BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 1, Nomor 2 (2019): 65-70 E-ISSN: 2714 - 8564
Biodegradasi Limbah Lindi Hitam, Acid Orange dan Acid Red Menggunakan Jamur Trametes Versicolor F200
Rismi Seftiani Jaitun 1 * , Nuraeni Ekowati 1 , Ajeng Arum Sari 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman
2 Pusat Penelitian Kimia, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia *Email: Rismis3@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 28/08/2019
Disetujui  : 03/12/2019

## Abstract
Black  liquor  and  azo  dyes  ( Acid  orange and acid  red )  are  hazardous  waste  that  can contaminate  ecosystem  if  not  treated  before  the  waste  are  discharged  into  the  ecosystem. Physical  and  chemical  proces  of  these  waste  has  a  few  disadvantages  due  to  the  high  energy inputs,  expensive  cost,  limited  application  and  producing  toxic  byproducts. Trametes versicolor used as a biodegradation agent because it can produces ligninolytic enzyme such as Laccase  (Lac),  manganese  Peroxidase  (MnP)  and  Lignin  Peroxidase  (LiP).  The  aim  of  this study was to determine the percentage of decolorization and enzyme activity of Lac, MnP and LiP in black liquor, acid orange and acid red . The results showed decolorization occurs 50% in black liquor, 90% in acid orange and acid red . While the enzyme activity of Lac, MnP and LiP in  black  liquor  were  143,59  U/L  (6  days),  33,3  U/L  (6  days)  dan  1167,42  U;  in acid  orange were  520,513  (U/L)  (0  days),  138  U/L  (0  days)  and  358  U/L  (0  days) ; and  in acid  red were 408,3 U/L (0 days), 77 U/L (0 days) and 228,871 U/L (6 days). Key words : B iodegradation, black liquor, Trametes versicolor F200 , acid orange and acid red

## Abstrak
Limbah lindi hitam dan zat warna azo ( acid orange dan acid red ) merupakan limbah berbahaya yang dapat mengkontaminasi ekosistem, sehingga perlu dilakukan pengolahan sebelum limbah dibuang  ke  ekosistem.  Pengolahan  secara  fisik  maupun  kimiawi  memiliki  kelemahan diantaranya membutuhkan input energi tinggi, biaya yang mahal, penerapan yang terbatas dan menghasilkan  produk  lain  yang  bersifat  toksik. Trametes  versicolor dapat  dijadikan  sebagai agen  biodegradasi,  sebab  menghasilkan  anzim  ligninolitik  seperti  Lakase  (Lac),  Manganese peroksidase  (MnP)  dan  Lignin  peroksidase  (LiP) . Jamur T.  versicolor F200  mampu mendekolorisasi  hingga 50%pada limbah lindi hitam; 90% pada Acid orange ; dan 90% pada Acid red . Aktivitas enzim Lac, MnP dan LiP terbaik masing-masing yaitu 143,59 U/L (6 hari inkubasi), 33,3 U/L (6 hari inkubasi) dan 1167,42 U/L (awal inkubasi) pada limbah lindi hitam; 520,513 U/L) (awal inkubasi), 138 U/L (awal inkubasi) dan 358 U/L (awal inkubasi) pada acid orange; dan  408,3  U/L  (awal  inkubasi,  77  U/L  (awal  inkubasi)  dan  228,871  U/L  (akhir inkubasi).
Kata  kunci : Biodegradasi, Limbah lindi hitam,  Trametes versicolor F200 dan  acid orange dan acid red

## PENDAHULUAN
Limbah lindi hitam dan zat warna azo adalah bahan  yang  berpotensi  menjadi  bahan  pencemar apabila  tidak  dilakukan  pengolahan  sebelum dibuang  ke  lingkungan.  Limbah  lindi  hitam merupakan  air  limbah  yang  dihasilkan  selama proses pretreatment Bioethanol  Generasi  kedua (G2)  (Sari et  al., 2015).  Limbah  lindi  hitam berbahaya  untuk  lingkungan  karena  warna  coklat kehitaman  yang  merupakan  karakter  dari  limbah lindi  hitam  dapat  menghalangi  cahaya  matahari masuk  ke  ekosistem  perairan  dan  mengganggu proses fotosintesis. Limbah lindi hitam mengandung lignin  yang  sulit  untuk  terdegradasi  (Da-  Re  dan Papinutti, 2011). Zat warna azo merupakan senyawa xenobiotik  yang  mudah  dimodifikasi,  mudah disintesis namun bersifat rekalsitrant  Zat  warna azo dan  produk  biotransformasinya  bersifat  toksik hingga  karsinogenik.  Zat  warna  azo  terdapat  dalam
limbah  tekstil  dengan  kisaran  60-70%  (Zollinger, 1987).
