## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  suatu  penyakit  yang  menjadi perhatian dalam dunia kesehatan serta merupakan salah satu penyakit yang menjadi perhatian serius pada bidang
kesehatan.  Hal  ini  terjadi  karena  jumlah  penderita kanker yang terus-menerus meningkat setiap tahunnya. Berdasarkan  data  (Kemenkes  RI,  2018),  prevalensi kanker  di  Indonesia  menunjukkan  adanya  peningkatan
Toksisitas Ekstrak Daun Sungkai ( Peronema canescens Jack) Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Toxocity Test of Sungkai Leaf Extract (Peronema canescens Jack) Against Artemia salina Leach Larvae Using the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Method
Gabriella Cantika Vidi 1*
Putri Vidiasari Darsono 2
Rahmadani 3
Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Sar Mulia, Banjarmasin, Kalimantan Selatan, Indonesia
*email: gabriellacv10@gmail.com

## Abstrak
Uji toksisitas merupakan suatu pengujian yang  bertujuan untuk mendeteksi adanya aktivitas antikanker dari suatu senyawa dengan menggunakan serangkaian konsentrasi yang diterima dalam periode 24 jam. Kanker merupakan penyakit sel yang mengalami kegagalan  mekanisme  pengatur  multiplikasi  dan  fungsi  homeostatis  lainnya  pada organisme multiseluler. Tanaman daun sungkai ( Peronema canescens Jack) merupakan tanaman yang banyak terdapat di wilayah Puruk Cahu, provinsi Kalimantan Tengah, dimana tanaman ini adalah tanaman obat yang dipakai oleh masyarakat sebagai obat penurun  demam,  flu,  batuk,  dan  mengatasi  kanker.  Dimana  senyawa  bioaktif  pada tanaman ini berpotensi sebagai antikanker. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan nilai LC 50 dari pengujian toksisitas ekstrak daun sungkai terhadap larva Artemia salina Leach  menggunakan Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Simplisia  daun  sungkai ( Peronema canescens Jack) diekstraksi menggunakan pelarut etanol 70% selama 3x24 jam  menggunakan  metode  maserasi,  kemudian  filtrat  disaring  dan  dikentalkan menggunakan mesin Rotary Evaporator . Ekstrak yang didapat dilakukan uji toksisitas terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)  dan  analisis  data  menggunakan  Analisis  Probit  dengan Ms.  Excel .  Hasil penelitian ini menunjukkan ekstrak daun sungkai ( Peronema canescens Jack) bersifat toksik  terhadap larva Artemia  salina Leach  yang  ditandai  dengan nilai  LC 50 < 1000 μ g/ml  dengan  hasil  yaitu  291,743 μ g/ml.  Sehingga,  ekstrak  etanol  daun  sungkai ( Peronema  canescens  Jack )  memiliki  kemampuan  toksisitas  terhadap  larva Artemia salina Leach sehingga berpotensi sebagai antikanker.

## Kata Kunci:
Artemia salina Leach
BSLT
Daun sungkai ( Peronema
canescens Jack) Toksisitas
Keywords :
Artemia salina Leach BSLT
Sungkai leaf (Peronema canescens Jack)
Toxicity

## Abstract
Toxicity  test  is  a  test  to  detect  the  anticancer  activity  of  a  compound  using  a  series  of concentrations received within a  24-hour period. Cancer is a cell disease that has failed regulatory  mechanisms  of  multiplication  and  other  homeostatic  functions  in  multicellular organisms. Sungkai leaf plant (Peronema canescens Jack) is a plant that is found in the Puruk  Cahu  region,  Central  Kalimantan  province,  this  plant  is  a  medicinal  used  by  the community as a medicine to fever, flu, cough, and cancer. Bioactive compounds in this plant have potential to be anticancer. Determine the LC50 value of sungkai leaf extract toxicity testing against Artemia salina Leach larvae using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Sungkai leaf simplisia (Peronema canescens Jack) is extracted using 70% ethanol solvent for 3x24 hours  using  maceration  method,  then  filtrate  is  filtered  and  thickened  using  a  Rotary Evaporator machine. The extracts obtained were tested for toxicity on Artemia salina Leach larvae using the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method and data analysis using Probit Analysis with Ms. Excel. The results of this study showed that sungkai leaf extract (Peronema canescens Jack) was toxic to Artemia salina Leach larvae which was characterized by LC50 values < 1000 μ g / ml with a result of 291.743 μ g / ml. Ethanol extract of sungkai leaves (Peronema canescens Jack) has the ability of toxicity to Artemia salina Leach larvae so that it has the potential as anticancer
© 2024 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i2.7734
dari 1,4 per 1000 penduduk di tahun 2013 menjadi 1,79 per  1000  penduduk  pada  tahun  2018.  Daerah Kalimantan  Selatan  dilaporkan  memiliki  tingkat prevalensi lebih tinggi yaitu 1,6 per 1000 penduduk di tahun 2013 dan menjadi 2.1 per 1000 penduduk  pada tahun 2018 (Kemenkes RI, 2018).
