## EFEK LAMA WAKTU PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
SELEDRI ( Apium graveolens L.) TERHADAP PENCEGAHAN

## PENINGKATAN KADAR IL-1β PADA TIKUS MODEL ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY
Celery (Apium graveolens L .) Ethanol Extract in the Prevention of Increases Il-1β In Ischemia-Reperfusion Injury Rats Model
Afifah 1*) , Khusnul Muflikha 2 , Viva Ratih Bening Ati 1
1 Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto, Jawa Tengah, Indonesia
2 Departemen Fisiologi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto, Jawa Tengah, Indonesia
*) Alamat korespondensi: afifah2403@gmail.com

## ABSTRACT
Ischemia-reperfusion  injury  (IRI)  is  the  condition  that  disrupted  the  blood  supply  to  the  organ followed by the restoration of blood flow. IRI in the kidneys promotes the inflammatory cascade. Interleukin- 1β (IL-1β) belongs to the most powerful pro-inflammatory cytokine that released in the early phase of IRI. Prevention of inflammation  is one of the strategies for reducing  kidney damage due to  IRI. Celery ( Apium graveolens L) is a natural  resource that  reported has anti-inflammatory and antioxidant effects. This study aimed to investigate the effect of duration of the administration ethanol extract of celery on IL-1β level in the IRI  rat  model.  Twenty-five  rats  male  Sprague  Dawley,  2-3  months  old  were  divided  into  5  groups:  Sham operations (SO, n=5), Ischemia-reperfusion (IR, n=5), celery 1000 mg/ kg BW for 7 days before IR (IR7) (IR7, n=5), 14 days before IR (IR14, n=5), 28 days before IR (IR28, n=5). The IL-1β level was assessed using the ELISA. Data were analyzed using One-way ANOVA (p<0.05). The results showed that the mean of IL-1β levels in the IR7 group (5.99±4.28 ng/L) and R14 (4.68±2.64 ng/L) were lower than IR group (8.19±5.36 ng/L), while the  R28  group  (9.05  ±  4.38  ng/L)  was  higher  than  the  IR  group  (8.19±5.36  ng/L).  In  conclusion,  the administration of celery ethanol extract 1000 mg/ kg BW for 7 days and 14 days can prevent the increase of IL-1β level in the IRI rat model.
Key words : Apium graveolens L., celery, ischemia-reperfusion injury, IL-1β.

## ABSTRAK
Ischemia-reperfusion injury (IRI) adalah suatu keadaan yang terjadi ketika suplai darah sebagian atau seluruh  organ  terganggu  diikuti  pemulihan  aliran  darah.  IRI  pada  ginjal  memicu  terjadinya  inflamasi. Interleukin-1β  (IL-1β)  termasuk  sitokin  pro-inflamasi  paling  kuat  yang  keluar  selama  fase  awal  IRI. Pencegahan  terhadap  inflamasi  merupakan  strategi  untuk  menurunkan  kerusakan  ginjal  akibat  IRI.  Seledri merupakan salah satu bahan alam yang diketahui mempunyai efek antiiflamasi dan antioksidan. Penelitian ini bertujuan  mengetahui  efek  lama  waktu  pemberian  ekstrak  etanol  seledri  terhadap  pencegahan  peningkatan kadar IL-1β pada tikus model IRI. Sebanyak 25 ekor tikus jantan Sprague Dawley , 2-3 bulan, dikelompokkan menjadi 5, yaitu Sham Operation (SO, n=5), Ischemia-reperfusion (IR, n=5), seledri 1000 mg/kgBB selama 7 hari sebelum IR(IR7, n=5), 14 hari sebelum IR(IR14, n=5), dan 28 hari sebelum IR(IR28, n=5). Kadar IL-1β diukur menggunakan metode ELISA. Data dianalisis dengan One Way ANOVA (p<0,05). Rerata kadar IL-1β pada kelompok IR7 (5,99±4,28 ng/L) dan IR14 (4,68±2,64 ng/L) lebih rendah dibandingkan dengan kelompok IR (8,19±5,36 ng/L), sedangkan kelompok IR28 (9,05±4,38 ng/L) lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok IR  (8,19±5,36  ng/L).  Pemberian  ekstrak  etanol  seledri  1000  mg/kgBB  selama  7  hari  dan  14  hari  dapat mencegah peningkatan kadar IL-1β pada tikus model IRI.
Kata kunci: Apium graveolens L., ischemia reperfusion injury, IL-1β, seledri.

