Kombinasi Ekstrak Batang Serai Wangi dan Ekstrak Biji Pinang Muda dalam Bentuk Spray sebagai Bioinsektisida Alami terhadap Nyamuk Aedes Aegypti
Dwi Anggun , Khoirul Anam STIKes Bhakti Al-Qodiri , Universitas Islam Jember Email : an660en.lestari@gmail.com , cunam.212@gmail.com

## Abstrak
Kasus DBD Kabupaten Jember menempati posisi kedua terbanyak setelah Kabupaten Jombang yaitu sebanyak 170  kasus  yang  dilaporkan  dan  3  korban  meninggal.  Pengendalian  vektor  nyamuk Aedes  aegypti  secara  kimia dengan menggunakan insektisida  dapat  ditujukan  terhadap  nyamuk dewasa maupun  larva.  Serai  wangi  dan biji pinang  mengandung  senyawa  yang  memiliki  kemampuan  sebagai  insektisida.Tujuan  penelitian  ini  adalah menganalisispotensi ekstrak  serai  wangi  (Cymbopogon  nardus)  dan  ekstrak  biji pinang  (Areca catechuL)  dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami  untuk  mengendalikan  nyamuk Aedes  aegypti. Penelitian  ini  termasuk kedalam  rancangan  penelitian  murni  (true  experiment  )  dengan  rancangan  Factorial  Design.  penelitian  ini menggunakan  25  ekor  nyamuk  untuk  setiap  unit  penelitian.  Dalam  penelitian  ini  terdapat  10  unit  penelitian dengan 3 kali pengulangan untuk setiap unit. Analisis data pada penelitian ini menggunakan uji statistik GLM  dan analisis Probit. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak serai wangi, biji pinang dan kombinasi memiliki hasil uji  0.000  <  0.005.  kesimpulan  penelitian  didapatkan  bahwa  Ekstrak  serai  wangi  memiliki  potensi    sebagai bioinsektisida  alami  nyamuk Aedes  aegypti,  Ekstrak  biji  pinang  muda  (Areca  cathecu  L)  tidak  memiliki  potensi sebagai  bioinsektisida  alami  nyamuk  Aedes  aegypti  sedangkan  Kombinasi  ekstrak  batang  serai  wangi (Cymbopogon  nardus)  dan  ekstrak  biji  pinang  muda  (Areca  cathecu  L)  memiliki  potensi    sebagai  bioinsektisida alami nyamuk Aedes aegypti.
Kata kunci : Serai Wangi, Biji Pinang, Aedes aegypti

## Abstract
The  DHF  case  in  Jember  Regency  was  the  second  largest  after  Jombang,  namely  170  reported  cases  and  3 deaths.  Chemical  control  of  the  Aedes  aegypt  mosquito  vector  using  insecticides  can  be  directed  against  both adult mosquitoes and larvae. Lemongrass and areca nut contain compounds that have the ability as insecticides. The purpose of this study was to analyze the potential of fragrant lemongrass extract (Cymbopogon nardus) and areca  seed  extract  (Areca  catechuL)  in  the  form  of  spray  as  a  natural  bioinsecticide  to  control  Aedes  aegypti mosquitoes.  This  research  belongs  to  a  pure  research  design  (true  experiment)  with  the  design  of  Factorial Design. this study used 25 mosquitoes for each research unit. In this study there were 10 research units with 3 repetitions  for  each  unit.  Data  analysis  in  this  study  using  GLM  statistical  tests  and  Probit  analysis. The  results showed that lemongrass extract, areca nut and combination had a test result of 0.000 <0.005. The conclusions of the study showed that citronella extract had the potential as a natural bioinsecticide of Aedes aegypti mosquito. Areca  cathecu  L  did  not  have  the  potential  as  a  natural  bioinsecticide  of  Aedes  aegypti  mosquitoes  while  the combination of fragrant lemongrass extract (Cymbopogon nardus) and young areca seed extract ( Areca cathecu L) has the potential as a natural bioinsecticide of the Aedes aegypti mosquito Keywords: areca seed, Frarant lemongrass, Aedes aegypti

## Pendahuluan
WHO  selaku  organisasi  kesehatan  dunia telah memberikan rekomendasi dalam penggunaan  insektisida  untuk  mengendalikan nyamuk Aedes aegypti sebagai vektor penyakit DBD (demam berdarah dengue) yaitu dengan  menggunakan  malathionpada  nyamuk stadium  dewasa  dan  pada  stadium  larva dengan  menggunakan  temephos  1%  atau lebih  sering  disebut  Abate.  Penelitian  yang dilakukan oleh Heny Prasetyowati dkk (2016)terhadap insektisida golongan organophosphate  di  wilayah  DKI  Jakarta didapatkan  hasil  bahwa  telah  terjadi  resistensi nyamuk  Aedes  aegypti  terhadap  insektisida malathion  dan  temephos  1%di  wilayah  DKI Jakarta, sehingga perlu  dicari insektisida  yang baru  serta  teruji  keefektifannya  terhadap kematian nyamuk Aedes aegypti
Insektisida organophosphate adalah insektisida  sintetik  dengan  waktu  paruh  yang panjang  sehingga  perlu  diperhatikan  dampak residu dari penggunaan insektisida organophosphate tersebut. Dampak penggunaan  insektisida  sintetik  dalam  jangka waktu  yang  lama  selain  resistensi  serangga adalah terjadinya gangguan kesehatan manusia dan kesehatan lingkungan.
Resistensi yang terjadi akibat penggunanaan  insektisida  sintetik  golongan organophosphate secara terus menerus dalam pengendalian  vektor  nyamuk  Aedes  aegypti dapat  dilihat  dari  gambaran  data  yang  dirilis oleh  Kemenkes  RI  pada  tahun  2010  dan 2015yang  menunjukan  terjadi  KLB  demam berdarah  dengue  di  beberapa  kabupaten/kota di  beberpa  propinsi  di  Indonesia.  Data  yang dirilis  oleh  Balitbang  Kemenkes  RI  per
Februari 2016 disebutkan telah terjadi fenomena  KLB  DBD  di  7  propinsi  dengan  9 kabupaten dan 2 kota di Indonesia, sedangkan pada  bulan  Maret  2016  telah  bertambah  4 propinsi  dan  6  kabupaten  menetapkan  status KLB  DBD  termasuk  Kabupaten  Situbondo  di Jawa  Timur  Data  kasus  DBD  untuk  wilayah Jawa Timur periode Januari - Maret 2016 telah terjadi sebanyak 858 kasus dan 27 diantaranya  meninggal  dunia,  sedangkan jumlah  kasus  DBD  di  Jawa  Timur  pada  tahun 2015  sebanyak  19.942  kasus  DBD  dan  277 meninggal  dunia.  Berdasarkan    jumlah  kasus DBD  di  Jawa  Timur  periode  Januari  -  Maret 2016,  Kabupaten  Jember  menempati  posisi kedua  terbanyak  setelah  Kabupaten  Jombang yaitu sebanyak 170 kasus yang dilaporkan dan 3 korban meninggal.
Serai  wangi  (Cymbopogon  nardus  L)  yang mengandung senyawa alkaloid seperti geraniol dan  sitronelol  memiliki  kemampuan  sebagai insektisida  yang  bekerja  layaknya  pestisida golongan organophosphateyang bersifat kontak dengan menghambat enzim cholinesterase  sehingga  akan  terjadi kontraksi otot secara terus menerus. Kontraksi otot yang terjadi  secara  terus  menerus  termasuk  otot pernapasan  serangga,  maka  akan  terjadi gangguan pernapasan yang akan menyebabkan  terjadinya  kematian  nyamuk karena kekurangan oksigen.
