Marine, Environment, and Fisheries
p-ISSN:
http://ejurnal.polnep.ac.id/index.php/manfish
Volume 1 Nomor 1 - Maret 2020 DOI:

## STUDI TINGKAT KETERURAIAN PEWARNA TEKSTIL MENGGUNAKAN LAKASE MURNI DARI Marasmiellus palmivorus
Ragil Putri Widyastuti 1 , Sri Harjati Suhardi 2, , Dani Permana 3 , Khomaini Hasan 2,5 , Edwan Kardena 4 , Agus Jatnika 4 .
1 Program Studi Budidaya Hasil Pertanian, Politeknik Negeri Pontianak
2 Pusat Penelitian Ilmu Hayati, Institut Teknologi Bandung, Jl. Ganesha No. 10, Bandung 40132, Indonesia
3 Research Unit for Clean Technology, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia(LIPI), Kampus LIPI Bandung, Jl. Cisitu–Sangkuriang, Bandung 40135, Indonesia
4 Jurusan Teknik Lingkungan, Institut Teknologi Bandung, Jl. Ganesha No. 10, Bandung 40132, Indonesia
5 Fakultas Kedokteran, Jenderal Ahmad Yani University (UNJANI), Jl. Terusan Jendral Sudirman, Cimahi, 40285, Indonesia Email: putriwidya90@gmail.com

## ABSTRAK
Pewarna di dalam limbah tekstil menjadi salah satu aspek penting karena sulit didegradasi. Enzim lakase yang berasal dari jamur pelapuk putih Marasmiellus palmivorus terbukti efektif dalam mendegradasi beberapa jenis  pewarna tekstil.  Lakase murni diujikan pada pewarna tekstil  dengan metode uji cepat atau High Throughput Screening (HTS). Sampel pewarna yang digunakan yaitu 14 pewarna jenis azo, anthrakuinon dan disperse. Uji cepat dilakukan pada suhu ruang menggunakan microplate titer dengan perbandingan sampel dan enzim 1:1 selama 24 jam dengan konsentrasi pewarna 150ppm. Sampel yang diamati merupakan campuran pewarna dan enzim murni dengan aktifitas spesifik 2,49 U/mg. Metode HTS  memperlihatkan  Procion  Blue  H-GN  dan  Levafix  Blue  E-Ra  Gran  positif  terdekolorisasi  oleh lakase. Screening dekolorisasi  pewarna  oleh  kultur  jamur M.  palmivorus pada  medium  PDA  juga dilakukan dengan hasil 7 pewarna terdekolorisasi yaitu Telon Blue AFN, Telon Red AFG, Isolan Silver N, Telon Blue BRL, Levafix Blue PN-3R, Procion Blue H-GN dan Levafix Blau E-Ra Gran. Dua warna yang  positif  terdegradasi  oleh  lakase  dan  kultur  jamur  diukur  perubahan  konsentrasinya  berdasarkan nilai  absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer.  Konsentrasi  pewarna  Levafix  Blue  E-Ra  Gran turun  hingga  86  ppm  setelah  24  jam.  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  metode  HTS  berhasil memperlihatkan  sifat  dekolorisasi  berbagai  pewarna  tekstil  dengan  cepat  dan  terbukti  dengan berubahnya konsentrasi pewarna setelah pengujian.
Kata kunci : High Throughput Screening, dekolorisasi, pewarna tekstil, lakase, Marasmiellus palmivorus

## PENDAHULUAN
Dampak negatif pewarna teroksidasi  dari industri  tekstil  bagi  lingkungan  perairan  selain
logam  berat  yaitu  turunnya  kadar  oksigen. Tingginya  Nilai  COD  dan  BOD,  kehadiran partikel  dan  sedimen,  dan  minyak  dan  lemak
dalam limbah menjadi penyebab turunnya kadar oksigen  terlarut.  Hal  ini  memiliki  efek  buruk pada  sistem  ekologi  perairan.  Penggunaan pewarna  dan  bahan  kimia  dalam  proses pewarnaan  tekstil,  menyebabkan    limbah  pun berwarna  gelap,  yang  dapat    meningkatkan kekeruhan badan air. Hal ini akan menghambat proses fotosintesis, dan selanjutnya menyebabkan perubahan dalam habitat perairan secara  keseluruhan  (Egli,  J. dalam Wang,  Z, dkk., 2011).
