P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Cite this Sudjarwo, S., Emaz, Z. and Prawita, A. (2023) 'Determination of Quercetin Content in Preparation of Powder Extract of Starfruit Leaves ( Averrhoa bilimbi L.) by TLC-Densitometry', Berkala Ilmiah Kimia Farmasi , 10(1), pp. 1-6. DOI: 10.20473/bikfar.v10i1.51432.
Copyright: ©2023 by the authors. Submitted for possible open-access publication under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International (CC BY-SA) license
Determination of Queercetin Content in Preparation of Powder Extract of Starfruit Leaves ( Averrhoa bilimbi L.) by Tlc-Densitometry
Determinasi Kuersetin dalam Sediaan Serbuk Ekstrak Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dengan KLT-Densitometri
Sudjarwo Sudjarwo 1) * , Zulfiyah Emaz 1) , Amirudin Prawita 1)
1 Faculty of Pharmacy, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
*Corresponding author E-mail: sudjarwo@ff.unair.ac.id
Article History:
Received: November 10, 2023; Revised: November 21, 2023; Accepted: November 24, 2023; Online: November 28, 2023

## ABSTRACT
Quercetin was a flavonoid from Averrhoa bilimbi Linn. which had a variety of potential therapeutic uses. Therefore,  this  research  was  needed  to  determine  the  quercetin  content  in Averrhoa bilimbi L.’s  extract powder.  Method  validation  was  performed  to  ensure  that  an  analytical  method  met  the  criteria  and requirements of a good analysis method. Method validation used was the first category with parameters of selectivity, linearity, accuracy, and precision. The content of quercetin in Averrhoa bilimbi L.’s leaf was small, which required the parameters of Limit of Detection (LOD) and Limit of Quantitation (LOQ). The analysis method was by TLC-Densitometry with Silica gel 60 F 254 , eluent of toluene: ethyl acetate: formic acid (7:3:1) as the mobile phase with a resolution of 1,67 and 1,60, respectively. The results showed a linear regression of y = 8122,4899 x + 1181,9943 (r: 0,9976; Vxo 4,88%). The accuracy was 90,2% (w/w) ± 5,89; the  coefficient  of  variation  of  precision  was  1,35%;  LOD  and  LOQ  were  0,0064  µg,  and  0,0215  µg, respectively.  The  determination  result  showed  that  quercetin  content  in  the  leaf  extract  in  ethanol  of Averrhoa bilimbi L. was 0,58% (w/w) ± 0,04, and the determination of quercetin from 4,0 g extract powder of Averrhoa bilimbi L. leaf showed that the average content of quercetin was 6,05 ± 0,09 mg.
Keywords: Quercetin, Extract Powder, Averrhoa bilimbi L, TLC-Densitometry

## ABSTRAK
Kuersetin adalah flavonoid dari Averrhoa bilimbi Linn. yang memiliki berbagai potensi terapi. Penelitian ini  ditujukan  untuk  mengetahui  kandungan  quercetin  pada  serbuk  ekstrak Averrhoa  bilimbi L.  Validasi metode  analisis  dilakukan  untuk  memastikan  bahwa  metode  memenuhi  kriteria  dan  persyaratan diimplementasikan sebagai metode analisis yang baik. Metode validasi yang digunakan dalam penelitian ini  termasuk  kategori  pertama  dengan  parameter  selektivitas,  linearitas,  akurasi,  presisi.  Kandungan quercetin pada daun Averrhoa bilimbi L. kecil, sehingga diperlukan parameter batas minimum penentuan kadar dan batas kuantitasi. Metode analisis KLT-Densitometri dilakukan dengan menggunakan Silica gel GF 254 dan eluen toluena: etil asetat: asam format (7:3:1) sebagai fase gerak dengan masing-masing resolusi 1,67 dan 1,60. Hasil penelitian menunjukkan regresi linier sebesar y = 8122,4899 x + 1181,9943 (r : 0,9976; Vxo 4,88%). Akurasi yang dihasilkan 90,2% (b/b) ± 5,89; koefisien variasi ketelitian 1,35%; batas deteksi dan batas kuantitasi masing-masing adalah 0,0064 µg dan 0,0215 µg. Pada penentuan kadar kuersetin dari serbuk ekstrak daun Averrhoa bilimbi L di dalam etanol 0,58% (b/b) ± 0,04 dan penentuan kuersetin setiap dari  sediaan  4,0  g  serbuk  ekstrak  daun Averrhoa  bilimbi L.  menunjukkan  bahwa  rata-rata  kandungan kuersetin adalah 6,05 ± 0,09 mg.
Kata kunci: Kuersetin, Serbuk Ekstrak, Averrhoa bilimbi L, KLT-Densitometri

