Menara Perkebunan 2009, 77(1), 36-46
Perbanyakan in vitro tanaman kina ( Cinchona ledgeriana Moens) melalui tunas aksiler dan apikal
In vitro propagation of cinchona ( Cinchona ledgeriana Moens) from axillary and apical buds
Imron RIYADI  & J. S. TAHARDI
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Bogor 16151, Indonesia

## Summary
The use of the appropriate source of nodal bud  explants  in culture  can  increase  the effectiveness and efficiency of shoot multiplication.  An  experiment  was conducted to  determine   and  compare  the  rate  of in  vitro shoot    multiplication  from  apical  and  axillary buds in cinchona ( Cinchona ledgeriana Moens) and their subsequent growth and development. The  plant  material  used  was Cinchona ledgeriana originating   from  the  Indonesian Tea and Cinchona Research Institute, Gambung,  West  Java.  Explants  were  taken from  apical  and  axillary  nodes  from in  vitro germinated  seedlings.  The  cultures  were incubated  at  26 0 C  and  60%  relative  humidity under a 14-h photoperiod with light intensity of 30 µmol photon/m 2 /sec. provided by cool-white fluorescent  tubes  (TL  40  W)  for  4  -  8  weeks. The parameters observed were shoot multiplication rate, shoot growth and development such as shoot length, leaf  number and  rooting  frequency.    Apical  and  axillary nodes produced shoots at different multiplication rates on  Murashige-Skoog (MS) standard  medium  containing  30  g/L  sucrose and  supplemented  with  1  –  5  mg/L  BA  in combination with 0.1 mg/L IBA.  Furthermore, shoots  or  plantlets  of  cinchona     grew  and developed  on  the  same  media  containing  5  – 10 mg/L IAA combined with 0.5 mg/L IBA.  The results  showed  that  shoot  multiplication  rate was  higher  in  axillary  than  in  apical  nodes. The  highest  multiplication  rate  in  axillary
nodes  was  24.6  shootlets  with  3  mg/L  BA treatment, whereas in apical nodes it  was 17.2 shootlets  with  5  mg/L  BA  treatment  for  eight weeks.   The  highest  rooting  frequency  of cinchona  plantlet  was  90%,  achieved  with 5 mg/L IAA in combination with 0.5 mg/L IBA. The  plantlets  were   successfully  acclimatized and transplanted to the field.
[ Key words: Shoot    multiplication, Cinchona ledgeriana, apical bud,   axillary bud].

## Ringkasan
Sumber  eksplan  berupa  nodus/tunas  pada kultur in  vitro umum  digunakan  untuk  multi- plikasi  tunas.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk membandingkan  tingkat  multiplikasi  antara tunas apikal dengan tunas aksiler tanaman kina Ledger  secara in  vitro. Bahan  tanaman  yang digunakan  adalah  kina  Ledger  ( Cinchona ledgeriana Moens)  yang  berasal  dari  Pusat Penelitian  Teh  dan  Kina,  Gambung,  Jawa Barat.  Eksplan  berupa  nodus/tunas  apikal  dan aksiler asal biji  yang dikecambahkan secara in vitro .  Kultur  tersebut  diinkubasikan  dalam ruang  terang  pada  intensitas  cahaya  30  µmol foton/m 2 /detik  dengan  periode  penyinaran 14 jam pada suhu 26 0 C dan kelembaban relatif
+  60%  selama  4  –  8  minggu.  Parameter  yang diamati adalah perbandingan multiplikasi tunas dan pertumbuhan tunas yang meliputi rata-rata tinggi  tunas,  jumlah  daun  dan  frekuensi

## Riyadi  &  Tahardi
pengakaran.    Nodus  apikal  maupun  aksiler menghasilkan tunas dengan tingkat multiplikasi  yang  berbeda  pada  medium Murashige-Skoog (MS) standar yang mengandung  sukrosa  30  g/L  dan  ditambahkan BA 1 – 5 mg/L dikombinasikan IBA 0,1 mg/L. Selanjutnya tunas/planlet kina tersebut berhasil tumbuh  dan  berkembang  pada  medium  sama yang diberi IAA  5 – 10 mg/L dikombinasikan dengan  IBA  0,5  mg/L.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa  tingkat  multiplikasi  tunas aksiler  lebih  tinggi  dari  pada  tunas  apikal. Multiplikasi tunas aksiler menghasilkan jumlah tunas  rata-rata  tertinggi  sebesar  24,6  tunas  per eksplan pada perlakuan BA 3 mg/L sedangkan multiplikasi tunas apikal tertinggi sebesar 17,2 tunas  per  eksplan  pada  perlakuan  BA  5  mg/L pada  umur  delapan  minggu.    Frekuensi pengakaran  planlet  kina  tertinggi  mencapai 90%  pada  perlakuan  IAA  10  mg/L  yang dikombinasikan dengan IBA 0,5 mg/L. Planlet yang  dihasilkan  telah  berhasil  diaklimatisasi dan dipindahkan ke tempat persemaian lapang.

