## VIABILITAS INOKULAN DALAM BAHAN PEMBAWA GAMBUT, KOMPOS, ARANG BATOK DAN ZEOLIT YANG DISTERIL DENGAN IRADIASI SINAR GAMMA Co-60 DAN MESIN BERKAS ELEKTRON
Viability of Inoculant in Peat, Compost, Coconut Shell Charcoal and Zeolite Sterilized by Gamma Irradiation Co-60 and Electron Beam Machine
Sindy Marieta Putri 1) , Iswandi Anas 2) , Fahrizal Hazra 2) dan Ania Citraresmini
3)
1) Laboratorium Bioteknologi Tanah, Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian IPB
2) Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian IPB, Kampus IPB-Dramaga Bogor 3) Pusat Aplikasi Isotop dan Radiasi-Badan Tenaga Nuklir Nasional Indonesia, Pasar Jumat, Jakarta Selatan

## ABSTRACT
Carrier is one of the important factor to determine the quality of biofertilizer. The inoculant carriers should  contain no or  less  microbial  contaminant.  The  purpose  of  this  research  was  to  investigate  viability  of  Azospirillum,  Azotobacter  and Phosphate  Solubilizing  Fungi  inoculants  in  carrier  material  that  were  sterilized  by  Gamma  Irradiation  Co-60  and  Electron Beam  Machine  (EBM).    Each  inoculants  was  injected  to  the  sterilized  peat,  compost,  coconut  shell  charcoal  and  zeolite. Viability of inoculants in  steriled carrier was evaluated at 0, 7, 14, 42 and 70 days after preparation. The stirage was done in incubator  at  25ºC.  The  result  of  viability  of  Azospirillum,  Azotobacter  and  Phosphate  Solubilizing  Fungi  inoculants  on sterilized carrier material by Gamma Irradiation Co-60, EBM and autoclave tended to decline during storage 70 days at room temperature (25 0 C). Viability of Azospirillum inoculants in zeolite sterilized by Gamma Irradiation Co-60 and autoclave gave the highest numbres of viable cells.  Storage of these  inoculants at 25ºC for 70 days only reduce  the number of viable cells by 11.1%.  Viability  of  Phosphate  Solubilizing  Fungi  inoculants  in  coconut  shell    charcoal  or  compost  sterilized  by  Gamma Irradiation Co-60 went down by 99.8% after 70 days. The sterilization of carriers by using  autoclave or Gamma Irradiation Co-60 were better than EBM sterilization. .
Keywords: Carrier, Electron Beam Machine, Gamma Irradiation Co-60, sterilization, viability

## PENDAHULUAN
Biofertilizer atau  yang  lebih  dikenal  dengan  pupuk hayati  merupakan  salah  satu  alternatif  pupuk  yang  dapat mengurangi  ketergantungan  penggunaan  pupuk  kimia. Pupuk hayati merupakan bahan yang mengandung sel hidup atau  mikrob  yang  memiliki  kemampuan  untuk  menambat nitrogen  maupun  melarutkan  fosfat  yang  sukar  larut  (Rao, 1982).  Penggunaan  pupuk  hayati  memanfaatkan  mikrob dalam mempercepat proses mikrobiologi untuk meningkatkan ketersediaan hara sehingga dapat dimanfaatkan oleh tanaman. Selain itu pupuk hayati mampu mengaktifkan  serapan  hara  oleh  tanaman,  mempercepat proses  pengomposan,  memperbaiki  struktur  tanah,  dan menghasilkan  substansi  aktif  yang  dapat  meningkatkan pertumbuhan tanaman (Tombe, 2008).
Beberapa  mikrob  yang  sering  digunakan  dalam pupuk  hayati  antara  lain Azotobacter sp.  dan Azospirillum sp. untuk menambat N 2 dari udara tanpa harus bersimbiosis dengan tanaman. Ada juga Aspergillus sp. yang merupakan mikrob  pelarut  P  yang  sangat  efektif  dalam  melepaskan ikatan  P  yang  sukar  larut.  Keuntungan  lain  dari  mikrob tersebut adalah peningkat ketersediaan hara serta pemantap agregat  tanah.  Berdasarkan  penelitian  Hidayati  (2009), aplikasi  pupuk  hayati  yang  mengandung  mikoriza  dan bakteri  penambat N, bakteri pelarut P dan bakteri pelarut K terbukti telah meningkatkan pertumbuhan jagung.
Menurut  Tombe  (2008),  salah  satu  faktor  yang menentukan  mutu  pupuk  hayati  adalah  kepadatan  populasi inokulan  yang  ada  di  dalamnya.  Ketahanan  hidup (viabilitas)  inokulan  perlu  dipertahankan  dalam  jumlah yang  tinggi  selama  masa  penyimpanan  pupuk  hayati.  Hal tersebut  dilakukan  agar  jumlah  mikrob  inokulan  yang diberikan ke tanah lebih mendominasi mikrob indigenus di dalam  tanah  sehingga  kualitas  pupuk  hayati  mampu memberikan  hasil  yang  optimum  untuk  pertumbuhan tanaman.
