## Jurnal Bahana Kesehatan Masyarakat
(Bahana of Journal Public Health) Vol 7 No 1 p-ISSN: 2580-0590/ e-ISSN: 2621-380X doi: https://doi.org/10.35910/jbkm.v6i1.537

## PERBANDINGAN KADAR ENZIM ALKALINE PHOSPHATASE (ALP) PADA SERUM HEMOLISIS RINGAN DAN NON HEMOLISIS
Tria Agustina 1 , Bastian *1 , Dewi Hartati 1
1 Prodi S.Tr Teknologi Laboratorium Medis, IKesT Muhamamdiyah Palembang, Indonesia
* Korespondensi penulis: bastiandarwin51@gmail.com

## ABSTRAK
Latar Belakang: Alkaline Phosphatase (ALP) merupakan enzim hidrolase yang di produksi pertama oleh epitel  hati  dan  osteoblast  (sel-sel  pembentuk  tulang  baru)  yang  melimpah  di  hati  dan  di  tulang. Pemeriksaan  enzim    ALP  dapat  dipengaruhi    apabila  terjadinya  kerusakan  pada  sel,  sehingga menyebabkan hemolisis. Hemolisis dapat dipengaruhi oleh teknik Flebotomi pada tahap pra analitk yang tidak  tepat , hemoli sis dapat  menyebakan  peningkatan  konsentrasi  dalam  sel  darah  merah  dibandingkan dengan serum  atau  plasma,  sehingga memberikan ha sil konsentrasi palsu. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kadar enzim ALP terhadap serum hemolisis ringan dan serum non hemolisis. Metode: Populasi  penelitian  meliputi  semua  mahasiswa  laki-laki  DIV  Teknologi  Laboratorium  Medis Fakultas  Sains  dan  Teknologi  Muhammadiyah  Palembang  sebanyak  17  orang  dengan  kriteria  inklusi yaitu  berusia  17  sampai  22  tahun,  berjenis  kelamin  laki-laki  dan  bersedia  menjadi  responden.  Sampel berupa serum hemolisis ringan dan non hemolisis yang diambil dari reponden. Tahapan penelitian diawali dengan  pengambilan  sampel  darah  vena,  pengolahan  darah  menjadi  serum  non  hemolisis  dan  serum hemolisis ringan, serta pemeriksaan ALP menggunakan alat Biosystem BA 200.
Hasil: Hasil  penelitian  menunjukan  adanya  perbedaan  antara  kadar  enzim  ALP  pada  sampel  non hemolisis  dan  hemolisis  sebesar  73,9  U/L.  Uji  analisis  data  menggunakan  uji  T  Berpasangan  yang  di peroleh p ≥ 0, 000. Kesimpulan: Terdapat perbedaan hasil antara serum hemolisis ringan dan serum non hemolisis.
Kata Kunci: ALP, hemolisis, serum

## COMPARISON OF ALKALINE PHOSPHATASE (ALP) ENZYME LEVELS IN LIGHT HEMOLYSIS AND NON-HEMOLYSIS SERUM

## ABSTRACT
Background:  Alkaline  Phosphatase  (ALP)  is  a  hydrolase  enzyme  that  is  first  produced  by  the  liver epithelium and osteoblasts (cells that form new bone), this enzyme is mostly found in the liver and bones. ALP enzyme examination can be affected if there is damage to the cells, causing haemolysis. Haemolysis can  be  affected  by  phlebotomy  techniques  at  an  inappropriate  pre-analytical  stage,  so  that  haemolysis can  cause  increased  concentrations  in  red  blood  cells  compared  to  serum  or  plasma,  thus  giving  false concentration  results.  This  study  aims  to  determine  the  differences  in  ALP  enzyme  levels  in  mild haemolysed serum and non-haemolysed serum.
Methods:  The  study  population  included  all  17  male  students  of  DIV  Medical  Technology  Laboratory, Faculty of Science and Technology Muhammadiyah Palembang, by differentiating inclusion, namely aged 17 to 22 years, male sex and willing to be respondents. Samples in the form of mild hemolysis and non- hemolysis serum were taken from the respondents. The stages of the research began with taking venous blood  samples,  processing  the  blood  into  non-hemolytic  serum  and  mild  hemolytic  serum,  and  ALP examination using the Biosystem BA 200 tool.
