Aktivitas Antibakteri Eco-Enzyme Limbah Citrus sinensis , Musa paradisiaca L. var Bluggoe , dan Kombinasinya terhadap Staphylococcus aureus
Antibacterial activity of eco-enzyme waste of Citrus sinensis, Musa paradisiaca L. var bluggoe, and their combination against Staphylococcus aureus
Iramie  Duma  Kencana  Irianto,  Krestanto  Purnomo,  Arfiana  Amanati,  Dhea  Savila, Ana Mardiyaningsih * DIII Farmasi Politeknik Kesehatan Bhakti Setya Indonesia, Yogyakarta Corresponding author: Ana Mardiyaningsih: Email: mardiyaningsihana@gmail.com
Submitted: 09-11-2022 Revised: 27-12-2023 Accepted: 27-12-2023
ABSTRAK
Pengendalian  penularan  COVID-19  pada  fase  transmisi  lokal  dapat  dilakukan  dengan penyemprotan  cairan  disinfektan. Eco-enzyme memiliki  banyak  manfaat,  salah  satunya  adalah sebagai disinfektan sehingga dapat menangani masalah pengolahan limbah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari eco-enzyme limbah Citrus sinensis , Musa paradisiaca L. var  bluggoe ,  dan  kombinasinya  terhadap Staphylococcus  aureus .  Preparasi eco-enzyme dilakukan dengan mencampur limbah, molase dan air pada perbandingan 3:1:10. Fermentasi dilakukan selama 90 hari. Evaluasi berupa organoleptik, nilai pH, skrining fitokimia, dan uji aktivitas antibakteri. Eco- enzyme yang dihasilkan berwarna coklat tua beraroma khas menyengat dan lebih asam dibanding bahan segarnya. Eco-enzyme C.sinensis mengandung alkaloid, polifenol, flavonoid dan saponin. Eco- enzyme M.paradisiaca var. bluggoe mengandung tanin, polifenol, flavonoid dan saponin. Ketiga eco- enzyme yang  dihasilkan  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus .  Urutan  aktivitas antibakteri  terhadap S.aureus dari  yang  lebih  kuat  adalah  (1) eco-enzyme  M.paradisiaca; (2) eco- enzyme C.sinensis; (3) eco-enzyme kombinasi C.sinensis dan M.paradisiaca var. bluggoe . Kata Kunci : antibakteri ; Citrus sinensis; eco-enzyme; Musa paradisiaca
ABSTRACT
Control of COVID-19 transmission in the local transmission phase can be done by spraying disinfectant liquid. Eco-enzyme has many benefits, one of which is used as a disinfectant so that it can handle waste treatment problems. This study aims to determine the antibacterial activity of eco- enzyme from Citrus sinensis waste, Musa paradisiaca L. var bluggoe, and their combination against Staphylococcus aureus . Preparation of eco-enzyme was done by mixing waste, molasses and water in the ratio of 3:1:10. Fermentation was carried out for 90 days. Evaluation included organoleptic, pH value,  phytochemical  screening,  and  antibacterial  activity  test.  Eco-enzyme  produced  was  dark brown in colour with a pungent aroma and more acidic than the fresh material. The C.sinensis eco- enzyme contained alkaloids, polyphenols, flavonoids and saponins. M.paradisiaca var. bluggoe eco- enzyme  contains  tannins,  polyphenols,  flavonoids  and  saponins.  All  three  eco-enzymes  produced were  able  to  inhibit  the  growth  of S.aureus bacteria.  The  order  of  antibacterial  activity  against S.aureus from  the  stronger  is  (1) eco-enzyme M.paradisiaca;  (2)  eco-enzyme C.sinensis ;  (3)  eco- enzyme combination of C.sinensis and M.paradisiaca var. bluggoe. Keywords : antibacterial; Citrus sinensis ; eco-enzyme; Musa paradisiaca

## PENDAHULUAN
Suatu  sindrom  pernapasan  akut  CoV-2,  SARS-CoV-2,  yang  lebih  dikenal  dengan  COVID-19, ditularkan  melalui  kontak  dan  semburan droplets pernapasan  dari  pasien(Lotfinejad  et  al.,  2020; Tartari  et  al.,  2019;  WHO,  2020).  Hasil  berbagai  tes  laboratorium  menunjukkan  bahwa  virus  ini mampu  bertahan  3  hingga  72  jam  pada  permukaan  benda  mati,  seperti  plastik, stainless  steel , tembaga, kardus, terutama pada area toilet bangsal isolasi(Subpiramaniyam, 2021). Penelitian Liu et al. (Yuan Liu et al., 2020) mengungkapkan bahwa virus COVID-19 terdapat pada area publik yang ramai dan air limbah yang berasal dari bandara dengan persentase positif COVID-19 hingga 77,5% (Subpiramaniyam, 2021).
