Juni 2024, Vol. 11 No. 1: 24 – 34
pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI
S.K. No. 105/E/KPT/2022

## PENGARUH LEVEL ZINK DALAM PENGENCER TRIS KUNING TELUR TERHADAP KUALITAS SEMEN CAIR SAPI ANGUS
(The effect of zinc level in the tris egg yolk extender on the quality of angus liquid semen)
Sofia Maria S. Siena*, Thomas Mata Hine, W. Marlene Nalley, Aloysius Marawali
Fakultas Peternakan Kelautan dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana,
Jalan Adisucipto Penfui, Kupang 85001
* Correspondent author, email: shaltrisnadur@gmail.com

## ABSTRAK
Upaya  perbaikan  produktivitas  ternak  sapi  bisa  dilakukan  dengan  menggunakan.teknologi  inseminasi  buatan (IB). Banyak faktor penentu keberhasilan IB, salah.satunya adalah pengencer yang digunakan dalam preservasi semen. Tujuan dilakukannya penelitian ini untuk mengetahui pengaruh level zink dalam pengencer tris-kuning telur  (T-KT)  terhadap  kualitas  semen  cair  sapi  Angus.  Semen  ditampung  satu  kali  per  minggu  menggunakan metode vagina buatan dari seekor   sapi Angus jantan yang berumur tiga tahun dalam keadaan tubuh serta organ reproduksi yang tidak ada kelainan atau sehat. Semen diencerkan dengan pengencer T-KT yang sudah ditambah dengan Zink pada beberapa level, 0 mg perlakuan kontrol.(P0), 10 mg.(P1), 20 mg.(P2), 30 mg.(P3), 40 mg (P4) per 100 mL pengencer. Semen yang selesai diencerkan disimpan dalam suhu.3-5oC, kemudian diamati tiap 24 jam akan motilitas, viabilitas,.abnormalitas dan daya tahan hidup.spermatozoa sampai.motilitas.minimum 40%. Hasil.penelitian  menyatakan  bahwa  penambahan  zink  sebanyak  20  mg  didalam  pengencer  T-KT  (P2) menghasilkan  kualitas  semen  cair  sapi  Angus  yang.lebih.tinggi  (P˂0,05)  daripada.perlakuan.lainnya.  Kualitas semen  cair  (motilitas,  viabilitas,.abnormalitas  serta  daya.tahan.hidup.spermatozoa)  secara  berturut-turut  adalah motilitas 44±5,75 %, viabilitas 48,39±13,59%, abnormalitas 6,91±1,85% dan daya tahan hidup 5,60±0,89 hari. Disimpulkan  bahwa  penambahan  zink  sebanyak  20  mg  didalam  pengencer.tris-kuning.telur  menghasilkan semen cair sapi Angus dengan kualitas yang lebih tinggi dari perlakuan lainnya.
Kata-kata kunci: kuning telur, sapi Angus, spermatozoa, tris, zink

## ABSTRACT
Efforts  to  improve  cattle  productivity  can  be  done  by  using  artificial  insemination  (AI)  technology.  Many factors determine the success of AI, one of which is the diluent used in semen preservation. The purpose of this study was to determine.the effect.of zinc level in.tris-egg yolk.diluent (T-EY) on the.quality of liquid semen of Angus bull. Semen is collected once a week using.an artificial.vaginal method from a three-year-old Angus bull in  an  undisturbed  or  healthy  body  and  reproductive  organs.  Semen  was  diluted  with  T-EY  diluent  which  had been added with zinc at several levels, 0 mg control treatment (T0), 10.mg (T1), 20.mg (T2), 30.mg (T3), 40 mg (T4).  The  diluted  semen  was.stored  at  a  temperature  of  3-5oC,  then  observed  every  24  hours  for.motility, viability,.abnormalities and survival of.spermatozoa to a minimum motility of 40%. The.results showed.that the addition of  20  mg  of  zinc  in the  T-EY.diluent (T2)  resulted  in  a higher.quality  of  liquid  semen of  Angus bull (P˂0.05) than other.treatments. The quality of the liquid semen (motility, viability, abnormalities and survival of spermatozoa)  were  motility  44±5.75%,  viability  48.39±13.59%,  abnormality  6.91±1.85%  and  durability.live 5.60±0.89  days.  It  was.concluded  that  the.addition.of  20  mg  zinc  in  the.tris-egg  yolk  diluent  produced  liquid semen of Angus bull with higher quality than other treatments.
Keywords: egg yolk, Angus bull, spermatozoa, tris, zinc

## PENDAHULUAN
Produktivitas yang tinggi merupakan satu diantara  penentu  keberhasilan  pada  suatu.usaha peternakan.  Upaya  perbaikan  produktivitas ternak sapi dapat dilakukan dengan menggunakan teknologi inseminasi buatan (IB). Salah satu faktor penentu keberhasilan IB yakni pengencer  yang  digunakan  dalam  presevasi semen.  Pengenceran  semen  dilakukan  untuk
mengurangkan  konsentrasi  spermatozoa  serta mempertahankan
kelangsungan
hidup spermatozoa  (Widjaya,  2011).  Syarat  bahan pengencer  yang  baik  bagi  spermatozoa  adalah dapat menyediakan sumber energi bagi spermatozoa, dapat menjadi buffer atau penyangga,  tidak  menghambat  pergerakan spermatozoa  serta  tidak  bersifat  racun  atau toksik, sehingga mengurangi bahaya asam laktat yang  disebabkan  oleh  sisa  metabolisme  (Foeh dan  Gaina,  2017).  Selain  itu,  pengencer  juga memiliki fungsi untuk menambah volume semen sehingga makin banyak jumlah ternak yang bisa diinseminasi (Susilawati, 2011).
Beberapa  pengencer  telah  digunakan untuk  mengencerkan  semen,  salah  satunya adalah  Tris  kuning  telur  (T-KT)  adalah pengencer  yang  paling  sering  digunakan  pada ternak  sapi  dalam  laporan  Blegur et  al. (2020), ternak  domba  pada  laporan  Nurcholis  dan Yamin  (2016)  dan  pada  ternak  kambing (Siswandoko et  al., 2017).  Tris  adalah  larutan yang  memiliki  kandungan  asam  sitrat  dan fruktosa  yang  berperan  sebagai  penyangga ( buffer ),  dengan  tujuan  mencegah  terjadinya perubahan  pH  akibat  asam  laktat  hasil metabolisme  spermatozoa  dan  mempertahankan tekanan  osmotik  serta  keseimbangan  elektrolit, sumber  energi  dan  menjaga  spermatozoa  dari cold  shock (Widjaya,  2011).  Pengencer  T-KT mempunyai kandungan yang relatif lengkap Tris ( hydroxymethyl ) aminometan ,  asam  sitrat  dan fruktosa.  Kuning  telur  mempunyai  komponen berupa  lipoprotein  dan  lesitin  yang  dapat mempertahankan  serta  melindungi  spermatozoa dari  cekaman  dingin  (Permatasari et  al., 2013). Kuning telur mengandung.asam amino, karbohidrat,  vitamin  dan  kebutuhan  hidup  bagi spermatozoa. Kuning telur juga mengandung.glukosa,  protein,  vitamin  yang larut dalam air dan lemak serta viskositasnya.yang  dapat  menguntungkan  bagi spermatozoa (Wawang et al ., 2024).
