## PENENTUAN KEMURNIAN RADIOKIMIA SENYAWA RADIOFARMAKA 99m Tc-MIBI SECARA CEPAT DAN PRAKTIS MENGGUNAKAN DOSE CALIBRATOR
Maskur, Enny Lestari, Endang Sarmini, Yayan Tahyan, Amal Rezka Putra, Dede Kurniasih, Adang Hardi Gunawan
Pusat Teknologi Radioisotop dan Radiofarmaka – BATAN Kawasan Puspiptek, Serpong, Tangerang Selatan, 15314 e-mail : maskur.dzaky@gmail.com (Naskah diterima: 19-01-2017, Naskah direvisi: 24-02-2017, Naskah disetujui: 28-02-2017)

## ABSTRAK
PENENTUAN  KEMURNIAN  RADIOKIMIA 99m Tc-MIBI  SECARA  CEPAT  DAN  PRAKTIS MENGGUNAKAN  DOSE  CALIBRATOR . Pada  umumnya  p engujian  kemurnian  radiokimia diawali  dengan  pemisahan  radiokimia  secara  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT),  untuk  selanjutnya dapat  diukur  menggunakan gamma  counter ,  namun  metoda  ini  tidak  dapat  diterapkan  di  rumah sakit karena umumnya rumah sakit hanya mempunyai alat ukur dose calibrator . Oleh karena itu, perlu  mencari  metoda  alternatif  yang  lebih  praktis  dan  cepat,  salah  satunya  adalah  metoda pemisahan  secara  ekstraksi  dan  pengukuran  radioaktivitasnya  dilakukan  dengan  menggunakan dose  calibrator .  Senyawa 99m Tc-MIBI  diekstraksi  menggunakan  campuran  salin  dan  chloroform dengan  perbandingan  volume  1:1,  sehingga 99m Tc-MIBI terpisah  dari pengotornya.  Senyawa 99m Tc-MIBI berada dalam fasa organik (chloroform) sedangkan 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - dalam fasa air  (salin).  Masing-masing  fasa  dicuplik  dengan  volume  yang  sama, kemudian diukur radioaktivitasnya menggunakan dose calibrator untuk menghitung kemurnian radiokimianya. Hasil ekstraksi  dibandingkan  dengan  hasil  pemisahan  menggunakan  metoda  baku  KLT.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa kemurnian radiokimia kit 99m Tc-MIBI menggunakan kedua metoda tersebut hampir sama yaitu sebesar 98,34 % ± 0,65 % dengan menggunakan metoda baku KLT dan  97,15  %  ±  0,56  %  menggunakan  metode  ekstraksi  dengan  presisi  yang  baik.  Waktu  yang diperlukan  untuk  pemisahan  dengan  menggunakan  KLT  hingga  pengukuran  menggunakan gamma  counter selama  180  menit,  sedangkan  pemisahan  menggunakan  ekstraksi  hingga pengukuran menggunakan dose calibrator hanya 20 menit. Hasil ini menunjukkan bahwa metoda pemisahan  secara  ekstraksi  dan  pengukuran  aktivitas  menggunakan dose  calibrator dapat digunakan sebagai alternatif untuk pengujian kemurnian radiokimia senyawa radiofarmaka 99m Tc- MIBI.  Keunggulan  metoda  ekstraksi  adalah  waktu  pengujian  lebih  cepat  bila  dibandingkan metoda pemisahan menggunakan KLT.
Kata Kunci : kemurnian radiokimia, radiofarmaka, 99m Tc-MIBI, gamma counter, dose calibrator .

## ABSTRACT
RADIOCHEMICAL  MEASUREMENTS  OF 99M Tc-MIBI  BY  FAST  AND  PRACTICAL  USING DOSE  CALIBRATOR.  Generally  the  determination  of  radiochemical  purity  begins  with Radiochemical separation using thin layer chromatography (TLC), and then measurement using a gamma  counter,  but  this  method  can  not  be  applied  in  hospitals  since  there  is  only  a  dose calibrator  available  in  the  hospitals.  Therefore,  we  conducted  such  an  investigation  using  an alternative  method  which  is  more  practical  and  faster,  ie  begins  with  radiochemical  separation using extraction method, and then measurement using a dose calibrator. The determination was carried  out  in  which 99m Tc-MIBI  was  extracted  using  a  mixture  of  saline  and  chloroform  with volume  ratio  of  1:1,  the  mixture  was  then  extracted.  The 99m Tc  -  MIBI  was  in  organic  phase (chloroform), where as 99m TcO 2 and 99m TcO 4 - were both in water phase (saline). Then, each phase of the sample was taken with the same volume, and then the radioactivity was measured using a gamma  ionization  chamber  and  the  radiochemical  purity  was  calculated.  Radiochemical  purity with  extraction  process  method  Compared  measuring  using  standard  methods  of  TLC Furthermore,  the  results  of  the  extraction  were  compared  with  the  standard  method  of  TLC.The results showed that the radiochemical purity of 99m Tc-MIBI using the two methods were almost the same,  ie  =98.34  %  ±  0,  65  %  for  TLC  standard  method  and  =  97.15  %  ±  0,56  %  for  extraxtion method  with  good  measurement  precision.  The  time  of determination  for  extraction  method  was 20  minutes  and  180  minutes  for  TLC  standard  method  respectively.These  results  indicated  that the  extraction  method  can  be  used  as  an  alternative  method  for  determination  of  radiochemical purity  of 99m Tc-MIBI  radiopharmaceutical.  The  advantage  of  extraction  method  that  it  is  faster compared to the TLC Method.
Keywords:  radiochemical  purity,  radiopharmaceutical, 99m Tc-MIBI,  gamma  counter,  dose calibrator .
