Kajian in Silico Daun Sungkai ( Peronema canescens ) dalam Menghambat Enzim lanosterol 14 - α demethylase Jamur Candida albicans
Nurul Istiqomah 1* , Safitri Fatikasari 2 , Ariani H. Hutuba 3
1 Jurusan D3 Farmasi, Fakultas Farmasi, IIK Bhakta Kediri, Kota Kediri., Indonesia.
2 Jurusan S1 Biologi, Fakultas Teknologi dan Manajemen Kesehatan, IIK Bhakta Kediri, Kota Kediri, Indonesia.
3 Jurusan Farmasi, Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia * E-mail: nurul.istiqomah@iik.ac.id

## Article Info:
Received: 26 Desember 2022 in revised form: 12 Februari 2023 Accepted: 15 Februari 2023 Available Online: 20 Februari 2023

## ABSTRACT
Candida albicans ( C. albicans ) is a fungus that causes candidiasis . C.  albicans has  the  enzyme  Lanosterol  14- α  demethylase. Lanosterol  14- α -demethylase  has  bioactivity  in  converting lanosterol  to  ergosterol,  a  special  sterol  found  in  fungal membranes,  which  mediates  membrane  permeability  and fluidity.  One  way  to  treat  candidiasis  is  to  use  traditional medicinal plants. Sungkai ( Peronema canescens ) can be used as an anti-fungal medicine. Drug development efforts can be done using  the  In  silico  method.  Objectives  of  this  study  was  to determine  the  interaction  between  terpenoid,  flavonoid,  and phenol compounds in Sungkai leaves against Lanosterol 14- α demethylase  in  Candida  albicans.  The  research  design  used was a pre-experimental one-shot case study. Toxtree software was used to test the toxicity of compounds. Test for compound potency using the Pass Online webserver. Docking molecular using  PyRx  software.  Visualization  of  docking  results  using Discovery  Studio  2019  Software.  Physicochemical  test  of compounds  using  Lipinski  Test. The  results showed  that  the compounds  that  had  a  low  risk  of  toxicity  were  butanoic, catechol,  guaiacol,  hydroquinone,  isopropanol,  methanoic acid,  palmitic  acid,  and  phytol.  Compounds  that  have  anti- fungal activity based on Pharma-expert analysis are butanoic acid,  genkwanin,  guaiacol,  hydroquinone,  isopropanol, palmitic  acid,  and  phytol.  Compounds  that  have  hydrogen bonds and binding affinity value <10 and RMSD value <2 are butanoic  acid,  catechol,  genkwanin,  guaiacol,  hydroquinone, isopropanol,  methanoic  acid,  palmitic  acid,  and  quinic  acid compounds.  These  compounds  are  thought  to  inhibit  the Lanosterol  14-alpha  demethylase  enzyme  in C.  albicans .
Compounds that comply with Lipinski's rules are anthocyanin and genkwanin compounds. The groups of compounds found in  Sungkai  leaves  that  have  antifungal  activity  are  the terpenoids, flavonoids, and phenols.
Keywords : Candida albicans ; Lanosterol 14- α demethylase ; Sungkai Leafs; In silico
Corresponding Author: Nurul Istiqomah
Jurusan D3 Farmasi Fakultas Farmasi IIK Bhakta Kediri Kota Kediri
Indonesia E-mail: nurul.istiqomah@iik.ac.id
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2023; 3 (1): 131 – 142
ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index
DOI: 10.37311/ijpe.v3i1.19135
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style): Istiqomah, N., Fatikasari, S.,Hutuba,A.H.(2023). Kajian in Silico Daun Sungkai (Peronema canescens) dalam Menghambat Enzim lanosterol 14- α demethylase Jamur Candida albicans . Indonesian Journal of Pharmaceutical (e-Journal), 3 (1), 131-142.

