Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(1): 120-130, Februari 2023

## PISANG RAJA OVERRIPE SEBAGAI SUMBER KARBON PADA PERTUMBUHAN MIKROALGA Thraustochytrids PENGHASIL DHA
Diza Lailuna Ardini *) , Sri Winarti, Ulya Sarofa Teknologi Pangan UPN “Veteran” Jawa Timur Jl. Rungkut Madya No. 1, Gn. Anyar, Kec. Gn. Anyar, Surabaya, 60294
*) Penulis korespondensi: dizaardini@gmail.com

## ABSTRAK
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki  potensi  signifikan  dalam  produksi mikroalga,  namun  pemanfaatannya  masih  sangat  terbatas.  Terdapat  banyak  penelitian terbarukan  yang  menyatakan  bahwa  banyak  jenis  mikroalga  yang  mampu  menghasilkan metabolit  berupa  asam  lemak  omega-3  DHA  dan  EPA  dengan  konsentrasi  tinggi,  yang  juga dapat menurunkan biaya produksinya. Thraustochytrids merupakan mikroalga penghasil lipid yang  tumbuh  di  habitat  laut  dan  bakau.  Dalam  pertumbuhannya, Thraustochytrids bersifat heterotrof dimana sumber karbon yang digunakan adalah glukosa. Pisang raja dapat menjadi sumber  karbon  yang  menjanjikan  bagi  pertumbuhan Thraustochytrids terkait  dengan kandungan glukosanya yang mencapai 17,12% ketika dalam keadaan overripe (limbah). Pada penelitian  ini  dilakukan  studi  terkait  produksi  biomassa  kering  mikroalga Thraustochytrids yang diisolasi dari daun mangrove ( Rhizophora apiculata ). Lama waktu fermentasi 5 dan 7 hari, dan konsentrasi sari pisang raja overripe pada 0%, 25%, 50%, 75%, dan 100% diperoleh berat biomassa kering yang berbeda. Berat kering 3,9 g/L pada konsentrasi sari pisang 50% di hari ke-7 fermentasi serupa dengan glukosa murni (0% sari pisang) yaitu sebesar 3,95 g/L di hari yang sama. Biomassa kering yang dihasilkan ke depannya dapat diekstrak lebih lanjut untuk menghasilkan asam lemak tak jenuh seperti DHA dan EPA.
Kata Kunci : Mikroalga, Thraustochytrids, Mangrove, Sari Pisang Overripe, DHA

## ABSTRACT
Indonesia  is  a  country  that  has  significant  potential  in  microalgae  production,  but  its utilization  is  still  very  limited.  There  are  many  recent  studies  which  state  that  many  types  of microalgae are capable of producing high concentrations of metabolites in the form of omega-3 fatty  acids  DHA  and  EPA,  which  can  also  reduce  production  costs.  Thraustochytrids  are  lipid- producing  microalgae  that  grow  in  marine  and  mangrove  habitats.  In  its  growth, Thraustochytrids are heterotrophs where the carbon source used is glucose. Banana plantains can be a promising carbon source for the growth of Thraustochytrids due to their  glucose content which reaches 17.12% when overripe (waste). This research was conducted in relation to the study of  dry  biomass  production  of  Thraustochytrids  microalgae  isolated  from  mangrove  leaves (Rhizophora  apiculata).  The  fermentation  time  was  5  and  7  days,  and  the  concentration  of overripe banana plantain juice at 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% obtained different weight of dry biomass. The dry weight of 3.9 g/L at 50% concentration of banana juice on day 7 had a similar reaction  with  pure  glucose  (0%  banana  juice)  which  was  3.95  g/L  on  the  same  day.  The  dry
biomass generated in front of it can be further extracted to produce unsaturated fatty acids such as DHA and EPA.
