Menara Perkebunan 2012  80(2), 48-56
Aktivitas ligninolitik Omphalina sp. hasil isolasi dari TKKS dan aplikasinya untuk dekolorisasi limbah kosmetik
Ligninolytic  activity of Omphalina sp. isolated from EFB and its application for decolorization of cosmetic waste
SUHARYANTO *) , Irma KRESNAWATY, Haryo Tejo PRAKOSO & Deden Dewantara ERIS
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia,  Jl. Taman Kencana No.1 Bogor 16151, Indonesia
Diterima tanggal 1 Maret 2012./disetujui tanggal 4 Juni 2012

## Abstract
White-rot fungi (WRF) are belong to Basidiomycetes group  that  capable  to  degrade  lignin,  because  they produce  extracelullar  ligninolytic  enzymes  such  as  lignin peroxsidase  (Li-P),  mangan  peroxidase  (Mn-P)  and laccase. The ligninolytic activity can be used in bioprocess oxidation  system  such  as  biopulping,  biobleaching  and bioremediation.    The  purposes  of  this  research  were  to determine  the  optimum  conditions  of  growth  and  ligni- nolytic  activity  of Omphalina and to observe its  potential to  decolorize  cosmetics  wastewater. Omphalina sp.  was grown on media of PDA-Remazol Brilliant Blue R (RBBR) and  PDA-Guaiacol  (GU)  at  various  pH  and  temperature conditions.  The  decolorization  of  cosmetic  effluent  was conducted  by  applying Omphalina sp.  at  various  dose  of inoculum.    Decolorization  rate  and  change  of  COD  were observed for eight days . The  results  showed that Ompha- lina sp.  could  grow  and  produce  peroxidase  enzyme  both on  RBBR  and  GU  media  at  pH  4.5-8.5    and  temperature 23-35 0 C.  Optimum  dose  of  inoculum    was  as  much  as 5%    w/v  at  which  the  fungus  was  able  to    decolorize cosmetic  factory  effluent  up  to  92.79%  and  to  decrease COD value up to  48.57 % after eight days of incubation.
[ Keywords  :  White-rot  fungi, Omphalina sp.,  ligninolytic enzyme,  waste decolorization ]

## Abstrak
Jamur  pelapuk  putih  (JPP)  merupakan  jamur kelompok Basidiomycetes yang  mampu  mendegradasi lignin  karena  memproduksi  enzim-enzim  ligninolitik ekstraseluler  seperti  lignin  peroksidase  (Li-P),  mangan peroksidase  (Mn-P)  dan  lakase.    Kemampuan  ligninolitik JPP  dapat  dimanfaatkan  dalam  sistem  oksidasi  bioproses seperti  biopulping,  biobleaching  dan  bioremediasi.  Pene- litian bertujuan menetapkan kondisi optimum pertumbuhan Omphalina sp.  dan  aktivitas  ligninolitik  yang  dihasilkan- nya  serta  mempelajari  potensinya  dalam  mendekolorisasi limbah  cair  kosmetik. Omphalina sp.  ditumbuhkan  dalam media  PDA- Remazol  Brilliant  Blue R  (RBBR)  dan PDA- Guaiakol (GU) pada berbagai berbagai variasi pH dan suhu
Percobaan  dekolorisasi  limbah  cair  kosmetik  dilakukan dengan  aplikasi  inokulum  dalam  berbagai  dosis.  Laju dekolorisasi  dan  perubahan  COD  diamati  selama  delapan hari. Hasil penelitian menunjukkan Omphalina sp. tumbuh dan  menghasilkan  enzim  peroksidase,  baik  pada    media RBBR  maupun  GU  pada  pH  4,5-8,5  dan  suhu  25-35 0 C. Dosis  optimum  aplikasi Omphalina sp.  adalah  5%  (b/v) yang mampu mendekolorisasi limbah cair pabrik kosmetik hingga  92,79%    dan  menurunkan  COD  48,57%  setelah delapan hari.
[ Kata  kunci  :  Jamur-pelapuk  putih, Omphalina sp.,  enzim ligninolitik, dekolorisasi limbah]

## Pendahuluan
Penggunaan  jamur  sebagai  agens  dekolorisasi limbah  telah  banyak  dilaporkan,  di  antaranya  jamur dari  kelompok  Deutromiset Fusarium dan Peni- cillium (Seyis & Subasioglu, 2008), Phialophora sp., Penicillium sp ., dan Cladosporium sp. (Torres et al ., 2011). Jamur  dari  kelompok  Basidiomiset  seperti jamur  pelapuk  putih  (JPP)  juga  dilaporkan memiliki kemampuan  mendekolorisasi  zat  warna. Jamur tersebut  menghasilkan  enzim-enzim  ligninolitik ekstraseluler  seperti  lignin  peroksidase  (Li-P), mangan  peroksidase  (Mn-P)  dan  lakase  (Wesenberg et  al., 2003;  Siripong et  al .,  2009;  enzim-enzim penghasil  H 2 O 2 (H 2 O 2 - generating  enzymes ),  glioksal oksidase  dan  fenol  oksidase  (Katun et  al .,  2012). Lignin  dan  senyawa-senyawa  terlarut  dalam  bahan berkayu  didegradasi  secara  sempurna  menjadi  CO 2 dan H 2 O dan meninggalkan warna putih dari selulosa serta  hasil  akhir  yang  tidak  berbahaya  (Kim et  al ., 2002a)  .    Enzim  Li-P  dan  Mn-P  memiliki  aktivitas oksidatif  yang  tinggi  dan  spektrum  yang  luas terhadap  substrat  lignin  (Higuchi,  2004).  Lakase merupakan  enzim  yang  mengandung  tembaga ( copper-containing glycoprotein ) yang dapat mengoksidasi  bermacam-macam  senyawa  fenolik termasuk lignin melalui pembentukan radikal fenoksi melalui  oksidasi  satu-elektron  (Widsten  &  Laine, 2002).  Lakase  juga  dapat  mengoksidasi  senyawa
*) Penulis korespondensi: suharyanto_biotek@yahoo.com
Aktivitas ligninolitik Omphalina sp. hasil isolasi dari TKKS dan ............... ( Suharyanto et al.)