(Maskur, Enny Lestari, Endang Sarmini, Yayan Tahyan, Amal Rezka Putra, Dede Kurniasih, Adang Hardi Gunawan)

## PENDAHULUAN
Kit  radiofarmaka  adalah  sediaan farmasi setengah jadi yang tersusun dengan komposisi  kimia  tertentu,  namun  tidak mengandung  radioaktif [1] .  Pada  saat  akan digunakan  untuk  mendiagnosis  penyakit pasien di rumah sakit, maka kit radiofarmaka tersebut  terlebih dahulu direaksikan dengan zat  radioaktif  di  rumah  sakit  sehingga diperoleh  suatu  senyawa  radiofarmaka. Radiofarmaka  adalah  sediaan  farmasi  siap dipakai  oleh  pasien  yang  salah  satu penyusunnya berupa zat radioaktif.
Pada  umumnya,  kit  radiofarmaka yang  digunakan  untuk  mendiagnosis  suatu penyakit  direaksikan  dengan  zat  radioaktif berupa radioisotop 99m Tc. Radiosotop tersebut memiliki sifat nuklir yang ideal untuk diagnosis suatu penyakit karena mempunyai waktu paruh pendek  yaitu sekitar 6 jam dan merupakan  pemancar  sinar  gamma  murni pada  energi  140  KeV.  Karakteristik  ini sangat  ideal  untuk  menghasilkan  suatu pencitraan  yang  baik  dengan  menggunakan alat  SPECT  (Single  Photon  Emission Computerize Tomography) [2] .
Saat  ini  kedokteran  nuklir  memiliki posisi  penting  dalam  diagnosis  maupun terapi berbagai penyakit [2,3] . Kit radiofarmaka Methoxyisobutylisonitrile atau MIBI  yang direaksikan dengan radioisotop 99m Tc menghasilkan  suatu  senyawa  radiofarmaka
99m Tc-MIBI.  Radiofarmaka  tersebut  telah digunakan sebagai protokol diagnosis penyakit  jantung  di  berbagai  rumah  sakit [4] . Pada perkembangannya radiofarmaka
99m Tc-MIBI  juga  dapat  digunakan  untuk mendeteksi  penyakit  tuberkulosis [5] dan, paratiroid [6,7,8,9,10] ,  serta  kanker  payudara
[11,12,]. Radiofarmaka 99m Tc-MIBI dapat digunakan  untuk  mendiagnosis  penyakit pada  kedokteran  nuklir,  karena  dapat memberi  informasi  tentang  keadaan  organ dari  pasien  dengan hasil  yang  akurat dalam waktu  relatif  pendek.  Keakuratan  diagnosis sangat dipengaruhi oleh kemurnian
radiokimia tersebut. Semakin murni radiokimianya maka semakin baik pula hasil pencitraannya.
Kemurnian  radiokimia 99m Tc-MIBI adalah  prosentase  jumlah  kompleks 99m Tc- MIBI dalam radiofarmaka tersebut, sedangkan pengotor radiokimia dalam setiap  produk 99m Tc-MIBI  adalah  berupa 99m TcO 4 - dan 99m TcO 2 .
Sebelum radiofarmaka tersebut digunakan  kepada  pasien,  maka  setiap produsen  radiofarmaka  harus  melakukan kendali  kualitas  dengan  baik.  Salah  satu parameter  kendali  kualitas  radiofarmaka 99m Tc-MIBI  adalah  penentuan  kemurnian radiokimia. Pada umumnya, pengujian kemurnian radiokimia dapat dilakukan menggunakan  metoda  pemisahan  secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang selanjutnya  besar  radioaktivitasnya  dapat diukur menggunakan gamma counter [13,14,15] . Metoda  pemisahan  dengan  KLT  yang dilanjutkan pengukuran kemurnian menggunakan gamma counter banyak digunakan karena murah dan akurat sehingga metoda tersebut banyak diterapkan di laboratorium.
Proses  penandaan  radiofarmaka berbasis 99m Tc  dilakukan  di  rumah  sakit sesaat  sebelum  digunakan  kepada  pasien. Idealnya,  sebelum  diinjeksikan  kepada pasien,  pihak  rumah  sakit  perlu  melakukan kendali  kualitas  agar  aman  bagi  pasien, namun  umumnya  di  rumah  sakit  tidak tersedia alat ukur gamma counter . Selain itu, pihak  rumah  sakit  ingin  menggunakan metoda  pengujian  yang  lebih  praktis,  cepat, dan  akurat.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini dilakukan  dengan  tujuan  untuk  memperoleh metoda pengujian alternatif dalam menentukan  kemurnian  radiokimia  dari senyawa  radiofarmaka 99m Tc-MIBI 16] dengan harapan  metoda  tersebut  dapat  diterapkan di rumah sakit .
Radiofarmaka 99m Tc-MIBI  merupa- kan  suatu  senyawa  kationik  [ 99m Tc(MIBI) 6 ] +
dan  bersifat  hidropobik [14] .  Sementara  itu, pengotor  radiokimianya  terdiri  dari 99m TcO 4 - dan 99m TcO 2 yang keduanya bersifat hidrophilik, sehingga antara produk radiofarmaka 99m Tc-MIBI dan pengotor ( 99m TcO 4 - dan 99m TcO 2 )  dapat  dipisahkan melalui  metode  ekstraksi  fasa  air  dan  fasa organik. Proses ekstraksi akan memisahkan senyawa produk ke fasa organik, sedangkan senyawa  pengotor  berada  dalam  fasa  air. Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini dilakukan  penelitian  pengujian  radiokimia 99m Tc-MIBI  menggunakan  metoda  ekstraksi dan  hasilnya  dibandingkan  dengan  metoda pengujian  baku,  yaitu  pemisahan  secara KLT yang dilanjutkan pengukuran radioaktivitasnya menggunakan gamma counter . Pada proses ekstraksi sebagai fasa air digunakan salin, sedangkan fasa organik digunakan  beberapa  jenis  larutan  kimia antara  lain,  chloroform,  n.hexan,  carbon tetra chlorida, dan dichloromethan.

