## DOI: 10.30644/rik.v8i2.458
Uji  antioksidan  campuran  buah  kelapa  muda  dan  air  perasan  jeruk  purut  sebagai imunonutrisi pada tikus terinduksi sepsis
Rahmayati Rusnedy
Program Studi S1 Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, Indonesia Email korespondensi : rahmayatikenedy@gmail.com
Accepted: 12 Desember 2020; revision: 17 Desember 2020; published: 31 Desember 2020

## Abstrak
Latar  Belakang :  Buah  kelapa  ( Cocus  nucifera L.)  dan  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix )  mengandung senyawa antioksidan polifenol yang dimanfaatkan sebagai agen imunonutrisi. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antioksidan campuran buah kelapa muda berbagai konsentrasi daging buah dengan air kelapa dan yang ditambahkan air perasan jeruk purut  serta aktivitas imunonutrisi dari  sediaan  uji  yang  memiliki  aktvitas  antioksidan  terbaik  terhadap  tikus  putih  jantan  terinduksi sepsis dengan Lipopolisakarida Escherichia coli .
Metode :  Sediaan  uji  dibuat  dari  campuran  buah  kelapa  muda  berbagai  konsentrasi  daging  buah 15%(KJ1); 20%(KJ2); 25%(KJ3) dengan air kelapa serta ditambahkan 1 ml air perasan jeruk purut, dan sediaan uji dari campuran daging buah 15%(K1); 20%(K2); 25%(K3) dengan air kelapa. Setiap sediaan  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  peredaman  DPPH  ( 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil ) dan uji imunonutrisi meliputi pehitungan % indeks organ limfa dan hati. Hasil : Hasil uji antioksidan dengan metode peredaman DPPH memberikan IC 50 terhadap KJ1, KJ2 dan KJ3 sebesar 83,310; 43,295 dan 38,842 μg/mL, sedangkan K1, K2 dan K3 sebesar 160,080; 121,998  dan 71,697 μg/mL. KJ2 dan KJ3 memiliki aktivitas antioksidan  yang sangat kuat karena mengandung  daging  buah  kelapa  muda  kosentrasi  yang  lebih  tinggi  dan  air  perasan  jeruk  purut jika  dibandingkan  dengan  sediaan  uji  lainnya.  Hasil  uji  imunonutrisi  KJ2  dan  KJ3  terhadap penilaian  %  indeks  organ  limfa  dan  hati  pada  dosis  100  dan  200  mg/kgbb/hari  didapatkan  hasil perbaikan  %  indeks  organ  secara  signifikan  (P<0,05)  jika  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol positif sakit.
Kesimpulan :  Sedian  KJ2  dosis  100  mg/kgbb/hari  dinilai  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai agen imunonutrisi pada kondisi sepsis melalui aktivitas antioksidan dari fitonutrien yang terkandung didalam sediaan uji .
Kata Kunci: antioksidan, buah kelapa, jeruk purut, imunonutrisi, sepsis.

## Abstract
Background :  Coconut  (Cocus  nucifera  L.)  and  kaffir  lime  (Citrus  hystrix)  contain  polyphenol antioxidant compounds which are used as immunonutrition agents. The purpose of this study was to determine the antioxidant activity of a mixture of young coconut fruit with various concentrations of fruit flesh with coconut water and added kaffir lime juice and the immunonutrition activity of the test  preparation  that  had  the  best  antioxidant  activity  against  sepsis-induced  male  white  rats  with Lipopolysaccharide Escherichia coli.
Method :  The  test  preparations  were  made  from  a  mixture  of  young  coconut  fruit  with  various concentrations of 15% pulp (KJ1); 20% (KJ2); 25% (KJ3) with coconut water and added with 1 ml of kaffir lime juice, and test preparation from a mixture of 15% pulp (K1); 20% (K2); 25% (K3) with coconut water. Each preparation was tested for its antioxidant activity with the DPPH (2,2-diphenyl- 1-picrylhydrazyl)  reduction  method  and  the  immunonutrition  test  included  calculating%  index  of lymph and liver organs.
Results : The results of the antioxidant test with the DPPH suppression method gave IC50 to KJ1, KJ2  and  KJ3 of  83.310;  43,295  and  38,842  μg/mL,  while  K1,  K2  and  K3  were  160,080;  121,998 and 71,697 μg/mL. KJ2 and KJ3 have very strong antioxidant activity because they contain higher concentrations  of  young  coconut  flesh  and  lime  juice  when  compared  to  other  test  preparations. The results of the KJ2 and KJ3 immunonutrition tests on the assessment of% index for lymph and liver  organs  at  doses  of  100  and  200  mg/kgbb/day  showed  a  significant  improvement  in%  organ index (P <0.05) when compared with the disease positive control group.
