Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra
# Korespondensi:  Pusat  Penelitian  Oseanografi,  Lembaga  Ilmu Pengetahuan  Indonesia  (LIPI).  Jl.  Pasir  Putih  I,  Ancol  Timur, Jakarta  14430,  Indonesia Tel.  +  62  812  91035602 E-mail:  annarejekisimbolon@gmail.com

## IDENTIFIKASI  SPESIES  MENGGUNAKAN  DNA  BARCODING  DALAM  MENUNJANG BUDIDAYA DAN  KONSERVASI  TERIPANG  DI  PERAIRAN  LAMPUNG
Anna  Rejeki  Simbolon *)# ,  Masteria  Yunovilsa  Putra **) ,  dan  Ismiliana  Wirawati *)
*) Pusat Penelitian Oseanografi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Jl. Pasir Putih I, Ancol Timur, Jakarta 14430
**) Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI Komplek CSC-LIPI Jln. Raya Bogor Km 46, Cibinong 16911, Bogor
(Naskah  diterima:  25  September  2020;  Revisi  final:  8  Februari  2021;  Disetujui  publikasi:  8  Februari  2021)

## ABSTRAK
Teripang  merupakan  komoditas  perikanan  yang  saat  ini  dibudidayakan  dan  dieksploitasi  di  perairan Lampung.  Namun  terdapat  kesulitan  dalam  mengidentifikasi  teripang  karena  kemiripan  morfologis  di antara spesies yang ada. Identifikasi yang baik berguna agar proses pembudidayaan dan konservasi dapat tepat  sasaran.  Penggunaan  DNA  barcoding  dapat  digunakan  untuk  mengidentifikasi  jenis-jenis  teripang yang  ada,  jarak  genetik,  dan  keragaman  genetik  intra/inter  spesies.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengidentifikasi  teripang  di  perairan  Lampung  dengan  menggunakan  sekuen  DNA  gen  COI. Teripang diambil dengan menggunakan metode jelajah pada saat surut dan dengan scuba diving. Pengamatan DNA menggunakan primer universal ceF, pengeditan dan diurutkan dengan program Geneious ver 9 dan program BLAST. Konstruksi pohon filogenetik dilakukan dengan metode neighbor joining (NJ) pada model Kimura-2. Penelitian  ini  menunjukkan  spesies  teripang  yang  teridentifikasi  adalah Holothuria  leucospilota,  H.  atra, Stichopus vastus, dan S. horrens dengan jarak kesamaan 99%-100%. S. vastus dan S. horrens memiliki jarak genetik  terendah  dengan  pengurangan  yang  tinggi.  Rekonstruksi  filogenetik  memperlihatkan pengelompokkan spesies-spesies ke dalam genus Holothuria dan Stichopus. Stichopus sp. memiliki kesamaan morfologi yang tinggi sehingga kesalahan identifikasi sering terjadi. DNA barcoding dapat mengidentifikasi teripang secara cepat dan akurat sehingga pengelolaan teripang baik secara budidaya maupun pengambilan langsung di alam dapat berkelanjutan. Identifikasi spesies yang tepat menjadi kunci utama dalam upaya pembudidayaan dan konservasi teripang yang tepat sasaran dan berkelanjutan.
KATA KUNCI: barcoding; DNA; COI; teripang
ABSTRACT: Species  identification  using  DNA  barcoding  in  supporting  the  cultivation  and conservation  of  sea  cucumber  in  Lampung  waters.  By:  Anna  Rejeki  Simbolon,  Masteria Yunovilsa  Putra,  and  Ismiliana  Wirawati.
