http://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindo/index

## Potensi Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Dan Fraksi n- Heksan Buah Jeruk Pamelo (Citrus maxima (Burm) Merr) Asal Kabupaten Pangkep
Masdiana Tahir 1* , Asriani Suhaenah 1 , Yulinda Rahim 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia Makassar
Article info Abstract History
Submission : 03-04-2019 Review : 23-12-2019 Accepted : 13-07-2020
* Email: masdiana.tahir@umi.ac.id
DOI: 10.33096/jffi.v7i2.488
Keywords: Antioxidants; Ethanol Extract; n-Hexane Fraction; Pamelo citrus (Citrus maxima ( Burm ) Merr
Pomelo  citrus  (Citrus  maxima  (Burm)  Merr)  is  a  fruit  plant  that  has  the potential  to  be  developed  for  health.  Pomelo  fruit  contains  lycopene, flavonoids  and  vitamin  C  which  can  provide  antioxidant  activity.  The purpose of this study was to determine the potential antioxidant activity of ethanol extract and fraction of n-hexane of pomelo citrus using quercetin as a  comparison.  Extraction  of  Pomelo  citrus  fruit  using  the  maceration method with liquid-liquid fractionation using water and n-hexane (1: 3 v / v).  Testing  of  antioxidant  activity  using  the  DPPH  (1,1-Diphenyl-2- picrylhidrazil) method is based on the ability of the sample to capture DPPH free radicals which are characterized by purple to yellow discoloration and a  decrease  in  the  absorbance  value  of  DPPH  which  has  reacted  with samples in certain concentrations. Absorbance measurements using a UV- Vis spectrophotometer at a wavelength of 514,942 nm. The results showed that  the  IC 50 value  of  quercetin  was  6.55  µg  /  mL  which  was  a  strong antioxidant, while the IC 50 value of the ethanol extract of pomelo citrus fruit was  2882.26  µg  /  mL  and  IC 50 value  of  the  n-hexane  fraction  of  pomelo orange was 3668,44 µg / mL which is a weak antioxidant category.

## I. Pendahuluan
Jeruk  pamelo  merupakan  tanaman  buah yang  potensial  untuk  dikembangkan  di  Indonesia dan salah satu sentra produksi jeruk besar atau jeruk pamelo  di  Sulawesi  Selatan  adalah  Kabupaten Pangkep. Jeruk pamelo, jeruk besar, atau yang lebih dikenal dengan sebutan jeruk Bali (bahasa Inggris: pomelo ,  latin: (Citrus  maxima (Burm)  Merr) merupakan  jeruk  penghasil  buah  terbesar.  Nama "Pamelo"  sekarang  disarankan  oleh  Departemen Pertanian  karena  jeruk  ini  tidak  ada  kaitannya dengan  Bali.  Jeruk  ini  termasuk  jenis  jeruk  yang mampu beradaptasi dengan baik pada daerah kering dan  relatif  tahan  terhadap  penyakit  (Dewi  & Mustika, 2014).
Buah  jeruk  pamelo  mengandung  likopen, flavonoid, provitamin A, vitamin C, pektin, vitamin B1  dan  B2,  asam  folat,  gula,  protein,  lemak karbohidrat, retinol, kalsium dan fosfor (Junaidi,2011).  Berdasarkan  kandungan  senyawa kimianya, maka buah jeruk pamelo merupakan salah satu bahan alam yang potensial untuk dikembangkan  bagi  kesehatan  misalnya  sebagai antioksidan.
Antioksidan adalah senyawa yang mampu menangkal  atau  meredam  radikal  bebas  dalam tubuh. Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan  satu  elektronnya  kepada  senyawa yang bersifat  oksidan sehinggan aktivitas  senyawa oksidan tersebut bias dihambat (Winarsi, 2007).
