Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32

## Efektifitas Propolis Pada Perbaikan Histopatologi Hepar Mencit Betina yang Dipapar Logam Berat Pb Asetat

## Effectivity of Propolis on The Improvement of Liver Histophatology of Female Mice Exposed by Heavy Metal Pb Acetate
Rachmani, S.D. 1 , Hestianah, E.P. 2 , Plumerastuti, H. 3 , Darsono, R. 3 Safitri, E. 4*
1 Alumni Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia 2 Departemen Anatomi Veteriner,Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
3 Departemen Patologi Veteriner,Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya,
Indonesia
4 Departemen Reproduksi Veteriner,Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia *e-mail: rma_fispro@yahoo.com

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  propolis  terhadap  gambaran histopatologi hati pada mencit ( Mus musculus ) betina yang terpapar timbal asetat. Subjek penelitian adalah 25 ekor mencit galur BALB / C dengan berat rata-rata 25-35 gram berumur 8 minggu, dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan dan terdiri dari 5 ekor per kelompok. Kelompok K diberi larutan Tween 80 dengan dosis 0,5 mg / kg BB selama 20 hari berturut-turut. Kelompok K + yang hanya diberi timbal asetat dengan dosis 10 mg / kg BB secara oral selama 10 hari. P1, P2, P3 diberikan larutan timbal asetat 10 mg / kg BB secara oral selama 10 hari. 10 hari berikutnya diberikan propolis dengan dosis P1 200 mf / kg BB, P2 400 mg / kg BB, P3 800 mg / kg BB. Pada hari ke 21 mencit dibedah untuk mengamati tingkat kerusakan yang terjadi. Semua data dilakukan menggunakan uji statistik  dengan  uji  Kruskal  Wallis  dan  jika  terdapat  perbedaan  yang  nyata  antar  kelompok perlakuan (p <0,05) maka dilanjutkan uji Mann-Whitney. Hasil penelitian diperoleh bahwa propolis lebah dapat memperbaiki kerusakan sel hati mencit betina yang terpapar timbal asetat. Peningkatan dosis  propolis  tidak  efektif  dalam  memperbaiki  kerusakan  sel  hati  mencit  betina  yang  terpapar timbal asetat.

## Kata kunci: Propolis, timbal asetat, histopathologi hati, mencit betina

## ABSTRACT
The purpose of this study was to find out the effect of propolis on histopathology images of hepatic  mice  ( Mus  musculus )  of  female  exposed  by  lead  acetate.  The  subjects  were  25  mice  of BALB/C strain with average weight 25-35 gram and 8 weeks old, divided into 5 treatment groups and consist of 5 mice per group. The K- group was given Tween 80 solution at a doses of 0.5 mg/kg BW for 20 consecutive days. The K+ group, which was given only lead acetate at a doses of 10 mg/kg BW orally for 10 days. P1, P2, P3 were given 10 mg/kg BW lead acxetate solution orally for 10 days. The following 10 days were given propolis with doses of P1 200 mf/kg BW, P2 400 mg/kg BW, P3 800 mg/kg BW. On the 21 th days the mice were dissected to observe the extent of the damage. All data  were  performed  using  statistical  test  with  Kruskal  Wallis  test  and  if  there  was  a  marked difference  between  treatment  groups  (p<0.05),  then  the  Mann-Whitney  test  was  followed.  The
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
Available at https://e-journal.unair.ac.id/MKH/index
results obtained that bee propolis can repair hepatic cell damage in mice of female exposed by lead acetate. Increased dose of propolis is ineffective in repairing hepatic cell damage in mice of female exposed by lead acetate.
Keywords: Propolis, lead acetate,  liver histopathology, female mice

