EFEKTIVITAS EKSTRAK BIJI JINTAN HITAM (Nigella sativa Linn.) TERHADAP INFEKSI BAKTERI STREPTOCOCCUS AGALACTIAE PADA IKAN NILA (Oreochromis niloticus Linn.)
The effectiveness of Nigella sativa Linn Extract on Oreochromis niloticus Linn infected with Streptococcus agalactiae
Gustiana * , Alexander Rantetondok, Elmi Nurhaidah Zainuddin
Diterima :               ; Disetujui :

## ABSTRACT
Black Cumin Seeds (Nigella sativa L.), commonly known as black seed, have been used in traditional medicine. Streptococcus  agalactiae  is  a  Gram-positive  bacteria  that  causes  the  disease  Streptococcosis  in  nile  tilapia (Oreochromis  niloticus  L.).  This  study  aims  to  find  the  bioactivity of  black  cumin  seeds  (N.  sativa  L.)  against bacterial pathogens in nile tilapia (O. niloticus L.). The research activities include preparation of samples black cumin seeds (N. sativa L.), extraction with kinetic maceration method using solvents from different polarity (n- hexane,  ethanol  and  methanol),  determination  of  antibacterial  activity  and  minimum  inhibition  concentration (MIC) by agar diffusion method. The results of antibacterial activity against S. agalactiae of pathogenic bacteria showed that the highest activity was performed by semi-polar extract ethanol (inhibition zone diameter of 15.33 mm),  followed    by  extract  polar  methanol  with  inhibition  zone  diameter  of  12.67  mm.    Extract  non-polar  n- hexane  did  not  show  any  activities  against  the  bacterial  test.  Determination  of  the  minimum  inhibitory concentration (MIC) of ethanol extract against  S. agalactiae showed a value of 250 ppm.
Keywords: Antibacteria, Streptococcus agalactiae, Nile Tilapia (Oreochromis niloticus L.), Nigella Sativa L.

## PENDAHULUAN
Jintan  hitam  ( Nigella  sativa L .) yang  dikenal  dengan  nama black  cumin atau Habbatusauda merupakan  tanaman  asli  dari  Eropa  Selatan  dan  banyak  ditemukan  di  India.      Tumbuhan  ini  telah digunakan  sebagai  pengobatan  herbal  selama  lebih  dari  2000  tahun.    Bagian  tumbuhan  jintan  hitam yang digunakan untuk pengobatan adalah bijinya, yang memiliki peran medis dan telah diaplikasikan dalam  sistem  pengobatan  herbal  tradisional  di  Arab  dan  Yunani.  Biji  jintan  hitam  dilaporkan  telah menunjukkan efek  farmakologis yang meliputi  antibakterial,  antihelmintik,  anticestoda, antischistosoma,  antifungi,  antiviral,  antioksidan,  dan  memiliki  aktivitas  antiinflamasi,  serta  dapat meningkatkan respon imun (Abdulelah & Zainal, 2007).
Ikan  nila (Oreochromis  niloticus L. ) merupakan  ikan  air  tawar  yang  paling  banyak dibudidayakan di dunia. Budidaya ikan nila telah memberikan kontribusi untuk akuakultur dunia sejak zaman Mesir kuno  dan tetap  menjadi spesies  ikan air tawar utama yang terus dibudidayakan.   Untuk memenuhi permintaan produk perikanan yang terus meningkat, penerapan intensifikasi budidaya tidak dapat  dihindarkan.  Namun,  intensifikasi  budidaya  dapat  menimbulkan  berbagai  dampak  penyakit (Shelton & Popma, 2006).
