UJI AKTIVITAS TANIN DAUN MIMBA ( Azzadirachta indica ) TERHADAP

## BAKTERI Salmonella typhi
Derys Ruwandha, Dwi Fitri Yani * , Damayanti Iskandar Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Raden Fatah Palembang, JL.Prof. K.H. Zainal Abidin Fikri Palembang, 30126 *Email: dwifitriyani_uin@radenfatah.ac.id
Received 19 January 202 1
Accepted 4 June 2021

## ABSTRAK
Penyakit tipus adalah penyakit yang disebabkan oleh bakteri gram negatif yaitu Salmonella typhi, salah satu pengobatan terhadap penyakit tipus adalah pengobatan dari bahan alam yang  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder,  yang  diketahui  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri senyawa  tanin  daun  mimba  ( Azzadirachta  indica )  terhadap  bakteri Salmonella  Typhi dengan  menggunakan  metode  difusi  cakram.  Uji  aktivitas  antibakteri  ditentukan berdasarkan diameter daya hambat senyawa tanin terhadap bakteri Salmonella typhi. Uji Fitokimia Ekstrak  metanol  daun  mimba  positif  mengandung  tanin,  flavonoid,  alkaloid, steroid,  dan  saponin.  Pemisahan  senyawa  tanin  dari  ekstrak  metanol  menghasilkan  nilai rendemen sebesar 69.6 %. Hasil pengujian antibakteri senyawa tanin dapat menghambat bakteri Salmonella typhi berturut-turut pada konsentrasi 15% (b/v), 30% (b/v), 50% (b/v), dan 75% (b/v) yaitu sebesar 15.03, 16.78, 19.02, 21.78 mm dengan klasifikasi kuat sampai sangat kuat berdasarkan klasifikasi Davis & Stout.
Kata Kunci : Daun Mimba, Antibakteri, Salmonella typhi , Tanin.

## ABSTRACT
Typhoid is a disease caused by gram-negative bacteria, namely Salmonella typhi, one of the  treatments  for  typhoid  is  a  treatment  made  from  natural  ingredients  that  contain secondary metabolites, which are known to inhibit bacterial growth. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the tannin compound of neem leaves (Azzadirachta  indica)  against  Salmonella  typhi  using  the  disc  diffusion  method.  The antibacterial activity test was determined based on the diameter of the inhibition of tannins against Salmonella typhi. Phytochemical Test The methanol  extract of neem leaves was positive  for  tannins,  flavonoids,  alkaloids,  steroids,  and  saponins.  Separation  of  tannin compounds from methanol extract resulted in a yield value of 69.6%. The results of the tannin compound antibacterial test can inhibit Salmonella typhi bacteria at a concentration of  15%  (b/v),  30%  (b/v),  50%  (b/v),  and  75%  (b/v)  respectively,  namely  15.03,  16.78, 19.02, 21.78 mm with a strong to very strong classification based on the Davis & Stout classification.
Keyword : Neem Leaves, Antibacterial, Salmonella Typhi, Tannin

