J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol. 8,  No. 2: 319 - 325,  Mei 2020

## PERTUMBUHAN  DAN  PATOGENISITAS  BEBERAPA  ISOLAT  MUTAN

## Metarhizium anisopliae TERHADAP HAMA PENGHISAP POLONG ( Riptortus  linearis )

## GROWTH AND  PATHOGENICITY  OF  Metarhizium  anisopliae  MUTANT ISOLATES ON  POD SUCKING  BUG (Riptortus linearis)
Puji Astuti*, Yuyun Fitriana, Lestari Wibowo dan FX. Susilo
.
Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Lampung JL. Prof. Dr. Soemantri Brojonegoro, No. 1 Bandar Lampung 35145
*Email: puji.astuti412@yahoo.com

## ABSTRACT
Growth and pathogenicity of Metarhizium anisopliae mutant isolates on pod sucking bug (Riptortus linearis). This study aimed to determine the growth ability of Metarhizium anisopliae mutant (colony diameter, spore density, and viability) and the ability of M. anisopliae to cause mortality in pod sucking bug(Riptortus linearis). The study conducted at the Laboratory of Agricultural Biotechnology, Faculty of Agriculture, University of Lampung. The study began in December 2016 - April 2017. M. anisopliae used in this study were isolate B wildtype (MYFT B), mutant M. anisopliae 1 (MYFT 1), mutant M. anisopliae 42 (MYFT 42), and M. mutant anisopliae 51 (MYFT 51). The results of this study indicated that the Myft B isolate (wildtype) had the widest diameter (5.50 cm) with the highest spore density in the MYFT 42 mutant isolate (7.4000 x 108 spores / ml) and the highest viability in the MYFT 51 mutant isolate (96.75%). MYFT 51 and MYFT 42 mutant isolates were able to cause 100 % mortality of R. linearis and significantly higher compared to the MYFT 1 mutant isolates and wildtype MYFT B.
Keywords: Metarhizium anisopliae, pathogenicity, growth, Riptortus linearis

## ABSTRAK
Pertumbuhan  dan  patogenisitas beberapa  isolat  mutan Metarhizium  anisopliae terhadap  hama penghisap polong ( Riptortus linearis ). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan pertumbuhan (diameter koloni, kerapatan spora, dan viabilitas) mutan jamur Metarhizium anisopliae dan mengetahui kemampuan jamur M. anisopliae dalam menyebabkan mortalitas hama pengisap polong ( Riptortus linearis) . Penelitian dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Penelitian dimulai bulan Desember 2016 - April 2017. M. anisopliae yang digunakan pada penelitian ini yaitu isolat B wildtype (MYFT B), mutan M. anisopliae 1 (MYFT 1), mutan M. anisopliae 42 (MYFT 42), dan mutan M. anisopliae 51 (MYFT 51).  Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa isolat Myft B ( wildtype ) memiliki diameter terlebar (5,50 cm) dengan kerapatan spora tertinggi pada isolat mutan MYFT 42 (7,4000 x 10 8 spora/ml) dan viabilitas tertinggi pada isolat mutan MYFT 51 (96,750%).  Isolat mutan MYFT 51 dan MYFT 42 mampu menyebabkan mortalitas R. linearis sebesar 100% dan secara nyata lebih tinggi dibandingkan dengan isolat mutan MYFT 1 dan wildtype MYFT B.
Kata Kunci : Metarhizium anisopliae, patogenisitas, pertumbuhan, Riptortus linearis.

