## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PHOTOCHEMICAL SCREENING AND TOXICITY TESTING OF RED MIANA LEAF (Coleus hybridus) ETHANOL EXTRACT USING BRINE SHRIMP LETHALITY TEST
(BSLT) METHOD

## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN
MIANA MERAH ( Coleus hybridus ) DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY
TEST (BSLT)
Laurencia D.B. Artantyo 1)* , Fatimawali 1) ,  Olvie Syenni Datu 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado, 95115
*diva.artantyo@gmail.com

## ABSTRACT
The  leaves of Coleus hybridus  are  used by  Indonesian people to treat coughs,  asthma, diarrhea  and help recovery after childbirth. Several studies have reported that the Coleus plant has potential as a cancer drug. This study aimed to analyze the secondary metabolite content of Coleus hybridus leaves and  determine  the  LC50  value  from  the  toxicity test of Coleus  hybridus leaf  extract against  Artemia salina  Leach  larvae.  Coleus  hybridus  leaves  were  macerated  using  ethanol,  the  macerate  was concentrated using an oven to obtain a thick extract. Phytochemical tests include testing for alkaloids, flavonoids, tannins, saponins, steroids and triterpenoids. The extract was tested for toxicity using the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. The ethanol extract used at concentrations of 1000 g/mL, 500 g/mL, 250 g/mL,  125 g/mL, 62.5 g/mL,  31.25 g/mL and 0 g/mL  (control), then observed  for 24 hours.  The  toxicity  effects  of  the  extracts  were  analyzed  by  probit  analysis  using  SPSS  25.0.  The results showed that the ethanol extract of the leaves of Coleus hybridus contained flavonoids, tannins, saponins and steroids. The results of the toxicity test obtained an LC 50 value of 323.225 g/mL, so it can be concluded that the ethanol extract of Coleus hybridus leaves is in the category of low toxic.
Keywords: Coleus hybridus leaves, Phytochemical Screening, BSLT, Cytotoxicity, LC 50 .

## ABSTRAK
Daun  Coleus  hybridus  digunakan  masyarakat  Indonesia  untuk  mengobati  batuk,  asma,  diare  dan membantu pemulihan setelah melahirkan. Beberapa penelitian melaporkan tanaman Coleus berpotensi sebagai obat kanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengklasifikasi kandungan metabolit sekunder dari daun  Coleus  hybridus  dan  menentukan  nilai  LC50  dari  uji  toksisitas  ekstrak  daun  Coleus  hybridus terhadap larva Artemia salina Leach . Daun Coleus hybridus dimaserasi menggunakan etanol, maserat dipekatkan  menggunakan  oven  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Pengujian  fitokimia  meliputi  uji alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, steroid dan triterpenoid. Ekstrak diuji toksisitasnya  dengan metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT).  Ekstrak  etanol  yang  digunakan konsentrasi  1000 μg/mL,  500 μg/mL, 250 μg/mL, 125 μg/mL, 62,5 μg/mL, 31,25 μg/mL dan 0 μg/mL (kontrol), kemudian diamati selama  24  jam.  Efek  toksisitas  ekstrak  dianalisis  dengan  analisis  probit  menggunakan  SPSS  25.0. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  Coleus  hybridus  memiliki  kandungan flavonoid, tanin, saponin dan steroid. Hasil uji toksisitas diperoleh nilai LC 50 sebesar 323,225 μg/mL, sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun Coleus hybridus masuk kategori kurang toksik (low toxic).
Kata kunci: Daun Coleus hybridus, Skrining Fitokimia, BSLT, Sitotoksisitas, LC 50 .