Keywords: Microalgae, Thraustochytrids, Mangroves, Overripe Banana Extract, DHA

## PENDAHULUAN
Asam lemak omega 3 adalah asam lemak tidak  jenuh  ganda  yang  mempunyai  ikatan rangkap  banyak,  ikatan  rangkap  pertama terletak pada atom karbon ketiga dari gugus metil  omega,  ikatan  rangkap  berikutnya terletak pada nomor atom karbon ketiga dari ikatan rangkap sebelumnya. Asam
dokosaheksaenoat
(DHA) merupakan golongan  senyawa  asam  lemak  tak  jenuh ganda  ( Polyunsaturated  Fatty  Acid/ PUFA) yang memiliki beragam manfaat dalam bidang pangan  dan  kesehatan.  Asam  lemak  ini tergolong ke dalam kelompok omega-3 rantai panjang (LC-PUFA) yang baik bagi kesehatan terutama  bagi  kerja  otak  manusia.  Selain  itu kelompok  asam  lemak  ini  juga  mampu menurunkan  risiko  penyakit  jantung, stroke, merawat  fungsi  ginjal,  dan  baik  bagi pertumbuhan anak (Ryckebosch, 2012). DHA banyak dimanfaatkan dalam bentuk suplemen atau  sebagai  fortifikan  pada  makanan.  Oleh karena itu, DHA juga memiliki nilai yang tinggi dalam aspek ekonomi.
Secara  umum,  DHA  banyak  diperoleh dari  berbagai  macam  jenis  ikan-ikanan  yang diekstrak  menjadi  minyak  ikan.  Asam  lemak omega-3  terutama  EPA  dan  DHA  banyak ditemukan  pada  ikan  yang  berlemak  antara lain ikan herring, makerel, sardine dan salmon
(Gunstone  1996;  Sijtsma,  2004).  Namun pemanfaatan hasil perikanan ini mengundang penolakan secara global karena keterkaitannya  dengan  isu  lingkungan tentang  pemanenan  ikan  secara  berlebihan yang  dapat  merusak  ekosistem  dan  rantai makanan  di  laut.  Menurut  Crawford  (2013), untuk  memenuhi  kebutuhan  omega-3  yang salah  satunya  merupakan  DHA,  diperlukan sebanyak lebih dari 164 juta ton ikan/tahun. Hasil perikanan pada saat ini masih terdapat pada angka 120 juta ton ikan/tahun. Apabila pemenuhan  kebutuhan  DHA  ini  terus dilakukan  dengan  menggunakan  ikan,  maka dikhawatirkan akan terjadi perusakan rantai makanan lebih lanjut pada ekosistem laut.
Maka  dari  itu,  telah  banyak  dilakukan studi  untuk  mencari  alternatif  sumber penghasil  DHA  selain  ikan  yaitu  antara  lain; minyak  krill,  minyak  cumi,  tanaman  dengan rekayasa genetik, dan mikroalga. Pemanfaatan  minyak  krill  dan  cumi-cumi dipandang  potensial  namun  masih  berisiko untuk  mengalami  panen  berlebih  sehingga tidak jauh berbeda dengan minyak ikan, akan berdampak buruk terhadap ekosistem laut. Di sisi  lain  menurut  Sayanova  (2011),  tanaman memerlukan  rekayasa  genetik  agar  dapat menghasilkan  DHA  dan  juga  membutuhkan lahan  yang  cukup  luas  untuk  produksi  DHA
skala  besar.  Sehingga  bisa  dikatakan  bahwa sumber DHA yang paling potensial hingga saat ini  adalah  mikroalga.  Dibandingkan  dengan tumbuhan  atau  sumber  DHA  lainnya, mikroalga  memiliki  kandungan  lipid  yang relatif tinggi dan tidak membutuhkan banyak lahan  untuk  pertumbuhannya.  Selain  itu, mikroalga  bisa  dikultivasikan  baik  secara fotoautotrof maupun heterotrof (Ryckebosch, 2012).
Potensi pengembangan mikroalga Thraustochytrids di Indonesia dapat dikategorikan  tinggi.  Hal  ini  dikarenakan kondisi geografis Indonesia yang menjadikan Indonesia  sebagai  negara  maritim  dimana hasil dari kelautannya sangat beragam, yang dalam  kaitannya  dengan  penelitian  ini  yaitu berupa mangrove sebagai  habitat  mikroalga Thraustochytrids penghasil  asam  lemak  tak jenuh.  Ekosistem mangrove merupakan sumber daya alam yang memberikan banyak keuntungan  bagi  kehidupan  manusia,  yakni dikarenakan  oleh  produktivitasnya  yang tinggi serta kemampuannya dalam memelihara alam. Mangrove sendiri
memproduksi nutrien yang dapat menyuburkan  perairan  laut, mangrove membantu  dalam  perputaran  karbon, nitrogen dan sulfur serta perairan mangrove kaya  akan  nutrient  baik nutrient  organic maupun anorganik (Bengen, 2001).