Salah satu jenis penyakit bakterial yang sering menyerang budidaya ikan nila adalah penyakit Streptococcosis . Penyakit  ini  disebabkan  oleh  serangan  dari  bakteri Streptococcus  agalactiae yang dapat menyebabkan  kematian  yang tinggi pada  organisme budidaya perairan  (Shoemaker & Klesius, 1997) . Ikan  nila    yang  terinfeksi  bakteri S.  agalactiae memperlihatkan  gejala-gejala  seperti kehilangan  nafsu  makan, tulang belakang bengkok, pendarahan di  mata, pendarahan pada dasar sirip dan  operkulum.    Tanda-tanda  yang  paling  menonjol  adalah  perut  menjadi  buncit  dan  berenang  tidak menentu (Evans dkk., 2006a).
* Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Hasanuddin, Jln. Perintis Kemerdekaan Km. 16, Makassar, 90245, email: tinjordan23@yahoo.com
Untuk  menanggulangi  infeksi  bakteri Streptococcus  agalactiae pada  ikan  nila  para pembudidaya menerapkan beberapa tindakan pencegahan dan terapi antibiotik.   Selama ini antibiotik sintetis  banyak  digunakan  untuk  menghambat  atau  membunuh  bakteri  patogen  pada  budidaya  ikan. Namun  dampak  dari  penggunaan  antibiotik  sintetis  secara  terus-menerus  dapat  menghasilkan  strain bakteri patogen  yang resisten terhadap antibiotik  yang telah ada.   Akumulasi residu antibiotik  dalam organisme  budidaya  berpotensi  merusak  kesehatan  manusia  dan  hewan  yang  mengkonsumsinya  dan juga terhadap lingkungan sekitarnya (Muniruzzaman & Chowdhury, 2004).
Oleh  karena  itu,  untuk  menghindari  efek  samping  yang  ditimbulkan  akibat  penggunaan antibiotik  sintetis,  maka  dilakukan  solusi  dengan  fitoterapi  (penggunaan  bahan  alami  dari  tanaman untuk  pengobatan  penyakit).      Penggunaan  bahan-bahan  alami  untuk  mengendalikan  hama  dan penyakit pada organisme budidaya lebih disarankan karena relatif lebih aman dan tidak meninggalkan residu antibiotik dalam organisme budidaya (Zainuddin & Malina, 2009).
Sampai  saat  ini  penanggulangan  infeksi  bakteri Streptococcus  agalactiae pada  ikan  nila (Oreochromis  niloticus L. ) masih  menggunakan  antibiotik  sintesis,  sehingga  perlu  dilakukan  upaya penanggulangan  dengan  menggunakan antibiotik alami seperti biji  jintan  hitam yang  dapat berperan sebagai  zat  antibakteri.  Tujuan  penelitian  adalah  untuk  menemukan  potensi  bioaktif  dari  biji  jintan hitam (Nigella  sativa L .) terhadap  bakteri  patogen Streptococcus  agalactiae pada  ikan  nila (Oreochromis niloticus L. ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret 2015 sampai dengan Juli 2015 di Laboratorium Mikrobiologi  Laut,  Hatcheri  (Fakultas  Ilmu  Kelautan  dan  Perikanan),  Laboratorium  Kualitas  Air, Laboratorium  Biofarmaka,  dan  di  Laboratorium  Oseonografi  Kimia  Universitas  Hasanuddin, Makassar Sulawesi Selatan.
Bahan  yang  digunakan  adalah  ikan  nila (Oreochromis  niloticus), biji  jintan  hitam (Nigella sativa) ,  strain  bakteri  patogen  uji Streptococcus  agalactiae ,  media  TSA (Triptic  Soy  Agar), media BHIA (Brain  Heart  Influcion  Agar) pelarut  n–heksana,  etanol,  metanol  (MeOH),  kloramfenikol, dimetilsulfooksida  (DMSO),  alkohol  70%,  larutan  fisiologis  NaCl  0,9%,  akuades,  air  laut  steril, safranin,  spiritus,  kertas  saring  Whatman  no.1 ,  paper  disc ,  kapas,  kertas  label,  tisu,  dan  aluminium foil.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  sebagai  berikut  inkubator,    rotavapor, laminar air  flow ,  lemari  pendingin, hot  plate,  magnetic  stirrer, oven,  mikropipet, vortex  mixer ,  timbangan analitik, autoclave , pisau/gunting, ember, blender, saringan, gloves, jarum ose bundar, lampu bunsen, botol sampel, gelas piala, cawan petri, tabung reaksi, spatula, cool box , labu Erlemneyer,  gelas ukur, tabung Eppendorf, corong, botol vial, jangka sorong, akuarium, bak fiber, aerator, serokan, timbangan digital.