Inokulan  dalam  bahan  pembawa  merupakan  kultur sediaan  mikrob  fungsional  seperti Azospirillum sp, Azotobacter sp, Aspergillus sp  dan  lain-lain.  Formulasi inokulan  umumnya  dipersiapkan  dalam  bentuk  cair. Kekurangan  dari  formulasi  cair  tersebut  adalah  rendahnya viabilitas  inokulan  selama  masa  penyimpanan,  sulitnya dalam hal pendistribusian, penyimpanan dan pengaplikasian  di  lapang  (Van  Dyke  dan  Prosser,  2000). Penggunaan  bahan  pembawa  menjadi  solusi  untuk mengatasi  kekurangan  dari  formulasi  inokulan  cair.  Untuk itu  bahan  pembawa  menjadi  unsur  yang  penting  dalam menentukan  kualitas  pupuk  hayati  karena  diharapkan mampu mempertahankan viabilitas dan menjaga keefektifan mikrob inokulan selama masa penyimpanan.
Bahan  pembawa  yang  umum  digunakan  berupa bahan  organik  seperti  gambut,  arang,  kompos,  zeolit  dan sebagainya.  Penginokulasian  inokulan  ke  dalam  bahan
Putri, S. M., I. Anas, F. Hazra, dan A.  Citraresmini.  2010. Viabilitas inokulan dalam bahan pembawa gambut, kompos, arang batok dan zeolit yang disteril dengan iradiasi sinar gamma Co-60 dan mesin berkas elektron. J. Tanah Lingk., 12 (1):23-30

## Viabilitas Inokulan dalam Bahan Pembawa (S. M. Putri)
pembawa bertujuan  untuk  menyesuaikan  lingkungan hidup mikrob  inokulan  sebelum  diberikan  ke  tanah.  Salah  satu syarat  bahan  pembawa  yang  baik  adalah  steril  dari  mikrob indigenus  sehingga  inokulan  mampu  bertahan  hidup  tanpa adanya  persaingan  dengan  mikrob  indigenus  dalam  bahan pembawa.
Sterilisasi  bahan  pembawa  merupakan  tahap  yang harus  dilakukan  sebelum  penginokulasian.  Pemilihan metode  sterilisasi  diperlukan  agar  bahan  pembawa  tidak mengalami  kerusakan  yang  dapat  mempengaruhi  viabilitas inokulan.  Metode  sterilisasi  bahan  pembawa  yang  umum digunakan  adalah  metode  fisik  yaitu  meliputi  pemanasan, pengeringan  dan  radiasi.  Metode  sterilisasi  pemanasan (panas  lembab)  biasanya  menggunakan  autoklaf  yang memanfaatkan  panas  dalam  suatu  ruangan  bertekanan dengan  temperatur  mencapai  121 0 C  selama  60  menit. Autoklaf memiliki kekurangan yaitu menimbulkan kerusakan  sifat  kimia  bahan  pembawa  dan  menghasilkan unsur  beracun.  Menurut  Toharisman  (1989)  intensitas sterilisasi tanah menggunakan autoklaf dapat meningkatkan kelarutan  Fe,  Mn  dan  Zn  yang  tinggi  sehingga  dapat meracuni mikob yang ada di dalamnya.
Metode  sterilisasi  fisik  lainnya  adalah  radiasi. Iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  memanfaatkan  gelombang elektromagnetik  (sinar  Gamma),  sedangkan  Mesin  Berkas Elektron  (MBE)  memanfaatkan  elektron  berenergi  tinggi untuk  meradiasi  bahan  pembawa.  Radiasi  sinar  Gamma atau  elektron  berenergi  tinggi  disebut  juga  radiasi  pengion karena  energi  radiasi  yang  terserap  oleh  benda  akan berinteraksi  dengan  benda  tersebut  dan  menimbulkan  efek biologi  yang  mengubah  proses  kehidupan  normal  dari  sel hidup.  Pada  mikrob  dapat  berpengaruh  terhadap  DNA sehingga  mikrob  tidak  dapat  membelah  diri  akibat perubahan  yang  ditimbulkan  oleh  radiasi  pengion (Hilmy,1980).
Metode sterilisasi radiasi menggunakan dosis radiasi yang merupakan besaran energi yang diabsorbsi oleh suatu bahan. Dosis optimum ditentukan terlebih dahulu  sehingga dalam  penggunaannya  mampu  mematikan  mikrob  baik  itu bakteri  maupun  fungi.  Dosis  serap  (D)  didefinisikan sebagai  rata-rata  energi  yang  diserap  bahan  per  satuan massa  bahan  tersebut.  Satuan  yang  digunakan  saat  ini adalah  Gray  (Gy)  dimana  1  Gray  (Gy)  =  1  Joule  kg -1 sehingga  diperoleh  hubungan  bahwa  1  Gray  (Gy)  =  100 rad. Menurut Kume (2005), radiasi Sinar Gamma memiliki efektivitas  yang  berbeda  dalam  mematikan  mikrob  seiring dengan  besaran  dosis  yang  diberikan.  Semakin  besar  dosis yang  diberikan  maka  daya  mematikan  mikrobnya  semakin besar pula.
Tujuan  penelitian  adalah  mengevaluasi  viabilitas inokulan Azospirillum , Azotobacter dan  Fungi  Pelarut Fosfat dalam bahan pembawa gambut, kompos, arang batok dan  zeolit  yang  telah  disterilisasi  dengan  metode  iradiasi Sinar  Gamma  Co-60,  MBE  dan  autoklaf  selama  masa penyimpanan.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian
dilaksanakan
di
Laboratorium Bioteknologi  Tanah  Departemen  Ilmu  Tanah  dan
Sumberdaya  Lahan,  Institut  Pertanian  Bogor.  Proses sterilisasi  bahan  pembawa  menggunakan  iradiasi  Sinar Gamma  Co-60  dan  Mesin  Berkas  Elektron (MBE) dilakukan  di  Pusat  Aplikasi  Isotop  dan  Radiasi-Badan Tenaga Nuklir Nasional Indonesia (PATIR-BATAN), Pasar Jumat, Jakarta Selatan.
