Jurnal Pendidikan, Matematika dan Sains
http://ejournal.uki.ac.id/index.php/edumatsains

## DAYA HAMBAT EKSTRAK CALLYSPONGIA SP. TERHADAP BAKTERI DARI Eucheuma Cottoni BERPENYAKIT Ice-Ice
Yosephina Payu Wao 1* , Melania Priska 2
1,2, Program Studi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Flores
Diterima: 27 Mei 2021     Direvisi: 11 Juni 2021     Diterbitkan : 01 Juli 2021

## ABSTRACT
Callyspongia  sp.  is  one  type  of  sea  sponge  that  produces  secondary  metabolites  in  the  form  of  steroids, alkaloids, flavonoids, and terpenoids which can be used as antibacterial agents. This reseach aims to determine whether  or not  there  is  an  inhibitory  power  of  sea  sponge  extract  Callyspongia  sp.  on  the growth  of  bacterial isolates  on  Eucheuma  cottonii  seaweed  that  is  infected  by  ice-ice  disease.  This  type  of  research  is  an experimental laboratory. Extract of Callyspongia sp. is the result of Callyspongia sp. extraction which has been dried and then macerated  using  a  polar  ethanol  solvent.  Inhibition test  with the modified  Kirby-Bauer method used wells to measure the zone of inhibition formed by the extract of the Callyspongia sp. The test was carried out to observe the presence or absence of an inhibition zone of Callyspongia sp. extract against bacterial isolates (Isolates I, II and III) that is infected by seaweed that is infected by ice-ice disease after 24 hours of incubation. The  results  showed  that  an  inhibition  zone  was  formed  in  bacterial  isolates.  Treatment  with  extracts  of Callyspongia  sp.  shows  the  diameter  of  the  highest  inhibition  zone  that  is  16.67  mm  which  is  classified  as  a strong  inhibitory  force,  so  that  Callysponia  sp.  extract  has  the  potential  in  overcoming  ice-ice  in  Eucheuma cottonii seaweed.
Keywords: Ice-ice, Callyspongia sp., Eucheuma cottonii

## PENDAHULUAN
Eucheuma  cottoni merupakan  rumput laut  karaginafit  yang  banyak  dibudidayakan di  Indonesia  (Distantina et  al. ,  2011).  Di Nusa Tenggara Timur (NTT), rumput laut E. cotonii menjadi  salah  satu  spesies  unggul dalam budidaya rumput laut. Rumput laut ini merupakan makroalga yang memiliki kandungan  karagenan  yang  yang  tinggi (Narvaez,  2018)  sehingga  bernilai  ekonomis yang  menjadi  salah  satu  sumber  pendapatan utama  bagi  masyarakat pesisir di NTT. Pada tahun  2015,  NTT  telah  menyumbangkan 60%  dari  total  produksi  rumput  laut  di
Indonesia (Kementrian Kelautan dan Perikanan, 2012).
Salah  satu  kendala  yang  dihadapi dalam budidaya rumput laut ialah munculnya penyakit  pada  rumput  laut.  Penyakit  yang menyerang rumput laut di wilayah NTT ialah ice-ice . Ice-ice merupakan  penyakit  yang menyebabkan kerusakan struktur jaringan sel penyusun rumput laut karena bakteri patogen yang  berdampak  pada  penurunan  jumlah kandugan  karaginan  dan  degradasi  substansi organik  secara  signifikan  pada  jaringan thallus rumput laut (Aris, 2011). Kemunculan  penyakit  ini  ditandai  dengan
adanya  bercak-bercak  merah  pada thallus yang  lama  kelamaan  menjadi  kuning  pucat kemudian  berangsur  putih  dan  akhirnya rontok (Arisandi dan Farid, 2014)