## METODOLOGI
a. Bahan dan Peralatan
Bahan yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  kit  radiofarmaka  MIBI, reagen  chlorofom,  tetra  carbon  chlorida,  n- hexan, dichloromethan, aseton, methyl ethyl keton  (MEK),  salin,  air  bebas  mineral, radioisotop 99m Tc.
Peralatan  yang  digunakan  adalah vortex, bejana kromatografi, gamma ionisation  chamber,  Gamma  Counter  Mini Assai, dose calibrator dan oven.
b. Preparasi penandaan 99m Tc-MIBI
Radioisotop 99m Tc  dengan  volume sebanyak 1-3 mL ditambahkan ke dalam vial yang berisi kit radiofarmaka MIBI, selanjutnya dipanaskan menggunakan water bath pada  temperatur  ±  90 °C  selama 10 menit dan posisi vial harus tegak. Setelah pemanasan  selesai,  vial  dikeluarkan  dan dibiarkan dingin pada temperatur kamar.
c. Preparasi pembuatan 99m TcO 2
sebagai control.
Larutan reduktor SnCl 2 .2H 2 O ditimbang  sebanyak  40  mg  kemudian dilarutkan  menggunakan  HCl  1N  sebanyak 0,1  mL.  Air  bebas  mineral  jenuh  nitrogen ditambahkan hingga volume menjadi 10 mL. Larutan  tersebut  diambil  2  mL,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  vial  yang  telah  berisi 0,5  mL 99m TcO 4 - dan  diaduk  menggunakan vortex.
d. Pengujian radiokimia menggunakan alat gamma counter
Pengujian kemurnian radiokimia dengan  alat gamma  counter diawali  dengan melakukan pemisahan komponen radiokimia menggunakan  metode  KLT.  Pemisahan dilakukan  dengan  menggunakan  fasa  diam alumina  selulosa  yang  telah  dipanaskan pada  temperatur  120 0 C  dan  fasa  gerak yang digunakan adalah larutan etanol 85 %. Hasil pemisahan dengan metode KLT diukur kemurniannya  menggunakan  alat gamma counter.
e. Pengujian radiokimia menggunakan alat dose calibrator
Pengujian kemurnian radiokimia menggunakan  alat dose  calibrator diawali dengan  melakukan  pemisahan  komponen radiokimia dengan metode ekstraksi.
Pemisahan dilakukan dengan cara
mencampurkan  larutan  salin  (fasa  air) sebanyak  550  µL  dan  chloroform  (fasa organik)  sebanyak  600  µL  ke  dalam mikro tube .  Radiofarmaka 99m Tc-MIBI  sebanyak 50 µL dimasukkan ke dalam mikro tube , lalu diaduk  menggunakan  vortek.  Setelah  itu, didiamkan hingga terpisah menjadi dua fasa, yaitu  fasa  organik  dan  fasa  air.  Kedua  fasa tersebut  dicuplik  masing-masing  sebanyak 200 µL, lalu diukur radioaktivitasnya menggunakan dose  calibrator .  Pencuplikan dilakukan  secara  triplo,  kemudian  besar radioaktivitasnya  dihitung  menjadi  rerata kemurnian  radiokimianya.  Hal  yang  sama dilakukan dengan mengganti larutan
pengekstrak yaitu berupa salin : carbon tetra
(Maskur, Enny Lestari, Endang Sarmini, Yayan Tahyan, Amal Rezka Putra, Dede Kurniasih, Adang Hardi Gunawan)
khlorida;  salin  :  dichloromethan;  dan  salin  : hexan.  Masing  masing  parameter  metode ekstraksi  diamati  dan  dievaluasi  hasilnya dan  dibandingkan  dengan  hasil  meng- gunakan metoda baku KLT dan pengukuran radioaktivitas dengan alat gamma counter .
Presisi  atau  keberulangan  diperoleh dari hasil pengukuran berulang yang dilakukan dengan cara melakukan pengukuran  kemurnian  radiokimia  dengan pengulangan  hingga  9  (sembilan)  kali pengukuran, kemudian dievaluasi nilai relatif standar deviasinya atau RSD.
