## UJI KANDUNGAN HIDROKSIMETILFURFURAL (HMF)
SEBAGAI PARAMETER KUALITAS MADU
Audi Rizki Koesprimadisari 1) , Dian Arrisujaya 2)* , Resty Syafdaningsih 1)
1) Balai Besar Industri Argo Jl. IR. H. Juanda No.11, Paledang, Bogor Tengah, Kota Bogor 16122
2) Program Studi Kimia FMIPA Universitas Nusa Bangsa Bogor Jl. K.H. Soleh Iskandar Km. 4 Tanah Sareal Bogor 16166
* e-mail: d1anarrisujaya@gmail.com

## ABSTRACT

## Hydroxymethylfurfural Content Test as Parameter Quality of Honey
Determination  hydroxymethylfurfural  (HMF)  levels  in  honey  had  been  done  refer  to  method  in  SNI 3545:2013.  Average of the HMF levels is 64,72 mg/kg whereas SNI decided maximal limit was 50 mg/kg so honey quality  is  not  good  enough.    To  support testing  result,  calculation  of  reapeatabily  with  relative  standard  deviation (RSD)  Horwitz  and  accuracy  with  %  recovery  was  done.  The  result  of  reapeatabilty  showed  that  analyst reapeatability was good because the relative standard deviation less than 2/3 RSD Horwitz.  The result of accuracy was good because both treatment gave recovery 89,28 % and 106,43 %, which in the range of acceptance recovery test for analite concentration about 50 mg/kg.
Keywords : HMF, Hydroxymethylfurfural, Honey, Quality of Honey , Reapeatability, Accuracy

## ABSTRAK
Penentuan  kadar  hidroksimetilfurfural  (HMF)  pada  madu  telah  dilakukan  dengan  metode  yang  mengacu pada SNI 3545:2013. Rata-rata hasil kandungan hidroksimetilfurfural adalah 64,72 mg/kg sedangkan batas maksimal yang ditetapkan SNI adalah 50 mg/kg sehingga kualitas contoh madu tersebut kurang baik.  Untuk menunjang hasil pengujian, maka dilakukan perhitungan repeatabilitas dengan menggunakan Standar Baku Relatif (SBR) Horwitz dan perhitungan  akurasi  menggunakan  %  perolehan  kembali . Hasil  perhitungan  repeatabilitas  menunjukkan  bahwa repeatabilitas analisis HMF baik karena nilai simpangan baku lebih kecil dari 2/3 SBR Horwitz.  Perhitungan akurasi pun  menunjukan  hasil  yang  baik  karena  kedua  perlakuan  memberi  hasil  perolehan  kembali  sebesar  89,28  %  dan 106,43  %,  yang  masuk  kedalam  batas  keberterimaan  uji  perolehan  kembali  untuk  konsentrasi  analit  dalam  contoh sekitar 50 mg/kg.
Kata Kunci : HMF, Hidroksimetilfurfural, Madu, Kualitas Madu, Reapitabilitas, Akurasi

## PENDAHULUAN
Seiring  maraknya  peredaran  madu palsu,  masyarakat  seharusnya  memiliki pengetahuan  yang  cukup  terkait  keaslian madu.  Secara  kasat  mata,  menentukan keaslian  madu  memang  sulit  dilakukan. Namun,  madu  asli    memiliki  kandungan bahan  kimia  yang  berbeda  dengan  madu palsu.    Dari  kandungan-kandungan  alami madu  dan  uji  laboratorium  mengenai keberadaan  zat-zat  di  dalam  madu,  kita dapat  mengetahui  keaslian  madu.    Terdapat beberapa  indikasi  dalam  uji  kuantitas  yang diperkirakan  menandakan  bahwa  suatu madu  adalah  madu  palsu  atau  campuran.
Diantaranya  yaitu  apabila  kadar  sukrosa madu naik, kadar enzim fluktuatif, kadar abu fluktuatif, kandungan mineral turun, perbedaan  aroma  dan  rasa,  dan  kandungan hidroksimetilfurfural (HMF) berubah.