Sea  cucumbers  is  a  highly  valued  fishery  commodity  that  is  currently  cultivated  and  exploited  in  Lampung waters.  However,  differentiating  a  sea  cucumber  species  from  another  is  sometimes  difficult  due  the morphological  similarities  between  the  species.  Developing  an  accurate  identification  method  is  then critical  to  ensure  successfull  farming  activities  and  conservation  efforts  of  sea  cucumbers.  DNA  barcoding could  be  used  to  accurately  identify  sea  cucumber  species,  genetic  distance,  and  genetic  diversity  between species.  This  study  aimed  to  identify  sea  cucumbers  existed  in  Lampung  waters  using  DNA  barcoding  of  the COI  gene  with  ceF  and  ceR  universal  primers.  Sea  cucumbers  are  taken  using  the  cruising  method  at  low tide  and  by  scuba  diving.  The  DNA  sequence  was  then  edited  and  aligmented  using  the  Geneious  ver.9 program  and  analyzed  using  the  BLAST  program.  Phylogenetic  tree  construction  was  carried  out  using  the neighbor  joining  (NJ)  method  on  the  Kimura-2  model.  This  study  showed  that  the  identified  species  of  sea cucumbers  were  Holothuria  leucospilota,  H.  atra,  Stichopus  vastus,  and  S.  horrens  with  a  similarity distance  of  99%-100%.  S.  vastus  and  S.  horrens  have  the  lowest  genetic  range.  Phylogenetic  reconstruction
shows  the  classification  of  species  into  the  genus  Holothuria  and  Stichopus.  Stichopus  sp.  have  high morphological  similarities  within  the  same  genus  which  often  lead  to  species  misidentification.  DNA barcoding  can  identify  sea  cucumbers  quickly  and  accurately.  This  method  allows  the  identification  of  the right  sea  cucumber  species  which  is  the  main  key  in  the  effort  to  cultivate  and  conserve  targeted  and sustainable  sea  cucumbers.
KEYWORDS: barcoding;  DNA;  COI;  sea  cucumbers
dapat digunakan untuk mengidentifikasi spesies dan keragaman genetiknya ialah DNA barcoding. Metode DNA barcoding pertama kali diterapkan pada tahun 2003 (Hebert et al., 2003). Metode ini juga dapat digunakan untuk  memvalidasi  spesies  kriptik  yang  banyak ditemukan pada hewan dengan morfologi yang serupa namun  terdapat  perbedaan  genetis  (Trivedi  et  al., 2016).  DNA  barcoding  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi  spesies  baik  dalam  stadium  telur, larva,  dan  dewasa  (Briski  et  al.,  2011).  Sehingga metode  ini  menjadi  sangat  popular  baik  bagi  para taksonom modern  maupun para  ahli ekologi  dalam memprediksi sejarah hidup suatu spesies (Trivedi et al., 2016).
Secara umum, DNA barcoding adalah pendekatan standar untuk mengidentifikasi tumbuhan dan hewan dengan urutan minimal sekuen DNA. Sementara itu, barcode DNA  ialah sebuah urutan DNA  pendek, dari sebuah  wilayah  yang  seragam  pada  genom,  yang digunakan  untuk  mengidentifikasi  spesies  (Zein  & Prawiradilaga, 2013). Identifikasi spesies teripang baik secara  morfologi  dan  genetik  di  perairan  Indonesia masih belum banyak dilakukan. Penelitian mengenai teripang  di  Indonesia  selama  ini  hanya  sebatas distribusi dan morfologi. Saat ini, diketahui terdapat 45 spesies teripang yang ada di perairan seluruh In- donesia,  dengan  22  spesies  termasuk  genus Holothuria (Setyastuti et al., 2019). Penggunaan DNA barcoding telah dilakukan oleh Madduppa et al. (2017) untuk  mengidentifikasi  jenis-jenis  teripang  yang tersebar di Kepulauan Seribu.
Penelitian DNA barcoding terkait jenis teripang yang dieksploitasi  maupun  tujuan  pembudidayaan  di perairan Lampung belum pernah dilakukan sehingga perlu  dilakukan  identifikasi  jenis  teripang  agar pemanfaatan dan pelestarian spesies dapat dilakukan dengan  baik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengidentifikasi  spesies  teripang  yang  di  perairan Lampung dengan menggunakan DNA barcoding.

