ISOLASI DAN ANALISIS ASAM LEMAK Scenedesmus quadricauda YANG

## DIISOLASI DARI AIR KOLAM
Devy Susanty Universitas Nusa Bangsa Jl KH Soleh Iskandar KM 4. Cimanggu Tanah Sareal Bogor 16166 e-mail: dvsusanty@gmail.com

## ABSTRACT

## Isolation and Fatty Acid Analysis of Scenedesmus quadricauda from freshwater
Microalgae have fast growth rate and fatty acids which potential as bioenergy. In addition, microalgae are also living with binding carbon dioxide for photosynthesis, so as to reduce air pollution. In this study, samples were taken from the freshwater, Sawahan, Padang, West Sumatra. Nile red staining performed on the samples to see the potential of lipid content. Microalgae having lipid content were isolated using the capillary pipette technique then it was  identified  using  a  microscope.  Isolated  microalgae  was  identified  as  Scenedesmus  quadricauda.  Microalgae growth measured by optical density value. It cultivated in different concentrations of NaNO 3 to see the effect of the amount of nitrogen on the growth. Scenedesmus quadricauda grew well at a concentration of 0.5 g / L NaNO 3 . Fatty acid  analysis  was  done  by  using  GC-MS.  Scenedesmus  quadricauda  had  several  types  of  fatty  acids.  The  most abundant fatty acid in Scenedesmus quadricaudawas C18: 1.
Keywords: Microalgae, Scenedesmus quadricauda, Nile red staining, Isolation, Fatty acid

## ABSTRAK
Mikroalga  memiliki  laju  pertumbuhan  yang  cepat  dan  mengandung  asam  lemak  sehingga  berpotensi  sebagai bioenergi.  Selain  itu,  mikroalga  juga  hidup  dengan  mengikat  karbondioksia  untuk  proses  fotosintesis,  sehingga mampu  mengurangi  pencemaran  udara.  Pada  penelitian  ini,  sampel  mikroalga  diambil  dari  air  kolam  dari  daerah Sawahan, Padang,  Sumatera  Barat.  Pewarnaan  nilered  dilakukan terhadap  sampel  untuk  melihat  potensi  kandungan lipid. Mikroalga yang memiliki kandungan lipid diisolasi dengan menggunakan teknik pipet kapiler, kemudian isolat diidentifikasi  secara  morfologi  dengan  menggunakan  mikroskop.  Isolat  yang  diperoleh  diidentifikasi  sebagai Scenedesmus  quadricauda .  Isolat  dikultivasi  dalam  Bold  Bassal  Medium  (BBM).  Pertumbuhan  mikroalga  diukur dengan  melihat  nilai  optical  density.  Isolat  dikultivasi  dalam  berbagai  konsentrasi  NaNO 3 untuk  melihat  pengaruh jumlah nitrogen terhadap pertumbuhannya. Scenedesmus quadricauda tumbuh dengan baik pada konsentrasi 0,5 g/L NaNO 3 .  Analisa  asam  lemak  dilakukan  dengan  menggunakan  GC-MS.  Pada Scenedesmus  quadricauda ditemukan beberapa jenis asam lemak. Asam lemak yang paling banyak terkandung pada mikroalga ini yaitu C18: 1.
Kata kunci: Mikroalga, Scenedesmus quadricauda, Pewarnaan nile red, Isolasi, Asam lemak

