Isolasi dan Uji Aktivitas Antibakteri dari Bakteri Endofit Simbion pada Rumput Laut Gracilaria verrucosa Asal Pantai Batu Meja Tongkaina, Sulawesi Utara
( Isolation and Antibacterial Activity assay of  Endophytic Symbiont Bacteria on Seaweed Gracilaria verrucosa originated from Batu Meja Tongkaina Beach, North Sulawesi )
Yolanda Sirri 1 , Veibe Warouw 2 , Inneke Fenny M. Rumengan 2 , Darus Sa’adah Paransa 2 , Suzanne Lydia Undap 2 , Elvy Like Ginting 2 *
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
2 Staf Pengajar Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia *Corresponding author: like.ginting@unsrat.ac.id

## Abstract
Seaweed  can  produce  bioactive  compounds  such  as  antibacterial.  Seaweed  co-exists  with bacteria endophytes. Entophytic bacteria are bacteria that live in host tissues and have the ability to protect the host itself by producing antibacterial compounds against pathogens. Therefore, the endophytic bacteria of seaweed symbionts can be utilized to produce antibacterial compounds. Bacteria can be mass-cultured because of their fast-growing characteristic. The aim of this study was to determine the antibacterial activity of endophytic symbiont bacteria on seaweed Gracilaria verrucosa originating from Batu Meja Tongkaina Beach, North Sulawesi. Isolation of bacteria was carried  out  by  dilution  steps  from  10 1 to  10 3 ־ times,  then  cultivation  on  Nutrient  Agar  media  to obtain  a  single  colony  of  the  bacteria.  Antibacterial  activity  was  tested  using  the  paper  disc diffusion method. The pathogens used were bacterial strains of Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, and Salmonella typhi . Moreover, antibiotics were used as positive controls.  The  antibacterial  ability  of  the  symbiotic  bacteria  was  measured  based  on  inhibition zones around the paper disc containing the isolates of endophytic bacteria. A total of 6 endophytic bacterial  isolates  were  found,  namely  isolates  B,  C,  D,  E,  F,  and  G,  characterized  by  different morphological features. The results showed that isolates B and C have an inhibition zone of 0.5 – 1.0 mm against S.  typhi ,  indicating  that these  two  isolates  produce  antibacterial  compounds with a weak ability against S. typhi . Keywords: Bacteria, Antibacterial, G. verrucosa , Endophytic symbiont.

## Abstrak
Rumput laut merupakan tumbuhan alga yang menghasilkan senyawa bioaktif seperti antibakteri. Rumput laut hidup berdampingan dengan  bakteri secara endofit. Bakteri endofit adalah bakteri yang  hidup  dalam  jaringan  inang  dan  memiliki  kemampuan  untuk  melindungi  inangnya  sendiri terhadap  patogen  dengan  memproduksi  senyawa  antibakteri.    Oleh  karena  itu,  bakteri  endofit dari simbion rumput laut dapat dimanfaatkan untuk menghasilkan senyawa antibakteri. Selain itu, Bakteri dapat dikultur secara masal karena sifatnya yang cepat tumbuh. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dari  bakteri  simbion  endofit  pada  rumput  laut  Gracilaria verrucosa  asal  Pantai  Batu  Meja  Tongkaina  Sulawesi  Utara.  Isolasi  bakteri  dilakukan  dengan melalui tahapan pengenceran 10 -1 sampai 10 -3 , kemudian ditumbuhkan pada media Nutrient Agar untuk mendapatkan satu koloni bakteri. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi kertas  cakram  dengan  menggunakan  bakteri  uji Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, Streptococcus  mutans, dan Salmonella  typhi. Antibiotik  digunakan  sebagai  kontrol  positif. Kemampuan antibakteri dari bakteri simbion diukur berdasarkan zona hambat yang terbentuk di sekitar  kertas  cakram  yang  berisi  isolat  bakteri  endofit.  Sebanyak  6  isolat  bakteri  endofit ditemukan, yaitu isolat B, C, D, E, F dan G, dengan ciri morfologi yang berbeda. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  isolat  B  dan  C  memiliki  zona  hambat  sebesar  0,5 – 1,0 mm terhadap S. typhi yang menunjukkan bahwa kedua isolat tersebut menghasilkan senyawa antibakteri dengan daya hambat yang lemah terhadap S. typhi . Kata Kunci: Bakteri; Antibakteri; G. verrucosa ; Simbion; Tongkaina

## PENDAHULUAN
Salah  satu  sumberdaya  hayati  yang dimanfaatkan oleh manusia adalah rumput
laut.  Rumput  laut  memiliki  kemampuan menghasilkan  metabolit  sekunder  yang berfungsi  untuk  pertahanan  diri.  Metabolit
sekunder tersebut berupa senyawa bioaktif yang  dapat  bersifat  antibakteri  (Zainnudin dan Malina., 2009).
