Efektifitas dan Kandungan Fraksi Aktif Metanol Daun Sirih Hijau ( PIPER Betle L) sebagai Antibakteri Salmonellatyphi
Rosita Mangesa 1* , Febiayu Aloatuan 2
1 Pendidikan Biologi, Universitas Iqra Buru, Namlea, Indonesia
2 Pendidikan Biologi, STKIP Gotong Royong Masohi, Indonesia
* Email: rositamangesa5@gmail.com
Received: April 17 th , 2019. Accepted : June 29 th , 2019. Published : June 30 th , 2019

## Abstract
The  content  of  secondary  metabolic  compounds  in  plants  is  often  used  as  antibiotics  and  to  obtain secondary  metabolic  compounds  extraction  and  fractionation  processes  are  carried  out.  This  study aims  to  determine,  (1)  the  content  of  flavonoids  and  flavonoid  levels  in  the  fraction  of  samples  of green betel leaves; (2) the most active fraction in inhibiting the activity of Salmonella typhi bacteria; (3)  types  of  compounds  found  in  the  active  fraction  and  molecular  structure.  This  research  is  an experimental research where the results of the study will be described as a whole. The results of the analysis  showed  that  of  the  four  fractions  obtained  from  green  betel  leaf  samples,  three  of  them contained flavonoid compounds with the highest flavonoid content in the M1 fraction which was equal to 51.4108% b / b. Antibacterial test results showed that the best fraction of green betel leaf samples was the methanol fraction at a concentration of 62.2 µg / ml having a inhibition zone of 4.3 mm with the highest molecular weight found on the Galic acid compound and its molecular formula C7H6O5.
Keywords : Active Fraction; Antibacterial; Green Betel Leaves; Salmonella typhy

## Abstrak
Kandungan senyawa metabolisme sekunder pada tanaman sering digunakan sebagai bahan antibiotik dan  untuk  mendapatkan  senyawa  metabolisme  sekunder  dilakukan  proses  ekstraksi  maupun fraksinansi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui,  (1)  kandungan  flavonoid  beserta  kadar flavonoid  pada  fraksi  dari  sampel  daun  sirih  hijau;  (2)  fraksi  yang  paling  aktif  dalam  menghambat aktifitas  bakteri Salmonella  typhi ;  (3)  jenis  senyawa  yang  terdapat  pada  fraksi  aktif  dan  struktur molekulnya.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen  dimana  hasil  penelitian  akan dideskripsikan  secara  keseluruhan.  Hasil  analisis  menunjukan  dari  empat  fraksi  yang  diperoleh  dari sampel  daun  sirih  hijau  tiga  diantaranya  mengandung  senyawa  flavonoid  dengan  kadar  flavonoid tertinggi terdapat pada fraksi M 1 yaitu sebesar 51,4108 % b/b. Hasil pengujian antibakteri menunjukan bahwa fraksi terbaik dari sampel daun sirih hijau adalah fraksi  metanol pada konsentrasi 62,2 µg/ml memiliki  zona  hambat  sebesar  4,3  mm  dengan  berat  molekul  tertinggi  terdapat  pada  senyawa  Galic acid dan rumus molekulnya C 7 H 6 O 5.
Kata Kunci: Fraksi Aktif; Antibakteri; Daun Sirih Hijau ; Salmonella typhi

## PENDAHULUAN
Saat  ini  telah  banyak  jenis  mikroorganisme  yang  dapat  menyebabkan  penyakit maupun infeksi, salah satunya yaitu bakteri Salmonella typhi yang merupakan bakteri jenis gram  negative  dengan  ukuran  2-4  mikrometer  X  0,5-0,8  mikrometer,  dan  berbentuk menyerupai  batang  serta  memiliki  flagel  peritrik  sebagai  alat  gerak.  Bakteri Salmonella typhi menyebabkan terjadinya penyebab demam tifoid (Moch, 2014; Nirwana, 2013; Nita, 2013).
