## Validasi Metoda Penetapan Kadar β– Karoten Ekstrak n-Heksana Kulit Jeruk Manis (Citrus sinensis L.) Dengan KLT- Densitometri

## Validation Method for Determination β- Carotene of Extract n-
Hexane Sweet Orange peel (Citrus sinensis L.) with KLT-

## Densitometry
Ulfah Eka Syafitri *1 , Yulianis 2 , Lili Andriani 3
1.2.3 Jalan Tarmizi Kadir Pakuan Baru, Program Studi Farmasi STIKES Harapan Ibu, Jambi and 36126, Indonesia
*Koresponding Penulis: 1 ulfahekas@gmail.com ; 2 yulianisaljazira@yahoo.com ; 3 liliandriani116@gmail.com

## Abstrak
Kulit  jeruk  manis  salah  satu  limbah  organik  memiliki  banyak  sekali  manfaat. Tujuan  penelitian  untuk  melakukan  validasi  metode  dan  menentukan  kadar  β-karoten dalam ekstrak sampel kulit jeruk manis tanpa pencucian dan ekstrak pencucian dengan aquadest  menggunakan  KLT-densitometri.  Penelitian  dilakukan  mulai  dari  proses ekstraksi,  dielusi  dalam  fase  diam  gel  silika  dan  fase  gerak  kloroform:Etil  Asetat  7:3 memperoleh  nilai  Rf  0,20,  uji  ekstrak  n-heksana  tanpa  pencucian  30,1938ppm, pencucian 30,5610ppm.  Validasi  metode dengan TLC-densitometri diperoleh  linearitas 0,999,presisi  0,0777%,LoD  0,30951μg/ml,LoQ  1,0317μg/ml,  akurasi  sampel  tanpa pencucian 108,81%, sampel pencucian 109,89%. Hasil data validasi metode memenuhi syarat dan analisis kadar β-karoten dapat ditentukan dengan metode KLT-Densitometri.
Kata kunci : β-karoten,validasi metode analisis, KLT-Densitometri

## Abstract
Sweet orange peel one organic waste has many benefits. One way to isolate beta carotene is TLC-densitometry.The purpose of this study was to validate the method and determining  the levels of β-carotene in  extracts of  sweet  orange peel  without  washing and  extract  washing  with  distilled  water  using  TLC-densitometry.  This  research  was carried out starting from the extraction process, eluted in the silica gel stationary phase and the mobile phase of the chloroform:Ethyl Acetate 7:3 obtained an Rf value of 0.20. The test extract n-hexane  without  washing  was 30.1938 ppm and washing  was 30.5610 ppm. The validation method with TLC-densitometry obtained linearity 0.999, precision 0.0777%,LoD  0.30951μg/ml,LoQ  1.0317μg/ml,  accuracy  of  samples  without  washing 108, 81% and 109.89% of washing samples. The results of the method validation meet the  requirements  and  analysis  of  β-carotene  levels  can  be  determined  by  the  TLC- Densitometry method.
Keywords: β-carotene, validation of analytical methods, TLC-Densitometry

## PENDAHULUAN
Kulit  jeruk  manis  merupakan  salah  satu  limbah  organik  yang  memiliki  banyak sekali  manfaat seperti  melindungi kulit dari tanda penuaan dini, untuk  kesehatan  mata, membantu  menurunkan  resiko  penyakit  kanker  hati  dan  mencegah  penyakit  kanker (Edi, 2016).  Kulit jeruk manis memiliki aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli, Staphylococcus  aureus,  Salmonella  tphyii, aktivitas  antioksidan,  dan  aktivitas antidiabetes (Dewi, 2019).
