http://e-journal.unair.ac.id/javest
Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt
Research Reports
Histopatologi Ginjal dan Ileum Rattus norvegicus Model Toksisitas Rhodamin B dan Sakarin yang Disuplementasi Yoghurt Rosela Ungu

## ABSTRACT

## ARTICLE INFO
Received: 14 June 2023 Revised: 1 September 2023 Accepted: 7 October 2023 Online: 30 October 2023
Journal of Applied Veterinary Science and Technology, p-ISSN: 2716-1188; e-ISSN: 2716-117X
Rhodamin B and saccharin are chemicals that are harmful to the health of the body. Consumption of rhodamine B and saccharin for a long time can cause problems for the body such as impaired organ function.
The aim was to find out the benefits of giving purple rosella yogurt in preventing damage to the kidneys and ileum of Rattus norvegicus caused by rhodamine B and saccharin. Using RAL with 28 male Rattus novergicus aged 8-12 weeks. Group K(-) was not given any treatment, K(+R) was given rhodamine B, K(+S) was given saccharin, K(+K) was given rhodamine B and saccharin, P1 was given rhodamine B and yoghurt, P2 was given saccharin and yoghurt, P3 was given rhodamine B, saccharin, and yogurt. The dose of rhodamine B was 22.5 mg/kg, the dose of saccharin was 157.7 mg/kg, the volume of yoghurt was 1 ml/head. Administered orally with gastric tube for 14 days. The concentration of purple rosella extract used was 15% (v/v).
Group K(+K) showed the heaviest damage. Groups P1, P2, and P3 still found damage to the kidneys, in P1 they experienced thickening of Bowman's capsule in the glomerulus, in P2 they experienced a loss of more than 25% of the brush border in the tubules, and in P3 they experienced glomerular tufts in the glomerulus. In the ileum, P1 experienced thickening of the muscles, P2 experienced clusters of inflammatory cells in the submucosa, and P3 experi- enced 10-50% loss of goblet cells.
Provision of purple rosella yogurt can prevent damage to the kidneys and ileum of Rattus novergicus due to rhodamine B and saccharin, although it is not optimal

## ABSTRAK
Rhodamin B dan sakarin adalah bahan kimia berbahaya bagi kesehatan tubuh. Konsumsi rhodamin B dan sakarin dalam waktu lama dapat mengakibatkan masalah bagi tubuh seperti gangguan fungsi organ. Untuk mengetahui manfaat pemberian yoghurt rosella ungu dalam mencegah kerusakan ginjal dan ileum Rattus norvegicus yang disebabkan oleh rhodamin B dan sakarin. Menggunakan RAL dengan 28 ekor Rattus novergicus jantan umur 8-12 minggu. Kelompok K(-) tidak diberi perlakuan, K(+R) diberi rhodamin B, K(+S) diberi sakarin, K(+K) diberi rhodamin B dan sakarin, P1 diberi rhodamin B dan yoghurt, P2 diberi sakarin dan yoghurt, P3 diberi rhodamin B, sakarin, serta yoghurt. Dosis rhodamin B 22,5 mg/kgBB, dosis sakarin 157,7 mg/kgBB, volume pemberian yoghurt 1 ml/ekor. Pemberian per-oral dengan sonde lambung selama 14 hari. Konsentrasi ekstrak rosella ungu yang digunakan adalah 15% (v/v). Kelompok K(+K) menunjukan kerusakan terberat. Kelompok P1, P2, dan P3 masih dapat ditemukan adanya kerusakan pada ginjal, pada P1 mengalami penebalan kapsula bowman pada glomerulus, P2 mengalami hilangnya brush border lebih dari 25% pada tubulus, dan P3 mengalami glomerular tuft pada glomerulus. Pada ileum, P1 mengalami penebalan pada otot, P2 mengalami kluster sel inflamasi pada submukosa, dan P3 mengalami hilangnya sel goblet 10-50%.
Pemberian yoghurt rosella ungu
dapat mencegah terjadinya kerusakan pada ginjal dan ileum Rattus novergicus akibat dari rhodamin B dan sakarin meskipun belum maksimal.
Keywords: Ileum; Kidneys; Purple Rosella; Rhodamine B; Saccharin;
Yoghurt
Kata kunci: Ginjal; Ileum; Rosela Ungu; Rhodamine B; Saccharin; Yoghurt
* Correspondence: Ajeng Erika Prihastuti Haskito E-mail: drhajengerika@ub.ac.id
Cite This Article:
         ­ ­ 
Dzakiyyah Salmaa 1 , Ajeng Erika Prihastuti Haskito 2* , Anna Safitri 3 , Aldila Noviatri 4 , Handayu Untari 5 Citra Sari 2
1 Student of Veterinary Medicine, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Brawijaya, Malang-Indonesia
2 Laboratory of Veterinary Public Health, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Brawijaya, Malang-Indonesia
3 Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Science, Universitas Brawijaya, Malang-Indonesia
4 Laboratory of Veterinary Pharmacology, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Brawijaya, Malang-Indonesia
5 Laboratory of Veterinary Anatomy, Histology and Embriology, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Brawijaya, Malang-Indonesia
Salmaa, D., et.al. 2023. Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt

## LATAR BELAKANG
Seiring perkembangan zaman dan bertambahnya jumlah penduduk, kebutuhan pangan juga semakin meningkat. Pada era saat ini, kualitas makanan dan ketertarikan masyarakat untuk mengonsumsi makanan diukur dari harga, bentuk, warna, dan rasa makanan tersebut. Demi memenuhi kebutu- han pangan tersebut, banyak produsen yang menggunakan Bahan Tambahan Makanan (BTM) kedalam makanan dan minuman untuk meningkatkan minat dan daya tarik konsumen terhadap suatu produk (Wahyudi, 2017) . Di Indonesia, peraturan penggunaan BTM sudah diatur dengan Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 33 Tahun 2012, yaitu tentang 27 golongan BTM yang diizinkan penggunaannya pada bahan pangan dn 19 jenis bahan yang dilarang penggunaannya sebagai BTM. Bahan Tambahan Makanan (BTM) dapat berupa pewarna buatan seperti rhodamin B dan pemanis buatan seperti sakarin. Rhodamin B termasuk dalam 19 jenis bahan yang dilarang penggunaan- nya sebagai BTM, dikarenakan rhodamin B adalah pewarna sintesik yang dijual bebas di pasaran sebagai pewarna indus- tri tekstil, namun masih banyak disalahgunakan oleh produ- sen menjadi pewarna pangan dikarenakan harganya yang murah, mudah didapat, dan dapat memberikan warna yang menarik pada makanan dan minuman (Yamlean, 2011, Wahyudi, 2017) . Sakarin termasuk dalam 27 golongan BTM yang diizinkan penggunaannya, namun dalam batasan atau jumlah tertentu, yaitu 0-5 mg/kg BB per-hari sesuai dengan batas Acceptable Daily Intake (ADI). Sakarin merupakan pemanis buatan yang diproduksi untuk penderita diabetes, namun banyak disalahgunakan pada produk pangan dengan jumlah yang melebihi batas. Sakarin banyak digunakan karena harganya yang murah dan rasanya lebih manis 200-700 kali dari sukrosa (Olivea Herman et al., 2020) .
Konsumsi rhodamin B dan sakarin dalam waktu lama dan melebihi batas penggunaan dapat menyebabkan pembentu- kan radikal bebas, kemudian menimbulkan keadaan stress oksidatif dalam tubuh. Stress oksidatif dapat menyebabkan kerusakan pada organ tubuh, seperti pada ginjal dan ileum (Utomo, et al., 2012; Wibowo and Saebani,  2016) . Rhodamin B dan sakarin merupakan kelompok zat xenobiotik, yang apabila tertelan selanjutnya dimetabolisme didalam hati melalui dua tahapan, antara lain fase pertama adalah oksidasi yang dikatalis oleh sitokrom P450 dan fase kedua adalah senyawa hasil produksi fase pertama yang diubah menjadi berbagai metabolit polar oleh enzim spesifik. Zat xenobiotik yang dimetabolisme oleh sitokrom P450, kemudian meng- hasilkan radikal bebas (Weber et al., 2011) .
Radikal bebas yang terbentuk akibat mengkonsumsi rhodamin B dan sakarin dapat dicegah dengan senyawa antioksidan. Normalnya di dalam tubuh sudah terdapat antioksidan, disebut dengan antioksidan endogen, namun dengan jumlah secukupnya dan tidak memiliki banyak cadangan. Oleh karena itu, diperlukan antioksidan eksogen atau antioksidan tambahan untuk mendukung kinerja antikosidan endogen (Khaira, 2010) .

