# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Sempur  No.  1,  Bogor  16129,  Indonesia Tel.:  +62  251  8313200 E-mail:  nu nan afiqoh @gmail.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma
SKRINING  MARKA  MHC-I  DAN  MHC-II  PADA  IKAN  LELE  AFRIKA  (Clarias  gariepinus) SEBAGAI  GEN  PENYANDI  RESISTEN  PENYAKIT  Motile  Aeromonas  Septicaemia  (MAS)
Rommy  Suprapto # ,  Bambang  Iswanto,  Huria  Marnis,  dan  Joni  Haryadi
Balai Riset Pemuliaan Ikan Jl. Raya 2 Sukamandi, Subang 41263, Jawa Barat
(Naskah diterima: 30 November 2020; Revisi final: 24 Desember 2020; Disetujui publikasi: 24 Desember 2020)

## ABSTRAK
Salah satu kendala yang dihadapi para pembudidaya ikan lele adalah serangan penyakit yang menyebabkan kematian massal sehingga mengakibatkan kerugian. Alternatif solusi yang dapat dilakukan adalah melakukan seleksi ikan lele tahan penyakit berbasis marka molekuler untuk memperoleh populasi unggul ikan lele. Seleksi dilakukan  pada gen marka yang  berkaitan dengan sistem  imun yaitu MHC-I dan  MHC-II. Tujuan penelitian ini adalah melakukan skrining marka MHC-I dan MHC-II pada ikan lele strain Mutiara, Paiton, Kenya, dan Sangkuriang yang merupakan koleksi di Balai Riset Pemuliaan Ikan (BRPI) Sukamandi. Jumlah sampel ikan pada tiap strain yang diambil untuk strain Mutiara, Paiton, Kenya, dan Sangkuriang masing- masing 14, 13, 3, dan 13 sampel. Analisis keberadaan marka MHC-I dan MHC-II dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi  dan  Genetika  BRPI  Sukamandi.  Skrining  keberadaan  marka  MHC-I  dan  MHC-II  dilakukan menggunakan metode PCR. Hasil menunjukkan persentase ikan yang positif membawa marka MHC-I adalah strain Mutiara 85,71%; strain Paiton 30,77%; strain Kenya 100%; dan strain Sangkuriang 92,31%; selanjutnya skrining ikan yang positif membawa marka MHC-II pada strain Mutiara menunjukkan persentase sebanyak 71,43%; strain Paiton 61,54%; strain Kenya 100%; dan pada strain Sangkuriang 0%. Dengan demikian dapat dikatakan bahwa ikan lele strain Mutiara, Paiton, dan Kenya adalah populasi yang potensial untuk menjadi kandidat dalam kegiatan seleksi ikan lele tahan penyakit berbasis marka molekuler MHC-I dan MHC-II.
KATA KUNCI: marka MHC; lele; strain; penyakit
ABSTRACT: Screening  of  MHC-I  and  MHC-II  marker  on  the  African  catfish  (Clarias  gariepinus)  as  a gene  code  Motile  Aeromonas  Septicaemia  (MAS)  disease  resistance.  By:  Rommy  Suprapto, Bambang  Iswanto,  Huria  Marnis,  and  Joni  Haryadi
One  of  the  challenges  faced  by  catfish  farmers  is  disease  outbreaks  that  can  cause  mass  mortality  resulting in  significant  economic  losses.  This  study  aimed  to  provide  an  alternative  solution  to  overcome  this  issue by  selecting  disease-resistant  catfish  via  molecular  markers  to  obtain  a  catfish’s  superior  population.  The selection  was  carried  out  on  marker  genes  related  to  the  immune  system,  namely  MHC-I  and  MHC-II.  This study screened the MHC-I and MHC-II markers on catfish strains of Mutiara, Paiton, Kenyan, and Sangkuriang, which  were  the  collections  of  Balai  Riset  Pemuliaan  Ikan  (BRPI)  Sukamandi.  The  number  of  fish  samples  for Mutiara,  Paiton,  Kenyan,  and  Sangkuriang  strains  were  14,  13,  3,  and  13  samples,  respectively.  Analysis  of the  presence  of  MHC-I  and  MHC-II  markers  was  carried  out  at  the  Physiology  and  Genetics  Laboratory  of BRPI  Sukamandi.  Screening  for  the  presence  of  MHC-I  and  MHC-II  markers  was  carried  out  using  the  PCR method.  The  results  showed  that  the  percentages  of  positive  fish  carrying  MHC-I  marker  were  85.71%  for Mutiara  strain,  30.77%  for  Paiton  strain,  100%  for  Kenyan  strain,  and  92.31%  for  Sangkuriang  strain. Furthermore,  the  percentages  of  positive  screening  of  fish  carrying  MHC-II  markers  were  71.43%  for Mutiara  strains,  61.54%  for  Paiton  strains,  100%  for  Kenyan  strain,  and  0%  for  Sangkuriang  strain.  This study’s  findings  suggest  that  the  catfish  strains  of Mutiara,  Paiton,  and  Kenyan  are  the  potential  populations to  serve  as  the  candidates  in  the  selection  of  disease-resistant  catfish  based  on  molecular  markers  MHC-I and  MHC-II.