Conclusion :  KJ2  at  a  dose  of  100  mg/kgbb/day  is  considered  to  have  the  potential  to  be developed  as  an  immunonutrition  agent  in  sepsis  through  the  antioxidant  activity  of  the phytonutrients contained in the test preparation.
Key words: antioxidant, coconut fruit, kaffir lime, immunonutrition, sepsis.

## PENDAHULUAN
Buah  kelapa  ( Cocos  nucifera L.) mengandung  polifenol  konsentrasi  tinggi, dan fitonutrien yang meningkatkan kesehatan. Kandungan komponen senyawa fenolik  yang  bersifat  antioksidan  (vitamin  E dari  golongan  monofenol  dan  asam  fenolat dari  golongan  polifenol)(1).  Daging  buah kelapa  muda  memiliki  komposisi  gizi  yang cukup  baik,  antara  lain  mengandung  asam lemak  dan  asam  amino  esensial  yang sangat  dibutuhkan  tubuh.  Sedangkan  air kelapa mengandung bermacam-macam mineral, vitamin dan gula serta asam amino esensial,  bernilai  gizi  tinggi.  Buah  kelapan muda mengandung komponen asam amino seperti Glutamat (GLU) 14,50%; 4,02%  dari air  dan  daging  buah  kelapa  muda,  Arginin (ARG) 12,75%; 2% dari air dan daging buah kelapa  muda,  asam  laurat  31,10%  dari daging  buah  kelapa  muda  dan  vitamin  C 2,2-3,4  mg/100  ml  dari  air  kelapa  muda(2). Barlina  R  (3) telah  melakukan  penelitian terhadap penambahan daging kelapa muda (B1)  15%,  (B2)  20%  dan  (B3)  25%  dalam sediaan serbuk minuman kelapa menyatakan adanya pengaruh nyata konsentrasi  daging  kelapa  muda  terhadap kadar fitonutrien.
Putra AP (4) telah melaporkan adanya pengaruh  penambahan  jeruk  purut  ( Citrus hystrix )  terhadap  proses  penghambatan ransiditas  atau  ketengikan  yang  timbul akibat teroksidasinya asam lemak tak jenuh yang  terkandung  dari  olahan  daging  buah kelapa.  Jeruk  purut  merupakan  buah  yang
dikenal masyarakat sebagai sumber makanan dan dijadikan obat  herbal dengan aktivitas  antioksidan  yang  sangat  tinggi sehingga banyak dimanfaatkan dalam kebutuhan  sehari-hari(5).  Tanaman  genus Citrus ini  dikenal  kaya  akan  polifenol(6), dianggap  sebagai  salah  satu  sumber  daya antioksidan yang mengandung cukup banyak  asam  askorbat,  tokoferol,  flavonoid dan senyawa fenolik lainnya(7)(8)(9). Polifenol  dan  flavonoid  adalah  donor electron  yang  baik  dengan  kekuatan antioksidannya bervariasi dari suatu senyawa dengan senyawa lainnya(10)(11).
Terapi nutrisi mengacu pada pemberian  nutrisi  dengan  tindakan  yang menguntungkan  tertentu  (misalnya  untuk efek  antioksidan)  secara  khusus  bertujuan untuk  mekanisme  pertahanan  kekebalan dan  untuk  menghambat  respons  pro- inflamasi  yang  berlebihan  selama  terjadi fase katabolik dari suatu penyakit (12)(13).
Sepsis adalah kondisi yang mengancam  jiwa  yang  ditandai  dengan respons  peradangan  yang  parah  akibat infeksi  sistemik  yang  dapat  disebabkan mikroorganisme seperti bakteri gram negatif maupun  positif,  jamur,  virus,  dan  parasit. Pada  kasus  yang  parah,  sepsis  dapat menyebabkan  kematian  dengan  kegagalan banyak organ sebagai penyebab utama(14). Respons  katabolik  selama  sepsis  akut sangat  membebani  sumber  daya  nutrisi tubuh,  menghasilkan  produk  limbah  seluler dalam jumlah besar dan sangat membutuhkan nutrisi yang cukup(15).
