Rahmat Agus Hidayat, Sulaiman Ngongu Depamede, Maskur (Identifikasi Mutasi FecX…)

## Identifikasi Mutasi FecX Pada Gen BMP15 dan Pengaruhnya Terhadap Sifat Prolifik pada
Kambing Lokal di Kabupaten Lombok Barat
(Identification of Mutation on Gene FecX BMP15 and its Effects on Prolific Nature of Local Goats in West Lombok Regency)
Rahmat Agus Hidayat 1) , Sulaiman Ngongu Depamede 2) , Maskur 3)
1) Program Magister Manajemen Sumberdaya Peternakan Universitas Mataram
2) Laboratorium Mikro-biotek Fakultas Peternakan Universitas Mataram
3) Laboratorium Genetika dan Pemuliaan Ternak Fakultas Peternakan Universitas Mataram Jalan Majapahit 62 Mataram Lombok, Indonesia.
Telepon: (0370) 633603.  Fax: (0370) 640592
Email: rahmat.agus78@yahoo.com
Diterima : 24 Maret 2015/ Disetujui:  4 Mei 2015

## ABSTRACT
The aims of this  study  were to identify the  mutations of FecX gene in the local goats and to analyze its polymorphism as well as its influence on the prolific nature of the local goats in West Lombok Regency, Indonesia.  The  study  was  conducted  in  the  Immunobiology  Laboratory  of  Mataram  University,  using DNA  isolated  from  100  blood  samples  of  local  female  goats  which  have  given  birth  of  once  to  three times.  The  methods  used  were  PCR-RFLP  method  and  the  PCR  products  were  digested  with  HinfI restriction enzyme (G|ANTC) then analyzed visually based on DNA banding patterns on 2% agarose gels. The  frequency  of  allele  and  genotype  obtained,  were  then  analyzed  through  a  comparison  with  the secondary data of litter size obtained from the local goat keepers information. The results showed that the gene mutation of FecX G produced two alleles: "wild-type" (+) sized of 110 bp and 31 bp, and the mutant allele (G) of 141 bp with the allele frequency of 0,965 and 0,035 respectively. Combinations of alleles in the gene BMP15 produced two genotypes, namely (a) genotype ++ (110 bp/110 bp) with a frequency of 0.93, with the average litter size of 1.59 ± 0.319, and (b) genotype G + (141bp/110 bp), with a frequency of 0.07 and with the average litter size of 1.65 ± 0.202. The results of this study indicated that mutation occurred  in  BMP15  gene,  i.e.  FecX G gene,  the  gene  responsible  for  the  prolificacy  of  animals  studied. Furthermore there was a correlation between polymorphism of FecX G gene and the prolific nature of the local goats, which was predicted to lead the divergence in litter size of each local goat genotype. Key -words: mutation, BMP15, local goat.