## MATERIAL dan Metode

## Sampel Penelitian
Hewan coba yang digunakan yaitu Rattus norvegicus , strain Wistar, jenis kelamin jantan, berumur 8-12 minggu, dan bobot 100-200 gram. Hewan coba didapatkan dari Iwan Farm Pakisaji. Sebanyak 28 ekor Rattus norvegicus diletakkan secara acak pada kandang hewan coba yang sudah diberi sekam, masing-masing 4 ekor per-kandang. Rattus novergicus diberi pakan BR-1 dan minum air mineral ad-libitum. Sebelum perlakuan penelitian dimulai, dilakukan masa akliti- masi selama 7 hari untuk adaptasi lingkungan.
Saat ini, antioksidan alami banyak dikembangkan sehingga menjadi suatu bahan pangan fungsional. Penambahan bahan alami seperti rosella ungu kedalam yoghurt diketahui dapat meningkatkan kandungan antioksidannya (Werdhasari A., 2014) . Rosella ungu ( Hibiscus sabdariffa L. ) merupakan merupakan bahan alami kaya antosianin dan flavonoid, yang telah terbukti mempunyai aktivitas antioksidan. Antosianin bersifat stabil pada larutan asam dan sifat ini memungkinkan penambahan antosianin pada produk-produk makanan asam (Ratna et al., 2022) . Yoghurt merupakan bahan pangan hasil fermentasi susu oleh Bakteri Asam Laktat (BAL). Bakteri Asam Laktat (BAL) memiliki enzim proteolitik yang mampu menghidrolisa peptida bioaktif yang terikat dalam protein prekusor, sehingga lepas dan akhirnya menghasilkan produk olahan susu dengan kandungan peptida bioaktif yang cukup tinggi. Beberapa fungsi biologis peptida bioaktif yang sudah diketahui, salah satunya sebagai antioksidan. Beberapa pepti- da bioaktif susu diketahui memegang peranan pada metabo- lisme oksidatif tubuh, yang berfungsi untuk mempertahank- an kehidupan sel tubuh. Derivat antioksidan peptida bioaktif susu terdiri dari lima sampai sebelas asam amino hidrofobik, antara lain seperti proline, histidine, tyrosine, dan trypto- phan, terutama yang telah terhidrolisa oleh aktivitas enzim proteolitik. Derivat antioksidan peptida bioaktif tersebut memiliki kemampuan mencegah kerusakan komponen seluler dengan mencegah pembentukan radikal dan memiliki efek scavenging radicals (Haskito et al., 2020) . Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui manfaat pemberian yoghurt rosella ungu, sebagai sumber antioksi- dan, dalam mencegah kerusakan yang terjadi pada ginjal dan ileum Rattus norvegicus model toksisitas Rhodamin B dan sakarin.
Starter Yoghurt
Sebanyak 50 ml susu dipasteurisasi dengan teknik High Temparture Short Time (HTST), kemudian didinginkan hingga suhunya mencapai 45 ℃ . Dilakukan inokulasi pada susu pasteurisasi dengan starter powder Yogourmet® (berisi BAL Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus , dan Lactobacillus acidophilus ) sebanyak 3% (g/v), dihomogenkan, diinkubasi pada inkubator selama ±6 jam dengan suhu 45 ℃ hingga mencapai pH 4,4-4,5, disimpan di dalam kulkas bersuhu ±4 ℃ .

## Ekstrak Rosella Ungu
Kelopak bunga rosella ungu yang sudah kering didapatkan dari Kota Kediri, Provinsi Jawa Timur, dilakukan penghalu- san dengan mesin blender dan diayak dengan saringan 60-mesh hingga didapatkan bentuk seperti serbuk. Sebanyak 20 gram serbuk rosella ungu dilarutkan dalam 100 ml akuades, dihomogenkan, dipasteurisasi selama 30 menit dalam waterbath dengan suhu 63-65°C. Setelah 30 menit, cairan dan supernatan dipisahkan menggunakan corong dan kertas saring, kemudian cairan yang diproleh disimpan di dalam kulkas bersuhu ±4 ℃ .
Yoghurt Rosella Ungu

## HASIL

## Analisis Data
Parameter pada penelitian yang digunakan adalah dengan melihat perubahan pada histopatologi glomerulus dan tubulus ginjal, serta submukosa, sel goblet, dan otot ileum Rattus novergicus. Histopatologi ginjal dan ileum yang diamati dilakukan skoring. Data yang diperoleh dianalisis dengan uji Kruskal-Wallis dan dilanjutkan uji Mann-Whit- ney untuk mengetahui perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan. Analisis data menggunakan aplikasi IBM SPSS Statistics 26.

## Table 1.
Kriteria Skoring Ginjal (Khalid et. al., 2016).

## Yoghurt
Sebanyak 100 ml susu dipasteurisasi dengan teknik HTST, kemudian didinginkan hingga suhunya mencapai 45 ℃ . Dilakukan inokulasi pada susu pasteurisasi dengan starter yoghurt sebanyak 3% (v/v), dihomogenkan, diinkubasi pada inkubator selama ±4 jam dengan suhu 45 ℃ hingga mencapai pH 4,5-5, disimpan di dalam kulkas bersuhu ±4 ℃ .
Sebanyak 15% (v/v) ekstrak rosella ungu ditambahkan ke dalam 100 ml yoghurt, dihomogenkan menggunakan blend- er , disimpan di dalam kulkas bersuhu ±4 ℃ .
Pemberian Rhodamin B, Sakarin, dan Yoghurt Rosella Ungu
Yoghurt rosella ungu diberikan pada kelompok P1, P2, dan P3 per-oral, sebanyak 1 ml/ekor dengan sonde lambung pada pukul 10.00 WIB setiap hari selama 14 hari. Rhodamin B dan sakarin diberikan pada kelompok K(+R), K(+S), dan K(+K) per-oral dengan sonde lambung, dengan dosis rhodamin B 22,5 mg/kgBB dan sakarin 157,7 mg/kgBB pada pukul 14.00 WIB setiap hari selama 14 hari.

## Kelompok Perlakuan
Pada penelitian ini terdapat 7 kelompok perlakuan, yaitu: K(-): kelompok tidak diberi perlakuan; K(+R): kelompok hanya diberi rhodamin B dosis 22,5 mg/kg BB; K(+S): kelom- pok hanya diberi sakarin dosis 157,7 mg/kg BB; K(+K): kelompok diberi rhodamin B dan sakarin masing-masing dosis 22,5 mg/kg BB dan 157,7 mg/kg BB; P1: kelompok diberi yoghurt rosella ungu sebanyak 1 ml/ekor dan rhodamin B  dosis 22,5 mg/kg BB; P2: kelompok diberi yoghurt rosella ungu sebanyak 1 ml/ekor dan sakarin dosis 157,7 mg/kg BB; P3: kelompok diberi yoghurt ekstrak rosella ungu sebanyak 1 ml/ekor, rhodamine B dosis 22,5 mg/kg BB dan sakarin dosis 157,7 mg/kg BB.

## Koleksi Sampel
Nekropsi dilakukan pada hari ke-15 setelah perlakuan peneli- tian. Hewan coba dieuthanasi dengan metode overdosis anestesi menggunakan kombinasi ketamine 100 mg/ml dan xylazine 20 mg/ml, kemudian dilakukan dislokasi os cervica- lis . Hewan coba direbah dorsal dan dibedah bagian abdomen untuk diambil ginjal dan ileum. Sampel ginjal dan ileum disimpan dalam pot organ berisi formalin 10% dengan perbandingan volume organ dan formalin 10% yaitu 1:20. Preparat histopatologi ginjal dan ileum dibuat dengan pewar- naan Hematoksilin-Eosin (HE).

## Pengamatan Histopatologi Ginjal dan Ileum
Diamati preparat histopatologi ginjal dan ileum masing-mas- ing pada perbesaran 100x dan 400x menggunakan mikroskop cahaya. Selanjutnya, gambaran yang didapat dilakukan skoring. Kriteria skoring yang digunakan dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Jenis Jaringan  Kerusakan Score Tubulus Tidak ada perubahan 0 Hilangnya Brush Border <25% dari sel tubular 1 Hilangnya Brush  Border >25%  dari  sel  tubular,  membran basal menebal 2 Inflamasi, nekrosis <60% dari sel tubular 3 Nekrosis >60% dari sel tubular 4 Glomerulus Tidak ada perubahan 0 Kapsula Bowman menebal 1 Glomerular tuft 2 Fibrosis glomerulus 3
Table 2. Kriteria Skoring Ileum (Koelink et. al., 2018).
Jenis Jaringan  Kerusakan Score Submukosa Tidak ada perubahan 0 Sel infalamasi individu 1 Cluster sel inflamasi 2 Cluster besar sel inflamasi 3 Sel goblet yang hilang Tidak ada perubahan 0 <10% 1 10–50% 2 >50% 3 Otot Tidak ada perubahan 0 Sedikit menebal 1 Tebal 2 Penebalan berlebihan 3

