## PENGHAMBATAN  KSANTIN OKSIDASE OLEH KOMBINASI EKSTRAK TEMPUYUNG  ( Sonchus
Arvensis ) DAN SALAM ( Syzygium Polyanthum ) PADA MENCIT HIPERURISEMIA
Muhtadi, Idi Retnani, Nurcahyanti Wahyuningtyas Fakutas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta Correspondence to: Muhtadi Email : muhtadi@ums.ac.id

## ABSTRACT
Tempuyung  (Sonchus  arvensis)  and  salam  (Syzygium  polyanthum)  leaves can  lower  uric  acid  levels were    studied.    The  purpose    of  this  research    was  to  determine  mechanism  of  combined  o f   tempuyung and  salam  extracts  to  reduce  uric acid  levels  by  inhibiting  xanthine  oxidase  in  hyperuricemic  mice.  This research used completely randomized design using mice. Fifteen mice were made hiperuricemic by 250 mg/kgBW potassium oxonate p.o then the mice were divided into 3 groups. Group I induced 10 mg/kgBW allopurinol p.o as positive control, group  II  induced  tempuyung-salam   p.o  each  100  mg/kgBW  as  the  treatment group,  group III  induced  0.5  mL/20  gBW  distilled  water  p.o  as  negative  control. Liver  was  taken  4th  day  after  2  hours induced  potassium  oxonate.  Data  inhibition  xanthine  oxidase  activity  was  tested  with  Mann-Whitney.  The result  showed  that the  combination  of  tempuyung-salam  extract  each  100  mg/kgBW  could  inhibit xanthine oxidase  activity  of 51,16%±2,76% ,  while  allopurinol 90,20%±0,16% (p = 0.000).
Keyword: Hyperuricemia, Xanthine Oxidase, Sonchus arvensis, Syzygium polyanthum

## PENDAHULUAN
Hiperurisemia  adalah  keadaan  dimana terjadi  peningkatan  kadar  asam urat darah  diatas normal  (Rose  dan  Kaye,  1997).  Batas  normal kadar asam urat pada manusia   adalah   3-8  mg/ dL  (Dipiro et  al .,  2008).  Hiperurisemia  terjadi akibat  sintesis    berlebihan    asam    urat  dan kegagalan  ginjal  dalam  mengeliminasi  asam urat, atau  kombinasi  faktor-faktor  tersebut  (Rose  dan Kaye, 1997). Hiperurisemia dapat diatasi dengan obat-obat  urikosurik  yang  bekerja  meningkatkan kliren ginjal dengan menghambat reabsorpsi asam urat pada tubulus. Selain itu dapat pula dilakukan dengan   pemberian   allopurinol   yang   bekerja menghambat   sintesis ksantin oksidase pada dua tahap  yaitu  menghambat  pembentukan  ksantin dari  senyawa  hipoksantin  dan  menghambat pembentukan  asam  urat  dari  ksantin.  Obat ini    memiliki      efek    samping      meliputi      rash kulit,    leukopenia,      kadang-kadang  gangguan gastrointestinal, dan dapat menimbulkan serangan akut  pada  awal  terapi  (Priyanto,  2008).  Oleh karena  itu,  perlu  dicari  alternatif  pengobatan yang  lebih aman dan efektif.
Tempuyung  ( Sonchus  arvensis )  merupakan salah  satu  tanaman  obat  yang berkhasiat  sebagai pemecah    batu  ginjal    dan  pelancar    air  seni (Winarto,  2004). Menurut  Wardani  (2008)  secara in  vitro daya  inhibisi   ksantin   oksidase   pada ektrak  air  tempuyung  sebesar  14,46%,  ekstrak etanol  tempuyung  sebesar  11,2%,  sedangkan � avonoid  sebesar  11,13%.  Kandungan � avonoid daun    tempuyung  berupa    5,7,3  ,4  -tetrahidroksi � avon    (luteolin),    5,7,4  -trihidroksi � avon (apigenin),  luteolin  7-O-glukosida,  dan  apigenin 7-O-glukosida  diduga  dapat  menurunkan  kadar asam  urat  melalui  penghambatan  kerja  enzim ksantin oksidase (Cos et al. , 1998; Djunaedi dkk., 2003).
