Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## FERTILISASI DAN DAYA TETAS TELUR IKAN TAWES
(Puntius javanicus) DARI SPERMA PASCA PENYIMPANAN PADA TEMPERATUR 4 o C
FERTILIZATION AND HATCHING RATE OF TAWES FISH EGGS (Puntius javanicus) AFTER CRYOPRESERVATION IN TEMPERATURE 4 o C
Nuri Lismawati 1 , Afrizal Hendri 2 , Mahendra 2
1 Mahasiswa Program Studi Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Teuku Umar, Aceh Barat
2 Program Studi Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Teuku Umar, Aceh Barat
Korespondensi : hendri2020@gmail.com

## Abstract
This  research  aims  to  know  the  level  of  fertilization  and  hatching  rate  of  tawes fish  eggs  ( Puntius  javanicus )  after  cryopreservation  sperm  in  temperature  4 o C.  This research  has  been  carried  out  in  the  mini  laboratory  (Meunasah  Krueng  Village  of Beutong Subdistrict Nagan Raya Regency) on 19-20 August 2015. This research is both experimental, using a complete Randomized Design with 5 treatments and 3 replicates. Sperm that is used is the result of storage with the dilution of  physiological  NaCl and green coconuts water including P 1 0% NaCl only, P 2 3%, P 3 5%, P 4 7% and P 5 9%. The results showed that the addition of green coconut water on sperm storage provides a real effect against fertilization and  hatching rate of tawes fish  eggs (p < 0.05). The highest levels  of  fertilization  found  in  the  treatment  of  P 4 (64.3%,  0.7  mL  of  diluent  in  green coconut water + physiological NaCl solution), while the lowest fertilization found on P 1 registration  (25%,  physiological  NaCl  solution).  For  the  level  of  hatching  rate,  the highest value is found in the treatment of P 4 (61.7%), and the lowest is present on the P 1 registration (14.3%).
Keywords: Fertilization, Hatching rate, Physiological NaCl, Puntius javanicus

