## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA JAMUR LAUT YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS Phyllospongia lamellose
Giovanny E. Payangan 1 ) , Fatimawali 1 ) , Henki Rotinsulu 1 )
1) PS Famasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponges  are  marine  organisms  that  inhabited  coral  reefs.  These  marine  animals  are  known  to containe compounds which has the potential to be developed in the field of medicine as antimicrobials. This study aims to determine whether the marine fungi associated with Phyllospongia lamellose Sponge has antimicrobial activity. The study included sponge sampling of Phyllospongia lamellose,  isolation and inoculation  of  fungi  associated  with  sponges,  fermentation,  extraction  with  acetone  continued  with fractionation  with  ethyl  acetate  solvent,  and  antimicrobial  testing  aginst  Staphylococcus  aureus, Echerichia  coli,  and  Candida  albicans.  Test  activity  was  performed  by  agar  diffusion  method,  the antimicrobial  activity  was  measured  from  the  inhibitory  zone  formed  around  the  paper  disc  to  the  test microbe. The results showed that the fungi associated with Phyllospongia lamellose sponge had a 7 mm inhibitory zone to Staphylococcus aureus, 6 mm to Echerichia coli, 13.3 mm to Candida albicans. It can be concluded that the fungi associated with Phyllospongia lamellose sponge have moderate antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Echerichia coli, and strong Candida albicans.
Keywords :  Phyllospongia  lamellose  sponge,  antimicrobial,  Staphylococcus  aureus,  Echerichia coli, Candida albicans.

## ABSTRAK
Spons  merupakan  salah  satu  biota  laut  penyusun  terumbu  karang.  Hewan  laut  ini  diketahui mengandung  senyawa-senyawa  yang  berpotensi  untuk  dikembangkan  dalam  bidang  pengobatan diantaranya sebagi antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah jamur yang berasosiasi dengan  spons Phyllospongia  lamellose memiliki  aktivitas  antimikroba.  Penelitian  dilakukan  meliputi sampling  spons Phyllospongia  lamellose ,  isolasi  dan  inokulasi  jamur  yang  berasosiasi  dengan  spons, fermentasi,  ektraksi  dengan  aseton  kemudian  difraksinasi  dengan  pelarut  etil  asetat,  dikeringkan  hingga mendapat ekstrak kasar dan pengujian antimikroba pada bakteri Staphylococcus aureus, Ercherchia coli, dan  jamur Candida  albicans .  Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar.  Aktivitas antimikroba didapatkan dari zona hambat yang terbentuk disekitaran cakram kertas terhadap mikroba uji. Dari  hasil  penelitian  didapatan  bahwa  jamur  yang  berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia  lamellose memiliki daya zona hambat 7 mm terhadap Stapylococcus aureus, 6 mm terhadap Ercherchia coli, 13,3 mm  terhadap Candida  albicans. Dapat  disimpulkan  bahwa  jamur  yang  berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia  lamellose memiliki  aktivitas  antimikroba  sedang  terhadap Stapylococcus  aureu, Ercherchia coli, dan kuat terhadap Candida albicans.
Kata Kunci
:  Spons Phyllospongia  lamellose ,  Antimikroba, Stapylococcus  aureu,  Ercherchia coli,   Candida albicans .

## PENDAHULUAN
Sekarang  ini  perkembangan  resistensi terhadap antimikroba dan munculnya patogen  multiresisten  telah  membangkitkan kepedulian kalangan medis di dunia. Hal ini telah  menjadi  permasalahan  yang  sangat penting untuk diselesaikan. Bakteri multidrug resistant adalah bakteri yang telah resisten  terhadap  dua  atau  lebih  golongan antibiotik.  Infeksi  yang  disebabkan  oleh bakteri  resisten  dikaitkan  dengan  angka perawatan  rumah  sakit  yang  lebih  tinggi, masa  perawatan  rumah  sakit  yang  lebih lama,  serta  tingkat  kesakitan  dan  kematian yang  lebih  tinggi  (Sastroasmoro,  2005). Penanganan bakteri patogen multiresisten di dalam  bidang  kesehatan  serta  pemanfaatan senyawa  antibiotik  baru  yang  ramah lingkungan  telah  menjadi  pekerjaan  rumah yang harus segera ditangani secara multidisiplin  dan  serius  (Hunt  and  Vincent, 2006).
