POTENSI RIMPANG KENCUR (Kaempferia galanga L. ) SEBAGAI PENCEGAH OSTEOPOROSIS DAN PENURUN KOLESTEROL  MELAUI STUDI IN-VIVO DAN IN-SILICO
Sri Handayani 1 , Fera Elia Fita 1 , Siti Istatoah 1 , Erika Indah 1 dan Ibrahim Arifin 2
1) Mahasiswa S-1 Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Bagian Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim Semarang
e-mail : srihandayani680@gmail.com

## ABSTRACT
Ethyl  p-methoxycinnamate  and  ethyl  cinnamate  as  a  phytoestrogen  in  galangal  root ( Kaempferia galanga L.) expected to be used for replacing the Hormone Replacement Therapy on prevention osteoporosis and as anti-cholesterol in menopausal women. The purpose of this study is to explore the potential estrogenic effect of galangal root extract on prevention of osteoporosis and as  an  anti-cholesterol  agent.  In-silico  test  is  performed  to  measure  the  molecular  interactions between  ethyl  p-methoxycinnamate  and  ethyl  cinnamate  with  estrogen  receptor  protein  (1QKM) and  in-vivo  tests  conducted  by  the  ovariectomy  method  on  female  Wistar  rats.  Thirty  female Wistar rats were divided into six treatment groups. Group I is the normal mice and the group II-VI is the  ovariectomies  rats.  Ovariectomy  surgery performed  at 70 days of age  rats.  Group  II is the baseline of ovariectomized rats. Group III rats treated with CMC-Na 0.5% (control). Group IV rats are  treated  with  estradiol  2  μg/kg  BW/day  while  the  group  V  and  VI  rats  are  rats  treated  with galangal root ethanol extract (500 and 1.000) mg/kg BW/day. Administration of the test material was performed for 30 days. At the end of the experiment, a blood sample was taken from orbital sinus for measurement of blood lipid levels. All the rats were sacrificed for necropsy procedures. The  results  showed  that  galangal  root  ethanol  extracts  significantly  decrease  the  cholesterol  and LDL levels, and enhance the femur bone density. However, extract has not significantly effect in decrease the triglyceride and enhance the HDL levels of ovariectomized rats.  There were almost the  same  binding  energy  between  ethyl  p-methoxycinnamate,  ethyl  cinnamate  and  17β-estradiol on 1QKM protein with binding energy is -94.9984; -949 948 and -94.9982 respectively.
Key words: Kaempferia galanga L., osteoporosis and anti-cholesterol agent, in-vivo, in-silico

## PENDAHULUAN
Menopause merupakan fase dimana pendarahan haid seorang wanita berhenti sama sekali. Fase  ini  terjadi  secara  progresif  dan  penurunan  fungsi  ovarium  akan  semakin  terlihat  seiring bertambahnya usia. Pada masa ini, wanita mengalami  defisiensi hormon estrogen yang memiliki peranan dalam regulasi reproduksi, modulasi kepadatan tulang, transpor kolesterol serta stimulasi proliferasi  sel epitel kelenjar payudara (Jordan, 2004). Gangguan hormon estrogen  menimbulkan berbagai  gangguan  fungsi  fisiologis  seperti  osteoporosis  dan  penyakit  kardiovaskuler  seperti hiperkolesterolemia  (Kenny,  dkk.,  2000).  Substitusi  estrogen  dari  luar  tubuh  dengan  HRT ( Hormon  Replacement  Teraphy )  merupakan  upaya  yang  telah  banyak  dilakukan.  Namun,  HRT dapat menimbulkan cacat fisik, pendarahan, ketergantungan serta kanker payudara (Beral, 2003). Oleh karena itu, diperlukan suatu alternatif yang aman dan murah sebagai pengganti HRT, salah satunya adalah dengan fitoestrogen.
