UJI DAYA HAMBAT ORGANISME LAUT SPONS Amphimedon sp., TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus ,
Escherichia coli , DAN Jamur Candida albicans
Rizky Akbar Latif 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponges  are  marine  animals  that  can  produce  bioactives  that  are  useful  as  anti-virus,  anti-fungal,  antibiotic, anti-cancer,  anti-inflammatory,  and  antioxidants.  Amphimedon  sp.,  sponge  itself  is  found  in  the  waters  of Lembeh  islands,  the  City  of  Bitung.  This  study  was  to  determine  the  inhibitory  activity  against  the microorganisms  growth  of  Amphimedon  sp.,  sponge,  against  microbes  of  Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli,  and  Candida  albicans.  Based  on  the  results  of  the  study,  the  extracts  and  fractions  of  Amphimedon  sp., sponge samples did not have microbial inhibitory activity against the test microbes of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida albicans
Keywords : Amphimedon sp., Antimicrobial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans

## ABSTRAK
Spons merupakan hewan laut yang dapat menghasilkan bioaktif yang bermanfaat sebagai anti virus, anti jamur, antibiotik,  anti  kanker,  anti  inflamasi,  dan  antioksidan.  Spons Amphimedon sp  sendiri  ditemukan  didaerah perairan  pulau  Lembeh  kota  bitung.  Penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui aktivitas  daya  hambat  pertumbuhan mikroorganisme  dari  spons Amphimedon sp.,  terhadap  mikroba Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli ,  dan Candida albicans. Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan ekstrak dan fraksi sampel spons Amphimedon sp., tidak  memiliki  aktivitas  daya  hambat  terhadap  mikroba  uji Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli ,  dan Candida albicans
Kata kunci : Amphimedon sp., Antimikroba, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans

## PENDAHULUAN
Mikroba  patogen  merupakan  salah satu  penyebab  penyakit  pada  manusia  dan makhluk  hidup  lainnya  (Juariah et  al ., 2014).  Berbagai  penelitian  menunjukkan bahwa organisme laut memiliki potensi yang sangat  besar  dalam  menghasilkan  senyawa- senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai bahan  baku  obat.  Beberapa  organisme  laut yang diketahui dapat menghasilkan senyawa aktif,  salah  satunya  adalah  ascidians. Organisme ini diketahui dapat menghasilkan sejumlah  besar  produk  laut  yang  bersifat alami, juga mampu menunjukkan keragaman senyawa kimia yang sangat besar (Thakur dan Muller, 2004).
Senyawa dengan
berbagai bioaktivitas, anatara lain: antivirus, antibakteri, antikanker, antileukimia, antiinflamasi,  insektisida,  dan  antihelmintik telah ditemukan dari spons (Kim, 2012). Hal ini  membuat  spons  menjadi  salah  satu hewan  laut  yang  menarik  untuk  diteliti karena berpotensi besar untuk dikembangkan  dalam  bidang  pengobatan salah satunya sebagai  antibakteri  (Abubakar et al , 2011).
Staphylococcus aureus adalah bakteri kokus gram positif. Bakteri ini sering ditemukan sebagai kuman flora normal pada manusia.  Bakteri Staphylococcus  aureus dapat  menjadi  penyebab  infeksi  baik  pada manusia  maupun  pada  hewan.  Infeksi  yang disebabkan  oleh Staphylococcus  aureus dapat  berkembang  menjadi  infeksi  sistemik yang  parah.  Habitat Staphylococcus  aureus biasanya ada di rongga hidung. Dari rongga hidung, Staphylococcus aureus dapat berpindah  dan  menyebar  kekulit  maupun bagian  tubuh  lainnya.  Selain  di  lokasi
tersebut, Koloni Staphylococcus aureus juga dapat  ditemukan  di  tenggorokkan,  usus, vagina,  lipatan  kulit  (ketiak)  dan  perineum. Tetapi  infeksi yang  disebabkan  oleh Staphylococcus  aureus merupakan  masalah penting  di  bagian  kesehatan.  Hal  ini dikarenakan adanya beberapa kasus resistensi  pada  antibiotik.  Selain  karena resistensi,  pengguna  antibiotik  memerlukan biaya  yang  belum  tentu  dapat  dicapai  oleh masyarakat umum (Rahardjo, 2017).