Penanganan  dari  penyakit  demam  tifoid  ini  yaitu  dengan  pemberian  antibiotik. Penggunaan  antibiotik  secara  tidak  teratur  dan  tidak  tepat  dapat  menyebabkan  bakteri
menjadi  resisten  yang  disebabkan  oleh  adanya  perubahan  genetik,  salah  satunya  yaitu bakteri Salmonella  typhi yang  mana  pada  1989  terjadi  resistensi  terhadap  tiga  antibiotic diantaranya  antibiotic  kloramfenikol,  kontrimoksasol,  dan  amoksilin  yang  mana  hal  ini ditemukan  secara  luas  pada  daerah  India,  Cina,  Pakistan  dan  bahkan  menyebar  hingga wilayah Afrika Selatan dan Timur Tengah (Nirwana, 2013).
Pada  beberapa  tumbuhan  terdapat  senyawa  bioaktif  yang  dapat  dimanfaatkan sebagai  antibiotik,  dengan  adanya  kasus  resistensi  bakteri  memberikan  peluang  untuk mengoptimalkan senyawa bioaktif dari tumbuhan  (A,  Fatimawali, &  I, 2012;  Ayu, 2013). Saat ini daun sirih hijau telah banyak dikenal dan digunakan sebagai obat antibakteri, serta merupakan  tumbuhan  dari  jenis  piperaceae.  Umumnya  daun  sirih  memiliki  kandungan kavikol , karvakol , kavibetol , kariovilem ,  1-4,2% hidroksikavikol ,  terpene,  asam askorbat , fenil propane , enzim diastase 0,8-1,8%, serkuiterpena , enzim katalase , metal eugenol , vitamin  A,  B,  C,  asam-asam  lemak  gula,  dan  pati.  Berdasarkan  hasil  penelitian  82,8% kandungan minyak atsiri terdiri dari senyawa fenol dan 18,2% adalah kandungan senyawa non fenol ,  yang  mana  senyawa  antibaktgeri  yang  dihasilkan  dapat  bersifat  gemnisidal, fungisidal  dan  bakterisidal.  Untuk  memperoleh  senyawa  bioaktif  atau  senyawa metabolisme  sekunder  dapat  dilakukan  dengan  cara  ekstraksi  dan  fraksinasi,  namun senyawa  bioaktif  atau  metabolisme  sekunder  yang  dihasilkan  bergantung  dari  peoses ekstraksi maupun fraksinasi.
Berdasarkan  beberapa  penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  banyak penelitian  yang  membahas  mengenai  kandungan  fraksi  aktif  methanol  daun  sirih  hijau (Hafida,  Ekiyantini,  &  Sri,  2012;  Haryun,  WIdodo,  &  Sudjarwo,  2017;  Moch,  2014; Syahrinastiti,  A,  Aziz,  &  Lili,  2015;  Ulviani,  Yusriadi,  &  Khaerati,  2016;  Widjaya, Retnani,  &  Hermana,  2018;  Wilis  &  Andriani,  2017)  Serta  penelitian  mengenai antibakteri Salmonella  typhi (Moch,  2014;  Nirwana,  2013;  Nita,  2013) . Namun,  belum adanya  penelitian  yang  mengembangkan  lembar  aktivis  matematika  berorientasi pendekatan saintifik untuk siswa SD
Berdasarkan  kajian  terdahulu  keterbaruan  penelitian  ini  terletak  pada  efektivitas dan kandungan fraksi aktif methanol daun sirih hijau sebagai antibakteri Salmonella typhi . Maka,  tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui  (1)  kandungan flavonoid beserta  kadar flavonoid pada  fraksi  dari  sampel  daun  sirih  hijau;  (2)  fraksi  yang  paling  aktif  dalam menghambat aktifitas bakteri Salmonella typhi ; (3) jenis senyawa yang terdapat pada fraksi aktif dan struktur molekulnya

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen  laboraturium,  dengan  sampel  daun sirih hijau dengan variabel fraksi dan efektifitas daya hambat.
Alat  yang  digunakan adalah Blender , Erlenmeyer ,  Timbangan,  Kantong  Plastik, Labu Ukur, Gelas Beker, Spatula, Gelas Ukur, Rotary Evaporator, Neraca Analitik, Corong Pisah,  Pipet,  Lemari  Es, Mikropipet ,  Batang  Pengaduk,  Tabung  Reaksi,  Hot  Plat, Spektrofotometer , Incubator , Autoclave ,  Mistar,  Petri,  LCMS.  Bahan  yang  digunakan: Simplisia  Daun  Sirih  Hijau,  Pelarut    Diantaranya  Metanol,  Etil  Asetat,  N-Heksan,  Air, Alcl 3 5%, Naoh 40%, Aluminium Klorida 10%, Aquades , Media SS, Kalium Asetat .
