## Penapisan Fitokimia dan Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Beberapa  Tanaman  Obat  Terhadap  Larva  Udang  Artemia salina Leach
Musadar Mappasomba 1 , Bayu Wirasmanto 2 , Muhammad Hajrul Malaka 2 , Wahyuni 2 , Sahidin 2*
1) Fakultas Pertanian Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu, Jl. H. E. A. Mokodompit Kendari 93232
2) Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu, Jl. H. E. A. Mokodompit Kendari 93232
E-mail: sahidin02@uho.ac.id

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongansenyawa yang terdapat dalam ekstrak metanol beberapa tanaman obat yang sering digunakan masyarakat Sulawesi Tenggara diantaranya miana ( C. scutellaroides L.), ketepeng cina ( C. alata L . ), eceng gondok ( E. crassipes ), kayu jawa ( L. coromandelica H.), dan nenas ( A. comocus L.) serta mengetahui tingkat toksisitasnya menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Sampel terdiri dari lima tanaman obat yang telah dipisahkan perbagiannya berupa akar, batang, daun, bunga dan buah. Ekstraksi menggunakan teknik maserasi, skrining fitokimia menggunakan teknik Kromatografi Lapis Tipis, serta  pengujian  toksisitas  terhadap  larva  udang Artemia  salina L.  Data  kematian  larva dianalisis  dengan  analisis  probit  untuk mengetahui nilai LC 50 pada masing-masing sampel, dimana ekstrak dikatakan toksik bila nilai LC 50 ˂1000 µg/mL. Hasil skrining fitokimia menunjukkan adanya kandungan flavonoid, tanin dan saponin pada setiap tanaman, kandungan alkaloid tidak terdapat pada tanaman E.  crassipes, dan  senyawa  triterpenoid  hanya  terdapat  pada  daun  tanaman C.  alata L.  Hasil  pengujian  toksisitas menunjukkan bahwa dari delapan belas sampel yang telah diuji, dua belas diantaranya bersifat toksik. Sampel yang memiliki nilai LC 50 terkecil (120,573 µg/mL) adalah kulit batang L. coromandelica sedangkan nilai LC 50 terbesar (1510,415 µg/mL) ditunjukkan oleh daun C. scutellaroides L

## 1. Pendahuluan
Pertambahan  jumlah  penduduk  dunia  yang  sangat pesat  terutama  di  negara-negara  berkembang  seperti Indonesia  dapat  menimbulkan  masalah  kesehatan.  Oleh karena itu kebutuhan akan suatu obat yang dapat mencegah atau  mengobati  dari  penyakit  tertentu  mutlak  diperlukan keberadaannya  [1].  Obat  tradisional  merupakan  pilihan pengobatan yang kini makin diminati, terlebih lagi dengan kesadaran  untuk  kembali  ke  alam.  Penggunaan  tanaman obat atau obat tradisional relatif lebih aman dibandingkan obat sintesis [2]. Obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan  yang  berasal  dari  tumbuh-tumbuhan,  hewan, mineral, sediaan sarian (galenik) atau campuran dari bahan tersebut  yang  secara  tradisional  telah  digunakan  untuk pengobatan [3].
Beberapa  tanaman  obat  yang  sering  digunakan masyarakat  untuk  menyembuhkan  penyakit  diantaranya miana  ( Coleus  scutellaroides L.),  ketepeng  cina  ( Cassia alata L . ), eceng gondok ( Eichhornia crassipes ), kayu jawa ( Lannea  coromandelica H.),  dan  nanas  ( Ananas comocus L.). Tanaman-tanaman tersebut digunakan langsung  maupun  diolah  secara  tradisional  untuk mengobati  berbagai  penyakit  diantaranya  penyakit  kulit, mempercepat  penyembuhan  luka,  obat  cacing,  batuk, peluruh  haid,  antiinflamasi  maupun  penambah  nafsu makan [4]. Pemanfaatan tanaman obat di masyarakat masih
berdasarkan pengalaman empiris, sehingga perlu didukung oleh informasi ilmiah mengenai kandungan senyawa kimia, khasiat,  dan  efek  samping.  Bahan  tanaman  yang  bersifat toksik  disebabkan  oleh  adanya  kandungan  senyawa metabolit  sekunder,  sehingga  perlu  dilakukan  identifikasi metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam  tanaman  obat tersebut [5].
