AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK SPONS Theonella swinhoei PADA

## MIKROBA PATOGEN MANUSIA
Desy Arianti Lamatenggo 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Herny E. I. Simbala 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado,  95115

## ABSTRACT
Sponges  are  marine  organisms  which  have  considerable  potential  ini  producing  active compounds. Theonella swinhoei it self is  often found  in tropical regions  where the  Bay  of Manado  is in the  area.  The  aim  of  this  study  was  determine  the  antimicrobial  activity  of Theonella  swinhoei extract obtained  from  Manado  bay  against Staphylococcus  aureus , Eschericia  coli ,  and Candida  albicans. The sampels  were  extracted  by  maceration  and  fractionation  using  ethanol,  methanol,  choloroform  and  n- hexane  solvents.  Antimicrobial  activity  was  carried  out  using  agar  diffusion  method  (Kiby  and  Bauer). The  results  showed  that  crude  ethanol  extract,  methanol  fraction,  chloroform  fraction,  and  n-hexane fraction were effective in inhibiting the microbes of Staphylococcus aureus , Eschericia coli , and Candida albicans. Crude  extract  of  ethanol,  Chloroform  fraction  and  methanol  fraction  are  categorized  moderate against  all  microbe,  but  for  n-hexane  fraction  are  categorized  strong  against Candida  albicans microbe based on David and Stout theory.
Keywords : Theonella  swinhoei ,  Antimicrobial, Staphylococcus  aureus , Eschericia  coli , Candida albicans

## ABSTRAK
Spons  merupakan  organisme  laut  yang  memiliki  potensi  cukup  besar  dalam    menghasilkan senyawa  aktif. Theonella  swinhoei sendiri  sering  ditemukan  di  daerah  tropis  di  mana  Teluk  Manado berada  dalam  kawasan  tersebut.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  antimikroba dari  ekstrak Theonella  swinhoei yang  diperoleh  dari  teluk  manado  terhadap  miroba  uji Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli, dan Candida  albicans .  Sampel  diekstraksi  secara  maserasi  dan  di  fraksinasi menggunakan pelarut etanol, metanol, kloroform, dan n-heksan. Aktivitas antimikroba dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  agar  (Kiby  dan  Bauer).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar etanol,  fraksi  metanol,fraksi  kloroform,  dan  fraksi  n-heksan  efektif  menghambat  mikroba  uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, dan Candida  albicans. Untuk  eksrak  kasar  etanol,  fraksi kloroform dan fraksi metanol di kategorikan sedang terhadap semua mikroba, tetapi untuk fraksi n-heksan dikategorikan kuat terhadap mikroba Candida albicans berdasarkan teori Davis and Stout.
Kata  Kunci : Theonella  swinhoei, Antimikroba, Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, Candida albicans .

## PENDAHULUAN
Biota  laut  memiliki  potensi  yang  sangat besar dalam menghasilkan senyawa- senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai bahan  baku  obat.  Sejak  tahun  1980, perhatian dunia pengobatan mulai terarah ke biota laut yang diketahui dapat menghasilkan  senyawa  aktif    salah  satunya adalah spons (Ismet, 2007).
Spons  merupakan  organisme  laut  yang memiliki  potensi  cukup besar  dalam menghasilkan  senyawa  aktif.    Didunia diduga terdapat sekitar 10.000 spesies spons dan  diperkirakan  sekitar  200  spesies  hidup diekosistem terumbu karang  Asia Tenggara. Spons dilaporkan memiliki aktivitas antikanker,  antimikroba,  dan  antiparasit (Dahuri et al ., 1998).
Mikroba  patogen  merupakan  salah  satu penyebab  penyakit  pada  manusia  dan makhluk  hidup  lainnya.  Banyak  usaha  yang telah dilakukan untuk mengantisipasi pengaruh  mikroba  patogen  tersebut  yaitu dengan  menemukan  senyawa  kimia  yang dapat menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri (Juariah, 2014).
Melihat  komponen  bioaktif  serta  lokasi penyebarannya  maka  peneliti  tertarik  untuk melakukan  penelitian  aktivitas  antimikroba dari spons Theonella swinhoei yang terdapat di perairan Teluk Manado.

