JURNAL KIMIA MULAWARMAN Vol 21, No. 2, Mei 2024 pp. 67-75 https://jurnal.kimia.fmipa.unmul.ac.id/index.php/JKM P-ISSN 1693-5616 E-ISSN 2476-9258

## The Anti-hyperuricemic Activity Test Of Ethanol
Extract Soursop Leaves ( Annona Muricata L.) and Analysis Compound Composition of the Contained
Putri Faizah A a , Daniel a,* , Saibun Sitorus a , Agustina Rahayu Magdalena b
a Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia.
b Program Studi Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia. * Corresponding Author: daniel_trg08@yahoo.com

## ABSTRACT
The  research  about  the  anti-hyperuricemic  activity  test  of  ethanol  extract soursop leaves ( Annona muricata L.) and analysis of compound composition has  been  conducted.  The  methods  used  include  the  in  vitro  method  using spectrophotometer  UV-Vis  and  GC-MS.  Allopurinol  was  used  as  a  positive control.  Based  on  the  results  of  a  phytochemical  test,  it  was  known  that ethanol crude extract contained alkaloids, flavonoids, tannins, and saponins. The activity of xanthine oxidase enzyme on the residue of 0,0004 U/mL and supernatant  of  0,00009  U/mL.Based  on  the  activity  of  xanthine  oxidase against coarse extracts of ethanol of soursop leaves (Annona muricata L.) at a concentration  of  0.00007  U/mL  obtained  consecutive  injectable  power  of
82.5%. Based on the results of tests with the GC-MS method of ethanol extract on  the  results  of  anti  hyperuricemia  activity  tests  are  best  obtained  22 components of the compound, including 2 dominant compounds namely Acid mono (2-Ethylhexyl) ester by 16.70% and vitamin E by 13.50%. Ethanol crude soursop  extract  ( Annona  muricata L.)  leaves  have  anti-hyperuricemic potential.
This is an open-access article under the CC – BY-SA license.
Article History Received 2022-02-17 Revised 2023-10-09 Accepted 2023-12-07

## Keywords
Annona muricata Linn Anti-hyperuricemic Xhantine oxidase Secondary metabolites

## 1. Pendahuluan
Penggunaan bneberapa tumbuhan saat ini  telah dimanfaatkan sebagai bahan alternatif oleh masyarakat  sebagai  obat  tradisionoil.  Salah  satu  tanaman  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai obat tradisional adalah daun sirsak ( Annona muricata L) dengan meminum air rebusan daunnya untuk  meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh,  menyembuhkan  infeksi,  diabetes  dan antihiperurisemia [1].
Asam urat adalah senyawa kimia hasil metabilosme purin yang berada di dalam darah dan urin. Asam urat yang dihasilkan yaitu dari sisa pembuangan dan pemecahan dari suatu bahan makanan  yang  memiliki  nukleotida  purin  dan  diproduksi  oleh  tubuh  maupun  yang  tidak diproduksi  tubuh.  Banyaknya  sisa  pembuangan  dari  hasil  metabolisme  purin  sehingga menimbulkan  gejala  meningkatnya  kadar  asam  urat  di  dalam  darah  penderita,  dan  juga menyebabkan ekskresi asam urat yang dikeluarkan melalui urin terlalu sedikit [2].
Sekitar 20-30% penderita asam urat yang terjadi akibat kelainan pada sintesa purin dalam jumlah yang besar menyebabkan kelebihan pada kadar asam urat. Kurang lebih sekitar 75% penderita  asam  urat  terjadi  karena  adanya  kelebihan  produksi  purin,  namun  mengalami pengeluaran yang juga tidak sempurna. Dengan terjadinya peningkatan produksi maka kadar asam urat juga mengalami peningkatan dalam darah. Biasanya kadar asam urat yang dimiliki oleh penderita asam urat melebihi 7,0mg/dL [2].
Kondisi  meningkatnya  kadar  asam  urat  dalam  darah  melebihi  batas  normal  disebut hiperurisemia.  Hiperurisemia  disebabkan  oleh  tingkat  produksi  asam  lemak  yang  berlebih, ekskresi asam urat. Hiperurisemia yang lanjut dapat menyebabkan gout [3]. Daun sirsak atau tanaman sirsak ( Annona muricata L) merupakan tumbuhan yang biasanya dipergunakan untuk mengobati  berbagai  penyakit  dan  juga  digunakan  untuk  menurunkan  kadar  asam  urat  atau hiperurisemia[1].  Bahan  alam  ini  juga  mempunyai  potensi  untuk  dijadikan  obat  herbal (tradisional) yang merupakan  tanaman dari famili Annonaceae [4]. Tanaman sirsak ( Annona muricata L.)  atau  yang  juga  dikenal  dengan  sebutan  nangka  Belanda  banyak  tumbuh  di sembarang tempat, dimana tanaman ini memiliki rasa manis tapi sedikit asam, sehingga sering dikonsumsi oleh masyarakat [5]. Daun sirsak ( Annona muricata L.) mengandung tanin, resin dan juga alkaloid sehingga memungkinkan dapat mengatasi nyeri sendi pada asam urat. Dimana sifat  antioksidan  yang  di  miliki  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  dapat  memperkecil pembentukan asam urat yaitu dengan cara produksi enzim xantin oksidasenya di hambat[6].
Berdasarkan  penjelasan  diatas,  penulis  akan  melakukan  penelitian  dengan  cara memanfaatkan salah satu jenis tumbuhan yang biasa dikonsumsi yaitu sirsak ( Annona muricata L.) dengan tujuan  untuk mengetahui jenis metabolit sekunder yang terdapat pada ekstrak daun sirsak  ( Annona muricata L.) dan  untuk mengetahui % inhibisi pada ekstrak dan masing-masing fraksi juga untuk mengetahui senyawa yang terkandung di dalam  ekstrak kasar etanol daun sirsak dianalisis dengan metode GC-MS.