Penularan  virus  COVID-19  diklasifikasikan  menjadi  empat  fase.  Fase  I  adalah  kemunculan orang pertama yang positif COVID-19 dan membawa virus dari satu tempat ke tempat lain. Fase II yaitu  terjadinya  penularan  lokal  (transmisi  lokal).  Pada  fase  kedua  ini  virus  menular  dari  pasien terinfeksi  (sumber  virus)  ke  orang  lain  yang  memiliki  kontak  terdekat.  Fase  III  yaitu  terjadinya penularan tingkat komunitas. Pada fase ini akan sulit mengidentifikasi sumber virus. Fase IV yakni terjadinya wabah yang meluas sehingga disebut sebagai tahap pandemi dan penyebaran yang tidak terkendali(ICMR, 2020). Disinfektan sering disemprotkan di dalam ruangan selama fase II. Namun beberapa kota menerapkan penyemprotan disinfektan  di lingkungan (luar  ruangan) pada tingkat komunitas (fase III) dan tahap pandemi (fase IV)(Subpiramaniyam, 2021).
Disinfektan  yang  dapat  digunakan  antara  lain    natrium  hipoklorit  (0,05 – 0,1%),  deterjen, etanol (62 – 71%), hidrogen peroksida (≥0,5%), benzalkonium klorida (0,05 – 0,2%), klorheksidin diglukonat (0,02%), senyawa fenol dan ammonium (ECDC, 2021). Namun disinfektan tersebut dapat menjadi  racun  bagi  organisme  akuatik  seperti  makroinvertebrata,  zooplankton  yang  merupakan sumber makanan utama biota air. Limbah yang dihasilkan dari penggunaan hidrogen peroksida dan hipoklorit secara luas dapat mencemari lingkungan air (Subpiramaniyam, 2021). Penelitian tentang evaluasi  paparan  inhalasi  benzalkonium  klorida  selama  14  hari  menunjukkan  bahwa  senyawa tersebut dapat menyebabkan iritasi pada rongga hidung dan paru-paru karena kerusakan oksidatif (Choi  et  al.,  2020).  Selain  itu,  penggunaan  disinfektan  tersebut  secara  silmultan  juga  dapat menyebabkan resistensi bakteri (Mc Carlie et al., 2020). Jika paparan disinfektan sintetik tersebut tidak digunakan secara bijak maka dapat berdampak buruk pada lingkungan. Oleh karena itu peneliti mencari alternatif disinfektan alami untuk meminimalisir efek samping tersebut.
Eco-enzyme mampu  berperan  sebagai  agen  anti-fungi,  anti-bakteri,  insektisidal  dan pembersih  rumah  tangga  (Vama  &  Cherekar,  2020). Eco-enzyme dapat  menetralisir  polutan  dan penghilang bau di atmosfer, badan air atau tanah (Low et al., 2021). Aplikasi lain dari eco-enzyme digunakan  sebagai  pengawet  makanan  karena  mengandung  asam  propionat  yang  efektif  dalam pencegahan pertumbuhan mikroba. Eco-enzyme juga dapat digunakan sebagai pupuk organik alami karena kandungan nitrat dan karbonat. Kandungan tersebut mampu meningkatkan kesuburan tanah karena  bertindak  sebagai  katalisator.  Sifat  katalisator  ini  digunakan  untuk  mempercepat dekomposisi,  komposisi  dan  transformasi  bahan  organik  menjadi  zat  yang  lebih  sederhana  dan aman(Rasit  et  al.,  2019).  Pemanfaatan eco-enzyme ini  selain  bermanfaat  juga  mudah  diperoleh, murah, tidak berbahaya dan alami (Janarthanan et al., 2020).
Beberapa  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa eco-enzyme memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap  beberapa  bakteri  patogen. Eco-enzyme yang  berasal  dari  kulit  buah  nanas  mampu menghambat pertumbuhan bakteri penyebab jerawat, yaitu S.aureus dan P.acnes dengan nilai KHM 50% karena mengandung tanin dan saponin (Ramadani et al., 2022). Eco-enzyme yang berasal dari limbah buah nanas, pisang, dan papaya dapat digunakan sebagai disinfektan alami pada kandang babi karena memiliki aktivitas antibakteri terhadap E.coli dengan perbandingan larutan eco-enzyme 1:30 dalam air (Ginting et al., 2021). Disinfektan alami juga dapat berasal dari eco-enzyme kombinasi limbah organik (kulit rambutan, tongkol jagung dan kulit labu siam) dan bunga kamboja ( Plumeria alba ). Eco-enzyme kombinasi limbah dan bunga tersebut memiliki aktivitas antibakteri sangat kuat terhadap S.aureus , dengan zona hambat 31,85 – 34,41mm (Rahayu et al., 2021).
Kulit  buah  jeruk  kaya  akan  manfaat,  diantaranya  sebagai corigen  odoris,  corigen  saporis , sumber vitamin C, berkhasiat dalam pengobatan serta memiliki tingkat keasaman yang tinggi. Eco- enzyme kulit buah jeruk (lemon, jeruk nipis dan jeruk manis) memiliki aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas spp., E.coli, dan Bacillus spp (Vama & Cherekar, 2020). Ekstrak etanol kulit buah jeruk manis  ( Citrus  sinensis )  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap P.aeruginosa,  K.pneumonia,  E.coli, S.aureus, dan S.thyphimurium . Ekstrak ini mengandung saponin, tanin, terpenoid, alkaloid, steroid, dan  flavonoid  yang  merupakan  golongan  senyawa  dengan  aktivitas  menghambat  pertumbuhan dan/atau membunuh bakteri (Mehmood et al., 2015; Purwanto & Irianto, 2022).
