Potensi Antibakteri Ekstrak Daun Kluwih ( Artocarpus camansi Blanco) terhadap Shigella dysenteriae dan Bacillus subtilis Antibacterial Potency from Ethanol Extract Leaves of Kluwih ( Artocarpus camansi Blanco ) against Shigella dysenteriae and Bacillus subtilis Amelia, Sogandi *)
Fakultas Farmasi, Universitas 17 Agustus 1945 Jakarta, Jalan Sunter Permai, Jakarta Utara * E-mail: sogandi@uta45jakarta.ac.id

## ABSTRACT
Gastrointestinal  infection  is  a  common  infection  in  Indonesia.  Many  bacteria  could  cause gastrointestinal disorder, including Shigella dysenteriae and Bacillus subtilis . Currently, they are treated using  chemical and  traditional  drugs.  One  of the  common  pants  in Indonesia  is  Kluwih ( Artocarpus camansi ). The objective our study to determine antibacterial activity and inhibitory mechanism  of  Kluwih  leaf  extract  against  pathogenic  bacteria  which  cause  gastrointestinal infection, i.e. Shigella dysenteriae and Bacillus subtilis . The extraction process used maceration technique using 96% ethanol solvent and the antibacterial activity was studied using agar diffusion method.  The  research  result  showed  that  Kluwih  leaf  extract  had  inhibitory  power  with  KHM (minimum  inhibitory  concentration)  value  of  25%  against S.  dysenteriae and  6.25%  against B.  subtilis. The  present  study  also  revealed  that  Kluwih  leaf  was  suspected  to  have  inhibitory activity against bacteria by making holes in the membrane of bacterial cell, leading to the release of nucleic acid and protein and cell death.
Keywords: antibacterial, Artocarpus camansi, kluwih, Shigella dysenteriae , Bacillus subtilis .

## PENDAHULUAN
Infeksi  saluran  pencernaan  merupakan  infeksi yang  sering  ditemui  di  Indonesia.  Banyak bakteri  yang  dapat  menyebabkan  gangguan fungsi  saluran  cerna  diantaranya  adalah S. dysenteriae dan B. subtilis . Beberapa spesies Shigella menyebabkan  penyakit  menular  yang disebut  shigellosis. S.  dysenteriae yang merupakan  bakteri  Gram  negatif  ini mensekresikan  jenis  protein  eksotoksin  pada fase pertumbuhan eksponensial  yang memiliki sifat  spesifik.  Anak-anak  yang  terjangkit shigella dapat menderita demam tinggi bahkan sampai  mengalami  kejang.  Hal  ini  yang menyebabkan  diare,  demam  dan  kram  perut terjadi  setelah  terinfeksi  bakteri  serta  diare sering  berdarah  (Susanti  &  Sunarsih,  2016). Bakteri Bacillus  subtilis adalah  jenis  bakteri Gram  positif,  biasanya  dapat  mencemari makanan dan bila dalam jumlah banyak di usus mampu  menyebabkan  gangguan  pencernaan berupa  diare,  seperti  yang  pernah  terjadi  di taman kanak-kanak tahun 2005 di Kroasia yang disebabkan oleh susu bubuk (Ropac, 2005). Sejak  dahulu  masyarakat  Indonesia  sudah mengenal  berbagai  macam  bahan  alam  yang dapat  dimanfaatkan  untuk  menanggulangi  dan mengobati berbagai jenis macam penyakit yang biasa kita kenal dengan pengobatan tradisional.
Pengobatan  tradisional  menggunakan tanaman herbal saat ini masih menjadi pilihan yang dapat digunakan untuk pengobatan (Yigit, 2017).  Jika  dibandingkan  dengan  obat  kimia, pengobatan  tradisional  memiliki  kemampuan yang lebih lambat, namun penggunaan tanaman herbal sebagai bahan baku utama ini membuat pengobatan tradisional  memiliki efek  samping yang lebih ringan (Vigneshwaran et al. , 2014). Diare  adalah  penyakit  yang  sering  diderita masyarakat  yang  disebabkan  oleh  bakteri  dan biasanya  diobati  dengan  tanaman  herbal (Mohamedkassm et al ., 2013). Daun  Kluwih (Artocarpus  camansi) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  herbal yang sudah sering digunakan masyarakat untuk mengatasi diare. Daun Kluwih sudah diketahui mengadung senyawa fitokimia alkaloid, tannin, steroid,  flavonoid,  triterpenoid,  glikosida,  dan antrakuinon  (Eryuda  &  Soleha,  2016).  Daun Kluwih  juga  diketahui  mengandung  GABA (Gamma  Amino  Butyric  Acid) (Indrowati  & Ariyanto 2012). Kandungan senyawa flavonoid pada Artocarpus altilis juga diketahui memiliki aktivitas  sebagai  antiinflamasi  (Fakhrudin et al .,  2015),  antibakteri,  antivirus  (Sikarwar et al. ,  2014),  antioksidan  (Arif et  al .,  2018)  dan memiliki  aktivitas  untuk  menurunkan  kadar glukosa  darah  penderita  diabetes  mellitus
dengan  dosis  50mg/kgBB  (Eryuda  &  Soleha, 2016). Ekstrak  etanol  daun A.  camansi Blanco pada  penelitian  sebelumnya  juga  diketahui memiliki  manfaat  sebagai  antioksidan  dan aktivitas antibakteri  yang  cukup  baik terhadap
Staphilococcus aureus dengan nilai konsentrasi hambat  minimum  (KHM)  25  mg/mL , Escherechia coli 25 mg/mL , dan Pseudomonas aeruginosa 50 mg/mL (Vianney et al. , 2018). Aktivitas  anti  bakteri  dari  ekstrak  daun Kluwih terhadap bakteri S. aureus, E. coli, dan P.  aeruginosa telah  diketahui,  namun pemanfaatan  daun  Kluwih  sebagai  inhibitor pertumbuhan  bakteri S.  dysenteriae dan B.  subtilis serta  bagaimana  mekanisme  aksi penghambatannya  belum  dilaporkan.  Oleh karena itu, perlu dilakukan pencarian informasi tentang aktivitas  penghambatan  ekstrak  etanol daun Kluwih serta mekanisme penghambatannya terhadap bakteri S. dysenteriae dan B. subtilis .