Mikroorganisme  yang  termasuk  ke dalam  kelas  Labyrinthulomycetes  dan  famili
Thraustochytriaceae  adalah  mikroorganisme uniseluler  yang  terdapat  dalam  ekosistem laut.  Mereka  memiliki  peran  penting  pada tahap awal makanan rantai mikroba, sebagai degradator  organik  (Raghukumar,  2002). Pada  famili  Thraustochytriaceae  ditemukan kandungan  lipid  yang  cukup  tinggi  sehingga hal  ini  menarik  banyak  minat  penelitian terhadap mikroalga ini (Molina, 2017).
Pada mode fotoautotrof, mikroalga akan membentuk  senyawa  organik  dari  senyawa anorganik  (CO 2 )  dengan  bantuan  cahaya. Namun  mode  kultivasi  ini  memiliki kelemahan yaitu sulit menghasilkan biomassa dengan  konsentrasi  tinggi  karena  masuknya cahaya  berbanding  terbalik  dengan  densitas sel yang menyebabkan rendahnya produktivitas  biomassa  dan  lipid  pada mikroalga (Chen and John, 1995). Berikutnya pada  mode  kultivasi  heterotrof,  mikroalga akan memanfaatkan molekul-molekul organik  seperti  glukosa  dan  asam  organik sebagai sumber karbon. Kelebihan dari mode kultivasi ini adalah tidak memerlukan cahaya matahari,  sehingga  hal  ini  menyebabkan tingginya  densitas  sel  yang  merujuk  kepada tingginya  produktivitas  biomassa  dan  lipid dari  sel  mikroalga  (Li et  al., 2007).  Namun pada mode kultivasi ini sumber karbon yang digunakan  merupakan  komponen  termahal pada  media  fermentasi  (Pleissner,  2013), sehingga  masih  belum  banyak  industri  yang
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(1): 120-130, Februari 2023
memproduksi DHA dari mikroalga heterotrof dalam skala besar.
Mikroorganisme  yang  termasuk  ke dalam  kelas Labyrinthulomycetes dan  famili Thraustochytriaceae adalah  mikroorganisme uniseluler  yang  terdapat  dalam  ekosistem laut.  Mereka  memiliki  peran  penting  pada tahap awal makanan rantai mikroba, sebagai degradator  organik  (Raghukumar,  2002). Pada  famili Thraustochytriaceae ditemukan kandungan  lipid  yang  cukup  tinggi  sehingga hal  ini  menarik  banyak  minat  penelitian terhadap mikroalga ini (Molina, 2017).
Mikroalga  dapat  dibiakkan  baik  secara fotoautotrof  atau  heterotrof.  Berdasarkan penelitian  Ryckebosch et  al. (2012),  Pada metode  budidaya  heterotrofik,  mikroalga mengambil  molekul  organik  sebagai  sumber nutrisi  utama.  Biasanya  dilakukan  dalam fermentor  tertutup.  Kedua  sistem  memiliki kelebihan dan kekurangan. Kultur fotoautotrofik  bersifat  lebih sustainable , karena adanya penggunaan CO 2 sebagai satu- satunya  sumber  karbon.  Keuntungan  utama dari  budidaya  heterotrofik  adalah  dapat menghasilkan sel dengan densitas yang lebih tinggi  yang  bisa  diaplikasikan  pada  industri besar  dengan  menumbuhkan  sel  tunggal (misal;  ragi,  bakteri)  dalam  fermentor. Mikroalga yang telah  terbukti dapat tumbuh heterotrof  termasuk Chlorella,  Nitzschia, Cyclotella, Tetraselmis, Spesies Schizochytrium dan Crypthecodinium .  Mikroalga  heterotrof
menghasilkan  omega-3  LC-PUFA  (EPA dan/atau  DHA,  tergantung  pada  spesies) terutama sebagai triasilgliserol dan fosfolipid.
