## PERTUMBUHAN Nephentes mirabilis PADA MEDIA DENGAN PENAMBAHAN ARANG AKTIF DAN PENGGUNAAN SUMBER EKSPLAN BERBEDA
The Growth of Nephentes mirabilis on Various of Medium with Different of Explants Source and Activated Carcoals Concentration
Susiyanti 1
1 Staf Pengajar Jurusan Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Serang-Banten E-mail: yantimara@yahoo.com

## ABSTRACT
Indonesia  has  a  rich  biological  diversity  due  to  its  varied  climatic,  altitudinal  variations  and ecological  habitats.  There  are  two  methods  of  conservation: in  situ and ex  situ onservation,  both  are complementary  to  each  other. In  situ methods  allow  conservation  to  occur  with  ongoing naturalevolutionary  processes, ex  situ conservation  via in  vitro propagation  also  acts  as  a  viable alternative  for  increase  and  conservation  of  populations  of  existing  bioresources  in  the  wild  and  to meet the commercial requirements.   The research was aimed to determine the source of explants and consentration of activated carcoal. This research has been conducted in 4 months has been carried out during March to July 2008 in the Laboratory of Indonesia Centre for Biodiversity and Biotechnology, Nagrak  Cilubang-Bogor.  This  research  using  completely  randomized  design  arranged  as  a  factorial with two factors, and 5 replicates. The first factor is sources of explants with two levels different (up and down of shoot). The second factor is the consentration of activated carcoal with 5 levels, namely: 0,1,2,3  g.l -1 .    The  results  showed  that  up  of  shoot  show  the  best  growth  performance;  while  the  best medium to increase explant regeneration with 2 g.l -1 activated carcoal.
Keywords: in vitro propagation, Nephentes mirabilis, activated charcoal, source of explants .

