## 1. Pendahuluan
Beberapa  jenis  tanaman  mengandung bahan-bahan yang berkhasiat obat, sekaligus racun.  Namun  hingga  kini  pemanfaatan tanaman  yang  mengandung  racun  dan  obat tidak  ada  batasan  yang  jelas,  sehingga pemanfaatan tanaman obat perlu ekstra hati- hati  agar  tidak  berakibat  fatal  bagi  yang menggunakan  (Kardinan  dan  Taryono, 2004).
Senyawa  aktif  dalam  tanaman  yang bersifat  racun  bagi  manusia  tetapi  dapat digunakan  sebagai  obat  adalah  alkaloid, sehingga  digunakan  secara  luas  dalam bidang  pengobatan,  dengan  alkaloid  dapat digunakan  sebagai  pengatur  tumbuh,  atau penghalau atau penarik serangga (Harborne, 1987). Alkaloid yang tersebar luas di dunia tumbuhan terdapat dalam tumbuhan sebagai garam  organik.  Alkaloid  diperoleh  dengan mengekstraksi bahan tumbuhan memakai air yang diasamkan, alkaloid dilarutkan sebagai garam atau bahan tumbuhan dapat dibasakan dengan  natrium  karbonat  atau  amonia,  dan basa  bebas  diekstraksi  dengan  pelarut organik  sepeti  kloroform,  eter,  dan  lain sebagainya (Robinson, 1995).
Salah  satu  tanaman  yang  mengandung alkaloid  adalah  Mahkota  Dewa  ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl). Alkaloid dapat diisolasi  dan  diidentifikasi  dengan  cara
fraksinasi  untuk  memisahkan  golongan utama  kandungan  yang  satu  dari  golongan yang  lain.  Kromatografi  kolom  dan  KLT m e r u p a k a n   m e t o d e   p i l i h a n   u n t u k memisahkan  campuran  alkaloid,  sedangkan untuk  pemurnian  dapat  digunakan  metode KLTP (Harborne, 1987).
Mahkota  Dewa  ( Phaleria  macrocarpa (Scheff.)  Boerl)  merupakan  salah  satu  obat t r a d i s i o n a l   y a n g   d i p e r c a y a   d a p a t menyembuhkan  beberapa  penyakit  berat seperti  liver,  kanker,  jantung,  asam  urat, rematik,  ginjal,  tekanan  darah  tinggi  dan penyakit ringan seperti eksim, jerawat, luka gigitan serangga, dan kencing nanah, tetapi belum diketahui dosis efektif yang aman dan bermanfaat,  sehingga  pemakaiannya  harus hati-hati (Harmanto, 2001).
Kandungan senyawa aktif buah Mahkota Dewa  berupa  alkaloid  yang  berfungsi sebagai detoksifikasi yang dapat menetralisir racun  di  dalam  tubuh.  Selain  alkaloid terdapat  juga  kandungan  tannin,  saponin, flavonoid,  terpenoid  dan  lignan  (golongan polifenol  yang  merupakan  senyawa  toksik terdapat  dalam  buah  Mahkota  Dewa  yang m e m i l i k i   a k t i v i t a s   a n t i k a n k e r ) ( http://id.wikipedia , 2007).
Uji  ketoksikan  akut  bertujuan  untuk menentukan efek toksis suatu senyawa yang akan  terjadi  dalam  waktu  yang  singkat
JURNAL FARMASI SAINS DAN KOMUNITAS, November 2012, hlm. 66-70
ISSN : 1693-5683
ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID BUAH MAHKOTA DEWA ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) SECARA SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis DAN IR SERTA UJI TOKSISITAS AKUT TERHADAP LARVA Artemia salina Leach

## CHRISTINA ASTUTININGSIH, FRIDA NUZULIA, AGUS SUPRIJONO

## Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi “Yayasan Pharmasi” Semarang
Abstract : Fruit Mahkota Dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) contains alkaloid, tannin, saponin, flavonoid, terpenoid dan lignin. The aim of this study was to elucidate compound from Mahkota  Dewa  based  on  the  analyses  on  spectrophotometry  UV-Vis,  IR  and  to  evaluate  the compound in the Brine Shrimp Lethality Test. On IR spectra revealed the presence of alkaloid amin primer. The isolated alkaloid compound was found to be toxic to brine shrimp with LC 50 33.8932 μ g/ml.
