## EKSPLORASI BAKTERI ANTAGONIS ASAL JARINGAN DAN RIZOSFER TANAMAN KARET UNTUK MENEKAN PERTUMBUHAN BAKTERI PROTEOLITIK PADA BAHAN OLAHAN KARET (BOKAR)

## Antagonistic Bacteria Exploration from Rubber Plant Tissue and Rhizosfer to
Suppress the Growth of Proteolitic Bacteria from Slab
Nuni Gofar 1)* ,  Munawar 2) , Hary Widjajanti 2) , dan Angga Prasetya Mulya 1)
1) Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya Jl. Raya Palembang-Prabumulih KM
35 Indralaya Ogan Ilir
2) Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sriwijaya Jl. Raya Palembang-Prabumulih KM 35 Indralaya Ogan Ilir

## ABSTRACT
Latex is a mainstay of agriculture  commodity and one of the most important sources of Indonesia’s foreign exchange earnings. However, the latex storage spreads odor to the air. The goal of this research is to explore antagonistic bacteria from rubber plant tissue and rhizosfer. These antagonistic bacteria can suppress the growth of proteolitic microbe that caused odor in rubber slab. The proteolitic bacteria are isolated from various shelf life of rubber slab. Antagonistic bacteria are isolated from  rubber  plant  tissue  and  rhizosfer.  The  ability  of  antagonistic  bacteria  to  suppress  the  growth  of  proteolitic  bacteria  is done through inhibition test in agar nutrient medium (NA). The diameter of clear zone formed is the indication of antagonistic bacteria ability in suppressing proteolitic bacteria activity. From this research, found 2 bacteria isolate that has the potency to be  developed  as  antagonistic  bacteria  to  suppress  proteolitic  bacteria  activity  in  the  storage  process.  Both  of  these antagonistic bacteria are isolates D 1 U 1 that comes from the leaves of rubber plant, and isolate A 2 U 2 that comes from the root of rubber plant. These isolates produce the widest average of inhibition zone with diameter of 11.37 mm and 11.29 mm.
Keywords: Antagonistics bacteria, odor reduction, latex storage

## ABSTRAK
Lateks  merupakan  komoditas  pertanian  andalan  dan  merupakan  sumber  penerimaan  devisa  negara  Indonesia  yang cukup  penting,  namun  pada  saat  penyimpanannya  menyumbangkan  bau  tidak  sedap  ke  udara.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengeksplorasi  bakteri  antagonis  asal  jaringan  dan  rizosfer  tanaman  karet  yang  mampu  menekan  pertumbuhan  mikroba proteolitik penyebab bau tidak sedap pada bahan olahan karet (bokar).  Bakteri proteolitik penyebab bau tidak sedap diisolasi dari  berbagai  masa  simpan  bokar.  Bakteri  antagonis  diisolasi  dari  jaringan  dan  rizosfer  tanaman  karet.  Kemampuan  bakteri antagonis  menekan  pertumbuhan  bakteri  proteolitik  dilakukan  dengan  uji  daya  hambat  dalam  medium  agar  (NA).  Diameter zona bening yang terbentuk merupakan indikasi kemampuan bakteri antagonis dalam menghambat aktivitas bakteri proteolitik. Dari  hasil  penelitian  ini  diperoleh  2  isolat  bakteri  yang  berpotensi  dikembangkan  sebagai  bakteri  antagonis  penghambat aktivitas bakteri proteolitik perombak bokar dalam proses penyimpanan. Kedua bakteri antagonis tersebut adalah isolat D 1 U 1 yang berasal dari daun tanaman karet dan isolat A 2 U 2 yang berasal dari akar tanaman karet, yang menghasilkan rata-rata zona hambat terluas berturut-turut berdiameter 11.37 dan 11.29 mm.
Kata kunci: Bakteri antagonis, penanggulangan bau, bokar

## PENDAHULUAN
Lateks merupakan komoditas pertanian andalan dan merupakan  sumber  penerimaan  devisa  negara  Indonesia yang  cukup  penting,  sehingga  persebaran  karet  di Indonesia cukup luas (3,506,201 ha) dengan produktivitas 1.45  ton  ha -1 (Direktorat  Jenderal  Perkebunan,  2012). Akan  tetapi,  dalam  proses  pengolahannya,  lateks  yang sudah berbentuk bokar (bahan olahan karet)  menimbulkan masalah  lingkungan  berupa  bau  yang  tidak  sedap  yang menyebar ke udara. Bau tersebut disebabkan oleh aktivitas mikroba  pengurai  protein  pada  lateks  yang  menghasilkan gas  amoniak  (NH 3 )  dan  hidrogen  sulfida  (H 2 S)  yang
mencemari  udara  di  sekitar  pabrik  pengolahan  bokar. Tercemarnya  udara  tersebut  tentunya  akan  menurunkan kualitas  lingkungan dan  mempunyai efek  negatif terhadap masyarakat yang berada di sekitar pabrik.
