Melatonin  menurunkan  berat  badan  tetapi  tidak  menurunkan  kadar TNF-α  pada  tikus wistar jantan  yang  diberi  minyak  jelantah  selama  28 hari
Anugrah Novianti 1 , Edi Dharmana 2 , Nyoman Suci Widyastiti 2

## ABSTRACT
Backgound: Non  Alcoholic  Fatty  Liver  Disease  (NAFLD)  occurs  when  the  intake  and  free  fatty  acid  synthesis  occurs  more frequently than its oxidation and resecretion in the blood. Melatonin is a powerful antioxidant that can boost the  synthesis of endogenous antioxidants in the body, suppress the inflammatory response and inhibit the formation of steatosis.
Objective: To analyze the effect of melatonin supplementation in reducing body weight andTNF-α levels in male Wistar rats were fed by waste cooking oil.
Methods: True experimental studyusing post-test only control group design. This study was done on 18 male wistar rats were divided  into  3  groups  :  the  positive  control  group  (P 0 )  was  administrated  waste  cooking  oil,  the  treated  group  1  (P 1 )  was administrated waste cooking oil and 5mg/kgBW melatonin, and the treated group 2 (P 2 ) was administrated waste cooking oil and 10mg/kgBW melatonin for 28 days.Data analysis using One Way ANOVA test and followed by Tukey test to determine the most effective dose of melatonin.
Results: There was significant difference in body weightbetween P 2 group and K 0 group (p=0,019) with the mean body weight difference was 19,167g lower than K 0 group. There was no difference in TNF-α levels between the three groups (p=0,155). Conclusion: Melatonin dose of 10mg/kgBWloses body weight male Wistar rats have given by waste cooking oil for 28 days, but does not reduce TNF-α levels.
Keywords : non-alcoholic fatty liver, waste cooking oil, melatonin, TNF-α levels.

## ABSTRAK
Latar  Belakang  : Penyakit  perlemakan  hati  non  alkohol  atau  Non  Alcoholic  Fatty  Liver  Disease  (NAFLD)  terjadi  ketika asupan  dan  sintesis  asam  lemak  bebas  lebih  banyak  terjadi  dibandingkan  proses  oksidasi  dan  resekresinya  dalam  darah. Melatonin merupakan antioksidan kuat yang dapat meningkatkan sintesis antioksidan endogen dalam tubuh, menekan respon inflamasi dan menghambat pembentukan steatosis.
Tujuan  : Menganalisis  pemberian  suplemen  melatonin  dalam  menurunkan  berat  badan  dan  kadar  TNF-α  pada  tikus  Wistar jantan yang diberi minyak jelantah.
Metode  : True  experimental  dengan  menggunakanpost-test  only  control  group  design.  Penelitian  ini  menggunakan  18  ekor tikus, dibagi menjadi 3 kelompok yaitu kelompok kontrol positif (P 0 ) diberi minyak jelantah, kelompok perlakuan 1 (P 1 ) diberi minyak  jelantah  dan  melatonin  dosis  5mg/kgBB,  kelompok  Perlakuan  2  (P 2 )  diberi  minyak  jelantah  dan  melatonin  dosis 10mg/kgBB  selama  28  hari.  Analisis  data  menggunakan  uji  One  Way  Anova  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Tukey  HSD  untuk mengetahui dosis perlakuan mana yang lebih baik.
Hasil : Ada perbedaan bermakna rerata berat badan antara kelompok P 2 dan K 0 (p=0,019) dengan selisih rerata berat badan kelompok P 2 sebesar 19,167 lebih rendah dari kelompok K 0 .Tidak ada perbedaan kadar  TNF-α antar ketiga kelompok yang diberi minyak jelantah (p=0,155).
Simpulan : Melatonin dosis 10mg/kgBB menurunkan berat badan tikus wistar jantan yang diberi minyak jelantahselama 28 hari, tetapi tidak menurunkan kadar TNF-α.
Kata kunci : Perlemakan hati non alkohol, minyak jelantah, melatonin, jumlah steatosis, kadar TNF-α.