Terapi imunonutrisi merupakan upaya untuk  mengurangi  atau  menghilangkan potensi  patogen  dan  toksin,  memenuhi asupan  nutrisi  dan  sebagai  antioksidan yang dapat memodulasi mekanisme pertahanan  imunitas  alami  dan  adiptif  pada penderita  penyakit  kritis  seperti  sepsis. Konsep  dukungan  nutrisi  dalam  upaya modulasi  fungsi  imunitas  dikenal  sebagai imunonutrisi  ( Immune-enhancing  diets  atau Immuno-modulating diets ) yaitu pendekatan terapi  terhadap  perubahan  patologis  dalam imunitas  adaptif  maupun  alamiah,  yang muncul  sekunder  akibat  inflamasi  dan infeksi sistemik melalui pemberian imunonutrien(13)(16).  Terapi  nutrisi  yang paling  relevan  pada  pasien  sepsis  adalah asupan  asam  amino  glutamin  dan  arginin, asam lemak, selenium, dan vitamin C(15).
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  campuran buah  kelapa  muda  berbagai  konsentrasi daging  buah  yang  ditambahkan  15%,  20%, 25% dengan air kelapa dan sediaan uji dari campuran buah kelapa muda yang ditambahkan  air  perasan  jeruk  purut  serta menentukan potensi imunonutrisi dari sediaan uji yang memiliki aktvitas antioksidan  terbaik    terhadap  tikus  putih jantan  ( Rattus  norvegicus )  yang  diinduksi sepsis dengan Lipopolisakarida (LPS) Escherichia coli dengan menentukan penilai % indeks organ.

## METODE
Lingkup kerja ini terdiri atas beberapa tahap,  yaitu  pembuatan sediaan  uji  dengan berbagai kosentrasi, uji antioksidan, pembuatan  larutan  penginduksi  LPS E.  coli dan  uji  imunonutrisi  sediaan  uji  terhadap tikus  jantan  ( Rattus  norvegicus ).  Penelitian dilakukan  di  Laboratorium  Sekolah  Tinggi Ilmu Farmasi Riau.

## Pembuatan Sediaan Uji
Sediaan  uji  dibuat  dengan  berbagai kosentrasi  olahan  campuran  buah  kelapa muda  berbagai  konsentrasi  daging  buah kelapa muda  yang  sudah  dihaluskan  (15%,
20% dan 25% dalam larutan air kelapa) (3). Sedangkan  buah  jeruk  purut  diperas  untuk mendapatkan air buahnya.
Dibuat  6  sediaan  uji  yakni  KJ1  dari daging  buah  kelapa  muda  15%  dengan  air kelapa  dan  ditambahkan  1  ml  air  perasan jeruk  purut.  KJ2  dari  daging  buah  kelapa muda 20% dengan air kelapa dan ditambahkan  1  ml  air  perasan  jeruk  purut. KJ3  dari  daging  buah  kelapa  muda  25% dengan air kelapa dan ditambahkan 1 ml air perasan  jeruk  purut.  Selanjutnya  K1  dari daging  buah  kelapa  muda  15%  dengan  air kelapa.  K2  dari  daging  buah  kelapa  muda 20%  dengan  air  kelapa.  K3  dari  daging buah kelapa muda 25% dengan air kelapa.
Uji Antioksidan Metode Peredaman Radikal  Bebas  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl ).
Masing-masing  campuran  sediaan  uji ditimbang  sebanyak  2  mg  ditambahkan kedalam  2  mL  metanol  sehingga  diperoleh konsentrasi  sediaan  uji  1000  µg/mL. Pengujian  dilakukan  dengan  pengenceran dalam enam seri konsentrasi yaitu konsentrasi  (100;  50;  25;  12,5;  6,25  dan 3,125  µg/mL)  dalam  metanol.  Kemudian campurkan  2  mL  larutan  DPPH  dan  2  mL masing-masing  sediaan  uji,  lalu  dikocok hingga  homogen  dengan  diinkubasi  pada suhu  ruang  dan  kondisi  gelap  selama  30 menit.  Larutan  tersebut  diukur  serapannya pada panjang gelombang maksimun DPPH(17).
Persiapan Hewan Uji. Tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ) galur Wistar dengan  bobot  tubuh  rerata 200-300  gram  dengan  kondisi  sehat digunakan sebagai hewan uji. Tikus diadaptasikan  selama  1  minggu  didalam kandang untuk aklimatisasi.

## Pembuatan Larutan Penginduksi
Induksi
menggunakan Lipopoli- sakarida  (LPS) E.  coli O55:B5  ( Sigma Aldrich )  dilakukan  secara  intraperitoneal (i.p).  LPS  diencerkan  dengan  larutan  NaCl

## 0,9% dengan perbandingan NaCl 0,9%:LPS
E. coli yaitu 10:1. Dosis yang diberikan yaitu 1  mg/Kgbb/hari  yang  dilarutkan  dalam media  NaCl  0.9%  sebanyak  0,5  ml(18). Penginduksian  sepsis  dengan  LPS E.  coli dilakukan  selama  2  hari  diawal  perlakuan dan dilakukan pada jam yang sama.

