Pengaruh Pemberian  Bakteri Bacillus pumilus pada kotoran Sapi Sebagai Pupuk terhadap Jumlah Kandungan Klorofil Dunaliella salina
The Effect of Bacteria Bacillus pumilus In Cow Dung As Fertilizer to Total Chlorophyll Dunaliella salina
Endang Dewi Masithah, Nuansa Adharia Ningrum dan Setiawati Sigit
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031 - 5911451

## Abstract
Dunaliella salina is one type of natural food used in the hatchery business. Production stability D. salina with an abundance of nutrients can be supported. The purpose of this study was to determine the effect and how many doses of the bacteria Bacillus pumilus best fermented in cow dung as fertilizer in increasing the population of D. salina . Research conducted at the Laboratory of Education Faculty of Fisheries and Marine Fisheries, Airlangga University Surabaya. The research design used was Completely Randomized Design (CRD) is followed by Duncan test. D. salina was cultured in 250 mL glass bottle with 5 treatments (2 treatments as a control) and four replications. Culture medium used contained 10 ppm cow dung. The concentration of cow manure are given in the study, namely A (12.5% Bacillus pumilus ), B (10% Bacillus pumilus ), C (7.5% Bacillus pumilus ), control 1 (without fermentation), control 2 (fertilizer Walne). The results showed that the addition of Bacillus pumilus on cow dung that were cultured in culture medium D. salina can increase the amount of chlorophyll content of D. salina . Addition of Bacillus pumilus by 10%  in  the  culture  medium  to  produce  the  amount  of  chlorophyll -a D.  salina high  of  0.014055  µg/mL  and chlorophyll- b of 0.009657142 µg/mL on the first day.
Keywords : Dunaliella salina, cow dung, Bacillus pumilus

## Latar Belakang
Dunaliella  salina termasuk  salah  satu  jenis fitoplankton dalam kelas  Chlorophyceae (alga hijau) yang sering disebut flagellata hijau bersel satu ( green unicellulair  flagellata ).  Keberadaan  fitoplankton jenis ini berperan penting dalam lingkungan perairan sebagai  produsen  primer  karena D.  salina bersifat fotosintetik,  mempunyai  klorofil  untuk  menangkap energi matahari dan karbon dioksida menjadi karbon organik  yang  berguna  sebagai  sumber  energi  bagi kehidupan organism air.
Setiap  media  kultur  mempunyai  komposisi unsur  hara  yang  berbeda-beda  dan  masing-masing mempunyai  fungsi  yang  berbeda  pula  bagi fitoplankton  yang  akan  dibudidayakan  (Prihatini et al., 2007).  Nutrisi  merupakan  sumber  utama fitoplankton  yang  menghasilkan  klorofil.  Nutrisi akan  dimanfaatkan  oleh D.  salina ,  makin  tinggi kepadatan  fitoplankton  maka  makin  tinggi kandungan klorofil (Arinardi, 1997).
Kotoran  sapi  merupakan  limbah  kaya lignohemiselulosa  yang  mempunyai  potensi  cukup besar  bagi  proses  industri  yang  memerlukan  bahan baku  mengandung  lignohemiselulosa.  Limbah lignohemiselulosa  yang  mengandung  xilan,  manan, arabinan  dan  arabinogalaktan  pada  kotoran  sapi dapat  dimanfaatkan  sebagai  sumber  karbon,  substrat dan inducer pada  media  pertumbuhan Bacillus pumilus untuk  menghasilkan  enzim-enzim lignohemilanase (Gunawan dan Sundari, 2003).
Guna  meningkatkan  kualitas  kotoran  sapi maka  dilakukan  proses  fermentasi  menggunakan bakteri Bacillus  pumilus. Bacillus  pumilus dapat mensekresikan  enzim  selulase  untuk  mendegradasi selulosa  menjadi  glukosa  atau  oligosakarida  (Naved et  al,  1998).  Manfaat  dari  fermentasi  kotoran  sapi dengan  penggunaan Bacillus  pumilus adalah  untuk menambah  ketersediaan  nutrien  media  kultur (Indrawan, 2003).
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  pengaruh  pemberian  fermentasi  kotoran sapi  oleh  bakteri Bacillus  pumilus sebagai  pupuk terhadap  peningkatan  kandungan  klorofil D.  salina dan  mengetahui  dosis  terbaik  bakteri Bacillus pumilus pada  fermentasi  kotoran  sapi  yang memberikan kandungan klorofil D. salina tertinggi .

