KOREKSI KADAR FLAVONOID DAN TOKSISITAS DALAM EKSTRAK TEMPUYUNG ( SONCHUS ARVENSIS ) DAN PEGAGAN ( CENTELLA ASIATICA )
Fajar Budi Sulaksono 1) , Syamsudin AB 2)
1) Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas Muhammadiyah Jakarta Syamsudin.ab@ftumj.ac.id
ABSTRAK .  Penelitian  ini dilakukan  selama dua bulan  sejak 6  April  sampai  dengan  6  Juni 2009 di Laboratorium Uji Pusat Studi Biofarmaka Jalan Taman Kencana No. 3 Bogor. Bahan penelitian  (unit  sampel)  adalah  daun  pegagan  (Centella  asiatica) tempuyung (Sonchus arvensis)  yang  diambil  dari  perkebunan  kampus  IPB.  Tujuan  penelitian  ini  adalah mengetahui  apakah  ada  pengaruh  dari  flavonoid  yang  terambil  terhadap  daya  toksisitas terhadap  larva  udang (Artemia  salina) pada  ekstrak  tempuyung (Sonchus  arvensis)  dan pegagan  (Cantella  asiatica) . Berdasarkan  percobaan  flavonoid  yang  terambil  tidak berpengaruh terhadap  sifat  toksisitas dikarenakan pada sampel tempuyung maserasi yang memiliki  flavonoid  sebesar  0,0216%  (b/b)  hanya  memiliki  nilai  LC50  sebesar 254.9644 dengan  program  SPSS,  sedangkan  untuk  sampel  tempuyung  refluks Jpmg memiliki  kadar flavonoid  sebesar  0,0102%  (b/b)  memiliki  nilai  LC50  sebesar  7.555.855  dengan  Program SPSS. Kemudian untuk sampel pegagan maserasi yang memiliki kadar flavonoid kecil yaitu sebesar 0,0088% (b/b) juga memiliki nilai LC50 yang kecil sebesar 611.508 dengan program SPSS,  sedangkan  untuk  sampel pegagan  refluks  yang  memiliki  kadar  flavonoid  lebih  kecil yaitu  0,0128%  (b/b)  memiliki  kadar  flavonoid  sebesar  11.214.722  dengan  program  SPSS, oleh karena itu tidak selamanya ada korelasi antara kadar flavonoid dan nilai toksisitas pada ekstrak tempuyung dan pegagan, kadar flavonoid yang tinggi tidak selamanya memiliki daya toksisitas yang tinggi
Kata Kunci: Flavonoid, larva udang (Artemia salina), maserasi, pegagan (Centella asiatica), tempuyung (Sonchus arvensis),

## PENDAHULUAN
Dewasa  ini  kebutuhan  hidup  manusia disegala bidang
kehidupan seperti kebutuhan  obat-obatan,  sandang,  pangan dan  papan  yang  berkualitas  semakin meningkat.  Fenomena  ini  mendorong manusia  mengusahakan  berbagai  macam solusi. Salah satunya dititik beratkan pada keberadaan hutan tropika yang menyimpan  banyak  sumber  daya  alam hayati yang di dalamnya termasuk sumber daya  nabati.  Sumber  daya  tersebut berkisar  antara  20.000-30.000  spesies, 25% diantaranya telah diteliti dan diketahui keberadaannya,
10% dimanfaatkan  untuk  keperluan  seperti, sandang, pangan, papan, obat-obatan dan pertanian.  Sisanya  masih  sebuah  misteri yang  masih  harus  diteliti  lebih  jauh  lagi (Hidayat 2002).
Sumber  daya  alam  nabati  merupakan sumber  metabolit  primer  dan  sekunder yang  dapat  dimanfaatkan  di  antaranya sebagai  bahan  baku  obat  pada  industri farmasi, pengawet makanan atau suplemen makanan pada industri pangan dan  sebagai  pestisida  alami  yang  ramah lingkungan pada sektor pertanian. Berbagai macam penelitian tentang tumbuhan  obat  banyak  dilakukan  di berbagai  negara  di  dunia  termasuk  di Indonesia.  Penelitian  terhadap  tanaman obat  ini  dilakukan  dengan  mencari senyawa  bioaktif  dalam  suatu  tumbuhan yang  nantinya  bisa  digunakan  sebagai obat.
Laboratorium  Uji  Pusat  Studi  Biofarmaka melakukan penelitian tentang khasiat dan manfaat  tanaman-tanaman  herbal  baik untuk obat-obatan pada bidang
kesehatan maupun dalam dunia pertanian. Salah satu penelitiannya adalah mengukur kadar metabolit sekunder  dan  pengujian  toksisitas  dari
beberapa jenis tanaman herbal. Penelitian  ini  meliputi  identifikasi  secara kuantitatif  kadar  Flavonoid  dan  menguji seberapa  besar  efek  farmakologisnya dengan  uji  toksisitas  pada  larva  udang Artemia  Salina  Leach. Tumbuhan  yang diuji adalah Tempuyung
(Sonchus arvensis ) dan Pegagan {Centella asiatica). Tumbuhan yang memiliki kadar flavonoid yang tinggi biasa digunakan sebagai tumbuhan obat-obatan pada  masyarakat  (Markham  1988).  Oleh karena  itu,  penting  dilakukan  percobaan untuk membuktikan  adanya korelasi antara kadar flavonoid dan daya toksisitas dari ekstrak tempuyung {Sonchus arvensis) dan pegagan {Centella asiatica).