Buah  pisang  dalam  keadaan overripe atau lewat matang memiliki kadar gula yang tinggi  yaitu  total  gula  sebesar  26,7% (Marriott,  1981).  Hal  ini  disebabkan  adanya proses hidrolisis pati menjadi gula-gula yang lebih sederhana. Proses konversi pati menjadi gula disebabkan oleh adanya aktivitas enzim amilase  pada  proses  pematangan.  Aktivitas enzim  amilase  paling  tinggi  ditemukan  pada fase ripe (Adewale,  2013).  Mekanisme  kerja enzim α -amilase terdiri dari dua tahap, yaitu: tahap  pertama  degradasi  amilosa  menjadi maltosa  dan  maltotriosa  yang  terjadi  secara acak.  Degradasi  ini  terjadi  sangat  cepat  dan diikuti  dengan  menurunnya  viskositas  buah dengan cepat. Tahap kedua terjadi pembentukan  glukosa  dan  maltosa  sebagai hasil  akhir  dan  tidak  acak.  Keduanya merupakan  kerja  enzim  α -amilase  pada molekul  amilosa.  Pada  molekul  amilopektin kerja  α -amilase  akan  menghasilkan  glukosa, maltosa  dan  satu  seri  α -limit  dekstrin,  serta oligosakarida  yang  terdiri  dari  empat  atau lebih glukosa yang mengandung ikatan α -1,6- glikosidik  (Winarno,  2010).  Maka  dari  itu penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  penggunaan  sari  pisang  raja overripe sebagai  sumber  karbon  pada pertumbuhan  mikroalga Thraustochytrids dalam produksi asam lemak tak jenuh.

## METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  terdiri  dari  daun mangrove ( Rhizophora apiculata )  di  kawasan  Hutan Mangrove Wonorejo  Surabaya  dengan  menggunakan media YPG ( Yeast, Peptone, and Glucose ) broth , ekstrak yeast, pepton , dan air laut  steril dari Pantai  Maneron  Bangkalan.  Sedangkan  sari pisang  raja overripe yang  digunakan  berasal dari petani di Kecamatan Mojo, Kediri (pisang dipanen  dalam  keadaan  belum  matang  dan disimpan  hingga  mengalami  fase  lewat matang selama 14 hari).
Pembuatan  sari  pisang  raja overripe sebagai sumber karbon menggunakan pisang raja  yang  berusia  14  hari  setelah  dipanen (dalam  keadaan  warna  hijau)  yang  dikupas dan  dihaluskan  menggunakan blender .
Selanjutnya  masuk  ke  tahap  pemerasan  dan penyaringan  dengan  ayakan  60  mesh  yang kemudian  sari  pisang  disterilkan  pada  suhu 121 o C  selama  15  menit  sebelum  disimpan pada  suhu  -10 o C  sampai  waktu  penggunaan. Sari pisang raja overripe yang telah diperoleh kemudian  dianalisa  kandungan  gulanya menggunakan  metode High  Performance Liquid Chromatography (HPLC).
Proses isolasi mikroalga Thraustochytrids dilakukan
dengan menggunakan  metode direct  planting, yaitu dengan  memperkecil  ukuran  sampel  daun yang  ditumbuhi  mikroalga  menjadi  persegi dengan ukuran 1 cm x 1 cm, kemudian sampel
direndam  dengan  air  laut  steril  selama  5 menit  dan  dibilas  kembali  dengan  air  laut steril.  Setelah  tidak  berair,  sampel  daun kemudian diletakkan pada cawan petri berisi media padat By+ yang tersusun atas glukosa 0,5%  (w/v), yeast  extract 0,1%  (w/v), bactopeptone 0,1% (w/v), agar 1% (w/v), air laut steril 50% (v/v), antibiotik penisilin G. 0,3 gr/l dan streptomisin 0,3 gr/l dalam akuades steril.  Sampel  diletakkan  di  tengah  cawan petri  dengan  jumlah  dua  buah  sampel  pada tiap  cawan.  Sampel  yang  telah  ditanam diinkubasi  selama  2-3  hari  disertai  dengan pengamatan  secara  fisik  dan  mikroskopis pada  tiap  harinya.  Pengamatan  morfologi mikroalga yang tumbuh dilakukan menggunakan mikroskop cahaya. Isolat yang diperoleh kemudian disimpan isolat mikroalga  heterotrof Thraustochytrids yang telah  diisolasi  pada  media  yang  terdiri  dari (per liter); 5 g glukosa, 1 g peptone, dan 1 g ekstrak yeast dalam 1 liter air laut steril.
Proses  fermentasi  dimulai  dengan persiapan  media  dengan  glukosa  sebagai kontrol positif (konsentrasi final 48 gr/L) dan sari pisang overripe yang diencerkan dengan konsentrasi  sari  pisang  lewat  matang  (v/v) yang terdiri dari (25%, 50%, 75%, dan 100% (sebagai kontrol negatif)). Mikroalga Thraustochytrids yang  berusia  1-2  hari (Fathurohman,  2017)  diinokulasikan  pada media dengan volume inokulum sebesar 10% dari  100  ml  media  yang  digunakan  pada
Erlenmeyer 250
mL. Pengadukan menggunakan shaker dengan  kecepatan  150 rpm (Julianti et al., 2018) selama 5 dan 7 hari.