## METODE PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  ialah  eksperimental laboratorium  yang  akan  menguji  aktivitas antimikroba  ekstrak Theonella  swinhoei yang diperoleh dari Teluk Manado.
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Januari  2018-Mei  2018  di  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program  Studi Farmasi  Fakultas  Matemarika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas sam
Ratulangi  dan  Laboratorium  Mikrobiologi Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas sam Ratulangi.

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  masker,  gunting,  sarung  tangan, pisau, snorkel, fins, tabung oksigen,
Erlenmeyer  (Pyrex),  gelas  ukur  (Pyrex), gelas  ukur  (Pyrex),  gelas  kimia  (Pyrex), tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes, bunsen, micro tubes, cawan petri, timbangan analitik  (Kern),  corong  pisah,  kertas  saring, batang pengaduk, rotary evaporator (Steroglass),  pinset, incubator  incucell (N- Biotek),  autoklaf  (autoklaf  KT-30s),  mikro pipet, Laminary  air  flow (Clean  Bench), kertas  label,  cakram  (paper  disk), tissue , aluminium  foil ,  mistar  berskala,  vial,  dan kamera (canon).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  ascidian
Theonella swinhoei , mikroba uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli , dan Candida albicans, etanol 96%, akuades, metanol,  n-heksan,  kloroform, Nutrient agar , potato  dextrose  agar ,  siprofloksasin paper disc .

## Pengambilan Sampel
Sampel  spons Theonella  swinhoei diambil dari perairan pulau Siladen dengan menggunakan  alat  bantu  (masker  renang, snorkel,  tabung  oksigen  dan  fins).  Sebelum sampel  di  ambil  sampel  difoto  terlebih dahulu,  kemudian  sampel  diambil  dan
dimasukkan  ke  dalam  kantong  plastik,  dan kemudian  sampel  dibawah  ke  Laboratorium Fitokimia  dan  Farmakognosi  Program  Studi
Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam
Ratulangi  untuk  diteliti.  Kemudian  sampel di  potong  kecil-kecil,  lalu  dimasukkan kedalam botol setelah itu sampel langsung di ekstraksi  dengan  menggunakan  metode maserasi  dengan  etanol  96%.  Sebagian  dari sampel  di  simpan  dalam  vial  untuk diawetkan  sebagai voucher dan  diberi  label serta  nomor  sampel,  untuk  selanjutnya dideterminasi.
Ekstraksi Ekstrak  spons Theonella  swinhoei sebanyak 1265 g dibuat dengan cara maserasi. sampel dipotong  kecil-kecil  dimasukkan  kedalam botol,  kemudian  sampel  direndam  dengan menggunakan  larutan  etanol  96%  sampai sampel  teremdam  semuanya,  dan  dibiarkan selama  1x24  jam.  Sampel  yang  direndam kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring  hingga  menghasilkan  filtrat  1  dan debris  1.  Debris  1  kemudian  ditambahkan dengan larutan etanol 96% sampai terendam semuanya  dan  dibiarkan  selama  1x24  jam, sampel  yang  direndam  kemudian  disaring dengan  menggunakan  kertas  saring  hingga menghasilkan filtrat 2 dan debris 2. Debris 2 kemudian  ditambahkan  dengan  larutan etanol  96%  sampai  terendam  semuany  dan dibiarkan  selama  1x24  jam,  sampel  tersebut lalu  disaring  dengan  menggunakan  kertas saring  hingga  menghasilakan  filtar  3  dan debris  3.  Filtrat  1,  2  dan  3  dicampurkan menjadi  satu  kemudian  disaring lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering  dan  ditimbang  menggunakan timbangan  analitik  dan  didapatkan  ekstrak
kasar  etanol  sampel  sebanyak  45,1351  g. selanjutnya  ekstrak  kasar  etanol  sampel digunakan untuk fraksinasi dan uji antimikroba.