## Sterilisasi Peralatan
Alat-alat  yang  digunakan  dicuci  bersih  dengan  deterjen  lalu  dibilas  dengan  air  kran  dan  terakhir dengan  akuades.  Alat  tersebut  kemudian  dikeringkan  di  oven  pada  suhu  60-70ºC.    Peralatan  yang terbuat  dari  gelas,  tidak  tahan  pada  pemanasan  dengan  suhu  tinggi,  distersilkan  dalam  autoklaf  pada suhu 121ºC, tekanan 2 atm selama 15 menit.  Jarum ose disterilkan dengan cara  pemanasan langsung pada api bunsen hingga memijar.

## Proses Ekstraksi Biji jintan hitam ( Nigella sativa L.)
Proses  ekstraksi  biji  jintan  hitam (Nigella  sativa) dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi. Proses  ekstraksi  dilakukan secara berturut-turut, dimulai dari pelarut non-polar, sampai polar. Pelarut yang digunakan secara berturut-turut mulai dari n-heksana, etanol, dan metanol.
Sampel  serbuk  jintan  hitam  sebanyak  25  gram  dimaserasi  menggunakan  pelarut  n-heksan  sebanyak 200  mL  dalam  labu  Enlenmeyer  dan  diekstraksi  di  atas magnetic  stirrer dengan  putaran  sedang. Ekstraksi dilakukan selama 24 jam dan diulang sebanyak tiga kali.  Setelah diekstraksi dengan pelarut n-heksan,  ampas  dikeringkan  terlebih  dahulu  sebelum  diremaserasi  dengan  pelarut  etanol  dan  begitu seterusnya hingga pelarut terakhir yaitu metanol.
Setelah  selesai  proses  ekstraksi,  pelarut  organik  diuapkan  secara  vakum  pada  rotavapor sampai  diperoleh  ekstrak  kasar.    Ekstrak  yang  belum  kering  sempurna,  selanjutnya  diuapkan  airnya dengan cara diliofilisasi dengan menggunakan freeze dryer.
Ekstrak  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  vial  yang  telah  diketahui  beratnya.  Setelah  pelarut kering,  ekstrak ditimbang beratnya  dan  disimpan  di freezer sampai akan  digunakan untuk pengujian. Untuk menghitung rendemen ekstrak digunakan rumus sebagai berikut :

## Pengujian Antibakteri Dengan Metode Difusi Agar
Metode  yang  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri  adalah  metode  difusi  agar (Zainuddin,  2006).  Setiap  ekstrak  kasar  (n-heksana,  etanol,  dan  metanol)  ditimbang  dengan konsentrasi  2  mg/50  μL/disk,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  tabung  Ependorf  dan  dilarutkan  dengan masing-masing  pelarutnya.  Selanjutnya  dihomogenkan  dengan  menggunakan  vortex  dan  siap  untuk dilakukan pengujian.
Organisme  yang  digunakan  dalam  pengujian  adalah  bakteri  patogen  yang  biasa  menginfeksi ikan  nila (Oreochromis  niloticus) .  Bakteri  patogen  yang  digunakan  sebagai  bakteri  uji  adalah  kultur murni Streptococcus  agalactiae yang  berasal  dari  Laboratorium  Bakteriologi,  Fakultas  Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor (IPB).
