## EKSPLORASI BAKTERI ENDOFIT DARI DAUN NAMNAM
( Cynometra cauliflora
L.)

## EXPLORATION OF ENDOPHITE BACTERIA FROM NAMNAM LEAF(Cynometra cauliflora L.)
Hamtini, Syarah Anliza, Ira Nuraeni Poltekkes Kemenkes Banten Korespondensi: hamtini.bio05@gmail.com

## ABSTRACT
Lately,  the  use  of  traditional  medicine  as  an  option  for  treatment  is  an  alternative  to many  in  demand  because  the  traditional  medicine  proved  relatively  safe  with  correct use  and  precise  indications  and  rarely  Once  cause  side  effects.  To  take  bioactive compounds directly from the plant is required very much biomass or part of the soil, so as  to  streamline  the  way  to  obtain  the  bioactive  compounds,  then  use  specific endophytic  microbes  that  Obtained  from  the  inside  of  the  plant  that  is  expected  to produce  a  number  of  bioactive  compounds  in  need  without  having  to  extract  from  the soil.  The  study  aims  to  isolate  the  endophytic  bacteria  from  the  Namnam  leaf (Cynometra  cauliflora L.). The method used in this study is to isolate and perform the purification of the endophyte bacteria from the Namnam leaf (Cynometra cauliflora L.), as  well  as  identify  with  Gram  staining.  The  results  in  the  form  of  19  isolates  of endophytic  bacteria  have  not  too  varied  morphological  characteristics,  the  shape  and color of the average colony of cream and white milk with some there which are flat and there are jagged  colonials  and there are  Rough  surfaces and some are slippery. Then continued  with  Gram  staining,  the  result  of  Gram  staining  obtained  18  isolates  of bacteria is Gram negative and 1 isolate is positive Gram.
Keywords : Endophyte Bacteria, Namnam Leaves ( Cynometra Cauliflora L.), Exploration

## ABSTRAK
Akhir-akhir  ini  kencenderungan  dalam  penggunaan  obat  tradisional  sebagai  pilihan untuk  pengobatan  menjadi  alternatif  yang  banyak  diminati  karena  obat  tradisonal terbukti relatif aman dengan cara penggunaan yang benar dan indikasi  yang tepat serta jarang  sekali  menimbulkan  efek  samping.  Untuk  mengambil  senyawa  bioaktif  secara langsung  dari  tanamannya  dibutuhkan  sangat  banyak  biomassa  atau  bagian  dari tanamannya,  sehingga  untuk  mengefisiensikan  cara  mendapatkan  senyawa  bioaktif tersebut,  maka  di  gunakan  mikroba  endofit  spesifik  yang  diperoleh  dari  bagian  dalam tanaman  yang  diharapkan  mampu  menghasilkan  sejumlah  senyawa  bioaktif  yang  di butuhkan  tanpa  harus  mengekstrak  dari  tanamannya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi bakteri endofit dari daun Namnam ( Cynometra cauliflora L.). Metode yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  mengisolasi  dan  melakukan  pemurnian  bakteri endofit  dari  daun  Namnam  ( Cynometra  cauliflora L.),  serta  melakukan  identifikasi dengan pewarnaan Gram. Hasil yang di dapat berupa 19 isolat bakteri endofit memiliki karakteristik morfologi  yang tidak terlalu bervariasi, bentuk dan warna koloni rata-rata
berwarna krem dan putih susu dengan beberapa ada yang tepian koloninya rata dan ada yang bergerigi serta ada permukaan yang kasar dan ada yang licin. Hasil dari pewarnaan Gram  didapatkan  18  isolat  bakteri  merupakan  Gram  negatif  dan  1  isolat  merupakan Gram positif.
Kata  Kunci  :  Bakteri  Endofit,  Daun  Namnam  ( Cynometra  cauliflora L.), Eksplorasi

## PENDAHULUAN
Akhir-akhir  ini  kencenderungan  dalam penggunaan  obat  tradisional  sebagai pilihan  untuk  pengobatan  menjadi alternatif  yang  banyak  diminati  karena obat  tradisonal  terbukti  relatif  aman dengan  cara  penggunaan  yang  benar dan  indikasi  yang  tepat  serta  jarang sekali  menimbulkan  efek  samping (Nanik,  2006).  Salah  satu  upaya tersebut adalah mengeksplor dan menemukan senyawa-senyawa
antioksidan seperti beta karoten, astasantin,  alkaloid,  dan  fenol  pada tumbuhan.
