## PROFIL GUGUS FUNGSIONAL DAN MASA MOLEKUL EKSTRAK KASAR HIPOKOTIL
Bruguiera gymnorhiza (L) Lamk. FASE MATANG ( mature phase )
Sri Handayani
Fakultas Pertanian, Universitas Tribhuwana Tunggadewi Malang E-mail : sri.handayani@unitri.ac.id handa2308@gmail.com

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  adalah  untuk  mengetahui  profile  gugus  fungsional  dan  massa  molekul  senyawa  yang terdapat  pada  ekstrak  kasar  metanol,  etanol,  aseton  dan  n-heksana  hipokotil Bruguiera  gymnorhiza warna  hijau (umur 77 HSA), hijau-ungu (umur 89 HSA) dan ungu (umur 107 HSA).Profile gugus fungsional pada penelitian ini dilakukan dengan Fourier Transform Infra Red (FTIR) dan profile massa molekul dengan Liquid Chromatografi-Mass Spectra (LCMS).  Hasil  analisa  dengan  FTIR  menginformasikan  bahwa  gugus  fungsional  dengan  serapan  puncak kuat   adalah  metil,  metilen, keton, aldehid,  eter,  alkohol  dan  ester.  Ekstrak aseton  hipokotil B. gymnorhiza warna ungu  memiliki  sebaran  senyawa  bioaktif  lebih  beragam    dibanding  ekstrak  metanol,  etanol,  dan  n-heksan.  Hasil analisa  LC-MS  menginformasikan  bahwa  profile  massa  molekul  tergambarkan  sebagai  puncak  relative.  Puncak relatif  ekstrak  metanol  hipokotil  hijau,  hijau-ungu  dan  ungu  adalah  sama,  yaitu  217,03;  410,93;  322,88;  364,94; 232,99; 306,90; 388,85; dan 203,02 m/z. Puncak relatif ekstrak etanol hipokotil hijau, hijau-ungu dan ungu adalah sama,  yaitu  217,03;  410,93;  203,02;  233,00;  dan  396,93  m/z.  Puncak  relatif  ekstrak  aseton  hipokotil  warna  ungu lebih  beragam  dibandingkan  warna  hijau  dan  hijau  ungu.  Puncak  relatif  802,70;  604,87,  dan  428,90  m/z  hanya muncul pada hipokotil warna ungu, sedangkan puncak relatif 413,08; 149,04,  dan 163,04 m/z terdeteksi di ketiga hipokotil. Puncak relatif ekstrak n-heksan menunjukkan bahwa semakin hipokotil berwarna ungu sempurna, semakin beragam. Puncak relatif 274,16; 413,03; 149,01 m/z muncul pada ketiga warna hipokotil, 338,21; 360,16; 429,15; 469,14; dan 165,09 m/z muncul pada hipokotil warna hijau-ungu dan ungu, sedangkan 230,17 dan 163,03 m/z hanya terdeteksi pada hipokotil warna hijau, dan 592,89 m/z hanya terdeteksi pada warna ungu. Diduga nilai puncak dasar atau puncak relatif yang terdeteksi pada spektrum massa pada ekstrak metanol dan etanol hipokotil B. gymnorhiza adalah  sebagian  dari  fragmen  senyawa  metabolit  sekunder  alkaoid,  fenol/polifenol,  steroid,  antosianin,  terpenoid, flavonoid,  tanin  dan  saponin, sedangkan  ekstrak  aseton  dari  golongan  fenol  dan  flavonoid,  ekstrak  n-heksan  dari golongan terpenoid dan steroid.
Key word: FTIR, LC-MS, ekstrak kasar hipokotil B. gymnorhiza fase matang.
PENDAHULUAN Hipokotil Bruguiera  gymnorhiza merupakan buah mangrove yang mempunyai kandungan enenrgi cukup  tinggi  sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai sumber  bahan  pangan  alternatif.  Handayani  (2016), menginformasikan  bahwa  komponen  kimia  hipokotil B.  gymnorhiza berwarna  hijau,  hijau-ungu  dan  ungu sebagai  berikut:  air  (62,55;  61,95;  dan  61,90%bk), protein  (1,61;  1,85;  dan1,91%),  lemak  (0,37;  0,38; dan 0,19%), abu (1,39; 1,05; dan 1,10%), pati (17,94; 18,43; dan18,45%), amilosa (0,41; 0,40 dan 0,39%), amilopektin  (17,53;  18,03;  dan  18,06%),  serat  kasar (2,65;  2,79;  dan  2,93%),  pektin  (0,94;  0,87;  dan
0,76%  sebagai  asam  pektat),  tanin  (4,49;  4,94;  dan
3,54%),  dan  HCN  (16,92;  15,88;  dan12,71  ppm). Lebih  lanjut  laporan  penelitian  Bandanaranayake (1994)  mengemukakan  bahwa B.  gymnorhiza mengandung  metabolit  sekunder  golongan  polifenol, flavonoid,  tanin,  alkaloid,  saponin,  dan  triterpenoid, beberapa  senyawa  yang  tergolong  metabolit sekunder  tersebut  berperan  mempunyai  fungsi sebagai  antioksidan..  Berdasarkan  hal  tersebut hipokotil B. gymnorhiza dapat dikembangkan sebagai pangan fungsional.
