## SKRINING ANTIOKSIDAN DAN AKTIFITAS ANTIDIABETES EKSTRAK
TERPURIFIKASI ETIL ASETAT KOPI HIJAU ARABIKA ( Coffea arabica L.) SECARA SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis
SCREENING OF ANTIOXIDANT AND ANTIDIABETIC ACTIVITIES OF GREEN COFFEE BEAN PURIFIED EXTRACT BY USING UV-VIS SPECTROPHOTOMETRY
Rissa Laila Vifta 1* , Dwi Mafitasari 2 , Erik Rahman 3
12 Universitas Ngudi Waluyo Jalan Diponegoro No. 186, Gedanganak, Ungaran Timur, Kabupaten Semarang, Jawa Tengah
3 STIFAR Yayasan Pharmasi Semarang Jalan Sarwo Edie Wibowo, Plamongansari, Semarang, Jawa Tengah
* e-mail korespondensi : rissalailavifta@gmail.com

## Abstrak
Biji  kopi  hijau  arabika  ( Coffea  arabica L.)  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  flavonoid, alkaloid,  tanin  dan  terpenoid.  Kandungan  flavonoid  pada  biji  kopi  hijau  arabika  diduga  memiliki aktifitas sebagai antioksidan dan antidiabetes. Peningkatan aktifitas senyawa aktif dapat ditingkatkan melalui proses purifikasi. Purifikasi biji kopi hijau arabika dilakukan menggunakan pelarut etil asetat melalui  pemisahan  cair-cair.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktifitas  antioksidan  ekstrak terpurifikasi etil asetat biji kopi hijau arabika serta menganalisis aktivitas penurunan glukosa secara in vitro .  Pengujian  aktivitas  antioksidan  ditentukan  menggunakan  metode  ABTS  (2,2  azinobis  (3- etilbenzotiazolin)-6-asam  sulfonat),  sedangkan  pengujian  antidiabetes  menggunakan  metode Nelson Somogyi dengan  pembacaan  absorbansi  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis.  Hasil  identifikasi kualitatif menunjukkan adanya senyawa aktif flavonoid pada ekstrak biji kopi hijau arabika (EBKHA) terpurifikasi etil asetat. Kadar flavonoid total pada EBKHA terpurifikasi etil asetat sebesar 49,47 mg QE/g.  Aktifitas  antioksidan  pada  EBKHA  terpurifikasi  etil  asetat  diperoleh  nilai  IC 50 69,95  ppm dengan kategori kuat, sedangkan  aktivitas penurunan kadar glukosa secara optimal pada konsentrasi 60  ppm  dengan  penurunan  kadar  glukosa  sebesar  67,50%.  Kandungan  flavonoid  pada  EBKHA terpurifikasi  etil  asetat  memiliki  kemampuan  antioksidan  kuat  serta  berpotensi  sebagai  kandidat antidiabetes.
Kata kunci : Antidiabetes, Antioksidan, Coffea arabica L., Flavonoid, Purifikasi

## Abstract
Arabica  green  coffee  beans  ( Coffea  arabica L.)  contain  secondary  metabolites  of  flavonoids, alkaloids, tannins and terpenoids. The content of flavonoids in arabica green coffee beans was thought to have antioxidant and antidiabetic activity. Increased active activities of metabolites compounds can be  increased  by  purification  process.  Purification  of  Arabica  green  coffee  beans  was  carried  out  by using  ethyl  acetate  solvent  through  liquid-liquid  separation.  This  study  aims  to  determine  the antioxidant  activity  of  purified  ethyl  acetate  extracts  of  arabica  green  coffee  beans  and  analyze glucose reduction activities in vitro. Testing for antioxidant activity was determined using the ABTS method (2.2 azinobis (3-ethylbenzothiazolin) -6-sulfonic acid), while the antidiabetic testing used the Nelson  Somogyi  method  with  absorbance  reading  using  UV-Vis  spectrophotometry.  Qualitative identification  results  indicate  the  presence  of  active  flavonoid  compounds  in  Arabica  green  coffee bean extract (EBKHA) purified by ethyl acetate. Total flavonoid levels in EBKHA purified by  ethyl acetate were 49.47 mg QE/g. Antioxidant activity on EBKHA purified by ethyl acetate obtained IC 50 value 69.95 ppm with a strong category, while the activity of reducing glucose  levels optimally at a concentration  of  60  ppm  with  a  decrease  in  glucose  levels  of  67.50%.  The  flavonoid  content  in EBKHA purified by ethyl acetate has strong antioxidant ability and has the potential as an antidiabetic candidate.
Keywords : Antidiabetic, Antioxidant, Coffea arabica L., Flavonoids, Purification

## PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  suatu  senyawa yang  dapat  menetralkan  dan  melawan  radikal bebas  dengan  menghambat  terjadinya  oksidan pada  sel  tubuh  sehingga  mengurangi  terjadinya oksidasi  dan  kerusakan  sel.  Kopi  hijau  arabika ( Coffea  arabica L.)    merupakan  salah  satu tumbuhan  yang  memiliki  potensi  sebagai antioksidan  alami.  Biji  kopi  mengandung senyawa aktif asam klorogenat, kafein, alkaloid, flavonoid,  terpenoid,  dan  polifenol  (Pramono dan Puspitasarai,  2015; Wahyuono et al., 2017). Selain  kandungan  senyawa  tersebut,  pada  biji kopi  hijau  arabika  ( Coffea  arabica L.)  terdapat air,  asam,  sukrosa,  gula  pereduksi,  lemak, karbohidrat,  lilin,  lipid,  minyak    dan  yang  lain yang dapat mengganggu aktivitas dari kopi hijau arabika.
Diabetes Melitus (DM) merupakan penyakit  kronis  yang  terjadi  ketika  pankreas tidak  memproduksi  insulin  yang  cukup  atau ketika  tubuh  tidak  dapat  secara  efektif menggunakan  insulin  yang  dihasilkan.  Penyakit DM Tipe II merupakan jenis penyakit DM yang paling sering terjadi di kalangan masyarakat dan menjadi masalah kesehatan yang utama didunia. Indonesia  menempati  urutan  ke  4  dengan prevalensi  penderita  DM  di  dunia  setelah  India, Cina dan Amerika Serikat (Pratiwi et al ., 2014). Peningkatan  aktivitas  senyawa  aktif  bahan  alam dapat  dilakukan  melalui  purifikasi.  Purifikasi merupakan metode untuk mendapatkan komponen  bahan  alam  murni  bebas  dari komponen  kimia  lain  yang  tidak  dibutuhkan. Purifikasi ekstrak diharapkan akan meningkatkan  khasiat  senyawa  aktif  dalam ekstrak (Srijanto et al ., 2012).
Berdasarkan uraian tersebut akan dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai skrining  awal  aktifitas  antioksidan  dan  aktifitas penurunan  kadar  glukosa  pada  ekstrak  biji  kopi hijau  arabika  ( Coffea  arabica L.)  terpurifikasi etil  asetat.  Penggunaan  pelarut  etil  asetat diharapkan  dapat  menarik  senyawa  aktif  pada ekstrak  biji  kopi  hijau  secara  lebih  optimal. Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan  metode ABTS  (2,2  azinobis  (3-etilbenzotiazolin)-6- asamsulfonat), sedangkan uji aktifitas antidiabetes dilakukan secara in vitro menggunakan metode Nelson Somogyi .
Penelitian diharapkan dapat memberikan informasi dan pengetahuan mengenai pemanfatan  bahan  alam  sebagai  alternatif  terapi farmakologis.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Seperangkat  alat  ekstraksi  dengan  metode maserasi,  blender,  oven,  batang  pengaduk, kertas  saring,  corong  kaca,  erlenmeyer,  gelas ukur,  beker  gelas,  cawan  penguap,  neraca analitik  OHAUS, rotary  evaporator RE  100- Pro, waterbath memmert dan corong pisah. Alat untuk  uji  in  vitro  meliputi  labu  takar,  tabung reaksi,  mikropipet  BioHit  1000  μL,  pipet  ukur, pipet tetes, spatula, vial, kuvet, dan spektrofotometer  UV-Vis  Shimadzu  UV  Mini 1240.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  biji kopi  hijau  arabika,  etanol  teknis  96%,  aquades, etil  asetat  (Merck ),  NaOH  (Merck ),  NaCl 10%  (Merck ),  FeCl 3 1%  (Merck ),  pereaksi dragendorff,  mayer,  HCl  p.a  (Merck ),  HCl  2 N, H 2 SO 4 Pekat (Merck ), kloroform (Merck ), asam  asetat  anhidrat,  ammonia,  metanol  p.a (Merck ),  ABTS  (Sigma-Aldrich ),  kalium persulfat  (Merck ),  Vitamin  C,  reagen  nelson somogyi  dan arsenomolibdat.