Teknik  pengolahan  pewarna  teroksidasi yang lazim digunakan antara lain secara fisika, kimia, dan biologi. Kekurangan teknik pengolahan secara fisika dan kimia yaitu biaya mahal,  pemakaian  bahan  kimia  yang  tidak sedikit dan menimbulkan lumpur yang banyak. Oleh  karena  itu  saat  ini  banyak  digunakan teknologi  pengolahan  limbah  yang  ramah lingkungan
seperti memanfaatkan
mikroorganisme  sebagai  agen  pendegradasi molekul pewarna tekstil yang memiliki struktur kompleks menjadi molekul yang lebih sederhana (Manurung dkk, 2004).
Salah  satu  mikroorganisme  yang  bisa dimanfaatkan dalam mendegradasi warna yaitu jamur  lapuk  putih.  Pemanfaatan  jamur  lapuk putih  yang  menghasilkan  enzim  lakase  dapat digunakan  sebagai  agen  biologis  dalam  proses dekolorisasi  atau  penghilangan  warna  karena peristiwa  adsorbsi  oleh  miselium  sebagai tingkat  awal  perubahan  warna  dalam  proses dekolorisasi warna. Dekolorisasi atau penghilangan warna merupakan suatu cara yang digunakan untuk mengurangi kepekatan warna.
Beberapa penelitian menyebutkan, enzim lakase  terbukti  dapat  dijadikan  sebagai  agen pendegradasi  warna,  hanya  saja  enzim  yang digunakan  belum  dimurnikan. Enzim  lakase yang  diisolasi,  dimurnikan,  dan  ditingkatkan
efisiensinya dari segi konsentrasi, pH, dan suhu diharapkan akan meningkatkan aktifitas spesifiknya  dibanding  dengan  enzim  yang belum dimurnikan.
Metode  uji  cepat High  throughput screening (HTS)  adalah  proses  pengujian senyawa kimia dalam jumlah besar dan beragam terhadap  senyawa  target  yang  akan  kita  uji. Keunggulan  metode  HTS  yaitu  lebih  cepat, biaya  rendah,  dan  lebih  efisien  yang    akan menghasilkan  informasi  yang  lebih  banyak. Dengan seluruh informasi tersebut, maka dalam penelitian ini akan terfokus pada pengembangan metode uji cepat ( High Throughput Screening ) sifat dekolorisasi pewarna tekstil menggunakan enzim lakase murni dari Marasmiellus palmivorus .

## METODE PENELITIAN
Kultur M. plamivorus dan
Pengembangbiakannya
Kultur Marasmiellus  palmivorus yang digunakan  sebagai  penghasil  lakase  diperoleh dari  laboratorium  mikologi,  Pusat  Penelitian Biosains  dan  Bioteknologi  (PPBB),  Institut Teknologi Bandung. Digunakan medium Potato Dextrose  Agar (PDA)  pada  tahap  kultur  awal, kemudian jamur diinokulasikan ke kultur padat pada tahap pre-conditioning dengan komposisi: serbuk kayu, kapur 2,5% dari serbuk kayu, NPK 1% dari serbuk kayu, dan dedak 5% dari serbuk kayu. Selanjutnya jamur dikultur di dalam baki steril  dengan  teknik Solid  State  Fermentation (SSF)  dengan  komposisi  yang  sama  dengan tahap pre-conditioning .  Jamur  diinkubasi  pada suhu dan tekanan ruang selama 4 minggu dalam kondisi steril.