## PENDAHULUAN
Kambing  lokal  di  Indonesia  yang  umum adalah  kambing  kacang  sebagai  kambing  asli Indonesia  dan  kambing-kambing  hasil  persi- langan  antara  kambing  kacang  dengan  kambing lainnya,  seperti  dengan  kambing  etawah  atau peranakan  etawah  (PE).  Salah  satu  hasil persilangan  kambing  kacang  deangan  kambing PE  adalah  kambing  batang  (Wijoseno,  2009). Jenis  kambing ini secara fisik miripkambing  PE tetapi  ukuran  tubuhnya  lebih  kecil  daripada kambing  PE  dan  lebih  besar  daripada  kambing kacang.
Kambing  kacang,  meskipun  beruk-uran relative  kecil,  memiliki  sifat  reproduksi  cukup tinggi  (prolifik)  dan  mampu  beradaptasi  dengan baik  di  lingkungan  yang  sangat  sederhana (Pamungkas et al., 2009). Sifat prolifik merupakan  sifat  bereproduksi  atau  kemampuan melahirkan  anak  lebih  dari  satu  ekor  per kelahiran. Sifat prolifik setiap individu kambing, berbeda-beda  disebabkan  oleh  adanya  variasi genetik  yang  menyebabkan  peningkatan  kece- patan  ovulasi  dan  jumlah  anak  per  kelahiran ( litter  size). Jumlah  anak  per  kelahiran menentukan  laju  peningkatan  populasi  ternak kambing.
Rahmat Agus Hidayat, Sulaiman Ngongu Depamede, Maskur ( Identifikasi Mutasi FecX…)
Gen bone morphogenetic protein 15 (BMP15)  atau  yang  sering  disebut FecX (fecundity  chromosome  X) merupakan  gen  yang mengendalikan sifat prolifik pada berbagai jenis domba.  Menurut  Chu et  al. (2007)  pola pengontrolan  gen  terhadap  mekanisme  prolifik mengindikasikan adanya perbedaan antara breed kambing  dan  domba,  tetapi  sifat  prolifik  pada kambing  dan  domba  masih  dikontrol  oleh  gen yang sama yaitu BMP 15.
Studi  tentang  mekanisme  gen  BMP-15 sebagai  marker  pembantu  seleksi  pada  program breeding ternak domba sudah banyak dilakukan. Pada  ternak  kambing,  informasi  mengenai potensi  dan  pemanfaatan  gen  ini  sebagai kandidat  gen  untuk  sifat  prolifik  belum  banyak dilaporkan,  maka  dilakukan  pengembangan marker  seleksi  melalui  identifikasi  mutasi  gen FecX  dan  pengaruhnya  terhadap  sifat  prolifik pada kambing lokal.
Penelitian ini bertujuan untuk meng- identifikasi  mutasi  gen  FecX  pada  ternak kambing  lokal  dan  menganalisis  polimorfisme gen  FecX  serta  pengaruh-nya  terhadap  sifat Prolifik pada kambing lokal.

## MATERI DAN METODE Lokasi penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Immunobiologi  Universitas  Mataram.  Materi utama penelitian berupa DNA yang diisolasi dari sampel  darah  100  ekor  kambing  lokal  betina dewasa  yang  sudah  melahirkan  2-3  kali  dan dipelihara  secara  tradisional  oleh  peternak  di Kabupaten Lombok Barat.
Identifikasi  mutasi  gen  FecX  dilakukan menggunakan  teknik  PCR-RFLP  ( polymerase chain  reactionreaction  fragment  length  poly- morphism) , seperti yang dilakukan oleh Davis et al. (2002),  Chu et  al. (2007),  dan  Maskur et  al . (2010).  Teknik  ini  sudah  digunakan  secara meluas pada berbagai uji DNA.

## Isolasi DNA sampel darah kambing
Isolasi  DNA  darah  kambing  dilakukan berdasarkan  metode  yang  digunakan  oleh Maskur et  al .  (2010)  dengan  menggunakan buffer  lisis untuk  mendegradasi  dinding  sel  dan fenol-khloroform untuk  mendegradasi  protein dan lemak, kemudian dipresipitasi menggunakan etanol  absolute ,  dan  diikuti  dengan  perlakuan
RNAse  untuk  memperoleh  DNA  yang  bebas RNA.

## Amplikasi PCR gen BMP 15
Gen  BMP  15  diamplifikasi  dengan  teknik PCR  menggunakan  Primer  gen  BMP-15  yang didesain  berdasarkan  informasi  sekuen  yang digunakan  sebelumnya  oleh  Chu et  al .  (2007), dengan  sekuen  Forward:  5'  CACTGTCTTCTT GTTACTGTATTTCAATGAC-3',  dan  Reverse: 5’GATGCAATACTGCCTGCTTG 3'.
Amplifikasi  dilakukan  mengikuti  metode yang  digunakan  sebelumnya  oleh  Davis et  al . (2002)  dan  Chu et  al .  (2007),  sebanyak  35 siklus, meliputi siklus pertama adalah predenaturasi  pada  suhu  95 o C  selama  5  menit, diikuti  denaturasi  95 o C  selama  45  detik, dilanjutkan  dengan anelling 63 o C  selama  45 detik,  dan  ekstensi  72 o C  selama  1  menit kemudian  diakhiri  satu  siklus  berikutnya  pada ekstensi akhir 72 o C selama 10 menit (Chu et al ., 2007).