Results:  This  study  showed  that  the  difference  between  ALP  enzyme  levels  in  non-haemolytic  and haemolytic samples was 73.9 U/L or 55%. The data analysis test used the Paired T test which obtained p ≥ 0,000.
Conclusion:  There  are  differences  in  results  between  mild  haemolysed  serum  and  non-haemolysed serum.
Keywords: ALP, hemolysis, serum

## PENDAHULUAN
Laboratorium merupakan bagian integral dari  pelayanan  kesehatan  yang  dibutuhkan untuk menegakkan diagnosis, pemberian pengobatan, mengevaluasi hasil pengobatan dan pengambilan  keputusan  lainnya.  Laboratorium mempunyai  tanggung  jawab  besar  sebagai penunjang  medis  di  rumah  sakit,  puskesmas, laboratorium  klinik  atau  layanan  kesehatan lainnya  sehingga  hasil  pemeriksaan  yang dikeluarkan  oleh  laboratorium  harus  dapat dipercaya.  Penjaminan mutu  laboratorium adalah  keseluruhan  kegiatan  yang  bertujuan untuk  menjamin  kualitas  hasil  pemeriksaan laboratorium.  Penjaminan  mutu  laboratorium dapat  dilaksanakan  melalui  pemantapan  mutu internal,  yang  meliputi  tahap  pra  analitik, analitik dan pasca analitik 1 . Tahapan  pemeriksaan  laboratorium  (pra analitik,  analitik,  dan  pasca  analitik)  memiliki peluang  terjadinya  kesalahan  pada  tahap  pra analitik memberikan kontribusi kesalahan terbesar yaitu 62%, tahap analitik menyumbang kesalahan sebesar 15% dan pasca analitik 23%. Tahap  pra  analitik  merupakan  serangkaian proses  yang  meliputi  permintaan  pemeriksaan oleh  klinisi,  persiapan  pasien,  pengambilan spesimen  dan  transportasi  spesimen.  Teknik pengambilan  sampel  pada  tahap  pra  analitik yang  memberikan  kesalahan  terbesar  pada  saat mengeluarkan  darah  dari  spuit  tanpa  melepas jarum terlebih dahulu sehingga akan menyebabkan  sel  eritrosit  pecah  atau  hemolisis (53%).  Apabila  sel  eritrosit  pecah  maka  akan menyebabkan  isi  sel  keluar,  misalnya:  enzim, elektrolit,  hemoglobin  sehingga  tampak  merah muda  sampai  merah  tua  pada  serum.  Enzim yang  keluar  pada  saat  eritrosit  pecah  salah satunya adalah enzim fungsi hati 2 , 3 . Pemeriksaan fungsi hati adalah sekelompok  tes  darah  yang  mengukur  enzim atau protein tertentu di dalam darah. Pemeriksaaan  ini    umumnya  digunakan  untuk membantu  mendeteksi,  menilai  dan  memantau penyakit  atau  kerusakan  hati.  Pemeriksaaan  ini dilakukan  untuk  mengetahui  kadar  enzim  pada fungsi  hati.  Hati  merupakan  organ  padat terbesar  yang  terletak  di  rongga  perut  bagian kanan  atas  hati  secara  luas  dilindungi  oleh  iga- iga  dan  mempunyai  peran  penting  di  dalam tubuh  karena  merupakan  regulator  dari  semua metebolisme  karbohidrat,  protein  dan  lemak, tempat  sintesa  dari  berbagai komponen  protein. Selain  itu,  hati  juga  merupakan  tempat pembentukan  dan  penyaluran  asam  empedu serta pusat pendeteksi racun dalam pemeriksaan fungsi hati 4,5 .
