## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 15, No. 2, DESEMBER 2018, Hal. 18 – 23 ISSN: 1693 -7899

## PENETAPAN KADAR STEVIOSIDA PADA SIMPLISIA DAN EKSTRAK  DAUN Stevia rebaudiana

## DARI TIGA DAERAH BERBEDA
Dian Kartikasari *1) , Nurkhasanah 2) , Suwijiyo Pramono 3)
*1) Akademi Farmasi Yarsi Pontianak
2) Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan
3) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Email: diankartikasari223@gmail.com

## INTISARI
Bahan baku obat dari hasil pertanian atau kumpulan tumbuhan liar kandungan kimianya tidak dapat dijamin  selalu  konstan  karena  adanya  variabel  bibit,  tempat  tubuh,  iklim,  kondisi  (umur  dan  cara  panen). Kandungan senyawa kimia  yang  bertanggung  jawab terhadap respon  biologis  harus  mempunyai  spesifikasi kimia, yaitu informasi komposisi (jenis dan kadar). Khasiat obat tradisional berdasarkan senyawa kimia yang terkandung.  Oleh  karena  itu  penetapan  kadar  zat  aktif  suatu  simplisia  dan  ekstrak  perlu  dilakukan  guna menjamin  bahwa  suatu  produk  obat  tradisional  dapat  terjamin  mutu  dan  khasiatnya.  Penetapan  kadar dilakukan  terhadap  simplisia  dan  ekstrak  etanol  50%  daun Stevia  rebaudiana .  Penetapan  kadar  terhadap simplisia dan ekstrak daun stevia dari daerah Malang, Tawangmangu, dan Bogor menggunakan metode High Performance  Liquid  Chromatograph .  Hasil  penetapan  kadar  steviosida  pada  simplisia  dan  ekstrak  daun stevia  diperoleh  kadar  steviosida  pada  simplisia  daun  stevia  dari  Malang,  Bogor,  Tawangmangu  berturut- turut  yaitu  5,65%;  3,89%;  1,59%.  Kadar  steviosida  pada  ekstrak  daun  stevia  dari  Malang,  Bogor, Tawangmangu berturut-turut yaitu 14,14%; 22,40%; 66,65%.
Kata kunci: Daun Stevia Rebaudiana , kadar steviosida, High Performance Liquid Chromatograph .

## ABSTRACT
Pharmaceutical raw materials from agriculture or collection of wild plant chemical content can not be guaranteed always constant due to  variable seed, the body, the climate, the conditions (age and how to harvest). The content of the chemical compounds responsible for the biological response must have chemical specifications,  namely  the  composition  information  (type  and  concentration).  The  efficacy  of  traditional medicine based on the chemical  compound. Therefore, the assay of the active substance a crude drugs and extracts  needs  to  be  done  to  ensure  that  a  traditional  medicinal  products  can  be  assured  of  quality  and usefulness. The assay performed on botanicals and 50% ethanol extract of leaves of Stevia rebaudiana. The assay of the crude drugs and extracts from the stevia leaf area of Malang, Tawangmangu, and Bogor using High  Performance  Liquid  Chromatograph    method.  Results  of  the  assay  stevioside  on  simplicia  and  stevia leaf  extract  obtained  stevioside  levels  in  simplicia  stevia  leaves  from  Malang,  Bogor,  Tawangmangu consecutive  namely  5.65%;  3.89%;  1.59%.  Stevioside  levels  in  the  stevia  leaf  extract  of  Malang,  Bogor, Tawangmangu respectively, are 14.14%; 22.40%; 66.65%.
Key word: Stevia rebaudiana leaf, stevioside content, High Performance Liquid Chromatograph
Corresponding author: Dian kartikasari Akademi Farmasi Yarsi Pontianak JL. Panglima A’im No. 2 Pontianak Email: diankartikasari223@gmail.com

