## REVIEW : PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK PROPOELIX TERHADAP MORFOLOGI MOTILITAS DAN JUMLAH SEL SPERMATOZOA TIKUS WISTAR JANTAN YANG DIINDUKSI OLEH MONOSODIUM GLUTAMAT
Review: The Effect Of Propoelix Extract On Motility Morphology And The number Of Spermatozoa Cells Of Wistar Rat Induced By Monosodium Glutamate
1 W.N.Rahmah
1 Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Palangkaraya, RTA. Milono Km. 1,5, Palangkaraya
*e-mail : windy.nazmatur@gmail.com

## ABSTRAK
Pemberian  MSG  dapat  menurunkan  kualitas  morfologi,  motilitas  dan  jumlah  sel  spermatozoa,  propoelix  bahan  yang  di kumpulkan oleh lebah madu merupakan antioksidan kuat, mampu bertindak sebagai non-enzymatic radical scavenger. Tujuan dari penelitian ini untuk mengatahui pengaruh pemberian ekstrak propoelix yang diinduksi MSG.
Post Test Control Group Design dengan sampel 18 tikus jantan galur Wistar umur 3 bulan, berat badan ± 250 gram, di bagi menjadi 3 kelompok secara random. Setelah 1 minggu aklimasi, treatment diberikan 2 kali sehari selama 21 hari. Hari ke 22, cauda  epididimis    sampai  ampula  vas  deferens  dipotong  di  tampung  dalam  toples  kaca  yang  telah  diberi  0,5cc  larutan  NaCl fisiologis  0,9%.  Hasil  penelitian  morfologi  spermatozoa  (%)  pada  kelompok  K  (54,5)  kelompok  P1  (65)  kelompok  P2  (76) lebih tinggi bermakna, p< 0,05. Motilitas spermatozoa (%) pada kelompok K (41,3) kelompok P1 (53,8) kelompok P2 (65,3) lebih tinggi bermakna, p<0,05. Jumlah sel spermatozoa (juta/ml) kelompok K (2,65) kelompok P1 (3,63) kelompok P2 (4,91) lebih tinggi bermakna, p<0,05. Pemberian ekstrak propoelix mampu meningkatkan kualitas morfologi motilitas dan jumlah sel spermatozoa pada tikus jantan wistar yang diinduksi MSG.
Kata kunci : MSG, Ekstrak Propoelix, Morfologi, Motilitas, Jumlah Sel Spermatozoa

## ABSTRACT
Giving MSG can reduce the morphological quality, motility and the count of spermatozoa. Propoelix extract as an antioxidant is  evidently  capable  of  non-enzymatic  radical  scavenger.  This  research  aims  at  evaluating  the  effect  of  propoelix  extract administration on sperm quality of MSG-induced male wistar rats. Employing the post the only control group design, 18 rats aged 3 months were divided into 3 random groups, weights ±250 gram. Propoelix extract was given orally for 21 days and on 22  days,  cauda  epididymis  until  the  ampulla  of  vas  deferens  was  cut  in  a  glass  jar  that  has  been  given  0,5  cc  of  0,9% physiological  solution.  The  result  of  spermatozoa  morphology  (%)  in  group  K  (54,5)  group  P1  (65)  group  P2  (76)  was significantly higher, p < 0,05. Spermatozoa motility (%) in group K (41.3) group P1 (53.8) group P2 (65.3) was significantly higher,  p  <  0.05.  The  number  of  spermatozoa  cells  (million  /  ml)  in  group  K  (2.65),  group  P1  (3.63),  group  P2  (4.91)  was significantly higher, p < 0.05. Conculatition of propoelix extract was able to improve the quality of the morphology, motility and the count of spermatozoa of MSG-induced male wistar rats.
Keyword : MSG, Propoelix Extract, Morphology, Motility, The number Spermatozoa Cell

## PENDAHULUAN
Monosodium  glutamate (MSG)  adalah  suatu senyawa  hasil  dari  purifikasi  glutamat  dengan sejumlah  kecil  peptida  yang  dihasilkan  dari  proses hidrolisa  protein  (Marwa  A.  A.and  Manal  R.  A,
2011).  MSG  digunakan  untuk  memperkuat  rasa dalam  makanan,  namun  penggunaannya  pada  dosis tinggi  dapat  berefek  pada  tubuh  seperti  sakit  kepala, mual, muka menjadi merah, dan perasaan panas yang
disebut  sindroma  restoran  cina  (Noor,  A.  N.  and Mourad,  M.I,  2010). Penggunaan  MSG  yang berlebihan  dapat  menyebabkan  stres  oksidatif  yang ditandai  dengan  meningkatkan  ROS. Monosodium Glutamate (MSG)  yang  berlebihan  akan  memicu hipotalamus  dalam  menghasilkan Gonadotrophin Releasing  Hormon (GnRH)  yang  memicu  Hipofisis anterior  dan  menyebabkan  penurunan  FSH  dan  LH, kemudian  disusul  dengan  menurunnya  testosteron. (WHO, 2010). Penurunan FSH dan LH
mengakibatnya spermatogenesis berjalan tidak normal (Foa A, 2008). Hal inilah yang menyebabkan penurunan kualitas sperma. (Hakim Lukman, 2012).
