## OPTIMASI VOLUME PREKURSOR Phenylacetic Acid (PAA) PADA

## PRODUKSI  PENISILIN G DARI Penicillium chrysogenum
Henny Rochaeni 1 , Silvia Rachmy 2
1 Program Studi Analis Kimia, 2 Program Studi Pengolahan Limbah Indsutri Politeknik AKA Bogor
Jalan Pangeran Sogiri No. 283 Tanah Baru, Bogor, Jawa Barat 16154

## Abstrak
Salah  satu  metode  untuk  meningkatkan  produktivitas  penisilin  G  dari jamur Penicillium  chrysogenum adalah  dengan  cara  Optimasi  PAA  karena  komposisi  dari  medium  yang  digunakan  untuk  kultivasi mikroorganisme  dapat  secara  langsung  berpengaruh  pada  fenotip  fisiologis  dan  kinerja  fermentasi mikroorganisme  tersebut.  Sampel  jamur Penicillium  chrysogenum terdiri  atas  koloni  2  dan  3  yang  kemudian diberi  perlakuan  yang  berbeda  dengan  menambahkan  prekursor  PAA  dengan  volume  yang  dibagi  menjadi  3 variasi, yakni PAA 0,5 mL, 0,6 mL, dan 0,7 mL. Semua sampel kemudian dianalisis lebih lanjut dengan metode HP-LC  dan  analisis  gula.  Dari  penelitian  ini  didapatkan  hasil  ,  pemberian  PAA  0,7  menghasilkan  rata-rata penisilin-G dalam jumlah yang paling besar (3787,2 dan 4021,4 ppm) dibandingkan dengan pemberian PAA 0,5 dan  PAA  0,6.  2.  Koloni  3  memiliki  morfologi  yang  mendekati  dengan  morfologi  koloni  ideal  yang  dapat menghasilkan  penisilin-G  di  atas  5000  ppm,  yaitu  berwarna  hijau  gelap  dengan  struktur  yang  menyerupai gunung  dengan  sebuah  kawah  di  bagian  tengah.  Akan  tetapi,  belum  bisa  ditentukan  volume  PAA  yang  dapat digunakan untuk menghasilkan penisilin-G dengan jumlah maksimal.
Kata kunci : Penicillium chrysogenum, penisilin, phenylacetic acid

## Abstract
One  method  to  increase  the  productivity  of  penicillin  G  from  the  Penicillium  chrysogenum  fungus  is  PAA optimization because the composition of the media used for the cultivation of microorganisms can directly affect the physiological phenotype and fermentation performance of these microorganisms. Penicillium chrysogenum fungi  samples  consisted  of  colonies  2  and  3  which  were  then  given  different  treatments  by  adding  PAA precursors with a volume divided into 3 variations, namely PAA 0.5 mL, 0.6 mL, and 0.7 mL. All samples were then  further  analyzed  by  HP-LC  method  and  sugar  analysis.  From  this  study,  the  results  showed  that  offering PAA  0.7  resulted  in  the  largest  average  amount  of  penicillin-G  (3787.2  and  4021.4  ppm)  compared  to  giving PAA  0.5  and  PAA  0.6.  2.  Colony  3  has  a  morphology  that  met  an  ideal  colony  morphology  that  can  produce penicillin-G above 5000 ppm, which is dark green in color with a structure that has the mountain with a crater in the middle. However, it has not been determined the volume of PAA that can be used to produce the maximum amount of penicillin-G.
Keywords: Penicillium chrysogenum, penicillin, phenylacetic acid

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  masih  menempati  urutan teratas  di  Indonesia,  sehingga  kebutuhan penangkal  penyakit  seperti  antibiotika cukup  besar  diperlukan.  Pola  hidup  dan kondisi  lingkungan  yang  buruk  memacu timbulnya  penyakit  baru  yang  pada tingkatannya memerlukan pengobatan
dengan  kebutuhan  akan  penemuan  obat baru.  Antibiotika  yang  beredar  saat  ini perlu  dikembangkan  lebih  lanjut  karena banyak  penyakit  infeksi  berspektrum  luas yang  sulit  disembuhkan  dengan  jenis antibiotika yang ada dikarenakan terjadinya resistensi.
Kebutuhan  antibiotika  yang  meningkat terus  dimana  sebagian  besarnya  masih diimpor  dari  luar  negeri,  hendaknya memacu Indonesia untuk dapat memproduksi  sendiri  antibiotik yang dikembangkan  secara  maksimal  baik menggunakan mikroorganisme yang sudah diketahui maupun menggunakan mikroorganisme  yang  diisolasi  sendiri sehingga  kelak  Indonesia  dapat  mandiri dalam hal produksi antibiotika.
Penicillium  chrysogenum adalah  jamur berfilamen yang digunakan untuk memproduksi  antibiotik  penisilin. Jamur ini  mampu  mensintesis  penisilin  dengan rantai  samping  hidrofobik  khusus  ketika prekursor  yang  sesuai  ditambahkan  pada media  fermentasi.  Penelitian-penelitian sebelumnya  menunjukkan  bahwa  asam fenilasetat  atau phenylacetic  acid (PAA) merupakan prekursor terbaik untuk produksi penisilin ini (Reena & Panneerselvam, 2010). Efektivitas dari prekursor  rantai  samping  tergantung  pada toksisitas  dan  ketahanannya  terhadap oksidasi  oleh P.  chrysogenum .  Pada kondisi  tidak  adanya  prekursor  rantai samping eksogen, hasil metabolisme utama dari P. chrysogenum adalah 6- aminopenicillanic acid (6-APA) dan beberapa    isopenicillin  N.  Dengan  kondisi tersebut, mono-substituted  acetic  acid terdapat pada konsentrasi intraselular  yang
rendah  dan  digunakan  untuk  membentuk sejumlah kecil penisilin seperti benzilpenisilin , 2-pentenylpenicillin , n- amylpenicillin , n-heptylpenicillin dan p- hydroxybenzylpenicillin (Kardos & Demain, 2011).
Golongan    penicillin  dan  turunannya termasuk  dalam  kategori  antibiotik  lini pertama, yaitu antibiotik yang direkomendasikan  untuk  mengatasi  gejala infeksi  awal.  Antibiotik  lini  pertama  ini biasanya  lebih  tua  dan  lebih  murah dibandingkan antibiotik kategori lini kedua yang memiliki cakupan lebih luas terhadap mikroorganisme dibandingkan dengan pendahulunya (Kardos & Demain, 2011).
Saat  ini  antibiotik  golongan  penicillin  dan turunannya  menghilang  sejak  3-4  tahun terakhir  dari  pasaran  obat  di  Indonesia. Obat  tersebut  telah  digantikan  oleh antibiotik golongan sefalosporin dan antibiotik lini kedua lainnya yang harganya lebih  mahal  sehingga  sulit  terjangkau  oleh masyarakat,  terlebih  untuk  beberapa  jenis mikroba,  perbedaan  tingkat  kesuksesan kedua  kategori  antibiotik  tersebut  tidak signifikan (Piccirillo, 2001).
Tujuan dari penelitian ini adalah mempelajari  dan  memahami  pengaruh penambahan  prekursor Phenylacetic  acid (PAA) terhadap produksi  Penisilin-G pada jamur Penicilium chrysogenum dan
menentukan  volume  PAA  optimal  yang dibutuhkan  untuk  menginduksi  produksi Penisilin-G  dari  hasil  analisa  HPLC,  gula total,  dan  perbandingan  morfologi  antar koloni tersebut.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Pembuatan Media Sporulasi (MP-1)
Bahan u/100 mL  u/500 mL  u/1000 mL Yeast extract 0,5 g/L 2,5 g/L 5 g/L Cane molasses 0,75 g/L 3,75 g/L 7,5 g/L Glyserin 0,75 g/L 3,75 g/L 7,5 g/L NaCl 1 g/L 5 g/L 10 g/L CaSO 4 0,025 g/L 0,125 g/L 0,25 g/L Larutan stok  0,1 mL 5 mL 10 mL Bacto agar 2,5 g 12,5 g 25 g H 2 O 100 mL 500 mL 1000 mL
Penimbangan  dilakukan  terhadap masing-masing  bahan  yang  dibutuhkan, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu erlenmeyer  1000  ml  satu  per  satu  sambil dilakukan pengadukan dengan menggunakan magnetic  stirrer di  atas hot plate .  Setelah  semua  bahan  tercampur dengan baik selanjutnya dilakukan pengukuran pH awal dengan menggunakan pH  meter  yang  dikalibrasi,  kemudian dilakukan  penyesuaian  pH  sampai  dengan pH  6,8  dengan  menambahkan  larutan NaOH  2N.  Labu  erlenmeyer  tersebut ditutup dengan sumbat kapas dan alumunium  foil.  Dilakukan  sterilisasi
dengan  autoklaf  selama  30  menit  pada suhu  121 0 C.  Setelah  itu,  media  dituang  ke dalam  cawan  petri  di  dalam  laminar  air flow  dan  dibiarkan  mendingin  pada  suhu ruang.  Media  kemudian  ditutup  dan disimpan dalam wadah plastik yang ditutup rapat sebelum digunakan.