## PENDAHULUAN
Kuersetin   telah   diteliti   30   tahun   terakhir   yang mempunyai  efek  sebagai  antioksidan  yang  menghambat xhantin     oxidase    dalam     metabolisme     asam     urat (Lakhanpal et  al .,  2007).  Salah  satu  tanaman      yang mengandung  kuersetin  adalah Averrhoa  bilimbi Linn, atau  yang  lebih  dikenal  dengan  nama  belimbing  wuluh ( Gambar 1 ) (Lide, 2005).
Ekstrak    daun    belimbing    wuluh    mengandung flavonoid, saponin, triterpenoid, dan tannin (Hayati et al ., 2010).      Daun      belimbing      wuluh      mengandung myricetin,  luteolin,  dan  kuersetin  (Miean  &  Mohamed, 2001).   Kandungan   kuersetin   dalam   daun   belimbing wuluh  sebesar  1,67  mg/g  ( Gambar  2 )  (Rahman et  al ., 2013). Pada  penelitian  ini  akan  dibuat  minuman  herbal serbuk ekstrak daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ,
Linn) sehingga  memudahkan  untuk  dikonsumsi  sebagai minuman kesehatan. Untuk menjamin kualitas, efektifitas, khasiat, dan reprodubilitas,  maka  diperlukan penetapan  kadar  kuersetin dalam  sediaan  serbuk  ekstrak belimbing wuluh.
Gambar  1. Daun  Belimbing  Wuluh  dan  Tanaman  Belimbing Wuluh (Kumar et al ., 2013)
Gambar 2. Struktur molekul kuersetin (Sweetman, 2009)
Penetapan  kadar  kuersetin  menggunakan  metode Thin  Layer  Chromatography (TLC)  (Ćetković et  al .,
2003),  dimana  metode  tersebut  memiliki  beberapa keuntungan  diantaranya  dapat  memisahkan  beberapa senyawa  bahan  aktif,  sampel  yang  digunakan  sedikit, tidak  ada  gangguan  fase  gerak  (Munson,  1991), sederhana, cepat, dan murah (Striegel & Hill, 1996).
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menetapkan kadar  kuersetin  dalam  serbuk  ekstrak  daun  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ,  Linn)  dengan  metode  KLT- Densitometri.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat Densitometer (Shimadzu Dual Wavelength
Chromato  Scanner  CS  930),  lampu  UV  CAMAG, timbangan  analitik  (O’Hauss  Pioneer),  pelat  KLT  silica 60 GF 254 (Merck), bejana kromatografi 20x10x5 cm³, pipa kapiler, freeze  dryer (Model  FD-81  EYELA),  dan  alat gelas  lain  yang  biasa  digunakan  di  laboratorium  kimia analisis.

## Bahan
Standar  kuersetin pharmaceutical  grade (Sigma Aldrich),  aseton p.a (Mallinckroft  Baker),  methanol p.a (Merck),  sukrosa  (Gulaku),  avicel  pH  101,  etanol p.a , aquadestilata. Daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi , Linn) yang diperoleh dari Kebun Raya Purwodadi LIPI, Pasuruan Jawa Timur.

## Prosedur Kerja Pembuatan Simplisia
Daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ,  Linn) yang telah terkumpul dipisahkan dari kotoran atau bagian tumbuhan  lain  yang  tidak  diinginkan,  cuci  dengan  air, lakukan sortasi untuk dipilih yang masih berwarna hijau dan segar. Selanjutnya, daun dikeringkan pada suhu ruang
hingga  diperoleh  simplisia  kering,  dan  diserbuk  dengan menggunakan blender (Kresnanugraha, 2012).

## Penetapan Kadar Air
Daun Averrhoa  bilimbi, Linn.  ditimbang  pada timbangan analitik satu sampai dua gram zat dalam wadah yang telah ditara. Kemudian dikeringkan pada suhu 105ºC selama  5  jam  dan  timbang,  dikeringkan  lagi  pada  suhu yang  sama  dan  ditimbang  pada  jarak  1  jam  sampai perbedaan  antara  dua  penimbangan  berturut-turut  tidak lebih dari 0,25% (Depkes RI, 2000).

