ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI ENDOFIT RIMPANG TEMULAWAK ( Curcuma xanthorrhiza Roxb.) SEBAGAI PENGHASIL SENYAWA ANTIFUNGI

## TERHADAP Candida albicans

## Alvi Milliana dan Wahyu Safitri
Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maliki Malang Email: alvimilliana@yahoo.com

## ABSTRAK
Infectious  diseases  in  humans  by  microbes  in  developing  countries  including  Indonesia remains a major problem. Forty-three percent of deaths in developing countries are caused by infections. Candida is a yeast species that often cause opportunistic infections. Disease caused  by  Candida  can  affect  the  mouth,  vagina,  skin,  nails,  lungs,  sometimes  can  cause septicemia,  endocarditis  and  meningitis.  Rising  yeast-leavened  which  has  resistance  to antifungal  compounds  that  exist,  encourage  researchers  continue  to  discover  new compounds which have antifungal properties. In addition, the side effects caused by the use of antifungal drugs, causing people still expect the natural ingredients that can be used as an alternative treatment. According to WHO, 80% of the world's population still relies on traditional  medicine,  including  the  use  of  drugs  from  plants,  one  of  which  is  the  use  of turmeric  plant  (Curcuma  zanthorriza).  Bioactive  compounds  of  plants  that  are  antifungal generally  are  volatile  oil,  aldehyde  and  phenol  compounds.  The  existence  of  endophytic microbes  in  plants  have  economic  significance  for  the  industry  favorable  treatment. Endophytic microbes easily grown, have a shorter life cycle than the plant and capable of producing bioactive compounds similar to the host plant. Therefore, it is necessary to study the  potential  of  endophytic  bacteria  ginger  rhizome  (C.  xanthorrhiza)  as  a  producer  of Candida  albicans  antifungal  compounds.  This  study  uses  ginger  rhizome  obtained  from Stone  and  Pasuruan.  After  the  isolation  of  microbes  from  ginger  rhizome,  further purification by means of subcultures. The endophytic microbial isolates gram staining and identification  of  bacteria.  The  result  is  a  gram-positive  bacterium  Actinomyces  viscosus, Bacillus  brevis  gram-positive  bacteria  and  gram-negative  bacteria  Pseudomonas  stutzeri. Then do the production of antifungal metabolites produced by endophytic bacteria and C. albicans antifungal test Paper Disc Diffusion method. The result looks the inhibition zone with a diameter of 4 mm, 15 mm and 45 mm.
Keywords: Curcuma xanthorrhiza, endophytic bacteria, antifungal activity

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  pada  manusia  oleh mikroba  di  Negara  berkembang  termasuk Indonesia  masih  menjadi  masalah  besar (Susanti, 2008). Penyakit infeksi telah menyebabkan kematian 13 juta orang di seluruh dunia  setiap  tahun  terutama  di  Negara-negara berkembang  seperti  Indonesia.  Empat  puluh tiga persen kematian di Negara-negara berkembang disebabkan oleh infeksi (Syaifuddin, 2004). Spesies
Candida
merupakan  salah  satu  spesies  khamir  yang sering  menyebabkan  infeksi. Candida adalah anggota flora normal terutama saluran pencernaan, selaput mukosa, saluran pernafasan, vagina, uretra, kulit, di bawah kuku tangan  dan  kaki. Candida bersifat  oportunis. Penyakit yang disebabkan oleh Candida dapat menyerang mulut, vagina, kulit, kuku dan paru, kadang- kadang dapat menyebabkan
septikemia , endocarditis atau meningitis (Ridawati, dkk, 2011).
Timbulnya  mikroorganisme  patogen yang  resisten  terhadap  antimikroba  semakin meningkat.  Resistensi  antibiotik  telah  menjadi masalah  klinik  dan  kesehatan  masyarakat sampai  saat  ini  (Levy,  2004;  Rosana  dkk, 1999).  Penggunaan  senyawa  antifungal  dari kelompok poliena seperti nistatin , amfoterisin , natamisin , kelompok imidazol dan triazol telah banyak  digunakan  dalam  dunia  medis  untuk pengobatan infeksi akibat khamir. Meningkatnya  khamir-khamir  yang  memiliki resistensi  terhadap  senyawa  antifungal  yang ada,  mendorong  peneliti  terus  melakukan eksplorasi  senyawa  baru  yang  memiliki  sifat antifungal.  Selain  itu,  efek  samping  yang ditimbulkan  akibat  penggunaan  obat  antibiotik, menyebabkan  masyarakat  tetap  mengharapkan bahan-bahan  alami  yang  dapat  digunakan
sebagai  pengobatan  alternatif  (Ridawati,  dkk, 2011).
Tanaman  telah  diketahui  merupakan salah  satu  sumber  daya  yang  sangat  penting dalam  pengbatan  dan  upaya  mempertahankan kesehatan  masyarakat.  Menurut  WHO  ( World Health  Organization ),  80%  penduduk  dunia masih  bergantung  pada  pengobatan  tradisional termasuk  penggunaan  obat  dari  tanaman  (Izza, 2011).  Indonesia  kaya  akan  tumbuhan  obat, salah  satu  diantaranya  adalah  dari  marga Curcuma yang  tergolong  ke  dalam  suku  temu- temuan Zingiberaceae . Curcuma banyak dimanfaatkan  sebagai  antimikroba  karena kandungan senyawa aktifnya mampu mencegah pertumbuhan mikroba. Tanaman ini terdiri dari beberapa  spesies  diantaranya C.  xanthorrhiza (temulawak), C. domestica (kunyit), C. mangga (temu  mangga), C.  zedoaria (temu  giring)  dan C.aeruginosa (temu  hitam)  (Tjitrosoepomo, 1994).