Biji pinang yang merupakan biji dari tumbuhan pinang (Areca catechu L) merupakan tumbuhan  yang  banyak  tumbuh  di  wilayah Indonesia.  Biji  pinang  berdasarkan  hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Vanimakhal (2016)  banyak  mengandung  senyawa  aktif yang diantaranya adalah tannin.
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  maka peneliti  tertarik  untuk  melakukan  penelitian tentang  “Pengaruh  Kombinasi  Ekstrak  Batang Serai  Wangi  dan  Ekstrak  Biji  Pinang  Muda dalam  Bentuk  Spray  sebagai  Bioinsektisida terhadapNyamuk Aedes aegypti. Tujuan penelitian  ini  adalah  menganalisispotensi ekstrak serai wangi (Cymbopogon nardus) dan ekstrak  biji  pinang  (Areca  catechuL)dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami untuk mengendalikan nyamuk Aedes aegypti.

## Metode Penelitian
Jenis  penelitian  eksperimen  adalah  suatu penelitian dengan melakukan percobaan (experiment) yang dimaksudkan untuk mengetahui  gejala  atau  pengaruh  yang  akan timbul  akibat  dari  suatu  perlakuan  atau intervensi tertentu pada eksperimen tersebut.
Penelitian  ini  menggunakan  25  ekor nyamuk  untuk  setiap  unit  penelitian.  Dalam penelitian  ini  terdapat  10  unit  penelitian
dengan  3  kali  pengulangan  untuk  setiap  unit. Tempat  penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Entomologi
Lembaga Penyakit Tropis
Universitas  Airlangga  Surabaya  pada  bulan Nopember 2018 sampai dengan Januari 2019.
Variabel  terikat  pada  penelitian  ini  adalah jumlah  kematian  nyamuk  Aedes  aegypti setelah mendapat intervensi berupa penyemprotan  atau  spray  ekstrak  serai  atau ekstrak biji pinang dan kombinasi ekstrak serai dan  ekstrak  biji  pinang  yang  sudah  ditentukan konsentrasinya. Variabel kendali adalah variabel yang berpotensi mengganggu hubungan  variabel  terikat  dan  variabel  bebas namun  dapat  dikendalikan  sehingga  tidak mempengaruhi  hasil  hubungan  antar  variabel dalam penelitian. Suhu, kelembaban dan angin dalam  penelitian  ini  merupakan  variabel kendali.  Analisis  data  pada  penelitian  ini menggunakan  uji  statistik  GLM  dan  analisis Probit.

## Hasil Dan Pembahasan
Hasil
Hasil  uji  statistik  yang  sudah  dilakukan menggunakan  aplikasi  SPSS  dengan  uji statistik GLM (General Linier Model) didapatkan  bahwa  pengaruh  potensi  ekstrak serai  wangi  (Cymbopogon  nardus)  dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami nyamuk  Aedes  aegypti  sebesar  0.000.  Nilai tingkat  signifikansi  0.000  lebih  kecil  dari  pada nilai  T  Tabel  yang  sudah  ditentukan  yaitu 0.005 sehingga H1 diterima yang menyatakan bahwa ekstrak batang serai wangi (Cymbopogon nardus) memiliki potensi sebagai  bioinsektisida  alami  nyamuk  Aedes aegypti.  Pengaruh  potensi  ekstrak  biji  pinang (Areca catechu L) dalam bentuk spray sebagai bioinsektisidaalami  nyamuk  Aedes  Aegypti sebesar  0.000.  Nilai  tingkat  signifikansi  0.000 lebih  kecil  dari  pada  nilai  T Tabel  yang  sudah ditentukan  yaitu  0.005  sehingga  H2  diterima yang  menyatakan  bahwa  Ekstrak  biji  pinang muda (Areca cathecu L) tidak memiliki potensi sebagai  bioinsektisida  alami  nyamuk  Aedes aegypti.
Selanjutnya  uji  pengaruh  potensi  ekstrak kombinasi didapatkan bahwa pengaruh potensi  ekstrak  kombinasi/campuran  ekstrak batang serai wangi (Cymbopogon nardus) dan ekstrak  biji  pinang  muda  (Areca  catechu  L) dalam  bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida alami  nyamuk  Aedes  aegypti  sebesar  0.000. Nilai  tingkat  signifikansi  0.000  lebih  kecil  dari pada nilai T Tabel yang sudah ditentukan yaitu 0.005 sehingga H3 diterima yang menyatakan bahwa  Kombinasi  ekstrak  batang  serai  wangi (Cymbopogon  nardus)  dan  ekstrak  biji  pinang muda  (Areca  cathecu  L)  memiliki  potensi
sebagai  bioinsektisida  alami  nyamuk  Aedes aegypti .
Pembahasan Serai wangi Tanaman  serai  wangi  atau  Cymbopogon nardus    merupakan  tumbuhan  monokotil dengan  daun  berwarna  hijau  runcing  pada ujungnya,  akar  sirkuler,  panjang  batang  5,0 – 7,0  cm  dengan  lebar  batang  5,0 –  15,0  mm berwarna  merah  kecoklatan.  Tumbuhan  ini tumbuh  secara  bergerombol  dengan  tinggi mencapai  1 –  1,5  meter.  Tumbuhan  ini  dapat tumbuh  subur  di  daerah  beriklim  tropis  dan sub-tropis  hingga  pada  ketinggian  900  meter dpl.  Tumbuhan  serai  wangi  tumbuh  secara merata di seluruh dunia hingga Indonesia yang dimanfaatkan sebagai rempah – rempah untuk memasak  makanan.  Menurut  Gunawan  dan Mulyani  (2010),  kandungan  bahan  aktif  dalam minyak  atsiri  daun  Cymbopogon  nardus adalah  berupa  alkaloid  geraniol  97  %  dan sisanya  adalah  sitronellol,  sitral  dan  mentol. Sedangkan  menurut  Luciani  Gaspar  De Toledo  (2016)  yang  dimuat  dalam  Molecular Sciences  menyebutkan  bahwa  kandungan utama  Cymbopogon  nardus  adalah  geraniol, citronellal, sitral dan citronellol. Gunawan dan
Mulyani  (2010)  dalam  bukunya  Ilmu  Obat Alam  (Farmakognosi)  Jilid  1  dikatakan  bahwa kandungan  utama  minyak  serai  wangi  adalah geraniol  (97%),  sitronela,  sitronelol,  sitral  dan mentol.  Hasil  uji  fitokimia  terhadap  ekstrak etanol  daun  serai  yang  dilakukan  oleh  Anita Verawati  dkk  (2013)  didapatkan  bahwa kandungan batang serai wangi adalah alkaloid, flavonoid,  saponin,  tannin,  quinone  dan terpenoid.  Tumbuhan  ini  seringkali  digunakan sebagai bahan kosmetik, parfum, dan repellen anti  nyamuk  (Gunawan,2010).  Kandungan alkaloid  yang  terdapat  pada  ekstrak  batang serai  wangi  terdiri  dari  geraniol,  sitronellol, sitronella,  sitral  dan  zat  lain  yang  jumlahnya sedikit  (Mulyani,  2010).  Geraniol  adalah  fraksi alkaloid dengan jumlah 97 % dari semua fraksi alkaloid  yang  terkandung  dalam  ekstrak batang serai wangi (Toledo, 2016). Geraniol Sitronelol Sitronelal Cara kerja alkaloid geraniol, sitronelol dan sitronelal  sebagai  insektisida  adalah  dengan berikatan  secara  irreversible  dengan  molekul enzim  cholinesterase  pada  celah  sinaps  yang menghubungkan  saraf  dan  otot.  Ikatan  yang bersifat irreversible ini mengakibatkan hambatan pada cara kerja enzim cholinesterase dalam menghidrolisis neurotransmitter  acetylcholine  menjadi  acetyl co-A dan cholin.