## I. Pendahuluan
Ikan  tawes  merupakan  salah  satu  ikan  konsumsi  yang  hidup  diperairan  tawar. Dalam  perkembangannya  ikan  ini  mulai  banyak  dibudidayakan  oleh  masyarakat. Budidaya  ikan  sangat  dipengaruhi  oleh  teknologi  pembenihan,  terutama  dalam pengadaan  benih  ikan.  Sering  kali  timbul  masalah  dalam  pengadaan  benih  yaitu dikarenakan  masa  pematangan  gamet  induk  ikan  jantan  dan  betina  terkadang  tidak terjadi  secara  bersamaan.  Salah  satu  alternatif  pemecahan  masalah  tersebut  yaitu melalui penerapan bioteknologi reproduksi berupa penyimpan sperma (Murtidjo, 2001).
Pada  proses  fertilisasi,  kualitas  sperma  ikan  sangat  menentukan  sukses  atau tidaknya fertilisasi tersebut. Pada beberapa kasus pembenihan ikan secara buatan, sering terjadi  tenggang  waktu  antara  ketersediaan  sperma  dengan  keberadaan  sel  telur (kematangan gonad ikan jantan dan ikan betina yang tidak sinkron) atau ada perbedaan jarak antara keberadaan sperma dengan keberadaan telur sehingga untuk mengatasinya sperma perlu dilakukan penyimpanan sperma/bank sperma (Hidayaturrahmah, 2007).
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Fertilisasi  merupakan  proses  penyatuan  antara  sel  telur  dengan  sel  spermatozoa untuk  membentuk  zigot.  Fertilisasi  dapat  dibagi  menjadi  dua,  yaitu  fertilisasi  internal dan  eksternal.  Fertilisasi  yang  umumnya  terjadi  pada  ikan  merupakan  jenis  fertilisasi eksternal,  dikarenakan  terjadi  di  luar  tubuh  induk  (Fujaya  2002).  Keberhasilan  proses fertilisasi dipengaruhi oleh kemampuan sperma untuk membuahi sel telur. Sperma yang tidak  disimpan  ( fresh  sperm ),  memiliki  kemampuan  fertilisasi  yang  lebih  tinggi dibandingkan sperma hasil penyimpanan. Hal tersebut dikarenakan teknik penyimpanan menyebabkan terjadinya penurunan kualitas sperma, seperti terjadinya perubahan dalam motilitas  dan  durasi  pergerakan  (Akcay et  al .  2004).  Penelitian  mengenai  fertilisasi spermatozoa  pasca  penyimpananan  telah  banyak  dilakukan.  Sultana et  al .  (2010), hasilnya  menunjukkan  penurunan  tingkat  fertilisasi  akibat  proses  penyimpanan,  yaitu dari  88%  menjadi  hanya  32-37%.  Penelitian  Horvath et  al. (2003)  juga  menunjukkan terjadinya  penurunan  kemampuan  fertilisasi  ikan  mas  pasca  penyimpanan  dari persentase  84%  (kontrol)  menjadi  hanya  sekitar  71-74%.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui tingkat fertilitasi spermatozoa ikan tawes pasca penyimpanan.
Menurut    Isnaini    (2000) dalam Sandy  (2005),  menyatakan  bahwa  larutan  NaCl fisiologis  sering  digunakan  sebagai  bahan  pengencer  sperma  yang  memberikan  sifat buffer  dan  mampu  mempertahakan    pH  sperma  ikan  dalam  suhu  freezer.  Selain    itu NaCl  fisiologis  dapat  memperpanjang  umur  sperma  kerena  bersifat  isotonis  dengan cairan  sel.  Penyimpanan  sperma  dalam  larutan  pengencer  NaCl  fisiologis  sebaiknya digunakan  tidak  lebih  dari  60  menit  setelah  penampungan.Salah  satu  cara  untuk memperpanjang waktu simpan sperma yaitu diperlukan subsitusi bahan pengencer lain yang  mengandung  protein  atau  bahan-bahan  yang  dapat  mempertahankan  motilitas spermatozoa.
Perkembangan telur ikan di awali dengan pembuahan sel telur oleh spermatozoa. Menurut  Heryadi et  al .  (1995),  proses  penetasan  telur  terjadi  mulai  dari  telur  dibuahi hingga  telur  menetas.  Perkembangan  telur  pada  umumnya  dimulai  dari  1  sel  hingga beberapa  sel  sampai  ketahap  pra  blastula-  blastula-grastula-  neurola-    embrio- penetasan.  Telur  yang  dibuahi  akan  mati  dan  akan  berubah  morfologinya  menjadi bewarna  putih  dan  keruh  (Sumantadinata,  1981).  Menurut  Sinjal  (2014)  untuk menentukan tingkat penetasan telur data yang diperlukan adalah banyaknya telur yang menetas  pada  masing-masing  perlakuan, Hacthing  rate adalah  jumlah  total  telur  yang menetas, dari total telur yang ditebar. Lama penetasan telur bergantung dari temperatur air  dan  kandungan  oksigen  disekelilingnya  (Minjoyo,  1993).  Penggunaan  air  kelapa muda  sebagai  pengencer  dalam  penyimpanan  spermatozoa  ikan  tawes  belum  pernah dilakukan, hal ini penulis perlu mengetahui untuk mendapatkan pengencer spermatozoa yang  mengandung  fruktosa  sehingga  selain  dapat  meningkatkan  motilitas  dan  lama hidup juga dapat meningkatkan proses fertilisasi dan daya tetas telur
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## II. Metode Penelitian

## 2.1. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  pada  tanggal  19  –  20  Agustus  tahun  2015, bertempat di UPR Meunasah Krueng Kecamatan Beutong Kabupaten Nagan Raya.