Ekstrak  hidroetanol  kulit  pisang  kepok  ( Musa  paradisiaca )  pada  konsentrasi  50%  mampu menghambat  pertumbuhan Candida  albicans (Loyaga-Castillo  et  al.,  2020).  Ekstrak  eter  kulit M.paradisiaca mampu  menghambat B.atrophaeus (zona  hambat  18±0,6mm)  sedangkan  ekstrak airnya menghambat S.typhimurium (zona hambat 14±0,8mm)(Butt et al., 2022). Hasil analisis HPLC, ekstrak metanol kulit buah M.paradisiaca mengandung  fenolik (asam galat, katekol, asam ferulat,
asam elagat, asam o- kumarat, asam salisilat, dan asam sinamat) serta flavonoid (rutin, mirissetin, dan naringenin)(Behiry et al., 2019).
Pemanfaatan  limbah  kulit  buah Citrus  sinensis dan Musa  paradisiaca L. var  bluggoe yang difermantasi  menjadi eco-enzyme merupakan  peluang  alternatif  disinfektan  alami  dalam pengendalian  penularan  infeksi  COVID-19.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri dari eco-enzyme Citrus  sinensis , Musa paradisiaca serta kombinasi keduanya terhadap bakteri Staphylococcus  aureus .  Hasil  penelitian  ini  akan  menjadi  bukti  ilmiah  dari  pemanfaatan limbah rumah tangga menuju zero waste lifestyle .

## METODE
Berisi rancangan penelitian, dilengkapi dengan keterangan mengenai jenis penelitian, lokasi, waktu, populasi, sampel, metode sampling, instrumen, teknik pengumpulan data, analisis, dan Ethical Consideration (apabila penelitian melibatkan manusia sebagai subjek).
Preparasi eco-enzyme Pengumpulan limbah kulit buah pisang kepok kuning ( Musa paradisiaca L. var bluggoe ) dan kulit buah jeruk manis ( Citrus sinensis L.) dilakukan pada pagi hari di Pasar Giwangan, Yogyakarta. Sortasi basah dilakukan terhadap limbah yang masih segar. Pencucian dilakukan dengan air mengalir dengan sumber PDAM. Perbandingan limbah, molase dan air adalah 3:1:10. Limbah yang digunakan dari M.paradisiaca var. bluggoe, C.sinensis dan kombinasi keduanya. Perbandingan limbah kombinasi M.paradisiaca var. bluggoeI dan Citrus sinensis adalah 1:1. Campuran tersebut selanjutkan disimpan pada tempat yang sejuk, terhindar dari sinar matahari langsung selama 90 hari (Gambar 1). Selama proses fermentasi botol dibuka setiap hari untuk 2 minggu pertama, 3 hari untuk minggu ke- 3, dan satu minggu sekali untuk minggu-minggu berikutnya. Setelah 90 hari larutan eco-enzyme dipisahkan dari ampasnya. Eco-enzyme yang dihasilkan diamati karakteristik organoleptik dan nilai pH.
Skrining fitokimia eco-enzyme Analisis Alkaloid Eco-enzyme sebanyak  2  mL  ditambahkan  dengan  2  tetes  pereaksi  Dragendorff.  Perubahan yang terjadi selama 30 menit dan hasil uji dinyatakan positif apabila terbentuk jingga/orange.
Gambar 1. Preparasi larutan eco-enzyme

## Analisis Tanin
Eco-enzyme sebanyak 2 mL ditambahkan dengan gelatin 1%. Perubahan yang terjadi adanya endapan berwarna putih.
Analisis Polifenol Eco-enzyme sebanyak 2 mL ditambahkan dengan 1 tetes FeCl 3 gojok hingga homogen. Hasil dinyatakan positif jika berwarna hijau biru kehitaman.
Analisis Flavonoid Eco-enzyme diteteskan pada kertas saring sebanyak 3 tetes. Kemudian kertas saring tersebut diuapkan dengan ammonia. Hasil positif ditunjukkan dengan warna kuning.

## Analisis Saponin
Eco-enzyme sebanyak  2  mL  ditambahkan  dengan  2  tetes  HCl  2N.  Kemudian  campuran ditambahkan air panas dan gojok kuat-kuat selama 10 detik. Dinyatakan positif jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm tidak kurang dari 10 menit.
Analisis Triterpenoid Eco-enzyme sebanyak  2  mL  ditambahkan  2  tetes  larutan  CHCl 3 .  Selanjutnya  campuran ditambahkan 3 tetes pereaksi Lieberman Burchard . Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya cincin berwarna merah ungu yang menunjukkan kandungan senyawa triterpenoid.
Uji aktivitas antibakteri eco-enzyme Uji  antibakteri  dilakukan  terhadap eco-enzyme C.sinensis,  M.paradisiaca  var.  bluggoe dan kombinasi keduanya. Variasi konsentrasi yang digunakan adalah 60%, 70%, 80%, 90% dan 100% dalam akuades. Kontrol positif yang digunakan adalah antibiotik kloramfenikol 30mg dalam 10mL akuades. Kontrol negatif adalah akuades steril. Bakteri yang digunakan adalah Staphylococcus aureus dalam  media Nutrient  Broth dengan  konsentrasi  1,5x10 8 CFU/mL.  Metode  uji  antibakteri  yang digunakan  adalah  difusi  cakram  dengan  media  pertumbuhan Nutrient  Agar .  Diameter  cakram sebesar  5,34mm.  Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  37 o C  selama  18 – 20jam.  Aktivitas  antibakteri ditunjukkan  melalui  parameter  diameter  zona  hambat  (zona  jernih)  pada  keliling  kertas  cakram dalam satuan milimeter. Pengambilan data dilakukan sebanyak tiga kali.
