UJI TOKSISITAS AKUT DARI KOMBINASI EKSTRAK HERBA MENIRAN ( Phyllanthus niruri auct. Non L.), DAUN TEMPUYUNG ( Sonchus arvensis L.) DAN BIJI JINTEN HITAM ( Nigella sativa L.)
ACUTE TOXICITY TESTING OF EXTRACTS COMBINATION OF MENIRAN HERBS ( Phyllanthus niruri auct . Non L.), TEMPUYUNG LEAVES ( Sonchus arvensis L.) AND BLACK CUMIN SEEDS ( Nigella sativa L.)
Muhtadi * , Andi Suhendi, Nurcahyanti W., dan EM. Sutrisna Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta pmuhtadi@gmail.com

## ABSTRAK
Telah dilakukan uji toksisitas akut pada tikus jantan dan betina dari kombinasi ekstrak herba meniran  ( Phyllanthus  niruri  auct.  Non L.),  daun  tempuyung  ( Sonchus  arvensis L.)  dan  biji  jinten hitam  ( Coleus  ambonicus Lour).  Pengujian  dilakukan  dengan  cara  pemberian  sediaan  uji  yang berupa  kombinasi  ekstrak  dengan  formula  1,5  :  3  :  1,5  dosis  tunggal  dengan  peringkat  dosis sebagai  berikut:  dosis  I;  100  mg/kgbb,  dosis  II;  300  mg/kgbb,  dosis  III;  900  mg/kgbb,  dosis  IV; 2.700 mg/kgbb dan dosis V; 8.100 mg/kgbb.  Kemudian dilakukan pengamatan gejala-gejala klinis yang  timbul,  perubahan  berat  badan  per  minggu  dan  histopatologi  organ-organ  vital  yaitu:  hati, ginjal,  lambung,  usus,  limfa,  jantung  dan  paru-paru.  Pengamatan  dilakukan  selama  14  hari.  Dari hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  dosis  tertinggi  hingga  8100  mg/kgbb  dari  kombinasi ekstrak tersebut hampir tidak toksik terhadap tikus putih betina dan jantan galur SD.
Kata kunci : uji toksisitas akut; kombinasi ekstrak; tikus jantan dan betina galur SD.

## ABSTRACT
Acute  toxicity  testing  were  conducted  in  male  and  female  rats  of  extracts  combination  of meniran herbs ( Phyllanthus niruri auct. Non L.), tempuyung leaves ( Sonchus arvensis L.) and black cumin seeds ( Nigella sativa L.).  Examination was done by preparation of the  extract combinations with the formula 1.5: 3: 1.5 single dose to rank the following doses I-V: (100 mg / kg bw, 300 mg / kg  bw,  900  mg  /  kg  bw,  2700  mg  /  kg  bw    and  8100  mg  /  kg  bw).  Then,  the  observed  clinical symptoms  arised,  changing  body  weight  per  week  and  histopathology  of  vital  organs  were:  liver, kidney,  stomach,  intestine,  spleen,  heart  and  lungs.  Observations  were  made  for  14  days.  The research  can be concluded that the highest dose of up to 8100 mg / kg of the extract combination hardly toxic to male and female white mice strain SD.
Key word : acute toxicity testing, extracts combination, male and female white mice strain SD

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara terkaya di dunia  dalam  kekayaan  hayati,  dengan  luas yang ‘hanya’ 1,3% dari luas total daratan dunia, Indonesia  dianugerahi  dengan  kekayaan  alam yang  beraneka  ragam,  baik  tumbuhan,  ikan, ampibi  dan  hewan-hewan  lainnya.  Potensi kekayaan  tumbuhan  dapat  dimanfaatkan  untuk menunjang  berbagai  macam  kebutuhan  hidup manusia,  terutama  dalam  bidang  obat-obatan dari  tumbuhan.  Pada  kenyataannya  ramuan dari tumbuhan tersebut masih banyak dimanfaatkan serta  memberi andil pada pemeliharaan kesehatan masyarakat.