Tubuh manusia tidak mempunyai cadangan antioksidan  dalam  jumlah  yang  berlebih,  sehingga jika  terjadi  paparan  radikal  berlebih  maka  tubuh membutuhkan  antioksidan  eksogen.  Adanya kekhawatiran akan kemungkinan efek samping yang belum diketahui dari antioksidan  sintetik menyebabkan  antioksidan  alami  menjadi  alternatif yang sangat dibutuhkan (Rohdiana, 2001 & Sunarni, 2005).  Antioksidan  dapat  berupa  antioksidan sintetik  maupun  antioksidan  alami.  Antioksidan alami  dapat  berasal  dari  tumbuh-tumbuhan,  buah- Buahan,  sayur-sayuran  dan  rempah-rempahan. Senyawa  kimia  yang  termasuk  kelompok antioksidan  yang  ditemukan  pada  tanaman,  antara lain dari golongan polifenol, vitamin C, vitamin E, karoten dan flavanoid (Hernani, 2005).
Beberapa  penelitian  tentang  jeruk  pamelo asal  Kab.  Pangkep  telah  dilakukan  diantaranya analisis  kandungan  vitamin  C  pada  daging  buah jeruk  pamelo  diperoleh  kadar  untuk  varietas  jeruk pamelo daging merah 0,721 mg/g dan daging putih 0,107  mg/g  (Tahir,M  dkk,  2018).  Dan  telah dilakukan  analisis  kadar  likopen  yang  merupakan golongan senyawa karoten pada buah jeruk pamelo di peroleh kadar likopen jeruk pamelo daging merah 32,444 mg/kg sampel segar dan daging putih 2,801 mg/kg sampel segar (Tahir,M.dkk, 2018). Serta uji aktivitas  perlindungan  sinar  UV  sari  buah  jeruk pamelo  berdasarkan  nilai  SPF  diperoleh  nilai  SPF untuk varietas daging merah 36,70 dan daging putih
35,50 yang merupakan kategori SPF tinggi (Tahir, M.& Melisa, 2018).
Berdasarkan  kajian  tersebut  diatas,  maka dilakukan penelitian untuk menguji potensi aktivitas antioksidan  ekstrak  buah  jeruk  pamelo (Citrus maxima (Burm)  Merr)  asal  Kab.Pangkep  dengan metode peredaman radiakal bebas yaitu menggunakan  senyawa  DPPH  ( 1,1-Diphenyl-2- picrylhidrazil ).

## II. Metode Penelitian II.1 Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  seperangkat alat maserasi, alat-alat gelas, mikropipet, timbangan analitik  ( And dan OHAUS ), Rotary  Vacuum Evaporator  (Rotavapor) ,  alat  vakum,  seperangkat alat  penyaring  Buchner  dan  spektrofotometer  UV- Vis ( Thermo Scientific Evolution 201 ).
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah pelarut  teknis  n-heksan  dan  etanol,  metanol  P.a., aquades,  kuersetin  sebagai  standar  baku,  senyawa radikal  DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrakzil )  dan sampel buah jeruk pamelo (Citrus maxima (Burm) Merr) varietas daging merah.
II.2 Pengolahan Sampel Daging buah jeruk pamelo (Citrus maxima (Burm)  Merr)  varietas  daging  merah  yang  akan dianalisis  dibersihkan  terlebih  dahulu,  kulitnya dikupas dan butiran-butiran daging buah dipisahkan dari  sekat-sekatnya.  Kemudian  daging  buah  jeruk pamelo (Citrus  maxima (Burm)  Merr)  dihaluskan dengan menggunakan blender (dengan penambahan sedikit pelarut) (Ervina syahfitri, 2012).

## II.3 Pembuatan Ekstrak Etanol dan Fraksi n-
Heksan
1. Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Jeruk Pamelo Buah jeruk pamelo ( Citrus maxima (Burm.) Merr) yang telah dihaluskan, dimasukkan ke dalam erlenmeyer 500 mL dan ditambahkan 300 mL etanol 96%  sampai  seluruh  sampel  terendam.  Pelarut dilebihkan  setinggi  kurang  lebih  2  cm  di  atas permukaan  sampel,  ditutup  dan  dibiarkan  selama 1x24  jam  dan  dilakukan  proses  maserasi.  Maserat disaring dengan menggunakan kertas saring. Filtrat diperoleh  melalui  penyaringan  dengan  corong Buchner dengan bantuan pompa vakum. Kemudian ampas  dimaserasi  kembali  dengan  etanol  selama 1x24  jam,  sehingga  filtrat  hampir  tidak  berwarna. Filtrat  dipekatkan  dengan  menggunakan  rotavapor hingga  diperoleh  ekstrak  etanol  kental  buah  jeruk pamelo.
