J. Teknol. dan Industri Pangan Vol. 27(1): 68-77 Th. 2016 ISSN: 1979-7788 Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012

## PEMANFAATAN  AKTIVITAS  ANTIMIKROBA  SAPONIN  DAUN  PEPAYA PADA  KEMASAN  KELOBOT  JAGUNG
[Utilization of Antimicrobial Activity of Saponins from Papaya Leaves on Maize Husk Packaging]
Sri Wahyuningsih 1) ,  Nugraha E. Suyatma 2) ,  dan Harsi D. Kusumaningrum 2,3) *
1) Program Studi Ilmu Pangan, Sekolah Pasca Sarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor
2) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor
3) Southeast Asian Food and Agricultural Science and Technology Center, Institut Pertanian Bogor, Bogor .

## Diterima 04 Januari 2016 / Disetujui 11 Mei 2016

## ABSTRACT
This study aimed to utilize saponins from papaya leaves as antifungal on maize husk packaging. Crude and semi-pure saponins were extracted from papaya leaves using Soxhlet and Ultrasonic-Assisted Extraction (UAE) methods. The total saponin contents were determined using UV-Vis spectrophotometry. Their  ab ility  to  inhib it  Aspergillus  niger  was  tested  b y  macrodillution  method.  The  extracts  were  also applied  to  maize  husk  b y  soaking  it  for  5  minutes  at  concentration  of  10,  20  and  25  mg/mL.  The parameters ob served were physical and mechanical properties (tensile strength and elongation), water vapor transmission rate (WVTR), total plate count (TPC) and mold and yeast counts (MYC) after 25 days of storage at room temperature (±28ºC). Drying of young papaya leaves using cab inet dryer resulted in the highest yield of crude saponin (12.96 ± 0.26%). Total saponin content in crude saponin extract was 115.43 mg/g, while in semi-pure saponin extract was 480.19 mg/g. Crude saponin and semi-pure saponin extract at  concentration  of  25  mg/mL  could  inhib it  the  growth  of  A.  niger  for  1.35  and  0.36  log  CFU/mL, respectively after 24 hours. The WVTR test indicated that treatment with a concentration of 25 mg/mL of crude  saponin  extracts  showed  the  lowest transmission. The addition of crude saponin and  semi-pure saponin extract to the maize husk at the concentration of 10 , 20 and 25 mg/mL was ab le to inhib it the microb ial  growth,  represented  b y  constant  numb er  in  TPC  and  MYC  for  2 5  days  storage.  This  study showed that crude saponin and semi-pure saponin extract could improve the functional properties of maize husk as packaging materials.
Keywords: crude saponins, maize husk, papaya leaves, semi-pure saponins

## ABSTRAK
1
Penelitian  ini  bertujuan  memanfaatkan  ekstrak  saponin  kasar dan semimurni dari daun pepaya sebagai  antikapang  pada kemasan kelobot jagung.  Saponin kasar dan semimurni diekstraksi meng- gunakan  metode  kombinasi soxhlet dan Ultrasonic-Assisted  Extraction (UAE),  dan  total  kandungan saponin pada ekstrak dideteksi menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Daya hambat saponin kasar dan semimurni terhadap A. niger diuji dengan metode makrodilusi. Aplikasi saponin kasar dan semimurni pada kelobot jagung dilakukan dengan mencelupkannya pada konsentrasi 10, 20 dan 25 mg/mL. Parameter yang diukur pada kelobot adalah sifat fisik dan mekanis (kekuatan tarik dan elongasi), laju transmisi uap air,  serta  Angka  Lempeng Total (ALT) dan Angka Kapang Khamir (AKK)  setelah penyimpanan 25 hari pada suhu ruang. Pengeringan daun papaya muda dengan menggunakan cab inet dryer menghasilkan rendemen ekstrak saponin kasar tertinggi yaitu sebanyak 12,96±0,26%. Kandungan saponin total pada ekstrak saponin kasar adalah 115,43 mg/g dan pada saponin semimurni adalah 480,19 mg/g. Paparan saponin kasar dengan konsentrasi 25 mg/mL selama 24 jam dapat menurunkan jumlah A. niger sebesar 1,35 log koloni/mL sedangkan saponin semimurni sebesar 0,36 log koloni/mL. Uji laju transmisi uap air menunjukkan bahwa perlakuan dengan konsentrasi 25 mg/mL saponin kasar menghasilkan transmisi yang paling rendah. Selanjutnya, penambahan saponin kasar dan semimurni pada kelobot jagung dengan konsentrasi 10, 20 dan 25 mg/mL mampu mempertahankan jumlah ALT dan AKK kelobot selama 25 hari. Penelitian ini menunjukkan bahwa penambahan saponin kasar dan semi murni dari daun pepaya pada kelobot jagung dapat meningkatkan kualitas kemasan kelobot jagung.
Kata kunci: daun pepaya, kelobot jagung, saponin kasar, saponin semimurni
*Penulis Korespondensi: E-mail:  h_kusumaningrum@ipb.ac.id

