# Korespondensi:  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Pusat Studi  Pesisir  dan  Kelautan,  Universitas  Brawijaya Gedung  Layanan  Bersama  UB  Lt.  8,  Jl.  Veteran,  Malang  65145, Indonesia.
Tel.:  +  62  812  35352299 E-mail:  andi_k@ub.ac.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma
ANALISIS  PENGARUH  KONSENTRASI  VANADAT  (VO 4 ³ - )  DALAM  MEDIA  KULTUR TERHADAP PERTUMBUHAN Dunaliella sp.
Andi  Kurniawan *)# ,  Mohammad  Elham  Firdaus *) ,  Lutfi  Ni’matus  Salamah *) ,  dan  Siti  Mariyah  Ulfa **)
*) Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Pusat Studi Pesisir dan Kelautan, Universitas Brawijaya Gedung Layanan Bersama UB Lt. 8, Jl. Veteran, Ketawanggede, Lowokwaru, Ketawanggede,
Kec. Lowokwaru, Kota Malang, Jawa Timur 65145
**) Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Brawijaya Jl. Veteran, Ketawanggede, Lowokwaru, Ketawanggede, Kec.  Lowokwaru, Kota Malang, Jawa  Timur 65145
(Naskah diterima: 4 Januari 2019; Revisi final: 22 Juni 2019; Disetujui publikasi: 24 Juni 2019)

## ABSTRAK
Dunaliella sp. adalah mikroalga halotoleran yang banyak dijumpai pada lingkungan hipersalin. Mikrolaga ini mengandung berbagai substansi yang berharga seperti karetonoid, gliserol, lipid, protein dan vitamin sehingga banyak dibudidayakan. Salah satu faktor utama yang memengaruhi pertumbuhan Dunaliella sp. yang  dibudidayakan  adalah  ketersediaan  senyawa  di  dalam  media  kulturnya.  Salah  satu  senyawa  yang dapat menstimulus pertumbuhan mikroalga adalah vanadat (VO 4 3- ). Penelitian ini menganalisis pengaruh konsentrasi vanadat dalam media kultur terhadap pertumbuhan Dunaliella sp. Konsentrasi vanadat yang digunakan adalah 0,002 mg/L; 0,02 mg/L; 0,2 mg/L; dan 0 mg/L (kontrol). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa  keberadaan  vanadat dalam  media  kultur  memengaruhi  secara signifikan  pertumbuhan Dunaliella sp.  di mana  pertumbuhan  terbaik didapatkan  pada  pemberian vanadat  dengan  konsentrasi 0,002  mg/L. Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  vanadat  dalam  media  kultur  dapat  digunakan  sebagai  penstimulus pertumbuhan Dunaliella sp.
KATA KUNCI: Dunaliella sp.; pertumbuhan; media kultur; vanadat
ABSTRACT: The effects of vanadate (VO 4 3- ) concentrations in culture medium on the growth of Dunaliella sp. By: Andi Kurniawan, Mohammad Elham Firdaus, Lutfi Ni’matus Salamah, and Siti Mariyah Ulfa
Dunaliella sp. is halotolerant microalgae commonly found in hypersaline waters. This microalgae contains various valuable substances such as carotenoids, glycerol, lipid, protein, and vitamins, and thus, widely cultivated. One of the primary factors that influence the growth of cultured Dunaliella sp. is the availability of certain nutrient/chemical compounds in its culture media. One of the compounds that can stimulate the growth of microalgae is vanadate (VO4 3- ). This study analyzed the effects of vanadate concentration in the culture media on the growth of Dunaliella sp. The vanadate concentrations used  were 0.002 mg/L, 0.02 mg/L, 0.2 mg/L, and 0 mg/L as the control concentration. The results of this study suggested that the existence of vanadate in the culture media significantly affected the growth of Dunaliella sp. in which the best growth of Dunaliella sp. was obtained by the treatment with 0.002 mg /L of vanadate. This study recommends that the  vanadate  with concentration of  0.002 mg/L should be  used in the culture media of Dunaliella sp.