## Pembuatan Media Vegetatif (MP-2)
Bahan g/L g/100 mL g/200 mL g/300 mL CSL 61 6,1 12,2 18,3 Sukrose 20 2 4 6 CaCO 3 5 0,5 1 1,5 H 2 O 1000 mL 100 mL 200 mL 300 mL
Penimbangan  dilakukan  terhadap masing-masing  bahan  yang  dibutuhkan, dimasukkan  ke  dalam  labu  erlenmeyer 1000  ml  satu  per  satu  dengan  H 2 O  dan CaCO 3 terlebih  dahulu  sambil  dilakukan pengadukan dengan menggunakan magnetic  stirr er  di  atas hot  plate .  Diukur pH  awal  dari  seluruh  campuran  bahan dengan menggunakan pH meter yang telah dikalibrasi.  Dilakukan  penyesuaian  pH sampai  didapatkan  nilai  pH  5,8  dengan menambahkan  larutan  NaOH  2N.  Masing- masing  labu  erlenmeyer  250  ml  yang sudah  diisi  dengan  3  buah  glass  beads kemudian  diisi  dengan  20  ml  medium. Ditutup dengan sumbat kapas dan alumunium foil kemudian dilakukan
sterilisasi dengan autoklaf selama 30 menit dengan suhu 121 0 C.

## Pembuatan Media Fermentatif (MP-3)
Bahan g/L CSL 42 Laktosa 130 KH 2 PO 4 4
(NH 4 ) 2 SO 4 4,5 CaCO 3 10
Na 2 SO 4 1,5 H 2 O 1000 mL
Pertama-tama, dilakukan penimbangan tiap-tiap bahan di atas sesuai dengan  kebutuhan  pembuatan.  Kemudian dimasukkan  satu  per  satu  ke  dalam  labu erlenmeyer  atau  gelas  ukur  2000  mL sambil  dilakukan  pengadukan  dengan magnetic  stirrer di  atas hot  plate .  Diukur pH  awal-nya  dan  dilakukan adjust pH sampai  mencapai  nilai  pH  sekitar  5,9 dengan  cara  menambahkan  larutan  NaOH 4N  sedikit  demi  sedikit.  Diambil  30  mL dengan  pipet  ukur  dimasukkan  ke  dalam beberapa labu erlenmeyer sesuai keperluan pembuatan.  Ke  dalam  tiap-tiap  labu erlenmeyer 250 mL sebelumnya ditambahkan  0,15  mL  soybean  oil  dan  3 butir  glass  beads.  Diberikan  3  perlakuan PAA yang berbeda  yaitu 0,5 mL; 0,6  mL; dan  0,7  mL  PAA  Labu  erlenmeyer  ditutup dengan  sumbat  kapas  dan  alumunium  foil untuk  kemudian  disterilisasi  di  autoklaf selama 30 menit dengan suhu 121 0 C.

## Pembuatan Media NA
Dilakukan  penimbangan  NA  sesuai kebutuhan  yang  kemudian  dilarutkan  di dalam  labu  Erlenmeyer  berisi  aquades sesuai  kebutuhan  lalu  distirrer  di  atas  hot plate  sambil  dilakukan  pengukuran  pH awal  sampai  mencapai  pH  7  dengan menambahkan  larutan  NaOH  4N  tetes demi  tetes.  Labu  erlenmeyer  tersebut  lalu ditutup dengan sumbat kapas dan alumunium  foil.  Kemudian  disterilisasi selama  15  menit  dengan  suhu  121 0 C. Selesai  disterilisasi,  dilakukan  penuangan media NA steril ke dalam  beberapa cawan petri  di  dalam  laminar  air  flow.  Setelah media  memadat,  cawan  Petri  ditutup  dan dimasukkan ke dalam kantung plastik.

## Pembuatan  Larutan  NaCl  0,9%  +  2 Tetes Tween
Padatan NaCl 0,9 gram dimasukkan ke  dalam becker  glass 300  mL  dan dilakukan pengadukan dengan menggunakan magnetic  stirrer di  atas hot plate .  Ditambahkan  2  tetes  larutan  Tween ke  dalam becker  glass tersebut.  Setelah semuanya  larut,  diambil  sebanyak  9  ml untuk  dimasukkan  ke  dalam  beberapa tabung  reaksi.  Beberapa  tabung  reaksi  itu kemudian  disterilisasi  selama  15  menit dengan suhu 121 0 C.

