Abstrak —Penyediaan benih bermutu merupakan permasalahan  dalam  peningkatan  produksi  tembakau.  Induksi mutasi  merupakan  salah  satu  cara  untuk  mendapatkan  varietas unggul  yang  memiliki  produktivitas  tinggi  dan  kualitas  yang baik. Beberapa  penelitian  mengenai  penggunaan  mutagen  kimia EMS  ( Ethyl  Methane  Sulphonate )  menunjukkan  pengaruh terhadap  perkecambahan  benih  tanaman  sehingga  diperlukan penelitian  untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi  mutagen EMS  terhadap  daya  berkecambah  benih  tanaman  tembakau. Beberapa  variasi  konsentrasi  EMS  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  0,1%,  0,5%,  1%,  dan  1,5%.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  perbedaan  konsentrasi  mutagen  EMS berpengaruh nyata terhadap daya berkecambah benih tembakau.  Perlakuan  EMS  dengan  konsentrasi  1%  dan  1,5% menunjukkan penurunan daya kecambah benih.
Kata  Kunci —  Benih  tembakau,  Daya  kecambah,  Induksi mutasi, Mutagen EMS .

## I. PENDAHULUAN
ANAMAN  tembakau  ( Nicotiana  tabacum )  merupakan salah satu komoditi perdagangan yang mampu menghasilkan  cukai  terbesar,  menghasilkan  devisa  dan menyerap  tenaga  kerja  yang  relatif  besar  untuk  aktivitas produksi dan pemasarannya. Tembakau memberikan pendapatan  negara  dari  cukai  rata-rata  43  trilyun/tahun  [1]. Indonesia juga merupakan salah satu dari sepuluh besar negara produsen daun tembakau, yang memberikan kontribusi sekitar 2,3%  suplai  dunia  [2].  Pentingnya  peran  tembakau  terhadap perekonomian  negara  menyebabkan  kebutuhan  produksi tembakau semakin meningkat. Peningkatan produksi tembakau  perlu  diimbangi  dengan  peningkatan  kualitas tanaman  tembakau  sehingga  tembakau  produksi  lokal  dapat laku  di  pasar  dalam  negeri  maupun  luar  negeri.  Untuk mendukung  perekonomian  negara  melalui  perdagangan  dan ekspor  tembakau,  maka  diperlukan  varietas  unggul  yang memiliki produktivitas tinggi dan kualitas yang baik.
Penggunaan  benih  bermutu  dari  varietas  unggul  sangat menentukan  keberhasilan  peningkatan  produksi  tanaman  [3]. Permasalahan  yang  dihadapi  dalam  pengembangan  tembakau rakyat diantaranya adalah penyediaan benih bermutu [4]. Pada umumnya,  petani  tembakau  mendapat  benih  dari  tanaman tembakau  itu  sendiri  dan  disimpan  pada  tempat  yang  kurang memenuhi syarat dengan kelembaban ruangan yang tinggi saat musim  hujan.  Hal  ini  menyebabkan  rendahnya  mutu  benih
yang  dimiliki  oleh  petani.  Penggunaan  benih  dengan  daya berkecambah  yang  rendah  akan  meningkatkan  biaya penyulaman dan harga benih serta pertumbuhan tanaman tidak merata  sehingga  produksi  tidak  optimal  dan  mutunya  rendah [5]. Benih tembakau dikatakan memenuhi syarat standar mutu jika memiliki daya berkecambah lebih dari 80% [6].
Upaya mendapatkan varietas unggul baru dalam  pemuliaan tanaman  dapat  dilakukan  melalui  introduksi,  hibridisasi, induksi  mutasi  dan  rekayasa  genetika  [7].  Diantara  cara-cara tersebut  mutasi  merupakan  salah  satu  cara  yang  dipandang paling murah  dan  cepat  dalam  upaya  peningkatan keanekaragaman  genetik  tanaman.  Induksi  mutasi  dapat dilakukan  dengan  menggunakan  mutagen  fisik  atau  kimiawi. Mutagen  fisik  yang  sering  digunakan  adalah  ionisasi  sinar alpha,  beta,  gamma, fast  neutron,  elektron  beam  dan  ion beam ,  sedangkan  mutagen  kimia  adalah sulphur  mustard , Colchisine ,  EMS  dan  DES  [8].  EMS  ( Ethyl  Methane Sulphonate )  paling  banyak  digunakan karena sering menghasilkan  mutan  yang  bermanfaat  dan  tidak  bersifat mutagenik setelah terhidrolisis [9].
