Hasil Penelitian

## SENYAW A  FENOLIK,  ORYZANOL,  DAN  AKTIVITAS  ANTIOKSIDAN BEKATUL  YANG  DIFERMENTASI  DENGAN Rhizopus  oryzae
[Phenolic Compounds, Oryzanol, and Antioxidant Activity of
Fermented Rice Bran Using Rhizopus oryzae]
Faizah 1) , Feri Kusnandar 2) *, dan Siti Nurjanah 2)
1) Program Studi Ilmu Pangan, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor
2) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian , Institut Pertanian Bogor, Bogor
Diterima 10 Juli 2019 / Disetujui 4 Februari 2020

## ABSTRACT
Rice  b ran  is  a  b y-product  of  milled rice. It contains b ioactive compounds, such as total phenolic compounds and  -oryzanol known to have antioxidant activities. However, these b ioactive compounds are chemically b ound in the lignin matrix of the rice b ran. Fermentation process potentially releases the b ound forms of the active compounds to b ecom e the free ones. In this research, the rice b rans of three varieties, i.e. Inpari 24 (red rice), inpari 30 (white rice), and koshihikari (white rice), were fermented using Rhizopus oryzae for 0, 24, 48, 72, 96 and 120 hours. Those showed highest antioxidant activities b y DPPH assays were selected for further chemical composition analyses (moisture, ash, fat, protein, and carb ohydrate), total phenolic compound, and  -oryzanol. The fermentation process significantly increased (P<0.05) the antioxidant activities of all rice b rans and those fermented for  72 hours showed the highest antioxidant activities. This fermentation condition resulted in significant increase in moisture, ash and protein contents, while decreasing the fat and carb ohydrate contents. The total phenolic compound and  -oryzanol of the three fermented rice b rans increased significantly (P<0.05). The fermented rice b ran of Inpari 24 variety showed the highest antioxidant activity, total phenolic compound, and  -oryzanol contents as compared to those of Inpari 30 and Koshihikari varieties.
Keywords: antioxidant activity, fungi fermentation, rice b ran, total phenol ic compound,  -oryzanol

## ABSTRAK
1
Bekatul merupakan hasil samping  dari hasil penyosohan beras pecah kulit. Bekatul mengandung senyawa bioaktif, seperti total senyawa fenolik dan  -oryzanol yang memiliki aktivitas antioksidan . Namun, Senyawa bioaktif ini terikat secara kimia dalam matriks senyawa lignin. Proses fermentasi kapang dapat memecah  komponen  lignin  sehingga  komponen  bioaktif  berada  dalam  bentuk  bebas.  Penelitian  ini mengkaji pengaruh fermentasi bekatul dengan menggunakan Rhizopus oryzae. Bekatul dari tiga varietas padi (Inpari 24 (beras merah), Inpari 30 (beras putih), dan Koshihikari (beras putih) difermentasi selama 0, 24,  48,  72,  96  dan  120  jam .  Sampel  dianalisis  aktivitas  antioksidannya  (pengujian  DPPH) dan yang menunjukkan  aktivitas  antioksidan  tertinggi dianalisis lebih lanjut komposisi kimianya (kadar air, abu, lemak,  protein,  dan  karbohidrat),  kadar  total  senyawa  fenolik dan  -oryzanol. Proses fermentasi pada ketiga varietas meningkatkan aktivitas antioksidan, dan yang paling tinggi ditunjukkan pada sampel yang difermentasi selama 72 jam.  Kondisi fermentasi ini meningkatkan secara nyata ( P <0,05) kadar air, abu dan protein, dan menurunkan kadar lemak dan protein. Kadar total fenol dan  -oryzanol dari ketiga bekatul terfementasi  juga  meningkat  ( P <0,05).  Bekatul  terfermentasi  dari  Inpari  24  menunjukkan  aktivitas antioksidan,  total  fenol  -oryzanol yang tertinggi dibandingkan bekatul terfermentasi dari Inpari 30 and Koshihikari.
Kata kunci: aktivitas antioksidan, bekatul, fermentasi kapang, total senyawa fenolik,  -oryzanol

## PENDAHULUAN
Bekatul  merupakan  serbuk  halus  yang  berasal dari  lapisan  terluar  beras  pecah  kulit  yang  berwarna cokelat  yang  dihasilkan  dari  proses  penggilingan padi  (Sukma et  al., 2010).  Menurut  Gul et  al. (2015) penggilingan  padi  dan  penyosohan  beras  dapat menghasilkan  70%  beras,  20%  sekam,  8%  bekatul dan  2%  lembaga.  Produksi  padi  Indonesia  sebesar 56,54  juta  ton  pada  tahun  2018  (BPS,  2018)  yang diperkirakan  menghasilkan  limbah  bekatul  sebesar 4,52  juta ton.
Bekatul  terdiri  dari  lapisan  perikarp,  testa  dan lapisan aleuron yang mengandung komponen makro,  mikro  dan  senyawa  bioaktif  (Norhaizan et  al., 2013).  Hartati et  al. (2015)  melaporkan  kisaran  kom- posisi  kimia  bekatul  dari  beberapa  varietas  padi, yaitu  air  (8,54-9,70%),  abu  (9,47-10,86%  bk),  lemak (16,80-23,75%  bk),  protein  kasar  (13,20-13,37%  bk), karbohidrat  (42,32-51,99%  bk ,  by  difference )  dan serat  kasar  (13,56-17,97%  bk).  Henderson et  al. (2012)  melaporkan  senyawa  bioaktif  yang  terdapat dalam  bekatul,  yaitu oryzanol ,  asam  ferulat,  asam kafeat, tricine ,  asam  kumarat,  asam  fitat, vitamin  E, fitosterol,  dan  karotenoid.  Senyawa  bioaktif  tersebut diketahui  bermanfaat  bagi  kesehatan  sebagai  anti- kanker  (Forster et  al., 2013),  antiinflamasi,  antidia- betes,  hipoalergenik,  dan  hipolipidemik  (Islam et  al., 2011).  Jumlah  bekatul  dihasilkan  besar,  yang  didu- kung  dengan  komposisi  kimia  dan  kandungan  kom- ponen  bioaktifnya  yang  baik,  sehingga  bekatul  ber- potensi  untuk  digunakan  sebagai  alternatif  bahan pangan.