## Pendahuluan
Indonesia merupakan negara berkembang yang kaya akan keanekaragaman hayati karena merupakan  negara  tropis  yang  memiliki jenis-jenis tumbuhan berkhasiat melimpah  (Moeloek,  F.  A.  2006),  Salah satu tumbuhan yang dimanfaatkan masyarakat sebagai obat adalah tanaman mimba ( Azzadirachta indica ). Tanaman mimba ( Azzadirachta indica ) banyak tumbuh di dataran rendah
yang  beriklim  tropis  maupun  sub  tropis (Sugiharjo, 2007). Hasil skrinning fitokimia  dan  spektrofotometer  infra merah daun mimba mengandung senyawa  metabolit  sekunder  sebagai antibakteri  karena  memberikan  hasil  uji positif  pada  senyawa  tanin, triterpene , saponin, alkaloid, flavonoid, dan steroid.
(Dyah, et  al .,  2016),  (Rohma,  2011). Menurut  Mihra et  al .,(2018)  kadar  tanin didalam  ekstrak  etanol  dan  air  daun mimba  ( Azzadirachta  indica )  adalah sebesar  0.55  %  dan  0.27%  pada  50  g sampel.  Tanin  adalah  suatu  polifenol yang memiliki berat molekul  yang besar dan  terdiri  dari  gugus  karboksil  dan hidroksi (Hovart, 1981) Tanin dapat berpotensi menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella  Tyhpi penyebab  penyakit demam  tifoid  atau  tipus  (Erni,  2004). Tifoid  atau  yang  sering  disebut  tipus adalah  penyakit  yang  disebabkan  oleh aktivitas suatu bakteri  yaitu Salmonella typhi. Diperkirakan  terdapat  sejumlah 600.000–1.500.000  per-tahun  penyakit tifoid yang menyebabkan kematian lebih dari  3%  dari  seluruh  kematian  di Indonesia  (Tri  Atmojo  dan  Triningsih, 1998).
Pengobatan  terhadap  penyakit tipus  masih  menjadi  masalah  utama karena penggunaan obat-obatan sintetik terkadang  memberikan  efek  samping terhadap  tubuh,  sehingga  diperlukan
alternatif  pengobatan  dari  bahan  alam yang  mengandung  senyawa  metabolit sekunder.  Menurut  Erni  (2004),  tanin mampu menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella Typhii (Mihra et al .,
2018). Data penelitian tanin dari Putu et al .,(2015)  bahwa,  senyawa  tanin  yang dihasilkan pada daun trembesi ( Samanea saman ( Jacq. ) Merr ) mampu menghambat  aktivitas  suatu  bakteri sebesar 7.0 mm pada konsentrasi 6%.

## Metode Penelitian

## Waktu dan Tempat Pelaksanaan
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Februari  -  Agustus 2020  di Laboratorium  Universitas  Islam  Negeri Raden Fatah Palembang dan Balai Besar Lingkungan  Hidup  (BBLK)  Palembang Sumatera Selatan.

