Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha p-ISSN : 2599-1450 e-ISSN : 2599-1485 Volume 8 Nomor 3 Tahun 2021 Open Acces : https://ejournal.undiksha.ac.id/index.php/JJPB/index
Isolasi dan karakterisasi Bakteri Asam Laktat pada air rendaman kacang tunggak  (Vigna  unguiculata  (L.)  Walp)  berpotensi  sebagai  penghasil antibiotik
Gergonius Fallo 1 , Yuni Sine 2 , Otersia Tael 3
1,2 Dosen Fakultas Pertanian, Universitas Timor, Kefamenanu, TTU
3 Mahasiswa Studi Biologi, Fakultas Pertanian, Universitas Timor, Kefamenanu, TTU Correspondent Author : * sineyuni@gmail.com

## Abstract
Cowpea  (Vigna  unguiculata  (L.)  Walp)  is  a  type  of  legume  whose  young    pods  and  seeds  are commonly  used  as  vegetables.  Cowpea  has  a  high  nutritional  content,  as  a  source  of  protein  and  has  the potential to be a substitute for soybeans in the production of tempeh. In the production of tempeh, the beans are soaked firts. Peanut soaking water is usually not reused, while peanut soaking water contains Lactid Acid Bacteria (BAL) which are beneficial for health. The purpose of this study was to determine the type of BAL n cowpea soaking water, the characteristics of BAL, and to determine the ability of BAL isolatesthat have the potential to produce antibiotics. The results of the study on cowpea immersion water obtained three bacterial isolates,  namely  KNU1,  KNU2,  and  KNU3  with  macroscopic  morphological  characteristics  of  small  size, circular shape, convex elevation, entire margin, milky white and microscopically the three  isolates had rod cell shape, gram positive, negative spores. Meanwhile, the physiological characteristics of the isolates were non-motile  and  catalase  negative.  Based  on  the  morphological  and  physiological  test  characteristics,  the three bacterial isolates were suspected to be Lactobacillus Sp. The results of the potential test of BAL isolates as  antibiotic  producers  proved  that  the  isolates  were  able  to  inhibit  the  growth  of  pathogenic  bacteria, namely Escherichia coli with a clear zone diameter of 7 mm, the response to growth inhibition was moderate. Whereas in Staphylococcus aureus with a clear zone diameter of 14 mm, the growth inhibition  response was quite strong.
Keywords: Lactic Acid Bacteria; Cowpea Soaking Water; Antibiotics

## Abstrak
Kacang tunggak ( Vigna unguiculata (L.) Walp) adalah sejenis tanaman legum yang polong muda dan bijinya biasa dijadikan sayur. Kacang tunggak memiliki kandungan gizi yang tinggi, sebagai sumber protein dan  berpotensi  menjadi  pengganti  kedelai  dalam  produksi  tempe.  Dalam  produksi  pembuatan  tempe dilakukan  terlebih  dahulu  perendaman  kacang.  Air  rendaman  kacang  biasanya  tidak  dimanfaatkan  kembali, sedangkan  dalam  air  rendaman  kacang  mengandung  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  yang  sifatnya menguntungkan bagi kesehatan. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengetahui jenis BAL pada air rendaman kacang  tunggak,  karakteristik  dari  (BAL),  dan  mengetahui  kemampuan  isolat  BAL  yang  berpotensi  sebagai penghasil  antibiotik.  Hasil  penelitian  pada  air  rendaman  kacang  tunggak  didapatkan  tiga  isolat  bakteri yaitu KNU1,  KNU2,  dan  KNU3  dengan  karakteristik  morfologi  secara  makroskopik  berukuran  kecil,  bentuk
circular,  elevasi  convex,  margin  entire,  berwarna  putih  susu  dan  secara  mikroskopik  ketiga  isolat  memiliki bentuk sel batang, gram positif, spora negatif. Sedangkan karakteristik fisiologi isolat bersifat non motil, dan katalase  negatif.  Berdasarkan  karakteristik  uji  morfologi  dan  fisiologi  ketiga  isolat  bakteri  diduga  adalah Lactobacillus Sp.  Hasil  uji  potensi  isolat  BAL  sebagai  penghasil  antibiotik  membuktikan  isolat  mampu menghambat pertumbuhan bakteri patogen yaitu Escherichia coli dengan diameter zona bening sebesar 7 mm, respon  hambatan  pertumbuhan  tergolong  sedang.  Sedangkan  pada Staphylococcus  aureus dengan  diameter zona bening sebesar 14 mm, respon hambatan pertumbuhan tergolong kuat.
Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat; Air Rendaman Kacang Tunggak; Antibiotik