nonfenolik  pada  kondisi  tertentu  (Gochev  & Krastanov, 2007). Kemampuan enzim-enzim tersebut dalam memutihkan ( biobleaching ) senyawa-senyawa dimanfaatkan  dalam  bioproses  yang  melibatkan sistem  oksidasi  seperti biopulping,  biobleaching, bioremediasi  serta  pengolahan  limbah  cair  pabrik kertas  dan  tekstil  (Perez et  al .,  2002).    Untuk  me- manfaatkan  JPP  sebagai  agen  bioproses,  kondisi optimal  pertumbuhan  dan  aktivitas  ligninolitik  JPP tersebut perlu diketahui.
Kosmetik  dapat  diartikan  sebagai  bahan  atau campuran bukan termasuk obat yang digunakan oleh manusia pada anggota  badan untuk  menambah  daya tarik  atau  mempercantik  diri.  Komposisi  bahan kosmetik dapat beragam, secara umum adalah bahan dasar,  bahan  aktif,  bahan  penstabil  emulsi  dan pelengkap  salah  satunya  adalah  pewarna  kosmetik. Pewarna  kosmetik  baik  alami  maupun  buatan  yang digunakan  sebagai  penyusun  kosmetik  mengakibat- kan  limbah  yang  dihasilkan  berwarna  hitam  pekat sehingga sulit dihilangkan.
Penanganan  limbah  cair  kosmetik  umumnya dilakukan  dengan  sistem  kolam  ( ponding  system ). Walaupun  sistem  kolam  cukup  sederhana  dan  biaya operasinya murah, eradikasi zat warna dalam limbah dengan  sistem  kolam  perlu  waktu  cukup  lama    dan kurang  efektif    terlihat  dari  limbah  keluar  kolam yang  masih  berwarna  pekat  (Zahrim et  al .,  2009). Aggelis et  al .  (2003)  melaporkan  bahwa  enzim lakase  dan  MnP  dari Pleurotus  ostreatus mampu mendekolorisasi  limbah  pengolahan  minyak  zaitun yang  banyak  mengandung  senyawa  fenolik.  Enzim LiP  dan  MnP  dari  jamur  tersebut  mengkatalis oksidasi  lignin,  senyawa  fenolik  terhalogenasi, senyawa  hidrokarbon  aromatik  polisiklik,  serta beberapa  senyawa  aromatik  lain.  Selain  dapat mendegradasi  lignin,  enzim  lakase  juga  dapat  men- dekomposisi  pewarna  tekstil  (Neifar et  al., 2011). Penambahan  inokulan Omphalina sp.  diharapkan dapat mempercepat waktu pengolahan, memperbaiki kualitas limbah dan menghilangkan zat warna dalam limbah  kosmetik.  Penelitian  bertujuan  menetapkan kondisi  optimum  pertumbuhan Omphalina sp.  dan aktivitas  ligninolitik  yang  dihasilkannya  serta  mem- pelajari  potensinya  dalam  mendekolorisasi  limbah cair kosmetik skala lab.

## Bahan dan Metode
Penelitian dilakukan di Balai Penelitian Biotek- nologi  Perkebunan  Indonesia  (BPBPI).  Isolat Omphalina sp.  merupakan  koleksi  BPBPI  hasil isolasi dari tandan kosong kelapa sawit (TKKS) dari pabrik  kelapa  sawit  (PKS)  Kebun  Kertajaya,  PTPN VIII  dan  dipelihara  dalam  medium potato  dextrose agar (PDA).  Limbah  kosmetik  berasal  dari  satu pabrik kosmetik di Tangerang, Banten.
Optimasi kondisi  kultur Omphalina sp.