Alkaline Phosphatase (ALP)  merupakan enzim  hidrolase  yang  di produksi  pertama  oleh epitel  hati  dan  osteoblas  (  sel-sel  pembentuk tulang  baru),  Enzim  ALP  banyak  ditemukan  di dalam hati dan tulang, serta diproduksi oleh sel- sel  pada  saluran  pencernaan,  plasenta,  dan ginjal. Peningkatan nilai ALP yang tinggi dapat menunjukkan adanya hambatan didalam saluran empedu. Kenaikan nilai ALP yang tidak normal dapat menunjukkan adanya penyakit hati atau tulang, dalam pemeriksan enzim ALP dapat diketahui  untuk  nilai  normal  kadar  enzim Alkaline  Phosphatase (ALP)    yaitu    30-115 IU/L 6 . Pemeriksaan enzim
ALP dapat dipengaruhi  oleh  kondisi  hemolisis  sampel akibat kerusakan  pada  sel.  Sampel  hemolisis dapat  dipengaruhi  oleh  teknik  pengambilan sampel  pada  tahap  pra  analitk  yang  tidak  tepat, seperti  penusukan  jarum  spuit  secara  berulang, penusukan pada kulit yang masih basah dengan alkohol,  penarikan  spuit  yang  terlalu  cepat, mengeluarkan  darah  dari  spuit  tanpa  melepas jarum terlebih dahulu, sehingga hemolisis dapat menyebakan  peningkatan  konsentrasi  dalam  sel darah merah dibandingkan dengan serum atau plasma, sehingga memberikan  hasil konsentrasi palsu 7,8.
Hemolisis terjadi karena pecahnya eritrosit  disertai  keluarnya  kandungan  zat  –  zat didalamnya, yang dapat menyebabkan kesalahan  dalam  analisis  sehingga  tampilan serum atau plasma tampak kemerahan. Hemolisis  adalah  penyebab  dari  kesalahan  pra analitik.  Hemolisis sendiri dapat diukur melalui visual  ataupun  secara  metode  otomatis.  Secara visual,  hemolisis  dapat  dilihat  melalui  warna merah  yang  dapat  dalam  plasma  atau  serum, namun  pemeriksaan  secara  visual  masih dianggap  kurang  akurat,  karena  tidak  dapat menunjukkan  kadar  hemoglobin  bebas  yang terkandung didalamnya. Secara metode otomatis,  hemolisis  diukur  menggunakan  alat spektrofotometer  dengan  menghitung  kadar hemoglobin.  Suatu  sampel  dapat  dikatakan hemolisis,  jika  kadar  hemoglobin  bebas  yang ada di plasma lebih dari 20 mg/dl 9,10 .
Hemolisis  sering  terjadi  dilapangan, sehingga  sebaiknya  jika  terdapat  sampel hemolisis dilakukan pengambilan sampel ulang, tetapi  hal  ini  tidak  akan  melakukan  teknik flebotomi  kembali  kepada  pasien  karena menyebabkan  pasien  tidak  nyaman,  sehingga memanfaatkan sampel hemolisis. Sampel hemolisis  yang  tidak  dapat  diambil  sampel ulang,  maka  diukur  kadar  hemoglobin  dalam serum  dan  hasil  pemeriksaan  laboratorium kemudian  dikonversikan  berdasarkan  nilai regresi  sehingga  didapatkan  nilai  aktivitas
enzim ALP yang sebenarnya.  Derajat hemolisis berdasarkan  kadar  hemoglobin  meliputi  20-100 mg/dl  (hemolisis  ringan),  100-300  mg/dl (hemolisis  sedang),  dan  >300  mg/dl  (hemolisis berat) 11 . Hemolisis  ringan  merujuk  pada  kondisi di  mana  sel  darah  merah  mengalami  kerusakan atau  pecah  dalam  jumlah  yang  relatif  kecil. Dalam  hemolisis  ringan,  kerusakan  pada  sel darah  merah  biasanya  terbatas  dan  tidak menyebabkan  konsekuensi  yang  serius  atau berbahaya  bagi  kesehatan  seseorang  untuk pemeriksaan  laboratorium. Hemolisis  ringan jauh  lebih  umum  dari  pada  bentuk  hemolisis yang  berat.  Hemolisis  berat  atau  yang melibatkan  kerusakan  sel  darah  merah  yang signifikan dapat memberikan hasil
konsentrasi palsu 12 . Kahar  et,al  (2017) 4 menyatakan  bahwa terdapat  pengaruh  hemolisis  terhadap  kadar SGPT.  Sari  et,  al  (2021) 3 menyatakan  bahwa terdapat  pengaruh  antara  serum  hemolisis terhadap kadar SGPT dan serum hemolisis yang ditambahkan  reagen  anti-Rh  dibandingkan dengan  serum  normal  didapatkan  tidak  ada perbedaan  terhadap  kadar  SGPT,  sedangkan penelitian  ini  untuk  mengetahui  kadar  ALT dengan  memanfaatkan  serum  hemolisis  ringan yang  realtif  kecil  menyebakan  kerusakan  sel darah  merah,  serta  manfaat  dari  penelitian  ini untuk menambah pengetahuan bahwa pemeriksaan  kadar  Enzim  ALP  pada  serum hemolisis  ringan  dan  non  hemolisis  memiliki nilai kadar yang berbeda.

