## Pengaruh Ekstrak Etanol Terhadap Peningkatan Konsentrasi Hemoglobin dan Nilai Hematokrit Ikan Kerapu Tikus

## Saparuddin
Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Sembilanbelas November Kolaka e-mail: Saparuddin_pbio@usn.ac.id

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efektifitas  penggunaan  ekstrak  daun M.  tanarius yang dicampur dengan pakan ikan komersil yang menginaktifkan VNN yang diukur  berdasarkan  kadar  hemoglobin  dan  nilai  hematokrit  ikan  kerapu  tikus (Cromileptes  altivelis).  Dalam  penelitian  ini  digunakan  Desain  Rancangan  Acak Kelompok.  Dua  puluh  lima  ekor  ikan  kerapu  tikus  yang  terinfeksi  VNN  dengan  berat badan  rata-rata  824,4  ¬+  156,23  g  dibagi  dalam  5  kelompok  keramba  jaring  apung, masing-masing  kelompok  berisi  5  ekor  ikan.  Perlakuan  1,  2,  3  dan  4  masing-masing diberikan ekstrak daun   M. tanarius dicampur dengan pakan ikan komersil berturut-turut 2 g, 3 g, 4 g, 5 g dan ikan kontrol hanya diberikan pakan ikan komersil. Masing-masing ikan  dari  semua  kelompok  diambil  darahnya  melalui  vena  caudalis.  Hasil  penelitian antara ikan perlakuan dan kontrol menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius efektif  secara  signifikan  menaikkan  kadar  hemoglobin  dan  nilai  hematokrit  serta memberikan  perbedaan  yang  signifikan  dengan  kelompok  kontrol.  Jumlah  kadar hemoglobin  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  ke-3  (11,96  gr%),  sedangkan  nilai hematokrit  tertinggi  pada  perlakuan  ke-3  (38,12%).  Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol daun M. tanarius melalui pemberian pakan dapat menginaktivasi VNN pada ikan kerapu tikus ditandai dengan meningkatkan kadar hemoglobin dan nilai hematokrit ikan kerapu tikus.
Kata kunci : Ikan kerapu tikus, kadar hemoglobin, nilai hematokrit, M. tanarius dan VNN
1. PENDAHULUAN
Budidaya ikan  kerapu tikus (Cromileptes altivelis) dewasa ini berkembang dengan pesat mengingat tingginya permintaan konsumen terhadap ikan tersebut. Namun, yang menjadi kendala  bagi  para  petani  budidaya  ikan  kerapu  tikus  adalah  munculnya  Viral  Nervous Necrosis  (VNN).    Hal  ini  disebabkan  karena  pakan  yang  digunakan  oleh  para  petani budidaya  masih  menggunakan  ikan  rucah.  Rizka  et  all.  (2013)  menyatakan  bahwa pemberian pakan dengan ikan rucah pada usaha budidaya ikan kerapu tikus menyebabkan terinfeksi  VNN.  Jenis  virus  ini  adalah  jenis  Nodaviridae  yang  dapat  menyebabkan kematian massal hingga 100% dalam budidaya.
Infeksi  VNN  pada  organ  otak  ikan  kerapu  tikus  berlangsung  dengan  cepat  dan langsung  menyerang  reseptor  sel  saraf  ikan,  karena  VNN  adalah  virus  yang  tidak mempunyai  envelope,  kemudian  virus  menyebar  ke  seluruh  tubuh  dan  otak  melalui sirkulasi  darah.  Chi  (2006)  menyatakan  bahwa  VNN  menyerang  otak  melalui  sirkulasi darah.
Gejala-gejala  ikan  yang  terinfeksi  VNN  antara  lain  berenang  tidak  normal  (berputar- putar),  gerakan  lemah,  nafsu  makan  berkurang,  pembesaran  gelembung  renang  pada beberapa species ikan, warna tubuh menjadi kehitaman, tubuh ikan menukil kebawa, ikan menabrak dinding kolam, penutupan selaput mata, mengalami buta dan pelemahan syaraf dan akhirnya ikan mati dalam Chi (2006) dan Yanuhar (2009).
Lagler  et  all  (1977)  menyatakan  bahwa  Sel  dan  cairan  darah  (plasma  darah) merupakan  aspek diagnosa yang penting untuk dikaji, karena aspek tersebut mempunyai peran  fisiologis  yang  sangat  penting  serta  mampu  menggambarkan  kondisi  kesehatan ikan.  Ikan  yang  terinfeksi  VNN  akan  ada  perbedaan  pada  konsentrasi  hemoglobin  dan nilai hematokrit.
Pemeriksaan  darah  ikan  merupakan  faktor  penting  dalam  membantu  diagnosis, prognosis, dan terapi Irianto (2005). Sejauh ini pemeriksaan darah ikan kerapu tikus dari aspek  hematologi  belum  banyak  yang  melaporkan.  Sehingga  untuk  mengetahui  status ikan  terinfeksi,  maka  perlu  dilakukan  pemeriksaan  karakteristik  darah,  yang  nantinya dapat digunakan sebagai solusi penanganan VNN pada ikan kerapu tikus.
Berdasarkan  studi  literatur  bahwa  Sampai  saat  ini  belum  ditemukan  suatu  cara yang  dapat  menekan  infeksi  VNN  pada  budidaya  ikan  kerapu  tikus.  Oleh  sebab  itu, diperlukan  suatu  upaya  alternatif  yang  dapat  mengatasi  infeksi  VNN  tersebut.  Ekstrak etanol daun M. tanarius  diketahui mengandung senyawa flavonoid, tannin, terpenoid dan lignan  Yana  dkk  (2007).  Senyawa  flavonoid  (quercetin,  morin,  rutin,  dan  hesperidin) memiliki kemampuan secara in vitro untuk menghambat siklus replikasi virus yaitu pada tahap adsorpsi dan penetrasi dalam Calvalho, dkk (2013). Senyawa tanin adalah polimer ditunjukkan  untuk  menghambat  pertumbuhan  virus  immunodeciency  human  (HIV)  dan virus  herpes  simpleks  (HSV)  dalam  Lee  dkk  (2000).  Senyawa-senyawa  tersebut merupakan  senyawa  bioaktif  yang  telah  teruji  secara  in  vitro  bersifat  sebagai  anti  virus. Namun,  secara  in  vivo  peran  senyawa  bioaktif  ini  belum  pernah  diteliti  khususnya  pada ikan kerapu tikus.
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka  perlu  dilakukan  penelitian  mengenai  peran senyawa ekstrak etanol daun M tanarius yang dapat menginaktifasi virus VNN pada ikan kerapu tikus yang diukur berdasarkan konsentrasi hemoglobin dan nilai hematokrit..