## PENDAHULUAN
Kelobot  jagung  merupakan  bahan  kemasan yang  mudah  didapat,  murah  dan  bersifat biode- gradable .  Kelobot  jagung  di  Indonesia  banyak  d- igunakan  sebagai  bahan  kemasan  makanan  tradi- sional,  diantaranya  wajit  Cililin  khas  Jawa  Barat, dodol  Bali  khas  Denpasar  dan  dodol  Labusel  khas Sumatra  Barat.  Lapisan  terbaik  yang  digunakan sebagai  kemasan  dodol  adalah  lapisan  tengah kelobot  jagung  (Setyowati et al., 2007).
Kerusakan  produk  pangan  dapat  disebabkan oleh  kontaminasi  mikroba  pada  permukaan  produk maupun  bahan  kemasannya.  Aplikasi  agen  anti- mikroba  pada  bahan  kemasan  akan  sangat  berguna dalam  mencegah  pertumbuhan  mikroba  pada  per- mukaan  produk.  Penambahan  senyawa  antimikroba pada  bahan  pengemas  dapat  dilakukan  dengan sistem  pencelupan  ( dipping )  atau  pelapisan  senya- wa  antimikroba  pada  produk  pangan  (Mangalassary, 2012).
Penggunaan  bahan  antimikroba  alami  cen- derung  meningkat  karena  konsumen  semakin  peduli terhadap  kesehatan  dan  potensi  bahaya  dari  pe- ngawet  sintetis.  Penggunaan  komponen  bioaktif, diantaranya  saponin,  alkaloid  dan  flavonoid  dari tanaman  dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroba. Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  komponen bioaktif  yang  bersifat  sebagai  antimikroba  adalah daun  pepaya.  Ekstrak  daun  pepaya  menggunakan etanol efektif  untuk  menghambat  pertumbuhan Bacillus  cereus dan Candida  tropicalis ,  sedangkan ekstrak  daun  pepaya  dengan  pelarut  etil  asetat  dan kloroform  efektif  menghambat  pertumbuhan Asper- gillus  flavus (Baskaran et  al., 2012).  Salah  satu komponen  bioaktif  pada  tanaman  yang  efektif menghambat  pertumbuhan  kapang  adalah  saponin (Barile et al., 2007). Komponen saponin merupakan metabolit sekunder  pada  tumbuhan.  Secara  kimia  saponin terdiri  dari  inti  hidrofobik  ( sapogenin )  yang  memiliki rantai  gula  yang  bersifat  hidrofilik  terikat.  Ada  dua jenis  struktur  dari  sapogenin  yaitu triterpenic dan steroidal saponin  yang  merupakan triterpene dan steroid .  Saponin Maesa  lanceolata efektif  meng- hambat  pertumbuhan  kapang Aspergillus  fumigatus, Crytococus neoformans dan Candida  albicans (Chapagain et  al., 2007).  Saponin  dapat  berikatan dengan  sterol  yang  merusak  membran  kapang  dan menyebabkan  hilangnya  integritas  membran  karena adanya  pembentukan  pori-pori  pada  membran  sel (Stuardo  dan  Ricardo,  2008) .
Aplikasi  kemasan  antimikroba  banyak  diguna- kan  pada  produk  pangan  karena  mampu  memper- lambat  pertumbuhan  mikroba  patogen  pada  maka- nan  dan  bahan  kemasan  (Winarti et  al., 2012). Kemasan  antimikroba  adalah  suatu  opsi  untuk pengemasan  aktif  yang  dapat  memperpanjang  umur
simpan  produk  pangan.  Pemilihan  ekstrak  anti- mikroba  untuk  aplikasi  kemasan  antimikroba  men- jadi  penting,  karena  ekstrak  antimikroba  dapat  ber- migrasi  ke  dalam  pangan,  sehingga  membuat produk  pangan  lebih  awet (Lantano et al., 2014).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memanfaatkan komponen  bioaktif  saponin  daun  pepaya  sebagai anti  kapang  pada  kelobot  jagung.    Parameter  yang diuji  adalah  kandungan  total  saponin,  aktivitas  peng- hambatan  ekstrak  saponin  kasar  dan  semimurni terhadap Aspergillus  niger ,  laju  transmisi  uap  air, elongasi  dan tensile  strength .  Selain  itu,  dilakukan pengujian mutu mikrobiologi kemasan kelobot jagung  yang  ditambah  ekstrak  saponin  kasar  dan semimurni  dan  disimpan  pada    suhu  ruang  selama 25  hari  dengan  uji  angka  kapang  khamir  (AKK)  dan angka  lempeng  total (ALT).

## BAHAN  DAN METODE

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  adalah  daun  tua dan  muda Carica  papaya varietas  Calina  (IPB  9) yang  diperoleh  dari  Pusat  Kajian  Hortikultura Tropika  (PKHT)  Institut  Pertanian  Bogor.  Daun muda  merupakan  daun  pepaya  yang  berada  pada  3 lapis  pertama  dari  pucuk  daun,  sedangkan  daun  tua merupakan  daun  yang  berada  pada  5-6  lapis pertama  dari  pucuk  daun.  Kelobot  jagung  yang digunakan  adalah  kelobot  jagung pioneer P27 varietas  Gajah  dengan  umur  panen  95  hari  yang diperoleh  dari  kebun  Cikaban,  Departemen  Agro- nomi  dan  hortikultura  IPB.  Kelobot  jagung  yang digunakan  adalah  kelobot  jagung  lapisan  tengah yaitu  lapisan  kelima  dari  lapisan  terluar  (Setyowati et al., 2007).

## Ekstraksi  saponin  daun pepaya
Daun  pepaya  Calina  segar  dikeringkan  meng- gunakan cabinet  dryer suhu  50°C  selama  20  jam. Daun  pepaya  kering  dihaluskan  hingga  diperoleh serbuk  daun  dengan  menggunakan  blender  dan disimpan  pada  wadah  tertutup.  Kadar  air  dari  serbuk daun  pepaya  diukur  dengan  metode  oven  (AOAC, 2005).  Ekstraksi  saponin  mengacu  pada  metode Ribeiro et  al .  (2013)  dengan  sedikit  modifikasi.  Pada ekstraksi  saponin  kasar,  serbuk  daun  tidak  di- defatting, sedangkan untuk ekstraksi saponin semimurni,  serbuk  daun  pepaya  muda  dan  tua  di- defatting terlebih  dahulu  menggunakan soxhlet (Electromantle  ME,  UK)  selama  6  jam  dengan pelarut  n-heksana  (Merck  &  Co.,  New  Jersey,  USA). Selanjutnya  25  g  serbuk  daun  pepaya  tua  dan  daun muda  diekstraksi  dengan  pelarut  etanol  (Merck  & Co.,  New  Jersey,  USA):  aquades  (v/v,  1:1,  200  mL) dengan metode Ultrasonic-Assisted Extraction (UAE)  menggunakan  alat Ultrasonic  bath  (Bransonic
Ultrasonic  Cleaner  model  8510E  MTH,  Branson Ultrasonic  Corporation,  Connecticut,  USA )  pada suhu  60°C  selama  30  menit.  Setelah  itu,  ekstrak disaring  dan  diuapkan  menggunakan rotary  evapo- rator (Butchi  Rotavapor  R-210,  BÜCHI  Labortechnik, Flawil,  Switzerland),  dengan  pompa  vakum  (Buchi B-169  vacum  system,  Switzerland)  pada  suhu  50°C sampai  2/3  volume  awal,  dan  ekstrak  dicuci  dua  kali dengan  20  mL  kloroform  (Merck  &  Co.,  New  Jersey, USA).  Selanjutnya  ekstrak  dipartisi  1x  dengan  20 mL  n-butanol  (Merck  &  Co.,  New  Jersey,  USA) untuk  mendapatkan  ekstrak  saponin  kasar.  Selain itu,  untuk  mendapatkan  ekstrak  saponin  semimurni, partisi  dilakukan  dengan  n-butanol  sebanyak  3x kemudian  dicuci  dengan  20  mL  NaOH  1%  (Merck, Germany)  untuk  memisahkan  komponen  fenolik. Pelarut  ekstrak  saponin  kasar  dan  semimurni  yang tersisa  kemudian  diuapkan  sampai  kering  meng- gunakan rotary  evaporator .  Selanjutnya,  ditambah- kan  akuades  sebanyak  1-2  mL  dan  dikeringbekukan menggunakan freeze  dryer (Martin  Christ  Gamma  2- 16  LSC)  selama  2  x  24  jam.  Saponin  kasar  dan semimurni  yang  telah  berbentuk  serbuk,  kemudian dihitung  rendemennya.