METODE
Bahan Daun  Kluwih (A.  camansi )  didapatkan  dari  Balai Penelitian  Tanaman  Obat  dan  Aromatik (BALITTRO).  Bakteri  uji  diperoleh  dari culture collection INACC LIPI (Lembaga Ilmu Pengetahuan
Indonesia),  Cibinong.  Penelitian  ini  menggunakan beberapa  bahan  yang  diantaranya  adalah  etanol 96%,  H 2 SO 4 (asam  sulfat),  NH 4 OH  (ammonium hidroksida),  HCl  (asam  klorida),  FeCl 3 (besi klorida),  logam  Mg  (magnesium),  pelarut  amil alkohol,  etil  asetat,  aquades,  NaOH  (natrium hidroksida),  ciprofloxacin,  NaCl  (natrium  klorida), pereaksi  Mayer,  Dragendorf,  Lieberman-Burchard, BaCl 2 1%  (Barium  klorida),  Serbuk  Zn  (seng),
Nutrient agar (NA), dan Nutrient Broth (NB). Persiapan Simplisia Daun Kluwih diperoleh dari BALITTRO sedangkan determinasi  dilakukan  di  LIPI  Biologi,  Cibinong, Bogor.  Simplisia  yang  telah  dideterminasi, dikeringkan  hingga  diperoleh  1  Kg  simplisia, kemudian  dilakukan  sortir  dengan  memilih  daun Kluwih  yang  masih  hijau,  tidak  berlubang,  tidak menguning  dan  tidak  layu,  kemudian  daun  terpilih dibersihkan dengan cara dicuci bersih menggunakan air  mengalir,  kemudian  dikeringkan  menggunakan oven  bersuhu  40ºC  hingga  tidak ada  air  dan  terasa lembab.  Simplisia  kemudian  dipotong  kecil-kecil, kemudian  dihaluskan  sampai  membentuk  serbuk dengan ukuran 40 mesh (Departemen Kesehatan RI, 2000).

## Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kluwih
Daun  Kluwih  kering  sebanyak  1  Kg  diekstraksi dengan perendaman dalam pelarut etanol 96% pada suhu  ruang,  dan  dilakukan  pengocokan  3  kali pengulangan  dalam  sehari.  Kemudian  disaring  dan filtrat  dikentalkan  dengan  cara  diuapkan menggunakan rotary  evaporator sampai  dihasilkan ekstrak  kental  yang  bebas  dari  pelarut  etanol. Rendemen  ekstrak  etanol  daun  Kluwih  dihitung secara gravimetri dengan cara membandingkan berat awal  simplisia  dengan  berat  akhir  ekstrak  setelah diuapkan (Harvey, 1959).

## Pemeriksaan Karakteristik Ekstrak Perhitungan
Rendemen Nilai rendemen didapat dengan membagi berat hasil (ekstrak  kental)  dengan  berat  awal  simplisia. Persentase  rendemen  diketahui  dari  perhitungan nilai  kesetaraan  tiap  gram  sampel  ekstrak  kental. (Departemen Kesehatan RI, 2000).

## Kadar Air
Penetuan  kadar  air  dilakukan  dengan  mengambil  3 gram  sampel  kemudian  dikeringkan  menggunakan oven  bersuhu  ±105 o C  selama  4  jam.  Sampel kemudian didinginkan dengan menempatkan sampel kedalam desikator selama ±30 menit dan kemudian sampel  ditimbang.  Proses  ini  dilakukan  berulang hingga didapatkan berat tetap (AOAC International, 1990).
Pemeriksaan bebas etanol Uji  bebas  etanol  pada  ekstrak  daun  Kluwih dilakukan  dengan  menambahkan  larutan  H 2 SO 4 kedalam  ekstrak  lalu  ditambahkan  lagi  dengan CH 3 COOH,  lalu  dipanaskan.  Ekstrak  dikatakan sudah  bebas  dari  pelarut  etanol  bila  tidak  tercium bau khas pelarut ester (Kurniawati, 2015).
Pemeriksaan  Senyawa  Fitokimia  Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak  2  mL  ekstrak  etanol  daun  Kluwih ditambahkan ke dalam tabung kaca, kemudian 1 mL larutan  HCl  dan  serbuk  magnesium  juga ditambahkan  dan  dihomogenkan.  Ekstrak  etanol daun  Kluwih  dinyatakan  mengandung  senyawa fitokimia  flavonoid  jika  terjadi  perubahan  warna endapan  menjadi  warna  merah-jingga  ataupun merah-ungu (Banu & Cathrine, 2015).
Pemeriksaan Alkaloid Ekstrak  kental  daun  Kluwih  sebanyak  1  gram ditambahkan  dengan  5  mL  pelarut  kloroform,  lalu ditambahkan  NH 4 OH,  saring  dan  uapkan  sampai mengental, tambahkan dengan HCl 2N dan dikocok, mengambil  lapisan  asam  lalu  dibagi  menjadi  3 bagian,  dan  memasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, dan  menambahkan  beberapa  tetes  pereaksi Dragendorf  dan  Mayer.  Hasil  positif  akan menghasilkan  endapan  berwarna  jingga  dan  putih pada  masing-masing  pereaksi  (Departemen Kesehatan RI, 2000).
