Daun Muda S.alba, ekstrak air mendidih, antioksidan
Terakreditasi Nasional (Sinta 3)
April 2024, 12(1): 32–40
SK Ditjen Risbang Kemristekdikti
https://doi.org/10.35800/mthp.12.1.2024.51673
No: 225/E/KPT/2022 Available online https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmthp/index

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAUN MUDA MANGROVE Sonneratia alba SEGAR ASAL PESISIR DESA WORI SULAWESI UTARA
Antioxidant Activity of Fresh Young Leaves Mangrove Sonneratia alba from Coastal Wori Village North Sulawesi
Verly Dotulong*, Lita A.D.Y.Montolalu, Albert R. Reo
Program Studi Teknologi Hasil Perikanan, Jurusan Pengolahan Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado *Penulis korespondensi: verly_dotulong@unsrat.ac.id
(Diterima 07-10-2023; Direvisi 30-04-2024; Dipublikasi 30-05-2024)

## ABSTRACT
The  results  of  research  on S.  alba antioxidants  collected  from  the  coast  of  Wori  Village,  North  Sulawesi, especially  about S.  alba leaves  that  have  undergone  drying  have  very  strong  antioxidant  activity,  so  far  there have been no research reports on antioxidants in young leaves that have not been dried (fresh) from the location of  Wori  Village.    The  purpose  of  this  study  was  to  explore  the  antioxidant  potential  of  fresh young  leaves  of S.alba mangroves    collected  on  the  coast  of  Wori  Village,  North  Sulawesi.  The  method  used  in  this  study  is exploratory, the data is analyzed descriptively, the treatment used is the length of extraction time of 5, 10, 15, 20, 25 and 30 minutes with boiling water, the test parameters used are antioxidant activity using the DPPH method (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil)  and  supporting  parameters,  namely  yield,  phytochemistry  qualitatively  and  total phenol  content  using  the  Folin-Ciocalteau  method.  The  results  obtained  were  as  follows:  the  highest  yield  was found at 30 minutes extraction time which was 30.97%, phytochemical components detected at all extraction time were  alkaloids,  flavonoids,  tannins,  saponins  and  phenolics,  the  highest  total  phenol  content  was  found  at  15 minutes extraction time of 0.7388 ± 0.044 mg GAE / g, the strongest antioxidant activity of 15 minutes straction with IC value 50DPPH = 21.05±2.95 μg / ml. In general, it can be concluded that the best treatment is the duration of extraction  time  in  boiling water  for  15  minutes  because  it  has  the  highest  total  phenol  content  and  the  samllest IC50DPPH value.
Kata kunci:  young leaves of S.alba, boiling water extract, antioxidant activity
Hasil  penelitian  tentang  antioksidan S.alba yang  dikoleksi  dari  pesisir  Desa  Wori  Sulawesi  Utara  khususnya tentang daun S.alba yang sudah mengalami pengeringan mempunyai aktivitas antioksidan tergolong sangat kuat, selama ini belum ada laporan penelitian tentang antioksidan dalam  daun muda yang belum dikeringkan (segar) dari  lokasi  Desa  Wori  ini.        Tujuan  penelitian  ini  adalah  menggali  potensi  antioksidan  daun  muda  mangrove S.alba segar yang dikoleksi di Pesisir Desa Wori Sulawesi Utara. Metode yang digunakan dalam penelitian ini bersifat eksploratif, data dianalisis secara deskriptif, perlakuan yang digunakan adalah lama waktu ekstraksi 5, 10, 15,  20,  25  dan  30  menit  dengan  air  mendidih,  parameter  uji  yang  digunakan  adalah  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)  serta  parameter  pendukung  yaitu  rendemen,  fitokimia secara  kualitatif  dan  kandungan  total  fenol  menggunakan  metode  Folin-Ciocalteau.  Hasil  penelitian  yang diperoleh  adalah  sebagai  berikut:    rendemen  tertinggi  terdapat  pada  lama  ekstraksi  30  menit  yaitu  30,97%, komponen fitokimia yang terdeteksi pada semua lama waktu ekstraksi adalah  alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan fenolik,  kandungan total fenol tertinggi terdapat pada lama waktu ekstraksi 15 menit yaitu sebesar 0,7388 ± 0,044  mg GAE/g,  aktivitas  antioksidan  terkuat  straksi  15  menit  dengan  nilai  IC 50 DPPH=  21,05±2,95  µg/ml. secara  umum  dapat  disimpulkan  bahwa  perlakuan  yang  terbaik  adalah  lama  ekstraksi  waktu  dalam  air mendidih  selama  15  menit  karena  mempunyai  kandungan  total  fenol  tertinggi  dan  nilai  IC 50 DPPH terkecil.
Kata kunci:  daun muda S.alba, ekstrak air mendidih, aktivitas antioksidan

