## Uji Toksisitas Akut dan Penetapan Kadar Fenolik dan Flavonoid Ekstrak dan Fraksi  Kulit  Batang  Kelor  (Moringa  oleifera)  dengan  Menggunakan  Metode
Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT)
(Acute toxicity assay of Moringa oleifera stem bark using Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT) methods and determination of phenolic and flavonoids content)
Yamin* 1 , Ari Sartinah 1 , Muhammad Arba 1 , Gusti Ayu Made Candrayanti 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kambu, Kota Kendari, 9323

## Email: yamin_taeri75@ymail.com

## Abstract
Latar Belakang : Kelor terbukti secara ilmiah merupakan sumber gizi dan berkhasiat sebagai  obat    diantaranya  penyakit  kulit,  infeksi  pernapasan,  infeksi  telinga  dan  gigi, hipertensi,  diabetes,  kanker,  antiinflamasi,  antioksidan,  hiperglikemia  dan  makanan suplemen. Tujuan :  untuk  menentukan  nilai  toksisitas  kulit  batang  kelor  ( Moringa oleifera ) dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT). Metode : Serbuk  kulit  batang  kelor  diekstraksi  dengan  cara  maserasi.  Fraksi  diperoleh  dengan metode  cair-cair.  Sifat  toksik  diuji  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethaly  Test (BSLT). Kadar fenolik dikur menggunakan metode reagen Folin-Ciocalteau. Kadar flavonoid diukur dengan metode kolorimeter Aluminium klarida . Hasil : Ekstrak metanol menunjukkan nilai toksik yang kuat dibandingkan dengan fraksi n-heksan dan air dengan nilai toksisitas sebesar 153,394 ppm. Kadar fenolik ektstrak methanol sebesar  509,91 g  EAG/100  g  sampel  dan  sebesar536,11    gEK/100  g  sampel. Kesimpulan :  Ekstrak  metanol  kulit  batang  kelor memiliki  sifat  paling  toksik  sehingga  dapat  ditelusuri  lebih  lanjut  untuk  mengetahui  senyawa  yang  paling  bersifat toksik.
Keywords : Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT), fenolik total, flavonoid total, Kulit batang  kelor, toksisitas

## 1. Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan  yang kaya  akan  keanekaragaman  hayati,  memiliki  hutan tropika  terbesar  kedua  di  dunia,  dan  dikenal  sebagai salah  satu  Negara  megabiodiversity  kedua  setelah Brazil [1]. Salah satu jenis hayati yang banyak terdapat di Indonesia adalah kelor ( Moringa oleifera L). Kelor dikenal  sebagai The  Miracle  Tree atau  pohon  ajaib karena    terbukti  secara  ilmiah  sumber  gizi  dan berkhasiat  sebagai obat  [2],    diantaranya  untuk mengobati penyakit penyakit kulit, infeksi pernapasan, infeksi  telinga  dan  gigi,  hipertensi,  diabetes,  kanker, antiinflamasi, antioksidan, hiperglikemia dan makanan suplemen [3,4,5]. Selain itu, kelor dapat juga digunakan  untuk  pengobatan  penyakit  hipotensi  dan diuretic [6].
Tanaman  kelor  mengadung  metabolit  seperti flavonoid,  alkaloid,  saponin,  steroid,  glikosida, antrakuinon, triterpenoid, tannin galat, tannin katekol dan  gulareduksi  [7,8].  Keberadaan  metabolit  yang terkandung  dalam  tanaman  dapat  menghasilkan  efek toksik  terhadap  suatu  organisme  [9].  Senyawa metabolit  seperti  fenolik,  tannin  dan  flavonoid  dapat menyebabkan  kematian  pada  larva  udang Artemia salina . Hal ini disebabkan oleh kemampuan senyawa metabolit tersebut dalam menghambat reseptor perasa yang terdapat pada mulut larva. Akibatnya, larva tidak mendapatkan  asupan  makanan  dan  larva  mengalami kematian.  Selain  itu,  metabolit  yang  terdapat  dalam sampel  tersebut  masuk  ke  dalam  perut  larva  dan bersifat  sebagai  racun  perut  atau stomach  poisoning [10,11].