## Ekstraksi dan Purifikasi
Ekstrak  kopi  hijau  arabika  dibuat  dengan metode  maserasi  menggunakan  etanol  96% dengan  perbandingan  1  :  10  (Puspitasari  dan Pramono,  2015),  yaitu  sebanyak  300  gram serbuk  simplisia  kering  dimaserasi  dengan etanol  96%  sebanyak  2250  mL,  dan  dilanjutkan dengan  remaserasi  menggunakan  etanol  96% sebanyak  750  mL.  Filtrat  yang  diperoleh kemudian  dipekaatkan  menggunakan rotary evaporator pada  suhu  60ºC  sehingga  akan diperoleh ekstrak kental (Afonso et al ., 2016).
Purifikasi  ekstrak  kopi  hijau  arabika dilakukan  menggunakan  pelarut    etil  asetat dengan  menimbang  sebanyak  10  gram  ekstrak kasar  kemudian  dilarutkan  dengan  air  panas sebanyak  200  ml  (1:20)    sampai  homogen. Setiap  100  mL  larutan  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah  dan  ditambahkan  etil  asetat sebanyak  100  mL  (1:1).  Sampai  diperoleh pemisahan lapisan air dan etil asetat. Penambahan  etil  asetat  dilakukan  hingga diperoleh lapisan etil asetat yang bening dimana lapisan etil asetat akan berada pada lapisan atas. Hasil  purifikasi  ekstrak  dipekatkan  hingga diperoleh  ekstrak  kental  terpurifikasi  dan dihitung rendemennya (Idrus et al., 2018).

## Uji Kadar Air
Uji  kadar  air  menggunakan moisture balance bertujuan  agar  pada  saat  penyimpanan
ekstrak terbebas dari cemaran jamur dan kapang (Salim, 2016).

## Uji Bebas Etanol
Uji bebas etanol bertujuan untuk membuktikan bahwa tidak ada kandungan etanol dalam  ekstrak  sehingga  tidak  mempengaruhi pada  saat  pengujian.  Uji  bebas  etanol  dilakukan menggunakan prinsip esterifikasi dengan menambahkan  asam  asetat  dan  katalis  asam sulfat  pekat  pada  ekstrak.  Hasil  bebas  etanol pada  ekstrak  ditunjukkan  dengan  tidak  adanya bau  ester  yang  terbentuk  (Serlahwaty  dan Sevian, 2016).

## Skrining Fitokimia
Metode penapisan fitokimia secara kualitatif  dilakukan  menggunakan  pereaksi warna  untuk  memberikan  gambaran  mengenai golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam tanaman (Serlahwaty dan Sevian, 2016).
Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode ABTS
Ekstrak kopi hijau arabika ( Coffea arabica
L.)  sebanyak  50  mg  dilarutkan  dalam  metanol p.a  ad  50  mL  dalam  labu  ukur  sehingga diperoleh  larutan  stok  1000  ppm  dan  kemudian dibuat  seri  kadar  dengan    konsentrasi  40  ppm, 50 ppm, 60 ppm, 70 ppm dan 80 ppm. Masing- masing  konsentrasi  masukkan  dalam  labu  ukur 10  mL  di  encerkan  dengan  metanol  p.a  hingga tanda  batas.  Diambil  1  mL  masing-masing konsentrasi  larutan  sampel  dan  ditambah  3  mL ABTS  dicukupkan  dengan  methanol  p.a  pada labu  ukur  5  ml.  Larutan  dihomogenkan, kemudian  tunggu operating  time dan  diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimal  menggunakan  spektrofotometer  Uv- Vis (Sami dan Rahimah, 2016).