Permasalahan  penggunaan  bekatul  sebagai bahan  pangan  adalah  fungsionalitas  dari  senyawa bioaktif  dari  bekatul  yang  disebabkan  oleh  ben- tuknya  yang  terikat  pada  matriks  senyawa  lain,  yaitu lignin  (Zhang et  al., 2010).  Permasalahan  lainnya terkait  dengan  palatabilitasnya  yang  kurang  disukai. Salah  satu  metode  yang  dapat  dilakukan  untuk  me- ningkatkan  sifat  fungsional  senyawa  fenolik  dan  - oryzanol  sebagai  antioksidan  adalah  dengan  proses fermentasi.  Rashid et  al .  (2015)  menyatakan  bahwa proses  fermentasi  dapat  digunakan  untuk  melepas - kan  ikatan  fitokimia  sehingga  dapat  meningkatkan bentuk  bebasnya  dan  bioavailabilitasnya.  Ryan et  al. (2011)  melaporkan  bahwa  proses  fermentasi  juga dapat  memperbaiki  stabilitas,  palatabilitas,  dan  nilai gizi  bekatul.  Fermentasi  kapang  dilaporkan  dapat meningkatkan  availabilitas  senyawa  bioaktif  pada bekatul  yang  disebabkan  oleh  kemampuan  kapang dalam  mendegradasi  matriks  lignoselulosa  dan  poli- sakarida  secara  enzimatis  (Schmidt  dan  Furlong, 2012).  Total  senyawa  fenolik  pada  bekatul  menga- lami  peningkatan  110%  (2,4-5,1  mg/g)  setelah  difer- mentasi  dengan  menggunakan  kapang Rizhopus oryzae selama  120  jam  (Schmidt et  al., 2014;
Rashid et  al (2015).  Beberapa  senyawa  fenolik  yang mengalami  peningkatan  setelah  proses  fermentasi yaitu  asam  ferulat  (14,7  mg/g),  galat  (2,6-154,5 mg/g),  klorogenat  (20,9-76,1  mg/g),  kafeat  (4,8-28,7 mg/g),  protokatekuat  (7,7-13,6  mg/g),  vanillin  (8,6- 13,1  mg/g)  dan  siringat  (2,1-12,7  mg/g)  (Schmidt et al., 2014).  Aktivitas  antioksidan  juga  mengalami  pe- ningkatan  setelah  fermentasi  selama  120  jam  (213- 250  mg/g DPPH ).  Pola  serupa  dijumpai  pada  penelitian Razak et  al .  (2015),  yang  memanfaatkan  kultur tunggal  dan  kombinasi  antara Rizhopus oligosporus dan Monascus  purpureus .  Komponen  total  senyawa fenolik  memgalami  peningkatan  setelah  fermentasi, yaitu  dari  3,93  mg  EAG/g  menjadi  7,54  mg  EAG/g (dengan Rizhopus  oligosporus ),  7,69  mg  EAG/g sampel  (dengan Monascus  purpureus )  dan  8,13  mg EAG/g  (dengan  campuran Rizhopus  oligosporus dan Monascus  purpureus ).
Senyawa  -oryzanol  adalah  salah  satu  kompo- nen  paling  penting  pada  bekatul.  Antioksidan  utama dalam  bekatul  beras  adalah  -oryzanol (62,9%)  dan asam  fenolat  (35,9%)  (Laokuldilok et  al., 2011).  Se- nyawa  -oryzanol  merupakan  campuran  ester  asam ferulat  dan  alkohol  triterpene.  Komposisi  -oryzanol dalam  minyak  bekatul  sekitar  1-2%  yang  berfungsi sebagai  antioksidan  alami.  Senyawa  -oryzanol mempunyai  tiga  komponen  utama,  yaitu  cycloartenyl ferulat,  24-methylene  cycloartenyl  ferulat,  dan  cam- pesteryl  ferulate  (Patel  dan  Naik,  2004).  Kandungan  -oryzanol  pada  bekatul  beras  hitam,  beras  merah dan  beras  putih  berbeda-beda,  yaitu  9,12;  8,58;  dan 1,52  mg/g  (Moongngarm et  al., 2012;  Jayadeep  dan Malleshi,  2011).  Rashid et  al. (2015)  melaporkan bahwa  kandungan  -oryzanol  pada  bekatul  yang difermentasi  dengan  bakteri P.  acidilactici menga- lami  peningkatan  dari  954,47  μg/mL ekstrak menjadi 1148,38  μg/mL ekstrak.
Kandungan  senyawa  bioaktif  bekatul  dapat berbeda-beda  yang  dipengaruhi  oleh  varietas  padi, sehingga  bekatul  dari  sumber  yang  berbeda  dapat memberikan  efek  aktivitas  biologis  yang  berbeda (Sompong et  al., 2011).  Penelitian  ini  menggunakan tiga  varietas  padi  yaitu  inpari  24,  inpari  30,  dan  ko- shihikari.  Varietas  Inpari  merupakan  padi  yang  ba- nyak  ditanam,  karena  tahan  terhadap  hama  penyakit dan  memiliki  tekstur  beras  yang  pulen  yang  disukai oleh  masyarakat.  Koshihikari  merupakan  jenis  beras Jepang  yang  dapat  ditanam  di  Indonesia  dan  sangat disukai  oleh  masyarakat.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengevaluasi  komposisi  kimia  (pH,  kadar  air, abu,  lemak,  protein,  dan  karbohidrat),  kandungan  to- tal  senyawa  fenolik,  -oryzanol,  dan  aktivitas  anti- oksidan  dari  bekatul  padi Indica (beras  putih  varietas inpari  30  dan  beras  merah  varietas  inpari  24)  dan Japonica (varietas  koshihikari)  yang  difermentasi  de- ngan  menggunakan  kapang Rizhopus  oryzae.

## BAHAN  DAN METODE

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  bekatul  jenis Indica dan Japonica dalam bentuk  gabah  kering  giling . Padi  jenis Indica yang digunakan  adalah beras  putih  varietas  inpari  30  dan beras  merah  varietas  Inpari  24  yang  diperoleh  dari petani  di  Jasinga,  Bogor,  sedangkan  padi  jenis Ja- ponica yang  digunakan  (Koshihikari)  diperoleh  dari Balai  Besar  Penelitian  Padi,  Sukamandi,  Subang. Bahan  lain  yang  digunakan  yaitu  inokulum  berupa kapang Rizhopus  oryzae (IPBCC  13.1138)  yang  di- peroleh  dari  IPB Culture  Collection, Institut  Perta- nian  Bogor.

## Penyiapan bekatul
Gabah  kering  giling  dari  masing-masing  varie- tas  dikupas  kulitnya  dengan  mesin huller (Satake, Japan)  untuk  memperoleh  beras  pecah  kulit.  Selan- jutnya,  beras  pecah  kulit  disosoh  dengan rice  mill (Satake,  Japan)  selama  2  menit.  Proses  sosoh  ini menghasilkan  beras  sosoh  dan  campuran  bekatul dan  dedak.  Campuran  dedak  dan  bekatul  ini  kemu- dian  dipisahkan  dengan  ayakan  20 mesh untuk mendapatkan  bekatul.  Bekatul  yang  diperoleh  selan- jutnya siap untuk  difermentasi.
