## Medical Laboratory Technology Journal
Available online at : http://ejurnal-analiskesehatan.web.id
PENGARUH VARIASI SUHU AWAL REAGEN TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH METODE ENZIMATIK

## Yayuk Kustiningsih, Nastiti Megawati, Jasmadi Joko Kartiko, Leka Lutpiatina
Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Banjarmasin Jl Mistar Cokrokusumo 4a Banjarbaru e-mail : yayukkustiningsih71@gmail.com
Abstract : Pre-analysis phase is the first step that determines the quality of the examination re- sults, in this case, is the preparation of glucose work reagent. Glucose is one of the clinical ex- amination clinical parameters that are often done  in the laboratory. This glucose examination uses enzymatic methods. Enzyme activity is influenced by several factors, namely temperature, pH, substrate level, enzyme level, and inhibitor. Glucose examination performed at a tempera- ture of 20-25 o C or 37 o C, but there are still laboratories in the field that is less attention to the initial temperature conditions of this reagent. This study aims to determine the effect of initial temperature  variations  of  reagents  on  blood  glucose  levels  of  enzymatic  methods.  The  re- search  used  Quasi  Experimental  research  method  with  Posttest-Only  Control  Group  Design design. The sample of this research used serum of a respondent who had no history of Diabe- tes Mellitus disease with 4 replication at each treatment. The results of the study with the initial temperature of 10 o C, 13 o C, 16 o C, 19 o C, 22 o C and 25 o C (control) respectively of 62.71 mg / dL; 65,74 mg / dL; 72.45 mg / dL; 76.91 mg / dL; 89.12 mg / dL and 97.19 mg / dL, the results of this study showed an increase in glucose levels in each treatment. Based on the results of line- ar regression analysis obtained a significance value of 0.000 with α = 0.05, which means Ho is rejected, so it can be concluded that there is an influence of initial temperature variation of rea- gent on blood glucose level. For the next researcher can do research about the effect of the initial temperature of reagent 22-38 oC on blood glucose enzymatic method. And the influence of incubation time on blood glucose level of enzymatic method.
Keywords : initial temperature of reagent; enzymatic methods; glucose
Abstrak :  Tahap  pra  analisa  merupakan  tahap  awal  yang  sangat  menentukan  kualitas  hasil pemeriksaan, dalam hal ini adalah persiapan reagen kerja glukosa. Glukosa merupakan salah satu parameter pemeriksaan kimia klinik  yang sering dilakukan di  laboratorium. Pemeriksaan glukosa ini menggunakan metode enzimatik. Aktivitas enzim dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu suhu, pH, kadar substrat, kadar enzim, dan inhibitor. Pemeriksaan glukosa dilakukan pa- da suhu 20-25 o C atau 37 o C, namun dilapangan masih ada laboratorium yang kurang memper- hatikan kondisi suhu awal reagen ini. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh vari- asi  suhu  awal  reagen  terhadap  kadar  glukosa  darah  metode  enzimatik.  Penelitian menggunakan metode penelitian Quasi Eksperiment dengan rancangan Posttest Only Control Group Design . Sampel penelitian menggunakan serum seorang responden yang tidak memiliki riwayat  penyakit  Diabetes  Mellitus  dengan  4  kali  replikasi  pada  setiap  perlakuan.  Hasil penelitian dengan suhu awal 10 o C, 13 o C, 16 o C, 19 o C, 22 o C dan 25 o C (kontrol) masing-masing sebesar 62,71 mg/dL; 65,74 mg/dL; 72,45 mg/dL; 76,91 mg/dL; 89,12 mg/dL dan 97,19 mg/dL, hasil penelitian ini menunjukkan peningkatan kadar glukosa pada tiap perlakuan. Berdasarkan hasil analisa uji Regresi linier didapatkan nilai signifikansi sebesar 0,000 dengan α = 0,05, yang berarti Ho ditolak, sehingga dapat disimpulkan bahwa ada pengaruh variasi suhu awal reagen terhadap kadar glukosa darah. Bagi peneliti selanjutnya dapat melakukan penelitian mengenai pengaruh  suhu  awal  reagen  22-38 o C  terhadap  kadar  glukosa  darah  metode  enzimatik.dan pengaruh waktu inkubasi terhadap kadar glukosa darah metode enzimatik.
Kata kunci : suhu awal reagen; metode enzimatik; glukosa
Received 2017-05-03; Received in revised form 2017-06-27; Accepted 2017-06-30

## PENDAHULUAN
Menurut  Hendrik  L.  Bloom  dalam  No- toatmodjo  (2007)  menjelaskan  bahwa  derajat kesehatan  masyarakat  dipengaruhi  oleh  em- pat faktor utama  yaitu faktor lingkungan, per- ilaku, pelayanan kesehatan dan keturunan.