f. Evaluasi hasil pengujian berbagai metoda
Pengujian kemurnian radiokimia dari senyawa  radiofarmaka 99m Tc-MIBI  meng- gunakan  lima  metoda,  yaitu  (a)  metoda pemisahan secara KLT dan diukur menggunakan gamma  counter ,  (b)  metoda pemisahan  secara  ekstraksi  dengan  larutan campuran  chloroform  dan  salin  kemudian diukur menggunakan dose calibrator ; metode  (c)  adalah  metoda  pemisahan
secara  ekstraksi  dengan  larutan  campuran CCl 4 dan salin kemudian diukur menggunakan dose  calibrator ,  (d)  adalah metoda pemisahan secara ekstraksi dengan larutan  campuran  dichloromethan  dan  salin kemudian diukur menggunakan dose calibrator dan (e) adalah metoda pemisahan secara  ekstraksi  dengan  larutan  campuran n.hexan dan salin kemudian diukur menggunakan dose calibrator . Hasil pengujian  radiokimia  dari  kelima  metoda tersebut dibuat suatu grafik untuk dievaluasi

## g. Perhitungan kemurnian radiokimia metoda gamma counter
Penentuan  kemurnian  radiokimia diidentifikasi  dari  niliai  retention  faktor  (Rf) yang  spesifik  setiap  komponen  radiokimia untuk  fasa  diam  dan  fasa  gerak  tertentu.  Rf adalah  jarak  yang  ditempuh  oleh  komponen dibagi  dengan  jarak  yang  ditempuh  oleh eluent. Sementara itu, persentase kemurnian radiokimia senyawa radiofarmaka 99m Tc-MIBI  ditentukan  dengan  perhitungan berdasarkan rumus berikut.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Telah dilakukan
pengujian
kemurnian radiokimia senyawa radiofarmaka
99m Tc-MIBI  dengan  menggunakan  metoda pemisahan secara
ekstraksi
yang selanjutnya  besar  kemurniannya  diukur menggunakan dose calibrator . Hasil pengukuran  dibandingkan  dengan  metoda pemisahan  dengan  menggunakan  metode KLT  yang  selanjutnya  kemurniannya  diukur menggunakan gamma counter.
Hasil  pengujian  radiokimia 99m TcO 4 - menggunakan  metoda  KLT,  sebagai  fasa diam  adalah  kertas  whatman  1  dan  fasa gerak MEK ditunjukkan pada Gambar 1.
Jarak elusi (cm)
Gambar 1. Radiokromatogram pemisahan 99m TcO 4 - dengan metoda KLT
Gambar  1  menunjukkan  bahwa radiokimia 99m TcO 4 - dapat diidentifikasi dengan  metoda  KLT  menggunakan  fasa diam  kertas  whatman-1  dan  fasa  gerak MEK.
c ac ah an
Kromatogram 99m TcO 4 - teridentifikasi pada retention  factor (Rf)  sebesar  0,8 sampai  1  dengan  kemurnian  radiokimia 99m TcO 4 - diperoleh sebesar  99,74  % [1-3] .  Hal ini menunjukkan bahwa komponen
radiokimia 99m TcO 4 - ketika dipisahkan menggunakan  metoda  KLT  dengan  fasa diam kertas whatman 1 dan fasa gerak MEK maka  akan  bergerak  ke  atas  hingga  Rf sebesar antara 0,8 sampai dengan 1.
Pada sampel yang sama, dilakukan pengujian radiokimia 99m TcO 4 - menggunakan metoda  ekstraksi  dan  hasil  selengkapnya ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1.   Penentuan radiokimia 99m TcO 4 -
dengan metoda ekstraksi.
No Nama Eluent Hasil pengujian radiokimia (%) Fasa air berada pada lapisan Fasa Air Fasa Organik 1 Chloroform:Salin = 1:1 99,93 0,07 atas 2 CCl 4 :Salin = 1:1 99,97 0,03 atas 3 Dichloromethane: Salin=1:1 99,96 0,04 atas 4 n.Hexan:Salin  = 1:1 99,97 0,03 bawah Tabel 1 menunjukkan bahwa dengan  metoda  ekstraksi  menggunakan campuran  eluent  fasa  air  dan  organik dengan  perbandingan  1:1,  maka 99m TcO 4 - akan  bergerak  ke  fasa  air.  Pengujian kemurnian menggunakan alat dose calibrator menunjukkan  bahwa  larutan  yang mengandung  radiokimia 99m TcO 4 - >  99,9  % bergerak  ke  fasa  air  (dalam  hal  ini  fasa  air adalah salin). Data Tabel 1 juga menunjukkan bahwa setelah proses ekstraksi  menggunakan  eluent  campuran chloroform  dan  salin,  CCl 4 dan salin,  serta dichloromethane  dan  salin  ternyata  fasa  air terpisah pada lapisan atas dan fasa organik pada lapisan bawah. Namun, pada campuran  n.  hexan:salin  terjadi  sebaliknya yaitu  fasa  air  terpisah  pada  lapisan  bawah dan  fasa  organik  pada  lapisan  atas.  Hal  ini terjadi karena berat jenis (BJ) larutan salin > BJ  n.  Hexan,  namun  BJ  larutan  salin  <  BJ chloroform, CCl 4 , ataupun dichloromethan.
Data  perbandingan  hasil  pengujian radiokimia 99m TcO 4 - metoda  ekstraksi  dan metoda KLT selengkapnya ditunjukkan pada Gambar 2 99 99,2 99,4 99,6 99,8 100 a b c d e 99,74 99,93 99,97 99,96 99,97 K e m u rn ian R ad io ki m ia (% )

## Metoda Pengujian
Gambar 2. Perbandingan  hasil  pengujian kemurnian  radiokimia  berbagai metoda.
Gambar 2 menunjukkan bahwa hasil pengujian  kemurnian  radiokimia 99m TcO 4 - menggunakan  berbagai  metoda  (a-e).  (a) adalah  metode  pemisahan  dengan  metode KLT,  (b)  (c)  (d)  dan  (e)  adalah  metode ekstraksi  dengan  berbagai  pelarut  seperti yang telah diuraikan pada metodologi.
Kemurnian
radiokimia 99m TcO 4 dengan  metode  ekstraksi  diperoleh  hasil yang  hampir  sama  dengan  pengujian menggunakan  metoda  baku  KLT  dengan fasa diam kertas whatman 1 dan fasa gerak MEK.  Fenomena  ini  menunjukkan  bahwa metoda  ekstraksi  dapat  digunakan  untuk menentukan  kemurnian  maupun  pengotor radiokimia 99m TcO 4 - dengan hasil akurat [17] .
