BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 4, Nomor 2 (2022): 76-82 E-ISSN: 2714-8564
Dekolorisasi Limbah Batik Menggunakan Jamur Aspergillus sp. 3 Teramobil Bentonit pada Waktu Inkubasi Berbeda
Kholilatul Kamalia 1 , Ratna Stia Dewi 1* , Mardiyah Kurniasih 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman
2 Fakultas Matematika dan Pengetahuan Alam, Universitas Jenderal Soedirman *Email: ratna.dewi@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima   : 15/12/2021 Disetujui  : 22/07/2022

## Abstract
The  batik  industry  produces  wastewater  with  a  high  dye  content.  One  of  the  well- developed  batik  industry  businesses  is  in  Sokaraja  Banyumas.  A  potential  method  for processing batik waste is by utilizing indigenous mushrooms. Aspergillus sp. 3 can be used for  decolorization  of  Indigosol  Blue  batik  waste.  Decolorization  of  batik  waste  can  use immobilization  techniques  or  attachment  to  the  substrate.  Bentonite  is  a  type  of  clay mineral that has the potential as a support material for immobilization. This study aims to determine the ability of the fungus Aspergillus sp. 3 which was immobilized by bentonite with different incubation times for the decolorization of batik waste, and to find out the effective incubation time for the use of Aspergillus sp. 3 which is immobilized by bentonite against  the  decolorization  of  batik  waste.This  study  used  a  Completely  Randomized Design (CRD) experimental method with incubation times of 0, 6, 12, 18, 24, 30, 36 hours. The independent variable is incubation time, while the dependent variable is the ability of the fungus Aspergillus sp. 3 which is immobilized by bentonite in the decolorization of batik  waste.  The  main  parameter  is  the  percentage  of  decolorization  of  IB  batik  waste, while the supporting parameters are pH, temperature, TDS, and repeated use of bentonite immobilized mycelium pellets. The percentage of decolorization data was analyzed using analysis  of  variance  at  an  error  rate  of  5%  followed  by  the  Advanced  Significant Difference test with an error rate of 5%. Incubation time of 6 hours is an effective time for Aspergillus sp. 3 immobilized bentonite for decolorizing batik IB waste was 97.43%, pH ranged from 5.40-7.30, temperature ranged from 30-31 C, TDS percentage ranged from 14.63-40.31,  and  repeated  use  of  immobilized  bentonite  mycelium  pellets  up  to  three times.
Key words: Aspergillus sp. 3, bentonite, decolorization, batik waste, immobilization

## Abstrak
Industri batik menghasilkan air limbah dengan kandungan zat warna yang tinggi. Salah satu usaha industri batik yang berkembang baik, terdapat di Sokaraja Banyumas. Metode yang  potensial  untuk  pengolahan  limbah  batik  yaitu  dengan  memanfaatkan  jamur indigenous. Aspergillus sp. 3 dapat digunakan untuk dekolorisasi limbah batik Indigosol Blue (IB).  Dekolorisasi  limbah  batik  dapat  menggunakan  teknik  amobilisasi  atau perlekatan  pada  substrat.  Bentonit  merupakan  jenis  mineral  lempung  yang  memiliki potensi sebagai support material amobilisasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan jamur Aspergillus sp. 3 yang teramobil bentonit dengan lama waktu inkubasi berbeda  terhadap  dekolorisasi  limbah  batik,  dan  mengetahui  waktu  lama  inkubasi  yang efektif  pada  penggunaan  jamur Aspergillus sp.  3  yang  teramobil  bentonit  terhadap dekolorisasi limbah batik. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  perlakuan  waktu  inkubasi  0,  6,  12,  18,  24,  30,  36 jamParameter utama berupa persentase dekolorisasi limbah batik IB, sedangkan parameter pendukung  adalah  pH,  suhu,  TDS,  dan  pemakaian  berulang  pelet  miselium  teramobil bentonit. Data persentase dekolorisasi dianalisis menggunakan analisis ragam pada tingkat kesalahan  5%  dilanjutkan  uji  Beda  Nyata  Lanjut  dengan  tingkat  kesalahan  5%.  Hasil penelitian  menunjukkan  waktu  inkubasi  6  jam  merupakan  waktu  yang  efektif  bagi Aspergillus sp.  3  teramobil  bentonit  untuk  mendekolorisasi  limbah  batik  IB  sebesar 97,43%, pH berkisar 5,40-7,30, suhu berkisar 30-31 ºC, persentase TDS berkisar 14,63- 40,31, dan pemakaian berulang pelet miselium teramobil bentonit sampai 3 kali.
Kata kunci : Amobilisasi, Aspergillus sp. 3, bentonit, dekolorisasi, limbah batik.

