## Identifikasi Polimorfisme Titik -1082 Promoter Gen IL-10 pada Penderita Kusta
Desi Oktariana 1* , Fifa Argentina 2 , Evi Lusiana 3 , Nia Savitri Tamzil 3
1 Bagian Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya, Palembang, Indonesia
2 Bagian Dermatovenereologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya, Palembang, Indonesia
3 Bagian Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sriwijaya, Palembang, Indonesia E-mail : desioktariana@fk.unsri.ac.id

## Abstrak
Kusta merupakan penyakit menahun yang disebabkan oleh infeksi Mycobacterium leprae , yang mengenai kulit dan saraf, yang dapat berakibat pada kecacatan. Interleukin-10 diyakini memainkan peranan penting dalam patogenesis penyakit  kusta.  Polimorfisme  pada  promotor  gen  ini  diduga  dapat  mempengaruhi  produksi  IL-10,  yang  kemudian dapat berpengaruh terhadap proses eliminasi mikroba dalam perkembangan penyakit kusta. Salah satu polimorfisme terkait gen IL-10 yang paling sering terjadi adalah polimorfisme titik -1082 pada promotor gen tersebut. Tujuan dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengidentifikasi  polimorfisme  titik  -1082  promotor  gen  interleukin-10  pada  penderita kusta  yang  dirawat  di  RSUP  dr.  Mohammad  Hoesin  Palembang.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  deskriptif observasional dengan rancangan cross sectional . Polimorfisme titik -1082 promotor gen interleukin-10 diukur dengan metode  PCR-RFLP, elektroforesis, dan divisualisasi pada sinar UV. Dari penelitian ini didapatkan distribusi frekuensi genotipe AA sebesar 80%, AG sebesar 14%, dan GG sebesar 6%. Distribusi frekuensi alel A sebesar 87% dan alel G sebesar 13%. Gambaran genotip wild type lebih banyak ditemukan pada penderita kusta (80%).
Kata kunci : Interleukin-10, Kusta, Polimorfisme

## Abstract
Identification  of  -1082  Interleukin-10  Gene  Promoter  In  Leprosy  Patient. Leprosy  is  a  chronic  disease  caused  by Mycobacterium leprae infection, which affects skin and nerves, then can result in disability. Interleukin-10 have an important  role  in  the  pathogenesis  of  leprosy.  Polymorphism  in  this  gene  promoter  is  thought  to  affect  IL-10 production, which can then influence the process of microbial elimination in the development of leprosy. One of the most  common  polymorphisms  associated  with  IL-10  is  the  polymorphism  of  the  -1082  on  the  gene  promoter.  The purpose of this study was to identify the polymorphism of the -1082 interleukin-10 gene promoter in leprosy patients treated  at  RSUP  dr.  Mohammad  Hoesin  Palembang.  This  research  is  an  observational  descriptive  study  with  cross sectional  design.  Polymorphism  of  -1082  interleukin-10  gene  promoter  was  measured  by  PCR-RFLP  method, electrophoresis, and visualized in UV light. From this study it was found that the frequency distribution of genotype AA was 80%, AG was 14%, and GG was 6%. The frequency distribution of allele A is 87% and allele G is 13%. Wild type genotype is more common in leprosy sufferers (80%).