## Pendahuluan
Kulit batang tanaman kina ( Cinchona spp .) mengandung alkaloid kuinolin ( quinoline )  yang  dapat  digunakan  sebagai obat  penyakit  malaria,  jantung,  kram ( night  cramps )  dan  penimbul  rasa  pahit ( bittering  agent )  serta  pencerah  minuman ringan  (Sumaryono  &  Riyadi,  2005). Permintaan  terhadap  bahan  baku  tersebut oleh  industri  minuman  dan  obat-obatan terus  meningkat,  sehingga  produksi  kulit kina  perlu  ditingkatkan  melalui  perluasan areal tanaman (Widayat, 2000).
Perbanyakan  tanaman  kina  secara konvensional  biasanya  dilakukan  dengan biji,  setek,  sambungan    dan  okulasi. Namun,  penyediaan  bibit  melalui  biji menghasilkan  keragaman  tanaman  yang tinggi  akibat  adanya  penyerbukan  silang. Biasanya turunannya mempunyai
kandungan  kuinolin  yang  lebih  rendah, sedangkan cara setek menghadapi kesulitan  dalam  menginduksi  perakaran- nya. Untuk teknik sambungan dan okulasi selain  diperlukan  batang  bawah  dalam jumlah  besar,  juga  perlu  diperhatikan kesesuaian  batang  bawah  dengan  batang atasnya.    Kendala  lain  yang  dihadapi dalam  penyediaan  bibit  secara  konven- sional  antara  lain  dengan  setek  sambung memerlukan waktu cukup lama yaitu 10 – 12  bulan,  dengan  kematian  mencapai 20-30  %.  Selain  itu,  dengan  teknik pembibitan  secara  konvensional  peme- nuhan  kebutuhan  bibit  jarak  jauh  juga menjadi kendala, kematian akibat
pengangkutan cukup tinggi, yaitu mencapai 50 % (Sukasmono et al ., 1980). Teknik in vitro melalui penggandaan tunas pucuk  dan  tunas  aksiler  merupakan metoda  alternatif  untuk  perbanyakan tanaman  kina  secara  cepat  dan  efisien (Krikorian et  al .,  1982).    Bibit  yang dihasilkan  selain  bersifat  klonal  juga memiliki  kejaguran  yang  lebih  tinggi dibandingkan dengan bibit asal biji, setek, sambungan  ataupun  okulasi  (Cestellanos et al ., 2008).
Penelitian  penggandaan  tunas  aksiler tanaman  kina  secara in  vitro telah dilaporkan oleh Santoso et al. (2004) yang menggunakan medium MS dengan penambahan  BA  pada  konsentrasi  0  – 5  mg/L.  Penggandaan  terbaik  tanaman kina Ledger sebanyak 7 tunas/eksplan dan Succi  sebanyak  3 – 4  tunas/eksplan  yang diperoleh  pada  konsentrasi  BA  sebesar 3  mg/L.    Untuk  pengakaran  planlet, digunakan  medium  B5  dengan  penam- bahan IBA konsentrasi 0 –2,5 mg/L. Hasil pengakaran terbaik diperoleh pada konsentrasi  IBA  2  mg/L.    Selanjutnya, Riyadi  &  Tahardi  (2005)  melaporkan
Perbanyakan in vitro tanaman kina (Cinchona ledgeriana Moens ) melalui tunas ....
hasil  penelitiannya  tentang  pengaruh kombinasi  NAA  dengan  IBA  terhadap pertumbuhan  dan  perkembangan  tunas, jumlah daun dan pengakaran tanaman kina Succi  ( C.  succirubra Pavon ) asal  nodus apikal in  vitro .    Konsentrasi  NAA  yang digunakan adalah 0,05 – 2,0 mg/L sedang- kan untuk IBA adalah 0 – 1,5 mg/L.  Hasil terbaik  diperoleh  pada  konsentrasi  NAA 0,05  mg/L  ditambah  IBA  0,05  mg/L dengan rata-rata pertumbuhan tinggi tunas 36,3  mm,  jumlah  daun  11,5  buah  dan frekuensi  pengakaran  13,1  planlet  selama empat  minggu.    Dari  beberapa  penelitian tersebut,  belum  diketahui  perbandingan tingkat  multiplikasi  antara  tunas  apikal dengan  tunas  aksiler.  Selain  itu,  daya multiplikasi  tunas  kina  tersebut  masih perlu ditingkatkan untuk mengefisiensikan proses penggandaannya.
Sumber  eksplan  untuk  perbanyakan tunas  tanaman  kina  secara in  vitro ,  selain tunas  aksiler  juga  dapat  digunakan  tunas apikal.    Namun,  daya  penggandaan  tunas apikal  dibandingkan  dengan  tunas  aksiler belum diketahui.  Oleh karena itu, penting untuk  diteliti  tingkat  penggandaan  tunas dari  kedua  sumber  eksplan  tersebut. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui tingkat  multiplikasi  tunas  apikal  dan aksiler  tanaman  kina  ( C.  ledgeriana ) secara in vitro .  Selain itu, juga ditentukan pengaruh kombinasi konsentrasi ZPT yang efektif dan efisien untuk pertumbuhan dan perkembangan tunas yang meliputi: jumlah  daun,  tinggi  tunas  dan  tingkat pengakaran planlet tanaman kina tersebut.