Acetylcholin  atau  asetilkolin  merupakan salah  satu  neurotransmitter  (zat  penghantar
rangsangan  saraf)  yang  mentransmisikan sinyal  atau  rangsangan  yang  diterima  untuk diteruskan diantara sel-sel saraf yang berdekatan  atau  pada  sambungan  antara ujung akhir saraf dan otot atau neuro-muscular junction. Acetylcholine yang merupakan neurotransmitter  yang  terdapat  pada  sistem saraf pusat maupun sistem saraf tepi disintesis di ujung presinaps dari acetyl co-A dan choline dengan bantuan enzim choline acetyltransferase.  Saat  ada  impuls  listrik  dari ujung saraf maka acetylcholine segera terbentuk  dan  gelembung  acetylcholine  ini bergerak  kearah  sinaps  dengan  membawa impuls  listrik  untuk  diteruskan  ke  saraf  yang lain  atau  ke  otot.  Acetylcholine    yang membawa  impuls  saraf  akan  segera  dipecah kembali  untuk  didaur  ulang  dengan  bantuan enzim  cholinesterase  menjadi  acetyl  co-A  dan choline  untuk  dibawa  ke  ujung  saraf  kembali dan dipergunakan untuk produksi acetylcholine yang baru (Victor W dkk, 2014).
Pemecahan  acetylcholine  menjadi  acetyl co-A  dan  cholin  agar  dapat  didaur  ulang  di celah  sinaps  memerlukan  bantuan  enzim cholinesterase.  Enzim  cholinesterase  akan terganggu  kerjanya  apabila  terdapat  zat-zat yang dapat menghambat kerja enzim cholinesterase  itu  sendiri.  Cholinesterase adalah  enzim  yang  memecah  acetylcholine dengan  cara  menghidrolisis  acetylcholine menjadi  acetyl  co-A  dan  choline.  Jika  aktifitas enzim  cholinesterase  yang  ada  pada  celah sianps  dan  neuro-muscular  junction  menurun, maka akan mengakibatkan aktifitas acetylcholine  akan  terus  berlangsung  dan terjadi  kontraksi  otot  yang  terus-menerus (Zuraida,2012).  Aktifitas  otot  yang  terus – menerus  berkontraksi  ini  terjadi  pada  semua otot  termasuk  otot-otot  pernapasan  sehingga akan  menyebabkan  terganggunya  sistem pernapasan  yang  berakhir  dengan  kelelahan otot  atau  fatique  dan  otot  tidak  mampu  lagi untuk  melakukan  aktifitas  depolarisasi  dan repolarisasi  yang  berakibat  terhentinya  suplai oksigen keseluruh tubuh (Perumalsam, 2009). Pinang muda
Tumbuhan  pinang  (Areca  catechu  L) tumbuh dan tersebar di wilayah Asia termasuk Indonesia.  Pinang  merupakan  tumbuhan  palm family  arecaceae  yang  dapat  tumbuh  antara 12 –  30  meter,  berakar  serabut  berwarna putih,  batang  tegak  dengan  bekas  pelepah yang  lepas  terlihat  jelas  dan  berdiameter  15 – 20  cm.  Daun  tebal  dengan  bersirip  dalam  dan mengumpul  di  bagian  ujung  atas  pohon, panjang  daun  dapat  mencapai  1  meter. Pelepah  daun  berbentuk  tabung  dengan panjang  mencapat  2  meter  dengan  tangkai daun  pendek.  Pinang  merupakan  tumbuhan
berumah  satu  (monoceous)  dimana  bunga jantan  dan  betina  berada  pada  satu  tempat. Tongkol bunga dengan seludang panjang yang mudah  rontok  dan  keluar  dari  bawah  roset daun dengan panjang mencapai 75 cm. Bunga betina  berada  di  bagian  pangkal  tongkol  dan bunga  jantan  berada  di  ujungnya  dengan ukuran  lebih  kecil  dan  mudah  rontok.  Bentuk buahnya  bulat  lonjong  seperti  telur  dengan panjang  antara  3,5 –  7  cm,  berwarna  hijau saat  masih  muda  dan  berubah  orange kemerahan saat sudah tua dengan bagian kulit berserabut.  Pada  bidang  irisan  melintang tampak  perisperm  berwarna  coklat  tuadengan lipatan  tidak  beraturan  yang  menembus endosperm yang berwarna agak keputihan.
Uji  fitokimia  ekstrak  etanol  biji  pinang yang  dilakukan  oleh  Vanimakhal  (2016) terdapat  beberapa  bahan  metabolit  sekunder dari  ekstrak  biji  pinang  yaitu;  saponin, flavonoid,  tannin,  phenol,  steroid,  alkaloid  dan protein.  Penelitian  kandungan  biji  pinang  juga dilakukan  oleh  Wei  Peng  (2015)  dari  jurusan Kedokteran  Tradisonal  Universitas  Chengdhu disebutkan  bahwa  kandungan  ekstrak  etanol biji  pinang  adalah  flavonoid,  alkaloid,  tannin, steroid dan bahan – bahan yang lain termasuk protein dan asam lemak. Kandungan tannin biji pinang  muda  menurut  Wei  Peng  dkk  (2015) paling  tinggi  dan  menurun  seiring  dengan bertambahnya  usia  buah  pinang.  Menurut Adediji  (2015)  dari  bagian  Anatomi  Fakultas Kedokteran  Dasar  dari  Universitas  Bennin Nigeria  disebutkan  bahwa  kandungan  biji pinang  adalah  air  30%,  karbohidrat  47%, protein  5%,  lemak  3%  dan  alkaloid  termasuk arecoline  0,5%  -  0,7%.  Penelitian  yang dilakukan  oleh  Nursidika  (2014)  terhadap ekstrak  biji  pinang  dengan  pelarut  etanol didapatkan  kandungan  bahan  aktif  terpenoid, flavoniod,  tannin,  alkaloid,  saponin  dan quinone.  Tannin  yang  terdapat  dalam  ekstrak biji pinang muda merupakan metabolit sekunder  dari  polyphenol  adalah  bahan  aktif yang dapat bekerja dengan cara menghambat kerja  enzim  α-amylase.  Port  de  entry  tannin pada  tubuh  serangga  adalah  melalui  kulit dengan  cara  merusak  kutikula  kulit  serangga dan berikatan dengan protein yang merupakan komponen  utama  enzim.  Ikatan  yang  terjadi antara  tannin  dan  protein  ini  mengakibatkan active  site  dari  enzim  tidak  dapat  mengikat substrat  sehingga  proses  katalisasi  dari metabolisme  amilum  menjadi  glukosa  tidak dapat berlangsung (Moctezuma, 2014).