## Materi dan Metode Penelitian
Waktu dan Tempat
Pelaksanaan  penelitian  ini  dilaksanakan pada  awal  September  sampai  dengan  Oktober  2010 di  Laboratorium  Pendidikan  Perikanan,  Program Studi  Budidaya  Perikanan,  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan, Universitas Airlangga.
Materi Penelitian
Materi  penelitian  yang  digunakan  terdiri dari bahan dan alat penelitian. Bahan penelitian yang digunakan  adalah  isolat D.  salina berasal  dari  Balai Budidaya  Air  Payau  Situbondo,  isolat  bakteri
lignohemiselulolitik Bacilllus  pumilus berasal  dari isi rumen sapi (hasil penelitian Lamid, 2006), pupuk Walne , kotoran  sapi  yang  diperoleh  dari  kandang hewan  Fakultas  Kedokteran  Hewan  (FKH) Universitas  Airlangga,  molases,  air  laut,  air  tawar, aquadest,  alkohol,  klorin,  Na  Thiosulfat,  MgCO 3, aceton  90%  dan  media  peremajaan Bacillus  pumilus yaitu menggunakan nutrien agar.
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  toples  kaca  (sebagai  wadah  penelitian), aerator  set, sterefoam ,  gelas  ukur,  pipet  tetes,  pipet volume,  mikroskop, handcounter , autoclave , spektrofotometer,  centrifuge, haemocytometer, test tube , cuvet ,  refraktometer,  pH paper ,  pipet  volume, kapas,  kasa,  tisu,  corong  air,  erlenmeyer,  timbangan digital,  termometer,  lampu  TL  neon  dengan  panjang 1 meter, shaker incubator , aluminium foil dan kertas saring.
Metode Penelitian
Penelitian  ini  semua  dikondisikan  sama kecuali  perlakuan  dosis  pupuk  kotoran  sapi. Rancangan  penelitian  utama  yang  digunakan  adalah Rancangan  acak  lengkap  (RAL)  (Kusriningrum, 1989). Penelitian ini menggunakan kotoran sapi yang difermentasi  dengan  penambahan  dosis  bakteri Bacillus  pumilus ,  pada  perlakuan  A  (12,5%),
B(10%),  C  (7,5%),  kontrol  1  (tanpa  fermentasi)  dan kontrol 2 (pupuk Walne). Setiap perlakuan mendapat ulangan sebanyak 4 kali.

## Prosedur Kerja
Persiapan Penelitian
Sterilisasi  peralatan  yang  akan  digunakan untuk  kultur  dilakukan  dengan  terlebih  dahulu mencuci  sampai  bersih  kemudian  dibilas  dengan  air tawar.    Peralatan  berukuran  besar  yang  sudah  bersih direndam  dengan  larutan  klorin  150  ppm  selama  24 jam.    Setelah  itu,  peralatan  dikeringkan  di  bawah sinar matahari.  Peralatan berukuran kecil dan terbuat dari  kaca  tahan  panas  yang  akan  digunakan  untuk kultur  disterilkan  dengan  menggunakan autoclave
o dengan  suhu  121 C  selama  15  menit.  Peralatan  ini harus  ditutup  dengan  kapas  dan  kasa  kemudian dibungkus dengan aluminium foil (Ekawati, 2005).
Sterilisasi  air  laut  dilakukan  dengan menggunakan larutan klorin.  Air laut terlebih dahulu disaring dengan kapas yang diletakkan dalam corong air  lalu  disterilkan  dengan  memberikan  klorin sebanyak 60 ppm dan diaerasi selama 24 jam lalu Na Thiosulfat  20 ppm diberikan  untuk  menghilangkan sisa–sisa klorin (Ekawati, 2005).
Nutrien  yang  akan  digunakan  juga d i l a k u k a n   p r o s e s   s t e r i l i s a s i   y a i t u   d e n g a n menggunakan autoclave .  Nutrien  dimasukkan kedalam  botol  erlenmeyer  atau test  tube steril  yang kemudian  ditutup  dengan  menggunakan  kapas  + gauze dilapisi  dengan aluminium  foil .  Setelah  itu erlenmeyer  atau test  tube yang  berisi  nutrien disterilisasi  dengan  menggunakan  autoclave  pada suhu 121 ºC selama 15 menit.

