ISSN Cetak         : 2087-9423

## PROFIL ASAM AMINO DAN SENYAWA BIOAKTIF KUDA LAUT Hippocampus comes

## AMINO ACID PROFILE AND BIOACTIVE COMPOUNDS OF SEAHORSE Hippocampus comes
Evi Maya Sari * , Mala Nurilmala, dan Asadatun Abdullah Departemen Teknologi Hasil Perairan, FPIK-IPB Kampus IPB Dramaga, Jl. Agatis, Bogor 16680 Jawa Barat Telp. (0251) 8622909-8622907, Fax (0251) 8622907
* E-mail: evimayasari2@gmail.com

## ABSTRACT
Seahorse is one of the marine living  resources usually used as ornamental fish, traditional medicinal materials, and souvenirs. The purpose of the study was to determine the proximate composition of wet and  dry  seahorses,  determine  the  profile  of  amino  acid  hydrolyzate  and  powder  of  seahorses,  and determines to content of bioactive compounds from the ethanol extract of seahorses on qualitatively. The sample of this study is seahorses obtained from nature. Prviously, seahorses were morphometric identified, subsequently, seahorses were made of the powder, hydrolyzate, and ethanol extract. Several analyzes  used  were  qualitative  analysis  of  proximate,  amino  acid,  and  phytochemical  analysis. Morphometric identification results indicate that the type is  H. comes. The proximate composition is ash  content  of  28.21±0.17%  (fresh)  and  10.76±0.19%  (powder),  lipid  content  3.470±0.66%  (fresh) and  5.45±0.31%  (powder),  protein  content  of  67.17±0.14%  (fresh)  and  77.88±0.85%  (powder), carbohydrate  1.16±0.68%  (fresh)  and  6.17±0.37%  (powder).  The  amino  acid  composition  both  on hydrolyzate  and  powder  comprising  8  essential  amino  acids  are  lysine,  leucine,  isoleucine, phenylalaline,  valine,  methionine,  histidine,  and  threonine  and  7  non  essential  amino  acids  are tyrosine,  alanine,  glycine,  serine,  arginine,  glutamic  acid,  and  aspartic  acid.  The  results  of identification  of  bioactive  compounds  is  flavonoids,  triterpenoids,  steroids,  saponins,  and  phenol  of hydroquinone.
Keywords : H. comes, proximate analysis, amino acid, and bioactive compounds

## ABSTRAK
Kuda laut merupakan salah satu sumberdaya hayati laut yang banyak dimanfaatkan sebagai ikan hias, bahan  obat  tradisional,  dan  cindera  mata.  Tujuan  penelitian  adalah  untuk  menentukan  kandungan proksimat kuda laut segar dan kering, menentukan profil asam amino hidrolisat dan tepung kuda laut, dan  menentukan  kandungan  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  etanol  kuda  laut  secara  kualitatif.  Sampel penelitian  ini  adalah  kuda  laut  yang  didapat  dari  alam.  Kuda  laut  sebelumnya  diidentifikasi  secara morfometrik,  selanjutnya  dibuat  dalam  bentuk  tepung,  hidrolisat,  dan  ekstrak  etanol.  Analisis  yang digunakan  adalah  analisis  proksimat,  analisis  asam  amino,  dan  uji  fitokimia  secara  kualitatif.  Hasil identifikasi  morfometrik  menyebutkan  bahwa  jenis  kuda  laut  yang  digunakan  adalah H.  comes . Kandungan  proksimat  kuda  laut H.  comes adalah  kadar  abu  28,21±0,17%  (segar)  dan  10,76±0,19% (tepung),  kadar  lemak  3,470±0,66%  (segar)  dan  5,45±0,31%  (tepung),  kadar  protein  67,17±0,14% (segar)  dan  77,88±0,85%  (tepung),  dan  karbohidrat  1,16±0,68%  (segar)  dan  6,17±0,37% (tepung). Komposisi asam amino hidrolisat dan tepung kuda terdiri atas 8 jenis asam amino esensial yaitu lisina, leusina, isoleusina, fenilalalina, valina, metionina, histidina, dan treonina dan 7 jenis asam amino non esensial  yaitu  tirosina,  alanina,  glisina,  serina,  arginina,  asam  glutamat,  dan  asam  aspartat.  Hasil  uji fitokimia  secara  kualitiatif  pada H.  comes yaitu  flavonoid,  triterpenoid,  steroid,  saponin,  dan  fenol hidrokuinon.
Kata kunci: H. comes , analisis proksimat, asam amino, dan senyawa bioaktif