## Bahan dan Metode
Bahan  penelitian  yang  digunakan adalah tanaman kina ( Cinchona ledgeriana Moens)    yang  berasal  dari
Pusat Penelitian Teh dan Kina, Gambung, Jawa  Barat.    Biji  kina  yang  berasal  dari buah masak.  Biji disterilkan dalam larutan kloroks  20%  selama  15  menit  diikuti dengan  sterilisasi  dalam  larutan  Dithane M-45  (1  g/L)  selama  dua  jam  sambil dikocok  dengan  kecepatan  80  rpm  di  atas mesin  pengocok.    Biji  dibilas    beberapa kali dengan akuades steril lalu dikecambahkan  dalam  cawan  Petri  yang berisi  kertas  saring  basah.    Biji  dikecam- bahkan  dalam  ruang  dengan  pencahayaan 14 jam/hari selama 2–4 minggu. Kecambah  dipindahkan  ke  medium  padat MS  dengan konsentrasi 50% unsur makro tanpa  ZPT  sampai  tingginya  mencapai +  15  cm.    Kecambah  tersebut  digunakan sebagai  sumber  eksplan  untuk  penelitian multiplikasi tunas dan pembesaran/ pertumbuhan  serta  pengakaran  tunas menjadi planlet.

## Multiplikasi tunas
Sumber  eksplan  yang  digunakan adalah  tunas  apikal  dan  aksiler  dengan panjangnya  +  10  mm  berasal  dari kecambah in vitro . Medium yang digunakan adalah
Murashige-Skoog (1962)  mengandung  3%  sukrosa    dan ditambah  1  –  5  mg/L  BA  yang    masing- masing  dikombinasikan  dengan  0,1  mg/L IBA,  gelrite  2,5  g/L.    pH  medium  diatur menjadi  5,7  sebelum    disterilisasi. Sterilisasi  medium  dilakukan  dengan autoklaf pada suhu 121 0 C dengan tekanan 1,5  atm  selama  20  menit.    Kultur diinkubasikan  di  dalam  ruang  terang  di bawah lampu TL dengan intensitas cahaya 30  µmol  foton/m 2 /detik  dengan  periode penyinaran  14  jam  pada  suhu  26 0 C  dan kelembaban  relatif  +  60%  selama  empat dan  delapan  minggu  yang  masing-masing diulang sebanyak 10 kali. Setelah tercapai

## Riyadi & Tahardi
waktu  kultur,  maka  tunas-tunas  tersebut dipanen  dan  diamati  dengan  memisahkan rerumpunan  tunas  dengan  pisau scalpel sehingga memudahkan dalam peng- hitungan tingkat multiplikasi tunas.

## Pertumbuhan dan pengakaran tunas
Tunas aksiler hasil multiplikasi diseleksi berdasarkan tingkat keseragaman dengan  tinggi  tunas  5  mm  dan  jumlah daun  dua  buah  (satu  pasang)  yang selanjutnya  ditransfer  pada  medium  MS dengan  penambahan  IAA  5  &  10  mg/L masing-masing  ditambah  IBA  0  & 0,5  mg/L  dalam  tabung.    Kemudian  tunas tersebut dikulturkan dalam ruang terang di bawah  lampu  TL  40  W  dengan  intensitas cahaya  30  µmol  foton/m 2 /detik  dengan periode  penyinaran  14  jam  pada  suhu 26 0 C  dan  kelembaban  relatif  +  60%. Tunas  tersebut  dikulturkan  selama  enam minggu  yang  diulang  sebanyak  10  kali, sehingga  dapat  terlihat  pertumbuhan  dan perkembangan  tunas  menjadi  planlet meliputi  jumlah  daun,  tinggi  tunas  dan persentase tunas yang berakar.

## Aklimatisasi planlet
Sebanyak  30  tunas  yang  sudah  ber- akar  banyak  dan  berdaun  cukup  lebat, selanjutnya  ditransplantasi  dan  diaklima- tisasi  pada  campuran  medium  tanah  dan pasir  dengan  perbandingan  1  :  1  yang dimasukkan dalam polibag hitam berdiameter 10 cm (tahap I) selama empat minggu.    Setelah  tunas  mencapai  tinggi lebih  dari  25  cm,  planlet/bibit  tersebut dipindah-kan  ke  polibag  berdiameter  20 cm sampai siap tanam di lapang (tahap II) selama empat minggu.