## Maserasi
Daun  simplisia  kering  direndam  dengan  aseton, kemudian didiamkan selama 5 hari. Selanjutnya, maserat dipisahkan  dengan  cara  filtrasi.  Kemudian  diuapkan dengan rotary vapour sampai diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan Larutan Baku Induk Kuersetin
Ditimbang  50,0  mg  kuersetin  standar,  dilarutkan dalam etanol hingga larut kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50,0 m dan tambahkan etanol sampai tepat.

## Formula Sediaan Serbuk
Ditimbang ekstrak daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi , Linn) sebanyak 1,1 gram, tambah dengan Avicel pH  101  (pengisi)  sedikit  demi  sedikit  sambil  digerus dalam  mortir  sampai  homogen.  Tambahkan  sukrosa sampai 4 g, campur sampai homogen.

## Preparasi Sampel
Serbuk  ekstrak  daun  belimbing  wuluh Averrhoa bilimbi Linn.  sebanyak  empat  gram  dilarutkan  dalam etanol p.a sampai  50,0  mL,  kemudian  dipipet  2,0  mL sebanyak enam kali, masing–masing ditambahkan 1,0 mL larutan  standar  kuersetin  200  ppm,  300  ppm,  400  ppm, 500 ppm, 600 ppm, dan 700 ppm dan tambahkan etanol 96% sampai batas tanda pada labu ukur 10,0 ml. Diambil 4,0  mL  uapkan  sampai  kering,  residu  dilarutkan  dengan 0,5  ml  etanol  96%,  ditotolkan  sebanyak  2  µL  pada lempeng KLT silika gel GF 254 , eluasi dengan fase gerak terpilih.  Diamati  area  pada  panjang  gelombang  terpilih menggunakan Densitometer.

## Validasi Metode Selektivitas
Serbuk 4,0 gram dilarutkan dalam etanol p.a sampai 50,0 mL, 3,0 mL larutan standar kuersetin 100 ppm, 3,0 mL larutan ekstrak, 3,0 mL larutan ekstrak ditambah 3,0 mL kuersetin standar 100 ppm, dan 3,0 mL larutan blanko (avicel PH 101 dan sukrosa) masing-masing dimasukkan ke  dalam  vial  dan  diuapkan  sampai  kering,  residu dilarutkan dengan 0,5 ml etanol p.a ., totolkan pada pelat KLT silika gel  GF 254 sebanyak 2 µL, eluasi dengan fase gerak di bawah ini.
Kloroform : Aseton : Asam Formiat (10 : 2 : 1) (Depkes RI, 2009) Toluen : Etil Asetat : Metanol (4 : 0,5 : 0,5) (Chandrappa et al ., 2014)
Toluen : Etil Asetat : Asam Formiat (5 : 4 : 1) (Hayun, 2010) Toluen : Etil Asetat : Asam Formiat (7 : 3 : 1) (Rohini & Kumar, 2011)
Setelah  dieluasi,  keringkan,  amati  dibawah  lampu UV dan amati kromatogramnya menggunakan Densitometer.

## Linieritas
Baku  kerja  kuersetin  standard  dengan  konsentrasi yang meningkat pada pelat KLT silika gel 60 GF 254 , eluasi dengan fase gerak terpilih sampai garis tanda. Noda yang dihasilkan  diukur  areanya  pada  panjang  gelombang terpilih dengan Densitometer.

## Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
Ditotolkan 2 µL kuersetin standard pada pelat KLT silika gel 60 F 254 , dengan konsentrasi 40 ng/µL sampai 75 ng/µL  dan  beberapa  totolan  dari  blanko,  eluasi  dengan fase  gerak  terpilih,  amati  areanya  pada  panjang gelombang terpilih menggunakan Densitometer.

## Akurasi
Satu  seri  larutan  standar  kuersetin  dengan  berat meningkat yaitu 80%, 100% dan 120% dari target dibuat, masing-masing  ditambahkan  larutan  ekstrak  daun belimbing wuluh Averrhoa bilimbi Linn. dengan volume yang  meningkat,  kemudian  ditambahkan  etanol p.a sampai 10,0 mL, ambil sebanyak 4,0 mL uapkan sampai kering,  larutkan  dengan  0,5  ml  etanol p.a .,  totolkan sebanyak 2 µL pada pelat KLT silika gel 60 F 254 , eluasi dengan  fase  gerak  terpilih,  amati  areanya  pada  panjang gelombang terpilih.