## I. PENDAHULUAN
Kuda  laut Hippocampus spp.  me- rupakan spesies dari biota laut yang unik dan distribusinya  tersebar  diseluruh  dunia.  Kuda laut  sering  dijumpai  pada  perairan  dangkal seperti  pada  ekosistem  lamun  (Lourie et  al ., 1999).  Kuda  laut  merupakan  salah  satu sumberdaya  hayati  laut  yang  memiliki  nilai komersial  dan  telah  banyak  diperdagangkan sebagai  ikan  hias,  bahan  baku  obat  tra- disional  dan  juga  untuk  cindera  mata  atau hiasan  (Chang et  al .,  2013).  Pemanfaatan kuda  laut  di  Cina  lebih  banyak  digunakan sebagai  obat  tradisional  Cina  dalam  bentuk kering  dibandingkan  dengan  penjualannya sebagai  ikan  hias  aquarium  (Panithanarak, 2015).  Konsumsi  kuda  laut  di  wilayah  Asia mencapai  45  ton/tahun  dengan  negara  yang mengkonsumsi  terbesar  adalah  Cina  (20 ton/tahun),  Taiwan  (11,2  ton/tahun),  Hong- kong  (10  ton/tahun)  dan  negara-negara  asia lainnya (3,8 ton/tahun) (BBLBatam, 2014).
Jenis  kuda  laut  yang  ditemukan  di Indonesia  antara  lain  adalah Hippocampus barbouri,  Hippocampus  bargibanti,  Hippo- campus comes, Hippocampus histrix, Hippo- campus kelloggi, Hippocampus kuda, Hippo- campus  spinosissimus,  Hippocampus  trima- culatus dan Hippocampus sp . Nov (Lourie et al .,  2004).  Beberapa  jenis  kuda  laut  diatas sering  dimanfaatkan  untuk  obat  tradisional dan  ikan  hias.  Jenis  kuda  laut  yang  dapat dibudidayakan  seperti  yang  dilakukan  oleh nelayan  di  Pulau  Badi,  Sulawesi  Selatan adalah H.  barbouri , H.  comes, dan H.  kuda . Jenis tersebut merupakan jenis dari kuda laut yang  paing  sering  dimanfaatkan  oleh masyarakat untuk pengobatan tradisional dan digunakan  sebagai  ikan  hias  (Dwiputra, 2013). Berdasarkan uraian tersebut, sehingga sampel  kuda  laut  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  kuda  laut  jenis H. comes .
Manfaat  dari  mengkonsumsi  kuda laut  bagi  masyarakat  Cina  adalah  sebagai obat  tradisional  untuk  penambah  stamina (Zhang  and  Lei,  2008),  selain  itu  kuda  laut
juga  digunakan  untuk  campuran  arak/ minuman  beralkohol,  kapsul,  pil,  dan  sup kuda  laut  untuk  dikonsumsi  oleh  manusia (Lin et  al .,  2008).  Berbagai  manfaat  kuda laut  dalam  dunia  farmasi  dan  pengobatan adalah  dapat  digunakan  sebagai antifatigue dengan  nilai  aktivitas  proliferasi  sel  160% (Kang et  al .,  2014).  Manfaat  lain  yaitu sebagai menghambat aktivitas oksidasi dengan  nilai  IC 50 43,8  ppm  (Qian et  al ., 2012),  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.coli dengan  nilai  zona  hambat  4  mm,  dan dapat  menghambat  pertumbuhan  jamur Aspergilus  flavus dengan  zaona  hambat  2 mm.  Banyaknya  manfaat  kuda  laut  tersebut dikarenakan terdapatnya kandungan senyawa bioaktif  yang  kompleks.  Senyawa  bioaktif yang biasa terdapat dalam bahan aktif adalah senyawa  metabolit  sekunder  dan  metabolit primer  (Kumaravel et  al .,  2015) . Beberapa manfaat  yang  dimiliki  kuda  laut  tersebut, sehingga  masyarakat  dapat  memanfaatkan khasiatnya  sebagai  alternatif  dalam  peng- obatan  secara  alami  (Su  and  Xu,  2015). Manfaat  lain  dari  kuda  laut  salah  satunya sebagai  sumber  makanan  protein  hewani yang banyak gizi dan sangat baik dikonsumsi oleh manusia.
Protein  merupakan  suatu  zat  yang penting  dalam  tubuh.  Asam  amino  merupa- kan komponen utama penyusun protein  yang memiliki  fungsi  metabolisme  dalam  tubuh dan  dibagi  dua  kelompok  yaitu  asam  amino esensial  dan  non-esensial  (Mandila  dan Hidajati,  2013).  Asam  amino  esensial merupakan  asam  amino  yang  tidak  dapat dibuat  oleh  tubuh  dan  harus  diperoleh  dari makanan  sumber  protein.  Asam  amino  non esensial  adalah  asam  amino  yang  dapat dibuat  oleh  tubuh  manusia.  Mutu  protein dinilai  dari  perbandingan  asam-asam  amino yang  terkandung  dalam  protein  tersebut (Winarno,  2008).  Perbedaan  jumlah  kan- dungan pada jenis asam amino yang terdapat di  dalam  kuda  laut  sangat  berperan  dalam memberikan manfaat kepada manusia.
Kandungan  nutrisi  kuda  laut  selain protein  yaitu  vitamin,  mineral,  karbohidrat,
serat,  dan  lainnya.  Kandungan  nutrisi  kuda laut  tersebut  berpotensi  sebagai  suplemen makanan  untuk  kesehatan  manusia  (Lin et al .,  2008).  Penelitian  terkait  dengan  analisis proksimat  dan  kandungan  asam  amino  yang terkandung  dalam  kuda  laut  baik  dalam tepung ataupun hidrolisatnya, serta dilakukan identifikasi  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak etanol  kuda  laut  sangat  penting  dilakukan. Hal  ini  dikarenakan  masih  kurangnya  infor- masi  mengenai  karakteristik  kimia  dari  kuda laut  yang  penting  untuk  masyarakat.  Tujuan penelitian  adalah  untuk  menentukan  kan- dungan proksimat kuda laut segar dan kering, menentukan profil asam amino hidrolisat dan tepung  kuda  laut,  dan  menentukan  kan- dungan  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  etanol kuda laut secara kualitatif.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan Desember 2016 sampai dengan Januari 2017. Tempat penelitian dilakukan dibebera- pa  laboratorium,  untuk  persiapan  sampel dilaksanakan  di  Laboratorium  Biomelekuler Hasil  Perairan  Departemen  Teknologi  Hasil Perairan,  FPIK  IPB.  Analisis  proksimat dilaksanakan di Laboratorium Pusat Peneliti- an  Sumberdaya  Hayati  dan  Bioteknologi, LPPM  IPB.  Analisis  skrining  fitokimia dilakukan  di  Laboratorium  Kimia  Analitik Departemen Kimia, FMIPA IPB.

## 2.2. Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  kuda  laut  segar  yang didapat  dari  nelayan.  Bahan  yang  digunakan dalam  analisis  proksimat  adalah  selenium, H 2 SO 4 pekat,  akuades,  NaOH  30%,  fenol- ftalein, asam borat (H 3 BO 3 ) 2%, bromocresol hijau  0,1%,  merah  metil  0,1%,  HCl,  dan H 3 BO 3 ,  H 2 SO 4 1,25%,  NaOH  1,25%,  dan alkohol.  Bahan  yang  digunakan  untuk pegujian  metabolit  sekunder  adalah  akuades, etanol  96%,  NH 3 ,  NHCl 3 ,  serbuk  Mg,  HCl
pekat,  FeCl 3 ,  dietil  eter,  asam  sulfat,  NaOH 10%.
Alat  yang  digunakan  dalam  analisis proksimat  adalah  cawan,  cawan  porselin, labu  soxhlet,  labu  kjeldahl,  desikator, erlenmeyer, kertas saring, corong, timbangan analitik, timbangan digital,  oven,  gelas ukur, blender,  dan beaker  glass .  Alat-alat  yang digunakan  untuk  pengujian  metabolit  sekun- der  adalah  evaporator,  petridisk,  dan  erlen- mayer.

## 2.3. Prosedur Penelitian
Prosedur penelitian ini terdiri dari tiga tahap.  Tahap  pertama  yaitu  identifikasi karakteristik  morfometrik  dan  analisis  prok- simat dari sampel kuda laut segar dan kering. Tahap kedua yaitu pembuatan ekstrak etanol, hidrolisat,  dan  tepung  kuda  laut.  Tahap terakhir  yaitu  melakukan  uji  fitokimia  pada ekstrak  etanol  kuda  laut  dan  analisis  asam amino  pada  hidrolisat,  ekstrak  etanol,  dan tepung kuda laut.

## 2.4. Metode Analisis

## 2.4.1. Identifikasi Morfometrik
Identifikasi  morfologi  mengacu  pada metode  Lourie et  al. (2004)  meliputi  bebe- rapa parameter panjang tubuh, jumlah cincin ekor,  tonjolan  mata,    tonjolan  dagu,  jumlah sirip  insang,  dan  jumlah  sirip  punggung  dari kuda  laut.  Karakteristik  morfologi  kuda  laut diamati  dan  disamakan  dengan  karakteristik yang  terdapat  pada  buku  identifikasi marine fishes of South-East Asia . Karakteristik  yang disamakan  berupa  morfometrik  kuda  laut yang menjadi ciri khas spesies.

