Bacillus Coagullans GBI-30,6068 Bagi Aktivitas Probiotik dan Keamanan Untuk Mengurangi Gejala Saluran Pernapasan Atas Dan Pencernaan Pada Anak-Anak Dengan Modulasi Protein Terkait Imunitas
Reynaldi Febriyan Haholongan (1) , Raden Fadly Bayu Dwiyoga (2)
Mahasiswa Jurusan Biologi Prodi Biologi Terapan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung
reynaldifebriyan@gmail.com (1), fadlybayu619@gmail.com (2)

## ABSTRAK
Studi  acak,  tersamar  ganda,  paralel  dan  terkontrol  plasebo  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  efek  Bacillus coagulans  GBI-30,6086 ® probiotik  (GanedenBC 30® )  terhadap  infeksi  saluran  pernapasan  atas  (URTI)  dan infeksi  saluran  cerna  gas  (GITI)  di  delapan  puluh  anak  usia  sekolah  yang  sehat  (6-8  tahun).  Data dikelompokkan  berdasarkan  perlakuan  (probiotik  atau  plasebo)  dan  waktu  percobaan  (bulan  0  atau  3). Kemudian, outlier ekstrim diidentifikasi dengan membangun boxplot (Grafik Box & Whiskers). Menariknya, pemberian  GanedenBC 30 selama  tiga  bulan  secara  signifikan  (p  <0,05)  menurunkan  kadar  serum  sembilan protein:  TNFα,  CD163,  G-CSF,  ICAM-1,  IL-6,  IL-8,  MCP-2,  RAGE,  dan  uPAR,  dan  peningkatan  kadar serum  PF4  dibandingkan  dengan  kondisi  awal,  yang  tidak  terpengaruh  dengan  pengobatan  placebo.  Oleh karena  itu,  probiotik B.  coagulans GBI-30,  6086 memodulasi  protein  yang  berhubungan  dengan  kekebalan pada anak-anak yang sehat, mengurangi beberapa gejala URTI dan GITI, dengan demikian, bahan fungsional ini dapat berkontribusi pada gaya hidup yang lebih sehat..
Kata Kunci : Probiotik, agen antibiotik, Bacillus coagulans , infeksi pernafasan atas, infeksi pencernaan

## ABSTRACT
This double-blind, parallel and placebo-controlled study aimed at infection with the probiotic GBI-30,6086 ® (GanedenBC 30® ) bacteria of the upper respiratory tract (URTI) and respiratory tract (GITI) in eighty healthy school-age  children  (6  -8  years).  Data  were  based  on  treatment  (probiotic  or  placebo)  and  time  of  trial (months  0  or  3).  Then,  extreme  outliers  are  identified  by  constructing  a  boxplot  (Box  &  Whiskers  Graph). Interestingly,  presenting  GanedenBC 30 for  three  months  significantly  (p  <  0.05)  decreased  serum  levels  of nine proteins: TNFα, CD163, G-CSF, ICAM-1, IL-6, IL-8, MCP-2, RAGE, and uPAR., and increased serum PF4 levels compared with baseline, which were not affected by placebo treatment. Therefore, the probiotic B. coagulans GBI-30, 6086 modulates immune-related proteins in healthy children, reducing some symptoms of URTI and GITI, thus, this functional ingredient may contribute to a healthier lifestyle.
Keywords : Probiotic,  antibiotic  agent, Bacillus  coagulans ,  Upper  Respiratory  Tract  Infections, Gastrointestinal Tract Infections
.
Febriyan Haholongan R, Fadly Bayu Dwiyoga R : Bacillus Coagullans GBI-30,6068 Bagi Aktivitas  Probiotik  dan  Keamanan  Untuk  Mengurangi  Gejala  Saluran  Pernapasan  Atas Dan Pencernaan Pada Anak-Anak Dengan Modulasi Protein Terkait Imunitas

