Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik Embriogenik Terung Pada Beberapa Media Maturasi
Regeneration Rate of Eggplant Somatic Embryogenic In Various

## Maturation Media
Hartati *) , Hanifah Agani, N. Sri Hartati, Enny Sudarmonowati Puslit Bioteknologi LIPI, Jl. Raya Bogor KM 46 Cibinong, 16911
* E-mail: tatiktikta@yahoo.com

## ABSTRACT
Ralstonia solanacearum is one of the most important pathogen that causes bacterial wilt disease in eggplant and inhibits eggplant production. Improvement of eggplant varieties resistant to bacterial wilt can be accomplished through genetic manipulation. Regeneration of in vitro plants  isone of the important tools to supports plant improvementthrough biotechnology. This study was aimed to determine  the  rate  of  eggplant  regeneration  in  various  maturation  media,  and  to  find  the  best medium  for  eggplant  regeneration  based  on  maturation  rate  and  the  number  of  cotyledon produced.  We  used  resistant  eggplant  (accession  032)as  the  material  to  produce  somatic embryogenic.There  were  7  types  of  regeneration  media  used  in  this  research.  MS  medium  was supplemented with a certain concentration of plant growt regulators , such as: 1 mg / L + BAP 1 mg / L, NAA 4mg / L, TDZ 0.005 mg / L, TDZ 0.001 mg / L, CuSO 4 2mM + BAP 1 mg / L, CuSO 4 2mM + BAP 2 mg / L and Kinetin 1 mg / L + CuSO 4 2mM. Three clumps of callus per plate  with    three  replications  were  transferred  to  MS  suplemented  medium.  The  parameters observed were the color of callus before and after they were transfered to regeneration medium, the day of formation of globular, heart-shaped, tubular and cotyledonary phase, and the number of cotyledons  formed.  The  results  obtained  showed  the  somatic  embryogenic  color  of  the  032 genotype  was  white  with  friable  structure before  being  transferred  to  regeneration  medium  and was  turned  to  yellowish  white  after  being  transferred  to  the  regeneration  medium.  On  the  day sixth, friable embryogenic somatic of eggplant was developed into nodule on medium MS + NAA 4 mg / L, MS + CuSO 4 2mM + BAP medium 1 mg / L, and MS + CuSO 4 2mM + BAP 2 mg / L. Somatic embryogenic callus of accession 032 were able to pass complete globular, heart-shaped, tubular  and  cotyledonary  phase.  The  most  responsive  medium  for  somatic  embryogenic  callus regeneration,  based  on  the  days  of  the  callus  phases  formation  and  the  number  of  early-phase cotyledons obtained, were MS medium suplemented with CuSO 4 2mM + BAP,and CuSO 4 2 mM + BAP 2 mg / L.
Keywords: eggplant, Ralstonia solanacearum, regeneration, cotyledonary, clump, BAP

## PENDAHULUAN
Terung  merupakan  salah  satu  sayuran  yang memiliki potensi yang baik untuk dikembangkan  di  Indonesia.Produksi  terung nasional menurut Badan Pusat Statistik (2017) mencapai  514.332  ton/tahun.Angka  produksi ini  menempatkan  Indonesia  pada  posisi keenam  negara  penghasil  terung  terbesar  di dunia.Walaupun,  jika  dibandingkan  dengan China  yang  berada  pada  posisi  nomor  satu dunia  dengan  produksi  28.800.000  ton  per tahun  (FAO 2015),  nilai  produksi  Indonesia masih rendah. Terung ( Solanum melongena L.) merupakan  salah  satu  sayuran  yang  biasa dikonsumsi  mentah  sebagai  lalapan  ataupun dengan  diolah  terlebih  dahulu.  Terung  kaya akan  serat  pangan,  vitamin  (B1,  B6,  niacin,
folate,  K)  dan  mineral  seperti  Cu,  Mn,  dan Kalium (National  Nutrient  Database  for Standard  Reference  2016). Beberapa  literatur menyebutkan  bahwa  terung,  berdasarkan  dari pengobatan  Aryuveda  India,  dapat  digunakan sebagai  obat. Akan  tetapi  Rao  (2011) melaporkan bahwa hal ini hanya mitos.Beberapa komponen phytonutrien dalam terung  seperti  nasunin  dan  clorogenic  acid dapat    menurunkan  gula  darah,  bersifat antioksidan, antibakteri, menghambat perkembangan sel kanker, mengatasi gangguan lambung dan saluran pernapasan (Plazas et al . 2014,  Zaro et  al . 2015).  Meski  demikian, terung bukanlah obat. Penyakit layu bakteri yang disebabkan oleh Ralstonia solanacearum merupakan salah satu faktor penghambat dalam peningkatan produksi

## Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
terung  di  Indonesia.  Pemberantasan  penyakit ini  biasanya  dilakukan  secara  biologis  dan kimiawi,  namun  cara  ini  kurang  efektif.  Salah satu upaya yang dapat dilakukan adalah dengan menciptakan  tanaman  terung  yang  tahan  layu bakteri Ralstonia  solanacearum .Perakitan tanaman tahan penyakit dapat dilakukan secara konvensional atau melalui aplikasi bioteknologi.  Sumber  ketahanan  terhadap Ralstonia dapat  diperoleh  dari  spesies  terung yang  sama  ataupun  kerabatnya  dari  species yang  berbeda. Solanum  torvum dan S. aethiopicum merupakan  salah  satu  sumber ketahanan  yang  dapat  digunakan  untuk perakitan terung tahan
Ralstonia (Daunay et al. 1991, Rizza et  al . 2002) . Tetapi,  persilangan antar  spesies  atau  yang  memiliki  kekerabatan yang  jauh  sulit  dilakukan  karena  kendala genetik (Gleba & Shlumukov 1990), selain itu biji yang dihasilkan biasanya steril (Tamura et al . 2002).
Kemajuan di bidang bioteknologi membuka peluang  untuk  mentransformasikan  sifat-sifat unggul  ke  tanaman  target,  termasuk  terung. Perakitan  varietas  atau  kultivar  terung  yang tahan  penyakit  dapat  diperoleh  melalui manipulasi  genetik  seperti  embrio rescue ,  fusi protoplas,  keragaman  somaklonal  (kultur protoplas,  kultur  sel)  dan  transformasi. Keberhasilan  regenerasi  tanaman  secara in vitro merupakan  salah  satu  alat  penentu keberhasilan  pemuliaan  tanaman  secara bioteknologi (Husni et al . 2003). Terung  termasuk  tanaman  yang  mudah dikultur  secara in  vitro sehingga    dapat dijadikan  model  untuk  genus Solanum dalam mempelajari  fisiologi  tanaman  secara in  vitro , serta mempelajari kestabilan genetik somaklonal  hasil  dari  proses  morfogenetik yang  berbeda (Magnioli et  al . 2001).  Respon tanaman pada berbagai media regenerasi sangat berbeda.Proliferasi  tanaman  secara  in  vitro dapat  dilakukan  melalui  jalur  organogenesis dan  embriogenesis  somatik.Proliferasi  melalui pembentukan  embriogenesis  somatik  lebih disukai  karena  jumlah  propagula  yang dihasilkan  tidak  terbatas  serta  dapat  diperoleh dalam waktu yang lebih singkat.
Selain  itu,  penggunaan  embrio  somatik pada  rekayasa  genetik  tanaman  dapat meningkatkan  keberhasilan  dengan  peluang transformasi yang tinggi karena karena embrio somatik  berasal  dari  satu  sel  somatik. Jika dibutuhkan, embrio somatik dapat diregenerasikan  membentuk  tanaman  utuh
(Purnamaningsih  2002). Ada  beberapa  faktor yang  mepengaruhi  keberhasilan  regenerasi embriogenik  somatik,  diantaranya  genotip tanaman,  sumber  eksplan  tanaman  (Mir et  al . 2011),  serta media  dan  hormon  (Slater et  al . 2003). Keberhasilan  pembentukan  embriogenesis somatik  pada  terung  pertama  kali  dilaporkan oleh Yamada (1967)  dengan  menggunakan eksplan  tanaman  dari  embrio  biji  muda pada media MS dengan tambahan Indole Acetic Acid (IAA).Hormon  pertumbuhan  seperti  auksin, sitokinin,  giberelin  dan  asam  absisat  berperan penting  dalam  regenerasi  tanaman.Auksin  dan sitokinin  dilaporkan  merupakan  hormon  yang paling berpengaruh dalam pembentukan kalus, pembentukan  akar  dan  regenerasi.  Diantara auksin, Naphthalene  Acetic  Acid  (NAA),  2,4 Dichlorophenoxyacetic  Acid  (2,4-D)  dan Indole Acetic Acid (IAA) memicu pembentukkan kalus, sedangkan Indole Butyric Acid (IBA)  memicu  pembentukkan  akar  pada terung (Kamat  &  Rao  1978,  Fobert  &  Webb 1988 dalam Sidhu et al . 2014). Sementara itu, konsentrasi  NAA  yang  berbeda  dibutuhkan untuk  pembentukkan  kalus  (0,8  mg/L), pembentukan akar (0,016 mg/L), pembentukan embrio  (8,0  mg/L)  dan  pembentukkan  tunas (NAA  0  mg/L)  (Swamynathan et  al . 2010 dalam Sidhu et al . 2014). Media pertumbuhan yang diberi penambahan  IBA  menghasilkan  kalus  putih berbentuk remah ( friable ) dengan pertumbuhan lambat,  NAA  menghasilkan  kalus  berwarna hijau  dengan  pertumbuhan  cepat;  2,4-D mengiduksi  kalus  secara  cepat  (Anwar et  al . 2002).  Diantara  berbagai  sitokinin,  Kinetin efektif  untuk  regenerasi  tunas  (Kamat  &  Rao 1978,  Alicchio et  al . 1982).Sitokinin  lainnya seperti Benzyl  Amino  Purin (BAP)  atau Thidiazuron (TDZ) juga  menghasilkan embrio somatik dengan presentasi tinggi pada eksplan yang  berbeda  dari  terung. Sitokinin  berperan secara sinergis dalam mendukung perkembangan kalus (Gleddie et al . 1983).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kecepatan  regenerasi  terung  pada  berbagai media maturasi  serta  mencari  media  terbaik untuk regenerasi terung berdasarkan kecepatan maturasi dan jumlah pembentukan kotiledon.