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Penggunaan  tanaman  obat  atau  herbal sebagai  pengobatan  tradisional  merupakan pilihan  pengobatan  yang  kini  makin  diminati karena  relatif  aman  dan  murah,  salah  satunya adalah  untuk  terapi  kanker.  Obat  kemoterapi telah  banyak  ditemukan  untuk  terapi  kanker namun hasilnya belum memuaskan, disamping kurang  selektif  dalam  penggunaan  obat  yang ada, juga ditemukan efek samping yang cukup besar  dari  obat  tersebut  (Hendrawati,  2009; Farida et  al .,  2009).  Dari  berbagai  penelitian, obat  tradisional  telah  diakui  keberadaannya oleh masyarakat, dengan demikian meningkatkan manfaat tanaman bagi kesehatan dan  menciptakan  kondisi  yang  mendorong pengembangan  obat  tradisional  (Hendrawati, 2009).
Kanker  merupakan  salah  satu  masalah kesehatan  terbesar  di  Indonesia  dan  menjadi penyebab  kematian  tertinggi  kedua  setelah penyakit  kardiovaskuler. Global  burden  of Cancer  Study (Globocan)  dari World  Health Organization (WHO)  mencatat,  total  kasus kanker di Indonesia pada tahun 2020 mencapai 396,914  kasus  dan  total  kematian  sebesar 234,511  kasus.    Metode  terapi  yang  lazim dilakukan  untuk  mengatasi  kanker  adalah kemoterapi, sinar atau radiasi ataupun pembedahan (Nafrinaldi & Gan, 1995), metode tersebut  sering  kali  kurang  efektif  ataupun tidak  aman  untuk  sel-sel  yang  normal, sehingga  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  menemukan  obat  baru  dari  alam (Pamilih, 2009; Tjay & Rahardja, 2007).
Masyarakat  lokal  di  Sulawesi  Utara  yang bermukim  di  sekitar  kawasan  hutan  telah banyak  memanfaatkan  sumber  daya  hutan khususnya tumbuhan untuk memenuhi kebutuhan  hidupnya  seperti keperluan  pangan, bahan  konstruksi  rumah,  dan  lainnya,  begitu pula  obat-obatan  tradisional,  kayu  bakar  dan sebagainya.
Pengetahuan
mengenai pengobatan  secara  tradisional,  terutama  yang bahan  bakunya  berasal dari  alam  telah dikenal sejak zaman purba ditanah Minahasa. Pengetahuan  ini  biasanya  diturunkan  dari generasi ke generasi (Khino et al , 2011). Tanaman Coleus  hybridus dari  beberapa penelitian  merupakan  satu  spesies  tanaman dari famili Lamiaceae yang berpotensi sebagai tanaman  obat  tradisional.  Tanaman  miana merah  ( Coleus  hybridus )  merupakan  genus Coleus sinonimnya piladang ( Coleus
scutellarioides )  (Borek, et  al ,  2016)  atau Plectranthus  scutellarioides.  Tanaman  miana merah  memiliki  sedikit  literatur  penelitian tentang  metabolit  sekunder,  bioaktivitas,  atau potensi  berkhasiat  obat.  Tanaman Coleus merupakan  tanaman  herba  yang  memiliki batang  tegak  atau  herba  baring  yang  berakar banyak,  harum  serta  memiliki  tinggi  umunya 0,5-1  meter  namun  beberapa  tanaman  bisa memiliki  tinggi  hingga  2  meter  (Suva, et  al ,. 2016).
Menurut Julianus (2011), air rebusan daun miana merah ( Coleus hybridus ) secara empiris telah  digunakan  oleh  masyarakat  di  beberapa daerah di Sulawesi Utara khususnya di wilayah Minahasa  untuk  mengobati    batuk,  wasir, terlambat  haid,  dan  kencing  manis.  Pada penelitian  untuk  penggunaan  daun  miana sebagai  senyawa  antikanker  ditemukan  bahwa terdapat  4  fraksi  toksik  dari  daun  miana diantaranya  adalah  fraksi  asam  palmitat, asam stearat,  9-  Oktadekenamida  dan  Ester  dioktil heksadioat. Empat senyawa diidentifikasi pada fraksi paling toksik (LC50 90,72) menggunakan Gas Chromatography-Mass Spectrometry (Swantara, 2010). Efek farmakologis dari tumbuhan disebabkan adanya senyawa metabolit sekunder  yang  terkandung  di  dalamnya. Efektivitas  komponen  aktif  tersebut  sebagai obat  herbal  dapat  ditentukan  melalui  analisis awal  berupa  analisis  toksisitas.  Beberapa penelitian menunjukkan bahwa beberapa genus Coleus memiliki aktivitas toksisitas. Untuk itu, pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  pengujian terhadap  spesies Coleus hybridus  agar  dapat mengetahui apakah terdapat aktivitas toksisitas atau  tidak.  Berdasarkan  informasi  diatas  serta untuk  menunjang  dan  melengkapi  informasi yang  bermanfaat  bagi  masyarakat  umum mengenai tanaman obat miana merah.
Metode  yang  sering  digunakan  pada analisis toksisitas yaitu Brine Shrimp Lethality Test  (BSLT).  Uji  ini  menggambarkan  tingkat ketoksikan  ekstrak  terhadap  larva Artemia salina . Uji ini merupakan uji tahap awal untuk menentukan  aktivitas  sitotoksik  karena  uji  ini lebih  mudah  dan  sederhana.  Penggunaan metode  ini  untuk  mengetahui  bioaktivitas secara  umum  dalam  ekstrak  tumbuhan  mulai diperkenalkan  pada  tahun  1982,  kemudian pada  tahun  1991  dimodifikasi  sebagai  uji pendahuluan untuk aktivitas sitotoksik. Pengujian  dengan  menggunakan  hewan  uji
larva  udang Artemia  salina ini  memiliki sensitivitas  yang  sangat  tinggi  terhadap senyawa  sitotoksik.  Oleh  karena  itu,  metode BSLT  sangat  disarankan  untuk  pengujian toksisitas  karena  memiliki  korelasi  hingga tingkat kepercayaan  95%  terhadap  uji  spesifik antikanker (Anderson, 1991).
Pada  penelitian  terdahulu  menunjukkan adanya  korelasi  positif  antara  toksisitas  brine shrimp  dengan  sitotoksisitas  9KB  (karsinoma nasofaring  pada  manusia).  Uji  BSLT  telah digunakan  20  tahun  terakhir  dan  telah mununtun  ditemukannya  efek  sitotoksik  dari berbagai bahan alam (Arum Syarie, 2010). Kelebihan  metode  BSLT  ialah  cepat,  rendah biaya  dan  sederhana.  Hasil  uji  ini  dapat dimanfaatkan untuk mengidentifikasi bioaktivitas tanaman yang lebih luas. Penelitian  ini  bertujuan  mempelajari  aktivitas toksisitas  ekstrak  etanol  daun  miana  merah yang diuji terhadap larva A. Salina .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Kimia  Farmasi  dan  Instrumen  di  Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi pada bulan Desember 2021- Januari 2022.