## METODOLOGI PENELITIAN
Bahan dan Alat: Bahan-bahan yang digunakan ialah
simplisia  tempuyung,  pegagan,  etanol 96%, kertas saring Whatman 24, alumunium  foil,  air  laut,  larutan  twin  80, larva udang, larutan
heksametilentetramina  0,5%,  HC1  25%, akuades, larutan A1C1 3 2% dalam larutan asam  asetat  glasial,  larutan  asam  asetat glacial  5%  dalam  metanol,  larutan  etil asetat,  aseton  dan  larutan  standar kuarsetin.
Alat-alat  yang  digunakan  ialah  alat-alat gelas, neraca analitik, pengaduk mekanik, sudip, rotavapor, pendingin tegak, waterbath ,  kuvet  dan  Spektrofotometer UV-VIS.

## Metode Penelitian Ekstraksi
Ditimbang  dengan  teliti  dalam  neraca analitik untuk ekstraksi maserasi, 100,0047  gram  sampel  tempuyung  yang telah  dihaluskan  lalu ditambahkan 500  ml etanol  teknis  96%.  Setelah  itu  campuran diaduk  dengan  alat  pengaduk  selama  6 jam Setelah selesai diaduk selama 6 jam, larutan  kemudian  didiamkan  selama  24 jam, kemudian saring larutan dan tampung filtrat dalam Erlenmeyer 500 mL.
Kemudian  residu  kembali  di  ekstrak dengan  500  mL  etanol  teknis  96%,  lalu diaduk  kembali  dengan  alat  pengaduk selama  6  jam,  setelah  itu  didiamkan kembali selama 24 jam. Setelah didiamkan selama 24 jam, larutan kembali disaring  dan  filtrat  disatukan  dalam Erlenmeyer  500  mL.  Kemudian  filtrat dipekatkan menggunakan rotavapor sampai  ekstrak  menjadi  pekat.  Prosedur diulangi untuk sampel pegagan.
Ditimbang  dengan  teliti  untuk  ekstraksi refluks  100,0134  gram  simplisia  kering, lalu  masukan  sampel  pada  Erlenmeyer asah. Erlenmeyer asah yang sudah berisi sempel,  ditambahkan  500  mL  etanol teknis  96%  kemudian  direfluks  selama  2 jam  pada  suhu  80°C,  dihitung  pada  saat larutan  mulai  mendidih.  Setelah  direfluks selama  2  jam  pada  suhu  80°C,  larutan kemudian  disaring  dengan  kertas  saring Whatman,  lalu  fltrat  hasil  penyaringan ditampung  dalam  Erlenmeyer  500  mL. Residu  dari  sisa  penyaringan  yang pertama  dimasuk  an  kembali  dalam Erlenmeyer  asah  kemudian  ditambahkan dengan  500  mL  etanol  96%.  Setelah ditambahkan  dengan  etanol  96%,  residu direfluks  selama  2  jam  pada  suhu  80°C. Waktu dihitung saat larutan mulai mendidih.  Setelah  direfluks  selama  2  jam larutan disaring dan filtrat hasil penyaringan disatukan dengan filtrat  hasil penyaringan yang pertama dalam Erlenmeyer 500 mL. Kemudian filtrat yang telah  disatukan  dipekatkan  menggunakan Rotavapor  sampai  ekstrak  menjadi  pekat.
Prosedur
diulangi untuk sampel tempuyung.

