## Pengaruh Vitamin D3 Terhadap Glukosa Darah Tikus Wistar Yang Dipapar Asap Rokok
Lolita Putri Nanda Utami 1 , Hetti Rusmini 2* , Yessi Nurmalasari 3 , Dessy Hermawan 4
1 Program Studi Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas Malahayati, putrilolita4@gmail.com 2 Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Malahayati, hettirusmini@gmail.com 3 Depatemen Gizi Fakultas Kedokteran Universitas Malahayati,  yesinurmalasari.dr@gmail.com
4 Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Malahayati, hermawan.dessy@gmail.com

## ABSTRAK
Rokok merupakan masalah kesehatan terbesar yang dihadapi dunia. Nikotin dalam rokok terbukti mengakibatkan resistensi  insulin  dan  dapat  menurunkan  sekresi  insulin  pada  sel  β  pankreas  yang  menyebabkan  kadar  glukosa darah  meningkat.  Salah  satu  upaya  untuk  menurunkan  kadar  glukosa  darah  ialah  dengan  mengkonsumsi  vitamin D3. Vitamin D3 merupakan prohormon yang berperan dalam fungsi metabolik didalam sel dan memperbaiki fungsi sel. Tujuan: Mengetahui pengaruh vitamin D3 terhadap glukosa darah tikus wistar jantan yang dipapar asap rokok. Metode:  Penelitian  eksperimental  murni  pre  and  post  test  with  control  group  design.  Sampel24  ekor  tikus  jantan dibagi  mejadi  4 kelompok yaitu  K1  merupakan  kelompok  yang  tidak  dipapar asap  rokok  dan  tidak diberi  vitamin D3,  K2  merupakan  kelompok  yang  dipapar  asap  rokok  namun  tidak  diberi  vitamin  D3,  K3  merupakan  kelompok yang tidak dipapar asap rokok namun diberi vitamin D3 dosis 0,2 µgr/ekor, P1 merupakan kelompok yang dipapar asap  rokok  dan  diberi  vitamin  D3  dosis  0,2  µgr/ekor.Hasil:  Uji  Paired  T-test  menunjukkan  peningkatan  glukosa darah yang bermakna (p<0,05) pada kelompok K2 (p=0,018) dan P1 (p=0,035). Uji One-way Anova menunjukkan terdapat perbedaan kadar glukosa darah yang bermakna antar kelompok dengan nilai (p=0,001). Analisis statistik Post Hoc LSD menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna pada kelompok K1 dengan K2 (p=0,004), kelompok K1  dengan  K3  (p=0,038),  kelompok  K1  dengan  P1  (p=0,038),  kelompok  K2  dengan  K3  (p=0,000),  kelompok  K2 dengan P1 (p=0,004). Kesimpulan:  Vitamin D3 dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus putih  wistar  jantan yang dipapar asap rokok.
Kata Kunci : Asap Rokok, Glukosa Darah, Vitamin D3

## ABSTRACT
Cigarettes are the biggest health problem around the world. Nicotine in cigarettes has been proved insulin receptor resistance and can reduce insulin secretion in pancreatic β cells, which causes an increase in blood glucose levels. One of the efforts to reduce blood glucose levels is to consume vitamin D3. Vitamin D3 is a prohormone that plays a role in metabolic functions in cells and repair functions of cells. Purpose: to know the effect of vitamin D3 toward glucose  blood  level  of  male  Rattus  norvegicus  Wistar  exposed  by  cigarette  smoke.  Methods:  This  research conducted  with  pure  experimental  pre-  and  post-test  with  control  group  design.  The  samples  used  were  24  male rats.  The  sample  divided  into  four  groups,  including  K1,  K2,  K3,  and  P1.  K1,  which  is  not  exposed  by  cigarette smoke  and  not  given of  vitamin  D3.  K2  is  a  group  exposed  by  cigarette  smoke  but  not  given  vitamin  D3.  K3  is  a group that is not exposed by cigarette smoke but given vitamin D3 a dose of 0.2 µgr /head. P1 is a group exposed by cigarette  smoke  and  given  a  vitamin  D3  dose  of  0.2  µgr  /head.  Results:  Paired  T-test  showed  increased  blood glucose  levels  that  are  meaningful  (p<0,05)  In  groups  K2  (p=0,018)  and  P1  (p=0,035).  One-way  Anova  showed there  were  differences  in  blood  glucose  levels  that  are  meaningful  between  groups  (p=0,001).  Statistical  analysis Post Hoc LSD showed significant differences in group K1 with K2 (p=0,004), group K1 with K3 (p=0,038), group K1 with P1  (p=0,038), group K2 with K3 (p=0,000),  group K2 with P1  (p=0,004). Conclusion: Vitamin D3 can reduce fasting blood glucose levels of Rattus norvegicus exposed by cigarette smoke.
