## UJI ANTIOKSIDAN EKSTRAK  HEKSANA, ETIL ASETAT, ETANOL,
METANOL 80% DAN AIR DAUN KELOR ( Moringa oleifera, Lamk)
Agung Abadi Kiswandono 1* , Mamay Maslahat 2
1 Universitas Prima Indonesia,  Medan
2 Jurusan Kimia FMIPA Universitas Nusa Bangsa, Bogor Jl. K. H. Sholeh Iskandar, Cimanggu, Tanah Sareal-Bogor 16166 *e-mail : nau_shila@yahoo.com

## ABSTRACT
Antioxidant Test of  Hexane, Etil Asetat, Ethanol, Methanol 80% and Water Extract in Moringa oleifera

## By. Agung Abadi Kiswandono and Mamay Maslahat
Antioxidant  is  a  substance  that  can  protect  a  materials  from  its  destruction.  Sources  of  antioxidant  could  be  from  plants. Alkaloid  compounds  in  the  Moringa  oleifera  leaves  have    potential    antioxidant  source.  This  research  aimed    to  examine  antioxidant potential  from  Moringa  oleifera  leaves  extract  of  hexane,  ethyl  acetate,  methanol  80%  and  water  .      The  extraction  methodes  was meseration,  and  antioxidant  test  used  the  DPPH  free  radical  scavenging  effect.  The    result  showed  that  extract  ethanol  had  the  best potential antioxidant with the value of 118.19 µg/mL and R 2 was 99.9%, from hexanes was 692.39 µg/mL (R 2 =99.9%), in ethyl acetate was  247.5  µg/mL  (R 2 =99.9%),  in  methanol  80%  was    121.79  µg/mL  (R 2 =  0.998)  and  in  water  extract  189.21  µg/mL  (R 2 =99.8%). Antioxidant standart as kuersetin that gave value of 15.84 µg/mL (R 2 = 99.9%).
Keywords : Bioactives compound, moringa oleifera,  antioxidant

## ABSTRAK
Antioksidan  merupakan  substansi  yang  dapat  mencegah  atau  memperlambat  kerusakan  suatu  zat.  Sumber  antioksidan  dapat diperoleh  dari  suatu  tumbuhan. Senyawa  alkaloid  yang  terdapat  pada  daun  kelor  berpotensi  sebagai  sumber  antioksidan. Penelitian  ini bertujuan  menguji  antioksidan  ekstrak  heksana,  etil  asetat,  etanol,  metanol  80%  dan  air  pada  daun  kelor  ( Moringa  oleifera, Lamk). Penelitian dilakukan dengan menggunakan  metode maserasi dan uji antioksidan menggunakan  metode  ”DPPH free radical scavenging effect ”.  Hasil  uji  antioksidan  terbaik  terdapat  pada  ekstrak  etanol,  yaitu  sebesar  118.19  µg/mL  dengan  harga  R 2 sebesar  99.9%, sedangkan pelarut yang lain, yaitu pelarut heksana sebesar 692.39 µg/mL (R 2 =99.9%), etil asetat 247.5 µg/mL (R 2 =99.9%), metanol 80% 121.79 µg/mL (R 2 = 0.998) dan air 189.21 µg/mL (R 2 =99.8%), sebagai pembanding antioksidan digunakan kuersetin, yaitu 15.84 µg/mL (R 2 = 99.9%).
Kata kunci : Senyawa bioaktif, moringa oleifera ,  antioksidan

