## VARIASI WAKTU EKSTRAKSI DAN JENIS ASAM PADA PROSES PRODUKSI GELATIN TULANG IKAN NILA (Oreochromis niloticus)
Neneng Suliasih, Asep Dedy Sutrisno, Nabella Respatyana
Program Studi Teknologi Pangan, Fakultas Teknik, Universitas Pasundan Jl. Dr. Setiabudi No. 193 Bandung 40153, Indonesia
Email : nenengsuliasih@unpas.ac.id

## Abstract
The purpose of this research is to find out determine the effect of the most effective extraction time and to determine the effect of the most effective type of acid in the production process of gelatin bone of tilapia fish. This research was using by Split Plot Design (SPD) with 3 times replication, so make 27 experiments were obtained. For main plot is extraction time (4 hours, 5 hours and 6 hours) and subplot is type of acid (4% chloride acid, 3% acetic acid and 6% citrate acid). Response  in  this  research  is  physical  response  such  as  gel  gelatin  strength,  viscosity  and  rendement  total,  chemical response such as pH, protein content and ash content and test of bone gelatin of tilapia fish with commercial gelatin. The main research result showed that the extraction time had significant effect on gelatin gel strength, gelatin viscosity, gelatin rendement, acidity degree (pH) of gelatin, gelatin protein content and gelatin ash content. Types of acid had significant effect on gelatin gel strength, gelatin renedement, acidity degree (pH) of gelatin, gelatin protein content and gelatin ash content,  and  interaction  of  time  of  extraction  and  type  of  acid    had  significant  effect  on  gelatin  gel  strength,  gelatin viscosity,  gelatin  rendement,  acidity  degree  (pH)  of  gelatin,  gelatin  protein  content  and  gelatin  ash  content  to  the extraction process of bone gelatin of tilapia fish. Based on the comparative test, the characteristics of gelatin of tilapia bone that close to commercial gelatin are a3b2 treatment (6 hours of extraction time, 3% acetic acid) with the result of gelatin gel strength 132,93 bloom; viscosity 5,83 cP; the amount of rendement 16,94; pH 6,10; protein content 83,62%; and ash content of 0.64%.
Keywords : Gelatin, Tilapia Bone, Gelatin Extraction, Type of Acid, Extraction Time.

## 1. Pendahuluan
Gelatin  merupakan  protein  hasil  hidrolisis  parsial kolagen  tulang  dan  kulit.  Penggunaan  gelatin  sangat luas  khususnya  dalam  bidang  industri,  baik  industri pangan  maupun  non  pangan.  Gelatin  memiliki  sifat yang khas, yaitu berubah secara reversible dari bentuk sol ke bentuk gel, mengembang dalam air dingin, dapat membentuk  film serta mempengaruhi viskositas suatu bahan dan dapat melindungi sistem koloid. Kelarutannya dalam air membuat gelatin diaplikasikan untuk keperluan berbagai industri (Wahyuni, 2003).
Ikan  dapat  digunakan  sebagai  bahan  baku  gelatin. Ikan nila merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang dibudidayakan oleh masyarakat Indonesia. Permintaan akan  daging fillet nila  sangat  tinggi.  Tercatat  ekspor fillet ikan  nila  dalam  bentuk  beku  Indonesia  di  pasar Amerika  Serikat  menduduki  peringkat  ke  dua  setelah Cina.(Haris, 2008).
Asam mampu mengubah serat kolagen triple heliks menjadi  rantai  tunggal,  sedangkan  larutan  perendam basa hanya mampu menghasilkan rantai ganda. Hal ini menyebabkan  pada  waktu  yang  sama  jumlah  kolagen yang  dihidrolisis  oleh  larutan  asam  lebih  banyak daripada  larutan  basa.  Karena  itu  perendaman  dalam larutan  basa  membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama
untuk menghidrolisis kolagen        (Ward dan Courts, 1977).
Pada  tahap  perendaman  dapat  dilakukan  dengan larutan  asam  organik  seperti  asam  asetat,  sitrat, fumarat,  askorbat,  malat,  suksinat,  tartarat,  dan  asam lainnya  yang  aman  dan  tidak  menusuk  hidung. Sedangkan  asam  anorganik  yang  biasa  digunakan adalah  asam  hidroklorat,  fosfat,  klorida,  dan  sulfat (Ward dan Courts, 1977).