## 2.2. Alat dan Bahan
Alat  yang digunakan dalam penelitian ditunjukkan pada Tabel 1 berikut : Tabel 1. Alat-alat yang digunakan dalam penelitian
Alat Fungsi Suntik/syringe, 1 cc Menginjeksi larutan/hormon kedalam tubuh ikan Toples Wadah penetasan hasil perlakuan Mangkok Untuk penampungan sperma dan telur Pipet tetes, 1 cc Untuk mengambil sampel perlakuan Mikroskop biologi DO meter pH Universal Untuk mengamati objek penelitian Untuk mengukur oksigen yang terlarut dalam air Untuk mengukur tingkat keasaman Siphon akuarium Membersih kotoran didasar wadah Thermometer Untuk mengukur suhu Aerasi Untuk Instalasi udara/oksigen Hiblow, 80 hp Untuk Sumber oksigen Kamera Media dokumentasi Alat tulis Untuk mencatat data selama penelitian Sendok teh Untuk mengambil telur dari mangkok Tabel 2. Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian : Bahan Fungsi Induk tawes betina, 250 g Induk tawes jantan, 250 g Objek dasar dalam penelitian Objek dasar dalam penelitian NaCl fisiologis Pengencer semen Air kelapa muda Pengencer semen Bulu ayam Tissu Cleo mineral water Ovaprin, syndel Membantu dalam pengadukan, fertilisasi Membersihkan darah atau kotoran Membantu dalam pengenceran sperma dengan telur Untuk meransang pengeluaran  gonad induk jantan dan betina

## 2.3. Tahapa-Tahapan Penelitian

## 1. Seleksi Induk
Induk  yang  akan  digunakan  untuk  penelitian  ini  adalah  induk  ikan  tawes  yang sudah  matang  gonad  yang  bertujuan  untuk  mendapat  sperma/telur  yang  berkualitas, didapatkan dari kolam pembudidaya ikan di Kabupaten Nagan Raya.

## 2.Penyuntikan Induk
Induk  yang  telah  diseleksi,  selanjutnya  dilakukan  penyuntikan  dengan  dosis  0.1 mL/kg induk dengan ovaprim, induk dimasukkan kedalam bak.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## 3. Striping
Setelah  12  jam  pasca  penyuntikan,  ikan  tawes  dilakukan  pengambilan/koleksi semen  dengan  striping  pada  bagian  bagian  perut  di  urut  ke  arah  urogenital,  semen ditampung menggunakan spuit/syringe 2 cc.
a. Persiapan Pengencer NaCl Fisiologis dan Air Kelapa Muda
Penelitian ini menggunakan pengencer air kelapa muda dengan NaCl sebanyak 5 kosentrasi  dan    1  kosentrasi  hanya  menggunakan    NaCl    tanpa  campuran  air  kelapa muda, 4 kosentrasi  menggunakan NaCl campuran air kelapa muda yaitu pengencer air kelapa  muda  dengan  kosentrasi  3%,  5%,7%,  dan  9%  serta  0%  hanya  NaCl  saja (Mariani,  2015).  Pengenceran  tiap  konsentrasi  dalam  penelitian  sebanyax  10  ml gunanya untuk mempermudah penekaran jumlah persentase air kelapa muda dan NaCl fisiologis, adapun konsentrasi tersebut diperoleh melalui penentuan berikut:
Air kelapa muda(konsentra
Sperma (1): pengencer (9)
0,2 ml        : 1,8 ml
1. Air kelapa muda 3%  = =0,3 ml 2. Air kelapa muda  5% = =0,5 ml 3. Air kelapa muda 7% = =0,7 ml 4. Air kelapa muda 9%  = =0,9 ml
b. Pencampuran Sperma dengan PengencerNaCl Fisiologis, Air Kelapa Muda
Sperma  yang  telah  diperoleh  dimasukan  kedalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  pengencer(  Air  kelapa  muda  dan  NaCl  fisologis  )  dari  tiap  perlakuan pengencer    yang  telah  dibuat  sebelumnya.  Adapun  kosentrasi  pengencer      Air  kelapa muda dan NaCl  yaitu (3%, 5%, 7% dan 9%). Sebagai kontrol adalah sperma ikan tawes hanya menggunakan  NaCl.

