## Efektivitas Ozonated Virgin Coconut Oil terhadap
Penyembuhan Luka Full Thickness Skin Graft
Ditinjau dari Proliferasi Endotel Progenitor Cell
dan Angiogenesis pada Tikus Sprague Dawley 1 1 2

## Rollin Hansen Sidauruk , Renn  Yuniati , Djoko Handojo
i
Latar  belakang  : Full  thickness  skin  graft merupakan  salah  satu  tekhnik  dalam mempercepat  penyembuhan  luka.  Proliferasi Endotel  Progenitor  Cell (EPC)  dan pembentukan  pembuluh  darah  baru  memiliki  peran  penting  dalam  keberhasilan Full thicknessskin graft . Kandungan ozon dalam Ozonated Virgin Coconut Oil (VCO) memiliki kemampuan  dalam  meningkatkan growth  factor sehingga  dapat  mempercepat penyembuhan  luka.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuktikan  efek ozonated  VCO dalam berbagai dosis dalam meningkatkan proliferasi EPC dan angiogenesis pada luka full thickness skin graft . Metode : Penelitan ini adalah studi eksperimental dengan randomized post test only with parallel  group  design .  Empat  puluh  ekor  tikus Sprague  Dawley dilakukan skin  graft autologous pada waktu yang bersamaan. Sampel dibagi secara acak menjadi 8 grup. Dua grup kontrol (X1 dan X5), dan 6 grup lagi lainnya diberikan ozonated VCO dosis bertingkat 50,6 mg/ml (X2, X6); 101,3 mg/ml (X3, X7); 202,6 mg/ml (X4, X8). Dilakukan terminasi pada  hari  ke-6  dan  hari  ke-12.  Dilakukan  pemeriksaan  jumlah  proliferasi  EPC  dengan pewarnaan IHC CD34 menggunakan pembesaran 1000x dengan bantuan minyak emersi secara single blind serta jumlah angiogenesis dengan menggunakan mikroskop binokuler pembesaran  100x  dengan  pewarnaan  HE  pada  masing-masing  grup.  Data  dianalisis dengan metode Saphiro Wilk , ANOVA, post-hoc Benferonni dan Pearsons menggunakan SPSS.
Hasil : Jumlah proliferasi EPC pada kelompok X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8 masing-masing memiliki rerata 6,2 ± 0,837; 10 ± 1,581;13,80 ± 2,049; 14,80 ± 2,280; 9,40 ± 2,074; 13,20 ± 1,483; 19,0 ± 2,055 dan 19,20 ± 1,095 lapang pandang mikroskop. Jumlah angiogenesis pada kelompok X5, X6, X7, X8 memiliki rerata 9,20 ± 1,095; 14,60 ± 2,881; 17,40 ± 3,286; 18,80 ± 2,168. Pemberian ozonated VCO dosis 202,5 mg/ml memberikan hasil terbaik dalam jumlah proliferasi EPC ( p =≤0,01) dan jumlah angiogenesis ( p =≤0,001). Simpulan  : Ozonated  VCO efektif  dalam  penyembuhan  luka full  thicknes  skin  graft ditinjau dari proliferasi EPC dan angiogenesis. Dosis ozonated VCO 202,5 mg/ml memiliki efek terbaik terhadap penyembuhan luka.
Kata kunci : Full thicknes skin graft , ozonated virgin coconut oil , endotel progenitor cell , angiogenesis
1 Magister Ilmu Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro
2 Bagian Bedah Onkologi Ilmu Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro / RSUP Dr. Kariadi
Abstrak

## Original Article
Med Hosp 2021; vol 8 (2) : 133–138 p-ISSN: 2301-4369 e-ISSN: 2685-7898 https://doi.org/10.36408/mhjcm.v8i2.446
Diajukan: 01 September 2020 Diterima: 29 Maret 2021

## Afiliasi Penulis:
Magister Ilmu Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro
Korespondensi Penulis: Rollin Hansen Sidauruk Jl. Prof. H. Soedarto, SH., Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275, Indonesia
E-mail: rollin.sidauruk1988@gmail.com
Background : Full thickness skin graft is one technique to accelerate wound healing. Endothelial Progenitor Cell (EPC) proliferation and new blood vessel formation have an important role in the success of Full thickness skin graft. Ozone content in ozonated virgin coconut oil (VCO) has the ability to increase growth factors so that it can accelerate wound healing. This study was aimed to prove the effects of ozonated VCO in various doses in increasing EPC proliferation and angiogenesis in full thickness skin graft wounds.