HMF  pada  dasarnya  adalah  pecahan dari sukrosa dan fruktosa.  Kandungan HMF maksimal pada madu adalah 50 mg/kg.  Jika lebih  dari  angka  tersebut,  dapat  dipastikan bahwa  madu  tersebut  palsu  atau  dicampur karena  adanya  gula  tambahan  dari  bahan yang dicampurkan. Dari segi perban-dingan, glukosa  pada  madu  asli  cenderung  lebih banyak  dibandingkan  gula  yang  lain. Sedangkan  pada  madu  palsu,  kandungan sukrosa  cenderung  lebih  menonjol.    Selain
itu,  dengan  pengujian  kimia  sederhana menggunakan  pH  meter  kita  dapat  menge- tahui  keaslian  madu.    Madu  yang  diuji  ter- bukti  asli  apabila  memiliki  pH  antara  3,4 sampai 4,5.  Madu yang memiliki campuran atau  secara  keseluruhan  palsu,  biasanya memiliki  pH  di  atas  atau  di  bawah  kisaran tersebut  yaitu  pada  angka  2,4  –  3,3  atau  di atas angka 5.
Kadar  HMF  dapat  menjadi  indikator kerusakan  madu  oleh  pemanasan  yang berlebihan  atau  karena  penambahan  gula invert (sebuah  campuran  bagian  yang  sama dari  glukosa  dan  fruktosa  yang  dihasilkan dari  hidrolisis  sukrosa).    Kedua  perlakuan tersebut  akan  meningkatkan  kadar  HMF (Winarno,  1982).    Semakin  lama  penyim- panan  menyebabkan kadar HMF pada madu semakin tinggi (White, 1994).
Kenaikan  kadar  HMF  juga  disebabkan oleh  suhu  penyimpanan.  Hal  tersebut  di- dukung  oleh  hasil  penelitian  Almayanthy (1998)  yang  menunjukkan  bahwa  kadar HMF  madu  yang  disimpan  pada  suhu  28°C lebih  tinggi  dibandingkan  pada  suhu  3°C dan  5°C.    Warna  madu  akan  semakin  gelap seiring  meningkatnya  kadar  HMF  karena oksigen  dari udara akan mengoksidasi HMF sehingga  membentuk  warna  gelap  pada madu (Bogdanov et al. , 2004).
Tingginya  kadar  HMF  dalam  madu akan  menurunkan  kualitas  madu  karena kandungan  HMF  dalam  memiliki  ke- terkaitan  dengan  beberapa  karakteristik kimia  madu  lainnya  seperti  kadar  air,  pH, kadar  asam  bebas,  kadar  gula  pereduksi, serta  aktivitas  enzimatik  dalam  madu (Kowalski et  al. ,  2013).    Kadar  maksimum HMF  dalam  madu  yang  ditetapkan  oleh Codex  Alimentarius  dan  European  Union adalah  maksimum  40  mg/kg  untuk  madu yang  berasal  dari  daerah  beriklim  subtropis dan  maksimum  80  mg/kg  untuk  madu  yang berasal dari dearah beriklim tropis (Bogdanov, 2011).
SNI  menetapkan  kadar  HMF  dalam madu  yakni  tidak  melebihi  50  mg/kg  (SNI 3545:2013).    Selain  itu  pada  beberapa  pe- nelitian  menyebutkan  bahwa  HMF  me- miliki  sifat  toksisitas,  mutagenik  dan karsinogenik (Chi et al. , 1998; Jankowski et al. , 2002).
Madu  asli  juga  memiliki  aktivitas enzim  diastase yang tinggi.  Enzim  merupa- kan  senyawa  kompleks  yang  tidak  dapat dibuat  oleh  manusia.    Enzim  diastaste  itu sendiri  merupakan  enzim  yang  berfungsi untuk  mengubah  karbohidrat  kompleks  atau polisakarida  menjadi  karbohidrat  sederhana atau  monosakarida.  Enzim  ini  secara  alami berada  di  dalam  madu  dan  sulit  didapatkan dari  bahan  lainnya.    Apabila  madu  yang diuji  memiliki  aktivitas  enzim  diastase minimal 3, maka madu tersebut adalah madu asli.    Sedangkan  pada  madu  palsu,  aktivitas enzim  ini  hanya  berkisar  pada  angka  yang sangat rendah yaitu 0,005 hingga 0,1.  Selain itu  terdapat  pula  enzim  lain  di  dalam  madu yaitu  invertase  yang  berfungsi  untuk memecah  molekul  sukrosa  menjadi  glukosa dan fruktosa,  glukosa  oksidase yang berperan sebagai pembantu oksidasi glukosa menjadi  asam  peroksida,  peroksidase  yang melakukan  proses  oksidasi  metabolisme, serta lipase.