Rumput  laut  yang  paling  banyak mengandung senyawa metabolit sekunder ialah  alga  merah  dibandingkan  dengan alga  hijau  dan  coklat  (Amaranggana  dan Wathoni., 2017). Berbagai bahan aktif dari alga merah
telah
ditemukan
penggunaannya
seperti antibakteri, antivirus, antijamur, sitotoksik, antialga dan lainnya (Vallinayagam dkk. , 2009).
Rumput laut hidup berasosiasi dengan  organisme  lain  seperti  bakteri secara  endofit.  Bakteri  endofit  merupakan mikroorganisme  yang  hidup  di  dalam jaringan  inang  yang  ditumpangi  dengan memberi  keuntungan  terhadap  inang  dan lingkungannya  (Foeh, dkk., 2019).  Endofit memiliki  kemampuan  dalam  melindungi inang  yang  ditumpangi,  salah  satunya melawan  patogen  (Rori, dkk., (2020), dengan  menghasilkan  metabolit  sekunder yang  dapat  bersifat  sebagai  antibakteri. Menurut  Hamzah, dkk., (2018),  bakteri yang  bersimbion  dengan  rumput  laut Galaxaura rugosa memiliki aktivitas antibakteri  pada  bakteri  uji S.aureus dengan  kategori  sedang  dan E.  coli kategori kuat.
Pemanfaatan bakteri ini dapat mengurangi eksploitasi  yang  berlebihan  terhadap rumput laut G. verucosa sebagai organisme  yang  dapat  menghasilkan senyawa  bioaktif . Hal  ini  dikarenakan bakteri  lebih  mudah  diisolasi  sebab keunggulannya  yang  cepat  dan  ekonomis untuk  ditumbuhkan  serta  dapat  diproduksi secara massal.
Pantai Batu Meja Tongkaina merupakan salah satu daerah yang banyak ditumbuhi  oleh  rumput  laut,  khususnya rumput laut jenis G. verrucosa . Oleh sebab itu,  isolasi  dan  penapisan  bakteri  simbion G.  verrucosa yang  memiliki  kemampuan aktivitas antibakteri perlu diteliti agar dapat dimanfaatkan bakteri dan senyawa antibakterinya.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Sampel  rumput  laut  diambil  dari pantai  Batu  Meja  Tongkaina  Kecamatan Bunaken  Kota  Manado,  Sulawesi  Utara (Gambar 1). Selanjutnya sampel dibawa ke Laboratorium Biologi Molekuler dan Farmasitika  Laut,  Fakultas  perikanan  dan Ilmu  kelautan  Universitas  Sam  Ratulangi. Penelitian  ini  berlangsung  pada  bulan Maret sampai dengan bulan Juni 2022.
Gambar 1. Lokasi Pengambilan Sampel Mikroplastik di Teluk Manado

## Pengambilan dan identifikasi sampel
Sampel  rumput  laut  diambil  dengan cara  menggunting  sampel  di  bagian  yang menyerupai  akar  (holfast).    Sampel
dimasukan  dalam  plastik  sampel  berisi  air laut  bersih  lalu  letakkan  dalam  coolbox untuk  dibawa  ke  Laboratorium  Biologi Molekuler  dan  Farmasitika  Laut  Fakulltas
Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Universitas Sam Ratulangi Manado. Sampel diidentifikasi menggunakan pedoman menurut buku Field Guide To The Common  Mangrove,  Seagrass  And  Algae Of  Philipine  (Calumpong  dan  Menez., 1997).Identifikasi didasarkan pada karakteristik  morfologi  seperti  bentuk percabangan dan warna.

