Atifitas Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Daun Sirsak...

## AKTIFITAS HEPATOPROTEKTIF EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona Muricata L.) TERHADAP KERUSAKAN HATI TIKUS YANG DIINDUKSI DENGAN PARASETAMOL
(Hepatoprotective activity of the ethanol extract of Annona Muricata L. leaves against paracetamol induced hepatotoxicity in rats)
Noni Zakiah 1* , Yanuarman 2 , Frengki 3 dan Munazar 4
1 Bagian Farmakologi, Jurusan Farmasi, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Jl. Soekarno Hatta, Kampus Terpadu Poltekkes Kemenkes RI Aceh Lampeneurut, Aceh Besar. Email: nonizakiah1981@gmail.com
2 Fakultas Kedokteran Universitas Syiah Kuala, Darussalam, Banda Aceh. Email: ss_tottenkopf_verbande@yahoo.co.id 3 Bagian Farmasi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala, D arussalam, Banda Aceh. Email : frengki_fkh@unsyiah.ac.id
4 Jurusan Keperawatan, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Jl. Soekarno Hatta, Kampus Terpadu Poltekkes Kemenkes RI Aceh Lampeneurut, Aceh Besar. Email: nazar_1575@yahoo.com
Received: 9/1/2017                       Accepted: 31/3/2017                       Published online: 12/5/2017

## ABSTRAK
Selama  ini  terapi  yang  dilakukan  terhadap  penyakit  hati masih merupakan tantangan bagi pengobatan modern. Obat- obat  yang  biasa  digunakan  pada  pengobatan  penyakit  hati diantaranya  adalah  antivirus,  diuretic  dan  antibiotik  yang dapat  menimbulkan  beberapa  efek  samping  yang  serius. Tumbuhan Annona muricata (sirsak) telah lama digunakan sebagai obat tradisional yang luas. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  efek  hepatoprotektif  ekstrak  etanol  daun sirsak  (Annona  muricata  L.) terhadap gambaran histologis hati  tikus  putih  galur  Sprague  dawley  yang  terpapar parasetamol  dosis  tinggi.  Dosis  yang  digunakan  adalah ekstrak etanol daun sirsak (EEDS) dosis  200 mg/kg BB, 400 mg/kg  BB  dan  600  mg/kg  BB  per  oral  selama  14  hari, kemudian  2  jam  setelah  pemberian  dosis  akhir,  diinduksi dengan  parasetamol  2,5  g/kg  BB  per  oral.  Selanjutnya dilakukan  pengamatan  histologi  hati  tikus,  dicatat  tingkat kerusakan  pada  sel  hati  tikus,  meliputi  kondisi  hepatosit, nekrosis, piknositosis, karioreksis, kariolisis. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  sirsak  dosis  600 mg/kg  BB  memperlihatkan  efek  hepatoprotektif  yang signifikan yang ditandai dengan kondisi hepatosit yang relatif normal  setelah  terpapar  dengan  dosis  tinggi  parasetamol. Dari  hasil  penelitian  disimpulkan  pemberian  ektrak  etanol daun sirsak memberikan efek hepatoprotektif
Kata kunci:   Annona muricata L.,  hepatoprotektif, parasetamol, histologi hati

## ABSTRACT
For a long period, the therapy of liver diseases that carried out  against  liver  diseases  is  still  a  challenge  for  modern medicine. The drugs used in the treatment of liver diseases such as antiviruses, diuretics and antibiotics could cause some  serious  side  effects.  Annona  muricata  plants  or
* Penulis untuk korespondensi: nonizakiah1981@gmail.com
better known as soursop plant has long been widely used as traditional medicine. This study was aimed to determine the hepatoprotective effects of ethanol extract of soursop (Annona muricata L.) leaves on liver histologist pattern of the mice of Sprague Dawley thread that exposed to high doses of paracetamol. The dosages of the ethanol extract of soursop leaves of 200 mg/Kg BW, 400 mg/Kg BW and 600  mg/Kg  BW  orally  for  14  days,  then  2  hours  after induction of final dose, induced with paracetamol 2.5 g/kg BW orally. Furthermore, through the observation of mice liver histologics, the level of damages in mice liver cells, including conditions of hepatocytes, necrosis, piknositosis, karyorrhexis,  karyolysis  were  recorded.  The  results showed that ethanol extract of soursop leaves with a dose of  600  mg/kg  BW  showed  significant  hepatoprotective effects  characterized  by  a  relatively  normal  hepatocytes condition after exposure to high doses of paracetamol. The final  conclusion  was  that  the  ethanol  extract  of  soursop leaves provide hepatoprotective effects.