Pembuatan suspensi bakteri uji  dilakukan  dengan cara  mengambil 2  ose  kultur  murni bakteri yang  akan  diuji,  kemudian  disuspensikan  dalam  3  mL  media  cair  TSB  steril  dan  divortex  hingga merata.    Sebanyak  200  µL  suspensi  bakteri  uji  dicampurkan  dalam  20  mL  media  TSA (Triptic  Soy Agar) yang hangat dan diaduk perlahan di dalam cawan petri dan dibiarkan memadat.  Kemudian tiap- tiap  ekstrak  diteteskan  sebanyak  50  µL  pada  kertas  disk  yang  berbeda  dan  kemudian  dibiarkan menguap sehingga betul-betul kering sebelum diletakkan secara hati-hati dan aseptis pada permukaan media  agar  yang  telah  dihomogenkan  dengan  mikroba.    Kemudian  diinkubasikan  pada  suhu  28ºC selama  24  jam.  Sebagai  kontrol  positif,  digunakan  antibiotik  komersil  tetrasiklin  30  ppm.  Kontrol negatif  yang  digunakan  adalah    pelarut  yang  digunakan  untuk  ekstraksi  (n-heksan,  etanol,  dan metanol).  Setelah  masa  inkubasi  aktivitas  antibakteri  ditunjukan  dengan  adanya  zona  penghambatan (Zona  bening/Zona  halo)  di  sekitar  kertas  disk  dimana  hal  tersebut  menunjukkan  adanya penghambatan pertumbuhan bakteri dan diukur menggunakan jangka sorong.
Setelah  masa  inkubasi,  diameter  zona  hambat  (daerah  terang  atau  halo)  dinyatakan berdasarkan zona bening  yang  dihasilkan  di sekitar paper disc. Diameter zona hambat pertumbuhan bakteri diukur dalam satuan mm dan dijadikan ukuran kuantitatif untuk ukuran zona hambat.  Jika = 6 mm  (tidak  aktif),  >6  dan  ≤10  (aktivitas  rendah),  >10  dan  ≤15  (aktivitas  sedang),  >15  dan  ≤20 (aktivitas tinggi) dan >20 (aktivitas sangat tinggi) (Zainuddin, 2006).

## Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  dari  ekstrak  biji  jintan  hitam (Nigella  sativa L .) ditentukan  dengan  metode  difusi  agar  menggunakan paper  disc .    Penentuan  KHM  dari  ekstrak dilakukan  terhadap  bakteri  patogen  uji  menggunakan  kisaran  konsentrasi  kelipatan  0,5  yang  dimulai dari 2000 ppm, 1000 ppm, 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 62,5 ppm, 31,25 ppm dan 15,625 ppm/disk. Efek  penghambatan  dianalisa  secara  deskriptif  terhadap  grafik  hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak dan  diameter  zona  hambat.Penentuan  nilai  KHM  hanya  dilakukan  terhadap  ekstrak  yang  ditemukan berpotensi menghambat bakteri patogen uji

## Analisis Data
Metode  yang  digunakan  adalah  metode  eksperimen  dengan  pengambilan  data  dilakukan secara  pengamatan  langsung.  Data  dianalisis  statistik  menggunakan one  way ANOVA (Analysis  of Variance) dengan program software SPSS dan dilanjutkan dengan uji Tukey untuk melihat perbedaan
Berat ekstrak % Rendemen =
x100%
Berat sampel
antara perlakuan. Sedangkan data kelangsungan hidup ikan dalam uji LC 50 dianalisis melalui program Probit  Analysis  yang  dibantu  dengan  tabel  probit  dan  untuk  persamaan  regresi  digunakan Microsoft Excell.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Rendamen Ekstrak Biji jintan hitam ( Nigella sativa ) Proses  ekstraksi biji  jintan  hitam (Nigella sativa L .) dilakukan  dengan  menggunakan  metode maserasi  kinetik  memakai  pelarut  dengan  polaritas  yang    berbeda  secara  berkelanjutan  (n-heksana, etanol  dan  metanol).    Setelah  diuapkan  dengan  menggunakan  rotavapor  berat  ekstrak  kemudian ditimbang.  Serbuk biji  jintan (Nigella sativa L .) sebanyak 300  g  yang  diekstraksi  memberikan  hasil rendemen ekstrak tertinggi dari pelarut non-polar yaitu n-heksana (6.83%) disusul oleh pelarut etanol (5.25%) sedangkan pelarut metanol  memberikan rendemen  ekstrak sebesar (4.1%) dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil ekstrak kasar dari berat biomas dan volume pelarut yang berbeda yang diperoleh selama penelitian  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Ilmu  Kelautan  dan  Perikanan  Universitas Hasanuddin, Makassar.