## Fraksinasi
Ekstrak  kasar  etanol  spons Theonella swinhoei sebanyak  25  g  dimasukkan kedalam  Erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol  80%  sebanyak  200  mL. Setelah  larut,  dimasukkan  kedalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n-heksan sebanyak 200 mL. Setelah itu dikocok dalam corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  lapisan  metanol  dan heksan.  Masing-masing  lapiran  kemudian ditampung  pada  wadah  berbeda.  Lapisan heksan  kemudian  di  evaporasi  dengan menggunakan rotary  evaporator hingga kering  dan  ini  dinamakan  Fraksi  n-Heksan. Selanjutnya  lapisan  MeOH  ditambahkan dengan  akuades  sebanyak  200  mL  dipartisi dengan pelarut kloroform sebanyak 400  mL dalam  corong  pisah,  setelah  itu  dikocok berulang  kali  hingga  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan MeOH  dan  lapisan  Kloroform.  Masing- masing lapisan ditampung pada wadah yang berbeda.  Lapisan  Kloroform  dalam  wadah selanjutnya di evaporasi dengan menggunakan rotary  evaporator hingga kering lalu di timbang. Ini dinamakan fraksi Kloroform. Lapisan MeOH  yang ditampung pada wadah yang lain kemudian dievaporasi berulang  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang  berat  sampel. Ini  dinamakan  fraksi  MeOH.  Ketiga  fraksi yang  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian antimikroba.
Pembuatan Media dan Pengujian Antimikroba

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian aktivitas  antimiroba  ini  distrerilkan  terlebih dahulu.  Alat-alat  gelas  disterilkan  dengan autoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit, pinset dibakar dengan pembakaran diatas api langsung  dan  media  disterilkan  diautoklaf pada  suhu  121  ˚C  selama  15  menit  (Ortez, 2005).
Pembuatan Media
Media Nutrient Agar (NA) Sebanyak 3,36 gram nutrien agar ditambahkan aquades sampai 120 ml diaduk sampai homogen. Media tersebut disterilkan di  dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama 15 menit,kemudian dipindahkan pada cawan petri dan didinginkan (Nuraina, 2015).

## Kultur Mikroba
Media cair yang sudah disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing- masing  mikroba  yang  sudah  dikultur ( Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli dan Candida  albicans )  sebanyak  100  µL kedalam  tabung  reaksi  yang  berbeda.  Tutup masing-masing tabung reaksi dengan aluminium  foil    dan  dimasukkan  kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Pengujian Antimikroba Pembuatan Suspensi Mikroba Uji
Mikroba  yang  telah  diinokulasi  diambil dengan jarum ose steril kemudian disuspensikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi 10  mL  larutan NaCl 0.9%, setelah  itu divortex hingga  diperoleh  kekeruhan  yang sama dengan larutan Mc . Farland Perlakuan yang sama dilakukan pada jamur uji lainnya (Dwyana et al ., 2012).
Pembutan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  dengan  cara  ditimbang ekstrak  kasar  etanol  dari  spons Theonella swinhoei sebanyak 1 mg, kemudian dilarutkan  dalam  200  μl  akuadest  sehingga menghasilkan konsentrasi larutan uji sebesar 250μg/50μl (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian  aktivitas antimikroba  ini  menggunakan ciprofloxacin paper  disc .  Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200 μL metanol kemudian ditotolkan pada paper disc.

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  metode  difusi  agar  ( disc  diffusion
Kirby and Bauer ). Aktivitas penghambatannya diuji terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923
(bakteri  Gram  positif), Eschrichia  coli ATCC  25922  (bakteri  Gram  negatif)  dan
Candida albicans ATCC 1231 (jamur), yang digunakan sebagai mikroorganisme uji. Pada pengujian  aktivitas  antimikroba  ini,  cakram ( paper  disc) yang  digunakan  berukuran  6 mm. Suspensi mikroba kemudian diinokulasikan ke dalam media dan dihomogenkan. Kemudian  media  yang telah diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke  dalam cawan  petri  dan  tunggu  sampai  media memadat. Masing-masing cawan petri diberi label dan nomor sampel yang sesuai. Sampel yang  telah  ditentukkan  konsentrasinya (250μg/50μL)  ditotolkan  pada  masing- masing cakram dengan menggunakan mikropipet.  Letakkan  kertas  cakram  yang telah  ditotolkan  sampel  uji  dengan  pinset
kedalam  cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama 1 x 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengukuran dan Penetapan Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24  jam masa  inkubasi.  Zona  bening  merupakan petunjuk  kepekaan  mikroba  terhadap  bahan antimikroba  yang  digunakan  sebagai  bahan uji  yang  dinyatakan  dengan  lebar  diameter zona  hambat  (Vandepite,  2005).  Diameter zona hambat diukur kemudian dikategorikan kekuatan  daya  antimikrobanya  berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi  Spons  Theonella  swinhoei dilakukan  di  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan  Program  Studi  Ilmu  Kelautan Universitas  Sam  Ratulangi.  Determinasi dilakukan  agar  mengetahui  sampel  yang diambil  dan  dilakukan  pengujian  adalah sampel  yang  sesuai  yaitu  spons  Theonella swinhoei.