## PENDAHULUAN
Mangrove  di  Indonesia  merupakan  yang  terbanyak  di  dunia,  baik  dari  segi  kuantitas  area  (± 42.550 km 2 ) maupun jumlah spesies (± 45 spesies) (Spalding et al., 2001).  Jenis mangrove yang dominan di Sulawesi Utara  yaitu Rhizopora, Bunguiera , dan Sonneratia (Kaunang dan Kimbal., 2009). Soneratia alba adalah spesies mangrove yang dominan di Desa Wori, Kecamatan Wori, Kabupaten Minahasa Utara, Propinsi Sulawesi Utara (Karaowan., 2011).
Mangrove  di  Indonesia  merupakan  yang  terbanyak  di  dunia,  baik  dari  segi  kuantitas  area  (± 42.550 km 2 ) maupun jumlah spesies (± 45 spesies) (Spalding et al., 2001).  Jenis mangrove yang dominan di Sulawesi Utara  yaitu Rhizopora, Bunguiera , dan Sonneratia (Kaunang dan Kimbal., 2009). Soneratia
alba adalah spesies mangrove yang dominan di Desa Wori, Kecamatan Wori, Kabupaten Minahasa Utara, Propinsi Sulawesi Utara (Karaowan., 2011).
Beberapa  jenis  mangrove  telah  diteliti  berpotensi  sebagai  sumber  antioksidan  alami  antara  lain Herawati dkk (  2011)    melaporkan  bahwa  batang  dari sonneratia  alba berpotensi    sebagai  sumber antioksidan alami yang kuat dengan nilai IC 50 DPPH sebesar 12,2 µg/ml lebih besar dari aktivitas vitamin C  (IC 50 adalah  17,64  µg/ml).  Rinto  (2012),  melaporkan  bahwa  ekstrak  etilaset  daun  mangrove  api-api ( Avicenia  marina )  mempunyai  niali  IC 50 DPPH  tergolong  lemah  yaitu  sebesar  182,33  ppm,  hasil  uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etilasetat tersebut mengandung bioaktif berupa flavonoid, steroid, terpenoid dan gula. Jacoeb et al., (2013), melaporkan bahwa ekstak metanol buah mangrove Brugueiera gymnorrhiza memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 DPPH  sebesar  9,42  ppm.  Uji fitokimia  pada  ekstrak  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  terbaik  mengandung  steroid,  flavonoid,  dan tanin.  Purwaningsih et al (2013), melaporkan bahwa aktivitas antioksidan (IC 50 DPPH) buah mangrove Rhizipora mucronata Lamk pada suhu evaporasi 40, 50, 60, 70 dan 80°C masing-masing adalah 10,2967 ppm,  11,0571  ppm,  8,2412  ppm,  0,7021  ppm,  dan  1,4152  ppm.      IC 50 DPPH  ekstrak  etilasetat  buah mangrove S.alba juga  tergolong  sangat  kuat  yaitu  3,55  ppm  (Wonggo  D.,  2018)  .  Nilai  aktivitas antioksidan  pada  mangrove  ini  menunjukkan  potensi  antioksidan  yang  sangat  kuat.    Santi et  al (2021) menyatakan bahwa suatu senyawa dikatakan memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat jika IC 50 kurang dari 50 µg/mL, kuat jika IC 50 50-100 µg/mL, sedang jika IC 50 101-150 µg/mL, lemah jika IC 50 151-200 µg/mL, dan tidak berpotensi sebagai antioksidan bila IC 50 lebih dari 200 µg/mL. Jenis mangrove lainnya juga  telah  dilaporkan  mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  tergolong  sangat  kuat  adalah Avicennia marina (Febriani et  al., 2020), Bruguera  gymnorizha (Madhu,  2021), Rhyzophoram  mucronata,  Nypa fruticans, Avicennia marina, Acanthus ilicifolius L , Acrostichum aureum dan Scaevola taccada ( Nengsih et al., 2021).
Bebrapa hasil penelitian tentang antioksidan S.alba yang dikoleksi dari pesisir Desa Wori Sulawesi Utara  antara  lain:  aktivitas  antioksidan  (IC 50 DPPH)  mangrove S.alba pada  buah  mangrove  kering menggunakan pelarut metanol = 4ppm (Wonggo et al., 2017). Dotulong et al ., (2020), melaporkan bahwa ekstrak air mendidih daun muda mangrove S.alba kering telah diteliti terdeteksi mengandung komponen fitokimia yaitu fenol, flavonoid , tanin, dan alkaloid, komponen-komponen kimia ini berpotensi sebagai antioksidan. Daun muda yang dikeringkan dibawah sinar matahari, ekstrak yang diperoleh menggunakan metode maserasi dengan metanol dan etanol mempunyai IC 50 7,45 dan 5,01ppm (Dotulong et al ., 2018), pada  daun  muda  yang  dikeringkan  dibawah  sinar  matahari  menggunakan  pelarut  etilasetat  mempunyai IC 50 3,43 ppm (Dotulong et al., 2021).
Tujuan  penelitian  ini  adalah  menggali  potensi  antioksidan  daun  muda  mangrove S.alba segar yang  dikoleksi  di  Pesisir  Desa  Wori  Sulawesi  Utara.  Harapan  besar  bahwa  daun  muda  segar  akan mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  karena  daun  muda  mangrove S.  alba ini  belum mengalami pengeringan, dimana pengeringan sinar matahari dapat merusak komponen fitokimia didalam daun mangrove. Ekstrak air mendidih daun mangrove S.alba segar yang mempunyai aktivitas antioksidan yang kuat kedepan bisa dikembangkan menjadi minuman fungsional yang dapat meningkatkan imunitas tubuh konsumen.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan alat penelitian
Bahan  baku  yang  digunakan  adalah  daun  muda S.alba (3-4  helai  dari  pucuk)  masing-masing sebanyak  10  kg,  diperoleh  dari    pesisir  Desa  Wori,  Kecamatan  Wori,  Kabupaten  Minahasa  Utara, Propinsi  Sulawesi  Utara.  Bahan  kimia  yang digunakan  untuk  analisa  yaitu :amoniak,  FeCl 3, H 2 SO 4, Mg, HCl, bubuk Mg, kloroform, ethanol, amoniak, pereaksi meyer, wagner, dragendorff, AlCl 3 ,Na 2 Co 3 , Folin denis dan aquades, DPPH, pereaksi folinciocalteau dan asam galat diperoleh dari  Sigma Aldrich Co. Ltd (St. Louis, MO,USA).
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain oven merek Eyela, NDO-410, untuk pengeringan ekstrak, Rotari evaporator Buchi untuk evaporasi pelarut  dalam  pengujian  dan  spektrofotometer  UV-1800  shimadzu,  kertas  whatman  no.1,  labu  ukur, vortex,  mikro  pipet,  tabung  reaksi,  penangas  air,  timbangan  analitik,  dan  botol-botol kecil betrwarna gelap.
Pembuatan ekstrak
Daun Muda S.alba, ekstrak air mendidih, antioksidan
Tahap-tahap  yang  dilakukan  dalam    pembuatan  ekstrak  air  rebusan  daun  muda  sergar  mangrove S.alba menurut Dotulong (2020) dengan sedikit modifikasi sebagai berikut:
1. Pembuatan  ekstrak  didahului  dengan  mencuci  bersih  daun  muda  mangrove S.alba segar sebanyak  50  gram,  digunting  menjadi  4  bagian  dan  dimasukkan  ke  dalam  3  liter  air mendidiih dalam wadah stainless steel diatas penangas air dan dieskstrak selama 5, 10, 15, 20,  25,  dan  30  menit.  Selanjutnya  dilakukan  penyaringan  dengan  kertas  saring  whatman no.1 untuk memisahkan ekstrak encer dari serbuk daun mangrove.
2. Ekstrak encer  dipekatkan  dengan  cara menguapkan  ekstrak  tersebut  dalam  wadah  stainless steel diatas penangas air suhu 70°C hingga dihasilkan ekstrak kental.
3. Ekstrak  kental  selanjutnya  dimasukkan  dalam  botol-botol  kecil  berwarna  gelap  dan dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  70°C  sampai  semua  pelarut  air  teruapkan  sehingga didapatkan ekstrak kering.
4. Pada ekstrak kering dianalisis fitokimia, kandungan total fenol dan aktivitas antioksidan (kemampuan menghambat radikal bebas DPPH) yaitu nilai IC50 DPPH.