## PENDAHULUAN
Ischemia-reperfusion  injury (IRI) adalah  suatu  keadaan  yang  terjadi  ketika suplai  darah  sebagian  atau  seluruh  organ terganggu  diikuti  oleh  pemulihan  aliran darah  kembali.  Kondisi  IRI  dapat  terjadi setelah  infark,  sepsis,  dan  transplantasi organ.  Pada  ginjal,  IRI  dapat  disebabkan oleh henti jantung (hipoperfusi sistemik), syok, intervensi bedah yang mengarah ke hipoperfusi ginjal seperti aortic crossclamping ,  nefrektomi  parsial,  dan transplantasi  (Chatauret et  al .,  2014;
Malek  dan  Nematbakhsh,  2015).  IRI merupakan  penyebab  tersering acute kidney injury (AKI).
IRI  pada  ginjal  memicu  kaskade inflamasi dan semakin parahnya kerusakan  ginjal.  Inflamasi  memiliki peran utama pada patofisiologi AKI akibat iskemia  (Bonventre  dan  Zuk,  2004).  Sel mast dan makrofag menghasilkan reactive oxygen species (ROS) yang menyebabkan aktivasi  sel  endotel  dan  selanjutnya  sel endotel mengekspresikan berbagai kemokin sdan molekul adesi dan menyebabkan  akumulasi  leukosit  pada tempat  terjadinya  cedera  (Rusai et  al ., 2008).
Kemokin  merupakan  mediator utama  pada  inflamasi  yang  meregulasi sitokin  proinflamasi,  ekspresi  molekul adesi,  aktivasi  dan  infiltrasi  leukosit
(Malek  dan  Nematbakhsh,  2015).  Selain kontribusi  leukosit  dan  sel  endotel terhadap  respon  inflamasi  akibat  cedera iskemik,  epitel  tubulus  ginjal  juga menghasilkan mediator yang mempotensiasi inflamasi, antara lain yaitu tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6  (IL-6),  interleukin-1β  (IL- 1β)  dan transforming  growth  factor -β (TGF- β) (Bonventre dan Zuk, 2004).
IL-1β  termasuk  kelompok  sitokin pro-inflamasi  paling  kuat  yang  keluar selama  fase  awal  reperfusi  setelah iskemia.  IL-1β  dapat  memicu  apoptosis dan proses inflamasi. Selanjutnya inflamasi  diregulasi  oleh  molekul  adesi yang  memperantarai  infiltrasi  leukosit  ke jaringan yang mengalami cedera. Ekspresi IL-1β pada ginjal mencapai kadar tertinggi yaitu  24  jam  setelah  induksi  iskemia (Rusai et  al .,  2008).  Strategi  pencegahan terhadap  inflamasi  merupakan  salah  satu strategi untuk menurunkan tingkat kerusakan pada ginjal akibat IRI.
Upaya  pencegahan  menggunakan bahan alam merupakan salah satu potensi yang dapat dilakukan mengingat Indonesia  merupakan  negara  yang  kaya bahan alam. Seledri merupakan salah satu bahan alam yang banyak kita temukan di sekitar  kita  dan  selama  ini  banyak dimanfaatkan  masyarakat  sebagai  bahan makanan.  Tanaman  seledri  diketahui
mempunyai efek farmakologi yaitu sebagai antinflamasi (Taylor et al ., 2012;
Wulandari et  al., 2016),  antioksidan (Kooti  dan  Daraei,  2017;  Sameh et  al. ,
2011), antihipertensi (Kooti et al ., 2014).
Penelitian Afifah et al ., (2019) menunjukkan bahwa ekstrak etanol seledri dosis  1000  mg/kg  BB  dapat  mencegah kerusakan  ginjal  akibat  IRI.  Hingga  saat ini  belum  ada  penelitian  yang  meneliti efek lama waktu pemberian ekstrak etanol seledri  terhadap  pencegahan  peningkatan kadar  IL-1β  pada  tikus  model  IRI Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek lama waktu pemberian ekstrak etanol seledri  terhadap  pencegahan  peningkatan kadar IL-1β pada tikus model IRI.