## Uji Toksisitas terhadap Larva Udang
Penetasan telur
Telur  udang  sebanyak  2  mg  ditempatkan pada  Erlenmeyer  500  mL  berisi  air  laut. Gelas  piala  diberi  aerator  dan  dibiarkan selama  48  jam.  Telur  akan  menetas dalam 48 jam dan larva siap untuk diuji.
Penyiapan sampel Masing-masing  ekstrak  tempuyung  dan pegagan dengan 2 metode ekstraksi yang
berbeda, masing-masing ditimbang sebanyak 50  mg  ke  dalam gelas piala 50 mL.  Setelah  itu  sampel  ditambahkan dengan  3  tetes  larutan  twin  80,  lalu sampel  dilarutkan  dengan  sedikit  air  laut sambil  diaduk  dengan  gelas  pengaduk. Setelah larut, sampel dimasukan ke dalam labu  takar  25  mL  dan  ditambahkan dengan  air  laut  sampai  tera  untuk membuat larutan sampel dengan konsentrasi  500  ppm  untuk  tempuyung maserasi,  1000  ppm  untuk  tempuyung refluks  dan  pegagan  maserasi,  lalu  2000 ppm untuk pegagan refluks.
Uji bioaktivitas Pada tiap sumur dimasukan 10 ekor larva udang dan 1 mL air laut. Pada tiap sumur dilakukan  pengenceran  dari  masing- masing  larutan  stok  sehingga  konsentrasi ekstrak dalam sumur menjadi  10 ppm, 50 ppm,  dan  250  ppm  untuk  ekstrak tempuyung  maserasi,  10  ppm,100  ppm, dan  500  ppm  untuk  sampel  tempuyung refluks  dan  pegagan  maserasi  lalu  500 ppm,  750  ppm  dan  1000  ppm  untuk sampel  pegagan  refluks.  Sebagai  kontrol negatif  digunakan  larva  udang  dengan  2 ml  air  laut  (tanpa  ekstrak).  Sumur dibiarkan  terbuka  selama  24  jam,  setelah 24  jam  dihitung  jumlah  larva  udang  yang mati  (tidak  menunjukan  gerakan)  atau yang  hidup  (terus  bergerak).  LC50 ditentukan dengan membuat kurva hubungan antara mortalitas dengan konsentrasi  ekstrak  atau  dapat  diolah menggunakan program SPSS.
Kadar  Flavonoid  Ekstrak  Tempuyung dan Pegagan Dengan Metode

## Spektrofotometri UV
Pembuatan larutan induk Ekstrak  yang  setara  dengan  200  mg simplisia  dimasukkan  ke  dalam  labu  alas bulat, kemudian ditambahkan dengan 1 ml larutan  heksametilentertramina  (HMT),  20 ml  aseton  dan  2  mL  larutan  HCl, kemudian dihidrolisis dengan cara direfluks  selama  30  menit.  Campuran disaring menggunakan kertas saring, filtrat dimasukan  ke  dalam  labu  takar  100  liter. Filtrat  dalam  labu  takar  ditambah  dengan aseton sampai 100 ml.
Diambil 20 ml filtrat, dimasukkan ke dalam corong  pisah,  ditambahkan  20  ml  air  dan diekstraksi tiga kali masing-masing dengan 15 ml etil asetat. Fraksi etil asetat dikumpulkan  dan  ditambah  dengan  etil asetat sampai 50 ml dalam labu takar.
Pembuatan larutan standar 5  mg  kuarsetin  ditimbang,  ditambah dengan  larutan  asam  asetat  glasial  5% dalam  metanol  sampai  50  ml  untuk membuat larutan standar dengan konsentrasi  100  ppm.  Kemudian  larutan standar  kuarsetin  100  ppm  diencerkan untuk  membuat  larutan  standar  dengan konsentrasi 75 ppm, 50 ppm, 25 ppm, 10 ppm, dan 5 ppm
Pembuatan larutan blanko Asam  asetat  glasial  dalam  metanol ditambah  dengan  1  ml  pereaksi  AICI 3 kemudian  ditepatkan  dengan  larutan asam  asetat  glasial  sampai  25  ml  dalam labu takar.
Pembuatan larutan sampel 10  ml  larutan  induk  diambil,  kemudian ditambah  dengan  1  ml  larutan  AICI 3 dan larutan  asam  asetat  glasial  sampai  25  ml dalam labu takar.

## Metode Analisa Data Pengukuran
Pengukuran  dilakukan  30  menit  setelah penambahan
AICI 3 menggunakan spektrofotometer  ultraviolet  pada  panjang gelombang 370,8 nm dengan pembanding kuarsetin  atau  sebagai  larutan  standar kuarsetin.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Data Hasil
Tabel 1. Data Ekstrak Tempuyung dan Pegagan Sampel Jenis ekstraksi Rendemen (%) Tempuyung  Maserasi 5.07 Refiuks 7.71 Pegagan Maserasi 10.83
Refiuks 20.97

## Hasil Rendemen Ekstrak Tempuyung
dan Pegagan

## Gambar 1. Hasil Rendemen Ekstrak Tempuyung dan Pegagan
Flavonoid total dengan metode

## Spektrofotometri
Hasil  pada  percobaan  dapat  dilihat  pada tabel 2 berikut:
Tabel 2. Data kadar flavonoid dalam ekstrak tempuyung dan pegagan
Gambar 2. Rerata (%) (b/b) flavonoid