Berat Biomassa (g) Pelarut Volume Pelarut (ml) Berat Ekstrak Kasar Warna (mg) % n-Heksana 200 20.482 6.83 Coklat Tua 300 Etanol 200 15.754 5.25 Coklat kehitaman Metanol 200 13.259 4.41 Coklat Muda
Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Biji jintan hitam ( Nigella sativa L .) Uji  aktivitas  antibakteri  biji  jintan  hitam (Nigella  sativa L .) dilakukan  menggunakan  metode difusi  agar.  Secara  keseluruhan  3  ekstrak    non-polar,  semi-polar  dan  polar  (n-heksana,  etanol  dan metanol)  dari  biji  jintan  hitam (N.  sativa) diuji  aktivitasnya  terhadap  bakteri  patogen Streptococcus agalactiae yang  berasal  dari  koleksi  kultur  murni  Laboratorium  Bakteriologi,  Fakultas  Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor (IPB).
Uji  Tukey  menunjukkan  bahwa  terhadap  bakteri Streptococcus  agalactiae diameter  zona hambat tertinggi diperlihatkan oleh ekstrak etanol yaitu sebesar 15,33 mm yang berbeda nyata dengan ekstrak  n-heksana  (6,00  mm)  dan  metanol  (12.67  mm).    Adapun  zona  hambat  antibiotik  kontrol tetrasiklin (30 ppm) yaitu sebesar 18.0 mm dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2.    Rata-rata  diameter  zona  hambat  dari  ekstrak  biji  jintan (Nigella    sativa) terhadap  bakteri Streptococcus  agalactiae yang  diperoleh  selama  penelitian  di  Laboratorium  Mikrobiologi Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan Universitas Hasanuddin, Makassar.
Ekstrak Rata-rata diameter zona hambat terhada Streptococcus agalactiae n-Heksana 6,00±0 a Etanol 15,33±0,58 c Metanol 12.67±0,58 b
Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan pada taraf p<0,05.

## Nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Ekstrak  aktif  dari  biji  jintan  hitam (Nigella  sativa L .) yaitu  ekstrak  etanol  digunakan  dalam penentuan  nilai  KHM.    Penentuan  nilai  KHM  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  terhadap  strain bakteri  patogen Streptococcus  agalactiae dengan  menggunakan  kisaran  konsentrasi  ekstrak berkelipatan 0,5 dimulai dari 2000 ppm sampai 15,625 ppm yang dibuat secara triplo.
Dari  hasil  uji  KHM  diperoleh  hasil  yaitu  konsentrasi  minimum  ekstrak  etanol  untuk menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus agalactiae adalah 250 ppm, karena pada konsentrasi lebih rendah yaitu 15,625 ppm tidak ada daya hambat yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Konsentrasi ekstrak (ppm) Di a m e te r z o n a h a m b a ta n ( m m ) 2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 5 10 15 20 Uji KHM ekstrak etanol
Gambar 2. Konsentrasi hambat  minimum (KHM) dari ekstrak etanol biji jintan  hitam (Nigella sativa L .) terhadap pertumbuhan bakteri patogen Streptococcus agalactiae [Metode Difusi Agar; n=  2;  2000-15,625  ppm,  Ø  zona  hambat  (mm)  termasuk  Ø  disk  (6  mm)]  yang  diperoleh selama  penelitian  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Ilmu  Kelautan  dan  Perikanan Universitas Hasanuddin, Makassar.