## 4. Penyimpanan dan Fertilisasi
Penyimpanan spermatozoa membutuhkan bahan pengencer  yang berfungsi untuk mengurangi  aktivitas  spermatozoa  sehingga  menghambat  pemakaian  energi  dan  dapat memperpanjang  hidup  spermatozoa  (Sunarma et  al .,  2007).  Sperma  ikan  tawes  yang sudah dicampurkan dengan jenis larutan pengencer  air kelapa muda dan Nacl fisiologis kemudian  disimpan  didalam  lemari  pendingin/kulkas  pada  temperatur  4 0 C    selama  3 hari.
Telur  dikoleksi  setelah  12  jam  penyuntikan,  telur  ditampung  pada  wadah mangkok  kecil,  jumlah  telur  yang  di  uji  pada  masing-masing  percobaan  adalah  100 butir. Sedangkan pengamatan angka fertilisasi dilakukan setelah 10 jam.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## 2.4. Parameter Uji

## 1. Persentase Pembuahan
Fertilization  rate (FR)  telur  dihitung  dengan  cara  membandingkan  telur  yang dibuahi dengan jumlah yang diinkubasi. Formulasinya merujuk pada Hui et al (2012) :
FR %

## 2. Persentase Penetasan
Hatching rate (HR) merupakan kegiatan merawat telur yang telah terbuahi hingga telur  tersebut  menetas.  Telur  yang  dibuahi  berkembang  menjadi  embrio  dan  akan menetas  menjadi  larva  sedangkan  telur  yang  tidak  terbuahi  akan  mati.  HR  telur  ikan tawes dihitung dengan cara menghitung larva satu persatu, kemudian dinyatakan dalam persen. Formulasinya merujuk pada Hui et al , (2012) :
HR %

## 2.5. Rancangan Penelitian
Penelitian ini bersifat eksperimental, sedangkan rancangan yang digunakan yaitu rancangan acak lengkap (RAL) dengan empat perlakuan dan masing-masing perlakuan ada tiga kali ulangan, perlakuan dalam penelitian ini yaitu:
P 1 = Larutan NaCl fisiologis P 2 = 0,3 ml air kelapa muda dalam pengencer larutan NaCl fisiologis P 3 =0,5 ml  air kelapa muda dalam pengencer larutan NaCl fisiologis P 4 =0,7 mlair kelapa muda dalam Pengencer larutan NaCl fisiologis P 5 =0,9 ml air kelapa muda dalam pengencer larutan NaCl fisiologis Penggunaan bahan-bahan diatas mengacu penelitian Mariani (2015 ).

## 2.6. Analisis Data
Data  dianalisis  secara  statistik  dengan  menggunakan  analisis  ragam  (ANOVA) sesuai  dengan  rancangan  yang  digunakan  yaitu  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dan untuk  mendapatkan  perlakuan  terbaik  dilakukan  uji  jarak  berganda  Duncan  taraf signifikansi 5%.