Escherichia  coli merupakan  family Enterobacteriaceae  dengan  ukuran  panjang sel 2,0 – 6,0 μm dan lebar 1,1 – 1,5 μm dan tidak  ditemukan  spora. Escherichia  coli termasuk  bakteri  gram  negatif,  selnya  bisa terdapat  tunggal,  berpasangan,  dan  dalam rantai  pendek,  biasanya  tidak  berkapsul. Escherichia coli merupakan penghuni normal  usus  yang  seringkali  menyebabkan infeksi (Wulandari, 2010).
Candida  albicans merupakan  salah satu  mikroorganisme  yang  terdapat  pada mukosa mulut dapat menyebabkan stomatitis apthosa atau sariawan. Kandidiasis dapat mencegah
pertumbuhannya dengan menggunakan antiseptik dan anti fungi (Melsi et al ., 2011). Spons Amphimedon sp., termasuk anggota  kelas  Demospongia  digunakan sebagai  materi  penelitian.  Genus  ini  banyak dilaporkan  memiliki  bahan  aktif  yang bermanfaat.  Hasil  ekstraksi  spons  genus Amphimedon dapat  dimanfaatkan  sebagai anti kanker (leukemia) (Nishi et al ., 2008).

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini ialah eksperimen laboratorium yang akan menguji komponen  yang  diekstrak  dari  Spons
Amphimedon sp ., sebagai  antimikroba  yang diperoleh dari perairan Selat Lembeh.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  September  2018  sampai  –  Februari 2019. Tempat pengambilan sampel dilakukan  di  Perairan  Selat  Lembeh,  Kota Bitung dan untuk preparasi sampel, pengamatan  dilakukan    di  Laboratorium Penelitian  Farmasi  Lanjutan  (Farmakognosi Fitokimia  dan  Laboratorium  Mikrobiologi Farmasi)  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Sam Ratulangi
Alat dan Bahan a. Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu sarung tangan, zipper bag , gunting, kamera,  wadah  kaca,  pisau,  Erlenmeyer (Pyrex),  corong  pisah,  timbangan  analitik, gelas  ukur  (Pyrex),  gelas  kimia  (Pyrex), Cawan  Petri,  autoklaf  (autoklaf  KT-30s), spatula, pinset, pembakar spritus, pipet tetes, mikro  tubes ,  batang  pengaduk, Laminar  air flow (Clean  Bench),  rak  tabung  reaksi, tabung  reaksi,  lemari  pendingin, incubator incucel (N-Biotek),  cakram  ( Paper  disc ), mikropipet, digital caliper , vial, oven, jarum ose, vortex dan jas lab.

## b. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu Spons Amphimedon  sp ,.  mikroba  uji Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , dan Candida albicans , etanol 96%, akuades,  metanol,  n-heksan,  kloroform, nutrient broth , nutrien agar, potato dextrose agar ,  Kloramfenikol,  kertas  cakram,  label, spidol  permanen,  tissue,  aluminium  foil, kertas saring, kapas.
Prosedur Penpelitian Ekstraksi
Ekstrak  Spons Amphimedon sp., sebanyak 540 g diekstraksi dengan menggunakan cara maserasi. Sampel dipotong  kecil-kecil  dengan  ukuran  1  cm² lalu  dimasukkan  ke  dalam  botol  dan direndam dengan larutan etanol 96% sampai sampel  terendam  secara  keseluruhan  dan dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel  yang direndam  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring  menghasilkan  filtrat  1  dan debris  1.  Debris  1  direndam  dengan  larutan etanol  96%  sampai  sampel  terendam  secara keseluruhankemudian  dibiarkan  selama  24 jam. Sampel tersebut disaring menggunakan kertas  saring  menghasilkan  filtrat  2  dan debris  2.  Debris  2  kemudian  direndam dalam  larutan  etanol  96%  sampai  sampel terendam  secara  keseluruhan  dan  dibiarkan selama  24  jam,  sampel  tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  3  dan  debris  3.  Filtrat  1,  2  dan  3 dicampur  menjadi  satu  kemudian  disaring, lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator  sehingga  didapat  ekstrak  kasar Spons Amphimedon sp., kemudian ditimbang menggunakan timbangan analitik, diperoleh  ekstrak  etanol  sampel  sebanyak 12,84  g.  Selanjutnya  ekstrak  etanol  Spons Amphimedon sp., digunakan dalam fraksinasi dan pengujian antimikroba.