## Analisa Fitokimia
Analisa  fitokimia  merupakan  analisa  kualitatif  dan  kwantitatif  yang  dilakukan  untuk  mengetahui ada tidaknya  komponen bioaktif yang terkandung dalam pelarut dari ekstrak S.alba. Komponen fitokimia seperti  alkaloid,  flavonoid,  fenolik,  tanin,  saponin,  steroid  dan  triterpenoid  menurut  Harborne  (2006) adalah sebagai berikut:
a. Alkaloid
Sampel ekstrak daun tua mangrove S.alba ditimbang sebanyak1,2 g dan dilarutkan dengan ethanol 20  ml  lalu  ditambahkan  kloforom  3  ml  dan  ditambahkan  10  tetes  H 2 SO 4, dikocok  perlahan  dibiarkan sampai  terbentuk  lapisan  asam,  lapisan  asam  dibagian  bawah  cincin  bening  yang  terbentuk  di penambahan H 2 SO 4 diambil, ditambahkan 5 tetes peraksi meyer, wagner dan dragendoff.
b. Flavonoid
Sampel ekstrak daun tua mangrove S.alba ditimbang sebanyak1,2 g dan dilarutkan dengan ethanol 20  ml  dan  dipanaskan  selama  lima  menit  di  dalam  tabung  reaksi  menggunakan  hot  plate.  Selanjutnya ditambah 5-10 tetes aquades lalu didiamkan selama 5 menit Kemudian ditambahkan 5-10 HCl pekat dan timbang  0,2 g bubuk Mg. Hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah tua selama 5 menit.
c. Saponin
Sampel ekstrak daun tua mangrove S.alba ditimbang sebanyak1,2 g dan dilarutkan dengan ethanol 20  ml  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lalau  dipanaskan  menggunakan  hotplate  kemudian ditambahkan  akuades  selanjutnya  didinginkan,  kemudian  dikocok  kuat-kuat.  asil  positif  ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil.
d. Fenolik
Sampel ekstrak daun tua mangrove S.alba ditimbang sebanyak1,2 g dan dilarutkan dengan ethanol 20  ml,  lalu  ditambahkan  FeCl 3 5%  sebanyak  5  –  10  tetes  sampel  positif  (+)  mengandung  fenolik  bila mengalami perubahan warna menjadi biru kehitaman
e. Tanin
Sampel ekstrak daun tua mangrove S.alba ditimbang sebanyak1,2 g dan dilarutkan dengan ethanol 20  ml.  Kemudian  ditambahkan  5-10  tetes  larutan  FeCl 3 1%.Hasil  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau.
f. Uji senyawa steroid dan triterpenoid
Sampel ekstrak daun tua mangrove S.alba ditimbang sebanyak1,2 g dan dilarutkan dengan ethanol  20  ml.Kemudian  ditambahkan  5-10  tetes  larutan  H 2 SO 4 .    Hasil  positif  ditunjukkan dengan terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau.