## 2. Metodologi

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu pipet tetes, gunting, corong pisah, labu ukur, botol reagen, botol vial, wadah kotak, blender, neraca analitik, gelas beker, pipet volume, pipet tisu, aluminium foil, kantong selofan, benang, kertas saring, kertas label, mikro,  penangas air,  batang  pengaduk,  spatula, rotary  evaporator, sentrifugasi,  Spektrofotometri  UV-Vis, Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)
Bahan  pada  penelitian  ini  yaitu  daun  sirsak  tua  ( Annona  muricata L.),  substrat  xantin, akuades, pelarut etanol 96%, padatan NaCl, larutan HCl (p) , larutan H 2 SO 4(p) , larutan FeCl 3 , serbuk Mg, larutan (NH 4 ) 2 SO 4 40%, larutan NaCl, larutan Ba(OH) 2 .8H 2 O, larutan NaOH 1 M, buffer fosfat 0,05 M, allopurinol, susu sapi.

## 2.2. Prosedur Penelitian
2.2.1. Preparasi Daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  dibersihkan  terlebih  dahulu  menggunaan  air  mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel pada daun. Setelah itu ditiriskan, lalu dipotong kecil-kecil, selanjutnya dikeringkan di dalam ruangan tanpa terkena sinar matahari langsung baru dihaluskan menggnakan blender.
2.2.2. Ekstraksi
Serbuk  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  sebanyak  220  gram  lalu  dimasukkan  ke  dalam bejana  maserasi.  selanjutnya dimaserasi  dengan    etanol  96%  selama  3x24  jam, disimpan  di tempat yang terhindar dari cahaya matahari dan diaduk. Kemudian filtratnya disaring dengan kertas saring dalam corong kaca. Setelah itu  eksrak yang diperoleh  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator sehingga  didapatkan  ekstrak  kasar  etanol.  Selanjutnya  dilakukan  proses maserasi berikutnya hingga larutan berwarna hijau bening [7]. Selanjutnya ditest uji fitokimia yaitu  uji  golongan  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin  dan  saponin.  Setelah  dilakukan  uji fitokimia, diidentifikasi senyawa yang terdapat dalam ekstrak kasar etanol menggunakan alat Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS).