## Pengukuran kandungan saponin
Pengukuran kandungan saponin mengacu pada  metode  Madland  (2013).  Larutan  standar  di- persiapkan  dengan  melarutkan  4,0  mg  standar saponin  (saponin wei β  rein ,  Merck,  Germany)  dalam etanol  volume  20  mL,  kemudian  dibuat  pengenceran 1,0;  1,4;  1,8;  2,2;  2,6;  3,0 mL. Sampel saponin kasar dan  semimurni  (masing-masing  50  µL)  dan  larutan standard  selanjutnya  diuapkan  sampai  kering,  dan ditambahkan  0,2  mL  vanilin-asam  asetat  (5%  b/v) (Merck  KgaA,  Darm-stadt,  Germany)  dan  0,8  mL asam  perklorat  (Merck  KgaA,  Darmstadt,  Germany). Sampel  kemudian  dipanaskan  menggunakan water- bath  incubator (Gesellschaft  Fur  Labortechnik  MbH (GFL)  D-30938  Burgwedel,  Germany)  pada  suhu 70°C  selama  15  menit.  Selanjutnya,  larutan  sampel didinginkan  di  atas  es  selama  20  detik  dan  ditam- bahkan  5  mL  asam  asetat  glasial  (Merck & Co., New Jersey,  USA).  Larutan  sampel  kemudian  diukur absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer  UV/ VIS  (Spectrophotometer  U-2900  Hitachi,  Japan) pada  panjang  gelombang  550  nm.
Penentuan  aktivitas  antimikroba  saponin  kasar dan semimurni dari daun pepaya
Penentuan aktivitas antimikroba dilakukan menggunakan  metode  pengenceran  makro  (macro- dilution).  Isolat A.  niger ATCC  6275  yang  ditumbuh- kan  pada  media Potatoes  Dextrose  Agar (PDA) (Oxoid  Ltd,  Hampshire,  UK)  selama  5  hari  pada suhu  25°C,  dipanen  sehingga  didapatkan  konsen- trasi  kapang  berkisar  10 4 -10 5 koloni/mL.  Sebanyak 100  μL  suspensi A.  niger diinokulasikan  ke  dalam  1
mL  media Potatoe  Dextrose  Broth (PDB)  (Oxoid  Ltd, Hampshire,  UK)  yang  sudah  ditambah  1  mL  saponin kasar  atau  semimurni  sehingga  diperoleh  seri konsentrasi  0  (kontrol);  6,25;  12,5;  25;  50  dan  100 mg/mL.  Suspensi  kemudian  diinkubasi  pada  27- 28°C  selama  24  jam.  Selanjutnya,  dilakukan  peng- hitungan  total  kapang  dengan  metode  sebar  pada media  PDA  yang  kemudian  diinkubasi  pada  27°C selama  2-5  hari  (Mazzola et  al., 2009).  Konsentrasi hambat  minimum  (KHM)  ditentukan  dengan  memilih konsentrasi  yang  menunjukkan  penurunan  angka kapang  sebesar  1 log/mL.

## Aplikasi  saponin  kasar  dan  semimurni  pada kelobot jagung
Kelobot  jagung  dicuci  dan  dikeringkan  dengan menggunakan cabinet  dryer selama  4  jam  suhu 50°C.  Pengukuran  kadar  air  dilakukan  dengan metode oven (AOAC, 2005). Kelobot jagung selanjutnya  dicelupkan  ke  dalam  larutan  saponin kasar  dan  semimurni  yang  telah  dipanaskan  pada suhu  60°C  selama  5  menit,  dengan  konsentrasi  10; 20  dan  25  mg/mL.  Kelobot  kemudian  ditiriskan  dan dibiarkan  pada  suhu  ruang  sehingga  ekstraknya terserap  pada  permukaan  kelobot  jagung,  lalu dikeringkan  pada  suhu  50°C  menggunakan cabinet dryer selama  4 jam.

## Pengukuran karakteristik  kelobot jagung
Ketebalan  kelobot  jagung  diukur  dengan  meng- gunakan  mikrometer  dengan  akurasi  0,01  mm. Pengukuran  dilakukan  3  kali  pada  tempat  yang berbeda  dan  rata-rata  pengukuran  dihitung  sebagai ketebalan  kelobot  jagung.  Sifat  mekanis  kemasan diukur  berdasarkan  metode  uji  standar  dari  ASTMD- 8-82-88  (Kanmani  dan  Rhim,  2014).  Transmisi  uap air  diukur  berdasarkan  metode  pada  ASTM  E96-95 dengan  sedikit  modifikasi  pada  tahap  pengambilan data  yaitu  setiap  2  jam  sekali,  selama  3  kali pengukuran.

## Pengujian  ALT  kelobot  jagung  selama  25  hari penyimpanan (USFDA, 2001)
Kelobot  jagung  yang  dicelup  larutan  saponin kasar  dan  semimurni  dengan  konsentrasi  10;20  dan 25  mg/mL  disimpan  selama  25  hari  pada  suhu  ruang (27-28°C).  Lapisan  kelobot  yang  digunakan  adalah lapisan  tengah  yaitu 5-7  lembar  dari  lapisan  luar.
Sampel  kelobot  ditimbang  1  g,  dimasukkan kedalam  botol  pengencer  yang  berisi  9  mL Buffer Peptone  Water (BPW)  0,1%  (Oxoid  Ltd,  Hampshire, UK),  divorteks  (Vortex  Genie  2,  Scientific  Industries Inc,  USA)  dan  dibuat  pengenceran  lanjut  sehingga diperoleh  pengenceran  10 -1 sampai  10 -4 .  Satu  (1) mL  sampel  kelobot  dimasukkan  ke  dalam  cawan, kemudian  sebanyak  15  mL  media Plate  Count  Agar (PCA)  (Oxoid  Ltd,  Hampshire,  UK)  steril  dituang  ke dalam  cawan  petri  dan  diratakan . Cawan  diinkubasi
pada  suhu  37 º C  selama  24-48  jam  dengan  posisi cawan  terbalik.  Jumlah  koloni  mikroba  dihitung dengan  standar  25-250.
Pengujian  AKK  selama  25  hari  penyimpanan kelobot jagung (USFDA,  2001)
Sampel  kelobot  ditimbang  1  g,  dimasukkan  ke dalam  botol  pengencer  yang  berisi  BPW  0,1% sebanyak  9  mL,  divorteks  dan  dibuat  pengenceran lanjut  sehingga  diperoleh  pengenceran  10 -1 sampai 10 -4 .  Satu  (1)  mL  sampel  kelobot  kemudian  dima- sukkan  ke  dalam  cawan,  dan  15  mL  media  PDA yang  ditambah  dengan  0,02  g  kloramfenikol  dituang ke  dalam  cawan  petri  serta  diratakan . Cawan diinkubasi  pada  suhu  25-27°C  selama  2-5  hari. Jumlah  koloni  mikroba  dihitung  dengan  standar  15- 150  untuk koloni  kapang.
Pengujian angka Aspergillus flavus-parasiticus
Sampel  kelobot  ditimbang  seberat  1  g,  dan dimasukkan  kedalam  botol  pengencer  yang  berisi BPW  0,1%  sebanyak  9  mL.  Selanjutnya,  sampel divorteks  dan  dilakukan  pengenceran  berseri  dari 10 -1 sampai  10 -4 .  Satu  mL  sampel  kelobot dipipetkan ke  dalam  cawan,  kemudian  ditambahkan  15  mL media  AFPA  (Oxoid  Ltd,  Hampshire,  England)  yang mengandung  0,02  g  kloramfenikol . Cawan  diin- kubasi  pada  suhu  25-27°C  selama  2-5  hari.  Jumlah koloni A.  flavus didapat  dengan  cara  menghitung koloni  yang  berwarna  oranye  spesifik  pada  bagian bawah  cawan  petri.

