## Juni 2017

## Aktivitas Sitotoksik Daun Ceremai
Lili Andriani 1 , Yulianis 2 , Hestia Ningra 3 1,2,3 Program Studi Farmasi, STIKES Harapan Ibu, Jambi, Indonesia Email : liliandriani116@gmail.com

## Abstrak
Latar  Belakang :  Daun  ceremai  ( Phyllanthus  acidus) mengandung  flavonoid,  saponin,  tanin,  dan steroid.  Kandungan senyawa  tersebut diduga  memiliki  aktivitas sitotoksik pada  pengobatan kanker. Tujuan penelitian ini untuk menguji aktivitas sitotoksik daun ceremai.
Metode :  Untuk  skrinning  awal  antikanker  dilakukan  uji  aktivitas  sitotoksik  dengan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  menguji  aktivitas  sitotoksik  dari ekstrak etanol dan fraksi daun ceremai dengan menentukan besarnya nilai LC 50 selama 24 jam. Hasil : Nilai LC 50 tertinggi pada ekstrak etanol adalah sebesar 6,83 ppm, dan fraksi etil asetat adalah sebesar 8,27 ppm.
Kesimpulan :  Ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang  tinggi dibandingkan fraksi lainnya sehingga sangat aktif  berpotensi sebagai antikanker.
Kata Kunci : Phyllanthus acidus , Brine Shrimp Lethality Test , LC 50

## Abstract
Background  : The  secondary  metabolites  from  ceremai  leaves  are  flavonoids,  saponins,  tannins, and  steroids.  At  certain  levels  these  leave  have  cytotoxic  activity,  where  cytotoxic  is  used  in  the treatment of cancer. The aim of this research is determining of cytotoxic activity of ceremai leaves Method : For the first screening of anticancer can be with the cytotoxic activity test by Brine  Shrimp Lethality  Test  (BSLT)  method.  The  cytotoxic  activity  of  ethanol  extract  and  fractions  of  leaves ceremai with determining LC 50 values for 24 hours. Results: The testing of the  extract obtained the highest of LC 50 value of ethanol is 6,839 ppm and ethyl acetate fraction is 8,279 ppm.
Conclusion : The conclusion from this research that the extracted ethanol and ethyl acetate fraction have higher cytotoxic activity compared to other fractions so that very potential as anticancer.
Keywords : Phyllanthus acidus, Brine shrimp lethality test, LC 50

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang kaya akan keanekaragaman hayati, memiliki  berbagai  jenis  tumbuhan  yang dapat  dimanfaatkan  sebagai  tumbuhan obat.  Saat ini upaya pencarian bahan alam sebagai  bahan  baku  obat  terus  dilakukan. Salah  satu  tumbuhan  berkhasiat  obat  yaitu Phyllanthus acidus .
Phyllanthus  acidus merupakan salah  satu  tumbuhan  yang  termasuk  pada famili  Phyllanthaceae(1).  Tumbuhan  ini  di Indonesia  dikenal  dengan  nama  ceremai. Berbagai  senyawa  yang  dilaporkan  dari spesies  ini  antara  lain  alkaloid,  flavonoid, steroid,  fenol,  saponin,  tannin,  karbohidrat, minyak,  resin,  dan  glikosida(2)(3).  Ekstrak daun  ceremai    dilaporkan  mempunyai

## Riset Informasi Kesehatan, Vol. 6 No.1
berbagai  aktifitas  fisiologis  antara  lain sebagai  antimikroba,  antioksidan,  anti- inflamasi,  antimalaria,  dan  analgesik  (2) (4)(5)(6).
Saat  ini  pencarian  senyawa  aktif untuk  pengobatan  penyakit  kanker  terus dilakukan.  Adanya  berbagai  senyawa  pada tumbuhan  ceremai  diduga  akan  dapat berperan  sebagai    agen  antikanker.  Untuk itu akan dilakukan penelitian untuk  menguji efek  sitotoksiknya  dengan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) menggunakan larva udang(7).