## 2.2.3. Uji Inhibisi Aktivitas Xantin Oksidase Isolasi Xantin Oksidase dari Susu Sapi
Enzim xantin oksidase diisolasi dari 250 ml susu sapi,  melalui pemanasan  pada suhu 30ºC. Kemudian ditambahkan padatan NaCl sebanyak 80,08 gram dan disentrifugasi selama 30 menit dengan  kecepatan  3000  rpm.  Selanjutnya  difraksinasi  menggunakan  (NH 4 ) 2 SO 4 0,05  M
kemudian disimpan pada suhu 4ºC menggunakanpendingin berupa lemari es. Kemudian selama 2 menit disentrifugasi  dengan kecepatan 8000 rpm pada suhu 4ºC. Supernatan maupun residu yang  telah  dipisahkan,  dipakai  sebagai  sampel  enzim  xantin  oksidase,  kemudian  residu dimurnikan dengan proses dialisis.
Kantong  selofan  dipotong  dengan  ukuran  10  cm,  kemudian  dididihkan  dengan  aqua sebanyak  250  mL   selama  10 menit  hingga  kantong selofan  dapat terbuka.Dilarutkan  enzim xantin  oksidase  dengan  buffer  fosfat  0,05  M  pH  7,5  hingga  150  mL.  Kemudian  campuran tersebut diaduk menggunakan stirer pada suhu ± 4ºC selama 8 jam. Buffer fosfat dipergunakan sebagai perendam diganti setiap 2 jam sekali hingga semua garam terpisah. Tahapan ini akan dihentikan  apabila  semua  garam  (NH 4 ) 2 SO 4 telah  keluar  dari  membran,  dan  kemudian mengujinya dengan larutan Ba(OH) 2 .8H 2 O 3 tetes dan 3 tetes HCl 0,1 M yang ditambahkan ke dalam larutan buffer yang terdapat di luar kantong selofan. Lalu didapatkan  larutan enzim dan diuji aktivitasnya [7].

## Uji Aktivitas Xantin Oksidase
Larutan substrat xantin 0,15 mM diambil sebanyak 2 mL dan ditambahkan  3 mL larutan buffer fosfat 0,05 M dengan pH 7,5. Kemudian ditempat gelap didiamkan selama 30 menit di. Lalu  campuran  diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang  maksimum  menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Kemudian ditambahkan xantin oksidase 0,2 mL dan diinkubasi pada suhu 25ºC. Selanjutnya serapannya diukur pada panjang gelombang maksimum setiap 10 menit sampai  menit  ke  40.  Xantin  dan  larutan  buffer  digunakan  sebagai  blanko.  Dimana  aktivitas xantin oksidase diperoleh dari sebuah persamaan linier antara kurva hubungan waktu dengan terhadap konsentrasi asam urat. Aktivitas enzim ditunjukkan oleh nilai a pada persamaan garis pada  grafik.  Perhitungan  konsentrasi  menurut  Bergmeyer  (1974)  ditentukan  berdasarkan dengan hukum Lambert-Beer yang dapat dihitung konsentrasi asam urat yang diperoleh dari absorbansi asam urat pada panjang gelombang 290 nm dengan rumus sebagai berikut:
𝐴 = 𝜀. 𝑏. 𝐶 (1)

## A = Absorbansi asam urat
Ε = Koefisien ekstingsi molar asam urat pada pH 7,5 dan λ 290 nm sebesar 12,2 mM -1 cm -1 C = Konsentrasi asam urat b = Lebar kuvet 1 cm

## Inhibisi Xantin Oksidase
Ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L.) dengan konsentrasi 100 mg/L dalam buffer fosfat  0,05  M dengan pH  7,5.  Selanjutnya diambil  0,2 mL  ekstrak dan masing-masing  fraksi, kemudian ditambahkan larutan buffer fosfat 0,05 mM pH 7,5 sebanyak 3 mL, lalu ditambahkan 2 mL xantin 0,15 mM dan xantin oksidase sebanyak 0,2 mL kemudian diinkubasi pada suhu 25 o C selama 45 menit. Setelah diinkubasi, campuran kemudian segera ditambahkan HCl 0,58 M sebanyak  1  mL.  Campuran  diukur  serapannya  dengan  menggunakan  spektrofotometri  UV dengan  69anjang  gelombang  maksimum  setiap  10  menit  hingga  40  menit.  Dihitung  daya inhibisi melalui persamaan linier kurva waktu terhadap konsentrasi xantin oksidase.

