Available online at BIOMA: Jurnal Ilmiah Biologi Website: http://journal.upgris.ac.id/index.php/bioma/index BIOMA: Jurnal Ilmiah Biologi, 11(1), April 2022, 103-120
Doi: https://doi.org/10.26877/bioma.v11i1.10558

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI METABOLIT SEKUNDER ISOLAT
BAKTERI ENDOFIT KUNYIT  ( Curcuma longa L . ) TERHADAP Propionibacterium acnes
Patrio Victorianus Baraga 1 , Mahyarudin Mahyarudin 2* , Ambar Rialita 3 . 1 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak Tenggara, Bansir Laut, Kota Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia 78115
2 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak Tenggara, Bansir Laut, Kota Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia 78115
3 Departemen Dermatovenerologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak Tenggara, Bansir Laut, Kota Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia 78115
*Corresponding author: mahyarudin@medical.untan.ac.id
Naskah diterima: 23 Desember 2021; Direvisi: 11 Januari 2022; Disetujui: 28 Februari 2022

## ABSTRAK
Propionibacterium  acnes merupakan  penyebab  utama  terjadinya  a cne  vulgaris . Pengobatan tanda, gejala, dan kekambuhan acne vulgaris cukup sulit dikarenakan P.  acnes yang  resisten  dengan  antibakteri  seperti  golongan  linkosamida.  Kunyit ( Curcuma  longa L. ) mempunyai  senyawa  aktif  kurkumin yang  merupakan polifenol  alami  dengan  sifat  antibakteri  terhadap P.  acnes. Bakteri  endofit  yang diisolasi  dari  suatu  tanaman  dapat  menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  sama dengan  tanaman  aslinya.  Penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri metabolit sekunder endofit kunyit terhadap P. acnes . Penelitian bersifat deskriptif yaitu isolat bakteri endofit kunyit diujikan dengan metode difusi cakram terhadap P.  acnes. Isolat  yang  paling  berpotensi  memiliki  aktivitas  antibakteri diidentifikasi berdasarkan karakterisasi morfologi koloni, morfologi sel, biokimia dan  dilakukan  uji  senyawa  metabolit  sekunder  dengan  menggunakan  metode Ciulei.  Sebanyak  12  dari  17  isolat  memiliki  aktivitas  terhadap P.  acnes dengan diameter  zona  hambat  terbedar  yaitu  21,2  mm  dengan  kode  isolat  H5.  Hasil identifikasi  menunjukkan  bahwa  H5  memiliki  kemiripan  dengan  genus Bacillus . Hasil uji metabolit menunjukkan bahwa senyawa antibakteri yang dihasilkan isolat H5 yaitu saponin, terpenoid dan flavanoid. Bakteri endofit tanaman kunyit memiliki potensi sebagai antibakteri terhadap bakteri P. acnes .
Kata kunci: antibakteri; bakteri endofit; Curcuma longa L.; Propionibacterium acnes .

## ABSTRACT
Antibacterial  activity  of  secondary  metabolites  of  endophytic  bacterial  isolated from  tumeric  (Curcuma  longa L. )  against  Propionibacterium  acnes.
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Propionibacterium acnes is the main cause of acne vulgaris. Treatment to control the  signs,  symptoms,  and  recurrence  of  acne  vulgaris  is  not  easy  due  to  its resistance to antibacterials such as linkosamide group. Turmeric (C. longa L.) has an  active  compound,  curcumin,  the  main  natural  polyphenol  which  has antibacterial properties against P. acnes. Endophytic bacteria isolated from plant can produce same secondary metabolites with the host plant. The study aimed to determine  the  antibacterial  activity  of  turmeric  bacterial  endophytes  secondary metabolites  against  P.  acnes.  The  research  was  descriptive  research  where endophytic  bacterial  isolates  of  turmeric  were  tested  by  disk  diffusion  method against  P.  acnes.  The  most  potential  isolates  with  antibacterial  activity  was identified based on the characterization  of  colony morphology, cell morphology, biochemical tests and a secondary metabolic compound test used Ciulei method. A total of 12 from 17 isolates had activity against P. acnes with the biggest inhibition zone  is  21.2  mm  with  code  H5.  The  identification  results  showed  that  H5  had similarities with the genus Bacillus. Metabolite test showed that the antibacterial compounds  produced  by  H5  were  saponins,  terpenoids  and  flavonoids.  The endophytic bacteria of turmeric plant has potential as an antibacterial against P. acnes.
Keywords : antibacterial; endophytic bacteria; Curcuma longa L. ;  P. acnes.

