## IDENTIFIKASI  SENYAWA METABOLIT SEKUNDER SERTA UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL TERIPANG Stichopus hermanii
IDENTIFICATION OF SECONDARY METABOLITES COMPOUNDS, ANTIBACTERIAL AND ANTIOXIDANT ACTIVITIES ON THE METHANOL
EXTRACT OF SEA CUCUMBER Stichopus hermanii

## Abdullah Rasyid
Pusat Penelitian Oseanografi LIPI, Jakarta; Email: a_rasyid_qf@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Identification  of  secondary  metabolites,  antibacterial  and  antioxidant  activities  assay  of methanol extract of sea cucumber Stichopus hermanii were conducted from May to July 2011 at the  Natural  Products  Laboratory,  Research  Center  for  Oceanography,  Indonesian  Institute  of Sciences. Sea cucumber used in this study comes from South Lampung waters. Objective of the study was to get information of secondary metabolites, antibacterial and antioxidant  activities of  methanol  extract  of  sea  cucumber  S.  hermanii.  The  extraction  method  which  used  in  this experiment  was  the  maceration  method  using  methanol  solvent.  Identification  of  secondary metabolites  was  performed  through  observing  reaction  of  colors,  precipitation,  and  foaming. Antibacterial  and  antioxidant  activities  of  methanol  extract  from  sea  cucumber  were  tested using  agar  diffusion  method  and  reducing  of  free  radicals  1.1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl (DPPH) respectively. The results showed that secondary metabolites identified in the methanol extract of sea cucumber S. hermanii were saponin and steroids. Both secondary metabolites had antibacterial  activities  against Staphylococcus  aureus,  Vibrio  eltor  and Bacilus  subtilis . The analysis of antioxidant activity showed that the IC 50 value of methanol extract of sea cucumber S.  hermanii was  about 65.08  ppm.  It  indicated  that  S.  hermanii is  having  potency as antibacterial and antioxidant.
Keywords: antibacterial,  antioxidants,  sea  cucumber  Stichopus  hermanii,  secondary metabolites

## ABSTRAK
Identifikasi  senyawa  metabolit  sekunder,  uji  aktivitas  antibakteri  dan  antioksidan  ekstrak metanol  teripang Stichopus  hermanii telah  dilakukan  pada  bulan  Mei  sampai  Juli  2011  di Laboratorium  Produk  Alam,  Pusat  Penelitian  Oseanografi,  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan Indonesia. Sampel teripang yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari perairan Lampung Selatan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  informasi  senyawa  metabolit  sekunder, aktivitas  antibakteri  dan  antioksidan  ekstrak  metanol  teripang S.  hermanii. Metode  ekstraksi yang  digunakan  adalah  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol.  Identifikasi  metabolit sekunder dengan pengamatan reaksi warna, pengendapan dan buih. Uji aktivitas antibakteri dan antioksidan  ekstrak  metanol  teripang  dilakukan  masing-masing  dengan  metode  difusi  dan reduksi  senyawa  radikal  bebas  1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl  (DPPH).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  golongan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  teridentifikasi  dalam  ekstrak metanol  teripang S.  hermanii adalah  saponin  dan  steroid.  Kedua  metabolit  sekunder  tersebut memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus, Vibrio  eltor dan Bacilus subtilis. Hasil  analisis  terhadap  aktivitas  antioksidan  menunjukkan  bahwa  nilai  IC 50 ekstrak metanol  teripang S.  hermanii sebesar  65,08  ppm.    Hal  ini  menunjukkan  bahwa S.  hermanii memiliki potensi sebagai antibakteri dan antioksidan.
Kata kunci: antibakteri, antioksidan, teripang Stichopus hermanii , metabolit sekunder

## I.  PENDAHULUAN
Teripang atau timun  laut termasuk dalam  filum  Echinodermata  merupakan salah  satu  biota  laut  yang  banyak ditemukan  di  perairan  Indonesia,  sebab secara geografis perairan Indonesia terletak  di  antara  Samudera  Pasifik  dan Samudera  Hindia  merupakan  habitat terbaik untuk hewan teripang (Conand and Byrne, 1993).  Meskipun memiliki bentuk yang  kurang  menarik,  teripang  tetap diminati  untuk  dikonsumsi.  Hal  ini dipengaruhi  oleh  peningkatan  kesadaran akan  pentingnya  makanan  kesehatan. Teripang  sangat  memungkinan  untuk dikembangkan  sebagai  produk  makanan kesehatan  karena  memiliki  kandungan protein  dan  kolagen  yang  sangat  tinggi. Selain  itu  kandungan  terpenting  dari teripang adalah mineral, mukopolisakarida, glucasaninoglycans,
omega-3,  6,  dan  9  ,  asam  amino  dan chondroitin (Jawahar et al., 2002).