Selama proses penyimpanan, zat-zat yang terkandung didalam pengencer dapat mengalami oksidasi  dan  menyebabkan  peningkatan  kadar radikal  bebas  yang  bisa  merusak  spermatozoa (Wiyanti et  al., 2013).  Selain  itu,  spermatozoa yang  aktif  secara  metabolik  juga  dapat menghasilkan  sejumlah  besar  radikal  bebas. Dalam  mengurangi  kerusakan  spermatozoa dalam  proses  penyimpanan,  diperlukannya penambahan  antioksidan  yang  bisa  mengikat senyawa  radikal  bebas  yang  dapat  menghambat reaksi  peroksidasi  lipid  yang  membentuk membran  plasma  spermatozoa  (Blegur et  al., 2020).  Antioksidan  adalah  senyawa  kimia  yang dapat  menyumbangkan  satu  atau  lebih  elektron kepada  radikal  bebas,  sehingga  radikal  bebas tersebut  bisa  diredam  (Binuni et  al., 2020). Penambahan  antioksidan  didalam  pengencer dilakukan  untuk  mengurangi  kerusakan  yang diakibatkan oleh radikal bebas terhadap membran  spermatozoa  (Savitri  dan  Suharyati, 2014).
Zink adalah konstituen dari superperoksida  dismutase,.suatu  enzim  yang berperan  sebagai  antioksidan  endogen  yang mampu  menjaga  sel  dari  kerusakan  yang disebabkan  oleh  radikal  bebas  (Payaran et  al., 2014).  Laporan  penelitian  Payaran et  al. (2014) menyatakan  bahwa  penambahan  zink  sebanyak 30 mg dapat mempertahankan kualitas spermatozoa selama proses penyimpanan. Penggunaan  sapi  Angus  sebagai  sumber  semen dalam  penelitian  ini  didasari  oleh  keunggulan yang  dimiliki  oleh  sapi  Angus,  yakni  dapat beradaptasi  dengan  pakan  yang  memiliki  mutu rendah  serta  daerah  tropis  di  Indonesia khususnya  di  NTT.  Tujuan  dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh level  zink  terbaik  dalam  pengencer  tris-kuning telur  (T-KT)  terhadap  kualitas  semen  cair  sapi Angus.

## METODE PENELITIAN

## Materi Penelitian
Semen  diperoleh  dari  ternak  sapi  Angus yang  berumur  tiga  tahun  dalam  kondisi  yang sehat  dan  sudah  terlatih  dalam  penampungan semen.  Ternak  yang  digunakan  mendapatkan pemeliharaan  dalam  kandang  individu  yang sudah  lengkap  dengan  tempat  makan  dan minum.  Pakan.hijauan  diberikan  10%  dan konsentrat 0,5 Kg dari bobot badan.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimen  dengan  rancangan  percobaan  yaitu rancangan  acak  lengkap,  yang  terdiri  atas  5 perlakuan  dan  5 ulangan  (penampungan  semen) sehingga  membentuk  25  unit  percobaan. Perlakuannya  adalah  level  zinc  per  100  mL pengencer,  yang  diperinci  sebagai  berikut:  P0= Tris-kuning  telur  (T-KT)  +  Zink  0  mg,  P1=  T-
KT + Zink 10 mg, P2= T-KT + Zink 20 mg, P3= T-KT  +  Zink  30  mg  dan  P4=  T-KT  +  Zink  40 mg.

## Penyiapan Bahan Pengencer
Penyiapan larutan
tris. Tris
(hydroxymethyl) aminometane ditimbang sebanyak  3,634  g,  asam  sitrat  1,99  g,  fruktosa 0,50  g,  dan  dilarutkan  dengan  menggunakan aquadest  sebanyak  100  mL  didalam  tabung erlenmeyer.
Penyiapan kuning telur. Telur dibersihkan menggunakan  kapas  yang  telah  ditetesi  dengan alkohol dengan kadar 70% agar steril kemudian
dipecahkan  dibagian  yang  lancip  dan  pisah kuning  telur  dengan  putih  telur.  Kuning  telur yang masih terbungkus selaput vitellin ditempatkan pada kertas saring supaya menyerap  putih  telur  yang  tersisa.  Kuning  telur dipecahkan  dengan  cara  menyobek  jaringan vitellin  lalu  dengan  perlahan  kuning  telur dituangkan dalam gelas ukur.
Larutan  Tris  sebanyak  80%  kemudian ditambahkan  kuning  telur  20%  dan  dicampur hingga homogen untuk menghasilkan pengencer tris-kuning telur; selanjutnya tambahkan antibiotik streptomisin dan penisilin (Tabel 1).
Tabel . 1. Komposisi . bahan pengencer (100 mL)
Bahan Perlakuan P0 P1 P2 P3 P4 Tris (mL) 80 80 80 80 80 Kuning . Telur (mL) 20 20 20 20 20 Penisilin . (IU mL -1 ) 1000 1000 1000 1000 1000 Streptomisin . (mg mL -1 ) 1 1 1 1 1 Zink (mg) 0 10 20 30 40

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Proses penampungan
semen menggunakan  metode  vagina.buatan.  Semen segar  yang  didapat  segera  dievaluasi  secara makroskopis  dan  mikroskopis.  Evaluasi  secara makroskopis mencakup  :  (1)  volume  dan  warna semen  yang  bisa  dibaca  dan  dilihat  langsung dalam  tabung  penampungan  berskala,  (2) konsistensi/kekentalan semen yang bisa diketahui  dengan  memiringkan  tabung  yang berisikan  semen  secara  perlahan-lahan  dan melihat  pergerakan  semen  yang  kembali  lagi pada  posisi  semula.  Cepat  atau  lambatnya gerakan  semen  menuju  ke  posisi  semula menunjukkan konsistensinya (encer, sedang atau kental).  (3)  Derajat..keasaman  atau  pH  semen bisa diketahui yaitu dengan diteteskannya semen pada  kertas  indikator  pH.  Pergantian    warna pada  kertas  akan  dicocokkan  dengan  standart warna pada kertas indikator.