## Presisi Alat
Larutan kuersetin standard 1,000 µg ditotolkan 6 kali dengan menggunakan pipa kapiler 2 µL pada pelat KLT silica gel 60 F 254 , eluasi dengan fase gerak terpilih sampai garis  tanda,  amati  areanya  pada  panjang  gelombang terpilih.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pembuatan Simplisia
Simplisia  daun Averrhoa  bilimbi 5,209  kg  daun basah, dihasilkan simplisia daun Averrhoa bilimbi sebesar 1,501 kg.

## Pembuatan Ekstrak
Simplisia  dimaeserasi  dengan  aseton  sebanyak  3,0 liter  selama  5  hari  dan  didapatkan  filtrat  sebanyak  1,24 liter, selanjutnya diuapkan menggunakan Rotary Vapour diperoleh ekstrak kental sebanyak 40,2065 g.

## Penetapan  Kadar  Air  Simplisia  dan  Ekstrak  Daun Averrhoa bilimbi
Penetapan kadar air dilakukan pada simplisia, hasil maserasi  daun Averrhoa  bilimbi berdasarkan  metode gravimetri.  Hasil  penetapan  kadar  air  dapat  dilihat  pada Tabel 1 .
Rerata kadar air simplisia 12,07 (%; b/b), sedangkan hasil peneliti sebelumnya 8,8%.  Perbedaan kadar air ini dapat  disebabkan  oleh  perbedaan  proses  pengeringan simplisa Averrhoa  bilimbi .  Pada  kadar  air  ekstrak diperoleh  7,89  (%;  b/b).  Kadar  air  yang  tinggi  akan menyebabkan  bahan  menjadi  mudah  rusak  ketika disimpan  karena  adanya  pertumbuhan  mikroba  dan aktifitas  enzim  penyebab  kerusakan.  Batas  kadar  air
minimal  dimana  mikroba  dapat  tumbuh  adalah  14-15% (Hidayati, 2007).

## Validasi Metode Penentuan Panjang Gelombang Terpilih
Dari  pengamatan  spektra  dengan  menggunakan Densitometer tersebut dapat diperoleh panjang gelombang terpilih untuk kuersetin yaitu 265 nm ( Gambar
3 ).
Gambar 3. Spektra Ekstrak Daun Averrhoa bilimbi dan Standar Kuersetin. Keterangan: (a) Ekstrak daun Averrhoa bilimbi + Standar kuersetin; (b) Standar kuersetin; (c) Baseline ; (d) Ekstrak daun Averrhoa bilimbi

## Selektivitas
Fase  gerak  Toluen:  Etil  Asetat:  Asam  Formiat (7:3:1)  dapat  memisahkan  senyawa-senyawa  yang terkandung dalam ekstrak dengan baik dibandingkan fase gerak yang lain, karena mempunyai nilai Rs sebesar 1,67 dan 1,60 (syarat Rs ≥ 1,5) dan nilai Rf sebesar 0,26 ( Tabel
2 ).
Tabel 1. Kadar Air
Bahan Kadar air (%; b/b) Rata- rata (%;b/b) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Simplisia Daun Averrhoa bilimbi . 12,02 12,10 12,08 12,07 Ekstrak Daun Averrhoa bilimbi . 7,89 8,00 7,78 7,89
Tabel 2. Selektifitas
Fase Gerak Rf Std Rf Sampel Rs 1 2 Kloroform: Aseton: Asam Formiat (10 : 2 : 1) 0,30 0,30 - - Toluen: Etil Asetat: Metanol (4 : 0,5 : 0,5) 0,10 0,10 - - Toluen: Etil Asetat: Asam Formiat (5 : 4 : 1) 0,43 0,43 1,33 - Toluen: Etil Asetat: Asam Formiat (7 : 3 : 1) 0,26 0,26 1,67 1,60

## Linieritas
Linieritas  yang  diperoleh  y  =  8122,4899x  + 1181,9943 (r = 0,9976),  dimana nilai r hitung > r Tabel (0,811; n = 6) dan nilai V xo = 4,88%. Hal ini menunjukkan adanya  hubungan  linier  antara  konsentrasi  larutan kuersetin dengan area ( Gambar 4 ).
Linieritas  yang  diperoleh  dari  hasil  peneliti  lain dengan  rentang  konsentrasi  200-600  ng  menghasilkan persamaan garis y = 12,09x - 1082 (r = 0,999) (Pawar & Salunkhe,  2012).  Perbedaan  linieritas  ini  dapat disebabkan  oleh  proses  preparasi  dan  pengenceran  serta konsentrasi larutan baku tergantung.