## ABSTRAK
Candida albicans ( C. albicans ) merupakan salah satu jamur penyebab penyakit kandidiasis. C. albicans memiliki  enzim Lanosterol  14- α  demethylase.  Lanosterol 14- α -demethylase memiliki bioaktivitas  dalam  mengubah  lanosterol  menjadi  ergosterol,  sterol  khusus  yang  ditemukan pada membran jamur, yang memediasi permeabilitas dan fluiditas membran. Salah satu cara untuk  mengobati  penyakit  kandidiasis  adalah  dengan  menggunakan  tanaman  obat tradisional. Tanaman Sungkai ( Peronema canescens ) dapat dijadikan sebagai obat anti-jamur. Metode In  silico dapat  digunakan  untuk  mengembangkan  dan  memprediksi  obat . Tujuan penelitian ini untuk mengetahui adanya interaksi senyawa golongan terpenoid, flavonoid dan fenol  pada  daun  sungkai  terhadap Lanosterol  14- α  demethylase pada  Jamur Candida  albicans . Rancangan penelitian yang digunakan adalah pre-eksperimental one-shot case study. Uji toksisitas senyawa  menggunakan Software  Toxtree .  Uji  potensi  senyawa  menggunakan webserver  Pass Online .  Docking  molecular  menggunakan Software  PyRx .  Visualisasi  hasil docking menggunakan Software  Discovery  Studio 2019.  Uji  Fisikokimia  senyawa  menggunakan Uji Lipinski . Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa yang memiliki resiko toksisitas rendah adalah butanoic, catechol, guaiacol, hidroquinon, isopropanol, methanoic acid, palmitic acid dan phytol. Senyawa yang memiliki aktivitas anti-jamur berdasarkan analisis Pharmaexpert adalah senyawa butanoic acid, genkwanin, guaiacol, hidroquinon, isopropanol, palmitic acid dan phytol. Senyawa yang memiliki ikatan hidrogen serta nilai binding affinity < 10 dan nilai RMSD <2  adalah  senyawa  butanoic  acid,  catechol,  genkwanin,  guaiacol,  hidroquinon, isopropanol,  methanoic  acid,  palmitic  acid  dan  quinic  acid.  Komponen  senyawa  tersebut diduga  dapat  menghambat  enzim Lanosterol  14-alpha  demethylase pada C.albicans .  Senyawa yang  memenuhi  aturan Lipinski adalah  senyawa  anthocyanin  dan  genkwanin.  Golongan senyawa  yang  terdapat  pada  daun  Sungkai dan  miliki  aktivitas  antijamur  adalah  golongan terpenoid, flavonoid dan fenol.
Kata Kunci: Candida albicans ; Lanosterol 14- α demethylase ; daun Sungkai; In silico

## 1. Pendahuluan
Jamur Candida albicans salah satu jamur yang sering menginfeksi manusia lebih dari 70% jamur genus Candida . Penyakit infeksi yang diakibatkan oleh jamur Candida albicans disebut dengan kandidiasis. Jenis infeksinya termasuk dalam golongan infeksi oportunistik. Candida merupakan jamur parasit yang menyerang bagian mukosa pada tubuh  yang  ada  di  dalam  mulut,  saluran  pernafasan,  pencernaan  dan  vagina  [1,2]. Antibiotik yang biasa digunakan untuk mengobati kandidiasis adalah golongan azol [2]. Kasus resistensi obat di antara patogen ini menjadi lebih sering, serta membutuhkan pengembangan  obat  baru  dan  pemahaman  yang  lebih  baik  tentang  enzim  yang ditargetkan. Lanoterol  14- α  demethylase (CYP51)  adalah  enzim  sitokrom  P450  yang
diperlukan untuk biosintesis sterol dalam sel eukariotik dan target tertentu dari patogen jamur yang dapat digunakan sebagai interaksi antar molekul reseptor-ligan [3 – 5].
Tumbuhan  Sungkai  termasuk  dalam  salah  satu  tanaman  etnobotani  yang dimanfaatkan oleh Suku Dayak di Kalimantan Timur. Tumbuhan ini dapat ditemukan di Sumetra bagian Selatan dan Kalimantan [6,7]. Tumbuhan Sungkai  termasuk dalam suku  Verbenaceae.    Hasil  uji  skrining  fitokimia  mengatakan  bahwa  daun  Sungkai memiliki  senyawa  metabolit  yaitu  terpenoid,  flavonoid  dan  fenol  [7].  Daun  Sungkai dapat digunakan  untuk  mengobati  pilek,  demam,  cacingan, dan  obat  kumur.  Upaya pengembangan  daun  sungkai  sebagai  obat  dapat  menggunakan  rancangan    obat  [8]. Rancangan obat merupakan salah satu langkah yang digunakan untuk mendapatkan obat baru menggunakan modifikasi struktur ikatan antara senyawa obat dengan protein target. Rancangan obat ini bertujuan untuk mencari kandidat senyawa yang digunakan sebagai  obat  dengan  daya  toksisitas  yang  rendah  dan  bioaktivitas  yang  tinggi  [9]. Perencanaan pengembangan obat suatu tumbuhan dapat dilakukan dengan modifikasi struktur.
Modifikasi  struktur  senyawa  dapat  dilakukan  dengan  mengisolasi  seluruh komponen  senyawa  yang  ada  pada  bagian  tanaman  yang  menjadi  sumber  daya. Kemudian  dilakukan  identifikasi  struktur,  serta  mengamati  aktivitas  biologinya  [9]. Perubahan susunan senyawa utama maupun derivatnya dapat mengubah sifat senyawa tersebut baik secara fisik, kimia, lipofilik, elektronik dan sterik. Adanya perubahan sifat tersebut  dapat  mempengaruhi  aktivitas  biologisnya  [10].  Kajian in  silico memiliki peranan  yang  sangat  penting  dalam  merancang  dan  mengoptimasi  bioaktivitas senyawa  dalam  proses  pengembangan  obat.  Berdasarkan  uraian  tersebut  penulis terdorong untuk melakukan kajian in silico golongan senyawa tepenoid, flavonoid dan fenol yang terdapat pada daun sungkai untuk  diinteraksikan dengan enzim Lanosterol 14- α demethylase [6].  Sehingga  penulis  dapat  mengetahui  potensi  ataupun  aktivitas komponen  senyawa  pada  daun  sungkai  yang  berpotensi  menghambat  pertumbuhan jamur Candida .