Article Info: Received: 6 July 2020 Accepted: 1 September 2020
DOI:
10.33772/pharmauho. v6i2.12759
Adanya senyawa yang memiliki gugus hidroksi (-  OH)  seperti  flavonoid  dan  fenolik  menyebabkan pecahnya  membran  sel,  akibatnya  ion  Na+  masuk kedalam sel secara tidak terkendali. Ini terjadi karena gugus  –  OH  dari  senyawa  fenolik  dan  flavonoid berikatan  dengan  protein  membran  sel.  Akibatnya transport  aktif  K+  dan  Na+  terhalang.  Sehingga mengakibatkan  kematian  sel  [12].  Tujuan  penelitian ini  adalah  untuk  menentukan  nilai  toksisitas  dengan menggunakan metode  BSLT serta  menetukan  kadar fenolik dan flavonoid yang terdapat pada batang kelor

## 2. Metode

## 2.1 Sampel Tumbuhan
Kulit batang Kelor ( Moringa oleifera ) diperoleh dari Kelurahan Fookuni, Kecamatan Katobu, Kabupaten  Muna,  Sulawesi  Tenggara.  Determinasi dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Halu Oleo.

## 2.2 Ekstraksi dan Fraksinasi
Sebanyak  500  gram  serbuk  kulit  batang  kelor dimaserasi  dengan  menggunakan  pelarut  metanol selama  3  x  24  jam.  Pelarut  diganti  setiap  24  jam, kemudian  diuapkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  45 o C  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental. Selanjutnya  15  gram  ekstrak  kulit  batang  kelor dilarutkan  dengan  aquades,  setelah  itu    dipartisi menggunakan  pelarut  n-heksan  dan  etil  asetat.  Hasil partisi  kemudian  diuapkan  menggunakan rotary evaporator ,  sehingga  diperoleh  sampel  ekstrak metanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi sisa air. Seperti pada Gambar 1.
Gambar  1. Skema  ekstraksi  dan  fraksinasi  kulit  batang kelor
2.3 Skrining Fitokimia Skrining ini bertujuan untuk  mengetahui golongan metabolit yang terkandung pada fraksi kulit
kelor,  seperti senyawa  flavonoid,  alkaloid,  tannin, terpenoi dan saponin [13].
a. Uji Flavonoid
Ekstrakdan  fraksi  kulit  batang  kelor  dimasukan kedalam tabung reaksi sebanyak 1 mL, ditambahkan  0,1  gram  serbuk  magnesium  dan  2 mL HCl  pekat. Terbentuk larutan berwarna merah menunjukan adanya flavonoid
b. Uji Alkaloid Ekstrak    dan  fraksi  batang  kelor  dimasukan kedalam  tabung  reaksi  1  mL,  lalu  ditambahkan pereaksi  dragendrof    2-3  tetes.  Terbentuknya endapan  cokelat  menunjukkan  adanya  senyawa alkaloid
c. Uji Tanin Ekstrak  dan fraksi  kulit batang kelor  dimasukkan dalam tabung reaksi sebanyak 1 mL, ditambahkan dengan  1  mL  larutan  Fe  (III)  klorida  1%. Terbentuk  warna  biru  tua,  biru  kehitaman  atau hitam  kehijuan  menunjukkan  adanya  senyawa tannin
d. Uji Terpenoid Ekstrak dan fraksi kulit batang kelor dimasukkan kedalam  tabung  reaksi  sebanyak  1  mL,  dan ditambahkan  0,5  mL  asam  asetat  anhidrat  dan  2 mL asam sulfat pekat. Terbentuknya warna merah atau ungu menunjukkan adanya senyawa terpenoid
e. Uji  Saponin Ekstrak  dan  fraksi  air  kulit  batang  kelor dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  1 mL,  ditambahkan  2  mL  air  panas  kemudian didinginkan,  dikocok  kuat  selama  10  detik. Terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit positif mengandung saponin.