## Preparasi Sampel
Sampel  spons    theonella  swinhoei  yang diambil dari perairan pulau Siladen, dipotong  kecil-keci.  Hal  ini  bertujuan  untuk memperluas  permukaan  yang  berinteraksi dengan  pelarut  sehingga  lebih  banyak senyawa  yang  dapat  ditarik  oleh  pelarut (Kristanti et  al .,  2008).  Setelah  di  potong kecil-kecil sampel lalu di masukkan kedalam wadah.
Ekstraksi dan Fraksinasi Sampel  spons Theonella  swinhoei di ekstraksi  dengan  menggunakan  metode maserasi  dengan  pealrut  etanol  96%  sampai sampel  terendam  semua  selama  24  jam. Tujuan  pemilihan  metode  maserasi  karena
pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan sederhana,  mudah  diusahakan,  mampu menarik  senyawa-senyawa  yang  berkhasiat, dan  untuk  menghindari  kerusakan  beberapa senyawa  aktif    dari  spons Theonella swinhoei akibat  pemanasan  yang  berlebih (suryanto, 2012). Untuk mendapatkan penyarian  yang  maksimal,  agar  senyawa kimia  di  dalam  sampel  dapat  terekstrak secara menyeluruh maka dilakukan remaserasi atau pengulangan dengan pergantian pelarut selama tiga kali menggunakan  pelarut  etanol.  Digunakan pelarut  etanol  96%  karena  pelarut  etanol yang  bersifat  selektif,  tidak  beracun,  dan bersifat universal yang cocok untuk mengekstrak  semua  golongan  senyawa metabolit  sekunder  (Kristanti  et  al.,  2008). Dan pelarut etanol menyari hampir keseluruhan  kandungan  simplisia  baik  non polar,  semi  polar  maupun  polar  (Iswanti, 2009).  Setelah  didapatkan  filtrat  hasil maserasi kemudian dilakukan teknik
evaporasi atau penguapan dengan menggunakan
rotary evaporator, penggunaan  rotary  evaporator  ini  bertujuan untuk  menguapkan  pelarut  dan  memperoleh senyawa  hasil  ekstraksi  yang  diinginkan. Suhu  yang  digunakan  dalam  proses  ini adalah  37°C  dengan  tujuan  agar  tidak merusak  senyawa  bioaktif  yang  terdapat pada filtrat apabila menggunakan suhu yang tinggi. hasil dari proses ini adalah mendapat ekstrak  kasar  dari  pelarut  (Aditya  et  al., 2016).  Setelah  diperoleh  ekstrak  kering etanol  dari  hasil  maserasi,  tahap  yang dilakukan    selanjutnya  adalah  fraksinasi dengan  menggunakan  pelarut  organik  yang memiliki kepolaran berbeda, yaitu methanol,  n-heksan  dan  kloroform  secara
berkesinambungan
dengan sifat
kepolarannya  yang  berbeda-beda  dimana  n- heksan  mewakili  sifat  nonpolar,  kloroform mewakili  sifat  semi-polar  dan  metanol mewakili  sifat  polar  (Aditya et  al. ,  2016).