## 2. METODE PENELITIAN
Metode  kerja  dalam  penelitian  ini  dilakukan  dengan  6  tahapan  yaitu  1). Pengumpulan  dan  pengeringan  daun  M.  tanarius,  2)  Pembuatan  ekstraksi  daun  M. tanarius, 3). Penyemprotan ekstrak daun M. tanarius pada pakan ikan komersil, 4). Desain perlakuan  (eksperimen)  dan  pemeliharaan  ikan,  5).  Pengambilan  sampel  darah  ikan  dan 6). Pengamatan kadar hemoglobin dan nilai hematokrit ikan kerapu tikus.

## 2.1 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  daun  M.  tanarius  diawali  dengan  pengeringan  pada  suhu ruang  dan  dilanjutkan  dengan  penghalusan.  Serbuk  halus  kemudian  direndam  dengan menggunakan etanol 80% selama 24 jam  yang disertai dengan pengadukan. Selanjutnya larutan  disaring  menggunakan  corong  buchner  yang  dilapis  dengan  kertas  saring  untuk memisahkan  ampas  (residu)  dengan  filtrat  yang  mengandung  senyawa  yang  larut  dalam pelarut.  Penyaringan  ini  dilakukan  tiga  kali  secara  berulang  sampai  warna  campuran menjadi agak pudar. Pelarut kemudian dipisahkan dengan cara evaporasi pada suhu 60 oC lalu  didapat  hasil  ekstraksi  berupa  ekstrak  pekat.  Hasil  ekstrak  pekat  daun    M.  tanarius
diperoleh  kemudian  diletakkan  di  atas  water  bath  suhu  50oC  untuk  menghilangkan pelarutnya sehingga didapatkan ekstrak kental.