KEYWORDS: marker  MHC;  catfish;  strain;  disease

## PENDAHULUAN
Major histocompatibilty complex (MHC) merupakan sekelompok  gen  yang  bertugas  mengkodekan glikoprotein  seluler  yang bertanggung  jawab  untuk menghadirkan  antigen  secara  internal  maupun eksternal  pada  reseptor  sel  T  (TCR),  dan  dengan demikian  akan  memulai  respons  imun  pada  hewan vertebrata (Sommer, 2005; Rakus, 2008). Secara umum molekul MHC dibagi menjadi dua sub-kelompok utama sesuai  dengan  struktur  kimianya  dan  fungsi molekulnya (Piertney  & Oliver,  2006; Srisapoome  et al.,  2004);  dua  sub-kelompok  MHC  terlibat  dalam kekebalan, yaitu a) molekul kelas-I yang diekspresikan pada  permukaan  sel  berinti  dan  yang  terutama bertanggung  jawab  untuk  menyajikan  peptida antigenik  seperti  berasal  dari  virus,  dan  b)  molekul kelas-II yang terjadi pada antigen presenting cells (APC) dan terlibat dalam menyajikan epitop yang berasal dari antigen ekstraseluler yang merupakan fagositosit atau endositosit (Osborne & Turner, 2011). Semua molekul MHC dicirikan oleh tingkat polimorfisme yang sangat tinggi  (yang  merupakan  salah  satu  karakter  paling penting dari gen MHC, yang memberikan dasar untuk skrining gen  tahan penyakit  yang berkaitan  dengan marka molekuler), terutama karena banyaknya alel yang ada dalam populasi, dan variasi urutan yang tinggi antara alel  (Grimholt  et  al.,  2003;  Pang  et  al.,  2013). Polimorfisme  pada  gen  MHC-I  dan  II  terutama ditemukan dalam pengodean kodon pada peptide bind- ing region (PBR), MHC-I diekspresikan oleh semua sel yang berinti, sedangkan MHC-II diekspresikan hanya oleh  sub-kelompok  yang  terbatas,  termasuk  thymic epithelial cells (TEC) dan sel APC lainnya (Picchietti et al., 2015).
Seiring berkembangnya studi tentang MHC, banyak penelitian  yang  menunjukkan  tingkat  polimorfisme yang tinggi baik itu pada MHC-I maupun MHC-II terkait erat  dengan  resistensi  atau  kerentanan  terhadap penyakit pada ikan nila (Poonsawat et al., 2009; Pang et al., 2013; Zhou et al., 2013), ikan mas (Rakus et al., 2009; Hayuningtyas et al., 2013), rainbow trout (Aoyagi et al., 2002; Grimholt et al., 2002), Chinese longsnout catfish (Shen et al., 2011), turbot Scophthalmus maxi- mus  (Min  et  al.,  2012),  Atlantik  salmon  (Kjoglum  et al., 2006),  belut (Li  et al.,  2014), dan  channel  catfish (Moulana et al., 2008; Li et al., 2013).
