https://doi.org/10.22487/kovalen.2022.v8.i3.16175
Evaluasi Kadar Senyawa Fenolat, Flavonoid Total, serta Aktivitas Antioksidan Secara in vitro dalam Ekstrak Metanol Bawang Dayak ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr
[Evaluation of Phenolic Compounds, Total Flavonoid Content and in vitro Antioxidant Activity of Methanol Extract of Dayak Onion Bulbs ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr]
Farida Laila  , Ika Resmeiliana, Wina Yulianti, Atep Dian Supardan
Program Studi Analisis Kimia Sekolah Vokasi IPB University, Jl. Kumbang No 14 Bogor 16128
Abstract. Dayak onion bulbs are a plant originating from Kalimantan which has been used for generations to treat various diseases. This plant is quite easy to grow and develop in many places in Indonesia. The aims of the present study were to evaluate the antioxidant potential of the methanol extract of Dayak onion bulbs based on the total of the phenolic and flavonoids contents and also the antioxidant activity using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging ability, ferric reducing power, and total antioxidant capacity.  The results showed the total phenolic and flavonoid methanol extract of Dayak onion bulbs were 14.49 ± 1.42 mg GAE/g dry weight and 5.41 ± 1.01 mg QE/g dry weight, respectively. Antioxidant activity as measured by the DPPH, total antioxidant capacity and ferric reduction assay with IC 50 values of 16.95 ± 1.58 μg/mL, 24.22 ± 2.51 µg/mL, and 85.40 ± 16.88 µg/mL, respectively.  These  results  suggest  that  the  methanol  extract  of Dayak onion  bulbs  has  potential  bioactive compounds  with  good  antioxidant  activity  and  can  be  developed  as  an  effective  and  safe  source  of  natural compounds for functional food or herbal medicine.
Keywords: antioxidant, Dayak onion bulbs, phenolic, flavonoid
Abstrak. Bawang Dayak merupakan tumbuhan yang berasal dari Kalimantan yang telah digunakan turun-temurun untuk mengobati berbagai penyakit. Tumbuhan ini cukup mudah ditanam dan dikembangkan di sejumlah tempat di  Indonesia.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  potensi  antioksidan  ektrak  metanol  bawang  Dayak berdasarkan kandungan senyawa fenolat, flavonoid serta aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH, daya reduksi besi dan antioksidan total. Hasil yang diperoleh menunjukan ekstrak metanol bawang Dayak memiliki kadar senyawa fenolat dan flavonoid total berturut-turut sebesar 14,49 ± 1,42 mg GAE/g bahan kering dan 5,41 ± 1,01 mg QE/g bahan kering. Nilai IC 50 aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH, antioksidan total dan reduksi besi berturut-turut sebesar 16,95 ± 1,58 μg/mL; 24,22 ± 2,51 μg/mL dan 85,40 ± 16,88 μg/mL. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa  bawang Dayak  memilki senyawa  bioaktif  potensial  dengan  aktivitas  antioksidan  yang baik dan dapat dikembangkan untuk sebagai sumber antioksidan yang efektif dan aman untuk pangan fungsional atau obat herbal.
Kata kunci : antioksidan, bawang dayak, fenol, flavonoid
Diterima:  28 November 2022, Disetujui: 15 Desember 2022
Sitasi:   Laila,  F.,  Resmeiliana,  I.,  Yulianti,  W.,  dan  Supardan,  A.  D.  (2022).  Evaluasi  Kadar  Senyawa  Fenolat,  Flavonoid  Total,  serta Aktivitas Antioksidan Secara in vitro dalam Ekstrak Metanol Bawang Dayak ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr. KOVALEN: Jurnal Riset Kimia , 8(3): 298-307.
https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/kovalen
 Corresponding author E-mail : farida_laila@apps.ipb.ac.id
Laila et al.

## LATAR BELAKANG
Tekanan oksidatif adalah
ketidakseimbangan antara pembentukan spesies  oksigen  reaktif  di  dalam  sel  dan jaringan  tubuh  terhadap  sistem  pertahanan antioksidan (Pizzino et al. 2017). Pada keadaan stress,  tubuh  kita  menghasilkan  lebih  banyak spesies  oksigen  reaktif  (ROS)  seperti  radikal anion  superoksida,  radikal  hidroksil  dan hidrogen  peroksida  jika  dibandingkan  dengan jumlah antioksidan enzimatik seperti superoksida dismutase (SOD), glutation peroksidase (GPx) dan katalase serta antioksidan  non  enzimatik  seperti  asam askorbat  (vitamin  C),  tokoferol  (vitamin  E), glutation, karotenoid dan flavonoid.
Ketidakseimbangan  ini  dapat  menyebabkan terjadinya kerusakan sel. Kekurangan antioksidan  dapat  memicu  perkembangan penyakit-penyakit  degeneratif  seperti  penyakit kardiovaskular, kanker, penyakit neurodegeneratif,  alzheimer  serta  inflamasi (Krishnaiah et  al., 2010).  Oleh  karena  itu, diperlukan  asupan  antioksidan  eksogen  yang dapat  memperbaiki  kerusakan  akibat  tekanan oksidatif.