Meningkatnya penggunaan antibiotik  dalam  mengatasi  berbagai penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri mulai menimbulkan masalah baru, terutama  karena  sebagian  besar  bahan antibakteri yang digunakan merupakan zat kimia  berbahaya  dan  sifatnya  tidak  aman bagi  kesehatan  (Nimah et  al., 2012). Sampai  saat  ini  penanggulangan  penyakit yang  disebabkan  oleh  bakteri  masih mengandalkan  antibiotik  sintetik.  Hal  ini menimbulkan  kekuatiran  akan  munculnya strain  bakteri  baru  yang  resisten  terhadap antibiotik (Tirtodiharjo, 2011).
Dalam  beberapa  dekade  terakhir, penelitian  pencarian  substans  i  aktif  dari biota laut yang memiliki aktivitas farmakologi  semakin  gencar  dilakukan termasuk teripang (Nigrelli, 1952; Yamanouchi,  1955;  Jawahar et  al., 2002).  Beberapa  senyawa  bioaktif  yang telah berhasil diisolasi dari teripang antara lain  24-dehydroholothurin  A  (Kobayashi et  al., 1991;  Jawahar et  al., 2002),
holothurin A  (Dang et al., 2007; Jawahar et al., 2002), holothurin B (Elyakov et al., 1973;  Jawahar et  al., 2002);  hillaside  A dan  B  (Wu et  al., 2007);  okhotensis  B1- B3 (Silchenko et al., 2008). marmoratoside A, alpha-hydroxy impatienside A, marmoratoside B, dan 25- acetoxy bivittoside D (Yuan et al., 2009). liouvillei A dan B (Maier et al., 2001) dan frondoside A (Ma et al., 2012).
Meskipun  Indonesia  merupakan salah satu eksportir teripang, pemanfaatan teripang sebagai produk obat dan makanan kesehatan belum banyak dilakukan.  Hal  ini  disebabkan  masih terbatasnya  informasi  potensi  bioaktif teripang asal perairan Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan informasi komponen senyawa  metabolit  sekunder  ekstrak metanol  teripang S.  hermanii yang memiliki aktivitas antibakteri dan antioksidan. Hasil penelitian ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi yang  berharga  tentang  potensi  antibakteri dan  antioksidan  teripang Stichopus hermanii ,  termasuk  komponen  senyawa metabolit sekunder.

## II. METODE PENELITIAN
2.1. Bahan Penelitian Sampel teripang S. hermanii (Gambar  1)  diperoleh  dari  perairan  Teluk Ratai  Lampung  Selatan  sebanyak  tiga ekor  (1,1  kg  berat  basah)  pada  bulan Maret  2011.    .Setelah  dibersihkan  dan dibuang  isi  perutnya,  sampel  dimasukkan kedalam  botol  kaca  dan  ditambahkan metanol sampai terendam, lalu dimasukkan dalam cool box untuk dibawa ke  laboratorium  Bahan  kimia  yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari metanol,  amonia,  kloroform,  asam  sulfat, pereaksi  Meyer,  pereaksi  Lieberman- Burchard,  asam  klorida,  ampisilin,  - tocopherol dan 1.1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl (DPPH).
Gambar 1. Sampel teripang Stichopus hermanii.