2.4 Toksisitas  Metode    Brine  Shrimp  Lethaly  Test ( BSLT )
Pengujian  tokisitas  dilakukan  menurut  metode Sumihe  et  al.      (2013)  dengan  sedikit  modifikasi. Sebanyak 10 larva udang dimasukan kedalam vial uji, kemudian  ditambahkan    larutan  sampel  hingga volumenya  mencapai  5  mL.  Setiap  konsentrasi dilakukan  3  kali  pengulangan.  Sebagai  kontrol digunakan  2,5  mL  larutan  blanko  kemudian ditambahkan 2,5 mL air laut. Pengujiannya dilakukan dengan  menggunakan  konsentrasi  dengan    variasi konsentrasi yaitu 10 ppm,  25 ppm, 50 ppm , 100 ppm, 125  ppm, 250 ppm,  500  ppm  ,  750  ppm,  1000 ppm, 2000 ppm.
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam  dengan menghitung  jumlah  larva  udang  yang  masih  hidup dan yang sudah mati.  Pengukuran mortalitas larva A. salina Leach seperti persamaan 1 [14].
Mortalitas (%) = 𝐴𝑘𝑢𝑚𝑢𝑙𝑎𝑠𝑖 𝑚𝑎𝑡𝑖 𝐴𝑘𝑢𝑚𝑢𝑙𝑎𝑠𝑖 𝑚𝑎𝑡𝑖+ 𝐴𝑘𝑢𝑚𝑢𝑙𝑎𝑠𝑖 𝐻𝑖𝑑𝑢𝑝 𝑥 100 % (1)

## 2.5 Penentuan Kandungan Fenolik total
Penentuan kadar fenolik total ekstrak dan fraksi kulit  batang  kelor  menggunakan  metode Folin- Ciocalteau dengan melakukan modifikasi [15]. Secara singkat, yakni mengambil 1 mL setiap seri kosentrasi dari  sampel  lalu  ditambahkan  0.4  mL  reagen Folin- Ciocalteau dikocok  lalu  dibiarkan  selama  8  menit kemudian  ditambahkan  4  mL  Na 2 CO 3 7%,  dikocok hingga  homogen  kemudian  dicukupkan  volumenya hingga 10  mL,  didiamkan  selama  30  menit  dan selanjutnya  diukur  absorbansinya  menggunakan spektrofometri  UV-Vis  panjang  gelombang  647  nm. Pengukuran  setiap  seri  kosentrasi  sample    dilakukan sebanyak  tiga  kali  replikasi.  Kadar  fenolik  total dinyatakan sebagai Ekuivalen Asam Galat (EAG)

## 2.6 Penentuan kandungan Flavonoid total
Pengukuran kandungan flavonoid total dilakukan menggunakan metode kolorimeter dengan melakukan modifikasi  [15,16].  Sebanyak  10  mg  sampel dilarutkan dengan metanol hingga 10 mL. selanjutnya diambil  1  mL  ditambahkan  3  mL  metanol  lalu ditambahkan 0,2 mL aluminium klorida 10% dan 0,2 mL  kalium  asetat  1  M  dan  dicukupkan  volumenya hingga 10 mL dengan akuades. Campuran diinkubasi selama  30  menit.  Lalu  diukur  absorbansinya  dengan menggunakan spektrofotometer  UV-Vis panjang gelombang 439 nm. Pengukuran dilakukan sebanyak tiga  kali.  Kadar  flavonoid  total  dinyatakan  sebagai Ekuivalen Kuersetin (EK)

## 2.7 Analisis Data
Analisis  probit  antara  konsentrasi  sampel    dan jumlah  kematian  larva  diuji  menggunakan  Minitab ver.18 sehingga menunjukkan nilai LC 50 dari masing- masing sampel tersebut. Suatu zat dinyatakan bersifat toksik jika LC 50 <1000 µg/mL untuk ekstrak  dan   < 30 µg/mL untuk senyawa murni [17].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Metode ekstraksi yang dilakukan adalah metode maserasi.  Prinsip  metode  maserasi  adalah  terjadinya difusi  larutan  ke  dalam  sel  tumbuhan  yang mengandung  senyawa  bioaktif.  Akibatnya  tekanan osmosis  dalam  sel  bebrbeda  dengan  di  luar  sel, sehingga senyawa yang memilki kepolaran yang sama dengan  pelarut  akan  terdesak  keluar  [18,25].  Hasil penyarian  menggunakan  pelarut  metanol  diperoleh sebanyak  33,9  gram  dengan    rendemen  6,78%.