## 2.2 Desain Perlakuan  dan Pemeliharaan
Penelitian dilakukan dengan Rancangan Acak Kelompok (RAK), lima  perlakuan dan  lima  ulangan.  Disiapkan  lima  kelompok  Keramba  Jaring  Apung  (KJA),  dengan ukuran  masing-masing  kelompok  1x1x1,5  m.  Dikumpulkan  sebanyak  dua  puluh  lima ekor  ikan  kerapu  tikus  yang  terinfeksi  VNN,  sesuai  dengan  gejala-gejala  ikan  yang terinfeksi VNN. Rata-rata berat badan ikan kerapu tikus yang terkumpul adalah 824,4  -+ 156,23  g.  Ikan-ikan  tersebut  dikumpulkan  dari  petani  budidaya  ikan  kerapu  tikus  yang pemeliharaannya diberikan pakan ikan rucah. Setiap kelompok perlakuan diberikan 120 g pakan ikan komersil per hari (3% dari masing-masing berat badan ikan) dalam Yushinta dkk (2011).
Pemberian  pakan  dilakukan  2  kali  sehari.  Setiap  pemberian  seberat  60  g  pakan ikan komersil pada setiap kelompok perlakuan. Perlakuan 1, 2, 3, dan 4, masing-masing berturut-turut diberikan 2 g, 3 g, 4 g, dan 5 g ekstrak daun M. tanarius disemprotkan pada pakan  ikan  komersil,  sedangkan  perlakuan  kontrol  hanya  diberikan  pakan  ikan  komersil tanpa ekstrak daun M. tanarius. Pemberian pakan dilakukan setiap pukul 06.30 dan pukul 17.30 WITA. Perlakuan dilakukan selama 30 hari.

## 2.3 Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  ikan  kerapu  tikus  (C.  altivelis) dengan berat badan rata-rata 824,4 ¬+ 156,23 g. Hewan uji tersebut diperoleh dari  petani budidaya dengan diberikan pakan ikan rucah selama pemeliharaannya. Menurut Rizka et al.,  (2013)  bahwa  pemberian  pakan  dengan  ikan  rucah  akan  terinfeksi  VNN.  Hewan  uji diseleksi sesuai dengan gejala-gejala klinik yang disebabkan oleh VNN yaitu warna tubuh menggelap,  berenang  berputar-putar,  tubuh  ikan  menukil  kebawah,  ikan  menabrak dinding kolam, penutupan selaput mata, mengalami buta  dan pelemahan syaraf dan ikan mati (Yanuhar, 2011).

## 2.4 Perlakuan
Sebanyak  25  ekor  ikan  kerapu  tikus  yang  terinfeksi  VNN  dibagi  ke  dalam  5  kelompok jaring apung. Setiap kelompok berisi 5 ekor ikan dengan lima kali ulangan. Perlakuan 1, 2,  3  dan  4  masing-masing  diberikan  ekstrak  daun  M.  tanarius  dicampur  dengan  pakan ikan  komersil  berturut-turut  2  g,  3g,  4  g  dan  5g.  Ikan  kontrol  hanya  diberikan  pakan komersil.

## 2.5 Pengambilan Sampel Darah
Sampel  darah  diambil  pada  hari  ke-0,  hari-10,  hari  ke-20  dan  hari  ke-30  setelah pemberian  pakan  2  kali/hari.  Pengambilan  sampel  darah  menggunakan  syringe  melalui vena caudalis dekat ekor di antara sisik ikan kerapu tikus. Sampel darah dihisap perlahan sebanyak  3 mL setiap ekor,  kemudian dipindahkan ke dalam tabung  hampa  udara  yang telah dibasahi terlebih dahulu dengan antikoagulan.

## 2.6 Pengamatan Konsentrasi Hemoglobin
Penghitungan konsentrasi  hemoglobin  ikan  kerapu  tikus sebelum dan sesudah perlakuan dengan  pemberian  ekstrak  daun  M.  tanarius  dapat  diukur  dengan  menggunakan  metode Sahli.  Sistem  kerja  metode  ini  yaitu  dengan  mengamati  kesamaan  warna  sampel
perlakuan  dengan  warna  standar  pada  alat  sahli.  Untuk  mengamati  konsentrasi hemoglobin,  terlebih  dahulu  sampel  darah  ikan  kerapu  tikus  dari  semua  masing-masing kelompok  perlakuan  dihisap  dengan  menggunakan  pipet  sahli  sampai  skala  20  mm3. Ujung pipet yang digunakan dibersihkan dari sisa – sisa darah dengan kertas tissue. Darah dipindahkan  ke  dalam  tabung  sahli  yang  telah  diisi  dengan  larutan  HCl  0,1  N  sampai angka 10. Selanjutnya, cairan diaduk hingga homogen. Tabung sahli tersebut ditempatkan diantara 2 tabung yang berisi warna standar. Sedikit demi sedikit ditambahkan akuades ke dalam  tabung  sahli  dengan  menggunakan  pipet,  sampai  warnanya  sama  dengan  warna standar, dan hasilnya dinyatakan dalam gr% (Hesser, 1960).