Upaya  untuk  menghilangkan  bau  tidak  sedap  pada penyimpanan  bokar  sudah  banyak  dilakukan  antara  lain dengan menggunakan aroma buah-buahan dan menggunakan asap cair, namun efektivitas dan efisiensinya  masih  rendah.  Suatu  teknologi  berbasis mikroba dengan mengeksplorasi bakteri antagonis terhadap  bakteri  proteolitik  pengurai  protein  bokar diharapkan  dapat  mengatasi  penurunan  kualitas  udara akibat  emisi  gas  amoniak  dan  hidrogen  sulfida.  Mikroba
*) Penulis Korespondensi: Telp. +628153550015;  Email. nigofar@yahoo.co.id
mempunyai  waktu  generasi  yang  cepat  dan  mempunyai variasi metabolisme yang sangat luas, sehingga mempunyai  peluang  besar  untuk  memperoleh  mikroba antagonis terhadap mikroba proteolitik penyebab bau tidak sedap  bokar  dan  dapat  diproduksi  pada  skala  komersial dengan lebih cepat dan mudah.
Berbagai  mikroba  menguntungkan  seperti  pemacu tumbuh, penambat  nitrogen, pelarut fosfat, atau perombak hidrokarbon telah banyak ditemukan dari berbagai jaringan dan  rizosfer tanaman  yang  tumbuh pada lahan suboptimal di  Sumatera  Selatan  (Gofar et  al .,  2012;  Munawar et  al.,
2012;  Estuningsih et  al .,  2012;  Elfita et  al .,  2012;  Gofar, 2013).  Bakteri  endofit  termasuk  salah  satu  kelompok mikroba  yang  memegang  peranan  penting  dalam  reaksi ketahanan  tanaman  terhadap  patogen,  diantaranya  sebagai agens  pengendali  hayati  (Hidayah  dan  Yulianti,  2008). Bakteri  endofitik  tanaman  karet  yang  tumbuh  liar  diduga mampu  menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  bersifat antimikroba  terhadap  mikroba  proteolitik  penyebab  bau tidak sedap pada bokar. Antagonis mikroba proteolitik asal rizosfer  atau  jaringan  tanaman  karet  akan  dikembangkan sebagai  metode  penyimpanan  bokar  baik  di  tingkat  petani maupun  di  pabrik  pengolahan  karet.  Prinsip  kerjanya adalah dengan  menekan aktivitas  mikroba proteolitik oleh bakteri  antagonis  yang  dapat  menghambat  penguraian protein bokar (Strobel dan Daisy, 2003).
Berdasarkan  uraian  diatas,  penelitian  ini  bertujuan untuk  mengeksplorasi  bakteri  antagonis  asal  jaringan  dan rizosfer tanaman karet yang mampu menekan pertumbuhan  mikroba  proteolitik  pada  bokar.  Penelitian ini  akan  memberikan  kontribusi  baru  berupa  bioteknologi pencegahan  bau  tidak  sedap  akibat  penguraian  protein bokar berbasis mikroba yang bersifat ramah lingkungan.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Mikrobiologi  Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sriwijaya  Indralaya. Isolat  bakteri  proteolitik  diisolasi  dari  beberapa  sumber, yakni  dari  lateks  yang  baru  disadap  di  kebun,  bokar simpanan petani, dan bokar di gudang penyimpanan pabrik pengolahan  karet.  Bakteri  antagonis  diisolasi  dari  tanah sekitar  rizosfer  serta  dari  jaringan  daun  dan  akar (endofitik) tanaman karet yang tumbuh secara liar di hutan dan sudah tua (berumur lebih kurang 30 tahun) serta tidak pernah dipupuk atau disemprot pestisida.