Keywords:  Annonamuricata L., hepatoprotective, paracetamol, liver histology

## PENDAHULUAN
Penyakit  hati  merupakan  masalah serius  di  negara  berkembang  dan  menjadi penyebab meningkatnya angka kesakitan dan kematian dunia. Penyakit hati sering disebabkan oleh berbagai toksikan, diantaranya  senyawa  kimia  obat  seperti parasetamol. 1 Diperkirakan  10%  populasi dunia  telah  dipengaruhi  oleh  penyakit  hati termasuk hepatitis kronis, steatosis
Jurnal AcTion: Aceh Nutrition Journal, Mei 2017; 2(1): 25-31
alkoholik,  fibrosis,  sirosis  dan  karsinoma hepatoselular. 2
Selama  ini  terapi  yang  dilakukan terhadap  penyakit  hati  masih  merupakan tantangan bagi pengobatan modern. Obat-obat yang  biasa  digunakan  pada  pengobatan penyakit  hati  diantaranya  adalah  antivirus, diuretic dan antibiotik 3 yang dapat menimbulkan  beberapa  efek  samping  yang serius.
Tumbuhan Annona  muricata atau  lebih dikenal  dengan  tumbuhan  sirsak  telah  lama digunakan  sebagai  obat  tradisional  yang  luas. Daun  sirsak  dipercaya  memiliki  efek  anti rematik, bijinya dapat mennghambat pertumbuhan  cacing  dan  parasit-parasit  tubuh lainnya.  Tumbuhan  ini  juga  kerap  digunakan untuk  mengobati  batuk,  insomnia,  diabetes, kejang,  demam  menghilangkan  rasa  sakit  dan penyakit kulit, juga dipercaya dapat menghentikan aktifitas tumor dan kanker. 4,5 Di Malaysia,  daun  tumbuhan ini telah  digunakan untuk  menurunkan  tekanan  darah,  diare  dan adstringen. 6
Beberapa kajian ilmiah telah membuktikan  bahwa  ekstrak  dari  daun tumbuhan  sirsak  dapat  menghasilkan  efek hipoglikemik, 7 menghambat  proliferasi  sel kanker, 8 menurunkan  kolesterol  total  dan meningkatkan HDL kolesterol secara signifikan, 9 efek antibakteri, 10 antifungi, 11 anti inflamasi, 12 efek hipotensif, 13 anti konvulsif, 14 dan mengandung antioksidan. 15
Diantara kandungan kimia yang ditemukan pada tumbuhan A. muricata antara lain  alkaloid  ,  minyak  atsiri, flavonol triglikosida,  fenolik  dan  siklopeptida. 6 Studi hepatoprotektif  dari  kombinasi  ekstrak  kulit batang Annona  muricata Linn  dan Polyalthia cerasoides Bedd menunjukkan bahwa kombinasi  tumbuhan  ini  secara  signifikan mencegah  peningkatan  serum  transaminase (SGOT  dan  SGPT)  dan  peroksida  lipid  hati tikus putih yang diinduksi dengan karbon tetra klorida (CCl 4 ). 16
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol daun sirsak (EEDS)  sebagai  antioksidan  yang  potensial untuk  melindungi  hati  tikus  dari  kerusakan yang  disebabkan  oleh  induksi  parasetamol
dosis tinggi dengan melihat gambaran histopatologi  hati  tikus  putih  jantan Rattus novergicus .

## DESAIN PENELITIAN
Penelitian  ini  bersifat true  experiment control  group  design ,  yang  dilakukan  dengan pendekatan observasional.
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Juli  hingga  Oktober  2016  di  Laboratorium Fitokimia
Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes  Aceh  untuk  proses  maserasi, pengeringan  ekstrak  di  Laboratorium  Kimia FKIP  Universitas  Syiahkuala  Banda  Aceh, pemeliharan  dan  perlakuan  hewan  uji  di Laboratorium  Hewan  Coba  serta  pengamatan histologi dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Syiahkuala.
