## EKSPLORASI POTENSI EKSTRAK ASETON KULIT BUAH KAKAO
( Theobroma cacao L.) SEBAGAI INHIBITOR α-GLUKOSIDASE
Dewi Chusniasih 1

## ABSTRACT
Diabetes  mellitus  is  a  disease  caused  by  metabolic  disorders  characterized  by hyperglycemia  and  abnormalities  in  the  metabolism  of  carbohydrates,  fats  and proteins.  One  alternative  way  to  overcome  hyperglycemia  is  to  reduce  the amount  of  glucose  that  can  be  absorbed  by  the  body  by  suppressing  the digestion process  of  carbohydrates  by  inhibitors  of  the  α-glucosidase  enzyme. This  study  aims to determine  the  inhibitory  activity  of  α-glucosidase by acetone extract of cocoa peel using spectrophotometric methods. Simplicia of cocoa fruit macerated with 80% aceton e solvent. The inhibition activity test of α-glucosidase enzyme showed that the cocoa peel acetone extract inhibited the activity of the α- glucosidase enzyme in a weak category with IC 50 value 712,86 µg mL-1.
Keywords: α-glukosidase  inhibitor,  acetone  extract,  cocoa  peels  (Theobroma cacao L).

## ABSTRAK
Diabetes  mellitus  adalah  salah  satu  penyakit  akibat  gangguan  metabolisme yang  ditandai  oleh  keadaan  hiperglikemia  dan  abnormalitas  dalam metabolisme karbohidrat, lemak, dan protein. Salah satu cara alternatif untuk mengatasi  hiperglikemia  adalah  dengan  mengurangi  jumlah  glukosa  yang dapat  diserap  tubuh  dengan  menekan  proses  pencernaan  karbohidrat  oleh inhibitor  enzim  α-glukosidase.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  penghambatan  α-glukosidase  oleh  ekstrak  aseton  kulit  buah  kakao menggunakan  metode  spektrofotometri.  Serbuk  simplisia  kulit  buah  kakao dimaserasi dengan pelarut aseton 80%. Uji aktivitas penghambatan enzim α- glukosidase  menunjukkan  bahwa  ekstrak  aseton  kulit  buah  kakao menghambat aktivitas enzim α-glukosidase dalam kategori lemah dengan nilai IC 50 712,86 µg mL -1 .
Kata  kunci:  Inhibitor  α-glukosidase,  ekstrak  aseton,  kulit  buah  kakao ( Theobroma cacao L).

## PENDAHULUAN
Inhibitor α-glukosidase merupakan salah satu agen antidiabetik  yang  bekerja  dengan cara menghambat kerja enzim alfa glukosidase. Enzim alfa glukosidase berperan  dalam  proses  hidrolisis dekstrin dari polisakarida kompleks
menjadi glukosa sebelum memasuki sirkulasi melalui penyerapan epitelium. Pengurangan penyerapan karbohidrat  dari  makanan  di  usus merupakan  sebuah  pendekatan terapeutik
bagi hiperglikemia
postpandrial. Inhibitor alfa glukosidase sintetis seperti akarbose,  telah  banyak  digunakan untuk penanganan pasien diabetes. Namun,  penggunaan  obat  ini  juga dilaporkan  menyebabkan  berbagai efek samping (Feng et al., 2011).
Tanaman kakao mengandung  senyawa  antioksidan dan  antiradikal  yang  telah  diuji secara  invitro.  Beberapa  dari senyawa  fenolik  tersebut  yaitu katekin,  epikatekin,  antosianidin, proantosianidin,  asam  fenolik,  dan beberapa flavonoid lainnya (Arlorio,
1995). Kulit buah coklat mengandung pigmen kakao (campuran dari flavonoid terpolimerisasi  atau  terkondensasi meliputi antosianidin, katekin, leukoantosianidin)  yang  kadang berikatan dengan glukosa, karbohidrat berbobot
molekul besar  (polisakarida)  dan  berbobot molekul  rendah  (monosakarida, oligosakarida)  (Mita,  2015).  Dalam proses  penanganan  biji  kakao  oleh petani,  dihasilkan  juga  limbah berupa  kulit  buah  kakao  sebesar kurang  lebih  73,77%  dari  berat buah  secara  keseluruhan.  Adanya komponen komponen polifenol dalam  biji  kakao,  tidak  menutup kemungkinan  juga  terdapat  dalam kulit  buah  kakao  dengan  khasiat yang sama.