Kulit  jeruk  manis  mengandung  vitamin  C,  senyawa  fenolik,  flavonoid,  glikosida flavon  (neohesperidin,  naringin,  hesperidin,  narirutin),  triterpene  (Limonene,  citrol), pigmen seperti (antosianin ,beta-cryptoxanthin, crytpoxanthin, zeaxanthin, beta karoten, rutin  dan  eriocitrin)  homocysteine,    polymethoxylated  flavones  (tangeretin,  nobiletin, hesperitin, naringin, sinensetin) dan  saponin (Milind & Dev, 2012; Wang et al ., 2014). Senyawa  karotenoid  merupakan  pigmen  larut  lemak  yang  bertanggung  jawab  pada berbagai  warna  merah,  oranye,  hingga  kuning.  Senyawa  karotenoid  dikenal  sebagai provitamin  A.  Sifat  fungsional  karotenoid  yang  lain  adalah  kemampuannya  sebagai antioksidan  sehingga  dapat  menangkap  radikal  bebas  di  dalam  tubuh  (Manasika  & Widjanarko, 2015)
β-karoten merupakan salah satu produk dari karotenoid yang mempunyai aktivitas vitamin  A  yang  paling  tinggi.  Pigmen  organik  berwarna  kuning,  oranye  atau  merah oranye  yang  dapat  terjadi  secara  alamiah  dalam  tumbuhan  yang  berfotosintesis, ganggang,  beberapa  jenis  jamur  dan  bakteri  (Kusbandari,  &  Susanti,  2017).  β-karoten dapat  larut  dalam  lemak  dan  berfungsi  sebagai  peredam  singlet  oksigen  dan  radikal bebas (Winarsi, 2010).  Beta karoten dapat menurunkan risiko penyakit jantung, kanker, reproduksi, dan penglihatan. β-karoten banyak terdapat dalam tanaman (Kusbandari, & Susanti, 2017).
Penetapan kadar beta karoten pada  penelitian sebelumnya wortel ( Daucus carota, L)  mentah  dan  wortel  rebus  dengan  spektrovotometri  uv-vis  hasil  yang  didapatkan menunjukkan  bahwa kadar  beta karoten wortel  mentah 34,94 ± 7,810 % dibandingkan dengan wortel rebus 23,31 ± 4,246 % (Agustina, Hidayati, & Susanti, 2019). Penelitian lainnya  ekstraksi  pigmen  karotenoid  labu  kabocha  dengan  menggunakan  metode ultrasonik  dilakukan  berbagai  variasi  ekstraksi  di  dapatkan  bahwa  waktu  25  menit
dengan total beta karoten 254,77 mg/100 g adalah waktu yang baik untuk mendapatkan kadar beta karoten (Manasika & Widjanarko, 2015).
Dengan  perbedaan  kandungan  β-karoten  dalam  kulit  jeruk  manis  dan  mengingat β-karoten  adalah  senyawa  antioksidan  yang  bermanfaat  maka  untuk  mengetahui kandungan  β-karoten diperlukan  metode untuk menentukan kadarnya. Oleh karena  itu, peneliti tertarik untuk melakukan uji kadar β-karoten dari ekstrak kulit jeruk manis yang diperoleh dari kebun kemingking, dengan cara diekstraksi pelarut n-heksana, ekstraksi 2 variasi  tanpa  pencucian  dan  pencucian  dengan  aquadest  dan  uji  kadar  beta  karoten menggunakan  KLT-Densitometri  dan  melakukan  validasi  metode  analisis.  Dipilih pelarut  n-heksana  dari  hasil  penelitian  uji  kadar  karotenoid  terhadap  beberapa  pelarut yaitu  aseton,  etil  asetat  dan  n-heksan  didapatkan  pelarut  n-heksan  adalah  pelarut tersebut maksimal mengekstrak karotenoid (Wahyuni & Widjanarko, 2015)

## METODE PENELITIAN
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  yaitu:  Kulit  Jeruk  Manis  Lokal ( Citrus  sinensis (L.)  yang  diperoleh  dari  Desa  Kemingking  Dalam  Kecamatan  Taman Rajo Muaro Jambi.
Penyiapan Ekstraksi Sampel Sampel tanpa pencucian
Serbuk  simplisia  yang  telah  dihaluskan  ditimbang  5  g  kemudian  dimasukkan  ke dalam  erlenmeyer  dan  ditambahkan  n-heksana  p.a  (pro  analisis)  10  mL  lalu dikocok/dishaker  selama  25  menit,  kemudian  disaring  menggunakan  kertas  saring whatmann.  filtrat dipisahkan, ulangi sampai dengan  jernih. Lalu  filtrat yang dihasilkan dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  25  mL  dan  ditambahkan  n-heksana  p.a  hingga  tanda batas (Manasika & Widjanarko, 2015).