Daun Namnam merupakan tanaman  dari  jenis  keluarga  Fabeceae dengan nama latin Cynometra
cauliflora ,  memiliki  daun  majemuk dengan  sepasang  anak  daun  berbentuk lonjong dengan panjang antara 5 sampai 15  cm,  berwarna  putih  atau  merah jambu  terang  ketika  masih  muda  dan berubah  menjadi  hijau  tua  mengkilat ketika  tua,  Namnam  belum  terlalu mendapat perhatian karena tidak tereksploitasi secara komersil dan untuk
pemanfaatannya  belum  diketahui  lebih lanjut  (Sumarlin,  2017).  Menurut  Aziz et al ., 2013 pada batang, kulit kayu, dan muda serta daun tua terkandung tannin, saponin  dan  flavonoid  berdasarkan  uji fitokimia  yang  telah  dilakukan  pada

## Cynometra cauliflora
Untuk mengambil senyawa bioaktif secara langsung dari
tanamannya  dibutuhkan  sangat  banyak biomassa  atau  bagian  dari  tanamannya, sehingga  untuk  mengefisiensikan  cara mendapatkan senyawa bioaktif tersebut, maka  di  gunakan  mikroba  endofit spesifik  yang  diperoleh  dari  bagian dalam tanaman yang diharapkan mampu menghasilkan sejumlah senyawa
bioaktif  yang  di  butuhkan  tanpa  harus mengekstrak dari tanamannya (Simarmata et al . 2007).
Mikroba endofit merupakan organisme hidup berukuran mikroskopis yang  hidup  di  dalam  jaringan  tanaman, sebagian besar ditemukan pada jaringan interseluler jarang sekali yang ditemukan  intraseluler  dan  di  dalam
jaringan vaskular selama periode
tertentu  dari  siklus  hidupnya  tanpa menyebabkan  gejala  penyakit  pada inangnya (Sessitsch et al . 2002).
Berdasarkan  penelitian  yang  di telah  dilakukan  oleh  Jatiningrum,  2015
telah  terdapat  17  isolat  bakteri  endofit daun  sirsak  ( Annona  muricata L.)  dari tiga  daerah  yaitu  Garut,  Cianjur,
Sukabumi  yang  menunjukkan  aktivitas terhadap  patogen.  Sebanyak  564  strain bakteri  endofit  berhasil  di  isolasi  dari tanaman tomat adalah Bacillus spp. dan
Pseudomonas spp  (Munif et  al .  2012).
Menurut  Hidayatun et  al .  2011  analisis sekuensing  untuk  identifikasi  isolat bakteri  endofitik  dan  filosfer    pada tanaman  padi  di  dapatkan  memiliki
identitas yang dekat dengan
Staphylococcus dan Seratia masing  5 isolat, Bacillus 4 isolat, Microbacteria 3 isolat, Pseudomonas 2  isolat  dan Klebsiella ,
Acidovorak , Bulkholderiaceae , Agrobacterium dan
Shewanella masing 1 isolat.
Bakteri  endofit  tanaman  hutan Indonesia  mempunyai  prospek  dalam menghasilkan senyawa aktif yang berguna  untuk  memproteksi  serangan mikrobia  patogen  tanaman  (Melliawati, et al . 2006). Isolasi bakteri endofit pada tanaman Morinda  citrifolia ditemukan
tiga  bakteri  endofit  Gram  positif  dan dua  Gram  negatif  yang  menunjukkan adanya  aktivitas  antibakteri  terhadap S. aureus , E.  coli , S.  typhimurium , B. subtilis dan Candida  albicans (Kumala 2007).

## METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  laboratorium Mikrobiologi  Jurusan  Analis  Kesehatan
Politeknik Kesehatan Kemenkes Banten.  Penelitian  ini  dilaksanakan pada  bulan  April-Juni  2018.  Isolasi bakteri Endofit. Daun Namnam
( Cynometra  cauliflora L.)  segar  di  cuci menggunakan  air  mengalir  lalu  di potong-potong  sekitar  3  cm.  Potongan daun  Namnam  tersebut  disterilisasi dengan  cara  dimasukkan  ke  dalam  air steril  setelah  itu  dimasukkan  ke  dalam etanol  96%  selama  30  detik.  Potongan daun  Namnam  tersebut  kemudian  di rendam  dalam  cairan  NaOCL  selama  5 menit  lalu  di  basuh  kembali  dengan  air steril.  Daun  Namnam  yang  telah disterilisasi  dikering  udarakan  lalu  di iris  tipis.  Irisan-Irisan  daun  Namnam tersebut  di  tanam  ke  dalam  cawan  petri yang  telah  berisikan  media  TSA  secara horizontal  (irisan  daun  ditidurkan). Setiap  tahapan  di  lakukan  secara  steril di  dalam  laminar  dan  dekat  api.  Satu cawan  petri  diisi  dengan  5  iris  daun
Namnam.  Setelah  itu  di  inkubasi  pada suhu  28 0 C  selama  2  hari  (Jatiningrum 2015 & Desriani 2013).