## 2.  Metode
Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Laptop  Merek  ASUS A407UFBV061T, Intel CORE i3 generasi 7, RAM 4 GB, Windows 10 dan perangkat lunak PyRx, Autodock VINA , Discovery studio 2019 dan Toxtree . Kemudian untuk webserver yang digunakan  adalah pubchem.ncbi,  rscb ( Research  Collaboratory  for  Structural Bioinformatics ) ,uniport.org, PassOnline Way2Drug , SWISS-MODEL dan Lipinski.

## Persiapan Bahan
Bahan  dalam  penelitian  ini  yaitu  bentuk  3D  pada  daun    sungkai  yaitu anthocyanin,  butanoic  acid,  carotenoid,  catechol,  genkwanin,  guaiacol,  hidroquinon, isopropanol,  methanoic  acid,  palmitic  acid,  phytol,  quinic  acid  dan  sitosterol  yang keseluruhan  senyawa  tersebut  tersimpan  dalam  bentuk  .sdf,  serta  struktur  protein Lanosterol 14- α demethylase yang disimpan dalam bentuk FASTA pada webserver masing- masing database .

## Pemodelan dan Preparasi Protein 3D
Tujuan dilakukannya pemodelan 3D untuk melakukan konstruksi model protein target  dari  struktur  2D  ke  3D,  sehingga  kita  dapat  memperoleh  sampel  struktur  3D protein target dengan cara melakukan input dan running sampel sekuen protein target pada webserver pemodelan  yaitu SWISS-MODEL ( swissmodel.expasy.org ),  serta
Istiqomah and Fatikasari., 2023; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 3(1): 131-142
mengunduhnya dalam format protein data bank (pdb). Tujuan dilakukannya preparasi protein  adalah menghilangkan  molekul  air  dan  ligan  kontaminan    kemudian mengunduhnya dalam format protein data bank (pdb).

## Minimasi Ligan
Ligan  yang  telah  diunduh  pada database  PubChem harus  terlebih  dahulu mengalami konversi dari sdf menjadi pdb. Selain itu tujuan dari minimasi adalah untuk memaksimalkan  energi  pengikatan  antara  atom  penyusun  ligan  agar  menjadi  lebih fleksibel  ketika  masuk  ke  tahapan molecular  docking .  Minimasi  menggunakan plugin OpenBabel yang terdapat dalam software PyRx sehingga kita akan memperoleh struktur 3D yang bersifat fleksibel dengan format pdb.

## Uji Toksisitas
Uji  toksisitas  adalah  uji  untuk  mengetahui  tingkat  toksisitas  senyawa,  tahap pertama  yang  dilakukan  adalah  membuka software Kemudian  tahap  selanjutnya masukkan canonical  smile yang  didapat  pada webserver  Pubchem ,  lalu  letakkan  pada “ Chemical  identifier ”,  lalu  pilih  metode  yang  digunakan  pada  “ Select  a  decision tree ”.kemudian pilih tiga paramater Cramer rules, Kroes TTC , Benigni/Bosa Rulebase secara bergantian lalu klik “ Estimate ” maka hasil akan muncul setelah selesai identifikasi hasil tersebut.

