## ________________________________________________________________

## Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat dari Kefir Susu Kambing Saanen (Capra aegagrus Hircus)
Ronanda Rumaisha, Ofa Suzanti Betha, Hendri Aldrat* Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
*Corresponding author: hendri@uinjkt.ac.id
Diterima: 4 Maret 2021; Disetujui 8 April 2021
Abstract: Kefir is a health drink that has a positive effect on humans whose ingredients can come from goat and cow milk. The change of milk to sour in kefir occurs due to the presence of various types of microbes that live symbiotically on kefir grains.  So  far  there have not  been  many  reports of  LAB  types in kefir obtained  from  Saanen goat milk  in  Indonesia.  This study  aims  to  determine  the types  and  characteristics  of  LAB from  Saanen goat  milk kefir. LAB isolation  was  carried  out using a multilevel dilution technique using distilled water, then grown on MRS agar medium which had been added with 1% CaCO 3 and incubated at 37ºC for 48 hours. LAB characterization is done by observing colony morphology, cell morphology, a physiological and biochemical characterization which included catalase test, motility test, fermentation type test, growth at temperature 11ºC, 37ºC, and 45ºC, and growth in NaCl 5%, 6.5%, and 10%. As results, 4 isolates were found in accordance with  the  general  characteristics  of  BAL,  which  were  Gram-positive,  spherical-shaped,  non-spore-forming,  and  negative catalase. All isolates are non-motile, homofermentative, non-hemolytic, which can grow at temperatures of 11ºC-45ºC and NaCl  concentrations  of  5%-10%.  The  characterization  results  showed  that  the  four  isolates  were  included  in  the  genus Enterococcus . The role of Enterococcus as a producer of lactic acid is discussed in this study.
Keywords: Lactic acid bacteria (BAL), Saanen goat milk kefir, isolation, characterization
Abstrak :  Kefir  merupakan  minuman  kesehatan  yang  memiliki  efek  positif  bagi  manusia  yang  bahannya  bisa  berasal  dari susu kambing dan sapi. Perubahan susu menjadi masam pada kefir terjadi karena adanya berbagai jenis mikroba yang hidup bersimbiosis pada bulir kefir. Sejauh ini belum banyak dilaporkan jenis BAL pada kefir yang diperoleh dari  susu kambing Saanen  di  Indonesia.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  jenis  dan  karakteristik  BAL  yang  terkandung  dalam  kefir susu kambing Saanen. BAL diisolasi dengan menggunakan media MRS yang disuplemen dengan CaCO 3 1% dan diinkubasi 48 jam suhu 37 o C. Selanjutnya dilakukan karakterisasi BAL dengan cara mengamati morfologi koloni dan sel, karakterisasi fisiologi  dan  biokimia  yang  di  antaranya:  uji  katalase,  motilitas,  tipe  fermentasi,  pertumbuhan  pada  suhu  11 o C,  37 o C,  dan 45 o C, serta uji pertumbuhan yang disuplemen dengan NaCl 5%, 6.5%, dan 10%. Penelitian ini berhasil memperoleh 4 isolat yang  sesuai  dengan  karakteristik  umum  BAL,  yaitu  Gram  positif  berbentuk  bulat,  tidak  membentuk  spora,  dan  bersifat katalase  negatif.  Semua  isolat  bersifat  non  motil,  homofermentatif,  dapat  tumbuh  pada  suhu  11 o C-45 o C  dan  konsentrasi NaCl  5%-10%.  Hasil  karakterisasi  menunjukkan  keempat  isolat  termasuk  dalam  genus Enterococcus .  Peran Enterococcus sebagai penghasil asam laktat didiskusikan dalam kajian ini.
Kata kunci Bakteri asam laktat (BAL), kefir susu kambing Saanen, isolasi, karakterisasi

## 1. PENDAHULUAN
Susu kambing dikenal memiliki beberapa keunggulan dibandingkan  susu  sapi  dari  segi  nutrisi.  Susu kambing  mengandung  vitamin  B6  25%,  vitamin  A 47%,  dan  kalsium  13%  lebih  banyak  dibandingkan susu sapi. Selain itu, rantai asam lemak susu kambing lebih  pendek  dibandingkan  susu  sapi  sehingga  lebih mudah dicerna dan diserap oleh tubuh (Getaneh et al ., 2016). Peningkatan cita rasa dan aroma susu kambing dapat dilakukan melalui proses fermentasi. Salah satu produk hasil fermentasi dari susu kambing yaitu kefir.