## BAHAN DAN METODE

## Teknik  Pengambilan  Sampel
Lokasi  pengambilan  sampel  teripang  di  perairan Lampung  (5°33’27.1"S  105°15’09.0"E),  Provinsi Lampung (Gambar 1). Teripang diambil dengan metode

## PENDAHULUAN
Holothuroidea merupakan salah satu jenis teripang atau timun laut bernilai ekonomis tinggi dan memiliki pasar  yang  baik.  Teripang  sering  dijumpai  dan terdistribusi secara luas di wilayah Indo Pasifik. Studi di  bidang farmakologi  menunjukkan bahwa  ekstrak teripang mengandung metabolit dan senyawa bioaktif potensial yang dapat digunakan dalam industri farmasi. Kandungan bahan aktif teripang yang dipercaya dapat meningkatkan stamina tubuh dan bahan baku obat.
Sebelum  tahun  2000  Indonesia  adalah  negara eksportir  teripang  terbesar  di  dunia  dengan  tujuan ekspor  utama  adalah  Hongkong.  Namun  akibat eksploitasi yang berlebihan oleh nelayan semakin sulit mendapatkan  teripang  dengan  jenis-jenis  tertentu. Dalam lima tahun terakhir, International Unionfor Con- servation of Nature (IUCN) mengevaluasi lebih dari 300 jenis timun laut Ordo Aspidochirotida dalam rangka mengetahui status populasinya. Sementara itu, Con- vention on Interantional Trade in Endangered Species of Wild  Fauna  and  Flora  (CITES)  bersama-sama  dengan negara-negara  eksportir  teripang  mendiskusikan mengenai perlunya  memasukkan teripang  ke dalam daftar Appendix II atau Appendix III CITES. CITES (2020) menyatakan jenis teripang yang telah masuk ke dalam daftar  apendiks  II  yaitu  dari  jenis  teripang  susu (Holothuria fuscogilva, H. nobilis, dan H. whitmaei).
Perairan Lampung merupakan salah satu wilayah di Indonesia yang melakukan budidaya teripang. Jenis teripang yang dibudidaya umumnya Holothuria scabra. Identifikasi  teripang  umumnya  dilakukan  secara morfologi, namun metode ini memiliki keterbatasan dikarenakan adanya beberapa spesies yang memiliki kemiripan morfologi yang tinggi, padahal identifikasi spesies  yang  tepat  berguna  agar  proses pembudidayaan  maupun  konservasi  spesies  dapat tepat  sasaran.  Selain itu,  teripang  merupakan  biota laut yang sangat mudah mengalami kontraksi sehingga seluruh karakter morfologinya masuk ke dalam tubuh. Teripang  juga  mampu  melakukan  eviserasi  atau mengeluarkan organ internal sampai memutuskan diri menjadi  beberapa  bagian saat  mengalami  stres  dan bertahan hidup (Wirawati et al., 2019). Oleh karena itu,  diperlukan  metode  untuk  mengidentifikasi teripang  secara  molekular.  Salah  satu  metode  yang
jelajah pada saat surut dan dengan scuba diving. Sampel teripang  yang  diambil  berjumlah  delapan  sampel, masing-masing spesies diambil satu individu (Gambar 2).  Sampel  kemudian  dimasukan  ke  dalam  plastik sampel  yang  berisi  alkohol  90%.  Untuk  keperluan analisis  DNA  sampel  teripang  dimasukan  ke  dalam botol sampel dalam larutan ethanol 99%.