Methods : This research is an experimental study with randomized post test only with parallel group design. 40 Sprague Dawley rats performed autologous  Skin grafts at the same time. Samples were randomly divided into 8 groups, two control groups (X1 and X5), and 6  other  groups  were  given  a  multi-dose  ozonated  VCO  50.6  mg/ml  (X2,  X6);  101.3  mg/ml  (X3,  X7);  202.6  mg/ml  (X4,  X8).  Conduct termination on day 6 and day 12. The number of EPC proliferation was examined with IHC CD34 staining using 1000x magnification with the aid of emersion oil. The amount of angiogenesis was examined using 100x magnification of binocular microscope with HE staining in each group. Data were analyzed by Saphiro Wijk, ANOVA, post hoc benferonni and pearsons with SPSS.
Results : The number of EPC proliferation in groups X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8 has a mean of 6.2 ± 0.837; 10 ± 1.581; 13.80 ± 2.049; 14.80 ± 2.280; 9.40 ± 2.074; 13.20 ± 1.483; 19.0 ± 2.055 and 19.20 ± 1.095. The number of angiogenesis in groups X5, X6, X7, X8 has a mean of 9.20 ± 1.095; 14.60 ± 2.881; 17.40 ± 3.286, 18.80 ± 2.168, 17.40 ± 3.286, 18.80 ± 2.168. The administration of ozonated VCO  dose of 202.6 mg/ml gave the best results in the amount of angiogenesis ( p =≤0.001). Conclusion : Ozonated VCO can increase the number of EPC proliferation and angiogenesis in the wound healing process of full thickness skin graft. The ozonated VCO dose of 202.6 mg / ml showed the best effect on increase wound healing process.
Keyword s : Full thicknes skin graft, ozonated virgin coconut oil , endotel progenitor cell, angiogenesis

## Abstract
The Effectivity of Ozonated Virgin Coconut Oil on Healing Full Thickness Skin graft Study on Endothelial Progenitor Cell Proliferation and Angiogenesis
in Sprague Dawley Mice

## PENDAHULUAN
Luka  merupakan  terputusnya  kontinuitas  integritas 1 kulit,  permukaan  mukosa  ataupun  organ  jaringan. Secara  khusus  berdasarkan  kedalaman  luka  ataupun struktur lapisan kulit, luka dapat dibagi menjadi 3 yaitu
1,2 superfisial, partial  thickness ,  dan full  thickness . Penanganan  luka  saat  ini  merupakan  permasalahan global   dan dapat menimbulkan komplikasi yang berat jika  tidak  ditangani  dengan  baik.  Di  Amerika  Serikat, lebih  dari  7  juta  orang  setiap  tahun  mengalami peradangan  kronis  pada  kulit  yang  disebabkan  oleh tekanan,  stasis  vena,  atau  diabetes  mellitus  yang memperparah  kondisi  luka.  Proses  fisiologis  dalam penyembuhan  luka  dimulai  dari  hemostasis,  inflamasi,
1 proliferasi, dan remodelling .  Beberapa proses yang terjadi pada  penyembuhan  luka  diantaranya  munculnya endothel  progenitor  cell (EPC)  yang  terjadi  akibat kerusakan  endotel  sehingga  akan  memicu  proses vaskulogenesis dan proses angiogenesis. Selain itu saat proses  penyembuhan  luka  terjadi  epitelisasi  luka  yang dimulai  dari  deposit  kolagen,  pembentukan  jaringan 1,2 granulasi, kontraksi luka dan penutupan luka.  Proses penyembuhan  luka  dapat  dipengaruhi  oleh  teknik 2,3 penanganan dan perawatan luka. Skin graft merupakan tindakan memindahkan sebagian atau seluruh tebalnya kulit dari satu tempat ke tempat lainnya supaya hidup di tempat  baru  tersebut  dan  dibutuhkan  revaskularisasi untuk  menjamin  kelangsungan  hidup  kulit  yang
dipindahkan  tersebut.  Metode  ini  digunakan  dalam penutupan  defek  kulit  yang  luas  untuk  rekonstruksi
4,5 pada operasi plastik.  Berdasarkan   ketebalannya skin graft dibagi menjadi 2 yaitu split thickness skin graft (STSG) 4-6 dan full  thickness  skin  graft (FTSG).   Namun  dalam pelaksanaannya  banyak  faktor  yang  dapat  menjadi
6 permasalahan dalam melakukan FTSG.