Pada  ikan  lele  (Clarias  sp.),  beberapa  penelitian menunjukkan bahwa fragmen MHC-I (Azis et al., 2015a; Alimuddin et al., 2018)  dan MHC-II  (Suprapto et  al., 2017) dapat menjadi marka molekuler ikan lele tahan penyakit terutama pada penyakit motile aeromonas sep- ticaemia (MAS) yang disebabkan oleh bakteri Aeromonas hydrophilla. Dengan demikian penelitian tentang MHC- I dan MHC-II terutama pada strain-strain ikan lele yang
terdapat di Indonesia sangat diperlukan terkait dengan program  seleksi  ikan  lele  resisten  penyakit  MAS. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  melakukan skrining marka MHC-I dan MHC-II pada ikan lele strain Mutiara, Paiton, Kenya, dan Sangkuriang untuk pro- gram seleksi menghasilkan ikan lele resisten penyakit MAS.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di Balai Riset Pemuliaan Ikan (BRPI) Sukamandi, menggunakan koleksi sebagai ikan uji dan skrining marka dilaksanakan di Laboratorium Genetika dan Fisiologi. Jumlah sampel ikan pada tiap strain  yang  diambil  tidak  sama  disesuaikan  dengan jumlah ikan koleksi, 14 strain Mutiara, 13 Paiton, tiga Kenya, dan 13 Sangkuriang.
Skrining  MHC-I  dan  MHC-II  menggunakan  DNA diekstraksi dari  sirip ikan  dengan menggunakan  kit Gene Jet Genomic DNA Purification (Thermo Scientific, USA) amplifikasi menggunakan PCR mycycler (Biorad, USA).  Amplifikasi  dilakukan  dengan  kit  Maxima  hot start green PCR master  Mix (2X) (Fermentas,  Thermo Scientific). Komposisi pereaksi PCR terdiri atas 1 ¼L primer forward; 1 ¼L primer reverse; 2 ¼L DNA; 12,5 ¼L kit Master mix PCR; dan 8,5 ¼L nuclease free water. Program amplifikasi PCR yang digunakan untuk MHC- I adalah pre-denaturasi pada suhu 94°C selama lima menit;  35  siklus  PCR  dengan  denaturasi  pada  suhu 94°C selama 30 detik, annealing pada suhu 55°C selama 30 detik,  dan ekstensi pada  suhu 72°C selama  satu menit; dan ekstensi akhir pada suhu 72°C selama tujuh menit  (Azis  et  al.,  2015a);  sedangkan  untuk  MHC-II adalah pre-denaturasi pada suhu 95°C selama empat menit;  35  siklus  PCR  dengan  denaturasi  pada  suhu 95°C selama 30 detik, annealing pada suhu 55°C selama satu menit, dan ekstensi pada suhu 72°C selama satu menit; dan ekstensi akhir pada suhu 72°C selama 10 menit (Suprapto et al., 2017). Sebagai kontrol inter- nal  loading  DNA  digunakan  primer  ²-aktin.  Setelah mesin  menjadi  dingin  (±4°C),  tabung  mikro dikeluarkan dari mesin PCR. Elekroforesis dilakukan dengan  menggunakan  gel  agarosa  2%  (w/v),  pada tegangan 60 volt selama 50 menit. DNA divisualisasi dengan menggunakan gel red (Biotum Inc.  California, USA) dan selanjutnya divisualisasikan menggunakan gel doc UV transiluminator.

## HASIL DAN BAHASAN
Hasil analisis keberadaan marka MHC-I dan MHC- II  menggunakan  metode  PCR  pada  ikan  lele  strain Mutiara tersaji pada Gambar 1.
Keberadaan marka MHC-I pada ikan lele Mutiara menunjukkan  pita  DNA  tunggal  berukuran  sekitar 1.000  bp,  dengan  persentase  ikan  yang  positif
membawa marka MHC-I sebesar 85,71%. Sedangkan ikan lele Mutiara yang positif membawa marka MHC- II  belum  menunjukkan  pita  DNA  tunggal,  yakni berukuran  sekitar  400  bp  dan  1.500  bp,  dengan persentase ikan yang positif membawa marka MHC-II sebanyak 71,43%. Tidak terdapatnya pita DNA produk PCR pada kontrol negatif (N) menunjukkan bahwa tidak ada  kontaminasi  dalam  proses  amplifikasi  PCR. Selanjutnya, PCR dengan menggunakan primer  aktin menghasilkan  pita  DNA  untuk  semua  sampel berukuran  sama,  yaitu  sekitar 300  bp.  Hal  tersebut
menunjukkan bahwa semua sampel ikan uji yang tidak ada  pita  DNA  pada  produk  PCR  saat  menggunakan primer MHC-I dan MHC-II adalah karena tidak ada DNA target pada sampel tersebut.
