Abstract : This study aims to isolate and identify botto-botto compounds that have the potential to be anti- cancer. Methanol solvent assists the extraction of simplicia of botto botto leaves through maceration method. The  methanol  extract  was  partitioned  with  n-Hexan and  ethyl  acetate  solvents  to  obtain  n-Hexan  and  ethyl acetate  fractions.  Each  fraction  was  then  fractionated  again  by  vacuum  liquid  chromatography  to  obtain isolates.  The  obtained  isolates  have  characteristics  using  UV-Vis  spectrophotometry  and  FT-IR spectrophotometry. The results obtained 2 compounds (Isolate HB3D3 from the n-Hexan fraction and Isolate EB6A5 from the ethyl acetate fraction). The results of the identification of isolate HB3D3 and isolate EB6A5 against  the  appearance  of  the  compound  group  spots  showed  that  the  HB3D3  and  EB6A5  isolates  were terpenoid  compounds.  Isolate  HB3D3  is  a  terpenoid  with  the  characteristics  of  the  presence  of  bound  OH groups, aliphatic C-H, monosubstituted aromatic rings, C = O and alkenes. Isolate EB6A5 is a terpenoid with the characteristics of the presence of bound OH groups, aliphatic C-H, monosubstituted aromatic rings, C-O- C, C-O ether and alkenes.

## Keywords :  Botto-Botto;  Isolation; Characterization;  Anticancer
Abstrak : Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan meengidentifikasi senyawa daun botto-botto yang berpotensi  sebagai  anti  kanker.  Simplisia  daun  Botto  botto  diekstraksi  menggunakan  pelarut  metanol dengan metode maserasi. Ekstrak metanol dipartisi dengan pelarut n–Hexan dan pelarut etil asetat sehingga diperoleh  fraksi  n-Hexan  dan  fraksi  etil  asetat.  Masing  masing  fraksi  selanjutnya  difraksinasi  dengan kromatografi  cair  vacum  hingga  diperoleh  isolat.  Isolat  yang  diperoleh  dikarakterisasi  dengan  metode spektrofotometri  UV-Vis  dan  spektrofotometri  FT-IR.  Hasil  penelitian  diperoleh  2  senyawa  (Isolat  HB3d3 dari fraksi n-Hexan dan Isolat EB6A5 dari fraksi etil asetat). Hasil identifikasi isolat HB3D3 dan isolat EB6A5 terhadap penampak bercak golongan senyawa menunjukkan isolat HB3D3 dan isolat EB6A5 adalah senyawa terpenoid. Isolat HB3D3 adalah terpenoid dengan karakteristik berupa adanya gugus OH terikat, C-H alifatik, cincin    aromatik  monosubsitusi,  C=O        dan  alkena.  Isolat    EB6A5    adalah  terpenoid  dengan  karakteristik berupa adanya gugus OH terikat, C-H alifatik, cincin aromatik monosubsitusi, C-O-C, C-O eter  dan alkena
Kata Kunci :  Botto-Botto; Isolasi; Karakterisasi; Antikanker
ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI EKSTRAK DAUN BOTTO-BOTTO ( Chromolaena odorota L.) YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIKANKER
1| Muhammad Rusdi, 2| Evi Fatmasyarif, 3| Citra Rezki Ananda Email Korespondensi : muhammad.rusdi@uin-alauddin.ac.id Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Alauddin Makassar