## Analisa Kandungan Total Fenol
Kandungan total
fenol diukur dengan spektrofotometer menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteau menurut Ganesan et al., (2008). Ekstrak sebanyak 0,1g
dilarutkan dalam 10 ml metanol, disentrifus dengan kecepatan 5900 rpm sehingga dihasilkan  supernatan.  Supernatan  diambil  50  µL  dan  ditambah  2,5  mL  reagen FolinCiocalteau (1/10 pengenceran dari konsentrasi awal) Ditambahkan 2 mL Na2CO3
7,5% selanjutnya diinkubasi pada suhu 45°C selama 15 menit, absorbansi diukur pada panjang gelombang 765 nm. Kurva standart asam galat dibuat mengikuti prosedur diatas hanya sampel diganti dengan asam galat. Kandungan total fenol diinterpretasikan sebagai mg equivalen asam galat/gekstrak (mg GAE/g ekstrak).

## Analisa Aktivitas Antioksidan Metode 1,1 – difenil – 2 – pikrilhidrazil (DPPH)
Analisis  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  1,1-difenil-2- pikrilhidrazil  (DPPH) berdasarkan  metode  Devi et  al., (2008).  Sampel  dengan konsentrasi  10  hingga  50  ppm  sebanyak  2  ml dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan larutan DPPH (1 x 10 -4 M) sebanyak 1 ml, campuran dihomogenkan  dan  diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  30  menit.  Absorbansi diukur  pada  panjang gelombang 517
nm.
Kontrol dibuat mengikuti prosedur diatas
hanya sampel diganti dengan metanol. Aktivitas antioksidan penangkapan radikal bebas DPPH ditetapkan sebagai persentasi penghambatan yang dihitung berdasarkan persamaan.
% Penghambatan = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100
Hasil  persentase  inhibisi  tersebut  dimasukkan  dalam  persamaan  linier  dengan  persamaan  Y= aX+b. dengan Y= persentase inhibisi, a=gradien, X=konsentrasi (μg/ml), b= Konstanta.
Untuk menghitung nilai IC 50 , persamaannya menjadi: 50= aX+b,. x = 50−𝑏 a Harga X adalah IC 50 dengan satuan μg/ml (ppm).  IC 50 merupakan konsentrasi larutan, dimana  semakin kecil nilai IC 50 berarti aktivitas antioksidannya semakin tinggi.

## Perlakuan dalam penelitian
Perlakuan yang diberikan dalam penelitian ini adalah . Lama waktu ekstraksi dalam air  mendidih, terdiri dari 8 perlakuan yaitu :5 menit, 10 menit, dan 15 menit, 20 menit, 25 menit dan 30 ,menit.

## Analisis dan penyajian data
Penelitian  ini  bersifat  eksploratif  menggunakan  3  kali ulangan,  data  dianalisis  secara  deskriptif menggunakan microsoft exel. Penyajian data dalam bentuk tabel dan gambar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Rendemen
Perhitungan  rendemen  didasarkan  pada  perbandingan  berat  ekstrak  yang  dihasilkan  dengan  berat sampel  yang  digunakan  dikalikan  100%  (Wahyuni et  al., 2015)  .  Nilai  komponen  senyawa  kimia  aktif yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  dapat  diketahui  melalui    kadar  rendemen  dari  ekstrak  tersebut. Rendemen    yang  dihasilkan  melalui  ekstraksi  dengan  air  mendidih  pada  daun  muda  mangrove S.alba segar ini menggunakan waktu ekstraksi  5, 10, 15, 20, 25 dan 30 menit.  Data  rendemen  ekstrak  air mendidih  daun    muda  mangrove Sonneratia  alba segar menggunakan  waktu  ekstraksi  yang  berbeda ditampilkan  pada Gambar 1.
Data  pada Gambar 1, memperlihatkan  bahwa lama waktu ekstraksi dengan air mendidih  sangat menentukan  jumlah  rendemen  yang  dihasilkan,  semakin  lama  waktu  ekstraksi  jumlah  rendemen  yang dihasilkan dalam proses ektraksi semakin meningkat, dimana jumlah rendemen tgerbanyak terdapat pada lama  waktu  ekstraksi  selama  30  menit  dengan  air  mendidih  yaitu  sebesar  30,97±1,03%.    Hal  ini kemungkinan disebabkan karena dengan pemanasan yang lebih lama didalam air mendidih menyebabkan dinding sel mengalami kerusakan sehingga komponen yang ada didalam sel yaitu metabolit tersebut dapat ditarik dan diikat oleh pelarut air mendidih.  Husni et al., (2014),  menyatakan bahwa  aktivitas penarikan senyawa  lebih  tinggi  pada  proses  ekstraksi  dengan  suhu  yang  lebih  tinggi  karena    dapat  meningkatkan kemampuan  untuk  mengekstraksi  senyawa-senyawa  yang  tidak  larut  dalam  suhu  kamar.  Pernyataan  ini didukung  oleh  hasil  penelitian  Wonggo et  al., (2018),  yaitu  fraksi  air  pada  buah  mangrove S.alba mempunyai  rendemen  sangat  kecil  hanya  sebesar  2,31  %.  Hal  ini  disebabkan  karena  pada  penelitian Wonggo et  al., (2018)    menggunakan  ekstraksi  dengan  cara  maserasi  dengan    pelarut  metanol  terlebih
dahulu, sesudah itu pada ekstrak metanol dilakukan fraksinasi berkesinambungan menggunakan heksana, etilastat dan air pada suhu kamar.