## PENDAHULUAN
NAFLD  ( Non-Alcoholic  Fatty  Liver  Disease ) kini diketahui sebagai salah satu bentuk penyakit hati kronik di negara-negara berkembang dengan
prevalensi  10-24%  dari  seluruh  populasi. 1 Penelitian pada masyarakat urban Jakarta menunjukkan prevalensi  NAFLD  sebesar  30,6%  berdasarkan diagnosis  ultrasonografi  (USG).  Sedangkan,  data  dari RSUP  dr.Kariadi  juga  menunjukkan  peningkatan prevalensi  penyakit  ini  dari  tahun  ke  tahun  (2005- 2009)  dimana  peningkatan  prevalensi  masing-masing per tahun adalah 4%, 4,5%, 5%, 6% dan 7%. 2 Adipokin-adipokin  seperti tumor  necrosis factor ‐ α (TNF ‐ α), resistin dan angiotensin II  memicu resistensi  insulin  dan  inflamasi  derajat  rendah  pada penderita  NAFLD  melalui  jalur  pensinyalan  protein
1. Fakultas  Ilmu  Kesehatan,  Universitas  Esa  Unggul,
Jakarta (email korespondensi : anugrahnovianti@gmail.com)
2. Bagian  Parasitologi,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Diponegoro, Semarang
3. Bagian Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Semarang
kinase  seperti c ‐ Jun  NH2 ‐ terminal  kinase ‐ 1 (JNK ‐ 1) dan  jalur nuclear  factor  kappa  B (NF ‐ κB). Sebaliknya,  bila  jalur  pensinyalan  TNF ‐ α  ini dihambat,  maka  resistensi  insulin  dan  NAFLD  dapat dicegah. 2 TNF-α  dikenal  mampu  memodulasi  dan meningkatkan  ekspresi sterol  regulatory  element binding protein-1 (SREBP-1c), yang secara transkripsional  mengaktivasi  seluruh  gen  yang diperlukan  dalam  proses  lipogenesis  dan  terbukti memicu  terjadinya  perlemakan  hati  dibandingkan sitokin proinflamasi NF-κB dependent lainnya. 3
Makanan  berlemak  atau  digoreng  merupakan makanan  yang  secara  luas  disukai  oleh  berbagai lapisan  masyarakat  dari  segala  tingkat  usia  di Indonesia. 4 Sumber  utama  asupan  lemak  orang Indonesia  berasal  dari  makanan  yang  digoreng  (80- 90%). 5 Tingkat  konsumsi  minyak  goreng  juga dilaporkan mencapai lebih dari 2,5 juta ton per tahun, atau  lebih  dari  12  kg  per  orang  per  tahun. 6 Minyak goreng  bekas  ( jelantah )  adalah  minyak  yang  telah digunakan lebih dari dua atau tiga kali penggorengan.Pemanasan  minyak  seperti  ini  dapat mempercepat hidrolisis trigliserida dan meningkatkan kandungan  asam  lemak  bebas  (FFA)  di  dalam minyak. 7 Konsumsi berlebihan minyak jelantah memicu  pembentukan  sitokin  TNF-α  yang  bersifat inflamasi  dan  menghambat  sekresi  insulin.  Hal  ini disebabkan  karena  makrofag  mudah  keluar  dari  sel adiposit  yang  meningkat  jumlahnya,  selanjutnya terjadi peningkatan kadar TNF-α dalam darah. 5
Melatonin  merupakan  suplemen  antioksidan yang sangat potensial untuk mencegah dan menanggulangi  NAFLD,  karena  mampu  bekerja  baik dalam  sel  maupun  membran  sel  dibandingkan  jenis antioksidan  lain  yang  hanya  mampu  larut  dalam  air atau lemak saja. Melatonin memiliki banyak manfaat, tidak hanya berperan sebagai penangkal radikal bebas yang  sangat  kuat,  pelindung  sel  tubuh  terhadap Reactive Oxygen Species (ROS)dan Nitrogen Reactive Species (NRS),  melatonin  juga  memiliki  kemampuan dalam  meningkatkan  produksi  glutation  sebagai antioksidan  yang  dihasilkan  tubuh,  anti-inflamasi, anti-apoptosis/proliferasi . 8,5,9 Selain  itu  melatonin  juga dapat  menurunkan  berat  badan  secara  cepat,  saat dengan meningkatkan produksi BAT dalam tubuh dan meningkatkan aktivitasnya untuk mengatur metabolisme energi dalam tubuh.
Tujuan dari penelitian ini adalah menganalisis pemberian  suplemen  melatonin  dalam  menurunkan berat  badan  dankadar  TNF-α  pada  tikus Wistar jantan yang  diberi  minyak jelantah .  Pengamatan  dilakukan selama 28 hari dengan dosis melatonin 5mg/kgBB dan 10  mg/kgBB,  dan  akan  dilakukan  analisis  lanjutan untuk mengetahui dosis melatonin yang terbaik.