Selanjutnya  pada  Gambar  2  tersaji  hasil  analisis keberadaan marka MHC-I dan MHC-II menggunakan metode PCR pada ikan lele Paiton. Keberadaan marka MHC-I pada ikan lele Paiton telah menunjukkan pita DNA tunggal dan berukuran sekitar 1.000 bp, dengan persentase ikan yang positif membawa marka MHC-I sebesar  30,77%.  Pada  sampel  ikan  lele  yang  positif
Gambar 1. Amplifikasi PCR dalam deteksi marka molekuler dengan target gen MHC-I dan MHC-II pada ikan lele strain Mutiara.  aktin digunakan sebagai kontrol load- ing DNA. M= marka ukuran fragmen DNA;  1-14= nomor ikan uji; dan N= produk PCR tanpa cetakan DNA (sebagai kontrol negatif).
Figure  1.
PCR  amplification  to  detect  MHC-I  and  MHC-II  gene  markers  on  the  Mutiara strain  catfish.   actin=  DNA  loading  control.  M=  DNA  ladder;  1-14=  num- bers  of  examined  specimens;  and  N=  the  PCR  products  without  DNA  tem- plate.
a b M     1     2     3    4     5    6    7     8     9  10   11  12  13   14  N MHC I MHC II  actin  actin

## M     1     2     3     4     5     6     7     8     9   10    11  12  13   14  N
(bp) 1500 1000 600 400 200 500 300 100 (bp) 1500 1000 600 400 200 500 300 100
membawa marka MHC-II juga belum menunjukkan pita DNA tunggal, yakni berukuran sekitar 400 bp dan 1.200 bp,  dengan  persentase  ikan  yang  positif  membawa marka MHC-II sebanyak 61,54%. Tidak terdapatnya pita DNA  produk  PCR  pada  kontrol  negatif  (N) menunjukkan  bahwa  tidak  ada  kontaminasi  dalam proses  amplifikasi  PCR.  Selanjutnya,  PCR  dengan menggunakan primer  aktin menghasilkan pita DNA untuk  semua  sampel  berukuran  sama,  yaitu  sekitar 300  bp.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  semua sampel ikan uji yang tidak ada pita DNA pada produk PCR  saat  menggunakan  primer  MHC-I  dan  MHC-II adalah karena tidak ada DNA target pada sampel ikan tersebut.
Hasil analisis keberadaan marka MHC-I dan MHC- II  menggunakan  metode  PCR  pada  ikan  lele  Kenya tersaji pada Gambar 3.
Keberadaan marka MHC-I pada ikan lele Kenya telah menunjukkan pita DNA tunggal dan berukuran sekitar 400 bp, dengan persentase ikan yang positif membawa marka MHC-I sebesar 100%. Untuk sampel ikan  lele yang  positif  membawa  marka  MHC-II  juga  telah menunjukkan  pita  DNA  tunggal,  yakni  berukuran sekitar 1.300 bp, dengan persentase ikan yang positif membawa  marka  MHC-II  sebanyak  100%.  Tidak terdapatnya pita DNA produk PCR pada kontrol negatif (N) menunjukkan bahwa tidak ada kontaminasi dalam proses  amplifikasi  PCR.  Selanjutnya,  PCR  dengan
menggunakan primer  aktin menghasilkan pita DNA untuk  semua  sampel  berukuran  sama,  yaitu  sekitar 300  bp.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  semua sampel ikan uji yang tidak ada pita DNA pada produk PCR  saat  menggunakan  primer  MHC-I  dan  MHC-II adalah karena tidak ada DNA target pada sampel ikan tersebut.
Selanjutnya hasil analisis keberadaan marka MHC- I dan MHC-II pada ikan lele Sangkuriang tersaji pada Gambar 4.
Keberadaan  marka  MHC-I  pada  ikan  lele Sangkuriang telah menunjukkan pita DNA tunggal dan berukuran sekitar 1.000 bp, dengan persentase ikan yang positif membawa marka MHC-I sebesar 92,31%. Namun  demikian  tidak  terdapat  sampel  ikan  lele Sangkuriang  yang  positif  membawa  marka  MHC-II. Tidak terdapatnya pita DNA produk PCR pada kontrol negatif (N) menunjukkan bahwa tidak ada kontaminasi dalam  proses  amplifikasi  PCR.  Selanjutnya,  PCR dengan menggunakan primer  aktin menghasilkan pita DNA untuk semua sampel berukuran sama, yaitu sekitar  300  bp.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa semua sampel ikan uji yang tidak ada pita DNA pada produk  PCR  saat  menggunakan  primer  MHC-I  dan MHC-II adalah karena tidak ada DNA target pada sampel ikan tersebut.