## dalam sampel

## Uji toksisitas pada ekstrak tempuyung dan pegagan
Pengujian toksisitas yang dilakukan terhadap tiap ekstrak diperoleh hasil seperti ditunjukan pada tabel 3 berikut:
Sampel Jenis ekstraksi Rerata (%) (b/b) flavonoid dalam sampel Tempuyung Maserasi 0.0216 Refluks 0.0102 Pegagan Maserasi 0.0088 Refluks 0.0128
Dan Pegagan (Centella Asiatica) Fajar Budi Sulaksono, Syamsudin Ab
Tabel 3 Data hasil nilai LC50 sampel ekstrak tempuyung dan pegagan Bahan Uji Cara Ekstraksi Konsentrasi (ppm) % mortalitas Rata-rata Nilai LC50 (SPSS) Ekstrak Maserasi 10 25 254.9644 Tempuyung 50 22.5 250 50 Refluks 10 0 755.5855 100 5 500 22.5 Ekstrak Maserasi 10 42.5 61.1508 Pegagan 100 57.5 500 77.5 Refluks 500 17.5 1121.4772 750 47.5 1000 37.5
Gambar 3. Nilai LC50 menggunakan metode SPSS
Pada  percobaan  bila  ditampilkan hasil  antara  kadar  flavonoid  dan  daya toksisitas,  dapat  dilihat  pada  tabel  4 berikut:
Tabel 4. Data korelasi antara kadar flavonoid dan daya toksisitas Bahan Uji Cara Ekstraksi Nilai LC50 (SPSS) Kadar Flavonoid % (b/b) dalam sampel Ekstrak Maserasi 254.9644 0.0216 Tempuyung Refluks 755.5855 0.0102 Ekstrak Maserasi 61.1508 0.0088 Pegagan Refluks 1121.4772 0.0128

## Pembahasan Metode Ekstraksi.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada percobaan ialah metode ekstraksi maserasi  dan  refiuks.  Pada  percobaan, sampel tempuyung dan pegagan diestraksi  dengan  etanol  teknis  96%, karena  alkohol  adalah  pelarut  serbaguna yang  baik  untuk  ekstraksi  (Harborne 2006).  Masing-masing  sampel  diekstraksi dengan  maserasi  dan  refiuks.  Perlakuan
ini  dimaksudkan  agar  dapat  diketahui, pengaruh  dari  metode  ekstraksi terhadap penentuan  kadar  flavonoid  dan daya toksisitas.  Hasil  yang  diperoleh  dari ekstraksi  pada  sampel  pegagan  dan tempuyung  dapat  dilihat  pada  Tabel  1 berikut:
Tabel 5 Data Ekstrak Tempuyung dan Pegagan Sampel Jenis ekstraksi Rendemen (%) Tempuyung Maserasi 5.07 Refluks 7,71 Pegagan Maserasi 10.83 Refluks 20.97
Berdasarkan  data  hasil  ekstraksi  tabel  1, untuk  mendapatkan hasil  rendemen  yang tinggi metode refluks lebih baik dari pada metode  maserasi.  Hal  ini  dikarenakan metode  refluks  adalah  metode  ekstraksi yang  menghasilkan  ekstrak  yang  lebih pekat  dibandingkan  metode  ekstraksi maserasi.  Pada  metode  ekstraksi  refluks sampel  diekstraksi  menggunakan  suhu yang  tinggi  sedangkan  metode  ekstraksi maserasi  berlangsung  pada  suhu  kamar. Pada  suhu  tinggi  daya  interaksi  pelarut terhadap sampel akan tinggi, oleh karena itu  senyawa  yang  terkandung  dalam sampel lebih mudah terlarut atau terambil ke  dalam  pelarut  yang  digunakan.  Oleh karena  itu  metode  ekstraksi  refluks menghasilkan sampel yang pekat, sedangkan ekstrak yang dihasilkan metode  maserasi  cenderung  lebih  encer. Perbedaan  hasil  ekstraksi  inilah  yang menyebabkan hasil rendemen yang dihasilkan  metode  ekstraksi  refluk  lebih tinggi  dibandingkan  metode  maserasi.
Karena  ekstrak  yang  dihasilkan  lebih pekat, maka pada saat sampel dipekatkan pada  rotavapor  ekstrak  pekat  yang dihasilkan lebih banyak dan pelarut teknis yang  didapatkan  kembali  lebih  sedikit dibandingkan  dengan  metode  maserasi yang  menghasilkan  pelarut  mumi  lebih banyak.  Pada  metode  ekstraksi  refluks rendemen  yang  dihasilkan  dari  sampel tempuyung  sebesar  7.71%  dan  pegagan sebesar 20.97%. Sedangkan hasil rendemen metode ekstraksi maserasi dari sampel  tempuyung  sebesar  5.07%  dan pegagan  sebesar  10.83%.  Sedangkan, bila  dilihat  dari  segi  jumlah  pelarut  yang digunakan antara metode ekstraksi refluks dan maserasi, kedua metode ekstraksi ini cenderung  sama  dalam  penggunaan jumlah pelarut.
Ekstrak yang diperoleh dijernihkan dengan  penyaringan,  lalu  dipekatkan dengan rotatory evaporator
atau rotavapor. Pemekatan  ekstrak  dengan
rotavapor ini dapat meningkatkan kualitas hasil ekstraksi, karena rotavapor memekatkan larutan menjadi volume kecil tanpa  terjadi  percikan  pada  suhu  antara 30  dan  50°C  (Harborne  2006).  Prinsip pemekatan  dengan rotavapor adalah pelarut yang digunakan untuk melarutkan sampel  akan  menguap  dan  masuk  ke dalam  kondensor.  Pada  saat  sampai dalam kondensor, pelarut akan mengembun dan jatuh kedalam labu yang digunakan  untuk  menampung  pelarut. Sehingga  pada  saat  pemekatan  dengan rotavapor pelarut  murni  bisa  didapatkan kembali  dan  kemungkinan  ekstrak  yang didapat  masih  terkandung  pelarut  kecil. Semakin kering ekstrak yang didapat dari proses  pemekatan  dengan rotavapor , akan  semakin  baik  kualitas  dari  ekstrak tersebut.  Karena  pada  saat  ekstrak  diuji lebih  lanjut  dengan  pengujian  aktivitas ekstrak  maka  hasil  yang  didapat  akan menunjukan  aktivitas  yang  sebenarnya dari ekstrak tersebut tanpa ada pengaruh dari  pelarut  yang  masih  ada  dalam ekstrak  dan  kemungkinan  masih  adanya pelarut  yang  menempel  pada  ekstrak sangat  kecil.  Oleh  karena  itu,  pemekatan
dengan rotavapor ini sangat penting untuk memperbanyak  jumlah  sampel  yang terkandung  pada  ekstrak  yang  didapat. Karena  bisa  saja  terjadi  pada  saat pengujian aktivitas sampel yang seharusnya  aktif,  menjadi  tidak  aktif terhadap  organisme  uji  hanya  karena jumlah  sampel  yang  terkandung  dalam ekstrak sedikit.
Flavonoid total dengan metode