Sebagai  langkah  awal  penelitian  pangan fungsional,  perlu  adanya  informasi  profile  senyawa- senyawa  yang  terdapat  dalam  hipokotil.  Selama perkembangan hipokotil B. gymnorhiza , fase matang
merupakan  perkembangan  fase  yang  paling  baik digunakan sebagai bahan pangan. Pada fase matang hipokotil B. gymnorhiza mengalami perubahan warna hipokotilnya. Perubahan warna tersebut menunjukkan adanya  perubahan  senyawa  yang  terdapat  pada hipokotil.  Gambaran  kasar  senyawa  secara sederhana  untuk  menginformasikan  hal  tersebut dapat  dilakukan  dengan  mengetahui  gugus fungsional  dengan  analisa Fourier  Transform Infra Red (FTIR) dan massa molekul dengan analisa Liquid Chromatografi-Mass Spectra (LC-MS) hipokotil selama fase matang.
FTIR  merupakan  salah  satu  instrumen  yang menggunakan  prinsip  spektroskopi.  Spektroskopi adalah  spektroskopi  inframerah  yang  dilengkapi dengan  transformasi  fourier  untuk  deteksi  dan analisis hasil  spektrumnya (Anam. 2007). Spektroskopi  inframerah  berguna  untuk  identifikasi senyawa  organik  karena  spektrumnya  yang  sangat kompleks  yang  terdiri  dari  banyak  puncak-puncak (Chusnul. 2011). Selain itu, masing-masing kelompok fungsional menyerap sinar inframerah pada frekuensi yang  unik.  Dengan  menggunakan  FTIR  perbedaan gugus fungsi yang terdapat dalam ekstrak hipokotil B. gymnorhiza selama fase matang dapat diketahui.
LC-MS  berfungsi  untuk  memisahkan beberapa  senyawa  atau  campuran  senyawa berdasarkan kepolarannya
(prinsip kerja kromatografi),  setelah  campuran  senyawa  tersebut terpisah,  maka  senyawa  yang  murni  akan diidentifikasi berat molekulnya. Data yang didapatkan adalah  bobot  molekul  ditambah  beberapa  muatan dan  bobot  molekul  pelarut  (Faust,  1998;  Kosela, 2010).  (LC-MS)  memadukan daya pemisahan  HPLC untuk  bahan  dengan  bobot  molekul  besar  dengan kemampuan MS untuk mendeteksi dan mengkonfirmasikan  identitas molekul  secara  selektif. Supratman  (2010)  menambahkan  bahwa  spektrum massa  dipaparkan  sebagai  grafik  batangan.  Setiap puncak  dalam  spektrum  menyatakan  suatu  fragmen molekul.  Fragmen-fragmen  disusun sedemikian  rupa sehingga  puncak-puncak  ditata  menurut  kenaikan m/z  dari  kiri  ke  kanan  dalam  spektrum.  Intensitas puncak  sebanding  dengan  kelimpahan  relatif
fragmen-fragmen.  Puncak  tertinggi  dalam  suatu spektrum  disebut  puncak  dasar  ( base  peak ),  diberi intensitas sebesar 100%, sedangkan puncak-puncak lebih  kecil  dilaporkan  sebagai  20%,  30%,  menurut nilai  relatifnya  terhadap  terhadap  puncak  dasar. Kadang-kadang  puncak  dasar  disebabkan  oleh  ion molekul,  tetapi  sering  berasal  dari  suatu  fragmen yang lebih kecil.
Tujuan  penelitian    untuk  memberi  informasi profile  gugus  fungsional  dan  massa  molekul  yang terdapat  pada  ekstrak  kasar metanol,  etanol,  aseton dan  n-heksan  hipokotil B.  gymnorhiza warna  hijau, hijau-ungu dan ungu selama fase matang.
Manfaat penelitian adalah hasil profile gugus fungsional dan  massa  molekul  dari berbagai  ekstrak kasar  dengan  tingkat  kepolaran  berbeda  hipokotil warna  hijau,  hijau-ungu  dan  ungu  dapat  digunakan sebagai informasi dasar penelitian lanjutan, misalnya karakter  senyawa  bioaktif  dalam  pengembangan pangan  funsional,  isolasi  senyawa  bioaktif  yang berfungsi  sebagai  antioksidan,  senyawa  anti  kanker, dan sebagainya.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat Penelitian
Bahan  utama  penelitian  adalah  hipokotil B. gymnorhiza (L)  Lamk, diambil  dari  tanaman B. gymnorhiza yang tumbuh di wilayah pesisir kawasan hutan  mangrove  di  Desa  Sawohan,  Kabupaten Sidoarjo,  Jawa  Timur,    pada  lahan  dengan  salinitas air antara 8 - 20 ‰, dan pH air antara 7,41 – 7,49). Hipokotil  yang  digunakan  pada  kondisi  matang fisiologis  ( mature ),  dan  terdiri  atas  3  jenjang  warna kulit  hipokotil,  yaitu  hijau  tua  (dari  ujung  sampai pangkal  hipokotil  berwarna  hijau  merata),  umur  77 Hari setelah Antesis (HSA)), hijau-ungu (bagian ujung hipokotil berwarna ungu dan bagian pangkal hipokotil berwarna hijau dengan perbandingan + 50 : 50), umur 89  HSA,  dan  ungu  (dari  ujung  hipokotil  sampai pangkal  hipokotil  berwarna  ungu  merata),  umur  107 HAS.