Selain  spesi  radiokimia 99m TcO 4 - juga perlu dilakukan pengujian spesi radiokimia 99m TcO 2 karena  kedua  spesi radiokimia  tersebut  merupakan  pengotor radiokimia  dari  kit  radiofarmaka 99m Tc-MIBI. Sebagai kontrol, 99m TcO 2 dibuat simulasi dari 99m TcO 4 - bulk yang  direduksi  dengan  Sn 2+ berlebih sehingga 99m TcO 4 - berubah menjadi 99m TcO 2. Kemurnian radiokimia 99m TcO 2 yang terbentuk  diuji  menggunakan  metoda  baku KLT  dengan  fasa  diam  kertas  whatman  1 dan fasa gerak MEK dan hasilnya ditunjukkan pada Gambar 3.
(Maskur, Enny Lestari, Endang Sarmini, Yayan Tahyan, Amal Rezka Putra, Dede Kurniasih, Adang Hardi Gunawan)

## Jarak elusi (cm)
Gambar 3. Radiokromatogram  TcO 2 dengan metoda KLT.
Gambar  3  menunjukkan  bahwa
radiokimia 99m TcO 2 dapat diidentifikasi dengan  metoda  KLT  menggunakan  fasa diam  kertas  whatman-1  dan  fasa  gerak MEK.  Kromatogram 99m TcO 2 teridentifikasi pada  Rf=0  dengan  persentase  radiokimia 91,78  %.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  spesi radiokimia 99m TcO 2 saat  dielusi  oleh  fasa gerak,  ternyata  spesi  radiokimia  tersebut tidak  dapat  bergerak  dan  tetap  diam  di tempat  penotolan  awal  cuplikan  sehingga Rf=0. Hal  ini  terjadi  karena  spesi  radiokimia 99m TcO 2 berbentuk  koloid,  selain  itu  juga teridentifikasi  juga 99m TcO 4 - sebesar  8,22  % pada  Rf  =  0,8  -  1.  Hal  ini  menunjukkan proses  reduksi 99m TcO 4 - menjadi 99m TcO 2 belum  terjadi  secara  sempurna  sehingga baru  sebagian  yang  berubah  menjadi 99m TcO 2 . Hal  ini terjadi karena  jumlah  SnCl 2 sebagai  reduktor  masih  kurang.  Selain  itu, hasil pengujian ini juga membuktikan bahwa antara spesi radiokimia 99m TcO 4 - dan
99m TcO 2 dapat  dipisahkan  menggunakan metoda KLT.
Sampel yang sama digunakan untuk pengujian radiokimia 99m TcO 2 dengan metoda pemisahan secara ekstraksi. Proses ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan larutan  pengekstrak  campuran  eluent  fasa air  dan  fasa  organik  dengan  perbandingan 1:1,  maka 99m TcO 2 akan  bergerak  ke  fasa air.  Hasil  pengujian  kemurnian  radiokimia yang diukur menggunakan alat dose calibrator ditunjukkan pada Gambar 4.
80 85 90 95 100 a b c d e 91,78 99,92 99,33 99,91 96,85 K em urnian R adiok im ia (%) Metoda Pengujian Gambar 4. Perbandingan  hasil  pengujian
radiokimia 99m TcO 2 dengan
berbagai metoda
Gambar  4  meunjukkan  bahwa  hasil pengujian  radiokimia 99m TcO 2 menggunakan metoda  ekstraksi  dengan  variasi  berbagai eluent  (b-e)  diperoleh  kemurnian  hampir sama sekitar 99 %. Namun jika dibandingkan  dengan  metoda  KLT  (a) hasilnya jauh berbeda yaitu sekitar 91,78 %. Hal  ini  terjadi  karena  dengan  metoda  KLT menggunakan  fasa  diam  kertas  whatman  1 dan  fasa  gerak  MEK  dapat  memisahkan senyawa  radiokimia 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - . Kromatogram 99m TcO 2 berada  pada  Rf  =  0, sedangkan 99m TcO 4 - berada  pada nilai Rf  antara  0,8  sampai  dengan  1.  Sementara itu,  dengan  metoda  ekstraksi  tidak  dapat memisahkan  antara 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - . Hal  ini  terjadi  karena  keduanya  merupakan zat  hidrofilik  sehingga  ketika  diekstraksi keduanya  akan  bergerak  ke  fasa  air.  Oleh karena  itu,  meskipun  sampel  mengandung 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - , keduanya  tidak  dapat dipisahkan  sehingga  tidak  dapat  ditentukan jumlah prosentase masing-masing.
Radiofarmaka 99m Tc-MIBI  merupa- kan  senyawa  lipofilik,  sedangkan  pengotor 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - . Keduanya merupakan senyawa  hidrofilik,  sehingga  secara  teori antara  senyawa 99m Tc-MIBI  sebagai  produk akan  dapat  dipisahkan  dari  pengotornya berupa 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - dengan metoda  ekstraksi.  Pengujian  kemurnian radiokimia  radiofarmaka 99m Tc-MIBI  yang dipisahkan dengan metoda ekstraksi menggunakan  variasi  pelarut  ditunjukkan pada Tabel 2.