## Deteksi mutasi gen BMP 15
Deteksi  mutasi  gen  BMP15  dilakukan melalui  tehnik  RFLP  ( restriction  fragment length  polymer-phism) menggunakan  enzim restriksi HinfI .  Produk  PCR  gen  BMP  15  serta pereaksi  diinkubasi  di  dalam  inkubator  pada suhu  37 o C  selama  16-18  jam.  Pengamatan terhadap mutasi alel gen dilakukan secara visual berdasarkan pada hasil elektroforesis gel agarose 2  %  menggunakan  ethidium  bromide,  dengan bantuan  Gel  documentation  and  Analysis Systems,  sebagaimana  dilakukan  Chen et  al . (2007), dengan beberapa modifikasi.

## Analisis statistik
Analisis terhadap frekuensi alel dan frekuensi genotype  dilakukan  berdasarkan  Maskur et  al ., (2010), sementara keseimbangan Hardy
Weinberg  diuji  dengan  uji  χ2  dilakukan berdasarkan Hartl dan Clark, (1997). Selanjutnya,  heterozigositas  pengamatan  (Ho), heterozigositas  harapan  (He)  dan  standar  eror heterozigositas  harapan  serta  nilai  PIC  dianalisa menurut  Weir,  (1996)  dan  perbedaan  rataan litter  size antara  genotipe  fragmen  gen BMP-15 dianalisis dengan uji t (Mendenhall, 1987).
Frekuensi alel
Frekuensi alel dihitung berdasarkan rumus Nei (1987) dan Nei dan Kumar (2000) sebagai berikut:

## Frekuensi genotipe
Frekuensi genotipe dihitung dengan rumus:

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Amplifikasi gen BMP15
Amplifikasi gen BMP15 pada kambing lokal menghasilkan DNA target (produk PCR) dengan panjang produk 141 bp (Gambar 1).
Hasil ini  sesuai dengan panjang produk pada Sekuens  gen BMP-15 pada  kromosom  X  ( Gen Bank dengan kode akses NC_022322). Hasil ini menunjukkan  bahwa  kondisi  optimum  PCR yang  digunakan  pada  penelitian  ini  terhadap DNA  yang  diisolasi  dari  darah  kambing  local cukup memadai.