Kondisi  Iingkungan  seperti  salinitas, suhu air dan intensitas cahaya menjadi faktor utama  dalam  budidaya  rumput  laut E. cottonii. Salintas  normal  bagi  pertumbuhan rumput  laut  yaitu  berkisar  antara  28  sampai 35  ppt.  Salinitas  yang  melebihi  35  ppt menyebabkan  rumput  laut  tidak  dapat menahan  arus  air  sehingga thallus mudah patah  dan  terhanyut.  Suhu  air  normal  bagi pertumbuhan  rumput  laut  yaitu  berkisar diantara 27 sampai 30°C. Suhu yang melibihi kondisi  normal  menyebabkan  denaturasi protein  sedangkan  suhu  kurang  dari  kondisi normal  menyebabkan  protein  dan  lemak akan  mengalami  kerusakan  sebagai  akibat terbentuknya  kristal  di  dalam  sel.  Intensitas cahaya yang baik untuk pertumbuhan rumput laut  yaitu  5000  lux  (Armita,  2011).  Cahaya adalah  sumber  energi  utama  yang  sangat penting  untuk  fotosintesis  dan  pertumbuhan rumput  laut  (Soenardjo,  2011).  Jika  kondisi salinitas air, suhu air dan intensi cahaya tidak sesuai  dengan  kondisi  normal  maka  akan menimbulkan stres pada rumput laut sehingga rumput laut memproduksi substansi organik  yang  menyebabkan thallus- nya berlendir  yang  merangsang  banyak  bakteri tumbuh  disekitarnya  (Arisandi et  al., 2011). Ice-ice menyebabkan thallus rumput  laut mengalami pengeroposan, patah dan
terhambatnya  proses  fotosintesis  sehingga berat biomassa rumput laut berkurang hingga mencapai  60  sampai  80%  (Vairappan et  al., 2010).
Bakteri  yang  ditemukan  pada  rumput laut  yang  terkena ice-ice bermacam-macam. Sarawati  (2016)  menemukan  dua  jenis bakteri  pada  rumput  laut  yang  berpenyakit ice-ice diantaranya Vibrio  alginoliticus dan Pseudomonas  aeroginosa .  Nasmia et  al. (2016)  menemukan  3  jenis  bakteri  pada rumput  yang  terkena ice-ice yaitu  bakteri Acinetobacter sp., Pseudomonas sp.,  dan Flavo-Cytophaga sp.  Erbabley dan  Kelabora (2018) juga  melaporkan 4  jenis  bakteri  yang ditemukan pada rumput laut yang berpenyakit ice-ice yaitu Pseudomonas stutzeri, Aeromonas faecalis, Vibrio alginolitycus dan Pseudomonas flurescens .
Porifera  banyak  ditemukan  di  perairan Indonesia dengan jumlah sebanyak 830 jenis (Marzuki,  2018).  Menurut  Setiowati  (2007), Porifera  banyak  ditemukan  di  wilayah perairan  NTT,  NTB  dan  Sulawesi.  Porifera memiliki  potensi  bioaktif  dengan  persentasi keaktifan  yang  lebih  besar  dibandingkan dengan  senyawa-senyawa  yang  dihasilkan oleh tumbuhan darat (Marzuki, 2018).
Kelas  Demospongiae  merupakan  kelas yang  mendominasi  filum  Porifera  dengan jumlah  mencapai  90%  dari  seluruh  jenis spons. Callyspongia sp.  merupakan  salah satu  spesies  dari  kelas  Demospongiae  yang mengandung  senyawa  aktif  yaitu  alkaloid,
steroid, terpenoid, dan flavonoid (Krisyunida, 2012). Ekstrak Callyspongia sp. dan C. plicifera menunjukan secara dominan menghambat pertumbuhan bakteri dari substrat  referensi  (Qian, et  al .,  2006).
Spesies  ini  banyak  ditemukan  di  perairan Indonesia, sehingga mudah ditemukan (Fristiohady et al ., 2020).
Dari  observasi  di  lapangan,  upaya penanggulangan  belum  banyak  dilakukan oleh  masyarakat.  Umumnya  masyarakat hanya  melakukan  tindakan  preventif  seperti membersihkan  kotoran  yang  melekat  pada thallus rumput  laut.  Tindakan  ini  belum cukup  efektif      sehingga  perlu  dilakukan penanggulangan lebih serius.
Pengetahuan mengenai senyawa antibakteri Callyspongia sp.  dapat  menjadi langkah  awal  dalam  penangulangan ice-ice . Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengetahui daya  hambat  eksrak Callyspongia sp. terhadap  bakteri  dari  rumput  laut E.  cottoni yang  berpenyakit ice-ice dengan  penilaian zona  hambat  yang  terbentuk.  Hasil  dari penelitian  ini  diharapkan  dapat  digunakan sebagai salah satu acuan dalam pengendalian infeksi  bakteri  terhadap  rumput  laut E. cottonii .