Keywords: alkaloid, Mahkota Dewa, toxicity, Artemia salina Leach
setelah  pemejanan  atau  pemberiannya dengan  takaran  tertentu,  biasanya  dalam waktu 24 jam (Donatus, 2001).
Metode yang digunakan sebagai hasil uji pendahuluan  untuk  menentukan  potensi ketoksikan  senyawa  atau  ekstrak  tumbuhan adalah  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) dengan menggunakan larva Artemia salina Leach  sebagai  hewan  uji.  Potensi ketoksikan  senyawa  dapat  diketahui berdasarkan jumlah kematian hewan uji.
Penggunaan BSLT juga dilakukan untuk mengetahui  batas  keamanan  penggunaan suatu zat tumbuhan untuk terapi pengobatan. Hasil uji dinyatakan toksik terhadap Artemia salina Leach,  bila  isolat  alkaloid  dari  buah Mahkota Dewa mempunyai LC  kurang dari 50 1000 μ g/ml (Meyer dkk, 1982).
Dari  latar  belakang  masalah  di  atas peneliti tertarik untuk melakukan isolasi dan identifikasi salah satu kandungan kimia pada buah Mahkota Dewa yaitu alkaloid, dengan menggunakan  metode  kromatografi  kolom, dan  kromatografi  lapis  tipis,  untuk mengetahui  gugus-gugus  parsial  alkaloid buah  mahkota  dewa  menggunakan  metode spektrofotometri  Uv-Vis  dan  IR  serta dilakukan  uji  ketoksikannya  dengan menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT).

## 2. Bahan dan Metode
Bahan  utama:  buah  Mahkota  Dewa
( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl). yang diperoleh  dari  daerah  Lamper  Tengah, Semarang  dan  dipetik  saat  buah  sudah bewarna merah tua.
Bahan  untuk  penyarian:  asam  klorida (HCl)  2  N,  ammonia,  eter,  kloroform, natrium  sulfat  anhidrat,  aquadest.  Bahan untuk  reaksi  pengendapan  alkaloid:  asam fosfomolibdat LP, Bouchardat LP, Meyer LP, Hager  LP.  Bahan  untuk  reaksi  warna alkaloid:  asam  nitrat  pekat  dan  asam  sulfat pekat.  Bahan  untuk  penyarian:  petroleum eter, etanol 95%. Bahan untuk fraksinasi: etil asetat,  asam  tartrat,  ammonia  Bahan  untuk kromatografi:  silica  gel  60  GF ,  silica  gel 254 GF , etil asetat p.a, metanol p.a, Dragendrof 254 LP.
Bahan  untuk  uji  BSLT:  telur Artemia salina Leach., metanol p.a, air laut, fermipan. Alat  penelitian  yang  digunakan  adalah: Alat  soxhlet,  kolom  kromatografi,  corong pisah,  gelas  piala, rotary  evaporator ,  labu t a k a r ,   d a n   b e j a n a   u n t u k   K LT , spektrofotometer  Shimadzu  Uv-Vis  1240, spektrofotometer  FT-IR  Shimadzu origin laboratory.

## 2.1. Tata Cara Penelitian

## 2.1.1. Isolasi dan Identifikasi Alkaloid Buah Mahkota Dewa
Serbuk  kering  buah  Mahkota  Dewa dilakukan penyarian dengan metode soxhlet menggunakan  petroleum  eter.  Kemudian dilanjutkan  dengan  menggunakan  pelarut etanol  95%.  Ekstrak  etanol  yang  diperoleh dipekatkan  sehingga  diperoleh  ekstrak kental.  Ekstrak  etanol  dilakukan  uji pendahuluan  dan  penegasan  terhadap kandungan  alkaloid,  dilakukan  fraksinasi, hasil  fraksinasi  dilakukan  KLT  dan  KLTP. Fraksi yang mengandung alkaloid terbanyak dilakukan  kromatografi  kolom.  Isolat  yang didapat  diidentifikasi  untuk  mengetahui kandungan  isolat  alkaloid  kemudian dilakukan  identifikasi  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dan  IR  untuk mengetahui  gugus-gugus  parsialnya  serta dilakukan  uji  toksisitas  akut  terhadap Artemia salina Leach.