Menurut  Kayaputri  (2014), kulit buah kakao masih mengandung  komponen  fungsional seperti  theobromine,  kafein,  dan polifenol. Senyawa-senyawa tersebut  merupakan  komponen fitokimia  hasil  metabolit  sekunder tanaman. Komponen fitokimia dapat diisolasi dari tanaman dengan  cara  ekstraksi.  Salah  satu metode  ekstraksi  yang  dapat diterapkan adalah maserasi menggunakan pelarut organik
seperti  etanol  dan  aseton.  Hasil penelitian  Kayaputri  et  al.,  (2014) menunjukkan  bahwa  berdasarkan skrining  fitokimia,  kulit  biji  kakao yang diekstrak menggunakan etanol  70%  mengandung  alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin,  dan triterpenoid. Analisis fitokimia menggunakan Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) menunjukkan  ekstrak  kulit  buah kakao  mengandung  2,3-butanediol
(6,45%),
benzeneacetic acid (2,33%),  caffeine  (23,51%),  dan theobromine (65,99%).
Berdasarkan
penelitian Oktaria  (2013),  flavonoid  terbukti dapat  menurunkan  kadar  gula darah.  Flavonoid  adalah  senyawa organik  alami  yang  ada  pada tumbuhan secara umum. Flavonoid alami  banyak  memainkan  peran penting dalam pencegahan
diabetes  dan  komplikasinya  (Jack,
2012). Flavonoid
merupakan senyawa  polar  karena  mempunyai gugus  hidroksil  atau  gula  , sehingga dapat larut dalam pelarut polar  seperti  etanol,  metanol, butanol,  aseton,  dimetilsulfoksida, dan air (Markham, 1988). Sejumlah  studi  telah  dilakukan untuk menunjukkan
efek hipoglikemik  dari  flavonoid  dengan menggunakan  model  eksperimen yang  berbeda,  hasilnya  tanaman yang  mengandung  flavonoid  telah terbukti memberi
efek
menguntungkan  dalam  melawan penyakit  diabetes  melitus,  baik melalui  kemampuan  mengurangi penyerapan glukosa maupun dengan cara meningkatkan toleransi  glukosa  (Brahmachari, 2011). Flavonoid menghambat GLUT  2  mukosa  usus  sehingga dapat
menurunkan absorbsi glukosa.  Hal  ini  menyebabkan pengurangan  penyerapan  glukosa dan  fruktosa  dari  usus  sehingga kadar glukosa darah turun. GLUT 2 diduga merupakan transporter mayor glukosa di usus pada kondisi normal.  Pada  penelitian  yang dilakukan didapatkan bahwa flavonoid dapat menghambat penyerapan glukosa. Ketika
flavonoid  tertelan  dengan  glukosa, hiperglikemia secara signifikan
menurun.  Flavonoid  juga  dapat menghambat fosfodiesterase sehingga meningkatkan cAMP pada sel  beta  pankreas  (Puspati  et  al., 2013).  Peningkatan  cAMP  akan menstimulasi  pengeluaran  protein kinase  A  (PKA)  yang  merangsang sekresi  insulin  semakin  meningkat (Harapan et al., 2010).