Sekitar 50 - 80 juta pasangan suami- istri dari seluruh  dunia  mempunyai  masalah  infertilitas. Sedangkan di Indonesia, prevalensi infertilitas adalah 12  %  atau  sekitar  3  juta  pasangan  suami  –  istri. Infertilitas  sebanyak  36%  disebabkan  oleh  pria, sedangkan  64%  disebabkan  oleh  wanita.  (WHO, 2011)  Infertilitas  pria  sekitar  24-42%  disebabkan karena  adanya  penurunan  kualitas  sperma.  (Ashish Ranjan  singh,  2013)  Sel  leydig  dan  sel  sertoli merupakan  komponen  penting  dalam  testis  yang berperan  pada  fertilitas.  Kerusakan  pada  sel  leydig dan  sel  sertoli  akan  mempengaruhi  fertilitas seseorang. (Foa A, 2008).
Peningkatan  ROS  yang  melebihi  ambang batas pertahanan antioksidan akan menyebabkan stres oksidatif  yang  akan  menyebabkan  gangguan  pada kesehatan manusia. Radikal bebas dan stres oksidatif dapat  terjadi  pada  testis  dan  sistem  hipotalamus- hipofisis-gonad  yang  dapat  menyebabkan  penurunan kadar  hormon  LH  dan  FSH.  Penurunan  LH  akan menghambat stimulasi sel leydig dalam memproduksi testosteron, sedangkan penurunan FSH akan menghambat  spermatogenesis.  Kerusakan  pada hipotalamus menurunkan sekresi gonadotropin realizing  hormone (GnRH).  Sisi  aktif  CAPE  (OH) akan  mendonorkan  elektronnya  untuk  berikatan dengan  radikal    bebas  sehingga  akan  mencegah proses  ikatan  radikal  bebas  dengan  membran  sel. Apabila  CAPE  mampu  berikatan  dengan  radikal bebas  secara  maksimal,  maka  kadar  antioksidan dalam sel mampu dipertahankan sehingga tidak akan terjadi  kondisi  stress  oksidatif  dan  menghambat kerusakan sel yang dipicu peningkatan radikal  bebas. (Lofty M, 2006).
Ekstrak Countinous Multi-Stage Countercurrent Extraction (CMCE) propoelix merupakan  ekstrak  propolis  yang  diekstrak  dengan menghasilkan 60% bioflavonoid utuh yang mengandung  ORAC  dengan  aktifitas  antioksidan sebesar  21.921  (HDI  Propoelix’s  leafleat,  2018). Kandungan  ekstrak  CMCE  propolis  berupa  senyawa aktif seperti asam cafeat, flavonoid, fenol, quercetin, terpenoid, dan coumarin yang bermanfaat sangat baik dalam  tubuh  manusia  (Pereira  ADS, et  al ,  2003). Flavonoid berfungsi sebagai antioksidan, anti-kanker, dan anti-bakteri. Turunan polifenol sebagai antioksidan dapat menstabilkan ROS dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki ROS, dan  menghambat  terjadinya  reaksi  berantai  dari pembentukan  ROS  (Hattenschwiller  S  and  Vitousek PM,  2000).  Studi  Farombi  EO,  Onyema  OO menunjukkan  peran  ekstrak  propoelix  sebagai antioksidan  terbukti  mampu  memperbaiki  kualitas sperma akibat radikal bebas dari paparan asap rokok. (Ivan  h,  2016).  Ekstrak  propoelix  membuktikan bahwa dengan dosis 9, 18, dan 27 mg/hari selama 30 hari  mampu  meningkatkan  persentase  spermatozoa dengan monosodium glutamate (Taufiqurrachman  et al,  2012)  Menurut  (Tri  Hardi,  2015)  bahwa pemberian  ekstrak  etanol  propolis  mempunyai pengaruh terhadap penekanan ekspresi Bcl2, peningkatan ekspresi p21, dan induksi apoptosis pada kultur  sel  kanker  servik  (Hela  cell  line).  Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  membuktikan  bahwa pemberian  ekstrak  propoelix  dapat  meningkatkan kualitas  morfologi,  motilitas  dan  jumlah  sel spermatozoa pada tikus jantan Wistar yang diinduksi MSG.