## 2.3. Ekstraksi Sampel
Sebanyak 500 gram sampel
teripang  segar  yang  telah  dibersihkan  dan dibuang  isi  perutnya  dimaserasi  dengan 1000  mL  metanol  p.a.  selama  3-5  hari, lalu  disaring.  Proses maserasi dan penyaringan  dilakukan  dengan  beberapa kali  pengulangan  sampai  diperoleh  filtrat yang  bening.  Filtrat  yang  diperoleh disentrifuge  dengan  kecepatan  6.000  rpm selama  10  menit  pada  suhu  4 O C.  Filtrat diuapkan  dengan rotary  evaporator pada suhu  40 O C  sampai  mengental,  lalu ditimbang.    Filtrat  yang  dihasilkan disimpan pada suhu 4 O C untuk digunakan pada analisis berikutnya.

## 2.4. Identifikasi Komponen Metabolit Sekunder
Untuk identifikasi senyawa alkaloid,  sebanyak  1  gram  ekstrak teripang  ditambah  dengan  3  tetes  amonia 10% dan 1,5 mL kloroform, lalu dikocok. Lapisan  kloroform  diambil  kemudian dilarutkan  dalam  1  mL  asam  sulfat  2  N, kemudian  dikocok.  Setelah  itu,  ekstrak ditambahkan  dengan  pereaksi  Meyer. Terbentuknya  endapan  putih  menandakan adanya  senyawa  alkaloid  (Harborne, 2006).
Untuk identifikasi senyawa steroid dan  triterpenoid,  sebanyak  sebanyak  1 gram  ekstrak  metanol  teripang  ditambah dengan  2  mL  kloroform  dalam  tabung
reaksi, kemudian diteteskan ke dalam plat tetes,  dan  dibiarkan  sampai  kering.
Setelah  itu,  ditambahkan  dengan  1  tetes pereaksi
Liebermann-Burchard. Terbentuknya  warna  merah  menandakan adanya senyawa triterpenoid dan terbentuknya  warna  biru  atau  ungu menandakan  adanya  senyawa  steroid (Harborne, 2006). Untuk identifikasi senyawa saponin, sebanyak 1 gram ekstrak teripang ditambah dengan 20 mL akuades, kemudian  dipanaskan  selama  5  menit. Larutan  dituang  ke  dalam  tabung  reaksi dalam  keadaan  panas.  Larutan  diambil sebanyak  10  mL,  kemudian  dikocok  kuat secara  vertical  selama  10  detik.  Adanya saponin  ditandai  dengan  terbentuknya busa  yang  stabil  setinggi  1-10  cm  selama 10  menit  dan  tidak  hilang  pada  saat ditambahkan  dengan  satu  tetes  HCl  2  N (Harborne, 2006).

## 2.5. Uji Aktivitas Antibakteri
Bakteri  bioindikator  untuk  uji antibakteri  digunakan S.  aureus,  B. subtilis,  V.  eltor dan E.  coli yang diperoleh  dari  Departemen  Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.  Uji  aktivitas  antibakteri  pada penelitian ini menggunakan metode difusi agar  (Lay,  1994).  Untuk  mengetahui efektvitas bakteri uji digunakan pembanding  antibiotik  yaitu  ampisilin.
Ampisilin  digunakan  dalam  penelitian  ini sebab  ampisilin  termasuk  salah  satu antibiotik  dengan  spektrum  pemakaian yang  luas,  lebih  murah  dan  mudah diperoleh.
Isolat  bakteri  uji  yang  telah dikultur  dalam  nutrien  broth  dioleskan pada permukaan nutrien agar
menggunakan  kapas  lidi  steril.  Sebanyak 20  µL  ekstrak  diteteskan  pada paper  disk menggunakan  pipet  mikro,  selanjutnya paper  disk yang  telah  mengandung ekstrak diletakkan pada permukaan media inokulasi  menggunakan  pinset.  Bakteri diinkubasi selama 24 jam pada suhu 30 0 C. Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk diukur dengan penggaris. Semua proses di atas dilakukan secara  aseptis.