## 2.4.2. Metode Analisis Proksimat 2.4.2.1.Kadar Air
Cawan  porselin  dikeringkan  dengan oven  pada  suhu  105°C  selama  60  menit. Selanjutnya  cawan  didinginkan  dalam  desi- kator  selama  30  menit,  lalu  ditimbang  bobot kosongnya.  Sampel  sebanyak  2  gram  ditim- bang  kemudian  dimasukan  ke  cawan  dan dikeringkan  dengan  menggunakan  oven sampai  bobot  konstan  pada  suhu  105°C
selama  waktu  tertentu  (bobot  konstan), proses  selanjutnya  cawan  beserta  isinya  ke- mudian  didinginkan  dalam  desikator  selama 30  menit  dan  ditimbang  hingga  diperoleh berat  yang  konstan.  Penentuan  kadar  air dilakukan sebanyak 3 kali ulangan. Kadar air dihitung dengan rumus berikut :
Kadar Air ( % ) = B-A A x 100% ........................ (1)
Keterangan: A = Bobot sampel kering (g); B = Bobot sampel (g).

## 2.4.2.2.Kadar Lemak
Labu  lemak  dikeringkan  dalam  oven suhu  105°C  selama  30  menit,  lalu  disimpan dalam  desikator  selama  15  menit  dan  ditim- bang  (A).  Sampel  ditimbang  sebanyak  5  g langsung  dalam  saringan  timbal  yang  sesuai ukuran. Pelarut lemak (heksana) dimasukkan ke dalam labu lemak dan dilakukan ekstraksi selama  3-4  jam.  Setelah  selesai,  pelarut disuling  kembali  dan  labu  lemak  diangkat dan dikeringan dalam oven pada suhu 105 o C sampai tidak ada penurunan berat lagi.  Labu lemak  disimpan  dalam  desikator  selama  20- 30 menit dan ditimbang (B).
Kadar Lemak (%) = (B-A) S x 100% ............. (2)
Keterangan: S =  berat contoh sampel (gram); A=  berat labu lemak tanpa lemak (gram); B= berat labu lemak dengan lemak (gram).

## 2.4.2.3.Kadar Abu
Cawan  pengabuan  dibersihkan  dan dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  105°C selama  60  menit  lalu  didinginkan  selama  15 menit  dalam desikator dan ditimbang hingga menunjukkan  berat  yang  konstan.  Selanjut- nya  sampel  sebanyak  5  gram  dimasukkan dalam  cawan  pengabuan  dan  dipijarkan  di atas  nyala  api  hingga  tidak  berasap.  Sampel dimasukkan  dalam  tanur  pengabuan  dengan 600°C selama waktu tertentu (bobot konstan).  Cawan  berisi  sampel  didinginkan dalam  desikator  selama  30  menit  kemudian
ditimbang  hingga  diperoleh  bobot  konstan. Penentuan  kadar  abu  dilakukan  sebanyak  3 kali  ulangan.  Rumus  yang  digunakan  untuk penghitungan kadar abu adalah :
Kadar Abu ( % ) = C-A B × 100% ...................... (3)
Keterangan : A = Bobot cawan kosong (g); B = Bobot sampel (g); C:  Bobot cawan kosong + sampel yang telah diabukan (g).

## 2.4.2.4.Kadar Protein
Pengukuran  kadar  protein  dilakukan dengan  metode  semimikro Kjeldahl .  Sampel ditimbang  sebanyak  0,5  g,  kemudian  di- masukkan  ke  dalam  labu Kjeldahl 100  mL, lalu ditambahkan 2 g campuran selenium dan 25 mL H 2 SO 4 pekat. Sampel didestruksi pada suhu  410°C  selama  kurang  lebih  2  jam sampai  larutan  berwarna  hijau  jernih  lalu didinginkan. Selanjutnya sampel dimasukkan ke  dalam  labu  takar  100  mL  dan  ditambah- kan  akuades  sampai  dengan  tanda  tera. Sampel  larutan  tersebut  diambil  sebanyak  5 mL,  ditambahkan  5  mL  NaOH  30%,  dan indikator  fenolftalein  (PP)  kemudian  di- distilasi dengan suhu destilator 100°C selama kurang  lebih  10  menit.  Hasil  distilasi  ditam- pung  dalam  labu  Erlenmeyer  250  mL  yang berisi  10  mL  asam  borat  (H 3 BO 3 )  2%  dan indikator  campuran  dari  bromocresol  hijau 0,1%  dan  merah  metil  0,1%  dengan  per- bandingan  5  :  1.  Sebelumya  HCl  distandar- disasi  dengan  (H 3 BO 3 ),  kemudian  dilakukan destilasi  sampai  diperoleh  larutan  berwarna hijau  kebiruan.  Destilat  yang  dihasilkan dititrasi  dengan  HCl  0,01  N  sampai  warna larutan berubah warna menjadi  merah muda. Volume  titran  dibaca  dan  dicatat.  Penetapan blanko  dilakukan  seperti  tahapan  sampel. Kadar protein dihitung dengan rumus:
Nitrogen (%) =
( V1- V2 ) × N ×14,007× FP
W ×100% ......................... (4)
P rotein ( % ) = Nitrogen (%)×6,25
Keterangan: V 1 = Volume HCl 0,01 N untuk titrasi  sampel  (mL);  V2  =  Volume  HCl  0,01 N untuk titrasi blanko (mL); N = Normalitas HCl  standar  yang  digunakan  (N);  FP  = Faktor  pengenceran;  W  =  Bobot  sampel kering (mg).
2.4.2.5.Kadar Karbohidrat ( By Difference ) Kadar  karbohidrat  dihitung  dengan menghitung  sisa  ( by  difference )  dari  selisih berat  utuh  (100%)  yaitu  dengan  rumus sebagai berikut:
Kadar Karbohidrat (%) = 100% (%air + %abu + %lemak + %protein)  ................... (5)

## 2.4.3. Metode Analisis Asam Amino 2.4.3.1.Pembuatan Hidrolisat Protein Kuda Laut
Metode  pembuatan  hidrolisat  protein kuda  laut  ini  mengacu  pada  metode  Karnila et  al. (2011)  dengan  modifikasi.  Pembuatan hidrolisat  protein  kuda  laut  melalui  reaksi hidrolisis  enzimatis  menggunakan  enzim alkalase.  Sampel  kuda  laut  sebelumnya  di- potong  kecil-kecil  dan  diblender  hingga halus,  kemdian  sampel  kuda  laut  tersebut dikering  bekukan  sampai  menjadi  tepung atau  tepung  kuda  laut.  Proses  selanjutnya adalah  tepung  kuda  laut  dicampur  dengan akuades  dan  dihomogenisasikan  dengan blender  selama  1  menit.  Enzim  alkalase  2% ditambahkan  dan  dihidrolisis  menggunakan water  bath  shaker suhu  55°C  selama  3  jam dengan  pH  8.  Inaktivasi  enzim  dilakukan pada  suhu  85°C  selama  20  menit  untuk menghentikan  proses  hidroloisis,  selanjutnya dilakukan  sentrifugasi  dengan  kecepatan 10.000 rpm selama 15 menit pada suhu 4°C, untuk  memisahkan  fraksi  terlarut  (super- natan)  dan  fraksi  yang  tidak  larut  (pellet). Supernatan  sebanyak  250  ml  selanjutnya dipekatkan  dengan  evaporator  selama  60 menit. Penyimpanan dilakukan dalam freezer suhu  ±  -15°C  untuk  digunakan  pada  tahap selanjutnya.