Toksisitas dapat diartikan sebagai suatu keadaan yang menandakan adanya efek  toksik atau racun yang terdapat pada  suatu  bahan  sebagai  sediaan  dosis  tunggal  atau campuran  [6].  Salah  satu  metode  yang  digunakan  dalam menentukan  efek  toksik  dari  suatu  tanaman  adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Metode ini telah dibuktikan memiliki kolerasi dengan adanya daya sitotoksik senyawa- senyawa  antikanker  [7,  8].  Metode  ini  dilakukan  dengan menentukan besarnya LC50 selama 24 jam. Suatu ekstrak tanaman dikatakan toksik jika nilai LC 50 ˂1000 µg/mL [9]. Untuk  keamanan  dan  pemanfaatan  dari  tanaman- tanaman  obat  tersebut,  maka  perlu  dilakukan  penelitian tentang  skrining  fitokimia  dan  uji  toksisitas  akut  ekstrak metanol  beberapa  tanaman  obat  terhadap  larva  udang Artemia salina Leach menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Penelitian ini dipilih karena masih kurangnya  informasi  ilmiah  mengenai  kandungan  kimia serta potensi toksisitas tanaman-tanaman obat tersebut.
Kata kunci: ekstrak, toksisitas, skrining, Artemia, BSLT
2. Metode

## 2.1 Umum
Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental eksplorasi dengan pendekatan post test-only control group design.  Sampel  tanaman  diperoleh  dari  area  Kecamatan Poasia, Kota Kendari. Benih  udang Artemia salina Leach diperoleh di Laboratorium Farmasi Universitas Halu Oleo, dan  air  laut  dengan  salinitas  terstandar  diperoleh di  Balai Benih  Udang  Dinas  Kelautan  dan  Perikanan  Provinsi Sulawesi Tenggara, Purirano, Kendari.

## 2.2 Penyiapan Sampel dan Ekstraksi
Total  keseluruhan  sampel  mencapai  delapan  belas bagian  tanaman.  Preparasi  dilakukan  dengan  memotong- motong  sampel  yang  sebelumnya  telah  dibersihkan, selanjutnya  dikering-anginkan  dengan  sinar  matahari. Simplisis  kering  selanjutnya  diserbukkan  sampai  menjadi partikel  kecil.  Ekstraksi  maserasi  serbuk  tanaman dilakukan dalam wadah tertutup selama 3 x 24 jam dengan sesekali pengadukan menggunakan pelarut metanol dengan penggantian pelarut setiap 1x24 jam. Filtrat hasil maserasi dikumpulkan dan dipekatkan dengan evaporator pada suhu 55 0 C hingga diperoleh ekstrak kental.

## 2.3 Penapisan Fitokimia
Uji  fitokimia  dilakukan  dengan  menggunakan  plat KLT  G 60 F 254 .  Masing-masing  plat  dengan  ukuran  9  x  5 cm 2 . Ekstrak dari masing-masing tanaman ditotolkan pada jarak  ±  1  cm  dari  tepi  bawah  plat  dengan  pipa  kapiler kemudian  dikeringkan  dan  dielusi  dengan  masing-masing fase  gerak  golongan  senyawanya.  Fase  gerak  dan  dan reagen  penguji  masing-masing  golongan  senyawa  adalah sebagai berikut:
a. Golongan  senyawa  alkaloid:  fase  gerak  kloroform- metanol  (9:1)  dan  pereaksi  Dragendorff  untuk mendeteksi yang menunjukkan bercak coklat jingga
b. Golongan senyawa flavonoid menggunakan fase gerak kloroform:  metanol  (8:2)  dan  diberi  uap  amonia  yang akan menghasilkan warna biru kehijauan
c. Golongan  senyawa  tannin  menggunakan  fase  gerak metanol-aseton  (5:5),  kemudian  disemprot  dengan FeCl3 1%  menghasilkan warna biru kehitaman
d. Golongan  senyawa  saponin  menggunakan  fase  gerak kloroform-metanol-air  (2:6:1)  ketika  ditambah  H 2 SO 4 menimbulkan warna ungu gelap.
