Efektivitas pemberian hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang ( Epinephelus lanceolatus, Bloch 1790) melalui perendaman dan oral terhadap pertumbuhan elver ikan sidat ( Anguilla bicolor bicolor )
[Effectiveness of recombinant giant grouper ( Ephinephelus lanceolatus ) growth hormone through immersion and oral delivery on growth of eel ( Anguilla bicolor bicolor ) elver ]
Alimuddin 1,  , Boyun Handoyo 2 , Nur Bambang Priyo Utomo 1
1 Departemen Budi Daya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB Jln. Agatis, Kampus IPB Dramaga 16680
2 Balai Layanan Usaha Perikanan Budi Daya, Karawang Desa Pusakajaya Utara, Kecamatan Cilebar, Kabupaten Karawang, Jawa Barat
Diterima: 11 Juni 2014; Disetujui: 23 September 2014

## Abstrak
Ikan  sidat  ( Anguilla  bicolor  bicolor )  telah  dibudidayakan  secara  intensif  di  Indonesia.  Pertumbuhan  ikan  sidat  relatif lambat.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menentukan  metode  pemberian  hormon  pertumbuhan  rekombinan  ikan  kerapu kertang  ( Epinephelus  lanceolatus )  (r El GH)  untuk  memacu  pertumbuhan,  dan  mengevaluasi  performa  budi  daya  dan pemanfaatan pakan pada elver ikan sidat. Tiga metode pemberian r El GH diuji, yakni perendaman, oral, dan kombinasi perendaman dan oral. Dosis r El GH yang digunakan merupakan hasil penelitian sebelumnya, yakni 12 mg L -1 untuk me- tode perendaman dan 30 mg  kg -1 pakan untuk metode oral. Ikan dipelihara dalam akuarium volume 23 L selama 120 hari, dengan padat tebar 45 ekor per akuarium. Hasil penelitian menunjukkan bahwa biomassa tertinggi (p<0,05) diper- oleh pada perlakuan kombinasi perendaman dan oral (73,68±2,07 g), sekitar 102,9% lebih tinggi daripada kontrol tanpa pemberian  r El GH  (36,32±0,97  g).  Perlakuan  r El GH  juga  meningkatkan  retensi  protein  dan  lemak,  masing-masing 142,5% dan 720,0% lebih tinggi daripada kontrol (p<0,05). Selanjutnya, perlakuan r El GH meningkatkan nafsu makan, dan konversi pakan (4,75) sekitar 55,2% lebih rendah (p<0,05) daripada kontrol (7,37). Perlakuan kombinasi perendam- an dan oral juga meningkatkan indeks hepatosomatik, dan ekspresi gen insuline-like growth factor I. Sebagai kesimpul- an, pemberian r El GH melalui kombinasi perendaman dan oral merupakan metode terbaik dalam memacu pertumbuhan elver ikan sidat, dan penerapan r El GH dapat digunakan untuk meningkatan produksi budi daya.
Kata penting: Anguilla bicolor bicolor , hormon pertumbuhan rekombinan, metode pemberian, pertumbuhan

## Abstract
Indonesian eel ( Anguilla bicolor bicolor ) has recently been cultivated intensively in Indonesia. The growth of Indone- sian eel is slow. This study was performed to determine a proper delivery method of recombinant giant grouper ( Epi- nephelus lanceolatus ) growth hormone (r El GH) and observe aquaculture and nutrient related performances of Indone- sian eel elver after r El GH treatment. Three delivery methods of r El GH, namely immersion, orally, and combination of immersion and orally were tested. The dosage of r El GH by immersion (12 mg L -1 water) and orally administration (30 mg kg -1 feed) were obtained in previous studies. Fish were maintained in 23 L glass aquaria for 120 days, at density of 45 fish in each aquarium. The results showed that higher (P<0.05) biomass of harvest (73.68±2.07 g) was obtained in immersion and oral combination treatment, by increment of about 102.9% compared to control (36.32±0.97 g). Admini- stration of r El GH also improved protein and lipid retentions by 142.5%, and 720.0% compared to those of control, res- pectively  (P<0.05).  In  addition,  r El GH  treatment  increased  appetite,  while  artificial  feed  conversion  ratio  (4.75)  was 55.15% lower (P<0.05) compared to that of control (7.37). Combination of r El GH immersion and oral administrations also increased hepatosomatic index, and insuline-like growth factor-1 gene expression level. Thus, rElGH administra- tion via immersion and oral combination was a proper method to improve growth of eel elver, and application of r El GH can be useful to increase aquaculture production.
Keywords: Anguilla bicolor bicolor , recombinant growth hormone, delivery method, growth