Sumber  antioksidan  alami  diantaranya berasal dari tumbuhan yang terutama mengandung  senyawa  fenolat  (asam  fenolat, flavonoid,  antosianin,  lignin  dan  stilbena), karotenoid  serta  vitamin  E  dan  C  (Xu et  al . 2017).  Sejumlah tanaman  telah banyak diteliti dan  terbukti  mampu  menangkap  ROS    serta mencegah peroksidasi lipid karena mengandung  antioksidan  alami  (Mishra et  a l.
2016). Selain itu, terdapat hubungan yang baik antara  pencegahan  penyakit  dan  konsumsi makanan yang kaya senyawa fenolat (Ibe et al.
2022)
Salah  satu  tanaman  yang  cukup  banyak diteliti  adalah  bawang  Dayak ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr) yang merupakan tanaman asli  dari  Kalimantan  Indonesia.  Tumbuhan  ini memiliki umbi menyerupai bawang merah yang memanjang. Komunitas suku Dayak di Kalimatan secara turun-temurun menggunakan tumbuhan  ini  sebagai  obat  tradisional  untuk mengobati  berbagai  penyakit  seperti  tekanan darah tinggi, kolesterol tinggi, diabetes, maag, sembelit,  stoke  dan  minuman  herbal  wanita pasca  melahirkan  (Mutiah et  al. 2020). Penelitian-penelitian  yang  telah  dilakukan mengenai khasiat bawang Dayak, diantaranya adalah potensi bawang Dayak untuk mengendalikan  dan  mencegah  hiperglikemia serta  kemampuan  menghambat  enzim  alfa glukosidase  (Febrinda et  al. 2022),  aktivitas antibakteri  (Wicaksono et  al. ,  2018),  serta berpotensi sebagai antimikoba terhadap MRSA ( methicilin-resistant  Staphylococcus  aureus )
(Subramaniam et al . 2012).
Potensi bawang
Dayak sebagai antioksidan  alami  secara in  vitro dapat ditentukan  berdasarkan  kandungan  senyawa fenolat  dan  flavonoid.  Penelitian  ini  bertujuan untuk menentukan kandungan senyawa fenolat,  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidan dalam ekstrak metanol bawang Dayak menggunakan  metode  DPPH,  daya  reduksi besi dan kapasitas antioksidan total.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan  kimia  yang  digunakan  pada penelitian ini, antara lain etanol, metanol, asam galat, Na 2 CO 3 , kuersetin, asam askorbat, AlCl 3 , asam  asetat,  asam  trikloroasetat,  kalium ferisianida (K 3 (Fe(CN) 6 ), 2,2-difenil-1-fikril hidrazil  (DPPH),  amonium  molibdat,  natrium
Laila et al.
fosfat, asam sulfat, asam galat, besi(III)klorida (FeCl 3 ) yang seluruhnya menggunakan produk Merck  Singapore.  Reagen  Folin  Ciocalteu mengggunakan produk Sigma-Aldrich USA.
Peralatan  yang  digunakan  antara  lain Spektrofotometer  Sinar  Tampak  (Thermo scientific Genesys 30 Visible), Rotary Evaporator (EYELA), Oven (Memmert), Neraca analitik dan peralatan gelas (IWAKI).

## Prosedur Penelitian

## Preparasi dan ekstraksi bawang dayak
Sampel  bawang  Dayak  yang  digunakan diperoleh  dari  hasil  kebun  percobaan  IPB University  di  daerah  Bogor.  Umbi  dipisahkan dari  batang  daun,  dibersihkan,  dicuci  dan dikeringudarakan. Sampel kemudian diiris tipis dan  ditentukan  kadar  airnya  dengan  cara dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  50⁰C, disimpan  dalam  wadah  kedap  udara  dan dihaluskan. Sampel kering sebanyak ditimbang 25  gram  dimaserasi  menggunakan  250  mL metanol  selama  5-6  jam  (3X).  Filtrat  disaring dan  ampas  diekstrak  kembali  dengan  125  mL metanol  selama  12  jam,  disaring  dan ditambahkan  lagi  50  mL  metanol,  dimaserasi kembali  selama  1  jam.  Ekstrak  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator .  Ekstrak disimpan dalam botol tertutup pada suhu 4 ᵅC sampai waktu analisis.

## Skrining pendahuluan kandungan fitokimia
Keberadaan  senyawa  fenolat,  flavonoid, alkaloid,  tannin,  saponin,  triterpenoid    Ekstrak metanol  bawang  Dayak  diuji  menggunakan metode yang disarankan oleh Harborne (1998). Uji  flavonoid  dilakukan  dengan  melarutkan bawang  Dayak  dengan  25  mL  air  panas  dan disaring. Filtrat ditambahkan 0,1 mg serbuk Mg dan 1 mL HCl pekat. Warna kuning atau jingga yang terbentuk menunjukkan adanya flavonoid.