## Persiapan Kotoran Sapi
Kotoran  sapi  yang  akan  digunakan  untuk penelitian  diperoleh  dari  kandang  hewan,  Fakultas Kedokteran  Hewan  (FKH),  Universitas  Airlangga, Surabaya.  Kotoran  sapi  yang  akan  digunakan dikeringkan  terlebih  dahulu  di  bawah  sinar  matahari selama kurang lebih 4-5 hari sampai kering. Kotoran sapi  kemudian  digiling.  Sebelum  kotoran  sapi dipergunakan, kotoran sapi yang telah kering terlebih dahulu  dilakukan  proses  analisis  laboratorium  untuk mengetahui kadar N dan kadar P. Setelah itu kotoran sapi  tersebut  diberi  molases,  kemudian  ditambahkan dengan  bakteri Bacillus  pumilus sebagai  fermentor sesuai dengan perlakuan.
Persiapan Bakteri Bacillus pumilus Sediaan  isolat  bakteri Bacillus  pumilus yang  akan  digunakan  adalah  hasil  isolasi  Lamid (2006)  berasal  dari  isi  rumen  sapi  yang  diremajakan kembali  pada  nutrien  agar  dan  dikultur  selama  24 jam.  Isolat  bakteri Bacillus  pumilus dilakukan peremajaan  untuk  mendapatkan  isolat  yang  tetap bertahan  hidup  dan  stabil  dalam  pertumbuhannya (Schlegel, 1994).
Fermentasi  Kotoran  Sapi  dengan  Menggunakan Bakteri Bacillus pumilus
Kotoran  sapi  yang  telah  kering  dan  sudah ditimbang  sebanyak  5  gr  difermentasi  menggunakan isolat  bakteri Bacillus  pumilus dan  sebagai  aktivator adalah  molases  dan  air.  Proses  ini  diawali  dengan kotoran  sapi  ditambahkan  4%  molases  (Lamid, 2006).  Setelah  itu  ditambahkan  1,5  ml  air  dan  isolat bakteri Bacillus  pumilus dengan  dosis  yang  sesuai dengan  perlakuan,  kemudian  diaduk  secara  merata. Sesudah  itu  dimasukkan  dalam  plastik  hitam  dalam kondisi  tertutup  rapat  dengan  jangka  waktu  yaitu  7 o
hari dengan suhu 27 – 32 C. Setelah mencapai jangka waktu fermentasi yang ditentukan, kotoran sapi yang telah  difermentasi  dikeringkan  dan  siap  dipakai (Nurjariah, 2005).

## Pengaruh Pemberian Bakteri ......

## P e r s i a p a n   P e m b u a t a n   S t o k   K o t o r a n   S a p i
Terfermentasi Bacillus pumilus
Kotoran  sapi  yang  sudah  kering  dan  telah difermentasi  dengan  isolat  bakteri Bacillus  pumilus ditimbang sebanyak 5000 mg, kemudian kotoran sapi tersebut  dilarutkan  dalam  500  mL  aquadest. Konsentrasi  larutan  kotoran  sapi  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah 10 ppm (Masithah, 2008) dengan  volume  penggunaan  1mL/L.  Kemudian dilakukan  proses  sterilisasi  pada  stok  yaitu  dengan cara  larutan  kotoran  sapi  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer  sambil  disaring  dengan  kertas  saring. Erlenmeyer  yang  berisi  larutan  kotoran  sapi  ditutup dengan  gause  (kapas  yang  dibalut  dengan  kasa)  dan dibalut  dengan  aluminium  foil  lalu  disterilkan menggunakan  autoclave.  Pembuatan  larutan  kotoran sapi  terfermentasi  bakteri Bacillus  pumilus untuk kultur D. salina menggunakan rumus :
Keterangan: Q = berat bahan yang dilarutkan (mg, gram) V = volume pelarut/ aquadest (ml, L) P = volume penggunaan dalam media kultur (ml/L) K = konsentrasi pupuk yang diketahui (ppm, mg/L)
Persiapan  Media  Kultur Dunaliella  salina dengan Pupuk Kotoran Sapi
Media  kultur  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  air  yang  mempunyai  salinitas  33 ppt sebanyak 250 ml yang dimasukkan dalam toples kaca.  Selanjutnya  ditambahkan  1  ml  larutan  kotoran sapi  yang  telah difermentasi dengan  bakteri Bacillus pumilus sesuai  dengan  dosis  perlakuan.  Kemudian media  kultur  diletakkan  di  rak  kultur  lalu  diberi aerasi  dan  siap  dimasukkan  bibit D.    salina dengan kepadatan yang diinginkan.
Lingkungan Kultur
Lingkungan  kultur  dapat  mempengaruhi pertumbuhan D.  salina ,  oleh  karena  itu  lingkungan dikondisikan  sama  untuk  setiap  perlakuan. Lingkungan kultur D. salina dalam penelitian adalah o
suhu  25  –  30 C,  salinitas  33  ppt,  intensitas  cahaya 1300  –  2300  lux,  pH  7  –  9  dan  photoperiod  18  jam dalam  keadaan  terang  dan  6  jam  dalam  keadaan gelap (Yurong, 2005).