## Uji Potensi Senyawa
Uji pharma expert adalah uji untuk mengetahui potensi senyawa dalam webserver Pass online W2Drug . Tahap pertama yang dilakukan adalah membuka webserver Setelah membuka webserver pass online selanjutnya klik “GO for prediction” lalu pilih kategori “SMILE”  selanjutnya  masukkan  canonical  smile  kemudian  klik  “ Get  prediction ”  lalu hasil akan muncul.
Molekular Docking
Metode  ini  digunakan  untuk  menginteraksikan  antara  molekul  satu  dengan lainnya,  sehingga  dapat  memperoleh  nilai  energi  pengikatan  stabil  yang memungkinkan  terbentuknya  sebuah  kompleks  molekul.  Energi  pengikatan  yang dipilih  adalah  energi  pengikatan  yang  paling  negatif,  karena  dapat  berpotensi mempengaruhi biological activity dari sebuah protein.  Metode docking yang digunakan yaitu blind  docking ,  jadi grid  docking akan  dibuat  maksimal  menyeluruh  pada  semua permukaan  protein  target  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  senyawa  query  yang potensial  mempengaruhi  aktivitas  protein  target.  Output  hasil docking berupa perbandingan  nilai  energi  pengikatan  dengan  mode  0,  karena  tujuannya  tadi  adalah blind  docking .  Nilai  0  dapat  diartikan  bahwa  nilai RMSD diabaikan,  sehingga  dapat diasumsikan ligan fleksibel sedangkan protein  tetap kaku atau bersifat rigid .

## Uji Lipinski
Uji Lipinski adalah  uji  untuk  melihat  senyawa  yang  memiliki  kelarutan  dan permeabilitas yang buruk dan diprediksi menggunakan rule of 5 lipinski , serta senyawa- senyawa  uji  dapat  memenuhi  syarat  jika  telah  memenuhi  lima  parameter Lipinski Lipinski yaitu:  bahwa absorbsi  dan  permeasi  yang kurang  baik ketika  suatu  senyawa memiliki lebih dari lima donor ikatan hidrogen, berat molekul lebih dari 500, Log P lebih dari  5,  molar  refractivity  antara  40-130  dan  terdapat  lebih  dari  10  akseptor  ikatan hidrogen.

## 3.  Hasil dan Pembahasan Uji Toksisitas
Uji ini dilakukan untuk memprediksi tingkat toksisitas  senyawa yang ada pada daun  sungkai.  Senyawa  tersebut  adalah  anthocyanin,  butanoic  acid,  carotenoid, catechol, genkwanin, guaiacol, hidroquinon, isopropanol, methanoic acid, palmitic acid, phytol, quinic acid dan sitosterol bagi tubuh manusia. Uji toksisitas ini menggunakan software Toxtree . Pengujian ini menggunakan tiga paramater yaitu cramer rules , Kroes TTC , dan Benigni/Bossa rulebase for mutagenicity and carcinogenicity . Hasil dari analisis toksisitas senyawa dengan menggunakan Toxtree dapat dilihat pada Tabel.1 berikut ini.
Tabel 1. Uji toksisitas menggunakan Toxtree
Keterangan: Cramer rules =  1(Low Class (I)), 2 (Intermediate Class (II)), 3( High (Class )) Benigni/Bosa = 1
(Structural alerts rulebase for genotoxic carcinogenicity); 8 (Negatif for genotoxic carcinogenicity); 9 (Negatif for nongenotoxic carcinogenicity) Kroes TTC = 1 (Substance would decision tree not expected to be safety concern).
Berdasarkan parameter cramer rule toksisitas suatu senyawa dikategorikan dalam tiga kelas yaitu kelas I, II dan III. Senyawa yang termasuk dalam katageori kelas I adalah senyawa dengan bentuk struktur yang sederhana, efisien atau mudah diserap, dan jika dikonsumsi secara oral memiliki tingkat toksisitas yang rendah. Senyawa yang masuk dalam katagori kelas I adalah cathecol, guaiacol, hidroquinon, isopropanol, methanoic acid, palmitic acid, phytol dan butanoic acid. Senyawa katagori kelas II adalah memiliki toksisitas  tingkat  medium  jika  didasarkan  pada  stukturnya.  Senyawa  yang  masuk kategori  kelas  II  adalah  carotenoid.  Senyawa  katagori  kelas  III  adalah  senyawayang memiliki  gugus  fungsional  yang  reaktif,  masuk  dalam  katagori  tidak  aman  jika dikonsumsi  terlalu  berlebihan,  dan  memiliki  aktivitas  toksisitas  yang  signifikan. Senyawa yang masuk katagori kelas III adalah genkwanin, quinic acid, sitosterol dan antocyanin [11,12].
Analisis  parameter  kroes  TTC  terlihat  bahwa  semua  senyawa  masuk  dalam katagori I yang dapat diartikan senyawa-senyawa tersebut tidak melebihi ambang batas paparan  aman.  Pada  hasil  parameter Benigni/Bossa  rulebase senyawa  yang  terdapat dalam daun sungkai termasuk dalam katagori 8 dan 9 yang berarti bahwa tidak bersifat genetoxic dan non-genetoxic carcinogenic. Berdasarkan ketiga parameter tersebut dapat dikategorikan bahwa sebagian besar senyawa yang ada pada daun sungkai aman untuk dikonsumsi secara oral [11,12].
Ligan Parameter Cramer Rules Kroes TTC Benigni/Bossa Rulebase Carotenoid II 1 8;9 Catechol I 1 8;9 Genkwanin III 1 8;9 Guaiacol I 1 8;9 Hidroquinon I 1 8;9 Isopropanol I 1 8;9 Methanoic acid I 1 8;9 Palmitic acid I 1 8;9 Phytol I 1 8;9 Quinic acid III 1 8;9 Sitosterol III 1 8;9 Antocyanin III 1 8;9 Butanoic acid I 1 8;9
Istiqomah and Fatikasari., 2023; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 3(1): 131-142
Uji  toksisitas  menunjukkan  bahwa  senyawa  pada  daun  sungkai  memiliki tingkatan  toksisitas  yang  berbeda.  Senyawa-senyawa  tersebut  dapat  memungkinkan resiko pada kesehatan yang cukup besar bagi manusia jika diberikan lebih dari ambang batas paparan yaitu 0,15 µg/hari. Senyawa-senyawa tersebut tidak menimbulkan zat yang berisko menyebabkan kerusakan genetik dan tidak menyebabkan kanker [12].

