## UJI ANTIOKSIDAN KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN ALPUKAT (Persea americana Mill.) DAN DAUN JAMBU BIJI
( Psidium guajava L .) METODE DPPH DAN FRAP
Dollince Douw 1 , Tatiana Siska Wardani 2 ,
1) Universitas Duta Bangsa Surakarta
2) Universitas Setia Budi Surakarta e-mail: dollinced@gmail.com

## ABSTRAK
Radikal  bebas  (free  radical)  adalah  suatu  senyawa  atau  molekul  yang mengandung  satu  atau  lebih  elektron  tidak  berpasangan  pada  orbital  luarnya. Semua bentuk gangguan tersebut dapat memicu munculnya berbagai penyakit seperti penyakit degeneratif hingga kanker. Oleh karena itu dilakukan penelitian yang  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  kombinasi  ekstrak etanol 96% daun alpukat (Persea americana Mill.) dan daun jambu biji (Psidium guajava L.) sebagai antioksidan ditinjau dari kapasitas peredaman radikal bebas pada  dua  ekstrak  tersebut  dibandingkan  dengan  larutan  standar  Vitamin  C dengan  seri  konsentrasi  secara  kombinasi  kedua  ekstrak  etanol  96% manggunakan  metode  DPPH  (2,2-difenil-1-  pikrilhidrazil)  dan  FRAP  ( Freec Reducing  antioxidant  power)  secara  Spektrofotometri  UV/Visibel.  Hasil  uji antioksidan  dari  kombinasi  ekstrak  daun  alpukat  dan  daun  jambu  biji menunjukkan pada metode DPPH nilai IC50 89,282 ppm mempunyai antiokidan aktif,  FRAP  IC50  47,795  ppm  mempunyai  antioksidan  sangat  aktif.  Nilai antioksidan  optimum  peredam  radikal  bebas  kombinasi  ekstrak  etanol  daun alpukat  ( Persea  americana Mill.)  dan  daun  jambu  biji  ( Psidium  guajava L .)  pada metode  FRAP  nilai  IC 50 47,795  ppm.    Hasil  IC 50 sangat  kuat  terdapat  pada metode  FRAP  nilai  IC 50 47,795  ppm  dibandingkan  metode  DPPH  nilai  IC 50 89,282 ppm. Dari kedua metode DPPH dan FRAP yang memiliki kadar optimum terdapat pada metode FRAP nilai IC 50 47,795 ppm.
Kata kunci: Daun alpukat, jambu biji, antioksidan

## ABSTRACT
Free radicals are compounds or molecules that contain one or more unpaired electrons in their  outer  orbitals.  All  forms  of  these  disorders  can  trigger  the  emergence  of  various diseases such as degenerative diseases to cancer. Therefore, a study was conducted which aimed to determine  the antioxidant  activity of a  combination  of 96% ethanol extract  of avocado  leaves  (Persea  americana  Mill.)  and  guava  leaves  (Psidium  guajava  L.)  as antioxidants in terms of the free radical scavenging capacity of the two extracts compared to standard solutions. Vitamin C with a series of concentrations in combination with the two  96%  ethanol  extracts  using  the  DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)  and  FRAP (Free  Reducing  antioxidant  power)  methods  by  UV/Visible  Spectrophotometry.  The
antioxidant test results from the combination of avocado and guava leaf extracts showed that in the DPPH method the IC50 value of 89.282 ppm had an active antioxidant, FRAP IC50 47.795 ppm had a very active antioxidant. The optimum antioxidant value of free radical scavengers combined with the ethanol extract of avocado leaves (Persea americana Mill.) and guava leaves (Psidium guajava L.) in the FRAP method IC50 value of 47.795 ppm. Very strong IC50 results were found in the FRAP method with an IC50 value of 47.795 ppm compared to the DPPH method with an IC50 value of 89.282 ppm. Of the two DPPH and FRAP methods which have optimum levels found in the FRAP method the IC50 value is 47.795 ppm.
Keywords: Avocado leaves, guava, antioxidants