## Alat dan Bahan
Alat  gelas,  corong  pisah  statif  dan klem,  pengaduk  kaca,  tabung  reaksi, erlenmeyer,  toples,  neraca  analitik (OHAUS  PA224),  pipet  tetes, rotary evaporator (Yamato RE301C-W),
autoklaf  (GEA  LS-50LJ),  Inkubator (Memmert IN750 plus), aluminium foil, kaca  arloji,  kertas  saring,    cawan  petri, spatula,  bunsen, hot  plate ,  corong, erlenmeyer, dan kertas cakram.
Daun  mimba  ( Azzadirachta  indica) yang diambil di daerah Sekip Palembang Sumatera  Selatan,  Metanol,  Etil  asetat, dan  N-heksana,  reagen Meyer dan Dragendorff , aquadest ,  HCl,  serbuk Nutrient  agar,  paper  disc ,  DMSO, amoxcillin 4.0%,  Mg,  FeCl 3 ,  larutan asam  asetat  anhidrat,  H 2 SO 4 pekat,  dan bakteri Salmonella thypi.
Prosedur Penelitian
Preparasi Dan Maserasi Daun  mimba    dikeringkan,  Serbuk daun mimba disaring untuk menghilangkan pengotor, sebanyak 590 g  dilakukan  maserasi  dengan  metanol selama  24  jam  sebanyak  3  kali,
kemudian  pelarutnya  diuapkan  dengan rotary evaporator dan dihitung rendemen nya.
Uji Fitokimia
Uji Tanin (Dewi, 2013) Ekstrak daun mimba ditambahkan 4 tetes  larutan Ferric  chloride (FeCl 3 ) pada  1  ml  ekstrak  daun  mimba,  dan ditunggu  hasilnya  apabila  terbentuk warna  hijau  atau  biru  kehitaman  maka menunjukkan adanya  senyawa tanin.
Uji Alkaloid (Dewi, 2013) Reagent Dragendorff ( Potassium Bismuth Iodide ) ditambahkan 1 ml pada 1  ml  ekstrak  daun  mimba,  apabila terbentuk  endapan  merah  bata  maka positif alkaloid.
Uji Flavonoid (Dewi, 2013) Ditambahkan  1  ml  HCl,  Mg,  dan etanol  pada  1  ml  ekstrak  daun  mimba. Apabila  terjadinya  perubahan  warna menjadi merah atau jingga maka positif flavonoid.
Uji  Steroid  dan  Triterpenoid (Dewi, 2013) Ditambahkan H 2 SO 4 pekat dan asam asetat anhidrat sebanyak 1 ml pada 1 ml ekstrak  daun  mimba,  apabila  ekstrak berubah  warna  menjadi  hijau  atau  biru maka  sampel  tersebut  mengandung senyawa  steroid,  dan  apabila  ekstrak berubah warna menjadi ungu atau jingga maka positif triterpenoid.
Uji Saponin (Dewi, 2013)
Uji saponin dilakukan dengan cara Foam’s  Test. 1  ml  ekstrak  dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan aquadest  dan  dikocok  sebanyak  10  kali dan apabila terbentuk busa setinggi 1-10 cm maka positif saponin.
Pemisahan Tanin
Total  ekstrak  pekat  daun  mimba ditambahkan dengan  metanol : aquadest (1:1).  Dan  didiamkan  selama  24  jam untuk  memisahkan  klorofil  dan  tanin yang  terdapat  pada  ekstrak,  selanjutnya filtrat  disaring,  sehingga  diperoleh