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  Negara  dari megadiversity  di  dunia  yang  memiliki  sumber daya  alam  luar  biasa,  salah  satunya  adalah sebagai  pusat  dari  Kantong  semar  ( Nepenthes sp. ).  Kantung semar merupakan tanaman unik dari  hutan  yang  belakangan  menjadi trend sebagai  tanaman  khas  komersil  di  Indonesia. Trend ini  mulai  berlangsung  sejak  tahun  lalu dan  semakin  marak  saat  ini,  karena  bentuknya yang  unik,  sehingga  tanaman  ini  mulai diperjualbelikan  oleh  masyarakat.  Namun, kebanyakan yang diperjualbelikan masih merupakan Nepenthes sp.  yang  diambil langsung dari alam, bukan dari hasil penangkaran  atau  budidaya  (Azwar et  al., 2007) . Namun  keberadaan  kantong  semar  di habitat  aslinya  justru  terancam  kepunahan.
Bahkan  juni  2009  silam,  LIPI  mengumumkan beberapa  spesies  kantong  semar  sebagai tanaman paling langka di Indonesia (Anonimous, 2009).
Nepenthes adalah  satu-satunya  genus dalam family Nepenthaceae dan hanya terdapat 82 jenis Nepenthes yang ada di dunia, 64 jenis hidup  di  Indonesia.  Borneo  (Kalimantan, Serawak,  Sabah  dan  Brunei)  merupakan  pusat penyebaran Nepenthes di  dunia. Saat  ini hidup sekitar 32 jenis (Mansur, 2007).
Bentuk  kantong  dan  corak  warna Nepenthes memiliki  nilai  seni  yang  unik, artistik,    dan  nilai  ekonomi  tinggi.  Sebagian besar  Nepenthes  potensial  dijadikan  sebagai tanaman hias karena keunikan dan kemampuan kantong  menangkap  serangga  (Handayani 2006).  Nephentes  mirabilis  merupakan  salah satu  jenis  kantong  semar  yang  daerah
penyebarannya  terdapat  di  Sumatera  (Azwar, 2007).
Populasi  kantong  semar  di  alam diprediksikan akan terus mengalami penurunan dari  tahun  ke  tahun.  Kondisi  ini  disebabkan oleh  beberapa  hal  di  antaranya  :  kebakaran hutan,  penebangan  kayu  secara  eksploitatif, pengembangan  pemukiman,  pertanian,  dan perkebunan  serta  eksploitasi  yang  berlebihan untuk  tujuan  komersil  (Mansur,  2006).  Hutan rawa  gambut  di  Sumatera  dan  Kalimantan sebagai salah satu habitat alami kantong semar, hampir  setiap  tahun  mengalami  kebakaran. Konversi  lahan  hutan  untuk  pengembangan pemukiman, pertanian, dan perkebunan menjadi suatu hal yang harus dilakukan seiring dengan semakin bertambahnya populasi penduduk.  Hal  ini  pulalah  yang  ditengarai sebagai  penyebab  makin  berkurangnya  habitat kantong  semar  di  alam.  Apabila  hal  ini  terus menerus dibiarkan tanpa adanya upaya penyelamatan  ancaman  kepunahan  kantong semar  di  alam  tinggal  menunggu  waktunya. Untuk itu diperlukan usaha konservasi, baik in- situ maupun ex-situ dengan cara budidaya dan pemuliaan.
Metode perbanyakan Nepenthes saat ini banyak  dilakukan  secara  stek  batang,  biji  dan pemisahan anakan. Perbanyakan tersebut secara  kuntitatif  masih  belum  dapat  memenuhi banyaknya  permintaan  akan  kantung  semar. Salah  satu  alternatif  yang  dapat  dilakukan adalah dengan  kultur jaringan.
Kultur  jaringan,  adalah  metode  yang paling  umum  dipakai  saat  ini,  khususnya  oleh penangkar  yang  memiliki  nursery.  Kelebihan perbanyakan  secara  kultur  jaringan  adalah perbnyakannya  relatif  mudah,  waktu  produksi lebih singkat, dan resiko kegagalan relatif lebih kecil.  Perbanyakan  secara  kultur  jaringan  juga mengurangi pengambilan kantong semar langsung dari alam bebas untuk dijual.
Berdasarkan hasil penelitian Dinarti dkk (2009)  Penggunaan  media  baik  itu  untuk pertumbuhan  Nepenthes  mirabilis  secara  in vitro    adalah  ½  MS  atau  ¼  KC    yang  dapat mempercepat  benih  berkecambah  (rata-rata  39 hari  setelah  semai).  Pemberian  zat  pengatur tumbuh TDZ, IAA dan GA3 nyata
meningkatkan  persentase  benih  Nepenthes mirabilis  berkecambah  (70  –  90  %)  dan mempercepat waktu perkecambahan (antara 27 –  38  hari  setelah  semai).  Selain  itu, pertumbuhan kultur pada media BAP 0 sampai 1  ppm  memberikan  hasil  terbaik  pada  peubah jumlah daun, jumlah tunas dibandingkan kultur yang  tumbuh  pada  media  dengan  2  ppm  BAP. Kultur  berakar  dengan  baik  pada  media  tanpa NAA .
Kultur  jaringan  banyak  digunakan secara  luas  dalam  industri  tanaman  yang diterapkan pada tanaman-tanaman yang dianggap  penting.  Metode  ini  diharapkan mampu  menghasilkan  tanaman  dalam  skala besar  dalam  waktu  yang  relatif  singkat  (Astuti dan  Amila,  2007;  Yusnita,  2003).  Namun, penelitian  kultur  jaringan Nepenthes belum banyak  dilakukan.      Dari  hasil  penelitian Sayekti  (2007),  menunjukkan  bahwa  media yang terbaik untuk pertumbuhan dan perkembangan  kecambah Nepenthes  mirabilis adalah ½ MS dan ¼ KC. Menurut Rahayu dan Isnaini  (2009),  media  ¼  MS  dan  1/8  MS menghasilkan jumlah kantong yang banyak dan berukuran  lebih  besar  dengan  pertumbuhan normal,  warnanya  hijau  sedangkan  media  ½ MS menunjukkan jumlah kantong yang banyak namun berukuran kecil pada tanaman Nepentes rafflesiana .
Keberhasilan  dalam  kultur  jaringan ditentukan  oleh  media  dan  jenis  eksplan  yang digunakan.    Pada  berbagai  tanaman  hias  kerap digunakan  arang  aktif  dalam  kultur  jaringan yang  dapatmemberikan  efek  positif  dalam pertumbuhannya  secara in  vitro .    Pemberian arang  aktif  yang  baik  untuk  tanaman  anggrek adalah 2 g per liter. Namun saat ini belum ada informasi  tentang  berapa  banyak  arang  aktif yang harus diberikan dalam media dan sumber ekplan yang tepat untuk mendapatkan pertumbuhan  yang  baik  pada Nephentes mirabilis.
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari respon terhadap berbagai konsentrasi  arang  aktif  pada  sumber  eksplan Nepenthes.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan
Maret 2008 hingga Juli 2008; di Laboratorium. Indonesia Center for
Biodiversity and Biotecnology (ICBB), Bogor.