Keywords : Cigarette smoke, Blood Glucose, Vitamin D3
* Korespondensi Author: Hetti Rusmini, Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Malahayati, hettirusmini@gmail.com, Telp. 0811724161

## I. PENDAHULUAN
Rokok  merupakan  masalah  kesehatan terbesar yang dihadapi dunia, merokok
membunuh lebih dari tujuh juta orang pertahun, aktif  maupun  pasif 1 .  Indonesia  merupakan negara  dengan  jumlah  perokok  ketiga  terbesar
setelah  Cina  dan  India.  Pada  tahun  2013 penduduk  indonesia  yang  merokok  33%  dari jumlah penduduk Indonesia secara keseluruhan 2 . Lampung  adalah  salah  satu  provinsi  dengan jumlah  kasus  perokok  yang  cukup  tinggi. Berdasarkan  data  dari  Riset  Kesehatan  Dasar (Riskesdas) 2013, lampung merupakan urutan ke 7 dari 33 provinsi yang ada di Indonesia setelah Riau  (27,2%),  Bengkulu  dan  Jawa  Barat (27,1%),  Nusa  Tenggara  Barat  dan  Gorontalo (26,8%), dan Bangka Belitung (26,7%). 3
Rokok sebagai salah satu produk olahan tembakau  yang  memberikan  dampak  negatif terhadap  kesehatan.  Hampir  seluruh  organ manusia  yang  terpapar  asap  rokok  mengalami gangguan  fungsi  bermakna.  Misalnya  paru-paru akan mengalami degradasi fungsi paru, gangguan  fungsi  jantung,  gangguan  fungsi pankreas, bahkan dapat menurunkan kemampuan organ reproduksi berupa impotensi. Rokok  mengandung  bermacam-macam  zat beracun yang dapat menganggu kesehatan tubuh dan  bahkan  bisa  mengakibatkan  kematian. Berikut  ini  merupakan  sebagian  zat  yang terkandung  di  dalam  rokok  dan  berpengaruh merusak  proses  metabolisme  tubuh  yaitu nikotin, gas karbon monoksida, nitrogen oksida, tar, dan gas amoniak. 4
Nikotin  dalam  rokok  telah  terbukti mengakibatkan  resistensi  reseptor  insulin  dan dapat  menurunkan  sekresi  insulin  pada  sel  β pankreas  yang  menyebabkan  kadar  glukosa darah  meningkat. 5,6 Selain  itu  merokok  dapat menganggu  proses  metabolisme  glukosa  secara langsung.  Mekanisme  ini  belum  dipahami sepenuhnya  namun  diduga  namun  diduga  stress oksidatif  yang  ditimbulkan  oleh  zat-zat  dalam rokok  meningkatkan  kadar  hormon  epinefrin dan  norefinefrin.  Lepasnya  hormon  tersebut akan mempengaruhi saraf simpatis dan meningkatkan laju glukoneogenesis dan glikogenolisis. 7,8
Salah  satu  prohormon  yang  berperan dalam  fungsi  metabolik  di  dalam  sel  adalah vitamin  D. 9 Vitamin  D  berperan  penting  dalam kontrol  glikemik.  Vitamin  D  mengontrol  aliran kalsium melalui membran di sel β pankreas dan
jaringan  perifer  target  insulin.  Vitamin  D  juga memicu  ekspresi  reseptor  insulin  sehingga meningkatkan tanggapan insulin terhadap transport  glukosa  dan  memperbaiki  inflamasi melalui efek langsung pada sitokin. Pada dua uji klinis  dengan  pasien  intoleransi  glukosa, suplementasi  vitamin  D  dapat  memperbaiki resistensi insulin. 10
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Shab- Bidar et  al., asupan  vitamin  D3  berhubungan signifikan dengan kadar glukosa darah. Hubungan  tersebut  diamati  dari  adanya  suatu hubungan  terbalik  antara  total  asupan  vitamin D3 dan konsentrasi glukosa darah. 11 Berdasarkan  fakta  dan  teori  di  atas,  diperlukan kajian  penelitian  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian  vitamin  D3  terhadap  kadar  glukosa darah pada tikus putih ( Rattus norvegicus) galur Wistar jantan yang dipapar asap rokok.

## II. METODOLOGI
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  murni  dengan  menggunakan rancangan  penelitian pre  and  post  test  with control  group  design .  Penelitian  ini  dilakukan pada bulan Juli - Agustus 2019 setelah mendapat persetujuan laik etik dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan  (KEPK)  Universitas  Malahayati. Tempat pemeliharaan hewan coba dan pemberian  perlakuan  dilakukan  di  Balai Veteriner  Lampung.  Dan  tempat  pemeriksaan kadar  glukosa  darah  dilakukan  di  Laboratorium Rumah Sakit Pertamina Bintang Amin Husada.
Unit  eksperimen  dalam  penelitian  ini adalah  tikus Rattus  norvegicus galur Wistar . Kriteria  sampel  inklusi  yaitu  tikus Rattus norvegicus  strain  wistar ,  jenis  kelamin  jantan, umur  10-12  minggu,  berat  badan  150  gram  – 200  gram,  sehat  ditandai  dengan  bergerak  aktif dan  rambut  tidak  mudah  rontok.  Variabel independepen  pada  penelitian  ini  adalah pemberian  vitamin  D3  dan  paparan  asap  rokok sedangkan  variabel  dependen  adalah  kadar glukosa darah.
