## ACTIVITY TEST OF MARINE ORGANISMS EXTRACT AND FRACTION OF Aaptos Aaptos SPONGE AGAINST Escherichia coli AND Staphylococcus aureus
UJI AKTIVITAS EKSTRAK dan FRAKSI ORGANISME LAUT SPONS Aaptos aaptos TERHADAP BAKTERI Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Sitti Juliah Nurhamidin 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Elly Juliana Suoth 1)
1) Program Studi Farmasi. FMIPA. UNSRAT, Manado 95115
*sittijuliah@gmail.com

## ABSTRACT
Aaptos  aaptos  Sponge  is  one  of  the  marine  biota  that  is  very  prospective  as  a  source  of  natural compounds  such  as  peptides,  terpenoids,  steroids,  acetogenins,  alkaloids,  cyclic  halides  and  nitrogen compounds.  This  study  aims  to  determine  whet  her  there  is  antibacterial  activity  of  the  extract  and fraction of Sponge Aaptos aaptos from Manado Bay waters against microbes Staphylococcus aureus and Escherichia Coli. Aaptos aaptos Sponge was extracted with 95% ethanol as solvent, fractionation using partition method with n-hexane, choloform and methanol as solvent and antibacterial testing usingagar diffusion method Kirby Baeur. The best antibacterial activity was found in the methanol fraction with an inhibitory power of 18.12 mm against Escherichia Coli bacteria, and an inhibitory power of 14.71 mm on Staphylococcus aureus. The results of this study indicate that the methanol fraction of the Aaptos aaptos Sponge  has  the  ability  to  inhibit  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria  which  can  be categorized as strong.
Keywords : Aaptos aaptos Sponge, Antibacterial , Staphylococcus aureus, Escherichia