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan Post  Test  Only  Control  Group  Design . Jumlah  sampel  dalam  penelitian  ini  adalah  18  ekor tikus  jantan Wistar yang  dipilih  secara  random  , dibagi dalam 3 kelompok masing-masing terdiri dari 6  ekor  tikus.  Kelompok  kontrol  (K)  dengan pemberian  MSG  140  mg/BB  tanpa  ekstrak  CMCE propolis, serta kelompok perlakuan dengan pemberian  ekstrak  CMCE  propolis  dengan  dosis  8,3 mg/BB  (P1)  dan  10,8  mg/BB  (P2),  dilarutkan dalam
2  ml  aquadest.  Perlakuan  dilakukan  selama  21  hari secara  oral,  dan  pada  hari  ke  22  dilakukan pemeriksaan  morfologi,  motilitas  dan  jumlah  sel spermatozoa  secara  mikroskopik.  Analisis  statistik yang  digunakan  adalah One  Way  ANOVA yang dilanjutkan dengan Uji Post Hoc LSD dengan tingkat signifikan  p<0,05.  Penelitian  ini  dilakukan  setelah mendapat  ijin  dari  Komit  Etik  Fakultas  Kedokteran Unissula No. 47/II/2019/Komisi Bioetik.

## PEMBAHASAN
Tabel  1.  Hasil  rerata  morfologi  motilitas  dan jumlah sel spermatozoa
Variabel Kelompok P Anova K (n=6) Mean ± SD P1 (n=6) Mean ± SD P2 (n=6) Mean ± SD Morfologi (%) 54,50 ± 2.74 65 ± 1,414 76 ± 2,191 0,000* Motilitas (%) 41,33 ± 1,211 53,83 ± 1,472 65,33 ± 1,633 0,000* Jumlah sel (juta/ml) 2,56 ± 0,914 3,63 ± 0,258 4,91 ± 0,136 0,000* * = Signifikan (p<0,05)
Gambar 1. Morfologi Spermatozoa Tikus Jantan Wistar yang Diinduksi MSG.
Keterangan: (K)  MSG  140mg/BB,  (P1)  MSG 140mg/BB  +  Ekstrak  CMCE  propolis  8,3  mg/BB, (P2)  MSG  140  mg/BB  +  Ekstrak  CMCE  propolis 10,8 mg/BB, (Pembesaran 100x objectif)
Gambar  2.  Hasil  Post  Hoc  Morfologi  Spermatozoa, Motilitas  Spermatozoa,  dan  Jumlah  Sel  Spermatozoa masing-masing kelompok : *
Hasil  uji post  hoc pada  Gambar  2 menunjukkan perbedaan
rerata morfologi spermatozoa antar dua kelompok semuanya signifikan  p<0,05,  kecuali  untuk  perbedaan  antar kelompok K dan P1 yang menunjukkan kelompok K lebih  rendah.  Perbedaan  jumlah  antar  kelompok  P1
0 20 40 60 80 100 Morfologi Spermatozoa (%) K P1 P2 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Motilitas Spermatozoa (%) K P1 P2 0 1 2 3 4 5 6 7 Jumlah Sel Spermatozoa (juta/ml) K P1 P2 K P1 P2
dan  P2  tidak  berbeda  signifikan  terhadap  morfologi spermatozoa.  Penelitian  morfologi  spermatozoa terendah  didapatkan  oleh  kelompok  K  sebagai kelompok  kontrol  positif  berbeda  signifikan  dengan kelompok P1 dan kelompok P2. Hal ini menunjukkan bahwa  pemberian  MSG  140mg/BB  menyebabkan penurunan  viabilitas    spermatozoa,  menurunkan kualitas  motil  spermatozoa,  serta  meningkatkan abnormalitas morfologi spermatozoa hal ini disebabkan  karena  MSG  berlebihan  menyebabkan peningkatan  natrium  dan  pembentukan  ROS  yang mengakibatkan  stress  oksidatif    dan  menyebabkan kerusakan  sel  dan  organ,  khususnya  untuk  sistem reproduksi.  Hal  ini  tidak    sejalan  dengan  penelitian yang dilakukan oleh Taufiqurrachman, Eni Widayanti, Anindiya Kusuma W. Pemberian propolis dengan  dosis  9,  18,  dan  27  mg/hari  selama  30  hari mampu  meningkatkan  konsentrasi  dan  persentase morfologi  normal  spermatozoa  pada  tikus    jantan galur  wistar  yang  diinduksi    dengan monosodium glutamate .