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  berjenis  ekperimental laboratorik yang dilaksanakan pada
Laboratorium
Pendidikan Biologi
Universitas  Nusa  Cendana  pada  bulan
Januari  sampai  September  2020  dengan tahap-tahap penelitian sebagai berikut :
a. Pengumpulan dan Penanganan

## Sampel
Sampel  rumput  laut  yang  berpenyakit ice-ice diperoleh dari lahan pertanian rumput laut di wilayah pesisir Tablolong, Kabupaten Kupang,  NTT.  Sampel  rumput  laut  yang diambil  yaitu  bagian thallus yang  berwarna keputih-putihan (berpenyakit ice-ice ). Thallus dimasukan  ke  dalam  wadah  yang berisi air laut.
b. Pembuatan  Isolat  Bakteri  Penyebab Penyakit Ice-ice
Thallus rumput  laut E.  cottonii yang berwarna  keputih-putihan  (berpenyakit ice- ice ) diambil dan dihaluskan dengan menggunakan  blender.  Untuk  meperoleh bakteri  bebas  sampel  diencerkan  dengan menggunakan  air  laut  steril.  Selanjutnya diambil  150  μl  sampel  dan  dituang  ke  atas media  agar  modifikasi  air  laut  pada  cawan petri  dan  disebarkan  dengan  menggunakan speader steril. Media agar yang telah dituang dengan sampel thallus yang berpenyakit ice- ice ,  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24 sampai  48  jam.  Selanjutnya  diamati  koloni bakteri  yang  tumbuh.  Setiap  koloni  bakteri yang  tumbuh  dikarakterisasi  berdasarkan karakteristik morfologi. Adapun karakteristik morfologi  yang  diamati  meliputi  bentuk, pola penataan, ukuran dan warna bakteri.
c. Pembuatan Larutan Antimikroba
Callyspongia sp.
Callyspongia sp.  dikumpulkan  dari Laut  Tablolong,  Kabupaten  Kupang  Barat, NTT. Callyspongia sp. dikeringkan, dipotong kecil-kecil dan dihaluskan. Selanjutnya  ditimbang  sebanyak  100  gram, kemudian  dimasukan  ke  dalam  wadah maserasi  dan  ditambah  pelarut  etanol sebanyak  350  ml  dan  didiamkan  selama  5 hari  sambil  sekali-sekali  diaduk.  Setelah proses  maserasi,  dilakukan  penyaringan sehingga  diperoleh  ekstrak Callyspongia sp.
Ekstrak  kemudian  dipekatkan  sampai  kental dengang Vacuum  Evaporator .  Selanjutnya, ekstrak  etanol Callyspongia sp.  ditimbang 5,0 gram dan dilarutkan dalam aquades steril hingga  volumenya  mencapai  10  ml  dengan konsentrasi 50%.

## d. Pembuatan Larutan Pembanding
Tetrasiklin  digunakan  sebagai  kontrol positif.  Tetrasiklin  ditimbang  sebanyak  3,0 gram  dan  dilarutkan  dalam  aquades  steril hingga  volumenya  mencapai  10  ml  dengan konsentrasi 30µg/ml.
e. Pengujian  Zona  Hambat  Ekstrak Callyspongia sp.  terhadap  Isolat  Bakteri dari  Rumput  Laut  yang  Berpenyakit Ice- ice
Sebanyak  10  ml  media  MHA  dituang secara  aseptik  ke  dalam  cawan  petri  dan dibiarkan hingga beku sebagai lapisan dasar. Sebanyak  5  ml  medium  MHA  yang  agak dingin  (suhu  45°C  sampai  48°C)  dicampur
rata  dengan  isolat  bakteri  dari  rumput  laut yang berpenyakit ice-ice . Selanjutnya campuran  tersebut  dituang  di  atas  lapisan dasar media MHA dan disebarkan secara rata dengan speader  steril .  Selanjutnya sensidisk atau  pecandang  diletakan  di  atas  permukaan media  dan  diisi  dengan  larutan  uji  sebanyak 0,2 ml.