Fermentasi  bekatul  (Schmidt et  al., 2014;  Razak et  al., 2015)
Substrat  bekatul  ditempatkan  pada  labu  erlen- meyer  250  mL,  lalu  ditambahkan  air  (perbandingan substrat  dan  air  adalah  2:1)  dan  ditutup  dengan  ka- pas  steril.  Sampel  selanjutnya  disterilisari  dengan autoklaf  (ALP  MC-40,  Jerman),  pada  suhu  121°C selama  15  menit.  Setelah  didinginkan  sampai  suhu 30°C,  sampel  diinokulasi  dengan Rizhopus  oryzae (1,5x10 5 spora/g  bekatul).  Sampel  yang  telah  diino- kulasi  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  32°C  selama 0,  24,  48,  72,  96  dan  120  jam.  Sampel  yang  telah difermentasi  lalu  dikering-kan  dengan freeze  dryer (Eyela,  Model  FDU-1100  DRC-1000  PFR-1000, Jepang), dan  disimpan  pada  suhu  -18°C  sampai waktu  analisis.  Sampel  dianalisis  aktivitas  antioksi- dannya  dan  yang  menunjukkan  aktivitas  antioksidan tertinggi  dipilih  untuk  pengujian  selanjutnya  (analisis komposisi  kimia,  kadar  total  senyawa  fenolik  dan  - oryzanol).
Ekstraksi  bekatul (Tuarita , 2017)
Ekstraksi  bekatul  menggunakan  pelarut  meta- nol  (Merck,  AS)  dengan  perbandingan  bekatul  dan metanol  sebesar  1:10  (%b/v).  Proses  ekstraksi menggunakan  metode  maserasi  selama  3  jam  de- ngan  menggunakan  penangas  air  (WNB-7  Mem- mert,  Jerman)  pada  suhu  ruang  (30°C),  dilanjutkan dengan  sonikasi  selama  10  menit.  Filtrat  dipisahkan dari  residunya  dengan  cara  disentrifugasi  pada  3000
rpm  selama  15  menit.  Filtrat  yang  didapat  disebut sebagai  ekstrak  bekatul  yang  digunakan  dalam  ana- lisis.
Analisis  aktivitas  antioksidan  (Baba  dan  Malik, 2014)
Aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  bekatul  di- analisis  dengan  metode  DPPH  (2,2-diphenyl-1-pi- crylhydrazyl) radical  scavenging .  Sampel  ekstrak bekatul  ( 200  μL)  direaksikan  dengan  3,8  mL  larutan DPPH  (150 μM)  (Merck,  AS),  kemudian  diinkubasi selama  1  jam  di  ruangan  gelap.  Selanjutnya  sampel diukur  absorbansinya  dengan  UV-Vis  spektrofoto- meter  (UV-1800  Shimadzu,  Jepang)  pada  panjang gelombang  517  nm.  Kontrol  positif  yang  digunakan berupa  Trolox  (Sigma)  dengan  konsentrasi  100 hingga  400  mg/g.  Larutan  blanko  dibuat  sesuai  de- ngan  tahap  di  atas  namun  dilakukan  penggantian sampel  dengan  menggunakan  metanol.  Nilai  absor- bansi  terkoreksi  dihitung  sebagai  selisih  dari  absor- bansi  blanko  dengan  sampel.  Aktivitas  antioksidan dihitung  dari  perhitungan  kurva  kalibrasi  larutan standar  dan  dinyatakan  dalam  % scavenging .
Analisis  proksimat (AOAC,  2012)
Sampel  bekatul  dianalisis  komposisi  kimianya (kadar  air,  abu,  lemak,  protein,  dan  karbohidrat). Kadar  air  diukur  menggunakan  metode  gravimetrik, kadar  abu  dengan  metode  pengabuan  kering,  kadar lemak  dengan  metode  soxhlet,  kadar  protein  dengan metode  kjeldahl,  dan  kadar  karbohidrat  dengan by difference.
Analisis  total  senyawa  fenolik ( Baba  dan  Malik, 2014)
Perhitungan  komponen  total  senyawa  fenolik dilakukan  dengan  reagen  Folin-Ciocalteau.  Seba- nyak  200 μL ekstrak bekatul (1 mg/mL) ditambahkan air  demineralisasi  sampai  3  mL,  lalu  dicampur  de- ngan  0,5  mL  reagen  Folin-Ciocalteu  fenol  (Merck, AS).  Selanjutnya  sampel  ditambah  2  mL  larutan natrium  karbonat  (20%  b/v)  dan  dikocok.  Sampel  di- inkubasi  pada  suhu  kamar  selama  60  menit  dengan kondisi  gelap  sebelum  diukur  nilai  absorbansinya dengan  UV-Vis  spektrofotometer  pada  panjang  ge- lombang  650  nm.  Total  senyawa  fenolik  ditentukan dengan  menggunakan  larutan  standar  asam  galat (Merck,  AS).  Kadar  total  senyawa  fenolik  dinyatakan dengan  mg ekuivalen  asam galat (EAG)/g.
Analisis  -oryzanol (Krishna et  al., 2 006) Ekstraksi  -oryzanol  dari bekatul  dilakukan  de- ngan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  n-hek- sana.  Sampel  bekatul  (1  g)  ditambahkan  larutan heksana  (Merck,  AS)  10  mL  pada  tabung  sentrifus. Larutan  divortex  selama  2  menit,  kemudian  disen- trifusi  pada  3000  rpm  selama  20  menit.  Sebanyak  1 mL  supernatan  diambil  dan  ditempatkan  pada  labu
71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 0 24 48 72 96 120 % Sca ve n g in g Waktu Fermentasi (Jam)
Inpari 24 Inpari 30 Koshihikari
ukur  10  mL,  kemudian  ditambah  pelarut  n-heksana. Sampel  diukur  dengan  UV-Vis  spektrofometer  pada panjang  gelombang  pada  319  nm.  Senyawa  - oryzanol  pada  bekatul  ditentukan  dengan  menggu- nakan  larutan  standar  -oryzanol.