Sementara  hasil  fraksinasi  berdasarkan  tingkat kepolaran  yang  berbeda  mendapat  nilai  rendemen yang  berbeda-beda  sebagaimana  yang  ditunjukkan pada Tabel 1. Hal ini dikarenakan suatu senyawa akan mudah tertarik pada pelarut yang cocok, sesuai dengan prinsip  “ like  dissolved  like ”.  Dimana  senyawa  akan tertarik  pada  pada  pelarut  yang  kepolarannya  sama [19].
Tabel 1 . Rendemen hasil fraksinasi ekstrak methanol kulit batang kelor
Fraksi Berat Ekstrak (g) Berat Fraksi (g) Rendemen (%) n- heksan 15 4,2 28 Etil asetat 2,7 18 Air 8,1 54 Berdasarkan hasi
skrining fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi  kulit  batang kelor positif mengandung alkaloid, flavonoid, tannin, terpenoid,  namun  tidak  mengandung  metabolit saponin. Hal ini sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2 . Hasil skrining fitokimi kulit batang kelor
Jenis uji Sampel Ekstrak metanol Fraksi n- heksan Fraksi  etil asetat Fraksi air Alkaloid + + + + Flavonoid + + + + Tannin + + + + Terpenoid + + + + Saponin - - - - Ket: + artinya positif mengandung metabolit sekunder
-  artinya tidak mengandung metabolit sekunder
Penggunaan  metode Brine  Shrimp  Lethaly  Test (BSLT) dalam penelitian ini karena metode ini sangat mudah  dan  murah,  serta  merupakan  metode  untuk mengamati  aktivitas antikanker suatu senyawa. Selain itu, metode ini memiliki korelasi dengan adanya daya sitotoksik  berpotensi  sebagai  anti  kanker,  antitumor atau  sitotoksik  skrining  produk  alami  [9,20].  Suatu sampel dikatakan toksik jika nilai LC 50 di bawah 1000 ppm (<1000 ppm) [21,22]. Hasil pengujian toksisitas ekstrak dan fraksi kulit batang kelor dengan kosentrasi uji  10  ppm,  100  ppm,  125 ppm,  250  ppm, 500  ppm, 750  ppm,  1000  ppm  dan  2000  ppm,  seperti ditunjukkan  pada  Tabel  3.    Hasil  uji  toksisitas menunjukkan    ekstrak  metanol  memiliki  toksisitas yang lebih kuat dibandingkan dengan fraksi n-heksan dan  fraksi  air  dengan  nilai  toksisitas  secara  berturut-
turut  153,394  ppm,  332,930  ppm  dan  503,839  ppm. Hal  ini  dikarenakan  dalam  ekstrak  masih  sangat multicompound ,  yang  dapat  mengakibatkan  efek sinergi  dari  metabolit  yang  terdapat  dalam  ekstrak tersebut [23]. Sebagaimana ditunjukkan pada Gambar 2.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  sebelumnya, diantaranya  tokisitas  akut  ekstrak  dan  fraksi  kulit batang  ketapang  laut  ( Terminalia  catappa L)  [24], toksisitas  kulit  batang  kumbou (Artocarpus  elastica Reinw.  ex  Bl)  Merr  [13].  Kedua  riset  tersebut menunjukkan    bahwa  ekstrak  metanol  lebih  toksik dibandingkan dengan fraksi etil asetat dan fraksi air.
Tabel  3. Hasil  perhitungan  nilai  LC 50 ekstrak  dan fraksi kulit batang kelor Sampel Konsentrasi (ppm) Mortalitas (%) LC 50 (ppm) Ekstrak metanol 10 10
153,394 100 53,33 125 63,33 250 70 500 73,33 750 90 1000 100 2000 100
Fraksi air 10 0
503,839 100 10 125 23,33 250 33,33 500 53,33 750 70 1000 90 2000 100 Fraksi n- heksan
10 10
332,930 100 30 125 43,33 250 46,66 500 63,33 750 80 1000 90 2000 100 Kontrol DMSO 0
Suatu  zat  dinyatakan  bersifat  toksik  jika  LC 50 <1000 µg/mL untuk ekstrak  dan   < 30 µg/mL untuk senyawa murni [17]. Berdasarkan data pada Gambar 2 menunjukkan  bahwa  kulit  batang  kelor  memiliki toksisitas yang sangat rendah.