KEYWORDS: Dunaliella sp.; growth; culture media; vanadate

## PENDAHULUAN
Dunaliella sp. merupakan mikroalga yang termasuk ke dalam filum Chlorophyta. Mikroalga ini dilengkapi dengan sepasang flagela, dan berbentuk menyerupai
telur dengan ukuran 9-11  m (García et al., 2007; Polle et al., 2008; Byrd & Burkholder, 2017). Dunaliella sp. dikenal sebagai mikroalga dengan potensi yang cukup besar sehingga banyak dibudidayakan (Abu-Rezq et al., 2010;  Helena  et  al.,  2016;  Imamoglu  et  al.,  2014; Malibari  et  al.,  2018).  Mikroalga  ini  mengandung berbagai macam senyawa bermanfaat seperti gliserol, lipid, mineral, vitamin, protein, dan karotenoid. Salah satu potensi terbesar Dunaliella sp. adalah kandungan senyawa  karotenoid  terutama  beta  karotena  yang
dapat  mencapai  14  %  dari  bobot  kering  (Tafreshi  & Shariati, 2009). Beta karotena merupakan pigmen ter- penoid yang mempunyai nilai ekonomis yang tinggi (Prieto et al., 2011).
Dunaliella  sp.  juga  memiliki  kelebihan  lain  yaitu relatif  mudah  dibudidayakan  karena  cukup  toleran terhadap perubahan lingkungan dan dapat hidup di berbagai habitat bersalinitas tinggi (Chevanton et al., 2013;  Keerthi  et  al.,  2018;  Novoveská  et  al.,  2016; Sathasivam  et  al.,  2018).  Modifikasi-modifikasi lingkungan/media tumbuh Dunaliella sp. telah banyak dilakukan. Salah satu dari modifikasi ini adalah dengan pembuatan  berbagai  media  kultur  seperti  media Johnson  yang  merupakan  media  yang  paling  umum dipakai dalam kultur Dunaliella sp. (Imamoglu et al., 2014; Sathasivam & Juntawong, 2013; Santín-Montanyá et al., 2007). Modifikasi media kultur untuk Dunaliella sp.  juga  dilakukan  dengan  memberikan  senyawa- senyawa  yang  bisa  digunakan  sebagai  stimulator pertumbuhan. Salah satu senyawa yang diduga dapat menstimulus pertumbuhan Dunaliella sp. adalah vanadat (VO 4 3- ) (Shatasivam & Juntawong, 2013).
Vanadat memiliki struktur kimia yang mirip dengan fosfat. Vanadat adalah bentuk oksidasi dari vanadium yang memiliki kemiripan struktur, analogi kelistrikan, dan reaksi protonasi dengan fosfat (Crans et al., 2004). Analogi ini terlihat dari bentuk tetrahedral trianionik kedua ion tersebut (VO 4 3- dan PO 4 3- ). Hanya saja pada kondisi sekitar pH netral, monomer vanadat ada dalam bentuk utama monoanion (H 4 VO 4 3- ) sedangkan fosfat ada  dalam  bentuk  utama  dianion  (HPO 4 3- ).  Fosfat mempunyai  peranan  penting  dalam  metabolisme intraseluler di mana fosfat grup dapat meningkatkan solubilitas, serta membantu meningkatkan rekoknasi enzim antara substrat seluler dan enzim (Crans et al., 2004).  Fosfat  merupakan  nutrien  penting  untuk pertumbuhan mikroalga dan berperan penting dalam penyusunan  struktur  RNA  dan  DNA  (Delgadillo- Mirquez  et  al.,  2016;  D’Este    et  al.,  2018;  Shah  & Abdullah,  2018).  Konsentrasi  fosfat  optimal  dalam media kultur alga adalah lebih dari 2 mg/L (Mostert & Grobbelaar, 1987). Seperti halnya fosfat, vanadat juga dilaporkan  dapat  berperan  sebagai  penstimulus pertumbuhan  dengan  berperan  pada  biosintesis klorofil  dan  fotosintesis  (Lee  &  Wendisch,  2017; Sathasivam & Juntawong, 2013).