Ekstraksi  dan  Fraksinasi: Simplisia  dari  daun  sirih  hijausebanyak  450  gr dimaserasi  dengan  metanol  sebanyak  1000  ml,  kemudian  disaring  dan  dipekatkan  dengan rotary  evaporator yang  selanjutnya  dimaserasi  kembali  sebanyak  tiga  kali.  Selanjutnya hasil ekstraksi yang diperoleh dipartisi lagi secara bertingkat dengan menggunakan pelarut n-heksan  dengan  perbandingan  1:1  yang  kemudian  dimasukkan  kedalam  corong  pisah. Hasil  fraksi  yang  diperoleh  akan  dipekatkan  dan  sisa  dari  mmetanol  +  air  dipartisi  lagi dengan  larutan  etil  asetat,  kemudian  hasil  sisa  dari  fraksi  dipartisi  lagi  dengan  larutan kloroform . Fraksi-fraksi yang telah didapatkan selanjutnya akan dipekatkan.
Skrining  Senyawa  Flavonoid  dan  Pengujian  Kadar  Flavonoid: 1  ml  sampel ditambahkan 1 ml etanol 95%, 0,5 ml asam kloroda, 100 mg serbuk Mg kemudian diamati perubahan warna  yang terjadi. Apabila warna  yang terlihat adalah warna jingga, maka hal ini  menunjukan  senyawa  flavonoid  golongan khalkon , auron atau flavon .  Sampel  yang mengandung senyawa flavonoid akan diuji kadarnya dengan cara dibuatkan kurva kalibrasi dengan quersitin sebagai pembanding,  yang kemudian sampel akan diuji kadarnya dengan spktrofotometer UV-VIS pada panjang  gelombang maksimum  yaitu 438  nm,  dan dihitung kadar flaonoidnya dengan rumus sebagai berikut:
FT = 𝐶 𝑥 𝑉 𝑥 𝐹 𝑥 10 −6
𝑚 x 100%
Keterangan:
FT   = jumlah flavonoid C     = kesetaraan quersetin V     = volume total ekstrak metanol F     = factor pengenceran
m = berat sampel
Pengujian  antibakteri: Tiap  sampel  yang  mengandung  senyawa  flavonoid diencerkan  dengan  twin  20  sehingga  menjadi  beberapa  kosentrasi  diantaranya  248,8  µg, 124,4  µg,  dan  62,6  µg.  kemudian  bakteri Salmonella  typhi diswab  pada  bagian  atas permukaan  media  SS  yang  telah  dibuatkan  sumuran  yang  kemudian  diisi  dengan  fraksi yang telah diencerkan selanjutnya dinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37 ºC dan diamati zona  daya  hambatnya.Fraksi  yang  memiliki  daya  hambat  terbesar  yang  kemudian  diuji kandungannya menggunakan alat LC-MS.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## Hasil Analisis Skrining Senyawa Flavonoid Dan Kadar  Flavonoid.
Berdasarkan  fraksi  yang  telah  dikumpulkan  diperoleh  empat  jenis  fraksi  yang keseluruhan  fraksi  tersebut  mengandung  senyawa flavonoid .  Berikut  merupakan  Tabel  1 hasil skrining senyawa flavonoid .
Tabel 1. Analisis Skrining Senyawa Flavonoid
Jenis Sampel Jenis fraksi Warna Awal Warna Akhir Hasil Daun sirih hijau Fraksi M 1 Hijau Kuning + fraksi M 2 Hijau Kuning + Frakis M 3 Hijau Kuning + Fraksi M 4 Coklat muda Kuning +
0 10 20 30 40 50 60 M1 M2 M3 M4 K a da r F la v o no id Jenis Fraksi
Berdasarkan  fraksi  yang  diuji  mengandung  senyawa flavonoid selanjutnya  diukur kadar  senyawa  flavonoidnya  dengan  menggunakan    alat  spektrofotometer.    Berikut merupakan gambar kadar flavonoid dari beberapa fraksi.