Fitoestrogen  merupakan  senyawa  pada  tumbuhan  yang  memiliki  aktivitas  estrogenik, sehingga  dapat  menggantikan  fungsi  estrogen  (Yildisz,  2005).  Mekanisme  utama  fitoestrogenik adalah dengan berikatan dengan Reseptor Estrogen (ER). Kandungan kimia tanaman kencur yaitu etil  sinamat,  etil  p-metoksisinamat,  p-metoksistiren,  karen,  borneol,  dan  parafin.  Kandungan minyak atsiri kencur adalah α-pinena, kampena, δ-3-carene, α-pelandrena, limonene, p-simena 4- isopropiltoluena, 7,8- epoksitrisiklododekana, 5-metiltrisiklo undek-2-en-4-one, 2-asam propenoat, 3-(4-mempunyai  nama  trivial  etil  p-metoksi  sinamat  (Nadhatil,  1972).  Etil  sinamat  dan  etil  p-
metoksi sinamat (EPMS) dari minyak atsiri kencur banyak digunakan didalam industri kosmetika dan dimanfaatkan dalam bidang farmasi sebagai obat asma dan antijamur. Etil p-metoksi sinamat merupakan  golongan  fenol  yang  merupakan  salah  satu  golongan  senyawa  yang  diduga  mampu menstimulasi  estrogen.  Efek  estrogenik  pada  tikus  dapat  dilihat  pada  beberapa  sistem  fisiologis, yaitu pengamatan profil densitas tulang dan kadar lipid darah.
Penelitian  ilmiah  mengenai  efek  estrogenik  dari  rimpang  kencur  belum  pernah  dilakukan. Namun,  penelitian  terhadap  tanaman  yang  satu  famili  dengan  kencur,  yaitu  kunyit  ( Curcuma longa ) telah dilakukan. Ekstrak kunyit  terbukti memiliki aktifitas sebagai agen estrogenik (Ismadi, 1993).  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  penelitian  untuk  mengukur  efek  estrogenik  ekstrak rimpang kencur terhadap kepadatan tulang dan kadar lipid darah (kolesterol total, LDL, HDL  dan trigliserida)  tikus  betina  galur  Wistar terovariektomi.  Penelitian  ini  juga  mencoba  menelusuri mekanisme molekuler etil p-metoksi sinamat dan etil sinamat, senyawa aktif dalam ekstrak etanol rimpang  kencur  sebagai  agen  esterogenik  dengan  menggunakan  metode docking pada  protein reseptor  esterogen  1QKM.  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat  digunakan  sebagai  dasar penelitian lebih lanjut dalam mengembangkan produk suplemen nutraseutikal dari rimpang kencur sebagai agen pencegah osteoporosis dan antikolesterol pada wanita menopause.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Bahan terdiri dari rimpang Kencur ( Kaempferia galanga L) diambil dari perkebunan Balai Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat  Tradisional  Tawangmangu.  Bahan kimia  yang  digunakan  terdiri  dari  etanol  96%  (Merck),  ketamin  100  mg/mL,  plain  catgut  suture 3/0,  NaCl  0,9%  (PT  Otsuka),  antibiotik  serbuk  Enbatic®  (PT  Erela,  Semarang),  Betadin®  (PT Mahakam  Beta  Farma,  Jakarta),  CMC-Na  (Merck),  aquadest,  formalin  10%  (Asia  lab),  estradiol (Sigma),  reagen  pengendap  dan  reagen  kit  kolesterol  serta  standart  kolesterol.  Bahan  untuk docking adalah  senyawa etil p-metoksisinamat, etil sinamat dan estradiol yang digambar dengan software MarvinSketch .  Struktur  kompleks  protein  reseptor  esterogen  Erβ  yang  diperoleh  dari Protein data Bank (PDB) yang didownload dari situs http://www.rscb.org/pdb .

## Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam preparasi bahan uji adalah labu perkolat, stamper, penampang sampel  dan  pemanas,  oven,  alat  penyerbuk,  dan rotary  evaporator. Alat  yang  digunakan  dalam pengukurankepadatan tulang dan kadar lipid darah adalah  neraca elektrik, kamera, spuit per oral, pipet tetes, mikropipet, timbangan gram elektrik, seperangkat alat rontgen, penggaris, alumunium foil dan alat-alat gelas serta seperangkat alat bedah (pinset, jarum jahit, gunting, dan jarum bedah). Alat  yang  digunakan  untuk  uji  in-silico  ( docking )  adalah  computer  PC, software PLANTS  1.1 manual, Co-Pendrivelinux-KDE, YASARA dan MarvinSketch.