## Gambar 1. Rendemen daun mangrove S.alba segar menggunakan lama ekstraksi yang berbeda dengan air mendidih
Rendemen  suatu  sampel  berkaitan  erat  dengan  banyaknya  kandungan  bioaktif  dalam  sampel tersebut  (Nurhayati.,  2009;  Dewastisari.,  2018).    Semakin  tinggi  nilai  rendemen  suatu  sampel  maka semakin  banyak  komponen  bioaktif  yang  terkandung  didalam  sampel  tersebut  (Budiyanto.,  2015). Berdasarkan  data  rendemen  pada  ekstrak  daun  muda  mangrove S.alba segar    menggunakan  pelarut  air mendidih (Gambar 1) maka  ekstrak dalam penelitian in sangat potensial sebagai sumber bioaktif.

## Fitokimia
Data hasil skinning fitokimia pada ekstrak daun muda mangrove S. alba segar dengan lama ekstraksi yang  berbeda  menggunakan  air  mendidih    dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Analisis  fitokimia  merupakan  uji pendahuluan  untuk  mengetahui  keberadaan  senyawa  kimia  spesifik  seperti  alkaloid,  flavonoid,  saponin, tannin,  steroid  dan triterponoid  yang  berperan  sebagai  senyawa  bioaktif  termasuk  juga  antioksidan..  Uji ini  sangat  bermanfaat  untuk  memberikan  informasi  senyawa  kimia  yang  terdapat    pada  tumbuhan. Analisis ini merupakan tahap awal dalam isolasi senyawa bahan alam selanjutnya.

## Tabel 1. Metabolit Sekunder Ekstrak Air Mendidih Daun Muda Mangrove S.alba Segar
Golongan senyawa Hasil Perubahan warna Alkaloid (Dragendorf, wagner, meyer) + + + Dragendorf :Jingga Wagner       : Coklat Meyer : endapan putih Flavonoid + Merah Tanin + Hijau Saponin + Gelembung / buih steroid - Tidak ada perubahan warna Triterpenoid - Tidak ada perubahan warna Fenolik + Coklat orange
Data  kandungan  fitokimia  yang  dihasilkan    pada  penelitian  ini  (Tabel  1)  untuk  enam  waktu ekstraksi  dengan  air  mendidih  yaitu  5,  10,  15,  20,  25  dan  30  menit    memperlihatkan  bahwa  komponen fitokimia yaitu alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan fenolik secara kualitatif  positif terdeteksi didalam semua ekstrak, dimana ekstrak air mendidih daun muda  mangrove S. alba segar kaya akan komponen metabolit sekunder yang berfungsi sebagai antioksidan dan tahan terhadap suhu tinggi.  Data ini didukung oleh Dotulong, et al., (2020) yang  melaporkan bahwa kandungan metabolit sekunder (fitokimia) ekstrak air mendidih  daun muda  mangrove S.alba yang dikeringkan dengan sinar matahari dan yang dikeringkan dengan cara diangin-anginkan di dalam ruangan dengan lama waktu ekstraksi yang lebih lama yaitu 40,
27.73 28 29.44 29.96 30.64 30.97 0 5 10 15 20 25 30 35 5 menit 10 menit 15 menit 20 menit 25 menit 30 menit Re n d em en (% ) Lama ekstraksi dengan ai air mendidih
50 dan 60 menit dengan air mendidih terdeteksi  positif mengandung senyawa fenolik, flavonoid, saponin, triterpenoid, tanin dan alkaloid.
Hasil  penelitian  metabolit  sekunder  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  lebih  banyak  jenisnya dibandingkan metabolit sekunder  yang dihasilkan dalam penelitian Wonggo et.al. (2017),  pada buah S. alba muda  diekstraksi  dengan  metanol  hanya  mengandung  fenolik,  flavonoid  dan  tanin,  Halimu et  al., (2020), melaporkan bahwa daun mangrove S. alba hanya mengandung tanin dan alkaloid. Cahyadi et al., (2018), melaporkan bahwa  daun mangrove S. alba mengandung flavonoid, steroid, saponin dan alkaloid. Senyawa-senyawa metabolit sekunder  ini mempunyai fungsi biologis tertentu pada tumbuhan, komponen metabolit ini memiliki efek toksik, farmakologis dan ekologis yang penting (Herawati., 2011).

## Kandungan Total Fenol
Data kandungan total fenol ekstrak air mendidih daun muda mangrove S. alba segar menggunakan dengan lama waktu ekstraksi dalam air mendidih selama 5, 10 , 15 , 20, 25 dan 30 menit dapat dilihat pada gambar 2. Data pada gambar 2 memperlihatkan bahwa kandungan total fenol tertinggi terdapat  pada  lama  waktu  ekstraksi  15  menit  yaitu  sebesar  0,7388  ±  0,044  mg GAE/g.  Hal  ini kemungkinan disebabkan karena pada waktu lama ekstrasi 5 dan 10  menit kerusakan dinding sel belum sempurna,
dengan bertambahnya waktu ekstraksi maka
kerusakan dinding sel meningkat sehingga senyawa-senyawa fenolik makin banyak terekstraksi, namun bila waktu ekstrak dalam air mendidih bertambah (lebih lama) menyebabkan senyawa fenolik yang sudah tersekstrasi mengalami kerusakan sehingga kandungan total fenol mengalami penurunan.