## I. PENDAHULUAN

## 1. Latar Belakang
Probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang adalam jumlah tertentu dapat bermanfaat bagi kesehatan inangnya (FAO/WHO, 2002). Manfaat dari probiotik antara lain memiliki antikarsinogenik,  mampu  memodulasi  dan  memperkuat  sistem  imun,  memiliki  manfaat bagi  kesehatan  saluran  pernafasan  atas,  dan  manfaat  bagi  saluran  pencernaan gastrointestinal,  serta  manfaat  lainnya.  Dalam  penentuan  mikroorganisme  atau  strain  apa yang  akan  digunakan  sebagai  agen  antibiotik,  haruslah  melewati  berbagai  uji  dengan berbagai  persyaratan  seperti  uji  resistensi  terhadap antibiotik,  lysozyme  dan  enzim-enzim pada pankreas, uji ketahanan terhadap keasaman pada perut dan empedu, dan uji ketahanan dalam menghadapi patogen-patogen dalam saluran pencernaan. Infeksi saluran pernafasan (URTI)  atas  dan  pencernaan  (GITI)  merupakan  infeksi  paling  umum  yang  terjadi  pada anak-anak.  Jumlah  kematianya  juga  sangat  besar,  yakni  >5  juta  kasus  pada  tahun  2015 (WHO,  2015).  Infeksi  saluran  pernafasan  atas  dapat  disebabkan  oleh  virus  seperti rhinovirus,  parainfluenza,  respiratory  syncytial  virus  (RSV),  adenovirus,  human metapneumovirus,  and  bocavirus.  Sedangkan  infeksi  pencernaan  (gastrointestinal)  yang sering  terjadi  adalah  diare,  konstipasi,  inflamasi  usus,  dan  muntah-muntah. Bacillus coagulans merupakan  strain  bakteri  asam  laktat  non-patogenik  gram  positif  aerobik ataupun  terkadang  anaerobik  berspora  yang  aman  dikonsumsi  manusia.  Strain  baru  dari bakteri probiotik ini berpotensi digunakan dalam penelitian dalam industri pangan.  Namun dalam  pemanfaatannya  perlu  diawasi  karena  dapat  membawa  karakteristik  sensorik  baru pada makanan. Probiotik dari Bacillus coagulans GBI-30, 6068 telah diketahui secara luas sebagai  probiotik  yang  dapat  meningkatkan  respon  imun  manusia  terhadap  virus  umum penyebab URTI. Terlebih dapat mengurangi gejala GITI pada orang dewasa.

## 2. Perumusan Masalah
Dari  latar  belakang  masalah  yang  telah  diuraikan  di  atas,  maka  rumusan  masalah  yang akan  dikaji  dalam  penelitian  ini  adalah  Infeksi  saluran  pernafasan  (URTI)  atas  dan pencernaan  (GITI)  merupakan  infeksi  paling  umum  yang  terjadi  pada  anak-anak. Jumlah kematianya juga sangat besar, yakni >5 juta kasus pada tahun 2015 (WHO, 2015). Infeksi saluran  pernafasan  atas  dapat  disebabkan  oleh  virus  seperti  rhinovirus,  parainfluenza, respiratory  syncytial  virus  (RSV),  adenovirus,  human  metapneumovirus,  and  bocavirus. Sedangkan  infeksi  pencernaan  (gastrointestinal)  yang  sering  terjadi  adalah  diare, konstipasi, inflamasi usus, dan muntah-muntah.

## 3. Tujuan Penelitian
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menguji  efektifitas  probiotik  GanedenBC 30 pada anak-anak usia sekolah.

## 4. Manfaat Penelitian
Manfaat  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektifitas  dari  probiotik GanedenBC 30 pada anak-anak