## ABSTRAK
Spons  Aaptos  aaptos merupakan  salah  satu  biota  laut  yang  sangat  prospektif  sebagai  sumber  senyawa bahan-bahan alami antara lain peptida, terpenoid, steroid, asetogenin, alkaloid, halida siklik dan senyawa nitrogen.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  untuk  mengetahui  apakah  terdapat  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  dan  fraksi  Spons Aaptos  aaptos dari  perairan  Teluk  Manado  terhadap  mikroba Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  Spons Aaptos  aaptos diekstraksi  dengan  pelarut  eanol  95%,  fraksinasi menggunakan metode partisi dengan pelarut n-heksan, kloroform dan metanol dan pengujian antibakteri menggunakan  metode  difusi  agar Kirby  Bauer. Aktivitas  antibakteri  paling  baik  terdapat  pada  fraksi metanol dengan daya hambat sebesar 18,12 mm menghambat bakteri Escherichia coli , dan daya hambat sebesar  14,71  mm  pada Staphylococcus  aureus .  Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  fraksi  metanol Spons Aaptos aaptos memiliki kemampuan menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli yang dapat dikategorikan kuat.
Kata Kunci: Spons Aaptos aaptos, Antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Laut  menutupi  71%  dari  permukaan bumi,  oleh  karena  itu  sangat  banyak  potensi yang    bisa  diambil  dari  laut  seperti  sumber makanan,  zat  warna,  kosmetik  bahkan  obat- obatan.  Pemanfaatan  organisme  laut  banyak digunakan  sebagai  sumber  senyawa  obat  baru. Hal  ini  disebabkan  oleh  kemampuan  organisme laut  seperti  tumbuhan  dan  invertebrata  laut dalam  memproduksi  senyawa  kimia  yang mempunyai  keanekaragaman  hayati  yang  tinggi dengan  struktur  kimia  yang  khas  (Sayed et  al., 2001).
Spons adalah hewan metazoa multiseluler,  yang  tergolong  ke  dalam  filum porifera,  yang  memiliki  perbedaan  struktur dengan  metazoa  lainnya.  Hal  ini  disebabkan seluruh  tubuh  Spons  terbentuk  dari  sistem  pori saluran  dan  ruang-ruang  sehingga  air  dapat dengan  mudah  mengalir  keluar  dan  masuk secara terus menerus (Kozloff, 1990).
Spons Aaptos  aaptos mempunyai  nilai ekonomis  karena  Spons  dari  genus  yang  dapat menghasilkan  senyawa  khusus  yaitu  aaptamine yang  dapat  digunakan  dalam  bidang  farmasi. Spons  laut  ini  terbagi  atas  dua  bagian  yaitu secara  eksternal  berwarna  ungu  kemerahan  dan secara internal kuning kecoklatan. Pada specimen intertidal, permukaannya berisi butiran butiran  yang  kecil,  berkutil,  atau  halus sedangkan  spesimen  sublitoral  kelihatan  seperti bongkahan-bongkahan tidak beraturan.
Mempunyai tekstur tubuh yang kuat tetapi dapat ditekan.  Dimensi  tubuhnya  mempunyai  ukuran tinggi 1.0 – 9.0 cm, lebar 4.2 – 4.8 cm, ketebalan dapat  mencapai  1.2  cm.  Oskulanya  kecil  dan melimpah,  yang  terdapat  dibagian tengah  apical pada  Spons  dengan  diameter  3.0  –  4.0  mm. Rangkanya tersusun secara radial dengan sistem spikula  yang  kuat  (Bergquist,  1968).  Spons Aaptos  aaptos yang  menghasilkan  seperti metabolit sekunder seperti mengandung senyawa-senyawa  bioaktif  potensial,  seperti antibakteri.  Senyawa-senyawa  tersebut  telah dibuktikan memiliki aktivitas sebagai anti tumor, sehingga  potensial  sebagai  sumber  obat-obatan baru (Pelletier et al ., 1987).
Antibakteri  merupakan  zat  yang  dapat mengganggu pertumbuhan atau bahkan mematikan  bakteri  dengan  cara  mengganggu
metabolisme mikroba yang merugikan. Mekanisme  kerja  dari  senyawa  antibakteri diantaranya  yaitu  menghambat  sintesis  dinding sel, menghambat keutuhan permeabilitas dinding sel  bakteri,  menghambat  kerja  enzim,  dan menghambat  sintesis  asam  nukleat  dan  protein (Dwidjoseputro, 1980).
Salah  satu  zat  antibakteri  yang  banyak dipergunakan  adalah  antibiotik.  Antibiotik adalah senyawa kimia khas yang dihasilkan atau diturunkan  oleh  organisme  hidup  termasuk struktur  analognya  yang  dibuat  secara  sintetik, yang  dalam  kadar  rendah  mampu  menghambat proses  penting  dalam  kehidupan  satu  spesies atau  lebih  mikroorganisme  (Siswando  dan Soekardjo,  1995).  Menurut  penelitian  Sitti (2019),  hasil  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  ekstrak  kasar  dan  fraksi  dari  Spons Aaptos  aaptos memiliki  aktivitas  antimikroba karena mampu menghambat pertumbuhan mikroba uji Staphylococcus aureus dengan zona hambat  yang  dapat  dikategorikan  kuat.  Nilai rata-rata dari aktivitas antimikroba ekstrak kasar etanol  adalah  20,32  mm  dengan  kategori  kuat, untuk  fraksi  kloroform  13,28  mm  dengan kategori  sedang  dan  fraksi  metanol  18,48  mm dengan kategori kuat .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan April  2021  –  Juni    2021  di  laboratorium penelitian  lanjut  Program  Studi  Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian yang menggunakan metode eksperimental laboratorium yang menguji aktivitas antimikroba dari ekstrak dan fraksinasi Spons Aaptos aaptos.

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  masker,  sarung  tangan,  pisau,  gunting, telenan, Scuba Diving, kantong plastik, Erlenmeyer  ( Pyrex ),  corong  pisah,  gelas  kimia ( Pyrex ),  gelas  ukur  ( Pyrex ),  oven,  timbangan analitik,  cawan  petri,  autoklaf,  pinset, magnetic steerer ,  pipet  tetes,  mikro  tubes,  batang
pengaduk, Laminar  Air  Flow (Clean  Bench), lemari pendingin, incubator ( N-biotek ), mikropipet,  digital  caliper,  kertas  label  dan kamera untuk keperluan dokumentasi.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu Spons Aaptos aaptos , bakteri uji Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli ,  etanol  95%,  akuades, methanol, n-heksan, khloroform, pepton, natrium  klorida,  media  agarB1( beef  extract ), Kloramfenikol,  kertas  cakram,  label,  spidol permanen,  tissue,aluminium  foil,  kertas  saring, dan sarung tangan.