## Gambar 2. Kandungan total fenol ekstrak air mendidih daun muda S.alba segar pada lama ekstraksi yang berbeda dengan air mendidih
Senyawa  fenolik  mempunyai  sifat  antioksidan  yang  baik  karena  kemampuannya  dalam menyumbang  elektron  untuk  menetralkan  radikal  bebas.  Menurut  Setianingrum  (2016),  fenolik merupakan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam  suatu  organisme  dan  mempunyai  sifat antioksidan alami yang terdapat sebagai bentuk  senyawa aktif dalam makanan.
Andriani & Murtisiwi., (2018), menyatakan bahwa data kandungan total fenol biasanya mempunyai korelasi  positif  dengan aktivitas  antioksidan  karena  senyawa  fenolik  mampu  menetralkan  kekurangan elektron  pada  radikal  bebas.  Kadar  senyawa  fenolik  dalam  penelitian  ini  mempunyai  korelasi  positif dengan  data  aktivitas  antioksidan  yaitu  pada  ekstrak  dengan  lama  waktu  ekstraksi  15  menit  dalam  air mendidih  yang  mempunyai  total  fenol  tertinggi  juga  mempunyai  aktivitas  antioksidan  tertkuat.  Hal  ini didukung  juga  oleh  pernyataan  Kiessoun et  al (2010)  dan  Shahwar et  al (2010),  senyawa  golongan
0.57501
0.72444 0.7388
0.7088 0.66005
0.6972
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 5 menit 10 menit 15 menit 20 menit 25 menit 30 menit K an d u n gan tot al f en ol (m g G AE/ g) Lama ekstraksi dalam air mendidih
fenolik    sangat  berperan  sebagai  antioksidan,  dimana semakin tinggi  kandungan total fenol  suatu  bahan maka bahan tersebut akan mempunyai aktivitas antioksidan yang semakin kuat.

## Aktivitas Antioksidan Penghambatan Radikal Bebas DPPH
Pengujian aktivitas  antioksidan  suatu  sampel  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan    metode  1,1- difenil-2-pikrilhidrazil  (  DPPH) . Metode  ini    dilakukan  untuk  mendapatkan  data  tentang    kemampuan suatu sampel dalam menghambat radikal bebas stabil DPPH  dengan cara mendonorkan atom hidrogen. Senyawa  yang  dapat  bekerja  sebagai  donor  hidrogen  untuk  menutup  radikal  bebas  adalah  golongan fenolik.  Contoh  salah  satu  antioksidan  senyawa  golongan  fenolik  yaitu  katekol,  dimana  radikal  fenolik yang terbentuk adalah suatu radikal yang stabil karena adanya resonansi ikatan rangkap didalam struktur molekulnya (Akoh and Min., 2008).
Data  aktivitas  antioksidan  ekstrak air mendidih  daun  muda mangrove S.alba segar  disajikan  pada gambar  3.  Pada  gambar  ini  disajikan  data  tentang  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  muda S.alba segar menggunakan pelarut air mendidih dengan lama waktu ekstraksi 5, 10, 15, 29, 25 dan 30 menit.

## Gambar 3. Aktivitas antioksidan ekstrak daun mangrove S.alba segar menggunakan lama ekstraksi yang berbeda dalam air mendidih
Data pada gambar 3 memperlihatkan bahwa ekstrak yang diperoleh menggunakan  lama ekstraksi 15 menit dalam air mendidih mempunyai aktivitas antioksidan yang paling kuat yang ditunjukkan dengan nilai  IC 50 DPPH  paling  kecil  yaitu  sebesar    21,05±2,95  µg/ml.    Aktivitas  antioksidan  pada  daun  muda S.alba segar  dalam penelitian ini mempunyai hubungan positif dengan data kandungan  total fenol yaitu pada  ekstrak  yang  diperoleh  menggunakan  lama  ekstraksi  15  menit  dalam  air  mendidih  mempunyai kandungan total fenol tertinggi yaitu 0,7388±0,044 mgGAE/g. Data juga memperlihatkan bahwa  ekstrak yang  diperoleh  menggunakan  semua  waktu  ekstraksi  mempunyai  aktivitas  antioksidan  tergolong  sangat kuat  kecuali  ekstrak  dengan  lama  ekstraksi  5  menit  tergolong  kuat  karena  nilai  IC50  lebih  besar  dari 50µg/ml. .  Santi et al (2021) menyatakan bahwa suatu senyawa dikatakan memiliki aktivitas antioksidan sangat  kuat  jika  IC 50 kurang  dari  50  µg/mL,  kuat  jika  IC 50 50-100  µg/mL  sedang  jika  IC 50 101-150 µg/mL, lemah jika IC 50 151-200 µg/mL, dan tidak berpotensi sebagai antioksidan bila IC 50 lebih dari 200 µg/mL . Hasil penelitian ini merupakan suatu terobosan baru yang membuktikan bahwa daun mangrove S.alba mengandung  senyawa  kimia  antioksidan  yang  tahan  terhadap  suhu  tinggi  karena  mempunyai aktivitas  antioksidan  yang  tergolong  sangat  kuat  walaupun  telah  mengalami  pemanasan  dengan  air mendidih selama 30 menit.