Menurut  Purba et  al. (Purba  et  al.,  2022) , kekuatan  antibakteri  dibedakan  menjadi  empat kategori berdasarkan diameter zona hambat. Aktivitas antibakteri sangat kuat jika diameter zona hambat  ≥20mm.  Aktivitas  antibakteri  k uat  jika  diameter  zona  hambat  diantara  10  mm  hingga <20mm.  Aktivitas  antibakteri  sedang  jika  diameter  zona  hambat  antara  5  mm  hingga  <10mm, sedangkan lemah jika diameter zona hambat <5mm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik eco-enzyme Eco-enzyme merupakan  cairan  multifungsi  yang  diproduksi  dari  hasil  fermentasi  limbah organik, molase, dan air. Proses fermentasi tersebut  membutuhkan waktu 3 bulan (Rahayu et al., 2021).  Komposisi  dan eco-enzyme yang  dihasilkan  pada  penelitian  ini  terdapat  pada  Tabel  I. Fermentasi ini menghasilkan alkohol dan asam asetat (Rusdianasari et al., 2021). Kandungan asam asetat tersebut menjadikan eco-enzyme sebagai insektisida atau pestisida alami. Sifat asam dari eco- enzyme ini dimanfaatkan sebagai pembersih lantai, toilet, dan keperluan rumah tangga lainnya (Rasit et  al.,  2019;  Vama  &  Cherekar,  2020).  Fermentasi  dari  limbah  organik  menghasilkan  cairan eco- enzyme yang  mengandung  enzim  protease,  amilase,  dan  lipase  (Galintin  et  al.,  2021;  Vama  & Cherekar, 2020).
Fermentasi  sampah  organik  ini  merupakan  jenis  dekomposisi  anaerobik.  Mikroba  yang terlibat  dalam  fermentasi  tersebut  membantu  memecah  karbohidrat  yang  terkandung  dalam sampah organik tanpa oksigen menjadi bahan organik yang lebih sederhana, yakni alkohol dan asam asetat  (Rasit  et  al.,  2019;  Rusdianasari  et  al.,  2021).  Hasilnya  menjadi  kurang  berbau  dibanding sebelumnya (Rasit et al., 2019). Semakin lama proses tersebut maka pH eco-enzyme yang dihasilkan
juga akan semakin rendah (Rusdianasari et al., 2021). Penelitian Rahayu et al. (Rahayu et al., 2021) membuktikan bahwa cairan eco-enzyme mengandung alkohol sebanyak 60-70% dan pH di bawah 4,0. Pada penelitian ini tidak dilakukan pengukuran kandungan etanol namun nilai pH telah sesuai dengan  penelitian  sebelumnya.  Baik eco-enzyme  C.sinensis dan M.paradisiaca  var.  bluggoe secara tunggal maupun kombinasi memiliki tingkat keasaman yang tinggi (Tabel II). Hasil ini sesuai dengan teori yang ada bahwa hasil fermentasi anaerob dari limbah organik berupa asam asetat. Kandungan asam  ini  berpengaruh  terhadap  aroma eco-enzyme yang  dihasilkan,  yakni  aroma  asam  yang menyengat (Tabel II).
Nilai pH eco-enzyme C.sinensis lebih rendah dibanding eco-enzyme M.paradisiaca var. bluggoe maupun kombinasinya. Keasaman yang rendah dari eco-enzyme C.sinensis tentu berhubungan dari kandungan kimia bahan baku kulit buah C.sinensis yang bersifat asam. Kandungan yang dimaksud adalah asam fenolat serta asam organik (asam laktat, asam sitrat, asam L-malat, asam kojat dan asam askorbat)(Liew et al., 2018).
Kandungan kimia eco-enzyme Eco-enzyme C.sinensis mengandung  alkaloid,  polifenol,  flavonoid  dan  saponin  (Tabel  III). Kandungan tersebut berasal dari bahan baku kulit buah C.sinensis . Analisis kuantitatif oleh Liew et al. menggunakan ultra performance liquid chromatography (UPLC) membuktikan bahwa kulit buah dari C.sinensis mengandung enam senyawa flavonoid, diantaranya katekin, epigalokatekin, viteksi, rutin,  luteolin  dan  apigenin  (Liew  et  al.,  2018).  Selain  itu,  berdasarkan  analisis high  performance liquid chromatography  (HPLC)  kulit  buah  dari C.sinensis juga  mengandung  lima  asam  fenolat, diantaranya asam galat, asam protokatekuat, asam 4-hidroksibenzoat, asam kafeat dan asam ferulat.
