## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF EXTRACTS AND FRACTIONS OF SPONGE Liosina paradoxa FROM MANTEHAGE ISLAND WATERS

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI  EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Liosina paradoxa

## DARI PERAIRAN PULAU MANTEHAGE
Endro Josua 1)* , Defny Wewengkang 1) , Elly Suoth 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado *endrojosua96@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges are one  of  the  biota  components  that  make  up  coral  reefs  that  have  bioactive  potential,  which has not been widely utilized. The secondary metabolite content of sponges is known to be able to ward off and  inhibit  the  pathogenic  bacteria  that  interfere  with  it.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine whether the extracts and fractions of the Liosina paradoxa sponge collected from Mantehage Island waters able  to  inhibit  the  growth  of  Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus  bacteria.  The  sample  was extracted  by  maceration  method  with  ethanol  solvent  and  the  fractionation  method  used  was  liquid  - liquid fractionation. Antibacterial activity was tested using the agar diffusion method (Kirby and Bauer disc  diffusion).  The  results  obtained  from  the  antibacterial  activity  test  against  the  Escherichia  coli bacteria, the methanol fraction got an average result of 9.94 mm and the average result of the chloroform fraction was 8.06 mm. In the Staphylococcus aureus bacteria, the methanol fraction got an average yield of 11.04 mm and the chloroform fraction an average yield of 7.19 mm, while the ethanol extract and n- hexane  fraction  did  not  have  antibacterial  activity  on  the  two  tested  bacteria.  Methanol  fraction  has moderate inhibitory power against Escherichia coli bacteria and strong inhibition against Staphylococcus aureus bacteria, while chloroform fraction has moderate inhibitory against both tested bacteria.
Keywords: Liosina paradoxa, Antibacterial, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang mempunyai potensi bioaktif yang  belum  banyak  dimanfaatkan.  Kandungan  metabolit  sekunder  dari  spons  diketahui  mampu menangkal  dan  menghambat  bakteri  patogen  pengganggunya.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  apakah  ekstrak  dan  fraksi  dari  spons Liosina  paradoxa yang  diperoleh  dari  perairan Pulau Mantehage  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus . Sampel diekstraksi dengan metode maserasi dengan pelarut etanol dan metode fraksinasi yang digunakan yaitu  fraksinasi  cair  –  cair.  Aktivitas  antibakteri  diuji  menggunakan  metode  difusi  agar  ( disc  diffusion Kirby  and  Bauer ).  Hasil  yang  didapat  dari  uji  aktivitas  antibakteri  pada  bakteri Escherichia coli , fraksi metanol mendapatkan hasil rata–rata 9,94 mm dan pada fraksi kloroform  hasil  rata  –  rata  8,06  mm.  Pada bakteri Staphylococcus  aureus ,  fraksi  metanol  mendapatkan  hasil  rata  -  rata  11,04  mm  dan  pada  fraksi kloroform  hasil  rata  –  rata  7,19  mm,  sedangkan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  n  –  heksan  tidak  memiliki aktivitas antibakteri pada kedua bakteri uji. Fraksi metanol memiliki daya hambat sedang terhadap bakteri Escherichia  coli dan  daya  hambat  kuat  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ,  sementara  fraksi kloroform memiliki daya hambat sedang terhadap kedua bakteri uji.
Kata kunci : Liosina paradoxa, Antibakteri, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Terapi penyakit infeksi dengan menggunakan  antibiotik  sampai  sekarang  terus berkembang,  penggunaannya  pun  meningkat. Penyakit  infeksi  di  Indonesia  masih  termasuk dalam  sepuluh  penyakit  terbanyak.  Salah  satu efek samping yang dikhawatirkan ialah resistensi antibiotik (Kemenkes, 2011).
Bakteri yang resisten dapat menyebabkan infeksi  yang  lebih  berat  dan  hanya  bisa  diobati dengan  antibiotik  alternatif  yang  terbatas  dan cenderung  lebih  mahal.  Pada  banyak  penelitian, resistensi jelas terbukti meningkatkan morbiditas,  mortalitas,  biaya  pengobatan  dan menurunkan kualitas pelayanan kesehatan. Oleh karena itu diperlukan penelitian tentang senyawa baru  sebagai  antibakteri  yang  dapat  digunakan sebagai alternatif pengobatan (Widodo, 2010).