## Mutasi gen BMP15 pada kambing lokal
Hasil  identifikasi  mutasi  gen  BMP15  pada kambing  lokal  dilakukan  dengan  metode  PCR- RFLP  menggunakan  enzim restriksi  HinfI sebagai  pemotong,  dengan  situs  pemotong G|ANTC (Gambar 2).
Mutasi  gen  BMP15  yang  terjadi  menimbul- kan  polimorfisme  genotipe  gen  FecX G pada kambing Lokal. Hasil penelitian ini sama dengan hasil  penelitian  yang  dilaporkan  oleh  Maskur et
al .  (2010).  Hasil  ini  menunjukkan  adanya indikasi bahwa kambing lokal membawa mutasi FecX G dari  gen  BMP15,  seperti  yang  dijumpai pada  domba  Han  ekor  tipis  (Chu et  al. ,  2007) dan domba Lombok ekor gemuk (Maskur et al ., 2010). Adanya mutasi gen FecX G mengakibatkan  polimorfisme  gen  BMP15  pada kambing  Lokal, yang menghasilkan dua  genotip yaitu  ++  (homozigot wild  type )  dan  G+ (heterozigot).  Menurut  Chu et  al. (2007)  mutasi yang  terjadi  pada  gen  BMP15  menyebabkan terjadinya premature akibat  danya stop  codon pada  asam  amino  ke  239  (Q239R)  dan menghasilkan alel G (Maskur et al ., 2010).
Mutasi  yang  terjadi  pada  gen  BMP15 disebabkan  oleh  perubahan  basa.  Menurut  Chu et  al. (2007)  bahwa  mutasi  gen  BMP15  yang terjadi  pada  domba  merupakan  perubahan (transisi) basa sitosin (C) menjadi timin (T) pada posisi  718.  Perubahan  basa  C  menjadi  T  pada sekuens  gen  BMP15  dapat  dilihat  pada  Gambar 3.
Pada  penelitian  ini  tidak  dilakukan  sekuensi terhadap  produk-produk  PCR  hasil  pemotongan menggunaan HinfI .  Akan  tetapi,  sebagai  acuan informasi  sekuens  gen  BMP15  ( Gene  Bank ) dengan situs pemotongan enzim retriksi HinfI (G|ANTC)  berada  pada  posisi  basa  ke  31 pb  yang  menye-babkan  perubahan  asam  amino pada kodon 131 dari start codonexon 2 dan posisi nukleotida 6031 pb (Gambar 3). Perubahan asam amino (CAG = Glutamine - TAG = Stop codon) menunjukkan bahwa terjadinya mutasi pada gen BMP15  yang  menyebabkan  perubahan  asam amino.
Perubahan  asam  amino  meng-akibatkan kehilangan fungsi pada BMP15 yang menghambat ekspresiresptor FSH ( follicle stimulating  hormone )  pada granulosa  cells menurun sehingga membuka peluang sensitifitas FSH  menjadi  lebih  tinggi  dan  meningkatkan ekspresi dari gen BMP15 (Davis, 2005).
Hubungan  mutasi  BMP15  dengan  laju ovulasi  berdasarkan  pada  konsep  bahwa meningkatkan  aktivitas  BMP15  yang  direduksi, laju  ovulasi  semakin  meningkat,  akan  tetapi apabila  level  BMP15  terlalu  rendah  akan menyebabkan tidak berfungsi secara total (Fabre et al ., 2006).
Ket.: xi = frekuensi genotipe ke-I; ni = jumlah  individu  bergenotipe  I, N =  jumlah individu sampel
Ket :
x i = frekuensi alel ke-i nii = jumlah individu bergenotipe ii nij = jumlah individu bergenotipe ij N = jumlah individu sampel
Gambar  1.  Representasi  visualisasi  hasil  ampli- fikasi  PCR  gen  BMP  15  kambing  Lokal pada gel agarose 2%.
Gambar  2.  Mutasi  FecX G gen  BMP15  yang dipotong dengan enzim HinfI .
Ket: M (marker) = Ladder 100 bp; G+ (1) = Individu heterozigot (141 bp,110 bp dan 31 bp); ++ (2,3,4,5) = Individu homozigot wild type (110 bp dan 31 bp)