## Analisa data
Hasil  pengukuran  dan  uji  terhadap  kemasan kelobot  jagung  dan  saponin  dianalisis  secara statistika  menggunakan  perangkat  lunak  SPSS  versi 22.  ANOVA  dan  uji  lanjut  Duncan  pada  taraf kepercayaan  5%  digunakan  untuk  membandingkan nilai  rata-rata  dari  semua  uji  yang  dilakukan  ter- hadap  kelobot  jagung  yang  ditambahkan  ekstrak daun  pepaya.  Setiap  perlakuan  dilakukan  dengan tiga ulangan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Saponin kasar  dan semimurni dari daun pepaya
Daun  pepaya  Calina  muda  segar  memiliki kadar  air  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan daun  pepaya  tua  yang  segar.  Rendemen  bubuk daun  pepaya  tua  lebih  besar  dibandingkan  daun muda  (Tabel  1).  Menurut  Anibijuwon  dan  Udeze (2009),  perbedaan  kadar  air  dan  rendemen  bubuk daun  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  yaitu  lokasi tumbuhnya  tanaman,  jenis  varietas  pepaya,  musim, cuaca  dan  waktu  pemanenan.  Metode  ekstraksi yang  digunakan  yaitu Ultrasonic-Assisted  Extraction (UAE  menggunakan  gelombang  ultrasonik  (20kHz-
100MHz)  dapat  mengakibatkan  terjadinya  perongga- an  sel  dan  mempercepat  pelepasan  isi  sel  sehingga komponen  bioaktifnya  keluar  (Azmir et al., 2013).
Tabel  1.  Kadar  air,  rendemen  bubuk  daun  serta rendemen  saponin  kasar  dan semimurni Parameter Daun Pepaya Daun Muda         Daun Tua Kadar air daun segar (%) 85,38±2,77 81,78±0,62 Kadar air bubuk daun kering (%) 6,70±0,05 6,62±0,24 Rendemen bubuk daun kering (%) 16,17±0,68 21,08±1,09 Rendemen saponin semimurni (%) 3,18±0,09 1,42±0,08 Rendemen saponin kasar (%) 12,96±0,26 7,20±0,29
Rendemen  saponin  kasar  dan  semimurni  daun pepaya  muda  lebih  banyak  dibandingkan  daun  tua (Tabel  1).  Selain  itu,  diperoleh  rendemen  saponin kasar  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan saponin  semimurni.  Perbedaan  rendemen  saponin kasar  dan  semimurni  diduga  dipengaruhi  oleh  jenis pelarut  lanjutan  yaitu  butanol  yang  berfungsi  untuk memisahkan  air  dan  gula  dan  NaOH  1%  yang berfungsi  menghilangkan  komponen  fenolik.  Hasil penelitian  Sherwani et  al .  (2013)  menunjukkan ekstrak  daun  pepaya  mengandung  komponen  bio- aktif  yaitu  karbohidrat,  protein,  antrakuinon,  flavo- noid,  saponin,  glikosida dan  alkaloid.

## Kandungan  saponin  pada  ekstrak  saponin  kasar dan semimurni
Kandungan  saponin  pada  ekstrak  saponin kasar  dan  semimurni  dari  daun  pepaya  diukur secara  kuantitatif  menggunakan  spektrofotometer UV/Vis.  Kandungan  total  saponin  yang  terdapat pada  ekstrak  saponin  kasar  adalah  115,43  mg saponin/g, sedangkan pada ekstrak saponin semimurni  adalah  480,19  mg  saponin/g (Gambar  1). Perbedaan  ini  diduga  disebabkan  karena  komponen yang  terekstrak  pada  ekstrak  saponin  kasar  lebih banyak  jenisnya  sehingga  kadar  saponinnya  lebih sedikit.  Menurut  Ribeiro et  al. (2013),  ekstraksi komponen  saponin  dengan  menggunakan  pelarut kloroform,  butanol  3x  partisi  dan  NaOH  1%  meng- hasilkan  ekstrak  kaya  saponin.  Ekstraksi  meng- gunakan  pelarut  kloroform  dan  butanol  1x  partisi menghasilkan  saponin  kasar  yang  mengandung banyak  komponen  bioaktif.  Berdasarkan  uji  fitokimia, pada  ekstrak  saponin  semimurni  hanya  ditemukan komponen  steroid  dan  saponin,  sedangkan  pada ekstrak saponin kasar ditemukan komponen saponin,  fenol,  triterpenoid,  tanin  dan  alkaloid  (data tidak  ditampilkan).  Menurut  Ribeiro et  al .  (2013), saponin  kasar  yang  diekstraksi  pada  tanaman Agave  sisalana mengandung  komponen  glikosida,
115,43 480,195 0 100 200 300 400 500 600 saponin kasar saponin T o ta l s a p o n in E ks tr a k D aun P e p a ya ( m g /g ) Jenis Ekstrak Daun Pepaya saponin semimurni 6,05 a 5,53 b
4,91 c 4,34 d 3,88 e 3,73 f 0 1 2 3 4 5 6 7 0 6.5 12.5 25 50 100 As p e rg il lu s n ig e r ( L o g ko lo n i/ m L )