Hasil analisis keberadaan marka MHC-I dan MHC- II  pada  ikan  lele  strain  Mutiara,  Paiton,  Kenya,  dan Sangkuriang  menunjukkan  adanya  keberadaan  gen
Gambar 2. Amplifikasi PCR dalam deteksi marka molekuler dengan target gen MHC-I dan MHC-II pada ikan lele  strain  Paiton.  aktin  digunakan  sebagai  kontrol  loading  DNA.  M=  marka  DNA;  1-14= nomor ikan uji; dan N= produk PCR tanpa cetakan DNA (sebagai kontrol negatif).
Figure 2. PCR amplification to detect MHC-I and MHC-II gene markers on the Paiton catfish strain.  actin= DNA  loading  control.  M=  DNA  ladder;  1-14=  numbers  of  examined  specimens;  and  N=  the  PCR products without DNA template.

## a                                                                             b
M  1  2   3  4  5  6   7  8  9 10 11 12 13 N

## M  1  2   3   4   5  6   7  8  9 10 11 12 13 N
MHC II  actin  actin (bp) 1500 1000 600 400 200 500 300 100 MHC I (bp) 1500 1000 600 400 200 500 300 100
MHC-I pada keempat strain tersebut, akan tetapi hanya tiga strain yang menunjukkan adanya keberadaan gen MHC-II yaitu strain Mutiara, Paiton, dan Kenya. Hasil dari amplifikasi PCR juga belum menunjukkan pita DNA tunggal,  yaitu  untuk  MHC-I  berkisar  400-1.000  bp, sedangkan untuk MHC-II berkisarantara 400-1.500 bp. Azis  et  al.  (2015a)  dalam  penelitiannya  melaporkan
bahwa marka MHC-I ikan lele belum menunjukkan pita DNA tunggal, yakni sekitar 300 bp, 500 bp, dan 1.000 bp. Akan tetapi berbeda dengan penelitian Suprapto et al. (2017) yang menunjukkan hasil amplifikasi PCR pita DNA tunggal MHC-II yaitu 426 bp pada ikan lele strain  Mutiara.  Penelitian  Suprapto  et  al.  (2017) menunjukkan bahwa benih ikan yang positif membawa
Gambar 3. Amplifikasi PCR  dalam deteksi  marka molekuler  dengan target  gen MHC-I dan MHC-II pada ikan lele strain Kenya.  aktin digunakan sebagai kontrol loading DNA. M= marka DNA; 1-14= nomor ikan uji; dan N= produk PCR tanpa cetakan DNA (sebagai kontrol negatif).
Figure  3. PCR  amplification  to  detect  MHC-I  and  MHC-II  gene  markers    on  the  Kenyan catfish  strain.  actin  =  DNA  loading  control.  M=  DNA  ladder;  1-14=  num- bers  of  examined  specimens;  and  N=  the  PCR  products  without  DNA  tem- plate.
Gambar 4. Amplifikasi PCR dalam deteksi marka molekuler dengan target gen MHC-I dan MHC-II pada ikan lele strain Sangkuriang.  aktin digunakan sebagai kontrol loading DNA. M = marka DNA; 1-14= nomor ikan uji; dan N = produk PCR tanpa cetakan DNA (sebagai kontrol negatif).
Figure  4. PCR  amplification  to  detect  MHC-I  and  MHC-II  gene  markers  on  the  Sangkuriang  catfish  strain.  actin  =  DNA  loading  control.  M  =  DNA  ladder;  1-14  =  numbers  of  examined  specimens;  and  N= the  PCR  products  without  DNA  templaet.
a                                                       b
a                                                                           b M  1   2   3   N M     1     2    3    N MHC I MHC II  actin (bp) 1500 1200 600 400 200 500 300 100  actin 1000 (bp) 1500 1200 600 400 200 500 300 100 1000 (bp) 1500 600 400 200 500 300 100 1000 M  1  2   3   4  5   6   7  8  9  10 11 12 13 N (bp) 1500 600 400 200 500 300 100 1000 MHC I MHC II  actin  actin

## M  1  2   3   4   5  6  7   8  9  10 11 12 13 N
marka  MHC-II  memiliki  daya  tahan  dan  respons imunitas yang lebih baik dibandingkan benih ikan yang tidak  membawa  marka  MHC-II,  hal  ini  dikarenakan kemampuan  ikan  dalam  memproduksi  antibodi rendah,  sehingga  ikan  lebih  banyak  mengandalkan pada kemampuan imunitas bawaan (imun non-spesifik) untuk  melawan  infeksi  patogen,  sehingga  dapat menstimulasi  kekebalan  tubuh  khususnya  untuk memproduksi  antibodi  melalui  limfosit  B,  sehingga daya  tahan  tubuh  dalam  merespons  adanya  infeksi patogen  akan  meningkat.  Hasil  tersebut  senada dengan penelitian Azis et al. (2015b) yang melaporkan bahwa peran MHC dalam sistem kekebalan pada tubuh ikan adalah untuk sebagai penanda kehadiran dari an- tigen.