Indonesia adalah negara yang kaya akan keanekaragaman tumbuhan sehingga  sumber daya alam hayatinya  dapat dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional.  Menariknya, pengobatan  tradisional  ini  banyak  diminati  oleh masyarakat disebabkan oleh kesadaran dari masyarakat untuk  kembali  memanfaatkan  kekayaan  alam  karena relatif aman dan murah (Surbakti et al ., 2018).
Daun  sungkai  ( Peronema  canescens Jack) merupakan etnobotani  Indonesia  dari  suku  Dayak  Kalimantan, dimana  penggunaan  secara  empiris  dari  daun  sungkai dimanfaatkan  oleh  masyarakat  untuk  mengatasi  sakit gigi, penurun demam dan mengatasi kanker. Pemberian seduhan  dari  daun  sungkai  sendiri  pada  masyarakat dipercaya dapat menurunkan tekanan darah, mengatasi malaria, demam, flu dan batuk, pilek, menurunkan kadar asam  urat,  meningkatkan  imunitas  tubuh  serta  dapat digunakan untuk mencegah kanker. Hal ini dikarenakan daun  sungkai  memiliki  kandungan  metabolit  sekunder seperti  flavonoid,  tanin,  fenolik,  saponin,  steroid  dan terpenoid (Latief et al ., 2021).
Salah satu contoh senyawa bioaktif pada daun sungkai adalah  flavonoid,  dimana  flavonoid  pada  daun  ini bermanfaat  untuk  mencegah  terjadinya  hipertensi. Selain  itu,  senyawa  bioaktif  tanin  pada  daun  sungkai berperan  sebagai  antioksidan  sehingga  mampu mencegah  terjadinya  oksidasi  sel  tubuh  (Latief et  al ., 2021).  Pada  penelitian  lain  juga  menyebutkan  bahwa kandungan senyawa bioaktif flavonoid pada daun sungkai dapat berfungsi sebagai antioksidan sehingga sangat baik untuk mencegah kanker (Fadlilaturrahmah et al ., 2021).
Metode yang digunakan untuk melakukan uji toksisitas yaitu metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan  hewan  uji  larva  udang Artemia  salina
Leach. Metode ini merupakan uji pendahuluan aktivitas biologis yang bertujuan menentukan toksisitas senyawa atau ekstrak secara akut. Metode BSLT juga mempunyai korelasi  dengan  daya  sitotoksik  senyawa-senyawa antikanker, sehingga sering digunakan sebagai penapisan awal  pada  senyawa-senyawa  bioaktif  yang  diduga memiliki  khasiat  sebagai  antikanker.  Prosedur  pada penggunaan  metode  BSLT  yaitu  dengan  menentukan nilai LC 50 dari aktivitas zat aktif terhadap larva udang A. salina Leach.  Nilai  LC 50 digunakan  untuk  melihat konsentrasi  efektif  toksikan  yang  mampu  mematikan 50%  biota  uji  dalam  waktu  tertentu  (Abriyani et  al ., 2022).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan aktivitas  sitotoksik  dari  suatu  senyawa  dengan menggunakan  serangkaian  konsentrasi  yang  diterima dalam  periode  24  jam  setelah  pemaparan  zat,  dan memperoleh  nilai  LC 50 dari  ekstrak  daun  sungkai menggunakan metode BSLT.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah    alat maserasi,  mesin rotary  evaporator (RE  100-Pro  Digital Rotary  Evaporator  0,5-2L  Dlab), water  bath (Faithful), timbangan analitik (Analytical Balance FA2204G), kertas saring (Whatman), vial, gelas beker (Pyrex), kaca arloji (Pyrex),  batang  pengaduk  (Xuebei  Round  Glass  Rod Stirrer), sendok tanduk, dan seperangkat alat penetasan udang A. salina Leach.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sungkai segar, telur A. salina Leach (Supreme Plus 10g), etanol 70%, aquadest (Usfa), NaCl, dan NaHCO3.