## Pendahuluan
Pemberian  hormon  pertumbuhan  ( growth hormone, GH)  dari  vertebrata  dapat  meningkat- kan  pertumbuhan,  kelangsungan  hidup,  dan  per-
kembangan  larva  ikan.  Bioaktivitas  GH  sapi  te- lah  diuji  pada  ikan channel  catfish ( Ictalurus punctatus )  (Silverstein et  al .  2000)  dan  ikan mujair  ( Oreochromis  mossambicus )  (Leedom et al .  2002),  GH  manusia  pada  ikan Catla  catla
(Nayak et  al .,  2001),  dan  GH  ikan  pada  pasca-  Penulis korespondensi Alamat surel: alimuddin_alsani@yahoo.com
larva  udang  vaname  ( Litopenaeus  vannamei ) (Santiesteban et  al .  2010  dan  Subaidah et  al . 2012).  Berbagai  efek  pleiotropik  akibat  pembe- rian  GH  telah  dilaporkan,  khususnya  metabolis- me  protein,  karbohidrat,  dan  lemak  (Zhu et  al . 2001).  GH  juga  menstimulasi  diferensiasi  dan mitogenesis pada berbagai sel dan jaringan (Kop- chick  &  Andry  2000).  Selanjutnya,  terkait  efek utama  memacu  pertumbuhan  ikan  dan  keterba- tasan  jumlah  GH  alami,  pembuatan  vektor  eks- presi  dan  produksi  protein  GH  rekombinan  ( re- combinant  growth  hormone ,  rGH)  telah  dilaku- kan oleh beberapa kelompok peneliti (Moriyama
&  Kawauchi  1990,  Sakai et  al .  1997, Tsai et  al .
1997,  Promdonkoy et  al .  2004,  Acosta et  al .
2007, dan Alimuddin et al . 2010).
Tiga  metode  pemberian  rGH  dapat  digu- nakan  untuk  memacu  pertumbuhan  ikan,  yakni metode  injeksi,  perendaman,  dan  oral.  Metode injeksi telah digunakan pada ikan channel catfish (Silverstein et al . 2000) dan ikan nila (Leedom et al. 2002  dan  Alimuddin et  al. 2010).  Efektivitas pemberian rGH menggunakan metode perendam- an telah diuji pada ikan coho salmon ( Oncorhyn- chus  kisutch ) dan chum  salmon ( Oncorhynchus keta )  (Moriyama  &  Kawauchi,  1990),  ikan  koki ( Carassius  auratus )  (Promdonkoy et  al .  2004), ikan nila merah ( Oreochromis sp . ) (Acosta et al . 2007),  udang  vaname  (Santiesteban et  al .  2010 dan Subaidah et al . 2012), ikan gurami  ( Osphro- nemus  goramy )  (Irmawati et  al .  2012)  dan  ikan sidat (Handoyo et al . 2012). Metode oral telah di- uji  pada  ikan  salmon  (Moriyama et  al .  1993), ikan  kakap  hitam  ( Acanthopagrus  schlegeli ) (Tsai et  al .  1997),  ikan  koki  (Promdonkoy et  al . 2004), udang vaname (Subaidah 2013), dan ikan rainbow  trout ( Oncorhynchus  mykiss )  (Haghighi et al . 2011).
Pemberian  rGH  umumnya  hanya  dilaku- kan  melalui  injeksi,  perendaman,  atau  oral  saja.
Efektivitas  kombinasi  metode tersebut belum di- laporkan.  Tiga  jenis  vektor  ekspresi  rGH  telah dibuat  di  Indonesia  (Alimuddin et  al .  2010)  dan tingkat  produksi  tertinggi  pada  bakteri Escheri- chia  coli adalah  rGH  ikan  kerapu  kertang (r El GH)  (Irmawati et  al .  2012).  Pada  penelitian ini  dilakukan  uji  efektivitas  pemberian  r El GH menggunakan  kombinasi  metode  perendaman dan oral terhadap pertumbuhan  dan pemanfaatan pakan pada elver ikan sidat ( Anguilla bicolor bi- color ).

## Bahan dan metode

## Pemeliharaan ikan
Penelitian dilakukan pada November 2011 sampai  Mei  2012 .  Glass  eel diperoleh  dari  pe- ngumpul  di  Sungai  Cimandiri,  Pelabuhan  Ratu, Sukabumi. Glass  eel (panjang  total  5,52±0,22 cm;  bobot  0,13±0,22  g)  dipelihara  selama  120 hari  dalam  akuarium  volume  23  L  dengan  padat tebar 45 ekor per akuarium. Ikan dipelihara pada kondisi fotoperiode alami, salinitas 0-5 g L -1 , dan suhu air 28-31 o C . Air pemeliharaan diganti seba- nyak 50-80% setiap hari, sebelum pemberian pa- kan dilakukan.

## Produksi hormon pertumbuhan rekombinan
Hormon  pertumbuhan  rekombinan  ikan kerapu  kertang  (r El GH)  diproduksi  mengikuti metode  seperti  dijelaskan  oleh  Alimuddin et  al.
(2010).  Bakteri  dilisis  menggunakan  sonikator dua kali selama 30 detik. Total protein bakteri di- bilas  dua  kali  dengan  bufer  fosfat  salin  (BFS), kemudian  disimpan  dalam deep  freezer -80 o C hingga akan digunakan.

## Penyiapan pakan
Proteksi  r El GH terhadap  digesti  enzim proteolitik dalam saluran pencernaan ikan dilaku- kan  dengan  membuat  matriks  r El GH-HP55;  di-
Tabel 1. Komposisi proksimat dan kandungan energi pakan yang digunakan dalam penelitian Jenis Pakan Kadar air (%) Protein (%) Lemak (%) Karbohidrat (%) GE (kkal/kg pakan) Pakan harian 6,29 46,00 5,22 11,4 4.285,9 Pakan kontrol 26,21 33,87 3,99 8,08 3.415,1 Pakan uji 25,63 33,72 4,05 8,57 3.414,3 Keterangan: GE= gross energy protein 5,6 kkal/g, lemak  9,4 kkal /g, karbohidrat  4,1 kkal /g (Watanabe 1998
buat  dengan  mencampurkan  r El GH  dengan hydroxypropylmethyl cellulose phthalate (HP-55,
Shinetsu, Japan)  mengikuti  metode  Moriyama et al. (1993).  Sebanyak  5  mg  r El GH  dicampur  de- ngan  10  mL  amonium  asetat  0,3%  (w/v)  yang mengandung  250  mg  HP-55.  Larutan  tersebut kemudian  dicampur  dengan  asam  asetat  0,01  M yang mengandung 10 mM NaCl 10 mM dan de- oxycholic acid 0,013% (w/v), selanjutnya dicam- pur dengan pakan komersial dengan dosis r El GH 30 mg kg -1 diet (Handoyo 2013).
Tiga jenis pakan buatan digunakan dalam penelitian, yaitu pakan harian (pakan komersial), pakan kontrol (pakan komersial dicampur dengan HP55), dan pakan uji (pakan komersial dicampur dengan  r El GH-HP55).  Komposisi  proksimat  pa- kan  dan  estimasi  kandungan  energi  ( gross energy ) ditampilkan pada Tabel 1.  Pakan dalam bentuk  tepung  ditambahkan  air  sebanyak  150% (v/w)  untuk  membuat  jadi  pasta  sebelum diberikan ke ikan (Tomiyama & Hibiya 1977).

## Metode pemberian hormon pertumbuhan
rekombinan
Tiga metode pemberian r El GH diuji, yaitu perendaman,  oral,  dan  kombinasi  perendaman dan  oral.  Kontrol  adalah  ikan  tidak  diberi  perla- kuan  r El GH.  Semua  perlakuan  dan  kontrol  diu- lang sebanyak tiga kali.