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  biji  jintan  hitam  memiliki  potensi  antibakteri terhadap  bakteri  uji Streptococcus  agalactiae pada  ikan  nila.  Ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas antibakteri  tertinggi  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  agalactiae yang  dilihat dari uji difusi bakteri.
Berdasarkan  penelitian  Sultan  dkk  (2009),  menemukan  bahwa  biji  jintan  hitam  ( N.  sativa) mengandung karbohidrat, protein dan lemak yang tinggi. Menurut Hosseinzadeh dkk (2007), senyawa yang umumnya terekstrak oleh  n-heksana adalah  lilin, lemak,  minyak, dan  minyak atsiri.  Tingginya rendemen ekstrak n-heksana menunjukkan kandungan lemak biji jintan hitam (N. sativa) cukup tinggi. Senyawa  yang  umum  larut  dalam  etanol  adalah  glikosida dan Thymoquinone ,  sedangkan  senyawa yang umum larut dalam metanol adalah alkaloid, aglikon, dan glikosida.
Menurut  Thongson dkk (2004),  komponen antibakteri dalam ekstrak bahan alami umumnya adalah golongan fenolik yang bersifat polar.  Komponen yang umumnya larut dalam n-heksana adalah lilin,  lemak,  komponen  terpenoid.    Ekstrak  biji  jintan  hitam (Nigella  sativa L. ) yang  menunjukkan spektrum  antibakteri  yang  luas  adalah  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  metanol  karena  dapat  menghambat bakteri  uji Streptococcus  agalactiae .  Ekstrak  etanol  dan  metanol  mengandung  komponen  antibakteri yang cenderung bersifat polar.
Hasil  penelitian  Najah  (2012),  menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  etanol biji  jintan  hitam (Nigella  sativa L .) dengan  diameter  zona  hambat  sebesar  12.7  mm  dan  10.4  mm terhadap bakteri Streptococcus  mutans dan Streptococcus  mitis .  Penelitian  Salman  dkk  (2008), melaporkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  jintan  hitam (Nigella  sativa L .) menghasilkan  aktivitas antibakteri terhadap berbagai mikroba dan terutama terhadap bakteri Gram-positif.
Melalui uji LC 50 selama 24 jam, dosis 2000 ppm menyebabkan kematian pada larva ikan nila (O.  niloticus) .   Hal  ini  diduga  karena  senyawa nigellin yang  berlebihan  dan  terasa  pahit  dari  ekstrak
etanol  menganggu  laju  pernafasan  dan  proses  fisiologis  dari  larva  ikan  uji  sehingga  menyebabkan kematian pada larva ikan nila (O. niloticus).
Nilai  KHM  adalah  konsentrasi  terendah  dari  ekstrak  uji  yang  menghambat  pertumbuhan bakteri  patogen.    Hal  ini  sangat  bermanfaat  guna  menghindari  efek  toksik  atau  mematikan  terhadap organisme  budidaya  yang  merupakan  inang  dari  bakteri  patogen  pada  ikan  serta  terhadap  manusia yang  mengkonsumsi  ikan akibat terakumulasinya antibiotik  dalam ikan  konsumsi (Zainuddin, 2006). Konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  didefinisikan  sebagai  nilai  terendah  dari  konsentrasi antimikroba yang akan menghambat pertumbuhan mikroorganisme setelah inkubasi 24 jam (Andrews, 2001).

## KESIMPULAN
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi  agar  terhadap  bakteri  patogen Streptococcus agalactiae, diperoleh aktivitas tertinggi pada ekstrak semi-polar etanol biji jintan hitam (Nigella  sativa L .) dengan  diameter  zona  hambat  15,33  mm,  disusul  ekstrak  polar  metanol  dengan diameter  zona  hambat  12,67  mm.    Ekstrak  non-polar  n-heksana  tidak  memperlihatkan  aktivitas terhadap  bakteri  uji.    Hasil  pengujian  sitotoksisitas  dari  ekstrak  semi-polar  etanol,  memperlihatkan hanya  konsentrasi  2000  ppm  yang  memperlihatkan  efek  toksik  yang  sedang  terhadap  larva  ikan  nila (Oreochromis  niloticus) (LC 50 =  630.9  ppm).  Konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  ekstrak  etanol terhadap bakteri Streptococcus agalactiae adalah 125 ppm.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  kepada  Prof.  Dr.  Ir.  Alexander  Rantetondok,  M.Fish,  Sc  dan  Dr.  rer.  nat.  Elmi  Nurhaidah Zainuddin, DES yang telah banyak membantu membimbing selama penelitian.