## Isolasi Bakteri Proteolitik
Sumber  bakteri  proteolitik  berupa  lateks  yang  baru disadap  di  kebun,  bokar  simpanan  petani,  dan  bokar  di gudang  penyimpanan  pabrik  pengolahan  karet  dibawa  ke laboratorium  untuk  diisolasi.  Lateks  dan  bokar  tersebut masing-masing  ditimbang  seberat  5  g,  dihaluskan,  lalu dilakukan  pengenceran  sampai  10 -5 menggunakan  larutan fisiologis  steril  0.85%  NaCl.  Masing-masing  dengan  3 ulangan dari pengenceran 10 -3 , 10 -4 , dan 10 -5 ditumbuhkan pada  medium  BHMS  (Bushnell  Hass  Mineral  Salt)  steril dengan  komposisi:  0.2  g  MgSO 4 .7H 2 O;  0.2  g  CaCl 2 ;  1  g KH 2 PO 4 ; 1 g K 2 HPO 4 ; 1 g NH 4 NO 3 ; 2 tetes FeCl 3 (60%); 2%  susu  skim  dan  1000  mL  akuades  dalam  cawan  petri
dengan  metode  agar  tuang,  lalu  diinkubasikan  pada  suhu 30 0 C selama 24 jam dalam inkubator.
Tumbuhnya  bakteri  proteolitik  ditunjukkan  oleh terbentuknya  zona  bening  di  sekeliling  koloni  bakteri, yang  menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut  mampu merombak  protein  asal  susu  skim  pada  media. Pertumbuhan bakteri proteolitik diamati dengan menghitung  jumlah  koloni  yang  terbentuk  dan  morfologi koloni.    Koloni-koloni  yang  memiliki  zona  bening  terluas dimurnikan  dengan  cara  menggoreskan  koloni  yang diambil  dengan  jarum ose pada  medium  padat  BHMS mengandung protein dengan metode kuadran.

## Isolasi Bakteri Antagonis Asal Jaringan Tanaman Karet dan Rizosfer
Isolasi bakteri antagonis diawali dengan pengambilan  sampel  jaringan  tanaman  karet  yang  berasal dari daun dan akar serta dari tanah sekitar rizosfer. Sampel daun  tanaman  karet  diperkecil  menjadi  ukuran  1x1  cm 2 dan  sampel  akar  dipotong-potong  dengan  panjang  1  cm. Daun dan akar yang telah dipotong-potong tersebut dicuci dengan  air,  lalu  ditimbang  masing-masing  seberat  1  g. Sampel  daun  dan  akar  tersebut  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer  100  mL,  lalu  disterilisasi  permukaannya dengan  menggunakan  alkohol  70%  selama  tiga  menit, kemudian  dibilas  menggunakan  akuades  steril  hingga aroma  alkohol  hilang,  selanjutnya  digerus  menggunakan mortar  dan  diencerkan  100  kali  menggunakan  larutan fisiologis steril. Akar dan tanah asal rizosfer sebanyak 10 g direndam  dalam  100  mL  larutan  fosiologis  steril  untuk mendapatkan suspensi tanah rizosfer, kemudian diencerkan 100 kali. Sebanyak 1 mL suspensi asal jaringan daun  dan  akar  serta  suspensi  tanah  rizosfer  dari  tiap pengenceran  ditumbuhkan  pada  medium  Nutrient  Agar (NA) dengan metode agar tuang, lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 30 0 C dalam inkubator. Pertumbuhan bakteri antagonis diamati dengan menghitung jumlah koloni yang terbentuk  dan  morfologi  koloni.  Koloni-koloni  yang tumbuh selanjutnya dimurnikan pada  medium  NA dengan metode kuadran sebagai stok kerja.

## Uji Bakteri Antagonis Terhadap Bakteri Proteolitik
Medium Nutrient Broth (NB) (3.0 g ekstrak daging sapi,  5.0  g  pepton,  1000  mL  akuades)  steril  disiapkan sebanyak  10  mL  dalam  tabung  reaksi.    Dengan menggunakan jarum ose , diambil 1 ose koloni murni setiap isolat  (baik  proteolitik  maupun  antagonis),  diinokulasikan pada  medium  NB  dalam  tabung  reaksi,  kemudian diinkubasikan selama 24 jam pada suhu ruang.  Setelah 24 jam,  kepadatan  sel  bakteri  dihitung  menggunakan hemasitometer.  Kepadatan  sel  bakteri  setiap  isolat ditetapkan pada 10 6 sel mL -1 sebagai inokulan awal.
Uji  daya  hambat  bakteri  antagonis  terhadap proteolitik  dilakukan  pada  medium  Nutrient  Agar  (NA). Cawan  petri  berisi  medium  NA  diberi  tanda  dengan membagi  area  cawan  sama  luas  sebanyak  jumlah  isolat bakteri  antagonis.  Dengan  menggunakan  mikropipet diambil  0.1  mL  biakan  bakteri  proteolitik  dari  medium cair, lalu disebar menggunakan metode spread pada cawan petri.  Kertas  Whatman  sebanyak  tiga  lapis  berbentuk cakram berdiameter 7 mm dicelupkan ke dalam biakan cair bakteri  antagonis  menggunakan  pinset  steril,  lalu
diletakkan  pada  cawan  petri  yang  telah  disebar  bakteri proteolitik.  Semua  bakteri  antagonis  disusun  pada  cawan petri  yang  telah  mengandung  bakteri  proteolitik  (Gambar 1), kemudian ditumbuhkan selama 24 jam pada suhu 30 0 C dalam inkubator. Diameter zona hambatan  yang terbentuk di  lingkaran  kertas  cakram  diukur  dengan  menggunakan jangka sorong.