Berdasarkan  hasil  penelitian  Adila  dkk (2013)  yang  menguji  ekstrak  enam  jenis rimpang Curcuma  spp .,  yang  paling  besar potensinya  dalam  menghambat  mikroba  uji adalah C.  xanthorrhiza (temulawak).  Senyawa antimikroba  yang  terdapat  dalam  rimpang Curcuma yaitu minyak atsiri, alkaloid, flavonoid,  tannin,  kurkuminoid  dan  terpenoid (Rukmana,  2004).  Senyawa  flavonoid  mampu merusak  dinding  sel  bakteri  (Heinrich et  al , 2009);  menghambat  pembentukan  protein sehingga menyebabkan kematian sel (Sundari et al , 1998). Senyawa alkaloid mempu mendenaturasi protein sehingga merusak aktivitas  enzim  dan  menyebabkan  kematian  sel (Robinson,  1991).  Senyawa  tannin  juga  dapat merusak  membrane  sel  dan  dapat  merusak pembentukan  konidia  jamur  (Cowan,  1999). Senyawa  bioaktif  tanaman  yang  bersifat antifungal  umumnya  adalah  minyak  atsiri, senyawa aldehida dan senyawa fenol (Ridawati, 2011).
Rimpang  temulawak  telah  digunakan secara  luas  dalam  rumah  tangga  dan  industri, termasuk industri obat-obatan. Hal ini memerlukan teknik pengolahan yang baik untuk menjaga  mutunya  sehingga  membutuhkan biaya  yang  tinggi  dan  banyak  mengalami kendala ketika akan dikembangkan dalam skala industri.  Oleh  karena  itu  diperlukan  alternatif pencarian bahan bioaktif yang lebih murah dan tidak  mengganggu  lingkungan.  Salah  satunya adalah  dengan  memanfaatkan  mikroorganisme yang  ada  pada  tumbuhan  yang  disebut  sebagai
mikroba  endofit  (Petrini,  1992).  Mikroba endofit  adalah  mikroba  yang  hidup  dalam jaringan  tanaman  tanpa  menimbulkan  bahaya dan  dapat  diisolasi  dari  jaringan  tanaman (Hallman et al , 1997).
Mikroba  endofit  dapat  ditemukan  pada berbagai  jaringan  tanaman,  diantaranya  biji, ovula, buah, batang, akar, umbi akar dan daun. Mikroba  endofit  mempunyai  arti  ekonomis karena  mampu  menghasilkan  senyawa  bioaktif yang  sangat  potensial  untuk  dikembangkan menjadi  obat.  Hal  ini  karena  mikroorganisme merupakan organisme yang mudah ditumbuhkan,  memiliki  siklus  hidup  yang pendek daripada tanaman dan dapat menghasilkan  senyawa  bioaktif  dalam  jumlah besar  dengan  metode  fermentasi  (Izza,  2011). Mikroba  endofit  di  dalam  medium  fermentasi akan  menghasilkan  senyawa  sejenis  yang terkandung pada tanaman inang dengan bantuan aktivitas  enzim  (Shibuya et  al ,  2005).  Oleh karena itu, isolasi mikroorganisme endofit yang dapat  memproduksi  metabolit  sekunder  dari tanaman  inangnya  merupakan  sebuah  peluang besar  dimasa  mendatang  sehingga  Indonesia dapat  meminimalisir  impor  antibiotik  yang mencapai Rp. 81,6 sampai Rp. 122,4 miliar per tahun (Izza, 2011).
Menurut  Radji  (2005)  mikroba  endofit yang  diisolasi  dari  suatu  tanaman  obat  dapat menghasilkan  metabolit  sekunder  sama  dengan tanaman  aslinya  atau  bahkan  dalam  jumlah yang  lebih  tinggi,  sehingga  kita  tidak  perlu menebang  tanaman  aslinya  untuk  diambil simplisisa.  Oleh  karena  itu  diperlukan  kajian potensi  bakteri  endofit  rimpang  temulawak  ( C. xanthorrhiza ) sebagai penghasil senyawa antifungi C.  albicans serta  bakteri  apa  saja yang  dapat  diisolasi  dari  rumpang  temulawak ( C. xanthorrhiza ).

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  menggunakan  bahan rimpang  temulawak  ( C.  xanthorrhiza )  yang diperoleh  dari  dua  daerah  yaitu  Batu  dan Pasuruan.  Sedangkan  fungi  yang  digunakan adalah C.  albicans yang  diperoleh  dari
Laboratorium Mikrobiologi Universitas Brawijaya. Setelah diperoleh rimpang temulawak  ( C.  xanthorrhiza ),  tahap  pertama penelitian  adalah  isolasi  bakteri  endofit  dari rimpang temulawak. Sampel rimpang temulawak dipotong sepanjang kurang lebih 10 cm, dicuci dengan air mengalir selama 5 menit dan  dilakukan  sterilisasi  permukaan  secara
bertahap dengan cara direndam ke dalam etanol 75%  sebanyak  10  ml  selama  5  menit, dilanjutkan ke dalam sodium hipoklorit (NaOCl)  6%  sebanyak  10  ml  selama  30  detik dan  dibiarkan  kering.  Kemudian  sampel direndam  kembali  ke  dalam  etanol  75% sebanyak  10  ml  selama  1  menit.  Setelah  itu dibilas  dengan  aquades  steril  selama  1  menit dan diulang dua  kali.  Potongan  sampel  yang  sudah disterilkan,  dikeringkan  dan  dibelah  secara longitudinal menjadi dua bagian secara aseptis. Setiap  bagian  dalam  potongan  ditempatkan masing-masing  pada  cawan  petri  yang  berisi media nutrient agar (NA) yang diberi suplemen nystatin  100  µg/ml  dan  diinkubasi  pada  suhu kamar  (27ºC)  sebagai  kontrol.  Pengamatan dilakukan setiap hari sampai tampak pertumbuhan  koloni  bakteri  endofit  yang memperlihatkan warna putih, kuning atau hitam (Strobel, 2000; Rosana, 2001; Utami, 2011).
Bakteri  endofit  yang  tumbuh  pada media  NA,  dimurnikan  pada  media  lempeng dan agar miring NA. Bakteri yang tumbuh pada media  isolasi  NA,  disubkultur  pada  media lempeng NA pada suhu 35ºC selama 24-48 jam sampai  diperoleh  koloni  yang  murni.  Koloni murni  kemudian  dipindahkan  ke  media  agar NA  miring  dan  diinkubasi  pada  suhu  35ºC selama  24-48  jam.  Setiap  isolat  bakteri  endofit dibuat  dua  pada  media  agar  miring,  masing- masing  dipergunakan  sebagai working  culture dan stock culture.