Kefir merupakan produk susu fermentasi yang dibuat dengan  menambahkan  bibit  kefir  ke  dalam  susu kambing,  sapi,  atau  domba  (Ismail,  Yulvizar  and Mazhitov, 2018). Rasa asam  yang muncul pada kefir akibat  adanya  bibit  kefir  mengandung  bakteri  asam laktat  (BAL)  seperti Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Leuconostoc spp., Streptococcus spp.),  bakteri asam asetat ( Acetobacter spp), khamir ( Saccharomyces , Torula ), dan mikroorganisme lainnya (Kıvanç and Yapici, 2015). Kambing Saanen

## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal
Volume 2(2), 2020, 79-86
merupakan salah satu jenis kambing yang berasal dari Lembah  Saanen,  Swiss  yang  dapat  menghasilkan jumlah  susu  yang  banyak  yakni  300-2000  kg  selama 150-300 hari laktasi (Devendra and Haenlein, 2011).
Bakteri  asam  laktat  (BAL)  merupakan  bakteri  Gram positif berbentuk kokus atau batang, tidak membentuk  spora,  katalase  negatif,  tahan  terhadap asam  dan  bersifat  fakultatif  anaerob.  BAL  ini merupakan  bakteri  yang  terdapat  pada  kefir  yang merubah  susu  menjadi  asam.  BAL  disebut  juga sebagai  bakteri  probiotik  yang  dapat  memberikan manfaat  untuk  saluran  pencernaan.  BAL  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen  dengan beberapa  cara,  antara  lain  dengan  menghasilkan senyawa antibakteri (asam organik, hidrogen peroksida,  reuterin,  reuterisiklin,  bakteriosin)  serta membentuk  kolonisasi  probiotik  dalam  saluran pencernaan (Lahtinen et al. , 2012; Yuniastuti, 2014). Tidak  hanya  itu,  LAB  pada  kefir  juga  memiliki kemampuan  menurunkan  kolesterol  sebagaimana yang  dilaporkan  pada  penelitian  sebelumnya  (Yusuf et al ., 2020).
Penelitian  sebelumnya  menyebutkan  bahwa  susu kambing  fermentasi  mengandung Lactobacillus plantarum , L.  pentosus , L.  delbrueckii , L.  helveticus , dan L.  paracasei (Cho  et  al.,  2018).  Bakteri  asam laktat  perlu  diidentifikasi  dengan  tujuan  untuk memperoleh  informasi  jenis  mikroba  apakah  terlibat dalam  perubahan  susu  menjadi  asam  akibat  proses fermentasi  dengan  bulir  kefir.  Mikroba  penghasil asam  laktat  tersebut  memiliki  potensi  untuk dikembangkan  di  masa  mendatang  sebagai  probiotik alami dan keperluan industri.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1 Alat
Peralatan yang dibutuhkan untuk penelitian ini antara
lain:  alat-alat  gelas  (botol  kaca  steril,  gelas  kimia, erlenmeyer,  gelas  ukur,  tabung  reaksi,  batang pengaduk, cawan petri, pipet tetes, corong), pH meter (Sartorius), hot plate (VELP Scientificia), termometer,  kertas  saring,  mikropipet  (Bio-Rad  dan Ranin), triangle spreader , jarum inokulum (ose) bulat dan runcing, kaca objek, cover glass , tabung Durham, pipet  tetes,  timbangan  analitik  (Ogawa  Seiki), bunsen,  mikroskop  (Olympus),  vortex  (Gemmy Industrial  Corp), refrigerator (GEA),  inkubator (France Etuves), shaker incubator (IKA), laminar air flow cabinet (Ogawa Seiki), autoklaf, oven (Memmert),  rak  tabung  reaksi,  saringan  besi,  plastik wrap,  aluminium  foil,  tali  kasur,  kapas,  kasa,  dan magnetic stirrer.

## 2.2 Bahan
Bahan-bahan  untuk  keperluan  penelitian  ini  adalah starter  kefir  yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Indonesia,  Depok. Susu  kambing  Saanen  diperoleh  dari  Peternakan Kampung  99  Pepohonan  di  Meruyung  Kota  Depok, akuades,  media  de  Man,  Rogosa  and  Sharpe  agar (MRSA),  media  de  Man,  Rogosa  and  Sharpe  broth (MRSB),  media  motility  test,  media  blood  agar, CaCO 3 ,  larutan  NaCl  (5%,  6,5%,  dan  10%),  alkohol (70%,  90%  dan  96%),  kristal  violet,  iodin,  safranin, larutan H 2 O 2 3% dan malachite green .

## 2.3 Prosedur Kerja
a. Pembuatan Kefir Susu Kambing Saanen
Proses pembuatan kefir susu kambing Saanen diawali dengan  pengukuran  pH  susu  kambing  Saanen menggunakan  pH  meter.  Selanjutnya  1L  susu kambing Saanen yang telah dipasteurisasi dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca  steril  yang  telah berisi 5% starter kefir (50 g). Selanjutnya susu diaduk
merata  dan  botol  kaca  ditutup.  Proses  fermentasi dilakukan  pada  suhu  25 o C  dengan  kecepatan  rotasi 125  rpm  selama  24  jam  di  dalam shaker incubator .