## Frekuensi alel dan genotipe gen BMP15
Analisis  keragaman  gen  BMP15  mengha- silkan  alel  +  dan  G  yang  memiliki  genotipe  ++ ( wild  type )  dan  G+,  sedangkan  genotipe  GG (homo-zigot  mutan)  tidak  ditemukan  pada kambing  Lokal  (Tabel  1).  Hasil  penelitian  ini sama  dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh Maskur et al ., (2010) pada domba Lombok ekor gemuk.
Selanjutnya,  tampak  pula  pada  Tabel  1 bahwa  frekuensi  alel  +  pada  gen  BMP15  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  alel  G.  Frekuensi alel  +  sebesar  0,965  dan  alel  G  sebesar  0,035. Hasil penelitian ini sama dengan hasil penelitian yang  dilaporkan  oleh  Chu et  al. (2007)  yaitu pada  gen  BMP15  menunjukkan  hasil  frekuensi alel + lebih tinggi daripada frekuensi alel G. Hal ini  mengindikasikan  bahwa  kandidat  gen BMP15  yang  terdapat  pada  berbagai  jenis domba  ditemukan  juga  pada  kambing  local, dengan nilai > 1%. Deangan demikian maka gen
BMP15  pada  kambing  kokal  dapat  dikatego- rikan  bersifat polimorfik karena  nilai  frekuensi alel nya lebih dari 1% (Nei dan Kumar, 2000).
Hasil  analisis  uji  Chi-square  (X 2 )  terhadap gen  BMP15  menunjukkan  bahwa  frekuensi genotipe dan frekuensi alel adalah homogen atau seimbang  terhadap  populasi  ternak  kam-bing lokal.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  populasi kambing  lokal  masih  berada  dalam  keadaan seimbang  (keseimbangan  Hardy  Weinberg)  dan menunjukkan  pada  populasi  ternak  kambing lokal belum pernah dilakukan seleksi.
Hasil  pengamatan  di  lokasi  penelitian menunjukkan  bahwa  populasi  kambing  lokal dipelihara  secara  tradisional,  tidak  pernah dilakukan seleksi terhadap ternak yang dipelihara,  terutama  seleksi  berdasarkan  jumlah anak sekelahiran. Pendugaan  nilai  heterozigositas  dan  PIC  gen BMP15. Nilai heterozigositas pengamatan (H o ) disajikan  pada  Tabel  2  yaitu  0,070  lebih  tinggi dibandingkan  nilai  heterozigositas  harapan  (H e ) sebesar  0,068.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa heterozigositas  pengamatan  dan  nilai  hetero- zigositas  harapan  pada  kambing  lokal  tidak menunjukkan adanya perbedaan yang besar pada fragmen gen BMP15.
Menurut  Tambasco et  al. (2003),  perbedaan antara nilai heterozigositas pengamatan (Ho) dan nilai  hetero-zigositas  harapan  (He)  dapat dijadikan  indikator  adanya  ketidak-seimbangan genotipe  pada  populasi  yang  diamati. Nilai heterozigositas pengamatan (Ho) dan heterozigositas  harapan  (He)  ini  juga  dapat digunakan  untuk menduga nilai inbreeding pada suatu  kelompok  ternak .  Nei  (1987)  menyatakan bahwa  nilai  heterozi-gositas  ditentukan  oleh jumlah sampel yang digunakan, jumlah dan nilai frekuensi,  serta  faktor  yang  mempengaruhi tinggi  rendahnya  nilai  heterozigositas  pada populasi ternak yang disebabkan oleh perkawinan  acak  atau  peluang inbreeding yang rendah.
Nilai polymorphic information contents (PIC) merupakan salah satu parameter yang menunjukkan tingkat informatifnya suatu marker/penciri.  Klasifikasi  nilai  PIC  yaitu PIC≤0,25 polimorfisme rendah, 0,25 ≤ PIC ≤ 0,5

## 1
Rahmat Agus Hidayat, Sulaiman Ngongu Depamede, Maskur (Identifikasi Mutasi FecX…)
Gambar 3 : Sekuens gen BMP15 pada kambing ( Gen Bank dengan kode akses JQ350891.1 ).
Keterangan : Posisi primer (bergaris bawah), perubahan basa/ asam amino (cetak tebal) dan situs pemotongan (bergaris bawah warna abu-abu).