## Pembuatan HCl 4N 100 mL
Sebanyak  165,6  ml  larutan  HCl 37%  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  500 ml.  Lalu  ditambahkan  akuades  ke  dalam labu  ukur  sampai  mencapai  batas  tera 100ml.  Pengerjaan  ini  dilakukan  di  dalam ruang asam.

## Pembuatan NaOH 4N 100 mL
Diambil  sebanyak 23,71 ml larutan NaOH  50%,  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur.  Dilakukan  pengenceran  dengan menambahkan  akuades  sampai  batas  tera 100 ml.

## Pembuatan Reagen DNS
3,5  DNS  10,6  gram,  19,8  gram NaOH,  dan  akuades  1416  mL  dicampur dan  dilarutkan  terlebih  dahulu.  Kemudian ditambahkan  306  gram  natrium  kalium tartrat,  7,6  mL  fenol  dan  8,3  gram  Na- metabisulfit. Pengadukan dilakukan dengan  menggunakan magnetic  stirrer di atas hot  plate .  Diambil  sebanyak  3  mL untuk  dititrasi  dengan  0,1  N  HCl  dan indikator  PP  (sampai  berubah  warna  ke warna semula setidaknya membutuhkan 5- 6  mL  HCl).  Jika  kurang  dari  5-6  mL  HCl, maka  ditambahkan  NaOH  sebanyak  2 gram untuk setiap penambahan 1 mL HCl.

## Pembuatan Larutan Alkohol 70%
Ke dalam gelas ukur 100 mL ditambahkan 70 mL alkohol 96% kemudian
ditambahkan  akuades  sampai  batas  tera 100 mL.
Transfer  Spora  dari  Agar  Miring  ke MP-2 dan Uji Sterilitas
Bahan-bahan  yang  perlu  disiapkan diantaranya  larutan  NaCl  0,9%,  agar  slant Penicillium  chrysogenum ,  media  MP-2, media NA, media MP-1, dan alkohol 70%. Alat-alat  yang  digunakan  antara  lain laminar  air  flow ,  pipet  ukur  steril,  bulb, incubator shaker , oose, inkubator 25 0 C dan 37 0 C.
Bahan-bahan  seperti agar  slant , media  MP-1,  media  MP-2,  media  NA  dan larutan  NaCl  0,9%  disemprot  dengan alkohol  70%.  Kemudian  dimasukkan  ke dalam  laminar  air  flow  yang  sudah dipersiapkan  sebelumnya.  Diambil  6  mL larutan  NaCl  0,9%.  Dimasukkan  ke  dalam agar  slant Penicillium  chrysogenum dan digoreskan-goreskan  ujung  pipet  ukur hingga  miselia Penicillium  chrysogenum larut.  Dari  agar  slant  tersebut  diambil sebanyak  1  mL  suspensi  spora  untuk dimasukkan ke dalam media MP-2. Setelah itu, dilakukan uji sterilitas dengan melakukan streak dari slant ke media MP-1 dan  media  NA  di  dalam  cawan  petri. Media  MP-2  yang  sudah  diinokulasikan dengan  kultur Penicillium  chrysogenum terpilih  dishaker selama 7 hari. Sedangkan hasil  streak  pada  media  MP-1  dan  media
NA disimpan di dalam inkubator 25 0 C dan 37 0 C  untuk  kemudian  dilihat  apakah terdapat  kontaminasi  atau  tidak  pada masing-masing kultur.
Transfer  Media  dari  Media  MP-2  ke Media MP-3
Media  MP-2,  media  MP-3,  media MP-1 dan media NA dimasukkan ke dalam laminar  air flow yang  sebelumnya  sudah disiapkan.  Dengan  menggunakan  pipet ukur  steril  sebanyak  1,5  mL  dari  media MP-2  dimasukkan  ke  dalam  media  MP-3. Kemudian,  dilakukan  uji  sterilitas  dengan melakukan streak dari tiap media MP-2 ke dalam  media  MP-1  dan  NA  di  dalam cawan petri.
Analisis  HP-LC  ( High  Performance- Liquid Chromatography )
Media  MP-3  yang  sudah  dishaker selama  10  hari  merupakan  sampel  yang dianalisa untuk menghitung jumlah penisilin-G  yang  dihasilkan  dan  jumlah PAA yang tersisa dalam media MP-3.
Alat-alat  yang  digunakan  antara lain  alat  sentrifuge,  alat  HPLC,  tabung sentrifuge  15  mL,  tutup  tabung sentrifuge , mikropipet  1  mL,  tabung  vial,  dan  tabung erlenmeyer 250 mL.
Tabung-tabung  erlenmeyer 250 mL yang  berisi  media  MP-3  disiapkan.  Dari tiap  tabung  tersebut  diambil  sebanyak  10 mL,  lalu  dimasukan  ke  tabung  sentrifuge
15  mL.  Setelah  ditutup  dengan  tutupnya, semua  tabung  dimasukkan  ke  dalam  alat sentrifuge  yang  diatur  kecepatannya  3500 rpm selama 15 menit. Selesai disentrifuge, diukur  jumlah  padatan  yang  mengendap sebagai  PMV  ( Packed  Mass  Volume ), sementara  itu  supernatannya  dipindahkan ke  dalam  kuvet  sebanyak  400  µL  untuk disentrifuge  kembali  dengan  kecepatan 130000 rpm selama 15 menit. Lalu, 200 µL supernatan  dipindahkan  ke  dalam  tabung vial untuk dianalisa pada alat HPLC. Tiap- tiap  sampel  diatur  tingkat  pengencerannya agar konsentrasi penisilin-G dan PAA yang terukur  masih  berada  dalam  batas  kurva standar yang digunakan.

## Analisis Gula Total
Pertama-tama  sampel  yang  akan diuji  ditimbang  dan  dipindahkan  ke  dalam tabung  reaksi  kecil.  Sesudah  dilakukan penimbangan  ditambahkan  0,5  mL  larutan HCl  4N  ke  dalam  masing-masing  sampel. Waterbath  diatur  untuk  suhu  >96 0 C. Sampel  yang  telah  diberi  penambahan  0,5 mL  HCl  4N  dipanaskan  dalam  waterbath selama  20  menit.  Setelah  20  menit, ditambahkan  1  mL  NaOH  2N  ke  dalam sampel tersebut.
Tabung  reaksi  besar  dipersiapkan dan  ke  dalamnya  dimasukkan  sebanyak  3 mL  dan  6  mL  larutan  DNS  untuk  sampel dan  blanko.  Selain  itu,  labu  ukur  50  mL
dan  corong  juga  dipersiapkan.  Sampel yang  akan  dianalisis  tersebut  dimasukkan ke  dalam  labu  ukur  50  mL,  dibilas sebanyak 3 kali serta ditambahkan akuades hingga  mencapai  batas  tera  50  mL  dan dipindahkan kembali ke tabung reaksi kecil yang sudah dibilas.
Tabung  reaksi  besar  yang  sudah berisi 3 mL larutan DNS ditambahkan 800 µL  akuades  dan  200  µL  sampel  untuk pengenceran  5x.  Sedangkan  untuk  kontrol sampel dilakukan pengenceran 10x dengan ditambahkannya  900  µL  akuades  dan  100 µL kontrol sampel. Kemudian divortex dan dipanaskan  selama  2  menit  di  waterbath dengan suhu > 96 0 C. Blanko yang berisi 6 mL larutan DNS juga dipanaskan.
Terakhir,  dilakukan  pengukuran spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 550 nm untuk mengetahui nilai absorbansi sampel  tersebut.  Setelah  didapatkan  nilai absorbansi  melalui  pengukuran,  data-data yang didapat  diproses  dan dihitung hingga mendapatkan nilai gula totalnya.