## Produksi Lakase
Lakase  diproduksi  dengan  mengekstrak kultur jamur pada 200 mM buffer natrium fosfat pH  6.  Komposisi  buffer  natrium  fosfat  yaitu NaH 2 PO 4 .H 2 O  220mM  dan  Na 2 HPO 4 .H 2 O 220mM  dengan  perbandingan  11:3.  Dalam  1L buffer terdapat 880ml NaH 2 PO 4 .H 2 O dan 120ml Na 2 HPO 4 .H 2 O.  Dishaker  campuran  jamur  dan buffer  pada  150  rpm  selama  2  jam  kemudian disaring  dan  disentrifuga  pada  kecepatan  5000 rpm selama 10 menit untuk mengendapkan sisa medium SSF yang masih tertinggal.

## Pemurnian Lakase
Enzim  lakase  dimurnikan  menggunakan metode  kromatografi  interaksi  hidrofobik ( hydrophobic interaction chromatography ) dan kromatografi  penukar  ion  ( ion  exchange chromatography ). Ekstrak kasar lakase diequilibrasi  dengan  25%  ammonium  sulfat. Campuran  kemudian  dimasukkan  ke  dalam kolom HIC dengan tinngi 6,5 cm dan diameter 2,8  cm  yang  telah  berisi  matriks  Butyl- Toyopearl  (Tosoh  Ltd.).  Dielusi  ekstrak  kasar dengan ammonium sulfat 25%, 20%, 15%, 10%, dan  5%  secara step  wise ,  kemudian  dielusi dengan  buffer  fosfat  sitrat  pH  5  20mM  dan terakhir dielusi dengan methanol 30%. Masing- masing  fraksi  ditampung  sebanyak  5ml,  diuji aktivitasnya dengan ABTS sebagai substrat dan konsentrasi  protein  diuji  dengan  Bradford assay .  Fraksi  yang  memiliki  puncak  aktivitas dikumpulkan  dalam  satu  pool.  Dimasukkan pool  yang  memiliki  aktivitas  dari  kolom  HIC dalam kolom kromatografi penukar ion dengan tinggi  20  cm  dan  diameter  2  cm.  Kolom  diisi dengan  matriks  DEAE-toyopearl  (Tosoh  Ltd.) setinggi 15 cm yang telah diequilibrasi dengan buffer  sodium  fosfat  50mM  pH  8.  Sampel dielusi  dengan  gradient  pH  8  sampai  4.
Ditampung  5ml  untuk  masing-masing  fraksi, diuji  aktivitas  dengan  ABTS  dan  dilakukan analisis A280. Puncak aktivitas fraksi dikumpulkan dalam satu pool.

## Uji Aktivitas dan Protein Enzim
Aktivitas lakase diuji dengan ABTS (2,2- azinobis  (3-ethylbenzthiazoline  6  sulphonic acid) 0,5 mM yang dilarutkan dengan 100 mM buffer  asetat  pH  4,5.  Oksidasi  ABTS  diukur dengan  melihat  peningkatan  absorbansinya pada 420 nm dan aktivitas lakase dihitung dari koefisien penurunan molar (ε) sebesar 36000 M - 1 cm -1 .  Satu  unit  aktivitas  lakase  menunjukkan besar enzim yang mengoksidasi 1 µmol ABTS ml/menit.  Ditentukan  konsentrasi  protein menggunakan metode Bradford, dengan bovine serum albumin (BSA) sebagai standar. Diulang pengukuran sebanyak 3x menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  (Thermo  Scientific Genesis 10S).