2.6. Uji Aktivitas Antioksidan Untuk penentuan aktivitas antioksidan teripang S. hermanii
menggunakan  metode  peredaman  radikal bebas  DPPH  (Brand-Williams et  al., 1995).  Sebanyak  2  mg  ekstrak  metanol teripang S.  hermanii dilarutkan  dalam metanol  dengan  berbagai  konsentrasi  : 500  ppm,  250  ppm,  125  ppm,  62,50  ppm dan  31,25 ppm. Masing-masing sebanyak 2 mL larutan ekstrak tersebut ditambahkan  dengan  3  mL  larutan  DPPH 20  ppm  dan  dibiarkan  selama  20  menit pada  temperatur  ruang  (terhindar  dari cahaya).  Pengukuran  absorban  dilakukan pada panjang gelombang 517 nm. Sebagai pembanding digunakan  –tocoperol. Perhitungan  %  inhibisi  menggunakan persamaan:
Inhibisi (%) =  [1 – (Absorban sampel/Absorban blanko)] x 100%

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Identifikasi Kandungan Metabolit
Sekunder Metabolit sekunder adalah senyawa  metabolit  yang  tidak  esensial bagi pertumbuhan organisme dan ditemukan  dalam  bentuk  yang  unik  atau berbeda-beda antara spesies yang satu dan lainnya. Fungsi metabolit sekunder adalah untuk  mempertahankan  diri  dari  kondisi lingkungan  yang  kurang  menguntungkan, misalnya  untuk  mengatasi  hama  dan penyakit,  menarik  polinator,  dan  sebagai molekul  sinyal  (Verpoorte  &  Alfermann, 2000).  Identifikasi  kandungan  metabolit sekunder  merupakan  langkah  awal  yang penting dalam penelitian pencarian senyawa  bioaktif  baru  dari  bahan  alam yang dapat menjadi prekursor bagi sintesis obat  baru  atau  prototipe  obat  beraktivitas tertentu ( Harborne, 2006). Hasil identifikasi golongan metabolit  sekunder  terhadap  ekstrak metanol  teripang S.  hermanii seperti terlihat  pada  Tabel  1.  Golongan  senyawa alkaloid tidak teridentifikasi dalam ekstrak metanol  teripang S.  hermanii yang ditandai dengan tidak terbentuknya endapan putih setelah ditambahkan pereaksi  Meyer.  Demikian  juga  halnya dengan triterpenoid yang tidak teridentifikasi sebab tidak terbentuk warna merah  setelah  ditambahkan  pereaksi Liebermann-Burchard (Harborne, 2006).
Tabel 1.  Hasil identifikasi golongan senyawa metabolit sekunder ekstrak metanol teripang S. Hermanii.
No Pereaksi Golongan Senyawa Hasil 1 Meyer Alkaloid - 2 Lieberman-Burchard Triterpenoid - 3 Lieberman-Burchard Steroid + 4 HCl Saponin +
Keterangan : + teridentifikasi - tidak teridentifikasi
Pada  uji  identifikasi  kandungan steroid  menunjukkan  hasil  positif  yang ditandai  dengan terbentuknya warna ungu atau  biru  setelah  ditambahkan  pereaksi Liebermann-Burchard.  Uji  identifikasi kandungan  saponin  menunjukkan  bahwa ekstrak  metanol  teripang S.  hermanii mengandung saponin yang ditandai dengan  terbentuknya  busa  yang  stabil setinggi  1-10  cm  selama  10  menit  dan tidak  hilang  pada  saat  ditambahkan  satu tetes HCl 2 N (Harborne, 2006).

## 3.2.  Uji aktivitas Antibakteri
Hasil  analisis  aktivitas  antibakteri ekstrak  metanol  teripang S.  hermanii disajikan  pada  Tabel  2.  Zona  hambat ekstrak  metanol  teripang S.  hermanii tertinggi  terhadap  bakteri  uji B.  subtilis sebesar 16 mm atau 76,19% terhadap zona hambat  ampisiln.    Zona  hambat  ekstrak metanol S.  hermanii terhadap V.  eltor sebesar  12  mm  atau  sebesar  46,15% terhadap  ampisilin,  sedangkan S.  aureus sebesar  7  mm  atau  24,14%  terhadap ampisilin.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  metanol  teripang S.  hermanii memiliki  aktivitas  antibakteri  tertinggi terhadap  bakteri B.  subtilis dibanding bakteri  uji  lainnya.  Dari  keempat  bakteri uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini, hanya E.  coli yang  tidak  menunjukkan
aktivitas terhadap ekstrak metanol teripang S.  hermani yang  ditandai dengan tidak adanya zona bening disekitar paper disk (Gambar 2).