## 2.7 Penghitungan Nilai Hematokrit
Nilai hematokrit digunakan untuk mengukur perbandingan antara eritrosit dengan plasma, sehingga  hematokrit  memberikan  rasio  total  eritrosit  dengan  total  volume  darah  dalam tubuh  ikan  kerapu  tikus.  Pengukuran  nilai  hematokrit  dilakukan  menggunakan  tabung mikrohematokrit  berupa  pipa  kapiler  yang  berlapis  heparin.  Sampel  darah  dialirkan  dari tabung hampa udara dengan menggunakan pipa kapiler hingga ¾ bagian kapiler. Ditutup pada  pipa  kapiler  dengan  bahan  penutup  (lilin)  pada  salah  satu  ujung  pipa  kapiler  agar pada  saat  disentrifuse  darah  tidak  keluar.  Pipa  kapiler  yang  berisi  darah  kemudian disentrifuse  dengan  kecepatan  1500  rpm  selama  5  menit.  Selanjtnya,  dilakukan pengukuran  dengan  membandingkan  bagian  darah  yang  mengendap  dengan  seluruh bagian  darah  yang  ada  di  dalam  tabung  mikrohematokrit.  Hasilnya  dinyatakan  dalam persen (%) (Angka dkk., 1985).

## 2.8 Analisis Data
Pengaruh  ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius  melalui  data  hematologi  ikan  kerapu tikus  dianalisis  secara  sidik  ragam  (ANOVA).  Jika  analisis  menunjukkan  berpengaruh nyata  atau  Fhitung>Ftabel,  maka  dilanjutkan  dengan  menggunakan  Uji  Beda  Nyata Terkecil (BNT) pada taraf kepercayaan 95%.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Ekstrak Tumbuhan M. tanarius
Tumbuhan  M.  tanarius  diambil  dari  hutan  Kabupaten  Buton  Tengah  Propinsi Sulawesi Tenggara. Bagian tumbuhan yang diambil adalah organ daun M. tanarius. Daun M.  tanarius  tersebut  dikeringkan  dengan  cara  dijemur  dibawah  sinar  matahari  hingga mengering  dan  dihaluskan  hingga  berbentuk  serbuk.  Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  M. tanarius dilakukan dengan metode maserasi atau perendaman. Ekstraksi daun M. tanarius menggunakan  pelarut  etano  80%  dengan  perbandingan  daun  M.  tanarius  dengan  pelarut etanol  1:3  dengan  metode  maserasi  (perendaman).  Maserasi  dilakukan  3x24  jam  untuk dapat  mengikat  senyawa  yang  terkandung  di didalam  daun  M.  tanarius  tersebut.  Setelah 24  jam  larutan  ini  disaring  dengan  menggunakan  corong  buchner  yang  dilapis  dengan kertas saring. Penyaringan ini dilakukan tiga kali secara berulang sampai warna campuran menjadi  agak  pudar.  Hasil  koleksi  ekstraksi  kemudian  dievaporasi  pada  suhu  60  oC dengan  tekanan  380  rpm  hingga  etanol  teruapkan  semua  dan  ekstrak  berbentuk  pasta seberat 830 g.

## 3.2 Hasil Pengamatan Konsentrasi Hemoglobin dan Nilai Hematokrit
Hasil  pengamatan  konsentrasi  hemoglobin  dan  nilai  hematokrit  selama pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius dengan dosis berbeda yang disemprotkan pada pakan  ikan  komersil  yaitu  P1  (2  gr),  P2  (3  gr),  P3  (4  gr)  dan  P4  (5  gr).  Sedangkan Perlakuan  kontrol  tanpa  pemberian  ekstrak.  Hasil  pengamatan  dapat  dilihat  pada  Tabel berikut
Tabel 1 konsentrasi hemoglobin dan nilai hematokrit Dosis Hemoglobin Hematokrit gr% % Kontrol 7.05  ± 0.69 a 25.79 ± 1.87 a P 1 (2 gr) 8.57  ± 2.39 ab 31.88 ± 3.91 b P 2 (3 gr) 8.77  ± 2.56 bc 34.07 ± 4.33 bc P 3 (4 gr) 11.96 ± 0.53 c 38.12 ± 4.31 c P 4 (5 gr) 11.25 ± 1.04 d 38.11 ± 3.2 c