Gambar 1. Kadar Flavonoid
Berdasarkan Gambar 1. kadar flavonoid terlihat bahwa kadar sampel M 1 lebih tinggi dibandingkan  fraksi  yang  lain  dengan  kadar  flavonoid  sebesar  51,4108  %  b/b  dan  kadar flavonoid terendah pada fraksi M 4 yaitu sebesar 41,9535 % b/b.

## Efektifitas Antibakteri
Dari  hasil  analisis  efektifitas  antibakteri  unuk  perlakuan  M 1 ,  M 2 ,  dan  M 3 terlihat bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka  maka  daya  hambatnya  akan  semakin  besar.  Pada fraksi M 1 dengan konsentrasi tinggi 248,8 µg memiliki daya hambat sebesar 6.6 mm, fraksi M 2 dengan konsentrasi tinggi 248,8 µg memiliki daya hambat sebesar 3,16 mm, fraksi M 3 dengan  konsentrasi  tinggi  248,8  µg  memiliki  daya  hambat  sebesar  6,5  mm,  namun  hal tersebut tidak berlaku pada fraksi sirih hijau M 4 dimana dengan konsentrasi tinggi 248,8 µg memiliki  daya  hambat  sebesar  3,5  mm  hasilnya  justru  lebih  rendah  bila  dibandingkan dengan  konsentrasi  62,2  µg.  Berikut  merupakan  diagram  aktivitas  antibakteri  dari  fraksi daun sirih hjau terhadap bakteri Salmonella thypi.
0 5 10 15 20 25 30 kontrol - kontrol + M1 M2 M3
M4
Da y a H a m ba t (m m ) Jenis Fraksi 248,8 µg/ml 124,4 µg/ml 62,2 µg/ml
Berdasarkan tingkat kekuatan daya hambat maka konsentrasi rendah yang memiliki daya  hambat  terbesar  merupakan  fraksi  terbaik,  dan  hal  tersebut  terdapat  pada  fraksi  M 4 pada konsentrasi yang kecil (62,2 µg/ml) memiliki daya hambat yang besar  yaitu 4,33 mm.

## Jenis Senyawa Dan Struktur Dari Fraksi Aktif
Fraksi  M4  merupakan  fraksi  yang  dianggap  terbaik  sehingga  dilanjutkan  pada pengujian jenis  senyawa serta struktur kimianya.Dari hasil chromatogram terlihat  61 jenis senyawa  yang  terdeteksi  pada  fraksi  M4  dengan  komposisi  dan  berat  molekul  yang berbeda-beda.Berikut  merupakan  gambaran  grafik  chromatogram  dan  molekul  dari  tiap senyawa yang terdapat pada fraksi M 4 .
Gambar 3 . Grafik Chromatogram Fraksi Metanol
Komposisi  terbanyak  terlilhat  pada  peak  nomor  22  yaitu  senyawa  Gallic  acid dengan bentuk struktur molekul sebagai berikut.
Gallic  acid  atau  asam  galat  merupakan  turunan  dari  asam  hidroksibenzoat  dan termasuk  dalam  golongan  asam  fenol  sederhana.  Senyawa  fenol  sendiri  merupakan senyawa yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri.
Berdasarkan  hasil  analisis  kadar  flavonoid  terlihat  bahwa  kandungan  tertinggi senyawa flavonoid yaitu terletak pada fraksi M 1 sebesar 75,7305 % b/b dan kadar flavonoid terendah  pada  fraksi  M 4 .  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  proses  fraksinasi  untuk  senyawa flavonoid lebih tertarik keluar pada pelarut n-heksan.