Sampel  penelitian  sebanyak  24  ekor yang  dipilih  secara  acak  dan  dibagi  kedalam  4 kelompoksesuai  dengan  rumus  federer  dan
menggunakan  prinsip  3R  sesuai  dengan  etik penelitian  laboratorium  untuk  menghindari terjadinya  kriteria  eksklusi  yang  meliputi Replacement, Reduction dan Refinement . Replacement adalah  mengganti  hewan  dengan organ  atau  jaringan  yang  diperoleh  dari  Rumah Potong  Hewan  (RPH)  atau  mengganti  dengan hewan  yang  lebih  rendah  ordonya,  atau mengganti  hewan  dengan  kultur/  jaringan  atau dengan  program  komputer. Reduction adalah mengurangi  penggunaan  hewan  coba  dengan tetap  memberikan  hasil  yang  valid  atau  sahih. Refinement adalah  mengurangi  stress  atau  rasa nyeri  dengan  prosedur  yang  benar  dan  orang yang terlatih, serta bila memungkinkan menggunakan metoda non invasif 12 .
Penelitian  ini  menggunakan  alat-alat  : kandang,  kawat  penutup,  botol  minum,  tempat pakan,  handscoon,  masker,  kapas,  kertas tissue , pompa  balon,  neraca  digital, chamber induksi, tabung  mikrohematokrit,  tabung  darah,  spuit  1 cc, alat tulis, spektofotometer, tabung eppendorf, sentrifuge ,  dan microtube .  Dan  bahan-bahan  : tikus  putih  ( Rattus  novergicus galur Wistar) jantan , rokok kretek (Tar 39 mg dan nikotin 2,5 mg),  vitamin  D3  300.000  IU,  serbuk  kayu, aquades, pakan Comfeed BR 2, dan ketamine . Prosedur  penelitian  diawali  dengan persiapan  hewan  coba.  Tikus  diperoleh  dari Palembang  Tikus  Centre.  Tikus  dipelihara  di Balai  Veteriner  Lampung.  Pada  awal  penelitian tikus  diaklimatisasi  selama  7  hari,  tersedia  air minum dan pakan yang cukup serta diperhatikan kebersihan kandang dan pergantian sekam setiap 2  hari  sekali.Kemudian  tikus  dibagi  menjadi  4 kelompok  perlakuan  yaitu  kelompok  kontrol  1, kontrol  2,  kontrol  3,  dan  kelompok  perlakuan 1.Dimana  kelompok  kontrol  1  merupakan kelompok  tikus  yang  tidak  dipapar  asap  rokok dan tidak diberi vitamin D3, kelompok kontrol 2 merupakan  kelompok  tikus  yang  hanya  dipapar asap rokok saja, kelompok kontrol 3 merupakan kelompok  tikus  yang  hanya  diberi  vitamin  D3 dengan  dosis  0,2  µg/ekor,  dan  kelompok perlakuan  1  merupakan  kelompok  tikus  yang dipapar  asap  rokok  dan  diberi  vitamin  D3 dengan dosis 0,2 µg/ekor.
Perlakuan paparan asap rokok dilakukan menggunakan chamber induksi yaitu alat khusus yang dirancang untuk penelitian ini. Mekanisme kerjanya  hewan  coba  ditempatkan  ke  dalam kotak  pengasapan  yang  di  dalamnya  telah terdapat  jeruji  pembatas  untuk  memisahkan hewan  coba  dengan  ujung  rokok  yang  terbakar, sehingga  hewan  coba  dapat  secara  langsung terkena  paparan  asap  rokok  tersebut. Chamber induksi  memiliki  empat  lubang,  dimana  fungsi lubang tersebut untuk memasukkan ujung rokok yang dibakar dan sebagai jalan arus pengeluaran asap  yang  dipaparkan.  Adapun  asap  rokok dihembuskan  berulang  kali  dengan  pompa  gas sampai  rokok  habis  terbakar.  Penelitian  ini dilakukan  selama  14  hari,  dengan  paparan  asap rokok  dilakukan  pada  pukul  14.00  sebanyak  8 batang  rokok  kretek  (tar  39  mg  dan  nikotin  2,5 mg) selama 30 menit.
Pemberian  vitamin  D3  diinjeksikan secara  IM  ( Intra  Muscular )  sebanyak  0,2 µg/ekor  yang  dilarutkan  menggunakan  minyak zaitun.  Pengambilan  darah  dilakukan  dua  kali yaitu pada hari ke-8 untuk pretest dan hari ke-15 untuk posttest .  Tikus  diinjeksikan ketamine secara  IM  dibagian  posterolateral  paha  tikus dengan  dosis  0,2  cc/100  grBB  sebagai  anastesi. Tikus  penelitian  dipuasakan  selama  10-12  jam namun  tetap  diberikan  minum ad  libitum , pengambilan darah pada tikus dilakukan melalui sinus  retro-orbitalis .  Tikus  dikondisikan  dalam keadaan  senyaman  mungkin  dengan  dipegang dan dijepit pada bagian tengkuk.Kemudian pada Canthus  medialis yaitu  bagian  di  bawah  bola mata  digores  dengan  menggunakan  tabung mikrohematokrit  sampai  mengenai vena  retro orbitalis. Sampel  darah  yang  keluar  ditampung dalam microtube sebanyak  3  ml.  Disentrifugasi darah yang telah ditampung dalam tabung reaksi pada  tahap  sebelumnya  dengan  kecepatan  5000 rpm selama 5 menit.
