ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (1) (2012) : 36 – 38
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Ekstrak Etil Asetat Rimpang Bengle ( Zingiber cassumunar Roxb.)
Safira a , Enny Fachriyah a* , Dewi Kusrini a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: enny.fachriyah@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Zingiber cassumunar
Roxb., flavonoid, isolation, identification, toxicity test
Isolation, identification and toxicity test of flavonoid compounds from ethyl acetate extract of bengle rhizome (Zingiber cassumunar Roxb.) have been performed. From the results, it was obtained  the yield of methanol extract as much as 5.75% came from maceration of bengle rhizome powder using methanol. The methanol extract obtained was then extracted using ethyl  acetate  and  obtained  an  ethyl  acetate  extract  of  4.8%.  The  results  of  phytochemical screening of bengle rhizome and ethyl acetate extract showed that both contained flavonoid compounds,  saponins,  steroids  and  triterpenoids.  Then  the  separation  of  flavonoid compounds  from  ethyl  acetate  extract  was  undertook  using  column  chromatography  and preparative TLC. From column chromatography result, 8 fractions (FA-FH) were obtained. The results of preparative TLC fraction D showed the presence of two flavonoid compounds. The  result  of  identification  using  UV-Vis  with  addition  of  Shif  reagent,  it  was  found  the flavonoid  class  of  flavonol  (3-OH  free)  ie  3,5,6,4  'tetrahydroxy  flavonoid  flavonoid  auron group that is 6,7,4' trihidroksi auron. Toxicity test results on the methanol fraction, ethyl acetate  fraction  and fraction D  yields  each  had  a LC50 values  of  41.645  ppm;  56.603 ppm; 143.384 ppm hence these three results had a potency as anti-bacterial.

## A b s t r a k
Kata kunci:
Zingiber cassumunar
Roxb., flavonoid, isolasi, identifikasi, uji toksisitas Telah  dilakukan  isolasi,  identifikasi,  dan  uji  toksisitas  senyawa  flavonoid  dari  ekstrak  etil asetat  rimpang  bengle  (Zingiber  cassumunar  Roxb.).  Dari  hasil  penelitian,  didapatkan rendemen  ekstrak  metanol  sebanyak  5.75%  berasal  dari  maserasi  serbuk  rimpang  bengle menggunakan metanol. Ekstrak metanol yang didapat selanjutnya diekstraksi menggunakan etil  asetat  dan  didapatkan  ekstrak  etil  asetat  sebanyak  4.8%.  Hasil  penapisan  fitokimia rimpang  bengle  dan  ekstrak  etil  asetat  menunjukkan  bahwa  pada  keduanya  mengandung senyawa  flavonoid,  saponin,  steroid  dan  triterpenoid.  Kemudian  dilakukan  pemisahan senyawa  flavonoid  dari  ekstrak  etil  asetat  menggunakan  kromatografi  kolom  dan  KLT preparatif. Dari hasil kromatografi kolom didapatkan 8 fraksi (FA-FH). Hasil KLT preparatif fraksi D memunjukkan adanya dua senyawa flavonoid. Hasil identifikasi menggunakan UV- Vis dengan penambahan pereaksi geser diperoleh flavonoid golongan flavonol (3-OH bebas) yaitu 3,5,6,4’ tetrahidroksi flavonol flavonoid golongan auron yaitu 6,7,4’ trihidroksi auron. Hasil uji toksisitas terhadap fraksi metanol, fraksi etil asetat dan hasil kolom fraksi D masing- masing memiliki nilai LC50 berturut-turut 41,645 ppm; 56,603 ppm; 143,384 ppm sehingga ketiga hasil tersebut memiliki potensi sebagai anti bakteri.