## Persiapan Pewarna Teroksidasi
Pewarna  tekstil  yang  digunakan  antara lain Telon  Yellow M, Telon  Blue AFN, Telon Red AFG, Isolan Silver N, Telon Blue BRL, Dx. Turquoise S-BG, Palanil Black SE-R, Dx. Black Xf,  Pal.  Scarlet  GS,  Disp.  Orange  3RLS, Levafixblau  PN-3R,  Remazol  Turkishblau G133,  Remazol  Turquoise  Blue,  Procion  Blue H-GN,  dan  Lavafix  Blau  E-Ra  Gran.  Untuk mensimulasikan kondisi kimia air limbah tekstil dalam  percobaan  dekolorisasi,  pewarna  (400 mg) dan Na 2 SO 4 (40 g) (Roth) ditambahkan 200 mL  air,  pH  diatur  menjadi  12,5  dan  senyawa dilarutkan  dengan  menginkubasi  campuran pada  suhu  80°  C  selama  50  menit.  Campuran kemudian  didinginkan  sampai  22  °  C  sebelum digunakan  dalam  percobaan (Boehmer, dkk , 2006).
Screening Dekolorisasi  Pewarna  dengan Jamur M. Palmivorus pada Medium PDA
Jamur  diinokulasi  di  cawan  petri  berisi media  PDA  yang  telah  ditambahkan  pewarna. Digunakan  antibakteri chloramphenicol dan antijamur benomyl untuk  mencegah  media terkontaminasi.  Konsentrasi  media  PDA  dan pewarna yaitu 150ppm. Jamur pada cawan petri diinkubasi pada suhu ruang (25 o C) selama 7-14 hari, diamati perubahan warna pada media PDA (Rathnan, dkk . 2013).

## High  Throughput  Screening  Dekolorisasi Warna dengan Lakase
Dimasukkan  enzim  lakase  dan  pewarna dengan konsentrasi 150ppm
dengan perbandingan 1:1 ke dalam mikroplate. Diamati perubahan warna yang terjadi dalam 24 jam.

## Pengukuran Konsentrasi Pewarna
Pengukuran konsentrasi ditentukan dengan  pembuatan  kurva  standar  pewarna teroksidasi terlebih dahulu. Konsentrasi limbah yang digunakan sebagai kurva standar yaitu 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120, 150, 180, dan 210ppm. Setelah  diperoleh  kurva  standar,  kemudian dilanjutkan  dengan  pengukuran  absorbansi sampel  uji  menggunakan  spektrofotometer. Konsentrasi  pewarna  yang  digunakan  yaitu 150ppm. Pewarna sebanyak 500µl ditambahkan enzim  murni  sebanyak  500µl  dengan  protein 0,46  mg/mL.  Pewarna  dan  akuades  dibuat sebagai  kontrol  negatif.  Sedangkan  kontrol positifnya  yaitu  enzim  murni  dan  akuades. Campuran dimasukkan ke dalam spektrofotometer  dan  perubahan  absorbansi diamati 2 jam sekali selama 24 jam pada suhu ruang.  Dilakukan  ulangan  sebanyak  2x.  Uji dekolorisasi  dengan  struktural  zat  warna berbeda  menggunakan  lakase  murni  dilihat dengan  adanya  penurunan  absorbansi  pada
panjang gelombang absorbansi maksimum pada tiap jenis pewarna (Youshuang, 2011).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Produksi Lakase Dari M. palmivorus
Medium  SSF  ( Solid  State  Fermentation ) digunakan  sebagai  substrat  tempat  jamur tumbuh.  Bhargav,  S.,  dkk  (2008)  mengatakan bahwa  kultur  padat  sangat  cocok  sebagai pertumbuhan jamur. Secara alami jamur tumbuh pada  substrat  padat  seperti  kayu,  akar,  biji, ataupun  bagian  tubuh  hewan  yang  sudah  mati seperti  kulit  dan  tulangnya.  Namun,  kondisi substrat  tempat  jamur  tumbuh  harus  memiliki kelembapan yang cukup. Menurut Hanung dkk., (2013)  kelembapan  media  SSF  yang  optimal untuk produksi lakase adalah 61%. Pada tingkat kelembapan  61%  produksi  lakase  dapat mencapai 4,45 IU/g dengan konsentrasi protein mencapai 4,4 x10 -3 g/g.