Biakan  murni  bakteri  endofit  yang ditumbuhkan  pada  media  lempeng  NA, diinkubasi  pada  suhu  35ºC  selama  24  jam. Preparat  yang  dibuat  dari  koloni  bakteri  yang tumbuh  diwarnai  dengan  pewarnaan  Gram, kemudian  diamati  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran 1000x. Berdasarkan hasil pewarnaan  Gram,  dilakukan  uji  biokimiawi untuk identifikasi lanjutan. Uji dengan Mikrobact dilakukan terhadap bakteri berbentuk batang  Gram  negatif  yang  sebelumnya  telah dilakukan tes oksidase memakai oksidase strip. Bakteri  Gram  positif  berbentuk  batang  dan kokus diuji dengan cara konvensional, memakai gula-gula  glukosa,  laktosa, maltose , manitol dan  sakarosa  serta  agar  semi  solid,  sitrat,  dan kertas oksidase .  Tahap  selanjutnya  adalah produksi  metabolit  bakteri  endofit.  Produksi metabolit  antimikroba  oleh  bakteri  endofit dilakukan  dengan  cara  menumbuhkannya  di dalam  media  MHB  ( Muller-Hinton  Broth ). Koloni  bakteri  endofit  yang  telah  diinkubasi
pada  media  lempeng  NA  selama  24-48  jam pada  suhu  35ºC,  diambil  satu  sengkelit  dan dipindahkan  ke  dalam  5  ml  media  MHB, kemudian  dilarutkan  memakai tube-stirrer sampai  mencapai  kekeruhan  0,5  McFarland. Suspense  koloni  bakteri  endofit  dipindahkan sebanyak  1  ml  ke  dalam  9  ml  medium  MHB pada 50 ml tabung Erlenmeyer, diinkubasi pada suhu  30ºC  menggunakan shaker  incubator 130 rpm  selama  48  jam.  Setelah  proses  fermentasi selesai,  masing-masing  medium  pertumbuhan di  sentrifugasi  2000  g  (3800  rpm)  4ºC  selama 20  menit.  Penyaringan  supernatan  hasil fermentasi  isolat  bakteri  endofit  meggunakan kertas  saring  whatman  0,22  µm.  Supernatant yang  diperoleh  dipergunakan  untuk  pengujian aktivitas antimikroba.
Persiapan uji antifungi dilakukan dengan  cara  menumbuhkan  jamur  uji C. albicans pada  media  lempeng  NA  dan diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  35ºC. Isolat  bakteri  yang  sudah  tumbuh,  diambil masing-masing satu sengkelit ose dan dicampur dengan  5  ml  media  NB  dampai  mencapai kekeruhan 0,5 McFarland.
Metode  Difusi  Kertas  ( Paper  Disc Diffusion )
dilakukan dengan cara menginokulasikan  1  ml  jamur  uji  ke  dalam  10 ml  media  MHA  steril  suhu  40-45ºC,  kemudian dituangkan ke dalam cawan petri steril. Setelah padat,  diletakkan  kertas  saring  whatman  steril ukuran  6  mm.  secara  aseptik,  kertas  cakram yang  sudah  disterilkan  direndam  di  dalam  50 µm  supernatan  kultur  bakteri  endofit  selama  3 hari. Kertas cakram diambil dengan menggunakan  pinset  steril  dan  diletakkan  di atas  medium  uji  aktivitas  antimikroba  (media lempeng  MHA).  Sebagai  kontrol  positif digunakan  cakram nistatin 1%, kloramfenikol dan  kontrol  negatif  digunakan  cakram  kosong steril.  Kemudian  diinkubasi  selama  18-24  jam pada suhu 37ºC. Setelah masa inkubasi selesai, dilakukan  pengukuran  terhadap  zona  jernih yang terbentuk dan diukur diameternya. Sampel yang  mempunyai  potensi  menghasilkan  zat antimikroba  ditunjukkan  dengan  adanya  zona jernih (Utami, 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  mikroba  endofit  dari  rimpang temulawak dilakukan dengan mengambil potongan  rimpang  temulawak  yang  telah disterilkan  permukaannya  dan  diletakkan  pada media  lempeng  NA.  Hasil  isolasi  mikroba
endofit  dari  rimpang  temulawak  dapat  dilihat
pada gambar 1
(a)
(b)

## Gambar 1. Hasil isolasi mikroba endofit dari rimpang Temulawak
Keterangan: (a)Temulawaak dari lokasi Batu, (b) Temulawak dari lokasi Pandaan
Setelah didapatkan isolate mikroba endofit tersebut lalu dimurnikan pada media lempeng dan agar miring NA. Bakteri yang tumbuh pada media isolasi NA, disubkultur pada media lempeng NA. Hasil pemurnian mikroba tampak pada gambar 2 berikut
(a) (b) (c) (d)