## Hewan Percobaan
Tikus  betina  galur  Wistar,  usia  40-50  hari,  dengan  berat  badan  86-118  gram.  Tikus  dipelihara sesuai  dengan  protokol  standar  yang  ada  di  Laboratorium  Farmakologi  Fakultas  Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

## Pembuatan Ekstrak Etanol Kencur
Serbuk rimpang kencur sebanyak 250 gram ditambah etanol 96% sebanyak 125 mL sedikit demi sedikit sambil diaduk dengan hati-hati, lalu dibiarkan terendam selama dua jam. Bahan yang telah  terbasahi  dimasukkan  dalam  perkolator  yang  telah  dilapisi  dengan kapas  dan  kertas  saring, kemudian ditambah cairan penyari hingga ¾ bagian perkolator dan dibiarkan terbasahi selama satu malam.  Perkolasi  dilakukan  hingga  cairan  di  atas  serbuk  jernih.  Perkolat  yang  diperoleh selanjutnya  dikentalkan  dengan rotary  evaporator, ekstrak  kental  dikumpulkan  dan  ditimbang bobotnya untuk menghitung rendemen yang dihasilkan menggunakan rumus sebagai berikut :
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 𝐻𝑎𝑠𝑖𝑙 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 𝑟𝑖𝑚𝑝𝑎𝑛𝑔 𝑘𝑒𝑛𝑐𝑢𝑟 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 𝑟𝑖𝑚𝑝𝑎𝑛𝑔 𝑘𝑒𝑛𝑐𝑢𝑟 𝑥 100 %
Potensi Rimpang Kencur (Kaempferia Galanga L. ) Sebagai

## Pengelompokan dan Perlakuan pada Hewan Uji
Tikus  betina  galur Wistar sebanyak  30  ekor  ditempatkan  dalam  kandang  plastik  dengan alas sekam dan diberi makan berupa pellet serta diberi air minum ad libitum . Tikus dibagi menjadi enam kelompok perlakuan dengan lima ekor tikus tiap kelompok yaitu : Kelompok I : base line non-ovariektomi, Kelompok II: baseline ovariektomi, Kelompok III : perlakuan CMC-Na 0,5% (kontrol  negatif), Kontrol  IV  : perlakuan  estradiol  2  μg/KgBB/hari, Kelompok  V  : perlakuan ekstrak  dosis  500  mg/kgBB/hari, Kelompok  VI: perlakuan  ekstrak  dosis  1.000  mg/kgBB/hari. Tikus kelompok II hingga kelompok VI diovariektomi pada usia 70 hari. Ovariektomi merupakan proses  pemotongan  ovarium,  sehingga  pada  kondisi  tersebut  tikus  dalam  keadaan  defisiensi estrogen.
Sediaan uji diberikan dalam bentuk suspensi dalam pelarut CMC-Na 0,5%. Larutan ekstrak dibuat baru sebelum diberikan kepada hewan uji. Pemberian sediaan uji dilakukan selama 30 hari. Sampel  darah  tikus  diambil  melalui  sinus  orbitalis  pada  akhir  percobaan  untuk  peeriksaan  kadar lipid darah (kadar kolesterol total, LDL, HDL dan trigliserida). Semua tikus akhirnya dikorbankan dengan cara dislokasi tulang punggung dan kemudian dilakukan proses nekropsi untuk mengukur kepadatan tulang.

## Penetapan Kadar Kolesterol Total, Trigliserida, HDL, dan LDL.
Sampel darah diambil dari sinus orbitalis kemudian diinkubasi pada suhu kamar selama 15 menit, lalu disentrifugasi dengan kecepatan 4.000 rpm selama 20 menit sehingga didapatkan serum untuk  penetapan  kadar  kolesterol  total,  trigliserida,  LDL,  dan  HDL.  Metode  penetapan  kadar dilakukan secara enzimatik.