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  ( free  radical )  adalah  suatu  senyawa  atau  molekul  yang mengandung  satu  atau  lebih  elektron  tidak  berpasangan  pada  orbital  luarnya. Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif  mencari  pasangan  dengan  cara  menyerang  dan  mengikat  elektron molekul yang berada disekitarnya. Radikal bebas dapat menyebabkan gangguan fungsi  sel,  kerusakan  struktur  sel,  molekul  termodifikasi  yang  tidak  dapat dikenali oleh sistem imun, dan bahkan mutasi. Semua bentuk gangguan tersebut dapat memicu munculnya berbagai penyakit seperti penyakit degeneratif hingga kanker.  Oleh  sebab  itu,  tubuh  kita  memerlukan  suatu  substansi  penting,  yakni antioksidan  yang  dapat  melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal  bebas  dan meredam dampak negatifnya (Amin, H. 2015) .
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  menghambat  reaksi oksidasi,  dengan  mengikat  radikal  bebas  dan  molekul  yang  sangat  reaktif. Akibatnya, kerusakan sel dapat dihambat. Berdasarkan sumbernya, antioksidan dapat  digolongkan  menjadi  2  jenis  yaitu  antioksidan  alami  dan  antioksidan sintesis.  Namun  adanya  kekhawatiran  terhadap  efek  samping  antioksidan sintetik  menjadikan  antioksidan  alami  sebagai alternatif  yang  terpilih ( Amin,  H. 2015) .
Tanaman  merupakan  salah  satu  sumber  antioksidan  alami,  oleh  karena  itu perlu  digali  terus  menerus  penelitiannya  untuk  mendapatkan  sumber antioksidan  potensial.  Beberapa  sumber  tanaman  yang  telah  diuji  aktivitas antioksidannya adalah daun alpukat dan daun jambu biji. Daun alpukat dikenal
masyarakat  sebagai  pengobatan  kencing  batu,  antihipertensi,  anti  inflamasi. Sedangkan  daun  jambu  biji  dikenal  masyarakat  sebagai  anti  inflamasi,  anti mutagenik, anti mikroba, analgesik antidiare, pengobatan sakit maag, sariawan, keputihan, perut kembung pada anak, sakit kulit, diabetes dan besar atau sering buang air kecil (Abdul Latif, 2012).
Metode yang dapat digunakan untuk menguji adanya aktivitas antioksidan adalah metode DPPH. Metode DPPH ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ) mengukur daya peredaman sampel (ekstrak) terhadap radikal bebas DPPH. DPPH akan bereaksi dengan  atom  hidrogen  dari  senyawa  peredaman  radikal  bebas  membentuk DPPH  yang  lebih  stabil.  Senyawa  peredaman  radikal  bebas  yang  bereaksi dengan DPPH akan menjadi radikal baru yang lebih stabil atau senyawa bukan radika (P. A. Z. Hasibuan, 2017).
Benzie  dan  Strain  (1996)  mengemukakan  bahwa  metode  FRAP  adalah metode  yang  digunakan  untuk  menguji  antioksidan  dalam  tumbuh-tumbuhan. Kelebihan  metode  FRAP  ini  yaitu  metodenya  murah,  reagennya  mudah disiapkan  dan  cukup  sederhana  dan  cepat.  Metode  ini  dapat  menentukan kandungan  antioksidan    total  dari  suatu  bahan  berdasarkan    kemampuan senyawa  antioksidan untuk mereduksi ion Fe³ ⁺ menjadi Fe² ⁺ sehingga kekuatan antioksidan  suatu  senyawa  dianalogikan  dengan  kemampuan  mereduksi  dari senyawa tersebut
Aktivitas  antioksidan  daun  alpukat  telah  dibuktikan  oleh . Zaiyar et  al , (2021) dengan  nilai  IC 50 sebesar  118.8056  µg/mL.  Sedangkan  aktivitas antioksidan  daun  jambu    biji  telah  dibuktikan  oleh Bagus  Wicaksono  (2017) dengan  nilai  IC50  sebesar  37,14  µg/mL.  Kombinasi  dari  dua  atau  lebih  jenis antioksidan  dimungkinkan  dapat  menghasilkan  potensi  aktivitas  antioksidan yang  lebih  tinggi ( Lingga,  L,  2012 ) .  Beberapa  penelitian  antioksidan  dengan mengkombinasi  tanaman  telah  dilakukan  untuk  meningkatkan  potensi antioksidan seperti temu ireng, temu lawak, temu giring dan kunyit (Simanjuntak .2008) .  Sarang  semut  dan  teh  hitam (Utomo et  al., 2011) , daun  sirsak  dan  daun jambu biji ( Bagus Wicaksono, 2017) .
Oleh  karena  itu  dilakukan  penelitian  yang  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  kombinasi  ekstrak  etanol  96%  daun  alpukat  ( Persea
americana Mill.)  dan  daun  jambu  biji  ( Psidium  guajava  L.) sebagai  antioksidan ditinjau  dari  kapasitas  peredaman  radikal  bebas  pada  dua  ekstrak  tersebut dibandingkan dengan larutan standar Vitamin C dengan seri konsentrasi secara kombinasi kedua ekstrak etanol 96%  manggunakan metode DPPH ( 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil ) dan FRAP ( Freec Reducing antioxidant power ) secara Spektrofotometri UV/Visibel.