Gelatin diperoleh dengan cara denaturasi panas dari kolagen (Amiruldin, 2007).
Ekstraksi adalah proses denaturasi untuk mengubah kolagen menjadi gelatin dengan penambahan senyawa pemecah  ikatan  hidrogen  pada  suhu  kamar  atau  suhu yang  lebih  rendah.  Ekstraksi  juga  dapat  dilakukan dengan menggunakan air panas, dimana pada proses ini terjadi denaturasi, peningkatan hidrolisis dan kelarutan gelatin. Waktu yang diperlukan untuk ekstraksi adalah 4  –  8  jam  dengan  suhu  antara  55  –  100 ℃ .  Setelah diperoleh ekstrak bersih, dilakukan pengeringan untuk mengurangi kadar air sebanyak 85 – 90%. Hal ini dapat dilakukan  dengan  menggunakan  evaporator  vakum dengan  suhu  43  –  45 ℃ dan  dilanjutkan  dengan menggunakan oven pada suhu antara 30 – 60 ℃ (Hadi, 2005).

## 2. Bahan dan Metode
Bahan baku yang digunakan adalah tulang ikan nila berumur  4  bulan,  5  bulan  dan  6  bulan  bagian  badan yang  diperoleh  dari  perairan  waduk  cirata  cianjur. Bahan  tambahan  yang  digunakan  adalah  HCl  4%, CH3COOH 3%, C6H8O7 6%, akuades.
Alat  yang  digunakan  untuk  proses  penelitian  ini adalah  pisau,  baskom,  timbangan,  panci,  termometer, talenan, toples, gelas kimia dan kain blacu.
Penelitian pendahuluan yang dilakukaan bertujuan untuk  mengetahui  kandungan  protein  yang  ada  di dalam tiap tulang ikan nila pada ikan nila yang berumur 4  bulan  yang  memiliki  berat  berkisar  150  –  170  g,  5 bulan yang memiliki berat berkisar 190 - 210 g dan 6 bulan  yang  memiliki  berat  berkisar  240  –  260  g sebelum dilakukan proses ekstraksi gelatin.
Penelitian  utama  yang  dilakukan  yaitu  proses ekstraksi  gelatin  dari  tulang  ikan  nila,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  interaksi  antara  waktu ekstraksi  dan  jenis  asam  yang  digunakan  terhadap respon fisik, kimia dan uji banding pada gelatin tulang ikan  nila.  Sehingga  dapat  ditentukan  sampel  terpilih yang memiliki karakteristik seperti gelatin komersial.

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Penelitian Pendahuluan
Analisis Protein metode Kjedhal yang dilakukan pada tulang ikan yang berumur 4 bulan dengan  berat  ikan 150 – 170 g, 5 bulan dengan berat ikan      190 – 210 g, serta 6 bulan dengan berat ikan 240 – 260 g. Berat tulang ikan sendiri yaitu berkisar 8 – 10% dari berat ikan utuh.
Umur Ikan Kadar Protein (%) 4 Bulan 21,64 5 Bulan 22,77 6 Bulan 24,12
Pada penelitian pendahuluan ini didapatkan hasil tulang ikan  yang  memiliki  kandungan  protein  paling  tinggi adalah  pada  tulang  ikan  yang  berumur  6  bulan  yaitu 24,12%, sehingga tulang ikan nila yang digunakan pada penelitian  utama  adalah  ikan  nila  yang  berumur  6 bulan.Kandungan  protein  pada  ikan  dalam  jaringan tubuh  dan tulangnya akan meningkat  disaat  mencapai pada umur yang optimal (Buwano, 2004).

## 3.2 Penelitian Utama
Respon Fisik Kekuatan Gel Gelatin
Keterangan: Huruf besar dibaca vertical dan huruf kecil dibaca horizontal.