Hasil  penelitian  pendahuluan  oleh  Tim Peneliti,  terbukti  bahwa  dekokta  daun  salam pada  dosis  1,25  g/kg  BB  mampu  menurunkan kadar  asam  urat  dalam  darah  mencit  putih jantan  secara  efektif  (Handadari,  2007)  dan infusa  daun  Salam  pada  dosis  2,5  g/kg  BB
mampu  menurunkan  kadar  asam  urat  yang setara  dengan  allopurinol  dosis  10  mg/kg  BB (Ariyanti,  2007).  Ada  pula  penelitian  yang menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol herba  meniran  ( Phyllanthus  niruri L . )  dapat menurunkan  kadar  asam  urat  ayam  leghorn jantan  yang  dibuat  hiperurisemia  dengan  diet purin tinggi (jus hati ayam) (Susanti, 2005).
Banyak  penelitian  menemukan  meniran sebagai immunostimulator, yang sangat dibutuhkan  oleh  penderita  penyakit-penyakit infeksi, juga berkhasiat sebagai antioksidan dan antineoplastik  (antikanker).  Selain  itu  juga berkhasiat  sebagai  imunoterapi  atau  terapi pendamping obat-obat kanker lainnya (Novalina, 2003).
Berdasarkan pengujian praklinik sebelumnya  secara in  vivo pada  mencit, tentang aktivitas antihiperurisemia dari beberapa  tumbuhan  obat  asli  Indonesia,
diperoleh  hasil  bahwa  kombinasi  ekstrak Meniran-Tempuyung-Jinten  Hitam  merupakan salah  satu  kombinasi  yang  cukup  poten  dalam menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  darah mencit yang diinduksi dengan potasium oksonat  (Muhtadi  dkk,  2010).  Oleh  karena  itu, ramuan  dari  ekstrak  tanaman  tersebut memiliki prospek  untuk  dikembangkan  menjadi  produk obat  herbal  atau  fitofarmaka  sebagai  obat  anti hiperurisemia.  Untuk  mendapatkan  data  yang lebih  lengkap  dan  potensi  pemanfaatannya sebagai  obat antihiperurisemia, perlu  dilakukan penelitian  toksisitas  untuk  melengkapi  data tingkat keamanan dalam penggunaannya.
Tulisan  ini  akan  melaporkan  hasil  uji toksisitas  akut  untuk  mengamati  efek  samping atau  tingkat  keamanan  ekstrak  dalam  jangka pendek penggunaan. Uji toksisitas akut dilakukan  dengan  menggunakan  parameter LD 50 untuk  mendapatkan  dosis  penggunaan yang  aman,  dilanjutkan  dengan  pemeriksaan histopatologi organ-organ tubuh yang vital yaitu hati,  ginjal,  lambung,  usus,  limfa,  jantung  dan paru-paru, untuk mengetahui derajat kerusakan yang  mungkin  ditimbulkan  akibat  pemakaian obat dalam jangka waktu tertentu.

## METODE PENELITIAN
Alat :  mikro  pipet  kepekaan  0,001  ml, timbangan  digital  kepekaan  0,1  g,  sonde lambung, kapas, tabung Erlenmeyer, seperangkat  alat  ekstraksi  untuk  penyediaan ekstrak bahan.
Bahan :  Ekstrak  methanol  daun  salam, tempuyung  dan  biji  jinten  hitam  yang  diperoleh dari  hasil  uji  praklinik  sebelumnya,  tikus  jantan dan  betina  galur Sprangue  Dawley dengan berat  badan  175 25  g,  makanan  dan minuman tikus, larutan NaCl fisiologis,

## Uji Toksisitas Akut
Uji  toksisitas  ini  dilakukan  terhadap  tikus jantan  dan  betina  galur Spring  Dawle dengan berat  badan  175 25  g.  Masing-masing kelompok  terdiri  atas  5  ekor.  Setiap  kelompok diberi perlakuan  dengan  pemberian  sediaan  uji pada  dosis  tunggal  ( single  dose ),  dengan prosedur sebagai berikut:
1.  Hewan  uji  dikelompokkan  menjadi  5 kelompok dengan
masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus jantan dan 5 ekor tikus betina.