99m TcO 2
99m TcO 4 - c ac ah an
Tabel 2.  Penentuan  kemurnian  radiokimia 99m Tc-MIBI
dengan
metoda ekstraksi No Nama larutan pengekstrak Hasil pengujian radiokimia (%) Fasa air berada pada lapisan Fasa air Fasa organik 1 Chloroform:Salin = 1:1 1,72 98,28 atas 2 CCl 4 :Salin = 1:1 1,78 98,22 atas 3 Dichloromethane :Salin=1:1 1,85 98,15 atas 4 n.Hexan:Salin  = 1:1 3,48 96,52 bawah Tabel 2 menunjukkan bahwa
dengan  metoda  ekstraksi  menggunakan campuran  eluent  fasa  organik  dan  air dengan perbandingan 1:1 ternyata radioaktivitas  bergerak  ke  fasa  organik sebesar  ±  98  %,  yaitu  senyawa 99m Tc-MIBI. Hal  ini  disebabkan  karena  senyawa 99m Tc- MIBI  bersifat  lipofilik. Fenomena  ini  perlu diuji  kebenarannya  melalui  konfirmasi  hasil pengujian  radiokimia  menggunakan  metoda baku  KLT  dengan  fasa  diam  alumina cellulosa dan  fasa  gerak  etanol.  Hasil pengujian  radiokimia 99m TcO 4 - dan 99m Tc- MIBI menggunakan metoda KLT ditunjukkan pada Gambar 5 dan 6.
Jarak elusi (cm)
Gambar 5. Kromatogram 99m TcO 4 - metoda KLT.
Jarak elusi (cm)
Gambar 6. Kromatogram 99m Tc-MIBI  metoda KLT.
Gambar  5  dan  6  menunjukkan bahwa pengujian radiokimia dengan metoda KLT  dengan  fasa  diam  adalah alumina cellulose, sedangkan  sebagai  fasa  gerak adalah etanol diperoleh hasil bahwa 99m TcO 4 - teridentifikasi  pada  Rf  antara  0,0 sampai  dengan  0,4  ,  sedangkan 99m Tc-MIBI teridentifikasi  pada  Rf  antara  0,8  sampai  1. Hasil  perbandingan  pengujian  radiokimia 99m Tc-MIBI  menggunakan metoda KLT dengan  metoda  ekstraksi  ditunjukkan  pada Gambar 7.
94 94,5 95 95,5 96 96,5 97 97,5 98 98,5 a b c d e 98,34 97,28 97,22 97,45 95,52 K e m u r n ian R ad io ki m ia (% )

## Metoda Pengujian
Gambar 7. Perbandingan  hasil  pengujian radiokimia 99m Tc-MIBI  dengan berbagai metoda Gambar 7 menunjukkan hasil
pengujian  kemurnian  radiokimia 99m Tc-MIBI dengan  menggunakan  metoda  pemisahan secara  ekstraksi  variasi  berbagai  eluent yang selanjutnya diukur menggunakan dose
c ac ah an c ac ah an
(Maskur, Enny Lestari, Endang Sarmini, Yayan Tahyan, Amal Rezka Putra, Dede Kurniasih, Adang Hardi Gunawan)
calibrator .  Hasil  yang  diperoleh  dengan metode  ekstraksi  menggunakan  larutan campuran  salin  dan  n.  Hexan  (metoda  e) diperoleh hasil kemurnian sebesar 95,52 %. Sementara itu, bila menggunakan campuran larutan  pengekstraksi  salin  dan  chloroform, salin dan dichloromethan, ataupun salin dan tetra  chloro  carbon  (metoda  b,c,d)  hasil ketiganya  hampir  sama,  yaitu  masing- masing sebesar 97,28; 97,22 ; dan 97,15 %. Jika  dibandingkan  dengan  metoda  KLT hasilnya  98,34  %.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  pengujian  kemurnian  radiokimia senyawa  radiofarmaka 99m Tc-MIBI  dapat dilakukan  menggunakan  metoda  ekstraksi dengan  selisih  hasil  radiokimia  lebih  kecil dari  1  %  bila  dibandingkan  dengan  metoda KLT  menggunakan  fasa  diam alumina cellulose dan  fasa  gerak  etanol.  Namun, keunggulan  dari  metoda  ekstraksi  adalah waktu  pengerjaan  relatif  lebih  singkat  yaitu sekitar  20  menit,  sedangkan  metoda  KLT dibutuhkan  waktu  sekitar  180  menit.  Selain itu,  keunggulan  metoda  ekstraksi  adalah menggunakan alat d ose calibrator sedangkan  metoda  KLT  menggunakan  alat ukur gamma  counter. Dari  hasil  ini  dapat dinyatakan  bahwa pengujian  radiokimia menggunakan metoda ekstraksi dapat diterapkan  di  rumah  sakit  karena  umumnya rumah  sakit  hanya  memiliki  alat  ukur dose calibrator. Kelemahan metoda ektraksi adalah  hanya  dapat  memisahkan  antara produk yang berupa 99m Tc-MIBI dan pengotornya berupa TcO 2 dan TcO 4 - , namun tidak  dapat  memisahkan  antara  pengotor TcO 2 dan  TcO 4 - .  Hal  ini  tidak  menjadi masalah  karena  yang  penting  metoda  ini dapat  memisahkan  antara  produk  dan pengotornya sehingga kemurnian radiokimia 99m Tc-MIBI dapat ditentukan secara akurat.