## 2.2.4. Analisis Data
Besarnya  persen  peredaman  enzim  xantin  oksidase  terhadap  aktivitas  antihiperurisemia dari  ekstrak  kasar  etanol  daun  sirsak  dinyatakan  dengan  %  inhibisi  yang  diperoleh  dengan menggunakan rumus:
% inhibisi = Aktivitas XO tanpa inhibitor−aktivitas XO dengan inhibitor aktivitas XO tanpa inhibitor x100% (2)

## 3. Hasil dan Diskusi
Dalam  tahap  preparasi,  sampel  dicuci  menggunakan  air  mengalir  untuk  menghilangkan kotoran  yang  terdapat  pada  daun  dan  kemudian  dikeringkan  tanpa  paparan  sinar  matahari setelah itu dihaluskan. Proses pengeringan  untuk mengurangi kadar air yang terdapat dalam sampel.  Selain  itu,  proses  pengeringan  juga  bertujuan  untuk  mencegah  kerusakan  pada simplisia yang disebabkan oleh mikroba untuk menghentikan proses reaksi enzimatik sehingga sampel  tidak  mudah  rusak  dan  dapat  disimpan  sampai  bebrapa  waktu  lamanya[8].  Proses menghaluskan    sampel    untuk  memperluas  sisi  aktif  pada  sampel  sehingga  dapat memungkinkan terjadinya lebih banyak kontak antara senyawa yang terdapat didalam sampel dengan  pelarut  pada  proses  ekstraksi  [9].  Sebanyak  220  gram  simplisia    yang  sudah  halus direndam  dengan  etanol  selama  3x24  jam  pada  suhu  ruang  dan  dilakukan  sebanyak  3  kali pengulangan  agar  lebih  banyak  metabolit  sekunder  yang  ditarik  oleh  etanol.  Pada  proses ekstraksi dilakukan pengadukan untuk memaksimalkan proses ekstraksi
Metode ekstraksi yang dilakukan yaitu dengan cara maserasi dimana perendaman sampel dengan pelarut organik dapat memecah membran dan dinding sel tumbuhan yang diakibatkan karena adanya perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel sehingga  metabolit sekunder yang terdapat dalam sitoplasma tumbuhan akan larut dengan pelarut organik [10]. Maserat yag diperoleh    dipekatkan  dengan  menggunakan rotary  evaporator suhu  40ºC.  Pada  proses  ini pelarut etanol akan menguap terlebih dahulu sebelum mencapai titik didihnya karena tekanan digunakan pada alat rotary evaporator diperkecil sehingga pelarut akan terpisah dari ekstrak tanpa menggunakan pemanasan pada suhu tinggi yang dapat merusak zat aktif yang terdapat dalam sampel bahan alam [11]. Setelah pelarut etanol diuapkan diperoleh ekstrak kasar etanol berbentuk  padatan  kental  berwarna  hijau  kecoklatan  sebanyak  21.7354  gram  dengan rendemen sebesar 8.6942%.

## 3.1. Uji Fitokimia
Pada penelitian ini dilakukan uji fitokimia pada ekstrak kasar etanol daun  ( Annona muricata L.)  dilakukan secara kualitatif dengan pereaksi spesifik untuk mendeteksi adanya kandungan metabolit sekunder di  dalam sampel yang ditandai  dengan perubahan warna  atau endapan. Adapun kandungan metabolit sekunder yang  adalah:  alkaloid (+), flavonoid (-), tanin (+) dan saponin (+).