## 1. Pendahuluan
Bakteri  asam  laktat  (BAL)  adalah  kelompok  bakteri  yang  melakukan  penguraian karbohidrat  (glukosa)  menjadi  asam  laktat  yang  akan  menurunkan  pH  serta  menimpulkan rasa asam. Anggota bakteri asam laktat merupakan bakteri gram positif, batang atau coccus yang tunggal, rantai tidak berspora, katalase negatif.
Peran  utama  BAL  adalah  untuk  pengasaman  bahan  mentah  dengan  memproduksi sebagian  besar  asam  laktat,  sebagian  kecil  asam  asetat,  etanol  dan  CO 2 (Putri  dkk,  2014). Bakteri  asam  laktat  yang  memiliki  sifat  menguntungkan  dan  tidak  merugikan  bagi kesehatan, memiliki kemampuan sebagai penghasil antibiotik.
Antibiotik  adalah  senyawa  kimia  yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme  secara sintetik  yang  dapat  membunuh  atau  menghambat  pertumbuhan  organisme  lain  seperti bakteri patogen yang sifatnya merugikan terutama dalam hal kesehatan. Banyak antibiotik yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme,  beberapa  dihasilkan  oleh  spesies  fungi  biasa misalnya  penisilin,  tetapi  kebanyakan  diperoleh  dari  bermacam  macam  bakteri  yang menyerupai fungi, sedikit sekali yang dihasilkan oleh bakteri asli, kecuali yang berasal dari spesies Bacillus (Utami, 2013).

## 2. Metode Penelitian

## Alat Dan Bahan Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah:  Kaca  objek,  kaca  penutup,  jarum ose,  pipet  tetes,  gelas  ukur,  pembakar  spiritus/bunsen,  tabung  reaksi,  beaker  gelas, Erlenmeyer,  Cawan  petri,  Mikropipet,  Timbangan  analitik,  Mikroskop  optik,  spatula,  pH meter, Rak tabung, Alumunium foil, Autoklaf, Lemari pendingin, Oven, Jangka Sorong.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  sebagai  berikut:  Kacang  tunggak  yang berasal dari kota Eban Kabupaten Timor Tengah Utara-Nusa Tenggara Timor, Air bersih, Aquades, Media Man Rogosa Sharpe Agar (MRSA), NaCl, Gentian Violet, Cairan Lugol, Malachite  Green,  safranin,  Hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ), Mueller  Hinton  Agar (MHA), Nutrient Broth (NB), Kapas, Kapas Lidi,  Tisu, Sil, Alkohol 70%.

## Isolasi Bakteri Asam Laktat
Tahap  isolasi  dilakukan  dengan  cara  yang  pertama  kacang  tunggak  yang  diperoleh disortir terlebih dahulu atau dipisahkan kacang yang baik dari yang sudah rusak, kemudian kacang  dibilas  menggunakan  air  bersih  dan  direndam  selama  24  jam  dalam  wadah  yang tertutup  rapat  dan  sudah  diberi  label  KNU1,  KNU2,  dan  KNU3.  Setelah  24  jam perendaman,  kacang  tunggak  dipisahkan  dari  air  rendaman,  tujuan  perendaman  adalah untuk mendapatkan BAL. Setelah itu diambil 1 ml air rendaman dan ditambahkan ke dalam 9  ml  aquades  dan  dihomogenkan.  Kemudian  dilakukan  pengenceran  bertingkat  dari  10 -1 sampai  pengenceran  10 -3 dan  diiambil  0,1  ml  dari  pengenceran  10 -3 dan  dikulturkan  pada media MRSA Menggunakan Metode Spread Plate.