## HASIL PENELITIAN
Penicillium chrysogenum merupakan  spesies  jamur  yang  dipakai untuk  memproduksi  antibiotik  penisilin yang sangat penting dalam dunia kesehatan sehingga  dilakukanlah  produksi  secara komersial dengan cara biosintesa, semisintesa  dan  sintesa  kimia  total.
Terdapat  dua  cara  dalam  biosintesa  yaitu surface culture method (jamur P. chrysogenum ditumbuhkan pada permukaan wadah yang berisi media padat yang lembab/cair) dan submerged agitated method (jamur P. chrysogenum ditumbuhkan  dengan  media  cair  yang selalu digoyang) (Abraham et al. , 1941).
Optimasi  PAA  merupakan  salah satu metode untuk meningkatkan produktivitas  penisilin  G  dari  jamur Penicillium chrysogenum karena komposisi  dari  medium  yang  digunakan untuk  kultivasi  mikroorganisme  dapat secara  langsung  berpengaruh  pada  fenotip fisiologis dan kinerja fermentasi mikroorganisme tersebut. Menurut penelitian yang telah dilakukan oleh Reena et  al pada  2011,  penggunaan  Phenylacetic Acid (PAA) sebagai prekursor menunjukkan  hasil  yang  optimal  jika dibandingkan  dengan  Phenyl  ActeAmide (PAAM) dan Phenoxyacetic Acid (POAA).
Dalam  pelaksanaan  penelitian  ini, tujuan utamanya adalah untuk
mengoptimasi volume PAA yang digunakan (dalam percobaan ini digunakan PAA  dengan  volume  0,5  mL,  0,6  mL,  dan 0,7  mL)  terhadap  sampel  koloni  jamur Penicillium chrysogenum (digunakan koloni  2  dan  koloni  3)  untuk  dapat menghasilkan antibiotik penisilin-G sehingga  dapat  dilakukan scale  up di fermentor secara efektif dan efisien.
Pengamatan  morfologi  terhadap
setiap sampel koloni Penicillium chrysogenum yang  dianalisa  dilakukan secara  kasat  mata  atau  menggunakan mikroskop  kemudian  difoto.  Pengamatan morfologi  dilakukan  dua  kali.  Pertama, pengamatan  bentuk  tumbuh  koloni  saat jamur  akan  diambil  sampelnya  dan dipindahkan  dari  agar  miring  tempat penyimpanannya ke medium vegetatif MP- 2.  Pengamatan  ini  dilakukan  secara  kasat mata. Pengamatan morfologi kedua dilakukan  sebelum  sampel  dipindahkan dari  media  vegetatif  MP-2  ke  media
fermentasi MP-3. Pengamatan ini dilakukan dibawah mikroskop untuk memilih sampel yang tepat untuk difermentasi.  Hasil  pengamatan  kemudian difoto  dan  dibandingkan  dengan  literatur. Dari  foto  tersebut  diamati  dan  dicatat  ciri- ciri  morfologinya  apakah  sesuai  atau berbeda  dengan  ciri-ciri  morfologi  sampel koloni Penicillium  chrysogenum yang dapat  menghasilkan  penisilin-G  di  atas 5000 ppm.
Berikut  adalah  hasil  pengamatan morfologi  terhadap  sampel  koloni  2  dan koloni 3.
Tabel 1. Morfologi Penicillium chrysogenum sampel koloni 2 dan 3 No Koloni Gambar Morfologi 1 Koloni 2 Warna : hijau muda Struktur  :  bagian  tengah  tidak tersusun rapi dan belum
menyerupai bentuk kawah.
2 Koloni 3
Warna : hijau tua Struktur  :  bentuk  hampir  bulat sempurna, bagian tengah hampir  rapi  dan  menyerupai
bentuk kawah.
3 Koloni 2.1dalam media vegetatif (MP-2) Perbesaran: 50x 4 Koloni 2.2 dalam media
vegetatif (MP-2)
Perbesaran: 50x
No Koloni Gambar Morfologi 5 Koloni 3.1 dalam media vegetatif (MP-2) Perbesaran: 50x 6 Koloni 3.2 dalam media vegetatif (MP-2) Perbesaran: 50x
Apabila  diamati  dari  perbedaan morfologi  tiap  sampel  koloni  Penicillium chrysogenum  yang  diuji,  berdasarkan Tabel 1 di atas, koloni 3 merupakan koloni yang  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan koloni  2.  Koloni  3  memiliki  struktur morfologi  yang  paling  mendekati  ciri-ciri struktur  morfologi  koloni Penicillium chrysogenum yang  dapat  menghasilkan penisilin-G  di  atas  5000  ppm  menurut Stefaniak et  al .,  (1946)  yaitu  memiliki warna  hijau  gelap  serta  membentuk struktur menyerupai gunung dengan kawah yang ada di tengah.
Masing-masing  sampel  kemudian diberi  perlakuan  yang  berbeda  dengan menambahkan  prekursor  PAA  dengan volume  yang  dibagi  menjadi  3  variasi, yakni  PAA  0,5  mL,  0,6  mL,  dan  0,7  mL. Semua  sampel  kemudian  dianalisis  lebih lanjut  dengan  metode  HP-LC  dan  analisis gula.
Phenylacetic  Acid (PAA)  sampai saat ini merupakan prekursor yang terbukti paling  baik  untuk  menginduksi  sintesis penisiln-G. Percobaan dengan
menggunakan volume PAA yang bervariasi diharapkan  dapat  mengetahui  volume optimal  yang  dapat  mempercepat  dan memperbanyak  produksi  penisilin-G  dari koloni Penicillium  chrysogenum secara efektif dan efisien. (Lee et al ., 1994).
Menurut Baker & Lonergan (2002), dalam suatu senyawa penisilin-G sepertiganya  merupakan  senyawa  PAA. Agar  lebih  jelasnya  perlu  dibandingkan struktur  kimia  masing-masing  yaitu  antara struktur  kimia  penisilin-G  dan  PAA,  serta struktur dasar penisilin pada umumnya.
HP-LC  merupakan  suatu  alat  yang sangat  bermanfaat  dalam  suatu  analisis kimia  serta  memiliki  prinsip  penggunaan yang sama dengan kromatografi lapis  tipis dan kolom. HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang berukuran sangat  kecil  untuk  material  terpadatkan dalam  kolom  yang  mana  akan  memberi luas  permukaan  lebih  besar  berinteraksi antara  fase  diam  dan  molekul-molekul yang melintasinya sehingga memungkinkan terjadinya pemisahan yang
lebih  baik  dari  komponen-komponen dalam campuran (Stefaniak et al ., 1946).
Analisis  HP-LC  dan  gula  total dilakukan  pada  dua  hari  yang  berbeda untuk masing-masing koloni (awal pengerjaan masing-masing koloni berselang  3  hari).  Dari  analisa  dengan menggunakan  HP-LC  ini  didapatkan  data mengenai jumlah penisilin-G yang dihasilkan, PAA yang digunakan, pemakaian  gula  sebagai  sumber  karbon yang  dipakai  serta  pH  dan  PMV  (Packed Mass Volume).
Gambar  1  sampai  Gambar  5 memperlihatkan perbandingan hasil analisis  HP-LC  dan  gula  total  masing- masing perlakuan pada sampel koloni 2.
Gambar  1.  Perbandingan  hasil  penisilin-G  rata- rata pada semua kelompok perlakuan koloni 2
Berdasarkan Gambar 1 dapat