Madu  mengandung  banyak  mineral seperti natrium, kalsium, magnesium, alumunium,  besi,  fosfor,  dan  kalium. Vitamin-vitamin  yang  terdapat  dalam  madu adalah  tiamin  (B1),  riboflavin  (B2),  asam askorbat  (C),  piridoksin  (B6),  niasin,  asam pantotenat, biotin, asam folat, dan vitamin K (Suranto, 2004).
Perbedaan nyata antara madu murni dan madu  tidak  murni  terletak  pada  komposisi kimianya (Sutami, 2003). Terdapat
beberapa  cara  untuk  mengetahui  kemurnian madu, salah satunya dapat dilakukan uji gula dengan  cara  Kromato-grafi  Cair  Kinerja Tinggi  (KCKT)  atau High  Peformance Liquid  Cromatografi (HPLC)  (Ratnayani et al. , 2008).
Analisis  kimia  yang  membutuhkan tenaga  ahli  dan  peralatan  khusus,  tidak semua  orang  dapat  melakukannya,  maka pengujian madu pada prakteknya di lapangan  sering  diuji  dengan  cara-cara berdasarkan  pengetahuan  atas  informasi yang  berhubungan  di  masyarakat  walaupun belum  dapat  dibuktikan  keakuratannya. Beberapa  cara  yang  sering  digunakan masyarakat  untuk  menilai  kemurnian  madu antara lain  menguji  kemurnian  madu seperti menggunakan semut, perembesan  madu bila ditetes  ke  koran,  korek  api  yang  dicelupkan
dalam  madu  murni  masih  dapat  menyala,
berwarna kuning tua, madu akan mengkristal  jika  diaduk  ke  dalam  kuning telur,  menyimpan  gas  atau  udara,  tidak membeku  bila  dimasukan  ke  dalam  lemari es.  Berdasarkan informasi tersebut berkem- banglah  beberapa  cara  pengujian  kemurnian madu.  Pengujian  tersebut  belum  teruji  ke- efektifannya.
Ansori  (2002)  melakukan  pengujian kemurnian  madu  yang  ditambahkan  dengan sukrosa,  fruktosa,  glukosa  dan  gula  aren dengan  menggunakan  uji  bakar,  uji  rembes, uji  koagulasi,  uji  kristalisasi,  dan  uji  larut, dan  dari  kelima  uji  tersebut  hanya  uji  larut yang paling akurat untuk menguji kemurnian madu.  Selain  kelima  uji  tersebut  masih banyak  uji  lainnya  yakni  uji  kelarutan,  uji pemanasan,  uji  tarik,  uji  lengket,  uji  ikan mentah,  uji  buih,  dan  uji  iod  yang  telah diketahui akurasinya menggunakan beberapa sampel madu palsu.
Madu memiliki banyak manfaat sehingga  marak  terjadi  pemalsuan  madu. Masyarakat perlu  mengetahui  kualitas madu yang  dikonsumsinya.  Salah satunya dengan melakukan pengujian kandungan hidroksimetilfurfural (HMF) dalam madu. Dari segi ilmu kimia, terdapat beberapa analisa yang bisa dilakukan untuk mengetahui  keaslian  madu.  Analisis  karbon, analisis  mikroskopis,  analisis  HMF,  analisis polaritas  cahaya  merupakan  beberapa  uji yang  biasa  dilakukan  untuk  mengetahui keaslian  madu.  Uji  kimia  yang  dilakukan adalah analisis hidroksi-metilfurfural
(HMF). Pengukuran  kadar HMF pada madu menggunakan spektro-fotometer,
dan
pengolahan data hasil analisis
hidroksimetilfurfural  meliputi  Standar  Baku Relatif  (SBR)  Horwitz  dan  %  perolehan kembali atau recovery.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  yaitu  madu, akuades,  larutan  Carrez  I,  larutan  Carrez  II, natrium bisulfit 0,2%, dan kertas saring.