## 1. Pendahuluan
Bengle  atau Zingiber  cassumunar Roxb . merupakan salah  satu  tanaman  obat  yang  dapat  tumbuh  subur  di
wilayah Indonesia. Manfaat rimpang bengle antara lain: aromatikum,  obat  demam,  menutup  luka,  obat  cacing, penenang  pada  anak  kecil,  stimulansia,  karminatif,
penghangat  badan  [1],  anti  radang  [2],  obat  asma, mengurangi rasa sakit atau bersifat analgetik, obat beri- beri [3], sebagai anti oksidan [4, 5]. Selain manfaat yang telah  disebutkan di atas Zingiber  cassumunar Roxb. juga merupakan  salah  satu  tanaman  yang  berfungsi  sebagai anti  bakteri.  Efek  farmakologis  dari  bengle  ini kemungkinan disebabkan oleh salah satu atau gabungan beberapa senyawa kimia yang terkandung di dalamnya, seperti:  saponin,  tannin,  terpenoid,  flavonoid,  fenil butenoid, dan minyak atsiri [6].
Flavonoid  adalah  suatu  kelompok  senyawa  fenol yang  ditemukan  di  alam  dan  hampir  dapat  ditemukan pada setiap jenis tumbuhan. Flavonoid yang terkandung pada  rimpang  bengle  diduga  merupakan  salah  satu senyawa yang ikut berperan dalam proses pengoobatan. Hal ini dikarenakan pada flavonoid mempunyai gugus- gugus  aktif  yang  berperan  dalam  proses  tersebut. Penelitian  dan  publikasi  mengenai  senyawa  flavonoid yang  terdapat  pada  rimpang  bengle  belum  banyak ditemukan. Oleh karena itu perlu adanya penelitian untuk mengetahui  senyawa  flavonoid  yang  terdapat  pada rimpang  tersebut.  Dengan  diketahuinya  senyawa flavonoid  dan  toksisitas  dari  rimpang  bengle  ( Zingiber cassumunar Roxb . ),  maka  rimpang  tersebut  dapat  lebih bermanfaat untuk kesehatan manusia.

## 2. Metode Penelitian

## Alat & Bahan
Peralatan  yang  digunakan  meliputi:  satu  set  alat maserator, satu set alat evaporator putar Buchii , neraca analitis,  batang  pengaduk,  gelas  beaker,  botol  vial, corong  pisah,  labu  ukur,  plat  tetes,  pipet  tetes,  pipet mikro, gelas ukur, tabung reaksi, satu set KLT, satu set kromatografi  kolom,  dan spektrofotometer  UV-Vis. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah rimpang  bengle  yang  dibeli  di  pasar  Johar  Semarang. Bahan kimia yang digunakan adalah metanol teknis, etil asetat,  Pereaksi  Libermann – Burchad  (anhidrida  asam asetat  p.a,  asam  sulfat  pekat  p.a),  Pereaksi  Meyer (merkuri klorida p.a, kalium iodida p.a), larutan 1% ferri klorida,  asam  klorida  pekat,  serbuk  magnesium,  amil alkohol  p.a,  amonia  25%  teknis,  kloroform  p.a,  n- heksana,  aquades,  natrium  hidroksida  2M,  aluminium klorida  5%,  natrium  asetat,  asam  borat,  telur Artemia salina , garam, dan aquades.

## Cara Kerja
Serbuk  rimpang  bengle  dimaserasi  menggunakan metanol  selama  7  x  24  jam.  Ekstrak  yang  didapat dikentalkan  menggunakan  evaporator  putar Buchii. Ekstrak metanol yang didapatkan dipartisi menggunakan etil asetat. Selanjutnya ekstrak etil asetat dievaporasi menggunakan evaporator. Ekstrak etil asetat yang didapat kemudian dilakukan pemisahan menggunakan  kromatografi  kolom  dengan  eluen campuran  yaitu:  metanol:  kloroform:  n-heksan  (1:2:6). Fraksi  yang  keluar dari  kromatografi  kolom ditampung dalam botol vial. Dari fraksi yang menghasilkan intesitas warna paling kuat pada uji flavonoid kemudian dilakukan KLT  preparatif  menggunakan  campuran  eluen  n- heksan:etil  asetat  (2:1).  Setelah  didapatkan  noda-noda
pada  plat  KLT,  kemudian  diuji  kembali  ada  tidaknya flavonoid.  Senyawa  flavonoid  pada  noda  tersebut, kemudian dikerok. Noda yang dihasilkan ternyata belum murni,  selanjutnya  dilakukan  pemisahan  kembali menggunakan  KLT  preparatif  dengan  eluen  n- heksan:kloroform (2:9). Kemudian noda yang intensitas flavonoidnya  paling  kuat  dilakukan  preparatif  ke-3 menggunakan  eluen  n-heksan:etil  asetat  (8:5).  Dari Hasil KLT preparatif diidentifikasi menggunakan UV-Vis dengan  penambahan  pereaksi  geser  (NaOH,  AlCl 3 ,  HCl, NaOAc, H 3 BO 3 ). Uji toksisitas terhadap ekstrak metanol, ekstrak  etil  asetat,  dan  fraksi  D  hasil  kolom  dilakukan dengan metode BSLT.