Tanaman  lain  yang  dimanfaatkan  dalam pengobatan  asam  urat  adalah  daun  salam. Kandungan  utama  daun  salam  meliputi  saponin, triterpen, � avonoid  total  sebesar  0,19%,  tanin, polifenol,    dan  alkaloid    (Sudarsono et  al., 2002;  Muhtadi dkk., 2010). Flavonoid  kuersetin dan  miresetin  pada  tanaman  salam  diduga berkhasiat    dalam  menghambat    kerja  ksantin oksidase    (Schemeda et  al .,  1987).  Penelitian
lain menunjukkan ekstrak air tempuyung 200 mg/ kgBB dan salam 200 mg/kgBB  dapat  menurunkan kadar    asam    urat    masing-masing    dari  3,10 mg/dL  menjadi  0,72  mg/dL  dan  0,52  mg/kgBB. Sedangkan  kombinasi  kedua  ekstrak  tersebut pada  dosis  masing-masing  100  mg/kgBB  dapat menurunkan  kadar  asam urat sebesar 0,38 mg/dL (Muhtadi dkk., 2010).
Berdasarkan  aktivitas  dari  kombinasi ekstrak tempuyung ( Sonchus arvensis ) dan salam ( Syzygium polyanthum ) dalam menurunkan kadar asam  urat,  maka  diperlukan  penelitian  lebih lanjut tentang mekanisme  penurunan kadar asam urat  secara in    vivo oleh    kombinasi    ekstrak air  tempuyung   ( Sonchus   arvensis )   dan salam ( Syzygium polyanthum ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  yang  dilakukan  termasuk  jenis penelitian eksperimental  semu dengan rancangan penelitian  acak  lengkap  pola  searah.  Variabel penelitian yang digunakan adalah: variabel bebas (Dosis    kombinasi    ekstrak    air    tempuyung ( Sonchus  arvensis )  dan  salam  ( Syzygium polyanthum )),  variabel  tergantung  (aktivitas enzim  ksantin  oksidase),  variabel  terkendali (Hewan   uji   diberi   makanan   buatan   (pellet BR), minuman ad libitum ,   jenis  kelamin  jantan, galur  Swiss ,  berat  badan  26-30  g,  umur  2-3 bulan).
Alat: Spuit injeksi volume 1 mL ( Terumo ), spuit  oral  ukuran  18 gauge , � akon, timbangan mencit  Ohaus  kapasitas    610  g,  timbangan analitik  ( Presica  A-SCS ), sentrifuge (M ikro 200R Hettich ), vacum dry oven ( J.P. Selecta, s.a ), vortex ( Maxi  Mix  II  Barnstead ),  homogenizer  ( Ultra Turrax ),  soni � kator  1510  Branson,  mikropipet ukuran  5-40 μ L;  200-1000 μ L,  kuvet,  alat-alat gelas  (P yrex ),    alat  bedah,  dan  spektrofotometri UV mini-1240 Shimadzu.
Bahan: Ekstrak  air  daun  tempuyung (RAPID),  ekstrak  air  daun  salam  (RAPID),  es batu,  phosphate  buffer  (pH  7,4),  EDTA,  HCl 0,58  M,  NaCl  0,9%  p.a,  KCl  p.a, NaOH 0,4 N p.a, tembaga (II) sulfat 1% p.a, natrium tatrat 2% p.a, asam fosfotungstat-asam    fosfomolibdat    p.a, natrium   karbonat    2%   p.a,   natrium hidroksida 0,1  N  p.a,  ammonium  sulfat  p.a,  bovin  serum albumin  (Aldrich Chemical Company),  aquadest, dapar asetat (pH 5), pellet, potasium oksonat  p.a (Aldrich  Chemical  Company),    allopurinol  p.a
(Aldrich  Chemical  Company), Aqua p.i, ksantin p.a (Aldrich  Chemical  Company) , mencit  jantan galur Swiss.
Penentuan  Dosis: Dosis  allopurinol adalah 10 mg/kgBB (Muhtadi dkk., 2010). Dosis potasium  oksonat  adalah  250 mg/kgBB  (Haidari et  al. ,  2009).  Dosis      ekstrak      air    kombinasi tempuyung    dan   salam   masing-masing    100 mg/kgBB (Muhtadi dkk., 2010).