## Histopatologi Ginjal
Pada Tabel 3 dan Gambar 2, dapat dilihat bahwa rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal kelompok K(-) yang didapatkan masing-masing sebesar 0.25 dan 0.5. Jika diband- ingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(-) memiliki rata-rata skor paling rendah, yang berarti sedikit terjadinya kerusakan atau hampir tidak ada perubahan pada kelompok tersebut. Kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.6 dan 1.8. Jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor paling tinggi. Oleh karena itu, kelompok K(+K) mengalami kerusakan yang paling parah dibanding kelompok lainnya, seperti terjadi
glomerular tuft pada glomerulus, serta terjadi inflamasi dan nekrosis <60% pada tubulus. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.55 dan 1.75. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor tertinggi kedua setelah kelompok K(+K). Oleh karena itu, kelompok K(+R) mengalami kerusakan yang cukup parah dibanding kelompok K(+S), seperti terjadi glomerular tuft pada glomerulus dan terjadi penebalan membran basal pada tubulus. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.35 dan 1.7. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata skor tertinggi ketiga setelah kelompok K(+K) dan K(+R). Oleh karena itu, kelompok K(+S) mengalami kerusakan namun tidak lebih parah jika dibanding kelompok K(+K) dan K(+R). Perubah- an yang terjadi seperti, mengalami hilangnya brush border lebih dari 25% pada tubulus, namun glomerulus normal. Histopatologi kerusakan glomerulus dan tubulus ginjal dapat dilihat pada Gambar 1.
Salmaa, D., et.al. 2023. Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt
Gambar 1. Histopatologi Ginjal Rattus novergicus. Keterangan: glomerular tuft (panah putih); penebalan membran basal (panah merah); hilangnya brush border (panah hijau); inflamasi dan nekrosis <60% (panah kuning); penebalan kapsula bowman (panah biru). HE: 400x
Pada Tabel 3 dan Gambar 2, dapat dilihat bahwa rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal kelompok K(-) yang didapatkan masing-masing sebesar 0.25 dan 0.5. Jika diband- ingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(-) memiliki rata-rata skor paling rendah, yang berarti sedikit terjadinya kerusakan atau hampir tidak ada perubahan pada kelompok tersebut. Kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.6 dan 1.8. Jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor paling tinggi. Oleh karena itu, kelompok K(+K) mengalami kerusakan yang paling parah dibanding kelompok lainnya, seperti terjadi
glomerular tuft pada glomerulus, serta terjadi inflamasi dan nekrosis <60% pada tubulus. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.55 dan 1.75. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor tertinggi kedua setelah kelompok K(+K). Oleh karena itu, kelompok K(+R) mengalami kerusakan yang cukup parah dibanding kelompok K(+S), seperti terjadi glomerular tuft pada glomerulus dan terjadi penebalan membran basal pada tubulus. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.35 dan 1.7. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata skor tertinggi ketiga setelah kelompok K(+K) dan K(+R). Oleh karena itu, kelompok K(+S) mengalami kerusakan namun tidak lebih parah jika dibanding kelompok K(+K) dan K(+R). Perubah- an yang terjadi seperti, mengalami hilangnya brush border lebih dari 25% pada tubulus, namun glomerulus normal. Histopatologi kerusakan glomerulus dan tubulus ginjal dapat dilihat pada Gambar 1.
Pada Tabel 3 dan Gambar 2, dapat dilihat bahwa rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal kelompok K(-) yang didapatkan masing-masing sebesar 0.25 dan 0.5. Jika diband- ingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(-) memiliki rata-rata skor paling rendah, yang berarti sedikit terjadinya kerusakan atau hampir tidak ada perubahan pada kelompok tersebut. Kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.6 dan 1.8. Jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor paling tinggi. Oleh karena itu, kelompok K(+K) mengalami kerusakan yang paling parah dibanding kelompok lainnya, seperti terjadi
Kelompok Glomerulus Tubulus K(-) 0.25 ± 0.19 a 0.50 ± 0.11 a K(+R) 1.55 ± 0.30 b 1.75 ± 0.50 b K(+S) 1.35 ± 0.10 b 1.70 ± 0.20 b K(+K) 1.60 ± 0.34 b 1.80 ± 0.36 b P1 0.60 ± 0.43 a 0.80 ± 0.28 a P2 0.50 ± 0.25 a 0.75 ± 0.34 a P3 0.65 ± 0.57 a 0.90 ± 0.41 a

## Tabel 3.
Rata-Rata Skoring Histopatologi Ginjal
Keterangan: Hasil ditunjukkan sebagai nilai rata-rata ± SD dengan superskrip huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan nyata (p<0.05)
Pada Tabel 3 dan Gambar 2, dapat dilihat bahwa rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal kelompok P1 yang didapatkan masing-masing sebesar 0.6 dan 0.8. Kelompok P2 memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 0.5 dan 0.75. Kelompok P3 memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 0.65 dan 0.9. Pada kelompok P1, P2, dan P3 didapat- kan bahwa rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal pada kelompok tersebut sudah mendekati rata-rata skor glomeru- lus dan tubulus ginjal kelompok K(-). Dapat disimpulkan bahwa pemberian yoghurt rosella ungu dapat mencegah terjadinya kerusakan pada ginjal, namun belum maksimal. Hal tersebut dapat disebabkan karena kemungkinan penggu- naan konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt, yaitu 15% (v/v) masih kurang efektif dalam menangani rhodamin B dan sakarin, sehingga pada kelom- pok P1, P2, dan P3 masih dapat ditemukan adanya kerusakan pada ginjal, seperti pada kelompok P1 mengalami penebalan kapsula bowman pada glomerulus, kelompok P2 mengalami hilangnya brush border lebih dari 25% pada tubulus, dan kelompok P3 mengalami glomerular tuft pada glomerulus.
Gambar 2. Diagram Batang Rata-Rata Skoring Histopatologi Ginjal