Oksigen  merupakan    modalitas  penting  yang membantu  dalam  penanganan  luka.  Ozon  (O3)  telah diakui secara luas memiliki efek bakterisida yang terbaik, antiviral, dan anti jamur serta saat ini secara empiris telah digunakan  sebagai  modalitas  terapi  klinis  untuk  luka kronis, seperti ulkus tropik dan ulkus iskemik. Tiga atom oksida  yang  dimiliki  oleh  ozon  jika  dilepaskan  akan berikatan  dengan  oksida  bebas  dalam  tubuh  dan menghasilkan  produk  oksigen  yang  akan  memberikan efek  positif  bagi  tubuh.  Efek  menguntungkan  dari perawatan  luka  dengan  menggunakan  ozon  akan memberikan  dampak  terhadap  penurunan  infeksi bakteri  dan  penyembuhan  kerusakan  kulit  yang terganggu  atau  peningkatan  tekanan  oksigen  oleh
7 paparan  ozon  di  area  luka.   Ozon  berpotensi  sebagai alternatif  dalam  membantu  penyembuhan  luka  pada kulit. Ozon bereaksi pada setiap organ dan permukaan tempat berkontaknya seperti sel endotel. Dengan dasar inilah, masih diperlukan penelitian lebih lanjut tentang ozon yang akan mengalami pemecahan menjadi oksigen, dan apakah hal ini   akan meningkatkan penyembuhan luka pada keadaan FTSG jika diberikan secara topikal.
Efektivitas Ozonated Virgin Coconut Oil terhadap Penyembuhan Luka Full Thickness Skin Graft Ditinjau dari Proliferasi Endotel Progenitor Cell dan Angiogenesis pada Tikus Sprague Dawley

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  studi  eksperimental  hewan dengan  desain “randomized  post-test  with  control  group” pada  40  ekor  tikus  jantan Sprague  Dawley yang  diinsisi pada  punggung  kanannya  dengan  panjang  luka  2cm  x 2cm dan kedalaman luka 2mm. Kriteria inklusi penelitian ini yaitu tikus jantan berumur ±2–3 bulan, dengan berat badan 250 ± 50 gram setelah aklimatisasi, serta tidak ada kelainan  anatomis.  Semua  subjek  diperlakukan  secara sama  dari  segi  paska  operasi  dan  diet  dalam  jumlah normal.  Subjek  hewan  percobaan  dibagi  secara  acak menjadi delapan grup sama rata dengan jumlah masing- masing kelompok 5 ekor (2 kelompok kontrol dan 6  kelompok  intervensi),  yaitu  kelompok  kontrol  1  (X1) diberikan  perawatan  dengan  NaCl  0,9%  1  kali  sehari selama 6 hari dan kelompok kontrol 2 selama 12 hari (X5). Kelompok  perlakuan  diberikan ozonated  VCO dengan dosis bertingkat yaitu 50,6 mg/ml (X2,X6); 101,3mg/ml (X3,X7);  dan  202,6mg/ml  (X4,X8).  