Spons  merupakan  salah  satu  komponen biota penyusun terumbu karang yang penyebarannya  cukup  luas.  Terdapat  15.000 spesies  spons  di  seluruh  dunia  dan  sekitar  45% senyawa bioaktif ditemukan pada spons (Denning, 2006).
Kandungan  metabolit  sekunder  dari spons diketahui mampu menangkal  dan menghambat  bakteri  patogen  pengganggunya. Hal  ini  membuat  spons  menjadi  salah  satu hewan  laut  yang  menarik  untuk  diteliti  karena berpotensi  besar  untuk  dikembangkan  dalam bidang  pengobatan  yaitu  sebagai  antibakteri (Abubakar et al ., 2011; Suparno, 2005).
Escherichia  coli merupakan  bakteri gram  negatif  berbentuk  batang,  merupakan bakteri enterik ( Enterobactericeae ) yaitu kuman flora normal  yang  ditemukan  dalam  usus  besar manusia.  Bakteri  ini  bersifat  patogen  apabila berada diluar usus, yaitu lokasi normal tempatnya berada dan  tempat  lain  yang  jarang  ditinggali oleh  bakteri  ini. Escherichia  coli sering menimbulkan  infeksi  pada  saluran  kemih, saluran  empedu  dan  tempat-tempat  lain  di rongga  perut. Escherichia  coli juga  merupakan penyebab  diare  dan  infeksi  saluran  kemih (Jawetz et al , 2005).
Staphylococcus aureus merupakan bakteri  Gram  positif  berbentuk  bulat,  tersusun dalam  kelompok-kelompok  yang  tidak  teratur seperti  buah  anggur,  fakultatif  anaerob,  tidak membentuk spora dan tidak bergerak. Bakteri ini tumbuh  pada  suhu  optimum  37  ºC,  tetapi
membentuk  pigmen  paling  baik  pada  suhu kamar (20-25 ºC). Koloni pada perbenihan padat berwarna  abu-abu  sampai  kuning  keemasan, berbentuk  bundar,  halus,  menonjol  dan  berkilau (Brooks et al., 2007).
Oeiyano et al (2019) dalam penelitiannya  melaporkan  bahwa  fraksi  metanol spons Liosina  paradoxa menunjukkan  aktivitas antimikroba  paling  besar  terhadap Escherichia coli dengan  nilai  rata-rata  11,33  mm,  dengan kategori  kuat,  fraksi  kloroform  7,33  mm kategori  sedang,  fraksi  n-hexan  7,16  mm kategori  sedang,  ekstrak  etanol  7,83  mm kategori aktivitas antimikroba sedang.

## METODOLOGI PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Pengambilan sampel dilakukan di Perairan  Pulau  Mantehage  Sulawesi  Utara. Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Farmasi Lanjut Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, dan di Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan Fakultas  Pertanian  Universitas  Sam  Ratulangi pada bulan Oktober 2020 – Maret 2021.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  yaitu  eksperimen laboratorium  yang  dilakukan  dengan  cara menguji komponen yang diekstrak dan difraksinasi dari spons Liosina paradoxa sebagai antibakteri  pada  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dengan  metode  difusi cakram.

## Alat Dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting, tabung oksigen, snorkel, fins, zipper lock bag , botol 600 ml,  talenan, cool  box ,  pisau,  Erlenmeyer (Pyrex),  corong, rotary  evaporator, timbangan analitik,  corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia (Pyrex),  cawan  petri,  autoklaf,  pinset, magnetic stirrer , pipet tetes, micro tubes , hot plate, batang pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi, tabung  reaksi,  lemari  pendingin,  inkubator,
cakram ( paper disc) , mikropipet, mistar berskala, kertas label, spidol permanen.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Liosina paradoxa , bakteri uji Escherichia coli  dan  Staphylococcus aureus , etanol, akuades,  metanol,  n-heksan,  kloroform , pepton, natrium  klorida,  ekstrak daging  ( beef  extract ), agar, kloramfenikol, paper disc , tissue, aluminium foil , kertas saring.