## Jenis Penelitian
Penelitian
merupakan penelitian
eksperimental laboratorium.

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat  yang  digunakan dalam  penelitian ini adalah tisu, blender, gunting, tabung reaksi, rak  tabung  reaksi,  pipet,  penggaris, rotary evaporator , timbangan, sarung tangan, masker, gelas  beker,  batang  pengaduk,  cawan  petri, waterbath ,  kertas  saring,  ayakan  mesh  80, corong,  kaca  pembesar, hotplate ,  aerator, lampu,  labu  takar,  erlenmeyer,  gelas  ukur, aluminium foil, spatula, toples kaca, pot salep, dan wadah plastik berukuran sedang.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalma penelitian ini  adalah  daun  miana  merah  ( Coleus hybridus ), etanol 96%, air laut, Artemia salina L.,  akuades,  garam  non  iodium,  CHCl 3 (kloroform),  NH 3 (amonia),  H 2 SO 4 (asam sulfat),  pereaksi  Meyer,  C 4 H 6 O 3 (asetat
anhidrat), HCl (asam klorida), Mg (magnesium) dan FeCl 3 (besi (III) klorida).

## Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  ialah  daun  miana merah  ( Coleus  hybridus )  yang  diambil  di kelurahan  Lapangan,  kecamatan  Mapanget, Kota  Manado,  Sulawesi  Utara.  Daun  miana merah  yang  diperoleh  akan  dilakukan  sortasi, pencucian  dan  pengeringan.  Sortasi  dan pencucian  yang  dilakukan  pada  daun  miana merah  bertujuan  untuk  membersihkan  dari kotoran-kotoran  yang  melekat  ataupun  bagian dari  tanaman  lain  yang  tidak  akan  digunakan yang terbawa saat pengumpulan daun menggunakan air bersih. Sedangkan pengeringan  bertujuan  untuk  menghilangkan air  yang  terdapat  dalam  sampel  yang  dapat menyebabkan terjadinya reaksi enzimatis yang mengakibatkan rusaknya sampel karena susunan  senyawa  yang  terdapat  dalam  daun tersebut telah berubah (Ningsih et al , 2016).

## Identifikasi Tanaman
Identifikasi tanaman dilakukan di Laboratorium  Taksonomi  Tumbuhan  Program Studi  Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Ekstraksi Sampel
Serbuk kering daun miana merah diekstraksi  dengan  metode  maserasi.  Serbuk daun miana merah yang digunakan sebesar 200 g  dan  diekstraksi  dengan  pelarut  etanol  96% sebanyak  1000  mL  selama  5  hari.  Setelah  5 hari dilakukan  lagi  remaserasi  1  kali  selama  3 hari  dengan  ditambahkan  pelarut  etanol  96% mencapai 600 mL.
Pemilihan  metode  maserasi  dikarenakan pelaksanaanya lebih mudah dan tidak memerlukan  peralatan  yang  spesifik.  Selain itu,  metode  maserasi  dapat  digunakan  untuk

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
jenis  senyawa  yang  tahan  panas  maupun  yang tidak  tahan  panas  dan  dapat  digunakan  untuk jenis  senyawa  yang  belum  diidentifikasi (Herawati et  al ,  2012).  Proses  ini  sangat menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa  bahan alam,  karena  selama  perendaman  terjadi peristiwa  plasmolisis  yang  menyebabkan terjadi pemecahan dinding sel akibat perbedaan  tekanan  didalam  dan  diluar  sel, sehingga  senyawa  yang  ada  dalam  sitoplasma akan  terlarut  dan  proses  ekstraksi  senyawa akan  sempurna  karena  dapat  diatur  lama perendaman  yang  diinginkan  (Ningsih et  al , 2016).

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  ialah  uji  kualitatif  yang dilakukan untuk mengenali komponen bioaktif yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  96% daun Coleus hybridus . Analisis fitokimia yang dilakukan  meliputi  uji  alkaloid,  flavonoid, tanin,  saponin  serta  triterpenoid/steroid.  Tata cara  analisis  yang  digunakan  bersumber  pada Harborne (1987).

## a. Alkaloid
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  daun  miana  merah ( Coleus hybridus ) dimasukan ke dalam tabung reaksi, selanjutnya ditambahkan 2 mL kloroform  (CHCl 3 )  dan  10  mL  amonia  (NH 3 ), kemudian  ditambahkan  10  tetes  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  2  M  untuk  memperjelas  terjadinya pemisahan  2  fase  yang  berbeda.  Campuran dikocok  dan  dibiarkan  hingga  membentuk  2 lapisan.  Bagian  atas  dari  fase  yang  terbentuk diambil dan dipindahkan dalam 3 tabung reaksi dengan  volume  masing-masing  2,5  mL. Setelah itu ketiga larutan ditambahkan masing- masing  reagen  Meyer,  Dragendorf  dan Wagner.  Terjadinya  endapan  putih  (untuk reagen  Meyer),  merah  jingga  (untuk  reagen Dragendorf) dan coklat (untuk reagen Wagner) menandakan adanya alkaloid.