Pada  penelitian  ini tidak ada subjek penelitian yang drop out . Ozonated VCO diperoleh  dari  pencampuran  antara  ozon  dan  VCO. Pembuatan ozonated  VCO dilakukan  di center  plasma research Universitas  Diponegoro,  Semarang.  Sedangkan proses   pembuatan luka dan penerapan full thikness skin graft terhadap tikus, serta proses pengambilan jaringan dilakukan  di  Laboratorium  Penelitian  dan  Pengujian Terpadu  (LPPT)  Universitas  Diponegoro  (UNDIP), Semarang.  Pada  hari  ke-6,  terminasi  dilakukan  pada kelompok  X1,  X2,  X3  dan  X4  dan  hari  ke  12  terminasi dilakukan pada kelompok X5, X6, X7 dan X8. Kemudian jaringan luka diambil dan dilakukan pemeriksaan secara mikroskopis.  Pemeriksaan  jumlah  proliferasi  EPC dengan  pewarnaan  IHC  CD34  menggunakan
pembesaran 1000x dengan bantuan minyak emersi secara single blind . Sedangkan pemeriksaan jumlah angiogenesis dengan cara menghitung jumlah percabangan baru pada jaringan luka yang memiliki tunika intima yang tipis dan tidak  memiliki  tunika  media    pada  5  lapang  pandang menggunakan  mikroskop  binokuler  pembesaran  100x dengan pewarnaan HE pada masing-masing grup. Data yang  diperoleh  kemudian  dianalisis  dengan  progam SPSS 21.0.

## HASIL
Setelah  dilakukan  pengambilan  jaringan,  jaringan diberikan  pengecatan  immunohistokimia  CD34. Pembacaan  preparat  jaringan  dilakukan  oleh  patolog pada setiap kelompok dengan single blind .
Grafik 1 menunjukkan bahwa adanya perbedaan jumlah endothel  progenitor  cell pada  masing-masing kelompok dengan kelompok yang diberikan NaCl 0,9% 1 kali sehari selama 6 hari yaitu 6,2 ± 0,837 lapang pandang mikroskop;  kelompok  yang  diberikan ozonated  VCO topikal 50,6 mg/ml selama 6 hari yaitu 10 ± 1,581 lapang pandang mikroskop; kelompok yang diberikan ozonated VCO topikal  101,3  mg/ml  selama  6  hari  yaitu  13,80  ± 2,049  lapang  pandang  mikroskop;  kelompok  yang diberikan ozonated VCO topikal 202,6 mg/ml selama 6  hari  yaitu  14,80  ±  2,280  lapang  pandang  mikroskop; kelompok yang diberikan NaCl 0,9% selama 12 hari yaitu 9,40 ± 2,074 lapang pandang mikroskop; kelompok yang diberikan ozonated VCO topikal   50,6 mg/ml selama 12 hari yaitu 13,20 ± 1,483 lapang pandang mikroskop; kelompok  yang  diberikan ozonated  VCO topikal  101,3 mg/ml  dan  202,6  mg/ml  selama  12  hari  yaitu  19,0  ± 2,055dan 19,20 ± 1,095 lapang pandang mikroskop.