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  sekelompok  penyakit  yang  ditandai  oleh  pertumbuhan  yang  tidak terkendali  dan  penyebaran  sel-sel  abnormal.  Salah  satu  faktor  penyebabnya  adalah  gaya hidup,  seperti  penggunaan  tembakau  dan  kelebihan  berat  badan,  dan  faktor-faktor  yang tidak   dapat   dimodifikasi,   seperti   genetik   bawaan,   mutasi,   hormon,   dan   kondisi kekebalan tubuh. Faktor-faktor risiko ini dapat bertindak secara bersamaan atau berurutan untuk memulai dan / atau mendorong pertumbuhan kanker (America Cancer Sosiety, 2020)
Menurut perkiraan dari Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) pada tahun 2015, kanker adalah penyebab kematian pertama atau kedua sebelum usia 70 tahun di 91 dari 172 negara, dan menempati urutan ketiga atau keempat dalam 22 negara tambahan (Bray et al., 2018)
Berdasarkan laporan Riskesdas 2018, prevelensi kanker di Indonesia menunjukkan adanya peningkatan  dari  1.4  per  1000  penduduk  di  tahun  2013  menjadi  1.8  per  1000  penduduk pada   tahun   2018.   Prevalensi   kanker   tertinggi   adalah   di   provinsi   DI Yogyakarta 4.86 per  1000  penduduk,  diikuti  Sumatera  Barat  2.47  per  1000  penduduk,  Gorontalo  2.44  per 1000 penduduk dan Sulawesi Selatan berada di urutan 15 dengan 1.59 per 1000 penduduk. (Kemenkes RI, 2018)
Berdasarkan data di atas dapat disimpulkan bahwa prevalensi kejadian kanker sangat tinggi. Penyembuhan  kanker  dapat  dilakukan  dengan  dua  cara  yaitu  cara  konvensional  dan  non konvensional.  Pengobatan  kanker  secara  konvensional  (medis)  seperti  pemberian  obat antikanker, kemoterapi, penyinaran/radiasi dan operasi/pembedahan relatif  mahal.  Bentuk
pengobatan  seperti  radioterapi  dan  kemoterapi  yang berhubungan dengan efek samping serta  keraguan  akan  efektivitasnya.  Kekhawatiran  mengenai  efek  samping  negatif  dari pengobatan medis kanker dapat mendorong pasien untuk menjalani pengobatan tradisional (Shabrina & Iskandarsyah, 2019)
Daun  Botto-Botto  biasa  digunakan  sebagai  obat  tradisional  oleh  masyarakat  Sulawesi Selatan. Ekstrak etil asetat daun botto-botto ( Chromolaena      odorata L memiliki efek yang paling besar terhadap Artemia salina Leach dengan nilai LC50 = 295,7μg/ml (mukhriani dkk 2016). Fraksi dari ekstrak etil asetat yang paling selektif dalam menghambat sel kanker HeLa adalah fraksi B dengan nilai selektivitas 3.387 (Rusdi, M dkk, 2020)
Berdasarkan    tingkat    insiden    dan    kematian    yang    tinggi,    serta    adanya    potensi    dari ekstrak Botto botto sebagai antikanker, maka dilakukan penelitian isolasi dan karakterisasi isolat  dari  ekstrak  Daun  Botto-Botto  yang  diharapkan  sebagai lead  coumpound dalam penelusuran dan pengembangan sediaan obat antikanker yang aman dan berkhasiat

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat    yang    digunakan    adalah    seperangkat    alat    maserasi,    seperangkat    alat    gelas, neraca  analitik,  seperangkat  alat  kromatografi    kolom  cair  vakum,  kromatografi  lapis  tipis, evaporator, spektrofotometer UV-Vis, spektrofotometer FT-IR Bahan-bahan  yang  digunakan adalah   daun  Botto-Botto  ( Chromolaena  odorata  L ) sebagai sampel, Metanol, n-Hexan, Etil asetat, Etanol, asam sulfat, lempeng silika gel 60 F254, silika gel 60 GF254

## Prosedur Penelitian

## Pengelolahan Sampel
Daun  Botto-Botto    yang    diperoleh    dari    Sungguminasa,    Sulawesi    Selatan,    dibersihkan, dikeringkan    dan    diserbukkan.    Ekstraksi    dilakukan    dengan    metode    maserasi    dengan pelarut  metanol.  Dilakukan  remaserasi  sebanyak  2  kali.  Ekstrak  metanol  Botto-Botto  yang telah  kering  dipartisi  dengan  pelarut  n–Hexan.  Selanjutnya  ekstrak  tidak  larut  n-  Hexan dipartisi  dengan  pelarut  etil  asetat  sehingga  diperoleh  fraksi  etil  asetat.  Selanjutnya dipisahkan    komponen  kimianya    (fraksinasi)    menggunakan    kromatografi  cair  vakum dengan  variasi  eluen  berdasarkan  profil  KLT,  fraksi  yang  sama  digabung  menjadi    fraksi gabungan.    Fraksi-fraksi    ini    diharapkan    dapat    memisahkan    senyawa-  senyawa  kimia dalam daun berdasarkan tingkat kepolarannya.

