hasil  uji antibakteri menunjukkan bahwadaun binara dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922  dan  kecenderungan  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  maka  zona  hambat  yang terbentuk semakin besar.

## Daftar Pustaka
Bangol.,  Erpi.,  Lidya,  I.M.  &  Jemmy,  A.  (2014). Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  dan  n- heksana  dari  daun  rumput  Santa  Maria ( Artemisia vulgaris L.) pada minyak ikan. Jurnal Ilmiah  Sains  Kimia  Universitas  Sam  Ratulangi,
14(2).
Bunrathep,  S.,  Songsak,  T.  &  Ruangrungsi,  N. (2005). Terpenoid contituents from leaves and cell  cultures  of Artemesia  vulgaris var.  indica and application of biotechnological techniques to increase davanone level. Journal Pharmaceutical Sciences ,12:147-153. Darsana,  I.G.O.,  Besung,  I.N.K.  &  Hapsari,  M. (2012).  Potensi  daun  binahong  ( Anredera cordifolia (Tenore) steenis) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli secara in vitro. Jurnal  Indonesia  Medicus  Veterinus,
1:337-351.
Davis,  W.W.  &  Stout,  T.R.  (1971).  Disc  plate method  of  microbiological  antibiotic  assay.
Journal of Applied Microbiology, 22:659-665. Khaira,  K.  (2010).  Menangkal  radikal  bebas dengan  antioksidan. Jurnal  Saintek ,  2:183- 187.
Kumar,  U.  &  Veeru,  P.  (2012).  Assessment  of antioxidant  enzymes  and  free  radical scavenging activity of selected medical plants . Journal  Free  Radicals  And  Antioxidants ,  2:58-
63. Kwan, A. (2007). Flavonoids and vascular disease. Diakses 19 Januari 2016. <http://www.freevas.demon.co.uk/student/fla vonoids.html>.
Malangngi, L.P., Meiske S.S.  & Jessy J.E.P. (2012). Penentuan  kandungan  tanin  dan  uji  aktivitas antioksidan  ekstrak  biji  buah  alpukat  ( Persea americana Mill.). Jurnal MIPA Unsrat , 1:5-10. Molyneux,  P.  (2004).  The  use  of  the  stable  free radical  diphenylpicrylhidrazil  (DPPH)  for estimating antioxidant activity. Journal Science Technology , 26:211-219.
Nurainy,  F.,  Samsul,  R.  &  Yudiantoro.  (2008). Pengaruh konsentrasi kitosan terhadap aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi agar  (sumur). Jurnal  Teknologi  Industri  dan Hasil Pertanian, 13:117-125.
Pham-Huy.,  Lien,  A.,  Hue,  H.  &  Pham-Huy,  C. (2008).  Free  radical  antioxidant  in  disease and health. Journal Biomed. Sciences, 4:89-96. Pokorny, J., Yanishlieva, N., & Gordon, M. (2001).
Antioxidant in food; practical applications. CRC Press, New York. Prakash,  A.,  Rigelhof,  F.  &  Miller,  E.  (2001). Antioxidant  Activity. Medalliaon  Laboratories Analitycal Progress , 10(2).
Pujimulyani., D., Raharjo, S., Marsono, Y. & Santoso,
U.  (2010).  Aktivitas  antioksidan  dan  kadar senyawa  fenolik  pada  kunir  putih  ( Curcuma mangga Val.)  segar  dan  setelah blanching. Jurnal Agritech, 30(2).
Rohdiana  D.,  Dede,  Z.A.  &  Arista,  B.  (2013).
Aktivitas  penghambatan  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli oleh  berbagai  jenis  teh  dan seduhannya .  Jurnal  Penelitian  Teh  dan  Kina, 16:37-44. Sunarni,  T.,  Pramono,  S.  &  Asmah,  R.  (2007).
Flavonoid antioksidan penangkap radikal dari daun kepel ( Stelechocarpus burahol (Bl. Hook f. &  Th.). Majalah  Farmasi  Indonesia ,  18:111- 116.
Thavaranjit,  A.C.  (2016).  In  vitro  antibacerial activity  and  phytochemical  screening  of Strychnos potatorum seed extract. Der Pharma Chemica, 8:218-221. Wijaya,  D.P.,  Jessy  E.P.  &  Jemmy,  A.  (2014). Skrining  fitokimia dan uji aktivitas antioksidan dari  daun  nasi  (Phrynium  capitatum)  dengan metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).
Jurnal MIPA UNSRAT , 3:11-15.
Yunikawati,  M.P.A.,  Besung,  I.N.K.  &  Hapsari,  M. (2013).  Efektifitas  perasan  daun  srikaya terhadap daya hambat pertumbuhan Escherichia  coli.  Jurnal  Indonesia  Medicus Veterinus , 2:170-179.