Optimasi  pH  enzim  ligninolitik  ekstraseluler dilakukan  dengan  mengkulturkan Omphalina sp. pada  media  PDA  yang  ditambahkan  guaiakol  (GU) 0,01% atau remazol brilliant blue R (RBBR) 0,05%. Media  PDA-GU  maupun  PDA-RBBR  yang  telah disterilkan  pada  suhu  121 o C  selama  15  menit, ditambahkan  HCl  1  N  atau  NaOH  1  N  steril  secara aseptis sesuai pH yang diinginkan, yaitu 2,5; 4,5; 6,5; dan 8,5. Kultur miselium Omphalina sp. pada media PDA  yang  diinkubasikan  pada  suhu  ruang  (28  – 30 o C) umur tujuh hari dicuplik (diameter 0,5 cm) dan diinokulasikan  di  tengah-tengah  cawan  petri  berisi media PDA-GU dan PDA-RBBR yang telah ditetap- kan pH-nya. Selanjutnya kultur diinkubasi pada suhu 28, 35, dan 40 o C selama tujuh hari. Pertumbuhan Omphalina sp.  diamati  dengan mengukur  perkembangan  diameter  koloni  pada kedua medium tersebut.  Aktivitas lignin peroksidase diamati  secara  visual  dengan  menetukan  tingkat difusi  warna  biru  yang  lebih  pekat  pada  koloni  atau sekeliling koloni hingga dekolorisasi warna biru pada seluruh  media  PDA-RBBR  (Gambar  1).    Aktivitas lakase ditentukan secara  visual  berdasarkan tingkat difusi  warna  cokelat  muda  hingga  cokelat  pekat  di sekitar koloni (Gambar 2)

## Penyiapan  inokulum  untuk  dekolorisasi  limbah kosmetik
Inokulum  disiapkan  dari  media  biji  milet  yang dimasak  sampai  biji  tersebut  pecah,  setelah  dingin sebanyak  200  g  milet  dimasukkan  ke  dalam  botol selai dan  disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu
dp dk
Gambar 1. Pengukuran diameter koloni miselium jamur dan dekolorisasi/akumulasi    warna  media  PDA- RBBR (dp = diameter pertumbuhan jamur (cm); dk = diameter  zona dekolorisasi zona (cm)).
Figure  1.  Fungi  mycelium  diameter  measurement  and decolorization  of PDA-RBBR media  (dp  = diameter growth of fungi (cm); dk = diameter of decolorization zone (cm)).
121 o C, tekanan 1,2 atm selama 15 menit. Media biji milet  steril  diinokulasi  dengan  1x1  cm  kultur miselium Omphalina sp.,  kemudian  diinkubasikan pada  suhu ruang  selama  2  minggu.  Kultur  miselium dalam  media  milet  selanjutnya  digunakan  sebagai sumber inokulum.

## Pembuatan media serutan kayu
Kayu  karet  muda  diserut,  direndam  dalam  air kran selama satu malam dan dijemur sampai serutan kayu  tersebut  kondisinya  tidak  terlalu  kering  juga tidak  terlalu  basah  (lembab).  Selanjutnya  sebanyak 1 kg serutan kayu karet dimasukkan ke dalam plastik tahan panas dan ditimbang sesuai jumlah bobot yang diinginkan.  Kemudian  disterilkan  dalam  autoklaf pada  suhu  121 o C, tekanan  1,2  atm  selama  15  menit. Omphalina sp.  yang  sudah  tumbuh  dalam  media milet  (50  g)  diinokulasikan  ke  media  serutan  kayu dan  diinkubasikan  selama  tiga  minggu  pada  suhu ruang  (28 – 30 o C). Omphalina sp.  yang  tumbuh  pada  media serutan  kayu,  diaplikasikan  dalam  limbah  kosmetik (2  L)  dengan  lima  perlakuan  konsentrasi,  yaitu  :  1; 2,5; 5; 7,5 dan 10% (b/v), dalam ember dengan cara mencelupkannya  dengan  disertai  dengan  aerator dengan  laju  50  gelembung  per  menit.  Sampel disentrifigasi dengan kecepatan 4.000 rpm selama 20 menit  kemudian  supernatan  diamati  perubahan warnanya  (dekolorisasi  limbah)  dengan  mengamati perubahan  absorbans  pada  panjang  gelombang  525 nm.  Peubah  yang  diamati lainnya  adalah nilai  COD, kandungan logam  berat  (AAS),  dan  pH  setelah  2,  4, 6 dan 8 hari.

## Hasil dan Pembahasan
Optimasi pertumbuhan dan aktivitas enzim ligninolitik
Pertumbuhan Omphalina sp.  yang  diukur berdasarkan  perkembangan  diameter  koloni  pada media  PDA-RBBR  pH  4,5;  6,5  dan  8,5  mencapai optimum pada hari ke-6-7 (Gambar 3).  Pada pH 4,5 Omphalina sp. awalnya tumbuh lebih lambat, namun diameter koloni pada hari ke-6 dan ke-7 hampir sama dengan  diameter  koloni  pada  pH  6,5  dan  8,5, sedangkan  pada  pH  2,5, Omphalina sp.  tidak tumbuh.  Berdasarkan  data  tersebut Omphalina sp. mempunyai  pH  optimum  pertumbuhan  pada  media PDA-RBBR pada nilai pH 6.5 – 8.5.