## Konsentrasi Saponin Kasar (mg/mL)
5,49 a 5,42 ab 5,25 b 4,33 c 3,57 d 3,24 e 0 1 2 3 4 5 6 0 6,5 12,5 25 50 100 Asp e rg il lu s n ig e r ( L o g ko lo n i/ m L )
Konsentrasi Saponin Semimurni (mg/mL)
saponin  dan  flavonoid,  sedangkan  ekstrak  saponin semimurni  hanya  mengandung  komponen  saponin. Menurut  penelitian  Vuong et  al .  (2015),  ekstraksi komponen  saponin  kasar  pada  daun  pepaya  dengan menggunakan  pelarut  etanol  80%  menghasilkan total saponin  sekitar 368  mg  ASE g -1 .
Gambar  1.  Kandungan  total  saponin  pada  ekstrak saponin  kasar  dan  saponin  semimurni daun  pepaya.
Potensi  antikapang  saponin  kasar  dan  semi- murni terhadap A. niger Pengaruh  berbagai  konsentrasi  saponin  kasar daun  pepaya  terhadap A. niger ATCC  6275  dengan inokulum  awal  kapang  berkisar  5,69  log  koloni/mL dapat  dilihat  pada  Gambar  2A.  Nilai  konsentrasi hambat  minimum  (KHM)  yang  diperoleh  adalah  25 mg/mL,  dengan  jumlah  total  kapang  akhir  setelah pemaparan  24  jam  sebesar  4,43  log  koloni/mL. Pemaparan  saponin  kasar  daun  pepaya  dengan konsentrasi  yang  tinggi,  yaitu  100  mg/mL  secara signifikan  mampu  mereduksi  pertumbuhan  spora A. niger sebesar  1,96 log  koloni/mL.
Gambar  2B  menunjukkan  pengaruh  berbagai konsentrasi  saponin  semimurni  terhadap A.  niger ATCC  6275  dengan  inokulum  awal  4,69  log koloni/mL.  Nilai  KHM  yang  diperoleh  adalah  50 mg/mL.  Pemaparan  saponin  dengan  konsentrasi yang  tinggi,  yaitu  100  mg/mL,  secara  signifikan mampu  menghambat  pertumbuhan A. niger sebesar 1,44  log  koloni/mL.  Kemampuan  saponin  meng- hambat  pertumbuhan A. niger diduga  dikarenakan saponin  merupakan  salah  satu  komponen  bioaktif yang  dapat  merusak  membran  kapang.
Menurut Stuardo dan Ricardo (2008), mekanisme  aktivitas  antikapang  dari  saponin  dapat berikatan  dengan  sterol  yang  merusak  membran kapang  dan  menyebabkan  hilangnya  integritas membran  karena  adanya  pembentukan  pori-pori pada  membran  sel.
Gambar  2.  Pengaruh berbagai konsentrasi (A) ekstrak  saponin  kasar  dan  (B)  ekstrak saponin  semimurni,  terhadap A.  niger ATCC  6275  dengan  inokulum  awal  (A) 5,69  log  koloni/mL  dan  (B)  4,69  log koloni/mL, setelah  pemaparan  selama 24  jam  pada  suhu  27-28°C  dengan metode pengenceran makro. Huruf superscript yang  berbeda  pada  setiap faktor  perlakuan  menunjukkan  perbeda- an  nyata pada  taraf  uji p=0,05
Beberapa  penelitian  menunjukkan  efektivitas saponin  kasar  dan  saponin  semimurni  dari  berbagai sumber  memiliki  kemampuan  sebagai  antikapang. Saponin  kasar  dari Achillea  fragrentissima dengan konsentrasi  6,25  mg/mL  mampu  menghambat  per- tumbuhan Aspergillus  sp. dan  memberikan  efek fungisidal  pada  konsentrasi  15,0  mg/mL  (Hazem et al., 2012).  Penelitian  yang  dilakukan  Ribeiro et  al. (2013)  menunjukkan  bahwa  saponin  dan  turunannya dengan  konsentrasi  312,5  µg/mL  (dari  tanaman Ziziphus  joazeiro )  dan  konsentrasi  >12,500  µg/mL (dari tanaman Agave  sisalana )  memiliki  efek penghambatan  pada Aspergillus  niger ATCC  16404. Penelitian  Sherwani et  al .  (2013)  menyatakan bahwa  ekstrak  kasar  daun  pepaya  pada  konsentrasi 120-160  mg/mL  mampu  menghambat  pertumbuhan A.  flavus dan A.  niger sedangkan  ekstrak  akuades daun  pepaya  pada  konsentrasi  160-220  mg/mL
A
B
282,3 ab 232,3 ab 319,3 ab 235,0 a 286,3 ab 248.1 a 416,657 b 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 0 10 20 25 Ke ku a ta n T a ri k (k Pa ) Konsentrasi (mg/mL) saponin saponin kasar saponin semimurni 22,2 ab 29,9 c 29,1 bc 23,2 abc 23.8 abc 19,4 a 24,1 abc 0 5 10 15 20 25 30 35 0 10 20 25 Pe m a n ja n g a n (% )
Konsentrasi Ekstrak (mg/mL)
saponin saponin kasar
saponin semimurni
mampu  menghambat  pertumbuhan  kapang A.  flavus dan A.  niger .  Sama  halnya  dengan  penelitian  Alabi et  al .  (2012),  ekstrak  segar  daun  pepaya  mengguna- kan  pelarut  akuades  pada  konsentrasi  100  mg/mL mampu menghambat pertumbuhan A. flavus , Trichopyton  metagrophtes dan Candida  albicans .

## Ketebalan dan sifat mekanis
Tebal  kelobot pioneer P27  varietas  Gajah  tanpa dan  dengan  perlakuan  pencelupan  dalam  ekstrak saponin  dapat  dilihat pada  Tabel  2.
Tabel  2.  Tebal  kelobot  jagung  setelah  dicelupkan dalam  larutan  saponin  kasar  dan  semi- murni  daun  pepaya Konsentrasi Ekstrak (mg/mL) Tebal Kelobot Jagung setelah Pencelupan dengan Ekstrak Saponin Daun Pepaya (mm) Kasar Semimurni 0 0,19±0,14 0,19±0,14 10 0,20±0,06 0,27±0,04 20 0,19±0,05 0,20±0,05 25 0,18±0,03 0,26±0,05
Hasil  analisis  ANOVA  menunjukkan  bahwa kelobot  jagung  dengan  penambahan  saponin  kasar dan  semimurni  dari  daun  pepaya  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  ketebalan  kelobot  jagung.  Per- bedaan  tebal  kelobot  antar  lapisan,  diduga  disebab- kan  perbedaan  tebal  sel  kelobot  pada  lapisan- Iapisan  tersebut  dan  perbedaan  kandungan  airnya. Perbedaan  varietas  tanaman  juga  menentukan  tebal bagian  tanaman,  diantaranya  tebal  daun  (Pantas - tico,  1986).  Hasil  pengukuran  kekuatan  tarik  dan pemanjangan  kelobot  jagung  yang  ditambahkan saponin  kasar  dan  saponin  semimurni  daun  pepaya dapat  dilihat  pada  Gambar  3 dan  4.
Hasil  analisis  ANOVA  menunjukkan  bahwa kelobot  jagung  dengan  penambahan  ekstrak  kasar saponin  dan  saponin  semimurni  daun  pepaya  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  kekuatan  tarik.  Hal  ini diduga  penambahan  saponin  kasar  dan  saponin tidak  mempengaruhi  serat  yang  tebal  dan  kaku  yang dimiliki  oleh  kelobot  jagung.  Walaupun  demikian, penambahan  ekstrak  saponin  semimurni  (10  dan  20 mg/mL) menunjukkan pengaruh nyata pada pemanjangan  kelobot  jagung.  Menurut  Setyowati et al .  (2007),  lapisan  kelobot  jagung  memiliki  serat yang  tebal  dan  kaku  sehingga  akan  cepat  putus  dan menyebabkan  nilai  pemanjangan  yang  rendah. Kandungan  lignin  yang  tinggi  menyebabkan  bahan lignoselulosik  lebih  kaku  dibandingkan  dengan  yang memiliki  bahan  yang  sama  tetapi  kandungan ligninnya  lebih  rendah.