## METODOLOGI PENELITIAN
Jenis  Penelitian yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah eksperimental. Tempat  Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Bahan  Alam Universitas  Duta  Bangsa  Surakarta  dan  Determinasi    dilakukan  di  Balai Penelitian Pengembangan Obat Dan Obat Tradisional (BP2TOO). Pengambilan sampel  dilakukan  di  Daerah  Kwadungan,  Kecamatan  Kerjo,  Kabupaten Karanganyar, Provinsi Jawa Tengah. Waktu penelitian ini berlangsung selama bulan  November  sampai  dengan  bulan  Februari  2023. Populasi  dalam penelitian ini adalah semua tanaman alpukat dan  jambu biji yang tumbuh di Daerah Kwadungan, Kecamatan Kerjo Kabupaten Karanganyar. Sampel dalam penelitian  ini  adalah  daun  alpukat  dan    daun  jambu  biji  sebanyak  masing- masing sampel sebanyak 3 kg.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  spektrofotometer UV-Vis (DA-X B-One), kuvet ( disposable ), rotary evarator (RE 100-PRO),waterbath (Memert WNB14RING), mikropipet ( yellow tips , P100), moinsture balance (MB120 OHAUS), tabung sentrifuges (4000RPM), penangas air ( Memmert ), neraca analitik ( Mettler  Toledo ),  tabung  reaksi,  corong  gelas  100  mm,  beaker  glas,  gelas  ukur, batang  pengaduk,  labu  takar  100  ml,  labu  ukur,  cawan  porselin,  spatula,  botol maserasi, aluminium foil, kain flannel, kertas saring.
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini antara lain ekstrak daun alpukat, daun jambu biji, serbuk asam askorbat , metanol pro analisa (metanol p.a),  serbuk  magnesium,  NaOH,  HCl  2  N,  KH2PO4,  kalium  ferisinida  asam asetat anhidrida, asam sulfat pekat, FeCl3, asam trikloroasetat (TCA), pereaksi meyer, pereaksi bouchardat, preaksi draendorf, dan aquadest.

## Prosedur Kerja
Sampel yang digunakan adalah bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun alpukat dan daun jambu biji masing-masing  sebanyak 3 kg  yang diperoleh  dari  Daerah  Kwadungan,  Kecamatan  Kerjo  Kabupaten  Karanganyar, Provinsi  Jawa  Tengah.  Determinasi  tumbuhan  dilakukan  di  Balai  Penelitian Pengembangan Obat Dan Obat Tradisional (BP2TOO). Sampel dibersihkan dari pengotor, dicuci hingga bersih, ditiriskan, dipotong menjadi ukuran yang kecil, kemudian  ditimbang.  Selanjutnya  daun  alpukat  dan  daun  jambu  biji  tersebut dikeringkan dengan diangin-anginkan. Daun alpukat dan daun jambu biji yang telah kering dapat ditandai dengan peremasan, dimana daun yang telah kering akan  rapuh.  Simplisia  yang  telah  kering  ditimbang.  Kemudian  dihaluskan menjadi serbuk halus dan diayakan dengan ayakan No 40  lalu dimasukkan ke dalam wadah tertutup rapat dan disimpan pada suhu kamar. Pembuatan ekstrak etanol    daun  alpukat  dan  daun  jambu  biji  dilakukan  dengan  metode  maserasi. Sebanyak 300 gram serbuk simplisia daun alpukat dan daun jambu biji masing- masing direndam menggunakan 3000 ml pelarut etanol (1:10), dibiarkan selama 3  hari  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  3  hari,  sampel  disaring  menggunakan kertas  saring.  Residu  yang  tersisa  dilakukan  remaserasi  sebanyak  2x  dengan penambahan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  3000  ml,  dibiarkan  selama  2  hari sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  2  hari,  remaserasi  disaring  sehingga menghasilkan  filtrat  2.  Filtrat  1  dan  2  dicampur  menjadi  satu,  lalu  diuapkan menggunakan waterbath, sampai diperoleh ekstrak kental.