Pertumbuhan Omphalina sp.  pada media  PDA- GU (Gambar 4) mampu tumbuh pada pH 4,5 hingga pH  8,5,  sedangkan  pada  pH  2,5  tidak  mengalami pertumbuhan.  Pertumbuhan Omphalina sp.  pada media  PDA-GU  mencapai  optimum  pada  hari  ke  7 dengan tingkat keasaman yakni pada pH 4,5 dan pH 8,5.  Hal  ini  memperkuat  Nishida et  al .  (1988)  yang menyatakan bahwa JPP mampu tumbuh pada rentang pH 3-9. Pertumbuhan dalam media PDA-GU relative lebih  lambat  daripada  pertumbuhan  pada  media PDA-RBBR.  Perbedaan  kurva  pertumbuhan  ini kemungkinan  disebabkan  oleh  perbedaan  struktur kimia yang lebih kompleks pada guaiacol dibanding- kan RBBR.

## Aktivitas enzim ligninolitik secara kualitatif
Aktivitas  enzim  ligninolitik  ekstraseluler  pada media  PDA-GU  (uji  lakase)  dan media  PDA-RBBR (uji peroksidase) diamati pada berbagai nilai pH (2,5; 4,5;  6,5,  dan  8,5)  dan  suhu  (28,  35,  dan  40ºC). Penggunaan  suhu  inkubasi  hingga  40 o C  dilakukan berdasarkan  sifat  JPP  yang  termotoleran  dan  dapat tumbuh  pada  suhu  antara  25-40 o C. Omphalina sp. diketahui  aktif  menghasilkan  lakase  dan  Mn-P (Widiastuti et  al. ,  2008)  yang    berpotensi  sebagai agen biobleaching dan  dekolorisasi.  Hasil  penga- matan  yang  dilakukan  pada hari  ke-7  disajikan  pada Tabel  1.  Uji  aktivitas  enzim  peroksidase  secara kualitatif pada media PDA-RBBR pada berbagai pH menunjukkan  bahwa Omphalina sp.    pada  pH  4,5; 6,5;  dan  8,5  masing-masing  memilki  diameter dekolorisasi  warna  biru  yang  sama,  yaitu  sebesar 8  cm  dan  intensitas  dekolorisasi  yang  sama.  Ber- dasarkan data tersebut. dapat diduga bahwa aktivitas enzim  peroksidase  untuk Omphalina sp  tidak  terlalu dipengaruhi  oleh  pH.  Dekolorisasi  terjadi  karena adanya  reaksi  redoks  antara  pewarna  RBBR  dan enzim ekstra seluller fungi (Borohov & Rothenburger, 2000). Enzim peroksidase Omphalina sp. optimum pada suhu 28 o C,  sedangkan  pada suhu
dp dk
Gambar  2.    Pengukuran  diameter  miselium  jamur  dan proses dekolorisasi warna cokelat pada media PDA-GU  (dp  :  diameter  pertumbuhan  fungi (cm),  dk:  diameter  difusi  warna  cokelat (cm)).
Figure 2. Fungi  mycelium  diameter  measurement  and decolorization  process  of  brown  colour  in PDA-GU media (dp: diameter  growth  of fungi (cm),  dk: brown  colour  difussion diameter (cm)).
Aktivitas ligninolitik Omphalina sp. hasil isolasi dari TKKS dan ............... ( Suharyanto et al.)
Gambar 3.  Kurva pertumbuhan Omphalina sp. pada media PDA-RBBR pada suhu 28 o C.
Figure 3.   The growth curve of Omphalina sp. cultured on PDA-RBBR media at 28 o C .
Gambar 4.  Kurva pertumbuhan Omphalina sp. pada media PDA-GU suhu 28º C
Figure 4.  The growth curve of Omphalina sp. cultured on PDA-GU media at 28 o C
35ºC  masih  memiliki  aktivitas  peroksidase,  tetapi dengan  diameter  dekolorisasi  yang  lebih  kecil dibanding dari pada suhu 28ºC, yaitu 6,0 cm.
Perubahan  intensitas  warna  yang  terjadi  me- nunjukkan  bahwa    isolat  JPP  tersebut  memiliki aktivitas  enzim  ligninolitik.  Aktivitas  tertinggi  di- tandai  dengan  semakin  pudarnya  warna  (deko- lorisasi)  dari  senyawa  sintetik  RBBR.    Adanya degradasi  senyawa  aromatik  termasuk  lignin  dapat terlihat dari penurunan intensitas warna yang dihasil- kan. Hal ini terjadi karena adanya pemecahan gugus kromofor  pada  beberapa  lignin.  Beberapa  hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  proses  degradasi lignin  yang  menyebabkan  terjadinya  dekolorisasi melibatkan  enzim  peroksidase  (Kim et  al., 2002b; Kiiskinen et al., 2004).
Aktivitas  enzim  ligninolitik Omphalina sp. pada  media  PDA-GU  (Tabel  2)  memiliki  aktivitas tertinggi  pada  pH  8,5,  yaitu  mempunyai  diameter warna  cokelat    sebesar  8,0  cm  dengan  intensitas warna  yang  tinggi.  Suhu  optimum Omphalina sp.
berada  pada  suhu  28ºC.  Diameter  akumulasi  warna cokelat  yang  terbentuk  pada  media  PDA-GU dipengaruhi juga oleh pertumbuhan miselium jamur. Intensitas  akumulasi  warna  coklat  yang  dihasilkan menunjukkan  aktivitas  enzim  lakase  yang  lebih tinggi, sehingga pemilihan aktivitas enzim lebih pada terbentuknya  intensitas  yang  lebih  tinggi  daripada diameter  warna  yang  lebih  besar  tetapi  intensitas akumulasi warna coklat yang lebih tipis. Berdasarkan data  yang  tersaji  pada  Tabel  1  dan  2,  dapat disimpulkan  bahwa  aktivitas  enzim  lakase  selain dipengaruhi oleh pH juga dipengaruhi oleh suhu.