Vanadate  esensial untuk  pertumbuhan  Dunaliella sp. namun, penelitian tentang pengaruh konsentrasi vanadat (VO 4 3- ) terhadap pertumbuhan Dunaliella sp. terutama pada konsentrasi rendah (< 0,2 mg/L) sangat jarang dilakukan. Penelitian terkait pengaruh vanadat (VO 4 3- )  pada  konsentrasi  rendah  tersebut  sangat dibutuhkan  untuk  dapat  mengetahui  dosis  vanadat (VO 4 3- ) terbaik dalam media kultur untuk menstimulus
pertumbuhan Dunaliella sp. karena pada konsentrasi tinggi (lebih dari 2 mg/L) vanadat justru dapat menjadi racun bagi mikroalga (Crans et al., 2004). Penelitian ini  menganalisis  pengaruh  konsentrasi  vanadat (VO 4 3- )  0,2  mg/L)  pada  media  kultur  terhadap pertumbuhan  Dunaliella  sp.  sehingga  dapat memberikan informasi mengenai konsentrasi vanadat (VO 4 3- )  terbaik  untuk  pertumbuhan  Dunaliella  sp. Berdasarkan hasil penelitian  ini, pemberian vanadat (VO 4 3- ) di media kultur dengan konsentrasi yang rendah (<  0,2  mg/L)  dapat  menstimulus  pertumbuhan Dunaliella sp.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Reproduksi Ikan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas  Brawijaya  pada  bulan  Februari  sampai dengan  Maret  2018.  Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  bahan-bahan  untuk  membuat media kultur yang terdiri atas Media Jhonson (media standar  yang  digunakan  sebagai  kontrol  dalam penelitian  ini)  dan  modifikasi  dari  media  Ramaraj (Sathasivam et al., 2013) terkait konsentrasi vanadat (VO 4 3- ) sebagaimana dijelaskan pada Tabel 1.
Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL)  dengan  empat  perlakuan  media  dengan konsentrasi vanadat yang berbeda yaitu media A (0,002 mg/L); media B (0,02 mg/L); media C (0,2 mg/L); dan kontrol (0 mg/L). Penentuan konsentrasi ini didasarkan pada laporan bahwa pada konsentrasi tinggi, vanadat bersifat  toksik  untuk  mikrolga  (Sathasivam  & Juntawong, 2013). Penentuan perbedaan konsentrasi sebesar  10  kali  lipat  (0,002-0,2  mg/L)  dimaksudkan untuk dapat melihat pengaruh perbedaan konsentrasi vanadat dalam media  kultur terhadap pertumbuhan Dunaliella  sp.  Kepadatan  awal  Dunaliella  sp.  yang digunakan dalam penelitian ini adalah ± 1 x 10 6 sel/ mL. Keseluruhan penelitian direplikasi sebanyak tiga kali secara independent. Masing-masing media kultur (1 L) dimasukkan ke dalam toples kaca (ukuran 2 L) dan diberikan aerasi untuk kemudian ditempatkan pada rak kultur dengan intensitas pencahayaan 2.800 lux (24 jam terang). Perhitungan kepadatan sel dilakukan setiap  hari  selama  11  hari  masa  kultur  dengan menggunakan Mikroskop Olympus CX21 dan Neubauer Haemocytometer. Data hasil penelitian ini dianalisis menggunakan  analisis  sidik  ragam  (ANOVA)  dan dilanjutkan  dengan  uji  Tukey  HSD  pada  tingkat kepercayaan 95% dengan sofware SPSS Statistik 22.

## HASIL DAN BAHASAN
Pertumbuhan  Dunaliella  sp.  dalam  empat  media yang  berbeda  diamati  setiap  hari  selama  11  hari (Gambar 1). Hasil pengamatan menunjukkan kepadatan
sel Dunaliella sp. berbeda pada masing-masing media kultur. Hasil  ini mengindikasikan  media kultur  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  menghasilkan  laju pertumbuhan  Dunaliella  sp.  yang  berbeda. Pertumbuahan mikroalga seperti Dunaliella sp.  akan sangat dipengaruhi oleh kondisi lingkungan termasuk keberadaan  senyawa  terlarut  di  media  hidupnya (Kurniawan, 2011).
Pada semua media yang diujikan dalam penelitian ini,  kepadatan  Dunaliella  sp.  meningkat  sejak  hari pertama  pengamatan.  Kondisi  ini  mengindikasikan kalau pada semua media kultur, fase adaptasi Dunaliella sp. berlangsung cepat (kurang dari 24 jam) sehingga kepadatan sel sudah menunjukkan kenaikan dari hari pertama  pengkulturan  (Kim,  2015).  Hasil  dalam penelitian ini mengindikasikan kalau fase eksponensial pertumbuhan Dunaliella sp. pada semua media kultur terjadi  mulai  dari  hari  ke-1  dan  mencapai  puncak pertumbuhan pada hari ke-5 atau ke-6.