Peralatan  yang  digunakan  adalah  sonde lambung,  spuit,  1  set  alat  bedah,  timbangan hewan, timbangan analitik, gelas piala, wadah maserasi, pot ekstrak, vacuum rotary evaporator ,  corong  kaca,  kertas  saring, mikroskop,  kapas,  masker,  1  set  kandang hewan  coba,  mikrotom  dan  sarung  tangan, mikroskop dan 1 set pewarna histologi.
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun sirsak,  tikus  jantan  putih  (Rattus  novergicus) galur Sprague dawley, etanol 80%, 90%, 95%, 96%  dan  etanol  absolut,  akuades,  tablet parasetamol,  natrium  CMC,  larutan  buffer normal  formalin  (BNF),  paraffin,  larutan hematoksilin-heosin, xilol dan entelan.
Populasi penelitian ini adalah tikus putih ( Rattus  novergicus )  sebagai  hewan  coba. Perlakuan  terdiri  dari  5  kelompok.  Besar sampel  diperoleh  melalui  rumus  Federer sebagai berikut:
(t – 1) (n – 1) ≥ 15
t = jumlah kelompok perlakuan r = besar sampel tiap kelompok
(t – 1) (n – 1) ≥ 15 (5 – 1) (n – 1) ≥ 15
(4n – 4) ≥ 15 4n ≥ 19 n ≥ 5
Sehingga  jumlah  tikus  minimum  yang digunakan  adalah  5  ekor  tiap  kelompok perlakuan. Berikut langkah-langkah kerja yang dilakukan dalam penelitian ini.

## 1.  Persiapan ekstrak etanol daun sirsak
Daun  sirsak  yang  digunakan  untuk membuat  ekstrak  dikumpulkan  sejumlah  2  kg dari  pohon  sirsak  yang  tumbuh  di  kawasan Banda  Aceh  dan  sekitarnya.  Kriteria  pemilihan daun  yang  digunakan  adalah  daun  yang  berada pada dahan ke-3 sampai dahan ke-7 dari pucuk tangkainya. Daun ini kemudian dideterminasi di Herbarium Jurusan Biologi  FMIPA Universitas Syiahkuala Banda Aceh.
Daun  sirsak  dikeringanginkan  dibawah sinar  matahari  secara  tidak  langsung    hingga kering.  Selanjutnya  daun  sirsak  diblender  dan dilakukan maserasi dengan menggunakan etanol 96%  selama  5  hari.  Selanjutnya  dilakukan penyaringan  hingga  diperoleh  filtrat  hasil maserasi  daun  ekstrak.  Pengeringan  ekstrak dilakukan  dengan  menggunakan vacum  rotary evaporator ,  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental daun  sirsak,  yang  selanjutnya  disingkat  dengan EEDS (Ekstrak Etanol Daun Sirsak).

## 2.  Perlakuan hewan uji
Hewan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah tikus jantan putih ( Rattus novergicus ) galur Sprague  dawley dengan  berat  badan berkisar 150-200 gram, dengan kriteria berumur 2-3  bulan,  memiliki  mata  yang  jernih  dan memiliki  bulu  yang  tidak  berdiri.  Sebelum dilakukan perlakuan, tikus diaklimatisasi selama 6  hari.  Selanjutnya  masing-masing  kelompok terdiri atas 5 ekor tikus. Pembagian kelompoknya dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1 : Kelompok perlakuan hewan uji
Kelompok Perlakuan I. Kontrol (K) Diberi  larutan  Na  CMC 0,5% per oral hinga hari ke-14 II. Kontrol negatif (KN) Diberi  larutan  Na  CMC 0,5% per oral hingga hari ke-14,  kemudian  2  jam setelah pemberian larutan  Na  CMC  0,5% terakhir, diinduksi
dengan  parasetamol  2,5
g/kg BB per oral III. Dosis  I (KD1) Diberi  EEDS  dosis  1 (200  mg/kg  BB)  yang disuspensikan  dalam  Na CMC  0,5%  per  oral selama 14 hari IV. Dosis II (KD2) Diberi  EEDS  dosis  2 (400  mg/kg  BB)  yang disuspensikan  dalam  Na CMC  0,5%  per  oral selama 14 hari V. Dosis III (KD3) Diberi  EEDS  dosis  3 (600  mg/kg  BB)  yang disuspensikan  dalam  Na CMC  0,5%  per  oral selama 14 hari
Pada  hari  ke-14,  tikus  diinduksi  dengan parasetamol 2,5 g/kg BB dosis tunggal per oral setelah  2  jam  dari  pemberian  ekstrak  terakhir. Setelah  24  jam,  tikus  dikorbankan  dengan  cara embolik  intrakardiak.  Selanjutnya  dilakukan pengambilan organ hati melalui proses pembedahan.