## PENDAHULUAN
Antioksidan  adalah  suatu  substansi  yang dapat  mencegah  atau  memperlambat  kerusakan substansi dengan cara peroksidasi. Sumber antioksidan  dapat  berasal  dari  dalam  tubuh  atau dapat  juga  berasal  dari  luar  tubuh.  Antioksidan yang  berasal  dari  luar  tubuh  dapat  diperoleh  dari tumbuhan  yang  mengandung  senyawa  alkaloid (Benabdesselam  e t.al. 2007).  Flavonoid,  fenol hidrokuinon,  tanin  juga  telah  banyak  dilaporkan memiliki  aktivitas  antioksidan  (Pratt  and  Hudson 1990). Senyawa tersebut berperan sebagai antioksidan  dengan  cara  menghambat  peroksida lipid sehingga dapat melindungi tubuh dari penyakit kanker.
Beberapa penelitian menyatakan bahwa tumbuhan Moringa oleifera L mempunyai
kandungan  bioaktivitas  dan  berfungsi  sebagai antiinflamasi  (Sashidhara et  al. 2007 ) ,  dan antibiotik (Eilert et al. 1981).
Kumar dan Pari  (2003) menyatakan bahwa ekstrak batang Moringa oleifera L mempunyai efek yang bersifat menurunkan peroksida lipid pada hati dan  meningkatkan  aktivitas  antioksidan.  Chumark et  al. dalam  penelitiannya  terhadap  daun Moringa oleifera L  yang  diambil  dari  Propinsi  Trang, Thailand,  menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  panas Moringa  oleifera L  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan  secara in  vivo  dan  ex  vivo .  Pengujian aktivitas  antioksidan  ini  dilakukan  dengan  metode DPPH free radical scavenging effect .
Senyawa  aktif  antioksidan  menghasilkan tingkat  hambatan inhibition  concentration (IC 50 ). IC 50 adalah  konsentrasi  antioksidan  (µg/ml)  yang mampu  menghambat  50%  radikal  bebas.  Semakin
banyak  radikal  bebas  yang  dihambat  oleh antioksidan,  maka  semakin  kecil  IC 50 .  Nilai  IC 50 diperoleh  dengan  membandingkan  serapan  radikal bebas  sebelum  dan  sesudah  direaksikan  dengan antioksidan yang terdapat dalam zat uji untuk setiap konsentrasi.  Ekstrak  dikatakan  aktif  sebagai antioksidan  jika  memiliki  IC 50 kurang  dari  100 µg/mL.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Sampel  daun  kelor  diambil  pada  bulan Maret 2008 dari desa Cikarang kecamatan Dramaga Bogor,  etanol,  metanol,  etil  asetat,  heksan, kuersetin, pereaksi 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil, kertas saring, aquades, aluminium foil, kapas bebas lemak dan tissue.

## Peralatan
Peralatan  yang  digunakan adalah satu  set  alat- alat  gelas,  alat  ekstraksi  maserasi,  oven,  rotary evavorator,  blender,  neraca  analitik,    desikator, refrigerator.

## Prosedur  Kerja
Sampel  daun  kelor  yang  didapatkan, kemudian  dibersihkan  dari  kotoran-kotoran  dan dikeringkan  di  udara  terbuka  pada  suhu  kamar. Sampel yang telah kering (mengandung kadar air ± 10%)  lalu  dihaluskan  dengan  menggunakan blender , lalu dilakukan proses maserasi.
Sebanyak 400 - 500 g sampel kering  yang telah dihaluskan dimaserasi dengan heksana sampai bebas  lemak  ditandai  dengan  larutan  yang  telah jernih.  Ekstrak  yang  dihasilkan  disaring,  kemudian filtratnya  di  pekatkan  dengan  menggunakan  labu penguap  putar  pada  suhu  40 o C  sehingga  diperoleh ekstrak  kasar.  Ampasnya  dikering  anginkan  lalu setelah kering, dimaserasi kembali selama 1 minggu dengan  berturut-turut  menggunakan  etil  asetat, etanol,  metanol  80%    dan  terakhir  dengan  air dengan cara yang sama seperti heksana. Filtrat yang dihasilkan  lalu  dipekatkan  dan  didapatkan  ekstrak kasar  kemudian  uji  antioksidan  terhadap  ekstrak heksana,  etil  asetat,  methanol  80%  dan  air  yang dihasilkan menggunakan metode DPPH free radical scavenging effect .

## Uji Antioksidan

## Pembuatan larutan blanko
Larutan  yang  digunakan  adalah  metanol. Pembuatan  larutan  blanko  dilakukan  dengan  cara memipet 800 µL metanol, kemudian dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi,  ditambah  200  µL  larutan DPPH lalu dikocok sampai homogen, inkubasi pada suhu ruang selama 30 menit.

## Pembuatan Larutan Kuersetin
a.  Pembuatan larutan  induk  1000  µg/mL,  sebanyak 1.0  mg  kuersetin  ditimbang  dan  dilarutkan dalam 1 mL metanol, kemudian dikocok hingga homogen.
b.  Pembuatan larutan seri 10, 50, 100 dan 200 ppm, Inkubasi  pada  suhu  kamar  selama  30  menit, setelah  itu  ditambahkan  1  mL  metanol  dan dikocok  kembali  hingga  homogen.  Setelah  itu diukur  absorbansinya  dengan  menggunakan spektrofoto meter UV-VIS pada  λ : 515 nm.

## Persiapan Larutan Bahan Uji
a. Pembuatan larutan induk bahan uji 1000 µg/mL
Sebanyak  1.0  mg  ekstrak  ditimbang  dan dilarutkan  dalam  1  mL  metanol,  kemudian dikocok hingga homogen
b.   Pembuatan  larutan  seri  10,  50,  100  dan  200 ppm,  Inkubasi  pada  suhu  kamar    selama  30 menit,  setelah  itu  ditambahkan  1  mL  metanol dan  dikocok  kembali  hingga  homogen.  Setelah itu  diukur  absorbansinya  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-VIS pada  λ : 515 nm.