Lautan merupakan sumber dari kelompok  besar  bahan  hayati  laut  dengan struktur  yang  unik.  Bahan  hayati  laut tersebut  terakumulasi  pada  hewan-hewan invertebrata  pada  ekosistem  terumbu karang,  seperti  spons,  tunikata,  bryozoa, moluska  dan  karang  lunak.  Beberapa metabolit sekunder yang dimiliki invertebrata  laut  tersebut  menunjukkan adanya aktivitas farmakologi yang merupakan    kandidat-kandidat  baru  untuk bahan obat-obatan (Proksch, 2002).
Baru-baru  ini  beberapa  investigasi menunjukkan bahwa spons dan karang lunak merupakan sumber jamur laut yang melimpah.  Beberapa  peneliti  mengatakan bahwa ada beberapa spons dan karang lunak yang  mengakumulasi  bakteri  dan  jamur
didalam  tubuhnya.  Sampai  saat  ini  belum jelas  apakah  ada  jamur  spesifik  yang  hidup pada  biota  tersebut.  Beberapa  penelitian menunjukkan bahwa jamur laut sangat  kaya akan keanekaragaman senyawa kimia dimana  dijadikan  sebagai  bahan  alami  yang sangat  berpotensi  sebagai  sumber  obat  baru namun  saat  ini  belum  banyak  yang menelitinya (Wiese, 2011).
Jamur  laut  memiliki  kelimpahannya yang  tinggi,  namun  yang  sudah  diteliti masih  kurang  dari  5%.  Jamur  mampu menghasilkan  senyawa  yang  berpotensi diaplikasikan  dalam  dunia  kesehatan  dan telah  dibuktikan  memiliki  banyak  sumber metabolit  sekunder  aktif  yang  unik  secara struktur (Bugni, 2004). Jamur tersebut dapat bersifat obligat, yaitu tumbuh bersporulasi di laut,  atau  bersifat  fakultatif,  yaitu  berasal dari  lingkungan  air  tawar  atau  darat  yang mampu  tumbuh  dan  juga  bersporulasi  di lingkungan laut (Kohlmeyer 1979).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret sampai bulan Juni 2018 di Laboratorium  Farmakognosi,  Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Mikrobiologi di Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi. Penelitian ini dilaksanakan menggunakan metode eksperimental
laboratorium yang menguji aktivitas antimikroba  dari  jamur  yang  diisolasi  dari spons Phyllospongia lamellose.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  masker,  sarung  tangan,  gunting, snorkel, fins, kantong plastik, kamera bawah laut, wadah kaca, pisau, Erlenmeyer, corong, rotary  evaporator, timbangan  digital,  gelas ukur, gelas kimia, cawan petri, corong pisah,
autoklaf,  pinset,  spatula,  pembakar  spritus, magnetic  stirrer ,  pipet  tetes,  mikro  tub, batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak tabung reaksi, tabung reaksi, lemari pendingin,  inkubator,  cakram  ( paper  disc) , mikropipet,  vial,  jangka  sorong,  jarum  ose, jas lab.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Phyllospongia lamellose , bakteri uji S. aureus , E. coli , jamur uji C. albicans , etanol, aquades,  air  laut,  etil  asetat,  aseton, Potato Dextro  Agar , Nutrient  Agar ,  Glukosa, Polypeptone ,  MgSO 4 .7H 2 O, Yeast  Extract , KH 2 PO 4 , Sukrosa, pati, Malt Extract , Ebios , larutan  H 2 SO 4 1%,  larutan  BaCl 2 1,75%, larutan NaCl 0,9%, kloramfenikol
paperdisc ,  label,  spidol  permanen, tissue, aluminium foil , kertas saring, kapas.

## Sterillisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas  antimikroba  ini  disterilkan  terlebih dahulu.  Alat-alat  gelas  disterilkan  dengan autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  ±  15 menit,  pinset,  gunting  dan  jarum  ose direndam  di  alkohol  dan  dibakar  dengan pembakaran  di  atas  api  langsung  dan  media disterilkan  diautoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit.

