## EFFECT OF FEED RAW MATERIALS TYPES ON DISSOLVED PROTEIN CONTENT, PROTEIN HYDROLYSIS LEVEL AND FEED NUTRITION CONTENT OF ORANGE MANGROVE CRAB
( Scylla olivacea ) LARVAE FEED
Haryati*, Yushinta Fujaya, Edison Saade
Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan Universitas Hasanuddin * haryati_fikpunhas@yahoo.com

## Abstract
Feed  is  one  of  the  factors  that  affect  the  success  of    hatchery  culture    of  mud    crab  ( Scylla olivacea ). The use of artificial feed in the form of microdiet can ensure availability, lower production costs and higher flexibility than natural feed. During this time the artificial feed used   is a commercial feed, which is relatively expensive, therefore the need for research to produce artificial feed of good quality,  with  a  cheap  price..  The  objective  of  this  research  is  to  determine  the  combination  of  raw material of artificial feed protein which produce dissolved protein content, protein hydrolysis degree and best protein content of feed. The experimental design used was completely randomized with eight treatments  and  three  replications.  The  treatments  were  the  use  of    various  combinations  of  feed protein  ingredients  :  A)  100% Artemia flour,  B)  100%  fish  meal,  C)  100%  squid  meal,  D)  50% Artemia and 50% fish meals, E)  50% Artemia and 50% squid meals, F) 50% fish  and 50% squid meals, G) 35% fish, 35% squid  and 30% Artemia meals, H) commercial feed. The parameters used were    dissolved  protein  content,  protein  hydrolysis  degree  and  protein  feed  content.  The  results showed that the difference of feed protein raw materials  had significant effect (p <0,05) on soluble protein  content  and  feed  protein  hydrolysis  degree.  The  highest  content  of  soluble  protein  in  in  the diet with a protein raw material was squid meal, but not significantly different (P> 0,05) than Artemia meal and  combination between 50% Artemia and 50% squid meals, but significantly different (P < 0.05)  than  other  treatments.  The  highest  degree  of  protein  hydrolysis  in  the  diet  with  a  protein  raw materials was Artemia meal,   but not significantly different (P> 0.05) than in commercial feed as well as  combination  between Artemia and  squid  meal  (P>  0.05),  but  significantly  different  (P  <0,  05) compared to other treatments. Feed protein content according to the needs of mangrove crab larvae. Fat  content  with  a  protein  raw  materials  was    100% artemia meal  was  higher  than  the  need. Carbohydrate content with a protein raw materials were  100% artemia meal, a combination of 50% artemia meal and 50% squid meal  and commercial feed according to the needs of mud crab larvae.
Keywords:  protein  raw  materials,  protein  hydrolysis  degree,  protein  feed  content,  dissolved  protein content

## 1. PENDAHULUAN
Pakan  adalah  merupakan  salah  satu faktor penentu keberhasilan usaha pembenihan  biota  perairan.  Penggunaan pakan buatan dalam bentuk mikro ( microdiet) dapat  menjamin  ketersediaan, biaya produksi lebih rendah dan fleksibilitasnya lebih tinggi (Gatesoupe dan Luquet,  1991).    Haryati et  al.  ( 2015)  telah
melakukan penelitian pengaruh penggantian pakan  alami  dengan  pakan  buatan  di  mana pakan  yang  digunakan  adalah    pakan komersial,      hasil  penelitian  tersebut menunjukkan  bahwa  pada  pemeliharaan larva  kepiting  bakau  mulai  stadia  zoea  1 sampai  megalopa,  pakan  buatan  baru  dapat diberikan  mulai  stadia  zoea  3.  Penggunaan pakan  buatan  dalam  pemeliharaan  larva
dapat dipercepat dengan melakukan
predigest pakan  yang  akan  digunakan. Hasil  penelitian  Haryati et  al. (2018) menunjukkan  bahwa  larva  kepiting  bakau ( Scylla  olivacea) dapat diberi pakan buatan yang sudah dipredigest dengan penambahan enzim papain dengan konsentrasi  4,5%  pada  pakan  buatan  mulai stadia zoea 2.