## PENDAHULUAN
Peningkatan  proses  industrialisasi berakibat  pada  peningkatan  pencemaran berbagai  logam  berat.  Hal  ini  dikarenakan pabrik  industri  yang  dibangun  dengan  tidak mengikuti sistem instalasi pengolahan air dan limbah (IPAL) yang memadai, akan berakibat pada  peningkatan  limbah  yang  dibuang  ke lingkungan.    Salah  satu  limbah  logam  dari banyak  jenis  yang  menjadi  pencemar lingkungan  adalah  timbal  (Pb  asetat) (Wardhayani,  2006).  Timbal  dapat  masuk dalam  tubuh  mahluk  hidup  melalui  saluran pencernaan (gastrointestinal), saluran pernafasan  (inhalasi),  dan  penetrasi  melalui kulit  (topikal),  baik  secara  langsung  maupun tidak langsung. Makanan dan minuman dapat terpapar timbal yang berasal dari kontaminasi pipa,  solder,  kran  dan  kontamunasi  kaleng minuman  dan  makanan  yang  mengandung timbal (Dedy, 2008).
Toksisitas  Pb  terutama  memberikan dampak yang berat pada organ-organ penting pada mahluk hidup misalnya pada hepar dan ginjal  (Darmono,  2001).  Hepar  merupakan organ  tubuh  terbesar  dan  organ  metabolism yang paling kompleks di dalam tubuh. Organ ini  terlibat  dalam  metabolism  zat  makanan serta  Sebagian  besar  obat  toksikan.  Menurut Santosa  (2005)  apabila  senyawa  racun  yang masuk  terlalu  besar  sehingga  bersifat  toksis pada  hepar,  maka  akan  menimbulkan degenerasi  jaringan  hepar,  bahkan  sampai terjadi  nekrosis  yang  dapat  merusak  jaringan hepar,  Hepar  berperan  dalam  melakukan proses  metabolisme  dan  detoksifikasi  untuk menetralkan  senyawa  yang  bersifat  racun dalam tubuh,  Adapun mekanisme kerusakan hepar  oleh  Pb  dapat  terjadi  akibat meningkatnya  radikal  bebas  dan  penurunan kemampuan  system  antioksidan  tubuh sehingga  memicu  stress  oksidatif  (Gurer  and Ercal,  2000).  Untuk  melindungi  hepar  dari
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
keruskan tersebut, maka diperlukan zat yang mampu melawan radikal bebas akibat paparan Pb,  yaitu  dengan  antioksidan  (Adams  and Angulo, 2006).
Kandungan  antioksidan  yang  tinggi terdapat pada propolis. Komponen utama dari propolis  adalah  flavonoid  dan  asam  fenolat, termasuk Caffeic  Acid  Phenetyl  Ester (CAPE).
Penelitian  di  Jepang  menunjukkan  bahwa kandungan CAPE yang ada di dalam propolis mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi yang dapat meningkatkan ekspresi glucose-6- phosphate  dehydrogenese  (G6PD)  yang didapat  dari  ekspresi  gen  antioksidan,  lebih kuat  dibandingkan  vitamin  E.  CAPE mempunyai aktivitas antioksidan 4-6 kali lebih kuat  terhadap  oksidan  seperti  H 2 O 2 dan radikal bebas dibandingkan vitamin C dan N- acetyl-cystein (NAC) (Nakajima, 2009).
Propolis  terbukti  memiliki  efek hepatoprotektor  yang  baik,  namun  belum diketahui  pengaruh  pemberian  propolis terhadap gambaran histopatologi hepar mencit ( Mus  musculus )  betina  yang  dipapar  logam berat Pb asetat.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  menggunakan  25  ekor mencit  ( Mus  musculus )  betina  strain  BALB  C dengan  berat  rata-rata  25-30  gram  dan berumur 8 minggu yang diperoleh dari Pusat Veteriner  Farma  (Pusvetma),  Surabaya,  Jawa Timur.  Kemudian  dipelihara  dalam  kondisi yang sama, diberikan pakan harian berbentuk pellet serta air minum yang diberikan secara ad libitum .
Sebelum  penelitian  dilakukan,  mencit betina  diadaptasikan  selama  7  hari  dan diberikan pakan pellet serta air minum secara ad libitum setiap hari.
Persiapan bahan timbal asetat dan pembuatan propolis Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah timbal asetat [Pb(C 2 H 3 O 2 ) 2 ].  Tablet  propolis  lebah  (CC Pollen  Co,  USA,  PT.  Harmoni    Dinamik Indonesia  Jakarta)    dihaluskan  sampai  halus dan  homogen  meggunakan  mortar  dan stamper.  Setelah  itu  ditambahkan  dengan tween 80 sebanyak 1% sebagai suspensator.