Enzim  merupakan  unit  funsional  dari metabolism  sel  yang  hingga  saat  ini  diketahui bahwa  protein  adalah  komponen  utama  dari enzim dimana kemampuan katalitiknya tergantung  pada integritas dari struktur
proteinnya  (Victor W,  2014).  Cara  kerja  enzim α-amylase  terhadap  amilum  dibadi  menjadi  2 tahap  yaitu  tahap  pertama  degradasi  molekul amilum  menjadi  matosa  dan  maltriosa  yang terjadi  secara  acak.  Tahap  ke-2  adalah degradasi  molekul  amilum  menjadi  glukosa dan  maltose  yang  terjadi  secara  lebih  lambat dari  tahap  pertama.  Teori  cara  kerja  enzim terhadap  substrat  adalah  dengan  teori  lock and  key  serta  dengan  teori  kecocokan  induksi (Induced  Fit  Theory),  diantara  kedua  teori  ini memiliki  kesamaan  yaitu  sifat  ikatan  substrat dan  enzim  adalah  ikatan  sementara  dan  akan segera  terlepas  setelah  reaksi  terjadi  (Victor, 2014).
Tannin  adalah  suatu  senyawa  fenolik dengan berat molekul cukup tinggi (C72H52O46) yang mengandung hidroksil dan kelompok  lain  yang  cocok  (karboksil)  untuk membentuk  kompleks  yang  efektif  dengan protein  dan  makromolekul  yang  lain  dibawah kondisi  lingkungan  tertentu  (Horvath,  1981). Berat  molekul  tannin  yang  tinggi  dan  memiliki gugus  hidroksil  mirip  dengan  berat  molekul amilum  (C6H10O5)n  sangat  memungkinkan tannin akan menggantikan posisi amilum pada metabolisme kabohidrat dalam tubuh serangga atau nyamuk. Cara kerja enzim α-amylase dan tannin adalah dengan membentuk ikatan yang bersifat  reversible  yang  berakibat  terjadinya inhibisi  metabolisme  amilum  menjadi  glukosa yang  sangat  dibutuhkan  oleh  serangga  untuk kebutuhan  energi.  Terhentinya  suplai  glukosa akibat hambatan yang terjadi ini mengakibatkan serangga tidak memiliki sumber  energy  untuk  keperluan  metabolism dan  aktifitas  seluler  dan  pada  akhirnya menyebabkan kematian (Gelgel, 2006).
Hasil pengamatan terhadap penggunaan ekstrak batang serai wangi dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami nyamuk  Aedes  aegypty  sesuai  dengan  hasil penelitian,  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  bahwa  tumbuhan  serai  wangi seringkali  digunakan  sebagai  bahan  anti nyamuk [7]. Insektisida nabati adalah insektisida  yang  berasal  dari  tumbuhan  yang mengandung  bahan  aktif  seperti  alkaloid (geraniol,  sitronellol,  rotenon  ,  dll),  saponin, tannin,  flavonoid.  Serai  wangi  (Cymbopogon nardus) yang mengandung bahan aktif geraniol  dan  stronellol  sebagai  alkaloid  utama telah  banyak  dipergunakan  sebagai  larvasida yang  memiliki  cara  kerja  menghambat  kerja enzim cholinesterase.
Kandungan senyawa metabolit sekunder pada ekstrak kasar dengan menggunakan  pelarut  metanol  dan  fraksi  etil asetat  dari  batang  serai  wangi  (Cymbopogon nardus) adalah flavonoid, fenolik dan
terpenoid,  sedangkan  dengan  menggunakan fraksi  etil  asetat  hanya  mengandung  senyawa steroid.  Penelitian  lain  menyatakan  bahwa dalam  mengurangi  larva  demam  berdarah maka  dilakukan  dengan  pemanfaatan  ekstrak serai wangi. Dari penelitian tersebut didapatkan semua konsentrasi pada kelompok perlakuan  memiliki  hasil  perbedaan  secara bermakna  dengan  kelompok  kontrol  dengan nilai  p<0,05.  Jumlah  kematian  larva  tertinggi pada konsentrasi 2% yaitu 38% kematian larva dan  terendah  pada  konsentrasi  0,05%  dan konsentrasi  0,1%  yaitu  8%  kematian  larva. Disimpulkan  bahwa  semua  konsentrasi  pada kelompok  perlakuan  efektif  sebagai  larvasida apabila  dibandingkan  dengan  kontrol  dengan nilai p<0,05.
Berdasarkan  beberapa  penelitian  yang dilakukan  oleh  peneliti  sebelumnya  tentang kandungan  dan  kemampuan  ekstrak  serai wangi  yang  sudah  ada  diatas  didapatkan bahwa  ekstrak  batang  serai  wangi  memang merupakan  bahan  yang    efektif  untuk mengendalikan    nyamuk  dan  larva  dari  Aedes aegypty. Hal tersebut terlihat dari standar error penelitian  ekstrak  batang  serai  wangi  dalam bentuk spray dengan menggunakan uji statistik GLM  menunjukkan  error  paling  kecil  kedua diantara  penggunaan  ekstrak  biji  pinang maupun  hasil  kombinasi  biji  pinang  dan  serai wangi.  Pada  uji  statistik  Probit  Analysis  untuk mengetahui dosis efektif yang telah ditentukan yaitu  dosis  konsentrasi  ekstrak  yang  dapat membunuh nyamuk sebanyak 60 % atau LC60 sampai  dengan  90  %  atau  LC92  dalam  waktu 240 menit setelah intervensi didapatkan bahwa konsentrasi  ekstrak  batang  serai  wangi  yang dapat  membunuh  nyamuk  Aedes  aegypti sebesar  60  %  dari  sampel  adalah  pada konsentrasi 9.808E4 ppm. Sedangkan konsentrasi  ekstrak  batang  serai  wangi  dalam bentuk  spray  yang  dapat  membunuh  sampel nyamuk sebesar 92 % adalah pada konsentrasi 1.675E5 ppm. Rentang konsentrasi  ekstrak  batang  serai  wangi  dalam bentuk  spray  yang  dapat  membunuh  sampel nyamuk  antara  60%  sampai  dengan  92  % tersebut  merupakan  dosis  efektif  yang  dapat dipergunakan  untuk  mengendalikan  nyamuk Aedes aegypti.
Hasil pengamatan terhadap penggunaan  ekstrak  biji  pinang  muda  dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami nyamuk  Aedes  aegypty  sesuai  dengan  hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  biji pinang  muda  dapat  digunakan  sebagai  bahan anti  nyamuk.  Biji  pinang  mengandung  banyak sekali bahan aktif dimana bahan aktif terbesar adalah tannin  yang mencapai 15% pada buah pinang  yang  masih  muda  dan  menurun
dengan bertambahnya usia  biji pinang.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan didapatkan  bahwa  tannin  bekerja  sebagai insektisida  dengan  cara  membentuk  ikatan protein-tannin  complex  dan  bekerja  dengan cara    menghambat  enzim  α-amilase  sehingga serangga  tidak  makan  (anti  feeding)  serta merusak kutikula serangga.
Campuran  atau  kombinasi  antara  dua bahan  aktif  akan  menimbulkan  interaksi  yang beragam.  Interaksi  ini  dapat  terjadi  secara kimiawi yaitu dengan kombinasi dua atau lebih bahan  aktif  akan  menimbulkan  senyawa  baru yang  lebih  toksik,  saling  menetralkan  atau tidak  mempengaruhi  satu  sama  lain.  Selain interaksi  secara  kimiawi,  interaksi  antara  dua bahan  atau  lebih  dapat  terjadi  secara  biologi yaitu  interaksi  yang  terjadi  antara  kombinasi bahan  aktif  dengan  tubuh  makhluk  hidup. Interaksi  ini  sangat  tergantung  dari  kondisi makhluk  hidup  itu  sendiri,  kondisi  lingkungan dan  kondisi  dari  campuran  bahan  tersebut (Gelgel,  2006).  Pengaruh  kombinasi  antara dua  bahan  yaitu  ekstrak  batang  serai  wangi yang  mengandung  alkaloid  dan  ekstrak  biji pinang  muda  yang  mengandung  tannin, saponin,  alkaloid  dan  lain-lain  terhadap naymuk  Aedes  aegypti  yang  diberikan  secara spray  akan  memberikan  respon  yang  berbeda bila  dibandingkan  dengan  pemberian  ekstrak secara sendiri-sendiri.
