## SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS SENYAWA ANALOG KALKON DARI 4’- HIDROKSIASETOFENON DENGAN 2-METOKSIBENZALDEHID
Denaria Oktavia 1 , Nur Balatif 2 , Adel Zamri 2
1. Mahasiswa Program S1 Kimia FMIPA-Universitas Riau 2. Dosen Jurusan Kimia FMIPA-Universitas Riau Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau Email: adel.zamri@lecturer.unri.ac.id

## ABSTRAK
Senyawa kalkon (E) -1-(4’- hidroksifenil)-3-(2-metoksifenil)prop-2-en-1-on (DO) telah disintesis melalui kondensasi Clasein-Schmidt antara  4’-hidroksiasetofenon  dengan  2-metokibenzaldehid  menggunakan  katalis  basa  (KOH) dibawah iradiasi gelombang mikro. Struktur senyawa dikarakterisasi berdasarkan interpretasi data spektroskopi UV, FTIR, 1 H-NMR  dan  MS.  Uji  toksisitas  senyawa  kalkon  ditentukan  dengan  metoda Brine  Shrimp  Lethality  Test terhadap larva Artemia salina Leach dan menunjukkan aktivitas dengan nilai LC 50 yaitu 49,54 µg/mL. Hasil tersebut menunjukkan bahwa senyawa  DO memiliki aktivitas toksisitas  yang cukup baik karena  memiliki nilai LC 50 < 200 µg/mL.
Kata kunci: kalkon, gelombang mikro, BSLT
1. PENDAHULUAN
Kalkon atau 1,3-difenil-2-propen-1-on merupakan  rantai  terbuka  flavonoid  yang  kedua cincin  aromatiknya  dihubungkan  oleh  tiga  atom karbon  sistem  karbonil  α,  β  tak  jenuh  (Patil et al. , 2009). Adanya sistem karbonil α, β tak jenuh menyebabkan  kalkon  memiliki  banyak  aktivitas biologis, beberapa diantaranya adalah antikanker (Syam et  al .,  2012),  analgesik,  antijamur, sitotoksik,  insektisidal  (Ahmed et  al .,  2011), anti-inflamasi,  antioksidan  (Chen et  al .,  2013), antimalarial  dan  antimikroba  (Kamble et  al ., 2011),  larvisidal  serta  inhibitor  beberapa  enzim terutama  alfa-amilase  pada  mamalia , siklo- oksigenase  dan  monoamin  oksidase  (Rahman, 2011).
Senyawa  kalkon  terdistribusi  dalam  buah- buahan,  sayur-sayuran,  rempah-rempah,  teh  dan kedelai. Kalkon di alam jumlahnya relatif sedikit dan  variasi  strukturnya  terbatas.  Selain  itu, isolasi senyawa kalkon dari alam  membutuhkan waktu  yang  lama  dan  pengerjaannya  cukup rumit.  Sintesis  merupakan  solusi  yang  tepat untuk mengatasi permasalahan tersebut.
Senyawa  kalkon  dapat  disintesis  melalui kondensasi  aldol  dari  suatu  keton  aromatik  dan aldehid  aromatik  baik  dalam  kondisi  asam maupun  basa.  Beberapa  kalkon  sudah  pernah disintesis  menggunakan  metode  konvensional
yaitu  gerus  dan  pengadukan,  namun  karena membutuhkan  waktu  yang  lama,  diperlukan alternatif  lain  agar  proses  sintesis  berlangsung lebih cepat dan senyawa kalkon yang dihasilkan maksimal.  Metode  iradiasi  gelombang  mikro merupakan  metode  non-konvensional  yang diyakini  dapat  menjadi  alternatif  pengganti metode  konvensional  tersebut,  dikarenakan waktu  reaksi  yang  lebih  cepat  dan  hasil  yang lebih  baik  dibandingkan  dengan  metode-metode lainnya (Revathi et al ., 2013).