## 3. Hasil Dan Pembahasan

## Isolasi Flavonoid dalam Rimpang Bengle ( Zingiber cassumunar Roxb.)
Hasil  maserasi  500gram  serbuk  rimpang  bengle menggunakan  metanol  didapatkan  ekstrak  metanol sebanyak 28,76 gram. Hasil ekstraksi menggunakan etil asetat  diperoleh  ekstrak  etil  asetat  sebanyak  24gram. Dari  hasil  uji  fitokimia  didapatkan  bahwa  pada  ekstrak etil  asetat  mengandung  flavonoid.  Hasil  pemisahan terhadap ekstrak etil asetat menggunakan kromatografi kolom  dengan  eluen  metanol:  kloroform:  n-heksan (1:2:6) didapatkan 8 fraksi (A-H) seperti yang dipaparkan pada tabel 1.
Secara kualitatif dari intensitas warna menunjukkan bahwa  FD  mengandung flavonoid.  Dilanjutkan pemisahan menggunakan KLT preparatif didapatkan dua noda  yang  intensitas  warna  flavonoidnya  paling  kuat, yaitu  pada  noda  ke-2  (biru  kekuningan)  dikerok kemudian  diidentifikasi  yang  disebut  isolat  A  dan  noda ke-1 (kuning kehijauaan) dilakukan pemisahan kembali menggunakan  KLT  preparatif  menggunakan  campuran n-heksan:kloroform (2:9) didapatkan 4 noda. Pada noda ke-1  dilakukan  preparatif  kembali  menggunakan  eluen campuran n-heksan:etil asetat (8:5). Didapatkan 4 noda. Noda  ke-2  (kuning)  dikerok  kemudian  diidentifikasi yang disebut isolat B.

## Tabel 1: Hasil uji fitokimia flavonoid dari fraksi hasil
kromatografi kolom Fraksi Botol Uji flavonoid A 1-16 - B 17-28 ++ C 29-55 +
D 56-108 +++
E 109-114 +
F 115-121 + G 122-129 + H 130-144 + Ket: -   : tidak mengandung flavonoid +  : mengandung flavonoid
Identifikasi Flavonoid dalam Rimpang Bengle ( Zingiber cassumunar Roxb.)
Hasil  analisis  isolat  A  dengan  spektrofotometer  uv dapat  diketahui  bahwa  terjadi  absorpsi  cahaya  pada panjang gelombang 270 nm dan 257 nm pada pita II dan 377nm  pada  pita  I.  Menurut  Markham  [7]  senyawa flavonoid  pada  rentang  250-280nm  (pita  II)  dan  350-
385nm (pita I) merupakan senyawa flavonoid golongan flavonol  (3  OH  bebas),  sehingga dimungkinkan  isolat  A adalah  flavonoid  golongan  flavonol  (3  OH  bebas).  Pola oksigenasi atau kemungkinan letak gugus hidroksi pada kerangka flavonol (3 OH bebas) diperoleh dari perubahan panjang gelombang setelah penambahan pereaksi geser (NaOH, AlCl 3 , HCl, NaOAc, H 3 BO 3 ). Dari hasil pergeseran panjang gelombang dapat disimpulkan bahwa kemungkinan  adalah  3,5,6,4’  tetrahidroksi  flavonol. Spektra  UV-Vis  sebelum  dan  setelah  penambahan pereaksi geser ditabulasikan pada tabel 2.
Tabel 2: Data spektra UV-Vis isolat A sebelum dan sesudah penambahan pereaksi geser
Pita I (nm) Pita II (nm) Pergeseran Pita I (nm) Metanol 377 270;257 - +NaOH 402,5 - 25.5 +NaOH 5 menit 403 - 26 +AlCl 3 391,5 257 14 +AlCl 3 +HCl 394,5 257.5 17.5 +NaOAC 377 271,5; 257,5 -
+NaOAC + H 3 BO 3 377 270,5; 257,5 -
Berdasarkan  data  hasil  analisis  isolat  B  dengan spektrofotometer  uv  dapat  diketahui  bahwa  terjadi absorpsi cahaya pada panjang gelombang 259,5 nm pada pita  II  dan  421  nm  pada  pita  I.  Menurut  Markham  [7] senyawa  flavonoid  pada  rentang  230-270  nm  (pita  II) dan 380-430 nm (pita I) merupakan senyawa flavonoid golongan auron, sehingga dimungkinkan isolat B adalah flavonoid  golongan  auron.  Sama  halnya  pada  isolat  A, pada  isolat  B  dilakukan  penambahan  pereaksi  geser untuk  mengetahui  pola  oksigenasinya.  Dari  hasil pergeseran  panjang  gelombang  dapat  disimpulkan bahwa  kemungkinan  adalah  6,7,4’  trihidroksi auron. Spektra  UV-Vis  sebelum  dan  setelah  penambahan pereaksi geser ditabulasikan pada tabel 3.
Tabel 3: Data spektra UV-Vis isolat B sebelum dan sesudah penambahan pereaksi geser PitaI (nm) Pita II (nm) Pergeseran Pita I (nm) Metanol 421 259,5 - +NaOH 460 258 39 +NaOH 5 menit 456,5 258 35,5 +AlCl 3 448,5 259 27,5 +AlCl 3 +HCl 443 259 22 +NaOAC 423 259 2 +NaOAC+H 3 BO 3 422,5 259 1,5
Uji Toksisitas Ekstrak Metanol, Ekatrak Etil Asetat, dan Fraksi D Hasil Kromatografi Kolom
Uji toksisitas ekstrak metanol, ekstrak etil asetat dan fraksi D hasil kromatografi kolom ini dilakukan dengan metode  BSLT  ( brine  shrimp  letality  test ).  Hasil  uji toksisitas fraksi metanol, fraksi etil asetat, dan fraksi D hasil kromatografi kolom didapatkan hasil seperti yang dipaparkan pada tabel 4.
Tabel 4: Hasil uji toksisitas Fraksi LC 50 metanol 41,645 etil asetat 56,603 hasil kolom fraksi D 143,384
Berdasarkan  hasil  yang  ditunjukkan  pada  tabel  4 diketahui bahwa ekstrak metanol, ekstrak etil asetat dan fraksi  D  hasil  kromatografi  kolom  ketiga  hasil  tersebut memiliki potensi sebagai anti bakteri.