Pengukuran  kadar  glukosa  darah diukur dengan pemeriksaan laboratorium menggunakan metode  GOD-PAP  dengan  rentang  nilai  GDP normal tikus 50-135 mg/dL. Tempat pemeriksaan  kadar  glukosa  darah  dilakukan  di
Laboratorium  Rumah  Sakit  Pertamina  Bintang Amin Husada.
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan  SPSS.  Dilakukan  uji  normalitas dan  homogenitas  menggunakan saphiro  wilk karena sampel <50. Kemudian  uji paired T-test untuk menganalisis perbedaan nilai sebelum dan sesudah perlakuan  jika data terdistribusi normal dan  menggunakan Wilcoxon jika  data  tidak terdistribusi normal. Kemudian dianalisis menggunakan  uji  komparatif One  Way  ANOVA apabila  data  terdistribusi  normal,  apabila  tidak terdistribusi  normal  dianalisis  menggunakan Kruskal-Wallis .  Dilanjutkan  uji Post  Hoc untuk
menganalisis  perbedaan  rerata  antar  kelompok, sehingga  dapat  diketahui  kelompok  yang  paling berpengaruh perbedaannya 13 .

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar glukosa darah diperiksa menggunakan  mesin  spektofotometer  dengan hasil  pengukuran  dinyatakan  dalam  satuan gr/dL.  Sebelumnya  darah  di  homogenkan dengan centrifuge dengan  kecepatan  5000  rpm selama  5  menit.  Darah  diambil  sebanyak  2  kali yaitu  sebelum  tikus  dipapar  asap  rokok  dan diberi vitamin D3, dan setelah tikus dipapar asap rokok dan diberi vitamin D3 selama 14 hari.

## Tabel 1. Karakteristik sampel
Masa penelitian Karakteristi k K1 K2 K3 P1 Sebelum dipapar asap rokok dan diberi vitamin D3 Jenis tikus Rattus norvegicus Jenis kelamin Jantan Usia 2-3 bulan Jumlah 24 ekor Warna bulu Putih Keadaan umum Sehat, aktif bergerak, tidak terdapat luka Rerata berat badan (gr) 176,67 ± SD 25,166 174,29  ± SD 10,202 186,67 ± SD 11,547 183,33 ± SD 15,275 Rerata kadar glukosa darah (mg/dl) 114,33 ± SD 19,399 108 ± SD 22,605 114,33 ± SD 18,448 118,33 ± SD 5,508 Setelah dipapar asap rokok dan diberi vitamin D3 Warna bulu Putih Putih kecoklatan Putih Putih kecoklatan Keadaan umum Sehat, aktif bergerak, tidak terdapat luka Lemah, kurang aktif bergerak Sehat, aktif bergerak, tidak terdapat luka Lemah, kurang aktif bergerak Rerata berat badan (mg) 260 ± SD 10,000 213,33 ± SD 28,840 260,00 ± SD 10,000 250 ± SD 36,056 Rerata kadar glukosa darah (mg/dl) 115,67 ± SD 14,012 150,67 ± SD 12,503 111,33 ± SD 17,010 115,33 ± SD 6,110 Keterangan : Kontrol 1 (K1) : Tidak dipapar asap rokok dan tidak diberi vitamin D3
Kontrol 2 (K2) : Dipapar asap rokok Kontrol 3 (K3) : Diberi vitamin D3 dosis 0,2 µg/ekor
Perlakuan 1 (P1)   : Dipapar asap rokok selama 30 menit seiap hari selama  14 hari dan diberi vitamin D3 dosis 0,2 µg/ekor
Hasil karakteristik sampel menggunakan tikus  putih  ( Rattus  norvegicus)  g alur Wistar Jantan  yang  berusia  2-3  bulan,  bulu  berwarna putih,  dengan  keadaan  umum  sehat,  bergerak
aktif, dan tidak terdapat luka.  Batas berat badan sebelum  perlakuan  ialah  150-200  gram  sesuai dengan kriteria inklusi, dengan nilai rerata berat badan  tikus  sebelum  perlakuan  pada  kelompok
kontrol  1  (176,67  ±  SD  25,166),  kelompok kontrol  2  (174,  29  ±  SD    10,202),  kelompok kontrol  3  (186,67  ±  SD  11,547),  dan  kelompok perlakuan  1  (183,33  ±  SD  15,275).  Kemudian setelah  perlakuan  terjadi  perubahan  berat
badannya  pada  setiap  kelompok  yaitu  pada kelompok kontrol 1 menjadi (260 ± SD 10,000), kontrol  2  (213,33  ±  SD  28,840),  kontrol  3 (260,00  ±  SD  10,000),  dan  perlakuan  1  (250  ± SD 36,056).