Beberapa  penelitian  melaporkan  EMS  menghasilkan peningkatan  keanekaragaman  dan  menghasilkan  mutan, misalnya dihasilkan mutan pisang yang resisten terhadap virus [10].  Mutagen  EMS  juga  menyebabkan  peningkatan keragaman  varian  dari  abaka  /  pisang  manila  ( Musa  textilis ) dan berhasil mendapatkan mutan yang tahan terhadap penyakit layu  Fusarium  [11]  [12].  Penggunaan  mutagen  kimia  EMS juga  berpengaruh  terhadap  perkecambahan  benih  tanaman. Hasil  penelitian  [13]  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi 0,5%  dengan  lama  perendaman  selama  6  jam  memiliki  efek menurunkan  perkecambahan  benih.  Demikian  pula  pada penelitian yang dilakukan oleh [14] yang menunjukkan bahwa terjadi  penurunan  persentase  perkecambahan  pada  benih  padi seiring dengan meningkatnya konsentrasi EMS.
Beberapa  penelitian  mengenai  penggunaan  EMS  dalam pemuliaan  tanaman  melatarbelakangi  penelitian  tentang pengaruh konsentrasi mutagen EMS terhadap daya berkecambah benih tanaman tembakau. Tujuan dari penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  perbedaan  konsentrasi EMS  terhadap  daya  berkecambah  benih  tanaman  tembakau dan  berapakah  konsentrasi  yang  berpengaruh  terhadap  daya berkecambah  benih  tanaman  tembakau.  Penelitian  ini diharapkan mampu memberikan informasi mengenai pengaruh konsentrasi  EMS  terhadap  daya  berkecambah  benih  tanaman

## Pengaruh Mutagen Kimia EMS ( Ethyl Methane Sulphonate ) Terhadap Daya Berkecambah Benih Tanaman Tembakau var. Marakot
Bangun Surya Putra dan Kristanti Indah Purwani Departemen Biologi, Fakultas Ilmu Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : kristanti@bio.its.ac.id
T
JURNAL SAINS DAN SENI POMITS Vol. 6, No.2, (2017) 2337-3520 (2301-928X Print)                    E  90
tembakau,  yang  diharapkan  dapat  mendukung  produktivitas tembakau.

## II. METODOLOGI
Waktu dan tempat A.
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Desember  2016  hingga bulan  Maret  2017  di greenhouse dan  Laboratorium  Biosains dan  Teknologi  Tumbuhan  Jurusan  Biologi,  Fakultas Matemtika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember.
Alat dan bahan B.
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  gelas  arloji, gelas  ukur,  gelas  beker,  pipet  volume, bulb ,  corong  gelas, cawan Petri, kaca pengaduk, kertas saring, neraca analitik, dan pot tray . Sedangkan bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu  benih  tanaman  tembakau  varietas  Marakot, aquadest , EMS  ( Ethyl  Methane  Sulphonate )  100%,  buffer  fosfat  pH  7, tanah, pupuk NPK, dan fungisida.
Cara kerja C.

## 1) Pembuatan larutan EMS (Ethyl Methane Sulphonate)
Dibuat  larutan  stok  EMS  10%  terlebih  dahulu.  Disiapkan EMS konsentrasi 100% sebanyak 2 ml lalu diencerkan dengan cara  ditambah  larutan  buffer  fosfat  pH  7  hingga  volumenya menjadi  20  ml.  Kemudian  larutan  diencerkan  menjadi  0,1%, 0,5%,  1%,  dan  1,5%  dengan  mengambil  larutan  stok  EMS 10%  sebanyak  0,2  ml,  1  ml,  2  ml,  dan  3  ml  lalu  masing- masing ditambah larutan buffer fosfat pH 7 hingga volumenya menjadi 20 ml.