## 3.2. Isolasi Xantin Oksidase dari Susu Sapi
Xantin  oksidase  merupakan  enzim  yang  dapat  mensintesis  asam  urat.  Xantin  oksidase ditemukan pada susu sapi segar dalam membran-membran disekitar globula lemak yang keluar dengan  bentuk  konsentrat  [12].  Pemanasan  pada  suhu  30ºC  bertujuan agar kandungan  lain dalam  susu sapi tidak  rusak dan menghindari  enzim rusak akibat  terjadinya denaturasi jika pemanasan  dilakukan  pada  suhu  tinggi.  Menurut  Fibriani  dan  Susanti  (2017)  bahwa  enzim dapat menjadi inaktif pada suhu 40ºC. Penambahan NaCl bertujuan supaya lapisan pelindung pecah sehingga dapat mengemulsi susu dan air dalam minyak yang menyebabkan enzim xantin oksidase dapat keluar dari membran sel [13]. Susu merupakan salah satu sistem koloid dengan jenis emulsi dengan zat terdispersi dan pendispersinya ialah berbentuk cair maka dari itu perlu ditambahakan  NaCl  untuk  mengemulsi  susu  menjadi  air  di  dalam  minyak  [14].  Residu  dan supernatan kemudian dipisahkan dengan cara sentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama 30 menit pada suhu 4ºC untuk mempertahankan kestabilan enzim. Pada proses ini diperoleh residu  berwarna  kuning  yang  menunjukkan  pengotor  mengendap  pada  proses  pemecahan emulsi dan hasil sentrifuge susu sapi segar sebanyak 250 mL menghasilkan 140 mL supernatan.. Kemudian supernatan difraksinasi dengan (NH 4 ) 2 SO 4 0-40% pada penangas es untuk menjaga kestabilan  enzim  xantin  oksidase.  Untuk  memisahkan  antara  residu  dengan  supernatan disentrifugasi pada kecepatan 8000 rpm selama 20 menit pada suhu 4ºC untuk menjaga enzim agar  tidak  rusak  akibat  dari  panas  yang  dihasilkan  dari  alat  sentrifuge.  Menurut  Wulandari (2012) fraksinasi (NH 4 ) 2 SO 4 0-40% akan mengendapatkan residu [15]. Residu yang diperoleh pada proses fraksinasi kemudian dilarutan dalam buffer fosfat 0,05 M pH 7,5 hingga mencapai 150 mL. Menurut laporan Egwim dkk (2004)  kondisi optimum enzim xantin oksidase yaitu pada pH 7,5 [16].
Teknik dialisis merupakan suatu pergerakan molekul dengan berdifusi melewati membran semi permeabel, pergerakan terjadi mulai dari konsentrasi tinggi menuju ke konsentrasi yang lebih rendah dimana hanya membran  yang dapat melewati pori adalah yang berukuran kecil melalui membran pada kantong selofan, pergerakan akan terus berlangsung hingga tercapainya titik keseimbangan antara kedua sistem larutan. Dialisis enzim xantin oksidase pada suhu 4ºC yang bertujuan untuk pemurnian enzim dari garam (NH 4 ) 2 SO 4 . Hasil dari proses isolasi enzim xantin oksidase berupa enzim hasil isolasi dan supernatan sebanyak 40 mL.

## 3.3. Uji Aktivitas Xantin Oksidase
Pada uji aktivitas enzim xantin oksidase, diukur absorbansi yang merupakan produksi asam urat  dari  hasil  spektrofotometer  UV-Vis.  Enzim  xantin  oksidase  kemudian  mengendap  pada fraksinasi (NH 4 ) 2 SO 4 0-40%. kemudian, aktivitas tertinggi ditunjukkan oleh residu yaitu sebesar 0,0004  U/mL.  Adanya  aktivitas    pada  supernatan  dikarenakan  masih  adanya  enzim  xantin oksidase yang belum terendapkan pada proses fraksinasi (NH 4 ) 2 SO 4 sehingga masih ditemukan aktivitas enzim dari xantin oksidase pada supernatan sebesar 0,00009 U/mL. Hasil uji aktivitas dari enzim xantin oksidase dapat dilihat pada tabel 1 berikut:
Table 1. Aktivitas Xantin Oksidase Sampel Waktu (menit) Absorbansi Konsentrasi Asam Urat (mM) Aktivitas Xantin Oksidase (U/mL) Supernatan 0 0,055
0,00450 0,00009
10 0,064 0,00688 20 0,082 0,00754 30 0,089 0,00811 40 0,193 0,00844 Residu 0 0,561
0,04598
0,0004 10 0,619 0,05073 20 0,631 0,05172 30 0,736 0,06032 40 0,756 0,06196

## Gambar 1. Kurva Aktivitas Xantin Oksidase Residu dan Supernatan
Gambar 1 menerangkan  bahwa enzim memiliki aktivitas lebih besar daripada supernatan. Dimana persamaan garis regresi dari enzim hasil fraksinasi adalah y = 0,0004x + 0,0458 dengan nilai R2 = 0,9413 dan persamaan garis regresi dari supernatan adalah y = 0,00009x + 0,00527 dengan nilai R2= 0,84535. Aktvitas xantin oksidase yang tertinggi ditunjukkan oleh enzim hasil
y = 0,0004x + 0,0458 R² = 0,9413
y = 0,00009x + 0,00527 R² = 0,84535 0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0 10 20 30 40 50 R es id u dan Su per nat an (K on se n tr as i) Aktivitas Xantin Oksidase (Waktu) Residu Supernatan
fraksinasi  yaitu  sebesar  0,0004  U/mL.  Pada  supernatan  diduga  masih  terdapat  enzim  yang belum terpisahkan  saat fraksinasi ammonium sulfat.