Kulit buah kakao mengandung  komponen  pektin. Pektin  banyak  dimanfaatkan  di industri  pangan  dan  non  pangan sebagai bahan pengental, pembentuk gel, bahan aditif dalam pembuatan  krim  sabun,  dan  pasta (Wayahningtyas,  2013).  Pektin merupakan suatu senyawa polisakarida kompleks yang
cenderung  banyak  terdapat  dalam dinding  sel  tumbuhan  dan  dapat ditemukan  dalam  berbagai  jenis tanaman  pangan.  Pektin  memiliki banyak manfaat, terutama dibidang  farmasi,  dimana  pektin bagi  peparat  cair  dan  sirup, sebagai antidotum, sebagai adsorben  pada  pengobatan  diare (Winarno,  1986).  Telah  diketahui bahwa dengan mengkonsumsi pektin,  akan  mampu  mengurangi kadar  kolesterol  dalam  darah, dimana  dengan  mengkonsumsi sedikitnya  6  gram  pektin  per  hari akan  mampu  mengurangi  kadar kolesterol dalam darah hingga 13% dalam  jangka  waktu  2  minggu
(Srivastava  and  Rishabha,  2011). Pektin  mengganggu  pencernaan intralumen  bagi  pati  dan  sukrosa,
sehingga
menunda absorbsi
karbohidrat.  Selain  itu  pektin  akan membentuk  gel  dan  menahan  air sehingga  dapat  memperlambat pengosongan lambung (Marks,
1996).
Belum  banyak  penelitian yang  mengeksplorasi  potensi  kulit buah  kakao  sebagai  sumber  zat aktif  obat.  Penelitian  ini  dilakukan untuk  mengetahui  potensi  limbah kulit  kakao  sebagai  sumber  bahan aktif  anti  diabetes  secara  in  vitro melalui  mekanisme  penghambatan enzim  α-glukosidase.  Pengujian dilakukan  pada  variasi  konsentrasi ekstrak kulit buah kakao ( Theobroma cacao L.) untuk
mengetahui  nilai  IC 50 inhibitor enzim α-glukosidase.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  oven,  rotary evaporator,    timbangan  analitik,
blender, penangas air, spektrofotometer UV-Vis, mikropipet,  kuvet  kuarsa,  pipet volum. Bahan yang digunakan
adalah  simplisia  kulit  buah  kakao ( Theobroma  cacao L.),  aseton 80%,  akarbose,  larutan  buffer
fosfat,  larutan  standar,  blanko,  p- nitrofenil-α-D-glukopiranosida
(pNPG),
Na2CO3,
Larutan
akarbose, enzim α-glukosidase.

## Persiapan Sampel
Kulit  buah  kakao  yang digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  kulit  buah  yang  sudah matang  dan  berwarna  kekuningan. Bagian kulit buah kakao yang telah disortasi  basah  kemudian  dicuci dengan  air  mengalir  hingga  bersih dan  dilakukan  perajangan  untuk mempermudah
pengeringan. Pengeringan dilakukan dengan cara diangin-anginkan
pada suhu ruangan hingga kering. Kulit kakao yang  telah  dikeringkan  kemudian dibuat serbuk dengan
menggunakan  blender  atau  mesin penggiling.  Simplisia  diekstraksi dengan  cara  maserasi  dengan pelarut  aseton  80%  kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental. Uji Aktivitas Inhibisi α- Glukosidase  (Sancheti et  al .,
2009)
Sebanyak  10  μl  larutan
standar, blanko dan sampel (konsentrasi  200,  500,  800  dan 1200 μg/mL) dimasukkan ke dalam sumur  microplate  reader  dan ditambahkan dengan 50 μL larutan
bufer  fosfat  pH  7.Selanjutnya, sebanyak  25  μl  substrat  berupa  p- nitrofenil-α-D-glukopiranosida (pNPG)  10  mM  ditambahkan  tiga menit  sebelum  uji  dimulai.  Reaksi diinisiasi  dengan  penambahan  25 μl  enzim  α-glukosidase  dengan konsentrasi 0.04 U/mL dalam bufer fosfat (pH 7.0) kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 30 menit.
Reaksi dihentikan dengan penambahan 100
μl
Na 2 CO 3 . Hasil reaksi diukur dengan microplate  reader  pada  panjang gelombang 410 nm. Larutan akarbose digunakan sebagai control positif dengan sistem reaksi sama  seperti  sampel.  Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan. Selanjutnya
dilakukan  perhitungan  %  inhibisi untuk  menentukan  nilai  IC 50 . Sistem reaksi dapat diketahui pada Tabel 1.