Bahan  kimia  yang  digunakan  untuk penelitian adalah katagori PA (Pro Analisis) meliputi,
metanol,  etanol,  aseton,  n-heksan,    kalium  bromide, dan larutan deuterium.
Peralatan  untuk  penelitian  meliputi  oven listrik  (Memmert),  desikator, rotary  vacuum evaporator (tipe  144  Buchi),  timbangan  analitik (Shimadzu), timbangan digital (Precia), corong gelas, pipet ukur 1 ml, erlenmayer (100, 250, 500, dan 1000 ml),  gelas  ukur  10,  dan  100  ml,  seperangkat spektrofotometer  infra  red (IR.  Prestige  ),  dan seperangkat alat LC-MS (Hitachi L 6200, system ESI, positive ion mode)
Persiapan sampel:
Hipokotil B. gymnorhiza yang diperoleh dari lokasi penelitian dibawa ke laboratorium untuk segera disortasi  dari  cacat  dan  busuk,  dicuci,  selanjutnya dikelompokan  ( grading )  berdasarkan  warna    kulit hipokotil dalam kelompok hijau, hijau-ungu, dan ungu. Selama  persiapan  sampel  untuk  uji  parameter, sampel hipokotil disimpan dalam keadaan vakum dan disimpan  di  ruang  pendingin  pada  suhu  +  15 ⁰ C. Selanjutnya dibawa ke Laboratorium  Teknologi Hasil Pertanian,  Fakultas  Teknologi  Pertanian  Universitas Brawijaya.

## Pembuatan ekstrak kasar
Ekstraksi  sampel  dilakukan  dengan  metode maserasi  tunggal  dengan  pelarut  organik  sesuai perlakuan  percobaan.  Prinsip  maserasi  adalah ekstraksi  zat  bioaktif  yaitu  dengan  cara  merendam serbuk  simplisia  atau  sampel  dalam  pelarut  (1:5) yang  sesuai  selama  3  x  24  jam  dalam  wadah  gelap dan  tertutup.  Selama  maserasi,  sampel  diletakkan dalam  ruangan  gelap.  dan  penggantian  pelarut dilakukan  setiap  24  jam.  Hasil  maserasi  disaring dengan  penyaring  hampa  agar  diperoleh  filtrat  dan residu. Filtrat hasil maserasi hari pertama, kedua dan ketiga  dikumpulkan  dan  dievaporasi  menggunakan vacuum  rotary  evaporator dengan  kemiringan  30 ⁰ terhadap  meja  percobaan.  Pemanas  penangas  air diatur  pada  suhu  40 ⁰ C.  Evaporasi  dihentikan  saat distilat  pelarut  sudah  tidak  menetes  lagi  pada  labu penampungan. Hasil ekstrak kasar ditampung dalam botol  kaca  gelap  dan  disimpan  pada  suhu  +  4 ⁰ C. Selanjutnya  ekstrak  kasar  dari  masing-masing
perlakuan  dianalisa  FTIR  di  Laboratorium  Kimia, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Brawijaya, Malang,  dan analisa LCMS di Laboratorium  Puspitek  Kimia,  LIPI  Serpong Tangerang.

## Analisa FTIR dan LCMS
Identifikasi  gugus  fungsional  dilakukan dengan  membuat  ekstrak  hipokotil  menggunakan pelarut  metanol,  etanol,  aseton  dan  n-heksan, selanjutnya  ekstrak  yang  diperoleh  diidentifikasi menggunakan  spektrofotometer  infra  merah  (IR.) Hasil  spektrum  FTIR  dianalisa  dengan infrared spectroscopy correlation table.
Identifikasi  massa  molekul  ekstrak  kasar hipokotil B.  gymnorhiza digambarkan  dengan  pola “ base peak” dari massa senyawa hasil kromatogram Liquid  Chromatography  -  Mass  Spectroscopy (LC- MS).  Kromatogram  masing-masing  perlakuan percobaan  kemudian  diamati,  dan  didiskripsikan secara rinci.

## HASIL DAN  PEMBAHASAN Profile Gugus Fungsional  dengan FTIR
Identifikasi  gugus  fungsional  ekstrak  kasar hipokotil B.  gymnorhiza dengan  spektroskopi  infra merah  (IR)  dimaksudkan  untuk  identifikasi    gugus fungsional  suatu  senyawa  bioaktif.  Keberadaan gugus  fungsional  tertentu  ditunjukkan  oleh  bilangan gelombang  tertentu,  yang  merupakan  hasil  transisi antara  tingkat  energi  vibrasi  (getaran)  dari  setiap interaksi  atom    dalam  suatu  molekul,  baik  berupa vibrasi  bengkokan ( bending )  ataupun  vibrasi rentangan ( stretching ).