## Pengambilan Sampel
S ampel  spons  diambil  dari  perairan Teluk  Manado  menggunakan  alat  bantu ( Scuba  Diving ).  Sampel  difoto  dengan kamera  bawah  laut  dan  diambil  lalu dimasukkan  ke  dalam ziper  bag dan disimpan  dalam cooling  box berisi  es  batu untuk dibawa ke Laboratorium
Farmakognosi dan Fitokimia  Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.
Pembuatan Media Uji
a. Media Ujia PDA
Sebanyak  4,2  gram potato  dextro agar ditambahkan  air  laut  sampai  100 ml diaduk sampai homogen menggunakan magnetic stirrer , kemudian dipindahkan pada cawan petri dan didinginkan.
b. Media Nutrient Agar
Sebanyak  3,36  gram nutrient  agar ditambahkan  dengan  aquades  sampai 120  ml  diaduk  sampai  homogen, kemudian dipindahkan pada cawan petri dan didinginkan (Nuraina, 2015).
c. Media Agar Miring
Nutrient  Agar (NA)  sebanyak  0,784 gram  dilarutkan  dalam  28  ml  aquades dan Potato Dextro Agar (PDA) sebanyak  0,588  gram  dilarutkan  dalam 14 ml aquades menggunakan erlenmeyer dan diaduk sampai homogen.  Media  tersebut  disterilkan  di dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15  menit,  kemudian  dibiarkan  pada suhu  ruangan  sampai  media  memadat pada kemiringan 30 0 . Media agar miring digunakan untuk inokulasi mikroba.
d. Media Pembenihan dan Media Produksi Sebanyak  2  gram  glukosa,  0,5  gram polypeptone ,  0,05  gram  MgSO 4 .7H 2 O,
0,2  gram yeast  extract ,  0,1  gram KH 2 PO 4 ,  0,1  gram  agar  dilarutkan hingga  100  ml  aquades  menggunakan erlenmeyer dan diaduk sampai homogen dan  disterilkan.  Kemudian  isolat  jamur murni  diinokulasikan  ke  dalam  media pembenihan  dan dishaker di  dalam inkubator shaker selama 3x24 jam.
Sebanyak 4,5 gram sukrosa, 4,5 gram s tarch ,  1,5  gram extract  Malt ,  0,45 gram ebios ,  0,75  KH 2 PO 4 ,  0,075  gram MgSO 4 dilarutkan  hingga  150  ml
aquades  menggunakan  erlenmeyer  dan diaduk  sampai  homogen  dan  siterilkan. Kemudian  diinokulasikan  bibit  kultur dari  media  pembenihan  ke  media produksi    dan dishaker di  dalam inkubator shaker selama 7x24 jam.

## Pembuatan Larutan McFarland
Larutan  H 2 SO 4 1%  sebanyak  9,5  ml dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 1,75% sebanyak 0,5 ml dalam erlenmeyer. Dikocok sampai  terbentuk  larutan  yang  keruh. Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai  standar kekeruhan  suspensi  bakteri  uji  (Victor, 1980).
Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Mikroba yang telah diinokulasi diambil  dengan  jarum  ose  steril  kemudian disuspensikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  7  ml  larutan  NaCl  0.9%,  setelah  itu divortex hingga  diperoleh  kekeruhan  yang sama  dengan  larutan McFarland Perlakuan yang  sama  dilakukan  pada  jamur  uji (Dwyana et al ., 2012).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu antibiotik  kloramfenikol. Kontrol  negatif yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu menggunakan metanol, dengan cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil  sebanyak  200  μl  metanol kemudian ditotolkan pada paper disc.

## Isolasi  dan  Purifikasi  Jamur  yang Berasosiasi Dengan Spons
Isolasi  jamur  dilakukan  dengan  cara sampel dibersihkan dengan aquades kemudian dipotong
kecil-kecil menggunakan  gunting  dan  pinset  dan dimasukkan  ke  dalam  media  PDA  yang telah  disiapkan.  Sampel  ditanam    di  atas
media  PDA  dengan  tiga  titik  pusat  yang berbentuk segitiga. Cawan  petri yang berisi sampel ditutup dan direkatkan menggunakan parafilm,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruangan selama 7 x 24 jam.
Setelah didapatkan isolat jamur, dilakukan  pemurnian  dengan  cara  isolat jamur  diinokulasikan  ke  media  PDA  yang baru,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruangan  selama  14  x  24  jam.  Selanjutnya diidentifikasi  morfologi  secara makroskopik untuk menghasilkan isolat jamur murni.