Rak  kultur  ditutupi  dengan  plastik  hitam, agar  suhu  ruang  tetap  stabil  menghindari  terjadinya fluktuasi  suhu  yang  ekstrim,  menghindari kontaminan dan mengatur photoperiod .
Kultur Dunaliella salina
D.  salina yang  digunakan  untuk  penelitian diperoleh  dari  Balai  Besar  Budidaya  Air  Payau Situbondo.  Media  kultur  yang  telah  siap  selanjutnya dimasukkan ke dalam botol kultur dengan kepadatan
5 5  x  10   sel/ml  dan  diaerasi.  Bibit D.  salina murni kemudian dimasukkan ke dalam botol sesuai dengan jumlah  kepadatan.  Wadah  tersebut  kemudian diletakkan  pada  rak-rak  kultur  lalu  diberi pencahayaan  dengan  lampu  TL  20  watt  sebanyak  2 buah untuk setiap perlakuan.
Selama  penelitian  berlangsung  wadah ditutup dan air medianya diberi aerasi terus menerus bertujuan  untuk  menjaga  kestabilan  pemenuhan oksigen terlarut (DO). Volume bibit atau jumlah bibit yang  yang  dibutuhkan  untuk  penebaran  dapat dihitung  dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut:
Keterangan: V1 = Volume bibit untuk penebaran awal (ml) N1 = Kepadatan bibit/ stock Dunaliella salina (unit/ ml) V2 = Volume media kultur yang dikehendaki (L) N2 = Kepadatan bibit Dunaliella salina yang dikehendaki (unit/ ml)
Pengukuran Kandungan Klorofil Pengukuran  kandungan  klorofil D.  salina dilakukan  menggunakan  spektrofotometer  dengan metode  modifikasi  dari  Sterman,  1988.  Sampel diambil  sebanyak  80  ml,  selanjutnya  dihitung kepadatan  sel  per  ml D.  salina. Sampel  dibagi menjadi  8  bagian  (kode  A-H),  masing-masing sebanyak  10  ml  dan  dimasukkan  ke  dalam  cuvet sentrifuge.  Sampel  disentrifuge  dengan  kecepatan 5000 rpm selama 5 menit.
S e t e l a h   p r o s e s   s e n t r i f u g e   s e l e s a i , supernatan  dibuang  hingga  tersisa  pelletnya.  Sampel A  ditambah  MgCO   dan  1  ml  acetone  90%  untuk 3 proses  ekstraksi.  Sample  dihomogenkan  secara manual  selama  kurang  lebih  10-15  menit.  Sample kode  A  (1  tabung)  merupakan  blanko.  Sedangkan pellet  dari  sample  kode    B-H  (7  tabung),  dijadikan satu  dalam  satu  kuvet,  selanjutnya  ditambahkan MgCO   dan  1  ml  acetone  90%.  Sample  tersebut 3 merupakan  sample  kandungan  klorofil  yang  akan dihitung pada spektrofotometer.
Sebelum  digunakan,  spektrofotometer dikaliberasi  terlebih  dahulu,  sesuai  dengan  panjang
1 2 2 1 N V N V × = (Ekawati, 2005) K P V Q × = (Satyantini dan  Masithah, 2008)
gelombang  yang  akan  digunakan  yaitu A   dan A .
664 647
Selanjutnya  blanko  dan  sample  diukur  serapan cahayanya  pada  spektrofotometer.  Selanjutnya kandungan  klorofil  dihitung  menggunakan  rumus berikut:
Kandungan  klorofil-a  dan  klorofil-b  (larutan aceton 90%) :
a) Klorofil-a = 11,93 A  – 1,93 A 664 647 b) Klorofil-b = 20,63 – 5,50 A647 A664
Sterman  (1988)  menyatakan  bahwa  setelah nilai  absorban  diketahui,  selanjutnya  nilai  absorban dimasukkan ke dalam rumus di bawah ini :
Berat molekul : chl-a 894, chl-b 908
Parameter Utama
Parameter  utama  dalam  penelitian  adalah kandungan  klorofil D.  salina .    Perhitungan kandungan  klorofil D.  salina dilakukan  setiap  dua hari  yaitu  pada  hari  pertama,  ketiga  dan  kelima. Kandungan  klorofil  dihitung  dengan  menggunakan spektrofotometer.
