UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BUAH Psidium guajava L, Melaleuca leucadendron L, Capsicum frutescens L, dan Anethum graveolens L DENGAN METODE DPPH BESERTA PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTALNYA
ANTIOXIDANT ACTIVITY ASSAY OF ETHANOL EXTRACT OF Psidium guajava L, Melaleuca leucadendron L, Capsicum frutescens L, and Anethum graveolens L FRUIT BY DPPH METHOD WITH DETERMINATION OF TOTAL PHENOLIC CONTENT
Rosita Melannisa, Ika Trisharyanti D.K., Andi Suhendi, Muhammad Da’i * , Arief Ilham Kusuma Atmaja Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta abulathfi@gmail.com

## ABSTRAK
Antioksidan  alami  dari  luar  tubuh  diperlukan  untuk  mencegah  munculnya  penyakit  karena terpapar  oleh  radikal  bebas  yang  berlebih.    Buah Psidium  guajava L, Melaleuca  leucadendron L, Capsicum  frutescens L  dan Anethum  graveolens L  diketahui  memiliki  kandungan  fenolik  dan flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk melihat korelasi antara kandungan  fenolik  total  dengan  aktivitas  antioksidannya.  Aktivitas  antiradikal  ditentukan  dengan menggunakan  metode  DPPH  kemudian  dihitung  nilai  Inhibitory  Concentration  (IC 50 )  yaitu konsentrasi  sampel  yang  mampu  menghambat  50%  radikal  DPPH.    Kandungan  fenol  ditetapkan dengan menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu dan dihitung sebagai GAE (Gallic Acid Equivalent). Hasil  penelitian  menunjukkan ekstrak etanol  buah  Psidium guajava L,  Melaleuca leucadendron  L, Capsicum frutescens L dan Anethum graveolens L memiliki nilai IC 50 berturut-turut 167,347; 6,074; 139,801;  dan  237,984  µg/mL.    Sedangkan  nilai  GAE  berturut-turut  23,73;  257,34;  21,44;  11,78 mg/g sampel. Nilai koefisien korelasi antara kandungan fenolik dengan aktivitas antioksidan adalah R 2 =  0,847,  yang  menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  buah  yang  diuji 84,7% merupakan kontribusi dari senyawa fenolik.
Kata  kunci: Antioksidan  DPPH, Psidium  guajava L, Melaleuca  leucadendron L, Capsicum frutescens L, Anethum graveolens L, Fenolik Total

## ABSTRACT
The  body  need  natural  antioxidants  from  outside    to  prevent  it  from  the  disease  caused  by exposure  of  excerssive  free  radical. Psidium  guajava L, Melaleuca  leucadendron L, Capsicum frutescens L, and Anethum graveolens L fruits are know contain phenolic and flavonoids that acts as antioxidants.  The aims of this study  to know the correlation between the phenolic content with antioxidant  activity.  Radical  activity  is  determined  by  DPPH  method.  The  content  of  phenols  is determined by using Folin-Ciocalteu reagent and calculated as GAE (Gallic Acid Equivalent).  The results  show  that  the  ethanol  extract  Psidium  guajava  L,  Melaleuca  leucadendron  L,  Capsicum frutescens  L,  and  Anethum  graveolens  L  fruits  has  IC 50 value  167.347;  6.074;  139.801;  and 237.984 µg/mL consecutively.  While the value of GAE 23.73; 257.34; 21.44; 11.78 mg / g sample consecutively.  The correlation coefficient between phenolic content with antioxidant activity is R 2 = 0.847,  which  is  indicated  that  84.7%  of  the  antioxidant  acativity  of  the  ethanol  extract  of  the  fruit were tested contribute by the phenolic compounds.
Key  words :  Antioxidant  DPPH, Psidium  guajava L, Melaleuca  leucadendron L, Capsicum frutescens L, Anethum graveolens L, Total Phenolic

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  sekelompok zat  kimia  yang  sangat  reaktif  karena  memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. Radikal bebas merupakan produk normal dari proses metabolisme (Hariyatmi, 2004) atau dapat terbentuk dari luar tubuh  (Langseth,  1995).    Radikal  bebas
berperan  penting  pada  kerusakan  jaringan  dan proses patologi dalam organisme hidup (Velazquez et al ., 2003).