## Perendaman
Perendaman glass eel ikan sidat dilakukan seperti  dijelaskan  dalam  Handoyo et  al .  (2012).
Ikan  dipuasakan  sekitar  14  jam  sebelum  dilaku-
kan  perendaman. Glass  eel diberi  perlakuan  hi- pertonik dalam air 500 mL mengandung NaCl 35 g  L -1 selama  dua  menit,  kemudian  dipindahkan ke  dalam  air  mengandung  12  mg  L -1 r El GH,  se- rum  albumin  sapi  100  mg  L -1 dan  NaCl  9  g  L -1 , dan dibiarkan selama dua jam.
Ikan  diberi  pakan  berupa  cacing  sutera ( Tubifex sp.)  sampai  kenyang,  selama  60  hari pertama.  Pada pemeliharaan 60 hari kedua, elver ikan sidat diberi pakan berupa pakan harian  (Ta- bel 1) tiga kali sehari sebanyak 6% biomassa. Pa- da  hari  pemberian  pakan  mengandung  r El GH untuk perlakuan oral, ikan perlakuan perendaman diberi pakan kontrol (Tabel 1) sebanyak 6% bio- massa, tiga kali sehari.

## Oral
Pada 60  hari  pertama glass  eel ikan  sidat dipelihara  seperti  ikan  perlakuan  perendaman.
Ikan juga diberi perlakuan sama seperti pada per- lakuan  perendaman  r El GH,  tetapi  air  tidak  me- ngandung r El GH. Ikan dipuasakan sekitar 14 jam sebelum  perlakuan  pakan.  Perlakuan  r El GH  me- lalui oral dimulai pada hari 60, elver diberi pakan mengandung  r El GH  dosis  30  mg/kg  (Handoyo 2013) dengan tingkat pemberian pakan sama de- ngan  pakan  harian.  Pemberian  pakan  mengan- dung  r El GH  dilakukan  tiga  kali  sehari,  dua  kali seminggu (interval 3 hari).

## Kombinasi perendaman dan oral
Glass  eel ikan  sidat  diberi  perlakuan  r El GH  sama  seperti  pada  perlakuan  perendaman, dan  kemudian  dimulai  pada  hari  60  elver  diberi
perlakuan r El GH secara oral.  Ikan dipelihara sa- ma seperti pada ikan perlakuan perendaman, dan perlakuan oral.

## Analisis ekspresi gen insulin-like growth factor I (IGF-I)
Organ hati  diambil  sebelum  dan  24  jam setelah  pemberian  pakan  kontrol  pada  perlakuan kontrol, dan pakan mengandung r El GH pada per- lakuan oral, masing-masing tiga ekor ikan. RNA total  diisolasi  dari  organ  hati  menggunakan  ba- han  isogen  (Nippon  Gen,  Japan)  mengikuti  pro- sedur  dalam  manual.  Sintesis  cDNA  dilakukan menggunakan  kit ready-to-go-you-prime  first- strand  beads (GE  Healthcare).  Tingkat  ekspresi gen IGF-I dianalisis menggunakan metode  semi- kuantitatif PCR dengan gen β-aktin sebagai kon- trol  internal.  Metode  semi-kuantitatif  PCR  dila- kukan mengikuti prosedur Alimuddin (2003). Se- kuen primer  yang digunakan adalah F- eel IGF-I: 5’GTKGACWCGCTGCARTTYGTGTG-3’, dan R- eel IGF-I:  5’-CCTTCGRCTSGWGTTCTTCT GATG-3’.  Primer  didesain  berdasarkan  data yang ada di Bank  Gen. Program PCR untuk gen IGF-I  adalah  pra-denaturasi  94 o C  selama  tiga menit,  35  siklus  (denaturasi  94 o C  selama  30  de- tik, annealing 64 o C selama 30 detik, dan ekstensi 72 o C  selama  30  detik),  dan  ekstensi  akhir  72 o C selama tiga menit.

## Koleksi data dan analisis statistik
Biomassa  diukur  setiap  15  hari,  sedang- kan  kelangsungan  hidup  dihitung  pada  akhir  pe- nelitian.  Laju  pertumbuhan  bobot  spesifik  (LPS) dihitung  pada  akhir  penelitian  menggunakan  ru- mus  [(Ln  Wt  -  Ln  Wo)  / T]  x  100,  di  mana  Wt dan  Wo  masing-masing  adalah  bobot  akhir  dan bobot  awal,  dan T adalah  hari.  Konversi  pakan (KP)  merupakan  jumlah  pakan  diberikan  (g)  di- bagi  dengan  pertambahan  bobot  (g).  Retensi  nu-
trien  (protein  dan  lemak)  merupakan  nutrien yang  disimpan  dalam  tubuh  (g)  dibagi  dengan nutrien  yang  dimakan  (g)  dikali  100.  Indeks  he- patosomatik (IHS) dihitung dengan cara memba- gi bobot hati dengan bobot tubuh dikali 100.
Pertumbuhan,  kelangsungan  hidup,  KP, dan retensi nutrient dianalisis menggunakan one- way ANOVA  dengan  bantuan  Minitab®  16.1.1. Hasil  dikategorikan  berbeda  nyata  pada  level p <0,05.  IHS,  komposisi  proksimat  dan  ekspresi gen IGF-I dianalisis secara deskriptif.