Pengambilan Sampel dan Preparasi Sampel Sampel spons Liosina paradoxa diperoleh  dari  perairan  Pulau  Mantehage. Sebelum  sampel  diambil,  difoto  terlebih  dahulu menggunakan  kamera  bawah  laut.  Sampel diambil  dengan  menggunakan alat  bantu  ( scuba diving ,  tabung  oksigen,  ziplok  dan  pisau), kemudian  dimasukkan  dalam  ziplock  dan diberikan  label,  sampel  dimasukkan  ke  dalam kotak  dingin  ( cool  box )  yang  berisi  es  batu  dan tidak  terkena  matahari  secara  langsung.  Sampel yang  telah  didapat  langsung  dibawa  ke Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam  Ratulangi. Sampel  dibersihkan,  lalu  dipotong  kecil-kecil, diberi label serta nomor sampel untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  spons Liosina  paradoxa dibuat dengan  cara  maserasi.  Sampel  sebanyak  240 gram  dibersihkan  dan  dipotong  kecil-kecil dimasukkan  ke  dalam  botol  600  ml,  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  sampai  sampel terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama  24 jam. Sampel yang direndam disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan  filtrat 1 dan debris 1. Debris 1 kemudian diremaserasi dengan pelarut etanol sampai terendam semuanya  dan  dibiarkan  selama 24 jam, sampel tersebut  disaring  menggunakan  kertas  saring menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2 kemudian  diremaserasi  dengan  pelarut  etanol sampai  terendam  semuanya  dan  dibiarkan selama 24    jam,    sampel    tersebut    disaring menggunakan      kertas      saring  menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1,2, dan 3 dicampur menjadi  satu      kemudian      disaring,      lalu
dievaporasi    menggunakan rotary evaporator dan  selanjutnya  ekstrak  kasar  spons Liosina paradoxa digunakan  dalam  fraksinasi  dan pengujian antibakteri.

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak  kasar  spons Liosina  paradoxa yang diperoleh dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dengan metanol  80%  sebanyak  100  mL,  setelah  larut, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100 mL,  setelah  itu  dikocok  dalam  corong  pisah sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai  terbentuk lapisan metanol dan lapisan n-heksan, kemudian masing-masing lapisan ditampung dalam  wadah yang  berbeda.  Lapisan  n-heksan  kemudian dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  n-heksan.  Lapisan  metanol  ditambahkan akuades  sebanyak  100  mL  kemudian  dipartisi dengan  pelarut  kloroform  dengan  perbandingan 1:1  v/v  dalam  corong  pisah,  setelah itu dikocok kembali  sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai tebentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan  metanol  dan kloroform,  kemudian  masing-  masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda.  Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering lalu  ditimbang berat  sampel  dan  diperoleh  fraksi  kloroform. Lapisan metanol kemudian dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering, lalu  ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  metanol. Ketiga  fraksi  yang  diperoleh  akan  digunakan dalam pengujian antibakteri.

## Sterilisasi
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antibakteri  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit,  pinset dibakar dengan pembakaran di atas api langsung dan media disterilkan di autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  dan aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian dibuat homogen menggunakan magnetic  stirrer lalu  diautoklaf  pada  suhu  121
˚C selama 15 menit. Dipipet 1 mL media cair B1 kemudian    dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi dan ditutup dengan alminium foil. Media cair B1 siap  digunakan  sebagai  media  kultur  bakteri (Ortez, 2005).

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol
Negatif
Kontrol positif dalam pengujian antibakteri  ini  menggunakan  kloramfenikol paper  disc .    Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan  pelarut metanol,  dengan  cara  dibuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  µL metanol  kemudian  ditotolkan  pada  kertas cakram (Lalamentik, 2017).