Keywords : Interleukin-10, Leprosy, Polymorphism

## 1. Pendahuluan
Kusta merupakan penyakit menahun yang disebabkan  oleh  infeksi Mycobacterium leprae ,  yang  mengenai  lesi  kulit  dan  saraf, yang  dapat  berakibat  pada  kecacatan. Prevalensi  penyakit  kusta  terus  meningkat,
terutama  di  Indonesia,  yang  termasuk  salah satu daerah endemik kusta. 1
Respon  imun  yang  unik  pada  masing- masing  individu  tidak  hanya  menentukan kerentanan  individu  untuk  terkena  penyakit kusta,  tapi juga menentukan tipe kusta yang akan bermanifestasi. 2 Salah satu respon imun
yang  memainkan  peranan  penting  dalam patogenesis penyakit kusta adalah interleukin- 10  (IL-10).  Interleukin-10  memiliki  efek  anti- inflamasi,  dengan  bekerja  pada  makrofag yang aktif untuk mengakhiri respons terhadap mikroba  dan  mengembalikan  sistem  ke keadaan istirahat setelah mikroba dihancurkan. Peningkatan regulasi IL-10 dapat berpengaruh  pada  penurunan  aktivitas makrofag dalam membunuh bakteri. 3 Produksi  IL-10  diatur  oleh  gen  yang menyandi  sitokin  tersebut.  Adanya  mutasi pada gen tersebut diduga dapat menyebabkan  perubahan  pada  ekspresi  gen IL-10 yang dihasilkan. Gen IL-10 terletak pada kromosom  1q32.  Polimorfisme  pada  gen  ini dapat  menyebabkan  variasi  fungsi  protein  IL- 10,  yang  kemudian  dapat  berpengaruh terhadap  proses  eliminasi  mikroba  dalam perkembangan penyakit kusta. 4

## 2. Metode
Penelitian  ini  merupakan  penelitian laboratorium  deskriptif  observasional  dengan pendekatan  studi cross  sectional ,  untuk mengamati  dan  memaparkan  hasil  dari pengamatan  terhadap  gen  IL-10  dengan menggunakan  PCR-RFLP  pada  penderita kusta. Pengambilan sampel dilakukan di RSUP dr. Mohammad Hoesin Palembang. Pengolahan  sampel  meliputi  ekstraksi  DNA dan  PCR-RFLP,  dilakukan  di  Laboratorium Bioteknologi FK Unsri.
Sampel darah diambil melalui punksi vena antecubiti  sebanyak  3  ml  dimasukkan kedalam tabung yang mengandung antikolagen ethylene  diamine  tetra  acid (EDTA)  untuk  ekstraksi  DNA  dan  PCR.  Proses PCR berlangsung dalam tiga tahap reaksi yang berulang  sebanyak  35  siklus  pada  suhu berbeda  yaitu  reaksi denaturasi pada  suhu 95 0 C  selama  2  menit  untuk  memisahkan rantai  ganda  menjadi  dua  rantai  tunggal, reaksi annealing yaitu  menyatunya  kembali kedua  rantai  DNA  tersebut  yang  berlangsung
pada suhu 95 0 C selama 30 detik, 60 0 C selama 45  detik,  72 0 C  selama  60  detik  dan ekstensi yaitu sintesis DNA melalui perpanjangan suatu primer  mengikuti  urutan  nukleotida  DNA rantai  tunggal  pasangannya  yang  umumnya berlangsung pada suhu 72 0 C selama 10 menit. Deteksi polimorfisme gen IL-10 dilakukan dengan  memotong  DNA  produk  PCR  dengan enzim  restriksi MnII .  Adanya  mutasi  akan menyebabkan  terbentuknya  situs  restriksi baru yang dapat dikenali oleh enzim restriksi. Sebanyak  0,25  µL  enzim  ditambahkan  ke dalam  tabung  eppendorf  yang  berisi  15,5  µL produk PCR, lalu divorteks beberapa detik dan diinkubasi  dalam  waterbath  pada  suhu  37 o C selama  1  jam. Setelah  digesti,  produk  PCR dielektroforesis  pada  3%  agarose  gel  dan dilihat dengan pewarnaan ethidium bromide.

## 3. Hasil
Sebanyak  50  orang  penderita  kusta berpartisipasi  dalam  penelitian  ini.  Frekuensi subjek  yang  berjenis  kelamin  laki-laki  adalah sebesar  33  orang,  sedangkan  wanita  adalah sebesar  17  orang.  Rerata  usia  adalah  42,08± 14,65  tahun.  Frekuensi  ras  melayu  adalah sebesar  49  orang,  sedangkan  frekuensi  ras non-melayu adalah sebesar 1 orang. Frekuensi jenis  kusta  (klasifikasi  WHO)  yang  paling banyak  adalah  tipe  multibasiler  (MB),  yaitu sebesar  46  orang  (92%).  Frekuensi  tipe pausibasiler (PB) adalah sebesar 4 orang (8%).
Genotipe AA, AG, dan GG gen IL-10 -1082 pada  subjek  penelitian  berturut-turut  adalah 40 (80%), 7 (14%), dan  3 (6%). Alel A dan alel G  pada  subjek  penelitian  berturut-turut adalah 87 (87%) dan 13 (13%).