Fraksinasi dilakukan untuk senyawa
berdasarkan  perbedaan  kepolaran.  Masing-
masing pelarut secara selektif akan memisahkan  kelompok  kandungan  kimia tersebut.  Mula-mula  disari  dengan  pelarut yang  non  polar,  kemudian  disari  dengan pelarut  yang  kurang  polar  dan  terakhir dengan pelarut polar (Fardhani, 2014).
Tabel 1. Randemen ekstrak dan fraksi Spons Theonella Swinhoei No. Sampel Randemen (%) Warna Sampel 1. EKE 3,57 Hijau Kecoklatan 2. FH 1,27 Oranye 3. FK 1,12 Hijau 4. FM 25,05 Coklat Keterangan : EKE :  Ekstrak Etanol FH  :  Fraksi Heksan
FK  :  Fraksi Kloroform FM  :  Fraksi Metanol
Untuk  mengetahui  presentasi  zat  yang terekstrak  dari  sampel  maka  hasil  timbang dari  massa  ekstrak/fraksi  dibagi  dengan massa  sampel/ekstrak  awal  dan  dikalikan 100%. Untuk ekstrak kasar etanol,
didapatkan  massa  dari  sejumlah  ekstrak 45,1351  g  dari  massa  sampel  yang  di maserasi sebnyak 1265 g, sehingga diperoleh  randemen  3,57%  dengan  warna filtrate hijau kecoklatan. Selanjutnya ekstrak kasar  etanol  di  fraksinasi  menggunakan pelarut  n-heksan,  kloroform  dan  metanol. Tahap  awal  fraksinasi  dilakukan  dengan 25,00  g  ekstrak  kasar  etanol  hasil  maserasi dengan menggunaka pelarut metanol, lalu di partisi pertama kali dengan pelarut n-heksan, didapatkan  filtrat  n-heksan  berwarna  oranye dengan  massa  hasil  ekstrak  0,3168  g, sehingga didapat randemen 1,27%.
Selanjutnya  metanol  kemudian  dipartisi kembali  dengan  dengan  pelarut  kloroform, didapatkan  filtrat  kloroform  berwarna  hijau dengan massa hasil ekstrak sebanyak 0,2788
g,  sehingga  didapatkan  randemen  1,12  % dan  didapatkan  filtrate  metanol  berwarna coklat  dengan  dengan  massa  hasil  ekstrak sebanyak  6,2636  g,  sehingga  didapatkan randemen  25,05  %.  Randemen  dari  fraksi metanol  merupakan  yang  terbesar  diantara fraksi  yang  lain,  hal  ini  menandakan  bahwa banyak  senyawa  yang  ditarik  oleh  pelarut polar. Senyawa-senyawa  yang  bersifat  polar seperti  flavonoid  dan  saponin  banyak  ke pelarut  polar  karena  sesuai  dengan  prinsip like dissolve like , dimana pelarut polar akan larut dengan pelarut polar.
Uji Aktivitas Antimikroba
Pengujian aktivitas senyawa
antimikroba  dari  ekstrak  etanol,  fraksi metanol, fraksi n-heksan, dan fraksi kloroform  dari  spons Theonella  swinhoei diuji  terhadap Staphylococcus  aureus yang mewakili  gram  positif, Escherichia  coli mewakili gram negatif dan Candida Albicans mewakili jamur dengan
menggunakan  metode  difusi  agar.  Metode difusi agar dipilih karena memiliki kelebihan dapat  digunakan  untuk  senyawa  non  polar, cepat,  mudah  dan  sederhana.  Metode  difusi ini  dilakukan  dengan  cara  kertas  cakram yang  berisi  senyawa  antimikroba,  kemudian diletakkan  pada  media  padat  yang  telah diinokulasi  mikroba.  Senyawa  antimikroba akan  berdifusi  ke  dalam  media  padat  yang diinokulasi mikroba dan menghambat pertumbuhan  mikroba  yang  ditandai  dengan terbentuknya  daerah  jernih  di  sekeliling kertas  cakram  (Brooks et  al .,  2005).
