## PENGEMBANGAN METODE GC-MS UNTUK PENETAPAN KADAR ACETAMINOPHEN PADA SPESIMEN RAMBUT MANUSIA
Komang Ari Gunapria Darmapatni*, Achmad Basori dan Ni Made Suaniti
Program Studi Magister Ilmu Forensik, Sekolah Pascasarjana, UNAIR, Surabaya Email : argun4sma@yahoo.com

## ABSTRAK
Rambut  dapat  digunakan  sebagai  pilihan  dalam  melakukan  analisis  senyawa  obat  di dalam  tubuh  khususnya  pada  kasus-kasus  penyalahgunaan  obat  atau  keracunan  yang  bersifat kronik. Telah dilakukan penelitian yang bertujuan untuk mengembangan metode untuk penetapan kadar acetaminophen pada  spesimen  rambut  manusia  menggunakan  instrumen  GC-MS.  Sampel rambut  diambil  pada  panjang  0-3  cm,  0-6  cm  dan  0-10  cm  pada  10  orang  pasien  yang mendapatkan  terapi  parasetamol.  Preparasi  sampel  terdiri  dari  tahap  dekontaminasi,  destruksi, ekstraksi dan derivatisasi pada masing-masing spesimen rambut. Kemudian ekstrak diinjeksikan pada sistem GC-MS. Hasil penelitian menunjukkan bahwa acetaminophen dapat terdeteksi pada spesimen  rambut  dalam  bentuk acetaminophen-TMS akibat  adanya  perlakuan  derivatisasi menggunakan  BSTFA  yang  mengandung  TMCS  1%.  Pada  panjang  spesimen  rambut  0-3  cm diperoleh konsentrasi 0,1761-0,3392 ng/mg spesimen rambut, pada panjang spesimen rambut 0-6 cm diperoleh hasil 0,2081-0.4845 ng/mg spesimen rambut dan pada panjang spesimen rambut 0- 10  cm  konsentrasi acetaminophen-TMS dalam  sampel  adalah  0,2473-0,5782  ng/mg  spesimen rambut.
Kata kunci : acetaminophen , rambut, Gas Chromatography - Mass Spectrometry

## ABSTRACT
Hair can be used as an option in the analysis of drug compounds in the body, especially in cases of drug abuse or poisoning that is chronic. There are previous researches that have aimed to develop the method for the determination of acetaminophen levels in specimens of human hair using GC-MS. The data was taken from the hair samples that are 0-3 cm long, 0-6 cm long and 0- 10 cm in 10 patients treated with paracetamol. Sample preparation consists of decontamination, destruction, extraction and derivatization processes on each hair specimen. Then the extract was injected into the GC-MS system. The results showed that acetaminophen can be detected in hair specimens  in  the  form  of acetaminophen-TMS as  a  result  of  the  derivatization  treatment  using BSTFA  containing  1%  of  TMCs. At  the  0-3  cm  long  hair  specimens,  it  was  obtained  the concentration of 0.1761 to 0.3392 ng/mg of hair specimens; at the 0-6 cm long hair specimens, it was obtained the concentration of 0.2081 to 0.4845 ng/mg of hair specimens; and at the 0-10 cm long  hair  specimens, acetaminophen-TMS concentration  in  the  sample  was  0.2473  to  0.5782 ng/mg of hair specimens.
Keyword   : acetaminophen , human hair, Gas Chromatography - Mass Spectrometry

## 1. PENDAHULUAN
Pada  tahun  2014  telah  terjadi berbagai  macam  kasus  keracunan  dan penyalahgunaan obat-obatan. Berdasarkan  data  yang  dikutip  dari website Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan,  pada  tahun  2014  mengenai kasus  keracunan  diperoleh  hasil  bahwa keracunan  disebabkan  oleh  beberapa salah  satunya  adalah  penyalahgunaan obat-obatan selain NAPZA.
Monitoring senyawa obat dalam tubuh  dapat  dilakukan  melalui  cairan tubuh  seperti  urin,  keringat,  saliva  dan darah.  Rambut  dalam  berbagai  kasus kriminal  digunakan  untuk  mengetahui kecocokan deoxyribonucleic acid (DNA)  namun  rambut  juga  dapat digunakan sebagai pilihan dalam melakukan analisis senyawa obat didalam  tubuh.  Kelebihan  penggunaan spesimen rambut dibandingkan urin dan darah  untuk  menganalisis  obat  adalah rambut  memiliki  informasi  keberadaan obat  yang  lebih  lama  dengan  rentang waktu minggu hingga bulan dibandingkan pada urin atau darah yang hanya mendeteksi dengan kisaran waktu beberapa  jam  hingga  beberapa  hari
(Kintz,  2000).  Han et  al. (2012)
menggunakan  spesimen  rambut  dengan panjang  rambut  yang  berbeda  yakni  0-3 cm,  3-6  cm,  6-9  cm,  9-12  cm  untuk menganalisis Tetrahydrocanabinol (THC). Berdasarkan penelitian ini diketahui  bahwa  konsentrasi  rata-rata
THC  pada  panjang  0-3  cm  lebih  besar dibandingkan 9-12 cm.