Validasi pengujian
radiokimia senyawa  radiofarmaka 99m Tc-MIBI  (nomor batch  lain)  dilakukan  menggunakan  metoda pemisahan secara ekstraksi. Hal ini dilakukan  dengan  pengujian  9  (sembilan) kali  pengulangan  menggunakan  larutan
pengekstrak  campuran  chloroform  dan  salin dengan  besar  perbandingan  1  :  1,  waktu pengadukan selama 1 menit, waktu inkubasi 5  menit.  Hasil  ekstraksi  menunjukkan  TcO 2 dan TcO 4 - terdistribusi pada fasa air (lapisan atas)  dan  Tc-MIBI  terdistribusi  pada  lapisan bawah (fasa organik). Hasil validasi pengujian  radiokimia  kit  MIBI  dengan metoda ekstraksi ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3.  Data validasi pengujian radiokimia kit MIBI metoda ekstraksi No Pengotor radiokimia
99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - (%) Kemurnian radiokimia 99m Tc-MIBI (%) 1 3,98 96,02 2 2,33 97,67 3 3,10 96,90 4 2,72 97,28 5 2,76 97,24 6 2,24 97,76 7 2,81 97,19 8 2,45 97,55 9 3,25 96,75 Rerata kemurnian radiokimia (%) 97,15 SD 0,54 RSD (%) 0,56
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  data pengujian  kemurnian  radiokimia 99m Tc-MIBI dengan  menggunakan  metoda  ekstraksi. Nilai  Standar  Deviasi  (SD)  dan  Relatif Standar  Deviasi  (RSD)  yang  diperoleh cukup  kecil.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa presisi  pengukuran  (keberulangan)  hasil pengujian  kemurnian  radiokimia  dengan metoda  ekstraksi  dan  diukur  menggunakan dose  calibrator ini  cukup  valid.  Hasil pengujian  tersebut  dibandingkan  dengan metoda  baku  yang  sudah  biasa  digunakan pada pengujian radiokimia senyawa radiofarmaka 99m Tc-MIBI,  yaitu  metoda  KLT menggunakan  fasa  gerak  etanol  dan  fasa diam alumina cellulose dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 4.  Hasil pengujian radiokimia menggunakan metoda ekstraksi dan KLT. No Metoda pemisahan Radio- kimia (%) RSD % Alat ukur Waktu uji (menit) 1  KLT 98,34  0,67 Gamma Counter 180 2  Ekstraksi 97,15  0,56 Dose Calibrator 20
Tabel  4  menunjukkan  bahwa  hasil pengujian  radiokimia  kit  MIBI  menggunakan metoda  baku  KLT  dan  metoda  ekstraksi hasilnya  tidak  jauh  berbeda.  Pengujian  kit MIBI  menggunakan  metode  KLT  diperoleh kemurnian  radiokimia  sebesar  98,34  %  dan metoda ekstraksi sebesar 97,15 %. Keberterimaan  pengukuran  yang  dilihat  dari nilai  RSD  menunjukkan  bahwa  dengan menggunakan  metoda  pemisahan  secara KLT  diperoleh  sebesar  0,67  %  sedangkan metoda  ekstraksi  sebesar  0,56  %.  Hal  ini menunjukkan bahwa pemisahan dan pengujian  menggunakan  metoda  ekstraksi maupun  KLT  hasilnya  hampir  sama  dan mempunyai tingkat repeatabilitas yang tinggi karena  diperoleh  nilai  RSD  yang  kecil,  yaitu sebesar  0,67  %  dan  0,56  %.  Semakin  kecil nilai  RSD  menunjukkan  nilai  keberulangan semakin tinggi.  Secara umum jika nilai RSD < 2 % menunjukkan kepresisian pengukuran baik.
Jika  dilihat  dari  waktu  pengujian yang  diperlukan,  dapat  diketahui  bahwa metoda ekstraksi memerlukan waktu pengujian yang lebih singkat yaitu 20 menit , bila dibandingkan dengan pengujian menggunakan  metoda  KLT  dibutuhkan waktu  pengujian  selama  180  menit.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  metoda  ekstraksi  lebih efisien  dan  cocok  untuk  pengujian  radio- kimia  di  rumah  sakit  yang  dilakukan  sesaat sebelum  disuntikkan  ke  pasien.  Bila  dilihat dari peralatan yang digunakan yang ditunjukkan  pada  Tabel  4  diketahui  bahwa pengujian  radiokimia  dengan  metoda  KLT menggunakan alat
gamma counter sedangkan  metoda  ekstraksi  menggunakan
alat dose  calibrator. Pada  umumnya  di rumah sakit tidak memiliki peralatan gamma counter dan  hanya  memiliki  alat dose calibrator sehingga  pengujian  kemurnian radiokimia  dengan  metoda  ekstraksi  ini sangat  sesuai  untuk  diterapkan  di  rumah sakit.

## SIMPULAN
Pengujian kemurnian radiokimia
senyawa  radiofarmaka 99m Tc-MIBI  dengan metoda pemisahan secara ekstraksi
menggunakan larutan
pengekstrak
campuran  salin  dan  chloroform  diperoleh hasil  hampir  sama  dengan  menggunakan metoda  pemisahan  secara  KLT. Kemurnian radiokimia  kit 99m Tc-MIBI  menggunakan kedua  metoda  tersebut  hampir  sama  yaitu sebesar  98,34  %  dengan  presisi  atau  RSD sebesar  0,65  %  dengan  menggunakan metoda baku KLT dan 97,15 % dengan RSD sebesar  0,56  %  dengan  menggunakan metode  ekstraksi. Kemurnian  radiokimia menggunakan  metoda  ekstraksi  diperoleh hasil lebih kecil dari 1 %, namun keunggulan metoda  ekstraksi  adalah  waktu  pengujian lebih singkat dibandingkan metoda KLT dan pengukuran  kemurniannya  menggunakan dose  calibrator ,  sedangkan  kekurangan metoda ekstraksi adalah tidak dapat memisahkan  antara  pengotor  radiokimia 99m TcO 2 dan 99m TcO 4 - .

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih diucapkan kepada
Bapak  Dr.  Rohadi  Awaludin,  Kepala  Bidang Teknologi Radiofarmaka yang telah memberi  arahan  sehingga  terlaksananya kegiatan  penelitian  ini  dan  Ibu  V.  Yulianti Susilo,  M.  Farm.  yang  telah  memberi masukan  dalam  penyusunan  Karya  Tulis Ilmiah ini.