## METODE

## Bahan
Untuk  kegiatan  penelitian  ini  digunakan  kalus somatik  embriogenik  terung  dari  nomor  koleksi terung  aksesi  032.Aksesi ini  telah  diidentifikasi
tahan  penyakit  layu  bakteri  yang  disebabkan  oleh Ralstonia.
Komposisi Media Perlakuan
Media  regenerasi  yang  digunakan  adalah  media Murashige  dan  Skoog  (MS)  yang  ditambah  dengan beberapa  jenis  hormon  dengan  konsentrasi  yang berbeda sesuai  perlakuan  (Tabel  1).Sebagai  bahan pemadat digunakan mikro agar sebanyak 2 mg/l. Tabel 1. Komposisi Media Perlakuan Media Komposisi Kontrol MS 0 M1 MS + Kinetin 1 mg/L + BAP 1 mg/L M2 MS + NAA 4mg/L M3 MS + TDZ 0,005 mg/L M4 MS + TDZ 0,001 mg/L M5 MS + CuSO4 2mM + BAP 1 mg/L M6 MS + CuSO4 2mM + BAP 2 mg/L M7 MS + Kinetin 1 mg/L + CuSO4 2mM Regenerasi Kalus Somatik Embriogenik Kalus  somatik  embriogenik  terung  ditransfer  ke media  regenerasi  sesuai  perlakuan  dengan  ukuran clump (bulatan)  1x1  cm  menggunakan  pinset  dan scalpel .  Jumlah  ulangan  tiap  perlakuan  adalah sebanyak  3  petri,  dan  pada  setiap  petri  terdapat masing-masing  3  bulatan/ clump kalus  somatik embriogenik  terung.  Setelah  ditanam  dan  petri  di seal , kalus dalam petri ditempatkan pada rak terang di  ruang  kultur  dengan  suhu  ruangan  20 o C. Pengamatan  proses  maturasi  dan  regenerasi  kalus terung  dilakukan  setiap  3  hari  sekali  dengan mikroskop  stereo  dan  perangkat  komputer  yang sudah  terinstal  aplikasi Leica  Aplication  Suite di dalamnya,  dan  didokumentasi.  Parameter  yang diamati  adalah  warna  kalus  sebelum  dan  sesudah ditransfer  ke  media  maturasi  dan  regenerasi,  lalu diamati  hari  pembentukan  pembentukan  fase globular,  fase heart-shaped atau  fase  hati,  fase tubular  dan  kotiledon,  serta  jumlah kotiledon  yang terbentuk.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan  kalus  somatik  embriogenik dilakukan sebelum dan sesudah dipindahkan ke media  regenerasi.Warna  kalus  somatik embriogenik  terung  genotip  032  dalam  media proliferasi  dan  sebelum  dipindahkan  ke  media regenerasi  berwarna  putih  dengan  struktur remah, dan  setelah  dipindahkan  ke  media regenerasi  berubah  warna  menjadi  putih kekuningan.  Pada  pengamatan  hari  ke  6, struktur  kalus  embriogenik  masih  berbentuk remah  pada  media  MS  +  Kinetin  1  mg/L, media  MS  +  TDZ  0,005  mg/L,  media  MS  +
TDZ 0,01 mg/L, media MS + Kinetin 1 mg/L, dan  media  kontrol.  Berbeda  dengan pengamatan  pada  media  regenerasi  tersebut, pada  pada  media  MS  +  NAA  4  mg/L,  media MS + CuSO 4 2mM + BAP 1 mg/L, media MS + CuSO 4 2mM + BAP 2 mg/L, struktur remah somatik  embriogenik  terung  mulai  berubah menjadi  berbentuk  nodul-nodul.  Gambar berikut  menunjukkan  perubahan  warna  kalus 032  (Gambar  1)  sebelum  dan  sesudah dipindahkan ke media regenerasi. Menurut  Purnamaningsih  (2002),  struktur kalus  menggambarkan  daya  regenerasinya membentuk  tunas  dan  akar.  Kalus  yang berbentuk globular (nodul-nodul) dan berwarna bening biasanya mempunyai kemampuan lebih tinggi  untuk  membentuk  tunas  daripada  kalus yang  bersifat  kompak  dan  berwarna  coklat kehitaman.  Dalam  hal  ini  media  yang digunakan  untuk  memacu  regenerasi  kalus akan sangat menentukan. Keseimbangan nutrisi dalam  media  tumbuh  sangat  mempengaruhi pertumbuhan  kalus  maupun  diferensiasinya membentuk tunas.
Morfogenesis  eksplan  tergantung  kepada keseimbangan  auksin  dan  sitokinin  didalam media dan interaksi antara zat pengatur tumbuh endogen  di  dalam  tanaman  dan  zat  pengatur tumbuh  eksogen  yang  diserap  dari  media tumbuh. Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh  Husni  (2005),  penampakan kalus  yang  dapat  beregenerasi  membentuk tunas  berasal  dari  kalus  embriogenik  yang ditandai dengan adanya nodul yang mengkilap berwarna  hijau  kekuningan  dan  kemudian membentuk  bakal  tunas  dan  tunas.  Sedangkan kalus  yang tidak dapat beregenerasi umumnya berbentuk  kompak  dan  kering  dengan  warna keputihan atau berwarna kuning kecoklatan. Embrio  somatik  dapat  dicirikan  dari strukturnya yang bipolar, yaitu mempunyai dua calon  meristem,  yaitu  meristem  akar  dan meristem tunas.Secara spesifik tahap regenerasi  embrio  somatik  dimulai  dari  fase globular, fase heart-shaped atau fase hati, fase torpedo,  dan  planlet  (Gaj 2001).Hasil pengamatan  perkembangan  kalus  somatik embriogenik  terung  genotip  032  di  media maturasi dan regenerasi melalui beberapa fase, yaitu  fase  globular  (Gambar  2), heart-shaped (Gambar 3), tubular (Gambar 4) dan kotiledon (Gambar 5).

## Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
Gambar 1. Warna dan Struktur Kalus Somatik Embriogenik Terung Genotipe 032,
(a)  Sebelum    dan  (b)  Sesudah  di Media  Regenerasi  MS  +  Kinetin  1 mg/L  +  BAP  1  mg/L  (c)  MS  +
NAA 4 mg/L  (d) MS + TDZ 0,005 mg/L  (e) MS + TDZ 0,01 mg/L  (f) MS + CuSO 4 2mM + BAP 1 mg/L (g)  MS  +  Cu  SO 4 2mM  +  BAP  2 mg/L  (h)  MS  +  Kinetin  1  mg/L  +
CuSO 4 2mM (i) Kontrol MS0
Gambar 2. Fase Globular Gambar 3. Fase Heart-shape Gambar 4. Fase Tubular Gambar 5. Fase Kotiledon a c b d e f g h i
128 Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
Gambar 1. Warna dan Struktur Kalus Somatik Embriogenik Terung Genotipe 032,
(a)  Sebelum    dan  (b)  Sesudah  di Media  Regenerasi  MS  +  Kinetin  1 mg/L  +  BAP  1  mg/L  (c)  MS  +
NAA 4 mg/L  (d) MS + TDZ 0,005 mg/L  (e) MS + TDZ 0,01 mg/L  (f) MS + CuSO 4 2mM + BAP 1 mg/L (g)  MS  +  Cu  SO 4 2mM  +  BAP  2 mg/L  (h)  MS  +  Kinetin  1  mg/L  +
CuSO 4 2mM (i) Kontrol MS0
Gambar 2. Fase Globular Gambar 3. Fase Heart-shape Gambar 4. Fase Tubular Gambar 5. Fase Kotiledon a c b d e f g h i
128 Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
Gambar 1. Warna dan Struktur Kalus Somatik Embriogenik Terung Genotipe 032,
(a)  Sebelum    dan  (b)  Sesudah  di Media  Regenerasi  MS  +  Kinetin  1 mg/L  +  BAP  1  mg/L  (c)  MS  +
NAA 4 mg/L  (d) MS + TDZ 0,005 mg/L  (e) MS + TDZ 0,01 mg/L  (f) MS + CuSO 4 2mM + BAP 1 mg/L (g)  MS  +  Cu  SO 4 2mM  +  BAP  2 mg/L  (h)  MS  +  Kinetin  1  mg/L  +
CuSO 4 2mM (i) Kontrol MS0
Gambar 2. Fase Globular Gambar 3. Fase Heart-shape Gambar 4. Fase Tubular Gambar 5. Fase Kotiledon a c b d e f g h i
Fase  globular  adalah  fase  dimana    sel-sel berkumpul  dan  membentuk  massa  sel  dengan struktur bulat. Fase heart-shaped atau fase hati adalah  fase  dimana  terlihat  adanya  pendataran dan  penonjolan  pada  kedua  sisi  daerah terminal,  sehingga  massa  sel membentuk struktur  seperti  jantung.  Penonjolan  pada  sisi kanan  dan  kiri  terjadi  akibat  pembelahan  sel yang lebih cepat pada daerah tersebut. Daerah penonjolan disusun oleh sel yang memiliki sifat meristematik, ditandai dengan sel bersitoplasma pekat dan inti yang jelas dengan penyerapan warna yang cukup banyak. Fase  tubular  adalah  fase  dimana  massa  sel tampak seperti tabung. Fase kotiledon ditandai dengan  terbentuknya  dua  buah  kotiledon. Daerah  diantara  kotiledon  padanya  terlihat kelompok  sel  yang  ukurannya  lebih  kecil dibandingkan  dengan  ukuran  sel  parenkim disekitarnya,  intinya  cukup  besar,  selain  itu sitoplasmanya  pun  cukup  pekat  dengan penyerapan  warna  yang  cukup  banyak, kelompok  sel  tersebut  adalah  sel  meristem apeks  pucuk  (Bhojwani  &  Soh  1999).  Kalus terung  genotip  032  yang  menunjukkan perkembangan  tersebut  yaitu  pada  media regenerasi  dengan  formulasi  MS  +  NAA  4 mg/L (M2), MS + TDZ 0,005 mg/L (M3), MS + CuSO 4 2mM +BAP 1 mg/L (M5) dan MS +
CuSO 4 2mM + BAP 2 mg/L (M6). Sel-sel  kalus  yang  mengikuti  pola embriogenesis  somatik  dapat  berkembang membentuk kalus embriogenik dan selanjutnya menjadi  embrio  somatik  mulai  dari  fase globular  sampai  fase  kotiledon. Penggunaan perlakuan yang berbeda memberikan pengaruh yangberbeda terhadap kalus yang ditumbuhkan karena  adanya  kompetisi  antara  sel embriogenik  dalam  pertumbuhan  maupun perkembangannya. Perbedaan  dari  masing- masing  perlakuan  tersebut  dapat  dilihat  pada tekstur  maupun  warna  kalus  yang  diperoleh. Jaringan  yang  menyentuh  media  lebih  mudah menyerap  hara  dan  zat  pengatur  tumbuh sehingga  pertumbuhannya  juga  berbeda dibandingkan  dengan  kalus  yang  berada  di bagian  permukaan. Adanya  persaingan  dalam penyerapan  hara  dari  media  yang  digunakan menentukan  arah  dan  kemampuan  tumbuh yang  berbeda,  sehingga  dihasilkan  embrio somatik  dengan  fase  dan  jumlah  yang  juga berbeda (Yelnititis 2013). Secara keseluruhan, tahap-tahap perkembangan  kalus  terung  genotip 032 dapat diikuti dan dilihat melalui
gambar
berikut.Pengamatan  dilakukan  dari  mulai ketika kalus masih dalam media proliferasi atau sejak sebelum di media regenerasi dan maturasi (Gambar  6)  hingga  setelah  dipindahkan  ke media  maturasi  dan  regenerasi  MS  + CuSO 4 2mM +  BAP,  yaitu  pada  hari  ke-3 (Gambar  7),  hari  ke-6  (Gambar  8),  hari  ke-9 (Gambar  9),  hari  ke-12  (Gambar  10), hari  ke- 15  (Gambar  11)  dan  hari  ke-18  (Gambar  12). Proses  regenerasi  tanaman  secara in  vitro dipengaruhi  oleh  dua  faktor  utama  yaitu komponen  media  dan  sumber  eksplan  (Rai et al . 2009). Komponen media yang memengaruhi proses regenerasi tanaman secara in  vitro salah  satunya  adalah  komposisi  zat pengatur  tumbuh  (Taji et  al . 2002). Morfogenesis kalus tergantung pada keseimbangan  auksin  dan  sitokinin  di  dalam media.  Interaksi  antara  zat  pengatur  tumbuh endogen  tanaman  dan  zat  pengatur  tumbuh eksogen  yang  diserap  dalam  media  akan menentukan  arah  perkembangan  kalus (Asnawati et al . 2002). Genotip  032  memiliki  kemampuan regenerasi  yang  baik,  dan  mengalami perubahan  fase  kalus  (globular,  tubular, torpedo,  kotiledon)  pada  media  M2,  M3,  M5 dan  M6  (Tabel  2). Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Sidhu (2014)  bahwa  genotip  dan eksplan merupakan faktor paling penting yang mempengaruhi  embriogenesis  somatik  dan regenerasi  lebih  lanjut.  Tahap  perkembangan embrio  somatik  terung  genotip  032  sesuai dengan teori yang telah dilaporkan sebelumnya,  yaitu  dimulai  dari  fase  globular, fase  hati,  fase  torpedo,  kotiledon dan  planlet (Gaj 2001). Berdasarkan pengamatan, kalus pada media MS + NAA 4 mg/L ulangan 2 memasuki fase globular pada hari ke-3, fase hati pada hari ke- 6,  fase  tubular  pada  hari  ke-9  dan  fase kotiledon  awal  pada  hari  ke-12.  Kalus  pada media  MS  +  TDZ  0,005  mg/L  ulangan  1 memasuki  fase  globular  pada  hari  ke-12,  fase hati pada hari ke-14, fase tubular pada hari ke- 15 dan fase  kotiledon pada hari ke-18.  Kalus pada media MS + TDZ 0,005 mg/L ulangan 3 memasuki  fase  globular  pada  hari  ke-6,  fase hati pada hari ke-12, fase tubular pada hari ke- 18  dan  fase  kotiledon  pada  hari  ke-18.  Kalus pada media MS + CuSO 4 2mM +BAP 1 mg/L ulangan  2  memasuki  fase  globular  pada  hari ke-3, fase hati pada hari ke-5, fase tubular pada hari  ke-6  dan  fase  kotiledon  pada  hari  ke-9. Kalus pada media MS + CuSO 4 2mM + BAP 2

## Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
mg/L  ulangan  1  memasuki  fase  globular  pada hari ke-9, fase hati pada hari ke-11, fase tubular pada  hari  ke-12  dan  fase  kotiledon  awal pada hari ke-12. Kalus  pada  media  MS  +  CuSO 4 2mM  + BAP 2 mg/L ulangan 2 memasuki fase globular pada  hari  ke-3,  fase  hati  pada  hari  ke-6,  fase tubular pada hari ke-9 dan fase kotiledon pada hari  ke-15.  Kalus  pada  media  MS  +  CuSO 4
2mM + BAP 2 mg/L ulangan 3 memasuki fase globular pada hari ke-13, fase hati pada hari le- 13,  fase  tubular  pada  hari  ke-15  dan  fase kotiledon  awal  pada  hari  ke-18.  Hasil perhitungan  jumlah  kalus  pada  media  MS  +
NAA  4  mg/L  ulangan  2  sebanyak  5  buah  per clump, media MS + TDZ 0,005 mg/L ulangan 1  sebanyak  3  buah  per  clump,  media  MS  +
TDZ  0,005  mg/L  ulangan  3  sebanyak  1  buah per clump, media MS + CuSO 4 2mM +BAP 1 mg/L ulangan 2 sebanyak 14 buah, media MS +  CuSO 4 2mM  +  BAP  2  mg/L  ulangan  1 sebanyak 14 buah, media MS + CuSO 4 2mM +
BAP  2  mg/L  ulangan  2  sebanyak  3  buah  dan media  MS  +  CuSO 4 2mM  +  BAP  2  mg/L ulangan 3 sebanyak 2 buah (Tabel 2). Menurut Purnamaningsih (2002), pemilihan zat pengatur tumbuh  merupakan  salah  satu  faktor  yang sangat  menentukan  diferensiasi  jaringan tanaman yang dikulturkan.
Gambar  6.  Kalus  somatik  embriogenik 032 sebelum di media regenerasi Gambar  7.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-3 (globular) Gambar  8.  Kondisis  kalus  032  hari  ke  6 (globular, tubular) Gambar  9.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-9 (globular,  tubular, torpedo, kotiledon) Gambar  10.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-12 (tubular, torpedo, kotiledon)
Gambar  11.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-15
(tubular, torpedo, kotiledon)
130 Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
mg/L  ulangan  1  memasuki  fase  globular  pada hari ke-9, fase hati pada hari ke-11, fase tubular pada  hari  ke-12  dan  fase  kotiledon  awal pada hari ke-12. Kalus  pada  media  MS  +  CuSO 4 2mM  + BAP 2 mg/L ulangan 2 memasuki fase globular pada  hari  ke-3,  fase  hati  pada  hari  ke-6,  fase tubular pada hari ke-9 dan fase kotiledon pada hari  ke-15.  Kalus  pada  media  MS  +  CuSO 4
2mM + BAP 2 mg/L ulangan 3 memasuki fase globular pada hari ke-13, fase hati pada hari le- 13,  fase  tubular  pada  hari  ke-15  dan  fase kotiledon  awal  pada  hari  ke-18.  Hasil perhitungan  jumlah  kalus  pada  media  MS  +
NAA  4  mg/L  ulangan  2  sebanyak  5  buah  per clump, media MS + TDZ 0,005 mg/L ulangan 1  sebanyak  3  buah  per  clump,  media  MS  +
TDZ  0,005  mg/L  ulangan  3  sebanyak  1  buah per clump, media MS + CuSO 4 2mM +BAP 1 mg/L ulangan 2 sebanyak 14 buah, media MS +  CuSO 4 2mM  +  BAP  2  mg/L  ulangan  1 sebanyak 14 buah, media MS + CuSO 4 2mM +
BAP  2  mg/L  ulangan  2  sebanyak  3  buah  dan media  MS  +  CuSO 4 2mM  +  BAP  2  mg/L ulangan 3 sebanyak 2 buah (Tabel 2). Menurut Purnamaningsih (2002), pemilihan zat pengatur tumbuh  merupakan  salah  satu  faktor  yang sangat  menentukan  diferensiasi  jaringan tanaman yang dikulturkan.
Gambar  6.  Kalus  somatik  embriogenik 032 sebelum di media regenerasi Gambar  7.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-3 (globular) Gambar  8.  Kondisis  kalus  032  hari  ke  6 (globular, tubular) Gambar  9.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-9 (globular,  tubular, torpedo, kotiledon) Gambar  10.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-12 (tubular, torpedo, kotiledon)
Gambar  11.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-15
(tubular, torpedo, kotiledon)
130 Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)
mg/L  ulangan  1  memasuki  fase  globular  pada hari ke-9, fase hati pada hari ke-11, fase tubular pada  hari  ke-12  dan  fase  kotiledon  awal pada hari ke-12. Kalus  pada  media  MS  +  CuSO 4 2mM  + BAP 2 mg/L ulangan 2 memasuki fase globular pada  hari  ke-3,  fase  hati  pada  hari  ke-6,  fase tubular pada hari ke-9 dan fase kotiledon pada hari  ke-15.  Kalus  pada  media  MS  +  CuSO 4
2mM + BAP 2 mg/L ulangan 3 memasuki fase globular pada hari ke-13, fase hati pada hari le- 13,  fase  tubular  pada  hari  ke-15  dan  fase kotiledon  awal  pada  hari  ke-18.  Hasil perhitungan  jumlah  kalus  pada  media  MS  +
NAA  4  mg/L  ulangan  2  sebanyak  5  buah  per clump, media MS + TDZ 0,005 mg/L ulangan 1  sebanyak  3  buah  per  clump,  media  MS  +
TDZ  0,005  mg/L  ulangan  3  sebanyak  1  buah per clump, media MS + CuSO 4 2mM +BAP 1 mg/L ulangan 2 sebanyak 14 buah, media MS +  CuSO 4 2mM  +  BAP  2  mg/L  ulangan  1 sebanyak 14 buah, media MS + CuSO 4 2mM +
BAP  2  mg/L  ulangan  2  sebanyak  3  buah  dan media  MS  +  CuSO 4 2mM  +  BAP  2  mg/L ulangan 3 sebanyak 2 buah (Tabel 2). Menurut Purnamaningsih (2002), pemilihan zat pengatur tumbuh  merupakan  salah  satu  faktor  yang sangat  menentukan  diferensiasi  jaringan tanaman yang dikulturkan.
Gambar  6.  Kalus  somatik  embriogenik 032 sebelum di media regenerasi Gambar  7.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-3 (globular) Gambar  8.  Kondisis  kalus  032  hari  ke  6 (globular, tubular) Gambar  9.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-9 (globular,  tubular, torpedo, kotiledon) Gambar  10.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-12 (tubular, torpedo, kotiledon)
Gambar  11.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-15 (tubular, torpedo, kotiledon)
Gambar  12.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-18
(tubular, torpedo, kotiledon) Tabel 2. Fase regenerasi terung dan kecepatan pembentukan kotiledon pada berbagai media maturasi Media Ul Hari terbentuknya Jumla h Koti- Ledon Fase Globular Fase Heart shaped Fase Tubular Fase Koti- Ledon Kontrol 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M1 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M2 1 - - - - - 2 3 6 9 12 5 3 - - - - - M3 1 12 14 15 18 3 2 - - - - - 3 6 12 18 18 1 M4 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M5 1 - - - - - 2 3 5 6 9 27 3 - - - - - M6 1 9 11 12 12 14 2 3 6 9 15 3 3 12 13 15
18 2 M7 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - Keterangan: Ul=ulangan Penggunaan  media  yang  tepat  dapat menginduksi terjadinya seluruh tahap perkembangan  embrio,  sebaliknya  pada  media yang kurang sesuai tidak terlihat perkembangan embrio (Purnamaningsih 2002). Kalus  somatik  embriogenik  yang  telah ditransfer  ke  media  maturasi  dan  regenerasi kontrol  (MS  0)  tidak  menunjukkan perkembangan kalus, sama halnya pada media M1  (MS  +  Kinetin  1  mg/L  +  BAP  1  mg/L), media M4 (MS + TDZ 0,001 mg/L) dan media M7  (MS  +  Kinetin  1  mg/L  +  CuSO 4 2mM) tidak  menunjukkan  perkembangan  fase  kalus. Sementara  itu  pada  media  M2  (MS  +  NAA
4mg/L) dan M3 (MS + TDZ 0,005 mg/L) kalus mengalami perkembangan namun lebih lambat dibandingkan perkembangan kalus pada media M5  dan  M6.  Berdasarkan  hasil  pengamatan hari  terbentuknya  fase  globular,  hati,  tubular dan  kotiledon  fase  awal  serta  perhitungan
jumlah  kotiledon  fase  awal  diperoleh  hasil paling  baik  yaitu  pada  media  M5  dengan formulasi  MS  +  CuSO 4 2mM+  BAP  1  mg/L. Kalus pada media ini mengalami perkembangan  fase paling  cepat.  Fase kotiledon  terlihat  9  hari  setelah  transfer  dan dengan  jumlah  terbanyak  dibandingkan  pada media lain,  yaitu 27 buah per petri. Penelitian lain  yang  dilakukan oleh  Gleddie (1983)  juga membuktikan  bahwa  BAP  menghasilkan embrio  somatik  dengan  presentasi  tinggi  pada eksplan yang berbeda dari terung. Media  yang  menempati  urutan  kedua terbaik  untuk  maturasi  dan  regenerasi  kalus terung yaitu media M6 (MS + CuSO 4 2mM + BAP  2  mg/L)  dimana  fase  kotiledon  mulai terlihat 12 hari setelah transfer dengan jumlah rata-rata 6 buah per petri.Hasil jauh lebih baik karena  BAP  dikombinasikan  dengan  CuSO 4 2mM.  Menurut  Danso  &  Lloyd  (2002), penambahan  CuSO 4 pada  media  dapat meningkatkan  induksi  embrio  primer  dan meningkatkan  produksi  embrio  sekunder  serta dapat mempersingkat  waktu  pematangan embrio  somatik  menjadi  25  hari  sejak  inisiasi embrio

