## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Spons Stylissa carteri dari Teluk Manado, Sulawesi
Utara
(Antibacterial Activity of Stylissa carteri Sponge Extract from Manado Bay, North Sulawesi)
Irpan Palungan 1 , Robert A. Bara 2 , Remy E.P. Mangindaan 2 , Kurniati Kemer 2 , Stenly Wullur 2 , Unstain N.W. Rembet 2*
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Manado-Sulawesi Utara, Indonesia
2 Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi Manado-Sulawesi Utara, Indonesia
*Corresponding Author, irfanpalungan99@gmail.com
Abstract
Marine  sponges  contain  secondary  metabolites  with  unique  chemical  structures  and  very interesting pharmacological activities, such as antibacterial, anticancer, antiviral and others to be developed as candidate drugs, so this study aims to examine the antibacterial activity of extracts and  fractions  of Stylissa  carteri sponge  fractions  as  well  as  testing the  Minimum  Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) values. The method used in testing the antibacterial activity is the agar diffusion method (Disc Diffusion Kirby Bauer Method) . The presence of antibacterial activity was indicated by the formation of a clear zone around the paper disc after incubation for 24 hours. The results showed that antibacterial activity of S. carteri sponge  extract  tested  on Bacillus  megaterium DSM32T  bacteria  revealed  to  be  the  strongest inhibition  zone  of  21  mm.  Further  testing  on  the  extract  fraction  of S.  carteri showed  that  the semipolar fractions showed strong activity against the B. megaterium while the polar fraction was categorized  as moderate  action, the non-polar fraction showed no activity against the bacteria. The  determination  of  the  MIC  and  MBC  values  was  obtained  at  500  ppm  and  1000  ppm respectively.

## Keywords: Antibacterial; Stylissa carteri; Bacillus megaterium; Manado Bay

## Abstrak
Spons laut memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder struktur kimia yang unik dan aktivitas farmakologis  yang  sangat  menarik,  seperti  antibakteri,  antikanker,  antivirus  dan  lain-lain  untuk dikembangkan  sebagai  kandidat  bahan  obat-obatan,  sehingga  penelitian  ini  bertujuan  untuk menguji aktivitas antibakteri pada ekstrak dan fraksi-fraksi spons Stylissa carteri serta pengujian nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC) serta Minimum Bactericidal Concentration (MBC). Metode  yang  digunakan  pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  yaitu  metode  difusi  agar (Disc Diffusion Kirby Bauer Method) . Adanya aktivitas antibakteri ditandai dengan terbentuknya zona bening  di  sekitar  kertas  cakram  setelah  diinkubasi  selama  1×24  jam.  Hasil  pengujian memperlihatkan  adanya  aktivitas  antibakteri  ekstrak  spons S.  carteri yang  diuji  pada  bakteri Bacillus megaterium DSM32T dengan zona hambat yang paling kuat sebesar 21 mm. Pengujian lanjut  pada  fraksi  ekstrak S.  carteri didapatkan  fraksi  semipolar  memperlihatkan  aktivitas  yang kuat  pada  bakteri  uji B.  megaterium sedangkan  fraksi  polar  dikategorikan  sedang,  sedangkan fraksi non-polar tidak memperlihatkan aktivitas antibakteri . Penentuan nilai MIC didapatkan pada konsentrasi 500 ppm dan nilai MBC berada pada konsentrasi 1000 ppm.
Kata Kunci: Antibakteri; Stylissa carteri ; Bacillus megaterium DSM32T; Teluk Manado