Tabel 1. Sistem reaksi inhibisi a-glukosidase
Reagen Volume (μL) Blanko Kontrol Blanko Sampel Kontrol Sampel Pelarut 10 10 - - Sampel - - 10 10 Buffer 50 50 50 50 Substrat 25 25 25 25 Enzim 25 - 25 - Buffer - 25 - 25 Inkubasi 70°C 30 menit Na 2 CO 3 100 100 100 100

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik ekstrak aseton kulit buah kakao ( Theobroma Cacao L. ) disajikan pada tabel 2.
Tabel 2.
Hasil Karakterisasi Ekstrak Aseton Kulit Buah Kakao ( Theobroma Cacao L. )
Jenis karakterisasi Hasil a. Identitas Nama ekstrak Nama latin Bagian tanaman Ekstrak aseton kulit buah kakao ( Theobroma Cacao L. ) Kulit buah kakao
b. Organoleptik Bentuk padat seperti pasta,
berwarna coklat kehijauan
Hasil pengujian aktivitas penghambatan  α-glukosidase  pada beberapa  konsentrasi  ekstrak  kulit buah kakao dengan metode
spektrofotometri  disajikan  pada tabel 2.
Tabel 3.
Hasil Pengujian Aktivitas Penghambatan Α-Glukosidase Pada Beberapa Konsentrasi Ekstrak Kulit Buah Kakao Dengan Metode Spektrofotometri
Sampel uji Konsentrasi (µg/mL) Rata-rata % Inhibisi (%) Nilai IC 50 (µg/mL) Keterangan Ekstrak Aseton Kulit Buah kakao
0 0 712,861 Lemah
200 7,544 300 14,921 400 22,751 500 33,438 600 39,461 800 55,927 1200 75,025 Glucobay (Kontrol Positif) 0 0
0,246 Sangat Kuat 0,1 30,196 0,5 65,037 1 76,834 5 91,054 10 93,521 Berdasarkan data hasil pengujian  aktivitas  penghambatan a-glucosidase dengan metode spektrofotometer,
persentase inhibisi  ekstrak  kulit  buah  kakao semakin  meningkat  seiring  dengan pertambahan  konsentrasi  ekstrak. Nilai  IC50  ekstrak  aseton  kulit buah  kakao  yaitu  712,861  µg/mL, sedangkan  nilai  IC50  Glucobay (Kontrol positif) yaitu 0,246 µg/mL.
Uji  aktivitas  penghambatan
α-glukosidase dilakukan untuk mengetahui aktivitas penghambatan dari beberapa konsentrasi ekstrak dengan melihat
nilai  persentase  inhibisi  dan  nilai IC 50 .  Konsentrasi  ekstrak  yang
digunakan  yaitu  0,  200,  300,  400, 500,  600,  800,  dan  1200  µg/mL. Ragam  konsentrasi  dibuat  untuk melihat  pengaruh  penambahan konsentrasi
ekstrak terhadap
peningkatan penghambatan α- glukosidase.  Sebagai  pembanding digunakan  tablet  glucobay  yang mengandung 100 mg acarbose tiap tabletnya.  Hasil  yang  disajikan pada  tabel  3  menunjukkan  bahwa kemampuan  penghambatan  enzim α-glukosidase  meningkat  seiring dengan adanya peningkatan konsentrasi,  baik  pada  ekstrak aseton  kulit  buah  kakao  maupun pada acarbose.
Acarbose merupakan senyawa oligosakarida yang berasal  dari  proses  fermentasi mikroorganisme Actinoplanes
utahenis .  Senyawa  oligosakarida kompleks  ini  merupakan  inhibitor kompetitif  potensial  dari  enzim  α- glukosidase  yang  berperan  untuk memecah  pati,  dekstrin,  maltose, dan  sukrosa  hingga  menghasilkan monosakarida  yang  dapat  dicerna. Berdasarkan  sifat  tersebut,  maka acarbose  merupakan  salah  satu agen  antidiabetes  oral  bagi  pasien diabetes  mellitus.  Efek  samping dari  penggunaan  acarbose  yaitu flatulensi,  diare,  dan  sakit  perut (Hollander et al , 1997). α-glukosidase  adalah  enzim yang  mengkatalisis  pemotongan
ikatan glikosidik pada oligosakarida.