## 3.3 Konsentrasi Hemoglobin
Hemoglobin  (Hb)  adalah  pigmen  merah  pembawa  oksigen  dalam  sel  darah merah, yang merupakan suatu protein yang kaya akan zat besi (Siakpere, 1985 dan Fange, 1994).  Virus  VNN  menginfeksi  ikan  kerapu  tikus  dengan  mengeluarkan  toksin    yang menyebabkan  aliran  darah    yang  bertugas    mengedarkan    nutrisi  dan  oksigen  terganggu sehingga  berkurangnya  kemampuan  hemoglobin  mengikat  oksigen.  Hemoglobin berfungsi untuk mengikat oksigen kemudian  digunakan dalam proses katabolisme untuk menghasilkan  energi.  Kemampuan  darah  untuk  mengangkut  oksigen  bergantung  pada kadar  hemoglobin  dalam  darah  (Lagler  dkk.,  1977).  Data  hasil  penelitian  menunjukkan peningkatan  konsentrasi  hemoglobin  pada  semua  Perlakuan  ekstrak  etanol  daun  M. tanarius  melalui  pemberian  pakan  sampai  pengukuran  hari  ke-30,  dimana  makin  tinggi dosis  Perlakuan  ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius,  maka  kadar  hemoglobin  ikan  uji  akan lebih tinggi.
Gambar 1 Rata-rata Konsentrasi Hemoglobin ikan kerapu tikus selama 30 hari pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius. Huruf yang sama (a, ab, b, c dan d) pada kolom yang sama menunjukkan tidak beda nyata (P<0,05)
Hasil  analisis  statistik  menunjukkan  kadar  hemoglobin  pada  Perlakuan  kontrol tidak  berbeda  nyata  (P<0,05)  dengan  Perlakuan  1,  tetapi  berbeda  nyata  dengan  ketiga Perlakuan  lainnya.  Perlakuan  1  tidak  berbeda  nyata  dengan  Perlakuan  2,  tetapi  tidak berbeda  nyata  dengan  Perlakuan  3  dan  Perlakuan  4.  Perlakuan  2  tidak  berbeda  nyata dengan  Perlakuan  3,  tetapi  berbeda  nyata  dengan  4.  Kenyataan  ini  menunjukkan  bahwa pengaruh  ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius  pada  dosis  yang  tinggi  secara  nyata  dapat meningkatkan kadar hemoglobin darah ikan kerapu tikus.
Kadar  hemoglobin  paling  tinggi  ditemukan  pada  Perlakuan  3,  selanjutnya Perlakuan  4;  Perlakuan  2;  Perlakuan  1  dan  Perlakuan  kontrol  dengan  presentase  secara berturut-turut  11,96  gr%;  11,25  gr%;  8,77  gr%;  8,57  gr%;  dan  7,05  gr%.  Hal  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  Bastwain  dkk.  (2001)  bahwa  nilai  hemoglobin  ikan  normal berkisar antara 10 – 14 gr%. Secara fisiologis, hemoglobin menentukan tingkat ketahanan tubuh  ikan  dikarenakan  hubungannya  yang  erat  dengan  adanya  daya  ikat  terhadap oksigen oleh darah. Peningkatan kadar hemoglobin pasca pemberian ekstrak etanol daun M.  tanarius  menunjukkan  meningkatnya  nafsu  makan  dan  aliran  darah    semakin  lancar untuk  mengedarkan    nutrisi  dan  oksigen  dalam  tubuh  ikan  seiring  dengan  berkurangnya tekanan infeksi VNN pada ikan kerapu tikus.