## 3.4. Uji Inhibisi Xantin Oksidase
Uji aktivitas antihiperurisemia pada ekstrak kasar etanoldilakukan dengan menghitung % inhibisi enzim xantin oksidase yang kemudian akan dibandingkan dengan standar penghambat enzim xantin oksidase yaitu allopurinol (kontrol positif). Parameter pengujian pada uji aktivitas antihiperurisemia  secara in  vitro yang dapat diamati  ialah  inhibisi xantin  oksidasenya.  Hasil perhitungan daya inhibisi pada ekstrakdan allopurinol ditunjukkan pada Tabel 2 berikut :
Table 2. Daya Inhibisi Ekstrak, Fraksi dan Allopurinol
Sampel Aktivitas Asam Urat (U/mL) Daya Inhibisi (%) Kontrol Negatif 0,0004 0 Ekstrak Kasar Etanol 0,00007 82,5 Allopurinol 0,00004 90
Berdasarkan tabel 2, menunjukkan bahwa allopurinol sebagai kontrol positif memiliki daya inhibisi  yang  paling  tinggi  yaitu  sebesar  90%,  hal  tersebut  disebabkan  karena  allopurinol merupakan inhibitor kompetitif sehingga dapat berkompetisi dengan substrat untuk berikatan dengan sisi aktif dengan enzim pada gugus samping. Ekstrak kasar etanol juga memiliki daya inhibisi  yang  tinggi  sebesar  82,5%  yang  menandakan  ekstrak  etanol  memiliki  kemampuan untuk menginhibisi enzim xantin oksidase. Hal tersebut dikarenakan ekstrak kasar etanol daun sirsak mengandung senyawa metabolit sekunder golongan alkaloid, tanin dan saponin. Menurut Shabella  (2011)  senyawa  metabolit  sekunder  alkaloid  dan  tanin  juga  memiliki  kemampuan sebagai  inhibitor  [6].  Menurut  Azmi  (2012)  saponin juga  berperan sebagai  inhibitor   xantin oksidase [17].
Sehubungan dengan data yang telah diperoleh mengenai daya inhibisi ekstrak kasar etanol dan  allopurinol  menunjukkan  bahwa  allopurinol  memiliki  daya  inhibisi  yang  paling  tinggi, kemudian ekstrak kasar etanol yang disebabkan karena adanya kandungan metabolit sekunder di dalam ekstrak kasar etanol. Selain itu juga dapat dipengaruhi oleh  faktor suhu, pH, aktivator serta  inhibitor.  Menurut  Menoi.  F  (2006),  enzim  dapat  bekerja  pada  rentang  suhu  tertentu, dimana  enzim  akan  bekerja  semakin  baik  dengan  peningkatan  suhu  hingga  suhu  optimum, namun apabila melewati batas suhu optimum akan mengakibatkan kinerja enzim menurun [8]. Sedangkan apabila suhu rendah,  kecepatan inaktifasi enzim berjalan sangat lambat sehingga boleh  diabaikan,  namun  sebaliknya  apabila  suhunya  tinggi  maka  laju  inaktifasi  enzim  akan sangat  cepat,  yang  dapat  menyebabkan  reaksi  enzimatik  dapat  berhenti  sama  sekali.  Setiap enzim  dapat  menghasilkan  aktivitas  tertinggi  dalam  mempercepat  suatu  reaksi  saat  telah mencapai pH optimumnya, dimana pH dapat mempengaruhi sisi aktif pada enzim.
Berdasarkan  data  aktivitas  xantin  oksidase  dan  daya  inhibisi  ekstrakdinyatakan  mampu bertindak sebagai antihiperurisemia yang artinya dapat menghambat pembentukan asam urat. Ekstrak ini dapat dikatakan berpotensi sebagai inhibitor xantin oksidase dan bisa dimanfaatkan sebagai obat asam urat apabila memiliki daya inhibisi lebih besar dari 50%.