## Prosedur Penelitian

## Hewan Uji
Hewan  percobaan  yang  akan  digunakan  adalah  larva udang A.  salina Leach  sebanyak  180  ekor  yang  akan
dikelompokkan  menjadi  6  kelompok,  dimana  setiap kelompok  uji  terdiri dari 10 ekor  larva  udang Artemia salina Leach dengan replikasi sebanyak 3 kali.

## Penyiapan Simplisia
Daun sungkai ( P. canescens Jack) dipanen di Puruk Cahu, kecamatan  Murung,  kabupaten  Murung  Raya,  provinsi Kalimantan  Tengah.  Lalu  dilakukan  sortasi  basah. Setelah  dilakukan  sortasi  basah  daun  sungkai  ( P. canescens Jack)  dirajang  guna  mempermudah  dalam proses  pengeringan.  Pengeringan  dilakukan  di  bawah sinar matahari dengan suhu 34 o C. Selanjutnya dilakukan sortasi kering yang bertujuan untuk membersihkan dari zat  pengotor  yang  dapat  mempengaruhi  dalam  proses ekstraksi.  Setelah  itu  simplisia  yang  sudah  kering  di haluskan  menggunakan  blender  sampai  terbentuk serbuk simplisia dengan ukuran 120 mesh.

## Pembuatan Ekstrak Daun Sungkai
Pembuatan  ekstrak  daun  sungkai  yaitu  simplisia  yang telah kering dan sudah dijadikan serbuk dimasukkan ke dalam  bejana/  toples  kaca  dengan  ukuran  3  liter, selanjutnya  dimaserasi  selama  tiga  hari  menggunakan pelarut  etanol  70%.  Kemudian  bejana  ditutup  dengan rapat menggunakan tutup bejana/ toples dan direndam selama  24  jam  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  24  jam ekstrak  disaring  menggunakan  kertas  saring  Whatman nomor  1.  Lakukan  pengulangan  pada  sampel  sampai filtrat yang didapat berubah menjadi jernih. Filtrat yang didapat  dilakukan  proses  pengentalan  menggunakan mesin Rotary Evaporator dengan suhu 50 o C.
Penyiapan Larva Artemia salina Leach
Penyiapan  larva  dilakukan  dengan  mengambil  telur Artemia salina Leach sebanyak 100 mg. Air laut buatan dibuat dengan cara melarutkan NaCl sebanyak 15 gram dan  NaHCO3  sebanyak  1  gram.  Setelah  itu,  larutan tersebut di tambahkan aquadest steril sebanyak 1 liter (Widyasari et al ., 2018).

## Penetasan Larva Udang
Penetasan  larva  udang  dilakukan  dengan  cara menyiapkan aquarium khusus yang memiliki bagian gelap dan bagian terang yang dipisahkan oleh sekat berlubang. Aquarium ditambahkan air laut buatan sebanyak 1 liter dengan  penerangan  lampu  10  watt.  Aquarium dipasangkan aerator dan ditempatkan pada suhu 25 o C- 31 o C.  Sedangkan  pada  bagian  gelap  ditutup  dengan penutup  aquarium  yang  telah  diberi  lakban  hitam. Selanjutnya,  telur  Artemia  salina  Leach  yang  telah ditimbang dan direndam didalam aquadest selama 1 jam, ditiriskan  dan  dimasukkan  kedalam  bagian  gelap  dan dibiarkan  menetas  selama  48  jam  (Widyasari  et  al., 2018).

## Pembuatan Larutan Konsentrasi Sampel Uji
Ekstrak  yang  akan  diuji  dibuat  kontrol  negatif  dan larutan induk dengan konsentrasi 1000 μ g/ml yaitu 100 mg  ekstrak  dilarutkan  dengan  100  ml  air  laut  buatan. Dari larutan induk ini dibuat konsentrasi 100 μ g/ml, 250 μ g/ml, 500 μ g/ml, 750 μ g/ml dan 1000 μ g/ml dengan cara pengenceran  air  laut  buatan  hingga  volume  5  ml (Widyasari et al ., 2018).