## Analisis statistik
Data dari parameter multiplikasi tunas apikal  dan  aksiler  maupun  pertumbuhan planlet  yang  meliputi  jumlah  daun  dan tinggi  tunas  diuji  statistik  menggunakan analisis keragaman (Anova) dengan metode  rancangan  acak  lengkap  (RAL). Perbedaan  antar  perlakuan  ditentukan dengan  uji  jarak  berganda  Duncan  pada taraf uji α = 0,05.

## Hasil dan Pembahasan

## Multiplikasi tunas
Tunas  apikal  maupun  aksiler  telah mengalami  multiplikasi  tunas  pada  umur empat  minggu    (Gambar  1b  &  1d)  pada semua  perlakuan  kosentrasi  ZPT  (Tabel 1).    Namun,  tingkat  multiplikasi  pada tunas  apikal  masih  rendah  yaitu  kurang dari  tujuh  buah  dengan  perbedaan  antar perlakuan  tidak  signifikan  pada  semua perlakuan.  Sebaliknya, pada tunas aksiler menghasilkan  tingkat  multiplikasi  tunas lebih  tinggi  yaitu  lebih  dari  tujuh  buah. Tingkat  multiplikasi  tunas  rata-rata  pada nodus  apikal  tertinggi  sebanyak  6,6  tunas yang diperoleh pada perlakuan BA 2 mg/L dikombinasikan  dengan  IBA  0,1  mg/L, sedangkan  pada  nodus  aksiler  mencapai 9,6  tunas  yang  diperoleh  pada  perlakuan BA  1  mg/L  dikombinasikan  dengan  IBA 0,1 mg/L.
Umur  kultur  delapan  minggu  mampu menaikkan tingkat multiplikasi tunas yang cukup  tinggi  pada  nodus  aksiler  maupun apikal  (Gambar  1c  &  1e).    Hasil  analisis statistik dengan uji jarak berganda Duncan pada  α  =    0,05  menghasilkan  perbedaan signifikan antar  perlakuan konsentrasi BA
Perbanyakan in vitro tanaman kina (Cinchona ledgeriana Moens ) melalui tunas ....
Gambar  1.    Kultur in  vitro tanaman    kina  (a)  kecambah in  vitro umur  3-4  minggu  yang  digunakan sebagai sumber eksplan, (b) multiplikasi tunas apikal umur delapan minggu, (c) multiplikasi tunas aksiler umur delapan minggu, (d)  pemisahan tunas dari multiplikasi tunas apikal umur delapan  minggu, (e) pemisahan tunas dari multiplikasi tunas aksiler umur delapan  minggu, (f) planlet berakar sempurna yang siap diaklimatisasi umur enam minggu dan (g) bibit hasil aklimatisasi umur 12  minggu.
Figure 1. In vitro culture of  cinchona   (a). in vitro germinants as explant source, 3-4 weeks (b) apical shoot  multiplication,  eight-week-old,  (c)  axillary  shoot  multiplication,  eight-week-old,  (d) shoots separated from multiplying apical shoot cluster, eight-week-old, (e)  shoots separated from  multiplying  axillary  shoot  cluster,  eight-week-old,  (f)  plantlet  with  roots  ready  to  be acclimated, six-week-old  and (g) plantlets that have been acclimated, twelve-week-old.
baik  pada  nodus  aksiler  maupun  apikal (Tabel 1).  Tingkat multiplikasi tunas rata- rata pada nodus aksiler tertinggi sebanyak 24,6  tunas  yang  diperoleh  pada  perlakuan konsentrasi  BA  3  mg/L  dikombinasikan dengan  IBA  0,1  mg/L,  sedangkan  pada nodus  apikal  hanya  17,2  tunas  yang
diperoleh  pada  perlakuan  konsentrasi  BA 5  mg/L    dikombinasikan  dengan  IBA 0,1  mg/L.  Santoso et al. (2004),  melapor- kan  multiplikasi  tunas  aksiler  tanaman kina  Ledger  terbaik  menggunakan  BA 5  mg/L  sebesar  13,2  tunas  pada  umur  16 minggu  dan  45  tunas  pada  umur  24
a b c d e g f

