## PENGARUH RENDAMAN KAYU ANGIN (Usnea baileyi) DALAM NIRA SEGAR DAN NIRA REBUS TERHADAP HATI TIKUS (Rattus norvegicus) YANG TERPAPAR TIMBAL ASETAT
Desak Made Malini 1* , Iin Supartinah 2 , Madihah 3 , Andi Perdana 4
1 Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Imu Pengetahun, Universitas Padjadjaran * Corresponding author : desak.made@unpad.ac.id

## Abstract
Lead acetate inhaled caused oxidative damage of liver due to the formation of free radicals. Ones of the plant that has  a  high  antioxidant  content  is  Usnea  baileyi.  This  study  aims  to  examine  the  potency  of  fresh  and  boiled  U. baileyi to reducing rats liver damage induced by lead acetate. This study used randomized complete design with nine treatments and three replications. Twenty seven male rats were randomly divided into  9 groups namely one positive control group (given 100 mg/kb bw lead acetate), two negative control groups (given 1 ml fresh sap and 1 ml  boiled  sap),    three  groups  given  U.  Baileyi  immersion  treatment  in  fresh  sap  and  three    group  treated  U. Baileyi  immersion  in  boiled  sap  with  dose  of  3,500  mg/kg  BW,  6,000  mg/kg  BW  and  10,500  mg/kg  BW  after induced by 100 mg/kg BW lead acetate. Treatment was given orally for  15 consecutive days The results showed that the morphology of rats treated with U. baileyi dosages of 6,000 mg/kg bw and U. baileyi 10,500 mg/kg b w both  in  fresh  sap  and  boiled  sap  had  morphology  that  was  not  significantly  different  from  negative  controls. Whereas  in  the  histological  structure  only  the  dose  U.  baileyi  10,500  mg/kg  Bw  did  not  show  a  significant difference with negative cotrol. It can be concluded that the dose of U. baileyi 10,500 mg/kg Bw rats in boiled sap gave the best effect in reducing damage to liver histology of rats induced by lead acetate.
Key words: lead acetate, liver, sap, Usnea baileyi,

## PENDAHULUAN
Dalam  kehidupan  sehari-hari  manusia terancam  oleh  zat  kimia  berbahaya  yang terpapar  secara  langsung  maupun  tidak langsung.  Salah  satu  zat  kimia  yang  banyak digunakan  dalam  kehidupan  sehari-hari adalah logam timbal . Logam tersebut banyak digunakan  sebagai  bahan  pengemas,  pipa saluran air dan alat-alat rumah tangga. Selain itu, timbal dalam  bentuk  oksida  digunakan sebagai  pewarna  dalam  industri  kosmetik, industri keramik dan peralatan rumah tangga. Sedangkan timbal dalam  bentuk  aerosol anorganik  dapat  masuk  ke  dalam  tubuh melalui  udara  yang  dihirup  atau  makanan. Proses  eliminasi  logam timbal lambat,
sehingga  jika  terpapar  dalam  jangka  waktu panjang  dapat  terakumulasi  dalam  tubuh (Librawati,  2005). Timbal yang  diabsorpsi oleh  tubuh  akan  berikatan  dengan  sel  darah merah  dan  selanjutnya  masuk  ke  dalam peredaran  darah,  cairan  ekstraseluler  dan akan disimpan pada jaringan lunak yaitu hati, ginjal, saraf dan pada jaringan mineral seperti tulang  dan  gigi  (Fardiaz,  1995). Timbal memiliki  kemampuan  untuk  menimbulkan kerusakan  oksidatif  pada  jaringan  dan meningkatkan
peroksidasi lemak (Komousani T.A. and S.S. Mouselhy. 2011).
Timbal juga secara langsung dapat menghambat  kerja  enzim  kemudian  dapat menghambat  penyerapan  mineral  oleh  tubuh
(Yushui et  al .,  2012).  Selain  itu timbal juga dapat menurunkan kadar antioksidan pada sel atau  jaringan  dan  meningkatkan  produksi radikal bebas (Wang et al ., 2010).