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  yang  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  media  yang  paling responsif  untuk  regenerasi  kalus  somatik embriogenik  terung  dilihat  dari  hari terbentuknya  fase-fase  kalus  dan  jumlah kotiledon  fase  awal  adalah    media  dengan formulasi  MS  +  CuSO 4 2mM +  BAP  1  mg/L dan MS + CuSO 4 2mM+ BAP 2 mg/L.

## DAFTAR PUSTAKA
Alicchio  R,  Grosso  ED &  Boschieri  E.  1982. Tissue Culture  and Plant Regeneration from Different Explants  in Six Cultivars of Solanummelongena . Experimentia. 38: 449-450.
Anwar  S,  Sabana  D,  Siddiqui  SA,  Shahzad  A &  Din  S.  2002.  Clonal Propagation  of
Brinjal, Solanum Melongena Through Young Petiolated Leaf Culture. Bionotes .
4. Asnawati,  Wattimena  GA,  Machmud  M& Purwito  A.  2002. Studi Regenerasi  dan Produksi Protoplas Mesofil Daun Beberapa Llon Tanaman Kentang ( Solanum Tuberosum L.). Buletin Agronomi . 30: 87-91. Badan Pusat Statistik. 2015. Produksi Sayuran Jurnal ILMU DASAR, Vol.19 No. 2, Juli 2018 :125-134
Journal homepage: https://jurnal.unej.ac.id/index.php/JID Gambar  12.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-18 (tubular, torpedo, kotiledon) Tabel 2. Fase regenerasi terung dan kecepatan pembentukan kotiledon pada berbagai media maturasi Media Ul Hari terbentuknya Jumla h Koti- Ledon Fase Globular Fase Heart shaped Fase Tubular Fase Koti- Ledon Kontrol 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M1 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M2 1 - - - - - 2 3 6 9 12 5 3 - - - - - M3 1 12 14 15 18 3 2 - - - - - 3 6 12 18 18 1 M4 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M5 1 - - - - - 2 3 5 6 9 27 3 - - - - - M6 1 9 11 12 12 14 2 3 6 9 15 3 3 12 13 15
18 2 M7 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - Keterangan: Ul=ulangan Penggunaan  media  yang  tepat  dapat menginduksi terjadinya seluruh tahap perkembangan  embrio,  sebaliknya  pada  media yang kurang sesuai tidak terlihat perkembangan embrio (Purnamaningsih 2002). Kalus  somatik  embriogenik  yang  telah ditransfer  ke  media  maturasi  dan  regenerasi kontrol  (MS  0)  tidak  menunjukkan perkembangan kalus, sama halnya pada media M1  (MS  +  Kinetin  1  mg/L  +  BAP  1  mg/L), media M4 (MS + TDZ 0,001 mg/L) dan media M7  (MS  +  Kinetin  1  mg/L  +  CuSO 4 2mM) tidak  menunjukkan  perkembangan  fase  kalus. Sementara  itu  pada  media  M2  (MS  +  NAA
4mg/L) dan M3 (MS + TDZ 0,005 mg/L) kalus mengalami perkembangan namun lebih lambat dibandingkan perkembangan kalus pada media M5  dan  M6.  Berdasarkan  hasil  pengamatan hari  terbentuknya  fase  globular,  hati,  tubular dan  kotiledon  fase  awal  serta  perhitungan
jumlah  kotiledon  fase  awal  diperoleh  hasil paling  baik  yaitu  pada  media  M5  dengan formulasi  MS  +  CuSO 4 2mM+  BAP  1  mg/L. Kalus pada media ini mengalami perkembangan  fase paling  cepat.  Fase kotiledon  terlihat  9  hari  setelah  transfer  dan dengan  jumlah  terbanyak  dibandingkan  pada media lain,  yaitu 27 buah per petri. Penelitian lain  yang  dilakukan oleh  Gleddie (1983)  juga membuktikan  bahwa  BAP  menghasilkan embrio  somatik  dengan  presentasi  tinggi  pada eksplan yang berbeda dari terung. Media  yang  menempati  urutan  kedua terbaik  untuk  maturasi  dan  regenerasi  kalus terung yaitu media M6 (MS + CuSO 4 2mM + BAP  2  mg/L)  dimana  fase  kotiledon  mulai terlihat 12 hari setelah transfer dengan jumlah rata-rata 6 buah per petri.Hasil jauh lebih baik karena  BAP  dikombinasikan  dengan  CuSO 4 2mM.  Menurut  Danso  &  Lloyd  (2002), penambahan  CuSO 4 pada  media  dapat meningkatkan  induksi  embrio  primer  dan meningkatkan  produksi  embrio  sekunder  serta dapat mempersingkat  waktu  pematangan embrio  somatik  menjadi  25  hari  sejak  inisiasi embrio

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  yang  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  media  yang  paling responsif  untuk  regenerasi  kalus  somatik embriogenik  terung  dilihat  dari  hari terbentuknya  fase-fase  kalus  dan  jumlah kotiledon  fase  awal  adalah    media  dengan formulasi  MS  +  CuSO 4 2mM +  BAP  1  mg/L dan MS + CuSO 4 2mM+ BAP 2 mg/L.

