## PENGARUH  VARIASI WAKTU PERENDAMAN SAMPEL DAN JUMLAH PELARUT HOMOGENASI TERHADAP PERSENTASE
EKSTRAK PROTEIN DAUN KELOR ( Moringa oleifera )

## THE EFFECT OF VARIATION OF SAMPLE SOAKING TIMING AND CONCENTRATION OF HOMOGENIZING SOLVERS ON THE
PRECENTAGE MORINGA LEAF PROTEIN (Moringa oleifera)
Meirita Sari, Methatias Ayu Moulina Program Studi Teknologi Hasil Pertanian, Universitas Dehasen Bengkulu
Email : meiritasari@unived.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian  ini  merupakan  salah  satu  bentuk  pemanfaatan  tumbuhan  pangan,  yaitu Kelor ( Moringa oleifera). M. oleifera dapat tumbuh dengan baik di Provinsi Bengkulu. Pada bagian  daun M.  oleifera mengandung  senyawa  protein  yang  berperilaku  seperti  lektin. Senyawa  ini  dapat  digunakan  sebagai  bahan  antimikroba.Tahapan  dalam  penelitian  ini meliputi  ekstraksi  protein  daun M.  oleifera dengan  menggunakan  metode salting  in dan salting  out .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  waktu  perendaman  dan jumlah pelarut dalam proses ekstraksi tahap homogenasi terhadap persentase ektrsak protein. Hasil  menunjukan  waktu  perendaman  berpengaruh  signifikan  dibandingkan  jumlah  pelarut pada tahap homogenasi ektraksi protein daun kelor ( Moringa oleifera). Semakin lama waktu yang dibutuhkan maka semakin besar Persentase ekstrak protein daun M. oleifera. Penelitian ini  berguna  bagi  peneliti,  masyarakat,  bidang  kesehatan,  serta  perkembangan  ilmu pengetahuan maupun dunia pendidikan.
Kata Kunci: Moringa oleifera; Ekstraksi; Protein

## ABSTRACT
This  research  is  one  form  of  utilization  of  food  plants,  namely  Moringa  (Moringa oleifera). M. oleifera can grow well in Bengkulu Province. The leaves of M. oleifera contain protein  compounds that behave like lectins. This compound can be used as an antimicrobial material.  The  stages  in  this  study  include  the  extraction  of  M.  oleifera  leaf  protein  using salting in and salting out methods. This study aims to determine the effect of the immersion time  and  the  amount  of  solvent  in  the  homogenation  stage  extraction  process  on  the percentage of protein extract. The results showed that the immersion time had a significant effect compared to the amount of solvent in the homogenation stage of Moringa oleifera leaf protein extraction. The longer the time needed, the greater the percentage of M. oleifera leaf protein extract. This research is useful for researchers, the public, the health sector, and the development of science and education.
Keywords: Moringa oleifera, Extraction, Protein