Tabel 2 Perbedaan nilai rata-rata ± kadar glukosa darah sebelum dan setelah perlakuan Kelompok K1 K2 K3 P1 GDP sebelum perlakuan Mean ± SD 114,33 ± SD 19,399 108 ± SD 22,605 114,33 ± SD 18,448 118,33 ± SD 5,508 GDP setelah perlakuan Mean ± SD 115,67 ± SD 14,012 150,67 ± SD 12,503 111,33 ± SD 17,010 115,33 ± SD 6,110 Nilai p uji Paired T- Test 0,933 0,018 0,188 0,035
Nilai  rerata  ±  SD  kadar  glukosa  darah puasa  sebelum  dan  sesudah  perlakuan  dapat dilihat pada tabel 2. Data dianalisis menggunakan program SPSS hasil uji normalitas  menunjukkan  kadar  glukosa  darah sebelum  dan  setelah  perlakuan  berdistribusi normal  dengan  p>0,05  pada  semua  kelompok. Uji paired  t-test menunjukkan  perbedaan  yang bermakna  p<0,05  pada  kelompok  K2  dengan nilai  (p=0,018)  dan  kelompok  P1  dengan  nilai (p=0,035).
Dalam  penelitian  ini  didapatkan  nilai rerata ± SD GDP sebelum dan setelah perlakuan pada  K1  (114,33  ±  SD  19,399)  dan  (115,67  ± SD 14,012), K2 (108 ± SD 22,605) dan (150,67 ±  SD  12,503),  K3  (114,33  ±  SD  18,448)  dan (111,33  ±  SD  17,010),  serta  P1  (118,33  ±  SD 5,508) dan (115,33 ± SD 6,110). Dari hasil nilai rerata ± SD GDP sebelum dan setelah perlakuan pada  kelompok  K1  didapatkan  kadar  glukosa darah  dalam  jumlah  normal.  Kelompok  K2 didapatkan  kadar  glukosa  darah  sebelum perlakuan  dalam  jumlah  normal,  namun meningkat hingga hiperglikemia setelah diberikan  perlakuan.  Dan kelompok  K3  dan K4 didapatkan  kadar  glukosa  darah  dalam  jumlah normal  sebelum  perlakuan,  namun  menurun dalam batas normal setelah perlakuan.
Glukosa darah adalah konsentrasi glukosa dalam darah, atau tingkat glukosa serum diatur  ketat  dalam  tubuh . Glukosa  merupakan bahan  baku  metabolisme  utama  pada  mamalia. Berbagai  jenis  karbohidrat  yang  dikonsumsi
manusia  baik  dalam  bentuk  monosakarida, disakarida,  atau  polisakarida  akan  di  konversi menjadi  glukosa  yang  kemudian  akan  di metabolisme menjadi ATP. 14
Peningkatan kadar glukosa darah setelah makan  atau  minum  merangsang  pankreas  untuk menghasilkan insulin sehingga mencegah kenaikan  kadar  glukosa  darah  yang  lebih  lanjut dan menyebabkan kadar glukosa darah menurun secara  perlahan 15 .  Kadar  glukosa  darah  diukur dengan pemeriksaan laboratorium menggunakan metode  GOD-PAP  dengan  rentang  nilai  GDP normal  pada  tikus  50-135  mg/dL. 16 Hasil penelitian  yang  dilakukan  dan  dianalisis menggunakan uji paired t-test terdapat perbedaan  yang  bermakna  kadar  glukosa  darah sebelum  dan  setelah  dipapar  asap  rokok (p<0,05)  pada  kelompok  K2  dengan  nilai (p=0,018)  dan  P1  dengan  nilai  (p=0,035). Kecuali  pada  kelompok  K1  tidak  terjadi peningkatan  kadar  glukosa  darah  karena  tidak dilakukan  paparan  asap  rokok  dan  tidak diberikan  vitamin  D3  dan  pada  kelompok  K3 karena hanya diberikan vitamin D3.
Hasil  uji one  way  anova didapatkan perbedaan  yang  bermakna  antar  kelompok (p<0,05). Uji selanjutnya menggunakan post hoc didapatkan  perbedaan  yang  bermakna  antar kelompok  K1  dengan  K2  dengan  nilai (p=0,004),  kelompok  K1  dengan  K3  dengan nilai    (p=0,038),  kelompok  K1  dengan  P1 dengan  nilai    (p=0,038),  kelompok  K2  dengan K3  dengan  nilai    (p=0,000),    kelompok  K2
dengan  P1  dengan  nilai  (p=0,004).  Sehingga pada  penelitian  ini  pemberian  paparan  asap rokok selama 14 hari dapat meningkatkan kadar glukosa darah. Peningkatan kadar glukosa darah terjadi  karena  diperantarai  oleh  stress  oksidatif dari  akumulasi  radikal  bebas  dalam  tubuh  yang menyebabkan terjadinya apoptosis sel  β pankreas  sehingga  terjadi  penurunan  insulin dalam  tubuh  yang  menyebabkan  peningkatan kadar glukosa darah. 17
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Li (2018), mengenai Melatonin attenuates smoking-induced  hyperglycemia  via  preserving insulin secretion and hepatic glycogen synthesis in rats didapatkan hasil yang signifikan dengan (p<0,05). 18 Sama halnya dengan penelitian yang dilakukan  oleh  Febrina  (2016) 19 ,  kadar  glukosa darah  tikus  percobaan  mengalami  kenaikan setelah  dipapar  asap  rokok  .  Sedangkan penelitian yang dilakukan oleh Tristyanto (2015) didapatkan  hasil  tidak  terdapat  perbedaan bermakna  kadar  gula  darah  kelompok  perokok aktif dan perokok pasif. 20