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu negara  kepulauan  terbesar  di  dunia  yang yang terletak di kawasan tropis menjadikan
Indonesia memiliki keanekaragaman hayati tinggi  yang  bukan  hanya  sebagai  sumber makanan, tetapi dapat juga dikembangkan sebagai bahan obat-obatan. Karena
keanekaragaman  hayati  yang  sangat tinggi, maka terjadi kompetisi antar spesies untuk  bertahan  hidup.  Kondisi  seperti  itu membuat  berbagai  jenis  biota  laut,  salah satunya  spons,  mensintesa  metabolit sekunder yang bersifat toksik sebagai alat pertahanan  diri  melawan  infeksi  bakteri, fungi  dan  virus  (Gudbjarnason,  1999; Sumaryono,  2004),  dan  juga  melawan predasi  maupun  persaingan  antar  mereka sendiri  untuk  mempertahankan  wilayah pertumbuhannya (Kerr, 2003 dalam Widjhati, dkk ., 2004). Kandungan metabolit sekunder yang dimiliki oleh organisme laut menarik  perhatian  para  peneliti,  karena senyawa-senyawa tersebut memiliki struktur  kimia  yang  unik  dan  aktivitas farmakologis yang sangat menarik, seperti antibakteri, antikanker, antiinflamasi, antivirus,  antifouling  dan  menghambat aktivitas enzim (Jiang, dkk . 2012; Kornprobst,  2010;  Newman  dan  Cragg, 2012;
Diyabalanage, dkk . 2012.,
Fattorusso, dkk ., 2012).
Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang mempunyai potensi bioaktif, sehingga menjadikan  spons  target  yang  sangat
menarik karena keanekaragamannya yang tinggi dan unik dan spons juga menduduki tempat  teratas  sebagai  sumber  substansi aktif  (Blunt, dkk .,  2012).  Keberadaan metabolit  bioaktif  pada  organisme  sesil seperti  spons  ini  juga  merefleksikan adaptasi  ekologi  yang  terbentuk  selama proses  evolusi  yang  panjang  sebagai mekanisme  pertahanan  diri  organisme  ini dengan lingkungannya yang berupa perlawanan terhadap faktor-faktor predasi, kompetisi  dan  infeksi  terhadap  bakteri patogen (Proksch dkk ., 2003).
Spons  asal  perairan  tropis  seperti  di Indonesia  memiliki  potensi  yang  sangat menjanjikan  sebagai  sumber  senyawa bioaktif baru untuk dikembangkan menjadi komoditas  bernilai  ekonomis  tinggi  seperti bahan  obat-obatan  (Widjhati dkk .,  2004).
Telah  dilaporkan  sebagian  senyawa  yang diisolasi dari spons mempunyai bioaktivitas yang tinggi sehingga dapat dikembangkan sebagai  kandidat  bahan  obat  antibakteri, antikanker  dan  antiparasit  (Amir  dan Budiyanto, 1996). Oleh karena itu, penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui apakah  spons  yang  diambil  dari  Teluk Manado memiliki aktivitas antibakteri.
Gambar 1. Peta lokasi pengambilan sampel di Teluk Manado, Sulawesi Utara.

## METODE
Pengambilan Sampel Pengambilan sampel spons dilakukan di Teluk Manado, Sulawesi Utara
dengan  titik  koordinat  124°47’31”  BT  dan 1°27’47”LU  (Gambar  1.)  Spons  diambil menggunakan  bantuan  alat  selam  atau SCUBA  pada  kedalaman  sekitar  6 –8 meter. Pengambilan sampel spons
dilakukan dengan cara memotong menggunakan pisau langsung dari substratnya  dan  dimasukkan  kedalam plastik  klip.  Setelah  pemotretan,  sampel dibawa  ke  Laboratorium  Biologi  Molekuler dan Farmasetika Laut, Fakultas Perikanan dan  Ilmu  Kelautan,  Universitas  Sam Ratulangi  Manado,  dan  disimpan  dalam lemari  pendingin  bersuhu  -20oC  untuk proses lanjut.

## Identifikasi Sampel
Identifikasi  sampel  spons  dilakukan dengan  cara  melihat  morfologi  sampel mulai  dari  bentuk  warna  dan  tekstur  yang terdapat pada tubuh sampel. Pengamatan morfologi sampel spons dipandu oleh buku Tropical  Pasific  Intervebrates (Colin  dan Charles  1995).  Selanjutnya  dibandingkan dengan gambar spons dalam referensi dan situs
web
WoRMS
(http://www.marinespecies.org/)  dan  juga penulis dibantu oleh Prof. Dr. NJ de Voogd, dari Leiden University (De Voogd, 2021).

## Ekstraksi
Sampel  spons  diekstraksi  dengan menggunakan  metode  maserasi.  Sampel spons dibilas  dengan  air  tawar  terlebih dahulu  kemudian  dipotong-potong  kecil menggunakan  pisau  lalu  dimasukkan  ke botol  dan  diberi  label.  Sampel  spons dimaserasi secara dinamik dengan pelarut etil  asetat.  dan  perbandingan  1:3  selama 24  jam  pada  suhu  kamar.  Ekstrak kemudian disaring dan dievaporasi dengan menggunakan  rotary  vacuum  evaporator pada temperatur 40oC, Sehingga diperoleh ekstrak  kasar  untuk  digunakan  dalam pengujian awal ( screening ) aktivitas antibakteri dari spons uji.