Hasil  hasil  penelitian  sebelumnya menyebutkan bahwa beberapa jenis teripang  memiliki  aktivitas  antbakteri seperti Holothuria  scabra terhadap V. haeveyi dan Pseudomonas  aeruginosa (Jawahar et  al. (2002), B.  cereus
(Nimah et al. (2012), B. subtilis (Rasyid, 2012)  dan S.  aureus (Tampbolon et  al.,
1998; Rasyid, 2012). Teripang S. variegatus memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap S,  aureus (Tampubolon et  al.,
1998).  Teripang Actinopyga  miliaris mamiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap E.
coli (Jawahar et al., 2002; Tampubolon et al., 1998).  Teripang Bohasdchia sp. menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap B.  subtilis dan V.  eltor (Rasyid,
2012).
Kemampuan beberapa jenis teripang yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri patogen menunjukkan  bahwa  teripang  memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai salah satu sumber bahan
antibakteri.
Pemanfaatan  teripang  sebagai  sumber bahan  antibakteri  dapat  memberikan  nilai tambah terhadap teripang.
Tabel 2. Hasil uji aktivitas antibakeri  ekstrak metanol teripang S. Hermanii. No Bakteri uji Diameter zona hambat (mm) Ekstrak metanol Ampisilin 1 S. aureus 7 29 2 V. eltor 12 26 3 B. subtilis 16 21 4 E. coli - 11
Gambar 2. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol teripang S. hermanii terhadap S. aureus (Sa), V. eltor (Ve), B. subtilis (Bs) dan E. coli (Ec).

## 3.3. Uji aktivitas Antioksidan
Berdasarkan data hasil pengukuran nilai  absorban  sampel  pada  menit  ke-20 dengan panjang  gelombang 517 nm  dapat dianalisis  pengaruh  konsentrasi  sampel terhadap  persentasi  aktivitas  peredaman radikal DPPH, dimana peningkatan konsentrasi  sampel  sebanding  dengan meningkatnya aktivitas peredaman radikal
bebas  DPPH.  Hasil  analisis  aktivitas antioksidan  menunjukkan  bahwa  ekstrak metanol  teripang S.  hermanii memiliki IC 50 sebesar 65,08 ppm  (Tabel  3). Hal  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  tersebut mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang kuat karena nilai IC 50 kurang dari 200 ppm (Blois,
1958).
ampisilin ekstrak metanol teripang S. hermanii ampisilin
ekstrak metanol teripang S. hermanii
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak metanol teripang S. hermanii dan  – tokoferol. Sampel/ Pembanding Konsentrasi sampel (ppm) Absorban (517 nm) Aktivitas Peredaman (%) IC 50 (ppm) DPPH 20 0,369 - - Ekstrak metanol 500 250 125 62,5 31,25 0,176 0,178 0,182 0,185 0,187 52,30 51,76 50,68 49,86 49,32 65,08  –tokoferol 500 250 125 62,5 31,25 0,118 0,139 0,149 0,172 0,202 68,02 62,33 59,62 53,39 45,26 2,75 Apabila  dibandingkan  dengan  aktivitas antioksidan  –tocopherol, aktivitas antioksidan  ekstrak  metanol  teripang S. he rmani masih  lebih  rendah.  Hal  ini kemungkinan  disebabkan  oleh  pengujian aktivitas antioksidan masih berupa ekstrak kasar.  Ada  kemungkinan  jika  senyawa murni  yang  terkandung  dalam  ekstrak metanol  teripnag S.  hermanii akan memiliki nilai aktivitas peredaman radikal bebas yang lebih kuat dibanding ekstraknya.
Menurut Althunibat et al., (2009), teripang  merupakan  salah  satu  biota  laut yang memiliki potensi untuk dikembangkang sebagai sumber antioksidan seperti H. scabra, H. leucospilota dan S.  chloronotus. Teripang Cucumaria  frondosa juga dilaporkan  memiliki  aktivitas  antioksidan (Zhong et  al., 2007,  Mamelona et  al.,
2007)  ).  Gelatin  yang  dihirdilisis  dari teripang Paracaudina  chilensis (Zeng et al., 2007) dan S. japonicus (Wang et al., (2010).  dan  senyawa  polipeptida  yang diisolasi dari teripang Acaudina
molpadioides dilaporkan memiliki
antivitas  antioksidan  (Huihui et  al., 2010).