## PENDAHULUAN
Batik  merupakan  budaya  Indonesia  dengan nilai  karya  seni  yang  tinggi  (Kartikasari et  al ., 2012). Perkembangan industri batik semakin pesat, sehingga menghasilkan banyak limbah. Limbah zat warna  ditimbulkan  akibat  penggunaan  zat  warna dalam  proses  produksi  (Hasri et  al .,  2018).  Zat warna  yang  sering  digunakan  dalam  pembatikan ialah zat warna  sintetik yang meliputi napthol dan indigosol  (Sorta et  al .,  2012).  Zat  warna  sintetik Indigosol  Blue (IB)  digunakan  sebagai  pewarna biru  dalam  industri  batik.  Pewarna  ini  merupakan salah  satu  zat  warna  antraquinon  dengan  ikatan molekul  –NH  dan  C=C  (Herfiani et  al .,  2017). Limbah  zat  warna  sintetik  memiliki  efek karsinogenik  bagi  manusia,  dan  menjadi  masalah pencemaran lingkungan karena sifatnya yang sukar untuk diuraikan (Pratiwi et al ., 2019).
Upaya  mengurangi  zat  warna  pada  limbah batik atau dekolorisasi dapat dilakukan dengan cara fisika,  kimia,  dan  biologi.  Pengolahan  limbah secara kimia dan fisika efektif untuk menghilangkan warna, akan tetapi tidak efisien dari segi biaya dan menimbulkan limbah lumpur padat ( sludge ) (Sastrawidana et al ., 2012). Metode yang potensial  untuk  pengolahan  limbah  batik  adalah dengan  cara  biologi  yaitu  dengan  memanfaatkan jamur indigenous yang berasal dari limbah batik itu sendiri (Haedar et al ., 2019). Aspergillus sp. 3 merupakan salah satu jamur mikroskopis hasil isolasi dari limbah pewarna batik Indigosol  Blue -04B  yang  diperoleh  dari  pengrajin batik  lokal  Banyumas  Jawa  Tengah.  Karakter makromorfologi  dan  mikromorfologi Aspergillus sp. 3 yaitu warna koloni kuning keemasan, memiliki diameter koloni sekitar 45 mm, miselium berwarna putih, vesikel, sel kaki, dan spora berdiameter 2,5- 3,0  μm . Kemampuan Aspergillus sp.  3  dalam mendekolorisasi  limbah  pewarna  batik Indigosol Blue -04B  sebesar  99,90%,  hal  ini  terlihat  dari perubahan  warna  limbah  dan  penebalan  warna miselium  setelah  perlakuan.  Perubahan  warna limbah  mengindikasikan  bahwa  jamur Aspergillus sp.  3  mampu  mengubah  struktur  kimia  zat  warna. Warna  limbah  berkurang  kepekatannya  ketika warna  biomassa  berubah,  dan  biomassa  miselium menyerap  zat  warna  biru  yang  terkandung  dalam limbah (Dewi et al ., 2018b).
Mekanisme dekolorisasi oleh jamur dilakukan dengan cara enzimatis dan non-enzimatis. Mekanisme dekolorisasi non-enzimatis oleh jamur terjadi melalui adsorpsi zat warna oleh dinding sel jamur. Adsorpsi oleh jamur terjadi ketika substansi molekul  pewarna  meninggalkan  limbah  dan bergabung  pada  permukaan  miselium  (Dewi  & Lestari,  2010),  sehingga  terjadi  perubahan  warna miselium  yang  semula  putih  menjadi  berwarna sesuai warna limbah yang digunakan (Dewi et al ., 2016). Perubahan warna miselium jamur dari warna awal  menunjukkan  proses  dekolorisasi  yang
disebabkan  oleh  mekanisme  adsorbsi  zat  warna oleh miselium (Wulandari et al ., 2014).
Mekanisme  dekolorisasi  oleh  jamur  secara enzimatis melibatkan enzim ekstraseluler kompleks yang  disekresikan  ke  dalam  medium  kultivasi (Wulandari et  al .,  2014).  Jamur  memiliki kemampuan  dalam  merombak  zat  warna  karena mampu  mengekskresikan  enzim  ligninolitik  yaitu laccase,  mangan  peroksidase  (MnP)  dan  lignin peroksidase (LiP). Enzim-enzim ini bekerja dengan memutus  ikatan  aromatik  yang  terdapat  dalam pewarna  (Dewi et  al .,  2016).  Selain  dengan pemutusan ikatan aromatik juga terjadi penjenuhan rantai  karbon  siklik.  Ikatan  aromatik  dan  rantai karbon  siklik  merupakan  pendukung  zat  warna, sehingga  apabila  terputus  maka  warna  dapat dihilangkan (Theresia et al ., 2012).
Aktivitas  jamur  dalam  mendegradasi  zat warna dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya konsentrasi zat warna, pH, waktu inkubasi (Sukarta &  Sumanhandriyani,  2013).  Lama  waktu  inkubasi berbanding  lurus  dengan  waktu  kontak  antara miselium  dengan  zat  warna,  sehingga  peluang  zat warna terserap lebih besar (Wulandari et al ., 2014), namun  penyerapan  akan  berkurang  setelah mencapai  titik  jenuh  penyerapan  sehingga  jamur akan melepaskan kembali zat warna yang terserap (Dewi & Dwiputranto, 2012).
Proses dekolorisasi saat ini banyak menggunakan  teknik  amobilisasi.  Amobilisasi adalah pengikatan biomassa secara fisik pada suatu tempat  tertentu  yang  memiliki  aktivitas  katalitik (Dwiyanti & Kuswytasari, 2016). Proses amobilisasi dapat dilakukan dengan cara mengikatkan biomassa pada suatu bahan pendukung ( matriks )  tertentu  melalui  pengikatan kimia atau menahan secara fisik dalam suatu rongga bahan pendukung (Nopiani et al ., 2016).
Bahan pendukung yang bisa digunakan untuk amobilisasi  salah  satunya  yaitu  bentonit.  Bentonit merupakan  jenis  mineral clay golongan smektit dioktahedral  yang  mengandung montmorillonit (Nopiani et al., 2016). Bentonit digunakan sebagai matriks  pendukung  karena  mempunyai  struktur berlapis,  kemampuan  mengembang  ( swelling ), memiliki  kation-kation  yang  dapat dipertukarkan (Susilawati  &  Naqiatuddin,  2014),  strukturnya inert ,  dan  termostabil  (Dwiyanti  &  Kuswytasari, 2016).  Aplikasi  bentonit  sebagai  adsorben  karena permukaan  bentonit  bermuatan  negatif,  sehingga mampu mengadsorpsi ion-ion logam yang bermuatan positif yang terdapat pada limbah batik (Hardyanti et al ., 2017).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  kemampuan  jamur Aspergillus sp.  3 teramobil  bentonit  dengan  lama  waktu  inkubasi yang berbeda terhadap dekolorisasi limbah batik IB dan  untuk  mengetahui  waktu  lama  inkubasi manakah  yang  paling  efektif  pada  penggunaan jamur Aspergillus sp.  3  yang  teramobil  bentonit terhadap dekolorisasi limbah batik IB. Manfaat dari
penelitian  ini  adalah  untuk  memberikan  informasi ilmiah tentang kemampuan jamur Aspergillus sp. 3 yang teramobil bentonit untuk dekolorisasi limbah batik IB.