Paparan  asap  rokok  memperburuk resistensi  insulin  hal  ini  disebabkan  oleh  bahan kimia  aktif  pada  rokok  yaitu  nikotin  yang menyebabkan  penurunan  pelepasan  insulin akibat  aktivasi  hormon  katekolamin,  pengaruh negatif  pada  kerja  insulin,  dan  gangguan  pada sel  β  pankreas.  Nikotin  mempengaruhi  sekresi insulin melalui nAChRs pada sel-sel β pankreas. Sekresi  insulin  dapat  diatur  dengan  mekanisme endogenous  pancreatic  ganglionic. Beberapa hasil  penelitian  secara in  vitro, menunjukkan
bahwa  nAChRs  terdapat  pada  ganglion  di pankreas  dan  mempengaruhi  seksresi  insulin melalui mekanisme intraganglionik yang kompleks.  Tidak  hanya  paparan  nikotin  dalam jangka  waktu  lama  tetapi  juga  paparan  waktu singkat mengakibatkan penurunan sekresi insulin.  Pada  paparan  dalam  jangka  waktu singkat dengan paparan nikotin konsentrasi lebih dari  1µmol/L  menghambat  pelepasan  insulin. Penemuan  ini  mengindikasikan  bahwa reseptor- reseptor  nikotinik  fungsional  terdapat  pada pulau-pulau  pankreas  dan  sel-sel  β  dan  bagian nikotin  secara  negatif  mempengaruhi  fungsi  sel β pancreas. 21
Peningkatan glukosa darah atau hiperglikemia  merupakan  salah  satu  tanda  awal terjadinya gangguan dalam metabolisme karbohidrat. Metabolisme karbohidrat dipengaruhi  oleh  kerja  insulin.  Insulin  menjaga keseimbangan glukosa dalam darah dan bertindak  meningkatkan  pengambilan  glukosa oleh  sel  tubuh  untuk  diubah  menjadi  energi. Kegagalan  tubuh  untuk  menghasilkan  insulin atau  jumlah  insulin  yang  tidak  mencukupi  akan menyebabkan  glukosa  tidak  masuk  kedalam  sel untuk  proses  metabolisme,  sehingga  glukosa  di dalam  darah  akan  meningkat  atau  terjadi hiperglikemia. 19
Pemberian paparan asap rokok dilakukan  selama  14  hari  dengan  tujuan meningkatkan  kadar  glukosa  darah  sehingga terjadi  perubahan  peningkatan  kadar  glukosa darah atau hiperglikemia. Kadar GDP dikatakan tinggi apabila mencapai >135 mg/dl.
Tabel 3. Hasil Analisis Data Menggunakan Uji One-way Anova
ANOVA GDP POST Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 3154.000 3 1051.333 19.173 .001 Within Groups 438.667 8 54.833 Total 3592.667 11
Hasil analisis data menggunakan uji One way  Anova didapatkan  hasil  dengan  nilai p=0,001.  Berarti  terdapat  perbedaan  yang
bermakna antar kelompok.
Selanjutnya digunakan  uji  statistik posthoc  LSD dapat  pada tabel 4.
Tabel 4. Rerata Selisih ± GDP sebelum dan setelah perlakuan dengan analisis post hoc LSD. (*) terdapat perbedaan yang bermakna (p<0,05) Kelompok Mean Difference (I-J) Std.Error Sig. K1 K2 -24.667 * 6.046 .004 * K3 15.000 * 6.046 .038 * P1 15.000 * 6.046 .038 * K2 K1 24.667 * 6.046 .004 * K3 39.667 * 6.046 .000 * P1 39.667 * 6.046 .000 * K3 K1 -15.000 * 6.046 .038 * K2 -39.667 * 6.046 .000 * P1 .000 6.046 1.000 P1 K1 -15.000 * 6.046 .038 * K2 -39.667 * 6.046 .000 * K3 .000 6.046 1.000 * terdapat perbedaan yang bermakna p<0,05
Pada penelitian ini dilakukan pemberian vitamin  D3  untuk  menurunkan  kadar  glukosa darah.  Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan menunjukkan  bahwa  pemberian  vitamin  D3 dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada kelompok  kontrol  3  (K3)  dan  kelompok perlakuan  1  (P1).  Hasil  analisis  uji paired  t-test menunjukkan  terjadi  penurunan  kadar  glukosa darah  yang  bermakna  (p<0,05)  pada  kelompok P1  dengan  nilai  (p=0,035).  Sedangkan  pada  K3 tidak  terjadi  penurunan  kadar  glukosa  darah yang  bermakna  dengan  nilai  (p=0,188)  karena hanya  diberikan  vitamin  D3.  Pada  analisis post hoc didapatkan  perbedaan  rerata  selisih  antara kelompok  K1  dengan  K2  dengan  nilai (p=0,004),  kelompok  K1  dengan  K3  dengan nilai    (p=0,038),  kelompok  K1  dengan  P1 dengan  nilai    (p=0,038),  kelompok  K2  dengan K3  dengan  nilai    (p=0,000),    kelompok  K2 dengan  P1  dengan  nilai  (p=0,004).  Berarti  pada pemberian  vitamin  D3  terdapat  pengaruh  dalam penurunan glukosa darah.