## Fraksinasi
Ekstrak  Sebanyak  2,00  g  ekstrak etanol  Spons Amphimedon sp.,  dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan dilarutkan dengan metanol  80%  sebanyak  100  mL.  Setelah sampel  larut,  sampel  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n- heksan sebanyak 100 mL. Sampel kemudian dikocok  berulangkali  dalam  corong  pisah hingga  homogen.  Sampel  dibiarkan  hingga membentuk  lapisan  metanol  (MeOH)  dan lapisan  n-heksan.  Masing-masing  lapisan metanol  dan  lapisan  n-heksan  ditampung  di dalam  wadah  yang  berbeda.  Lapisan  n- heksan selanjutnya dievaporasi
menggunakan  oven  hingga  kering,  lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh  fraksi  n-heksan  sebanyak  0,06  g. Selanjutnya  lapisan  metanol  ditambahkan dengan akuades 100 mL, kemudian dipartisi dengan  pelarut  kloroform  menggunakan perbandingan  1:1  v/v  setelah  itu  dikocok dalam  corong  pisah  hingga  homogen. Lapisan metanol dibiarkan hingga membentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan metanol  dan  lapisan  kloroform.  Masing- masing lapisan metanol dan lapisan kloroform  ditampung  ke  dalam  wadah  yang berbeda.Lapisan kloroform dievaporasi menggunakan  oven  hingga  kering  lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh  fraksi  kloroform  sebanyak  1,1  g. Lapisan  metanol  yang  ditampung  pada wadah lain dievaporasi menggunakan rotary evaporator  hingga  kering  lalu  ditimbang dengan  timbangan  analitik  dan  diperoleh fraksi metanol sebanyak 1,7 g. Ketiga fraksi yang  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian antimikroba. Rendemen- rendemen  ekstrak  dan  fraksi  dihitung dengan  persamaan  berat  hasil  ekstrak/fraksi dibagikan  dengan  berat  awal  ekstrak/fraksi kemudian dikalikan dengan 100%.
Pembuatan Media dan Pengujian Antimikroba Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan dalam  penelitian  aktivitas  antimikroba  ini disterilkan terlebih dahulu dengan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran di  atas api langsung dan media disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media B1
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium klorida 0,3 g dan akuades sebanyak 100  ml  diaduk  sampai  homogen  kemudian
disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit dan setelah itu didinginkan. Setelah  dingin,  media  cair  B1  di  tutup dengan aluminium  foil (Dwijendra et  al , 2014).

## Kultur Mikroba
Mikroba yang  digunakan yaitu Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Candida  albicans .  Masing-masing  mikroba diambil  dari  biakan  murni  menggunakan mikropipet sebanyak 100 μL dan dimasukkan ke dalam masing-masing tabung  reaksi  yang  sudah  berisi  media  cair B1  sebanyak  1  ml  dan  kemudian  ditutup menggunakan aluminium  foil .  Setelah  itu, diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37 0 C selama 1 x 24 Jam (Dwijendra et al , 2014).

## Pengujian Antimikroba
Pembuatan Media Uji
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium  klorida  0,3  g,  agar  1,5  g  dan akuades  sebanyak  100  ml  diaduk  sampai homogen  kemudian  disterilkan  di  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  15  menit (Dwijendra et al , 2014).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  1  mg ekstrak  kasar  Spons Amphimedon  sp. dilarutkan  dalam  200  μL  metanol  dan dikocok  hingga  homogen  menggunakan vortex. Perlakuan yang sama dilakukan pada fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi metanol (Ortez,2005).

## Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian aktivitas  antimikroba  ini  menggunakan Kloramfenikol  paper  disc .  Kontrol  negatif yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu menggunakan metanol, dengan cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil  sebanyak  200  μL  metanol kemudian ditotolkan pada paper disc.

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada  pengujian aktivitas  antimikroba  ini,  cakram  ( paper disc )  yang  digunakan  berukuran  6  mm dengan  daya  serap  50  μL  tiap  cakram. Sebanyak  100  μL  mikroba  yang  telah dikultur,  dipipet  dan  diinokulasi  pada  100 ml  media  agar  lalu  diaduk  hingga  homogen dan  kemudian  dituangkan  ke  dalam  cawan petri  dan  tunggu  sampai  media  agar mengeras.  Kemudian,  larutan  uji  yang  telah disiapkan  ditotolkan  pada  masing-masing cakram  dengan  menggunakan  mikropipet. Setelah  agar  mengeras,  kertas  cakram  yang telah  ditotolkan  sampel  Spons Amphimedon sp . ,  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif diletakkan  ke  dalam  cawan  petri  dengan menggunakan  pinset.  Selanjutnya,  cawan petri  diberi  label  dan  diinkubasi  dalam inkubator pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 Jam (Ortez, 2005).
Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran cakram  menunjukkan  kepekaan  mikroba terhadap  antibiotik  atau  bahan  antimikroba yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  diameter  zona  bening. Diameter zona bening diukur menggunakkan digital  caliper .  Kemudian zona bening yang telah diukur, dikategorikan  berdasarkan  pedoman  Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi
Determinasi  Spons Amphimedon sp. dilakukan  di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Program  Studi  Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi.  Determinasi dilakukan  agar  mengetahui  sampel  yang diambil  dan  dilakukan  pengujian  adalah
sampel yang sesuai yaitu spons Amphimedon spPenggunaan  bahan  alami sebagai  zat  hambat  mikroorganisme  adalah langkah kembali ke alam untuk memanfaatkan bahan alami. Senyawa dalam tumbuhan, mengharuskan kita untuk mengetahui  senyawa  kimia  yang  mampu memberikan efek terapi.

## Preparasi Sampel
Sampel spons Amphimedon sp.  yang diambil  dari  perairan  Selat  Lembeh  Bitung, dipotong kecil-kecil. Hal ini bertujuan untuk memperluas  permukaan  yang  berinteraksi dengan  pelarut  sehingga  lebih  banyak senyawa  yang  dapat  ditarik  oleh  pelarut (Kristanti et  al .,  2008).  Setelah  di  potong kecil-kecil  sampel  lalu di masukkan kedalam wadah.
Ekstraksi Spons Amphimedon sp.
Sampel spons
Amphimedon sp.dilakukan ekstraksi dengan menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96% sampai  sampel  terendam  semua  selama  24 jam.  Maserasi  sampel  dilakukan  dengan pelarut  96  %  karena  pelarut  ini  memiliki kemampuan menyari dengan tingkat polaritas  yang  lebar  mulai  dari  senyawa polar  dan  non  polar  (Saifudin et  al ,  2011). Pelarut  etanol  96%  memiliki  sifat  selektif, tidak  beracun,  dan  bersifat  universal  yang cocok  untuk  mengekstrak  semua  golongan senyawa  metabolit  sekunder  (Kristianti et al .,  2008)  metode  maserasi  dipilih  karena pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan sederhana,  mudah  diusahakan,  mampu menarik  senyawa-senyawa  yang  berkhasiat, dan  untuk  menghindari  kerusakan  beberapa senyawa  aktif    dari  spons Amphimedon sp. (Kristiani,  2014).  Prinsip  ekstraksi  pelarut yakni  dengan  memisahkan  dua  komponen atau  lebih  berdasarkan  perbedaan  kelarutan komponen  tersebut  dalam  pelarut  yang digunakan.  Proses  pemisahan  akan  berhasil apabila bergantung pada perbedaan
kelarutan  senyawa  yang  akan  dipisahkan dalam pelarut (Suryanto,2012).
