## Kajian Kombinasi Perlakuan Zat Pengatur Tumbuh TDZ dan Benzil Adenin Terhadap
Perkembangan Kalus Durian Merah
(Study on Growth Regulating Substance Treatment Combination of TDZ and Benzyl Adenine on the Development of Red Durian Callus)
1 Khoirul Bariyyah dan 1 Putri Istianingrum
1 Staf Pengajar Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian dan Perikanan, Universitas 17 Agustus 1945 Banyuwangi
Jl. Laksda Adi Sucipto, Taman Baru, Kec. Banyuwangi, Kabupaten Banyuwangi Telp. 0333-411428, email: khoirulbariyyah@untag-banyuwangi.ac.id

## ABSTRACK
Red durian plants have the potential to be developed because they have high economic value. Red durian plants are propagated conventionally in two ways, namely through seeds and shoot grafts. Propagation using shoot graft creates a new problem for red durian farmers, namely a decrease in fruit production on the parent plant due to large amounts of scion. One alternative to the propagation of red durian seeds without damaging the parent plant can be done  by  using  tissue  culture  techniques.  The  explants  used  in  this  study  was  durian  callus. The callus was grown on B5 media treated with a plant growth regulator combination in the form of TDZ consisting of six treatments, namely 0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 ppm and BA consisting of five treatment, namely 0, 0.3, 0.6, 0.9, 1.2 ppm. This research was conducted to determine the  best  dose  of  combination  treatment  of  tidiazuron  (TDZ)  with  BA  in  the  formation  of shoots from red durian callus through tissue culture. The results showed that at the age of 6 months after culture, red durian callus had a color change from yellow to green in the TDZ treatment 1.6 ppm + BA 1.2 ppm.
Keywords : culture, callus, red durian

## PENDAHULUAN
Banyuwangi memiliki beragam jenis durian  merah  yang  berpotensi  untuk dikembangkan  karena  memiliki  nilai ekonomi  tinggi.  Buah  durian  merah mengandung kadar antosianin yang tinggi, kaya  protein  fitosterol  dan  fitohormon sehingga dapat berfungsi sebagai antistres, antihipertensi,  dan  afrodisiaka  (Rusmiati, 2013). Tanaman durian merah diperbanyak secara konvensional dua cara yaitu  melalui  biji  dan  sambung  pucuk
( minigrafting ). Perbanyakan durian merah
menggunakan biji menyebabkan timbulnya keragaman corak warna daging buah,  rasa  dan  aroma  pada  buah. Sedangkan  perbanyakan  menggunakan sambung pucuk
menimbulkan permasalahan  baru  bagi  petani  durian merah  yaitu  terjadi  penurunan  produksi buah  pada  tanaman  induk  akibat pengambilan entres dalam jumlah besar.
Salah  satu  alternatif  perbanyakan bibit durian merah tanpa merusak tanaman induk  dapat  dilakukan  dengan  teknik kultur  jaringan.  Teknik  ini  hanya
membutuhkan  sedikit  bahan  tanam (eksplan)  untuk  pembibitan  tetapi  dapat menyediakan  bibit  dalam  jumlah  besar. Faktor  yang  mempengaruhi  keberhasilan kultur  jaringan  yaitu  media  dasar,  zat pengatur  tumbuh , serta  lingkungan  kultur seperti  pencahayaan  maupun  kelembaban dan  suhu  ruangan  (Lestari,  2012).  Zat pengatur  tumbuh  tanaman  berperan penting  dalam  mengontrol  proses-proses biologi  dalam  jaringan  tanaman  (Gaba, 2015).  Peran  zat  pengatur  tumbuh  antara lain mengatur kecepatan pertumbuhan dari masing-masing jaringan dan mengintegrasikan  bagian-bagian  tersebut guna menghasilkan bentuk yang kita kenal sebagai tanaman. Penambahan auksin atau sitokinin  ke  dalam  media  kultur  jaringan dapat  meningkatkan  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh  di  dalam  sel,  sehingga menjadi  faktor  pemicu  dalam  proses pertumbuhan  tumbuh  dan  perkembangan jaringan (Lestari, 2012).