## b. Flavonoid
Sebanyak 0,5  g  ekstrak etanol daun  miana merah ( Coleus hybridus ) dimasukkan ke dalam tabung  reaksi,  ditambahkan  5  mL  etanol  dan dipanaskan  selama  5  menit  dalam  tabung reaksi. Setelah  dipanaskan,  ditambahkan beberapa  tetes  asam  klorida  (HCl)  pekat. Kemudian ditambahkan 0,2 g serbuk
magnesium (Mg).
Adanya flavonoid ditunjukkan oleh timbulnya warna merah bata.

## c. Tanin
Sebanyak 0,5  g  ekstrak etanol daun  miana merah ( Coleus hybridus ) dimasukkan ke dalam tabung reaksi, selanjutnya ditambahkan dengan 10  mL  air  panas,  kemudian  ditetesi  besi  (III) klorida  (FeCl 3 ),  keberadaan  tannin  dalam sampel  ditandai  dengan  munculnya  warna hijau kebiruan.

## d. Saponin
Sebanyak 0,5  g  ekstrak etanol daun  miana merah  ( Coleus  hybridus )  ditambahkan  dengan 10  mL  akuades  kemudian  dikocok  selama kurang  lebih  1  menit.  Selanjutnya  didiamkan selama  10  menit  dan  diamati  buih  atau  busa yang  terbentuk.  Keberadaan  senyawa  saponin dalam  sampel  ditandai  dengan  terbentuknya buih yang stabil selama 10 menit.

## e. Steroid/Triterpenoid
Sebanyak 0,5  g  ekstrak etanol daun  miana merah  ( Coleus  hybridus )  ditambahkan  dengan 1 mL kloroform (CHCl 3 ). Selanjutnya campuran  dikocok.  Ditambahkan  masing- masing  asetat  anhidrat  (C 4 H 6 O 3 )  dan  asam sulfat (H 2 SO 4 ) pekat sebanyak 2 tetes. Larutan dikocok  perlahan  lalu  dibiarkan  selama beberapa  menit.  Jika  mengandung  steroid maka  larutan  memberikan  warna  biru  atau hijau  dan  apabila  menxgandung  triterpenoid maka  larutan  memberikan  warna  merah  atau ungu.

## Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Penyiapan Larva Artemia Salina L.
Penetasan  telur Artemia  salina L.  dilakukan dengan  cara  merendam  sebanyak  50  mg  telur A.  salina dalam  wadah  yang  berisi  air  laut dibawah cahaya lampu 25 watt. Telur A. salina akan menetas dan menjadi larva setelah 24 jam (Mudjiman,  1988).  Larva A.  salina yang  baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur 48  jam  sebab  jika  lebih  dari  48  jam dikhawatirkan  kematian A.  salina bukan disebabkan toksisitas melainkan oleh terbatasnya persediaan makanan (Meyer et al ., 1982).

## Pembuatan Konsentrasi Sampel Uji
Konsentrasi larutan uji untuk BSLT adalah 1000  μg/mL,  500  μg/mL,  250  μg/mL,  l25 μg/mL, 62,5 μg/mL, 31,25 μg/mL, dan larutan kontrol. Untuk pembuatan larutan stok, ekstrak kental  etanol  96%  ditimbang  sebanyak  500 mg,  kemudian dilarutkan dengan ke dalam  air laut  sebanyak  500  mL,  hingga  diperoleh konsentrasi larutan stok 1000 μg/mL. a.  Larutan  konsentrasi  1000  μg/mL  dibuat dengan cara diambil 10 mL dari larutan stok. b.  Larutan  konsentrasi  500  μg/mL  dibuat dengan cara diambil 5 mL dari larutan stok dan ditambahkan air laut hingga 10 mL.
c.  Larutan  konsentrasi  250  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  5  mL  dari  larutan  500 μg/mL dan ditambahkan air laut hingga 10 mL. d.  Larutan  konsentrasi  125  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  5  mL  dari  larutan  250 μg/mL dan ditambahkan air laut hingga 10 mL. e.  Larutan  konsentrasi  62,5  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  5  mL  dari  larutan  125 μg/mL dan ditambahkan air laut hingga 10 mL. f.  Larutan  konsentrasi  31,25  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  5  mL  dari  larutan  62,5 μg/mL dan ditambahkan air laut hingga 10 mL.
g.  Larutan  kontrol  dibuat  dengan  mengambil 10 mL air laut saja.

## Pelaksanaan Uji Toksisitas
Pada uji toksisitas masing-masing konsentrasi  dilakukan  3  duplikasi  dengan  tiap kelompok  sebanyak  10  ekor  larva Artemia salina L.  Disiapkan  wadah  untuk  pengujian, untuk  masing  -  masing  konsentrasi  ekstrak sampel  membutuhkan  3  wadah  dan  3  wadah sebagai  kontrol  untuk  masing  -  masing duplikasi.  Selanjutnya  pada  tiap  konsentrasi larutan  dimasukan  10  ekor  larva A.  salina . Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian  larva A.  salina dimana  setiap konsentrasi dilakukan 3 duplikasi dan
dibandingkan  dengan  kontrol.  Kriteria  standar untuk  menilai  kematian  larva A.  salina yaitu
bila  larva A.  salina tidak  menunjukkan pergerakkan selama 60 detik observasi.