## PENDAHULUAN
Perkembangan  obat  tradisional  didukung  oleh  Peraturan  Menteri  Kesehatan  Republik Indonesia,  tentang  fitofarmaka,  yang  berarti  diperlukannya  adanya  pengendalian  mutu  simplisia yang akan digunakan untuk bahan baku obat atau sediaan galenik (Depkes, 1979). Suatu simplisia tidak dapat dikatakan bermutu jika tidak memenuhi persyaratan mutu yang tertera dalam monografi
simplisia  salah  satunya  kandungan  kimia  berupa  kadar  zat  aktif  yang  berhasiat.  Persyaratan  mutu ini berlaku bagi simplisia dan ekstrak yang digunakan dengan tujuan pengobatan dan pemeliharaan kesehatan (Depkes, 2008).
Bahan baku yang berasal dari lahan pertanian maupun dari tumbuhan liar kandungan bahan kimianya  tidak  dapat  dijamin  selalu  konstan  karena  adanya  berbagai  variabel  yang  dapat mempengaruhi jumlah dan kandungan bahan kimia dari tumbuhan tersebut. Penyediaan bahan baku obat alam semestinya harus yang aman, berkhasiat, dan teruji secara ilmiah.
Stevia  Rebaudiana adalah  suatu  sumber  bahan  pemanis  alami  yang  mempunyai  tingkat kemanisan  200-300  kali  lebih  manis  dari  pada  gula  tebu  (Ratnani,  2005).  Beberapa  penelitian menyebutkan  bahwa  steviosida  pada  daun  stevia  mengandung  kalori  yang  rendah  sampai  dengan nol  kalori,  sehingga  aman  bagi  penderita  diabetes  atau  konsumen  yang  sedang  melakukan  diet. Berdasarkan  hasil  penelitian,  steviosida  aman  dikonsumsi  oleh  masyarakat  umum  karena  tidak mempunyai efek teratogenik, mutagenic atau karsinogenik (Martono, 2011).  Daun stevia memiliki aktivitas  antioksidan  sehingga  memiliki  kemampuan  untuk  meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh dan  mencegah  radikal  bebas  penyebab  penyakit  (Mandal,  2013).  Konstituen  utama  dalam  daun stevia  adalah  glikosida  diterpenoid,  yang  berpotensi  sebagai  pemanis  adalah  steviosida, rebaudiosides dan dulcosida (Chaturvedula, 2011).
Tumbuhan yang tumbuh ditempat berbeda pastinya memiliki kandungan aktif dan unsur hara yang  berbeda.  Pada  penelitian  ini  daun  stevia  yang  digunakan  berasal  dari  daerah  Bogor, Tawangmangu,  dan  Malang.  Diharapkan,  simplisia  dan  ekstrak  daun S.  rebaudiana dari  ketiga daerah tersebut dapat ditetapkan kadar steviosidanya sehingga terjamin mutu dan khasiatnya.
Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  menetapkan  kadar  steviosida  pada  simplisia dan ekstrak daun stevia dari daerah Malang, Bogor, dan Tawangmangu dengan High Performance Liquid  Chromatograph .  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan  informasi  kandungan kadar  steviosida  pada  simplisia  dan  ekstrak  daun  stevia  dari  tiga  daerah  berbeda,  sehingga  dapat digunakan sebagai acuan dalam penelitian berikutnya maupun penggunaan sebagai pengobatan.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  timbangan  analitik,  alat-alat  gelas laboratorium,  evaporator,  HPLC.  Simplisia  daun Stevia  rebaudiana diambil  dari  daerah Tawangmangu, Bogor, dan Malang. Etanol, aquadest.
Jalannya Penelitian 1. Pembuatan serbuk simplisia
Penanganan  pasca  panen  bahan  simplisia  yang  telah  bersih  dikeringkan  dibawah  sinar matahari  dengan  ditutupi  kain  hitam  dengan  alas  pengering  terbuat  dari  bambu.  Setelah  kering simplisia diserbuk dengan menggunakan blender.

## 2. Pembuatan ekstrak 50% secara maserasi
Ekstrak  etanol  daun  stevia  dibuat  dengan  metode  maserasi  menggunakan  penyari  etanol 50%.  Maserat  diperoleh  kemudian  pelarutnya  diuapkan  dengan  menggunakan  rotary  evaporator hingga  diperoleh  ektrak  cair,  penguapan  dilanjutkan  diatas  waterbath  pada  suhu  terjaga  sampai diperoleh ekstrak kental.

## 3. Penetapan Kadar dengan HPLC
Penetapan  kadar  simplisia  dan  ekstrak  daun  stevia  menggunakan  HPLC  dengan  kondisi operasi yang digunakan yaitu, fase gerak yang digunakan air:metanol (80:20) pH 3,0; kolom  yang digunakan  adalah  C-18  atau  oktadensil  silika  (ODS);  dengan  panjang  kolom  25cm  dan  diameter 4,6mm; temperatur percobaan HPLC 30 o C; laju alir 0,6ml/menit; volume larutan yang diinjeksikan 20µl dan panjang gelombang 210 nm.