## Analisis  data
Percobaan  menggunakan  metode  rancangan acak  lengkap  (RAL)  satu  faktor,  yaitu  jenis  beras (Inpari  24,  Inpari  30  dan  Koshihikari).  Percobaan  di- lakukan  dengan  dua  kali  ulangan.  Bekatul  dari masing-masing  varietas  yang  tidak  difermentasi  dija- dikan  sebagai  kontrol.  Pengolahan  data  dilakukan dengan  menggunakan  perangkat  lunak  IBM  SPSS 22.0.  Data  hasil  analisis  aktivitas  antioksidan  dan komposisi  kimia  diuji  dengan  analisis  variansi (ANOVA)  dan  uji  lanjut duncan  multiple  range  test (DMRT)  pada  taraf  signifikansi  5%.  Pada  pengukur- an  total  senyawa  fenolik  dan  -oryzanol,  data  diana- lisis  dengan  uji  T  pada  taraf  signifikansi  5%.  Uji Pearson  dilakukan  untuk  menunjukkan  ada  tidaknya korelasi  antar  komponen  yang dianalisis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas  antioksidan
Gambar  1  menunjukkan  aktivitas  antioksidan bekatul  Inpari  24,  Inpari  30  dan  Koshihikari  sebelum dan  selama  proses  fermentasi  oleh Rizhopus  ory- zae .  Bekatul  non-fermentasi  dari  ketiga  jenis  beras menunjukkan  aktivitas  oksidan,  yaitu  75,07%  (untuk Inpari  24),  73,92%  (untuk  Inpari  30)  dan  75,20% (untuk  Koshihikari).  Secara  umum,  bekatul  yang  di- fermentasi  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lebih tinggi  dibandingkan  bekatul  non-fermentasi,  yang  di- pengaruhi  oleh  lamanya  waktu  fermentasi.  Ketiga jenis  bekatul  yang  difermentasi  selama  24-120  jam menunjukkan,  aktivitas  antioksidan  lebih  tinggi  ( P < 0,05)  dibandingkan  bekatul  non-fermentasi,  yaitu pada  rentang  75,34%  hingga  78,92%.  Aktivitas  anti- oksidan  meningkat  5,0%  dibandingkan  bekatul  non- fermentasi  hingga  waktu  fermentasi  selama  72  jam, namun  cenderung  menurun  bila  waktu  fermentasi  di- perpanjang  hingga  120  jam.  Penurunan  aktivitas antioksidan  disebabkan  oleh  kompetisi  kapang  da- lam  memperoleh  nutrisi  dan  substrat  yang  menye- babkan  penurunan  produksi  enzim  pemecah  lignin oleh  kapang.  Perubahan  yang  terjadi  selama  fer- mentasi  dipengaruhi  oleh  jenis  substrat,  kapang yang  digunakan,  dan  kondisi  fermentasi  (Schmidt dan  Furlong,  2012).  Hal  yang  sama  dilaporkan  oleh Razak et  al. (2015)  yaitu  aktivitas  antioksidan  me- ningkat  3,0%  setelah  proses  fermentasi  selama  12 hari.  Komponen  asam  fenolat  seperti  asam  galat, protokatekuat,  dan  kafeat  juga  menunjukkan  pening- katan tertinggi.
Peningkatan  aktivitas  antioksidan  pada  sampel bekatul  fermentasi  diduga  sebagai  konsekuens i  me- ningkatnya  komponen  fenolik  bebas  seperti  asam ferulat,  asam  galat  (Schmidt et  al., 2014),  antosianin dan  oryzanol  (Jun et  al., 2015).  Peningkatan  asam fenolat  pada  bekatul  fermentasi  disebabkan  oleh  pe- mecahan  selulosa  dan  hemiselulosa  dengan  lignin (komponen  struktural  dinding  sel)  (Schmidt  dan Furlong,  2012).  Kapang  menghasilkan  enzim  peme- cah  lignin  dan  memiliki  kemampuan  sistem  oksidatif ligniolitik  yang  mendegradasi  cincin  fenil  sehingga meningkatkan  komponen  fenol  bebas  (Martins et  al., 2011).  Menurut  Razak et  al. (2015),  komponen  feno- lik  seperti  asam  ferulat  (komponen  fenolik  utama  pa- da  bekatul)  dapat  bertindak  sebagai radical  sca- vengers terhadap  DPPH dan  NO  (nitrogen  oksida).
Gambar  1.   Perubahan  aktivitas  antioksidan  bekatul yang difermentasi  dengan Rizhopus
oryzae
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  varietas  Inpari 24  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi dibanding  Inpari  30  dan  Koshihikari.  Hal  ini  karena bekatul  beras  merah  mempunyai  kadar  total  senya- wa  fenolik  dan  -oryzanol  lebih  tinggi  dibandingkan bekatul  lainnya.  Senyawa  fenolik  dan  -oryzanol  ter- bukti  mampu  mencegah  oksidasi  dan  radikal  bebas. Inpari  24  merupakan  jenis  beras  merah  yang  diketa- hui  memiliki  pigmen  antosianin  yang  berfungsi  seba- gai  antioksidan.  Muntana  dan  Prasong  (2010)  me- nyatakan  bahwa  perbedaan  profil  dan  kadar  pigmen antosianin  dipengaruhi  oleh  warna  bekatul  beras. Sebagian  besar  asam  fenolik  (83-97%)  yang  terda- pat  pada  beras  berpigmen  berada  dalam  bentuk  ter- ikat  dengan  komponen  lain.  Asam  fenolik  yang banyak  terdapat  pada  beras  merah  adalah  asam ferulat  dan  asam  protokatekat,  yaitu  berkisar  2,9-3,9 mg/100  g  (Sompong et  al., 2011).  Moko et  al. (2014)
melaporkan  bahwa  bekatul  beras  putih  (varietas Superwin  dan  Cigeulis)  mengandung  komponen fenolik,  flavonoid,  alkaloid,  triterpenoid,  steroid,  dan tanin  serta  antosianin  yang  lebih  rendah  disbanding- kan  beras  merah.  Bekatul  beras  merah  memiliki komponen  fenolik  lebih  tinggi  (4,3  mg/g)  disbanding- kan  bekatul  beras  putih  (1,96  mg/g)  (Moongngarm et al., 2012).
Berdasarkan  hasil  pengujian  aktivitas  antioksi- dan  sebagaimana  diuraikan  di  atas,  maka  sampel bekatul  yang  difermentasi  selama  72  jam  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tertinggi  dibandingkan waktu  fermentasi  lainnya.  Waktu  fermentasi  tersebut kemudian  dipilih  untuk  analisis  lebih  lanjut  (kompo- sisi  kimia,  kadar  total  senyawa  fenolik  dan  kadar  - oryzanol).

## Komposisi  kimia
Bekatul  non-fermentasi  dari  tiga  varietas  memi- liki  komposisi  kimia  yang  berbeda  (Tabel  1).  Hal  ini sejalan  dengan  yang  dilaporkan  oleh  Hartati et  al. (2015)  yang  menunjukkan  komposisi  kimia  yang berbeda  dari  bekatul  varietas  padi  IR-64,  Sintanur, Rajalele,  dan  Menthik  wangi.  Komposisi  kimia  beka- tul  yang  beragam  dipengaruhi  oleh  varietas,  proses penggilingan,  lingkungan  tempat  padi  tumbuh,  dan derajat  penggilingan  gabah.