## METODE
Penelitian
ini merupakan penelitian  kuasi  eksperimental  dengan rancangan posttest  only  controlled  group design. Penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium Farmakologi dan
Laboratorium Riset  Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman.
Penelitian  ini  sudah  mendapatkan ethical clerance dari  Komisi  Etik  Fakultas
Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman  tanggal  5  Juli  2019  dengan nomor 3052/KEPK/VII/2019.
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini  yaitu kandang hewan coba, timbangan  digital,  skala  0-2000  gram merk  Sweet  Scale  Oxone  OX-211 diproduksi  oleh  PT  Oxone  Indonesia, timbangan digital, skala 0,00000- 100,0000  gram  merk  Dragon  303 Precision  Balance-AAR  3231  diproduksi Mettler  Toledo  Group,  spidol  snowman permanent marker warna hitam, bulldock klem,  minor  set,  sonde  oral  nomor  18  G stainless steel dengan ball tripped needle, s arung tangan, spuit 3 cc, gelas kimia, labu erlenmeyer,  batang  pengaduk,  gelar  ukur 100  cc,  mikropipet  100  µl  Fit  merk Accumax  pro  diproduksi  PT  Endo Indonesia,  mikropipet  1000  µl  Fit  merk Accumax  pro  diproduksi  PT  Endo Indonesia, tabung EDTA, tabung eppendorf, rak tabung reaksi, Laboratory Centrifuge  Lab  Medical  Practice 2000- 4000  rpm,  ELISA  reader  450nm, spektofotometer.  Bahan  yang  digunakan pada  penelitian  ini  yaitu  seledri,  yang diperoleh dari Pratin, Purbalingga,  etanol 96%, ketamine, aquades, ELISA kit.

## Subjek Penelitian
Sebanyak  25  ekor  tikus  putih jantan Sprague  Dawley ,  BB  190-250 gram,  usia  2-3  bulan  digunakan  sebagai subjek  pada  penelitian  ini.  Hewan  coba dimasukkan ke dalam kandang dan dijaga
pada  suhu  25 o C,  dengan  siklus  gelap terang  12jam/12  jam.  Hewan  coba  di aklimatisasi  selama  7  hari,  dan  akses makan serta minum secara ad libitum .

## Ekstraksi Tamanan
Seledri  didapatkan  dari  Pratin, Purbalingga,
Jawa Tengah dan diidentifikasi di Laboratorium Lingkungan, Fakultas Biologi, Universitas
Jenderal
Soedirman.
Pembuatan ekstrak etanol tanaman seledri dilakukan dengan cara maserasi. Tanaman seledri  dipotong  dan  dikeringkan  dalam oven  pengering  suhu  45 o C  kemudian digiling  dengan  mesin  diskmill,  dengan ayakan  60  mesh.  Serbuk  simplisia dimasukkan ke dalam kontainer ekstraktor dan  ditambahkan  etanol  70%.  Ekstraksi dengan  ultraturax  kecepatan  1.000  rpm, dan dimaserasi selama 24 jam.
Selanjutnya difiltrasi menggunakan corong  Buchner,  dan  disedot  dengan mesin  vakum.  Filtrat  dievaporasi  dengan vacuum rotary evaporator tekanan vakum pada suhu 45 o C kecepatan rotary 90 rpm.
Ekstrak  dipindahkan  ke  dalam  cawan porselin  kemudian  dimasukkan  ke  dalam oven  digital  pada  suhu  45 o C.  Ekstrak dikeringkan hingga bobot tetap.