Penggunaan  pakan  buatan  komersial harga relatif mahal, yaitu Rp. 250 000,- per kg,  oleh  karena  itu  perlu  dilakukan penelitian  untuk  mengembangkan    pakan buatan  yang  mempunyai  kualitas  sesuai dengan kebutuhan larva dengan harga yang lebih  murah  dibandingkan  pakan  buatan komersial.    Microbound  diets  adalah  salah satu  jenis  pakan  buatan  yang  secara  luas diaplikasikan  pada  studi  nutrisi  larva krustase.    Kualitas  microbound  diets ditentukan oleh bahan baku sumber protein (May-Hellen,  2008).  Bahan  baku  protein akan  berpengaruh  terhadap  kualitas  pakan. Tujuan dari penelitian ini adalah menentukan kombinasi bahan baku sumber protein    pakan  buatan  setelah  dihidrolisa dengan  menggunakan  enzim  papain  yang menghasilkan  kandungan  protein  terlarut, derajat hidrolisis protein dan kualitas pakan yang  terbaik,  serta  membandingkan  pakan tersebut dengan pakan komersial

## 2. METODE PENELITIAN
Proses pembuatan pakan dan hidrolisis pakan dilakukan di laboratorium nutrisi dan teknologi  pakan,  Fakultas  Ilmu  Kelautan dan perikanan UNHAS.
Analisis kandungan protein terlarut, derajat hidrolisis  protein  dan  analisis  proksimat pakan  di  lakukan  di  laboratorium  Kimia Makanan  Ternak  Fakultas  Peternakan Universitas Hasanuddin. Analisis
komposisi  asam  amino  dan  asam  lemak pakan  dilakukan  di  Laboratorium  Terpadu
IPB.
Enzim  papain  yang  digunakan  adalah Newzime  yang  diproduksi  oleh  Balai
Budidaya  Air  Payau  (BBAP)  Jepara. Pakan buatan yang digunakan adalah pakan komersial berbentuk bubuk.
Untuk menganalisis pengaruh perbedaan  bahan  baku  protein  pakan terhadap  kadar  protein  terlarut  dan  derajat hidrolisis  protein  digunakan  rancangan acak lengkap dengan          8 perlakuan dan 3 kali ulangan.  Perlakuan dalam penelitian ini yaitu:
A. 100% tepung Artemia
B. 100% tepung ikan
C. 100% tepung cumi
D. 50% tepung Artemia , 50% tepung ikan E. 50% tepung Artemia , 50% tepung cumi F. 50% tepung ikan, 50% tepung cumi
G. 30% tepung Artemia , 35% tepung ikan,
35% tepung cumi
H. Pakan komersial
Selain bahan baku protein ditambahkan 5% minyak  ikan,  5%  vitamin  mineral  mix  dan 5% tepung tapioka sebagai bahan pengikat. Pakan  dihidrolisa  dengan  menggunakan enzim papain 4,5%
Analisis  kadar  protein  terlarut  dan derajat  hidrolisis  protein  dilakukan  secara invitro.    Ditimbang  10  g  pakan  yang  akan di predigest ,  ke  dalam  pakan  tersebut selanjutnya  ditambahkan  enzim  papain 4,5%  yang  sebelumnya  telah  diencerkan dengan  l  ml  aquades.  Campuran  tersebut selanjutnya  diinkubasikan  selama  120 menit.    Setelah  inkubasi  selesai,  sampel pakan  diambil  sebanyak    0,5  g  dan dihentikan  reaksi  hidrolisis  proteinnya dengan  menambahkan  1,5  ml  larutan trikloroasetat  7%  dan  dibiarkan  pada  suhu ruang.    Selanjutnya  ditambah  3  ml  Tris HCl  pH  6,5  dan  disentrifuse  dengan kecepatan    10  000  rpm  selama  20  menit. Supernatan  yang  diperoleh  digunakan untuk  analisis  kadar  protein  terlarut mengikuti metode Bradford. Endapan yang dihasilkan  digunaan  untuk  analisis  kadar protein  total  dengan  menggunakan  metode
Kjeldahl.    Derajat  hidrolisis  protein  pakan dihitung dengan menggunakan rumus:
P 0 – P t DHP =  ______  x 100 Po
Dimana: DHP   = derajat hidrolisis protein Po      =  kadar  protein  pakan  sebelum dihidrolisis P t =  kandungan protein pakan setelah hidrolisis dalam jangka waktu
Selain parameter tersebut juga dilakukan  analisis  prosimat,  komposisi asam  amino  dan  asam  lemak  pakan  untuk mengevaluasi kualitas pakan yang dihasilkan.