Tabel  1  menyajikan  komposisi  kimia  dari  tiga sampel  bekatul  sebelum  dan  setelah  fermentasi  se- lama  72  jam.  Secara  umum,  proses  fermentasi  me- ngubah  komposisi  kimia  secara  nyata  ( P <0,05).  Ka- dar  air,  kadar  abu  dan  kadar  protein  dari  ketiga  be- katul  yang  difermentasi  selama  72  jam  meningkat, sedangkan  kadar  lemak  dan  karbohidrat  menurun. Peningkatan  kadar  air  disebabkan  oleh  aktivitas  me- tabolisme  kapang  yang  menghasilkan  air  sebagai hasil  sampingnya.  Penurunan  kadar  lemak  disebab- kan  oleh  aktivitas  kapang  dalam  menggunakan  le- mak  sebagai  sumber  energi  untuk  sintesis  miselium. Perubahan  komposisi  kimia  ini  sejalan  dengan  yang dilaporkan  oleh  Oliveira et  al. (2010),  yang  menun- jukkan  terjadinya  peningkatan  kadar  air,  kadar  abu,
serat,  dan  asam  fitat,  namun  terjadi  penurunan  pada kadar  lemak  dan  gula  reduksi  pada  bekatul  yang  di- fermentasi  dengan  menggunakan Rizhopus  oryzae selama  120  jam.  Perubahan  komposisi  kimia  yang terjadi  pada  bekatul  fermentasi  diduga  disebabkan oleh  penambahan  massa  yang  berasal  dari  kapang yang  digunakan  pada  saat proses  fermentasi.
Proses  fermentasi  dapat  mengubah  komposisi kimia  yang  disebabkan  oleh  produksi  enzim  ekstra- selular oleh  mikroorganisme  untuk  mendapatkan nutrisi  dan  hasil  samping  dari  metabolit  lainnya.  Me- tabolisme  ini  dapat  memperkaya  nutrisi  pada  subs - trat,  tergantung  pada  komponen  yang  terdapat  pada agen  fermentasi  atau  ketersediaan  nutrisi  pada substrat tersebut  (Oliveira et al., 2010).

## Kadar total senyawa fenolik
Gambar  2  menunjukkan  hasil  analisis  kandung- an  total  senyawa  fenolik  pada  bekatul  non-fermenta- si  dan  yang  difermentasi  selama  72  jam.  Bekatul  se- belum  difermentasi  mengandung  kadar  total  senya- wa  fenolik  sebesar  3,29  mg  EAG/g  (Inpari  24),  3,13 mg  EAG/g  (Inpari  30)  dan  3,12  mg  EAG/g  (Koshihi- kari).  Arab et  al. (2011)  juga  melaporkan  kadar  total senyawa  fenolik  yang  berbeda  dari  bekatul  varietas padi  Fajr  dan  Tarem  masing-masing  sebesar  0,331 mg EAG/g dan  0,201  mg  EAG/g.
Berdasarkan  Gambar  2,  maka  bekatul  Inpari  24 menunjukkan  kadar  total  senyawa  fenolik  yang  lebih tinggi  dibandingkan  Inpari  30  dan  Koshihikari.  Se- perti  dijelaskan  di  atas,  Inpari  24  merupakan  varie- tas  padi  merah  yang  memiliki  pigmen  warna  dan menunjukkan  akivitas  antioksidan  yang  tertinggi. Analisis  korelasi  Pearson  menunjukkan  bahwa  total senyawa  fenolik  memiliki  korelasi  positif  (0,96)  yang sangat  nyata  ( P <0,01)  dengan  nilai  aktivitas  anti- oksidan.  Hal  ini  sejalan  dengan  Rashid et  al. (2015), bahwa  aktivitas  antioksidan  pada  bekatul  non-fer- mentasi  dan  bekatul  fermentasi  memiliki  korelasi yang  tinggi  dengan  kontribusi  seluruh  komponen bioaktif  di  dalamnya  dan  tidak  spesifik  pada  kompo- nen-komponen  fenoliknya  saja.
Tabel  1.  Karakteristik  bekatul  non-fermentasi  dan  bekatul  yang  difermentasi  dengan Rizhopus oryzae sela- ma 72  jam
Karakteristik Inpari  24 Inpari  30 Koshihikari Non- Fermentasi Fermentasi Non- Fermentasi Fermentasi Non- Fermentasi Fermentasi Kadar air (% bb) 2,09±0,35 c 4,77±0,76 ab 4,84±0,59 ab 4,95±0,22 ab 3,69±0,32 b 5,73±0,63 a Kadar abu (% bk) 7,66±0,06 c 10,21±0,00 b 9,61±0,93 b 12,73±0,03 a 9,04±0,06 b 12,54±0,63 a Lemak  (% bk) 14,52±0,27 b 13,38±3.84 b 16,29±0,35 b 12,90±0,25 b 22,26±0,10 a 21,03±1,98 a Protein(%  bk) 14,77±0,90 c 18,53±1,55 abc 14,30±1,55 c 20,66±0,81 ab 17,10±0,44 bc 22,37±3,14 a Karbohidrat  (% bk) 63,06±0,57 a 57,88±2,29 bc 59,80±0,27 b 53,78±1,03 c 51,60±0,48 c 44,07±5,75 d Aktivitas  antioksidan  (%) 75,07 d 78,92 e 73,92 d 77,16 a 75,20 c 78,04 b
Keterangan:  Data  merupakan  nilai  rata-rata  ±  SD  (n =  2).  Huruf  yang  sama  pada  baris  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada taraf signifikansi  5% (uji selang  berganda  Duncan)
3,29 b 3,13b 3,12 b
3,94 a 3,62 a 3,67 a - 1 2 3 4 5 Inpari24 Inpari30 Koshihikari Ka d a r T PC (m g EA G /g s a m p e l) Varietas Padi Non-fermentasi Fermentasi 0
Gambar  2.   Kadar  total  senyawa  fenolik  bekatul non-fermentasi  dan  yang  difermentasi dengan Rizhopus oryzae selama  72  jam
Muntana  dan  Prasong  (2010)  menjelaskan  bah- wa  perbedaan  kadar  pigmen  antosianin  dipengaruhi oleh  perbedaan  warna  pada  bekatul  beras.  Seba- gian  besar  asam  fenolik  (83-97%)  yang  terdapat pada  beras  berpigmen  berada  dalam  bentuk  terikat dengan  komponen  lain.  Asam  fenolik  yang  banyak terdapat  pada  beras  merah  adalah  asam  ferulat  dan asam  protokatekat  berkisar  2,9-3,9  mg/100  g  (Som- pong et  al., 2011).  Moko et  al. (2014)  melaporkan bahwa  bekatul  beras  putih  (varietas  Superwin  dan Cigeulis)  mengandung  komponen  fenolik,  flavonoid, alkaloid,  triterpenoid,  steroid,  dan  tanin  serta  anto- sianin  yang  lebih  rendah  bila  dibandingkan  beras merah.  Bekatul  beras  merah  memiliki  komponen fenolik  lebih  tinggi  yaitu  4,3  mg/g  dibandingkan  be- katul  beras  putih  yaitu  1,96  mg/g  (Moongngarm et al., 2012).
