UJI TOKSISITAS  EKSTRAK DAUN  PLETEKAN ( Ruellia  tuberosa L. ) DENGAN MENGGUNAKAN METODE  BRINE  SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Nurhawa Vitalia 1 , Ahmad Najib, Aktsar roskiana Ahmad Fakultas Farmasi, Iniversitas Muslim Indoensia
1 Nurhawa_vitalia@yahoo.com

## ABSTRACT
Minnie  root  (Ruellia  tuberosa L .) belongs  to Acanthaceae  family. In traditional medicine  has  been used as  diuretic,  antidiabetic,  antipyretic  and  antihypertensive and  it also  recently  been  incorporated  as a component in  a  herbal  tea  in  Taiwan.  This  research  is  aim  to  determine  LC 50 value  of Minnie  root  leaves  extract  (Ruellia tuberosa L .)  to  Artemia  salina  Leach  shrimp  larvae.  Dryed  samples  extracted  by graduate  maceration  with  n- hexan,  ethyl  acetate  and  ethanol  respectively.  Rendamen  n-hexane  extract  obtained  as  much  as  1.158%,  ethyl acetate  extract  as  much as 2.017% and  ethanol  extract  as  much as 3.669 %. Based on  qualitative  screening used TLC  method,  ethyl  acetate  extracts  and  ethanol  extracts  of  Minnie  root  (Ruellia  tuberosa L .)  leaves  contain alkaloid,  saponin,  flavonoid  and  phenolic  compounds.  Toxicity assay  Artemia  salina  Leach  shrimp  larvae  have been  conducted  on  leaves  extracts  of  Minnie  root  (Ruellia  tuberosa L .).  Toxicity  assay  on  sample  extract  of Minnie  root  (Ruellia  tuberosa L. )  leaves  determine  by  counting  the  number  died  of  larvae  after  24  hours treatment.  LC 50 on  sample  calculated by probit  analysis method.  The  toxicity  assay  showed  LC 50 of  ethyl  acetate extracts  and  ethanol  extracts  are  toxic with LC 50 266.07  ± 0.93 µg/mL and  142.160  ± 1.30 µg/mL.
Keywords: Artemia  salina  Leach,  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT),  Minnie  root,  Phytocemical  test,  Toxicity assay.

## I.  PENDAHULUAN
Masyarakat  Indonesia  telah  lama  mengenal serta  menggunakan  obat-obatan  alami  atau  yang dikenal  dengan  obat  tradisional.  Obat  tradisional lebih  mudah  diterima  oleh  masyarakat  karena  selain telah  akrab  dengan  masyarakat,  obat  ini  lebih  murah dan mudah didapat  (Hyeronimus,  2006).
Salah  satu  tanaman  obat  yang  banyak ditemukan  di  Indonesia  yaitu Ruellia  tuberosa L. Ruellia  tuberosa  dilaporkan  mengandung  flavonoid, steroid,  triterpenoid,  dan  alkaloid.  Terdapat  lima jenis  flavonoid  yang  terdapat  pada  tanaman  Ruellia tuberosa  diantaranya kirsimaritin,  kirsimarin,  kirsilol 4’-glukosida,  sorbifolin,  dan  pedalitin  (Chothani,  et al.,  2011;  Lin,  et  al.,  2006).  Komponen  antioksidan pada  bunga  kecombrang  ternyata  memiliki  kekuatan yang  cukup  besar  untuk  meredam  senyawa  radikal bebas  sehingga  mencegah  terjadinya  oksidasi  yaitu sebesar 92.92 %, dalam 0.5 g/ml ekstrak kecombrang dengan pelarut etanol (Krismawati, 2007).