## Ekstraksi  DNA
Ekstraksi  DNA  dilakukan  dengan  menempatkan irisan jaringan teripang (± 25 mg) ke dalam 1,5 mL tube microsentrifuges yang telah berisi 180 µL larutan buffer ATL kemudian dihaluskan dengan menggunakan gunting bedah. Kemudian ditambahkan 20 µL protein-
Gambar 1. Lokasi  pengambilan  sampel  di  perairan  Lampung (5°33’27.1"S 105°15’09.0"E), Provinsi Lampung, Indonesia.
Figure 1. Sampling  location  in  Lampung  waters  (5°33’27.1"S
105°15’09.0"E),  Lampung  Province,  Indonesia.
Gambar 2. Sampel teripang yang diperoleh selama penelitian. Figure 2. Species of sea cucumber obtained during the field research.
TRI991                           TRI992                                  TRI993                             TRI994 TRI995                                  TRI996                                TRI997                               TRI998 Teluk  Lampung Lampung Bay SAMUDERA  HINDIA Jawa Sumatera Laut Jawa Java Sea Selat Sunda Sunda Strait Lokasi  sampling Legend: Sumatera Jawa -5 .5 0 0 - 6 .0 0 0 - 6 .0 0 0 -5 .5 0 0 105.500                                                    106.000                                                     106.500
105.500                                                    106.000                                                     106.500
ase K dan di-vortex selama satu menit, serta diinkubasi selama  semalam  pada  suhu  56°C  di  thermostat waterbath.  Sampel  yang  telah  diinkubasi  di-vortex selama 15 detik dan ditambahkan 200 µL buffer AL dan 200 µL ET-OH (96%-100%) lalu di- vortex selama dua menit. Selanjutnya sampel dipindahkan ke dalam DNA easy mini spin colomn yang sudah ditempatkan dalam 2 mL collection tube. Sampel di-sentrifugasi pada 8.000 rpm selama satu menit. Hasil sisa residu sentrifugasi dibuang dan DNA easy spin colomn dipindahkan dalam 2 mL collection tube yang baru. Selanjutnya dilakukan penambahan500  µL  buffer  AW1  dan  di-sentrifugasi pada  8.000  rpm  selama  satu  menit.  Spin  colomn ditempatkan  dalam  2  mL  collection  tube  baru  dan ditambahkan  500  µL  buffer  AW2  kemudian  di- sentrifugasi  pada  14.000  rpm  selama  tiga  menit. Kemudian spin colomn dipindahkan ke dalam 1,5 mL microsentrifuge tube baru. Eludasi DNA dilakukan dengan menambahkan 200 µL buffer AE lalu inkubasi selama satu menit pada suhu ruang dan di-sentrifugasi pada 8.000 rpm selama satu menit. Konsentrasi dan kualitas ektrak DNA diukur pada nanophotometer IMPLEN dan disimpan pada freezer suhu -80°C.

## Analisis  PCR
Analisis PCR dilakukan dengan pembuatan larutan PCR yang terdiri 19,7 µL ddH2O; 3 µL Taq buffer; 3 µL MgCl 2 ; 0,6 µL dNTPmix; 0,5 µL BSA, 1 µL primer for- ward  dan  reverse ;  0,2  µL  Taq  DNA;  serta  1  µL  DNA template  (±  100  ng).  Ruas  gen  COI  genom mitokondria  kemudian  diamplifikasi  menggunakan primer  DNA  barcoding  primer  forward  COI  ceF  (5’- ACTGCCCACGCCCTAGTAATGATATTTTTTATGGTNATGCC -3’)  dan  primer  reverse  CO1  ceR  (5’- TCGTGTGTCTACGTCCATTCCTACTGTRAACATRTG  - 3’)  (Hoareau  &  Boissin,  2010).  Amplifikasi  PCR dilakukan dengan mengatur suhu PCR step down antara lain;  suhu  pre-denaturation  95°C  selama  tiga  menit, masing-masing 30 siklus dengan denaturasi pada suhu 94°C selama 45 detik, anneling pada suhu 60°C-55°C selama satu menit 10 detik; serta extention pada suhu 72°C selama satu menit 20 detik dan diakhiri dengan post  extention  pada  suhu  72°C  selama  lima  menit. Visualisasi  hasil  PCR  dengan  menggunakan  gel eletroforesis 2% dan UV transluminator. Sampel hasil PCR  yang  teramplifikasi  kemudian  dikirim  ke Macrogene untuk dilakukan sekuensing DNA.

## Analisis  Data  Hasil  Sekuen
Hasil  sekuen  diedit  dan  diurutkan  dengan menggunakan program Geneious Prime, hasil aligment dicocokan  dengan  program  Basic  Local  Assignment Search Tool (BLAST) dan validasi spesies dengan tingkat kesamaan  99%-100%.  Konstruksi  pohon  filogenetik
dilakukan  pada  program  MEGA  X  dengan menambahkan  sekuen  dari  GenBank  dengan  kode antara  lain  JN207617.1,  LC217310.1,  KX874353.1, KY986418.1  dengan  tingkat  kesamaan  tertinggi. Analisis  filogenetik  menggunakan  metode  neighbor joining (NJ) dengan model Kimura-2 parameter dengan uji pada 1.000x bootstrap (Tamura et al., 2011).