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Peralatan dan bahan yang digunakan pada  penelitian  ini  disterilisasi  untuk menghindari  kontaminasi  mikroba  yang tidak  diinginkan.  Untuk  bahan  seperti media Nutrient  Agar (NA) , Media Brain Heart  Infusion (BHI) dan  Media Mueller
Hinton
Agar (MHA ),
disterilisasi menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121oC selama + 15 menit. Untuk peralatan seperti cawan petri, tabung reaksi, dan sebagainya terlebih dahulu dicuci, kemudian disterilisasi menggunakan oven pada suhu 160oC selama + 2 jam.

## Uji Antibakteri

## Pembuatan media Nutrient Agar (NA)
Sebanyak  2,84  g  nutrient  agar dilarutkan  dalam  100  ml  aquades.  Media dituang  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak 10  ml  per  tabung.  Kemudian  disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC selama 15  menit  dan  dibiarkan  mengeras  dengan kemiringan 15°.

## Pembuatan  media  Cair  Brain  Heart Infusion (BHI)
Brain  Heart  Infusion  sebanyak  3,7  g BHI  dilarutkan  dengan  100  ml  akuades dalam  erlenmeyer.  Kemudian  disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit.

## Pembuatan  media  Mueller  Hinton  Agar (MHA)
Ditimbang  sebanyak  3,8  g  MHA dilarutkan dengan 100 ml aquades. Media disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121oC selama 15 menit. Kemudian media dituang ke dalam cawan petri sebanyak 20 ml per cawan.

## Kultur Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  digunakan  yaitu Bacillus  megaterium DSM32T  (Gram positif)  dan Escherichia  coli DSM498 (Gram  negatif).  Kedua  isolat  bakteri  ini berasal  dari Deutsche  Sammlung  von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ), Braunschweig, Jerman.  Masing-masing diambil sebanyak 1 ose kemudian digoreskan  pada  permukaan  media  NA miring dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu  37oC  dalam  inkubator.  Bakteri  yang telah  tumbuh  pada  media  agar  miring selanjutnya  dikultur  kembali  dalam  media BHI,  dengan  cara  mengambil  dengan jarum  ose  selanjutnya  dipindahkan  pada media  BHI.  Setelah  pada  pemindahan bakteri pertama, jarum ose kembali dibakar untuk mensterilkan kembali dan digunakan lagi  untuk  pemindahan  bakteri  kedua  dan seterusnya  lakukan  hal  yang  sama. Setelah  pemindahan  pada  media  BHI, selanjutnya  diinkubasi  lagi  selama  24  jam pada suhu 37oC di dalam inkubator.

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Amoxilin  dengan  konsentrasi  (1 mg/ml)  digunakan  sebagai  kontrol  positif
sedangkan untuk kontrol negatif menggunakan akuades.

## Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan pada pengujian aktivitas antibakteri yaitu metode difusi  agar (Disc  Diffusion  Kirby  Bauer Method) .  Adanya  aktivitas  antibakteri ditandai dengan terbentuknya zona bening di sekitar cakram. Konsentrasi awal ekstrak sampel  spons  ditentukan  terlebih  dahulu sebesar 100 mg/ml. Konsentrasi bakteri B. megaterium dan E.  coli menggunakan spektrofotometer dengan didapatkan dengan  bantuan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  λ  =  600  nm. dengan
OD600=1 setara dengan konsentrasi bakteri 1x10^8 sel/ml.
Pada  tahap  pengujian  awal  yaitu masing-masing bakteri yang telah diinkubasi  selama  24  jam  dipindahkan  ke media  MHA  menggunakan  mikropipet kemudian digoyang-goyang lalu dituang ke cawan petri yang telah disiapkan. Selanjutnya kertas cakram dengan diameter 6 mm ditetesi larutan ekstak pekat S.carteri sebanyak 10 µl, begitu juga untuk kontrol positif dan kontrol negatif, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC (Ortez,  2005).  Zona  bening  yang  terlihat setelah  inkubasi  24  jam  diukur  dengan menggunakan kaliper. Penggolongan kriteria  kekuatan  suatu  bahan  antibakteri, yakni  diameter  zona  hambat  5  mm  atau kurang dikategorikan lemah, zona hambat 5  -  10  mm  dikategorikan  sedang, sedangkan diameter zona hambat 10 - 20 mm dikategorikan kuat dan diameter zona hambat  yang  melebihi  dari  20  mm dikategorikan  sangat  kuat  (Davis  dan Stout, 1971). Ekstrak spons yang menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang kuat  dilanjutkan  dengan  partisi  untuk melihat  di  mana  fraksi  aktif  dari  ekstrak spons S. carteri tersebut.