## Kultur Bakteri Uji
Bakteri yang digunakan yaitu Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus . Bakteri  dipipet  sebanyak  100  µL  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi  yang  berisi  media  cair yang  sudah  disiapkan  sebelumnya.  Tiap  tabung reaksi  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan dimasukkan kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara dilarutkan  2  mg  ekstrak  kasar  spons Liosina paradoxa ke  dalam  400  μL  metanol  sehingga menghasilkan konsentrasi larutan uji sebesar 250 μg/50 μL. Perlakuan yang sama dilakukan pada fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract ) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g,  agar 1,5 g dan  aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai rata  kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirre r  lalu  diautoklaf  pada  suhu  121 ˚C  selama  15  menit.  Media  agar  B1  siap digunakan untuk uji aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada  pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  cakram  ( Paper  disc )
yang  digunakan  berukuran  6  mm  dengan  daya serap  50  μL  tiap  cakram.  Sampel  yang  telah ditentukan  konsentrasinya  yaitu  250  μg/50  μL ditotolkan  pada  masing-masing cakram  dengan menggunakan  mikropipet.  Bakteri  yang  telah dikultur  dalam  hal  ini Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dipipet  dan  diinokulasi pada media Agar B1, lalu media agar yang telah diinokulasi dituangkan ke dalam cawan petri dan ditunggu  sampai  media  mengeras.  Kertas cakram  yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  spons Liosina  paradoxa diletakkan  menggunakan pinset  ke  dalam  cawan  petri  dan  kemudian diinkubasi selama 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran  cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan dengan  diameter  zona  bening.  Diameter  zona bening  diukur  menggunakkan  mistar  berskala. Diameter  ≤  5  mm  memiliki  kekuatan  daya hambat  lemah,  6-10  mm  daya  hambat  sedang, 11-20  mm  daya hambat kuat  dan ≥21 mm daya hambat sangat kuat (Susanto, dkk, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Proses perendaman sampel pada metode maserasi  dapat  membuat    dinding  sel  pecah karena  adanya  perbedaan  konsentrasi  di  dalam dan  diluar  sel. Konsentrasi  di  luar  sel  lebih tinggi  dari  konsentrasi  di dalam  sel,  sehingga dinding  sel  menjadi  pecah  karena  tidak  dapat menahan  tekanan  dari  perbedaan  konsentrasi (Harborne, 1996).
Sampel dimaserasi dengan menggunakan  pelarut  etanol  karena  etanol dipertimbangkan  sebagai  cairan  penyari  yang efektif.  Kapang  dan  kuman  sulit tumbuh  dalam etanol  20%  ke  atas,  tidak  beracun,  absorbsinya baik,  dan  dapat  bercampur  dengan  air  pada segala  perbandingan.  Untuk  konsentrasi  yang digunakan yaitu etanol 95%, ini karena semakin tinggi  konsentrasi  pelarut  yang digunakan maka semakin baik pula proses penarikan senyawa dari dalam sel (Sa’adah dan Nurhasnawati, 2015).
Hasil  ekstrak  yang  diperoleh  kemudian dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator . Ekstrak  kasar  yang  diperoleh  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Ekstrak kasar yang diperoleh difraksinasi  dengan  tiga  pelarut  berbeda  yang mewakili  pelarut  polar,  semi  polar,  dan  non polar. Dalam hal ini pelarut yang digunakan ialah metanol,  kloroform  dan  n-heksan.  Dari  proses ini, dapat diketahui sifat kepolaran dari senyawa yang akan dipisahkan, dimana senyawa-senyawa yang  bersifat  non  polar  akan  larut dalam pelarut yang  non  polar  sebaliknya  senyawa-senyawa yang bersifat polar akan larut dalam pelarut yang bersifat polar juga (Irwan, 2017).