## 3.5. Identifikasi Ekstrak
Ekstrak kasar etanol daun sirsak ( Annona muricata L.) dilakukan terlebih dahulu aktivitas enzin xantin oksidase dan dilanjutkan dengan penentuan komposisi senyawa yang terkandung dengan menggunakan alat GC-MS  Adapaun  kromatogram  hasil analisis  GC-MS ekstrak  kasar etanol daun sirsak ditunjukkan pada Gambar 2 sebagai berikut:

## Gambar 2. Kromatogram Ekstrak Etanol Daun Sirsak
Berdasarkan  gambar  2,  terdapat  22  komponen senyawa yang memiliki  persen area yang besar.  Komponen  senyawa  yang  memiliki  persen  area  tersebut  ditunjukkan  pada  Tabel  3. berikut:
Table 3. Komposisi Senyawa Kimia Ekstrak Kasar Etanol Jenis/Kode Sampel Senyawa RT Area (%) Ekstrak Kasar Etanol Daun Sirsak 1,1-Diethoxy-2-Butene 4.332 1,03 Neophytadiene 27.252 4,56 Hexadecanoic Acid, Methylene Ester 28.120 3,07 N-Heksadecanoic Acid 28.775 1,70 Octadecanoic Acid 28.865 1,02 11-Octadecenoic Acid, Methyl Ester 29.348 4,87 Phytol 29.465 10,96 1,2-Benzenedicarboxylic Acid, Mono (2-Ethylhexyl) Ester 31.582 16,70 2-Methyl-Z,Z-3,13- Octadecadienol 32.416 3,14 Squalene 33.030 1,06 5H-Benzocyclohepten-5- 1,2,3,4,6-Tetrahydroxy 24.967 3,10 Gamma-Tocopherol 35.133 2,31 Cyclohexanecarboxylic Acid, Heptyl Ester 35.402 1,75 Vitamin E 36.091 13,50 Campesterol 37.443 1,81 Stigmasterol 37.898 1,50
Gamma-Sitosterol Ergost-4-En-3-1, (24R) 4,22-Stigmastadiene-3-One Stigmast-4-En-3-One 1,19-Eicosadiene 39.960 39.670 40.242 41.559 43.787 5,89 1,12 1,21 5,87 3,25 Pyridine-3-Carboxamide, Oxime,N-(2- trifluoromethylphenyl) 50.130 1,88
Berdasarkan tabel  3, hasil analisis komposisi kimia ekstrak kasar dari etanol daun sirsak menunjukkan  adanya  senyawa-senyawa  yang  dapat  menghambat  kerja  xantin  oksidase ataupun yang dapat menjaga kadar asam urat pada tubuh berada pada keadaan normal. Adapun beberapa senyawa tersebut yaitu vitamin E, campesterol, stigmasterol dan gamma-sitosterol. Menurut  Mehta  (2011)  vitamin  E  dapat  menghambat  kerja  xantin  oksidase  dan  xantin dehidrogenase sehingga sintesis asam urat dapat terhambat [19].
4. Kesimpulan Dari hasil penelitian  dapat diperoleh kesimpulan sebagai berikut pada ekstrak kasar etanol daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  memiliki    metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  tanin  dan saponin.  Nilai  aktivitas  enzim  xantin  oksidase  pada  residu  sebesar  0,0004  U/mL  dan  pada supernatan sebesar 0,00009 U/mL.Nilai daya inhibisi ekstrak kasar etanoldaun sirsak ( Annona muricata L.)adalah 82,5%. Berdasarkan hasil uji dengan alat GC-MS pada ekstrak kasar etanol diperoleh  22  komponen  senyawa  yang  memiliki  persen  area  yang  besar.  Adapun  beberapa senyawa tersebut yang dapat menghambat kerja xantin oksidase yaitu vitamin E, campesterol, stigmasterol dan gamma-sitosterol.

