## AKTIVITAS ANTIBAKTERI ISOLAT KAPANG ENDOFIT DARI KULIT NANAS (Ananas comosus (L.) Meer)
Siti Hamidatul ‘Aliyah 1* , Musfirotun 1 , Nur Antriana 2
1 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu Jambi
2 Program Studi Keperawatan, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu Jambi
* Email korespondensi: sitihamidatula@stikes-hi.ac.id

## Abstract
Pineapple  contains an  enzyme  called bromelain  which  is  can  be  used  as  antiseptic  of mouth, antibacterial, antifungal, and disinfectant. Endophytic mold is a microbe that forms colonies  in  healthy  tissues  of  living  organisms,  generally,  endophytic  microbes  do  not cause harmful symptoms in the tissue of their host. This study aims to isolate the endophytic shell origin of pineapple peel that has acted as an antibacterial. A total of 3 endophytic capsules, Ac-I, Ac-II and Ac-III were isolated from pineapple skin using PDA media. The three isolates were purified and microscopic examinations were performed. Antibacterial testing  was  performed  by  fermentation  to  produce  supernatant,  then  tested  using  disc method  (Kirby-Bauer  method)  with  Staphylococcus  aureus  and  Escerichia  coli  test bacteria.  The  3  isolates  obtained  only  1  isolate  Ac-III  isolates  that  have  activity  as antibacterial, with the inhibition zone diameter in bacterium Staphylococcus aureus 7.65 mm while in the bacterium Escerichia coli 6,9 mm.
Keywords: antibacterial, endophytic mold, pineapple peel.

## 1. PENDAHULUAN
Infeksi  merupakan  proses  masuknya  mikroba  patogen  kedalam  tubuh, kemudian  berkembangbiak.  Bakteri  merupakan  mikrorganisme  yang  dapat menyebabkan infeksi  baik secara lokal maupun sistemik.  Penyakit infeksi secara umum dapat diobati dengan obat antibakteri/antibiotik. Akan tetapi dengan semakin tingginya  penggunaan  antibiotik,  dapat  meningkatkan  resistensi  dari  bakteri patogen. Resistensi terhadap antibiotik pada bakteri  mendorong upaya penemuan obat baru yang lebih efektif  dan aman.  Selain itu penggunaan antibiotik kimiawi harganya relatif mahal dan menimbulkan beberapa efek samping bagi kesehatan, sehingga  kapang  endofit  dapat  menjadi  salah  satu  alternatif  untuk  menghasilkan senyawa  antibiotik  untuk  menghambat  mikroba  pantogen  (Walpajri,  Rodesia,  & Roza, 2014; Van Antwerpen, Rutherford, & Vogel, 2002).
Kapang  endofit  merupakan  mikroorganisme  yang  sebagian  ataupun keseluruhan fase hidupnya ada pada tumbuhan inanganya tetapi tidak menimbulkan
penyakit pada tumbuhan inang  Fungi endofit biasanya ditemukan pada tumbuhan (Fitriarni & Kasiamdari, 2018). Kapang endofit biasanya dapat diisolasi dari bagian tumbuhan baik daun, batang, bunga, buah dan biji (Roze, Chanda, & Linz, 2011). Kapang  endofit  merupakan  mikroorganisme  yang  menarik  karena  bersimbiosis dengan  tumbuhan  dan  bermanfaat  untuk  pertahanan  diri  inangnya  dari  musuh alaminya (Faeth & Fagan, 2002). Kapang endofit dapat meningkatkan pertahanan tanaman terhadap cekaman lingkungan baik abiotik aupun biotik. Beberapa kapang endofit  menghasilkan  zat  toksik  yang  dapat  melindungi  tumbuhan  inang  dari pathogen  misalnya  tumbuhan  lain,  serangga,  nematoda  dan  herbivora  (Mousa  & Raizada, 2013).
Penelitian ini mengisolasi kapang endofit dari kulit nanas.  Nanas merupakan salah satu  tumbuhan yang banyak ditemukan di Jambi. Buah nanas  mengandung enzim  bromelin,  vitamin,  kalsium,  fosfor,  magnesium,  zat  besi,  natrium,  kalium, dekstrosa,  dan  sukrosa.  Enzim  bromelin  pada  nanas  dapat  digunakan  sebagai antibakteri,  anti  jamur  dan  desinfektan  (Rahmat,  Ratih  L.,  Nurhidayati,  &  Ayu Bathini,  2015).  Buah  nanas  yang  muda  dan  yang  matang  sama-sama  memiliki kandungan  enzim  bromelin,  namun  pada  buah  nanas  yang  muda  lebih  banyak mengandung  enzim  bromelin  dari  pada  yang  matang  (Nurhidayah,  Masriany,  & Masri, 2013).
Enzim  bromelin  dapat  mengubah  atau  merusak  struktur  protein  penyusun dinding  luar  sel  bakteri  sehingga  berakibat  dinding  sel  bakteri  pecah  (Eshamah, Han, Naas, Rieck, & Dawson, 2013). Husniah & Gunata, (2020), telah melaporkan bahwa ekstrak kulit nanas memiliki aktivitas antibakteri terutama pada bakteri gram positif. Selain itu, Fitriana et al (2016) juga telah melakukan penelusuran terhadap fungi  endofit  pada  daun  nanas  yang  berpotensi  sebagai  anti  bakteri.  Namun, informasi terkait isolasi kapang endofit pada kulit nanas yang berpotensi sebagai antibakteri masih sangat terbatas. Sehingga tujuan penelitian ini untuk mengisolasi kapang endofit dari kulit nanas yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri.