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini diperoleh dari teluk Manado. Sampel diambil dengan menggunakan alat bantu (Scuba diving) . Setelah  sampel  diambil  kemudian  dimasukkan dalam  kantong  plastik  jepit  yang  sudah  di siapkan  dan  di  simpan  dalam  kotak  pendingin lalu  dibawah  ke  Laboratorium  Farmasi  Lanjut Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi Manado .

## Preparasi Sampel
Spons Aaptos  aaptos yang  sudah diambil  dibersihkan,  lalu  dipotong  kecil-kecil dan  langsung  dimasukkan  kedalam  botol  yang berisi  pelarut  etanol  95%.  Selanjutnya  sampel difoto dan diberi label serta nomor sampel,untuk selanjutnya sampel tersebut diekstraksi menggunakan  metode  maserasi  selama  24  jam dan diulangi sebanyak 3x (3x24).

## Ekstraksi
Sampel  Spons Aaptos  aaptos 380  g diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Sampel dipotong kecil-kecil kemudian dimasukkan  kedalam  botol  dan  digunakan pelarut  yang  digunakan  yaitu  etanol  95%. Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara merendam  sampel  dengan  larutan  etanol  95% selama  3x24  jam.  Hasil  dari  maserasi  disaring agar  mendapatkan  hasil  filtratnya  yang  baik, kemudian  hasil  dari  filtrat  yang  didapatkan  dari 3 kali pengulangan diuapkan sehingga menghasilkan  ekstrak  kental  dari  sampel,  lalu tuangkan ke cawan petri dan masukan ke dalam
oven untuk dikerjakan dan mendapatkan ekstrak kasar  dari  sampel  Spons Aaptos  aaptos . Selanjutnya  ekstrak  etanol  kasar  Spons Aaptos aaptos digunakan dalam fraksinasi dan pengujian antibakteri.

## Fraksinasi
Ekstrak  Spons Aaptos  aaptos sebanyak 14  g  yang  diperoleh  dimasukkan  kedalam erlenmeyer,  kemudian  sebanyak  200  mL dilarutkan  dengan  metanol  80%  .  Setelah  larut, ditambahkan  pelarut  n-heksana  sebanyak  200 mL  dan  dimasukan  kedalam  corong  pisah. Setelah  itu  dikocok  dalam  corong  pisah  sampai homogen  dan  biarkan  hingga  terbentuk  lapisan metanol  dan  lapisan  n-heksan.  Masing-masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda dan  diberi  kertas  label.  Lapisan  n-heksan selanjutnya  dievaporasi  menggunakan  oven hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh ekstrak fraksi n-heksan sebanyak 1,49 g. Setelah itu  tambahkan  akuades  100  mL  pada  lapisan metanol, lalu dipartisi dengan pelarut kloroform dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam  corong pisah  dikocok  sampai  homogen  lalu  biarkan hingga  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan metanol  dan  lapisan  kloroform.  Masing-masing lapisan    ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  kloroform  selanjutnya  dievaporasi menggunakan oven hingga kering lalu ditimbang dan diperoleh fraksi kloroform sebanyak 0,36 g. Lapisan metanol dievaporasi menggunakan oven hingga  kering  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  metanol  sebanyak  10,04  g.  Ketiga  fraksi yang  diperoleh  digunakan  dalam  pengujian antibakteri  dan  dihitung  nilai  rendemen  dari masing-masing fraksi dengan persamaan sebagai berikut :
Rendemen =

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antimikroba  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  ±  15  menit  pinset,  L- glass,  dan  jarum  ose  di  bakar  di  atas  api langsung (Pembakar spritus) (Waluyo, 2009)

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5g  ,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  Natrium  klorida  0,3g  ,  dan aquades  sebanyak  100  mL  aduk  sampai  rata, kemudian dibuat homogen menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ℃ selama  15  menit.  Dipipet  1  mL  media  cair  B1, kemudian  masukkan  dalam  tabung  reaksi  dan tutup dengan aluminium foil. Media cair B1 siap digunakan  sebagai  media  kultur  bakteri  (Ortez, 2005).