Sampel  dari  setiap  perlakuan  kemudian disentrifugasi  pada  kecepatan  3000  rpm selama 3 menit lalu endapan yang diperoleh dikeringkan  di  oven  pengering  dengan  suhu 80 o C selama 3 jam maka diperoleh biomassa kering yang kemudian ditimbang pada waktu yang  berbeda  (5  dan  7  hari)  sebagai parameter pertumbuhan mikroalga Thraustochytrids. Percobaan serupa dilakukan dengan dua kali pengulangan untuk mendapatkan hasil yang lebih akurat (Liang et al., 2010).
Adapun  alat  yang  digunakan  dalam proses  pengujian  kandungan  gula  pada  sari pisang overripe menggunakan HPLC (Shimadzu). Proses fermentasi menggunakan Erlenmeyer, shaker , dan sentrifuge.
Selanjutnya  proses  pengeringan  biomassa menggunakan oven pengering.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Sari Pisang Raja Overripe
Tahap  pertama  pada  penelitian  ini adalah mempersiapkan unsur gula yang akan dijadikan sebagai sumber karbon pada proses
produksi
DHA oleh mikroalga
Thraustochytrids yakni  dari  sari  pisang  raja overripe .  Pembuatan  sari  pisang overripe diawali dengan pematangan pisang raja yang telah  dipanen  dalam  keadaan all  green atau pada tingkat kematangan 1 yaitu hijau secara
keseluruan  dan  dengan  status  “belum matang”,  Pisang  yang  dipanen  kemudian disimpan  di  ruang  terbuka  selama  14  hari untuk mencapai tingkat “lewat matang” atau “ overripe ” .  Pisang  yang  telah  lewat  matang kemudian dicuci dan dipisahkan dari kulitnya. Buah  yang  diperoleh  dihancurkan  dan dihaluskan  menggunakan  blender  yang kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring agar diperoleh sari pisang raja overripe . Sari pisang overripe lalu diuji kandungan gulanya dengan menggunakan metode HPLC ( High  Performance  Liquid  Chromatography ). Pengujian ini bertujuan untuk mengidentifikasi  jenis  gula  yang  terkandung pada  sari  pisang  raja overripe beserta kuantifikasinya.  Dari  pengujian  HPLC  yang telah  dilakukan,  diketahui  bahwa  gula  yang terkandung  pada  sari  pisang  raja overripe terdiri  dari  tiga  jenis  gula  yaitu  fruktosa, glukosa,  dan  sukrosa.  Kromatogram  hasil pengujian  kandungan  gula  pada  sari  pisang raja overripe dapat dilihat pada Gambar 1.

## Gambar 1.  Kromatogram  Kandungan  Gula pada  Sampel  Sari  Pisang  Raja Overripe
Puncak dari fruktosa dan glukosa pada sampel ditemukan pada waktu retensi selama 5,073  menit  dan  5,946  menit,  sedangkan
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(1): 120-130, Februari 2023
sukrosa  ditemukan  pada  waktu  retensi 10,063  menit.  Berdasarkan  kromatogram yang diperoleh, diketahui bahwa nilai resolusi dari  tiap  jenis  gula  yaitu  sebesar  1,53  untuk glukosa  dan  5,26  untuk  sukrosa.  Hal  ini menunjukkan bahwa pemisahan puncak pada setiap  jenis  gula  telah  memenuhi  standar  (≥ 1,5)  sesuai  dengan  Anggraena  (2018)  yang
menyatakan  bahwa  nilai  Resolusi  harus mendekati  atau  lebih  dari  1,5  karena  akan memberikan  pemisahan  puncak  yang  baik ( base line resolution ). Selanjutnya, kandungan gula  yang  terdapat  pada  sampel  sari  pisang raja overripe beserta  kadarnya  ditampilkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Kadar Gula yang Terkandung pada Sampel Sari Pisang dan Larutan Standar
Sampel Kadar (g/100 mL) Fruktosa Glukosa Sukrosa Total Gula Sari Pisang Raja Overripe 17.68 17.12 ± 0.01 2.48 37.28 ± 0.26 Larutan Standar Gula 21.22 ± 0.2  22.04 ± 0.21  20.16 ± 0.11  63.42 ± 0.94
Pada penelitian ini, kandungan glukosa menjadi  acuan  sebagai  sumber  karbon  bagi pertumbuhan  mikroalga Thraustochytrids.