Uji  alkaloid  dilakukan  dengan  melarutkan sampel  dalam  kloroform –  amoniak  (3:1), disaring dan filtrat ditambahkan beberapa tetes H 2 SO 4 2M. Lapisan asam yang tidak berwarna dipisahkan  ke  dalam  tiga  tabung  reaksi. Tabung pertama ditambahkan pereaksi Mayer, adanya  endapan  putih  menunjukkan  positif alkaloid. Tabung kedua menggunakan pereaksi Wagner  dengan  hasil  positif  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  coklat.  Tabung  ketiga menggunakan  pereaksi  Dragendorf  dengan hasil positif ditandai terbentuknya warna jingga. Uji triterpenoid dilakukan dengan menambahkan  25  mL  etil  asetat,  kemudian filtrat digunakan untuk uji triterpenoid menggunakan  pereaksi  Lieberman-Burchard dan hasil positif terbentuk warna merah coklat atau  kuning.  Residu  dilarutkan  dengan  air kemudian dipanaskan, adanya saponin ditandai  terbentuknya  busa  yang  bertahan selama  15  menit.  Uji  tanin  dilakukan  dengan melarutkan  sampel  dalam  metanol,  disaring dan  ditambahkan  FeCl 3 1%,  warna  hijau kehitaman atau biru yang menunjukkan adanya tannin pada sampel.

## Penentuan kadar senyawa fenolat total
Kandungan senyawa fenolat total ditentukan  menggunakan  prosedur  Folin- Ciocalteu  yang  disarankan  oleh    Slinkard  dan Singleton (1977). Ekstrak hasil preparasi dibuat larutan  sampel  induk  5000  mg/L  dalam  labu takar  100,0  mL  dalam  pelarut  metanol, kemudian  dipipet  ke  dalam  labu  takar  gelap 25.00  mL,  lalu  ditambahkan  0,5  mL  reagen Folin-Ciocalteu,  2  mL  Na 2 CO 3 2%  dan dibiarkan selama 2 menit, kemudian ditambahkan akuades sampai tera lalu dibiarkan selama 30 menit dalam ruang gelap.
Absorbansi
diukur menggunakan spektrofotometer  pada  750  nm.  Asam  galat

## Laila et al.
digunakan sebagai standar pada konsentrasi 5 –  15  mg/L  untuk  membuat  kurva  kalibrasi. Kadar fenolat total dinyatakan dalam milligram ekuivalen  asam  galat  per  gram  bahan  kering (mg GAE/g bahan kering).

## Penentuan kadar flavonoid total
Kandungan  flavonoid  total  dalam  ekstrak metanol  bawang  Dayak  diukur  menggunakan uji  kolorimetri  aluminium  klorida  (Djeridane et al. 2006).  Larutan  ekstrak  pada  beberapa konsentrasi (100-1000 mg/L) dan deret standar kuersetin  (2-12  mg/L)  dibuat  dalam  labu  takar 25  mL  dengan  penambahan  pereaksi  1  mL AlCl 3 10%  dan  ditera  menggunakan  asam asetat  5%  dan  diinkubasi  pada  suhu  ruang selama 30 menit. Larutan diukur menggunakan spektrofotometer pada 425 nm. Kadar flavonoid total dinyatakan sebagai mg ekuivalen kuersetin  per  gram  bahan  kering  (mg  QE/g bahan  kering)  menggunakan  kurva  kalibrasi standar kuersetin.
Uji aktivitas antioksidan secara in vitro a.  Aktivitas  penangkapan  radikal  ( radical scavenging activity )
Aktivitas antioksidan ekstrak metanol bawang Dayak diuji menggunakan metode DPPH  (Shimada et  al .  1992).  Larutan DPPH  0.01%  dalam  metanol  100% disiapkan. 2.0 mL larutan ini ditambahkan
6.0  mL  larutan  ekstrak  pada  beberapa konsentrasi  (25- 150  μg/mL).  Larutan diaduk  dan  diinkubasi  selama  30  menit dalam  ruang  gelap.  Absorbans  diukur pada 517 nm. Asam askorbat (1- 5 μg/mL)
digunakan  sebagai  standar.  Penurunan absorbansi menandakan
aktivitas penangkapan  radikal  yang  lebih  tinggi.
Aktivitas  penangkapan  radikal  DPPH
dihitung menggunakan Persamaan 1.
%Inhibisi= ( 1- As Ac ) x100  …..……...(1)
Keterangan: As adalah Absorbans sampel atau standar dan Ac adalah Absorbans kontrol negatif.
b.  Kapasitas antioksidan total
Kapasitas antioksidan
total ditentukan  menggunakan  metode  yang digunakan oleh Lfitat et al. (2021) dengan sedikit  modifikasi.  Deret  larutan  ekstrak (200- 1000  μg/mL)  dibuat  dalam  pelarut metanol.  Aliquot  (0,6  mL)  dicampurkan dengan  5,4  mL  larutan  pereaksi  (Na 3 PO 4 28  mM,  amonium  molibdat  4  mM  dan H 2 SO 4 0,6  M).  Tabung  reaksi  kemudian ditutup menggunakan kapas dan aluminium  foil  dan  diinkubasi  pada  suhu 95⁰C  selama  90  menit,  didinginkan kemudian absorbans diukur pada 695 nm terhadap blanko. Asam askorbat
digunakan sebagai standar (10-100
μg/mL). Kenaikan absorbans menandakan kenaikan  kapasitas  antioksidan.  Persen inhibisi ditentukan menggunakan Persamaan 2. %Inhibisi= ( As-Ac As ) x100  ……..…..(2)
Keterangan:
As adalah Absorbans sampel atau standar Ac adalah Absorbans kontrol negatif . c.  Daya reduksi besi(III)
Daya reduksi ekstrak metanol bawang  dayak  ditentukan  menggunakan metode  yang  dipakai  oleh  Lfitat et  al.