## Analisis Data
Data yang dikumpulkan adalah data primer yang didapatkan dari jumlah larva udang yang mati  24  jam  setelah  perlakuan  pada  tiap-tiap konsentrasi  ekstrak  daun  miana  merah.  Data hasil  penelitian  dari  uji  toksisitas  akan dianalisis  dengan  analisis  probit  menggunakan SPSS 25.0  for  Windows  untuk  mengetahui nilai LC 50 , serta disajikan dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Besar  rendemen  hasil  ekstraksi  200  g serbuk  daun  miana  merah  dalam  1000  mL etanol  dihitung  dalam  persen  rendemen.  Hasil ekstraksi daun miana merah diperoleh rendemen  ekstrak  kental  sebanyak  25,9  g. Persen  rendemen  ekstrak  daun  miana  merah didapat  dengan  membagi  jumlah  rendemen ekstrak  dengan  berat  serbuk  sebelum  ekstraksi kemudian  dikalikan  100%.  Persen  rendemen yang didapat yaitu 12,95%.

## Uji Fitokimia
Pengujian  fitokimia  dilakukan  menggunakan metode  yang  berdasarkan  pada  Harborne (1987).  Hasil  pengujian  dapat  dilihat  pada Tabel 1. Pengujian  fitokimia ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  miana  merah  positif memiliki  senyawa  metabolit  sekunder  yakni steroid, flavonoid, tanin dan saponin. Sedangkan untuk metabolit sekunder triterpenoid  dan  alkaloid  menunjukkan  hasil negatif. Keberadaan metabolit sekunder tersebut  menunjukkan  bahwa  daun  miana merah  mempunyai  efek  farmakologis  dan berpotensi untuk dijadikan sebagai bahan obat- obatan.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia dari Ekstrak Etanol Daun Miana Merah ( Coleus hybridus ) Senyawa Metabolit Penambahan Perubahan Positif Perubahan Warna Hasil Pengujian Alkaloid 2 mL kloroform + 10 tetes asam sulfat Pereaksi Meyer: endapan putih Pereaksi Dragendorf: merah jingga Pereaksi merah jingga -

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Wagner: coklat Flavonoid 10 tetes asam klorida pekat + 0,2 g serbuk magnesium Warna merah bata Warna merah bata + Tanin 10 mL air panas + 5 tetes besi (III) klorida Warna hijau kebiruan Warna hijau kebiruan + Saponin 10 mL akuades Terbentuknya buih stabil selama 10 menit Terbentuknya buih stabil selama 10 menit + Steroid dan Triterpenoid 1 mL kloroform + 2 tetes asetat anhidrat + 2 tetes asam sulfat pekat Steroid: warna biru atau hijau Triterpenoid: warna merah atau ungu Warna hijau kebiruan + Steroid - Triterpenoid

## Pengujian Toksisitas dengan Metode BSLT
Pengujian  toksisitas  dilakukan  dengan metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test ) menggunakan larva Artemia salina L. Kemampuan toksisitas dari ekstrak etanol daun miana  merah  dalam  mematikan  larva  udang yang  telah  diberikan  perlakuan  dengan konsentrasi  1000,  500,  250,  125,  62,5  dan 31,25  μg/mL  beserta  larutan  kontrol  yang hanya  berisi air  laut dapat  dilihat dalam  Tabel 2. Penambahan larutan kontrol dilakukan untuk mengetahui  pengaruh  air  laut  maupun  faktor lain terhadap kematian larva, sehingga
kematian  larva  dapat  dipastikan  karena  efek dari ekstrak yang ditambahkan.
Air  laut  yang  digunakan  merupakan  air laut  sintetik  yang  dibuat  dengan  cara melarutkan  garam  non  iodium  sebanyak  20  g dalam  1000  mL  akuades.  Dapat  diketahui bahwa  masing-masing  konsentrasi  ekstrak daun miana merah yang digunakan memperlihatkan  pengaruh  yang  berbeda. Jumlah  larva  tiap  uji  adalah  10  ekor  dan  tiap konsentrasi  dilakukan  hingga  3  kali  duplikasi. Jumlah  total  larva  udang A.  salina yang digunakan adalah 210 ekor larva. Tabel 2. Persentase Jumlah Kematian Larva Udang
Pengujian Larutan Kontrol Jumlah Kematian Setiap Konsentrasi 31,25 μg/mL 62,5 μg/mL 125 μg/mL 250 μg/mL 500 μg/mL 1000 μg/mL 1 0 2 2 3 4 10 10 2 0 2 2 3 3 8 10 3 1 1 3 6 6 9 10 Total Kematian Larva 1 5 7 12 13 27 30 Rata-rata 0,3 1,6 2,3 4 4,3 9 10 Persentase Kematian 3% 16% 23% 40% 43% 90% 100%
Berdasarkan  Tabel  2,  dapat  dilihat  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin besar  juga  tingkat  kematian  larva  udang, dimana  diperoleh  tingkat  kematian  tertinggi pada  konsentrasi  1000  μg/mL  dan  kematian terendah pada konsentrasi 31,25 μg/mL.
Mekanisme kematian larva udang berhubungan dengan senyawa metabolit sekunder  ekstrak  yang  bersifat  toksik  yang dapat menghambat daya makan larva udang.
Ketika  senyawa  tersebut  tertelan  oleh  larva, alat  pencernaanya  akan  terganggu.  Selain  itu, senyawa  ini  menghambat  reseptor  perasa  pada daerah  mulut  larva  udang.  Larva  udang  tidak bisa  makan,  sehingga  menyebabkan  larva udang mati (Meyer et al ., 1982).
Menurut  Meyer et  al .,  (1982),  ekstrak dapat  disebut  bersifat  toksik  apabila  memiliki nilai LC 50 dengan konsentrasi kurang dari 1000 μg/mL, semakin kecil nilai LC50 menunjukkan