Gambar 1. Gambaran Proliferasi EPC pada hari ke 6 perawatan
(menggunakan  pewarnaan IHC CD34 dengan pembesaran 1000x dengan bantuan minyak emersi)
Gambar 2. Gambaran Proliferasi EPC pada hari ke 12 perawatan (menggunakan  pewarnaan IHC CD34 dengan pembesaran 1000x dengan bantuan minyak emersi)
Grafik 1. Grafik box plot data Jumlah Proliferasi EPC pada kelompok X1 – X8
25 20 15 10 5 Ju m la h E P C x1 x2 x3 x4 x5 x6 x7 x8 Kelompok 26 39 40 P=0,023* P=0,023* P=0,023* P=1,00 P=0,001* P=0,008* P=0,574 P=0,103 P=0,0001* P=0,023* P=0,021* P=1,00
EPC : Endothelial Progenitor Cell
X1 : kelompok kontrol yang diberi NaCl 0,9% dan diterminasi pada hari ke-6 X2 : kelompok yang diberi ozonated VCO 50,6 mg/ml dan diterminasi pada hari ke-6 X3 : kelompok yang diberi ozonated VCO 101,3 mg/ml dan diterminasi pada hari ke-6 X4 : kelompok yang diberi ozonated VCO 202,6 mg/ml dan diterminasi pada hari ke-6 X5 : kelompok kontrol yang diberi NaCl 0,9% dan diterminasi pada hari ke-12 X6 : kelompok yang diberi ozonated VCO 50,6 mg/ml dan diterminasi pada hari ke-12 X7 : kelompok yang diberi ozonated VCO 101,3 mg/ml dan diterminasi pada hari ke-12 X8 : kelompok yang diberi ozonated VCO 202,6 mg/ml dan diterminasi pada hari ke-12
Efektivitas Ozonated Virgin Coconut Oil terhadap Penyembuhan Luka Full Thickness Skin Graft Ditinjau dari Proliferasi Endotel Progenitor Cell dan Angiogenesis pada Tikus Sprague Dawley
Berdasarkan  hasil  uji One  Way ANOVA didapatkan  nilai p =0,00,  maka  dapat  disimpulkan terdapat  perbedaan  bermakna  jumlah  proliferasi  EPC pada  kelompok  yang  diberikan  NaCl  0,9%  1x  sehari selama  6  hari,  kelompok  yang  diberikan ozonated  VCO topikal  50,6  mg/ml  selama  6  hari,  kelompok  yang diberikan ozonated VCO topikal  101,3 mg/ml selama 6  hari  dan  kelompok  yang  diberikan ozonated  VCO topikal 202,6 mg/ml selama 6 hari.
Pembuluh  darah  baru  yang  muncul  dapat dibedakan  dengan  pembuluh  darah  lama  dengan melihat tunika media. Dari grafik 2, menunjukkan bahwa adanya  perbedaan  jumlah  angiogenesis  pada  masing- masing  kelompok  kontrol  dengan  kelompok  yang
diberikan perlakuan. Jumlah pembuluh darah baru yang muncul  paling  banyak  terdapat  pada  kelompok  X8. Berdasarkan hasil uji One Way ANOVA didapatkan nilai p =0,00,  maka  dapat  disimpulkan  ada  perbedaan bermakna  jumlah  angiogenesis  pada  kelompok  yang diberikan  NaCl  0,9%  selama  12  hari,  kelompok  yang diberikan ozonated VCO topikal   7,59 mg selama 12 hari, kelompok  yang  diberikan ozonated  VCO topikal 15,195 mg dan 30,375 mg selama 12 hari.