## Uji Potensi Senyawa
Uji pharma expert adalah uji untuk mengetahui potensi senyawa dalam webserver Pass Online ( prediction of activity spectra for subtances ). Pass Online adalah aplikasi yang berbasis  web,  dirancang  sebagai  alat  untuk  mengevaluasi  potensi  biologis  suatu senyawa yang dapat digunakan sebagai obat . Hasil dari uji Pharma expert dapat dilihat pada Tabel.2 berikut ini.
Tabel 2. Analisis Bioaktivitas Senyawa Ligan Pa Pi Aktivitas Ligan Pa Pi Aktivitas Anthocyanin   - - - Isopropanol   0,920  0,003  Feruloyl esterase inhibitor Butanoic acid 0,932  0,002    L-glucuronate reductase inhibitor 0,942  0,003  Saccharopepsi n inhibitor 0,741  0,003    Aspergillus nuclease   S1 inhibitor Methanoic acid - - - Carotenoid   0,985  0,000    Phosphatidylc holineretinolOacyltr ansferase inhibitor Palmitic acid 0,973  0,001  Acylcarnitine hydrolase inhibitor Catechol 0,939  0,003    Feruloyl esterase inhibitor 0,961  0,002  Saccharopepsi n inhibitor Genkwanin    0,976  0,001    Chlordecone reductase inhibitor 0,753  0,003  Aspergillus nuclease S1 inhibitor 0,922  0,002    Kinase inhibitor Phytol 0,911  0,002   Prenyldiphosphatase inhibitor Guaiacol 0,965  0,002    Aspulvinone dimethylallyltr ansferase inhibitor 0,845  0,012  Saccharopepsi n inhibitor 0,939  0,003    Feruloyl esterase inhibitor Quinic acid   0,936  0,003  Sugarphosphatase inhibitor Hidroquinon   0,961  0,002    Aspulvinone dimethylallyltr ansferase inhibitor Sitosterol    0,965  0,001  DELTA14- sterol reductase inhibitor 0,920  0,003    Feruloyl
esterase inhibitor
Hasil  yang  tertera  pada  Tabel  2.  kolom  pertama  menunjukkan  potensi  paling tinggi untuk setiap senyawa yaitu yang memiliki nilai Pa>0,7 (11). Keakuratan prediksi yaitu 95% berdasarkan penilaian Leave-One-Out Cross Validation (LOO CV) Jika nilai Pa 0,9 maka untuk 90% aktif,  hasil dari senyawa-senyawa daun sungkai diperoleh hasil yang mendekati 1 karena lebih valid dan cenderung menunjukkan aktivitas (Amagase et al ., 2001), maka dapat disimpulkan bahwa senyawa-senyawa yang memiliki aktivitas agen-antijamur  adalah  senyawa  butanoic  acid,  genkwanin,  guaiacol,  hidroquinon, isopropanol, palmitic acid dan phytol [13].
Molekular Docking
Paramater  yang  dilihat  pada  penelitian  molekular docking antara  lain Grid  box , Binding affinity , RMSD , Residu asam amino, Jenis ikatan, Ikatan hidrogen, Jarak ikatan dan Gambar 2D hasil interaksi ligan dan reseptor.   Senyawa fitokimia dianggap sebagai agonis  apabila  memiliki  interaksi  ikatan  pada  kedua  tempat  ikatan  tersebut (Paramanindita et al ., 2018). Dapat dilihat pada Tabel. 3 berikut ini.
Tabel 3. Hasil analisis docking molekuler dengan menggunakan PyRx Ligan Binding affinity Rmsd Residu Asam Amino Ikatan Hidrogen Jarak Ikatan Interaksi Reseptor dengan Ligan Antocyanin -9,0 0.0 Met 508; Phe 233; Tyr 118; Pro 230 - - Butanoic acid -4,1 0.0 Ser 378; Phe 380 Ser 378 (O) 2.37737 Carotenoid -11,3 0.0 Phe 380; Ile 231; Ala 61; Leu 87; Leu 88; Phe 233; Tyr 132; Leu
121; Tyr 118;
Lys 143; Leu 139; Leu 300; Ile 131;
Ile 304