## 2.1.2. Uji BSLT
Sampel uji isolat alkaloid dibuat dengan melarutkan 52,1 mg isolat alkaloid dalam 25 ml pelarut metanol (larutan stok A). Larutan ini  dibuat  suatu  seri  larutan  uji  dengan konsentrasi 10 μ g/ml; 18 μ g/ml; 32,4 μ g/ml; dan 58,32 μ g/ml. Larutan uji dengan berbagai konsentrasi dimasukkan dalam vial. Kontrol positif adalah 5 ml metanol dimasukkan ke dalam  vial.  Dibuat  replikasi  sebanyak  lima kali. Kemudian pelarut dalam vial diuapkan di  atas  penangas  air  sampai  habis,  lalu d i t a m b a h k a n   1   m l   a i r   l a u t   d a n dihomogenkan.  Tiap-tiap  vial  ditambahkan 10 ekor Artemia salina Leach. yang berumur
C. ASTUTININGSIH, F. NUZULIA, A. SUPRIJONO 67
4 8   j a m   d a n   d i c u k u p k a n   d e n g a n menambahkan  air  laut  sampai  tanda  5  ml, kemudian  ditambahkan  1  tetes  suspensi fermipan,  vial  diletakkan  di  bawah penerangan dan setelah 24 jam dihitung larva yang mati.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Serbuk  kering  dalam  etanol  95% dilakukan  uji  pendahuluan  kandungan alkaloid. Untuk uji pendahuluan kandungan alkaloid dilakukan dengan penambahan HCl 2N  dalam  ekstrak  etanol,  bertujuan  untuk menarik garam alkaloid yang berada dalam ekstrak etanol sehingga garam alkaloid yang terbentuk dapat larut dalam air, fase air asam ditambah  ammonia  yang  bertujuan  untuk melarutkan  alkaloid  basa.  Dari  hasil  uji pendahuluan,  penegasan  dan  uji  warna terhadap buah mahkota dewa menunjukkan reaksi  positif  terhadap  dua  pereaksi  yang ditambahkan yaitu Bauchardat LP dan hager L P  s e h i n g g a   b u a h   m a h k o t a   d e w a mengandung  alkaloid  golongan  II  dan golongan IV.
Dari  hasil  identifikasi  ke  tiga  fraksi (fraksi  etil  asetat  I,  fraksi  etil  asetat  II,  dan fraksi  basa)  positif  mengandung  alkaloid karena  setelah  disemprot  dengan  pereaksi Dragendrof LP memberikan noda berwarna orange  sampai  cokelat.  Hasil  uji  KLTP terhadap fraksi etil asetat I, etil asetat II dan fraksi  basa,  dilakukan  isolasi  secara kromatografi  kolom  pada  fraksi  basa  yang mempunyai  kandungan  alkaloid  terbanyak p a d a   b u a h   m a h k o t a   d e w a .   I s o l a s i menggunakan  fase  diam  silica  gel  60  GF 254 dan  fase  gerak  etil  asetat-metanol  (90:10), isolate-isolat  yang  didapat  di  tamping, diidentifikasi secara KLT untuk mengetahui adanya kandungan isolat alkaloid. Dari hasil uji  isolate  alkaloid  secara  KLT  sudah didapatkan satu noda, ini berarti isolate yang didapat sudah dalam keadaan murni.
Isolat  kemudian  dilakukan  identifikasi dengan spektrofotometer UV-Vis dilarutkan dengan etanol p.a, dipilih etanol p.a, karena etanol  p.a  merupakan  pelarut  yang  cocok
untuk analisa dengan spektrofotometer UV- Vis,  selain  itu  etanol  p.a  tidak  memberikan serapan panjang gelombang diatas 200 nm. Identifikasi  dengan  spektrofotometer  UV- Vis  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya gugus  yang  dapat  mengabsorbsi  sinar  UV- Vis. Hasil dari spektrum isolat alkaloid dapat dilihat pada Gambar 1.
