## Research Articles

## Validasi metode pengujian amonia menggunakan metode uji cepat Hanna HI 96733
Siti Nuraini * , Hanida Yanti
Jurusan Kimia FMIPA Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan, Indonesia

## Received 8 Desember 2019; Accepted 9 Januari 2020; Published 20 Januari 2020
Keyword:
Validation; Hanna HI 96733 ; Ammonia ABSTRACT: Validation of ammonia testing methods using the Hanna HI 96733 rapid test method has been performed. Hanna HI 96733 rapid test method has advantages that cost more economical because using only 2 reagents and more practical, the number of sample volume used relatively little so that the waste produced is also less, the analysis is easier and faster. The validation parameters that are performed are test linearity, Method Detection Level (MDL), precision test  and  accuracy  test,  so  that  the  method  can  be  known  is  valid  or  not. Ammonia testing with HI 96733 has linearity (r) 0.9993 for concentration range 5 – 50 ppm, MDL of 0.4752 ppm, precision of 5.2505% and accuracy of 100.48%. The rapid test method of Hanna HI 96733 can be used as a method of testing ammonia  in  LPT  FMIPA  because  it  meets  all  the  acceptance  limits.  @2020 Published  by  UP2M,  Faculty  of  Mathematics  and  Natural  Sciences,  Sriwijaya University Kata Kunci: Validasi; Hanna HI 96733; Amonia ABSTRAK: Validasi metode pengujian amonia menggunakan metode uji cepat Hanna HI 96733 telah dilakukan. Metode uji cepat Hanna HI 96733 memiliki kelebihan yaitu biaya lebih ekonomis karena hanya menggunakan 2 pereaksi dan lebih praktis, jumlah volume sampel yang digunakan relatif sedikit sehingga limbah yang dihasilkan juga sedikit, analisa lebih mudah dan cepat. Parameter validasi yang dilakukan adalah uji linearitas, uji limid deteksi metode (MDL), uji presisi dan uji akurasi, sehingga dapat diketahui metode ini adalah valid atau tidak. Pengujian amonia dengan HI 96733 memiliki linearitas (r) 0.9993 untuk rentang  konsentrasi  5  –  50  ppm,  MDL  sebesar  0.4752  ppm,  presisi  sebesar 5.2505  %  dan  akurasi  100.48  %.  Metode  uji  cepat  Hanna  HI  96733  dapat digunakan sebagai metode pengujian amonia di LPT FMIPA karena memenuhi semua batas keberterimaan. @2020 Published by UP2M, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Sriwijaya University

## Jurnal Penelitian Sains
Journal Home Page: http://ejurnal.mipa.unsri.ac.id/index.php/jps/index
DOI: https://doi.org/10.26554/jps.v22i1.554
ISSN:  2597-7059  Online,  1410-7058  print/  @2020  Published  by  UP2M,  Faculty  of  Mathematics  and  Natural Sciences, Sriwijaya University