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
bahwa  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  ekstrak  tersebut  semakin kuat.  Nilai  LC50  merupakan konsentrasi  yang dapat  menyebabkan  kematian  50%  larva selama  waktu  tertentu.  Sampel  uji  dapat dikatakan aktif jika nilai LC50 lebih kecil dari 1000 μg/mL.
Tabel 3. Hasil Analisis Probit Nilai LC50 menggunakan SPSS 25.0
Hasil  dari  analisis  probit  menggunakan SPSS  25.0  menunjukkan  nilai  LC50  dari ekstrak  etanol  daun  miana  merah  adalah 323,225  μg/mL  dan  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  daun  miana  merah  bersifat toksik.  Sehingga  berdasarkan  nilai  LC50  yang diperoleh  dengan  metode  BSLT,  tanaman miana  merah  dapat  dilakukan  penelitian lanjutan  untuk  dikembangkan  sebagai  obat antikanker.
Menurut  Meyer  (1982),  ada  3  kategori mengklasifikasikan  tingkat  toksisitas  suatu ekstrak. Ekstrak etanol daun miana merah yang telah  di  uji  pada  penelitian  ini  jika dikategorikan  menujukkan  bahwa  ekstrak masuk ke dalam kategori low toxic. Walaupun dalam  kategori  low  toxic,  ekstrak  masih dikatakan aktif sebagai antikanker karena nilai LC50  yang  dihasilkan  dari  analisis  probit menunjukkan konsentrasi masih dibawah 1000 μg/mL.  Semakin  kecil  nilai  LC50  yang diperoleh, maka semakin tinggi sifat toksisitasnya.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan sebagai berikut:
1.  Ekstrak  etanol  96%  daun  miana  merah (Coleus hybridus) mengandung senyawa metabolit  sekunder  yakni  steroid,  flavonoid, tanin  dan  saponin  yang  dapat  memberikan aktivitas farmakologis.
2.  Ekstrak  etanol  96%  daun  miana  merah (Coleus hybridus) memiliki sifat toksik dengan kategori  low  toxic  terhadap  larva  udang dengan nilai LC50¬ sebesar 323,225 μg/mL.

## SARAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan  ini,  tanaman  miana  merah  (Coleus hybridus)  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut,  karena  daun  miana  merah  (Coleus hybridus) memiliki berbagai senyawa metabolit  sekunder  yang  bermanfaat.  Perlu juga dilakukan  penelitian  lebih lanjut  terhadap ekstrak  etanol  daun  miana  merah  yang terbuktik  bersifat  toksik  dengan  kategori  low toxic berpotensi sebagai bahan obat antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
A. Nurul Qalbi BM, Jasri Djangi & Muhaedah. (2017). Isolasi Dan Identifikasi Senyawa  Metabolit  Sekunder Ekstrak Kloroform Daun Tumbuhan Iler (Coleus scutellarioides,  Linn,  Benth). Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Negeri Makassar.
Anderson, J. E., Goetz C.M., Mc Laughlin J.L.
(1991). A Blind comparison of Simple  Bench-top  Bioassay and Human Tumor Cell Cytotoxicities  as  Antitumor Prescrenss,  Natural  Product Chemistry, Elseiver, Amsterdam.
Ariani,  S.  R.  D.,  Endang  S.,  Elfi  S.  V.  H.  & Setiyani.  (2008).  Uji  Aktivitas Ekstrak  Metanol  Daun  Jambu Biji  ( Psidium  guajava L.) sebagai Antifertilitas Kontrsepsi  pada  Tikus  Putih ( Rattus  norvegicus ). Jurnal Indo  J.Chem .,  8  (2),  264-270.