## Penetapan Densitas (Kepadatan) Tulang
Sampel tulang femur diambil pada bagian paha di akhir masa perlakuan (saat nekropsi) dan diuji  densitas  tulangnya.  Pengukuran  densitas  dilakukan  dari  foto  rontgen  tulang  femur  dengan densitometer.  Nilai  densitas  didapat  dari  optical  density  seperti  yang  tertera  pada  densitometer. Semakin kecil nilai optical density berarti sinar-X yang diserap tulang semakin kecil sehingga nilai densitas besar. Sebaliknya, semakin besar nilai optical density berarti sinar-X yang diserap tulang semakin besar sehingga nilai densitas kecil
Analisis Molecular Docking Senyawa Etil p-Metoksi Sinamat, Etil Sinamat dan 17β-estradiol melalui Uji in-Silico
Struktur  3D  senyawa  etil  p-metoksi  sinamat,  etil  sinamat  dan  17β-estradiol  (sebagai pembanding)  dibuat  dengan  menggunakan  program MarvinSketh .  Preparasi  protein  target dilakukan  dengan software YASARA.Validasi dilakukan dengan  program yang digunakan untuk docking adalah PLANTS1.1 Manual. Pemilihan metode ditentukan oleh harga RMSD (Root Mean Square Distances) . Visualisasi residu asam amino yang berinteraksi dengan ligand diolah dengan menggunakan program MOE (Purnomo, 2011).

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Pembuatan Ekstrak etanol Rimpang Kencur ( Kaempferia galanga L.  ) Kadar  air  simplisia  rimpang  kencur  setelah  dikeringkan  adalah  sebesar  8,41%  dan  telah memenuhi  standar  simplisia  yang  baik  (Gunawan  dan  Mulyani,  2004).  Ekstrak  kental  rimpang kencur  yang  dihasilkan  dari  1.000  g  serbuk  simplisia  kering  rimpang  kencur  adalah  140  gram (rendemen:  14%).  Ekstrak  etanol  rimpang  kencur  disimpan  dalam  wadah  tertutup  rapat  dan terlindung  dari  cahaya  untuk  mencegah  terkontaminasinya  ekstrak  oleh  mikroorganisme  yang terdapat  di  udara  dan  mencegah  reaksi  degradasi  senyawa  aktif  yang  dikatalisis  oleh  cahaya matahari yang dapat merusak komponen zat aktif (Voigt, 1994).
Uji In Silico: Analisis Docking Molekuler Etil p-metoksisinamat, Etil Sinamat dan Estradiol terhadap Reseptor Estrogen sebagai Protein Target
Uji in  silico  dilakukan  melalui analisis docking  molekuler. Terjadinya interaksi  molekuler digambarkan  oleh  energi  ikatan  yang  dihasilkan  oleh  dua  senyawa  aktif  dalam  ekstrak  etanol
rimpang  kencur  (etil  p-metoksisinamat  dan  etil  sinamat)  terhadap  protein  reseptor  β  esterogen (1QKM).  Interaksi  tersebut  diduga  kuat  memperantarai  efek  ekstrak  etanol  rimpang  kencur sebagai agen antikolesterol dan pencegah osteoporosis. Analisis docking molekuler menggunakan program PLANTS. Hasil analisis dapat dilihat pada tabel I dan senyawa 17β-estradiol digunakan sebagai senyawa standar/pembanding yang dapat berinteraksi dengan protein reseptor β esterogen (1QKM).