Di samping itu, MHC sebagai penanda molekuler juga menunjukkan bahwa resistensi dapat diwariskan, dan tingkat kelangsungan hidup sekitar 2,2 kali lebih tinggi daripada ikan tanpa penanda molekuler (Azis et al., 2015b). Hal ini diperkuat juga oleh penelitian Alimuddin et al. (2018) yang melaporkan bahwa benih ikan dari induk yang positif MHC-I memiliki tingkat pertumbuhan  dan  sintasan  yang  lebih  tinggi dibandingkan dengan benih dari induk yang negatif MHC  I.  Pada  penelitian  yang  lain  juga  melaporkan bahwa terdapat asosiasi gen MHC ikan teleost dengan resistensi penyakit, yaitu pada ikan rainbow trout dan Atlantik  salmon  di  mana  seluruh  genomnya  yang resisten  terhadap  penyakit  dapat  dengan  mudah dikaitkan  dengan  informasi  sekuens  genom keseluruhan (Berthelot et al., 2014; Lien et al., 2016) yang  tersedia  di  tingkat  kromosom  dan  kelompok kekerabatan (Phillips et al., 2006; Palti et al., 2011). Dijelaskan pula oleh Kaufman (2018) bahwa variasi alel MHC  umumnya  diyakini  dapat  meningkatkan perlindungan suatu populasi spesies terhadap patogen. Sejumlah laporan tentang organisasi genom dari gen MHC (polimorfisme dan ekspresi) pada ikan ternyata tampak  serupa  dengan  yang  ada  pada  mamalia (Yamaguchi  &  Djikstra,  2019).  Hasil  yang  diperoleh pada penelitian ini menunjukkan bahwa ikan lele strain Mutiara, Paiton, Kenya, dan Sangkuriang merupakan kandidat  populasi  yang  potensial  dalam  kegiatan seleksi  ikan  lele  tahan  penyakit  berbasis  marka molekuler MHC-I, sedangkan untuk seleksi ikan lele tahan  penyakit  berbasis  marka  molekuler  MHC-II kandidat populasi yang potensial adalah strain Mutiara, Paiton, dan Kenya.

## KESIMPULAN
Marka  molekuler  MHC-I  terdapat  pada  ikan  lele strain Mutiara, Paiton, Kenya, dan Sangkuriang dengan ukuran  pita  DNA  berkisar  pada  400-1.000  bp;
sedangkan  marka  molekuler MHC-II  hanya  terdapat pada ikan lele strain Mutiara, Paiton, dan Kenya dengan ukuran pita DNA berkisar pada 400-1500 bp. Penelitian lebih  lanjut  diperlukan  untuk  memastikan  alel  dan sekuen  nukleotidanya  secara  total,  serta  untuk mendesain  lagi  primer  spesifik  dengan  produk  pita DNA tunggal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar- besarnya kepada Tim Kelompok Penelitian Ikan Lele Balai  Riset  Pemuliaan  Ikan  (BRPI)  Sukamandi  atas bantuannya selama pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR  ACUAN
Alimuddin, Putri, F.M., Wahjuningrum, D., Hardiantho, D., Sunarma, A., & Nuryati, S. (2018). Resistance against  Aeromonas  hydrophila  infection  and growth of (F2) second generation African catfish selected [Clarias gariepinus] using molecular mark- ers.  Biotropia,  25(2),  95-102.
Aoyagi, K., Dijkstra, J.M., Xia, C., Denda, I., Ototake, M., Hashimoto, K., & Nakanishi, T. (2002). Classi- cal MHC class I genes composed of highly diver- gent  sequence  line  ages  share  a  single  locus  in rainbow  trout  (Oncorhynchus  mykiss).  J. Immunol.,  168,  260-273.