## Isolasi senyawa dari fraksi aktif
Fraksi    n-Hexan    dan    Fraksi    Etil    asetat    yang    sebelumnya    aktif    sebagai    antikanker, selanjutnya  di  fraksinasi  dengan  kromatografi  kolom  cair  vakum.  Ekstrak  dielusi menggunakan  KLT  untuk  menentukan  eluen  yang  pola  pemisahannya  paling  baik. Fraksi tersebut kemudian dipisahkan dengan menggunakan eluen n-heksana dan etil asetat dengan metode  Kromatografi  Cair  Vakum  (KCV).  Fraksi  yang  memiliki  senyawa  yang  mirip digabungkan.  Selanjutnya  dilakukan  pemisahan  kembali  dengan  metode  Kromatigrafi  cair Vakum

## Identifikasi senyawa
Identifikasi    dilakukan    dengan    pereaksi    bercak.    Senyawa    ditotolkan    di    lempeng    KLT kemudian  disemprotkan  dengan  pereaksi  bercak  yaitu  pereaksi  Dragendorf,  Lieberman Bouchard,  AlCl3,  dan  pereaksi  FeCl3.  d.  Karakterisasi  senyawa  Karakterisasi  senyawa  hasil isolasi dilakukan dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis dan FT-IR.

## Analisis UV
Sampel  ditimbang  1  mg  kemudian  dilarutkan  pada  10  mL  etil  asetat.  Larutan  tersebut divorteks selama 5 menit kemudian didiamkan selama 1 jam, agar senyawa pada silika larut
ke dalam pelarut. Sampel kemudian disaring lalu diuji pada spektro UV-VIS dengan panjang gelombang 200-400 nm.

## Analisis FTIR
Sebanyak  1  mg  sampel  digerus  dengan  100  mg  KBr  secara  homogen,  kemudian  diukur serapan infra merahpada bilangan gelombang

## Analisis Data

## Data dari spektrofotometer UV dan FTIR selanjutnya diinterpretasi

## HASIL PENELITIAN
1. Persentase rendamen ekstrak
% Rendamen
220,4 𝑔𝑟𝑎𝑚 4000 𝑔𝑟𝑎𝑚 𝑥 100% = 5,51%

## 2. Hasil Fraksinasi dari fraksi n-Hexan
Fraksi  n-heksan  daun  Botto-botto  difraksinasi  dengan  metode  Kromatografi  Cair  Vakum (KCV).  Diperoleh  21  fraksi  dan  digabung  menjadi  3  fraksi  (A,  B,  C).  Fraksi  B  kemudian difraksinasi kembali dengan Kromatografi Cair Vakum dan diperoleh hasil fraksi sebanyak 14 fraksi  dan  digabung  menjadi  8  fraksi  (HB1,  HB2,  HB3,  HB4,  HB5,  HB6,  HB7  dan  HB8). Selanjutnya fraksi HB3 difraksinasi kembali dengan kromatografi cair vakum dengan variasi eluan.  Diperoleh  14  fraksi  dan  digabungkan  menjadi  8  fraksi  (HB3a,  HB3b,  HB3c,  HB3d, HB3e, HB3f, HB3g dan HB3h. Selanjutnya Fraksi HB3d difraksinasi dengan kromatografi cair vakum.  Diperoleh  15  hasil  fraksi,  yang  kemudian  digabungkan  menjadi  5    gabungan  fraksi yang  sama  melalui  penampakan  bercak  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm  (HB3d1,  HB3d2, HB3d3, HB3d4 dan HB3d5)