## Hasil
Stimulasi  pertumbuhan  akibat  pemberian r El GH  melalui perendaman,  oral, dan kombinasi perendaman dan oral pada elver ikan sidat ditam- pilkan  pada  Gambar  1  dan  Tabel  2.  Pemberian r EL GH  menghasilkan  peningkatan  yang  signifi- kan  terhadap  biomassa  dan  LPS  relatif  terhadap kontrol (p<0,05). Biomassa tertinggi (Gambar 1) dan  LPS  (Tabel  2)  diperoleh  pada  perlakuan kombinasi  perendaman  dan  oral  (p<0,05).  Bio- massa  ikan  pada  perlakuan  tersebut  meningkat dua  kali  lipat  dibandingkan  dengan  kontrol.  Pe- ningkatan  biomassa  searah  dengan  peningkatan IHS (Gambar 2), dan ekspresi gen IGF-I pada 24 jam pascapemberian r El GH  secara oral (Gambar 3). Peningkatan ekspresi IGF-I perlakuan hormon relatif  terhadap  kondisi  awal  adalah  sekitar  tiga kali  lebih  tinggi  daripada  kontrol.  Peningkatan ekspresi  gen  IGF-I  mendukung  fakta  jalur GH/IGF-I dalam induksi pertumbuhan pada ikan.
Pemberian  r El GH  juga  memperbaiki  ke- langsungan hidup ikan, khususnya pada perlaku- an  perendaman,  dan  kombinasi  perendaman  dan oral (Tabel 2). Kelangsungan hidup ikan perlaku- an  perendaman  (82,05±2,09%),  dan  kombinasi perendaman dan oral (82,80±4,16%) sekitar 20% lebih  tinggi  (p<0,05)  dibandingkan  dengan  kon- trol (Tabel 2).
Gambar 1. Biomassa elver ikan sidat yang diberi melalui perendaman ( immersion ), oral, dan kombinasi per- lakuan perendaman dan oral ( immersion+oral ). Bar I merupakan simpangan eror. Huruf berbe- da di akhir ujung garis pertumbuhan menunjukkan berbeda nyata (p<0,05).
Tabel 2. Laju pertumbuhan bobot spesifik (LPS), kelangsungan hidup (KH), konversi pakan (KP), dan total amonium nitrogen (TAN) pada elver ikan sidat setelah diberi perlakuan Perlakuan LPS KH (%) KPpa KPpb TAN (mg/BT/hari) Kontrol 1,37±0,008 d 68,46±3,19 b 12,91±0,09 b 7,37±0,20 d 2,79±0,07 b Perendaman 1,67±0,007 c 82,05±2,09 a 11,19±0,36 a 6,38±0,26 c 2,23±0,25 a Oral 1,78±0,010 b 74,65±6,05 ab 12,59±0,63 b 5,54±0,13 b 2,58±0,19 ab Perendaman dan oral 1,94±0,009 a 82,80±4,16 a 11,22±0,38 a 4,75±0,13 a 2,38±0,13 ab
Keterangan: KPpa: KP untuk pakan alami (bobot basah). KPpb: KP untuk pakan buatan (bobot kering). Pengukuran TAN dilakukan 24 jam setelah pemberian pakan sebanyak 6% biomassa. Nilai ditampilkan dalam bentuk rerata ± SE ( n =3). Huruf tika atas berbeda pada kolom yang sama menunjukkan nilai berbeda nyata (p<0,05).
Tabel 3. Kandungan proksimat (% bobot kering), retensi protein, dan retensi lemak elver ikan sidat kontrol dan yang telah diberi perlakuan
Perlakuan Kadar abu Kadar protein Kadar Lema k Karbohidrat Retensi protein (%) Retensi lemak (%) Serat kasar BETN Kontrol 14,74 53,62 23,90 0,61 7,13 7,78±0,21 d 7,42±0,19 d Perendaman 12,45 46,77 29,03 0,39 11,36 12,12±0,49 c 26,11±1,06 c Oral 12,94 46,64 28,66 0,47 11,29 15,49±0,36 b 34,48±0,79 b Perendaman dan oral 12,48 45,78 30,02 0,14 11,58 17,87±0,50 a 60,91±1,71 a
Keterangan: nilai retensi protein dan lemak ditampilkan dalam bentuk rerata ± SE ( n =3). Kandungan proksimat adalah dalam  satuan  persen  bobot  kering.  Perhitungan  retensi  protein  dan  lemak  berdasarkan  pakan  buatan.  BETN:  bahan ekstrak tanpa nitrogen. Huruf tika atas berbeda pada kolom yang sama menunjukkan nilai berbeda nyata (p<0,05).
Konversi  pakan  (KP)  juga  konsisten  de- ngan  perbaikan  pertumbuhan.  Nilai  KP  terbaik, baik  KP  pakan  alami  (KPpa)  maupun  pakan
buatan  (KPpb)  diperoleh  pada  perlakuan  kombi- nasi  perendaman  dan  oral  (Tabel  2).  KPpa  dan KPpb pada perlakuan kombinasi perendaman dan
a b d c 0 10 20 30 40 50 60 70 80 D-0 D-15 D-30 D-45 D-60 D-75 D-90 D-105 D-120 B iom as s a (g) Waktu (hari, D) Control Immersion Oral Immersion+oral
Kontrol
Perendaman
Oral Kombinasi
oral adalah masing-masing sekitar 15% dan 55% lebih rendah daripada kontrol (p<0,05). Selanjut- nya,  ikan  yang  diberi  r El GH  memiliki  kadar  le- mak  dan  BETN,  retensi  protein  dan  lemak  yang lebih  tinggi,  sedangkan  kadar  protein,  abu  dan serat  kasar  lebih  rendah  jika  dibandingkan  de-
ngan  kontrol  (Tabel  3).  Retensi  protein  dan  le- mak tertinggi diperoleh pada perlakuan kombina- si perendaman dan oral (Tabel 3), masing-masing adalah  sekitar  dua  dan  delapan  kali  lebih  tinggi daripada kontrol (p<0,05).
Gambar 2. Indeks hepatosomatik elver ikan sidat kontrol dan perlakuan melalui kombinasi perendaman dan oral  ( n =10). Huruf berbeda di atas bar menunjukkan berbeda nyata (p<0,05).
Gambar 3. Ekspresi relatif gen insulin-like growth factor -I (IGF-1) di hati elver ikan sidat kontrol dan diberi perlakuan melalui oral. Hati diambil sebelum (0 h) dan 24 jam (24 h) setelah pemberian pakan mengandung  r El GH.  RNA  total  setiap  sampel  digabung  dari  3  ekor  ikan.  Ekspresi  relatif  gen IGF-I  dinormalisasi  dengan  ekspresi  gen  β-aktin  sebagai  kontrol  internal loading mRNA  yang digunakan dalam sintesis cDNA.
a b 0,64 0,61 0,73 0,89 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 Control Treated El-mGH by oral E k s pres i IG F -I d ino rm al is as i de ng an β -ak ti n Perlakuan 0 h 24 h Kontrol                            El-mGH dengan oral 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 Control Via Immersion + Oral ind ek s Hep ato s om ati k ( %) Perlakuan Kontrol Perendaman + Oral a b