## KESIMPULAN
Kesimpulan dari hasil penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Rendemen pada ekstrak daun muda S.alba segar menggunakan lama waktu ekstraksi dengan air mendidih  5,  10,  15,  20,  25  dan  30  menit  bertuturt-turut  adalah  27,73±2,26;  28,00±2,96; 29,44±1,06; 29,96±0,87; 30,64±1,17; dan 30,97±1,03%.
2. Komponen  fitokimia  yang  terdeteksi  pada  ekstrak  daun  muda S.alba segar    untuk  semua  lama waktu ekstraksi dengan air mendidih adalah alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan fenolik.
51.1 41.31 21.05 44.17 33.88 40.38 0 10 20 30 40 50 60 5 menit 10 menit 15 menit 20 menit 25 menit 30 menit IC 50 DP P H (µg/ m l) Lama ekstraksi dalam air mendidih
3. Kandungan total fenol pada ekstrak daun muda S.alba segar menggunakan lama waktu ekstraksi dengan  air  mendidih    5,  10,  15,  20,  25  dan  30  menit  bertuturt-turut  adalah  0,57501±0,046; 0,72444±0,124;  0,7388±0,044;  0,7088±0,067;  0,66005±0,042  dan  0,6972±0,042mgGAE/g,  nilai total fenol tertinggi  ditemukan pada  ekstrak dengan  lama waktu ekstraksi 15 menit.
4. Aktivitas antioksidan pada ekstrak daun muda S.alba segar menggunakan lama waktu ekstraksi dengan air mendidih 5, 10, 15, 20, 25 dan 30 menit bertuturt-turut adalah 51,1± 2,08; 41,31±8,11; 21,05±2,95; 44,17± 1,49; 33,88 ± 3,34 dan 40,38 ± 3,34 µg/ml, nilai aktivitas antioksidan terkuat ditemukan pada ekstrak dengan lama waktu  ekstraksi 15 menit
5. Lama  ekstraksi  15  menit  dengan  air  mendidih  baik  digunakan  untuk  mengekstrak  senyawa fenolik dan antioksidan dari daun muda mangrove S.alba segar.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  diucapkan  kepada  LPPM  UNSRAT  yang  telah memberikan  dana  penelitian  Tahun 2023 melalui Skim penelitian Riset Dasar Unggulan Unsrat (RDUU).