Selain  zat  pengatur  tumbuh,  faktor eksplan juga menjadi penentu keberhasilan kultur  jaringan.  Dalam  penelitian  ini eksplan  yang  digunakan  adalah  kalus durian  merah  yang  berasal  dari  kotiledon durian merah. Kalus merupakan kumpulan masa  sel  yang  belum  terorganisasi ( amorphous )  yang  terjadi  dari  sel-sel jaringan  yang  membelah  diri  secara  terus menerus  (Fauziyyah,  dkk.,  2012).  Kalus- kalus tersebut selanjutnya akan
diregenerasi  untuk  ditumbuhkan  tunas pada media B5.
Thidiazuron  merupakan  kelompok sitokinin  yang  sangat  kuat  untuk pembentukan  pucuk  (Sugito,  dkk.,  2006). Sedangkan  zat  pengatur  tumbuh  BA ( Benzyl  Adenin )  paling  banyak  digunakan untuk  memacu  penggandaan  tunas  karena mempunyai  aktivitas  yang  kuat  dibanding kinetin  (Zaer  dan  Mapes,  l982).  Flick et al .,  (1993)  menyatakan  bahwa  pada umumnya  tanaman  memiliki  respon  yang lebih  baik  terhadap  BA  dibandingkan terhadap  kinetin  dan  2-iP  sehingga  BA lebih efektif untuk produksi tunas in vitro. Kombinasi  perlakuan  TDZ  dan  BA diharapkan  dapat  terjadi  pembentukan tunas  dari  kalus  durian  merah.  Penelitian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  dosis terbaik  kombinasi  perlakuan  tidiazuron (TDZ)  dengan  BA  dalam  pembentukan tunas  dari  kalus  durian  merah  melalui kultur jaringan.
Kombinasi perlakuan TDZ dan BA diharapkan  dapat  terjadi  pembentukan tunas  dari  kalus  durian  merah.  Penelitian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  dosis terbaik  kombinasi  perlakuan  tidiazuron (TDZ)  dengan  BA  dalam  pembentukan tunas  dari  kalus  durian  merah  melalui kultur jaringan.

## BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium kultur  jaringan  fakultas  pertanian  dan perikanan  universitas  17  agustus  1945 Banyuwangi  pada  bulan  Maret  – November 2020.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini meliputi Laminar  Air  Flow  (LAF),
autoklaf,  pinset,  gelas  ukur,  timbangan digital, magnetic stirrer , kompor, petridisk,  gelas  kultur, scalpel ,  pH  meter, pipet  tetes.  Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini meliputi kalus durian merah, media  B5,  agarose,  sukrosa,  air  kelapa, thidiazuron  (TDZ),  Benzil  Adenin  (BA), aquades,  NaOH,  HCl, Plant  Persevative Mixture ( PPM ), alumunium  foil,  plastik wrap .
Pelaksanaan Penelitian
1. Pembuatan  Media  Tanam  dan Kombinasi Perlakuan Media yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  media  B5  yang mengandung  gula  3%,  agar  8  g/l  dan air  kelapa  3%.  Selanjutnya  di  dalam media tersebut
ditambahkan kombinasi  perlakuan  zat  pengatur tumbuh TDZ dan BA. Perlakuan ZPT BA (I) terdiri dari lima taraf perlakuan yaitu  0,  0.3,  0.6,  0.9,  1.2  ppm  dan Tidiazuron  (T)  terdiri  dari  enam  taraf perlakuan  yaitu  0,  0.4,  0.8,  1.2,  1.6 ppm. Sehingga terdapat  25 kombinasi perlakuan dan tiap kombinasi
perlakuan  diulang  sebanyak  3  kali. Media  tersebut  di  setrilisasi  di  dalam autoklaf  pada  temperatur  121 ℃ tekanan  17,5  psi  selama  20-30  menit. Selanjutnya  setelah  sterilisasi  media diinkubasi dalam rak kultur pada suhu 25 ℃ selama 7 hari.