Faktor ketiga yang mempengaruhi dera- jat  kesehatan  masyarakat  yaitu  pelayanan kesehatan.  Laboratorium  sebagai  salah  satu sarana  pelayanan  kesehatan  dituntut  untuk memberikan  pelayanan  seoptimal  mungkin, sebab semakin hari konsumen akan semakin kritis  dengan  teknik  pelayanan  maupun  hasil pemeriksaan  yang  dikeluarkan  oleh  suatu  la- boratorium  klinik.  Oleh  karena  itu  dituntut kepada  pengelola  laboratorium  untuk  selalu melakukan kontrol atas segala kegiatan yang dilaksanakan  baik  tahap  pra  analisa,  analisa, dan  post  analisa  (Puslabkes,  1999).  Per- siapan  reagen  kerja  merupakan  bagian  dari tahap  pra  analisa.  Tahap  ini  sangat  menen- tukan kualitas hasil pemeriksaan sampel yang nantinya  akan  dihasilkan  dan  mempengaruhi proses berikutnya.
Berdasarkan  observasi  dari  parameter kimia  darah  yang  diperiksa  di  laboratorium klinik  RSUD  Ratu  Zalecha  Martapura  untuk tahun  2015  berjumlah  22.467  pemeriksaan glukosa,  6.285  pemeriksaan  kolesterol  total, 5.909 pemeriksaan asam urat, 6.094 pemerik- saan  trigliserida,  11.772  pemeriksaan  SGOT, 11.876 pemeriksaan SGPT data pemeriksaan memberikan  informasi  bahwa  pemeriksaan glukosa  darah  paling  sering  diperiksa dibandingkan pemeriksaan lain.
Metode  uji  glukosa  darah  yang digunakan pada laboratorium klinik RSUD Ra- tu  Zalecha  Martapura  adalah  berdasarkan pemeriksaan  enzimatik.  Metode  enzimatik yang  digunakan  untuk  uji  glukosa  darah  ada tiga  macam,  yaitu:  glukosa  heksokinase, oksidase  dan  dehydrogenase  (Astuti  G., 2012) Laboratorium ini menggunakan metode oksidase.  Penelitian  yang  pernah  dilakukan menunjukkkan  hasil  tidak  ada  perbedaan yang  bermakna  terkait  kadar  glukosa  darah dalam menggunakan metode glukosa oksidase,  glukosa  dehidrogenase  dan  glu- kosa  heksokinase  (Baharuddin,  Nurulita  A, Afif M, 2015).
Pada  pemeriksaan  glukosa  darah metode  enzimatik  tersebut  terdapat  reagen warna  yang  berupa  enzim,  sehingga  per- siapan  pra  analisa  reagen  ini  harus  diper- hatikan  karena  akan  mempengaruhi  kepe- kaan reaksi kimia yang terjadi.
Aktivitas  enzim  dipengaruhi  oleh  be-
berapa faktor, yaitu suhu, pH, kadar substrat, kadar  enzim,  dan  inhibitor  (Panil,  2008).  Ke- cepatan reaksi meningkat seiring peningkatan suhu,  tetapi  dengan  berjalannya  reaksi  enzi- matik,  titik  maksimal  akan  dicapai  dan  laju reaksi akan menurun dengan peningkatan su- hu (Saryono, 2011). Pada suhu rendah reaksi kimia  berlangsung  lambat,  sedangkan  pada suhu  yang  lebih  tinggi  reaksi  berlangsung lebih cepat sampai pada suhu optimal (37 o C) (Poedjiadi, 2006). Penelitian tentang enzim oleh
Kusumadjaja  dan  Rita  (2005),  didapatkan hasil  bahwa  aktivitas  papain  mengalami  ke- naikan  seiring  dengan  peningkatan  suhu  dari 32 o C  hingga  50 o C.  Aktivitas  maksimum  di- capai  pada  suhu  50 o C,  yang  berarti  bahwa laju reaksi enzimatik sangat dipengaruhi oleh suhu.