## PENDAHULUAN
Acne  vulgaris (jerawat)  adalah  kondisi  pada  kulit  yang  terjadi  karena tersumbatnya  folikel  rambut  oleh  sel  minyak  dan  kulit  mati.  Jerawat  umumnya mudah di temukan pada wajah, leher, dada, punggung serta bahu. Jerawat umumnya dimulai pada masa remaja, tetapi waktu berakhirnya bervariasi. Usia onsetnya 18- 20 tahun atau tertunda hingga 25-30 tahun. Kadang-kadang dapat dimulai pada usia yang  lebih  lanjut.  Jerawat  dapat  disebabkan  oleh P.  acnes dan Staphylococcus aureus (Aydemir, 2017).
Bakteri P. acnes adalah bakteri Gram positif anaerob fakultatif, terdapat pada kulit, rongga mulut, usus besar, konjungtiva, saluran telinga eksternal, dan paling umum  pada  kelenjar  minyak  kulit.  Bakteri  ini  merupakan  penyebab  utama acne vulgaris (AV)  dan  berperan  sebagai  patogen  oportunistik  yang  menyebabkan infeksi pasca operasi. Beberapa penelitian juga mengidentifikasi P. acnes sebagai kontaminan produk darah, kultur jaringan, dan luka bedah (Mollerup et al. , 2016).
Anti  jerawat  topikal  merupakan salah satu  cara  pengobatan  awal  pada AV. Bakteri P.  acnes dihambat  pertumbuhannya  dengan  pengobatan  secara  topikal seperti  penggunaan  benzoil  peroksida  (BP),  antibiotik  (klindamisin  dan
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
eritromisin), kombinasi antibiotik topikal dan BP, retinoid (tretinoin adapalen, dan tazaroten),  kombinasi  antara  retinoid  dan  BP,  asam  azelat,  dapson,  dan  asam salisilat (Alshehri et al. , 2017).
Kekambuhan  terjadi  karena P.  acnes merupakan  flora  normal  pada  kulit sehingga tidak dapat mengeradikasinya  secara permanen  (Mollerup et al. , 2016). Sampai saat ini belum ada pengobatan dengan hasil memuaskan dalam mengontrol tanda dan gejala AV terutama kekambuhannya. Hal tersebut dikarenakan P. acnes yang  dapat  resisten  dengan  antibakteri  seperti  golongan  linkosamida  akibat pemakaian jangka panjang untuk pengobatan (Zhu et al. , 2019). Oleh karena itu, dibutuhkan  alternatif  untuk  mengatasi  infeksi  pada  AV  contohnya  penggunaan metabolit sekunder dari bakteri endofit yang merupakan flora normal dari tanaman (Septiana et al. , 2017).
Salah satu tanaman yang banyak digunakan masyarakat sebagai bahan baku obat  tradisional  berasal  dari  marga Zingiberaceae .  Jenis  tanaman  yang  sering digunakan  adalah  kunyit  ( C.  longa L.).  Tanaman  ini  mempunyai  senyawa  aktif yaitu  kurkumin yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  (Soleimani et  al. ,  2018).
Diferuloylmethane adalah polifenol alami utama yang ditemukan pada kunyit ( C. longa L.). Kunyit telah digunakan secara tradisional di negara-negara Asia sebagai ramuan medis karena memiliki senyawa antioksidan, antiinflamasi, antimutagenik, antimikroba, dan antikanker (Hewlings & Kalman, 2017).
Tanaman obat dan endofitnya merupakan sumber penting penghasil senyawa metabolit sekunder yang berpotensi dalam pengobatan tradisional. Mikroorganisme endofit  adalah penghasil metabolit  sekunder sebagai  sumber obat  untuk  aktivitas antibakteri,  antiartritis,  antimikroba,  antikanker,  antidiabetik,  anti-serangga,  dan imunosupresan  (Gouda et  al. ,  2016). Bakteri  endofit  yang  diisolasi  dari  suatu tanaman  dapat  menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  sama  dengan  tanaman inangnya (Nxumalo et al. , 2020).
Bakteri  endofit  adalah  mikroorganisme  yang  hidup  di  dalam  jaringan tanaman  dengan  membentuk  koloni  untuk  bertahan  hidup  tanpa  merugikan  sel inang. Bakteri endofit dapat ditemukan di seluruh jaringan tanaman yaitu batang, daun,  akar,  bunga,  buah,  dan  biji  (Afzal et  al. ,  2019). Bakteri  endofit  berperan sebagai  penghasil  senyawa  metabolit  sekunder  yang  melindungi  sel  inang  dari
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
stress lingkungan dan serangan mikroba lain (Afzal et al. , 2019). Beberapa mikroba endofit yang berpotensi diantaranya adalah endofit tanaman jahe merah ( Zingiber officinale ) mampu menghambat pertumbuhan Escherichia coli dan Streptococcus pyogenes (Abdul et  al. ,  2020) dan  bakteri  endofit  tanaman  kunyit  ( C.  longa ) memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan S. enterica ser (Sulistiyani et al. , 2016). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi aktivitas antibakteri bakteri  endofit  kunyit  terhadap P.  acnes yang  kemudian  diharapkan  menjadi alternatif antibakteri terhadap kasus AV saat ini.

## MATERIAL DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah cawan petri, tabung reaksi, pipet volume, jarum ose, bunsen, vortex mixer, penjepit  kaca objek, jangka sorong, pinset, inkubator, gelas beaker, gelas ukur, pipet mikro, mikroskop, erlenmeyer dan centrifuge .
Bahan yang digunakan adalah isolat bakteri endofit kunyit, isolat P. acnes , media NA ( Nutrient agar ), media NB ( Nutrient Broth ), media agar darah, H2SO4
1%,  BaCl2  1%,  NaCl  steril  0,9%,  kristal  violet,  lugol,  alkohol  96%,  safranin, klindamisin,  tetrametil  paraphenildiamin,  media  MIO  ( Motility  Indole  Ornitin ),
H2O2 30%, media glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa, sorbitol, mannitol, inositol, medium urea, media Tryptone Water , reagen Kovacs, media O-F, parafin, media Simmons Citrat Agar miring, KOH 40%, etil asetat, Dragendroff , FeCl3, Liberman ,
Mayer, kaca objek, kertas cakram, tisu, handscoon steril, kertas saring steril.
Prosedur Penelitian