Efek  farmakologis  Pletekan  di  antaranya sebagai  peluruh  batu  kencing  dan  jantung  coroner (Hariana,  2005). Secara eksperimen Ruellia  tuberosa terbukti  memiliki  efek  antioksidan  antimikroba, antikanker,  aktivitas  gastroprotektif,  antinoceptive, dan  aktivitas  antiinflamasi.  Daun  Pletekan  juga berfungsi  sebagai  obat  pada  pengobatan  sifilis, kencing  batu,  bronchitis,  kanker,  penyakit  jantung,
pilek,  demam,  hipertensi,  dan  masalah  pencernaan (Chothani,  et al.,  2011; Rajan,  et al., 2012).
Toksisitas  adalah  efek berbahaya  dari bahan kimia  atau  suatu  obat  pada  organ  target.  Umumnya setiap  senyawa  kimia  mempunyai  potensi  terhadap timbulnya  gangguan  atau  kematian  jika  diberikan kepada  organisme  hidup  dalam  jumlah  yang  cukup (Hayes,  1983).
Uji  toksisitas  pad  ekstrak  tanaman  biasanya dilakukan dengan untuk mengetahui tingkat keamanan  suatu ekstrak.  Dimana pengujian  toksisitas biasanya dengan menggunakan hewan  uji.  Salah  satu hewan  uji  yang  sesuai  adalah  brine  shrimp  (udang laut) A. salina Leach, sejenis udang-udangan primitif dan   pertama  kali  ditemukan  di  Lymington, Inggris pada  tahun  1755  dan  termasuk  family  crustaceae tingkat  rendah  dari phylum arthropoda (Sukandar,  et al.,  2007).
Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT) pertama kali  diperkenalkan  oleh  Michael,  dkk  pada  tahun 1956.    Metode  pengujian  ini  didasarkan  pada  bahan senyawa aktif dari tumbuhan  yang bersifat  toksik dan mampu membunuh  larva A.  salina Leach.   dan dapat digunakan sebagai uji praskrining aktivitas antikanker  (Sukandar,  et al.,  2007).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  maka penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  toksisitas ekstrak daun Pletekan  ( Ruellia tuberosa L.)   terhadap
larva  udang A.  salina Leach  melalui  uji Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).
II. METODE PENELITIAN
A. Pengambilan sampel Sampel Daun Pletekan ( Ruellia tuberosa L.) diambil  di Kota  Makassar  di belakang kampus UMI. Waktu  pengumpulan  sampel  daun  dilakukan      saat proses  fotosintesis  maksimal,  yaitu  saat  mulai berbunga atau sedang berbunga tetapi belum berbuah. Pada  saat  ini  proses  fotosintesis  berhenti  sementara (Dirjen POM, 1989).
Teknik  pengumpulan  sampel  daun  dapat dilakukan  dengan  tangan,  tanpa  atau  dengan menggunakan mesin. Apabila pengumpulan dilakukan secara  manual langsung (pemetikan) maka keterampilan  pemetik dalam menentukan  dan memetik  organ  yang  sesuai  dari  tanaman  sangat penting  diperhatikan.  Keterampilan  diperlukan  untuk memperoleh  simplisia yang benar dan tepat (misalnya kalau  diperlukan  daun  muda,  tidak  terpetik  daun  tua dan  ranting)  serta  tidak  merusak  tanaman  induk (Dirjen POM,1989).

## B. Pengolahan Sampel
Serbuk rimpang kecombrang sebanyak 500 g dimasukkan  ke  dalam  wadah  maserasi,  lalu ditambahkan  pelarut  metanol  sebanyak  2000  mL hingga simplisia tersebut terendam, dibiarkan selama 3  hari  dalam  bejana  tertutup  dan  terlindung  dari cahaya  matahari  langsung  sambil  diaduk  secara periodik,  setelah  3  x  24  jam  dilakukan  penyaringan dan  ampasnya  dimaserasi  kembali  dengan  cairan penyari  yang  baru.  Maserasi  dilakukan  sebanyak  3 kali  dan  diperoleh  ekstrak  metanol  cair.  Hasil penyarian yang diperoleh kemudian diuapkan dengan menggunakan  rotavapor  sehingga  akan  diperoleh ekstrak kental.