Gambar 1. Pengujian daya hambat bakteri antagonis (pada kertas cakram)  terhadap  bakteri  proteolitik  (pada  medium NA).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Bakteri Proteolitik
Dari  27  sampel  bokar  yang  diisolasi,  diperoleh  20 cawan petri yang ditumbuhi bakteri proteolitik dengan ciri terbentuknya  zona  jernih  di  sekitar  koloni  bakteri  yang tumbuh.  Rata-rata  populasi  bakteri  proteolitik  asal berbagai  sumber  dan  morfologi  koloni  yang  berhasil tumbuh disajikan pada Tabel 1.
Pertumbuhan  bakteri  proteolitik  sangat  pesat  yang dapat  ditandai  dengan  waktu  pertumbuhan  yang  relatif singkat, yakni dalam waktu 24 jam telah membentuk zona jernih  di  sekitar  koloni.  Zona  jernih  ini  terbentuk  karena bakteri  yang  tumbuh  menghasilkan  enzim  protease, sehingga  mampu  menguraikan  protein  pada  susu  skim dalam medium tumbuh. Bakteri proteolitik mengkonsumsi sumber  karbon  sederhana  yang  terkandung  di  dalam medium.  Karbon  dalam  konsentrasi  rendah  dan  kadar protein  tinggi  merangsang  pembentukan  enzim  protease. Semakin  sedikit  sumber  karbonnya  maka  bakteri proteolitik akan menghasilkan enzim protease untuk dapat menguraikan protein (Assodeh dan Mussaabadi, 2012).
Tabel 1. Morfologi koloni bakteri proteolitik dengan berbagai sumber dan populasinya
No Sumber bakteri proteolitik Populasi (SPK mL -1 ) Bentuk Koloni Dominan Bentuk Tepian Koloni Bentuk Zona Bening Warna Koloni 1 Lateks kebun 1.1 x 10 5 Oval Membulat Bulat Putih 2 Lateks kebun 3.5 x 10 5 Bulat Membulat Bulat Putih 3 Bokar petani 41 x 10 5 Bulat Membulat Bulat Kekuningan 4 Bokar petani 13 x 10 5 Bulat Membulat Bulat Putih 5 Bokar pabrik 46 x 10 5 Oval Membulat Bulat Kekuningan 6 Bokar pabrik 54 x 10 5 Bulat Membulat Bulat Kekuningan
Berdasarkan bentuk koloni dominan, bentuk  tepian koloni, bentuk zona bening dan warna koloni, diperoleh 6 karakter  bakteri  proteolitik  dari  6  sumber  berbeda  (Tabel 1).  Populasi  bakteri  proteolitik  terendah  (1.1  x  10 5 SPK mL -1 )  dengan  bentuk  koloni  oval,  diikuti  oleh  bakteri proteolitik  dengan  bentuk  koloni  bulat  (3.5  x  10 5 SPK mL -1 ),  keduanya  berasal  dari  lateks  kebun.  Kepadatan populasi  bakteri  proteolitik  asal  lateks  kebun  yang  lebih rendah  dibandingkan  bakteri  proteolitik  asal  bokar  petani dan  bokar  tersimpan  di  pabrik  pengolahan  karet dikarenakan lateks asal kebun relatif belum terkontaminasi bakteri.  Populasi  bakteri  proteolitik  terbanyak  (54  x  10 5 SPK  mL -1 )    didapatkan  pada  bokar  simpanan  pabrik. Makin  tinggi  populasi  bakteri  proteolitik,  perombakan protein  yang  merupakan  komponen  utama  getah  karet makin  aktif  yang  berakibat  pada  pelepasan  gas  hidrogen sulfida dan amoniak ke udara yang menimbulkan bau tidak sedap.  Bokar  pabrik  merupakan  getah  karet  dalam penyimpanan  waktu  terlama  dibandingkan  lateks  kebun dan bokar dari penyimpanan petani. Dengan bertambahnya waktu  penyimpanan  bokar,  populasi  bakteri  proteolitik meningkat  dan  aktivitas  protease  juga  meningkat.  Sejalan dengan  penelitian  Purwati et  al .  (2011)  bahwa  dengan bertambahnya  waktu,  kadar  protein  larut  hasil  hidrolisis
protease  makin  meningkat.  Demikian  pula  Zilda et  al . (2012)  menyatakan  bahwa  aktivitas  enzim protease meningkat dengan meningkatnya waktu.