## BAHAN DAN METODE

## Pembuatan Minyak Jelantah
Minyak jelantah dibuat dengan cara menggoreng singkong selama 6x proses penggorengan  secara  bertahap  yang  sebelumnya sudah  dikupas,  dicuci  dan  dipotong  terlebih  dahulu, sehingga menghasilkan minyak jelantah dari hasil sisa penggorengannya.Penggunaan singkong sebagai bahan  pangan  untuk  menghasilkan  minyak jelantah pada  penelitian ini,  karena  singkong  merupakan jenis golongan pangan sumber karbohidrat dengan kandungan  asam  lemak  jenuh  yang  sedikit  sehingga meminimalkan  peningkatan  jumlah  asam  lemak  pada minyak  goreng  yang  bukan  akibat  dari  hasil penggorengan  berulang.  Singkong  dan  minyak ditimbang  dengan  perbandingan  1:2  dan  dimasukkan ke  dalam  minyak  yang  telah  dipanaskan  terlebih dahulu dan digoreng hingga matang. Tenggang waktu satu  penggorengan  dengan  penggorengan  selanjutnya (sampai 6x menggoreng) 15 menit. Setelah proses ini selesai,  kemudian  dilakukan  analisis  perhitungan bilangan peroksida dan Thio Barbituric Acid (TBA).

## Hewan dan Perlakuan
Tikus  putih  ( Rattus  Novergicus )  jantan  galur Wistar,  umur  2-3  bulan,  berat  badan  200-225g  dari Laboratorium Fakultas Farmasi UGM Yogyakarta.Tikus Wistar pada penelitian ini dibagi ke dalam  tiga  kelompok  :  kelompok  kontrol  positif  (P 0 ) yang diberi minyak jelantah dosis 3,5ml/200gBB dan plasebo,  kelompok  perlakuan  1  (P 1 )  yang  diberi minyak  jelantah  dosis  3,5ml/200gBB  dan  melatonin dosis 5mg/kgBB dan kelompok perlakuan 2 (P 2 ) yang diberi  minyak  jelantah  dosis  3,5ml/200gBB  dan melatonin dosis 10mg/kgBB.
Pakan  standar Comfeed  AD  II dengan komposisi  :  Air  =  Maks.  12%,  Protein  Kasar  = Min.15%, Lemak Kasar = 3-7%, Serat Kasar = Maks. 6%,  Abu  =  Maks  7%,  Kalsium  =  0,9-1,1,  Fosfor  = 0,6-0,9.Plasebo  yang  diberikan  pada  kelompok  P 0 ialah  aquades  1  ml,  sedangkan  dosis  melatonin  yang diberikan  untuk  kelompok  P 1 dan  P 2 masing-masing ialah 5mg/kgBB dan 10mg/kgBB, dilarutkan dalam 1 ml aquades.
Pengambilan darah pada tikus dilakukan 1x di akhir  penelitian  sebanyak  2  cc  melalui plexus retroorbitalis pada  mata,  tikus  dianestesi  terlebih dahulu,  dipegang  dan  dijepit  bagian  tengkuk  dengan jari  tangan,  kemudian  mikrokapiler  digoreskan  pada medial  canthus mata  di  bawah  bola  mata  ke  arah foramen  opticus ,  darah  yang  keluar  ditampung  pada effendorf tanpa  EDTA  untuk  tujuan  pengambilan serumnya.

## Pengukuran Berat Badan Tikus
Berat badan tikus diukur setiap minggu pukul 8-9 pagi menggunakan timbangan digital elektrik.

## Pemeriksaan Kadar TNF-α
Kadar TNF-α diperiksa dari serum darah tikus menggunakan  kit  ELISA  merk  Raybio®  Tech,  Inc Parkway Lane, Suite 100, Norcross Georgia, USA.