## MATERI DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini jamur Aspergillus sp.  3,  medium Potato  Dextrose Agar (PDA), medium  Potato  Dextrose  Broth (PDB), Indigosol  Blue (IB),  limbah  batik  IB  dari pengrajin  batik  Kecamatan  Sokaraja  Kabupaten Banyumas Jawa Tengah, chloramphenicol , alkohol 70%,  dan  bentonit.  Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  labu  Erlenmeyer  250  ml,  cawan petri, shaker , autoklaf, oven, pH meter, TDS meter, hotplate , magnetic stirrer , UV-Vis spectrophotometer , dan Laminar Air Flow (LAF). Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL).  Variabel  bebas  berupa  waktu inkubasi sedangkan variabel terikatnya kemampuan jamur Aspergillus sp.  3  yang  teramobil  bentonit dalam dekolorisai limbah batik IB. Parameter utama yang diukur adalah  persentase dekolorisasi limbah batik  IB.  Parameter  pendukung  yang  diukur  pH, suhu, TDS, dan pemakaian berulang pelet miselium teramobil bentonit.

## Pembuatan Medium PDA dan PDB
Kentang  200  g  diiris  dadu  dan  dimasukkan  ke dalam  beaker  glass  1000  ml  yang  berisi  500  ml aquades,  dididihkan  selama  20  menit,  kemudian disaring  dan  diambil  ekstraknya.  Ekstrak  yang diperoleh dicampurkan dengan dekstrosa 20 g dan agar 20 g serta ditambahkan aquades sampai 1000 ml,  kemudian  dihomogenkan.  Medium  kemudian disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121 ºC, tekanan 2 atm selama 15 menit. Medium PDB dibuat  dengan  langkah  yang  sama  tetapi  tidak ditambahkan agar.

## Peremajaan Isolat Jamur pada Medium PDA
Jamur Aspergillus sp.  3  diambil  1  ose  secara aseptis, kemudian diinokulasikan pada cawan petri yang berisi medium PDA, selanjutnya diinkubasikan pada suhu ruang selama tiga hari.

## Pembuatan Pelet Miselium pada Medium PDB
Jamur Aspergillus sp.  3  yang  tumbuh  pada medium  PDA  hasil  peremajaan,  diambil  secara aseptis sebanyak 6 plug dan kemudian dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer 250 ml yang berisi 100 ml medium PDB. Labu Erlenmeyer ditutup dengan kapas  dan wrapper ,  kemudian  diinkubasi  pada shaker  dengan  kecepatan 100  rpm  selama  6  x  24 jam.  Pelet  miselium  yang  didapatkan  dipisah  dari medium PDB dengan cara disaring secara aseptis.

## Pengaktifan Bentonit
Bentonit  25  g  dimasukan  ke  dalam beaker glass 250  ml  dan  diaktifkan  dengan  penambahan H 2 SO 4 20%  sebanyak  100  ml  dengan  suhu pengaktifan  110  ºC,  dan  waktu  pengaktifan  30
menit.    Bentonit  yang  telah  aktif  dicuci  dengan akuades panas sampai keasamannya menjadi netral lalu disaring. Bentonit yang telah dicuci dikeringkan menggunakan oven pada suhu 110 ºC selama 2 jam.