Tingginya  kematian  pada  larva  udang Artemia salina  L pada  sampel  diakibatkan  karena  kandungan metabolit yang terdapat dalam sampel seperti fenolik, tannin  dan  flavonoid.  Hal  ini  disebabkan  oleh kemampuan  senyawa  metabolit  tersebut  dalam menghambat reseptor perasa yang terdapat pada mulut larva.  Akibatnya,  larva  tidak  mendapatkan  asupan makanan  dan  larva  mengalami  kematian.  Selain  itu, metabolit yang terdapat dalam sampel tersebut masuk
ke dalam perut larva dan bersifat sebagai racun perut atau stomach poisoning [10,11].
Gambar 2 . Nilai LC50 ekstrak dan fraksi kulit batang kelor ( Moringa oleifera L)
Tabel 4 menunjukkan kandungan flavonoid dan fenolik  yang  terdapat  dalam  esktrak  dan  fraksi  kulit batang kelor. Dari data tersebut kandungan fenolik dan flavonoid  ekstrak  methanol  >  fraksi  fraksi  air  >  n- heksan  dengan  nilai  berturut-turut  sebesar  536,11  > 509,44 > 175>55 g EK/100 g  sampel untuk flavonoid, sedangkan untuk fenolik nilai sebesar 501,90 > 311,43 > 101,90 g EAG/100 g sampel.
Tabel  4 .  Kadar  Fenolik  dan  flavonoid  ekstrak  dan fraksi kulit batang kelor
Sampel Kadar fenolik (g EAG/ 100 g sampel) Kadar flavonoid (g EK/ 100 g sampel) Ekstrak metanol 501,90 536,11 Fraksi  n- heksan 101,90 175,55 Fraksi air 311,43 509,44
Adanya  senyawa yang memiliki gugus hidroksi (-  OH)  seperti  flavonoid  dan  fenolik  menyebabkan pecahnya  membran  sel,  akibatnya  ion  Na+  masuk kedalam sel secara tidak terkendali. Ini terjadi karena gugus  –  OH  dari  senyawa  fenolik  dan  flavonoid berikatan  dengan  protein  membran  sel.  Akibatnya transport  aktif  K+  dan  Na+  terhalang.  Sehingga mengakibatkan kematian sel [12].

## 4. Kesimpulan
Kesimpulan Ekstrak metanol dan fraksin-heksan dan  fraksi  air  kulit  batang  kelor  (Moringa  oleifera) memiliki  sifat  toksik  terhadap  larva  udang  Artemia salina. Ekstrak metanol paling bersifat toksik dengan nilai LC 50 sebesar 153,394 ppm. Hal ini kemungkinan disebabkan  karena  kadar  fenolik  dan  flavonoid  yang tinggi  pada  ekstrak  metanol  dengan  nilai  501,90  g EAG/100 g sampel untuk fenolik dan 536,11 g EK/100 g sampel untuk flavonoid

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Fakultas  Farmasi Universitas  Halu  Oleo  atas  dukungan  dan  bantuan dalam pelaksanaan penelitian ini.

## Daftar Pustaka
[1] Ningsih,  I.  Y.  (2016).  Studi  Etnofarmasi Penggunaan Tumbuhan Obat Oleh Suku Tengger Di  Kabupaten  Lumajang  dan  Malang,  Jawa Timur. Pharmacy , 13 (01), 10–20.
[2] Tutik,  Dwipayana,  I.  N.  A.,  &  Malahayati, Elsyana, V. (2018). Identifikasi dan Perbandingan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun Kelor Pada Variasi Pelarut dengan Metode DPPH. Jurnal Farmasi Malahayati , 1 (2), 80–97.
[3] Mohammed, S., & Manan, F. A. (2015). Analysis of total phenolics , tannins and flavonoids from Moringa oleifera seed extract . 7 (1), 132–135.