## Daftar Pustaka
Abdulelah H.A.A. & Zainal – Abidin B.A.H. (2007). In vivo Anti-Malarial Test of Nigella sativa (Black Seed) Different  Extracts .  American  Journal  of  Pharmacology  and  Toxicology,  Vol.  2  (2):  46-50.  ISSN: 1557-4962.
Andrews,  J.  M.  (2001).  Determination  of  minimum  inhibitory  concentrations.  Journal  of  Antimicrobial Chemotherapy (2001) 48, 5-16.
Evans    J.J.,  Pasnik    D.J.,  Klesius  P.H.,  &  Shoemaker  C.A.  (2006a).  Identification  and  epidemiology  of Streptococcus  iniae and Streptococcus  agalactiae in  tilapia, Oreochromis spp. International Symposium  on  Tilapia  in  Aquaculture  7 (pp.  25-42).  Charles  Town,  WV,  USA,  American  Tilapia Association.
Hosseinzadeh H., Parvardeh S. Asl M.N. Sadeghnia H.R & Ziaee T. (2007). Effect of thymoquinone and Nigella sativa seeds oil on lipid peroxidation level during global cerebral ischemia-reperfusion injury in rat hippocampus. Phytomedicine, 14: 621-627. DOI: 10.1016/j.phymed.2006.12.005 Muniruzzaman  M.  &  Chowdhury  M.B.R.  (2004).  Sensitivity  of  fish  pathogenic  bacteria  to  various  medicinal herbs. Bangladesh Journal of Veterinary Medicine, 2004; 2 (1): 75-82. Najah  A.  Mohammed.  (2012).  Effect  of Nigella  Sativa  L. extracts  against Streptococcus  mutans and Streptococcus mitis in Vitro. J Bagh Coll Dentistry 2012; 24(3):154-157. Salman  MT.,  Khan  RA.,  &  Shukla  I.  (2008).  Anti-microbial  activity  of Nigella  sativa Linn.  Seed  oil  against multi drug resistant bacteria from clinical isolates. Nat Prod Rad 2008; 7: 10-14. Shelton W.L. & Popma T.J. (2006). Biology: Tilapia biology, culture and nutrition . New York, NY, USA: Food Production Press.
Shoemaker,  C.A.,  &  Klesius,  P.H.  (1997). Streptococcal  disease  problem  and  control:  A  review. Tilapia Aquaculture Ithaca, NY, USA. Northwest Regional Aquaculture Engineering Service.
Sultan, M.T., Masood, S.B., Faqir, M.A., Amer, J., Saeed, A., dan Muhammad, N. (2009). Nutritional Profile of Indigenous Cultivar of Black Cumin Seeds and Antioxidant Potential of Its Fixed and Essential Oil. Pakistan Journal Botani, Vol. 41(3): 1321-1330.
Thongson, C., P. M. Davidson, W. Mahakarnchanakul & J. Weiss. (2004). Antimicrobial activity of ultrasound- assisted solvent-extracted spices. Letters in Applied Microbiology. 39:401-406.
Zainuddin, E.N. (2006). Chemical and Biological Investigations of Selected Cyanobacteria (Blue-green Algae). PhD Thesis, University Greifswald.
Zainuddin, E.N. & A.C. Malina. (2009). Skrining rumput laut komersil asal Sulawesi Selatan sebagai antibiotik melawan bakteri patogen pada ikan. Penelitian Research Grant, Biaya IMHERE-DIKTI.