diketahui  bahwa  dari  penelitian  yang dilakukan  pada  koloni  2,  sampel  dengan kandungan PAA sebanyak 0.7 mL menghasilkan  penisilin-G  dengan  nilai rata-rata paling tinggi, yaitu sebesar 3787,2 ppm,  dibandingkan  dengan  sampel  yang diberi  PAA  sebanyak  0,5  mL  dan  0,6  mL. Hal ini mungkin disebabkan oleh
keefisienan metabolisme koloni Penicillium  chrysogenum yang  ada  pada sampel  tersebut.  Dengan  melihat  hasil tersebut,  maka  koloni  2  belum  dapat dilanjutkan scale-up pada fermentor karena jumlah penisilin-G minimal yang dibutuhkan  untuk scale-up adalah  5000 ppm  karenanya  perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  bagaimana  memaksimalkan produksi  penisilin  pada  koloni  2  untuk mendapatkan trend jumlah  penisilin-G seperti  yang  diharapkan.  Perlu  juga dilakukan pembandingan dari segi morfologi  agar  didapatkan  koloni  yang lebih unggul.
Gambar  2  Perbandingan  nilai  PAA  rata-rata saat  HPLC  pada  semua  kelompok  perlakuan koloni 2
Berdasarkan Gambar 2 dapat diketahui  rata-rata  konsentrasi  PAA  yang tersisa  dalam  medium  pada  saat  panen dilaksanakan  dan  dibandingkan  dengan masing-masing kontrolnya. Kelompok perlakuan  dengan  PAA  sebanyak  0,7 memiliki konsentrasi PAA sisa yang paling banyak,  yaitu  1752,4  ppm,  dibanding
kelompok perlakuan lainnya. Dari Gambar 2  dapat  diperkirakan  konsumsi  PAA  pada masing-masing kelompok perlakuan.
Kelompok  perlakuan  yang  mendapatkan PAA sebesar 0,5 mL diperkirakan mengkonsumsi  PAA  sebanyak  2636  ppm. Kelompok perlakuan PAA 0,6 mL diperkirakan  mengkonsumsi  PAA  sebesar 3091,2  ppm.  Konsumsi  PAA  terbesar diperkirakan terjadi pada kelompok perlakuan PAA 0,7 mL yaitu 3988,6 ppm.
Gambar  3  Perbandingan  gula  total  rata-rata pada semua kelompok perlakuan koloni 2
Berdasarkan Gambar 3 dapat diketahui  rata-rata  konsentrasi  gula  total yang  terdapat  dalam  medium  pada  saat panen  dilaksanakan  dan  dibandingkan dengan masing-masing kontrolnya.
Kelompok perlakuan PAA 0,5 pada koloni 2  mengkonsumsi  gula  rata-rata  sebesar 45,62  g/L.  Kelompok  perlakuan  PAA  0,6 dan  PAA  0,7  masing-masing  diperkirakan menghabiskan  gula  rata-rata  sebesar  34,16 g/L  dan  44,94  g/L.  Konsumsi  gula  yang cenderung menurun ini diperkirakan
memiliki hubungan dengan konsumsi PAA dari  masing-masing  kelompok  perlakuan yang  cenderung  meningkat.  Dengan  kata lain,  dapat  dikatakan  bahwa  semakin banyak mikroba mengkonsumsi PAA untuk mensintesis  penisilin-G,  semakin  sedikit sumber  karbon  yang  dikonsumsi  untuk pertumbuhan mikroba tersebut.
Gambar  4.  Perbandingan  pH  rata-rata  pada semua kelompok perlakuan koloni 2
Berdasarkan Gambar 4 dapat diketahui  rata-rata  pH  medium  pada  saat panen  dilaksanakan  dan  dibandingkan dengan  masing-masing  kontrolnya.  pH perlakuan  cenderung  naik  dan  lebih  tinggi daripada  pH  kontrolnya.  Hal  ini  dapat dikarenakan  PAA  dalam  media  tersebut berkurang  karena  ada  yang  di  konsumsi oleh  mikroba.  Seperti  yang  kita  ketahui, phenylacetic  acid (PAA)  bersifat  asam sehingga  semakin  banyak  PAA  yang terkandung dalam medium, semakin rendah  pula  pH  nya.  Hasil  ini  mendukung data  sebelumnya  yang  menyatakan  bahwa koloni  2  yang  diberi  PAA  0,7  mL mengkonsumsi PAA paling banyak
dibandingkan perlakuan PAA 0,5 dan PAA 0,6  karena  kenaikan  pH  dari  koloni  2 perlakuan  PAA  0,7  ini  juga  yang  paling tinggi,  yaitu  naik  sebesar  0,61,  diantara perlakuan  lainnya  yang  hanya  mengalami kenaikan pH sebesar 0,23 dan 0,5.
Gambar  5  Perbandingan  PMV  rata-rata  pada semua kelompok perlakuan koloni 2
Pada  Gambar  5  dapat  terlihat bahwa PMV yang didapat pada saat panen cenderung semakin menurun dari perlakuan dengan PAA 0,5 sampai perlakuan  dengan  PAA  0,7. Packed  Mass Volume (PMV) dapat dikorelasikan dengan massa  sel  mikroba  yang  ada  dalam medium  perlakuan.  Semakin  besar  PMV maka  semakin  besar  massa  sel  mikroba yang  juga  berarti  semakin  banyak  terjadi pertumbuhan sel. Hasil ini dapat dijelaskan oleh  data  sebelumnya  yang  menyatakan bahwa koloni dengan PAA 0,5 mengkonsumsi gula paling banyak diantara koloni  dengan  PAA  0,6  dan  PAA  0,7. Dengan  semakin  banyaknya  gula  yang dikonsumsi  maka  semakin  besar  pula
pertumbuhannya  sehingga  PMV  yang didapat juga semakin besar.
Berdasarkan  Gambar  5  di  atas, sampel  koloni  2  yang  diberikan  PAA  0,5 mL menghasilkan penisilin-G dengan nilai rata-rata  sebanyak  3544,6  ppm  dan  dari Tabel 3.5 tersebut dapat diketahui rata-rata PAA  yang  tersisa  dalam  medium  adalah sebanyak  773  ppm,  sedangkan  rata-rata gula yang tersisa dari sampel koloni 2 PAA 0,5  adalah  sebanyak  46,54  g/L  serta  rata- rata pH dan PMV masing-masing sebanyak 6,44 dan 2,2 mL/10 mL.
Pada  hasil  analisa  koloni  2  yang diberikan  PAA  0,6  mL  menghasilkan penisilin-G dengan nilai rata-rata sebanyak 3404,6 ppm dan rata-rata PAA yang tersisa dalam  medium  adalah  1357,8  ppm, sedangkan  rata-rata  gula  yang  tersisa  dari sampel  koloni  2  PAA  0,6  adalah  sebanyak 58,59  g/L  serta  rata-rata  pH  dan  PMV masing-masing  sebanyak  6,60  dan  2,4 mL/10 mL.
Pada  sampel  koloni  2  dengan prekursor PAA yang ditambahkan sebanyak  0,7  mL,  penisilin-G  rata-rata yang  dihasilkan  sebanyak  3787,2  ppm. Rata-rata PAA  yang tersisa dalam  medium adalah  1757,2  ppm  sedangkan  rata-rata gula yang tersisa dari sampel koloni 2 PAA 0,7  mL  sebanyak  67,81  g/L  serta  rata-rata pH  dan  PMV  masing-masing  sebanyak 6,73 dan 2,6 mL/ 10 mL.
Gambar  6  sampai  Gambar  10 memperlihatkan perbandingan hasil analisis  HP-LC  dan  gula  total  masing- masing perlakuan pada sampel koloni 3.
Gambar  6  Perbandingan  hasil  penisilin-G  rata- rata pada semua kelompok perlakuan koloni 3