Salah satu organ yang dapat mengalami perubahan  akibat  paparan timbal yang berlebihan adalah hati. Hati merupakan organ tubuh  yang  terbesar  dan  organ  metabolisme yang paling kompleks di dalam tubuh. Organ ini  terlibat  dalam  metabolisme  zat  makanan, sebagian besar obat dan toksikan (Lu, 1995). Adapun  mekanisme  kerusakan  hati  yang diakibatkan  oleh timbal adalah  menginduksi pembentukan  radikal  bebas  dan  menurunkan kemampuan sistem antioksidan tubuh sehingga  selanjutnya  akan  menyebabkan terjadinya stres oksidatif (Guerer & N. Ercal. 2000).  Beberapa  penelitian  menyebutkan bahwa  pemberian timbal asetat dapat merusak  morfologi  dan  histologi  hati.  Oleh karena  itu,  kadar  antioksidan  dalam  tubuh perlu  ditingkatkan  untuk  mencegah  terjadi kerusakan  jaringan  akibat  stres  oksidatif, terutama pada organ hati, karena antioksidan dapat  menghambat  pembentukan  radikal bebas (Nurliani et al., 2012).
Pada  saat  ini  antioksidan  alami  yang berasal dari tumbuh-tumbuhan baik tumbuhan  tingkat  tinggi  maupun  tumbuhan tingkat  rendah  semakin  banyak  diminati masyarakat,  karena  mempunyai  kemampuan yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan antioksidan  sintetik  (Julyasih et  al., 2009).
Salah  satu  tumbuhan  tingkat  rendah  yang mempunyai  kandungan  antioksidan  yang tinggi  adalah likhen janggot  kai  ( Usnea baileyi ). Usneabaileyi merupakan jenis likhen yang  sejak  lama  telah  digunakan  dalam pengobatan  tradisional  oleh  masyarakat Indonesia.  Hunneck  &Yoshimura  (1996) menyatakan bahwa di dalam likhen terkandung  senyawa  metabolit  asam  usnat yangmemiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan dan  antimutagenik  (Noer et  al. ,  2009).  Pada U . baileyi ditemukan juga senyawa metabolit sekunder lainnya yaitu asam norstictic , asam protocetraric, dan  asam salazinic,  zeorin, sterol ,  asam diffraktat ,  asam barbatat, asam linoleat, senyawa  aromatik  dan  vitamin  C (Ohmura,  2001;  Knight,  2003).  Berbagai macam  penelitian  telah  dilakukan  untuk mendapatkanmetabolit sekunder yang terkandung  dalam U . baileyi .  Salah  satu diantaranya adalah denganmelakukan perendaman U . baileyi dalamvodka. Menurut Giodino  (2002),  vodka  dapat  melarutkan senyawa metabolit  sekunderyang terkandung dalam U . baileyi .  Sedangkan  menurut  Ratu (2009),  nira  sebagai  pengganti  vodka  juga memiliki  kemampuan  yang  sama  dalam melarutkan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam U . baileyi setelah difermentasi lebih dari satu malam perendaman .
Nira  merupakan  cairan  hasil  sadapan dari  bunga  jantan  pohon  aren  yang
Desak  Made  Malini,  dkk:  Pengaruh  Rendaman  Kayu  Angin  ( Usnea  baileyi )  dalam  Nira  Segar  dan  Nira Rebus Terhadap Hati Tikus ( Rattus norvegicus ) yang Terpapar Timbal Asetat
mengandung  gula  sebanyak  7.5  -  20  %  dan dapat  dijadikan  minuman  ringan,  minuman beralkohol,  sirup  aren,  gula  aren, nata  de arenga ,  cuka  aren  dan  tuak  manis  (Tarwiyah &  Kemal,  2001).  Hasil  penelitian  lain menunjukkan  bahwa  di  dalam  nira  terdapat bakteri Zymomonas  mobilis yang  memiliki kemampuan  memfermentasi  gula  menjadi karbondioksida  dan  ethanol  (Silalahi,  1987). Pemanfaatan U . baileyi yang  direndam  dalam nira  segar  dan  nira  rebus  bagi  kehidupan manusia terutama untuk pengobatan hati yang terpapar timbal masih  jarang  dilakukan.  Oleh karena  itu    dilakukan  penelitian  untuk mendapatkan  dosis  efektif  dari  rendaman U . baileyi dalamnira  segar  dan  nirarebus  yang dapat  memperbaiki  kerusakan  morfologi  dan histologi  hati  tikus  yang  diinduksi timbal asetat .

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat yang digunakan
adalah maserator , evaporator,platform, bunsen, magnetic  stirrer , disposable  syringe volume  5  ml,  alat  bedah,  alat  gelas, blender , botol  film,  botol  kaca,  botol  minum  hewan uji, kandang baskom plastik da n penutup besi, kaca  objek  dan  kaca  penutup, Heating  Plate Thermatic ,  jarum sonde oral,  kamera, mikroskop  cahaya,  mikrotom  putar,  neraca timbang analitik,oven, staining jar .