Satu  medium  ditumbuhkan  satu  jenis bakteri  (1  isolat  bakteri)  dan  diletakan  3 pecandang yang masing-masing diisi dengan Tetrasiklin  sebagai  kontrol  positif,  Aquades sebagai kontrol negatif dan ekstrak Callyspongia sp.. Medium tersebut diinkubasi  pada  suhu  30°C  selama  24  jam. Selanjutnya  diameter  zona  hambat  diukur dengan menggunakan jangka sorong. Kategori  zona  hambat  dapat  digolongkan berdasarkan  Susanto,  Sudrajat  dan  Ruga (2012) pada tabel 1.

## f. Pengumpulan dan Analisis Data
Data yang dikumpulkan dalam penelitian ini  adalah  diameter  zona  bening  atau  zona hambat  dari  masing-masing  isolat  bakteri rumput  laut  yang  berpenyakit ice-ice yang diberikan ekstrak Callyspongia sp, tetrasiklin dan  aquades.  Data  zona  hambat  tersebut dianalisis  secara  statistik  dengan one  way ANOVA pada taraf signifikansi 1%.
Tabel 1. Kategori Diameter Zona Hambat
Diameter Kekuatan daya hambat ≤ 5 mm Lemah 6-10 mm Sedang 11-20 mm Kuat ≥21 mm Sangat kuat (Susanto, Sudrajat dan Ruga, 2012 )

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Callyspongia sp . dan  rumput  laut E. cottoni yang  digunakan  dalam  penelitian  ini berasal  dari  Perairan  Laut  Timor,  Desa Tablolong,  Kabupaten  Kupang  Barat,  NTT. Callyspongia sp.  yang  diperoleh  memiliki bentuk  seperti  tabung  dengan  diameter berkisar  antara  2  sampai  3  cm,  memiliki warna  cokelat  sedikit  orange,  mempunyai
pori  yang  berdiameter  antara  0,2  cm  sampai 0,6  cm  dan  mempunyai  tubuh  yang  rapuh. Sedangkan, rumput laut E.  cottonii memiliki ciri-ciri  yaitu thallu s  berbentuk  silindris dengan  percabangan  tidak  teratur,  terdapat bintil-bintil  pada  permukaan thallus dengan pola  tidak  teratur  dan  berwarna  hijau kekuningan (Gambar 1).
Gambar 1. Rumput Laut Eucheuma cottonii
1. Jenis-jenis  isolat  Bakteri  dari  Rumput Laut yang Berpenyakit Ice-ice
Hasil  isolasi  bakteri  dari  rumput  laut yang berpenyakit ice-ice menunjukkan beberapa  ciri  tertentu  (Tabel  2).  Isolat  I (Gambar  2.)  mempunyai  bentuk  kokus berbeda  dengan  isolat  II (Gambar  3.)  dan  III
(Gambar  4.)  yang  mempunyai  bentuk  yang sama  yaitu  batang  pendek.  Untuk  pola penataan,  isolat  I  mempunyai  pola  penataan strepto sama dengan isolat II, namun berbeda dengan  isolat  III  yang  mempunyai  pola penataan  mono.  Ukuran  bakteri  dari  ketiga isolat  berbeda-beda.  Isolat  I  berukuran  0,5  x
1µm, isolat II berukuran 1,2µm dan isolat III berukuran  0,7  µm).  Pada  pewarnaan  gram menunjukkan  bahwa  isolat  I  dan  II  adalah
bakteri ber-gram negatif dan  isolat III  adalah bakteri ber-gram positif.