## Pengujian Vitamin C sebagai pembanding
Sebanyak  50  mg  vitamin  C  dilarutkan dalam  50  mL  etanol  p.a  sehingga  diperoleh larutan  stok  1000  ppm.  Kemudian,  dilakukan pengenceran  larutan  dengan  konsentrasi  3,  5,  7, 9,  dan  11  ppm.  Masing-masing  konsentrasi dimasukkan  dalam  labu  ukur  10  mL  dan encerkan dengan metanol p.a hingga tanda batas. Diambil  1  mL  masing-masing  konsentrasi vitamin  C  dimasukan  dalam  tabung  reaksi  dan ditambah  3  mL  ABTS  dan  dicukupkan  dengan methanol  pa  pada  labu  ukur  5  ml.  Larutan dihomogenkan, kemudian tunggu operating time dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang
maksimal menggunakan
spektrofotometer  UV-Vis  (Sami  dan  Rahimah, 2016).
Uji  Antidiabetes In  Vitro dengan  Metode

## Nelson-Somogyi
Ekstrak  terpurifikasi  kopi  hijau  arabika masing-masing  dibuat  larutan  stok  sebanyak 1000 ppm. Sebanyak 100 mg ekstrak terpurifikasi  dilarutkan  ke  dalam  labu  100  ml dengan  akuades  sampai  tanda  batas,    kemudian dibuat seri konsentrasi 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 ppm.  Masing-masing  seri  larutan  diambil  3  mL dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan dengan  3  mL  baku  glukosa  dengan  konsentrasi 40  ppm  dalam  akuades.  Larutan  diambil  1  mL, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  10 mL,  dan  ditambah  1  mL  reagen nelson . Selanjutnya, ditutup dengan kapas dan dipanaskan  di  atas  air  mendidih  selama  10 menit.  Larutan  didinginkan  selama  5  menit, ditambah  1  mL  reagen  Arsenomolibdat,  dan ditambah  akuades  sampai  tanda  batas.  Larutan selanjutnya  diaduk  perlahan  dan  didiamkan selama  waktu  inkubasi.  Hasilnya  dilakukan pembacaan  dengan  spektrofotometri  UV-Vis dan operating  time yang  sesuai  panjang gelombang maksimum.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Tanaman
Determinasi  tanaman  biji  kopi  hijau arabika  merupakan  tahap  awal  yang  dilakukan pada  sebuah  penelitian  sebelum  melangkah  ke tahap  selanjutnya.  Hasil  dari  determinasi menunjukkan  bahwa  sampel  tanaman  yang digunakan  adalah  benar  kopi  hijau  arabika ( Coffea arabica L.).
Pembuatan  Ekstrak  Biji  Kopi  Arabika ( Coffea arabica L.)
Proses  penarikan  senyawa  aktif  dalam kopi  hijau  arabika  dilakukan  dengan  cara ekstraksi menggunakan metode maserasi. Cairan penyari  yang  digunakan  adalah  etanol  96%. Etanol  96%  dipilih  sebagai  larutan  penyari karena  mampu  menarik  senyawa  aktif  senyawa secara  optimal  dari  senyawa  dengan  tingkat kepolaran rendah sampai tinggi. Proses maserasi dilakukan  selama  24  jam  dan  diremaserasi selama 2x24 jam. Hasil ekstrak yang didapatkan setelah dikentalkan menggunakan rotary evaporator pada  suhu  60°C  dan  diuapkan dengan  water  bath  yaitu  sebanyak  54,83  gram dengan  rendemen  sebesar  18,28%.  Penggunaan suhu  60°C  yaitu  disesuaikan  dengan  sifat senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung
dalam  biji  kopi  arabika  dan  tidak  melebihi  titik didih etanol yakni antara 78-79°C.
Pada  penelitian  ini  dilakukan  purifikasi atau  pemurnian  terhadap  ekstrak  yang  didapat. Proses purifikasi adalah metode untuk mendapatkan  komponen  bahan  alam  murni bebas  dari  komponen  kimia  lain  yang  tidak dibutuhkan  (Nugroho  et al ,  2013).  Pada penelitian ini purifikasi dilakukan menggunakan pelarut  etil  asetat  yang  bersifat  semi  polar. Pelarut semi polar mampu mengekstrak senyawa fenol,  alkaloid,  aglikon,  glikosida.  Jenis  pelarut pengekstraksi juga mempengaruhi jumlah senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak, sesuai  konsep  like  dissolve  like  (Romadanu  et al ., 2014).
Hasil  rendemen  ekstrak  purifikasi  etil asetat diperoleh sebesar 85,9% b/b dengan bobot awal  ekstrak  kasar  sebesar  10  gram.  Hasil  uji kadar  air  terhadap  ekstrak  purifikasi  etil  asetat diperoleh  kadar  presenyase  0,66%  MC.  Kadar air  yang  terkandung  dalam  ekstrak  tidak  boleh lebih  dari  10%  karena  dapat  mempengaruhi mutu  sediaan  ekstrak  tersebut  (Zainab  et al., 2016).