Ektrak  kasar  lakase  dapat  diproduksi setelah jamur tumbuh memenuhi medium SSF. Sesuai  dengan  pernyataan  Vikineswary  dkk., (2006)  bahwa  enzim  lakase  dapat  terekstraksi secara  optimal  dengan  menggunakan  larutan buffer pH 4,8-6,0 pada temperatur 25 o C.
Gambar 1. Kultur jamur dalam medium SSF (kiri) dan ekstrak kasar Lakase (kanan)

## Pemurnian Lakase
Gambar  2.  Analisa  SDS  Page  hasil  Ion Exchange  Chromatography  dan  Hidrophobic Interaction Chromatography
Penelitian  oleh  Suhardi,  dkk  (2014) menunjukkan  lakase  memiliki  3  isoenzim dengan  berat  molekul  masing-masing  15,  35, dan  67  kDa.  Dalam  penelitian  ini  hanya diperoleh lakase dengan berat molekul 67 kDA.
Tabel 1. Tabel Pemurnian Enzim Lakase
Tahap pemurnian
Aktivitas total (U) Protein total (mg) Aktivitas spesifik (U/mg) Yield (%) Purification fold Ekstrak kasar 38,14 1244 0,03 100 1 KIH Butyl- Toyopearl 17,53 40,60 0,43 45,96 14,08 Lakase 67 kDa 1,14 0,46 2,49 2,99 81,35
Hasil  pemurnian  lakase  menunujukkan hasil  protein  total  lakase  sangat  rendah  yaitu 0,46  mg.  Hal  ini  disebabkan  karena  terjadi proses  pengenceran  pada  saat  enzim  didialisis untuk menghilangkan garam ammonium sulfat. Enzim  murni  yang  telah  diperoleh  kemudian digunakan  untuk  uji  dekolorisasi  beberapa pewarna tekstil
Telon Red AFG Telon Blue AFN Isolan Silver N Telon Blue BRL Levafixblau PN-3R Procion Blue H-GN

## Levafix Blue E-Ra Gran
Gambar  3.  Dekolorisasi  Pewarna  Tekstil  oleh jamur M. palmivorus
Dekolorisasi  oleh  jamur Marasmiellus palmivorus pada  medium  PDA  yang  telah pewarna Levafix Blue E-Ra Gran menunjukkan bahwa  pewarna  telah  terdegradasi  dengan sempurna.  Gambar  sebelah  kiri  merupakan medium  PDA  yang  telah  dicampur  dengan pewarna  dan  diberi  jamur M.  palmivorus ,
sedangkan  gambar  sebelah  kanan  merupakan kontrol  negatif  media  dan  pewarna  yang  tidak
diberi  jamur.  Degradasi  pewarna  telah  terlihat pada hari keempat setelah jamur diinokulasi.
Tabel 2. Uji Dekolorisasi Dengan M. palmivorus pada Medium PDA No Pewarna Degradasi (+/-) Hari degradasi Pola degradasi Laju pertambahan diameter (cm/hari) 1 Telon Yellow M (-) - - 0.4 2 Telon Blue AFN (+) hari kedua ke luar 0.6 3 Telon Red AFG (+) hari kedua ke luar 0.2 4 Isolan Silver N (+) hari kedua ke luar 0.5 5 Telon Blue BRL (+) hari keempat ke luar 0.3 6 Dx. Turquoise S-BG (-) - - 0.4 7 Palanil Black SE-R (-) - - 0.3 8 Dx. Black Xf (-) - - 0.5 9 Pal. Scarlet GS (-) - - 0.4 10 Disp. Orange 3RLS (-) - - 0.5 11 Levafixblau PN-3R (+) hari keempat ke luar 0.5 12 Remazol Turquoise Blue (-) - - 0.5 13 Procion Blue H-GN (+) hari keempat ke luar 0.5 14 Levafix Blau E-Ra Gran (+) hari keempat ke luar 0.5
Gambar 4. Uji cepat dekolorisasi pewarna teroksidasi dengan Lakase murni (atas) dan Lakase crude (bawah) waktu 0 jam (kiri) dan setelah 24 jam (kanan).