## 3.  Pemeriksaan histopatologi
Organ  hati  yang  telah  diambil  kemudian dicuci dengan NaCl 0,9% selanjutnya dimasukkan  dalam  pot  dan  disimpan  difiksasi dalam  larutan  BNF  (Buffer  Normal  Formalin). Jaringan yang telah difiksasi kemudian didehidrasi dengan alkohol mulai dari konsentrasi  70%,  80%,  90%,  95%  masing- masing  selama  24  jam  dilanjutkan  dengan alkohol  100%  selama  1  jam  yang  diulang  tiga kali.  Setelah  dehidrasi  dilanjutkan  dengan penjernihan dengan menggunakan xilol sebanyak  tiga  kali  masing-masing  selama  satu jam,  dilanjutkan  dengan  infiltrasi  parafin. Jaringan  kemudian  ditanam  dalam  media parafin.  Berikutnya  dilakukan  penyayatan dengan  ketebalan  4-5  mikron.  Hasil  sayatan dilekatkan pada kaca objek, kemudian diwarnai dengan  zat  pewarnaan  hematoksilineosin  (HE). Pengamatan  histologi  hati  dilakukan  di  bawah mikroskop  dan  didokumentasikan.  Kemudian diamati  dan  dicatat  tingkat  kerusakan  pada  sel hati    meliputi  kondisi  hemoragi,  hiperemia  dan nekrosis sel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah  dilakukan  penelitian  mengenai efek  pemberian  ekstrak  etanol  daun  sirsak terhadap  kerusakan    histologis  sel  hati  tikus akibat pemberian parasetamol yang dikelompokkan menjadi 5 kelompok perlakuan yaitu kelompok kontrol (K), kelompok kontrol negatif  (KN),  kelompok  dosis  I  KD1  ( EEDS dosis 200 mg/kg BB) , kelompok dosis II KD2 ( EEDS  dosis  400  mg/kg  BB dan  kelompok dosis  III  KD3  ( EEDS  dosis  600  mg/kg  BB) diperoleh  hasil  pengamatan  pada  kelompok perlakuan dengan data gambaran histopatologi hati  tikus  tiap  kelompok,  dianalisis  secara deskriptif  dengan  membandingkan  perubahan struktur  histopatologi  hati  tikus  pada  5 kelompok  menggunakan  literatur  dan  atlas hispatologi. 17

## Gambar 1. Gambaran mikroanatomi sel hati kelompok kontrol
Gambaran  mikroanatomi  sel  hati  pada kelompok  kontrol  menunjukkan  struktur penyusun sel hati yang relatif normal, hepatosit (Hp)  dan  celah  sinusoid  (Sn)  terlihat    jelas, tidak  ada  vakuola,  tetapi  ditemukan  beberapa kerusakan  inti  sel  hati  seperti  piknosis  dan karioreksis.  Hal  ini  kemungkinan  karena proses  penuaan  dan  kematian  sel  yang  secara fisiologi  dialami  oleh  semua  sel-sel  normal. Setiap sel dalam tubuh akan selalu mengalami penuaan  yang  diakhiri  kematian  sel  dan digantikan  oleh  sel-sel  baru  melalui  proses regenerasi. 18
Pada  kelompok  KN  (hanya  induksi parasetamol 2 g/kg BB) yaitu Gambar 2, terdapat kerusakan  struktur  hati  yang  signifikan  berupa munculnya degenerasi melemak (DM), nekrosis sel  yang  ditandai    dengan  munculnya  piknosis (Pi)  yaitu  inti  menjadi  lebih  padat  dan  warna menjadi  lebih  gelap,  karioreksis  (Kr)  yaitu pecahnya  inti  sel  dan  rusaknya  kromatin  dan kariolisis (Kl) yaitu inti tidak dapat terwarnai dan inti hilang.