## 3.4 Nilai Hematokrit
Kadar  hematokrit  merupakan    perbandingan  antara  sel  darah  merah  dengan plasma  darah,  serta  berpengaruh  terhadap  pengaturan  sel  darah  merah.  Pengukuran  ini merupakan  persentase  eritrosit  dalam  darah  lengkap  setelah  spesimen  darah disentrifugasi. Hasil pengukuran menunjukkan peningkatan kadar hematokrit pada semua Perlakuan  dengan  memberikan  ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius  sampai  pengukuran  hari ke-30,  dimana  makin  tinggi  Perlakuan  dosis  ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius  yang diberikan  melalui  pakan,  maka  kadar  hematokrit  ikan  uji  akan  lebih  tinggi  mendekati normal.  Berbeda  dengan  Perlakuan  kontrol,  kadar  hematokrit  hingga  hari  ke-30  terukur menunjukkan nilai yang relatif stabil.
Gambar 2 Rata-rata Nilai hematokrit ikan kerapu tikus selama 30 hari pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius. Huruf yang sama (a, b, bc, dan c) pada kolom yang sama menunjukkan tidak beda nyata (P<0,05).
Kadar  hematokrit  ikan  uji  pada  Perlakuan  1  tidak  berbeda  nyata  dengan Perlakuan 2, tetapi berbeda nyata dengan Perlakuan 3 dan Perlakuan 4. Kadar hematokrit pada Perlakuan ke-2 tidak berbeda nyata dengan Perlakuan ke-3 dan ke-4, tetapi berbeda nyata dengan Perlakuan kontrol. Kenyataan ini menunjukkan bahwa pengaruh pemberian ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius  dicampur  dengan  pakan  ikan  komersil  dapat meningkatkan kadar hematokrit darah pada ikan kerapu tikus yang terinfeksi VNN. Kadar  hematokrit  paling  tinggi  ditemukan  pada  Perlakuan  3,  selanjutnya  Perlakuan  4; Perlakuan  2;  Perlakuan  1  dan  Perlakuan  kontrol  dengan  persentase  secara  berturut-turut 38.12%;  38.11%;  34.07%;  31.88%;  dan  25.79%.  Hasil  analisis  statistik  menunjukkan kadar  hematokrit  pada  Perlakuan  kontrol  berbeda  nyata  (P<0,05)  dengan  keempat Perlakuan  lainnya.  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  penelitian  Bastwain  dkk  (2001)  bahwa nilai hematokrit ikan normal berkisar antara 30,8 – 45,5%. Pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius pada ikan kerapu tikus sampai pengukuran hari ke-30 memberikan pengaruh yang  signifikan  terhadap  peningkatan  kadar  hematokrit  menjadi  normal,  seiring  dengan meningkatnya jumlah eritrosit dan nilai hemoglobin.
Hasil  pemeriksaan  konsentasi  hemoglobin  dan  nilai  hematokrit  antara  ikan Perlakuan dan kontrol menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius efektif secara signifikan.  Pengukuran  konsentrasi  hemoglobin  dan  nilai  hematokrit  dari  hari  ke-0 sampai hari ke-30 menunjukkan bahwa konsentrasi hemoglobin terendah pada Perlakuan kontrol  (7.05  g%)  dan  tertinggi  pada  Perlakuan  3  (11,96  gr%),  dan  nilai  hematokrit terendah pada Perlakuan kontrol (25.79 %) dan tertinggi pada Perlakuan 3 (38,12 %).
4. KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  M.  tanarius  melalui  pemberian pakan  terindikasi  mampu  menginaktivasi  VNN  pada  ikan  kerapu  tikus,  yang  ditandai dengan  meningkatnya  konsentrasi  hemoglobin  dan  nilai  hematokrit  mendekati  jumlah normal ikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Andayani,S.,  Marsoedi.,  Sanoesi,E.,  Wilujeng.A.E.,  dan  H.  Suprastiani.  2008.  Profil Hematologi Beberapa Ikan Air Tawar Budidaya. Jurusan MSP, Fakulstas  Perikanan dan Kelautan, UB Malang.
Angka SL, GT Wongkar, Karwani. 1985. Blood Picture and Bacteria Isolated From Ulcered  and  Crooked-Black  Clarias  Batrachus.  Symposium  On  Pract.  Measure  for Preventing and Controlling FishDisease. BIOTROP. 17 P.