2. Pembuatan  Fraksi  n-Heksan  Buah  Jeruk Pamelo
Ekstrak  etanol  kental  buah  jeruk  pamelo ditambahkan 10 mL air hangat dan diekstraksi cair- cair  menggunakan  n-heksan  dengan  perbandingan larutan air : n-heksan (1:3 v/v) sehingga didapatkan fraksi  n-heksan.  Setelah  dipisahkan,  pelarut  dari fraksi  n-heksan  diuapkan  menggunakan  rotavapor
hingga  diperoleh  fraksi  n-heksan  kental  ekstrak etanol buah jeruk pamelo  (Mikhael & Soegihardjo, 2013).

## II.4 Penentuan Aktivitas Antioksidan
1. Penentuan  Panjang  Gelombang  Maksimum DPPH
Penentuan panjang gelombang maksimum dengan  cara  mengukur  4,0  mL  larutan  DPPH  50 ppm  pada  spektrofotometer  UV-Vis  dengan  range panjang  gelombang  400-600  nm  dan  diperoleh panjang gelombang maksimumnya adalah  514,942 nm.
2. Penentuan Aktivitas Antioksidan Baku Pembanding Kuersetin
Sebanyak 2 mL larutan DPPH ditambahkan dengan  masing-masing  1  mL  larutan  kuersetin konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 ppm dari larutan stok 100 ppm. Selanjutnya larutan tersebut dikocok kuat menggunakan  vortex,  diinkubasi  selama  30  menit, lalu diukur absorbansinya menggunakan spektrofometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 514,942 nm (Navitri & Monica, 2012).
3. Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  dan  Fraksi  n-Heksan  Buah  Jeruk Pamelo
Ekstrak  etanol  dengan  konsentrasi  1000, 2000,  3000,  4000  dan  5000  ppm,  dan  fraksi  n- heksan dengan konsentrasi 1000, 2000, 3000, 4000 dan 5000 ppm dari larutan stok 5000 ppm. Sebanyak 1  mL  dari  masing-masing  larutan  ekstrak  tersebut ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH  ( 1,1  difenil-2- pikrilhidrokzil )  0,4  mM.  Selanjutnya  larutan tersebut  dikocok  menggunakan  vortex,  diinkubasi selama  30  menit,  lalu  diukur  absorbansinya menggunakan spektrofometer UV-Vis pada panjang gelombang 514,942 nm. Perlakuan yang sama juga dilakukan terhadap blanko yang berisi etanol.

## II.5 Analisis Data
Besarnya  presentase  pengikat  radikal  bebas  (% inhibisi) dihitung dengan rumus:
% Inhibisi= (Abs standar-(Abs sampel-Abs blanko) Abs standar x 100%
Nilai  IC 50 dihitung  dengan  menggunakan persamaan  regresi  linear  konsentrasi  sampel sebagai sumbu x dan % inhibisi sebagai sumbu y. Dari  persamaan:  y = a + bx, dapat  dihitung nilai IC 50 dengan menggunakan rumus:
IC 50 = (50-b) a
III. Hasil Dan Pembahasan Hasil  ekstraksi  buah  jeruk  pamelo ( Citrus maxima (Burm.)  Merr)  dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut  etanol 96%  diperoleh persen rendamen sebesar 10,85 % dari 150 g sampel segar buah  jeruk  pamelo  dan  hasil  fraksinasi  ekstrak
etanol buah jeruk pamelo dengan metode ekstraksi cair-cair  menggunakan  corong  pisah  diperoleh persen rendamen fraksi n-heksan sebesar 1,18% dari 10 g ekstrak etanol.