Sampel dengan pencucian
Serbuk  simplisia  yang  telah  dihaluskan  ditimbang  5  g  kemudian  dimasukkan  ke dalam  erlenmayer  dan  ditambahkan  n-heksana  p.a  (pro  analisis)  10  mL  lalu dikocok/dishaker selama 25  menit, kemudian disaring dengan kertas saring whatmann. Filtrat  dipisahkan.Ulangi  ekstraksi  dengan  n-heksana  p.a  sampai  dengan  jernih.Lalu filtrat dimasukkan ke erlenmeyer dan ditambahkan 25 mL aquades, terbentuk lapisan air dan  lapisan  n-heksana.Lapisan  air  dibuang.Hasil  lapisan  n-heksana  dicuci  sebanyak  2 kali dengan 25 mL aquades.Filtrat hasil pencucian, ditambahkan natrium sulfat anhidrat
p.a  1.25  g  per  25  mL  digunakan  untuk  mengikat  senyawa  polar  yang  tersisa  dalam ekstrak.  Filtrat  yang  dihasilkan  dimasukkan  labu  ukur  25  mL  dan  ditambahkan  n- heksana p.a hingga tanda batas (Manasika & Widjanarko, 2015).

## Analisa Kuantitatif
Penentuan kurva kalibrasi diawali dengan pembuatan  larutan standar beta karoten 100  ppm  kemudian  pembuatan  larutan  seri  standar  beta  karoten  dengan  konsentrasi  6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, 12 ppm, dan 14 ppm yang dilakukan dengan cara sebagai berikut : dari  larutan beta karoten 100 ppm sebanyak 0,6 mL, 0,8 mL, 1,0 mL, 1,2 mL, dan 1,4 mL  dipipet  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10mL  lalu  dicukupkan  volumenya dengan  menggunakan  n-heksana  p.a  hingga  tanda  batas,  salah  satu  konsentrasi  larutan standar  diukur  panjang  gelombang  pada  daerah  200-700  nm  dengan  densitometer (Chandra,  Zulharmita,  &  Handayani,  2017).  Selanjutnya  5  konsentrasi  dilakukan  elusi dengan  fase  gerak  yang  optimal  kemudin  spot/  bercak  yang  dihasilkan  diukur  area puncak  panjang  gelombang  untuk  mendapatkan  kurva  kalibrasi  dan  linearita  larutan standar
Intrumentasi dan Optimasi analisis KLT
Analisis  dilakukan  dengan  menggunakan  lempeng  KLT  aluminium  yang  dilapisi silika  gel  dengan  ketebalan.  Lempeng  KLT  dipotong  dengan  ukuran  10  cm  x  5  cm (bergantung  pada  jumlah  larutan  sampel/  baku  yang  akan  dianalisis)  sehingga  jarak antar sampel 1 cm. Plat diaktifkan dengan metanol. Selanjutnya, plat dikeringkan dalam oven pada suhu 60 ° C selama 1 jam. Larutan sampel dan standar dalam volume 10-μL ditotolkan dengan pipa kapiler terukur (Starek et al ., 2015).
Fase  gerak  yang  digunakan  adalah  fase  gerak  yang  optimal  dari  salah  satu  dari campuran  berikut:  campuran  kloroform  -  etil  asetat  (7:3),  diklorometana  –  metanol (4:1), dan n-heksana – etil asetat (3:7). Jenuhkan wadah elusi/ chamber dengan uap fase gerak.  Faktor  retardasi  (Rf)  untuk  β-karoten  (standar  dan  sampel)  dihitung.  (Starek et al ., 2015)
Penetapan kadar beta karoten dalam sampel.