Tabel I. Komposisi dan hasil eco-enzyme Perlakuan Penimbangan Limbah C.sisnensis Limbah M.paradisiaca var. bluggoe Molase Air Hasil Eco-enzyme P1 300 g - 100 g 1000 mL 850 mL P2 - 300 g 100 g 1000 mL 850 mL P3 150 g 150 g 100 g 1000 mL 850 mL Tabel II. Organoleptik dan pH eco-enzyme Perlakuan Organoleptik Nilai pH Aroma Warna Penampakan P1 Khas jeruk menyengat Coklat tua kehitaman 2 P2 Khas pisang matang Coklat tua 3 P3 Khas aroma asam menyengat Coklat tua kehitaman 3
Penelitian Shetty et al. menunjukkan bahwa fraksi air  kulit buah C.sinensis mengandung alkaloid, tanin, polifenol, flavonoid dan saponin (Shetty et al., 2016). Tanin  tidak  lagi  terkandung  dalam eco-enzyme dikarenakan  terdegradasi  pada  proses fermentasi.  Walau  tanin  mampu  menghambat  pertumbuhan  mikroba,  beberapa  mikroba  resisten bahkan  mampu  mendegradasi  tanin  menjadi  oligomer  atau  turunan  lain,  seperti  asam  galat  atau pyrogallol.  Enzim  yang  dapat  mendegradasi  tanin  adalah  tanase.  Enzim  ini  dapat  berasal  dari Staphylococcus  lugdunensis,  Lactobacillus  plantarum, dan Enterobacter  sp (Jiménez  et  al.,  2014). Namun  keberadaan  enzim  tanase  maupun  mikroba  pendegradasi  tanin  tersebut  dalam  proses fermentasi eco-enzyme perlu dilakukan studi lebih lanjut pada tingkat molekuler. Eco-enzyme M.paradisiaca var. bluggoe mengandung tanin, polifenol, flavonoid dan saponin (Tabel III). Analisis fitokimia yang dilakukan oleh Uzairu dan Kano menunjukkan bahwa ekstrak air dari kulit buah M.paradisiaca var. bluggoe yang telah matang mengandung tanin dan saponin (Uzairu &  Kano,  2021).  Keberadaan  kandungan  polifenol  dan  flavonoid  pada eco-enzyme yang  dihasilkan (Tabel III) karena proses fermentasi pada preparasi eco-enzyme dapat menghasilkan senyawa baru. Hal ini juga terjadi pada penelitian terdahulu, yakni fermentasi sayuran segar seperti pakcoy dan sawi mengandung lebih banyak polifenol dan flavonoid dibanding bahan segarnya (Šalić & Šamec, 2022).
Aktivitas antibakteri eco-enzyme terhadap S.aureus
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi  cakram  berdasarkan  kemampuan senyawa aktif dalam berdifusi dari cakram menuju media pertumbuhan bakteri. Kemampuan difusi tersebut  dipengaruhi  oleh  polaritas  senyawa  aktif  dan  media  pertumbuhan  bakteri,  serta kemampuan  senyawa  aktif  menghambat  pertumbuhan  bakteri  selama  inkubasi  berlangsung. Keberhasilan  pertumbuhan  bakteri  ditunjukkan  dengan  kekeruhan  pada  media  pertumbuhan. Berbeda dengan kemampuan difusi senyawa aktif, ditunjukkan dengan zona jernih di sekitar cakram yang berisi sampel. Kemampuan difusi tersebut selanjutnya diukur dan dinyatakan sebagai diameter zona  hambat  (mm).  Semakin  besar  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  maka  makin  besar aktivitas  antibakterinya.  Tabel  IV  memperlihatkan  bahwa  metode  yang  digunakan  sudah  tepat berdasarkan  diameter  zona  hambat  kontrol  negatif  dan  kontrol  postif.  Kontrol  negatif  yang merupakan pelarut akuades tidak memiliki aktivitas antibakteri, sedangkan kontrol positif memiliki aktivitas antibakteri yang sangat kuat terhadap S.aureus . Eco-enzyme ketiga  perlakuan  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus dengan diameter  zona  hambat  yang  semakin  meningkat  seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi  yang digunakan (Tabel IV). Aktivitas antibakteri eco-enzyme C.sinensis pada konsentrasi 60-80% tergolong lemah dan meningkat mulai konsentrasi 90% menjadi kategori sedang. Aktivitas antibakteri tersebut dapat  dikarenakan  fitokimia  dalam eco-enzyme  C.sinensis ,  yakni  alkaloid,  polifenol,  flavonoid  dan saponin (Tabel III). Metabolit sekunder tersebut mampu menghambat pertumbuhan bakteri melalui beberapa  mekanisme.  Alkaloid  memiliki  kemampuan  menghambat  pertumbuhan  bakteri  karena mampu  merubah  permeabilitas  membran  sel  bakteri;  menghambat  metabolisme  bakteri;  serta menghambat asam nukleat dan sintesis protein bakteri (Yan Liu et al., 2019).