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah hewan uji, bahan uji dan bahan kimia. Hewan uji terdiri dari tikus putih ( Rattus  norvegicus) galur Wistar jantan sebanyak  27  ekor  dengan  umur  8-12  minggu dan  berat  badan  rata-rata  200-250  gram. Bahan  yang  diujikan  adalah  kayu  angin ( Usnea  baileyi ) yang  diperolehdari  hutan pinus  Gunung  Manglayang,  Sumedang  dan hutan  pinus  Kamojang ,  nira  segar diperoleh dari  masyarakat  penyadap  nira  dan  pembuat gula  aren  di  daerah  Rancakalong,  Sumedang dan timbal asetat .  Bahan-bahan  kimia  yang diperlukan untuk pembuatan preparat histologis dengan metode parafin  diantaranya adalah  larutan Bouin untuk fiksasi ,  garam fisiologis NaCl (0,9%), alkohol teknis, toluol, xylol ,  parafin  dengan  titik  cair  50-55 o C, pewarna Haematoxylin dan Eosin Y, akuades,
Meyer’s albumin dan enthelan .

## Jenis Penelitian
Penelitian menggunakan metode eksperimental di laboratorium dengan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  faktor tunggal  dengan  9  perlakuan yaitu  3  macam kontrol,  3  macam  dosis  rendaman U . baileyi dalam  nira  segar  dan  3  macam  dosis rendaman U . baileyi dalam  nira  rebus. Masing-masing perlakuan diulang sebanyak 3 kali. Hewan  uji  kontrol  negatif  diinduksi timbal asetat dengan  dosis  100  gr/kg  bb dalam  CMC  0,5%  berturut-turut  selama  30
hari, sedangkan untuk kontrol positif 1 hanya diberi  nira  segar  dan  kontrol  positif  2  diberi nira  rebus.  Dosis  yang  diberikan  untuk Kelompok perlakuan nira segar adalah 3 .500 mg/  kg  bb,  6.000  mg/kg  bb  dan  10.500 mg/kg  bb.  Demikian  juga  untuk Kelompok perlakuan  nira  rebus  dosis  yang  diberikan adalah 3.500 mg/ kg bb, 6.000 mg/kg bb dan 10.500 mg/kg bb.

## Prosedur kerja
Persiapan hewan uji Hewan  uji    dipelihara  di  kandang hewan  yang beralaskan  sekam dan  masing- masing  kandang  berisi  3  ekor  hewan  uji sesuai  dengan  perlakuan  yang  diberikan. Sebelum  diberi  perlakuan hewan  uji  terlebih dahulu  diaklimatisasi  selama  7 hari untuk membiasakan  hewan  uji  hidup  dalam lingkungan  laboratorium.  Makanan  yang diberikan  berupa  pakan  pelet  CV  551  dan untuk  air  minum  diberi  air  ledeng  yang diberikan  secara Ad  libitum .  Kandang disimpan  pada  ruangan    dengan  kodisi ruangan  12  jam  terang  dan  12  jam  gelap, suhu  ruangan  sekitar  26 0 C  dan  kelembaban 60-75 %.
Pembuatan bahan uji
Pembuatan bahan uji rendaman
U.baileyi dalam  nira  segar  dan  nira  rebus dilakukan  dengan  cara  s ediaan U . baileyi dikeringanginkan  terlebih  dahulu  pada  udara terbuka dan setelah kering dihaluskan dengan menggunakan blender sampai  berbentuk
bubuk dan memiliki tekstur yang halus. Nira segar  diperoleh  dari  penyadap  nira  dan pembuat  gula  aren  di  daerah  Rancakalong, Sumedang  setiap  pagi  hari  pada  hari  yang sama  dengan  hari  perlakuan,  yaitu  setiap pukul  06.00  WIB.  Pembuatan  rendaman U. Baileyi dalam  nira  segar  dilakukan  dengan cara memasukkan bubuk U . baileyi ke dalam nira  segar  sesuai  dengan  dosis  yang diinginkan  dan  didiamkan  selama  1-2  jam. Sedangkan  untuk  membuat  rendaman U. baileyi dalam  nira  rebus  dilakukan  dengan cara    menambahkan  bubuk U.  Baileyi pada nira  yang  sebelumnya  telah  direbus  sampai timbul gelembung  didih  dan  selanjutnya disimpan  dalam  lemari  pendingin  selama  3 malam.