## 1. PENDAHULUAN
Air  merupakan  sumber  kehidupan,  air hampir digunakan pada seluruh kebutuhan dasar dan  pekerjaan  manusia.  Kegiatan  rumah  tangga dan  industri  menjadi  salah  satu  penyebab menurunnya  kualitas  air,  akibat  limbah  yang dihasilkan. Amonia yang berada di perairan dapat menjadi  indikasi  terjadinya  kontaminasi  yang berasal  dari  material  organik.  Bila  air  tersebut dikonsumsi  oleh  masyarakat  untuk  mandi,  cuci dan  kakus  dapat  menimbulkan  dampak  negatif pada kesehatan masyarakat (1).
Gangguan,  kerusakan  dan  bahaya  bagì semua  mahluk  hìdup  yang  bergantung  pada sumber  daya  air  yang  tercemar.  Amonia  dalam perairan  pada    konsentrasi  1-3  mg/L  dapat meracuni  ikan  dan  makhluk  air  lainnya, konsentrasi 400-700 mg/L akan memberikan efek jangka  pendek  atau  akut  yaitu  iritasi  terhadap saluran  pernafasan,  hidung,  tenggorokan  dan mata  yang  terjadi  pada,  sedangkan  pada  5000 mg/L dapat menimbulkan kematian. (2)
Laboratorium  Pengujian  Terpadu  Fakultas MIPA  Universitas  Sriwijaya  (LPT  FMIPA)  adalah salah  satu  laboratorium  di  Universitas  Sriwijaya yang  telah  terakreditasi  oleh  Komisi  Akreditasi Nasional  (KAN)  sesuai  dengan  ISO/IEC  17025 2017.  Amonia  merupakan  salah  satu  parameter pengujian  yang  dilakukan  di  LPT  FMIPA.  Salah satu  metode  yang  sering  digunakan  dalam pengujian amonia saat ini adalah Metode Standar Fenat  berdasarkan  Standar  Nasional  Indonesia (SNI)  06-6989.30-2005  dengan  menggunakan spektrofotometer Ultraviolet-Visible (UV-VIS) (3). Kelebihan  metode  ini  adalah  mempunyai sensitifitas yang tinggi dan dapat digunakan juga untuk  analisis  amonia  dalam  matriks  air  laut. Kelemahannya adalah pereaksi pewarna kompleks  kurang  stabil  sehingga  harus  dibuat baru setiap analisis, ragam jenis bahan kimia yang digunakan  sebagai  pereaksi  banyak  dan  mahal, volume  sampel  banyak,  sehingga  menghasilkan limbah yang cukup banyak (2).
Seiring berkembangnya
kemajuan teknologi, telah banyak dilakukan penelitian untuk penentuan senyawa tertentu dengan menggunakan  metode  uji  cepat.  Penentuan amonia  dalam  sampel  cairan  dapat  ditentukan dengan uji ini, yaitu dengan ammonia high range test  kit  method menggunakan  metode  uji  cepat
Hanna HI 96733. Metode ini diadopsi dari ASTM D1426-92 Manual  Water  and  Environmental Technology dengan  Metode  Nessler.  (4) Kelebihan  dari  metode  ini  adalah  biaya  lebih ekonomis karena hanya menggunakan 2 pereaksi dan  lebih  praktis,  jumlah  volume  sampel  yang digunakan  relatif  sedikit,  sehingga  limbah  yang dihasilkan  juga  sedikit,  analisa  lebih  mudah  dan cepat.
SNI  ISO/IEC  17025:2017  butir  7.2.2.1 mempersyaratkan  bahwa  laboratorium  harus memvalidasi  metode  tidak  baku,  metode  yang dikembangkan  laboratorium  dan  metode  baku yang  dimodifikasi  untuk  mengkorfirmasi  bahwa metode  itu  sesuai  untuk  penggunaan  yang dimaksud.  (5)  Dalam  rangka  memenuhi persyaratan  tersebut  pengujian  amonia  dengan metode uji cepat Hanna HI 96733 harus divalidasi karena  merupakan  metode  standar  yang dimodifikasi.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1 Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan Hanna HI 96733, labu  volumetrik  dan  pipet  volumetrik  kelas  A, buatan  pyrex,  Iwaki.  Bahan  yang  digunakan aquabidest steril, pereaksi A HI 93733A-0 (Reagen Nessler),  pereaksi  B  HI  93733B-0  (Reagen amonia)  dan  larutan  standar  amonia  1000  mg/L yang tertelusur SRM (Merck).

## 2.2 Prosedur Penelitian 2.2.1 Pengujian Metode Uji Cepat HI 96733
Pengujian  menggunakan  HI  96733  sesuai dengan instruksi pada manual alat yaitu dipipet 1 ml  sampel  kemudian  masukkan  kedalam  kuvet, ditambahkan  9  ml  reagen  B  HI  93733B-0, diletakkan kuvet kedalam tempat kuvet kemudian tekan  “ZERO/CFM,  setelah  beberapa  saat  layar akan  menunjukkan  “-0,0-“.ditambahkan  4  tetes Reagen Nessler HI 93733A-0, kemudian dikocok dan dimasukkan kembali kedalam tempat kuvet, kemudian ditekan dan ditahan “READ” selama 3 detik.  Setelah  3  –  30  detik  hasil  amonia  akan tampak pada layar.