## Histopatologi Ileum
Pada Tabel 4 dan Gambar 4, dapat dilihat bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok K(-) yang didapatkan masing-masing sebesar 1.05, 0.8, dan 0.45. Jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(-) memiliki rata-rata skor paling rendah, yang berarti sedikit terjadinya kerusakan atau hampir tidak ada perubahan pada kelompok tersebut. Kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.9, 1.9, dan 1.5. Jika dibandingkan
glomerular tuft pada glomerulus, serta terjadi inflamasi dan nekrosis <60% pada tubulus. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.55 dan 1.75. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor tertinggi kedua setelah kelompok K(+K). Oleh karena itu, kelompok K(+R) mengalami kerusakan yang cukup parah dibanding kelompok K(+S), seperti terjadi glomerular tuft pada glomerulus dan terjadi penebalan membran basal pada tubulus. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata skor glomerulus dan tubulus ginjal masing-masing sebesar 1.35 dan 1.7. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata skor tertinggi ketiga setelah kelompok K(+K) dan K(+R). Oleh karena itu, kelompok K(+S) mengalami kerusakan namun tidak lebih parah jika dibanding kelompok K(+K) dan K(+R). Perubah- an yang terjadi seperti, mengalami hilangnya brush border lebih dari 25% pada tubulus, namun glomerulus normal. Histopatologi kerusakan glomerulus dan tubulus ginjal dapat dilihat pada Gambar 1.
dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor paling tinggi. Oleh karena itu, kelom- pok K(+K) mengalami kerusakan yang paling parah diband- ing kelompok lainnya, seperti terjadi penebalan pada otot, hilangnya sel goblet 10-50%, dan terdapat kluster besar sel inflamasi pada submukosa. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.8, 1.75, dan 1.45. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor tertinggi kedua setelah kelompok K(+K). Oleh karena itu, kelompok K(+R) mengalami kerusakan yang cukup parah dibanding kelompok K(+S), seperti terjadi hilangnya sel goblet 10-50% dan terdapat kluster sel inflamasi pada submukosa. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.75, 1.65, dan 1.35. Kelompok K(+S) memiliki rata- rata skor tertinggi ketiga setelah kelompok K(+K) dan K(+R). Oleh karena itu, kelompok K(+S) mengalami kerusakan, namun tidak lebih parah jika diband- ing kelompok K(+K) dan K(+R). Perubahan yang terjadi seperti, otot mengalami penebalan, dan terdapat sel inflamasi individu pada submukosa. Histopatologi kerusakan submu- kosa, sel goblet, dan otot ileum dapat dilihat pada Gambar 3. Pada Tabel 4 dan Gambar 4, dapat dilihat bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok P1 yang didapatkan masing-masing sebesar 1.15, 1.0, dan 0.75. Kelompok P2 memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.1, 0.85, dan 0.65. Kelompok P3 memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok P3 yang didapatkan masing-mas- ing sebesar 1.2, 1.15, dan 0.8. Pada kelompok P1, P2, dan P3 didapatkan bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum pada kelompok tersebut sudah mendekati rata-ra- ta skor kelompok K(-). Dapat disimpulkan bahwa pemberian yoghurt ekstrak rosella ungu dapat mencegah terjadinya
kerusakan pada ileum, namun belum maksimal. Hal tersebut juga diduga disebabkan karena kemungkinan penggunaan konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt, yaitu 15% (v/v) masih kurang efektif dalam menan- gani rhodamin B dan sakarin, sehingga, pada kelompok P1, P2, dan P3 masih dapat ditemukan adanya kerusakan pada ileum, seperti pada kelompok P1 mengalami penebalan pada otot, kelompok P2 mengalami kluster sel inflamasi pada submukosa, dan kelompok P3 mengalami hilangnya sel
Salmaa, D., et.al. 2023. Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt
Pada Tabel 4 dan Gambar 4, dapat dilihat bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok K(-) yang didapatkan masing-masing sebesar 1.05, 0.8, dan 0.45. Jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(-) memiliki rata-rata skor paling rendah, yang berarti sedikit terjadinya kerusakan atau hampir tidak ada perubahan pada kelompok tersebut. Kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.9, 1.9, dan 1.5. Jika dibandingkan
Gambar 3. Histopatologi Ileum Tikus Putih ( Rattus novergicus ).
Keterangan: sel-sel inflamasi (panah merah); penebalan pada otot (panah hijau); hilangnya sel goblet (panah kuning). H.E:100x
dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor paling tinggi. Oleh karena itu, kelom- pok K(+K) mengalami kerusakan yang paling parah diband- ing kelompok lainnya, seperti terjadi penebalan pada otot, hilangnya sel goblet 10-50%, dan terdapat kluster besar sel inflamasi pada submukosa. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.8, 1.75, dan 1.45. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor tertinggi kedua setelah kelompok K(+K). Oleh karena itu, kelompok K(+R) mengalami kerusakan yang cukup parah dibanding kelompok K(+S), seperti terjadi hilangnya sel goblet 10-50% dan terdapat kluster sel inflamasi pada submukosa. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.75, 1.65, dan 1.35. Kelompok K(+S) memiliki rata- rata skor tertinggi ketiga setelah kelompok K(+K) dan K(+R). Oleh karena itu, kelompok K(+S) mengalami kerusakan, namun tidak lebih parah jika diband- ing kelompok K(+K) dan K(+R). Perubahan yang terjadi seperti, otot mengalami penebalan, dan terdapat sel inflamasi individu pada submukosa. Histopatologi kerusakan submu- kosa, sel goblet, dan otot ileum dapat dilihat pada Gambar 3. Pada Tabel 4 dan Gambar 4, dapat dilihat bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok P1 yang didapatkan masing-masing sebesar 1.15, 1.0, dan 0.75. Kelompok P2 memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.1, 0.85, dan 0.65. Kelompok P3 memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok P3 yang didapatkan masing-mas- ing sebesar 1.2, 1.15, dan 0.8. Pada kelompok P1, P2, dan P3 didapatkan bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum pada kelompok tersebut sudah mendekati rata-ra- ta skor kelompok K(-). Dapat disimpulkan bahwa pemberian yoghurt ekstrak rosella ungu dapat mencegah terjadinya
kerusakan pada ileum, namun belum maksimal. Hal tersebut juga diduga disebabkan karena kemungkinan penggunaan konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt, yaitu 15% (v/v) masih kurang efektif dalam menan- gani rhodamin B dan sakarin, sehingga, pada kelompok P1, P2, dan P3 masih dapat ditemukan adanya kerusakan pada ileum, seperti pada kelompok P1 mengalami penebalan pada otot, kelompok P2 mengalami kluster sel inflamasi pada submukosa, dan kelompok P3 mengalami hilangnya sel
Ginjal merupakan organ ekskresi utama yang penting dalam mengeluarkan sisa-sisa metabolisme tubuh, termasuk zat-zat toksik yang masuk kedalam tubuh. Oleh karena itu, ginjal menjadi salah satu sasaran utama yang terkena efek toksik. Bahan-bahan yang bersifat toksik dapat menyebabkan kerusakan pada ginjal dalam bentuk perubahan struktur dan fungsi ginjal (Mayori et al., 2019) . Pada histopatologi ginjal, glomerulus yang membesar terjadi karena adanya interaksi pembuluh darah dengan zat toksik, sehingga terjadi vasodi- latasi yang menyebabkan kapiler pada glomerulus membesar. Perubahan tersebut akan menyebabkan aliran darah tergang-
Salmaa, D., et.al. 2023. Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt
Pada Tabel 4 dan Gambar 4, dapat dilihat bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok K(-) yang didapatkan masing-masing sebesar 1.05, 0.8, dan 0.45. Jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(-) memiliki rata-rata skor paling rendah, yang berarti sedikit terjadinya kerusakan atau hampir tidak ada perubahan pada kelompok tersebut. Kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.9, 1.9, dan 1.5. Jika dibandingkan
Kelompok Submukosa Sel Goblet Otot K(-) 1.05 ± 0.10 a 0.80 ± 0.36 a 0.45 ± 0.25 a K(+R) 1.80 ± 0.36 b 1.75 ± 0.19 b 1.45 ± 0.19 b K(+S) 1.75 ± 0.19 b 1.65 ± 0.25 b 1.35 ± 0.19 b K(+K) 1.90 ± 0.75 b 1.65 ± 0.25 b 1.50 ± 0.11 b P1 1.15 ± 0.10 a 1.00 ± 0.43 a 0.75 ± 0.34 a P2 1.10 ± 0.11 a 0.85 ± 0.34 a 0.65 ± 0.30 a P3 1.20 ± 0.16 a 1.15 ± 0.30 a 0.65 ± 0.30 a
Gambar 4. Diagram Batang Rata-Rata Skoring Histopatologi Ileum