## Persiapan Isolasi dan Kultur Bakteri
- Pengadaan Air Laut Pengadaan air laut diperlukan sebagai  pelarut  dalam  pembuatan  media kultur bakteri dan untuk membilas sampel. Air  laut  diambil  pada  lokasi  pengambilan sampe  rumput  lautl.  Air  laut  disaring dengan menggunakan kertas saring hingga berwarna jernih, lalu disterilkan menggunakan autoclave pada suhu 1210C selama ± 15 menit. - Pembuatan  Media  Nutrien  Broth (NB) Media NB digunakan untuk mengkultur bakteri. Adapun cara pembuatan media NB yaitu menimbang NB
(Merck:  500g)  sebanyak  1,6  g  kemudian disuspensikan ke dalam aquades sebanyak  40  ml  (20%)  dan  air  laut  bersih 160  ml  (80%),  selanjutnya  dihomogenkan menggunakan  magnetic  stirrer  tanpa dididihkan. Selanjutnya disterilkan di dalam autoclave dengan suhu 121 ̊C selama ±15 menit.
- Pembuatan  Media  Nutrien  Agar (NA) Media NA digunakan untuk
mengisolasi  dan  menumbuhkan  isolat bakteri.  Cara  pembuatan  medi  ini  dengan menimbang agar sebanyak 1,6 g, Nutrient Broth  (Merck:  500g)  sebanyak  0.8  g. Semua  bahan  disuspensikan  kedalam  20 ml (20%) aquades dan 80 ml (80%) air laut bersih.  Panaskan  media  di  atas  Hotplate stirrer  bar  sampai  mendidih.  Selanjutnya media disterilkan di dalam autoclave pada suhu 121 ̊C selama ±15 menit.

## Isolasi Bakteri
Isolasi bakteri diawali dengan melakukan  pengenceran  sampel.    Tujuan pengenceran  untuk  mengurangi  jumlah kepadatan
mikroba sehingga menghasilkan isolat bakteri tunggal.
Pengenceran  dilakukan  dengan  cara menimbang sampel sebanyak 1 g lalu bilas dengan  air  laut  steri.  Selanjutnya  sampel digerus di dalam tabung reaksi berisi 9 ml larutan  NaCl  steril.  Vortex  hasil  gerusan hingga  homogen  dan  hasil  ini  menjadi pengenceran  1-1.  Dari  pengenceran  10-1 membuat  pengenceran    1-2  dengan mengambil    1  ml    pengenceran  1-1 menggunakan mikropipet lalu pindahkan ke tabung  berisikan  9  ml  larutan  NaCl. Lakukan hal yang sama untuk mendapatkan 1-3. Sampel hasil pengenceran selanjutnya ditumbuhkan pada media NA dengan metode penyebaran  menggunakan  L-glass  lalu diinkubasi pada suhu 3 5̊C selama 24 jam.
Isolat  bakteri  yang  tumbuh,  diinokulasikan ke media NA menggunakan metode gores kuadran. Selanjutnya hasil kultur diinkubasi pada  suhu  3 5̊C  selama  24  jam.  Koloni bakteri  yang  tumbuh  diamati  karakteristik morfologi  bakteri  berupa  elevasi,  tepian, bentuk koloni dan warna.

## Uji Aktivitas Antibakteri
- Kultur  Isolat  Bakteri  dan  Bakteri  Uji pada Media NB
Bakteri  uji  yang  digunakan  pada  uji aktivitas antibakteri adalah Staphylococcus aureus,  Streptococcus  mutans  (Gram positif)  dan  Escherichia  coli,  Salmonella thypi (Gram negatif). Setiap bakteri uji dan isolat  bakteri  simbion,  masing-masing dikultur  dalam  media  NB  dan  diinkubasi pada suhu 3 5̊C selama 24 jam.