## METODE
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian kuantitatif  dengan  desain  penelitian Cross Sectional .  Penelitian  dilakukandi  Laboratorium Patologi IKesT MP dan BBLK Palembang pada tanggal  23  Desember  2021.  Populasi  penelitian adalah semua mahasiswa laki-laki DIV Teknologi  Laboratorium  Medis  Fakultas  Sains dan  Teknologi  Muhammadiyah  Palembang sebanyak 17 orang dengan kriteria inklusi yaitu berusia  17  sampai  22  tahun,  berjenis  kelamin laki-laki  dan  bersedia  menjadi  responden. Sampel berupa serum hemolisis ringan dan non hemolisis  yang  diambil  dari  reponden.  Teknik yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu menggunakan  teknik purposive  sampling .  Alat dan  bahan  yang  digunakan  adalah  Biosystem BA 200, perlengkapan flebotomi, tip kuning dan biru,  tempat  limbah,    rak  tabung,  tube,  masker, handscoon,  box.    Bahan  penelitian  yang digunakan  antara  lain;  serum,  SGPT  tes  kit Biosystem  BA200,  kapas  alkohol,  dan  plester. Prosedur  kerja  pada  penelitian  ini  meliputi
persiapan  pasien,  pengambilan  3  cc  sampel darah,  pemisahan  serum  darah,  pengolahan darah  menjadi  serum  non  hemolisis  dan  serum hemolisis  ringan,  dan  pemeriksaan  ALP menggunakan  alat  Biosystem  BA  200.  Hasil kadar  pemeriksaan  ALP  dilakukan  analisis statistic menggunakan aplikasi SPSS  dengan uji T berpasangan ( Paired sample T test ) 13 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jumah  sampel  yang  digunakan  sebanyak 34 sampel yang terdiri dari 17 sampel hemolisis ringan dan 17 sampel  non hemolisis. Parameter pemeriksaan  yang  dilakukan  yaitu  kadar  enzim ALP,  menggunakan  alat Biosystem BA  200 dengan metode Indonesian Foresty Certification Cooperation (IFCC).  Nilai  rata-rata  dari  hasil pemeriksaan  kadar  enzim  ALP  pada  serum hemolisis  136,6  U/L  dan  pada  serum  non hemolisis  62,7U/L.  Perbedaan  kadar  ALP  pada sampel  hemolisis  ringan  dan  non  hemolisis adalah  sebesar  73,9  U/L  atau  55%.  Sampel serum  hemolisis  ringan  lebih  tinggi  kadar  ALP nya  di  bandingkan  kadar  ALP  pada  sampel serum  non  hemolisis.  Hasil  pemeriksaan tersebut  di  lanjutkan  dengan  analisis  dengan menggunakan program aplikasi statistik.
Hasil  uji  tes  normalitas  menunjukan bahwa  serum  non  hemolisis  di  dapatkan  hasil sebesar  sig  0,601  yang  mana  nilai  tersebut p ≥ 0,005 maka normalitas data terdistribusi normal. Untuk  data  serum  hemolisis  ringan  di  dapatkan hasil  normalitas p ≥  0,202  yang  mana  nilai tersebut  yang  mana  nilai  tersebut p ≥  0,005 maka  normalitas  data  terdistribusi  normal dilanjutkan  dengan  uji  T  berpasangan.  Hasil analisis  uji  T  berpasangan  diperoleh  nilai significancy  0,000  ( p ≥  0,005)  yang  berarti terdapat  perbedaan  signifikan  antara  kadar enzim    ALP  pada  serum    hemolisis  ringan  dan non hemolisis.