Senyawa  antioksidan  memiliki  peran yang sangat penting dalam kesehatan. Karakter  utama  senyawa  antioksidan  adalah kemampuannya  untuk  menangkap  radikal bebas  (Prakash,  2001 cit Amrun et  al .,  2007).
Antioksidan merupakan zat yang dapat menetralkan  radikal  bebas,  atau  suatu  bahan yang  berfungsi  melindungi  sistem  biologi  tubuh dari  efek  merugikan  proses  reaksi  yang menyebabkan  oksidasi  berlebihan  (Hariyatmi, 2004).
Antioksidan  tambahan  dari  luar  atau antioksidan eksogen, seperti Vitamin E, Vitamin C  maupun  berbagai  jenis  sayuran  dan  buah- buahan  diperlukan  untuk  menetralkan  radikal dalam  tubuh  (Soeksmanto et  al .,  2007). Beberapa penelitian menyebutkan bahwa antioksidan alami dihubungkan dengan keberadaan  senyawa-senyawa  fenolik  dan flavonoid  (Zou et  al., 2004 cit Montoro et al., 2005).
Indonesia adalah negara yang kaya akan sayuran  dan  buah-buahan,  sebagian  besar sayuran  dan  buah-buahan  di  Indonesia  bisa dimanfaatkan  sebagai  sumber  obat  alam. Beberapa  tanaman  antara  lain:  Jambu  biji ( Psidium  guajava Linn),  Kayu  putih  ( Melaleuca leucadendron L),  Cabe  rawit  ( Capsicum frutescens L),  Adas  ( Anethum  graveolens L). Jambu  biji  mengandung  senyawa  fenolik seperti  mirisetin  dan  apigenin  (Miean  dan Mohamed,  2001 cit Thaipong et  al .,  2006), ellagic  acid ,  dan  antosianin  (Misra  dan Seshadri,  1968).    Kayu  putih  mengandung saponin,  flavonoida  dan  tanin,  di  samping minyak  atsiri  (Thomas, 1992).    Cabe  rawit mengandung  kapsaisin,  kapsantin,  karotenoid, alkaloid  asiri,  resin  (Anomin,  2005).  Adas mengandung 50-60 persen anetol, lebih kurang 20  persen fenkon,  pinen,  limonen,  dipenten, felandren,  metilchavikol ,  anisaldehid,  asam anisat.
Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian terhadap korelasi aktivitas antioksidan  dan  kandungan  fenolik  ekstrak etanol  buah Psidium  guajava Linn, Melaleuca leucadendron L, Capsicum  frutescens L  dan Anethum graveolens L.

## BAHAN DAN METODE ANALISIS
Bahan  yang  digunakan  yaitu  ekstrak etanol  buah Psidium  guajava L, Melaleuca leucadendron L, Capsicum  frutescens L  dan Anethum  graveolens L  dari  Fakultas  Farmasi UMS,  DPPH,  etanol p.a. ( E.Merck ),  etanol teknis . ( E.Merck ),  alumunium  foil,  vitamin  E ( Sigma Co .), natrium bikarbonat( E.Merk), aquabidestillata.

## Uji Aktivitas Antikosidan
Sejumlah  larutan  sampel  ekstrak  etanol buah Psidium guajava Linn, Melaleuca leucadendron L, Capsicum  frutescens L  dan Anethum  graveolens L  serta  vitamin  E  dengan volume  tertentu,  ditempatkan  dalam  labu  takar 5,0 mL.    Sampel selanjutnya ditambah dengan 700 µL DPPH 0,4 mM dan ditambah etanol p.a hingga  tanda.  Campuran  tersebut  divorteks selama  30  detik  dan  diinkubasi  selama  30 menit.
Absorbansi  sampel  diukur  terhadap blangko  yang  terdiri  dari  sejumlah  larutan  stok sampel  dalam  etanol  pada max .  Selain  itu, dibandingkan  dengan  kontrol  yang  terdiri  dari 700  µL  DPPH  0,4  mM  dalam  etanol p.a . Dihitung  %  aktivitas  antiradikal.  Dibuat  kurva regresi  linier  antara  konsentrasi  melawan  % aktivitas  antiradikal.  Didapatkan  rumus  regresi linier  dan  ditentukan  konsentrasi  sampel  pada aktivitas 50%. Percobaan uji aktivitas antiradikal direplikasi sebanyak tiga kali. Setiap sekali percobaan, pembuatan stok dan pengenceran sampel dibuat pembacaan duplo.