## Pembahasan
Pada  penelitian  ini  ditemukan  bahwa pemberian  r El GH  melalui  perendaman  pada glass  eel dilanjutkan  melalui  pakan  pada elver ikan  sidat  memberikan  performa  pertumbuhan (biomassa;  Gambar  1),  dan  kelangsungan  hidup lebih tinggi daripada hanya melalui perendaman, atau  oral  saja  (Tabel  2).  Hal  ini  merupakan  per- tama kali dilaporkan pada ikan sidat di Indonesia. Hingga  saat ini belum ada induk  unggul  ikan si- dat  hasil  pemuliaan,  dan  pemuliaan  memerlukan waktu relatif lama untuk mendapatkan perbaikan performa  budidaya  yang  signifikan.  Dengan  de- mikian,  penggunaan  hormon  pertumbuhan  re- kombinan  merupakan  jalan  alternatif  cepat  dan efektif  untuk  meningkatkan  pertumbuhan  dan produksi  budi  daya  ikan  sidat.  Peningkatan  per- tumbuhan yang tinggi pada perlakuan  kombinasi perendaman  dan  oral  baru-baru  ini  juga  dilapor- kan pada udang vaname (Subaidah 2013). Hal ini mengindikasikan  bahwa  kombinasi  perlakuan r El GH  melalui  perendaman  dan  oral  akan  mem- berikan stimulasi pertumbuhan tinggi pada finfish dan shellfish .
Dengan  pertimbangan  teknis  dan  untuk mengurangi stres akibat perendaman, pada  pene- litian ini perendaman dilakukan satu kali. Efekti- vitas perendaman satu kali pada benih ikan gura- mi  telah  dilaporkan  sebelumnya  oleh  Syazili et al . (2012). Sementara itu, lama waktu pemberian rGH  secara  oral  pada  setiap  spesies  budi  daya, termasuk  ikan  sidat  masih  perlu  diteliti  untuk mendapatkan  performa  pertumbuhan  maksimal dan  penggunaan  rGH  lebih  efisien.  Pada  peneli- tian ini pemberian rGH secara oral dilakukan se- lama  satu  bulan  dengan  interval  waktu  tiga  hari, belum mencapai ukuran  konsumsi. Demikian ju- ga  riset  yang  dilakukan  oleh  Subaidah  (2013), udang vaname PL-2 diberi r El GH sampai menca- pai PL-14 dengan interval tiga hari, dan membe-
rikan peningkatan pertumbuhan 17,7% (Subaidah 2013).  Dengan demikian metode aplikasi r El GH pada ikan sidat hingga diperoleh ukuran konsum- si masih perlu dikembangkan.
Ikan  perlakuan  kombinasi  perendaman dan oral memiliki nilai IHS lebih tinggi daripada kontrol  (Gambar  2),  mengindikasikan  kaitan yang  erat  antara  pertumbuhan  dengan  nilai  IHS. Hal  ini  sejalan  dengan  pernyataan  Yandes et  al . (2003)  bahwa  nilai  IHS  dapat  menjadi  indikator pertumbuhan  ikan.  Selain  itu,  hati  merupakan tempat  utama produksi IGF-I (Duan 1998). Eks- presi gen IGF-I di hati ikan perlakuan rElGH me- lalui  oral  lebih  tinggi  daripada  kontrol  (Gambar 3),  dan  ini  juga  menjadi  indikasi  peran  r El GH dalam menstimulasi pertumbuhan. Hal ini sejalan dengan pernyataan  Moriyama et al . (2000) bah- wa  pertumbuhan  somatik  pada  vertebrata  teruta- ma  dikontrol  oleh  jalur  GH/IGF-I.  Peningkatan ekspresi gen IGF-I akibat perlakuan GH eksogen juga  telah  dilaporkan  pada  ikan  sidat  Jepang Anguilla  japonica (Duan  &  Hirano  1992),  ikan salmon  coho Oncorhynchus  kisutch (Duguay et al .  1994),  ikan rainbow  trout ( Oncorhynchus mykiss )  (Shamblott et  al .  1995),  ikan seabream Sparus  aurata (Duguay et  al .  1996),  dan  ikan mas Cyprinus carpio (Hashimoto et al . 1997 dan Vong et al . 2003).
Penurunan  KP  dan  meningkatnya  retensi protein  dan  lemak  pada  ikan  sidat  yang  diberi perlakuan  r El GH  dibandingkan  kontrol,  sangat berkaitan dengan peningkatan nafsu makan ikan. Pada penelitian ini, peningkatan nafsu makan ter- lihat dari waktu yang diperlukan oleh ikan untuk mengonsumsi  pakan  sekitar  tiga  lebih  cepat  jika dibandingkan kontrol. Ikan yang diberi perlakuan r El GH  menghabiskan  pakan  (3%  bobot  tubuh) dalam  waktu  15-20  menit,  sedangkan  ikan  kon- trol  selama  50-65  menit.  Kecepatan  dalam  me- ngonsumsi  pakan  sangat  berpengaruh  terhadap
banyaknya  pakan  yang  bisa  dimakan  sebelum mengalami  pelindian  ( leaching )  dan  akhirnya akan memengaruhi efisiensi pemberian pakan pa- da  ikan  sidat.  Kecepatan  mengonsumsi  pakan sangat penting karena pakan yang diberikan ada- lah dalam bentuk pasta yang bisa mengalami pe- lindian  dengan  cepat.  Pakan  pasta  yang  diguna- kan mengalami pelindian sekitar 50-60% per jam dari total bobot pakan  yang diberikan jika dima- sukkan  ke  dalam  air  dalam  akuarium  tidak  diisi ikan. Akibat pakan cepat masuk ke dalam saluran pencernaan  dan  lebih  banyak  pakan  yang  dima- kan,  hal  ini  berkontribusi  besar  meningkatkan pertumbuhan ikan sidat.