Dalam  penelitian  ini  serapan  gugus fungsional  pada  rentang  wilayah  1  yaitu  pada bilangan  gelombang  4.000  –  2.500  cm -1 puncak serapan yang kuat diberikan oleh gugus amida primer (-CO-NH 2 ),  alkana  metil  (-CH 3 )  dan  metilen  (-CH 2 ). Pada  rentang  wilayah  2,  yaitu  pada  bilangan gelombang  2.500  -  2000  cm -1 tidak  terdapat  puncak serapan.  Sedangkan  pada  rentang  wilayah  3,  yaitu pada bilangan gelombang 2000 - 1.500 cm -1 puncak serapan  kuat  dimunculkan  oleh  cincin  aromatik,  dan
rentang wilayah 4 (bilangan gelombang  1.500 - 400 cm -1 ), yaitu daerah sidik jari,  maka puncak serapan cukup  kuat  dimunculkan  oleh  gugus  alkohol  (-OH), eter  (R-OR’),  karboksilat  (R-COOH),    aldehida  (R- CHO)  dan  ester  (R-CO-OR’)  [Gambar  1(a),  (b),  (c), dan Tabel 1
Hasil  spektrum  FTIR  ekstrak  metanol, etanol,  aseton,  dan  n-heksan  hipokotil  warna  hijau, hijau-ungu,  dan  ungu  disajikan  pada  Tabel  1. Berdasarkan  Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  dalam ekstrak metanol gugus fungsional yang muncul pada hipokotil  warna  hijau,  hijau-ungu  dan  ungu  adalah sama, yaitu amida primer (-CO-NH 2 ), metilena (-CH 2 ), metil (-CH 3 ), aldehid (R-CHO), ester (R-CO-OR'), eter (R-OR')  dan  alkohol  (R-OH).  Pada  ekstrak  etanol, keberadaan gugus fungsional aldehid, eter dan ester pada  hipokotil  warna  hijau  tidak  muncul,  demikian pula  aldehid  pada  hipokotil  warna  hijau-ungu,  dan
eter  pada  hipokotil  warna  ungu.  Gugus  fungsional ester  dan  eter  hanya  muncul  pada  hipokotil B. gymnorhiza warna  hijau-ungu  dan  ungu,  Pada ekstrak  aseton,  hipokotil  warna  ungu,  gugus fungsional  yang  muncul  lebih  beragam  dibanding warna  hijau  dan  hijau-ungu,  gugus  fungsional tersebut meliputi: asam karboksilat (R-COOH), keton (R-CO-R'), dan alkil halida (R-X), yaitu pada panjang gelombang 1699,17;  1608,52; 1363,58 dan 1317,29 cm -1 . Gugus fungsional aldehid (R-CHO) masih tetap muncul  (seperti  pada  hipokotil  warna  hijau-ungu), demikian  pula    gugus  fungsional  amida,  metil, metilena,  ester,  dan  alkohol  (seperti  pada  hipokotil warna  hijau).  Ekstrak  n-heksan  hipokotil  warna  hijau lebih  beragam  dibandingkan  warna  hijau-ungu  dan ungu, hal  ini  dikarenakan  pada  hipokotil  warna hijau gugus  fungsional  ester,  eter  dan  alkohol  masih muncul,  disamping  gugus  fungsional  amida,  metal, dan metilena.
Bilangan  gelombang (cm -1 ) In te n s ita s (% ) Keterangan :  (a) Hipokotil warna hijau
----- : ekstrak  metanol, ---- : etanol, ----- : aseton, ---- : n-heksan (a) In te n s ita s (% )
Gambar 1. Hasil spektrum infra merah (FTIR) ekstrak metanol, etanol,  aseton, dan n-heksan hipokotil B. gymnorhiza warna hijau (a), hijau-ungu (b), dan ungu (c)
Gugus  fungsional  hidroksil  (-OH),  eter  (R- OR'),  dan  keton  (R-CO-R')  merupakan  gugus fungsional  yang  banyak  terdapat  pada  senyawa golongan alkaloid, fenol/polifenol, flavonoid, terpenoid, saponin pada karbon siklisnya, dan alkana [metil  (-CH 3 ),  dan  metilen  (-CH 2 )]  sebagai  karbon alifatisnya. Sedangkan gugus fungsional ester (R-CO- OR')  pada  umumnya  terdapat  pada  golongan senyawa aromatik (Robinson, 1995). Hal ini dikuatkan oleh  pendapat  Jacoeb dkk. .  (2013)  bahwa  ekstrak metanol  hipokotil B.  gymnorhiza mengandung senyawa  golongan  steroid,  flavonoid,  alkaloid,
saponin,  fenol    hidroquinon  dan  tanin.  Selanjutnya Tiwari et  al .  (2011)  memberikan  informasi  bahwa ekstrak    metanol,  pada  umumnya  mengandung senyawa  golongan  antosianin,  terpenoid,  saponin, polifenol, flavonoid, lakton, santilin dan tanin. Ekstrak etanol  mengandung  senyawa  golongan  tanin, saponin,  polifenol,  sterol,  alkaloid  dan  poliasetilen. Ekstrak aseton mengandung senyawa golongan fenol dan  flavonoid.  Bano  (2007)  menambahkan  bahwa ekstrak  n-heksan  mengandung  senyawa  golongan terpenoid dan steroid.