## METODE
Bahan yang digunakan adalah daun ceremai  segar  berasal  dari  Kuala  Tungkal, Jambi.    Sebanyak  1  kg  daun  ceremai dibersihkan, lalu dirajang sampai halus.
Bahan  kimia  yang  digunakan  yaitu etanol 96%, n-heksan, etil asetat, n-butanol, hidrogen klorida, kloroform, amoniak, reagen  Mayer,  reagen  Wagner,  reagen Dragendorf,  asam  asetat,  magnesium, akuades, asam sulfat pekat, dimetil sulfoksida, larva udang, dan air laut.
Alat yang digunakan ialah timbangan  digital,  lampu  UV,  chamber, wadah  pembiakan  larva,  pipet  mikro Eppendorf , dan alat-alat gelas.

## Cara kerja
Daun  ceremai  segar  sebanyak  1  kg dimaserasi  dengan  etanol  96%.  Maserat kemudian difraksinasi menggunakan pelarut yang  berbeda  tingkat  kepolarannya  yaitu n-heksana (nonpolar), etil asetat (semipolar) dan n-butanol (polar).
Uji  fitokimia  dilakukan  pada  ekstrak dan  fraksi  daun  ceremai  terdiri  dari  uji alkaloid,  flavonoid,  tanin,  steroid  dan
saponin.  Uji  KLT  pada  ekstrak  dan  fraksi daun  ceremai  dilakukan  dengan  eluen n-heksana:etil asetat (7:3).
Pengujian aktivitas dilakukan dengan  3  ragam  konsentrasi,  yaitu  100, 250,   dan  500 ppm.    Ekstrak kental  etanol, fraksi  n-heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi air masing-masing dipipet berdasarkan konsentrasi yang telah ditentukan  kemudian  dimasukkan  kedalam vial  5  mL.  Pada  masing-masing  vial ditambahkan DMSO 100 µL dan ditambahkan  air  laut  ½  bagian  dari  batas vial  5  mL.  Kemudian  dimasukkan  10  larva udang  dan  diaduk  hingga  homogen  lalu inkubasi  selama  1x24  jam.  Lalu  dihitung larva  yang  mati  setiap  vial,  kemudian dihitung rata-rata kematian dari tiap pengenceran  dan dihitung persentase kematiannya.

## HASIL
Hasil  maserasi  1  kg  daun  ceremai didapatkan rendemen ekstrak kental sebanyak  97.83  g.  Kemudian  dari  40  g ekstrak kental didapatkan rendemen masing-masing  fraksi  dapat  dilihat  pada gambar 1.

## Gambar  1. Persen rendemen ekstrak dan fraksi daun ceremai
Uji  fitokimia  memperlihatkan  adanya beragam  metabolit  sekunder.  Pada  ekstrak
etanol  positif  mengandung  flavonoid,  tanin, saponin  dan  steroid.  Pada  fraksi  heksan memperlihatkan  adanya  senyawa  steroid. Fraksi  etil  asetat  menunjukkan  adanya steroid  dan  tanin.  Pada  fraksi  butanol terdapat flavonoid dan saponin. Sedangkan pada  fraksi  sisa  terdapat  flavonoid,  tanin dan saponin (Tabel 1)
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia
Untuk memonitor metabolit sekunder dari  masing-masing  ekstrak  dan  fraksi, maka  dilakukan  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT) dengan eluen heksan:etil asetat (7:3). Hasil KLT dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar  2.  Profil  KLT  ekstrak  dan  fraksi  daun ceremei
Nilai  LC 50 dari  hasil  uji  aktivitas sitotoksik  ekstrak  dan  fraksi  ditampilkan pada gambar 3 berikut.
Gambar  3.  Nilai  LC 50 ekstrak  dan  fraksi daun ceremei
Pada  gambar  3  di  atas  terlihat perbedaan  nilai  LC 50 pada  ekstrak  dan masing-masing fraksi. Suatu ekstrak dianggap  sangat  toksik  jika  nilai  LC 50 di bawah  30  ppm,  dianggap  toksik  jika  nilai LC 50 dalam  rentang  30-1000  ppm  dan dianggap  tidak  toksik  jika  nilai  LC 50 di  atas 1000 ppm (7).