## 2.4.3.2.Analisis Asam Amino
Analisis asam amino dilakukan untuk mengetahui  karakteristik  asam  amino  yang terdapat  pada  produk.  Sampel  yang  diguna- kan  untuk  melakukan  analisis  asam  amino adalah  tepung  kuda  laut  dan  hidrolisat  kuda laut. Prinsip analisis asam amino mengguna- kan High  Performance  Liquid  Chroma- tography (HPLC)  adalah  memanfaatkan reaksi  pra  kolom  gugus  amino  primer  dalam suasana  basa,  mengandung  merkaptoetanol membentuk  senyawa  yang  berfluorensensi sehingga  dapat  dideteksi  dengan  detector fluoresensi.  Larutan  buffer  kalium  borat  pH 10,4  ditambahkan  kedalam  sampel  dengan perbandingan  1:1  sehingga  diperoleh  larutan sampel  yang  siap  dianalisis.  Larutan  sampel sebanyak  10  µL  dicampur  dengan  25  µl pereaksi  ortoftalaldehida  (OPA).  Hal  yang sama  dilakukan  pada  larutan  standar  asam amino.  Larutan  yang  telah  tercampur  (baik sampel maupun standar) didiamkan selama 1 menit agar derivatiasi berlangsung sempurna. Larutan standar diinjeksikan ke dalam kolom HPLC  sebanyak  5  µL,  lalu  ditunggu  sampai pemisahan semua asam amino selesai.

## 2.4.4. Analisis Kualitatif Fitokimia 2.4.4.1.Pembuatan Ekstrak Etanol Kuda Laut
Kuda laut dibuang isi perutnya lalu di cuci dengan akuades dan ditimbang sebanyak 50  gram.  Sampel  dipotong  dan  dihancurkan sampai  berukuran  kecil  lalu  direndam menggunakan etanol 96% sebanyak 200 mL, direndam  selama  3  hari  dengan  1  kali pengocokan tiap harinya. Perbandingan sam- pel  dengan  pelarut  adalah  50:200  (w/v). Setelah  3  hari  dilakukan  penyaringan  meng- gunakan saringan teh dan kertas whatman 42. Maserasi  dilakukan  hingga  pelarut  bewarna bening  atau  keruh.  Setelah  proses  maserasi selesai  dilakukan  proses  evaporasi  meng- gunakan evaporator dengan suhu 45°C. Hasil Ekstrak  di  uji  secara  kualitatif  dengan  uji fitokimia.

## 2.4.4.2.Analisis Kualitatif Fitokimia
Uji  fitokimia  Alkaloid  dengan  me- larutkan  1  g  sampel  dengan  beberapa  tetes asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  2  N.  Pengujian  di- lakukan  menggunakan  tiga  pereaksi  alkaloid yaitu  pereaksi  Dragendoff,  pereaksi  Meyer, dan  Pereaksi  Wagner.  Pereaksi  Dragendorff dibuat  dengan  cara  0,8  g  bismutsubnitrat ditambahkan  dengan  10  mL  asam  asetat  dan 40  mL  air.  Larutan  ini  dicampur  dengan larutan yang dibuat dari 8 g KI dalam 20 mL air.  Satu  volume  campuran  ini  sebelum digunakan  diencerkan  dengan  2,3  volume asam asetat glasial dan 100 mL air. Pereaksi ini  berwarna  jingga.  Pereaksi  Meyer  dibuat dengan  cara  menambahkan  1,36  g  HgCl2 dengan  0,5  g  KI  lalu  dilarutkan  dan diencerkan dengan akuades  menjadi  100 mL dengan  labu  takar.  Pereaksi  ini  tidak  ber- warna.  Pereaksi  Wagner  dibuat  dengan  cara 10 mL akuades ditambahkan 2,5 g iodine dan 2 g KI lalu dilarutkan dan diencerkan dengan akuades  menjadi  200  mL  dalam  labu  takar. Pereaksi  ini  berwarna  coklat.  Hasil  uji dinyatakan  positif  bila  dengan  pereaksi Dragendorff terbentuk endapan merah hingga jingga,  endapan  putih  kekuningan  dengan pereaksi  Meyer  dan  endapan  coklat  dengan pereaksi Wagner.
Uji  fitokimia  flavonoid  dengan  me- larutkan1  g  sampel  ditambahkan  0,1  mg serbuk  magnesium  dan  0,4  mL  amil  alkohol (campuran asam klorida 37% dan etanol 95% dengan volume yang sama) dan 4 Ml alkohol kemudian campuran dikocok. Adanya flavonoid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya warna  merah,  kuning  atau  jingga  pada lapisan amil alkohol.
Uji  fitokimia  fenol  hidrokuinon dengan  melarutkan  1  g  diekstrak  dengan  20 mL  etanol  70%.  Larutan  yang  dihasilkan diambil sebanyak 1 mL kemudian ditambah- kan  2  tetes  larutan  FeCl3  5%.  Adanya senyawa  fenol  dalam  bahan  ditunjukkan dengan  terbentuknya  warna  hijau  atau  hijau biru.
Uji fitokimia Saponin dapat dideteksi dengan  uji  busa  dalam  air  panas.  Busa  yang
stabil selama 30 menit dan tidak hilang pada penambahan  1  tetes  HCl  2  N  menunjukkan adanya saponin.
Uji fitokimia Steroid dengan melarut- kan  1  g  sampel  dilarutkan  dalam  2  mL kloroform  dalam  tabung  reaksi  yang  kering. Sampel  ditambahkan  10  tetes  anhidra  asetat dan  3  tetes  asam  sulfat  pekat.  Reaksi  positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  larutan berwarna  merah  untuk  pertama  kali  ke- mudian berubah menjadi biru dan hijau.
Uji  fitokimia  Tanin  dengan  Sampel sebanyak  1  g  ditambah  pereaksi  FeCl3  3%. Adanya  warna  hijau  kehitaman  menandakan suatu bahan mengandung komponen tanin.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Identifikasi Morfometrik Kuda Laut
Berdasarkan  hasil  identifikasi  morfo- metrik,  sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  spesies Hippocampus comes .  Hasil  tersebut  diketahu  dengan  me- lihat  ciri-ciri  morfologi  dari H.  comes yaitu duri  pipi  ganda,  duri  depan  mata  kadang menonjol,  tulang  belakang  hidung  tajam, panjang,  moncong  ramping,  duri  punggung tumpul,  mahkota  rendah,  tidak  ada  duri ekor/halus.  Warna  atau  pola:  ada  bintik  atau bercak  pola  pada  tubuh;  kadang  memiliki garis  putih  halus  pada  mata;  ada  warna kuning kemerahan pada ekor dan membentuk garis.  Karakterisik  secara  morfologi  dari kuda laut H. comes tersaji pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakteristik kuda laut H. comes . No Deskripsi Jumlah 1 Panjang tubuh (cm) 13,6 2 Jumlah cincin ekor (unit) 35 3 Tonjolan mata (unit) 1 4 Tonjolan dagu (unit) 2 5 Jumlah sirip insang (unit) 16 6 Jumlah sirip punggung (unit) 17 7 Berat Total (gram) 14
Habitat  dari  kuda  laut  ini  biasanya ditemukan  pada  kedalaman  maksimum  <  10 m,  dan  beberapa  hasil  penelitian  menyebut- kan  bahwa  keberadaannya  sampai  dengan kedalaman  20  m.  Habitat  hidupnya  pada ekosistem  terumbu  karang,  lamun,  spons, sargassum.  Beberapa  hasil  penelitian  me- nyebutkan  bahwa  kuda  laut H.  comes lebih menyukai  sargassum  sebagai  tempat  hidup- nya (Lourie et al ., 2004). Dokumentasi kuda laut H.comes dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Kuda laut H. comes .