Tabel I. Analisis docking molekuler Senyawa Aktif dalam Ekstrak Etanol Rimpang Kencur terhadap protein terget
Senyawa Aktif dalam Ekstrak Etanol Rimpang Kencur Skor Docking: Energi Ikatan (kkal/mol) terhadap Protein Target 1QKM Etil p-metoksisinamat -94,9984 Etil sinamat -94,9948 Pembanding 17β-Estradiol -94,9982 RMSD ( root mean square deviations ): 1,1221 °A
Validasi  protokol  docking  dapat  dinilai  skor  RMSD  yang  dihasilkan.  Protokol  docking molekuler  dapat diterima jika  RMSD < 2 o A. Nilai RMSD yang dihasilkan pada analisis docking dalam  penelitian  ini  adalah  1,1221  °A  sehingga  protokol  docking  hasil  validasi  protein  PDB 1QKM dapat diterima.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  energi  ikatan  yang  dihasilkan  dari  hasil  interaksi senyawa aktif ekstrak etanol rimpang kencur, etil p-metoksisinamat dan etil sinamat hampir sama dengan interaksi senyawa pembanding 17β-Estradiol (tabel I). Hal ini menunjukkan bahwa etil p- metoksisinamat  dan  etil  sinamat  dapat  berikatan  dengan  protein  reseptor  β-esterogen  dengan energi ikatan berturut-turut sebesar -94,9984 dan -94,9948 kkal/mol. Sementara itu, energi ikatan yang  dihasilkan  oleh  interaksi  senyawa  pembanding  17β-estradiol  terhadap  protein  reseptor  β- esterogen (1QKM)  adalah  sebesar  -94,9982 kkal/mol.  Visualisasi interaksi  molekuler  antara    etil p-metoksisinamat, etil sinamat dan pembanding 17β-Estradiol dapat dilihat pada gambar 1, 2 dan 3. Sementara itu, residu asam amino dan jenis ikatan yang terjadi disajikan pada tabel II.
Gambar 1.   Interaksi antara etil p-metoksisinamat dengan protein reseptor β-esterogen (1QKM) (A) dan residu asam amino protein reseptor β-esterogen (1QKM) (B)
A B
Potensi Rimpang Kencur (Kaempferia Galanga L. ) Sebagai
Gambar 2.   Interaksi antara etil etil sinamat dengan protein reseptor β-esterogen (1QKM) (A) dan residu asam amino protein reseptor β-esterogen (1QKM) (B)
Gambar 3.   Interaksi antara etil 17β-estradiol dengan protein reseptor β-esterogen (1QKM) (A) dan residu asam amino protein reseptor β-esterogen (1QKM) (B)
Tabel II.   Ikatan  Senyawa  Etil  p-Metoksisinamat,  Etil  Sinamat  dan  17β-Estradiol  dengan residu asam amino protein reseptor β-esterogen (1QKM) dan jenis ikatan yang terbentuk Protein Target Senyawa Residu asam amino Jenis ikatan 1QKM Etil p-metoksisinamat Leu 459 Cys 334 Glu 337 Ikatan Hidrogen Ikatan Hidrogen Ikatan Hidrogen Etil sinamat Tyr 397 Val 465 Arg 466 Ikatan Hidrogen Ikatan Hidrogen Ikatan Hidrogen 17β-Estradiol Leu 398 Cys 399 Lys 401 Ikatan Hidrogen Ikatan Hidrogen Ikatan Hidrogen
A A B B Sri Handayani
Hasil uji in silico menunjukkan bahwa etil p-metoksisinamat, etilsinamat dan 17β-estradiol sama-sama berikatan dengan tiga residu asam amino protein reseptor β-esterogen (1QKM) dengan jenis ikatan yang sama, yaitu ikatan hidrogen. Hal inilah yang mungkin bisa menjelaskan mengapa energi  ikatan  ketiga  senyawa  tersebut  hampir  sama.  Walaupun  demikian,  ikatan  yang  terjadi adalah  dengan  residu  asam  amino  yang  berbeda-beda.  Interaksi  antara  etil  p-metoksisinamat dengan protein reseptor β-esterogen (1QKM) terjadi melalui ikatan hidrogen dengan asam amino Leu  459,  Cys  334,  Glu  337.  Ikatan  antara  etil  sinamat  dengan  protein  reseptor  β-esterogen (1QKM)  terjadi  melalui  ikatan  hidrogen  dengan  asam  amino  Tyr  397,  Val  465,  Arg  466. Sementara  itu,  17β-estradiol  berikatan  dengan  protein  reseptor  β-esterogen  (1QKM)  terjadi melalui ikatan hidrogen dengan asam amino Leu 398, Cys 399, Lys 401.