## Amobilisasi Pelet Miselium pada Bentonit
Bentonit steril sebanyak 0,24 g dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer 250 ml yang berisi 100 ml medium PDB, selanjutnya pelet miselium diinokulasikan ke dalam labu Erlenmeyer. Kemudian diinkubasi pada shaker dengan kecepatan 100 rpm selama 5X24 jam.

## Uji Dekolorisasi Limbah Batik IB
Pelet miselium yang telah terbentuk dipisahkan  dari  medium  PDB  secara  aseptis  dan dibiarkan  tetap  pada  labu  Erlenmeyer.    Sebanyak 100  ml  Limbah  batik  IB  ditambahkan    pada  labu Erlenmeyer,  kemudian  diinkubasi  pada  shaker dengan  kecepatan  100  rpm  dengan  variasi  waktu inkubasi 0, 6, 12, 18, 24, 30, dan 36 jam.

## Pengukuran Persentase Dekolorisasi
Sampel  limbah  batik  IB  awal  dan  hasil  setiap perlakuan  optimasi  diambil  sebanyak  5  ml,  lalu diukur absorbansinya menggunakan UV- Vis spektrofotometer dengan  panjang  gelombang maksimum (ƛ max) zat warna Indigosol Blue yaitu 604,5nm. Persentase dekolorisasi Limbah batik IB dihitung menggunakan rumus:
D (%) = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐴𝑤𝑎𝑙−𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐴𝑘ℎ𝑖𝑟 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐴𝑤𝑎𝑙 x 100%
Keterangan : D= Dekolorisasi limbah batik IB

## Pengukuran pH
Limbah  batik  IB  sebelum  dan  sesudah didekolorisasi  diukur  menggunakan  pH  meter digital yang sudah dikalibrasi.

## Pengukuran Suhu
Suhu  Limbah  batik  IB  pada  sebelum  dan sesudah didekolorisasi diukur. Pengukuran menggunakan termometer.

## Pengukuran Total dissolved solids (TDS)
Limbah  batik  IB  sebelum  dan  sesudah didekolorisasi  diukur  menggunakan  TDS  meter. Persentase pengurangan TDS dihitung menggunakan rumus:
%TDS = 𝑇𝐷𝑆  𝐴𝑤𝑎𝑙− 𝑇𝐷𝑆 𝐴𝑘ℎ𝑖𝑟 𝑇𝐷𝑆 𝐴𝑤𝑎𝑙 x 100% Pengukuran Berulang Pelet Miselium
Teramobil Bentonit
Pelet  miselium  teramobil  bentonit  yang  telah digunakan  untuk  dekolorisasi  dengan  waktu inkubasi  berbeda,  digunakan  kembali  untuk mendekolorisasi  limbah  batik  IB  dengan  waktu inkubasi  sesuai  perlakuan  sampai  pelet  miselium teramobil  bentonit  tidak  mampu  mendekolorisasi limbah batik IB.
Gambar 1. Histogram persentase rata-rata dekolorisasi limbah batik IB teramobil bentonit dengan lama waktu inkubasi berbeda.  LW0= 0 (kontrol), LW1 =6, LW2 = 12, LW3 = 18, LW 4 = 24, LW5= 30,   LW6 = 36 jam.