Uji  lakase  positif  ditandai  dengan  perubahan warna media pada koloni atau di sekitar koloni pada media  PDA-GU.  Terbentuknya  warna  cokelat  pada media  PDA-GU,  disebabkan  terjadinya  proses degradasi  guaiakol  oleh  enzim  lakase  dari  JPP.  JPP yang  menyebabkan  warna  cokelat  pada  media  per- tumbuhan  yang diberi indikator  guaiakol  merupakan jamur pendegradasi lignin yang menghasilkan enzim lakase (Atalla et al., 2010).  Adanya  aktivitas  enzim
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7
Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 6,5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7
Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 2,5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 4,5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 8,5 Waktu inkubasi/ Incubation period (hari/day) D ia m et er ko lon i( cm ) C ol on y di am et er 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0             1           2            3           4            5           6            7 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (hari ke-) D ia m e te r (c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 Waktu inkubasi/ Incubation period (hari/day) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 6,5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (Hari ke-) D ia m e te r (c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 2,5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7
Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 4,5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (hari ke-) D i a m e t e r ( c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 pH 8,5 D ia m et er ko lon i( cm ) C ol on y di am et er 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Waktu Inkubasi (Hari ke-) D ia m e te r (c m ) pH 2,5 pH 4,5 pH 6,5 pH 8,5 0             1           2            3           4            5           6            7
Menara Perkebunan 2012  80(2), 48-56
Tabel 1.    Aktivitas enzim ligninolitik Omphalina sp. yang dikulturkan pada media PDA-RBBR pada berbagai nilai pH dan suhu pada inkubasi selama tujuh hari.
Table 1 . Ligninolytic enzyme activity of Omphalina sp. c ultured on PDA-RBBR medium at various pH and temperature at seven days incubation period.
Pengamatan Observation Keasaman (pH) media PDA-RBBR ( PDA-RBBR medium adjusted at pH ) 2,5 4,5 6,5 8,5 Diameter koloni (cm) Diameter of colony 0,0 8,0 8,0 8,0 Intensitas dekolorisasi Decolorization intensity - ++ ++ ++ Pengamatan Observation Suhu inkubasi ( Incubation temperature ) 28 o C 35 o C 40 o C Diameter koloni (cm) Diameter of colony 8,0 6,0 0 Intensitas dekolorisasi Decolorization intensity + ++ - Keterangan/ Note : +      Difusi warna biru muda-tua yang terbentuk tepat di bawah cuplikan inokulum bila dilihat dari bagian bawah cawan petri. ( Light to dark blue diffusion colour is formed below the inoculum footage or blue decolorization is occurred if seen from the bottom side  of the dish).
++    Difusi warna biru muda-tua yang terbentuk pada hampir seluruh koloni jamur bila dilihat dari bagian bawah petri dan terjadi dekolorisasi warna biru disekitar koloni. ( Blue to dark blue diffusion colour is formed in almost  side entire at the bottom of the dish on the colony blue decolorization occurred).
Tabel 2.   Aktivitas enzim ligninolitik Omphalina sp. yang dikulturkan pada media PDA-GU dengan berbagai nilai pH dan suhu pada inkubasi selama tujuh hari.
Table 2. Omphalina sp. ligninolytic activity cultured on PDA-GU medium at various pH and temperature at seven days incubation period.
Pengamatan Observation Diameter koloni (cm) dan intensitas akumulasi warna cokelat pada pH- Colony diameter and accumulation of brown colour intensity at pH- 2,5 4,5 6,5 8,5 Diameter koloni (cm) Diameter of colony 0,0 7,0 5,0 8,0 Intensitas dekolorisasi Decolorization intensity - ++ +++ +++ Pengamatan Observation Suhu inkubasi ( Incubation temperature ) 28 o C 35 o C 40 o C Diameter koloni (cm) Diameter of colony 8,0 6,5 0 Intensitas dekolorisasi Decolorization intensity +++ +++ -
Keterangan/ Note : ++   Difusi warna cokelat muda-tua yang terbentuk  pada  hampir  seluruh koloni jamur bila dilihat dari bagian bawah petri. ( Brown to dark brown-diffusion color are formed in almost surounding fungal colonies when viewed from inversed petridish ).
+++   Difusi warna cokelat muda-tua pada sekitar koloni dan dapat terlihat dari bagian atas petri atau seluruh koloni menutupi  agar  dan  bagian bawah agar berwarna cokelat. ( Brown to dark  brown-diffusion color are formed surrounding colonies and can be seen from the top of a petridish and brown color also formed at the bottom).
Aktivitas ligninolitik Omphalina sp. hasil isolasi dari TKKS dan ............... ( Suharyanto et al.)
ligninolitik dari jamur yang ditumbuhkan pada media lignin  dapat  mengkatalisis  terbentuknya  radikal fenoksi yang menyebabkan terjadinya oksidasi lignin dan  terjadinya  polimerisasi  sering  dipicu  oleh aktivitas enzim oksidase.