## ANALISIS DATA
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengukuran  kadar  steviosida  menggunakan  HPLC  dianalisis secara deskriptif dan jelas.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  daun S.  rebaudiana yang  diektraksi dengan  menggunakan  metode  maserasi.  Metode  maserasi  dipilih  sebagai  metode  dalam mengekstraksi  karena  adanya  sifat  daun  yang  lunak  dan  mudah  mengembang  dalam  cairan pengekstraksi. Selain itu, maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana karena cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif ini akan larut dan adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif didalam dengan diluar sel menyebabkan larutan yang terpekat keluar hingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di  dalam  dengan  di  luar  sel  (Markham,  1988).  Cairan  penyari  yang  digunakan  dalam  proses maserasi ini adalah etanol 50%.

## Organoleptik
Pemeriksaan  organoleptik  bertujuan  memberikan  pengenalan  awal  simplisia  dan  ekstrak secara  objektif  berupa  bentuk,  warna,  bau,  dan  rasa.  Data  ini  juga  dapat  digunakan  sebagai  dasar untuk  menguji  simplisia  dan  ekstrak  selama  penyimpanan  yang  dapat  mempengaruhi  khasiatnya. Hasil pemeriksaan organoleptik dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel I. Data Organoleptik Simplisia dan Ekstrak Daun S. rebaudiana Parameter organoleptik Jenis Daerah pengambilan sampel Tawangmangu Bogor Malang Bentuk Simplisia Serbuk Serbuk Serbuk Ekstrak Kental Kental Kental Warna Simplisia Hijau kecoklatan Hijau kecoklatan Hijau kecoklatan Ekstrak Hitam Hitam Hitam Bau Simplisia Khas Khas Khas Ekstrak Caramel Caramel Caramel Rasa Simplisia Manis Manis Manis Ekstrak Manis agak pahit Manis agak pahit Manis agak pahit
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  diperoleh  data  sebagai  berikut:  simplisia  daun S. rebaudiana yang sudah dikeringkan dan berasal dari daerah Malang, Bogor, Tawangmangu adalah berbentuk  serbuk,  berwarna  hijau  kecoklatan,  berbau  khas,  dan  berasa  manis;  ekstrak  etanol  50% daun  S.  rebaudiana  dari  daerah  Malang,  Bogor,  Tawangmangu  (T.  Mangu)  adalah  berbentuk kental, berwarna hitam, berbau karamel, dan berasa manis agak pahit.