Pemeriksaan Tanin Ekstrak  etanol  daun  Kluwih  diencerkan  dengan  3 mL aquades panas sampai homogen. Setelah dingin, ditambahkan dengan 5 tetes larutan natrium klorida konsentrasi 10% kemudian disaring dan filtrat dibagi kedalam 3 tabung. Satu tabung sebagai blangko, satu tabung  filtrat  untuk  ditambahkan  dengan  3  tetes pereaksi  FeCl 3 ,  dan  sisa  satu  bagian  filtrate  lagi ditambahkan  dengan  gelatin.  Terbentuknya  warna coklat  kehijauan  atau  biru  kehitaman  menandakan sample  positif  mengandung  tannin  (Ukoha et  al. , 2011).
Pemeriksaan Senyawa Steroid dan Triterpenoid Senyawa  fitokimia  steroid  dan  triterpenoid  dalam ekstrak  daun  Kluwih  ditentukan  dengan  pereaksi Lieberman-Burchard.  Ekstrak  daun  Kluwih sebanyak  2  mL  diuapkan  menggunakan  cawan. Ekstrak  kental  yang  didapat  kemudian  dilarutkan kedalam 0,5 mL pelarut kloroform, ditambahkan 0,5 mL  CH 3 COOH  dan  dihomogenkan.  Selanjutnya, ditambahkan dengan 2 mL asam sulfat pekat. Positif mengandung  triterpenoid  jika  menghasilkan  cincin berwarna  kecoklatan  atau  violet,  sedangkan  untuk senyawa  steroid  ditunjukkan  dengan  menghasilkan cincin berwarna biru kehijauan (Tiwari et al ., 2011). Pemeriksaan Glikosida Senyawa  glikosida  dalam  ekstrak  etanol  daun Kluwih diidentifikasi dengan menambahkan 100 µL larutan  ekstrak  dengan  5  mL  larutan  asam  asetat glasial,  dan  5  tetes  H 2 SO 4 pekat  kedalam  tabung reaksi. Sampel mengandung senyawa glikosida jika terbentuk endapan berwarna biru atau hijau ( Rajesh et al ., 2014).
Pemeriksaan Fenolik Senyawa  fenolik  dalam  sampel  daun  Kluwih diidentifikasi  dengan  memasukkan  2  mL  ekstrak daun  Kluwih  ke  dalam  tabung  kaca  dan menambahkan  200  µL  air  panas,  kemudian ditambahkan  dengan  3  tetes  pereaksi  FeCl 3 konsentrasi 3%. Keberadaan senyawa fenolik dalam ekstrak  etanol  daun  Kluwih  diketahui  jika  ada perubahan  warna  menjadi  hijau  kebiruan  atau  biru gelap (Prabhavathi et al ., 2016).
Pemeriksaan Saponin Senyawa  saponin  diidentifikasi  dengan  melarutkan 1  gram  ekstrak  etanol  daun  Kluwih  danaquadest hingga  seluruh  sampel  terlarut  secara  homogen, kemudian dididihkan selama 3 menit,
mendingankan,  dan  dikocok  dengan  kuat.
Keberadaan  senyawa  saponin  dalam  ekstrak  etanol daun  Kluwih  diketahui  jika  terbentuk  buih  yang stabil dan tidak hilang dalam beberapa menit (Tiwari et al ., 2011).
Pembuatan Media Media Nutrient Agar (NA) Media Nutrient  agar dibuat  dengan  cara menambahkan 23 g serbuk NA ke dalam 1L aquades dan  diaduk  sampai  melarut  sempurna,  selanjutnya proses  sterilisasi  dilakukan  dengan  autoklaf
bertekanan  1  atmosfer  selama  15  menit  pada  suhu 121 o C (Sogandi et al., 2019).
Media Nutrient Broth (NB) Media Nutrient broth dibuat dengan  menambahkan
25g  serbuk NB kedalam  1L  aquades  dan dihomogenkan sampai melarut sempurna,
selanjutnya disterilisasi  dengan autoklaf bertekanan 1  atmosfer  selama  15  menit  pada  suhu  121 o C (Sogandi et al., 2019).
Pembuatan Larutan Mc. Farland 0,5
Larutan  Mc.  Farland  yang  digunakan  sebagai standar kekeruhan dibuat dengan cara mencampurkan  H 2 SO 4 0,18  N  sebanyak  45,5  mL dengan  larutan  BaCl 2 .2H 2 O  1,175  %  250  µL kedalam  labu
Erlenmeyer dan  dihomogenkan. Kekeruhan  larutan  diukur  dengan  spektrofotometer dengan  panjang  gelombang  (λ)  620  nm.  Nilai absorbansi  larutan Mc  Farland 0,5  berada  pada kisaran  0,20  sampai  dengan  0,80.  Jika  belum diperoleh  nilai  absorbansi  pada  rentang  tersebut, maka  larutan  diencerkan  dan  diukur  kembali. Larutan Mc  Farland 0,5  yang  dibuat  ini  setara dengan  konsentrasi  sel bakteri  ujisebanyak  1,5x10 8