## 2) Perendaman  benih  tembakau  dengan  EMS  (Ethyl Methane Sulphonate)
Benih  tembakau  disiapkan  sebanyak  ±0,15  gram,  lalu direndam  ke  dalam  100  ml aquadest di  dalam  gelas  beker pada suhu ruangan selama 24 jam. Benih yang telah direndam dikeringkan  diatas  kertas  saring.  Digunakan  0,01  gram  (120 biji)  benih  tembakau  untuk  setiap  perlakuan  perendaman dengan  3  kali  ulangan.  Benih  yang  digunakan  untuk  kontrol hanya  direndam  dengan aquadest. Sedangkan  pada  perlakuan menggunakan  EMS,  benih  direndam  dalam  20  ml  EMS konsentrasi  0,1%,  0,5%,  1%,  dan  1,5%  selama  6  jam.  Benih yang  telah  direndam  selama  6  jam  kemudian  dibilas  dengan air untuk menghilangkan sisa mutagen.

## 3) Pengujian daya kecambah benih
Pengujian  dilakukan  di  dalam  greenhouse  dengan  media tanam berupa tanah. Benih kontrol dan benih yang telah diberi perlakuan perendaman EMS ditanam pada pada pot tray yang telah  diisi  dengan  media  tanah.  Dilakukan  penyiraman sebanyak  dua  kali  sehari  yaitu  pada  pagi  dan  sore  hari. Parameter daya berkecambah dihitung menurut rumus sebagai berikut :
[1]
DK :   Daya kecambah (%) JK :   Jumlah benih yang berkecambah JC  :   Jumlah benih yang diujikan

## 4) Rancangan penelitian dan analisa data
Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap (RAL)  dengan  satu  faktor  yaitu  perbedaan  konsentrasi  EMS. Data  yang  diperoleh  kemudian  dianalisis  menggunakan ANOVA  One  Way  untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi mutagen  EMS  terhadap  daya  berkecambah  benih  tembakau yang dibandingkan dengan data kontrol. Kemudian dilakukan uji  lanjutan  Tukey  apabila  terdapat  pengaruh  perlakuan terhadap parameter yang diujikan.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisis  statistik  terhadap  uji  daya  kecambah  benih tembakau varietas Marakot dapat dilihat pada tabel berikut
Tabel 1. Hasil rata-rata uji daya kecambah benih tembakau var. Marakot (0-21 hari pengamatan) Perlakuan Daya Kecambah  (%) Kontrol 78,89a 0,1% 81,67a 0,5% 62,78a 1% 31,11b 1,5% 6,67b
Keterangan: angka-angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan beda nyata berdasarkan uji Tukey 5%.
Berdasarkan  tabel  data  tersebut,  uji  statistik  ANOVA menunjukkan  bahwa  konsentrasi  EMS  berpengaruh  nyata terhadap daya kecambah (DK), yaitu pada konsentrasi 1% dan 1,5%.
Gambar.1.  Grafik  pengaruh  konsentrasi  EMS  terhadap  daya  kecambah benih tembakau var. Marakot (0-21 hari pengamatan).
Penurunan  daya  kecambah  terjadi  seiring  dengan  besarnya konsentrasi EMS, yang ditunjukkan pada grafik (Gambar 4.1). Daya kecambah paling rendah terdapat pada benih yang diberi perlakuan  EMS  dengan  konsentrasi  1,5%,  yaitu  sebesar 6,67%.  Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  sesuai  dengan beberapa  penelitian  sebelumnya,  yang  menunjukkan  bahwa efek  penghambatan  akan  bertambah  seiring  dengan  semakin tingginya konsentrasi EMS yang diberikan, dalam hal ini yaitu daya berkecambah benih. Pada penelitian yang dilakukan oleh [16]  terhadap  tanaman  tembakau  yang  diberi  perlakuan  EMS dengan  konsentrasi  0,1%,  0,3%,  dan  0,5%  selama  12  jam
0 20 40 60 80 100 Kontrol 0,10% 0,50% 1% 1,50% % P e rk e ca m b ah an Konsentrasi EMS Daya Kecambah
JURNAL SAINS DAN SENI POMITS Vol. 6, No.2, (2017) 2337-3520 (2301-928X Print)                    E  91
menunjukkan  daya  kecambah  paling  rendah  pada  konsentrasi EMS  tertinggi  (0,5%).  Hasil  serupa  juga  ditunjukkan  pada jarak pagar ( Jatropha curcas ) [17] dan padi [14].