## Perlakuan hewan coba
Hewan coba dikelompokkan secara acak menjadi 5 kelompok
perlakuan dengan masing-masing kelompok  terdiri  dari  5  ekor.  Setiap kelompok hewan coba diberikan perlakuan sebagai berikut: Kelompok SO: Hewan  coba  dengan Sham  Operation ; Kelompok  IR:  Hewan  coba  dengan  IRI; Kelompok  IR7:  Hewan  coba  diberi ekstrak etanol seledri dosis 1000 mg/kgBB  selama 7 hari kemudian dibuat model IRI dan dan tikus diterminasi pada hari  berikutnya;  Kelompok  IR14:  Hewan coba    diberi  ekstrak  etanol  seledri  dosis 1000 mg/kgBB  selama 14 hari kemudian dibuat model IRI dan dan tikus diterminasi pada  hari  berikutnya;  Kelompok  IR28: Hewan  coba  diberi  ekstrak  etanol  seledri dosis  1000  mg/kgBB  selama  28  hari kemudian  dibuat  model  IRI  dan  tikus diterminasi pada hari berikutnya.

## Pembuatan model IRI
Tikus  dianestesi  menggunakan ketamin  (dosis  100  mg/kgBB)  dengan suntikan  intra  muskuler.  Perut  tikus dibedah pada pertengahan (linea mediana) dan  hilus  renalis  kanan  dan  kiri  dijepit dengan menggunakan non-traumatic vascular  clamp selama  45  menit.  Perut tikus  kemudian  ditutup  dengan  dijahit menggunakan benang jahit. Pada kelompok  SO  dilakukan  prosedur  yang sama  kecuali clamp  hilus  renalis .  Tikus dikembalikan ke kandang.

## Pengambilan sampel darah
Hewan  coba  diambil  darahnya sebanyak  3  ml  melalui  sinus  retro-
orbitalis.
Darah ( whole blood ) disentrifugasi  4000  rpm  selama  10  menit untuk  mendapatkan  serum,  serum  yang terbentuk  kemudian  dipindahkan  ke tabung eppendorf.

## Pengukuran kadar IL-1β
Pengukuran kadar IL-1β dilakukan dengan  menambahkan  50μL  standar  ke standar well .  Menambahkan  40μL  serum sempel  ke  sampel well ,  kemudian menambahkan  10μL  anti  IL-1β  antibodi ke sampel. Menambahkan 50μL streptavidin  HRP  ke  sampel well dan standar well ,  campur  merata,  tutup plate dengan  sealer,  inkubasi  60  menit  pada suhu  37 o C.  Buang  sealer  dan  cuci plate sebanyak  5  kali  dengan  wash  buffer. Menambahkan 50 μL substrat solution A pada  masing-masing well ,  kemudian menambahkan  50μL  substrat  solution  B ke  masing-masing well .  Inkubasi  plate selama 10 menit pada suhu 37 o C di dalam gelap. Menambahkan 50 μL stop solution pada  masing-masing well .  Warna  biru akan berubah menjadi kuning. Pembacaan dilakukan  dengan  ELISA  reader  dengan panjang gelombang 450 nm maksimal 10 menit  setelah  penambahan  stop  solution.
Kadar  IL-1 β serum  sampel  darah  tikus dinyatakan dengan satuan ng/L.

