Majalah Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
Formulasi  Nanopartikel  Kurkumin  dengan  Teknik  Gelasi  Ionik Menggunakan Kitosan, Tripolifosfat dan Natrium Alginat serta Uji Stabilitasnya Secara In Vitro
Suryani *1 , Wahyuni 1 , Dian Ariastika 1 , Rahmanpiu 2
1 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232
2 Program Studi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Halu Oleo Kendari 93232

## Abstrak
Kurkumin  merupakan  senyawa  obat  yang  memiliki  potensi  cukup  besar  sebagai  antioksidan,  antiinflamasi,  antimikroba  dan antikarsinogenesis,  namun  terkendala  oleh  sifat  kurkumin  yang  sukar  larut  dalam  air  sehingga  menyebabkan  rendahnya bioavailibilitas di dalam sirkulasi sistemik. Untuk mengatasi permasalahan tersebut dilakukan formulasi kurkumin dalam bentuk nanopartikel menggunakan polimer kitosan, suatu derivat dari kitin yang dapat diperoleh dari limbah cangkang kepiting maupun udang.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan  formulasi  nanopartikel  kurkumin  dengan  teknik  gelasi  ionik  menggunakan kitosan,  tripolifosfat  (TPP)  dan  natrium  alginate  serta  mengevaluasi  stabilitas  nanopartikel  secara in  vitro .  Karakterisasi nanopartikel  yang  dilakukan  meliputi  uji  efisiensi  penjerapan,  penentuan  ukuran  partikel  dan  zeta  potensial  menggunakan  alat Particle  Size  Analyzer dan  pengamatan  morfologi  menggunakan  alat Transmission  Electron  Microscopy (TEM).  Stabilitas nanopartikel kurkumin secara in vitro menggunakan cairan lambung buatan dan cairan usus buatan dan hasilnya diperoleh dengan menghitung pelepasan kurkumin dari nanopartikel. Hasil penelitian menunjukkan formula nanopartikel paling baik mengandung komposisi kurkumin 0,01%; kitosan 0,02%; tripolifosfat 0,01%; dan natrium alginat 0,02%. Efisiensi penjerapan kurkumin dalam nanopartikel  berkisar  86,60%  -  93,21%,  ukuran  partikel  rata-rata  693,8  nm  dan  zeta  potensial  +15,13  mV.  Hasil  pengamatan morfologi memperlihatkan partikel berbentuk bulat dengan permukaan yang tidak rata. Nanopartikel diketahui lebih stabil di dalam cairan usus buatan dibandingkan dalam cairan lambung buatan. Hal ini mengindikasikan nanopartikel kurkumin sangat potensial untuk dikembangkan sebagai sistem penghantaran obat yang efektif.
Kata kunci : nanopartikel kurkumin, kitosan, gelasi ionik, natrium alginat, stabilitas