## LOD dan LOQ
Dari  larutan  standar  kuersetin  pada  rentang  kadar 0,08460µg - 0,14728µg, diperoleh persamaan garis   y = 6255,00x  –  239,8389  (r  =  0,9837)  dan  dari  blanko diperoleh  Standar  Deviasi  (SD)  13,44,  sehingga  nilai LOD  dan  LOQ  masing  masing  adalah  0,0064  µg  dan
0,0064 µg.

## Presisi
Dari  hasil  perhitungan  presisi  diperoleh  KV  1,35% (persyaratan KV ≤ 2%), dapat dijelaskan bahwa  metode memiliki derajat keterulangan yang baik ( Tabel 3 ).

## Akurasi
Hasil persentase perolehan kembali berdasarkan cara adisi  baku  kuersetin  dengan  tiga  macam  kadar  yang berbeda, diperoleh hasil 90,28 (%; b/b) ± 5,89 ( Tabel 4 ).

## Penetapan  Kadar  Kuersetin  dalam  Ekstrak  Daun
Averrhoa bilimbi Linn Kadar  kuersetin  dalam  ekstrak  daun Averrhoa bilimbi perlu diketahui untuk menentukan jumlah ekstrak yang dibutuhkan dalam pembuatan sediaan serbuk. Dari hasil penetapan kadar, diperoleh rata-rata kadar kuersetin dalam ekstrak daun Averrhoa bilimbi L. adalah 0,5841 ± 6,93 (%; b/b) ( Tabel 5 ).

## Penetapan Kadar Kuersetin di dalam Sediaan Serbuk Ekstrak
Berdasarkan  hasil  penetapan  kadar  kuersetin  dalam sediaan serbuk diperoleh kadar rata-rata kuersetin sebesar 6,0538 mg ± 1,62 setiap 4 gram sediaan serbuk ( Tabel 6 ).