Peralatan  yang  digunakan  yaitu neraca analitik, alat-alat kaca dan spektrofotometer UV/Vis HP 8453.
Metode 1. Analisis Hidroksi Metilfurufal
a. Pembuatan Larutan Blanko
Akuades  ditambahkan  larutan  Carrez  I dan Carez II masing-masing 0,50 mL hingga batas volume 50 mL.
b. Preparasi Sampel Preparasi sampel dilakukan untuk menjernihkan  larutan  dengan  pengendapan protein  yang  akan  dianalisa  menggunakan spektro-fotometer UV. Sampel madu sebanyak 5 gram dilarutkan dengan akuades hingga  volume  25  mL.  Larutan  sampel ditambahkan  larutan  Carrez  I  dan  Carrez  II masing-masing sebanyak 0,50 mL. Kemudian larutan ditambahkan akuades dan dihomogenkan  hingga  volume  50  mL.
Larutan  sampel  disaring  hingga  jernih. Larutan sampel sebanyak 1 mL ditambahkan akuades sebanyak 19 mL merupakan larutan A.
Larutan  pembanding  dibuat  dari  natrium bisulfit  0,2%  10  mL  dan  natrium  bisulfit 0,1%  9  mL  dan  dihomogenkan.  Larutan pembanding ini merupakan larutan B.
c. Pengujian Sampel Larutan  A  dan  larutan  B  dibaca menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 284 nm dan 336 nm.
2. Perhitungan
Perhitungan konsentrasi hidroksi-
metilfurfural (HMF) dapat dilakukan dengan menggunakan rumus yang terdapat pada SNI
3545:2013.
Keterangan:
126 : bobot molekul HMF 16830  : absortivitas molar HMF pada panjang gelombang 284 nm 1000 : mg/g 10 : cL/L 100 : gram madu yang dilaporkan 5 : bobot sampel dalam gram

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis  hidroksimetilfurfural  (HMF) pada madu dilakukan dengan  menggunakan metode  spektrofotometri.    Analisis  HMF dilakukan  untuk  mengetahui  kualitas  madu yang  dipengaruhi  oleh  pemanasan  yang berlebihan,  penambahan  gula invert dan suhu  penyimpanan  madu.    Kualitas  madu tidak dapat ditentukan hanya dengan analisis HMF, tetapi perlu dilakukan analisis lainnya seperti  aktivitas  enzim  diastase,  kadar  air, gula pereduksi, sukrosa.
Analisis HMF dapat memberikan informasi yang diperlukan untuk
memperkirakan  total  paparan  panas  dari setiap  jenis  madu.    Termasuk  panas  yang digunakan  dalam  pengolahan,  penyimpanan atau  pengiriman.    Madu  yang  baru  dipanen pun  sudah  mengandung  HMF  dan  tidak bergantung pada jenis madunya.
Analisis
HMF ini menggunakan
beberapa  pereaksi  yang  memiliki  fungsi tersendiri.    Larutan  Carrez  I  dan  Carrez  II
berfungsi  untuk  mengendapkan  protein. Larutan  natrium  bisulfit  digunakan  sebagai pembanding.    Hasil  pengukuran  konsentrasi HMF dapat dilihat pada Tabel 1.
Dari tabel dapat dilihat konsentrasi rata- rata  HMF  yang  didapat  pada  sampel  madu lebih  besar  yaitu  64,72  mg/kg  dari  batas maksimal  yang  ditetapkan  SNI  adalah  50 mg/kg  sehingga  kualitas  sampel  madu tersebut kurang baik. Perhitungan konsentrasi  hidroksimetilfurfural  terdapat pada Lampiran 2.