## Karakterasasi Isolat Bakteri Asam Laktat
Karakterisasi  isolat  meliputi  karakterisasi  morfologi  dan  fisiologi.  Karakterisasi morfologi terdiri dari pewarnaan gram, pewarnaan spora, sedangkan karakterisasi fisiologi terdiri dari uji motilitas dan uji katalase.

## a. Karakterisasi Morfologi Bakteri Asam Laktat

## Pewarnaan Gram (Amaliah dkk, 2018)
Dilakukan  dengan  cara  diteteskan  NACL  fisiologis  pada  kaca  obyek  isolat,  lalu  diambil satu  ose  isolat  dari  agar  miring.  Isolat  tersebut  disebarkan  pada  kaca  obyek  lalu  difiksasi. Gentian  violet  diteteskan  diatas  preparat  dan  dibiarkan  selama  1  menit,  preparat  dicuci dengan  air  mengalir.  Cairan  lugol  diteteskan  pada  preparat  kemudian  di  biarkan  selama  1 menit  preparat  dicuci  dan  diteteskan  dengan  alkohol  selama  30  detik,  preparat  dicuci dengan air mengalir. Terakhir preparat diteteskan dengan safranin dan dibiarkan selama 45- 60 detik. Preparat dicuci dan dikeringkan untuk diamati dibawah mikroskop. Bakteri gram positif akan berwarna unggu dan bakteri gram negatif akan berwarna merah.

## Pewarnaan Spora
Dilakukan  dengan  cara  bakteri  digoreskan  pada  kaca  objek  yang  bersih  dan  difiksasi. Sampel  diteteskan malachite  green dan  dipanaskan  diatas  Bunsen  tetapi  tidak  sampai mendidih atau mengering. Setiap kali pewarna menjadi kering diteteskan lagi pewarna baru lalu  dibilas  dengan  air  selama  beberapa  detik  dan  dikeringkan  menggunakan  kertas  tissu. Sampel diteteskan larutan safranin selama 30 detik dan dibilas dengan air mengalir dengan cepat, lalu dikeringkan dengan kertas tissu dan diamati di bawah mikroskop. Hasil pewarna diamati, spora  bakteri  akan terlihat berwarna  hijau sedangkan sel  vegetatif  akan berwarna merah.

## b. Karakterisasi Fisiologi Bakteri Asam Laktat
Uji Motilitas (Sine & Fallo, 2017)
Pengujian  motilitas  bakteri  dilakukan  dengan  cara  sebagai  berikut,  secara  aseptis dengan  menggunakan  jarum  ose yang lurus  bagian ujungnya, kemudian diambil  sebanyak satu  ose  isolat  bakteri  ditusukkan  kedalam nutrient  broth dan  diinkubasi  selama  48  jam. Hasil  uji  motilitas  bersifat  motil  apabila  pertumbuhan  bakteri  menyebar,  dan  apabila
pertumbuhan  bakteri  tidak  menyebar,  hanya  berupa  garis  saja,  maka  bakteri  tersebut bersifat non motil.

## Uji Katalase
Dilakukan  dengan  menggunakan  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  3%.  Isolat  diambil  dari stok kultur dan diletakan pada kaca obyek. Satu sampai dua tetes H 2 O 2 3% ditambahkan ke isolat.  Jika  terbentuk  gelembung  mengindikasikan  bakteri  positif  katalase,  dan  jika  tidak maka mengindikasikan bakteri negatif katalase (Harley, 2005).