## Produksi Metabolit Sekunder dari Bakteri Endofit Kunyit
Bakteri endofit kunyit didapat dari koleksi penelitian sebelumnya (Yuanita et  al. ,  2019).  Bakteri  pada Nutrient  Agar (NA),  disubkultur  pada NA yang  baru dengan metode cawan  gores dan diinkubasi  pada 37ºC selama 24-48 jam  hingga diperoleh  kultur  murni  (Yusmaniar et  al. ,  2017).  Kultur  murni  diambil  dan dimasukan  pada Nutrient  Broth ( NB )  steril  sebanyak  10  mL  untuk  produksi metabolit  sekunder.  Kultur  diinkubasi  selama  24-72  jam  pada  suhu  37°C  dalam kondisi stasioner, kemudian disentrifugasi pada 13.000 rpm selama 5 menit hingga
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
didapatkan  supernatan.  Uji  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  cakram (Adityawarman, 2017).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji P.  acnes didapat  dari  Laboratorium  Parasitologi,  Universitas Indonesia. Peremajaan dilakukan dengan inokulasi P. acnes melalui metode cawan gores pada NA dan kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24-48 jam. Bakteri hasil  peremajaan  inilah  yang  digunakan  dalam  pembuatan  suspensi  bakteri  uji (Yusmaniar et al. , 2017).
Bakteri uji hasil peremajaan disuspensikan ke tabung yang berisi 5 ml NaCl 0,9%  steril,  dan  kemudian  dihomogenisasi  dengan  vortex  hingga  kekeruhannya sama  dengan  larutan  standard  Mc  Farland  0,5.  Larutan  baku  McFarland  0,5 ekuivalen dengan suspensi sel bakteri konsentrasi 1,5 x 10 8 CFU/ml (Nuria, 2010).

## Uji Sensitivitas Antibakteri
Uji  sensitivitas  antibiotik  dengan  difusi  cakram Kirby  Bauer sesuai rekomendasi Clinical  Laboratory  Standard  Institute (CLSI).  Suspensi  bakteri dipindah secara aseptik sebanyak 200µL pada permukaan lempeng Mueller-Hilton Agar (MHA).  Pada  permukaan  media  diletakkan  4  buah  cakram  antibiotik  dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Sensitivitas bakteri uji ditandai dengan tidak  adanya  pertumbuhan  koloni  di  sekitar  kertas  cakram  (Patel et  al. ,  2017a).
Kontrol positif berupa klindamisin dan kontrol negatif berupa Nutrient Broth .
Tabel 1. Kriteria zona hambat antibiotik (Patel et al. , 2017).
Antimikroba Konsentrasi cakram Kriteria Interpretasi diameter (mm) Susceptible (S) Intermediate (I) Resistant (R) Klindamisin 2µg ≥ 21 15-20 ≤14

## Skrining Bakteri Endofit yang Berpotensi sebagai Antibakteri terhadap P. acnes
Kultur isolat  bakteri  endofit  yang telah diproduksi  metabolit  sekundernya kemudian diuji potensi antibakteri dengan metode Kirby Bauer. Suspensi P. acnes disebar  pada  permukaan  MHA  dengan  metode  swab.  Sebanyak  20μL  suspensi bakteri endofit hasil homogenasi diserapkan pada kertas cakram (diameter 6 mm)
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam  (Muharni et  al. ,  2014;  Pence  & Liesman,  2020).  Diameter  zona  hambat  (mm)  yang  terbentuk  di  sekitar  cakram diukur  dengan  jangka  sorong  (Hidayat et  al. ,  2014)  dan  dikategorikan  menurut klasifikasi zona hambat ( Tabel 2 ) (Mahmudah & Atun, 2017).
Tabel 2. Klasifikasi respon hambatan pertumbuhan bakteri berdasarkan diameter zona hambat (Mahmudah & Atun, 2017).
Diameter Zona Hambat (mm) Interpretasi 0 1,4 - 6,2 6,3-10,3
10,4-26,8 >26,8 Tidak ada aktivitas Lemah Sedang Kuat
Sangat kuat

## Identifikasi Bakteri Endofit
Isolat  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  tertinggi  dikarakterisasi  dan diidentifikasi secara biokimia dengan mengacu Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. Karakterisasi yang dilakukan meliputi pengamatan morfologi koloni, morfologi sel, uji biokimia, dan pewarnaan endospora bakteri endofit (Krieg et al. , 2010;  Mamou et  al. ,  2016). Pengamatan  sel  dilakukan  dengan  pewarnaan  Gram (Nurhidayati et al. , 2015). Uji biokimia dilakukan dengan uji oksidase, uji katalase, fermentasi  karbohidrat,  erease,  indol,  penggunaan  sitrat,  kebutuhan  oksigen,  uji glukosa OF dan uji motilitas (Rahmadani, 2018).
Sebanyak 0,5 mL NaCl 0,9%, isolat bakteri endofit, dan carbol fuchsin 0,5 mL dimasukkan  ke microtube kemudian dipanaskan dalam waterbath suhu 80 o C selama  10  menit.  Campuran  kemudian  digoreskan  ke  gelas  obyek,  dikeringkan dengan slide dryer , dicuci dengan H 2 SO 4 1%, dan dibilas dengan akuades. Gelas obyek di  warnai dengan methylene blue selama 2 menit kemudian dicuci  dengan akuades, kemudian diamati dengan mikroskop pembesaran 100x.