Berdasarkan Gambar 6 dapat diketahui  bahwa  dari  penelitian  yang dilakukan  pada  koloni  3,  sampel  dengan kandungan PAA sebanyak 0.7 mL menghasilkan  penisilin-G  dengan  nilai rata-rata paling tinggi, yaitu sebesar 4543,2 ppm,  dibandingkan  dengan  sampel  yang diberi  PAA  sebanyak  0,5  mL  dan  0,6  mL. Hal ini mungkin disebabkan oleh keefisienan metabolisme koloni Penicillium  chrysogenum yang  ada  pada sampel  tersebut.  Dengan  melihat  hasil tersebut,  maka  koloni  3  belum  dapat dilanjutkan scale-up pada fermentor karena jumlah penisilin-G minimal yang dibutuhkan  untuk scale-up adalah  5000 ppm  karenanya  perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  bagaimana  memaksimalkan produksi  penisilin  pada  koloni  3  untuk
mendapatkan trend jumlah  penisilin-G seperti  yang  diharapkan.  Perlu  juga dilakukan pembandingan dari segi morfologi  agar  didapatkan  koloni  yang lebih unggul.
Gambar  7  Perbandingan  nilai  PAA  rata-rata saat  HPLC  pada  semua  kelompok  perlakuan koloni 3
Pada  Gambar  7  dapat  diketahui  rata-rata konsumsi  PAA  masing-masing  perlakuan dibandingkan dengan kontrolnya. Berdasarkan  Gambar  3.8  dapat  diketahui rata-rata  konsentrasi  PAA  yang  tersisa dalam medium pada saat panen dilaksanakan  dan  dibandingkan  dengan masing-masing kontrolnya. Kelompok perlakuan  dengan  PAA  sebanyak  0,7 memiliki konsentrasi PAA sisa yang paling banyak,  yaitu  1385,6  ppm,  dibanding kelompok perlakuan lainnya. Dari Gambar 3.8 dapat diperkirakan konsumsi PAA pada masing-masing kelompok perlakuan. Kelompok  perlakuan  yang  mendapatkan PAA sebesar 0,5 mL diperkirakan
mengkonsumsi  PAA  sebanyak  7266  ppm. Kelompok perlakuan PAA 0,6 mL diperkirakan  mengkonsumsi  PAA  sebesar 7247  ppm.  Konsumsi  PAA  terbesar diperkirakan terjadi pada kelompok perlakuan PAA 0,7 mL yaitu 7880,9 ppm.
Gambar  8  Perbandingan  gula  total  rata-rata pada semua kelompok perlakuan koloni 3
Berdasarkan Gambar 8 dapat diketahui  rata-rata  konsentrasi  gula  total yang  terdapat  dalam  medium  pada  saat panen  dilaksanakan  dan  dibandingkan dengan masing-masing kontrolnya.
Kelompok perlakuan PAA 0,5 pada koloni 3  mengkonsumsi  gula  rata-rata  sebesar 56,6  g/L.  Kelompok  perlakuan  PAA  0,6 dan 0,7 masing-masing diperkirakan menghabiskan  gula  rata-rata  sebesar  54,54 g/L  dan  57,87  g/L.  Karakter  koloni  3 dalam mengkonsumsi gula terlihat berbeda dengan  karakter  yang  dimiliki  oleh  koloni 2.  Pada  koloni  3,  jika  PAA  yang  di konsumsi  sedikit,  maka  konsumsi  gula juga  cenderung  mengikuti  (menjadi  lebih
sedikit),  begitu  pula  sebaliknya.  Hal  ini mungkin  dikarenakan  karakteristik  dari masing-masing koloni yang beragam.
Gambar  9  Perbandingan  pH  rata-rata  pada semua kelompok perlakuan koloni 3
Berdasarkan Gambar 9 dapat diketahui  rata-rata  pH  medium  pada  saat panen  dilaksanakan  dan  dibandingkan dengan  masing-masing  kontrolnya.  pH perlakuan  PAA  0,5  pada  koloni  3  lebih tinggi daripada pH kontrolnya, penyebabnya  mungkin  sama  seperti  yang sudah  dijelaskan  sebelumnya,  bahwa kenaikan pH bisa terjadi akibat PAA dalam media  tersebut  berkurang  karena  ada  yang di  konsumsi  oleh  mikroba.  Sementara  itu penurunan pH dibandingkan dengan kontrolnya pada kelompok percobaan PAA 0,6  dan  PAA  0,7  dapat  disebabkan  oleh banyaknya  asam  laktat  yang  terbentuk sebagai hasil dari terjadinya fermentasi.
Gambar  10  Perbandingan  PMV  rata-rata  pada semua kelompok perlakuan koloni 3
Pada  Gambar  10  dapat  terlihat bahwa PMV yang didapat pada saat panen cenderung semakin menurun dari perlakuan dengan PAA 0,5 sampai perlakuan dengan PAA 0,7. Pada koloni 3, kelompok perlakuan dengan PAA 0,7 yang mengkonsumsi PAA dan gula paling tinggi juga  memiliki  PMV  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan pada koloni 3 lainnya.
Pada  hasil  analisa  koloni  3  yang diberikan  PAA  0,5  mL  menghasilkan penisilin-G dengan nilai rata-rata sebanyak 3149,6  ppm  dan  rata-rata  rata-rata  PAA yang tersisa dalam medium adalah sebesar 559    ppm,  sedangkan  rata-rata  gula  yang tersisa  dari  sampel  koloni  2  PAA  0,6 adalah  sebanyak  81,72  g/L  serta  rata-rata pH  dan  PMV  masing-masing  sebanyak 6,08 dan 2,1 mL/10 mL.
Pada  hasil  analisa  koloni  3  yang diberikan  PAA  0,6  mL  menghasilkan penisilin-G dengan nilai rata-rata sebanyak 4021,4  ppm  dan  rata-rata  rata-rata  PAA
yang  tersisa  dalam  medium  adalah  170,4 ppm, sedangkan rata-rata gula yang tersisa dari  sampel  koloni  2  PAA  0,6  adalah sebanyak  73,68  g/L  serta  rata-rata  pH  dan PMV  masing-masing  sebanyak  6,25  dan 2,1 mL/10 mL.
Pada  hasil  analisa  koloni  3  yang diberikan  PAA  0,7  mL  menghasilkan penisilin-G dengan nilai rata-rata sebanyak 4021,4 ppm dan rata-rata PAA yang tersisa dalam  medium  adalah  sebanyak  1385,6 ppm, sedangkan rata-rata gula  yang tersisa dari  sampel  koloni  2  PAA  0,7  adalah sebanyak  74,79  g/L  serta  rata-rata  pH  dan PMV  masing-masing  sebanyak  6,08  dan 2,2 mL/10 mL.
Dari  hasil  analisa  yang  didapatkan, jumlah  penisilin-G  pada  koloni  2    dapat dilakukan scale-up pada  fermentor  karena jumlah penisilin-G minimal yang dibutuhkan  untuk scale-up adalah  5000 ppm  karenanya  perlu  dilakukan  seleksi koloni  berkelanjutan  untuk  mendapatkan trend jumlah  penisilin-G  seperti  yang diharapkan.  Apabila  dilihat  dari  rentang nilai  pH-nya,  sudah  baik  karena  memiliki rentang pH berkisar antara 6-7.
Hasil  analisa  HP-LC  menunjukkan bahwa  baik  koloni  2  dan  koloni  3 menghasilkan  penisilin-G  rata-rata  pada pemberian  PAA  0,7  mL  (3782,2  ppm)  dan (4543,2  ppm).  Rata-rata  konsentrasi  gula total  koloni  2  dan  3  pada  masing-masing perlakuan  tidak  termasuk  tinggi  yaitu