## Penentuan Kandungan Fenolik
Larutan stok
ekstrak
Melaleuca
leucadendron L  dibuat  menjadi  konsentrasi 0,1% sedangkan untuk ekstrak Psidium guajava L, Capsicum  Frutescens L  dan Anethum Graveolens L dibuat menjadi konsentrasi  0,5%  dan  diambil  100  µL  stok sampel, kemudian direaksikan seperti pada OT, kemudian  didiamkan  selama  OT  dan  diamati absorbansinya pada max . Penentuan dilakukan dengan  replikasi  3  kali  dan  pembacaan  duplo. Nilai  yang  diperoleh  merupakan  ekuivalensi miligram  asam  galat  tiap  gram  ekstrak  ( Gallic Acid Equivalent / GAE).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antiradikal ditentukan dari kemampuan  sampel  uji  untuk  merubah  warna ungu  dari  DPPH  menjadi  warna  kuning  pada panjang gelombang maksimalnya.  Pembacaan absorbansi terhadap perubahan warna dilakukan pada waktu tertentu yang memberikan  kesempatan  yang  cukup  untuk berlangsungnya  reaksi  antara  DPPH  dan senyawa  antiradikal  atau  biasa  disebut  dengan waktu inkubasi.
Berdasarkan
hasil
pengukuran didapatkan waktu  inkubasi 30-34 menit, sedangkan panjang gelombang yang
digunakan adalah 517,6 nm. Hasil penangkapan radikal bebas DPPH oleh ekstark uji dan vitamin E disajikan dalam Gambar 1.
Gambar 1- Perbandingan IC 50
(M) Melaleuca leucadendron L, (V) Vitamin E, (C) Capsicum frutescens L, (P) Psidium  guajava L  dan  (A) Anethum  graveolens L, semakin  rendah  nilai  IC 50 maka  semakin  kuat  aktivitas antioksidannya.
Perbedaan  aktivitas  antioksidan  dari ekstrak  yang  diuji  bisa  dikarenakan  perbedaan kandungan  kimia  dari  tiap  ekstrak.  Aktivitas antiradikal  dari  ekstrak  etanol  buah Psidium guajava L, Melaleuca leucadendron L, Capsicum frutescens L, dan Anethum graveolens L  dapat  dikarenakan  jenis  dan kandungan  senyawa-senyawa  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  seperti  fenolik.    Untuk mengetahui hubungan antara kandungan fenolik  dengan  aktivitas  antioksidan  maka dilakukan  uji  kandungan  fenolik  total  dalam sampel.

## Penentuan Kandungan Fenolik
Penetapan kandungan fenolik total dilakukan  dengan  menggunakan  pereaksi Folin-Ciocalteu.  Pereaksi  tersebut  digunakan karena  dapat  bereaksi  dengan  semua  jenis senyawa fenolik.  Penetapan kandungan fenolik total  dilakukan  pada  panjang  gelombang maksimal 742,5 nm dan operating time- nya 40- 55 menit.
Berdasarkan hasil pengujian kandungan fenolik ekstrak  uji,  menunjukkan  bahwa  kandungan fenolik ekstrak buah Melaleuca leucadendron L (257,34  mg/g  sampel)  lebih  besar  dari  pada ekstrak  buah Psidium  guaj L(23,73  mg/g sampel), Capsicum  frutescens L  (21,44  mg/g sampel),  dan Anethum  graveolens L  (11,78 mg/g sampel) (Gambar 2).
Gambar  2- Kandungan  Fenolik  total  (M) Melaleuca leucadendron L,  (P) Psidium  guajava L,  (C) Capsicum frutescens L  dan  (A) Anethum  graveolens L,  konsentrasi stok 0,1% untuk M dan 0,5% untuk ( P , C dan A ).
Korelasi Kandungan
Fenolik dengan Aktivitas Antioksidan
Hasil penetapan aktivitas antioksidan dari ekstrak  etanol  buah Melaleuca  leucadendron L memiliki aktivitas yang paling besar, kandungan fenolik  total  dari  ekstrak  buah Melaleuca leucadendron L  juga  paling  tinggi.    Sedangkan ekstrak  etanol  buah Anethum  graveolens L memiliki  aktivitas  antioksidan  paling  rendah, kadar  fenolik  total  ekstrak Anethum  graveolens L paling kecil jika dibandingkan dengan sampel yang lain. Berdasarkan hasil penelitian diketahui  bahwa  semakin  tinggi  kandungan fenolik  maka  akan  memberikan  aktivitas antioksidan yang semakin besar.