Di  Inggris  pada  tahun  2000 hingga  2008  sebesar  90  hingga  155 orang  meninggal  akibat  keracunan acetaminophen tiap  tahunnya  (Hawton et al ., 2011). Acetaminophen merupakan analgesik-antipiretik  non  opioid  dan anti-inflamasi non-steroid (AINS). Acetaminophen dan metabolitnya memiliki  sifat  yang  cenderung  polar
(Hansen et  al. ,  2012). Acetaminophen meniru  cara  keja  dari  heroin  (Aronson, 2014)  sehingga  sering  digunakan  secara bersama-sama  dengan  analgesik  opioid untuk meningkatkan efektivitas analgesik  dan  menurunkan  kebutuhan
akan analgesik opioid tersebut (Curatolo and Sveticic, 2002). Selain itu penggunaan acetaminophen dengan alkohol juga meningkatkan risiko nekrosis hati pada penggunanya (Mozayani dan Raymond, 2002). Konsentrasi obat dalam spesimen rambut relatif rendah sehingga diperlukan  teknik  ekstraksi  yang  tepat serta  instrumen  yang  mendukung  untuk menganalisis  suatu  senyawa  dalam konsentrasi  yang  kecil  salah  satu instrument yang dapat mendeteksi suatu senyawa  hingga  <  1  ng/g  adalah Gas
Chromatography-Mass Spectrometry
(GC-MS).  Selain  instrumen  yang  tepat dibutuhkan  juga  teknik  khusus  sebelum sampel  diinjeksikan  ke  dalam  sistem
GC-MS,  salah  satunya  adalah  teknik derivatisasi. Teknik ini digunakan apabila  senyawa  yang  ingin  diketahui keberadaannya cenderung sulit menguap dan tidak stabil pada suhu tinggi. Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui apakah senyawa acetaminophen dapat  terdeteksi  pada spesimen rambut pasien yang mendapatkan  terapi  parasetamol  serta mengetahui  pengaruh  panjang  spesimen rambut terhadap konsentrasi acetaminophen pada  spesimen  rambut manusia.  Analisis  dilakukan  dengan menggunakan GC-MS dengan tambahan perlakuan  derivatisasi  menggunakan N,O-bis  (trimetilsilil)  trifluoroasetamida (BSTFA) yang mengandung trimetilklorosilan (TMCS) 1%. Upaya  untuk  menjamin  bahwa prosedur  analisis  yang  dipilih  akan memberikan  hasil  yang  valid  dan  dapat dipercaya maka harus dilakukan validasi metode.  Adapun  uji  yang  dilakukan dalam  validasi  metode  antara  lain  : linieritas,  batas  deteksi/LoD  ( Limit  of Detection ),  batas  kuantitasi/LoQ  ( Limit of Quantitation ), accuracy dan
precision. Selain  uji  validasi  dilakukan juga uji statistik untuk memastikan hasil yang diperoleh memiliki makna berdasarkan statistik.
2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Rambut
Rambut  merupakan  salah  satu bagian  tubuh  yang  memiliki  bentuk seperti  benang  yang  tumbuh  dari  akar rambut  yang  ada  dalam  lapisan  dermis dan  melalui  saluran  folikel  rambut  ke luar dari kulit. Komponen kimia rambut terdiri  atas  0.1-5  pigmen  (melanin),  1- 9%  lemak,  dan  65-95%  protein  serta komponen-komponen  lainnya  seperti polisakarida dan air (Kintz, 2007). Clay et  al .,  (1940)  menemukan  bahwa dalam  rambut  yang  berwarna  hitam mengandung lebih banyak kandungan  protein  sistein  (Asquith, 1977) Rambut kepala dihasilkan selama periode waktu 4-8 tahun sedangkan non rambut kepala dihasilkan selama  periode  kurang  dari  12  bulan dengan  pertumbuhan  rata-rata  0,6-1,42 cm  per  bulan  hal  ini  tergantung  pada tipe  rambut  dan  lokasi  tumbuhnya (Saitoh,  1969).  Tingkat  pertumbuhan rambut  kulit  kepala  manusia  adalah sekitar  0,35  mm  per  hari  pada  pria  dan wanita,  namun  hal  ini  sangat  bervariasi (Kintz, 2007).
Berdasarkan  penelitian  Pötsch (1996)  ditemukan  beberapa  variasi pertumbuhan  rambut  yakni  0,07  dan 0,78  mm  per  hari  sedangkan    82%  dari populasi  penelitian  mempunyai  variasi antara 0,32 dan 0,46 mm per hari. Siklus pertumbuhan  rambut  manusia  dimulai dengan fase anagen atau fase pertumbuhan,  yaitu  folikel  berkembang dan  rambut  diproduksi.  Durasi  fase anagen sangat  bervariasi  dan  biasanya berlanjut  antara  7-94  minggu,  namun dapat  berlangsung  selama  beberapa tahun, tergantung pada daerah anatominya (Castanet and Ortonne,1997). Catagen adalah  fase regresi, yaitu ketika aktivitas bola folikel berhenti  dan  dermal  papila  mengkerut ketika  folikel  mendekati  fase  istirahat, telogen, kemudian  setelah  fase telogen , siklus  pertumbuhan  lain  dimulai  (Kintz, 2007).  Gambar  2.1  Struktur  folikel
rambut (Kintz, 2007) sedangkan Gambar  2.2  Fase  pertumbuhan  rambut (Kintz, 2007)
Baugartner  (1979)  melakukan penelitian  keberadaan  metabolit  morfin pada  sampel  rambut  yang  berasal  dari seorang pengguna heroin dengan metode radioimmunoassay (RIA), diperoleh hasil  bahwa  perbedaan  konsentrasi morfin  dalam  sepanjang  helai  rambut tersebut  berhubungan  dengan  waktu pemakaian. Terdapat tiga model penyatuan obat yang telah diteliti antara lain  :  obat  bisa  masuk  ke  dalam  rambut melalui  (1)  difusi  aktif  atau  pasif  dari aliran  darah  yang  memenuhi  papila dermal,  (2)  difusi  dari  keringat  dan sekresi lainnya  membasahi  serat  rambut yang  tumbuh  atau  yang  sudah  dewasa, atau  (3)  obat  eksternal  dari  uap  atau serbuk  yang  berdifusi  ke  dalam  serat rambut  dewasa  (Kintz,  2007). . Gambar 2.3  menunjukkan  mekanisme  distribusi obat ke dalam rambut.