Lalu  kefir  disaring  menggunakan  saringan stainless steel . Kemudian bibit kefir disimpan untuk digunakan pada  inokulasi  selanjutnya.  Kefir  susu  kambing Saanen  dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca  steril, dilakukan  pengukuran  pH  dan  disimpan  pada  suhu 4 o C (Ismail et al ., 2018; Otles & Cagindi, 2003; Pop et al ., 2014).

## b. Isolasi  dan  Pemurnian  BAL  dari  Kefir  Susu Kambing Saanen
Sebanyak  1  mL  kefir  ditambahkan  ke  dalam  tabung reaksi  yang  berisi  9  ml  akuades.  Kemudian  larutan sampel dihomogenkan menggunakan vortex. Selanjutnya  dilakukan  pengenceran  bertingkat  dari pengenceran 10 -1 , 10 -2 dan 10 -7 (Ismail, Yulvizar and Mazhitov, 2018). Hasil dari masing-masing pengenceran  tersebut  diambil  sebanyak  100  µl  dan masing-masing  diinokulasikan  ke  dalam  cawan  petri berisi  media  MRS  agar  yang  telah  ditambahkan dengan  CaCO 3 1%  dengan  metode spread  plate secara  duplo.  Kemudian  isolat  diinkubasi  pada  suhu 37 o C  selama  48  jam  berdasarkan  Ismail  et.al  dengan sedikit  modifikasi  (Ismail,  Yulvizar  and  Mazhitov, 2018).
Pemurnian  isolat  BAL  dilakukan  dengan  cara menginokulasikan  isolat  bakteri  yang  menghasilkan zona bening di sekeliling koloni bakteri tersebut pada media MRS agar baru dengan metode streak plate dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24-48 jam (Ismail, Yulvizar  and  Mazhitov,  2018).  Kultur  yang  telah dimurnikan  selanjutnya  disimpan  pada  suhu  11°C dengan  media  MRS  agar  (Misgiyarta  and  Widowati, 2007).

## c. Karakterisasi Morfologi Isolat BAL dari Kefir Susu Kambing Saanen
Proses  karakterisasi  penetuan  morfologi  isolate  BAL dilakukan  dengan  dua  cara,  yakni  makroskopis  dan mikroskopis.  Morfologi  makroskopis  BAL  diamati secara  visual  bentuk-bentuk  koloni,  tepi,  warna,  dan elevasi dari isolat bakteri (Ismail et al ., 2018)
Pewarnaan  Gram: Kaca  objek  disterilisasi  dengan alkohol  70%.  Selanjutnya,  isolate  bakteri  dicuplik menggunakan jarum ose secara aseptik dan dioleskan pada kaca objek dan selanjutnya dilewatkan beberapa kali  di  atas  nyala  api  bunsen.  Setelah  itu,  2  tetes kristal  violet  diteteskan  di  atas  kaca  yang mengandung  isolat  bakteri,  lalu  didiamkan  1  menit, kemudian  dibilas  dengan  aquades  dan  dikeringkan. Isolat  bakteri  kemudian  diteteskan  iodin  lalu didiamkan  selama  1  menit,  kemudian  dibilas  dengan akuades  dan  dikeringkan.  Selanjutnya  isolat  bakteri perlahan-lahan  diteteskan  alkohol  96%  selama  30 detik,  kemudian  dibilas  dengan  akuades  dan dikeringkan.  Setelah  itu  isolat  bakteri  diteteskan safranin  perlahan  selama  30  detik,  kemudian  dibilas dengan  akuades  dan  dikeringkan.  Pengamatan  isolat bakteri  berupa  bentuk  dan  warna  dinding  selnya dilakukan  di  bawah  mikroskop  dengan  perbesaran 40× (Ismail et al. , 2018).
Pewarnaan  Endospora: Kaca  objek  disterilisasi dengan alkohol 70%. Kemudian isolat bakteri diambil dengan  jarum  inokulum  (ose)  secara  aseptik  dan dioleskan  pada  kaca  objek  dan  dilewatkan  beberapa kali  di  atas  api  bunsen.  Setelah  itu  preparat  ditutup dengan  kertas  saring  dan  ditetesi  dengan  malachite hijau.  Preparat  kemudian  diletakkan  di  atas  kawat yang  dipanaskan  di  atas  uap  air  mendidih  selama  5 menit,  kemudiam  dibilas  dengan  akuades.  Lalu preparat  diteteskan  dengan  safranin,  didiamkan selama  1  menit,  kemudian  dibilas  dengan  akuades
dan  dikeringkan.  Preparat  kemudian  diamati  dengan mikroskop.  Sel  vegetatif  ditandai  dengan  warna merah, sedangkan spora ditandai dengan warna hijau (Misgiyarta & Widowati, 2007).