Parameter Pendukung Parameter  pendukung  dalam  penelitian adalah  suhu,  pH  dan  salinitas.  Pengamatan  terhadap
suhu,  pH  dan  salinitas  dilakukan  setiap  hari. Parameter  pendukung  digunakan  untuk  melengkapi data dari parameter utama.

## Analisis Data
Data  penelitian  yang  diperoleh  dianalisis secara  statistik  dengan  menggunakan  ANAVA.  Data yang  dihasilkan  bila  terdapat  perbedaan  dapat dilakukan uji lanjutan. Uji lanjutan dengan Uji Jarak Berganda  Duncan  ( Duncan's  Multiple  Range  Test ) digunakan  untuk  mengetahui  signifikasi  pengaruh perlakuan  satu  dengan  perlakuan  yang  lain (Kusriningrum, 2008).

## Hasil dan Pembahasan
Klorofil - a
Data pertumbuhan dan hasil Analisis Varian (ANAVA)  pada  hari  pertama  yang  ditunjukkan  pada tabel  1  menunjukkan  bahwa  masing  –  masing perlakuan  memberi  pengaruh  yang  berbeda  nyata (p<0,05)  terhadap  jumlah  kandungan  klorofil- a D. salina .  Jumlah  kandungan  klorofil D.  salina hari pertama  meningkat  dan  terus  mengalami  penurunan sampai  pada  hari  kelima.  Puncak  yang  terjadi  pada hari  pertama  diperoleh  pada  perlakuan  B  yaitu penambahan dosis bakteri Bacillus pumilus sebanyak 10%.
Tabel 1. Jumlah rata-rata klorofil- a Dunaliella salina (µg/ml) pada hari pertama, ketiga, dan kelima
Perlakuan Hari ke-1 Rata-rata ± SD (µg/ml) Hari ke-3 Rata-rata ± SD (µg/ml) Hari ke-5 Rata-rata ± SD (µg/ml) Kontrol 1 (tanpa fermentasi) Kontrol 2 (walne)
Perlakuan A (12,5% B. pumillus ) Perlakuan B (10% B. pumillus ) Perlakuan C (7,5% B. pumillus ) c 0.0073211 ± 0.0007963
ab 0.012785 ± 0.0008151 c
0.0080375 ± 0.0009290 a 0.014055 ± 0.0006668
b
0.0118225 ± 0.0008007
a
0.007375 ± 0.0022774
a
0.0088675 ± 0.0020201 a 0.00672 ± 0.0006007 a 0.00765 ± 0.0015769
a 0.0064525 ± 0.0009294 ab 0.00464 ± 0.0016352 a 0.00643 ± 0.0013880 bc 0.00342 ± 0.0013634
a 0.00673 ± 0.0005061
c
0.00106 ± 0.0005172
Keterangan : Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan (p<0,05)
Tabel 2. Jumlah rata-rata klorofil- b Dunaliella salina (µg/ml) pada hari pertama, ketiga, dan kelima
Perlakuan Hari ke-1 Rata-rata ± SD (µg/ml) Hari ke-3 Rata-rata ± SD (µg/ml) Hari ke-5 Rata-rata ± SD (µg/ml) Kontrol 1 (tanpa fermentasi) Kontrol 2 (walne)
Perlakuan A (12,5% B. pumillus ) Perlakuan B (10% B. pumillus ) Perlakuan C (7,5% B. pumillus )
b
0.011308 ±0.0015605
a 0.0.022361 ±0.00128890 b .009657 ±0.0027681 a 0.021579 ±0.0013277 b 0.009122 ±0.0068903 a
0.007375 ± 0.0022774
a 0.0088675 ± 0.0020201
a
0.00672 ± 0.0006007
a 0.00765 ± 0.0015769 a 0.0064525 ± 0.0009294 ab 0.00464 ± 0.0016352 a 0.00643 ± 0.0013880 bc 0.00342 ± 0.0013634 a 0.00673 ± 0.0005061 c
0.00106 ± 0.0005172
Keterangan : Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan (p<0,05)
Klorofil - b
Data pertumbuhan dan hasil Analisis Varian (ANAVA)  pada  hari  pertama  yang  ditunjukkan  pada tabel  1  menunjukkan  bahwa  masing  –  masing perlakuan  memberi  pengaruh  yang  berbeda  nyata (p<0,05)  terhadap  jumlah  kandungan  klorofil- a D. salina .  Jumlah  kandungan  klorofil D.  salina hari pertama  meningkat  dan  terus  mengalami  penurunan sampai  pada  hari  kelima.  Puncak  yang  terjadi  pada hari  pertama  diperoleh  pada  kontrol  2  yaitu penambahan pupuk Walne.