2.2 Parasetamol Parasetamol  mempunyai  rumus molekul C 8 H 9 NO 2 dengan berat molekul  151,16  g/mol.  Nama  lain  dari parasetamol  adalah acetaminophen atau 4-hidroksi asetalinida. Parasetamol memiliki  kelarutan  sangat  rendah  bila dilarutkan dalam pelarut nonpolar seperti  toluena.  Pada  alkohol  kelarutan parasetamol  akan  menurun  dengan peningkatan  panjang  rantai  karbon sedangkan dalam air kelarutan parasetamol  jauh  lebih  rendah  daripada di  pelarut  polar  lainnya  seperti  alkohol (Granberg and Rasmuson, 1999).
Acetaminophen dapat  membentuk ikatan  dengan  gugus  thiol  pada sistein (Lemke et al. 2007).
Penelitian  Saito  (2008)  telah berhasil melakukan analisis acetaminophen menggunakan  spesimen rambut  pada  kasus  keracunan  dalam kondisi overdose (OD).  Dari  penelitian ini  diketahui  pula  bahwa  limit  deteksi GC-MS  adalah  0,1  ng/mg  dengan
jumlah spesimen rambut yang digunakan sebanyak 20 mg.
Gambar  2.1 Struktur  folikel  rambut (Kintz, 2007)
Gambar  2.2 Fase  pertumbuhan  rambut (Kintz, 2007) Gambar  2.3 Mekanisme  distribusi  obat ke dalam rambut (Kintz, 2007) 2.3 GC-MS Teknik GC pertama kali diperkenalkan  oleh  James  dan  Martin pada  tahun  1952  (Sparkman et  al., 2011).  GC  merupakan  salah  satu  teknik kromatografi yang hanya dapat digunakan  untuk  mendeteksi  senyawa- senyawa yang mudah menguap. Kriteria menguap  adalah  dapat  menguap  pada kondisi  vakum  tinggi  dan  tekanan rendah  serta  dapat  dipanaskan  (Drozd, 1985). Dasar  pemisahan  menggunakan kromatografi  gas  adalah  penyebaran cuplikan  pada  fase  diam  sedangkan  gas sebagai fase gerak mengelusi fase diam. Cara  kerja  dari  GC  adalah  suatu  fase gerak  yang  berbentuk  gas  mengalir  di bawah  tekanan  melewati  pipa  yang dipanaskan dan disalut dengan fase diam cair atau dikemas dengan fase diam cair yang  disalut  pada  suatu  penyangga padat.  Analit  tersebut  dimuatkan  ke bagian  atas  kolom  melalui  suatu  portal injeksi  yang  dipanaskan.  Suhu  oven dijaga  atau  diprogram  agar  meningkat secara  bertahap.  Ketika  sudah  berada dalam  kolom,  terjadi  proses  pemisahan antar  komponen.  Pemisahan  ini  akan bergantung  pada  lamanya  waktu  relatif yang dibutuhkan oleh komponen-
komponen tersebut di fase diam (Sparkman et al., 2011). Seiring dengan perkembangan teknologi maka  instrument  GC  digunakan  secara bersama-sama  dengan  instrumen  lain seperti Mass-Spectrometer (MS). Spektrometer  massa  diperlukan untuk  identifikasi  senyawa  sebagai penentu  bobot  molekul  dan  penentuan rumus  molekul.  Prinsip  dari  MS  adalah pengionan    senyawa-senyawa  kimia untuk  menghasilkan  molekul  bermuatan atau  fragmen  molekul  dan  mengukur rasio massa/muatan.  Molekul yang telah terionisasi  akibat  penembakan  elektron berenergi tinggi tersebut akan menghasilkan ion dengan muatan positif, kemudian ion tersebut diarahkan menuju medan magnet dengan kecepatan  tinggi.  Medan  magnet  atau medan  listrik  akan  membelokkan  ion tersebut  agar  dapat  menentukan  bobot molekulnya  dan  bobot  molekul  semua fragmen  yang  dihasilkan  (David,  2005). Kemudian  detektor  akan  menghitung muatan  yang  terinduksi  atau  arus  yang dihasilkan  ketika  ion  dilewatkan  atau mengenai  permukaan, scanning massa dan  menghitung  ion  sebagai mass  to charge  ratio (m/z).  Terdapat  4  (empat) proses  dalam  spektrometri  massa  yakni ionisasi,  percepatan,  pembelokkan  dan pendeteksian.
Derivatisasi  merupakan  proses kimiawi untuk mengubah suatu senyawa menjadi  senyawa  lain  yang  mempunyai sifat-sifat  yang  sesuai  untuk  dilakukan analisis  menggunakan  kromatografi  gas atau menjadi lebih mudah menguap. Hal ini  dilakukan  jika  suatu  senyawa diketahu  sulit  menguap  maka  dilakukan derivatisasi  terlebih  dahulu  sebelum dianalisis  menggunakan  GC.  (Drozd, 1985).
Derivatisasi  dilakukan  karena terdapat  senyawa-senyawa  dengan  berat molekul  besar  yang  biasanya  tidak mudah  menguap  karena  adanya  gaya tarik-menarik  inter  molekuler  antara gugus-gugus polar atau yang
mengadung  hidrogen  aktif  seperti  SH,  - OH, -NH dan -COOH maka jika gugus-
gugus  polar  ini  ditutup  dengan  cara derivatisasi  akan  mampu  meningkatkan volatilitas  senyawa.  Selain  itu  beberapa senyawa volatil mengalami dekomposisi parsial karena panas sehingga diperlukan derivatisasi untuk meningkatkan stabilitasnya (Drozd, 1985).