## III. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Fertilisasi dan Daya Tetas Telur Ikan Tawes
Hasil  penelitian  yang  telah  dilaksanakan  diperoleh  data  fertilisasi  dan  daya  tetas telur ikan tawes seperti Tabel dan gambar dibawah ini :
Tabel  3.  Rataan  fertilisasi  dan  daya  tetas  telur  ikan  tawes  selama  percobaan  (sperma
pasca penyimpanan) Parameter uji Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 Fertilisasi, F (%) ± Stdev 25±4c 34,7±4c 42,7±1b 64,3±4a 51,7±4b Daya Tetas, HR (%) ± Stdev 14,3±4c 25±3c 32,3±2c 61,7±3a 38,3±1c
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Ket : standar deviasi (simpangan baku):  mengambarkan seberapa besar perbedaan nilai sampel terhadap rata-ratanya.  Semakin  besar  nilai  standar  deviasi  maka  data  sampel  semakin  menyebar  (bervariasi)  dari rata-ratanya. Sebaliknya jika semakin kecil maka data sampel semakin homogen (hampir sama).
Hasil  fertilisasi  dan  daya  tetas  telur  ikan  tawes  yang  tertera  di  Tabel  3 menunjukkan bahwa terdapat pengaruh nyata dari sperma yang diencerkan dengan NaCl fisiologis  dan  air  kelapa  muda  yang  telah  disimpan  pada  suhu  4 o C  (p<0.05).  Hasil percobaan  menunjukkan  fertilisasi  yang  terbaik  terdapat  pada  P 4 dengan  (0,7  %)  air kelapa muda dalam pengencer NaCl fisiologis dengan nilai rata – rata  64,3 %.
Fertilisasi  dapat  didukung  oleh  kualitas  spermatozoa  yang  baik.  Kualitas  sperma (konsentrasi spermatozoa, motilitas spermatozoa dan komposisi cairan  plasma semen) akan  berpengaruh  terhadap  fertilisasi  spermatozoa.  Tingkat  fertilisasi  nampaknya mengikuti apa yang terjadi pada tingkat kualitas sperma, jika motilitas yang meningkat memberikan fertilisasi yang tinggi. Hal ini sesuai dengan pendapat Adipu et al (2011), bahwa dengan adanya penambahan larutan NaCl dan air kelapa muda pada pengenceran sperma,  maka  lama  waktu  aktivitas  sperma  menjadi  panjang  sehingga  sperma memperoleh  banyak  waktu  untuk  menemukan  dan  membuahi  sel  telur  .  Adanya peningkatan waktu tersebut dapat memperpanjang daya tahan hidup dan keaktifan gerak spermatozoa  (Hidayahturahmah,  2007).  Pada  kondisi  pergerakan  sperma  aktif  dan lincah  sperma  mempunyai  kemampuan  dan  1,38  energi  untuk  menembus  lubang mikrofil  telur  (Adipu et  al ,  2011).  Nurman  (1998)  menyatakan  pembuahan  adalah proses terjadinya pertemuan antara spermatozoa dengan sel telur.
Proses  pembuahan  pada  sel  telur  sangat  dipengaruhi  oleh  kualitas  telur,  kualitas sperma dan kecepatan sperma untuk bergerak spontan sehingga mampu masuk kedalam lubang  mikrofil  pada  sel  telur.  Selain  itu,  Rizal  dan  Efizal  (1997)  menambahkan tingginya  tingkat  pembuahan  dikarenakan  tingkat  pergerakan  spermatozoa  yang semakian  aktif.  Pada  perlakuan  P1(  kontrol)  tanpa  konsentrasi  air  kelapa  muda  hanya NaCl  saja  mengalami  fertilasasi  terendah    dengan  nilai  rata-rata  sebesar  (25%) dibandingkan perlakuan P4 sebanyak 64,3, P2 sebanyak 36,6%, P3 sebanyak 42,6% dan P5  sebanyak  51,6%.  Diduga  dengan  NaCl  saja  tidak  memberikan  sumber  138  energi yang cukup untuk proses fertilisasi.