Tabel 4. Rata-Rata Skoring Histopatologi Ileum
Keterangan: Hasil ditunjukkan sebagai nilai rata-rata ± SD dengan superskrip huruf yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan nyata (p<0.05)
PEMBAHASAN
dengan kelompok perlakuan lainnya, kelompok K(+K) memiliki rata-rata skor paling tinggi. Oleh karena itu, kelom- pok K(+K) mengalami kerusakan yang paling parah diband- ing kelompok lainnya, seperti terjadi penebalan pada otot, hilangnya sel goblet 10-50%, dan terdapat kluster besar sel inflamasi pada submukosa. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.8, 1.75, dan 1.45. Kelompok K(+R) memiliki rata-rata skor tertinggi kedua setelah kelompok K(+K). Oleh karena itu, kelompok K(+R) mengalami kerusakan yang cukup parah dibanding kelompok K(+S), seperti terjadi hilangnya sel goblet 10-50% dan terdapat kluster sel inflamasi pada submukosa. Kelompok K(+S) memiliki rata-rata submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.75, 1.65, dan 1.35. Kelompok K(+S) memiliki rata- rata skor tertinggi ketiga setelah kelompok K(+K) dan K(+R). Oleh karena itu, kelompok K(+S) mengalami kerusakan, namun tidak lebih parah jika diband- ing kelompok K(+K) dan K(+R). Perubahan yang terjadi seperti, otot mengalami penebalan, dan terdapat sel inflamasi individu pada submukosa. Histopatologi kerusakan submu- kosa, sel goblet, dan otot ileum dapat dilihat pada Gambar 3. Pada Tabel 4 dan Gambar 4, dapat dilihat bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok P1 yang didapatkan masing-masing sebesar 1.15, 1.0, dan 0.75. Kelompok P2 memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum masing-masing sebesar 1.1, 0.85, dan 0.65. Kelompok P3 memiliki rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum kelompok P3 yang didapatkan masing-mas- ing sebesar 1.2, 1.15, dan 0.8. Pada kelompok P1, P2, dan P3 didapatkan bahwa rata-rata skor submukosa, sel goblet, dan otot ileum pada kelompok tersebut sudah mendekati rata-ra- ta skor kelompok K(-). Dapat disimpulkan bahwa pemberian yoghurt ekstrak rosella ungu dapat mencegah terjadinya
kerusakan pada ileum, namun belum maksimal. Hal tersebut juga diduga disebabkan karena kemungkinan penggunaan konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt, yaitu 15% (v/v) masih kurang efektif dalam menan- gani rhodamin B dan sakarin, sehingga, pada kelompok P1, P2, dan P3 masih dapat ditemukan adanya kerusakan pada ileum, seperti pada kelompok P1 mengalami penebalan pada otot, kelompok P2 mengalami kluster sel inflamasi pada submukosa, dan kelompok P3 mengalami hilangnya sel
gu dan sel darah merah terjebak dalam kapiler, sehingga sirkulasi darah menjadi tidak lancar. Selain itu, membesarnya glomerulus juga dapat disebabkan karena peradangan dan akan mengakibatkan terganggunya fungsi produksi filtrat dan kontrol komposisi filtrat, yang akan mempengaruhi daya filtrasi glomerulus, sehingga daya saring pada glomerulus menjadi berkurang. Nekrosis merupakan tingkat kerusakan pada tubulus yang lebih parah setelah terganggunya permea- bilitas membran dengan adanya bengkak keruh yang diikuti oleh lisis, yang ditandai dengan penyerapan warna oleh inti berkurang, dan terlepasnya sel-sel tubulus ke dalam lumen. Kerusakan pada tubulus dapat menyebabkan terganggunya proses rearbsorbsi dan sekresi. Jika proses rearbsorbsi terganggu, zat yang masih dibutuhkan oleh tubuh tidak dapat diserap kembali sehingga zat tersebut dapat keluar melalui urin, sedangkan, jika proses sekresi terganggu, zat yang tidak dibutuhkan oleh tubuh tidak dapat dikeluarkan melalui urin sehingga bersifat toksik dan dapat merusak ginjal (Togatorop et al., 2016; Roosdiana et al., 2017) . Yoghurt merupakan hasil dari fermentasi susu sapi yang memiliki kandungan antioksidan yang banyak, dikarenakan kandungan peptide bioatif di dalam yoghurt seperti seperti proline, histidine, tyrosine, dan tryptophan (Haskito et al., 2020) . Rosella ungu diketahui memiliki sifat antioksidan karena adanya kandungan zat bioaktif berupa antosianin dan flavonoid, yang jika ditambahkan kedalam yohgurt dapat meningkatkan kandungan antioksidan dari yoghurt itu sendiri (Ratna et al., 2022) . Pada penelitian ini, flavonoid yang terkandung dalam rosella ungu memiliki aktivitas diuretikum yang dapat meningkatkan urinasi, pengeluaran elektrolit, dan dapat meningkatkan kecepatan filtrasi glomer- ulus, sehingga zat toksik yang masuk kedalam ginjal dapat dikeluarkan secara cepat dan meminimalisir terjadinya pengendapan rhodamin B dan sakarin pada ginjal. Selain itu, flavonoid berfungsi sebagai antioksidan yang dapat melind- ungi struktur sel epitel pada ginjal, serta dapat menghambat proses inflamasi pada daerah glomerulus dan tubulus dengan menghambat aktivitas enzim-enzim inflamasi dan pelepasan sitokin (Ratna et al., 2022) . Sebagai antioksidan, flavonoid pada rosella ungu berperan dalam menangkap dan menang- kal radikal bebas ( scavenger ) dengan cara mendonorkan satu atom hidrogen dari gugus hidroksil fenolik pada saat bereaksi dengan radikal bebas (Kusumastuti, 2014) .
Pada ginjal, antosianin yang terkandung dalam rosella ungu akan terakumulasi kedalam sel endotel dan mampu melind- ungi sel endotel dari pengaruh radikal bebas, sehingga mampu mempertahankan Nitric Oxide Synthase (NOS) sebagai vasodilator yang kuat. Stress oksidatif yang terjadi dapat mengurangi bioavailabilitas NOS, sehingga terjadi respon relaksasi pembuluh darah. Sebagai antioksidan, antosianin memiliki struktur ikatan rangkap terkonjugasi yang mampu menghancurkan dan menangkal radikal bebas, serta memangsa berbagai jenis radikal bebas turunan oksigen reaktif, seperti hidroksil (OH), peroksil (ROO), dan oksigen tunggal (O2) (Priska et al., 2018) . Oleh karena itu, yoghurt rosella ungu terbukti dapat mempengaruhi daya tahan sel serta dapat membantu memperbaiki struktur sel pada ileum,
namun pada penelitian ini pencegahan kerusakan yang belum optimal dimungkinkan dari konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan ke dalam yoghurt masih kurang efektif.
Ileum merupakan bagian dari usus halus yang berfungsi untuk mengabsorbsi zat-zat makanan yang masuk ke dalam tubuh seperti asam amino dan asam lemak, serta produk akhir pencernaan, seperti protein, karbohidrat, dan lemak, sehingga, jika terdapat zat-zat toksik yang masuk ke dalam tubuh akan diserap oleh mukosa ileum, sehingga dapat mengakibatkan kerusakan pada ileum. Pada histopatologi ileum, sel goblet yang terdapat pada lapisan mukosa ileum berfungsi untuk melindungi permukaan ileum dari patogen dengan cara mensekresikan mukus berbentuk gel. Oleh karena itu, hilangnya sel goblet dapat mengganggu produkti- vitas ileum sehingga patogen dapat masuk dengan mudah (Wiratmoko and Rafie, 2014) . Adanya sel inflamasi atau sel radang pada ileum yang disebabkan oleh bahan kimia bersi- fat toksik, terbentuk karena adanya reaksi tubuh terhadap trauma pada jaringan. Peradangan sendiri berfungsi untuk menghancurkan atau membatasi agen yang merugikan, serta memicu terjadinya serangkaian proses pemulihan dan meng- ganti jaringan yang rusak. Peradangan pada ileum ditandai dengan dinding yang menebal, vili menjadi lebih panjang, dan jaringan limfatik menjadi lebih banyak (Prayoga et al.,
2016) .
Yoghurt merupakan hasil dari fermentasi susu sapi yang memiliki kandungan antioksidan yang banyak, dikarenakan ada kandungan peptida bioatif didalam yoghurt seperti proline, histidine, tyrosine, dan tryptophan (Haskito et al., 2020) .  Pada penelitian ini, flavonoid yang terkandung dalam rosella ungu berperan sebagai stimulus enzim COX I yang membuat prostaglandin meningkat, sehingga terjadi pening- katan produksi mukus pada sel goblet yang berfungsi sebagai protektif usus dari bakteri endogen dan eksogen yang dapat menyebabkan inflamasi dan kerusakan pada ileum serta melindungi mukosa ileum (Kusumastuti, 2014; Ratna et al., 2022) . Sebagai antioksidan, flavonoid bekerja dengan cara menghambat pembentukan radikal bebas ( free radical scavenging ) dan menghambat pembentukan nitrit oksida yang dapat menyebabkan kerusakan oksidatif. Flavonoid juga menghambat pembentukan enzim proinflamasi yaitu siklooksigenase dan lipooksigenase, yang menyebabkan penurunan mediator-mediator penting inflamasi seperti prostaglandin, leukotrien, dan nitrit oksida (Prayoga et al., 2016) . Pada ileum, antosianin yang terkandung didalam rosella ungu memiliki aktivitas antioksidan yang mampu menghambat oksidasi asam arakidonat menjadi endoper- oksida, sehingga oksigen reaktif dan mediator kimia penye- bab radang tidak dapat terbentuk. Selain itu, antioksidan dalam antosianin mampu menurunkan aktivitas enzim lipooksiginase, sehingga leukotrien yang dapat menginakti- vasi leukosit yang memacu terjadinya peradangan tidak dapat terbentuk. Sebagai antioksidan, antosianin bekerja sebagai peredam atau pemerangkap, dimana molekul tersebut dapat bereaksi terhadap radikal bebas dan menetralkan radikal bebas (Priska et al., 2018) . Oleh karena itu, yoghurt rosella