Penggunaan  mikroba uji  ini  bertujuan untuk mengetahui bahwa apakah ekstrak kasar dan fraksi  dari  Theonella  swinhoei  ini  dapat berasosiasi memiliki aktivitas sebagai
antimikroba serta apakah mempunyai spektrum luas yaitu dapat membunuh bakteri
Gram  positif,,  gram  negatif  dan  jamur  atau mempunyai  spektrum  sempit  yaitu  hanya dapat  membunuh  salah  satu  dari  bakteri Gram  positif,  Gram  negatif  atau  jamur. (Valgas  et  al.,  2007).  Dalam  uji  aktivitas antimikroba hasil diperoleh melalui pengamatan  yang  dilakukan  selama  1x24 jam masa inkubasi dengan 3 kali pengulangan  untuk  masing-masing  bakteri terhadap spons Theonella swinhoei. Pengulangan  ini  dilakukan  untuk  lebih mengakuratkan  hasil  yang  akan  diperoleh. Terbentuknya  zona  hambat  (daerah  bening) disekeliling  cakram  berukuran  ±  6  mm (paper disk) menunjukkan kepekaan mikroba terhadap bahan antimikroba maupun  antibiotik  yang  digunakan  sebagai positif kontrol.
Tabel 2. Hasil pengukuran rata-rata diameter daya antimikroba dari ekstrak kasar etanol, fraksi kloroform, fraksi  n-heksan, dan  fraksi  metanol dari spons Theonella swinhoei terhadap mikroba uji Staphylococcus aureus, Escherichia coli , dan Candida albicans.
Keterangan :
EKE  : Ekstrak Kasar Etanol FH : Fraksi n-Heksan FK : Fraksi Kloroform FM : Fraksi Metanol K + : Kontrol Positif K - : Kontrol Negatif
Dalam pengujian ini digunakan kontrol  positif  dan  kontrol  negatif.  Kontrol positif berfungsi sebagai kontrol dari zat uji,
dengan  membandingkan  diameter  daerah hambat  yang  terbentuk  (Dwijendra,  2014). Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah
Rata-rata Diameter Total Zona Hambat (mm) Mikroba EKE FH FK FM K + K - S.aureus 8,1 7,1 6 7,3 33,8 0,0 E.coli 6 7 8 6 25,8 0,0 C.albicans 9,8 14 6,5 7,6 24,3 0,0
antibiotik  Siprofloksasin.  Menurut  Sarro (2001)  antibiotika  siprofloksasin  merupakan antibiotika  dengan  kegiatan  luas,  yaitu antibiotika  yang  memiliki  aktivitas  terhadap banyak  jenis  bakteri,  virus,  jamur  dan protozoa.  Kontrol  negatif  berfungsi  untuk mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh  pelarut terhadap pertumbuhan mikroba uji
Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan
Candida  albicans,  sehingga  dapat  diketahui bahwa yang mempunyai aktivitas antimikroba  adalah  zat  uji  bukan  pelarut (Dwijendra,  2014).  Kontrol  negatif  yang digunakan adalah metanol.
Dari  hasil  menunjukkan  diameter  zona hambat  dari  kontrol  positif  ketiga  mikroba
uji  lebih  besar dibandingkan dengan ekstrak dan  fraksi  serta  kontrol  negatif.  Diameter zona  hambat  dari  bakteri  Staphylococcus aureus  yaitu  sebesar  33,8  mm,  bakteri Escherichia  coli  yaitu  sebesar  25,8  mm  dan jamur  Candida  albicans  yaitu  sebesar  24,3 mm. Untuk kontrol negatif tidak memperlihatkan  adanya  daya  hambat  untuk ketiga  mikroba uji. Hal  ini  mengindikasikan bahwa  kontrol  yang  digunakan  tidak berpengaruh  pada  uji  antimikroba,  sehingga daya hambat yang terbentuk tidak dipengaruhi  oleh  pelarut  melainkan  karena aktivitas  senyawa  yang  ada  pada  spons  laut Theonella swinhoei.
Tabel 3. Standar Kekuatan Daya Antimikroba Menurut Davis dan Stout (1971).