## Analisis Statistik
Perbedaan rerata berat badan dan kadar TNF- α  antar  kelompok  menggunakan  uji one  way  Anova dilanjutkan  dengan  uji Post  Hoc untuk  mengetahui efek perlakuan dosis mana yang lebih baik.

## HASIL
Hasil pengamatan pembuatan minyak jelantah memperlihatkan  bahwa  minyak  goreng  kelapa  sawit sebanyak  3  liter  yang  dipanaskan  dengan  alat Deep Frying yang dilengkapi termometer, mulai bergejolak (siap untuk menggoreng) pada suhu 150 o C dan bahan makanan (singkong) digoreng hingga matang membutuhkan  waktu  3  menit.  Hasil  analisis  bilangan peroksida  dan Thio  Barbituric  Acid (TBA)  disajikan tabel berikut :
Tabel 1. Hasil Analisis Bilangan Peroksida Berat Sampel (g) Volume Titrasi (ml) Bil.Peroksida (awal) (mEq/1000g) Bil.Peroksida (akhir) (mEq/1000g) 5,045 5,15 102 108 Tabel 2. Hasil Analisis Bilangan TBA Berat Sampel (g) ABS TBA (awal) (mgMDA/kg) TBA (akhir) (mgMDA/kg) 10,06 0,1896 0,441 0,528
Menurut  standar  baku  mutu  minyak  goreng dari  Badan  Standarisasi  Nasional  (SNI  3741:2013) 10 , syarat  mutu  minyak  yang  baik  memiliki  bilangan peroksida maksimal 10  mEq/1000g. Hasil analisis ini menunjukkan  bahwa  minyak  jelantah  tersebut  telah rusak dengan hasil bilangan peroksida mencapai 102- 108mEq/1000g.  Selain  itu,  hasil  analisis  bilangan TBA yang menunjukkan semakin tinggi hasil analisis bilangan  TBA  maka  semakin  jelek  mutu  minyak tersebut. Analisis bilangan TBA pada minyak tersebut menunjukkan  hasil  bilangan  TBA  yang  tinggi  yaitu 0,441-0,528 mgMDA/kg

## Beda  Rerata  Berat  Badan  dan  Kadar  TNF-  α Antar Kelompok
Analisis  efek  perlakuan  diuji  berdasarkan rerata  berat  badan  dan  kadar  TNF-α  antar  kelompok sesudah  diberikan  perlakuan.  Analisis  kemaknaan dengan uji One Way Anova yang tersaji dalam Tabel 3 menunjukkan  rerata  berat  pada  kelompok  kontrol positif  yang  diberi  minyak  jelantah  tanpa  melatonin mengalami peningkatan berat badan yang lebih tinggi dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  yang  hanya diberi pakan standar dan kelompok perlakuan 1 dan 2 yang  diberi  minyak  jelantah  +  melatonin.  Selain  itu, terdapat perbedaan bermakna rerata berat badan antar
ketiga  kelompok  yang  ditunjukkan  dengan  nilai  ( p < 0,05).
Tabel  3  juga  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  bermakna  rerata  kadar  TNF-α  antar  ketiga kelompok  ( p >0,05).  Tetapi  hasil  ini  menunjukkan bahwa  rerata  kadar  TNF-α  kelompok  kontrol (78,14±3,73  pg/ml)  yang  diberi  pakan  standar  lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol positif (126,53±4,22  pg/ml)  yang  diberi  minyak  jelantah dengan  selisih  48,39  pg/ml.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  minyak  jelantah  yang  melalui  proses penggorengan  lebih  dari  5  kali  pemakaian  dengan bilangan  peroksida  102-108mEq/1000g  dan  bilang TBA  0,441-0,528  mgMDA/kg  dapat  memicu  proses inflamasi  dan  stress  oksidatif  dalam  tubuh  dengan meningkatkan kadar TNF-α.
Analisis  uji  kemaknaan  rerata  berat  badan dengan One  Way  Anova menunjukkan  adanya perbedaan yang signifikan ( p< 0,05 ), maka dilakukan uji  lanjutan Tukey  HSD untuk  mengetahui  dosis melatonin  mana  yang  lebih  baik  menurunkan  berat badan tikus. Hasil uji Tukey HSD menunjukkan dosis melatonin 10 mg/kgBB signifikan dlaam menurunkan berat badan tikus (p<0,05) yag disajikan pada Tabel 4 di bawah ini.
Tabel 3.Hasil Uji One Way Anova Rerata Berat Badan dan Kadar TNF-α Antar Kelompok Sesudah
Perlakuan Variabel P 0 P 1 P 2 p Berat Badan 239,17±12,57 (a) 226,50±6,34 (a) 220±12,10 (a) 0,002 (b) Kadar TNF-α 126,53±4,22 (a) 101,40±1,11 (a) 98,095±1,21 (a) 0,155 (c)
Keterangan  : (a) Variabel  ditentukan  berdasarkan  mean±SD, (b) Berbeda  signifikan  ( p <0,05)  menurunkan  berat  badan  setelah perlakuan  28  hari  berdasarkan  uji one  way  ANOVA , (c) Tidak  berbeda  signifikan  ( p >0,05)  menurunkan  kadar  TNFα  setelah perlakuan 28 hari berdasarkan uji one way ANOVA.
Tabel 4. Hasil Uji Tukey HSD Rerata Berat Badan Antar Kelompok Kelompok Δ p P 0 dan P 1 12,667 (a) 0,135 (b) P 0 dan P 2 P 1 dan P 2 19,167 (a) 6,50 (a) 0,019 (c) 0,558 (b)
Keterangan : (a) Selisih rerata antar kedua kelompok, (b) Dosis  melatonin 5mg/kgBB tidak  signifikan  menurunkan berat  badan tikus ( p >0,05), (c) Dosis melatonin 10mg/kgBB signifikan menurunkan berat badan tikus ( p <0,05).