## Analisis Data
Data  persentase  dekolorisasi  yang  diperoleh dianalisis menggunakan analisis ragam pada tingkat kepercayaan  95%  dan  99%  dilanjutkan  pengujian lanjut menggunakan uji Beda Nyata Lanjut dengan tingkat kesalahan 1% dan 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  dekolorisasi  limbah  batik menggunakan  jamur Aspergillus sp.  3  teramobil bentonit  pada  lama  waktu  inkubasi  berbeda menunjukkan nilai rata-rata persentase dekolorisasi berkisar antara 93,29% - 98,78% (Gambar 1). Nilai rata-rata persentase dekolorisasi terendah diperoleh pada  perlakuan  24  jam  (LW4)  yaitu  sebesar 93,29%.  Nilai  rata-rata  persentase  dekolorisasi tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  lama  waktu inkubasi 12 jam (LW2) sebesar 98,78%. Besarnya nilai  rata-rata  persentase  dekolorisasi  setiap perlakuan  variasi  lama  waktu  inkubasi  berbeda- beda.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Stephanie (2019),  yang  menyatakan  bahwa  nilai  persentase dekolorisasi berbeda setiap lama waktu inkubasi.
Tabel  1. Uji  Beda  Nyata  Jujur  (BNJ)  persentase dekolorisasi limbah batik menggunakan Aspergillus sp. 3 teramobil bentonit pada lama waktu inkubasi berbeda No Perlakuan Rata-rata Persentase Dekolorisasi (%) 1 LW0 0,00 a 2 LW1 97,43 b 3 LW2 98,78 b 4 LW3 93,99 b 5 LW4 93,29 b 6 LW5 95,28 b 7 LW6 98,03 b
Keterangan: angka yang diikuti huruf yang sama berbeda tidak nyata
Data  persentase  dekolorisasi  limbah  batik menggunakan  jamur Aspergillus sp.  3  teramobil bentonit  pada  waktu  inkubasi  berbeda  yang diperoleh kemudian  dianalisis menggunakan analisis  ragam  (ANOVA)  pada  kepercayaan  95% dan  99%.  kemudian  dilanjutkan  dengan  Uji  Beda Nyata Jujur (BNJ) dengan tingkat kesalahan 1% dan 5%.
Berdasarkan  Tabel  1.  perlakuan  lama  waktu inkubasi 6, 12, 18, 24, 30, dan 36 jam berbeda tidak nyata  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  lama waktu  inkubasi  6  jam  merupakan  waktu  yang efektif  bagi Aspergillus sp.3  teramobil  bentonit untuk mendekolorisasi limbah batik IB. Penelitian yang  dilakukan  oleh  Singh et  al .,  (2013), menyatakan  bahwa Pleurotus  flabellatus efektif mendekolorisasi  limbah Direct  blue pada  lama waktu  inkubasi  6  jam.  Waktu  awal  inkubasi merupakan masa  penyerapan paling  besar, kemudian  pada waktu inkubasi berikutnya kemampuan  penyerapan  mengalami  penurunan karena  jamur  telah  berada  pada  titik  jenuh penyerapan (Novak et al ., 2001).
Pengamatan  visual  limbah  batik  IB  semula berwarna  biru  pekat  mampu  didekolorisasi  oleh jamur Aspergillus sp. 3 teramobil bentonit dengan ditandai dengan berubahnya warna limbah batik IB menjadi  jernih  (Gambar  2.).  Dewi et  al .,  (2018b), limbah batik Indigosol Blue -04 yang berwarna biru didekolorisasi oleh Aspergillus sp. menjadi jernih.
Mekanisme dekolorisasi non-enzimatik terjadi diawal proses yaitu dengan adsorbsi oleh miselium jamur,  kemudian  diikuti  degradasi  zat  warna  dan pemecahan  ikatan  kompleks  oleh  mekanisme enzimatik  (Blanquez et  al .,  2004).    Mekanisme adsorbsi  oleh  miselium  jamur  disebabkan  oleh adanya  pertukaran  ionik  antara  permukaan biomassa jamur dengan zat warna. Biomassa jamur memiliki beberapa gugus fungsional yaitu karboksil,  amino,  fosfat,  dan  fraksi  lipid  (Kang et al ., 2018). Proses adsorbsi zat warna oleh miselium pada penelitian ini ditandai dengan terjadinya
0 97,43 98,78 93,99 93,29 95,28 98,03 0 20 40 60 80 100 120 LW0 LW1 LW2 LW3 LW4 LW5 LW6 P ers en ta se d ek o lo risa si (% ) Perlakuan lama waktu inkubasi
Gambar 2. Hasil dekolorisasi limbah batik IB menggunakan jamur Aspergillus sp. 3 teramobil bentonit dengan lama waktu inkubasi 0 jam (A), 6 jam (B), 12 jam (C), 18 jam (D), 24 jam (E), 30 jam (F), 36 jam (G).
Gambar 3. Miselium Aspergillus sp. 3 teramobil bentonit sebelum dekolorisasi (A), setelah dekolorisasi ( B)