## 4. Kesimpulan dan Saran
Dari hasil isolasi ekstrak etil asetat rimpang bengle didapatkan  isolat  A  dimungkinkan  senyawa  flavonoid golongan  flavonol  (3  OH  bebas)  yaitu  3,5,6,4. tetrahidroksi  flavonol  ,  dan  isolat  B  dimungkinkan senyawa  flavonoid  golongan  auron  yaitu  6,7,4’ trihidroksi  auron.  Hasil  uji  toksisitas  terhadap  ekstrak metanol,  ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi  D  hasil kromatografi  kolom  memiliki  potensi  sebagai  anti bakteri.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  AG  Kartasapoetra,  Budidaya  tanaman  berkhasiat obat, PT. Bina Aksara, 1988.
[2]  Y Ozaki, N Kawahara, M Harada, Anti-inflammatory Effect of Zingiber cassumunar ROXB. and Its Active Principles, Chemical & Pharmaceutical Bulletin , 39, 9,
(1991)
2353-2356
http://dx.doi.org/10.1248/cpb.39.2353
[3]  Anchana  Chanwitheesuk,  Aphiwat  Teerawutgulrag, Nuansri  Rakariyatham,  Screening  of  antioxidant activity and antioxidant compounds of some edible plants of Thailand, Food Chemistry , 92, 3, (2005) 491- 497 http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2004.07.035
[4]  R. R. Hafidh, A. S. Abdulamir, F. A. Bakar, F. Abas, F. Jahanshiri, Z. Sekawi, Antioxidant research in Asia in the  period  from  2000-2008, American  Journal  of Pharmacology and Toxicology , 4, 3, (2009) 56-74
[5]  Shinta  Julia  Marennu,  Identifikasi  dan  Penentuan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Rimpang Bengle (Zingiber Cassumunar Roxb.) menggunakan Metode  DPPH,  Departemen  Kimia,  Universitas Diponegoro, Semarang
[6]  S  Majaw,  J  Moirangthem,  Qualitative  and quantitative Analysis of Clerodendron colebrookianum walp. leaves and Zingiber cassumunar Roxb. Rhizomes, Ethnobotanical Leaflets , 2009, 5, (2009) 3
[7]  KR Markham, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, ITB, Bandung, 1988.