Gambar 2 Hasil pemurnian mikroba endofir rimpang temulawak
Keterangan: (a)Temulawak dari lokasi Batu 1, (b) Temulawak dari lokasi Batu 2, (c) Temulawak dari lokasi Pandaan 1, (d) Temulawak dari lokasi Pandaan 2
Setelah  mikroba  endofit  dimurnikan,  kemudian  dilakukan  identifikasi  mikroba  endofit  yang tumbuh. Hasil identifikasi mikroba endofit tersebut adalah sebagai berikut:
KODE ISOLAT Pd1 JENIS TES HASIL BGP POSITIF Spora NEGATIF Koloni Filamentous POSITIF Diftroid sel POSITIF Warna Koloni krem POSITIF UJI FISIOLOGIS Katalase NEGATIF Indol NEGATIF NO3 --> NO2 POSITIF Metil Red POSITIF Voges-Proskouer POSITIF H2S NEGATIF TSI NEGATIF Urease NEGATIF Starch hydrolysis NEGATIF Gelatin hydrolysis NEGATIF FERMENTASI KARBOHIDRAT Arabinosa POSITIF Fruktosa POSITIF Glukosa POSITIF Inositol POSITIF Laktosa POSITIF Maltosa POSITIF Mannitol NEGATIF Raffinosa POSITIF Rhamnosa NEGATIF Salicin POSITIF Sorbitol NEGATIF Sukrosa POSITIF Xylosa NEGATIF DX LAB. Actinomyces viscosus
KODE ISOLAT Pd2 JENIS TES HASIL BGP POSITIF Spora POSITIF FERMENTASI GULA-GULA Glukosa POSITIF Xylosa NEGATIF Mannitol NEGATIF Laktosa NEGATIF Sukrosa NEGATIF Maltosa POSITIF Arabinosa NEGATIF SUHU PERTUMBUHAN 25 0 C POSITIF 37 0 C POSITIF 40 0 C POSITIF 55 0 C POSITIF TUMBUH DI Nutrient Broth POSITIF MCA NEGATIF TSI A/A,H2S- CITRAT NEGATIF INDOL NEGATIF MR NEGATIF VP NEGATIF NaCl 7% NEGATIF Motilitas POSITIF Starch hydrolysis NEGATIF PENICILLIN SENSITIV BETA-HEMOLISA POSITIF Katalase POSITIF Oksidase POSITIF Reduksi Nitrat NEGATIF Reduksi Meth. Blue NEGATIF DX LAB. B. brevis
KODE ISOLAT Bt1 JENIS TES HASIL BGP POSITIF Spora NEGATIF Koloni Filamentous POSITIF Diftroid sel POSITIF Warna Koloni krem POSITIF UJI FISIOLOGIS Katalase NEGATIF Indol NEGATIF NO3 --> NO2 POSITIF Metil Red POSITIF Voges-Proskouer POSITIF H2S NEGATIF TSI NEGATIF Urease NEGATIF Starch hydrolysis NEGATIF Gelatin hydrolisis NEGATIF FERMENTASI KARBOHIDRAT Arabinosa NEGATIF Fruktosa POSITIF Glukosa POSITIF Inositol POSITIF Laktosa POSITIF Maltosa POSITIF Mannitol NEGATIF Raffinosa POSITIF Rhamnosa NEGATIF Salicin POSITIF Sorbitol NEGATIF Sukrosa POSITIF Xylosa NEGATIF DX LAB. Actinomyces viscosus
KODE ISOLAT Bt2 JENIS TES HASIL Spora NEGATIF Oksidase POSITIF Motilitas POSITIF Nitrat POSITIF Lysin NEGATIF Ornithin NEGATIF H 2 S NEGATIF Glukosa NEGATIF Manitol NEGATIF Xylosa NEGATIF ONPG POSITIF Indole NEGATIF Urease NEGATIF V-P NEGATIF Sitrat NEGATIF TDA NEGATIF Gelatin NEGATIF Malonat NEGATIF Inositol NEGATIF Rhamnosa NEGATIF Sukrosa NEGATIF Lactosa NEGATIF Arabinosa NEGATIF Adonitol NEGATIF Raffinosa NEGATIF Salicin NEGATIF Arginin NEGATIF Katalase NEGATIF Koagulase NEGATIF DX Lab Pseudomonas stutzeri
Hasil  pewarnaan  gram  dari  keempat  spesies  mikroba endofit adalah seperti  yang  tampak  pada gambar 3 berikut
(a) (b) (c) (d)

## Gambar 3 Hasil pewarnaan gram mikroba endofit
Keterangan:
a. Mikroba endofit dari rimpang temulawak lokasi Batu 1
b. Mikroba endofit dari rimpang temulawak lokasi Batu 2
c. Mikroba endofit dari rimpang temulawak lokasi Pandaan 1
d. Mikroba endofit dari rimpang temulawak lokasi Pandaan 2
Dari table hasil identifikasi tersebut dapat diketahui  bahawa  bakteri  endofit  yang  tumbuh dari lokasi Pandaan pertama (kode Pd1) adalah A.  viscosus ,  sedangkan  dari  lokasi  Pandaan kedua  (kode  Pd2)  adalah B.  brevis .  Sedangkan bakteri  endofit  yang  tumbuh  dari  lokasi  Batu pertama (kode Bt1) adalah A. viscosus dan dari lokasi Batu kedua (kode Bt2) adalah P. stutzeri . Sedangkan  dari  hasil  pewanaan  gram  tampak bahwa mikroba endofit dari rimpang temulawak lokasi Batu 1 merupakan gram positif, mikroba endofit  dari  rimpang  temulawak  lokasi  Batu  2 merupakan  gram  negatif, mikroba    endofit  dari rimpang temulawak lokasi Pandaan 1
merupakan  gram  positif  dan  mikroba    endofit dari  rimpang  temulawak  lokasi  Pandaan  2 merupakan gram positif.