## Kultur B1 bakteri Uji
Bakteri  yang  akan  digunakan  yaitu Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli. Media cair B1 yang sudah disiapkan, ditambahkan  dengan  masing-masing  bakteri yang  sudah  dikultur  sebanyak  100  µL,  media yang  telah  padat  ditutup  dengan  menggunakan aluminium  foil agar  bebas  terkontaminasi  dan diinkubasi  dalam  inkubator  selama  1x24  jam pada suhu 37ºC (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif dan Positif
Pengujian antimikroba ini dengan kontrol positif yang digunakan yaitu kloramfenikol paper disc. Kontrol negatif dalam penelitian  yaitu  menggunakan  pelarut  metanol yaitu dengan cara membuat larutan stok metanol sebanyak  200  µL  metanol  lalu  ditotolkan  pada kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  dibuat  dengan menggunakan  cara  melarutkan  ekstraksi  dan fraksinasi Spons Aaptos aaptos dengan konsentrasi  250  µg/50  µL  yaitu  dengan membuat larutan stok, dengan cara ekstrak kasar etanol  ditimbang  sebanyak  0,0250  g,  kemudian dilarutkan dalam 5 mL metanol. Perlakuan yang sama  juga  dilakukan  untuk  fraksi  n-heksana, fraksi metanol, dan fraksi kloroform.

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  (meat extract) 0,3 g, natrium klorida 0,3, agar 1,5 g dan aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian dibuat homogen menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ℃
selama 15 menit. Media agar B1 siap digunakan untuk uji aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  yaitu  Metode Difusi  (Disc  Diffusion Kirby  and  Bauer ). Dengan  pengujian  aktivitas  antimikroba  ini cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan  berukuran 6  mm  dengan  daya  serap  50  µL  pada  tiap cakram. Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya  (250  µg/50  µL)  ditotolkan  pada masing-masing  cakram  dengan  menggunakan mikropipet.  Media  agar  B1  yang  sudah diautoklaf  pada  suhu  121ºC  selama  15  menit, kemudian  di  dinginkan  sampai  suhu  40ºC. Media  agar  B1  dituangkan  ke  cawan  petri, kemudian  bakteri  yang  telah  dikultur  dalam tabung  reaksi  diambil  sebanyak  100  µL,  lalu dipipet dan diinokulasi pada media agar B1 dan tunggu  sampai  media  B1  mengeras.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan  nomor sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas  cakram yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  spons Aaptos aaptos kedalam  cawan  petri  menggunakan pinset  lalu  diinkubasi  selama  1x24  jam  (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam dengan  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitar cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan diameter  zona  hambat.  Diameter  zona  hambat diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakan digital caliper dengan cara diukur diameter  total  zona  bening  cakram.  Kemudian diameter  zona  hambat  tersebut  dikategorikan kekuatan daya antibakterinya (Fridly, 2014)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dari Spons Aaptos  aaptos dilakukan  pada  bakteri Escherichia  coli mewakili  bakteri  Gram  negatif, bakteri Staphylococcus  aureus yang  mewakili bakteri Gram positif menggunakan metode difusi agar (difusi Kirby-Bauer yang telah dimodifikasi). Hasil disajikan pada tabel 1 dan 2.