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  terdapat  per- bedaan  yang  nyata  ( P <0,05)  antara  kadar  total  se- nyawa  fenolik  dari  bekatul  non-fermentasi  dengan bekatul  yang  difermentasi  selama  72  jam.  Bekatul yang  difermentasi  selama  72  jam  meningkat  kadar total  senyawa  fenoliknya  dibandingkan  bekatul  non- fermentasi,  yaitu  sebesar  18%  (Inpari  24),  16% (Inpari  30)  dan  19%  (Koshihikari).  Kandungan  total senyawa  fenolik  tertinggi  ditunjukkan  oleh  bekatul Inpari  24  terfermentasi,  yaitu  3,94  mg  EAG/g.  Hasil penelitian  ini  lebih  rendah  dibandingkan  dengan yang  dilaporkan  oleh  Schmidt et  al. (2014),  yaitu meningkat  sebesar  110%.  Perbedaan  ini  disebab- kan  waktu  fermentasi  yang  digunakan  (120  jam),  di samping  juga  perbedaan  varietas  padi  yang  digu- nakan.  Namun,  dari  hasil  penelitian  dapat  dilihat bahwa  proses  fermentasi  dapat  meningkatkan  kom- ponen  total senyawa  fenolik.
Proses  fermentasi  diduga  meningkatkan  keter- sediaan  asam-asam  fenolik  bebas,  sehingga  bekatul fermentasi  memiliki  total  senyawa  fenolik  lebih  ting- gi.  Peningkatan  fenolik  bebas  diakibatkan  aktivitas hidrolitik  enzimatis  ekstraseluler  mikroba  selama fermentasi.  Selain  itu,  kapang  juga  dapat  mempro- duksi  senyawa  fenolik.  Razak et  al. (2015)  melapor- kan  bahwa  kapang  dapat  memproduksi  enzim  yang berperan  dalam  proses  hidrolitik enzimatis,  yaitu  β- glukosidase.  Enzim  β-glukosidase  berperan  sebagai katalis  dalam  proses  hidrolisis  ikatan  glikosida  pada gugus  alkil  dan  aril  β-D-glukosida.  Enzim  tersebut menghidrolisis  glikosida  fenolik  sehingga  melepas - kannya  menjadi  asam  fenolik  bebas.  Sebagaimana dijelaskan  di  atas, Rizhopus oryzae menghasilkan enzim  pemecah  karbohidrat  dan  memiliki  kemampu- an  sistem  oksidatif  lignolitik  yang  mendegradasi  cin- cin  fenil  yang  dapat  meningkatkan  komponen  fenol bebas  (Martin et  al., 2011).  Lakase  merupakan  sa- lah  satu  enzim  lignolitik  yang  banyak  mengandung tembaga  oksidase  dan  mempunyai  kemampuan untuk  mengoksidasi  senyawa  fenol.  Reaksi  enzima- tik  pada  enzim  lakase  merupakan  reaksi  oksidasi yang  menghasilkan  satu  elektron  hasil  oksidasi  se- nyawa  fenol  dan  mereduksi  oksigen  menjadi  air (Sigit,  2008).  Kapang  jenis Rhizopus  sp memliki kemampuan  untuk  memproduksi  enzim  lakase.  Rek- sohadiwinoto et  al. (2017)  melaporkan  bahwa  akti- vitas  enzim  lakase  pada  fermentasi  dengan  meng- gunakan Rhizopus  oligosporus meningkat  selama fermentasi.  Pada  hari  ke-0  fermentasi,  lakase  tidak memiliki  aktivitas,  namun  aktivitas  meningkat  men- jadi  0,297  U/mL  (hari  ke-3)  dan  3,55  U/mL  (hari  ke- 6).
Kadar  -oryzanol Hasil  pengukuran  terhadap  kadar  -oryzanol pada  hasil  ekstraksi  bekatul  sebelum  dan  setelah fermentasi  disajikan  pada  Gambar  3.  Bekatul  non- fermentasi  dari  Inpari  24  memiliki  kadar  -oryzanol tertinggi  (11,21  mg/g)  dibandingkan  Inpari  30  (9,01 mg/g)  dan  Koshihikari  (10,13  mg/g).  Mumpuni  dan Ayustaningwarno  (2013)  juga  menunjukkan  perbe- daan  kadar  -oryzanol  dari  bekatul  varietas  yang berbeda,  yaitu  varietas  Mansur  (13,34  mg/g),  beras Taun  merah  (24,20  mg/g),  dan  beras  taun  hitam (15,01  mg/g).  Moongngarm et  al. (2012)  juga  mela- porkan  bahwa  kandungan  -oryzanol  pada  beras  hi- tam,  beras  merah  dan  beras  putih  berturut-turut sebesar  9,12;  8,58; dan  1,52  mg/g.
Perlakuan  fermentasi  selama  72  jam  pada bekatul  menghasilkan  komponen  -oryzanol  yang meningkat  sebesar  13-19%.  Hasil  penelitian  ini  lebih rendah  dibandingkan  dengan  yang  dilaporkan  oleh Rashid et  al .  (2015),  yaitu  kandungan  -oryzanol pada  bekatul  yang  difermentasi  dengan  mengguna- kan  bakteri P.  acidilactici meningkat  sebesar  20%.
11,21 b 9,01 b 10,13 b 12,93 a 10,74 a 11,44 a 0 2 4 6 8 10 12 14 Inpari24 Inpari30 Koshihikari Ka d a r O ry za n o l (m g /g s a m p e l) Varietas Padi Non-fermentasi Fermentasi
Perbedaan  hasil  ini  disebabkan  oleh  penggunaan mikroba  dan  metode  fermentasi  yang  berbeda.