Masing-masing  sampel  diambil  10µL  ditotolkan  pada  plat  KLT  dengan menggunakan pipet kapiler terukur, dan sampel yang sudah ditotolkan pada KLT dielusi dengan  fase  gerak  yang  optimal  pemisahan.  Luas  puncak  kromatogram  dibaca  pada
panjang  gelombang  maksimum  yang  diperoleh  dengan  KLT-Densitometer.  Pengujian ini dilakukan sebanyak 3 kali.
Validasi metode analisis Uji akurasi
Penetapan  akurasi  ditotolkan  pada  plat  KLT,  dielusi  dengan  fase  gerak  yang  optimal diukur pengulangan 3 kali. Perhitungan perolehan kembali dapat juga ditetapkan dengan rumus sebagai berikut:(Harmita, 2004)
%recovery = kadar terukur kadar sebenarnya x100%

## Uji presisi
Uji  presisi  (keseksamaan)  dilakukan  dengan  cara  buat  larutan  beta  karoten  dengan konsentrasi  dilakukan  pengenceran  hingga  tanda  batas.  Kemudian  diukur  sebanyak  6 kali  pengulangan  dihari  yang  sama.  Hasil  pengujian  dihitung  standar  deviasi (simpangan baku/SD) dengan menggunakan rumus : (Rohman, 2016)
SD = √ ∑(xi − xi ̅) 2 n − 1 RSD (%) = SD xi ̅ x 100%
Linearitas
Nilai linearitas yang baik adalah 0,997 ≤ r ≤ 1(Harmita, 2004) .
Keterangan : 𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎
𝑟 = 𝑛Ʃ𝑥𝑦 − Ʃ𝑥Ʃ𝑦 √{𝑛Ʃ𝑥 2 − (Ʃ𝑥) 2 }{𝑛Ʃ𝑦 2 − (Ʃ𝑦) 2 }
Uji batas deteksi (LoD) dan Uji batas kuantisasi (LoQ)
Persamaan LoD dan LoQ. sebagai berikut:(Rohman, 2016)
𝐿𝑜𝐷 = 3𝑆 𝐷 𝑏 𝐿𝑜𝑄 = 10𝑆𝐷 𝑏
Analisis Data
Analisis  data  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  dianalisis  secara  KLT- Densitometri dan Validasi metode analisis (Rohman, 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi
Identifikasi  sampel  tumbuhan  dilakukan  di  Herbarium  Andalas  determinasi menunjukkan bahwa sampel adalah tumbuhan jeruk manis ( Citrus sinensis (L.) Osbeck) dengan family Rutaceae.
Analisis Kadar Beta Karoten dengan KLT Densitometri
a. Hasil  penentuan  panjang  gelombang  maksimum  beta  karoten  standar  dengan spektrofotometer UV-Vis pada Gambar 1.
Gambar 1. Spektrum panjang gelombang maksimal larutan standar beta karoten diperoleh 448,50 nm dengan metode spektrofotometri UV-Vis
Dari  hasil  pengukuran  panjang  gelombang  maksimum  didapatkan  448,50 nm,  hasil  yang  diperoleh  tidak  terlalu  jauh  berbeda  dari  panjang  gelombang maksimum beta karoten  dari penelitian lain 450 nm (Sari & Mayasari, 2013).
b. Dari  hasil  optimasi  analisis  KLT  dengan  berbagai  eluen  yaitu  kloroform  :  etil asetat  (7:3),  diklorometana  :  metanol  (4:1),  dan  n-heksana  :  etil  asetat  (3:7). Setelah  dilakukan  pengujian  dengan  3  fase  gerak  tersebut,  fase  gerak  yang memberikan pemisahan yang optimal yaitu campuran antara kloroform : etil asetat (7:3)  dengan  nilai  Rf  0,20  dengan  luas  area  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan fase gerak yang lain.