Berdasarkan  usia,  genotipe  AA,  AG,  GG gen IL-10 -1082 pada subjek penelitian adalah 29 (58%), 7 (14%), 2 (4%) untuk yang berusia di  bawah  50  tahun,  dan  11  (22%),  0  (0%),  1 (2%) untuk yang berusia di atas 50 tahun. Alel A  dan  G  gen  IL-10  -1082  pada  subjek penelitian  adalah  65  (65%)  dan  11  (11%) untuk yang berusia di bawah 50 tahun, serta
22  (22%)  dan  2  (2%)  untuk  yang  berusia  di atas  50  tahun.  Berdasarkan  jenis  kelamin, genotipe  AA,  AG,  GG  gen  IL-10  -1082  pada subjek  penelitian  adalah  28  (56%),  4  (8%),  1 (2%)  pada  laki-laki,  dan  12  (24%),  3  (6%),  2 (4%) pada perempuan. Alel A dan G gen IL-10 -1082 adalah 60 (60 %) dan 6 (6%) pada laki- laki,  serta  27  (27%)  dan  7  (7%)  pada perempuan.  Berdasarkan  klasifikasi  penyakit, genotipe  AA,  AG,  GG  gen  IL-10  -1082 berdasarkan pada subjek penelitian adalah 36 (72%), 7 (14%), 3 (6%) untuk multibasiler, dan 4 (8%), 0 (0%), 0 (0%) untuk pausibasiler. Alel A  dan  G  gen  IL-10  -1082  ini  adalah  79  (79%) dan 13 (13%) untuk multibasiler, serta 8 (8%) dan 0 (0%) untuk pausibasiler.

## 4. Pembahasan
Beberapa  studi  epidemiologi  melaporkan bahwa  penderita  kusta  lebih  banyak  berjenis kelamin laki-laki dibandingkan dengan wanita, seperti  studi  di  Etiopia  yang  menyatakan bahwa  64,5%  dari  total  penderita  kusta merupakan  laki-laki. 5 Studi  lain  di  Brazil  juga melaporkan hal serupa yaitu terdapat insiden yang  lebih  tinggi  pada  penderita  kusta berjenis  kelamin  laki,  dan  angka  kejadian reaksi kusta lebih banyak terjadi pada laki-laki dibandingkan  dengan  wanita. 6 Penelitian  lain juga  menunjukkan  bahwa  laki-laki  memiliki risiko  22  kali  lipat  lebih  tinggi  dibandingkan dengan wanita. 7 Usia  merupakan  salah  satu  faktor  risiko potensial  bagi  orang  yang  memiliki  kontak dengan  penderita  kusta,  untuk  berkembang menjadi  kusta.  Doull  dkk  melaporkan  pada tahun  1945  di  Filipina  bahwa  ada  hubungan antara  risiko  terkena  kusta  secara  klinis dengan  usia  pajanan  awal,  risiko  menurun sesuai  usia  pajanan.  Noordeen,  di  sisi  lain, menyatakan  bahwa  di  daerah  endemik  tinggi seperti  India  Selatan  (studi  Vijayakumaran juga  dilakukan  di  India  Selatan)  insiden  yang khusus  terkait  usia  menunjukkan  distribusi bimodal  dengan  puncak  pada  usia  10-14
tahun,  yang  diikuti  oleh  depresi,  dan kemudian  diikuti  oleh  kenaikan  dan  puncak pada  usia  30-60  tahun,  yang  lebih  tinggi  dari puncak pertama. 8
Beberapa studi epidemiologi menyatakan bahwa  insiden  kusta  jenis  multibasiler/MB lebih banyak dibandingkan dengan kusta jenis pausibasiler/PB,  di  Etiopia  misalnya,  insiden kusta MB lebih tinggi 90% dibanding PB yang hanya 10% (Ramos, dkk, 2012). Penelitian lain juga menyatakan bahwa terdapat peningkatan  kasus  baru  kusta  jenis  MB dibandingkan  dengan  kusta  jenis  PB  (Basel, dkk,  2014).  Kontak  “Cutaneous”  dengan pasien  MB  memiliki  risiko  8  kali  lipat  untuk terkena kusta pada orang sehat, dibandingkan kontak  “neural”  pada  pasien  PB  yang  hanya memiliki risiko 4 kali lipat. 8
Polimorfisme yang terjadi pada gen IL-10 yang  dipotong  dengan  enzim MnlI adalah berupa  perubahan  basa  A  (adenin)  menjadi basa G (guanin) pada basa ke-1082. Genotipe wild  type (AA)  saat  divisualisasi  akan memperlihatkan  1  pita,  genotipe  heterozigot (AG) saat divisualisasi akan memperlihatkan 3 pita, dan genotipe homozigot mutan (GG) saat divisualisasi akan memperlihatkan 2 pita pada daerah marker.