Sililasi  merupakan  salah  satu proses derivatitasi dengan menghasilkan produk berupa derivatif silil yang sangat volatil,  dan  lebih  stabil  pada  suhu  yang tinggi.  Cara  kerja  dari  penderivat  tipe silil  ini  adalah  dengan  mengganti  gugus hidrogen  (H)  dengan  trimetilsilil  atau TMS (Regis, 1998).

## 3. METODE PENELITIAN
3.1 Bahan penelitian Spesimen yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  rambut. Bahan  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah bahan kimia dalam derajat pro analisis (p.a) yang terdiri dari diklorometana (CH 2 Cl 2 ), metanol (CH 3 OH), standar pembanding acetaminophen dan N,O-bis (trimetilsilil) trifluoroasetamida (BSTFA) yang mengandung trimetilklorosilan  (TMCS)  1%  yang diperoleh  dari Sigma  Aldrich  Chemical
Singapore .
3.2 Instrumen penelitian
Alat  yang  digunakan  meliputi alat-alat  gelas  yang  umum  digunakan dalam  laboratorium  analisis, box es, pipet  mikro  dengan  ukuran  1000  μL (200-1000  μL)  dan  20  μL  (2-20  μL), neraca  analitik,  gunting stainless  steel , wadah plastik bertutup, Gas Chromatography (GC)  tipe  Agilent 6890N  dengan  kolom  kapiler  HP-5ms (30  m  x  0,25  mm  x  0,25  μm)  dan detektor Mass  Spectrometry (MS)  tipe
Agilent 5973.
3.3 Pengumpulan data 3.3.1 Preparasi Larutan Standar Parasetamol Sebanyak 1 mg standar parasetamol ditimbang, kemudian
dilarutkan dengan metanol (98%) dalam labu  ukur  10  mL  hingga  tanda  batas sehingga  diperoleh  larutan  standar parasetamol  dengan  konsentrasi  100 ppm. Kemudian larutan standar parasetamol    100  ppm  dipipet  berturut- turut 0,3 mL; 0,7 mL; 1 mL; 1,5 mL dan
2  mL,  dimasukkan  masing-masing dalam  labu  10  mL  dan  ditambahkan metanol  98%  hingga  tanda  batas sehingga  diperoleh  konsentrasi  larutan standar yakni 3 ppm, 7 ppm, 10 ppm, 15 ppm  dan  20  ppm. Seluruh  larutan standar diderivatisasi sebelum diinjeksikan ke sistem GC-MS. 3.3.2  Ekstraksi spesimen rambut simulasi Spesimen rambut yang diperoleh  dari  orang  sehat,  100  mg spesimen rambut didekontaminasi terlebih  dahulu,  dihomogenasi,  dan diekstraksi  dengan  1  mL  larutan acetaminophen 10  ppm  pada  suhu  45 o C selama  2  jam.  Ekstrak  cairnya  di sentrifugasi dengan kecepatan 5000 rpm selama  5  menit.    Ekstrak  diuapkan hingga  990  μL.  Kemudian  sebanyak  10 μL  BSTFA  yang  sudah  mengandung TMCS  1  %  ditambahkan  ke  dalam ekstrak.  Tabung  disegel  dan  dipanaskan pada  60 o C  selama  20  menit.  Setelah derivatisasi, spesimen didinginkan sampai  suhu  kamar.  Sebanyak  1  μL spesimen  hasil  derivatisasi  disuntikkan ke dalam kondisi GC-MS terpilih.
3.3.3  Preparasi  dan  analisis  spesimen rambut Analisis  pada  rambut  dilakukan pada  10  orang  pasien  (sukarelawan) yang mendapatkan terapi tablet parasetamol  yang  sama  pada  dosis terapi.  Masing-masing  spesimen  rambut dipotong  dengan  panjang  0-3  cm,  0-6
cm dan 0-10 cm.
Setiap  helai  rambut  diperoleh dengan cara rambut digunting
menggunakan  gunting stainless  steel . Rambut  diambil  pada  bagian  depan, atas,  samping  kanan,  samping  kiri,  dan
bagian belakang. Kemudian dimasukkan ke  dalam  wadah  plastik  dan  disimpan pada suhu ruang (Wijayaputra, 2011). Sebanyak  200  mg  spesimen rambut ditimbang. Kemudian didekontaminasi dengan 5 mL
diklorometana selama 2 menit pada suhu ruang,  5  mL  air  hangat  selama  2  menit dan 5 mL diklorometana selama 2 menit (Saito,  2008).  Setelah  didekontaminasi, spesimen  rambut  digunting  menjadi kecil dan diinkubasi pada 45 0 C selama 2 jam  dalam  1  mL  metanol.  Kemudian lapisan air ditampung dan disentrifugasi dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  5 menit  (Wijayaputra,  2011).  Supernatan yang  diperoleh  diambil  dan  diuapkan menggunakan  nitrogen.    Residu  yang diperoleh kemudian diderivatisasi. Sebanyak 10 μL BSTFA dengan TMCS 1  %  ditambahkan  ke  residu.  Tabung disegel  dan  dipanaskan  pada  60 o C selama  20  menit.  Setelah  derivatisasi, spesimen  didinginkan  sampai  suhu kamar.  Sebanyak  1  μL  spesimen  hasil derivatisasi disuntikkan ke dalam sistem GC-MS.