Kombinasi  atau  campuran  dua  zat  aktif atau  lebih  akan  menyebabkan  terjadinya interkasi  yang  bersifat  antagonis,  aditif  atau sinergis.  Sifat  antagonis  terjadi  apabila  antara dua  zat  atau  lebih  dikombinasikan  akan menyebabkan  hilangnya  atau  berkurangnya efek  darimzat  aktif  tersebut  karena  terjadi kompetisi diantara keduanya, efek aditif terjadi apabila  efek  yang  diakibatkan  oleh  dua  zat aktif tersebut baru muncul setelah dikcampurkan dan efek sinergis terjadi apabila efek  yang  ditimbulkan  oleh  dua  zat  atau  lebih akan menjadi lebih besar dari pada bila berdiri sendiri  (Hodgson,  2011).  Indikator  terjadinya efek  yang  bersifat  sinergis  dari  campuan ekstrak  batang  serai  wangi  dan  ekstrak  biji pinang  muda  dapat  dilihat  dari  respon  jumlah kematian  nyamuk  yang  lebih  banyak  bila dibandingkan dengan respon kematian nyamuk yang diintervensi menggunakan ekstrak  yang  berdiri  sendiri  pada  konsentrasi yang  sama.  Indikator  berikutnya  adalah  waktu terjadinya  respon  berupa  kematian  nyamuk yang  diamati  menjadi  lebih  cepat  terjadi apabila  dua  zat  atau  lebih  dikombinasikan. Lamanya  waktu  yang  dibutuhkan  agar  terjadi respon  kematian  nyamuk  menjadi  lebih  cepat terjadi  dengan  pemberian  kombinasi  ekstrak batang  serai  wangi  dan  ekstrak  biji  pinang
muda  dapat  dilihat  dari  LT50  yang  lebih pendek bila diandingkan dengan LT50 masing- masing ekstrak tanpa dikombinasikan.
Interaksi  antara  dua  bahan  racun  atau xenobiotik  pada  dasarnya  dapat  digolongkan menjadi    interaksi  yang  bersifat  antagonis, sinergis atau aditif. Interaksi yang bersifat aditif terjadi  apabila  apabila  antara  dua  bahan  atau lebih  tersebut  memiliki  target  organ  yang sama,  memiliki  efek  yang  sama  atau  identik dan  tidak  memberikan  efek  terhadap  target organ  apabila  diberikan  secara  sendiri-sendiri. Interaksi sinergis terjadi apabila kombinasi dua racun atau xenobiotik memiliki efek yang  lebih besar  dari  pertambahan  masing-masing  racun atau  xenobiotik.  Pada  interaksi  sinergis  target organ  dapat  berbeda  dan  cara  kerja  yang berbeda  stau  dengan  yang  lainnya,  sehingga antara  dua  bahan  atau  lebih  ini  dapat  bekerja secara  bersama-sama.  Interaksi  antagonis terjadi  apabila  antara  dua  bahan  atau  lebih memiliki  target  organ  yang  sama  dan  cara kerja  yang  sama  namun  saling  menetralkan satu  dengan  yang  lainnya.  Prinsip  interaksi antagonis  ini  dipakai  sebagai  dasar  terapi toksikasi  yaitu  dengan  memberikan  antidotum yang  merupakan  zat  yang  memiliki  target organ  yang  sama  sehingga  terjadi  kompetisi dan mengurangi efek toksiyang terjadi (Gelgel, 2006).
Proses  interaksi  yang  terjadi  antara racun  dan  enzim  tidaklah  sederhana  seperti yang  dibayangkan,  bahwa  untuk  mencapai target  organ  racun  harus  melalui  serangkaian perjalanan  mulai  dari  luar  tubuh  makhluk hidup.  Jenis  racun  menurut  port  de  entry  nya dapat  dibedakan  menjadi  racun  kontak,  racun inhalan,  racun  lambung  dan  racun  sistemik (Hodgson,  2011).  Racun  atau  toksin  yang bersifat  racun  kontak  memiliki  port  de  entry melalui  kulit  makhluk  hidup,  sehingga  kondisi kulit  sebagai  barier  pertama  dari  ekspose toksin  memegang  peranan  yang  sangat  vital. Adanya  lesi  atau  kerusakan  kulit  akan mempermudah  penetrasi  toksin  yang  bersifat kontak sehingga mempercepat masuk kedalam  system  peredaran  darah  atau  limfe dan  mencapai target  organ.  Insektisida organophosphate  adalah  contoh  racun  kontak yang dapat masuk ke dalam tubuh melalui kulit makhluk  hidup  (Kemenkes  ,  2012).  Alkaloid geraniol,  sitronelol  dan  sitronela  merupakan alkaloid  yang  terkandung  dalam  ekstrak batang serai wangi dan memiliki cara kerja dan cara masuk sama dengan golongan organophosphate (Partiban, 2015).
Port  de  entry  dari  tannin  sebagai insektisida sebagaimana alkaloid adalah melalui  kulit  dengan  cara  berikatan  dengan protein  yang  ada  pada  membran  sel  kulit
sehingga merusak kutikula kulit (Hammerbecker,  2014).  Kerusakan  kutikula akibat interaksi tannin dengan protein membentuk tannin-protein komplek akan memudahkan  toksin  menmebus  barrier  kulit termasuk  alkaloid  yang  terkandung  dalam ekstrak batang serai wangi yang dikombinasikan  dengan  ekstrak  biji  pinang muda.  Perjalanan  selanjutnya  dari  dua  bahan yang  berbeda  ini  akan  terdistribusi  ke  seluruh tubuh  nyamuk  melalui  peredaran  darah  untuk memcapai  target  sasaran  yang  berbeda. Perbedaan  target  sasaran  ini  karena  antara kedua jenis bahan aktif yang terkandung pada kedua  jenis  ekstrak  ini  memiliki  reseptor  yang berbeda,  yaitu  alkaloid  memiliki  reseptor  di celah  sinaps  berupa  enzim  cholinesterase sedangkan  tannin  memiliki  reseptor  enzim  α- amylase.  Perbedaan  titik  tangkap  atau  cara kerja  (mode  of  action)  akan  memberikan  efek yang saling mendukung terhadap kemampuan kombinasi  ekstrak  ini  untuk  menimbulkan respon terhadap nyamuk (Hodgson, 2011).
Mode  of  action  ekstrak  serai  wangi dengan  reseptor  berada  pada  sisi  aktif  enzim cholinesterase  pada  celah  sinaps  atau  pada neuro  muscular  junction  yang  secara  umum bersifat irreversible akan menyebabkan acetylcholine  tidak  cepat  didegradasi  menjadi acetyl co-A dan cholin agar dapat didaur ulang kembali.  Akibat  dari  acetylcholine  yang  tidak cepat  didaur  ulang  iki  menyebabkan  impuls listrik  dari  ujung  saraf  akan  terus  dikirim  ke saraf  sekitarnya  atau  end  target  berupa  otot akan  terus  berkontraksi  (Ganong,  2008). Kontraksi  otot  yang  terus  menerus  terjadi  ini membutuhkan  energi  yang  besar  dimana kebutuhan  energi  dapat  terpenuhi  apabila glukosa  sebagai  sumber  energi  yang  bisa dengan cepat dimetabolisme untuk menghasilkan  ATP  dari  pada  sumber  energi yang  lain  seperti  lemak  ataupun  protein  di hambat produksinya oleh tannin yang ber ikatan  secara  reversible  dengan  enzim  α- amylase  sehingga  kebutuhan  ATP  sel  otot tidak  dapat  terpenuhi  dan  mempercepat kematian  nyamuk.