Pada  media  A  (konsentrasi  vanadat  0,002  mg/L) pertumbuhan  mencapai  puncak  pada  hari  ke-5 sedangkan media lainnya termasuk kontrol mengalami puncak pertumbuhan sel pada  hari ke-6. Perbedaan ini bisa disebabkan karena vanadat dalam konsentrasi yang lebih rendah mampu dimanfaatkan dengan lebih baik oleh mikroalga (Crans et al., 2004) sehingga pada media  A  mencapai  puncak  kepadatan  lebih  cepat dibandingkan dengan media B, media C, dan kontrol. Vanadat  berfungsi  sebagai  trace  element  yang merupakan  elemen  esensial  untuk  pertumbuhan organisme seperti mikroalga. Vanadat dapat berperan sebagai  counterions  untuk  protein,  DNA,  RNA,  dan berbagai organela sel (Sathasivam & Juntawong, 2013). Keberadaan  vanadat  dalam  jumlah  terbatas  dapat menjaga berbagai struktur biologi dan menjadi kunci berbagai reaksi terkait protein terutama pertumbuhan dan perkembangan sel (Crans et al., 2004). Fase puncak pertumbuhan setelah sekitar  126 jam pengkulturan
Tabel 1. Komposisi kimia dari media kultur Dunaliella sp. yang digunakan Table 1. Chemical compositions of culture medias of Dunaliella sp.
Keterangan (Note): * pH diukur sebelum penambahan NaHCO 3 (pH measured before addition NaHCO 3 )
Jhonson A B
C H 3 BO 3 0.61 9.28 9.28 9.28 (NH 4 )6Mo 7 O 24 .4H 2 O 0.38 - - - CuSO 4 .5H 2 O 0.06 - - - CoCl 2 .6H 2 O 0.05 0.05 0.05 0.05 ZnCl 2 0.04 0.11 0.11 0.11 MnCl 2 .2H 2 O 0.033 1.62 1.62 1.62 Na 2 MoO 4 - 0.49 0.49 0.49 NH 4 VO 3 - 0.002 0.02 0.2 CuCl 2 .6H 2 O - 0.05 0.05 0.05 MgCl 2 .6H 2 O 1.5 - - - MgSO 4 .7H 2 O 0.5 1.23 1.23 1.23 KCl 0.2 0.2 0.2 0.2 CaCl 2 .2H 2 O 0.2 0.044 0.044 0.044 KNO 3 1 0.5 0.5 0.5 KH 2 PO 4 0.04 0.014 0.014 0.014 FeCl 3 .6H 2 O 0.0024 0.0005 0.0005 0.0005 Na 2 EDTA 0.0018 0.074 0.074 0.074 NaHCO 3 0.04 2.1 2.1 2.1 NaCl 87.7 87.7 87.7 87.7 pH * 7.5 7.5 7.5 7.5 Media Bahan kimia Chemical material  (g/L)
(5-6  hari)  merupakan  kisaran  waktu  yang  pada umumnya dibutuhkan oleh mikrolaga seperti Dunaliella sp. untuk mencapai puncak  kepadatan sel (Becerra- Dórame et al., 2010; Kim et al., 2017; Pradana et al., 2017).
Setelah mencapai puncak pertumbuhan, kepadatan sel Dunaliella sp. pada ke seluruh media yang digunakan dalam  penelitian  ini  mengalami  penurunan.  Hal  ini mengindikasikan  kalau  setelah  mencapai  puncak pertumbuhan, terjadi penurunan laju pertumbuhan dan juga  kematian  Dunaliella  sp.  Kejadian  ini  bisa diakibatkan karena berkurangnya nutrien dalam me- dia kultur seiring dengan peningkatan kepadatan sel yang tinggi. Kompetisi antara sel Dunaliella sp.  juga berpengaruh  terhadap  kemampuan  pembelahan  sel sehingga  mengakibatkan  produksi  sel  semakin berkurang (Abidin & Trihandaru, 2009).
Analisis statistik  sidik ragam  (ANOVA) dilakukan untuk  mengetahui  secara  lebih  jelas  pengaruh perbedaan konsentrasi vanadat yang terjadi. Hasil uji ANOVA  menunjukkan  bahwa  nilai  significance  lebih kecil dari  0,05 yang  menandakan kalau  konsentrasi vanadat  yang  berbeda  memberi  pengaruh  yang signifikan  terhadap  pertumbuhan  Dunaliella  sp. (Nawari,  2010). Data  hasil  uji ANOVA  menunjukkan bahwa konsentrasi vanadat memberi pengaruh yang nyata terhadap pertumbuhan Dunaliella sp.