## 2. METODE PENELITIAN
2.1 Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Kulit nanas diambil dari lahan perkebunan warga di Tangkit Baru, Kecamatan Sungai Gelam, Kabupaten Muaro Jambi, Provinsi Jambi. Sampel kulit nanas yang masih muda, berwarna hijau, dan segar dicuci bersih dengan air mengalir selama ±10  menit,  kemudian  diiris  sepanjang  ±1cm  lalu  dibilas  dengan  aquades  steril, kemudian  kulit  nanas  dikering  anginkan  diatas  kertas  saring  steril  kemudian permukaan  kulit  nanas  disterilisasi  dengan  cara  direndam  dalam  larutan  alkohol 70% selama 1 menit, kemudian direndam dalam natrium hipoklorit (NaOCl) 1% selama  5  menit.  Setelah  itu  dilakukan  pengulangan  direndam  kembali  dalam alkohol 70% selama 1 menit. Selanjutnya, dibilas 3 kali dengan aquades steril .

## 2.2 Isolasi dan pemurnian Kapang Endofit
Kulit nanas yang telah disterilisasi dan diiris sepanjang 1 cm diletakkan pada media Potato  Dextrose  Agar (PDA)  yang  telah  dicampur  dengan  kloramfenikol 0,05mg/mL  (Crozier,  Thomas,  Aime,  Evans,  &  Holmes,  2006).  Setelah  itu diinkubasi selama 5-7 hari pada suhu 37 0 C, amati hingga ada pertumbuhan kapang, isolasi kapang endofit dilakukan dengan tiga kali pengulangan ( triplo ). Pada isolasi sampel yang pertama diberinama Ac-1 yang berarti Ananas comosus -1, begitu juga seterusnya pada sampel yang ke dua dan ketiga. Isolat kapang endofit yang tumbuh dan menunjukkan morfologi dan warna koloni yang berbeda kemudian dimurnikan untuk  memperoleh  isolat  tunggal.  Isolat  yang  telah  murni  kemudian  dilakukan karakterisasi secara makroskopis dan mikroskopis (Noverita, Dinah Fitria, 2009).