e. Golongan  senyawa  triterpenoid  menggunakan  fase gerak  n-heksana:etil  asetat  (2:8)  disemprot  dengan pereaksi  Lieberman-burchard  menghasilkan  warna merah ungu

## 2.4 Uji Toksisitas Akut

## Pembuatan Larutan Stok
Larutan  stok  dari  masing-masing  bahan  uji  dengan dibuat  dengan  melarutkan  0,5  g  sampel  dalam  pelarut metanol  sampai  tepat  50  mL  sehingga  diperoleh  larutan stok  dengan  konsentrasi  10.000  µg/mL.  Seri  konsentrasi
sampel uji dibuat dengan pengambilan volume tertentu dari larutan stok menggunakan mikropipet dan dimasukkan ke dalam  vial.  Pembuatan  kontrol  uji  dilakukan  dengan memasukkan pelarut tanpa sampel ke dalam vial. Kontrol tersebut  diperlukan  untuk  mengevaluasi  kemungkinan timbulnya  efek  karena  pelarut  yang  belum  menguap sempurna  dan  pengaruh  lain  selain  pelarut  terhadap  uji yang  dilakukan.  Vial  yang  telah  diisi  sampel  dan  kontrol diangin-anginkan  hingga  kering  dan  tidak  berbau  pelarut lagi.

## Penetasan Larva
Penetasan  telur A.salina L . dilakukan  dalam  wadah penetas telur atau akuarium mini dengan dua bagian ruang bersekat,  satu  bagian  ruang  gelap  dan  yang  satu  terang. Sekat  dibuat  berlubang  dengan  diameter  ±2  mm.  Air  laut dimasukkan ke dalam wadah, serta diaerasi menggunakan aerator.  Sejumlah  telur A . salina L.  dimasukkan  ke  dalam satu ruang, kemudian ruang tersebut ditutup. Sisi yang lain dibiarkan  terbuka  dan  diberi  lampu  untuk  menarik A . salina L.  yang  telah  menetas  melalui  lubang  sekat.  Telur akan  menetas  18-24  jam  menjadi  larva.  Larva  yang berumur  48  jam  dapat  digunakan  untuk  uji  toksisitas [11,12,13].

## Uji Toksisitas
Pengujian sampel dilakukan dengan cara memasukkan  masing-masing  sampel  ke  dalam  vial  yang kemudian  diuapkan  dengan  diangin-anginkan  hingga pelarutnya  hilang.  Selanjutnya  vial  diisi  air  laut  2  mL, kemudian  digoyang-goyangkan  kurang  lebih  selama  1 menit  untuk  dihomogenkan.  Ekstrak  yang  sukar  larut  air laut  terlebih  dahulu  ditambahkan  DMSO  dengan  batas penggunaan 100 µl per 10 mL. Sepuluh ekor larva A . salina berumur 48 jam yang sehat (bergerak aktif) dipilih secara acak, dimasukkan  ke dalam vial yang berisi sampel yang bebas  pelarut  menggunakan  pipet  tetes  kemudian ditambahkan  air  laut  sampai  10  mL.  Satu  tetes  suspensi tepung  jagung  (3  mg/10  mL  air  laut)  ditambahkan  ke dalamnya sebagai makanan A . salina L . Vial diletakkan di bawah  lampu  penerangan  selama  24  jam  dan  dihitung jumlah  larva A . salina L.  yang  mati  (tidak  bergerak  lagi) [12,13].  Dilakukan  tiga  kali  replikasi  untuk  tiap-tiap  seri konsentrasi sampel.

## Pengolahan dan Analisis Data
Jumlah  persen  kematian  larva  uji  setelah  24  jam perlakuan  dengan  menggunakan  rumus  berikut  (Meyer dkk., 1982).