## DISKUSI
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat  efektivitas pemberian ozonated virgin coconut oil (VCO) secara topikal
Gambar 3. Gambaran Angiogenesis (Pembuluh darah baru) pada kelompok penelitian (Menggunakan pewarnaan HE dengan pembesaran 1000x)
Hari -12 x1 x2 x3 x4 x5 x6 x7 x8 35 38 40 11 17 13 21 24 Kelompok 5 10 15 20 25 Ju m la h v as ku la ri sa si
Grafik 2. Grafik box plot data Jumlah Angiogenesis pada kelompok X1–X8
Medica Hospitalia | Vol. 8, No. 2, Juli 2021
dalam  meningkatkan  respon  penyembuhan  luka  pada FTSG kulit Sprague Dawley ditinjau dari proliferasi EPC dan  jumlah  angiogenesis  dimana  dilakukan  perlakuan selama  6  dan  12  hari.  Kemudian  dilihat  dengan pewarnaan  staining  IHC  CD34  untuk  melihat  jumlah proliferasi EPC dan angiogenesis melalui pewarnaan HE. Peneliti  menggunakan  ozonated  VCO  yang  dihasilkan dari generator yang akan dicampurkan ke dalam VCO, karena  kandungan  senyawa  VCO  efektif  dalam mengatasi inflamasi pada setiap luka. VCO secara topikal dapat berguna sebagai pelindung pada kulit dari radikal bebas  dan  dapat  melembabkan  kulit.  Polifenol  yang terkandung  dalam  VCO  diketahui  dapat  berperan sebagai  antioksidan.  VCO  dapat  mempercepat  waktu penyembuhan luka, mengecilkan ukuran diameter luka serta  menurunkan  serum  alkaline  phosphatase.VCO dapat  menurunkan  puncak  konsentrasi  TNF-alpha,
8-10 IL-ß,dan IL-6. Tiap  kelompok  diberikan  perlakuan  dengan menggunakan ozonated VCO dengan dosis yang berbeda- beda. Pada kelompok   dengan pemberian ozonated VCO dosis  15,195  mg  (101,3  mg/ml)  dan  30,375mg  (202,5 mg/ml)  menunjukkan jumlah proliferasi EPC yang lebih tinggi dan kelompok yang dilakukan pemberian ozonated VCO dosis  202,4  mg/ml  menunjukkan  jumlah angiogenesis  yang  lebih  tinggi.  Hal  tersebut  sejalan dengan  teori  yang  menyebutkan  bahwa  ozon  akan menghasilkan  produk  H2O2  dan  ROS.  ROS  yang dihasilkan  oleh  ozon  akan  mengaktivasi  ekspresi  gene Nitric  oxide  synthase  sehingga  akan  meningkatkan pembentukan  nitric  oxide.  Nitric  oxide  akan merangsang  endothel  untuk  berproliferasi  melalui eNOS.  eNOS  akan  mengirimkan  sinyal  dan  akan mengaktivasi  EPC  dari bone  marrow dan  akan 11–14 memobilisasi EPC ke pembuluh darah perifer. Ozon juga akan meningkatkan jumlah fibroblast, kolagen dan kadar VEGF yang merupakan komponen penting dalam proses  angiogenesis.  Ozon  akan  berperan  untuk memanggil sitokin proinflamasi seperti TNF-α, IL-6, Il-8, IL-10  untuk  menimbulkan  kaskade  penyembuhan dengan  mendorong  terstimulasinya  VEGF (Vascular endothelial growth factor) dan memastikan suplai fibroblast dapat  mencapai  tujuan  agar  bisa  menciptakan  kolagen 11-12,15-17 untuk perlekatan donor.
Penelitian ini juga memiliki beberapa kekurangan seperti bahan yang diuji hanya pada beberapa mediator inflamasi  serta  VCO  sebagai  bahan  pelarut  ozon  dapat memberikan  bias  hasil  dikarenakan  VCO  juga mempunyai  efek  anti  inflamasi  dan  mempercepat penyembuhan luka.

## SIMPULAN
Pemberian ozonated  VCO dapat  mempercepat penyembuhan  luka full  thickness  skin  graft yang  dapat dilihat berdasarkan indikator jumlah proliferasi endothel
progenitor  cell dan  angiogenesis  dibandingkan  dengan pemb erian  NaCl  0,9%.  Dosis  t erb aik   unt uk penyembuhan  luka full  thickness  skin  graft adalah 202,6 mg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Velnar T, Bailey T, Smrkolj V. The wound healing process: an overview of the cellular and molecular mechanisms. J Int Med Res. 2009;37(5):1528–42
2. Geoffrey C, Victor W. Wound Healing: Normal and Abnormal. In: Thorne CH, editor. Grabb and Smith's Plastic Surgery. 7 ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. 2014; 20–35.