## Laju transmisi  uap air
Laju  transmisi  uap  air  pada  masing-masing perlakuan  dengan  pencelupan  ekstrak  saponin
kasar  dan  saponin  semimurni  dengan  konsentrasi  0; 10; 20  dan  25 mg/mL  dapat  dillihat pada  Gambar  5.
Gambar  3.  Kekuatan  tarik  kelobot  jagung  yang dicelup  dengan  saponin  kasar  dan saponin  semimurni  daun  pepaya.  Huruf superscript yang  berbeda  pada  setiap faktor  perlakuan  menunjukkan  perbeda- an  nyata pada  taraf  uji p=0,05
Gambar  4.  Pemanjangan kelobot jagung yang diaplikasikan  pada  saponin  kasar  dan saponin  semimurni  daun  pepaya.  Huruf superscript yang  berbeda  pada  setiap faktor  perlakuan  menunjukkan  perbeda- an  nyata pada  taraf  uji p=0,05
Hasil  uji  laju  transmisi  uap  air  menunjukkan bahwa  perlakuan  pencelupan    dalam  larutan  25 mg/mL  saponin  kasar  memiliki  nilai  transmisi  uap  air yang  paling  rendah,  meskipun  tidak  berbeda  nyata dengan pencelupan  dalam  larutan  20  mg/mL saponin  kasar.  Hasil  pengujian  laju  transmisi  uap  air menunjukkan  bahwa  semakin  besar  konsentrasi ekstrak yang  ditambahkan  pada  kelobot  jagung maka  semakin  rendah  nilai  laju  transmisi  uap  airnya. Penurunan  laju  transmisi  uap  air  kelobot  jagung dengan  penambahan  saponin  kasar  dan  saponin semimurni  daun  pepaya  diduga  karena  adanya komponen  non  polar  atau  semipolar  yang  terlarut
52 a 49 a 43 c
44 c 51 a 50 a 46 b 0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 25 T ra n s m isi U a p A Ir W V T R ( g /m 2 .2 4 jam )
Konsentrasi Ekstrak Daun Pepaya saponin kasar saponin saponin semimurni 0 1 2 3 4 5 6 0 5 10 15
20 25
A n g ka L e m p e n g T o ta l ( A L T ) (L o g ko lo n i/ g ) Hari Penyimpanan 0 mg/mL 10 mg/mL 20 mg/mL 25 mg/mL 0 1 2 3 4 5 0 5 10 15
20 25
A n g ka L e m p e n g T o ta l (A L T ) (L o g ko lo n i/ g )

## Hari Penyimpanan
0 mg/ml
10 mg/ml 20 mg/ml 25 mg/ml
dan  tidak  terlarut  yang  melekat  pada  permukaan kelobot  jagung.  komponen  yang  bersifat  non  polar, dapat  menghambat  masuknya  uap  air  yang  me- nyebabkan  nilai  laju  transmisi  kelobot  jagung  lebih rendah.  Kelobot  jagung  dengan  penambahan  sapo- nin  kasar  dan  saponin  semimurni  dapat  menahan laju uap  air  menjadi  lebih  efisien.
Gambar  5.  Laju  transmisi  uap  air  kelobot  jagung yang  dicelup  dalam  larutan  ekstrak saponin  daun  pepaya  pada  hari  ke  5 penyimpanan  pada  suhu  ruang.  Huruf superscript yang  berbeda  pada  setiap faktor  perlakuan  menunjukkan  perbe- daan  nyata  pada  taraf  uji p=0,05
Menurut  Robertson  (2012),  nilai  laju  transmisi uap  air  bahan  kemasan,  dipengaruhi  oleh  ketebalan bahan kemasan, tingkat kepolaran dan juga dipengaruhi  oleh  kerapatan  bahan.  Diduga  kelobot jagung pioneer yang  ditambah  ekstrak  kasar  daun pepaya  yang  melekat  pada  permukaan  kelobot, mengandung  komponen  yang  bersifat  nonpolar berupa  lipid  yang  baik  untuk  menghambat  laju transmisi  pada  suatu  bahan  kemasan.  Penelitian Setyowati et  al .  (2007),  menunjukkan  bahwa  kelobot jagung  basah  varietas pioneer dan  varietas super sweet memiliki  laju  transmisi  uap  air  yang  sangat tinggi  (570,80-665,49  g/m 2 .24  jam)  dibandingkan dengan  daun  pisang  kering  yang  memiliki  nilai  laju transmisi uap  air  sebesar  43,44  g/m 2 .24 jam.
Perubahan  mutu  mikrobiologi  kelobot  jagung dengan  penambahan  saponin  kasar  dan  semi- murni selama penyimpanan 25 hari
Kadar  air  kelobot  jagung  (kering)  pascapanen yang  berasal  dari  kebun  Cikabayan  IPB  adalah 42,92%.  Kadar  air  kelobot  jagung  yang  telah  dicelup dengan  larutan  ekstrak  saponin  dan  dikeringkan kembali  adalah  13,83%.  Angka  Lempeng  Total (ALT)  kelobot  jagung  pasca  panen  adalah  6,34  log koloni/mL,  sedangkan  Angka  Kapang  Khamir  (AKK) adalah  5,47  log  koloni/mL  dan  Angka Aspergillus flavus-parasiticus (AFPA)  adalah  4,29  log  koloni/mL.
Kapang  yang  umumnya  mengontaminasi  jagung dan  kelobot  jagung  adalah Aspergillus  flavus dan Aspergillus  parasiticus .  Kedua  kapang  ini  dapat menghasilkan  produk  metabolit  sekunder  yang bersifat  toksik  bagi  manusia.  Cemaran  aflatoksin pada  jagung  bergantung  pada  kondisi  lingkungan dan  perlakuan  pascapanen . Kapang  ini  banyak  me- nyerang  produk  pertanian  salah  satunya  adalah jagung.  Menurut  Rahayu  (2006).  Kapang  yang banyak  mengkontaminasi  jagung  dan  tongkol  jagung adalah  kapang A.  flavus , A.  parasiticus , Fusarium moniliforme.
Pencelupan kelobot jagung  dalam  larutan saponin  kasar  dan  saponin  semimurni  pada  dengan konsentrasi  10;  20  dan  25  mg/mL,  selama  pe- nyimpanan  25  hari  mampu  mempertahankan  nilai ALT  (Gambar  6A  dan  6B)  dan  AKK  (Gambar  7A  dan 7B).
Gambar  6.  ALT  kelobot  jagung  dengan  perlakuan pencelupan  (A)  saponin  kasar  dan  (B) saponin  semimurni  selama  penyim- panan  25  hari  pada  suhu  ruang  (27- 28°C)
A
B
0 1 2 3 4 5 0 5 10 15 20 25 A n g ka Ka p a n g Kh a m ir (L o g ko lo n i/ g ) Hari Penyimpanan 0 mg/ml 10 mg/ml 20 mg/ml 25 mg/ml 0 1 2 3 4 5 0 5 10 15
20 25 A n g ka Ka p a n g Kh a m ir (L o g ko lo n i/ g )