[4] Fitriana,  W.  D.,  Ersam,  T.,  Shimizu,  K.,  & Fatmawati,  S.  (2016).  Antioxidant  Activity  of Moringa  oleifera  Extracts. Indones.  J.  Chem. , 16 (3), 297–301.
[5] Moodley,  I.  (2017).  Acute  toxicity  of  Moringa oleifera leaf powder in rats. Journal of Medicinal Plants Studies , 5 (5), 180–185.
[6] Okumu,  M.  O.,  Mbaria,  J.  M.,  Kanja,  L.  W., Gakuya, D. W., Kiama, S. G., Ochola, F. O., & Okumu,  P.  O.  (2016).  Acute  toxicity  of  the aqueous-methanolic  Moringa  oleifera  (  Lam  ) leaf  extract  on  female  Wistar  albino  rats. International  Journal  of  Basic  &  Clinical Pharmacology , 5 (5), 1856–1861.
[7] Amabye,  T.  G.,  &  Tadesse,  F.  M.  (2016). Phytochemical  and  antibacterial  activity  of moringa  oleifera  available  in  the  market  of Mekelle.
Journal of Analytical & Pharmaceutical Researc , 2 (1), 23–26. https://doi.org/10.15406/japlr.2016.02.00011
[8] Abdulkadir,  I.  S.,  Nasir,  I.  A.,  Sofowora,  A., Yahaya,  F.,  Ahmad,  A.  A.,  &  Hassan,  I.  A. (2015). Phytochemical Screening and Antimicrobial Activities of Ethanolic Extracts of Moringa  oleifera  Lam  on  Isolates  of  Some Pathogens. Journal  of  Applied  Pharmacy , 7 (4), 1–7. https://doi.org/10.4172/1920-4159.1000203
[9] Yamin, Y., Kasmawati, H., & Talita Lisa Linggi, A. (2020). Skrining Fitokimia dan Uji Toksisitas Ekstrak  dan  Fraksi  Kulit  Batang  Kumbou  ( Artocarpus  elastica  Reinw  .  ex  Bl  )  dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethaly  Test  (  BSLT  ). Pharmauho:  Jurnal  Farmasi,  Sains,  Dan
Kesehatan , 6 (1), 15–19. https://doi.org/10.33772/pharmauho.v6i1.11398
[10] Muaja, A. D., Koleangan, H. S. J., & Runtuwene, M.  R.  J.  (2013).  Uji  Toksisitas  dengan  Metode BSLT  dan  Analisis  Kandungan  Fitokimia Ekstrak Daun Soyogik (Saurauia bracteosa DC) dengan  Metode  Soxhletasi. Jurnal  MIPA , 2 (2),
115. https://doi.org/10.35799/jm.2.2.2013.3000
[11] Sondakh,  R.  M.,  Posangi,  J.,  &  Wowor,  P.  M. (2017). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Spons Laut (Callyspongia aerizusa) terhadap Larva Artemia salina  Leach  dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test. Jurnal  E-Biomedik , 5 (2),  0–3. https://doi.org/10.35790/ebm.5.2.2017.18312
[12] Sumihe, G., Liwas, D., & Sekunder, M. (2013). Phytochemical  Analysis  and  Determining  Lc50 Value of Liwas Leave Methanol Extract . 1–4.
[13] Yamin,  Ruslin,  Sartinah,  A.,  Ihsan,  S., Kasmawati,  H.,  Suryani,  Andriyani,  R.,  Asma, Adjeng,  A.  N.  T.,  &  Arba,  M.  (2020).    Radical scavenging  assay  and  determination  Flavonoid and  Phenolic  total  of  extract  and  Fractions  of Raghu bark ( Dracontomelon dao (Blanco) Merr) . Research Journal of Pharmacy and Technology , 13 (5), 2335. https://doi.org/10.5958/0974-
360x.2020.00420.5
[14] Kalor, J. D., Simaremare, E. S., Futwembun, A., Wabiser, G., Gunawan, E., & Yabansabra, Y. R. (2019).  Cytotoxic  test  of  Octopus  cyanea  ink extract. Journal  of  Ecological  Engineering , 20 (8), 144–152. https://doi.org/10.12911/22998993/111153
[15] John, B., Sulaiman, C. T., George, S., & Reddy, V. R. K. (2014). Total Phenolics and Flavonoids In  Selected  Medicinal  Plants  From  Kerala. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 6 (1), 0–2.