Dari tabel diatas dapat dilihat pada perlakuan jenis asam  b 1 (Asam  Klorida  4%)  semakin  lama  waktu ekstraksi  semakin  tinggi  kekuatan  gel  gelatinnya begitupula pada perlakukan jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%)  dan  b 3 (Asam  Sitrat  6%).  Hal  ini  disebabkan karena pembentukan gel gelatin terjadi saat pengembangan molekul gelatin pada waktu pemanasan.  Panas  akan  membuka  ikatan-ikatan  pada molekul gelatin dan cairan yang semula bebas mengalir menjadi  terperangkap  di  dalam  struktur  tersebut, sehingga terbentuk gel yang kental (Stainsby, 1977).
Dari tabel diatas dapat dilihat pula pada perlakuan waktu  ekstraksi  a 1 (4 jam) jenis asam  b 1 (Asam Klorida 4%) memiliki kekuatan gel gelatin yang paling tinggi, tetapi  pada perlakuan a 2 (5 jam) dan a 3 (6 jam) jenis  asam  b 2 (Asam  Asetat  3%)    yang  memiliki kekuatan gel  gelatin  paling tinggi. Hal  ini disebabkan karena  konsentrasi  asam  yang  semakin  tinggi  dan peningkatan  waktu  ekstraksi  menyebabkan  terjadinya hidrolisis lanjutan pada kolagen yang sudah terkonversi menjadi  gelatin, yang menyebabkan pendeknya rantai asam  amino  sehingga  kekuatan  gel  menjadi  rendah. Menurut  Stainsby  (1977),  kekuatan  gel  berhubungan dengan  panjang  rantai  asam  aminonya.  Pembentukan gel gelatin dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain pH.  Dari  hasil  penelitian  ini  terlihat  adanya kecenderungan  hubungan  antara  nilai  pH,  viskositas dan  kekuatan  gel.  Apabila  nilai  pH  tinggi  maka viskositas  dan  kekuatan  gel  akan  menurun.  Hal  ini disebabkan rantai polipeptida hasil hidrolisis mengalami degradasi melalui hidrolisis lanjutan akibat adanya  sisa  ion  H + ,  efeknya  adalah  rantai  polpeptida pembentuk  struktur  tiga  dimensi  menjadi  semakin pendek sehingga kekuatan gel semakin menurun.
Dari  hasil  analisis  didapat  kekuatan  gel  gelatin paling  tinggi  diperoleh  oleh  perlakuan  a 3 b 2 (waktu ekstraksi 6 jam ; asam asetat 3%).
Viskositas Gelatin
Keterangan: Huruf besar dibaca vertical dan huruf kecil dibaca horizontal.
Dari tabel diatas dapat dilihat pada perlakuan jenis asam  b 1 (Asam  Klorida  4%)  semakin  lama  waktu ekstraksi semakin tinggi viskositas gelatinnya begitupula pada perlakukan jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%), tetapi pada perlakuan jenis asam b 3 (Asam Sitrat 6%)  waktu  ekstraksi  a 2 (5  jam)  dan  a 3 (6  jam) yang paling tinggi viskositas gelatinnya. Hal ini disebabkan karena  peningkatkan  nilai  viskositas  dapat  terjadi apabila  waktu  ekstraksi  semakin  lama  mampu memecah ikatan peptida pada ikatan yang tepat dengan
menghasilkan  molekul  yang  lebih  panjang  (Said,  M. Irfan, dkk, 2011).
Dari tabel diatas dapat dilihat pula perlakuan jenis asam  memiliki  perbedaan  yang  nyata  dimana  ketiga jenis  asam  berbeda  nyata.  Pada  perlakuan  waktu ekstraksi  a 1 (4  jam)  jenis  asam  b 3 (Asam  Sitrat  6%) memiliki  viskositas  gelatin  yang  paling  tinggi,  tetapi pada perlakuan a 2 (5 jam) dan a 3 (6 jam) jenis asam b 2 (Asam  Asetat  3%)    yang  memiliki  viskositas  gelatin paling  tinggi.  Hal  ini  disebabkan  karena  konsentrasi larutan asam yang berbeda berpengaruh terhadap bobot molekul  yang  dihasilkan.  Viskositas  berhubungan dengan bobot molekul rata-rata gelatin, bobot molekul gelatin  berhubungan  langsung  dengan  panjang  rantai asam  aminonya.  Berarti  semakin  panjang  rantai  asam amino  maka  nilai  viskositas  akan  semakin  tinggi (Ward dan Courts, 1977).