## DAFTAR PUSTAKA
Andriani, D., & Murtisiwi, L. (2018). Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol Bunga Telang ( Clitoria Ternatea L.) Dengan Spektrofotometri UV Vis. Cendekia Journal of Pharmacy , 2 (1): 32–38.
Akoh,  C.C,  &  D.B.Min.2008.Food  Lipid  Chemistry,  Nutrition  and  Biotechnology.  Third  Edition.  CRC  Press  Taylor  &  Francis Group. Boca Raton London New York.
Budiyanto, A. (2015). Potensi Antioksidan, Inhibitor Tirosinase, dan Nilai Toksisitas dari Beberapa Spesies Tanaman Mangrove di Indonesia. Skripsi. Intitut Pertanian Bogor. 37 Halaman
Cahyadi,  J.,  Satriani,  G. ., Gusman, E., Weliyadi,  E., &  Sabri.  (2018).  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Buah  Mangrove  (Sonneratia Alba) Sebagai Bioenrichment Pakan Alami Artemia Salina Phytochemical. Jurnal Borneo Saintek, 1(3): 33–39.
Dedin F.R. 2009. Aktivitas Antioksidan Fraksi-Fraksi Moromi  Kecap Dan Produk Reaksi Maillard Berdasarkan Berat Molekul. Disertasi.  Pascasarjana., IPB. Bogor.
Dewatisari, W. F., Rumiyanti, L., & Rakhmawati, I. (2018). Rendemen dan Skrining Fitokimiapada Ekstrak Daun Sanseviera sp. Jurnal Penelitian Pertanian Terapan, 17(3):197-202.
Dotulong  V.,  Wonggo  D.,  Montolalu  L.A.D.Y.  2018.  Phytochemical  Content,  Total  Phenols,  and  Antioxidant  Activity  of Mangrove Sonneratia  alba Young  Leaf  Through  Different  Extraction  Methods  and  Solvents.  International  Journal  of ChemTech Research. 11(11): 356-363.
Dotulong  A.R,  Dotulong  V,  Wonggo  D,  Montolalu  A.D.Y  Harikedua  S.D,  Mentang1  F,  Damongilala  L.J.  2020.    Metabolit Sekunder Ekstrak Air Mendidih Daun Mangrove Sonneratia alba . Media Teknologi Hasil Perikanan. 8(2): 66-69
Dotulong V, Wonggo D , Montolalu L.A. D. Y. 2021. Evaluation of Secondary Metabolites and Antioxidant Activity of Water,
Ethyl  Acetate  and  Hexane  Fractions  from  the  Mangrove  Young  Leaves Sonneratia  alba .  Chemical  Science International Journal. 30(2): 23-32
Febriani A. K, Ismiyarto and Anam  K. 2020.  Total Phenolic and Coumarin Content, Antioxidant Activity of Leaves, Fruits, and Stem Barks of Grey Mangrove ( Avicennia marina ). Journal of Scientific and Applied Chemistry  23(2):34-38 Gazali  M,  Nurjanah,  Ukhty  N,  Nurdin  M,  Z.  2020.  Skrining  Senyawa  Bioaktif  Daun  Perepat  ( Sonneratia  Alba J.E.  Smith) Sebagai  Antioksidan  Asal  Pesisir  Kuala  Bubon  Aceh  Barat  Mohamad.  Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia, 23(2): 402–411
Halimu, R. ., Sulistijowati, R., & Mile, L. (2020). Identifikasi Kandungan Tanin Pada Sonneratia Alba. Jurnal Ilmiah Perikanan Dan Kelautan, 5(4), 93–97.
Herawati,  N,  Jalaludin,  N.,  Daha,  L.,  dan  Zenta,  F.  2011.    Potensi  Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Kulit  Batang  Tumbuhan Mangrove S. alba . Farmasi dan Farmakologi. 15(1): 23-25.
Husni  A, Putra  D.R , dan Lelana  I. Y. B.  2014. Aktivitas Antioksidan  Padina sp. pada Berbagai Suhu dan Lama Pengeringan. Jpb perikanan vol. 9 no. 2 tahun 2014: 165–173.
Jacoeb  A.  M,  Subtijah  P,  dan  Zahidah.   2013.   Komposisi  Kimia,  Komponen  Bioaktif  dan  Aktivitas  Antioksidan  Buah  Lindur ( Bruguiera gymnorrhiza ). JPHPI. 16(1):  86-94
Kaunang D.T dan Kimbal  J.D.  2009. Komposisi dan Struktur Vegetasi Hutan Mangrove di Taman Nasional Bunaken Sulawesi Utara.  Agritek 17(5):1163-1171.
Kisseoun K, Souza A, Meda N.T.R,  Coulib aly A.Y, Kiendrebeogo M, Lamien-Meda A, Lamidi M, Millogo-Rasolodimby J and Nacoulma  O.G.  2010.  Polyphenol  Contents,  Antioxidant  and  Anti-Inflammatory  Activities  of  Six  Malvaceae  Species Traditionally used to Tread Hepatitis B in Burkina Faso. European Journal of Scientific Research  44(4):570-580 Madhu.  2021.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Akar,  Batang  dan  Daun  Mangrove Bruguierra  gymnorrhiza Menggunakan  Metode DPPH  di  Pesisir  Banyuasin,  Sumatera  Selatan.  Skripsi.  Ilmu  Kelautan  pada  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sriwijaya. 36 Hal
Nengsih  E,  Aried  Eriadi  A,  and  Fajrina  A.  2021.  Review:  Antioxidant  Activity  Test  of  Various  Types  of  Mangroves. Int. Journal of Pharmaceutical Sciences and Medicine (IJPSM)  6(8):32-41 Nurhayati, T.D, Aryanti dan Nurjabah. 2009. Kajian awal potensi ekstrak  spons sebagai antioksidan. Jurnal Kelautan Nasional 2(2): 43-51
Pham-Huy  LA,  He  Hua,  Pham-Huy  C.  2008.  Free  radicals,  antioxidants  in  disease  andhealth. International  Journal  of Biomedical Science 4(2): 89–96.
Purwaningsih.  S,  Salamah.  E,  Sukarno.  A.  Y.  P,    dan Deskawati  E.  2013.    Aktivitas  Antioksidan  dari  Buah  Mangrove
( Rhizophora  mucronata Lamk.)  pada  Suhu  yang   Berbeda. Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia 16  (3):  199- 206
Rinto.    2012.    Deskripi  Histologi  Komponen  Bioaktif  dan  Aktivitas  Antioksidan  Daun  Mangrove  Api-api  ( Avicenia  marina ). Skripsi. FPIK IPB. Bogor Santi  I,    Abidin  Z  ,    Asnawi  N.  2021.  Aktivitas  Antioksidan  Dari  Tumbuhan  Pepaya  ( Carica  papaya L.). Jurnal  Farmasi 13(2):102-107.
Septiana A.T, F.R, Zakaria, dan Sullistiyani. 2002. Ekstrak Jahe ( Zingiber officinale Roscoe) Peghambat Oksidasi LDL. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan 13(1): 70-78
Shahwar  D,  Shafiq  R,  Ahmad  N,  Ullah  S  and  Raza  M.  2010.  Antioxidant  Activities  of  the  Selected  Plants  from  the  Family Euphorbiaceae, Lauraceae, Malvaceaeand Balsaminaceae. African Journal of Biotechnology 9(7):1086-1096
Souri  E,  Amin  G,  Sherifabadi  AD,  Nazifi  A,Farsam  H.  2004.  Antioxidative  activity  of  sixty  plants  from  Iran. Journal ofPharmacy Research 3: 55-59.
Spalding,  M.  D.,  Ravilious,  C.,  and  Green,  E.  P.  2001.  Word  Atlas  of  Coral  Reefs  Universitas  of  California.  Press  Berheley. USA.
Steinberg D. 2009. The LDL modifi cation hypothesis of atherogenesis. Journal of Lipid Research 50:376-381.
Wahyuni  W.  T,  Darusman,  L.  K  dan  Surya  N.  K.  2015.  Potency  of  Rhizopora  spp.  Extracts  as  Antioxidant  and  Inhibitor  of Acetylcholinesterase”. Procedia Chemistry 16: 681-686. Wonggo  D, Berhimpon  S, Kurnia  D and Dotulong  V. 2017.  Antioxidant Activities of Mangrove Fruit ( Sonneratia alba ) taken from Wori Village, North Sulawesi, Indonesia . International Journal of ChemTech Research 10(12): 284-290. Wonggo  D.  2018.  Antioksidan  Buah  mangrove Sonneratia  alba Dari  Desa  Wori  Kecamatan  Minahasa  Utara  Sulawesi  Utara. Disertasi. Program Studi S3 Ilmu Kelautan Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulang, Manado. 163 Hal.