## 3. Hasil Fraksinasi dari fraksi etil asetat
Fraksi  etil  asetat  daun  Botto-botto  (Chromolaena  odorat),  selanjutnya  difraksinasi  dengan Kromatografi  Cair  Vakum  kemudian  diperoleh  21  fraksi  dan  digabung  menjadi  3  fraksi berdasarkan kesamaan penampakan noda pada kromatografi lapis tipis setelah diamati pada lampu  UV  254  nm  dan  36  nm  (A,  B,  C).  Fraksi  B  kemudian  difraksinasi  kembali    dengan Kromatografi  Cair  Vakum.  Diperoleh  fraksi  sebanyak 17  fraksi  dan digabung menjadi 6 fraksi  (EB1,  EB2,  EB3,  EB4,  EB5,  dan  EB6).  Fraksi  EB6  kembali  dikromatografi  cair  vakum diperoleh 33 fraksi dan digabung menjadi 10 fraksi (EB6A, EB6B, EB6C, EB6D, EB6E, EB6F, EB6G, EB6H, EB6I, EB6J).   Fraksi EB6A kembali   di kromatografi cair vakum. Diperoleh 23 fraksi.
4. Identifikasi isolat
Hasil  isolat  (HB3D3  dan  EB6A5)  kemudian      diidentifikasi  golongan  senyawanya  yang diujikan dengan beberapa reagen yaitu AlCl3, FeCl3, dragendroff, dan Liebermann- Buchard. Hasil identifikasi golongan senyawa isolate dapat dilihat pada tabel 1

## 5. Karakterisasi senyawa isolat
Senyawa  isolat  HB3D3  dan  EB6A5  dikarakterisasi  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis dan spektrofotometri FT- IR. Data panjang gelombang absorpsi dan absorbansi isolat dilihat pada Tabel 2. Data bilangan gelombang, bentuk pita, dan intensitas isolat dilihat pada Tabel 3.