3.3.4  Cara  Pengolahan  dan    Analisis
Data Data yang diperoleh dari
penelitian  ini  akan  berupa kromatogram dengan  puncak  ( peak ),  waktu  retensi (tR)  dan  luas  puncak  yang  kemudian dilakukan  perhitungan  untuk  validasi metode dan konsentrasi senyawa parasetamol. Konsentrasi senyawa acetaminophen dalam  spesimen  rambut diperoleh  dengan  cara  luas  puncak spesimen  diplotkan  dalam  persamaan regresi linier standar sehingga diperoleh konsentrasi acetaminophen dalam spesimen  rambut  pasien.  Kemudian dilakukan  uji  statistic  regresi  linier sederhana  menggunakan software IBM SPSS Statistics 24.
4.4 Validasi metode
4.4.2 Linieritas
Uji  linieritas  dilakukan  dengan cara  membuat  persamaan  regresi  linier
berdasarkan konsentrasi dan area, dengan rumus : y = bx + a dengan, y = luas puncak ( peak area)
x = konsentrasi zat
kemudian  dihitung  harga  koefisien korelasi.
4.4.3 Penentuan batas deteksi (LoD) dan batas kuantitasi (LoQ) Untuk menentukan LoD dan LoQ dapat digunakan rumus : LOD = S(y/x) = LOQ = 4.4.4 Akurasi (persen recovery) Untuk menentukan akurasi maka  dilakukan  perhitungan  persen recovery atau perolehan kembali menggunakan  ekstrak  cair  spesimen rambut simulasi. Digunakan rumus nilai recovery : Recovery = x 100% 4.4.5 Presisi Presisi diperoleh dengan menginjeksikan  masing-masing  standar acetaminophen sebanyak  3  (tiga)  kali, kemudian dihitung nilai presisi berdasarkan  harga  koefisien  variasi,
dengan rumus :
CV =
dengan, S b :   simpangan baku relatif
:  harga  rata-rata  dari  banyaknya pengukuran
4. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Validasi Metode Penelitian Berdasarkan hasil analisis terlihat  bahwa  pada  blanko  tidak ditemukan  puncak  yang  merupakan senyawa acetaminophen , sedangkan pada larutan standar terkonsenrasi menunjukkan puncak senyawa
acetaminophen dalam bentuk derivatnya yakni acetaminophen-TMS pada  waktu retensi  18.10  pada  mode  Full  Scan  dan 18.09  pada  mode  SIM  ( Selected  Ion
Monitoring ). Mode  Full  Scan  merupakan mode  untuk  menganalisis  keseluruhan senyawa  dalam  sampel,  sedangkan mode  SIM  merupakan  mode  operasi tanpa  merekam  keseluruhan  spektra,
namun hanya ion-ion tertentu (Moffat, et al. ,  2004).  Mode Full  Scan dilakukan terlebih dahulu guna memastikan senyawa  apa  yang  terdapat  dalam sampel tersebut, kemudian jika senyawa yang  dicari  telah  ditemukan  maka dilakukan  analisis  dengan  mode  SIM, mode SIM relatif lebih peka dikarenakan dengan mode SIM senyawa-senyawa dengan ion-ion fragmentasi yang diinginkan atau dengan  kelimpahan  yang  tinggi  saja yang akan dideteksi walaupun konsentrasinya relatif rendah. Pada  penelitian  ini  digunakan ion  fragmentasi  166,  181,  dan  223 karena  memiliki  kelimpahan  relative lebih tinggi dan spesifik. Hal ini terbukti bila  ditinjau  dan  membandingkan  hasil analisis  full  scan  dan  SIM.  Pada  mode full scan semua senyawa yang ada pada ekstrak terdeteksi oleh instrumen, namun  pada  mode  SIM  hanya  terlihat  1 puncak yang merupakan acetaminophen-TMS . 4.1.1 Linieritas Linieritas berfungsi untuk membuktikan  hubungan  linier  antara konsentrasi  dan peak area.  Berdasarkan perhitungan diketahui bahwa nilai koefisien  korelasi    (r)  =  0,9950. Nilai koefisien  korelasi  yang  mendekati  +1 menunjukkan  adanya  korelasi  positif yang  kuat  antar  variabel  sedangkan berdasarkan  nilai  koefisien  determinasi (R 2 )  sebesar  0.9901  yang  menunjukkan bahwa  variabel  X  (konsentrasi  larutan standar) mempengaruhi variabel Y (luas area) sebesar 99,01%.
4.1.2 Presisi
Nilai presisi dihitung berdasarkan harga  koefisien  variasi.  Tabel  4.1 menunjukkan  harga  koefisien  variasi masing-masing larutan standar acetaminophen. Nilai  presisi  dihitung berdasarkan  harga  koefisien  variasi.
Nilai  %  RSD  menyatakan  tingkat ketelitian analisis, semakin kecil nilai %
RSD maka makin teliti tingkat ketelitiannya, namun hal ini disesuaikan dengan  konsentrasi  komponen  terukur dalam sampel. Semakin kecil konsentrasi  komponen  maka  semakin besar nilai % RSD yang dihasilkan. Tabel  4.2  menunjukkan  tingkat presisi  berdasarkan  konsentrasi  analit yang  dianalisis  yang  dikutip  dari American pre-Veterinary Medical Assosiation (2004) sedangkan berdasarkan Association  of  Analytical Communities (AOAC)  tingkat  presisi disesuaikan  juga  dengan  konsentrasi komponen  dalam  sampel.  Tabel  4.3 menunjukkan tingkat presisi disesuaikan juga  dengan  konsentrasi  komponen dalam sampel berdasarkan AOAC.