perubahan  warna  miselium  yang  semula  putih kekuningan  menjadi  biru  gelap  (Gambar  4.3). Dekolorisasi mengubah miselium Aspergillus sp. 3 yang  awalnya  putih  menjadi  biru  sesuai  dengan limbah  yang  digunakan  yaitu  limbah  batik Indigosol blue (Dewi et al., 2019b). Mekanisme enzimatik dalam proses dekolorisasi  disebabkan  karena  adanya  enzim ligninolitik yang disekresikan oleh jamur (Dimawarnita  &  Panji,  2019).  Enzim  ligninolitik diantaranya  enzim  Lignin  Peroksidase  (LiP), Mangan Peroksidase (MnP),dan Lakase (Gorska et al ., 2014). Enzim ekstraseluler ligninolitik berfungsi  sebagai  penurun  intensitas  zat  warna dengan cara memecah ikatan kromofor (pembentuk warna)  (Kausik  &  Malik,  2009).  Komponen xenobiotik  yang  terdapat  dalam  limbah  dapat diubah oleh enzim ligninolitik menjadi bentuk yang tidak  berbahaya  bagi  lingkungan  (Yesilada et  al ., 2018).  Enzim  ligninolitik  yang  berperan  paling dominan  dalam  dekolorisasi  yaitu  enzim  lakase (Xin et al ., 2013).
Lakase adalah enzim yang mampu mengoksidasi berbagai senyawa aromatik (terutama senyawa  fenolik)  dengan  akseptor  terakhir  berupa oksigen  dan  air  sebagai  hasil  akhirnya  (Mishra et al ., 2019). Lakase berperan sebagai pemutus ikatan kompleks  dalam  larutan  Indigo  menjadi  senyawa yang lebih sederhana. Lakase mengoksidase indigo menjadi senyawa isatin menggunakan O2. Setelah isatin terbentuk, degradasi selanjutnya berlangsung secara  hidrolitik  tanpa  mediasi  lakase.  Kemudian isatin yang terbentuk tidak stabil dan secara spontan
akan terurai menghasilkan asam antranilat sebagai produk akhir degradasi (Campos et al ., 2001).
Selain  dekolorisasi  melalui  mekanisme  non- enzimatik  dan  enzimatik  oleh  jamur,  bentonit teraktivasi  berperan  dalam  dekolorisasi  limbah (Nurzihan et al ., 2019). Aktivasi bentonit dilakukan dengan  proses  aktivasi  kimia  menggunakan  asam sulfat (H 2 SO 4 ). Pengasaman bentonit bertujuan agar terjadi  pertukaran  ion  Ca 2+ ,  Mg 2+ ,  Al 3+ ,  Fe 3+ dan pengotor  lain  yang  terdapat  pada  kisi  bentonit dengan asam H + dari asam sulfat. Hal ini membuat bentonit  menjadi  aktif,  dan  pori  pada  permukaan bentonit  menjadi  lebih  terbuka,  sehingga  luas permukaan  dan  volume  total  pori  meningkat (Nafsiyah et  al .,  2017).  Semakin  luas  permukaan bentonit maka akan semakin banyak zat warna yang dapat diserap (Susilawati & Naqiatuddin, 2014).
Penelitian ini juga dilakukan pengukuran pH, suhu, dan  TDS  sebelum  dan sesudah  dekolorisasi, serta pemakaian berulang pellet miselium teramobil bentonit.  Derajat  keasaman  (pH)  berpengaruh dalam proses dekolorisasi (Stephanie, 2019). Nilai pH limbah sebelum didekolorisasi yaitu 6,9 namun setelah limbah terdekolorisasi berkisar antara 5,70 – 7,30. Hal ini sesuai dengan penelitian Dewi et al .
(2020), yang menyatakan bahwa setelah dekolorisasi  limbah  mengalami  penurunan  pH. Persentase  dekolorisasi  akan  menurun  seiring dengan peningkatan pH (Martani et al ., 2000). Suhu sebelum  dekolorisasi  30ºC  dan  suhu  setelah dekolorisasi  30ºC-31ºC.  Hal  ini  menandakan selama  proses  dekolorisasi  terjadi  kenaikan  suhu. Aktivitas  metabolisme  jamur  dalam  proses
penguraian substrat menyebabkan suhu meningkat (Gandjar et al ., 2006). Kisaran rata-rata penurunan TDS  pada  penelitian  ini  yaitu  14,63%  -  40,31%. Kadar TDS yang tinggi dalam perairan menyebabkan kualitas air kurang baik (Indihani et al ., 2017), menyebabkan pencemaran, dan kematian terhadap organisme air, serta mengganggu kesehatan  manusia  (Kustiyaningsih  &  Irawanto, 2020).
Tujuan  amobilisasi  salah  satunya  ialah  agar miselium teramobil dapat digunakan beberapa kali reaksi. Oleh sebab itu efisiensi pemakaian miseluim amobil  perlu  diamati,  dengan  cara  mengukur presentase  dekolorisasi  menggunakan  miselium teramobil berulang.
Rata-rata
persentase dekolorisasi mengalami penurunan setiap pengulangan.  Pemakaian  miselium  teramobil berulang  sebanyak  3X  pengulangan  dengan  rata- rata-rata persentase dekolorisasi berkisar 87,73%  - 96,36%.  Penurunan  ini  kemungkinan  disebabkan karena  rusakya  enzim  selama  perlakuan  atau rusaknya pori-pori matriks bentonit (Sutrisno et al ., 2018).

## SIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah penggunaan jamur Aspergillus sp. 3 yang teramobil bentonit dengan lama waktu inkubasi yang berbeda mampu  mendekolorisasi  limbah  batik  IB,  dan Waktu  inkubasi  6  jam  merupakan  waktu  yang efektif bagi jamur Aspergillus sp. 3 yang teramobil bentonit untuk mendekolorisasi limbah batik IB.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis ucapkan terima kasib kepada Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Kepada Masyarakat (LPPM) Badan Layanan Umum (BLU) Unsoed  penelitian  Dr.  Ratna  Stia  Dewi,  S.Si.,  M. Sc.  Skema  Riset  Unggulan  Terapan  yang  telah membiayai penelitian ini.

## DAFTAR REFERENSI
Dewi, R.S., & Dwiputranto, U., 2012. Penggunaan Limbah Medium Tanam Jamur Tiram ( Pleurotus ostreatus ) dalam Penyerapan Warna Limbah  Cair  Batik. Prosiding  Seminar Nasional  “Pengembangan  Sumber  Daya Pedesaan  dan  Kearifan  Lokal  Berkelanjutan II ”. Purwokerto: Jawa Tengah.
Dewi,  R.S.,  Kasiamdari,  R.S.,  Martani,  E.  & Purwestri,  Y.A.,  2018b.  Decolorization  and Detoxification of Batik Dye Effluent Containing  Indigosol  Blue-04B  Using  Fungi Isolated  from  Contaminated  Dye  Effluent. Indonesian  Journal  of  Biotechnology ,  23(2), pp. 54-60.
Dewi,  R.S.,  Kasiamdari,  R.S.,  Martani,  E.  & Purwestri, Y.A., 2019b. Efficiency of Aspergillus sp.  3  to  Reduce  Chromium,
Sulfide, Ammonia, Phenol, and Fat from Batik
Wastewater. IOP
Conference Series:
Environmental Science , 308, pp. 1-8.
Dewi,  R.S.,  Mumpuni,  A.  &  Tsabitah,  N.I.,  2020. Batik Dyes Decolorization by  Immobilized of Aspergillus sp .  IOP  Conf.  Series:  Earth  and Environmental Science , Volume 550, pp. 1-9.
Dewi,  S.R.,  Kasiamdari,  S.R.,  Martani,  E.  & Purwestri,  Y.A.,  2016.  Studi  Komparatif Penurunan Warna Limbah Cair Batik
Menggunakan Aspergillus  niger . Prosiding Symbion  (Symposium  on  Biology  Education), Prodi  Pendidikan  Biologi,  FKIP,  Universitas Ahmad Dahlan , pp. 269-278.
Dimawarnita, F. & Panji, T., 2019. Aktivitas Enzim Ligninolitik Pleurotus  ostreatus pada  Media yang  Mengandung  TKKS  dan  Aplikasinya untuk  Dekolorisasi  Zat  Warna. Menara Perkebunan , 87(1), pp. 31-40.
Dwiyanti,  D.  &  Kuswytasari,  N.D.,  2016. Amobilisasi Enzim Ligninolitik Kapang Tanah pada Bentonit. Jurnal Sains dan Seni ITS , 5(2), pp. 77-81.
Dwiyanti,  D.  &  Kuswytasari,  N.D.,  2016. Amobilisasi  Enzim  Ligninolitik  Kapang Tanah  pada  Bentonit. Jurnal  Sains  dan  Seni ITS , 5(2), pp. 77-81.
Gandjar,  I.,  Sjamsuridjal,  W.  &  Oetari,  A.,  2006. Mikologi Dasar dan Terapan . Jakarta: Yayasan Obor Indonesia.
Gorska,  E.B.,  Jankiewicz,  U.,  Dobrzynski,  J., Galazka,  A.,  Sitarek,  M.,  Gozdowski,  D., Russel, S., & Kowalczyk, P., 2014. Production of  Ligninolytic  Enzyme by  Cultures  of  White Rot  Fungi. Polish  Journal  of  Microbiology , 63(4), pp. 461-465.
Haedar,  N.,  Fahrusin.,  Syam,  N.A.,  &  Talessang, N.H.,  2019.  Dekolorisasi  dan  Degradasi Limbah  Zat  Warna  Naftol  oleh  Jamur  dari Limbah  Industri  Batik. Jurnal  Ilmu  Alam  dan Lingkungan , 10(2), pp. 1-8.
Hardyanti,  I.S.,  Nurani,  I.,  Hardjono,  D.S., Apriliani,  E.,  &  Wibowo,  E.A.P.,  2017. Pemanfaatan  Silika  (SiO2)  dan  Bentonit sebagai  Adsorben  Logam  Berat  Fe  pada Limbah Batik. Jurnal Sains Terapan , 3(2), pp. 1-5.
Hasri, Sudding & Amiruddin, A., 2018. Biodegradasi  Zat  Warna  Acid  Orange  7 Menggunakan  Enzim  Jamur  Tiram  Putih ( Pleurotus ostreatus ). Jurnal Kimia Riset , 3(1), pp. 47-51.
Hefriani,  Z.H.,  Rezagama,  A.  &  Nur,  M.,  2017. Pengolahan  Limbah  Cair  Zat  Warna  Jenis Indigosol  Blue (C.IVAT  BLUE  4)  sebagai Hasil  Produksi  Kain  Batik  Menggunakan Metode  Ozonasi  dan  Adsorpsi  Arang  Aktif Batok  Kelapa  terhadap  Parameter  COD  dan
Warna. Jurnal Teknik Lingkungan , 6(3), pp. 1- 10.
Indihani,  R.R.,  Nugroho,  W.A.  &  Musthofa,  L.,
2017. Pengaruh Konsentrasi Aktivator Arang Aktif  dan  Waktu  Kontak  Limbah  terhadap
Kandungan TDS dan Zat Warna Limbah Cair Batik. Jurnal  Keteknikan  Pertanian  Tropis dan Biosistem , 5(3), pp. 281-288.