## Prosedur Penelitian
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
Received: 14-09-2019, Accepted: 08-12-2019, Published online: 29-01-2020
Available at https://e-journal.unair.ac.id/MKH/index
Mencit  diberikan  perlakuan  dengan propolis  dan  timbal  asetat  secara  per  oral menggunakan  1  ml  tuberculin  sekali  pakai selama  20  hari.  Perlakuan  tersebut  dijelaskan sebagai berikut:
K (-)  :  Kelompok  kontrol,  hanya hanya diberi Tween 80 sebanyak  0.5  ml/ekor/hari
selama  20 hari
K (+)  :  Larutan  Pb  asetat  10 mg/kg/BB selama 10 hari P (1)  :  Larutan  Pb  asetat  10 mg/kg/BB  selama  10  hari  + propolis  200  mg/kg  BB  selama 10 hari berikutnya
P (2)  :  Larutan  Pb  asetat  10 mg/kg/BB  selama  10  hari  + propolis  400  mg/kg  BB  selama 10 hari berikutnya
P (1)  :  Larutan  Pb  asetat  10 mg/kg/BB  selama  10  hari  + propolis  800  mg/kg  BB  selama 10 hari berikutnya
Setelah 24 jam dari pemberian propolis terakhir,  mencit  dikorbankan  denga  metode
dislocation  cervicalis ,  kemudian  dilakukan pengambilan  organ  hepar  mencit  dan dimasukkan dalam Neutral Buffered Formalin 10%. Perubahan yang diamati adalah :
Degenerasi : kelainan yang menyebabkan perubahan pada sitoplasma sel berupa pembengkakan, akumulasi  air  dan kekeruhan sitoplasma. Nekrosis :  kematian  sel  dari jaringan  tubuh  yang masih hidup dan ditandai dengan Adanya perubahan pada  inti  sel  berupa piknotis, karioreksis
dan kariolisis.
Hal  ini  terjadi  Ketika  tidak  ada  cukup  darah mengalir  ke  jaringan  baik  karena  cidera, radiasi atau bahan kimia.
Pemeriksaan  preparat  histopatologi hepar  dilakukan  dengan  mengamati  lesi dengan vena sentralis berada ditengah-tengah
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
Received: 14-09-2019, Accepted: 08-12-2019, Published online: 29-01-2020 Available at https://e-journal.unair.ac.id/MKH/index
lapang pandang dan menggunakan mikroskop cahaya pembesaran 400x. Kemudian
dilakukan  pem\nilaian  derajat  kerusakan
hepar.  Penilaian  derajat  kerusakan  hepar
menggunakan  metode  scoring  berdasarkan persen  terjadinya  degenerasi  dan  nekrosis (Brunt el al ., 1999) (Tabel 1).
Tabel 3.1. Skor penilaian derajat histopathologi sel hepar Derajat Degenerasi Nekrosis Tidak ada 0 0 Minimal (0-25%) 1 1 Ringan (25-50%) 2 2 Sedang (50-75%) 3 3 Berat (75-100%) 4 4

## Pengamatan gambaran mikroskopik hepar
Pemeriksaan sediaan hepar yang sudah diwarnai dengan pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE)  menggunakan  mikroskop  cahaya Olympus dengan perbesaran 400x.

## Analisis Data
Data yang diperoleh berupa skor nilai gambaran  histopatologi  yang  meliputi degenerasi dan nekrosis hepatosit mencit yang disusun  dalam  bentuk  table  kemudian dilakukan  analisis  statistik.  Analisis  data dilakukan  uji  statistic  dengan  menggunakab
uji Krukal  Wallis dan  bila  terdapat  perbedaan yang  nyata  diantara  kelompok  perlakuan (p<0.05),  maka  dilanjutkan  dengan  uji Mann- Whitney .  Seluruh  analisis  tersebut  dikerjakan dengan  program  computer  SPSS  18.00 for Windows .

## HASIL
Hasil pemeriksaan histopatologi hepar mencit ( Mus musculus ) betina sebagai hewan coba dalam penelitian berdasarkan pengamatan degenerasi dan nekrosis hepar ini dapat dilihat  pada   Tabel 2.
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32