## 2. Sterilisasi Eksplan
Eksplan  yang  digunakan  berasal  dari kalus  durian  meah  yang  berasal  dari kotiledon durian merah yang berumur 2  bulan.  Percobaan  ini  menggunakan bahan alkohol 70%, betadine, aquades,  dan  kalus  durian  merah. Sedangkan alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu alat standart kultur jaringan.

## Parameter Pengamatan
Adapun  Parameter  yang  diamati  meliputi (1)  persentase  tingkat  kontaminasi  kalus durian  merah,  (2)  jenis  kontaminan  kalus durian  merah,  (3)  warna  kalus  durian merah dan (4) Umur Muncul SE.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jenis Kontaminan pada Media dengan Kombinasi Perlakuan TDZ dan BA
Penelitian  ini  menggunakan  media B5  dengan  menggunakan  perlakuan kombinasi  zat  pengatur  tumbuh  TDZ  dan BA  dengan  konsentrasi  perlakuan  BA terdiri dari lima taraf yaitu 0; 0,3; 0,6; 0,9 dan  1,2  ppm  dan  konsentrasi  perlakuan TDZ  terdiri  dari  lima  taraf  yaitu  0;  0,4;
0,8;  1,2  dan  1,6  ppm.  Hasil  pengamatan
secara  visual  menunjukkan  bahwa  kalus durian  merah  yang  ditumbuhkan  pada media  dengan  kombinasi  perlakuan  zat pengatur tumbuh TDZ dan BA mengalami kontaminasi  pada  minggu  ke  delapan
setelah  kultur  dengan  tingkat  kontaminasi 100%  pada  kombinasi  perlakuan  TDZ  0 ppm  +  BA  0,3  ppm,  TDZ  1,2  ppm  +  BA 0,3  ppm,  TDZ 1,2  ppm  +  BA  0,9  ppm,  dan TDZ  0,8  ppm  +  BA  1,2  ppm  (Tabel  1).
Tabel 1. Tingkat Kontaminasi Eksplan (Kalus Durian Merah) pada Perlakuan kombinasi TDZ dengan BA
Perlakuan BA 0 ppm BA 0,3 ppm BA 0,6 ppm  BA 0,9 ppm  BA 1,2 ppm TDZ 0 ppm 0% 100% 66.7% 33,3% 67,3% TDZ 0,4 ppm 0% 33,3% 0% 0% 33,3% TDZ 0,8 ppm 0% 0% 0% 0% 100% TDZ 1,2 ppm 66.7% 100% 0% 100% 33,3% TDZ 1.6 ppm 0% 0% 66.7% 33,3% 67,3%
Tabel  2.  Menunjukkan  bahwa  Jenis kontaminan  yang  muncul  pada  media kultur jaringan kalus durian merah dengan kombinasi  perlakuan  TDZ  dan  BA  adalah jamur. Jamur yang tumbuh di dalam media perlakuan memiliki ciri-ciri yaitu koloninya  berwarna  putih,  permukaan koloni  licin,  miselium  tidak  berwarna,
tidak  memproduksi  spora,  tidak  berhifa, tidak  memiliki  tangkai  spora.  Ciri-ciri tersebut  menurut  Oratmangun,  dkk,. (2017) termasuk dalam deskripsi jenis ragi Sacharomyces. Di  dalam  media  kultur Sacharomycetes memiliki  kemampuan mengubah  glukosa  menjadi  alkohol  dan CO ₂ yang  bersifat  toksik  bagi  eksplan.
.
Tabel  2.  Jenis  Kontaminan  eksplan  (kalus  durian  merah)  pada  Perlakuan  kombinasi  TDZ dengan BA
Perlakuan BA 0 ppm BA 0,3 ppm BA 0,6 ppm BA 0,9 ppm BA 1,2 ppm TDZ 0 ppm, - Jamur Jamur Jamur Jamur TDZ 0,4 ppm - Jamur - - Jamur TDZ 0,8 ppm - - - - Jamur TDZ 1,2 ppm Jamur Jamur - Jamur Jamur TDZ 1.6 ppm - - Jamur Jamur Jamur *Keterangan : -   =kontaminasi Kontaminasi  jamur  pada  kultur jaringan  menyebabkan  eksplan  yang  di tanam  pada  media  kultur  mengalami
kematian.