Berdasarkan  hasil  analisa  HPLC  yang  telah dilakukan,  diketahui  bahwa  kandungan glukosa pada sampel pisang raja overripe yang digunakan  mencapai  sebesar  17.12  ±  0.01 (g/100 mL). Hal ini selaras dengan yang telah dipaparkan  oleh  Sylvia et  al. (2015),  bahwa pada  akhir  pemasakan  buah  hampir  semua pati  (yang  semula  berjumlah  20-30%) terhidrolisis  menjadi  gula  sederhana  hingga mencapai  90%  dari  total  kandungan  pati. Sebagaimana yang telah dinyatakan oleh Paul & Halen (1981) terkait rasa manis pada buah yang telah masak ditentukan oleh adanya gula hasil  degradasi  pati  menjadi  gula  yang  lebih sederhana  yaitu  sukrosa,  glukosa,  dan fruktosa.  Maka  pada  sampel  sari  pisang  raja overripe yang  digunakan  mengandung
glukosa  yang  cukup  tinggi  dan  dapat digunakan  sebagai  alternatif  sumber  karbon bagi pertumbuhan mikroalga Thraustochytrids penghasil DHA. Kultivasi Mikroalga Proses isolasi mikroalga Thraustochytrids dari  daun  mangrove ( Rhizopora apiculata ) yang berasal dari Hutan Mangrove  Wonorejo  dilakukan  pada  media padat By+ ( Yeast  extract,  peptone,  glucose ) dengan  metode direct  planting. Koloni mikroalga yang tumbuh kemudian dimurnikan  dengan  metode streak  plate hingga  didapat  mikroalga  yang  murni  jika diamati  secara  mikroskopik.  Sampel  dengan ciri-ciri  yang  paling  mendekati  bentuk morfologi  dari  mikroalga Thraustochytrids mengacu  kepada  Julianti et  al. (2018)  dan Jarithkuan  &  Suanjit  (2018)  sebagai perlakuan terbaik yang kemudian
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(1): 120-130, Februari 2023
difermentasikan  dengan  media  YPG  dengan sari  pisang  raja overripe sebagai  sumber karbon.
Gambar  2 . Mikroalga Thraustochytrids dari sampel  daun R.  apiculata coklat (400x)
Hasil pengamatan mikroskopis mikroalga  yang  telah  diisolasi  dari  daun mangrove menunjukkan  kesesuaian  dengan jenis  mikroalga Thraustochytrids yang  telah ditemukan  sebelumnya  oleh  Julianti et  al.
(2018).  Sampel  yang  didapatkan  setelah proses  isolasi  memenuhi  ciri-ciri  mikroalga Thraustochytrids yang  berbentuk  miselia bulat, dan tidak memiliki bagian-bagian yang jelas  pada  komponen  selnya.  Hal  ini  sesuai dengan  Metzger  dan  Largeau  (2004)  yang menyatakan bahwa bentuk mikroalga berupa miselia  mikroskopis  (dengan  diameter  1-10 µm), termasuk ke dalam kelas alga dan hidup sebagai koloni dan juga sel tunggal. Morfologi bentuk  uniseluler  dari  mikroalga  tidak memiliki  pembagian  fungsi  organ  yang  jelas pada komponen selnya. Berdasarkan kemiripan ciri-ciri morfologi isolat mikroalga yang diperoleh dengan isolat milik Julianti et al. ,  (2018),  dapat  diketahui  bahwa  isolat mikroalga yang telah didapatkan merupakan Thraustochytrium sp., mikroalga
Thraustochytrids heterotrof penghasil DHA.
Isolat mikroalga yang diperoleh kemudian  dikultivasikan  ke  dalam  cawan petri  yang  berisi  media  YPG  dan  diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 o C.
Fermentasi Mikroalga Thraustochytrids Isolat Thraustochytrium sp. dari sampel terbaik yang diperoleh dari hasil pengamatan mikroskopik  kemudian  difermentasikan dengan  media  YPG  dan  sari  pisang  raja overripe untuk  menghasilkan  lipid  berjenis PUFA  ( Polyunsaturated  Fatty  Acid ).  Proses Fermentasi ini dilakukan dengan menggunakan  dua  faktor  yaitu  konsentrasi sari  pisang  yang  digunakan  sebagai  sumber karbon (0%, 25%, 50%, 75%, dan 100%) dan lama  fermentasi  (5  dan  7  hari)  terhadap produksi  biomassa  yang  dihasilkan.  Adapun berat  biomassa  yang  diperoleh  tertera  pada Gambar 3.