Untuk mengetahui pengaruh perbedaan bahan  baku  protein  pakan  serta  pakan komersial    terhadap  kandungan  protein terlarut  dan  derajat  hidrolisis  protein digunakan  analisis  ragam  (ANOVA). Apabila  perlakuan  berpengaruh  nyata dilanjutkan  dengan  uji                    W-Tukey untuk  menentukan  bahan  baku  protein pakan  yang  menghasilkan  kandungan protein  terlarut  dan  derajat  hidrolisis protein  terbaik.    Untuk  mengetahui pengaruh  perbedaan  bahan  baku  protein pakan  maupun  pakan  komersial  terhadap kualitas  pakan  berdasarkan  hasil  analisis proksimat,  komposisi  asam  amino  dan asam  lemak    dianalisis  secara  diskriptif sesuai kebutuhan larva kepiting bakau.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan protein terlarut dan derajat hidrolisis  protein  pakan,  pada  berbagai bahan  baku  protein  pakan  serta  pakan komersial setelah dihidrolisa dengan menggunakan enzim papain 4,5% disajikan pada  Tabel  1.    Hasil  analisis  ragam menunjukkan bahwa perbedaan bahan baku protein  pakan  maupun  pakan  komersial berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap kandungan  protein  terlarut  maupun  derajat
hidrolisis  protein.  Kandungan  protein terlarut paling rendah pada pakan komersial tetapi  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05) dibandingkan  pakan  dengan  bahan  baku protein 100% tepung ikan serta  kombinasi 50%  tepung  ikan  dan                    50%  tepung cumi.    Kandungan    protein    terlarut  paling tinggi    pada  pakan  dengan  sumber  protein 100%  tepung  cumi-cumi,  tetapi  tidak berbeda  nyata  (P>0,05)  dibandingkan pakan dengan sumber protein 100% tepung Artemia maupun    kombinasi  antara  50% tepung Artemia dan  50%  tepung  cumi, tetapi berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan perlakuan lainnya.
Derajat  hidrolsis  protein  paling  tinggi pada  pakan  dengan  bahan  baku  protein tepung Artemia tetapi  tidak  berbeda  nyata (P>0.05) dibandingkan pada pakan komersial maupun kombinasi antara tepung Artemia dan  tepung  cumi  (P>0,05),  tetapi berbeda  nyata  (P<0,05)  dibandingkan perlakuan lainnya.
Hidrolisis protein adalah proses pemecahan ikatan kovalen yang menghubungkan asam-asam amino penyusun  protein.    Pada  proses  hidrolisis, ikatan kovalen antar molekul akan terputus dan  akan  dihasilkan  asam  amino  bebas (Zayas, 1997). Faktor faktor yang mempengaruhi  proses  hidrolisis  meliputi rasio  enzim  dan  substrat,  perbedaan  jenis enzim,  pH,  waktu  dan  suhu  hidrolisis. Rasio antara enzim dan substrat berbanding lurus  dengan  derajat  hidrolisa  (Dumay et al .  2006).  Peningkatan  enzim  protease meningkatkan  jumlah  nitrogen  terlarut  dari hidrolisat selama proses hidrolisis (Wang et al .  2007).  Menurut  Kirk  dan  Othmer (1985),  selama  hidrolisis  terjadi  konversi protein  yang  bersifat  tidak  larut  menjadi senyawa  nitrogen  yang  bersifat  larut, selanjutnya  terurai menjadi senyawa- senyawa  yang  lebih  sederhana,  seperti peptida-peptida,  asam  amino  dan  amonia. Tingginya  kandungan  protein  terlarut  dan derajat  hidrolisis  protein  pada  pakan
dengan  bahan  baku  protein  100%  tepung
Artemia karena  pada  pakan  tersebut konsentrasi enzim lebih tinggi dibandingkan  perlakuan  lainnya.  Selain enzim  papain  yang  digunakan  untuk menghidrolisa  pakan,  pada Artemia juga terdapat enzim protease yang akan menghidrolisa  protein.  Menurut  Nielsen (1997)  semakin  besar  konsentrasi  protease akan  semakin  banyak  ikatan  peptida  dari
protein  yang  terputus  menjadi  peptida- peptida  sederhana  sehingga  kelarutan protein  semakin  meningkat.  Hal  ini  sesuai pendapat  Haslaniza et  al .  (2010)  yang menyatakan  bahwa  konsentrasi  enzim proteolitik  yang  semakin  meningkat  dalam proses hidrolisis akan menyebabkan peningkatan  kandungan  nitrogen  terlarut dalam hidrolisat protein ikan.