Sampel  kemudian  dibersihkan  dari  kotoran yang  melekat    lalu  dikeringkan    dengan  cara diangin-anginkan    dan    disimpan    di  lemari pengering.   Setelah   kering,  Daun  Pletekan ( Ruellia tuberosa L.)  diblender  sampai  menjadi  serbuk, disimpan ke  dalam  wadah  dan  siap  untuk diekstraksi.

## C. Metode Ekstraksi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  maserasi  bertingkat  dengan menggunakan tiga pelarut yang berbeda kepolarannya  yaitu  pelarut  non  polar  (n-heksan), pelarut  semipolar  (etil  asetat),  dan  pelarut  polar (etanol).
Ditimbang  900  gram  serbuk  simplisia, kemudian  dimasukan  serbuk  simplisia  yang  akan disari  dalam  bejana  maserasi.  Dituangkan  secara
perlahan  pelarut  non  polar  (n-heksan)  kedalam bejana  maserasi  yang  berisi  serbuk  simplisia. Kemudian  dibiarkan  cairan  penyari  merendam serbuk  simplisia.  Biarkan  simplisia  selama  3-7 x 24 jam,  lalu  saring  untuk  mendapatkan  ekstrak  cair dan  diuapkan  hasil  penyarian  (dengan  rotavapor) pada  50 0 C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental  (Dirjen POM, 2000).
Residu  selanjutnya  dimasukkan  dalam wadah  maserasi  lalu ditambahkan  pelarut semipolar (etil  asetat).  Dibiarkan  selama  3  hari  sambil sesekali  diaduk.  Kemudian  disaring,  ekstrak  cair dipekatkan  menggunakan  rotavapor pada  suhu 50 o C (Ditjen  POM, 2000).
Residu  selanjutnya  dimasukkan  dalam wadah  maserasi  lalu  ditambahkan  pelarut  polar (etanol).  Dibiarkan  selama  3  hari  sambil  sesekali diaduk.  Kemudian  disaring,  ekstrak  cair  dipekatkan menggunakan  rotavapor  pada  suhu  50 o C  (Ditjen POM, 2000).

## D. Uji  Toksisitas
Pengujian Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  yang dilakukan  pada ekstrak  daun pletekan ( Ruellia  tuberosa L.)  berdasarkan  pada  prosedur Rahman (2005) dengan beberapa modifikasi:

## a. Penyiapan  Larva
Sebanyak  50  mg  telur  Artemia  salina Leach.  direndam  dalam  1000  mL air laut  pada  area gelap  wadah  yang  tertutup aluminium  foil.  Setelah 48  jam  telur  akan  menetas  menjadi  larva  dan berpindah  pada  area  wadah  yang  disinari  dengan cahaya lampu.   Larva  yang  telah  berumur   48  jam akan digunakan  sebagai  hewan uji untuk uji aktivitas toksisitasnya.

## b. Pembuatan Larutan Uji
Masing-masing  ekstrak  ditimbang sebanyak 0,02    gram.    Kemudian  ditempatkan  pada  labu  takar 10 mL. Kemudian masing-masing ekstrak ditambahkan  dengan  air  laut  untuk  melarutkan.  Jika tidak  larut  maka  ditambahkan  DMSO  beberapa  tetes namun  tidak  melebihi  0,5  µL.  Setelah  homogen dicukupkan    dengan    10    mL    air    laut  kemudian digunakan  sebagai  larutan  stok  dengan  konsentrasi 2000  ppm.  Dari  larutan  stok  tersebut  dibuat  variasi konsentrasi  didalam    vial  10  ppm,  100  ppm,  dan 1000 ppm.

## c. Pengujian  Toksisitas  Ekstrak
Pada   masing-masing    vial  dimasukkan  10 ekor  larva  udang  yang  berumur  48  jam  dan dicukupkan  dengan  air  laut  hingga  5  mL.  Vial-vial uji  kemudian  disimpan  di  tempat  yang  cukup mendapatkan  sinar  lampu.  Setelah 24  jam dilakukan
pengamatan terhadap  jumlah larva yang mati.   Untuk setiap sampel kontrol dilakukan pengulangan sebanyak  3  kali.  Bila  LC 50 di  bawah  1000  µg/mL dinyatakan  bersifat  toksik  dan  diatas  1000  µg/mL dinyatakan  tidak toksik.