Gambar 3 . Biomassa Kering yang dihasilkan terhadap  Lama  Fermentasi  dan Konsentrasi  Sari  Pisang  Raja Overripe
3,75 2,2 3,4 0,9 0,55 3,95 2,75 3,9 1,05 0,8 0 1 2 3 4 5 0% 25% 50% 75% 100%
B er at B io m as sa K er in g (m g) Konsentrasi Sari Pisang Raja Overripe (%) Biomassa Kering Mikroalga Thraustochytrids 5 hari 7 hari
Pertumbuhan
mikroalga
Thraustochytrids pada konsentrasi sari pisang overripe yang  berbeda diamati  dan dibandingkan  dengan  mikroalga  yang menggunakan glukosa murni sebagai sumber karbon (konsentrasi sari pisang 0%). Seperti yang tercantum pada Gambar 2 , hasil terbaik ditemukan pada konsentrasi sari pisang 50% dengan lama fermentasi 7 hari yang memiliki berat  biomassa  paling  mendekati  berat biomassa kontrol (glukosa murni). Sedangkan pada konsentrasi sari pisang overripe sebesar 75%  dan  100%  didapatkan  biomassa  yang sangat  kecil  atau  hampir  tidak  ditemukan biomassa  dari  mikroalga Thraustochytrids.
Penjelasan  untuk  hasil  yang  didapat  adalah dengan  beberapa  kemungkinan  berdasarkan Liang  (2010):  (1)  penghambatan  substrat  di mana  konsentrasi  substrat  yang  rendah merangsang  pertumbuhan  sel  sedangkan konsentrasi substrat yang tinggi memiliki efek penghambatan.  Hal  ini  didukung  oleh  fakta bahwa  pada  lima  hari  pertama,  kandungan sari  pisang  25%  menghasilkan  peningkatan biomassa tercepat dibandingkan dengan tiga konsentrasi  lainnya;  dan  (2)  kandungan garam. Thraustochytrids adalah  alga  laut. Media yang kami gunakan untuk pertumbuhannya memiliki 18 g/L NaCl. Saat media  ini  digunakan  untuk  mengencerkan sari  pisang  untuk  membentuk  konsentrasi yang  berbeda,  konsentrasi  NaCl  untuk masing-masing konsentrasinya berbeda. Pada
konsentrasi sari pisang sebesar 100% secara otomatis  tidak  mengandung  air  laut  sama sekali  sehingga  hal  ini  yang  menjadi  alasan terdapat  perbedaan  pertumbuhan  mikroalga Thraustochytrids yang  signifikan  dibanding dengan konsentrasi lainnya.

## KESIMPULAN
Pemanfaatan  sari  pisang  raja overripe dinilai  efektif  untuk  menjadi  sumber karbon pada proses fermentasi mikroalga Thraustochytrids dengan  hasil  biomassa kering sebesar 3,9 g/L pada konsentrasi sari pisang sebesar 50% dengan lama fermentasi 7 hari.

## DAFTAR PUSTAKA
Adewale,  I.  O.,  Adefila,  A.,  &  Adewale,  T.  B. (2013).  Changes  in  Amylase  Activity, Soluble  Sugars  and  Proteins  of  Unripe Banana  and  Plantain  during  Ripening. Annual  Review  &  Research  in  Biology 3(4): 678-685
Anggraena,  F.  W.  (2018).  Validasi  Metode Analisa  Penetapan  Kadar  Nystatin Dalam  Tablet  Nystatin  Salut  Gula 500.000  IU  Secara  HPLC  (High Performance  Liquid  Chromatography).
[Skripsi]. Yogyakarta: Universitas Islam Indonesia.
Bengen, D. G. (2001). Sinopsis Ekosistem dan Sumber  Daya  Alam  Pesisir.  Institut Pertanian  Bogor:  Pusat  kajian  Sumber Daya Pesisir dan Lautan.