## Efek Ekstrak Etanol Rimpang Kencur terhadap Kadar Kolesterol Total, Trigliserida, HDL dan LDL Tikus Terovariektomi
Hewan  percobaan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  tikus  betina  galur  Wistar yang terovariektomi. Ovarektomi dilakukan untuk mengkondisikan tikus dalam keadaan defisiensi estrogen.  Dalam  kondisi  ini,  tikus  membutuhkan  subtitusi  estrogen  dari  luar.  Ovariektomi  dalam penelitian  ini dilakukan pada saat  tikus berusia 70 hari. Pemberian  CMC-Na 0,5%, estradiol dan ekstrak  etanol  rimpang  kencur  (sediaan  uji)  dilakukan  satu  kali  sehari  selama  30  hari.  Kadar kolesterol  total,  trigliserida,  LDL  dan  HDL  serum  darah  tikus  diukur  pada  hari  ke-30  perlakuan sediaan uji (gambar 4).
Keterangan: K1  : Tikus kontrol baseline non-ovarektomi K2  : Tikus kontrol baseline ovarektomi K3  : Tikus terovariektomi dengan perlakuan CMC-Na 0,5% (kontrol negatif) K4  : Tikus terovariektomi dengan perlakuan estradiol 2 µg/hari P1  : Tikus terovariektomi dengan perlakuan ekstrak etanol rimpang kencur 500 mg/kg BB/hari P2  : Tikus terovariektomi dengan perlakuan ekstrak etanol rimpang kencur 1.000 mg/kgBB/hari
Gambar 4.   Perbandingan rata-rata kadar kolesterol total (A), trigliserida (B), LDL (C) dan HDL (D) serum darah tikus pada hari ke-30 perlakuan CMC-Na, estradiol dan ekstrak  etanol  rimpang  kencur. (a) hasil uji Tukey menunjukkan perbedaan  yang signifikan  dengan  data  kelompok  kontrol baseline non-ovariektomi  (p<0,05).  (b) hasil  uji  Tukey  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  dengan  data  kelompok kontrol negatif terovariektomi (p<0,05)
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  proses  overiektomi  mampu  meningkatkan  kadar kolesterol  total  (gambar  4A)  dan  LDL  (gambar 4C)  serum  darah  tikus.  Akan  tetapi,  ovariektomi
Potensi Rimpang Kencur (Kaempferia Galanga L. ) Sebagai
tidak  berpengaruh  terhadap  kadar  trigliserida  (gambar  4B)  dan  HDL  (gambar  4D)  serum  darah tikus. Proses ovariektomi cenderung menurunkan kadar trigliserida dan meningkatkan kadar HDL serum darah tikus. Walaupun demikian, hasil analisis Anova satu jalan tidak menunjukkan adanya perbedaan  yang  signifikan  antara  kadar  trigliserida  dan  kadar  HDL  tikus  terovariektomi  dengan kadar  trigliserida  dan  kadar  HDL  serum  darah  tikus  kelompok  kontrol baseline non-ovariektomi (p>0,05).