Nafsu  makan  ( apetite )  ikan  dipengaruhi oleh  hormon  ghrelin  (Volkoff et  al .  2005  dan Debnanth  2010).  Peningkatan  nafsu  makan  ikan sidat  yang  diberi  r El GH  diduga  juga  melibatkan hormon  ghrelin.  Peran  GH  dalam  meningkatkan efisiensi  pemberian  pakan  juga  dilaporkan  pada ikan  mas  merah  ( Cyprinus  carpio )  (Fu et  al . 1998),  ikan  nila  (Rahman et  al .  1998),  ikan  sal- mon  (Cook et  al .  2000  dan  Devlin et  al .  2004), ikan mud loach ( Misgurnus mizolepis ) transgenik (Nam et  al .  2004),  ikan  nila  (Hardiantho et  al . 2012),  ikan  gurami  (Irmawati et  al .  2012),  dan udang vaname (Subaidah 2013).
Meskipun mekanismenya belum jelas, GH berperan dalam dalam proses pencernaan, penye- rapan  dan  pengangkutan  nutrisi  pada  ikan  trans- genik (Fu et al . 1998, Cook et al . 2000, dan Dev- lin et al . 2004). Ikan salmon coho transgenik GH memiliki permukaan usus dan pilorus caecae le- bih  luas  dibandingkan  kontrol,  sehingga  dapat meningkatkan  proses  penyerapan  makanan  yang secara  langsung  akan    mempercepat  pertumbuh- an.  Perubahan  secara  struktural  tersebut,  secara langsung  berpengaruh  terhadap  proses  metabo- lisme  menjadi  lebih  efisien  seperti  penyerapan asam amino (Farmanfarmaian & Sun, 1999). Pa-
da  ikan  mas  koki,  pemberian  GH  juga  mampu memperpanjang  usus  43%  jika  dibandingkan kontrol,  meningkatkan leucine  uptake ,  ketebalan mukosa usus, tinggi mikrovilli, luas area dan ke- padatan  jaringan  epitel  pada  usus,  sehingga  pro- ses  penyerapan  bahan  makanan  lebih  optimum (Walker et al. 2004).  Pemberian GH eksogen ju- ga  dapat    mempengaruhi  lipolisis  dan  glukoneo- genesis  (O'Connor et  al .  1993).  GH  juga  berpe- ngaruh  dalam  sintesis  protein  dan  omset  lipid (Fauconneau et  al .  1996,  dan  Oommen  &  John- son, 1998). Akibatnya, ikan yang diberi perlaku- an GH eksogen memiliki kemampuan lebih besar untuk  mencerna  makanan,  menyerap nutrisi, dan mengkonversi  lebih  besar  proporsi  makanan  un- tuk  membentuk  komposisi  tubuh  ikan,  sehingga dapat berpengaruh terhadap peningkatan efisiensi pemberian  pakan. Hal  yang  sama diduga terjadi pada ikan sidat yang diberi r El GH, dan penelitian lebih  lanjut  diperlukan  untuk  membuktikan  hal tersebut.
Ikan  yang  diberi  r El GH  memiliki  kadar lemak  yang  lebih  tinggi,  sedangkan  kadar  pro- teinnya  lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan kontrol (Tabel 3). Hal serupa juga dilaporkan pa- da  penelitian  pemberian  rGH  ikan channel  cat- fish (Silverstein et al . 2000). Hal ini berbeda de- ngan  benih  ikan  gurami  yang  diberi  rGH,  yaitu kadar  lemaknya  lebih  rendah  dibandingkan  de- ngan ikan kontrol (Irmawati et al . 2012). Aktivi- tas  enzim  lipase  ikan  gurami  yang  diberi  r El GH lebih tinggi daripada ikan kontrol, sehingga didu- ga bahwa penurunan kadar lemak tersebut terkait dengan peningkatan aktivitas enzim lipase (Irma- wati et  al .  2012).  Dengan  demikian,  perbedaan kadar  lemak  merupakan  respons  spesifik  spesies ikan terhadap pemberian rGH. Selain itu, ikan si- dat  dikenal  sebagai  ikan  yang  banyak  mengan- dung lemak, dan semakin besar ukurannya maka semakin tinggi kandungan lemaknya (Heinsbroek
et  al .  2007).  Pemberian  rElGH  diduga  mengin- duksi  kemampuan  ikan  sidat  dalam  menyimpan lemak dalam tubuh.
Kelangsungan hidup ikan diberi perlakuan r El GH  lebih  tinggi  daripada  kontrol  (Tabel  2). Seperti ditunjukkan pada Tabel 2 bahwa nilai to- tal amonium nitrogen antara kontrol dan perlaku- an  r El GH  secara  oral,  dan  kombinasi  perendam- an  dan  oral  adalah  sama.  Pemeliharaan  benih ikan  sidat  dilakukan  dalam  akuarium  dan  untuk menjaga  kualitas  air  tetap  baik,  maka  dilakukan penggantian  air  sebanyak  sekitar  70%  per  hari. Selain  itu,  secara  visual  tidak  terlihat  ada  tanda- tanda  terserang  penyakit.  Ikan  sidat  termasuk ikan  yang  belum  terdomestikasi,  sehingga  peng- gantian  air  tiap  hari  diduga  menyebabkan  stres. Kortisol merupakan salah satu indikator stres pa- da  ikan  (Haukenes et  al. 2008),  dan  penelitian pada  ikan  gurami  yang  diberi  perlakuan  r El GH menunjukkan  bahwa  kadar  kortisol  lebih  rendah daripada  ikan  kontrol  tanpa  perlakuan  r El GH (Syazili 2012). Interaksi antara kadar kortisol dan GH  terkait  adaptasi  ikan  terhadap  kondisi  ling- kungan  juga  sudah  dijelaskan  sebelumnya  oleh McCormick  (2001).  Dengan  demikian,  sangat besar  kemungkinannya  perbedaan  kelangsungan hidup  elver  ikan  sidat  terkait  dengan  perbedaan kemampuan adaptasi terhadap lingkungan.