Hasil uji Post hoc pada Gambar.2 menunjukkan  pasangan  kelompok  menunjukkan bahwa  perbedaan  hasil  rerata  pasangan  kelompok motilitas  spermatozoa  antar  dua  kelompok  hampir semuanya  signifikan  (p<0,05),  kecuali  perberbedaan motilitas  spermatozoa  antar  kelompok  K  dengan kelompok  P2  (p>0,05)  dan  kelompok  K  dan kelompok P1 (p>0,05). Perbedaan motilitas spermatozoa yang berbeda signifikan antar kelompok K  dengan  kelompok  P2  (p<0,05)  menunjukkan bahwa  pemberian  ekstrak  CMCE  propolis  dosis 10,8mg/hari).Dari hasil penelitian motilitas spermatozoa  terendah  di  dapatkan  oleh  kelompok  K sebagai  kelompok  kontrol  positif  berbeda  signifikan dengan  kelompok  P1  dan  kelompok  P2.  Hal  ini menunjukkan bahwa pemberian dosis MSG140mg/BB  dosis  tinggi  meningkatkan  kadar radikal  bebas  dalam  tubuh  yang  menyebabkan penurunan motilitas spermatozoa.
Hasil uji Post hoc pada Gambar.2 menunjukkan  pasangan  kelompok  menunjukkan bahwa  perbedaan  hasil  rerata  pasangan  kelompok morfologi  spermatozoa  antar  dua  kelompok  hampir semuanya  signifikan  (p<0,05),  kecuali  perberbedaan morfologi  spermatozoa  antar  kelompok  K  dengan kelompok  P2  (p>0,05)  dan  kelompok  K  dan
kelompok  P1  (p>0,05).Jumlah  spermatozoa  terendah didapatkan  pada  kelompok  K.  Sebagai  kelompok kontrol  positif  berbeda  signifikan  dengan  kelompok P1  dan  kelompok  P2.  Hal  ini  menunjukkan pemberian MSG 140mg/BB  menyebabkan gangguan spermatogenesis melalui mekanisme testikuler bersifat  sitotoksik.  MSG  menyebabkan  terbentuknya radikal  bebas  yang  berlebih  dan  menimbulkan  stress oksidatif.  MSG  juga  dapat  merusak  sumbu  HHT (hipotalamus, hipofisis, testis) sehingga menyebabkan penurunan jumlah spermatozoa. Akibat ketidak  seimbangan  antara  radikal  bebas  dan antioksidan  menyebabkan  stress  oksidatif  yang menggangu  fungsi  normal  spermatozoa.  Stress oksidatif  memicu  terjadinya  peningkatan  peroksidasi lipid sehingga terjadi kerusakan sel dan apoptosis sel spermatozoa yang mempengaruhi jumlah spermatozoa.  Senyawa  antioksidan  diperlukan  untuk melawan  radikal  bebas  yang  disebabkan  oleh  MSG salah  satunya  dengan  pemberian  ekstrak  propoelix yang  mengandung  CAPE  dan  flavonoid,  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  sehingga  dapat melindungi dari kondisi infertil.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  propoelix  dengan  dosis 8,3  mg  dan  10,8  mg  dapat  meningkatkan  kualitas morfologi, motilitas dan jumlah sel spermatozoa pada tikus jantan Wistar yang diinduksi MSG.

## DAFTAR PUSTAKA
Bogdanov,  S.  (2013)  Propolis:  Composition,  Health, Medicine:  A  Review,  Bee  Product Science.
Capucho, C. et al. (2012) ‘Green Brazilian propolis effects on  sperm  count  and  epididymis  morphology and  oxidative  stress’,  Food  and  Chemical Toxicology.  Elsevier  Ltd,  50(11),  pp.  3956– 3962. doi: 10.1016/j.fct.2012.08.027.
Dong,  H.  V  and  Robbins,  W.  A.  (2015)  ‘Ingestion  of monosodium  glutamate  (MSG)  in  adult  male rats  reduces  sperm  count,  testosterone,  and disrupts testicular histology’,  Nutrition Bytes, 19(1), pp. 1–10.