## PEMBAHASAN
Uji Brine  Shrimp  Lethality  Test
(BSLT) digunakan untuk memprediksi senyawa  atau  ekstrak  yang  mempunyai aktivitas antikanker (7).
Kandungan berbagai metabolit sekunder  pada daun ceremai  diduga  dapat menyebabkan  kematian  pada  larva  udang.
Berbagai  penelitian  mengenai  uji  aktivitas sitotoksik pada larva udang banyak dilaporkan.  Ekstrak  metanol  daun  saga mempunyai sitotoksik terhadap larva udang dengan nilai LC 50 606, 73 ppm. Sifat toksik pada  daun  saga  diduga  disebabkan  oleh kandungan  senyawanya  yaitu  abrin  (8). Efek dari abrin diantaranya dapat mempertinggi  aktivitas  sel pembunuh alami baik pada sel normal maupun sel tumor (9).
Sampel Metabolit Sekunder Alkaloid Flavonoid Saponin Tanin Steroid Ekstrak Etanol - + + + + Fraksi Heksan - - - - + Fraksi Etil Asetat - - - + + Fraksi Butanol - + + - - Fraksi Sisa - + + + -
6.83 31.0 4 8.27 124,16 247.17 ppm
Pada ekstrak metanol daun  bongkal mempunyai sifat sitotoksik dengan nilai LC 50 363  ppm.  Kemampuan  sitotoksik  ekstrak tumbuhan  ini  diduga  karena  pengaruh  dari senyawa yang ada pada tumbuhan tersebut (10).
Beberapa  hasil  penelitian  mengenai uji BSLT yang memiliki  nilai  LC 50 di bawah 20 µg/ml berkemungkinan memiliki senyawa  yang  bersifat  antikanker  (11)(12). Diantaranya  dari  crude  ekstrak  daun Phyllanthus amarus memiliki nilai LC 50 9.15 µg/ml(13), Phyllanthus engleri memiliki nilai LC 50 0.47  µg/ml(12),  dan  dari  tumbuhan  ini berhasil  diisolasi  senyawa  yang  bersifat antikanker  dari    golongan  seskuiterpen, Englerin A (14).
Hasil  LC 50 menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  memiliki  nilai  LC 50 6,83  ppm dan  fraksi  etil  asetat    memiliki  nilai  LC 50 8.27.  Keduanya  termasuk  dalam  kategori sangat  toksik,  sedangkan  fraksi  heksan, fraksi  butanol  dan  fraksi  sisa    termasuk kedalam  kategori  toksik  karena  memiliki nilai LC 50 direntang 30-1000 ppm.
Hasil  BSLT  juga  bisa  dijadikan indikasi untuk pencarian senyawa antikanker  dari  tumbuhan,  semakin  kecil nilai  LC 50, semakin  tinggi  tingkat  toksisitas senyawa  tersebut  dan  terdapat  korelasi antara  sitotoksitas  dengan  letalitas  larva udang pada    ekstrak  tumbuhan  (15).  Nilai LC 50 yang  sangat  kecil  menunjukkan aktivitas ekstrak uji yang berpotensi sebagai antikanker.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat paling berpotensi sebagai antikanker karena memiliki nilai LC 50 di bawah 30 ppm.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang  lebih tinggi  dalam  membunuh  larva  udang dibandingkan fraksi lainnya, sehingga ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  sangat berpotensi sebagai antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Devi  SS,  Paul  SB.  An  Over  View  on Cicca  acida  (Phyllanthus  acidus).  Biol Environ Sci. 2011;7(I):156 –60.
2.  A.Jagajothi1 GM, V.K. Evanjelene, A.Nirmala.  Antimicrobial  Activity  and phytochemical  analysis  of  Phyllanthus acidus. J Today’s Biogical Sicences Res &Review. 2013;2(2):55 –62.
3.  Rahman  MM,  Habib  MR,  Hasan  SMR, Sayeed  MA,  Rana  MS.  Antibacterial, cytotoxic  and  antioxidant  potential  of methanolic  extract  of  phyllanthus  acidus L. Int J Drug Dev Res. 2011;3(2):154 –61.
4.  Jain, N.K and A.K S. Protective effects of Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels  leaf extracts on acetaminophen and thioacetamide  induced hepatic  injuries in Wistar  rats.  Asian  Pac  J  Trop  Med. 2011;4(6):470 –4.
5.  Raja  chakraborty,  Biplab  De,  Nayakanti
Devanna S Sen. Antiinflammatory, antinonciceptive and antioxidant activities of  phyllanthus  acidus  extracts.  Asian Pacific Jourrnal Trop Biomed. 2012;953 –
61.
6.  A. Bagavan, A. A. Rahuman, C. Kamaraj, N.  K.  Kaushik,  D.  Mohanakrishnan  and DS.  Antiplasmodial  activity  of  botanical extracts  against  Plasmodium  falciparum. Parasitol Res. 2011;108(5):1099 –109.
7.  Meyer B, Ferrigni N, Putnam J, Jacobsen L,  DE.Nichols,  JL.McLaughlin.  Brine Shrimp:  A  Convenient  General  Bioassay for  Active  Plant  Constituents.  Planta Med. 1982;45(05):31 –4.
8.  Juniarti  od,  yarsi.  Kandungan  Senyawa Kimia , Uji Toksisitas           (Brine Shrimp Lethality  Test)  Dan  Antioksidan  (1,1- Diphenyl-2-Pikrilhydrazyl)  Dari  Ekstrak