## Spektrofotometri
Berdasarkan  hasil  percobaan,  ekstrak simplisia  yang  setara  dengan  200  mg direfluks kembali dengan aseton dan HC1 25%.  Fungsi  dari  HC1  25%  adalah  untuk menghidrolisis  senyawa  flavonoid  dalam bentuk  glikosida  dalam  sampel  dan penambahan  aseton  bertujuan  untuk mengikat senyawa flavonoid dalam bentuk glikosida  lain  yang  sedikit  polar  dalam  air (Robinson 1995). Sehingga pada percobaan,  diharapkan  semua  flavonoid dalam  sampel  dapat  terambil.  Setelah semua  flavonoid  diharapkan  terambil ketika  proses  refluks,  selanjutnya  sampel diekstraksi  dengan  etil  asetat.  Etil  asetat adalah  pelarut  organik  yang  bersifat sedikit  polar.  Penambahan  etil  asetat bertujuan  untuk  memisahkan  senyawa golongan  flavonoid  dari  senyawa  yang lebih  polar  seperti  karbohidrat.  Etil  asetat juga  berguna  untuk  mengambil  katekin dan proantosianidin yang termasuk dalam golongan  senyawa  flavonoid  (Robinson 1995). Pada percobaan, digunakan standar  sebagai  pembanding  adalah kuarsetin.
Percobaan  menggunakan  pereaksi  AICI 3 , pereaksi  AICI 3 akan  berikatan  dengan sampel atau standar kuarsetin membentuk  kompleks  warna  fluoresensi kiming-hijau.  Keberadaan  cincin  aromatik terkonjugasi  dan  kompleks  hijau  yang terbentuk  dengan  pereaksi  AICI3  akan menyebabkan  flavonoid  menunjukan  pita serapan  kuat  pada  daerah  spektrum  UV dan  spektrum  tampak  (Harborne  2006). Panjang gelombang yang digunakan pada pengukuran mengggunakan spektrofotometer  adalah  370.8  nm.  Pada
percobaan  standar  kuarsetin  membentuk kompleks  warna  hijau,  sedangkan  untuk sampel  tempuyung  maserasi,  tempuyung refluks,  pegagan  maserasi  dan  pegagan refluks membentuk kompleks warna yang tak sama seperti standar. Setelah penambahan  AICI3,  standar  dan  sampel didiamkan dulu selama 30 menit sebelum diukur  pada  spektrofotometer  (BPOM 2005).  Hal  ini  bertujuan  agar  semua komponen  flavonoid  yang  terdapat  pada standar dan sampel membentuk kompleks warna  dengan  sempurna.  Hasil  pada percobaan  dapat  dilihat  pada  tabel  6 berikut:
Tabel 6 Data kadar flavonoid dalam ekstrak tempuyung dan pegagan
Hasil  yang  diperoleh  pada  percobaan, sampel  pegagan  refluks  memiliki  kadar flavonoid  total  sebesar  0.0128%  (b/b) Sedangkan  sampel  pegagan  maserasi memiliki  kadar  flavonoid  lebih  kecil daripada  sampel  pegagan  refluks,  yaitu sebesar  0.0088%  (b/b)  (Tabel  6).  Kadar flavonoid  pada  pegagan  refluks  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  pegagan maserasi,  hal  ini  dimungkinkan  karena pada  sampel  pegagan  metode  ekstraksi refluk,  hampir  semua  senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak  tersebut  dapat terambil  akibat  metode  ekstraksi  yang menggunakan  pemanasan.  Hal  tersebut mungkin juga ditunjang dengan komponen flavonoid  yang  terdapat  dalam  pegagan bersifat  tahan  panas,  sehingga  flavonoid dalam sempel pegagan banyak menyerap radiasi  pada  panjang  gelombang  370.8 nm.
Flavonoid  yang  terkandung  pada  sampel tempuyung  maserasi  pada  percobaan sedikit  lebih  tinggi  daripada  sampel
tempuyung  refluks  (Tabel  6).  Kadar flavonoid total dalam tempuyung maserasi sebesar 0.0216%  (b/b). Sedangkan kadar flavonoid  total  pada  sampel  tempuyung refluks sedikit lebih rendah yaitu 0.0102% (b/b).  Hal  ini  dapat  terjadi  karena  tidak semua  flavonoid  bersifat  tahan  panas. Sifat  ini  bergantung  pada  sejauh  mana kandungan  flavonoid  dalam  bahan  alam memiliki  gugus  OH  agar  setiap  senyawa didalamnya  dapat  berikatan  hidrogen dengan  kuat  sehingga  untuk  memutus ikatan ini diperlukan energi yang kuat.
Gambar 4. Struktur kaemferol dan kuarsetin