## PEMBAHASAN
Simplisia  daun  kering  belimbing  wuluh  dimaserasi dengan  menggunakan  pelarut  aseton  selama  5  hari. Dipilih cara maserasi merupakan salah satu cara ekstraksi yang paling sederhana untuk menarik zat-zat berkhasiat, termasuk  yang  tahan  pemanasan  (Istiqomah,  2013). Selanjutnya  dilakukan  penentuan  panjang  gelombang maksimum  standar  kuersetin  yang  memberikan  absorpsi maksimum pada panjang gelombang 265 nm. Sedangkan panjang gelombang maksimum menurut The Merck Index (2009)  sebesar  258  nm,  perbedaan  panjang  gelombang kurang dari 10 nm masih dianggap sama.
Linieritas  yang  diperoleh  y  =  8122,4899x  + 1181,9943  (r  =  0,9976),  dimana  nilai  r  hitung  >  r  tabel (0,811; n = 6) dan nilai V xo = 4,88%. Hal ini menunjukkan adanya  hubungan  linier  antara  konsentrasi  larutan kuersetin dengan area ( Gambar 4 ). Linieritas dari peneliti lain dengan konsentrasi 200-600 ng dengan y = 12,09x - 1082  (r  =  0,999)  (Pawar  &  Salunkhe,  2012).  Perbedaan linieritas ini tergantung dari konsentrasi yang dibuat oleh peneliti.
Dari  hasil  perhitungan  presisi  diperoleh  KV  1,35%
(persyaratan  KV  ≤  2%),  menunjukkan  metode  memiliki keterulangan yang baik. Data pustaka belum menyebutkan data presisi.
Pada  penentuan  LOD/LOQ,  dari  standar  kuersetin dengan  kadar  0,08460-0,14728  µg,  diperoleh  y  = 6255,00x  –  239,8389  (r  =  0,9837)  dan  dari  blanko
Gambar 4. Linieritas Kuersetin
Tabel 3 . Presisi Kuersetin
Kuersetin (µg) Area 1,026 8196,33 8131,80 8240,30 8372,36 8349,90 8104,53 Rata-rata 8232,70 Standar Deviasi (SD) 110,91 Koefisien Variasi (KV) 1,35%
Tabel 5 . Kadar Kuersetin di dalam ekstrak daun Averrhoa
bilimbi Linn
Replikasi Persen Kadar Air (%;b/b) Berat yang Ditimbang (g) Berat yang Diperoleh (g) Kadar (%;b/b) 1 7,89 0,2508 1,4256 x 10 -6 0,5684 2 7,89 0,2540 1,6269 x 10 -6 0,6405 3 7,89 0,2531 1,5454 x 10 -6 0,6106 4 7,89 0,2497 1,3975 x 10 -6 0,5597 5 7,89 0,2495 1,3506 x 10 -6 0,5413 Rata-rata 0,5841 SD 0,0400 KV 6,9300
Tabel 6 . Kadar Kuersetin di dalam Sediaan serbuk Ekstrak Replikasi Kadar Kuersetin (mg) 1 5,9922 2 5,9972 3 6,0188 4 6,2266 5 6,0344 Rata-rata 6,0538 SD 0,0980 KV 1,62 %
diperoleh  Standar  Deviasi  (SD)  13,44.  Sehingga  nilai LOD dan LOQ masing masing 0,0064 µg dan 0,0064 µg. Peneliti  atau  pustaka  lain  belum  ada  yang  melakukan LOD/LOQ.
Penentuan akurasi yang dilakukan dengan cara adisi baku  kuersetin  dengan  tiga  macam  kadar  yang  berbeda, diperoleh  hasil  90,28  ±  5,89  (%;  b/b)  ( Tabel  4 ),  dapat dijelaskan  akurasi  tersebut  memenuhi  persyaratan  80- 110%  (AOAC,  2012).  Peneliti  lain  tidak  ada  yang melakukan  uji  akurasi  sebelum  penetuan  kadar  senyawa bahan aktif.
Hasil  penentuan  akurasi  yang  telah  memenuhi persyaratan digunakan untuk menentukan kadar kuersetin dalam ekstrak daun Averrhoa bilimbi sebagai dasar untuk perhitungan  jumlah  ekstrak  yang  dibutuhkan  dalam pembuatan  sediaan  serbuk.  Dari  hasil  penetapan  kadar kuersetin di dalam ekstrak daun blimbing wuluh diperoleh rata-rata  kadar  kuersetin  dalam  ekstrak  daun Averrhoa bilimbi 0,5841%  (b/b)  ±  6,93.  Dilaporkan  peneliti  lain kadar  kuersetin  dalam  daun  blimbing  wuluh  1,67 mg/gram  (Rahman et  al .,  2013).  Perbedaan  ini  dapat disebabkan  oleh  perbedaan  perolehan  bahan  baku simplisia dan metode yang digunakan.
Dari formula sediaan serbuk ekstrak daun blimbing wuluh,  ditentukan  kadar  kuersetinnya  diperoleh  kadar rata-rata  kuersetin  sebesar  6,0538  mg  ±  1,62  setiap  4,0 gram  sediaan  serbuk,  yang  diharapkan  sesuai  dengan dosis sekali minum dari kuersetin.