## PENDAHULUAN
Kacang-kacangan  merupakan  tanaman sayuran semusim yang banyak dimanfaatkan oleh masyarakat  Indonesia.    Beragam  jenis  tanaman kacang-kacangan yang dapat ditemukan dengan mudah di Indonesia, antara lain kacang panjang, kedelai, kacang merah, kacang hijau dan lain-lain.Petani yang membudidayakan tanaman kacang-kacangan tersebar di dataran tinggi dan rendah.
Usaha budidaya kacang-kacangan di Indone- sia masih mengalami kendala, salah satunya adalah permasalahan hama. Terdapat beberapa spesies hama yang  mengisap  atau  perusak  polong  yaitu  kepik penghisap polong ( R.linearis F.) , kepik hijau (Nezara viridula) dan  kepik  piezodorus  ( Piezodorus rubrofasciatus). Diantara  ketiga  hama  tersebut, Penghisap polong ( R. linearis) mempunyai daerah penyerangan yang paling luas dan sangat merugikan (Asadi, 2009).  Kerugian ini terjadi karena serangganya secara langsung merusak biji sehingga menurunkan produksi dan kualitas biji.  Akibat serangan hama ini petani  dapat  mengalami  gagal  panen  jika  tidak dikendalikan (Marwoto, 2012).
Upaya pengendalian hama pengisap polong kedelai terus dikembangkan, antara lain pemanfaatan agensia hayati (Tengkano et al. , 1992).  Salah satu agensia hayati yang banyak dikembangkan adalah jamur entomopatogen.  Keunggulan penggunaan jamur entomopatogen sebagai pengendali populasi serangga hama adalah mampu membentuk spora yang tahan terhadap pengaruh lingkungan.  Salah satu jamur entomopatogen yang banyak dimanfaatkan dalam
pengendalian secara hayati adalah jamur M. anisopliae (Rosmayuningsih et al ., 2014).
Infeksi  jamur M.  anisopliae dapat menyebabkan kelumpuhan otot serangga (Samuels, 1998). M. anisopliae telah banyak digunakan untuk mengendalikan berbagai jenis hama tanaman, antara lain kumbang gandum ( Anisopliae austriaca ), hama tebu  ( Cleanus  punctiventris ),  kumbang  tanduk ( Oryctes rhinocheros ), hama bubuk kopi, termasuk juga hama penghisap buah kakao ( Helopeltisspp .) (Gunapradangga, 2014).
Penelitian  tentang  mutan  dari  jamur entomopatogen saat ini mulai banyak dilakukan. Mutan adalah organisme atau karakter genetik baru yang timbul atau dihasilkan karena adanya mutasi (Anonim, 2015). Mutan dari satu jenis entomopatogen dapat memiliki sifat unggul dalam kemampuan menginfeksi serangga inangnya. Metarhizium dalam bentuk mutan yang dihasilkan karna proses radiasi perlu diteliti apakah juga memiliki keunggulan.
Pada penelitian ini akan diamati pertumbuhan beberapa isolat mutan M. anisopliae dan mortalitas serangga uji akibat aplikasi beberapa isolat jamur mutan M.anisopliae .  Mortalitas  pada  serangga  uji menggambarkan  patogenisitas  dari  jamur entomopatogen.