Rata-rata  kadar  kolesterol  total  tikus  normal  (kontrol baseline non-ovariektomi)  dalam penelitian  ini  adalah  23,13  mg/dL,  sedangkan  kadar  kolesterol  total  tikus  kelompok  kontrol baseline terovariektomi  hampir  empat  kali  lipat  lebih  tinggi,  yaitu    87,51  mg/dL.  Sementara  itu, kadar  LDL  tikus  sehat  adalah  20,2  mg/dL  dan  kadar  LDL  tikus  kelompok  kontrol baseline terovariektomi  hampir  empat  tiga  lipat  lebih  tinggi,  yaitu    55,49  mg/dL.  Semua  kelompok perlakuan  sediaan  uji  tikus  terovariektomi  memiliki  kadar  kolesterol  total  dan  LDL  yang  lebih tinggi dari pada tikus kontrol baseline non-ovariektomi (p<0,05).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  estradiol  2g/kg  BB  dan  ekstrak  etanol rimpang kencur (500 dan 1.000) mg/kg BB selama 30 hari mampu menurunkan secara signifikan kadar  kolesterol  total  dan  LDL  serum  darah  tikus  terovariektomi,  akan  tetapi  tidak  berpengaruh terhadap kadar trigliserida dan HDL tikus. Hal ini membuktikan bahwa reseptor esterogen hanya memainkan peranan penting dalam pengaturan kadar kolesterol total dan LDL dalam tubuh tikus.
Perlakuan ekstrak etanol rimpang kencur (500 dan 1.000) mg/kg BB selama 30 hari mampu menurunkan  secara  signifikan  kadar  kolesterol  total  dan  LDL  serum  darah  tikus  terovariektomi. Kadar  kolesterol  total  dan  LDL  serum darah  tikus  yang mendapatkan  perlakuan  ekstrak dua kali lebih rendah daripada kadar kolesterol total dan LDL serum darah tikus kelompok kontrol negatif terovariektomi  (p<0,05).  Sementara  itu,  pengaruh  perlakuan  ekstrak  etanol  rimpang  kencur terhadap  penurunan  kadar  trigliserida  serum  darah  tikus  tidak  signifikan  dan  perlakuan  ekstrak cenderung menurunkan kadar HDL serum darah tikus terovariektomi. Kadar trigliserida dan HDL serum  darah  tikus  yang  mendapatkan  perlakuan  ekstrak  etanol  rimpang  kencur  (500  dan  1.000) mg/kg BB selama 30 hari tidak berbeda signifikan dengan kadar trigliserida dan HDL serum darah tikus kelompok kontrol negatif terovariektomi (p>0,05).

## Efek  Ekstrak  Etanol  Rimpang  Kencur  terhadap  Densitas  Tulang  Femur  Tikus Terovariektomi
Data penelitian yang didapatkan dari analisis tulang femur adalah optical density dari hasil pembacaan foto rontgen tulang femur pada alat densitomener. Semakin kecil nilai optical density berarti  sinar-X  yang  diserap  tulang  semakin  kecil  sehingga  nilai  densitas  besar.  Sebaliknya, semakin  besar  nilai optical  density menggambarkan  nilai  densitas  tulang  femur  yang  kecil.  Nilai optical  density tulang  femur  tikus  pada  masing-masing  kelompok  perlakuan  dapat  dilihat  pada gambar 5.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  proses  overiektomi  mengakibatkan  penurunan densitas tulang femur tikus yang menyatakan bahwa tikus telah mengalami osteoporosis. Keadaan ini terlihat dari nilai optical density tulang femur tikus kelompok kontrol baseline terovariektomi, dan  kelompok  perlakuan  estradiol  dan  ekstrak  etanol  rimpang  kencur  lebih  besar  daripada  nilai optical  density tulang  femur  tikus  kelompok  kontrol baseline non-ovariektomi  (p<0,05).  Nilai optical density yang besar menggambarkan kepadatan (densitas) tulang femur yang kecil. Perlakuan  estradiol  dan  ekstrak  etanol  rimpang  kencur  terbukti  mampu  mencegah terjadinya osteoporosis pada tikus galur Wistar terovariektomi. Nilai optical density tulang femur tikus yang mendapatkan perlakuan estradiol 2 μg/hari dan ekstrak etanol rimpang kencur (500 dan 1.000)  mg/kg  BB  selama  30  hari  lebih  rendah  dari  pada  nilai optical  density tikus  kelompok kontrol  negatif  (p<0,05).  Dengan  kata  lain,  tikus  yang  mendapatkan  perlakuan  ekstrak  etanol rimpang kencur memiliki kepadatan (densitas) tulang yang lebih tinggi dari pada tikus kelompok kontrol negatif (p<0,05). Oleh karena itu, hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa ekstrak etanol rimpang kencur memiliki potensi yang baik untuk pencegahan osteoporosis.