Dari hasil analisis didapat viskositas gelatin paling tinggi diperoleh oleh perlakuan a 3 b 2 (waktu ekstraksi 6 jam  ;  asam  asetat  3%),  yang  berarti  viskositas  gelatin berbanding lurus dengan kekuatan gel gelatin.

## Rendemen Gelatin
Keterangan: Huruf besar dibaca vertical dan huruf kecil dibaca horizontal.
Dari tabel diatas dapat dilihat pada perlakuan jenis asam  b 1 (Asam  Klorida  4%)  semakin  lama  waktu ekstraksi semakin tinggi rendemen gelatinnya begitupula pada perlakukan jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%)  dan  b 3 (Asam  Sitrat  6%).  Hal  ini  disebabkan karena  semakin  lama  waktu  ekstraksi  menyebabkan kolagen  terurai  lebih  banyak  menjadi  gelatin. Peningkatan lama pemasakan (ekstraksi) atau pemanasan  dalam  air  akan  meningkatkan  kelarutan kolagen  sehingga  rendemen  gelatin  akan  meningkat (Lehninger, 1990).
Dari tabel diatas dapat dilihat pula pada perlakuan waktu ekstraksi a 1 (4 jam) dan a 2 (5 jam) jenis asam b 1 (Asam Klorida 4%) memiliki rendemen gelatin yang paling  tinggi,  tetapi  pada  perlakuan  a 3 (6  jam)  jenis asam  b 1 (Asam  Klorida 4%) dan b 3 (Asam  Sitrat 6%) yang memiliki rendemen gelatin paling tinggi. Hal ini disebabkan karena jumlah nilai rendemen dipengaruhi oleh  jenis  asam  yang  digunakan  dalam  perendaman. Semakin  tinggi  konsentrasi  larutan  asam  yang digunakan  akan  menyebabkan  larutan  perendaman semakin  asam  sehingga  ion  H + yang  menghidrolisis kolagen dari  rantai triple helix menjadi  rantai tunggal semakin banyak. Selain itu dapat dilihat dari jenis asam yang digunakan, dimana asam kuat akan menghidrolisis  lebih  banyak  kolagen  menjadi  gelatin (Astawan, 2003).
Dari  hasil  analisis  didapat  jumlah  rendemen  gel gelatin  paling  tinggi  diperoleh  oleh  perlakuan  a 3 b 1 (waktu ekstraksi 6 jam ; asam klorida 4%). Rendemen yang  cukup  tinggi  pada  perlakuan  a 3 b 1 tersebut diakibatkan  oleh  proses  hidrolisis  kolagen  menjadi gelatin  pada  perlakuan  tersebut  berlangsung  cukup baik.

## Respon Kimia Derajat Keasamn (pH) Gelatin
Keterangan: Huruf besar dibaca vertical dan huruf kecil dibaca horizontal.
Dari  tabel  diatas  dapat  dilihat  pada  jenis  asam  b 1 (Asam Klorida 4%) perlakuan a 2 (5 jam) dan a 3 (6 jam) memiliki  pH  gelatin  yang  paling  tinggi,  tetapi  pada perlakuan  jenis  asam  b 2 (Asam  Asetat  3%)  dan  b 3 (Asam  Sitrat  6%) perlakuan a 3 (6 jam) yang memiliki pH  gelatin  paling  tinggi.  Hal  ini  disebabkan  karena pada saat proses ekstraksi jaringan fibril pada kolagen menjadi  jenuh  karena  adanya  reaksi  asam,  dimana semakin lama waktu ekstraksi  pH akan melewati titik isoelektrik  dari  komponen-komponen  protein  non- kolagen (Fatimah, 2006). Titik isoelektrik  adalah titik di  mana  asam  amino  penyusun  protein  non-kolagen menjadi dipolar dan memiliki muatan nol sehingga pH yang rendah akan meningkat (Hart, 2003).