46,54 g/L, 58,59 g/L, dan 67,81 g/L, 73,68 g/L,  81,72  g/L,  dan  74,79  g/L.  Sumber karbon  akan  dirombak  dan  digunakan untuk membangun massa sel dan membentuk produk. Komposisi dari medium  yang  digunakan  untuk  fermentasi secara langsung berpengaruh pada kemampuan produksi mikroorganisme tersebut,  yang  juga  akan  berdampak  pada efektivitas  dan  efisiensi  dalam  aplikasi industri.  Pada  penelitian  yang  dilakukan oleh  Reena  A.  dan  Panneerselvam  A. (2010),  diketahui  bahwa  dibandingkan dengan glukosa, laktosa merupakan sumber  karbon  yang  lebih  baik  untuk fermentasi  penisilin  ini.    Konsentrasi  gula laktosa  di  dalam  media  fermentasi  harus dipertimbangkan dengan seksama.
Konsentrasi gula total yang lebih tinggi (di atas  200  g/L)  masih  dapat  ditoleransi  oleh ragi  dan  jamur  seperti P.  chrysogenum yang  mampu  merombak  20  –  40  g/L  gula total  menjadi  asam  laktat  pada  saat  proses fermentasi  berlangsung.  Pada  konsentrasi tertentu,  sumber  karbon  dan  katabolit karbon  dapat  menghambat  satu  atau beberapa  enzim  yang  berperan  dalam proses  pembentukan  produk  dalam  hal  ini penisilin-G.  Salah  satu  pendekatan  untuk mencegah  penghambatan  tersebut  adalah dengan memberikan sumber karbon secara terus  menerus  pada  konsentrasi  tertentu  di bawah  konsentrasi  penghambatan  (Shuler dan Kargi, 1992). Menurut Stanbury et al .,
(2016),  konsentrasi  gula  total  yang  paling sesuai  untuk  pertumbuhan  koloni P. chrysogenum adalah diantara 80 – 120 g/L sehingga  dapat  mendukung  pembentukan sporanya  dan  tetap  dapat  menghasilkan penisilin-G.
Konsentrasi ion hidrogen mempengaruhi  penyerapan  nutrisi  dan aktivitas fisiologi mikroba sehingga mempengaruhi pertumbuhan biomassa dan pembentukan  produk.  Ragi  dan  jamur memiliki  pH  optimal  petumbuhan  pada rentang  4,5  –  5,5  namun  pH  optimal pertumbuhan tidak selalu sama dengan pH optimal  pembentukan  produk.  Produksi penisilin-G maksimum oleh P. chrysogenum diperoleh  pada  rentang  pH
6,0  –  7,0.  Berdasarkan  hasil  penelitian, diperoleh  rata-rata  pH  yang  masih  berada dalam  rentang  pH  optimal  6,0  –  7,0  untuk menghasilkan  penisilin-G.    Pengendalian pH  pada  proses  fermentasi  ini  cukup  sulit dilakukan  karena  terjadinya  penurunan konsumsi  glukosa  dan  cepat  terbentuknya asam laktat menyebabkan terjadinya penurunan  pH.  Penambahan  CaCO 3 pada media  MP-2  dan  media  MP-3  dapat mencegah terjadinya penurunan pH (Shuler dan Kargi, 1992).
Pada  proses  fermentasi,  asam fenilasetat (PAA) ditambahkan pada medium fermentasi sebagai senyawa prekursor  pada  pembentukan  penisilin-G. Penambahan  fenilasetat  (PAA)  diharapkan
dapat  mempercepat  dan  memperbanyak produksi  penisilin-G  dari  koloni P. chrysogenum .
Pada  penelitian  ini,  ditemukan bahwa  volume  PAA  0,7  mL  menghasilkan penisilin-G  dalam  jumlah  yang  paling banyak  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan  dengan  volume  PAA  yang  lebih rendah,  akan  tetapi  rata-rata  PAA  dari masing-masing ulangan koloni tidak selalu berada  pada  rata-rata  konsentrasi  PAA
optimal yang diperlukan untuk pembentukan penisilin-G sehingga penisilin-G yang dihasilkan belum mencapai 5000 ppm (Lee et al ., 1994).
Menurut Baker & Lonergan (2002), dalam suatu senyawa penisilin-G sepertiganya  merupakan  senyawa  PAA. Agar  lebih  jelasnya  perlu  dibandingkan struktur  kimia  masing-masing  yaitu  antara struktur  kimia  pensiilin-G  dan  PAA,  serta struktur dasar penisilin pada umumnya.
Gambar 11 Struktur
Kimia (A)
Penisilin
G dan (B) PA
A B
Berdasarkan  Gambar  11  di  atas  tersebut, struktur  kimia  PAA  pada  Gambar  B  juga terdapat  pada  struktur  kimia  penisilin-G (A).  Sehingga  dapat  dikatakan  bahwa sepertiga  dari  senyawa  penisilin-G  adalah senyawa PAA. Secara teoritis apabila ingin dihasilkan penisilin-G sebanyak 5000 ppm maka  jumlah  PAA  yang  ditambahkan haruslah sebesar sepertiganya yaitu sebanyak  1667,67  ppm  senyawa  PAA (Stanbury et al. , 2016).
Sintesis penisilin G dari Penicillium  chrysogenum diinduksi  oleh Phenylacetic  Acid  (PAA)  dan  garamnya. Namun, juga dapat ditekan oleh keberadaan glukosa, laktosa, fruktosa, dan sumber  karbon  lainnya.  PAA  memang berperan untuk menginduksi pembentukan penisilin  G,  namun  PAA  juga  berperan sebagai  penghambat  pertumbuhan  jamur pada  konsentrasi  yang  melebihi  derajat optimumnya  (Rodriguez,  M.E. et  al. ,
1994).
Berdasarkan  informasi  tersebut, maka  konsentrasi  PAA  yang  diberikan pada  semua  perlakuan  sudah  mencukupi bahkan  ada  yang  melebihi  konsentrasi yang dibutuhkan oleh Penicillium chrysogenum untuk menghasilkan penisilin-G  di  atas  5000  ppm.  Meskipun berdasarkan  percobaan  ini  konsentrasi penisilin-G  yang  dihasilkan  pada  semua koloni  adalah  sampel  yang  diberikan  PAA
dengan  volume  0,7  mL,  namun  menurut kami  hasil  ini  kurang  memuaskan  karena apabila dibandingkan dengan sampel  yang diberikan  PAA  dengan  volume  0,5  mL hasilnya tidak berbeda jauh.
Hasil  produksi  penisilin-G  yang tidak  sesuai  dengan  keinginan  bisa  jadi disebabkan  oleh  konsentrasi  PAA  yang diberikan terlalu berlebih sehingga bersifat toksik bagi Penicillium chrysogenum , bisa juga  disebabkan  oleh  metabolisme  dari koloni  sampel  yang  tidak  efektif  dan efisien  sehinggu  diperlukan  seleksi  koloni dan  penelitian  berkelanjutan  agar  hasil produksi  penisilin-G  yang  diharapkan dapat tercapai.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  dapat  diambil dari  penelitian  dalam  penelitian  ini  adalah :
1. Pada koloni 2 dan 3, pemberian PAA 0,7 menghasilkan rata-rata penisilin-G  dalam  jumlah  yang paling besar (3787,2 dan 4021,4 ppm) dibandingkan dengan pemberian PAA 0,5 dan PAA  0,6.  Namun  pengaruh pemberian PAA terhadap produksi  penisilin-G  koloni  2 dan  3  ini  tidak  berbanding lurus.
2. Koloni  3  memiliki  morfologi yang mendekati dengan morfologi  koloni  ideal  yang dapat menghasilkan penisilin-G di  atas  5000  ppm,  yaitu berwarna  hijau  gelap  dengan struktur yang menyerupai gunung  dengan  sebuah  kawah di bagian tengah.
3. Belum  bisa  ditentukan  volume
PAA  yang  dapat  digunakan untuk  menghasilkan  penisilin- G dengan jumlah maksimal.