## Perlakuan terhadap hewan uji
Semua  hewan  uji  kecuali  kelompok hewan  uji  kontrol  negatif  1  dan  2  diberi perlakuan timbal asetat setiap hari selama 30 hari  dengan  dosis  100  mg/kg  bb  yang dilarutkan dalam larutan CMC 5%. Pemberian  Perlakuan  rendaman U . baileyi dalam  nira  segar dan nira  rebus  dilakukan sehari  setelah  pemberian timbal asetat selama  15  hari  berturut-turut  masing-masing dengan  3  dosis  yang  berbeda  yaitu  dosis 3.500;  6.000;  dan  10.500  mg/kg  bb, sedangkan untuk kontrol diberi CMC sebesar 1  ml.  Pemberian  dilakukan  secara  oral melalui  pencekokan  menggunakan  suntikan vol. 5 ml dan jarum sonde .
Desak Made Malini, dkk: Pengaruh Rendaman Kayu Angin ( Usnea baileyi ) dalam Nira Segar dan Nira Rebus Terhadap Hati Tikus ( Rattus norvegicus ) yang Terpapar Timbal Asetat

## Teknik pengambilan data
Sehari  setelah  perlakuan  dihentikan, semua  hewan  uji  dikorbankan  dengan  cara dislokasi leher, selanjutnya dibedah, diisolasi organ  hatinya  dan  sebelum  ditimbang dibersihkan  terlebih  dahulu  dengan  larutan NaCl fisiologis 0,9%.
Untuk  pengamatan  morfologi,  yang diamati  warna  dan  kelainan  yang  tampak pada  permukaannya.  Pengamatan  morfologi dilakukan  secara  langsung  atau  deskriptif berdasarkan  ketentuan  dari Budiono  dan  S. Herwiyanti  (2000) ,  sedangkan  pengamatan histologi  dilakukan  pada  preparat  histologi hati  yang  dibuat  dengan  pewarnaan  HE. Penilaian  dilakukan  dengan  memberi  skor pada  parameter  yang  telah  ditentukan. Data yang diperoleh  dianalisis dengan uji statistik non-parametrik Kruskal-Wallis. Bila terdapat perbedaan  yang  nyata  diantara  kelompok
perlakuan, dilanjutkan dengan Uji Pembandingan Berganda (Uji Z).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  Rendaman  U.  baileyi  dalam Nira  Segar  dan  Nira  Rebus  terhadap Morfologi  Hati  Tikus  yang  diinduksi

## Timbal Asetat
Hasil  pengamatan  secara  morfologi meliputi  warna  dan  kontur  permukaan  hati akibat pemberian rendaman U. baileyi dalam nira  segar  dan  nira  rebus  ditampilkan  pada [tabel 1] .
Menurut Robins & Kumar (1992),  hati yang  normal  memiliki  permukaan  rata  dan halus  serta  berwarna  merah  kecokelatan, sedangkan  hati  yang  tidak  normal  memiliki kontur  yang  kasar  danmengalami  perubahan warna  seperti  memucat.  Berdasarkan  hasil pengamatan  secara morfologi menunjukkan bahwa  terdapat  kelainan  warna  dan  kontur hati  pada  kelompok  perlakuan  P1  (diberi timbal asetat ), P4 (diberi timbal asetat +rendaman U . baleyi 3.500 mg/kg  bb dalam  nira  segar) dan  P7  (diberi timbal asetat +rendaman U . baleyi 3.500 mg/kg  bb dalam  nira  rebus) .  Namun  secara  statistik tidak  berbeda  nyata  apabila  dibandingkan dengan kontrol.
Pengaruh  Rendaman  U.  Baileyi  dalam Nira  Segar  dan  Nira  Rebus  terhadap Histologi  Hati  Tikus  yang  diinduksi

## Timbal Asetat
Pada  penelitian  ini,  struktur  histologi  hati tikus  yang  diamati  meliputi  keadaan vena sentralis ,        susunan        sel        parenkim, sinusoid dan  inti  sel  hati.  Hasil  pengamatan histologi  hati  tikus  yang  diberi  rendaman U . baileyi dalam  nira  segar  dan  nira  rebus disajikan pada [tabel 2].