Tabel 2. Karakteristik Sel dari Masing-Masing Isolat dan Hasil Pewarnaan Gram
No Karakteristik Isolat Bakteri I II III 1 Bentuk Kokus Batang Pendek Batang pendek 2 Pola Penataan Strepto Strepto Mono 3 Ukuran 0,5 x 1µm 1,2µm 0,7µm 4 Warna Merah Merah Ungu 5 Gram Negatif Negatif Positif
Damayati  (2003)  menunjukkan  dua  jenis bakteri  yang  ditemukan  pada  rumput  laut yang  berpenyakit ice-ice yaitu Bacillus cereus dan Bacilllus  megaterium ,  serta bakteri  lain  yang  ditemukan  oleh  Aris et  al . (2013)  yaitu Corynebacterium sp..  Ketiga bakteri  ini  memiliki  kesaman  bentuk  dan jenis  dengan  ketiga  isolat  dari  rumput  laut yang  berpenyakit ice-ice yaitu  berbentuk
batang  dan  merupakan  bakteri  gram  positif. Namun,  isolat  bakteri  ini  belum  dipastikan merupakan  ketiga  jenis  bakteri  tersebut. Perlu  dilakukan  uji  lanjutan  seperti  uji biokimia  untuk  mengetahui  spesies  bakteri melalui  kemampuan  tumbuh  pada  masing- masing media (Saraswati dan Darmasetiawana, 2016).
Gambar 2. Isolat (I) Bakteri dari E. cottoni yang Terinfeksi Ice-ice
Gambar 3. Isolat (II) Bakteri dari E. cottoni yang Terinfeksi Ice-ice
Gambar 4. Isolat (III) Bakteri dari E. cottoni yang Terinfeksi Ice-ice
2. Zona Hambat Ekstrak Callyspongia sp.
Zona  hambat  ekstrak Callyspongia sp. diketahui  dengan  mengamati  zona  bening yang  terdapat  pada  sekeliling  pecandang pada masing-masing isolat bakteri. Selanjutnya, diameter horizontal dan vertikal pada  zona  bening  tersebut  diukur  dengan menggunakan jangka sorong. Hasil pengukuran kemudian dijumlahkan, selanjutnya  dirata-ratakan  dan  hasilnya dikurangi  7  (ukurang  diameter  pecandang,  7 mm).  Secara  matematis  dapat  dihitung dengan menggunakan rumus berikut (Warbung et al ., 2013) (1)
Keterangan: d1 = diameter vertikal zona bening pada media d2 = diameter horizontal zona bening pada media
X  = diameter pecandang (7 mm)
Pengujian  daya  hambat  dilakukan dengan  mengukur  diameter  zona  hambat setiap  perlakuan  yaitu  ekstra Callyspongia sp.,  Tetrasiklin  dan  Aquades  pada  masing- masing  isolat  (Tabel  3.)  Pada  isolat  I, diameter  zona  hambat  dari  ketiga  perlakuan yang  menunjukkan  aktivitas  tertinggi  adalah pada  ekstrak Callyspongia sp.  (15,67  mm) dan  Tetrasiklin  (15,  67  mm).  Pada  isolat  II, diameter  zona  hambat  dari  ketiga  perlakuan yang  menunjukkan  aktivitas  tertinggi  adalah ekstrak Callyspongia sp.  (16,67  mm) kemudian  diikuti  dengan  tetrasiklin  (15,33 mm).  Pada  isolat  III,  diameter  zona  hambat yang  menunjukkan  aktivitas  tertinggi  adalah ekstrak Callyspongia sp.  (16,67  mm) kemudian  diikuti  dengan  tetrasiklin.  (15,67 mm).  Dari  ketiga  perlakuan  pada  masing- masing isolat, perlakuan yag tidak menunjukkan  diameter  zona  hambat  adalah aquades.