## PENDAHULUAN
Kondisi  geografis  dan  keadaan  wilayah propinsi Bengkulu yang subur
memungkinkan  banyaknya  area  hutan dengan keanekaragaman yang tinggi. Hal ini  memberikan  peluang  besar  untuk
peneliti  dalam  mengembangkan  potensi yang dimiliki oleh  suatu  tumbuhan.  Pada tumbuhan  terkandung  senyawa  metabolit sekunder  dan  metabolit  primer  yang memiliki  aktivitas  biologi.  Beberapa senyawa  metabolit  primer  antara  lain karbohidrat,  lemak  dan  protein.  Terdapat tumbuhan perdu yang memiliki kandungan  protein  yang  cukup  tinggi yaitu  kelor  ( Moringa  oleifera). Kelor merupakan  tumbuhan  perdu  dengan batang  kayu  yang  mudah  patah  namun mempunyai  akar  yang  kuat  serta  daun sebesar  ujung  jari,  berbentuk  bulat  telur dan  tersusun  majemuk  (Sari,  2017). Pemanfaatan  daun  kelor  masih  terbatas pada  daun  mudanya  sebagai  menu  lauk pauk.  Daun  termasuk  bagian  tumbuhan yang  padat  nutrisi.  Tepung  dari  daun kelor  mengandung  kadar  protein  sebesar 28,7% protein  kasar/total  (Teixeira, 2014).
Protein mempunyai peranan penting  dalam  aktivitas  metabolisme tubuh manusia.  Terdapat  kelompok protein  yang  berinteraksi  secara  khas dengan  karbohidrat  spesifik  yaitu  lektin (lam, 2011). Dimana karbohidrat termasuk komponen utama pembentuk sel baik  pada  prokariot  maupun  eukariot. Ikatan  yang  terbentuk  ini  mengakibatkan perubahan  permeabilitas  membran  sel. Membran  sel  berperan  dalam  menjaga komposisi  ion-ion  yang  ada  dalam
sitoplasma  untuk  berfungsinya  suatu  sel. Perubahan  permeabilitas  membran  sel menyebabkan terganggunya proses transport nutrisi dan terhambatnya aktivitas  serta  biosintesis  enzim-enzim spesifik  yang  diperlukan  dalam  reaksi metabolisme.
Hal ini mengakibatkan sel mengalami  kekurangan  nutrisi  yang dibutuhkan  dalam  proses  pertumbuhan yang  lama-kelamaan  menimbulkan  lisis pada  sel      (Haryanto,  2014).  Sifat biologis  protein  lektin  ini  berpotensi untuk diteliti lebih lanjut sebagai antimikroba.  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui pengaruh waktu perendaman  dan  jumlah  pelarut  dalam proses  ekstraktsi  terhadap  persentase ektrsak  protein.  Ekstraksi  merupakan penyarian  zat-zat  berkhasiat  atau  zat-zat aktif  dari  bagian  tumbuhan  obat,  hewan dan  beberapa  jenis  ikan  termasuk  biota laut.  Ekstraksi  bahan  alam  dimaksudkan untuk  menarik  komponen  kimia  yang terdapat  pada  bahan  alam.  Ekstraksi  ini didasarkan  pada  prinsip  perpindahan massa  komponen  zat  ke  dalam  pelarut, dimana  perpindahan  mulai  terjadi  pada lapisan  antar  muka  kemudian  berdifusi masuk ke dalam pelarut (Harbone, 1996).

## METODE PENELITIAN
Ekstraksi Lektin Daun Kelor ( Moringa oleifera )
Sampel  daun  kelor (Moringa oleifera) yang  telah  dipilih  dan  bersih ditimbang  dan Kemudian digiling hingga menjadi  bubur  serta  dihomogenisasikan dalam  larutan buffer  tris HCl  pH  10
(metode salting  in )    menggunakan  3 varian  perbandingan  sampel  dan  pelarut (2:1, 1:1, 1:2)   dalam kondisi lingkungan dingin dengan 3 varian waktu perendaman  yaitu  1  jam,  12  jam  dan  24 jam.    Homogenat  disaring,  cairan  hasil saringan  disentrifugasi  dengan  kecepatan 3500  rpm  selama  15  menit  dengan  T= 4oC.  Pellet  Hasil  sentrifugasi  tahap pertama dibuang  dan  supernatan  diambil. Supernatan dipresipitasi dengan ammonium  sulfat  jenuh  70%  (metode salting  out )      dengan  perbandingan jumlah 1:1. Kemudian dilakukan sentrifugasi tahap kedua dengan kecepatan  13.500  rpm  selama  30  menit dengan T = 4oC. (Sari, 2015).
Penentuan  konsentrasi  lektin  biji A. microcarpum
Penentuan konsentrasi protein dengan  metode  biuret  menggunakan spektrofotometer PD 303S. Larutan sampel  yang  akan  diukur  konsentrasinya diberi  perlakuan  sebagai  berikut:  0,5  mL sampel  ditambahkan  dengan  9,5  mL larutan  biuret,  divortex  mixer,  kemudian diletakkan pada penangas air ( water bath )
dengan  suhu  400C  selama  10  menit. Setelah  itu  dilakukan  pengukuran  pada spektofotometer PD 303S dengan panjang gelombang 540 nm.