Tabel 1. Hasil optimasi analisis beta karoten dari ekstraksi sampel Pelarut
Luas Area
Dari  hasil  optimasi  fase  gerak  beta  karoten  yang  bersifat  non  polar  akan lebih  berinteraksi  dengan  fase  gerak  yang  juga  bersifat  non  polar.  Hasil  yang diperoleh kloroform : etil asetat (7:3) adalah fase gerak yang optimal (Rizkiyah & Aziz, 2016)
c. Penetapan  kadar  beta  karoten  dalam  kulit  jeruk  manis  diperoleh  dari  metode ekstraksi  tanpa  pencucian  adalah  30,1938  ppm,  dan  dengan  pencucian  adalah 30,5610  ppm,  Dari  hasil  kadar  yang  di  dapat  dari  proses  ekstraksi  dengan pencucian  dengan  aquades  ternyata  tidak  signifikan  terhadap  kadar  beta  karoten dalam sampel tanpa pencucian Tabel 2.
Tabel 2. Penetapan Kadar Beta Karoten dalam Kulit Jeruk Manis Ekstraksi Pengulangan Area Kadar β-Karoten Kadar Larutan (μg/g) Sampel (μg/g) Sampel Rata-rata Tanpa Pencucian 1 1096,9 6,02475 30,1237 30,1938 2 1099,5 6,04084 30,2042 3 1101,1 6,05074 30,2536 Pencucian 1 1110,4 6,10829 30,5414 30,561 2 1111,0 6,11200 30,5600 3 1111,7 6,11633 30,5816 Validasi Metode Penetapan Kadar
Beta Karoten
dalam Sampel Kulit Jeruk Manis dengan KLT-Densitometri
Validasi  metode  analisis  yang  digunakan  yaitu  linieritas  dengan  melihat  nilai korelasi  (r),  uji  sensitivitas  (batas  deteksi  (LoD) dan  batas  kuantifikasi  (LoQ)),  presisi dan akurasi diperoleh sesuai dengan Tabel 3:
Tabel 3. Hasil Validasi Metode Analisis dengan KLT-Densitometri.
Tanpa Pencucian Pencucian Kloroform : Etil Asetat (7:3) 1096.5 1110.0 Diklorometana : Metanol (4:1) 818.2 883.2 n-Heksana : Etil Asetat (3:7) 528.1 645.0 Validasi Metode Persyaratan (Harmita, 2004) Hasil Keterangan Linearitas ≥ 0,997 0,999 Memenuhi LoD (µg/ml) Kons.minimal terdeteksi 0,30951 µg/ml Memenuhi
Keterangan : TP : Tanpa Pencucian, P : Pencucian
a. Linearitas
Pembuatan  kurva  kalibrasi  dan  linearitas  larutan  standar  β-Karoten  didapatkan persamaan regresi pada Gambar 2.
Gambar 2. Kurva Kalibrasi Larutan Standar Beta Karoten
Dari  hasil  kurva  kalibrasi  (linearitas)  yang  diperoleh  persamaan  regresi  yang dihasilkan  menggunakan  KLT-Densitometri  yaitu 𝑦 = 161,6𝑥 + 123,3 dengan  nilai koefisien  korelasi  (r)  0,999.Koefisien  korelasi  di  atas  menunjukan  hubungan  antara konsentrasi  dengan  absorban  memiliki  nilai  yang  lebih  baik  karena  lebih  mendekati  1 sesuai  dengan  literatur  yang  menyatakan  kriteria  penerimaan  yaitu  nilai  koefisien korelasi (r) mendekati 1 (0,990≤ r ≤ 1) (Harmita, 2004)
b. Akurasi
Pada penelitian  ini, dilakukan uji akurasi dengan  metode perolehan kembali atau recovery . Suatu metode dikatakan valid jika nilai presentase recovery dari suatu standar yaitu  antara  90-110%  (Harmita,  2004).  Hasil recovery yang  didapatkan  pada  beta
y = 161,6x + 123,3 R² = 0,999 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 0 5 10 15 A rea Konsentrasi (μg/ml) Kurva Kalibrasi Larutan Standar β-karoten LoQ (µg/ml)
Kons.minimal terdeteksi 1,0317 µg/ml Memenuhi Presisi (%) RSD ≤2% 0,0777% Memenuhi Akurasi (%) 90-110% TP : 108,81 % P   : 109,89% Memenuhi
karoten  dengan  sampel  tanpa  pencucian  dan  sampel  pencucian  dengan  metode  KLT- Densitometri  yaitu  108,81  %  dan  109,89  %sehingga  hasil  tersebut  dapat  dikatakan memenuhi  syarat recovery ,  sehingga  metode  ini  menghasilkan  ketepatan  yang  baik dalam menunjukkan nilai pengukuran dengan nilai sebenarnya pada Tabel 4.