Sesuai  dengan  pendapat  Ardias  (2008)  yang  menyatakan  bahwa  keberhasilan fertilisasi  sangat  bergantung  pada  kualitas  dan  kuantitas  sperma,  kemudian  Iromo et al .(2007) juga menjelaskan bahwa tingginya fertilisasi berhubungan dengan komposisi pengencer  yang  mampu  memberikan  sumber  energi  dan  perlindungan  pada  sperma selama  disimpan  pada  suhu  rendah.  Selanjutnya  Adipu et  al .  (2011)  menyebutkan motilitas yang semakin menurun mengakibatkan daya fertilisasi sel telur menjadi lemah. Hal  ini  ditunjukkan  pada  data  pengamatan  motilitas,  dimana  semakin  lama  sperma disimpan  ketersediaan  nutrisi  sebagai  sumber  energi  pada  pengencer  akan  berkurang sehingga motilitas mengalami penurunan.
Menurut  Oyen et  al (  1991) dalam Syandri  (1993),  faktor  internal  yang berpengaruh  terhadap  daya  tetas  telur  adalah  perkembangan  embrio  yang  terhambat karena    kualitas  spermatozoa  dan  telur  kurang  baik.  Sedangkan  faktor  eksternal  yang
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
berpengaruh  terhadap  penetasan  telur  adalah  lingkungan  yang  didalamnya  terdapat temperatur  air,  oksigen  terlarut,  pH  ,  dan  amoniak.  Hal  ini  didukung  oleh  pernyataan Masrizal  dan  Efrizal  (1997)  bahwa  daya  tetas  telur  ikan  tawes  selalu  di  tentukan  oleh pembuahan  sperma,  kecuali  bila  ada  faktor  lingkungan  yang  mempengaruhi. Selanjutnya  dikemukakan  bahwa,  faktor  internal  yang  akan  mempengaruhi  tingkat penetasan  telur ikan tawes adalah perkembangan embrio yang terlambat akibat sperma yang kurang motil.
Hasil  yang  didapatkan  pada  perlakuan  P 4 bisa  dilihat  dari  baiknya  tinggkat motilitas  (82,33  %).  Hasil  penelitian  menunjukkan  P 4 dengan  kosentrasi  air  kelapa muda  7%  dalam  pengenceran  NaCl  fisiologis  spermatozoa  dapat  mengoptimalkan motilitas, viabilitas dan mortalitas selama penyimpanan 3 hari, diduga bahwa Air kelapa muda  dapat  mempertahankan  Mortalitas  dan  viabilitas  sperma  disebabkan  kandungan Air  kelapa  muda  yang  mampu  menutrisi  spermatozoa  sehingga  sperma  masih  dapat bertahan selama penyimpanan, (Mariani,2015).
Chew dan Zulkafli (2010) melaporkan bahwa hasil percobaan terhadap beberapa spesies  ikan  dengan  nilai  fertilisasi  tertinggi  20-55  %  pada  ikan  Lele  dumbo  dengan teknik penyimpanan sperma, sedangkan pada penetasan mendapatkan nilai tertinggi 20- 53 %  pada ikan Semah Malaysia.
Tabel 4. Fertilisasi dan penetasan pada beberapa spesies ikan Spesies Fertilisasi (%) Penetasan (%) Bard Jawa 12-100 5-75 Lele Dumbo 21-37 19-32 Isok Duri 1.2-10 0.8-4.6 Semah Malaysia 20-55 20-53
Ket: Extender (DMSO, ethanol, glyserol dan methanol)