## PENDAHULUAN
Mikroalga merupakan sumber biodiesel yang dapat diperbaharui dan dapat memenuhi permintaan minyak untuk transportasi  (Hossain et  al .,  2008).  Mikro- alga dapat digunakan sebagai sumber energi bahan  bakar  alternatif  karena  mengandung jumlah minyak yang tinggi, dapat diekstrak, diproses,  dan  diubah  menjadi  bahan  bakar transportasi dengan menggunakan teknologi yang  tersedia.  Mikroalga  memiliki  laju pertumbuhan  yang  cepat,  dapat  tumbuh
tanpa  ditanam  pada  lahan  dan  hidup  pada air yang tidak  dapat diminum,  memerlukan lebih  sedikit  air,  dan  tidak  menggantikan kultur  tanaman  untuk  makanan,  produksi- nya tidak bergantung pada cuaca dan  dapat dipanen  harian  (Gouveia et  al .,  2009). Mikroalga menggunakan proses fotosintesis yang  sama  dengan  tumbuhan  tingkat  tinggi (da-Silva et  al .,  2009)  sehingga  mampu mengurangi  efek  rumah  kaca.  Disamping itu,  penggunaan  mikroalga  tidak  mem- bahayakan  produksi  makanan  (Hu et  al .,
2008),  bahkan  mikroalga  juga  dapat  ber-
potensi  sebagai  sumber  nutrisi  karena beberapa  mikroalga  dapat  mengandung asam lemak esensial (Ratha et al ., 2013). Mikroalga  memiliki kandungan lipid dan asam lemak yang dapat dikonversi menjadi  biodiesel  melalui  reaksi  trans- esterifikasi.  Kemampuan  mikroalga  dalam menghasilkan biodiesel terkait dengan lipid dan  asam  lemak  yang  terkandung  dalam mikroalga  tersebut.  Kadar  lipid  bergantung pada  jenis  mikroalga  dan  proses  kultivasi- nya.  Beberapa  penelitian  telah  dilakukan untuk  melihat  spesies  dan  proses  kultivasi yang  baik  dalam  produksi  biodiesel. Diantara  mikroalga  yang  sudah  diteliti dengan  kondisi  kultivasi  tertentu  dan  dapat menghasilkan  biodiesel  yaitu, Chlorella vulgaris, Spirulina maxima, Nanno- chloropsis sp, Neochloris  oleabundans, Scenedesmus  obliquus  dan  Dunaliella tertiolecta (Gouveia et al., 2009).

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat

## Bahan  yang  digunakan  yaitu
Bold  Bassal’s  Medium,  Nile  red  (Aldrich Sigma  N  3303),  Aseton,  Physiological Saline ( 0,9 % NaCl).
Peralatan  yang  digunakan  yaitu Mikroskop  fluorescent  (λ=515-565,  Zeiss);
Inkubator (Sanplatec), Autoclave,
Mikroplate  48  wells,  Petri  Dish,  Sentrifius
(999  x100  rpm,  himac  CT-15D,  Hitachi),
PCR (Takara), GC-MS (kolom DB WAXTR  30  m,  φ  =0,250  µm;  Agilent), Laminar  Air  Flow,  Neraca  Analitik,  dan peralatan Gelas lainnya.

## Metode Pengambilan Sampel
Sampel  Mikroalga  diambil  dari  air kolam  di  daerah  Sawahan  (00 o 56’35.701” LS  dan  100 o 22’18.091”  BT)  dengan  cara menyaring  3  L  air  kolam.  Mikroalga  yang terkumpul  kemudian  di  simpan  dalam medium  BBM  sebanyak  250  mL  sebagai stok awal.

## Pewarnaan Nile red
Pewarnaan  Nile  red  (1  mg/mL aseton)  dilakukan  terhadap  sampel  dan isolat. mikroalga sebanyak 0,5 mL
disentrifius  dengan  kecepatan  1500  rpm selama 10 menit, kemudian dicuci beberapa kali  dengan physiological  saline. Setelah dicuci, mikroalga diresuspended lagi dengan physiological saline dan
ditambahkan  nile  red  (1:  100  v/v).  Setelah itu dilakukan Inkubasi selama 20 menit dan dilihat  di  bawah  mikroskop  fluorescent (Elumalai et al. , 2011).

## Isolasi Mikroalga
Isolasi mikroalga dilakukan dengan teknik  pipet  kapiler  (Belcher et  al .,  1982). Pipet kapiler dibuat dengan membakar pipet dan  menarik  ujungnya  hingga  membentuk kapiler.  Sel  mikroalga  diambil  dengan menggunakan  pipet  kapiler  dan  dilihat dengan  mikroskop.  Sel  mikroalga  yang telah  diambil  dipindahkan  ke  dalam mikroplate yang telah diisi  dengan  medium BBM  dan  diinkubasi  pada  suhu  30 o C, pencahayaan  lampu  dengan  intensitas ±3000 lux, pH medium= 7. Mikroalga yang diisolasi  dibiarkan  tumbuh  selama  ±  2 minggu  dan  diamati  setiap  hari  dengan mikroskop.

## Kultivasi Mikroalga
Kultivasi mikroalga dilakukan dalam  medium  BBM  (pH=  7)  dengan pemberian  cahaya  secara  berkelanjutan (±3000  lux),  suhu  30 o C,  di  dalam flask culture .

## Pertumbuhan Mikroalga
Pertumbuhan  mikroalga  ditentukan berdasarkan  absorbansinya  (OD 570 )  dan diukur  dengan  menggunakan Microplate Reader (PerkenElmer) setiap hari selama 21 hari.