Pembuatan  Stok  Uji  dan  Potasium Oksonat: Potasium  oksonat  dibuat  dengan konsentrasi 0,5%. Potasium oksonat selalu dibuat baru  setiap  akan  digunakan,  kelarutan  potasium oksonat  adalah  5 mg/mL dalam  air. Sediaan  uji, ekstrak  diperoleh  dengan  cara  dekocta.  Ekstrak kering  daun  tempuyung  dan  salam      ditimbang seksama   dengan   konsentrasi    masing-masing 1,2%      dalam  aquadest.  Digunakan  soni � kator untuk mempermudah  kelarutan.
Pembuatan Hiperurisemia: Hewan uji  diadaptasi  terlebih  dahulu  pada  lingkungan penelitian  selama  satu  minggu    pada    suhu kandang.    Hewan    uji    tidak    diberi    makan    1 jam    sebelum  penelitian    dimulai  (Haidari et al. ,  2009).  Pembuatan  hiperurisemia  dilakukan 1  jam  sebelum  pemberian  sediaan  uji  dengan menginjeksikan  secara  i.p  potasium oksonat 250 mg/kgBB pada jam 07.00 (Haidari et al. , 2009). Desain  Pengujian  Ekstrak: Sebelumnya dilakukan  pembuatan  model  hiperurisemia dengan cara mencit diinduksi  potasium  oksonat 250  mg/kgBB  1  jam  sebelum  perlakuan. Perlakuan dilakukan  selama  4  hari.  Digunakan 15    ekor    mencit    yang    dibagi    menjadi    3 kelompok.  1)    Kelompok  perlakuan:  diinduksi kombinasi   ekstrak   air   tempuyung   dan  salam masing-masing  p.o  100  mg/kgBB.  2)  Kontrol positif:  diinduksi  allopurinol  p.o  10  mg/kgBB. 3)  Kontrol  negatif:  diinduksi  aquadest  p.o  0,5 mL/20gBB.  Pembedahan  hati  dilakukan  setelah 2  jam  pemberian  potasium  oksonat,  hati  segera dicuci dengan 0,9% NaCl. Hati dibagi menjadi 2 bagian  dan  ditimbang  masing-masing  sebanyak 1 g. Selanjutnya  hati digunakan  untuk penetapan protein  dengan  metode  Lowry  dan  penetapan aktivitas  ksantin  oksidase  dengan  metode spektrofotometri  UV.
Penetapan Kadar Protein dengan Metode Lowry: 1.  Pembuatan larutan stok (Larutan  stok 0,05%  dibuat  dengan  menimbang  5  mg  bovin serum albumin dan dilarutkan dengan aquadest 10
mL). 2.  Penentuan operating time (OT) (Larutan bovin  serum  albumin  2,5x10-3%  dibuat  dengan cara  diambil  500 μ L  dari  larutan  stok  Lowry kemudian ditambah aquadest 500 μ L, selanjutnya ditambahkan   reagen  Lowry  B  8  mL  ditunggu sampai   10   menit   setelah   itu ditambah  reagen Lowry A 1 mL. Kemudian  diukur absorbansinya dengan  spektrofotometri  UV-Vis  setiap  1  menit. Absorbansinya yang paling stabil merupakan OT. OT yang diperoleh adalah 20 menit). 3. Penentuan panjang  gelombang  maksimum  (Larutan  bovin serum  albumin  2,5x10-3%  dibuat  dengan cara  diambil  500 μ L  dari  larutan  stok  Lowry ditambah  aquadest  500 μ L. Kemudian  ditambah reagen  Lowry    B  8  mL    ditunggu    sampai    10 menit.    Ditambah    reagen    Lowry    A  1  mL ditunggu  20  menit.  Diukur  absorbansinya  pada spektrofotometri  UV-Vis  mulai dari 550 nm-650 nm. Absorbansi tertinggi pada panjang gelombang tersebut merupakan panjang gelombang maksimum.  Panjang  gelombang  maksimum yang  diperoleh  741  nm.  4.  Pembuatan  kurva baku Lowry (Kurva  baku  Lowry  dibuat  dengan mengambil  seri  konsentrasi  (0,5;  1;  1,5;  2;   2,5; 3;  3,5;  4;  4,5)  x10-3%  dari  larutan  stok  Lowry, masing-masing      ditambah  aquadest    sampai    1 mL.  Ditambah  reagen  Lowry  B  8  mL  ditunggu sampai    10  menit  kemudian  ditambah  reagen Lowry  A  1  mL  dan  dibiarkan  selama  20  menit. Diukur absorbansinya  pada 741 nm. Kurva baku standar protein yaitu y=15,14x + 0,01 (r=0,999)). 5.  Penetapan sampel (Segera setelah pembedahan hati  dicuci  dengan  0,9%  NaCl  dan  ditempatkan pada  1,15%  b/v   KCl.  Hati  ditimbang  sebanyak 1  g  setelah  itu  hati  dipotong- potong,  selama preparasi  suhu  dijaga  tetap  pada  suhu  dingin (4 � C). Ditambahkan 200  mg  kristal  ammonium sulfat    sampai    jenuh.    Kemudian    disentrifuge pada  11.000  rpm  selama  10  menit,  supernatan dipisahkan. Diambil endapan ± 100 mg, kemudian dilarutkan dengan dapar asetat pH 5 sampai 10,0 mL.  Diambil  400 μ L sampel   dan   ditambahkan 8    mL    reagen    Lowry    B    dibiarkan    selama 10   menit. Kemudian   ditambah   1   mL   reagen Lowry    A    dan    dibiarkan    selama    20    menit. Dibaca pada panjang gelombang 741 nm (Sudjadi dan Rohman, 2004)).