## d. Karakterisasi  Fisiologi  dan  Biokimia  BAL
dari Kefir Susu Kambing Saanen
Uji  Katalase: Uji  katalase  dilakukan  dengan mengoleskan  satu  ose  isolat  bakteri  berusia  24  jam pada  kaca  objek  yang  disterilkan  menggunakan alkohol  70%,  selanjutnya  ditambahkan  2  tetes  H 2 O 2 3%.  Keberadaan  gelembung  oksigen  menunjukkan bahwa  bakteri  dapat  menghasilkan  enzim  katalase yang  dapat  mengubah  H 2 O 2 menjadi  air  (H 2 O)  dan oksigen (O 2 ) (Ismail et al ., 2018).
Uji  Motilitas: Sebanyak  satu  ose  isolat  bakteri diambil  dan  ditusukkan  ke  dalam  media motility  test pada  tabung  reaksi  menggunakan  jarum  ose  runcing lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 o C. Hasil positif  menunjukkan  pertumbuhan  bakteri  yang menyebar  pada  permukaan  media,  sedangkan  hasil negatif akan menunjukkan pertumbuhan bakteri yang tidak  menyebar  dan  hanya  tumbuh  di  sekitar  lokasi yang ditusukkan (Ismail et al ., 2018).
Uji  Tipe  Fermentasi: Berdasarkan  tipe  fermentasi, BAL dikelompokkan menjadi dua, yakni homofermentatif  dan  heterofermentatif.  Uji  ini dilakukan  menggunakan  tabung  Durham  yang  diisi dengan kultur yang mengandung media MRS broth di dalam  tabung  reaksi,  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama  48  jam.  Pengamatan  dilakukan  dengan melihat  terbentuknya  gelembung  udara  pada  tabung Durham (Romadhon et al ., 2012). Bakteri yang dapat menghasilkan  gelembung  udara  merupakan  bakteri heterofermentatif, sedangkan bakteri yang tidak dapat menghasilkan  gelembung  udara  merupakan  bakteri homofermentatif (Ismail et al ., 2018).
Uji Pertumbuhan BAL pada Suhu yang Berbeda: Sebanyak satu ose bakteri diinokulasikan pada media MRS broth dan diinkubasi pada suhu 11 o C, 37 o C, dan 45 o C  selama  7  hari.  Pertumbuhan  bakteri  ditandai dengan  adanya  kekeruhan  pada  media  (modifikasi Ismail et al ., 2018).
Uji  Pertumbuhan  BAL  pada  Konsentrasi  NaCl yang Berbeda: Sebanyak satu ose bakteri diinokulasikan  pada  media  MRS  broth  dengan konsentrasi NaCl 5%, 6,5%, dan 10% lalu diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  7  hari.  Pertumbuhan  bakteri ditandai  dengan  adanya  kekeruhan  pada  media (Ismail et al ., 2018).

## e. Uji Hemolitik
Uji  hemolitik  dilakukan  dengan  menginokulasikan satu  ose  isolat  bakteri  yang  berumur  24  jam  setelah inkubasi.  Streak  satu  koloni  tersebut  pada  media blood agar dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam.  Aktivitas  hemolitik  diamati  dengan  melihat adanya  zona  bening  (hemolitik-ß),  atau  zona  hijau (hemolitik-α), atau tidak terbentuk zona (hemolitik-γ) di  sekitar  koloni  bakteri.  Uji  hemolitik  dilakukan untuk  mengetahui  bakteri  bersifat  patogen  atau  non- patogen.  Keberadaan  bakteri  patogen  ditunjukkan dengan  munculnya  zona  di  sekitar  koloni  bakteri yang  menunjukkan  adanya  aktivitas  hemolitik, sedangkan bakteri non-patogen ditandai dengan tidak terbentuknya zona di sekitar koloni bakteri (modifikasi  Hargrove  dan  Alfrod  dalam  Hawaz, 2014).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Pembuatan Kefir Susu Kambing Saanen
Pada  Proses  fermentasi  susu  kambing  Saanen menggunakan  bibit  kefir  menunjukkan  adanya
aktivitas  BAL  yang  terkandung  dalam  bibit  kefir menyebabkan  penurunan  pH  susu  dari  6,82  menjadi 4,53. Hal ini disebabkan BAL memecah laktosa pada susu  menjadi  asam  laktat,  sehingga  susu  menjadi asam.  Selain  itu,  peningkatan  bobot  bibit  kefir  dari 50,07  g  menjadi  151,43  g  menunjukkan  adanya aktivitas L.  kefiranofaciens selama  proses  fermentasi (Rahayu & Nurwitri, 2012).