Evaluasi semen secara mikroskopis mencakup : a) Gerakan massa spermatozoa yang memiliki  4  kategori,  yaitu  pergerakan  massa spermatozoa  yang  serupa  dengan  awan  tebal serta  bergerak  cepat  diberikan  skor  (+++), pergerakan massa spermatozoa awan tebal serta bergerak  sedikit  lambat  diberikan  skor  (++), pergerakan  massa  spermatzoa  yang  serupa
dengan  awan  tipis  serta  bergerak  lambat diberikan  skor  (+),  pergerakan  spermatozoa sangat  sedikit  atau  tidak  adanya  pergerakan individual  diberi  skor  N  (necrospermia  atau  0). b) Konsentrasi.spermatozoa : menerangkan total sel  spermatozoa  per  satuan  volume  semen. Konsentrasi spermatozoa dihitung menggunakan haemocytometer pada mikroskop dengan pembesaran  10×40.  Perhitungan  konsentrasi menggunakan rumus.:.
.
X=Jumlah spermatozoa.hasil.perhitungan. c) Motilitas spermatozoa : diperoleh melalui pengamatan.spermatozoa  di  bawah  mikroskop dengan  pembesaran  lensanya  10×40.  Nilai motilitas dimulai dari 0 (nol) persen (spermatozoa  bergerak  progresif  ke  depan  tidak ada) sampai dengan 100% (semua spermatozoa..bergerak  progresif  ke  depan) serta memiliki  kisaran  penilaian  5%.  d)  Viabilitas spermatozoa  :  dihitung  berdasarkan  banyaknya spermatozoa  hidup  yang    menggunakan  metode pewarnaan  yang  berwarna  merah  (eosin- negrosin). Spermatozoa yang hidup ditunjukkan dengan  spermatozoa  tidak  menyerap  cairan eosin-negrosin  (tetap  bening  atau  putih), sedangkan  spermatozoa  yang  mati  dapat menyerap  warna  merah  ungu.  Perhitungan nilai..viabilitas  dilakukan  dibawah  mikroskop
dengan  pembesaran  10×40  dengan  rumus:    .  e) Abnormalitas..spermatozoa  :  dapat  diketahui melalui  cara  yang  sama  dalam  perhitungan viabilitas dengan menggunakan rumus : .

## Variabel Penelitian
Variabel  yang  diukur  pada  penelitian  ini yaitu : (a) motilitas spermatozoa (%) merupakan penilaian terhadap persentase spermatozoa yang bergerak secara progresif..dengan kisaran angka penilaian  0-100%,  (b)  viabilitas  spermatozoa (%)  merupakan  pengamatan  pada  spermatozoa hidup  yang  memiliki  kepala  putih  karena  tidak menyerap larutan eosin-negrosin, (c)
abnormalitas  spermatozoa  (%)  merupakan pengamatan  spermatozoa  abnormal  yang  terjadi pada  bagian  kepala  atau  ekor  spermatozoa,  (d) daya.tahan hidup spermatozoa (hari) merupakan penilaian  spermatozoa  yang  dapat  bertahan dalam  penyimpanan  serta  memiliki  persentase motilitas minimum 40%.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  kemudian  hitung rata-rata serta standart deviasinya dan..dianalisis menggunakan analysis of variance (ANOVA).serta.dilanjutkan.dengan.uji  Duncan. Analisis  menggunakan  software  SPSS  22  for windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Semen Segar
Semen  yang  digunakan  sebagai  materi penelitian  adalah  semen  yang  berkualitas  baik yakni memiliki motilitas sperma progresif  ≥ 70
persen  dan  abnormalitas  sperma  <  20  persen. Karakteristik  semen  segar  sapi  Angus  yang diperoleh selama penelitian disajikan pada Tabel 2.

## Tabel 2. Karakteristik.semen segar.sapi Angus
Karakteristik Semen Rerata ± standar deviasi Volume (mL) 3,36±0,59 Warna Krem Konsistensi Encer-sedang pH 6,52±0,16 Gerakan Massa spermatozoa (+) ++-+++ Konsentrasi spermatozoa (x10 6 sel/mL) 1.127,60±202,38 Motilitas.spermatozoa (%) 77,50±2,50 Viabilitas.spermatozoa (%) 86,11±1,55 Abnormalitas.spermatozoa (%) 6,54±1,03
Rataan  untuk  volume  semen  segar  sapi Angus  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini adalah  3,36±0,59  dengan  kisaran  2,8-4,0  mL. Volume semen masih pada kisaran yang normal volume..normal semen.sapi berkisar diantara 2-8 mL  (Barszcz et  al. ,  2012).  Menurut  Ax et  al. (2008),  volume  semen  dipengaruhi  oleh  umur serta frekuensi penampungan. Frekuensi penampungan  serta  ejakulasi  yang  berlebihan dapat  menyebabkan  penurunan  jumlah  semen yang diperoleh serta kualitasnya (Seuk, 2018).
Warna dari semen segar sapi Angus yang diperoleh  adalah  crem,  warna  semen  dengan penampilan putih susu dan krem termasuk dalam kriteria  warna  semen  yang  baik  dan  normal (Arifiantini et  al., 2020).  Johnson et  al. (2000), menjelaskan  bahwa  berbagai  faktor  yang berpengaruh  terhadap  warna  semen  adalah tingkat  rangsangan,  frekuensi  ejakulasi  serta mutu pakan. Pada persiapan sebelum
penampungan  semen,  yaitu  memperlakukan pejantan  sapi  dengan  baik  serta  hati-hati  agar mampu memberikan rangsangan yang baik.
Konsistensi  semen  segar  hasil  penelitian yakni  memiliki  kisaran  encer-sedang.  Warna, konsentrasi dan konsistensi spermatozoa memiliki  ikatan  yang  erat,  apabila  semen  yang diperoleh  encer  maka  konsentrasi  spermatozoa akan  menjadi  rendah  dan  warna  semen  akan menjadi  pudar  (Suyadi  dan  Rachmawati,  2012). Salah satu faktor yang memengaruhi konsistensi semen  merupakan  tingkat  rangsangan  (Johnson et  al., 2000).  Semakin  baik  rangsangan  yang diberikan  pada  waktu  penampungan,  maka semakin  baik  pula  konsistensi  semen  yang diperoleh.  Derajat  keasaman  atau  pH  semen segar  yang  didapat  pada  penelitian  ini  yaitu 6,52±0,16.  Derajat  keasaman  yang  diperoleh masih tergolong pH  normal  berdasarkan  Garner
and Hafez (2016) dimana kisaran pH semen sapi yaitu 5,9-7,3.