Tabel 4.1 Harga  koefisien  variasi masing-masing larutan standar acetaminophen No Konsentrasi (ppm) %RSD 1. 3 17.5% 2. 7 7.67% 3. 10 1.85% 4. 15 2.5% 5. 20 2.9% Ditinjau berdasarkan APVMA metode  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  memenuhi  syarat  %  RSD yang diterima karena konsentrasi komponen  terukur  ≤  0.10 %  atau ≤  100 ppm  dengan  syarat  keberterimaan  ≤  20 %. Tabel  4.2 Tingkat  presisi  berdasarkan konsentrasi  analit  yang  dianalisis berdasarkan American pre-
Veterinary  Medical  Assosiation (2004) Jumlah  komponen  terukur dalam sampel Tingkat presisi ≥ 10.00% ≤ 2 % 1.00 % ≤ x ≤ 10.00 % ≤ 2 % 0.10 % ≤ x ≤ 1.00 % ≤ 10 % ≤ 0.10 % ≤ 20 % Tabel  4.3 Tingkat  presisi  disesuaikan juga dengan konsentrasi komponen dalam sampel nerdasarkan AOAC. Konsentrasi Presisi 100% ≤ 1 % 10% ≤ 1,5 % 1% ≤ 2 % 0.1 % ≤ 3 % 0.01 % (100 ppm) ≤ 4 % 10 ppm ≤ 6 % 10 ppb ≤ 15 %
Bila  digunakan  acuan  AOAC  maka hanya  konsentrasi  10,  15  dan  20  ppm yang  memenuhi  syarat  keberterimaan yakni ≤ 4 % untuk konsentrasi 15 dan 20 ppm sedangkan ≤ 6 % untuk konsentrasi 10  ppm.  Adanya  variasi  pada  hasil presisi dapat disebabkan karena kesalahan acak. Kesalahan acak merupakan kesalahan dalam penggukuran  karena  gangguan  dan perbedaan  kondisi  setiap  pengukuran sehingga dihasilkan angka yang berbeda.
Tabel  4.4 Syarat  keberterimaan  % recovery disesuaikan dengan konsentrasi berdasarkan AOAC. Konsentrasi Batas Recovery 100 % 98-101 % 10 % 95-102 % 1 % 92-105 % 0.1 % 90-108 % 0.01 %  (100 ppm) 85-110 % 10 ppm 80-115 % 10 ppb 70-125 %
4.1.3 NIlai LOD dan LOQ Berdasarkan perhitungan diperoleh  nilai  LOD  sebesar  2.31  mg/L sedangkan  nilai  LOQ  sebesar  7.71 mg/L.  Nilai  LOD  berguna  untuk mengetahui jumlah terkecil analit dalam sampel  yang  masih  dapat dideteksi  oleh instrument sedangkan nilai LOQ
menunjukkan  jumlah  terkecil  analit dalam  sampel  yang  masih  memenuhi kriteria presisi dan akurasi. Berdasarkan hasil  perhitungan  diperoleh  konsentrasi terkecil  analit  dalam  sampel  yang  dapat terdeteksi  adalah  2.31  mg/L  dan konsentrasi terkecil analit dalam sampel yang  memenuhi  kriteria  presisi  dan akurasi  namun  masih  dapat  dideteksi adalah 7.71 mg/L.
Jika  ditinjau  berdasarkan  hasil perhitungan  LOQ  maka  hal  ini  sesuai dengan perhitungan presisi yang menunjukkan bahwa konsentrasi 3 dan 7 ppm  menghasilkan  nilai  presisi  yang kurang memenuhi kriteria jika menggunakan acuan keberterimaan presisi AOAC. 4.1.4 Akurasi Hasil perhitungan terhadap larutan standar 10 dan 15 ppm diperoleh %  recovery  yakni  84,3%  dan  87%. Berdasarkan AOAC syarat keberterimaan  %  recovery  disesuaikan dengan  konsentrasi  yang  digunakan. Tabel 4.4 menunjukkan syarat keberterimaan  %  recovery  disesuaikan dengan konsentrasi berdasarkan AOAC.
Maka  jika  ditinjau  berdasarkan tabel  AOAC,  hasil  %  recovery  pada konsentrasi  10  dan  15  ppm  telah memenuhi syarat keberterimaan.
4.2  Pengaruh  Perlakuan  Derivatisasi Terhadap Hasil Pengukuran Larutan Standar Acetaminophen
Dipilihnya BSTFA sebagai agen penderivat  karena  BSTFA  mampu bereaksi  dengan  berbagai  senyawa organik  polar  dengan  menggantikan hidrogen aktif dengan trimetilsilil (Si(CH 3 ) 3 ),  selain  itu  BSTFA  bereaksi
lebih  cepat  dibandingkan  penderivat dengan  prinsip  sililasi  lainnya  seperti bis(trimetilsilil)asetamida atau BSA sedangkan TMCS berguna untuk meningkatkan reaktivitas BSTFA (Regis, 1998). BSTFA yang mengandung  1%  TMCS  merupakan reagen  sililasi  yang  memiliki  sifat pelarut  yang  baik  serta  dapat  berfungsi tanpa  melakukan  penambahan  pelarut lainnya (Knapp, 1979). Pada larutan standar acetaminophen 20 ppm yang diinjeksikan  ke  dalam  sistem  GC-MS tanpa  perlakuan  derivatisasi,  diperoleh hasil  puncak  yang  tidak  beraturan  dan cenderung  lebih  dari  1  puncak.  Hal  ini dapat disebabkan senyawa acetaminophen tidak  stabil  pada  suhu tinggi  sehingga  dapat  terdekomposisi parsial  yang  menyebabkan  terdapat beberapa  puncak acetaminophen yang sama namun dengan waktu retensi yang berbeda,  sehingga  konsentrasi  senyawa menjadi  tidak  dapat  diketahui  melalui peak area. Maka metode tanpa derivatisasi  kurang  laik  digunakan dalam menganalisis senyawa acetaminophen menggunakan  GC-MS. Gambar  4.2  menunjukan  kromatogram senyawa acetaminophen pada  larutan standar  tanpa  derivatisasi  sedangkan Gambar  4.3  merupakan  kromatogram senyawa acetaminophen pada  larutan standar (derivatisasi) menggunakan mode SIM Pada larutan standar acetaminophen 20 ppm yang diinjeksikan  ke  dalam  sistem  GC-MS dengan perlakuan derivatisasi, diperoleh hanya 1 puncak untuk senyawa acetaminophen ,  yakni  dalam  bentuk acetaminophen-TMS . Acetaminophen- TMS (C 11 H 17 NO 2 Si)  merupakan  derivat acetaminophen akibat  pergantian  gugus H  dengan  Trimetilsilil  (Si(CH 3 ) 3 )  pada molekul NH. Perubahan senyawa menyebabkan terjadinya perubahan berat molekul (BM). Senyawa acetaminophen-TMS memiliki BM 223.34  g/mol    dengan  ion  fragmentasi
yang  memiliki  kelimpahan  tertinggi antara lain  : 166, 181, dan 223.