ungu terbukti dapat mempengaruhi daya tahan sel serta dapat membantu memperbaiki struktur sel pada ileum, namun pada penelitian ini pencegahan kerusakan yang belum optimal dimungkinkan dari konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt masih kurang efektif.
Ginjal merupakan organ ekskresi utama yang penting dalam mengeluarkan sisa-sisa metabolisme tubuh, termasuk zat-zat toksik yang masuk kedalam tubuh. Oleh karena itu, ginjal menjadi salah satu sasaran utama yang terkena efek toksik. Bahan-bahan yang bersifat toksik dapat menyebabkan kerusakan pada ginjal dalam bentuk perubahan struktur dan fungsi ginjal (Mayori et al., 2019) . Pada histopatologi ginjal, glomerulus yang membesar terjadi karena adanya interaksi pembuluh darah dengan zat toksik, sehingga terjadi vasodi- latasi yang menyebabkan kapiler pada glomerulus membesar.
Perubahan tersebut akan menyebabkan aliran darah tergang-
gu dan sel darah merah terjebak dalam kapiler, sehingga sirkulasi darah menjadi tidak lancar. Selain itu, membesarnya glomerulus juga dapat disebabkan karena peradangan dan akan mengakibatkan terganggunya fungsi produksi filtrat dan kontrol komposisi filtrat, yang akan mempengaruhi daya filtrasi glomerulus, sehingga daya saring pada glomerulus menjadi berkurang. Nekrosis merupakan tingkat kerusakan pada tubulus yang lebih parah setelah terganggunya permea- bilitas membran dengan adanya bengkak keruh yang diikuti oleh lisis, yang ditandai dengan penyerapan warna oleh inti berkurang, dan terlepasnya sel-sel tubulus ke dalam lumen. Kerusakan pada tubulus dapat menyebabkan terganggunya proses rearbsorbsi dan sekresi. Jika proses rearbsorbsi terganggu, zat yang masih dibutuhkan oleh tubuh tidak dapat diserap kembali sehingga zat tersebut dapat keluar melalui urin, sedangkan, jika proses sekresi terganggu, zat yang tidak dibutuhkan oleh tubuh tidak dapat dikeluarkan melalui urin sehingga bersifat toksik dan dapat merusak ginjal (Togatorop et al., 2016; Roosdiana et al., 2017) .
Yoghurt merupakan hasil dari fermentasi susu sapi yang memiliki kandungan antioksidan yang banyak, dikarenakan kandungan peptide bioatif di dalam yoghurt seperti seperti proline, histidine, tyrosine, dan tryptophan (Haskito et al., 2020) . Rosella ungu diketahui memiliki sifat antioksidan karena adanya kandungan zat bioaktif berupa antosianin dan flavonoid, yang jika ditambahkan kedalam yohgurt dapat meningkatkan kandungan antioksidan dari yoghurt itu sendiri (Ratna et al., 2022) . Pada penelitian ini, flavonoid yang terkandung dalam rosella ungu memiliki aktivitas diuretikum yang dapat meningkatkan urinasi, pengeluaran elektrolit, dan dapat meningkatkan kecepatan filtrasi glomer- ulus, sehingga zat toksik yang masuk kedalam ginjal dapat dikeluarkan secara cepat dan meminimalisir terjadinya pengendapan rhodamin B dan sakarin pada ginjal. Selain itu, flavonoid berfungsi sebagai antioksidan yang dapat melind- ungi struktur sel epitel pada ginjal, serta dapat menghambat proses inflamasi pada daerah glomerulus dan tubulus dengan menghambat aktivitas enzim-enzim inflamasi dan pelepasan sitokin (Ratna et al., 2022) . Sebagai antioksidan, flavonoid pada rosella ungu berperan dalam menangkap dan menang- kal radikal bebas ( scavenger ) dengan cara mendonorkan satu atom hidrogen dari gugus hidroksil fenolik pada saat bereaksi dengan radikal bebas (Kusumastuti, 2014) .
Pada ginjal, antosianin yang terkandung dalam rosella ungu akan terakumulasi kedalam sel endotel dan mampu melind- ungi sel endotel dari pengaruh radikal bebas, sehingga mampu mempertahankan Nitric Oxide Synthase (NOS) sebagai vasodilator yang kuat. Stress oksidatif yang terjadi dapat mengurangi bioavailabilitas NOS, sehingga terjadi respon relaksasi pembuluh darah. Sebagai antioksidan, antosianin memiliki struktur ikatan rangkap terkonjugasi yang mampu menghancurkan dan menangkal radikal bebas, serta memangsa berbagai jenis radikal bebas turunan oksigen reaktif, seperti hidroksil (OH), peroksil (ROO), dan oksigen tunggal (O2) (Priska et al., 2018) . Oleh karena itu, yoghurt rosella ungu terbukti dapat mempengaruhi daya tahan sel serta dapat membantu memperbaiki struktur sel pada ileum,
namun pada penelitian ini pencegahan kerusakan yang belum optimal dimungkinkan dari konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan ke dalam yoghurt masih kurang efektif.
Ileum merupakan bagian dari usus halus yang berfungsi untuk mengabsorbsi zat-zat makanan yang masuk ke dalam tubuh seperti asam amino dan asam lemak, serta produk akhir pencernaan, seperti protein, karbohidrat, dan lemak, sehingga, jika terdapat zat-zat toksik yang masuk ke dalam tubuh akan diserap oleh mukosa ileum, sehingga dapat mengakibatkan kerusakan pada ileum. Pada histopatologi ileum, sel goblet yang terdapat pada lapisan mukosa ileum berfungsi untuk melindungi permukaan ileum dari patogen dengan cara mensekresikan mukus berbentuk gel. Oleh karena itu, hilangnya sel goblet dapat mengganggu produkti- vitas ileum sehingga patogen dapat masuk dengan mudah (Wiratmoko and Rafie, 2014) . Adanya sel inflamasi atau sel radang pada ileum yang disebabkan oleh bahan kimia bersi- fat toksik, terbentuk karena adanya reaksi tubuh terhadap trauma pada jaringan. Peradangan sendiri berfungsi untuk menghancurkan atau membatasi agen yang merugikan, serta memicu terjadinya serangkaian proses pemulihan dan meng- ganti jaringan yang rusak. Peradangan pada ileum ditandai dengan dinding yang menebal, vili menjadi lebih panjang, dan jaringan limfatik menjadi lebih banyak (Prayoga et al., 2016) .
Yoghurt merupakan hasil dari fermentasi susu sapi yang memiliki kandungan antioksidan yang banyak, dikarenakan ada kandungan peptida bioatif didalam yoghurt seperti proline, histidine, tyrosine, dan tryptophan (Haskito et al., 2020) .  Pada penelitian ini, flavonoid yang terkandung dalam rosella ungu berperan sebagai stimulus enzim COX I yang membuat prostaglandin meningkat, sehingga terjadi pening- katan produksi mukus pada sel goblet yang berfungsi sebagai protektif usus dari bakteri endogen dan eksogen yang dapat menyebabkan inflamasi dan kerusakan pada ileum serta melindungi mukosa ileum (Kusumastuti, 2014; Ratna et al., 2022) . Sebagai antioksidan, flavonoid bekerja dengan cara menghambat pembentukan radikal bebas ( free radical scavenging ) dan menghambat pembentukan nitrit oksida yang dapat menyebabkan kerusakan oksidatif. Flavonoid juga menghambat pembentukan enzim proinflamasi yaitu siklooksigenase dan lipooksigenase, yang menyebabkan penurunan mediator-mediator penting inflamasi seperti prostaglandin, leukotrien, dan nitrit oksida (Prayoga et al., 2016) . Pada ileum, antosianin yang terkandung didalam rosella ungu memiliki aktivitas antioksidan yang mampu menghambat oksidasi asam arakidonat menjadi endoper- oksida, sehingga oksigen reaktif dan mediator kimia penye- bab radang tidak dapat terbentuk. Selain itu, antioksidan dalam antosianin mampu menurunkan aktivitas enzim lipooksiginase, sehingga leukotrien yang dapat menginakti- vasi leukosit yang memacu terjadinya peradangan tidak dapat terbentuk. Sebagai antioksidan, antosianin bekerja sebagai peredam atau pemerangkap, dimana molekul tersebut dapat bereaksi terhadap radikal bebas dan menetralkan radikal bebas (Priska et al., 2018) . Oleh karena itu, yoghurt rosella
ungu terbukti dapat mempengaruhi daya tahan sel serta dapat membantu memperbaiki struktur sel pada ileum, namun pada penelitian ini pencegahan kerusakan yang belum optimal dimungkinkan dari konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt masih kurang efektif.