Gambar  3.  Kadar  -oryzanol  bekatul  non-fermentasi dan  yang  difermentasi  dengan Rizhopus oryzae selama 72  jam
Schmidt et  al .  (2014)  melaporkan  bahwa  proses fermentasi  bekatul  menggunakan Rizhopus  oryzae meningkatkan  senyawa  fenolik  (asam  ferulat,  galat, klorogenat,  kafeat, p -kumarat,  protokatekuat,  vanilin dan  siringat).  Peningkatan  asam  fenolat  pada  be- katul  fermentasi  disebabkan  pemecahan  komponen kompleks  dengan  lignin  oleh  enzim  metabolit  dari Rizhopus  oryzae (Schmidt  dan  Furlong,  2012). Alasan  yang  sama  yang  dapat  menjelaskan  hasil  di atas,  yaitu  oleh  kemampuan Rizhopus  oryzae dalam memproduksi  enzim  pemecah  ikatan  kompleks  de- ngan  lignin  yang  dapat  meningkatkan  kandungan  - oryzanol  dalam  bekatul  terfermentasi.
Uji  korelasi  Pearson  menunjukkan  bahwa  kadar  -oryzanol  berkorelasi  positif  (0,87)  sangat  nyata ( P <0,01)  dengan  aktivitas  antioksidan.  Hal  ini  seja- lan  dengan  Jun et  al. (2015)  yang  menyatakan,  bah- wa  aktivitas  antioksidan  bekatul  sangat  dipengaruhi keberadaan  asam-asam  fenolik  (asam  ferulat,  asam galat,  kafeat, p -kumarat,  protokatekuat,  vanilat  dan siringat)  dan  beberapa  komponen  bioaktif  lainnya seperti  antosianin,  -oryzanol,  tokotrienol,  dan  toko- ferol.  Semakin  tinggi  konsentrasi  komponen  bioaktif dengan  sifat  fungsional  antioksidan  tersebut,  maka semakin  tinggi  pula  aktivitas  sifat  fungsionalnya sebagai  antioksidan.

## KESIMPULAN
Bekatul  dari  padi  varietas  Inpari  24,  Inpari  30 dan  Koshihikari  yang  difermentasi  dengan Rizhopus oryzae mengalami  peningkatan  aktivitas  antioksi- dan,  perubahan  komposisi  kimia,  dan  peningkatan kadar  total  senyawa  fenolik  dan  kadar  -oryzanol dibandingkan  bekatul  non-fermentasi.  Ketiga  bekatul yang  difermentasi  selama  72  jam  menunjukkan  pe- ningkatan  aktivitas  antioksidan  tertinggi,  dengan  ka- dar  total  senyawa  fenolik  dan  kadar  -oryzanol  yang meningkat  secara  berturut-turut  menjadi  3,6-3,9  mg EAG/g  dan  10,74-12,93  mg/g.  Bekatul  dari  Inpari  24 menunjukkan  aktivitas  antioksidan,  kadar  total  se- nyawa  fenolik,  dan  kadar  -oryzanol  tertinggi,  baik sebelum  maupun  setelah  fermentasi  72  jam.  Aktivi- tas  antioksidan,  total  senyawa  fenolik  dan  -oryzanol dari  bekatul  yang  difermentasi  pada  kondisi  tersebut secara  berturut-turut  mengalami  peningkatan  sebe- sar  3,73;  19,76;  dan  15,34%  dibandingkan  bekatul tanpa  fermentasi.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical  Chemistry. 2012.  Official  Method  of  Analysis.  Association of  Official  Analytical  Chemistry  19th  Edition. AOAC  Inc, Gaithersburg  (US).
Arab  F,  Alemzadeh  I,  Maghsoudi  V.  2011.  Determi- nation  of  antioxidant  component  and  activity  of rice  bran  extract.  Sci  Iran  Transactions  C: Chem  Chem  Eng  18:  1402-1406.  DOI:  10.1016/ j.scient.2011.09.014.
Baba  SA,  Malik  SA.  2015.  Determination  of  total phenolic  and  flavonoid  content,  antimicrobial and  antioxidant  activity  of  a  root  extract  of Arisaema  jacquemontii.  J  Taibah  University  Sci 9: 449-454  DOI:  10.1016/j.jtusci.2014.11.001.
[BPS]  Badan  Pusat  Statistik.  2018.  Luas  panen  dan produksi  padi  di  Indonesia.  http://www.bps.go. id. [02 Januari  2019].
Esa  NM,  Ling  TB,  Peng  LS.  2013.  By-product  of  rice processing:    An  overview  of  health  benefits  and application.  J  Rice  Res  1:  107-117.  DOI:  10.417 2/jrr.1000107.
Forster  GM,  Raina  K,  Kumar  A,  Kumar  S,  Agarwal R,  Chen  MH,  Bauer  JE,  McClung AM, Ryan EP. 2013.  Rice  varietal  differences  in  bioactive  bran components  for  inhibition  of  colorectal  cancer cell  growth.  Food  Chem  141:  1545-1552.  DOI: 10.1016/j.foodchem.2013.04.020.
Gul  K,  Yousuf  B,  Singh  AK,  Singh  P,  Wani  AA. 2015.  Rice  bran:  Nutritional  values  and  its emerging  potential  for  development  of  functio- nal  food  -  a  review.  Bioactive  Carbohyd  Dietary Fibre  6:  24-30.  DOI:  10.1016/j.bcdf.2015.06. 002.
Hartati  S,  Marsono  Y,  Suparmo,  Santoso  U.  2015. Komposisi  kimia  serta  aktivitas  antioksidan  eks - trak  hidrofilik  bekatul  beberapa  varietas  padi.  J Agritech  35:  35-42.  DOI:  10.22146/agritech. 9417.
Henderson  AJ,  Ollila  CA,  Kumar  A,  Borresen  EC, Raina  K,  Agarwal  R,  Ryan  EP.  2012.  Chemo- preventive  properties  of  dietary  rice  bran: current  status  and  future  prospects.  Adv  Nutr  3: 643-653.  DOI:  10.3945/an.112.002303.
Islam  MS,  Nagasaka  R,  Ohara  K,  Hosoya  T,  Ozaki H,  Ushio  H,  Hori  M.  2011.  Biological  abilities  of rice  bran  derived  antioxidant  phytochemicals  for medical  therapy  -  a  review.  Curr  Top  Med Chem  11:  1847-1853.  DOI:  10.2174/15680261 1796235099.
Jayadeep  A,  Malleshi  NG.  2011.  Nutrients,  composi- tion  of  tocotrienols,  tocopherols,  and  γ-oryza- nol,  and  antioxidant  activity  in  brown  rice  before and  after  biotransformation.  CyTA-J  Food  9:  82- 87. DOI:  10.1080/19476331003686866.