Fauzan,  M.  and  Bagus,  S.  (2016)  ‘Administration  of
Propoelix  ®  as  an  Adjuvant  Therapy  for

## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology
Patients  with  HIV  /  AIDS  in  Sungailiat Hospital, Bangka’, Medika, 3, pp. 128–138. Hanipah,  E.  N.  A.  et  al.  (2018)  ‘Monosodium  Glutamate Induced  Oxidative  Stress  in  Accessory Reproductive  Organs  of  Male  Sprague- Dawley  Rats’,  Jurnal  Sains  Kesihatan
Malaysia, 10, pp. 67–73.
Hoesada, I., Nasihun, T. and Isradji, I. (2016) ‘The Effect
of Propolis Extract on MDA Levels (Malondialdehyde)  and  Sperm  Quality  on Epididimis  (Experimental  Study  on  Wistar Strain  Male  Rats  Exposed  to  Kretek Cigarettes)’, Sains medika, 7(1), pp. 9–14.
Mahidin,  Maulana,  A.  M.  and  Susiyadi,  S.  (2018) ‘Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol  Daun Kemangi  (Ocimum  basilicium  L)  Terhadap Jumlah Sel Spermatogrnik Tikus Putih (Rattus norvegicus)  Galur  Wistar  Jantan  Yang Diinduksi  Monosodium  Glutamat’,  Herb- Medicine  Journal,  1(1),  pp.  19–30.  doi: 10.30595/hmj.v1i1.2480. Martin-hidalgo,  D.  et  al.  (2019)  ‘Antioxidants  and  Male Fertility:  from  Molecular  Studies  to  Clinical Evidence’, Antioxidants, 8(89), pp. 1–21. doi:
10.3390/antiox8040089.
Nasihun, T., Widayati, E. and Anindiya Kusuma W (2012) Proteksi Spermatozoa dengan Propolis dengan ROS  Pada  Tikus  Jantan  Galur  Wistar  Yang
Diinduksi Oleh Monosodium Glutamat.
Semarang:  Bagian  Andrology  dan  Biokimia Fakultas  Kedokteran  Universitas  Islam  Sultan Agung (UNISSULA).
Onyema,  O.  O.  and  Alisi,  C.  S.  (2012)  ‘Monosodium Glutamate  Induces  Oxidative  Stress  and
Affects Glucose Metabolism in the Kidney of Rats’,  International  Journal  of  Biochemistry Research, 2(1), pp. 1–11. Onyema, O. O., Farombi, E. O. and Emerole, G. O. (2006) ‘Effect  of  vitamin  E  on  monosodium glutamate induced hepatotoxicity and oxidative  stress  in  rats’,  Indian  Journal  of Biochemistry & Biophysics, 43, pp. 20–24. Prasetyo,  D.  H.,  Suparyanti,  E.  L.  and  Guntur,  A.  H.
(2013)  ‘Ekstrak  Etanol  Propolis  Isolat
Menurunkan  Derajat  Inflamasi  dan  Kadar Malondialdehid  pada  Serum  Tikus  Model
Sepsis’, MKB, 45(3), pp. 161–166.
Sharma,  A.  (2015)  ‘Monosodium  glutamate-induced oxidative  kidney  damage  and  possible mechanisms:  a  mini-review’,  Journal  of Biomedical  Science.  Journal  of  Biomedical Science,  p.  22:93.  doi:  10.1186/s12929-015- 0192-5.
Singh, A. R. (2013) ‘Spermicidal Activity and Antifertility Activity  of  Ethanolic  Extract  of  Withania somnifera in Male Albino Rats’, International Journal  of  Pharmaceutical  Science  Review and Research.
Susanto,  T.  H.,  Maryono,  S.  and  Purwanto,  B.  (2017) ‘Pengaruh Ekstrak Propolis Terhadap Ekspersi
Protein BcI2,p21, dan Induksi Apoptosis Pada Sel Hela’, Biomedika, 9(2), pp. 6–14.
Sutikno,  M.  T.  (2014)  Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Propolis
Terhadap Penurunan Jumlah Spermatid Mencit  (Mus  Munculus)  yang  dipapar  Asap Rokok. Universitas Sebelas Maret.
World  Health  Organization  (WHO)  (2010)  WHO Laboratory  Manual  for  Examination  and Processing  Human  Semen.  5th  edn.  Geneva
World Heal. Organ.
Zegers-Hochschild,  F.  et  al.  (2009)  ‘The  International
Committee for Monitoring Assisted Reproductive  Technology  (ICMART)  and  the
World  Health  Organization  (WHO)  Revised
Glossary  on  ART  Terminology’,  Human Reproduction,  24(11),  pp.  2683–2687.  doi:
10.1093/humrep/dep343.