## CFU/mL.
Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM) Ekstrak Etanol Daun Kluwih Nilai  kadar  hambat  minimum  (KHM)  dari  ekstrak etanol daun Kluwih ditentukan dengan metode dilusi cair,  yaitu  dengan  membuat  berbagai  konsentrasi larutan uji yang terdiri atas 3,125%, 6,25%, 12,5%, dan  25%.  Kelompok  perlakuan  dilakukan  dengan cara, 5 mL media Nutrient Broth steril ditambahkan 5  µL  suspensi  bakteri  uji  sebanyak  1,5x10 8 CFU/mLdan  1  mL  ekstrak  etanol  daun  Kluwih dengan  berbagai  konsentrasi,  kemudian  digoyang- goyang  sampai  homogen.  Kemudian  tabung  yang sudah  berisi  kultur  bakteri  tersebut  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37 ⁰ C.  Kekeruhan  yang terbentuk  diamati  dengan  membandingkan  setiap tabung  terhadap  kontrol.  Nilai  konsentrasi  hambat minimum  ditentukan  melihat  konsentrasi  terendah dari  larutan  sampel  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  yang  ditandai  dengan  mulai adanya kejernihan (Karahan et al ., 2016).
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Kluwih Sebanyak  2  mL  suspensi  bakteri  diambil  dan ditambahkan 18 mL media Nutrient Agar kemudian dimasukkan  kedalam  cawan  petri,  dan  ditunggu sampai  memadat.  Kertas  cakram  uji  yang  sudah diteteskan  ekstrak  etanol  daun  kluwih  dalam berbagai konsentrasi (100%, 80%, 60%, 40%, 20%) diletakkan  pada  media Nutrient  Agar. Dalam penelitian ini menggunakan akuades sebagai kontrol negatif  serta  ciprofloxacin  4µg/mL  sebagai  kontrol positif.  Cawan  petri  berisi  sampel  dan  bakteri  uji kemudian  disimpan  dalam  inkubator  dengan  suhu konstan  37 o C  selama  18  jam  dan  kemudian dilakukan  pengukuran  diameter  zona  hambat  yang
…                      (Sogandi & Amelia)
terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram  (Sogandi et  al ., 2015).
Analisis Kebocoran Sel Suspensi bakteri B.s subtilis dan S. dysenteriae, yang berumur  18  jam  ditambahkan  ekstrak  etanol  daun Kluwih  dengan  konsentrasi  yang  digunakan berdasarkan nilai KHM yang diperoleh sebelumnya.
Terdiri atas 0 KHM sebagai kontrol, 1 KHM dan 2 KHM sebagai larutan uji. Kemudian disimpan dalam inkubator dengan suhu konstan 37 o C selama 24 jam. Kultur  bakteri  uji  kemudian  disentrifugasi  pada kecepatan  6000  rpm  dalam  suhu  ruang  selama  5 menit,  kemudian  supernatant  yang  diperoleh dianalisis  dengan  spektrofotometri  pada  panjang gelombang  (λ)  260  nm  dan  280 nm dengan tujuan melihat keberadaan asam  nukleat  (DNA  dan RNA) dan  protein  yang  dikeluarkan  sel  bakteri  ke  media tumbuh  sebagai  akibat  dari  lisisnya  sel  bakteri  uji. Jika  terjadi  peningkatan  nilai  absorbansi  setelah diberi perlakuan ekstrak etanol daun Kluwih, maka diasumsikan bahwa bakteri uji telah mengalami lisis dan kebocoran sehingga materi genetik berupa asam nukleat  dan  protein  terhambur  dan  keluar  dari  sel (Sogandi & Nilasari, 2019).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Karakteristik Ekstrak
Rendemen Ekstrak Ekstrak  etanol  yang  didapatkan  dari  hasil maserasi  simplisia  daun  Kluwih  sebanyak  33 gram  dengan  rendemen  sebesar  3,3%,  nilai rendemen didapat dengan membagi berat hasil (ekstrak  kental)  dengan  berat  awal  simplisia (Departemen Kesehatan RI, 2000). Kadar Air Uji  penentuan  kadar  air  dilakukan  di BALITTRO yang dikerjakan dengan menggunakan  serbuk  daun  Kluwih  secara gravimetri.  Menurut  Nielsen  (2010)  kadar  air dari  suatu  sampel  dapat  mempengaruhi  sifat fisik  sampel  berupa  kekerasan,  kekeringan, perubahan kimia, kerusakan mikrobiologis dan terjadinya  perubahan  enzimatis.  Oleh  karena itu  kadar  air  ditetapkan  untuk  dapat  menjaga kualitas  ekstrak  agar  tidak  terjadi  perubahan selama  proses  penyimpanan.  Hasil  penentuan kadar air  pada  sampel  daun  Kluwih  diperoleh sebesar 10,71%.
Uji Bebas Etanol Hasil ekstraksi yang diperoleh dalam penelitian ini kemudian dilakukan uji bebas etanol untuk memastikan  bahwa  ekstrak  kental  hasil maserasi yang akan digunakan sebagai sampel dalam pengujian aktivitas antibakteri ini sudah bebas  dari  etanol.  Etanol  diketahui  memiliki sifat sebagai antibakteri sehingga dengan tidak adanya  kandungan  etanol  dalam  sampel  uji
yang  digunakan,  akan  menghindarkan  dari timbulnya positif palsu pada perlakuan sampel nantinya  (Kurniawati,  2015).  Dari  hasil pengujian diketahui bahwa sampel sudah bebas dari  etanol  dengan  ditandai  tidak  terciumnya bau  ester  setelah  mereaksikan  ekstrak  dengan asam sulfat dan asam asetat yang dipanaskan.