Penetapan  Aktivitas  Ksantin  Oksidase: 1.  Pembuatan larutan stok (Larutan  stok  ksantin oksidase  dibuat  dengan  menimbang    1,25  mg ksantin oksidase  dilarutkan  aquadest  hingga  100
mL (8 unit/mg)). 2. Pembuatan kurva baku ksantin (Kurva  baku  ksantin  dibuat  dengan  mengambil (10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80,  90) μ L  dari  larutan stok  ksantin  oksidase,  di  tambah  1  mL  ksantin 5 μ M kemudian  dilarutkan  fosfat  buffer  50  mM hingga  5 mL. Diinkubasi  pada suhu 37°C selama 15 menit, selanjutnya  d itambahkan  0,5 mL HCl 0,58  M  dan  dibaca  absorbansinya  pada λ 290 nm.  1  unit  (U)  aktivitas  ksantin  oksidase  setara dengan  1 μ mol  ksantin  yang  diubah  menjadi asam  urat  tiap  menit  pada  suhu  37°C  dan  pH 7,4. Kurva baku standar Lowry yaitu y=720,9x - 0,021  (r=0,997)). 3.  Penetapan  aktivitas  ksantin oksidase (Segera setelah pembedahan  hati dicuci dengan 0,9% NaCl, kemudian ditimbang sebanyak 1  g.  Selanjutnya  ditempatkan  pada  campuran 1,15%  b/v    KCl dan  0,1  mMol  EDTA.   Hati dipotong-potong    dan    dihomogenasi    dalam    4 mL sodium  fosfat  50  mM  (pH  7,4).  Homogenat disentrifuge  dengan  kecepatan  3000 rpm  selama 10  menit.  Supernatan  disentrifuge  kembali dengan  kecepatan  15000 rpm  selama  60  menit pada  suhu  4 � C.  Selanjutnya  supernatan  dipisah dengan endapan  pada  tabung  ependrof.  Diambil 100 μ L  supernatan  kemudian  dicampur 50 μ M ksantin  dan  ditambahkan  fosfat  buffer  50  mM sampai 5 mL. Larutan diinkubasi selama 15 menit pada  suhu  37 � C.  Dibaca  absorbansinya  dengan spektrofotometri  UV pada λ 290 nm).
Data  yang  diperoleh  berupa  kadar  protein dan  aktivitas  ksantin  oksidase tidak terdistribusi normal  dan  variansinya  tidak  homogen  setelah dilakukan  transformasi  maka  dilakukan  uji nonparametik  dengan  menggunakan  uji Kruskal Wallis dan  uji Mann-Whitney dengan  taraf kepercayaan 95%. Penghambatan aktivitas ksantin oksidase diuji dengan uji t tidak berpasangan.