Berdasarkan hasil pengamatan histologi hati  pada  kelompok  perlakuan  tikus  P2,  P3, P6,  P7  dan  P8  menunjukkan  kondisi  normal dengan  karakteristik  lebar vena  sentralis normal, sinusoid utuh  serta  sel hepatosit dengan nukleus normal dan susunan sel yang
Tabel  1. Hasil  Pengamatan  Warna    dan  kontur  Hati  Tikus  yang  diberi  Rendaman U . baileyi dalam
Nira Segar dan Nira Rebus Parameter Perlakuan Warna hati Rata-rata Skor Kontur/ permukaan hati Rata-rata Skor
P 1 = Kontrol positif (100 mg timbal asetat)
1 Merah kecokelatan
1 Kasar, ada kelainan 1 2 Merah kecokelatan Kasar, ada kelainan 3 Merah kecokelatan Kasar, ada kelainan P 2 = Kontrol negatif (nira segar) 1 Merah tua
0 Halus, tidak ada kelainan 0 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan 3 Merah tua Halus, tidak ada kelainan P 3 = Kontrol negatif ( nira rebus) 1 Merah tua
0 Halus, tidak ada kelainan 0 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan 3 Merah tua Halus, tidak ada kelainan P 4 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 3.500 mg/kg bb dalam nira segar 1 Merah kecokelatan 1 Kasar, ada kelainan 1 2 Merah kecokelatan Kasar, ada kelainan 3 Merah kecokelatan Kasar, ada kelainan P 5 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 6.000 mg/kg bb dalam nira segar 1 Merah tua
0
Halus, tidak ada kelainan 0 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan 3 Merah tua Halus, tidak ada kelainan
P 6 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 10.500 mg/kg bb dalam nira segar 1 Merah tua 0 Halus, tidak ada kelainan 0 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan 3 Merah tua Halus, tidak ada kelainan P 7 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 3.500 mg/kg bb dalam nira rebus 1 Merah kecokelatan 1 Kasar, ada kelainan 1 2 Merah kecokelatan Kasar, ada kelainan 3 Merah kecokelatan
Kasar, ada kelainan P 8 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 6.000 mg/kg bb dalam nira rebus 1 Merah tua
0 Halus, tidak ada kelainan 0 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan 3 Merah tua Halus, tidak ada kelainan P 9 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 10.500 mg/kg bb dalam nira rebus 1 Merah tua
0 Halus, tidak ada kelainan 0 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan 2 Merah tua Halus, tidak ada kelainan
Keterangan: Skor 0  = normal, Skor 1 = kerusakan ringan, Skor 2 = kerusakan parah
teratur.  Sedangkan  kelompok  P1(kontrol positifyang  diberi timbal asetat )  dan kelompok  P4  (rendaman U.  baileyi dosis 3500  mg/kg  BB  dalam  nira  segar  yang diberi timbal asetat )  menunjukkan  derajat kerusakan  struktur  hati  dengan  kriteria rusak parah yang ditunjukkan dengan vena sentralis sempit, sinusoid melebar  dan tidak  utuh,  sel hepatosit dengan  nukleus yang nekrosis dan  susunan  sel  yang  tidak
teratur.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa rendaman U . baileyi dalam  nira  segar  di atas  dosis  3500  mg/kg  BB dapat memperbaiki kerusakan histologi hati yang diinduksioleh timbal asetat .
Hasil  pengamatan  secara  histologi akibat  pemberian  rendaman U.  baileyi dalam  nira  segar  dan  nira  rebus  terhadap organ  hati  tikus  yang  diinduksi timbal asetat ditampilkan pada [gambar 1]
Desak  Made  Malini,  dkk:  Pengaruh  Rendaman  Kayu  Angin  ( Usnea  baileyi )  dalam  Nira  Segar  dan  Nira Rebus Terhadap Hati Tikus ( Rattus norvegicus ) yang Terpapar Timbal Asetat
Tabel  2. Hasil  Pengamatan  Histologi  Hati  Tikusyang  diberi  Rendaman  Usnea  baileyi  dalam  Nira Segar dan Nira Rebus Parameter Perlakuan Vena sentralis Sinusoid Inti Sel Susunan Sel Skor Rata-rata Skor Derajat Kerusakan P 1 = Kontrol positif (100 mg timbal asetat) 1 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2 2d kerusakan parah 2 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2 3 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2 P 2 = Kontrol negatif (1 ml nira segar) 1 Teratur Utuh Normal Teratur 0 0a normal 2 Teratur Utuh Normal Teratur 0 3 Teratur Utuh Normal Teratur 0 P 3 = Kontrol negatif (1 ml nira rebus) 1 Teratur Utuh Normal Teratur 0 0a normal 2 Teratur Utuh Normal Teratur 0 3 Teratur Utuh Normal Teratur 0 P 4 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 3.500 mg/kg BB dalam nira segar 1 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2 2d kerusakan parah 2 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2