## Gambar 1. Beda rerata berat badan Antar kelompok

## PEMBAHASAN
Proses inflamasi dalam tubuh dapat diketahui melalui  parameter  peningkatan    kadar  TNF-α . Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  minyak  jelantah yang  melalui  proses  penggorengan  lebih  dari  5  kali pemakaian dengan bilangan peroksida 102- 108mEq/1000g dan bilang TBA 0,441-0,528 mgMDA/kg dapat memicu proses inflamasi dan stress oksidatif  dalam  tubuh  dengan  meningkatkan  kadar TNF-α.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Susila  Sastri tahun  2010  yang  menunjukkan  pemberian  diet  tinggi minyak sawit jelantah meningkatkan secara signifikan kadar sitokin TNF-α 4 .
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak bermaknanya  penurunan  kadar  TNF-α  secara  statistik pada  kelompok  perlakuan  1  dan  2.  Hal  ini  mungkin disebabkan karena adanya proses inflamasi akut yang belum  sepenuhnya  dihambat  oleh  melatonin.  Hal  ini dapat  disebabkan  beberapa  faktor  seperti  kurangnya waktu  perlakuan  melatonin  dosis  5-10mg/kgBB
selama  28  hari  dan  kurangnya  efektifitas  suplemen melatonin tunggal dalam menurunkan kadar TNF-α.
Oksidasi  asam  lemak  dalam  hepatosit  merupakan penyebab  utama  peningkatan  stress  oksidatif  dalam hepatosit  yang  menyebabkan  terjadinya  kerusakan DNA  nukleus,  disfungsi  mitokondria  dan  pelepasan sitokin-sitokin  proinflamasi  NF ‐ κB  dependent  (TNF- α,  IL-6,  IL-1β). Tumor  Necrosis  Factor α  (TNF-α) merupakan  sitokin  utama  pada  respon  inflamasi  akut terhadap  bakteri  gram  negative  dan  mikroba  lainnya. Infeksi  yang  berat  dapat  memicu  produksi  TNF-  α dalam  jumlah  besar  yang  akan  menimbulkan  reaksi sistemik.  TNF-  α  pada  awalnya  diidentifikasi  sebagai mediator nekrosis tumor pada hewan coba yang diberi Lipopolysaccharide (LPS), hal ini dapat menyebabkan kematian sel,
Disseminated
Intravascular Coagulation (DIC)  dan  kerusakan  pada  jaringan. TNF-  α  memiliki  efek  biologis  sebagai  berikut  :  (1) Merangsang  makrofag  mensekresikan  kemokin  dan menginduksi  kemoktaksis  dan  pengerahan  leukosit. (2) Merangsang fagosit mononuclear untuk
Gambar  1.  Beda  rerata  berat badan  kelompok  kontrol  positif (P 0 ) yang diberi minyak jelantah dan plasebo, kelompok perlakuan  1  (P 1 )  yang  diberi minyak  jelantah  dan  melatonin dosis  5mg/kgBB  dan  kelompok perlakuan  2  (P 2 )  yang  diberi minyak  jelantah  dan  melatonin dosis 10mg/kgBB.
mensekresikan  IL-1  dengan  efek  yang  sama  seperti TNF-  α.  (3)  Menginduksi  apoptosis  sel  yang mengalami  inflamasi.  (4)  Produksi  TNF-  α  dalam jumlah  besar  dapat  menurunkan  kontraktilitas  otot, tekanan darah atau syok yang menimbulkan kaheksia, gangguan  metabolisme  glukosa  yang  disebabkan karena penggunaan glukosa yang berlebihan oleh otot dan hati dan gagal untuk menggantikannya. 11