Penanganan limbah lindi hitam dan limbah zat warna  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan metode  oksidasi  kimia, reverse  osmosis dan adsorbsi.  Metodetersebut  efisien  dalam  menangani limbah  namun  membutuhkan  input  energi  yang tinggi,  biaya  yang  mahal,  penerapan  yang  terbatas dan  biasanya  menghasilkan  produk  lain  yang bersifat toksik (Sari et al., 2015).
Jamur  pelapuk  putih  (JPP)  dapat  digunakan sebagai  agen  biodegradasi  dalam  berbagai  tingkat kontaminasi  sebagai  alternatif  pengolahan  limbah yang ramah lingkungan. JPP dapat mendekontaminasi polutan tunggal maupun campuran  karena  menghasilkan  enzim  ekstraselular oksidatif, seperti lakase dan peroksidase yang dapat menginisiasi  degradasi  senyawa  polimer  aromatik kompleks  (Santi et  al., 2007).  Enzim  tersebut
memiliki  mekanisme  oksidasi  yang  tidak  spesifik, sehingga  dapat  digunakan  dalam  mendegradasi lignin serta berbagai jenis polutan. Degradasi limbah menggunakan  JPP  merupakan  metode  yang  efisien, tidak  membutuhkan  biaya  yang  tinggi,  konsumsi energi  yang  lebih  rendah  dan  penerapannya  luas (Isroi et al., 2011).
Spesies  jamur  pelapuk  putih  yang  dapat digunakan  sebagai  agen  bioremediasi  di  antaranya Phanerochaete chrysosporium , Ph . sordida , Pleurotus  ostreatus , Phellinus  weirii dan Trametes versicolor .  Jamur  tersebut  dapat  menguraikan sejumlah  senyawa  xenobiotik  seperti  hidrokarbon aromatik  (Benzo  α-piren,  penatren  dan  piren), senyawa  organoklorin  (Insektisida  alkil  halida, kloroanilin,  DDT,  pentaklorofenol,  triklorofenol, poliklorinasi  bifenil  dan  asam  asetat  triklorofenol), nitrogen  aromatik  (2,4-dinitrotoluena  dan  2,4,6- trinitrotoluena  (TNT))  dan  beberapa  zat  warna seperti basic  blue 22, bromophenol  blue , brilliant green dan methyl  red (Radhika et  al., 2014). T. versicolor dapatmenjadi  agen  biodegradasi  berbagai polutan  dengan  kemampuan  produksi  enzim ligninolitik terutama MnP dan Lakase dalam jumlah yang besar (Iqbal et al., 2011). Biodegradasi  limbah  lindi  hitam, Acid  orange dan Acid  red dapat  diketahui  salah  satunya  melalui proses  dekolorisasi.  Aktivitas  enzim  ligninolitik (Lignin  peroksidase,  Manganese  peroksidase  dan Lakase) dapat diukur untuk mengetahui enzim yang berperan  dalam  proses  degradasi  limbah.  Tujuan dari penelitian adalah mengetahuipersentase dekolorisasi  limbah  lindi  hitam, acid  orange dan acid  red oleh  jamur T.  versicolor F200dan mengetahui aktivitas enzim Lac, MnP dan LiP pada limbah  lindi  hitam, acid  orange dan acid  red oleh jamur T. versicolor F200.

## MATERI DAN METODE
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  peralatan  gelas,  autoklaf, laminar  air  flow (LAF)  pH meter,  inkubator,  kertas  saring, centrifuge ,  timbangan  analitik,  desikator,  oven, stirer ,  autoklaf  dan  spektrofotometer  UV-Vis (Optizen 2120 UV).