Pemurnian bakteri Endofit.
Bakteri  yang  tumbuh  dari  sampel tanaman  pada  media  TSA  dimurnikan dengan  cara  digores  menggunakan  ose ke  media  TSA  yang  baru  yang kemudian  di  inkubasi    pada  suhu  28 0 C untuk  mendapatkan  koloni  tunggal.
Setelah  di  dapatkan  koloni  tunggal bakteri  kemudian  di  simpan  di  agar miring  yang  kemudian  di  simpan  di lemari pendingin.
Identifikasi  isolat-isolat  endofit.
Isolat-isolat  yang  di  dapat  hasil  isolasi bakteri  endofit  daun  tanaman  namnam di  inokulasikan  ke  media  agar    miring untuk kemudian di ambil 1 ose untuk di lakukan pewarnaan Gram.
Data hasil penelitian ini disajikan secara deskriptif  dalam  bentuk  tabel  dan gambar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian
mengenai  eksplorasi  bakteri  endofit pada daun tanaman
Namnam
( Cynometra  cauliflora L.)  di  temukan
19  isolat  bakteri  endofit.  Data  hasil dapat di lihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  isolasi  bakteri  Endofit  dari daun Tanaman Namnam ( Cynometra cauliflora L.) Kode Isolat Karakteristik 1.9 DN 2 Putih susu, tepian licin,
permukaan licin, cembung
3.1 DN Putih  susu,  tepian  bergerigi,
permukaan cembung
10.1 DN Putih,  koloni  besar,  tepian  licin, permukaan  cembung  (ada  bulatan kecil ditengah)
10.1 DN 5 Putih  susu,  koloni  kecil,  tepian licin, permukaan cembung
7.1 DN Putih  susu,  koloni  sedang,  tepian bergerigi, permukaan datar
4.1 DN Putih  susu,  koloni  besar,  tepian bergerigi, permukaan cembung
9.1 DN Putih susu, tepian licin, permukaan cembung, koloni kecil 1.2 DN 2
Putih  susu,  tepian  bergerigi, permukaan cembung, koloni sedang 2.0 DN 3 Krem,  tepian  licin,  permukaan cembung,koloni sedang 1.3 DN 2 Putih susu, tepian licin,
permukaan cembung, koloni kecil 1.8 DN 2
Putih  susu,  tepian  licin,  koloni kecil, permukaan cembung
5.1 DN Putih  susu,  permukaan  cembung,
koloni kecil, tepian bergerigi 2.01 DN 3 Krem,  koloni  besar,  tepian  licin, permukaan da 8.1 DN Putih  susu,  koloni  kecil,  tepian licin, permukaan cembung 11.1 5 DN Krem,  tepian  licin,  ada  bulatan kecil ditengah, koloni kecil
1.6 DN 2
Putih  susu,  koloni  besar,  tepian bergerigi, permukaan datar
1.1 DN Putih  susu,  koloni  sedang,  tepian bergerigi, permukaan cembung
2.1 DN Putih  susu,  tepian  bergerigi, koloni sedang, permukaan cembung 1.5 DN 2 Putih  susu,  tepian  bergerigi, koloni sedang, permukaan cembung
Berdasarkan Tabel 1. dapat dilihat bahwa  hasil  isolasi  bakteri  endofit ditemukan  19  isolat  bakteri,  dengan karakteristik  morfologi  yang  tidak terlalu  bervariasi,  bentuk  dan  warna koloni  rata-rata  berwarna  krem  dan putih  susu  dengan  beberapa  ada  yang tepian  koloninya  rata  dan  ada  yang bergerigi  serta  ada  permukaan  yang kasar  dan  ada  yang  licin  Gambar  1  (c).
Uji  kontrol  negatif  yang  di  lakukan terhadap  air  rendaman  terakhir  yang disebarkan pada media agar
menunjukkan  bahwa  tidak  ada  mikrob yang  tumbuh,  hasil  ini  menguatkan bahwa  hanya  bakteri  endofit  yang tumbuh (Gambar 1 (b).