## Uji Imunonutrisi
Pengujian  ini  dilakukan  terhadap  30 ekor tikus yang dibagi menjadi  6 kelompok, dengan  masing-masing  kelompok  terdiri atas  5  ekor  tikus  yang  dipilih  secara  acak. Kelompok  I  adalah  tikus  tanpa  perlakuan apapun sebagai kontrol negatif. Kelompok II adalah  tikus  yang  hanya  diinduksi  LPS E. coli dengan  dosis  1  mg/kgbb/hari  selama  2 hari  sebagai  kontrol  positif.  Kelompok  III adalah  tikus  yang  diberi  diinduksi  LPS E. coli dengan  dosis  1  mg/kgbb/hari  selama  2 hari terlebih dahulu dan dilanjutkan pemberian sediaan KJ2 dosis 100 mg/Kgbb/hari  selama  7  hari.  Kelompok  IV adalah  tikus  yang  diberi  diinduksi  LPS  E. coli  dengan  dosis  1  mg/kgbb/hari  selama  2 hari dan dilanjutkan pemberian sediaan KJ2 dosis  200  mg/Kgbb/hari  selama  7  hari. Kelompok  V  adalah  tikus  yang  diberi diinduksi  LPS E.  coli dengan  dosis 1 mg/kgbb/hari selama 2 hari dan dilanjutkan  pemberian  sediaan  KJ3  dosis 100  mg/Kgbb/hari  selama  7  hari  dan Kelompok  VI  adalah  tikus  yang  diberi diinduksi  LPS E.  coli dengan  dosis  1 mg/kgbb/hari  selama  2  hari  dan  dilanjutkan pemberian sediaan KJ2 dosis 200 mg/Kgbb/hari selama 7 hari.
Setiap  hari  lakukan  pemeriksaan berat  badan  hewan  uji  selama  waktu perlakuan  pada  masing-masing  kelompok. Pada  hari  ke  11,  hewan  uji  dieutanasia dengan menggunakan  anestesi  eter  secara inhalasi. Hewan dikorbankan untuk mengambil organ imunitas seperti limfa dan hati.  Limfa  dan  hati  tikus  diisolasi  dan ditimbang. Perbandingan bobot organ dengan  bobot  badan  dihitung  sehingga diperoleh indeks organ dalam %.
Indeks Organ = x 100 %
Indeks  organ  kelompok  yang  diberi sediaan uji dengan berbagai dosis dibandingkan terhadap indeks organ kelompok kontrol positif(19).

## Analisis Data
Aktivitas imunonutrisi dengan
penilaian  %  indeks  organ  setelah  diinduksi sepsis. Distribusi normal data hasil penelitian  dianalisis  dengan  uji  Kolmogorov Smirnov.  Data  terdistribusi  normal  dan homogen  jika  nilai  (p>0,05)  dan  dilanjutkan dengan  uji  ANOVA  (Analysis  of  Varians) one- way dengan α sebesar 95%.

## HASIL
Uji Antioksidan Metode Peredaman Radikal Bebas DPPH.
Hasil  pengujian  antioksidan  metode peredaman DPPH, didapatkan Kurva persamaan  regresi  linier  digunakan  untuk menghitung nilai IC50 ( Inhibition
Concentration 50)  yaitu  konsentrasi  efektif senyawa dalam sampel yang dapat meredam  aktivitas  radikal  bebas  DPPH sebesar 50%.
Kurva persamaan regresi linier y = bx + a antara konsentrasi larutan uji (x) dengan  persentase  inhibisi  (y)  dari  sediaan uji  KJ1,  KJ2  dan  KJ3  dapat  dilihat  pada Gambar  1,  Gambar  2,  Gambar  3  dan sediaan  uji  K1,  K2  dan  K3  dapat  dilihat pada Gambar 4, Gambar 5 dan Gambar 6.
Gambar  1. Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan sediaan uji kelompok KJ1.
Gambar  2. Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan sediaan uji kelompok KJ2.
Gambar  3. Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan sediaan uji kelompok KJ3.
Gambar  4. Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan sediaan uji kelompok K1.
Gambar  5. Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan sediaan uji kelompok K2.
Gambar  6. Kurva  hubungan  %  inhibisi  dengan sediaan uji kelompok K3. Penetapan kategori aktivitas antioksidan ini berdasarkan Molyneux
(2004) menyatakan semakin kecil nilai IC50 berarti  semakin  tinggi  aktivitas  antioksidan.