Dari tabel diatas dapat dilihat pula pada perlakuan waktu  ekstraksi  a 1 (4 jam) jenis asam  b 2 (Asam Asetat  3%)  dan  b 3 (Asam  Sitrat  6%)  memiliki  pH gelatin  yang paling tinggi, tetapi  pada perlakuan a 2 (5 jam) dan a 3 (6 jam) jenis asam b 3 (Asam Sitrat 6%) yang memiliki  rendemen  gelatin  paling  tinggi.  Hal  ini disebabkan  karena  nilai  pH  gelatin  disebabkan  oleh jenis asam yang digunakan ketika proses demineralisasi diduga  masih  terbawa  ketika  dilakukan  proses ekstraksi,  sehingga  mempengaruhi  tingkat  keasamn gelatin yang dihasilkan. Hal ini dikarenakan jenis asam yang  digunakan  memiliki  konsentrasi  yang  berbeda- beda maka kepekatan asam dan juga asam yang terikat pada ossein akan  berbeda-beda.  Pada  penelitian  jenis asam  yang  digunakan  berpengaruh  pada  pH  gelatin yang dihasilkan (Hinterwaldner, 1977).
Dari hasil analisis didapat pH gelatin paling tinggi diperoleh oleh perlakuan a 3 b 3 (waktu ekstraksi 6 jam ; asam  sitrat  6%).  Nilai  pH  gelatin  berbanding  terbalik dengan kekuatan gel gelatin dan viskositas gelatin.

## Kadar Protein Gelatin
Dari  tabel  dapat  dilihat pada perlakuan jenis asam b 1 (Asam  Klorida  4%)  semakin  lama  waktu  ekstraksi semakin tinggi kekuatan gel gelatinnya begitupula pada perlakukan jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%), tetapi pada perlakuan jenis asam b 3 (Asam Sitrat 6%) perlakuan a 2
(5  jam)  dan  a 3 (6  jam)  memiliki  kadar  protein  gelatin yang paling tinggi. Hal ini disebabkan karena semakin lama  proses  ekstraksi  jumlah  kolagen  yang  terbebas dan dapat dikonversi menjadi gelatin semakin banyak. Kemungkinan tersebutlah yang membuat kadar protein meningkat  seiring  dengan  waktu  ekstraksi  yang semakin lama (Ward dan Court, 1977).
Keterangan: Huruf besar dibaca vertical dan huruf kecil dibaca horizontal.
Dari tabel diatas dapat dilihat pula pada perlakuan waktu ekstraksi a 1 (4 jam), a 2 (5 jam) dan a 3 (6 jam) jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%) memiliki kadar protein gelatin  yang  paling  tinggi.  Hal  ini  disebabkan  karena dengan perbedaan jenis asam yang menyebabkan berat jumlah  molekul  dari  setiap  asam  bertambah  sehingga kerapatan molekulnya berbeda-beda, yang mengakibatkan berat molekul kolagen yang ada dalam tulang menjadi mengembang dan akan pecah pada saat pemanasan, sehingga ikatan kovalen yang menghubungkan asam amino satu dengan yang lainnya terputus,  memyebabkan  banyaknya  asam  amino  yang terkandung.  Semakin  tinggi  kadar  protein  maka semakin baik jenis asam yang digunakan karena dapat memecah ikatan polipeptida (Santoso, 2015).
Dari  hasil  analisis  didapat  kadar  protein  gelatin paling  tinggi  diperoleh  oleh  perlakuan  a 3 b 2 (waktu ekstraksi 6 jam ; asam asetat 3%).

## Kadar Abu Gelatin
Keterangan: Huruf besar dibaca vertical dan huruf kecil dibaca horizontal.
Dari tabel diatas dapat dilihat pada perlakuan jenis asam  b 1 (Asam  Klorida  4%)  semakin  lama  waktu ekstraksi  semakin  rendah  kadar  abu  gelatinnya begitupula pada perlakukan jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%), tetapi pada perlakuan jenis asam b 3 (Asam Sitrat 6%) perlakuan a 2 (5 jam) dan a 3 (6 jam) memiliki kadar abu  gelatin  yang  paling  rendah.  Hal  ini  disebabkan karena panas yang diterima pada saat proses ekstraksi lebih lama, sehingga mineral yang terkandung didalam tulang  pun  ikut  menurun.  Selain  proses  ekstraksi, proses  evaporasi  dan  pengeringan  pada  gelatin berpengaruh  dari  menurunnya  kadar  abu  yang terkandung pada gelatin    (Rahayu, 2007).