- Pembuatan  Media  Muller  Hinton Agar
Media Muller Hinton Agar merupakan media  yang  digunakan  untuk  uji  aktivitas antibakteri.  Adapun  cara  pembuatan MHA yaitu menimbang MHA sebanyak 6,8 g kemudian disuspensikan ke dalam 200 ml (100%)  air  laut  bersih.  Larutan  media dipanaskan dengan menggunakan hotplate magnetic  stirrer  sampai  homogen  dan mendidih.  Media  disterilkan menggunakan autoclave  selama  ±15  menit  pada  suhu 12 1̊C.
- Pembuatan Larutan Antibiotik
Antibiotik  digunakan  sebagai  kontrol positif  (c+)  atau  sebagai  pembanding.
Antibiotik yang digunakan adalah amoxilin, ampicilin,  kloramfenikol  dan  ciprofloxacin. Cara  pembuatan  larutan  antibiotik  yakni dengan  menghancurkan  masing  masing antibiotik menggunakan mortal.
Menimbang 0,10 g masing-masing antibiotik amoxilin, ampicilin dan kloramfenikol dan disuspensikan ke dalam 10 ml aquades steril. Sedangkan antibiotik Ciprofloxacin, menimbang 0,07 g Ciprofloxacin dan disuspensikan ke dalam 10 ml aquades. - Pelaksaan Pengujian Ativitas

## Antibakteri
Metode  yang  digunakan  untuk  uji antibakteri  yaitu    metode  difusi  kertas cakram. Metode ini dilakukan dengan cara: sebanyak  30µl  kultur  bakteri  uji  diambil menggunakan  mikropipet  dan  diinokulasi pada  cawan  petri  mengandung  media MHA.  Kultur  bakteri  tersebut  disebarkan menggunakan cotton swab steril.
Selanjutnya,  kertas  cakram  steril  diambil menggunakan pinset, dicelupkan ke dalam tabung  berisi  kultur  isolat  bakteri  simbion dan antibiotik secara bergantian, kemudian diletakan  di  atas  permukaan  media  MHA yang  sudah  terdapat  bakteri  uji.  Setiap pengujian  untuk  bakteri  uji  menggunakan antibiotik yang berbeda.
E.coli
menggunakan  ciprofloxacin,  S.  mutans menggunakan amoxillin, S.aureus menggunakan ampicilin dan bakteri S. thypi menggunakan  kloramfenikol.  Selanjutnya kultur  tersebut  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  3 7̊C.  Setelah  24  jam,  zona hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  bakteri simbion yang tumbuh pada kertas cakram dimati dan diukur menggunakan penggaris. Pengukuran  zona  hambat  dilakukan  pada
waktu inkubasi 24 jam, 48 jam dan 72 jam. Penentuan  kekuatan  zona  hambat  dari bakteri  simbion  G.  verrucosa  berdasarkan kategori  Davis  dan  Stout  (1971)  dalam Maarisit  dkk,  (2021)  yaitu  diameter  zona hambat  lemah  ≤5  mm,  zona  hambat sedang 5-10 mm, zona hambat kuat 10-20 mm dan zona hambat sangat kuat ≥20 mm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Identifikasi Rumput Laut
Sampel  rumput  laut  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  diidentifikasi  menurut buku  Field  Guide  To  The  Common Mangrove Seagrass and Algae of Philipine adalah  rumput  laut  jenis  G.  verrucosa (Gambar 2).
Berdasarkan isolasi bakteri, diperoleh 6 isolat bakteri endofit simbion rumput laut G. verrucosa yang berasal dari Pantai Batu Meja  Tongkaina  (Gambar  3).  Karakteristik morfologi  dari  setiap  isolat  disajikan  pada Tabel 1.