Tingginya nilai HMF (64,72 mg/kg) bisa disebabkan  oleh  kerusakan  yang  terjadi  dari proses  pemanasan  madu  setelah  dipanen maupun  proses  penyimpanan  yang  kurang baik  (terkena  sinar  matahari  langsung). Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Soleha (2015)  membandingkan  pengaruh  suhu pemananasan dan lama penyimpanan terhadap  kualitas  madu  asal  Desa  Terasa. Hasil  penelitian  tersebut  dapat  dilihat  pada
Tabel 2.
Tabel 1. Konsentrasi HMF pada Madu Dibandingkan dengan SNI 3545:2013 Ulangan Hasil Analisis (mg/kg) 1 60.63 2 59.71 3 65.46 4 65.95 5 66.21 6 66.65 7 68.44 Rata-rata 64.72 SNI 3545:2013 50.00 Tabel 2. Kadar HMF Madu Asal Desa Terasa Berdasarkan Lama Penyimpanan dan Waktu Pemanasan Sampel Perlakuan Kadar HMF (mg/kg) S1 S2 S3 S4 S35 S90 S110 Penyimpanan 1 bulan Penyimpanan 2 bulan Penyimpanan 3 bulan Penyimpanan 4 bulan Pemanasan 35°C Pemanasan 90°C Pemanasan 110°C 32,2063 55,6775 61,7024 88,7168 54,8764 68,5644 182,3035
Sumber : Soleha, 2015
Tabel 3. Repeatabilitas Hasil Analisis Hidroksimetilfurfural (HMF) Ulangan Hasil Analisis (mg/kg) 1 60.63 2 59.71 3 65.46 4 65.95 5 66.21 6 66.65 7 68.44 Jumlah : 517.77 Rata-rata : 64.72 SB : 3.0141 SBR perhitungan : SB/rata-rata x 100 % SBR perhitungan : 4.66 SBR Horwitz : 2 (1-0.5 log C) SBR Horwitz : 8.5414 2/3 SBR Horwitz : 5.6943 Untuk  menunjang  hasil  pengujian, maka dilakukan pula perhitungan repeatabilitas dilakukan menggunakan Standar  Baku  Relatif  (SBR)  Horwitz dengan  rumus    2 (1-0.5  log  C) .    Tujuan  dari pengulangan  adalah  untuk  mengetahui presisi  data  yang  diperoleh  oleh  analis. Pengulangan  dilakukan sebanyak tujuh  kali karena  percobaan  keseksamaan  dilakukan terhadap  minimal  enam  replika  sampel yang diambil dari campuran sampel dengan matriks  yang  homogen.    Perhitungan repeatabilitas hasil analisis hidroksi- metilfurfural  terdapat  pada  Tabel  3.    Dari hasil  yang  didapatkan  dapat  disimpulkan bahwa  repeatabilitas  analisis  HMF  baik karena  nilai  simpangan  baku  lebih  kecil dari 2/3 SBR Horwitz.
Perhitungan akurasi didapatkan dari % perolehan kembali atau recovery . Perolehan  kembali  atau recovery dilakukan
dengan metode adisi (penambahan standar). Dapat dilihat dalam persamaan berikut :
Sampel yang akan dianalisis
ditambahkan  sejumlah  standar  yang  telah diketahui  konsentrasinya  lalu  dilakukan analisis  bersama  dengan  sampel  lainnya. Selisih  kedua  hasil  dibandingkan  dengan konsentrasi  yang  sebenarnya.  Dengan  C1 adalah  konsentrasi  dari  analit  dalam campuran  sampel  +  sejumlah  tertentu analit,  C2  adalah  konsentrasi  dari  analit dalam  sampel,  dan  C3  adalah  konsentrasi dari  analit  yang  ditambahkan  kedalam sampel.    Hasil  perhitungan  perolehan kembali dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Persen Perolehan Kembali (% recovery )
No Sampel (gram) Konsentrasi sampel + standar (mg/kg) Jumlah standar Konsentrasi standar yang ditambahkan Rata-rata konsentrasi sampel (mg/kg) Konsentrasi standar yang ditambahkan dalam sampel (mg/kg) % Recovery 1 5.1381 116.85 0.2 mL 1500 ppm 64.72 58.39 89.28 2 5.9582 118.31 50.35 106.43
Batas  keberterimaan  uji  perolehan kembali  untuk  konsentrasi  analit  dalam sampel  sekitar  50  mg/kg  adalah  80-110%. Uji  perolehan  kembali  yang  dilakukan  dari dua  kali  perlakuan  didapatkan  hasil  yang memenuhi syarat keberterimaan.  Pengujian pertama  memberi  hasil  perolehan  kembali sebesar  89,28%  dan  pengujian  kedua memberi  hasil  perolehan  kembali  sebesar 106,43%.