## Partisi
Ekstrak  dari  sampel  spons  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  kuat dipartisi  menggunakan  pelarut  etanol,  etil asetat,  oktana  dan  air  dengan  hasil  akhir dari partisi ini diperoleh 3 fraksi, yaitu fraksi air  (polar),  fraksi  etanol  (semipolar)  dan fraksi  oktana  (nonpolar).  Ekstrak  pekat dilarutkan  dengan  menggunakan  pelarut
etil  asetat  sebanyak  50  ml.  Ekstrak  ini kemudian  dipindahkan  ke  dalam  corong pisah. Perbandingan pelarut dalam corong pisah adalah (1:1), kemudian corong pisah dikocok-kocok  sehingga  kedua  pelarut tercampur  dengan  baik  lalu  didiamkan sampai  terlihat  dua  lapisan.  Ketika  kedua pelarut  telah  terpisah,  tutup  corong  pisah dibuka  dan  kran  corong  pisah  dibuka perlahan-lahan. Pelarut yang paling bawah ditampung  pada  erlenmeyer , selanjutnya pelarut yang berada di atas yaitu fraksi air (polar)  ditampung  ke  dalam  erlenmeyer yang  berbeda.  pelarut  yang  dibagian bawah  selanjutnya  dievaporasi.  Kegiatan partisi selanjutnya dilakukan dengan menuangkan  hasil  evaporasi  pelarut  yang di  bagian  bawah  kedalam  corong  pisah ditambahkan  pelarut  etanol  70  ml  dan oktana  (polar)  50  ml  sampai  terlarut dengan  baik,  kemudian  ditambahkan  lagi 15  ml  air. Corong  pisah  dikocok-kocok sehingga kedua pelarut bercampur dengan baik  lalu  didiamkan  sampai  terlihat  dua lapisan. Ketika kedua pelarut telah terpisah,  tutup  corong  pisah  dibuka  dan kran  corong  pisah  dibuka  perlahan-lahan. Pelarut yang paling bawah ditampung pada erlenmeyer  sehingga  didapatkan  fraksi etanol  (semipolar) , selanjutnya  pelarut yang  berada  di  atas  fraksi  etanol  yaitu fraksi  oktana  (nonpolar)  ditampung  ke dalam erlenmeyer yang berbeda dilanjutkan  dengan  menguapkan  kedua fraksi  tersebut  dengan  menggunakan evaporator. Ketiga  fraksi  kemudian  diuji kembali  aktivitas  antibakterinya  untuk melihat  di  mana  fraksi  yang  memiliki aktivitas  antibakteri mengikuti  prosedur  uji yang telah dijelaskan sebelumnya. Selanjutnya fraksi aktif diuji lanjut mengikuti prosedur uji Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dan Minimum
Bactericidal Concentration (MBC).
Uji  Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC) dan Minimum  Bactericidal Concentration (MBC).
Konsentrasi  ekstrak  minimum  yang menghambat pertumbuhan bakteri dilakukan  sebagai  berikut  :  Konsentrasi awal  fraksi aktif ditentukan terlebih dahulu (100 mg/ml=100.000 ppm). Pertama dibuat suatu  seri  pengenceran  fraksi  yang menunjukkan  aktivitas  antibakteri  mulai
dari  1000  ppm,  500  pmm,  250  ppm,  125 ppm,  62,5  ppm,  31,25  ppm,  15,62  ppm, 7,81  ppm,  dan  3,90  ppm  serta  1  tabung sebagai  kontrol.  Suspensi  bakteri B. megaterium uji (1 x 10 3 sel/ml) ditambahkan  ke  dalam  media  cair Brain Heart  Infusion  (BHI)  Broth lalu  di  goyang- goyang . Selanjutnya  bakteri  yang  di  BHI akan diambil sebanyak 4 ml menggunakan mikropipet  kemudian  di  masukkan  ke dalam  tabung  reaksi  yang  1000  ppm  dan diambil lagi 2 ml bakteri yang di BHI untuk masing-masing  tabung  yang  500  sampai ke 3,90 ppm. Kemudian tabung 1000 ppm ditambahkan  fraksi  aktif  40  µl,  lalu  dari tabung  1000  ppm  diambil  sebanyak  2  ml lalu  dipindahkan  ke  tabung  500  ppm,  lalu dari  tabung  500  ppm  diambil  lagi  2  ml dipindahkan  ke  tabung  250  begitupun seterusnya sampai pada tabung 3,90 ppm sedangkan untuk kontrol diambil sebanyak 2  ml  bakteri  dari  BHI  tanpa  ditambahkan fraksi  aktif.  Kemudian  semua  tabung diinkubasi  selama  1  x  24  jam  pada temperatur  37oC.  Pengamatan  dilakukan pada setiap tabung perlakuan, jika tabung
yang tidak keruh maka itu yang diteruskan ke  pengujian  MBC  dan  tabung  tabung pertama  yang  tidak  keruh  itu  dianggap sebagai konsentrasi penghambatan minimum (MIC). Namun demikian penghambatan  belum  berarti  mematikan semua bakteri. Untuk itu dilakukan pengecekan  untuk  semua  tabung  yang tidak keruh. Dari tabung-tabung yang tidak keruh diambil cuplikan (1 tetes) dan digores pada  media  agar  (NA)  lalu  diinkubasi selama  1  x  24  jam  pada  suhu  37oC. Setelah diinkubasi, diamati dengan melihat langsung  jika  tidak  ada  bakteri  yang tumbuh  maka  itu  ditentukan  sebagai  nilai MBC.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengambilan Sampel di Lapangan
Pengambilan sampel dilakukan pada siang hari sekitar pukul 11:00 – 15:00 WITA pada  kedalaman  6 –  8  m  dengan temperatur  29oC.  Berikut  sampel  spons yang telah didapatkan yaitu Stylissa carteri (Gambar 2.).
Gambar 2. Sampel Stylissa carteri .