(a) (b)

## (c)
Gambar 1. (a) Bakteri Endofit yang tumbuh di daun (2x24 jam) (b) Kontrol Negatif, (c) Bakteri Endofit kode 1.9 DN 2
Tahapan  selanjutnya  di  lakukan identifikasi  dengan  pewarnaan  Gram Tabel  2.  Setelah  dilakukan  pewarnaan Gram  di  dapatkan  18  isolat  bakteri merupakan  bakteri  Gram  negatif  dan  1 bakteri merupakan bakterti Gram
positif.  Pewarnaan  Gram  di  lakukan sebagai identifikasi awal, untuk pengelompokan  bakteri  berdasarkan kelompok  Gram  positif  dan  Gram negatif.
Tabel  2.  Hasil  Pewarnaan  Gram  Isolat- isolat bakteri endofit Kode spesies Gram (+)/(-) 1.9 DN 2 Negatif 3.1 DN Negatif 10.1 DN Negatif 10.1 DN 5 Negatif 7.1 DN Negatif 4.1 DN Negatif 9.1 DN Negatif 1.2 DN 2 Negatif 2.0 DN 3 Negatif 1.3 DN 2 Negatif 1.8 DN 2 Negatif 5.1 DN Positif 2.01 DN 3 Negatif 8.1 DN Negatif 11.1 5 DN Negatif 1.6 DN 2 Negatif 1.1 DN Negatif 2.1 DN Negatif 1.5 DN 2 Negatif
Indonesia  yang  dikenal  sebagai salah satu dari 7 negara yang
keanekaragaman hayatinya terbesar kedua  setelah  Brazil,  tentu  sangat
potensial  dalam  mengembangkan  obat herbal yang berbasis pada tanaman obat kita  sendiri  (Radji,  2005).  Sehingga penelitian  mengenai  mikroba  endofit  di perlukan  untuk  lebih  mengeksploitasi secara komesil sehingga ke depan dapat dimanfaatkan  dalam  dunia  pengobatan untuk mencegah berbagai macam penyakit.
Bakteri  endofit  mendapatkan nutrisi  dari  hasil  metabolisme  tanaman dan memproteksi tanaman dalam melawan  patogen,  sedangkan  tanaman mendapatkan derivat nutrisi dan senyawa  aktif  yang  diperlukan  selama hidupnya  (Simarmata et  al .  2007).
Mikroorganisme  yang  berada  dalam jaringan  tanaman  memiliki  peranan dalam  mempengaruhi  pertumbuhan, perkembangan, serta pertahanan tanaman (Parida, 2016).
Berdasarkan  Tabel  1.  dapat  di lihat  bahwa  total  bakteri  endofit  yang berhasil  di  isolasi  dari  daun  tanaman Namnam  adalah  sebanyak  19  isolat hasil dari purifikasi. Hasil pemurnian 19 isolat bakteri menunjukkan bahwa ke 19 isolat  tersebut  memiliki  karakteristik morfologi  yang  tidak  terlalu  bervariasi, bentuk  dan  warna  koloni  rata-rata berwarna  krem  dan  putih  susu  dengan beberapa ada yang tepian koloninya rata
dan  ada  yang  bergerigi  serta  ada permukaan  yang  kasar  dan  ada  yang licin.  Menurut  Bacon  &  Hinton  2006 jumlah bakteri endofit di dalam tanaman  tidak  dapat  ditentukan  secara pasti,  namun  bakteri  ini  dapat  dideteksi dengan mengisolasi pada media agar.
Populasi bakteri endofit dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan seperti, sifat tanah, bahan organik dalam tanah, teknik budidaya, pemupukan, dan aplikasi  pestisida  (Parida,  2016).  Selain itu  juga  studi  mengenai  keragaman bakteri  dalam  dua  dekade  terakhir mengungkapkan  bahwa  lebih  dari  99% bakteri  yang  ada  di  alam  tidak  dapat dikulturkan  di  laboratorium  dengan menggunakan  metode  kultur  standar (Primanita,  2015).  Setelah  di  lakukan proses  isolasi  sehingga  didapatkan koloni  tunggal,  identifikasi  awal  di lakukan  dengan  uji  perwarnaan  Gram, uji  ini  untuk  membedakan  kelompok bakteri  Gram  poasitif  dan  kelompok bakteri  Gram  negatif.  Berdasarkan Tabel  2.  dapat  dilihat  bahwa  dari  19 isolat yang berhasil 18 isolat merupakan bakteri Gram negatif dan 1 isolat bakteri merupakan bakteri Gram positif.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil dan pembahasan yang telah  dibuat  maka  dapat  disimpulkan
bahwa  hasil  isolasi  bakteri  endofit  dari daun  tanaman  Namnam  ( Cynometra cauliflora L.) mendapatkan sebanyak 19 isolat  bakteri  endofit.  Hasil  pemurnian 19 isolat bakteri menunjukkan bahwa ke 19 isolat tersebut memiliki karakteristik morfologi  yang  tidak  terlalu  bervariasi, bentuk  dan  warna  koloni  rata-rata berwarna  krem  dan  putih  susu  dengan beberapa ada yang tepian koloninya rata dan  ada  yang  bergerigi  serta  ada permukaan  yang  kasar  dan  ada  yang licin.