Laboratorium  klinik  yang  kurang  mem- perhatikan  kondisi  suhu  dari  reagen  kerja masih  ditemukan.  Kondisi  dari  reagen  kerja yang  masih  dingin  telah  digunakan  untuk pemeriksaan,  seharusnya  reagen  dikondisi- kan  pada  suhu  kamar  terlebih  dahulu  sebe- lum  digunakan  untuk  pemeriksaan  karena berdasarkan  kit  reagen  pemeriksaan  dil- akukan pada suhu 20-25 o C atau 37 o C. Ketid- aktepatan  penggunaan  reagen  ini  dapat  ber- pengaruh terhadap hasil pemeriksaan labora- torium.  Berdasarkan  uji  pendahuluan  ter- hadap  reagen  glukosa  setelah  pengeluaran dari  kulkas  sampai  kondisi  suhu  kamar  di- peroleh hasil pada 0 menit = 12 o C, 10 menit = 16 o C, 20 menit = 20 o C, 30 menit = 22 o C, dan 40 menit = 24 o C. Pada uji pendahuluan kedua diperoleh hasil pada 0 menit = 9 o C, 10 menit =  13 o C,  20  menit  =  17 o C,  30  menit  =  19 o C, dan  40  menit  =  21 o C.  Data  hasil  uji  penda- huluan  tersebut  menunjukkan  bahwa  untuk mendapatkan  suhu  kamar  (20-25 o C)  diper- lukan  pendiaman  ±  20-40  menit  setelah dikeluarkan  dari  kulkas.  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  variasi suhu  awal  reagen  terhadap  kadar  glukosa darah metode enzimatik.

## BAHAN DAN METODE
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah Quasi  Eksperimen .  Rancangan  penelitian yang  digunakan  yaitu Posttest  Only  Control Group  Design yaitu  mengukur  pengaruh  per- lakuan  (intervensi)  pada  kelompok  eksperi- men kengan cara   membandingkan ke- lompok  tersebut  dengan  kelompok  kontrol (Notoatmodjo, 2010).
Objek  penelitian  ini  adalah  reagen  glu- kosa di Laboratorium Klinik Analis Kesehatan Politeknik Kesehatan Kemenkes Banjarmasin. Variasi  suhu  awal  reagen  pada penelitian  ini dikelompokkan menjadi 6 perla- kuan yaitu 10 o C, 13 o C, 16 o C, 19 o C, 22 o C dan 25 o C (sebagai kontrol). Variabel bebas dalam penelitian ini adalah variasi suhu awal reagen. Variabel  terikat  dalam  penelitian  ini  adalah kadar glukosa darah.
Pembuatan  serum  dengan  cara  darah yang  telah  diambil  dimasukkan  kedalam  ta- bung  sentrifuge  kemudian  didiamkan  selama 30-45 menit. Darah tersebut disentrifuge sela- ma  10  menit  dengan  kecepatan  3000  rpm. Serum  yang  diperoleh  dipisahkan  (Susilo, 2014).
Persiapan Reagen glukosa dengan cara sebelum  melakukan  pemeriksaan,  reagen glukosa  yang  digunakan  masing-masing diberikan perlakuan kelompok reagen I dikon- disikan pada suhu awal 10 o C. Kelompok rea- gen II dikondisikan pada suhu awal 13 o C. Ke- lompok  reagen  III  dikondisikan  pada  suhu awal  16 o C.Kelompok  reagen  IV  dikondisikan pada  suhu  awal  19 o C.  Kelompok  reagen  V dikondisikan pada suhu awal 22 o C. Kelompok reagen VI dikondisikan pada suhu awal 25 o C (sebagai kontrol)
Cara  pengondisian  suhu  awal  reagen pada  tiap  perlakuan  tersebut  dilakukan dengan memasukkan masing-masing 1000 µl reagen  glukosa  kedalam  7  buah  tabung reaksi.  Dimana  1  buah  digunakan  untuk blanko,  1  buah  digunakan  untuk  standar,  4 buah  digunakan  untuk  sampel  (4  kali  pengu- langan),  dan  1  buah  digunakan  untuk  kontrol suhu.    Dimana  setelah  reagen  dikeluarkan dari  kulkas,  suhu  reagen  diukur  dengan termometer,  ditunggu  sampai  suhu  yang dikehendaki  tercapai  (suhu  untuk  tiap  perla- kuan  tercapai),  kemudian  dilakukan  pemerik- saan glukosa darah.
Prosedur  Pemeriksaan  glukosa  darah metode  GOD-PAP  tes  enzimatik  kolorimetrik secara  semi-mikro  merek  Human  memasuk- kan dalam tabung reaksi seperti tabel 1.
Tabel 1. Prosedur Pemeriksaan glukosa darah metode GOD-PAP
Mencampur  dan  mendiamkan  selama 10  menit  pada  suhu  kamar  (25 o C).Mengukur konsentrasi  standar  dan  sampel  terhadap blanko dengan fotometer dengan panjang ge- lombang 546 nm tidak lebih dari 60 menit.