Luasnya  zona  jernih  yang  terbentuk  di  sekitar koloni  menunjukkan  perbedaan  kemampuan  bakteri proteolitik  dalam  merombak  protein.  Hasil  pengamatan secara  visual  menunjukkan  bahwa  masing-masing  koloni bakteri  proteolitik  memiliki  zona  bening  yang  berbeda luasnya.  Badriyah  dan  Ardyati  (2013)  menyatakan semakin  besar  kemampuan  bakteri  proteolitik  dalam menghasilkan  enzim  protease  maka  zona  bening  yang terbentuk semakin luas.
Setelah  dilakukan  pemurnian  isolat,  diperoleh  2 isolat  bakteri  proteolitik  asal  lateks  kebun,  4  isolat  asal bokar  petani,  dan  8  isolat  bakteri  proteolitik  asal  bokar pabrik  pengolahan  karet.  Total  isolat  bakteri  proteolitik yang diuji dengan bakteri antagonis sebanyak 14 isolat.

## Bakteri Antagonis
Dari eksplorasi bakteri antagonis asal jaringan akar dan daun tanaman karet dan rizosfer, didapatkan 11 cawan petri dari 15 sampel yang diisolasi yang ditumbuhi bakteri yang diharapkan memiliki sifat antagonis terhadap bakteri
proteolitik. Adapun sumber isolat, populasi dan morfologi koloni bakteri antagonis disajikan pada Tabel 2.
Berdasarkan  sifat  morfologis  bentuk  koloninya, semua  koloni  memiliki  kemiripan  kecuali  pada  cawan dengan  kode  A 2 U 2 yang  memiliki  tepian  koloni bergelombang.  Jumlah  koloni  bakteri  bervariasi  dari terendah  pada  isolat  asal  daun  dengan  kode  isolat  D 1 U 1 , yaitu  1.2  x  10 3 SPK  mL -1 dan  tertinggi  pada  isolat  yang berasal  dari  tanah  sekitar  rizosfer  dengan  kode  R 2 U 1 dengan kepadatan mencapai 27 x 10 3 SPK mL -1 .  Populasi bakteri  antagonis  asal  rizosfer  lebih  tinggi  dibandingkan
populasi  bakteri  antagonis  asal  daun  dan  akar.  Meskipun menurut  Hallmann  dan  Berg  (2006)  bakteri  endofitik  asal jaringan  daun  segar  kerapatan  populasinya  rendah  dengan rata-rata  hanya  10 3 SPK  mL -l ,  namun  pada  penelitian  ini populasi  bakteri  endofitik  pada  daun  tidak  selalu  lebih rendah  dibandingkan  pada  akar.  Perbedaan  populasi bakteri  antagonis  dari  ketiga  sumber  diduga  disebabkan eksudat  yang  dikeluarkan  baik  melalui  daun  maupun  akar tanaman  disukai  bakteri,  sehingga  eksudat  tersebut menarik bakteri filosfer dan rizosfer untuk mengkolonisasi jaringan daun dan rizosfer tanaman (Pinton et al ., 2007).
Tabel 2. Morfologi koloni bakteri antagonis dari berbagai sumber dan populasinya
No Sumber Kode cawan Populasi (spk mL -1 ) Bentuk Koloni Dominan Bentuk Tepian Koloni Warna Koloni 1 Daun D 1 U 1 1.2 x 10 3 Bulat Membulat Putih 2 Daun D 1 U 2 1.8 x 10 3 Bulat Membulat Putih 3 Daun D 2 U 1 7.0 x 10 3 Bulat Membulat Putih 4 Daun D 2 U 2 6.0 x 10 3 Bulat Membulat Putih 5 Akar A 1 U 1 2.8 x 10 3 Bulat Membulat Putih 6 Akar A 1 U 2 1.9 x 10 3 Bulat Membulat Putih 7 Akar A 2 U 2 17 x 10 3 Tidak Beraturan Bergelombang Putih 8 Rizosfer R 1 U 1 5.2 x 10 3 Bulat Membulat Putih 9 Rizosfer R 1 U 2 2.9 x 10 3 Bulat Membulat Putih 10 Rizosfer R 2 U 1 27 x 10 3 Bulat Membulat Putih 11 Rizosfer R 2 U 2 15 x 10 3 Bulat Membulat Putih
Setelah  dilakukan  pemurnian,  didapatkan  14  isolat dari  11  cawan  petri  (Tabel  2)  yang  ditumbuhi  bakteri antagonis.  Diperoleh  3  isolat  dari  cawan  D 2 U 1 (isolat D 2 U 1 B 1 ,  D 2 U 1 B 2, dan  D 2 U 1 B 3 )    dan  2  isolat  dari  cawan D 2 U 2 (isolat  D 2 U 2 B 1 dan  D 2 U 2 B 2 )  serta  masing-masing  1 isolat  dari  cawan  lainnya,  sehingga  total  isolat  bakteri antagonis yang diujikan sebanyak 14 isolat.