## 3.2  Isolasi  dan  Pemurnian  Isolat  BAL  dari  Kefir Susu Kambing Saanen
Pada  penelitian  ini  didapatkan  6  isolat  bakteri  dari kefir  susu  kambing  Saanen  yang  diberi  kode  nama KS1,  KS2,  KS3,  KS4,  dan  KS6.  Pemilihan  isolat berdasarkan  zona  bening  di  sekitar  isolat  dan perbedaan  morfologi  koloninya  Zona  bening  yang dihasilkan  isolat  menunjukkan  adanya  reaksi  antara asam  laktat,  produk  metabolit  dari  isolat  dengan CaCO 3 dan  membentuk  Ca-laktat  yang  larut  dalam media  (Pradana et al ., 2018). Selanjutnya isolat hasil isolasi dimurnikan dengan metode goresan 4 kuadran. Pemurnian  dilakukan  sebanyak  4-5  kali  hingga didapatkan  koloni  tunggal  dari  isolat  murni.  Isolat yang  telah  murni  kemudian  dipindahkan  ke  dalam media MRS agar miring.

## 3.3 Karakterisasi Morfologi Isolat BAL dari Kefir Susu Kambing Saanen
Karakterisasi morfologi dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis. Karakterisasi morfologi  bakteri  makroskopik  dilakukan  dengan mengamati  bentuk  koloni  (dilihat  dari  atas),  tepi koloni  (dilihat  dari  atas),  elevasi  (dilihat  dari samping),  dan  warna  koloni  secara  langsung menggunakan  mata  (Ismail et  al .,  2018).  Hasil pengamatan morfologi makroskopis isolat BAL dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1. Karakteristik morfologi isolat BAL dari kefir susu kambing Saanen secara makroskopis
Isolat Morfologi Koloni Bentuk Tepi Elevasi Warna Ukuran KS1 Bulat Licin Cembung Putih 1 mm KS2 Bulat Licin Cembung Putih 1 mm KS3 Bulat Licin Cembung Putih 0,5 mm KS4 Bulat Licin Cembung Putih 1 mm KS5 Bulat Licin Cembung Putih 1,5 mm KS6 Bulat Licin Cembung Putih 2 mm
Berdasarkan  hasil  isolasi,  semua  isolat  berbentuk bulat,  tepian  licin,  elevasi  cembung,  berwarna  putih dengan  ukuran  0,5-2  mm.  Hasil  yang  didapatkan sesuai  dengan  morfologi  makroskopis  BAL  yang diperoleh (Ismail et al., 2017), yaitu berbentuk bulat, elevasi  cembung  dan  datar,  berwarna  putih  susu  dan krem,  dengan  tepian  licin.    Karakterisasi  morfologi secara  mikroskopis  dilakukan  dengan  pewarnaan Gram  dan  pewarnaan  endospora  yang  kemudian diamati  di bawah mikroskop dengan perbesaran 40×. Hasil  pewarnaan  Gram  isolat  BAL  dari  kefir  susu kambing Saanen dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2. Hasil pewarnaan Gram isolat BAL dari kefir susu kambing Saanen
Isolat Pewarnaan Gram Bentuk Sel KS1 Positif Bulat KS2 Positif Bulat KS3 Negatif Bulat KS4 Negatif Bulat KS5 Positif Bulat KS6 Positif Bulat
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa 4 isolat (KS1, KS2,  KS5,  KS6)  merupakan  Gram  positif  dengan keberadaan  warna  ungu  dan  2  isolat  lainnya  (KS3, KS4)  merupakan  bakteri  Gram  negatif  yang  ditandai dengan  warna  merah.  Semua  isolat  memiliki  bentuk sel bulat. Hasil pewarnaan Gram menunjukkan isolat KS1,  KS2,  KS5,  dan  KS6  diduga  tergolong  BAL, karena  sesuai  dengan  salah  satu  karakteristik  umum dari BAL yaitu Gram positif dengan bentuk sel bulat atau  batang  (Khandelwal et  al .,  2016).  Selanjutnya dilakukan  pewarnaan  endospora  pada  keempat  isolat Gram  positif,  yaitu  KS1,  KS2,  KS5,  dan  KS6.  Hasil pewarnaan  endospora  menunjukkan  semua  isolat tidak  memiliki  spora,  karena  hanya  terlihat  sel vegetatif  yang  berwarna  merah  setelah  diberikan
pewarna safranin. Pada pewarnaan  endospora, spora yang  dihasilkan  bakteri  akan  menyerap  pewarna malachite  hijau  (Misgiyarta  and  Widowati,  2007). Hasil  pewarnaan  endospora  keempat  isolat  sesuai dengan  karakteristik  umum  BAL,  yaitu  tidak membentuk spora (König and Fröhlich, 2009).

## 3.4  Karakterisasi  Fisiologi  dan  Biokimia  Isolat BAL dari Kefir Susu Kambing Saanen
Karakterisasi  fisiologi  dan  biokimia  dilakukan dengan  uji  katalase,  uji  motilitas,  uji  tipe  fermentasi, uji  pertumbuhan  pada  suhu  dan  konsentrasi  NaCl yang  berbeda.  Semua  uji  ini  dilakukan  pada  isolat BAL  yang  termasuk  Gram  positif  dan  tidak membentuk  spora,  yaitu  isolat  KS1,  KS2,  KS5,  dan KS6 (Tabel 3).