## Simpulan
Kombinasi  pemberian  r El GH  melalui  pe- rendaman  dan  oral  lebih  efektif  dalam  memacu pertumbuhan,  dan  meningkatkan  retensi  protein dan  lemak.  Metode  ini  memiliki  potensi  tinggi dapat  digunakan  untuk  memacu  pertumbuhan spesies ikan budidaya lainnya.

## Persantunan
Terima  kasih  kami  sampaikan  kepada Prof.  Dr.  Komar  Sumantadinata  (almarhum),
Prof.  Dr.  Goro  Yoshizaki,  dan  Anna  Octavera MSi  atas  sumbang  sarannya.  Terima  kasih  juga disampaikan  kepada  Dr.  Agus  Somamihardja (PT.  Suri  Tani  Pemuka)  yang  memberikan  ban- tuan  pakan.  Riset  ini  didukung  oleh  Direktorat Jenderal Perikanan Budi Daya, Kementerian Ke- lautan  dan  Perikanan,  serta  IPB  Press  kepada Boyun Handoyo.

## Daftar pustaka
Acosta  JR,  Morales  R,  Morales  M,  Alonso  M, Estrada  MP.  2007. Pichia  pastoris expres- sing  recombinant  tilapia  growth  hormone accelerates  the  growth  of  tilapia. Biotech- nology Letters, 29(11):1671-1676.
Alimuddin, Lesmana I, Sudrajat AO, Carman O, Faizal  I.  2010.  Production  and  bioactivity potential  of  three  recombinant  growth  hor- mones  of  farmed  fish. Indonesian  Aqua- culture Journal , 5(1):11-16.
Alimuddin. 2003. Introduction and expression of foreign  6-desaturase-like gene in a teleos- tean  fish. Master  Thesis .  Tokyo  University of Fisheries. 41 p.
Cook JT, McNiven MA, Richardson GF, Sutter- lin  AM.  2000.  Growth  rate,  body  composi- tion  and  feed  digestibility/conversion  of growth  enhanced  Atlantic  salmon  ( Salmo salar ). Aquaculture , 188(1-2):15-32.
Debnanth S. 2010. A review on the physiology of insulin-like  growth  factor-I  (IGF-I)  peptide in bony  fishes and its phylogenetic correla- tion in 30 different taxa of 14 families of te- leosts. Advances in Environmental Biology , 5(1):31-52.
Devlin RH, Biagi CA, Yesaki TY, 2004. Growth, viability  and  genetic  characteristics  of  GH transgenic  coho  salmon  strains. Aquacul- ture , 236(1-4):607–632.
Duan  C,  Hirano  T.  1992.  Effects  of  insulin-like growth  factor-I  and  insulin  on  the  in  vitro uptake of sulfate by eel branchial cartilage: evidence  for  the  presence  of  independent hepatic  and  pancreatic  sulfation  factors.
Journal of Endocrinology, 133(2):211-219. Duan C. 1998. Nutritional and developmental re- gulation  of  insulin-like  growth  factors  in fish. The Journal of Nutrition, 128(2):306S- 314S.
Duguay  SJ,  Lai-Zhang  J,  Steiner  DF,  Funkens- tein  B,  Chan  SJ.  1996.  Developmental  and
tissue  regulated  expression  of  insulinlike growth  factor  I  and  II  mRNA  in Sparus aurata . Journal  of  Molecular  Endocrino- logy, 16(2):123-132
Duguay  SJ,  Swanson  P,  Dickhoff  WW.  1994. Differential  expression  and  hormonal  regu- lation of alternatively spliced IGF-I  mRNA transcript  in  salmon. Journal  of  Molecular Endocrinology, 12(1):25-37.
Farmanfarmaian  A,  Sun  LZ.  1999.  Growth  hor- mone  effects  on  essential  amino  acid  ab- sorption,  muscle  amino  acid  profile,  N retention  and  nutritional  requirements  of striped  bass  hybrids. Genetic  Analysis, 15(3-5):107-113.
Fauconneau B, Mady MP, Le Bail PY. 1996. Ef- fect  of  growth  hormone  on  muscle  protein synthesis  in  rainbow  trout  ( Oncorhynchus mykiss )  and  Atlantic  salmon  ( Salmo  salar ). Fish  Physiology  and  Biochemistry, 15(1): 49-56.
Fu  C,  Cui  Y,  Hung  SSO,  Zhu  Z.  1998.  Growth and  feed  utilization  by  F4  human  growth hormone transgenic carp fed diets  with dif- ferent protein levels. Journal of Fish Biolo- gy , 53(1):115-129.
Haghighi M, Sharif RM, Sharifpour I, Sepahdari
A,  Lashtoo  AGR.  2011.  Oral  recombinant bovine  somatotropin  improves  growth  per- formance  in  rainbow  trout  ( Oncorhynchus mykiss ). Iranian  Journal  of  Fisheries  Sci- ences, 10(3):415-424.
Handoyo  B,  Alimuddin,  Utomo  NBP.  2012.
Growth, feed conversion and  retention, and proximate of eel juvenile treated by immer- sion  of  recombinant  giant  grouper  growth hormone. Jurnal  Akuakultur  Indonesia,
11(2):132-140.
Handoyo  B.  2013.  Respons  benih  ikan  sidat  ter- hadap  hormon  pertumbuhan  rekombinan ikan  kerapu  kertang  melalui  perendaman dan oral. Tesis . Institut Pertanian Bogor. 53 hlm.
Hardiantho  D,  Alimuddin,  Prasetiyo  AE,  Yanti
DH, Sumantadinata K.  2012.  Performa be- nih ikan nila diberi pakan mengandung hor- mon  pertumbuhan  rekombinan  ikan  mas dengan  dosis  berbeda. Jurnal  Akuakultur Indonesia , 11(1):17-22.
Hashimoto  H,  Mikawa  S,  Takayama  E,  Yoko- yama  Y,  Toyohara  H,  Sakaguchi  M.  1997.
Molecular cloning and growth ormoneregu- lated  gene  expression  of  carp  insulin-like growth  factor-I. Biochemistry  and  Molecu- lar Biology International, 41(5):877-886.
Haukenes  AH, Barton BA, Bollig H. 2008. Cor- tisol  responses  of  pallid  sturgeon  and  yel- low perch following challenge  with lipopo- lysaccharide. Journal  of  Fish  Biology,
72(3):780-784.
Heinsbroek  LTN,  Van  Hoff  PLA,  Winkels  W, Tank  MWT,  Schrama  JW,  Verreth  JAJ. 2007.  Effects  of  feed  composition  on  life history  developments  in  feed  intake,  meta- bolism,  growth  and  body  composition  of European  eel  ( Anguilla  anguilla ). Aquacul- ture, 267(1-4):175-187.
Irmawati,  Alimuddin,  Zairin  MJr,  Suprayudi MA,  Wahyudi  AT.  2012.  Peningkatan  laju pertumbuhan  benih  ikan  gurami  ( Osphro- nemus  goramy Lac.)  yang  direndam  dalam air yang mengandung hormon pertumbuhan ikan mas. Jurnal Iktiologi Indonesia , 12(1): 13-23.
Kopchick JJ, Andry JM. 2000. Growth hormone (GH), GH receptor, and signal transduction. Molecular  Genetics  and  Metabolism ,  71(1- 2):293-314.