## HASIL dan PEMBAHASAN
Ekstraksi lektin daun kelor ( Moringa oleifera)
Tumbuhan yang diekstraksi proteinnya  adalah  tumbuhan Moringa oleifera tepatnya  pada  bagian  daun . Sampel  tersebut  dihaluskan  terlebih dahulu,  guna  memperluas  permukaan bidang  sentuh  sampel  sehingga  peluang kontak  antara  sampel  dengan  pelarut semakin  banyak  dan  mempermudah penetrasi  pelarut  ke  dalam  sampel sehingga  hasil  semakin  sempurna.  Selain itu  juga  dimaksudkan  agar  sel  atau jaringan  tumbuhan  yang  mengandung senyawa-senyawa  organik  dapat  terlarut sebanyak  mungkin  dalam  pelarut  yang terbatas.
Sampel yang telah halus, dihomogenkan dengan buffer dingin Tris- HCl  pH  10.  Larutan  buffer  dengan  pH yang  lebih  rendah  dari 10  akan mengkibatkan depurifikasi dan mengakibatkan  protein  terdistribusi  ke fase  fenol  selama  proses  deproteinisasi. Sedangkan  pH  larutan  yang  lebih  tinggi dari  10  akan  mengakibatkan  pemisahan untaian  protein.  Fungsi  larutan  buffer
adalah  untuk  menjaga  struktur  protein selama proses penghancuran dan purifikasi  sehingga  memudahkan  dalam mencegah  aktivitas  enzim  pendegradasi protein  dan  mencegah  perubahan  pada molekul protein.
Hasil homogenasi yang dinamakan  homogenat  umumnya  masih berupa  larutan  keruh  yang  terdiri  dari debris sel (bagian sel  yang tidak hancur), organel-organel  sel  dan  makromolekul penyusun  sel  diantaranya  yaitu  protein. Untuk    memisahkan  molekul  dalam larutan  ini  yaitu  menggunakan  metode sentrifugasi. Tujuan dari sentrifugasi yaitu pemisahan larutan berdasarkan perbedaan berat  molekulnya.  Dengan  sentrifugasi, debris dan organel sel akan mengendap di dasar tabung sentrifus (dinamakan pellet), sedangkan  makromolekul  (termasuk  di dalamnya  protein)  yang  ukurannya  jauh lebih kecil daripada debris dan organel sel tidak  akan  mengendap  tetapi  terlarut dalam  buffer  (dinamakan  supernatan yang  bening).  Supernatan    inilah    yang
dipakai   sebagai   sampel   untuk   analisis isolasi    protein.    Hasil sentrifugasi  tahap pertama dapat dilihat pada gambar 1.
Supernatan hasil sentrifugasi pada tahap  pertama  perlu  diendapkan  kembali untuk  mendapatkan  ekstrak  protein. Pengendapan dilakukan dengan menambahkan  amonium  sulfat  70%.
Presipitasi protein merupakan pengendapan yang terjadi karena penggumpalan  yang  parsial.  Presipitasi disebabkan  oleh  berkurangnya  kelarutan protein  (perubahan  fisik)  yang  terjadi karena  perubahan  kimia.  Presipitasi disebabkan  oleh  pengembangan  molekul protein akibat unfolding atau membukanya heliks-heliks protein. Presipitasi juga terjadi akibat terganggunya  kesetabilan  koloid  yang disebabkan  oleh  menurunnya  muatan elektrostatik protein sehingga gaya gravitasi akan lebih dominan dibandingkan  gaya  tolak-menolak  antar molekul.
Supernatan Pelet
Gambar 1. Hasil Sentrifugasi tahap pertama
Supernat
an Protein terpresipitasi
Gambar 2. Hasil  sentrifugasi tahap kedua
Supernatan yang dipresipitasi
dengan ammonium sulfat 70% merupakan metode salting out . Mekanisme  dasar salting  out sangat kompleks  yaitu  pengendapan  terjadi karena  persaingan  antara  garam  dan protein untuk mengikat air. Pada konsentrasi  tinggi,  kekuatan  ionik  garam semakin kuat sehingga garam lebih dapat mengikat  molekul  air.  Dengan  demikian, tidak cukup banyak  air  yang terikat  pada protein sehingga gaya tarik menarik antar molekul protein lebih menonjol
dibandingkan  dengan  tarik  menarik antara  air  dan  protein.  Dalam  kondisi seperti itu maka protein akan mengendap.
Pada isolasi lektin, untuk pemisahan  protein  dilakukan  dua  kali pengendapan melalui sentrifugasi.
Sentrifugasi  pertama  pada  3500  rpm selama  15  menit  untuk  memisahkan pengotor  yang  masih  terdapat  pada larutan  sampel  selanjutnya  sentrifugasi kedua  pada 13.500 rpm selama 30 menit untuk  memisahkan  protein  terpresipitasi dengan  larutannya  (Englard,  1990),
pelletnya  diambil  karena  merupakan protein presipitasi, kemudian pellet tersebut dilakukan penentuan konsentrasi protein. Analisis kuantitatif    protein    hasil  pengendapan amonium  sulfat  (jenis  protein  lebih spesifik)      pada  penelitian  ini  diperoleh rendemen  terendah  sebesar  2,44  %. Persentase  ekstrak  protein  tertinggi  yang diperoleh  dari  305 g sampel  biji M. oleifera adalah  sebesar  21,897  %  atau 66,786 g.