Berdasarkan  Tabel  1,  isolat  bakteri endofit  B,  C,  D,  E,  F  dan  G  memiliki karakteristik morfologi bakteri yang berbeda,  baik  bentuk  koloni,  elevasi  dan warna,  namun  memiliki  tepian  yang  sama yakni  rata.  Isolat  bakteri  B,  F,  G  memiliki elevasi  convex  dan  isolat  bakteri  C,  D,  E elevasinya  unbonate.  Bentuk  koloni  pada isolat bakteri B tidak beraturan sedangkan isolat  bakteri  C,  D,  E,  F  dan  G  memiliki koloni  bakteri  bulat.  Warna  koloni  pada isolat bakteri simbion bervariasi yaitu isolat bakteri  B  memiliki  warna  krim,  isolat  D berwarna  kuning  dan  warna  putih  pada isolat  C,  E,  F  dan  G.  Perbedaan karakteristik  morfologi  dari  setiap  isolat bakteri  mengindikasikan  perbedaan  jenis bakteri setiap isolat bakteri tersebut.
Gambar 3 . Isolat Tunggal Bakteri Simbion G. verrucosa
Tabel 1 . Karakteristik morfologi isolat bakteri simbion G.verrucosa
Ginting, dkk., (2019)  melaporkan  5 isolat  bakteri  simbion  alga  merah  mirip Gracilaria sp.  yang  didominasi  warna coklat. Bentuk koloni bakteri dominan tidak bulat atau disebut irregular pada tiga isolat yang  ditemukan.    Selanjutnya,  Poluan, dkk., (2019), melaporkan karakteristik morfologi  dari  bakteri  simbion  spons menyerupai Cribochanina sp. dari Perairan Malalayang. Melalui isolasi yang dilakukan, terdapat  5  isolat  bakteri  simbion  pada spons  yang  menyerupai Cribochanina sp. Morfologi  dari  bakteri  yang  bersimbion dengan spons ini bervariasi yaitu dominan berbentuk  circular  dengan  warna  putih namun tepian dan elevasi yang berbeda.

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  dengan Bakteri Uji E. coli
Uji  aktivitas  antibakteri  dari  bakteri simbion G. verrucosa dengan bakteri uji E. coli tidak menunjukan adanya pembentukan  zona  hambat  di  sekitar kertas cakram yang berisi isolat B, C, D, E, F  dan  G  (Gambar  4),  selama  waktu inkubasi 24 jam, 48 jam dan 72 jam.  Hal ini
menunjukkan  bahwa  semua  isolat  bakteri simbion endofit tidak memiliki kemampuan untuk membunuh dan manghambat pertumbuhan dari bakteri uji E.coli .
Antibiotik  yang  digunakan  sebagai kontrol positif yaitu
Ciprofloxacin.
Penggunaan  antibiotik  Ciprofloxacin  untuk bakteri  uji E.coli disesuaikan  dengan tingkat  resisten  antibiotik  terhadap  bakteri patogen.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Arivo  dan  Dwiningtyas.,  (2017)  mendapati bahwa  bakteri E.  coli rentan  terhadap antibiotik Ciprofloxacin dimana antibiotik ini memiliki besar zona hambat ≥20 mm.

## Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji S. aureus
Berdasarkan  hasil  pengamatan  uji aktivitas  antibakteri  dari  isolat  bakteri endofit  dengan  bakteri  uji S.  aureus tidak terlihat adanya pembentukan zona hambat di  sekitar  kertas  cakram  yang  ditumbuhi bakteri  simbion  (Gambar  5)  pada  waktu inkubasi  24  jam,  48  jam  dan  72  jam terhadap isolat bakteri B, C, D, E, F dan G.
Isolat Bakteri Elevasi Tinggi Batas/ Tepian Keseluruhan koloni Warna B Cembung, Convex Rata Tidak Beraturan Krim C Cembung, Umbonate Rata Bulat Putih D Cembung, Umbonate Rata Bulat Kuning E Cembung, Umbonate Rata Bulat Putih F Cenbung, Convex Rata Bulat Putih G Cembung, Convex Rata Bulat Putih
Gambar 4 . Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji E. coli ket : a: Isolat endofit B, endofit C, kontrol positif (+) b: Isolat endofit D, endofit  E, endofit F, endofit G, kontrol positif (+)
Gambar 5. Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji S. aureus Ket. a: Isolat bakteri endofit B, endofit C, kontrol positif (+) b: Isolat bakteri endofi D, endofit  E, kontrol positif (+) c: Isolat bakteri endofit F, endofit G, kontrol positif (+)
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa    tidak ada  aktivitas  antibakteri  yang  dimiliki  oleh semua  isolat  bakteri  tersebut.  Kontrol positif  yang  digunakan  untuk  bakteri  uji S.aureus yaitu  ampicilin.  Menurut  Suheri, dkk., (2015),  ampicilin  sensitif  dan  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus dengan besar diameternya 36,64 mm.
Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji S. mutans
Hasil pengamatan uji aktivitas antibakteri  dari  isolat  B,  C,  D,  E,  F  dan  G dengan  bakteri  uji S.  mutans tidak  terlihat pembentukan zona hambat di sekitar koloni bakteri yang tumbuh (Gambar 6). Hasil ini menunjukkan bahwa kesemua isolat bakteri  tersebut  tidak  memeliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  uji S.  mutans. Kontrol  positif  yang  digunakan  untuk bakteri  uji S.  mutans yaitu  amoxilin. Menurut  Maarisit, dkk .,(2021)  amoksilin menghasilkan zona hambat sebesar 20mm
terhadap  bakteri  uji S.  mutans. Hal  Ini menandakan  bahwa  antibiotik  amoxilin sesuai  digunakan  sebagai  kontrol  positif pada bakteri uji S. mutans.

## Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji S. thypi
Hasil  pengamatan  memperlihatkan pembentukan  zona  hambat  di  sekitar kertas  cakram  yang  berisi  isolat  bakteri  B dan C pada uji aktivitas antibakteri S. thypi . (Gambar 7). Adanya zona hambat tersebut menandakan isolat bakteri tersebut memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  mampu menghambat atau membunuh bakteri uji S. aureus.
Pada isolat D, E, F dan G tidak terjadi pembentukan  zona  hambat  di  sekitar kertas  cakram  yang  ditumbuhi  bakteri simbion. Hal ini menunjukan bahwa 4 isolat bakteri  simbion  tersebut  tidak  mempunyai kemampuan  dalam  menghambat  atau membunuh bakteri uji.
Gambar 6 . Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji S. mutans ket. a: Isolat bakteri endofit B, C, kontrol positif (+) b: Isolat bakteri endofit D, E, F, G, kontrol positif (+)
Gambar 7. Uji Aktivitas Antibakteri dengan Bakteri Uji S. thypi Ket. a: Isolat bakteri endofit B, C, kontrol positif (+) b: Isolat bakteri endofit D, E, F, G, kontrol positif (+)
Tabel 2 . Diameter zona hambat bakteri simbion dengan bakteri uji S. thypi
Berdasarkan Tabel 2,  diameter zona hambat  dari  isolat  bakteri  B  tidak bertambah seiring waktu inkubasi yaitu 0,5 mm,  sedangkan  isolat  C  pada  waktu inkubasi  24  jam  yaitu  0,5  mm,  pada inkubasi  48  jam  meningkat  menjadi  1  mm sampai waktu inkubasi 72 jam. Sedangkan diameter kontrol positif adalah 22,5 mm. Diameter zona hambat isolat B dan C lebih kecil  dari  diamneter  zona  hambat  kontrol positif.  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah Kloramfenikol. Menurut hasil penelitian  Suswati  dan  Juniarti.,  (2010),
Kloramfenikol  sensitif  untuk  S.  typhi  yaitu sebesar  63,3%.  Hal  ini  menujukan  bahwa antibiotik  Kloramfenikol  dapat  digunakan
sebagai  kontrol  positif  terhadap  bakteri  S. thypi.
Perbedaan  diameter  isolat  bakteri dan  antibiotik,  dikarenakan  kontrol  positif pada setiap bakteri uji merupakan senyawa yang sudah dimurnikan, sedangkan isolat bakteri  B  dan  C  merupakan  organisme hidup yang metabolit sekundernya sebagai antibakteri harus diproduksi terlebih dahulu.