## Tabel 1. Frekuensi genotip dan alel gen BMP15 pada kambing Lokal
Gen Frekuensi Genotipe Alel X 2 (HWE) X 2 (0.05) GG G+ ++ G + BMP15 0,00 (0) 0,07 (7) 0,93 (93) 0,035 0,965 0,132 * 3,841
Keterangan : * = X 2 hitung < X 2 tabel (0.05)(1)
Tabel 2.   Nilai heterozigositas pengamatan (H o ), heterozigositas harapan (H e ), dan polymorphic information contents (PIC) gen BMP15 pada kambing lokal
Gen N Ho He ± Se PIC BMP15 100 0.070 0.068 ± 0.031 0.069 Keterangan : N : jumlah ternak
Tabel 3. Rata-rata nilai litter size pada kambing lokal dengan gen BMP15
Genotipe BMP15 Jumlah Ternak Litter Size G+ ++ 7 93 1,65±0,202 a 1,59±0,319 b
Keterangan : (a-b) = Rata-rata dengan superskrip yang beda menunjukkan beda nyata (P<0.05)
polimorfisme  sedang,  dan  PIC  ≥  0,5 polimor- fisme tinggi.
Selanjutnya,  pada  Tabel  2  tampak  pula bawa  hasil  analisis  nilai  PIC  gen  BMP15 adalah 0,069. Hasil ini menggambarkan bahwa polimerfisme  genetik  gen  BMP15  pada populasi  kambing  lokal  berada  pada  level rendah.  Berdasarkan  nilai  PIC  tersebut  maka gen  BMP15  memiliki  potensi  yang  rendah sebagai  penciri/marker  genetik  untuk  sifat prolifik  pada  kambing  lokal.  Selain  itu,  nilai PIC  juga  digunakan  untuk  menentukan  ada tidaknya alel yang polimorfik .

## Hubungan  polimorfisme  gen  BMP  15 terhadap sifat prolifik kambing local
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  rata- rata  jumlah  anak  sekelahiran  atau litter  size pada kambing lokal yaitu 1,60 ekor/induk/kelahiran.  Hasil  data  kelahiran yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  yaitu  induk beranak  antara  2-3  kali  dengan  kisaran  29% (29  ekor)  induk  beranak  tunggal,  69%  (69 ekor)  induk  pernah  beranak  kembar  ( twins) dan  10  %  (10  ekor)  induk  pernah  beranak  3 (triplets)  lebih  tinggi  dengan  yang  dilaporkan oleh Pamungkas et  al. (2009)  bahwa  tingkat kesuburan  kambing  kacang  cukup  tinggi dengan  kemampuan  hidup  dari  lahir  sampai sapih  79,4%,  sifat  prolifik  anak  kembar  dua 52,2%,  kembar  tiga  2,6%  dan  anak  tunggal 44,9%. Hasil rata-rata litter size pada kambing lokal  dengan  gen  BMP15  dapat  dilihat  pada Tabel 3.
Menurut  Davis  (2005)  gen  BMP-15 merupakan  gen  yang  menyebabkan  kenaikan laju  ovulasi  pada  betina  dalam  keadaan heterozigot  dan  menyebabkan  infertill  pada betina  dalam  keadaan  homozigot.  Sedangkan menurut  Hamdan et  al. (2012)  jumlah  anak yang  dilahirkan  oleh  seekor  ternak  sangat tergantung  dari  jumlah  sel  telur  yang diovulasikan  setiap  siklusnya  dan  berkaitan dengan  sekresi  hormon follicle  stimulating hormone (FSH)  pada  saat folikulogenesis . Selanjutnya  dijelaskan  bahwa  sifat  prolifik  ini dikendalikan  oleh  gen  fekunditas,  yaitu  gen BMP15.  Pola  pengontrolan  gen  terhadap mekanisme prolifisasi mengindikasikan adanya  perbedaan  antara  breed  kambing  dan domba,  tetapi  sifat  prolifik  pada  kambing  dan domba  masih  dikontrol  oleh  gen  yang  sama yaitu  BMP  15  (Chu et  al., 2007).  Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  kambing lokal yang diamati terdapat korelasi
polimorfisme gen  FecX G atau  gen  BMP15 terhadap  sifat  prolifik  pada  kambing  lokal yang  menyebabkan  adanya  perbedaan litter size masing-masing genotipe kambing lokal.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  PCR-RFLP  dengan enzim  restriksi HinfI (G|ANTC)  terdapat mutasi  gen  FecX G pada  kambing  lokal. Terdapat  korelasi polimorfisme gen  FecX G terhadap  sifat  prolifik  pada  kambing  lokal yang  menyebabkan  adanya  perbedaan litter size masing-masing genotipe.