Untuk  uji  aktivitas  antioksidan  digunakan metode  peredaman  radikal  bebas  DPPH  (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl) .  Aktivitas  antioksidan diukur  berdasarkan  kemampuan  untuk  menangkap radikal bebas DPPH. Keberadaan antioksidan akan menetralisasi radikal
DPPH dengan menyumbangkan elektron kepada DPPH, menghasilkan  perubahan  warna  dari  ungu  menjadi kuning. Penghilangan warna akan sebanding dengan jumlah elektron yang diambil oleh DPPH sehingga dapat  diukur  secara  spektrofotometri  (Prakash, 2001).  Pengukuran  absorbansi  dilakukan  pada panjang  gelombang  serapan  maksimal,  yaitu panjang  gelombang  yang  mempunyai  absorbansi maksimal.  Secara  teoritis,  panjang  gelombang maksimum DPPH dalam etanol diukur pada panjang gelombang 400-600 nm. Hasil pengukuran panjang gelombang  maksimum  DPPH  50  PPM  diperoleh panjang gelombang maksimum 514,942 nm dengan nilai absorbansi sebesar 0,965.
Persen  penangkapan  radikal  bebas  DPPH digunakan untuk membandingkan aktivitas peredaman  radikal  bebas  DPPH  oleh  kuersetin dengan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  n-heksan  buah jeruk  pamelo  ( Citrus  maxima (Burm.)  Merr). Sedangkan  IC 50 merupakan  konsentrasi  efektif senyawa  uji  dalam  menghasilkan  aktivitas peredaman  radikal  bebas  DPPH  sebesar  50%.
Variasi  seri  konsentrasi  dibuat  untuk  memperoleh persamaan regresi  linier sehingga dapat  ditentukan nilai IC 50 , dimana nilai IC 50 dihitung menggunakan persamaan  garis  regresi  linier  antara  konsentrasi senyawa  uji  sebagai  sumbu  x  dan  persen  inhibisi sebagai sumbu y (Winarsi, 2007).
Pada  penelitian  ini  digunakan  Kuersetin sebagai  pembanding  karena  kuersetin  merupakan senyawa  golongan  flavanoid  jenis  flavonol  dan flavon,  dimana  senyawa  flavon  memiliki  sifat antioksidan.  Pengujian  nilai  aktivitas  antioksidan kuersetin  sebagai  pembanding  dilakukan  dengan membuat  larutan  standar  kuersetin  dalam  5  seri konsentrasi  yaitu  konsentrasi  2;  4;  6;  8;  10  ppm. Masing-masing  konsentrasi  dipipet  1  mL  dan ditambahkan  2  mL  DPPH  50  ppm,  diinkubasi selama  30  menit.  Setelah  itu  diukur  absorbansinya pada  panjang  gelombang  maksimum  514,942  nm. Absorbansi  yang  diperoleh  digunakan  untuk menghitung  %  inhibisi  radikal  bebas  dan  dibuat kurva  penghambatan  standar  kuersetin,  plot  antara % inhibisi dan konsentrasi  dan diperoleh persamaan regresi  linear  y  =  6,4767x  +  7,5646  dengan  nilai koefisien korelasi R = 0,999 yang memenuhi syarat analisis  (Gambar  1).  Dari  nilai  persamaan  regresi linear tersebut dihitung nilai aktivitas antioksidannya  dalam  nilai  IC 50 dimana  y  =  50 (penghambatan  50%  oksidasi)  dan  x  adalah  nilai IC 50. Dari  hasil  perhitungan  diperoleh  IC 50 standar kuersetin adalah 6,55 µg/mL yang dapat dilihat pada Tabel 1.