Pada  proses  fraksinasi,  ekstrak  kasar etanol  diambil  sebanyak  2,50  gram.  Hasil randemen  ekstrak  dan  fraksi  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen Ekstrak Fraksi  Spons
Liosina paradoxa
No Sampel Berat (g) Randeme n (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 5,24 2,18 Coklat 2 Fraksi n-Heksan 0,09 3,60 Kuning 3 Fraksi Kloroform 0,06 2,40 Putih Keabuan 4 Fraksi Metanol 1,47 58,80 Putih
Pelarut  yang  berbeda  akan  melarutkan senyawa-senyawa  yang  berbeda  tergantung berdasarkan  tingkat  kepolaran.  Oleh  karena  itu, jumlah  ekstrak  yang  dihasilkan  tergantung  dari jenis  pelarut  yang  dipakai  (Mujipradhana et  al , 2018).  Berangkat  dari  teori  tersebut,  dapat dilihat pada tabel 1 bahwa hasil yang didapatkan berbeda-beda,  fraksi  metanol  memiliki  hasil rendemen  paling tinggi.  Hal  ini  menunjukkan bahwa spons Liosina paradoxa banyak mengandung  senyawa  yang  bersifat  polar sehingga  pelarut  metanol  banyak  menarik senyawa tersebut dari dalam sampel.

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri
digunakan  metode  difusi  agar  ( Disk  diffusion Kirby  and  Bauer yang  telah  dimodifikasi),  dan bakteri  yang  digunakan  ialah Escherichia  coli yang  mewakili  bakteri  Gram  negatif  dan Staphylococcus  aureus yang  mewakili  bakteri Gram  positif.  Hal  ini  dilakukan  agar  dapat mengetahui  apakah  spons Liosina  paradoxa memiliki  sifat  antibakteri  dengan  spektrum  luas atau tidak. Suatu antibakteri dikatakan berspektrum  luas  apabila  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif (Dwijoseputro, 1990).
Zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar cakram  ( paper  disc )  yang  berukuran  6  mm, menunjukkan  adanya  aktivitas  penghambat pertumbuhan bakteri yang dihasilkan oleh spons Liosina paradoxa . Pengamatan dilakukan setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37 ℃ dengan tiga kali pengulangan pada masing- masing ekstrak dan fraksi. Pengulangan dilakukan  untuk  mengakuratkan  hasil  yang diperoleh (Mujipradana et al , 2018).
Tabel  2. Hasil  pengukuran  diameter  zona bening  ekstrak  dan  fraksi  spons Liosina paradoxa terhadap Escherichia  coli dan Stapphylococcus aureus.
EE
FK FH FM c+ c- Ec - 7,66 - 11,03 - 7,97 - 8,95 28,63 - - 8,56 - 9,86 ∑ - 24,19 - 29,84 Rata -rata - 8,06 - 9,94 Sa - 7,20 - 12,83 - 7,13 - 11,01  30,38 - - 7,26 - 10,38 ∑ - 21,59 - 34,22 Rata -rata - 7,19 - 11,04
Keterangan:
EE  : Ekstrak Etanol       FM  : Fraksi Metanol FK  : Fraksi Kloroform   C+: Control Positif FH  : Fraksi Heksan        C- : Control Negatif
Hasil  pengukuran  rata  –  rata  diameter daya  antibakteri  dari  ekstrak  etanol,  fraksi klorofom,  fraksi  n  –  heksan,  dan fraksi  metanol ditunjukkan  pada  tabel  2.  Hasil  pengukuran diameter yang diperoleh digolongkan berdasarkan  kriteria  kekuatan  daya  antibakteri menurut Davis dan Stout (1971) yang ditunjukkan pada tabel 3.