3. Harper D, Young A, McNaught C-E. The physiology of wound healing. Basic Science. Surgery 2014;32(9):445–50.
4. Lee CK, Hansen SL. Management of acute wound. Surg Clin North Am. 2009; 89(3):659–76.
5. Thorne  CH.  Technique  and  Principles  in  Plastic  Suqery.  In: Thorne  CH,  editor.  Grabb  and  Smith's  Plastic  Surgery.  7  ed. Philadelphia: Lippincott William . Wilkins. 2014; 1–19.
6. I. C. Valencia, A. F. Falabella, W. H. Eaglstein. Skin grafting. Dermatologic Clinics 2000;18(3.):521–32.
7. Kim, H.S., Noh, S.U., Han, Y.W., Kim, K.M., Kang, H., Kim, H. O, et al . Therapeutic Effects of Topical Application of Ozon on Acute Cutaneous Wound Healing. J Korean Med Sci. 2009; 24: 368–74.
8. Aggarwal  B,  Lamba  HS,  Sharma  P,  Ajeer.  Various Pharacological  Aspects  of  Cocos  nucifera-A  Review.  J Pharmacol Sci.2017: 5:25–30.
9. Rajagukguk H, Syukur S, Ibrahim S, Syafrizayanti S. Beneficial Effect of Application of Virgin Coconut oil (VCO) Product from Padang  West  Sumatra,  Indonesia  on  Palatoplasty  Wound Healing. ASRJETS. 2017: 34:231–6.
10. GhaniNAA,  Channip  A-A,  Hwa  PCH,  Ja'Faar  F,  Yasin  HM, Usman A. Physicochemical properties, antioxidant capacities, and metal content of virgin coconut oil produced by wet and dry processes. Food Sci Nutr J. 2018: 6:1298–306.
11. Smith  NL,  Wilson  AL,  Gandhi  J,  Vatsia  S,  Khan  SA.  Ozon Therapy: an overview of pharmacodynamics, current research, and clinical utility.Med Gas Res J. 2017; 7(3): 212–219.
12. Valacchi G, Zanardi I, Lim Y, Belmonte G, Miracco C, Sticozzi C, et al. Ozonated sesame oil enhances cutaneous wound healing in SKH1 mice.Int J Pharm. 2013; 458(1):65–73.
13. George,  A.  L.,  Bangalore-Prakash,  P.,  Rajoria,  S.,  Suriano,  R., Shanmugam,  A.,  Mittelman,  A. et  al .  Endothelial  Progenitor Cell  Biology  In  Disease  And  Tissue  Regeneration.  J  Hematol Oncol2011;4(1):24–31.
14. Napoli C, Paolisso G, Casamassimi A, Al-Omran M, Barbieri M, Sommese  L,  MD, et  al .  Effects  of  nitric  oxide  on  cell proliferation:  novel  insights.  J  Am  Coll  Cardiol2013;62(2): 89–95.
15. Tepper  O,  Capla  J,  Galiano  R,  Ceradini  D,  Callaghan  M, Kleinman M, et al . Adult vasculogenesis occurs through in situ recruitment, proliferation, and tubulization of circulating bone marrow-derived cells. Blood. 2005;105(3);1068–7.
16. Li W, Liu ZQ, Wei J, Liu Y, Hu LS. Contribution of endothelial progenitor cells to neovascularization (Review). International J of Molecular Medicine2012;30(5):1000–6.
17. Yang Y, Qi PK, Yang ZL, Huang N. Nitric oxide based strategies for  applications  of  biomedical  devices.  Biosurface  and Biotribology12015;177201.
Efektivitas Ozonated Virgin Coconut Oil terhadap Penyembuhan Luka Full Thickness Skin Graft Ditinjau dari Proliferasi Endotel Progenitor Cell dan Angiogenesis pada Tikus Sprague Dawley