Bilangan  gelombang (cm -1 ) In te n s ita s (% ) Keterangan : (c) Hipokotil warna ungu,
----- : ekstrak  metanol, ---- : etanol,
----- : aseton, ---- : n-heksan
(c)
Tabel  1 . Bilangan gelombang dan jenis gugus fungsional ekstrak hipokotil B. gymnorhiza warna hijau, hijau-ungu, dan ungu pada pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda
Jenis pelarut Hipokotil warna hijau Hipokotil warna hijau-ungu Hipokotil warna ungu Bilangan gelombang (cm-1) Jenis  gugus fungsional Bilangan gelombang (cm-1) Jenis  gugus fungsional Bilangan gelombang (cm-1) Jenis  gugus fungsional Metanol 3357,84; 1610,45 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 3319,26 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 3357,84; 1610,45 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 2923,88 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2923,38 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2948,96 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2842,88; 1442,66 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2734,87 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2842,88; 1442,66 Alkana: Metil (-CH 3 ) 1527,52 Aromatik 1525,59 Aromatik 1529,45 Aromatik 1355,86 Aldehida (R-CHO) 1350,08; 1323,08 Aldehida (R- CHO) 1348,15 Aldehida (R-CHO) 1288,36 Ester (R-CO-OR') 1286,43 Ester (R-CO-OR') 1288,36 Ester (R-CO-OR') 1253,64; 1205,43; 1010,63 Eter (R-OR')  1205,43; 1008,7 Eter (R-OR') 1255,57; 1205,43; 1108,99; 1053,06; 1012,56 Eter (R-OR') 1108,99; 1053 Alkohol: sekunder (-CHROH), primer (R-OH) 1108,99; 1047,27 Alkohol: sekunder (-CHROH), primer (R-OH) 1147,57 Alkohol tertier (-CR 2 -OH) 825,48; 730,97 Alkil halida (R-X)
Lanjutan Tabel 1 .Bilangan gelombang dan jenis gugus fungsional ekstrak hipokotil B. gymnorhiza warna hijau, hijau- ungu, dan ungu pada pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda
Jenis pelarut Hipokotil warna hijau Hipokotil warna hijau-ungu Hipokotil warna ungu Bilangan gelombang (cm-1) Jenis gugus fungsional Bilangan gelombang (cm-1) Jenis gugus fungsional Bilangan gelombang (cm-1) Jenis gugus fungsional Etanol 3332,76 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 3330,84 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 3353,98; 1610,45 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 2939,31 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2937,38 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2937,38 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2846,74; 1440,73 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2829,38; 1440,73 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2844,81; 1442,66 Alkana: Metil (-CH 3 ) 1608,52; 1107,06 Alkohol: primer (R-OH), 1608,57; 1145,64 Alkohol: primer (R-OH), 1348,15 Aldehida ( R-CHO)
sekunder (-CHROH) tertsier (-CR2-OH) 1525,59 Aromatik 1525,59 Aromatik 1288,36; 1251,72 Ester (R-CO-OR') 1249,79 Ester (R-CO-OR') 1205,43; 1047,27; 1008,7 Eter (R-OR') 1205,43 Eter (R-OR') 1145,64; 1108,99 Alkohol: tertier (-CR 2 -OH), sekunder (C-OH)
Lanjutan Tabel 1 .Bilangan gelombang dan jenis gugus fungsional ekstrak hipokotil B. gymnorhiza warna hijau, hijau- ungu, dan ungu pada pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda Jenis pelarut Hipokotil warna hijau Hipokotil warna hijau-ungu Hipokotil warna ungu Bilangan gelombang (cm-1) Jenis gugus fungsional Bilangan gelombang (cm-1) Jenis gugus fungsional Bilangan gelombang (cm-1) Jenis gugus fungsional Aseton  3355,91 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 3353,98 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 3360,12 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 2954,74 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2929,67; 2856,38; 1610,45; 1519,8 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 2954,74; Alkana: Metil (-CH 3 ) 2927,74: 2854,45; 1610,45 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 1444,58 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2927,74; 2854,45 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 1286,43 Ester (R-CO-OR') 1361,65 Nitro (-NO 2 ) 1731,96 Lakton 1271,00; 1205,43 Eter (R-OR') 1253,64; 1203,5; 1047,27 Eter (R-OR') 1699,17 Asam Karboksilat ( R-COOH ) 1112,85 Nitro (-NO 2 ) 1145,64;
1107,06
Alkohol: tertier (-CR 2 OH ), sekunder (-CHROH ) 1608,52 Keton (R-CO-R') 1051,13 Alkohol: primer (-CH 2 OH) 1446,57 Aromatik 1363,58; 1340,43 Aldehida (R-CHO) 1317,29 Alkil Halida (R-X) 1286,43 Ester (R-CO-OR') 1145,64 Alkohol: tersier (-CR 2 OH)