## Uji Bebas Etanol
Ekstrak  dilarutkan  dengan  H 2 SO 4 Pekat dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan asam  asetat  dipanaskan  sampai  mendidih.  Hasil pengujian  ekstrak  terpurifikasi  etil  asetat  kopi hijau  arabika  dinyatakan  bebas  dari  etanol karena tidak tercium bau ester.

## Skrining Fitokimia
Hasil  penapisan  fitokimia  menunjukkan bahwa ekstrak terpurifikasi etil asetat kopi hijau arabika  positif  mengandung  senyawa  metabolit flavonoid,  alkaloid,  tanin  dan  terpenoid  sesuai yang  terdapat  pada  literatur  (Gunalan  et al., 2012).

## Pengujian Flavonoid Total
Hasil uji flavonoid total pada ekstrak biji kopi  hijau  arabika  terpurifikasi  etil  asetat diperoleh  sebesar  49,47  mg  QE/g.  Kandungan flavonoid  pada  biji  kopi  hijau  arabika  memiliki korelasi  terhadap  aktifitas  antioksidan  maupun antidiabetesnya.

## Tabel 1. Hasil Uji Flavonoid Total
Parameter Hasil (mg QE/g) Flavonoid Total EBKHA terpurifikasi etil asetat 49,47 Keterangan :
EBKHA = Ekstrak Biji Kopi Hijau Arabika