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  limbah  lindi  hitam  yang  dihasilkan  dari proses pretreatment bioetanol di P2 Kimia LIPI, zat warna  azo  ( Acid  orange dan Acid  red ),  jamur T. versicolor F200 dari InaCC Pusat Penelitian Biologi LIPI,  dan  bahan  kimia  yang  diperoleh  dari  Wako Japan, seperti: glukosa, KH 2 PO 4 , K 2 HPO 4 , CuSO 4 ,MnCl 2 ,  Na 2 MoO 4 ,  FeCl 3 ,  ZnCl 2 ,  tiamin hidroklorida,  CuSO 4 ,  MnSO 4 ,  polisorbat  80  ( Tween 80 ), 2,6- dimetilfenol (2,6-DMP), buffer LiP, buffer NaH 2 PO 4 , akuades,  hidrogen  peroksida,  buffer malonat,  HCl,  NaOH,Na 2 SO 4 ,  K 2 Cr 2 O 7 ,  HgSO 4,  - Ag 2 SO 4 , Kalium Hidrogen Ftalat (HOOC 6 H 4 COOK) dan H 2 SO 4.

## Dekolorisasi Limbah
Prosedur  pertama  adalah  membuat  kultur jamur T.  versicolor dalam  media  PDA.  Kultur diinkubasi  7  hari  hingga  tumbuh  miselium. Sebanyak  3  plug  jamur T.  versicolor diambil  dari stok  inokulum  pada  medium  PDA,  diinokulasikan ke  dalam  medium  AG  cair  dalam  erlenmeyer  dan diinkubasi  selama  10  hari  pada  suhu  28 o C.  Setelah inkubasi, kultur jamur ditambahkan limbah sehingga konsentrasi  total  larutan  adalah  70.000  ppm  untuk limbah lindi hitam, dan 400 ppm untuk acid orange dan acid red dengan  volume  akhir larutan 200  mL. Kultur  diinkubasi  selama  6  hari  pada  suhu  28 o C. Konsentrasi limbah sebelum dan setelah dekolorisasi diukur dengan menggunakan spektrofotometer  uv-vis  pada  panjang  gelombang 406  nm  untuk  lindi  hitam,  491  nm  untuk acid orange 7 dan 485 nm untuk acid red . Dekolorisasi dihitung  dengan  menggunakan  persamaan  dibawah ini.
Persamaan Dekolorisasi  :
Dekolorisasi = Co  – Ci Co x 100%
Keterangan:
C o : Konsentrasi awal (ppm) C i
: Konsentrasi akhir (ppm)

## Pengukuran Aktivitas Enzim
Aktivitas Manganese peroxidase (MnP) ditentukan dengan mengamati reaksi oksidasi 120 µl 2,6-DMP20  mM  pada  panjang  gelombang  470  nm dalam 1750 µl buffer malonat (pH 4,5) 50 mM yang mengandung 125 µl MnSO 4 20 mM di dalam 300 µl
H 2 O 2 2  mM  (Takano et  al., 2004).  Aktivitas Lignin peroxidase (LiP)  ditentukan  dengan  mengamati pembentukan 300 µl H 2 O 2 2 mM dan 2000 µl buffer LiP pada panjang gelombang 310 nm (Collins et al., 1997).  Aktivitas Laccase ditentukan  dengan mengamati  oksidasi  100  µl syringaldazine menjadi quinone di dalambuffer 750 µl NaH 2 PO 4 0,1 M pada panjang gelombang 525 nm (Zavarzina et al., 2006). Reaksi  dilakukan  pada  suhu  20 0 C  dan  diukur aktivitas  enzim  setelah  satu  menit.  Semua  aktivitas enzim  diukur  dalam  satuan  U/I,  yang  menunjukkan jumlah enzim  yang dibutuhkan  untuk  mengoksidasi 1μmol  substrat  selama  1  menit.  Aktivitas  dihitung dengan formula :
Persamaan aktivitas enzim    :
(absorbansi/ɛ) x (volume total/106) x 106 x (60/waktu) (volume 𝑐𝑟𝑢𝑑𝑒 𝑒𝑛𝑧𝑦𝑚𝑒/103)
Keterangan:
ɛ = 6.500 (Lac); 49.000 (MnP); dan 9.300 (LiP)
v. total   = 1.750 (Lac); 3.300 (MnP); dan 3.300 (LiP)
v. crude  enzyme =  900  (Lac);  1.000  (MnP);  dan  1.000 (LiP).