Tabel 1. Rata-rata Kandungan protein terlarut (%) dan derajat hidrolisis protein (%) pakan pada berbagai bahan baku protein setelah dihidrolisis dengan enzim papain Perlakuan Protein terlarut Derajat hidrolisis Protein A - 100% tepung Artemia
B - 100% tepung ikan C - 100% tepung cumi D - 50% tepung Artemia, 50% tepung ikan E- 50% tepung Artemia, 50% tepung cumi F - 50% tepung ikan, 50% tepung cumi G- 30% tepung Artemia , 35% tepung ikan,
35% tepung cumi
H - Pakan komersial 2,43 ab ± 0,062 1,98 cd ± 0,016 2,76 a ± 0,031 2,33 b ± 0,011 2,41 ab ± 0,003 2,19 cd ± 0,009 2,22 bc ± 0,123
1,82 d ± 0,004 65,40 a ±0,3906 48,45 c ±0,2949 53,70 b ±1,4985 53,04 b ±0,5773 63,57 a ±1,1139 47,20 c ±0,0882 54,17 b ±0,3906 64,30 a ±0,3354
Keterangan: Huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf 5%
Tingginya  kandungan  protein  terlarut pada  pakan  dengan  100%  tepung  cumi karena  kandungan  protein  pakan  relatif tinggi  sehingga  substrat  yang  dihidrolisa juga  tinggi,  sedangkan  pada  pakan  dengan bahan  baku  protein    50%  tepung Artemia dan 50% tepung cumi disebabkan pengaruh kombinasi,  yaitu  suplai  enzim  protease yang  berasal  dari  tepung Artemia dan tingginya  kandungan  protein  pada  cumi-
cumi.  Tingginya  derajat  hidrolisis  protein pada  pakan  komersial  karena  kandungan protein relatif rendah sehingga enzim dapat menghidrolisa  pakan  dengan  baik.  Hal  ini sesuai pendapat Dumay et al. (2006) bahwa rasio  antara  enzim dan substrat  berbanding lurus dengan derajat hidrolisa.
Hasil  analisis  proksimat  pakan  pada berbagai  bahan  baku  protein  serta  pakan komersial  disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil analisis proksimat pakan (%  bobot  kering) Perlakuan Protein Lemak kasar Serat kasar BETN Abu A B C D E F G H 55.22 52.16 81.21 54.62 67.00 65.77 78.32 47.70 18.02 12.61 11.10 13.46 12.97 10.90 11.33 3.49 1.15 1.16 0.84 0.93 1.27 0.71 0.70 2.16 11,19 4.79 1,43 9,04 10,26 5.09 4.75 27.81 14.42 29.28 5.42 21,95 8,5 17.51 4.90 18.82 Keberhasilan pemberian pakan ditentukan  oleh  kualitas  dan  kuantitas
pakan  yang  diberikan.    Kualitas  pakan secara  kimiawi  antara  lain  ditentukan  oleh
kandungan protein, lemak dan karbohidrat. Kebutuhan  protein  pada Scylla  serrata stadia  megalopa  menurut  Genodepa et  al. (2004)  adalah  79,4%,  sedangkan  menurut Catacutan (2002) kebutuhan protein juvenil Scylla  serrata berkisar  antara  34,2%– 51,8%.  Kandungan  protein  pakan  berkisar antara    47,70%  -  81.21%.    Berdasarkan kandungan  protein,  pakan  dengan  bahan baku  protein  100%  tepung  cumi  lebih tinggi  dari  kebutuhan,  sedangkan  pakan dengan  bahan  baku  protein  yang  lain  serta pakan  komersial  mempunyai  kualitas sesuai kebutuhan larva kepiting bakau.