## Hari Penyimpanan
0 mg/ml 10 mg/ml 20 mg/ml 25 mg/ml
Gambar  7.  AKK  kelobot  jagung  dengan  perlakuan pencelupan  (A)  saponin  kasar  dan  (B) saponin  semimurni  selama  penyim- panan  25  hari  pada  suhu  ruang  (27- 28°C)
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  pada kelobot  jagung  yang  diberi  perlakuan  ekstrak saponin  semimurni  memiliki  cemaran  2,55-2,80  log koloni/g,  sedangkan  dengan  perlakuan  saponin kasara  memiliki  ALT  2,51-2,75  log  koloni/g  selama penyimpanan  sampai  25  hari.  Nilai  ini  lebih  rendah secara  signifikan  dibandingkan  dengan  kelobot kontrol.  Selain  itu,  hasil  pengujian  AKK  kelobot jagung  yang  diberi  perlakuan  saponin  kasar  dan semi  murni  daun  pepaya  juga  memiliki  angka  yang relative  tidak  berubah,  yaitu  memiliki  cemaran  2,2- 2,2 log koloni/g dengan perlakuan saponin semimurni  dan  2,44-2,62  log  koloni/g  dengan perlakuan  saponin  kasar  selama  penyimpanan sampai  25  hari.  Untuk  aplikasi  kemasan  kelobot jagung  pada  produk  semi  basah,  perlu  dilakukan pembersihan  atau  pengeringan  di  awal  pascapanen agar  dapat  mengurangi  jumlah  awal  cemaran mikroba  pada  kelobot  jagung.  Jumlah  AKK  awal kelobot  jagung  diharapkan  sebesar  1  log  koloni/g atau  maksimum  2x10 2 koloni/g,  agar  kelobot  jagung
aman  sebagai  pengemas  produk  semi  basah. Kelobot  jagung  banyak  digunakan  untuk  mengemas produk  semi  basah  seperti  dodol  wajik  (Jawa)  atau wajit  (Sunda).  Produk  semi  basah  yang  memiliki  a w rendah  (0,70-0,85%),  kadar  air  (20-50%)  dan  kadar gula  tinggi  berisiko  ditumbuhi  kapang  jika  tidak dikemas dengan  baik.
Hasil  analisis  ANOVA  dengan  uji  lanjut  Duncan menunjukkan  aplikasi  ekstrak  yang  terbaik  untuk menghambat  ALT  selama  penyimpanan  25  hari adalah  dengan  pencelupan  dalam  larutan  saponin kasar  25  mg/mL.  Walaupun  demikian,  hasil  uji  AKK menunjukkan  bahwa  perlakuan  dengan  penam- bahan  saponin  semimurni  konsentrasi  25  mg/mL memberikan  nilai  AKK  yang  lebih  rendah  dibanding- kan  perlakuan  dengan  saponin  kasar.  Penelitian  ini menunjukkan  bahwa  larutan  saponin  semimurni  25 mg/mL  mampu  menghambat  pertumbuhan  kapang khamir  yang  mengkontaminasi  kelobot  jagung,  tetapi untuk  menghambat  pertumbuhan A.  niger diperlukan konsentrasi  saponin  semimurni  yang  lebih  besar, yaitu konsentrasi  50 mg/mL.
Menurut  Vuong et  al .  (2015),  ekstrak  daun pepaya mengandung komponen bioaktif yaitu flavonoid,  alkaloid  dan  saponin  yang  mampu  bekerja sebagai  komponen  antimikroba  dan  antikapang. Saponin  kasar  dan  saponin  semimurni  daun  pepaya yang  terdapat  pada  kelobot  jagung  mampu  mem- bantu  mencegah  terjadinya  kontaminasi  mikroba. Adanya  kerja  dari  komponen  antimikroba  menye- babkan  bakteri  dan  kapang  sulit  tumbuh  akibat  pada kelobot  jagung.  Menurut  Ribeiro et  al .  (2013), saponin kasar dan saponin semimurni pada tanaman Agave  sisalana dan Ziziphus  joazeiaro dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Salmonella dan  bakteri  yang mengkontaminasi  produk  pangan.

## KESIMPULAN
Kandungan  total  saponin  pada  ekstrak  saponin kasar  daun  pepaya  adalah  115,43  mg/g sedangkan pada  ekstrak  saponin  semimurni  adalah  480,19 mg/g.  Nilai  kandungan  total  saponin  pada  ekstrak saponin  semimurni  lebih  besar  hampir  5  kali dibanding  ekstrak  saponin  kasar.  Perlakuan  dengan larutan  saponin  semimurni  daun  pepaya  tidak memberikan  pengaruh  terhadap  tebal  kelobot  dan kekuatan  tarik,  tetapi  berpengaruh  terhadap  peman- jangan  kelobot  jagung.  Selain  itu,  Perlakuan  dengan larutan  saponin  semimurni  juga  mampu  mengu- rangi  laju  transmisi  uap  air.  Penambahan  ekstrak kasar  dan  saponin  semimurni  daun  pepaya  pada kelobot  jagung  mampu  memperbaiki  mutu  kelobot jagung sebagai pengemas pangan tradisional. Aplikasi  ekstrak  yang  terbaik  untuk  menghambat total  mikroba  dan  kapang-khamir  AKK  pada  kelobot jagung  selama  penyimpanan  25  hari  adalah  larutan saponin  semimurni  dengan  konsentrasi  25 mg/mL.
A
B

## UCAPAN  TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  diberikan  kepada  Direk- torat  Jenderal  Pendidikan  Tinggi  Kemenristek-Dikti yang  telah  membiayai  penelitian  ini  melalui  pene- litian unggulan  perguruan  tinggi  tahun  2015.