Hasil  dari  spektrofotometer  UV-Vis untuk  isolat  alkaloid  didapat  dua  puncak serapan  maksimal  yaitu  pada  panjang gelombang  205  nm  dan  290  nm.  Pada panjang  gelombang  205  nm  memberikan puncak serapan yang kuat, ini menunjukkan adanya serapan benzene hal ini dikarenakan adanya  transisi  n  – σ *  yang  menunjukkan adanya  molekul  organik  jenuh  yang mempunyai  satu  atau  lebih  atom  dengan pasangan  elektron  sunyi,  sedang  pada panjang  gelombang  290  nm  memberikan puncak serapan yang lemah ini menunjukkan a d a n y a   k r o m o f o r   b e n z e n e   y a n g diperpanjang,  hal  ini  dikarenakan  adanya transisi n – π *.
Dari  hasil  spektrofotometer  infra  merah isolat  alkaloid  (gambar  2)  dinterpretasikan
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
68
Gambar 1. Spektrum Uv-Vis Isolat Alkaloid Buah Mahkota Dewa
C. ASTUTININGSIH, F. NUZULIA, A. SUPRIJONO
sebagai berikut. Terdapat pita kembar dengan intensitas  sedang  pada  bilangan  gelombang -1 -1 3549,02 cm dan 3464,15 cm  menunjukkan adanya  gugus  N  –  H  primer.  Pita  kuat berintensitas tajam pada bilangan gelombang -1 2985,81  cm dan  2900,94  menunjukkan adanya gugus C – H alifatik karena letaknya -1 kurang  dari  3000  cm .  Pita  tajam  pada - 1 b i l a n g a n   g e l o m b a n g   1 7 4 3 , 6 5   c m menunjukkan adanya gugus karbonil ( C = O )  ulur.  Terdapat  dua  gugus  aromatis  pada bilangan  gelombang  1450,47  dan  1373,32 -1 cm  menunjukkan adanya   C = C aromatik.
- 1 B i l a n g a n   g e l o m b a n g   1 2 4 2 , 1 6   c m menunjukkan  adanya  gugus  karbonil  ester (C–O)  yang  berintensitas  sedang.  Gugus N–H  di  luar  bidang  terdapat  pada  bilangan -1 gelombang 848,68 dan 786,96 cm (Tabel 1).
Penelitian  uji  toksisitas  buah  mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) dilakukan  dengan  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Larva
Artemia salina Leach yang digunakan untuk uji adalah larva yang berumur 48 jam setelah menetas. Uji BSLT dilakukan terhadap isolat alkaloid  buah  mahkota  dewa  yang  didapat dari pemisahan secara kromatografi kolom, kemudian  dibandingkan  harga  LC   nya. 50 Isolat  yang  digunakan  dibuat  dalam  deret konsentrasi  dengan  faktor  pengali  1,8.  Uji BSLT  isolat  alkaloid  menggunakan  4 peringkat  konsentrasi  yaitu  10 μ g/ml;  18 μ g/ml;  32,4 μ g/ml;  dan  58,32 μ g/ml. Persamaan  garis  lurus  dari  ekstrak  etanol yaitu  Y=  2,017X  -  18,3865  dengan  harga LC sebesar 33,8932 μ g/ml (Tabel 2).