## 3.2. Kandungan Proksimat Kuda Laut H. comes
Analisis  proksimat  dilakukan  dengan tujuan  mengetahui  kandungan  gizi  secara kasar  ( crude ).  Analisis  proksimat  kuda  laut segar  dan  tepung  kuda  laut  ini  bertujuan untuk  melihat  perbedaan  jumlah  komponen yang  ada  didalam  kuda  laut,  dalam  kondisi segar  dan  bentuk  olahannya.  Brown  dan Murphy  (1991)  menyatakan  bahwa  kan- dungan  proksimat  pada  tubuh  kuda  laut mencirikan  kondisi  fisiologis  dan  kesehatan kuda  laut.  Umumnya  komposisi  tubuh  kuda laut  diperoleh  dengan  analisis  proksimat, namun  pengukuran  kondisi  fisiologis  juga dapat ditentukan menggunakan perbandingan hubungan  berat  dan  panjang  standar  pasa sampel  yang  digunakan.  Komposisi  prok-
simat  dari  kuda  laut  yang  dianalisis  antara lain kadar air, kadar abu, kadar lemak, kadar protein,  dan  karbohidrat.  Hasil  analisis proksimat kuda laut berdasarkan berat kering ( dry basis ) dapat dilihat pada Tabel 2.
Kadar  abu  merupakan  komponen yang tidak mudah menguap dan tetap tinggal dalam  pembakaran  dan  pemijaran  senyawa organik.  Kadar  abu  yang  terkandung  di dalam  kuda  laut  segar  adalah  28,21±0,17% dan  setelah  mengalami  proses  pembuatan menjadi  tepung  sebesar  10,76±0,19%.  Nilai kadar  abu  tepung  kuda  laut  lebih  rendah dibandingkan dengan kuda laut segar. Hal ini menunjukkan  terjadinya  penurunan  kan- dungan  kadar  abu  selama  proses  pembuatan tepung  kuda  laut.  Sudarmadji et  al. (2007) menyebutkan  bahwa  penurunan  kadar  abu salah satunya disebabkan oleh hilangnya atau menguapnya  mineral-mineral  pada  saat proses penguapan yang tinggi.
Kadar  protein  pada  kuda  laut  segar adalah  67,17±0.14%  dan  setelah  proses pembuatan  tepung  kuda  laut  menjadi  77,88± 0,85%.  Terjadi  peningkatan  kadar  protein pada saat proses pembuatan tepung kuda laut. Meningkatnya  kadar  protein  tersebut  diduga dikarenakan  pencampuran  dari  beberapa jenis  kelamin  kuda  laut  yang  digunakan  dan status  reproduksi  dari  kuda  laut  yang dijadikan  sampel.  Lourie et  al. (1999) menjelaskan  bahwa  perbedaan  kandungan kimia  dari  kuda  laut  tersebut  dikarenakan pada  kondisi  lingkungan  perairan  sekitar, habitat  tempat  hidup,  kompisi  makanan  dari kuda laut, jenis kelamin dan status reproduksinya.
Kadar lemak yang terdapat pada kuda laut  segar  adalah  3,470±0,66%,  sedangkan pada  tepung  kuda  laut  5,50±0,31%.  Kadar lemak  pada  tepung  kuda  laut  mengalami peningkatan  pada  saat  proses  pembuatan tepung.  Hal  ini  diduga  terjadi  penambahan kalori dan terjadi proses polimerisasi. Proses tersebut  akan  merubah  jumlah  kadar  lemak dan  dapat  mempengaruhi  rasa  dari  produk. Kandungan  lemak  setiap  bahan  pangan berbeda,  tergantung   pada   asal  dari  bahan
Tabel 2 Komposisi proksimat kuda laut segar dan tepung kuda laut.
No Komposisi Proksimat Kuda Laut Segar (%) Tepung Kuda Laut (%) 1 Kadar Abu 28,21±0,17 10,76±0,19 2 Kadar Lemak 3,470±0,66 5,450±0,31 3 Kadar Protein 67,17±0,14 77,88±0,85 4 Karbohidrat 1,160±0,68 6,170±0,37
pangan  dan  proses  pembuatan  bahan  pangan tersebut (Winarno, 2008).
Karbohidrat  merupakan  salah  satu komponen  gizi  yang  sangat  penting  karena berperan  sebagai  sumber  energi.  Penentuan kadar karbohidrat  pada  penelitian ini dengan cara by  difference yang  berarti  kandungan karbohidrat yang  diperoleh  dari  hasil pengurangan  angka  100  dengan  presentase komponen lain (air, abu, protein dan lemak). Kadar  karbohidrat  kuda  laut  segar  adalah 1,160±0,68%  dan  setelah  mengalami  proses pembuatan  tepung  menjadi  6,170±0,37%. Terjadi  peningkatan  pada  kadar  karbohidrat setelah proses pembuatan tepung sebesar 5%. Tingginya  kadar  karbohidrat  pada  tepung kuda  laut  tersebut  menunjukkan  bahwa tepung  kuda  laut  sangat  baik  dijadikan sebagai salah satu sumber pangan.
3.3.      Asam Amino Kuda Laut H. comes
Kualitas  protein  dari  suatu  bahan dapat ditentukan dari kandungan asam amino yang  menyusunnya  (Wu et  al., 2010). Analisis  asam  amino  ini  digunakan  untuk mengetahui  jumlah  kandungan  asam  amino dan  jenis  asam  amino  yang  ada  di  dalam kuda laut dalam bentuk hidrolisat dan tepung kuda  laut.  Menurut  Lansida  (2011),  metode HPLC  berasal dari  pemutusan  ikatan hidrogen  pada  protein  melalui  hidrolisis asam.  Menurut  Kamiya et  al. (2002)  asam amino sangat dibutuhkan oleh tubuh manusia.  Beberapa  fungsi  asam  amino  yaitu memperbaiki  jaringan  yang  rusak  setelah luka,  melindungi  hati  dari  berbagai  zat toksik, menurunkan tekanan darah, mengatur metabolisme  kolesterol,  mendorong  sekresi hormon pertumbuhan, dan mengurangi kadar amonia di dalam darah.
Berdasarkan  jenisnya,  terdapat  2 (dua)  jenis  asam  amino  yaitu  asam  amino non esensial dan asam amino esensial. Asam amino non esensial adalah asam  amino  yang dapat  dibuat  dalam  tubuh  disebut  juga  asam amino  endogen,  sedangkan  asam  amino esensial  merupakan  asam  amino  yang  tidak dapat  dibuat  dalam  tubuh  dan  hanya  bisa diperoleh  dengan  mengkonsumsi  makanan yang  mengandung  protein  (Winarno,  2008). Hasil  pengujian  asam  amino  pada  kuda  laut pada  bentuk  hidrolisat  maupun  pada  bentuk tepung  menunjukkan  15  jenis  asam  amino yang terdiri atas 8 jenis asam amino esensial dan  7  jenis  asam  amino  non  esensial.  Asam amino  esensial  yang  terdapat  pada  kuda  laut pada  bentuk  hidrolisat  dan  tepung  yaitu histidina, treonina, valina, metionina, isoleusina,  leusina,  fenilalanina,  dan  lisina, sedangkan  asam  amino  non  esensial,  yaitu asam aspartat, asam glutamat, serina, glisina, alanina, arginina dan tirosina.