## 1. Pendahuluan
Kurkumin  adalah  senyawa  kurkuminoid  yang diisolasi  dari Curcuma  longa .  Kurkumin  merupakan senyawa  obat  yang  memiliki  potensial  klinik  cukup besar.  Kurkumin  telah  memperlihatkan  aktivitas antioksidan, antiinflamasi, antimikroba dan antikarsinogenesis. Kurkumin memperlihatkan absorbsi yang  buruk,  metabolisme  dan  eliminasi  yang  cepat sebagai  alasan  utama  rendahnya  bioavailabilitas senyawa polifenol ini [1].
Untuk  meningkatkan aplikasi potensialnya dalam hal klinis, beberapa strategi formulasi telah dikembangkan.  Salah  satu  formulasi  yang  dapat dilakukan  adalah  nanopartikel.  Uji  farmakokinetik
* KBK Farmasetika dan Teknologi Farmasi, Fakultas Farmasi UHO Email: suryanisuere@gmail.com
menunjukkan  bahwa  formulasi  nanopartikel  secara signifikan meningkatkan bioavailabilitas kurkumin [2].
Nanopartikel  kurkumin  telah  berhasil  diformulasi menggunakan polimer, salah satunya adalah kitosan [3]. Kitosan  merupakan  biopolimer  alam  dan  mudah diperoleh  dari  proses  deasetilasi  senyawa  kitin  pada cangkang  binatang Crustaceae seperti  rajungan  dan udang.  Kitosan  bersifat  non  toksik,  biodegradabel, biokompatibel, dan bersifat mukoadhesif [4].
Teknik  gelasi  ionik  adalah  teknik  utama  untuk interaksi  ionik  menggunakan  kitosan  sebagai  senyawa polikation.  Pada  teknik  gelasi  ionik,  nanopartikel  juga dibentuk  oleh  suatu  senyawa  polianion  misalnya tripolifosfat  [5].  Kombinasi  nanopartikel  kitosan  dan
Suryani, dkk: Formulasi Nanopartikel Kurkumin dengan Teknik Gelasi Ionik Menggunakan Kitosan, Tripolifosfat, dan Natrium Alginat, serta Uji Stabilitasnya Secara In Vitro
TPP  telah  dibuat  untuk  membuat  sistem  penghantaran nanopartikel  kurkumin  dan  nanopartikel  yang  dibuat memiliki  kestabilan  yang  baik  [6].  Senyawa  polianion yang  juga  telah  digunakan  dalam  sistem  penghantaran nanopartikel  adalah  natrium  alginat.  Enkapsulasi  oleh alginat  memberikan  perlindungan  dan  stabilitas  di sepanjang  saluran  pencernaan  sehingga  meningkatkan jumlah obat dalam sirkulasi [7].
Hingga  saat  ini  formulasi  nanopartikel  kurkumin masih terus dikembangkan. Pada penelitian ini dilakukan formulasi  nanopartikel  kurkumin  dengan  teknik  gelasi ionik  menggunakan  kitosan,  tripolifosfat  dan  natrium alginat dengan harapan dapat meningkatkan karakteristik fisik nanopartikel yang terbentuk sehingga meningkatkan  bioavailabilitas  kurkumin  untuk  tujuan klinis.

## 2. Metode

## 2.1 Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah kurkumin murni (Merck), kitosan (Laboratorium Kimia Fisik,  Fakultas  MIPA  UHO),  etanol  p.a.  (Merck), natrium alginat (teknis), tripolifosfat (teknis), CH 3 COONa  (teknis),  asam  asetat  glasial  (teknis),  etil asetat (Merck), etanol 96% (teknis), HCl 37% (Merck), NaCl  (Sigma-Aldrich),  NaOH  (Merck),  K 2 HPO 4 (Merck)  dan  akuades.  Alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  antara  lain  spektrofotometer  UV-Vis (Jenway  6800), shaker  incubator (Stuart  SI500), sentrifuge  (Boeco  Zentrifugen  D-78532),  timbangan analitik (Precisa XB 220A), vortex mixer (Stuart SA8), hotplate and magnetic stirrer (Stuart CB162), pH meter (Jenway 370), mikropipet (Smart Gen-nex) dan alat-alat gelas  (Pyrex).  Formulasi  dilakukan  di  Laboratorium Teknologi  Farmasi  Fakultas  Farmasi  UHO.  Penentuan ukuran partikel dan zeta potensial menggunakan Particle Size Analyzer (PSA) Delsa TM Nano Submicron Particle Size and Zeta Potential Analyzer (Beckman Coulter) di Balai  Penelitian  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia (BP-LIPI)  Jakarta.  Pengamatan  morfologi  nanopartikel menggunakan  alat Transmission  Electron  Microscopy (JEOL  JEM  1400)  Universitas  Gadjah  Mada  (UGM) Yogyakarta.
2.2 Pembuatan nanopartikel kurkumin .
Sebanyak  2,5  mL  larutan  kurkumin  0,01%  dalam etanol 96% dicampurkan dengan 2,5 mL larutan kitosan dalam buffer asetat pH 4 (variasi konsentrasi 0,02% dan 0,04%),  kemudian  dilakukan  pencampuran  dan pengecilan  ukuran  menggunakan  alat magnetic  stirrer . Setelah  pencampuran  berlangsung  selama  5  menit, larutan TPP dalam akuades (variasi konsentrasi 0,01%- 0,03%)  sebanyak  2,5  mL  dan  larutan  natrium  alginat
dalam  akuades  (variasi  konsentrasi  0,01%-0,06%) sebanyak  2,5  mL  dimasukkan  ke  dalam  campuran tersebut. Pencampuran dan pengecilan ukuran menggunakan  alat magnetic  stirrer kembali  dilakukan selama 5 menit. Etanol kemudian diuapkan dan setelah itu preparat disimpan selama 1 minggu untuk mengamati sistem dispersi yang stabil sebagai formula terpilih.