Tabel III. Kandungan kimia eco-enzyme C.sinensis dan M.paradisiaca var. bluggoe
Golongan senyawa Eco-enzyme C.sinensis Eco-enzyme M.paradisiaca var. bluggoe Alkaloid + - Tanin - + Polifenol + + Flavonoid + + Saponin + + Triterpenoid - -
Keterangan: (+) golongan senyawa teridentifikasi; (-) golongan senyawa tidak teridentifikasi
Aktivitas  antibakteri  dari  polifenol  karena  kemampuannya  menurunkan  konsentrasi  ATP intraseluler  bakteri;  depolarisasi  membran  sel  bakteri;  menurunkan  kandungan  protein  bakteri; serta menyebabkan kebocoran sitoplasma bakteri(Guo et al., 2020). Flavonoid sebagai antibakteri karena  mampu  menghambat  sintesis  dan  perusakan  membran  sel;  menghambat  sintesis  asam nukleat; menghambat pergerakan bakteri; menghambat jalur transport elektron dan sintesis ATP; menghambat pengeluaran toksin bakteri; menghambat pembentukan biofilm; menghambat enzim yang terlibat pada sifat virulensi bakteri; menghambat efflux pump ; serta menghambat terbantuknya quorum sensing bakteri(Purwanto & Irianto, 2022). Saponin dapat menyebabkan kerusakan parah pada bakteri karena kemampuannya mendegradasi dinding sel yang diikuti oleh gangguan membran sitoplasma  dan  protein  membran.  Kemampuan  saponin  tersebut  menyebabkan  kebocoran  isi  sel bakteri sehingga terjadi kematian sel (Dong et al., 2020).
Mekanisme keempat metabolit sekunder yang terkandung dalam eco-enzyme C.sinensis (Tabel III) saling melengkapi (efek komplementer) dalam membunuh bakteri. Hal ini juga terjadi pada eco- enzyme M.paradisiaca var. bluggoe yang mengandung tanin, polifenol, flavonoid, dan saponin (Tabel III).  Tanin  memiliki  aktivitas  antibakteri  karena  kemampuannya  untuk  mengaktifkan  enzim; mengganggu  transport  protein  pada  lapisan  sel  bagian  dalam  bakteri;  serta  merusak  polipeptida dinding sel bakteri sehingga pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna (Pakadang, 2018). Selain itu, tanin juga menghambat fosforilasi oksidatif sehingga mengganggu metabolisme bakteri yang berguna untuk menghasilkan energi dalam tumbuh kembang bakteri (Sutanti et al., 2020).
Aktivitas antibakteri dari eco-enzyme M.paradisiaca var bluggoe paling tinggi dibandingkan eco-enzyme C.sinensis maupun kombinasi keduanya. Hal ini dibuktikan dari aktivitas antibakteri yang tergolong aktivitas sedang mulai konsentrasi 70% (tabel IV). Jika konsentrasi yang lebih kecil sudah dapat menghasilkan diameter zona hambat yang lebih besar maka berpotensi untuk dikembangkan sebagai antibakteri lebih lanjut. Aktivitas antibakteri dari zat aktif tidak banyak tergantung dari jenis, tapi juga dari jumlah/konsentrasi zat aktif yang terkandung dalafanm sampel. Pada penelitian ini tidak dilakukan analisis kuantitatif zat aktif yang terkandung dalam ketiga eco-enzyme . Keterbatasan
Tabel IV. Aktivitas antibakteri eco-enzyme terhadap S.aureus
Perlakuan Konsentrasi Diameter zona hambat (mm) Kategori antibakteri Kontrol negatif 100% 0 Tidak memiliki aktivitas Kontrol positif 30𝑚𝑔 10𝑚𝐿 ⁄ 21,00±0,57 Sangat kuat P1 ( eco-enzyme C.sinensis )
60% 1,06±0,31 Lemah 70% 1,94±0,62 Lemah 80% 2,33±0,57 Lemah 90% 8,51±2,74 Sedang 100% 6,93±1,63 Sedang P2 ( eco-enzyme M.paradisiaca var. bluggoe ) 60% 4,99±2,05 Lemah 70% 6,76±0,52 Sedang 80% 9,52±2,91 Sedang 90% 7,26±0,34 Sedang 100% 8,42±0,85 Sedang P3 ( eco-enzyme kombinasi)
60% 1,76±0,63 Lemah 70% 2,09±0,47 Lemah 80% 2,38±0,49 Lemah 90% 3,48±0,35 Lemah 100% 3,82±0,11 Lemah
Keterangan: Pengukuran  menggunakan  jangka  sorong  dengan  ketelitian  0,05mm;  Hasil  zona hambat sudah dikurangi dengan diameter kertas cakram (5,34mm).
penelitian  ini  tentu  menjadi  peluang  penelitian  lanjutan  sehingga  bukti  ilmiah  dari eco-enzyme , khususnya dari limbah C.sinensis dan M.paradisiaca var bluggoe , semakin banyak dan menyeluruh. Eco-enzyme kombinasi C.sinensis dan M.paradisiaca var bluggoe memiliki aktivitas antibakteri paling  rendah  dibandingkan  dengan eco-enzyme dalam  bentuk  tunggalnya.  Fenomena  ini  dapat terjadi  mengingat  zat  aktif  merupakan  beberapa  jenis  metabolit  sekunder  hasil  dari  fermentasi. Beberapa  metabolit  sekunder  tersebut  dapat  berinteraksi  secara  antagonis  sehingga  aktivitas antibakteri dari kombinasi dua eco-enzyme menjadi lebih rendah dibandingkan eco-enzyme dalam bentuk tunggalnya.