Secara  spesifik  suatu  senyawa  dikatakan sebagai  antioksidan  sangat  kuat  jika  nilai IC50  kurang  dari  50  ppm  (IC50<50ppm), kuat (50<IC50<100 ppm), sedang (100<IC50<150 ppm), lemah
(150<IC50<200  ppm)  dan  sangat  lemah IC50>200 ppm(17).
Hasil  uji  antioksidan  KJ2  dan  KJ3 menunjukkan  bahwa  nilai  IC50  pada sediaan  uij  tersebut  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  termasuk  katagori  sangat kuat.  dengan  nilai  IC50  sebesar  43,295 µg/mL dan 38,842 µg/mL (Tabel 1.)
Tabel 1 . Nilai IC 50 Sediaan uji Sediaan uji IC 50 (μg/mL) Kategori aktivitas antioksidan (17) KJ1 83,310±0,12 Kuat KJ2 43,295±0,09 Sangat kuat KJ3 38,842±0,56 Sangat kuat K1 160,080±0,32 Lemah K2 121,998±0,49 Sedang K3 71,697±0,67        Kuat
IC 50 = nilai inhibition  concentration 50%  atau  konsentrasi yang  dapat  meredam  aktivitas  radikal  bebas  DPPH sebesar 50%.

## Uji Imunonutrisi
Hasil  yang  diperoleh  pada  data  % indeks  organ  imunitas  pada  tikus  jantan meliputi  organ  limfa  dan  hati  berdasarkan Tabel  2.,  menunjukkan  bahwa  adanya perbaikan  dari  %  indeks  organ  yang
signifikan  pada  organ  limfa  dan  hati kelompok  sediaan  uji  KJ2  dan  KJ3  dosis 100  dan  200  mg/Kgbb  bila  dibandingkan kelompok II sebagai kontrol positif sakit.
Tabel 2 .  Nilai % indeks organ Kelompok Dosis (mg/Kg bb) Limfa Hati Kontrol negatif - 0,398±0,34 3,936±0,43 Kontrol positif  sakit 1 0,637±0,19 4,270±0,76 KJ2 100 200 0,443±0,26 * 0,438±0,31 * 4,090±0,14 * 3,986±0,23 * KJ3 100 200 0,438±0,32 * 0,458±0,52 * 4,007±0,48 *
4,025±0,26 * KJ2= (daging buah kelapa 20% dengan air kelapa + 1 ml air perasan jeruk purut); KJ3 (daging buah kelapa 25% dengan air kelapa + 1 ml air perasan jeruk purut). * = (P < 0,05) ada perbedaan signifikan dengan kelompok kontrol positif sakit.

## PEMBAHASAN
Uji Antioksidan Metode Peredaman Radikal Bebas DPPH.
Berdasarkan  uji  aktivitas  antioksidan dari  sediaan  KJ1,  KJ2  dan  KJ3  yang merupakan sediaan uji yang ditambahkan 1 ml  air  perasan  jeruk  purut  ternyata  mampu meningkatkan  aktivitas  antioksidan  pada sediaan  jika  dibandingkan  dengan  sediaan yang  tidak  diberikan  tambahan  air  perasan jeruk  purut  yakni  sediaan  K1,  K2  dan  K3. Hal  ini  erat  kaitannya  karena  adanya pengaruh penambahan jeruk purut terhadap proses penghambatan ransiditas atau ketengikan yang telah dilaporkan oleh Putra AP  (4)  bahwa  ketengikan  timbul  akibat teroksidasinya  asam  lemak  tak  jenuh  yang terkandung dari olahan daging buah kelapa. Ketengikan dari olahan daging buah kelapa dapat  diatasi  dengan  usaha  menambahkan bahan yang mengandung antioksidan salah satunya air perasan jeruk purut.
Sedian KJ2 dan KJ3 yang merupakan sediaan  uji  yang  mengandung  persentase penambahan  daging  buah  kelapa  muda sebanyak 20% dan 25%. Adanya
peningkatan aktivitas antioksidan dari sediaan  uji  tersebut,  dipengaruhi  dari komponen yang terdapat pada buah kelapa ( Cocos  nucifera L)  yang  mengandung polifenol konsentrasi tinggi yang merupakan fitonutrien  seperti  karoten,  vitamin  E  dan flavonoid(1).   Barlina  R  (3) telah melakukan penelitian  terhadap  penambahan  daging kelapa muda (B1)  15%, (B2)  20%  dan (B3) 25%  dalam  sediaan  serbuk  minuman kelapa menyatakan adanya pengaruh nyata konsentrasi  daging  kelapa  muda  terhadap Kadar  serat  pangan/fitonutrien.  (B2)  20% merupakan  formula  terbaik  berdasarkan hasil analisis parameter mutu dan berpotensi untuk dikembangkan.