## Pembahasan
Pengujian  ini  menggunakan  metode difusi  agar  dengan  cara  kertas  cakram  yang berisi  senyawa  antimikroba  diletakkan  pada media  pada  yang  telah  diinokulasi  bakteri. Senyawa  antimikroba  akan  berdifusi  ke  dalam media  padat  yang  diinokulasikan  bakteri sehingga  menghambat  pertumbuhan  bakteri yang ditandai dengan terbentuknya daerah jernih di sekeliling kertas cakram (Brooks et al , 2005). Metode difusi digunakan karena prosedurnya yang sederhana, mudah dan praktis untuk  dikerjakan  dan  dapat  melihat  sensitivitas berbagai  jenis  mikroba  terhadap  antimikroba (Mpila,  2012).  Penggunaan  mikroba  hal  ini bertujuan  melihat  apakah  ekstrak  dan  fraksi Spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas antimikroba  terhadap  mikroba  patogen  pada tubuh  manusia  dan  untuk  mengetahui  spektrum dari  aktivitas  antimikroba  Spons Aaptos  aaptos memiliki  spektrum  luas  (membunuh  banyak jenis mikroba) atau spektrum sempit (membunuh  salah  satu  mikroba)  (Tunggali, 2019).
Hasil  yang  diperoleh dalam  uji  aktivitas antimikroba  dilakukan  pengamatan  setelah inkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  1x24  jam dengan 3 kali pengulangan pada masing-masing bakteri.  Aktivitas  yang  terbentuk  terlihat  dari adanya  zona  hambat  (zona  bening)  disekitaran cakram  dengan  ukuran  cakram  ( paper  disc )  6 mm,  membuktikan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi Spons Aaptos aaptos yang diujikan menunjukkan kepekaan terhadap masing-masing mikroba  dan  antibiotik  yang  digunakan  sebagai kontrol positif.
Konsentrasi  yang  digunakan  yaitu  250 µg  dalam  setiap  kertas  cakram  yang  memiliki daya  serap  50  µg  dari  sampel  Spons Aaptos aaptos terhadap  bakteri  uji Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  Hasil  pengukuran diameter zona hambat dari ekstrak etanol, fraksi n-Heksan,  fraksi  kloroform,  dan  fraksi  metanol terhadap  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli ditunjukkan pada Tabel 1 dan 2.
Tabel 1.  Hasil  pengujian ekstrak fraksi Spons Aaptos aaptos terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus
Ulangan Diameter zona hambat (mm) terhadap Staphylococcus aureus Ekstrak EtOH Fraksi N-Hexana Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 15,14 11,01 13,59 15,39 40,32 0 II 15,13 10,30 14,84 14,83 III 14,75 9,81 14,21 13,91 Total 45,02 31,12 42,64 44,13 15,00 10,37 14,21 14,71
Tabel 2. Hasil pengujian ekstrak fraksi Spons Aaptos aaptos terhadap bakteri uji Escherichia coli Ulangan Diameter zona hambat (mm) terhadap Escherichia coli Ekstrak EtOH Fraksi N-Hexana Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 12,43 8,71 11,66 18,40 33,53 0 II 12,71 9,21 11,65 18,38
III 11,67 8,19 11,47 17,58 Total 36,81 26,11 34,78 54,36 12,27 8,70 11,59 18,12 Hasil pengukuran diameter zona hambat digolongkan berdasarkan klasifikasi zona hambat  menurut  (Davis  and  Stout  )  yaitu meliputi  respon  lemah  dengan  diameter  5  mm, respon sedang dengan diameter 5-10 mm, respon kuat  dengan  diameter  10-20  mm,  dan  respon sangat kuat dengan diameter >20 mm.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu metanol,  terlihat  dari  hasil  yang  diperoleh metanol tidak menunjukkan adanya zona hambat pada  pengujian  yang  dilakukan  pada  masing- masing  mikroba  uji.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wewengkang et al. , (2014) dan Mujipradhana, (2018)
membuktikan  bahwa  kontrol  negatif  metanol yang  digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji antimikroba,  sehingga  daya  hambat  yang terbentuk tidak dipengaruhi oleh  pelarut melainkan  karena  aktivitas  senyawa  yang  ada dalam  Spons Aaptos  aaptos .  Kontrol  positif yang digunakan yaitu kloramfenikol. Kloramfenikol dipilih karena merupakan antibiotik  berspektrum  luas.  Kloramfenikol memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  lebih  besar terhadap bakteri uji dibandingkan ekstrak etanol, fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform,  dan  fraksi metanol.  Diameter  zona  bening  yang  dihasilkan kloramfenikol  pada Staphylococcus  aureus sebesar  40,32  mm  sedangkan  pada Escherichia coli sebesar 33,53 mm.
Hasil  ekstrak  kasar  kasar  etanol,  fraksi kloroform  ,  fraksi  metanol  dan  fraksi  N-heksan pada  Spons Aaptos  aaptos dari semua  mikroba uji yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ,  terlihat  yang  memberikan  daya  hambat yang  paling  besar  terdapat  pada  bakteri Staphylococcus aureus dengan jumlah 15,00 mm dengan  kategori  kuat,  fraksi  kloroform  14,21 mm  dengan  kategori  kuat,  fraksi  metanol  14,71 mm  dengan  kategori  kuat,  dan  fraksi  N-heksan 10,37  mm  dengan  kategori  kuat.  Sedangkan pada bakteri Escherichia coli terlihat memberikan  daya  hambat  pada  ekstrak  etanol
sebesar  12,27  mm  dengan  kategori  kuat,  fraksi kloroform  11,59  mm  dengan  kategori  kuat, fraksi  metanol  18,12  mm  dengan  kategori  kuat dan  fraksi  N-heksan  8,70  mm  dengan  kategori sedang. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak dan fraksi  dari  Spons Aaptos  aaptos memiliki  daya hambat  yang  lebih  peka  pada Staphylococcus aureus diband  ingkan Escherichia  coli. Bakteri Gram  positif  cenderung  lebih  sensitif  terhadap antimikroba,  karena  struktur  dinding  sel  bakteri Gram  positif  lebih  sederhana  dibandingkan struktur  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif sehingga  memudahakan  senyawa  antimikroba untuk  masuk  kedalam  sel  bakteri  Gram  positif (Murniasih, 2003).