## HASIL DAN BAHASAN

## Budidaya  Teripang
Budidaya  teripang  saat  ini  masih  mengandalkan bibit dari alam, kemudian diperbesarkan dalam kolam perbesaran  (karamba  tancap).  Di  Indonesia  jenis teripang yang dibudidayakan dan dimanfaatkan antara lain teripang pasir (Holothuria scabra), teripang perut hitam  (Holothuria  atra,  teripang  susuan  (Holothuria edulis),  dan  teripang  nanas  (Thelenota  ananas). Pengambilan bibit di alam oleh para nelayan umumnya dengan ukuran teripang 40-60 g/ekor. Penebaran bibit umumnya dilakukan pada pagi atau sore hari dengan padat tebar 3-5 ekor/m 2 . Penambahan pakan umumnya dilakukan seminggu sekali dapat berupa pellet maupun sisa makanan. Masa pemeliharan berkisar 4-6 bulan tergantung ukuran benih saat ditebar. Teripang dipanen dengan ukuran 400-600 g/ekor pada saat surut terendah (Tangko, 2009). Budidaya teripang dilakukan pada jenis teripang  yang  sama  dalam  satu  karamba  sehingga penentuan jenis teripang yang tepat dalam budidaya teripang  harus  dilakukan  agar  budidaya  teripang memperoleh hasil yang maksimal.

## Identifikasi  Sampel
Dari delapan sampel teripang hanya empat sampel yang menghasilkan konsentrasi dan kualitas DNA yang baik (Tabel 1).
Hasil konsentrasi DNA berkisar antara 12-161,75 ng/µL. Sekuen DNA Cytochorme Oxydase Subunit I (COI) yang dihasilkan adalah sepanjang 525 bp. Berdasarkan BLAST yang dilakukan menggunakan data sekuen gene bank  tidak  ditemukan  adanya  insertion  dan  diletion. Berdasarkan hasil analisis dengan menggunakan BLAST sampel  TR1992  teridentifikasi  dengan  Holothuria leucospilota,  TR1993  teridentifikasi  dengan  H.  atra, TR1997 teridentifikasi dengan Stichopus vastus dan TR 1998 teridentifikasi dengan S. horrens (Tabel 2).
Semakin  tinggi  nilai  identity  antar  spesies menunjukkan kesamaan spesies yang semakin tinggi. Nilai identity yang lebih besar dari 95% dan mendekati 100%, serta nilai E = 0 menunjukkan tingkat kesamaan spesies  yang  tinggi.  (Madduppa  et  al.,  2017). Penelitian ini menunjukkan nilai identity berkisar 99%- 100%  dengan  demikian  hasil  BLAST  yang  diperoleh
pada  penelitian  ini  menunjukkan  tingkat  validasi kesamaan spesies yang tinggi.
Setyastuti  et  al.  (2019)  menyatakan  H.  atra ditemukan  di  23  lokasi  di  Indonesia  antara  lain  di Sabang,  Nias,  Mentawai,  Batam,  Bintan,  Lingga, Belitung,  Lampung,  Karimunjawa,  Jawa  Timur, Sumbawa,  Derawan,  Makassar,  Selayar,  Sumba, Kendari,  Wakatobi,  Buton,  Ternate,  Seram,  Ambon, Raja Ampat, dan Kaimana. H. leucospilota ditemukan di  14  lokasi  antara  lain  di  Batam,  Bintan,  Belitung, Karimunjawa, Jawa Timur, Lombok Barat, Sumbawa, Makassar, Sumba, Kendari, Buton, Seram, Ambon, dan Biak.  S.  horrens  ditemukan  di  lima  lokasi  yaitu Karimunjawa,  Jawa  Timur,  Derawan,  Selayar,  Seram. Sementara itu, S. vastus ditemukan di delapan lokasi di Indonesia yaitu Lampung, Karimunjawa, Jawa Timur, Derawan,  Selayar,  Ternate,  Seram,  dan  Kaimana. Penelitian ini menunjukan distribusi H. leucospilota dan S. horrens juga terdapat di perairan Lampung. Namun demikian, dilaporkan bahwa Wibowo et al. (2019) telah melakukan penelitian pada H. leucospilota yang berasal dari perairan Lampung. Sedangkan, Rasyid et al. (2018) melakukan analisis pada S. horrens yang berasal dari perairan  Teluk  Rantai,  Lampung.  Dengan  demikian keberadaan kedua spesies tersebut di Lampung dapat dikonfirmasi dengan hasil penelitian yang dilakukan.