Dari tabel diatas dapat dilihat pula pada perlakuan waktu ekstraksi a 1 (4 jam) dan a 3 (6 jam) jenis asam b 2 (Asam Asetat 3%) memiliki kadar abu gelatin yang paling  rendah,  tetapi  pada  perlakuan  a 2 (5  jam)  jenis asam  b 3 (Asam Sitrat 6%) memiliki kadar abu gelatin yang  paling  rendah.  Hal  ini  disebabkan  karena  besar kecilnya  kadar  abu  ditentukan  pada  saat  proses demineralisasi dimana jenis asam yang digunakan akan menghasilkan kadar abu yang berbeda-beda. Semakin banyak kalsium yang larut pada proses demineralisasi, maka  kadar  abu  akan  semakin  rendah.  Pada  proses tersebut,  asam  akan  bereaksi  dengan  kalsium  fosfat pada tulang (Rahayu, 2007). Semakin kuat jenis asam yang digunakan nilai kadar abunya semakin tinggi. Hal ini  diduga  kemampuan  asam  untuk  mengekstrak komponen  non  kolagen  pun  semakin  tinggi,  sehingga nilai kadar abu pun menjadi tinggi. (Menurut Ward dan Court,  1977)..  Asam  asetat  yang  digunakan  untuk demineralisasi  merupakan  asam  organik  dan  tidak mengandung mineral sehingga pada saat diabukan akan ikut terbakar.
Dari  hasil  analisis  didapat  kadar  protein  gelatin paling  tinggi  diperoleh  oleh  perlakuan  a 3 b 2 (waktu ekstraksi 6 jam ; asam asetat 3%).

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  pendahuluan  tulang  ikan yang memiliki kandungan protein paling tinggi adalah pada tulang ikan yang berumur 6 bulan yaitu 24,12%, sedangkan pada tulang ikan yang berumur 4 bulan yaitu 21,64%  dan  5  bulan  yaitu  22,77%.  Sehinnga  tulang ikan yang digunakan adalah ikan nila yang berumur 6 bulan.
Waktu  ekstraksi  (4  jam,  5  jam  dan  6  jam) berpengaruh  nyata  terhadap  respon  kekuatan  gel gelatin,  viskositas  gelatin,  rendemen  gelatin,  derajat keasaman (pH) gelatin, kadar protein gelatin dan kadar abu  gelatin  terhadap  proses  ekstraksi  gelatin  tulang ikan nila.
Jenis  asam  (Asam  Klorida  4%,  Asam  Asetat 3%  dan  Asam  Sitrat  6%)  berpengaruh  nyata  terhadap respon kekuatan gel gelatin, rendemen gelatin, derajat keasaman (pH) gelatin, kadar protein gelatin dan kadar abu  gelatin  terhadap  proses  ekstraksi  gelatin  tulang ikan nila.
Interaksi  waktu  ekstraksi  (4  jam,  5  jam  dan  6 jam) dan jenis asam (Asam Klorida 4%, Asam Asetat 3%  dan  Asam  Sitrat  6%)  berpengaruh  nyata  terhadap respon  kekuatan  gel  gelatin,  viskositas  gelatin, rendemen gelatin, derajat keasaman (pH) gelatin, kadar protein  gelatin  dan  kadar  abu  gelatin  terhadap  proses ekstraksi gelatin tulang ikan nila.
Hasil  uji  banding  antara  gelatin  komersial  dan gelatin  tulang  ikan  nila  didapatkan  hasil  yang  paling mendekati dengan gelatin  komersial adalah perlakuan a 3 b 2 (waktu  ekstraksi  6 jam ;  asam  asetat 3%) dengan hasil analisis yaitu kekuatan gel gelatin 132,93 bloom ; viskositas 5,83 cP ; jumlah rendemen 16,94 ; pH 6,10 ; kadar protein 83,62% ; dan kadar abu 0,64%

## Daftar Pustaka
1. Adiningsih,  Yuni  dan  Tatik  Purwanti.  2015.
Karakteristik  Mutu  Gelatin  Ikan  Tenggiri (Scomberomorus commersonii) dengan Perendaman  Menggunakan  Asam  Sitrat  dan Asam  Sulfat .  Samarinda:  Balai  Riset  dan Standarisasi Industri Samarinda.