Tabel 3. Diameter Zona Hambat yang Terbentuk dari Masing-Masing Perlakuan pada Ketiga
Isolat Bakteri Bakteri Uji Perlakuan Diameter Zona Hambat Rata-rata (mm) Keterangan Antibakteri Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Isolat 1 Ekstrak Callyspongia sp. 15 14 18 15.67±2.08 a Kuat Tetrasiklin 15 16 16 15,67±0.58 a Kuat Aquades 0 0 0 0 ± 0 b Lemah Isolat 2 Ekstrak Callyspongia sp. 18 16 16 16.67± 1.15 a Kuat Tetrasiklin 16 15 15 15,33±0.58 a Kuat Aquades 0 0 0 0 ± 0 b Lemah Isolat 3 Ekstrak Callyspongia sp. 15 18 17 16.67± 1.53 a Kuat Tetrasiklin 16 16 15 15,67± 0.58 a Kuat Aquades 0 0 0 0± 0 b Lemah
Keterangan: Huruf superkrip yang berbeda (a dan b) menunjukkan perbedaan yang signifikan P<0.001)
Hasil  uji One  Way ANOVA  menunjukkan adanya  perbedaan  signifikan  dari  rata-rata diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  dari perlakuan ekstrak Callyspongia sp., tetrasiklin dan aquades terhadap ketiga isolat bakteri  uji  (P  <  0,01;  n=9).        Krisyuninda (2012) menunjukan bahwa ekstrak Callyospongia sp.  mengandung  senyawa steroid,  alkaloid,  flavonoid  dan  terpenoid. Steroid  ialah  salah  satu  kelompok  senyawa metabolit  sekunder.  Kelompok  senyawa tersebut  diketahui  memiliki  potensi  sebagai antibakteri  (Wadhaningsi et  al .,  2014)  dan antifungi  (Saraswati, et  al .,  2010).  Senyawa steroid berpotensi sebagai antibakteri melalui mekanisme  penghambatan  sintesis  protein
pada  sel  bakteri  sehingga  menyebabkan perubahan  komponen-komponen  penyusun sel (Siregar et al ., 2012).
Senyawa  flavonoid  mampu  merusak dinding  sel  bakteri  karena  adanya  ikatan hidrogen  pada  strukur  protein  pada  dinding sel,  sehigga  menyebabkan  struktur  dinding sel  menjadi  tidak  normal  yang  kemudian akan  menghambat  berbagai  aktivitas  sel bakteri.  Terhambatnya  aktivitas  sel  bakteri dapat  menimbulkan  kematian  sel  bakteri tersebut.  Rustama  dan  Lingga  (2005)  juga menunjukkan  bahwa  aktivitas  senyawa flavonoid terhadap bakteri dilakukan dengan merusak dinding sel  bakteri  yang terdiri atas lipid  dan  asam  amino.  Selain  itu,  flavonoid
akan bereaksi dengan DNA yang menimbulkan  kerusakan  struktur  lipid  DNA sehingga bakteri akan lisis dan sel akan mati.
Seperti flavonoid yang bekerja merusak  dinding  sel  bakteri,  senyawa alkaloid  juga  dapat  merusak  komponen penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri, yang  mengakibatkan  dinding  sel  bakteri tidak  terbentuk  secara  utuh  dan  terjadi kematian  sel  tersebut  (Darsana et  al ,  2012). Mekanisme kerja terpenoid sebagai senyawa antibakteri  melalui  interaksi  dengan  porin (protein  transmembran)  pada  membran  luar dinding sel bakteri. Interaksi ini menghasilkan ikatan polimer yang kuat yang mengurangi permeabilitas dinding sel bakteri (Wulansari et al ., 2020).
Adanya  kandungan  senyawa-senyawa ini  pada  ekstrak Callyspongia sp.  dapat menghambat  pertumbuhan  sel  bakteri  pada isolat  bakteri  pada  rumput  laut  yang berpenyakit ice-ice sehingga  terlihat  adanya zona  bening  (tidak  ditumbuhi  bakteri) sebagai  zona  hambat  yang  terlihat  di  sekitar pecandang  yang  berisi  ekstrak Callyspongia sp..

## KESIMPULAN
Ekstrak Callyspongia sp. dapat menghambat  pertumbuhan  isolat  bakteri pada  rumput  laut Eucheuma  cottonii yang berpenyakit ice-ice. Daya  hambat  ekstrak Callyspongia sp.  terhadap  isolat  II  dan  III sama  besar  dan  keduanya  lebih  besar
daripada  daya  hambat  Callyspongia  sp. terhadap isolat I dengan besar diameter zona hambat  yang  terbentuk  pada  isolat  II  dan  III ialah  16,67,  yang  tergolong  sebagai  daya hambat  kuat  sehingga  dapat  digunakan sebagai  senyawa  antibakteri  rumput  laut E. cottonii yang terinfeksi ice-ice .

## DAFTAR PUSTAKA
Armita,  D.  2011.  Analisis  Perbandingan Kualitas  Air  di  Daerah  Budidaya Rumput  Laut  dengan  Daerah  Tidak Ada  Budidaya  Rumput  Laut  di  Dusun Malelaya,  Desa  Punaga,  Kecamatan Mangarabombang,  Kabupaten  Takalar. Skripsi. Universitas Hasanuddin
Makassar.