## Tabel 2. Nilai Rerata Tingkat Degenerasi dan Nekrosis Hepatosit
Perlakuan Reratan ± SD Degenerasi Rerata ± SD Nekrosis K- = Kelompok kontrol, hanya hanya diberi Tween 80 sebanyak 0.5 ml/ekor/hari selama 20 hari K+ = Larutan Pb asetat 10 mg/kg/BB selama 10 hari 3.00 a ± 1.32
23.0 d ± 1.45 6.00 a ± 0.43
23.0 d ± 0.48
P1  = Larutan Pb asetat 10 mg/kg/BB selama 10 hari + propolis 200 mg/kg BB selama 10 hari berikutnya 15.7 c ± 1.22 17.6 c ± 0.52
P2  = Larutan Pb asetat 10 mg/kg/BB selama 10 hari
+ propolis 400 mg/kg BB selama 10 hari berikutnya 15.3 c ± 1.08 12.7 b ± 0.55
P3  = Larutan Pb asetat 10 mg/kg/BB selama 10 hari
+ propolis 800 mg/kg BB selama 10 hari berikutnya 8.00 b ± 1.47 6.00 a ± 0.48
Superskrip yang berbeda pada kolom yang sama memperlihatkan perbedaan yang nyata (P<0,05)

## DISKUSI
Berdasarkan  hasil  penelitian,  pada kelompok K- yang tidak terpapar Pb asetat dan tanpa  pemberian  propolis,  kondisi  hepar normal  karena  sel  hepatosit  tidak  mengalami jejas,  inti  sel  Nampak  berwarna  biru  dan sitoplasma  Nampak  berwarna  keunguan karena bersifat eosinofilik. Kelompok perlakuan  K+  yang  tanpa  diberikan  propolis namun  dipapar  logam  berat  Pb  asetat  10 mg/kgBB  menunjukkan  kelainan  patologi
degenerasi tertinggi skor 4 artinya degenerasi dan  nekrosis  terjadi  75%-100%  dari  seluruh lapangan  pandang  dibandingkan  dengan kelompok  perlakuan  lainnya.  Timbal  yang masuk  ke  dalam  tubuh  melalui  saluran pencernaan  akan  diabsorbsi  oleh  usus  untuk dimetabolisme di hepar. Vena porta membawa darah deoksigenasi dan zat toksik timbal yang diabsorbsi  dari  usus.  Cabang  dari  vena  porta membawa  darah  terebut  ke  sinusoid  yang kemudian  diiterima  oleh  sel  hepar.  Timbal
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
Received: 14-09-2019, Accepted: 08-12-2019, Published online: 29-01-2020
Available at https://e-journal.unair.ac.id/MKH/index
dalam  sel  hepatosit  dapat  menginduksi pembentukan radikal bebas dan menurunkan kemampuan  sistem  antioksidan  tubuh sehingga  terjadi  stress  oksidatif.  Menurut penelitian  Jin et  al .  (2008)  mencit  yang  diberi logam  berat  Pb  asetat  dosis  10  mg/kg  BB secara  oral  dapat  memicu  timbulnya  stress oksidatif. Stress oksidattif memicu
pembentukan  radikal  bebas  yaitu Reactive Oxygen Species (ROS) yang dapat bereaksi den menyebabkan  kerusakan  pada  banyak molekul  di  dalam  sel.  Perusakan  sel  akibat ROS didahului oleh kerusakan membrane sel antara  lain  mengubah  fluiditas,  struktur  dan fungsi  membrane  sel  (Sipos  et  al.,  2003). Radikal  bebas  berikatan  dengan  lipid  dari membrane sel hepatosit membentuk
peroksidasi  lipid.  Konsekuensi  penting  dari peroksidasi  lipid  adalah  meningkatnya permeabilitas membrane yang dapat menggaggu  proses  pompa  ion  Ca 2+ dan hambatan terhadap proses pompa ion Na+ dan K+  di  dalam  sel  sehingga  terjadi  degenerasi pada  sel  karena  gangguan  hemostasis. Keadaan  sel  yang  mengalami  gangguan
tersebut  dapat  menyebabkan  keadaan  di dalam  sel  lebih  pekat  dan  bersifat  hipotonis sedangkan  keadaan  ekstraseluler  menjadi hipertonis  sehingga  cairan  yang  berada  pada ekstraseluler akanmmasuk ke dalam intraseluler  dan  menyebabkan  gangguan patologi  yang  biasa  disebut  degenerasi hidrofik.
Secara umum degenerasi
dikarenakan  adanya  penurunan  kemampuan system  pompa  ion  Na+  dalam  sel  yang menyebabkan pembengkakan sel dan degenerasi keruh (Kresnasari dkk., 2014).