## Fermentasi
Fermentasi  dilakukan  dengan  cara biakan  jamur  murni  yang  telah  diperoleh diinokulasikan  ke  dalam  labu  erlenmeyer yang  berisi  (2  gram  glukosa,  0,5  gram polypeptone ,  0,05  gram  MgSO 4 .7H 2 O,  0,2 gram yeast  extract ,  0,1  gram    KH 2 PO 4, dan 0,1  gram    agar  ditambahkan  100  ml aquades).  Labu  tersebut  kemudian  diaduk menggunakan  alat shaker pada  suhu  27 0 C dengan  kecepatan  120  rpm  selama  3  x  24 jam untuk memperoleh bibit kultur.
Setelah didapatkan bibit kultur, kemudian  dipindahkan  sebanyak  300  μl  ke media  produksi  yang  berisi  (4,5  gram sukrosa,  4,5  gram starch ,  1,5  gram ekstrak malt ,  0,45 Ebios ,  0,75  gram  KH 2 PO 4 ,  dan 0,075 MgSO 4 .7H 2 O dalam 150 ml aquades).
Labu tersebut kemudian diaduk menggunakan  alat shaker pada  suhu  27 0 C dengan  kecepatan  120  rpm  selama  7  x  24 jam.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Pada akhir hari ketujuh  setelah proses fermentasi, dilakukan ekstraksi pada campuran miselium jamur dan broth dengan menggunakan  200  ml  aseton.  Dilakukan
ekstraksi  pada  campuran  miselium  jamur dan  broth  dengan  menggunakan  aseton. Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan shaker pada suhu ruangan dengan kecepatan 150  rpm  selama  5  menit.  Selanjutnya dipisahkan  antara  fase  air  dan  aseton menggunakan  corong  pisah  dan  kertas saring.  Setelah  didaptkan  filtrat  dari  hasil penyaringan  kemudian  diuapkan  dengan rotary evaporator (Diah, 2016) .
Setelah  didapatkan  ekstrak  kental dari hasil  evaporasi,  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah  dan  ditamabahkan  pelarut  etil asetat  sebanyak  200  ml  setelah  itu  dikocok dalam  corong  pisah  sampai  homogen. Dibiarkan  sampai  terbentuk  lapisan  air  dan lapisan  etil  asetat.  Masing-masing  lapisan ditampung  pada  wadah  yang  berbeda. Lapisan  air  kemudian  difraksinasi  lagi menggunakan  pelarut  etil  asetat  sebanyak 200 ml. Hal ini dilakukan sebanyak tiga kali. Selanjutnya  fraksi  etil  asetat  dikumpulkan kemudian  pelarut  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sampai  diperoleh  ekstrak kasar  yang  akan  digunakan  untuk  uji aktivitas antimikroba.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  dengan  cara ditimbang  ekstrak  kasar  jamur  dari  spons Phyllospongia  lamellose sebanyak  1  mg, kemudian  dilarutkan  dalam  200  μl  CMC sehingga  menghasilkan  konsentrasi  larutan uji sebesar 250 μg/50 μl (Ortez, 2005).

## Pengujian aktivitas antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ),  aktivitas penghambatannya  diuji  terhadap S.  aureus ATCC 25923 (bakteri Gram positif), E. coli
ATCC 25922 (bakteri Gram negatif) dan C. albicans ATCC 1231 (jamur), yang digunakan sebagai mikroorganisme uji. Pada pengujian  aktivitas  antimikroba  ini,  cakram ( paper  disc) yang  digunakan  berukuran  6 mm  dengan  daya  serap  50  μl  tiap  cakram. Suspensi  mikroba  kemudian  diinokulasikan ke  dalam  media  dan  dihomogenkan. Kemudian  media  yang  telah  diinokulasi mikroba  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri dan  tunggu  sampai  media  mengeras. Masing-masing  cawan petri diberi  label  dan nomor  sampel  yang  sesuai.  Sampel  yang telah ditentukan konsentrasinya (250μg/50μl)  ditotolkan  pada  masing- masing cakram dengan menggunakan mikropipet.  Letakkan  kertas  cakram  yang telah ditotolkan sampel uji dengan pinset ke dalam  cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama 1x24  jam  untuk  masa  inkubasi  bakteri  dan 2x24 jam untuk masa inkubasi jamur (Ortez, 2005).