Azis,  Alimuddin,  Sukenda,  &  Zairin,  M.Jr.  (2015a).
Identifikasi kandidat marka MHC I pada ikan lele (Clarias  sp.)  tahan  infeksi  Aeromonas  hydrophila. [Identification of MHC I marker candidate in cat- fish  (Clarias  sp.)  resistance  to  Aeromonas hydrophila  infection].  Jurnal  Riset  Akuakultur, 10(2), 261-9.
Azis, Alimuddin, Sukenda, & Zairin, M.Jr. (2015b). MHC I molecular marker inheritance and first genera- tion  catfish  (Clarias  sp.)  resistance  against Aeromonas  hydrophila  infection.  Pak.  J. Biotechnol.,  12(2),  131-7.
Berthelot, C., Brunet, F., Chalopin, D., Juanchich, A., Bernard, M., Noël, B., Bento, P., … & Guiguen, Y. (2014). The rainbow trout genome provides novel insights  into  evolution  after  whole-genome  du- plication  in  vertebrates.  Nat.  Commun.,  5, 3657.
Grimholt, U., Drablos, F., Jorgensen, S.M., Hoyheim, B.,  &  Stet,  R.J.  (2002).  The  major  histocompat- ibility class I locus in Atlantic salmon (Salmosalar L.):  Polymorphism,  linkage  analysis  and  protein modelling. Immunogenetics, 54, 570-58.
Grimholt,  U.,  Larsen,  S.,  Nordmo,  R.,  Midtlyng,  P., Kjoeglum,  S.,  Storset,  A.,  Saeb,  S.,  &  Stet,  R.J. (2003). MHC polymorphism and disease resistance in Atlantic salmon (Salmo salar); facing pathogens with  single  expressed  major  histocompatibility class I and class II loci. Immunogenetics, 55, 210- 219.
Hayuningtyas,  E.P.,  Ariyanto,  D.,  &  Syahputra,  K.
(2013).  Hubungan  antara  pertumbuhan  dengan keberadaan  gen  tahan  penyakit  Major  Histocom- patibility  Complex  (MHC)  pada  ikan  mas  Cyprinus carpio.  Jurnal  Riset  Akuakultur,  8(3),  383-391.
Kaufman, J. (2018). Generalists and specialists: A new view  of  how  MHC  class  I  molecules  fight  infec- tious  pathogens.  Trends  Immunol.,  39,  367-379.
Kjoglum,  S.,  Larsen,  S., Bakke,  H.G.,  &  Grimholt,  U. (2006). How speciûc MHC class I and class II com- binations affect disease resistance against infec- tious salmon anaemia in  Atlantic salmon (Salmo salar).  Fish  Shellûsh  Immunol.,  21,  431-441.
Li, C., Wang, R., Su, B., Luo, Y., Terhune, J., Beck, B., & Peatman, E. (2013). Evasion of mucosal defenses during  Aeromonas  hydrophila  infection  of  chan- nel catfish (Ictalurus punctatus) skin.  Developmen- tal  and  Comparative  Immunology,  39,  447-455.
Li,  W.,  Sun,  W.X.,  Hu,  J.F.,  Hong,  D.W.,  &  Chen,  S.L. (2014). Molecular characterization, polymorphism and expression analysis of swamp eel MHC class II b gene, after infection by Aeromonas hydrophila. J. Animal Plant Sci., 24(2), 481-491.
Lien,  S.,  Koop,  B.F.,  Sandve,  S.R.,  Miller,  J.R.,  Kent, M.P.,  Nome,  T.,…  &  Davidson,  W.S.  (2016).  The Atlantic  salmon  genome  provides  insights  into rediploidization. Nature, 533, 200-205.
Min,  D.,  Chen,  S.L.,  Liu,  Y.H.,  Niu,  B.Z.,  Yang,  J.F.,  & Zheng, B. (2012). MHC polymorphism and disease- resistance  to  Edwardsiel  latarda  in  six  turbot Scophthalmus  maximus  families.  Chinese  Sci  Bul- letin, 57(25), 3262-3269.
Moulana, M., Evenhuis, J., Albertino, M., Godwin, U., Kountikov,  E.I.,  Stuge,  T.B.,  Wilson,  M.,  .....,  & McConnell,  T.J.  (2008).  Characterization  of  anti- channel catfish MHC class IIb monoclonal antibod- ies.  Vet.  Immunol.  Immunopathol.,  126,  120-130.