## Bahan dan Alat
Bahan tanaman yang digunakan sebagai eksplan  adalah  tanaman  kantong  semar ( Nepenthes  mirabilis),  m edia  media  MS (Murashige and Skoog), agar sukrosa, aquades, alkohol, spirtus.
Alat  yang  digunakan  yaitu  autoclave, laminar air flow, kompor gas, gelas ukur, pipet, pH-meter,  neraca  analitik,  hand  sprayer,  hot plate, gelas ukur, oven, magnetic stirrer , pipet, botol  kultur,  petridish,  pinset,  gunting  kultur, pisau scapel.
Alat  untuk  pengamatan  diantaranya ballpoin, kertas label dan kamera digital.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  dua faktor.
Faktor  pertama  yaitu  konsentrasi  Arrang  aktif (A) dalam 4 taraf, yaitu
A1 :  tanpa arang aktif A2 : 1 g arang aktif per liter A3 : 2 g arang aktif per liter A4 : 3 g arang aktif per liter Faktor kedua adalah sumber eksplan (B) dalam 2 taraf,  yaitu
B1 : pucuk B2 : pangkal batang
Terdapat 10 kombinasi perlakuan dengan 5 ulangan.
Model umum rancangan faktorial tersebut adalah:
Y ijk = μ + α i + β j + (αβ) ij + ε ijk
Dimana :  i = 1,2,3,4,5
j = 1,2,3 k = 1,2,3,4 keterangan :
Y ijk = Pengaruh faktor perbedaan konsentrasi arang aktif ke-i dan sumber eksplan ke-j pada ulangan ke-k
μ = Rataan nilai tengah populasi
α i = Pengaruh konsentrasi arang aktif
ke-i
β j = Pengaruh sumber eksplan ke-j (αβ) ij =  Pengaruh  interaksi  antara  faktor konsentrasi  media  MS  ke-i  dengan faktor pH ke-j
ε ijk =  Galat  percobaan  pada  faktor konsentrasi media MS ke-i, faktor pH ke-j dan ulangan ke-k
Data yang diperoleh dari hasil pengamatan  dilakukan  analisis  ragam,  bila dalam uji F berbeda nyata atau berbeda sangat nyata,  maka  analisis  dilanjutkan  dengan  uji jarak  berganda  Duncan  (DMRT)  pada  taraf signifikan 5%.

## Pelaksanaan

## Sterilisasi Botol dan Alat
Botol kultur sebelum digunakan terlebih dahulu  dicuci  bersih  dengan  air  dan  deterjen selanjutnya  dikeringkan  dalam  rak  agar  kering tanpa  ada  air  yang  tertinggal.  Alat-alat  yang akan  digunakan  seperti  pinset,  gunting  kultur, cawan  petri,  pisau  kultur  dapat  disterilkan dengan  menggunakan  alkohol  70%.  Botol  dan alat-alat  disterilkan  dalam  autoklaf  pada tekanan  15  psi  dengan  suhu  121 0 C  selama  15 menit  dengan  cara  alat-alat  tersebut  dibungkus rapat dengan kertas.

## Pembuatan Media Kultur
Media yang digunakan dalam penelitian ini  menggunakan  media  dasar  yaitu  media Murashige  and  Skoog  (MS).  Media  tersebut dibuat menjadi beberapa modifikasi konsentrasi tanpa perlakuan zat pengatur tumbuh.
Pembuatan  1  liter  media  misalnya media  1/8  MS  dilakukan  dengan  memipet larutan unsur makro 1.25 ml  larutan NH 4 NO 3 , 1.25  ml  larutan  KHO 3 ,  1.25  larutan  MgSO 4 , 1.25  ml  larutan  KH 2 PO 4 ,  1.25  ml  larutan CaCL 2 , 1.25 ml larutan FeSO 4 , 1.25 ml larutan Na2,  EDTA.    untuk  larutan  unsur  mikro  1.25 ml  larutan  H 3 BO 3 ,  1.25  ml  larutan  MnSO 4 , 1.25  ml  larutan  ZnSO 4 ,  1.25  ml  larutan  KL, 1.25  ml  larutan  Na,MOO4,  1.25  ml  larutan C 4 SO 4 , 1.25 ml larutan COCL 2 . larutan vitamin dipakai  dalam  konnsentarsi  volume  larutan perliter  yaitu  10  ml.  dengan  penambahan
gelrite sebanyak 2 g/l dan gula sebanyak 30 g/l ke dalam labu takar 1 liter .