## KESIMPULAN
Pemberian yoghurt rosella ungu dapat mencegah terjadinya kerusakan pada ginjal dan ileum Rattus novergicus akibat paparan radikal bebas dari rhodamin B dan sakarin meski- pun belum maksimal. Disarankan dapat dilakukan penelitian lanjutan dengan meningkatkan konsentrasi penambahan ekstrak rosella ungu >15% (v/v).

## UCAPAN  TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Lembaga Peneli- tian dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Brawi- jaya (LPPM UB) dan juga kepada Laboratorium Kesehatan Masyarakat Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universi- tas Brawijaya (FKH UB) sebagai fasilitator lokasi dilakukann- ya penelitian ini.

## KONFLIK KEPENTINGAN

## SUMBER PENDANAAN
Ginjal merupakan organ ekskresi utama yang penting dalam mengeluarkan sisa-sisa metabolisme tubuh, termasuk zat-zat toksik yang masuk kedalam tubuh. Oleh karena itu, ginjal menjadi salah satu sasaran utama yang terkena efek toksik. Bahan-bahan yang bersifat toksik dapat menyebabkan kerusakan pada ginjal dalam bentuk perubahan struktur dan fungsi ginjal (Mayori et al., 2019) . Pada histopatologi ginjal, glomerulus yang membesar terjadi karena adanya interaksi pembuluh darah dengan zat toksik, sehingga terjadi vasodi- latasi yang menyebabkan kapiler pada glomerulus membesar. Perubahan tersebut akan menyebabkan aliran darah tergang-
Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan dalam penelitian ini
Sumber pendanaan berasal dari Hibah Peneliti Pemula (HPP) Tahun 2022 Universitas Brawijaya
Salmaa, D., et.al. 2023. Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt
gu dan sel darah merah terjebak dalam kapiler, sehingga sirkulasi darah menjadi tidak lancar. Selain itu, membesarnya glomerulus juga dapat disebabkan karena peradangan dan akan mengakibatkan terganggunya fungsi produksi filtrat dan kontrol komposisi filtrat, yang akan mempengaruhi daya filtrasi glomerulus, sehingga daya saring pada glomerulus menjadi berkurang. Nekrosis merupakan tingkat kerusakan pada tubulus yang lebih parah setelah terganggunya permea- bilitas membran dengan adanya bengkak keruh yang diikuti oleh lisis, yang ditandai dengan penyerapan warna oleh inti berkurang, dan terlepasnya sel-sel tubulus ke dalam lumen. Kerusakan pada tubulus dapat menyebabkan terganggunya proses rearbsorbsi dan sekresi. Jika proses rearbsorbsi terganggu, zat yang masih dibutuhkan oleh tubuh tidak dapat diserap kembali sehingga zat tersebut dapat keluar melalui urin, sedangkan, jika proses sekresi terganggu, zat yang tidak dibutuhkan oleh tubuh tidak dapat dikeluarkan melalui urin sehingga bersifat toksik dan dapat merusak ginjal (Togatorop et al., 2016; Roosdiana et al., 2017) .
Yoghurt merupakan hasil dari fermentasi susu sapi yang memiliki kandungan antioksidan yang banyak, dikarenakan kandungan peptide bioatif di dalam yoghurt seperti seperti proline, histidine, tyrosine, dan tryptophan (Haskito et al., 2020) . Rosella ungu diketahui memiliki sifat antioksidan karena adanya kandungan zat bioaktif berupa antosianin dan flavonoid, yang jika ditambahkan kedalam yohgurt dapat meningkatkan kandungan antioksidan dari yoghurt itu sendiri (Ratna et al., 2022) . Pada penelitian ini, flavonoid yang terkandung dalam rosella ungu memiliki aktivitas diuretikum yang dapat meningkatkan urinasi, pengeluaran elektrolit, dan dapat meningkatkan kecepatan filtrasi glomer- ulus, sehingga zat toksik yang masuk kedalam ginjal dapat dikeluarkan secara cepat dan meminimalisir terjadinya pengendapan rhodamin B dan sakarin pada ginjal. Selain itu, flavonoid berfungsi sebagai antioksidan yang dapat melind- ungi struktur sel epitel pada ginjal, serta dapat menghambat proses inflamasi pada daerah glomerulus dan tubulus dengan menghambat aktivitas enzim-enzim inflamasi dan pelepasan sitokin (Ratna et al., 2022) . Sebagai antioksidan, flavonoid pada rosella ungu berperan dalam menangkap dan menang- kal radikal bebas ( scavenger ) dengan cara mendonorkan satu atom hidrogen dari gugus hidroksil fenolik pada saat bereaksi dengan radikal bebas (Kusumastuti, 2014) .
Pada ginjal, antosianin yang terkandung dalam rosella ungu akan terakumulasi kedalam sel endotel dan mampu melind- ungi sel endotel dari pengaruh radikal bebas, sehingga mampu mempertahankan Nitric Oxide Synthase (NOS) sebagai vasodilator yang kuat. Stress oksidatif yang terjadi dapat mengurangi bioavailabilitas NOS, sehingga terjadi respon relaksasi pembuluh darah. Sebagai antioksidan, antosianin memiliki struktur ikatan rangkap terkonjugasi yang mampu menghancurkan dan menangkal radikal bebas, serta memangsa berbagai jenis radikal bebas turunan oksigen reaktif, seperti hidroksil (OH), peroksil (ROO), dan oksigen tunggal (O2) (Priska et al., 2018) . Oleh karena itu, yoghurt rosella ungu terbukti dapat mempengaruhi daya tahan sel serta dapat membantu memperbaiki struktur sel pada ileum,
namun pada penelitian ini pencegahan kerusakan yang belum optimal dimungkinkan dari konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan ke dalam yoghurt masih kurang efektif.
Ileum merupakan bagian dari usus halus yang berfungsi untuk mengabsorbsi zat-zat makanan yang masuk ke dalam tubuh seperti asam amino dan asam lemak, serta produk akhir pencernaan, seperti protein, karbohidrat, dan lemak, sehingga, jika terdapat zat-zat toksik yang masuk ke dalam tubuh akan diserap oleh mukosa ileum, sehingga dapat mengakibatkan kerusakan pada ileum. Pada histopatologi ileum, sel goblet yang terdapat pada lapisan mukosa ileum berfungsi untuk melindungi permukaan ileum dari patogen dengan cara mensekresikan mukus berbentuk gel. Oleh karena itu, hilangnya sel goblet dapat mengganggu produkti- vitas ileum sehingga patogen dapat masuk dengan mudah (Wiratmoko and Rafie, 2014) . Adanya sel inflamasi atau sel radang pada ileum yang disebabkan oleh bahan kimia bersi- fat toksik, terbentuk karena adanya reaksi tubuh terhadap trauma pada jaringan. Peradangan sendiri berfungsi untuk menghancurkan atau membatasi agen yang merugikan, serta memicu terjadinya serangkaian proses pemulihan dan meng- ganti jaringan yang rusak. Peradangan pada ileum ditandai dengan dinding yang menebal, vili menjadi lebih panjang, dan jaringan limfatik menjadi lebih banyak (Prayoga et al., 2016) .
Yoghurt merupakan hasil dari fermentasi susu sapi yang memiliki kandungan antioksidan yang banyak, dikarenakan ada kandungan peptida bioatif didalam yoghurt seperti proline, histidine, tyrosine, dan tryptophan (Haskito et al.,
2020) .  Pada penelitian ini, flavonoid yang terkandung dalam rosella ungu berperan sebagai stimulus enzim COX I yang membuat prostaglandin meningkat, sehingga terjadi pening- katan produksi mukus pada sel goblet yang berfungsi sebagai protektif usus dari bakteri endogen dan eksogen yang dapat menyebabkan inflamasi dan kerusakan pada ileum serta melindungi mukosa ileum (Kusumastuti, 2014; Ratna et al., 2022) . Sebagai antioksidan, flavonoid bekerja dengan cara menghambat pembentukan radikal bebas ( free radical scavenging ) dan menghambat pembentukan nitrit oksida yang dapat menyebabkan kerusakan oksidatif. Flavonoid juga menghambat pembentukan enzim proinflamasi yaitu siklooksigenase dan lipooksigenase, yang menyebabkan penurunan mediator-mediator penting inflamasi seperti prostaglandin, leukotrien, dan nitrit oksida (Prayoga et al., 2016) . Pada ileum, antosianin yang terkandung didalam rosella ungu memiliki aktivitas antioksidan yang mampu menghambat oksidasi asam arakidonat menjadi endoper- oksida, sehingga oksigen reaktif dan mediator kimia penye- bab radang tidak dapat terbentuk. Selain itu, antioksidan dalam antosianin mampu menurunkan aktivitas enzim lipooksiginase, sehingga leukotrien yang dapat menginakti- vasi leukosit yang memacu terjadinya peradangan tidak dapat terbentuk. Sebagai antioksidan, antosianin bekerja sebagai peredam atau pemerangkap, dimana molekul tersebut dapat bereaksi terhadap radikal bebas dan menetralkan radikal bebas (Priska et al., 2018) . Oleh karena itu, yoghurt rosella

## KONTRIBUSI PENULIS
A.E.P.H berkontribusi dalam merancang desain penelitian. D.S., H.U., C.S., berkontribusi dalam mengambil data dan menginterpretasi data. A.E.P.H, A.S., A.N., berkontribusi dalam menyusun dan revisi naskah