Gambar 1. Pengaruh konsentrasi terhadap % inhibisi larutan standar  kuersetin  (pembanding)
Tabel 1. Hasil pengukuran absorbansi, persentasi peredaman DPPH dan  nilai IC 50 dari kuersetin (pembanding)
Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 2 4 6 8 10 0,765 0,645 0,521 0,383 0,271 20,725 33,161 46,010 60,311 71,917
6,55 y = 6,4767x + 7,5646 R² = 0,9992  R = 0,999 0 20 40 60 80 0 5 10 15 % In h ib is Konsentrasi (ppm)
Kurva Penghambatan Standar Kuersetin
Series1
Pengujian  nilai  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  buah  jeruk  pamelo  ( Citrus  maxima (Burm.)  Merr)  dengan  metode  peredaman  radikal bebsa DPPH. Langkah pertama, pembuatan larutan stok  ekstrak  etanol,  kemudian  dibuat  dalam  5  seri konsentrasi yaitu 1000; 2000; 3000; 4000; dan 5000 ppm. Masing-masing konsentrasi dipipet 1 mL dan ditambahkan  2  mL  DPPH  50  ppm,  diinkubasi selama  30  menit.  Setelah  itu  diukur  absorbannya pada  panjang  gelombang  maksimum  514,942  nm. Absorbansi  yang  diperoleh  digunakan  untuk menghitung  %  inhibisi  radikal  bebas  DPPH  dan
dibuat  kurva  penghambatan  ekstrak  etanol  buah jeruk  pamelo  diperoleh  persamaan  regresi  y  = 0,0097x + 22,042 dengan nilai koefisien korelasi R =  0,998  yang  memenuhi  syarat  analisis.  Dari persamaan  regresi  linear  diperoleh  IC 50 ekstrak etanol  buah  jeruk  pamelo  sebesar  2882,26  µg/mL µg/mL  yang  dapat  dilihat  pada  Tabel  2  dan  hasil pengukuran  fraksi  n-heksan  diperoleh  persamaan regresi y = 0,009x + 16,984 dengan nilai koefisien korelasi  R  =  0,996  dan  diperoleh  IC 50 fraksi  n- heksan  ekstrak  etanol  buah  jeruk  pamelo  sebesar 3668,44 µg/mL yang dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 2. Hasil pengukuran absorbansi, persentasi peredaman DPPH dan nilai IC 50 dari ekstrak etanol buah jeruk pamelo ( Citrus maxima (Burm.) Merr) Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 1000 2000 3000 4000 5000 0,664 0,560 0,462 0,385 0,282 31,192 41,969 52,124 60,104 70,777 2882,26
Tabel 3. Hasil pengukuran absorbansi, persentasi peredaman DPPH dan nilai IC 50 dari fraksi n-heksan buah jeruk pamelo ( Citrus maxima (Burm.) Merr) Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi IC 50 (µg/mL) 1000 2000 3000 4000 5000 0,717 0,627 0,541 0,434 0,377 25,699 35,026 43,938 55,026 60,933 3668,44
Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  nilai IC 50 dari kuersetin sebesar 6,55 µg/mL, sedangkan nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol  buah  jeruk  pamelo sebesar 2882,26 µg/mL dan nilai IC 50 dari fraksi n- heksan buah jeruk pamelo sebesar 3668,44 µg/mL. Menurut  pembagian  kategori  antioksidan Blois (Yanhouy,  2011)  suatu  bahan  alam  ( raw  material ) yang  memiliki  IC 50 kurang  dari  50  µg/mL  dapat dikategorikan sebagai antioksidan yang sangat kuat, 50-100 µg/mL sebagai antioksidan sedang dan jika lebih  dari  159  µg/mL  dikategorikan  sebagai antioksidan  lemah.  Sehingga  kuersetin  berpotensi sebagai antioksidan sangat kuat, sedangkan sampel ekstrak  etanol  dan  fraksi  n-heksan  buah  jeruk pamelo berpotensi sebagai antioksidan lemah.

## IV. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  dan  fraksi  n-heksan  buah  jeruk  pamelo ( Citrus  maxima (Burm.)  Merr)  memiliki  aktivitas sebagai  antioksidan  dengan  nilai  aktivitas antioksidan (IC 50 ) ekstrak etanol buah jeruk pamelo adalah  2882,268  µg/mL  dan  nilai  IC 50 fraksi  n- heksan  adalah  3668,444  µg/mL  yang  merupakan kategori aktivitas antioksidan lemah.