Purnianingsih., (2017), membagi tingkat  toksisitas  antibakteri  dalam  dua bentuk  kerja  yaitu  membunuh  sel  bakteri (bakterisidal) dan menghambat pertumbuhan  sel  bakteri  (bakteriostatik). Berdasarkan  kategori  tersebut,  isolat
bakteri B mampu menghambat sedangkan bakteri  C  mampu  membunuh    bakteri  uji gram negatif S. thypi. Hasil ini terlihat dari tidak  bertambahnya  zona  hambat  yang terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram  berisi bakteri  B  dengan  penambahan  waktu inkubasi,  sedangkan  isolat  C,  terjadi penambahan diameter zona hambat dengan pertambahan waktu inkubasi.
Menurut  Davis  dan  Stout  (1971) dalam    Maarisit  dkk,  (2021)  zona  hambat terbagi menjadi empat kategori, yaitu zona hambat lemah ≤5  mm,  zona  hambat sedang 5-10 mm, zona hambat kuat 10-20 mm,  zona  hamba t  sangat  kuat    ≥20  mm. Aktivitas  antibakteri  isolat  bakteri  B  dan  C dengan  menggunakan  bakteri  uji  S.  thypi termasuk  kategori  lemah  dan  aktivitas antibakteri  yang  dihasilkan  berspektrum sempit  karena  hanya  mampu  membunuh bakteri  Gram  Negatif.  Suatu  antibakteri disebut  berspektrum  luas  apabila  mampu membunuh  bakteri  gram  positif  maupun bakteri gram negatif dan disebut berspektrum sempit jika hanya  membunuh bakteri  gram  positif  atau  bakteri  gram negatif saja (Dwijoseputro., 1990).
Kusmiyati dan Agustin., (2007), menyatakan bahwa gram positif cenderung lebih  peka  terhadap  komponen  antibakteri karena  struktur  dinding  selnya  lebih sederhana sehingga mempermudah senyawa  antibakteri  masuk  ke  dalam  sel, sedangkan bakteri negatif memiliki struktur dinding  sel  lebih  kompleks  dan  berlapis tiga,  yaitu  lapisan  luar  berupa  lipoprotein, lapisan  tengah  berupa  peptidoglikan  dan lapisan luar berupa lipopolisakarida sehingga hal inilah yang bembuat ketahanan  bakteri  gram  negatif  lebih  baik dibandingkan bakteri gram positif.
Meskipun bakteri S. thypi memiliki dinding sel  yang  kuat,  namun  antibakteri  yang dihasilkan  oleh  isolat  B  dan  C  mampu membunuh  bakteri  S.  thypi  dengan mengeluarkan  senyawa  bioaktif  sebagai perlindungan  diri  terhadap  bakteri  uji tersebut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan
hasil penelitian diperoleh  6  isolat  bakteri  endofit  simbion dengan  rumput  laut G.  verrucosa dari
Pantai Batu Meja Tongkaina Kota Manado, Sulawesi  Utara.  Dua  isolat  bakteri  endofit simbion,  yakni  isolat  B  dan  C  memilki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  uji Gram  Negatif S.  thypi dengan  kategori lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Amaranggana,  L.,  Wathoni,  N.  2017. Manfaat  Alga  Merah  ( Rhodophyta ) Sebagai  Sumber  Obat  Dari  Bahan Alam.  Majalah  Farmasitika,  Fakultas Farmasi Universitas Pandjajaran Sumedang, Jawah Timur. 2(1): 16-19. Arivo,  D.,  Dwiningtyas,  A.W.  2017.  Uji Sensitivitas Antibiotik Terhadap Escherichia  Coli Penyebab  Infeksi Saluran Kemih. Jurnal Ilmu Kedokteran dan Kesehatan Universitas Malahayati, Bandar Lampung. 4(4): 216-225. Calumpong and Menez. 1997. Field Guide To The Common Mangrove, Seagrass And Algae Of Philipine. Inc. Makati City, Philipines. P 197. Davis,  W.W.,  dan  Stout,  T.R.  1971.  Disc Plate Method of Microbiologi Antibiotic Assay. Laboratorium Penelitian  Lilly,  Eli  Lilly  dan  Co, Indianapolis, Indiana 46206. Dwijoseputro, D. 1990. Dasar-dasar mikrobiologi. Djambtan, Jakarta.