## Pohon  Filogenetik
Jarak genetik antar spesies teripang disajikan pada Tabel  3.  Penelitian  ini  menunjukkan  jarak  genetik berkisar antara 0,0668-0,3012 dengan jarak genetik terendah antara Stichopus vastus dan S. horrens yaitu 0,0668  dan  tertinggi  sebesar  0,3012  yaitu  antara Holothuria  leucospilota  dan  S.vastus.  Perbedaan  jarak genetik dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain genetic drift dan seleksi alam (Freeland, 2012). Semakin rendah  jarak  genetik  antar  spesies  menunjukkan semakin  sedikit  perbedaan  pasangan  basa  antar spesies  yang  diikuti  dengan  semakin  tinggi persamaan morfologinya. Penelitian ini menunjukkan genus Stichopus memiliki jarak genetik terendah, hal yang sama dilaporkan oleh Madduppa et al. (2017) pada jenis-jenis teripang di Kepulauan Seribu.
Hewan invertebrata umumnya memiliki kesamaan morfologi yang tinggi antar spesies (cryptic), sehingga identifikasi  molekuler  dapat  digunakan  untuk memvalidasi spesies kriptik.  Menurut Patantis et  al. (2019), secara molekuler, jenis-jenis teripang yang ada di  perdagangkan  di  Indonesia  adalah  Acaudina  sp., Actinopyga  echinites,  A.  lecanora,  A.  miliaris, Bohadschia  argus,  B.  marmorata,  B.  ocellata,  B. vitiensis,  Holothuria  sp.,  H.  atra,  H.  coluber,  H.  edulis, H.  excellens,  H.  fuscocinerea,  H.  fuscogilva,  H.