## 2.3 Pemeriksaan Makroskopis dan Mikroskopis
Karakterisasi  makroskopis  kapang  endofit  dilakukan  dengan  mengamati morfologi koloni dan warna koloni. Morfologi koloni meliputi bentuk, tepian, dan elevasi  dari  koloni  tersebut  Sedangkan  pemeriksaan  mikroskopis  dengan  teknik pewarnaan  sel  vegetatif.  Objek  glass  dan  penutup  dibersihkan  dengan menggunakan alkohol 70%, lalu teteskan sedikit larutan Lacto Fenol Cotton Blue (LFCB) ditengan permukaan objek glass, koloni kapang diambil  dari bagian tepi
media dan diletakkan di permukaan kaca objek. Selanjutnya hifa kapang diuraikan menggunakan  jarum  ose  secara  perlahan  kemudian  jika  kapang  sudah  terurai ditutup dengan gelas penutup. Kemudian amati bentuk hifa dan warna hifa dibawah mikroskop dengan perbesaran mulai terkecil,

## 2.4 Fermentasi Isolat Kapang Endofit
Fermentasi  kapang  endofit  dilakukan  dengan  cara  fermentasi  cair menggunakan media Potato Dextrose Borth (PDB). Koloni kapang endofit murni kemudian diambil menggunakan sedotan steril sebanyak 1 potongan dimasukkan kedalam medium PDB cair sebanyak 50 mL kemudian diinkubasi selama 5-7 hari pada  suhu  ruang  dengan  kultur  diam  (statis).  Masing-masing  kultur  yang  telah difermentasi  dimasukkan  kedalam  tabung  10  mL  steril  kemudian  di  sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit, setelah disentrifus, bagian supernatan diambil untuk pengujian aktivitas antibakteri (Noverita, Dinah Fitria, 2009).

## 2.5 Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas  antibakteri  menggunakan media Nutrien Agar. Bakteri uji yang digunakan yaitu bakteri gram negatif ( Escherichia coli ) dan bakteri gram positif ( S . aureus) dengan metode Kirby-Bauer (metode cakram). Tuang media Nutrian agar ke dalam masing-masing cawan petri steril sebanyak ±20 ml dan didiamkan sampai media  menjadi  padat  selama  15  menit.  Bakteri E.coli dan S.  aureus yang  telah disuspensikan sebelumnya masukkan kedalam cawan petri yang telah berisi media nutrien agar sebanyak 100 µl kemudian disebar diatas media tersebut dan di ratakan atau  digores  menggunakan  batang  L  yang  steril  hingga  biakan  bakteri  tersebut merata  diatas  media  setelah  bakteri  merata  masukkan  kertas  cakram  yang  telah disterilkan  terlebih  dahulu  lalu  tetesi  kertas  cakram  tersebut  dengan  suspensi kapang endofit sebanyak 20 µl hinnga kertas cakram tersebut jenuh.
Kontrol  positif  menggunakan  cakram  kloramfenikol,  sebagai  kontrol  negatif digunakan  kertas  cakram  steril.  Selanjutnya,  dilakukan  diinkubasi  selama  24-48 jam  pada  suhu  37 0 C.  Setelah  inkubasi,  zona  bening  yang  terbentuk  dan  diukur
diameternya.  Zona  bening  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  dari  isolate  kapang endofit.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Kapang  endofit  merupakan  mikroorganisme  yang  hidup  di  dalam  jaringan tumbuhan pada periode tertentu dan membentuk koloni dalam jaringan tumbuhan tetapi  tidak  merugikan  inangnya.  Tumbuhan  tingkat  tinggi  dapat  mengandung beberapa  mikroba  endofit  yang  mampu  menghasilkan  metabolit  sekunder  yang sama dengan metabot sekunder yang dihasilkan inangnya (Radji, 2005). Kumaran dkk,  (2010)  menyatakan  bahwa  mikroba  endofit  dapat  menghasilkan  senyawa berupa enzim, vitamin, antibakteri, antioksidan dan agen farmakologi
Sampel  penelitian  ini  adalah  kulit  buah  nanas  ( Ananas  comosus (L.)  Merr) yang merupakan penghasil kapang endofit. Isolasi kapang endofit asal kulit nanas dilakukan  menggunakan  difusi  agar.  Sampel  tanaman  nanas  diambil  dari  lahan perkebunan warga di Tangkit Baru, Kecamatan Sungai Gelam, Kabupaten Muaro Jambi, Provinsi Jambi.