x aktivitas XO kontrol negatif - x aktivitas XO kontrol negatif % Penghambat = x100% x aktivitas XO kontrol negatif x aktivitas XO kontrol negatif - x aktivitas XO kontrol negatif % Penghambat = x100%
x aktivitas XO kontrol negatif

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sediaan  uji  yang  digunakan  untuk menurunkan    kadar  asam  urat  melalui mekanisme    penghambatan    enzim    oksidase adalah      ekstrak      air      kombinasi  tempuyung dan    salam    dosis    masing-masing      100    mg/ kgBB.    Secara in    vitro beberapa � avonoid dapat    menghambat    enzim    ksantin    oksidase di    antaranya � avonoid  luteolin,  apigenin,
kersetin  dan  miresetin  (Gambar  1).  Kandungan � avonoid  pada  ekstrak  etanol  tempuyung yaitu  5,7,3  ,4  -tetrahidroksi � avon  (luteolin), 5,7,4  -trihidroksi � avon   (apigenin),    luteolin 7-O-glukosida,      dan  apigenin      7-O-glukosida (Djunaedi    dkk.,   2003).    Flavonoid    luteolin dapat menghambat  ksantin  oksidase  dengan  nilai IC50 sebesar  0,96 μ M  dan  0,55 μ M, sedangkan apigenin  memiliki  IC50  sebesar  29,1 μ M  dan 0,70 μ M  (Nagao et  al. , 1999;  Cos et al., 1998). Daun  salam  diduga  mengandung � avonoid kuersetin  dan miresetin (Schemeda et al ., 1987). Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa � avonoid kuersetin    memiliki    IC50    sebesar    0,44 μ M dan  2,62 μ M,  sedangkan  nilai  IC50 miresetin sebesar   1,27 μ M  dan  2,38 μ M  (Nagao at  al. , 1999;  Cos at  al .,  1998).  Hasil    penelitian    lain
menunjukkan   bahwa  kuersetin   pada  dosis  50 dan  100 mg/kgBB  menunjukkan  penghambatan ksantin    oksidase    yang    sigini � kan    pada  tikus hiperurisemia  (Mo Shi-Fu, 2007).
Senyawa � avonoid  dapat  menghambat ksantin oksidase  disebabkan  oleh adanya   gugus hidroksil    pada    atom    C-5    atau    C-7    serta adanya  ikatan  rangkap antara C-2 dan C-3 yang memungkinkan terjadi reaksi adisi (oksidase oleh ksantin  oksidase)  sehingga  cincin  B  menjadi co-planar terhadap  cincin  A  dan  C  (Cos et al. ,  1998).  Kemampuan � avonoid  dalam menghambat  aktivitas  ksantin  oksidase  yaitu melalui    mekanisme    inhibisi    kompetitif    dan interaksi    dengan    enzim    pada  gugus  samping (Nagao et al ., 1999; Lin et al ., 2002).
Gambar 1.  Struktur Flavonoid  Flavon (Apigenin, Luteolin) dan Flavonol (Kuersetin, Miresetin)
Tabel 1.   Data Kadar ksantin oksidase, kadar protein, aktivitas ksantin oksidase dan persentase penghambatan ksantin oksidase pada kontrol positif, kontrol negatif dan kombinasi tempuyung-salam
Perlakuan No. HU Kadar XO Kadar Protein Aktivitas XO Persentase Penghambatan (%) (U/g hati) (g protein/g hati) (U/g protein) Kontrol Positif 1 0,09 0,12 0,80 90,03 2 0,10 0,12 0,82 89,71 3 0,09 0,12 0,79 90,14 4 0,09 0,13 0,76 90,47 5 0,09 0,12 0,75 90,63 X±SE (mg/mL) 0,09±0,00 0,12±0,00* 0,78±0,01* 90,20±0,16* Kontrol Negatif 1 0,19 0,02 8,11 - 2 0,20 0,03 8,04 - 3 0,20 0,02 8,08 - 4 0,19 0,03 7,62 - 5 0,20 0,03 8,15 - X±SE (mg/mL) 0,20±0,00 0,03±0,00 # 8,00±0,10 #
Tempuyung-Salam 1 0,10 0,02 4,58 42,79 2 0,11 0,03 4,26 46,77 3 0,12 0,03 3,41 57,38 4 0,13 0,03 3,75 53,10 5 0,14 0,04 3,54 55,76 X±SE (mg/mL) 0,12±0,00 0,03±0,00 **# 3,91±0,22 *# 51,16±2,76* Keterangan  :
(*):   Berbeda  bermakna  terhadap  kontrol negatif jika p<0,05 (#): Berbeda  bermakna  terhadap  kontrol positif  jika p<0,05
pada  pemanasan    re � uks  selama  30  menit  di waterbath  dan microwive di bawah 160 W selama 1  menit  sehingga  diduga  menyebabkan  efek penghambatan   salam  lebih  kecil  dibandingkan tempuyung.   Kemungkinan   lain bahwa   adanya senyawa-senyawa    selain � avonoid    yang    ikut tersari  yang  dapat mengganggu aktivitas senyawa aktif pada ekstrak tempuyung-salam.