endapan. Endapan yang berada di bagian dasar  adalah  klorofil yang  tidak dibutuhkan  dalam  pengujian  sedangkan yang berbentuk koloid yang mengambang  di  permukaan    ( Gummy ) adalah  tanin.  Filtrat  dan  etil  asetat dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah dengan perbandingan 1:1 hingga terbentuk  2,  kemudian  fase  bawah  di pisahkan,  selanjutnya  fase  methanol-air ditambahkan  pelarut  n-heksan  1:1  dan dipisahkan.  Masing-masing  fraksi  yang diperoleh  dihitung  rendemennya  dan dilakukan uji fitikokimia kembali untuk memastikan  adanya  senyawa  tanin dalam sampel yang akan diuji.
Uji Antibakteri Uji aktivitas antibakteri menggunakan  metode  diameter  daya hambat  dengan  kontrol  positif  yaitu
Amoxcillin 4%, dan kontrol negatif yaitu aquadest .

## Sterilisasi Alat
Sebelum  memasukkan  larutan  NA, cawan  petri  dan  alat-alat  disterilkan terlebih  dahulu  menggunakan autoclaff pada suhu 100°C.
Pembuatan media agar Aquadest dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer sebanyak  200  ml,  panaskan menggunakan hotplate stirrer ,
masukkan  0.2  g  serbuk  NA  ke  dalam Erlenmeyer  dan  homogenkan  dengan menggunakan magnetic  stirrer, setelah homogen  tutup  bagian  atas  Erlenmeyer dengan menggunakan kapas dan alluminium  foil dan  diamkan  beberapa
saat sampai mengeras .
Inokulasi Bakteri Salmonella  Typi diinokulasikan pada  media  agar  dengan  cara,  cawan petri  dibagi  menjadi  6  bagian,  kontrol positif  berupa Ammoxcillin 4%,  kontrol negatif  berupa aquadest ,  sampel  tanin dengan beberapa konsentrasi. Jarum ose yang  telah  dipanaskan  digunakan  untuk mengambil biakan Salmonella thypi dan diinokulasikan  pada  seluruh  bagian
media  agar  dengan  metode  zig-zag secara vertikal. Cawan petri yang sudah diinokulasikan bakteri diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C.
Pengaplikasian sampel
Media  agar  yang  diinokulasikan bakteri Salmonella  Typi yang  telah disterilkan  dan  diinkubasi  pada  setiap cawan  petri  disesuaikan  dengan  variasi konsentrasi  ekstrak  yaitu  15%,  30%, 50%, 75% yang telah dilarutkan dengan larutan DMSO. Kemudian kertas cakram direndam pada setiap variasi konsentrasi ekstrak  daun  mimba  ( Azzadirachta Indica ). Setelah itu media agar diinkubasi  kembali  pada  suhu  37°C selama 24 jam.
Hasil dan Pembahasan

## Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Daun mimba dicuci dan dikeringkan.  Pengeringan  daun  mimba dilakukan  untuk  mengurangi  kadar  air sehingga terhindar dari jamur, selain itu juga untuk mendapatkan simplisia yang tidak  mudah  rusak  sehingga  dapat disimpan dalam jangka waktu yang lama (Susmitha et al ., 2013).
Ekstrak  kental  daun  mimba  yang sudah  di evaporator memiliki  berat sebesar  33  g  sehingga  didapatkan rendemen sebesar 5.59%.

## Uji Fitokimia Ekstrak Daun Mimba
Berikut  merupakan  tabel  dari  uji fitokimia ekstrak daun mimba yang telah dilakukan : Tabel 1. Kandungan fitokimia ekstrak  metanol dan fraksi tanin Uji Hasil Uji Ekstrak Metanol Fraksi Tanin Flavonoid (+) Berwarna Jingga (-) Berwarna Hijau Terpenoid (-) Berwarna Hijau (-) Berwarna Hijau Tanin (+) Hijau Kehitaman (+) Hijau Kehitaman Steroid (+) Berwarna Coklat (-) Berwarna Hijau Saponin (+) Terbentuk Busa (-) Tidak Terbentuk Busa Alkaloid (+) Berwarna Kuning Endapan Putih (-) Berwarna Kuning Tidak Terdapat Endapan Putih Hasil  uji  fitokimia  yang  dilakukan pada ekstrak daun mimba menunjukkan bahwa ekstrak daun mimba ( Azzadirachta indica ) positif
mengandung  tanin,  flavonoid,  alkaloid, saponin, dan steroid. Hasil uji fitokimia tersebut  berbeda  dengan  penelitian Mihra  (2018)  yang  positif  mengandung terpenoid  (Dyah et  al .,  2016)(Rohma, 2011).  Sedangkan  uji  fitokimia  pada Tabel 1 uji  negatif  untuk  terpenoid  hal
ini disebabkan adanya perbedaan lokasi tumbuh, sehingga mengakibatkan perbedaan  senyawa  yang  terbentuk. Perbedaan  hasil  uji  fitokimia  tersebut juga dikarenakan pengaruh usia tanaman dan  faktor  genetik,  temperatur,  cuaca, curah  hujan,  keadaan  tanah,  dan  nutrisi yang diberikan (Senja, 2014)
Hasil uji fitokimia pada fraksi tanin menunjukkan bahwa positif mengandung  tanin  yang  ditunjukkan
dengan perubahan warna menjadi hijau dengan  uji  FeCl 3 dan  terdapat  endapan putih  dengan  penambahan  larutan gelatin.  Tanin  telah  terpisah  dengan senyawa lain yang terdapat pada ekstrak
daun mimba. Hal ini disebabkan karena tanin  dapat  membentuk  koloid  dengan air  dan  akan  terpisah  dengan  endapan larutan  dikarenakan  senyawa  tanin dapat larut di dalam air.
O O HO OH Fe O O OH OH O O OH HO OH OH HO OH 3 + FeCl 3+ + 3Cl -
Gambar 1. Reaksi Tanin + FeCl 3 Pemisahan Tanin Berdasarkan penelitian Erni (2004), senyawa  tanin  yang  telah  disintesis menjadi asam tanat yang sudah diperjual-belikan memberikan pengaruh yang  sangat  bermakna  terhadap  bakteri Salmonella  Typhi yang  lebih  baik dibandingkan  dengan  kontrol  positif berupa  kloramfenikol  (Erni,  2004), sehingga  pada  penelitian  ini  dilakukan pemisahan  senyawa  tanin  terhadap senyawa-senyawa  lain  yang  terdapat pada  daun  mimba,  untuk  mengetahui daya hambat terhadap bakteri
Salmonella typhi .
Fraksi  tanin  air  berwarna  hitam menghasilkan  rendemen  paling  banyak
sebesar 69%, fraksi etil asetat berwarna kuning menghasilkan rendemen sebesar 9.1  %,  dan  fraksi  n-heksana  berwarna orange kehitaman, menghasilkan rendemen  paling  sedikit  sebesar  3.6%. Senyawa  tanin  dapat  terpisah  karena tanin akan membentuk koloid dengan air dan
terpisah dengan endapan dikarenakan  senyawa  tanin  dapat  larut didalamnya, setelah itu difraksinasi cair- cair  dengan  pelarut  etil  asetat  dan  n- heksana yang akan memisahkan senyawa  berdasarkan  kepolarannya, data  partisi  dan  rendemen    pemisahan tanin dirangkum pada Tabel 2. Tabel 2. Hasil Partisi Dan Rendemen Pelarut Warna Ekstrak Pekat Rendemen (%) Fraksi Tanin Air Hitam 69.6 % Fraksi EtilAsetat Kuning 9.1 % Fraksi NHeksana Oranye Kehitaman 3.6 %