(Maskur, Enny Lestari, Endang Sarmini, Yayan Tahyan, Amal Rezka Putra, Dede Kurniasih, Adang Hardi Gunawan)

## DAFTAR PUSTAKA
[1] World  Health  Organization,  (2008),
Radiopharmaceuticals,  Final  text  for addition to The International Pharmacopoeia, Document  QAS/08. 262 / Final.
[2] Hossein Sadeghpour, Mehrosadat
Alavi, Majid Shahedi, Seyed Mohammad Entezarmahdi, Amirhossein Sakhteman (2015), Evaluation of radiochemical purities of some  radiopharmaceuticals  in  Shiraz Namazi  Teaching  hospital ,  Trends  in Pharmaceutical Sciences, 1(1), 14-19
[3] Zimmerman  B,  Herbst  C,  Norenberg J,  Woods  M.,  (2006), International guidance  on  the  establishment  of quality  assurance  programmes  for radioactivity  measurement  in  nuclear medicine . Applied radiation and isotopes. 64(10):1142-6.
doi:
10.1016/j.apradiso.2006.02.012. Pubmed PMID: 16934984.
[4] Berna  Okudan,  MD,  Thomas  C. Smitherman,  MD,  (2004). The  Value and  Throughput  of  Rest  Thallium- 201/Stress Technetium -99m Sestamibi  Dual-Isotope  Myocardial SPECT ,  Journal  Anadolu  Kardiyol Derg vol 4: 161-168
[5] G.  Razei,  M.  Reza  Masjedi,  F. Fotouhi, I.  Neshandar  Asli, B. Shafiei, H. Javadi,  M. Assadi (2012), The role of 99m Tc-MIBI  scintigraphy  in  the management of patients
with
pulmonary tuberculosis ,  European Review for Medical and Pharmacological  Sciences,  vol.  16:
622-629
[6] Nadia  Abdulla  Batawil  (2015), MIBI SPECT  Scan  and  Ultrasonography  in Preoperative  Imaging  of  Primary Hyperparathyroidism ,
Volume  4  • Issue 3 • 1000188
[7] ID  Mulyanto,  AHS  Kartamihardja,  JS
Masjhur  (2012) ,  Retention  Index  (RI) Of Tc-99m MIBI Thyroid Scintigraphy, Ultrasonography  (USG),  and  Fine- Needle Aspiration Cytology (FNAC) In The  Assesmentof  Thyroid  Nodule , Oral  Presentation  on  10th  Asia  and
Oceania Thyroid Association Congress Bali, Indonesia, 21-24
October 2012
[8] Savaş  Karyağar,  MD,  Sevda  S. Karyağar, MD, Nalan Ulufi, MD, Tevfik Özpaçaci,  MD,  Enis  Yüney,  MD,
Surgical  (2010), Treatment  of  the  Tc- 99m  Sesta  mibi  Negative  Solitary
Parathyroid Adenoma with Radioguided Occult Lesion Localization  (ROLL)  Technique ,  Turk 32 J Nucl Med vol 19(1)
[9] P  Rajendra  Prasad1,  Shrinivas  B. Somalwar*, Neelaveni (2015), Primary Hyperparathyroidism  due  to  Ectopic Mediastinal  Parathyroid  Adenoma , Sch  J  Med  Case  Rep  vol  3(5):423- 425.
[10]  Sait  Siregar,  Betul  Vatankulu,  Ezgi Erdogan, Sanem Mut, Serkan Teksoz, Tulin Ozturk, Kerin Sonmezeglu, Bedii Kanmaz,  (2015), Comparison  of  F-18 FDG PET/CT and Tc-99m MIBIin The Preoperative Evaluation of Cold Thyroid  Nodules  In  The  Same  Patien Group , J.Endocrinevol 50:138-145.
[11]  Del Vecchio S,  Zanetti  A.,  Fonti  R., Ionmelli  F.,  Salvatore  M.  (2004), Tc- 99m  MIBI  in  the  evaluation  of  Breast Cancer
Biology , Journal Breast Cancer (ISSN: 9783-540367802) , Vol.1, 71-81.
[12]  Rajchadara  S,  MD.  (2012), Breast Specific  Gamma  Imaging  (BSGI)/ Molecular  Breast  Imaging  (MBI) ,  The Bangkok  Medical  Journal  Vol.  3;  97- 100.
[13]  Faria,  D.  P.,  Buchpiguel,  C.  A.,  & Marques,  F.  L.  N.  (2015), Alternative chromatographic system for the quality control of lipophilic technetium- 99m  radiopharmaceuticals  such  as [99mTc(MIBI)6]+ . Brazilian  Journal  of Medical  and  Biological  Research , 48 (10),902 –907.
[14]  Andrade,  W.  G.,  &  Santos,  L.  A.  P., (2013), Evaluation of Different
Detection  Systems  To  Determinei  the Radiochemical Purity of the Technetium Eluate and the Radiopharmaceutical . Article, R.).
Breast  Specific  Gamma  Imaging (BSGI)/  Molecular  Breast  Imaging
(MBI), 97 –100.
[15]  Poliane Angelo De L. Santos,
Wellington G.  Andreade, Luiz  Antonio P.  Santos,  and  Fabiana  Farias  De Lima  (2013), Evaluation  of  Different Detection  System  to  Determinei  The
Radiochemical purity of the Technetium Eluate and the Radiopharmaceutical Sestamibi , International Nuclear Atlantic Conference – INAC Recife, PE, Brazil,
2013.
[16]  S.  B.  Khamis,  M.  AB-Wahid,  (1998), Development  of  MIBI  Kit  For  Heart Imaging , IAEA TECDOC 1029, Vienna.