## 2.2.2 Validasi
Metode validasi yang digunakan mengacu pada Eurachem  Guide (Eurachem)    dengan
parameter  validasi  yang  dilakukan  meliputi  uji linearitas, MDL, presisi dan akurasi

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Parameter  validasi  yang  pertama  adalah linearitas. Pada uji linearitas di gunakan 2 rentang
konsentrasi  yaitu  0.1  –  5  ppm  dan  5  –  50  ppm. Hasil  uji  linearitas  tercantum  pada  Tabel  1, berdasarkan  data  dari  kedua  rentang  tersebut, harga r yang dihasilkan pada rentang 5 – 50 ppm yang memenuhi persyaratan.

## Tabel 1. Data Linearitas
Rentang Konsentrasi (ppm) Persamaan Regresi r Evaluasi 0.1 – 5 y = 1.0013x – 0.1461 0.9895 Tidak memenuhi 5 – 50 y = 0.9935x – 0.4073 0.9993 memenuhi
Parameter  validasi  yang  kedua  yaitu  uji MDL,  estimasi  MDL  ditentukan  berdasarkan persyaratan  pelanggan  atau  baku  mutu lingkungan  atau  nilai  ambang  batas  yang  di cantumkan dalam peraturan perundang-
undangan.  Kadar  spike  yang  di  tambahkan  di kalikan  faktor  1  -  5.  (6)    Spike  sampel  yang  di tambahkan  pada  uji  MDL  ini  adalah  1.5  ppm. Hasil uji MDL tercantum pada Tabel 2 berikut.
Tabel 2. Hasil Uji MDL Amonia
Kriteria Hasil Syarat Keberterimaan Keterangan Rerata kadar spike 1.5571 ppm %Relative Standar Deviasi (RSD) 9.7092 % 10.08 RSD = SD rerata × 100% Rasio Signal to Noise (S/N) 9.72 2.5 – 10 S/N = rerata SD MDL 0.4752 ppm   MDL < Kadar spike  MDL = 3.143 x SD MDL < baku mutu lingkungan 0.4752 ppm MDL < 0.5 ppm
Berdasarkan  data  tersebut,  MDL  yang diperoleh  untuk  penentuan  amonia  metode  uji cepat HI 96733 adalah 0.4752 ppm, nilai ini masih dapat  diterima  untuk  pengujian  parameter kualitas lingkungan, akan tetapi untuk pengujian dibawah nilai ini perlu dicari lagi metode lain yang mempunyai nilai MDL lebih rendah dari metode ini.
Parameter  validasi  selanjutnya  adalah  uji presisi.  Dalam  uji  presisi  diukur  ketelitian  dan keterulangan  metode  pengujian.  Pada  uji  presisi amonia  ini  di  dilakukan  dengan  pengukuran larutan standar amonia 2.5 ppm sebanyak 7 kali pengulangan. Hasil uji presisi pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil uji presisi amonia
Kriteria Hasil Keterangan Rerata 2.6286 ppm % RSD Hasil 5.2505 %
% RSD perkiraan (CV HORWITZ ) 13.9388 % CV HORWITZ = 2 1-0.5logC
Nilai  presisi  tersebut  dapat  diterima  jika memenuhi  Horwittz  Rasio  (HorRat)  (7)  dengan persamaan sebagai berikut :
HorRat = RSD 𝐻𝑎𝑠𝑖𝑙 RSD Perkiraan ………………………(1)
Presisi dengan repeatabilitas dapat diterima jika nilai HorRat antara 0.3 – 1.3. Pada uji presisi amonia ini diperoleh nilai HorRat sebesar 0.3767, ini  berarti  uji  presisi  metode  amonia  ini memenuhi.
Uji  akurasi  merupakan  perbandingan antara  nilai  rerata  hasil  pengulangan  pengujian dengan nilai benar dari bahan acuan bersertifikat yang  digunakan  (8),  nilai  yang  tercantum  dalam Certificated  of  Analysis (CoA)  larutan  standar ammonium  yang  tertelusur  ke  SRM  adalah  998 ppm  ± 0,4% . Berdasarkan pengolahan data 7 kali pengujian SRM amonia 15 ppm, didapat hasil uji akurasi pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Uji Akurasi Amonia
Kriteria Hasil Syarat Keberterimaan Keterangan % R 100.48  % 80 – 115 % % R = nilai terukur nilai target 𝑥 100% Rerata 15.1 ppm SD 0.4499 % Trueness 100.68 % % Trueness = rerata nilai CRM x 100%
Nilai trueness tersebut dapat di terima jika memenuhi  batas  keberterimaa  uji-t  sebagai berikut :
t hitung = | C CRM -C Hasil | √ U 2 𝐶𝑅𝑀 + SD2 n …………………… (2)
dimana: t hitung = t berdasarkan perhitungan C CRM = kadar certified reference material (CRM / SRM) C Hasil = kadar rerata pengujian U CRM = ketidakpastian CRM n = jumlah pengulangan pengujian
Dengan  menggunakan  informasi  pada tabel  4  dan  informasi  pada  CoA  SRM  amonia maka  didapatkan  nilai  t hitung sebesar  1.72,  hasil t hitung tersebut dibandingkan dengan t tabel pada two side test dengan tingkat kepercayaan 95% maka di peroleh t tabel sebesar 2.365. Nilai t hitung < t tabel maka nilai trueness metode uji amonia dengan HI 96733 ini di terima.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, disimpulkan sebagai berikut:
a. Validasi metode pengujian amonia menggunakan  metode  uji  cepat  Hanna  HI 96733  memiliki  linearitas  (r)  sebesar  0.9895 untuk  rentang  konsentrasi  0.1  –  5  ppm  dan 0.9993 untuk rentang konsentrasi 5 – 50 ppm, MDL  sebesar  0.4752  ppm,  presisi  sebesar 5.2505 %, akurasi 100.48 %.
b. Metode  uji  cepat  Hanna  HI  96733  dapat digunakan sebagai metode pengujian amonia di LPT FMIPA karena memenuhi semua batas keberterimaan.