## Skrining Fitokimia

## Tanin/fenolik
Membuat  larutan  100  mg  ekstrak  ditambah  dengan  10  ml  etanol  96%.  lalu diambil 2 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambah 2-3 tetes larutan  FeCl3  1%.  Hasil  positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  hijau kehitaman.

## Flavonoid
Sebanyak 2 gram ekstrak dimasukkan kedalam tabung reaksi ditambahkan 0,1 g serbuk Mg, 1 mL HCl lalu dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol.

## Alkaloid
Mengambil 1 mg larutan dimasukkan kedalam tabung reaksi kemudian ditetesi dengan 2 ml HCl 2 N pekat lalu ditambahkan  pereaksi mayer dan dragendrof. Hasil positif ditunjukan dengan terbentuknya endapan putih pada penambahan meyer dan pada dreagendrof terbentuk endapan jingga.

## Saponin
Mengambil  1  gram    dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  2  ml akuades  panas    dan  dikocok  kuat  selama  10  menit.  Hasil  positif  apabila  buih yang terbentuk stabil selama tidak kurang dari 10 menit.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan metode DPPH
Pembuatan Larutan Stok DPPH 50 ppm.
Ditimbang sebanyak 5 mg DPPH kemudian dilarutkan dengan 100 mL metanol p. a pada pada labu ukur.

## Pembuatan Larutan Stok Vitamin C 1000 ppm
Ditimbang 50  mg  Vitamin  C  (asam  askorbat)  kemudian  dilarutkan dengan  50 mL metanol p.a pada labu ukur

## Pembuatan Larutan Stok Ekstrak Kombinasi Daun Alpukat dan Daun Jambu
Biji
Ditimbang  ekstrak  daun  alpukat  dan  daun  jambu  biji,  dengan  perbandingan sampel (0 : 100 mg), (25 mg: 75 mg), (50 mg : 50 mg), (75 mg : 25 mg), dan (100 mg : 0) dilarutkan dengan metanol p.a pada labu ukur dengan konsentrasi 1000 ppm.

## Pengukuran Serapan Blangko
Diambil  sebanyak  3  ml  larutan  stok  DPPH,  kemudian  dilakukan  scanning pangjang  gelombang  dengan  spektrofotometer  UV-VIS  pada  panjang gelombang  400-800  nm,  selanjutnya  serapan  diukur  dengan  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS  pada  panjang  gelombang  maksimal yang diperoleh.

## Pengukuran Aktivitas Pengikat DPPH Dengan Vitamin C
Pengukuran dilakukan dengan dibuat masing-masing 2 ppm,4  ppm, 6 ppm, 8 ppm,  dan  10  ppm  dari  larutan  stok  Vitamin  C  (asam  askorbat)  kemudian dicukupkan  masing-masing  hingga  volume  10 mL  labu  ukur dengan  metanol p.a. Dari larutan tersebut kemudian diambil 1 mL larutan dan tambahkan 2 ml
larutan stok DPPH. Larutan tersebut diinkubasi selama 30 menit dan kemudian diukur  serapan  sampel  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS  pada panjang gelombang  maksimal yang diperoleh 516.

## Pengukuran  Aktivitas  Pengikat  DPPH  Dengan  Ekstrak  Kombinasi  Daun
Alpukat dan Daun Jambu Biji
Pengukuran dilakukan dengan dibuat dari masing-masing 5 ppm, 10 ppm, 25 ppm,  50  ppm  dan  100  ppm  larutan  stok  ekstrak,  dicukupkan  masing-masing hingga  volume  10  mL  labu  ukur  menggunakan  metanol  p.a.  Dari  larutan tersebut  kemudian  diambil  1  mL  larutan  dan  ditambah  2  mL  larutan  stok DPPH. Larutan tersebut diinkubasi selama 30 menit dan diukur serapan sampel dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS  pada  panjang  gelombang maksimal 516 nm.