## Dekolorisasi limbah cair pabrik kosmetik
Proses  dekolorisasi  limbah  cair  kosmetik  dapat dipercepat  dengan  aplikasi Omphalina sp.  Setelah perlakuan, limbah cair kosmetik segar yang berwarna hitam   kemerahan  dengan   nilai   absorbansi   0,72
mengalami  dekolorisasi  dengan  cepat  pada  hari kedua,  yaitu  sebesar  82,86  -  88,57%.  Pada  inkubasi selanjutnya laju dekolorisasi mulai menurun (Gambar 5).  Setelah inkubasi selama delapan hari, dosis  inokulum  5%  menghasilkan  dekolorisasi  yang nyata  yaitu  sebesar  92,7%  (P  <  0,05).  Berdasarkan pengamatan  diketahui  bahwa  peningkatan  dosis inokulum  hingga  10%  tidak  meningkatkan  deko- lorisasi secara nyata. Perubahan warna visual limbah cair  industri  kosmetik  setelah  perlakuan  dengan Omphalina sp.  selama  delapan  hari  dapat  dilihat pada Gambar 6.
Gambar 5.  Proses dekolorisasi oleh Omphalina sp. selama delapan hari inkubasi pada berbagai konsentrasi.
Figure 5. Decolorization process of Omphalina sp . during eight days incubation period at various concentrations.
0,70 0,50 0,45 0,40 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0 2                       4                    6                        8 Konsentrasi ( Concentration ) 1%
2,5% 5%
7,5% 10% Kontol/ Control
Waktu/ Period (hari/ days ) A bs or ba n si / A b sor b anc e λ = 52 5 nm
53
Gambar 6.  Dekolorisasi dan penurunan nilai COD pada limbah cair kosmetik dengan berbagai
konsentrasi Omphalina sp. pada inkubasi hari ke delapan.
Figure  6.      Cosmetics  wastewater  decolorization  and  decreasing  of  COD  value  at  various concentrations of Omphalina sp. at eight days incubation.
D ekol or is as i/ D ec o lor iz a ti on (%) P enu runa n ni la n C O D ( C O D de cr eas ing v a lu e ) (% ) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 kontrol           1,0           2,5            5,0              7,5            10 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Menara Perkebunan 2012  80(2), 48-56
Dosis  inokulum  optimal  dalam  penelitian  ini  lebih tinggi dari pada yang dilaporkan Vaithanomsat et al . (2010) yaitu sebesar 2% menggunakan JPP Datronia sp.  KAPI0039.    Namun,  tingkat  dekolorisasi  yang dapat dicapai oleh Vaithanomsat et al . (2010) pada zat  warna reactive  blue  19 dan reactive  black  5 (RB5)  adalah  88%  yang  diikuti  dengan  meningkat- nya aktivitas lakase.
Penurunan  nilai  absorbansi  sampel  yang  diberi perlakuan  dengan Omphalina sp.  disebabkan  oleh degradasi campuran senyawa zat warna yang diguna- kan  dalam  produksi  kosmetik  ( pigment  green  8, solvent  red  3, dan  sebagainya)  oleh  aktivitas  enzim- enzim  yang  dihasilkan  oleh Omphalina sp.  meng- hasilkan  enzim  lakase  (E.C.1.10.3.2.;  benzendiol: oksigen  oksidoreduktase)  atau  fenol  oksidase  yang mampu  mengoksidasi  senyawa-senyawa  seperti  zat warna  menghasilkan  CO 2 dan  H 2 O.  Menurut Awaludin et  al (2001)  dekolorisasi  zat  warna  oleh jamur  secara  umum  terjadi  melalui  proses  adsorpsi pada  miselium  sebagai  tingkat  awal  dan  selanjutnya degradasi oleh enzim ekstraseluler.  Dominasi enzim lakase  dalam  proses  dekolorisasi  ini  dikarenakan enzim  lakase  mampu  mengoksidasi  ikatan  azo (-N=N-)  yang  merupakan  gugus  kromofor  menjadi gugus OH dan N 2 (Octavio et al., 2006).
Perlakuan  aerasi  akan  meningkatkan  partum- buhan Omphalina sp. sehingga aktifitas  metabolism- nya (termasuk produksi enzim) meningkat. Penurunan  absorbansi  yang  terjadi  pada  perlakuan kontrol,  dimungkinkan  karena  adanya  mikroba pengurai  alami  yang  sudah  terdapat  dalam  limbah yang  diaktivasi  dengan  perlakuan  aerasi,  sehingga mikroba-mikroba tersebut lebih aktif dalam mengurai  zat-zat  warna  yang  ada  pada  limbah  cair industri kosmetik tersebut.