Jun  HI,  Shin  JW,  Yang  GS,  Kim  YS.  2015.  Isolation and  identification  of  phenolic  antioxidants  in black  rice  bran.  J  Food  Sci  80:  262-268.  DOI: 10.1111/1750-3841.12754.
Krishna  AGG,  Hemakumar  KH,  Khaton  S.  2006. Study  on  the  composition  of  rice  bran  oil  and its higher  free  fatty  acids  value.  J  Am  Oil  Chem Soc  83:  117-120.  DOI:  10.1007/s11746-006- 1183-1.
Laokuldilok  T,  Shoemaker  CF,  Jongkaewwattana  S. 2011.  Antioxidants  and  antioxidant  activity  of several  pigmented  rice  brans.  J  Agric  Food Chem  59:  193-199.  DOI:  10.1021/jf103649q.
Martins  S,  Mussatto  SI,  Martinez  AG,  Montanez  SJ,
Aguilar  CN,  Teixeira  JA.  2011.  Bioactive  pheno- lic  compounds:  Production  and  extraction  by solid-state  fermentation  -  a  review.  Biotech  Adv 29:  365-373.  DOI:  10.1016/j.biotechadv.2011. 01.008.
Moko  EM,  Purnomo  H,  Kusnadi  J,  Ijong  FG.  2014. Phytochemical  content  and  antioxidant  proper- ties  of  colored  and  non-colored  varieties  of  rice bran  from  Minahasa,  North  Sulawesi,  Indone- sia. Int Food  Res  J 21: 1053-1059.
Moongngarm  A,  Daomukda  N,  Khumpika  S.  2012.
Chemical  compositions,  phytochemicals,  and antioxidant  capacity  of  rice  bran,  rice  bran layer, and  rice  germ.  Asia-Pac  Chem,  Biol  Environ Eng  (APCBEE)  Proc  2:  73-79.  DOI:  10.1016/j. apcbee.2012.06.014.
Mumpuni  PD,  Ayustaningwarno  F.  2013.  Analisis kadar  tokoferol, γ-oryzanol  dan  β-karoten  serta aktivitas  antioksidan  minyak  bekatul  kasar.  J Nutr  College  2:  350-357.  DOI:  10.14710/jnc. v2i3.3436.
Muntana  N,  Prasong  S.  2010.  Study  on  total  pheno- lic  contents  and  their  antioxidant  activities  of Thai  white,  red,  and  black  rice  bran  extracts. Pakistan  J  Biol  Sci  13:  170-174.  DOI:  10.3923/ pjbs.2010.170.174.
Oliveira  MS,  Fedden  V,  Kupski  L,  Cipolatti  EP,
Furlong  EB,  Soares  LS.  2010.  Physico-chemi- cal  characterization  of  fermented  rice  bran  bio- mass.  CyTA-J  Food  8:  229-236.  DOI:  10.1080/ 19476330903450274.
Patel  M,  Naik  SN.  2004.  Gamma-oryzanol  from  rice bran  oil -  a review.  J Sci Ind  Res 63: 569-578.
Rashid  NYA,  Razak  DLA,  Jamaluddin  A,  Sharifuddin SA,  Long  K.  2015.  Bioactive  compounds  and antioxidant  activity  of  rice  bran  fermented  with lactic  acid  bacteria.  Malaysian  J  Microbiol  11: 156-162.  DOI:  10.21161/mjm.12714.
Razak  DLA,  Rashid  NYAR,  Jamaluddin  A,  Shari- fudin  SA,  Long  K.  2015.  Enhancement  of  phe- nolic  acid  content  and  antioxidant  activity  of  rice bran  fermented  with Rhizopus  oligosporus and Monascus  purpureus .  Biocatal  Agric  Biotechnol 4: 33-38.  DOI  10.1016/j.bcab.2014.11.003.
Reksohadiwinoto  BS,  Rosmalawati  S,  Cahyana  PT, dan  Hariyanto  B.  2017.  Enzim  laccase  dari edible  mushroom  untuk  pemutihan  pati  sagu ramah  lingkungan.  J  Teknol  Lingkungan  18: 224-332.  DOI:  10.29122/jtl.v18i2.1790.
Ryan  EP,  Heuberger  AL,  Weir  TL,  Barnett  B,  Broec - kling  CD,  Prenni  JE.  2011.  Rice  bran  fermented with  Saccharomyces  boulardii  generates  novel metabolite  profile  with  bioactivity.  J  Agric  Food Chem  59:  1862-1870.  DOI:  10.1021/jf1038103.
Schmidt  CG,  Furlong  EB.  2012.  Effect  of  particle size  and  ammonium  sulfate  concentration  on rice  bran  fermentation  with  the  fungus  Rhizopus oryzae.  Bioresource  Technology  123:  36-41. DOI:  10.1016/j.biortech.2012.07.081.
Schmidt  CG,  Goncalves  LM,  Prietto  L,  Hackbart  HS,
Furlong  EB.  2014.  Antioxidant  activity  and  en- zyme  inhibition  of  phenolic  acids  from  fer- mented  rice  bran  with  fungus Rizhopus  oryzae . Food  Chem  124:  132-140.  DOI:  10.1016/j.food chem.2013.09.101.
Sigit  AM.  2008.  Pola  aktivitas  enzim  lignolitik  jamur tiram  ( Pleurotus  ostreatus )  [Skripsi].  Bogor:
Fakultas  Matematika  dan  Pengetahuan  Alam, Institut Pertanian  Bogor.
Sompong  R,  Siebenhandl  ES,  Linsberger  MG, Berghofer  E.  2011.  Physicochemical  and  anti- oxidative  properties  of  red  and  black  rice varieties  from  Thailand,  China  and  Sri  Lanka. Food  Chem  124:  132-140.  DOI:  10.1016/j.food chem.2010.05.115.
Sukma  LN,  Zackiyah,  Gumilar  GG.  2010.  Pengkaya- an  asam  lemak  tak  jenuh  pada  bekatul  dengan
cara  fermentasi  padat  menggunakan  Asper- gillus terreus.  J Sains Teknol  Kimia 1: 66-72.
Tuarita  MZ.  2017.  Identifikasi  Senyawa  Sitotoksik dan  Antioksidan  dari  Berbagai  Jenis  Bekatul dengan Pendekatan Metabolomik [Tesis].
Bogor:  Fakultas  Teknologi  Pertanian,  Institut Pertanian  Bogor.
Zhang  MW,  Zhang  RF,  Zhang  FX,  Liu  RH.  2010.
Phenolic  profiles  and  antioxidant  activity  of black  rice  bran  of  different  commercially  avail- able  varieties.  J  Agric  Food  Chem  58:  7580- 7587.  DOI:  10.1021/jf1007665.