## Analisis Data
Data  hasil  pembanding  uji  antioksidan  kombinasi  ekstrak  daun  alpukat  dan daun  jambu  biji  dengan  konsentrasi  uji  karakteristik  meliputi  pengujian mikroskopik, susut pengeringan, kadar air dianalisis dengan menggunakan alat monsterbelenc  untuk  mengetahui  perbedaan  rata-rata  pada  berskala  data interval/rasio.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Determinasi
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  tanaman  daun  alpukat  dan  daun jambu  biji  yang  digunakan  dalam  penelitian  sesuai  dengan  tanaman  yang dimaksud yaitu tanaman alpukat dan daun jambu biji.

## Ekstraksi Daun Alpukat Dan Jambu Biji
Hasil akhir yang didapat setelah bobot tetap yaitu ekstrak kental daun alpukat 13.294 g dan daun jambu biji 10.439 gram.
Tabel 6. Rendemen  Ekstrak dan  Serbuk Sampel Bobot Serbuk (gr) Bobot Ekstrak (gr)  Rendemen % (b/b) Daun Alpukat Daun Jambu Biji 600 800 13.294 10,439 2,215 1,304
Berdasarkan  tabel  dapat dijelaskan  bahwa  bobot  serbuk  daun  alpukat  adalah 600 gram dan daun jambu biji adalah 800 gram. Setelah setelah itu serbuk dibuat ekstrak  hasil  bobot  ekstrak  didapatkan  daun  alpukat  adalah  13.294  gram    dan daun  jambu  biji  adalah  10.439  gram.  Sehingga  didapatkan  jumlah  rendemen ekstrak  daun  alpukat  adalah  2,215  %  (b/b)  dan  daun  jambi  biji  adalah  1,304 %b/b.

## Tabel 7. Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Daun Alpukat Dan Daun Jambu
Biji Daun Alpukat Kandungan Kimia Hasil Keterangan Alkaloid - Endapan  berwarna kuning ke coklatan → Dragendrof -  Endapan  putih kabut → Meyer Mayer → kuning,  disertai  endapan putih  hingga  putih  kabut.Dragendroff
→ merah jingga, endapan orange hingga endapan  kuning  kecoklatan (Hanani, M.S.E. 2015) Flavonoid Merah  pada  lapisan amil alkohol Ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah,  kuning,  atau  jingga (Hanani, M.S.E. 2015) Tanin Hijau kecoklatan → FeCl3 Ditandai dengan warna hijau kehitaman,  kecoklatan (Hanani,  M.S.E. 2015) Saponin Berbentuk busa Ditandai  dengan  Berbentuk  busa (Hanani, M.S.E. 2015) Daun Jambu Biji Alkaloid -Endapan    berwarna coklat jingga → Dragendrof. -Endapan putih → Meyer Mayer → kuning,  disertai  endapan putih hingga putih kabut.Dragendrof → merah  jingga,  endapan  orange  hingga endapan  kuning  kecoklatan  (Hanani, M.S.E. 2015) Flavonoid Merah  pada  lapisan amil alkohol Ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah,  kuning,  atau  jingga (Hanani, M.S.E. 2015) Tanin Orange kecoklatan → FeCl3 Ditandai dengan warna hijau kehitaman,  kecoklatan (Hanani,  M.S.E. 2015) Saponin Berbentuk busa Reaksi  positif  ditandai  dengan busa yang  terbentuk  tidak  kurang  dari  10 menit  setelah  pengocokan  serta  stabil dengan  penambahan  HCl  2M  (Hanani,
M.S.E. 2015)
Keterangan : (+) = Terdeteksi, (-) = Tidak Terdeteki
Berdasarkan tabel diatas idetifikasi kandungan kimia senyawa dari ekstrak daun alpukat dan daun jambu biji menunjukkan bahwa adalanya alkaloid, flavonoid, tanin dan saponin.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Tabel 8. Hasil Uji Antioksidan Kadar Vitamin C
Metode DPPH
Larutan Uji          Konsentrasi (ppm)     Rata-Rata Absorbansi    %Inhibisi
Vitamin C 2 4 6 8 10 0,655 0,575 0,508 0,258 0,226 17,464 27,497 35,936 67,506 71,536 Metode FRAP Vitamin C 2 4 6 8 10 0, 841 0,783 0,684 0,575 0,362 6,0529 12,610 20,554 27,490 54,350
Untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dapat  dilihat  dari  nilai  IC 50 standar vitamin  C  sebagai  pembanding  mempunyai  nilai  IC 50 pada  metode  DPPH sebesar 13,397  ppm dan IC 50 pada metode FRAP 6,6878.