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan Desmiarti  (2012),  senyawa  dengan  substituen metoksi baik pada cincin A maupun B memiliki aktivitas  toksisitas  yang  baik.  Ritriani  (2011), Hastiningrum  (2013)  dan  Prayitno  (2015)  juga melakukan  penelitian  terhadap  senyawa  kalkon yang  mengandung  gugus  metoksi.  Menurut Ritriani  (2011)  kalkon  dengan  substituen monometoksi  memiliki  nilai  LC 50 yang  lebih kecil sehingga lebih berpotensi sebagai antikanker,  oleh  karena  itu  penulis  tertarik melakukan penelitian tentang aktivitas toksisitas senyawa  kalkon  tersubstitusi  monometoksi dengan  posisi  substituen  yang  berbeda  pada cincin aromatik B.
Senyawa hasil sintesis dikarakterisasi berdasarkan  interpretasi  data  spektroskopi  UV- Vis,  FTIR, 1 H  NMR  dan  MS,  kemudian  diuji
sifat  toksiknya  dengan  metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT).  Pada  metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT),  suatu  tanaman atau  hasil  isolasi  dianggap  menunjukkan aktivitas  sitotoksik  yang  baik  jika  mempunyai nilai  LC 50 kecil  dari  1000  µg/mL,  sedangkan untuk  senyawa  murni  dianggap  menunjukkan aktivitas  sitotoksik  bila  mempunyai  nilai  LC 50 kecil dari 200 µg/mL (Meyer, 1982).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah Microwave (Samsung  ME 109F 500 MHz), alat pengukur titik leleh Fisher John (SMP  11-Stuart  ),  lampu  254/366  nm (Camag  ),  spektrofotometer  UV-Vis  (Genesys 10S  UV-Vis  v4.002  2L9N175013),  HPLC (Shimadzu  LCsolution  jenis  kolom shim-pack VP-ODS  dengan  panjang  diameter  150  x  4,6 mm),  spektrofotometer  IR  (FTIR  Shimadzu,  IR Prestige-21),  spektroskopi 1 H-NMR  (Agilent 500  MHz  DD2),  spektroskopi  Massa  (water LCT  premier  XE  mode  positif),  serta  alat-alat untuk  sintesis  dan  uji  toksisitas  yang  umum digunakan di laboratorium.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  4’- hidroksiasetofenon (Aldrich), 2- metoksibenzaldehid  (Merck),  kalium  hidroksida (KOH)  6N  (Merck),  asam  klorida  (HCl)  3N (Merck), indikator universal, n-heksana (Merck), etil  asetat  (Merck),  methanol  (Merck),  etanol absolut  (Merck),  plat  KLT  GF 254 ,  akuades  dan larva Artemia salina L.

## Sintesis senyawa kalkon
Sebanyak  5  mmol  4’-hidroksiasetofenon ditempatkan  dalam  wadah  Erlenmeyer  125  mL, kemudian  dilarutkan  dengan  7,5  mL  etanol absolut  dan  ditambahkan  dengan  12,5  mL larutan KOH 6N. Campuran didiamkan selama 2 menit,  lalu  ke  dalam  campuran  dimasukkan sebanyak 5 mmol 2-metoksibenzaldehid.
Campuran  ini  di-iradiasi  gelombang  mikro selama  10  menit  dengan  daya  180  watt.  Reaksi dipantau  melalui  uji  KLT  setiap  2  menit. Kemudian  campuran  didiamkan  selama  20  jam untuk  menyempurnakan  reaksi.  Setelah  20  jam, campuran  ditambahkan  15  mL  akuades  dingin
dan  pH  campuran  dinetralkan  dengan  HCl  3N. Campuran  dibiarkan  di  dalam  lemari  pendingin untuk  memaksimalkan  hasil  reaksi  (endapan) yang  diperoleh.  Endapan  yang  terbentuk kemudian disaring menggunakan corong buchner sambil  dicuci  dengan  akuades  dan  n- heksana  dingin,  kemudian  dikeringkan  pada suhu  ruang.  Rekristalisasi  dilakukan  dengan menggunakan  etanol.  Kemurnian  senyawa ditentukan  dengan  KLT,  titik  leleh  dan  analisis HPLC.