Hasil  pengujian  data  yang  diperoleh dengan  menggunakan  uji  statistik  Repeated Measure GLM  pada kematian sampel  nyamuk akibat  spray  kombinasi  ekstrak  batang  serai wangi dan ekstrak biji pinang muda didapatkan hasil  bahwa  kombinasi  ekstrak  batang  serai wangi  dan  ekstrak  biji  pinang  muda  dalam bentuk spray memiliki pengaruh yang terhadap kematian nyamuk Aedes aegypti. Hal itu dapat dilihat  dari  nilai    sig.  0,000  yang  lebih  rendah dari  nilai  α  sebesar  0,05  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  kombinasi  ekstrak  batang serai  wangi  dan  ekstrak  biji  pinang  muda
dalam bentuk spray memiliki pengaruh terhadap  kematian  nyamuk  Aedes  aegypti. Pengaruh kombinasi ekstrak terhdap kematian sampel  nyamuk  bila  dibandingkan  dengan pengaruh  ekstrak  serai  wangi  yang  berdiri sendiri  maupun  ekstrak  biji  pinang  muda secara  berdiri  sendiri  masih  lebih  baik  secara kombinasi.  Hal  itu  dapat  dilihat  dari  nilai  error berdasarkn  uji  GLM  diantara  ketiga  jenis ekstrak  tersebut,  yaitu  nilai  error  ekstrak  serai wangi  sebesar  21.667,  nilai  error  ekstrak  biji pinang  muda  sebesar  32.333  dan  sedangkan error  kombinasi  ekstrak  batang  serai  wangi dan  ekstrak  biji  pinang  muda  sebesar  17.333. Meskipun  ada  perbedaan  berdasarkan  nilai error  namun  berdasarkan  Post  Hoc  Tukey diantara  ketiga  jenis  bahan  ekstrak  tersebut tidak  berbeda  secara  signifikan karena nilai  p- value atau sig. dari ketiga jensi bahan tersebut 0,404 > 0,05.

## Gambar.  Probit LC 50 kombinasi ekstrak batang serai wangi dan ekstrak biji pinang muda.
Pada  uji  statistik  Probit  Analysis  untuk mengetahui dosis efektif yang telah ditentukan yaitu  dosis  konsentrasi  ekstrak  yang  dapat membunuh nyamuk sebanyak 50 % atau LC50 didapatkan  bahwa  konsentrasi  kombinasi ekstrak  batang  serai  wangi  dan  ekstrak  biji pinang  muda  dengan  perbandingan  1:1  yang dapat  membunuh  nyamuk  Aedes  aegypti sebesar  50  %  dari  sampel  adalah  pada konsentrasi  1.329  ppm.  Sedangkan  waktu yang dibutuhkan untuk dapat membunuh 50 % dari  populasi  sampel  dengan  menggunakan kombinasi  ekstrak  batang  serai  wangi  dan ekstrak  biji  pinang  muda  dalam  bentuk  spray atau  LT50  adalah  sebesar  17,795  menit setelah  intervensi.  LT50  pada  spray  dengan menggunakan  ekstrak  batang  serai  wangi membutuhkan  waktu  sebesar  27,490  menit setelah  intervensi  dan  pada  pemberian  spray ekstrak  biji  pinang  muda  memiliki  LT50 sebesar 56,967 menit. Berdasarkan lethal time dari  ketiga  jenis  ekstrak  tersebut  dapat diketahui  bahwa  LT50  kombinasi  ekstrak batang  serai  wangi  dan  ekstrak  biji  pinang
muda  paling  rendah  atau  paling  toksis  diikuti ekstrak  batang  serai  wangi  dan  ekstrak  biji pinang muda.
Gambar Grafik LT50 kombinasi ekstrak batang serai wangi dan ekstrak biji pinang muda.
Pengaruh  ketiga  jenis  ekstrak  terhadap kematian  sampel  nyamuk  dapat  diketahi perbedaan  pengaruhnya  signifikan  atau  tidak dengan  menggunakan  Post  Hoc  Tukey sebagai berikut:
Tabel  1.  Pengaruh  jenis  ekstrak  berdasarkan terhadap kematian nyamuk Bahan N Subset 1 Kombinasi Batang serai wangi Biji pinang muda Sig. 45 45 45 15.82 16.36 15.96 .404
Berdasarkan  hasil  dari  Post  Hoc  Tukey tersebut  dapat  diketahui  bahwa  dari  ketiga jenis ekstrak tersebut tidak memiliki perbedaan yang signifikan untuk mempengaruhi kematian nyamuk Aedes aegypti. Hal itu dapat diketahui dari  nilai  p-value  sebesar  0,404  yang  lebih besar  dari  nilai  α  sebesar  0,05.  Hasil  uji dengan  menggunakan  Repeated  Measure GLM  dari  masing –masing  jenis  ekstrak memberikan pengaruh yang signifikan terhadap  kematian  sampel  nyamuk,  namun bila  dilihat  dari  Post  Hoc  Tukey  dari  ketiga jenis  ekstrak  tidak  memiliki  perbedaan  yang signifikan. Berdasarkan hasil uji tersebut dapat disimpulkan  bahwa  ketiga  jenis  ekstrak tersebut  memiliki  pengaruh  yang  signifikan terhadap  kematian  sampel  nyamuk  namun pengaruh  ketiga  jenis  ekstrak  tersebut  tidak berbeda secara signifikan satu sama lain. Pengaruh  jenis  ekstrak  serta  konsentrasi  dari
masing-masing  ekstrak  terhadap  kematian sampel  nyamuk  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor  yaitu  lamanya  paparan  atau  waktu, faktor  lingkungan  seperti  suhu,  kelembaban dan angina tau juga faktor individu dari sampel nyamuk  itu  sendiri.  Faktor  lamaya  waktu terpapar  ikut  diteliti  pada  penelitian  ini, sedangkan  faktor  lingkungan  tidak  diteliti namun  dikendalikan  di  laboratorium  sehingga relative  tidak  berubah  dan  kecil  kemungkinan mempengaruhi hasil. Sedangkan faktor individu  dari  sampel  nyamuk  tidak  diteliti  dan sangat mungkin mempengaruhi hasil penelitian ini. Faktor makhluk hidup atau faktor individu  nyamuk  dalam  hal  ini  berkaitan dengan  toksokinetik  dan  toksodinamik  yang terjadi pada ketiga jenis ekstrak tersebut.