## Hasil Uji Antioksidan Ekstrak

## Tabel 9. Nilai Rata-Rata Absorbansi Larutan Uji DPPH dan FRAP
Metode Konsentrasi (ppm) Rata-Rata Absorbansi %Inhibisi DPPH 5 10 25 50 100 0,822 0,720 0,633 0,579 0,556 3,526 9, 319 20,277 27,078 29,974 FRAP 5 10 25 50 100 0,817 0,726 0,646 0,531 0,348 3,0264 8,4489 18,537 33,039 56,116
Hasil pengukuran absorbansi pada tabel 8 menunjukkan bahwa semakin besar  konsentrasi  larutan  uji  maka  nilai  absorbansi  akan  semakin  berkurang. Pada  ekstrak  konsentrasi  5  dan  10  ppm  menunjukkan  nilai  absorbansi  DPPH 0,822  dan  pada  FRAP  0,817  kemudian  pada  konsentrasi  25  ppm  DPPH  terjadi
penurunan nilai absorbansi 0,633 dan FRAP 0,646 kemudian dengan peningkatan konsentrasi menjadi 50 ppm DPPH terjadi penurunan nilai absorbansinya 0,579 dan  pada  FRAP  0,531.  Kemudian  meningkatnya  konsentrasi  menjadi  100  ppm menunjukkan pada DPPH menjadi 0,556 dan pada FRAP 0,348.
Hasil  pengukuran  absorbansi  digunakan  untuk  mendapatkan  nilai  % inhibisi. Nilai% inhibisi digunakan untuk mencari nilai IC 50 untuk menentukan kekuatan aktivitas antioksidan pada sampel yang diukur. Aktivitas antioksidan dari  ekstrak  etanol  kombinasi  daun  alpukat  dan  daun  ajambu  biji  dapat dinyatakan  dengan  IC 50 ( Inhibition  Concentration ),  IC 50 adalah  konsentrasi sampel yang dibutuhkan untuk menangkap 50% radikal bebas DPPH dan FRAP selama  operating  time.  Data  dari  ekstrak  etanol  kombinasi  daunalpukat  dan daun ajambu biji kemudian dihitung nilai IC 50 dengan menggunakan persamaan regresi linier berdasarkan rumus Y= + bx dapat dilihat pada tabel.
Tabel 10. Nilai IC50 Kombinasi Ekstrak Daun alpukat Dan Daun Jambu Biji
Metode Larutan Uji Nilai IC50 (ppm) DPPH+Ekstrak 89,282 FRAP+ Ekstrak 47,795
Ekstrak etanol kombinasi daun alpukat dan daun jambu biji pada metode DPPH  memiliki nilai IC 50 sebesar 89,282 ppm yang artinya pada metode DPPH mempunyai  aktivitas  antioksidan  aktif  dan  pada  metode  FRAP  memiliki  nilai IC 50 47,795  yang  artinya  pada  metode  FRAP  mempunyai  aktivitas  antioksidan sangat aktif jika dibandingkan dengan pembanding vitamin C. Akan tetapi jika dilihat  dari  nilai  IC 50 sampel  esktrak  menggunakan  metode  FRAP  memilki antivitas antioksidan yang kuat (nilai IC 50 <50 ppm).
Pada  pengujian  dengan  metode  DPPH  mempunyai  aktivitas  antioksidan aktif    jika  dibanding  aktivitas  antioksidan  FRAP  dengan  nilai  IC 50 47,795  ppm artinya aktivitas antioksidan sangat aktif, hal ini dikarenakan terdapat senyawa flavonoid  seperti  yang  dinyatakan  oleh Ratna  Djamil  (2015) bahwa    senyawa flavonoid  mampu  menghambat  reaksi  oksidasi  melalui  makanisme  penangkap radikal.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  tentang  uji  antioksidan  kombinasi  esktrak etanol daun alpukat dan daun jambu biji dengan metode DPPH dan FRAP  dapat disimpulkan  bahwa  nilai  antioksidan  optimum  peredam  radikal  bebas kombinasi ekstrak etanol daun alpukat ( Persea americana Mill.) dan daun jambu biji  ( Psidium  guajava L .)  pada  metode  FRAP  nilai  IC 50 47,795  ppm.    Hasil  IC 50 sangat  kuat  terdapat  pada  metode  FRAP  nilai  IC 50 47,795  ppm  dibandingkan metode DPPH nilai IC 50 89,282 ppm. Dari kedua metode DPPH dan FRAP yang memiliki kadar optimum terdapat pada metode FRAP nilai IC 50 47,795 ppm.