(2021) dengan beberapa modifikasi. 1 mL larutan ekstrak dengan beberapa konsentrasi (200- 1000 μg/mL)
ditambahkan 2,5 mL buffer fosfat 0,2 M pH 6,6  dan  2,5  mL  kalium  ferisianida kemudian diinkubasi pada 50⁰C selama 30 menit. Sebanyak 2,5 mL asam trikloroasetat  10%  ditambahkan  untuk
Laila et al.
menghentikan  reaksi,  disentrifuse  pada 3000 rpm selama 10 menit. 2,5 mL bagian atas larutan diambil dan ditambahkan 2,5 mL  akuades  dan  0,5  mL  FeCl 3 0,1%. absorbans  diukur  pada  700  nm.  Asam askorbat (5- 25 μg/mL) digunakan sebagai standar.
Kenaikan absorbans
menandakan  kenaikan  daya  reduksi.
Persen  inhibisi  ditentukan  menggunakan
Persamaan 3.
%Inhibisi= ( As-Ac As ) x100   ……..…(3)
Keterangan: As adalah Absorbans sampel atau standar Ac adalah Absorbans kontrol negatif .

## Analisis statistik
Analisis secara statistik dilakukan menggunakan uji One-way analysis of variance (ANOVA)  menggunakan  program  statistik
(Graphad Prism 9.2.0) dan perbedaan signifikan antar rerata ditentukan menggunakan  uji  tingkat  signifikan  Duncan pada  (p  <  0,05).  Perhitungan  IC 50 dilakukan menggunakan Graphad prism 9.2.0. Pengujian dilakukan sebanyak tiga kali ulangan dan hasil dinyatakan sebagai rerata ± SD.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Skrining Fitokimia
Fitokimia  merupakan    bahan  kimia  non- nutrisi  yang  terdapat  pada  bagian-bagian tumbuhan yang memilki kapasitas bioaktif yang berperan misalnya sebagai penghambat pertumbuhan  patogen  penyakit  dan  kapasitas antioksidan  dengan  cara  melindungi  sel-sel terhadap  tekanan  oksidatif  dan  kerusakan akibat  radikal  bebas  (Sharifi-Rad et  al. 2020).
Skrining  fitokimia  ekstrak  metanol  bawang Dayak  menunjukkan  keberadaaan  sejumlah metabolit  sekunder  antara  lain  flavonoid,
alkaloid, triterpenoid, saponin dan tanin (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil Uji Kualitatif Bawang Dayak Uji Pereaksi Pengamatan  Hasil Flavonoid Mg + HCl Jingga + Alkaloid Mayer Endapan putih + Wagner Endapan coklat + Dragendorf Endapan jingga + Triterpenoid Lieberman- Burchard Kuning + Saponin Uji Forth Busa + Tanin FeCl 3 Hijau kehitaman +
Kadar Senyawa Fenolat dan Flavonoid Total Kandungan senyawa fenolat dalam ekstrak  metanol  bawang  diperoleh  dari  kurva kalibrasi  asam  galat  (Gambar  1)  dengan persamaan  linear y=0,0745x –0,2434;  r 2 = 0,993, p<0,05) dan diperoleh sebesar  14,49 ± 1,42 mg GAE/g bahan kering. Kadar senyawa fenolat  dalam  bawang  Dayak  cukup  baik  jika dibandingkan  dengan  beberapa  literatur  yang meneliti  tumbuhan  lain  yang  sudah  banyak dikenal memiliki aktivitas antioksidan yang baik seperti  ekstrak  umbi  bit  yang  mengandung senyawa fenolat antara 1,28 – 18,8 mg GAE/g bahan kering (Kavalcová et al. 2015;  Koubaier
et al. 2014; Kujala et al. , 2001).
Kandungan  flavonoid  total  dinyatakan sebagai  ekuivalen  kuersetin  dalam  mg  QE/g bahan kering. Nilai flavonoid total diperoleh dari kurva  kalibrasi  kuersetin  (Gambar  1)  (y  = 0,0555x –0,0055; r 2 =  0,9992, p<0,05).  Ekstrak metanol bawang Dayak yang diperoleh sebesar 5,41 ± 1,01 mg QE/g bahan kering).
Laila et al.
Gambar 1. Kurva  standar  polifenol  (A); Kurva standar flavonoid (B)
Kandungan senyawa fenolat dan flavonoid bertanggung jawab terhadap aktivitas antioksidan.