## E. Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  yang  dilakukan  terhadap ekstrak  daun  pletekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  yaitu sebagai  berikut:
a. Uji Alkaloid
Ekstrak ditotol pada lempeng KLT, kemudian dielusi dengan eluen. Setelah itu disemprot dengan  menggunakan  pereaksi  dragendorff.  Diamati pada  cahaya  tampak.  Setelah  plat disemprot  dengan pereaksi  Dragendorff  akan  menunjukkan  bercak coklat  jingga  berlatar  belakang  kuning  (Harborne, 1996).

## b. Uji Fenol
Larutan  ekstrak  ditotol  pada  lempeng  KLT, kemudian  dielusi  dengan  eluen.  Kemudian  diamati bercak  pada  lampu  UV  dan  di  semprot  dengan pereaksi  FeCl 3 . Positif  mengandung  fenol  jika  noda berwarna  hijau,  merah,  ungu,  biru  atau  hitam  yang kuat (Harbone,  1987).

## c. Uji Flavonoid
Larutan    ekstrak    ditotolkan    pada  lempeng KLT  dan  dielusi  dengan  eluen  yang  sesuai. Kemudian  diamati  bercak  pada  lampu  UV  dan  di tetesi dengan  pereaksi AlCl 3 . Flavonoid mengandung sistem  aromatic  yang  terkonjugasi  sehingga  akan menunjukkan  pita  serapan  yang  kuat  pada  sinar  UV dan  sinar  tampak.  Pada  analisis  dengan  KLT  dan penampakkan dengan pereaksi  AlCl3, flavonoid akan tampak  berupa  bercak  berwarna  kuning dan tergantung strukturnya,
flavonoid
akan
berfluoresensi  kuning,  biru,  atau  hijau  di  bawah UV  366 nm (Harborne,  1987).

## d. Uji Saponin
Larutan  ekstrak  ditotolkan  pada  lempeng KLT  dan  dielusi  dengan    eluen  yang  sesuai. Kemudian  diamati  bercak  pada  lampu  UV  dan  di semprot  dengan  pereaksi Vanillin.  Glikosida  saponin jika dideteksi dengan  pereaksi semprot vanillin-asam sulfat atau anisaldehid-asam  sulfat akan memberikan warna  biru  sampai  biru  violet  terkadang  berupa bercak  warna  merah,  kuning,  biru  tua,  ungu,  hijau, atau  berupa  kuning  coklat  pada  sinar  tampak (Wardhani,  2012)

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji toksisitas  dengan Brine Shrimp Lethality  Test (BSLT)  ekstrak  daun  Pletekan ( Ruellia  tuberosa L.) dapat ditunjukkan  pada table berikut:
Tabel  1. Perhitungan  kadar  rata-rata  asam  galat  pada  ekstrak  metanol  rimpang  kecombrang  menggunakan  KLT- densitometri.
No Sampel Uji LC50 µg/mL Rata-rata Kematian Larva Udang 1 Ekstrak n-Heksan 1389,31 ± 0,61 µg/mL 2,8 2 Ekstrak Etil asetat 453,941 ± 0,76 µg/mL 3,4 3 Ekstrak Etanol 142,160 ± 1,30 µg/mL 4,5
Penelitian  ini  menggunakan  daun  Pletekan ( Ruellia  tuber osa  L.)  dan  metode  ekstraksi  yang digunakan  adalah  metode  maserasi  bertingkat  yang merupakan  salah  satu  metode  ekstraksi  dingin. Metode  ini  tidak  merusak  komponen  kimia  dari sampel  daun  Pletekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  karena tidak  adanya  pemanasan  dalam  proses  ekstraksi (Dirjen  POM, 1986).