Pemeriksaan enzim ALP terhadap  serum hemolisis  ringan  dan  non  hemolisis  memiliki perbedaan  yang  signifikan.  Perbedaan  terjadi karena  serum  non  hemolisis  merupakan  serum yang  mengandung  semua  elektrolit,  antibodi, antigen,  hormon  dan  substansi  eksogen  serum berupa sampel yang digunakan dalam pemeriksaan  laboratorium  patologi  klinik 14 . Serum hemolisis merupakan sampel serum yang mengandung hemoglobin bebas masuk kedalam serum  sehingga  mengakibatkan  terjadinya perubahan  warna  pada  serum,yang  akan menyebabkan gangguan penyerapan warna pada analisa  kolorimetri  yang  berpengaruh  terhadap pemeriksaan kimia darah, dimana akan menyebabkan  hasil  pemeriksaan  tinggi  palsu atau rendah palsu 10,15 .
Kahar  et,  al  (2017) 4 menyatakan  bahwa pada  serum  hemolisis  terjadi  pemecahan membran eritrosit sehingga dalam tes laboratorium  menunjukkan  peningkatan  kadar SGPT  dibandingkan    kadar  SGPT  pada  serum non  hemolisis.  Sari  et,  al  (2021) 3 juga menambahkan  bahwa  serum  hemolisis  dapat menyebabkan  kenaikan  palsu    enzim  SGPT yang  disebabkan  oleh  keluarnya  enzim  yang terdapat  di  dalam  eritrosit,  sehingga  kadar enzim  SGPT  serum  hemolisis  lebih  tinggi dibandingkan  serum  normal.  Hasil  penelitian sebelumnya  Kahar  et,  al  (2017) 4 dan  Sari  et,  al (2021) 3 sejalan  dengan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  yaitu  didapatkan  peningkatan kadar  Enzim  ALP  pada  serum  hemolisis  ringan dengan  menggunakan  metode  pemeriksaan IFCC.
Pemeriksaan  enzim  ALP  menggunakan metode  IFCC  dengan  pengukuran  berdasarkan serapan  sinar  oleh  warna  zat  yang  di  ukur, sehingga  sampel  hemolisis  yang  mengandung hemoglobin dan merubah warna serum menjadi warna  kemerahan  akan  mengganggu  hasil pemeriksaan  sehingga  menyebabkan  hasil  tidak akurat.  Menurut  Susilaningsih  (2017) 16 sampel serum  hemolisis  dapat  menyebabkan  kenaikan palsu  yang  disebabkan  oleh  keluarnya  enzim yang terdapat di dalam eritrosit yang pecah serta mengeluarkan  komponen–  komponennya,  dan dapat meningkatkan hasil pemeriksaan. sedangkan  hemoglobin  yang  keluar  ke dalam serum  dapat  menyebabkan gangguan  kromogen pada kolorimetrik sehingga gangguan kromogen ini  menyebabkan  peningkatan  intensitas  warna dimana  terjadi  peningkatan  absorbansi  pada pembacaan hasil oleh fotometer.

## KESIMPULAN
Penelitian yang telah dilakukan menunjukan  adanya  perbedaan  yang  signifikan antara  kadar  enzim Alkaline (ALP)  pada  serum hemolisis,  hemolisis  ringan  dan  non  hemolisis. Saran  dalam  penelitian  ini  untuk  peneliti selanjutnya  dapat  digunakan  sebagai  bahan perbandingan  dan  referensi  untuk  penelitian dengan  menggunakan  pemeriksaan  metode  lain seperti pNPP, HPLC dan  lainnya.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti mengucapkan terimakasih kepada  Institut  Ilmu  Kesehatan  dan  Teknologi muhammadiyah  Palembang,  Prodi  Sarjana Terapan  Teknologi  Laboratorium  Medis,  dosen pembimbing dan pihak laboratorium Mikrobiologi IKesT Muhammadiah Palembang,
serta  rekan  –  rekan  sekaligus  responden  yang membantu jalanya penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Syuhada S, Izzuddin A, Yudhistira H.
Perbandingan  Trombosit  dengan  Antikoagulan
K2EDTA Abstrak Keywords : About CrossMark.
JIKSH    J  Ilm  Kesehat  Sandi  Husada.
2021;10:170–6.