3 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2 P 5 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 6.000 mg/kg BB dalam nira segar 1 Teratur Tidak Utuh Normal Teratur 1 1,6cd kerusakan ringan 2 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2
3 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis
Tidak Teratur
2 P 6 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 10.500 mg/kg BB dalam nira segar 1 Teratur Utuh Normal Teratur 0 0,3 ab normal 2 Teratur Utuh Normal Teratur 0 3 Teratur Tidak Utuh Normal Tidak Teratur 1 P 7 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 3.500
mg/kg BB dalam nira rebus 1 Tidak Teratur Tidak Utuh Normal Tidak Teratur 0 0,6abc kerusakan ringan 2 Tidak Teratur Tidak Utuh Normal Tidak Teratur 1 3 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis
Tidak Teratur
1 P 8 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 6.000 mg/kg BB dalam nira rebus 1 Teratur Utuh Normal Teratur 0 0 a normal 2 Teratur Utuh Normal Teratur 0 3 Teratur Utuh Normal Teratur 0 P 9 = timbal asetat + rendaman U. baleyi 10.500 mg/kg BB
dalam nira rebus 1 Teratur Tidak Utuh Normal Teratur 1 1,3bcd kerusakan ringan 2 Tidak Teratur Tidak Utuh Nekrosis Tidak Teratur 2 3 Teratur Tidak Utuh Normal Teratur 1
Keterangan:        huruf  yang  sama  dalam  satu  kolom  menyatakan  tidak  ada  perbedaan    yang  nyata  (P>0,05),  Skor  0    =  normal,  Skor  1  = kerusakan  ringan:  terdapat  1-2,  kategori  kerusakan,  Skor  2  =  kerusakan  parah:  terdapat  3-4  kategori  kerusakan.
b a d a c a d b d a c a d
Gambar 1. Fotomikrografi histologis hati setelah diberi perlakuan selama 15 hari berturut-turut.
Keterangan:  A= timbal asetat 100 mg/kg BB (P1) B= nira segar 1 ml (P2), C= nira rebus 1 ml (P3) D= timbal asetat 100 mg/kg BB+ rendaman U. baileyi dalam nira segar 3.500 mg/kg BB(P4), E= timbal asetat 100 mg/kg BB+ rendaman U. baileyi dalam nira segar 10.500 mg/kg BB(P6), F= timbal asetat 100 mg/kg BB+ rendaman U. baileyi dalam nira rebus 6000 mg/kg BB(P8); a = vena sentralis , b = inti sel normal, c = sinusoid , d = susunan sel
Kerusakan  jaringan  hati  karena  zat toksik  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor, seperti  jenis  zat  kimia  yang  terlibat,  dosis yang  diberikan,  dan  lamanya  paparan  zat tersebut  seperti  akut,  subkronik  atau  kronik.
Selain  itu,  hati  mempunyai  kemampuan regenerasi  yang  tinggi.  Kehilangan  jaringan akibat  zat-zat  toksik  memacu  mekanisme dimana sel-sel hati mulai membelah dan terus berlangsung sampai perbaikan massa jaringan
C A D B E F
Desak  Made  Malini,  dkk:  Pengaruh  Rendaman  Kayu  Angin  ( Usnea  baileyi )  dalam  Nira  Segar  dan  Nira Rebus Terhadap Hati Tikus ( Rattus norvegicus ) yang Terpapar Timbal Asetat
tercapai (Junqueira, L. et al ., 2007). Aktivitas regenerasi pada hati ini terdapat pada jaringan ikat. Jika terdapat kerusakan pada organ yang berlangsung  terus  menerus  dan  berulang bersamaan  dengan  regenerasi  sel  hati,  maka dapat  terbentuk  jaringan  ikat  yang  berlebihan sehingga akan mengganggu regenerasi sel hati tersebut (Junqueira et al. , 1992).
Nekrosis jaringan hati diawali dengan  pembengkakan  pada  sitoplasma, dilatasi  retikulum  endoplasma (Fawcett,  and W. Don. 2002). Nekrosis dapat terjadi karena adanya  toksin  atau  kurangnya  oksigen  secara akut  di  dalam  sel. Nekrosis dapat  dilihat dengan  berkurangnya  jumlah  inti  pada  sel atau  hilangnya  inti  sama  sekali,  dan pengeruhan  pada  sitoplasma  (Thomas,  1998). Toksikan  pada hepatosit yang  rusak  akan mudah  berkontak  dengan sinusoid ,  dan apabila  konsentrasi  toksikan  tinggi  maka  hal ini  akan  menyebabkan  kerusakan  pada sinusoid (Junqueira et al. , 1992).