## KESIMPULAN
Ketiga eco-enzyme yang  dihasilkan  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus . Urutan  aktivitas  antibakteri  terhadap S.aureus dari  yang  lebih  kuat  adalah  (1) eco-enzyme M.paradisiaca; (2) eco-enzyme C.sinensis; (3) eco-enzyme kombinasi C.sinensis dan M.paradisiaca var. bluggoe .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  diberikan  kepada  Politeknik  Kesehatan  Bhakti  Setya  Indonesia  atas dukungannya dalam penyediaan sarana dan prasarana sehingga penelitian ini dapat berjalan dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Behiry, S. I., Okla, M. K., Alamri, S. A., El-Hefny, M., Salem, M. Z. M., Alaraidh, I. A., Ali, H. M., Al-Ghtani, S. M., Monroy, J. C., & Salem, A. Z. M. (2019). Antifungal and antibacterial activities of Musa paradisiaca L. peel extract: HPLC analysis of phenolic and flavonoid contents. Processes , 7 , 215. Butt, K.  Y., Nadeem, N., Ghori, M. I., Zain, H., &  Kanwal, N. (2022). Analysis  of  Trigonella foenum- graecum  Seeds,  Musa  paradisiaca,  and  Citrus  sinensis  peels  as  a  poultry  feed  supplement. Pakistan Journal of Life and Social Sciences , 20 (1), 45 – 51.
Choi, H. Y., Lee, Y. H., Lim, C. H., Kim, Y. S., Lee, I. S., Jo, J. M., Lee, H. Y., Cha, H. G., Woo, H. J., & Seo, D. S. (2020). Assessment of respiratory and systemic toxicity of Benzalkonium chloride following a 14-day inhalation study in rats. Particle and Fibre Toxicology , 17 (1), 1 – 19.
Dong, S., Yang, X., Zhao, L., Zhang, F., Hou, Z., & Xue, P. (2020). Antibacterial activity and mechanism of  action  saponins  from  Chenopodium  quinoa  Willd.  husks  against  foodborne  pathogenic bacteria. Industrial Crops and Products , 149 , 112350. ECDC.  (2021). Infection  prevention  and  control  for  COVID-19  in  healthcare  settings  Infection prevention and control and preparedness for COVID-19 in healthcare settings (6 ed.). European Centre for Disease Prevention and Control.
Galintin, O., Rasit, N., & Hamzah, S. (2021). Production and characterization of eco enzyme produced from  fruit  and  vegetable  wastes  and  its  influence  on  the  aquaculture  sludge. Biointerface Research in Applied Chemistry , 11 (3), 10205 – 10214. Ginting, N., Hasnudi, H., & Yunilas, Y. (2021). Eco-enzyme Disinfection in Pig Housing as an Effort to Suppress Esherechia coli Population. Jurnal Sain Peternakan Indonesia , 16 (3), 283 – 287. Guo,  L.,  Gong,  S.,  Wang,  Y.,  Sun,  Q.,  Duo,  K.,  &  Fei,  P.  (2020).  Antibacterial  Activity  of  Olive  Oil Polyphenol  Extract  Against  Salmonella  Typhimurium  and  Staphylococcus  aureus:  Possible Mechanisms. Foodborne Pathogens and Disease , 17 (6), 396 – 403. ICMR. (2020). The Grants Register 2021. The Grants Register 2021 , 445.
Janarthanan,  M.,  Mani,  K.,  &  Raja,  S.  R.  S.  (2020).  Purification  of  Contaminated  Water  Using  Eco Enzyme. IOP Conference Series: Materials Science and Engineering , 955 (1).
Jiménez,  N.,  Esteban-Torres,  M.,  Mancheño,  J.  M.,  De  las  Rivas,  B.,  &  Muñoza,  R.  (2014).  Tannin degradation  by  a  novel  tannase  enzyme  present  in  some  Lactobacillus  plantarum  strains. Applied and Environmental Microbiology , 80 (10), 2991 – 2997.
Liew, S. S., Ho, W. Y., Yeap, S. K., & Bin Sharifudin, S. A. (2018). Phytochemical composition and in vitro antioxidant activities of Citrus sinensis peel extracts. PeerJ , 2018 (8), e5331.
Liu, Yan, Liu, J., & Zhang, Y. (2019). Research Progress on Chemical Constituents of Zingiber officinale Roscoe. BioMed Research International , 2019 .
Liu, Yuan, Ning, Z., Chen, Y., Guo, M., Liu, Y., Kumar Gali, N., Sun, L., Duan, Y., Cai, J., Westerdahl, D., Liu,
X., Xu, K., Ho, K., Kan, H., Fu, Q., & Lan, K. (2020). Aerodynamic analysis of SARS-CoV-2 in two Wuhan hospitals. Nature | , 582 .
Lotfinejad, N., Peters, A., & Pittet, D. (2020). Hand hygiene and the novel coronavirus pandemic: the role of healthcare workers. Journal of Hospital Infection , 105 (4), 776 – 777.
Low, C. W., Ling, R. L. Z., & Teo, S.-S. (2021). Effective microorganisms in producing eco-enzyme from food waste for wastewater treatment. Applied Microbiology: Theory & Technology , 2 (1), 28 – 36. Loyaga-Castillo, M., Calla-Poma, R. D., Calla-Poma, R., Requena-Mendizabal, M. F., & Millones-Gómez, P. A. (2020). Antifungal activity of  peruvian  banana peel (Musa  paradisiaca L.) on  Candida albicans: an in vitro study. The Journal of Contemporary Dental Practice , 21 (5), 509 – 514. Mc Carlie, S., Boucher, C. E., & Bragg, R. R. (2020). Molecular basis of bacterial disinfectant resistance.