## 3.1 Hasil Pemurnian Isolat Kapang Endofit
Sebanyak 3 isolat kapang endofit yang berhasil diisolasi dari kulit nanas yang diambil dari lahan perkebunan warga di Tangkit Baru yang diberi nama Isolat Ac- 1,  Isolat  Ac-II,  dan  Isolat  Ac-III  (Gambar  1).  Semua  isolat  tumbuh  dengan  baik pada media PDA karena media PDA merupakan media selektif untuk pertumbuhan kapang. Media mudah dicerna sehingga memudahkan untuk kapang endofit yang telah  berhasil  diisolasi  lebih  mudah  untuk  tumbuh.  Peremajaan  kapang  endofit bertujuan  untuk  menjamin  kapang  endofit  agar  tidak  berada  pada  fase  kematian dipercepat  dimana  lebih  banyak  sel-sel  yang  mati  dari  pada  sel-sel  yang  hidup (Gandjar, Syamsuridzal & Oetari, 2006).
Media fermentasi yang digunakan adalah media PDB, karena dalam media ini  mengandung  sumber  karbon  dan  sumber  nitrogen  yang  diperlukan  untuk pertumbuhan  kapang  endofit.  Selain  itu  juga  mengandung  garam-garam  organik serta beberapa vitamin dan mineral. Proses fermentasi dilakukan selama tujuh hari
dimana  kapang  endofit  diperkirakan  sudah  mencapai  fase  stationer  dan menghasilkan metabolit sekunder berupa antibiotik.
Gambar 1. Hasil isolat murni kapang endofit asal kulit nanas ( Isolat Ac-1 , Isolat Ac-II, dan Isolat Ac-III).

## 3.2 Hasil Pengamatan Makroskopis
Isolat yang telah murni kemudian dilakukan pengamatan secara makroskopis. Isolat  kapang  endofit  yang  diperoleh  diduga  mempunyai  genus Mucor, dengan karakteristik: koloni kapang endofit ini memiliki hifa bercabang, warna hifa putih kecoklatan hingga kehitam dengan permukaan koloni membentuk cembung, bentuk koloni bundar dengan memiliki tepian menyebar kasar, tidak merata. Warna koloni putih  kecoklatan  hingga  kehitam.  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  penelitian  yang diperoleh  berdasarkan  pengamatan  morfologi  koloni  di  atas  media  padat  secara makroskopis (Tabel 1).

## 3.3 Hasil Pengamatan Mikroskopis
Identifikasi kapang endofit dapat dilakukan dengan menggunakan karakterisasi mikroskopis  menggunakan  larutan  LFCB.  Penggunaan  larutan  LFCB  pada pengamatan mikroskopis menyebabkan warna biru pada hifa karena larutan LFCB yang digunakan berwarna biru (Gambar 2).