Osborne, M.J. & Turner, T.F. (2011). Isolation and char- acterization of major histocompatibility class II² genes in an endangered North American cyprinid fish, the Rio Grande silvery minnow Hybognathus amarus. Fish Shellfish Immunol., 30, 1275-1282.
Palti,  Y.,  Genet,  C.,  Luo,  M.C.,  Charlet,  A.,  Gao,  G., Hu, Y., & Rexroad, C.E. (2011). A first generation integrated map of the rainbow trout genome. 3 rd .
BMC Genomics, 12, 180.
Pang,  J.,  Gao,  F.,  Lu,  M.,  Ye,  X.,  Zhu,  H.,  &  Ke,  X. (2013). Major histocompatibility complex class IIA and IIB genes of nile tilapia Oreochromis niloticus, genomic structure, molecular polymorphism and expression  patterns.  Fish  Shellfish  Immunol.,  34, 486-496.
Phillips, R.B., Nichols, K.M., DeKoning, J.J., Morasch, M.R.,  Keatley,  K.A.,  Rexroad,  C.E.,  &  Thorgaard, G.H.  (2006).  Assignment  of  rainbow  trout  link- age groups to speciûc chromosomes. Genetics, 174, 1661-1670.
Picchietti,  S.,  Abelli,  L.,  Guerra,  L.,  Randelli,  E., Serafini, F.P., Belardinelli, M.C., Buonocore, F., ....., &  Scapigliati, G.  (2015).  MHC  II-²  chain  gene  ex- pression studies define the regional organization of  the  thymus  in  the  developing  bony  fish Dicentrarchus labrax L. Fish Shellfish Immunol., 42, 483-493.
Piertney, S.B. & Oliver, M.K. (2006). The evolutionary ecology of the major histocompatibility complex. Heredity, 96, 7-21.
Poonsawat,  S., Areechon,  N.,  Srisapoome, P.,  Maita, M.,  &  Endo,  M.  (2009).  Polymorphism  of  major histocompatibility complex class I alpha cDNA and resistance  against  streptococcosis  of  six  strains of  nile  tilapia  (Oreochromis  niloticus  Linnaeus). Kasetsart J. (Nat. Sci.), 43, 348-357.
Rakus, K.A., Wiegertjes, G.F., Jurecka, P., Walker, P.D., Pilarczyk, A., & Irnazarowa, I. (2009). Major his- tocompatibility (MH) class II B gene polymorphism influences  disease  resistance  of  common  carp Cyprinus carpio. Aquaculture, 288, 44-50.
Rakus, K.A. (2008). Major histocompatibility (MH) poly- morphism  of  common  carp.  Link  with  disease  resis- tance.  Disertasi.  Wageningen  (NL):  Wageningen University.
Shen, T., Xu, S., Yang, M., Pang, S., & Yang, G. (2011). Molecular  cloning,  expression  pattern,  and  3D structural  analysis  of  the MHC  class  IIB  gene  in the Chinese longsnout catfish Leiocassis longirostris. Vet. Immunol. Immunopathol., 141, 33-45.
Sommer, S. (2005). The importance of immune gene variability (MHC) in evolutionary ecology and con- servation. Frontiers in Zoology, 2, 16-34.
Srisapoome, P., Ohira, T., Hirono, I., & Aoki, T. (2004).
Cloning, characterization and expression of cDNA containing major histocompatibility complex class II a and II ß genes of Japanese flounder Paralichtys olivaceus. Fish. Sci., 70, 264-276.
Suprapto, R.,  Alimuddin, Nuryati, S.,  Imron, Marnis, H., & Iswanto, B. (2017). MHC II marker potential linked to motile aeromonad septicaemia disease resistance  in  African  Catfish  (Clarias  gariepinus). Indonesian Aquaculture Journal, 12(1), 21-28.
Yamaguchi, T. & Djikstra, J.M. (2019). Review: Major histocompatibility complex (MHC) genes and dis- ease resistance in fish. Cells, 8,  378.
Zhou, F., Dong, Z., Fu, Y., Li, T., Zeng, Y., Ji, X., Chen, W., Zhang, J., & Wang, H. (2013). Molecular clon- ing, genomic structure, polymorphism and expres- sion analysis of major histocompatibility complex class  II  B  gene  of  nile  tilapia  (Oreochromis niloticus).  Aquaculture,  372-375,  149-157.