Efek  penurunan  asam  urat  pada  ekstrak air  kombinasi   tempuyung-salam dosis  masing- masing  100  mg/kgBB  lebih  besar  dibandingkan dengan  ekstrak  air  tempuyung-salam  200  mg/ kgBB  (Muhtadi  dkk.,  2010)  sehingga  dapat dikatakan  kemungkinan  salam  memiliki  efek urikosurik  dalam  menurunkan  kadar  asam  urat maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut.
Penelitian  lain  terhadap  penurunan  asam urat  melalui  penghambatan  ksantin  oksidase diantaranya    pada  kombinasi    ekstrak    air tempuyung-jinten    hitam  dosis  masing-masing 100   mg   secara in   vivo dapat   menghambat aktivitas    ksantin  oksidase      sebesar      43,26% (Heryani,      2012).      Berdasarkan      penelitian tersebut  terbukti  bahwa  kombinasi  ekstrak  air tempuyung-salam  dosis  masing-masing  100 mg/kgBB  berpotensi  sebagai  inhibitor  ksantin oksidase  (51,16%±2,76%,)  karena memiliki daya inhibisi lebih besar sehingga dapat dikembangkan sebagai obat antihiperurisemia.
Kelemahan  dari  penelitian  ini  yaitu  tidak adanya  kontrol  normal  (hewan  uji  yang    tidak diberi  potasium  oksonat)  sehingga  tidak  dapat dilihat  perbedaan aktivitas ksantin oksidase pada hewan uji normal dan hiperurisemia.

## KESIMPULAN
Kombinasi  ekstrak  air  tempuyung- salam  pada  dosis  masing-masing  100  mg/kgBB memiliki  aktivitas  ksantin  oksidase  sebesar  3,91 U/g  protein  dan  dapat  menghambat      ksantin oksidase    sebesar    51,16%±2,76%      sedangkan allopurinol sebesar 90,20%±0,16%.
Hasil  uji Mann-Whitney menunjukkan bahwa kadar protein pada allopurinol lebih besar secara  signi � kan  dibandingkan  kontrol  negatif (p=0,008)  maupun  pada  kombinasi  tempuyung- salam (p=0,008). Sedangkan antara kontrol negatif dan  kombinasi  tempuyung-salam  tidak  terdapat perbedaan jumlah kadar protein secara signi � kan (p=0,151)    (Tabel    1).    Hal    ini    sesuai    dengan penelitian  sebelumnya bahwa  setelah  pemberian allopurinol   pada  sel  hamster   diperoleh   kadar protein  sebesar    12,82    mg    protein/mL    enzim sedangkan    dengan    pemberian    asam    urat hanya  memperoleh  kadar  protein  sebesar  9,45 mg  protein/mL  enzim  (Brunschede  dan  Krooth, 1973).  Pada  aktivitas  ksantin  oksidase  diperoleh bahwa allopurinol 10 mg/kgBB   dan   kombinasi ekstrak   air   tempuyung-salam    masing-masing 100  mg/kgBB  mampu    menurunkan  aktivitas enzim  ksantin  oksidase  secara  signi � kan  jika dibandingkan  dengan kontrol negatif (p=0.008).
Hasil  uji  statistik  dengan  uji  t  pada penghambatan aktivitas ksantin oksidase menunjukkan  pemberian  kombinasi  ekstrak tempuyung-salam  masing-masing  100  mg/kgBB dapat   menghambat   aktivitas   ksantin   oksidase sebesar      51,16%  sedangkan    pada    allopurinol sebesar    90,20%    (p=0,000).    Penelitian    lain menunjukkan      secara in      vivo ekstrak      air daun   tempuyung   200   mg/kgBB menunjukkan penghambatan   sebesar   70,30%   (Frastyowati, 2012)    sedangkan  ekstrak  air  daun  salam  200 mg/kgBB  memberikan  penghambatan  sebesar 23,67%  (Wahyudin,  2012).  Hal  ini  disebabkan karena  dosis  pada  kombinasi  tempuyung- salam lebih  rendah  dibandingkan  dosis  tunggalnya sehingga  efek  yang  dihasilkan  tidak  mencapai hasil  yang  optimal.  Selain  itu,  secara in  vitro senyawa  luteolin pada daun tempuyung memiliki aktivitas  inhibisi  paling  kuat  (Cos et  al .,  1998), sedangkan  menurut  Biesaga  M.,  (2011)  senyawa miresetin  pada  daun  salam mudah  terdegradasi

## SARAN
1.  Perlu   dilakukan    isolasi    dan   identi � kasi senyawa   aktif   pada   ekstrak   air tempuyung dan  salam  yang  bertanggung   jawab  dalam penghambatan  enzim ksantin oksidase.