## Penentuan Konsentrasi Protein
Protein hasil sentrifugasi homogenat  masih  terdiri  dari  berbagai jenis  protein  (atau  dinamakan crude protein) ataupun protein hasil pengendapan  amonium  sulfat  (jenis protein  lebih  spesifik)  selanjutnya  dapat dianalisis  secara  kuantitatif  maupun kualitatif.  Analisis  kuantitatif  protein pada penelitian ini menggunakan spektrofotometer PD 303S. dengan panjang  gelombang  540  nm.  Dengan spektrofotometer dapat diketahui
banyaknya  atau  jumlah  protein  dalam suatu  sampel  dan  diperoleh  konsentrasi 3000  mg/L pada  sampel protein daun M. oleifera .

## KESIMPULAN
Waktu  perendaman  berpengaruh signifikan  dibandingkan  jumlah  pelarut pada  tahap  homogenasi  ektraksi  protein daun  kelor  ( Moringa  oleifera). Semakin lama  waktu  yang  dibutuhkan  maka semakin  besar  Persentase  ekstrak  protein daun M. oleifera.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terima kasih  kepada  Kemenristek  Dikti,  Ketua Prodi  Pertanian  Universitas  Dehasen Bengkulu  dan  pengelola  Laboratorium
Fakultas Kedokteran Universitas
Bengkulu atas bantuan dalam pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Englard, S., S. Seifter. 1990. Precipitation Techniques. USA: Academic Press Harborne,  J.  B.  1996. Metode  Fitokimia. Bandung: Penerbit ITB Haryanto,  H.,  dan  Muslim,  C.  2014.
Buku  Ajar  Membran  Biologi; Struktur  dan  Fungsi. Yogyakarta:
Deepublis
Lam,    S.K.,  and    Ng,    T.B.    2011.
Lectins:
Production and
practical    applications. Appl
Microbiol Biotechnol. 89:45–55
Sari,  Meirita.  2015. Isolasi  Lektin  Biji
Kabau (Archidendron microcarpum)  Dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Serta  Implementasinya Sebagai Modul Pembelajaran Koba. Jurnal Pendipa. vol 2 no 3 Sari, Meirita. 2017. Koagulan Alami Dari Serbuk Biji Kelor (Moringa oleifera)  Terhadap Limbah  Cair Industri  Tahu .  Jurnal  Agritepa.
Vol. IV No.1 Teixeira  EMB,  Carvalho  MRB,  Neves VA,  Silva  MA,  Arantes-Pereira LA. 2014. Chemical charactheristic  and  fractionation of  proteins  from  Moringa  oleifera Lam.  leaves. Food  Chemistry  147 51-54