Dari  hasil  uji  antioksidan,  KJ2  dipilih sebagai sediaan terbaik memberikan aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  yakni 43,295±0,09  μg/mL  berpotensi  untuk dikembangkan  lebih  lanjut.  Hal  ini  dinilai dari  perbandingan  aktivitas  antioksidan sediaan uji KJ3 yang juga termasuk katagori sangat kuat, namun pada sediaan KJ2 yang hanya  dengan  penambahan  20%  daging buah  kelapa  muda  sudah  memberikan aktivitas antioksidan yang sangat kuat.

## Uji imunonutrisi
Pada uji imunonutrisi, terjadi peningkatan % indeks organ-organ imunitas limfa  dan  hati  pada  kelompok  II  yakni 0,637±0,19 untuk organ limfa dan 4,270±0,76 untuk organ hati. Jika dibandingkan  dengan  kelompok  I  sebagi kontrol  negatif  (tanpa  perlakuan),  adanya peningkatan  %  indeks  organ  menyatakan terjadinya pembesaran pada organ tersebut Hal  ini  menyatakan  bahwa  hewan  uji  benar sudah  terinduksi  sepsis  dengan  pemberian LPS E.coli 1  mg/kgbb/hari  selama  2  hari secara  i.p.  Peningkatan  %  indeks  organ limfa  dan  hati  pada  kelompok  II  terjadi karena sel-sel pada organ imunitas tersebut mengalami  inflamasi  dan  mensekresikan sejumlah  besar  sel-sel  imunitas  bawaan dan  mediator  inflamansi  sebagai  upaya perlawanan  terhadap  patogen  LPS E.coli untuk  menjaga  homeostatis  kekebalan
tubuh  yang  dampaknya  menyebabkan pembesaran  sel  organ.  Hal  ini  merupakan tahapan pertama dalam permulaan respons inang terhadap patogen melalui aktivasi sel imun bawaan(20).
Penilaian  %  indeks  organ  limfa  dan hati  pada  kelompok  III,  IV,  V  dan  VI  yang diberikan  sediaan  uji  KJ2  dan  KJ3  pada dosis  100;200  mg/kgbb/hari  dibandingkan dengan  kelompok  II  sebagai  kontrol  positif sakit  dan  kelompok  I  sebagai  kontrol negatif. Jika dibandingkan dengan kelompok  kontrol  positif  sakit,  diketahui adanya  %  indeks  organ  yang  berbeda dengan kontrol positif sakit (P<0,05). Hal ini dikarenakan kelompok yang diberikan sediaan  uji  KJ2  dan  KJ3  pada  dosis  100 dan 200 mg/kgbb/hari mengalami perbaikan bobot  organ  berdasarkan  perbandingan dengan  nilai  %  indeks  organ  kelompok kontrol  negatif  yang  tidak  berbeda  secara bermakna  yakni  mendekati  bobot  normal organ  limfa  dan  hati  pada  tikus.  Diduga aktivitas  dari  masing-masing  dosis  mampu memberikan  efek recovery sel-sel  organ limfa  dan  hati  yang  sebelumnya  terinduksi sepsis dengan LPS E.coli dan menetralisasi toksin  LPS E.coli oleh  immunoglobulin  M (IgM) yang telah terbentuk pada hari ke 5-7 dari  pemberian  sediaan  uji  sebagai  asupan imnonutrsi(21). IgM dapat mencegah penempelan  pathogen  terhadap  sel  target dan  meningkatkan  fagositosis  sel  imunitas untuk eliminasi pathogen (22).
Telah  diketahui  buah  kelapa  muda mengandung komponen asam amino seperti      Glutamat  (GLU)  14,50%;4,02% dari  air  dan  daging  buah  kelapa  muda, Arginin  (ARG)  12,75%;  2%  dari  air  dan daging  buah  kelapa  muda,  asam  laurat 31,10%  dari  daging  buah kelapa  muda  dan vitamin C 2,2-3,4 mg/100 ml dari air kelapa muda(2). Adanya kandungan polifenol pada sedian  uji  campuran  daging  dan  air  kelapa dengan  penambahan  air  perasan  jeruk purut,  diduga  bertindak  sebagai  kofaktor yang berperan dalam respon imun terutama sebagai  katalisator  enzim  dan  antioksidan. Selain  itu,  komponen  asam  amino  seperti
Glutamat  (GLU)  memiliki  banyak  peran dalam sistem imun. Suplementasi glutamate dilaporkan  terbukti  memiliki  keuntungan ganda  antara  lain  meningkatkan  retensi nitrogen dan mengurangi kehilangan massa sel  otot,  meningkatkan  fungsi  kekebalan tubuh  sehingga  menurunkan  risiko  infeksi serta  mempertahankan  glutamin  organ. Glutamat  adalah  nutrisi  penting  untuk enterosit  dan  sel  kekebalan  melalui  efek antioksidan dan sitoprotektif (15).