2. Amiruldin,  Musfiq.  2007. Pembuatan  dan Analisis  Karakteristik  Gelatin  Dari  Tulang Ikan Tuna (Thunnus albacares) . Bogor: Institut Pertanian Bogor.
3. Astawan  M,  Aviana  T. 2003. Pengaruh  jenis larutan perendaman serta metode pengeringan  terhadap  sifat  fisik,  kimia,  dan fungsional  gelatin  dari  kulit  cucut. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan: Vol 14 (1):      7- 12.
4. Buwano,  Ibnu  Dwi.  2004. Kebutuhan  Asam Amino Esensial Dalam Ransum Ikan . Yogyakarta: Kanisius.
5. Fatimah,  Dewi  dan  Akyunul  Jannah.  2008. Efektivitas  Penggunaan  Asam  Sitrat  dalam
Pembuatan  Gelatin  Tulang  Ikan  Bandeng (Chanos  chanos  forskal ).  Malang:  Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
6. Hadi  S.  2005. Karakteristik  Fisikokimia Gelatin  dari  Tulang  Ikan  Kakap  Merah (Lutjanus  Sp.)  Serta  Pemanfaatannya  dalam
Produk Jelly . Bogor: Institut Pertanian Bogor.
7. Haris,  M.  Azwar.  2008. Pemanfaatan  Limbah
Tulang  Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus)
Sebagai Gelatin dan Pengaruh Lama Penyimpanan  Pada  Suhu  Ruang .  Bogor:
Institut Pertanian Bogor.
8. Hart,  H.  2003. Kimia  Organik:  Suatu  Kuliah Singkat . Jakarta: Erlangga.
9. Hinterwaldner,  R.  1977. Technologi  of  gelatin manufacture,  In:  Ward  AG  dan  Courts  A, editors.  The  Science  And  technology  of
Gelatin . New York: Academic Press. 10. Huda,  Wahyu  Nurul,  dkk.  2013. Kajian
Karakteristik  Fisik  dan  Kimia  Gelatin Ekstraksi  Tulang  Kaki  Ayam  (Gallus  galus bankiva)  dengan  Variasi  Lama  Perendaman dan  Konsentrasi  Asam .  Surakarta:  Universitas
Sebelas Maret.
11. Lehninger,  A.L.  1990. Dasar-Dasar  Biokimia. Jilid  I .  Jakarta:  Erlangga.  Terjemahan  dari: Fundamental of Biochemistry.
12. Rahayu,  Fadjar  dan  Nurul  Hidayati  Fithriyah. 2007. Pengaruh  Waktu  Ekstraksi  Terhadap
Gelatin Dari Tulang Ikan Nila Merah . Jakarta: Universitas Muhammadiyah Jakarta.
13. Said, M. Irfan, dkk. 2011. Karakteristik Gelatin Kambing  yang  Diproduksi  Melalui  Proses Asam dan Basa . Yogyakarta: Universitas Gajah Mada.
14. Santoso, Candra dkk. 2015. Perbedaan Penggunaan Konsentrasi Larutan Asam Sitrat Dalam  Pembuatan  Gelatin  Tulang  Rawan Ikan  Pari  Mondol .  Semarang:  Universitas Dipenogoro.
15. Stainsby G. 1977. The Gelatin Gel and The Sol- Gel Transformation, In: Ward AG dan Courts A,  editors.  The  Science  and  Technology  of Gelatin . New York: Academic press.
16. Suyanto,  S.R.  2002. Nila .  Jakarta:  Penebar Swadaya.
17. Utama,  H.  1997. Gelatin  Bikin  Heboh .  Jurnal Halal LPPOM-MUI No. 18:         10 – 12.
18. Wahyuni,  M  &  Rosmawati.  2003. Perbaikan Daya  Saing  Industri  Pengolahan  Perikanan Melalui  Pemanfaatan  Limbah  Non  Ikonomis
Ikan Menjadi Gelatin . www.dkp.go.id. (Diakses: 22 September 2017).
19. Ward, AG and Courts A. 1977. The Science and Technology  of  Gelatin .  New  York:  Academic Press.