## Persiapan Ruang Tanamm
Sebelum  menggunakan  laminar  air  flow terlebih dahulu disterilkan
dengan menyemprotkan alkohol 70% pada dinding dan alasnya kemudian selama 15 menit. Lalu lampu ultraviolet  yang  berada  didalamnya  dinyalakan selama  30-40  menit  dengan  tujuan  untuk membunuh  kontaminan  yang  berada  didalam laminar  air  flow.  Blower  di  nyalakan  agar kontaminan  yang  terdapat  didalam  dapat dihembuskan ke luar laminar air flow.

## Penanaman
Bahan  tanaman  (eksplan)  yang  akan ditanam  berupa  plantlet  yang  telah  dikulturkan dalam media dasar ½ MS tanpa  ZPT selama 5 bulan  yang  berasal  dari  Singapura  di  dalam ruangan inkubasi. Tanaman Nepenthes mirabilis dipotong-potong  diatas  cawan  petri sepanjang  0.7  cm  dengan  memotong  akar tanaman yang sudah panjang dengan menggunakan  gunting  kultur  atau  pisau  kultur yang  di  tempatkan  di  cawan  petri  di  dalam Laminar  air  flow.  Kemudian  eksplan  di  tanam pada  media  perlakuan  dengan  botol  kultur berukuran  kecil  (volume  130  ml)  diisi  sekitar 15  ml  media.  lalu  ditutup  dan  botol  dibungkus dengan  tutup  botol  atau  plastik  wraping  dan disimpan pada ruang inkubasi dengan suhu 23- 26 0 C  dan  mendapatkan  pencahayaan  2112- 2934 (x 1000) lux, serta kelembapan 56-61%.