## II. METODE Tempat dan Waktu
Penelitian dilakukan di Querétaro, México pada 2019.

## Rancangan Penelitian atau Model
Untuk mengevaluasi dampak probiotik GanedenBC 30 pada anak-anak digunakan rancangan penelitian  dalam  waktu  tiga  bulan,  double-blinded,  paralel,  plasebo  terkontrol  dan  acak.
Febriyan Haholongan R, Fadly Bayu Dwiyoga R : Bacillus Coagullans GBI-30,6068 Bagi Aktivitas  Probiotik  dan  Keamanan  Untuk  Mengurangi  Gejala  Saluran  Pernapasan  Atas Dan Pencernaan Pada Anak-Anak Dengan Modulasi Protein Terkait Imunitas
Intervensi  terdiri  dari  pemberian  sachet  2  g  setiap  hari  mengandung  probiotik GanedenBC 30 (~1×109  CFU/2  g  sachet)  atau  maltodekstrin  (plasebo)  selama  tiga  bulan. Semua perawatan dilarutkan dalam ~50 mL air rasa dan segera diberikan ke peserta oleh anggota  tim  peneliti  pada  hari  kerja  dan  oleh  orang  tua  atau  wali  sah  pada  akhir  pekan. Sampel  darah  dikumpulkan  pada  bulan  0  dan  3  untuk  pemisahan  serum,  yang  disimpan pada -80 °C sampai analisis.

## Bahan dan Peralatan
Pada penelitian Miriam A, bahan yang digunakan sebagai objek penelitian adalah Bacillus coagulans  GBI-30,  6086  strain  (GanedenBC30)  dan  plasebo  (maltodekstrin)  yang disumbangkan oleh Ganeden, Inc. (Mayfield Heights, OH, USA). Probiotik GanedenBC30 terdiri  dari  B.  koagulan  yang  diperoleh  melalui  fermentasi,  diperoleh  kembali  dengan sentrifugasi,  dan  dikeringkan  dengan  semprotan  maltodekstrin,  sedangkan  plasebo  hanya terdiri dari maltodekstrin (88,1% atau lebih pentasakarida, Maltrin M100, Grain Processing Co.,  Muscatine,  IA,  USA).  Kedua  produk  tersebut  dikemas  dalam  sachet  berisi  2  gram. Sachet probiotik mengandung ~1 × 109 CFU/2 g B. coagulans. Kedua produk stabil pada suhu kamar dan dalam bentuk bubuk terdispersi selama penelitian. Kedua sachet itu identik dalam  rasa  dan  penampilan.  Sementara  pada  penelitian  Gozde  Konuray  menggunakan  B. koagulanGBI-30,  6086  dibeli  dari  Ganeden  Biotech  Inc.  (Ketinggian  Mayfield,  OH).B. koagulanGBI-30,  6086  adalah  galur  probiotik  komersial  dengan  nama  GanedenBC30 dalam bentuk semprot kering. Itu dikonfirmasi sebagai strain murni B. koagulanPalu, yang pertama  diisolasi  dari  susu  evaporasi  kalengan  (Administrasi  Makanan  dan  Obat-obatan (FDA),  2021).  Indikator  regangan  B.  cereus,  B.  subtilis,  Escherichia  coli  NCTC  12241, Listeria monocytogenesATCC 7644 danSalmonella sp. diperoleh dari Universitas ukurova, Departemen  Teknik  Pangan,  Laboratorium  Mikrobiologi  Pangan  dan  ditumbuhkan  dalam kaldu Nutrient (NB) pada suhu 37◦C selama 18 jam. Semua bahan kimia dibeli dari Merck, Jerman, jika tidak disebutkan sebaliknya.