EMS  masuk  ke  dalam  benih  ketika  perlakuan  perendaman, setelah  benih  mengalami  proses  imbibisi  ketika  benih direndam  terlebih  dahulu  ke  dalam aquadest .  Imbibisi  akan menyebabkan  kulit  biji  menjadi  lunak  dan  retak,  sehingga EMS dapat masuk ke dalam benih tembakau. Masuknya EMS ke dalam benih akan menyebabkan mutasi titik pada DNA sel embrio  yang  ada  di  dalam  benih  dan  akan  menyebabkan perubahan  susunan  asam  amino.  Sintesis  hormon  dan  enzim yang  terganggu  oleh  EMS  menyebabkan  terhambatnya metabolisme  pada  benih  [18].  Demikian  juga  dengan  [19], yang  menyatakan  bahwa  tingginya  konsentrasi  EMS  dapat merusak  promotor  pertumbuhan,  meningkatkan  penghambat pertumbuhan  dan  metabolisme  benih,  dan  menyebabkan berbagai  penyimpangan  kromosom.  Hal  ini  ditunjukkan  pada tabel  hasil  penelitian  (Tabel  4),  bahwa  terhambatnya metabolisme  pada  benih  berdampak  pada  daya  kecambah benih  yang  rendah,  yaitu  pada  benih  yang  diberi  perlakuan mutagen kimia EMS dengan konsentrasi paling tinggi (1,5%). Efek  EMS  dalam  menurunkan  perkecambahan  bisa dihubungkan  dengan  beda  potensial  air.  Perbedaan  potensial air  di  dalam  sel  dan  di  luar  sel  dapat  menghambat perkecambahan  benih  karena  adanya  hambatan  penyerapan air. Semakin besar konsentrasi partikel atau zat, makin rendah nilai  potensial  air.  Meningkatnya  potensial  osmotik,  EMS akan  menurunkan  potensial  air  sehingga  akan  menyulitkan benih  mendapatkan  air  [20].  Konsentrasi  EMS  yang  lebih tinggi  dapat  menurunkan  potensial  air  di  luar  benih  dan  oleh karena  itu  benih  tidak  dapat  melakukan  imbibisi  air  yang cukup untuk perkecambahan [21].
Meskipun  perkecambahan  benih  terhambat  karena  adanya EMS,  tetapi  kecambah  tembakau  masih  dapat  tumbuh  pada semua konsentrasi perlakuan EMS. Hal ini diduga disebabkan karena  adanya  kemampuan  benih  untuk  mengembangkan toleransi  terhadap  efek  penghambatan  mutagen  dan  benih tersebut  telah  meningkatkan  kondisi  fisiologis  pada  saat berlangsungnya  proses  perkecambahan,  sehingga  benih  yang diberi  perlakuan  mutagen  dapat  mengalami  perkecambahan walaupun  lambat  [22].  EMS  merupakan  senyawa  yang beracun,  sehingga  menghambat  pertumbuhan,  tetapi  akhirnya benih  dapat  beradaptasi  dan  mampu  muncul  ke  permukaan tanah [23].
Selain  efek  penghambatan,  EMS  juga  menunjukkan  efek menstimulasi  pertumbuhan  benih.  Pada  perlakuan  EMS dengan konsentrasi rendah (0,1%), daya kecambah benih lebih tinggi  dibandingkan  dengan  kontrol  dan  perlakuan  EMS lainnya,  yaitu  81,67%  (Tabel  4).  Menurut  [24],  pemberian mutagen  EMS  dengan  konsentrasi  yang  rendah  dapat menjadikan benih tetap viabel, akan tetapi variasi genetik yang dihasilkan  mungkin  rendah  karena  sedikitnya  mutagen  yang masuk  ke  dalam  benih.  Sebaliknya,  pemberian  EMS  dengan konsentrasi  yang  tinggi  dapat  memunculkan  lebih  banyak variasi  genetik  karena  banyaknya  mutagen  yang  masuk  ke dalam  benih,  meskipun  benih  tersebut  memiliki  daya berkecambah  yang  rendah  dan  tingkat  kematian  yang  tinggi. [25]  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  EMS menyebabkan  semakin  banyak  EMS  yang  terserap  sehingga toksisitas EMS semakin bertambah.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat disimpulkan bahwa:
1. Perlakuan  mutagen  EMS  dengan  konsentrasi  yang berbeda  terhadap  benih  tanaman  tembakau  memberikan pengaruh nyata terhadap daya kecambah benih.