Tabel 3. Kriteria kekuatan daya antibakteri Diameter Zona Bening (mm) Kategori >20 Sangat Kuat 10-20 Kuat 5-10 Sedang <5 Lemah
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah Kloramfenikol paper  disc karena  kloramfenikol merupakan  antibiotik  bersifat  bakteriostatik dan mempunyai  spektrum  luas.  Kloramfenikol efektif  untuk  pengobatan  infeksi  berat  yang disebabkan  gram  positif  dan  gram  negatif (Soekardjo  dan  Siswandono,  2000).  Diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  kloramfenikol pada bakteri Escherichia coli yaitu sebesar 28,63 mm  dan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus yaitu sebesar 30,38 mm.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam pengujian  ialah  Metanol,  hal  ini  dikarenakan pelarut  yang  digunakan  untuk  melarutkan ekstrak  dan  semua  fraksi  sebagai  sampel  uji adalah  metanol.  Kontrol  negatif  ini  bertujuan untuk membuktikkan bahwa aktivitas antibakteri yang  dihasilkan  berasal  dari  sampel uji  spons Liosina  paradoxa dan  bukan  dari  pelarutnya. Sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh,  kontrol negatif  yang  digunakan  dalam  hal  ini  ialah metanol  tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas antibakteri  baik  terhadap  bakteri Escherichia coli maupun bakteri Staphylococcus aureus . Hasil yang diperoleh pada ekstrak etanol tidak  menunjukkan  adanya  zona  bening  yang terbentuk  terbentuk  di  sekitar  cakram,  pada bakteri Escherichia coli maupun Staphylococcus aureus .  Ini  berarti  senyawa  yang  terkandung dalam  ekstrak  etanol  spons Liosina  paradoxa tidak  memiliki aktivitas antibakteri.
Hasil  yang  diperoleh  pada  fraksi metanol menunjukkan adanya zona bening yang terbentuk  disekitar  cakram  pada  kedua  bakteri uji Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . Zona  bening  yang  terbentuk  merupakan  yang terbesar  dibanding  dengan  ekstrak  dan  fraksi lainnya  yaitu  dengan  rata  –  rata  diameter  9,94 mm dengan kategori sedang pada Eschericia coli dan  11,04  mm  dengan  kategori  kuat  pada Staphylococcus aureus. Ini menunjukkan bahwa senyawa  yang  terdapat  pada  fraksi  metanol memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan  spektrum luas  karena  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Gram  negatif dan Gram positif.
Hasil  yang  diperoleh  pada  fraksi  n  – heksan  tidak  menunjukkan  adanya zona  bening yang  terbentuk  di  sekitar  cakram,  baik  pada bakteri Escherichia coli maupun Staphylococcus aureus .  Ini  berarti  bahwa  senyawa  yang terkandung  dalam  fraksi  n  –  heksan  spons Liosina  paradoxa tidak  memiliki  aktivitas antibakteri.
Hasil  yang  diperoleh  pada  fraksi kloroform  menunjukkan  adanya  zona  bening yang  terbentuk  di  sekitar  cakram  pada  kedua bakteri  uji Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .  Zona  bening  yang  terbentuk  memiliki rata  –  rata  diameter  9,06  mm  dengan  kategori sedang  pada Eschericia  coli dan  7,19  mm dengan  kategori  sedang  pada Staphylococcus aureus. Ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  yang terdapat pada fraksi klorofom memiliki aktivitas antibakteri dengan spektrum luas karena mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram negatif dan Gram positif.
Hasil  yang  didapat  dari  pengujian  ini ialah spons Liosina paradoxa memiliki aktivitas antibakteri  pada  fraksi  metanol  dan  fraksi kloroform-nya dengan kategori kuat dan sedang. Pada  ekstrak  etanol  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri,  hal  ini  dikarenakan  pada  ekstrak tersebut  masih  mengandung  banyak  senyawa yang  tidak  spesifik, dimana  masing  –  masing senyawa  tersebut  mempunyai  fungsi  yang berbeda-  beda.  Setelah  dilakukan  pemisahan senyawa  berdasarkan  tingkat  kepolarannya melalui  proses  fraksinasi  barulah  senyawa  – senyawa  tersebut  menjadi  lebih  spesifik  dari sebelumnya,  dan  didapatilah  senyawa  yang bersifat polar dan semi polar pada spons Liosina paradoxa yang memiliki aktivitas antibakteri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  sampel  spons Liosina paradoxa yang  diambil  dari  perairan  pulau Mantehage  memiliki aktivitas  antibakteri  pada fraksi  metanol  dengan  kategori  daya  hambat sedang pada  bakteri Escherichia  coli dan  kuat pada Staphylococcus aureus dan fraksi kloroform  dengan  kategori  daya  hambat  sedang pada kedua bakteri uji.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap  spons Liosina  paradoxa khususnya untuk  ekstrak  dan  fraksi  yang  tidak  memiliki aktivitas  antibakteri  kemungkinan  memiliki fungsi  yang  lain  seperti  antioksidan  dan sebagainya.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar,  H.,  Wahyudi,  A.T.,  Yuhana,  M. 2011. Skrining Bakteri yang Berasosiasi dengan  Spons Jaspis  sp .  Sebagai Penghasil Senyawa Antimikroba. Jurnal Ilmu Kelautan . 16(1): 35-40.