## BAHAN DAN METODE
Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu mutan dan wildtype M. anisopliae (Tabel 1), alkohol, kacang panjang, aquades , kentang, agar batang, gula, kertas label, nimfa R. linearis instar 3, sedangkan alat
yang digunakan pada penelitian ini yaitu stoples plastik untuk pemeliharaan serangga uji, sprayer , cawan petri, karet gelang, jarum ose, laminar air flow (LAF), mikroskop,  spatula,  tabung  reaksi,  erlenmeyer, haemocytometer , drigalsky ,  bunsen, autoklaf ,
shaker , mikropipet, borgabus, stoples, timbangan, kompor, ketas label, kain kasa, karet, tisu, nampan, dan kuas.
Penelitian ini terdiri dari 2 set percobaan. Percobaan yang pertama yaitu uji pertumbuhan M. anisopliae mutan dan wildtype secara in vitro dalam media PDA.
Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan empat perlakuan yang diulang sebanyak empat kali. Variabel yang diamati yaitu pertumbuhan koloni M. anisopliae , kerapatan dan viabilitas spora M. anisopliae . Perlakuannya adalah aplikasi suspensi MYFT B, MYFT 1, MYFT 42 dan MYFT 51 (Tabel 1).
Set  percobaan  yang  kedua  adalah  uji patogenesitas  mutan  dan wildtype  M.  anisopliae terhadap R. linearis . Percobaan ini menggunakan Rancangan Acak  Kelompok  (RAK),  dengan  5 perlakuan dan diulang 4 kali, sehingga terdapat 20 unit percobaan.  Dalam 1 unit percobaan menggunakan 10
ekor  serangga.  Perlakuan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :
1. MYFT B:  Aplikasi suspensi jamur wildtype M. anispoliae B  dengan  kerapatan  spora  n  x  108 spora/ml.
2. MYFT  1:  Aplikasi suspensi jamur mutan M. anisopliae 1 dengan kerapatan spora n x108 spora/
ml.
3. MYFT 42 :  Aplikasi suspensi jamur mutan M. anisopliae 42 dengan  kerapatan spora n x 108 spora/ml.
4.MYFT  51: Aplikasi  suspensi  jamur  mutan M. anisopliae 51 dengan kerapatan spora n x 108 spora/ml.
5.Kontrol (0,1 % Tween 80).
Variabel yang diamati pada penelitian ini antara lain pertumbuhan jamur M. anisopliae wildtype dan mutan.  Pengamatan pertumbuhan jamur dilakukan cara mengukur diameter koloni jamur secara vertikal dan horizontal lalu dijumlahkan dan dibagi dengan 2. Pengamatan dilakukan setiap hari dimulai 1 hari setelah inokulasi selama 14 hari.
Selanjutnya yaitu kerapatan spora dengan menggunakan suspensi spora yang telah didapatkan lalu
Tabel 1. Isolat yang digunakan dalam penelitian
Isolat Kode Asal isolate Metarhizium anisopliae B (wild type) MYFT B
Larva Heptophylla picea dan larva kumbang dari Shizuoka
Mutan Metarhizium  anisopliae 1 MYFT 1 Irradiasi ion-beam (100) Gy Mutan Metarhizium  anisopliae 42 MYFT 42 Irradiasi Gamma-ray (100) Gy Mutan Metarhizium  anisopliae 51 MYFT 51 Irradiasi Gamma-ray (100) Gy
322 Jurnal Agrotek Tropika 8(2): 319-325, 2020
diteteskan  pada haemocytometer ,  dilakukan pengenceran 108 setelah itu diambil 1 ml dari masing- masing  perlakuan  tersebut  dan  diteteskan  pada haemocytometer. Kemudian dilakukan pengamatan di bawah mikroskop.  Penghitungan kerapatan spora dilakukan dengan cara memilih 3 kotak perhitungan, tiap kotak tersebut dihitung dan dirata-rata nilainya. Kerapatan spora dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut :

## S= R x K x F
Keterangan : S = Jumlah spora/ml R= Jumlah rata-rata spora pada 5 kotak sedang haemocytometer K= Konstanta koefisien alat (2,5x10)
F= Faktor Pengenceran yang digunakan
Selanjutnya dilakukan penghitungan viabilitas spora dengan cara suspensi sampel yang telah diamati kerapatan sporanya kemudian diteteskan sebanyak 25 µl pada media PSA dan diinkubasi selama 16 jam. Pengamatan viabilitas dilakukan di bawah mikroskop.
Viabilitas spora dihitung apabila ada spora yang mulai berkecambah. Spora dikatakan berkecambah apabila
panjang ukuran spora bertambah. Viabilitas spora dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
Keterangan : V = Perkecambahan spora (viabilitas) g = Jumlah spora yang berkecambah u = Jumlah spora yang tidak berkec ambah
Pengamatan  mortalitas  hama R.  linearis dilakukan setiap hari selama 7 hsa sampai nimfa menjadi imago dan sampai serangga uji mati, baik yang diberi perlakuan semprot atau kontrol.  Nimfa R. linearis yang diduga terinfeksi jamur M. anisopliae dipisahkan dalam  wadah  untuk  dilembapkan  dengan  cara dimasukkan ke dalam cawan petri yang sudah dilapisi tisu basah, kemudian diamati di bawah mikroskop untuk  memastikan  mortalitas  nimfa R.  linearis disebabkan oleh larutan jamur M. anisopliae. untuk menghitung  mortalitas  nimfa  dapat  dilakukan perhitungan dengan rumus sebagai berikut :
Perlakuan Diameter koloni (cm) Kerapatan spora (x 108/ml) Viabilitas spora (100%) MYFT B 5,50 a 1,6750 b 88,250 ab MYFT 1 4,25 b 4,1500 ab 83,500 ab MYFT 51 3,00 c 5,7750 ab 96,750 a MYFT 42 3,75 bc 7,4000 a 80, 250 b Fhit 11,8* 4,44* 2,32* BNT (0,05) 1,07 4,07 16,54
Tabel 2. Pertumbuhan jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B, dan isolat mutan MYFT 1, MYFT 51 dan MYFT 42 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil penelitian memperlihatkan bahwa jamur
M. anisopliae isolat wildtype MYFT B danjamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 1, MYFT 51, MYFT 42 mampu tumbuh dan berkembang dengan normal. Jamur M.  anisopliae isolat  mutan  MYFT  42 menghasilkan spora yang lebih banyak dibandingkan jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 1, MYFT 51  dan  isolat wildtype MYFT  B,  namun  daya kecambah isolat mutanMYFT 42 tidak lebih tinggi dari ke tiga isolat tersebut.  Data pertumbuhan jamur M. anisopliae tertera pada Tabel 2.