% Kematian= jumlah larva  𝐴.  𝑠𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎 mati jumlah larva uji x 100%
Jika terjadi kematian pada kontrol uji dapat dikoreksi dengan rumus Abbot, yaitu:
% Kematian= jumlah larva 𝐴.  𝑠𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎 𝑚𝑎𝑡𝑖 (uji−kontrol) jumlah larva uji−kontrol yang mati x 100%
Analisis  probit  antara  konsentrasi  uji  dan  jumlah kematian larva dianalisis dengan menggunakan Minitab®
ver 17.1.2 sehingga menunjukkan nilai LC 50 dari masing- masing sampel [13]. Ekstrak dikatakan toksik apabila nilai LC 50 di  bawah  atau  sama  dengan  500  ppm  untuk  ekstrak atau fraksi [14].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penapisan  fitokimia  dilakukan  untuk  memberi gambaran  tentang  golongan  senyawa  yang  terkandung dalam ekstrak. Untuk mengetahui golongan senyawa yang ada  dalam  sampel  maka  ditambahkan  pereaksi  untuk menguji  ada  tidaknya  senyawa  tertentu  dalam  sampel. Penapisan fitokimia pada masing-masing ekstrak tanaman telah  memperjelas  penelitian-penelitian  yang  pernah dilakukan  sebelumnya  tentang  kandungan  metabolit sekunder  pada  tanaman  tersebut,  sekaligus  menambah informasi  mengenai  kandungan  metabolit  yang  tersebar pada berbagai bagian tanaman.
Toksisitas merupakan suatu keadaan yang menandakan  adanya  efek  toksik  atau  racun  pada  suatu bahan atau campuran bahan. Uji toksisitas akut merupakan pengujian  dengan  cara  pemberian  obat  atau  zat  tertentu sebanyak  satu  kali  dalam  jangka  waktu  24  jam. Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  adalah  salah  satu  metode skrining  untuk  menentukan  toksisitas  suatu  senyawa  atau ekstrak  secara  akut  dengan  menggunakan  hewan  coba Artemia  salina .  Daya  toksisitas  suatu  senyawa  dapat diketahui  dengan  menghitung  jumlah  kematian  larva Artemia  salina dengan  parameter lethal  concentration 50
(LC 50 ).Suatu  ekstrak  dinyatakan  bersifat  toksik  menurut metode  BST  ini  jika  memiliki  LC 50 kurang  dari  1000 µg/mL.    Jika  hasil  uji  BST  menunjukkan  bahwa  ekstrak tumbuhan  bersifat  toksik  maka  dapat  dikembangkan  ke penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengisolasi  senyawa sitotoksik  tumbuhan  sebagai  usaha  pengembangan  obat alternatif  antikanker,  sebaliknya  jika  hasil  uji  BST  tidak bersifat  toksik  maka  dapat  pula  dikembangkan  ke penelitian  lanjutan  menggunakan  hewan  coba  yang  lebih besar sebagai usaha pengembangan obat herbal terstandar dan fitofarmaka.
Senyawa  bioaktif  hampir  selalu  bersifat  toksik  pada dosis tinggi, oleh karena itu daya bunuh in vitro senyawa pada hewan coba, dapat dijadikan pengujian untuk ekstrak tanaman  yang  mempunyai  bioaktifitas. Artemia  salina merupakan salah satu hewan coba yang sangat sesuai untuk pengujian tersebut, hal ini karena pengujiannya cepat, tidak memerlukan  teknik  aseptik,  murah  (tidak  membutuhkan serum  hewan),  jumlah  organisme  banyak  sehingga memenuhi  kebutuhan  validasi  statistik  dan  hanya membutuhkan sedikit sampel.