## Skrining Fitokimia
Berdasarkan pengujian senyawa fitokimia yang dilakukan, diketahui bahwa ekstrak etanol daun Kluwih  memiliki  beberapa  senyawa  metabolit sekunder  fitokimia  yang  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel  1.  Kandungan  fitokimia  ekstrak  daun Kluwih Metode Pengujian Jenis Pemeriksaan Hasil Pemeriksaan Kualitatif Alkaloid + Saponin + Tanin + Fenolik + Flavonoid + Triterpenoid + Steroid - Glikosida + Keterangan:  (+)  memberikan  hasil  positif,  (-) memberikan hasil negatif
Ekstraksi  daun  Kluwih  pada  penelitian  ini menggunakan  metode  maserasi  dengan merendam serbuk simplisia daun Kluwih yang sudah dihaluskan ke dalam pelarut etanol yang dapat masuk ke dalam dinding sel dan rongga sel  tanaman.  Senyawa  yang  ada  dalam simplisia  dapat  ditarik  keluar  dari  sel disebabkan oleh adanya perbedaan konsentrasi di dalam sel dengan di luar sel. Hal ini terjadi berulang-ulang  setiap  kali  larutan  penyari diganti  sampai  semua  senyawa  terekstraksi keluar  dari  sel  (Chan et  al .,  2013).Pemilihan pelarut  yang  digunakan  dalam  menarik senyawa metabolit sekunder adalah etanol 96% atau absolute ,  karena  untuk  mengurangi konsentrasi air  yang terdapat di dalam sampel uji.  Hal  ini  karena  air  bisa  menjadi  media tempat  pertumbuhan  yang  baik  untuk mikroorganisme. Penggunaan etanol 96% yang hanya  mengandung  4%  air  untuk  membantu nutrisi  masuk  ke  dalam  sel,  maka  dapat mengurangi  kontaminasi  pada  ekstrak,  pelarut etanol  96%  juga  bersifat  lebih  selektif  dan mampu  melarutkan  zat  bersifat  lebih  polar
maupun nonpolar, memiliki absorbs yang baik, membuat kapang dan khamir sulit tumbuh, dan etanol  96%  mudah  menguap  sehingga ekstrak kental  lebih  cepat  diperoleh  dibandingkan menggunakan  pelarut  etanol  70%  (Yulianti et al. , 2014).
Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) Ekstrak Etanol Daun Kluwih
Nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) ditentukan  dengan  metode  dilusi  cairyaitu dilihat  dari  tingkat  kekeruhan  pada  tabung reaksi  yang  sudah  berisi  media,  bakteri  dan larutan  ekstrak  etanol  daun  Kluwih menggunakan  berbagai  konsentrasi.  Kontrol yang  digunakan  adalah  media NB  yang  berisi suspensi bakteri uji kemudian disimpan dalam inkubator shaker dengan  suhu  konstan  37 o C selama 24 jam . Tabel 2. Hasil pengukuran KHM Konsentrasi (%) Hasil Pengamatan Shigella dysenteriae Bacillus subtilis 1,5 % +++ ++ 3,125 % +++ + 6,25 %
++ - 12,5 % + - 25 % - - 30 % - - Keterangan : (+) : larutan keruh (++) : larutan lebih keruh (+++) : larutan paling keruh (-) : larutan bening Hasil  pengukuran  KHM  terhadap  Bakteri B.  Subtilis berdasarkan  pada  (Tabel  2)  diatas pada  konsentrasi  3,125%  masih  terlihat aktivitas  bakteri,  namun  pada  konsentrasi 6,25% sudah mulai terhambat ditandai dengan warna  kultur  bakteri  yang  masih  jernih, sehingga  konsentrasi  6,25%  ini  merupakan nilai  KHM  ekstrak  etanol  daun  Kluwih terhadap bakteri B. subtilis . Hasil penelitian ini berbeda dengan nilai KHM ekstrak akar manis terhadap bakteri B. Subtilis yang memiliki nilai KHM 12,5% (Sogandi et al ., 2019). Sedangkan pada  bakteri Shigella  dysenteriae diketahui memiliki nilai KHM 25%, hal ini ditunjukkan dengan  ekstrak  etanol  daun  kluwih  mulai menghambat  pertumbuhan  bakteri  pada konsentrasi 25%, sehingga konsentrasi 25% ini ditetapkan sebagai nilai KHM. Pada penelitian sebelumnya  (Sugumaran et  al .,  2013)  ekstrak
etanol daun binahong diketahui memiliki KHM 0,8 dan 0,2% untuk bakteri S. dysenteriae dan bakteri B.  subtilis .  Perbedaan  nilai  KHM  ini dipengaruhi  oleh  banyak  faktor  dengan  salah satunya adalah struktur dinding sel bakteri. Jika dilihat  pada  struktur  penyusun  dinding  sel bakteri  Gram  positif  lebih  sederhana dibandingkan  dengan  struktur  penyusun dinding  sel  yang  terdapat  pada  bakteri  Gram negatif.  Hal  ini  mempermudah  senyawa antibakteri  dari  ekstrak  daun  Kluwih  dapat masuk  ke  dalam  Gram  positif  dibandingkan dengan Gram negatif (Madduluri et al ., 2013).