## Analisis statistik
Data disajikan dalam bentuk tabel dan  grafik.  Analisis  statistik  yang digunakan  yaitu One-Way ANOVA dengan  melakukan  uji  normalitas  dan homogenitas terlebih dahulu. Uji normalitas  menggunakan Saphiro-wilk dan  homogenitas  menggunakan Levene’s test .  Nilai  p<0,05  digunakan  sebagai kriteria signifikansi .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  quasi  eksperimental  ini bertujuan  untuk  mengetahui  efek  lama waktu  pemberian  ekstrak  etanol  seledri terhadap  kadar  IL-1 β pada  tikus  model IRI. Penelitian dilaksanakan di
Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal
Soedirman dan Laboratorium Riset Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa rerata kadar IL-1 β pada kelompok SO  (4,79  ±  3,48  ng/L),  IR  (8,19  ±  5,36 ng/L), IR7 (5,99 ± 4,28 ng/L), IR14 (4,68 ± 2,64 ng/L), dan IR28 (9,05 ± 4,38 ng/L). Setelah dilakukan uji normalitas menggunakan  uji Saphiro-wilk dan  uji homogenitas  menggunakan Leven’s  test
diperoleh  bahwa  sebaran  data  normal dengan  nilai p =0,73  ( p >0,05)  dan homogen  dengan  nilai p =0,628  ( p >0,05).
Karena  data  normal  dan  homogen selanjutnya dilakukan uji statistik one way ANOVA.  Hasil  uji one  way ANOVA didapatkan p-value =0,357 (p>0,05)
( Tabel  1 ).  Hal  itu  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna rerata kadar IL-1 β antar kelompok.
Tabel  1.  Hasil  analisis  statistik  uji one  way ANOVA kadar IL-1β
Kelompok n Mean ± SD p-value SO 5 4,79 ± 3,48 0,357 IR 5 8,19 ± 5,36 IR7 5 5,99 ± 4,28 IR14 5 4,68 ± 2,64 IR28 5 9,05 ± 4,38
Keterangan:Kelompok  SO:  sham  operation; Kelompok  IR:  ischemia-reperfusion injury;  Kelompok IR7:  diberi  ekstrak etanol  seledri  1000  mg/kgBB  selama 7 hari kemudian dibuat IRI; Kelompok IR14: diberi ekstrak etanol seledri 1000 mg/kgBB selama 14 hari kemudian  dibuat  IRI;  Kelompok IR28:  diberi  ekstrak  etanol  seledri 1000  mg/kgBB  selama  28  hari kemudian dibuat IRI.
Rerata  kadar  IL-1β  pada  setiap kelompok  dapat  dilihat  pada Gambar  1 .
Rerata  kadar  IL-1β  pada  kelompok  IR (8,19  ng/L)  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  kelompok  SO  (4,79  ng/L). Meskipun  berdasarkan  hasil  analisis statistik  tidak  berbeda  bermakna  tetapi dapat  dilihat  bahwa  pada  kelompok  IR, yaitu kelompok yang dilakukan klem pada hilus  renalis  untuk  membuat  aliran  darah ke  ginjal  berhenti  selama  45  menit  dan
kemudian  klem  dilepas  sehingga  darah kembali  mengalir,  kadarnya  lebih  tinggi dibandingkan dengan kelompok SO, yaitu kelompok yang tidak dilakukan klem pada hilus renalis. Sesuai dengan penelitian Wu et  al. (2007)  yang  menunjukkan  bahwa terjadi  peningkatan  kadar  IL-1β  yang signifikan  pada  ginjal  dengan  IRI dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol sham (Wu et al ., 2007). Menurut  Joe et al.
(2006) ekspresi IL-1 pada ginjal mencapai puncak  tertinggi  pada  24  jam  setelah induksi ischemia (Jo et al ., 2006).