Fase yang digunakan dalam penelitian ini adalah fase nauplius karena pada saat itu A. salina Leach berada pada fase  yang  paling  aktif  membelah  secara  mitosis  yang identik  dengan  sel  kanker  yang  juga  membelah  secara mitosis.  Hal  ini  menyebabkan  uji  BSLT  ini  sering digunakan  sebagai  penelitian  pendahuluan  dari  aktivitas antikanker.  Salah  satu  mekanisme  kerja  obat  antikanker
Tabel 1. Hasil penapisan fitokimia sampel
Sampel Profil Fitokimia Alkaloid Flavonoid Terpenoid Saponin Tanin E E 1 - - - 1 - E 2 - 5 - - 1 E 3 - 1 - 1 1 J J 1 1 - - 2 2 J 2 1 4 - 2 2 J 3 - 5 - 1 2 K K 1 1 - - 1 1 K 2 1 1 - 1 1 K 3 1 4 1 1 1 K 4 - 1 - 1 - K 5 1 1 - 1 1 M M 1 1 1 - 2 2 M 2 1 1 - 2 1 M 3 1 3 - 1 1 M 4 1 1 - 1 1 N N 1 - - - 2 1 N 2 1 2 - 1 2 N 3 - 2 - - 1 Keterangan: E 1 : Akar E. crassipes E 2 : Daun E. crassipes E 3 : Bunga E. crassipes J 1 : Akar L. coromandelica H. J 2 : Kulit batang L. coromandelica H. J 3 : Daun L. coromandelica H. K 1 : Akar C. alata L. K 2 : Kulit batang C. alata L. K 3 : Daun C. alata L.
K 4 :  Bunga C. alata L. K 5 :  Buah C. alata L. M 1 : Akar C. scutellaroides L. M 2 : Batang C. scutellaroides L. M 3 : Daun C. scutellaroides L. M 4 : Bunga C. scutellaroides L. N 1 : Akar A. comocus L. N 2 :  Daun A. comocus L. N 3 :  Kulit buah A. comocus L.
juga  bersifat  sitotoksik  yaitu  dengan  cara  menghambat pertumbuhan  sel  yang  akhirnya  menyebabkan  kematian pada sel sedangkan mekanisme aktivitas sitotoksik pada A. salina Leach belum diketahui secara pasti [13].
Tabel  2. Hasil  Perhitungan  Nilai  LC 50 masing-masing  tanaman perbagiannya.
No Nama Tanaman Bagian Tanaman LC 50 (µg/mL) 1 E. crasippes Akar 530,161 Daun 388,670 Bunga 345,199 2 L. coromandelica Akar 122,194 Kulit Batang 120,573 Daun 521,217 3 C. alata L. Akar 1062,960 Kulit Batang 223,095 Daun 1049,352 Bunga 1079,233 Buah 1116,823 4 C. scutellaroides L. Akar 605,480 Batang 1030,293 Daun 1510,415 Bunga 127,495 5 A. comocus L. Akar 205,076 Daun 221,469 Kulit Buah 358,323
Sebanyak 18 sampel tanaman tersebut ternyata yang menunjukkan  nilai  LC 50 ˂1000 µg/ mL jauh lebih banyak dibandingkan  sampel  yang  memiliki  nilai  LC 50 ˃1000, artinya  sampel  yang  bersifat  toksik  menurut  metode  BST jauh lebih banyak dibandingkan sampel yang tidak bersifat toksik,  sampel  tanaman  yang  bersifat  toksik  menurut metode  BSLT  berjumlah  12  sampel,  sementara  yang bersifat tidak toksik menurut metode BST hanya berjumlah 6  sampel.  Sampel  yang  menunjukkan  nilai  LC 50 terkecil pada  tabel  diatas  adalah  kulit  batang L.  coromandelica dengan  nilai  LC 50 sebesar  120,573µg/mL,  artinya  kulit batang L.  coromandelica memiliki  potensi  toksik  paling tinggidibandingkan  bagian  tanaman  yang  lain,  sedangkan sampel yang menunjukkan nilai LC 50 terbesar adalah daun C.  scutellaroides L.  dengan  nilai  LC 50 sebesar 1510,415µg/mL, artinya daun C. scutellaroides L.memiliki potensi  tidak  toksik  paling  tinggi  dibandingkan  sampel yang lain.