## 3.4 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil uji antibakteri isolat kapang endofit terhadap bakteri uji yang dilakukan menggunakan  metode  Kirby-Bauer  (metode  cakram)  dengan  kontrol  positif antibiotik  kloramfenikol  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan  bakteri Escherichia coli menunjukkan adanya zona hambat sebesar 28 mm pada bakteri S. aureus sedangkan pada bakteri E. coli memiliki diamater zona hambat sebesar 22 mm,  yang  terbentuk  pada  sekeliling  cakram.  Kedua  kontrol  positif  tersebut memiliki  diameter  zona  hambat  yang  dikatagorikan  sangat  kuat.    Kloramfenikol merupakan antibiotik spektrum luas yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram  positif  dan  bakteri  gram  negatif.  Sedangkan  pada  kontrol  negatif  tidak  ada zona hambat yang terbentuk di sekitar cakram.
Tabel 1. Hasil pengamatan makroskopis kapang endofit
Isolat Warna Koloni Bentuk Koloni Elevasi Tepian Ac-1 Putih  Kecoklatan  hingga kehitaman Bundar dengan tepian menyebar Cembung  Bercabang Ac-II Putih  kecoklatan  hingga kehitamna Bundar dengan tepian menyebar Cembung  Bercabang Ac- III Putih  kecoklatan  hingga kehitaman Bundar dengan tepian menyebar Cembung  Bercabang
Gambar  2.  Hasil  pengamatan  mikroskopis.  Ac  = Ananas  comosus, A      = Sporangiospora, B   = Hifa
Gambar 3. Hasil uji aktivitas antibakteri isolat kapang endofit.terhadap bakteri A. S.
Aureus ; B. E. coli. 1 = Cakram kloramfenikol (kontrol +); 2 = Kontrol negatif (cakram steril); 3 = Isolat Isolat Ac-III
Menurut penelitian yang dilakukan Fitriana, et al (2016)  bahwa kapang endofit mempunyai aktivitas antibakteri, sama halnya pengujian aktivitas antibakteri yang di  lakukan  menggunakan  metode  Kirby-Bauer  yang  lebih  sering  dikenal  dengan sebutan metode cakram. Hasil dari penelitian yang diperoleh dari isolat Ac-III dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan diameter hambat sebesar 7,65 mm dan pada bakteri Eschericia coli sebesar 6,9 mm. Hal ini ditandai dengan adanya zona bening yang terdapat di sekitar paper disk . Sama halnya pada penelitian  sebelumnya  yang  telah  dilakukan  menunjukkan  hasil  pada  daun  nanas dan  daging  nanas  mampu  menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus dan Eschericia coli hal ini ditandai dengan adanya zona hambat yang terbentuk disekitar paper  disk .  Hal  ini  diduga  bahwa  isolat kapang  endofit  yang  terdapat  pada  kulit nanas mampu menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang sama dengan yang dihasilkan oleh tumbuhan inangnya (Rahmat et al., 2015).
Perbedaan aktivitas dari senyawa antibakteri yang terdapat pada isolat kapang endofit  terhadap  bakteri  uji S.  aureus dan  bakteri E.  coli disebabkan  karena perbedaan  dinding  selnya, E.coli yang  merupakan  bakteri  gram  negatif  yang memiliki  struktur  dinding  selnya  yang  tersusun  atas  tiga  lapis  yaitu  lipoprotein, fosfolipit dan polimer atau yang biasa disebut lipopolisakarida, sedangkan bakteri S.  aureus adalah  bakteri  Gram  positif  yang  memiliki  dinding  relative  lebih sederhana  karena  berupa  sel  berlapis  tunggal  (Polapa,  2015).  Kemampuan  daya hambat bakteri uji ditandai dengan terbentuknya zona bening disekitar cakram uji,
jika  diameter  hambatnya  lebih  dari  20  mm  dikategorikan  sangat  kuat,  10-20 dikategorikan  kuat,  5-10  mm  dikategorikan  sedang  dan  kurang  dari  5  mm dikategorikan lemah (Rante, Herlina, Taebe, 2013). Hasil penelitian ini melaporkan bahwa  aktivitas  antibakteri  isolat  kapang  endofit  Ac-III  dikategorikan  sedang karena mamiliki daya hambat 7,65 pada bakteri uji S. aureus dan 6,9 mm diameter zona hambat pada bakteri E. coli .