Selanjutnya  dilakukan  uji  Tukey  HSD  untuk membandingkan  keseluruhan  pasangan  perlakuan
setelah uji analisis ragam dilakukan (Saefuddin et al., 2009).  Hasil  uji  Tukey  HSD  menunjukkan  bahwa perlakuan kontrol dan media  B memiliki perbedaan yang paling kecil (Hsu, 1996). Sedangkan perlakuan media  C  dan  perlakuan  media  A  memberikan perbedaan  pengaruh  yang  signifikan  terhadap pertumbuhan  Dunaliella  sp.  Hasil  ini  menunjukkan kalau  dosis  vanadat  terbaik  untuk  menstimulus pertumbuhan Dunaliella sp. ada pada perlakuan media A  yaitu  sebesar  0,002  mg/L.  Perlakuan  pemberian vanadat dengan dosis yang rendah dapat menstimulus pertumbuhan Dunaliella sp. secara lebih baik dibanding perlakuan dosis yang lebih tinggi.
Penelitian ini menunjukkan bahwa kadar vanadat (VO 4 3- )  yang  berbeda  memberikan  pengaruh  yang berbeda  terhadap  pertumbuhan  Dunaliella  sp.  Hasil dalam penelitian ini menunjukkan bahwa kadar vanadat (VO 4 3- ) yang paling baik untuk mendukung pertumbuhan Dunaliella sp. adalah 0,002 mg/L. Vanadat (VO 4 3- ) adalah keadaan teroksidasi dari vanadium (V) yang merupakan trace element yang esensial untuk kehidupan mikroalga. Eleman  ini  dapat  memainkan  peranan  penting  bagi kehidupan dengan berperan sebagai counterions untuk protein, DNA, RNA, dan berbagai organela sel (Crans et  al.,  2004).  Vanadat  (VO 4 3- )  juga  memiliki  struktur kimia yang mirip dengan  fosfat dan dapat berperan pada biosintesis klorofil dan fotosintesis. Akan tetapi, walaupun  vanadat  (VO 4 3- )  dapat  berfungsi  untuk menstimulus  pertumbuhan,  elemen  ini  hanya dibutuhkan  dalam  jumlah  yang  kecil.  Keberadaan
Gambar 1. Kepadatan sel Dunaliella sp. pada media kultur yang berbeda.
Figure 1. Cell density of Dunaliella sp. in different culture media. 0 5 10 15 20 25 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 K ep ad at an ( se l/m L x 1 0 6 ) D en si ty ( ce ll/ m L x 1 0 6 ) Waktu (hari) / Time (days) 0.002 mg/L 0.02 mg/L 0.2 mg/L
0 mg/L
vanadat (VO 4 3- ) dalam jumlah yang besar justru dapat menjadi  racun  untuk  kehidupan  mikroalga  seperti Dunaliella  sp.  (Shatasivam  &  Juntawong,  2013). Kelebihan  vanadat  justru  bisa  mengganggu pembentukan  protein  dan  menyebabkan  gangguan pada RNA maupun DNA. Kelebihan vanadat dilaporkan dapat mengakibatkan kematian sel (Capella et al., 2002; Elfant & Keen, 1987). Oleh karena itulah, untuk dapat menjadikan  vanadat  (VO 4 3- )  sebagai  stimulator pertumbuhan  untuk  Dunaliella  sp.  maka  elemen  ini harus diberikan dalam konsentrasi rendah dalam me- dia kultur.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa perbedaan konsentrasi  vanadat  (VO 4 3- )  secara  signifikan memengaruhi  laju  pertumbuhan  Dunaliella  sp. Konsentrasi vanadat (VO 4 3- ) terbaik untuk menstimulus pertumbuhan  Dunaliella  sp.  adalah  0,002  mg/L. Berdasarkan hasil penelitian ini, vanadat (VO 4 3- ) dalam dosis yang rendah pada media kultur dapat digunakan untuk menstimulus pertumbuhan Dunaliella sp.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Nurjannah,  Ph.D.  dari  Jurusan  Statistik  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA), Uni- versitas Brawijaya untuk masukan dan diskusi terkait analisis  data  dalam  penelitian  ini.  Penelitian  dan publikasi  ini  didanai  oleh  Direktorat  Riset  dan Pengabdian Masyarakat, Direktorat Jenderal Penguatan Riset  dan  Pengembangan,  Kementerian  Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi dengan pelaksanaan kegiatan di bawah koordinasi Lembaga Penelitian dan Pengabdian  Kepada  Masyarakat  (LPPM)  Universitas Brawijaya.