Aktivitas Antibakteri  Ekstrak Etanol Daun Kluwih Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun Kluwih (A.  camansi) terhadap  bakteri  uji S. dysenteriae dan B.  subtilis menggunakan metode  difusi  cakram.  Penentuan  potensi antibakteri  ekstrak  etanol  daun  Kluwih  ini dilihat dari luasnya diameter zona bening yang terbentuk  untuk  setiap  konsentrasi  ekstrak dengan  ciprofloxacin  dan  akuades  sebagai kontrol positif dan negatif. Sebelum digunakan dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri,  bakteri uji  ditanam  ulang (preculture) terlebih  dahulu selama  1x24  jam  kerena  diperlukan  bakteri yang  berada  pada  fase  log  sebagai starter (Adaramoye & Akanni, 2014). Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S.  dysenteriae maupun B.  subtilis dilakukan dengan  seri  konsentrasi  yang  sama  yaitu sebesar 20, 40, 60, 80 dan 100%. Ciprofloxacin 4µg/mL digunakan sebagai kontrol positif dan akuades sebagai kontrol negatif, dengan media adalah  media NA .  Bakteri  yang  telah diremajakan  diambil  dan  diencerkan  hingga didapatkan  kekeruhan  yang  setara  dengan konsentrasi  1,5  x  10 8 CFU/mL  bakteri  uji, kemudian  diambil  2  mL  dan  ditambahkan  18 mL  media NA, kemudian  dihomogenkan  dan dimasukkan ke dalam cawan petri steril.
(a) (b) Gambar 1. Aktivitas antibakteri ekstrak etanol Daun  Kluwih  terhadap Shigella dysenteriae (a)  dan Bacillus subtilis (b)
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  Tabel  3 didapatkan  zona  hambat
S.  dysenteriae konsentrasi  100%  adalah  17±1,4  mm,  pada konsentrasi  80%  adalah  9±1,4  mm,  pada konsentrasi 60% adalah 7±1,2 mm, konsentrasi 40% dan 20% adalah 6,5± 0,7mm. Sedangkan pada  bakteri B.  subtilis zona  bening  yang terbentuk  pada  konsentrasi  100%  adalah 16±1,3  mm,  konsentrasi  80%  adalah  7±1,4 mm,  konsentrasi  60%  adalah  7±  1,5  mm, konsentrasi 40% adalah 6,5± 0,4 mm dan pada konsentrasi 20% adalah 6±0 mm. Terbentuknya  daya  hambat  di  sekitar larutan uji diduga karena adanya aktivitas dari metabolit sekunder  yang  dimiliki daun  kluwih diantaranya  flavonoid,  tanin,  saponin,  fenolik dan alkaloid (Inoue et al ., 2018). Berdasarkan hasil  yang  didapatkan  bahwa  dengan bertambahnya  konsentrasi  ekstrak,  maka bertambah  juga  aktivitas  antibakteri  yang ditandai  dengan  luasnya  zona  bening  yang dihasilkan ekstrak semakin melebar. Meningkatnya  zona  hambat  yang  terbentuk dikarenakan  bertambahnya  jumlah  dan aktivitas  ekstrak,  hal  tersebut  menandakan semakin banyak juga senyawa yang terkandung dalam  ekstrak  yang  berdifusi  kedalam  agar untuk  membentuk  zona  hambat  (Permata  &
Asben, 2017).
Ukuran  suatu  zona  bening  dapat memperlihatkan  aktivitas  dari  suatu  zat terhadap bakteri uji, aktivitas antibakteri dapat diklasifikasikan  ke  dalam  beberapa  kategori berdasarkan  diameter  zona  bening  yang terbentuk.  Menurut  Davis  &  Stout  (1971) aktivitas  eksrak  etanol  daun  Kluwih  terhadap bakteri  uji S.  dysenteriae dan B.  subtilis tergolong  kedalam  kategori  yang  kuat  dan
kontrol  positif  ciprofloxacin  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  tergolong  sangat  kuat dengan  zona  bening  mencapai  lebih  dari  20 mm.  Hasil  pengukuran  zona  hambat  dan klasifikasi ini sesuai dengan standar dari Davis dan Stout (Davis & Stout, 1971).
Uji Kebocoran Sel Hasil  penelitian  menunjukkan  adanya peningkatan  absorbansi  dari  supernatan  sel yang ditandai dengan meningkatnya konsentrasi  asam  nukleat  dan  protein  dalam media pertumbuhan bakteri yang dapat terbaca pada  panjang  gelombang  (λ)  260  nm  dan 280 nm  pada  alat  spektrofotometri.  Peningkatan absorbansi menunjukkan meningkatnya jumlah molekul  yang  dikeluarkan  oleh  sel.  Jenis senyawa yang dapat diserap oleh spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  (λ) 260 nm berupa asam nukleat (DNA dan RNA), sedangkan  senyawa  yang  dapat  diserap  pada 280 nm adalah protein (Jiang et al ., 2017). Kebocoran  sel  ditandai  dengan  adanya kerusakan  di  membran  sel  bakteri  uji  atau terganggunya permeabilitas membran sel, yang mengakibatkan  keluarnya  senyawa  asam nukleat berupa DNA maupun RNA dan protein dari bakteri yang telah diberikan ekstrak etanol daun  Kluwih.  Hasil  penelitian  ini  sejalan dengan hasil penelitian yang diungkapkan oleh Suhendar et  al., (2019)  yang  menjelaskan penampakan  permukaan  sel    bakteri  ketika diberi perlakuan ekstrak metanol buah mangga kasturi dapat membuat lubang atau melisis sel bakteri  berdasarkan  hasil  dari  pengambilan gambar permukaan sel uji menggunakan SEM ( Scanning Electron Microspe ).