Gambar  5.    Perbandingan  rata-rata  optical  density  tulang  femur  tikus  setelah perlakuan CMC-Na,  estradiol  dan  ekstrak  etanol  rimpang  kencur. (a)  hasil  uji  Tukey menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  dengan  data  kelompok  kontrol baseline non-ovariektomi  (p<0,05).  (b)  hasil  uji  Tukey  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan dengan data kelompok kontrol negatif terovariektomi (p<0,05)

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  rimpang  kencur  (500  dan  1.000)  mg/kg  BB  yang  diberikan  selama  30  hari mampu  menurunkan  secara  signifikan  kadar  kolesterol  total  dan  LDL  dan  meningkatkan kepadatan  tulang  femur  tikus  galur  Wistar  terovariektomi.  Akan  tetapi,  perlakuan  ekstrak  tidak mampu  menurunkan  kadar  trigliserida  dan  meningkatkan  kadar  HDL  serum  darah  tikus terovariektomi.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  dengan  variasi  dosis  yang  baru  dan  waktu  perlakuan  setelah ovariektomi yang lebih lama.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih kami sampaikan kepada Ditjen DIKTI melalui program PKM-P tahun 2015.

## DAFTAR PUSTAKA
American Cancer Society, 2013, Cancer Fact and Figure 2013 , American Cancer Society, Atlanta
Benassayag C., Perrot  A.M. and Ferre F., 2002, Phytoestrogen as Modulators of Steroid Action in Target Cells. J. Chromatogr. 777 , 233-248
Beral V., 2003, Breast Cancer and Hormon Replacement Therapy in Women Study. The Lancet , 362 , 413-427
Cyrus  C.S.G.,  Robert  L.,  2005,  Prevention  and  Treatment  of  Osteoporosis:  a  Clinician’s  Guide, Taylor and Francis, New York
Gruber  C.J.,  Walter  T.,Christian  S.  and  Johannes,  C.  2002.  Production  and  Action  of  Estrogens, The New England Journal of Medicine , 346 (5), 340-350
Potensi Rimpang Kencur (Kaempferia Galanga L. ) Sebagai
Harnish D.C., Evans S. and Karanthanasis S.K., 1998, Estrogen Regulation of the Apoliprotein Al Gene  Promoter  through  Transkription  Cofactor  Sharing, The  Journal  of  Biological Chemistry , 273 (15), 9270-9278
Jordan  V.C.,  2004,  Selective  Estrogen  Reseptor  Modulation:  Concept  and  Consequenses  in Cancer, Cancer Cell , 15 , 207-213
Kenny  A.M.,  Prestwood,  and  Raisz,  L.G.,  2000,  The  Short  Term  Effects  of  Tamoxifen  on  Bone Turnover in Older Women, J Clin Endocrinol Metab , 80 , 3287-3291
Lindsay  R.  Casper.,  Braunwald  E,  Kasper  D.L.,  Hauser  S.L.,  Longo  D.L.,  Jameson  J.L,  2008, Harrison’s Principle of Internal Medicine, 17th Eds., 2397-2408, Mc-Graw Hill, USA
Matthews  J.  and  Gustafsson  J.,  2003,  Estrogen  Signaling:  a  Subbtle  Balance  bettween  ERα  and Erβ, Molecular Interventions , 3 , 281-292
Meyer  M.R.  and  Barton  M.,  2006,  Gender  Differences  of  Cardiovascular  Disease:  New Perspectives for Estrogen Reseptor Signaling , Hypertention , 47 , 1019-1026
Ross  J.A.  and  Kasum  C.M.,  2002,  DIETARY  Flavonoids:  Bioavalability,  Metabolic  Effect  and Safety. Annu. rev. Nutr ., 22 , 19-34
Yildiz F., 2005, Phytoestrogen in Functional Foods ,  210-211, CRC Press, Bosa Roca, USA
Sri Handayani