2.  Ditimbang  berat  badan  masing-masing hewan uji.
3.  Ditentukan  peringkat  dosis  sediaan  uji, pada  tahap  awal  mengacu  dosis  lazim dari uji toksisitas in vitro kemudian dilakukan uji pendahuluan  untuk  orientasi  dosis  dimana dosis maksimum yang masih dapat diberikan atau dosis yang telah menyebabkan  sebagian  (50%)  hewan  uji mati  ditetapkan  sebagai  dosis  tertinggi kemudian dosis tersebut diturunkan
berdasarkan  faktor  logaritmik  atau  rasio tertentu  sedemikian  hingga  memberikan efek dari 0% sampai 100%. 4.  Ditentukan  LD 50, yaitu  besar  dosis  yang menyebabkan  kematian  (dosis  letal)  50% hewan  coba,  karena  itu  perlu  diberikan dosis  yang  menyebabkan  kematian  >  50% hewan  coba,  bila  tidak  dapat  ditentukan LD 50 maka  diberikan  dosis  lebih  tinggi sampai dosis tertinggi yaitu dosis maksimal yang secara teknis masih mungkin diberikan pada hewan coba. 5.  Pemberian  sediaan  uji  pada  hewan  coba dilakukan sesuai dengan cara
penggunaannya  yaitu  secara  peroral  dosis tunggal.
6.  Pengamatan  hewan  coba  sudah  dimulai sejak  masa  persiapan  sebelum  diberikan perlakuan  (fase  penyesuaian  hewan  coba terhadap  situasi  dan  kondisis  pelaksanaan eksperimen). Pengamatan dilakukan secara  intensif,  cermat,  dengan  frekuensi dan  selama  jangka  waktu  tertentu.  Jangka waktu pengamatan  yang lazim adalah 7-14 hari.
7.  Kriteria pengamatan meliputi:
a.  Gejala klinis (perilaku, gerakan, kepekaan  terhadap  rangsang,  ukuran pupil,  pernafasan,  kelopak  mata,  bola mata, diare dan keadaan umum).
b.  Perubahan berat badan.
c.  Jumlah  hewan  coba  yang  mati  pada masing-masing kelompok.
d.  Histologi  organ  hati,  ginjal,  lambung, jantung, paru-paru, usus dan limfa.
Masa  pengamatan  gejala  klinis  dilakukan selama  3  jam  sejak  perlakuan  sediaan  uji, sedang  pengamatan  jumlah  hewan  coba yang  mati  dilakukan  sampai  dengan  24 jam.
8.  Hewan  coba  yang  bertahan  hidup  sampai batas  akhir  masa  pengamatan  juga  perlu dihistologi. Hewan coba yang menunjukkan gejala efek toksik namun tidak dikorbankan bermanfaat  untuk  diamati  terjadi  tidaknya pemulihan.
9.  Hasil  pengamatan  dianalisis  statistik.  Dari jumlah  hewan  yang  mati  pada  masing- masing  kelompok,  dihitung  nilai  LD 50 menurut cara: Metode kertas grafik logaritma Farmakope Indonesia.