Kriteria inilah yang di gunakan dalam penelitian untuk menggolongkan daya hambat kontrol dan bahan uji sampel ekstrak dan  fraksi.  Maka  hasil  yang  didapatkan untuk  ekstrak  kasar  etanol  menunjukkan bahwa diameter zona bening yang terbentuk pada  bakteri  Staphylococcus  aureus  yaitu 8,1    mm  tergolong  kategori  sedang, sedangkan  pada  bakteri  Escherichia  coli yaitu  6  mm  tergolong  kategori  sedang.  Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak kasar etanol spons  Theonella  swinhoei  memiliki  daya hambat  yang  lebih  peka  pada  bakteri  gram positif dibandingkan gram negatif.
Fraksi  kloroform  nilai  rata-rata  diameter zona  bening  untuk  bakteri  Staphylococcus aureus  yaitu  6  mm  tergolong  kategori sedang  dan  untuk  bakteri  Eschericia  coli yaitu  8  mm  tergolong  kategori  sedang.  Dari nilai  yang  didapat  dapat  diketahui  bahwa fraksi  klorofom  spons  Theonella  swinhoei memiliki  daya  hambat  lebih  peka  pada bakteri  gram  negatif  dibandingkan  dengan gram  positif.  Fraksi  n-heksan  nilai  rata-rata diameter zona bening untuk bakteri Staphylococcus  aureus  yaitu  7,1  mm tergolong kategori sedang dan untuk bakteri Eschericia  coli  yaitu  7  mm  tergolong kategori  sedang.  Dari  nilai  yang  didapat
Diameter Zona Bening (mm) Kategori >20 Kuat 10-20 Sedang <5 Lemah
dapat diketahui bahwa fraksi n-heksan spons Theonella  swinhoei  memiliki  daya  hambat yang  lebih  peka  pada  bakteri  gram  positif dibandingkan  bakteri  gram  negatif.  Fraksi metanol  nilai  rata-rata  diameter  zona beningnya  pada  bakteri  Staphylococcus aureus  yaitu  7,3  mm  tergolong  sedang  dan untuk  bakteri  Eschericia  coli  yaitu  6  mm tergolong  sedang.  Nilai  yang  didapat  untuk fraksi  metanol  spons  Theonella  swinhoei memiliki  daya  hambat  yang  lebih  peka terhadap  bakteri  gram  positif  dibandingkan bakteri gram negatif.
Diameter  zona  hambat  yang  ditunjukkan pada  fraksi  n-heksan  terhadap  mikroba Candida  albicans  memiliki  nilai  (14  mm) yang  paling  besar  dibandingkan  dengan ekstrak dan fraksi lainnya dalam menghambat  pertumbuhan  mikroba  dan dikategorikan  kuat.  Menurut  Roihanah  et  al (2012) pelarut n-heksan adalah pelarut yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan  mikroba,  hal  ini  disebabkan karena  senyawa  bioaktif  yang  terkandung pada spons Theonella swinhoei  mudah  larut dalam  non  polar  yang  dapat  berfungsi sebagai bahan antimikroba.
Jadi pada penelitian ini ekstrak etanol, fraksi n-heksan  dan  fraksi  metanol  merupakan ekstrak/fraksi yang efektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (gram positif)
dibandingkan bakteri Escherichia coli (gram negatif).  Hal  ini  terjadi  karena  adanya perbedaan  sensitivitas  bakteri  terhadap antimikroba  yang  dipengaruhi  oleh  dinding sel  bakteri.  Bakteri  gram  positif  cenderung lebih  sensitif  terhadap  antimikroba,  karena struktur  dinding  sel  bakteri  gram  positif
lebih sederhana dibandingkan struktur dinding  sel  bakteri  gram  negatif  sehingga memudahan  senyawa  antimikroba  untuk masuk kedalam sel bakteri gram positif.  Hal ini diduga adanya perbedaan struktur-stuktur dinding  sel  menentukan  penetrasi,  ikatan dan  aktivitas  senyawa  antimikroba  (Brooks et  al.,  2005).  Untuk  fraksi  kloroform  spons Theonella swinhoei aktif dalam menghambat bakteri gram negatif dibandingkan  dengan  gram  positif.  Menurut Davidson et al (2005), senyawa antimikroba yang  berupa  asam-asam  organik  memiliki daya  hambat  yang  lebih  besar  terhadap bakteri  gram  negatif.  Masing-masing  fraksi ternyata  menghasilkan  zona  hambat  yang berbeda terhadap mikroba uji. Hal ini diduga karena tingkat kepekaan dari masing-masing bakteri berbeda untuk setiap fraksi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak kasar, fraksi metanol, fraksi kloroform  dan  fraksi  n-heksan  memiliki aktivitas  antimikroba  terhadap  mikroba  uji Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli ,
dan Candida albicans.