## DAFTAR PUSTAKA

## PERSETUJUAN ETIK
Penggunaan hewan coba dalam penelitian ini telah mendapa- tkan sertifikat Laik Etik dari Komisi Laik Etik Penelitian Universitas Brawijaya Nomor 079-KEP-UB-2022.
Haskito, A.E.P., Mahdi, C., and Noviatri, A., 2020. Compari- son of Antioxidant Activity and Total Lactic Acid Bacteria (LAB) of Goat Milk Yoghurt, Goat Milk Yoghurt Fortified by Redand Black Rice Bran Flour. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 465 (1), 01-59. Khaira, K., 2010. Menangkal Radikal Bebas dengan Anti-Oksidan. Jurnal Sainstek, 2 (2), 183-187. Kusumastuti, I.R., 2014. Roselle (Hibiscus Sabdariffa Linn) Effects on Lowering Blood Pressure as a Treatment for Hypertension. Medical Journal of Lampung University ,
7 (4), 70-74.
Mayori, R., Marusin, N., and Tjong, D. H., 2019. Pengaruh Pemberian Rhodamin B terhadap Struktur Histologis Ginjal Mencit Putih (Mus musculus L.). Jurnal Biologi Universitas Andalas, 2 (01), 43-49. Olivea Herman, N., Ari Yusasrini, Nl., and Kencana Putra, I.N., 2020. Identifikasi  Sakarin , Siklamat ,dan  Natri- um Benzoat Serta Karakterisktik Susu Kedelai yang Dijual  dI Pasar Tradisional  Wilayah Jimbaran , Bali Selama Penyimpanan. Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan (ITEPA), 9 (4), 468. Prayoga, R. D., Kurnijasanti, R., and Hastutiek, P., 2016. Pengaruh Ekstrak Batang Pisang Ambon (Musa paradisiaca var. sapientum) Terhadap Gambaran Histoatologi Jejenum Tikus (Rattus norvegicus) Inflammatory Bowel Disease. Journal of Basic Medicine Veterinary, 5 (1), 16-21. Priska, M., Peni, N., Carvallo, L., and Dala N. Y., 2018. Review: Antosianin dan Pemanfaatannya. Cakra Kimia (Indonesian E-Journal of Applied Chemistry) ,  6  (2),
79-97.
Ratna, N.K.D.N., Setianingrum, A., Nugroho, W., Haskito, A.E.P., and Noviatri, A., 2022. Suplementasi Yogurt Fotifikasi Konsentrasi Bertingkat Ekstrak Rosella Ungu Terhadap Kadar Malondialdehida (MDA) dan Gamba- ran Histologi Ginjal Mencit. Jurnal Kajian Veteriner, 10 (1), 1–12.
Roosdiana, A., Oktavianie, D. A., and Lestari, Y. P., 2017. Pengaruh Rhodamin B dan Sakarin Terhadap Aktivitas Superoxide Dismutase (SOD) Ginjal Tikus Putih (Rattus novergicus). Prosiding Seminar Nasional Kimia UNY 2017, 183-188. Togatorop, D., Pasiak, T., Wongkar, D., and Kaseke, M., 2016. Gambaran Histologik Ginjal Tikus Wistar yang Diberi- kan Jus Tomat Setelah Diinduksi dengan Monosodium Glutamat. e-Biomedik, 4 (2), 1-4. Utomo, Y., A., Hidayat, M., and F. A. Sasi., 2012. Studi Histo- patologi Hati Mencit (Mus musculus L.) yang Diinduk- si Pemanis Buatan. Jurnal MIPA, 35 (2), 122-129. Wahyudi, J., 2017. Mengenali Bahan Tambahan Pangan Berbahaya: Ulasan. Jurnal Litbang: Media Informasi Penelitian, Pengembangan dan IPTEK, 13 (1), 3–12. Weber, K., Razinger, T., Hardisty, J.F., Mann, P., Martel, K.C.,
Frische, E.A., Blumbach, K., Hillen, S., Song, S., Anzai, T., and Chevalier, H.-J., 2011. Differences in Rat
Models Used in Routine Toxicity Studies. International Journal of Toxicology, 30 (2), 162–173. Werdhasari, A., 2014. Peran Antioksidan bagi Kesehatan. Jurnal Biotek Medisiana Indonesia, 3 (2),  59-68. Wibowo, B. A. and Saebani, 2016. Pengaruh Rhodamine B Peroral Dosis Bertingkat Selama 12 Minggu terhadap Gambaran Histopatologis Jantung Tikus Wistar. Jurnal Kedokteran Diponegoro, 5 (2), 139-144. Wiratmoko, W. and Rafie, R., 2014. Pengaruh Pemberian Rhodamin B Peroral dengan Dosis Bertingkat Terha- dap Gambaran Histopatologi Mukosa Ileum Mencit (Mus musculus) Jantan. Jurnal Kedokteran dan Keseha- tan, 1 (1), 49-55.
ungu terbukti dapat mempengaruhi daya tahan sel serta dapat membantu memperbaiki struktur sel pada ileum, namun pada penelitian ini pencegahan kerusakan yang belum optimal dimungkinkan dari konsentrasi ekstrak rosella ungu yang ditambahkan kedalam yoghurt masih kurang efektif.
Yamlean, P.V.Y., 2011. Identifikasi dan Penetapan Kadar
Rhodamin B pada Jajanan Kue Berwarna Merah Muda yang Beredar di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains, 15
(1), 289-295.
Salmaa, D., et.al. 2023. Kidney and Ileum Histopathology of Rattus norvegicus Toxicity Model of Rhodamine B and Saccharin Supplemented with Purple Roselle Yoghurt
Haskito, A.E.P., Mahdi, C., and Noviatri, A., 2020. Compari- son of Antioxidant Activity and Total Lactic Acid Bacteria (LAB) of Goat Milk Yoghurt, Goat Milk Yoghurt Fortified by Redand Black Rice Bran Flour. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 465 (1), 01-59. Khaira, K., 2010. Menangkal Radikal Bebas dengan Anti-Oksidan. Jurnal Sainstek, 2 (2), 183-187. Kusumastuti, I.R., 2014. Roselle (Hibiscus Sabdariffa Linn) Effects on Lowering Blood Pressure as a Treatment for Hypertension. Medical Journal of Lampung University , 7 (4), 70-74.
Mayori, R., Marusin, N., and Tjong, D. H., 2019. Pengaruh Pemberian Rhodamin B terhadap Struktur Histologis Ginjal Mencit Putih (Mus musculus L.). Jurnal Biologi Universitas Andalas, 2 (01), 43-49. Olivea Herman, N., Ari Yusasrini, Nl., and Kencana Putra, I.N., 2020. Identifikasi  Sakarin , Siklamat ,dan  Natri- um Benzoat Serta Karakterisktik Susu Kedelai yang Dijual  dI Pasar Tradisional  Wilayah Jimbaran , Bali Selama Penyimpanan. Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan (ITEPA), 9 (4), 468. Prayoga, R. D., Kurnijasanti, R., and Hastutiek, P., 2016. Pengaruh Ekstrak Batang Pisang Ambon (Musa paradisiaca var. sapientum) Terhadap Gambaran Histoatologi Jejenum Tikus (Rattus norvegicus) Inflammatory Bowel Disease. Journal of Basic Medicine Veterinary, 5 (1), 16-21. Priska, M., Peni, N., Carvallo, L., and Dala N. Y., 2018. Review: Antosianin dan Pemanfaatannya. Cakra Kimia (Indonesian E-Journal of Applied Chemistry) ,  6  (2),
79-97.
Ratna, N.K.D.N., Setianingrum, A., Nugroho, W., Haskito,
A.E.P., and Noviatri, A., 2022. Suplementasi Yogurt Fotifikasi Konsentrasi Bertingkat Ekstrak Rosella Ungu Terhadap Kadar Malondialdehida (MDA) dan Gamba- ran Histologi Ginjal Mencit. Jurnal Kajian Veteriner, 10 (1), 1–12. Roosdiana, A., Oktavianie, D. A., and Lestari, Y. P., 2017. Pengaruh Rhodamin B dan Sakarin Terhadap Aktivitas Superoxide Dismutase (SOD) Ginjal Tikus Putih (Rattus novergicus). Prosiding Seminar Nasional Kimia UNY 2017, 183-188. Togatorop, D., Pasiak, T., Wongkar, D., and Kaseke, M., 2016. Gambaran Histologik Ginjal Tikus Wistar yang Diberi- kan Jus Tomat Setelah Diinduksi dengan Monosodium Glutamat. e-Biomedik, 4 (2), 1-4. Utomo, Y., A., Hidayat, M., and F. A. Sasi., 2012. Studi Histo- patologi Hati Mencit (Mus musculus L.) yang Diinduk- si Pemanis Buatan. Jurnal MIPA, 35 (2), 122-129. Wahyudi, J., 2017. Mengenali Bahan Tambahan Pangan Berbahaya: Ulasan. Jurnal Litbang: Media Informasi Penelitian, Pengembangan dan IPTEK, 13 (1), 3–12. Weber, K., Razinger, T., Hardisty, J.F., Mann, P., Martel, K.C., Frische, E.A., Blumbach, K., Hillen, S., Song, S., Anzai, T., and Chevalier, H.-J., 2011. Differences in Rat Models Used in Routine Toxicity Studies. International Journal of Toxicology, 30 (2), 162–173. Werdhasari, A., 2014. Peran Antioksidan bagi Kesehatan. Jurnal Biotek Medisiana Indonesia, 3 (2),  59-68. Wibowo, B. A. and Saebani, 2016. Pengaruh Rhodamine B Peroral Dosis Bertingkat Selama 12 Minggu terhadap Gambaran Histopatologis Jantung Tikus Wistar. Jurnal Kedokteran Diponegoro, 5 (2), 139-144. Wiratmoko, W. and Rafie, R., 2014. Pengaruh Pemberian Rhodamin B Peroral dengan Dosis Bertingkat Terha- dap Gambaran Histopatologi Mukosa Ileum Mencit (Mus musculus) Jantan. Jurnal Kedokteran dan Keseha- tan, 1 (1), 49-55.
Yamlean, P.V.Y., 2011. Identifikasi dan Penetapan Kadar Rhodamin B pada Jajanan Kue Berwarna Merah Muda yang Beredar di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains, 15 (1), 289-295.