Tabel 3. Aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Kluwih Perlakuan (%) Zona Hambat (mm) Shigella dysenteriae Bacillus subtilis K (+)ciprofloxacin 37 ± 1,4 24 ± 0,7 K (-) akuades 0 0 100 17± 1,4 16 ± 1,3 80 9± 1,4 7 ± 1,4
60
7± 1,2 7 ± 1,5 40 6,5 ± 0,7 6,5 ± 0,4 20 6,5± 0,7 6 ± 0
Tabel 4 . Plot Data Nilai Tukar Petani λ (nm) Shigella dysenteriae Bacillus subtilis 0 KHM 1 KHM 2 KHM 0 KHM 1 KHM 2 KHM 260 0,37 3,58 3,60 0,40 3,48 3,58 280 0,34 3,48 3,58 0,39 3,43 3,50 Keterangan: KHM=Keterangan Hambat Minimum Tabel  4  menunjukkan  bahwa  terdapat peningkatan nilai absorbansi pada 260 nm dan 280 nm yang menandakan adanya peningkatan konsentrasi  asam  nukleat  dan  protein  terlarut dalam  media  kultur  bakteri  setelah  diberikan ekstrak etanol daun Kluwih dengan konsentrasi 1  KHM  dan  2  KHM.  Hal  ini  menandakan bahwa sel bakteri telah mengalami kebocoran. Meningkatnya  nilai  abosrbansi  menunjukkan bahwa asam nukleat dan protein dari bakteri uji telah  keluar  dari  sel  dan  terlarut  ke  dalam media NB .  Hal  ini  sejalan  dengan  hasil penelitian sebelumnya pada ekstrak akar manis bahwa  dengan  nilai  konsentrasi  ekstrak  yang semakin  tinggi,  maka  nilai  absorbansi  atau penyerapan terhadap asam nukleat dan protein juga  akan  semakin  tinggi  pula  (Sogandi  & Nilasari, 2019).

## KESIMPULAN
Daun  Kluwih (A.  camansi) memiliki  potensi sebagai  sumber  bahan  alami  dalam  mengatasi penyakit diare dengan menghambat pertumbuhan  bakteri  pathogen S.  dysenteriae dengan  nilai  KHM  25%  dan Bacillus  subtilis memiliki  nilai  KHM  6,25%.  Mekanisme  aksi penghambatan  ekstrak  etanol  daun  Kluwih adalah  dengan  membuat  lubang  membran  sel bakteri  uji  dan  menyebabkan  terjadinya kebocoran sel.

## DAFTAR PUSTAKA
Adaramoye OA  & Akanni OO. 2014. Effects of  Methanol  Extract  of  Breadfruit ( Artocarpus altilis ) on Atherogenic Indices and  Redox  Status  of  Cellular  System  of Hypercholesterolemic Male Rats. Advances in Pharmacological Science . 2014 : 604525. AOAC International. 1990. AOAC: Agricultural  Chemicals;  Contaminants; Drugs. AOAC:  Official  Methods  of
Analysis . 1 Arif  M,  Rahman  N  &  Supriadi  S.  2018.  Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Buah Kluwih  ( Artocarpus  communis ). Jurnal Akademika Kimia 7 :85. Banu  KS  &  Cathrine  L.  2015.  General Techniques  Involved  in  Phytochemical Analysis. International  Journal  of Advanced  Research  in  Chemical  Science .
2 :25–32. Chan S, Popplewell W, Henrich C, Linehan W, Bottaro  D,  Mcmahon  J,  Mckee  T &Gustafson  K.  2013.  Isolation  and Identification  of  Natural  Products  from Artocarpus communis . Planta Medica . 79 Davis  WW  &  Stout  TR.  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Applied Microbiology 22 : 666–670. Departemen  Kesehatan  RI.  2000.  Parameter
Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat Durniawati E. 2015. Daya Antibakteri Ekstrak Etanol  Tunas  Bambu  Apus  Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus Secara  Invitro.
Jurnal Wiyata . 2 :193–199. Eryuda  F  &Soleha  TU.  2016.  Ekstrak  Daun Kluwih  ( Artocarpus  camansi )  dalam Menurunkan  Kadar  Glukosa  Darah  Pada Penderita  Diabetes  Melitus. Majority . 5 : 71–75. Fakhrudin  N,  Hastuti,  A,  Andriani  A,
Widyarini S & Nurrohmad A. 2015. Study on  the  Antiinflammatory  Activity  of Artocarpus  altilis Leaves  Extract  in  Mice. International  Journal  of  Pharmacognosy and  Phytochemical  Research . 7 :  1080– 1085.
Harvey D, 1999,
Modern Analytical Chemistry ,
McGrawHill, USA.
Indrowati  M  &  Ariyanto  J.  2012.  Kadar Kolesterol  dan  Trigliserida  Darah  pada Diabetes  Melalui  Perlakuan  Ekstrak  Daun Kluwih Artocarpus  altilis Park.  Prosiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi FKIP UNS: 655–66. Inoue  M,  Hitora  Y,  Kato  H,  Losung  F, Mangindaan  REP  &  Tsukamoto  S.  2018. New geranyl flavonoids from the leaves of Artocarpus  communis . Journal  of  Natural Medicines . 72 (3):632-640 Jiang H, Zou J, Cheng H, Fang J & Huang G. 2017.  Purification,  Characterization,  and Mode of Action of Pentocin JL-1, a Novel Bacteriocin  Isolated  from Lactobacillus pentosus , against Drug-Resistant
112 Potensi Antibakteri Ekstrak Daun …                      (Sogandi & Amelia)
Staphylococcus  aureus . BioMed  Research International . 2017 :1–11.
Karahan  F,  Avsar  C,  Ozyigit  II  &Berber  I. 2016.  Antimicrobial  and  Antioxidant
Activities  of  Medicinal  Plant Glycyrrhiza glabra var  .  glandulifera  from  Different Habitats. Biotechnology & Biotechnological Equipment . 2818 :1–8. Laware  SL.  2015.  Sequential  Extraction  of Plant Metabolites. Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci . 4 : 33–38. Madduluri  S,  Babu  K  &  Sitram  B.  2013.  In vitro  evaluation  of  antibacterial  activity  of five  indigenous  plants  extract  against  five bacterial pathogens of human. International Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical
Science . 5 : 679–684.