Proses maserasi bertingkat dilakukan dengan menggunakan pelarut yang berbeda berdasarkan  tingkat  kepolarannya.  Dimulai  dari pelarut  yang  bersifat  non  polar  yaitu  n-heksan dimana  n-heksan  memiliki  sifat  spesifik  yang  hanya akan  menarik  senyawa  yang  bersifat  non  polar  saja kemudian  pelarut  etil  asetat  dimana  etil  asetat
memiliki  tingkat  kepolaran  yang  rendah  sehingga diharapkan   dapat   menarik   senyawa yang memiliki tingkat  kepolaran  yang  rendah,  selanjutnya  etanol yang  memiliki  tingkat  kepolaran  yang  tinggi. Diharapkan  dengan  menggunakan  pelarut  yang berbeda  berdasarkan  tingkat  kepolarannya  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  daun  Pletekan  ( Ruellia tuberosa L.)  dapat  tertarik  berdasarkan  tingkat kepolarannya  (Departemen  Kesehatan  RI, 2000).
Ekstrak  daun  Pletekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  yang  diperoleh  kemudian  diujikan  ketoksikannya dengan  menggunakan metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT).
Metode  BSLT  menggunakan  larva  udang Artemia  salina L.  merupakan  salah  satu  tahapan
dalam pengujian farmakologik eksperimental.
Metode  ini  dipilih  dengan  beberapa  alasan.  Pertama, metode ini merupakan metode penapisan  farmakologi awal  yang  mudah  dan relatif  tidak mahal  serta tidak membutuhkan  suatu  spesialisasi  tertentu  dalam pelaksanaannya.  Kedua,  metode  ini  merupakan metode  yang  telah  teruji  hasilnya  dengan  tingkat kepercayaan  95%  untuk  mengamati  toksisitas  suatu senyawa  di  dalam  ekstrak  kasar  tanaman.  Ketiga, metode  BSLT  sering  digunakan  dalam  tahap  awal isolasi  senyawa  toksik  yang  terkandung  dalam  suatu ekstrak  kasar.  Dan  keempat,  berkaitan  dengan  salah satu  kegunaan  daun  Pletekan  yang  secara  empiris banyak  digunakan  sebagai  obat  kanker  maka  metode ini  sering  dikaitkan sebagai  metode  penapisan  untuk penyarian senyawa antikanker dari tanaman (Lisdawati,  2006).
Pengujian  toksisitas  dengan  metode  BSLT menggunakan  larva  udang Artemia  salina Leach sebagai  hewan  uji.  Artemia  salina  Leach  telah digunakan  oleh  Pusat  Kanker  Purdue,  Universitas Purdue  di  Lafayette  untuk  senyawa  aktif  tanaman secara umum dan tidak spesifik untuk zat anti kanker. Namun  demikian  hubungan  yang  signifikan  dari sampel  yang  bersifat  toksik  terhadap  larva  Artemia salina  Leach  ternyata  juga  mempunyai  aktifitas sitotoksik.  Berdasarkan  hal  tersebut  maka  larva Artemia  salina Leach  dapat  digunakan  untuk  uji toksisitas (Baraja, 2008).
Dari  hasil  penelitian,  menunjukkan  bahwa nilai  LC 50 dari  ekstrak  daun  Pletekan  ( Ruellia tuberosa L.)  beruturut- turut  yaitu  nilai LC 50 ekstrak n-heksan  1389,31  µg/mL,  nilai  LC 50 ekstrak  etila setat  453,941  µg/mL  dan  nilai  LC 50 ekstrak  etanol 142,160 µg/mL.  Hanya ekstrak etil asetat dan ekstrak etanol  dari  daun  Pletekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  yang menunjukan  efek      toksik  dengan  nilai  LC 50 <1000 µg/mL.  Ini  menunjukkan  bahwa  golongan  senyawa metabolit  sekunder  dari  golongan  polar  lebih  banyak terdapat  di  dalam  ekstrak  sampel  dibandingkan golongan  senyawa  metabolit  non  polar  lainnya. Selanjutnya  dilakukan  Uji Kualitatif komponen  kmia yang  terkandung  dalam  daun  Pletekan  ( Ruellia tuberosa L.)  dengan  menggunakan  pereaksi-pereaksi kimia.  Hasil  identifikasi  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etil  asetat  dan  etanol  positif  mengandung senyawa alkaloid,  saponin,  flavonoid  dan fenol.