- - Catechol -5,2 0.0 Ser 507; His 377; Ser 378 Ser 507 (O) 2.7229
Genkwanin -8,6 0.0 Tyr 505; Tyr 64; Phe 380; Phe 233; Pro 230 Tyr 505 (O) 2.71486 Guaiacol -5,1 0.0 Ser 438; Glu 473; Pro 462; Leu 461 Ser 438 (O) 2.89519 2.53561 Hidroquinon -4,6 0.0 His 310; Asp 225; Pro 193; Ala 313 Asp 225 (O) His 310 (O) 2.43001 2.78183 Isopropanol -2,9 0.0 Cys 470; Arg 469; Gln 474 Arg 469 (O) Gln 474 (O) Cys 470 (O) 2.99442 3.01955 2.08293 Methanoic acid -3,0 0.0 His 400; Thr 93; Ala 48; Tyr 41; Ser 84; Pro 397 Tyr 41 (O) Thr 93 (O) His 400 (O) Ala 48 (O) Ser 84 (O) 3.00103 2.86576 2.93515 2.63732 2.4465
Palmitic acid -6,0 0.0 Ser 378; His 377; Pro 230 Ser 378 (O) 2.90087 2.46008 Phytol -6,1 0.0 Phe 233; Met 508; Pro 230; Leu 87; Tyr 64 - - Quinic acid -5,8 0.0 Glu 473; Lys 367; Ser 436; Ser 438; Arg 469 Lys 367 (O) Ser 438 (O) Ser 438 (O) Ser 438 (O) Glu 473 (O) Ser 436 (O) 2.95993 2.91738 2.84178 2.85307 2.34338 2.57722 Sitosterol -9,8 0.0 Ser 378; Tyr 118; Ile 131; Leu 139; Lys 143; Ala 146;
Ile 471; Leu 300; Tyr 132;
Ile 304; Phe 126; Leu 376; Met 508; Leu 121; Phe 233 Ser 378 (O) 2.7207
Berdasarkan  hasil  pada  Tabel  3  menunjukkan  bahwa  hasil  yang  didapatkan adalah sebagai berikut Binding affinity mempunyai nilai yang kurang dari 10. Penelitian ini  dikatakan  berhasil  jika  terdapat  interaksi  antara  protein  dengan  ligan  dan  nilai RMSD <2.  Hasil  docking  molecular  menunjukkan  bahwa  senyawa  anthocyanin, carotenoid, phytol dan sitosterol tidak ditemukan ikatan hydrogen antara reseptor dan ligan,  namun  yang  terbentuk  adalah  ikatan  hidrofobik.  Jarak  ikatan  hidrogen  pada masing-masing senyawa berbeda.
Istiqomah and Fatikasari., 2023; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 3(1): 131-142
Analisis  molekular docking menujukkan  bahwa  senyawa  yang  memiliki  nilai binding affinity dan nilai RMSD terbaik adalah senyawa carotenoid namun carotenoid tidak  memiliki  ikatan  hidrogen.  Semakin  banyak  ikatan  hydrogen  yang  terbentuk menandakan  bahwa  bioaktivitas  senyawa  tersebut  semakin  tinggi.  Ikatan  hydrogen ikatan  yang  paling  kuat  karena  dapat  terbentuk  meskipun  jarak  antara  ligan  dan reseptor jauh [5,9,10,14].
Berdasarkan hasil analisis residu asam amino Arg 469, Ile 131, Leu 300, Met 508, Phe 380, Pro 230, Phe 233, Ser 378, Ser 438, dan Tyr 118 merupakan residu yang paling sering berinteraksi dengan ligan. Residu-residu tersebut kemungkinan merupakan key residu  dalam  reaksi  penghambatan  aktivitas  enzim Lanosterol  14- α  demethylase . Senyawa-senyawa yang berpotensi sebagai antijamur adalah senyawa yang memiliki ikatan hidrogen serta nilai binding affinity kurang dari 10 dan nilai RMSD kurang dari 2 yaitu senyawa butanoic acid, catechol, genkwanin, guaiacol, hidroquinon, isopropanol, methanoic acid, palmitic acid dan quinic acid. Senyawa-senyawa tersebut diduga dapat menghambat  enzim Lanosterol  14-alpha  demethylase pada C.albicans .  Senyawa-senyawa tersebut bersifat agonis, Senyawa fitokimia dianggap sebagai agonis apabila memiliki interaksi ikatan pada kedua tempat ikatan tersebut [9,14 – 16].