[16] Vyas,  S.,  Kachhwaha,  S.,  &  Kothari,  S.  L. (2015).  Comparative  analysis  of  phenolic contents  and  total  antioxidant  capacity  of Moringa oleifera Lam . Pharmacognosy Journal , 7 (1). https://doi.org/10.5530/pj.2015.7.5
[17] Megawati,  Darmawan,  A.,  &  Dewijanti,  I.  D. (2012). Bioactivity Brine Shrimp Lethality Test Extract  and  Fractination  fFrom  Kalanchoe Pinnata  Lam  Pers. Proceeding  of  International Conference  on  Drug  Development  of  Natural Resources , 147–152.
[18] Pratiwi, L., Fudholi, A., Martien, R., & Pramono, S. (2016). Ethanol Extract , Ethyl Acetate Extract , Ethyl Acetate Fraction , and n-Heksan Fraction Mangosteen Peels ( Garcinia mangostana L .) As Source  of  Bioactive  Substance  Free-Radical Scavengers Ekstrak etanol , Ekstrak etil asetat , Fraksi  etil  asetat  ,  dan  F. Journal  of Pharmaceutical Science and Clinical Research , 01 , 71–82.
[19] Amaro,  H.  M.,  Andrade,  P.  B.,  Malcata,  F.  X., Guedes, A. C., Jorge, R. De, Ferreira, V., Frias, R.,  Process,  E.,  &  Frias,  R.  (2015).  Effect  of
Solvent  System  on  Extractability  of  Lipidic Components  of  Scenedesmus  obliquus  (M2-1) and  Gloeothece  sp.  on  Antioxidant  Scavenging Capacity  Thereof. Marine  Drugs , 13 ,  6453– 6471. https://doi.org/10.3390/md13106453
[20] Handayani,  V.,  Najib,  A.,  Syarif,  R.  A., Mahmud,  A.,  Hamidu,  L.,  &  Ahmad,  A.  R. (2019). Uji Toksisitas Ekstrak Etanol
Terpurifikasi Biji Mahoni ( Swietenia mahagoni ). Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 6 (2), 360–362.
[21] Widiyarti,  G.,  Supiani,  S.,  &  Tiara,  Y.  (2018). Antioxidant  Activity  and  Toxicity  of  Puspa (Schima wallichii) Leaves Extract from Indonesia. Journal of Tropical Life Science , 8 (2), 151–157. https://doi.org/10.11594/jtls.08.02.08
[22] Windyaswari,  A.  S.,  Faramayuda,  F.,  & Ratnasari,  D.  (2015).  Kajian  Pendahuluan Potensi  Anti  Kanker  dengan  Uji  Toksisitas
Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) Terhadap Ekstrak Etanol dan Fraksi-Fraksi dari Kulit  Batang  Kemiri  Aleurites  moluccana  (L.) Willd. Kartika J. Ilm. Far , 3 (1), 36–42.
[23] Pimentel Montanher, A. B., Pizzolatti, M. G., & Costa Brighente, I. M. (2002). An application of the brine shrimp bioassay for general screening of Brazilian medicinal plants. Acta Farmaceutica Bonaerense , 21 (3), 175–178.
[24] Sartinah, A., Arba, M., Akib, N. I., & Tendri, A. N.  (2020).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  dan Fraksi Kulit Batang Ketapang Laut ( Terminalia Catappa  L  .)  menggunakan  Metode  BSLT  ( Acute  Toxicity  Test  of  Extract  and  Fractions Terminalia  Catappa  L  .  Stem  Skin  with  BSLT Method  ). Pharmauho :  Jurnal  Farmasi,  Sains,
Dan Kesehatan ,
6 (1), 42–47. https://doi.org/10.33772/pharmauho.v6i
[25] Yamin,  Wahyono,  &  Susidarti,  R.  A.  (2010). Isolasi  dan  Indentifikasi  Senyawa  Antibakteri dari  Daun  Jakang  (Muenhelebeckia  platyclada
MEISSN) . Gadjah Mada.