Gerakan massa spermatozoa yang didapakan mempunyai nilai ++-+++. Hasil yang diperoleh sama dengan kriteria gerakan massaaspermatozoa  menurut.tAx et  al. (2008) yaitu (+++) dengan pergerakan koloni spermatozoa  amat  cepat  serta  tebal  dan  nilai (++)  dengan  pergerakan  cepat  akan  tetapi  tipis atau  tidak  amat  tebal.  Rataan  konsentrasi spermatozoa  dalam  kategori  normal  yakni 1.127,60±202,38  juta/mL.  Hasil  penelitian  ini selaras  dengan  pernyataan  Garner  dan  Hafez (2016)  yang  menjelaskan  bahwa  konsentrasi spermatozoa  adalah  memiliki  kisaran  antara 800-2.000 juta/mL.
Rataan motilitas
spermatozoa
77,50±2,50%.  Motilitas  spermatozoa  yang didapatkan  pada  penelitian  ini  telah  memenuhi syarat,  dimana  berdasarkan  pernyataan  Garner and  Hafez  (2016)  motilitas  spermatozoa..sapi dapat  berkisar  antara..40-75%,  serta  agar  bisa dilakukannya proses pengenceran serta
pembekuan,    maka  semen  segar  wajib memenuhi  syarat  minimal  70%.  Viabilitas spermatozoa sapi yang didapat yaitu 86,11±1,55%.  Viabilitas  spermatozoa  sapi Angus  dalam penelitian ini  mendekati  viabilitas spermatozoa hasil penelitian Blegur et al. (2020) pada  sapi  bali  yaitu  81,07%,  Sapi  limousine 93% (Kusumawati et al. , 2018) dan sapi madura 95,4% (Romadhoni et al. , 2014).
Abnormalitas spermatozoa yang diperoleh adalah 6,54±1,03%. Hasil abnormalitas menerangkan  bahwa  semen  segar  sapi  Angus yang  diperoleh  dapat  dipergunakan  dalam tindakan  lebih  lanjut,  berdasarkan  Garner  and Hafez (2016) persentase abnormalitas spermatozoa tidak boleh lebih dari 20%.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Motilitas Spermatozoa
Rata-rata  nilai  motilitas  spermatozoa  sapi Angus  pada  setiap  perlakuan  tercantum  dalam Tabel.3.
Tabel 3. Motilitassspermatozoa sapi Angus pasca preservasi pada pengencer T-KT dengan..beberapa level zink
H ari ke Perlakuan P0 P1 P2 P3 P4 p-value 0  77,00±2,74 a 77,00±2,74 a 77,00±2,74 a 77,00±2,74 a 77,00±2,74 a 1.000 1  70,90±2,79 b 72,00±2,74 b 71,00±2,24 b 68,00±2,74 ab 66,00±5,48 a 0.060 2  61,00±2,24 b 64,50±4,48 b 66,00±2,24 b 61,00±2,24 b 53,50±9,29 a 0.007 3  52,50±2,50 b 54,00±5,48 b 58,00±4,48 b 52,00±4,10 b 44,00±8,94 a 0.012 4  42,50±2,50 ab 48,50±6,02 bc 51,00±4,18 c 44,00±5,48 abc 38,00±6,94 a 0.008 5  33,00±4,47 a 38,00±4,80 ab 44,00±5,75 b 35,50±5,70 a 32,00±5,70 a 0.014 6  23,00±4,47 a 30,00±9,35 ab 37,00±6,71 b 25,50±7,98 a 21,50±4,87 a 0.014 7  13,00±5,42 a 21,50±10,84 a 29,00±10,84 a 18,00±7,58 a 11,50±3,35 a 0.020
a,b,c,d Superskrip.yang.berbeda.pada baris yang.sama menunjukkan perbedaan.yang nyata.(P<0,05)
Dari  Tabel  3  dapat  dilihat  bahwa  dengan bertambahnya  durasi  waktu  penyimpanan, terjadi penurunan persentase motilitas spermatozoa  pada setiap  perlakuan  dengan  nilai yang berbeda..Rataan penurunan motilitas spermatozoa pada perlakuan kontrol (P0) adalah 8,00%,  P1:6,937%,  P2:6%,  P3:7,375%  dan P4:8,187%. Dengan demikian, penurunan persentase  motilitas  spermatozoa  terendah terjadi  perlakuan  P2  dan  tertinggi  pada perlakuan  P4.  Timgginya  penurunan  persentase motilitas  sperma  pada  perlakuan  P4  dapat disebabkan  oleh  kadar  zinc  yang  ditambahkan ke  dalam  bahan  pengencer  terlalu  berlebihan sehingga    keberadaan  zinc  di  dalam  pengencer justru  memberikan  efek  negatif  terhadap motilitas  sperma.    Menurut  Sotler  et  al.  (2019)
bahwa  antioksidan  dapat  berubah  menjadi prooksidan  ketika  berada  dalam  jumlah  yang berlebihan.
Hasil  analisis  statistik  terhadap  motilitas spermatozoa  pada  hari  penyimpanan  ke-0  dan ke-1  memperlihatkan  perbedaan  yang.tidak nyata.(P˃0,05)  antara.perlakuan.  Akan  tetapi, sesudah penyimpanan pada hari ke-2 sampai ke- 7 menyatakan perbedaan yang nyata antara.perlakuan  (P˂0,05).  Spermatozoa  sapi Angus  yang  dipreservasi  pada  pengencer  T-KT dapat  mempertahankan  motilitas  spermatozoa semasa penyimpanan.
Pada  penyimpanan  hari  ke-0,  hasil analisis statistik terhadap  motilitas..spermatozoa menyatakan perbedaan yang tidak nyata.(P˃0,05)  antara  perlakuan.  Akan  tetapi
sesudah dipreservasi selama lima hari, spermatozoa  yang  dipreservasi  pada  perlakuan P2  menghasilkan  motilitas  yang  lebih  tinggi (P˂0,05)  daripada  P0,.P3, dan  P4  serta  berbeda tidak.nyata  (P˃0,05)..dengan  perlakuan  P1.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  penambahan  Zn dengan  level  20  mg  per  mL  T-KT  dapat menunjang daya hidup dan motilitas spermatozoa  sapi  Angus  yang  lebih  baik daripada  level  Zn  lainnya.  Hal  ini  semakin menegaskan  peranan  zinc  sebagai  antioksidan yang  dapat  menetralisir  pengaruh  negatif  yang ditimbullkan oleh radikal bebas yang diproduksi secara berlebihan selama preservasi sperma.