## DISKUSI
Kanker merupakan salah satu penyebab kematian tertinggi  didunia. Kegagalan yang terjadi pada  terapi  kanker  disebabkan  karena  rendahnya  selektivitas  yang  dimiliki  oleh  obat-obat terapi  kanker.  Obat  yang  bersifat  selektif  diharapkan  hanya  mampu  membunuh  sel-sel
kanker  tanpa  membunuh  sel  normal.  Terapi  kanker  yang  pada  awalnya  bertujuan  untuk membunuh  sel  kanker  ini  lambat  laun  akan  menyerang  sel  normal.  Sel  normal  pada umumnya  akan  lebih  resisten  terhadap  kemoterapi  karena  biasanya  ia  akan  berhenti membelah  jika  kondisi  lingkungannya  tidak  memungkinnya  untuk  berkembang.  Tapi,  ada beberapa sel normal yang membelah dengan cepat sehingga kemoterapi akan mempengaruhi sel normal tersebut.
Simplisia  yang  telah  dikeringkan,  kemudian  dihaluskan  hingga  berbentuk  serbuk. Ukuran simplisia  mempengaruhi  jumlah  senyawa  yang  akan  ditarik  oleh  pelarut. Semakin kecil ukuran simplisia, maka luas permukaannya akan semakin besar dan pelarut dapat menarik senyawa-senyawa kimia semakin banyak.
Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode maserasi. Metode ini sederhana,  mudah  dan  tidak  menggunakan  pemanasan  sehingga  rusaknya  senyawa- senyawa yang tidak  tahan panas dapat dihindari.  Ekstrak metanol dari daun Botto- Botto selanjutnya dipartisi.  Pada tahap partisi didapatkan 2 hasil partisi yakni partisi larut heksan 28,2  g,  dan  partisi  larut  etil  38,5  g.  Senyawa  dengan  kepolaran  rendah  akan  tertarik  pada pelarut  non-polar,  sedangkan  senyawa  dengan  kepolaran  yang  tinggi  akan  tertarik  pada pelarut  yang  semipolar.  Dalam  hal  ini,  dapat  diketahui  bahwa  dalam  ekstrak  daun  Botto- botto mengandung lebih banyak senyawa semipolar.
Penelitian  sebelumnya  telah  membuktikan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  berpotensi  sebagai antikanker (Rusdi, M. dkk, 2020). Partisi larut n-Hexan kemudian difraksinasi menggunakan metode KCV (Kromatografi Cair Vakum) untuk mendapatkan pemisahan senyawa yang lebih kompleks.  Fraksinasi  diawali  terlebih  dahulu  dengan  identifikasi  KLT.    Identifikasi    KLT dilakukan untuk menentukan eluen  terbaik  pada  proses  KCV. Selanjutnya sampel dielusi dengan  eluen  berdasarkan  gradien  kepolaran.  Fraksi  yang  sama  digabungkan  dan dilanjutkan  dengan  fraksinasi  dengan  KCV  untuk  mendapatkan  senyawa  yang  lebih  murni lagi. Fraksinasi terhadap fraksi n_hexan dilakukan hingga 4 kali untuk mendapatkan senyawa tunggal yakni isolat HB3d3. Yang selanjutnya diidentifikasi dan dikarakterisasi
Partisi larut Etil asetat kemudian difraksinasi menggunakan metode KCV (Kromatografi Cair Vakum)  untuk  mendapatkan  pemisahan  senyawa  yang  lebih  kompleks.  Fraksinasi  diawali terlebih dahulu dengan identifikasi KLT. Identifikasi KLT dilakukan untuk menentukan eluen terbaik  pada  proses  KCV.  Selanjutnya  sampel  dielusi  dengan  eluen  berdasarkan  gradien kepolaran  .  Fraksi  yang  sama  digabungkan  dan  dilanjutkan  dengan  fraksinasi  dengan  KCV untuk  mendapatkan  senyawa  yang  lebih  murni  lagi.  Fraksinasi  terhadap  fraksi  etil  asetat dilakukan  hingga  4  kali  untuk  mendapatkan  senyawa  tunggal  yakni  isolate  EB6A5.  Yang selanjutnya diidentifikasi dan dikarakterisasi
Hasil identifikasi isolat HB3D3 dan isolat EB6A5 terhadap penampak bercak golongan kimia menunjukkan  isolat  HB3D3  dan  isolat  EB6A5  berwarna  hitam/ungu  dengan  penampak bercak    Lieberman    bouchard    setelah    dipanaskan.    Hasil    tersebut  menunjukkan  bahwa senyawa isolat memberikan hasil positif golongan senyawa terpenoid.
Karakterisasi Isolat HB3d3 dan isolat EB6A5 dilakukan dengan spektrofotometri UV-Vis dan FT-IR. Hasil pengukuran dengan spektrofotometer ultraviolet dengan pelarut etil asetat  p.a memperlihatkan  adanya  absorpsi  maksimum  pada  panjang  gelombang
231,238    dan    246    nm    untuk    isolat    HB3D3,    238,246,250,343,348,    368    untuk    isolat EB6A5.  Spektrum  UV  menunjukkan  absorpsi  maksimum  pada  panjang  gelombang  238  nm yang memberikan indikasi adanya transisi elektron n→π * dan n→σ *
Pada data spektrum IR isolat HB3D3 dapat terlihat absorpsi pada bilangan gelombang 3443, cm-1  yang  menunjukkan  adanya  gugus  OH.  Absorpsi  pada  bilangan  gelombang  2849,2917 dan   cm-1 menunjukkan adanya gugus CH alifatik. Absorpsi pada bilangan gelombang 1720 cm-1  menunjukkan  adanya  gugus  karbonil.  Absorpsi  pada    bilangan  gelombang    1638 menunjukkan  adanya  alkena.  Alkena  biasanya  terabsorpsi  (sedang sampai  lemah)  pada
bilangan  gelombang  1667-1640  cm-1.  Alkena  mono  substitusi yaitu grup vinyl, diabsorpsi dengan  intensitas  sedang  pada  bilangan  gelombang  1638  cm-1  dan  kuat  pada  bilangan gelombang  1462  cm-1.  Pita-pita  yang  terdapat  pada  bilangan  gelombang  1600-1500  cm-1 menunjukkan  cincin  aromatis  seperti  benzen,  sistem  polisiklik  dan  piridin.  Data menunjukkan adanya pita yang terabsopsi pada bilangan gelombang 1544 cm-1. serapan di daerah sidik jari pada 1380 cm -1 menunjukkan uluran -CH2. Pita pada bilangan gelombang 719 cm-1 menunjukkan aromatik monosubstitusi.
Pada data spektrum IR isolat EB6A5 dapat terlihat absorpsi pada bilangan gelombang 3450, cm-1 yang menunjukkan adanya gugus OH. Absorpsi pada bilangan gelombang 2852,  2928 cm-1  menunjukkan  adanya  gugus  CH  alifatik.  Absorpsi  pada  bilangan  gelombang  1627 menunjukkan  menunjukkan  vibrasi  tekuk  H-O-H.  Pita-pita  yang  terdapat  pada  bilangan gelombang 1600-1500 cm-1 menunjukkan cincin aromatis seperti benzen, sistem polisiklik dan  piridin.  Data  menunjukkan  adanya  pita  yang  terabsopsi    pada    bilangan    gelombang 1509,1545    cm-1.    Pada    1095,29    cm-1  menunjukkan  vibrasi    C-H.    Bilangan    gelombang 1042  cm-1  menunjukkan  vibrasi  ulur  C-O-C.  Pita  serapan  lemah  pada  bilangan  gelombang 1243 cm-1 dan 1095 cm-1 menunjukkan adanya gugus fungsi C-O eter. Bilangan gelombang 1444 cm-1 menunjukkan  vibrasi tekuk C-H dari –CH2