## Daya Hambat Bakteri Antagonis
Isolat  yang  memiliki  potensi  sebagai  bakteri antagonis  terhadap  bakteri  proteolitik  ditunjukkan  dengan kemampuannya  membentuk  zona  bening  atau  zona hambat. Kemampuan bakteri antagonis dalam menghambat  bakteri  proteolitik  disajikan  pada  Tabel  3. Berdasarkan  Tabel  3,  sebagian  besar  isolat  bakteri antagonis  mampu  membentuk  zona  hambat  pada  medium yang  telah  ditumbuhi  bakteri  proteolitik.  Kemampuan bakteri antagonis sangat baik digunakan untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri  proteolitik.  Dari  196 pasangan  yang  diujikan  (14  bakteri  antagonis  terhadap  14 bakteri  proteolitik),  hanya  5  pasangan  yang  tidak  bersifat antagonis.  Kemampuan  isolat  bakteri  antagonis  yang
diperoleh  dari  penelitian  ini  tidak  efektif  hanya  terhadap beberapa  isolat  bakteri  proteolitik  saja.  Isolat  bakteri antagonis R 1 U 2 tidak memiliki daya hambat terhadap isolat bakteri proteolitik  A 1 B 2 dan A 2 B 1 . Isolat bakteri antagonis D 2 U 1 B 3 tidak  efektif  terhadap  isolat  bakteri  proteolitik A 2 B 3 dan  A 3 B 4 .  Isolat  bakteri  antagonis  D 2 U 1 B 2 tidak memiliki  daya  hambat terhadap  bakteri  proteolitik  A 3 B 6 . Tidak  mampunya  ketiga  bakteri  antagonis  tersebut menghambat  5  isolat  bakteri  proteolitik  diduga  karena bakteri  proteolitik  memiliki  kemampuan  yang  lebih  kuat dalam  berkompetisi  dan  tidak  mampu  dihambat  oleh  zat penghambat  yang  dieksudasi  oleh  bakteri  antagonis. Secara  umum,  diketahui  bahwa  kemampuan  14  isolat bakteri  antagonis  asal  jaringan  tanaman  karet  dan  rizosfer akar  dalam  emnghambat  bakteri  proteolitk  sebesar 97.44%.    Bakteri  antagonis  dengan  spektrum  yang  luas seperti  yang  ditemukan  dalam  penelitian  ini  merupakan persyaratan untuk dikembangkan sebagai agensia pengendali  hayati  patogen  (Djatmiko et  al .,  2007), termasuk pengendali bakteri perombak lateks.