10.  Perhitungan  LD50  menurut  Farmakope Indonesia: m = a- b (∑pi-0,5) dengan syarat: a.  Menggunakan seri dosis dengan pengenceran kelipatan tetap b.  Jumlah hewan percobaan tiap kelompok harus sama
c.  Dosis  diatur  sedimikian  rupa  sehingga memberikan  efek  dari  0%  sampai 100%  dan  perhitungan  dibatasi  pada kelompok  percobaan  yang  memberi efek dari 0-100%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Peringkat Dosis Ekstrak Uji Peringkat dosis uji toksisitas akut kombinasi  ekstrak  meniran,  tempuyung  dan jinten  hitam  dengan  formulasi  1,5  :  3  :  1,5 dalam penelitian ini dibagi menjadi 5 (lima) seri dosis  untuk  masing-masing  kelompok  terdiri dari  5  ekor  tikus  jantan  dan  5  ekor  tikus  betina galur SD. Peringkat dosis tersebut adalah:
Dosis I : 100 mg/KgBB Dosis II : 300 mg/KgBB Dosis III : 900 mg/KgBB Dosis IV
: 2,70   g/KgBB Dosis V : 8,10   g/KgBB

## Pengamatan Kualitatif Gejala Klinis
Pengamatan  gejala  klinik  yang  dilakukan meliputi:  aktivitas  gerak,  kejang,  reflek  kornea, muntah,  perilaku,  dan  reflek  badan.  Hasil pengamatan  untuk  tikus  betina  dan  jantan terlihat pada tabel 1. Secara kualitatif tidak ada perubahan  yang  signifikan  antara  sebelum perlakuan dan 14 hari setelah perlakuan. Hal ini berarti bahwa pemberian kelima peringkat dosis kombinasi  3  ekstrak  tidak  menyebabkan timbulnya gejala-gejala toksik selama penelitian berlangsung.
Tabel 1- Hasil Pengamatan Gejala Klinik Tikus Betina dan Jantan Akibat Pemberian Sediaan Uji Selama 14 Hari
Kelompok Perlakuan Dosis Sediaan Uji (mg/kgBB) Jumlah Hewan Uji Gejala Toksik yang Timbul I 100 10 aktif II 300 10 aktif, agresif terhadap peneliti III 900 10 Aktif, agresif terhadap peneliti, ada beberapa bulunya mudah rontok dan sedikit berdiri IV 2700 10 bulu berdiri, perilaku semakin aktif, agresif terhadap peneliti ,vokalisasi, ada beberapa tikus bulunya mudah rontok V 8100 10 bulu berdiri, ada beberapa tikus bulunya mudah rontok, perilaku pasif bermalas-malasan ada juga beberapa yang aktif dan feses agak lembek dan sebagian ada yang mencret
Perkembangan  Berat  Badan  Dan  Jumlah Hewan Uji Mati Berdasarkan
hasil pengamatan perkembangan  berat  badan  dan  jumlah  hewan uji  yang  mati  menunjukkan  bahwa  dengan pemberian  ekstrak  uji  dosis  tunggal  secara peroral  pada  tikus  sampai  dengan  dosis maksimal  yang  dapat  diberikan  secara  teknis pada  hewan  uji  yaitu  8100  mg/kgBB  ternyata tidak  menimbulkan  kematian  pada  hewan  uji dari  seluruh  kelompok,  sehingga  potensi ketoksikan  akut  ekstrak  uji  tidak  dapat ditentukan.  Oleh  karena  itu,  untuk  penentuan
potensi  ketoksikan  akut  dapat  digunakan  nilai LD 50 semu,  yaitu  nilai  dosis  tertinggi  yang secara  teknis  masih  dapat  diberikan  pada hewan  uji.  Jadi  nilai  LD 50 sediaan  kombinasi ekstrak  meniran,  tempuyung  dan  jinten  hitam secara  oral  dosis  tunggal  untuk  tikus  lebih besar  dari  8100  mg/kgBB.  Hasil  tersebut mempunyai  makna  toksikologi  bahwa  potensi ketoksikan  akut  ekstrak  uji  menurut  kriteria Loomis (1978) termasuk dalam kategori  praktis tidak toksik. Jumlah hewan uji yang mati padac pemberian  ekstrak  tabel  2  di  bawah  ini:
Tabel 2- Hasil pengamatan jumlah hewan uji yang mati setelah selama 14 hari  setelah pemberian sediaan ekstrak uji secara oral
Kelompok Dosis Sediaan Uji (mg/kgBB) Jumlah Hewan Uji Jumlah Hewan Uji yang Mati Respon (%) LD 50 Semu I 100 10 0
0 > dosis
tertinggi 8100 mg/kgBB
II
300 10 0 0 III 900 10 0 0 IV 2700 10 0 0 V 8100 10 0 0

## Histopatologi Organ
Hasil  pengamatan  secara  makroskopik terhadap organ-organ vital diantaranya jantung, paru-paru, ginjal, hati, lambung, usus dan limfa tidak menunjukkan adanya perubahan- perubahan  yang  menandakan  terjadinya  efek toksik terhadap organ. Hal ini dapat membuktikan bahwa kombinasi ekstrak
meniran,  tempuyung  dan  jinten  hitam  dengan dosis  tertinggi  secara  teknis  dapat  diberikan secara  oral  yaitu  8100  mg/kgBB  belum menimbulkan  efek  toksik  terhadap  tikus  putih galur SD.