Kang,  Y.  et  al.,  2018.  Decolorization  of  Mordant Yellow 1 Using Aspergillus sp. TS-A CGMCC 12964  by  Biosorption  and  Biodegradation. Bioengineered , 9(1), pp. 222-232.
Kartikasari, T.H., Lestari, S. & Dewi, R. S., 2012. Adsorpsi  Zn  dan  Dekolorisasi  Limbah  Batik Menggunakan  Limbah  Baglog Pleurotus ostreatus dengan Sistem Inkubasi dan Volume Limbah  Batik  Berbeda. Biosfera ,  29(3),  pp. 168-174.
Kausik,  P.  &  Malik,  A.,  2009.  Fungal  Dye Decolorization: Recent Advantages and Future Potential. Environment  International ,  Volume 35, pp. 127-141.
Kustiyaningsih,  E.  &  Irawanto,  R.,  2020. Pengukuran Total Dissolve Solid (TDS) dalam Fitoremediasi  Detergen  dengan  Tumbuhan Sagittaria  lancifolia. Jurnal  Tanah  dan Sumberdaya Lahan , 7(1), pp. 141-148.
Martani,  E.,  Rahayu,  S.A.  &  Murachman,  N.H.H. B., 2000. Optimization Condition of Bioprocess  for  Phenol  Degradation  in  Oil Refinery Wastewater. Berkala Ilmiah Biologi , 2, pp. 127-133.
Mishra,  A.,  Kumar,  S.  &  Bhatnagar,  A.,  2019. Potential of Fungal Laccase in Decolorization of  Synthetic  Dyes. Microbial  Wastewater Treatment , 7, pp. 127-151.
Nafsiyah, N., Shofiyani, A. & Syahbanu, I., 2017. Studi  Kinetika  dan  Isoterm  Adsorpsi  Fe  (III) pada Bentonit Teraktivasi Asam Sulfat. Jurnal Kimia Khatulistiwa , 6(1), pp. 57-63.
Nopiani,  A.S.Y.  &  Hadi,  S.,  2016.  Peningkatan Kestabilan  Enzim  Lipase  dari Pseudomonas aeruginosa ATCC  27853 dengan  Amobilisasi
Menggunakan Bentonit. Jurnal Analis Kesehatan , 5(1), pp. 504-509.
Novak,  J.T.,  Robert,  C.H.  Clifford,  W.R.,  2001. Biological Treatment of a Synthetic Dye Water and an Industrial Textile Wastewater Containing  Azo  Dye  Compound .  Blacksburg Viriginia:  Viriginia  Polytechnic  Institute  and State University.
Pratiwi, N.P.R.K., Sibarani, J. & Puspawati, N.M.,
2019.  Aplikasi  Koagulan  Alami  Ekstrak  Air Kulit  Singkong  ( Manihot  esculenta )  dalam Pengolahan  Limbah  Zat  Warna Malachite Green , Remazol  Blue ,  dan  Violet. Cakra Kimia , 7(2), pp. 1-9.
Sastrawidana, I.D.K., Maryam, S. & Sukarta, I.N., 2012.  Perombakan  Air  Limbah  Tekstil Menggunakan Jamur Pendegradasi Kayu Jenis Polyporus sp Teramobil pada Serbuk Gergaji. Jurnal Bumi Lestari , 12(2), pp. 382-389.
Singh, M.P., Vishwakarma, S.K., & Srivasta, K. A.,
2013.  Bioremediation  of  Direct  Blue  14  and Extracellular Ligninolytic Enzyme Production by  White  Rot  Fungi:  Pleurotus  spp. Biomed Research International , 2013.
Sukarta, I..N. & Sumahandriyni, P., 2013. Pengaruh Konsentrasi  Ammonium  Sulfat  ((NH4)2SO4) Optimasi Jamur Jerami Padi ILS (Isolat Lokal Singaraja) untuk Biodegradasi Zat Warna Azo Jenis Remazol Red. Jurnal Kimia , 7(1), pp. 91- 100.
Susilawati  &  Naqiatuddin,  N.A.,  2014.  Chemical Activation  of  Bentonite  Clay  and  Its Adsorption Properties of Methylen Blue . Jurnal Natural , 14(2), pp. 7-12.
Sutrisno.,  Roosdiana,  A.  &  Mahdi,  C.,  2018. Penentuan  Kondisi  Optimum  Amobilisasi Xilanase dari Trichoderma viride pada Matrik Bentonit. LPPM-Universitas Negeri Surabaya , pp. 576-582.
Theresia,  R.R.,  Lestari,  S.  &  Dewi,  R.S.,  2012. Dekolorisasi  beberapa  Macam  Limbah  Cair Batik Menggunakan Limbah Baglog P leurotus ostreatus dengan  Waktu  Inkubasi  Berbeda. Majalah  Ilmiah  Biologi  Biosfera ,  29(3),  pp. 136-140.
Wulandari, F.Y., Ratnaningtyas, N.I. & Dewi, R.S.,
2014. Dekolorisasi Limbah Batik Menggunakan Limbah Medium Tanam Pleuotus ostreatus pada Waktu Inkubasi yang Berbeda. Scripta Biologica , 1(1), pp. 71-75.
Xin, F., Sun, Y., Hu, S., Cheong, K. & Geng, A., 2013. Decolourization of Remazol Briliant Blue R by Enzymatic Extract and Submerged Cultures of A Newly Isolated Pleurotus ostreatus MR3. Academic Journals , 12(39), pp. 5778-5783
Yesilada,  O.,  Birhanli,  E.  &  Geckil,  H.,  2018.
Bioremediation  and  Decolorization  of Textile  Dyes  by  White  Rot  Fungi  and Laccase  Enzyme.  In:  Prasad  R.  (eds)
Mycoremediation and Environmental Sustanability . Springer International Publishing