## Uji Potensi Bakteri Asam Laktat Sebagai Penghasil Antibiotik
Uji  Potensi  Bakteri  Asam  laktat  dilakukan  dengan  cara  mengambil  suspense  isolat bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan kapas lidi steril dan digores pada media MHA dengan metode streak sebar, kemudian biakan murni isolat bakteri asam laktat diambil menggunakan jarum ose dan ditanam ditengah-tengah bakteri uji pada media MHA. Sedangkan untuk kontrol positif antibiotik dilakukan dengan cara cakram antibiotik (Kromfenicol)  diletakkan  menggunakan  kertas  saring  steril  yang  di  tetesi  antibiotik kedalam  media  MHA  yang  telah  ditanam  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli. Untuk kontrol  negatif dengan cara kertas saring direndam  menggunakan aquades  steril  kemudian  diambil  dan  ditanam  pada  media  MHA  yang  berisi  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli. Hasil  uji  pada  media  MHA  kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam.  Kemampuan  isolat  menghasilkan  antibiotik diketahui  dengan  ada  tidaknya  zona  bening.  Untuk  mengetahui  respon  hambatan  zona bening klasifikasi seperti Rita, (2010).
Diameter Zona Bening Respon Hambatan Pertumbuhan < 5 mm Lemah 5-10 mm Sedang 10-19 mm Kuat >20 mm Sangat kuat Sumber: Rita, (2010).

## 3. Hasil dan Pembahasan
1. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat (BAL)
Isolasi  Bakteri  Asam  Laktat  yang  berasal  dari  sampel  air  rendaman  kacang  tunggak selama  24  jam,  menggunakan  media  MRSA.  Media  tersebut  merupakan  medium  selektif bagi  pertumbuhan  bakteri  asam  laktat.  Hasil  isolasi  bakteri  asam  laktat  diperoleh  3  (tiga) isolat dengan kode isolat yaitu KNU1, KNU2, dan KNU3. Hasil Pengamatan karakteristik morfologi ke 3 isolat  terlihat pada tabel 1.
Tabel  1.    Karakterisasi  Morfologi  Isolat  dari  Air  Rendaman  Kacang  Tunggak  ( Vigna unguiculata (L.) Kode Isolat Karakterisasi Morfologi Isolat Makroskopis Mikroskopis Ukuran Bentuk  Elevasi  Margin Warna Gram  Spora  Bentuk Sel KNU1 Kecil
circular convex
Entire putih susu (+) (-) batang KNU2
Kecil circular convex entire putih susu (+) (-) batang KNU3
Kecil circular convex entire putih susu (+) (-) batang Sumber: Data Primer, 2021
Hasil pengamatan morfologi isolat dari air  rendaman kacang tunggak dapat diketahui memiliki karakter koloni dengan ukuran kecil, berbentuk  cirkular, elevasi  convex, margin entire  dan  warna  koloni  putih  susu.    Hasil  penelitian  ini  diduga  isolat  yang  ditemukan adalah  BAL.  Hasil  isolasi  mirip  dengan  penelitian  Putri  dan  Kusdiyantini  (2018)  tentang isolasi  bakteri  asam  laktat  dari  pangan  fermentasi  di  Maluku  ditemukan  4  (isolat)  pada media MRSA dengan karakter koloni berbentuk cirkular, elevasi convex, dengan tepi entire dan warna koloni putih.
Menurut  Yoni  (2010)  menyatakan  bahwa  koloni  BAL  memiliki  ciri-ciri  putih mengkilat,  berbentuk  bulat  dan  ukuran  koloni  kecil  yaitu  0,5-2  mm.  Untuk  memastikan BAL ada pada air rendaman kacang tunggak ( Vigna unguiculata (L) dilakukan pengecetan spora  dan  pewarnaan  Gram.  Hasil  pewarnaan  Gram  terhadap  isolat  diketahui  memiliki warna ungu. Hal ini menandakan bahwa isolat yang ada pada  air rendaman kacang tunggak adalah Isolat Gram Positif.
Menurut  Brooks  dkk,  (2005),  bakteri  gram  positif  memiliki  unsur  khusus  yaitu teichoic sebanyak 50% dari berat kering dinding sel. Bakteri Gram positif memiliki dinding sel  berupa  peptidoglikan  yang  tebal.  Berdasarkan  hasil  pewarnaan  spora  diketahui  bahwa isolat bakteri yang diperoleh merupakan bakteri yang tidak memiliki spora (spora negatif). Menurut  Laily  dkk,  (2013),  menyatakan  bahwa  pewarnaan  endospora  pada  BAL menggunakan malachite green menunjukan hasil BAL tidak memiliki spora. Hal ini sesuai dengan karakter BAL.
Karakterisasi isolat berdasarkan sifat fisiologi yang diuji meliputi uji motilitas dan uji katalase. Hasil pengujian motilitas dan katalase dilihat pada tabel 2 dan gambar 1.
Tabel 2. Uji Motilitas dan Katalase Isolat Bakteri Motilitas Katalase KNU1 (-) (-) KNU2 (-) (-) KNU3 (-) (-)
Sumber: Data Primer, 2021
Gambar 1. Uji Motilitas dan Katalase Isolat KNU1, KNU2, dan KNU3 (Sumber: Data Primer, 2021)
Hasil  uji  motilitas  menunjukan  bahwa  ketiga  isolat  yang  diisolasi  dari  air  rendaman kacang  tunggak  bersifat  non  motil.  Yang  artinya  bahwa  bakteri  tersebut  tidak  memiliki flagela. Hal ini dapat dilihat dari pertumbuhannya yang tidak menyebar pada medium NB, melainkan hanya tumbuh pada bekas tusukan jarum inokulum saja.
Surono  (2004)  menyatakan  bahwa  bakteri  asam  laktat  bersifat  non  motil,  bakteri probiotik  memiliki  kemampuan  biosintesis  yang  sangat  terbatas,  sehingga  bersifat  non motil dan perolehan energinya semata-mata hanya bergantungan pada metabolisme secara fermentatif.  Hasil  uji  katalase  yang  dilakukan  pada  isolat  diketahui  tidak  terdapatnya gelembung  gas.  Tujuan  uji  katalase  yaitu  untuk  mengetahui  kemampuan  isolat  dalam menghasikan enzim katalase. Enzim katalase merupakan enzim yang mampu mengkatalilis langsung konversi hidrogen peroksida (H 2 O 2 ) yang toksik bagi sel menjadi air dan oksigen. Menurut Brooks dkk, (2005) Bakteri asam laktat genus Lactobacillus merupakan kelompok bakteri  yang  tidak  memiliki  enzim  katalase,  tetapi  memiliki  enzim  peroksidase  untuk mengubah H 2 O 2 yang bersifat toksik menjadi H 2 O. Djide & Wahyudin (2008) menjelaskan bahwa  reaksi  katalase  menunjukan  hasil  positif  bila  terbentuk  gelembung  gas  yang mengindikasikan  terbentuknya  gas  O2  dan  hasil  negatif  jika  tidak  menunjukan  adanya gelembung gas.