## Uji Metabolit Sekunder Bakteri Endofit yang Potensial
Uji  metabolit  sekunder  meliputi  uji  terpenoid,  alkaloid,  flavanoid,  dan saponin  (Sharma et  al. ,  2016).  Uji  terpenoid  dilakukan  dengan  campuran supernatan  dan  kloroform  beramoniak  dimasukkan  ke  tabung  reaksi  kemudian ditambah H2SO4 2N dan dikocok kuat. Campuran didiamkan hingga terbentuk dua lapisan yaitu lapisan asam (atas) dan lapisan kloroform (bawah). Lapisan kloroform
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
diletakkan di plat tetes dan dibiarkan menguap lalu ditambah dengan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (pereaksi Lieberman-Burchardt ). Adanya senyawa terpenoid ditandai dengan warna merah (Sharma et al. , 2016).
Supernatan dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambah kloroform untuk uji  alkaloid.  Tabung  dibagi  menjadi  dua  dan  masing-masing  ditambah  pereaksi Dragendroff dan  pereaksi Mayer .  Hasil  positif  ditandai  adanya  perubahan  warna menjadi  jingga  setelah  penambahan  pereaksi Dragendroff dan  putih  setelah penambahan pereaksi Mayer (Sharma et al. , 2016).
Supernatan dimasukkan dalam tabung reaksi,  ditambah alkohol 70%,  dan dipanaskan untuk  uji flavonoid.  Campuran  ditambah lempeng logam magnesium dan  setetes  asam  klorida  pekat.  Hasil  positif  ditandai  perubahan  warna  larutan menjadi kuning (Sharma et al. , 2016).
Supernatan  dan  akuades  dimasukkan  dalam  tabung  kemudian  dipanaskan hingga mendidih untuk uji saponin. Larutan dikocok kuat dan hasil positif ditandai terbentuknya busa yang stabil selama sepuluh menit (Sharma et al. , 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Peremajaan Bakteri Endofit
Sebanyak  17  dari  21  isolat  bakteri  endofit  dari  rimpang  kunyit  berhasil diremajakan pada media NA . Isolat tersebut terdiri dari 5 bakteri Gram positif dan 12 bakteri Gram negatif ( Tabel 3 ), sedangkan 4 isolat bakteri yang tidak berhasil diremajakan terdiri dari 2 bakteri Gram positif dan 2 bakteri Gram negatif dengan kode H3, H7, M1, dan M12 dikarenakan memang tidak dapat diremajakan kembali maupun  sudah  terkontaminasi  oleh  bakteri  lain.  Isolat  bakteri  endofit  yang  tidak tumbuh dan juga terkontaminasi diduga akibat teknik penyimpanan jangka panjang yang kurang baik (Becker et al. , 2015).
Isolat  bakteri  dapat  disimpan  pada  minyak  mineral  (parafin  cair)  untuk jangka panjang. Penyimpanan dilakukan untuk mempertahankan viabilitas mikroba dengan  mencegah  keringnya  medium  sehingga  waktu  penyimpanan  lebih  lama (beberapa tahun) dan tidak diperlukan peremajaan berulang. Teknik preservasi lain yang  juga  efektif  dan  umum  dilakukan  adalah  subkultur  pada  media  segar, pengawetan pada cakram gelatin, penyimpanan di tanah steril, penyimpanan silika
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
gel,  pengeringan  semprot,  kriopreservasi,  liofilisasi,  pengeringan  cair,  dan vitrifikasi (de Vero et al. , 2019).

## Tabel 3. Hasil peremajaan bakteri endofit
No Nama Isolat Morfologi Koloni Morfologi Sel Bentuk  Permukaan Tepi Warna 1 M2 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 2 M3 Bulat Cembung Bergerigi Putih kekuningan Basil, Gram negatif 3 M4 Ireguler Datar Bergerigi Putih kekuningan Basil, Gram negatif 4 M5 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 5 M6 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 6 M7 Ireguler Timbul Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 7 M8 Ireguler Timbul Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 8 M9 Ireguler Timbul Bergerigi Putih kekuningan Basil, Gram negatif 9 M10 Ireguler Datar Bergerigi Putih kekuningan Basil,Gram negatif 10 M11 Ireguler Timbul Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 11 M13 Ireguler Timbul Bergerigi Putih kekuningan Basil, Gram negatif 12 M14 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram negatif 13 H1 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram positif 14 H2 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Coccus , Gram positif 15 H4 Ireguler Datar Bergerigi Putih kekuningan Coccus , Gram positif 16 H5 Ireguler Datar Bergelombang Putih kekuningan Basil, Gram positif 17 H6 Ireguler Datar Datar Putih kekuningan Basil, Gram positif
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Isolat  bakteri  endofit  yang  baru  memiliki  kualitas  yang  lebih  baik dibandingkan isolat lama yang sebelumnya di simpan pada lemari pendingin dalam kondisi inaktif sehingga bakteri endofit yang masih muda memiliki tingkat optimal yang lebih baik pada saat produksi metabolit sekunder (de Vero et al. , 2019).

## Peremajaan dan Konfirmasi Bakteri Uji
Peremajaan bakteri uji pada media agar darah setelah 48 jam menunjukkan pertumbuhan  koloni  berukuran  kecil,  berbentuk  bulat,  mengkilat,  tepian  utuh, cembung dan berwarna putih. Sel berbentuk basil, tidak beraturan, dan merupakan bakteri Gram positif ( Gambar 3 ). Penggunaan agar darah sebagai media yang kaya nutrisi dapat membantu pertumbuhan P. acnes (Niederstebruch et al. , 2017).
Gambar 3. A) Morfologi koloni P. acnes pada media agar darah usia 48 jam  dan
B) morfologi sel P. acnes (Perbesaran 1000x)

## Kontrol positif dan kontrol negatif
Kontrol positif berupa klindamisin sedangkan kontrol negatif berupa media NB sebagai  pembanding.  Pada Gambar  4 dapat  dilihat  bahwa  kontrol  positif menghasilkan  zona  hambat sebesar  28,876  mm  yang  menandakan P.  acnes sangat sensitif terhadap klindamisin (Patel et al. , 2017), sedangkan kontrol negatif tidak membentuk zona hambat.
Skrining Bakteri Endofit yang Berpotensi sebagai Antibakteri terhadap P. acnes Hasil uji antibakteri  terhadap P. acnes dengan difusi  cakram  menunjukan bahwa dari  17 isolat  bakteri endofit rimpang tanaman kunyit,  sebanyak 12 isolat memiliki  aktivitas  sedang  hingga  kuat  terhadap P.  acnes dengan  diameter  zona hambat  8,44  mm-21,2  mm  ( Tabel  4 ).  Interpretasi  zona  hambat  berdasarkan Mahmudah &  Atun  (2017)  yaitu  sangat  kuat  bila >26,8  mm; kuat  bila 10,4-26,8
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
mm; sedang bila 6,3-10,3 mm; lemah bila 1,4-6,2 mm; dan tidak ada aktivitas bila tidak ada zona hambat (0 mm). Isolat bakteri endofit tanaman kunyit dengan kode H5 memiliki zona hambat terbesar dengan diameter sebesar 21,2 mm ( Gambar 5 ).
Tabel 4. Hasil uji aktivitas antibakteri bakteri endofit
No. Nama Isolat Zona Hambat (mm) Interpretasi 1. H1 8,44 Sedang 2. H2 0 Tidak ada aktivitas 3. H4 0 Tidak ada aktivitas 4. H5 21,2 Kuat 5. H6 0 Tidak ada aktivitas 6. M2 11,06 Kuat 7. M3 0 Tidak ada aktivitas 8. M4 11,56 Kuat 9. M5 0 Tidak ada aktivitas 10. M6 15,4 Kuat 11. M7 15,63 Kuat 12. M8 13,75 Kuat 13. M9 15,97 Kuat 14. M10 16,09 Kuat 15. M11 15,3 Kuat 16. M13 17,3 Kuat 17. M14 9,38 Sedang
Catatan: Isolat diuji tanpa pengulangan
Gambar 4. A) Kontrol positif  klindamisin pada media agar darah usia 48 jam dan B) kontrol negatif NB pada media agar darah usia 48 jam
A B
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Gambar 5. A) Isolat M3 tidak memiliki aktivitas antibakteri; B) Isolat M14 dengan aktivitas sedang, dan C) Isolat H5 dengan aktivitas kuat