Drug Resistance Updates , 48 (October 2019), 100672.
Mehmood, B., Dar, K. K., Ali, S., Awan, U. A., Nayyer, A. Q., Ghous, T., & Andleeb, S. (2015). In vitro assessment of antioxidant, antibacterial and phytochemical analysis of peel of Citrus sinensis. Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences , 28 (1), 231 – 239.
Pakadang,  S.  R.  (2018).  Potential  of  Miana  Leaves  (  Coleus  scutellarioides  (L.)  Benth  )  As  an Antibacterial Streptococcus Pneumonia , Staphylococcus Aureus , Staphylococcus Epidermidis ,  Klebsiella  Pneumonia  from  Sputum  Cough  Patients  in  Makassar  City. Proceeding  1st. International  Conference  Health  Polytechnic  of  Kupang,  122-131.  Retrieved  from http://proceeding.poltekeskupang.ac.id/index.php/ichpk/article/view/45 , 1 , 122 – 131. Purba, P. Y., Yoswaty, D., & Nursyirwani. (2022). Antibacterial Activity of Avicennia alba Leaves and Stem  Extracts  Against  Pathogenic  Bacteria  (Pseudomonas  aeruginosa,  Aeromonas salmonicida, Staphylococcus aureus). Journal of Coastal and Ocean Sciences , 3 (2), 144 – 151. Purwanto,  &  Irianto,  I.  D.  K.  (2022). Senyawa  Alam  sebagai  Antibakteri  dan  Mekanisme  Aksinya . Gadjah Mada University Press.
Rahayu,  M.  R.,  Muliarta,  I.  N.,  &  Situmeang,  Y.  P.  (2021).  Acceleration  of  Production  Natural Disinfectants from the Combination of Eco-Enzyme Domestic Organic Waste and Frangipani Flowers (Plumeria alba). SEAS (Sustainable Environment Agricultural Science) , 5 (1), 15 – 21. Ramadani, A. H., Karima, R., & Ningrum, R. S. (2022). Antibacterial Activity of Pineapple Peel (Ananas comosus) Eco-enzyme Against Acne Bacterias (Staphylococcus aureus and Prapionibacterium acnes). Indo. J. Chem. Res. , 9 (3), 201 – 207.
Rasit, N., Fern, L. H.,  & Ghani, A. W. A. K. (2019).  Production and characterization of eco enzyme produced  from  tomato  and  orange  wastes  and  its  influence  on  the  aquaculture  sludge. International Journal of Civil Engineering and Technology , 10 (3), 967 – 980.
Rusdianasari, R., Syakdani, A., Zaman, M., Zaman, M., Sari, F. F., Nasyta, N. P., & Amalia, R. (2021). Utilization of Eco-Enzymes from Fruit Skin Waste as Hand Sanitizer. AJARCDE | Asian Journal of Applied Research for Community Development and Empowerment , 5 (3), 1 – 5.
Šalić, A., & Šamec, D. (2022). Changes in the content of glucosinolates, polyphenols and carotenoids during lactic-acid fermentation of cruciferous vegetables: a mini review. Food Chemistry: X , 16 (September), 100457.
Shetty,  S.  B.,  Mahin-Syed-Ismail,  P.,  Varghese,  S.,  Thomas-George,  B.,  Thajuraj,  P.  K.,  Haleem,  S., Sreedhar, S., & Devang-Divakar, D. (2016). Antimicrobial effects of Citrus sinensis peel extracts against dental caries bacteria: an in vitro study. Journal section: Community and Preventive Dentistry , 8 (1), e70 – e77.
Subpiramaniyam, S. (2021). Outdoor disinfectant sprays for the prevention of COVID-19: Are they safe for the environment? Science of the Total Environment , 759 , 144289.
Sutanti, V., Fuadiyah, D., Hidayat, L. H., Agnizarridlo, T., & Anggiarta, K. S. (2020). Analysis of the effect of extracted yellow kepok banana peels (Musa paradisiaca l.) on the size and morphology of Enterococcus faecalis. Journal of Physics: Conference Series , 1665 (1), 1 – 6. Tartari,  E.,  Fankhauser,  C.,  Masson-Roy,  S.,  Márquez-Villarreal,  H.,  Moreno,  I.  F.,  Navas,  M.  L.  R.,
Sarabia, O., Bellissimo-Rodrigues, F., Mezerville, M. H. De, Lee, Y. F., Aelami, M. H., Mehtar, S., Agostinho, A., Camilleri, L., Allegranzi, B., Pires, D., & Pittet, D. (2019). Train-the-Trainers in hand  hygiene:  A  standardized  approach  to  guide  education  in  infection  prevention  and control. Antimicrobial Resistance and Infection Control , 8 , 206.
Uzairu, S. M., & Kano, M. A. (2021). Assessment of phytochemical and mineral composition of unripe and ripe plantain (Musa paradisiaca) peels. African Journal of Food Science , 15 (3), 107 – 112.
Vama, L., & Cherekar, M. N. (2020). Production, extraciton and uses of eco enzyme using citrus fruit waste: Wealth from waste. Asian Jr. of Microbiol. Biotech. Env. Sc , 22 (2), 346 – 351.
WHO.  (2020). Modes  of  transmission  of  virus  causing  COVID-19:  Implications  for  IPC  precaution recommendations . World Health Organization.