## Diameter Koloni
Diameter koloni jamur M. anisopliae berbeda nyata antar isolat.  Diameter koloni tertinggi ditunjukkan oleh jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B yaitu sebesar 5,50 cm.  Jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B mampu tumbuh dengan baik dan secara  nyata  memiliki  diameter  koloni  tertinggi dibandingkan ketiga isolat jamur lainnya.  Jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 51 memiliki diameter terendah yaitu sebesar 3,00 cm.
Kerapatan Spora
Jamur M. anisopliae memiliki kerapatan spora yang berbeda antar isolat . Jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 42 mempunyai kerapatan spora tertinggi yaitu  sebesar  7,4000x  10 8 spora/ml.    Jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 42 tidak berbeda nyata dengan jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 1 dan MYFT 51 yaitu sebesar 4,1500 x 10 8 spora/ml dan 5,7750 x 10 8 spora/ml.  Kerapatan spora terendah didapatkan  jamur M.  anisopliae isolat wildtype
MYFT B yang hanya mencapai 1,6750 x 10 8 spora/ml Viabilitas Spora
Viabilitas spora jamur M. anisopliae berbeda antar isolat.  Viabilitas Spora M. anisopliae yang memiliki daya berkecambah paling tinggi yaitu jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 51 yang mencapai 96,7%,  dan  berbeda  nyata  dengan  jamur M. anisopliae isolat  mutan  MYFT  42  dengan perkecambahan spora sebesar 80,2%.  Jamur dengan nilai perkecambahan spora yang tidak berbeda nyata dengan jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 51 adalah jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B dan jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 1 dengan kisaran perkecambahan sebesar 88,2% dan 83,5%. Perkecambahan spora paling rendah diperoleh pada jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 42 yaitu sebesar 80,2%.  Baik jamur mutan maupun wildtype mampu  berkecambah  dengan  baik  dimana  daya kecambah lebih dari 80%.
Pengaruh Aplikasi Jamur Metarizium anisopliae terhadap Riptortus linearis
Jamur  mutan  dan wildtype  M.  anisopliae memiliki kemampuan yang berbeda.  Berdasarkan Tabel 3, dapat dilihat bahwa jamur M. anisopliae mempunyai kemampuan yang berbeda dalam membunuh serangga R. linearis.  M. anisopliae yang memiliki kemampuan menyebabkan mortalitas paling tinggi yaitu jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 51 dan MYFT 42 yang mencapai 100% hingga hari ke 7 setelah aplikasi, namun jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT 51 yang lebih dulu dapat menyebabkan kematian hama R.  linearis .    Kemampuan  membunuh  jamur
M. anisopliae isolat mutan MYFT 51 tidak berbeda nyata dengan jamur M. anisopliae isolat mutanMYFT 42, tetapi berbeda nyata dengan jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B dan jamur M. anisopliae isolat  mutan  MYFT  1  dengan  mortalitas  sebesar 87,50%  dan  92,50%.    Mortalitas  paling  rendah dihasilkan oleh jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B yaitu mencapai 87,50%.
Hasil penelitian memperlihatkan bahwa jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B dan jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 1, MYFT 51, MYFT 42 mampu tumbuh dan berkembang dengan normal. Isolat mutan MYFT 42 menghasilkan spora yang lebih banyak dibandingkan jamur M. anisopliae isolat mutan MYFT 1, MYFT 51 dan isolat wildtype MYFT B, daya kecambah isolat mutan MYFT 42 tidak lebih tinggi dari ke tiga isolat tersebut.  Namun dengan demikian jumlah  konidia  yang  tinggi  atau  rendah,  tidak mempengaruhi jamur entomopatogen dalam membunuh hama sasaran.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah pertumbuhan diameter koloni jamur Metarhizium
anisopliae isolat wildtype MYFT  B  lebih  tinggi dibandingkan dengan isolat mutan (MYFT 1, MYFT 51  dan  MYFT  42) , kerapatan  spora  jamur M. anisopliae isolat  mutan  MYFT  42  lebih  tinggi dibandingkan dengan isolat wildtype MYFT B , dan viabilitas spora jamur M. anisopliae isolat wildtype MYFT B tidak berbeda nyata dengan isolat mutan (MYFT 1, MYFT 51 dan MYFT 42).  Jamur M. anisopliae isolat mutan (MYFT 1, MYFT 51 dan MYFT  42)  secara  nyata  mampu  menyebabkan mortalitas lebih tinggi terhadap hama Riptortus linearis dibandingkan isolat wildtype MYFT B.
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  penulis menyarankan Perlu adanya penelitian lebih lanjut tentang penggunaan isolat M. anisopliae ini dengan tingkat kerapatan spora yang berbeda-beda sehingga dapat diketahui konsentrasi kerapatan spora yang pal- ing efektif dalam menginfeksi R. linearis .
Perlakuan Mortalitas R. linearis (%) MYFT B 87,50 c MYFT 1 92,50 b MYFT 51 100,00 a MYFT 42 100,00 a Fhit 598,25* BNT (0,05) 2,98 Tabel 3. Mortalitas R. linearis (%) setelah diaplikasi jamur M.anisopliae 7 HSA