Penelitian
yang dilakukan
Dudonn é et  al. (2009)  terhadap  tigapuluh macam ekstrak tumbuhan memberikan hubungan  yang  signifikan  antara  konsentrasi senyawa  fenolat  dengan  aktivitas  antioksidan mengggunakan metode
berdasarkan penangkapan  radikal  bebas  dan  kapasitas mereduksi  besi(III).  Senyawa  fenolat  memiliki efek penghambatan terhadap mutagenesis dan karsinogenesis  dalam  tubuh  manusia  yang mengkonsumsi  hingga  1  gram  per  hari  dari makanan buah dan sayuran (Sun et al . 2011).

## Aktivitas Antioksidan
Pada  penelitian  ini  pengujian  aktivitas antioksidan  dilakukan  menggunakan  tiga metode,  antara  lain  DPPH,  daya  reduksi  besi dan  kapasitas  antioksidan  total.  Gambar  2
menunjukkan persen inhibisi terhadap sejumlah konsentrasi ekstrak metanol bawang Dayak  yang  meningkat  dengan  naiknya konsentrasi  ekstrak.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  aktivitas  antioksidan  bergantung  pada konsentrasi ekstrak yang digunakan .
0 25 50 75 100 125 150 50 55 60 65 70 75 Konsentrasi ( μg/mL) % in h ib is i 0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 Konsentrasi ( μg/mL) % i n h ib is i 0 25 50 75 100 0 20 40 60 80 100 konsentrasi ( μg/mL) % i n h ib is i
Gambar 2. Kenaikan  persen  inhibisi  ekstrak terhadap konsentrasi ekstrak metanol bawang dayak metode (A)
DPPH;  (B)  reduksi  besi;  dan  (C) antioksidan total.
y = 0.0745x - 0.2434 R² = 0.993 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 5 10 15 20 A b sorban si [Fenol] (µg/mL) A y = 0.0555x - 0.0055 R² = 0.9992 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0 5 10 15 A b sorban si [Flavonoid] (µg/mL) B A B C

## Laila et al.
Tabel 2 dan Gambar 3 menunjukkan nilai IC 50 yang  diperoleh  dari  ketiga  pengujian  dan dibandingkan dengan nilai IC 50 asam askorbat.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  tumbuhan  dapat diklasifikasikan  berdasarkan  kriteria  jika  nilai IC 50 yang  diperoleh  <10 μ g/mL  termasuk memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat;  10 – 50 μ g/mL  termasuk  sedang;  50  -100 μ g/mL termasuk rendah dan jika >100 μ g/mL dianggap tidak aktif (Indrayanto et al., 2021).
Tabel 2. Nilai  IC 50 ekstrak  bawang  Dayak menggunakan metode DPPH, antioksidan total dan reduksi besi Metode IC 50 (µg/mL) Ekstrak bawang Dayak Asam askorbat DPPH 16,95 ± 1,58 0,413 ± 0,072 Total 24,22 ± 2,51 1,374 ± 0,043 Reduksi Besi 85,40 ± 16,88 1,475 ± 0,035
As DPPH BD DPPH As Total BD Total As Besi BD Besi 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 IC 50 k o n s e n tr a s i (μ g /m L ) 0,413 16,95 1,374 24,22 1,475 85,40
Gambar 3. Perbandingan IC 50 ekstrak bawang Dayak (BD) menggunakan metode DPPH,
antioksidan  total  dan  reduksi  besi terhadap IC 50 asam askorbat (As).
DPPH  merupakan  radikal  bebas  organik stabil  dengan  pita  absorpsi  pada  517  nm  dan kehilangan absorbsinya saat menerima elektron  atau  spesies  radikal  bebas  yang
menyebabkan  pudarnya  warna  ungu  secara visual  menjadi  kuning.  Antioksidan  telah diketahui  mampu  menangkap  radikal  bebas dari  rantai  oksidasi  dan  membentuk  radikal bebas stabil yang  tidak  memicu  atau menyebabkan  pengambatan  oksidasi  lebih lanjut  (Kedare  &  Singh,  2011).  Radikal  DPPH banyak digunakan untuk mengevaluasi kapasitas  penangkapan  radikal  bebas  dari antioksidan. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa  ekstrak  metanol  bawang  Dayak  dan asam  askorbat  efektif  mereduksi  radikal  stabil DPPH  menjadi  difenilfikrilhidrazil  berwarna kuning  yang  menandakan  ekstrak  aktif  dalam menangkap radikal DPPH. Hasil yang diperoleh menunjukan  bahwa  ekstrak  metanol  bawang Dayak  dengan  nilai  IC 50 16,95  ±  1,58  µg/mL tergolong memiliki aktivitas antioksidan sedang dan  memiliki  aktivitas  lebih  rendah  secara signifikan  jika  dibandingkan  asam  askorbat (p<0,05).
Kapasitas antioksidan total ekstrak bawang Dayak dalam pelarut metanol
ditentukan
menggunakan metode fosfomolibdenum  yang  berdasarkan  reduksi Mo(VI) menjadi  Mo(V) oleh senyawa-senyawa antioksidan dan pembentukan kompleks Mo(V) fosfat  berwarna  hijau  pada  pH  asam.  Nilai absorbans  yang  tinggi  menandakan  sampel memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  signifikan. Hasil yang diperoleh menunjukan IC 50 kapasitas antioksidan ekstrak metanol bawang Dayak (24,22 ± 2,51 µg/mL) termasuk sedang, dan  nilainya  masih  lebih  rendah  dibandingkan aktivitas antioksidan asam askorbat (p<0,05).