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN

## 4.1 Kesimpulan
Isolat kapang endofit asal kulit buah nanas yang masih muda (hijau) diduga berasal  dari  genus Mucor dan  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  baik  pada bakteri gram positif maupun gram negatif.
4.2 Saran
Perlu dilakukan identifikasi molekuler untuk mengidentifikasi jenis kapang endofit pada kulit buah nanas.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Crozier, J., Thomas, S. E., Aime, M. C., Evans, H. C., & Holmes, K. A. (2006).
Molecular  characterization  of  fungal endophytic  morphospecies  isolated from  stems  and  pods  of  Theobroma  cacao. Plant  Pathology . https://doi.org/10.1111/j.1365-3059.2006.01446.x
Eshamah, H., Han, I., Naas, H., Rieck, J., & Dawson, P. (2013). Bactericidal Effects of  Natural  Tenderizing  Enzymes  on  Escherichia  Coli  and  Listeria monocytogenes. Journal of Food Research . https://doi.org/10.5539/jfr.v2n1p8
Faeth,  S.  H.,  &  Fagan,  W.  F.  (2002).  Fungal  endophytes:  Common  host  plant symbionts  but  uncommon  mutualists. Integrative  and  Comparative Biology . https://doi.org/10.1093/icb/42.2.360
Febri Walpajri, Rodesia M. Roza, F. (2014). Eksplorasi dan uji daya hambat bakteri endofit dari tanaman benalu sawo (. JOM FMIPA , 1 (2), 1–10.
Fitriana,  Maryam,  S.,  Naid,  T.,  &  Maryana.  (2016).  Penelusuran  Fungi  Endofit Sebagai  Penghasil  Senyawa  Antibiotika  Dari  Daun  Nanas  (Ananas comosus (L) Meer). J. As-Syifaa .
Fitriarni, D., & Kasiamdari, R. S. (2018). Isolation and Identification of Endophytic Fungi  from  Leave  and  Stem  of  Calopogonium  mucunoides. Journal  of Tropical
Biodiversity and Biotechnology , 3 (1), 30. https://doi.org/10.22146/jtbb.32477
Husniah,  I.,  &  Gunata,  A.  F.  (2020).  Ekstrak  Kulit  Nanas  sebagai  Antibakteri.
Jurnal Penelitian Perawat Profesional , 2 (1), 85–90. https://doi.org/10.37287/jppp.v2i1.51
Kumaran,  R.  S.,  Kim,  H.  J.,  &  Hur,  B.  K.  (2010).  Taxol  promising  fungal endophyte, Pestalotiopsis species isolated from Taxus cuspidata. Journal of Bioscience and Bioengineering . https://doi.org/10.1016/j.jbiosc.2010.06.007
Mousa,  W.  K.,  &  Raizada,  M.  N.  (2013).  The  Diversity  of  Anti-Microbial
Secondary  Metabolites  Produced  by  Fungal  Endophytes:  An Interdisciplinary Perspective. Frontiers in Microbiology . https://doi.org/10.3389/fmicb.2013.00065
Noverita, Dinah Fitria, E. S. F. (2009). Isolasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri Jamur Endofit Dari Daun Dan Rimpang. Farmasi Indonesia .
Nurhidayah,  N.,  Masriany,  M.,  &  Masri,  M.  (2013).  Isolasi  dan  Pengukuran Aktivitas  Enzim  Bromelin  dari  Ekstrak  Kasar  Batang  Nanas  (Ananas comosus)  Berdasarkan  Variasi  pH. Biogenesis:  Jurnal  Ilmiah  Biologi , 1 (2), 116–122. https://doi.org/10.24252/bio.v1i2.457
Polapa, F. S. (2015). Antibakteri dari Ekstrak Kasar Bakteri Asosiasi Karang Batu yang  terinfeksi  Penyakit  Brown  Band  (Brb)  terhadap  Bakteri  Patogen Staphylococcus Aureus dan, Skripsi FIKP .
Radji,  M.  (2005).  Peranan  Bioteknologi  Dan  Mikroba  Endofit  Dalam Pengembangan Obat Herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian . https://doi.org/10.7454/psr.v2i3.3388
Rahmat, D., Ratih L., D., Nurhidayati, L., & Ayu Bathini, M. (2015). Peningkatan Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Nanas  (Ananas  comosus  (L.).  Merr) dengan  Pembentukan  Nanopartikel. Jurnal  Sains  Dan  Kesehatan , 1 (5), 236–244. https://doi.org/10.25026/jsk.v1i5.45
Rante, Herlina, Taebe, B. dan I. S. (2013). Isolasi Fungi Endofit Penghasil Senyawa Antimikroba  Dari  Daun  Cabai  Katokkon  (Capsicum  annuum  L  var. chinensis)  Dan  Profil  Klt  Bioautografi. Majalah  Farmasi  Dan Farmakologi .
Roze, L. V., Chanda, A., & Linz, J. E. (2011). Compartmentalization and molecular traffic  in  secondary  metabolism:  A  new  understanding  of  established
cellular processes. Fungal Genetics and Biology .
https://doi.org/10.1016/j.fgb.2010.05.006
Van Antwerpen, T., Rutherford, R., & Vogel, J. (2002). Assessment of sugarcane endophytic  bacteria  and  rhizospheric  Burkholderia  species  as  antifungal agents. Proc Annu Congr S Afr Sugar Technol Assoc .