## Uji Toksisitas
Pada pengujian toksisitas diperlukan vial ukuran 10 ml untuk masing-masing konsentrasi, dimana diperlukan 3 vial  untuk  larutan  uji  dan  3  vial  lagi  untuk  larutan kontrol. Setiap kelompok uji terdiri dari 10 ekor larva Artemia  salina Leach  dengan  replikasi  sebanyak  3  kali. Perhitungan  pada  pemberian  ekstrak  dilakukan menggunakan  perhitungan  pengenceran  konsentrasi dengan rumus V1.M1 = V2.M2
Keterangan : V1 = Volume awal larutan
M1 = Konsentrasi awal larutan
V2 = Volume akhir larutan M2 = Konsentrasi akhir larutan
Konsentrasi  larutan  bisa  berupa  %,  M  ataupun  ppm, sehingga didapatkan volume sesuai dengan perhitungan masing-masing konsentrasi, selanjutnya buat 100 ml air laut  buatan  yang  kemudian  di  larutkan  pada  masing- masing konsentrasi ekstrak, lalu setiap vial diisi aquadest sebanyak  5  ml  dan  diberi  tanda  batas,  setelah  sudah diberi tanda batas maka aquadest didalam tiap vial tadi dikeluarkan lagi lalu diganti dengan ekstrak yang sudah dilakukan  pengenceran  berdasarkan  konsentrasi masing-masing sampai tanda batas.
Ada  5  kelompok  pengujian,  dimana  masing-masing kelompok diberi konsentrasi yang berbeda, konsentrasi tersebut adalah:
(1)  Kelompok I diberikan air laut sebanyak 5 ml, dimana kelompok  I  merupakan  kelompok  kontrol  dengan konsentrasi 0.
(2)  Kelompok  II  diberikan  larutan  uji  ekstrak  dengan konsentrasi 100 μ g/ml sebanyak 0,5 ml.
(3)  Kelompok  III  diberikan  larutan  uji  dengan konsentrasi 250 μ g/ml sebanyak 1,25 ml.
(4)  Kelompok  IV  diberikan  larutan  uji  dengan konsentrasi 500 μ g/ml sebanyak 2,5 ml.
(5)  Kelompok  V  diberikan  larutan  uji  dengan konsentrasi 750 μ g/ml sebanyak 3,75 ml.
(6)  Kelompok  VI  diberikan  larutan  uji  dengan konsentrasi 1000 μ g/ml sebanyak 5 ml.
Selanjutnya  masing-masing  vial  diletakan  dibawah penerangan  lampu  10  watt.  Pengamatan  dilakukan selama  24  jam  kematian  larva Artemia  salina Leach.
Setelah 24 jam, hitung jumlah larva Artemia salina Leach yang mati di masing-masing vial. Jumlah larva yang mati dihitung dengan mengurangkan jumlah larva total pada setiap  konsentrasi  dengan  larva  yang  masih  hidup selanjutnya  dapat  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol negatif (Widyasari et al ., 2018).

## Analisis Data
Analisis data dari penelitian ini adalah metode kualitatif. Data kualitatif bertujuan untuk melihat nilai LC 50 pada
uji  toksisitas  dengan  menggunakan  metode  probit dimana metode ini merupakan cara untuk menentukan nilai probit dari % kematian tiap kelompok hewan uji. Rumus % kematian dihitung dengan:
% 𝑘𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 = jumlah larva mati jumlah total larva awal 𝑥 100%
Apabila pada kontrol terdapat larva yang mati maka % kematian ditetapkan dengan rumus:
% mati = jumlah larva mati (sampel)−j𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎 𝑚𝑎𝑡𝑖 (𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙) jumlah larva uji mula−mula pada sampel uji 𝑥 100
Kemudian  dilakukan  persamaan  garis  lurus  hubungan antara nilai probit dengan log konsentrasi, Y merupakan angka  probit  dan  X  adalah  log  konsentrasi.  Sehingga digunakan rumus persamaan yaitu, Y = ax + b. Y sama dengan  log  konsentrasi  dan  a  didapatkan  dari  regresi linier  menggunakan Ms.  Excel untuk  menentukan  nilai LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Toksisitas
Data dari hasil uji toksisitas didapatkan bahwa kematian larva  yang  meningkat,  hal  ini  ditunjukkan  dengan  data pada  tabel  2,  dimana  pemberian    konsentrasi  yang semakin  besar  terhadap  larva A.  salina Leach mengakibatkan kematian larva juga semakin meningkat.