Bahan  yang  digunakan  adalah  bahan  pembawa berupa  gambut  yang  berasal  dari  Kalimantan  Selatan; kompos yang diproduksi di BATAN; arang batok dan zeolit yang berasal dari Cikembar, Sukabumi (Jawa Barat). Isolat yang  digunakan  adalah Azospirillum , Azotobacter dan Fungi Pelarut Fosfat. Alat yang digunakan untuk sterilisasi bahan pembawa adalah iradiasi Sinar Gamma Co-60, MBE dan autoklaf.

## Persiapan Bahan Pembawa
Masing-masing  bahan  pembawa  dihaluskan  hingga berukuran  partikel  0.5  mm  –  1.5  mm.  Bahan  pembawa terlebih  dahulu  dianalisis  sifat  kimianya  untuk  mengetahui karakteristik  bahan.  Pengukuran  pH-H 2 O  dilakukan menggunakan  pH-meter  dengan  perbandingan  sampel  dan aquades  sebesar  1:10.  Pengukuran  kadar  air  dilakukan melalui  pengovenan  dengan  suhu  105 0 C  selama  24  jam untuk mengetahui kelembaban bahan pembawa.
Masing-masing  bahan  pembawa  dikemas  ke  dalam plastik sebanyak 10 g. Hal ini bertujuan untuk memudahkan dan  meminimalkan  kontaminasi  pada  saat  melakukan  seri pengenceran.  Bahan  pembawa  dikemas  ke  dalam  plastik tahan  panas  untuk  sterilisasi  autoklaf.  Sterilisasi  iradiasi Sinar  Gamma  Co-60  dan  MBE  menggunakan  plastik  HDP ( High  Density  Plastic )  kemudian  kemasan  disegel  dengan rapat menggunakan sealer.

## Proses Sterilisasi Bahan Pembawa
Sterilisasi menggunakan autoklaf dilakukan sebanyak  dua  kali  selama  dua  hari  berturut-turut  dengan suhu  mencapai  121 0 C  selama  60  menit.  Hal  ini  bertujuan untuk memberikan jeda waktu spora berkecambah sehingga pada  saat  pemanasan  berikutnya  dipastikan  semua  mikrob dapat  terbunuh.  Bahan  pembawa  sebanyak  10  g dimasukkan ke dalam plastik tahan panas kemudian ditutup menggunakan  klip.  Setelah  selesai  proses  autoklaf,  uap  air dalam  plastik  dibiarkan  mengering  kemudian  disegel dengan  rapat  menggunakan sealer pada  akhir  proses autoklaf hari kedua.
Sterilisasi  Iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  dilakukan dengan  cara  sejumlah  bahan  pembawa,  yang  masing- masing telah dikemas dalam plastik HDP sebanyak 10 g per kemasan bahan pembawa, ditempatkan menjadi satu dalam satu wadah kontainer lalu diletakkan di dalam ruang radiasi atau irradiation chamber . Ruang radiasi tersebut kemudian diberikan  sinar  gamma  yang  berasal  dari  sumber  radiasi. Sumber  radiasi  tersebut  dikendalikan  oleh  operator  dari ruangan yang berbeda. Dosis radiasi yang diberikan adalah 50 kGy untuk semua sampel.
Bahan  pembawa  yang  disterilisasi  menggunakan MBE  permukaannya  diratakan  kurang  dari  1  cm  pada  saat diletakkan  di  wadah  yang  akan  melewati  MBE.  Hal  ini perlu  dilakukan  karena  pada  MBE  hanya  terjadi  tumbukan
radiasi  pada  permukaan  bahan  yang  akan  dipancarkan. Wadah  tersebut  kemudian  masuk  ke  dalam  ruang  berkas elektron dengan jalur khusus yang akan melewati pancaran elektron.  Sampel  bahan  pembawa  dilewatkan  di  bawah mesin  berkas  elektron  sebanyak  5  kali  yang  setara  dengan dosis 50 kGy.

## Produksi Inokulan
Isolat Azospirillum dan Azotobacter diperbanyak menggunakan  100  ml Nutrient  Broth kemudian  dikocok selama  tiga  hari  dengan  kecepatan  120  rpm  pada  suhu kamar. Fungi Pelarut Fosfat (FPF) diperbanyak menggunakan 100 ml Pikovskaya cair yang dikocok selama tiga  hari  dengan  kecepatan  120  rpm  pada  suhu  ruang setelah  itu  ditumbuhkan  dalam  media Potato  Dextrose
Agar .  Spora  fungi  yang  tumbuh  dalam  media  tersebut kemudian dipanen.
Penetapan populasi masing-masing inokulan dilakukan untuk mengetahui jumlah sel awal inokulan yang dimasukkan  ke  dalam  bahan  pembawa  yang  telah disterilisasi  oleh  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60,  MBE  dan autoklaf.  Hasil  penetapan  populasi  inokulan Azospirillum , Azotobacter dan  Fungi  Pelarut  Fosfat  (FPF)  dapat  dilihat pada  Tabel  1.  Jumlah  sel  inokulan  yang  dimasukkan  ke dalam bahan pembawa gambut dan kompos berbeda dengan jumlah  sel  inokulan  yang  dimasukkan  ke  dalam  bahan pembawa arang batok dan zeolit. Hal tersebut terjadi karena produksi  inokulan  yang  dilakukan  berbeda  sehingga  hasil jumlah sel yang didapatkan berbeda pula.