Tabel 4. Akurasi- Recovery β-Karoten
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 6 No. 1 April 2020 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
Ekstraksi Pengulangan Luas Area sampel + standar %Recovery Rata-rata %recovery Tanpa Pencucian 1 1136,2 108,51 % 108,81% 2 1139,4 108,91 % 3 1140,7 109,01 % Pencucian 1 1149,3 109,82 % 109,89 % 2 1149,9 109,89 % 3 1150,6 109,96 %

## c. Presisi
Hasil  analisis  presisi  dapat  dilakukan  sebanyak  enam  kali  ulangan  oleh  analisis  dan kondisi  yang  sama  serta  dihari  yang  sama  dalam  interval  waktu  yang  pendek.  Uji  presisi dengan  KLT-Densitometri  diperoleh  nilai  %  RSD  beta  karoten  yaitu  0,0777  %.  Metode  ini memiliki ketelitian  yang sangat teliti, karena nilai  % RSD ≤1% yaitu sangat teliti dan ≤2% yaitu  teliti.  Maka  dari  itu,  hasil  RSD  menyatakan  bahwa  semakin  kecil  %  RSD  yang dihasilkan maka semakin tinggi tingkat ketelitiannya (Kriswanto dkk., 2014)
d. Batas  Deteksi  atau Limit  of  Detection  (LoD) dan  Batas  Kuantitasi  atau Limit  of Quantitation (LoQ)
Hasil analisis LoD dan LoQ dengan metode KLT-Densitometri yaitu 0,30951µg/ml dan 1,0317µg/ml.  Apabila  konsentrasi  analit  yang  diperoleh  berada  dibawah  nilai  LoD,  maka sinyal  yang  didapat  tidak  dapat  dipercaya  dan  berupa noise (Mariana  dkk.,  2018).  Penguji kadar β-karoten lebih besar dari LoD dan LoQ, maka hasil tersebut dapat dipercaya sebagai sinyal analit.besar dari LoD, maka hasil tersebut dapat dipercaya sebagai sinyal analit.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: Hasil penetapan kadar  optimal  beta  karoten  yang  didapatkan  didalam  kulit  jeruk  manis  ( Citrus  sinensis L.) menggunakan  metode  KLT-Densitometri  sampel  tanpa  pencucian  30,1938  ppm  dan pencucian  30,5610  ppm.  Uji  validasi  analisis  metode  penetapan  kadar  beta  karoten  dengan KLT-Densitometri memenuhi syarat. Pada KLT-Densitometri untuk beta karoten mempunyai linieritas  (r)=  0,999,  presisi  dengan  RSD=  0,0777%,  LoD=  0,30951  µg/ml,  LoQ=  1,0317 µg/ml dan akurasi sampel tanpa pencucian 108,81%  dan pencucian 109,89%,

## SARAN
Saran  untuk  penelitian  selanjutnya  adalah  dapat  meneliti  kadar  beta  karoten  dalam sampel yang sama tetapi menggunakan metode yang berbeda seperti HPLC atau kromatografi GC-MS.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina,  A.,  Hidayati,  N.,  &  Susanti,  P.  (2019).  Penetapan  kadar  β-karoten  pada  wortel (Daucus  carota  L.)  mentah  dan  wortel  rebus  dengan  spektofotometri  visibel. Jurnal Farmasi Sains dan Praktis , 5 (1), 7-13
Chandra,  B.,  Zulharmita,  &  Handayani,  A.  D.  H.  (2017).  Analisis  kandungan  beta  karoten pada  daun  bayam  merah  (  Amaranthus  hybridus  L.)  dengan  metode  spektrofotometri visibel. Jurnal Farmasi Higea , 9 (2).