Toksokinetik  berkaitan  dengan  proses perjalanan  toksin  (jenis  ekstrak)  mulai  dari proses  spray  sampai  dengan  toksin  berikatan dengan  reseptor  di  target  organ.  Sedangkan toksodinamik  berkaitan  dengan  proses  biologi yang  terjadi  terhadap  toksin  setelah  berikatan dengan reseptor sampai dengan dimetabolisme  oleh  tubuh  makhluk  hidup sampai dengan di eksresi(Hodgson, 2011). Proses  toksokinetik  dimulai  saat  nyamuk  ter- ekspos  oleh  toksin  (Ekstrak  batang  serai wangi, ekstrak biji pinang muda atau kombinasi)  melalui  kulit,  masuk  sub-dermis dan ikut peredaran darah dan limfe ke seluruh tubuh  sampai  dengan  target  organ.  Selama proses  ini  tidak  semua  toksin  sampai  dengan konsentrasi  dan  jumlah  yang  sama  Karen tentu  nyamuk  memiliki  system  pertahanan atau  system  imun  mulai  dari  kulit  sampai dengan  target  organ  terhadap  semua  benda asing  yang masuk ke dalam tubuhnya. Proses toksodinamik  dimulai  terhadap  toksin  yang telah berikatan dengan reseptor spesifik untuk dimetabolisme di dalam liver dan diekskresikan  melalui  system  eksresi  nyamuk dalam  bentuk  metabolit  sekunder.  Kedua proses  inilah  yang  menyebabkan  adanya perbedaan  respon  nyamuk  terhadap  jenis ekstrak  dan  perbedaan  konsentrasi  dari masing-masing jenis ekstrak maupun lamanya waktu paparan nyamuk dengan toksin (Hodgson, 2011).
Desain  penelitian  faktorial  ini  ada  dua variabel  bebas  yaitu  variabel  konsentrasi  dan variabel  waktu  observasi  yang  diperlalukan secara bersama-sama terhadap variabel terikat yaitu jumlah kematian nyamuk. Pada uji Pos  Hoc  Tukey  untuk  mengetahui  variabel yang  mana  diantara  variabel  konsentrasi  dan waktu  yang  mempengaruhi  kematian  nyamuk didapatkan  hasil  sebagai  berikut.  Hasil  Pos Hoc  Tukey  variabel  konsentrasi  terhadap kematian  sampel  nyamuk  didapatkan  hasil
bahwa  dari  ketiga  macam  konsentrasi  yang dipakai  dalam  penelitian  yaitu  konsentrasi 1.000  ppm,  konsentrasi  5.000  ppm  dan konsentrasi  10.000  ppm  didapatkan  hasil bahwa  pengaruh  yang  paling  besar  adalah pada  konsentrasi  10.000  atau  konsentrasi terbesar  sehingga  dapat  diartikan  bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak maka akan semakin besar pengaruhnya terhadap kematian nyamuk. Sedangkan varaiabel waktu beradasarkan hasil Post Hoc Tukey didapatkan  hasil  bahwa  variabel  durasi  waktu observasi  atau  time  effect  terhadap  kematian nyamuk dapat dikatakan bahwa waktu observasi  pada  menit  ke  60  setelah  intervensi sampai  dengan  menit  ke  240  tidak  memiliki perbedaan pengaruh yang signifikan, sedangkan  pada menit ke-15  dan menit ke-30 memiliki perbedaan pengaruh yang signifikan. Pengaruh  waktu  yang  berbeda  secara signifikan  antara  time  effect  menit  ke-15 sampai  menit  ke-60,  sedangkan  pada  menit ke-60  sampai  dengan  menit  ke-240  berbeda namun  tidak  signifikan  sangat  mungkin  terjadi karena  pengaruh  faktor  farmakodinamik  dari toksin  tersebut  dalam  tubuh  nyamuk.  Suatu toksin  yang  masuk  dalam  tubuh  makluk  hidup akan  mengalami  proses  metabolisme  dan ekskresi oleh makhluk hidup tersebut (Hodgson, 2011). Hasil metabolisme zat racun dalam  tubuh  serangga  akan  dibuang  melalui pembuluh  Malphigi  yang  merupakan  organ ekskretori pada serangga. Proses metabolisme  dan  ekskresi  ini  mempengaruhi toksisitas  racun  yang  masuk  dalam  tubuh serangga sehingga akan mempengaruhi dampak  racun  terhadap  serangga  itu  sendiri. Lamanya proses metabolisme dan ekskresi ini akan  mempengaruhi  konsentrasi  racun  dalam tubuh  serangga  dan  efek  toksik  dari  racun tersebut (Hadi, 2009).
Hasil  uji  statistik  yang  sudah  dilakukan didapatkan  bahwa  pengaruh  potensi  ekstrak biji  pinang  muda  (Areca  catechu  L)  dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami nyamuk Aedes aegypti efektif untuk membunuh nyamuk dengan tingkat signifikansi mencapai 0.000 < 0.005 sehingga  dinyatakan bahwa  terdapat  pengaruh  antara  ekstrak  biji pinang  muda  terhadap  kematian  nyamuk Aedes  aegypti  dengan  nilai  error  sebesar 32.333. Pada uji statistik Probit Analysis untuk mengetahui dosis efektif yang telah ditentukan yaitu  dosis  konsentrasi  ekstrak  yang  dapat membunuh nyamuk sebanyak 60 % atau LC60 sampai  dengan  90  %  atau  LC92  dalam  waktu 240 menit setelah intervensi didapatkan bahwa konsentrasi  ekstrak  biji  pinang  muda  yang dapat  membunuh  nyamuk  Aedes  aegypti sebesar  60  %  dari  sampel  adalah  pada
konsentrasi 4.775
ppm.
Sedangkan konsentrasi  ekstrak  biji  pinang  muda  dalam bentuk  spray  yang  dapat  membunuh  sampel nyamuk sebesar 92 % adalah pada konsentrasi  7.731  ppm.  Rentang  konsentrasi ekstrak  biji  pinang  muda  dalam  bentuk  spray yang dapat membunuh sampel nyamuk antara 60% sampai dengan 92 % tersebut merupakan dosis  efektif  yang  dapat  dipergunakan  untuk mengendalikan nyamuk Aedes aegypti.
Hasil penelitian memperkuat hasil penelitian  yang  dilakukan  peneliti  sebelumnya yang menyatakan bahwa tannin  yang terdapat dalam  ekstrak  biji  pinang  muda  dapat dipergunakan sebagai bahan alternatif pengganti insektisida sintetik yang tidak ramah terhadap  kesehatan,  lingkungan  dan  juga memiliki dampak residu yang berbahaya. Hasil penelitian  ini  juga  dikuatkan  dengan  hasil penemuan  penelitian  sebelumnya  dengan menggunakan  ekstrak  biji  pinang  muda terhadap  persentase  mortalitas  larva  Aedes aegypti  didapatkan  bahwa  pada  konsentrasi 6,25%  adalah  0%,  pada  konsentrasi  12,5% memiliki  prosentase  kematian  larva  sebesar 12%, pada konsentrasi 25% memiliki prosentase kematian larva sebesar 45%, pada konsentrasi 50% memiliki prosentase kematian larva  sebesar  92%  dan  konsentrasi  100% memiliki  prosentase  kematian  larva  sebesar 100%. Infusa biji buah pinang pada konsentrasi  100%  memiliki  aktivitas  larvasida terhadap  Aedes  aegypti  yang  serupa  dengan temefos  dan  disimpulkan  bahwai  infusa  biji buah  pinang  mempunyai  aktivitas  sebagai larvasida Aedes aegypti.