Gambar 2. Gambaran mikroanatomi sel hati kelompok kontrol negatif (KN)

## Gambar 3. Gambaran mikroanatomi sel hati kelompok KD1
Pada  kelompok  KD1  dan  KD2  masih banyak terdapat nekrosis sel berupa piknositosis, karioreksis dan kariolisis, juga terdapat vakuola (Va). Pada kelompok KD3 sudah mulai terlihat adanya  sel-sel  yang  berada  dalam  kondisi normal.
Hp Sn Kr Kr Pi Kl Va DM Pi Kl
Gambar 4. Gambaran mikroanatomi sel hati kelompok KD2
Gambar 5. Gambaran mikroanatomi sel hati kelompok KD3
Celah sinusoid  tetap terlihat  dan lempeng hepatosit  yang  masih  terlihat  jelas.  Hal  ini kemungkinan disebabkan oleh karena keberadaan  antioksidan  yang  terdapat  di  dalam ekstrak  etanol  daun  sirsak  yang  mampu melindungi  sel-sel  hati  dari  kerusakan  yang disebabkan  oleh  radikal  bebas  yang  dihasilkan oleh induksi parasetamol dosis tinggi. 19
Kerusakan  hati  ditandai  dengan  adanya perubahan  struktur  mikroanatominya.  Dampak kerusakan hati akibat obat melalui 3 jalur  yaitu mengubah  sintesis  protein  atau  merubah metabolisme  lain  yang  esensial  dalam  sel  hati, mengubah  aliran  darah  ke  hati  sehingga  timbul nekrosis    jaringan  hati,  dan  mengubah metabolisme  lemak.  Kerusakan  hati  dapat bersifat  ireversibel  (tetap)  dan  reversibel
(sementara).  Perubahan  degenerasi  merupakan perubahan  yang  bersifat  reversibel.  Degenerasi yang berlangsung terus-menerus dapat mengakibatkan kematian sel (nekrosis). Nekrosis  adalah  perubahan  yang  prosesnya bersifat irreversible. 20
Degenerasi juga ditandai dengan perubahan  pada  sitoplasma.  Pada  degenarasi hidropis ditandai dengan sitoplasma mengalami vakuolisasi  dan    degenerasi  melemak  ditandai dengan vakuola–vakuola yang berisi lemak dan mendesak inti ke tepi sel. 21
Nekrosis  sel  hati  akibat  parasetamol dapat  bersifat  fokal,  sentral,  perifer  atau  masif. Kematian sel terjadi bersamaan dengan pecahnya membran plasma. Perubahan morfologis  awal  berupa  :  edema  sitoplasma, dilatasi  retikulum  endoplasma  dan  disagregasi polisom. Selanjutnya terjadi akumulasi trigliserida  sebagai  butiran  lemak  dalam  sel, pembengkakan  mitokondria  progresif  dengan kerusakan  krista  dan  pembengkakan  biokimia yang bersifat kompleks. 22
Pada  kondisi  normal,  parasetamol  yang diabsorbsi oleh tubuh dikonjugasi dengan asam glukoronat  dan  asam  sulfat,  sebagian  kecil dihidroksilasi  dengan  sitokrom  P-450  menjadi metabolit N-asetil-pbenzoquinonimin (NAPQI). Metabolit NAPQI ini oleh glutation hati diubah menjadi  metabolit  sistin  dan  merkapturat  yang kemudian dibuang melalui urin. 23
Jika jumlah parasetamol yang dikonsumsi jauh  melebihi  dosis  terapi,  maka  asam glukoronat dan asam sulfat dalam hati akan habis cadangannya,  kemudian  terbentuklah  metabolit reaktif  NAPQI  yang  berlebihan.  Selama glutation tersedia untuk mendetoksifikasi NAPQI tersebut, maka tidak akan terjadi reaksi hepatotoksisitas.  Namun,  bila  glutation  terus terpakai, akhirnya terjadi pengosongan glutation dan terjadi penimbunan metabolit NAPQI  yang toksik  dan  reaktif. N-asetilp- benzoquinonimin (NAPQI)  merupakan  metabolit  minor  dari parasetamol yang sangat aktif dan bersifat toksik bagi hati dan ginjal. Metabolit ini akan bereaksi dengan  gugusan nukleofilik  yang terdapat  pada makromolekul sel hati, seperti protein, menimbulkan hepatotoksisitas yang menyebabkan nekrosis hati. 23 Selain itu, NAPQI dapat menimbulkan stres oksidatif, yang berarti