1: Telon Yellow; 2: Tellon Blue; 3: Telon Red; 4: Isolan Silver; 5. Telon Blue; 6. Dx. Turquoise; 7. Palanil Black Xf; 8. Dx. Black Xf; 9. Pal. Scarlet GS; 10. Disp. Orange 3RLS; 11. Levafixbalu PN-3R; 12. Remazol Turkisblau; 13. Procion Blue; 14. Levafix Blau E-RA gran
A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol - A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol - A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol - A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol - A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol - A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol -
Berbeda dengan screening dengan medium PDA yang menghasilkan 7 warna dapat terdekolorisasi,  uji  cepat  menggunakan  enzim memperlihatkan 2 jenis pewarna saja yang bisa didegradasi oleh enzim lakase. Pewarna asli dan pewarna teroksidasi yang dapat didegradasi oleh enzim lakase adalah Procion  Blue dan Levafix Blue  E-Ra  Gran.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari perubahan warna yang terjadi. Pewarna Procion Blue  mengalami  perubahan  dari  biru  menjadi ungu  sedangkan  Levafix  Blue  E-Ra  Gran berubah dari biru menjadi bening. Pewarna yang positif  mengalami  dekolorisasi  kemudian diukur perubahan konsentrasinya menggunakan spektrofotometer.
Gambar  6.  Perubahan  konsentrasi  pewarna teroksidasi  Procion  Blue  H-
GN+lakase murni Gambar  7.  Perubahan  konsentrasi  pewarna teroksidasi Levafix Blue E0Ra Gran+lakase murni 0 50 100 150 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 K o n sen tr asi ( p p m ) Waktu (jam) 85 90 95 100 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 K on sen tr as i (p p m ) Waktu (jam) A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol -
A : ulangan 1 B : ulangan 2 C : kontrol -
Gambar  5.  Uji  cepat  dekolorisasi  pewarna  asli  dengan  Lakase  murni  (atas)  dan  Lakase crude (bawah) waktu 0 jam (kiri) dan setelah 24 jam (kanan).
1: Telon Yellow; 2: Tellon Blue; 3: Telon Red; 4: Isolan Silver; 5. Telon Blue; 6. Dx. Turquoise; 7.  Palanil  Black  Xf;  8.  Dx.  Black  Xf;  9.  Pal.  Scarlet  GS;  10.  Disp.  Orange  3RLS;  11. Levafixbalu PN-3R; 12. Remazol Turkisblau; 13. Procion Blue; 14. Levafix Blau E-RA gran
Gambar 8. Dekolorisasi pewarna teroksidasi Procion Blue H-GN+lakase murni
Gambar 9. Dekolorisasi pewarna teroksidasi Levafix Blue E-Ra Gran+lakase murni

## Pembahasan
Dari  7  pewarna  yang  dapat  didegradasi oleh  jamur M.  palmivorus ,  4  diantaranya memiliki  struktur  antrakuinon.  Sedangkan
sisanya  memiliki  struktur  azo.  Gordon  dan Gregory  (1987)  menyatakan  bahwa  pewarna antrakuinon  memiliki  ikatan  yang  lebih  lemah dibanding  dengan  ikatan  azo.  Oleh  karena  itu sebagian  besar  pewarna  dengan  struktur
0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800 400 414 428 442 456 470 484 498 512 526 540 554 568 582 596 610 624 638 652 666 680 694 Ab so rb an si Panjang Gelombang (nm) 0 jam 2 jam 4 jam