Kematian
eksplan
mengakibatkan tidak  adanya respon nodul maupun  pertumbuhan  tunas  terhadap media  hormon.  Hal  ini  ditengarai disebabkan  karena  adanya  senyawa
sterilan  yang  bersifat  fitotoksik  sehingga meracuni  jaringan  tanaman  (Mng’omba, Sileshi,  du  Toit,  &  K.,  2012).  Eksplan yang  terkontaminasi  pada  kultur  in  vitro umumnya  disebabkan  oleh  mikroba. Tajuddin,  dkk  (2014),  berpendapat  bahwa kontaminan  ini  jika  tidak  dihilangkan maka  akan  hidup  dan  berkembang  di dalam kultur sehingga dapat menghambat, bahkan  menyebabkan  kematian  eksplan. Daud,  dkk  (2012)  menyatakan  jika mikroba penyebab kematian kultur jaringan  adalah  sebagian  besar  berupa jamur dan bakteri. Mikroba dapat hadir di dalam  eksplan  (endofitik)  atau  dapat muncul  kembali  dari  penanganan  proses sterilisasi  yang  buruk,  yang  disebabkan kondisi tidak higienis di dalam laboratorium atau dari peralatan laboratorium  yang  digunakan,  termasuk laboran. Oyebanji et al. (2009) menambahkan,  mikroba  bersaing  dengan kultur  atau  tanaman  untuk  mendapatkan nutrisi.  Kehadiran  mikroba  pada  kultur  in vitro  mengakibatkan  meningkatnya  angka kematian, penurunan pertumbuhan, nekrosis  jaringan  dan  berkurangnya proliferasi tunas.
Pengaruh  Kombinasi  TDZ  dengan  BA Terhadap Warna Kalus Durian Merah
Hasil  pengamatan  secara  Visual menunjukkan  bahwa  perlakuan  kombinasi BA  dengan  TDZ  pada  kalus  tebu memperlihatkan warna  yang berbeda pada masing-masing kombinasi perlakuan (Tabel 3). Kalus merupakan kumpulan sel yang  tidak  terorganisasi  dan  aktif membelah  diri  yang  sering  terjadi  karena pelukaan  jaringan.  Warna  kalus  dapat mengindikasikan perubahan perkembangan  kalus.  Kalus  yang  terang atau  putih  dapat  mengindikasi  bahwa kondisi kalus masih cukup baik. Perbedaan warna  kalus  bisa  disebabkan  oleh  respon terhadap  hormon  baik  secara  eksogen maupun  endogen  yang  diperlakukan  pada kalus. Pada umur tiga bulan setelah kultur di  media  kombinasi  TDZ  dengan  BA kalus  yang  paling  baik  ditunjukkan  pada media  TDZ  0  ppm  +  BA  0  ppm  dengan warna  kalus  kuning  kehijauan.  Kalus berwarna kuning kehijauan dengan tekstur kalus  yaitu  kompak  ( non  friable ).  Kalus yang  berwarna  hijau  merupakan  kalus yang  di  dalam  sel-selnya  terkandung klorofil  (Rosyidah,  dkk,  2014)  yang kemungkinan besar akan mampu berkembang  membentuk  tunas.  Akan tetapi  pada  umur  6  bulan,  kalus  tersebut justru  mengalami  kematian  (Tabel  4).
