KAJIAN POTENSI ESTROGENIK EKSTRAK n-HEKSAN HERBA KEMANGI
( Ocimum americanum L.) PADA TIKUS PUTIH BETINA ( Rattus norvegicus )
Mulyati effendi 1 dan Anatria Kholiyah 2
1 Program Studi Biologi, FMIPA Universitas Pakuan, Bogor
2 Program Studi Farmasi, FMIPA Universitas Pakuan, Bogor
E-mail : mulyatichandra@gmail.com

## ABSTRACT
Menopause is a condition in which menstrual cycles stalled due to gland gonadotropin no longer carry out their duties in work affecting the ovaries to produce estrogen. Will halt production of estrogen can lead to osteoporosis (bone loss), kolesterolemia and heart disease. Basil  herbs  contain  chemicals  suspected  of  having  estrogenic  activity.  This  study  aims  to determine the optimum dose estrogenic activity and n-hexane extractof herbs basil ( Ocimum americanum L.). animal testing is used 25 female rats were divided into 5 treatment groups. The  result  showed  that  all  three  doses  of  n-hexane  extract  of  basil  herbs  have  estrogenic activity. The average increase in estrous cycle in groups III, IV and V was 143 hours, 144,6 hours,  and  148,6  hours,  while  the  average  of  scoring  against  ovarian  and  uterine vascularitation in group III, IV and V are 2,2; 2 and 2,4. In weighing the ovaries and uterus weights on average in groups III, IV and V are 1,36 g, 1,72 g and 1,7 g. From the above result it can be oncluded that n-hexane extracts of basil herb can cause estrogenic activity with an effective dose of 0,2 g/200g BW.
Key words: Basil ( Ocimum americanum L.), estrogen wung, n-Heksan

## PENDAHULUAN
Pada usia antara 45 tahun hingga 55 tahun umumnya wanita mengalami keadaan yang disebut menopause. Menopause  adalah  keadaan  dimana  siklus menstruasi  terhenti  yang  diawali  dengan menstruasi  yang  tidak  teratur.  Hal  ini disebabkan  kelenjar  gonadotropin  pada wanita  sudah  tidak  menjalankan  tugasnya lagi  dalam  mempengaruhi  kerja  ovarium untuk  memproduksi  hormon  estrogen. Menopause  sering  menimbulkan  keluhan- keluhan antara lain rasa panas, kemampuan tubuh  melemas,  rasa  takut,  perasaan depresi dan rasa pening (Mutschler, 1991).
Estrogen pada wanita akan berperan dalam  pembentukan  kontur  tubuh,  juga mampu mengurangi proses resorpsi kalsium  tulang  sehingga  kepadatan  tulang dapat  dipertahankan.  Estrogen  juga  dapat meningkatkan  trigliserid  dan  menurunkan
kolesterol  total  plasma  meskipun  ringan. Produksi estrogen yang terhenti akan dapat mengakibatkan  osteoporosis  (kerapuhan tulang), kolesterolemia dan penyakit jantung.
Estrogen  telah  banyak  digunakan sebagai salah satu alternatif dalam pengobatan.  Penggunaan  estrogen  sintetis secara  berlebihan  dan  terus  menerus  akan menimbulkan  efek  samping  yang  memba- hayakan  bagi  manusia  seperti  kanker endometrium (Gunawan, 2007).
Menyadari pentingnya estrogen untuk  kesehatan  dan  untuk  mengurangi efek samping penggunaan estrogen sintetis yang  tidak  diinginkan  maka  pada  saat  ini banyak  dikembangkan  produk  herbal  yang mempunyai  khasiat  sebagai  fitoestrogen. Salah satu tanaman yang diduga mempunyai  khasiat  fitoestrogen  adalah kemangi.
Ekologia , Vol. 14  No.2 , Oktober  2014:40-45
Kemangi  juga  dapat  dimanfaatkan sebagai peluruh air susu ibu (ASI), peluruh kentut,  peluruh  haid,  menurunkan  demam juga mengurangi aroma tubuh yang kurang sedap.  Kemangi  dapat  memperlancar peredaran  darah  sehingga  dapat  membuat kulit cantik, sehat dan halus. Minyak atsiri yang  terkandung  dalam  kemangi  berfungsi sebagai pembunuh bakteri seperti
Staphylococcus
aureus , Salmonella
enteritidis dan
Escherichia coli (Kurniawati, 2010).
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Effendi,  EM.  dkk  (2011), dimana aktivitas  estrogenik herba kemangi ( Ocimum  americanum L.)  ditentukan  oleh kandungan  steroid  yang  diperoleh  dari hasil  ekstraksi  dengan  etanol  70%.  Dosis optimum  yang  dapat  menimbulkan  efek estrogenik  yaitu  pada  dosis  0,8g/200gBB yang  sebanding  dengan  kontrol  positif ethinyl estradiol dosis 9x10 -3 mg/200gBB. Steroid adalah senyawa yang bersifat  non  polar,  oleh  karena  itu  pelarut yang  digunakan  untuk  memaksimalkan penarikan  steroid  pada  herba  kemangi sebaiknya  juga  pelarut  yang  memiliki  sifat non polar seperti n-heksan yang telah diuji menggunakan GC-MS dimana pada ekstrak dengan pelarut n-heksan ditemukan senyawa dengan kemiripan terhadap senyawa  steroid  99%  bila  dibandingkan dengan pelarut etil asetat dan etanol 70%.