Foeh,  S.C.,  Temaja,  I.G.R.M.,  Khalimi,  K. 2019.  Potensi  Bakteri  Endofit  dalam Menekan Pertumbuhan Phytophthora palmivora (Butler)  Secara  In  Vitro.
Jurnal Agroekoteknologi Tropika, Fakultas Pertanian, Universitas
Udayana Denpasar. 8(4): 388-398
Ginting, E. L., Rangian, L., Wantania, L. L.,
Wullur,  S.  2019.  Isolasi  Bakteri Simbion  Alga  Merah  dari  Perairan Tongkeina,  Sulawesi  Utara.  Junal Ilmiah  Platax  Fakultas  Perikana  dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi.7(2): 394-400 Hamzah,  M.Z.,  Simbala,  H.E.I.,  Yudistira, A. 2018. Pengujian
AktivitasAntibakteri  dan  Identifikasi Secara Molekuler menggunakan Gen 16S  RRNA  Bakteri  Simbion  Endofit
yang  Diisolasi  dari  Alga  Merah (Galaxaura  rugosa). Jurnal  Ilmiah farmasi  Program  Studi  Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.7(3): 294-301
Kusmiyati  dan  Agustin,  N.W.S.  2007.  Uji Aktivitas  Antibakteri  dari  Makroalga
Porphyridium cruentum. Biodiversitas, 8(1): 48-53.
Maarisit,  I.  Angkouw,  E.D.,  Mangindaan,
R.E.P., Rumampuk, N.D.C.,
Manoppo,  H.,  Ginting,  E.L.  2021. Isolasi  Dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri dari  Bakteri  Epifit  Simbion  Lamun Thalassia  hempricii dari  Perairan Bahowo,  Sulawesi  Utara.  Jurnal
Platax,  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan  Universitas  Sam  Ratulangi Manado. 9(1): 115-122
Poluan,  G.G.,  Ginting,  E.L.,  Wullur,  S.
2019.  Karakteristik  morfologi  bakteri simbion spons menyerupai Cribochalina sp. Dari perairan malalayang  sulawesi  utara.  Jurnal Pesisir  dan  Laut  tropis,  Faluktas Perikanan dan Ilmu kelautan
Universitas  Sam  Ratulangi,  Manado.
7(3) : 191-195 Purniangsih, N. A., Kalor, H., Atu, S. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Temulawak  ( Curcuma  Xanthorrhiza )
Terhadap  Bakteri Escherichia  coli
ATCC 11229  Dan Staphylococcus aureus ATCC 25923. Jurnal Penelitian Saintek, Fakultas Matematika  dan  Pengetahuan  Alam
Universitas Negeri Yogyakarta. 22(2):
140-147.
Rori, C.A., Kandou, F.E.F., Tangapo, A.M. 2020.  Aktivitas  enzim  ekstraseluler dari bakteri endofit tumbuhan mangrove Avicennia  marina. Jurnal bios  logos,  Jurusan  biologi  Fakultas FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi Manado. 10(2): 48-55
Suheri,  F.L.,  Agus,Z.,  Fitria,  I.  2015. Perbandingan  Uji  Resistensi  Bakteri Staphylococcus  aureus Terhadap Obat Antibiotik Ampisilin dan Tetrasiklin. Fakultas kedokteran, Universitas  Andalas,  Sumatra  Barat.
Hal: 26-33.
Suswati,  I.,  Juniarti,  A.  2010.  Sensitivitas
Salmonella Typhi Terhadap Kloramfenikol  dan  Seftriakson  Di RSUD Dr. Soetomo Surabaya dan di RSUD  Dr.  Saiful  Anwar  Malang Tahun 2008-2009. Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang. Hal:27-32. Vallinayagam, K, Arumugam, Kannan,R.R.R., Thirumaran, G.,
Anantharaman, P. 2009. Antibacterial Activity of Some Selected Seaweeds from  Pudumadam  Coastal  Regions. Global  Journal  of  Pharmacology.  3 (1): 50-52.
Zainuddin  dan  Malina.  2009.  Skrining Rumput  Laut  Asal  Sulawesi  Selatan Sebagai  Antibiotik  Melawan  Bakteri Pathogen Pada Ikan [Laporan Penelitian].