Tabel 3. Warna Kalus Durian Merah pada Perlakuan kombinasi TDZ dengan BA  pada umur 3 bulan
Perlakuan BA 0 ppm BA 0,3 ppm BA 0,6 ppm BA 0,9 ppm BA 1,2 ppm
TDZ 0 ppm Kuning kehijauan - Kuning kecoklatan putih kuning TDZ 0,4 ppm Putih coklat Kuning kecoklatan kuning Kuning TDZ 0,8 ppm putih Kuning kecoklatan Kuning Kecoklatan kuning - TDZ 1,2 ppm Kuning - Putih - Kuning TDZ 1.6 ppm Kuning putih Kuning kuning Kuning *Keterangan : -   =kontaminasi Tabel  4  menunjukkan  bahwa  pada umur  6  bulan  terjadi  perubahan  warna kalus durian merah perubahan warna kalus ini
mengindikasikan adanya
perkembangan kalus (Tabel 4). Pada bulan ke  enam  setelah  kultur,  perkembangan kalus  terbaik  ditunjukkan  pada  kambinasi
perlakuan    TDZ  1,6  ppm  +  BA  1,2  ppm. pada  perlakuan  tersebut  kalus  durian merah  mengalami  perubahan  dari  warna kuning menjadi warna hijau dengan tekstur padat dan keras yang diindikasikan sebagai kalus embriogenik (Gambar 2).
Tabel 4. Warna Kalus Durian Merah pada Perlakuan kombinasi BA dengan TDZ pada umur 6 bulan Perlakuan BA 0 ppm BA 0,3 ppm BA 0,6 ppm BA 0,9 ppm BA 1,2 ppm TDZ 0 ppm hitam - hitam Putih - TDZ 0,4 ppm coklat - coklat - - TDZ 0,8 ppm kuning coklat hitam - - TDZ 1,2 ppm - - - - - TDZ 1.6 ppm kuning - - Kuning Hijau *Keterangan : -   =kontaminasi
Menurut  Widyawati  (2010),  warna kalus  semakin  gelap  (menjadi  coklat) berarti  pertumbuhan  kalus  semakin menurun.  Warna  kalus  yang  hijau disebabkan  adanya  konsentrasi  sitokinin (BA) yang tinggi dalam media.
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan
oleh  Husni  (2005),  penampakan  kalus yang dapat beregenerasi membentuk tunas berasal  dari  kalus  embriogenik  yang ditandai  dengan  adanya  nodul  yang mengkilap berwarna hijau kekuningan dan kemudian  membentuk  bakal  tunas  dan tunas (Hartati, 2018).
Gambar 1. Kalus berwarna hijau pada perlakuan TDZ 1,6 ppm + BA 1,2 ppm

## SIMPULAN
Media  B5  dengan  penambahan  zat pengatur  tumbuh  TDZ  1,6  ppm  +  BA  1,2 ppm  memberikan  pengaruh  baik  terhadap kemunculan SE.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Kepada  Masyarakat,  Kemeristekdikti,
Republik Indonesia yang telah memberikan dukungan dana guna pelaksanaan kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Daud,  N.H.,  S.  Jayaraman  dan  R.
Mohamed. 2012. Methods Paper: An
improved surface sterilization
technique for introducing leaf, nodal and  seed  explants  of  Aquilaria malaccensis  from  field  sources  into tissue  culture.  Aspac  J  Mol  Biol Biotechnol, 20(1) : 55 – 58.
Fauziyyah,  D.,  T.  Hardiyati,  dan Kamsinah.  2012.  Upaya  Memacu Pembentukan Kalus Eksplan Embrio Kedelai  ( Glycine  Max (L.)  Merril)
Dengan Pemberian Kombinasi 2.4-D dan  Sukrosa  Secara  Kultur  In  Vitro. Jurnal Pembangunan Pedesaan 12 (I) : 30 - 37
Flick,  C.E.,  D.A.  Evans,  and  W.R.  Sharp. 1993. Organogenesis. In D.A. Evans,
W.R.Sharp,  P.V.  Amirato,  and  T.
Yamada  (eds.)  Handbook  of  Plant Cell  Culture  Collier  Macmillan. Publisher London. p. 13-81.
Gaba, V.P. 2005. Plant Growth Regulator.
In  R.N.  Trigiano  and  D.J.  Gray (eds.)  Plant  Tissue  Culture  and Development.  CRC  Press.  London. p. 87-100.