Tabel 1.  Jumlah sel inokulan Azospirillum , Azotobacter dan fungi pelarut fosfat yang dimasukkan ke dalam bahan pembawa
Bahan Pembawa Mikrob Jumlah sel (spk ml -1 ) Gambut dan Kompos Azospirillum 1.40 x 10 7 Azotobacter 9.56 x 10 8 Fungi Pelarut Fosfat 6.88 x 10 7 Arang batok dan Zeolit Azospirillum 4.50 x 10 5 Azotobacter 4.78 x 10 9 Fungi Pelarut Fosfat 3.44 x 10 8 Proses Inokulasi
Proses inokulasi Azospirillum , Azotobacter dan FPF ke  dalam  bahan  pembawa  dilakukan  secara  aseptik  di laminar  flow .  Sebanyak  5  ml  inokulan  dimasukkan  ke dalam  kemasan  yang  berisi  10  g  bahan  pembawa menggunakan  jarum  suntik  setelah  itu  ditutup  sehingga tidak  memungkinkan  terjadinya  kontaminasi.  Selanjutnya bahan pembawa dalam kemasan diratakan hingga homogen dan  diberi  label  sesuai  dengan  nama  bahan  pembawa  dan jenis  inokulannya.  Kemasan-kemasan  bahan  tersebut dimasukkan ke dalam kotak dan disimpan di dalam ruangan pada suhu kamar (25 º C).

## Uji Viabilitas Inokulan Selama Masa Penyimpanan
Pengujian  dilakukan  selama  masa  penyimpanan dengan  periode  pengujian  pada  hari  ke-7,  hari  ke-21,  hari ke-42  dan  hari  ke-70.  Uji  viabilitas  inokulan  dilakukan dengan  cara  memasukkan  satu  kemasan  bahan  pembawa (10  g)  ke  dalam  90  ml  larutan  fisiologis  (NaCl  0.85%), kemudian dikocok selama 15 menit supaya larutan menjadi homogen  dan  setelah  itu  membuat  seri  pengenceran. Masing-masing  inokulan  ditumbuhkan  pada  media  NFB untuk Azospirillum ,  NFM  untuk Azotobacter dan
Pikovskaya untuk  FPF  lalu  diinkubasi  selama  3  hari  untuk Azotobacter dan  FPF,  14  hari  untuk Azospirillum . Penghitungan koloni dilakukan setelah diinkubasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  Viabilitas Azospirillum dalam  Bahan  Pembawa Steril
Viabilitas Azospirillum dalam  bahan  pembawa arang  batok,  zeolit,  gambut  dan  kompos  yang  telah disterilisasi  menggunakan  metode  sterilisasi  yang  berbeda (iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60,  Mesin  Berkas  Elektron (MBE)  dan  autoklaf)  hingga  masa  penyimpanan  70  hari pada  suhu  kamar  (25 º C)  menunjukkan  penurunan.  Jumlah sel Azospirillum dalam  arang  batok  mulai  mengalami penurunan  pada  hari  ke-7  dan  terus  menurun  dari  jumlah awal  10 5 spk  ml -1 menjadi  10 4 spk  g -1 hingga  hari  ke  70 pada bahan pembawa arang batok dan zeolit (Tabel 2). Hal yang  sama  juga  terjadi  pada  viabilitas Azospirillum dalam bahan  pembawa  gambut  dan  kompos  yaitu  jumlah  sel menurun  dari  10 7 spk  ml -1 menjadi  10 5 spk  g -1 hingga  hari ke-70 (Tabel 3).
Tabel 2.  Viabilitas  inokulan Azospirillum dalam  bahan  pembawa  arang  batok  dan  zeolit  steril  menggunakan  iradiasi  sinar  gamma  Co-60, MBE dan autoklaf pada suhu kamar selama masa penyimpanan 70 hari
Bahan Pembawa Metode Sterilisasi Masa Penyimpanan (hari) 7 21 42 70 ……..………. spk g -1 bahan pembawa ………… Arang Batok MBE 4.00 x 10 5 1.50 x 10 5 1.50 x 10 4 7.00 x 10 4 Co-60 3.00 x 10 5 2.00 x 10 5 7.00 x 10 4 7.00 x 10 4 Autoklaf 3.50 x 10 6 4.00 x 10 5 1.10 x10 5 1.10 x 10 5 Zeolit MBE 3.50 x 10 6 3.50 x 10 6 3.00 x 10 5 3.50 x 10 6 C0-60 1.10 x 10 6 7.50 x 10 4 7.50 x 10 4 4.00 x 10 5 Autoklaf 2.00 x 10 5 1.10 x 10 5 1.50 x 10 4 4.00 x 10 5
Keterangan : Jumlah sel awal 4.50 x 10 5 spk ml -1 ; (+) : kenaikan jumlah sel

## Viabilitas Inokulan dalam Bahan Pembawa (S. M. Putri)
Tabel 3.  Viabilitas  inokulan Azospirillum dalam  bahan  pembawa  gambut  dan  kompos  steril  menggunakan  iradiasi  sinar  gamma  Co-60, MBE dan autoklaf pada suhu kamar selama masa penyimpanan 70 hari
Bahan Pembawa Metode Sterilisasi Masa Penyimpanan (hari) 7 21 42 70 ……................………. spk g -1 bahan pembawa …........….......…………. Gambut MBE 3.00 x 10 6 4.50 x 10 6 3.00 x 10 5 1.40 x 10 5 Co-60 1.30 x 10 6 6.00 x 10 6 2.00 x 10 5 3.00 x 10 5 Autoklaf 2.00 x 10 6 1.50 x 10 5 1.60 x 10 5 7.00 x 10 5 Kompos MBE 2.00 x 10 7 1.10 x 10 7 1.10 x 10 7 1.50 x 10 6 Co-60 1.15 x 10 7 4.50 x 10 6 4.50 x 10 6 2.00 x 10 6 Autoklaf 1.10 x 10 8 1.10 x 10 7 4.50 x 10 6 2.50 x 10 6
Keterangan : Jumlah sel awal 1.40 x 10 7 spk ml -1 ; (+) : kenaikan jumlah sel
Jumlah sel Azospirillum pada hari ke-7 dalam bahan pembawa  arang  batok  sterilisasi  autoklaf  lebih  tinggi dibandingkan  dalam  arang  batok  sterilisasi  iradiasi  Sinar Gamma Co-60 dan MBE. Sebaliknya dengan zeolit, jumlah sel Azospirillum dalam  zeolit  steril  iradiasi  Sinar  Gamma Co-60  dan  MBE  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  zeolit steril autoklaf. Hal tersebut dapat disebabkan oleh adaptasi awal Azospirillum terhadap  lingkungan  bahan  pembawa. Menurut  Alexander  (1977), Azospirillum hidup  pada lingkungan dengan pH 6.8-7.9.