## 2.3 Uji efisiensi penjerapan nanopartikel
Efisiensi  penjerapan  kurkumin  dalam  kompleks kitosan – TPP – alginat dilakukan menggunakan metode ekstraksi.  Sebanyak  3x7,5  mL  formula  nanopartikel diendapkan  dengan  sentrifugasi  pada  kecepatan  6.000 rpm selama 45 menit lalu ditambahkan etil asetat hingga volume  14  mL.  Kurkumin  bebas  (tak  terjerap  dalam kompleks  kitosan  –  TPP  –  alginat)  dalam  supernatan diekstraksi  dengan  cara  dicampur  menggunakan  alat vortex  mixer selama  1  menit.  Fase  etil  asetat  diukur absorbansnya  menggunakan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  416  nm  untuk  mengetahui kandungan kurkumin bebas.

## 2.4 Penentuan ukuran partikel dan zeta potensial
Penentuan  ukuran  partikel  dan  zeta  potensial dilakukan  untuk  mengetahui  ukuran  nanopartikel  yang diperoleh  dan  mengetahui  muatan  permukaan  partikel. Penentuan ukuran partikel dan zeta potensial dilakukan pada  suhu  25 0 C  dengan  indeks  refraksi  1,3332; viskositas  0,8878  cP;  dan  intensitas  penghamburan 4.466 cps. Dua tetes sampel nanopartikel dimasukkan ke dalam kuvet dan ditambahkan 5 mL akuades. Kemudian sampel ditentukan ukuran partikelnya menggunakan alat Delsa TM Nano  Submicron  Particle  Size  and  Zeta Potential Analyzer.