Perbedaan  hasil  yang  diperoleh  dari kedua  pengujian  tersebut  dapat  disebabkan oleh beberapa faktor saat persiapan sampel, diantaranya:
a. Neraca  yang  tidak  dalam  kondisi  baik dan  bersih  saat  penimbangan.    Untuk menghindarinya dapat dilakukan pembersihan  bagian  pinggan  neraca, penempatan  posisi  gelembung  udara dibagian  tengah  lingkaran  dan  peneraan neraca sebelum digunakan.
b. Bahan kimia yang  terkontaminasi. Untuk  menghindarinya  dapat  dilakukan dengan memberi label pada setiap bahan kimia  yang  digunakan,  mengambil bahan  kimia  dengan  peralatan  yang bersih  dan  menutup  kembali  bahan kimia setelah digunakan.
c. Kesalahan  saat  pemipetan  standar. Untuk  menghindarinya  dapat  dilakukan dengan bekerja secara teliti.
d. Larutan  yang  kurang  homogen.  Untuk menghindarinya dapat dilakukan dengan melakukan penghomogenan larutan sampel dengan baik.
e. Kesalahan  saat  proses  pengenceran. Untuk  menghindarinya  dapat  dilakukan dengan bekerja secara teliti dan
menggunakan gelas ukur dengan rentang
skala yang lebih kecil.
f. Peralatan  yang  kurang  bersih.    Untuk menghindarinya dapat dilakukan  dengan membilas  kembali  peralatan  yang  akan digunakan  menggunakan  air  suling  atau larutan  yang  akan  digunakan,  dan  bila diperlukan  peralatan  yang  kering  maka setelah  pembilasan  dapat  dilakukan pengeringan dalam oven.
Selain kesalahan saat persiapan sampel, terdapat pula kesalahan  yang dapat disebabkan oleh
spektrofotometer.
Kesalahan  yang  mungkin  terjadi  dalam
analisis ini adalah kesalahan fotometri yang disebabkan  oleh  larutan  yang  terlalu  pekat. Dalam  SNI  3545:2013  disebutkan  bahw   “ Bila  absorban  lebih  tinggi  dari  0,6  untuk memperoleh  hasil  yang  teliti,  larutan sampel  diencerkan  dengan  air  sesuai kebutuhan.    Demikian  juga  dengan  larutan pembanding  (larutan  referensi)  encerkan dengan  cara  sama  dengan  menggunakan larutan  NaHSO 3 0,1%  nilai  absorban  yang diperoleh dikalikan dengan faktor
pen encer n se el   perhi  n  n”.
Prosedur  kerja  yang  digunakan  pun sedikit  berbeda  dengan  yang  tercantum pada SNI 3545:2013.  Perbedaan ini terjadi saat proses pemipetan sampel dan pengencerannya.    Dalam  SNI  3545:2013 jumlah  sampel  yang  dipipet  adalah  5  mL, namun  pada  pengerjaannya  jumlah  sampel yang dipipet hanya 1 mL.  Hal ini dilakukan karena  absorban  yang  didapatkan  akan lebih  dari  0,6  bila  sampel  dipipet  sebanyak 5 mL.  Perbedaan pada proses pengenceran pun  terjadi  karena  dalam  SNI  3545:2013 jumlah akhir larutan yang akan dibaca pada spektrofotometer  adalah  10  mL,  jumlah tersebut  dikhawatirkan  tidak  mencukupi jika  digunakan  untuk  membilas  kuvet spektrofotometer.