Efek  yang  ditimbulkan  dari  penggunaan  metode sterilisasi  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  dan  MBE  adalah kenaikan  pH  terhadap  bahan  yang  diradiasi.  Kenaikan  pH tersebut  umumnya  terjadi  pada  tanah  terutama  tanah  yang lembab (Lotrario et al ., 1995; Tuominen et al. , 1994).
Nilai  pH  arang  batok  dan  zeolit  masing-masing  8.4 dan  5.8,  sedangkan  nilai  pH  gambut  dan  kompos  masing- masing  4.2  dan  7.3.  Kenaikan  nilai  pH  arang  batok  dan gambut  akibat  sterilisasi  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  dan MBE  kurang  mendukung  ketahanan  hidup Azospirillum sehingga  jumlah  sel  pada  hari  ke-7  lebih  rendah dibandingkan jumlah sel dalam arang batok steril autoklaf. Sebaliknya kenaikan nilai pH pada zeolit dan kompos steril iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  dan  MBE  menyebabkan lingkungan  hidup Azospirillum semakin  mendukung
sehingga  jumlah  sel  pada  hari  ke-7  lebih  tinggi dibandingkan jumlah sel dalam zeolit steril autoklaf.
Persentase  penurunan  jumlah  sel Azospirillum yang paling  besar  adalah  pada  bahan  gambut  steril  MBE  yaitu sebesar  99.0%  dan  yang  paling  kecil  pada  bahan  zeolit steril    iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  dan  autoklaf  yaitu 11.1%. Selain penurunan jumlah sel, terdapat juga kenaikan jumlah sel Azospirillum yaitu pada bahan zeolit steril MBE hingga  akhir  penyimpanan  hari  ke-70.  Hal  ini  diduga disebabkan  oleh  kondisi  lingkungan  pada  bahan  tersebut optimum untuk Azospirillum bertumbuh. Penurunan  viabilitas Azospirillum dengan  berbagai metode  sterilisasi  dalam  arang  batok,  zeolit,  gambut  dan kompos  dapat  dilihat  pada  Gambar  1.  Penggunaan sterilisasi  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60,  MBE  dan  autoklaf menunjukkan  viabilitas  mikrob  hingga  hari  ke-70  masih relatif  tinggi  dalam  keempat  bahan  pembawa  walaupun terjadi penurunan dari jumlah sel awal yang dimasukkan ke dalam  bahan  pembawa.  Namun  walaupun  demikian,  zeolit lebih  mampu  mempertahankan  viabilitas Azospirillum hingga  masa  penyimpanan  70  hari  dibandingkan  dengan arang  batok,  gambut  dan  kompos.  Hal  tersebut  ditandai dengan persentase penurunan jumlah sel Azospirillum pada bahan  pembawa  zeolit  yang  paling  kecil  diantara  ketiga bahan pembawa lainnya.
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Kompos Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Arang Batok Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Zeolit
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Gambut
Uji Viabilitas Azotobacter dalam Bahan Pembawa Steril
Viabilitas Azotobacter dalam  bahan pembawa arang batok,  zeolit  dan  gambut  mengalami  penurunan  selama masa  penyimpanan  70  hari  (Tabel  4),  sedangkan  viabilitas Azotobacter dalam  bahan  pembawa  kompos  mengalami peningkatan  selama  masa  penyimpanan  (Tabel  5).  Pada umumnya Azotobacter tumbuh  optimum  pada  keadaan  pH > 6.0 (Alexander, 1977).
Persentase  penurunan  jumlah  sel Azotobacter yang paling  besar  adalah  pada  bahan  arang  batok  steril  iradiasi Sinar  Gamma  Co-60  yaitu  sebesar  99.1%.  Penurunan viabilitas  sel Azotobacter dalam  bahan  pembawa  arang batok,  zeolit  dan  gambut    memiliki  rata-rata  kisaran  lebih dari  90%.  Hal  tersebut  diduga  karena Azotobacter tidak mampu  mempertahankan  hidupnya  dalam  ketiga  bahan pembawa  tersebut  serta  keadaan  lingkungan  bahan pembawa yang tidak optimum untuk mendukung kehidupan Azotobacter .