2.  Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek  urikosurik  pada  kombinasi  ekstrak  air tempuyung dan salam.
3.  Perlu  dilakukan  kontrol  normal  untuk mengetahui  perbedaan  aktivitas  ksantin oksidase  pada  hewan  uji  normal  dan hiperurisemia.

## DAFTAR  PUSTAKA
Brunschede,  H. & Krooth,  R.S., 1973, Studies  on the Xanthine  Oxidase  Activity  of  Mammalian Cells, Biochemical Genetics , 8(4).
Biesaga,  M.,  2011,  In � uence  of  Extraction  Methods on  Stability  of  Flavonoids, Journal Chromatogr      A .,      Department      of Chemistry,   University   of Warsaw, Poland 1216(18), 2505-2512.
Cos, P., Ying, L., Calomme, M., Jia, P. Hu, Cimanga, K., Van P. B., Pieters,  L., Arnold  J., Vlietinck, and  Berghe  V.,  Dirk,  1998,  Structure- Activity  Relationship    and  Classsi � cation of  Flavanoid    as  Inhibitors  of  Xanthine oxdase and Superoxide Scavengers,
Journal  of  Natural  Products ,  Department of  pharmaceutical  sciences,  University  of Antwerp, Belgium.
Dipiro,  J.T.,  Robert,  L.T.,  Gary,  C.Y.,  Gary,  R.M., Barbara,  G.W.,  Michael,  P.L.,  2008, Pharmacotherapy A Pathophysiologic
Approach  Seven  Edition, Mc  Graw  Hill Medical, New York, 1572-1573.
Djunaedi, D.D., Padmawinata K., Soediro I., Yulinah S. E., 2003, Efek antibatu Kemih Orthosiphon aristatus (BI.)Miq., Sonchus  arvensis L., Phyllanthus  niruri L.,  dan  Campurannya serta Isolasi dan Identi � kasi Senyawaa  dari Sonchus  arvensis L., Disertasi ,  Fakultas Farmasi ITB, Bandung.
Frastyowati,  H.,  2012,  Penghambatan Xanthin Oxidase Oleh Ekstrak Tempuyung ( Sonchus arvensis )  Terhadap  Mencit  Hiperurisemia,
Skripsi ,  Fakultas  Farmasi,  Universitas Muhammadiyah  Surakarta, Surakarta.
Haidari,    F.,  Rashidi,    M.,  Reza,  Keshavarz,    S.
A.,  Shahi,  M.  M.,  2009.  Orange  Juice and Hesperetin Supplementation to Hyperuricemic  Rats Alter Oxidative  Stress Markers  and  Xanthine  Oxidoreductase
Activity. J.  Clin.  Biochem.  Nutr .  Volume 45. 285  291.
Heryani,  S.,  2012,  Penghambatan  Ksantin  Oksidase Oleh  Ekstrak  Kombinasi  Tempuyung ( Sonchus    arvensis )    dan  Jintan  Hitan ( Nigella  sativa )  Pada Mencit  Hiperurisemia, Skripsi, Fakultas     Farmasi,     Universitas Muhammadiyah  Surakarta, Surakarta.
Lin  CM,  Cheng  CS,  Chen  CT,  Liang  YC,  Lin  JK, 2002,  Molecular  Modeling  of  Flavonoid That Inhibitors  Xanthin  Oxidase. Biocheml Biophys  Res  Com. 294:167-172.
Mazzali,  M.,  Kanallis  J.,  Han  L.,  Feng  L., Yang  Xia Li,  Chen  Q.,  Duk-  Hee  Kang,  katherine L.,  Gardon,    Watanabe    S.,  Nakagawa
T.,  Lan  and  Richard    J.  Johnson.,  2001 , Hyperuricemia Induces A Primary Renal  Arteriolopathy  in  Rats  By  A  Blood Preassure-independent Mechanism,
Division  of Nephrology,  Baylor  College  of Medicine , Houston, Texas 77030.