## SARAN
Perlu  di  lakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk mengetahui senyawa yang terkandung dalam  Spons  Theonella  swinhoei  di  setiap ekstrak dan fraksi.

## DAFTAR PUSTAKA
Aditya,  A.,  Trianto,  A.,  Santoso,  A.  2016.
Eksplorasi Jamur Simbion Pada Spons Demospongiae  yang  Dikoleksi  dari
Perairan  Kupang  Penghasil  Bahan Antimikroba Multidrug Resistent (MDR). Jurnal ilmu Kelautan . Universitas Diponegoro.
Brooks, G. L., J.S. Butel, S.A Morse. 2005.
Mikrobiologi  Kedokteran  Ed.  23,
Translation  of  Medical  Microbiology,
23th  Ed. Alih  Bahasa  oleh  Hartanto, Salemba Medika, Jakarta.
Dahuri,  R.  1998.  Coastal  zone  management in  Indonesia:  issues  and  approaches. Journal  of  Coastal  Development .
1(2) :97-112.
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  assay. Journal of microbiology 22: 659-665. Dwijendra, I. M. 2014. Aktivitas Antimikroba dan Karakterisasi Senyawa  Fraksi  Spos  Lamellodysidea herbacea  yang  Diperoleh  dari  Teluk
Manado [skripsi].  Program  Studi Farmasi  FMIPA  Universitas  Sam Ratulangi, Manado.
Dwyana,  Z  dan  Johanes  E.  2012. Uji Efektivitas  Ekstrak  Kasar  Alga  Merah Eucheuma Cottoni Sebagai Antimikroba Terhadap Bakteri Patogen .  [Skripsi].  Program  Studi Biologi Universitas
Hasanudin,
Makassar.
Ismet,  M.  S.  2007. Penapisan  Senyawa
Bioaktif  Spons  Spons  Aaptops dan
Petrosia  sp. dari lokasi yang berbeda .
[ skripsi ]. Pasca sarjana ITB, Bandung.
Iswanti, D.A. 2009. Uji Aktivitas Antimikroba  Fraksi  N-Heksan,  Fraksi Etil  Asetat,  Dan  Fraksi  Etanol  96% Daun Ekor Kucing  (Acalypha Hispida Burm. F) Terhadap Bakteri
Staphylococcus  aureus  ATCC  25923
Secara Dilusi [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi, Surakata. Kristanti, A. N., N.S. Aminah., M. Tanjung., B. Kurniadi. 2008. Buku Ajar
Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Nuraina,  2015. Uji  Aktivitas  Antimikroba Ekstrak  Daun  Gracinia  benthami Pierre Dengan Metode Dilusi .
[Skripsi]. Program Studi  Farmasi UIN Syarif Hidaytullah, Jakarta
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed). American  society  for  Microbiology, America.
Roihana  S,  Sukoso,  Andayani  S.  2012.
Aktivitas Antimikroba Ekstrak
Teripang  (Holoturia  Sp)  Terhadap Bakteri  Vibrio  Harveyi  Secara  In- Vitro. [ Skripsi ]. Fakultas Perikana dan Ilmu  Kelautan. Universitas Brawijaya.
Malang.
Sarro,  A.D.,  G.D.  Sarro.  2001.  Adverse
Reactions  to  Fluoroquinolones.  An Overview  on  Mechanism  Aspect. Current  Medicinal  Chemistry. 8  :371- 384.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Penerbit  Putra  Media  Nusantara, Surabaya.
Valgas,  C.,  Souza,  S.  M.  D.,  Smania,  E.  F.
A.  and  Artu,  S.  2007.  Screening Methods  to  Determine  Antibacterial Activity of Natural Products. Brazilian Journal  of  Microbiology .  38,  p.  369- 380.