## Perubahan nilai COD
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  perlakuan Omphalina sp.  menyebabkan  penurunan  nilai  COD limbah cair pabrik kosmetik (Gambar 6). Konsentrasi 1% dapat menurunkan nilai COD limbah cair pabrik kosmetik  sebesar  8,5%,  begitu  juga  dengan  kon- sentrasi 2,5; 5; 7,5 dan 10% yang dapat menurunkan nilai  COD  masing-masing  42,8;  48,5;  68,5  dan 91,4  %  sedangkan  pada  kontrol  COD  menurun sebesar 5,7%.  Shertate & Thorat (2012) melaporkan bahwa  penggunaan  agen  biologis Marinobacter algicola mampu  menurunkan  COD  dari  larutan  zat warna  tekstil mordant  orange-1 sampai  90%. Penurunan nilai COD ini disebabkan oleh terurainya senyawa-senyawa  zat  warna  limbah  oleh  perlakuan Omphalina sp . dan  aerasi.  Limbah  kosmetik  selain mengandung  zat  warna  juga  terdapat  sisa  bahan- bahan  lain  seperti  surfaktan,  pelembab,  pengental, dan  pengisi.  Dengan  demikian,  penurunan  deko- lorisasi  tidak  sebanding  dengan  penurunan  COD. Perlakuan  dengan Omphalina sp.  secara  umum menyebabkan penurunan nilai COD yang lebih tinggi dibandingkan  dengan  kontrol.  Semakin  tinggi pemberian Omphalina sp.  penurunan  nilai  COD semakin  besar.  Hal  ini  dapat  dipahami  karena semakin  besar  konsentrasi Omphalina sp.  berarti semakin  banyak  kontak  antara  miselium Omphalina sp. dengan limbah sehingga penguraian limbah lebih efektif.    Nilai  COD  limbah  terendah    pada  konsen- trasi Omphalina sp.  10%  adalah  sekitar  240 mg/L. Nilai ini masih berada di atas nilai standar nilai baku limbah  cair  industri  yaitu  100  mg/L  (KLH  03/ MENLH/1998).  Perlakuan  dengan Omphalina sp. dan  aerasi  merupakan  perlakuan  pertama  atau perlakuan  primer.  Untuk  menurunkan  nilai   COD
Gambar 7. Perubahan warna limbah cair pabrik kosmetik yang diberi perlakuan dengan Omphalina sp. : Limbah awal, (S), Kontrol (K), perlakuan dengan pemberian inokulum Omphalina sp.  Sebanyak  1, 2.5, 5, 7.5 dan 10%  setelah inkubasi selama delapan hari.
Figure 7.  The colour change of cosmetic factory effluent after treated by Omphalina sp. initial effluent (S), control (K), use of Omphalina sp.  inoculum at 1, 2,5, 5, 7,5 and 10%  after incubation for eight days.
Aktivitas ligninolitik Omphalina sp. hasil isolasi dari TKKS dan ............... ( Suharyanto et al.)
sesuai  dengan  baku  mutu  limbah  cair  industri  di- perlukan perlakuan lanjutan yaitu perlakuan sekunder  atau  tersier,  misalnya  dengan  filtrasi dengan zeolit, pasir dan absorpsi eceng gondok.
Sampel  limbah  cair industri  kosmetik  memiliki pH  awal  5,  setelah  diberi  perlakuan Omphalina sp. dan  aerasi  pH  tersebut  naik  menjadi  6. Omphalina sp. adalah jamur yang mampu tumbuh pada pH asam antara 4,5 – 5,5. Hal ini berarti pH limbah awal dapat memberikan  kondisi  yang  ideal  untuk  pertumbuhan jamur tersebut sehingga jamur dapat tumbuh dengan baik  dan  mampu  menurunkan  kepekatan  warna limbah cair industri kosmetik tersebut dengan efektif. Naiknya  pH  limbah  tersebut  setelah  perlakuan disebabkan  terbentuknya  senyawa-senyawa  yang bersifat  basa  atau  CO 2 yang  membentuk  senyawa karbonat. Keberadaan logam berat dalam limbah cair industri  kosmetik  akan  mengganggu  pertumbuhan jamur Omphalina sp.  Oleh  karena  itu  dalam penelitian  ini  diperiksa  kandungan  logam  berat  Pb, As  dan  Hg  (data  tidak  disampaikan).  Logam  berat selain  dapat  mengganggu  pertumbuhan  jamur Omphalina sp.  juga  dapat  mencemari  lingkungan serta  dapat  mencemari  organisme  lain.  Logam  berat kemungkinan  digunakan  untuk  pro  oksidan  dalam konsentrasi  sangat  kecil.  Hasil  penelitian  ini menunjukan bahwa ketiga jenis logam tersebut tidak terdeteksi dengan instrumen Spektrofotometer Serapan Atom (SSA).

## Kesimpulan
Omphalina sp.  tumbuh  dan  menghasilkan enzim  peroksidase  dan  lakase  dengan  baik  pada media  PDA-RBBR  dan  PDA-GU  pada  pH  4,5-8,5 suhu  25-35 0 C.  Isolat  ini  berpotensi  dalam  men- dekolorisasi  limbah  cair  kosmetik  dengan  perlakuan aerasi untuk mengoptimumkan pertumbuhan Omphalina sp. Dosis optimum Omphalina sp. untuk dekolorisasi  limbah  kosmetik  adalah  5%  b/v  dan inkubasi pada suhu ruang selama delapan hari.

## Daftar Pustaka
Aggelis  G,  C  Ehaliotis,  F  Nerud,  I  Stoychev,  G  Lyberatos
&  G  Zervakis  (2002).    Evaluation  of  white-rot  fungi for detoxification and decolorization of effluents from the green olive debittering process. Appl Microb and Biotech 59 (2-3), 353-360.