Antioksidan  berfungsi  sebagai  senyawa yang  dapat  menunda,  memperlambat  dan mencegah  proses  oksidasi  lipid,  dengan  cara mencegah  terjadinya  autoksidasi  radikal  bebas dalam  oksidasi  lipid  (Shui et  al., 2004). Egwurugwu et  al. (2013)  menyatakan  bahwa pemberian  Zn  dapat  mempertahankan  motilitas sperma.  Zn  terlibat  dalam  katabolisme  lipida yang  merupakan  sumber  energi  utama  yang dibutuhkan untuk pergerakan spermatozoa. Zink dapat  melindungi  sperma  dari  radikal  bebas yang  dapat  menyebabkan  kerusakan  membran dan  menghambat  fosfolipase  pada  peroksidase lipid (Payaran et al., 2014).
Hasil  penelitian  ini  tidak  sejalan  dengan hasil penelitian yang dilaporkan oleh Payaran et
al. (2014)  menyatakan  bahwa  semakin  besar takaran  zink  yang  diberikan,  maka  semakin besar pengaruh
peningkatan kualitas..spermatozoa.
Namun
apabila dibandingkan  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  saat  ini,  hasil  terbaik  yang  diperoleh adalah  pada  level  Zn  20  mg  (P2)  dan  terendah pada level Zn 40 mg (P4).
Standar  motilitas  minimum  yang  layak untuk  digunakan  pada inseminasi  buatan  adalah 40%  yang  terdapat  pada  setiap  perlakuan  yang diamati  pada  hari  yang  berbeda.  Berdasarkan Tabel  3  maka  untuk  keperluan  inseminasi buatan,  spermatozoa  yang  dipreservasi  pada perlakuan P0, P1, dan P3 hanya dapat disimpan selama empat hari, perlakuan P4 hanya tiga hari, dan perlakuan P2 lima hari.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Viabilitas Spermatozoa
Pemeriksaan viabilitas spermatozoa merupakan  hal  yang  penting  dalam  penilaian kualitas spermatozoa. Nilai viabilitas spermatozoa,  semakin  tinggi  persentasenya maka  semakin  bagus  pula  kualitas  semennya. Persentase  viabilitas  spermatozoa  sapi  Angus hasil penelitian ditampilkan pada Tabel 4.
Tabel 4.Viabilitas spermatozoa sapi Angus pasca preservasi pada pengencer T-KT dengan beberapa level zink
Hari ke- Perlakuan P0 P1. P2. P3. P4. p-value 0 85,64±1,56 a 85,22±2,36 a 85,56±1,79 a 86,17±1,34 a 85,42±1,50 a 0.932 1 79,17±2,48 b 81,24±2,85 b 78,82±3,54 b 76,09±4,83 ab 73,36±3,93 a 0.034 2 70,17±3,77 ab 73,15±6,09 b 73,66±4,23 b 70,03±4,62 ab 64,99±6,04 a 0.090 3 63,99±3,62 ab 64,16±7,70 ab 66,83±6,86 b 61,50±8,10 ab 55,27±6,70 a 0.119 4 53,59±2,97 a 55,82±9,92 a 52,12±8,63 a 48,25±5,53 a 48,25±5,53 a 0.444 5 42,17±6,93 a 48,41±10,33 a 48,39±13,59 a 43,68±8,78 a 41,34±4,87 a 0.631 6 31,99±6,90 a 38,94±13,07 a 41,55±15,34 a 33,22±9,78 a 30,19±4,19 a 0.416 7 24,63±6,86 a 32,66±12,95 a 34,39±11,09 a 26,18±9,34 a 21,40±4,94 a 0.195
a,b,c,d Superskrip.yang.berbeda pada baris.yang sama menunjukkan.perbedaan yang.nyata (P<0,05)
Dari Tabel 4, dapat dilihat hasil viabilitas spermatozoa  mengalami penurunan  rataan persentase  sejalan dengan bertambahnya waktu penyimpanan, namun tingkat penurunan viabilitas spermatozoa berbeda antara perlakuan. Rata-rata penurunan viabilitas spermatozoa pada perlakuan P0 adalah 8,80%, P1:7,50%, P2:7,31%,  P3:8,57%,  dan  P4:9,14%,  penurunan tertinggi terjadi pada P4 dan yang terendah pada P2. Menurunnya persentase viabilitas spermatozoa disebabkan oleh keadaan membran
plasma  spermatozoa  yang  sudah  rusak.  Selain itu  penurunan  persentase  viabilitas  dapat  pula disebabkan  oleh  spermatozoa  yang  telah  mati. Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Solihati et  al.
(2006) mengatakan bahwa banyaknya spermatozoa  yang  mati  bisa  memengaruhi spermatozoa yang masih hidup semasa penyimpanan.
Jika  dibandingkan  dengan  nilai  motilitas spermatozoa  maka,  nilai  viabilitas  lebih  tinggi dikarenakan nilai viabilitas merupakan
penjumlahan  dari  spermatozoa  yang  bergerak maju (progresif), yang bergerak kurang progresif, dan yang tidak bergerak namun masih hidup,  sedangkan  motilitas  sperma  hanya diperoleh  dari  spermatozoa  yang  bergerak  maju kedepan  secara  progresif.  Kecepatan  penurunan nilai  viabilitas  pada  setiap  perlakuan  selama pengamatan  berbeda,  faktor  yang  menyebabkan perbedaan    tersebut  adalah  tingkat  stress  pada saat  pengenceran  dan  selama  penyimpanan (Yani  dan  Nuryadi,  2001).  Menurut  penjelasan Yani  dan  Nuryadi  (2001),  penurunan  viabilitas spermatozoa  diakibatkan  karena  dengan  cara yang  alamiah  akan  mengalami  kematian  sel, spermatozoa  yang  stress  pada  saat  pengenceran serta  mengalami  penurunan  kualitas  sehingga jumlah  spermatozoa  yang  mati  akan  meningkat pasca penyimpanan hari ke-dua dilanjutkan hari ke-tiga.
Pada  penyimpanan  dari  hari  ke-1  hingga hari  ke-7  menunjukkan  hasil  analisis  statistik dari viabilitas spermatozoa, penyimpanan menunjukkan penambahan zink didalam pengencer  T-KT  memberi  pengaruh  yang  tidak nyata..(P˃0,05),  bahkan  pada  hari  pertama penyimpanan,  P4  dengan  level  zink  40  mg menghasilkan  viabilitas  spermatozoa yang lebih rendah  (P˂0,05)  dibandingkan  dengan  kontrol. Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  dengan  adanya penambahan  zink  didalam  pengencer  T-KT
tidak  berdampak  positif  terhadap  viabilitas spermatozoa  dan  hasil  ini  berbeda  dengan dampak yang ditimbulkan motilitas spermatozoa yang bersifat positif. Hal ini, semakin memperjelas  peranan  zink  terhadap  motilitas spermatozoa melalui peranannya dalam meningkatkan  kerja  enzim  baik  berkaitan dengan  produksi  energi  yang  berasal  dari adenosine  triphosphate  (ATP)  yang  siap digunakan  untuk  motilitas spermatozoa maupun melalui kerjanya sebagai antioksidan intraseluler untuk  menghambat  atau  menetralisir  radikal bebas..Hal  ini  sepadan  dengan  pernyataan Solihati et al. (2006), bahwa Zn memiliki peran sebagai  antioksidan  yang  bisa  menjaga  sperma dari  radikal  bebas  yang  dapat  menghambat fosfolifase  pada  peroksidase  lipid  serta  mampu mengakibatkan kerusakan pada membran.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  abnormalitas Spermatozoa
Afiati et al. (2015) menyatakan abnormalitas  adalah  salah  satu  indikator  dalam penentuan terhadap kualitas spermatozoa , dikarenakan  struktur  sel  yang  tidak  normal  bisa mengakibatkan  gangguan  serta  hambatan  saat pembuahan. Rerataan  persentase  abnormalitas spermatozoa  pada  setiap  perlakuan  bisa  dilihat dalam Tabel 5.