## Ekstraksi Maserasi
Sampel  spons  diekstraksi  dengan menggunakan  metode  maserasi  dengan pelarut etil asetat, kemudian
dievaporasi  sehingga  didapatkan  hasil ekstrak kasar untuk sampel spons Stylissa carteri (Gambar 3.).
Gambar 3. Hasil ekstraksi sampel spons Stylissa carteri .
Aktivitas Antibakteri Pada Bakteri Bacillus megaterium DSM32T dan Escherichia coli DSM498.
Setelah  dilakukan  pengujian  dari ekstrak spons Stylissa carteri pada bakteri Bacillus  megaterium didapatkan  rata-rata zona  hambatnya  21,00  mm  sedangkan untuk  bakteri Escherichia  coli didapatkan rata-rata  zona  hambatnya  18,00  mm. Ekstrak  spons S.  carteri yang  diuji  pada bakteri B.  megaterium memiliki  aktivitas antibakteri  yang  tergolong  sangat  kuat dibandingkan  dengan  yang  diuji  pada E. coli yang  tergolong  kuat,  berdasarkan penggolongan  kriteria  kekuatan  suatu bahan  antibakteri  menurut  (Davis  dan Stout, 1971). Ekstrak spons S. carteri yang diuji pada bakteri B. megaterium menunjukkan aktivitas antibakteri yang
sangat  kuat  dilanjutkan  dengan  partisi untuk  melihat  di  mana  fraksi  aktif  dari ekstrak spons tersebut.