## Tabel 1. Konsentrasi DNA teripang
Table 1. DNA concentration of sea cucumber
Tabel 2. Hasil identifikasi melalui program BLAST I Table 2. Identification results through BLAST program
Kode sampel
Sample code
Kode ekstrak DNA
DNA extract code Konsentrasi DNA DNA concentration (ng/µL) TR1991 TC91 - TR1992 TC92 12.5 TR1993 TC93 41.5 TR1994 TC94 2.4 TR1995 TC95 - TR1996 TC96 - TR1997 TC97 22.05 TR1998 TC98 421.45 Kode sampel Sample code Kode DNA DNA code identifikasi BLAST BLAST identified Identifikasi Identity  (%) Nilai E E value Nomor aksesi Accesion number TR1992 TC92 Holothuria leucospilota 99.67 0 JN207617.1 TR1993 TC93 Holothuria atra 100 0 LC217310.1 TR1997 TC97 Stichopus vastus 100 0 KX874353.1 TR1998 TC98 Stichopus horrens 99.83 0 KY986418.1
fuscopunctata,  H.  scabra,  Pearsonothuria  graeffei, Phyrella  sp.,  Stichopus  herrmanni,  S.  horrens,  dan  S. monotuberculatus.  Penelitian  tersebut  juga menyebutkan  rendahnya  jarak  genetik  antar  genus Stichopus menyebabkan seringnya terjadi kesalahan identifikasi pada genus Stichopus.
Rekonstruksi  pohon  filogenetik  spesies-spesies yang  ada  dibandingkan  dengan  data  GenBank ditampilkan  pada  Gambar  3.  Pohon  filogenetik menunjukkan bahwa pengelompokan spesies-spesies terjadi  karena  kesamaan  genetik  terkait  hubungan kekerabatan. Genus Holothuria bercabang membentuk dua clade. Hal ini kemungkinan disebabkan tingginya variabilitas  COI  pada  genus  Holothuria.  Holothuria terdiri  atas  18  subgenera  yang  selanjutnya  dibagi menjadi 160 spesies, sedangkan genus lainnya belum
Tabel 3. Jarak genetik antar spesies teripang yang teridentifikasi dalam penelitian Table  3. Genetic  distance  between  spesies  of  sea  cucumber  identified  in  the  study
dibagi menjadi subgenera (Honey et al., 2012). Genus Stichopus memiliki clade dengan nilai bootstrap yang tinggi yang menunjukkan hubungan kekerabatan yang dekat.
Identifikasi  spesies  secara  molekular  dapat mengungkap  keanekeragaman  spesies  secara  cepat dan akurat. Identifikasi yang tepat dapat memberikan data  yang  penting  terkait  distribusi  dan  jumlah populasi  teripang  di  alam  sehingga  pengelolaan teripang baik secara budidaya maupun pengambilan langsung di alam dapat berkelanjutan. Penggunaan DNA barcoding  dalam  penentuan  identifikasi  spesies teripang dalam penelitian ini dapat dijadikan referensi dalam  pengembangan  budidaya  dan  konservasi teripang di Indonesia khususnya di perairan Lampung, sehingga proses budidaya dapat tepat sasaran.
Spesies (Species ) Stichopus horrens Stichopus vastus Holothuria atra Holothuria Stichopus horrens Stichopus vastus 0.0668 Holothuria atra 0.256 0.2597 Holothuria leucospilota 0.2855 0.3012 0.2053
Gambar 3. Pohon filogenetik teripang berdasarkan sekuen DNA COI gen menggunakan metode neighbor joining (NJ) dengan model Kimura-2 parameter, bootstrap 1.000 replikasi.
Figure 3. Phylogenetic tree of sea cucumbers based on DNA COI gen sequen using the neigh- bor joining (NJ) method with a 2-parameter Kimura model, bootstrap 1,000 repli- cations.
TC98 KY986418.1 Stichopus horrens JQ815219.1 Stichopus horrens EU848275.1 Stichopus vastus TC97 TC92 KX874353.1 Stichopus vastus JN207617.1 Holothuria leucospilota EU848283.1 Holothuria atra LC217310.1 Holothuria atra AY574880.1 Bohadschia bivittata TC93 0.020 100 100 100 99 99 99 100 84

## KESIMPULAN
Identifikasi  spesies  yang  tepat  menjadi  kunci utama  dalam  upaya pembudidayaan  dan  konservasi teripang yang tepat sasaran dan berkelanjutan. Secara morfologis  terdapat  delapan  jenis  teripang  yang diperoleh dari perairan Lampung. Empat di antaranya teridentifikasi sebagai Holothuria leucospilota, H. atra, Stichopus  vastus,  dan  S.  horrens.  Stichopus  vastus dan  S.  horrens  memiliki  jarak  genetik  terendah  dan nilai  bootstrap  yang  tinggi.  Pohon  filogenetik menunjukkan  pengelompokkan  spesies-spesies berdasarkan  genus  yang  berbeda.  Teripang  jenis Stichopus  sp.  memiliki  kesamaan  morfologi  yang tinggi sehingga kesalahan identifikasi sering terjadi. DNA barcoding dapat mengidentifikasi teripang secara cepat dan akurat sehingga pengelolaan teripang baik secara budidaya maupun pengambilan langsung di alam dapat  berkelanjutan.  Keanekaragaman  genetik  dan studi populasi teripang perlu dilakukan sehingga upaya konservasi teripang dapat optimal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Kepala Pusat  Penelitian  Oseanografi,  Lembaga  Ilmu Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  yang  mengizinkan penelitian  ini  berlangsung.  Ucapan  terima  kasih disampaikan  kepada  Aji  Nugroho  yang  membantu dalam pengambilan sampel. Penelitian ini dibiayai oleh Pusat  Penelitian  Oseanografi  LIPI  melalui  dana COREMAP-CTI tahun 2019.