Lanjutan Tabel 1 . Bilangan gelombang dan jenis gugus fungsional ekstrak hipokotil B. gymnorhiza warna hijau, hijau- ungu, dan ungu pada pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda Jenis pelarut Hipokotil warna hijau Hipokotil warna hijau-ungu Hipokotil warna ungu Bilangan gelombang (cm- 1 ) Jenis gugus fungsional Bilangan gelombang (cm- 1 ) Jenis gugus fungsional Bilangan gelombang (cm- 1 ) Jenis gugus fungsional n-heksan 3355,91 Amida Primer (-CO-NH 2 ) 2956,67; 2925,81; 2854,45 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2962,46; 2925,81; 2854,45 Alkana: Metil (-CH 3 ) 2954,74 Alkana: Metil (-CH 3 ) 1463,87 Alkana: Metilena (-CH2-); Aromatik 1463,87 Alkana: metilena (-CH 2 -); Aromatik 2927,74; 2854,45; 1610,45 Alkana: Metilena (-CH 2 ) 1170,71 Eter (R-OR') 1286,43 Ester (R-CO-OR') 1271,00; 1205,43 Eter (R-OR') 1145,64; 1051,13; 1051,13 Alkohol: primer (R-OH) 1112,85 Nitro ( -NO 2 )
Keterangan:  Hasil  pembacaan  berdasarkan  korelasi  spektrum  infra  merah  gugus  fungsional  molekul  organik (William and Flemming,1980)

## Profile Massa Molekul dengan LC-MS
Analisa  spektrum  LC-MS  ekstrak  hipokotil B. gymnorhiza diperoleh  dari Biospectrometry  Mariner yang  dilengkapi  dengan  pompa  “biner”.  LC-MS tersebut  dihubungkan  dengan  spektrometer  massa Q-tof yang dilengkapi dengan sumber ESI mode full- scan    100  -  1200  m/z.  Spektrum  massa  yang dipaparkan  ditampilkan  sebagai  grafik  batangan. Setiap  puncak  dalam  spektrum  menyatakan  suatu fragmen  molekul.  Fragmen  molekul  tersusun sedemikian  rupa  sehingga  puncak-puncak    tertata menurut kenaikan m/z dalam spektrum dari arah kiri ke  kanan.  Puncak  tertinggi  dalam  suatu  spektrum disebut puncak dasar ( base peak ), dan nilai intensitas terbesar 100%, sedangkan puncak-puncak yang lebih rendah dilaporkan setara 20%, 30%, dan seterusnya
menurut  nilai  relatifnya  terhadap  puncak  dasar tertinggi (Gambar 2).
Hasil  spektrum  massa  dalam  penelitian  ini dilaporkan  berdasarkan  puncak  dasar  (base  peak) sesuai dengan full-scan kromatogram masing-masing ekstrak yang bisa dideteksi oleh spektrometer massa ( system  Elektrospray  Ionisation,  Positive  ion  mode ). Hasil spektrum LC-MS ekstrak kasar metanol, etanol, aseton  dan  n-heksan  dari  hipokotil B.  gymnorhiza disajikan  pada  Gambar  2.  Hasil  full-scan kromatogram Gambar 2. menunjukkan bahwa puncak dasar (base peak) ekstrak kasar metanol hipokotil B. gymnorhiza  memberikan  puncak  dasar  sama,  yaitu 217,00 m/z, area puncak dasar hipokotil warna hijau lebih  luas    daripada  hipokotil  wara  hijau-ungu  dan ungu (Lampiran 2.13, 2.17, dan 2.21).
Gambar 2. Hasil full-scan kromatogram LCMS ekstrak metanol (hitam), etanol (merah), aseton (biru), n-heksan (hijau) hipokotil B. gymnorhiza warna hijau (a), hijau-ungu (b), dan ungu (c).
Ekstrak  kasar  etanol  memberikan  puncak dasar  yang  lebih  beragam  pada  hipokotil B. gymnorhiza warna hijau, berturut-turut adalah 268,00; 217,00;  413,10;  dan  338,20  m/z.  Pada  ekstrak aseton dan n-heksan, warna hipokotil B. gymnorhiza makin  ungu,  memberikan  puncak  dasar  makin beragam.  Untuk  puncak  dasar  ekstrak  aseton
hipokotil  warna  ungu  berturut-turut  adalah  217,00; 344,90; 456,90; dan 413,00 m/z,  dan untuk puncak dasar ekstrak n-heksan hipokotil warna ungu berturut- turut  adalah  274,20;  413,10;  592,90;  338,20;  dan 429,10  m/z.  Demikian  pula  hasil  full-scan kromatogram  untuk  puncak  relatif  ( relative  peak ), hipokotil B. gymnorhiza makin berwarna ungu, maka
(a) (b) (c)
Keterangan : --- : ekstrak metanol - --- : ekstrak etanol
- --- : ekstrak aseton - --- : ekstrak n-heksana Keterangan : --- : ekstrak metanol - --- : ekstrak etanol
- --- : ekstrak aseton - --- : ekstrak n-heksana Keterangan : --- : ekstrak metanol - --- : ekstrak etanol
- --- : ekstrak aseton - --- : ekstrak n-heksana Waktu retensi (menit) Waktu retensi (menit) Waktu retensi (menit) In te n s it a s ( % ) In te n s it a s ( % ) In te n s it a s ( % )
puncak relatif yang dihasilkan makin beragam (pada base peak yang sama), kecuali puncak relatif ekstrak kasar etanol, yaitu puncak relatif hipokotil warna hijau memberikan  hasil  yang  lebih  beragam  pada base peak yang sama (Tabel 2).