## Kandungan Nutrien Kotoran Api
Uji  laboratorium  kadar  nitrogen  dan phosphor  sebelum  fermentasi  adalah  1,3333  dan 1,48.  Kadar  unsur  nitrogen  kotoran  sapi  setelah fermentasi  menggunakan  bakteri Bacillus  pumilus terjadi  peningkatan  menjadi  1,470  sedangkan  kadar unsur phosphor mengalami penurunan menjadi 0,04. Data  kandungan  bahan  organik  dapat  dilihat  pada tabel 4.
Kualitas Air
Hasil analisis kualitas air meliputi pH, suhu dan  salinitas  yang  memberikan  pengaruh  terhadap populasi Dunaliella  salina. Pengukuran  kualitas  air dilakukan  setiap  hari  selama  kegiatan  penelitian.
Pengukuran  suhu  air  selama    penelitian  bekisar
o
antara antara 26 – 28 C, salinitas berkisar antara 36 – 45 ppt dan pH berkisar antara 6 – 8.
Hasil  penghitungan  Anova  pada  penelitian pengaruh  pemberian  bakteri Bacillus  pumilus pada kotoran  sapi  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap jumlah  klorofil- a D.  salina .  Hasil  uji  jarak  berganda Duncan  menunjukkan  bahwa  perlakuan  B  (10% Bacillus  pumilus )  pada  hari  pertama  memberikan pengaruh  terbaik  dibandingkan  dengan  hari  ketiga dan  kelima,  yang  berbeda  nyata  (p<0,05)  dengan perlakuan lainnya.
Hasil  penghitungan  Anova  pada  penelitian pengaruh  pemberian  bakteri Bacillus  pumilus pada kotoran  sapi  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap jumlah  klorofil- b D.  salina .  Hasil  uji  jarak  berganda Duncan menunjukkan bahwa kontrol 2 (walne) pada hari  pertama  memberikan  pengaruh  terbaik  yang berbeda  nyata  (p<0,05)  dengan  perlakuan A  (12,5%
Bacillus  pumilus ),  C  (7,5% Bacillus    pumilus )  dan kontrol  1.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian bakteri Bacillus  pumilus pada  kotoran  sapi memberikan pengaruh yang berbeda terhadap jumlah klorofil- a dan klorofil-b D. salina antara perlakuan.
Hasil  dari  penelitian  pemberian  bakteri Bacillus  pumilus pada  kotoran  sapi  terhadap  jumlah klorofil- a terendah pada kontrol 1 (tanpa fermentasi).
Hal  ini  dikarenakan  kandungan  unsur  hara  dalam kotoran sapi masih dalam bentuk senyawa kompleks yang  belum  dapat  memenuhi  kebutuhan  nutrien D. salina . Denault et al., (2000) juga menyatakan bahwa jumlah  klorofil- a menurun  seiring  dengan menurunnya  unsur  hara  pada  media  pemeliharaan. Kurangnya  unsur  hara  dapat  menyebabkan  proses fotosintesis  terhambat  dan  berpengaruh  terhadap jumlah klorofil (Latif, 2008).
Kandungan  klorofil  pada  hari  pertama tertinggi  pada  perlakuan  B  (10% Bacillus  pumilus ) bila dibandingkan dengan yang lainnya. Hal tersebut disebabkan  pada  perlakuan  C  (7,5% Bacillus pumilus )  diduga  dosis  bakteri Bacillus  pumilus yang ditambahkan  pada  media  kultur  kurang,  sehingga belum mencukupi kebutuhan nutrien yang diperlukan D.  salina untuk  tumbuh  lebih  baik  dibandingkan perlakuan B (10% Bacillus pumilus ), sedangkan pada perlakuan  A  (12,5% Bacillus  pumilus )  diduga mengandung  dosis Bacillus  pumilus yang  lebih banyak,  mengakibatkan  populasi Bacillus  pumilus meningkat  sehingga  terjadi  persaingan  nutrien  oleh bakteri akibatnya nutrien yang ada pada kotoran sapi menurun.  Sedangkan  pada  kontrol  1  (tanpa fermentasi)  tidak  dilakukan  penambahan Bacillus pumilus, sehingga  belum  mencukupi  kebutuhan nutrien  yang  diperlukan D.  salina diduga  karena komponen-komponen  serat  kasar  masih  belum terurai  sehingga  belum  dapat  dimanfaatkan  oleh D. salina untuk sumber nutrien. Pada kontrol 2 (walne) memberikan  hasil  yang  tidak  jauh  berbeda  dengan perlakuan  B,  hal  ini  dikarenakan  komposisi  kimia Walne mencukupi kebutuhan nutrien yang diperlukan D. salina.