50 Harga  LC   diperoleh  dengan  cara 50 memplotkan  hubungan  regresi  linier  antara konsentrasi  (X)  dengan  %  kematian  (Y) (gambar  3),  penggunaan  persamaan  ini b e r t u j u a n   u n t u k   m e n g e t a h u i   p a d a konsentrasi  berapa  isolat  alkaloid  buah mahkota dewa dapat menyebabkan kematian 50%  hewan  uji.  Pada  hasil  percobaan,
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Gambar 2. Spektrum IR isolat alkaloid buah mahkota dewa
Daerah Serapan
Puncak Serapan
Gugus 1900 – 1640 cm -1 3750  - 3000 cm -1 1300 – 1000 cm -1 1680 – 1640 cm -1 Sebelah kanan 3000 cm -1 Dekat 800 cm -1 1743,65 cm -1 3549,02 dan 3464,15 cm -1 1242,16 cm -1 1450,47 dan 1373,32 cm -1 2985,81 dan 2900,94 cm -1 848,68 dan 786, 96 cm -1 C = O N – H primer C – O ester C =C aromatik C – H alifatik N – H out of plane Tabel 1. Analisis Spektrum IR Isolat Alkaloid buah Mahkota Dewa
C. ASTUTININGSIH, F. NUZULIA, A. SUPRIJONO
konsentrasi zat uji dengan respon %kematian berbanding  lurus  artinya,  semakin  besar konsentrasi  zat  uji  semakin  besar  pula pengaruhnya  terhadap  kematian  hewan  uji. Berdasarkan perhitungan,   konsentrasi yang menyebabkan  kematian  50%  hewan  uji adalah  pada  konsentrasi  33,8932  µg/ml. S e m a k i n   b e s a r   h a rg a   L C   b e r a r t i 5 0 toksisitasnya  semakin  kecil  dan  sebaliknya semakin kecil harga LC  maka toksisitasnya 50 semakin  besar.  Jika  harga  LC yang 50 diperoleh lebih kecil dari 1000 μ g/ml maka senyawa uji dikatakan toksik (Meyer, 1982).
Berdasarkan data di atas, hasil LC  dari 50 isolat  buah  mahkota  dewa  ( Phaleria macrocarpa (Scheff.)  Boerl)  mempunyai efek  toksik  terhadap  larva Artemia  salina Leach.

## 4. Kesimpulan
Hasil  penelitian  menunjukkan  senyawa yang  diisolasi  dari  buah  mahkota  dewa adalah  golongan  senyawa  alkaloid,  yang mempunyai  fek  toksik  terhadap  larva
Artemia  salina Leach  dengan  nilai  LC 50 sebesar 33,8932 μ g/ml.

## Daftar Pustaka
Dhalimarta, Setiawan. 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 3 . Jakarta : Puspa Swara Donatus, I.A. 2001. Toksikologi Dasar . 124-159, 200- 209. Yogyakarta : Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Farmasi UGM.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia. Diterjemahkan  oleh  Padmawinata,  K.,  dan Soediro, I. Bandung : ITB Harmanto, Ning. 2004. Menggempur Penyakit Hewan Kesayangan  dengan  Mahkota  Dewa .  Jakarta  :
Penebar Swadaya
Hendrawati,  L.  Veronika.  2006. Uji  Toksisitas  Akut E k s t r a k   E t a n o l   K u l i t   A k a r   S e n g g u g u (Clerodendron serratum Spreng) Beserta Fraksi n-Butanol  dan    Fraksi  Air  Sisanya  terhadap Larva Artemia salina Leach. Skripsi. Semarang : Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Yayasan Pharmasi.
http://id.wikipedia.org/wiki/Mahkota_Dewa
Kardinan,  A.dan  Taryono.2004. Tanaman  obat Penggempur  Kanker. Jakarta:  Agromedia Pustaka.
Meyer, B. N.,Ferigni, N.R., Putman, J. E.,Jacobsen, L.
B., Nicholas, D. E., and Mc Laughin, J.L., 1982, Brine shrimps : A Convenients General Bioassay for Active Plant Constituents, Journal of Planta Medica . Vol. 45. Robinson,  Trevor.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan  Tinggi. Diterjemahkan  oleh Padmawinata, K. Bandung : ITB Sastrohamidjojo, H. 1991. Spektroskopi. Yogyakarta : Liberty Sastrohamidjojo,  H.  1996. Sintesis  Bahan  Alam. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas 70
Konsentrasi ( µg/ml ) Persen (%) kematian Persamaan garis lurus ( konsentrasi vs % kematian ) LC 50 ( µg/ml ) 10,0000 0 % Y  = 2,0177 X – 18,3865 18,0000 22 % 50 = 2,0177 X – 18,3865 33,8932 µg/ml 32,4000 44 % X  = 33,8932 µg/ml 58,3200 100 % r   = 0,9974
Tabel 2. Persamaan LC50Isolat Alkaloid Buah Mahkota Dewa
Gambar 3. Grafik regresi linier pada perlakuan isolat alkaloid buah Mahkota Dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl)
C. ASTUTININGSIH, F. NUZULIA, A. SUPRIJONO