Pada  keadaan  normal, vena  sentralis merupakan  sebuah  pembuluh  vena  yang dikelilingi  oleh  sel  endotelium  yang  tersusun rapat  (Flore,  1981)  dan  terletak  pada lobulus hepar dengan hepatosit tersusun secara radier ke  arah vena  sentralis .  Di  dalam hepatosit terdapat  sitoplasma  yang  masih  utuh  dengan nukleus  yang  bulat.  Di  sepanjang hepatosit terdapat sinusoid tempat  mengalirkan  darah yang  nantinya  akan  ditampung  oleh vena
sentralis (Flore,  1981;  Junqueira,  1992; Fawcett, 2002).
Kandungan
U . baileyi diduga mempunyai  aktivitas  menurunkan  kerusakan histologi  hati  yang  diinduksi  oleh timbal asetat karena  kandungan  antioksidan  yang cukup tinggi di dalam U . baileyi , diantaranya adalah saponin , flavanoid , polifenol ,  vitamin C  dan  vitamin  E  (Sharma  &    S.  Kalikotay, 2012). Flavonoid terdiri  dari  sejumlah  besar grup polifenol dengan  sifat  antioksidan. Menurut  Bartosz  (2001) flavonoid adalah derivat fenol yang  disintesis  dalam  jumlah tertentudantersebar  secara  luas  pada  berbagai tanaman  tingkat  tinggi  dalam  bentuk  pigmen dan  jika  senyawa flavonoid terserap  oleh tubuh  makadapat  berfungsi  dalam  fase  air seperti  Vitamin  C  atau  dalam  fase  lemak (lipofilik) seperti vitamin E.
Kemampuan antioksidan dalam senyawa fenolik dan flavonoid yang terkandung dalam U . baileyi dapat  memperbaiki  kerusakan  pada jaringan  hati  akibat  radikal  bebas  melalui beberapa  tahap,  yaitu  memutus  reaksi pembentuk  radikal  bebas;  menyumbangkan atom  H;  mereduksi  radikal  dengan  cara mentransfer  atom  H  atau  oksigen;  mengikat ion timbal asetat yang  bersifat  peroksidan; atau mengubah hidroperoksida menjadi bentuk  stabil  (Tuminah,  2000;  Hariyatmi, 2004).  Dengan  demikian  diduga  kandungan senyawa  aktif  dalam U.  baileyi ini  dapat
efektif  menjadi  penangkal  radikal  bebas  dari timbal asetat .
Vitamin E dan C dapat menghambat dan menetralkan radikal bebas yang baru terbentuk,  sehingga  kerusakan  sel  hati  lebih lanjut  dapat  dicegah  (Kumar et  al .,  2003).
Menurut  Murray et  al., (2003),  vitamin  C bersifat  hidrofil  yang  larut  dalam  air melindungi  membran  sel  luar  terutama  pada sitosol  dan  cairan  ekstraseluler  sehingga ketika  vitamin  C  masuk  ke  dalam  pembuluh darah  maka  akan  mudah  larut  dalam  plasma darah. Ketika radikal bebas dari timbal asetat masuk  ke  dalam  pembuluh  darah,  vitamin  C akan  langsung  bekerja  sebagai  antioksidan dengan  mendonorkan  atom  hidrogen  kepada radikal  bebas,  sehingga  strukturnya  menjadi stabil dan tidak akan merusak sel dan jaringan di  sekitanya  (Dawson et  al. ,  1992).  Oleh karena  itu,  kemungkinan  radikal  bebas  yang merusak  membran  sel  dan  menyebabkan nekrosis pada jaringan hati dapat dicegah oleh vitamin  C  yang  terkandung  di  dalam U. baileyi .
Menurut  Patrick  (2006),  vitamin  E sebagai antioksidan berperan dalam melindungi hepatosit dari  radikal  bebas  dan menetralisir efek kerusakan yang ditimbulkan dari  paparan timbal dengan  cara  memutus rantai peroksil dan radikal aloksil .