Hubungan  antara  kandungan  senyawa fenolik  total  ekstrak  etanol  buah Psidium guajava L,  Melaleuca leucadendron, Capsicum frutescens L,  dan Anethum  graveolens L dengan  nilai  IC 50 -nya  mempunyai  koefisien korelasi  R 2 =  0,847  (y=  -0,478  +  196,6) (Gambar 3).
0 50 100 150 200 250 6.074 M 12.43 V 139.801 C 167.347 P 237.984 A IC 5 0 µ g/ m L Sampel 0 50 100 150 200 250 300 M 257.34 P
23.73
C 21.44 A 11.78 GA E ( m g/ g s a m pel) Sampel
Gambar  3- Hubungan  antara  kandungan  fenolik  dengan  aktivitas  antioksidan  Ekstrak  Etanol  Buah Psidium  guajava L, Melaleuca leucadendron L, Capsicum frutescens L dan Anethum graveolens L.
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  84,7% aktivitas  antiradikal  ekstrak  etanol  buah  yang diuji merupakan kontribusi dari senyawa fenolik yang terkandung di- dalamnya seperti kuersetin, guajavarin,
asam
galat, leukosianidin,  dan  asam  elagat  pada  buah Psidium guajava L (Sudarsono, 2002), Kapsaisin pada Capsicum frutescens L (Anonim,
2005),
dihidrokapsaisin, homokapsaisin nor- dihidrokapsaisin dan homodihidro-  kapsaisin  (German  Commission E, 1990 cit Wakhyulianto, 2005). Aktivitas
antioksidan
Melaleuca
leucadendron L berasal dari senyawa, Picetanol atau Astringinin (Tsuruga, et al., 1991 cit Bavaresco et  al. ,  2002),  yang  diketahui mempunyai aktivitas antioksidan dan penangkap  radikal  bebas  (Fauconneau et  al. , 1997 cit Bavaresco et al. , 2002), flavonoida dan tannin  (Thomas, 1992).  Berdasarkan  penelitian Zhang dan Lin (2009) tannin yang diekstrak dari buah Syzygium cumini mempunyai kemampuan dalam  menangkap  radikal  DPPH,  hasil  ini
menunjukkan bahwa tannin mempunyai kemampuan  sebagai  pendonor  proton  dan dapat  berperan  sebagai  penghambat  atau panangkap radikal bebas.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol
buah
Melaleuca leucadendron L  memiliki  aktivitas  antioksidan (IC 50 =  6,074  µg/mL), Capsicum  frutescens L (IC 50 =  139,801  µg/mL), Psidium  guajava L (167,347  µg/mL), Anethum  graveolens L (237,984  µg/mL).  Kandungan  fenolik  ekstrak buah Melaleuca leucadendron L (GAE = 257,34 mg/g  sampel), Psidium  guajava L  (23,73  mg/g sampel), Capsicum  frutescens L  (21,44  mg/g sampel),  dan Anethum  graveolens L  (11,78 mg/g sampel).
Terdapat  korelasi  sebesar  84,7%  antara kandungan  fenolik  dengan  aktivitas  antiradikal, dimana  semakin  tinggi  kandungan  fenolik dalam  sampel  semakin  tinggi  pula  aktivitas antioksidannya.

## DAFTAR PUSTAKA
Amrun.,  M.H,  Umiyah.,  Evi  U.U.,  2007,  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Air  dan  Ekstrak  Metanol beberapa Varian Buah Kenitu ( Chrysophyllum cainito L.) dari Daerah Jember, Berk. Penel. Hayati , Vol 13, Hal 45, Bagian Biologi Farmasi, Program Studi Farmasi Universitas Jember, Jember.
Anonim,
2005, Antioksidan
dan Radikal Bebas, (online), http://www.chem-is- try.org/?sect=artikel&ext=81, diakses tanggal 11 Mei 2006.
Bavaresco,  L.,  Fregoni,  M.,  Trevisan,  M.,  Mattivi,  F.,  Vrhovsek,  U  and  Falchetti,  R,  2002,  The Occurrence of The Stilben Piceatannol in Grapes, Vitis 41, (3), 133.