## 2. Uji Potensi Bakteri Asam Laktat Sebagai Penghasil Antibiotik
Hasil  uji  Isolat  BAL  yang  diperoleh  dari  air  rendamanan  kacang  tunggak  diketahui bahwa  isolat  tersebut  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli Hal  ini  menunjukan  isolat  tersebut  memiliki  kemampuan
sebagai  penghasil  antibiotik.  Hasil  uji  aktivitas  bakteri  terhadap  bakteri  patogen Staphylococcus aureus , dan Escherichia coli dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Uji Potensi Antibiotik Isolat BAL terhadap Bakteri Patogen
Uji Potensi Antibiotik Diameter Zona Bening (mm) Respon Hambatan Pertumbuhan KNU1 S. aureus 14 Kuat E. coli 7 Sedang Kontrol Positif S. aureus 240 Sangat kuat E. coli 270 Sangat kuat Sumber: Hasil Penelitian, 2021 (A) (B)
Gambar 2. Uji Potensi  Antibiotik. A. Kontrol (+) Kloramfenikol,  (B) Isolat KNU1 (Sumber: Data Primer, 2021)
Hasil  uji  potensi  antibiotik  dilihat  pada  tabel  3  dan  gambar  2  membuktikan  bahwa pada  perlakuan  A  (kontrol  positif)  yang  diberi  kloramfenikol  pada  media  yang  terdapat bakteri pathogen S. aureus dan E. coli memiliki respon daya hambat tergolong sangat kuat dengan  diameter  zona  bening  sebesar  270  mm,  dan  240  mm.  Sedangkan  hasil  uji  isolat KNU1  pada  bakteri  patogen  menunjukan  adanya  respon  daya  hambat  dengan  munculnya zona bening dengan diameter 14 mm pada S. aureus memiliki respon hambatan tergolong kuat  dan  7  mm  pada E.  Coli memiliki  respon  hambatan  tergolong  sedang.  Terbentuknya zona  bening  dikarenakan  adanya  penghambatan  senyawa  antibiotik  terhadap  sel-sel mikroba.
Diameter hambat tidak selalu naik sebanding dengan naiknya konsentrasi  antibiotik. Hal  ini  terjadi  karena  adanya  perbedaan  kecepatan  difusi  senyawa  antibiotik  pada  media agar,  jenis  dan  konsentrasi  senyawa  antibiotik  dari  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan. Secara  umum  kemampuan  menghambat  pertumbuhan  bakteri  disebabkan  faktor;  produksi antibiotik,  bakteriosin  (senyawa  protein  yang  memiliki  efek  bakterisida  terhadap
Zona bening
mikroorganisme  lain),  lisosom,  protease  dan  hidrogen  peroksida  atau  mempengaruhi  pH media dengan menghasilkan asam organik tertentu (Elifah, 2010).
Menurut Adam ddk, (2014), semakin besar zona hambat menunjukan bahwa senyawa antibiotik  tersebut  semakin  efektif  dalam  meghambat  pertumbuhan  mikroba  patogen. Walaupun demikian, zona hambat yang kecil tidak menunjukan bahwa senyawa antibiotik tersebut kurang efektif, akan tetapi konsentrasinya yang belum mencapai konsentrasi yang efektif  untuk  menghambat  pertumbuhan  mikroba  patogen.  Sari  dkk,  (2019)  mengatakan bahwa  senyawa  antibiotik  yang  dihasilkan  dari  air  rendaman  umumnya  memiliki  sifat penghambatan spectrum sempit yang artinya kemampuan penghambatan hanya terjadi pada tingkat  kekerabatan  yang  dekat  dengan  bakteri  penghasilan  antibiotik  sendiri  akan  tetapi beberapa  senyawa  antibiotik  dari  golongan  gram  positif  air  rendaman  memiliki  aktivitas penghambatan  spectrum  luas  dan  dapat  digunakan  untuk  memhambat  pertumbuhan patogen.
Adanya  aktivitas  senyawa  antibiotik  menghambat  pertumbuhan  sel-sel  bakteri patogen dengan mencegah sintesis peptidoglikan yang utuh, sehinggah dinding sel bakteri akan melemah dan akibatnya bakteri mengalami lisis (Sumual dkk, 2019).