4.3  Analisis senyawa acetaminophen pada spesimen rambut Analisis  dilakukan  pada  10 sukarelawan  yang  mendapatkan  terapi acetaminophen kemudian diambil spesimen  rambutnya  pada  panjang  0-3 cm, 0-6cm dan 0-10 cm untuk dianalisis. Dari  10  orang  subyek  penelitian,  2 diantaranya  tidak  terdeteksi  senyawa acetaminophen ,  sedangkan  8  lainnya terdeteksi senyawa acetaminophen dalam bentuk acetaminophen-TMS . Sebagai  pembanding  maka  digunakan sampel  blanko  yang  diperoleh  dari sukarelawan  yang  tidak  mendapatkan terapi acetaminophen dan dibuat larutan standar acetaminophen dengan konsentrasi tertentu. Gambar 4.1 merupakan  kromatogram  blanko  (full scan)
Gambar 4.1 Kromatogram blanko (full scan)
Gambar 4.2 Kromatogram senyawa acetaminophen pada larutan standar (tanpa derivatisasi) menggunakan mode SIM.
Gambar 4.3 Kromatogram senyawa acetaminophen pada larutan standar (derivatisasi) menggunakan mode SIM
Pada  larutan  standar  dengan konsentrasi  20  ppm  muncul  1  puncak pada  waktu  retensi  18.09  menit  yang ditinjau berdasarkan Ion fragmentas dan library C:\Database\wiley7n.l merupakan acetaminophen-TMS sedangkan  pada  blanko  terdapat  puncak dengan  waktu  retensi  18.15  menit namun berdasarkan Ion fragmentasi dan Library, senyawa tersebut adalah Piridinkarboksaldehid. Pada sampel muncul puncak pada waktu retensi 18.19 menit  dan  berdasarkan  ion  fragmentasi didukung  Library  senyawa  tersebut merupakan Acetaminophen-TMS . Gambar  4.4  menunjukkan  kromatogram senyawa acetaminophen pada  sampel spesimen  rambut.  Terlihat  beberapa puncak lain selain puncak acetaminophen karena  spesimen  rambut tersusun  atas  berbagai  macam  senyawa lain  yang  bersifat  kompleks  sehingga memungkinkan  bagi  senyawa  lainnya ikut terekstraksi dan terdeteksi.
Terdapat 2 sampel yang menunjukkan hasil bahwa acetaminophen tidak  terdeteksi  pada spesimen rambut, hal ini disebabkan : 1. Faktor  dosis  obat  yang  pernah dikonsumsi sebelumnya. 2. Faktor rute perjalanan acetaminophen setelah dikonsumsi. 3. Konsentrasi acetaminophen pada spesimen  rambut  di  bawah  limit deteksi. 4. Jumlah spesimen rambut yang sedikit. 4.4  Pengaruh  panjang  spesimen  rambut terhadap konsentrasi acetaminophen pada spesimen rambut Dari  8  subyek  yang  terdeteksi senyawa acetaminophen maka dilakukan perhitungan untuk mengetahui kadar acetaminophen . Berdasarkan hasil perhitungan diketahui pada  panjang  spesimen  rambut  0-3cm konsentrasi acetaminophen 0,1761-
0,3392  ng/mg  spesimen  rambut,  pada panjang  spesimen  rambut  0-6  cm diperoleh  hasil  0,2081-0.4845  ng/mg spesimen  rambut  dan  pada  panjang spesimen  rambut  0-10  cm  konsentrasi acetaminophen-TMS dalam sampel adalah  0,2473-0,5782  ng/mg  spesimen rambut. Kemudian dilakukan uji statistik regresi  linier  sederhana  menggunakan software IBM SPSS Statistics 24.
Gambar 4.3 Kromatogram senyawa acetaminophen pada sampel spesimen rambut
Tujuan  uji  regresi  linier  sederhana ini  adalah  untuk  mengetahui  hubungan pengaruh  signifikan  variabel  independen
(panjang spesimen rambut) terhadap variabel  dependen  (konsentrasi  senyawa acetaminophen) .  Berdasarkan  hasil  uji regresi  linier  sederhana  diperoleh  nilai  r  = 0.535 yang menunjukkan bahwa 53.5% dari varians konsentrasi senyawa acetaminophen dapat  dijelaskan  oleh  perubahan  dalam variabel panjang spesimen rambut sedangkan  46.5%  sisanya  dijelaskan  oleh faktor di luar model. Diperoleh persamaaan :
Y = 0.202 + 0.019 X + e dengan  nilai  probabilitas  (nilai  signifikan) adalah 0,007. Nilai ini kurang dari 0.05 yang berarti variabel independen (panjang spesimen  rambut)  berpengaruh  positif  dan signifikan terhadap variabel dependen (konsentrasi senyawa acetaminophen ).