## DAFTAR  ACUAN
Briski,  E.,  Cristescu,  E.,  Bailey,  S.,  &  MacIsaac,  H.
(2011). Use of DNA barcoding to detect inverte- brate invasive species from diapausing eggs. Bio- logical Invasions, 13(6), 1325-1340.
Convention  on  International  Trade  In  Endangered Species of Wild Fauna and Flora [CITES]. (2020). Appendices I, II and III. Geneva: UN Environment Programme (UNEP), 74 pp.
Freeland,  J.R.,  Kirk,  H.,  &  Petersen.  S.  (2012).  Ge- netic analysis of multiple populations in molecu- lar ecology. 2 nd edition. New York: John Wiley and Sons.
Hebert, P.D.N., Cywinska, A., Ball, S., & deWaard, J.R. (2003).  Biological  identifications  through  DNA barcodes. Proceeding Biological Sciences Royal Soci- ety  London  B,  270,  313-21.
Hoareau,  T.B.  &  Boissin,  E.  (2010).  DNA  barcoding design of phylum-speciûc hybrid primers for DNA barcoding: addressing the need for efûcient COI ampliûcation  in  The  Echinodermata.  Molecular Ecology  Resources,  10,  960-967.
Honey,  E.M.,  Figueras,  L.A.,  &  MarÍN,  S.F.A.  (2012). Molecular phylogeny of the subgenus Holothuria (Selenkothuria) Deichmann, 1958 (Holothuroidea: Aspidochirotida).  Zool.  J.  Linn.  Soc.,  165(1), 109-120.
Madduppa,  H.,  Taurusman,  Am.A.,  Subhan,  B., Anggraini, N.P., Fadillah, R., & Tarman, K. (2017). Short communication: DNA barcoding reveals vul- nerable and not evaluated species of sea cucum- bers  (Holothuroidea  and  Stichopodidae)  from Kepulauan  Seribu Reefs,  Indonesia.  Biodiversitas, 18(3), 893-898.
Patantis,  G.,  Dewi,  A.S.,  Fawzya,  Y.N.,  &  Nursid,  M. (2019).  Identification  of  Beche-de-mers  from Indonesia  by  molecular  approach.  Biodiversitas, 20(2), 537-543.
Rasyid, A., Wahyuningsih, T., & Ardiansyah, A. (2018). Profil metabolit sekunder, aktivitas antibakteri dan komposisi  senyawa  yang  terkandung  dalam ekstrak metanol teripang Stichopus horrens. Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, 10(2), 333-340.
Setyastuti,  A.,  Wirawati,  I.,  Permadi,  S.,  &  Vimono, I.B., (2019). Teripang Indonesia: Jenis, sebaran, dan status  nilai  ekonomi.  Bogor:  PT.  Media  Sains Nasional, 75 hlm.
Tangko,  A.M.  (2009).  Present  status  produksi  dan budidaya  teripang  di  Sulawesi  Selatan.  Media Akuakultur, 4(1), 32-39.
Tamura,  K.,  Peterson,  D.,  Peterson,  N.,  Stecher,  G., Nei,  M.,  &  Kumar,  S.  (2011).  MEGA5:  molecular evolutionary  genetics  analysis  using  maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods. Molecular Biology and Evolu- tion, 28, 2731-2739.
Trivedi,  S.,  Aloufi,  A.A.,  Ansari,  A.A.,  &  Ghosh,  S.K. (2016). Review: Role of DNA barcoding in marine biodiversity  assessment  and  conser vation: An  update.  Saudi  Journal  of  Biological  Sciences, 23, 161-171.
Wirawati, I., Setyastuti, A., & Purwati, P. (2019). Timun Laut  dari  Perairan  Dangkal  Indonesia.  Jakarta: Media Sains Nasional, 93 hlm.
Wibowo, T.J., Murniasih, T., Kellermann, M.Y., Versluis, D.,  Putra,  M.Y.,  Praditya,  D.F.,  Mohr,  K.I.,  Wink, J.,  Engelmann,  M.,  Steinmann,  E.,  &  Schupp,  P.J. (2019). Biotechnological potential of bacteria iso- lated from the sea cucumber Holothuria leucospilota and Stichopus vastus from Lampung, Indonesia. Ma- rine.  Drugs,  17(635),  1-25.
Zein,  M.S.A.  &  Prawiradilaga,  D.M.  (2013).  DNA barcode fauna Indonesia. Jakarta: Prenada Media, 260 hlm.