Chen F, Johns M. R . (1995). A Strategy for High Cell  Density  Culture  of  Heterotrophic Microalgae with Inhibitory Substrates. J Appl Phycol 7:43 – 46
Crawford,  M.  A.,  Leigh  Broadhurst,  C.,  Guest, M., Nagar, A., Wang, Y., Ghebremeskel, K., &  Schmidt,  W.  F.  (2013).  A  Quantum Theory  for  The  Irreplaceable  Role  of Docosahexaenoic  Acid  In  Neural  Cell Signalling Throughout Evolution. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids (PLEFA), 88(1), 5 – 13. doi:10.1016/j.plefa.2012.08.005
10.1016/j.plefa.2012.08.005
Julianti, E., Fathurohman, M., Damayanti, S. & Kartasusmita,  R.  E.  (2018).  Isolate  of Heterothrophic
Microalgae Thraustochytrium aureum as a Potential Source  of  Docosahexanoic  Acid  (DHA).
Mar. Res. Indonesia Vol. 43, No. 2, 2018: 79-86
Liang,  Y.,  Sarkany,  N.,  Cui,  Y.,  Yesuf,  J., Trushenski,  J.,  &  Blackburn,  J.  W.
(2010). Use  of  sweet  sorghum  juice  for lipid  production  by  Schizochytrium limacinum SR21. Bioresource Technology, 101(10), 3623 – 3627. doi:10.1016/j.biortech.2009.12.0 87
Li  X.  F.,  Xu  H.,  Wu  Q.  Y  .2007.  Large-scale Biodiesel  Production  from  Microalga
Chlorella protothecoides Through Heterotrophic Cultivation in Bioreactors. Biotechnol  Bioeng 98:764 – 771
Marriott,  J.,  Robinson,  M.  &  Karikari,  S.K.
(1981). Starch and SUGAR
Transformation  during  the  Ripening  of Plantains  and  Bananas. Journal  of  the Science of Food and Agriculture , 32 (10), 1021-1026, 1981
Metzger,  P.,  &  Largeau,  C.  (2004).
Botryococcus braunii : A Rich Source for Hydrocarbons and Related Ether Lipids. Applied Microbiology and Biotechnology ,
66(5),  486 – 496.  doi:10.1007/s00253- 004-1779-z
Molina, E. C.  (2017). Isolation and Molecular
Characterization  of  Thraustochytrium Strain Isolated from Antarctic Peninsula and its Biotechnological Potential in the Production  of  Fatty  Acids . Brazilian Journal of Microbiology http://dx.doi.org/10.1016/j.bjm.2017.0
1.011
Paul, P.C. & H. P. Halen. (1981). Fruit Theory and  Application,  John  Willey  and  Sons Inc. Co., New York.
Pleissner, D., Lam, W. C., Sun, Z., & Lin, C. S. K.
(2013). Food Waste as Nutrient Source in Heterotrophic Microalgae Cultivation. Bioresource Technology, 137, 139 – 146. doi:10.1016/j.biortech.2013.03.088
Raghukumar, S. (2002). Ecology of The Marine Protists, the Labyrinthulomycetes ( Thraustochytrids and Labyrinthulids ).
European Journal of Protistology , 38(2),
127 – 145. doi:10.1078/0932-4739- 00832
Ryckebosch,  E.,  Bruneel,  C.,  Muylaert,  K.,  & Foubert,  I.  (2012). Microalgae  as  an Alternative  Source  of  Omega-3  Long Chain Polyunsaturated Fatty Acids . Lipid Technology, 24(6), 128 –
130. doi:10.1002/lite.201200197
Sayanova, O., Ruiz-Lopez, N., Haslam, R. P., & Napier,  J.  A.  (2011).  The  Role of  Δ6 - Desaturase  Acyl-Carrier  Specificity  in The  Efficient  Synthesis  of  Long-chain Polyunsaturated Fatty Acids in
Transgenic  Plants. Plant  Biotechnology Journal , 10(2), 195 – 206. doi:10.1111/j.1467-7652.2011.00653
Sijtsma, L. (2004). Marine Micro- ­­organisms as New Sources of n- ­­3 Polyunstaurated Fatty  Acids  (PUFA).  In:  Functional Foods,  Cardiovascular  Disease  and Diabetes.  Edited  by:  A.  Arnoldi.  2004. CRC Press. Boca Raton.
Sylvia,  N.,  Meriatna  &  Haslina.  (2015). Kinetika  Hidrolisa  Kulit  Pisang  Kepok Menjadi  Glukosa  Menggunakan  Katalis
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(1): 120-130, Februari 2023
Asam  Klorida. Jurnal  Teknologi  Kimia Unimal 4: 2 (November 2015) 51-65
Winarno,  F.G.  (2010).  Enzim  Pangan.  Bogor:
M-Brio Press.