## Partisi
Ekstrak  spons S.  carteri yang menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang sangat kuat di partisi untuk mendapatkan 3 fraksi.  Proses  partisi  pertama  yaitu  untuk mendapatkan  fraksi  Polar  (air)  sedangkan untuk  proses  partisi  kedua  yaitu  untuk mendapatkan fraksi semipolar (etanol) dan nonpolar  (oktana)  dapat  dilihat  pada (Gambar  4.)  Untuk  hasil  fraksi  yang  telah didapatkan  yaitu  fraksi  air  (polar),  fraksi etanol  (semipolar)  dan  fraksi  oktana (nonpolar) dapat dilihat pada (Gambar 5.).
Gambar 4. Proses partisi pertama (1) dan proses partisi kedua (2).
1.
2.
Gambar 5. Hasil fraksi air (a), fraksi etanol (b), dan fraksi oktana (c) .
Selanjutnya ketiga fraksi tersebut diuji untuk  melihat  difraksi  mana  yang memiliki aktivitas  antibakteri  pada  bakteri B. megaterium.
Pada pengamatan yang telah dilakukan  ketiga  fraksi  yang  diuji  pada
bakteri B. megaterium (Gambar 6.) dengan
3 kali ulangan, fraksi air (polar) dan etanol (semipolar)  menunjukkan  adanya  zona hambat sedangkan fraksi oktana (nonpolar) tidak menunjukkan zona hambat.
Gambar 6. Hasil pengamatan fraksi air, etanol dan oktana bakteri Bacillus megaterium.
Ket : 1 : fraksi air (polar) 2 : fraksi etanol (semipolar), dan 3 : fraksi oktana (nonpolar).
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat aktivitas antibakteri pada bakteri B. megaterium (Tabel  1.)  untuk  fraksi  polar menunjukkan diameter zona hambat pada ulangan  I  (9  mm),  ulangan  II  (8  mm)  dan ulangan III (9 mm) dengan rata-rata (8,67). Untuk fraksi semipolar menunjukkan diameter zona hambat pada ulangan I (12 mm),  ulangan  II  (11  mm)  dan  ulangan  III (12  mm)  dengan  rata-rata  (11,67  mm). Untuk nonpolar tidak menunjukkan diameter  zona  hambat  pada  ketiga ulangan.
Berdasarkan  rata-rata  zona  hambat pada  bakteri B.  megaterium (Gambar  7.) untuk  fraksi  polar  menghasilkan  rata-rata zona  hambat  sebesar  8,67  mm,  fraksi semipolar menghasilkan  rata-rata  zona hambat  sebesar  11,67  mm.  Dari  hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  fraksi  polar memiliki aktivitas antibakteri yang tergolong sedang sedangkan fraksi semipolar  memiliki  aktivitas  antibakteri yang tergolong kuat.
Tabel 1. Diameter zona hambat pada bakteri Bacillus megaterium DSM32T.
Pengamatan 1 x 24 jam Bacillus megaterium DSM32T Zona Hambat Fraksi Ulangan 1 (mm) Ulangan 2 (mm) Ulangan 3 (mm) Rata-rata stdev Polar (air) 9 8 9 8,67 0,58 Semipolar (etanol) 12 11 12 11,67 0,58 Nonpolar (oktana) 0 0 0 0 0
a. b. c.
Gambar 7. Rata-rata zona hambat ekstrak spons pada bakteri Bacillus megaterium.
Penelitian  Watupongoh dkk (2019) menggunakan  sampel  spons S.  carteri yang dikoleksi dari Perairan Selat Lembeh Kota  Bitung,  pengujian  fraksi  kloroform, metanol  dan  n-heksana  memperlihatkan aktivitas  antibakteri  hanya  pada  fraksi metanol  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan E.  coli. Hal  ini  menunjukkan bahwa  fraksi  metanol  memiliki  spektrum kerja  yang  luas  dalam  menghambat aktivitas  antimikroba  dengan  bakteri S. aureus , dan E. coli .