## Uji Lipinski
Uji Lipinski dilakukan  untuk  menentukan  sifat  fisikokimia  suatu  ligan  ketika melintasi  membran  sel  dalam  tubuh,  adapun  syarat  yang  harus  dipenuhi  oleh  suatu senyawa berdasarkan aturan Lipinski yaitu seperti parameter pada Tabel. 4 berikut ini.
Tabel 4. Uji Lipinski senyawa pada Daun Sungkai Ligan Berat molekul (Da) Jumlah Ikatan Hidrogen Donor Jumlah Ikatan Hidrogen akseptor Molar refractiv itiy Log p Syarat Antocyanin 207.25 0 1 65.39 4.19 Memenuhi Butanoic acid 88.11 1 2 22.54 0.87 Tidak memenuhi Carotenoid 536.9 0 0 181.39 12.61 Tidak memenuhi Catechol 110.11 2 2 29.77 1.09 Tidak memenuhi Genkwanin 284.26 2 5 75.70 2.73 Memenuhi Guaiacol 124.14 1 2 34.66 1.40 Tidak memenuhi Hidroquinon 110.11 2 2 29.77 1.09 Tidak memenuhi Isopropanol 60.1 1 1 17.35 0.38 Tidak memenuhi Methanoic acid 46.025 1 2 8.69 0.29 Tidak memenuhi Palmitic acid 256.42 1 2 77.95 5.55 Tidak memenuhi Phytol 296.5 1 1 95.56 6.36 Tidak memenuhi Quinic acid 192.17 5 6 39.84 2.32 Tidak memenuhi
Sitosterol 414.7 1 1 128.22 8.02 Tidak memenuhi
Senyawa-senyawa yang melanggar aturan Lipinski pada parameter berat molekul kurang  dari  500  Da  yaitu  senyawa  carotenoid,  untuk  paramater  molar  refractivity senyawa  yang  tidak  memenuhi  aturan  adalah  butanoic  acid,  catechol,  guaiacol, hidroquinon, isopropanol, methanoic acid, dan quinic acid, sedangkan pada parameter Log P < 5 Senyawa yang melanggar aturan antara lain carotenoid, methanoic acid, quinic acid dan sitosterol. Secara umum aturan Lipinski menggambarkan solubilitas senyawa tertentu  untuk  menembus  membran  sel.  Bioavailabilitas  yang  baik  akan  memenuhi aturan Lipinski [17,18].