## 2.5 Pengamatan morfologi nanopartikel
Sampel nanopartikel diteteskan pada kisi tembaga kemudian  dilapisi  karbon  dengan  alat Auto  Carbon Coated (JOEL JEC-560) selama 5 detik dan dikeringkan pada  suhu  ruang  selama  24  jam.  Selanjutnya  kisi tembaga  dimasukkan  ke  dalam holder dan  sampel dianalisis  dengan  percepatan  voltasi  120  kV  dan magnifikasi 40.000.
2.6 Uji stabilitas in vitro menggunakan cairan lambung buatan dan cairan usus buatan
Uji  stabilitas in  vitro dilakukan  untuk  melihat kestabilan  nanopartikel  dalam  kondisi  asam  lambung dan  basa  usus.  Formula  nanopartikel  diinkubasi  dalam cairan lambung buatan (0,2% NaCl; 0,26% HCl; H akhir 1,2)  dan  cairan  usus  buatan (0,68%  K 2 HPO 4 ;  0.15% NaOH; pH 7,4) Sebanyak 7,5 mL formula nanopartikel
Suryani, dkk: Formulasi Nanopartikel Kurkumin dengan Teknik Gelasi Ionik Menggunakan Kitosan, Tripolifosfat, dan Natrium Alginat, serta Uji Stabilitasnya Secara In Vitro
dimasukkan  ke  dalam  93  mL  cairan  lambung/usus buatan. Kemudian sampel diinkubasi dengan alat shaker incubator pad suhu 37 o C dan kecepatan pengadukan 100 rpm. Sampel diambil tiap jam selama 4 jam pada cairan lambung buatan dan 5 jam pada cairan usus buatan. Tiap pengambilan sampel adalah 3 x 4 mL. Kurkumin bebas dalam  sampel  diekstraksi  dngan  4  mL  etil  asetat menggunakan vortex  mixer. Fase  etil  asetat  diukur aborbansnya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 416 nm.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1 Formulasi nanopartikel kurkumin
Penelitian diawali dengan melakukan uji pendahuluan  terhadap  formula  nanopartikel  kurkumin. Konsentrasi  kurkumin  yang  digunakan  adalah  0,01%. Penggunaan konsentrasi kurkumin ini berdasarkan pada hasil  penelitian  sebelumnya,  dimana  nanopartikel  yang mengandung  kurkumin  0,01%  memiliki  stabilitas selama  penyimpanan  yang  paling  baik  [6].  Pada  uji pendahuluan ini parameter yang diamati adalah stabilitas fisik  nanopartikel  berupa  jumlah  endapan  yang terbentuk.  Hasil  pengamatan  terhadap  stabilitas nanopartikel selama 7 hari menunjukkan formula dengan perbandingan  konsentrasi  kurkumin  :  kitosan  :  TPP  : natrium alginat sebesar 0,01% : 0,02% : 0,01% : 0,01% (A1),  0,01%  :  0,02%  :  0,01%  :  0,02%  (A3),  0,01%  : 0,02% : 0,02% : 0,01% (B1) dan 0,01% : 0,02% : 0,02% :  0,02%  (B3),  merupakan  formula  yang  stabil  selama penyimpanan.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan  sedikitnya jumlah  endapan  yang  terbentuk.    Hasil  pengamatan menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi kitosan dan TPP, maka semakin banyak endapan yang terbentuk. Hal  ini  mungkin  disebabkan  karena  pada  konsentrasi kitosan yang tinggi, partikel-partikel yang terbentuk dari interaksi ionik antara kitosan dan TPP sangat banyak dan padat  sehingga  bergerombol  membentuk  agregat menjadi  partikel  berukuran  besar  [8].  Peningkatan jumlah  TPP  maka  kelebihan  TPP  akan  menghasilkan interaksi  ionik  antar  nanopartikel  sehingga  membentuk nanopartikel berukuran besar [9]. Peningkatan konsentrasi natrium alginat juga menunjukkan peningkatan jumlah endapan. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh You dkk. (2006), bahwa nanopartikel  yang  mengandung  kitosan  dan  natrium alginat  akan  saling  berinteraksi  melalui  gerak  Brown untuk membentuk gumpalan [10].

## 3.2 Efisiensi penjerapan nanopartikel
Efisiensi  penjerapan  adalah  jumlah  obat  yang terjerap di dalam nanopartikel. Sistem nanopartikel yang baik  adalah  nanopartikel  yang  memiliki  efisiensi penjerapan yang tinggi. Efisiensi penjerapan yang tinggi
sangat menguntungkan karena dapat mengangkut cukup obat pada sel target dan meningkatkan waktu kontak obat [11].
Gambar  1. Efisiensi  penjerapan  nanopartikel  kurkumin dengan  perbandingan  konsentrasi  kurkumin  :  kitosan  :  TPP  : natrium alginat 0,01% : 0,02% : 0,01% : 0,01% (A1), 0,01% : 0,02% : 0,01% : 0,02% (A3), 0,01% : 0,02% : 0,02% : 0,01% (B1) dan 0,01%: 0,02% : 0,02% : 0,02% (B3)
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa nanopartikel  menghasilkan  nilai  efisiensi  penjerapan yang cukup tinggi yaitu berkisar antara 86,60% - 93,21% ( Gambar 1 ). Efisiensi penjerapan bergantung pada jenis obat  dan  interaksi  obat-polimer  [7].  Kurkumin merupakan senyawa dengan muatan parsial negatif yang dapat  mengalami  interaksi  ionik  lemah  dengan  muatan positif  kitosan  [1].  Oleh  karena  itu  kurkumin  dapat terjerap  dalam  matriks  polimer  dan  menghasilkan efisiensi penjerapan yang besar.