## DAFTAR PUSTAKA
E.P.  Abraham,  Further  Observations  On
Penicillin,The  Lancet,Volume  238, Issue 6155(1941)Pages 177-189
Kardos,  Nelson  &  Demain,  Arnold.
(2011).  Penicillin:  The  medicine with the greatest impact on
therapeutic outcomes. Applied microbiology and biotechnology. 92. 677-87.  10.1007/s00253-011-3587-
6.
Lee,  K.H.,  Lee,  S.C.  and  Lee,  W.K. (1994),  Penicillin  G  extraction  from model  media  using  an  emulsion liquid  membrane:  A  theoretical model  of  product  decomposition.  J. Chem.  Technol.  Biotechnol.,  59:
365-370.
Piccirillo,  J.F.  (2001).  Impact  of  first-line vs  second-line  antibiotics  for  the treatment  of  acute  uncomplicated sinusitis.  JAMA  :  the  journal  of  the American Medical Association. 286. 1849-56.
Reena  A  and  Panneerselvam  A  (2011) Isolation,Screening  and  optimization of  Penicillium  Chrysogenum,  from the  soil  samples  of  Muthupet Marshes, Tamilnadu. Ind.J.Applied.Microbiol,  13(1):  19- 23
Rodriguez,  M.,  Guereca,  L.,  Valle,  F., Quintero, R. and LópezMunguía, A.,
(1992)  Process  Biochem., 27,  217– 223
Shuler,  M.  &  Kargi,  Fikret.  (2002). Bioprocess Engineering: Basic Concepts. xvi.
Stanbury,  P.F.  &  Whitaker,  A.  &  Hall,
S.J.. (2016). Principles of Fermentation Technology: Third Edition.
Stefaniak, J. J., Gaiey, F. B., Brown, C. S.,
And  Johnson,  M.  J.  (1946)  Pilot plant  equipment  for  submerged penicillin production. In  press.