## Tahapan Penelitian Pengumpulan Data
Pada  penelitian  ini,  pengumpulan  data  dilakukan  dengan  mengumpulkan  anak-anak  dari usia  6-8  tahun.  Data  dikategorikan  menjadi  kriteria  inklusi  dan  kritesia  eksklusi.  Kriteria inklusi berisi anak-anak dengan kondisi kesehatan yang relatif normal, dan kriteria eksklusi berisi  anak-anak  dengan  penyakit  infeksi  saluran  pernafasan  atas  dan  pencernaan  parah. Peserta  diminta  untuk  tidak  mengkonsumsi  obat-obatan  pharmaceutical  seperti  anti- inflammatory, immunosuppressive, dan laxative agents, dan konsumsi suplemen probiotik maupun prebiotik selama masa penelitian.
Analisis  Hematologi Dilakukan  pengambilan  sampel  darah  dari  setiap  peserta  dalam kondisi  puasa.  Dihitung  analisis  Total  Blood  Count  (TBC)  nya.  Indikator  yang  hendak diperiksa  antara  lain hemoglobin  (HGB),  hematokrit  (HCT),  jumlah  sel  darah  merah  dan putih (RBC dan  WBC), mean corpuscular volume (MCV), mean konsentrasi hemoglobin (MCH),  mean  corpuscular  hemoglobin  konsentrasi  (MCHC),  jumlah  dan  persentase limfosit (LYM), granulosit (GRA), neutrofil (NEU), dan trombosit (PLT). Kuantifikasi  protein terkait  kekebalan Kadar serum Imunoglobulin A (IgA), E (IgE), G (IgG),  dan  M  (IgM)  diukur  dengan  kit  enzyme-linked  immunosorbent  assay  (ELISA). Protein yang termasuk dalam susunan adalah sebagai berikut: CD40, CRP, E selectin, IL- 1a, IL-1b, IL-2 Ra, IL-10, IL-13, IL-18, ST2, TNFα, CD14, CD163, FAS, FASL, G-CSF, ICAM-1,  IL-2,  IL-4,  IL-6,  IL-8,  IL-12  p70,  Lipocalin-2,  MCP-1,  MCP-2,  MIF,  MIP-1a, MIP-1b,  OPN,  PAI-I,  PF4,  Prokalsitonin,  RAGE,  Resistin,  Trombomodulin,  TREM-1, uPAR, VCAM-1, dan VEGF. Susunan antibodi mencakup kontrol positif dan negatif dan setiap  antibodi  disusun  dalam  rangkap  empat.  Kuantifikasi  simultan  dari  protein  terkait
Febriyan Haholongan R, Fadly Bayu Dwiyoga R : Bacillus Coagullans GBI-30,6068 Bagi Aktivitas  Probiotik  dan  Keamanan  Untuk  Mengurangi  Gejala  Saluran  Pernapasan  Atas Dan Pencernaan Pada Anak-Anak Dengan Modulasi Protein Terkait Imunitas
kekebalan  dinilai  sesuai  dengan  protokol  pabrikan.  Bintik-bintik  protein  dideteksi menggunakan  Cy3  berlabel-streptavidin,  dan  kepadatan  setiap  titik  ditentukan  dengan pemindai laser (Genepix 4100 Microarray Scanner). Normalisasi slide intra dan antar kaca dilakukan  untuk  semua  sampel,  menggunakan  dua  kontrol  positif  untuk  normalisasi. Standar dimasukkan dalam susunan antibodi untuk pembuatan kurva standar untuk setiap protein, yang dianalisis baik dengan regresi linier atau algoritma log-log untuk memenuhi kebutuhan analitisnya.

## III. HASIL Karakteristik Dasar
Sebanyak 80 anak terdaftar dalam penelitian ini, yang diacak ke dalam kelompok probiotik (n  =  40)  dan  kelompok  plasebo  (n  =  40).  Tidak  ada  perbedaan  signifikan  yang  diamati dalam distribusi gender dan usia antar kelompok. Pemberian plasebo dan probiotik selama 3  bulan  secara  signifikan  (p  <  0,05)  meningkatkan  sel  darah  merah  (RBC,  ~2,8%),  he moglobin  (HBG,  2,8–3,1%),  hematokrit  (HCT,  ~3,6%),  dan  limfosit  (LYM,  12-14%) dibandingkan  dengan  kondisi  awal  (bulan  0).  Pemberian  probiotik  secara  signifikan  (p <0,05)  meningkatkan  rata-rata  volume  trombosit  (MVP,  3,7%)  yang  tidak  dimodifikasi dengan  plasebo.  Sebaliknya,  plasebo  secara  signifikan  (p  <0,05)  meningkatkan  jumlah monosit,  basofil  dan  eosinofil  (MXD,  22,9%)  dan  jumlah  neutrofil  (NEU,  17,5%),  yang tidak  dimodulasi  oleh  probiotik.  Penting  untuk  disebutkan  bahwa  semua  data  hematologi berada  dalam  nilai  referensi.  Selain  itu,  variabilitas  yang  diamati  pada  kondisi  awal  dan akhir  dari  kedua  kelompok  eksperimen  berada  dalam  variabilitas  normal  parameter hematologi  ini;  oleh  karena  itu,  tidak  ada  signifikansi  biologis  yang  dapat  disimpulkan dengan  hasil  ini.  Salah  satu  penjelasan  yang  mungkin  dari  peningkatan  kadar  parameter hematologi  ini  adalah  hemokonsentrasi  karena  asupan  air  yang  lebih  rendah,  karena penelitian  dilakukan  dari  September  hingga  November  yang  sedang  musim  dingin  yang dikaitkan  dengan  dehidrasi.  Dengan  demikian,  dehidrasi  ringan  telah  dikaitkan  dengan sedikit peningkatan HGB dan HCT. Namun demikian, kami tidak memasukkan asupan air dalam kuesioner untuk mendukung hipotesis ini.