Mohamedkassm N, Fessehaye N, Mebrahtu D, Teaghes  K,  Fessehaye  Y,  Kaushik  A  & Medhanie  G.  2013.  The  Ethno-botanic Significance  and  Antimicrobial  Activities of  Two  Plant  Extracts  used  in  Eritrea. American  Journal  of  Phytomedicine  and Clinical Thereutics . 1 :520–529. Nielsen SS. 2010. Food Analysis . Springer.
Permata  DA  &  Asben  A.  2017.  Karakteristik dan Senyawa Bioaktif Ekstrak Kering Daun Kluwih  dari  Posisi  Daun  yang  Berbeda. Jurnal  Teknologi  Pertanian  Andalas . 21 : 79–85.
Prabhavathi  RM,  Prasad  MP  &  Jayaramu  M.
2016.  Studies  on  Qualitative  and Quantitative  Phytochemical  Analysis  of Cissus  quadrangularis. Plagia  Research
Library . 7 : 11–17.
Rajesh  KD,  Vasantha  S,  Rajesh  NV  &
Panneerselvam  A.  2014.  Qualitative  and quantitative phytochemical analysis in four pteridophytes. International  Journal  of Pharmaceutical  Science  Review  and Research . 27 : 408–412.
Ropac  D.  2005.  An  Outbreak  of  Food
Poisoning in a Kindergarten caused by Milk Powder  containing  toxigenic
Bacillus subtilis and Bacillus  licheniformis . Archiv für lebensmittelhygiene . 56 : 1–24. Sikarwar  MS,  Hui  BJ,  Subramaniam  K,
Valeisamy  BD  &  Yean  LK.  2014.  A Review  on Artocarpus  altilis (Parkinson)
Fosberg  (breadfruit). Journal  of  Applied Pharmaceutical Science . 4 : 91–97. Sogandi,  Darma  WST  &  Jannah  R.  2019.
Potensi  Senyawa  Antibakteri  dari  Ekstrak Akar  Manis  ( Glycyrrhiza  glabra L) terhadap Bacillus  cereus . Jurnal  Kimia
Sains Dan Aplikasi . 22(4) :105-111. Sogandi,  Mustopa  AZ,  Artika  IM  &  Budiarto
BR.  2015.  Inhibitory  Activity  of Lactobacillus plantarum U10 Isolated from Tempoyak  (Fermented  Durian)  Made  in Indonesia  against
Salmonella  typhi . Microbiol Indones . 9 :73–81. Sogandi  &  Nilasari  P.  2019.  Identifikasi Senyawa  Aktif  Ekstrak  Buah  Mengkudu ( Morinda  citrifolia L.)  dan  Potensinya sebagai  Inhibitor  Karies  Gigi. Jurnal Kefarmasian Indonesia . 9 :73–81. Sugumaran  P,  Kowsalya  N,  Karthic  R  & Seshadri S. 2013. Biomass Production and Antibacterial Activity of JusticiaGendarussa : A Valuable  Medicinal Plant. The Journal of Tropical Life Science .
3 : 8–13. Suhendar  U,  Fathurrahman  M,  &  Sogandi. 2019. Antibacterial Activity and Mechanismof  Action  of  Methanol Extractfrom Kasturi Mango Fruit (Mangifera casturi ) on Caries- CausingBacterium Streptococcus  mutans. Jurnal  Kimia  Sains  dan  Aplikasi . 22(6):
235-241. Susanti  WE  &  Sunarsih  E.  2016.  Determinan Kejadian  Diare  pada  Anak  Balita  Di Indonesia  (Analisis  Lanjut  Data  SDKI 2012). Jurnal Ilmu Kesehatan Masyarakat .
7 : 64–72.
Tiwari P, Kumar B, Kaur M, Kaur G & Kaur
H.  2011.  Phytochemical  screening  and Extraction:  A  Review. Internationale
Pharmaceutica Sciencia . 1 :98106. Ukoha  PO,  Cemaluk  EAC,  Nnamdi  OL  & Madus  EP.  2011.  Tannins  and  other phytochemical  of  the  Samanaea  saman pods  and  their  antimicrobial  activities. African  Journal  of  Pure  and  Applied Chemistry . 5 : 237–244. Vianney  YM,  Amanda  N,  Pieknell  K,  Johan CW & Hardjo PH. 2018. Evaluation of the antioxidant  and  antibacterial  activity  of breadnut ( Artocarpus camansi Blanco ) leaf extracts. Indian  Journal  of  Natural Products and Resources . 9 :151–159. Vigneshwaran  V,  Somegowda  M  &  Pramod SN.  2014.  Pharmacological  Evaluation  of Analgesic  and  Antivenom  Potential  from the Leaves of Folk Medicinal Plant Lobelia nicotianae folia. American  Journal  of Phytomedicine  and  Clinical  Therapeutics . 2 :1404–1415. Yigit  D.  2017.  Antifungal  Activity  of
Lawsonia  inermis L.  (Henna)  Against Clinical  Candida  Isolates.
Journal  of
Science and Technology . 10 : 196–202. Yulianti D, Susilo B & Yulianingsih R. 2014. Pengaruh  Lama  Ekstraksi  dan  Konsentrasi Pelarut  Etanol  terhadap  Sifat  Fisika-Kimia Ekstrak  Daun  Stevia  ( Stevia  rebaudiana Bertoni M)  dengan  Metode  Microwave
Assisted  Extraction  (MAE).
Jurnal
Bioproses Komoditas Tropis . 2 :35–41.