## BAHAN DAN METODE
Bahan Tikus putih betina ( Rattus norvegicus ) galur Sprague Dawley varietas ke-3  (sudah  pernah  melahirkan)  usia  8-9 bulan  dengan  bobot  badan  berkisar  200- 250g sebanyak 30 ekor, 5 ekor tikus jantan, NaCl  fisiologis,  ethynil  estradiol  (Lynoral tablet),  aquadest,  herba  kemangi  ( Ocimum americanum L.),  pewarna  giemsa,  CMC Na, n-heksan, eter.

## Metode Penyediaan Simplisia
Herba  kemangi  yang  telah  dicuci bersih,  ditiriskan  untuk  membebaskan  dari sisa-sisa  air  cucian,  kemudian  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  di  bawah sinar  matahari  tidak  langsung.  Setelah kering kemangi diserbukkan menggunakan alat  (grinder)  hingga  menjadi  serbuk kemudian  diayak  menggunakan  mesh  20 setelah  itu  disimpan  dalam  wadah  tertutup rapat.

## Penetapan Kadar Air
Cawan  kosong  ditimbang  dan ditambahkan  serbuk  sebanyak  2-3  g kemudian  dimasukkan  ke  dalam  oven bersuhu  100-105°C  selama  2  jam.Cawan yang  telah  terisi  tadi  didinginkan  di  dalam eksikator, beberapa saat kemudian ditimbang. Kemudian dimasukkan kembali dalam oven selama 1 jam, lalu didinginkan kembali  dalam  eksikator  dan  ditimbang sampai  mencapai  berat  konstan  yaitu dilakukan  tiga  kali  penimbangan  (Depkes RI, 1978).

## Uji Fitokimia a. Senyawa Alkaloid
Sebanyak 100 mg ekstrak ditambah HCl  10%  dan  amonia  encer  hingga  pH  8, kemudian disarikan dengan kloroform. Sari kloroform  diuapkan  sampai  kering,  sisa dilarutkan  dalam  HCl  dan  larutan  tersebut dibagi  dalam  empat  tabung.  Tabung pertama  digunakan  sebagai  pembanding, tabung ke dua ditambahkan pereaksi Mayer terbentuk  endapan  putih,  tabung  ke  tiga ditambahkan pereaksi
Dragendroff terbentuk  endapan  jingga  dan  tabung keempat ditambahkan
Bouchardat terbentuk endapan  coklat  (Penentuan dilakukan duplo).
b. Senyawa Saponin
Sebanyak 100 mg ekstrak dimasukkan ke dalam tabung lalu diencerkan  dengan  air,  kemudian  dikocok kuat selama 10 menit. Keberadaan senyawa
golongan saponin ditunjukkan oleh terben- tuknya  busa  yang  stabil  dan  busa  tetap stabil  setelah  penambahan  1  tetes  HCl  1% (encer). (Penentuan dilakukan duplo)

## c. Senyawa Flavonoid
Sebanyak 100 mg ekstrak ditambah 100  ml  air  panas  kemudian  dididihkan selama 5 menit, disaring sehingga diperoleh  filtrat  yang  digunakan  sebagai larutan  percobaan.  5  ml  larutan  percobaan ditambahkan  serbuk  magnesium  dan  1  ml HCl  pekat,  selanjutnya  ditam-bahkan amilalkohol,  campuran  tersebut  dikocok dengan kuat dan dibiarkan hingga memisah.  Terbentuknya  warna  merah, kuning atau jingga dalam larutan amilalkohol  menunjukkan adanya senyawa golongan  flavonoid  (Penentuan  dilakukan duplo).