Lemak  diketahui  mempunyai  peran penting  sebagai  sumber  enersi,  menjaga integritas  struktur  membrane  biologi  dan berfungsi sebagai precursors steroid penting  (Corraze et  al ,  2001) Pengaruh kandungan lemak pakan terhadap pertumbuhan  juvenil  kepiting  bakau  telah diteliti    oleh Sheen dan Wu (1999),   hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  kandungan lemak  pakan  berkisar  antara  3,3%  sampai 13,8%  memenuhi  kebutuhan  kepiting bakau.  Catacutan  (2002),  mengemukakan bahwa  kebutuhan  lemak  dari  juveniles
Scyllla  serrata berkisar  antara 6%   sampai 12%.  Kebutuhan  lemak Scylla  serrata stadia  megalopa  sebesar  6%  (Genodepa et al .,  2004).  Kandungan  lemak  pakan berkisar antara 3,49% - 18,02%.
Kandungan  lemak  pakan  komersial  lebih rendah  dibandingkan  kebutuhan  larva kepiting  bakau,  sedangkan  pakan  dengan bahan  baku  protein  100%  tepung Artemia kandungan  lemaknya  lebih  tinggi  dari kebutuhan.    Kandungan  lemak  pakan dengan bahan baku protein yang lain masih sesuai  kebutuhan  larva  kepiting  bakau.
Kandungan  BETN    pakan    berkisar antara  1,43%  -  27,81%  bahan  kering. Sheen  dan  Wu  (1999)  dan  Sheen  (2000) mengemukakan bahwa kebutuhan karbohidrat  juvenil Scylla  serrata berkisar antara  13,5%  sampai  27%  bahan  kering.
Kebutuhan karbohidrat pada larva  kepiting bakau belum diketahui. Berdasarkan pendapat  tersebut  kandungan  karbohidrat pakan  dengan  bahan  baku  100%  tepung Artemia, kombinasi  antara  50%  tepung Artemia dan 50% tepung cumi serta pakan komersial  berturut-turut  12,31%,  11,32% dan  27,81%  bahan  kering  relatif  sesuai kebutuhan larva kepiting bakau.
Kandungan karbohidrat pakan yang tersusun  atas  beberapa  bahan  baku  protein yang lain perlu ditingkatkan.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
1. Kandungan  protein  terlarut  pada  pakan dengan  bahan  baku  protein    100% tepung cumi, 100% tepung Artemia dan kombinasi  antara  50%  tepung Artemia dan  50%  tepung  cumi  lebih  tinggi dibandingkan  pakan  komersial  maupun bahan baku protein pakan yang lain
2. Derajat  hidrolisis  protein  pada  pakan dengan  bahan baku protein pakan 100% tepung Artemia dan  100%  tepung  cumi dan pakan komersial  relatif sama tetapi lebih  tinggi  dibandingkan  bahan  baku ptotein yang lain.
3. Kandungan protein pakan dengan bahan baku  protein  100%  tepung  cumi  lebih tinggi  dari  kebutuhan,  sedangkan  bahn baku  protein  yang  lain  serta  pakan komersial  sesuai  dengan  kebutuhan larva kepiting bakau.  Kandungan lemak dengan  bahan  baku  protein  100% tepung Artemia lebih  tinggi  dari kebutuhan. Kandungan karbohidrat pakan dengan bahan baku 100% tepung Artemia, kombinasi  antara 50% tepung Artemia dan  50%  tepung  cumi  serta pakan komersial  sesuai  kebutuhan larva kepiting bakau. Berdasarkan kajian terhadap
kandungan protein terlarut, derajat hidrolisis  protein,  dan  hasil  analisis proksimat,  pakan  yang  tersusun  atas
berbagai baku protein  dapat menggantikan pakan komersial.