Hasil  uji  katalase  isolat  BAL  sifat  katalase  negatif yang  ditandai  dengan  isolat  tidak  menghasilkan gelembung ketika ditetesi dengan H 2 O 2 3%. Hidrogen peroksida  merupakan  produk  samping  dari  proses metabolisme  aerobik  yang  bersifat  toksik,  sehingga bakteri  aerob  menghasilkan  enzim  katalase  untuk memecah hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen yang  ditandai  dengan  terbentuknya  gelembung  gas oksigen . (Goyal et  al .,  2012).    Hasil  uji  motilitas menunjukkan  keempat  isolat BAL  bersifat  non  motil yang ditandai dengan pertumbuhan bakteri yang tidak menyebar  dan  hanya  tumbuh  di  sekitar  lokasi penusukan.    Hasil  uji  tipe  fermentasi  menunjukkan keempat  isolat  BAL  bersifat  homofermentatif  yang ditandai  dengan  tidak  terbentuk  gelembung  pada tabung  Durham  setelah  inkubasi  selama  48  jam.  Hal ini disebabkan bakteri homofermentatif menggunakan jalur  fermentasi Embden-Meyerhof-Parnas (EMP), sehingga dalam proses fermentasinya hanya
dihasilkan produk akhir asam laktat, genus BAL yang bersifat  homofermentatif  meliputi  beberapa  spesies dari genera Lactobacillus , Lactococcus , Pediococcus , Streptococcus , Vagococcus dan Tetragenococcus (Jay et al ., 2005).
Hasil  uji  pertumbuhan  isolat  BAL  menunjukkan semua isolat dapat tumbuh pada suhu 11 o C, 37 o C, dan 45 o C yang ditandai dengan kekeruhan media MRSB.
Enterococcus dapat tumbuh pada suhu 10 o C dan 45 o C (Lahtinen et  al .,  2012).  Selanjutnya,  isolat  BAL diujikan terhadap tiga konsentrasi NaCl yang berbeda menunjukkan  semua  isolat  dan L.  casei dapat menoleransi  konsentrasi  NaCl  5%,  6,5%,  dan  10%. Enterococcus dan Aerococcus dapat  menoleransi konsentrasi  NaCl  6,5%  (Cappucino  &  Sherman, 2012).  Bakteri Enterococcus penghasil  asam  laktat bisa  memiliki  beberapa  aspek  yang  perlu  disikapi dengan  hati-hati.  Adanya  strain-strain Enterococcus ini  yang  bisa  melakukan  transfer  genetik  yang  dapat mengakibatkan  resisten  antibiotic  baik  dari E. faecalis atau E.  faecium (Franz et  al .,  2011).  Oleh sebab  itu  perlu  dimonitor  agar  strain-strain  tertentu yang  berpotensi  meningkatkan  resistensi  antibiotik tidak  masuk  ke  dalam  makanan  atau  minuman  yang difermentasi  menggunakan  BAL.    Di  sisi  lain,  asam laktat  yang  dihasilkan  oleh  BAL  merupakan  bahan baku  untuk  pembuatan polylactic  acid (PLA), substansi  yang  disukai  karena  bisa  diproduksi  dari sumber  terbarukan  (Subramanian,  Talluri  and Christopher,  2015).  Lebih  lanjut  Subramanian  et.  al mengungkapkan  bahwa  PLA  merupakan  polimer termoplastik  yang  merupakan  bahan  baku  penting dalam  industri printing 3D. E.  faecalis juga dilaporkan  sebagai  penghasil  asam  laktat  dengan konsentrasi  tinggi  dibandingkan  dengan  BAL  jenis lainnya.

## 3.5 Uji Hemolitik
Bakteri  berdasarkan  aktivitas  hemolitiknya  dapat dibedakan  menjadi  tiga  kategori,  yaitu  hemolitik-ß (menghasilkan  zona  bening  di  sekeliling  koloni bakteri),  hemolitik-α  (menghasilkan  zona  hijau  di sekeliling  koloni  bakteri,  dan  hemolitik-γ  (tidak menghasilkan  zona  di  sekeliling  koloni  bakteri) (Cappucino & Sherman, 2012; Hawaz, 2014). Bakteri hemolitik-ß  memiliki  kemampuan  memecahkan eritrosit  secara  sempurna  sehingga  menghasilkan zona  bening.  Bakteri  hemolitik-α  tidak  dapat memecahkan  eritrosit  secara  sempurna  dan  hanya menyebabkan kebocoran saja sehingga menghasilkan zona hijau. Bakteri hemolitik-γ tidak  dapat memecahkan  eritrosit  sehingga  tidak  menghasilkan zona (Suardana et al ., 2014).