## KESIMPULAN
Penetapan  kadar  kuersetin    di  dalam  ekstrak belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ,  Linn)  dapat menggunakan KLT-Densitometri.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim  (1983) The  Merck  Index,  An  Encyclopedia  of Chemicals  and  Drugs .  Ninth  Edition.  Rahway, New Jersey, USA: Merck and Co., Inc, p. 7936.
AOAC (2002) 'AOAC  Guidelines for Single Laboratory Validation  of  Chemical  Methods  for  Dietary Supplements and Botanicals'.
Cetkovic,  G.S.,  Dilas,  S.M.,  Canadanovic,  B.J.M.  and Tumbas, V.T. (2003) 'Thin-layer chromatography analysis  and  scavenging  activity  of  marigold ( Celendula  officinalis L.)  extracts', BIBLID ,  34, pp. 93-102.
Chandrappa,  C.P.,  Govindappa,  M.,  Anil  Kumar,  N.V.,
Channabasava, R., Chandrasekar, N., Umashankar, T. and Mahabaleshwara, K. (2014) 'Identification  and  Separation  of  Quercetin  from Ethanol Extract of Carmona Retusa', ISSN , 3(6), pp. 2020-2029.
Departemen  Kesehatan  RI  (2000) Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Jakarta:
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Hayati, K., Elok, F., Fasyah, A.G. and Sa’adah, L. (2010)
'Fraksinasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Tanin  pada Daun  Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)', Jurnal Kimia , 4(2), pp. 193-200.
Hayun,  Mun’im,  A.  and  Putri,  A.N.  (2010)  'Analisis Kuersetin  dan  Kurkuminoid  dalam  Tablet  Yang Mengandung Ekstrak Daun Jambu Biji ( Psidium guajava Linn)  dan  Rimpang  Kunyit  ( Curcuma domestica Val) Secara KLT-Densitometri', Jurnal Bahan Alam Indonesia , 7(2).
Istiqomah  (2013)  'Perbandingan  Metode  Ekstraksi Maserasi  dan  Sokletasi  Terhadap  Kadar  Piperin Buah  Cabe  Jawa  ( Piperis  retrofracti  fructus )', Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan Universitas  Islam  Negeri  Syarif  Hidayatullah Jakarta .
Kresnanugraha,  Y.  (2012)  'Uji  Penghambatan  Aktivitas Enzim  Xantin  Oksidase  dari  Ekstrak  Daun Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi Linn.)  dan Identifikasi Golongan Senyawa dari Fraksi Aktif', Depok, FMIPA Universitas Airlangga .
Kumar,  K.A.,  Gousia,  S.K.M.,  Anupama  and  Latha, J.L.N.  (2013)  'A  Review  on  Phytochemical Constituents  and  Biological  Assays of  Averrhoa bilimbi ', International  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Science Research , 3(4), pp. 136- 139.
Lakhanpal, P. and Kumar Rai, D.K. (2007) 'Quercetin: A Versatile Flavonoid', Internet Journal of Medical Update , 2(2).
Lide,  D.R.  (2005) CRC  Handbook  of  Chemistry  and Physics . New York: CRC Press LLC, p. 494.
Tabel 4 . Akurasi
Target Konsentrasi Replikasi Berat Kuersetin yang Diketahui (µg) Berat Kuersetin yang Diporoleh (µg) Persen perolehan kembali (%; b/b) 80% 1 307,8 281,3 91,39 2 304,8 264,6 86,81 3 307,2 255,3 83,11 100% 1 410,4 377,5 91,98 2 406,4 350,0 86,12 3 409,6 419,2 102,36 120% 1 513,0 437,5 85,28 2 508,0 482,4 94,96 3 512,0 460,2 90,59 Rata-rata 90,28 SD 5,89 KV 6,52%
Miean,  K.H.  and  Mohamed,  S.  (2001)  'Flavonoid Myricetin, Quercetin, Kaempferol, Luteolin, and Apigenin)  Content  of  Edible  Tropical  Plants', J. Agric. Food. Chem. , 49(6), pp. 3106-3112.
Munson,  J.W.  (1991) Analisis  Farmasi  metode  Modern . Surabaya:  Airlangga  University  Press,  pp.  126- 142.
Pawar, P.N. and Salunkhe, R.V. (2012) 'Development and Validation of HPTLC Method For Simultaneous
Estimation of Rutin And Quercetin in Hydroalcoholic  Extract  of  Triphala  Churna', International  Journal  of  PharmTech  Research , 4(4), pp. 1457-1463.
Rahman, M.M., Habib, R., Hasan, A., Amin, A.M., Saha, A.  and  Mannan,  A.  (2013)  'Comparative assessment  on  in  vitro  antioxidant  activities  of ethanol  extracts  of  Averrhoa  bilimbi,  Gymnema
sylvestre,  and  Capsicum  frutescens', Faculty  of Biological Sciences, University of Chittagong , pp. 4331.
Rohini,  R.M.  and  Kumar,  A.  (2011)  'Determination  of Lupeol,  B-Sitosterol,  and  Quercetin  from  Ethyl Acetate  Extract  of  Rhizophora  Mucronata  Bark by  HPTLC  Technique', Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research , 4(1).
Striegel,  M.F.  and  Hill,  J.  (1996) Thin-Layer Chromatography  for  Binding  Media  Analysis . Los Angeles: The Getty Conservation Institute.
Sweetman,  S.C.  (2009) Martindale  The  Complete  Drug
Reference . Thirty-sixth edition. London:
Pharmaceutical Press.