Ketoksikan suatu tanaman berkaitan dengan metabolit sekunder  yang  terkandung  didalamnya,  sebagian  besar metobolit  sekunder  yang  terdapat  didalam  satu  tanaman sama,  akan  tetapi  penyebarannya  tidak  selalu  merata, sehingga  dapat  perbedaan  aktifitas  yang  cukup  nampak antara  bagian  tanaman  tertentu  dan  bagian  lainnya. Senyawa  golongan  flavonoid,  alkaloid,  triterpenoid, saponin dan tanin merupakan senyawa metabolit sekunder yang  terkandung  dalam  suatu  tanaman,  metabolit  ini digunakan  tanaman  sebagai  bentuk  pertahanan  diri  dari mahluk  hidup  lain  yang  mengancam  dirinya.  Beberapa golongan  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  alkaloid
dan  triterpenoin  dapat  menginduksi  kematian  sel  dan karena  kemampuan  itu  sehingga  senyawa  tersebut  dapat digunakan  sebagai  agen  antikanker.Senyawa  golongan flavonoid  dapat  menginduksi  fragmentasi  DNA  yang mengakibatkan  DNA  menjadi  rusak,  kerusakan  DNA mengakibatkan  ekspresi  protein  proapoptosis  sehingga terjadilah  proses  apoptosis  sel  yang  mengakibatkan kematian  sel,  senyawa  flavonoid  juga  dapat  menghambat reseptor  tyrosin  kinase  sehingga  proses  transduksi  signal terhalang,  akibatnya  proses  pertumbuhan  sel  dapat terhalang dan mengakibatkan kematian sel.
Beberapa  golongan  senyawa  alkaloid  juga  dapat bersifat sitotoksik, yaitu berperan sebagai tubulin inhibitor. Alkaloid dapat berikatan dengan tubulin, yaitu protein yang menyusun mikrotubulus. Terkaitnya tubulin pada alkaloid mengakibatkan  polimerasi  protein  menjadi  mikrotubulus akan  terhambat  sehingga  pembentukan spindle mitotik akan  terhambat  pula  dan  siklus  sel  akan  terhenti  pada metafase.  Karena  tidak  dapat melakukan pembelahan  sel, sel tersebut kemudian akan mengalami apoptosis. Senyawa golongan triterpenoid dapat memblok siklus sel pada fase gap 2 (pada tahap interfase) dengan menstabilkan benang- benang spindle pada  fase  mitosis  sehingga  menyebabkan proses  mitosis  terhambat.  Pada  tahap  selanjutnya  akan terjadi  penghambatan  proliferasi  sel  dan  pemacuan apoptosis. Terjadinya proses apoptosis dan penghambatan pertumbuhan sel dapat mematikan larva Artemia pada uji toksisitas  menggunakan  metode  BST  sehingga  pengujian ini dapat digunakan sebagai salah satu cara pencarian obat- obat yang memiliki potensi sebagai antikanker. Disamping itu  kandungan  metabolit  seperti  saponin  dan  tanin  juga dapat mematikan larva Artemia , senyawa golongan saponin dan  tanin  memiliki  rasa  yang  pahit  sehingga  dapat mengganggu  stimulasi  rasa  pada Artemia ,  hal  ini  dapat membuat  larva  artemia  tidak  mampu  mengenali makanannya dan akhirnya mati karena kelaparan. Senyawa golongan  saponin  juga  dapat  mengikat  oksigen  yang terdapat  didalam  air  sehingga  kadar  oksigen  didalam  air menurun dan larva Artemia dapat mati karena kekurangan oksigen.
Hampir  semua  tanaman  yang  memiliki  kandungan bioaktif  akan  bersifat  toksik  pada  dosis  tinggi,  sehingga dapat  dikatakan  bahwa  tanaman-tanaman  diatas  banyak memiliki  kandungan  bioaktif  dan  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui  potensinya. Apabila  suatu  ekstrak  tanaman  bersifat  toksik  menurut harga  LC 50 dengan  metode  BST,  maka  tanaman  tersebut dapat  dikembangkan  sebagai  kandidat  obat  antikanker. Namun,  bila  tidak  bersifat  toksik  maka  tanaman  tersebut dapat diteliti kembali untuk mengetahui khasiatnya dengan menggunakan  hewan  coba  yang  lebih  besar  dari  larva Artemia salina seperti mencit dan tikus secara in vivo untuk pengembangan  obat  herbal  terstandar  (OHT)  maupun fitofarmaka.

## 4. Kesimpulan
Hasil  penapisan  fitokimia  menunjukkan  bahwa kandungan  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid  dan saponin cukup banyak terdistribusi di bagian tanaman. Dari
18 sampel, mayoritas sampel memiliki sifat toksik dengan rata-rata LC 50 <1000 ppm.