Beberapa  keterbatasan  studi  saat  ini tentang  pemanfaatan  kelapa  ( C.  nucifera ) yang harus diakui adalah :
1. Studi saat ini hanya difokuskan pada efek dari  berbagai  bagian  tanaman  tetapi  tanpa mendemonstrasikan  mekanisme  kerja  dari senyawa yang terkandung didalamnya. 2.  Formulasi  berdasarkan  bagian  tanaman harus  dikembangkan  untuk  selanjutnya dilakukan uji klinis(23).
Dari  penelitian  ini,  sediaan  uji  KJ2 dengan  dosis  100  dan  200  mg/kgbb merupakan  sediaan  uji  yang  tepat  untuk dikembangkan,  karena  memberikan  efek imunonutrisi yang baik. Dari hasil pengujian antioksidan  dan  imunonutrisi  dari  kedua sediian  uji  tersebut  menunjukkan  adanya korelasi  peningkatan  dosis  pada  sediaan terhadap hasil uji yang didapatkan. Sediaan KJ2 dosis 100 mg/kgbb/hari dinilai berpotensi  untuk  dikembangkan  lebih  lanjut karena pada dosis tersebut sudah memberikan hasil terapi yang baik. Pemilihan  sediaan  KJ2  yang  memiliki  nilai prospek untuk dikembangkan jika dibandingkan  dengan  sediaan  uji  KJ3 berdasarkan  adanya  korelasi  peningkatan konsentrasi  campuran  daging  buah  kelapa dan  adanya  penambahan  air  perasan  jeruk purut  pada  sedian  uji  tersebut,  yangmana sediaan  KJ2  yang  diolah  hanya  dari penambahan  20%  daging  kelapa  muda sudah menunjukkan hasil terapi imunonutrisi  yang  baik  pada  hewan  uji terinduksi  sepsis  melalui  aktivitas  senyawa antioksidan yang mampu menjaga hemostatis  sistem  imun  tubuh  ketika terinfeksi sepsis.

## KESIMPULAN
Sediaan  uji  KJ2  dan  KJ3  memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat yakni dengan  nilai  IC50  sebesar  43,295  µg/mL dan 38,842 µg/mL . Kemampuan imunonutrisi
sediaan uji tersebut dipengaruhi  oleh  aktivitas  antioksidan  yang mampu  menghilangkan  potensi  patogen dan  toksin  dari  LPS E.coli pada  keadaan awal  terjadinya  sepsis  dan  memodulasi mekanisme  pertahanan  imunitas  alami  dan adiptif. Aktivitas antioksidan dan imunonutrisi ini berkorelasi dengan peningkatan kosentrasi daging buah kelapa muda dan adanya penambahan air perasan jeruk  purut  yang  digunakan,  mengandung fitonutrien  seperti  polifenol  yang  penting bagi  imunitas.  Sedian  KJ2  dosis  100 mg/kgbb/hari berpotensi untuk dikembangkan  sebagai  agen  imunonutrisi pada kondisi sepsis.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Pulung  ML,  Yogaswara  R.  Oil  Dari
Tanaman  Kelapa  Asal  Papua.  Chem Prog. 2016;9(2):63 –9.
2.   Barlina  R,  Barlina  RBPTK  dan  PL. Potensi  Buah  Kelapa  Muda  Untuk
Kesehatan dan
Pengolahannya. Perspektif. 2016;3(2):46 –60.
3.   Barlina  R.  Pengaruh  Perbandingan  Air Kelapa  Dengan  Penambahan  Daging Kelapa  Muda.  J  Littri.  2007;13(2):73 – 82.
4.   Putra  AP.  Pengaruh  penambahan minyak  jeruk  purut  terhadap  proses penghambatan  ransiditas  pada  minyak kelapa. Universitas Brawijaya; 2016.
5.   Rahmi  U,  Manjang  Y,  Santoni  A.  Profil Fitokimia  Metabolit  Sekunder  Dan  Uji Aktivitas  Antioksidan  Tanaman  Jeruk Purut  (Citrus  histrix  DC)  dan  jeruk  bali (Citrus  maxima  (Burm.f.)  Merr).  J  Kim Unand. 2013;2(2):109 –14.