Diantara  bakteri  endofit  yang  sudah dikenal mampu memproduksi berbagai senyawa  metabolit  sekunder  yang  bermanfaat adalah  dari  golongan  bakteri Actinomycetes . Actinomycetes telah  dikenal  sebagai  mikrobia produsen berbagai jenis antibiotic baik antijamur  maupun  antibakteri.  Sekitar  0%  dari antibiotik  yang  ada  saat  ini  diisolasi  dari Actinomycetes ,  dimana  sebagian  besar  berasal dari  genus Streptomyces .  Berbagai  jenis antibiotik  yang  dihasilkan  bakteri  ini  telah
banyak  dimanfaatkan  baik  dalam  bidang kedokteran maupun pertanian. Selain antibiotik, Actinomycetes juga mampu mensekresi berbagai  senyawa  lain  yang  berguna  dalam bidang  pertanian  seperti  zat  pengatur  tumbuh. enzim pendegradasi dinding sel seperti chitinase and β-glucanas serta siderophore . Empat  isolat  endofitik Actinomycetes dari tanaman padi lokal Lombok memiliki kemampuan    untuk    menghambat  pertumbuhan jamur fitopatogenik Fusarium sp. and Rhizoctonia  solani (Listiana  dkk,  2012). Actinomyces adalah  kelompok  ke  17  dari bakteri  yang  diakui  dalam  edisi  mutakhir Bergey’s  Manual,  termasuk  domain  bakteri. Semua Actinomyces adalah  gram  positif  dan bersifat anaerob fakultatif. Spesies Actinomyces dapat  membentuk  spora,  dan  ketika  berada dalam bentuk bakteri tunggal berbentuk batang. Secara morfologi koloni, Actinomyces berbentuk seperti fungi dengan adanya jaringan hifa  yang  bercabang  (Safinah,  2008).  Bakteri endofit Actinomycetes terbukti mampu menghasilkan  senyawa  aktif  antimikroba. Bakteri  endofit  ini  diperoleh  dari  tanaman Curcuma  domestica,  Phaleria  macrocarpa, Isotoma longiflora , dan
Symplocos
cocchinensis . Isolate Actinomycetes ini terbukti memiliki aktivitas antimikroba terhadap Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas  aeruginosa , dan Bacillus  subtilis (Sunaryanto dan Mahsunah, 2013).
Bacillus  brevis atau Aneurinibacillus migulanus dalam Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (2nd ed. 2004) disebut sebagai Brevibacillus  brevis. spesies Bacillus berbentuk batang, dapat membentuk endospore, bersifat aerob atau anaerob fakultatif, merupakan  bakteri  gram  positif.  Bakteri  ini mampu hidup pada berbagai kondisi lingkungan.  Sporanya  tahan  terhadap  panas, dingin,  radiasi,  desikasi  dan  desinfektan. Spesies Bacillus digunakan  pada  berbagai bidang  kedokteran,  farmasi,  pertanian,  dan proses  industry  karena  karakteristik  fisiologi
dan kemampuannya dalam memproduksi enzyme  hospes,  antibiotk  dan  metabolit  lain. Basitrasin dan polymyxin adalah  contoh antibiotic  yang  didapat  dari  spesies Bacillus (Turnbull, 1996)
Pseudomonas  stutzeri memiliki  habitat yang  luas  pada  berbagai  kondisi  lingkungan, dan  merupakan  pathogen  oportunistik  pada manusia. Pseudomonas  stutzeri merupakan bakteri  gram  negative  yang  berbentuk  batang, dengan  ukuran  panjang  1-3  µm  dan  lebar  0,5 µm serta memiliki flagella pada salah ujungnya (monotrikus),  tetapi  ada  pula  strain  yang memiliki flagella di samping tubuhnya. Bakteri ini  termasuk  dalam  genus Pseudomonas . Koloninya  memiliki  bentuk  yang  khas  yaitu tampak  berkerut,  berwarna  merah  kecoklatan, memiliki  konsistensi  keras,  kering,  mudah dipindahkan  dari  permukaan  yang  padat  dan memiliki  bentuk  polygonal  yang  irregular  atau zona  konsentris.  Organisme  ini  dapat  bergerak (Lalucat, et al , 2006). Penelitian tentang bakteri endofit Pseudomonas  stutzeri sudah  pernah dilakukan  sebelumnya. Pseudomonas  stutzeri pernah  diisolasi  dari  umbi  tanaman  Dahlia ( Dahlia  variabilis ).  Umbi  tanaman  dahlia mampu menghasilkan senyawa sekunder golongan  fenolik,  flavonoid  dan  saponin  yang memiliki aktivitas antimikroba. Senyawa metabolit sekunder terutama senyawa antimikroba oleh isolat bakteri endofit  ini dapat diproduksi dengan cara menumbuhkannya pada media fermentasi Mueller-Hinton Broth . Bakteri endofitik Pseudomonas stutzeri memiliki  aktivitas  antibakteri    terhadap  bakteri patogen E. coli dan S. aureus (Elita dkk, 2013). Uji aktifitas antifungi dilakukan dengan metode difusi. Hasil uji aktivitas antifungi dapat dilihat  pada  table  1  dan  gambar  2  (a,  b,  c,  d,  e dan f). Isolate mikroba endofit yang dinyatakan mempunyai  aktivitas  antifungi  adalah  jika terbentuk  zona  jernih  di  sekeliling  isolat mikroba endofit yang ditumbuhkan pada media yang telah diinokulasi oleh mikroba pathogen.
(a) (b) (c) (d) (e)
(f) Gambar 4. Isolate bakteri yang menunjukkan aktivitas antifungi Keterangan:
a. Isolate endofit dari lokasi Batu 1
b. Isolate endofit dari lokasi Batu 1 (duplo)
c. Isolate endofit dari lokasi Batu 2
d. Isolate endofit dari lokasi Batu 2 (duplo)
e. Isolate endofit dari lokasi Pandaan 2
f. Isolate endofit dari lokasi Pandaan 2 (duplo)
Tabel 1. Hasil pengukuran zona hambat isolate terhadap C. albican Kode isolate Luas zona hambat terhadap C. albican (cm) Bt 1 0,4 Bt 2 0,15 Pd 1 0,4 Pd 2 0,45
Berdasarkan  table  1  diperoleh  hasil bahwa  seluruh  isolate  mikroba  endofit  dari  2 lokasi di daerah Batu dan Pandaan memperlihatkan  potensi  aktivitas  antifungi. Isolate  dari  lokasi  2  Pandaan  memperlihatkan zona  hambat  yang  paling  luas  yaitu  0,45  mm, sedangkan  dari  lokasi  2  Batu  memperlihatkan zona  hambat  yang  paling  kecil  yaitu  0,15  cm. Isolate dari lokasi 1 Batu dan lokasi 1 Pandaan
memperlihatkan  luas  zona  hambat  yang  sama. Isolate  yang  menunjukkan  aktivitas  antifungi lebih  sempit  mungkin  mempunyai  kandungan senyawa aktif namun jumlahnya lebih kecil atau mungkin  juga  mengandung  senyawa  aktif potensial yang lain (Simarmata, dkk, 2007).