Beberapa  kandungan  kimia  dalam  ekstrak daun Pletekan ( Ruellia tuberosa L.) yang kemungkinan  bersifat  toksik  yaitu  alkaloid,  saponin, dan  flavonoid.  Menurut  Hopkins  dan  Hiiner  (2004) dalam  Yunita  dkk  (2009),  saponin  mengandung glikosida  dalam  tanaman  yang  sifatnya  menyerupai sabun  dan  dapat  larut  dalam  air.  Saponin  dapat menurunkan aktivitas enzim pencernaan dan penyerapan  makanan.
Mekanisme  kematian  larva Artemia  salina Leach  berhubungan  dengan  fungsi  senyawa  alkaloid dan  flavonoid  menghambat  daya  makan  larva (antifedant).  Cara  kerja  senyawa-senyawa  tersebut adalah  dengan  bertindak  sebagai  stomach  poisoning atau  racun  perut.  Oleh  karena  itu,  bila  senyawa- senyawa  ini  masuk  ke  dalam  tubuh  larva,  alat pencernaannya  akan  terganggu.  Senyawa  ini  akan menghambat reseptor perasa pada daerah mulut larva. Hal  ini  mengakibatkan  larva  gagal  mendapatkan stimulus  rasa  sehingga  tidak  mampu  mengenali makanannya  dan akibatnya  larva mati kelaparan (Rita et al .,  2008 dalam  Putri dkk 2012).
Menurut Haditimo (2010), flavonoid merupakan  senyawa pertahanan tumbuhan yang dapat bersifat  menghambat  makan  serangga  dan  juga bersifat  toksik.
Dari  data  yang  diperoleh  ekstrak  daun Pletekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  memiliki  efek  toksik yaitu  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol  dengan nilai  LC 50 <1000  µg/mL  dan  senyawa yang  bersifat toksik yaitu alkaloid, saponin, dan flavonoid.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  yang  bersifat toksik  yaitu  ekstrak etil asetat dan ekstrak etanol dari daun  Pletekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  dengan  nilai LC 50 sebesar  453,941  ±  0,76  µg/mL  dan 142,160  ± 1,30 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  A.  R.  2012.  Isolasi  dan  Elusidasi  Struktur Antioksidan dan Penghambat  Enzim xantin Oksidase  Ekstrak  Daun  Pletekan  ( Ruellia tuberosa L.).  (Tesis).  Depok:  Universitas Indonesia.
Ariens,  E.J.,  Mutschler, E.,  Simonis, A.M. 1993.Toksitologi  Umum.  Gadjah  Mada University Press: Yogyakarta.
Baraja,  M.  2008.  Uji Toksisitas  ekstrak daun  Ficus Elastica Nois Ex Blume  terhadap   Artemia salina  Leach  dan  Profil  Kromatografi Lapis Tipis. Penerbit Universitas Muhamadiyah Surakarta: Surakarta.
Chaitanya,  K.,  Babu,  R.,  Ramesh,  Ravella,  A., Vardhan,  J.,  & Atigari,  D.V.  2012. Hypolipidemic  and  Anti  Oxidant  Activity of Ruellia tuberosa  Linn. Research  Article Pharmacheutical Science,  2, 63-72.
Chen, C.H., Chan, H.C., Chu, Y.T., Ho, H.Y., Chen, P.Y.,  Lee,  T.H.,  &  Lee,  C.K.  2009.
Antioxidant  Activity of  Some  Plant Extracts Towards Xanthine Oxidase, Lipoxygenase  and  Tyrosinase.  Molecules, 14, 2947-2958.