Namun  efektifitas  antibateri  yang  paling  baik  terlihat  pada  fraksi  M 4 dimana  pada konsentrasi yang sangat kecil fraksi M 4 memiliki daya hambat yang lebih besar. Perbedaan besarnya  zona  hambat  antar  fraksi  disebabkan  karena  adanya  kandungan  senyawa  yang terdapat  pada  masing-masing  fraksi  berbeda-beda  dimana  komponen  senyawa  yang terdapat  pada  tiap  fraksi  berdasarkan  jenis  pelarutnya,  yang  mampu  menarik  senyawa berdasarkan  tingkat  kepolarannya.  Hal  ini  sejalan  degan  pendapat  Nilamsari  yang menyatakan  bahwa  selain  komponen  senyawa  aktif  ada  bebrapa  hal  yang  mempengaruhi besar  kecilnya  zona  hambat  yang  merupakan  variable  antibakteri  antara  lain  konsentrasi bahan,  jumlah  mikroba,  suhu,  waktu,  jenis  mikroba,  pH,  dan  bahan  organik  pelarut(Tri, Tantin, & Aju, 2012).
Jika  dilihat  dari  kadar  flavonoid  terbanyak  terdapat  pada  fraksiM 1 namun  hal tersebut tidak menjamin bahwa fraksi M 1 lebih efektif karena pada konsentrasi terkecil zona hambat  pada  fraksi  M 1 lebih  kecil  dibandingkan  fraksi  M 4 .  Hal  ini  disebabkan  oleh banyaknya senyawa antimikroba pada fraksi metanol selain senyawa flavonoid  yang lebih kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella  thypi. Banyaknya  senyawa antimikroba pada fraksi  metanol  karena metanol  merupakan plarut  yang dapat  melarutkan hampir semua senyawa metabolisme sekunder.
Keseluruhan fraksi dapat menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella thypi karena salah  satu  kandungan  dari  fraksi-fraksi  tersebut  adalah  senyawa  flavonoid.  Senyawa flavonoid  sendiri  merupakan  senyawa  yang  memiliki  peran  sebagai  antibakteri,  dan memiliki  mekanisme  kerja  antibakteri  yaitu  mengganggu  permeabilitas  membran  sel bakteri,  dimana  sebagai  pelindung  membrane  sel  dan  sitoplasma  tersusun  atas  70% fosfolipid  yang merupakan struktur dasar dari membrane protein  sebanyak 30%, sehingga terganggunya  fosfolipid  dari  membrane  sel  menyebabkan  permeabilitas  membrane  yang diikut  kerusakan  membrane  dan  keluarnya  metabolit  seluler  seperti  protein,  asam  nukleat dan  ion-ion  logam  Ca 2+ dan  K + ,  selain  itu  senyawa  aktif  terhadap  membrane  sel  dapat menyebabkanterjadinya  denaturasi  protein  dan  lisisnya  sel  bakteri.  Hal  ini  sejalan  dengan pendapat  Roslizawaty  yang  menyatakan  bahwa  kemampuan  flavonoid  sebagai  antibakteri diduga  Karena  senyawa  flavonoid  membentuk  kompleks  dengan  protein  ekstraseluler, mengaktivasi  enzim,  dan  merusak    membrane  sel.  Flavonoid  sendiri    berfugsi  sebagai antibakteri dengan cara membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler yang menggaggu  integritas  membrane  sel  bakteri(Roslizawaty,  Ramadani,  Fakhrurrazi,  & Herrialfian, 2013).
Berbeda  dari  fraksi  lainnya  yang  semakin  tinggi  konsentrasi  semakin  besar  zona hambatnya,  fraksi  M 4 dengan  konsentrasi  tinggi  justru  memiliki  zona  hambat  lebih  besar hal  ini  kemungkinan  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  antara  lain  terjadinya  fluktasi  yang disebabkan oleh bahan aktif yang memiliki mekanisme berbeda, perbedaan kecepatan difusi senyawa antibakteri pada media agar, dan jumlah mikroba,  yang mana pada penelitian ini menggunakan  metode  swab  sehingga  jumlah  bakteri  pada  setiap  cawan  petri  tidaklah seragam.