## Analisis Protein Terkait Kekebalan
Antibodi  serum  dan  protein  terkait  kekebalan  diukur  untuk  memahami  efek imunomodulator probiotik BC-30 pada gejala URTI dan GITI. Pengaruh probiotik BC-30 pada  empat  serum  im  munoglobulin  (IgA,  IgE,  IgG,  dan  IgM).  Suplementasi GanedenBC30  selama  tiga  bulan  secara  signifikan  (p  <0,05)  meningkatkan  IgE  serum sebesar 17,3% dibandingkan dengan kondisi awal (bulan 0), sedangkan imunoglobulin ini tidak terpengaruh pada kelompok plasebo. Namun demikian, kadar IgE serum tetap dalam nilai referensi normal (<1600 UI/mL). Il-1b secara signifikan (p <0,05) meningkat dengan suplementasi  GanedenBC30  (24,2%)  tetapi  secara  signifikan  (p  <0,05)  menurun  dengan pengobatan  plasebo  (27,1%).  Selain  itu,  anak-anak  yang  diobati  dengan  plasebo  selama tiga  bulan  menunjukkan  penurunan  kadar  serum  IgM  (12,3%),  IL-18  (21,5%),  FASL (36,8%),  Osteopontin  (OPN,  89,7%),  Procalcitonin  (36,5%),  dan  Thrombomodulin (29,2%),  dan  secara  signifikan  (p  <0,05)  meningkatkan  Resistin  (107,6%)  dibandingkan dengan  kondisi  awal,  yang  tidak  terpengaruh  oleh  pemberian  probiotik.  Menariknya, pemberian GanedenBC30 selama tiga bulan secara signifikan (p <0,05) menurunkan kadar serum sembilan protein: TNFα, CD163, G-CSF, ICAM-1, IL-6, IL-8, MCP-2, RAGE, dan uPAR,  dan  peningkatan  kadar  serum  PF4  dibandingkan  dengan  kondisi  awal,  yang  tidak terpengaruh  dengan  pengobatan  plasebo.  Namun  demikian,  kadar  IgE  serum  tetap  dalam nilai referensi normal (<1600 UI/mL).  Selain imunoglobulin, tiga puluh sembilan protein terkait  respon  imun  manusia  diukur  (Tabel  5).  Tiga  protein  (ST2,  FAS,  dan  Lipocalin-2)
Febriyan Haholongan R, Fadly Bayu Dwiyoga R : Bacillus Coagullans GBI-30,6068 Bagi Aktivitas  Probiotik  dan  Keamanan  Untuk  Mengurangi  Gejala  Saluran  Pernapasan  Atas Dan Pencernaan Pada Anak-Anak Dengan Modulasi Protein Terkait Imunitas
berkurang secara signifikan (p <0,05) dengan pemberian GanedenBC30 dan plasebo (19,7– 24,4,  30,5–36,0,  dan  16,8–18,7%,  masing-masing).  Penurunan  kadar  serum  lipocalin-2 pada  kedua  kelompok  eksperimen  dapat  dikaitkan  dengan  lingkar  pinggang  bawah  yang diamati pada akhir penelitian, karena protein ini merupakan adipokin yang terlibat dengan remodeling jaringan adiposa putih dan secara positif terkait dengan indeks massa tubuh. Il- 1b  secara  signifikan  (p  <0,05)  meningkat  dengan  suplementasi  GanedenBC30  (24,2%) tetapi secara signifikan (p <0,05) menurun dengan pengobatan plasebo (27,1%). Selain itu, anak-anak  yang  diobati  dengan  plasebo  selama  tiga  bulan menunjukkan  penurunan  kadar serum  IgM  (12,3%),  IL-18  (21,5%),  FASL  (36,8%),  Osteopontin  (OPN,  89,7%), Procalcitonin  (36,5%),  dan  Thrombomodulin  (29,2%),  dan  secara  signifikan  (p  <  0,05) meningkatkan  Resistin  (107,6%)  dibandingkan  dengan  kondisi  awal,  yang  tidak terpengaruh oleh pemberian probiotik. Menariknya, pemberian GanedenBC30 selama tiga bulan  secara  signifikan  (p  <0,05)  menurunkan  kadar  serum  sembilan  protein:  TNFα, CD163,  G-CSF,  ICAM-1,  IL-6,  IL-8,  MCP-2,  RAGE,  dan  uPAR,  dan  peningkatan  kadar serum PF4 dibandingkan dengan kondisi awal, yang tidak terpengaruh dengan pengobatan plasebo.