Pengamatan dan Pengukuran Zona
Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24 jam  masa  inkubasi  bakteri  dan  2x24  jam masa inkubasi jamur. Zona bening merupakan  petunjuk  kepekaan  mikroba terhadap bahan antimikroba yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan lebar  diameter  zona  hambat  (Vandepite, 2005).  Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  milimeter  (mm).  diameter  zona hambat yang terukur dikategorikan kekuatan daya  hambatnya  berdasarkan  penggolongan Davis and Stout, 1971.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi Spons
Hasil  identifikasi  yang  dilakukan  di program  studi  Biologi  Universitas  Sam Ratulangi  Manado  menunjukkan  bahwa, spons  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah Phyllospongia lamellose.

## Isolasi dan Fermentasi
Spons Phyllospongia  lamellose yang telah  ditanam  di  atas  media  PDA  dan diinkubasi  selama  7  x  24  jam  pada  suhu 27 o C  memperlihatkan  banyaknya  koloni berbentuk  kapas  yang  bertumbuh  disekitar sampel.  Diamati  hasil  isolat  jamur  yang pertumbuhan  koloninya  paling  dominan kemudian  diinokulasikan  ke  media  PDA baru untuk dilakukan pemurnian. Pemurnian isolat  jamur  bertujuan  untuk  memisahkan hasil  inokulasi  yang  terdiri  dari  banyak koloni yang berlainan jenis sehingga didapat koloni  murni  pada  setiap  cawan  petri (Hadioetomo,  1990).  Setelah  dilakukan pemurnian  selama  14  x  24  jam  didapatkan isolat  jamur  murni  yaitu  isolat  yang mengandung  satu  bentuk  morfologi  koloni yang  sama.  Isolat  jamur  murni  kemudian difermentasi dengan tujuan untuk memperbanyak mikroorganisme. Fermentasi isolat  jamur  murni  dilakukan  dengan fermentasi cair. Media fermentasi terdiri dari glukosa, polypeptone ,  MgSO 4 .7H 2 O, yeast extract ,  KH 2 PO 4 ,  pati, extract  Malt , ebios dimana semuanya merupakan sumber nutrisi untuk pertumbuhan jamur. Hal ini diperkuat dengan  pernyataan  oleh  Hadietomo  (1990), nutrien  dalam  media  pembenihan  harus mengandung  seluruh  elemen  yang  penting untuk  sintesis  biologik  organisme  baru. Proses  fermentasi  dilakukan  di  dalam inkubator shaker agar  media  pembenihan dan  media  produksi  tetap  homogen.  Suhu pada  inkubator  diatur  mengikuti  suhu
optimum  untuk  pertumbuhan  jamur  yaitu 25-35 0 C. Sebanyak 110 ml bibit kultur hasil fermentasi  dari  media  pembenihan,  diambil 300  µl  untuk  dipindahkan  ke  media produksi.  Hasil  yang  diapat  dari  media produksi  yaitu  120  ml  miselium  dan  broth jamur yang berwarna putih pucat.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstraksi  isolat  jamur  dari  spons Phyllospongia lamellose dimaksudkan untuk memisahkan  atau  menyaring  senyawa  aktif yang ada dalam bahan. Hal ini sesuai dengan prinsip  ekstraksi  pelarut  yaitu  dengan memisahkan  dua  komponen  atau  lebih berdasarkan  perbedaan  kelarutan  komponen tersebut  (Suryanto,  2012).  Ekstraksi  yang dilakukan  adalah  dengan  metode  maserasi, proses  maserasi  ini  dilakukan  dengan  cara perendaman  miselium  dan  broth  jamur dengan menggunkan pelarut aseton. Penggunaan  pelarut  aseton  ini  dikarenakan aseton  merupakan  pelarut  polar  dan  mudah menguap.  Aseton  yang  bersifat  polar  akan menarik senyawa yang bersifat polar sampai non  polar  (Sarastani et  al. ,  2002).  Setalah dimaserasi  selama  5  menit,  disaring  untuk memisahkan  miselium  dan  filtrat.  Filtrat yang didapat kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator . Penggunaan  alat  ini  bertujuan  untuk menguapkan pelarut dan memperoleh senyawa  hasil  ektraksi  yang  diinginkan. Hasil  dari  proses  ini  adalah  ekstrak  kental yang berminyak yang kemudian ditambahkan  pelarut  etil  asetat  untuk difraksinasi.  Tujuan  dilakukan  fraksinasi yaitu untuk memisahkan senyawa berdasarkan perbedaan keloparan. Fraksinasi dilakukan sebanyak tiga kali agar semuanya senyawa  yang  terkandung  dalam  sampel
dapat diambil dengan sempurna. Pelarut etil asetat  digunakan  untuk  menarik  senyawa yang  bersifat  semi  polar,  seperti  fenol, flavonoid,  terpenoid,  dan  steroid  yang memiliki sifat antibakteri tertinggi (Pambayun et  al., 2007;  Reskika,  2011).