Perbedaan  nilai  kandungan  protein hidrolisat  kuda  laut  lebih  tinggi  20,15% dibandingkan  dengan  protein  tepung.  Hasil pengujian  total  asam  amino  dari  hidrolisat kuda laut lebih tinggi 9,86% dari asam amino tepung  kuda  laut.  Hasil  analisis  asam  amino menunjukkan bahwa kandungan asam amino pada  hidrolisat  kuda  laut  kualitasnya  lebih baik  daripada  tepung  kuda  laut,  akan  tetapi terdapat 2 jenis asam amino yang lebih tinggi pada  sampel  tepung  yaitu  arginina  (4,82%) dan  treonina  (2,02%).  Semua  protein  yang dihidrolisis  akan  menghasilkan  asam-asam amino,  tetapi  ada  beberapa  protein  yang disamping  menghasilkan  asam  amino  juga menghasilkan  molekul-molekul  protein  yang masih berikatan (West dan Todd, 1964).
Tabel 3. Hasil analisis asam amino kuda laut H. comes dalam tepung hidrolisat dan tepung (%).
Parameter Hidrolisat H.comes Tepung H.comes H. kuda * H. comes* Kandungan Protein 73,63 53,48 70,70 76,59 Asam Amino Esensial Histidina 1,36 0,92 1,28 1,25 Treonina 1,89 2,02 2,52 2,80 Metionina 1,77 1,50 1,64 1,99 Valina 3,38 2,68 2,68 3,02 Fenilalalina 2,33 1,88 2,53 2,68 Isoleusina 2,64 1,98 1,87 2,01 Leusina 4,22 3,30 2,96 3,28 Lisina 6,80 3,47 3,12 3,42 Asam Amino Non Esensial Asam Aspartat 5,10 4,57 6,10 6,38 Asam Glutamat 9,13 7,33 7,62 8,39 Serina 1,99 1,79 2,31 2,72 Glisina 6,77 5,91 9,65 10,73 Alanina 5,46 4,70 5,68 6,55 Arginina 3,55 4,82 5,06 5,85 Tirosina 1,50 1,16 1,43 1,42 Total Asam Amino 57,89 48,03 56,45 62,49
Keterangan: * = Hasil penelitian Lin et al. (2008).
Kandungan  asam  amino  pada  kuda laut  dapat  dilihat  pada  Tabel  3.  Kandungan asam  amino  tertinggi  dari  sampel  hidrolisat dan  tepung  kuda  laut  tersebut  adalah  asam glutamat  dengan  nilai  masing-masing  9,13% (hidrolisat)  dan  7,33%  (tepung).  Kandungan asam  amino  terendah  pada  sampel  hidrolisat dan  tepung  adalah  histidina  dengan  nilai masing-masing 1,36% (hidrolisat) dan 0,92% (tepung).  Schweigert et  al. (2010)  menyata- kan  bahwa  tingginya  kandungan  asam glutamat  yang  terkandung  dalam  daging dikarenakan  adanya  deaminasi  antara  asam amino  glutamin  dan  asparagina yang membentuk  asam  glutamat  sehingga  me- ningkatkan  kadar  asam  glutamat  pada daging.  Helpern  (2000)  menyatakan  bahwa asam  glutamat  mengandung  ion  glutamat yang dapat merangsang beberapa tipe syaraf
yang ada pada lidah manusia. Asam glutamat dan asam aspartat memberikan cita rasa pada seafood , namun dalam bentuk garam sodium seperti  pada  MSG  akan  memberikan  rasa umami.  Manfaat  lain  dari  asam  glutamat menurut Linder (1992) adalah untuk menahan  konsumsi  alkohol  berlebih,  mem- percepat  penyembuhan  luka  pada  usus, meningkatkan kesehatan mental serta meredam depresi.
Hasil analisis asam  amino menunjuk- kan  bahwa  terdapat  8  (delapan)  jenis  asam amino  esensial  yang  terkandung  pada  kuda laut yaitu lisina, leusina, isoleusina, fenilalanina, valina, metionina, histidina, dan treonina.  Kandungan  asam  amino  esensial tertinggi  yang  terdapat  pada  kuda  laut,  baik dalam  bentuk  hidrolisat  dan  tepung  adalah lisina dengan nilai masing-masing 6,80% dan 3,47%. Suryaningrum et al. (2010) menyata-
kan  bahwa,  lisina  merupakan  asam  amino esensial  yang  sangat  dibutuhkan  sebagai bahan  dasar  antibodi  darah,  memperkuat sistem  sirkulasi,  dan  mempertahankan  per- tumbuhan  sel-sel  normal.  Kekurangan  lisin menyebabkan mudah lelah, sulit konsentrasi, rambut rontok, anemia, pertumbuhan terhambat, dan kelainan reproduksi.
Kandungan asam amino non essensial tertinggi  yang terdapat pada kuda laut dalam bentuk  hidrolisat  dan  tepung  adalah  asam glutamat  (9,13%).  Sama  dengan  hasil penelitian  dari  Purbasari  (2008)  yang  me- nyebutkan  bahwa  asam  glutamat  merupakan asam  amino  tertinggi  yang  terdapat  pada hidrolisat protein kerang mas ngur ( Atactodea  striata ),  yaitu  sebesar  13,085%. Asam  glutamat  merupakan  asam  amino  non esensial  yang  berperan  dalam  menunjang fungsi  otak,  mempermudah  belajar  dan memperkuat  ingatan.  Selain  itu,  asam glutamat  juga  bermanfaat  untuk  membantu dalam  meningkatkan  massa  otot  (mem- perbesar  otot).  Asupan  asam  glutamat  yang berlebihan  (lebih  dari  120  mg  per  kg  berat badan) per hari dapat menyebabkan kerusakan  sistem  syaraf  sehingga  dapat menimbulkan penyakit alzheimer dan amyotrophic  lateral  sclerosis (Winarno, 2008).
Jenis  asam  amino  non  esensial  yang dimiliki  oleh  tepung  kuda  laut  adalah arginina  (4,82%).  Jenis  ini  merupakan  salah satu  asam  amino  yang  mampu  menambah stamina. Villanueva et al. (2004) menyatakan bahwa  arginina  merupakan  asam  amino esensial  yang  diperlukan  tubuh  untuk pembuatan  cairan  seminal  (air  mani)  dan memperkuat  sistem  imun.  Arginina  merupa- kan  asam  amino  esensial  yang  bermanfaat dalam  meningkatkan  daya  tahan  tubuh  atau produksi lomfosit.