## Identifikasi Bakteri Endofit yang Potensial sebagai Antibakteri
Identifikasi  bakteri  dilakukan  melalui  empat  tahap  pemeriksaan  yaitu pemeriksaan morfologi koloni, morfologi sel, pengujian biokimia, dan pewarnaan endospora. Pemeriksaan morfologi koloni dan morfologi sel diketahui bahwa isolat bakteri endofit H5 memiliki bentuk ireguler, permukaan datar, tepi bergelombang, dan  bewarna  putih  kekuningan.  Sedangkan  hasil  pemeriksaan  morfologi  sel menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  endofit  H5  merupakan  bakteri  Gram  positif berbentuk batang ( Gambar 6 ).
Gambar 6. A) Morfologi koloni isolat H5 pada NA usia 24 jam; B) Morfologi sel isolat H5 perbesaran 1000x; dan C) Zona hambat H5 yang terbentuk di media agar darah usia 48 Jam
Pengujian biokimia yang dilakukan terhadap isolat potensial atau isolat H5 yaitu uji kebutuhan oksigen, uji motilitas, uji glukosa, uji laktosa, uji manitol, uji maltosa,  uji  sukrosa,  uji  indol,  uji  simon  sitrat,  uji  oksidase,  uji  katalase  dan  uji TSIA  ( Tabel  5 ).  Berdasarkan  hasil pengamatan  morfologi  koloni,  morfologi  sel, dan hasil biokimia, diperoleh bahwa isolat bakteri endofit yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap P. acnes yaitu isolat H5 memiliki kemiripan dengan
A B
C
A C B
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Bacillus sp.  sebagian  besar  Genus Bacillus dapat  menghasilkan  enzim  katalase. Genus  ini  ada  yang  aerob,  fakultatif  anaerob,  tetapi  beberapa  spesies  ada  yang bersifat  obligat  anaerob.  Kebanyakan  spesies  pada  genus  ini  akan  tumbuh  pada media biasa seperti NA dan agar darah. Morfologi koloni dan ukurannya bervariasi tergantung spesiesnya. Bersifat oksidase positif maupun negatif (Krieg et al. , 2010). Biasanya  ditemukan  di  tanah,  lingkungan  yang  terkontaminasi  oleh  tanah  baik secara langsung maupun tidak, serta juga dapat ditemukan pada air dan  makanan (Logan & Vos, 2015).
Tabel 5. Hasil uji biokimia bakteri endofit yang potensial No. Uji Biokimia Hasil Interpretasi 1. Motilitas + Bakteri ini memiliki flagel untuk bergerak. 2. Glukosa + Bakteri  ini  dapat  memfermentasi  glukosa menghasilkan asam dan gas. 3. Laktosa - Bakteri  ini  tidak  dapat  memfermentasi  laktosa menghasilkan asam. 4. Manitol - Bakteri ini tidak dapat memfermentasi manitol. 5. Maltosa - Bakteri ini tidak dapat memfermentasi maltosa. 6. Sacarosa (sukrosa) + Bakteri  ini  dapat  memfermentasi  sukrosa menghasilkan asam. 7. Indol - Bakteri ini tidak memiliki enzim triptopanase. 8. Urea +
Bakteri memiliki enzim urease, dapat mengubah urea menjadi ammonia 9. Simon sitrat - Bakteri  ini  tidak  menggunakan  sitrat  sebagai sumber energinya. 10. Oksidase + Bakteri ini memiliki enzim sitokrom c oksidase 11. Katalase + Bakteri  ini  memiliki  enzim  katalase  untuk mengubah H 2 O 2 menjadi air 12. Glukosa OF NF Bakteri tidak  dapat  memfermentasi  karbohidat pada keadaan tabung tertutup.
Pewarnaan  endospora  dilakukan  untuk  mengkonfirmasi  secara  pasti terhadap Bacillus ,  dikarenakan Bacillus mampu  menghasilkan  endospora. Endospora  yang  dihasilkan,  mampu  untuk  membuat  bakteri  tahan  terhadap berbagai kondisi ekstrim seperti suhu, kekeringan, sinar UV, larutan asam dan basa kuat,  zat  oksidatif,  dan  tekanan  hidrostatik  yang  ekstrim.  Endospora  umumnya dapat  rusak  pada  suhu  121 o C,  akan  tetapi  terdapat  beberapa  bakteri  yang  dapat
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
menghasilkan endospora  yang tahan dengan pemanasan 150 o C (Palombo, 2020). Pada pewarnaan endospora bakteri didapatkan hasil bahwa isolat bakteri endofit H5 positif memiliki endospora ( Gambar 7 ). Hal ini sesuai dengan penelitian yang oleh Sulistiyani et  al. (2016)  yang  menemukan  bakteri Bacillus dari  tanaman  kunyit. Bacillus subtilis diketahui dapat menghasilkan metabolit sekunder golongan cyclic lipopetide ( surfactin, iturin, dan fengycin yang termasuk dalam golongan saponin (Kaspar et  al. ,  2019).  Senyawa  saponin  sebagai  antibakteri  memiliki  cara  kerja dengan  menyebabkan  kebocoran  protein  dan  enzim  dari  dalam  sel  (Khan et  al. , 2018).
Gambar 7. Pewarnaan spora isolat H5 perbesaran 1000x