## Analisis Asam Lemak dengan GC-MS
Isolat  mikroalga  sebanyak  10  mL disentrifius  dengan  kecepatan  3000  rpm selama  10  menit.  Setelah  sentrifius, supernatan dipisahkan. Pelet yang diperoleh dikeringkan  dengan  gas  nitrogen.  Setelah kering,  ditambahkan  5  µL  internal  standar (C19:0)  0,1  mg/mL  untuk  standar  dalam menentukan  jumlah  asam  lemak  pada mikroalga.  Untuk  proses  transesterifikasi, ditambahkan  0,1  mL  HCL-Metanol  0,5  %, dan 0,4 mL dehydrated methanol.
Campuran  divortex  dan  dipanaskan  pada suhu  100 o C  selama  1  jam,  kemudian didinginkan. Lipid diekstrak dengan menggunakan  heksan  sebanyak  5  mL. Campuran  dikocok  selama  1  menit  hingga terbentuk  dua  fasa.  Setelah  itu  dilakukan setrifius  2000  rpm  selama  5  menit,  Fasa heksan  diambil  dan  dipindahkan  ke  tabung baru,  dikeringkan  dengan  gas  nitrogen, kemudian  disimpan  di  dalam  kulkas. Sebelum  analisa  dengan  GC-MS  heksan ditambahkan  lagi  sebanyak  40  µL.  Sampel diinjeksikan  ke  kolom  GC-MS  sebanyak 1µL.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi
Isolasi  mikroalga  ditujukan  untuk memisahkan  satu  spesies  mikroalga  yang akan  dikembangkan  dan  dianalisis  lebih lanjut.  Berbagai  teknik  isolasi  yang  dapat dilakukan seperti teknik  dilusi, penggunaan media  agar,  dan  penggunaan  mikropipet atau pipet kapiler (Andersen et al ., 2005). Isolasi  mikroalga  dilakukan  ber- dasarkan  pengamatan  awal  pada  sampel. Mikroalga  yang  diisolasi  yaitu  mikroalga yang  dominan  tumbuh  pada  sampel, memiliki  pertumbuhan  cepat,  dan  mengan- dung  lipid.  Isolasi  mikroalga  dilakukan dengan  teknik  pipet  kapiler  (Belcher et  al ., 1982).  Dengan  menggunakan  pipet  kapiler pada  isolasi  mikroalga,  maka  spesies  yang ingin  diisolasi  lebih  mudah  diperoleh (Andersen et  al .,  2005).  Mikroalga  yang
diisolasi  diidentifikasi  dengan  micros-kop berdasarkan  morfologinya.  Mikroalga  yang diisolasi diidentifikasi sebagai Scenedesmus quadricauda (Gambar 1) .
Pewarnaan Nile Red Pewarnaan Nile  red dilakukan terhadap  sampel  awal  untuk  mengetahui spesies  mikroalga  yang  memiliki  kan- dungan  lipid.  Hasil  pewarnaan  terhadap sampel  awal  tidak  begitu  jelas.  Hal  ini disebabkan karena  banyaknya  spesies mikroalga  di  dalam  sampel  dan  berada dalam  keadaan  menyatu,  sehingga  sulit memastikan  spesiesnya.  Oleh  karena  itu pewarnaan juga dilakukan terhadap
mikroalga  yang  sudah  diisolasi.  Hasil pewarnaan  Nile  red  pada  isolat  mikroalga dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Berdasarkan hasil  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  isolat memiliki  kandungan  lipid  karena  adanya warna kuning yang terbentuk.
Pewarnaan Nile  red dilakukan untuk  melihat  adanya  lipid  pada  mikroalga secara  kualitatif.  Mikroalga  yang  mengan- dung  lipid  menunjukkan  adanya  warna kuning setelah dilakukan pewarnaan dengan Nile  red .  Interaksi  antara Nile  red dengan  lipid  menyebabkan  pewarnaan kuning pada mikroalga. Lipid netral berupa hidrokarbon dan trigliserida ditandai dengan pembentukan warna kuning,
sedangkan  lipid  polar  ditandai  dengan warna merah (Pedro et al. , 2013).
Gambar 1.Mikroalga yang Diisolasi ( S. quadricauda ) Dilihat dengan Mikroskop Fluorescent (ZEISS, perbesaran 320x).
Gambar  2.  Pewarnaan Nile  red pada mikroalga  yang  diisolasi  ( S.  quadricauda ) Dilihat dengan mikroskop fluorescent (ZEISS, perbesaran 320x).
Penggunaan Nile  red memudahkan skrining  mikroalga  yang  mengandung  lipid sebagai  kandidat  dalam  produksi  biodiesel. Namun,  penggunaan Nile  red tidak  selalu memberikan  gambaran  yang  bagus  tentang kandungan  lipid  pada  mikroalga.  Adakala- nya  keberadaan  lipid  sulit  dideteksi  akibat tidak  terbentuknya  warna  kuning  yang  jelas pada  sel  mikroalga.  Beberapa  penelitian sebelumnya  menyatakan  bahwa  ketidak- berhasilan  metode fluorescent dengan Nile
red dalam penentuan  kandungan  lipid  netral pada  alga  hijau  mengacu  pada  ketebalan, kekakuan  dinding  sel  pada  mikroalga mencegah  pewarnaan Nile  red masuk  ke dalam  sel  untuk  mengikat  lipid  dan memberikan  peningkatan  fluorescent  yang khusus  (Govender  et  al.,  2012;  Chen et  al ., 2009).