Va Va Pi Hp
bahwa  NAPQI  dapat  menyebabkan  terjadinya peroksidasi  lipid.  Peroksidasi  lipid  merupakan bagian dari proses atau rantai reaksi terbentuknya  radikal  bebas. 24 Radikal  bebas mampu  mengubah  suatu  molekul  menjadi radikal bebas baru dan akan membentuk radikal bebas  kembali  sehingga  terjadilah  reaksi  rantai ( chain reaction ). 25
Daun  sirsak  memiliki  efek  sebagai antioksidan  dari  senyawa  asetogenin  yang dikandungnya. 26 Antioksidan  ini  yang  berperan penting  dalam  menangkap  radikal  bebas sehingga  dapat  mencegah  kerusakan  sel  hati yang diinduksi oleh parasetamol dosis tinggi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  sirsak ( Annona  muricata L.)  memiliki  aktifitas hepatoprotektif terhadap gambaran histologi hati tikus  putih Rattus  novergicus yang  terpapar parasetamol dosis tinggi. Disarankan perlu untuk dilakukan  penelitian  lanjutan  terhadap  isolasi senyawa  aktif  hepatoprotektor  yang  terdapat didalam daun sirsak ( Annona muricata L.)

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kaplowitz N., Drug-Induced Liver Disorders:  Introduction  and  Overview.  In  :
Kaplowitz  N,  ed. Drug-Induced  Liver Disease California: Marcel Dekker; 2002.
2. Saleem  TSM,  Chetty  CM,  Ramkanth  S, Rajan  VST,  Kumar  M,  Gauthaman  K. Hepatoprotective herbs – A Review. Int. J. Res. Pharm. Sci . 2010; 1(1) : 1-5.
3. Zhang A, Sun H, Wang X. Recent advances in natural products from plants for treatment of  liver  Diseases. European  Journal  of Medicinal Chemistry . 2013; 63 : 570-577.
4. Pharmaceutical  care  untuk  penyakit  hati : Jakarta : Direktorat Bina Farmasi Komunitas  Dan  Klinik  Ditjen  Bina Kefarmasian Dan Alat Kesehatan Departemen Kesehatan RI; 2007.
5. Database  file  for  Graviola  ( Annona muricata ). Tropical Plant Database:
http://www.rain- tree.com/graviola.htm#.VvDErXl8PIV . Published  1996.  Updated  December  28. Accessed Marc 20, 2016.
6. Moghadamtousi SZ, Fadeinasab M, Nikzad S,  Mohan  G,  Ali  HP,  Kadir  HA. Annona muricata (Annonaceae):  A  Review  of  Its Traditional Uses,  Isolated Acetogenins  and Biological Activities. Int. J. Mol. Sci. 2015; 16 : 15625-15658. DOI:10.3390/ijms160715625.
7. Adewole SO, Martins EAC. Morphological Changes  and  Hypoglycemic  Effects  of Annona Muricata Linn. (Annonaceae) Leaf
Aqueous  Extract  on  Pancreatic  Β-Cells  of Streptozotocin-Treated Diabetic Rats. African  Journal  of  Biomedical  Research . 2006; 9 : 173 – 187.
8. Rosdi  MNM,  Daud  NNNNM.  Cytotoxic effect  of Annona  muricata Linn  leaves extract on Capan-1 cells. Journal of Applied Pharmaceutical  Science 2015;  5(05):  45- 48. DOI: 10.7324/JAPS.2015.50508.