## Uji Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  difusi  cakram.
Difusi  cakram  merupakan  salah  satu metode  uji  aktivitas  antibakteri  yang
paling  banyak  digunakan  dikarenakan penggunaannya yang mudah dan sederhana  (Guyton,  2007).  Berikut merupakan  tabel  dari  uji  antibakteri
senyawa tanin dan ekstrak daun mimba yang telah dilakukan :
Tabel 3. Uji Antibakteri Senyawa Tanin Daun Mimba Konsentrasi Diameter Daya Hambat (mm) Rata-Rata Zona Hambat (mm) 1 2 3 4 15% 14.04 14.04  16.03 16.02 15.03 30% 16.05 17.03 17.03 17.02 16.78 50% 20.01 18.02 19.02 19.04 19.02 75% 22.04 21.07 22.01 22.02 21.78 Kontrol (+) Ammoxcilin 4.0% 26.02 28.01 30.02 28.07 28.02 Kontrol (-) Aquadest 0 0 0 0 0
Gambar 2. Hasil  Zona Hambat Pengulangan ke-1, 2, 3, dan 4.
Berdasarkan Tabel  3 dan Gambar
2. Menunjukkan bahwa Diameter
terbesar  yang  dihasilkan  oleh  senyawa tanin  terdapat  pada  konsentrasi  75% yang  memiliki  rata-rata  zona  hambat dalam 4 kali pengulangan sebesar 21.78 mm  yang masuk dalam  kategori respon hambat  sangat  kuat  yaitu  >20  mm, sedangkan  pada  konsentrasi  15%,  30%, dan 50% memiliki rata-rata zona hambat berturut-turut  sebesar  15,03  mm,  16,78 mm,  19,02  mm  yang  masuk  dalam kategori  kuat  berdasarkan  klasifikasi (Davis dan Stout, 1971). Sementara pada
penelitian  Ariani  (2016),  diameter terbesar  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak daun  mimba    yaitu  sebesar  18.25  mm dan  masuk  dalam  kategori  respon hambat kuat yaitu 10-20 mm berdasarkan klasifikasi (Davis dan Stout, 2009).
Penggunaan kontrol positif berupa Amoxcillin dipilih  karena  memiliki spektrum  yang  luas  dan  sangat  sensitif terhadap  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif  karena  dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan mengganggu sintesis dinding sel bakteri.
Dinding sel merupakan lapisan luar yang melindungi  inti  sel  pada  setiap  spesies bakteri.  Dengan  terhambatnya  reaksi tersebut  maka  akan  mengakibatkan sintesis  peptidoglikan  berhenti  dan bakteri pun akan mati (Katzung, 2007)
Dinding  sel  bakteri  gram  negatif mempunyai kandungan lipid yang tinggi yang  terletak  pada  membran  luar  yaitu polisakarida  dan  lipid  ini  akan  larut dengan  alkohol,  sehingga  pori-pori dinding sel akan membesar dan merusak permeabilitas membrane (Waidil, 2014). Bakteri  membutuhkan  nutrisi  salah satunya air untuk bertahan hidup, Karena tanin  merupakan  senyawa  yang  dapat larut  dengan  air  sehingga  akan  mudah masuk ke dalam porin  yang merupakan pintu masuk dan keluarnya nutrisi  yang dibutuhkan oleh bakteri (Darsana, 2018)
Setelah  tanin  masuk  ke  dalam dinding  sel  melalui  porin,  tanin  dengan mudahnya menembus dinding sel bagian luar  yaitu  lipopolisakarida.  Dengan rusaknya  permeabilitas  dinding  sel, maka  senyawa  tanin  akan  masuk  ke dalam  peptidoglikan  yang  berperan penting dalam mempertahankan kehidupan bakteri dari lingkungan yang hipotonik  sehingga  kehilangan  dan kerusakan  dinding  sel  ini  menyebabkan hilangnya kekakuan dinding sel dan akan menghambat  proses  keluar  masuknya nutrisi yang dibutuhkan bakteri sehingga berakibat pada kematian
sel (Rachmawaty,  2009).  Setelah  senyawa tanin  masuk  ke  dalam  sel  melewati dinding  sel,  tanin  akan  menghambat sintesis  protein  yang  terjadi  di  dalam ribosom. Tanin akan mengganggu fungsi ribosom untuk mentranslate  RNA menjadi  protein  sehingga  protein  tidak bisa  disintesis  (Radji,  2011).  Translasi RNA  adalah  proses  yang  terjadi  di ribosom  yang  terletak  pada  sitoplasma yang berfungsi untuk mensintesis protein  setelah  terjadinya    proses transkripsi DNA menjadi RNA di dalam
inti  sel.  Proses    translasi  memiliki beberapa fase yaitu inisiasi, perpanjangan, dan pemutusan, Senyawa tanin  akan  mengganggu  fungsi  ribosom dalam  fase  perpanjangan  yang  akan menyebabkan ribosom salah menerjemahkan  kode  genetik  yang dibawa  oleh  RNA  sehingga  tidak  dapat terbentuk protein dan akan mengakibatkan  kematian  pada  bakteri (Sari,  2011)  Berdasarkan  mekanisme kerja  senyawa  tanin  terhadap  bakteri Salmonella  typhi maka,  senyawa  tanin dari  daun  mimba  ( Azzadirachta  indica ) dapat  mengakibatkan  efek  menghambat (Bakteriostatik)  dan  juga  membunuh bakteri (Bakteriosidal) (Madigan, 2003)