Tabel 4.  Viabilitas  inokulan Azotobacter dalam  bahan  pembawa  arang  batok  dan  zeolit  steril  menggunakan  iradiasi  sinar  gamma  Co-60, MBE dan autoklaf pada suhu kamar selama masa penyimpanan 70 hari
Bahan Pembawa Metode Sterilisasi Masa Penyimpanan (hari) 7 21 42 70 ……..……..…. spk g -1 bahan pembawa …………. Arang Batok MBE 2.12 x 10 9 5.08 x 10 8 3.33 x 10 8 1.65 x 10 8 Co-60 2.18 x 10 9 7.61 x 10 8 3.22 x 10 8 4.41 x 10 7 Autoklaf 8.91 x 10 8 8.85 x 10 8 2.42 x 10 8 1.92 x 10 8 Zeolit MBE 2.45 x 10 9 6.96 x 10 8 7.42 x 10 8 4.58 x 10 8 Co-60 2.36 x 10 9 5.15 x 10 8 3.12 x 10 8 2.30 x 10 8 Autoklaf 1.34 x 10 9 1.57 x 10 9 9.11 x 10 8 5.80 x 10 7
Keterangan : Jumlah sel awal 4.78 x 10 9 spk ml -1
Tabel 5. Viabilitas inokulan Azotobacter dalam bahan pembawa gambut dan kompos steril menggunakan iradiasi sinar gamma Co-60, MBE dan autoklaf pada suhu kamar selama masa penyimpanan 70 hari
Bahan Pembawa Metode Sterilisasi Masa Penyimpanan (hari) 7 21 42 70 ……..………. spk g -1 bahan pembawa ………………. Gambut MBE 1.47 x 10 7 1.15 x 10 9 4.25 x 10 9 2.20 x 10 7 Co-60 7.70 x 10 8 3.58 x 10 9 1.47 x 10 9 1.60 x 10 7 Autoklaf 3.57 x 10 9 6.34 x 10 9 2.48 x 10 9 3.38 x 10 7 Kompos MBE 2.09 x 10 10 9.18 x 10 9 4.27 x 10 9 6.75 x 10 9 Co-60 1.59 x 10 10 7.18 x 10 9 5.05 x 10 9 8.56 x 10 9 Autoklaf 2.05 x 10 9 5.79 x 10 9 2.98 x 10 9 5.65 x 10 9
Keterangan : Jumlah sel awal 9.56 x 10 8 spk ml -1 ; (+) : kenaikan jumlah sel
Kenaikan  jumlah  sel Azotobacter dalam  bahan pembawa  kompos  hingga  masa  penyimpanan  70  hari diduga  disebabkan  oleh  kompos  merupakan  bahan  yang lebih  optimum  untuk Azotobacter bertumbuh.  Hal  tersebut sesuai  dengan  penelitian  Lasrin  (1997)  yang  menyebutkan bahwa populasi Azotobacter mengalami peningkatan dalam bahan  kompos  hingga  masa  penyimpanan  10  minggu  pada suhu 28 0 C.
Viabilitas Azotobacter dalam arang batok dan zeolit yang  disterilisasi  dengan  berbagai  metode  menunjukkan hasil  yang  hampir  seragam  (Gambar  2).  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  viabilitas Azotobacter tidak  terlalu banyak  dipertahankan  melalui  berbagai  metode  sterilisasi pada bahan pembawa arang batok, zeolit dan gambut.

## Viabilitas Inokulan dalam Bahan Pembawa (S. M. Putri)
Gambar 2.  Populasi Azotobacter dalam bahan pembawa arang batok, zeolit, gambut dan kompos steril selama masa penyimpanan 70 hari

## Uji  Viabilitas  Fungi  Pelarut  Fosfat  dalam  Bahan Pembawa Steril
Persentase  penurunan  jumlah  sel  Fungi  Pelarut Fosfat  (FPF)  dari  jumlah  sel  awal  hingga  masa penyimpanan  70  hari  ditunjukkan  oleh  Tabel  6  dan  7.
Persentase  penurunan  jumlah  sel  FPF  yang  paling  besar adalah  pada  bahan  arang  batok  steril  autoklaf  dan  bahan kompos  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  yaitu  sebesar  99.8% dan  penurunan  paling  kecil  adalah  pada  bahan  kompos steril autoklaf yaitu 45.8%.