Dilihat  dari  strukturnya,  apigenin  dan luteolin  (Gambar  5)  memiliki  gugus  OH yang  lebih  sedikit  dibandingkan  dengan kaemferol  dan  kuarsetin  (Gambar  4) sebagai  standar  yang  memiliki  gugus OH yang  lebih  banyak.  Dilihat  dari  mayoritas kandungan flavonoidnya yang lebih banyak  apigenin  dan  luteolin  dari  pada kaemferol, bisa disimpulkan bahwa ikatan hidrogen  antar  ikatannya  cenderung lemah dan  mudah  rusak  atau  terputus  dengan panas.  Ikatan  yang  telah  terputus  terurai menjadi  bentuk  yang  lain,  sehingga senyawa  yang  terurai  tersebut  menjadi bentuk  lain  yang  tidak  bisa  menyerap radiasi  pada  panjang  gelombang  370.8 nm.  Hal  inilah  yang  menyebabkan  kadar flavonoid  dalam  tempuyung  refluks  lebih rendah  dari  pada  kadar  flavonoid  dalam tempuyung maserasi.
Sampel Jenis ekstraksi Rerata (%) (b/b) flavonoid dalam sampel Tempuyung Maserasi 0.0216 Refluks 0.0102 Pegagan Maserasi 0.0088 Refluks 0.0128
Gambar 5. Luteolin dan apigenin
Tempuyung  dengan  metode  ekstraksi maserasi, cenderung
lebih kecil kemungkinan  komponen  rusak,  karena pada  tahap  awal  ekstraksi,  metode  ini tidak  melibatkan  pemanasan,  sehingga pemanasan  hanya  terjadi  pada  saat preparasi  sampel  untuk  kadar  flavonoid. Sedangkan  untuk  sampel  tempuyung maserasi,  dari  awal  ekstraksi,  metode  ini sudah  melibatkan  pemanasan  sehingga pada  tahap  preparasi  sampel  kadar flavonoid, pemanasan yang kedua dimungkinkan  menimbulkan  efek  yang lebih  hebat  yang  berpengaruh  dalam pemutusan  ikatan.  Pada  flavonoid,  tidak semua golongan flavonoid dapat berikatan  dengan  sempurna  dengan pereaksi warna AlCl 3 membentuk kompleks  warna,  karena  pereaksi  warna untuk  flavonoid  tidak  hanya  AICI 3 2%, tetapi  bisa  dengan  FeCl 3 -K 3 Fe(CN) 6 (1:1) dengan  hasil  biru  dan  pereaksi  Folin Ciocalteau (Harborne 2006).
Tumbuhan herbal yang diduga mengandung  banyak  flavonoid  biasanya digunakan sebagai bahan untuk pengobatan. Karena flavonoid diduga bisa digunakan  sebagai anti  kanker  (Markham 1988).  Dari  pernyataan  tersebut  tersirat bahwa ada korelasi antara kadar flavonoid dengan  daya  toksisitas  terhadap  larva udang.  Oleh  karena  itu  pada  percobaan ini  juga  dilakukan  analisis  toksisitas ekstrak tempuyung dan pegagan terhadap larva udang ( Artemia Salina Leach).
Uji  toksisitas  pada  ekstrak  tempuyung dan pegagan
Organisme  uji A.  Salina yang  digunakan untuk  uji  toksisitas  diperoleh  dari  hasil penetasan  menggunakan  air  laut  dengan bantuan  aerator  untuk  memenuhi  kadar oksigen  yang  terlarut.  Gelembung  udara yang berasal dari aerator dengan
kekuatan sedang juga berfungsi mengaduk  telur  sehingga  telur  tidak mengendap  pada  dasar  wadah  yang dapat  menyebabkan  telur  sulit  menetas akibat  kekurangan  oksigen  (Wardani
2008).  Larva  udang  yang  digunakan berumur  48  jam.  Pada  umur  tersebut, larva  A Salina bersifat  peka  Hal  ini disebabkan  membran  sel  larva  masih lunak  sehingga  memudahkan  senyawa asing  dalam  air  laut  masuk  ke  dalam tubuh  larva  dan  menyebabkan  kematian (Wardani  2008).  Pemeriksaan  toksisitas pada larva udang merupakan
pemeriksaan toksisitas awal yang diperlukan  untuk  mengetahui  berapa konsentrasi  yang  dapat  menyebabkan keracunan.  Tingkat  konsentrasi  yang dapat  menyebabkan  keracunan  dapat ditentukan,  salah  satunya  dengan  letal konsentrasi  50%  (LC50).  LC50  adalah konsentrasi  dari  suatu  bahan  yang menyebabkan 50%  kematian dalam suatu populasi.  LC50  dapat  digunakan  untuk menentukan toksisitas awal dari suatu zat. Data  mortalitas  hewan  uji  yang  diperoleh dapat  diolah  untuk  mendapatkan  nilai LC50  dengan  selang  kepercayaan  95% (Wardani 2008). Pengujian toksisitas yang dilakukan  terhadap  tiap  ekstrak  diperoleh hasil  seperti  ditunjukan  pada  tabel  7 berikut:
Tabel 7 Data hasil nilai LC50 sampel ekstrak tempuyung dan pegagan Ba ha n uji Car a ekst raks i Konsen trasi (ppm) % mortal itas Rata- rata Nilai LC50 (SPSS ) Ekstra k tempu yung Mas eras i 10 50 250 25 22.5 50 254.96 44 Refl uks 10 100 500 0 5 22.5 755.58 55 Ekstra k pegag an Mas eras i 10 100 500 42.5 57.5 77,5 61.150 8 Refl uks 500 750 1000 17.5 47.5 1121.4 772
37.5
Data lengkap dari tabel di atas bisa dilihat pada Lampiran 5, 6, 7 dan 8. Bila melihat hasil  yang  diperoleh  pada  percobaan, terlihat  bagaimana  pengaruh  metode ekstraksi  terhadap  aktivitas  komponen yang  terkandung  didalam  sampel  sangat besar.  Pada  sampel  herba  tempuyung, nilai  LC50  dari  metode  ekstraksi  refluks lebih besar dibandingkan nilai  LC50 pada metode ekstraksi maserasi. Pada tempuyung  refluks,  nilai  LC50  sebesar 755.5855 ppm sedangkan pada tempuyung  maserasi  nilai  LC50  sebesar 254.9644  ppm  (Tabel  3).  Hal  yang  sama juga teijadi pada sampel pegagan, dimana metode  ekstraksi  sangat  berpengaruh pada  nilai  LC50  yang  diperoleh  pada percobaan.  Pada  pegagan  refluks,  nilai LC50 sebesar 1121.4772 ppm sedangkan pada  pegagan  maserasi  nilai  LC50 sebesar  61.1508  ppm  (Tabel  3).  Pada kedua  sampel  yang  diujikan,  nilai  LC50 sampel  yang  diekstraksi  menggunakan metode maserasi lebih toksik
dibandingkan dengan sampel yang diekstraksi dengan metode refluks. Konsentrasi  yang  kecil  pada  nilai  LC50 menjadi  ukuran  bahwa  pada  konsentrasi yang  kecil,  sampel  ini  memiliki  toksisitas yang  cukup  untuk  membunuh  setengah dari populasi larva udang yang digunakan sebagai  organisme  uji  pada  percobaan. Sampel  yang  diekstraksi  dengan  metode refluks  memiliki  kemungkinan  komponen yang terkandung di dalamnya rusak akibat pemanasan.  Mengingat  metode  ekstraksi ini memiliki kemungkinan rusaknya komponen  lebih  besar  dibanding  metode maserasi yang sama sekali tidak melibatkan pemanasan. Nilai LC50
masing-masing  ekstrak  ini  menjadi  batas penentuan  ragam  konsentrasi,  mangingat dalam  formula  obat  akan  lebih  aman  jika dibuat di bawah nilai LC50-nya. Tumbuhan herbal yang diduga mengandung  banyak  flavonoid  biasanya digunakan sebagai bahan untuk pengobatan.  Dari  pernyataan  tersebut bisa  diartikan  bahwa  semakin  banyak flavonoid  yang  terkandung  pada  sampel seharusnya sampel akan bersifat semakin
toksik pada larva udang sebagai organisme  uji.  Pada  percobaan  bila ditampilkan  hasil  antara  kadar  flavonoid dan  daya  toksisitas,  dapat  dilihat  pada tabel  3.  Hal  ini  dimungkinkan  pada pegagan,  senyawa  yang  bersifat  lebih toksik  terhadap  organisme  uji  adalah senyawa  lain  diluar  golongan  flavonoid. Oleh  karena  itu  bisa  dikatakan  bahwa tidak  ada  pengaruh  dari  flavonoid  yang terambil  terhadap  daya  toksisitas  atau tidak selamanya ada korelasi antara kadar flavonoid  dengan  daya  toksisitas  pada ekstrak  tempuyung  dan  pegagan  yang telah dilakukan pada penelitian ini.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  percobaan  Flavonoid  yang terambil tidak berpengaruh terhadap daya toksisitas dikarenakan pada sampel tempuyung maserasi yang memiliki kadar Flavonoid  sebesar  0,0216%  (b/b)  hanya memiliki  nilai  LC50  sebesar  2.549.644 dengan program SPSS, sedangkan untuk sampel tempuyung Refluks yang memiliki kadar  Flavonoid  sebesar  0,0102%  (b/b) memiliki  nilai  LC50  sebesar  7.555.855 dengan  Program  SPSS.  Kemudian  untuk sampel  Pegagan  maserasi  yang  memiliki kadar  Flavonoid  kecil  yaitu  sebesar 0,0088%  (b/b)  juga  memiliki  nilai  LC50 yang  kecil  sebesar  611.508  dengan program  SPSS,  sedangkan untuk  sampel Pegagan  refluks  yang  memiliki  kadar Flavonoid lebih tinggi yaitu 0,0128%  (b/b) memiliki kadar Flavonoid sebesar 11.214.722  dengan  program  SPSS,  oleh karena  itu  tidak  selamanya  ada  korelasi antara kadar flavonoid dan nilai toksisitas pada  ekstrak  tempuyung  dan  pegagan, kadar flavonoid yang tinggi tidak selamanya  memiliki  daya  toksisitas  yang tinggi.