6.   Swallah  MS, Sun H, Affoh R, Fu H, Yu H.  Antioxidant  Potential  Overviews  of Secondary Metabolites (Polyphenols) in Fruits. Int J Food Sci. 2020;2020.
7.   Al-Juhaimi  FY,  Ghafoor  K.  Bioactive compounds,  antioxidant  and  physico- chemical properties of juice from lemon, mandarin and orange fruits cultivated in Saudi Arabia. Pakistan J Bot. 2013;45(4):1193 –6. 8.   Ching LS, Mohamed S. Alpha-
Tocopherol  Content  in  62  Edible Tropical  Plants.  J  Agric  Food  Chem. 2001;49(6):3101−3105.
9.   Ghasemi K, Ghasemi Y, Ebrahimzadeh MA.  Antioxidant  activity,  phenol  and flavonoid  contents  of  13  citrus  species peels  and  tissues.  Pak  J  Pharm  Sci. 2009;22(3):277 –81.
10.  Bourgou  S,  Ksouri  R,  Bellila  A, Skandrani  I,  Falleh  H,  Marzouk  B. Phenolic  composition  and  biological activities  of  Tunisian  Nigella  sativa  L. shoots  and  roots.  Comptes  Rendus  - Biol. 2008;331(1):48 –55.
11.  Naczk  M,  Shahidi  F.  Extraction  and analysis  of  phenolics  in  food.  J Chromatogr A. 2004;1054(1 –2):95– 111.
12.  Pierre  JF,  Heneghan  AF,  Lawson  CM,
Wischmeyer  PE,  Kozar  RA,  Kudsk  KA. Pharmaconutrition
Review: Physiological  Mechanisms.  J  Parenter Enter Nutr. 2013;37:51S-65S. 13.  McCarthy MS, Martindale RG. Immunonutrition in Critical Illness: What Is the Role? Nutr Clin Pract.
2018;33(3):348 –58.
14.  Vincent JL, Sakr Y, Sprung CL, Ranieri VM,  Reinhart  K,  Gerlach  H,  et  al. Sepsis  in  European  intensive  care units:  Results  of  the  SOAP  study.  Crit Care Med. 2006;34(2):344 –53.
15.  De  Waele  E,  Malbrain  MLNG,  Spapen H.  Nutrition  in  sepsis:  A  bench-to- bedside  review.  Vol.  12,  Nutrients. 2020. p. 1 –16.
16.  Mizock  BA,  Sriram  K.  Perioperative immunonutrition. Expert Rev Clin
Immunol. 2011;7(1):1 –3.
17.  Molyneux  P.  The  Use  of  the  Stable Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant
Activity.  Songklanakarin  J  Sci  Technol. 2004;26(December 2003):211 –9.
18.  Sari  EK,  Wihastuti  TA,  Ardiansyah  W. Probiotik  Meningkatkan  Konsentrasi Hemoglobin  Pada  Tikus  Putih  Yang Diinduksi  Lipopolisakarida  Escherichia Coli. Majalah Kesehatan. 2018;5(1):18 –
25.
19.  Dewi  MK,  Lantika  UA,  Ahmad  S.  Efek Ekstrak  Air  Daun  Sirsak  (Annona Muricata  L)  Terhadap  Distribusi  Lemak
Tubuh  Pada Tikus  Jantan Galur Wistar Model Obesitas. In: Prosiding SNaPP2014  Sains,  Teknologi,  dan
Kesehatan. 2014. p. 81 –8.
20.  Vincent  JL,  Moreno  R,  Takala  J, Willatts S, De Mendonça A, Bruining H, et  al. The  SOFA  (Sepsis-related Organ Failure Assessment) score to describe
organ dysfunction/failure. Intensive Care Med. 1996;22(7):707 –10.
21.  Kadafi  KT,  Wibowo  S.  Differences  in systemic  humoral  immune  response among  Balb/c  mice  administered  with probiotic,  LPS  Escherichia  coli,  and probiotic-LPS  E.  coli.  Iran  J  Microbiol. 2019;11(4):294 –9.
22.  Munasir  Z.  Respons  Imun  Terhadap Infeksi Bakteri. Sari Pediatr. 2016;2(4):193.
23.  Lima  EBC,  Sousa  CNS,  Meneses  LN, Ximenes  NC,  Santos  Júnior  MA, Vasconcelos  GS,  et  al.  Cocos  nucifera (L.)  (arecaceae):  A  phytochemical  and pharmacological review. Vol. 48, Brazilian  Journal  of  Medical  and Biological Research. 2015. p. 953 –64.