Tabel I. Hasil kematian larva setelah 24 jam
Ppm Replikasi Jumlah kematian Total larva 1 2 3
0 0 0 0 0 30 100 1 2 2 5 30 250 3 4 5 12 30 500 5 7 9 21 30 750 7 8 9 24 30 1000 8 9 9 26 30

## Berdasarkan  dari  hasil  kematian  larva Artemia
Salina Leach,  didapatkan  nilai  rata-rata  sebagai berikut:
Tabel II. Rata-rata hasil kematian larva setelah 24
Berdasarkan data pada tabel diatas didapatkan nilai LC 50 sebesar 291,743 μ g/ml.
Berikut ini adalah grafik perbandingan antara nilai probit dan log konsentrasi:
Gambar 1. Grafik hubungan antara log konsentrasi dengan nilai probit terhadap kematian larva
BSLT merupakan uji pendahuluan aktivitas biologis yang sederhana dengan tujuan untuk menentukan toksisitas suatu  senyawa  atau  ekstrak  secara  akut  dengan menggunakan  hewan  uji  larva Artemia  salina Leach. Keunggulan  dari  metode  BSLT  ini  adalah  mudah dilakukan,  murah  dan  tidak  memerlukan  waktu  yang lama. Oleh karena kemampuan untuk mematikan larva udang  itulah  sehingga  metode  BSLT  dapat  digunakan
sebagai uji pendahuluan yang cepat dan sederhana untuk mengetahui  bioaktivitas  suatu  senyawa  secara  in  vivo (Kurniawan  &  Ropiqa,  2021).  Uji  toksisitas  akut dilakukan terhadap larva A. salina Leach yang berusia 24 hingga 48 jam atau disebut nauplii pada media air laut buatan.  Pada  pengujian  toksisitas  larva A.  salina Leach yang digunakan ialah yang berada pada tahap nauplii atau tahap  larva.  Hal  ini  dikarenakan  larva A.  salina Leach pada  tahap nauplii sangat  mirip  dengan  sel  manusia (Abriyani et al., 2022).
Pengujian toksisitas dilakukan dengan metode BSLT ini menggunakan beberapa konsentrasi yang berbeda untuk tiap  perlakuan  yang  terbagi  menjadi  0 μ g/ml  (kontrol negatif),100 μ g/ml, 250 μ g/ml, 500 μ g/ml, 750 μ g/ml dan 1000 μ g/ml.  Berdasarkan  hasil  penelitian  didapatkan data  kematian  larva A.  salina Leach  setelah  diberi  seri konsentrasi ekstrak selama 24 jam. Dimana pada tabel 4.2  dapat  dilihat  bahwa  pada  konsentrasi  1000 μ g/ml adalah tingkat kematian tertinggi, dan tingkat kematian terendah  pada  konsentrasi  100 μ g/ml.  Selanjutnya dilakukan  perhitungan  LC 50 dengan  metode  analisis probit  menggunakan Microsoft.  Excel dan  didapatkan hasil  yaitu  291,743 μ g/ml,  sehingga  pada  pengujian toksisitas  ekstrak  daun  sungkai  ( P.  canescens Jack) memperoleh nilai LC 50 < 1000 μ g/ml yang dimana hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  sungkai  ( Peronema canescens Jack)  bersifat  toksik  terhadap  larva A.  salina Leach dan sekaligus berpotensi sebagai antikanker.
Suatu senyawa dinyatakan aktif dan mempunyai potensi toksisitas akut jika mempunyai harga LC 50 kurang dari 1000 μ g/ml.  LC 50 ( Lethal  Concentration 50)  merupakan konsentrasi zat yang menyebabkan terjadinya kematian pada  50%  hewan  uji.  Suatu  bahan  alam  apabila dikategorikan bersifat toksik, maka bahan alam tersebut dapat dikatakan aman dan dapat dikembangkan sebagai antikanker  sehingga  nantinya  bisa  digunakan  sebagai obat di masa yang akan datang (Putri et al ., 2021).