Uji toksisitas dengan metode brine shrimp lethality test (BSLT)
Sampel sebanyak 20 mg dilarutkan dalam 2 mL  metanol  (larutan  induk,  konsentrasi  10000 µg/mL),  kemudian  dari  larutan  induk  dibuat konsentrasi  yang  berbeda  1000  µg/mL,  100 µg/mL  dan  10  µg/mL  dengan  cara  pengenceran bertingkat. Kemudian disiapkan vial 5 mL yang sudah dikalibrasi untuk masing-masing konsentrasi.  Sampel  dipipet  kedalam  masing- masing  vial  sebanyak  0,5  mL,  lalu  pelarut diuapkan hingga mengering. Selanjutnya, kedalam masing-masing vial ditambahkan 50 µL DMSO  dan  0,5  mL  air  laut.  Sebanyak  10  ekor larva  udang  dimasukkan  kedalam  vial  tersebut dan  ditambah  air  laut  hingga  batas  kalibrasi  5 mL.  Tingkat  toksisitas  diukur  dengan  cara menghitung  jumlah  larva  udang  yang  mati dalam selang waktu 24 jam. Pengujian dilakukan tiga  kali  pengulangan  dengan  perlakuan  yang sama untuk masing-masing konsentrasi. Kemudian  LC 50 dihitung dengan  metode  kurva menggunakan tabel analisis probit.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis univariat digunakan untuk menggambarkan  pemberian  ASI  ekslusifpada bayi  usia  0  -  6  bulan  terhadap  pengetahuan  dan sikap.

## Sintesis senyawa kalkon
Senyawa  kalkon  disintesis  melalui  reaksi kondensasi  aldol  dari  senyawa  awal  4’- hidroksiasetofenon  dan  2-metoksibenzaldehid menggunakan  iradiasi  gelombang  mikro  dan penambahan katalis KOH. Senyawa kalkon yang diperoleh  dimurnikan  dengan  rekristalisasi.

## Sintesis  senyawa  DO  dapat  dilihat  pada
Gambar 1.
Gambar 1. Sintesis Senyawa DO
Sintesis  yang  telah  dilakukan  menghasilkan senyawa  kalkon  berupa  padatan  berwarna kuning  dengan  berat  sebesar  1,1704  g  dan rendemen yang dihasilkan sebesar 92,07%. Sifat fisika  dari  senyawa  kalkon  yang  dihasilkan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Sifat fisika senyawa DO Senyawa Rumus molekul Berat molekul Warna Rendemen (%) Titik leleh (ºC) Kalkon (DO) C 16 H 15 O 3 254,1021 kuning 92,07 186 – 187 Analisis kemurnian senyawa kalkon dilakukan menggunakan uji KLT, titik leleh, dan HPLC.  Analisis  kemurnian  dengan  KLT dilakukan  menggunakan  eluen  yang  bervariasi dan  perbandingan  yang  berbeda.  Senyawa kalkon  menunjukkan  satu  noda  pada  plat  KLT. Noda  pada KLT  diamati  dengan  bantuan  lampu UV (λ 254 nm dan 366 nm). Analisis kemurnian dengan titik leleh menunjukkan bahwa senyawa memiliki range titik  leleh sebesar  1°C.  Analisis kemurnian senyawa kalkon menggunakan HPLC dilakukan pada panjang gelombang 236 nm dan 345 nm menunjukkan satu puncak dominan pada t R =11 menit. Berdasarkan data analisis kemurnian tersebut menunjukkan bahwa senyawa kalkon yang diperoleh telah murni.
Spektrum  UV  senyawa  kalkon  (DO) memperlihatkan  adanya  serapan  maksimum pada  204;  236  dan  345  nm  ( Gambar  2 ).
Berdasarkan  nilai  serapan  maksimum  senyawa tersebut  memiliki  ikatan  rangkap  terkonjugasi. Spektrum  IR  senyawa  kalkon  memperlihatkan adanya  serapan  pada  bilangan  gelombang  3086 cm -1 menunjukkan adanya gugus C-H aromatik.
Serapan  pada  bilangan  gelombang  3193  cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  O-H.  Serapan  pada bilangan  gelombang  2907  cm -1 menunjukkan adanya gugus C-H alifatik. Gugus C=O terdapat pada  serapan  bilangan  gelombang  1648  cm -1 .