## V. Ucapan Terima Kasih
Kami  ucapkan  terimakasih  kepada  LP2S Yayasan  Wakaf  Universitas  Muslim  Indonesia Makasaar yang telah membiayai penelitian ini
Daftar Pustaka Dewi dan Mustika N.H. (2014) ‘ Bahan pangan, gizi dan kesehatan’. Alfabeta Bandung. Ervina, SL, Lely ,SL,dan Julia, R. (2013) ‘Pelembab Kulit  Alami  dari  Sari  Buah  Jeruk  Bali (Citrus maxima (Burm.) Osbeck) ’ , Journal of Pharmaceutics and Pharmacology , vol.
2, pp 104-111.
Hernanidan&  Raharjo,  M.  (2005)  ‘ Tanaman Berkhasiat Antioksidan ’,  Cetakan  I,
Penebar Swadaya, Jakarta. Junaidi, I. (2011), Ensiklopedia Jus Sayur dan Buah ,
Penerbit Bhuana Ilmu Populer, Jakarta, Hal 74-75.
Mikhael,  GC,  dan  Soegihardjo.  (2013)  ‘Uji
Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal Bebas 1,1-Difenil-2-
Pikrylhydrazyl dan  Penetapan  Kandungan fenolik  Total  Fraksi  Etil  Asetat  Ekstrak Etanol  Buah  Anggur  Bali  ( Vitis  vinifera L.)I’, Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas ,
ISSN  :  1693-5683,  vol.  10  No.2,  pp  109- 120.
Navitri, A.D.,dan Monica, M. (2012) ‘Uji Aktivitas Antiradikal  Bebas  Estrak  Buah  Jeruk Bal (Citrus  Maxima  Burm.  Fz) Dengan Metode DPPH (1,1- DiphenylPikrylhidrazyl)’, UNESA Journal
of Chemistry Vol. 1, No. 2. Prakash, A. (2001) ‘ Antioxidan Activity’ , medalliom Laboratorium Analytical Progress, vol. 19. pp 2.
Rohdiana,  D.  (2001)  ‘Aktivitas  Daya  Tangkap Radikal  Polifenol  Dalam  Daun  Teh’, Majalah Jurnal Indonesia , V0l.12 (1), pp 53-58. Sunarni, T.  (2005)  ‘Aktivitas  antioksidn  penangkp radikal bebas beberapa kecambah dari biji tanaman  familia  Papilionaceae’, Jurnal Farmasi Indonesia , Vol 2 (2), pp 53-56. Tahir,  M.  &  Kusuma,  A.T.,dan  Ekawati.  (2018) ‘ Analysis  of  Lycopene  and  Vitamin  C Levels  of  Pomelo  Citrus  Fruit  (Citrus maxima  (Burm)  Merr)  Red  and  White Varieties From South Sulawesi ’, Journal of Current  Pharmaceutical  Sciences ,  Vol.  2 No.1  September  2018,  Hal.  125-130, eISSN :2598-2095, pISSN: 2598-2087. Tahir,  M.,  dan  Melisa.  (2017)  ‘Aktivitas perlindungan  sinar  uv  sari  buah  jeruk pamelo ( citrus maxima (burm.)
berdasarkan  nilai sun  protection  factor (SPF)’, Poster  Ilmiah  Seminar  Nasional Kefarmasian , STIFA Makassar.
Winarsi, H. (2007) ‘ Antioksidan Alami dan Radikal bebas ’ Kanisius, Yogyakarta.
Yanhouy,  L,  Hong,  CO,  Nam,  MH,  and  Kim,  JH.
(2011) ‘Antioxidan and Glycation
Inhibitory  Activities  of  Gold  Kiwifruit’, Actinidia chinensis. J. Korean Soc , vol.54, no.3, pp 460-670.