Perhitungan Konsentrasi Glukosa

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan di  Laboratorium  Kimia  Klinik  Jurusan  Analis Kesehatan  pada  bulan  Mei  2016  didapatkan hasil  pemeriksaan  kadar  glukosa  darah metode enzimatik (GOD-PAP) pada penggunaan reagen dengan suhu awal 10 o C, 13 o C,  16 o C,  19 o C,  22 o C  dan  25 o C  disajikan pada Tabel 2.
Tabel  2. Kadar  glukosa  darah  dengan penggunaan  reagen  pada  berbagai  variasi suhu awal reagen
Hubungan antara variasi suhu awal rea- gen  terhadap  kadar  glukosa  darah  dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 Grafik hubungan antara vari- asi suhu awal reagen terhadap kadar glukosa darah
Untuk  mendapatkan  nilai  persentase perbedaan kadar glukosa darah metode enzi- matik pada penggunaan reagen dengan suhu awal 10 o C, 13 o C, 16 o C, 19 o C, 22 o C dan 25 o C. Maka  dapat  dilakukan  perhitungan  dengan rumus % Perbedaan Kadar Glukosa =
x 100%.
Gambar 2 Grafik persentase perbedaan kadar  glukosa  darah  metode  enzimatik  pada penggunaan reagen dengan suhu awal 10 o C, 13 o C, 16 o C, 19 o C, 22 o C dan 25 o C
Berdasarkan  hasil  uji  analisa  statistik menggunakan  uji  regresi  Linier  didapatkan nilai  signifikansi  =  0,000.  Sesuai  ketentuan apabila  nilai  signifikansi  <  α  =  0,05  maka dapat  dinyatakan  bahwa  ada  pengaruh  ber- makna  penggunaan  suhu  awal  reagen  ter- hadap  kadar  glukosa  darah.  Dengan  persa- maan  garis  Linier  y  =    2,353x  +  36,186  dari persamaan y = bx + a, dimana y adalah varia- bel  terikat  (kadar  glukosa  darah),  x  adalah variabel  bebas  (suhu  awal  reagen),  a  adalah konstanta dan b adalah koefisien regresi. Per- samaan  ini  dapat  digunakan  untuk  mem- perkirakan  kadar  glukosa  darah  seseorang pada penggunaan suhu awal reagen yang te- lah diketahui dan sebaliknya.
Selanjutnya nilai R Square yang didapat sebesar  0,914.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa persentase  pengaruh  suhu  awal  reagen  ter- hadap  kadar  glukosa  darah  adalah  sebesar 91,4%.
Penelitian  ini  menggunakan  1  sampel dengan  6  (enam)  perlakuan  dan  tiap  perla- kuan dilakukan pengulangan sebanyak 4 kali. 6 (enam) perlakuan tersebut adalah penguku- ran kadar glukosa darah dengan menggunakan suhu awal reagen 10 o C, 13 o C, 16 o C,  19 o C,  22 o C  dan  25 o C.  Pada  kit  reagen pemeriksaan  dilakukan  pada  suhu  20-25 o C atau  37 o C,  sehingga  perlakuan  pada  suhu awal  25 o C  digunakan  sebagai  kontrol  dalam penelitian ini.
Menurut  Panil  (2008),  aktivitas  enzim dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu suhu, pH, kadar substrat, kadar enzim, dan inhibitor.
Dari  hasil  penelitian  didapatkan  kadar glukosa  pada  suhu  awal  10 o C  =62,71mg/dl; 13 o C = 65,74mg/dl; 16 o C = 72,45mg/dl; 19 o C = 76,91mg/dl; 22 o C = 89,12mg/dl dan 25 o C = 97,19mg/dl. Dilihat dari data pengukuran glu- kosa  tersebut  terjadi  peningkatan  kadar  glu- kosa darah pada tiap perlakuannya yang dim- ulai dari penggunaan suhu awal reagen 10 o C sampai dengan 25 o C. Peningkatan kadar glu- kosa  ini  disebabkan  oleh  salah  satu  faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim yaitu su- hu. Pada suhu yang rendah reaksi kimia ber- langsung lambat, sedangkan pada suhu yang lebih  tinggi  reaksi  berlangsung  lebih  cepat sampai  pada  suhu  optimal  (Poedjiadi,  2006). Peninggian  suhu  reaksi  sampai  pada  suhu optimal  akan  meningkatkan  jumlah  molekul yang dapat bereaksi, sehingga jumlah partikel yang bertumbukan lebih banyak dibandingkan pada suhu rendah. Hal ini disebabkan karena pada  suhu  tinggi  energi  kinetik  partikel  akan lebih  besar,  sehingga  jumlah  tumbukan  se- makin banyak dan laju reaksi akan meningkat (Murray, 2003).
Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Kusumadjaja  dan  Rita  (2005)  yang  menya- takan bahwa aktivitas papain mengalami pen- ingkatan  dari  suhu  32 o C  sampai  dengan  50 o C.
Enzim glukosa oksidase dalam keadaan kering dan murni berwarna kuning pucat, pa- da  suhu  0oC  stabil  selama  2  tahun.  Pada penyimpanan  suhu  25oC  enzim  glukosa oksidase hanya stabil selama 8 bulan. Aktivi- tas  enzim  glukosa  oksidase  hilang  bila dipanaskan  pada  suhu  diatas  suhu  37O  C  . pH  optimum  enzim  glukosa  oksidase  adalah 5,6.  Larutan  enzim  glukosa  oksidase  stabil pada kisaran pH 3 - 8, di luar kisaran pH ter- sebut  enzim  mengalami  kerusakan  lebih  ce- pat (Steven and Price, 1993).
Hasil penelitian diatas menunjuk- kan bahwa untuk melakukan pemeriksaan pa- rameter laboratorium kimia klinik harus sesuai atau  memperhatikan Standard  Operational Procedur (SOP) yang ada.

## KESIMPULAN
Kadar glukosa darah pada penggunaan reagen  suhu  awal  10 o C  =62,71mg/dl;  13 o C  = 65,74mg/dl;  16 o C  =  72,45mg/dl;  19 o C  = 76,91mg/dl;  22 o C  =  89,12mg/dl  dan  25 o C  = 97,19mg/dl. Persentase perbedaan kadar glu- kosa  darah  dengan  penggunaan  suhu  awal 10 o C  =  35,47%;  13 o C  =  32,35%;  16 o C  = 25,45%;  19 o C  =  20,86%;  22 o C  =  8,30%  dan 25 o C  =  0%  (kontrol).  Berdasarkan  hasil  uji statistik  dengan  Regresi  Linier  terdapat pengaruh  bermakna  penggunaan  suhu  awal reagen  terhadap  kadar  glukosa  darah, dengan nilai signifikansi 0,000.

## SARAN
Melakukan  penelitian  pengaruh  variasi suhu  awal  reagen  terhadap  kadar  glukosa darah  dengan  suhu  awal  22 o C  sampai dengan 38 o C. Melakukan penelitian pengaruh lamanya  waktu  inkubasi  terhadap  kadar  glu- kosa darah.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  G.  (2012).  Analitik  Pemeriksaan  Glu- kosa  dengan  Glukosameter.  Dalam: Pemeriksaan Laboratorium pada Diabe- tes Melitus. Departemen Patologi Klinik, Fak. Kedokteran UI . Baharuddin, Nurulita, A., & Arif, M. (2015). Uji Glukosa Darah Antara Metode Heksoki- nase  Dengan  Glukosa  Oksidase  Dan Glukosa  Dehidrogenase  Di  Diabetes Melitus. Indonesian  Journal  Of  Clinical Pathology  And  Medical  Laboratory , 21 (2).
Kusumadjaja, A., & Rita,  P. (2005). Penentu- an Kondisi Optimum Enzim Papain dari Pepaya  Burung  Varietas  Jawa  (Carica papaya). Indo.J.Chem , 5 (2), 147 – 151. Murray,  R.,  Daryl,  K.,  Peter,  A.,  &  Victor,  W. (2003). Biokimia Harper . Jakarta: EGC. Notoatmodjo,  S.  (2007). Promosi  Kesehatan dan  Ilmu  Perilaku .  Jakarta:  PT  Rineka Cipta. Panil,  Z.  (2008). Memahami  teori  dan  praktik Biokimia Dasar Medis untuk Mahasiswa Kedokteran, Keperawatan, Gizi dan An- alis Kesehatan . Jakarta: EGC.
Poedjiadi,  A.,  &  Supriyanti,  F.  (2006). Dasar- dasar  Biokimia .  Jakarta:  Universitas  In- donesia.
Puslabkes. (1999). Pedoman Praktek Labora- torium Yang Benar . Jakarta: Depkes RI. Saryono. (2011). Biokimia Enzim . Yogyakarta:
Nuha Medika.
Steven, L., & Price, W. . (1992). Fundamental of  enzymology,  Second  Edition .  New
York: Oxford University. Susilo,  R.  (2014). Flebotomi  Teori  dan  Prak- tek untuk Laboratorium Kesehatan . Bali: 89 Printing.