Tabel 6.  Viabilitas inokulan fungi pelarut fosfat dalam bahan pembawa arang batok dan zeolit steril menggunakan iradiasi sinar gamma Co- 60, MBE dan autoklaf pada suhu kamar selama masa penyimpanan 70 hari
Bahan Pembawa Metode Sterilisasi Masa Penyimpanan (hari) 7 21 42 70 ……………... spk g -1 bahan pembawa ……………… Arang Batok MBE 7.77 x 10 8 1.83 x 10 8 1.83 x 10 8 5.61 x 10 7 Co-60 3.64 x 10 9 6.66 x 10 8 1.66 x 10 8 3.33 x 10 7 Autoklaf 2.52 x 10 9 3.83 x 10 7 3.30 x 10 6 8.33 x 10 5 Zeolit MBE 3.17 x 10 8 2.03 x 10 8 1.68 x 10 8 2.83 x 10 7 Co-60 7.30 x 10 8 1.66 x 10 8 2.05 x 10 8 8.00 x 10 7 Autoklaf 1.49 x 10 9 1.66 x 10 7 1.21 x 10 7 6.66 x 10 6
Keterangan : Jumlah sel awal 3.44 x 10 8 spk ml -1
Tabel 7. Viabilitas inokulan fungi pelarut fosfat dalam bahan pembawa gambut dan kompos steril menggunakan iradiasi sinar gamma Co-60, MBE dan autoklaf pada suhu kamar selama masa penyimpanan 70 hari
Bahan Pembawa Metode Sterilisasi Masa Penyimpanan (hari) 7 21 42 70 ……..………. spk g -1 bahan pembawa ………………. Gambut MBE 3.00 x 10 5 3.60 x 10 7 2.00 x 10 7 7.67 x 10 6 Co-60 6.40 x 10 6 3.89 x 10 7 2.50 x 10 6 1.43 x 10 7 Autoklaf 5.70 x 10 6 5.60 x 10 7 1.00 x 10 6 9.62 x 10 6 Kompos MBE 1.29 x 10 7 1.10 x 10 8 6.80 x 10 7 3.33 x 10 6 Co-60 1.62 x 10 7 5.00 x 10 6 1.00 x 10 6 1.67 x 10 5 Autoklaf 2.00 x 10 7 6.70 x 10 7 1.20 x 10 8 3.73 x 10 7
Keterangan : Jumlah sel awal 6.88 x 10 7 spk ml -1
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan
Pembawa Arang Batok Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Gambut
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan
Pembawa Zeolit
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Kompos
Metode sterilisasi autoklaf mengakibatkan penurunan  jumlah  sel  FPF  yang  paling  besar  pada  bahan pembawa  arang  batok  dan  zeolit.  Hal  tersebut  diduga disebabkan  oleh  keracunan  dari  kelarutan  unsur  akibat proses autoklaf sehingga FPF tidak mampu mempertahankan hidupnya. Metode sterilisasi iradiasi Sinar Gamma  Co-60  juga  mengakibatkan  penurunan  jumlah  sel FPF  pada  bahan  pembawa  kompos.  Hal  tersebut  dapat diduga  disebabkan  oleh  kurang  mendukungnya  kondisi lingkungan bahan kompos setelah disterilisasi menggunakan  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60.  Penggunaan
sterilisasi  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  pada  dosis  50  kGy mengubah  sifat  kimia  tanah  yaitu  meningkatnya  NH 4 (Bowen  dan  Cawse,  1964;  Tuominen et  al .,  1994),  fosfor, mangan  dan  kalium  (Bowen  dan  Cawse,  1964)  serta kenaikan  pH  yang  umumnya  terjadi  pada  tanah  lembab (Lotrario et  al .,  1995;  Tuominen et  al. ,  1994).  Menurut Waksman  dan  Starkey  (1981),  pertumbuhan  FPF  optimum pada  keadaan  masam  pH  5.0  –  5.5.  Hal  tersebut  dapat menjelaskan  mengapa  viabilitas  FPF  dalam  kompos  steril mengalami penurunan jumlah sel yang paling besar hingga hari ke 70.
Gambar 3.  Populasi Fungi Pelarut Fosfat  dalam bahan pembawa arang batok, zeolit, gambut dan kompos steril selama masa penyimpanan 70 hari
Pemilihan  bahan  pembawa  serta  metode  sterilisasi yang  digunakan  dapat  mempengaruhi  kelangsungan  hidup mikrob inokulan. Bahan pembawa zeolit memberikan hasil yang lebih baik dalam mempertahankan viabilitas inokulan Azospirillum , Azotobacter dan  FPF  dibandingkan  dengan arang batok hingga masa penyimpanan 70 hari. Sedangkan metode  sterilisasi  yang  lebih  baik  dalam  mempertahankan viabilitas inokulan adalah iradiasi Sinar Gamma Co-60.
Bahan  pembawa  zeolit  yang  disterilkan  dengan metode  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  dan  autoklaf  dengan inokulan Azospirillum memberikan  hasil  yang  terbaik dalam uji viabilitas dengan persentase penurunan jumlah sel sebesar  11.1%.  Namun  penggunaan  metode  sterilisasi autoklaf terhadap bahan pembawa arang batok menyebabkan  penurunan  jumlah  sel  inokulan  FPF  sebesar 99.8%.  Penggunaan  metode  sterilisasi  iradiasi  Sinar Gamma  Co-60  terhadap  kompos  juga  menyebabkan penurunan  jumlah  sel  inokulan  FPF  sebesar  99.8%
sehingga  dapat  dikatakan  autoklaf  dan  iradiasi  Sinar Gamma Co-60 bukanlah metode sterilisasi yang terbaik.
Masing-masing  inokulan  memberikan  hasil  uji viabilitas  yang  berbeda  terhadap  metode  sterilisasi  yang digunakan  terhadap  bahan  pembawa.  Hal  ini  diduga disebabkan  oleh  perubahan  kondisi  bahan  pembawa  yang merupakan  lingkungan  hidup  mikrob  inokulan  akibat proses  sterilisasi.  Penggunaan  sterilisasi  iradiasi  Sinar Gamma  Co-60  pada  dosis  50  kGy  mengubah  sifat  kimia tanah  yaitu  meningkatnya  NH 4 (Bowen  dan  Cawse,  1964; Tuominen et al ., 1994), fosfor, mangan dan kalium (Bowen dan Cawse, 1964) serta kenaikan pH yang umumnya terjadi pada  tanah  lembab  (Lotrario et  al .,  1995; Tuominen et  al. , 1994).