## Daftar Pustaka
1. Ruslin  dan  Sahidin,  I.,  2008,  Identifikasi  dan  Determinasi Tanaman  Obat  Tradisional  Masyarakat  Sulawesi  Tenggara pada  Arboretum  Prof.  Mahmud  Hamundu  Universitas Haluoleo, Majalah Farmasi Indonesia,19(2) : 101-107.
2. Nur  RA,  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Daun  Sukun (A rtocarpus  altilis) Terhadap  Larva Artemia  salina Leach DenganMetode Brine Shrimp Lethality Test (BST), Laporan
Akhir Penelitian Karya Tulis Ilmiah , Universitas Diponegoro, 2009.
3. Dirjen  POM. Pedoman  Pelaksanaan  Uji  Klinik  Obat Tradisional , Edisi 1, Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 2000.
4. Kemenkes RI, Riset Khusus  Eksplorasi Pengetahuan Lokal Etnomedisin  dan  Tumbuhan  Obat  Di  Indonesia  Berbasis Komunitas, Ristoja: Laporan  Provinsi  Sulawesi  Tenggara, 2012.
5. Sangi MS, Momuat LI, Kumaunang M, Uji Toksisitas Dan Skrining  Fitokimia  Tepung  Gabah  Pelepah  Aren (Arenga pinnata) , Jurnal Ilmiah Sains, 2012, 12 ( 2) .
6. Hodgson E, A Textbook of Modern Toxicology , 4 th Ed , North Carolina: John Wiley & Sons. Inc., Publication, 2010; 225 – 236.
7. Fitrah M, Tahar N, Husniar, Uji toksisitas fraksi daun pedada ( Sonneratia  caseolaris l.)  terhadap    larva  udang  ( Artemia salina leach)  dengan  menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT), Jurnal Para Pemikir, 2018, 7(1) ;181- 186
8. Carballo  JL,  Hernandez  ZL,  Perez  P,  Garcia,  MD, Comparison  between  two  brine  shrimp  assays  to  detect  in vitro  cytotoxicity  in  marine  natural  products, BMC
Biotechnology , 2002, 2 , 1472-6570.
9. Oratmangun SA, Fatimawali, Bodhi W, Uji toksisitas ekstrak tanaman  patah  tulang  ( Euphorbia  tirucalli L.)  terhadap Artemia salina dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)  sebagai  studi  pendahuluan  potensi  anti  kanker, Pharmacon: Jurnal Ilmiah Farmasi , 2014, 3(3)
10. Harborne  JB, Metode  Fitokimia:  Penuntun  cara  modern menganalisis  Tumbuhan ,  ditejemahkan  oleh  Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro,  Bandung:  Penerbit  ITB, 1987.
11. McLaughlin  JL,  Crown  Gall  Tumours  on  Potato  Disc  and Brine  Shrimp  Lethality:  Two  Simple  Bioassay  for  Higher Plant  Screening  and  Fractination, Methods  in  Plants Biochemistry, 1991, 6(1) ;1-30.
12. Anderson  JE,  Goetz  CM,  McLaughlin  JL,  A  blind Comparison  of  Simple  Banch-top  Bioassay  and  Human Tumour  Cell  Cytotoxicities  as  Anti  tumour  Prescreen, Phytochemical Analysis , 1991, 6 ;107-111.
13. Sadarun B, Malaka MH, Wahyuni W, I Sahidin, Toksisitas Akut Senyawa Metabolit Sekunder dari Spons Laut Clathria sp., Pharmauho , 3(1) ;6-9.
14. Meyer BN, Ferrigni NR, Putnan JE, Jacobsen LB, Nicholas DE,  McLaughlin  JL, Brine  Shrimp:  A  Convenient  General Bioassay  for  Active  Plant  Constituent.    Departement  of Medical  Chemistry  and    Pharmacognosy, School  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Science,  Cell  Culture Laboratory, Perdue Cancer Center, West Lavayette, 1982.
© 2019 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution License ( http://creativecommons.org/ licenses/by/4.0/ )