## Riyadi & Tahardi
minggu  menggunakan  BA  3  mg/L. Sedangkan  untuk  kina Succi ,  multiplikasi tunas  terbaik  diperoleh  pada  BA  3  mg/L sebesar  8,1  tunas  pada  umur  16  minggu dan 25,5 tunas pada umur 24 minggu pada konsentrasi BA sama.
Proses  multiplikasi  tunas  tanaman memerlukan  adanya  hormon  tumbuh eksternal  khususnya  golongan  sitokinin seperti  BA  karena  untuk  mendapatkan tingkat  multiplikasi  tunas  yang  tinggi, sitokinin  internal  masih  kurang.    Staba  & Chung    (1981),  melaporkan  bahwa  dalam menumbuhkan  eksplan  tunas C.  ledge- riana dan C.  succirubra hingga  meng- hasilkan  planlet  sempurna  menggunakan ZPT  berupa  BA  dikombinasikan  IBA. Penggunaan  BA  juga  diaplikasikan  dalam multiplikasi  tunas  tanaman  lain  seperti tanaman pisang abaca (Avivi & Ikrarwati,
2004).  Konsentrasi  BA  terbaik  yang digunakan untuk multiplikasi tunas pisang abaca  sebesar  6  -  7  mg/L  yang menghasilkan tunas rata-rata sebesar 8,4 - 8,6  buah.    Penggunaan  hormon  tumbuh diperlukan  untuk  pengembangan  dan penumbuhan  planlet,  karena  produksi in vivo hormon  tersebut  belum  cukup sehingga perlu penambahan ZPT ke dalam medium  kultur  (Cestellanos et  al., 2008). Selain  hormon  tumbuh,  sumber  tunas  dan umur kultur yang tepat juga mempengaruhi  tingkat  multiplikasi  tunas tanaman  kina.    Hasil  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa,  sumber    tunas  pada nodus aksiler menghasilkan tingkat multiplikasi  tunas  lebih  tinggi  dibanding- kan nodus apikal (Tabel 1 dan 2).  Hal ini mungkin  disebabkan  jumlah  mata  tunas pada nodus aksiler lebih banyak
Tabel 1.  Pengaruh zat pengatur tumbuh (ZPT) terhadap multiplikasi tunas asal nodus apikal dan aksiler tanaman kina setelah empat dan delapan minggu pada medium MS.
Table 1.  Effect of plant growth regulators (PGR) on shoot multiplication from  apical and axillay nodes of cinchona after four and eight- week-old  on MS media.
Kombinasi ZPT Combination of PGR (mg/L) Rata-rata jumlah tunas    ( Average of bud number ) buah/ shootlets
Asal nodus apikal From apical node Asal nodus aksiler From axillary node BA IBA Empat minggu Four- week-old Delapan minggu Eight- week-old Empat minggu Four- week-old Delapan minggu Eight- week-old 1 0,1 4,6 a 7,8 c 9,6 a 11,4 c 2 0,1 6,6 a 9,2 c 6,0 a 15,2 c 3 0,1 5,2 a 13,8 b 4,6 a 24,6 a* 5 0,1 5,4 a 17,2 a 6,2 a 20,6 ab
*)  Angka dalam kolom yang sama diikuti oleh huruf  yang sama berarti tidak berbeda nyata  menurut uji jarak berganda Duncan pada  α = 0,05.
*)  Means in the same column  followed  by the same letters are not  significantly  different  according  to Duncan’s multiple range test  at α = 0.05.
Perbanyakan in vitro tanaman kina (Cinchona ledgeriana Moens ) melalui tunas ....
Tabel  2.    Pengaruh  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT)  terhadap  pertumbuhan  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun tanaman kina setelah enam minggu pada medium MS.
Table 2.  Effects of plant growth regulators (PGR) on shoot length and leaf number in   cinchona after six- week-old  on MS media.
Kombinasi ZPT Combination of PGR (mg/L) IAA IBA Tinggi tunas Shoot length (mm) Jumlah daun Leaf number (buah/ sheets ) 5 0 22,2 a 7,8 a 10 0 21,4 a 7,8 a 5 0,5 16,5 a 7,4 a 10 0,5 16,1 a 6,4 a
*)  Angka dalam kolom yang sama diikuti oleh huruf   yang  sama tidak berbeda nyata  menurut uji jarak berganda Duncan pada  α = 0,05.
*)   Means in the same column followed by the same letters are not significantly different according  to Duncan’s multiple range test  at α = 0.05.
dibandingkan  nodus  apikal  karena  pada satu  nodus  yang  sama  terdapat  dua  mata tunas  untuk  nodus  aksiler  dan  satu  mata tunas  pada  nodus  apikal.    Selain  itu, dengan  adanya  pemotongan  tunas  apikal maka  dominansi  tunas  apikal  terhadap tunas  aksiler  menjadi  hilang  sehingga pertumbuhan  mata  tunas  pada  nodus aksiler  menjadi  pesat.    Menurut  Ruttink et  al .  (2007)  pada  nodus  apikal  terdapat penumpukan  hormon  tumbuh  internal terutama  auksin  yang  mempengaruhi pertumbuhan  tunas.    Akibat  penumpukan hormon  di  bagian  pucuk  tersebut,  maka pengaruh  hormon  di  bagian  mata  tunas aksiler menjadi lemah, sehingga memunculkan  fenomena  yang  disebut  “ dominansi apikal.”