## d. Senyawa Steroid
Sebanyak 100 mg ekstrak dimasukkan ke dalam tabung lalu ditambahkan pereaksi Lieberman Bouchard. Terbentuknya warna merah atau cincin hijau menunjukkan adanya senyawa golongan
steroid atau tripernoid (Penentuan dilakukan duplo).
e. Senyawa Tanin
Sebanyak 100 mg ekstrak diencerkan  dengan  air  dan  larutan  tersebut ditambahkan pereaksi FeCl 3 . Terbentuknya warna  biru  tua  atau  hijau  kehitaman menunjukkan adanya golongan tanin (Penentuan dilakukan duplo).
Pembuatan Ekstrak n-Heksan Herba Kemangi
Sebanyak 200g serbuk herba kemangi yang  telah  diayak  dengan mengunakan  mesh  20,  diekstrak  dengan menggunakan  metode  maserasi,  dengan menggunakan 2L n-Heksan (1:10), didiam- kan dalam tabung selama 3 hari. Kemudian disaring dan ampasnya dimaserasi kembali
sebanyak  2  kali  dengan  perlakuan  yang sama.  Ekstrak  yang  diperoleh  dievaporasi dengan  menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  30-40°C  untuk  memperoleh ekstrak kental.

## Persiapan Hewan Coba
Hewan  percobaan  yang  digunakan adalah  25  ekor  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  betina  galur Sprague  Dawley pre-menopause  dengan  kondisi  kesehatan yang  baik  dan  sudah  pernah  dikawinkan, berat  rata-rata  200-250g.  Dari  jumlah tersebut  dibagi  menjadi  5  kelompok perlakuan,  masing-masing  5  ekor  dalam tiap kandang.
Sebelum digunakan untuk penelitian,  semua  tikus  diadaptasikan selama  1  minggu.  Selanjutnya  untuk menyeragamkan  birahi  dilakukan  metode Whitten  Effect dengan  cara  meletakkan kandang tikus jantan di  atas kandang tikus betina.

## Pengambilan Sampel Preparat Ulas
Vagina ( Vagina Smear ) Vagina  Smear yang  dilakukan  2 kali sehari setiap 12 jam dengan cara kapas ( cotton  bud )  yang  telah  dibasahi  dengan NaCl  fisiologis  diulaskan  ke  dalam  lubang vagina  tikus  kemudian  diusapkan  di  atas objek  gelas  dan  difiksasi  menggunakan metanol 10% selama 5 menit. Preparat ulas diwarnai  menggunakan  Giemsa  selama  30 menit,  kemudian  dicuci  dengan  akuades lalu  dikeringkan  dan  dilihat  dibawah mikroskop (Hafez, 1980).

## Penentuan Aktivitas Estrogenik
Untuk
penentuan aktivitas estrogenik  25  ekor  tikus  dibagi  menjadi  5 kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus dimana K1 (kontrol positif  dengan  ethinyl  estradiol  (Lynoral tablet)  9x10 -3 mg/200gBB),  K2  (kontrol negatif CMC Na 1%/200gBB), K3 (ekstrak n-heksan    herba  kemangi  0,2g/200gBB),
K4  (ekstrak  n-heksan  herba  kemangi 0,4g/200gBB), K5 (ekstrak n-heksan herba kemangi 0,8g/200gBB). Pemberian ekstrak herba kemangi pada tikus dilakukan selama 7 hari berturut-turut yang dimulai pada fase estrus tikus  yang terlihat dari preparat ulas vagina  tikus.Pada  hari  ke  8  dilakukan dekapitasi  hewan  coba  tersebut  untuk mengamati vaskularisasi uterus dan ovarium serta menimbang bobot keduanya. Dihitung waktu yang diperlukan untuk satu siklus estrus.