Tabel  5.  Abnormalitas  spermatozoa  sapi  Angus  pasca  preservasi  didalam  pengencer  T-KT  dengan beberapa level zink
Hari ke- Perlakuan PO P1 P2 P3 P4 p-value 0 5,72±2,10 a 5,96±2,02 a 5,99±1,99 a 5,92±1,10 a 5,82±2,07 a 1.000 1 5,84±2,07 a 6,10±2,04 a 6,08±2,01 a 6,19±1,91 a 5,91±2,10 a 0.999 2 5,90±2,02 a 6,14±1,98 a 6,23±1,92 a 6,36±1,91 a 6,13±2,05 a 0.997 3 6,16±1,92 a 6,47±1,62 a 6,43±1,89 a 6,42±1,86 a 6,40±2,03 a 0.999 4 6,44±1,97 a 6,53±2,01 a 6,63±1,88 a 6,94±1,78 a 6,68±1,93 a 0.995 5 6,71±1,92 a 6,79±1,93 a 6,91±1,85 a 7,29±1,49 a 6,70±1,77 a 0.984 6 6,91±1,77 a 7,02±1,80 a 7,44±1,67 a 7,53±1,37 a 7,02±1,84 a 0.967 7 7,29±1,52 a 7,27±1,55 a 7,50±1,60 a 7,71±1,27 a 7,18±1,81 a 0.982
a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata.(P<0,05)
Berdasarkan  Tabel  5,  bisa  dilihat  nilai abnormalitas  spermatozoa  selama  preservasi mengalami  peningkatan  dengan  persentase abnormalitas yang berbeda-beda. Namun analisis  menunjukkan  perbedaan  yang  tidak nyata  (P˃0,05),  dari  hari  ke-0  sampai  dengan hari ke-7 penyimpanan. Persentase abnormalitas spermatozoa  yang  meningkat  pada  setiap pengamatan  dapat  dipengaruhi  oleh  perlakuan pada  saat  pencampuran  semen  (Bunga et  al.,
2014). Peningkatan persentase abnormalitas juga masih  pada  kisaran  yang  normal  serta  bisa dipakai  dalam  melakukan  inseminasi  buatan. Hal  ini  berdasarkan  pada  penjelasan  Johnson et al. (2000)  yaitu  persentase  abnormalitas  tidak boleh  melebihi  20%.  Persentase  abnormalitas spermatozoa  8-10%  tidak  dapat  memberi dampak  yang  cukup  terhadap  pembuahan, namun apabila persentase abnormalitas melebihi
25%  akan mengakibatkan terjadinya penurunan terhadap fertilitas.
Perbedaan  ini  dapat  dipengaruhi  oleh faktor  kesuburan  serta  umur  pejantan  (Garner dan Hafez, 2016). Hal ini juga dapat dipengaruhi oleh  kerusakan  membran  plasma  yang  terjadi akibat cold  shock (kejutan  dingin)  serta mengalami  perubahan  tekanan  osmotik  dan perubahan  tekanan  osmotik  yang  menyebabkan tidak  adanya  perubahan  secara  tidak  biasa  akan bentuk  morfologi  spermatozoa.  Abnormalitas spermatozoa  yang  diamati  dalam  penelitian  ini adalah jenis abnormalitas yang  sekunder  seperti ekor  putus,  kepala  yang  terpisah  dari  ekor  dan ekor melengkung.
Adanya  peningkatan  abnormalitas  seiring dengan bertambahnya lama penyimpanan mungkin berkaitan dengan penurunan lipoprotein  yang  berada  didalam  kuning  telur yang  akan  semakin  menurun  atau  berkurang sehingga  fungsi  perlindungannya  terhadap spermatozoa juga mengalami penurunan.
Peningkatan  persentase  pada  abnormalitas spermatozoa  selain  disebabkan  pada  saat dibuatnya  preparat  atau  dapat  pula  disebabkan oleh adanya peroksidasi lipid (Romadhoni et al., 2014).  Apabila  waktu  penyimpanan  semakin lama maka semakin tinggi persentase abnomalitas  spermatozoa,  hal  ini  diakibatkan oleh  adanya  spermatozoa  dingin  serta  ketidak- seimbangan  tekanan  osmotik  yang  diakibatkan oleh  proses  metabolik  yang  berjalan  selama penyimpanan  secara  terus-menerus  (Yani  dan Nuryadi, 2001).

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  daya  tahan hidup Spermatozoa
Daya tahan..hidup merupakan kemampuan  spermatozoa  untuk  selalu  hidup dalam  masa  waktu  tertentu  pasca  penyimpanan in  vitro (Hine et  al., 2014).  Rataan  daya  tahan hidup  spermatozoa  sapi  Angus  hasil  penelitian disajikan dalam Tabel 6.
Tabel 6. Pengaruh perlakuan terhadap daya tahan hidup spermatozoa
Perlakuan.(mg) Daya Tahan Hidup (hari) P0 4,20±0,45 ab P1 4,80±0,84 bc P2 5,60±0,89 c P3 4,40±0,55 ab P4 3,40±0,89 a p-value 0.003
a,b,c,d Superskrip.yang berbeda pada baris yang sama.menunjukkan perbedaan yang.nyata (P<0,05)
Dapat  dilihat  pada  Tabel  6,  yakni spermatozoa  yang  dipreservasi  pada  perlakuan P2  mempunyai  daya  tahan  hidup  yang  lebih lama  jika  dibandingkan  dengan  kontrol..Hasil analisis  statistik  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  perlakuan  berpengaruh..nyata  (P˂0,05) terhadap daya..tahan hidup..spermatozoa. Pengencer yang digunakan yaitu pengencer TKT yang  memiliki  kandungan  komposisi  bahan yang  berfungsi  mempertahankan  daya  tahan hidup  spermatozoa,  khususnya  lipoprotein, lesitin  dan  fruktosa  serta  Zn  yang  ditambahkan dengan  level  yang  berbeda  pada  setiap perlakuan, yang semakin memperkuat pertahanan  daya  tahan  spermatozoa  dari kerusakan  seperti  radikal  bebas.  Zink  memiliki sifat antioksidatif dan dapat mengurangi oksigen reaktif  yang  diproduksi  oleh  spermatozoa  yang rusak  serta  leukosit  dan  untuk  meningkatkan fertilitas.