Melatonin sebagai suplemen antioksidan pada penelitian  ini  belum  mampu  menekan  respon inflamasi  akut  yang  ditimbulkan  dari  aktivasi  sitokin TNF-α tersebut. Penelitian Zaitone tahun 2011 tentang penggunaan  kombinasi  melatonin  dengan  berbagai jenis  obat  seperti Pentoxifylline dan Pioglitazone menunjukkan  bahwa  kombinasi  melatonin  dan  obat khususnya Pentoxifylline terbukti  lebih  efektif menurunkan kadar TNF-α secara signifikan pada tikus yang  diberi  diet  tinggi  lemak  dibandingkan  dengan melatonin  tunggal  tanpa  kombinasi  atau  kombinasi dengan obat Pioglitazone . 12
Melatonin  juga  memegang  peranan  penting dalam  meningkatkan  produksi Brown  Adipose  Tissue (BAT)  dalam  tubuh  dan  meningkatkan  aktivitasnya dalam  mengatur  metabolisme  energi  dalam  tubuh. BAT berperan dalam proses pembakaran lemak dalam sel  dan  mempengaruhi  tingkat  metabolik  secara signifikan. Seseorang yang memiliki kandungan BAT lebih  banyak  dalam  tubuhnya  mampu  mengatasi kelebihan  kalori  dengan  lebih  baik  dan  resisten terhadap terjadinya obesitas. 13
Penelitian  lainnya  oleh  Faruk  Serin  tahun 2013 tentang pemberian kombinasi suplemen melatonin  dan  resveratrol  menunjukkan  peningkatan perbaikan  sel  hati  pada  tikus  Wistar  yang  diberi Carbon  Tetrachloride (CCL4)  dan  mengalami fibrosis 14 .  Hasil-hasil  peneltian  ini  menunjukkan bahwa  penggunaan  melatonin  yang  dikombinasikan dengan  obat  atau  suplemen  antioksidan  lain  seperti resveratrol  menunjukkan  hasil  yang  lebih  efektif dalam  menurunkan  kadar  TNF-α  dan  fibrosis  hati pada tikus percobaan dibandingkan dengan penggunaan  melatonin  tunggal  tanpa  kombinasi  obat dan suplemen antioksidan lain.
Kombinasi  melatonin  dan  antioksidan  lain seperti  resveratrol  dapat  bekerja  sinergis  dalam mempengaruhi  aktivitas  sitokin  proinflamasi  melalui penghambatan jalur aktivitas Nuclear Factor Kappa β (NF ‐ κB). Penghambatan aktivitas pensinyalan NF ‐ κB mampu menekan pelepasan sitokin proinflamasi TNF- α  yang  disekresikan  sel  hepatosit  yang  mengalami inflamasi.  Selain  itu,  kemampuan  antioksidan- antioksidan  ini  yang  kaya  akan  elektron  positif  dapat berfungsi  sebagai  donor  elektron  positif  yang  lebih kuat dan berikatan langsung dengan DNA mitokondria dan menjaganya dari kerusakan, kombinasi  antioksidan  ini  juga  berperan  dalam
aktivasi  enzim catalase (CAT)  dalam  menangkal berbagai serangan ROS. 15

## SIMPULAN
Melatonin  dosis  terbaik  10mg/kgBB  menurunkan berat  badan  tikus  wistar jantan yang  diberi  minyak jelantah selama 28 hari, tetapi tidak menurunkan kadar TNF-α.