Kandungan klorofil terbaik pada perlakuan B
(10% Bacillus pumilus ) hari pertama.  Hal ini diduga bahwa  bakteri B.  pumilus mampu  menguraikan s e m u a   k o m p o n e n   o r g a n i k   t e r u t a m a lignohemisellulosa yang merupakan serat kasar yang sulit  dipecah.  Oleh  karena  itu  dengan  penambahan Bacillus  pumilus diharapkan  mampu  memecah menjadi  komponen  yang  lebih  sederhana.  Lamid, 2006  menyatakan  bahwa  peningkatan  kandungan nutrisi  kotoran  sapi  dapat  terjadi  apabila  adanya
Nitrogen ( ppm ) Phospor ( ppm ) Rasio N:P Sebelum Sesudah 1,333 1,470 1,48 0,04 0 0 0 1 : 1 37 : 1
degradasi  ikatan  lignin  dengan  xilan,  mannan, arabinogalaktan dan arabinan.
Berdasarkan  penelitian  pendahuluan, perlakuan  lama  fermentasi  terbaik  adalah  perlakuan
B  (10% Bacillus  pumilus )  yaitu  fermentasi  7  hari.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  dengan  waktu fermentasi  tersebut,  nutrien  tersedia  bagi  plankton adalah  optimal  dibanding  perlakuan  lama  fermentasi 5  hari  dan  9  hari.  Pada  fermentasi  5  hari,  diduga proses fermentasi belum berjalan sempurna, sehingga nutrisi  tersedia  lebih  rendah.  Pada  fermentasi  yang lebih  lama  (9  hari),  diduga  nutrisi  hasil  fermentasi digunakan untuk kehidupan dan pertumbuhan bakteri sehingga  nutrien  menjadi  berkurang.  Lama fermentasi untuk masing-masing bahan organik dapat berbeda-beda  bergantung  asal  bahan  organik  dan bakteri  fermentor  itu  sendiri.  Prasojo  (2010) mendapatkan waktu fermentasi terbaik untuk kotoran ayam    adalah  5  hari.  Bila  dibandingkan  dengan penelitian  ini,  maka  waktu  fermentasi  penelitian  ini lebih  lama.  Hal  ini  diduga  karena  perbedaan  asal pakan  yang  berbeda.  Makanan  ayam  ternak umumnya berupa pellet dan dedak yang mengandung s e r a t   l e b i h   r e n d a h   d i b a n d i n g   s a p i   y a n g mengkonsumsi rumput pakan hijauan lainnya.
Hasil  uji  laboratorium  kadar  nitrogen  dan phoshpor  sebelum  fermentasi  adalah    1,3333  dan 1,48.  Kadar  unsur  nitrogen  kotoran  sapi  setelah fermentasi  menggunaka n Bacillus  pumilus terjadi peningkatan  menjadi  1,470.  Sedangkan  kadar phosphor  setelah  fermentasi  mengalami  penurunan menjadi  0,04.  Ratio  N:P  sebelum  fermentasi  adalah 1:1.  Sedangkan  rasio  N:P  setelah  fermentasi  adalah 37:1.  Perubahan  rasio  N:P  setelah  fermentasi, menyebabkan komposisi nutrien menjadi lebih sesuai untuk  pertumbuhan D.  salina .  Rachmawati  (2002)
mengatakan  bahwa  rasio  N:P  optimal  untuk pertumbuhan  Chlorophyceae  adalah  25:1.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  perlakuan  B  (10% Bacillus pumilus ) memberikan hasil N tertinggi yang merupakan  komponen  penting  bagi  pertumbuhan fitoplankton  (Anggadireja  dkk.,  2006).  Hal  ini disebabkan  N  merupakan  faktor  pembatas  bagi pertumbuhan  mikrolaga  (Hanisak,  1983).  Novizan (2000) dalam Latif (2008) menyatakan bahwa pupuk
N  di  dalam  perairan  menyebabkan  fitoplankton mengalami  kepadataan  yang  tinggi,  sehingga produksinya  meningkat.  N  berfungsi  membantu proses  pembentukan  klorofil- a ,  fotosintesis,  protein, lemak  dan  persenyawaan  organik  lainnya  (Salundik dan  Simamora,  2006).  Unsur  P  setelah  fermentasi mengalami penurunan diduga aktivitas bakteri untuk
penggunaan  unsur  P  lebih  banyak  daripada  yang diproduksi didalam proses fermentasi.

## Kesimpulan
Penggunaan  pupuk  kotoran  sapi  yang difermentasi  dengan  bakteri B.  pumilus berpengaruh nyata  (P<0,05)  terhadap  jumlah  kandungan  klorofil D. salina.