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Chemistry Study Program, Faculty of Educations, Sebelas Maret University.
Arum  Syarie,  S.  (2010). “Uji  Toksisitas  Daun Gracinia  porrecta Wall  var. Schizogyna Boerl dengan Metode Brine Shrimp Lethality  Test (BSLT)  dan Identifikasi Golongan Senyawa  Kimia  dari  Ekstrak dan  yang  Aktif”.  Skripsi. Universitas Indonesia.
Asaduzzaman,  M.,  Rana,  M.,  Hasan,  S., Hossain,  M.,  &  Das,  N.
(2015). Cytotoxic (brine shimp lethality bioassay) and antioxidant  investigation  of Barringtonia  acutangula (L.). International Journal of Pharma Sciences and Research ( IJPSR ), 6(8), 1179–
1185.
Borek, M., R. Bączek-Kwinta, and M. Rapacz.
(2016). “Photosynthetic Activity  of  Variegated  Leaves of  Coleus  ×  Hybridus  Hort. Cultivars  Characterised  by Chlorophyll Fluorescence Techniques.” Photosynthetica
54(3):331–39.
Dede  Indra  Syari,  Rhida  Aini,  Wiza  Septia,
Rudi  Hendra  Sy  &  Hilwan Yuda  Teruna.  (2018).  UJI AKTIVITAS TOKSISITAS DARI EKSTRAK TANAMAN MIANA MERAH  ( Coleus  hybridus )
MENGGUNAKAN METODE BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality Test ).  Mahasiswa  Program Studi Pasca Sarjana Kimia dan
Mahasiswa  Program  Sarjana Kimia  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam. Kampus Binawidya Pekanbaru.
Departemen Kesehatan RI. (1995). Farmakope Indonesia Edisi  IV,  551,  713.
Jakarta. Dewi,  I.D.A.D.Y.,  Astuti,  K.W.1,  Warditiani, N.K. (2013). Skrining Fitokimia Ekstrka  Etanol 95% Kulit Buah Manggis ( Garcinia mangostana L.). Skripsi . Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Udayana. Bali. Farida,  Y.,  T.  Martati, B.  Edward.  (2009).  Uji Aktivitas Biologi Secara BSLT  dan  Uji  Sitotoksik dengan  Metode  MTT  dari Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak  Metanol  Daun  Keladi Tikus ( Typhonium divaricatum (L) Decne). Jurnal Ilmu
Kefarmasian  Indonesia .  8  (2): 118-124.
Gajardo,  G.,  &  Beardmore,  J.  (2012).  The brine shrimp Artemia: adapted to  critical  life  conditions. Frontiers  in  Physiology ,  3,  1–
8. doi: 10.3389/fphys.2012.00185
Harborne,  J.  B.  (1987). Metode  Fitokimia,
Edisi ke-2 . ITB, Bandung.
Hendrawati,  A.  R.  S.  (2009).  Uji  Toksisitas
Akut  Ekstrak  Etanol  Daun Kemangi  ( Ocimum  sanctum Linn.) Terhadap Artemia salina  Leach  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  [skripsi].  Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang.
Julianus et  al .  (2011). Tumbuhan  Obat
Tradisional di Sulawesi Utara . Ed ke-2. Manado: Balai Penelitian Kehutanan Manado.
Kanwar,  A.  (2007).  Brine  shrimp  ( Artemia salina )  a  marine  animal  for simple  and  rapid  biological assays. Journal  of  Chinese Clinical  Medicine ,  2(4),  236– 240.
Kristianti,  A.  N,  N.  S.  Aminah,  M.  Tanjung, dan B. Kurniadi. (2008). Buku
Ajar Fitokimia . Surabaya: Jurusan  Kimia  Laboratorium Kimia Organik FMIPA Universitas  Airlangga.  P.47- 48. Kumala,  S. 2009.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak daun iler ( Coleus antropurpureus (L) Beth) terhadap  beberaqpa  bakteri Gram (+) dan bakteri Gram (-) Jurnal  Bahan  Alam  Indonesia vol 7 no 1. Kumalasari,  Aristin  Nanda  Djuraidah,  Anik Alamudi, Aam. (2015). Analisis Probit untuk Menentukan  Pestisida  yang Efektif bagi Crocidolamia
Pavonana .  Institut  Pertanian Bogor. Bogor.
Kusumawati,  Dwi  Endah,  Fachriyan  Hasmi Pasaribu,  and  Maria  Bintang.
(2014).  “Aktivitas  Antibakteri Isolat  Bakteri  Endofit  dari Tanaman Miana ( Coleus Scutellariodes [L.]  Benth  .) terhadap Staphylococcus Aureus dan Escherichia Coli.”
Current Biochemistry 1(1):45– 50.
Lestari, M. .., T. Himawan, A. .. Abadi, and R. Retnowati.  (2015).  “Toxicity and  Phytochemistry  Test  of Methanol  Extract  of  Several Plants from Papua Using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).” Journal of Chemical and  Pharmaceutical  Research 7(4):866–72.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  Putnam,  J.E.  Jacobsen,
L.B. Nichols, Mclaughin.
(1982). Brine  Shrimp: A Convinient  General  Bioassay for  Active  Plant  Constituents . Planta Medica. 45 : 31-34.
Mudjiman,  A.  (1988). Udang  Renik  Air  Asin
(Artemia salina) . Bhatara
Karya Aksara, Jakarta.
Murtini, J.T., Triwibowo, R., Indriatri, N., dan
Ariyani, F. (2010). Uji Toksisitas Sub Kronik Spirulina  platensis Secara In- Vivo . Jurnal  Pascapaen  dan Bioteknologi  Kelautan  dan Perikanan . 5(2). Hal. 123-134.
Mustikasari,  K  &  Ariyani,  D.  (2008).  Studi Potensi Binjai ( Mangifera caesia ) dan Kasturi
(Mangifera  casturi )  sebagai
Antidiabetes  melalui  Skrining Fitokimia  pada  Akar  dan Batang. Jurnal  Sains  dan Terapan Kimia 2 (2) : 64-73.
Ningsih,  D.R.,  Zusfahair,  D.  Kartika.  (2016). Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder  Serta  Uji  Aktivitas Ekstrak  Daun  Sirsak  Sebagai