UCAPAN TERIMA KASIH Ucapan  terima  kasih  ditujukan  kepada Kementerian  Ristek  dan  Perguruan  Tinggi yang  telah  membiayai  penelitian  ini melalui  Penelitian  Terapan  Unggulan Perguruan  Tinggi  Terapan  untuk  anggaran tahun 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Catacutan, M. R. , 2002. Growth and body composition of juvenile mud crab, Scylla serrata , fed different dietary protein and lipid levels and protein to energy ratio.  Aquaculture, 208: 113 – 123
2. Corraze, C., 2001.  Lipid nutrition. In: Gillume, J., Kaushik, S., Begot., Metailler, R. (Eds.),
3. Nutrition and feeding of fish and crustacean.  Praxix, Chshester, U.K, pp. 111 -129.
4. Dumay J, Donnay-Moreno C, Barnathan G, Jaouen &  P, Berge. 2006. Improvement of lipid and phospholipid  recoveries  from  sardine  (Sardina  pilchardus)  viscera  using  industrial  proteases. Process Biochem 41:2327-2332.DOI: 10.1016/j.procbio.2006.04.005
5. Gatesoupe,  F.    &  P.    Luquet,  1991.    Practical  diet  for  mass  culture  of  the  rotifer Brachionus plicatili s: application to larval rearing of sea bass, Dicentrarchus labrax. Aquaculture, 22; 149 – 163
6. Genodepa, J., P.C. Southgate & C. Zeng, 2004.  Preliminary assessment of amicrobound diet as an Artemia replacement for mud crab , Scylla serrata megalopa.  Aquaculture, 236: 497 – 509.
7. Haryati,  Y.  Fujaya  &  Anugrah.    2015.    Pengaruh  pergantian  pakan  alami  dengan  pakan  buatan terhadap aktivitas enzim pencernaan kepiting bakau ( Scylla olivacea ). Prosiding Seminar Nasional Perikanan dan Kelautan XII UGM, jilid I Budidaya Perikanan, hal:               137 - 144 .
8. Haryati, Y. Fujaya  &  E. Saade, 2018. Effect of Using Papain Enzyme in Artificial Diet on the Degree  of  Protein  Hydrolysis  and  Protease  Enzyme  Activity  of  Mud  Crab  ( Scylla  olivacea )
Larva. Aquacultura Indonesiana Vol. 19(2) : 76-
82.(http://aquasiana.org/index.php/ai/article/view/118/121)
9. Haslaniza,  H.  2010.  The  effects  of  enzyme  concentration,  temperature  and  incubation  time  on content  and  degree  of  hydrolysis  of  protein  precipitate  from  cockle  ( Anadara  granosa )  meat wash water. International Food Research Journal 17: 147-152
10. Kirk,  R.E. &  D.F.Othmer, 1985. “ Encyclopedia of Chemical Technology “,vol.1, 3rd edition, A Willey Interscience Publication, John Wiley and Sons Co., New York.
11. May-Helen,  H,  2008.    Towards  development  of  formulated  diet  for  mud  crab  ( Scylla  serrata ) larvae, with emphasis on lipid nutrition.  PhD thesis, James Cook University. 190 pp.
12. Nielsen PM, 1997. Food Proteins and Their Applications. Marcel Dekker, Inc. New York.
13. Sheen,  S.S.  &  S.W.  Wu,  1999.  The  effect  of  dietary  lipid  levels  on  the  growth  response  of juvenile mud crab, Scylla serrata. Aquaculture, 93: 121 – 134
14. Sheen,  S.S.,    2000.  Dietary  cholesterol  requirement  of  juvenile  mud  crab Scylla  serrata . Aquaculture, 189: 277 – 285
15. Wang J.S., M.M. Zhao,Q.Z. Zhao, Y. Bao &  Y.M. Jiang. 2007. Characterization of hydrolysates derived  from  enzymatic  hydrolysis  of  wheat  gluten.  J  Food  Sci72:      C103–C107.  DOI: 10.1111/j.1750-3841.2006.00247.x.
16. Zayas, J.F. 1997. Fungtional Properties of Protein in Food. Springer-Verlag. Berlin