## Pertumbuhan dan pengakaran tunas
Tunas-tunas  hasil  multiplikasi  setelah dikulturkan  selama  enam  minggu  telah menampakkan  pertumbuhan  dan  perkem- bangan cukup pesat yang mencapai lebih
dari  3-4  kali  lipat  dari  awal  kultur  yang tingginya hanya 5 mm (Gambar 1f).  Pada parameter  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun perbedaannya  tidak  signifikan  untuk semua    konsentrasi  ZPT  dengan  uji  jarak berganda Duncan pada α = 0,05  (Tabel 2). Rata-rata  tinggi  tunas  tertinggi  sebesar 22,21  mm  yang  diperoleh  pada  perlakuan IAA  5  mg/L,  sedangkan  jumlah  daun tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  IAA 5  mg/L  ataupun  10  mg/L.    Persentase pengakaran  tertinggi  sebesar  90%  di- peroleh pada perlakuan IAA 10 mg/L.
Pertumbuhan  tinggi  tunas  mulai terlihat  pada  umur  +  5  hari  dan  berkem- bang    cukup  pesat  pada  umur  15  hari setelah  tanam.    Dari  empat  perlakuan konsentrasi  ZPT  yang  diuji,  hasilnya menunjukkan  bahwa  tinggi  tunas  pada semua perlakuan mengalami pertumbuhan dan  perkembangan  yang  cukup  pesat meskipun  perbedaannya  tidak  signifikan. Pemberian  IAA  secara  tunggal  dengan konsentrasi 5 mg/L pada kultur tunas kina telah cukup untuk  memacu  pertumbuhan

## Riyadi & Tahardi
tinggi  tunas.    Peningkatan  konsentrasi IAA dua kali lipat menjadi 10 mg/L tidak meningkatkan laju tinggi tunas. Penambahan auksin lain berupa IBA pada konsentrasi 0,5 mg/L juga tidak meningkatkan laju tinggi tunas (Tabel 2).
Pertumbuhan  dan  pertambahan  daun mulai  terlihat  seminggu  setelah  kultur dengan  adanya  pertumbuhan  tunas  atau bakal  daun  baru.    Pada  awal  kultur,  rata- rata  jumlah  daun  sebesar  empat  buah  per tunas,  dan  enam  minggu  setelah  kultur jumlah  daun  telah  mencapai  rata-rata  7,8 buah per tunas (Tabel 2).  Daun-daun baru dapat  tumbuh  dan  berkembang  sempurna. Bentuk  dan  ukuran  daun  tersebut  sesuai dengan besar tunas yang tumbuh.
Menurut Webster et al. (2006), penggunaan  kombinasi  beberapa  ZPT akan  mempercepat  dan  meningkatkan hasil  induksi  tunas  daun  dalam  kultur. Menurut  Cestellnos et  al .  (2008),  hormon tumbuh  golongan  auksin  (IAA,  NAA, IBA)  sangat  diperlukan  dalam  masa
pertumbuhan organogenesis termasuk pembentukan tunas daun.
Inisiasi  akar  adventif  mulai  terlihat 15  hari  setelah  kultur.    Akar  tersebut tumbuh mulai dari bagian distal tunas atau tepat  pada  permukaan  medium.  Setelah akar  tersebut  berkembang,  akar  baru tumbuh lagi di bagian bawahnya sehingga sistem akar  menjadi besar  atau lebat yang berbentuk  serabut.    Frekuensi  pemben- tukan  akar  tertinggi  sebesar  90%  yang diperoleh  pada  perlakuan  IAA  sebesar 10  mg/L  (Gambar  2).      Pada  konsentrasi IAA  5  mg/L  frekuensi  perakaran  hanya 40%.  Dengan  demikian,  pengaruh  IAA secara tunggal dapat menginduksi perakaran  tanaman  kina  Ledger.    Hal  ini sesuai  dengan  hasil  penelitian  Tahardi (1994),  yang  melaporkan  keberhasilannya dalam menginduksi akar pada tanaman teh ( Camellia  sinensis L)  dengan  meng- gunakan  auksin  (berupa  NAA)  secara tunggal.    Eksplan  yang  digunakan  adalah tunas    aksiler  pada  medium  WP  dengan
Gambar 2. Persentase planlet kina ( C. ledgeriana Moens) yang berakar pada medium pembesaran setelah enam minggu.
Figure 2.  Root percentage of cinchona plantlet ( C. ledgeriana Moens) on  development media after six- week-old.
0 20 40 60 80 100 IAA 5 IAA 10  IAA 5 + IBA 0,5  IAA 10 + IBA 0,5 Konsentrasi ZPT ( PGR concentration) P e rs en ta se p er ak a ra n P er ce n ta g e o f ro o t (% )
Perbanyakan in vitro tanaman kina (Cinchona ledgeriana Moens ) melalui tunas ....
dengan penambahan NAA pada konsentrasi  1  –  3  mg/L  secara  tunggal, mampu  menghasilkan  akar  sampai  82%. Muhit (2007) melaporkan hasil penelitian- nya  dalam  menginduksi  akar  tanaman beberapa  varietas  krisan  yang  meng- gunakan IAA konsentrasi   0,5 mg/L pada medium  MS  berkonsentrasi  50%  unsur makro.  Akar  tanaman  krisan  tersebut tumbuh setelah 1 – 4 minggu.
Penggunaan  IAA  5  mg/L  bersama IBA  0,5  mg/L  dapat  meningkatkan persentase  perakaran.  IAA  pada  konsen- trasi  5  mg/L  secara  tunggal  menghasilkan frekuensi  perakaran  40%,  namun  pada kombinasi  IAA  5  mg/L  dengan  IBA 0,5  mg/L  dapat  meningkat  menjadi  50%. Dengan  demikian,  pemberian  IBA  dalam medium  yang  dikombinasikan  dengan IAA  5  mg/L  dapat  meningkatkan  laju induksi  pengakaran  pada  tanaman  kina Ledger.    Namun,  pada  konsentrasi  IAA 10  mg/L  yang  dikombinasikan  dengan IBA  0,5  mg/L  tidak  dapat  meningkatkan persentase  perakaran  justru  menurunkan. Hal  ini  dimungkinkan  bahwa  untuk induksi  perakaran  tanaman  kina  Ledger menggunakan  IAA  konsentrasi  10  mg/L sudah  melebihi  kebutuhan  optimal  jika ditambahkan  auksin  lagi  seperti  IBA 0,5  mg/L.    Menurut  Holiday  (2004)  dan Cestellmor et  al. (2008),  auksin  sangat diperlukan  dalam  pertumbuhan  organo- genesis  termasuk  dalam  pembentukan akar.    Kombinasi  ZPT  antara  beberapa jenis auksin dengan konsentrasi yang tepat dapat  meningkatkan  hasil  inisiasi  dan induksi akar pada kultur tanaman.