Chothani, D.L.,  Patel,  M.B.,  &  Mishra,  S.H., 2012. HPTLC Fingerprint  Profile and Isolation of Marker  Compound  of Ruellia  tuberosa. Chromatography  Research  International, 2012, 180103.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  1986. Sediaan  Galenik.  Departemen  Kesehatan Republik  Indonesia:  Jakarta.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  2000.
Penelititan  Tanaman  Obat  Dibeberapa Perguruan  Tinggi  Indonesia  Edisi  X.
Percetakan  Negara: Jakarta.
Dewoto, H.  R.  2007. Pengembangan Obat Tradisional Indonesia Menjadi Fitofarmaka. Majalah  Kedokteran Indonesia,  57, 7, 205- 211.
Direktorat  Jendral  Pengawasan  Obat  dan  Makanan. 2000.  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak
Tumbuhan  Obat.  Departemen  Kesehatan
Republik Indonesia:  Jakarta.
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.1979. Farmakope Indonesia (Edisi III). Departemen Kesehatan
Republik  Indonesia:  Jakarta.
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.1989.  Materi  Medika  Indonesia Jilid  V.  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.  Jakarta.
Fadhilla,  R.,  2013.  Potensi  Tumbuhan  Lumut
Sebagai Sumber Baru Antibakteri.
(Online). (http://pustakaku.net/science- technology-news/potensi-tumbuhan- lumut-sebagai-sumber-baru-ntibakteri. Diakses  tanggal  20 September  2013.
Harborne,  J,  B.  1987.    Metode  Fitokimia  Edisi Kedua.  Bandung:  Penerbit  ITB.  Harborne, J.,  1996.  Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan.
Terbitan  kedua. Penerjemah:  Padmawinata,
K. dan I. Soediro.  Bandung:  Penerbit  ITB.
Hariana,  A.  2004.  Tumbuhan  Obat  dan  Khasiatnya (Vol.1). Penerbit Penebar Swadaya:
Jakarta.
Hayes,  A.W.  1983.  Principles  and  Metods  of Toxitology. Raven Press: New York 4-23
Hodgson,  E., Patricia,  E., & Levi. 2000. A Texbook Of Modern  Toxicology.
Hyeronimus,  S.  B.  2006.  Ragam  dan  Khasiat Tanaman Obat. Agro Media:  Jakarta.
Inayah,  N.,  Ningsih,  R.,  &  Adi,  T,  K.  2012.Uji Toksisitas  dan  Identifikasi  Awal  Golongan Senyawa  Aktif  Ekstrak  Etanol  dan  N- heksana Teripang Pasir (Holothuria Scabra)  Kering  Pantai  Kenjeran  Surabaya. Alchemy. 1, 1, 92-100.
Integrated  Taxonomic  Information  System. 2013. Artemia                        salina (Online).( http://www.itis.gov/servlet/Singl eRpt/SingleRpt?search_topic=TSN&searc h_value=565468 . Diakses tanggal 25 September 2013).
Integrated  Taxonomic  Information  System. 2013. Ruellia            tuberosa              L (Online).( http://www.itis.gov/servlet/Singl eRpt/SingleRpt?search_topic=TSN&searc h_value=565468 .  Diakses tanggal 24
Agustus  2013).
Lisdawati,  V.  2006. Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  dari berbagai  fraksi ekstrak  daging buah  dan  kulit  biji  Mahkota  Dewa. Departemen Farmasi.UI
Manikandan,  A.,  &  Doss,  D.V.A.  2010. Evaluation of Biochemical  Content, Nutritional  Value, Trace  Elements,  SDS-PAGE  and  HPTLC Profiling  in The Leaves of Ruellia tuberosa L.  and  Dipteracanthus  patulus  (Jacq.). Journal  of  Chemical  and  Pharmacheutical Research, 2(3), 295-303.