## References
[1] Y.A  Sukandar,  I  Ketut,  dan    S.  Readi,  "Uji  Efek  Antihiperurikemia  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak (Annona muricata L.) pada Tikus Betina Galur Wistar," Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung . Vol. XXXVII, No. 3, 2012.
[2] D. Krisnatuti, D, " Perencanaan menu untuk penderita gangguan asam urat ," Jakarta: Niaga swadaya, 1997.
[3] A. Susanti, " Inhibisi Ekstrak Air dan Etanol  Daun Asam Jawa dan Rimpang Kunci Pepet Terhadap Lipase Pankreas Secara In Vitro ," Bogor: IPB, 2012.
[4] R.  Yulianti,  R.  Kodariah,  dan  P.  Ekawuyung,  "Pengaruh  Ekstrak  Metanol  Daun  Sirsak  (Annona Muricata  Linn.)  Terhadap  Visabilitas  Galur  Sel  Kanker  Prostat," Jurnal  MKA ,  Vol.  37,  No.  3. http://jurnalmka.fk.unand.ac.id, 2014.
[5] Naspiah, Nisa, Masruhim, M. Amir, dan V.Y.Fitriani, "Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata L) Terhadap DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)," Indonesian Journal Applied Sciences-IJAS , Vol. 3, No. 2, 2013.
[6] R. Shabella, " Terapi Kulit Manggis " Salatiga : Cerdas Pustaka, 2011.
[7] P.S. Sari, S. Sitorus, dan R. Gunawan, "Inhibisi Xantin Oksidase Oleh Fraksi Etil Asetat dari Daun Jarum Tujuh Bilah (Pereskia bleo (Kunth) D.C) Sebagai  Antihiperurisemia," Jurnal Atomik ., Vol. 03, No. 2, hal 116-121, 2018.
[8] F. Manoi, "Pengaruh Cara Pengeringan Terhadap Mutu Simplisia Sambiloto," Bul. Littro . Vol. XVII No. 1, hal. 1-5, 2006.
[9] D. Rosadi, " Pengantar Analisa Data Runtun Waktu ," UGM : FMIPA UGM, 2006.
[10] D. Darwis, "Teknik Dasar Laboratorium dalam Penelitian Senyawa Bahan Alam Hayati," Workshop Pengembangan  Sumber  Daya  Manusia  dalam  Bidang  Kimia  Organik  Bahan  Alam  Hayati .  DITJEN DIKTI DEPDIKNAS. 9-14 Oktober 2000, Padang.
[11] R. Yunus, A.H. Alimuddin, dan P. Ardinigsih, "Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Buah Tampoi (Baccaurea Macrocarpa) Terhadap Bakteri  Escherichia Coli dan  Staphylococcus Aureus," Jurnal Katulistiwa , Vol. 3, No. 3, hal. 19-30, 2014.
[12] M.S.  Briley  and  R.  Eisenthal,  "Association  Xanthine  Oxidase  with  the  Bovine  Milk-Fat-Globule Membrane," Journal of Biochemistry , Vol. 147, hal. 417-423, 1975.
[13] F. Fibriana dan E. Susanti, E. " Teknologi Enzim ," Yogyakarta, 2017.
[14] Johannes, " Kimia Koloid dan Kimia Permukaan ," Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada, 1974.
[15] S. Wulandari, Subandi, dan Muntholib, " Inhibisi Xantin Oksidase Oleh Ekstrak Etanol Kulit Melinjo (Gnetum gnemon) Relatif Terhadap Allopurinol ," Malang : Universitas Negeri Malang, 2012.
[16] E. C. Egwim, M.A. Vunchi, and P. O. Egwim, “ Comparison of Xanthine Oxidase Activities in Cow and Goat Milks, ” Nigeria Society for Experimental Biology , (Online), Vol. 17, No. 1, hal.1-6, 2005.
[17] S.  Azmi,  P.  Jamal,  dan  A. Amid,  “ Xanthine  Oxidase  Inhibitory  Activity  from  Potential  Malaysian Medicinal Plant as Remedie For Gout, ” International Food Research Journal , Vol. 19, No. 1, hal. 156- 159, 2012.
[18] A.  T.  Mardiningsih, “ Penghambatan  Aktivitas  Enzim  Xantin  Oksidase  Oleh  Ekstrak  Etanol  Daun Kacang Tanah (Arachis hypogeae L.) secara In Vitro , ” [17Malang: UIN Maulana Maling Ibrahim, 2017.
[19] J. Mehta, A. Sukla, V.Bukhairiya, dan R. Charde, "The Magic Remedy of Moringa Oliferia," Int J Biomed Adv Re s. Vol. 5, No. 2, 2011.