## IV. KESIMPULAN
Hasil identifikasi metabolit sekunder  menunjukkan  bahwa  ekstrak metanol teripang S. hermanii mengandung  steroid  dan  saponin.  Kedua metabolit  sekunder  tersebut  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  cukup  kuat serta  aktivitas  antibakteri  terhadap S. aureus, V. eltor dan B. subtilis.

## DAFTAR PUSTAKA
Althumbat,  O.Y.,  B.H.  Ridzwan,  M. Taher,  M.D.  Jamaluddin,  M.A. Ikeda  and  B.I.  Zali.  2009. In  vitro antioxidant  and  antiproliferative activities  of  three  Malaysian  sea cucumber  species. Eur.  J.  Sci. Res., 37:376-387.
Blois,  M.S.    1958.    Antioxidant  determi- nations  by  the  use  of  stable  free radical. Nature , 181:1199-1200. Brand-William, W., M.E. Cuvelier, and C.
Berset.    1995.    Use  of  a  free radical method to evaluate antioxidant  activity. Lebensmittel- Wissenschaft  und  Technologie ,
28:25–30. Huihui,  C.,  Y.  Ping  and    L.  Jianrong. 2010.  The preparation of collagen polypeptide  with  free  radical
scavenging  ability  purified  from Acaudina malpadioldes Semper. J. Chin.  Inst.  Food  Sci.  Technol. (http://en.cnki.com.cn/Article_en/ CJFDTOTAL-GSP201001002.htm diakses tanggal 6 Agustus 2012). Conand,  C.    and  M.  Byrne.    1993.    A review  of  recent  developments  in the  world  sea  cucumber  fisheries.
Marine  Fisheries  Review, 55(4):1- 13.
Dang, N.H., N.V. Thanh, P.V. Kien, L.M. Huong, C.V. Ninh, and Y. Hokim. 2007.    Two  new  triterpene glycosidic  from  sea  cucumber Holothuria  scabra.  Arch.  Pharm. Res., 30(11):1387-1391.
Elyakov, G.B., V.A. Stonik, E.V. Levina, V.P.  Slanke, T.A. Kuznetsova and V.S. Levina.  1973.  Glycosides of marine invertebrates I. A compara- tive  study  of  the  glycosides fraction  of  Pacific  sea  cucumbers. Comparative  Biochemistry  and Physiology , 44:325-336.
Harborne,  J.B.    2006.    Metode  fitokimia: Penuntun  cara  modern  mengana- lisis  tumbuhan.  Edisi  IV.  Kokasih P.  dan  I.  Soediro.  (penterjemah). ITB, Bandung. 354hlm. Jawahar,  A.T.,  J.  Nagarajan,  and  S.A.
Shanmugan.  2002.  Antimicrobial substances  of  potential  biomedical importance from holothurian
species. Indian  J.  Mar.  Sci. , 31:161-164.
Kobayashi.  M.,  M.  Hori,  K.  Tan,  T.
Yazusawa,  M.  Matsui,  S.  Suzuki, and  I.  Kitagawa.    1991.    Marine natural product XXVII. Distribution of ianostane-type triterpene    oligogly  cosides  in  ten kind  of  Okinawan  sea  cucumbers.
Chemical  and  Pharmacological Bulletein, 39:2282-2287.
Lay,  B.W.    1994.    Analisis  mikroba  di laboratorium . PT.  Raja  Grafindo Persada. Jakarta. 168hlm.
Ma,  X.,  N.  Kundu,  P.D.  Collin,  O. Goloubeva,  and  A.M.  Fulton.
2012.  Frondoside A inhibits breast cancer  metastasis  and  antagonizes prostaglandin E receptors EP4 and EP2. Breast  Cancer  Res.  Treat., 132(3):1001–1008.
Maler,  M.S.,  A.J.  Roccatagliata,  A. Kuriss,  H.  Chludil,  A.M.  Seldes.
C.A.  Pujol,  and  E.B.  Damonte.
2001.    Two  new  cytotoxic  and virucidal tridulfated triterpene glycosides  from  the  Antarctic  sea cucumber Staurocucumis  liovillei.