Hasil  rekapitulasi  kromatogram  Gambar  2. berupa  puncak  dasar  dan  relatif  masing-masing ekstrak  dari  hipokotil  warna  hijau,  hijau-ungu  dan ungu disajikan pada Tabel 2.
Tabel  2.  merupakan  hasil  tabrakan  antara sebuah  molekul  organik  dengan  salah  satu  elektron berenergi tinggi yang menyebabkan lepasnya sebuah elektron dari molekul tersebut dan terbentuknya suatu ion  organik.  Ion  organik  tersebut  tidak  stabil    dan pecah menjadi  fragmen  kecil,  baik berbentuk  radikal bebas  maupun  ion  lain.  Dengan  demikian  maka fragmen yang bermuatan positif akan muncul. Puncak dasar (base peak) terkadang merupakan ion molekul dari  fragmen  yang  lebih  kecil,  sehingga  bukan merupakan  bobot  molekul  (m/z)  dari  molekul  yang tertabrak  elektron  berenergi  tinggi  tersebut (Supratman, 2010).
Tabel  2.  menginformasikan  bahwa  puncak relatif ekstrak metanol hipokotil hijau, hijau-ungu dan ungu  adalah  sama,  yaitu  217,03;  410,93;  322,88; 364,94;  232,99;  306,90;  388,85;  dan  203,02  m/z. Puncak  relatif  ekstrak  etanol  hipokotil  hijau,  hijau- ungu  dan  ungu  adalah  sama,  yaitu  217,03;  410,93;
203,02;  233,00;  dan  396,93  m/z.  Puncak  relatif ekstrak  aseton  hipokotil  warna  ungu  lebih  beragam dibandingkan  warna  hijau  dan  hijau  ungu.  Puncak relatif 802,70; 604,87, dan 428,90 m/z hanya muncul pada hipokotil warna ungu, sedangkan puncak relatif 413,08;  149,04,  dan  163,04  m/z  terdeteksi  di  ketiga hipokotil. Puncak relatif ekstrak n-heksan menunjukkan  bahwa  semakin  hipokotil  berwarna ungu  sempurna,  semakin  beragam.  Puncak  relatif 274,16;  413,03;  149,01  m/z  muncul  pada  ketiga warna hipokotil, 338,21; 360,16; 429,15; 469,14; dan 165,09  m/z  muncul  pada  hipokotil  warna  hijau-ungu dan ungu, sedangkan 230,17 dan 163,03 m/z hanya terdeteksi pada hipokotil warna hijau, dan 592,89 m/z hanya terdeteksi pada warna ungu.
Menurut  Bandaranayake  (2002),  bahwa senyawa  metabolit  sekunder  pada  B.  gymnorhiza seperti antosianin, karoten, katekin, tanin (condensed,  hydrolysable),  diterpen,  flavan,  polimer flavan,  fenol,  prosianidin,  steroid,  dan  triterpen ditemukan  pada  B.  gymnorhiza.  Senyawa-senyawa tersebut diatas merupakan senyawa yang dapat larut dalam  pelarut  polar  hingga  non-polar.  Diduga  nilai puncak  dasar  atau  puncak  relatif  yang  terdeteksi pada  spektrum  massa  pada  ekstrak  hipokotil  B. gymnorhiza  di  atas  adalah  sebagian  dari  fragmen senyawa metabolit sekunder tersebut.