2. Perlakuan  mutagen  EMS  dengan  konsentrasi  1%  dan 1,5% memberikan pengaruh menurunkan daya perkecambahan benih tembakau.

## LAMPIRAN
Tabel 2 Hasil uji daya kecambah benih Perlakuan Ulangan Daya berkecambah (%) Kontrol 1 79,17 2 80,83 3 76,67 0,1% 1 100,00 2 85,00 3 60,00 0,         0,5% 1 60,00 2 75,83 3 52,50 1,0% 1 40,83 2 29,17 3 23,33 1,5% 1 5,00 2 5,83
3 9,17
Gambar 2. Gambar Kecambah Tembakau Normal (umur 1 minggu)

## DAFTAR PUSTAKA
[1] R.  Hanadyo.,  T.  Hadiastono.,  dan  M.  Martosudiro. Pengaruh Pemberian  Pupuk  Daun  Cair  Terhadap  Intensitas  Serangan Tobacco  Mosaic  Virus (TMV),  Pertumbuhan,  dan  Produksi Tanaman  Tembakau  ( Nicotiana  tabacum L.) . Jurnal  HPT .  1(2): 28-36 (2013).
[2] E.  A.  Putri.,  A.  Suwandari.,  dan  J.  A.  Ridjal. Analisis  Pendapatan dan Efisiensi Biaya Usahatani Tembakau Maesan 2 di Kabupaten Bondowoso . JSEP. 8(1): 64-69 (2015).
[3] M.  K.  Lesilolo.,  J.  Patty  dan  N.  Tetty. Penggunaan  Desikan  Abu dan  Lama  Simpan  Terhadap  Kualitas  Benih  Jagung  ( Zea  mays L.)  pada  Penyimpanan  Ruang  Terbuka . Jurnal  Agrologia .    1(1): 51-59 (2012).
[4] A.  H.  Rachman. Status  Pertembakauan  Nasional,  Prosiding Lokakarya  Nasional  Agribisnis  Tembakau. Pusat  Penelitian  dan
Pengembangan  Perkebunan.  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Pertanian, Surabaya (2007).
[5] M.  Hasanah. Peran  Mutu  Fisiologik  Benih  dan  Pengembangan Benih  Tanaman  Industri. Jurnal  Litbang  Pertanian. 21(2):  8 (2002).
[6] SNI. Standar  Nasional  Indonesia:  Benih  Tembakau  Kelas  Benih Dasar  dan  Benih  Sebar.  SNI.  01-7161-2006.  ICS  27-180 .  Standar Nasional Indonesia. Badan Standarisasi Nasional (2006).
[7] L.Sari.,  A.  Purwito.,  D.  Sopandie.,  R.  Purmaningsih.,  dan  Enny Sudarmonowati. Pengaruh  Irradiasi  Sinar  Gamma  pada Pertumbuhan  Kalus  dan  Tunas  Tanaman  Gandum  ( Triticum aestivum L. ) . Jurnal Ilmu Pertanian . 1(1) : 44-50 (2015).
[8] L.V.  Crowder. Genetika  Tumbuhan .  Terjemahan  Kusdiarti,  L., Sutarso ( ed ). Gadjah Mada University Press, Yogyakarta (1993).
[9] A.M.  Van  Harten. Mutation  Breeding:  Theory  and  Practical Application . Cambridge University Press, New York. (1998).
[10] M. Imelda., Deswina, P., Hartati, S., Estiati, A., and Atmowijoyo, S.