## DAFTAR  ACUAN
Abidin,  D.  &  Trihandaru,  S.  (2009).  Monitoring densitas optik Dunaliella salina dengan optical den- sitometer sederhana serta uji kandungan klorofil. Prosiding  Seminar  Nasional  Sains  dan  Pendidikan Sains  IV.  (hlm.  602).  Salatiga,  Indonesia: Departement of Science and Math, UKSW Salatiga. Abu-Rezq,  T.S.,  Al-Hooti,  S.,  &  Jacob,  D.A.  (2010). Optimum culture conditions required for the lo- cally isolated Dunaliella salina. Journal of Algal Bio- mass Utilization, 1(2), 12-19.
Becerra-Dórame,  M.,  López-Elías,  J.A.,  &  Martínez- Córdova, L.R. (2010). An alternative outdoor pro- duction  system  for  the  microalgae  Chaetocerus muelleri and Dunaliella sp. during winter and spring
in Northwest Mexico. Aquacultural Engineering, 43, 24-28.
Byrd, S.M. & Burkholder, J.M. (2017). Environmental stressors  and  lipid production  in  Dunaliella  spp. II. Nutrients, pH, and light under optimal or low salinity. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 487, 33-44.
Capella, L.S., Gefe, M.R., Silva, E.F., Affonso-Mitidieri, O., Lopes, A.G., Rumjanek, V.M., & Capella, M.A. (2002). Mechanisms of vanadate-induced cellular toxicity: role of cellular glutathione and NADPH. Archives of Biochemistry and Biophysics, 406, 65-72. Chevanton, M.L., Garnier, M., Bougaran, G., Schreiber, N., Lukomska, E., Berard, J.-B., Foulland, E., Ber- nard,  O.,  &  Cadoret.  J.-P.  (2013).  Screening  and selection  of  growth-promoting  bacteria  for Dunaliella cultures. Algal Research, 2, 212-222.
Crans, D.C., Smee, J.J., Gaidamauskas, E., & Yang, L. (2004). The chemistry and biochemistry of vana- dium and the biological activities exerted by va- nadium compounds. Chemical Review, 104(2), 849- 902.
D’Este,  M.,  Alvarado-Morales,  M.,  &  Angelidaki,  I. (2018). Amino acids production focusing on fer- mentation  technologies:  A  review.  Biotechnology Advances, 36(1), 14-25.
Delgadillo-Mirquez, L., Lopes, F., Taidi, B., & Pareau, D. (2016). Nitrogen and phosphate removal from wastewater with a mixed microalgae and bacteria culture. Biotechnology Reports, 11, 18-26.
Elfant,  M.  &  Keen,  C.L.  (1987).  Sonodium  vanadate toxicity in adult and developing rats. Biological Trace Element Research, 14, 193-208.
García,  F.,  Freile-Pelegrín,  Y.,  &  Robledo,  D.  (2007). Physiological  characterization  of  Dunaliella  sp. (Chlorophyta, Volvocales) from Yucatan, Mexico. Bioresource Technology, 98, 1359-1365.
Helena,  S.,  Zainuri  M.,  &  Suprijanto,  J.  (2016). Microalgae  Dunaliella  salina  (Teodoresco,  1905) growth using the LED light (Light Limiting Dioda) and Different Media. Aquatic Procedia, 7, 226–230. Hsu,  J.  (1996).  Multiple  Comparisons:  Theory  and Methods (pp. 82). Florida: CRC Press.
Imamoglu, E., Demirel, Z., & Dalay, M. C. (2014). Evalu- ation  of  culture  conditions  of  locally  isolated Dunaliella  salina  strain  EgeMacc-024.  Biochemical Engineering Journal, 92, 22-27.