## Saran
Perlu  diadakan  identifikasi  lebih  lanjut terhadap  kandungan  senyawa  selain golongan  flavonoid  pada  daun  pegagan dan tempuyung dengan metode Fitokimia. Sehingga  dapat  diketahui  senyawa  lain
seperti alkaloid yang kemungkinan mempengaruhi  daya  toksisitas  dalam ekstrak tempuyung dan pegagan.

## DAFTAR PUSTAKA
Harborne  J.B.  1987. Metoda  Fitokimia. Padmawinata
K,
Soediro
I, penerjemah. Bandung: Penerbit ITB.
Teijemahan
dari:
Phytochemical Method.
Hidayat Mochamad Gelar. 2002. Penapisan Fitokimia Dan Uji
Toksisitas  Pada  Ekstrak  Daun
Kaliandra  Merah (skripsi).  Bogor:
Fakultas  MIPA  Institut  Pertanian Bogor.
Markham K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Padmawinata K,
penerjemah.
Bandung: Penerbit ITB. Teijemahan dari: Techniques of Flavonoid Identification.
Robinson Trevor. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Padmawinata K,
penerjemah.
Bandung: Penerbit ITB. Teijemahan dari: The  Organic  Constituents  of Higher Plants.
Wardani Chintya Galuh Tri. 2008. Potensi
Ekstrak  Tempuyung  dan  Meniran Sebagai  Antiasam  Urat  :  Aktivitas Inhibisinya Terhadap Xantin Oksidase (Skripsi).  Bogor:  Fakultas MIPA Institut Pertanian Bogor.