## SARAN
Peneliti  selanjutnya  diharapkan  dapat  dilakukan  penentuan  aktivitas antioksidan spesies daun jambu biji lain dan kombinasinya dengan daun alpukat dalam  berbagai  konsenstrasi  untuk  mendapatkan  ekstrak  yang  memiliki aktivitas antioksidan yang optimal.

## DAFTAR PUSTAKA
Amin, H. 2015. Aplikasi Asuhan Keperawatan Berdasarkan Diagnosa Medis dan Nanda  Nic-  Noc  Edisi  Revisi  Jilid  3.  Jogakarta:  Mediaction Publishing.
Abdul Latif.2012. Obat tradisional. Jakarta: EGC.
Bagus  Wicaksono,  I.,  Ulfah,  M.,  Farmasi,  F.,  &  Wahid  Hasyim  Jl  Menoreh Tengah, U. X. (2017). Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata L.) Dan Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) Dengan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) . 2 (1), 44 – 48.
Halvorsen, B.L., Holte,Kari., Myhrstad, Mari C. W., Barikmo, I.,Hvattum Erlend, Remberg  Siv  Fagertun,  Wold  Anne-Brit,  Haffner  Karin,  Baugerød Halvard  ,  Andersen  Lene  Frost  ,  Moskaug  Jan,  Jacobs  David  R  , Blomhoff  Rune.  2002. A  Systematic  Screening  of  Total  Antioxidant  in Dietary Plants , Journal of Nutrition .
Hanani,  M.S.E.2015.  Analisis  Fitokimia  .  Jakarta:  Buku  Kedokteran  EGC  IDF,
(2019). IDF Diabetes Atlas (9th ed.) BELGIUM: International Diabetes Federation.
Lingga, L. (ed). 2012. Bebas asam urat tanpa obat. Agro media.
P.  A.  Z.  Hasibuan.  2017.  Aktivitas  Antioksidan  dari  Ekstrak  Etanol Daun  Okra (Abelmoschus  Esculentus  Moench.),”  Hal:8.Fisiologi  Nutrisi.Kimia Fisika.Jakarta.
Ratna  Djamil.  2015 . Green  Synthesis  Nanopartikel  Ag  dengan  Menggunakan Ekstrak  Gambir  sebagai  Bioreduktor,  Prosiding  Semirata    bidang MIPA BKS-PTN Barat ,2015, 233-238
Simanjuntak  .2008.  Pengaruh  Time  budget  pressure  dan  Risiko  Kesalahan terhadap    Penurunan  Kualitas  Audit  (Studi  Empiris  pada  Auditor
KAP di Jakarta.
Utomo et al., 2011. Nitrogen fertilizer requirement of maize (Zea mays L.) on biochar- treated  soil.  p.  32-36  in  Hayashi,  Keiichi  (ed.)  Biochar  for  Future  Food Security:  learning  from  experience  and  identifying  research  priorities.
Project  Coordinator/Soil  Scientist,  IRRI-Japan  Collaborative,  Research Project  on  Climate  Change  Adaptation  in  Rainfed  Rice  Areas (CCARA)
IRRI.
Zaiyar, Alfin surya, Anggun Syasulfa. 2021. Ativitas Antioksidan Ekstrak Daun Alpukat Dengan Metode DPPH. Program Studi D-3 Analis Kesehatan Universitas Abdurrap Pekanbaru.Pekanbaru.