## DAFTAR PUSTAKA
Alicchio  R,  Grosso  ED &  Boschieri  E.  1982. Tissue Culture  and Plant Regeneration from Different Explants  in Six Cultivars of Solanummelongena . Experimentia. 38: 449-450.
Anwar  S,  Sabana  D,  Siddiqui  SA,  Shahzad  A &  Din  S.  2002.  Clonal Propagation  of
Brinjal, Solanum Melongena Through Young Petiolated Leaf Culture. Bionotes .
4. Asnawati,  Wattimena  GA,  Machmud  M& Purwito  A.  2002. Studi Regenerasi  dan Produksi Protoplas Mesofil Daun Beberapa Llon Tanaman Kentang ( Solanum Tuberosum L.). Buletin Agronomi . 30: 87-91. Badan Pusat Statistik. 2015. Produksi Sayuran Jurnal ILMU DASAR, Vol.19 No. 2, Juli 2018 :125-134
Journal homepage: https://jurnal.unej.ac.id/index.php/JID Gambar  12.  Kondisis  kalus  032  hari  ke-18 (tubular, torpedo, kotiledon) Tabel 2. Fase regenerasi terung dan kecepatan pembentukan kotiledon pada berbagai media maturasi Media Ul Hari terbentuknya Jumla h Koti- Ledon Fase Globular Fase Heart shaped Fase Tubular Fase Koti- Ledon Kontrol 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M1 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M2 1 - - - - - 2 3 6 9 12 5 3 - - - - - M3 1 12 14 15 18 3 2 - - - - - 3 6 12 18 18 1 M4 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - M5 1 - - - - - 2 3 5 6 9 27 3 - - - - - M6 1 9 11 12 12 14 2 3 6 9 15 3 3 12 13 15
18 2 M7 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - Keterangan: Ul=ulangan Penggunaan  media  yang  tepat  dapat menginduksi terjadinya seluruh tahap perkembangan  embrio,  sebaliknya  pada  media yang kurang sesuai tidak terlihat perkembangan embrio (Purnamaningsih 2002). Kalus  somatik  embriogenik  yang  telah ditransfer  ke  media  maturasi  dan  regenerasi kontrol  (MS  0)  tidak  menunjukkan perkembangan kalus, sama halnya pada media M1  (MS  +  Kinetin  1  mg/L  +  BAP  1  mg/L), media M4 (MS + TDZ 0,001 mg/L) dan media M7  (MS  +  Kinetin  1  mg/L  +  CuSO 4 2mM) tidak  menunjukkan  perkembangan  fase  kalus. Sementara  itu  pada  media  M2  (MS  +  NAA
4mg/L) dan M3 (MS + TDZ 0,005 mg/L) kalus mengalami perkembangan namun lebih lambat dibandingkan perkembangan kalus pada media M5  dan  M6.  Berdasarkan  hasil  pengamatan hari  terbentuknya  fase  globular,  hati,  tubular dan  kotiledon  fase  awal  serta  perhitungan
jumlah  kotiledon  fase  awal  diperoleh  hasil paling  baik  yaitu  pada  media  M5  dengan formulasi  MS  +  CuSO 4 2mM+  BAP  1  mg/L. Kalus pada media ini mengalami perkembangan  fase paling  cepat.  Fase kotiledon  terlihat  9  hari  setelah  transfer  dan dengan  jumlah  terbanyak  dibandingkan  pada media lain,  yaitu 27 buah per petri. Penelitian lain  yang  dilakukan oleh  Gleddie (1983)  juga membuktikan  bahwa  BAP  menghasilkan embrio  somatik  dengan  presentasi  tinggi  pada eksplan yang berbeda dari terung. Media  yang  menempati  urutan  kedua terbaik  untuk  maturasi  dan  regenerasi  kalus terung yaitu media M6 (MS + CuSO 4 2mM + BAP  2  mg/L)  dimana  fase  kotiledon  mulai terlihat 12 hari setelah transfer dengan jumlah rata-rata 6 buah per petri.Hasil jauh lebih baik karena  BAP  dikombinasikan  dengan  CuSO 4 2mM.  Menurut  Danso  &  Lloyd  (2002), penambahan  CuSO 4 pada  media  dapat meningkatkan  induksi  embrio  primer  dan meningkatkan  produksi  embrio  sekunder  serta dapat mempersingkat  waktu  pematangan embrio  somatik  menjadi  25  hari  sejak  inisiasi embrio

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  yang  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  media  yang  paling responsif  untuk  regenerasi  kalus  somatik embriogenik  terung  dilihat  dari  hari terbentuknya  fase-fase  kalus  dan  jumlah kotiledon  fase  awal  adalah    media  dengan formulasi  MS  +  CuSO 4 2mM +  BAP  1  mg/L dan MS + CuSO 4 2mM+ BAP 2 mg/L.