Tabel 2. Hasil pengamatan uji antifungi pada bakteri endofit Temulawak
Kode isolate Uji antifugi terhadap C. albican Bt 1 + Bt 2 + Pd 1 + Pd 2 + Keterangan: + : terbentuk zona hambat Bt 1 : temulawak yang diambil dari lokasi 1 Batu Bt 2 : temulawak yang diambil dari lokasi 2 Batu Pd 1 : temulawak yang diambil dari lokasi 1 Pandaan Pd 2 : temulawak yang diambil dari lokasi 2 Pandaan Berdasarkan penelitian tersebut didapatkan  hasil  bahwa  jenis  bakteri  endofit yang  dapat  diisolasi  dari  rimpang  temulawak ( C.  xanthorrhiza )  dari  2  lokasi  sampel  di  Batu dan  Pandaan  adalah A.  viscosus , B.  brevis dan P. stutzeri . Rimpang temulawak ( C. xanthorrhiza )  dari  2  lokasi  sampel  di  Batu  dan Pandaan menunjukkan adanya aktivitas antifungi terhadap C. albicans Temulawak  diketahui  mengandung zat  antimikroba,  salah  satu  kandungannya adalah  kurkumin  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  dan  mematikan  mikroorganisme (Ardiansyah,  2007).Komposisi  kimia  dari rimpang  temulawak  adalah  protein  pati, kurkumin  dan  minyak  atsiri.  fellandrean  dan turmerol.  Selain  itu  juga  mengandung  kamfer, glukosida,  foluymetik  karbinol.  Temulawak mengandung  minyak  atsiri  seperti  limonina yang  mengharumkan,  sedangkan  kandungan
flavonoidnya berkhasiat menyembuhkan radang.  Minyak  atsiri  juga  mampu  membunuh mikroba. (Purnowati, 2008).
Sebagian besar komponen kimia yang berasal  dari  tanaman  yang  digunakan  sebagai obat  atau  bahan  obat  merupakan  metabolit sekunder. Metabolit sekunder termasuk antibiotic  atau  antimikroba  dapa  diproduksi oleh  mikroorganisme  endofit  yang  dalam habitat  aslinya  dapat  membentuk  koloni  dalam jaringan tanaman. Mikroorganisme dapat ditemukan  dalam  batang,  umbi  akar  dan  akar tetapi  tidak  menyebabkan  penyakit  pada tanaman tersebut (Izza, 2011).
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Erna Listiana dkk terhadap bakteri endofit Actinomycetes dari tanaman padi local Lombok didapatkan  hasil  bahwa Actinomycetes dapat menghambat  pertumbuhan  jamur  fitopatogenik
Fusarium  sp.  and  Rhizoctonia  solani  (Listiana, dkk, 2012).
Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut, maka  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  potensi  antifungi  bakteri  endofit rimpang  temulawak  ( C.  xanthorrhiza )  terhadap spesies  jamur  lainnyadan  untuk  mengetahui jenis  senyawa  aktif  antifungi  yang  dihasilkan oleh  bakteri  endofit  rimpang  temulawak  ( C. xanthorrhiza ).

## DAFTAR PUSTAKA
Adila, R., Nurmiati, dan Anthoni, A. 2013. Uji Antimikroba  terhadap  Pertumbuhan Candida Albica , Staphilococcus aurens dan Eschercia  coli . Jurnal  Biologi ,  hl 6-11.
Afifah,E. 2003. Khasiat dan manfaat temulawak,  rimpang  penyembuh  aneka penyakit. Agromedika Pustaka , Jakarta.
Aini, L. Q. dan A. L. Abadi . 2004. Keragaman
Bakteri  Endofitik  dalam  Jaringan  Akar Tanaman Pisang Serta Potensi Antagonistiknya. Jurnal Ilmu-Ilmu Hayati . 16 (2) : 114-115.
Batubara,  R.,  Mohammad  Rafi,  Latifah  K. 2005. Estimasi  Kandungan  Kurkumin
pada Sediaan Herbal Komersial Secara Spektrofotometri Derivative .
JurnalSains Kimia vol 9, No. 1,: 28-3.
Castillo UF, Strobel, Ford EJ, Hess WM, Porter H,  Jensen  JB,  Albert  H,  Robison  R, Condron  MAM,  Teplow  DB,  Stevens D,  Yaver  D.  2002.  Munumbicins,  34 wide-spectrum  antibiotics  produced  by Streptomyces NRRL 30562, endophytic on Kennedia  nigriscans.  Microbiology.
148:2675−2685 . developments (Review). Drugs. 53:539-549.
Cowan, M. 1999 . Plant Products as Antimicrobial Agents . Clinical Microbiology  (12)  4:  564-582  Hwang, J.K. 2000. Dwidjoseputro, D. 1989. Dasar-dasar
Mikrobiologi . Jakarta: Djambatan Elita,  A.,  Saryono,  S.,  Christine,  J.  2013.
Penentuan  Waktu  Optimum  Produksi Antimikroba dan Uji Fitokimia Ekstrak
Kasar  Fermentasi  Bakteri  Endofit Pseudomonas  sp.  Dari  Umbi  Tanaman Dahlia (Dahlia variabilis). J. Ind.Che.Acta  Vol.  3  (2)  Mei  2013,  p.
56-62
Ezra  D et  al ..  2004.  Coronamycins,  peptide antibiotics  produced  by  a  verticillate
Streptomyces sp. (MSU-2110) endophytic on Monstera sp..
Microbiology. 150:785−793. Fatmawati,  D.A.  2008. Pola  Protein  dan Kandungan Kurkuminoid Rimpang Temulawak  (Curcuma  Xanthorrhiza Roxb.). [Skripsi]. FMIPA.ITB. Bandung. Fengxia  L,  Lijun  S,  Zhaoxin  L,  Xiaomei  B,
Yaowei  F,  Shu  L.  2007.  Isolation  and identification  of  an  endophytic  strain EJS-3  producing  novel  fibrinolytic enzymes. Curr Microbiol. 54:435−439. Hallman,  J.  Quadr-Hallman  A,  Mahaffee,  WF, Klopper,
JW. 1997. Bacterial
Endophytes  in  Agricultural  Crop.  Can
J Microbiol. 43: 895-914.