## 3.3 Ukuran dan zeta potensial nanopartikel
Ukuran partikel juga dapat mempengaruhi muatan obat,  pelepasan  obat  dan  stabilitas  nanopartikel  [12]. Nilai  indeks  polidispersitas  dari  distribusi  ukuran partikel  digunakan  sebagai  parameter  keseragaman ukuran. Jika indeks polidispersitas mendekati 1, kisaran ukuran  semakin  lebar  [11].  Zeta  potensial  adalah potensial  elektrik  yang  berkaitan  dengan  mobilitas partikel.  Zeta  potensial  umumnya  digunakan  untuk mengkarakterisasi sifat muatan permukaan nanopartikel. Hal  ini  penting  untuk  mengevaluasi  stabilitas  fisik, menentukan  keefektifan  lapisan  permukaan  atau adsorbsi obat pada nanopartikel [13].
Tabel 2. Ukuran  partikel  dan  zeta  potensial  formula  A3 (kurkumin  0,01%;  kitosan  0,02%;  TPP  0,01%; natrium alginat 0,02%) Ukuran Partikel Indeks Polidispersitas Zeta Potensial 693,8 nm 0,535 +15,13 mV
82 84 86 88 90 92 94 A1 A3 B1 B3 E fi si e n si P e n je r a p a n ( % ) Formula Nanopartikel
Suryani, dkk: Formulasi Nanopartikel Kurkumin dengan Teknik Gelasi Ionik Menggunakan Kitosan, Tripolifosfat, dan Natrium Alginat, serta Uji Stabilitasnya Secara In Vitro
Hasil  pengamatan  ukuran  partikel  dan  indeks polidispersitas  menunjukkan  bahwa  nanopartikel  yang diperoleh  berukuran  cukup  kecil  (<1.000  nm)  dan memiliki  keseragaman  ukuran  yang  cukup  baik  atau distribusi  ukuran  yang  cukup  pendek  (<1).  Hasil pengukuran zeta potensial nanopartikel kurkumin (Tabel 1)  adalah  +15,13  mV.  Nilai  zeta  potensial  dipengaruhi oleh komposisi partikel [12]. Pada permukaan partikel, muatan  positif  kitosan  dan  muatan  negatif  TPP  dan natrium  alginat  mengalami  interaksi  ionik.  Hal  ini menyebabkan  jumlah  gugus  amin  bebas  kitosan  yang bermuatan  positif  berkurang,  sehingga  zeta  potensial nanopartikel kecil namun tetap bernilai positif.

## 3.4 Morfologi nanopartikel
Morfologi permukaan mempengaruhi kemampuan nanopartikel  untuk  menembus  membran  sel  target. Permukaan  nanopartikel  yang  bulat  lebih  mudah memasuki sel [13].
Gambar  2. Morfologi  nanopartikel  kurkumin  formula  A3 (kurkumin 0,01%; kitosan 0,02%; TPP 0,01%; natrium alginat 0,02%) perbesaran 40.000x
Berdasarkan pengamatan morfologi menggunakan Tranmission Electron Microscopy (TEM) pada Gambar 2 ,  diketahui  nanopartikel  berbentuk  cenderung  bulat namun  permukaannya  tidak  rata.  Bentuk  permukaan partikel  yang  dibuat  dengan  metode  gelasi  ionik dipengaruhi oleh parameter proses antara lain kecepatan pengadukan dan jumlah senyawa polianion [14].