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian disimpulkan  bahwa  senyawa  tanin ekstrak  daun  mimba  ( Azzadirachta indica )    memiliki  aktivitas  antibakteri dengan  rentang  klasifikasi  kuat  sampai sangat  kuat  berdasarkan  klasifikasi Davis  &  Stout.  Zona  hambat  pada konsentrasi  15%,  30%,  50%,  75% berturut-turut  adalah  15.03  mm,  16.78 mm, 19.02 mm, 21.78 mm, 28.02 mm.

## Daftar Pustaka
Davis  WW, Stout TR. 2009. Disc Plate
Method of Microbiological Antibiotic Assay. Applied Microbiology 22(4): 659-665.
Darsana,  I.G.O.,  Besung,  I.N.K.,  dan Mahatmi,  H.  2012.  Potensi  daun Binahong  ( Anredera  cordifolia
( Tenore ) Steenis ) Dalam Menghambat Pertumbuhan bakteri Escherichia coli secara In Vitro. J. Indonesia  Medicus  Veterinus,  1
(3) ; 337-351.
Dewi  I,  Astuti  KW,  Warditiani,  N.K., 2013.  Skrining  fitokimia  ekstrak etanol  95%  kulit  buah  manggis (Garcinia  mangostana  L). Jurnal Farmasi Udayana .
Dyah Dkk, 2016, Identifikasi kandungan senyawa fitokimia minyak mimba
( Azzadirachta indica ), Jurnal Biologi, Vol.5(3): 5. Erni,  Y, Mahtuti.  2004.  Pengaruh Daya Antimikroba Asam Tanat Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Salmonella Typhi Secara In Vitro.
Universitas Airlangga Surabaya. Guyton,  Arthur.  C.  2007.  Buku  Ajar
Fisiologi  Kedokteran.  EGC  : Jakarta.
Horvart,  P.  J.  1981.  The  Nutrional  and
Eculogical  Significance  of  Acer Tanins  and  Related  Polyphenols.
Thesis. New York.
Katzung, B,G. 2007. Basic and Clinical Pharmacology. Farmakologi Dasar dan  Klinik.  Edisi  ke-10,  Salemba Medika. Jakarta.
Madigan,  M.  T.  Martinko,  J.  M.  dan
Parker, J. 2003. Brock Biology of Microorganism.  Southern  Illinois University Carbondale : Illinois. Mihra,. Minarmi, R.J., Purnama Ningsih.,  2018.  Analisis  Kadar Tanin Dalam Ekstrak Daun Mimba ( Azzadirachta Indica A.Juss )  Dengan  Pelarut  Air  Dan
Etanol.  Jurnal  Akademika  Kim,
Vol. 7 (4): 179-184. Moeloek,  F.  A.  2006.  Herbal  and Traditional    Medicine : National Perspectives  And  Policies  In Indonesia.  Jurnal  Bahan  Alam Indonesia. 5 (1) 293-297. Putu, P.S. Wiwik, S. R. Ni, M. P. 2015. Identifikasi  dan  Uji  Aktivitas
Senyawa Tanin dari Ekstrak Daun Trembesi ( Samanea saman (Jacq.) Merr) sebagai Antibakteri Escherichia  coli ( E.  coli ).  Jurnal
Kimia 9 (1) : 27-34.
Rachmawaty,  Farida  Juliantina  et  al. 2009. Manfaat Sirih Merah ( Piper crocatum )  Sebagai  Agen  Anti Bakterial  Terhadap  Bakteri  Gram
Positif dan Negatif. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia. Radji,  Maksum.  2011.  Buku  Ajar Mikrobiologi : Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran, Jakarta: EGC, pp.10- 12, 179-199. Rohma, A, 2011, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Mimba ( Azzadirachta  indica  A.  juss ) terhadap Bakteri Shigella dysentriae ,  Tidak  Diterbitkan, Malang:  Akademi Analis Farmasi dan  Makanan  Putra  Indonesia Malang.
Sari, F.P. dan S. M. Sari. 2011. Ekstraksi Zat Aktif Antimikroba dari Tanaman Yodium ( Jatropha multifida Linn ) sebgai Bahan Baku Alternatif Antibiotik Alami. Fakultas Teknik Universitas Diponegoro. Semarang. Senja, Yulia Rima, dkk. 2014. Perbandingan  metode  ekstraksi dan variasi pelarut terhadap rendeman dan aktivitas antioksidan  ekstrak  kubis  ungu ( Brassica oleracea L. var. capitata f.  rubra ). Journal  of  Faculty  Of Pharmacy  Universitas  Gadjah Mada, Vol 19 (1), 43-48.
Sugiharjo,  2007.    The  difference  of antibacterial effect of neem leaves and  stick  extracts.  International Chin Journal dental, Vol.7: 27-29.
Susmitha, S. Vidyamol, KK. Ranganayaki, P. 2013. Phytochemical extraction and antimicrobial properties of Azadirachta indica (neem). Global
Journal of Pharmacology.
Tri  Atmodjo,  P  dan    Triningsih,  E.M.
Besarnya Kasus Demam Tifoid di Indonesia  dan  Pola  Resisten Salmonella Typhi Terhadap Antibiotika.  Majalah  Kesehatan
Masyarakat  Indonesia.  5:261-263. 1998. Waidil  Anuar,.  Andi,  D.  Christine,  J. 2014.  Isolasi  Bakteri  Selulolitik dari Perairan Dumai. JOM FMIPA Vol.1 (2)