Hartati,  H.  Agani,  N.  S.  Hartati,  E.
Sudarmonowati.  2018.  Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik Embriogenik  TerungPada  Beberapa
Media. Jurnal  Ilmu  Dasar 9  (2) :125-134.
Husni  A.  2005.  Regenerasi  Protoplas
Tanaman  Terung  dan  Ketahanan Regeneran Terhadap Penyakit
Bakteri Layu. Berita Biologi. 7: 285-
292.
Lestari,  E.G.  2011.  Peranan  Zat  Pengatur
Tumbuh dalam Perbanyakan
Tanaman  melalui  Kultur  Jaringan. Jurnal AgroBiogen 7(1):63-68
Mng’omba,  S.A.,  G.  Sileshi  dan  E.S.  du
Toit.  2012.  Efficacy  and  Utilization of  Fungicides  and  Other  Antibiotics for  Aseptic  Plant  Cultures.  In  D.
Dhanasekaran  (Ed.),  Fungicides  for
Pland  and  Animal  Diseases  (pp.
245–254). InTech Europe. https://doi.org/10.5772/1130.
Oratmangun,  K.M.,  D.  Pandiangana  dan F.E.  Kandou.  2017.  Deskripsi Jenis- jenis  Kontaminan  dari  Kultur  Kalus Catharanthus  roseus (L.)  G.  Don. Jurnal MIPA UNSRAT Online, 6(1)
: 47 – 52.
Oyebanji,  O.B,  O.  Nweke,  O.  Odebunmi,
N.B.  Galadima,  M.S.  Idris,  U.N.
Nnodi,  A.S.  Afolabi  dan  G.H. Ogbadu. 2009. Simple, effective and
economical
explantsurface sterilization  protocol  for  cowpea, rice  and  sorghum  seeds.  Afr  J. Biotechnol 8(20) : 5395-5399.
Rosyidah,  M.,  Evie,  R.,  dan  Yuni,  S.R.
2014.  Induksi  Kalus  Daun  Melati (Jasminum sambac) dengan Penambahan  Berbagai  Konsentrasi Dichlorophenoxyacetic  Acid  (2,4-D)
dan  6-Benzylamino  Purin  (BAP)
pada  Media  MS  secara  In  Vitro. Jurnal  Biologi.  Vol  3(3).  Hal  :  147- 153.
Rusmiati,  E.  Mulyono,  S.  Ashari,  M.A. Widodo,  dan  L.  Basir.  2013.
Eksplorasi, Inventarisasi dan Karakterisasi Durian Merah Banyuwangi. online.
https://jurnal.fmipa.unila.ac.id/semir ata/article/view/622/442. Diakses pada 27 Oktober 2020.
Sugito,  H.,  Y.  Santosa,  E.  Sandra.  2006.
Penggunaan  Thidiazuron,  2,  4  –  D Dan  Giberellin  Dalam  Pembentukan Embrio  Somatik  Pule  Pandak (Rauvolfia Serpentina (L.) Benth. Ex Kurz)  Melalui  Kultur  In  Vitro. Media  Konservasi  Vol.  Xi,  No.  2  :
66-71.
Tajuddin,  T.,  Karyanti,  T.  Sukarnih,  N.
Haska.  2014.  A  revised  method  for sucker  sterilization  to  support  the  in vitro  propagation  of  sago  palm (Metroxylon sagu Rottb.). J.
Bioteknol  Biosains  Indonesia,  1(1)  : 21 – 26. doi: 10.29122/jbbi.v1i1.548.
Widyawati,  G.  2010.  Pengaruh  Variasi Konsentrasi  NAA  dan  BAP  tehadap Induksi  Kalus  Jarak  Pagar  (Jatropha curcas L. Tesis. Biosains. Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Zaer  and  Mapes.  1982.  Action  of  growth regeneration.  In  Bonga  and  Durzan (eds.)  Tissue  Culture  in  Forestry.
Martinus  Nijhoff  London.  p.  231- 235.