Proses ekstraksi dilakukan perendaman selama 3x24 jam dan setiap 24 jam ekstrak disaring dan dimaserasi kembali dengan  menggunakan  pelarut  yang  baru  hal ini  disebut  dengan  remaserasi.  Remaserasi bertujuan  untuk  mendapatkan  penyarian maksimal,  agar  senyawa  kimia  didalam sampel  dapat  terekstrak  secara  menyeluruh dengan  pergantian  pelarut  selama  tiga  kali menggunakan pelarut etanol.Kemudian diperoleh  filtrat  diuapkan  menggunakan oven  40°C  dengan  tujuan  agar  tidak merusak  senyawa  bioaktif  yang  terdapat difiltrat  apabila  menggunakan  suhu  tinggi. Hasil  dari  proses  ini  didapat  ekstrak  kasar dari  pelarut  (Aditya et  al .,  2016).  Didapat Massa  ekstrak  beserta  rendemen  yang dihasilkan pada proses ekstraksi ditunjukkan pada Tabel  1.
Tabel  1.  Rendemen  ekstrak  Spons
Amphimedon sp.
No Sampel Massa Ekstrak Rendemen Warna Sampel 1 Ekstrak Etanol 0,54 2,4 Coklat
Fraksinasi Amphimedon sp.
Setelah diperoleh ekstrak kering etanol dari  hasil  maserasi,  selanjutnya  dilakukan tahap  fraksinasi.  Metode  penelitian  ini menggunakan  metode  fraksinasi  cair-cair yang  dimana  merupakan  metode  pemisahan dengan  menggunakan  dua  cairan  pelarut yang  tidak  saling  tercampur  sehingga senyawa yang memiliki sifat polar akan larut dalam  pelarut  polar,  yang  semi  polar  akan larut  dalam  pelarut  semi  polar,  dan  yang bersifat non polar akan larut kedalam pelarut non  polar  (Engka,  2016).  Dimana  pelarut yang  digunakan yang  memiliki sifat kepolaran  yang  berbeda,  yaitu  methanol,  n-
heksan dan kloroform secara berkesinambungan dengan sifat yang berbeda dimana n-heksan mewakili sifat non polar,  kloroform  mewakili  sifat  semi-polar dan methanol mewakili sifat polar (Aditya et al ., 2016).Dilakukan fraksinasi untuk senyawa  berdasarkan  kepolaran.  Masing- masing pelarut secara selektif akan memisahkan  kelompok  kandungan  kimia tersebut.  Pertama  simplisia  disari  berturut- turut  dengan  pelarut  yang  non  polar, kemudian  disari  dengan  pelarut  yang berkurang polar dan terakhir dengan pelarut polar  (Iswanti,  2009).  Berdasarkan  massa fraksi  beserta  rendemen  yang  dihasilkan dalam  proses  fraksinasi  ditunjukkan  pada Tabel 2.
Tabel 2. Rendemen fraksi Spons Amphimedon sp.
Untuk  mengetahui  presentasi  zat  yang terekstrak  dari  sampel  maka  hasil  timbang dari  massa  ekstrak/fraksi  dibagi  dengan massa  sampel/ekstrak  dan  dikalikan  100%. Perbedaan  nilai  ini  disebabkan  karena perbedaan  jenis  pelarut  yang  digunakan. Dimana, pelarut yang berbeda akan melarutkan senyawa-senyawa berbeda, sehingga  jumlah  fraksi  pelarut  methanol memiliki  rendemen  paling  tinggi.  Hal  ini menunjukkan bahwa dalam Spons
No Sampel Massa Ekstrak (g) Rendemen (%) Warna Sampel 1 Fraksi n- heksan 0,06 3% Putih bening 2 Fraksi Kloroform 1,036 55% Putih keruh 3 Fraksi methanol 1,7 85% Putih susu
Amphimedon sp.,  terdapat  banyak  senyawa yang bersifat polar.