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Antibakteri .  Molekul. 11 (1):
101-111.
Nafrinaldi,  &  Gan,  S.  (1995).  Antikanker  dan Imunosupresan.  In  G.  G. Sulistia  (Ed.), Farmakologi dan  Terapi (4  ed.).  Jakarta:
Bagian Farmakologi FKUI.
Nugraheni,  M.,  U.  Santoso,  Suparmo,  and  H.
Wuryastuti.  (2011).  “Potential of  Coleus  Tuberosus  as  an Antioxidant and Cancer Chemoprevention Agent.” International  Food  Research Journal 18(4):1471–80.
Nugroho  Y  A.  2003.  Karakterisasi,  uji toksisitas  akut  oral  dan  uji mukolitik  tanaman  mayana ( Plectranthus  scutellarioides
(L) R. Br.). Laporan
Penelitian. Jakarta : Penelitian
dan Pengembangan Kesehatan
2003: hal. 5.
Padmasari,  P  D.,  Astuti  K.W.,  Warditiani,  N K.  (2013).  Skrining  Fitokimia
Ekstrak  Etanol  70%  Rimpang Bangle  ( Zingiber  purpureum Roxb.). Jurnal Farmasi Udayana 2 (4) : 1-4. Pamilih,  H.  (2009). Uji Sitotoksik Ekstrak  Etil Asetat Herba Bandotan (Ageratum conyzoides L.) Terhadap Sel Kanker Payudara  (T47D)  dan  Profil Kromatografi Lapis Tipis. (S1), Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta. Ravishankar  D,  rajora  AK,  Greco  F,  Osborn HMI.  2013.  Flavonoids  as prospective  compounds  for anti-cancer therapy. The International Journal of Biochemistry and Cell Biology . 30:1-11. Ren  W,  Qiao  Z,  Wang  H,  Zhu  L,  Zhang  L.
2003.  Flavonoids:  promising anticancer  agents. Medicinal
Research Reviews . 23(4): 519-
534.
Seniwaty.,  Raihanah.,  Nuhgraeni,  I  K  dan
Umaningrum, D. (2009). Skrining Fitokimia dari Alang- alang  ( Imperata Cylindrica L.Beauv)  dan  Lidah  Ular ( Hedyotis Corymbosa L.Lamk). Sains  dan  Terapan
Kimia 3 (2) : 124-133.
Sudaryono,  A.  (2011).  Teratogenitas  Senyawa
Flavonoid dalam Ekstrak Metanol Daun Benalu ( Dendrophthoe  pentandra  (L) Miq. )  pada Mus  musculus. Jurnal Exacta 9 (1):1-8.
Suva,  Manoj  A.,  Ankita  M.  Patel,  and  Neeraj
Sharma. (2016). “Coleus Species : Solenostemon Scutellarioides.” Inventi Journals ( P ) 2015(2):1–5. Swantara IMD. (2010). Isolasi dan Identifikasi Fraksi toksik Ekstrak Tumbuhan Iler ( Coleus scutellarioides [L.] Benth ).Indonesian  Journal  of Cancer 4(1) : 9-13.
Tjay, T.H., & Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting: Khasiat, Penggunaan dan  Efek-Efek  Sampingnya . Jakarta: Elex Media Komputindo. Tomahayu,  R.T.  (2014).  Identifikasi  Senyawa Aktif dan Uji Toksisitas Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia Ten.Steenis)  dengan  Metode
Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Thesis .  Universitas Negeri Gorontalo.
Widayanti,  S.  M.,  A.  W.  Permana,  H.  D.
Kusumaningrum. (2009). Kapasitas  Kadar  Antosianin Ekstrak  Tepung  Kulit  Buah Manggis ( Garcinia

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
mangostana L.) Pada Berbagai Pelarut Dengan Metode Maserasi. J. Pascapanen, 6 (2): 61-68. Wirasuta  dan  Niruri.  (2006). Toksikologi Umum .  Bandung:  Universitas
Udayana
Yildirim  I,  Kutlu  T.  2015.  Anticancer  agents:
saponin and tannin. Journal of Biological Chemistry . 9(6):332-340. Zakari,  A., &  Kubmarawa,  D.  (2016).  In  vitro cytotoxicity studies and qualitative  investigation  of phytochemicals  of  stem  bark extracts of Detarium microcarpum (Caesalpinioideae), Echinaceae angustifolia (Compositae)  and Isoberlinia doka (Fabaceae). National Journal  of  Multidisciplinary Research  and  Development ,
1(1), 22–26.