## Pengujian Antioksidan dengan Metode ABTS
Panjang gelombang larutan ABTS didapatkan  maksimal yaitu 740,20 nm dengan absorbansi  0,709.  Penelitian  yang  dilakukan (Mistriyani  et al .,  2017),  panjang  gelombang maksimum  734  nm  dengan  absorbansi  0,600- 0,800.  Panjang  gelombang  maksimum  yang dipilih  merupakan  dengan  absorbansi  yang paling  tinggi  atau  yang  memiliki  serapan maksimal. Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk mengetahui panjang gelombang yang mempunyai serapan maksimum yaitu saat senyawa berada pada kondisi optimum sehingga diperoleh kepekaan yang maksimum.
Prinsip Operating  time yaitu  dengan mengamati kestabilan senyawa produk, diketahui absorbansi mulai dari saat direaksikan hingga  tercapai  serapan  yang  stabil.  Penentuan operating  time dengan  metode  ABTS  yang diukur  pada  panjang  gelombang  maksimum 740,20  nm  dengan  absorbansi  0,709  yang  stabil dilakukan  pada  menit  ke  1-40  lalu  dihitung absorbansinya,  dari  hasil  pengukuran  operating time didapatkan absorbansi stabil pada menit ke- 6  sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Fidrianny et al ., (2016).
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  kopi  hijau arabika  ( Coffea  arabica L.)  secara  ditentukan dengan  metode  ABTS  yaitu  berdasarkan kemampuan  ekstrak  kopi  hijau  arabika  dalam mereduksi  atau  meredam  radikal  bebas  ABTS. Kemampuan  ekstrak  kopi  hijau  arabika  ditandai dengan  berkurangnya  intensitas  warna  biru  dari larutan  ABTS  yang  telah  ditambahkan  dalam sampel.  Aktivitas  penangkap  radikal  bebas ABTS  juga  ditentukan  berdasarkan  parameter inhibitory  concentration ( IC 50 ).  Semakin  kuat aktivitas  penangkapan  radikal  ABTS  yang diberikan suatu sampel maka akan menghasikan nilai IC 50 semakin  kecil  (Isnindar,  2017; Romadanu et al., 2014).
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dengan metode  ABTS  yang  telah  dilakukan  terhadap purifikasi  etil  asetat  didapatkan  nilai IC 50 69.95 ppm  (kuat),  dan  pembanding  vitamin  C  yang termasuk golongan antioksidan yang sangat kuat sebesar  8.11  ppm.  Penelitian  yang  dilakukan dapat  diketahui  bahwa  vitamin  C  memiliki aktivitas  peredaman  radikal  bebas  yang  lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak purifikasi etil asetat.

## Tabel 2. Hasil Uji Antioksidan Metode ABTS
Sampel Konsentrasi (ppm) Abs Rata-rata ± SD Aktivitas Antioksidan (%) IC 50 (ppm) (Kategori) EBKHA terpurifikasi etil asetat 40 0,629 ± 0,007 11,90 69,95 (kuat) 50 0,552 ± 0.0085 22,69 60 0,440 ± 0.0094 38,37 70 0,351 ± 0.01 50,84 80 0,270 ± 0.0025 62,18 Vitamin C 3 0,562 ± 0.0037 20,73 8,11 (sangat kuat) 5 0,458 ± 0.001 35,40 7 0,388 ± 0.0075 45,27 8 0,321 ± 0.0057 54,72 11 0,254 ± 0.0063 64,27 Keterangan : EBKHA = Ekstrak Biji Kopi Hijau Arabika
Pengujian
antioksidan dengan pembanding  vitamin  C  yang  sudah  terbukti memiliki  kemampuan  yang  poten  dan  berperan sebagai  antioksidan  dengan  cara  donor  atom hidrogen  pada  senyawa  radikal  bebas,  sehingga kurang reaktif (Rohman et al ., 2010).
Kandungan  senyawa  aktif  dalam  ekstrak biji kopi hijau arabika berperan sebagai aktivitas antioksidan.  Selain  flavonoid,  pada  biji  kopi hijau  arabika  mengandung  senyawa  metabolik lain seperti asam klorogenat dan karetenoid yang membantu dalam peningkatan aktivitas antioksidan (Fidrianny et al ., 2016).
Uji Aktivitas Antidiabetes secara In Vitro Penentuan panjang gelombang  maksimum dilakukan untuk mengetahui panjang gelombang
yang memberikan absorbansi maksimum. Pengujian  dilakukan  pada  kisaran  panjang gelombang  antara  700-780  nm  dan  diperoleh panjang  gelombang  maksimum  751,8  nm dengan waktu operating time selama 19 menit. Pengujian  dilanjutkan  dengan  pembuatan kurva standar glukosa. Pembuatan kurva standar glukosa bertujuan untuk mendapatkan persamaan  linearitas  antara  absorbansi  dengan konsentrasi.