Chemical  Mutation  by  Ethyl  Methane  Sulfonate  (EMS)  for Bunchy  Top .  Virus  Resistence  in  Banana.  Annales  Bogorienses.
38(3): 205-211 (2000).
[11] R.D.  Purwati.,  Budi,  U.,  dan  Sudarsono,  S. Penggunaan  Asam Fusarat  dalam  Seleksi  in  vitro  untuk  Resistensi  terhadap Fusarium oxysporum . Jurnal Littri . 7(2): 80-91 (2007).
[12] R.D.  Purwati.,  Sudjindro,  K.E.,  dan  Sudarsono,  S. Keragaman Genetika  Varian  Abaka  yang  Diinduksi  dengan  Ethyl  Methane Sulphonate (EMS) . Jurnal Littri . 15(4): 152-161 (2008).
[13] N.  Jabeen.,  and  Mirza,  B. Ethyl  Methane  Sulfonate  Induces Morphological  Mutations  in Capsicum  annuum . International Journal of Agriculture Biology . 6(2): 340-345 (2004).
[14] A.B. Talebi., A.B. Talebi., and Behzad Shahrokhifar. Ethyl Methane Sulphonate  (EMS)  Induced  Mutagenesis  in  Malaysian  Rice  (cv. MR219) for Lethal Dose Determination . American Journal of Plant Sciences . 3: 1661-1665 (2012).
[15] H.  Kuswanto. Dasar-Dasar  Teknologi  Produksi  dan  Sertifikasi Benih . Penerbit Andi, Yogyakarta (1996).
[16]  S. Amarnath and A.B. Prasad. Induced Variability in Homozygous and  Heterozygous  Genotypes  of  Tobacco . Indian  Journal  of Genetics . 58(1): 69-77 (1998).
[17]  D. Dhakshanamoorthy., R. Selvaraj., dan A. Chidambaram. Physical and  Chemical  Mutagenesis  in Jatropha  Curcas L.  to  Induce Variability  in  Seed  Germination,  Growth  and  Yield  Traits. Journal of Plant Biology . 55(2): 113–125 (2012). [18]  J. Sambrook, and D.W. Russel. Molecular Cloning : A Laboratory Manual .  Eds  3.  New  York  :  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press (2001).
[19]  S.  Jayakumar.,  and  Selvaraj  R. Mutagenic  Effectiveness  and Efficiency  of  Gamma  Rays  and  Ethyl  Methane  Sulphonate  in Sunflower  ( Helianthus annus L.) . Madras  Jurnal  Agriculture. 90(1): 574-576 (2003).
[20]  A. R. Loveless. Prinsip Prinsip Biologi Tumbuhan Untuk Daerah Tropik. Jilid 1 . Jakarta: PT. Gramedia Pustaka (1991).
[21]  R.  Singh.,  and  Kole,  C.R. Effect  of  Mutagenic  Treatments  with EMS  on  Germination  and  Some  Seedling  Parameters  in Mungbean . Crop Research . 30(2): 236-240 (2005).
[22]  F.  Al-Qurainy.,  and  S.  Khan. Mutagenic  Effects  of  Sodium  Azide and its Application in Crop Improvement . World Applied Sciences Journal . 7(2): 220-226. (2009).
[23]  N. K. Rustini., dan M. Pharmawati. Aksi Ethyl Methane Sulphonate terhadap  Munculnya  Bibit  dan  Pertumbuhan  Cabai  Rawit ( Capsicum frutescens L .). Jurnal Bioslogos . 4(1):1-8 (2013).
[24]  D.  K.  Lee.,  Y.  S.  Kim.,  and  J.  K.  Kim. Determination  of  The Optimal  Condition  for  Ethylmethane  Sulfonate-Mediated Mutagenesis in Korean Commercial Rice, Japonica Cv. Dongjin . Applied Biological Chemistry (2017).
[25] Priyono dan A.W Susilo. Respon Regenerasi In vitro Eksplant Sisik Mikro Kerk  Lily  ( Lilium  longiflorum )  terhadap Ethyl  Methane Sulfonate (EMS). Jurnal Ilmu Dasar. 3(2): 74-79 ( 2002) .