Beberapa glukosidase  yang  bekerja  spesifik dalam  memotong  ikatan  glikosidik bergantung  pada  jumlah,  posisi, atau  konfigurasi  grup  hidroksil  di dalam  molekul  gula.  Aktivitas glukosidase  merupakan  hal  yang fundamental  bagi  beberapa  proses biokimia
seperti degradasi polisakarida menjadi unit
monosakarida  agar  dapat  diserap dan  digunakan  oleh  organisme  (de Melo et al ., 2006). Oleh karena itu pada  kondisi  hiperglikemia  dimana konsentrasi  gula  pada  darah  tinggi melebihi  normal  seperti  yang
terjadi  pada  penderita  diabetes, penghambatan  kerja  enzim  α- glukosidase dapat membantu mengatasi  kondisi  hiperglikemia karena  jumlah  monosakarida  yang dapat  diserap  oleh  usus  menjadi berkurang.
Aktivitas penghambatan enzim  α-glukosidase  oleh  ekstrak aseton kulit buah kakao dinyatakan dalam  nilai  IC 50 yaitu  pada konsentrasi  712,861  µg  mL -1 .  Nilai IC 50 ekstrak  kulit  buah  kakao termasuk  dalam  kategori  lemah, bila  dibandingkan  dengan  kontrol positif acarbose yang memiliki nilai IC 50 0,246  µg  mL -1 .  Hal  ini  dapat disebabkan oleh kandungan fitokimia  yang  berperan  dalam menghambat  aktivitas  enzim  α- glukosidase  mungkin  saja  memiliki sifat  kepolaran  yang  berbeda dengan  aseton  sebagai  pelarut dalam  penelitian  ini,  sehingga  zat- zat  fitokimia  tersebut  tidak  ada atau  ada  dalam  konsentrasi  yang rendah dalam ekstrak aseton.
Banyak penelitian telah membuktikan bahwa senyawa fitokimia memiliki kemampuan untuk menghambat kerja enzim  α- glukosidase,  seperti  senyawa  dari golongan  alkaloid  (Patel  et  al. 2012),  triterpenes  (Lai  et  al. 2012),  dan  flavonoid  (Wang  et  al. 2010).  Penghambatan  aktivitas  α- glukosidase oleh berbagai senyawa
fenolik juga telah banyak dijelaskan  dalam  literatur,  dimana antara  lain  disebutkan  bahwa  α- glukosidase secara
efektif
dihambat  oleh  flavonol  (Lee  et  al. 2008),  luteolin,  myricetin,  dan quercetin  (Tadera  et  al.  2006). Dengan demikian kemampuan
aktivitas  inhibitor  alfa  glukosidase yang    dimiliki  oleh  ekstrak  kulit buah  kakao  tidak  lepas  dari  kerja senyawa fitokimia yang
dikandungnya.  Menurut  Kim  et  al. (2008)  sebagian  besar  inhibitor  α- glukosidase  bekerja  dengan  cara meniru  cara  meniru  posisi  transisi unit  piranosidik  dari  substrat glukosidase alami, sehingga diduga mekanisme penghambatannya adalah berupa penghambatan kompetitif.  Perlu  dilakukan  isolasi dengan  teknik  spektrofotometri massa untuk mengungkapkan senyawa  bioaktif  yang  bekerja sebagai inhibitor α-glukosidase dalam  ekstrak  aseton  kulit  buah
kakao agar dapat
diketahui mekanisme penghambatannya.

## KESIMPULAN
Aktivitas
penghambatan enzim  α-glukosidase  oleh  ekstrak aseton kulit buah kakao dinyatakan dalam  nilai  IC 50 yaitu  pada konsentrasi  712,861  µg  mL -1 .  Nilai IC 50 ekstrak  kulit  buah  kakao termasuk  dalam  kategori  lemah,
bila  dibandingkan  dengan  kontrol positif acarbose yang memiliki nilai IC 50 0,246 µg mL -1 .

## DAFTAR PUSTAKA
Arlorio,
M., et al . (2005). Antioxidant  and  Biological Activity of Phenolic Pigments  from  Theobroma Cacao  L.  Hulls  Extracted with Supercritical CO2.