Penggunaan  pupuk  kotoran  sapi  yang difermentasi  dengan  bakteri B.  pumilus terhadap klorofil D.  salina yang  memberikan  hasil  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  B  (pupuk  kotoran  sapi dengan dosis 10% bakteri B. pumilus ).
Pada  kultur D.  salina ,  untuk  meningkatkan jumlah kandungan klorofil D. salina dapat digunakan kotoran  sapi  yang  difermentasi  oleh B.  pumilus dengan  dosis  10  %  sehingga  limbah  dapat termaanfaatkan  sehingga  dapat  mengurangi pencemaran lingkungan.

## Daftar Pustaka
Anggadireja,  J.  T., A.  Zatnika.,  H.  Purwanto  dan  S. Istini.  2006.  Rumput  Laut.  Penebar Swadaya. Jakarta. hal. 39-47.
Arinardi,  O.H.,  A.B.  Sutomo,  S.A.  Yusuf,
Trimaningsih,  E.  Asnaryanti  dan  S.H. Riyono,  1997.  Kisaran  Kelimpahan  dan Komposisi  Plankton  Predominan  di Perairan  Kawasan  Timur  Indonesia. Puslitbang Oseanologi-LIPI, Jakarta.
Denault, M., E. Stieve and I. valiela. 2000. Effects of
N i t r o g e n   L o a d   a n d   I r r a d i a n c e   o n Photosynthetic  Pigment  Concentration  in Cladophora  vagabunda  and  Gracillaria tikhivae  in  Esturies  of  Waquoit  Bay. Biology Billetins. 199 : 223-225.
Ekawati, A. W. 2005. Diktat Kuliah Budidaya Pakan Alami.  Fakultas  Perikanan  Universitas Brawijaya. Malang. hal. 3 – 48.
Gunawan  dan  Sundari.  2003.  Pengaruh  Penggunaan
P r o b i o t i k   d a l a m   R a n s u m   t e r h a d a p P r o d u k t i v i t a s A y a m . http://peternakan.litbang.deptan.go.id/133- 2.pdf. 25/10/2009. 7 hal.
Hanisak, 1983. The Nitrogen Relationhips of Marine Macroalgae. In :  Carpenter,  E.  J  and  D.  G. C a p o n e .   N i t r o g e n   i n   T h e   M a r i n e Environment.  Academic  Press  Inc.  New York. p. 703
Kusriningrum,  R.  1989.  Dasar  Perencanaan Percobaan  dan  Rancangan  Acak  Lengkap. Universitas Airlangga. Surabaya. hal.53–90.

## Pengaruh Pemberian Bakteri ......
Lamid,  M.,  S.  Chuzaemi,  N.  Nyoman  T.  P.  dan Kusmartono.  2006.  Inokulasi  Bakteri Xilanolitik  Asal  Rumen  sebagai  Upaya Peningkatan  Nilai  Nutrisi  Jerami  Padi.
Fakultas  Kedokteran  Hewan    Universitas
A i r l a n g g a .   S u r a b a y a . h t t p / / w w w. m i r n i l a m i d @ y a h o o . c o m . 11/03/2010. 7 hal.
Nurjariah.  2005.  Kelimpahan  Bakteri  dalam Budidaya  Cacing  Sutera Limnodrilus sp. Yang  Dipupuk  Kotoran  Ayam  Hasil Fermentasi.  Skripsi.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor. 34 hal.
Prasojo,  R.  2010.  Pengaruh  Penggunaan  Pupuk
Kotoran  Ayam  yang  Difermentasi  EM4 Terhadap Pertumbuhan Populasi Dunaliella salina. Skripsi.  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan Universitas Airlangga.
Satyantini,  W.H  dan  E.  D.  Masithah.  2007.  Diktat Penuntun  Praktikum  Budidaya  Pakan Alami.  Program  Studi  Budidaya  Perairan Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 2 – 28.
Sterman,  T.  N.  1988.  Spectrophotometric  and Fluorometric  Chlorophyll  Analysis. In : Lobban,  S.  C.,  D.J.  Chapman  and  B.  P. Kremer.  Experimental  phycology,  A Laboratory  Manual  Cambridge  University Press. New York. P. 35-39
Yurong,  C.,  L. Yumin, W. Tianyun,  H. Weihong  and
X.  Lexun.  2007.  Heterologous  Gene Expression  Driven  by  Carbonic Anhydrase Gene  Promoter  in Dunaliella  salina . http://www.sciencedirect.com.  25/10/2009. 6pp.