6 jam 8 jam 10 jam 12 jam 14 jam 16 jam 18 jam 20 jam 22 jam 24 jam kontrol (-)
0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 400 413 426 439 452 465 478 491 504 517 530 543 556 569 582 595 608 621 634 647 660 673 686 699 Ab so rb an si Panjang Gelombang (nm) 0 jam 2 jam 4 jam 6 jam
8 jam 10 jam
12 jam
14 jam 16 jam
18 jam 20 jam 22 jam 24 jam
kontrol (-)
antrakuinon  dapat  didegradasi  oleh  jamur M. palmivorus dibanding  dengan  pewarna  dengan struktur  azo.  Terdapat  3  mekanisme  jamur dalam menghilangkan pewarna yaitu bioakumulasi,  bioabsorbsi  dan  biodegradasi. Tidak  nampaknya  pewarna  dalam  jamur  yang tumbuh mengindikasikan bahwa jamur bekerja dengan  cara  mendegradasi  pewarna.  Hal  ini karena  jamur  dapat  menghasilkan  berbagai enzim  ekstraseluler  yang  non  spesifik  seperti lakase,  mangan  peroksidase  (MnP),  lignin peroksidase  (LiP),  tirosinase  dan  lain-lain. Tingkat  biodegradasi  zat  warna  oleh  jamur dipengaruhi beberapa faktor seperti lingkungan, struktur  molekul  pewarna,  dan  enzim  yang terlibat  dalam  penghilangan  warna  itu  sendiri. Enzim yang sama namun dihasilkan oleh jamur yang berbeda bisa jadi memiliki efektifitas yang berbeda  (Yang,  dkk.  2015).  Faktor-faktor seperti  pH,  konsentrasi  jamur,  temperatur,  dan lama inkubasi juga mempengaruhi kinerja jamur dalam  mendegradasi  pewarna  tekstil  (Ali  dan Muhammad, 2008).
Berdasarkan Gambar IV. 12 di atas dapat dilihat  bahwa  nilai  absorbansi  menurun  dalam waktu  2  jam,  namun  meningkat  setelah  4  jam hingga 24 jam. Apabila  dibandingakan dengan kontrol, konsentrasi pewarna mengalami penurunan.  Meningkatnya  konsentrasi  warna mungkin  terjadi  karena  adanya  perubahan warna  dari  biru  ke  ungu  seperti  yang ditunjukkan pada saat screening pada mikroplate.  Berubahnya  warna  dari  biru menjadi ungu menyebabkan perubahan panjang gelombang  warna.  Procion  Blue  H-GN memiliki panjang gelombang 627 nm dan warna ungu/violet  secara  umum  memiliki  panjang gelombang  500-580  nm  (Day,  R.  A.  dan Underwood,  A.  L.,  1986).  Perbedaan  panjang gelombang  pewarna  Procion  Blue  H-GN
dengan  pewarna  ungu  tidak  jauh  berbeda sehingga nilai absorbansi mengalami peningkatan. Konsentrasi pewarna yang digunakan juga mempengaruhi kerja enzim dalam mendegradasi pewarna tekstil. Penelitian Ratanapongleka,  K.  dan  Phetsom,  J.  (2014) menunjukkan bahwa kemampuan enzim dalam mendegradasi  warna  memiliki  kemampuan berbeda  tergantung  konsentrasi  pewarna  yang digunakan.  Penelitian  tersebut  menggunakan konsentrasi  pewarna  dari  konsentrasi  20  mg/l hingga 140mg/l. Enzim lakase dapat mendekolorisasi  warna  Acid  Blue  hingga  85% dalam  waktu  180  menit  apabilan  konsentrasi pewarna  yang  digunakan  dibawah  50  mg/l. Konsentrasi  pewarna  di  atas  50  mg/l  akan menyulitkan lakase dalam mendegradasi warna.