Tabel 3. Daya hambat bakteri antagonis terhadap bakteri proteolitik Bakteri Proteolitik Diameter zona hambat bakteri antagonis * (mm) terhadap bakteri proteolitik
D 1 U 2 D 1 U 1 D 2 U 1 B 2 D 2 U 2 B 2 D 2 U 2 B 1 D 2 U 1 B 1 D 2 U 1 B 3 A 1 U 1 A 1 U 2 A 2 U 2 R 1 U 1 R 1 U 2 R 2 U 1 R 2 U 2
A 1 B 2 10.9 10.7 10.8 10.6 9.9 10.2 10.2 9.3 9.4 10.7 11.7 13.7 12.7 11.7 A 1 B 2 11.2 10.1 10.3 10.5 9.6 8.9 9.8 10.4 13.7 10.5 9.1 7.0 * 10.2 10.2 A 2 B 1 13.1 13.5 11.2 11.7 11.9 9.3 9.6 13.7 12.2 13.3 12.7 7.0 * 12.7 11.2 A 2 B 2 10.2 10.2 9.0 7.8 10.2 9.2 10.2 12.2 11.2 11.7 11.2 12.4 10.7 9.2 A 2 B 3 10.2 11.7 11.4 11.1 11.3 12.2 7.0 * 9.9 11.8 11.3 10.7 9.3 10.7 9.8 A 2 B 4 10.2 10.7 11.5 11.7 12.7 12.5 11.7 11.5 10.2 10.5 10.3 10.5 9.9 10.3 A 3 B 1 9.5 8.9 10.2 8.5 8.5 8.7 9.7 9.5 9.3 11.2 9.2 8.9 8.9 11.5 A 3 B 2 11.2 11.2 13.2 12.5 11.5 11.4 10.2 9.8 9.8 10.2 10.5 11.5 12.2 12.2 A 3 B 3 11.2 11.2 9.9 10.2 10.4 11.5 10.5 12.5 12.7 10.2 12.7 10.7 11.7 11.6 A 3 B 4 11.1 10.2 9.3 9.3 8.9 8.7 7.0 * 9.8 9.8 10.4 10.2 9.9 10.5 10.2 A 3 B 5 12.2 11.2 12.5 11.5 12.5 11.3 11.2 9.5 10.2 11.2 11.2 12.1 11.2 12.2 A 3 B 6 12.2 13.7 11.3 12.2 12.1 10.2 8.9 9.2 10.2 10.5 10.8 11.2 11.3 11.2 A 3 B 7 13.1 13.4 13.3 13.3 11.4 12.2 12.5 14.2 13.3 13.4 13.2 14.2 13.2 12.2 A 3 B 8 9.5 12.5 7.0 * 11.5 15.7 12.9 11.2 13.7 13.3 13.0 14.2 12.0 11.1 11.7 Rata-rata 11.12 11.37 10.27 10.88 11.18 10.65 8.97 11.08 11.22 11.29 10.67 7.93 11.14 11.08
Keterangan: * Tidak terjadi antagonis
Berdasarkan Tabel 3 terdapat 10 isolat yang mampu menghambat  semua  isolat  bakteri  proteolitik.  Dari  10 isolat  yang  memiliki  potensi  menghambat  bakteri proteolitik diperoleh 2 isolat bakteri dengan diameter zona hambat  terbesar,  yakni  isolat  D 1 U 1 dan  A 2 U 2 .  Isolat  D 1 U 1 membentuk diameter zona hambat rata-rata 11.37 mm dan isolat  A 2 U 2 dengan  diameter  zona  hambat  rata-rata  11.29 mm.  Isolat D 1 U 1 berasal dari jaringan daun tanaman karet. sedangkan  isolat  A 2 U 2 berasal  dari  jaringan  akar  tanaman karet.  Dengan  demikian  kedua  bakteri  yang  berpotensi dikembangkan sebagai pengendali proteolitik bokar adalah bakteri endofitik asal jaringan tanaman karet.
Menurut  Strobel  dan  Daisy  (2003)  terbentuknya zona  hambat  menandakan  bahwa  bakteri  antagonis tersebut  menghasilkan  antibiotik.  Antibiotik  digolongkan sebagai  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh  bakteri endofitik dan antagonis dalam jalur metabolisme dan oleh enzim  yang  tidak  diperlukan  untuk  pertumbuhan  dan pemeliharaan  sel  tumbuhan.  Dengan  adanya  dugaan bakteri  antagonis  mampu  menghasilkan  antibiotik  maka mekanisme  terpenting  dari  kerja  antibiotik  terhadap  sel bakteri  adalah  menghambat  sintesa  protein  dan  asam nukleat oleh bakteri proteolitik. Selain mekanisme tersebut aktivitas antibiotik juga meliputi perusakan dan penghambatan  pembentukan  dinding  sel.  perubahan permeabilitas  sel  target  dan  penghambatan  kerja  enzim yang  berperan  dalam  pertumbuhan  bakteri  (Tasnim et  al ., 2011).

## SIMPULAN
Dari hasil penelitian ini diperoleh dua isolat bakteri yang  berpotensi  dikembangkan  sebagai  bakteri  antagonis terhadap  bakteri  proteolitik  perombak  bahan  olahan  karet (bokar)  dalam  proses  penyimpanan.  Kedua  bakteri antagonis  tersebut  adalah  isolat  dengan  kode  D 1 U 1 yang berasal  dari  jaringan  daun  tanaman  karet  dan  isolat  A 2 U 2 dari  jaringan  akar  tanaman  karet.  yang  menghasilkan diameter zona hambat berturut-turut 11.37 dan 11.29 mm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Gabungan  Pengusaha  Karet  Indonesia  (GAPKINDO) cabang  Sumatera  Selatan  yang  telah  mendanai  penelitian ini  melalui  kerjasama  yang  dilegalkan  dengan  SPK  no. 344/SK-PEN/GAP/VI/2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Assodeh, A. and H.M. Mussaabadi. 2012. Purification and characterization  of  thermostable  neuthrophilic metalloprotease  from Pseudomonas sp.  DR89. Iranian J. of Biotech ., 10: 120-128.