## REFERENSI
[1] Efektifitas Teknik Biofiltrasi Dengan Media Bio- Ball  Terhadap  Penurunan  Kadar  Nitrogen Total.  Dewi,  Yusriani  Sapta  and  masithoh, Mega.  1,  Jakarta  :  Jurnal  Ilmiah  Fakultas Teknik Limit's, 2013, Vol. 9.
[2] Pengkajian Metode Analisis Amonia Dalam Air Dengan Metode Salicylate Test Kit. Apriyanti, Dyah, Santi, Vera Indria and Siregar, Yusraini Dian Inayati. 2, s.l. : Ecolab, 2016, Vol. 7.
[3] Nasional, Badan Standarisasi. SNI 06-6989.30- 2005 Cara Uji Amonia dengan
Spektrofotometer  Secara  Fenat.  s.l.  :  Badan Standasisasi Nasional, 2005.
[4] Inc, Hanna Instruments. HI 96733C Ammonia High  Range  ISM.  Instruction  Manual.  USA  : s.n., 2012.
[5] 17025, ISO/IEC. General Requirements for the Competence  of  Testing  and  Calibration Laboratories. 2017.
[6] Anwar Hadi, Teknologi dan Produksi Bersih - Kementerian  Lingkungan  Hidup.  Pedoman Verifikasi  Metode  Pengujian  Parameter Kualitas  Lingkungan.  s.l.  :  Kementrian Lingkungan Hidup, 2010.
[7]  Horwittz  Equation  As  Quality  Benchmark  In ISO/IEC  17025  Testing  Laboratory.  Carlos,
Rivera.  Col.  Las  granjas.  chihuahua  Mexico  : s.n.
[8] Comparison of a Measurement Result With the Certified Value. Linsinger, Thomas. Belgium : ERM European Reference Material European Communities, 2005.
[9] Yildirim,  Aufer.  Certificated  of  Analysis Ammonium  Standard  Solution  Treaceable  to SRM  from  NIST.  s.l.  :  EMD  Milipore Corporation, 2017.
[10] The Fitness for Purpose of Analytical Methode -  A  Laboratory  Guide  to  Methode  Validation and  Related  Topics.  Magnusson,  Bertil  and Guide,  Ulf  Ornemark  (eds)  Eurachem.  s.l.  : ISBN 978-91-87461-59-0, 2014.