## Pengamatan
Pengamatan dilakukan terhadap peubah yang  diukur  dan  diamati  dalam  penelitian  ini terdiri dari:
a. Persentase eksplan hidup Dihitung  dari  total  eksplan  yang  hidup per  total  keseluruhan  eksplan  untuk setiap  kombinasi  perlakuan  kemudian dikalikan 100%.
b. Tinggi tanaman Diukur dari permukaan media sampai titik tumbuh
c. Jumlah daun
Dihitung jumlah daun yang terbentuk untuk setiap eksplan
d. Jumlah akar
Dihitung jumlah akar yang terbentuk untuk setiap eksplan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  semua  peubah  yang  diamati  tidak terdapat  interaksi  antara  jenis  eksplan  dan arang  aktif  yang  diberikan.  Secara  mandiri jenis  eksplan  yang  digunakan  memberikan pengaruh nyata; demikian pula dengan konsentrasi  arang  aktif  yang  diberikan  dalam media kultur.
Tabel 1. Persentase ekplan hidup  tanaman Nephenthes mirabilis pada media kultur dengan konsentrasi arang aktif berbeda (%) B1 B2 Rata-rata A1 75.0         50.0 62.5 A2 75.0         75.0 75.0 A3 50.0         50.0 50.0 A4 100.0         50.0 75.0 Rata-rata 75.0         56.3 Keterangan: A1 :  tanpa arang aktif A2 : 1 g arang aktif per liter A3 : 2 g arang aktif per liter A4 : 3 g arang aktif per liter B1 : pucuk B2 : pangkal batang
Tabel 2. Tinggi tunas  eksplan Nephenthes mirabilis pada media kultur dengan konsentrasi arang aktif berbeda (cm)
B1 B2 Rata-rata A1 2.50 2.25 2.4 c A2 3.00 2.95 3.0 b A3 3.55 3.10 3.3 a A4 3.55 3.35 3.5 a Rata-rata 3.2 A 2.9 B Keterangan: Angka-angka  yang  dikuti  oleh  huruf kecil  yang  sama  pada  kolom  yang sama;  dan  huruf  besar  pada  baris yang sama; berbeda tidak nyata pada uji DMRT  α 0,05.
A1 :  tanpa arang aktif A2 : 1 g arang aktif per liter A3 : 2 g arang aktif per liter A4 : 3 g arang aktif per liter B1 : pucuk
B2 : pangkal batang 1000 bp
850 bp
Tabel  3.    Jumlah  daun  eksplan Nephenthes mirabilis pada media kultur dengan  konsentrasi  arang  aktif berbeda B1 B2 Rata-rata A1 3.0 2.3 2.6 c A2 3.2 3.1 3.1 b A3 4.2 4.0 4.1 a A4 4.3 4.0 4.2 a Rata-rata 3.6 A 3.3 B Keterangan: Angka-angka  yang  dikuti  oleh  huruf kecil  yang  sama  pada  kolom  yang sama;  dan  huruf  besar  pada  baris yang sama; berbeda tidak nyata pada uji DMRT  α 0,05.
A1 :  tanpa arang aktif A2 : 1 g arang aktif per liter A3 : 2 g arang aktif per liter A4 : 3 g arang aktif per liter B1 : pucuk B2 : pangkal batang
Tabel 4. Jumlah akar Nephenthes mirabilis pada media kultur dengan konsentrasi arang aktif berbeda
B1 B2 Rata-rata A1 2.0 1.5 1.8 c A2 2.8 2.0 2.4 bc A3 3.2 2.5 2.9 ab A4 3.3 3.0 3.2 a Rata-rata 2.8 A 2.3 B
Keterangan: Angka-angka  yang  dikuti  oleh  huruf kecil  yang  sama  pada  kolom  yang sama;  dan  huruf  besar  pada  baris yang sama; berbeda tidak nyata pada uji DMRT  α 0,05.
A1 :  tanpa arang aktif A2 : 1 g arang aktif per liter A3 : 2 g arang aktif per liter A4 : 3 g arang aktif per liter B1 : pucuk B2 : pangkal batang
Persentase    eksplan  hidup  dapat  dilihat pada  Tabel  1.    Persentase  eksplan  hidup  erat kaitannya  dengan  keampuan  dalam  melakukan kultur steril dan jenis eksplan  yang digunakan. Eksplan yang memiliki jaringan meristem lebih mudah untuk hidup dan tumbuh.
Konsentrasi arang aktif yang baik untuk pertumbuhan  Nephentes  mirabilis  secara  in vitro  adalah  2  g  per  liter  media.  Sedangkan eksplan yang baik adalah dengan menggunakan pucuk tunas Nephentes mirabilis .  Pertumbuhan eksplan    kantong  semar Nephenthes mirabilis dapat dilihat pada Gambar 1.
Secara penampilan pertumbuhan eksplan kantong semar yang berasal dari pucuk lebih  cepat  bila  dibandingkan  dengan  eksplan yang  berasal  dari  pangkal  batang.      Ekplan pucuk  lebih  cepat  tumbuh  dan  membentuk daun karena memiliki jaringan meristem pucuk yang  memiliki  dominansi  apical.    Sementara pada eksplan yang berasal dari pangkal batang, pertumbuhannya  lebih  lambat  karena  harus membentuk  tunas baru terlebih dahulu.  Hal  ini tampak  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun  yang dapat dilihat pada Tabel 2 dan 3.
Gambar 1.  Pertumbuhan eksplan Nehenthes mirabilis pada berbagai media dengan konsentrasi arang aktif berbeda.
Keterangan: A1 :  tanpa arang aktif A2 : 1 g arang aktif per liter A3 : 2 g arang aktif per liter A4 : 3 g arang aktif per liter B1 : pucuk B2 : pangkal batang
Jumlah  akar    yang  dihasilkan Nephenthes mirabilis dapat  dilihat  pada  Tabel  4.    Jumlah akar  erat  kaitannya  dengan  ketersediaan  ZPT. Eksplan  pangkal  batang  memiliki  auksin endogen  yang  lebih  bila  dibandingkan  dengan eksplan  pucuk.    Hal  ini    dikarenakan  pucuk merupakan  pusat  untuk  pembentukan  hormone endogen  sitokinin,  sedangkan  bagian  akar merupakan  pusat  pembentukan  auksin.    Selain itu,  pemberian  arang  aktif  kan  memberikan warna  gelap  pada  media  sehingga  lebih merangsang  sistem  perakaran,  karena  arang aktif  mampu  mengurangi  cahaya  yang  masuk ke dalam media. Intensitas cahaya yang rendah dapat  merangsang  ZPT  endogen  bekerja  lebih aktif  dalam  melakukan  proses  inisiasi  akar. Auksin bekerja optimum pada intensitas cahaya rendah, walau proses sintesis auksin berlangsung ketika ada cahaya terang. Widiastoety  dan  Marwoto  (2004),  menyatakan bahwa  arang  aktif  dapat  menyerap  senyawa
fenol  yang  keluar  dari  jaringan  tanaman  yang terluka pada saat inisiasi. Disamping itu, arang aktif  dapat  mengurangi  pencoklatan  media akibat  pemanasan  tinggi  setelah  sterilisisasi media kultur.