Daya  pereduksi  merupakan  salah  satu mekanisme  kerja  antioksidan  dan  dapat digunakan  sebagai  salah  satu  indikator  dari potensi  antioksidan  (Lfitat et  al .,  2021).  Daya reduksi umumnya berhubungan dengan
Laila et al.
keberadaan reduktan. Aktivitas reduktan antioksidan  berdasarkan  pemutusan  rantai radikal bebas dengan cara mendonorkan atom hidrogen.  Reduktan  juga  bereaksi  dengan prekursor-prekursor peroksida tertentu sehingga  mencegah  pembentukan  peroksida (Sannigrahi et  al .,  2010).  Uji  daya  reduksi  ini digunakan  untuk  mengevaluasi  kemampuan ekstrak  untuk  mereduksi  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ . Jumlah  Fe 2+ dimonitor  dengan  mengukur pembentukan  warna  biru  Prusia  pada  700  nm (Koksal et al ., 2011). Kapasitas ini dibandingkan  dengan  asam  askorbat  sebagai antioksidan  standar.  Ekstrak  metanol  bawang Dayak menunjukan daya reduksi sebesar 85,40 ±  16,88  µg/mL  serta  lebih  rendah  secara signifikan  (p  <  0.05)  daripada  asam  askorbat (1,475  ±  0,035  µg/mL).  Hasil  ini  menunjukkan ekstrak  metanol  bawang  Dayak  memiliki kemampuan  untuk  mendonorkan  elektron  ke radikal  bebas  reaktif  dan  diubah  menjadi produk-produk yang lebih stabil serta menghentikan  reaksi  rantai  radikal  bebas.  Hal ini kemungkinan disebabkan kandungan senyawa  fenolat  sebagai  reduktan  dengan mendonorkan  elektron  dan  bereaksi  dengan radikal-radikal  bebas  untuk  diubah  menjadi produk  yang  lebih  stabil  dan  menghentikan reaksi rantai radikal.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol bawang  Dayak  yang  diuji  menggunakan  tiga metode yang berbeda seluruhnya lebih rendah dibandingkan  aktivitas  standar  vitamin  C. Vitamin  C  memang  telah  terbukti  sebagai antioksidan  yang  sangat  baik  baik  secara in vitro maupun in vivo . Akan tetapi, pada kondisi terdapat  ion-ion  logam  bersifat  katalitik  dapat menyebabkan vitamin C juga berfungsi sebagai prooksidan. Vitamin C secara khusus ternyata mampu  mereduksi  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ yang
kemudian akan bereaksi dengan oksigen atau hidrogen peroksida membentuk radikal hidroksil  dan  superoksida  yang  akhirnya merusak  biomolekul.  Sifat  prooksidan  ini dipercaya  bergantung  pada  konsentrasi  serta keberadaan  ion-ion  logam  bersifat  katalitik (Kasote et al ., 2015)
Hasil
penentuan antioksidan menggunakan  tiga  metode  tersebut  tidak  bisa dibandingkan  satu  sama  lain  karena  memiliki mekanisme  yang  berbeda,  serta  bergantung pada  potensial  redoks,  pH  serta  pelarut  yang digunakan.  Pengujian  aktivitas  antioksidan secara in  vitro secara  langsung  dilakukan berdasarkan  transfer  atom  hidrogen  atau elektron  dari  antioksidan  terhadap  radikal bebas.  Aktivitas  antioksidan  yang  dilaporkan menggunakan  metode-metode  ini  secara umum  berhubungan  dengan  kapasitasnya untuk  menetralkan  jenis-jenis  tertentu  spesies radikal  yang  kemungkinan  kurang  relevan secara  biologis  (Munteanu  &  Apetrei,  2021). Aktivitas  antioksidan  yang  diperoleh  masih memerlukan validasi melalui pengujian secara in  vivo .  Akan  tetapi,  hasil  penelitian  ini diharapkan dapat memberikan informasi penting potensi bawang Dayak sebagai sumber antioksidan  alami  berdasarkan  pengujian secara in vitro.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa ekstrak metanol bawang Dayak yang dianalisis memiliki  kandungan  senyawa  fenolat  dan flavonoid yang cukup baik dan dapat dijadikan sebagai acuan keberadaan senyawa-senyawa yang  memiliki  aktivitas  antioksidan.  Hasil pengujian  antioksidan  menggunakan  metode DPPH,  reduksi  besi  dan  antioksidan  total menyimpulkan  adanya  aktivitas  antioksidan

## Laila et al.
yang  baik  walaupun  masih  lebih  rendah dibandingkan  asam  askorbat.  Hasil  penelitian ini  diharapkan  dapat  menjadi  acuan  untuk penelitian  lebih  lanjut  serta  dijadikan  referensi klaim tradisional mengenai manfaat therapeutik bawang Dayak.

## DAFTAR PUSTAKA
Djeridane,  A.,  M.  Yousfi,  B.  Nadjemi,  D.
Boutassouna,  P.  Stocker,  and  N.  Vidal.