Aris,  M.  (2011).  Identifikasi,  Patogenitas Bakteri  dan  Pemanfaatan  Gen  16S- rRNA  untuk  Deteksi  Penyakit Ice-ice pada Budidaya Rumput Laut ( Kappaphycus alvarezii ). Tesis. Institut Pertanian Bogor
Aris, M. Enang, H. Fatuhri, S. dan Munti, Y.
(2013).  Identifikasi  Molekular  Bakteri Patogen  dan  Desain  Primer  PCR. Aquacultura Indonesiana . 1 (3), 43-50. Arisandi,  A.,  Marsoedi,  Nursyam,  H.,
Sartimbul,  A.  (2011).  Kecepatan  dan Presentase  Infeksi  Penyakit Ice-ice pada Kappaphycus alvarezii di Perairan Bluto Sumenep. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan , 3 (1), 47-51.
Arisandi,  A.  dan  Farid,  A.  (2014).  Dampak Faktor  Ekologis  terhadap  Sebaran Penyakit Ice-ice .  Jurnal  Kelautan, 7(1).20-25.
Darmayati,  Y.  (2003).  Bakteri  Patogenik Penyebab  Penyakit  Ice  ice  pada Rumput  Laut Kappaphycus  alvarezii
(Doty,  1986)  ( Eucheuma  cotonii ). ISBN 978-978-98802-5-3.
IPB International Convention Center. Bogor.
Darsana,  I.  G.  O.,  Besung,  I.  N.  K.  dan
Mahatmi,  H.  (2012).  Potensi  Daun
Binahong ( Anredera cordifolia
(Tenore)  Steenis)  dalam  Menghambat Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli
secara  In  Vitro. Indonesia  Medicus Veterinus , 1 (3), 337-351.
Distantina,  S.,  Wiratni,  Fahrurrozi,  M., Rochmadi. (2011). Carrageenan
Properties  Extracted  From Eucheuma cottonii , Indonesia. International Journal  of  Chemical  and  Molecular Engineering , 5 (6), 487-491.
Erbabley,  N.  Y.  G.  F.,  Kelabora,  D.  M.
(2018).  Identifikasi  Bakteri  Rumput Laut Kappaphycus alvarezii Berdasarkan Musim Tanam di Perairan Maluku  Tenggara. Jurnal  Akuatika Indonesia , 3 (1), 19-25.
Fristiohady,  A.,  Yodha,  A.W.  M.,  Sadarun, B.,  Purnama,  L.O.  M.  J.,  Rachmat  H, A.  A.,  Malaka,  M.  H.,  Hamsidi,  R., Wahyuni,  Salma,  W.  O.,  Musnina,
W.O.  S.,  Sahidin,  I.  (2021).  Isolation and Identification of Secondary Metabolite from Marine Sponge Callyspongia sp.  and  its  Antibacterial Potency. Biointerface  Research  in Applied  Chemistry  Journal .  11(3),
10082-10088.
Kementerian Kelautan dan Perikanan Republik  Indonesia.  (2012). Kelautan dan  Perikanan  Dalam  Angka  2012 . Jakarta:  Departemen  Kelautan  dan Perikanan.
Kriyuninda,  M.  (2012).  Uji  toksisitasfraksi spons  Callyspongia  sp. dengan  metode brine  shrimp  test  dari  perairan  pasir putih  situbondo.  Surabaya:  Institut Teknologi Sepuluh November
Marzuki,  I.  (2018).  Eksplorasi  Spons Indonesia. Makasar: Nas Media Pustaka
Narvaez, T.A. (2018). Seaweeds Jobs Value-
Chain Analysis in Zamboanga Peninsula,  Philippines,  2015 Int  J Oceanogr Aquac . 2 (2). 1-12.
Nasmia,  Natsir,  S  dan  Rosyida,  E.  (2016).