Food  Research  Int .,  38, 1009-1014. Brahmachari,  G.  (2011).  Bio- Flavonoids  With  Promising Antidiabetic  Potentials:  A Critical  Survey. Research Signpost, 187-212. Feng  J,  Yang  XW.,  Wang  RF. (2011).  Bio-Assay  Guide
Isolation  and  Identification of  a-Glucosidase  Inhibitors From The Leaves of Aquilaria sinensis . Photochemistry ,  72,  242-
247.
Harapan,  Jamil  KF,  Hayati  Z,
Muhammad I. (2010). Peran puasa dalam remodelling sel enteroendokrin untuk mencegah diabetes melitus tipe 2. JIMKI , 1(1), 36-40. Hollander  P.,  Pi-Sunyer  X.,  Coniff RF.  (1997).  Acarbose  in
Treatment of Type 1 Diabetes. Diabetes  Care, 20, 248-253. Jack. (2012). Synthesis of Antidiabetic Flavonoids and Their  Derivative. Medical
Research , pp 180. Kayaputri,  I.L.,  Sumanti,  D.M., Djali,  M.,  Indiarto  R.,  Dewi D.L. (2014). Kajian Fitokimia  Ekstrak  Kulit  Biji
Kakao  (Theobroma  cacao
L.). Chimica  et  Natura Acta , 2:1, 83-9. Lai  YC.,  Chen  CK.,  Tsai  SF.,  Lee SS.  (2012).  Triterpenes  as a-Glucosidase Inhibitor From Fagus Hayatae.
Phytochemistry ,  74,  206-
211. Lee SS., Lin HC., Chen CK. (2008). Acylated Flavonol Monorhamnosides, a- glucosidase Inhibitors, From Machillus philippinensis . Phytochemistry ,  69,  2347-
2353.
Markham, K.R. (1988). Cara Mengidentifikasi  Flavonoid . Diterjemahkan oleh Padmawinata, Bandung. Penerbit ITB, Bandung. Marks,  D.B.,  Allan  D.  Marks,  dan Smith C.M. (1996). Biokimia Kedokteran Dasar:  Sebuah  Pendekatan Klinis . EGC, Jakarta. Mita,  Nur.  (2015).  Formulasi  Krim
Dari  Kulit  Buah  Kakao (Theobroma cacao L.) Berkhasiat  Antioksidan. J. Trop. Pharm. Chem , 3:1. Oktaria,  Y.E.  (2013).Uji  Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Biji Alpukat ( Persea americana Mill.)  Terhadap Tikus  Galur  Wistar  Yang Diinduksi Aloksan. Makalah.  Fakultas  Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Patel  MB.,  Mishra  SM.  (2012). Magnoflorine
From Tinospora  cordifolia Stem
Inhibits  a-glucosidase  and its  antiglycemic  in  rats. J
Functs Foods , 4, 79-86.
Puspati NKS, Anthara MS, Dharmayudha AAGO. (2013). Pertambahan bobot badan tikus diabetes melitus  dengan  pemberian ekstrak  etanol  buah  naga daging  putih. Indonesia Medicus  Veterinus ,  2:2, 225-34. Srivastava,  P.,  dan  Rishabha  M.
(2011).  Sources  of  Pectin, Extraction,  Application  in
Pharmaceutical
Industry. Indian  Journal  of  Natural Products and Resources , 2, 10-18.
Tadera,  K.,  Minami  Y.,  Takamatsu K.,  Matsuoka  T.  (2006).
Inhibition  of  α-Glucosidase and α-amylase
by
Flavonoids. J.  Nutr.  Sci Vitaminol , 52, 149-153.
Wang H., Du YJ., Song HC. (2010).
α-Glucosidase and α- amylase Inhibitory
Activities  of  Guava  Leaves.
Food Chem, 123, 6-13. Wayahningtyas, P. (2013). Produksi Pektin Dari Tepung  Kulit  Buah  Kakao (Theobroma cacao L.) Dengan Variasi Pengukusan Dan Jenis Pelarut Asam. Etd Repository UGM, Universitas Gadjah Mada. Winarno, F.G. (1986). Kimia Makanan
.  PT.  Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.