## DAFTAR PUSTAKA
Alabi  OA,  Haruna  MT,  Anokwuru  CP,  Jegede  T, Abia H, Okegbe VU, Esan  BE.  2012. Comparative  studies  on  antimicrobial  properties of  extracts  of  fresh  and  dried  leaves  of Carica papaya (L)  on  clinical  bacterial  and  fungi isolates. Adv  Appl  Sci Res 3: 3107-3114.
Anibijuwon  II,  Udeze  AO.  2009.  Antimicrobial  activity of Carica  papaya (paw-paw  leaf)  on  some pathogenic  organism  of  clinical  origin  from South-Western  Nigeria.  Ethnobot  Leaflets  13: 850-864.
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical  Chemistry. 2005.  Official  Method  of  Analysis.  Association of  Official  Analytical  Chemistry.  Washington  DC (US):  AOAC.
Azmir  J,  Zaidul  ISM,  Rahman  MM,  Shafir  KM, Mahmoed  A,  Sahena  F,  Jahurul  MHA,  Ghafoor K,  Norulaini  NAN,  Omar  AKM.  2013.  Tech- niques  for  extraction  of  bioactive  compounds from  plant  materials:  a  review.  J  Food  Eng  117: 426-436.  DOI:  10.1016/j.jfoodeng.2013.01.014.
Barile  E,  Bonanomi  G,  Antignani  V,  Zolfaghari  B, Sajjadi  SE,  Scala  F,  Lanzotti  V. 2007. Saponins from  Allium  minutiflorum  with  antifungal  activity. Phytochemistry  68:  596-603.  DOI:  10.1016/j. phytochem.2006.10.009.
Baskaran  C,  Ratha  VB,  Velu  S,  Kumaran  K.  2012. The  efficacy  of Carica  papaya leaf  extract  on some  bacterial  and  a  fungal  strain  by  well diffusion  method.  Asian  Pac  J  Trop  Dis:  658- 662.  DOI:  10.1016/S2222-1808(12)60239-4.
Chapagain  BP,  Wiesman  Z,  Tsror  L.  2007.  In  vitro  of the  antifungal  activity  of  saponin-rich  extracts against  prevalent  phytopathogenic  fungi.  Ind Crop  Prod  26:  109-115.  DOI:  10.1016/j.Ind crop.2007.02.005.
Hazem  A,  Charchafchi  A,  Fawzia,  Ghazzawi,  Dina. 2012.  Biochemical,  antibacterial  and  antifungal activity  of  extracts  from  Achillea  Fragrantissima and  evaluation  of  volatile  oil  composition.  Der Pharmacia  Sinica  3: 349-356.
Kanmani  P,  Rhim  JW.  2014.  Properties  and characterization of bionanocomposite films prepared  with  various  biopolymers  and  ZnO nanoparticles.  Carbohyd  Polym  106:  190 –199. DOI:  10.1016/j/carbpol.2014.02. 007.
Lantano  C,  Alfieri  I,  Cavazza  A,  Corradini  C,  Lorenzi A,  Nicola  Z,  Montenero  A.  2014.  Natamycin based  sol-gel  antimicrobial  coatings  on  poly- actic  acid  films  for  food  packaging.  Food  Chem 165:  342-347.  DOI:  10.1016/j.foodchem.2014. 05.066.
Madland  E.  2013.  Extraction,  Isolation  and  Structure Elucidation  of  Saponins  from Herniaria  incana [Thesis].  Faculty  of  Natural  Sciences  and Tecnology.  Norwegian  University  of  Science and  Technology.
Mangalassary  S.  2012.  Antimicrobial  food  packaging to  enhance  food  safety:  current  developments and  future  challenges.  J  Food  Process  Technol 5: 1-2.  DOI:  10.4172/2157-7110.1000e103.
Mazzola  PG,  Jozala  AF,  Novaes  LCDL,  Moriel  P,
Penna  TCV.  2009.  Minimal  inhibitory  concen- tration  (MIC)  determination  of  disinfectant  and /or  sterilizing  angents.  Braz  J  Pharm  Sci  45: 241-248.  DOI:  10.1590/S1984-8250200900020 0008.
Pantastico  ERB.  1986.  Fisiologi  Pasca  Panen. Penanganan  dan  Pemanfaatan  Buah-buahan dan  Sayur-sayuran  Tropika  dan  Subtropika. 902.  Gadjah  Mada  University  Press,  Yogya- karta.
Rahayu  ES.  2006.  Hasil-hasil  Penelitian  Aflatoksin. Makalah  Disampaikan  dalam  Pertemuan  Forum Aflatoksin  Indonesia,  Fakultas  Teknologi  Per- tanian.  Universitas  Gadjah  Mada,  Yogyakarta, 24  Februari  2006.
Ribeiro  BD,  Alviano  DS,  Barreto  DW,  Coelho  MAZ. 2013.  Functional  properties  of  saponins  from sisal  ( Agave  sisalana )  and  jua  ( Ziziphus joazeiro ):  Critical  micellar  concentration,  anti- oxidant  and  antimicrobial  activities.  Colloids Surface  A  436:  736-743.  DOI: 10.1016/j.col surfa.2013.08.007.
Robertson  GL.  2012.  Food  Packaging: Principle  and Practice.  126-127.  CRC  Press,  Boca  Raton, Florida.
Setyowati  K,  Adnan  AA,  Sugiarto.  2007.  Karak- terisasi  sifat  fisiko  kimia  dan  mekanis  k elobot sebagai  bahan  kemasan.  J  Teknol  Industri Pertanian  16: 119-124.
Sherwani  SK,  Bokhari  TZ,  Nazim  K,  Gilani  A,  Kazmi SU.  2013.  Qualitative  phytochemical  screening ad  antifungal  activity  of  carica  papaya  leaf extract  against  human  and  plant  pathogenic fungi.  Int  Res  J  Pharm  4:  83-86.  DOI: 10.7897/ 2230-8407.04718.
Stuardo  M,  Martin  RS.  2008.  Antifungal  properties  of quinoa ( Chenopodium quinoa Willd)  alkali treated  saponins  against Botrytis  cinerea .  Ind Crop  Prod 27:  296-302.  DOI:  10.1016/j.indcrop. 2007.11.003.
[USFDA]  United  State  Food  and  Drug  Adminis- tration.  2001.  BAM:  Aerobic  Plate  Count  &
Yeasts,  Molds,  and  Mycotoxins.  http://www.fda. gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMe thods/ucm071435.htm.  [05  Mei 2015].
Vuong  QV,  Hirun  S,  Chuen  TLK,  Goldsmith  CD, Murchie  S,  Bowyer  MC,  Philips  PA, Scarlett CJ. 2015.  Antioxidant  and  anticancer  capacity  of saponin-enriched Carica  papaya leaf  extracts. International  J  Food  Sci  Tech  50:  169-177.  DOI: 10.1111/ijfs.12618.
Winarti  C,  Miskiyah,  Widaningrum.  2012.  Teknologi produksi  dan  aplikasi  pengemas  edible  anti- mikroba  berbasis  pati . J  Litbang  Pert 31: 85-93.