## DAFTAR PUSTAKA
1. AV,  Sey. Nonalcoholic  Fatty  Liver  Disease  : Epidemiology  and  Diagnosis .  E-Liver  Online. 2004, Vol. 1, 1-5.
2. Hasan  I,  Gani  RA,  Machmud  R.  Prevalence  and Risk  Factors  For  Nonalcoholic  Fatty  Liver  in Indonesia. J Gastr Hepatol. 2002.Vol. 17, 154.
3. Seo  YY,  Cho  YK,  Bae  JC.  Tumor  Necrosis Factor-α  as  a  predictor  for  the  Development  of Nonalcoholic  Fatty  Liver  Disease  :  A  4-Years Follow-Up  Study.  Endocrinol  Metab.  2013.  Vol 28 : 41-5.
4. Sastri  S.    Perbedaan  pengaruh  diet  tinggi  minyak sawit  segar  dengan  minyak  jelantah  terhadap lemak  dan  TNF-  α  darah  tikus.  Majalah Kedokteran Andalas. 2010. Vol.34. No.1.
5. Sartika  RAD.  Pengaruh  asam  lemak  jenuh,  tidak jenuhdan  asam  lemak  trans  terhadap  kesehatan. Jurnal  Kesehatan  Masyarakat  Nasional.  2008 ;2(4):154-60.
6. Aisyah  S,  Balqis  U,  Karunia  E.  Histopatologi Jantung  Tikus  Putih  Akibat  Pemberian  Minyak Jelantah. Jurnal Medika Veterinaria.  2014. Vol 8 (1).
7. Chowdhury I, Sengupta A, Kumar S. Melatonin : Fifty  Years  of  Scientific  Journey  from  the Discovery  in  Bovine  Pineal  Gland  to  Delineation of  Functions  in  Human.  Indian  Journal  Of Biochemistry  and  Biophysics.  2008.    Vol  45,  pp. 289-304.
8. Lingga  L.The  Healing  Power  of  Antioxidant  : Mengenal  Lebih  Jauh  Sumber  Antioksidan Unggulan. Jakarta : Elex Media Komputindo. Hal : 343-45. 2012.
9. Pevet  P.  Melatonin  in  animal  models.  Dialogues in Clinical Neuroscience. 2003. Vol 5, No. 4.
10. Badan  Standarisasi  Nasional.  Minyak  Goreng. 2013. Jakarta : BSN. 134619320/SNI-3741-2013- Minyak-Goreng.pdf.
11. Kumar  S,  Balakrishnan  V.  Role  of  Cytokines  in the  Pathogenesis  of  Non-Alcoholic  Fatty  Liver Disease. Ind J Clin Biochem. 2011. Vol. 2, 202-09
12. Zaitone  Sawsan,  Neven  H,  Naglaa  El-Orabi,  El- Sayed El-Awady. Pentoxifylline and melatonin in combination with pioglitazone ameliorate
experimental non-alcoholic fatty liver disease. Eur J Pharmacology. 2011. Vol 662 (1-3) : 70-7.
13. Reiter  RJ,  Tan  DX,  Terron  MP,  Flores  LJ, Zbigniew  C.  Melatonin  and  its  metabolites:  new findings  regarding  their  production  and  their radical  scavenging  actions.  Acta  Biochimica Polonica. 2007.  Vol. 54 (1) : 1-9.
14. Serin  Faruk,  Ertukler  M,  Gul  Mehmet,  Yigitcan Birgul.  Investigating  the effects  of  melatonin  and resveratrol  agents  on  non  alcoholic  fatty  liver disease. Academic World Education and Research Center. Vol 3 (2013) : 1446-53.
15. Tan  DX,  Chen  LD,  Reiter  RJ,  Poeggeler  B,
Manchester  LC.  Melatonin:  a potent,  endogenous hydroxyl radical scavenger. Endocr J. 1993. Vol 1 (4) : 57-60.