(2006).  Antioxidant  Activity  of  Some
Algerian Medicinal Plants Extracts Containing  Phenolic  Compounds. Food Chemistry 97 (4), 654 –60.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2005. 04.028.
Febrinda,  Andi  Early,  Nancy  Dewi  Yuliana,
Tutik  Wresdiyati,  and  Made  Astawan.
(2022). Hypoglycaemic Effect of Bawang Dayak Extracts ( Eleutherine palmifolia ( L
.)  Merr  .)  on  Sprague  Dawley  Rats. E3S Web Conf., 2nd International Conference on  Applied  Sciences  2021  (ICAS  2021) , 348, 00029, pp. 1-7.
Harborne, J.B. (1998). Textbook of Phytochemical  Methods.  A  Guide  to Modern  Techniques  of  Plant  Analysis, Third Edition . Chapman & Hall, London.
Ibe, C.  I.,  Ajaegbu, E.E.,  Ajaghaku, A.A., Eze,
P.M.,  Onyeka,  I.P.,  Ezugwu,  C.O.,  and Okoye, F.B.C. (2022). In Vitro and in Vivo Antioxidant  Potential  of  the  Methanol Extract,  Its  Fractions  and  Isolated Compounds  of  Piliostigma  Thonningi. Phytomedicine  Plus 2  (4),  100335. https://doi.org/10.1016/j.phyplu.2022.100 335.
Indrayanto,  G.,  .Putra,  G.S.,  and  Suhud,  F. (2021).  Validation  of  In-Vitro  Bioassay Methods:  Application  in  Herbal  Drug Research. Profiles  of  Drug  Substances, Excipients  and  Related  Methodology , 46,273-307. https://doi.org/10.1016/bs.podrm.2020.07 .005.
Kasote, D. M., .Katyare, S.S., Hegde, M.V., and Bae, H. (2015). Significance of
Antioxidant  Potential  of  Plants  and  Its
Relevance  to  Therapeutic  Applications.
Int J Biol Sci., 11(8), 982 –991. https://doi.org/10.7150/ijbs.12096.
Kavalcová,  P.  .,  Bystrická,  J.  .,  Tomáš,  J.  ., Karovičová,  J.  .,  Kovarovič,  J.  .,  &
Lenková, M. (2015). The Content Of Total Polyphenols  And  Antioxidant  Activity  In Red  Beetroot. Potravinarstvo  Slovak Journal  of  Food  Sciences ,  9(1),  77 –83. https://doi.org/10.5219/441.
Kedare, S. B., and Singh, R.P. (2011). Genesis and  Development  of  DPPH  Method  of Antioxidant  Assay.  J Food  Sci  Technol. 2011 Aug, 48(4), 412 –422.
https://doi.org/10.1007/s13197-011- 0251-1.
Koksal,  E.,  Bursal,  E.,  Dikici,  E.,  Tozoglu,  F., and Gulcin, I. (2011). Antioxidant Activity of  Melissa  Officinalis  Leaves. Journal  of Medicinal Plants Research 5 (2): 217 –22.
Koubaier, H.B.H., Snoussi, H., and  Essaidi, I., Chaabouni, M., Thonart, P., and Buozouita,  N.  (2014).  Betalain  and Phenolic  Compositions  ,  Antioxidant Activity  of  Tunisian  Red  Beet  ( Beta Vulgaris L . Conditiva ) Roots and Stems
Extracts. International  Journal  of  Food Properties. 17(9), 1934-1945. https://doi.org/10.1080/10942912.2013.7 72196. Krishnaiah, D., Sarbatly, R., and Nithyanandam,  R.  (2010).  Food  and
Bioproducts  Processing  A  Review  of  the
Antioxidant  Potential  of  Medicinal  Plant
Species. F ood and Bioproducts Processing, 9(3), 217 –33.
https://doi.org/10.1016/j.fbp.2010.04.008.
Kujala, Tytti, Jyrki Loponen, and Kalevi Pihlaja. (2001).  Betalains  and  Phenolics  in  Red Beetroot  ( Beta  vulgaris )  Peel  Extracts : Extraction and Characterisation.
Z
Naturforsch C J Biosci., 56(5-6), 343-348. doi: 10.1515/znc-2001-5-604. PMID: 11421447.
Lfitat,  A., Zejli,  H.,  Bousraf, F.Z., Bousselham, A., El Atki, Y., Gourch, A., Lyoussi, B., and Abdellaoui, A. (2021). Comparative Assessment  of  Total  Phenolics  Content and in Vitro Antioxidant Capacity
Variations  of  Macerated  Leaf  Extracts  of Olea  Europaea  L.  And  Argania  Spinosa (L.) Skeels. Materials Today: Proceedings, 45, 7271 –77.
https://doi.org/10.1016/j.matpr.2020.12.990.

## Laila et al.
Mishra, T., Arya, R.K., Meena, S., Joshi, P., Pal,
M., Meena, B., Upreti, D. K., Rana, T. S., and Datta, D. (2016). Isolation,
Characterization and Anticancer Potential of Cytotoxic Triterpenes from Betula Utilis
Bark. PLoS ONE 11(7), 1 –14. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0159 430.