Penelitian  yang  dilakukan  Shab-Bidar, et  al., asupan  vitamin  D3  berhubungan signifikan dengan kadar glukosa darah. Hubungan  tersebut  diamati  dari  adanya  suatu
hubungan  terbalik  antara  total  asupan  vitamin D3  dan  konsentrasi  glukosa  darah 11 .  Penelitian yang dilakukan oleh Maddaloni (2018), mengenai Vitamin  D  and  diabetes  melitus didapatkan  hasil  uji  klinis  yang  lemah  bahkan tidak  terdapat  pengaruh.  Mayoritas study pada tipe  1  diabetes  gagal  untuk  menunjukkan  peran perlindung  vitamin  D.  Namun,  tampak  adanya kesempatam  untuk  pencegahan  penyakit,  tetapi sebaiknya  dimulai  sejak  dini  bahkan  dimulai sejak masa kehamilan. 22
Vitamin  D  adalah  grup  vitamin  yang larut  dalam  lemak  yang  terdiri  atas  dua  bentuk aktif  vitamin  D,  yaitu  vitamin  D 2 berasal  dari ragi/tanaman sedangkan vitamin D 3 (kolekalsiferol)  berasal  dari  sumber  hewani  dan banyak  ditemukan  pada  kulit  manusia.  Fungsi utama vitamin  D adalah untuk absorbsi kalsium di  usus  dan  mengatur  depositnya  di  tulang. Bentuk aktif vitamin D juga dapat memodifikasi aktivitas  seluler,  diferensiasi  dan  proliferasi  sel pada system imunitas, saraf, kardiovaskular, dan gastrointestinal. 23
Vitamin D memacu pembentukan insulin  di  sel  beta  pankreas.  Jika  vitamin  D cukup,  maka  ada  cukup  rangsangan  yang  akan
memacu  sel  beta  pankreas  memproduksi  cukup insulin,  sehingga  gula  darah  dapat  dimasukkan ke  dalam  sel.  Sebaliknya  ketika  tubuh kekurangan  vitamin  D  dalam  darah,  maka  tidak ada  yang  memacu  lagi  pembentukan  insulin  di sel β pankreas. 24
Terdapat berbagai metode untuk meningkatkan  sekresi  insulin  salah  satunya dengan  pemberian  vitamin  D.  Vitamin  D merangsang  sel  β  secara  langsung  dan  melalui perannya dalam kadar kalsium di sel β pankreas menyebabkan  peningkatan  insulin.  Diduga vitamin  D  juga  meningkatkan  ambilan  glukosa di  perifer  dan  meningkatkan  kepekaan  insulin sehingga menyebabkan penurunan kadar glukosa darah. 25

## .

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang berjudul  Pengaruh  Vitamin  D3  terhadap  Kadar Glukosa  Darah  pada  Tikus  Putih Wistar Jantan yang  Dipapar  Asap  Rokok,  disimpulkan  bahwa ada  pengaruh  pemberian  vitamin  D3  terhadap kadar  glukosa  darah  pada  tikus  putih (Rattus norvegicus) galur Wistar jantan  yang  dipapar asap rokok.

## SARAN Bagi Peneliti
Hasil  penelitian  ini  dapat  digunakan sebagai perbandingan untuk melakukan penelitian yang sama diwaktu lainnya.

## Bagi Institusi/Peneliti Selanjutnya
Hasil  penelitian  ini  dapat  digunakan sebagai  referensi  bagi  peneliti  selanjutnya sebagai  dasar  teori  untuk  penelitian  tentang pengaruh  vitamin  D3  terhadap  pasien  dengan hiperglikemia.

## Bagi Masyarakat
Masyarakat  dengan  hiperglikemia  atau diabetes  melitus  akibat  stress  oksidatif  paparan asap  rokok  dapat  mengkonsumsi  vitamin  D3 sebagai terapi komplementer untuk menurunkan maupun mempertahankan kadar glukosa darah.

## V. UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kami  sampaikan  kepada Kementrian  Riset,  Teknologi  dan  Pendidikan Tinggi  Republik  Indonesia  dan  Balai  Besar Veteriner Lampung.

## REFERENSI
1. World Health Organization.  Tobacco [Internet]. World  Health  Organization;  p.  2018.  Available from: . https://www.who.int/en/news  - room/fact-  sheets/detail/tobacco. 2018
2.   Susanti Y,  Suraji C.  Hubungan  Antara Perilaku Merokok  Pelajar  Dengan  Kebijakan  Kawasan Tanpa  Rokok.  J  Ilm  Permas  J  Ilm  STIKES Kendal. 2019;9(3):207–12.
3.   Kesehatan  K  RK.  Riset  Kesehatan  Dasar (RISKESDAS)  2013.  Jakarta:  Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Kesehatan  Departemen Kesehatan  Republik  Indonesia;  2013  Desember p. 1–208.
4.   Yulianto  EA.  Persepsi  Siswa  Smk  Kristen  (Ti) Salatiga  Tentang  Bahaya  Merokok  Bagi Kesehatan. J Phys Educ. 2015;4(5):1807–13.