Hedge,  B.M.  2005. Antibiotic  Crisis-A  Time Bomb.  Jurnal  Kuwait  Med .  37  (2):  79- 81  Hansel,  R.  1980.  Pharmazeutische Biology, Springer-Verlag. Berlin.
Heinrich, M. 2009. Farmakognasi dan Filoterapi . Buku Kedokteran Indonesia. Jakarta.
Hallman,  J.  Quadr-Hallman  A,  Mahaffee,  WF,
Klopper, JW. 1997. Bacterial
Endophytes  in  Agricultural  Crop.  Can
J Microbiol. 43: 895-914.
Hwang,  J.K.  2000. Xhantorrhizol  a  Potential Antibacterial Agent for Curcuma Xantorrizha Against Streptococcus
Mutans . Planta Med 66: 196-197. Izza,  I.  2011. Isolasi,  Karakterisasi  dan Identifikasi Bakteri Endofit daari Tanaman  Mahkota  Dewa  (Phaleria macrocarpa)  yang  Berpotensi  Sebagai Penghasil  Antimikroba. UIN  Sunan Kalijaga, Yogyakarta.
Jawetz,E.,J.L. Melnick & E.A. Adelberg. 2004.
Medical  Microbiology .  Lange  Medical Publications, Canada.
Lalucat,  J.,  Bennasar,  A.,  Bosch,  R.,  Garcia- Valdes,  E.,  Pallero,  N.J.  2006.  Biology of Pseudomonas stutzeri . Microbiology and  Molecular  Biology  Reviews,  June 2006, p. 510–547
Levy,  S.B.  2002. Faktors  Impacting  on  the Problem  of  Antibiotic  Resistence.  J.  of Antimicrobial  Chemotherapy .  49:  25-
30.
Listiana, E., Anugrahwati, D.R., Muthahanas, I.
2012. Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri Endofitik  Actinomycetes  dari  Tanaman Padi  Lokal  Lombok .  Downloaded  on February 2, 2015
Lumyong  S,  Norkaew  N,  Ponputhachart  D,
Lumyong  P,  dan  Tomita  F,  2001. Isolation, Optimisation and Characterization  of  Xylanase  from Endophytic  fungi.  Biotechnology  for Sustainable  Utilization  of  Biological
Resources. The Tropic , 15. Manitto,  P.  1981. Biosynthesis  of  Natural Products .  Ellis  Hormood  Limited.
Koensoemardiyah (penterjemah). 1992. Biosintesis Produk Alami. IKIP Semarang Press. Melo FMP, Fiore MF, Moraes LAB, Scramin S, Teixeira MA, Melo IS. 2009.
Antifungal  compound  produced  by  the cassava  endophyte Bacillus  pumilus MAIIIM4A. Sci Agr. 66: 583−592.
Miller RV, Miller CM, Garton Kinney D et al ., 1998.  Ecomycins,  Unique  Antimucotis from Pseudomonas Virid Flava. J. Appl
Microbiol ; 151: 67-73.
Myers, RS. 2006. Antifungal Agents . Immunizing and Antimicrobial Agents. Spring 2006. MEDCH 401
Pelczar,  M.  J,  Jr.,  and  Chan  E.  C.  S,  1986,
Mikrobiologi Dasar, Edisi Kelima, Jilid I,  a.b.  Sri,  R.  H.,  dkk,  Universitas Indonesia-Press, Jakarta. Penerbit Kanisius. Yogyakarta Pelczar, M.J dan E.C.S Chan, 1998. Mikrobiologi. Penterjemah:
Hadioetomo,  R.S  dan  Tjitrosomo,  S.L.
Penerbit UI Jakarta.
Petrini  OTN,  Sieber  LT,  Viret  O.  1992.
Ecology,  Metabolite  Production  and Substrate  Utilization  and  Endhophytic Fungi . Natural Toxin .p. 185-196.
Pujiyanto S, Lestari Y, Suwanto A, Budiarti S,
Darusman LK. 2012. Alpha- glucosidase inhibitor activity and characterization of
endophytic
actinomycetes  isolated  from  some indonesian  diabetic  medicinal  plants. Int J Pharm Pharm Sci. 4: 327−333.
Purnomowati,  Sri.  2008. Khasiat  Temulawak:
Tinjauan  Literatur  tahun  1980-1997.
http://www.indofarma.co.id/index.php? option=com_content&task=view&id=2 1&Itemid=125 . Downloaded
on
Agustus 31, 2008).
Qiong-Ying W, Jun-Qiang J, Guang-Xiu T, Hui Y, Zhong-Zheng G. 2012. Isolation and characterization  of  an  antimicrobial endophytic  bacterium  ME-2  from
mulberry twig in China. Afr J Mic Res. 6: 6462−6467
Radji,  Maksum.  2005. Peranan  Bioteknologi dan Mikroba Endofit dalam Pengembangan  Obat  Herbal .  Majalah Ilmu  Kefarmasian,  Vol.  II  No.  3,  113- 126.
Rahman,  M.  2008. Aktivitas  Anti  Bakteri Senyawa Hasil Biotransformasi Kurkumin  Oleh  Mikrob  Endofil  Asal Kunyit . http://repository.ip b.ac.id/bitstream/handle/123456789/14 837/ G09mnr.pdf [15 Februari 2015]. Rahmat  Rukmana,  Ir.  1995.  Temulawak: Tanaman rempah dan obat. Ridawati, Jenie, BSL., Djuwita, I.,
Sjamsuridjal,  W.  2011.  Aktiivitas Antifungal  Minyak  Atsiri  Jinten  Putih Terhadap Candida parapsilosis  SS25, C. orthopsilosis NN14,
C. metapsilosis MP27, dan C. etchellsii MP18. Makara  Sains ,  Vol.15  No.1, April 2011: 58-62 Robinson,  T.  1991. Kandungan  Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi . ITB. Bandung.