## 3.5 Stabilitas in vitro nanopartikel kurkumin
Kestabilan nanopartikel dalam saluran cerna dapat diketahui  dengan  melakukan  uji  stabilitas in  vitro menggunakan  cairan  lambung  buatan  dan  cairan  usus buatan.    Uji  stabilitas in  vitro nanopartikel  diperlukan untuk mengetahui apakah nanopartikel dapat melindungi obat dari kondisi asam lambung dan basa usus, terlihat pada banyaknya jumlah nanopartikel  yang  masih  stabil tiap  satuan  waktu.  Hasil  uji  stabilitas  memperlihatkan bahwa nanopartikel kurang stabil dalam cairan lambung
buatan (Gambar 3a ) dibandingkan dengan di cairan usus buatan (Gambar 3b ).
(a)
(b)
Gambar  4. Stabilitas  nanopartikel  kurkumin  pada  cairan lambung buatan (a); dan cairan usus buatan (b); A1 (kurkumin 0,01%;  kitosan  0,02%;  TPP  0,01%;  alginat  0,01%);  A3 (kurkumin 0,01%; kitosan 0,02%; TPP 0,01%; alginat 0,02%); B1  (kurkumin  0,01%;  kitosan  0,02%;  TPP  0,02%;  alginat 0,01%) dan B3 (kurkumin 0,01%; kitosan 0,02%; TPP 0,02%; alginat 0,02%)
Ikatan ionik antara kitosan dan senyawa polianion dalam cairan lambung buatan (pH 1,2) mudah rusak atau terlepas  sehingga  penghambatan  pelepasan  obat  dari nanopartikel  cukup  rendah  [14].  Kitosan  yang  mudah larut  dalam  pH  asam  menyebabkan  erosi  membran polimer kitosan dan mempermudah pelepasan kurkumin dari nanopartikel. Nanopartikel memiliki stabilitas yang tinggi pada cairan usus buatan (pH 7,4) disebabkan oleh ikatan ionik antara kitosan dan senyawa polianion tahan terhadap pH netral maupun basa lemah [15].

## 4. Kesimpulan
Penjerapan nanopartikel berkisar 86,60% - 93,21%, ukuran partikel rata-rata 693,8 nm; zeta potensial +15,13 mV dengan komposisi kurkumin 0,01%; kitosan 0,02%; tripolifosfat  0,01%;  dan  natrium  alginat  0,02%, menunjukkan kurkumin sangat potensial untuk dikembangkan  sebagai  sistem  penghantaran  obat  yang efektif.
0 10 20 30 40 50 60 70 0 2 4 6 % n a n o p a r ti k e l lama inkubasi (jam) A1 A3 B1 B3 0 20 40 60 80 100 120 0 2 4 6 % n a n o p a r ti k e l lama inkubasi (jam) A1 A3 B1
B3
Suryani, dkk: Formulasi Nanopartikel Kurkumin dengan Teknik Gelasi Ionik Menggunakan Kitosan, Tripolifosfat, dan Natrium Alginat, serta Uji Stabilitasnya Secara In Vitro

## Ucapan terima kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Dikti atas  pendanaan  terhadap  penelitian  ini  melalui  skim Hibah Bersaing tahun 2013-2014.