Penggunaan bioinsektisida alami termasuk  salah  satunya  ekstrak  biji  pinang muda merupakan suatu hal yang positif dalam rangka  pengurangan  penggunaan  insektisida. Hal tersebut dikarenakan penggunakan insektisida  sintetik  tidak  selalu  memiliki dampak  positif  bagi  penggunanya  yaitu manusia  kondisi  tersebut  sesuai  dengan  hasil penelitian  terdahulu  yang  sudah  dilakukan mengenai  dampak  kesehatan  yang  terjadi dengan  penggunaan  pestisida  sintetik  yang menunjukkan  bahwa  terdapat  hubungan  yang signifikan antara jenis pestisida yang digunakan, lama kerja dan frekuensi penyemprotan  dengan  keluhan  kesehatan petani.
Berdasarkan  beberapa  penelitian  yang sudah  ada  diatas  didapatkan  bahwa  ekstrak biji pinang muda merupakan salah satu bahan yang  efektif  untuk  membunuh  nyamuk  dan larva  dari  Aedes  aegypty.  Tingkat  efektifitas penggunaan biji pinang muda sebagai bioinsektisida  alami  untuk  nyamuk  Aedes aegypty  masih  lebih  rendah  dari  pada
penggunaan  ekstrak  batang  serai  wangi  dan kombinasi antara ekstrak biji pinang muda dan ekstrak  batang  serai  wangi.  Hal  tersebut terlihat  dari  error  penelitian  yang  ada  yaitu menunjukkan  error  paling  besar  diantara penggunaan  ekstrak  batang  serai  wangi maupun  hasil  kombinasi  ekstrak  biji  pinang muda dan ekstrak batang serai wangi.
Kombinasi atau campuran ekstrak batang serai wangi (Cymbopogon nardus) dan ekstrak  biji  pinang  muda  (Areca  catechu  L) dengan perbandingan 1:1 memiliki kemampuan  sebagai  bioinsektisida  alami terhadap nyamuk Aedes aegypti. Hal itu dapat dilihat dari hasil pengamatan kematian nyamuk tiap  unit  perlakuan  dengan  menggunakan kombinasi  ekstrak  batang  serai  wangi  dan ekstrak biji pinang muda dengan perbandingan 1:1  pada  konsentrasi  1.000  ppm,  5.000  ppm dan 10.000 ppm. Hasil uji statistik yang sudah dilakukan menggunakan aplikasi SPSS dengan  uji  statistik  GLM  (General  Linier Model)  didapatkan  bahwa  pengaruh  potensi ekstrak  kombinasi/campuran  ekstrak  batang serai wangi (Cymbopogon nardus) dan ekstrak biji  pinang  muda  (Areca  catechu  L)    dalam bentuk  spray  sebagai  bioinsektisida  alami nyamuk  Aedes  aegypti  sebesar  0.000.  Nilai tingkat  signifikansi  0.000  lebih  kecil  dari  pada nilai  T  Tabel  yang  sudah  ditentukan  yaitu 0.005  sehingga  H3  diterima  yang  menyatakan bahwa  Kombinasi  ekstrak  batang  serai  wangi (Cymbopogon  nardus)  dan  ekstrak  biji  pinang muda  (Areca  cathecu  L)  memiliki  potensi sebagai  bioinsektisida  alami  nyamuk  Aedes aegypti.

## Kesimpulan Dan Saran
1.  Hasil  uji  statistic  Repeated  Measure GLM pada penelitian ini memberi bukti bahwa terdapat pengaruh yang signifikan  antara  variabel  konsentrasi ekstrak  batang  biji  pinang  muda  dan waktu  observasi    dalam  bentuk  spray sebagai bioinsektisida terhadap jumlah kematian sampel nyamuk Aedes aegypti.
2.  Pada  penelitian  ini  waktu  observasi hanya  sampai  pada  observasi  menit ke-240  setelah  intervensi,  sedangkan menurut  WHOPES  ekstrak  alami  dari tumbuhan  yang  diujikan  terhadap vector  nyamuk  sebaiknya  diuji  selama 24-48  jam  sehingga  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  sesuai  dengan panduan WHO.
3.  Penelitian lebih lanjut terkait kemungkinan  dampak  negative  dari penggunaan ekstrak batang biji pinang muda  dalam  bentu  spray  terhadap
hewan  non  target  termasuk  dampak terhadap manusia perlu juga dilakukan untuk  mengetahui  keamanan  ekstrak tersebut  bila  diaplikasikan  secara  luas di masyarakat.

## Daftar Pustaka
Atta,  JP  &  Mannolo,  MMQ.  In Vitro  Evaluation of  Areca  cathecu  Essential  Oil  Against Leaf Disease Fungus of Narra (Pterocarpus indicus Wild).
Int.Res.J.Biological  Sci.  3  (8):  56-59. College  Laguna  :  University  of  the Philippines Los Banos; 2014
Daniel,  Cong,  dkk.  Optimal  Extraction  and Evaluation  on  The  Oil  Content  of Citronella  Oil  Extracted  from  Areca cathecu.  Malaysia.  The  Malysian  Journal of Ananlytical Sciences; 2015.
Ernest,  Hodgson.  A  Texbook  of  Modern Toxicology  Fourt  Edition.  North  Carolina University. John Willey @ Son. 2011.
Johan,P.R. Profil Kesehatan Indonesia. Katalog Dalam Terbitan. Jakarta: Kemenkes RI ; 2016. Mahyuni,EL. Faktor Resiko Dalam Penggunaan Pestisida Terhadap Keluhan Kesehatan Petani di Kecamatan Berastagi  Kabupaten  Karo  2014.  Jurnal Kesmas  9  (1):  79-89.  Medan  :  Fakultas Kesehatan Masyarakat
Universitas Sumatera Utara; 2014.
Moctezuma,Correl&  Hammerbacker,A.  2014.
Specific  Polyphenols  and  Tannins  are Associated  with  Defense  Againts  Insects Herbivores  in  the  Tropical  Oak  Quercus oleoides.  J  Chem  Ecol.  New  York  : Springer Science and Busines Media. Niluh,  Arcani,  dkk.  Efektifitas  Ekstrak  Etanol Biji pinang muda (Areca cathecu) sebagai Larvasida  Aedes  aegypti.  Denpasar.  E- Jurnal Medika Udayana; 2017.
Notoatmodjo,S. Metodologi Penelitian Kesehatan.  KDT.  Jakarta  :  Rineka  Cipta; 2012. Peng,Wei, . 2014. Areca catechu L. (Arecaceae):  A  Review  of  Its  Traditional Uses, Otany, Phytochemistry, Pharmacology  and  Toxicology.  Journal  of Etnopharmacology.  164  (2015):  340-356. Chengdu : Chengdu University of Traditional Chinese Medicine.
Perumalsam, H. Larvacidal Activity of Compounds Isolated from Asarum heterotrophoides  Againts  Culex  pipiens pallens,  Aedes  aegypti,  and  Ochlerotatus togoi.  Jurnal  of  Medicine  Entomology. Seoul : Seoul National University; 2017.
Prasetyowati,  H  &  Hendri,J.  Status  Resistensi
Aedes aegypti (Linn.) Terhadap Organofosfat  di  Tiga  Kotamadya  DKI Jakarta.  Jurnal.  Pangandaran  :  Loka Litbang P2B2 Ciamis ;2016.
Sukamto  dan  Suheryadi.  Biji  pinang  muda  () sebagai Penghasil Minyak Atsiri, Tanaman  Konservasi  dan  Pakan  Ternak. Bogor. Posiding Seminar Nasional; 2011.
Victor,  Rodwell,  dkk.  Biokimia  Harpe  Edisi  30. Jakarta. Penerbit Buku Kedokteran, EGC. 2008
Victor, W, Rodwel. 2008. Biokimia Harper Edisi 30.  Jakarta.  Penerbit  Buku  Kedokteran, EGC.