Leedom  TA,  Uchida  K,  Yada  T,  Richman  NH, Byatt  JC,  Collier  RJ,  Hirano  T,  Grau  EG. 2002. Recombinant bovine growth hormone treatment of tilapia: growth response, meta- bolic clearance, receptor binding and immu- noglobulin production. Aquaculture , 207(3-
4):359-380.
McCormick  SD.  2001.  Endocrine  control  of  os- moregulation  in  the  teleost  fish. American Zoologist, 41(4):781-794.
Moriyama  S, Hiroshi Y, Seiji S, Toshio A, Tet- suya  H,  Hiroshi  K.  1993.  Oral  administra- tion  of  recombinant  salmon  growth  hormo- ne to rainbow trout ( Oncorhynchus mykiss ) . Aquaculture, 112(1):99-106.
Moriyama  S,  Ayson  FG,  Kawauchi  H.  2000. Growth  regulation  by  insulin-like  growth factor  I  in  fish. Bioscience,  Biotechnology, and Biochemistry, 64(8):1553-1562.
Moriyama  S, Kawauchi H. 1990. Growth stimu- lation  of  juvenile  salmonids  by  immersion in  recombinant  salmon  growth  hormone.
Nippon Suisan Gakkaishi, 56(1):31-34.
Nam  YK,  Noh  JK,  Cho  YS,  Cho  HJ,  Cho  KN, Kim  CG,  Kim  DS.  2004.  Dramatically  ac- celerated  growth  and  extraordinary  gigan- tism  of  transgenic  mud  loach  ( Misgurnus mizolepis ). Transgenic  Research ,  10(4):
353-362.
Nayak  PK,  Misra  J,  Mishra  TK,  Pandey  AK,
Singh  BN,  Ayyappan  S.  2001.  Evaluation of  the  potential  for  using  hGH  to  enhance
growth in juvenile Catla catla . Indian Jour- nal of Fisheries , 48(1):27-33.
O'Connor  PK,  Reich  B,  Sheridan  MA.  1993. Growth  hormone  stimulates  hepatic  lipid mobilization  in  rainbow  trout  ( Oncorhyn- chus mykiss ). Journal of Comparative Phy- siology , 163(5):427-431.
Oommen  OV,  Johnson  B.  1998.  Metabolic  ef- fects of ovine  growth  hormone in a teleost, Anabas  testudineus . Annuals  of  the  New York Academy of Sciences , 839(1):380-381.
Promdonkoy  B,  Warit  S,  Panyim  S.  2004.  Pro- duction of a biologically active growth hor- mone  from  giant  catfish  ( Pangasianodon gigas )  in Escherichia  coli . Biotechnology Letters, 26(8):649-653.
Rahman MA, Mak R, Ayad H, Smith A, Maclean N.  1998.  Expression  of  a  novel  piscine growth hormone gene results  in growth en- hancement  in  transgenic  tilapia  ( Oreochro- mis  niloticus ). Transgenic  Research ,  7(5): 357-369.
Sakai  M,  Kajita  Y,  Kobayashi  M,  Kawauchi  H. 1997.  Immunostimulating  effect  of  growth hormone:  in  vivo  administration  of  growth hormone  in  rainbow  trout  enhances  resis- tance to Vibrio anguillarum infection . Vete- rinary  Immunology  and  Immunopathology,
57(1-2):1-6.
Santiesteban  D,    Martín  L,  Arenal  A,  Franco  R, Sotolongo J. 2010. Tilapia growth hormone binds to a receptor in brush border membra- ne  vesicles  from  the  hepatopancreas  of shrimp  ( Litopenaeus  vannamei ). Aquacul- ture, 306(1-4):338-342.
Shamblott  MJ,  Cheng  CM,  Bolt  D,  Chen  TT. 1995.  Appearance  of  insulin-like  growth factor mRNA in the liver and pyloric caeca of  a  teleost  in  response  to  exogenous growth  hormone. Proceedings  of  the  Nati- onal  Academy  of  Sciences  of  the  United States of America, 92(15):6943-6946.
Silverstein  JT, Wolters  WR,  Shimizu  M,  Dickh- off  WW.  2000.  Bovine  growth  hormone treatment of channel catfish: strain and tem- perature  effects  on  growth,  plasma  IGF-I levels, feed intake and efficiency, and body composition. Aquaculture, 190(1-2):77-88.
Subaidah  S,  Carman  O,  Sumantadinata  K,  Su- kenda,  Alimuddin.  2012.  Respons  pertum- buhan  dan  ekspresi  gen  udang  vaname  ( Li- topenaeus  vannamei )  setelah  direndam  da- lam  larutan  hormon  pertumbuhan  rekom- binan  ikan  kerapu  kertang. Jurnal  Riset Akuakultur, 7(3):337-352.
Subaidah S. 2013. Respons pertumbuhan, imuni- tas dan ekspresi gen udang vaname ( Litope- naeus  vannamei )  yang  diberi  hormon  per- tumbuhan  rekombinan. Disertasi .  Institut Pertanian Bogor. 114 hlm.
Syazili  A,  Irmawati,  Alimuddin,  Sumantadinata K.  2012.  Pertumbuhan  dan  kelangsungan hidup  juvenil  ikan  gurami  yang  direndam dalam  hormon  pertumbuhan  rekombinan dengan  frekuensi  berbeda. Jurnal  Akuakul- tur Indonesia , 11(1):23-27.
Syazili  A.  2012.  Aplikasi  hormon  pertumbuhan rekombinan  melalui perendaman untuk me- macu  pertumbuhan  benih  ikan  gurami ( Osphronemus  goramy ). Tesis .  Institut  Per- tanian Bogor. 52 hlm.
Tomiyama T, Hibiya T. 1977. Fisheries in Japan (Ee l).  Japan  Marine  Product  Photo  Materi- als Association. 225 p.
Tsai  HJ,  Hsih  MH,  Kuo  JC.  1997. Escherichia coli produced  fish  growth  hormone  as  a feed  additive  to  enhance  the  growth  of juvenile  black  seabream  ( Acanthopagrus schlegeli ). Journal  of  Applied  Ichthyology,
13(2):78-82.
Volkoff H,  Canosa  LF, Unniappan S, Cerdá-Re- verterfer  JM,  Bernier  NJ,  Kelly  SP,  Peter RE. 2005. Neuropeptides and the control of food  intake  in  fish. General  and  Compara- tive Endocrinology , 142(1-2):3-19.
Vong QP, Chan KM, Cheng CH. 2003. Quantifi- cation  of  common  carp  ( Cyprinus  carpio ) IGF-I  and  IGF-II  mRNA  by  realtime  PCR: differential regulation of expression by GH. Journal of Endocrinology, 178(3):513-521.
Walker  RL,  Buret  AG,  Jackson  CL,  Scott  KG, Bajwa  R,  Habibi  HR.  2004.  Effects  of growth  hormone on leucine absorption, in- testinal  morphology,  and  ultrastructure  of the goldfish intestine. Canadian Journal of Physiology  Pharmacology ,  82(11):951- 959.
Watanabe  T.  1998. Fish  nutrition  and  maricul- ture .  Department  of  Aquatic  Bioscience. Tokyo University of Fisheries. JICA. 233 p.
Yandes, Affandi R, Mokoginta I. 2003. Pengaruh pemberian  selulosa  dalam  pakan  terhadap kondisi  biologis  benih  ikan  gurami  ( Os- phronemus  gourami Lac). Jurnal  Iktiologi Indonesia , 3(1):27-33.
Zhu T, Goh ELK, Graichen R, Ling L, Lobie PE. 2001.  Signal  transduction  via  the  growth hormone  receptor. Cellular  Signalling , 3(9):599-616.