## Uji Metabolit Sekunder Bakteri Endofit yang Potensial sebagai Antibakteri
Uji  metabolit  sekunder dilakukan terhadap  isolat  potensial  yaitu  H5  yang diduga  termasuk  dalam  genus Bacillus .  Hasil  uji  menunjukkan  isolat  H5  dapat menghasilkan senyawa golongan saponin, terpenoid dan flavonoid ( Tabel 6 yang memiliki sifat antibakteri. Hal ini sesuai dengan pernyataan Sulistiyani et al. (2016) bahwa bakteri endofit mampu menghasilkan senyawa yang serupa dengan senyawa yang dihasilkan tanaman kunyit yaitu saponin, triterpenoid, flavonoid, dan alkaloid.
Tabel 6. Hasil uji metabolit sekunder bakteri endofit potensial
No. Uji Metabolit Sekunder Isolat H5 1. Saponin + 2. Alkaloid - 3. Terpenoid + 4. Flavonoid + 5. Fenol -
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Penelitian  menyebutkan  bahwa B.  subtilis dapat  menghasilkan  terpenoid dengan cara memproduksi banyak isoprena secara alami. Isoprena yang dihasilkan B. subtilis melalui proses metabolik diubah menjadi senyawa metabolit terpenoid (Guan et al. , 2015). Terpenoid menghambat pertumbuhan bakteri dengan bereaksi dengan  porin  (protein  transmembran)  pada  membran  luar  dinding  sel  bakteri, membentuk  ikatan  polimer  yang  kuat  sehingga  mengakibatkan  rusaknya  porin sehingga  menurunkan  permeabilitas  membran  sel  (Guan et  al. ,  2015).  Flavanoid berfungsi sebagai antibakteri dengan cara membentuk senyawa kompleks terhadap protein extraseluler yang mengganggu keutuhan membran sel bakteri. Mekanisme kerjanya dengan cara mendenaturasi protein sel bakteri dan merusak membran sel tanpa dapat diperbaiki lagi (Khan et al. , 2018).
Bacillus dapat  menghasilkan  beberapa  senyawa  antibiotik  baru  sebagai metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh  tiap  spesiesnya.  Hal  ini  terbukti  dari penelitian  yang  dilakukan  oleh  Horak.  Beberapa  spesies Bacillus yang  telah diketahui dapat menghasilkan senyawa antibiotik baru adalah B. cereus diketahui dapat  menghasilkan cerexin dan zwittermicin , B.  circulans and Brevibacillus laterosporus diketahui  dapat  menghasilkan circulin , B.  licheniformis dapat menghasilkan bacitracin , B.  pumilus dapat  menghasilkan pumulin and B.subtilis menghasilkan difficidin, subtilin, surfactin dan bacilomycin (Horak et al. , 2019) .
Senyawa  metabolit  ini  memiliki  potensi  untuk  dikembangkan  menjadi antibakteri.  Bakteri  endofit  juga  dapat  memodulasi  senyawa  metabolit  sekunder dari  tanaman  inangnya.  Literatur  sebelumnya  juga  menyatakan  bahwa  bakteri endofit yang berasal dari famili Solanum  lycopersicum , Psidium  guajava , Pinus merkusii , Dendrocalamus asper , Albizia  chinensis , dan Theobroma  cacao L dapat memproduksi  senyawa  metabolit  sekunder  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri (Maulidia et al. , 2020).