Hasil  uji  hemolitik  pada  keempat  isolat  BAL menunjukkan bakteri bersifat non hemolitik (hemolitik-γ)  dan  tidak  dapat  memecahkan  eritrosit yang  ditandai  dengan  tidak  terbentuk  zona  di
sekeliling  koloni  bakteri.  Bakteri  patogen  seperti S. aureus bersifat  hemolitik-ß  yang  menunjukkan bakteri  dapat  memecahkan  eritrosit  secara  sempurna yang  ditandai  dengan  terbentuk  zona  bening  di sekeliling koloni bakteri.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan, dapat  disimpulkan  bahwa  empat  isolat  BAL  yang berhasil diisolasi dari kefir susu kambing Saanen dan termasuk  dalam  genus Enterococcus .  Keempat  isolat BAL  memiliki  karakteristik  Gram  positif  berbentuk bulat,  tidak  membentuk  spora,  bersifat  non  motil, katalase negatif, homofermentatif, dapat tumbuh pada kisaran  suhu  11-45 o C  dan  konsentrasi  NaCl  5-10%. Keempat  BAL  ini  memiliki  sifat  bersifat  non hemolitik (hemolitik-γ) dan tidak dapat memecahkan eritrosit.
Tabel  3. Karakteristik fisiologi, dan biokimia isolat BAL dari kefir susu kambing Saanen
Jenis Uji Isolat KS1 KS2 KS5 KS6 Pewarnaan Gram + + + + Bentuk sel Bulat Bulat Bulat Bulat Pewarnaan endospora - - - - Uji katalase - - - - Uji motilitas - - - - Uji tipe fermentasi HM HM HM HM Uji suhu Suhu 11 o C
Suhu 37 o C
Suhu 45 o C
+ + + + + +
+ + + + + + Uji toleransi NaCl NaCl 5% NaCl 6,5% NaCl 10% + + + + + + + + + + + + Uji hemolitik Hemolitik-γ Hemolitik-γ Hemolitik-γ Hemolitik-γ Identifikasi genus Enterococcus Enterococcus Enterococcus Enterococcus Keterangan:  (+):  hasil  reaksi  positif,  (-):  hasil  reaksi  negatif,  HM:  homofermentatif,  TD:
tidak dilakukan. (Sumber: Lahtinen et al ., 2012; Schillinger & Lucke, 1989 dalam Kalschne et al ., 2015)

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Cho,  G.  S. et  al .  (2018)  ‘Isolation  and  characterization  of lactic acid bacteria from fermented goat milk in Tajikistan’, Journal  of  Microbiology  and  Biotechnology,  28(11),  pp. 1834–1845. doi: 10.4014/jmb.1807.08011.
Devendra, C. and Haenlein, G. F. W. (2011) ‘Goat breeds’, in Fox, P. F. and McSweeney, P. L. H. (eds) Encyclopedia of Dairy Sciences. 2nd edn. Amsterdam: Elsevier, pp. 310– 324.
Franz, C. M. A. P. et al . (2011) ‘Enterococci as probiotics and their implications in food safety’, International Journal of Food Microbiology. Int J Food Microbiol, pp. 125–140. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2011.08.014.
Getaneh,  G. et  al .  (2016)  ‘Review  on  Goat  Milk Composition and its Nutritive Value’,  Journal of Nutrition and Health Sciences. Annex Publishers, LLC, 3(4), p. 401. doi: 10.15744/2393-9060.3.401.
Goyal,  R. et  al. (2012)  ‘Characterization  of  the Lactobacillus  Isolated  from  Different  Curd  Samples’, African  Journal  of  Biotechnology,  11(79),  pp.  14448– 14452. doi: 10.5897/AJB11.310.
Hawaz, E. (2014) ‘Isolation and identification of probiotic lactic acid bacteria from curd and in vitro evaluation of its growth  inhibition  activities  against  pathogenic  bacteria’, African  Journal  of  Microbiology  Research,  8(13),  pp. 1419–1425. doi: 10.5897/AJMR2014.6639.
Ismail,  Y.  S.,  Yulvizar,  C.  and  Mazhitov,  B.  (2018) ‘Characterization  of  lactic  acid  bacteria  from  local  cows milk kefir’,  IOP  Conference  Series:  Earth  and Environmental Science, 130(1), pp. 1–8. doi: 10.1088/1755-1315/130/1/012019.
Ismail,  Y.  S.,  Yulvizar,  C.  and  Putriani  (2017)  ‘Isolasi, karakterisasi  dan  uji  aktivitas  antimikroba  bakteri  asam laktat  dari  fermentasi  biji  kakao  (Theobroma  cacao  L.)’, Jurnal Bioleuser, 1(2).
Jay,  J.  M.,  Loessner,  M.  J.  and  Golden,  D.  A.  (2005) Modern  Food  Microbiology.  7th  edn.  Edited  by  D.  R. Heldman. New York: Springer.