## Gambar 1. Rerata kadar IL-1β
Kadar  IL-1β  pada  kelompok  IR7 (kelompok  yang  diberi  ekstrak  etanol seledri  dosis  1000  mg/kgBB  selama  7 hari)  sebesar  5,99  ng/L  dan  kadar  IL-1β pada  kelompok  IR14  (kelompok  yang diberi  ekstrak  etanol  seledri  dosis  1000 mg/kgBB  selama  14  hari)  sebesar  4,68 ng/L  sedangkan  pada  kelompok  IR28 (kelompok  yang  diberi  ekstrak  etanol
4,79 8,19 5,99 4,68 9,05 0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 14,00 16,00 SO IR IR7 IR14 IR28 K ad ar I L -1 β (n g /L ) Kelompok
seledri  dosis  1000  mg/kgBB  selama  28 hari)  sebesar  9,05  ng/L.  Kelompok  IR7 dan IR14 memiliki kadar IL-1β  yang lebih rendah  dibandingkan  dengan  kelompok IR.  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak seledri  selama  14  hari  kemudian  dibuat model  IRI  memiliki  kadar  IL-1β  lebih rendah  dibandingkan  dengan  kelompok yang diberi ekstrak etanol seledri selama 7 hari.  Ekstrak  daun  dan  batang  seledri mengandung fenol. Flavonoid merupakan komponen  utama  yang  mengandung epigenin.  Efek  antiinflamasi  flavonoid pada  seledri  kemungkinan  melalui  jalur penghambatan  NF-κB  (Crespo et  al .,
2008).  NF-κB  merupakan  regulator inflamasi  (Bhakar et  al .,  2002).  NF-κB bertahan dalam bentuk laten di sitoplasma sel  terikat  dengan  protein  inhibitori  IκB. Kompleks  enzim  IκB  kinase  (IKK) bertanggungjawab  dalam  fosforilasi  IκB. Fosforilasi IκB tersebut akan melepaskan NF-κB.  Aktivasi  IKK  penting  untuk menginduksi aktivitas NF-κB (Ridder dan Schwaninger,  2009).  Di  endotel,  NF-κB memicu ekspresi cellular adhesion molecules (CAM) dan sitokin proinflamasi  yang  menginduksi  migrasi leukosit  (Godínez-Rubí et  al .,  2013).
Flavonoid akan menurunkan aktivitas NF- κB  dengan  mencegah  degradasi  dari inhibitor  IκB  dan  mencegah  aktivasi extracellular  signal-regulated  kinases
(ERK) (Crespo et al ., 2008). Aktivitas NF- κB  yang  menurun  akan  mencegah kerusakan endotel. Seledri juga mengandung tannin yang berperan sebagai scavenger radikal  bebas  yang terbentuk akibat cedera iskemia reperfusi (KaramacÌ,  2009).  Adanya  pembentukan radikal  bebad  pada  tikus  model  IRI  juga memicu  terjadinya  inflamasi.  Sesuai penelitian Afifah et al. (2019) pemberian ekstrak  etanol  seledri  dapat  mencegah penurunan  kadar  SOD  pada  tikus  model IRI  (Afifah et  al., 2019),  sehingga penurunan radikal bebas juga menurunkan inflamasi.
Berdasar  hasil  penelitian  pada kelompok  IR28,  yaitu  kelompok  yang diberikan ekstrak etanol seledri selama 28 hari  diperoleh  kadar  IL-1β  sebesar  9,05 ng/L. Nilai tersebut lebih tinggi dibandingkan  kelompok  IR.  Hal  itu menunjukkan bahwa kemungkinan inflammasi  yang  terjadi  lebih  besar dibandingkan  dengan  kelompok  IR. Kondisi  tersebut  diduga  bahwa  adanya kandungan seledri yang bersifat antioksidan  jika  dalam  jumlah  yang berlebih  akan  berbalik  sifat  menjadi  pro- oksidan yang justru memperberat kerusakan pada IRI (Erejuwa et al. , 2010),
namun demikian perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  kadar oksidan pada model ini.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol seledri dosis 1000 mg/kgBB selama 7  hari  dan  14  hari  dapat  mencegah peningkatan kadar IL-1β pada tikus model IRI. Implikasi  hasil  penelitian  ini diharapakan ekstrak seledri dapat dikonsumsi  pada  populasi  yang  berisiko tinggi mengalami AKI sehingga diharapkan  dapat  mencegah  inflamasi yang berlebihan jika terjadi AKI.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Rektor Unsoed melalui LPPM Unsoed yang telah mendanai  penelitian  ini  tahun  anggaran 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Afifah  A,  Muflikhah  K,  Ati  VRB,  Tsani  RM, Khasanah  D,  Maulana  W.  2019.  Protective effect  of  ethanol  extract  of  celery  (Apium graveolens  L)  on  kidney  damage  in ischemia/  reperfusion  injury  rats  model.
Molekul 14(1): 11–17. doi:
10.20884/1.jm.2019.14.1.448.