## KESIMPULAN
Hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  dan  fraksi dari  Spons Aaptos  aaptos memiliki  aktivitas antimikroba karena mampu menghambat pertumbuhan  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan  aktivitas  yang paling  terjadi  pada  fraksi  metanol  dengan  daya hambat  sebesar  18,12  mm  menghambat  bakteri Escherichia coli , dan daya hambat sebesar 14,71 mm menghambat bakteri Staphylococcus aureus yang dapat dikategorikan kuat.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  senyawa  apa  yang  efektif menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus maupun Escherichia  coli yang  ada  pada  fraksi metanol.

## DAFTAR PUSTAKA
Bergquist, P.R. 1968. The Marine Fauna of New Zealand: Porifera, Demospongiae, Part 1 (Tetractinomorpha  and  Lithistida).  New Zealand  Department  of  Scientific  and Industrial Research. New Zealand Oceanographic Institute Memoirs.
Brooks,  G.  L.,  Butel,  J.S.,  Morse,  S.A.  2005.
Mikrobiologi Kedokteran Ed. 23,
Translation  of  Medical  Microbiology,
23th  Ed.  Alih  Bahasa  oleh  Hartanto, Salemba Medika, Jakarta.
Dwidjoseputro,  D.  1980.  Pengantar  Fisiologi Tumbuhan. Gramedia, Jakarta.
Davis,  W.W  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Microbiology. Vol. 22 No (4).
Sayed  E,  Mohamed  AG,  Noval  L,  Mahfouz  A, Zeid  HA.  2001.  Malnutrition  Among Pre-School  Children  in  Alexandria, Egypt. Journal Health Popular Nutrition. Centre  for  Health  and  Population Research. Vol. 19 No (4).
Fridly M , Defny SW, Frenly W. 2014. Aktivitas Antibakteri  Dan  Karakterisasi  Senyawa Spons  Haliclona  sp.  Yang  Diperoleh Dari  Teluk  Manado.  Jurnal  Ilmiah. PHARMACON.  Farmasi  UNSRAT. Vol.3 No (4).
Kozloff,  EN.  1990.  Invertebrates.  Saunders College Publishing.
Mpila,  D.  A.  2012.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana  ( Coleus atropurpureus benth ) Terhadap
Staphylococcus aureus , Escherichia coli dan Pseudomas  aeruginosa Secara Invitro [Skripsi]. Program Studi Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Murniasih,  T.  2003.  Metabolit  Sekunder  Dari Spons  Sebagai  Bahan  Obat-Obatan. Oseana . Vol 28 No. (3).
Mujipradhana,  V.,  Defny,  W.,  Edi,  S.  2018 Aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak ascidian herdmania momus pada mikroba  patogen  manusia.  Jurnal Ilmiah Farmasi. Vol. 7 No (3).
Ortez,  J.H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual  of  Antimicrobial  Susceptibility Testing.  Marie  B .  Coyle  (Coord.Ed). American Society for Microbiology.
Pelletier  JC,  Cava  MP.  1987.  Synthesis  of marine alkaloids aaptamine and demethyloxyaaptamine  of  the  parent structure  didemethoxyaaptamine.  J  Org Chem . 52: 616-622. Siswando  dan  Soekardjo,  B.  1995.  Kimia Medisinal. Universitas Airlangga, Surabaya. Tunggali  SN.,  Simbala  H.,  Rotinsulu  H.  2019. Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Dan  Fraksi Spons Aaptos aaptos Terhadap
Pertumbuhan Escherichia  coli, dan Staphylococcus  aureus. Jurnal  Ilmiah. PHARMACON. Farmasi UNSRAT. Vol 8 No (1).
Wewengkang,  D.,  Deiske.  S.,  Hengki.  R.  2014. Karakterisasi  dan  Bioaktif  Antibakteri Senyawa  Spons Haliclona sp.  Dari Teluk  Manado.  Jurnal  LPPM  Bidang Sains dan Teknologi. Vol 1 No (1).
Waluyo,  L.  2009. Teknik  dan  Metode  Dasar Mikrobiologi . UMM, Malang.