Khandelwal, P. et al. (2016) ‘Lactic Acid Bacteria’, in Ray, R.  C.  and  Montet,  D.  (eds)  Fermented  Foods.  Part  I:  Bi. New York: CRC Press, pp. 127–146.
Kıvanç,  M.  and  Yapici,  E.  (2015)  ‘Kefir  as  a  Probiotic Dairy  Beverage :  Determination  Lactic  Acid  Bacteria  and Yeast’, International Journal of Food Engineering, 1(1), pp. 55–60. doi: 10.18178/ijfe.1.1.55-60.
König, H. and Fröhlich, J. (2009) ‘Lactic Acid Bacteria’, in König,  H.,  Fröhlich,  J.,  and  Unden,  G.  (eds)  Biology  of Microorganism  on  Grapes,  in  Must  and  in  Wine.  Berlin: Springer-Verlag, pp. 3–6.
Lahtinen,  S. et  al. (2012)  Lactic  acid  bacteria: Microbiological and functional aspects. Fourth. New York: Taylor & Francis Group.
Misgiyarta  and  Widowati,  S.  (2007)  ‘Seleksi  dan Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  Indigenus’, Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan
Bioteknologi
Tanaman, 24(4), pp. 38–57. doi: 10.1111/j.1540-5842.2007.00924.x.
Otles, S. and Cagindi, O. (2003) ‘Kefir: A Probiotic Dairy- Composition,  Nutritional  and  Therapeutic  Aspects’, Pakistan  Journal  of  Nutrition,  2(2),  pp.  54–59.  doi: 10.1093/pasj/48.2.377.
Pop,  C. et  al .  (2014)  ‘Influence  of  Different  Growth Conditions  on  the  Kefir  Grains  Production,  Used  in  the Kefiran  Synthesis’,  Bulletin  UASVM  Food  Science  and Technology, 71(2), pp. 147–153. doi: 10.15835/buasvmcn- fst.
Pradana,  I.  P.  E.,  Dewi,  S.  S.  and  Wilson,  W.  (2018) ‘Aktivitas Kefir dan Isolat Bakteri  Asam Laktat dari Kefir dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Salmonellatyphi’,  in Prosiding  Seminar  Nasional  Mahasiswa  Unimus,  pp.  170– 177.
Rahayu,  W.  P.  and  Nurwitri,  C.  .  (2012)  Mikrobiologi Pangan.  Edited  by  P.  Komalasari.  Bogor:  Penerbit  ITB
Press.
Available at: https://books.google.co.id/books?hl=en&lr=&id=Ho8SEA AAQBAJ&oi=fnd&pg=PP1&ots=GrTddsDhjD&sig=ql72_ x_mvSffQvKpDZu0RxzHlgQ&redir_esc=y#v=onepage&q &f=false (Accessed: 3 March 2021).
Romadhon,  R.,  Subagiyo,  S.  and  Margino,  S.  (2012) ‘Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam  Laktat  Dari  Usus Udang  Penghasil  Bakteriosin  Sebagai  Agen  Antibakteria Pada  Produk-Produk  Hasil  Perikanan’,  Saintek  Perikanan : Indonesian  Journal  of  Fisheries  Science  and  Technology, 8(1), pp. 59–64. doi: 10.14710/IJFST.8.1.59-64.
Suardana,  I.  W.,  Utama,  I.  H.  and  Wibowo,  H.  (2014) ‘Identifikasi  Escherichia  coli  O157:H7  dari  Feses  Ayam dan  Uji  Profil  Hemolisisnya  pada  Media  Agar  Darah’, Jurnal Kedokteran Hewan, 8(1), pp. 1–5.
Subramanian,  M.  R.,  Talluri,  S.  and  Christopher,  L.  P. (2015)  ‘Production  of  lactic  acid  using  a  new homofermentative Enterococcus faecalis
isolate’,  Microbial  Biotechnology.  John  Wiley  and  Sons Ltd, 8(2), pp. 221–229. doi: 10.1111/1751-7915.12133.
Trujillo,  M.  E. et  al .  (eds)  (2015)  Bergey’s  Manual  of Systematics  of  Archaea  and  Bacteria,  Bergey’s  Manual  of Systematics  of  Archaea  and  Bacteria.  Wiley.  doi: 10.1002/9781118960608.
Yuniastuti,  A.  (2014)  Probiotik  (  Dalam  Perspektif Kesehatan ). 1st edn. Semarang: UNNES PRESS.
Yusuf, D. et al . (2020) ‘In Vitro Characterization of Lactic Acid  Bacteria  from  Indonesian  Kefir  Grains  as  Probiotics with Cholesterol-Lowering Effect’, Journal of Microbiology  and  Biotechnology.  Korean  Society  for Microbiology and Biotechnology, 30(5), pp. 726–732. doi: 10.4014/jmb.1910.10028.