Munteanu,  I.  G.,  and  Apetrei,  C.  (2021).
Analytical  Methods  Used  in  Determining Antioxidant Activity :  A  Review. Int  J  Mol Sci. , 22(7), 3380.
doi:
10.3390/ijms22073380. PMID: 33806141.
Mutiah  R.,  Sari  R.A.,  Firsyaradha  W.Y.,
Listiyana  A., Indrawijaya  Y.Y.A., Wafi A., Suryadinata  A.,  Susilowati  R.,  and Rahmawati A. (2020). Activity and Toxicity of Eleutherine palmifolia (L.) Merr. Extract on BALB/c Mice Colitis-Associated Colon Cancer  Model. Asian  Pacific  Journal  of Cancer  Prevention, 21  (12),  3579 –3586. https://doi.org/10.31557/APJCP.2020.21. 12.3579.
Pizzino,  Gabriele,  Natasha  Irrera,  Mariapaola
Cucinotta,  Giovanni  Pallio,  Federica Mannino,  Vincenzo  Arcoraci,  Francesco Squadrito, Domenica Altavilla, and Alessandra Bitto. 2017. “Oxidative Stress: Harms  and  Benefits  for  Human  Health.”
Oxidative Medicine and Cellular Longevity 2017.
https://doi.org/10.1155/2017/8416763.
Sannigrahi, S., Kanti Mazuder, U., Kumar, Pal D.,  Parida,  S.,  and  Jain,  S.  (2010). Antioxidant Potential of Crude Extract and
Different  Fractions  of  Enhydra  Fluctuans Lour. Iranian  Journal  of  Pharmaceutical Research, 9 (1): 75 –82.
Sharifi-Rad,  M.,  Anil  Kumar,  NV.,  Zucca,  P., Varoni,  EM.,  Dini,  L.,  Panzarini,  E., Rajkovic, J., Tsouh, Fokou PV., Azzini, E, Peluso, I., Prakash Mishra, A., Nigam, M., El Rayess, Y., Beyrouthy, ME., Polito, L.,
Iriti, M., Martins, N., Martorell, M., Docea, AO.,  Setzer,  WN.,  Calina,  D.,  Cho,  WC., and  Sharifi-Rad,  J.  (2020).  Lifestyle, Oxidative  Stress,  and  Antioxidants:  Back and  Forth  in  the  Pathophysiology  of
Chronic Diseases. Frontiers in Physiology, 11, 694.
https://doi.org/10.3389/fphys.2020.00694
Shimada,  K.,  Fujikawa,  K.,  Yahara,  K.,  and Nakamurat,  T.  (1992).  Antioxidative properties of xanthan on the autoxidation of soybean oil in cyclodextrin emulsion. J. Agric. Food Chem., 40( 6), 945 –948.
Slinkard,  K.  and  Singleton,  V.L.  (1977).  Total
Phenol Analysis: Automation and Comparison with Manual Methods.
American  Journal of  Enology  and Viticulture, 28: 49 –55.
Subramaniam,  K.,  Suriyamoorthy,  S.,  Wahab, F.,  Sharon,  F.B.,  and  Rex,  G.R.  (2012). Antagonistic Activity of Eleutherine Palmifolia  Linn  Antagonistic  Activity  of Eleutherine Palmifolia Linn. Asian Pacific Journal  of  Tropical  Disease ,  2(1),  S491- S493. https://doi.org/10.1016/S2222- 1808(12)60208-4.
Sun,  L.,  Zhang,  J.,  Lu,  X.,  Zhang,  L.,  and Zhang,  Y.  (2011).  Evaluation  to  the Antioxidant  Activity  of  Total  Flavonoids Extract  from  Persimmon  ( Diospyros  kaki
L.) Leaves. Food and Chemical Toxicology, 49 (10), 2689 –96. https://doi.org/10.1016/j.fct.2011.07.042.
Wicaksono,  I.,  Runadi,  D.,  and  Firmansyah,  I. (2018).  Antibacterial  Activity  Test  of Dayak  Onions  (E leutherine  palmifolia L. Merr.)  Ethanolic  Extract  against  Shigella Dysenteriae ATCC 13313. National Journal  of  Physiology,  Pharmacy  and Pharmacology, 8 (5): 741-744.
https://doi.org/10.5455/njppp.2018.8.124 8625012018.
Dudonn é, S., Vitrac, X., Coutière, P., Woillez, ., and  M érillon,  J.  (2009).  Comparative
Study of Antioxidant Properties and Total Phenolic  Content  of  30  Plant  Extracts  of Industrial  Interest  Using  DPPH  ,  ABTS  , FRAP  ,  SOD  ,  and  ORAC  Assays. J. Agric. Food Chem. , 57(5), 1768 –1774.
Xu, D.P.,  Li,  Y., Meng, X.,  Zhou, T., Zhou,  Y., Zheng,  J.,  Zhang,  J.J.,  and  Li,  H.B. (2017). Natural Antioxidants in Foods and Medicinal Plants: Extraction, Assessment and  Resources. International  Journal  of
Molecular  Sciences, 18  (1),  20 –31. https://doi.org/10.3390/ijms18010096.