## DAFTAR PUSTAKA
Aziz  AFA,  Iqbal  M.  2013.  Antioxidant activity and phytochemical composition of Cynometra cauliflora . J  Exp  Integr  Med .  3(4):
337-341.
Bacon CW, Hinton DM. 2006. Bacterial endophytes:  the  endophytic  niche, its  occupants,  and  its    utility.  Di dalam:  Gnanamanickam  SS, editor.
Plant-Associated
Bacteria.
Netherland: Springer.
Desriani,  Kusumawati  DW,  Rivai  A,
Hasanah  N,  Amrinola  W,  Triratna L,  Sukma  A.  2013.  Potential Endophytic  Bacteria  for  Increasing Paddy  var  Rojolele  Productivity. Int.  J.  on  Adv.  Sci.,  Eng.  And Information Tech . 3 (1): 76-78.
Hidayatun N, Susilowati DN, Mulya K.
2011.  Identifikasi  26  Isolat  Bakteri Endofitik  dan  Filosfer  Padi  dengan
Analisis Sekuens 16s rDNA. Berita Biologi 10(4).
Jatiningrum  I.  2015.  Isolasi  dan
Identifikasi  Bakteri  Endofit  dari Daun  Sirsak  ( Annona  mucicata L.) Penghasil Senyawa Antibakteri [Skripsi].  Bogor  [ID]:  Institut Pertanian Bogor. Kumala S, 2007. Isolation and screening  of  endophytic  microbes from  Morinda  citrifolia  and  their ability  to  produce  anti  microbial substances. J  Microbiol  Ind 1(3):
145-148.
Munif  A,  Hallmann  J,  Sikora  R.  2012.
Isolation  of  Endophytic  Bacteria from  Tomato  and  Their  Biocontrol Activities Against Fungal Diseases.
Microbiology  Indonesia.  6(4):  148-
156.
Melliawati  R,  Widyaningrum  DN,
Djohan  AP,  Sukiman  H.  2006. Pengakajian Bakteri Endofit Penghasil  Senyawa  Bioaktif  untuk Proteksi Tanaman. Jurnal Biodiversitas . 7(3): 221-224.
Nanik  Fauziah.  2006.  Isolasi  dan  Uji Aktifitas  Inhibitor  Xantin  Oxidase Senyawa  Flavonoid  dari  Kulit Batang  Saccopetalum  Horsfledii
Benn. Library@lib.unair.ac.ic.
Parida  I.  2016.  Isolasi,  seleksi,  dan
Identifikasi  bakteri  endofit  sebagai agens penginduksi ketahanan tanaman  padi  terhadap  penyakit hawar  daun  bakteri.  [Tesis].  Bogor [ID]: Institut Pertanian Bogor. Primanita M. 2015. Analisis Metagenomik Aktinomiset Eendofit pada Tanaman brotowali ( Tinospora crispa L. Miers) berdasarkan Gen 16S rRNA
Radji  M.  2005.  Peranan  Bioteknologi dan Mikroba Endofit dalam
Pengembangan Obat Herbal. Review Artikel .  Majalah Ilmu
Kefarmasian. 2(3): 113-126. Sessitsch  A,  Reiter  B,  Pfeifer  U,
Wilhelm  E.  2002.  Cultivation independent  population  analysis  of endophytics  in  tree  potato  varieties
based on
eubacterial and
Actinomycetes specific PCR of 16S
RRNA  genes. FEMS  Microbiol
Ecol 39: 23-32. Sumarlin  LO.  2017.  Studi  Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Daun Namnam  ( Cynometra  cauliflora )
Secara  in  vitro  dan  in  vivo  pada Tikus Sprague  Dawlay [Disertasi].
Bogor  [ID]:  Institut  Pertanian Bogor. Simarmata R, Lekatompessy S, Sukiman  H.  2007.  Isolasi  Mikroba Endofitik dari Tanaman Obat Sambung Nyawa (Gynura procumbens) dan Analisis Potensinya  sebagai  antimikroba. J
Berk Penel Hayati . 13.