## Daftar Pustaka
1. Mishra VK, Mohammad G, Mishra SK. Downregulation of  Telomerase  Activity  May  Enhanced  by  Nanoparticle Mediated  Curcumin  Delivery. Digest  J.  of  Nano. Biostruct. , 2008, 3 ; 163-169.
2. Cheng KK, Yeung CF, Ho SW, Chow, SF, Chow AHL, Baum  L.  Highly  Stabilized  Curcumin  Nanoparticles Tested in an In Vitro Blood – Brain Barrier Model and in Alzheimer’s Disease Tg2576 Mice, AAPS Journal , 2012, 15(2) ; 324-335.
3. Kim TH, Jiang HH, Youn YS, Park CW, Tak KK, Lee S, Kim  H,  Jon  S,  Chen  X  and  Lee  KC.  Preparation  and characterization of water-soluble-albumin-bound curcumin nanoparticle with improved antitumor activity. Int. J. Pharm, 2012, 403 ; 285-291.
4. Qi LF, Xu ZR, Li Y, Jiang X, Han XY. In vitro effects of chitosan  nanoparticles  on  proliferation  of  human  gastric carcinoma cell line MGC803 cells. World J. Gastro , 2005, 11(33) ; 5136-5141.
5. Tiyaboonchai  W,  Chitosan  nanoparticles:  a  promising system  for  drug  delivery, Naresuan  University  Journal, 2003, 11(3) , 51-66.
6. Suryani,  Martien  R,  Ismail  H.  Preparation  of  Curcumin Nanoparticles and Cellular Uptake Study on HeLa Cells, Proceeding International Seminar Latest Trends In Food, Biological  and  Ecological  Science ,  Dubai  October  11- 12 th , 2015;13-17.
7. Ahmad  Z,  Pandey  R,  Sharma  S,  Khuller  GK.  Alginate
Nanoparticles  as  Antituberculosis  Drug  Carriers:
Formulation Development, Pharmacokinetics and Therapeutic Potential, The Indian J. of Chest Diseases & All. Sci. , 2006, 48 ; 171-176.
8. Mardliyati  E,  Muttaqien  SE,  Setyawati  DR,  Rosidah  I, Sriningsih.  Preparasi  dan  Aplikasi  Nanopartikel  Kitosan sebagai  Sistem  Penghantaran  Insulin  secara  Oral, Prosiding  Pertemuan  Ilmiah  Ilmu  Pengetahuan  dan Teknologi  Bahan  2012 ,  Jakarta,  29-30  November  2012; 25-30.
9. Stoica  R,  Somoshi  R,  Ion  RM. Preparation  of  Chitosan- Tripolyphosphate Nanoparticles of the Encapsulation on Polyphenol Extracted from Rose Hips, Digest J. of Nano. Biostruc. , 2013, 8(3) ; 955-963.
10. You JO, Liu YC, Peng CA. Efficient Gene Transfection Using  Chitosan–Alginate  Core-Shell  Nanoparticles. Int. J. of Nanomed. , 2006, 1(2) ; 173–180.
11. Ranjan AP, Mukerjee A, Helson L, Vishwanatha K. Scale Up, Optimization and Stability Analysis of Curcumin C3 Complex-Loaded Nanoparticles for Cancer Therapy, J. of Nanobiotech. , 2012, 10(38) ; 1-18.
12. Mohanraj UJ, Chen Y. Nanoparticles, A Review, Trop. J. of Pharm. Res. , 2006, 5 ; 561-573.
13. Guterres  SS,  Alves  MP,  Pohlmann  AR.  Polymeric Nanoparticles;  Nanospheres  and  Nanocapsules  for Cutaneosus Applications, Drug Target Insights, 2007, 2 ; 147–157.
14. Rijal  MA,  Mikail  A,  Sari  R.  Pengaruh  pH  Larutan Tripolifosfat  Terhadap  Karakteristik  Fisik  serta  Profil Pelepasan  Mikropartikel  Teofilin-Chitosan, Majalah Farmasi Airlangga , 2010, 8(2) ; 28-33.
15. Diab  R,  Jaafar-Maalej  C,  Fessi  H,  dan  Maincent  P. Engineered  Nanoparticulate  Drug  Delivery  System:  the Next  Frontier  for  Oral  Administration. AAPS ,  2012, 14(4) ; 688-702