Filtrat dari hasil fraksinasi dicampurkan dan diuapkan  mengunakan rotary  evaporator sehingga menghasilkan 58 mg ekstrak kasar.

## Pengujian aktivitas antimikroba
Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan dengan  metode  difusi  agar.  Metode  difusi agar dipilih karena memiliki kelebihan yaitu jumlah  zat  yang  digunakan  dapat  diatur, cepat,  mudah  dan  sederhana  (Valgas et  al., 2007).  Mikroba  uji  yang  digunakan  adalah S.  aureus ATCC  25923  mewakili  bakteri Gram positif, E. coli ATCC 25922 mewaliki bakteri Gram negatif, dan C. albicans ATCC 1231  mewakili  golongan  jamur.  Ketiga mikroba uji ini ada dalam tubuh manusia. S. aureus umumnya  ditemukan  pada  kulit, E. coli umumnya  ditemukan  di  usus,  dan C. albicans ditemukan  di  mulut  dan  area kelamin. Pengujian antimikroba ini bertujuan untuk mengetahui apakah terdapat aktivitas  antimikroba  dari  jamur  laut  yang berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia lamellose.
Tabel  1.  Rata-rata  Diameter  Zona Hambar (mm)
Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) Perlakukan
Mikroba Uji SA EC
CA
Ekstrak Etil Asetat
7 6 13,3 Kontrol Positif 10,2 10 21,3 Kontrol Negatif 0,00 0,00 0,00
Hasil  yang  didapatkan  dari  penelitian ini, yaitu adanya zona bening yang terbentuk disekitaran  kertas  cakram.  Pengukuran  zona hambat  dilakukan  dengan  cara  mengukur jarak  dari  tepi  kertas  cakram  ke  batas lingkaran zona hambat menggunakan jangka sorong  (ketelitian  0,01  mm)  pada  beberapa sisi  kertas  cakram,  lalu  dirata-ratakan. Berdasarkan kriteria Davis and Stout (1971) kategori  lemah  kurang  dari  5  mm,  kategori sedang 5 mm - 10 mm, kategori kuat 10 mm -  20  mm,  kategori  sangat  kuat  lebih  dari  20 mm. Dari  pengukuran  rata-rata  diameter zona  hambatnya  (Table  1.),  maka  daya antimikroba dari sampel spons Phyllospongia  lamellose pada  bakteri S. aureus ATCC  25923  sebesar  7  mm termasuk  dalam  kategori  sedang,  untuk bakteri E.  coli ATCC  25922  sebesar  6mm termasuk  dalam  kategori  sedang,  dan  untuk jamur C. albicans ATCC 1231 sebesar 13,3 mm termasuk dalam kategori kuat. Pengamatan pada zona hambat dilakukan 24 jam  masa  inkubasi  bakteri  uji  dan  48  jam masa inkubasi jamur.
Menurut  Mycek et  al. (2001),  suatu antimikroba bersifat bakteristatik dan fungistatik  jika  suatu  senyawa  antimikroba mampu  menghambat  pertumbuhan  mikroba jika  pemberian  secara  terus-menerus  dan
jika  penambahan  senyawa  dihentikan  atau habis  maka  pertumbuhan  mikroba  akan meningkat.  Bakterisidal  dan  fungisidal  jika suatu senyawa antimikroba mampu membunuh  dan  menghentikan  aktivitas fisiologis  dari  mokriba  uji    meskipun pemberian senyawa dihentikan.