## Aklimatisasi Planlet
Semua  planlet  diseleksi  berdasarkan perkembangan  daun  dan  tunas  serta pertumbuhan  akar  yang  memadai  untuk aklimatisasi.    Planlet    kina  pada  tahap  I tersebut  dapat  tumbuh  dan  berkembang pada medium aklimatisasi yang digunakan sehingga  perlu  dipindah  lagi  ke  polibag yang  ukurannya  lebih  besar  (diameter 20  cm).    Setelah  empat  minggu  bibit tersebut  dikeluarkan  dari  kotak  kaca, kemudian  ditempatkan  di  dalam  rumah kaca  dengan  intensitas  cahaya  yang  lebih tinggi  (tahap  II)  selama  empat  minggu. Pertumbuhan  dan  perkembangan  planlet pada  tahap  II  semakin  cepat  dan  tampak lebih kuat dan jagur (Gambar 1g).
Pada  aklimatisasi  tahap  I  rata-rata tingkat kematian planlet relatif tinggi yaitu +  40%  dari  30  bibit.    Sedangkan  pada aklimatisasi  tahap  II  tingkat  kematian planlet  sudah  menurun  pesat  yaitu  +  10% dari  18    bibit.    Hasil  ini  dimungkinkan karena  pada  medium  tumbuh  dengan perbandingan tanah dan pasir 1:1 merupakan  medium  yang  sesuai  bagi serapan  air,  ketersediaan  unsur  hara maupun  kondisi  lingkungan  perakaran planlet  tanaman  kina.    Sampai  akhir aklimatisasi  tahap  II  planlet  tanaman  kina mampu  tumbuh dan  berkembang  dan siap dipindahkan ke  tempat  persemaian lapang sampai  siap  transplanting  di  lapangan. Pada  umur  16  minggu,  tinggi  bibit  kina mencapai  +  40  cm  dengan  jumlah  daun lebih  dari  10  helai  sehingga  bibit  tersebut telah siap ditransplanting di lapang.

## Riyadi & Tahardi

## Kesimpulan
Tanaman kina  ( Cinchona  ledgeriana Moens)  dapat  diperbanyak  secara in  vitro dengan  multiplikasi  tunas  aksiler  maupun apikal. Pada tunas aksiler, tingkat multiplikasi tertinggi selama empat minggu rata-rata mencapai 11,6  kali (pada perlakuan  BA  1  mg/L  +  IBA  0,1  mg/L), selanjutnya  pada  umur  delapan    minggu meningkat  pesat  menjadi  24,6  kali  (pada perlakuan  BA  3  mg/L  +  IBA  0,1  mg/L). Untuk tunas apikal,  tingkat multi- plikasinya  lebih  rendah  yaitu  6,6  kali selama empat minggu (pada perlakuan BA 2  mg/L  +  IBA  0,1  mg/L)  dan    17,2  kali selama  delapan  minggu  (pada  perlakuan BA 5 mg/L + IBA 0,1 mg/L). Tunas-tunas tersebut mengalami pertumbuhan  dan  perkembangan  normal yang  tercermin  pada  tinggi  tunas,  jumlah daun  dan  sistem  perakaran.    Planlet  kina tersebut  telah  berhasil  diaklimatisasi  pada medium campuran tanah dan pasir dengan perbandingan  1  :  1  dengan  tingkat keberhasilan 75%.