## IV. KESIMPULAN
Konsumsi Bacillus coagulans GBI-30, 6086 (GanedenBC30) menurunkan angka kejadian hidung  tersumbat,  hidung  berdarah,  hidung  gatal,  suara  serak,  dan  perut  kembung,  serta durasi  suara  serak,  sakit  kepala,  mata  merah  dan  kelelahan  di  sekolah  sehat.  -anak-anak berusia lebih dari tiga bulan. Efek menguntungkan pada gejala infeksi saluran pernapasan atas  dan  gastrointestinal  ini  dikaitkan  dengan  modulasi  sistem  kekebalan,  karena GanedenBC30  mengubah  kadar  serum  TNFα,  CD163,  G-CSF,  ICAM-1,  IL-6,  IL-8, MCP2,  RAGE,  uPAR,  dan  PF4.  Oleh  karena  itu,  hasil  ini  menunjukkan  bahwa GanedenBC30  dapat  digunakan  sebagai  bahan  fungsional  dengan  sifat  imunomodulator positif  pada  anak-anak.  Studi  lebih  lanjut  dapat  bertujuan  mengevaluasi  efek GanedenBC30  pada  infeksi  terkait  kekebalan  lainnya  atau  penyakit  metabolik  untuk mengeksplorasi dampaknya terhadap kesehatan manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahanchian  H,  Jones  CM,  Chen  YS,  Sly  PD.  Respiratory  viral  infections  in children  with asthma: Do they matter and can we prevent them? BMC Pediatr. 2012;12:147.
Altun, G. K., Erginkaya, Z. 2021. Identification and characterization of Bacillus coagulans strains  for  probiotic  activity  and  safety.  Journal.  Cukurova  University.  Turkey. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0023643821013864?ref=pdf_dow nload&fr=RR-2&rr=71ac26881fee879f.
Anaya-Loyolaa,  M.  A.,  Enciso-Morenob,  J.  A.,  López-Ramosb,  J.  E.,  García-Marínc,  G. Álvareza, M. Y. O., Vega-Garcíaa, A. M., Mosquedaa, J., García-Gutiérrezc, D. G., Kellerd, D., Pérez-Ramírezc, I. F. 2019. Bacillus coagulans GBI-30, 6068 decreases upper  respiratory  and  gastrointestinal  tract  symptoms  in  healthy  Mexican  scholar- aged  children  by  modulating  immune-related  proteins.  Journal.  Universidad Autónoma de Querétaro. Mexico
Azad  MB,  Kozyrskyj  AL.  Perinatal  programming  of  asthma:  The  role  of  gut  microbiota. Clinical &Developmental Immunol. 2012;2012:932072.
Castellazzi  AM,  Valsecchi  C,  Caimmi  S,  Licari  A,  Marseglia  A,  Leoni  MC,  et  al. Probiotics and food allergy. Italian J Pediatr. 2013;39:47.
Febriyan Haholongan R, Fadly Bayu Dwiyoga R : Bacillus Coagullans GBI-30,6068 Bagi Aktivitas  Probiotik  dan  Keamanan  Untuk  Mengurangi  Gejala  Saluran  Pernapasan  Atas Dan Pencernaan Pada Anak-Anak Dengan Modulasi Protein Terkait Imunitas
Dotterud  CK,  Storro  O,  Johnsen  R,  Oien  T.  Probiotics  in  pregnant  women  to  prevent allergic disease:  A randomized, double-blind trial. Br J Dermatol. 2010;163(3):616- 23.