## Penetapan Kadar Steviosida dengan HPLC
Fase  gerak  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  aquadest:  metanol  (80:20).  Fase  gerak pada  HPLC  bertindak  sebagai  pelarut  sangat  mempengaruhi  waktu  retensi,  sehingga  pelarut  yang digunakan harus benar-benar jernih dan murni. Kromatogram larutan standar steviosida dan sampel dapat dilihat pada gambar 1.
Hasil  yang terlihat pada tabel  II menunjukkan data absorbansi menurun dan persen inhibisi yang meningkat seiring dengan peningkatan konsentrasi. Hal ini menunjukkan bahwa terjadi reaksi antara sampel (fraksi etanol, kloroform, vitamin C)dengan DPPH pada saat proses inkubasi. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian (Putri, 2014), bahwa terjadi pengurangan konsentrasi DPPH setelah direaksikan dengan sampel.Hasil penentuan nilai regresi linier fraksi etanol, kloroform dan vitamin C dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar  1. Kromatogram  larutan  standar  steviosida  (warna  merah)  dan  sampel  (warna  hitam). Waktu retensi steviosida 11,267 menit
Penentuan  kadar  steviosida  secara  kuantitatif  memerlukan  larutan  standar  yaitu  steviosida murni. Pada data kromatogram larutan standar diperoleh waktu retensi yaitu 11,267 menit dan area sebesar 394140. Waktu retensi merupakan jangka waktu yang terukur saat sampel melewati HPLC. Larutan  standar  steviosida  yang  dibuat  yaitu,  20µg/ml,  40µg/ml,  80µg/ml,  100µg/ml,  120µg/ml. Tabel data larutan standar steviosida yang diperoleh dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II. Larutan Standar Steviosida
Konsentrasi µg/ml Luas area Waktu retensi 20 67,728 10,683 40 125,744 11,167 80 237,311 11,200 100 294,809 11,433 120 359,678 10,717
Berdasarkan tabel 2 di atas maka dibuat kurva kalibrasi, sehingga diperoleh persamaan garis y =  2,888x  +  9,091  dengan  R 2 =  0,9994.  Setelah  dilakukan  perhitungan  menggunakan  persamaan garis,  maka  didapat  kadar  steviosida  pada  simplisia  dan  ekstrak  daun S.  rebaudiana dapat  dilihat pada Tabel 3 dan disajikan pada Gambar 2 dan 3.
Tabel III. Kadar steviosida pada simplisia dan ekstrak daun S.rebaudiana dari daerah Bogor, Malang dan Tawangmangu
Asal daerah Kadar (% w/w) Simplisia Malang 5,65 Simplisia Bogor 3,89 Simplisia T. Mangu 1,59 Ekstrak Malang 14,14 Ekstrak Bogor 22,40 Ekstrak T. Mangu 66,65
Gambar 21. Kadar steviosida pada simplisia daun S. Rebaudiana
Gambar 3. Kadar steviosida pada ekstrak daun S. rebaudiana
Berdasarkan data pada tabel 2 diketahui bahwa kadar tertinggi ekstrak adalah ekstak daun S. rebaudiana yang berasal dari Tawangmangu yaitu 66,65%, dan kadar tertinggi pada simplisia daun S.  rebaudiana yang  berasal  dari  Malang  yaitu  5,65%.  Dalam  hal  ini  terlihat  bahwa  kandungan steviosida  dalam  bentuk  simplisia  dari  daerah  Malang  lebih  tinggi  dibanding  daerah  Bogor  dan Tawangmangu.  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan  oleh  susut  pengeringan  pada  simplisia  dari Malang  jauh  lebih  kecil  daripada  simplisia  dari  Bogor  dan  Tawangmangu.  Namun  ketika  sudah menjadi  ekstrak  kandungan  steviosida  justru  lebih  rendah  dibanding  daerah  Bogor  dan Tawangmangu.  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan  oleh  banyaknya  zat  lain  yang  tersari  sehingga kadar steviosidanya menjadi kecil.  Sebaliknya kadar steviosida ekstrak dari Tawangmangu sangat jauh  lebih  besar.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  Tawangmangu  dengan  rendemen  rendah tetapi memiliki kadar steviosida tinggi. Jika ditinjau dari sisi ekonomi akan lebih menguntungkan.

## KESIMPULAN
Telah  diperoleh  nilai  kadar  steviosida  dari  tiga  daerah  pada  simplisia  tidak  kurang  dari 1,59% dan kadar steviosida pada ekstrak tidak kurang dari 14,14%.

## DAFTAR PUSTAKA
Chaturvedula, V., Upreti, M., & Prakash, I. (2011). Diterpene Glycoside from Stevia Rebaudiana, Article Molecules. In O. C. The Coca Cola Company. Atlanta, USA: One Coca-Cola Plaza. Depkes.  (1979).  Farmakope  Indonesia  Edisi  III.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Depkes. (2008). Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Mandal,  B.,  &  Madan,  S.  (2013).  Preliminary  Phytochemical  Screening  and  Evaluation  of  Free Radical  Scavenging  Activity  of  Stevia  Rebaudiana  Bertoni  from  Different  Geographical Source. Journal pf Pharmacognosy and Phytochemistry, IC Journal, 2(1), 14-19.
Markham,  K.R.,  1988,  Cara  Mengidentifikasi  Flavonoid  terjemahan,  K.  Radmawinata,  Penerbit ITB, Bandung
Martono, Y., Dwiastuti, R., & Sriwahyuni, A. (2011). Optimalisasi Teknik Kristalisasi Steviosida dari  Stevia  Rebaudiana  (Bert.)  sebagai  Pemanis  Alami  Rendah  Kalori.  Kementrian Pendidikan Nasional. Jakarta: Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi (Dirjen DIKTI).
Ratnani,  R.,  &  Anggraeni,  R.  (2005).  Ekstraksi  Gula  Stevia  dari  Tanaman  Stevia  Rebaudiana Bertoni,. Momentum, 1, 27-32.