## 4. Simpulan dan Saran

## Simpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  saya  tentang:  ‘’Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam Laktat  Pada  Air  Rendaman  Kacang  Tunggak  ( Vigna  unguiculata (L.)  Walp)  Berpotensi Sebagai Penghasil Antibiotik’’, maka diperoleh simpulan sebagai berikut :
1. Hasil  isolasi  BAL  pada  air  rendaman  kacang  tunggak  diperoleh  3  (tiga)  isolat  yaitu KNU1, KNU2, dan KNU3.
2. Hasil karakterisasi morfologi isolat secara makroskopis dan mikroskopis diketahui ke 3 isolat berukuran kecil, bentuk circular, elevasi convex, margin entire, warna koloni putih  susu,  termasuk  gram  positif,  tidak  dapat  membentuk  spora,  dan  bentuk  sel batang.  Sedangkan  karakterisasi  fisiologi  bersifat  non  motil  dan  katalase  negatif. Diduga ketiga isolat tersebut adalah Lactobacillus Sp.
3. Hasil pengujian potensi isolat BAL sebagai penghasil antibiotik diketahui isolat BAL mampu  menghambat  pertumbuhan E.  Coli dengan  diameter  zona  bening  sebesar  7 mm  dengan  respon  hambatan  pertumbuhan  tergolong  sedang.  Sedangkan  pada S. aureus diameter  zona  bening  sebesar  14  mm  dengan  respon  hambatan  pertumbuhan tergolong kuat.