Hasil  perhitungan  rata-rata  diameter zona  hambat  yang  dihasilkan,  isolat  jamur dari spons Phyllospongia lamellose menunjukan jamur C.  albicans ATCC 1231 (13,5mm)  memiliki  nilai  perhitungan  rata- rata  diameter  zona  hambat  yang  lebih  besar dibandingkan  dengan  bakteri S.  aureus ATCC  2592  (7  mm)  dan E.  coli ATCC 25922 (6 mm). Selanjutnya peneliti melakukan  pencarian  mengenai  penelitian yang  serupa  untuk  membandingkan  dengan penelitian  ini,  namun  tidak  ditemukan adanya penelitian tentang aktivitas antimikroba tetapi hanya ditemukan penelitian  tentang  aktivitas  antibakteri  dan antikanker.  Penelitian  oleh  Undap  (2016) dan  Dajoh  (2004)  menunjukan  adanya senyawa  aktif  dari Phyllospongia  lamellose yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri,  begitu  juga  dengan  penelitian  oleh Agus et  al., (2004)  menunjukan  adanya
aktivitas antikanker pada spons Phyllospongia lamellose.
Pengujian ini digunakan kontrol positif  dan  negatif.  Kontrol  positifnya digunakan antibiotik kloramfenikol.
Pemilihan  antibiotik  kloramfenikol  sebagai kontrol  positif  karena  merupakan  antibiotik bakteriostatik  berspektrum  luas  yang  aktif terhadap  Gram  positif  maupun  negatif (Katzung, 2004). Penggunaan kontrol positif berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  hambat yang  terbentuk.  Dari  hasil  menunjukan
diameter  zona  hambat  dari  kontrol  positif pada  bakteri S.  aureus ATCC  2592  (10,2 mm)  termasuk  dalam  kategori  kuat, E.  coli ATCC  25922  (10  mm)  termasuk  dalam kategori  kuat,  dan  untuk  jamur C.  albicans ATCC  1231  (21,3  mm)  termasuk  dalam kategori  sangat  kuat.  Kontrol  negatif  yang digunakan  yaitu  metanol,  menunjukkan tidak  adanya  zona  hambat  pada  pengujian terhadap  bakteri S.  aureus ATCC  2592, E. coli ATCC  25922,  dan  jamur C.  albicans ATCC  1231.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa  kontrol  yang  digunakan  tidak berpengaruh  pada  uji  antimikroba,  sehingga daya hambat yang terbentuk tidak dipengaruhi  oleh  pelarut  melainkan  karena aktivitas  senyawa  yang  ada  pada  spons Phylospongia lamellose . Penggunaan metanol  sebagai  kontrol  negatif  diperkuat dengan penelitian oleh Ginting (2010), yang menyatakan bahwa kontrol metanol pada uji antibakteri tidak menunjukan adanya aktivitas  sehingga  dapat  dipastikan  bahwa metanol tidak berpengaruh terhadap aktivitas yang terbentuk.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa, jamur  laut  yang  berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia  lamellose memiliki  aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri S.  aureus (7 mm)  termasuk  kategori  sedang ,  E.  coli (6 mm) termasuk kategori sedang dan jamur C. albicans (13,3 mm) termasuk kategori kuat.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan aktivitas  antimikroba  jamur  laut  yang berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia
lamellose ini  perlu  dilakukannya  penelitian lebih  lanjut  untuk  identifikasi  jenis  dan senyawa  kimia  antimikroba  yang  terdapat dalam  jamur  laut  yang  berasosiasi  dengan spons Phyllospongia lamellose.

## DAFTAR PUSTAKA
Agus,  T.,  Ambariyanto.,  Retno,  M.  2004. Skrining  bahan  anti  kanker  pada berbagai  jenis  spons  dan  gorgonian terhadap  L1210 Cell  Line . Jurnal  Ilmu Kelautan . 9 (3) : 120-124.
Dajoh, O. 2004. Pengujian aktivitas antibakteri  dari  spons  di  perairan  selat lembeh. Manado: Skripsi FPIK UNSRAT.
Davis,  W.W.,  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc
Plate Methods of Microbiological Antibiotic Assay. Journal Microbiology . 22 ( 4 ): 659 – 665.