## Perhitungan
a. Pengukuran  aktivitas  antioksidan  dihitung dengan rumus sebagai berikut :
Inhibisi adalah besar aktivitas yang dihasilkan oleh sampel.
b. Perhitungan  IC 50 dengan  menggunakan regresi linier  Y = a + bX
Keterangan : Yi  :  Inhibisi Xi  :  Konsentrasi larutan uji a :   Harga  intersep  yang  menunjukkan  faktor kesalahan sistematis
b :  Harga  slope  yang  menunjukkan  hubungan antara perubahan absis dan   ordinat
r :  Koefisien korelasi Nilai  IC 50 dicari dengan menggunakan regresi linier Y = a + bX
Keterangan :
Y :  50
X :  IC 50 a :   Harga  intersep  yang  menunjukkan  faktor kesalahan sistematis
b :   Harga  slope  yang  menunjukkan  hubungan antara perubahan absis dan  ordinat
IC 50 pada  uji  antioksidan  artinya  adalah konsentrasi  larutan  uji  yang  dapat  menghambat 50% radikal bebas DPPH.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian ini  merupakan  bahan  yang  berasal  dari  tumbuh- tumbuhan, sehingga sampel mengandung air dalam jumlah  relatif  tinggi.  Oleh  karena  itu,  dalam  tahap persiapan  sampel  harus  dilakukan  penentuan  kadar air  yang  terkandung  dalam  sampel,  karena  akan mempengaruhi  daya  tahan  bahan  pangan  terhadap serangan atau aktivitas mikroorganisme.
Kadar air ditetapkan dengan cara gravimetri, yaitu diperoleh dengan cara menghitung bobot bahan sebelum dan sesudah dikeringkan pada temperatur  di  atas  titik  didih  air,  sehingga diharapkan  semua  air  akan  menguap  pada  suhu tersebut dan pada periode waktu tertentu. Kadar air pada sampel diperoleh sebesar 9.67%.
Ekstrak  kasar  pada  penelitian  ini  diperoleh dengan  cara  perendaman  (maserasi)  sampel. Mekanisme  metode  maserasi  adalah  proses  difusi pelarut  ke  dalam  dinding  sel  tumbuhan  untuk mengekstrak  senyawa-senyawa  yang  ada  dalam tumbuhan  tersebut.  Metode  maserasi  digunakan untuk  mengekstrak  senyawa  yang  kurang  tahan terhadap  panas,  biasanya  digunakn  untuk  sampel yang belum diketahui karakterisasi senyawanya.
Pelarut yang digunakan adalah heksana, etil asetat,  etanol,  metanol  dan  terakhir  menggunakan air. Pemisahan pertama terhadap sampel digunakan pelarut  heksana  dengan  tujuan  untuk  memisahkan senyawa-senyawa  non  polar  termasuk  lemak  yang terkandung  pada  sampel.    Kemudian  larutan  yang dihasilkan  di  kentalkan  menggunakan  vakum evaporator  untuk  mendapatkan  ekstrak  kental. Ampas  dari  ekstraksi  lalu  dikeringkan  dan  di lakukan  ekstraksi  kembali  menggunakan  pelarut berturut-turut  etil  asetat,  etanol,  metanol  dan terakhir dengan air.
Ekstrak kasar yang dihasilkan dari masing- masing pelarut kemudian diuji aktivitas antioksidan.    Pada  penelitian  ini  aktivitas antioksidan  diukur  dengan  metode  DPPH Free Radical Scavenger.
DPPH  merupakan  senyawa  radikal  bebas yang  stabil.    Uji  aktivitas  antioksidan  dengan menggunakan DPPH, prinsipnya adalah penangkapan hidrogen dari antioksidan oleh radikal bebas DPPH (warna ungu) dan diubah menjadi 1,1- difenil-2-pikrilhidrazin  (warna  kuning),  kemudian sisa  DPPH  diukur  intensitas  warna  ungunya  pada panjang gelombang 515 nm. Reaksi uji antioksidan disajikan pada Gambar 1.
Nilai  IC 50 dari  Ekstrak  etanol  adalah  yang terkecil  dari  ke  5  ekstrak  yang  dilakukan  pada penelitian ini, yaitu 118.19 µg/mL dengan harga R 2 =  0,9996  (Gambar  3),  disusul  kemudian  oleh pelarut  lainnya.  Pelarut  tersebut  adalah  metanol 80% sebesar 121,79 µg/mL (Gambar 4), pelarut air sebesar  189,21  µg/mL    (Gambar  5),  pelarut  etil- asetat sebesar 247,5 µg/mL  (Gambar 6) dan pelarut heksana sebesar  692,39 µg/mL dengan harga R 2 = 99,5%  (Gambar  7).  Standar  antioksidan  yang digunakan  sebagai  pembanding  adalah  kuersetin dengan  nilai  15,84  µg/mL  (Gambar  2).    Ekstrak dikatakan  aktif  sebagai  antioksidan  jika  memiliki IC 50 kurang  dari  100  µg/mL  (Artanti et.al. 2000), artinya  bahwa  kandungan  senyawa-senyawa  yang mampu meredam radikal bebas DPPH pada sampel daun kelor adalah sedikit (kandungannya sedikit).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  uji antioksidan  terbaik  terdapat  pada  ekstrak  etanol, yaitu  sebesar  118,19  µg/mL  dengan  harga  R 2 sebesar  99.9%,  sedangkan  pelarut  yang  lain,  yaitu pelarut heksana sebesar 692.39 µg/mL (R 2 =99.9%), etil  asetat  247.5  µg/mL  (R 2 =99.9%),  metanol  80% 121.79  µg/mL  (R 2 =  0.998)  dan  air  189.21  µg/mL (R 2 =99.8%),  sebagai  pembanding  antioksidan digunakan  kuersetin,  yaitu  15.84  µg/mL  (R 2 =99.9%).