## Saran
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  perlu  dilanjutkan  penelitian  lanjutan mengenai Bakteri Asam Laktat sampai ke tingkat molekuler.

## DAFTAR RUJUKAN
Amaliah,  Z.Z.N.,  Bahri,S.dan  Amelia,  P.  2018.  Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam Laktat Dari Limbah Cair Rendaman Kacang Kedelai. JFFI.2018;5(1) 253-257
Brooks,  G.F.,  Butel,  J.s.,  and  Morse,  S.A.  2005.  “Jawetz,  Melnick  &  Adelbergh’s: Mikrobiologi  Kedokteran”.  Buku  I,  Edisi  I,  Alih  Bahasa:  Bagian  Mikrobiologi, FKU Unair, Salemba Medika, Jakarta.
Djide, M.N., dan Wahyudin  E. 2008.  Isolasi  Bakteri  Asam  Laktat  Dari Air Susu Ibu  Dan Potensinya Dalam Penurunan Kadar Kolestrol Secara In Vintro. Vol. 12 (3): 73-78. Elifah, E. 2010. Uji Antibakteri Fraksi Aktif Ekstrak Methanol Dauk Sanggani (melastoma candidum,  D.Don)  Terhadap  Escherichia  coli  Dan  Bacillus  subtilis  Serta  Profil Kromatografi Lapis Tipisnya. Skripsi. FMIPA UNS. Surakarta.
Laily,  IN.,  Utami,  R.  dan  Widowati  E.  2013.  Isolasi  dan  karakterisasi  bakteri  asam  laktat penghasil  riboflavin  dari  produk  fermentasi  sawiasin.  Jurnal  aplikasi  teknologi pangan. Vol.2 (4):179-184
Putri,  D.M.  Budiharjo,A.dan  Kusdiyantini,  E.  2014.  Isolasi  Karakterisasi  Bakteri  Asam Laktat Dan Analisis Proksimat Dari Pangan Fermentasi Rusip Ikan Teri.
Rita,  W.S.,  2010.  Isolasi  Identifikasi  Dan  Uji  Aktifitas  Antibakteri  Senyawa  Golongan Tripenoid  Pada  Rimpang  Temu  Putih  (Curcuma  zedoaria  (Berg)  Roscoe).  Jurnal kimia FMIPA. Universitas Udayana. Bukit Jimbaran.
Sari,  M.T.,  Effendi,  I.,  Nursyirwani  2019.  Identifikasi  Bakteri  Penghasil  Antibiotik  Dari Mikrohabitat Ekstrim Di Ekosistem Mangrove Secara Molekuler Dan Aktivitasnya Terhadap Bakteri Patogen (Vibrio alginolyticus) Vol.9 No.2 Hlm.137-150. P-ISSN 2089-3469. e-ISSN 2540-9484.
Sine,  Y.  dan  Fallo,  G.  2017.  Isolasi  Bakteri  Asam  Laktat  Pada  Perendaman  Biji  Gude (Cajanus cajan (L) Millsp.)
Sumual, M.A., Fatimawali, Tallei E.T. 2019. Uji Antibakteri Dari BakteriAsamLaktat Hasil FermentasiSelada Romain (Laktuca sativa Var. longifoliaLam.) Vol.8. No.2.
Surono, IS. 2004. Probiotik Susu Fermentasi Dan Kesehatan. Tri CiptaKarya. Jakarta. Susilawati, S. 2016. IsolasidanKarakterisasiBakteriAsamLaktat (BAL) Dari Fermentasi Air CucianBeras.
Utami,  S.  2013.  Isolasi  Mikroba  Penghasil  Antibiotik  Dari  Air  Limbah  Pasar  Daya Kecamatan Biringkanaya.
Yoni,  S.,  Astuti.  Oktavia  B.  dan  Umniyati  S.  2010.  Isolasi  dan  karakterisasi  bakteri  asam laktat  dari  limbah  kotora  ayam  sebagai  agen  probiotik  dan  enzim  kolesterol reduktase. Biologi FMIPA UNY. Hlm.138-147