## KESIMPULAN
Bakteri  endofit  tanaman  kunyit  ( C.  longa L.)  memiliki  potensi  sebagai antibakteri dengan aktivitas sedang (8,44 mm) hingga kuat (21,2 mm) terhadap P. acnes . Identifikasi  karakter  bakteri  endofit  yang  memiliki  potensi  sebagai antibakteri paling potensial (isolat H5) berdasarkan pengamatan morfologi koloni,
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
morfologi sel, dan uji biokimia menunjukkan adanya kemiripan dengan Bacillus .
Senyawa  metabolit  yang  dapat  dihasilkan  bakteri  endofit  isolat  H5  diantaranya yaitu senyawa golongan saponin, terpenoid, dan flavanoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul, J. A., Posangi, J., Wowor, P. M., & Bara, R. A. (2020). Uji efek daya hambat jamur  endofit  rimpang  jahe  ( Zingiber  officinale Rosc)  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Jurnal Biomedik , 12 (2), 88–93. https://doi.org/10.35790/jbm.12.2.2020.29163
Adityawarman.  (2017).  Isolasi,  identifikasi  dan aktivitas antibakteri  endofit daun pegagang ( Centella asiatica L.) terhadap Escherichia coli . Jurnal Cerebellum ,
5 (4B), 1569–1581. https://jurnal.untan.ac.id/index.php/JC/article/view/44821
Afzal,  I.,  Shinwari,  Z.  K.,  Sikandar,  S.,  &  Shahzad,  S.  (2019).  Plant  beneficial endophytic  bacteria:  Mechanisms,  diversity,  host  range  and  genetic determinants. Microbiological Research , 221 , 36–49.
https://doi.org/10.1016/j.micres.2019.02.001
Alshehri, M.,  Almutairi, A., Alomran, A., Alrashed, B., & Kaliyadan,  F. (2017). Over-the-counter  and  prescription  medications  for  acne:  A  cross-sectional survey in a sample of university students in Saudi Arabia. Indian Dermatology Online Journal , 8 (2), 120. https://doi.org/10.4103/2229-5178.202273
Aydemir,  E.  H.  (2017).  Acne  vulgaris. Türk  Pediatri  Arşivi , 49 (1),  13–16. https://doi.org/10.5152/tpa.2014.1943
Becker, K., Skov, R. L., & von Eiff, C. (2015). Staphylococcus , Micrococcus , and other catalase-positive Cocci. In Manual of  Clinical Microbiology (pp. 354– 382). ASM Press. https://doi.org/10.1128/9781555817381.ch21
de Vero, L., Boniotti, M. B., Budroni, M., Buzzini, P., Cassanelli, S., Comunian, R.,  Gullo,  M.,  Logrieco,  A.  F.,  Mannazzu,  I.,  Musumeci,  R.,  Perugini,  I., Perrone, G., Pulvirenti, A., Romano, P., Turchetti, B., & Varese, G. C. (2019). Preservation, characterization and exploitation of microbial biodiversity: The Perspective  of  the  Italian  network  of  culture  collections. Microorganisms , 7 (12), 685. https://doi.org/10.3390/microorganisms7120685
Gouda, S., Das, G., Sen, S. K., Shin, H.-S., & Patra, J. K. (2016). Endophytes: A treasure house of bioactive compounds of medicinal importance. Frontiers in Microbiology , 7 . https://doi.org/10.3389/fmicb.2016.01538
Guan, Z., Xue, D., Abdallah, I. I., Dijkshoorn, L., Setroikromo, R., Lv, G., & Quax, W.  J.  (2015).  Metabolic  engineering  of Bacillus  subtilis for  terpenoid
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
production. Applied  Microbiology  and  Biotechnology , 99 (22),  9395–9406. https://doi.org/10.1007/s00253-015-6950-1
Hewlings, S., & Kalman, D. (2017). Curcumin: A review of its effects on human health. Foods , 6 (10), 92. https://doi.org/10.3390/foods6100092
Hidayat,  S.,  Hanum,  F.,  &  Ismail,  A.  (2014).  Efektivitas  daya  hambat  dan  daya bunuh  bakteri  ulkus  traumatikus  pada  mukosa  mulut  dengan  berbagai konsentrasi  propolis  ( Trigona sp.). Medali:  Media  Dental  Intelektual , 2 (1), 79–84. http://jurnal.unissula.ac.id/index.php/medali/article/view/456/382
Horak,  I., Engelbrecht,  G., Rensburg, P. J. J., &  Claassens, S.  (2019). Microbial metabolomics:  essential  definitions  and  the  importance  of  cultivation conditions for utilizing Bacillus species as bionematicides. Journal of Applied Microbiology , 127 (2), 326–343. https://doi.org/10.1111/jam.14218
Kaspar, F., Neubauer, P., & Gimpel, M. (2019). Bioactive secondary metabolites from Bacillus subtilis : A comprehensive review. Journal of Natural Products , 82 (7), 2038–2053. https://doi.org/10.1021/acs.jnatprod.9b00110
Khan, M. I., Ahhmed, A., Shin, J. H., Baek, J. S., Kim, M. Y., & Kim, J. D. (2018). Green  tea  seed  isolated  saponins  exerts  antibacterial  effects  against  various strains of Gram positive and Gram negative bacteria, a comprehensive study in  vitro and in  vivo . Evidence-Based  Complementary  and  Alternative Medicine , 2018 , 1–12. https://doi.org/10.1155/2018/3486106
Krieg, N. R., Staley, J. T., Brown, D. R., Hedlund, B. P., Paster, B. J., Ward, N. L., Ludwig,  W.,  &  Whitman,  W.  B.  (2010).  Bergey’s  manual  of  systematic bacteriology second edition. In Springer-Verlag New York Inc.
Logan, N., & Vos, P. de. (2015). Bergeys’s manual of systematics of archaea and bacteria: genus bacillus (W. S. John, Ed.). Inc.
Mahmudah, F. L., & Atun, S. (2017). Uji aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol temu  kunci  ( Boesenbergia  pandurata Roxb)  terhadap  bakteri Streptococcus mutans . Jurnal Penelitian Saintek , 22 (1), 59.
https://doi.org/10.21831/jps.v22i1.15380
Mamou, G., Malli Mohan, G. B., Rouvinski, A., Rosenberg, A., & Ben-Yehuda, S. (2016). Early developmental program shapes colony morphology in bacteria. Cell Reports , 14 (8), 1850–1857. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2016.01.071