Uji Aktivitas
Antimikroba
Spons Amphimedon sp.
Uji  aktivitas  senyawa  antimikroba dari ekstrak etanol, fraksi methanol, fraksi n- heksan,  dan  fraksi  kloroform  dari  spons Amphimedon sp. diuji terhadap Staphylococcus aureus yang mewakili gram positif, Escherichia  coli mewakili  gram negatif  dan Candida  albicans mewakili jamur dengan dilakukan metode difusi agar. Metode  difusi  agar  adalah  dimana  metode dilakukan dengan pengukuran dan pengamatan  diameter  zona  bening  yang terbentuk  disekitar  cakram  yang  berisi  zat antimikroba  yang  diletakkan  pada  media agar  yang  sudah  diinokulasi  mikroba (Lalamentik,  2017).  Metode  difusi  agar dipilih  karena  memiliki  kelebihan  yaitu jumlah  zat  yang  digunakan  mudah  diatur, cepat, dan pengerjaannya sederhana (Valgas et  al.,  2007),  dan  juga  untuk  melihat sensitivitas  berbagai  jenis  mikroba  terhadap antimikroba pada konsentrasi tertentu (Akhyar, 2010).
Penggunaan  ketiga  jenis  mikroba  ini bertujuan untuk mengetahui apakah ekstrak/fraksi  dari  Spons Amphimedon sp. memiliki  aktivitas  daya  hambat  serta mengetahui  spektrum  yang  sempit  yang hanya mampu menghambat atau membunuh salah  satu  golongan  mikroba  saja,  atau spektrum luas yang dimana dapat membunuh  atau  menghambat  baik  bakteri golongan  gram  negatif  maupun  golongan gram positif (Pratiwi, 2008).
Pada  uji  aktivitas  antimikroba  hasil yang  diperoleh  melalui  pengamatan  yang dilakukan  selama  1x24  jam  massa  inkubasi dengan  3  kali  pengulangan  untuk  masing- masing bakteri terhadap spons Amphimedon sp.,  tujuannya  untuk  lebih  mengakurat  hasil pengujian  yang  diperoleh.  pada  pengujian ini,  daya  antimikroba  ditandai  dengan
adanya  zona  bening  disekelilingi  kertas cakram yang berukuran ± 6 mm.
Tabel  3.  Hasil  Pengukuran  Rata-rata Diameter  Uji  Daya  Hambat dari  Ekstrak  dan  Fraksi Spons Amphimedon sp.
Keterangan :
Ec : Escherichia coli Sa : Staphylococcus aureus Ca : Candida albicans EE : Ekstrak Etanol FK : Fraksi Kloroform FM : Fraksi Metanol FH : Fraksi n-heksan + : Kontrol Positif - : Kontrol Negatif
Pada  pengujian  ini  menunjukkan bahwa  tidak  adanya  kepekaan  antimikroba maupun  antibiotik    terhadap  ekstrak  dan fraksi  Spons Amphimedon sp.,  kemampuan penghambatan  pertumbuhan  mikroba  uji dipresentasikan  oleh  terbentuknya  zona bening pada pengujian aktivitas antimikroba.  Proses  dilakukan  3  (tiga)  kali pengulagan  pada  pengujian  ini,  dimana bertujuan  agar  hasil  yang  diperoleh  lebih akurat.  Symbiant  yang  berasosiasi  dengan spons Amphimedon sp.  tidak  mampu menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder seperti,  alkaloid,  terpenoid,  steroid,  kuinon, fenol dan sebagiannya yang dimana Senyawa-senyawa-senyawa  ini  sebagian besar  mempunyai  potensi  sebagai  senyawa bioaktif  (Tan  dan  Zou,  2001).  Hal  ini menunjukkan secara fisiologis, proses metabolisme  hewan  spons  dipengaruhi  oleh
Mikrob a Rata-rata Diameter (mm)
EE FK FM FH + -
Ec 0,0 0 0,0 0 0,0 0 0,0 0 19,1 5 0,0 0 Sa 0,0 0 0,0 0 0,0 0 0,0 0 21,2 2 0,0 0 Ca 0,0 0 0,0 0 0,0 0 0,0 0 20,1 0 0,0 0
beberapa faktor lingkungan seperti termperatur,  kekeruhan,  kekuatan  arus, cahaya,  salinity,  serta  faktor-faktor  kimiawi lainnya.  Sehingga  jenis  spons  yang  sama tetapi  masing-masing  hidup  pada  kondisi lingkungan  yang  berbeda,  dapat  memiliki keaktifan  metabolit  sekunder  yang  berbeda pula (Bergquist and Bedford, 1989).