Berdasarkan  data  yang  diperoleh  dari  penelitian  yang telah  dilakukan,  larva A.  salina Leach  mengalami
Konsentras i (%) Ppm Log (ppm ) Probi t Mortalita s % Mortalita s Tota l larva 0 0 0 0 0 0% 30 0,1 100 2,000 4,05 5 17% 30 0,025 250 2,398 4,75 12 40% 30 0,05 500 2,699 5,52 21 70% 30 0,075 750 2,875 5,84 24 80% 30 0,1 100 0 3,000 6,13 26 87% 30
kematian  setelah  pemberian  ekstrak  dengan  berbagai konsentrasi  karena  tingginya  konsentrasi  ekstrak  yang diberikan  sehingga  kandungan  senyawa  aktif  yang berdifusi  kedalam  tubuh  larva A.  salina Leach  lebih banyak, kemudian mengganggu kinerja pada tubuh larva A.  salina Leach,  sehingga  mengalami  kematian  yang disebabkan  oleh  keberadaan  senyawa  metabolit sekunder yang bersifat toksik, senyawa toksik yang ada pada  ekstrak  dapat  masuk  melalui  bagian  mulut  larva udang A.  Salina Leach  dan  diabsorpsi  masuk  ke  dalam saluran  pencernaan  yang  kemudian  terjadi  proses absorpsi  lagi  melalui  membran  sel.  Setelah  proses absorpsi,  maka  akan  dilanjutkan  dengan  proses distribusi senyawa toksik ke dalam tubuh larva udang A.
Salina Leach  yang  kemudian  terjadi  proses  kerusakan reaksi metabolisme (Rani et al ., 2022).
Struktur anatomi tubuh larva A. salina Leach pada tahap nauplii masih sangat sederhana, yaitu terdiri dari lapisan kulit,  mulut,  anthena,  saluran  pencernaan  atau  digesti yang  masih  sederhana,  dan  calon thoracopoda .
Perubahan  gradien  konsentrasi  yang  drastis  antara  di dalam  dan  di  luar  sel  mengakibatkan  senyawa  toksik mampu  menyebar  dengan  baik  ke  tubuh  larva  udang Artemia salina Leach. Efek kerusakan metabolisme yang ditimbulkan  terjadi  secara  cepat  dan  dapat  dideteksi dalam waktu 24 jam, hingga menyebabkan 50% kematian larva udang Artemia salina Leach (Surbakti et al ., 2018).
Adapun  berdasarkan  penelitian  uji  toksisitas  pada ekstrak tanaman lain, yang dilakukan oleh (Kurniawan & Ropiqa, 2021) menyebutkan bahwa senyawa metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  daun  ekor  kucing ( Acalypha  hispida Burm.f.)  yaitu  alkaloid  dan  flavonoid dimana pada kadar tertentu memiliki potensi toksisitas akut  serta  dapat  menyebabkan  kematian  larva Artemia salina Leach karena dapat menghambat daya makan larva ( antifedant )  dengan  cara  bertindak  sebagai stomach poisoning (racun  perut).  Selanjutnya,  berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh (Widyasari et al ., 2018) menyebutkan bahwa senyawa metabolit sekunder yang
terdapat  dalam  kulit  buah  jeruk  sambal  ( Citrus microcarpa Bunge)  yaitu  flavonoid  dan  alkaloid. Sedangkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Putri et  al ., 2021) menyebutkan bahwa senyawa metabolit sekunder yang  terdapat  dalam  daun  cassava/  singkong  ( Manihot esculenta )  salah  satunya  adalah  senyawa  flavonoid  dan saponin dalam daun  singkong yang dapat menghambat daya  makan  larva  ( antifedant ).  Lalu,  penelitian  yang dilakukan  oleh  (Abriyani et  al .,  2022)  menyebutkan bahwa  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat dalam  daun  telang  ( Clitoria  ternatea L)  flavonoid  dan saponin.
Hasil  dari  beberapa  penelitian  yang  sudah  dilakukan dengan menggunakan ekstrak tanaman lain menunjukkan bahwa senyawa metabolit sekunder yang lebih  banyak  mempengaruhi  kematian  larva A.  salina Leach  adalah  senyawa  flavonoid,  alkaloid  dan  saponin. Sehingga hal ini juga berpengaruh pada kematian  larva Artemia salina Leach dengan menggunakan ekstrak daun sungkai ( P. canescens Jack) karena pada tanaman sungkai juga  terdapat  senyawa  metabolit  sekunder  alkaloid, flavonoid  dan  saponin.  Dimana  mekanisme  kerja kematian  larva Artemia  salina Leach  karena  senyawa- senyawa  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun  sungkai ( Peronema  canescens Jack)  dapat  menghambat  daya makan larva ( antifedant ) dengan cara bertindak sebagai stomach  poisoning (racun  perut).  Sehingga  apabila senyawa-senyawa  ini  masuk  ke  dalam  tubuh  larva Artemia  salina Leach,  maka  alat  pencernaannya  akan terganggu.  Racun  perut  menyerang  organ  utama pencernaan  serangga  yaitu  bagian  ventriculus  (Syahr, 2023).