Pengukuran Chemical Oxygen Demand (COD) dengan  Refluks  Tertutup  secara  Spektrofotometri. Prinsip  metode  ini  adalah  senyawa  organik  dan anorganik,  terutama  organik  dalam  contoh  uji dioksidasi  oleh  Cr 2 O 7 2- dalam  refluks  tertutup menghasilkan Cr 3+ . Jumlah oksidan yang dibutuhkan dinyatakan dalam ekuivalen oksigen (O 2 mg/L)  yang  diukur  secara  spektrofotometri  sinar tampak.  Cr 2 O 7 2- mengabsorsi  secara  kuat  pada panjang  gelombang  420  nm  dan  Cr 3+ mengabsorbsi pada  panjang  gelombang  600  nm.  Nilai  COD  100 mg/L  sampai  dengan  900  mg/L  nilai  kenaikan  Cr 3+ ditentukan  pada  panjang  gelombang  600  nm. Contoh  uji  yang  memiliki  nilai  lebih  tinggi dilakukan  pengenceran  terlebih  dahulu  sebelum pengujian.  Sedangkan  nilai  COD  kurang  dari  90 mg/L,  penurunan  konsentrasi  Cr 2 O 7 2- ditentukan pada panjang gelombang 420 nm.
Uji  COD  dilakukan  dengan  memasukkan sampel sebanyak 2,5 mL ke dalam digestion vessel , ditambah  dengan  1,5  mL digestion  solution kisaran konsentraso  tinggi  dan  3,5  mL  pereaksi  sulfat. Digestion  vessel ditutup  rapat,  dikocok  sampai homogen.  Selanjutnya  tabung  beserta  isinya dimasukkan ke dalam COD reaktor, yang dioperasikan  pada  suhu  150 0 C  selama  120  menit. Larutan yang telah dingin diukur dengan spektrofotometer.  Hasil  spektrofotometri  kemudian digunakan  untuk  mengetahui  konsentrasi  COD melalui  kurva  kalibrasi  larutan  baku    Kalium Hidrogen  Ftalat  (HOOCC 6 H 4 COOK)  (  SNI  6989.2 2009.).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Biodegradasi  limbah  oleh  jamur T.  versicolor F200  dilakukan  dengan  menambahkan  limbah  lindi hitam  70.000  ppm, Acid  orange 400  ppm  dan Acid red 400  ppm  pada  kultur T.  versicolor F200. Inkubasi  dilakukan  selama  6  hari  untuk  mengamati perubahan  intensitas  warna  dan  konsentrasi  limbah yang merupakan indikasi bahwa jamur T. versicolor F200  dapat  menjadi  agen  biodegradasi.  Aktivitas enzim ligninolitik  yang diukur dalam penelitian ini; yaitu  LiP,  MnP  dan  Lac  dapat  menjadi  petunjuk
bahwa  proses  dekolorisasi  juga  berkaitan  dengan proses degradasi enzimatis yang terjadi pada limbah. Tabel  1.  menunjukkan  konsentrasi  limbah  sebelum dan  sesudah  perlakuan  dengan  menggunakan  jamur T. versicolor F200.
Tabel 1. Konsentrasi Awal dan Akhir Limbah Lindi Hitam, Acid orange dan Acid red
Jenis limbah Konsentrasi awal (ppm) Konsentrasi akhir (ppm) Limbah lindi hitam 70.626 34.806 Acid orange 460 17 Acid red 421 36
Berdasarkan  Tabel  1.dapat  diketahui  bahwa terjadi  penurunan  konsentrasi  limbah  pada  akhir waktu  inkubasi.  Terjadinya  penurunan  konsentrasi limbah  menunjukkan  bahwa  jamur T.  versicolor F200  memanfaatkan  kandungan  dalam  limbah sebagai  nutrisi  untuk  pertumbuhannya . Sari et  al.,
(2015)  menyatakan  bahwa  lindi  hitam  memiliki kandungan 40% senyawa organik (lemak, resin dan polisakarida), 25% lignin, 7,5% hemiselulosa, 7,5% asam  organik  dan  20%  senyawa  anorganik.Adapun kandungan  lindi  hitam  yang  dapat  dimanfaatkan oleh JPP sebagai sumber karbon adalah polisakarida serta  hemiselulosa  yang  masih  terdapat  dalam limbah. Sedangkan penggunaan lignin sebagai satu- satunya  sumber  karbon  oleh  jamur  belum  dapat dikonfirmasi (Leonowicz et al., 1999).JPP memecah lignin  agar  mendapat  akses  terhadap  selulosa  dan hemiselulosa  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai sumber  karbon.Penurunan  konsentrasi  zat  warna acid  orange dan acid  red juga  terjadi  yang menunjukkan  bahwa T.  versicolor F200  juga  dapat mendegradasi  zat  warna.  JPP  dapat  memanfaatkan hasil degradasi zat warna untuk pertumbuhannya. Gambar  1.menunjukkan  hasil  dekolorisasi  dari limbah  oleh  jamur T.  versicolor F200.  Tingginya nilai persentase dekolorisasi oleh jamur T.versicolor