Maulidia,  V.,  Soesanto,  L.,  Syamsuddin,  S.,  Khairan,  K.,  Hamaguchi,  T., Hasegawa,  K.,  &  Sriwati,  R.  (2020).  Secondary  metabolites  produced  by endophytic  bacteria  against  the  root-knot  nematode  ( Meloidogyne sp.). Biodiversitas Journal of Biological
Diversity , 21 (11). https://doi.org/10.13057/biodiv/d211130
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Mollerup, S., Friis-Nielsen, J., Vinner, L., Hansen, T. A., Richter, S. R., Fridholm, H., Herrera, J. A. R., Lund, O., Brunak, S., Izarzugaza, J. M. G., Mourier, T., Nielsen,  L.  P.,  &  Hansen,  A.  J.  (2016). Propionibacterium  acnes :  Disease- causing agent or common contaminant? detection in diverse patient samples by next-generation sequencing. Journal of Clinical Microbiology , 54 (4), 980– 987. https://doi.org/10.1128/JCM.02723-15
Muharni,  Fitrya,  Oktaruliza,  M.,  &  Elfita.  (2014).  Uji  aktivitas  antibakteri  dan antioksidan  senyawa  derivat  piranon  dari  mikroba  endofitik Penicillium sp. pada tumbuhan kunyit putih ( Curcuma zedoaria (berg.) Roscoe). Traditional Medicine Journal , 19 (3), 107–112. https://doi.org/10.22146/tradmedj.8226
Niederstebruch, N., Sixt, D., Benda, B. I., & Banboye, N. (2017). A suitable blood agar  containing  human  blood  especially  for  the  use  in  laboratories  of developing  countries. The  Journal  of  Infection  in  Developing  Countries , 11 (05), 399. https://doi.org/10.3855/jidc.8957
Nurhidayati, S., Faturrahman, F., & Ghazali, M. (2015).  Deteksi bakteri patogen yang berasosiasi dengan Kappaphycus alvarezii (Doty) bergejala penyakit ice- ice. Jurnal Sains Teknologi & Lingkungan , 1 (2), 24-30. https://doi.org/10.29303/jstl.v1i2.53
Nuria,  M.  C.  (2010).  Antibacterial  activities  from  jangkang  ( Homalocladium platycladum (F.  Muell)  Bailey)  leaves. Mediagro:  Jurnal  Ilmu-Ilmu Pertanian , 6 (2), 9-15. https://doi.org/10.31942/md.v6i2.883
Nxumalo, C. I., Ngidi, L. S., Shandu, J. S. E., & Maliehe, T. S. (2020). Isolation of endophytic  bacteria  from  the  leaves  of Anredera  cordifolia CIX1  for metabolites and their biological activities. BMC Complementary Medicine and Therapies , 20 (1), 300. https://doi.org/10.1186/s12906-020-03095-z
Palombo,  E.  A.  (2020).  Ethanol  treatment  does  not  inactivate  spore-forming bacteria  –  A  cautionary  note  about  the  safe  transport  of  bacteria  prior  to identification by MALDI-TOF MS. Journal of Microbiological Methods , 172 , 105893. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2020.105893
Patel,  J.,  Weinstein,  M.,  Eliopoulus,  G.,  Jenkins,  S.,  Lewis,  J.,  Limbago,  B.,  & Mathers, A. (2017a). Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing (P.  A.  Wayne,  Ed.;  27th  ed.,  Vol.  37).  Clinical  and  Laboratory Standards Institute.
Patel,  J.,  Weinstein,  M.,  Eliopoulus,  G.,  Jenkins,  S.,  Lewis,  J.,  Limbago,  B.,  & Mathers, A. (2017b). Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing (P.  A.  Wayne,  Ed.;  27th  ed.,  Vol.  37).  Clinical  and  Laboratory Standards Institute.
Baraga et al. , Aktivitas antibakteri metabolit sekunder ...
Pence,  M.  A.,  &  Liesman,  R.  (2020).  Clinical  microbiology.  In Contemporary Practice in Clinical Chemistry (pp. 985–1006). Elsevier. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-815499-1.00055-7
Rahmadani,  B.  A.  (2018).  Karakteristik  bakteri  endofit  daun  pare  ( Momordica charantia L.)  yang memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap Shigella  flexneri . Jurnal  Mahasiswa  PSPD  FK  Universitas  Tanjungpura , 4 (1),  3–22. https://jurnal.untan.ac.id/index.php/jfk/article/view/25678
Septiana, E., Sukarno, N., & Simanjuntak, P. (2017). Endophytic fungi associated with  turmeric  (Curcuma  longa  L.)  can  inhibit  histamine-forming  bacteria  in fish. . HAYATI: Journal of Biosciences , 24 (1), 46–47. https://doi.org/10.4308/hjb.24.1.46
Sharma,  D.,  Pramanik,  A.,  &  Agrawal,  P.  K.  (2016).  Evaluation  of  bioactive secondary metabolites from endophytic fungus Pestalotiopsis neglecta BAB- 5510 isolated from leaves of Cupressus torulosa D.Don. 3 Biotech , 6 (2), 210. https://doi.org/10.1007/s13205-016-0518-3
Soleimani,  V.,  Sahebkar,  A.,  &  Hosseinzadeh,  H.  (2018).  Turmeric  ( Curcuma longa ) and its major constituent (curcumin) as nontoxic and safe substances: Review. Phytotherapy Research , 32 (6), 985–995. https://doi.org/10.1002/ptr.6054
Sulistiyani, S., Ardyati, T., & Winarsih, S. (2016). Antimicrobial and antioxidant activity of endophyte bacteria associated  with Curcuma longa rhizome. The Journal of Experimental Life Sciences , 6 (1), 45–51. https://doi.org/10.21776/ub.jels.2016.006.01.11
Yuanita, M. M., Putri, E. A., Mahyarudin, M., Mardhia, M., & Rialita, A. (2019). Eksplorasi bakteri gram negatif endofit tanaman kunyit ( Curcuma longa L.) yang memiliki kemampuan quorum quenching. Majalah Kedokteran Andalas , 42 (2), 80. https://doi.org/10.25077/mka.v42.i2.p80-90.2019
Yusmaniar,  Wardiyah,  &  Nida,  K.  (2017). Mikrobiologi  dan  parasitologi (E. Krisnadi,  Ed.;  1st  ed.).  Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia. http://bppsdmk.kemkes.go.id/pusdiksdmk/wp-
content/uploads/2017/11/DAFTAR-ISI-DAN-MIKROBIOLOGI- PARASITOLOGI.pdf
Zhu,  T.,  Zhu,  W.,  Wang,  Q.,  He,  L.,  Wu,  W.,  Liu,  J.,  Li,  Y.,  &  Sun,  D.  (2019). Antibiotic  susceptibility  of Propionibacterium  acnes isolated  from  patients with acne in a public hospital in Southwest China: Prospective cross-sectional study. BMJ  Open , 9 (2),  e022938.  https://doi.org/10.1136/bmjopen-2018- 022938