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri ini  pada  ketiga  fraksi  diatas  terhadap bakteri B. megaterium maka fraksi semipolar dikategorikan  memiliki  aktivitas yang kuat dengan diameter rata-rata (11,67 mm)  dan  dikategorikan  kuat.  Fraksi semipolar ini yang dilanjutkan ke pengujian MIC dan MBC.
Pengujian Minimum
Inhibitory Concentration  (MIC)  dan  Minimum Bactericidal Concentration (MBC).
Berdasarkan  hasil  pengujian  yang telah  dilakukan  nilai Minimum  Inhibitory Concentration (MIC)  dari  fraksi  semipolar (Gambar 8.) ditunjukkan pada konsentrasi 500  ppm  dibuktikan  pada  (Gambar  9.) dimana  konsentrasi  500  masih  tumbuh bakteri  pada  media  agar.  Pada  tabel  2 ditunjukkan  untuk  tabung  yang  keruh (konsentrasi 250 - 3,9 ppm) dan yang tidak keruh  (konsentrasi  500  dan  1000  ppm) dimana  tabung  yang  keruh  menandakan bahwa bakteri masih tumbuh pada tabung tersebut  sedangkan  tabung  yang  tidak keruh  menandakan  bahwa  pertumbuhan bakteri  sudah  mulai  dihambat  oleh  fraksi semipolar,  Sedangkan  kontrol  yang  tidak diberi  ekstrak  menunjukkan  bakteri  dapat tumbuh pada tabung tersebut.
8.67 11.67 0 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 Polar Semi polar Non polar
1000 Mini
mu m Bact erici dal Con cent ratio n (MB C) Minimum Bactericidal Concentration
(MBC)
Tabel 2. Pengelompokkan tabung yang keruh dan tidak keruh .
Nomor Tabung Konsentrasi (ppm) Keruh Tidak Keruh 1. 1000 √ 2. 500 √ 3. 250 √ 4. 125 √ 5. 62,5 √ 6. 31,2 √ 7. 52,6 √ 8. 7,81 √ 9. 3,90 √ 10. kontrol √ Hasil pengamatan nilai MIC kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  MBC untuk  melihat  nilai  konsentrasi  ambang batas terbunuhnya bakteri uji Minimum
Bactericidal Concentration (MBC) (Gambar 9.)  menyajikan  hasil  pengujian  MBC  dari fraksi aktif ekstrak spons Stylissa carteri.
Gambar 9. Hasil pengujian Minimum Bactericidal Concentration (MBC) dari fraksi semipolar.
Berdasarkan hasil
pengujian
penentuan  nilai Minimum  Bactericidal Concentration (MBC) dari fraksi semipolar (Gambar 9.) ditunjukkan pada konsentrasi 1000  ppm  hal  ini  dibuktikan  dengan  tidak adanya  koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada media  agar  sedangkan  konsentrasi  500 ppm  masih  terdapat  pertumbuhan  koloni bakteri uji baik pada ulangan I dan II.
Suatu antimikroba bersifat bakteriostatik  jika  senyawa  antimikroba tersebut  hanya  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri jika pemberian senyawa terus dilakukan dan jika dihentikan atau habis, maka pertumbuhan dan  perbanyakan  dari  bakteri  kembali meningkat yang ditandai dengan berkurangnya  diameter  zona  hambatan. Sebaliknya bersifat bakterisid jika diameter zona hambatan meningkat, hal ini disebabkan  karena  senyawa  ini  mampu membunuh  dan  menghentikan  aktivitas fisiologis dari bakteri, meskipun pemberian senyawa  tersebut  dihentikan  (Wiyanto,
2010).  Dengan  demikian  fraksi  semipolar (etil  asetat)  dari  ekstrak  aktif S.  carteri bersifat  bakteriostatik  dan  juga  bersifat bakterisid dikarenakan dapat menghambat dan membunuh bakteri B. megaterium.