J. Nat. Prod., (6):732–736. Mamelona,  J,  F.M.  Pelletier,  K.G.
Lalancette, J. Legault, S. Karboune,  and  S.  Kermasha. 2007.    Quantification  of  phenolic contents  and  antioxidant  capacity of Atlantic sea cucumber,
Cucumaria frondosa . Food Chem.,
104:1040–1047.
Nigrelli,  R.F.    1952.    The  effect  of holothurin  on  fish  and  mice  with sarcoma 180, Zoologica, 37:89-90. Nimah,  S.,  W.F.  Ma’ruf  and  A.  Trianto.
2012. Uji aktivitas ekstrak teripang pasir (Holothuria scabra) terhadap bakteri Pseudomonas  aeruginosa dan Bacilluscereus.  J.  Perikanan , 1(2):1-9.
Rasyid,  A.    2012.    Identifikasi  senyawa metabolit  sekunder  dan  aktivitas antibakteri  ekstrak  metanol  tiga jenis  teripang. Dalam :  Nababan  et al.  (eds.). Prosiding  Pertemuan Ilmiah  Nasional  Tahunan  VIII ISOI . Jakarta. Hlm.:1-7. Silchenko,  A.S.,  S.A.  Avilov,  V.I. Kalinin,  A.I.  Kalinavsky,  P.S. Dmitrenok,  S.N.  Federov,  V.G. Stepanov,  Z.  Dong,  and  V.A. Stonik.    2008.    Constituent  of the se  cucumber Cucumaria  okhoten- sis. Structure  of  okhotosides  B1- B3  and  cytotoxic  activities  of
some glycosides from this species. J. Nat. Prod., 7(3):351–356.
Tampubolon,  K.  dan  W.  Zahiruddin. 1998.  Studi pendahuluan senyawa bioaktif  dari  teripang  ( Holothuria sp. ) .  Lembaga  Penelitian  IPB, Bogor  (http://repository.ipb.ac.id/ bitstream/handle/123456789/2636 6/STUDI%20PENDAHULUAN%
20SENYAWA.pdf?sequence=1 diakses tanggal  6 September 2012). Tirtodiharjo,  M.K.    2011.    Strategi mengatasi  bacteria  yang  resisten terhadap antibiotika. Pidato Pengukuhan  Jabatan  Guru  Besar Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada tanggal 22 Desember 2011. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. 21hlm. Verpoorte,  R.  and  A.W.  Alfermann. 2000.    Metabolic  engineering  of plant secondary
metabolism . Springer. 1-3pp. Wang,  J.,  Y.  Wang,  Q.  Tang,  Y.  Chang, Q.  Zhao,  and  C.  Xue.    2010. Antioxidant  activities    of  low- molecular-weight  gelatin  hydoly- sate  isolated  from    sea  cucumber Stichopus  japonicus. J.  Ocean
Univ. China,  9:94-98.
Wu, J., Y.H. Li, H.F. Tang, H.M. Wu, and Z.R.  Zhou.    2007.    Hillosides  A and B, two new cytotoxic
triterpene  glycosides  from  the  sea cucumber Holothuria hilla Lesson. J. Asian Nat. Prod. Res., 6(8):609– 615. Yamanouchi, T.  1955.  On teh poisonous substance  contained  in  holothu- rians. Publication  of  the  Seto Marine Biologica Lab., 4:163-203. Yuan, W.H., Y.H. Li, H.F. Tang, B.S. Liu,
Z.L.  Wang,  W.  Zhang,  L.  Li,  and
P.  Sun.    2009.    Antifungal triterpene  glycosides  from  the  sea cucumber Bohadschia  marmorata.
Planta Medica, 75(2):168–173.
Zeng, M., F. Xiao, B. Li, Y. Zhao, Z. Liu, and S. Dong.  2007.  Study on free radical  scavenging  activity  of  sea cucumber (paracaudina  chinens var ) gelatin hydrolysate. J. Ocean Univ. China, 6:255-258.
Zhong,  Y.,  M.A.  Khan,  and    F.  Shahidi, 2007.    Compositional  characte- ristics  and  antioxidant  properties of fresh and processed sea cucumber (Cucumaria  frondosa), J.  Agric.  Food  Chem., 55:1188- 1192.