Bhakar  AL,  Tannis  LL,  Zeindler  C,  Russo  M.P, Jobin C. Park DS, et al. 2002. Constitutive nuclear  factor-κB  activity  is  required  for central neuron survival. Journal of Neuroscience 22(19):  8466–8475.  doi:
10.1523/jneurosci.22-19-08466.2002.
Bonventre  JV  dan  Zuk  A.  2004.  Ischemic  acute renal  failure:  An  inflammatory  disease? Kidney  International 66:  480–485.  doi:
10.1111/j.1523-1755.2004.761_2.x.
Chatauret N, Badet L, Barrou B, Hauet  T. 2014).
Ischemia-reperfusion:  From  cell  biology  to acute  kidney  injury. Progres  En  Urologie 24(SUPPL.1): S4–S12. doi: 10.1016/S1166- 7087(14)70057-0.
Crespo  I,  García-Mediavilla  MV,  Gutiérrez  B, Sánchez-Campos  S,  Tuñón  MJ,  González- Gallego J. 2008. A comparison of the effects of  kaempferol  and  quercetin  on  cytokine- induced pro-inflammatory status of cultured human  endothelial  cells. British  Journal  of Nutrition 100(5): 968–976. https://doi.org/10.1017/S000711450896608 3.
Erejuwa  OO,  Sulaiman  SA,  Wahab  MSA, Sirajudeen  KNS,  Md  Salleh  MS,  Gurtu  S. 2010.  Antioxidant  protective  effect  of glibenclamide and metformin in combination  with  honey  in  pancreas  of streptozotocin- induced diabetic rats. International Journal of Molecular Sciences 11(5):
2056–2066. doi: 10.3390/ijms11052056.
Godínez-Rubí  M., Rojas-Mayorquín  AE, Ortuño- Sahagún  D.  2013.  Nitric  oxide  donors  as neuroprotective  agents  after  an  ischemic stroke-related inflammatory reaction.
Oxidative  Medicine  and  Cellular  Longevity 2013 . doi: 10.1155/2013/297357.
Jo SK, Sung SA, Cho WY, Go KJ, Kim H K. 2006. Macrophages  contribute  to  the  initiation  of ischaemic  acute  renal  failure  in  rats. Nephrology Dialysis Transplantation 21(5):
1231–1239. doi: 10.1093/ndt/gfk047.
KaramacI M. 2009. In-vitro study on the efficacy of  tannin  fractions  of  edible  nuts  as antioxidants. European  Journal  of  Lipid Science  and  Technology 111(11):  1063– 1071. doi: 10.1002/ejlt.200900067.
Kooti W, Ali-akbari S, Asadi-samani M, Ghadery H,  Ashtary-larky  D.  2014.  A  review  on medicinal  plant  of  Apium  graveolens. Advanced Herbal Medicine 1(1): 48–59.
Kooti  W  dan  Daraei  N.  2017.  A  Review  of  the Antioxidant  Activity  of  Celery  (Apium graveolens  L). Journal  of  Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine 22(4): 1029–1034. doi: 10.1177/2156587217717415.
Malek  M  dan  Nematbakhsh  M.  2015.  Renal ischemia/reperfusion injury; from
pathophysiology  to  treatment. Journal  of
Renal  Injury  Prevention 4(2):  20–27.  doi: 10.12861/jrip.2015.06.
Ridder  DA  dan  Schwaninger  M.  2009.  NF-κB signaling in cerebral ischemia. Neuroscience
158(3):
995–1006.
doi: 10.1016/J.NEUROSCIENCE.2008.07.007.
Rusai  K,  Huang  H,  Sayed  N,  Strobl  M,  Roos  M, Schmaderer,  C. et  al .  2008.  Administration of interleukin-1 receptor antagonist ameliorates renal ischemia-reperfusion injury. Transplant International 21(6): 572– 580. doi: 10.1111/j.1432-
2277.2008.00651.x.
Sameh  B,  Ibtissem  B,  Mahmoud  A,  Boukef  K, Naceur  A.  2011.  Antioxidant  Activity  of Apium  graveolens  Extracts. Journal  of Biologgically  Active  Product  from  Nature
1(5–6):
340–343.
doi: 10.1080/22311866.2011.10719102.
Taylor  P,  Baananou  S,  Borgi  W,  Mahmoud  A, Boukef  K,  Chouchane  N.  2012.  Anti- inflammatory  and  Analgesic  Activities  of Tunisian  Apium  graveolens  L  .  Leaves Extracts  in  Rats. Journal  of  Biologgically Active  Product  from  Nature 4:  37–41.  doi: 10.1080/22311866.2012.10719129.
Wu  H,  Chen  G,  Wyburn  KR,  Yin  J,  Bertolino  P, Eris  J. et  al .  2007.  TLR4  Activation Mediates Kidney Ischemia/Reperfusion Injury. The Journal of Clinical Investigation , 117:  2847–2859.  doi:  10.1097/00007890- 200607152-00905.
Wulandari  DI,  Fitrianingsih  SP,  Mulqie  L.  2016. Uji  Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol Herba  Seledri  (  Apium  graveolens  L  .) terhadap  Tikus  Wistar  Jantan.  [Prosiding] Farmasi 2 : 59–66.