Dewi, A. D. R. (2019). Aktivitas antioksidan dan antibakteri ekstrak kulit jeruk manis (Citrus sinensis)  dan  aplikasinya  sebagai  pengawet  pangan. Jurnal  Teknologi  Dan  Industri Pangan , 30 (1), 83–90. Edi,  B.  (2016). Cara  cerdas  mendulang  mendulang  emas  dari  bertanam  jeruk .  Jawa  Barat: Akar Publishing.
Harmita.  (2004). Petunjuk  pelaksanaan  validasi  metode  dan  cara  perhitungannya ,  Majalah ilmu Kefarmasian. I (3), 117–135.
Kriswanto,  Permanasari,  A.,  &  Fatimah,  S.  S.  (2014).  Pengembangan  dan  Uji  Validasi Metode  Analisis  Kadar  Parasetamol  dan  Kafein  dengan  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi. Jurnal Sains Dan Teknologi Kimia ISSN 2087-7412 , (I). Kusbandari,  A.,  &  Susanti,  H.  (2017).  Kandungan  beta  karoten  dan  aktivitas  penangkapan radikal  bebas  terhadap  DPPH  (1,1-difenil  2-pikrilhidrazil)  ekstrak  buah  blewah (Cucumis  melo  var.  Cantalupensis  L)  secara  spektrofotometri  UV-Visibel. Jurnal Farmasi Sains Dan Komunitas , 14(1) (Mei), 37–42.
Mariana, E., Cahyono, E., Rahayu, E. F., & Nurcahyo, B. (2018). Validasi Metode Penetapan Kuantitatif  Metanol  dalam  Urin  Menggunakan  Gas  Chromatography-Flame  Ionization Detector. Indonesian Journal of Chemical Science , 7(3).
Manasika,  A.,  &  Widjanarko,  S.  B.  (2015).  Ekstraksi  pigmen  karotenoid  labu  Kabocha menggunakan metode ultrasonik ( kajian rasio bahan pelarut dan lama ekstraksi ). Jurnal Pangan Dan Agroindustri , 3 (3), 928–938. Milind, P., & Dev, C. (2012). Review Article Orange : range of benefits, Journal Pharmacy . 3 (7), 3–7.
Parwata,  O.  A.,  Ratnayani,  K.,  &  Listya,  A.  (2010).  Aktivitas  antiradikal  bebas  serta  kadar beta  karoten  pada  madu  randu  (Ceiba  pentandra)  dan  madu  kelengkeng  (Nephelium longata L.). Jurnal Kimia , 4 (1), 54–62. Rizkiyah, R., & Aziz, Z. (2016). Analysis of beta-carotene in green melon and orange melon (Cucumis melo L. var. Sky Rock and var. Cantaloupe) by TLC-Densitometry . Rohman,  A.  (2016). Validasi  dan  penjaminan  mutu  metode  analisis  kimia .  Yogyakarta: Graha Ilmu.
Sari,  A.  E.,  &  Mayasari,  E.  (2013).  Analisa  beta  karoten  pada  sayuran  lokal  di  Indonesia . Jurnal Farmasi Higea , 5 (2).
Starek, M., Guja, A., & Dabrowska, M. (2015). Assay of β-Carotene in Dietary Supplements and Fruit Juices by TLC-Densitometry. Food Analytical Methods , 8 (5), 1347–1355.
Wahyuni,  D.  T.,  &  Widjanarko,  S.  B.  (2015).  Pengaruh  jenis  pelarut  dan  lama  ekstraksi terhadap  ekstrak  karotenoid  labu  kuning  dengan  metode  gelombang  ultrasonik. Jurnal
Pangan Dan Agroindustri , 3 (2), 390–401.
Wang, L., Wang, J., Fang, L., Zheng, Z., Zhi, D., Wang, S., … Zhao, H. (2014). Anticancer activities  of  Citrus  Peel  polymethoxyflavones  related  to  angiogenesis  and  others, BioMed Research International , 1–10 Winarsi, H. (2010). Antioksidan alami & radikal bebas . Yogyakarta: Kanisius.