Pada kelompok P1 yang diberi propolis 200  mg/kgBB  tampak  histopatologi  hepar berupa  degenerasi  hidrofik,  yang  merupakan jejas  yang  reversible.  Peran  propolis  pada  P1 telah  menunjukan  perbaikan  jejas  sel,  namun masih  belum  mencapai  keadaan  normal. Perubahan  yang  terjadi  adalah  sel  hepatosit Nampak  membengkak  berisi  cairan,  inti  sel masih  terlihat  jelas  dan  jaringan  hepar  masih dapat  dikenali.  Sel    hepatosit  masih  Nampak membesar dan mendesak sinusoid. Sitoplasma sel  tampak  keruh  dan  pucat.  Hal  tersebut terjadi karena jumlah zar aktif yang berperan
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
Received: 14-09-2019, Accepted: 08-12-2019, Published online: 29-01-2020
Available at https://e-journal.unair.ac.id/MKH/index
sebagai antioksidan dalam propolis pada dosis tersebut  masih  belum  cukup  efektif  untuk melawan radikal bebas.
Pada  kelompok  perlakuan  P2  yang diberikan propolis 400 mb/kg BB juga masih terlihat adanya degenerasi hidrofilik disebabkan  terganggunya  metabolism  energi dalam sela tau karena cedera pada membrane sel  sehingga  sel  tidak  mampu  memompa  ion Na+  yang  cukup  (Resaang,  1994)  tetapi jumlahnya tidak sebanyak kelompok perlakuan  sebelumnya.  Kelompok  perlakuan P3  yang  diberikan  propolis  800  mg/kg  BB terjadi degenerasi ringan. Peran propolis pada konsentrasi  initelah  dapat  memperbaiki  jejas sel  yang  reversible,  dikarenakan  keadaanya hamper mencapai normal. Propolis mengandung  flavonoid.  Senyawa  flavonoid berperan  dalam  aktivitas  antioksidan,  yaitu dengan  menghambat  dihasilkannya  agen oksidatif  seperti  ROS  oleh  sel  darah  perifer, atau  dengan  menghambat  paparan  osidatif dalam  tubuh  yang  melindungi  lipid  protein agar  tidak  berubah  menjadi  lipid  peroksida. Kedua  mekanisme  ini  membuat  flavonoid
memiliki beberapa efek, diantaranya menghambat  peroksidase  lipid,  menahan kerusakan  jaringan  oleh  radikal  bebas (Krisnatuti dan Yenrina, 2005).
Pada kelompok K+ yang hanya dipapar logsm berat Pb asetat 10 mg/kg BB mengalami nekrosis  paling  parah  dengan  nilai  skor  4, artinya  nekrosis  terjadi  pada  75%-100%  dari seluruh  lapangan  pandang,  terjadi  kematian sel  yang  bersifat  irreversible  yaitu  kariolisis. Inti sel menjadi hilang sehingga pada gambar tampak  sebagai  sel  yang  kosong  (Wulandari, 2006).  Apabila  darah  dari  vena  porta  banyak membawa  racun  atau  toksin,  maka  zona pertama paling dekat dengan sumber pasokan darah  yang  pertama  kali  terkena  zat  toksik tersebut sehingga kerusakan sel paling banyak ditemukan pada sekitar portalis (Arimbi dkk., 2013).
Pada kelompok perlakuan K- yang tanpa dipapar logam berat Pb asetat dan propolis, P1 yang  diberi  propolis  200  mg/kg  BB  dan  P2 yang  diberi  propolis  400  mg/kg  BB  masih terlihat adanya nekrosis, tetapi dalam jumlah yang sedikit, tidak merata, bahkan dibeberapa
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
tempat  nekrosis  tidak  terjadi  sehingga  skor yang  di  dapat  adalah  0.  Pada  kelompok perlakuan P3 yang diberi propolis 800 g/kg BB telah dapat memperbaiki jejas sel sama halnya dengan antibiotik sehingga kematian sel yang bersifat irreversible dapat dicegah.
Propolis  dapat  berfungsi  memperbaiki kondisi patologi dari bagian tubuh yang sakit, bekerja  sebagai  antioksidan  dan  antibiotik serta  meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh baik  humoral  maupun  seluler  karena mengandung  flavonoid  sekitar  15%  (Krell, 1996).  Flavonoid  merupakan  antioksidan  dan antibiotic  yang  berfungsi  menguatkan  Dan mengantisipasi  kerusakan  pada  pembuluh darah serta bahan aktif yang berfungsi sebagai anti  radang  dan  antivirus.  Daya  antioksidan menggambarkan  besarnya  potensi  propolis untuk  berperan  sebagai  antioksiidan.  Anti oksidan  yang  ada  dapat  meredam  dampak negative dari oksidan dengancara memberikan elektronya pada oksidan, antioksidan tersebut mampu mencegah dan meregenerasi kerusakan  sel  akibat  radikal  bebas  (Widjaja, 1997).