## 3.4. Kandungan Metabolit Sekunder
Ekstrak Hoippocampus comes
3.4.1.   Senyawa Biaoktif Ekstrak Etanol Identifikasi senyawa metabolit sekunder  yang  ada  pada  ekstark  etanol  kuda
laut H.comes dilakukan  dengan  metode  uji fitokimia  secara  kualitatif.  Pengujian  fito- kimia  ini  digunakan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  bioaktif  apa  saja  yang terdapat  pada  kuda  laut H.comes yang diperoleh  secara  kualitatif,  sehingga  diper- oleh hasil positif dan negatif dari senyawa uji tersebut.  Identifikasi  senyawa  bioaktif  yang akan  dilakukan  dalam  penelitian  ini  antara lain: senyawa flavonoid, triterpenoid, steroid, saponin,  fenol  hidrokuinon,  alkaloid,  dan tanin.  Berikut  ini  adalah  hasil  dari  iden- tifikasi  senyawa bioaktif ekstrak etanol kuda laut H.comes dapat dilihat pada Tabel 4.
Pengujian  komponen  senyawa  bio- aktif  pada  ekstrak  etanol  kuda  laut  secara kualitatif  ini  memiliki  peran  penting  dalam mengetahui  manfaat  apa  saja  yang  dapat dimiliki dan dihasilkan dari sampel kuda laut ini. Secara umum, hasil  identifikasi  senyawa bioaktif  metabolit  sekunder  yang  ada  di ekstrak  etanol  kuda  laut  secara  kualitatif meliputi  flavonoid,  triterpenoid,  steroid, saponin,  dan  fenol  hidrokuinon.  Hasil  dari penelitian Rumagit et  al. (2015) dari  ekstrak etanol  dari  spons  Lamellodysidea  herbacea menyebutkan  bahwa  kandungan  metabolit sekunder  dari  hasil  skrining  fitokimia  me- liputi  flavonoid,  steroid,  saponin,  alkaloid, dan tanin.
Hasil  pengujian  senyawa  flavonoid pada  kuda  laut Hippocampus  comes Secara umum  senyawa  polar  larut  dalam  pelarut polar seperti etanol. Etanol berfungsi sebagai pembebas  flavonoid  dari  bentuk  garamnya. Penambahan  asam  klorida  pekat  berfungsi untuk  protonasi  flavonoid  hingga  terbentuk garam flavonoid. Setelah penambahan tepung magnesium, hasil positif ditunjukkan dengan perubahan  warna  larutan  menjadi  hitam kemerahan.  Warna  hitam  kemerahan  yang dihasilkan  menandakan  adanya  flavonoid akibat  dari  reduksi  oleh  asam  klorida  pekat dan  magnesium  (Harborne,  1987).  Senyawa bioaktif  lainnya  yang  mendapatkan  hasil positif adalah steroid dan triterpenoid. Hal ini dibuktikan  dengan  perubahan  warna  larutan menjadi  biru   atau   hijau  saat  ditambahkan
Tabel 4. Hasil identifikasi senyawa bioaktif ektsrak kuda laut H. comes secara kualitatif.
No Senyawa uji Hasil Kondisi Ideal 1 Flavonoid + Warna lapisan atas lebih pekat dibandingkan lapisan bawah menunjukkan flavonoid positif 2 Triterpenoid + Berwarna merah 3 Steroid + Berwarna biru atau hijau (paling luar) 4 Saponin + Terbentuk busa 5 Fenol Hidrokuinon + Cream-merah 6 Alkaloid: - Mayer - Wagner
- Dargendraf - Terdapat endapan 7 Tanin - Terbentuk warna hijau – hitam
Keterangan: (+) ada; (-) tidak ada.
kloroform  dan  asam  sulfat  pekat  yang menandakan  adanya  steroid  dan  ditengah- tengah  terjadi  perubahan  larutan  sampel menjadi  merah  sebelum  menjadi  hijau. Perubahan  warna  tersebut  menunjukkan bahwa  sampel  positif  mengandung  senyawa triterpenoid.  Steroid  banyak  dimanfaatkan pada hormon seksual untuk menjaga vitalitas, meningkatkan  kerja kelenjar adrenalin, antiinflamasi  dan  menurunkan  rasio  densitas tinggi pada jantung.
Steroid  memiliki  kemampuan  untuk berinteraksi  dengan  respon  imun  dan  efek antiinflamasi,  namun  penggunaan  steroid murni  dinilai  berbahaya  sehingga  digunakan kortikosteroid  sebagai  alternatif  penggunaan aman  senyawa  steroid.  Saponin  merupakan glikosida  alami  yang  terikat  dengan  steroid dan  triterpena.  Manfaat  saponin  antara  lain sebagai  imunomodulator,  anti  tumor,  anti kanker,  antibiotik,  anti  virus,  antiinflamasi, hipokolesterol,  hepatoprotektan,  dan  anti hiperglikemik. Keberadaan saponin dapat di- ketahui  dengan  timbulnya  busa  pada  peng- ujian fitokimia (Widodo dan Alan, 2010).