## Juni 2017
Daun  Saga  (  Abrus  precatorius  L). Macara Sains. 2009;13(1):50 –4.
9.  Ramnath V, Kuttan G KR. Effect of abrin on  cell-mediated  immune  responses  in mice.Immunopharmacol  Immunotoxicol. 2006;28(2):259 –68.
10.  Asmiyarti  NI,  Wibowo  MA.  Metode  Bslt Pada  Ekstrak  Metanol  Daun  Bongkal ( Nuaclea subdita  ( Korth ) Steud ). JKK. 2014;3(4):58 –62.
11.  Moshi  MJ,  Cosam  JC,  Mbwambo  ZH, Kapingu M, Nkunya MH. Testing beyond ethnomedical claims: brine shrimp lethality  of  some  Tanzanian  plants. Pharm Biol. 2004;42(7):547 –51.
12. Moshi MJ,  Mbwambo  ZH,  Nondo  RSO, Masimba  PJ,  Kamuhabwa  A,  Kapingu MC,  et  al.  Evaluation  of  ethnomedical claims and brine shrimp toxicity of some
plants  used  in  Tanzania  as  traditional medicines. African J Tradit Complement Altern Med. 2006;3(3):48 –58.
13. Lira DN, Uddin MA, Uddin M, Rouf ASS.
Assessment of cytotoxic activities of Phyllanthus  amarus  and  Monstera deliciosa. J Appl Pharm Sci. 2014;4(7):110 –3.
14.  Wen B, Lampe JN, Roberts AG, Atkins WM,  Rodrigues  a  D,  Nelson  SD.
Englerin  A,  a  Selective  Inhibitor  of
Renal  Cancer  Cell  Growth,  from Phyllanthus engleri. Org Lett. 2007;454(1):42 –54.
15.  Carballo  J,  Hernández  Z,  Pérez  P, García  M.  A  comparison  between  two brine  shrimp  assays  to  detect  in  vitro cytotoxicity  in  marine  natural  products. BMC Biotechnol. 2002;2:17.