Pada  pewarna  tekstil  Levafix  Blue  E-Ra Gran  (Gambar  IV.  13),  nilai  absorbansinya menurun  pada  panjang  gelombang  sekitar  630 Å,  dan  meningkat  pada  panjang  gelombang sekitar 400-500 Å. Menurunnya nilai absorbansi terjadi  hingga  24  jam.  Hal  ini  membuktikan bahwa  terjadi  degradasi  warna  biru,  menjadi warna  lain  yaitu  kuning  pada  panjang gelombang sekitar 450 – 495 Å (Day, R. A. dan Underwood, A. L., 1986).

## KESIMPULAN
Metode High  Throughput  Screening berhasil memperlihatkan  sifat  dekolorisasi  pewarna tekstil menggunakan enzim dari
M.  palmivorus dengan  cepat  dan  terbukti dengan berubahnya konsentrasi pewarna setelah pengujian.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali P dan Muhammad SK. 2008. Biodecolorization  of  Acid  Violet  19  by
Alternaria solani , African  Journal  of Biotechnology Vol 7 :  831-833.
Boehmer  U,  Suhardi  SH  dan  Bley  T.  2006. Decolorizing Reactive Textile Dyes With White-Rot Fungi by Temporary Immerse Cultivation. Eng.  Life.  Sci Vol  6:  417  – 420.
Day  RA  dan  Underwood  AL.  1986.  Analisis Kimia Kuantitatif, Edisi Kelima, Penerbit Erlangga, Jakarta, Hal 390.
Egli J. 2007. Wastewater treatment in the textile industry. Dyeing Printing Finishing Vol 10: 60-66.
Gordon  PF  dan  Gregory  P.  1987. Organic Chemistry  in  Colour ,  Springer  Berlin Heidelberg, UK, 163-164.
Hanung  CD,  Osmond  R,  Risdianto  H,  Suhardi SH  dan  Setiadi  T.  2013.  Optimisasi
Produksi Enzim Lakase pada Fermentasi Kultur Padat Menggunakan Jamur Pelapuk Putih Marasmius sp. : Pengaruh Ukuran  Partikel,  Kelembapan,  dan Konsentrasi  Cu, Jurnal  Selulosa, Vol  3 (2): 67 - 74.
Manurung  R,  Hasibuan  R  dan  Irvan.  2004. Perombakan  Zat  Warna  Azo  Reaktif Secara  Anaerob  –  Aerob.  e-USU
Repository: 1 – 2.
Rathnan RK, Anto SM, Rajan L, Sreedevi E. S, Ambili  M  dan  Balasaravan  T.  2013.
Comparative studies of Decolorization of Toxic  Dyes  with  Laccase  Enzymes producing  Mono  and  Mixed  cultures  of Fungi. Research Article Vol 1: 21- 24.
Suhardi SH, Wildani MA, Hasan K,
Rahmaniyah WR dan Aryanta INP. 2013. Purification  and  Characterization  of Laccase  from Marasmiellus  palmivorus and  Its  Potential  Activity  to  Degrade Phenolic Compounds in Addition of Cu, Cd, and EDTA, PIH, ITB, Bandung. Vikineswary S, Noorlidah AM, Renuvathani M,
Sekaran A, Pandey EBG dan Jones. 2006. Productivity of laccase in solid substrate fermentation of selected agro-residues by Pycnoporus sanguineus , Biores.Technol. ,
Vol 97: 171-177.
Yang  P,  Shi  W,  Wang  H  dan  Liu  H.  2016. Screening  of  freshwater  fungi  for decolorizing  multiple  synthetic  dyes,
Brazilian  Journal  of  Microbiology ,  Vol 47: 828 – 834.
Youshuang  Z,  Haibo  Z,  Mingle  C,  Zhenzhen W, Feng H dan Peiji G. 2011. Production of a Thermostable Metal-tolerant Laccase from Trametes  versicolor and  its Application  in  Dye  Decolorization, Biotechnology and Bioprocess Engineering Vol 16: 1027 – 1035.