Gambar 2. Aktivitas enzim ligninolitik Jamur T. versicolor F200
berbeda  pada  setiap  limbah.  Hal  tersebut  dapat terjadi  karena  perbedaan  konsentrasi  awal  limbah. Limbah  lindi  hitam  yang  digunakan  dalam penelitian  memiliki  konsentrasi  awal  70.000  ppm, sedangkan  zat  warna acid  orange dan acid  red memiliki konsentrasi awal 400 ppm. Komposisi dan struktur  kimia  juga  mempengaruhi  kecepatan dekolorisasi.  Zat  warna acid  orange dan acid  red yang  memiliki  konsentrasi  sama  juga  mengalami dekolorisasi yang berbeda akibat perbedaan struktur kimia.  Limbah  lindi  hitam  yang  sebagian  besar tersusun  dari  lignin  serta  derivatnya  mengalami dekolorisasi  yang  lebih  lambat  dibandingkan  zat warna acid  red dan acid  orange .  Hal  ini  karena lignin merupakan komponen yang sulit terdegradasi akibat  kompleksitas  komponen  penyusunnya  (p- koumaril  alkohol,  koniferil  alkohol  dan  sinapil alkohol) (Singh, 2006).
Dekolorisasi limbah lindi hitam dan zat  warna ( acid orange dan acid red ) oleh JPP dapat melalui dua  mekanisme  yaitu  adsorbsi  dan  degradasi (Setiadi, 2002). Proses degradasi melibatkan enzim- enzim  yang dihasilkan oleh JPP seperti peroksidase dan  oksigenase,  untuk  memecah  molekul  kompleks menjadi molekul sederhana yang dapat dimanfaatkan  oleh  JPP  (Setiadi,  2002).  Proses adsorbsi  merupakan  penyerapan  limbah  dan  zat warna oleh miselium jamur. Jamur memiliki dinding sel  yang  tersusun  atas  matriks  ekstraseluler  yang diantaranya  tersusun  atas  protein,  polisakarida  dan kitin yang dapat berperan sebagai adsorben. Dinding sel  jamur  juga  memiliki  kemampuan  untuk mengeluarkan  gel  yang  berfungsi  sebagai  perekat yang  dapat  menyerap  zat  warna  atau  limbah  yang terdapat  pada  medium  (Wulandari et  al .,  2014). Terjadinya  proses  adsorbsi  dapat  ditunjukkan
dengan perubahan warna pada miselium (Wulandari et  al .,  2014).  Amriani et  al .,  (2017)  dalam penelitiannya  dengan  menggunakan  miselium T. versicolor U80 yang telah disterilisasi menunjukkan bahwa  miselium  jamur  memiliki  kemampuan menyeraplimbahlindihitamdan  mendekolorisasinya hingga 25,1% setelah inkubasi selama 15 hari. Daya absorbsi  limbah  dan  zat  warna  dipengaruhi  oleh lama  waktu  inkubasi,  semakin  lama  kontak  terjadi antara sorben dan limbah,  maka penyerapan limbah oleh  sorben  semakin  besar  (Purnama  dan  setiati, 2004).  Benito et  al .  (1997)  dalam  penelitiannya menunjukkan bahwa proses dekolorisasi limbah dari fermentasi alkohol oleh jamur T. versicolor 5-10 % dilakukan  melalui  proses  adsorbsi,  sedangkan  90% dekolorisasi  limbah  dilakukan  melalui  proses degradasi  enzimatik.  Sedangkan  proses  degradasi dapat  diketahui  melalui  aktivitas  enzim  ligninolitik jamur T.  versicolor F200.  Gambar  2.  menyajikan aktivitas enzim LiP, MnP dan Lac pada awal waktu inkubasi dan akhir waktu inkubasi.