Penggunaan  sterilisasi  autoklaf  dengan  intensitas tertentu dapat meningkatkan kelarutan Fe, Mn dan Zn yang tinggi  sehingga  dapat  meracuni  mikob  yang  ada  di dalamnya  (Toharisman,  1989).  Proses  autoklaf  juga  dapat
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan
Pembawa Arang Batok Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Zeolit
Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Gambut Viabilitas Azospirillum dalam Bahan Pembawa Kompos

## Viabilitas Inokulan dalam Bahan Pembawa (S. M. Putri)
menyebabkan penurunan nilai pH hingga mencapai 0.2 unit (Skipper dan Westermann, 1973).

## KESIMPULAN
Bahan pembawa zeolit memberikan hasil yang lebih baik dalam mempertahankan
viabilitas inokulan Azospirillum , Azotobacter dan  Fungi  Pelarut  Fosfat  (FPF) hingga  masa  penyimpanan  70  hari.  Selanjutnya,  metode sterilisasi yang lebih baik dalam mempertahankan viabilitas inokulan  adalah  autoklaf  dan  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60 sedangkan metode EBM tidak efektif menurunkan populasi mikroba  dalam  bahan  pembawa.  Bahan  pembawa  zeolit yang disterilkan dengan  metode iradiasi Sinar Gamma Co- 60 dan autoklaf dengan inokulan Azospirillum memberikan hasil  yang  terbaik  dalam  uji  viabilitas  dengan  persentase penurunan jumlah sel sebesar 11.1%.
Penggunaan  metode  sterilisasi  autoklaf  terhadap bahan  pembawa  arang  batok  menyebabkan  penurunan jumlah  sel  inokulan  FPF  sebesar  99.8%.  Penggunaan metode  sterilisasi  iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  terhadap kompos juga  menyebabkan penurunan jumlah  sel inokulan FPF  sebesar  99.8%  sehingga  dapat  dikatakan  autoklaf  dan iradiasi  Sinar  Gamma  Co-60  bukanlah  metode  sterilisasi yang terbaik.

## SARAN
Perlu  dilakukan  kelanjutan  uji  viabilitas  inokulan hingga  masa  penyimpanan  satu  tahun  serta  pengujian efektivitas  mikrob  dengan  pengaplikasian  pada  tanaman sehingga  kualitas  mikrob  dalam  bahan  pembawa  dapat diketahui.  Pengujian  lanjut  sterilisasi  bahan  pembawa  juga perlu dilakukan untuk mengetahui batas masa penyimpanan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alexander,  M.  1977.  Introduction  to  Soil  Microbiology. 2nd Ed. John Wiley and Sons. New York.
Bowen,  H.  J.  M.  and  P.  A.  Cawse.  1964.  Some  effects  of gamma  radiation  on  the  composition  of  the  soil solution  and  soil  organic  matter. Soil  Sci., 98:  358- 361.
Hidayati, N. 2009. Efektivitas Pupuk Hayati pada Berbagai Lama Simpan Terhadap Pertumbuhan Tanaman Padi ( Oryza  sativa )  dan  Jagung  ( Zea  mays )  [skripsi].
Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam. Institut Pertanian Bogor.
Hilmy,  N.  1980.  Penetapan  Dosis  Sterilisasi  dan Pasteurisasi  Radiasi.  Pusat  Aplikasi  Isotop  dan Radiasi. Jakarta.
Kume,  T.  2005.  Radiation  Sterilization  of  Carrier . FNCA Biofertilizer Project Technical meeting on Sterilization of Carrier by Irradiation. Tokyo.
Lasrin,  H.  1997.  Ketahanan  Hidup  Azotobacter  Penambat Nitrogen  pada  Berbagai  Bahan  Pembawa  Serta Pengaruhnya  Terhadap  Pertumbuhan  Tanaman Jagung  ( Zea  Mays ).  Skripsi  Departemen  Ilmu Tanah, Fakultas Pertanian IPB.
Lotrario, J. B., B. J. Stuart., T. Lam., R. R. Arands, and D.
S. Kosson. 1995. Effects of sterilization methods on the  physical  characteristics  of  soil:  implications  for sorption  isotherm  analyses. Environ.  Contam. Toxicol ., 54: 668-675.
Rao,  N.  S.  1982.  Biofertilizers  in  Agriculture.  Oxford  & IBH Publishing Co. Oxford.
Skipper,  H.  D.  dan  D.  T.  Westermann.  1973.  Comperative effects  propylene  oxide,  sodium  azide  and autoclaving  on  selected  soil  properties. Soil  Biol. Biochem., 5: 409-414.
Toharisman, A. 1989. Evaluasi berbagai Metode Sterilisasi Tanah  dan  Pengaruh  Sterilisasi  Autoklaf  terhadap Beberapa  Sifat  Tanah  dan  Pertumbuhan  Tanaman Kedelai  dan  Jagung  [skripsi].  Jurusan  Tanah. Fakultas Pertanian. Institut Pertanian Bogor.
Tombe,  M.  2008.  Sekilas  Pupuk  Hayati.  Direktorat Perbenihan dan Sarana Produksi. http://dasar2ilmutanah.blogspot.com .
Tuominen,  L.,  T.  Kairesalo.,  and  H.  Hartikainen.  1994.
Comparison  of  methods  for  inhibiting  bacterial activity  in  sediment. Appl.  Environ.  Microbiol., 60: 3454-3457.
Van Dyke, M. I. and J. I. Prosser. 2000. Enhanced survival of Pseudomonas  fluorescens in  soil  following estabilishment  of  inoculum  in  a  sterile  soil  carrier. Soil Biol. Biochem., 32: 1377-1382.
Waksman, S. A. and R. L. Starkey. 1981. The Soil and The Microbe. John Wiley and Sons, Inc. New York.