## ANALISIS ASAM LEMAK
Komposisi asam lemak yang terkandung  pada  mikroalga  yang  diisolasi ditentukan  dengan  membandingkan  puncak internal  sandar  (C19:0)  dengan  puncak masing-masing  asam  lemak  (Gambar  3). Senyawa  C19:0  merupakan  senyawa  yang ideal  sebagai  internal  standar,  karena senyawa  ini  memiliki  sifat  yang  mirip dengan  analit  lainnya  namun  tidak  mungkin ada pada sampel asam lemak alami (Angulo et  al .,  2008).  Berdasarkan  hasil  tersebut terlihat  bahwa  asam  lemak  terbanyak  yang terdapat  pada Scenedesmus  quadricauda adalah C:18.2.
Gambar 3.Komposisi Asam Lemak Mikroalga pada S. quadricauda yang Diisolasi 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 C16:0 C16 : 1 C16 : 2
C16 : 3 C16 : 4 C18 : 1 C18 : 2 C18 : 3 C18 : 4
Jum la h As am Le m ak ( nm ol ) Jenis Asam Lemak (B2)
Analisis  asam  lemak  pada  genus Scenedesmus yang  telah  dilakukan  pada penelitian  sebelumnya  menunjukkan  jumlah yang  tinggi  terhadap  beberapa  jenis  asam lemak. Scenedesmus sp.  yang  berasal  dari danau di India dan  dikultur pada Bold Bassal’s Medium mengandung  asam  lemak  C18:2 dengan jumlah yang tinggi yaitu sebanyak 29% dari  total  asam  lemak.  Selain  itu,  spesies  ini mengandung  asam  lemak  C16:0  sebanyak 23,2%  (Ratha et  al .,  2013).  Penelitian  lain menunjukkan  hasil  yang  mirip  terhadap  asam lemak  utama  yang  terdapat  pada Scenedesmus sp. Beberapa penelitian juga melaporkan bahwa asam  lemak  yang  tinggi  pada Scenedesmus sp. yaitu  C18:1,  C16:0,  dan  C18:2  (Yoo et  al ., 2010; Kaur et al ., 2012; Breuer et al ., 2012).