Pada  penelitian  ini  menggunakan  metode  swab  (ulas)  karena  saat  melakukan penelitian  pendahuluan  dengan  menggunakan  metode  pengenceran  bakteri  yang  akan dicampurkan  pada  media  SS  layer  bagian  atas  untuk  pengujian  antibakteri,  bakteri  yang tumbuh  tidak  memiiki  ciri-ciri  seperti  bakteri  yang  diinginkan  sehigga  penelitian selanjutnya  dilakukan  dengan  metode  swab  dimana  bakteri  yang  telah  diremajakan langsung  dipindahkan  kemedia  untuk  pengujian  antibakteri  dengan  cara  mengusapkan cotton  bud  dengan  garis  lurus  dan  rapat  pada  seluruh  permukaan  media  yang  akan digunakan.  Hal  ini  sejalan  dengan  pendapat  Nilamsari  yang  menyatakan  bahwa  selain komponen senyawa aktif ada beberapa hal yang mempegaruhi besar kecilnya daya hambat yang merupakan variable antibakteri antara lain  konsentrasi bahan, jumlah mikroba, suhu, waktu, jenis mikroba, pH, dan bahan organic pelarut (Tri et al., 2012).
Fraksi teraktif dalam menghambat bakteri Salmonella thypi akan dilanjutkan dengan pengujian  chromatogram  untuk  menentukan  jenis  senyawa.  Hasil  chromatogram  LC-MS terdapat 61 jenis senyawa dari fraksi M 4 sampel daun sirih hjau dimana komposisi terbesar yang  ditemukan  dari  sampel  daun  sirih  hijau  ditunjukkan  oleh  peak  number  22  dengan nama  senyawa  Gallic  acid  dengan  berat  molekul  170,12  pada  Rt  4,277  serta  memiliki formula  senyawa  C 7 H 8 o 5 .  Gallic  acid  atau  asam  galat  merupakan  turunan  dari  asam hidroksibenzoat dan termasuk dalam golongan asam fenol sederhana.Senyawa fenol sendiri merupakan  senyawa  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri.  Hal  ini  sejalan  dengan pendapat  Syahriastiti  dan  Mariyatin  yang  menyatakan  bahwa  Fenol  memiliki  peran menghambat  aktifitas  bakteri  dengan  cara  menghambat  pembentukan  dinding  sel  dengan cara  melisiskan  dinding  sel  yang  sudah  terbentuk,  hal  ini  terjadi  apabila  adanya  interaksi antar  mikroorganisme  menyebabkan  perubahan  keseimbangan  muatan  dalam  molekul protein, sehingga terjadinya koagulasi dan berdampak pada aktivitas fisiologi bakteri tidak dapat  berfungsi  dengan  baik.  Dengan  kata  lain  apabila  terjadi  perubahan  struktur  protein pada  dinding  sel  bakteri  akan  meningkatkan  permeabilitas  sel  sehingga  pertumbuhan  sel terhambat dan menjadi rusak(Hafida et al., 2012; Syahrinastiti et al., 2015).
Selain senyawa gallic acid yang ada pada fraksi M 4 terdapat pula senyawa flavonoid jenis  luteolin,  catechin,  quercetin,  rhamnetin,  myricetin,  luteolin  7  glucoside,  quercitrin dan rutin . Kedelapan senyawa  flavonoid  ini juga memiliki peran sebagai  antibakteri  yang saling bersinergi dengan senyawa lain yang memiliki peran antibakteri sehingga fraksi M 4 memiliki efektifitas antibakteri lebih besar dibandingkan dengan fraksi lainnya.

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil dan kesimpulan, dari sampel daun sirih hijau keempat fraksi yang diperoleh  yaitu  fraksi  N-Heksan,  fraksi  etil  asetat,  fraksi  kloroform,  fraksi  methanol memiliki kandungan senyawa flavonoid dengan kadar masing-masing yaitu 51,4108 % b/b., 47,6889 % b/b., 42,9645 % b/b., dan 41,9535 % b/b. Fraksi teraktif dari sampel daun sirih hijau  yaitu  fraksi  metanol  dengan  konsentrasi  terkecil  yakni  62,2  µg/ml  memiliki  zona hambat sebesar 4,3 mm.
Berdasarkan hasil penelitian, saran yang perlu di berikan untuk peneliti selanjutnya adalah penelitian ini dapat dilanjutkan dengan memisahkan senyawa yang dianggap paling aktif secara murni dan diuji coba antibakterinya.

## DAFTAR PUSTAKA
A,  M.  D.,  Fatimawali,  &  I,  W.  W.  (2012).  Uji  Aktifitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Mayana  (Coleus  atropurpureus  (L)  Benth)  Terhadap  Staphylococcus  aureus, Escherchia  coli  Dan  Pseudomonas  aeruginosa  secara  In-Vitro. Manado,  Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT , 1 (1), 13–21.