5.   Bajaj M. Nicotine and Insulin Resistance: When the  Smoke  Clears.  Diabetes.  2012  Dec 1;61(12):3078–80.
6.   Liu  T,  Chen  W-Q,  David  SP,  Tyndale  RF, Wang  H,  Chen  Y-M,  et  al.  Interaction  between heavy smoking and CYP2A6 genotypes on type 2  diabetes  and  its  possible  pathways.  Eur  J Endocrinol. 2011 Dec;165(6):961–7.
7.   Vu  CU,  Siddiqui  JA,  Wadensweiler  P,  Gayen JR,  Avolio  E,  Bandyopadhyay  GK,  et  al. Nicotinic  Acetylcholine  Receptors  in  Glucose Homeostasis:  The  Acute  Hyperglycemic  and Chronic  Insulin-Sensitive  Effects  of  Nicotine Suggest  Dual  Opposing  Roles  of  the  Receptors in Male Mice. Endocrinology. 2014 Oct;155(10):3793–805.
8.   Hilawe EH, Yatsuya H, Li Y, Uemura M, Wang C, Chiang C, et al. Smoking and Diabetes: Is the Association  Mediated  by  Adiponectin,  Leptin, or C-reactive Protein? J Epidemiol. 2015;25(2):99–109.
9.   Rochmah,  Nur  P  Enny,  Dieny,  Fillah  Fithra. Hubungan  Asupan  Vitamin  D  dan  Kalsium dengan  Kadar  Glukosa  Darah  Puasa  Wanita Obesitas  Usia  45-55  Tahun.  J  Nutr  Coll. 2017;6(4):285–92.
10.   Vera,  Setiati,  Siti  G  Arya.  Determinan Diagnostik  Klinis  Defisiensi  Vitamin  D  pada Wanita Berusia Lebih dari 50 Tahun. J Penyakit Dalam Indones. 2015 Jan;2(1):38–48.
11.   Shab-Bidar  S,  Hosseini-Esfahani  F,  Delshad  H, Asghari G, Mirmiran P, Azizi F. Dietary intake of  vitamin  D  and  metabolic  syndrome  after  3-
year follow-up: Tehran lipid and glucose study. J Nutr Sci Diet. 2015 Jan 11;1(2):71–9.
12.   Ridwan E. Etika Pemanfaatan Hewan
Percobaan  dalam  Penelitian  Kesehatan.  J Indones Med Assoc. 2013 Mar;63(3):112–6.
13.   Notoatmodjo S. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta; 2012.
14.   Murray RK, Granner DK, Rodwell V. Biokimia Harper.  27th  ed.  Jakarta:  Buku  Kedokteran ECG; 2014.
15.   Guyton  A,  Hall  J.  Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran. 12th ed. Singapura: Elsevier; 2016.
16.   Kusumawati  D.  Bersahabat  dengan  Hewan Coba.  1st  ed.  Yogyakarta:  Gadjah  Mada University Press; 2004.
17.   Morimoto  A,  Tatsumi  Y,  Deura  K,  Mizuno  S, Ohno  Y,  Watanabe  S.  Impact  of  cigarette smoking  on  impaired  insulin  secretion  and insulin  resistance  in  Japanese  men:  The  Saku Study. J Diabetes Investig. 2013 May;4(3):274– 80. 18.   Li  T,  Ni  L,  Zhao  Z,  Liu  X,  Lai  Z,  Di  X,  et  al.
Melatonin attenuates
smoking-induced
hyperglycemia  via  preserving  insulin  secretion and  hepatic  glycogen  synthesis  in  rats.  J  Pineal Res. 2018 May;64(4):e12475.
19.   Laboratorium  Penelitian  dan  Pengembangan Kefarmasian Farmaka Tropis, Fakultas Farmasi, Universitas  Mulawarman,  Febrina  L,  Helmi  H, Rijai L. Profil Kadar Malondialdehida, Glukosa Dan Kolesterol Pada Tikus Putih Yang Terpapar
Asap  Rokok.  J  Trop  Pharm  Chem.  2016  Dec 31;3(4):277–82.
20.   Tristiyanto  N.  Perbedaan  Kadar  Gula  Darah Pada  Perokok  Aktif  Dan  Perokok  Pasif  Di Kecamatan Madyopuro Tahun 2015. Akad Anal Kesehat Malang. 2015;
21.   Ario  MD.  Effect  Of  Nicotine  In  Cigarette  For Type  2  Diabetes  Mellitus.  J  Major.  2014 Desember;3(7):75–80.
22.   Maddaloni  E,  Cavallari  I,  Napoli  N,  Conte  C. Vitamin  D  and  Diabetes  Mellitus.  Clin  Med. 2018;50:161–79.
23.   Singh  A,  Atta  A,  Gupta  A,  Mengi  S,  Malhotra P. Vitamin D: Pathophysiology of its Deficiency. J Int Med Sci Acad. 2014;27(4).
24.   Hermawan D.  Sehat Selalu  Dengan  Vitamin D. 1st ed. Yogyakarta: Andi; 2016.
25.   Pusparini.  Defisiensi  Vitamin  D  Terhadap Penyakit. Indones J Clin Pathol Med Lab. 2014
Nov;21(1):90–5.