Mo, Shi-Fu, Zhou, Feng, Lv, Yao-Zhou, Hu, Qing-Hua, Zhang, Dong-Mei, Kong, Ling-Dong, 2007, Hypouricemic Aktion of Selected Flavonoid in  Mice:  Structure-Activity  Relationships, Biol.  Pharm.  Bull.,  Vol.  30,  No.  8,  1551- 1556
Muhtadi, Sutrisna, E.M., Wahyuningtyas,  N., Suhendi A., 2010, , Pembangunan   Agen   Fitoterapi Asam      Urat      Dari      Tumbuhan      Obat Indonesia   Untuk   Peningkatan   Kapasitas Bahan  Alam  Obat  Menjadi Produk  Obat Herbal   Terstandr   (OHT),  Laporan  Akhir Tahun  Pertama  Riset  Andalan  Perguruan Tinggi  dan  Industri  (RAPID), Direktorat Jendral    Pendidikan  Tinggi  Departemen Pendidikan Nasional, Jakarta.
Mutschler,    E.,  1991, Dinamika    Obat,  Buku  Ajar Farmakologi    dan  Toksikologi, Edisi Kelima, ITB, Bandung, 220-221.
Nagao, Akihiko, Seki, Michiko, Kobayashi, Hidetaka,
1999, Inhibition  of  Xanthin  Oxidase  by Flavonoid ,  Biosci.  Biotechnol,  biochem, Japan.
Nordstrom,    G.,    Seeman,    T.,    Hasselgren    P,O.,
1985,    Bene � cial    Effect    of Allopurinol in Liver Ischemia, Sugery , 97 (6), 679-684.
Heryani,  S.,  2012,  Penghambatan  Ksantin  Oksidase
Oleh  Ekstrak  Kombinasi  Tempuyung ( Sonchus    arvensis )    dan  Jintan  Hitan ( Nigella  sativa )  Pada Mencit  Hiperurisemia,
Skripsi, Fakultas     Farmasi,     Universitas Muhammadiyah  Surakarta, Surakarta.
Priyanto    dan  Batubara,    2008, Farmakologi Dasar ,    Cetakan    Pertama,    Leskon � , Jakarta, 107-108.
Rose, L. F., Kaye, D., 1997, Buku Ajar Penyakit Dalam  Untuk  Kedokteran  Gigi, Jilid 1, Edisi 2, Binarupa Aksara, Jakarta, 99.
Schemeda  H.  G.,  Theoduloz,  C.,  Fransco,  L., Ferro, E., Arias, A. R., 1987, Preliminary pharmalogical    studies    on  eugenia uni � ora    leaves:  xanthine  oxidase inhibitory  activity ,  J  Ethnopharmacol , 21(2): 183-186.
Sudarsono,    Gunawan,    D.,  Wahyuono,    S., Donatus,  A.  I.,  dan  Purnomo,   2002, Tumbuhan    Obat  II  Hasil  Penelitian,
Sifat-sifat    dan  Penggunaan, Pusat Studi  Obat  Tradisional,  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta,  174-175.
Sudjadi    dan  Rohman,    A.,  2004, Analisis Obat  dan  Makanan, Pustaka  Pelajar, Yogjakarta,  125-126.
Wahyudin,  M.  W.,  2012,  Aktivitas  Penghambatan Ksantin  Oksidase  Ekstrak Daun Salam ( Syzygium  polyanthum )  Pada  Mencit yang  Diinduksi  Kalium  Oksonat, Skripsi ,  Fakultas  Farmasi,  Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Wardani,  C.  G.  T.,  2008,  Potensi  Ekstrak Tempuyung  dan  Meniran  Sebagai Anti  Asam  Urat:  Aktivitas  Inhibisinya Terhadap Xanthin  Oksidase,  Skripsi, Fakultas    Matematika    dan    Ilmu Pengetahuan  Alam,  Institut  Pertanian Bogor, Bogar.
Winarto,  W.  P.,  dan  Karyasari,  2004, Tempuyung Tanaman    Penghancur    Batu  Ginjal , Agromedia Pustaka, Jakarta, 2-3.