Brooks,  G.F.,  Butel,  J.F.,  Morse,  S.A.,  editors. 2007. Jawetz,  Melnick  &  Adelberg Mikrobiologi  Kedokteran  (25th  ed) . Jakarta: EGC ; p. 206-11. Davis,  W.W.,  T.R.  Stout.1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Assay. Journal of Microbiology . 22 :659-665.
Denning,  D.  2006  . Branches  on  the  Tree  of
Life: Sponges . From http://ebiomedia.com/prod/BOspo nges.html.  [diakses  pada  13  Oktober 2020] Dwijoseputro. (1990). Dasar-dasar mikrobiologi (Ed. ke-11) . Jakarta: Djambtan.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun Modern Menganalisis Tumbuhan  Edisi  Kedua .  Diterjemahkan oleh  Kosashi  dan  Iwang  Soedira. Bandung : ITB Press.
Jawetz,  E.,  Melnick,  J.,  Adelberg,  E.  2005. Mikrobiologi  Kedokteran  (terjemahan) Edisi ke 25 . Jakarta : EGC.
Kemenkes  RI,  2011, Modul  Penggunaan  Obat Rasional ,  Bina  Pelayanan  Kefarmasian, Jakarta.
Lalamentik,  G.  2017. Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Karang Lunak Klyxum sp. yang Diperoleh dari Teluk Manado . [ Skripsi ].
Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Mujipradana,  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,E. Suryanto.  2018.  Aktivitas  Antimikroba dari Ekstrak Ascidian Herdmania momus pada Mikroba Patogen Manusia.
Pharmacon . 7(3): 338-347.
Oeiyano,  W.,  Simbala,  H.,  Rotinsulu,  H.  2019.
Uji  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  dan Fraksi  Spons  Liosina  paradoxa  Dari Perairan Desa Tumbak Minahasa Tenggara Terhadap Pertumbuhan Mikroba Staphylococcus aureus , Eschericia  coli ,  dan Candida  albicans , Jurnal Pharmacon . Vol. 8 (3) . Hal. 629. Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed).
American society  for  Microbiology,
America. Sa’adah, H., Nurhasnawati, H. 2015. Perbandingan  Pelarut  Etanol  dan  Air Pada Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai ( Eleutherine Americana Merr) Menggunakan Metode Maserasi . Jurnal  Ilmiah  Manuntung .  Vol. 1(2) . Hal. 150. Soekardjo,  B.,  Siswandono.  2000. Kimia Medisinal. Surabaya : UNAIR Press. Suparno.  2005. Kajian  Bioaktif  Spons  Laut (Porifera  :  Demospongiae)  Suatu
Peluang Alternatif Pemanfaatan
Ekosistem  Karang  Indonesia  Dalam Bidang Farmasi . Bogor : IPB.
Susanto,  D.,  Sudrajat  dan  R.  Ruga.  2012.  Studi Kandungan  Bahan  Aktif  Tumbuhan Meranti Merah ( Shorea leprosula Miq) Sebagai  Sumber  Senyawa  Antibakteri . Mulawarmnan  Scientifie .  Vol. 11  (2) : 181-190. Widodo,  D.  2010. Kebijakan  Penggunaan Antibiotika  Bertujuan  Meningkatkan Kualitas Pelayanan Pasien dan Mencegah Peningkatan Resistensi
Kuman .  Jakarta  :  CDK  (Cermin  Dunia Kedokteran).