Diah  Prawita  Sari,  N.  P.  2016.  Aktivitas Antimikroba Jamur Endofid Penicillium oxalicum dari Spons Genus Hamoxinella. [Skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Erlangga,
Surabaya.
Dwyana,  Z  dan  Johanes  E.  2012.  Uji Efektifitas  Esktrak  Kasar  Alga  Merah Eucheuma  cottoni Sebagai  Antibakteri Terhadap  Bakteri  Patogen  [Skripsi]. Program  Studi  Biologi  Universitas Hassanudin, Makassar.
Ginting, E. L., Warouw, V., Suleman, R. W.
Aktivitas  Antibakteri  Dari  Ekstrak Kasar Bakteri Yang Berasosiasi Dengan Sponge Acanthostrongylophora sp.
[skripsi].  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu
Kelautan  Universitas  Sam  Ratulangi,
Manado
Hadioetomo.  1990.  Mikrobiologi  umum.
Gadjah Mada University
Press.
Yogyakarta.
Hunt,  B.,  and  A.C.J.  Vincent.  2006.  Scale and sustainability of marine bioprospecting  for  pharmaceu-ticals. Ambio, 35(2):57-64.
Katzung,  Betram  G.  2004. Farmakologi Dasar dan Klinik edisi 4. Alih Bahasa :
Staf Dosen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya. Jakarta : EGC. : 709-719.
Kohlmeyer  J,  Kohlmeyer  E  .  1979.  Marine mycology: The Higher Fungi. Academic Press, New York.
Mycek,  M.J.,  Harvey,  R.A.,  Champe,  P.C., Fisher,  B.D.  2001.  Farmakologi  Ulasan Bergambar:  Obat-obat  Antijamur.  Edisi 2. Jakarta: Widya Medika. pp. 341-7.
Nuraina.  2015.  Uji  Aktivitas  Antimikroba Ekstrak Daun Gracinia benthami pierre dengan Metode Dilusi. [Skripsi]. Program  Studi  Farmasi  UIN  Syarif Hidaytullah. Jakarta.
Oretz,  J.  H.  2005.  Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  coyle  (Coord.  Ed). American  society  for  microbiologr. Amerika.
Pambayun,  R.  ,  Gardjito,  M.,  Sudarmadji, S., Kuswanto, K. R.,. 2007. Kandungan Fenol  dan  Sifat  Antibakteri  dari Berbagai  Jenis  Ekstrak  Produk  Gambi r (Uncaria gambir Roxb.) , Majalah Farmasi Indonesia 18(3), 141-146.
Proksch, P., R.A. Edrada and R. Ebel. 2002. Drugs  from  the  Seas  –  Current  Status and Microbiological Implications. Appl. Microbiol.  Biotechnol.59  :  125-124 hlm.
Sarastani  D,    Soekarto  ST,  Muhchtadi  TR, Fardiaz  D,  Apriyantono  A.  2002. Aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi ekstrak biji antung (Parinarium
glaberrimum). Jurnal  Teknologi  dan Industri Pangan . 13( 2 ).
Sastroasmoro,
S. 2005. Using
Cyprofloxantin  in  Indonesia.  Indonesia
HTA. 1-28 hlm.
Suryanto,  E.  2012.  Fitokimia  Antioksidan.
Penerbit Putra Media Nusantara.
Surabaya.
Undap, N. 2016. Senyawa antibakteri spons Smenospongia  aurea,  Strepsichordaia sp., Angelas tubulata dan Phyllospongia sp., dari  perairan  pantai  malalayang manado  terhadapat  pertumbuhan  stain bakteri.  Tessis.  Manado:  Pasca  Sarjana Universitas Sam Ratulangi.
Valgas,  C.,  Souza,  S.M.D.,  Smania,  E.F.A, and Artu, S. 2007. Screening methods to determine antibacterial activity of natural  products. Brazilian  Journal  of
Microbiology , 38, p. 369-380.
Victor,  L.  1980.  Antibiotics  in  Laboratory
Test. The wiliam and Wilknia Company. USA.
Wiese  J,  Birgit  Ohlendorf,  Martina  Blümel,
Rolf  Schmaljohann  and  Johannes  F. Imhoff. 2011. Phylogenetic Identification of Fungi Isolated from the Marine  Spons  Tethyaaurantium  and Identification of Their Secondary Metabolites.Mar. Drugs.9 ; 562 – 564