2.   Nurrahman  N,  Mariyam  M.  Status  Hematologi, Kadar  IgG  dan  IgA  Tikus  yang  Mengonsumsi berbagai  Variasi  Jumlah  Tempe  Kedelai  Hitam. agriTECH. 2019;39(3):215.
3.   Sari  I,  Sari  H,  Trianes  J.  Pemanfaatan  Serum Hemolisis  Dengan  Penambahan  Reagen  Anti-Rh Terhadap  Kadar  Enzim  Serum  Glutamic  Pyruvic Transminase ( SGPT ). 2021;2(4).
4.   Kahar  H.  Pengaruh  Hemolisis  Terdapat  Kadar Serum Glutamate Pyruvate Transaminase (SGPT) Sebagai  Salah  Satu  Parameter  Fungsi  Hati.  J Muhammadiyah Med Lab Technol. 2017;1(1):38.
5.   Gilang  Nugraha.  Pendoman  Teknik  Pemeriksaan Laboratorium Klinik. 2018;110–5.
6.   Hendriani  NKMF,  Artini  NPR,  Aryasa  IWT. Analisi  Kadar  Alp  (Alkaline  Phospatase)  Dan Kholinesterase  Akibat  Lama  Bekerja  Pada
Petugas Fogging Di Kota Denpasar. J Muhammadiyah Med Lab Technol. 2020;3(2):32.
7.   Nur  LM,  Jutomo  L.  Deteksi  Dini  Stunting  Pada Jemaat  Gmim  Kapernaum  Tenau.  J  Pengabdi pada  Masy  Kepul  Lahan  Kering.  2019;2234:87– 93.
8.   Medipally DKR, Cullen D, Untereiner V, Bryant J, Sockalingum GD, Nguyen TNQ, et al. Effect of hemolysis  on  Fourier  transform  infrared  and Raman  spectra  of  blood  plasma.  J  Biophotonics. 2020;13(7):1–16.
9.   Ariyani  L,  Siagian  LRD,  Yusran  DI,  Kaltim  PK, Klinik P, Abdul R, et al. Kadar Serum Glutamate
Oxaloacetat Transaminase. J Kesehat.
2019;5(1):42–50.
10.  Nugrahena  NP,  Sudarsono  TA,  Wijayanti  L. Pengaruh  Hemolisis  Terhadap  Nilai  Trombosit Dengan  Menggunakan  Metode  Direct  Counting. 2021;8(2):108–13.
11.  Vinet  L,  Zhedanov  A.  A  “missing”  family  of classical orthogonal polynomials. J Phys A Math Theor [Internet]. 2011;44(8):1–8. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.cirp.2016.06.001%0A http://dx.doi.org/10.1016/j.powtec.2016.12.055% 0Ahttps://doi.org/10.1016/j.ijfatigue.2019.02.006 %0Ahttps://doi.org/10.1016/j.matlet.2019.04.024 %0Ahttps://doi.org/10.1016/j.matlet.2019.127252 %0Ahttp://dx.doi.o 12.  Dila  Wanti  H,  Fadhilah  F,  Taufiqurrohman  O.
Pengaruh  Hemolisis  Dalam  Serum  Terhadap Aktivitas  Enzim  Aspartat  Aminotransferase Dengan Metode Kinetik-Ifcc. J Indones Med Lab Sci. 2020;1(1):48–56.
13.  Nuryadi,  Astuti  TD,  Utami  ES,  Budiantara  M. Buku  ajar  dasar-dasar  statistik  penelitian.  2017. 170 p.
14.  Darmawati S. Penentuan Golongan Darah Sistem Abo  Dengan  Serum  Dan  Reagen  Anti-Sera
Metode Slide. Gaster. 2019;17(1):77.
15.  Istiqomaria  I,  Bastian  B.  Perbedaan  Kadar Hemoglobin  Pada  Darah  Simpan  Suhu  20oC  – 25oC dan 4oC– 8oC Selama 6 Jam. Anakes  J Ilm Anal Kesehat. 2021;7(2):226–32.
16.  Susilaningsih  R.  Perbandingan  kadar  alkali fosfatase  (ALP)  serum  sebelum  dan  sesudah waktu  tunda  4  dan  8  hari  pada  suhu  kamar  (20- 25°c). 2017;