Senyawa alkaloid memiliki karakter toksin, repellent dan antifedant pada  serangga  sehingga  dapat  mengganggu pertumbuhan  dan  perkembangan  dari  larva A.  salina Leach.  Apabila  dalam  jumlah  sedikit  alkaloid  hanya bersifat sebagai antifedant dan membunuh larva A. salina Leach secara perlahan dengan cara menurunkan  nafsu makan  sehingga  akan  menyebabkan  kematian  dalam
beberapa  waktu  karena  kelaparan  (Apra et  al .,  2021).
Namun,  apabila  senyawa  alkaloid  diberi  dalam  jumlah yang besar, maka senyawa ini akan bekerja sebagai racun kontak  dan  racun  pencernaan  yang  akan  langsung membunuh  larva  serta  menyebabkan  kematian  karena langsung  menyerang  organ  vital  seperti  sistem  syaraf dan  mempengaruhi  aktivitas  jantung  dari  larva  udang (Kurniawan & Ropiqa, 2021).
Pada  senyawa  flavonoid  memiliki  cara  kerja  yang berfungsi  sebagai  racun  pernapasan  dan  racun metabolisme  yang  dapat  langsung  menyebabkan kematian  dalam  waktu  singkat.  Bila  senyawa  flavonoid masuk  kemulut  larva  dapat  mengakibatkan  kelemahan pada  saraf  dan  kerusakan  pada  spirakel  sehingga  larva menjadi  tidak  dapat  bernafas  dan  akhirnya  mati (Yulistyana et al ., 2020). Senyawa flavonoid juga  dapat menghambat saluran pencernaan larva yang juga bersifat toksik.  Selain  itu,  senyawa  ini  juga  dapat  menghambat reseptor  perasa  pada  daerah  mulut  larva  yang mengakibatkan  larva  gagal  mendapatkan  stimulus  rasa sehingga tidak mampu mengenali makanannya dan larva akhirnya  mati  akibat  kelaparan  (Kurniawan  &  Ropiqa, 2021).
Sedangkan  senyawa  saponin  merupakan  senyawa bioaktif yang juga bersifat    toksik serta termasuk ke dalam  golongan  racun  kontak.  Efek  dari  senyawa saponin  yaitu  dapat  menurunkan  tegangan  permukaan selaput  mukosa tractus  digestivus ,  sehingga  apabila permukaan selaput larva Artemia salina Leach terpapar senyawa  tersebut  maka  akan  menjadi  rusak,  sehingga pada  bagian  dindingnya  menjadi  korosif  dan  gangguan pada proses metabolism. Hal ini akan berdampak pada penyerapan  nutrisi  untuk  mendukung  kelangsungan hidup larva Artemia salina Leach (Bisyaroh, 2020) .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dari  penelitian  tentang  uji  fitokimia diketahui  bahwa  ekstrak  daun  sungkai  memiliki metabolit sekunder seperti flavonoid, alkaloid, saponin,
tanin,  dan  terpenoid-steroid.  Selanjutnya  hasil  dari pengujian toksisitas ekstrak daun sungkai ( P. canescens Jack) terhadap larva Artemia salina Leach dengan metode BSLT menunjukkan nilai LC 50 < 1000 μ g/ml. Nilai LC 50 yang  diperoleh  adalah  sebesar  291,743  µg/ml  yang berarti ekstrak daun sungkai ( Peronema canescens Jack) bersifat  toksik  terhadap  larva A.  salina Leach  dan berpotensi sebagai antikanker sehingga dapat dilakukan penelitian lebih lanjut.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Universitas Sari Mulia dan pihak-pihak yang turut-serta membantu mulai  dari  mempersiapkan,  melaksanakan,  dan menyelesaikan penelitian ini.

## REFERENSI
Abriyani,  E.,  Yuniarsih,  N.,  Fikayuniar,  L.,  Sulastri,  D., Farmasi,  F.,  Buana,  U.,  Karawang,  P.,  & Karawang, I. 2022. Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Clitoria Ternatea L Dan Uji Toksisitas Terhadap  Larva  Udang  Artemia  Salina. Skrining  Fitokimia  Ekstrak:  Journal  of Pharmacopolium, 5 (2), 220–222.