9. Wurdianing I, Nugraheni SA, Rahfiludin Z. Efek ekstrak daun sirsak ( Annona muricata Linn) terhadap profil lipid tikus putih jantan ( Rattus Norvegicus ). Jurnal Gizi Indonesia . 2014; 3(1) : 96-101
10. Haro  G,  Utami  NP,  Sitompul  E.  Study  Of
The  Antibacterial  Activities  Of  Soursop ( Annona muricata L.) Leaves . International Journal of PharmTech Research . 2014; 6(2) : 575-581.
11. Abubacker  MN,  Deepalakshmi  T.  In  vitro Antifungal Potentials of Bioactive
Compound  Methyl  Ester  of  Hexadecanoic Acid  Isolated from Annona muricata Linn. (Annonaceae) Leaves. Biosciences
Biotechnology Research Asia . 2013; 10 (2) : 879-884.
12. Sousa  OV,  Vieira  GDV,  Pinho  JJRG, Yamamoto CH, Alves MS. Antinociceptive and  Anti-Inflammatory  Activities  of  the Ethanol  Extract  of Annona  muricata L.
Leaves in  Animal Models. Int. J.  Mol.  Sci. 2010; 11: 2067-2078. doi:10.3390/ijms11052067.
13. Nwokocha  CR,  Owu  DU,  Gordon  A, Thaxter K, McCallah G, Ozolua RI,  young L.  Possible  mechanism  of  action  of  the
hypotensive  effect  of Annona  muricata (soursop) in normotensive Sprague-Dawley rats. Pharmaceutical  Biology .  2012;  1-6. DOI 10.3109/13880209.2012.684690.
14. Bum,  EN,  Taiwe  GS,  Moto  FCO,  et  al. Antiepileptic  Medicinal  Plants  used  in Traditional Medicine to Treat Epilepsy. In: Afawi  Z,  ed. Clinical And Genetic Aspects Of Epilepsy . Croatia, Intech; 2011:175-192.
15. Ahalya B, Ravishankar K, PriyaBandhavi P. Evaluation  Of  In  Vitro  Anti  Oxidant Activity  Of Annona  Muricata Bark .
IJPCBS . 2013; 3 (2) : 406-410.
16. Muthu  S,  Durairaj  B.  Evaluation  of antioxidant  and  free  radical  scavenging activity of Annona  muricata. Euro. J. Exp.
Bio. 2015; 5(3): 39-45.
17. Zhang S. An Atlas of Histology . New York: Springer-Verlag; 1999.
18. Iber FL, Latham  PS. Pathologic Physiology Mechanism of Disease . Jakarta: EGC; 1994.
19. Kedari  TS  and  Khan    AA.  Guyabano ( Annona  Muricata ):  A  review  of  its Traditional uses Phytochemistry and Pharmacology. American Journal of Research  Communication .  2014;    2  (10)  :
247-268.
20. Proskuryakov  SY,  Konoplyannikov  Ag, Gabai  VL.  Necrosis  :  a  specific  form  of programmed  cell  death? Experimental  Cell Research . 2003; 283 (2003): 1—16.
21. Thomas  C.  Histopatologi.  Edisi  X.  Alih Bahasa: Tonang dkk. Jakarta: EGC; 1988.
22. Wenas  NT.  Kelainan  Hati  Akibat  Obat. Dalam  : Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam Jilid  I Edisi  III. Jakarta:  Balai Penerbit  FK UI; 1996.
23. Wilmana  P  F,  Gunawan  S  G..  Analgesik- Antipiretik Analgesik Anti-Inflamasi
Nonsteroid  dan  Obat  Gangguan  Sendi Lainnya . Dalam: Farmakologi  dan  Terapi. Edisi V. Jakarta: Balai Penerbit FKUI; 2007.
24. Rubin  E,  Gorstein  F,  Rubin  R,  Schwarting R,  Strayer  D.  Rubin’s Pathology: Clinicopathologic Foundations of Medicine .
4 th ed . Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 2005
25. Widjaja  S.  Antioksidan  :  Pertahanan  tubuh terhadap  efek  oksidan  dan  radikal  bebas.
Maj. Ilm. Fak. Kedokt. Usakti . 1997; 16 (1): 162-165.
26. Baskar R, Rajeswari V, Kumar TS. In vitro antioxidant  studies  in  leaves  of  annona species .  Indian  J  Exp  Biol .  2007;  4  :  480- 485.