Pembacaan pada spektrofotometer dilakukan pada panjang gelombang 284 nm dan  336  nm,  kedua  panjang  gelombang tersebut  berada  pada  daerah  radiasi  UV. Untuk dapat dibaca pada daerah radiasi UV, sampel harus mengandung kromofor.  Pada HMF, yang menjadi kromofor adalah gugus C=C dan C=O, sedangkan gugus hidroksi (- OH) berperan sebagai auksokrom.

## KESIMPULAN
Dari hasil analisis hidroksi- metilfurfural (HMF) pada madu menunjukkan  nilai  hidroksimetilfurfural melebihi  batas  persyaratan  yang  ditetapkan oleh  SNI  3545:2013.    Hal  tersebut menunjukan  telah  terjadi  kerusakan  pada sampel  madu  yang  dianalisis  sehingga madu  tersebut  memiliki  kualitas  yang kurang  baik.    Kerusakan  tersebut  dapat disebabkan  oleh  proses  pemanasan  madu setelah dipanen
maupun proses
penyimpanan  yang  kurang  baik  (terkena sinar matahari langsung).
Perhitungan repeatabilitas dengan menggunakan  Standar  Baku  Relatif(SBR)
Horwitz  dan  akurasi  dengan  menggunakan
%  perolehan kembali  atau recovery menunjukkan nilai yang baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Almayanthy, D. 1998. Kualitas madu randu pada  suhu  penyimpanan  yang berbeda. Skripsi .  Fakultas  Peter- nakan, IPB. Bogor.
Ansori,  F.  M.  2002.  Studi  keakuratan beberapa  cara  uji  keaslian  madu.
Skripsi .  Jurusan  Teknologi  Hasil
Ternak,  Fakultas  Peternakan,  IPB. Bogor.
Badan  Standardisasi  Nasional.  2013. SNI 3545:2013 Madu .
Bogdanov, S., K. Ruoff, L. P. Oddo. 2004. Physico-Chemical  Methods  For
The  Characterisation  Of  Unifloral
Honeys:  A  Review. Apidologie . 35(2): 4-17.
Bogdanov, S. 2011. Honey as Nutrient and Food  Function  Food .  Bee  Product Science.
Chi,  W.,  C.  B.  Zhang,  Y.  H.  Lao,  L.  Y. Guo.  1998.  Investigation  of  the Restriction  on  The  Formation  of HMF. J.Pharm. 14(1): 101-104.
Kowalski,  S.,  M.  Lukasiewicz,  A.  Duda- Chodak, G. Ziec. 2013 . 5- Hydroxymethyl-2-Furfural Heat- Induced  Formation  Occurance  in Food  and  Biotransfromation:  a Review .  Polish  Journal  of  Food and  Nutrition  Science. 63  (4):  207- 225.
Ratnayani,  K.,  N.  M.  A.  D.  Adhi  S.,  I  .G. A.  M.  A.  S.  Gitadewi.  2008. Penentuan kadar glukosa dan fruktosa  pada  madu  randu  dan
madu  kelengkeng  dengan  metode kromatografi  cair  kinerja  tinggi. Jurnal Kimia. 2 (2) : 77-86.
Soleha,  R.  M.  2015.  Pengaruh  Suhu
Pemanasan  dan  Lama  Penyim- panan  Terhadap  Kualitas  Madu Asal  Desa  Terasa  Berdasarkan Kandungan 5-(Hidroksimetil) Furan-2-Karbaldehida (HMF) . Skripsi .  Jurusan  Kimia,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin. Makassar. Suranto,  A.  2004. Khasiat  &  Manfaat Madu  Herbal .  PT  Agro  Media
Pustaka. Depok. Sutami, A. 2003. Pengaruh waktu penyimpanan  dalam  refrigerator terhadap komposisi kimia madu asli dan  madu  palsu. Skripsi .  Jurusan Ilmu  Produksi  Ternak,  Fakultas Peternakan, IPB. Bogor.
White,  J.  W.  1994.  The  role  of  HMF  and diastase  assays  in  honey  quality evaluation. Bee  World .  75(3):  104- 117
Winarno,  F.  G.  1982. Madu  :  Teknologi, Khasiat dan Analisa . Ghalia Indonesia. Jakarta.
Lampiran 1 . Hasil Pembacaan Hidroksimetilfurfural (HMF) dengan Spektrofotom