## Daftar Pustaka
Avivi, S. & Ikrarwati  (2004).  Mikropropagasi pisang abaca ( Musa textilis Nee) melalui teknik  kultur  jaringan. Ilmu  Pertanian , 11 (2), 27-34.
Cestellanos,  M.,  B.  Power  &  M.  Davery (2008).    Tissue  culture  technologies  for micropropagation, in  vitro regeneration and  genetic  improvement  of  poinsettia. Propagation  on  Ornamental  Plants , 8 (4), 173-185.
Halliday,  K.  J.    (2005).    Plant  Hormones:  The Interplay  of  Brassinosteroids  and  Auxin. Curr. Biol. , 14 (23), R1008-R1010.
Han,  Y.S.,  R.V.D.  Heijden,  A.W.M.  Lefeber, C.  Erkelens  &  R.  Verpoorte    (2002). Biosynthesis  of  anthraquinonesnin  all cultures  of  Cinchona  ‘robusta’  proceeds via  the  methylerythritol  4-phosphate pathway. Phytochem., 59 (1), 45-55.
Hunter,  C.S.    (1988). Cinchona spp.  :  Micro- propagation,  and  the in  vitro production of  quinine  and  quinidine. In :  Bajaj, Y.P.S. (ed.) Biotechnology in Agriculture and  Forestry . Vol.  4:  Medicinal  and Aromatic  Plants  I .  New  York.  Springer- Verlag,
Krikorian,  A.D.,  M.  Singh  &  C.  E.  Quinn
(1982).    Aseptic  micropropagation  of Cinchona :  Prospects  and  problems. In : Rao,  A.N.  (ed.) Tissue  Culture  of Economically  Important  Plants . Proc. Int’l.  Symp .,  National  Unversity  of Singapore, 28-30 April 1981.
Muhit, A.  (2007).  Teknik produksi tahap awal benih  vegetatif  krisan  ( Chrysanthemum morifolium R). Bul. Teknik Pertanian , 12 (1), 14-18.
Murashige, T.  & F. Skoog  (1962).  A revised medium  for  rapid  growth  and  bioassays with  tobacco  tissue  cultures. Physiol.
Plant ., 15 , 473-479.
Riyadi,  I  &  J.S.  Tahardi    (2005).    Pengaruh NAA  dan  IBA  terhadap  pertumbuhan dan perkembangan tunas kina ( Cinchona succirubra ). J.  Bioteknol.  Pertanian ,
10 (2), 45-50.
Ruttink, T., M. Arend, K. Morreel, V. Storme,
S.  Rombauts,  J.  Fromm,  R.P.  Bhalerao, W.  Boerjan  &  A.  Rohde    (2007).    A Molecular  Timetable  for  Apical  Bud Formation  and  Dormancy  Induction  in Poplar. Plant Cell , 19 , 2370-2390. Santoso, J., N.
Toruan-Mathius, U.  Sastraprawira,  G.  Suryatmana  &
D. Saodah (2004).  Perbanyakan tanaman kina Cinchona  ledgeriana Moens  dan
Perbanyakan in vitro tanaman kina (Cinchona ledgeriana Moens ) melalui tunas ....
C.  succirubra Pavon  melalui  peng- gandaaan tunas aksiler. Menara Perkebunan , 72 (1), 11-25.
Staba,  E.J.  &  A.C.  Chung    (1981).    Quinine and quinidin production by cinchona leaf,
root and unorganized cultures.
Phytochem . 20 (11), 2495-2498. Sukasmono, M., Suhawijaya & A.  L.  Supartoyono    (1980).    Setek sambungan  kina  hasil  pengujian  di lapangan. Warta BPTK., 6 (1/2), 105-109. Sumaryono & I. Riyadi  (2005).  Pertumbuhan biak  kalus  dan  suspensi  sel  tanaman  kina ( Cinchona  ledgeriana Moens). Menara Perkebunan , 73 (1), 1-11.
Tahardi, J.S.  (1994).  Micropropagation of tea through  shoot  proliferation  from  excised axillary buds. Menara Perkebunan , 62 (2), 20-24.
Webster,  S.A.,  S.A.  Mitchell,  W.A.  Reid  & M.  H.  Ahmad    (2006).    Somatic embryogenesis  from  leaf  and  zygotic embryo  explants  of  Blighia  sapida ‘cheese’  ackee. In  Vitro  Cell  Dev.  Biol. Plant , 42 , 467-472.
Widayat,  W.  (2000).    Peluang  pasar  dan perkembangan  industri  kina  Indonesia. In M.  Martono et  al .  (eds.) Pros.  Seminar Sehari Pengembangan Perkebunan Indonesia , Buku  II:  Pengembangan  Kina Nasional. Bandung, 3 Agustus 2000. p. 4- 10.