## PERTUMBUHAN MIKROALGA
Pertumbuhan mikroalga merupakan hal yang  penting  dalam  produksi  biodiesel. Mikroalga  yang  memiliki  laju  pertumbuhan tinggi  dan  mengandung  lipid  yang  tinggi memiliki  potensi  sebagai  biomassa  dalam produksi  biodiesel.  Mikroalga  yang  diisolasi ditumbuhkan  pada  Bold  Bassal’s  Medium  dan diukur  serapannya  setiap  hari  menggunakan microplate reader (OD 570 ) selama 21 hari untuk melihat  pertumbuhannya.  Pertumbuhan  ketiga
isolat  pada  medium  BBM  diukur  berdasarkan absorbansinya.
Modifikasi
konsentrasi NaNO 3 dilakukan pada BBM untuk melihat konsentrasi nitrogen  yang  dibutuhkan  untuk  tumbuh  dan bertahan  hidup.  Isolat  memiliki  pertumbuhan optimum  pada  konsentrasi  NaNO 3 0,5  g/L dalam medium BBM (Gambar 4).
Pertumbuhan mikroalga merupakan hal yang  penting  dalam  produksi  biodiesel. Mikroalga  yang  memiliki  laju  pertumbuhan tinggi  dan  mengandung  lipid  yang  tinggi memiliki  potensi  sebagai  biomassa  dalam produksi  biodiesel.  Pada  kultivasi  mikroalga diperlukan  berbagai  nutrien  untuk  medium pertumbuhannya. Nutrien utama yang diperlukan  untuk  produksi  mikroalga  adalah nitrogen  dan  phosphor  (Wijffels et  al .,  2010). NaNO 3 merupakan  sumber  nitrogen  yang paling  baik  untuk  pertumbuhan  mikroalga (Ratha et  al .,  2013).  Variasi  jumlah  NaNO 3 dalam  medium  pertumbuhan  mikroalga  pada penelitian  ini  memperlihatkan  peranan  jumlah NaNO 3 terhadap  pertumbuhan  mikroalga. Pertumbuhan  mikroalga  pada  setiap  jumlah NaNO 3 berbeda-beda.
Scenedesmus quadricauda memiliki  pertumbuhan  optimum 0,5 g/L NaNO 3 dalam medium BBM.
Gambar 4 . Grafik Pertumbuhan Mikroalga S. quadricauda pada Berbagai Konsentrasi NaNO 3 dalam BBM
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 O p ti ca l D e n si ty
Waktu (hari) 0.1 g/L 0.25 g/L 0.5 g/L 0.75 g/L 1 g/L
Kaitan  jumlah  nitrogen  dalam  medium dengan  laju  pertumbuhan  mikroalga  juga  telah dilaporkan pada penelitian sebelumnya terhadap  spesies  lain.  Produktivitas  biomassa tertinggi dari mikroalga Neochloris oleoabundans diperoleh  dengan  pemberian nitrogen  yang  bersumber  dari  sodium  nitrat dengan  konsentrasi  10  mM  (Li et  al. ,  2008).
Penelitian  lain  melaporkan  pengaruh  jumlah nitrogen  terhadap  pertumbuhan Scenedesmus obliquus .  Pertumbuhan  mikroalga  tersebut lebih  baik  pada  konsentrasi  nitrogen  0,1  g/L dalam  medium  N11  (Mandal et  al .,  2009). Pertumbuhan Nannochloropsis  gaditana yang dikultur  pada  medium  F2  dengan  variasi konsentrasi  nitrogen  telah  diteliti  sebelumnya dan menunjukkan hasil bahwa Nannochloropsis gaditana tumbuh  baik  pada  konsentrasi  nitrat 8,0 mM (Pedro et al., 2013).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan, dapat  diketahui  bahwa  jumlah  nitrogen  di dalam  medium  mempengaruhi  pertumbuhan mikroalga.  Hal  ini  disebabkan  karena  nitrogen merupakan  komponen  esensial  dalam  sintesis protein yang nantinya digunakan untuk pertumbuhan  mikroalga  (Deng et  al .,  2011). Masing-masing mikroalga membutuhkan jumlah  nitrogen  yang  berbeda  untuk  mencapai pertumbuhan yang optimum.

## KESIMPULAN
Mikroalga yang diisolasi yaitu Scenedesmus quadricauda. Pewarnaan Nile red dapat  dimanfaatkan  untuk  memilih  mikroalga yang mengandung lipid sebagai kandidat untuk produksi  biodesel.  Asam  lemak  yang  paling banyak  pada Scenedesmus  quadricauda adalah C18:1. Scenedesmus  quadricauda memiliki pertumbuhan  optimum  pada  0,5  g/L  NaNO 3 dalam medium BBM.