Ayu,  A.  M.  (2013). Aktifitas  Antibakteri  Fraksi  n-Heksan  ekstrak  etanol  daginng  buah sirsak  (Annona  muricata  L)  Terhadap  Pseudomonas  aeruginosa,  Stapylococcus aureus,  Shigella  sonnei  dan  Serta  Bioautografinya .  Universitas  Muhammadiayah Surakarta.
Hafida,  M.,  Ekiyantini,  W.,  &  Sri,  L.  (2012).  Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Sirih Merah  (Piper  Crocatum)  Dan  Sirih  Hijau  (Piper  Betle  L.)  Sebagai  Bahan  Alternatif Irigasi  Saluran  Akar. Artikel  Ilmiah  Hasil  Penelitian  Mahasiswa  Pendidikan  Dokter Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Jember (UNEJ) , 1–4.
Haryun,  N.,  WIdodo,  E.,  &  Sudjarwo,  E.  (2017).  Efek  Penambahan  Jus  dan  Daun  Sirih Sebagai Aditif Pakan Terhadap Peforma Ayam Petelur. Briliant , 2 (4), 429–433.
Moch, A. (2014). Efektifitas Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum) Terhadap Kadar Hambat  Minimal  Dan  Kadar  Bunuh  Minimal  Bakteri  Salmonella  typhi .  Universitas Muhammadiyah Yogyakarta.
Nirwana,  P.  D.  (2013). Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Metanol  Daun  Kenikir  (Cosmos caudatus  Kunth.)  terhadap  Bakteri  Salmonella  typhi .  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang.
Nita,  N.  (2013).  Potensi  Daun  Teh  (Camellia  sinensis)  dan  Daun  Antinganting  Acalypha indica  L.  dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Salmonella  typhi. Jurnal  Al-Azhar Indonesia Seri Sains Dan Teknologi , 2 (1), 104–110.
Roslizawaty, Ramadani,  N. Y., Fakhrurrazi, & Herrialfian. (2013). Aktivitas Antibakterial Ekstrak  Etanol  Dan  Rebusan  Sarang  Semut  (Myrmecodia  Sp.)TerhadapBakteri Escherichia coli. Jurnal Medika Veterinaria , 7 (2).
Syahrinastiti, A, T., Aziz, D., & Lili, I. (2015). Perbedaan Daya Hambat Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle  L) Dan Daun Sirih Merah (Piper  crocatum Ruiz & Pav) Terhadap Pertumbuhan Eschericia coli. Jurnal Kesehatan Andalas , 2 (4), 421–424.
Tri, N. F., Tantin, E., & Aju, F. D. W. (2012). Nilamsari Febriana Tri., Ermawati Tantin, F Dwi Warna Aju. 2012. Daya Hambat Ekstrak Kulit Buah Apel (Malus sylvestris Mill.) Varietas  Manalagi  Terhadap  Pertumbuhan  Streptococcus  viridans(Antibacterial Activity Of Apple Peel (Malus sylvestris Mill.) Varie. Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa , 1–4.
Ulviani,  V.,  Yusriadi,  &  Khaerati,  H.  (2016).  Pengaruh  Gel  Ekstrak  Daun  Sirih  Merah  ( Piper  Crocatum  Ruiz  &  Pav)  Terhadap  Penyembuhan  Luka  Bakar  Pada  Kelinci  ( Oriyctolagus Cuniculus). Jurnal Farmasi Galenika , 2 (2), 103–110.
Widjaya, F.  E., Retnani, Y., & Hermana, W. (2018). Pengaruh Suplementasi  Infusa Daun Sirih (Piperbetle L.) Terhadap Kualitas Telur Puyuh. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 23 (1), 1–9.
Wilis,  R.,  &  Andriani.  (2017).  Efektivitas  Berkumur  Rebusan  Daun  Sirih  Dibandingkan Rebusan  Daun  Saga  Terhadap  Perubahan  Derajat  Keasaman  Air  Ludah. Action:  Ac Nutrition Journal , 2 (1), 67–72.