Adapun kriteria kekuatan antimikroba sebagai berikut : diameter zona hambat  5  mm  atau  kurang  dikategorikan lemah, zona hambat 5-10 mm dikategorikan sedang, zona hambat
10-20 mm dikategorikan kuat dan zona hambat 20 mm atau  lebih  dikategorikan  sangat  kuat  . macam-macam  kriteria ini digunakan dalam peelitian untuk menggolongkan daya hambat control  dan  bahan  uji  sampel  (Davis  dan Stout, 1971)
Berdasarkan pengujian ini digunakan kontrol  positif    dan  kontrol  negatif  sebagai pembanding.  Kontrol  positif  berfungsi sebagai  kontrol  dari  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  daerah  hambat yang  terbentuk  (Dwijendra,  2014).  Kontrol positif  yang  digunakan  dalam  penelitian yaitu  Kloramfenikol,  hal  ini  dikarenakan kloramfenikol memiliki spektrum kerja yang luas  (Rahmawati,  2015).  Kontrol  positif digunakan  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  daerah hambat yang terbentuk (Dwijendra, 2014).Dari  hasil  yang  diperoleh  kontrol positif  kloramfenikol  dengan  ekstrak  dan fraksi  sampel  spons Amphimedon sp., sedangkan  kontrol  negatif  fungsinya  untuk mengetahui  ada  atau  tidaknya  pengaruh pelarut  terhadap  pertumbuhan  mikroba  uji. Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu methanol,  dimana  digunakan  sebagai  untuk melarutkan larutan uji. Hal ini mengindikasikan    bahwa  kontrol  yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji  anti mikroba.  Sehingga  daya  hambat  yang terbentuk  tidak  berpengaruh  oleh  pelarut
melainkan  karena  aktivitas  senyawa  yang ada pada spons laut Amphimedon sp.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak kasar, fraksi metanol, fraksi kloroform  dan  fraksi  n-heksan  spons Amphimedon sp.  tidak  memiliki  aktivitas antimikroba terhadap mikroba uji Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , dan Candida albicans .

## SARAN
Peneliti mengharapkan dapat dilakukan  identifikasi  senyawa  sebelum melakukan  pengujian  agar  peneliti  dapat mengetahui  terlebih  dahulu  kandungan senyawa  kimia  yang  terdapat  pada  sampel yang akan diteliti

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar,  H.  Wahyudi,  T.  Yuhana,  M. 2011.  Skrining  Bakteri  yang Berasosiasi  dengan  Spons Jaspis sp.,  sebagai  Penghasil  Senyawa Antimikroba. Jurnal Ilmu Kelautan . 16 : 35-40
Aditya,  A.,  Trianto,  A.,  Santoso,  A.  2016.
Eksplorasi  Jamur  Simbion  Pada Spons Demospongiae yang Dikoleksi  dari  Perairan  Kupang Penghasil Bahan Antimikroba Multidrug Resistent (MDR). Jurnal ilmu Kelautan . Universitas Diponegoro.
Akhyar.  2010.  Uji  Daya  Hambat  dan
Analisis KLT Bioautografi Ekstrak  Akar  dan  Buah  Bakau  ( Rhizophora stylosa Griff.) Terhadap Vibrio Harveyi [skripsi]. Fakultas Farmasi
Universitas Hasanuddin, Makassar.