## DAFTAR PUSTAKA
Andersen,  R.  A.  2005. Algal  Culturing Techniques . Elsevier Academic Press.
Angulo,  J.,  K.  Numberg,  L.  Mahecha,  M. Olivera, D. Dannenberger. 2011.
Manual of lipid extraction, methylation and  gas  chromatography,  for  the  study of different tissues in ruminant
research . Research Institute for Biology of Farm Animals.
Belcher,  H.,  E.  Swale.  1982. Culturing  Algae . Culture  Collection  of  Algae  and Protozoa.
Breuer,  G.,  P.P.Lamers,  D.  E.  Martens,  R.  B. Draaisma,  R.  H.  Wijffels.  2012. The impact  of  nitrogen  starvation  on  the dynamics of
triacylglycerol accumulation in nine microalgae strains. bioresource  Technology.  124: 217-226.
Chen, W., C. Zhang, L. Song, M. Sommerfeld, Q.  Hu.  2009.  A  high  throughput  Nile red method for quantitative measurement  of  neutral  lipids  in microalgae. Journal of Microbiological Methods. 77 (1): 41-47.
Da-Silva,  T.  L.,  A.  Reis,  R.  Medeiros,  A.  C. Oliveira,  L.  Gouveia.  2009.  Oil Production  Towards  Biofuel  from
Autotrophic Microalgae Semicontinuous Cultivations Monitorized  by  Flow  Cytometry. Appl
Biochem Biotechnol. 159 (2): 568-578.
Deng,  X.,  X.  Fei,  Y.  Li.  2011.  The  effects  of nutritional  restriction  on  neutral  lipid accumulation  in Chlamydomonas and Chlorella . African Journal of Microbiology Research. 5(3): 260-270.
Elumalai,  S.,  S.  Baskaran,  V.  Prakasam,  N.  S.
Kumar. 2011. Ultra Structural Analysis and  Lipid  Staining  of  Biodiesel Producing Microalgae Chlorella
vulgaris  Collected  from  Various  Ponds in  Tamil  Nadu,  India. Journal  of Ecobiotechnology. 3(1): 05-07.
Gouveia, L., A.C.Oliveria. 2009. Microalgae as a  raw  material  for  biofuels  production. J  Ind  Microbiol  Biotechnol. 36(2): 269–274.
Govender  T.,  L.  Ramanna,  I.  Rawat,  F.  Bux. 2012.  BODIPY  staining,  an  alternative to  the  Nile  Red  fluorescence  method for the evaluation of intracellular lipids in
microalgae . Bioresource
Technology . 114: 507-511.
Hossain, A. B. M. S., A. Salleh., A. N. Boyce,
P.  Chowdhury,  M.  Naqiuddin.  2008. Biodiesel  Fuel  Production  from  Algae
as Renewable Energy . American Journal of Biochemistry and
Biotechnology . 4 (3): 250-258.
Hu, Q., M. Sommerfeld, E. Jarvis, M. Ghirardi,
M.  Posewitz,  M.  Seibert,  A.  Darzins.
2008.  Microalgal  triacylglycerols  as feedstocks  for  biofuel  production: perspectives  and  advances . The  Plant Journal . 54 (4): 621-639.
Kaur,  S.,  M.  Sarkar,  R.  B.  Srivastava,  H.  K.
Gogoi,  M.  C.  Kalita.  2012.  Fatty  acid profiling and molecular characterization  of  some  freshwater microalgae  from  India  with  potential for biodiesel
production .
New Biotechnology . 29 (3): 332-344.
Li,  Y.,  M.  Horsman,  N.  Wu,  C.  Q.  Lan,  N.
Dubois-Calero.  2008.    Biofuels  from Microalgae. Biotechnol.  Prog 24:  815- 820.
Mandal,  S.,  N.  Mallick.  2009.  Microalgae Scenedesmus  obliquus  as  a  potential source  for  biodiesel  production. Appl Microbiol Biotechnol. 84 (2): 281-291.
Pedro, A. S., C.V.Gonzalez-Lopez, F.G. Acién,
E. Molina-Grima. 2013. Marine
microalgae selection and culture conditions  optimization  for  biodiesel production. Bioresource  Technology . 134: 353–361.
Ratha,  S.  K.,  R.  Prasanna,  R.  B.  N.  Prasad,  C. Sarika,  D.  W.  Dhar,  A.  K.  Saxena. 2013.  Modulating  lipid  accumulation and  composition  in  microalgae  by biphasic nitrogen supplementation.
Aquaculture. 392: 69-76.
Wijffels,  R.  H.,  M.J.  Barbosa.  2010.  An Outlook on Microalgal Biofuels.
Science . 329 (5993): 796-799.
Yoo, C, S. Y. Jun, J. Y. Lee, C. Y. Ahn, H. M. Oh.  2010.  Selection  of  microalgae  for lipid  production  under  high  levels carbon
dioxide . Bioresource
Technology . 101: S71-S74.

## LAMPIRAN 1. Kromatogram GC-MS asam lemak Scenedesmus quadricauda
Gambar 5. Kromatogram GC-MS asam lemak pada Scenedesmus quadricauda (JEOL GCmate)