## Rancangan Penelitian
Untuk memperoleh
suatu kesimpulan  pengaruh  estrogenik dari ekstrak n-heksan herba kemangi pada tikus putih  betina  dapat  menimbulkan  aktivitas estrogenik,  maka  data  yang  diperoleh dianalisa  dengan  menggunakan  analisis ragam  untuk  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dengan  lima  perlakuan  dan  lima ulangan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pembuatan Simplisia Herba Kemangi
Herba  kemangi  yang  dibutuhkan sebanyak  25  kg  yang  setelah  dikeringkan diperoleh  2,2  kg  simplisia  herba  kemangi. Kadar air simplisia diukur dengan moisture balance sebesar  4,72%,  kadar  air  ini memenuhi  persyaratan  kadar  air  untuk simplisia herba kemangi (Depkes, 2000).
Pembuatan  Ekstrak  n-Heksan  Herba Kemangi
Simplisia yang telah diayak kemudian  dimaserasi  dengan  pelarut  n- heksan  sebanyak  22  liter  (1:10)  diperoleh ekstrak  herba  kemangi  sebanyak  68g dengan  nilai  rendemen  sebesar  3,09%. Kadar  air  ekstrak  n-heksan  herba  kemangi sebesar  6,47%  yang  diukur  dengan moisture balance.

## Hasil Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  yang  telah  dilakukan pada simplisia menunjukan adanya kandungan steroid , alkaloid, saponin, tanin dan  flavonoid.  Uji  terhadap  ekstrak  n- heksan herba kemangi menunjukan adanya kandungan  steroid,  flavonoid  dan  alkaloid, akan  tetapi  tidak  teridentifikasi  adanya saponin  dan  tanin.  Hal  ini  disebabkan karena  senyawa  tersebut  lebih  bersifat polar sehingga tidak tertarik oleh pelarut n- heksan yang bersifat non polar.

## Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  n-Heksan Herba  Kemangi  Terhadap  Perubahan Waktu Siklus Estrus
Hasil  pengujian  ekstrak  n-heksan herba  kemangi  terhadap  perubahan  waktu siklus  estrus  tikus  menunjukan  bahwa kontrol  negatif  CMC  Na  1%  memberikan waktu  siklus  estrus  yang  paling  rendah yaitu  110,6  jam.  Pemberian  ekstrak  n- heksan  herba  kemangi  dosis  0,8  g  /200  g BB  memberikan  perubahan  waktu  siklus estrus  yang  paling  besar  yaitu  148,6  jam. Dari  perlakuan  kontrol  positif  maupun pemberian ekstrak n-heksan herba kemangi semua  menunjukan    hasil  yang  sangat berbeda  nyata  (P<0.01)  bila  dibandingkan dengan kontrol negatif. Hal ini membuktikan  bahwa  pemberian  ekstrak  n- heksan herba kemangi dapat meningkatkan hormon  estrogen  sehingga  menyebabkan peningkatan panjang siklus estrus.
Peningkatan  estrogen  ini  tidak  secara langsung  mempengaruhi  panjang  siklus estrus  akan  tetapi  mampu  meningkatkan perkembangan  folikel  sehingga  folikel yang  matang  di  ovarium  semakin  banyak dengan  demikian  hormon  estrogen  yang disekresikan  juga  akan  semakin  banyak sehingga  cenderung  akan  memperpanjang siklus estrus.
Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  n-Heksan Herba Kemangi Terhadap Vaskularisasi Ovarium dan Uterus
Data  yang  dihasilkan  menunjukkan bahwa  semua  perlakuan  termasuk  kontrol positif  dan  kontrol  negatif  memberikan hasil  skoring  vaskularisasi  ovarium  dan uterus  yang  tidak  berbeda  nyata.  Hasil skoring yang paling rendah ditunjukan oleh pemberian ekstrak n-heksan herba kemangi dosis 0,2 g/200 g BB dengan nilai rata-rata 2.  Pemberian  ekstrak  n-heksan  herba kemangi dosis 0,8 g/200 g BB memberikan skor paling tinggi yaitu rata-rata 2,4.
Pemberian ekstrak dosis 0,4 g/200 g BB  telah  memberikan  pengaruh  yang setara  dengan  kontrol  positif  ethinyl estradiol dosis 9 x 10 -3 mg/200 g BB dalam meningkatkan  vaskularisasi  ovarium  dan uterus. Vaskularisasi ini ditunjukan dengan perubahan  warna  yang  terdapat  di  mukosa ovarium  dan  uterus  yang  terjadi  akibat peningkatan  jumlah  estrogen.  Estrogen yang  dihasilkan  oleh  ovarium  akan menstimulasi pembentukan lapisan endometrium dinding uterus yang kemudian  membentuk  pembuluh  darah baru dan sel-sel penghasil mukus sehingga uterus  cenderung  menebal  dan  berwarna merah.

## Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  n-Heksan Herba  Kemangi  Terhadap  Peningkatan Bobot Ovarium dan Uterus
Hasil yang diperoleh terlihat bahwa pada  kelompok  kontrol  positif  yang diberikan  ethinyl  estradiol  menunjukan bobot  ovarium  dan  uterus  yang  paling rendah  dibanding  keempat  kelompok perlakuan  yang  lain  yaitu  1,26  g. Kelompok  perlakuan  ekstrak  n-heksan herba  kemangi  dengan  dosis  0,4  g/200  g BB  menghasilkan  peningkatan  bobot ovarium  dan  uterus  yang  paling  tinggi sebesar  1,72  g.  Pengaruh  pemberian ekstrak  n-heksan  herba  kemangi  tidak berbeda nyata pada setiap perlakuan.
Hasil  tersebut  menunjukan  bahwa ekstrak  n-heksan  herba  kemangi  dengan dosis  0,2  g/200  g  BB  telah  setara  dengan ethinyl  estradiol  dosis  9  x  10 -3 mg/200  g BB sebagai kontrol positif dalam meningkatkan  bobot  ovarium  dan  uterus tikus. Hal ini membuktikan bahwa fitoestrogen  dapat  meningkatkan  bobot ovarium  dan  uterus  tikus  yang  disebabkan oleh  sifat  estrogen  yang  mampu  menim- bulkan  proliferasi  dan  pertumbuhan  sel jaringan  organ  seksual  pada  sistem reproduksi  yang  secara  tidak  langsung berpengaruh  pada  peningkatan  bobot jaringan  tersebut.  Hasil  ini  juga  sebaiknya dibuktikan  dengan  pemeriksaan  histologi jaringan  agar  dapat  dipastikan  bahwa peningkatan  bobot  ovarium  dan  uterus disebabkan oleh peningkatan jumlah folikel dalam ovarium dan uterus.

## SIMPULAN
1. Ekstrak n-heksan herba kemangi ( Ocimum americanum L.) dapat menimbulkan  aktivitas  estrogenik  pada organ target estrogen tikus putih ( Rattus norvegicus ) usia 8-9 bulan.
2. Ekstrak n-heksan herba kemangi ( Ocimum  americanum L.)  dosis  0,4 g/200  g  BB  dapat  meningkatkan  bobot ovarium dan uterus tikus.
3. Ekstrak n-heksan herba kemangi ( Ocimum  americanum L.)  dosis  0,2 g/200 g BB dapat memperpanjang siklus estrus  tikus  putih  betina  usia  8-9  bulan yang  sebanding  dengan  kontrol  positif Ethinyl Estradiol 9 x 10 -3 mg/200 g BB.

## SARAN
 Perlu  dilakukan  pemeriksaan  serum darah  tikus  dengan  metode bioassay guna  mengetahui  kadar  estrogen  dalam darah.
 Perlu  dilakukan  pemeriksaan  histologi terhadap  ovarium  dan  uterus  tikus  guna mengetahui pengaruh pemberian ekstrak
n-heksan herba kemangi terhadap peningkatan jumlah folikel.
 Perlu  dilakukan  pemeriksaan  lebih lanjut  terhadap  organ  hati  dan  ginjal guna  mengetahui  toksisitas  ekstrak  n- heksan herba kemangi pada tubuh.

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes RI. 1989. Materia Medika Indonesia , Edisi V. Jakarta. Effendi, E.M., H. Maheswari, M.I.M. Indra 20111).  Uji  aktifitas  Estrogenik Ekstrak Etanol 70% Herba
Kemangi  ( Ocimum  americanum , L.)  Pada  Tikus  Putih  ( Rattus norvegicus ) Betina Pre- Menopause.  Jurnal  Fitofarmaka Vol. 1 (1): 1-6. ______ .2000. Parameter  Standar  Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat .Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta Gunawan,  S.  G.  2007. Farmakologi  dan Terapi , Edisi 5.Departemen Farmakologi dan Terapeutik UI.Gaya Baru. Jakarta Hafez,  E.  S.  E.  1980. Reproduction  in Farm Animal , 4 th Edition. Philadelphia: 30-78
Kurniawati,  N.  2010. Sehat  dan  Cantik Berkat  Khasiat  Bumbu  Dapur . Qanita. Jakarta
Mutschler,  E.  1991. Dinamika  Obat , Buku Ajar Farmakologi dan
Toksikologi, Edisi  V.  Penerbit ITB. Bandung: 364-370.