Berdasarkan Gambar 2. dapat diketahui bahwa pada awal waktu inkubasi limbah lindi hitam, enzim yang  memiliki  aktivitas  paling  baik  adalah  LiP. Sedangkan  pada  akhir  waktu  inkubasi,  LiP mengalami  penurunan  sedangkan  MnP  dan  Lac mengalami  kenaikan.  Sedangkan  pada  zat  warna acid  orange dan acid  red ,  enzim  yang  memiliki aktivitas paling baik pada awal inkubasi adalah Lac, sedangkan  pada  akhir  waktu  inkubasi  adalah  LiP. Aktivitas  MnP  baik  pada  awal  maupun  akhir inkubasi pada semua limbah memiliki aktivitas yang relatif rendah.
Perbedaan  aktivitas  enzim  pada  tiap  proses degradasi menunjukkan bahwa enzim-enzim tersebut  bekerja  pada  waktu  tertentu  sesuai  dengan
kondisi  substrat.  Tingginya  aktivitas  LiP  dalam degradasi  limbah  lindi  hitam  pada  awal  inkubasi dapat  terjadi  akibat  spesifitas  enzim  LiP  yang  luas, yang sangat dibutuhkan dalam mendegradasi lignin. Enzim  LiP  dapat  mendegradasi  baik  senyawa fenolik  maupun  senyawa  non-fenolik  y  terdapat dalam  limbah,  mengingat  limbah  lindi  hitam merupakan  limbah  yang  disusun  oleh  berbagai komponen  diantaranya;  polisakarida,  lignin,  resin, hemiselulosa,  asam  organik  dan  asam  anorganik (Sari et al., 2015).
Begitu  pula  pada  akhir  waktu  inkubasi  zat warna acid orange dan acid red , yang memungkinkan  lebih  beragamnya  substrat  yang tersedia akibat pemecahan awal oleh enzim Lac. Enzim  Lac  merupakan  enzim  yang  bekerja  dalam mengoksidasi senyawa fenolik. Oleh karena itu, Lac memiliki  aktivitas  yang  tinggi  pada  awal  inkubasi zat warna acid orange dan acid red yang merupakan senyawa  fenolik.  Enzim  MnP  memiliki  aktivitas yang paling rendah dalam mendegradasi limbah. Hal ini dapat terjadi karena beberapa hal; 1) Enzim MnP hanya  mampu  mendegradasi  senyawa  fenolik;  2) Enzim  MnP  produksi  dan  aktivitasnya  sangat bergantung pada penambahan Mn 2+ ke dalam kultur (Janusz et  al., 2013);  dan  3)  Terjadi  kemungkinan bahwa  kondisi  kultur  lebih  mendukung  enzim  LiP bekerja dengan lebih optimum apabila dibandingkan dengan  enzim  MnP.  Singh  (2006)  menyatakan bahwa enzim LiP mrupakan enzim yang aktivitasnya  bergantung  pada  H 2 O 2 ,  sedangkan enzim  MnP  dalam  kondisi  H 2 O 2 tinggi  aktivitasnya dapat dihambat.

## SIMPULAN
Jamur T. versicolor F200 mampu mendekolorisasi    hingga  50%pada  limbah  lindi hitam;  90%  pada Acid  orange ;  dan  90%  pada Acid red danAktivitas  enzim  Lac,  MnP  dan  LiP  terbaik masing-masing  yaitu  143,59  U/L  (6  hari  inkubasi), 33,3  U/L  (6  hari  inkubasi)  dan  1167,42  U/L  (awal inkubasi)  pada  limbah  lindi  hitam;  520,513  U/L) (awal  inkubasi),  138  U/L  (awal  inkubasi  dan  358
U/L  (awal  inkubasi)  pada acid  orange; dan  408,3
U/L  (awal  inkubasi),  77  U/L  (awal  inkubasi)  dan 228,871 U/L (akhir inkubasi).

## DAFTAR REFERENSI
Amriani,  F.,  Sari,  A.A.A.  F.  Irni.,  Haznan,  A.  and Tachibana,  S.  2017.  Evaluation  Of  Lignin- Based  Black  Liquor  Decolorization  by Trametes  versicolor U  80. International Symposium  on  Applied  Chemistry (ISAC) 2016.
Benito,  G.G.,  Miranda,  P  and  Santos,  D.R.  1997. Decolorization  Of  Wastewater  From  An
Alcoholic Fermentation Process with Trametes versicolor . Bioresource technology. (61), pp. 33-37
Chauhan,  R.,  2016.  Optimization  of  Physical Parameters  For  The  Growth  of  A  White-Rot Fungus Trametes  versicolor . International Journal  of  information  research  and  review, XI(3), pp. 3125-3128.