## DAFTAR PUSTAKA
Alicchio  R,  Grosso  ED &  Boschieri  E.  1982. Tissue Culture  and Plant Regeneration from Different Explants  in Six Cultivars of Solanummelongena . Experimentia. 38: 449-450.
Anwar  S,  Sabana  D,  Siddiqui  SA,  Shahzad  A &  Din  S.  2002.  Clonal Propagation  of
Brinjal, Solanum Melongena Through Young Petiolated Leaf Culture. Bionotes .
4. Asnawati,  Wattimena  GA,  Machmud  M& Purwito  A.  2002. Studi Regenerasi  dan Produksi Protoplas Mesofil Daun Beberapa Llon Tanaman Kentang ( Solanum Tuberosum L.). Buletin Agronomi . 30: 87-91.
Badan Pusat Statistik. 2015. Produksi Sayuran
Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk) di Indonesia 1997-2014. http://www.bps.go.id .  Diakses  pada  3 November 2017. Bhojwani  SS  &  Soh  WY.  1999. Morphogenesis  in  Plant  Tissue  Cultures . Netherlands: Kluwer Academic Publishers. Danso KE & Ford-Lloyd BV. 2002. Induction of High Frequency Somatic Embryos  in Cassava for Cryopreservation. Plant Cell Reproduction . 21: 226-236. Daunay  MC,  Lester  RN &  Laterrot  H.  1991. The Use of Wild Species for The Genetic Improvement  of  Brinjal Eggplant (Solanum Melongena)  and Tomato (Lycopersicon esculentum) .In Hawkes JH, Lester  RN,  Nee  M  &  Estrada  N ( Eds.).Solanaceae III: Taxonomy, Chemistry,  Evolution, vol.  7.  London: Royal Botanic Gardens Kew and Linnean Society. FAO. 2015. http://www.fao.org/faostat/en/ Fobert  PR  &  Webb  DT.  1988.  Effect  of Polyamines, Polyamine Precursors,  and Polyamine Biosythethic Inhibitors  on Somatic Embryogenesis  from Eggplant ( Solanum  melongena L.) Cotyledons.
Canadian  Journal  of  Botany. 66: 1734- 1742. Gaj MD. 2001. Direct Somatic Embryogenesis as A Rapid  and Efficient System for In Vitro Regeneration  of Arabidopsis thaliana . Plant  Cell,  Tissue  and  Organ Culture . 64: 39-46. Gleba  YY  &Shlumukov LR.  1990. Somatic
Hybridization  and Cybridization. In  S.S. Bhojwani (Ed.).  Plant  Tissue  Culture: Application  and  limitation,  Development in Crop Science . Amsterdam: Elsevier. Gleddie  S,  Keller  W &  Setterfield  G.  1983. Somatic Embryogenesis  and Plant Regeneration from Leaf Explants and Cell Suspensions  of Solanum Melongena (Eggplant). Canadian Journal of Botany. 61: 656-666. Husni A. 2005. Regenerasi Protoplas Tanaman Terung  dan Ketahanan Regeneran Terhadap Penyakit Bakteri Layu. Berita Biologi . 7: 285-292.
Husni A, Wattimena GA, Mariska I &Purwito
A.  2003. Keragaman Genetik Tanaman
Terung Hasil Regenerasi Protoplas. Jurnal Bioteknologi Pertanian. 8: 52-59.
Kamat  MG  &  Rao  PS.  1978. Vegetative
Multiplication  of Eggplants  ( Solanum
Melongena L.) Using Tissue Culture
Techniques. Plant Sciences Letter. 13: 57- 65. Magnioli  C, Barroco  RM,  Rocha  CAB,  Tarre E, Fernandes LDS, Mansur E, Engler G, Margis PM & Sachetto MG. 2001.  Somatic Embryo Formation  in Arabidopsis and Eggplant in Asassociated with The Expression  of Glycine Rich Protein Gene  ( Atgrp-5 ). Plant  Science . 161:559-567.
Mir  KA,  Dhatt  AS,  Sandhu  JS  &  Sidhu  AS. 2011.  Effect  of Genotype, Explant  and Culture Medium  on Organogenesis  in Brinjal. Indian Journal of Horticulture. 68: 332-335. Plazas  M,  Andujar  I,  Vilanova  S,  Hurtado  M, Gramazio  P,  Herraiz  FJ  &  Prohens  J.
2014. Breeding  for Chlorogenic Acid Content  in Eggplant  : Interest  and Prospect. Not Bot Horti Agrobo. 41: 26-
35.
Purnamaningsih R. 2002. Regenerasi Tanaman Melalui Embriogenesis Somatik  dan Beberapa Gen  yang Mengendalikannya.
Buletin AgroBio . 5: 51-58.
Rai MK., Jaiswal VS & Jaiswal U. 2009. Shoot Multiplication  and Plant Regeneration  of Guava ( Psidium Guajava L.) from Nodal Explants  of In Vitro Raised Plantlets. Journal Fruit Ornamental Plants Rescue . 17: 29-38. Rao  CK.  2011.  Use  of Brinjal  ( Solanum
Melongena L.) in Alternative Systems of Medicine in India. FBAE .Bangalore. Rizza F, Mennella G, Collonnier C, Shiachakr
D, Kashyap V, Rajam MV, Prestera M&
Rotino GL. 2002. Androgenic Dihaploids from Somatic Hybrids Between Solanum
Melongena and S. aethiopicum Group Gilo  as A Source  of Resistance  to Fusarium Oxysporum f.  sp. Melongenae . Plant Cell Reports . 20: .1022-1032. Sidhu MK, Dhatt AS &Sidhu GS. 2014. Plant Regeneration  in Eggplant  ( Solanum Melongena L.): A Review. African Journal of Biotechnology . 13: 714-722.
Slater  A,  Scott  N&  Fowler  M.  2003. Plant Biotechnology: The Genetic Manipulation of  Plants .  New  York:  Oxford  University Press Inc. Swamynathan B, Nadanakunjidam S, Ramamourti A, Sindhu K & Ramamoorthy  D.  2010. In Vitroplantlet Regeneration Through Somatic
Embryogenesis  in Solanum Melongena (Thengaithittu Variety). Academic Journal of Plant Science. 3: 64-70. Taji  A,  Kumar  PP&  Lakshmanan  P.  2002. In Vitro  Plant  Breeding .  New  York:  Food Products Pr. Tamura N, Murata Y& Mukaihara T. 2002. A Somatic Hybrid Between Solanum Integrifolium and Solanum Violaceum That is Resistant to Bacterial Wilt Caused by Ralstonia Solanacearum . Plant  Cell
Report s. 21: 353-358. Wattimena  GA. 1992.
Bioteknologi  Tanaman . Bogor:  Departemen  Pendidikan  dan Kebudayaan, Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Pusat Antar Universitas IPB. Yamada T,  Nakagawa  H &  Sinto  Y.  1967. Studies  on Differentiation  in Cultured Cells. Embryogenesis in Three Dtrains of Solanum callus. Botanical  Magazine .  80: 68-74. Yelnititis  2013.Induksi Embrio Somatik Shorea  Pinanga
Scheff. pada Kondisi Fisik Media  berbeda. Jurnal  Pemuliaan
Tanaman Hutan . 7: 73-84.
National  Nutrient  Database  for  Standard Reference.2016.
https://ndb.nal.usda.gov/ndb/foods/show/
2962 Zaro  MJ,  Ortiz  LC,  Keunchkarian  S,  Chaves AR,  Vicente  AR&Concellon A.  2015.
Chlorogenic Acid Retention  in White  and Purple Eggplant After Processing  and Cooking. Food  Science  and  Technology . 64: 802-808.

## Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik …                                   (Hartati, dkk)