## DAFTAR PUSTAKA
Artanti,  N.  et  al.  Evaluasi  Aktivitas  Antioksidan
Berbagai Ekstrak Daun Benalu ( Dendrophthoe pentandra L ) yang Tumbuh  pada  Inang  Belimbing  dan mangga. Laporan Penelitian . Pusat
Penelitian Kimia LIPI. Hal 1-7 .
Benabdesselam,  FM.  et.  al.  2007.  Antioxidant Activities  of  Alkaloid  Extracts  of  Two Algerian  Species  of  Fumaria  :  Fumaria Capreolatan  and  Fumaria  bastard.  ACG
Publication rec.nat.Prod 1 : 28-35.
Budiman,  A.  2001. Senyawa  Bioaktif    Golongan Kumarin  Artemisia  Sacrorum    Ledeb .
Skripsi. Bogor : FMIPA. IPB.
Dalimarta, S. 2003. Karakteristik  Tumbuhan Obat.
Prosiding Seminar dan Pameran
Nasional  Tumbuhan  Obat  Indonesia
XXIV .  Pusat  Studi  Biofarmaka  IPB.
Bogor.
Eilert  U,  et.  al.  1981.  The  Antibitic  Principle  of Seeds  of  Moringa  oleifera  and  moringa stenopetala. J.  Medicinal  Plant  res.  42
(55-61) .
Harborne,  J.  B.    1996. Metode  Fitokimia.  Cara modern menganalisa Tumbuhan. Terjemahan  Kosasih    Patmawinata  dan
Iwang  Soediro.  Edisi  ke  3.  Penerbit  ITB.
Bandung.
Hermawan, H. 2002. Isolasi dan Pencirian Senyawa Aktif  dari  Tumbuhan    Anting-anting (Acalypha  indica L.)  yang  Berpotensi Menurunkan  Kadar    Glukosa Darah. Skripsi. FMIPA. IPB. Bogor.
Hidayat MG. 2004. Perbandingan Metode Ekstraksi Flavonoid  dan  Terpenoid  dari  Sidaguri Serta  Daya    Inhibisi  Ekstrak  Terhadap Aktivitas Xantin Oxidase . Skripsi.
FMIPA. IPB. Bogor.
Joni, MS, M. Sitorus, Nelly Katharina. 2008. Cegah
Malnutrisi  Dengan  Kelor. Yogyakarta. Penerbit Kanisius.
Prat DE, BJF. Hudson. 1990. Natural  Antioxidant not  Exploited  Commercially. Di  dalam BJF  Hudson.  Editor Food  Antioxidant. London. Elsevier Science.
Putri,    LD.  2004.  Pemisahan  dan  Pencirian  Pektin
Dari  Kulit  Buah  Kakao.  Skripsi.  FMIPA. IPB. Bogor. Rafi,  M.  2003.  Identifikasi  Fisik  dan  Senyawa Kimia Pada Tumbuhan Obat Fokus Untuk Tumbuhan Obat Diabites Melitus. Makalah  Pelatihan  Tanaman  Tradisional (swamedikasi) Pengobatan Penyakit Diabites Melitus . Pusat Studi Biofarmaka. IPB. Bogor.
Sashidhara  KV.  et.  al.  2007.  Rare  Dipeptida  and Urea  Derivatives  from  Roots  of  Moringa
oleifera  as  Potential  Anti-Inflammatory and  Antinoniciceptive  Agents.  Short Communication Eurpean  Journal  of Medicinal Chemistry .
Sidik M. 1997. Antioksidan Alami Asal Tumbuhan . Prosiding  Seminar  Nasional  Tumbuhan Obat Indonesia XII . ITB. Bandung.
Simanjuntak,  P.  1988.  Metode  Isolasi  dan Pemurnian  Ekstrak  Air  dari    Tumbuhan. Warta AKAB .