Gugus C=C aromatik diperlihatkan pada serapan bilangan  gelombang  1517  cm -1 . Sedangkan gugus  C-O  diperlihatkan  pada  serapan  bilangan gelombang 1034 cm -1 .
Gambar  2. Spektrum  UV  senyawa  DO  dalam pelarut metanol Spektrum 1 H-NMR senyawa kalkon menunjukkan bahwa  jumlah proton dari senyawa tersebut sesuai dengan yang diharapkan, dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Interpretasi data 1 H-NMR senyawa DO
Nomor Atom Senyawa DO  H (ppm) 1 - 2 - 3 6,99 (d, 1H) 4 7,43 (dt, 1H, J = 7,5 Hz) 5 7,03 (t, 1H, J = 7,5 Hz) 6 7,85  (dd,  1H, J a  =  1,35  Hz; J b=  7,75 Hz)
C  7,86 (d, 1H  , J = 15,7 Hz) C  8,13 (d, 1H  , J = 15,75 Hz) 1’ - 2’ 8,08 (dd, 1H, J a= 1,8 Hz; J b= 8,7 Hz)
3’ 7,11 (d, 1H, J = 8,25 Hz) 4’ - 5’ 7,11 (d, 1H, J = 8,25 Hz) 6’ 8,08 (dd, 1H, J a= 1,8 Hz; J b= 8,7 Hz) -OCH 3 3,96 (s, 3H)
Pergeseran  kimia  pada  δ  6,99  ppm  (d,  1H) menunjukkan  proton  H  pada  posisi  C-3  dengan puncak doublet .  Pergeseran  kimia  pada  δ  7,43 ppm (dt, 1H, J = 7,5 Hz) menunjukkan proton H dengan  puncak doublet  of triplet pada  posisi  C- 4. Pergeseran kimia pada δ 7,03 ppm (t, 1H, J = 7,5  Hz)  menunjukkan  proton  H  dengan  puncak triplet pada posisi C-5. Pergeseran kimia pada δ 7,85  (dd,  1H, J a  =  1,35  Hz; J b=  7,75  Hz) menunjukkan  proton  H  dengan  puncak doublet of  doublet pada  posisi  C-6.  Pergeseran  kimia pada δ 7,86 ppm (d, 1H  , J = 15,7 Hz) dan δ 8,13 ppm (d, 1H, J =15,75 Hz) dengan puncak doublet berturut-turut  memperlihatkan  proton  H  dengan puncak doublet  of  doublet pada  posisi  C-2’  dan C-6’.  Pergeseran  kimia  δ  7,11  ppm  (d,  1H, J = 8,25  Hz)  menunjukkan  proton  dengan  puncak doublet pada  posisi  C-3’  dan  C-5’.  Pergeseran kimia  δ  3,96  ppm  (s,  3H)  menunjukkan  proton dengan  puncak  singlet  untuk  gugus  metoksi,  - OCH 3 .  Proton  yang  terdapat  pada  C α dan  C β memiliki  nilai  tetapan  kopling  ( J )  15-16  Hz dengan puncak doublet . Nilai tersebut menunjukkan bahwa ikatan rangkap pada C α dan C β mempunyai konfigurasi trans.
Berat  molekul  kalkon  ditunjukkan  oleh spektrum massa yang dihitung sebagai C 16 H 15 O 3 [M+H] + dengan  puncak  ion  molekul  m/z 255,1021  dan  massa  terukur  ditemukan  pada m/z  255,1024,  selisih  massa:  0,0003.  Selisih massa  senyawa  kalkon  sangat  kecil  sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  senyawa  kalkon tersebut murni.

## Uji toksisitas
Uji  aktivitas  toksisitas  senyawa  kalkon dilakukan  dengan  menggunakan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Hasil  uji toksisitas  dari senyawa  kalkon  pada  konsentrasi 1000, 100 dan 10 µg/mL terhadap larva Artemia salina yang  dianalisis  dengan  metode  analisis probit tingkat potensi toksisitas senyawa kalkon dengan  nilai  LC 50 sebesar  49,54  µg/mL.