## SIMPULAN
(1) Tidak terdapat interaksi antara jenis eksplan dan  arang  aktif  yang  diberikan.  Secara mandiri  jenis  eksplan  yang  digunakan memberikan pengaruh nyata; demikian pula dengan  konsentrasi  arang  aktif  yang diberikan dalam media kultur.
(2) Konsentrasi  arang  aktif  yang  baik  untuk pertumbuhan Nephentes  mirabilis  secara in vitro adalah 2 g per liter media.
(3) Eksplan yang baik adalah dengan menggunakan  pucuk  tunas Nephentes mirabilis

## A1 B1                            A2 B1                     A3B1                       A4 B1

## A1 B2                            A2 B2                      A3B2                       A4 B2

## DAFTAR PUSTAKA
Anonimous. 2009. Kantong Semar Tanaman Karnivora. http://alamendah.wordpress.com/2009 /10/08/kantong-semar-tanaman-
karnivora/.
Astuti,  Y  dan  Amila.  2007.  Perbanyakan  Bibit
Aglonema  Dalam  Media  Murashige and skoog dan konsentarsi NAA.
Azwar F., A. Kunarso, dan T. Rahman.  2007. Kantong  semar  ( Nepenthes sp.)  di hutan  sumatera,  tanaman  unik  yang semakin  langka.  Prosiding  Ekspose Hasil-Hasil Penelitian, 2007
Dinarti, D., S. Urip, dan A.  Yayu    2009.  Kultur  Jaringan
Kantong  Semar  Nepenthes  mirabilis. Abstract. http://iirc.ipb.ac.id/jspui/handle/12345 6789/32977.
Handayani,  T.  2006.  Perbanyakan  Tanaman KantongSemar (Nepenthes spp). www.lipi.go.id.  Diakses  tanggal  9  april
2010.
Mansur,  M.  2006.  Nepenthes  Kantong  Semar Yang Unik. Penebar Swadaya. Jakarta. Rahayu, E.M.D., dan  Y.  Isnaini. 2009. Induksi
pembentukan
kantong tanaman
Nepenthes rafflesiana
Jack. pada berbagai  konsentarsi  media  dan  ukuran wadah  kultur. Prosiding  Seminar  “ Peranan  Konservasi  Flora  Indonesia dalam  Mengatasi  Dampak  Pemanasan Global” .  UPT  BKT  Kebun  Raya  Eka
Karya  Bali-LIPI  dan  PTTI,  FMIPA Universitas Udayana dan BLH Prov  Bali Hal:436-441.
Sayekti,  U.  2006  Pengaruh  media  terhadap perkecambahan Nepenthes  mirabilis secara in vitro . Proseeding
Perhimpunan  Hortikultura  Indonesia
Tahun 2006.
Widiastuti D,  Marwoto  B.  2004.    Pengaruh berbagai  sumber  arang  dalam  media kultur  in  vitro  terhadap  pertumbuhan
plantlet Oncidium .  J. Hort. 14(1):1-4. Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan Hortikultura, Rangunan, Pasar Minggu. Yusnita. 2003. Kultur jaringan cara memperbanyak  tanaman  secara  efisien.
Agromedia Pustaka, Jakarta.