Dari  hasil  pengamatan  yang  dilaksanakan selama  penelitian,  bisa  diketahui  bahwa  dari
masing-masing  perlakuan  menunjukkan  hasil persentase  daya  tahan  hidup  spermatozoa  yang tidak sama setelah pengenceran. Hasil pengamatan  pada  P0,  P1,  dan  P3  yaitu  daya tahan  hidup  diatas  50%  dan  bertahan  sampai hari  ketiga.  Pada  P2  daya  tahan  hidup  diatas 50%  bertahan  sampai  hari  keempat  dan  P4 bertahan  sampai  hari  kedua.  Hal  ini  dapat disebabkan  karena  semakin  tinggi  kadar  zinc  di dalam pengencer dapat merubah sifat pengencer menjadi  hipertonis.  Pengencer  yang  hipertonis akan menyebabkan pergerakan air dari dalam sel ke  luar  sel  untuk  menjaga  keseimbangan  cairan antara  intraseluler  dan  ekstraseluler,  dan  pada tingkat tertentu dapat menyebabkan  kekurangan cairan di dalam sel yang selanjutnya berdampak pada  penurunan  motilitas  maupun  daya  tahan hidup sperma (Aisen et al., 2005).
Rendahnya  persentase  daya  tahan  hidup dapat disebabkan oleh adanya aktifitas metabolisme  spermatozoa..yang  membentuk asam  laktat  pada  zat  pengencer  (Rhoyan et al.,
2014).  Menurut  pernyataan  Widjaya  (2011), asam  laktat  yang  berlebihan  pada  pengencer dapat  menyebabkan  perubahan  pH  yang  dapat
menimbulkan  efek  racun  dan  kematian  yang tinggi bagi spermatozoa.

## SIMPULAN
Disimpulkan  bahwa  penambahan  level zink  pada  pengencer  tris-kuning.telur  mampu menghasilkan  semen  cair  sapi  Angus  yang
berkualitas  tinggi,  dengan  level  zink  terbaik adalah 20 mg.

## SARAN
Dari hasil penelitian yang diperoleh, maka perlu dilakukannya  penelitian  lebih  lanjut  untuk menguji  keberhasilan    pada  proses  inseminasi
buatan  (IB)  dengan  menggunakan  semen  yang diencerkan  dengan  Tris-kuning  telur  yang ditambahkan zink 20 mg per 100 mL pengencer.

## DAFTAR PUSTAKA
Afiati  F,  Yulnawati  MR,  Arifiantini  RI.  2015. Abnormalitas spermatozoa domba dengan frekuensi  penampungan  berbeda. Pros Sem  Nas  Masy  Biodiv  Indonesia 1(4): 930-934. https://doi.org/10.13057/psnmbi/m010449
Arifiantini  RI,  Aun  M,    Sukmawati  E.  2020.
Kualitas semen segar dan produksi semen beku  sapi  pejantan  madura  pada  musim yang  berbeda. Jurnal  Ilmu  Produksi  Dan
Teknologi  Hasil  Peternakan 8(1):  15–21. https://doi.org/10.29244/jipthp.8.1.15-21 Aisen  E,  Quintana  M,  Medina  V,  Morello  H, Venturino A. 2005. Ultramicroscopic and biochemical  changes  in  ram  spermatozoa cryopreserved with trehalose-based hypertonic extenders. Cryobiology
50:239–249.
Ax  RL,  Dally  M,  Didion  BA,  Lenz  RW,  Love
CC,  Varner DD. 2008. Semen Evaluation In  Reproduction  In  Farm  Animal  7th edition  ed.  by  ESE  Hafez  and  B  Hafez. pp. 363–375. Blackwell Publisher. https://doi.org/10.1002/978111
9265306.ch25
Barszcz  K,  Wiesetek  D,  Wasowicz  M,
Kupczynska  M.  2012.  Bull  semen collection  and  analysis  for  artificial insemination. Journal  of  Agricultural Science 4 (3): 1-10.
Binuni  R,  Maarisit  W,  Hariyadi  H,    Saroinsong Y. 2020. Uji aktivitas antioksidan ekstrak daun  mangrove  Sonneratia  alba  dari Kecamatan  Tagulandang,  Sulawesi  Utara menggunakan metode DPPH. Biofarmasetikal  Tropis 3(1):  79–85.
https://doi.org/10.55724/j.biofar.trop.v3i1. 260
Blegur J, Nalley WM, Hine TM. 2020. Pengaruh penambahan  virgin  coconut  oil  dalam pengencer  tris  kuning  telur  terhadap kualitas  spermatozoa  sapi  bali  selama preservasi. Jurnal  Nukleus  Peternakan , 7(2):130–138.
https://doi.org/10.35508/nukleus.v7i2.299
7
Bunga VD, Susilawati T, Wahjuningsih S. 2014. Kualitas  semen  Sapi  Limousin  pada pengencer yang berbeda selama pendinginan. Journal  of  Tropical  Animal Production 1 (1): 13–20.
Egwurugwu  JN,  Ifedi  CU,  Uchefuna  RC, Ezeokafor EN, Alagwu EA. 2013. Effects of zinc on male sex hormones and semen quality  in  rats. Nigerian  Journal  of Physiological Sciences 28(1): 17–22. Fafo  M,  Hine  TM,    Nalley  WM.  2016.
Pengujian  efektivitas  ekstrak  daun  kelor dalam pengencer sitrat-kuning telur terhadap kualitas semen cair babi landrace. Jurnal Nukleus Peternakan 3(2): 184–
195. https://doi.org/10.35508/nukleus.v3i 2.805
Foeh NDFK, Gaina CD. 2017. Sari Buah Lontar
Sebagai Pengencer Alami Dalam
Mempertahankan  Kualitas  Spermatozoa Babi. Jurnal  Kajian  Veteriner 5 (1):  52– 58. https://doi.org/10.35508/jkv.v5i1.1024
Garner DL, Hafez ESE. 2016. Spermatozoa and seminal  plasma. Reproduction  in  Farm Animals.  Lea  and  Febiger. Philadelphia, 144–164.
https://doi.org/10.1002/9781119265306.ch7 Hindrawati  S,  Ciptadi  G,  Chuzaemi  S.  2020.