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  diperoleh  2 senyawa  (Isolat  HB3d3  dari  fraksi  n-Hexan  dan  Isolat  EB6A5  dari  fraksi  etil  asetat)  yang dapat  diisolasi  dari  ekstrak  metanol  daun  Botto-Botto  (Chromolaena  odorata  L)  yang memiliki efek sebagai antikanker Hasil identifikasi isolat HB3D3 dan isolat EB6A5 terhadap penampak  bercak  golongan  senyawa  menunjukkan  isolat  HB3D3  dan  isolat  EB6A5  adalah senyawa  terpenoid.  Isolat  HB3D3  adalah  terpenoid  dengan  karakteristik  berupa  adanya gugus OH terikat, C- H alifatik, cincin aromatik monosubsitusi, C=O dan alkena Isolat EB6A5 adalah terpenoid dengan karakteristik berupa adanya gugus OH terikat, C- H alifatik, cincin aromatik monosubsitusi, C-O-C, C-O eter dan alkena

## DAFTAR PUSTAKA
American  Cancer  Society.  Cancer  Treatment  and  Survivorship  Facts  and  Figures 2019-2021. American Cancer Society, 1–48. 2019
Bray,  F.,  Ferlay,  J.,  Soerjomataram,  I.,  Siegel,  R.  L.,  Torre,  L.  A.,  &  Jemal,  A.  Global  cancer statistics  2018:  GLOBOCAN  estimates  of  incidence  and  mortality  worldwide  for  36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians, 68(6), 394–424. 2018 Kemenkes  RI.  Laporan  Nasional  Riset  Kesehatan  Dasar.  Kementerian  Kesehatan  RI,  1–582.
2018
Shabrina, A., & Iskandarsyah, A. Pengambilan Keputusan mengenai Pengobatan pada Pasien    Kanker    Payudara    yang    Menjalani    Pengobatan    Tradisional.    Jurnal    Psikologi, 46(1), 72. 2019
Mukhriani.    Andi    Armisman    Edy,    Muh    Fitrah    Ilyas,    Dwi    Wahyuni    Leboe.    Analisis Efektivitas  Daun  Botto-Botto  ( Chromolaena  Odorata L)  Terhadap  Artemia  Salina Leach Yang Berpotensi Sebagai Agen Antikanker. JF FIK UINAM Vol.4 No.1. 2016 Rusdi.   M,   Haeria,   Nursalam,   Afri   Susnawati   Rauf,   Faradibha   Amriani ,   Potensi Farmakologi  Fraksi  Dari  Ekstrak  Metanol  Daun  Botto-Botto  (Chromolaena  odorata L.) Sebagai  Antikanker  Serviks.  Ad-dawaa  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences Vol.3  No.2.2020

## Tabel 1 (Identifikasi golongan senyawa isolat HB3D3 dan EB6A5)
No Isolat Golongan Senyawa Alkaloid Terpenoid Flavanoid Fenol 1 HB3D3 - + - - 2 EB6A5 - + - - Tabel 2 (Data panjang gelombang dari isolat HB3D3 dan EB6A5) Isolat panjang gelombang (nm) HB3D3 202,210,222,231,238,246 EB6A5 210,238,246,250,343,345,358,368 Tabel 3 (Data bilangan gelombang  isolat HB3D3 dan EB6A5 Isolat Bilangan gelombang HB3D3 3433,2917,2849,1720,1638,1462,1380, 1037,881,719,468 EB6A5 3450,2928,2852,1738,1627,1545,1509, 1460,1334,1284,1208,1042,835,603,463