Fauconneau,  B.,  Waffo-Teguo,  R.,  Huguet,  F.,  Barrier,  L.,  Decendit,  A.,  Merillon,  J.M,  1997, Comparative  Study  of Radical  Scavenger and  Antioxidant Properties of  Phenolic Compound from Vittis vinevera Cell Cultures using In vitro Test, Life Sci, 61, 2103-2110.
German Commission E, 1990, http: //www.wrc.Net /wrcnet_content/herbalresources /materiamedica/Cayenne.htm
Anethum graveolens L Capsicum frutescens L Psidium guajava L Melaleuca leucadendron L y = -0,7483x + 196,64 R² = 0,8472 0 50 100 150 200 250 0 50 100 150 200 250 300 IC 50 (µ g/ m L) Kandungan Fenolik (% GAE) Series1 Linear (Series1)
Hariyatmi , 2004, Kemampuan Vitamin E sebagai Antioksidan terhadap Radikal Bebas pada Lanjut Usia, MIPA Vol. 14, No. 1 , Januari 2004, Jurusan Pendidikan Biologi FKIP UMS, Surakarta.
Langseth,  L.,  1995, Oxidants,  Antioxidans,  and  Disease  Prevention, International  Life  Sciences Institutes (ILSI) Europe, Belgium.
Miean,  K.H.,  Mohamed,  S.,  2001,  Flavonoid  (Myricetin,  Quarcetin,  Kaemfenol,  Luteolin,  and Apigenin) Content of Edible Tropical Plants, Journal of Agricultural and Food Chemistry 49, 3106- 311.
Misra,  K.,  Seshadri,  T.R.,  1968,  Chemical  Components  of  the  Fruit  of Psidium  Guajava. Phytochemistry 7 , 641-645.
Montoro  P,  Braca  A,  Pizza  C,  Tommasi  N.D,  2005,  Structure  Antioxidant  Activity  Relationship  of Flavonoid Isolated from Different Plant Specie s . J Food Chemistry , 92, 349-55.
Prakash, A., 2001, Antioxidant Activity, Heart of Giant Recource , Vol 19, No.2.
Soeksmanto,  A.,  Yatri,  H.,  Partomuan,  S.,  2007,  Kandungan  Antioksidan  pada  Beberapa  Bagian Tanaman  Mahkota  Dewa, Phaleria  macrocarpa (Scheff)  Boerl.  (Thymelaceae), Biodiversitas, Volume 8 Nomor 2, Hal 92-93.
Sudarsono., Gunawan, D., Wahyuono, S., Argodonatus, I., dan Purnomo, 2002, Tanaman Obat II : Hasil  Penelitian,  sifat-sifat,  dan  penggunaan,  156-160, Pusat  Studi  Obat  Tradisional  UGM, Yogyakarta.
Thaipong,  Kriengsak.,  Boonprakob,  Unaroj.,  Crosby  Kevin.,  Cisneroz-Zevallos,  Luis.,  Byrne, Hawkins,  D.,  2006,  Comparison  of  ABTS,  FRAP,  and  ORAC  assays  for  estimating  antioxidant activity from guajava fruit extracts, Journal of Food and Analysis, 19 (2006) 669-675.
Thomas, A.N.S., 1992, Tanaman Obat Tradisional , Kanisius, Yogayakarta, 56-58.
Tsugura,  T.,  Chun,  Y.T,  Ebizuka,  Y.,  Sankawa,  U,  1991,  Biologically  Active  Constituent  of Melaleuca  luecadendron L:  Inhibitor  of  Induced  Histamin  Realease  from  Rat  Mast  Cell, Chem Pharm Bull , 39, 3276-3278.
Velazquez,  E.,  Tournie, HA.,  Buschiazzo  Mordujovich  de,  P.,  Saavedra,  G.,  Schinella,  GR,  2003, Antioxidant Activity of Paraguayan Plant Extract, Fitoterapia , 74, 91-97.
Zhang, L.L., and Lin, Y.M, 2009, Antioxidant Tannin from Syzygium cumini Fruit, African Journal of Biotechnology, Vol 8, (10), 2301-2309.
Zou Y., Lu Y., Wei D., 2004, Antioxidant Activity of Flavonoid Rich Extratc of Hypericum perforatum L In Vitro, J Agric Food Chem 52: 5032-9.