Kajian Suplementasi Zinc Organik Terhadap  Kualitas  Semen  Pejantan  Sapi Bos  indicus. Journal  of  Tropical  Animal Production 21(2): 237- 245. https://doi.org/10.21776/ub.jtapro.20
20.021.02.7
Hine  TM,  Burhanuddin  MA.  2014.  Efektivitas air  buah  lontar  dalam  mempertahankan motilitas,  viabilitas  dan  daya  tahan  hidup spermatozoa  sapi  bali. Jurnal  Veteriner 15(2): 263–273.
Johnson  LA,  Weitze  KF,  Fiser  P,  Maxwell,  W. M.  C.  2000.  Storage  of  boar  semen. Animal  Reproduction  Science 62(1–3): 143–172. https://doi.org/10.1016/S0378- 4320(00)00157-3
Kusumawati  ED,  Betu  H,  Krisnaningsih  ATN,
Rahadi  S.  2018.  Kualitas  Semen  Segar Sapi  Limousin  Pada  Lama  Simpan  yang Berbeda. Jurnal  Ilmiah  Fillia  Cendekia 3 (1):
1–9.
https://doi.org/10.32503/fillia.v3i1.162
Nurcholis ARI,  Yamin M. 2016. Kriopreservasi semen  domba  garut  menggunakan  tris kuning  telur  yang  disuplementasi  omega- 3  minyak  ikan  salmon. Jurnal  Veteriner 17(2):
309–
315. https://doi.org/10.19087/jveteriner.2 016.17.2.309
Payaran  KO,  Wantouw  B,  Tendean  L.  2014. Pengaruh pemberian zink terhadap kualitas  spermatozoa  pada  mencit  jantan (Mus  musculus). E-Biomedik 2(2):  496–
500. https://doi.org/10.35790/ebm.v2i2.5044 Permatasari  WD,  Setiatin  ET,    Samsudewa  D. 2013.  Studi  tentang  pengencer  kuning telur  dan  pengaruhnya  terhadap  kualitas semen  beku  sapi  jawa  brebes. Animal
Agriculture Journal 2 (1): 143–151. http://ejournal-s1.undip.ac.id/index.php/aa
Rhoyan  YH,  Lestari  TD,  Setiawan  R.  2014.
Kualitas Semen Cair Dingin Domba Garut pada  Tiga  Jenis  Larutan  Pengencer.
Jurnal Ilmu Ternak 14 (1): 63–67.
Romadhoni  I,  Rachmawati  A,  Suyadi  S.  2014. Kualitas  semen  sapi  Madura  setelah pengenceran  dengan  tris  aminomethane kuning  telur  yang  disuplementasi  α- tocopherol pada penyimpanan suhu ruang. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan 24(1):  39–
44.
Roy  B,  Baghel  RPS,  Mohanty  TK,  Mondal  G. 2013.  Zinc  and  male  reproduction  in domestic  animals:  A  review.  Indian Journal of Animal Nutrition, 30 (4): 339–
350.
Seuk
M. 2018. Pengaruh frekuensi penampungan terhadap kualitas spermatozoa  sapi  bali .  JAS .  3(4):  51-53. https://doi.org/https://doi.org/10.32938/ja v3i4.540.
Siswandoko  B,  Zaenab  S,    Husamah  H.  2017. Penambahan Ekstrak Kulit Buah Naga Ke Dalam  Pengencer  Tris  Kuning  Telur Untuk  Meningkatkan  Kualitas  Semen Beku Kambing Peranakan Ettawa. Scripta Biologica 4(4): 247–251. DOI: 10.20884/1.sb.2017.4.4.609
Savitri  FK,  Suharyati  S.  2014.  Kualitas  Semen Beku  Sapi  Bali  dengan  Penambahan Berbagai  Dosis  Vitamin  C  pada  Bahan Pengencer  Skim  Kuning  Telur.  Jurnal Ilmiah  Peternakan  Terpadu 2 (3):  30–36. DOI: http://dx.doi.org/10.23960/jipt.v2i3.
p%25p
Solihati N, Idi R, Setiawan R, Asmara IY. 2006.
Pengaruh  lama  penyimpanan  semen  cair ayam  buras  pada  suhu  5 o c  terhadap periode fertil dan fertilitas sperma. Jurnal Ilmu Ternak 6 (1): 7–11. DOI: https://doi.org/10.24198/jit.v6i1.225
8
Sotler R, Poljšak B, Dahmane R, Jukić T, Jukić DP, Rotim C, Trebše P. 2019. Prooxidant activities of antioxidants and their impact on  health. Acta  clinica  Croatica 58(4): 726-736. https://doi.org/10.20471/acc.2019.58.04.2
0
Susilawati  T.  2011. Spermatologi  Malang .  UB
Press.
Suyadi  S,  Rachmawati  A.  2012.  Effect  of  α- tocopherol in tris-aminomethane–egg yolk on  the  semen  quality  during  cold  storage in boer goats. Jurnal Ilmu-Ilmu
Peternakan 22 (3): 15–26.
Wawang  SK,  Nalley  WM,  Hine  TM.  2024.
Kualitas spermatozoa babi landrace dalam pengencer  sitrat-kuning  telur  dengan substitusi sari buah melon (Cucumis melo L). Comserva 3(11): 4689-4699.
Widhyari  SD,  Esfandiari  A,  Wijaya  A, Wulansari R, Widodo S, Maylina L. 2015. Tinjauan  penambahan  mineral  Zn  dalam pakan terhadap kualitas spermatozoa pada
sapi  Frisian  Holstein  jantan. Jurnal  Ilmu Pertanian Indonesia 20 (1): 72–77.
Widjaya  N.  2011.  Pengaruh  Pemberian  Susu Skim  dengan  Pengencer  Tris  Kuning Telur  terhadap  Daya  Tahan  Hidup Spermatozoa Sapi pada Suhu Penyimpanan  5 o C. Sains  Peternakan 9(2)
: 72–76.
https://doi.org/10.20961/sainspet.v9i2.47 96
Wiyanti  DC,  Isnaini  N,  Trisunuwati  P.  2013. Pengaruh  lama  simpan  semen  dalam
pengencer  NaCl  fisiologis  pada  suhu kamar  terhadap  kualitas  spermatozoa ayam  kampung  (Gallus  domesticus). Journal  of  Veterinary  Sciences 7(1):  53– 55. https://doi.org/10.21157/j.ked.hewan.v7i1
.566
Yani  A,  Nuryadi  P.  2001.  Pengaruh  tingkat substitusi  santan  kelapa  pada  pengencer tris kuning telur dam waktu penyimpanan terhadap kualitas semen kambing etawa . J Biosains 1(1): 12–15.