Hasil pengamatan  mikroskopik  juga menunjukkan  sel-sel  organ  masih  normal. (panah Gambar 1)
Gambar 1- Hasil histologi organ tikus setelah 14 hari pengamatan Keterangan: a. Limfa, b. Usus, c. Ginjal, d. Jantung, e. Hati, f. Paru-paru dan g. Lambung

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  analisis  uji  toksisitas akut  terhadap  kombinasi  ekstrak  air  meniran, tempuyung  dan  jinten  hitam  dengan  formula
kombinasi  1,5:3:1,5  dapat  dikatakan  hampir tidak  toksik  untuk  pemberian  dosis  tunggal dengan LD 50 semu sebesar 8100 mg/kgbb.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyanti, R., 2007, Pengaruh Pemberian Infusa Daun Salam (Eugenia Polyantha Wight) Terhadap Penurunan  Kadar  Asam  Urat  Darah  Mencit  Putih  Jantan  Yang  Diinduksi  Dengan  Potasium Oksonat, Skripsi , Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Dalimartha,  S.,  2000,  A tlas  Tumbuhan  Obat  Indonesia ,  Jilid  I,  Cetakan  I,  Trubus  Agriwidya, Jakarta.
Handadari,  H.R.,  2007,  Pengaruh  Pemberian Decocta Daun  Salam  ( Eugenia  Polyantha Wight) Terhadap  Penurunan  Kadar  Asam  Urat  Darah  Pada  Mencit  Putih  ( Mus  Muculus )  Jantan Hiperurisemia, Skripsi , Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Jonosewojo,  A.,  2007,  Implementasi  Obat  Alam  Indonesia  dalam  Pelayanan  Kesehatan  Formal dan Alternatif, Makalah Seminar Nasional , Fak. Farmasi – UMS, 10 Maret 2007, 31-36.
Loomis,T., 1978. Essential  of  Toxicology , 3rd edition, Lea & Febriger, Philadelphia.
Ma’at,  S., 2003, Pengembangan Industrialisasi Fitofarmaka untuk Pelayanan Medis di Indonesia , Seminar Nasional, Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Muhtadi, Sutrisna, Wahyuningtyas dan Suhendi, 2010, Pengembangan Agen Fitoterapi Asam Urat dari  Beberapa  Tumbuhan  Obat  Insonesia  untuk  Peningkatan  Kapasitas  Bahan  Alam  menjadi Produk  Obat  Herbal  Terstandar  (OHT) ,  Penelitian  Rapid  yang  belum  dipublikasikan,  UMS, Surakarta.
Novalina,  2003,  Penggunaan  tanaman  obat  sebagai  upaya  alternatif  dalam  terapi  kanker. Pengantar ke Falsafah Sains, PPS Institut Pertanian Bogor, Bogor
Sudarsono, Gunawan, D.,  Wahyuono, S., Donatus, A. I., dan Purnomo., 2002, Tumbuhan Obat II Hasil Penelitian, Sifat-sifat dan Penggunaan, Pusat Studi Obat Tradisional, UGM, Yogyakarta.
Susanti,  A.,  2005,  Pengaruh  pemberian  ekstrak  maserasi  etanol  70%  herba  meniran  (Phyllantus niruri  L.,  )  terhadap  kadar  asam  urat  serum  darah  ayam  leghorn  jantan  hiperurisemia, Skripsi , Surakarta
Wijayakusuma,  H.,  2002, Tumbuhan  Berkhasiat  Obat  Indonesia  Rempah,  Rimpang  dan  Umbi. Prestasi Instan Indonesia, Jakarta.
a c b f d g e d b