Apra,  M.,  Aniek  Prasetyaningsih,  &  Kukuh Madyaningrana.  2021.  Potensi  Bioakrisida Ekstrak Daun Mimba ( Azadirachta Indica ) Dan Bunga  Cengkeh  ( Syzygium  Aromaticum ) Terhadap Tungau Penyebab Penyakit Krepes Pada  Jamur  Kuping.  EduMatSains : Jurnal Pendidikan, Matematika Dan Sains, 5 (2), 225–
238. https://doi.org/10.33541/edumatsains.v5i2.22 41
Bisyaroh,  N.  2020.  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Biji  Kelor (Moringa Oleifera) Terhadap Larva Nyamuk Aedes Aegypti. Jurnal  Farmasi  Tinctura,  1 (2),
34–44. https://doi.org/10.35316/tinctura.v1i2.987
BPOM RI. 2020. Peraturan Badan Pengawas Obat Dan Makanan  Tentang  Pedoman  Uji  Toksisitas Praklinik  Secara  in  Vivo. Journal  of  Chemical Information  and  Modeling,  53 (9),  21–25. http://www.elsevier.com/locate/scp
Fadlilaturrahmah, F., Putra, A. M. P., Rizki, M. I. & Nor,
T.  2021.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  dan Antitirosinase Fraksi n-Butanol Daun Sungkai
(Peronema canescens Jack.) Secara Kualitatif Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis. Jurnal Pharmascience, 8 (2), 90.
https://doi.org/10.20527/jps.v8i2.11160
Kemenkes RI. 2018. Hasil Riset Kesehatan Dasar Tahun 2018. Kementrian Kesehatan RI, 53 (9), 1689–
1699.
Kurniawan,  H.,  &  Ropiqa,  M.  2021.  Uji  Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Ekor Kucing (Acalypha hispida  Burm.f.)  Dengan  Metode  Brine Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Journal  Syifa Sciences  and  Clinical  Research,  3 (2),  52–62. https://doi.org/10.37311/jsscr.v3i2.11398
Latief, M., Tarigan, I. L., Sari, P. M., & Aurora, F. E. 2021. Aktivitas  Antihiperurisemia  Ekstrak  Etanol
Daun  Sungkai  (Peronema  canescens  Jack) Pada  Mencit  Putih  Jantan. Pharmacon:  Jurnal Farmasi Indonesia, 18 (1), 23–37.
https://doi.org/10.23917/pharmacon.v18i01. 12880
Putri, R. B., Nugrahaningsih, W. H., & Dewi, N. K. 2021. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Cassava Terhadap
Larva Artemia salina Leach. 44 (2), 86–91.
Rani,  Z.,  Ridwanto,  R.,  Miswanda,  D.,  Yuniarti,  R., Sutiani, A., Syahputra, R. A., & Irma, R. 2022. Cytotoxicity  Test  of  Cocoa  Leaf  Ethanol Extract  (Theobroma  Cacao  L.)  With  Brine Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  Method. Indonesian  Journal  of  Chemical  Science  and
Technology (IJCST), 5 (2), 80.
https://doi.org/10.24114/ijcst.v5i2.37452
Surbakti, P. A. A., Queljoe, E. De, & Boddhi, W. 2018. Skrining Fitokimia dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Binahong (Andredera cordifolia (Ten.) Steenis) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality  Test  (BSLT). Pharmacon,  7 (3),  22– 31.
Syahr,  L.  (2023). Uji  Mortalitas  Wereng  Batang  Coklat (Nilaparvata  lugens  )  dengan  Pestisida  Nabati Ekstrak Daun Sukun ( Artocarpus altili ). 14 (1), 98–106.
Widyasari,  R.,  Yuspitasari,  D.,  Wildaniah,  W.,  & Cahayuni,  R.  2018.  Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah  Jeruk  Sambal (Citrus  microcarpa  Bunge)  Terhadap  Larva Artemia  salina  L.  Dengan  Metode  Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Medical Sains : Jurnal  Ilmiah  Kefarmasian,  3 (1),  51–58. https://doi.org/10.37874/ms.v3i1.64
Yulistyana, A. D., Wilson, W., & Iswara, A. 2020. Test Effectiveness of Biolarvasides On the Extract of Cucumber (Cucumis sativus L.) and Pare Leaves  (Momordica  charantia)  On  Aedes aegypti Mosquito Larva. Jurnal Labora Medika,
4, 38–41.