## DAFTAR PUSTAKA
Chu, M.X., Liu, Z.H. Liu, C.L. Jiao, Y.Q. He, L.  Fang,  S.C.  Ye,  G.H.  Chen  and  J.Y. Wang.  2007.  Mutations  in  BMPR-IB  and BMP-15  genes  are  associated  with  litter size  in  Small  Tailed  Han  sheep  (Ovis aries).  Journal  of  Animal  Science.  85:598– 603.
Davis  G.H.  2005.  Major  Genes  Effecting Ovulation  Rate  in  Sheep.  Journal  Genetics Selection Evolution 37: S11-S23.
Davis,  G.H.,  S.M.  Galloway,  I.K.  Ross,  S.M.
Gregan,  J.  Ward,  B.V.  Nimbkar,  P.M. Ghalsasi, C. Nimbkar, G.D. Gray, Subandriyo,  I.  Inounu,  B.  Tiesnamurti,  E. Martyniuk, E. Eythorsdottir, P. Mulsant, F. Lecerf,  J.P. Hanrahan,  G.E.   Bradford,  and T.  Wilson.  2002.  DNA  tests  in  prolific sheep  from  eight  countries  provide  new evidence  on  origin  of  the  Booroola  (FecB) mutation . Biology  Reproduction.  66:1869– 1874.
Fabre,  S.,  A.  Pierre,  P.  Mulsant,  L.  Bodin,  E. Di Pasquale, L. Persani, P. Monget, and D. Monniaux.  2006.  Regulation  of  ovulation rate  in  mammals:  Contribution  of  sheep genetic  models.  Biology  Reproduction Endocrinology 4:20.
Hamdan, D.N., T.N. Siregar,  B. Panjaitan dan Husnurrizal.  2012.  Kinerja  reproduksi kambing lokal yang diinduksi super-ovulasi dengan antiserum Inhibin . Jurnal Kedokteran Hewan 6(1):1-5.
Hartl,  D.L.,  and  A.G.  Clark.  1997.  Principles of  Population  Genetics.  3rd  ed.  Sinauer Associates.  Inc.  Publishers.  Sunderland. Massachusetts.
Maskur  dan  C.  Arman.  2010.  Identifikasi mutasi  gen  BMPR-1B  dan  BMP15  pada
domba ekor gemuk. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner 15(1): 16-21. Mendenhall, W. 1987. Inroduction to Probability and Statistics. Seventh Ed. PWS Publishers. 20 Park Plaza. Boston, Massachusetts. USA. Nei,  M.  1987.  Molecular  Evolutionary Genetics.  Columbia  University  Press.  New York.
Nei,  M.  and  S.  Kumar.  2000.  Molecular Evaluation  and  Phylogenetics . Oxford University Press, New York.
Pamungkas, F.A., A.
Batubara, M. Doloksaribu  dan  E.  Sihite.  2009.  Petunjuk
Teknis  Potensi  Beberapa  Plasma  Nutfah
Kambing  Indonesia.  Pusat  Penelitian  dan
Pengembangan  Peternakan,  Deli  Serdang, Sumatera Utara.
Tambasco,  D.  D,  M.  Tambasco-Studart,  A.  P. Pereira, M.M. Alencar, A. R. Freitas, L. L. Countinho,  I.U.  Packer  and  L.  C.  A. Regitano.  2003.  Candidate  genes  for growth  traits  in  beef  cattle  Bos  Taurus  x Bos  Indicus . Journal  of  Animal.  Breeding and Genetics 120: 51-60. Weir,  B.S.  1996.  Genetic  data  analysis  II. Sinauer  Associates.  Sunderland.  Massa- chusetts.
Wijosono,  S.R,  L.G.S.  Astiti,  T.  Panjaitan,  A. Muzani,  N.  Agustini.  2009.  Beternak kambing intensif. Proseding Seminar
Nasional.  Balai  Pengkajian  Teknologi Pertanian,  NTB.  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Pertanian.
Departemen Pertanian.
Rahmat Agus Hidayat, Sulaiman Ngongu Depamede, Maskur (Identifikasi Mutasi FecX…)

## .