Atalla  M,  HK  Zeinab,    RH  Eman,    AY  Amani  & AA  Abeer    (2010).  Screening  of  some  marine-derived fungal  isolates  for  lignin  degrading  enzymes  (LDEs) production. Agricul Biol J of North America 1(4), 591- 599.
Borohov    O  &  S  Rothenburger  (2000).  Rapid  dye decolorization  method  for  screening  potential  wood preservatives. Appl  Environ & Microb 66(12), 5457– 5459.
Gochev  VK  &  AI  Krastanov  (2007).  Fungal  laccases (review). Bulgarian J Agric Sci 13, 75-83.
Higuchi T (2004). Microbial degradation of lignin: Role of lignin  peroxidase,  manganese  peroxidase,  and  laccase.
In : Proc  Japan  Academy 80 (5), 204-214.
Khatun  S,  MD  Ashraduzaman,    MR  Karim,  F  Pervin, N  Absar  &  A  Rosma  (2012).  Purification  and characterization  of  peroxidase  from Moringa  oleifera leaves. Bio Res 7 (3), 3237-3251.
Kiiskinen  LL,   M  Ratto  &  K  Kruus  (2004).  Screening  for novel  laccase-producing  microbes. J  Appl  Microb 97(3), 640-646.
Kim  K,  Y  Leem,  K  Kim,  K  Kim  &  H  Choi  (2002a). Transformation  of  the  medicinal  basidiomycete Trametes  versicolour  to  hygromycin  B  resistance  by restriction  enzyme  mediated  integration. MS  Microb Lett 209, 273-276.
Kim  Y,  C  Nam-Seok  C,  E  Tae-Jin  &  W  Shin    (2002b). Purification  and  characterization  of  a  laccase  from Cerrena  unicolor and  its  reactivity  in  lignin degradation. Bull of Korean Chem Soc 23(7), 985-989.
Neifar  M,  A  Jaouani,  A  Kamoun,    R  Ellouze-Ghorbel  &
S    Ellouze-Chaabouni  (2011).  Decolorization  of solophenyl  red  3bl  polyazo  dye  by  laccase-mediator system: optimization through response surface methodology. Enzyme Res 2011 8p.
Nishida  T,  Y  Kashino,  A  Mimura    &  Y  Takahara  (1988).
Lignin biodegradation by wood rotting fungi. Mokuzai Gakkaki 34, 530-536.
Octavio  LC,  P  Pérez  Ma,  C  Irma,  BRJ  Ricardo  & VO Francisco (2006). Laccase. Advances in Agricultural & Food Biotechnology, 2006, 323-340.
Perez  J,   J  Munoz-Dorado,    T  de la  Rubia  & J   Martı´nez (2002).  Biodegradation  and  biological  treatments  of cellulose,  hemicelluloses  and  lignin:  an  overview. Internat Microb 5, 53–63.
Seyis  I  &  T  Subasioglu    (2008).  Comparison  of  live  and dead  biomass  of  fungi  ondecolorization  of  methyl orange. African J  Biotech 7 (13), 2212-2216.
Shertate RS & P Thorat (2012).  Decolorization of mordant orange-1 by Marinobacter algicola MO-17. J Biol Sci 12 (1), 1-15.
Siripong  P,  B  Oraphin,  T  Sanro  &  P    Duanporn  (2009).
Screening  of  fungi  from  natural  sources  in  Thailand for  degradation  of  polychlorinated  hydrocarbons. American-Eurasian J   Agricult    &  Environmen    Sci (4),  466-472.
Torres  JMO,  V  Christine,  LS  Cardenas,  LS  Moron  LS, AP  Guzman  AP  &  TE  Cruz    (2011).  Dye decolorization  activities  of  marine-derived  fungi isolated  from  Manila  Bay  and  Calatagan  Bay, Philippines. Philippine J Sci 140 (2), 133-143.
Vaithanomsat  P,  W  Apiwatanapiwat,  O  Petchoy  &
J  Chedchant (2010).  Production  of  ligninolytic enzymes  by  white-rot  fungus Datronia sp.  API0039 and  their  application  for  reactive  dye  removal. Internat  J  Chem Engin 2010, 6p.
Wesenberg  D,  I  Kyriakides,  SN  Agathos  (2003).    White- rot  fungi  and  their  enzymes  for  the  treatment  of industrial dye effluents. Biotech Adv 22, 161–187.
Widiastuti H, Suharyanto, A Wulaningtyas & Sutamihardja  (2008).  Activity  of  ligninolytic enzymes  during  growth  and  fruiting  body  develop- ment of white rot fungi Omphalina sp. and Pleurotus ostreatus . Hayati 5 (4), 140-144.
Widsten  P  &  JE  Laine  (2002).  Radical  formation  on laccase  treatment  of  wood  defibrated  at  high temperatures. Nordic  Pulp  and  Paper  Res  J 17(2), 139-146.
Zahrim  AY,  FM  Rachel,  S  Menaka,  SY  Su,    F  Melvin  & ES  Chan  (2009).    Decolorization  of  anaerobic  plam oil  mill  effluent  via  activated  sludge-granular activated carbon. World Appl Sci J 5, 126-129.