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.    2015. Pengertian  Mutan . http:// biosend.blogspot.co.id/2015/10/pengertian- mutan.html . Diakses 22 Januari 2017.
Asadi. 2009. Identifikasi ketahanan sumber daya genetik  kedelai  terhadap  hama  pengisap polong. Buletin Plasma Nutfah. 15(1): 27-
31.
Gunapradangga, A.2014. Metarhizium anisopliae . h t t p : / / a g r i k e n c a n a p e r k a s a . c o m / metarhizium-anisopliae/ .Diakses  11  Mei 2016.
Marwoto. 2012. Waspadai pengisap polong Riptortus pada kedelai di musim k e m a r a u . h t t p : / / balitkabi.litbang.pertanian.go.id/kilas- litbang/1644- waspada-pengisap-polong- ri pt or tus -pada-kedelai-di-musi m- kemarau.pdf. Diakses 20 Agustus 2017.
Rosmayuningsih,  A.,  B.  T.  Rahardjo.,  & Rachmawati.2014.    Patogenisitas  jamur
Metarhizium  anisopliae terhadap  hama kepinding  tanah  ( Stibaropus  molginus )
(Hemiptera:Cydnidae)  dari  beberapa formulasi. Jurnal  Hama  Penyakit Tanaman .2(2):  28-37.
Samuels,  R.I.1998.Systematics  morphology  and physiology:  A sensitive bioassay for dextru- xins, cyciodepsipeptides from the culture filtrates  of  the  entomopathonic  fungus Metarhizium anisopliae (Metch.) Sorok. An. Soc. Entomol .  27(2): 229-235.
Tengkano,  W.,Arifin,  M.,  &Tohir, A.  M.    1992.
Bioekologi,  Serangan  dan  Pengendalian Hama  Pengisap  dan  Penggerek  Polong Kedelai .    Dalam  Marwoto,  N.  Saleh, Sunardi,  & A.  Winarto  (Ed.s).  Risalah Lokakarya  Pengendalian  Hama  Terpadu Tanaman  Kedelai, Malang 8"10 Agustus 1991.  Balai  Penelitian Tanaman  Pangan Malang. Hlm 117"153.