Perubahan  A à G  pada  basa  ke-1082  gen IL-10  ini  dapat  memengaruhi  regulasi transkripsi. Gen IL-10 terletak pada kromosom 1  pada  1q31-32,  membentang  dengan panjang sekitar 4,7 kb dan berisi empat intron dan  lima  ekson.  Regio  5’  flanking  merupakan regio  DNA  yang  melekat  pada  ujung  5’  dari gen,  yang  mengandung  promotor  dan mungkin mengandung enhancers atau protein binding  sites lainnya.  Regio  ini  terutama berfungsi  dalam  regulasi  transkripsi  gen. Polimorfisme  pada  regio  ini  dapat  memicu perubahan  pada  regulasi  transkripsi.  Regio  3’ flanking  merupakan  regio  DNA  yang  melekat pada  ujung  3’  dari  gen,  yang  tidak  dikopi menjadi mRNA matang. Regio ini mengandung  sekuen  yang  mempengaruhi
formasi ujung 3’ dari DNA, yang juga mungkin mengandung enhancers atau protein  binding sites lainnya. Distribusi  genotipe  AA,  AG,  dan  GG  gen IL-10 -1082 pada subjek penelitian ini masing- masing adalah 40 (80%), 7 (14%), dan  3 (6%). Dalam  penelitian  ini,  sebagian  besar  pasien kusta bergenotipe gen IL-10 normal atau wild type (AA).
Beberapa penelitian menyimpulkan bahwa
terdapat hubungan antara polimorfisme  titik  -1082  promotor  gen  IL-10 dengan  kerentanan  penyakit  kusta,  namun beberapa  penelitian  lainnya  mendapatkan hasil yang sebaliknya.
Fakta  membuktikan  bahwa  beberapa polimorfisme  regio  proksimal  promoter  IL-10 dapat  digabungkan  untuk  membentuk haplotipe,  yang  paling  sering  diamati  terkait dengan  produksi  IL-10  yang  tinggi  adalah haplotype    -3575T/-2849G/-2763C/-819T/- 592A.  Oleh  karena  itu,  ada  kemungkinan bahwa  haplotipe  IL-10  ini  dikaitkan  dengan kerentanan  pasien  terhadap  perkembangan kusta. Penelitian  Moraes  pada  tahun  2004 menemukan  pola  haplotipe  protektif  dan haplotipe  yang  rentan  terhadap  kusta. Haplotipe  protektif  adalah  -3575A/-2849G/- 2763C/-1082G/-819C,  sedangkan  -3575T/  - 2849A/-2763C/-1082G/-819T adalah
haplotipe yang rentan. 9 Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Malhotra
(2005) pada populasi India juga mengungkapkan  bahwa  haplotipe  promotor gen  IL-10  -3575T/-2849G/-2763C/-1082A/-
819C/-592C  berhubungan  dengan  resistensi terhadap  kusta.  Sementara  itu,  haplotype  IL- 10 -3575T/-2849G/-2763C/-1082A/-819T/- 592A  terkait  dengan  risiko  berkembangnya keparahan kusta. 10
Penelitian  ini  mengkonfirmasi  penemuan yang menyatakan bahwa regio promoter IL-10 memiliki  peran  dalam  mengendalikan kerentanan dan keparahan kusta dan hasilnya
mengimplikasikan  bahwa  haplotipe  -3575T/- 2849A/-2763C/-1082G/-819T berhubungan dengan kerentanan penyakit kusta. Penelitian yang dilakukan oleh Franceschi 11 pada  tahun  2009  menemukan bahwa  analisis  genotipe  IL-10  tidak menunjukkan  perbedaan  signifikan  antara penderita  kusta  dan  kontrol.  Frekuensi haplotipe  polimorfisme  promotor  gen  IL-10  - 1082G/-819C/-592C  ditemukan  lebih  rendah pada  pasien  kusta  LL  dibandingkan  kontrol, namun  setelah  statistik  diolah  lebih  lanjut, hasil tersebut tidak lagi signifikan. Selanjutnya,  penelitian  lanjutan  oleh  Garcia pada tahun 2013 mengkonfirmasi hal serupa, bahwa  genotipe  ACC/ACC  dan  ACC/GCC (A1082G,  C819T,  C592A)    menunjukkan  hasil yang  signifikan  terhadap  proteksi  melawan perkembangan  penyakit  kusta,  dalam  profil produksi  IL-10  rendah  dan  sedang.  Oleh karena  itu,  genotipe  A1082G,  C819T,  C592A yang dibentuk oleh polimorfisme IL-10 sangat terkait dengan proteksi terhadap perkembangan  penyakit  kusta  pada  populasi Brazil  Utara,  khususnya  genotipe  ACC/ACC dan ACC/GCC.