## KESIMPULAN
Disimpulkan bahwa pemberian propolis  memberikan  pengaruh  yang  dapat memperbaiki  sel  hepatosit  dari  kerusakan akibat  paparan  logam  berat  Pb  asetat. Pemberian  propolis  dengan  dosis  800  mg/kg BB paling baik memperbaiki sel hepatosit dari kerusakan akibat logam berat Pb asetat.

## DAFTAR PUSTAKA
Adams L.A and P. Angulo. 2006. Treatment of non  alcoholic  fatty  liver  disease. Postgrad Med. 82: 315-22.
Arimbi,  A.  Azmijah,  R.  Darsono,  H.
Plumerastuti,  T.V.  Widiyatno,  D.
Legowo  .2013.  Buku  Ajar  Patologi Umum  Veteriner.  Airlangga  University Press. Surabaya. 9-10.
Darmono.  2001.  Lingkungan  Hidup  dan
Pencemaran. Hubungan dengan
Toksikologi  Senyawa  Logam.  Penerbit Universitas  Indonesia  (UI  Press).  109, 112, 140.
Dedy,  S.  2008.  Pengaruh  Proteksi  Vitamin  C terhadap  enzim  Transminaze  dan gambaran  histopatologi  hepar  mencit
Rachmani et al. MKH (2020). 23-32 DOI: 10.20473/mkh.v31i1.2020.23-32
Received: 14-09-2019, Accepted: 08-12-2019, Published online: 29-01-2020 Available at https://e-journal.unair.ac.id/MKH/index
yang dipapar plumbum (Tesis) Sumatra Utara. Universitas Sumatra Utara.
Jin X, L. Ling-Jun, W. Chen, W. Xiao-Feng, F.
Wen-Yu  and  X.  Li-Hong.  2008.  Lead induces oxidative oxidative strass, DNA damage  and  alteration  of  p53,  Bax  and Bcl-2 expression in mice. Food and Chem Tox. 46: 1488-1494.
Krell,  R.  1996. Value  added  product  from beekeeping .

## http://www.fao.org/docrep/w0076e
Krisnasari, D, K. Diah, S. Hidayat, R.B.A Viva .2014. Efek propolis terhadap fungsi dan perlemakan  hati  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  model  Hiperkolesterolemia.
Jurusan  Kedokteran.FKIK.  Universitas Jendral Soedirman. Purwokerto.
Krisnatuti,  D  dan  S.  Yenrina  .2005.
Menyiapkan makanan pendamping ASI.
Pustaka Swara. Jakarta.
Lu,  F.C.  1995.  Toksikologi  dasar,  azas,  orga sasaran  dan  penilaian  resiko.  Edisi Kedua. Jakarta. Penerbit UI. Hal. 224-235.
Nakajima,  Y  .2009.  Comparison  of  bee products based on assays of antioksidant
capacities.  BMC  Complementary  and Alternative Medicine.
Ressang, M.D. 1984. Patologi khusud veteriner.
Edisi kedua. Team Leader IFAD Project : Bali  cattle  disease  investigation  unit. Denpasar. Bali 45-46.
Sipos, P, K. Szentmihalyl, E. Feher, M. Abaza,
M. Szilsgyl and A. Blazovics .2003. Some effects of lead contamination on liver and gallbladder bile. Acta Biol Szegediensia. 47()1-4): 139-142.
Wardhayani,  S.  2006.  Analisis  resiko pencemaran  bahan  toksik  timbal  (Pb) pada sapi potong di tempat pembuangan akhir  (TPA)  sampah  jatibarang  (Tesis).
Fakultas Kesehatan Lingkungan Universitas Diponegoro.
Widjaya,  S.  1997.  Antioksidan  pertahanan tubuh terhadap efek oksidan dan radikal bebas. Maj. Ilm Fak Kedok. Usakti. 16(1):
162 .