## 3.2. Kualitas Spermatozoa Pasca Penyimpanan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilaksanakan  diperoleh  data  kualitas spermatozoa  ikan  tawes  pasca  pemberian  konsentrasi  air  kelapa  muda  dalam  NaCl fisiologis,  dengan    lama  penyimpanan  selama  3  hari  pada  suhu  4 0 C.  Didapatkan  hasil motilitas  tertinggi  pada  perlakuan  P 4 sebesar  (82,33  %).  Dengan  demikian  dapat disimpulkan  bahwa  spermatoza  pasca  penyimpanan  tersebut  masih  mampu  bertahan hidup dan bisa dilanjutkan ketahap fertilisasi.

## IV. Kesimpulan
1. Sperma pasca penyimpanan memberikan pengaruh nyata terhadap  angka fertilisasi dan daya tetas telur ikan tawes (Puntius javanicus).
2. Perlakuan  terbaik  adalah  P 4 (0,7%  NaCl  fisiologis  dan  air  kelapa)  dengan persentase nilai rataan yang tertinggi (64,3 %)
3. Daya tetas yang terbaik terdapat pada P 4 dengan nilai 61,6%.
Jurnal Perikanan Tropis Available online at: Volume 3, Nomor 1, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html
ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## Daftar Pustaka
Adipu Y, Sinjal H, dan Watung J. 2011. Ratio Pengenceran Sperma Terhadap Motilitas Spermatozoa,  Fertilisasi  dan  Daya  Tetas  Telur  Ikan  Lele (Clarias  sp).  Jurnal Perikanan dan Kelautan Tropis Vol. 7 NP. 1 April 2011. 48-55.
Akcay  E,  Y.  Bozkurt,  S.  Secer  &  N.  Tekun.  2004.  Cryopreservation  Of  Mirrol  Carp Semen. Turkey Journal Vetenary Animal Science 28: 837-843.
Ardias,  N.  2008.Peranan  NaCl  fisiologis  Terhadap  Derajad  Pembuahan,  Penetasan Telur  dan  Kelansungan  Hidup  Larva  Ikan  Koi Crypinus  Carpio. ( Skripsi ).
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, 48 hlm.
Chew P. C dan Zulkifli. A. R.  2010. Sperm Cryopreservation of Some Freshwater Fish Spesies  in  Malaysia .  Freshwater  Fisheries  Research  Division,  FRI  Glami  Lemi, Jelebu, Negeri Malaysia.
Fujaya,Y.  2002. Fisiologis  Ikan:Dasar  Pengembangan  Teknik  Perikanan ,  Penerbit Rineka Cipta, Jakarta. Jakarta.
Heryadi,  D.,  Sutisna  dan  Sutarmanta.  1995. Pembenihan  Ikan  Air  Tawar .  Kanisius, Yogyakarta.
Hidayaturrahmah  2007.  Waktu  Motilitas  dan  Viabilitas  Spermatozoa  dan  Peningkatan Volume  Semen  dan  Kualitas  Spermatozoa  Ikan  belutu  Melalui  Kombinasi Penyuntikan  HCG  dan  Ekstrak  Hipofisa  Ikan  Mas  http://jurnalpdn.irpi.co.id diakses
Horvath,.  E.  Miskolczi  dan  B.Urbayi.  2003. Cryopreservation  of  Common  Sperm . Aquatic  Living Resources16: 457 – 460.
Hui  W,  Xiaowen  Z,  Haizhen  W,  Jun  Q,  Pao  X,    dan  Ruiwei  L.  2012.  Joint  Effect  of Temperatur, Salinity ang pH on the Percentage Fertilization and Hacthing Rate of Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) . Aquaculture Research . Hal 1-11.
Iromo,  H.,  I.  Supriatna,  dan  E.  Riani.  2007.  Efektifitas  Pengencer  Laktat  Ringer, Modifikasi  Ringer  dan  Larutan  Fisiologis  NaCl  Terhadap  Viabilitas  Preservasi Spermtozoa Ikan Baung (Mystus nemurus ). Acuaqultura Indonesia 8 (1) : 49 - 57. Masrizal dan Efrizal  1997. Pengaruh Rasio Pengenceran Mani terhadap Fertilisasi. Minjoyo, H. 1993. Teknik Pembenihan Ikan Air Tawar. Penebar swadaya, Jakarta. Murtidjo.  2011 .  Beberapa  Metode  Pembenihan  Ikan  Air  Tawar .    Penerbit  Kanasius. Jogjakarta.
Sandy  A  W.  2005.  Pengaruh  subtitusi  Santan  Kelapa  pada  NaCl  fisiologisTerhadap waktu Penyimpanan Dan Kualitas Semen Ikan Mas (Cyprinus carpio L) . Skripsi . Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam.  Institut  Teknologi  Sepuluh November Surabaya.
Sinjal, H. 2014. Pengaruh Vitamin C Terhadap Perkembangan Gonad, Daya Tetas Telur dan Sintasan Larva Ikan Lele Dumbo (Clarias sp) . Jurnal 2 (1) 29-22
Sultana.M.,  M.  Nahiduzzaman,  M.M.  Hasan,  M.U.H.  Khanam  dan  M.A.R.  Hossain, 2010. J. Zool. Rajshahi. Univ. 28:51-55.
Sumantadinata, K., 1981. Pengembangan Ikan-Ikan Peliharaan Di indonesia. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Sunarma,  A.  2007.  Kriopreservasi  Spermatozoa  Ikan  Nilem  (Osteochilus  hasseltii) Menggunakan  Ekstender  Dan  Krioprotektan  Berbeda. Tesis .  Program Pascasarjana - Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto: xvii + 73 hlm.
Syandri  H.  1993.  Berbagai  Dosis  Ekstrak  Hipofisa  dan  Pengaruhnya  Mani  dan  Daya Tetas  Telur  Ikan  Mas (Cypinus  Carpio  L). Jurnal  Terubuku .  Fakultas  Perikanan Universitas Bung Hatta. Padang.