## KESIMPULAN
Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri ekstrak  spons Stylissa  carteri yang  diuji pada bakteri Bacillus megaterium menunjukkan  rata-rata  diameter  zona hambat (21,00) yang dikategorikan sangat kuat dibandingkan dengan yang diuji pada bakteri Escherichia  coli yang  rata-rata diameternya  18,00  mm.  Pada  pengujian partisi,  fraksi  semipolar  dengan  rata-rata diameter  zona  hambatnya  (11,67  mm) dikategorikan  kuat  dibandingkan  dengan fraksi polar dan non polar. Fraksi semipolar menunjukkan  nilai Minimum  Inhibitory Concentration (MIC) yaitu pada konsentrasi  500  ppm  sedangkan  nilai Minimum Bactericidal Concentration (MBC) yaitu pada konsentrasi 1000 ppm.
Ulangan I Ulangan II Ulangan I Ulangan II

## DAFTAR PUSTAKA
Amir,  I  dan  Budiyanto.  1996.  Mengenal Spons  Laut  (Demospongiae)  Secara Umum. Oseana, Volume XXI, Nomor 2, 1996 : 15-31.
Blunt,  J.W.,  Copp,  B.R.,  Keyzers,  R.A., Munro,  M.H.G.,  and  Prinsep,  M.R. 2012.  Marine  natural  products. Nat. Prod.  Rep .  29:  144 –222,  and previous reports in this series.
Colin, L. P., and Charles A. 1995. Tropical Pasific Invertebrates : A Field Guideto the Marine Invertebrates Occuring on Tropical Pasific Coral Reefs, Segrass Beds and Mangroves.
Davis, W. W., T. R. Stout. 1971. Disc plate methods  of  microbiological  antibiotic assay. Microbiology 22: 659-665.
Diyabalanage, T., Ratnayake, R., Bokesch,
H.R.,  Ransom,  T.T.,  Henrich,  C.J., Beutler,  J.A.,  McMahon,  J.B.,  and Gustafson,  K.R.  2012.  Flabelliferrins A  and  B,  sesterpenoids  from  the South Pasific sponge carteriospongia flabellifera.  J.  Nat.  Prod. 75:  1490 – 1494.
Fattorusso, E., Gerwick, W.H., and Orazio Taglialatela-Scafati. 2012. Handbook of Marine Natural Products. Springer.
Gudbjarnason,  S.  1999.  Bioactive  Marine Natural  Products.  Rit  fiskideiddal. 16:107 –110.
Jiang,  C.-S.,  Muller,  W.E.G.,  Schroder, H.C., and Guo, Y.-W. 2012. Disulfide- and
Multisulfide-containing
metabolites  from  marine  organisms.
Chem. Rev . 112: 2179 – 2207.
Kornprobst,  J.M.  2010.  Encyclopedia  of marine  natural  products.  Willey- Blackwell. Oxford. 1594pp (3 vols).
Newman,  D.J.  and  Cragg,  G.M.  2012. Natural  products  as  sources  of  new drugs over the 30 years from 1981 to 2010. J. Nat. Prod . 75: 311 –335, and previous reports in this series.
Ortez,  J.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual of Antimicrobial Susceptibility testing. Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed). American society for Microbiology.29 Pettit,  R.K.,  B.R.  Fakoury,  J.C. Knight, C.A. Weber, G.R. Pettit, G.D.
Cage,  S.  Pon.  2004.  Antibacterial Activity of The Marine Spone Sonstituent Cribrostatin 6.  Journal of Medical Microbiology, 53: 61 – 65.
Proksch,  P.,  Ebel,  R.,  Edrada,  R.A., Schupp,  P.,  Lin,  W.H.,  Sudarsono, Wray,  V.  and  Steube,  K.  2003. Detection of pharmacologically active natural  pro-ducts  using  ecology, selected  examples  from  Indopacific marine  invertebrates  and  spons- derived  fungi.  Pure  Applied  Chem. 75: 343 –352.
Sumaryono, W. 2004. Prospek, tantangan dan strategi pengembangan bioteknologi  kelautan  di  Indonesia. Makalah  dalam  Forum  Bioteknologi Kelautan  dan  Perikanan  Indonesia. Pusat  Riset  Pengolahan  Produk  dan Sosial Ekonomi Kelautan dan Perikanan.  Jakarta,  25  Maret  2004.
14 pp.
De  Voogd  NJ.  2021.  Komunikasi  Pribadi Tentang  Identifikasi  Sampel  Spons dari Teluk Manado.
Watupongoh,  C.  C.  A.,  Wewengkang,  D. S.,  Rotinsulu,  H.  2019.  Aktivitas Antimikroba  Dari  Ekstrak  Dan  Fraksi Organisme  Laut  Spons Stylissa carteri Yang  Dikoleksi  Dari  Perairan Selat Lembeh Kota Bitung. Volume 8 Nomor 3.
Widjhati,  R.A.,  Supriono  dan  Subiantoro.
2004. Pengembangan senyawa bioaktif  dari  biota  laut  (review kegiatan  penelitian  biota  laut  di BPPT). Makalah dalam Forum Bioteknologi Kelautan dan Perikanan Indonesia.  Pusat  Riset  Pengolahan Produk dan Sosial Ekonomi Kelautan dan  Perikanan.  Jakarta,  25  Maret 2004. p. 89 –95.
Wiyanto,  D.B.  “Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Rumput  Laut Kappaphycus alvarezii dan Eucheuma denticullatum Terhadap Bakteri
Aeromonas  hydrophila  dan  Vibrio harveyii”.  Jurnal  Kelautan.  2010,  3, hal. 1-17.