## Tabel 3. Hasil Uji Antioksidan Metode ABTS
Konsentrasi (ppm) Absorbansi 10 0.256 20 0.324 30 0.408 40 0.523 50 0.626 Tabel 4. Hasil Uji Penurunan Kadar Glukosa Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi Rata-rata ± SD Kadar %Penurunan EBKHA terpurifikasi etil asetat 10 0,535± 5,77x10 -3 41,43 2.72 20 0.478 ± 0.02 35,36 16.97 30 0.409 ± 3.78x10 28,01 34.23 40 0.367 ± 8.36x10 -3 23,54 44.73 50 0.329 ± 6.42x10 -3 19,49 54.23 60 0.276 ± 2.64x10 -3 13,84 67.50
Keterangan : EBKHA = Ekstrak Biji Kopi Hijau Arabika
Gambar 1. Kurva standar glukosa
Pembuatan  kurva  kalibrasi  dilakukan dengan  membuat  deret  konsentrasi  10,  20,  30, 40,  dan  50  ppm.  Persamaan  linear  yang didapatkan  adalah  y  =  0,146x  +  0,0093  dengan nilai  koefisian  korelasi  r=  0,995.  Persamaan regresi  linier  berfungsi  untuk  mengetahui pengaruh  antara  satu  buah  variabel  bebas terhadap satu buah variabel terikat.
Pengukuran  kadar  glukosa  didahului dengan  pengukuran  konsentrasi  awal  larutan glukosa  untuk  mengetahui  konsentrasi  glukosa secara  kuantitatif  yang  digunakan  sebelum ditambahkan dengan sampel. Konsentrasi ekstrak  kopi  hijau  arabika  yang  digunakan adalah  10,  20,  30,  40,  50  dan  60  ppm.  Hasil persen  penurunan  kadar  glukosa  ekstrak purifikasi  etil  asetat  kopi  hijau  arabika  sebesar 67,50%.  Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat diketahui  bahwa  ekstrak  terpurifikasi  etil  asetat kopi hijau arabika dapat memberikan penurunan kadar glukosa secara in vitro .

## KESIMPULAN
Ekstrak  terpurifikasi  kopi  hijau  arabika mempunyai  kandungan  metabolit  sekunder yaitu,  flavonoid,  alkaloid,  tanin  dan  terpenoid. Ekstrak  biji  kopi  hijau  arabika  ( Coffea  arabica L.)  memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan dengan metode ABTS. Nilai IC 50 pada purifikasi etil  asetat  sebesar  69,95  ppm  (kuat).  Aktivitas menurunkan  kadar  glukosa  secara  optimal  pada konsentrasi 60 ppm purifikasi  etil asetat sebesar 67,50%. Kandungan flavonoid pada ekstrak kopi hijau arabika memiliki aktivitas sebagai antioksidan  dan  mmapu  menurunkan  kadar glukosa secara in vitro.