Makna  berpengaruh  positif  artinya  makin panjang spesimen rambut maka makin tinggi konsentrasi  senyawa acetaminophen pada penelitian ini.
Pada  panjang  0-10  cm  diperoleh nilai  konsentrasi tertinggi,  dapat  disebabkan karena dengan panjang spesismen rambut 10 cm maka dapat dikatakan bahwa usia rambut tersebut  ≤  10  bulan  karena  menurut  Saitoh (1969)  rata-rata  0,6-1,42  cm  per  bulan, sehingga memungkinkan untuk lebih banyak senyawa  obat  yang  berikatan  dengan spesimen rambut.

## 5. SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Berdasarkan  penelitian  ini  maka  dapat disimpulkan bahwa :
a. Acetaminophen dapat  dideteksi  pada spesimen rambut menggunakan GC-MS.
b. Perlakuan derivatisasi dapat mengoptimalkan hasil analisis acetaminophen pada  spesimen  rambut menggunakan GC-MS. c. Terdapat  pengaruh  panjang  spesimen rambut  terhadap  konsentrasi  senyawa acetaminophen yang dianalisis menggunakan GC-MS.
5.2 Saran Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap  senyawa  golongan  narkotika, psikotropika  maupun  doping  pada  spesimen rambut dengan memperhatikan waktu konsumsi  dari  obat-obatan  tersebut.  Selain itu  perlu  dilakukan  kembali  penelitian dengan  menggunakan  panjang  spesimen rambut  yang  lebih  dari  10  cm  untuk membuktikan ketahanan masing-masing senyawa obat dalam spesimen rambut.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Melalui  kesempatan  ini  penulis menyampaikan  ucapan  terima  kasih  kepada semua  pihak  atas  saran  dan  kritiknya sehingga penelitian ini dapat terselesaikan

## DAFTAR PUSTAKA
APVMA,  2004, Guidelines  For  The Validation  Of  Analytical  Methods For Active Constituent , Agricultural And Veterinary  Chemical  Product, Kingston APVMA, Australia.
Aronson,  J.K.,  2014, Side  Effect  of  Drug Annual  35 ,  University  of  Oxford,
Elsevier
Asquith,  R.S.,  1977, Chemistry  of Natural  Protein  Fiber ,  Plenum Press, New York and London Castanet,  J.  and  Ortonne,  J.-P.,  1997,  Hair melanin  and  hair  color, Formation and  Structure  of  Human  Hair ,  pp. 209–225.
David, G. W., 2005, Analisis Farmasi , Edisi kedua, EGC, Jakarta
Drozd,  J.,  1985,  Chemical  Derivatization  in Gas  Chromatography, Journal  of Chromatography Library, 19 Forte,  J.S.,  2002, Paracetamol  :  Safety Versus Toxicity , (2) Granberg, R.A and Åke C. Rasmuson, A.C,
1999,  Solubility  of  Paracetamol  in
Pure Solvents, J. Chem. Eng., 44 (6) : 1391–1395 Han,  E.,Chung,  H.,  soong,  J.M.,  2012, Segmental  Hair  Analysis  for  11- Nor-Δ 9 -tertrahydrocannabinol-9- Carboxylic  Acid  and  the  Patternsof Cannabis Use, Journal of Analytical Toxicology , 32 :195-200
Hansen, S., Bjergaard, S.P., Rasmussen, K., 2012, Intrduction to Pharmaceutical Chemical Analysis , Wiley, UK
Kintz,  P.,  2000,  Hair,  In:  Jay  A.  S.  editors. Encyclopedia  of  Forensic  Sciences ,
Vol  II.  UK  :  Academic  Press.  p. 598-640
Kintz,  P.,  2007, Analytical  and Practical Aspects  of Drug  Testing  in  Hair, Taylor  and  Francis  Group ,  CRC
Press
Knapp, D.,R., 1979, Handbook of Analytical Derivatization Reactions , New York Lamke,  T.L.,  Williams,  D.A.,  Roche,
V.F., Zito, S.W., 2007, Medicinal Chemistry Sixth Edition, USA
Moffat,  C.  A.,  M.  D.  Osselton,  and  B.
Widdop.  2004. Clarke’s  Analysis  of Drugs  and  Poisons .  Great  Britain: Pharmaceutical Press
Moffat,  C.  A.,  M.  D.  Osselton,  and  B. Widdop.  2005. Clarke’s Analysis of Drugs  and  Poisons .  Great  Britain: Pharmaceutical Press Mozayani,  A.,  and  Raymon,  M.P.,  2002,
Handbook  of  Drug  Interactions  A Clinical and Forensic Guide , Humana Press
Pötsch, L., A discourse on human hair ﬁbers and  reﬂections  on  the  conservation of  drug  molecules, Int.  J.  Legal Med. , 108, 285–293, 1996. Saitoh,  M.,  1969, Rate  of  Hair  Growth  in Advances  in  Biology  of  Skin , Oxford, Pergamon Press p.183-201 Saito,  T.,  Morita,  T.,  Inoue,  S.,  Yamamoto, I.,  and  Inokuchi,  S.,  2008,  GC-MS assay  for acetaminophen in  human hair  segments, Forensic  Toxicol 26:27-30
Sparkman,  O.D.,  Penton,  Z.,  Fulton,  G., 2011, Gas  chromatography  and mass  spectrometry  :  a  practical guide , Elsevier
Wijayaputra,  N.,  2011,  Deteksi  Senyawa Metamfetamin  (MA)  Pada  Rambut dengan Metode SIM GC-MS, Tesis ,
Universitas Udayana, Denpasar