Elazab N, Mendy A, Gasana J, Vieira ER, Quizon A, Forno E. Probiotic administration in early  life,  atopy,  and  asthma:  A  meta-analysis  of  clinical  trials.  Pediatrics. 2013;132(3):666-76.
Enomoto  T,  Sowa  M,  Nishimori  K,  Shimazu  S,  Yoshida  A,  Yamada  K,  et  al.  Effects  of bifidobacterial supplementation to pregnant women and infants in the prevention of allergy  development  in  infants  and  on  fecal  microbiota.  Allergology  Internat. 2014;63(4):575-85.evaluation.  Rome:  Food  and  Agriculture  Organization  of  the United Nations: World Health Organization; 2006. viii, 50 p. p.
Food  and  Agriculture  Organization  of  the  United  Nations,  World  Health  Organization.
Probiotics in food: Health and nutritional properties and guidelines for
Lin TY, Chen CJ, Chen LK, Wen SH, Jan RH. Effect of probiotics on allergic rhinitis in Df, Dp or dust-sensitive children: A randomized double blind controlled trial. Indian Pediatr. 2013;50(2):209-13.
Matamoros S, Gras-Leguen C,  Le Vacon F, Potel G, de La Cochetiere MF. Development of  intestinal  microbiota  in  infants  and  its  impact  on  health.  Trends  Microbiol. 2013;21(4):167-73.
Meneghin  F,  Fabiano  V,  Mameli  C,  Zuccotti  GV.  Probiotics  and  atopic  dermatitis  in children. Pharmaceuticals. 2012;5(7):727-44.
Pelucchi  C,  Chatenoud  L,  Turati  F,  Galeone  C,  Moja  L,  Bach  JF,  et  al.  Probiotics supplementation  during  pregnancy  or  infancy  for  the  prevention  of  atopic dermatitis:meta-analysis. Epidemiology 2012;23(3):402-14.
Vael  C,  Desager  K.  The  importance  of  the  development  of  the  intestinal  microbiota  in infancy. Curr Opin Pediatr. 2009;21(6):794-800.
Vael  C,  Vanheirstraeten  L,  Desager  KN,  Goossens  H.  Denaturing  gradient  gel electrophoresis  of  neonatal  intestinal  microbiota  in  relation  to  the  development  of asthma. BMC Microbiol. 2011;11:68.
Vandenplas Y, Huys G, Daube G. Probiotics: An update. Jornal de pediatria. 2015;91(1):6- 21.
West CE, D’Vaz N, Prescott SL. Dietary immunomodulatory factors in the development of immune tolerance. Curr Allerg Asthma Rep. 2011;11(4):325-33.
Yap  GC,  Loo  EX,  Aw  M,  Lu  Q,  Shek  LP,  Lee  BW.  Molecular  analysis  of  infant  fecal microbiota  in  an  Asian  at-risk  cohort-correlates  with  infant  and  childhood eczema.BMC Res Notes. 2014;7:166.
Yesilova  Y,  Calka  O,  Akdeniz  N,  Berktas  M.  Effect  of  probiotics  on  the  treatment  of children with atopic dermatitis. Ann Dermatol. 2012;24(2):189-93. da Costa Baptista IP, Accioly E, de Carvalho Padilha P. Effect of the use of probiotics in the treatment of  children  with  atopic  dermatitis;  A  literature  review.  Nutricion  hospitalaria. 2013;28(1):16-26.
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 13 Juni 2022 25 Juli  2022 02 Agustus 2022 Ya