Bergquist, P. R. dan Bedford, J. J. 1978. The incidence  of  antibacterial  activity in marine Demospongiae: Systematic and
geographic consideration. Mar.  Biol. 46 : 215-221
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  assay. Journal  of  microbiology 22 :  659-
665.
Dwijendra, I. M. 2014. Aktivitas Antimikroba  dan  Karakterisasi Senyawa Fraksi Spos Lamellodysidea  herbacea  yang Diperoleh  dari  Teluk  Manado [skripsi].  Program  Studi  Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Engka,  T.  2016.  Aktivitas  Antioksidan  dan Penentuan Kandungan Total Fenolik  dan  Flavonoid  dari  Umbi Kuso Mafola ( Drynariaquercifolia L.) [skripsi]. Program  Studi  Farmasi  FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Iswanti, D.A. 2009. Uji Aktivitas
Antimikroba  Fraksi  N-Heksan, Fraksi  Etil  Asetat,  Dan  Fraksi Etanol  96%  Daun  Ekor  Kucing (Acalypha  Hispida  Burm.  F) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus  ATCC  25923  Secara Dilusi [skripsi].  Fakultas  Farmasi Universitas Setia Budi, Surakata.
Juariah et  al. 2014.  Aktivitas  Antibakteri Spesies Asterias forbesii Terhadap Beberapa  Jenis  Bakteri  Patogen.
Jurnal Perikanan Terubuk. 42( 2 ) : 37-50
Kristani, A. N., N.S. Aminah., M. Tanjung., B.  Kurniadi.  2008. Buku  Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya. Lalamentik, G. 2017. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Karang Lunak Klyxum sp. yang Diperoleh dari Teluk Manado[skripsi]. Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Nishi,  T.  Kubota,  T.  Fromont,  J.  Sasaki,  T. Kobayashi,  J.  2008.  Nakinadines B-F  :  New  Phyridine  Alkaloids with a ß-amino Acid Morety From Sponge  Amphimedon  sp. Journal Tetrahedron . 64 : 3127-3132
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual of
antimicrobial susceptibility  testing.  Marie  B. Coyle (Coord.  Ed).  American society for Microbiology,
America.
Pratiwi,  S.  T.  2008. Mikrobiologi  Farmasi . Erlangga, Jakarta.
Rahardjo,  M.  Koendhori,  E.B  Setiawan,  Y.
2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Etanol  Lidah  Buaya  ( Aloe Vera ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Jurnal Kedokteran Syiah Kuala. 17( 2 ) : 65-70
Rahmawati, M. 2015. Uji Aktivitas
Antimikroba  Ekstrak  Etanol  dan Air  Rimpang  Pacing  ( Costus spiralis ) Terhadap Bakteri Escherichia coli , Shigella dysenteriae , Salmonella
typhimurium , Bacillus  subtilis ,
Staphylococcus aureus Serta
Fungi Candida  albicans [skripsi]. Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu
Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Penerbit  Putra  Media  Nusantara, Surabaya.
Tan,  R.  X.  dan  Zou,  W.  X.  2001. Endophytes:  a  Rich  Source  ofa Functional  Metabolites. Natural
Product Reports . 18 , p. 448-459
Thakur.  N.  L.,  Muller,  W.  E.  G.  2004.
Biotechnological Potential of
Marine  Sponge. Current  Science .
86( 11 ) : 1506-1512
Valgas,  C.,  Souza,  S.  M.  D.,  Smania,  E.  F.
A.  and  Artu,  S.  2007.  Screening Methods to Determine Antibacterial  Activity  of  Natural Products. Brazilian  Journal  of
Microbiology . 38 , p. 369-380.
Wulandari,  2010.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksan dan
Etil Asetat Daun Sidaguri ( Sidarhom
bifolia L .) Terhadap Beberapa Bakteri [Skripsi] Universitas Sumatera Utara, Medan,