Mansyur.  2004.  Toxicology  Effek-Effek  yang  tidak Diinginkan.  Universitas  Sumatera  Utara: Medan.
Meyer,  B.N.  1982.  Brine  Shrimp,  A  Converient
General Bioassay or Active Plant
Constituent. (Vol.45)  Plan Medica.
Mudjiman,  A.  1998.  Udang  Renik Air Asin.  Bhrata karya Aksara:  Jakarta.
Nurjanah,  S.  2011.  Antimicrobial  Activity  Of
Ginger Extract (Zingiber officinale Roscoe) Against Several Pathogen Bacterial.
Penerbit  Institut  Pertanian  Bogor:  Jawa Barat.
Panjaitan,  B.  R.  2011.  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Kulit  Batang  Pulasari  (Alyxiae  Cortex) dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).  (Skripsi).  Yogyakarta: Universitas
Sanata  Dharma.
Purwantini,  I.,  Setyowati,  E,  P.,  &  Hertiani,  T. 2002.  Uji Toksisitas  Ekstrak  Etanol: Buah,
Biji, Daun Makutadewa (Phaleria macrocarpa  (Scheff.)  Boerl.)  Terhadap Artemia salina
Leach
dan
Profil
Kromatografi  Lapis  Tipis  Ekstrak  Aktif. Majalah  Farmasi  Indonesia,  13,  2,  101- 106.
Putri,  Mukti  K,  dkk.  2012.  Uji  Fitokimia  dan Toksisitas  Ekstrak  Kasar Gastropoda ( Telescopium telescopium )  Terhadap Larva Artemia salina . Journal of Marine Research. Volume  1,  No.  2,  Hal  58-66.  Ilmu Kelautan
Universitas
Diponegoro:
Semarang.
Rahman,  A.U. 2005. Bioassay  Techniques  for Drug Development. Harwoos
academic publishers.  San Diego:  USA.
Rajan,  M.,  Kumar,  V.K.,  Kumar,  S.,  Swathi,  K.R.,
& Haritha, S. 2012. Antidiabetic, antihyperlipidaemic  and  hepatoprotective activity  of  methanolic  extract  of Ruellia tuberosa Linn  leaves  in  normal  and alloxan  induced  diabetic  rats.  Journal  of Chemical  and  Pharmacheutical  Research, 4(6),  2860-2868.
Sari,  L.  O.  R.  K.  2011.  Pemanfaatan  Obat Tradisional  dengan  Pertimbangan  Manfaat dan
Keamanannya. Majalah
Ilmu
Kefarmasian.  Vol  III,  1,  01-07,  ISSN- 0975-7066.
Srikumar,  P.P., &  Pardhasaradhi,  P.  2013. Preliminary  Phytochemical  Investigation and  Antiulcer  Activity  of  Aerial  Parts  of Ruellia  tuberosa L.  (Acanthaceae)  in  Male Wistar  Rats.  International  Journal  of
Pharmacheutical and Biomedical Research,  4(3), 145-148.
Sukandar,  D.,  Hermanto,  S.,  &  Lestari,  E.  2007. Uji Toksisitas Ekstrak Daun  Pandan Wangi ( Pandanus  amaryllifolius Roxb.)  Dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Penerbit  UIN  Syarif  Hidayatullah: Jakarta.
Van Steenis,  C. G. G. J. 2008. Flora.  PT Percetakan Penebar Swadaya: Jakarta.
Wardhani,  L.K.,  Sulistyani,  N.  2012.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun Binahong  ( Anredera  scandes (L.)  Moq) Terhadap  Shigella  flexneri  Beserta  Profil Kromatografi  Lapis  Tipis.  Jurnal  Ilmiah Kefarmasian,  Vol 2, No  1,1-16.
Yunita, Elena, dkk.  2009.  Pengaruh  Ekstrak Daun Teklan  (Eupatorium  rioarium)  Terhadap Mortilitas  dan Perkembangan Larva Aedes aegypti:  BIOMA,  Vol  11,  No.  1,  Hal  11- 17.  ISSN:1410-