Tabel 2 . Puncak dasar dan puncak relatif ekstrak hipokotil B. gymnorhiza warna hijau, hijau-ungu, dan ungu yang terdeteksi pada spektrum LCMS Jenis Ekstrak Hipokotil warna hijau Hipokotil warna hijau-ungu Hipokotil warna ungu Massa puncak dasar (m/z) Massa puncak relatif (m/z) Massa puncak dasar (m/z) Massa puncak relatif (m/z) Massa puncak dasar (m/z) Massa puncak relatif (m/z) Metanol 217,00 217,03; 232,98; 388,84; 364,93; 410,93 217,00 203,04;  217,03; 274,17;  322,89; 338,84;  364,94; 410,94 217,00 203,03; 217,03; 219,00; 274,16; 322,87; 364,93; 410,93 Etanol 2,680 168,99; 268,93; 309,09; 344,35; 217,00 217,03;  232,98; 273,98;  276,99; 306,91;  322,90; 338,89;  364,94; 217,00 203,03; 217,03; 232,98; 255,04;
432,80 410,95 273,98; 276,99; 306,90; 322,90; 338,89; 364,94; 410,95 217,00 203,02; 217,03; 233,00; 322,87; 396,93; 410,94 413,10 149,03; 163,05; 181,06; 391,09; 413,07; 488,99 338,20 338,20; 360,06; 436,10; 675,17 Aseton 413,10 149,04; 163,05; 181,05; 413,07; 429,02; 802,92 217,00  139,02;  163,04; 217,03;  292,89; 306.93;  410,92 217,00 138,98; 216,97; 276,88; 322,78; 410,77 413,10  149,03;  163,04; 181,04;  413,06; 488,99;  802,92 344,90 162,97; 181,98; 275,86; 306,79; 322,78; 330,82; 344,84 456,90 416,78; 456,90 413,00 148,99; 162,98; 412,92; 428,90; 488,79; 604,86; 802,69 n-Heksana 274,20 230,16; 274,15 274,20 230,18;  274,18; 296,18 274,20 274,18 413,10 123,11; 149,01; 163,02; 181,04; 199,98; 413,03 413,10 149,04;  327,10; 413,06 413,10 149,04; 413,07
338,20 338,21;  360,17; 485,10 592,90 133,02; 441,02; 592.89 429,20 165,09;  429,15; 469,14 338,20 338,19; 360,15 429,10 149,02; 165,09; 429,14; 489,10

## KESIMPULAN
Gugus  fungsional  dengan  serapan  puncak kuat    adalah  metil,  metilen,  keton,  aldehid,  eter, alkohol  dan  ester.  Ekstrak  aseton  hipokotil B. gymnorhiza warna  ungu  memiliki  sebaran  senyawa bioaktif  lebih  beragam    dibanding  ekstrak  metanol, etanol, dan n-heksan.
Diduga nilai  puncak  dasar  atau  puncak  relatif yang  terdeteksi  pada  spektrum  massa  pada  ekstrak metanol  dan  etanol  hipokotil B.  gymnorhiza adalah sebagian  dari  fragmen  senyawa  metabolit  sekunder alkaoid, fenol/polifenol, steroid, antosianin, terpenoid, flavonoid,  tanin  dan  saponin,  sedangkan  ekstrak aseton  dari  golongan  fenol  dan  flavonoid,  ekstrak  n- heksan dari golongan terpenoid dan steroid.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  kepada  Puspa  D. Lotulung,  Pusat  Penelitin  Kimia,  LIPI  Serpong  dan Heri,  Laboratorium  Kimia,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya

## REFERENSI
Anam, Choirul. Sirojudin 2007. Analisis Gugus Fungsi Pada  Sampel  Uji,  Bensin  Dan  Spiritus Menggunakan  Metode  Spektroskopi  FT-IR. Berkala Fisika . Vol 10 no.1. 79-85
Bandaranayake,  W.  M.  1994.  Phyto-chemical constituents  and  pigments  in  mangrove species  and  mangal  associates  of  Northern Australia. Australian Institut of Marine Science.
Townsville.
Bano, S. 2007. Terpenoid. Departement of Chemistry, Faculty of Science Jamia Hamdrad, new Delhi. Chusnul.  2011.  Spektroskopi  IR.  www.  Scribd.com diakses tanggal 27 Desember 2013
Faust,  B.  1998.  Modern  Chemical  Techniques.  The Royal Society of Chemistry. London Handayani,  S.  2016.  Histochemical  and  chemical analysis  of  hypocotile  Bruguiera  gymnorhiza (L)  Lamk.  During  the  mature  phase. Jurnal Rekapangan . Vol 11 (2): 73-80.
Jacoeb,  A.  M.,  P.  Septijah  and  Zahidah.  2013.
Chemical  composition,  bioactive  component and antioxidant activity of large-leaf mangrove ( Bruguiera gymnorhiza ) fruit. Jurnal
Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia .16(1):
86-94.
Kosela, S. 2010. Determination of Molecular Structure Based  Data  Spectra  (NMR,  MASS,  IR,  UV). Publisher  Institute  Faculty  of  Economics,
University of Indonesia. Jakarta.
Robinson,  T.  1995.  Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi. Penerbit ITB. Bandung
Supratman,  U.  2010.  Eludasi  Structure  of  Organic
Compounds:  Spectroscopy  Methods  for determining  the  structure  of  organic compounds.  Widya  Padjadjaran.  Bandung.
Indonesia
Tiwari. P., B. Kumar, K. Mandeep, K. Gurpreet and K.
Harleen.  2011.  Phytochemical  screening  and extraction  :  A  Review. J.  International Pharmaceutical Sciencia 1 (1): 988-1006 William,  D.  H.  and  I.  Fleming.  1980.  Spectroscopic Methods  in  Organic  Chemistry.  Third  ed. Mcgraw-Hill Book. Company.