Potensi  Aktivitas  dari  Ekstrak  Rumput Laut Sargassum  Cinereum terhadap Bakteri Patogen Ice-ice pada
Gracilaria Verrucosa. Seminar Nasional  Inovasi  IPTES  Perguruan Tinggi untuk Meningkatkan
Kesejahteraan  Masyarakat, Denpasar:
29-30 Agustus 2016. Hal. 1009-1017.
Qian,  Y.,  Dobretsov,  S.,  Dahms,  H.  U.,
Pawlik,  J.  (2006).  Antifouling  activity and microbial diversity of two congeneric  sponges Callyspongia spp. from  Hong  Kong  and  the  Bahamas.
Mar Ecol Prog Ser, 324, 151–165.
Rustama,  M.  M.,  Lingga,  M.  A.  (2005).  Uji Aktivitas  Antibakteri  dari  Ekstrak  Air dan  Etanol  Bawang  Putih  ( Allium sativum L.)  terhadap  Bakteri  Gram
Negatif dan Gram Positif yang
Diisolasi dari Udang Dogol ( Metapenaeus monoceros ), Udang
Lobster  ( Panulirus sp.),  dan  Udang Rebon  ( Mysis  Acetes ). Jurnal  Biotika 5(2), 35-40.
Saraswathi, R., Lokesh, U.,
Venkatakrishnan,  R.,  Meera,  R.,  Devi,
P.  (2010).  Isolation  and  biological evaluation  of  steroid  from  stem  of Costus  igneus, Journal  of  Chemical and  Pharmaceutical  Research ,  2(5), 444-448.
Saraswati,  S.  A.,  Darmasetiyawana,  I.  M.  S. (2016). Identifikasi Bakteri pada Rumput Laut Euchema spinosum yang terserang  penyakit Ice-ice di  Perairan
Pantai  Kutuh. J.  Mar.  Aquat.  Sci. 2, 11–15.
Setiowati,  Tety  dan  Deswaty  Furqonita.
2007.  Biologi  Interaktif.  Azka  Press.
Jakarta.  hal. 217
Siregar,  A.  F.,  Sabdono,  A.,  Pringgenies,  D. (2012).  Potensi  Antibakteri  Ekstrak
Rumput Laut Terhadap Bakteri Penyakit Kulit Pseudomonas aeruginosa ,
Staphylococcus epidermidis ,  dan Micrococcus  luteus. Journal  Of  Marine  Research .1( 2 ),152- 160.
Soenardjo,  N.  2011.  Aplikasi  Budidaya Rumput Laut Eucheuma cottoni (Weber  van  Bosse)  dengan  Metode Jaring  Lepas  Dasar  ( Net  Bag )  Model Cidaun.  Buletin  Oseanorafi  Marina.  1:
36-44.
Susanto,  D.,  Sudrajat  dan  Ruga,  R.  (2012). Studi Kandungan Bahan Aktif
tumbuhan  Meranti  Merah  (Shorea leprosula Miq) Sebagai Sumber Senyawa Antibakteri, 11(2), 1-5.
Vairappan,  C.  S.,  Anangdan,  S.  P.,  Tan,  K.
L.  dan  Shigeki,  M.  (2010).  Role  of Secondary  Metabolites  as  Defense Chemicals  Against Ice-ice Disease  in Biofouler  at  Carrageenophyte  Farms.
Journal  of  Applied  Phycology .  22  (3):
305 – 311.
Wahdaningsih, S., Untari, E. K., Fauziah, Y.
(2014). Antibakteri  Fraksi  n-Heksana Kulit  Hylocereus  polyrhizus  Terhadap Staphylococcus epidermidis dan Propionibacterium  acnes.  Pharm  Sci Res , 1 (3), 180-193.
Warbung,  Y.Y.,  Vonny,  N.  S.  W.,  Jimmy.
(2014).  Daya  Hambat  Ekstrak  Spons Laut Callyspongia sp terhadap Pertubuhan  Bakteri Staphylococcus
aureus.  Jurnal  Ilmiah  Kedokteran Gigi . 1(2), 1-12.
Wulansari,  E.D.,  Lestari,  D.,  Khoirunissa, M.A.  (2020).  Kandungan  terpenoid dalam  daun  ara  ( ficus  carica l.)
Sebagai  agen  antibakteri  terhadap bakteri Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Pharmcon
Journal, 9(2), 219-225.