Rosana,  Y,  Sjahrurachman,  A.,  Setyaningsih, ER. Studi  Resistensi  N.  Gonorrhoeae yang  diisolasi  dari  Pekerja  Seks Komersial  di  Beberapa  Tempat  di Jakarta. Mikrobiol  Indon. 1999;  4:  60- 63. Rukmana, R. 2004. Temu-temuan Apotek Hidup di Pekarangan . Kanisius. Yogyakarta. Ryan RP, Germaine K, Franks A, Ryan DJ and
Dowling DN. 2007. Minireview: Bacterial endophytes: recent developments  and  applications. FEMS
Microbiol Lett. 278:1−9.
Safinah. 2008. Optimasi Separasi dan Purifikasi  Senyawa  Antibiotika  yang Dihasilkan oleh Aktinomiset Endofit
Shibuya  H.  Agusta  A,  Ohashi  K,  Maehara  S, and Simanjuntak P. 2005. Biooxidation of  (/)-  Catechin  and  (-)-  Epicatechin into  3,4-Dihydroxy  flavan  Derivatives by  the  Endophytic  Fungus  Diaporthe sp.  Isolated  from  a  Tea  Plant .  Chem Pharm Bull. 53 (7): 866-7.
Sidik,  Mulyono  M.W.,  &  Muhtadi  A.,  1985,
Temulawak (Curcuma xanthorriza
Robx.) ,  Yayasan  Pengembangan  Obat Bahan Alam Phytomedica, Jakarta.
Simanjuntak,  P.,  Titik  K.P.,  Bustanussalam, Kazuyoshi  O.,  Hirotaka  S.,  2001.
Biochemical  Character  of  Endophyte Microbes  Isolates  from  Cinchona Plnts ..In Biotechnology for Sustainable Utilization  Biological  Resources  in  the Tropics. Vol. 15.
Simarmata,  R.,  Lekatompessy,  S.,  Sukimin,  H.
2007.  Isolasi  Mikroba  Endofitik  daari Tanaman Obat Sambung Nyawa
(Gynura  procumbens)  dan  Analisis Potensinya  sebagai  Antimikroba.  Berk.
Penel. Hayati: 13 (85–90) Srikandace Y, Hapsari Y, Simanjuntak P. 2007. Seleksi  mikroba  endofit Curcuma zedoaria dalam  memproduksi  senyawa kimia antimikroba. JIFI. 5(2):77−84. Strobel GA, Hess WM, Fund E, Sidhu RS, And
Yang  X.  1996a. Taxol  from  Fungal
Endophytes and the Issue of
Biodeversity. J Industrial Microbiol. 17;
417-29.
Strobel GA, Yang X, Sears J, Kramer P. Sidhu RS,  and  Hess  WM.  1996b. Taxol  from Pestatiopsis Microspore an Endophytic Fungus of Taxus Wallachiana. Microbiology. 142: 435-40.
Sunaryanto, R., Mahsunah, A.H. 2013. Isolation, Purification, and Characterization of Antimicrobial Substances from Endophytic Actinomycetes.  Makara J.  Sci .  17/3
(2013), p. 87-92
Sundari,  D.,  Dzulkarnain,  B.,  Widowati,  L., Astuti,  Y.,  Adjirni.,  Pudjiastuti.  1998. Penelitian  Tanaman  Obat  di  Beberapa
Perguruan  Tinggi  di  Indonesia  IX . Jakarta: Pusat Penelitian dan Pengembangan Farmasi, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Departemen Kesehatan RI.
Sunitha VH, Ramesha A, Savitha J, Srinivas C. 2012. Amylase production
by
endophytic fungi C ylindrocephalum sp. isolated  from  medicinal  plant  A lpinia calcarata (haw.)  Roscoe. Braz  J Microbiol. 2012:1213−1221.
Susanti,  Ivy.  2008. Pemprov  NAD  Luncurkan Tahun  Sanitasi  Internasional .  Harian
Waspada  Online  03  Maret  2008, diakses  dari http://www.waspada.co.id tanggal 03 Maret 2008. Syaifuddin,  M.  2004. Peranan  Teknik  Nuklir dalam Pemberantasan Penyakit Infeksi, Puslitbang  Keselamatan  Radiasi  dan Biomedika Nuklir-BATAN . Bulletin
Alara 5 (1); 15-22.
Taechowisan  T,  Chuaychot  N,  Chanaphat  S,
Wanbanjob A, Shen Y. 2008. Biological activity of chemical constituents isolated from Streptomyces sp.  Tc052  and  endophyte  in Alpinia galanga . Int J Pharm. 4:95−101.
Taechowisan  T,  Lumyong  S.  2003.  Activity  of endophytic actinomycetes from roots of Zingiber officinale and Alpinia galanga against  phytopathogenic  fungi. Ann Microbiol. 53:291−298.
Tan,  R.  X.  and  W.  X.  Zou.  2001.  Endophytes:
A  rich  of  functional  metabolites. Nat.
Prod. Rep. 18 : 448-459.
Tjitrosoepomo,  G.  1994. Taksonomi  Tanaman Obat-obatan . UGM. Yogyakarta.
Tortora, G.J., B.R/ Funke, Christine L.C. 2001.
Microbiology an Introduction .
International  Edition.  Addison  Wesley Longman, Inc. New York. Isolation, id.
Turnbull,  P.C.T.  1996.  Bacillus.  In:  Baron,  S., editor.  Medical  Microbiology.  4 th edition.  Galveston  (TX):  University  of Texas  Medical  Branch  at  Galvaston. Chapter 15 Utami,  U.  2011. Isolation,  Identification  and antimicrobial  activities  selection  of endophytic  bacterial  from  Mangrove Bruguiera Gymnorrhiza ..Intern. Journal of  Academic  Research,  vol.3,  p.  187- 194.
Waluyo,Lud.  2008.  Dasar  Teknik  Metode
Mikrobiologi. Malang: UMM Press. Wikipedia. 2015. Actinomyces . http://en.wikipedia.org/wiki/Actinomyc es . Downloaded on February 2, 2015