Collins,  P.,  Field,  J.A.,  Teunissen,  P.  and  Dobson, A,D.W.,  1997.  Stabilization  of  Lignin Peroxidase In White-Rot Fungi by Tryptophan. Applied  and  Environmental Microbiology, VII(63), pp. 406-415.
Da-Re,  V.  and  Papinutti,  L.,  2011.  Black  Liquor Decolorization by Selected White Rot Fungi. appl biochem biotechnol, 165, pp. 406-415.
Iqbal,  H.  M.,  Ahmed,  I.,  Zia,  M.  and  Irfan,  M., 2011.  Purification  And  Characterization  of The Kinetic Parameters of Cellulose Produced From Wheat Straw  by Tricoderma Viride Under  SSF  and  Its  Detergent Compatibility. Advances  in  Bioscience  and Biotechnology, III(2), pp. 149-156.
Isroi ,, Ria,  M.,  Siti,  S.,  Claes,  N.,  and  Muhammad, N.,  2011.  Biological  Pretreatment  Of Lignucelluloses With White Rot Fungus And Its  Application:  A  review. Bioresouces, IV(6), pp. 5224-5259.
Janusz,  G.,  Kucharzyk,  K.H.,  Pawlik,  A.  Staszcak, M.  and  Paszczynski,  A.J.  2013.  Fungal Laccase,  Manganese  peroxidase  and  lignin peroxidase: Gene expression and Regulation. Enzyme  and  Micronial  Technology .  52,  pp.
1-12
Leonowicz,  A.,  Matuszewska,  A.,  Luterek,  J., Ziegenhagen,  D.,  Wojtas-Wasilewska,  M., Cho,  N.S.,  Hofrichter,  M  and  Rogalski,  J. 1999. Biodegradation of Lignin by White Rot Fungi. Fungal  Genetics  and  Biology .  (27), pp. 175-185
Radhika, R., G. R. Jebapriya, J. J. Gnanadoss. 2014. Decolorization  of  Synthetic  Textile  Dye Using The Edible Mushroom Fungi Pleurotus. Pakistan  Journal  of  Biological Science . 17(2), pp.248-253.
Santi,  L.,  Lisdar,  I.  dan  Didiek,  H.,  2007.  Potensi Fungi Pelapuk Putih Asal Lingkungan Tropik untuk  Bioremediasi  Herbisida. Menara Perkebunan, I(75), pp. 43-55.
Sari, A. A., Kurniawan, H. H. and Nurdin, M. A. H., 2015.  Decolorization  of  Black  Liquor Wastewater  Generated  From  Bioethanol Precess  By  Using  Oil  Palm  Empty  Fruit Bunches. Energy procedia, Issue 68, pp. 254- 262.
Setiadi,  T.,  Suwardiyono,  and  Wenten.  I.G.  2002. Treatment  of  Textile  Wastewater  By  A Coupling  Of  Activated  Sludge  Process  With Membran  Separation. Proc.  Environmental Technology and Management Seminar.
Singh, H., 2006. Mycoremediation:Fungal Bioremediation. New  Jersey:  John  Wiley  & Sons.
Takano,  M.,  M.  Nakamura,  A.  Nishida,  and  M. Ishihara.  2004.Manganase  peroxidase  from Phanerochaete  crassa  WD1694.Bull. FFPRI 3(1), pp. 7-13.
Xavier,  A.,  Traves,  A.,  Rita,  F.  and  Francisco,  A., 2007. Trametes  versicolor Growth  And Laccase Induction With By-Products Of Pulp And  Paper  Industry. Electronic  Journal  of Biotechnology, III(10), pp. 444-451.
Wulandari,  D.,  Sulistyowati,  L.  and  Muhibuddin,
A.,  2014.  Keanekaragaman  jamur  endofit pada tanaman tomat ( Lycopersicum esculentum Mill.) dan kemampuan antagonisnya terhadap Phytophthora infestans. Jurnal  Hama  dan  Penyakit Tumbuhan , 2 (1), pp. 110.
Zavarzina, A.G. and  Zavarzin , A.A.2006.  Laccase and tyrosinase activities in lichens. Microbiology , 75, pp. 1-12
Zollinger,  H.,  1987. Color  Chemistry-Syntheses, Properties and Applications of Organic Dyes and Pigments. New York: VCH Publisher