## DAFTAR RUJUKAN
Affonso,  R.C.L.,  Voytena,  A.P.L.,  Fanan,  S., Pitz,  H.,  Coelho,  D.S.,  Horstmann,  A.L.,
Pereira,  A.,  Uarrota,  V.G.,  Hillmann, M.C.,  Varela,  L.A.C.  and  Ribeiro-do- Valle, R.M., (2016). Phytochemical composition,  antioxidant  activity,  and  the effect  of  the  aqueous  extract  of  coffee ( Coffea  arabica L.)  bean  residual  press cake on the skin wound healing. Oxidative medicine  and  cellular  longevity ,  2016,
PMC5124758.
Fidrianny,  I.,  Annisa.,  dan  Ruslan,  K.  (2016). Antioxidant  activities  of  arabica  green coffee from three regions using ABTS and DPPH.  Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research . 9(2):189–193.
Gunalan,  G.,  Myla,  N.,  &  Balabhaskar,  R.
(2012).  In  vitro  antioxidant  analysis  of selected  coffee  bean  varieties. Journal  of Chemical  and  Pharmaceutical  Research , 4(4), 2126-2132.
Idrus,  H.  H.,  Yuniarti,  L.,  Fadilah,  A.  M., Mangarengi,  Y.,  &  Sodiqah,  Y.  (2018). Efektifitas  Ekstrak  Buah  Sawo  Manila (Achras zapota L.)  terhadap Salmonella typhi dengan  Metode  Agar  Difus. UMI Medical Journal , 4(01), 1-10.
Mistriyani., Riyanto, S., dan Rohman, A. (2018). Antioxidant activities of Rambutan ( Nephelium  lappaceum L)  peel  in  vitro. Food Research . 2(1):19–123.
Nugroho,  A.  E.,  Malik,  A.,  &  Pramono,  S. (2013).  Total  phenolic  and  flavonoid contents,  and  in  vitro  antihypertension activity  of  purified  extract  of  Indonesian cashew  leaves  ( Anacardium  occidentale L.). International  food  research  journal , 20(1).
Pramono,  S.,  &  Puspitasari,  A.  D.  (2015).
Comparison  Of  Methods  Of  Producing Bee  Propolis  Purified  Extract  Based  On Total  Flavonoid  Content  Using  Rutin  As Standard. Majalah  Obat  Tradisional , 20(2), 81-86.
Pratiwi,  P.,  Amatiria,  G.,  &  Yamin,  M.  (2016). Pengaruh  Stress  Terhadap  Kadar  Gula Darah  Sewaktu  Pada  Pasien  Diabetes Melitus  Yang  Menjalani  Hemodialisa.
Jurnal Kesehatan , 5(1).
Rohman,  A.,  Riyanto,  S.,  Yuniarti,  N.,  Saputra, W. R., Utami, R., & Mulatsih, W. (2010). Antioxidant  activity,  total  phenolic,  and total  flavaonoid  of  extracts  and  fractions
68 | Jurnal Zarah , Vol. 8 No. 2 (2020)
of  red  fruit  ( Pandanus  conoideus Lam). International  Food  Research  Journal , 17(1), 97-106. Romadanu,  R.,  Hanggita,  S.,  &  Lestari,  S.  D. (2014).  Pengujian  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Bunga  Lotus  ( Nelumbo  nucifera ). Jurnal FishtecH , 3(1), 1-7. Salim,  M.,  Sulistyaningrum,  N.,  Isnawati,  A., Sitorus,  H.,  Yahya,  Y.,  &  Ni'mah,  T. (2016). Karakterisasi Simplisia dan
Ekstrak  Kulit  Buah  Duku  (Lansium domesticum  Corr)  dari  Provinsi  Sumatera Selatan  dan  Jambi. Jurnal  Kefarmasian Indonesia , 6(2), 117-128. Sami, F. J., & Rahimah, S. (2015). Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Bunga Brokoli ( Brassica oleracea L. var. Italica) dengan  Metode  DPPH  (2,  2  diphenyl-1- picrylhydrazyl)  dan  Metode  ABTS  (2,  2 azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat). Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia , 2(2), 107-110.
Serlahwaty,  D.,  &  Sevian,  A.  N.  (2016).  Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 96%
Kombinasi  Buah  Strawberry  Dan  Tomat
Dengan  Metode  ABTS. In  Proceeding  of Mulawarman Pharmaceuticals Conferences (Vol. 3, pp. 322-330). Srijanto, B., Olivia, B.P., Lely, K., Eriawan,  R., dan Sriningsih. (2012). Pemurnian Ekstrak Etanol
Sambiloto
(Andrographis
Paniculata Ness) dengan Teknik Ekstraksi Cair-Cair. Prosiding InSINas 2012, 26-29. Wahyuono,  S.,  Widyarini,  S.,  &  Yuswanto,  Y. (2017).  Aktivitas  Antioksidan  Buah  Kopi Hijau Merapi. JPSCR: Journal of
Pharmaceutical  Science  and  Clinical
Research , 2(2), 130-136.
Zainab,  G.  F.,  Witasari,  H.  A.,  Edityaningrum, C.  A.,  &  Mustofa,  M.  M.  (2016). Penetapan  parameter  standarisasi  non spesifik  ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.).  Jakarta  (ID) Prosiding Rakernas dan Pertemuan Ilmiah Tahunan Ikatan Apoteker Indonesia. 210-214.