Badriyah,  T.  dan  Ardyati.  2013.  Deteksi  aktivitas proteolitik  isolat  bakteri  asal  ampas  tahu  pada substrat bekatul. J. Biotropika , 1: 109 – 113.
Direktorat  Jenderal  Perkebunan.  2012.  Luas  areal  karet menurut  propinsi  di  seluruh  Indonesia.  Statistik Perkebunan Tahun 2009 – 2012.  Jakarta.
Djatmiko,  H.,  T.  Arwiyanto,  B.  Hadisutrisno  dan  B. Sunarminto.  2007.  Potensi  tiga  genus  bakteri  dari tiga  rizosfer  tanaman  sebagai  agensia  pengendali hayati  penyakit  lincat. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Pertanian Indonesia , 9: 40 – 47.
Elfita,  Muharni,  Munawar,  and  S.  Aryani.  2012. Secondary  metabolite  from  endophytic  fungi Aspergillus niger of the stem bark of Kandis Gajah ( Garcinia griffithii ). Indo. J. Chem., 12: 195-200.
Estuningsih,  S.,  Muharni,  dan  M.  Rynanda.  2012.  Isolasi dan  identifikasi  bakteri  hidrokarbon  di  sekitar rizosfer  rumput  belulang (Eleusine  Indica  (L.) Gaertn) yang  berperan  dalam  fitoremediumsi
Eksplorasi Bakteri Antagonis Asal Jaringan dan Rizosfer Tanaman Karet (Gofar, N., Munawar, H. Widjajanti, dan A.P. Mulya)
limbah  minyak  bumi. J.  Penelitian  Sains ,  15:  40  – 43.
Gofar,  N.,  H.  Widjajanti,  dan  N.L.P.S.  Ratmini.  2012. Populasi  bakteri  penambat  nitrogen  dan  pelarut fosfat  pada  rizosfer  tanaman  pangan  di  lahan. Prosiding  Seminar  Perhepi  Pengelolaan  Agribisnis Pangan  pada  Korporasi  Lahan  Suboptimal.  ISBN: 978-979-8420-12-2.
Gofar,  N.  2013.  Synergism  of  wild  grass  and hydrocarbonoclastic bacteria in petroleum biodegradation. J. Trop. Soils ., 18: 161-168.
Hallmann, J. and G. Berg. 2006 . Spectrum and Population Dynamics of Bacterial Root Endophytes. Microbial Roots Endophytes . Springer-Verlag Berlin.
Hidayah, N. dan T. Yulianti. 2008. Peranan bakteri endofit dalam  reaksi  ketahanan  tanaman  terhadap  patogen. J. Pengendalian Hayati , 1: 88-93.
Munawar, P. Aditiawati, and D.I. Astuti. 2012. Sequential isolation  of  saturated.  aromatic.  resinic  and asphaltic  fractions  degrading  bacteria  from  oil contaminated  soil  in  South  Sumatra. Makara
Journal of Science , 16: 58-64.
Pinton,  R.,  Z.  Varananni,  and  P.  Namipieri.  2007. The Rhizosfer:  Biochemistry  and  Organic  Subtances  at the Soil. Plant Interface 2 nd . CRC. New York.
Purwati, S., R.S. Soetopo, dan T. Idiyanti. 2011.  Aplikasi protease  dan  pengaruh  suhu  pada  asidifikasi digestasi  anaerobik  dua-tahap  lumpur  ipal  biologi industri kertas. J. Selulosa , 1: 20-30.
Strobel,  G.  and  B.  Daisy.  2003.  Bioprospecting  for microbial  endophytes  and  their  natural  products: Microbiology  and  Molecular  Biology  Reviews. J. Microbiol , 67: 491-502.
Tasnim,  S,  K. Retno, dan N.P.A. Astiti. 2011. Efektifitas daya  hambat  bakteri Streptomyces sp.  terhadap Erwinia sp.  penyebab  penyakit  busuk  rebah  pada tanaman  lidah  buaya (Aloe  Barbadensis Mill). J. Simbiosis , I: 21-27.
Zilda,  D.S.,  E.  Harmayani,  J.  Widada,  W.  Asmara,  H.E. Irianto,  G.  Patantis,  and  Y.N.  Fawzya.  2012. Screening  of  thermostable  protease  producing microorganisms isolated from Indonesian hotspring. Squalen , 7: 105-114.