Keerthi, S., Koduru, U.D., Nittala, S.S., & Parine, N.R. (2018). The heterotrophic eubacterial and archaeal co-inhabitants  of  the  halophilic  Dunaliella  salina in solar salterns fed by Bay of Bengal along south
eastern coast of India. Saudi Journal  of Biological Sciences, 25, 1411-1419.
Kim, G.Y., Heo, J., Kim, H.S., & Han, J.I. (2017). Bicar- bonate-based  cultivation  of  Dunaliella  salina  for enhancing carbon utilization efficiency. Bioresource Technology, 237, 72-77.
Kim,  S.  (2015).  Biothecnology  advances.  Handbook of  marine  microalgae  (p.  57).  Amsterdam:  Aca- demic  Press.
Kurniawan,  A.  (2011).  Pendugaan  status  pecemaran air dengan plankton sebagai bioindikator di pantai Kabupatan Banyuwangi Jawa Timur. Jurnal Kelautan: Indonesian Journal of Marine Science and Technology, 4(1), 18-23.
Lee, J.H. & Wendisch, V.F. (2017). Production of amino acids:  Genetic  and  metabolic  engineering  ap- proaches. Bioresource Technology, 245, 1575-1587. Malibari, R., Sayegh, F., Elazzazy, A.M., Baeshen, M.N., Dourou, M., & Aggelis, G. (2018). Reuse of shrimp farm  wastewater  as  growth  medium  for  marine microalgae  isolated  from  Red  Sea,  Jeddah.  Jour- nal of Cleaner Production, 198, 160-169.
Mostert, E.S. & Grobbelaar, J.U. (1987). The influence of nitrogen and phosphorus on algal growth and quality in outdoors mass algal cultures. Biomass, 13, 219-233.
Nawari.  (2010).  Analisis  statistik  dengan  MS.  Excel 2007 dan SPSS 17. Jakarta: Elex Media Komputindo, 186 hlm.
Novoveská, L., Franks, D.T.,  Wulfers, T.A., & Henley, W.J. (2016). Stabilizing continuous mixed cultures of microalgae. Algae Research, 13, 126-133.
Polle,  J.E.W.,  Struwe,  L.,  &  Jin,  E.  (2008).  Identifica- tion and characterization of a new strain of the unicellular green alga Dunaliella salina (Teod.) from Korea.  Journal  of  Microbiology  and  Biotechnology, 18(5), 821-827.
Pradana,  D.P.,  Putri,  B.,  &  Hudaidah,  S.  (2017).
Pengaruh intensitas cahaya terhadap pertumbuhan dan  kandungan  karotenoid  Dunaliella  sp.  pada media ekstrak daun lamtoro Leucaena leucephala. Scripta Biologica, 5(4), 263-267.
Prieto,  A.,  Canavate,  J.P.,  &  Garcia-Gonzalez,  M. (2011). Assessment of carotenoid production by Dunaliella salina in different culture systems and operation regimes. Journal of Biotechnology,  151, 180-185.
Saefuddin, A., Notodiputro, K.A., Alamudi, A., & Sadik, K. (2009). Statistika dasar. Jakarta: Grasindo, 102 hlm.
Santín-Montanyá, I., Sandín-España, P., García Baudín, J.M., & Coll-Morales, J. (2007). Optimal growth of Dunaliella primolecta in axenic conditions to assay herbicides. Chemosphere, 66, 1315-1322.
Sathasivam,  R.  &  Juntawong,  N.  (2013).  Modified medium for enhanced growth of Dunaliella strains. Int. J. Curr. Sci., 5, 67-73.
Sathasivam,  R.,  Pongpadung,  P.,  Praiboon,  J., Chirapart,  A.,  Trakulnaleamsai,  S.,  Roytrakul,  S., & Juntawong, N. (2018). Optimizing NaCl and KNO3 concentrations for high â-carotene production in photobioreactor by Dunaliella salina KU11 isolated from saline soil sample. Chiang Mai J. Sci., 45(1), 106-115.
Shah, S.M.U. & Abdullah, M.A. (2018). Effects of macro/ micronutrients on green and brown microalgal cell growth  and  fatty  acids  in  photobioreactor  and open-tank systems. Biocatalysis and Agricultural Bio- technology, 14, 10-17.
Tafreshi,  A.H.  &  Shariati,  M.  (2009).  Dunaliella  bio- technology: Methods and applications. Journal of Applied Microbiology, 107, 14-35.