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa golongan senyawa yang terdapat pada daun sungkai memiliki pengaruh sebagai aktivitas anti- jamur dan terdapat interaksi senyawa golongan terpenoid, flavonoid dan fenol terhadap enzim lonesterol 14α demethylase dari Candida albicans .  Perlu dilakukan penelitian secara in vitro dan in vivo dari masing-masing senyawa daun Sungkai yang telah diuji untuk mengetahui potensinya dalam skala laboratorium terhadap jamur Candida albicans .

## Referensi
[1]. Jasminka Talapko , Martina Juzbaši´c, Tatjana Matijevi´c, Emina Pustijanac, Sanja Beki´c,  Ivan  Kotris,  et  al.  Candida  albicans — The  Virulence  Factors  and  Clinical Manifestations of Infection. Journal of Fungi. 2021 Jan;7(79):1 – 19.
[2]. Hakim L, Ramadhian MR. Kandidiasis Oral. Medscape. 2015 Dec;4(8):53 – 7.
[3]. Leonid  Kaluzhskiy,  Pavel  Ershov,  Evgeniy  Yablokov,  Tatsiana  Shkel,  Irina Grabovec,  Yuri  Mezentsev,  et  al.  Human  Lanosterol  14-Alpha  Demethylase (CYP51A1)  Is  a  Putative  Target  for  Natural  Flavonoid  Luteolin  7,3′ -Disulfate. Molecules. 2021 Apr;26:1 – 12.
[4]. Galina  I.  Lepesheva ,  Michael  R.  Waterman.  Sterol  14α -demethylase  cytochrome P450  (CYP51),  a  P450  in  all  biological  kingdoms.  Biochim  Biophys  Acta. 2007;177:467 – 77.
[5]. Fillah  M,  Herawati  D,  Fakih  TM.  Uji  In-Silico  Aktivitas  Antikanker  Kolorektal Senyawa Organosulfur  Bawang Putih (Allium sativum L.) terhadap Protein Target COX-2. Bandung Conference Series: Pharmacy. 2022;2(2):1 – 4.
[6]. Muhammad R. R., Yasmiwar S., Ida M., Raden M. F., Muchtaridi, Sri A. S. In Silico Study  of  Bioactive  Compounds  from  Sungkai  (Peronema  canescens)  as Immunomodulator. Int J App Pharm. 2022 Aug;14(4):135 – 41.
[7]. Ariefa  P.  Yani,  Agus  M.H.  Putranto.  E xamination  of  The  Sungkai’s Young  Leaf Extract  (Peronema canescens) as an Antipiretic, Immunity,  Antiplasmodium and Teratogenity  in  Mice  (Mus.muculus)  .  International  Journal  of  Science  and Engineering. 2014 Jul;7(1):30 – 4.
[8]. Arif Rahman, Gianda Putri Rengganis, Sintia Prayuni, Ine Novriyanti, Tiara Novita Sari, Puspa Dwi Pratiwi, et al. PENGARUH PEMBERIAN INFUSA Daun Sungkai (Peronema  canescens)  Terhadap  Jumlah  Leukosit  Pada  Mencit.  Journal  of Healthcare Technology and Medicine. 2021 Oct;7(2):614 – 20.
[9]. N Istiqomah, A H Ramadhani, R S Ningrum, E Purwati. Ethanol extract analysis of stem pineapple (Ananas comosus. L) and its application as antibacterial agent: In vitro and silico studies. 2nd Biennial Conference of Tropical Biodiversity. 2021;886.
[10]. Aditya  Tri  Ananda,  Alsya  Firdausi  Nuzula,  Devi  Ayu  Safitri. Uji   Efek   Inhibitorik   Komponen   Bioaktif   Bawang   Putih  (Allium   sativum) terhadapLanosterol  14α -demethylasepadaCandida   albicans  melalui  Studi  In Silico. Biota: Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu iHayat. 2020 Jun;5(2):124 – 9.
[11]. Alexey Lagunin, Alla Stepanchikova, Dmitrii Filimonov, Vladimir Poroikov. PASS: prediction  of  activity  spectra  for  biologically  active  substances.  Bioinformatics Applications Note. 2000 Mar;16(8):747 – 8.
[12]. Sneha  Bhatia,  Terry  Schultz,  David  Roberts,  Jie  Shen,  Lambros  Kromidas,  Anne Marie Api. Comparison of Cramer classification between Toxtree, the OECD QSAR Toolbox  and  expert  judgment.  Regulatory  Toxicology  and  Pharmacolog.  2015 Nov;71(1):52 – 62.
[13]. D. S. Druzhilovskiy, A. V. Rudik, D. A. Filimonov, A. A. Lagunin, T. A. Gloriozova, v. V. Poroikov. Online resources for the prediction of biological activity of organic compounds. Russian Chemical Bulletin. 2016 Feb;65(2):384 – 93.
[14]. Taufik  Muhammad  Fakih,  Firda  Aulia  Jannati,  Annisa  Meilani,  Dwi  Syah  Fitra Ramadhan,  Fitrianti  Darusman.  Studi  In  Silico  Aktivitas  Analog  Senyawa Zizyphine dari Bidara Arab (Zizyphus spina-christi) sebagai Antivirus SARS-CoV- 2  terhadap  Reseptor  3CLpro  .  ALCHEMY  Jurnal  Penelitian  Kimia.  2022 Mar;18(1):70 – 9.
[15]. Paramanindita AS, Indarto D, Balgis. Potensi Scopoletin sebagai Agonis Reseptor Transferin  2 untuk Pengembangan Terapi Anemia Defisiensi Besi. Smart Medical Journal. 2018;1(1):33 – 41.
[16]. Hardjono  S,  Siswandono,  Purwanto,  Darmanto  W.  Quantitative  Structure- Cytotoxic  Activity  Relationship  1-(Benzoyloxy)urea  And  Its  Derivative.  Current Drug Discovery Technollogy. 2016;13(2):101 – 8.
[17]. Thais  Batista Fernandes,  Mariana  Celestina  Frojuello  Segretti,  Michelle  Carneiro Pollic,  Roberto  Parise-Filho.  Analysis  of  the  Applicability  and  Use  of  Lipinski`s Rule for Central  Nervous System Drugs. Lett Drug Des Discov. 2016 Jun;13(9):1 – 8.
[18]. Sen  DJ,  Nandi  K,  Saha  D.  Rule  of  Five  Men  Army  to  Cross  The  Blood  Brain Barrier   for  Therapeutically  Potent.  WORLD  JOURNAL  OF  ADVANCE HEALTHCARE RESEARCH. 2021 Apr;5(3):206 – 11.