## IV. KESIMPULAN
Penelitian  ini  dapat  ditarik  kesimpul- an  bahwa  pada  spesies  kuda  laut  yang teridentifikasi secara morfometrik adalah H.
comes .  Sampel  kuda  laut  segar  dan  tepung kuda laut mengandung komponen gizi berupa mineral,  lemak,  protein,  dan  karbohidrat. Komposisi asam amino hidrolisat dan tepung kuda  laut  terdiri  atas  8  jenis  asam  amino esensial dan 7 jenis asam amino non esensial Hasil  uji  fitokimia  secara  kualitiatif  pada H. comes yaitu  flavonoid,  triterpenoid,  steroid, saponin, dan fenol hidrokuinon.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih ditujukan kepada Ditjen  Dikti,  Kementerian  Riset  Teknologi dan Pendidikan Tinggi yang telah membiayai penelitian  ini  melalui  program  BOPTN dengan skema penelitian  PUPT Tahun 2017 Nomor:  011/  SP2H/  LT/  DRPM/  IV/  2017 atas  nama  Dr.  Mala  Nurilmala  serta  seluruh pihak  yang  telah  membantu  kelancaran pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnanda, A.D., Ambariyanto, dan A. Ridlo . 2005. Fluktuasi kandungan proksimat kerang  bulu  ( anadara  inflata  reeve ) di  perairan  Pantai  Semarang. Ilmu Kelautan 10(2):78-84.
Balai  Budidaya  Laut  Batam  (BBLBatam). 2014.  Potensi  pengembangan  budi-
daya  kuda  laut  ( Hippocampus  kuda ) di  Kepulauan  Riau.  Tersedia  pada: http://bblbatam.djpb.kkp.go.id/?p=78 5. [Diakses tanggal 20 Agustus 2016]. Chang, C.H., N.H. Jang-Liaw, Y.S. Lin, Y.C.
Fang, and K.T. Shao . 2013. Authenti- cating the use of dried seahorse in the tradisional  Chinese  medicine  market in  Taiwan  using  molecular  forensics.
J.  of  Food  and  Drug  Analysis, 21: 310-316.
Dwiputra,  M.A.  2013.  Pemeliharaan  juwana Kuda  Laut  ( Hippocampus  barbouri ) dengan  sistem  resirkulasi.  Tesis. Universitas Hasanuddin. 65hlm. Harborne,  J.B.  1987.  Metode  fitokimia penuntun  cara  modern  menganalisis tumbuhan.  Padmawinata,  K  (penter- jemah). ITB. Bandung. 275hlm.
Kamiya,  T.,  Miyukigaoka,  T.  Shi,  and Ibaraki.  2002.  Biological  functions and  health  benefits  of  amino  acids. Food and Food Ingredients  J., 68(3): 206-210.
Kang,  N.,  S.Y.  Kim,  S.  Rho,  J.Y.  Ko,  and Y.J.  Jeon.  2014.  Antifatigue  activity of mixture of seahorse ( Hippocampus abdominalis )  hydrolysate  and  red ginseng. Fisheries and Aquatic Science , 20:1-8.
Karnila,  R.,  A.  Made,  dan  W.  Tutik.  2011. Potensi ekstrakm hidrolisat, dan isolat protein  teripang  pasir  ( Holothuria scabra J.)  untuk  menurunkan  kadar glukosa darah dan memperbaiki profil sel  beta  pankreas  tikus  diabetes melitus.  Laporan  Hasil  Penelitian. Hibah  Bersaing  2010.  Universitas Riau. 120hlm.
Kumaravel,  K.,  S.  Ravichandran,  T.    Bala- subramanian,  K.S.  Subramanian,  and B.A. Bhat. 2015. Antimicrobial effect of  five  seahorses  species  from  Indian Coast. British  J.  of  Pharmacology and Toxicology, 1(2):62-66.
Lansida.  2011.  High  performance  liquid chromatography (HPLC). http://www.
lansida.com. [Diakses tanggal 2 April 2017].
Lin,  Q.,  J.  Lin,  and  C.  Wang.  2009. Biochemical  composition  of  the  wild and cultured seahorses, Hippocampus kuda Bleeker  and Hippocampus trimaculatus Leach. Aquaculture
Research, 40:710-719.
Lin,  Q.,  J.  Lin,  J.  Lu,  and  B.  Li.  2008.
Biochemical  composition  of  six  sea- horse species, Hippocampus sp., from the  Chinese  coast. J.  World  Aquacult Soc , 39:225–234.
Linder,  M.C.  1992.  Biokimia  nutrisi  dan metabolisme  dengan  pemakaian  se- cara  kimia . Aminuddin,  P.  (penter- jemah). UI Press. Jakarta. 74hlm.
Lourie,  S.A.,  A.C.J.  Vincent,  and  H.J.  Hall. 1999.  Seahorses:  an  identification guide to  the  world's species and their conservation.  Project  Seahorse.  Lon- don UK. 214p.
Lourie, S.A., S.J. Foster, E.W.T. Cooper, and A.C.J.  Vincent.  2004.  A  guide  to  the identification  of  seahorses.  Project Seahorse  and  TRAFFIC.  University of  British  Columbia  and  World Wildlife Fund. North America. 234p.
Mandila,  S.P.  dan  N.  Hidajati.  2013.  Identi- fikasi  asam  amino  pada  cacing  sutra (Tubifex  sp.)  yang  diekstrak  dengan pelarut  asam  asetat  dan  asam  laktat.
UNESA  J.  of  Chemistry, 2(1):103- 109.
Pangestuti, R., R. Bomi, S.W.A. Himaya, and S.K.  Kim.  2013.  Optimization  of hydrolysis  conditions,  isolation,  and identification  of  neuroprotective  pep- tides  derived  from  seahorse  Hippo- campus  trimaculatus. Amino  Acids , 45:369-381.
Panithanarak,  T.  2015.  Phylogeny  of  Thai seahorse  infered  from  mitochondrial DNA  cytochrome  b  gene.  Pro- ceedings  of  the  Burapha  University International  Conference  2015,  10-12 July 2015, Bangsaen, Conburi. Thailand. 1010-1023pp.
Purbasari,  D.  2008.  Produksi  dan  karak- terisasi  hidrolisat  protein  dari  Kerang Mas  Ngur  ( Atactodea  striata ).  Skrip- si.  Institut  Pertanian  Bogor.  Bogor. 77hlm.
Qian,  Z.J.,  K.H.  Kang,  and  S.K.  Kim.  2012.
Isolation  and  antioxidant  activity evaluation  of  two  new  phthalate derivatives  from  seahorse, Hippo- campus Kuda Bleeker. Biotechnology and  Bioprocess  Enginering,  17:1031- 1040.
Rumagit,  H.M.,  M.R.J.  Runtuwene,  dan  S. Sudewi.  2015.  Uji  fitokimia  dan  uji antioksidan  dari  ekstrak  etanol  spons Lamellodysidea  herbacea . J.  Ilmiah
Farmasi , 4(3):183-192.
Schweigert,  B.S.,  H.R.  Kraybill,  and  D.A.
Greenwood.  2010.  Amino  acid  com- position  of  fresh  and  cooked  beef cuts. J.  Science  Food  and  Nutrition , 56(2):156-162.
Su,  Y.  and  Y.  Xu.  2015.  Study  on  the extraction  and  purification  of  glyco- protein  from  the  yellow  seahorse,
Hippocampus  kuda Bleeker.  Food Science and Nutrition, 3(4):302-312. The  Association  of  Official  Analytical Chemist  (AOAC).  2005.  Official methods of analysis. 18 th ed. Asso- ciation of Official Analytical
Chemist. Washington DC. 300p.
Villanueva,  R.,  J.  Riba,  C.  Ruiz-Capillas, Gonzales AV, Baeta M. 2004. Amino acid  composition  of  early  stages  of cephalopods and effect of amino acid dietary  treatments  on  Octopus  vul- garis  paralarvae. Aqualculture ,  242
:455-478.
West, E.S. and W.C. Todd. 1964.  Text book of biochemistry. The Mac millan. Co. New York. 226p.
Widodo,  A.D.  and  R.T.  Alan.  2010. Pengunaan steroid  dalam  tata laksana sepsis  analisis  kasus  berbasis  bukti. Sari Pediatri , 11(6):387-394.
Winarno, F.G. 2008. Kimia pangan dan gizi.
PT.  Gramedia  Pustaka  Utama.  Jakar- ta. 112hlm.
Wu,  X.,  B.  Zhou,  Y.  Cheng,  C.  Zeng,  C. Wang,  and  L.  Feng.  2010.  Com- parison  of  gender  differences  in biochemical  composition  and  nutri- tional value of various edible parts of the  blue  swimmer  crab. J.  Food Composition Analysis, 23:154-159. Zhang, J.S. and X.L. Lei. 2008. Extraction of glycoprotein  from  squid  viscera  and its  immunomodulation. Mod.  Food Sci. Technol., 24:167-170.
Diterima : 30 Maret 2017 Direview : 07 April 2017 Disetujui : 30 November 2017