Azhar.  F.,  Pengaruh  Pemberian  Probiotik  dan  Prebiotik  Terhadap  Performan  Juvenile Ikan  Kerapu  Bebek  (Cromileptes  altivelis).  Laboratorium  Kesehatan  Ikan.  Institut Pertanian Bogor . Bogor16680.
Bastiawan,  D;  A.  Wahid;  M.  Alifudin,  dan  I.  Agustiawan.  2001.  Gambaran  Darah  Lele dumbo  (Clarias  spp.)yang  Diinfeksi  Cendawan  Aphanomyces  sppada  pH  yang Berbeda. Jurnal penelitian Indonesia 7(3): 44-47.
Bijanti,  R.  2005.  Hematologi  Ikan  :  Teknik  Pengambilan  Darah  dan  Pemeriksaan Hematologi  Ikan.  Bagian  ilmu  kedokteran  hewan  veteriner.  Fakultas  Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga.
Carvalhoa,  C.,  Botelhoa,  C.,  Ferreiraa,  H.,  Ferreiraa,  M.R.,  Santosa,  M.,  Diazb,  T., Oliveirab,  J.A.,  Soares-Martinsc,  M.,  Almeidab,  A.,    Silva  Júnior.  2013.  .  In  vitro inhibition of canine distemper virus by flavonoids and phenolic acids:Implications of structural  differences  for  antiviral  design.  Laboratório  de  Virologia  Animal  (LVA), Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG, Brazil. Chi,  S. C. 2006. Piscine Nodavirus Infections in Asia. First International Symposium on
Viral  Nervous  Necrosis  of  Fish  International  Conference  Center,  Hiroshima, November 28 to December 1, 2006.
Dugencie,  S.  K.,  Arda,  N  and  A.  Canda.  2003.  Some  Medicinal  Plants  as Immunostimulant for fish. Journal of ethnopharmacology, (88), 99-106.
Esteban, M. A., Cuesta, A., Betuna, J and J. Meseguer. 2001. Immunomodullatory effects oddietary  intake  of  chitin  on  Gilthead  Seabream  (Sparus  aurata  L)Innate Immunesystem. J. Fish and Shellfish Immunology. Vol 11, 303-313.
Fange, R. 1994. Blood Cell, Haemopoiesis and Lymphomyeloid tissues in fish. Journal of fish and shellfish Immunology. Vol 10, 234-244.
Formica,  J.V.,  Regelson,  W.,  1995.  Review  of  biology  of  quercetin  and  related bioflavanoids. Food and Chemical Toxicology 33, 1061 – 1080
Hesser EF. 1960. Methods for Routine Fish Hematology. Progressive Fish Culturist. Irianto Agus. 2005. Patologi Ikan Teleostei. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Kabata,  Z.  1985.  Parasites  and  Disease  of  Fish  Cultured  in  the  Tropics.  Taylor  and
Frandhis Ltd. London. 318p.
Lagler  KF,  Bardach  JE,  RR  Miller,  Passino  DRM.  1977.  Ichthyology.  John  Willey  and Sons. Inc. new York-London. Hlm 506.
Lee, M. H.,  Jwo-Farn Chiou., Kun-Ying Yen., Yang, L.L., 2000. EBV DNA polymerase inhibition  of  tannins  from  Eugenia  uniflora.  Graduate  Institute  of  Pharmacognosy Science, Taipei Medical College, 250 Wu-Hsing Street, Taipei 110, Taiwan
Lim,  T.Y.,    Lim,  Y.Y.,  C.M.  Yule,  C.M.,  2008.  Evaluation  of  antioxidant,  antibacterial and  anti-tyrosinase  activitiesof  fourMacarangaspecies.  School  of  Science,  Monash University  Sunway  Campus,  Jalan  Lagoon  Selatan,  Bandar  Sunway,  46150  Petaling Jaya, Selangor, Malaysia.
Rizka R P, Yanuhar U, Suryanto A M.2013. Perubahan Struktur Jaringan Mata dan Otak pada  Larva  Ikan  Kerapu  Tikus  (C.  altivelis)  Yang  Terinfeksi  Viral  Nervous  (VNN) Dengan  Pemeriksaan  Scanning  Electro  Microscope  (SEM).  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya. Malang.
Siakpere,  O.K.  1985.  Haematological  Characteristics  of  Clarias  Fisheriensis.  S.J  Fish Biology, Vol 27 (3), 259-264.
Uribe  C,  Folch  H  Enriquez  R,  dan  Moran  G.  2001.  Innate  and  adaptive  immunity  in teleost fish: a riview. Veterinari Medicina 56 (10):484-503.
Yanuhar,  U.  2011.  The  Function  of  Receptor  Protein  Humpback  Grouper    Cromileptes altivelis  in Expression and Proliferation of CD4 and CD8 cells in Defence Immunity of  Viral  Nervous  Necrotic  Infection.  International  Journal  of  Bioscience, Biochemistry and Bioinformatics, Vol. 1, No. 2.