Di  Cina,  penelitian  yang  dilakukan  oleh Chen  pada  tahun  2013  menyatakan  bahwa polimorfisme  titik  -1082  promoter  gen  IL-10 tidak  berhubungan  dengan  kerentanan penyakit  kusta.  Haplotipe  -3575A/-2849G/- 2763A/-1082G/-819C/-592C berhubungan dengan  kerentanan  kusta  dan  subtype  PB  di Barat Daya Cina. 12
Pada kulit yang sehat, up-regulasi dari IL- 10  endogen  adalah  mekanisme  kunci  dalam supresi respon imun yang dimediasi sel-T dan peningkatan produksi IL-10 pada pasien kusta LL  yang  tidak  respon  terhadap  pengobatan. Sitokin  IL-10  memiliki  banyak  efek  dalam pengaturan sistem kekebalan tubuh, termasuk  penghambatan  sekresi  sitokin  Th1 dan proliferasi sel T.
Polimorfisme  interleukin-10  pada  regio distal  dan  proksimal  membentuk  haplotipe
dalam promoter gen, dan kombinasi ini telah dikaitkan  dengan  sekresi  sitokin  in  vitro. Beberapa  polimorfisme  di  daerah  promotor gen  IL-10  diduga  berpengaruh  terhadap produksi  IL-10.  Beberapa  varian  genetik  dari promotor  gen  IL-10,  seperti  A1082G,  C819T dan  C592A,  sendiri  atau  dalam  haplotype telah banyak dipelajari pada pasien kusta. Sitokin  IL-10  memiliki  efek  pleiotropik dalam  imunoregulasi  dan  peradangan, termasuk  penghambatan  sekresi  sitokin  TH1 dan  proliferasi  sel  T.  Polimorfisme  dalam promotor  mempengaruhi  jumlah  produksi IL10.  Produksi  IL-10  yang  tinggi  dapat meningkatkan kerentanan mikobakteri dengan  cara  menekan  peradangan.  Tiga polimorfisme  di  bagian  proksimal  promotor gen  IL-10  yang  paling  sering  diteliti  adalah polimorfisme  di  titik  A1082G,  C819T  dan C592A.
Selain  polimorfisme  titik  (SNP),  berbagai haplotipe juga dapat memengaruhi sekresi IL- 10.  Eskdale  et  al.  (1999)  telah  melaporkan sebuah  studi  SNP  promotor  IL-10  dari  56 keluarga Eropa Belanda di mana SNP-1082G/-
819C/-892C/-592C promotor IL-10 menunjukkan  sekresi  yang  relatif  rendah, sedangkan 1082A/-819C/-592C
adalah haplotype dengan sekresi relatif tinggi. Gibson et  al.  (2001)  telah  melakukan  studi  lupus erythematosus  sistemik  di  mana  SNP haplotype  promotor  IL-10  distal  -3575T/- 2849G/-2763C  terbukti  berhubungan  dengan hipersekresi  IL-10,  dan  haplotype  -3575A/- 2849G/-2763A  terkait  dengan  sekresi  IL-10 yang  rendah.  Selain  itu,  SNP  distal  memiliki efek  yang  lebih  besar  pada  sekresi  IL-10 daripada  SNP  proksimal.  SNP  promotor  IL-10 dan haplotype dapat dikaitkan dengan sekresi IL-10 dan kerentanan kusta yang tinggi, tetapi berbagai kelompok populasi dengan hubungan tipe penyakit dan kusta serta studi fungsional belum sepenuhnya dieksplorasi.