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  toksisitas, senyawa  kalkon  berpotensi  sebagai  senyawa antikanker  karena  memiliki  nilai  LC 50 <  200 µg/mL.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dpat  disimpulkan  bahwa senyawa  kalkon  diperoleh  melalui  reaksi kondeansasi aldol Claisen-Schmidt menggunakan  katalis  basa  (KOH)  dibawah kondisi  iradiasi  gelombang  mikro.  Rendemen yang dihasilkan yaitu 92,07%. Hasil karakterisasi  menggunakan  spektroskopi  UV, IR, 1 H-NMR  dan  MS  menunjukkan  bahwa senyawa  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian adalah  murni  dan  merupakan  senyawa  kalkon dengan  struktur  yang  diharapkan.  Senyawa kalkon  memiliki  toksisitas  dengan  nilai  LC 50 sebesar 49,54 µg/mL, hasil tersebut menunjukkan bahwa senyawa kalkon berpotensi sebagai  senyawa  antikanker.  Namun  penelitian lebih  lanjut  diperlukan  pada  penggunaan  katalis lain  yang  hanya  membutuhkan  konsentrasi rendah dan volume yang sedikit

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Ahmed,  R.M.,  Sastry,  G.V.,  Bano,  N.,
Ravichandra, S., dan Raghavendra, M.
2011. Synthesis and Cytotoxic, Antioxidant Activities of New Chalcone Derivatives. Rasayan Journal Chem . 4(2): 289-294. Chen,  Y.H.,  Wang,  W.H.,  Wang,  Y.H.,  Lin,
Z.Y.,  Wen,  C.C.,  dan  Chern,  C.Y. 2013. Evaluation of the Anti-
Inflammatory  Effect  of  Chalcone  and Chalcone  Analogues  in  a  Zebrafish Model. Molecules. 18: 2052-2560.
Desmiarti,  Z.  2012.  Sintesis  dan  Uji  Toksisitas Senyawa  Kalkon  Turunan  4-Metoksi Asetofenon . Skripsi .  Universitas  Riau, Pekanbaru.
Hastiningrum,  W.P.,  Eryanti,  Y.,  Zamri,  A.
2013. Sintesis Senyawa Kalkon
Analog 3,4-Dimetoksi Asetofenon Dan
Uji  Toksisitas  Menggunakan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT).
Skripsi . Universitas Riau, Pekanbaru.
Kamble,  V.M.,  Hatnapure,  G.D.,  Keche,  A.P., Biradjar,  S.,  Patil,  S.G.,  Tale,  R.H.,
Rodge, A.H., Turkar, S.S. dan Gour, K. 2011. Synthesis and Biological
Evaluation  of  a  Novel  Series  of
Methoxylatedchalcone  As  Antioxidant and  Anti-microbial  Agents. Journal  of Chemical and Pharmaceutical Research . 3(6): 639-648.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putman,  J.E.,
Jacobsen,  L.B.,  Nichols,  D.E  dan McLaughiin, J.L. 1982. Brine Shrimp: A  Convencient  General  Bioassay  for Active  Plants  Consistuent. Journal  of Plant Medical . 45: 31-34.
Prayitno,  E.  2015.  Sintesis  dan  Uji  Toksisitas Tiga  Analog  Kalkon  Tersubstitusi Metoksi. JOM FMIPA . 2 (1).
Rahman,  M.A.  2011.  Chalcone:  A  Valuable Insight  into  the  Recent  Advances  and Potential  Pharmacological  Activities. Chemical Sciences Journal . 1-16. Ritriani.  2011. Sintesis  Senyawa  Calkon Turunan Metoksi  Benzaldehid  Dan  Uji Aktivitas  Sitotoksik  Dengan  Metoda Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Skripsi.  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi Riau Yayasan Universitas Riau,
Pekanbaru. Syam,  S.,  Abdelwahab,  S.I.,  Al-Mamary,  M.A., dan  Mohan,  S.  2012.  Synthesis  of Chalcones  with  Anticancer  Activities. Molecules . 17: 6179-6195.