Penelitian  dari  Moraes  menunjukkan bahwa  IL-10  penting  selama  fase  imunitas
awal  dan  akhir  terhadap M.  leprae ,  tetapi mungkin  memainkan  peran  yang  berbeda dalam  tahap  yang  berbeda  ini. 9 Seperti disebutkan sebelumnya, hanya sebagian kecil pasien  kusta  memiliki  haplotipe  IL-10  yang terkait  dengan  penyakit  atau  keparahan penyakit,  dan  beberapa  pasien  masih membawa  haplotipe  terkait  resistensi  kusta, yang  menunjukkan  bahwa  hasil  penyakit mikobakteri  disebabkan  oleh  interaksi  yang kompleks  antara  beberapa  gen  inang, kemungkinan  termasuk  gen  sitokin  dan reseptor  lainnya,  gen  yang  dikodekan  HLA (termasuk TNF-a) dan lainnya. Selain itu, tidak dapat  dikecualikan  bahwa  kontrol  genetik kerentanan terhadap kusta adalah heterogen sehingga  lokus  yang  berbeda  dapat mengendalikan fenotipe yang sama.

## 5. Kesimpulan
Gambaran genotip wild type lebih banyak ditemukan pada penderita kusta.

## Daftar Pustaka
1. Depkes  RI.  Buku  pedoman  nasional pemberantasan penyakit kusta. Jakarta Direktorat Jenderal Pengendali Penyakit  dan  Penyehatan  Lingkung. 2006;
2. Alter A, Grant A, Abel L, Alcaïs A, Schurr
E. Leprosy as a genetic disease. Mamm genome. 2011;22(1–2):19–31.
3. Sari  N,  Amiruddin  MD,  Amin  S,  Adam AM,  Djamaluddin  W,  Vitayani  S.  Peran Interleukin--2  (IL-2),  Interleukin-10  (IL-
10) dan Tumor Necrosis Factor-α (TNF- α)  pada  Penyakit  Kusta.  MDVI.
2013;40(1):35–40.
4. Cardoso  CC,  Pereira  AC,  de  Sales Marques  C,  Moraes  MO.  Leprosy susceptibility: genetic variations regulate innate and adaptive immunity, and disease outcome. Future Microbiol.
2011;6(5):533–49.
5. Ramos  JM,  Martínez-Martín  M,  Reyes
F,  Lemma  D,  Belinchón  I,  Gutiérrez  F. Gender  differential  on  characteristics and  outcome  of  leprosy  patients admitted  to  a  long-term  care  rural hospital in South-Eastern Ethiopia. Int J Equity Health. 2012;11(1):56.
6. Mastrangelo G, Silva Neto J da, Silva GV da, Scoizzato L, Fadda E, Dallapicola M, et  al.  Leprosy  reactions:  the  effect  of gender  and  household  contacts.  Mem Inst Oswaldo Cruz. 2011;106(1):92–6.
7. Bakker  MI,  Hatta  M,  Kwenang  A,  Van Mosseveld  P,  Faber  WR,  Klatser  PR,  et al. Risk factors for developing leprosy-a population-based  cohort  study  in Indonesia. Lepr Rev. 2006;77(1):48–61.
8. Moet FJ, Meima A, Oskam L, Richardus JH. Risk factors for the development of clinical  leprosy  among  contacts,  and their relevance for targeted interventions.  Lepr  rev.  2004;75:310– 26. 9. Moraes  MO,  Pacheco  AG,  Schonkeren JJM, Vanderborght PR, Nery JAC, Santos
AR,  et  al.  Interleukin-10  promoter
single-nucleotide  polymorphisms  as markers  for  disease  susceptibility  and disease  severity  in  leprosy.  Genes Immun. 2004;5(7):592–5.
10.   Malhotra D, Darvishi K, Sood S, Sharma S,  Grover  C,  Relhan  V,  et  al.  IL-10 promoter single nucleotide polymorphisms are significantly associated  with  resistance  to  leprosy. Hum Genet. 2005;118(2):295–300.
11.   Franceschi  DSA,  Mazini  PS,  Rudnick
CCC, Sell AM, Tsuneto LT, Ribas ML, et al.  Influence  of  TNF  and  IL10  gene polymorphisms in the immunopathogenesis  of  leprosy  in  the south  of  Brazil.  Int  J  Infect  Dis. 2009;13(4):493–8.
12.   Chen XH, Xiong JH, Ning Y, Wen Y, Liu J, Mao C, et al. IL-10 promoter SNPs and susceptibility  to  leprosy  in  ethnic groups  from  southwest  China.  Genet Mol Res. 2013;12(3):2876–85.