Berdasarkan  penelitian  Christijanti et  al. (2010), vitamin E memiliki kemampuan untuk menghentikan lipid  peroksida dengan  cara
menyumbangkan  satu  atom  hidrogennya  dari gugus  OH  kepada lipid  peroksida yang bersifat  radikal  sehingga  menjadi  radikal bebas yang kurang reaktif dan tidak merusak. Menurut  Sulistyowati  (2006),  vitamin  E memiliki kecenderungan untuk mengekstraksi sebuah  atom  hidrogen  dari  senyawa  lain  dan berinteraksi  secara  langsung  dengan  radikal peroksidasi lemak sehingga atom hidrogennya berkurang dan menjadi teroksidasi sempurna.Menurut  Mostafa et  al .,  (2010), vitamin  E  dapat  larut  dalam  fase  lemak  atau lipofilik  sehingga  diduga  sifat timbal yang lipofilik  dapat  memudahkan  vitamin  E  yang terkandung  di  dalam U.  baileyi berperan sebagai  antioksidan  terhadap  radikal  bebas yang ditimbulkan oleh timbal asetat sehingga radikal  bebas  yang  ditimbulkannya  menjadi stabil dan tidak menimbulkan kerusakan pada jaringan.
Rendaman U . baileyi dalam  nira  segar dan  nira  rebus  ini  diduga  dapat  menurunkan kerusakan  histologi  hati  akibat  aktivitas timbal asetat karena  adanya  senyawa  aktif flavonoid , polifenol, vitamin C dan vitamin E. Menurut  Mahdi et  al .,  (2008),  senyawa- senyawa  tersebut  termasuk  antioksidan  yang mampu mencegah pembentukan radikal bebas dan  mencegah  terjadinya  stres  oksidatif. Pemberian  rendaman U.  baileyi dosis  10.500 mg/kg bb dalam nira segar (P 6 ) menunjukkan dosis yang paling efektif. Hal ini karena pada dosis tersebut, rendaman U . baileyi dalam nira
Desak  Made  Malini,  dkk:  Pengaruh  Rendaman  Kayu  Angin  ( Usnea  baileyi )  dalam  Nira  Segar  dan  Nira Rebus Terhadap Hati Tikus ( Rattus norvegicus ) yang Terpapar Timbal Asetat
segar  mampu  menarik  senyawa  metabolit yang  terkandung  dalam  kadar  yang  tepat  dan tidak  memberikan  efek  toksik  bagi  tubuh. Pemberian antioksidan yang melebihi kebutuhan tubuh dapat menyebabkan terbentuknya tannin yang bersifat toksik (Sies H.,  W.  Stahl  &  A.  Sevanian.  2005). Rendaman U.  baileyi dalam    nira  segar  tidak memberikan efek toksik karena tidak mengandung  banyak  ethanol.  Semakin  besar kadar  ethanol  dan  senyawa  metabolit  yang terkandung dalam nira maka efek antioksidan yang  didapatkan  semakin  kecil  karena  akan berubah  menjadi  prooksidan  (Halliwell  & J.M.C. Gutteridge, 1999). Pemberian U.baileyi dosis  10.500  mg/kg  bb  dalam  nira segar  (P 6 )  menghasilkansenyawa  metabolit yang  diperlukan  untuk  menangkal  aktivitas radikal  bebas  dari timbal berada  dalam  kadar yang  efektif    bila  diberikan  dalam  rendaman nira  segar  dengan  dosis  tersebut.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  senyawa  metabolit U. baileyi tergolong  dalam  seyawa  antioksidan karena  dalam  dosis  ini  dapat  menghambat atau  mencegah  oksidasi  yang  dialami  oleh substrat  yang  ada  di  dekatnya  (Halliwell, 1999).
Perlakuan  pemberian  rendaman U.
baileyi dosis 6000 mg/kg bb dalam nira rebus (P 8 )  merupakan  dosis  optimum  dalam menurunkan  kerusakan  histologi  hati  tikus yang  terpapar timbal asetat .  Hal  ini disebabkan  nira  rebus  memiliki  kandungan
alkohol  yang  mampu  menarik  lebih  banyak senyawa  metabolit  yang  terkandung  pada U. baileyi sehingga  jumlah  metabolit  yang diperlukan  untuk  menangkal  radikal  bebas lebih  banyak  terdapat  pada  rendaman U. baileyi dalam  nira  rebus  dibandingkan  pada rendaman U.  baileyi dalam  nira  segar. Menurut  Silalahi  (1987)  bakteri Z.  mobilis yang  terdapat  pada  nira  tidak  mati  walaupun mengalami  perebusan,  karena  bakteri Z. mobilis memiliki  ketahanan  terhadap  panas dan  asam,  sehingga  proses  perendaman selama  72  jam  memberikan  kesempatan  bagi bakteri Z.  mobilis untuk  memfermentasi  gula dalam  nira  rebus  menghasilkan  alkohol  yang mampu  menarik  kandungan U.  baileyi secara optimum  bila  dibandingkan  rendaman U. baileyi dalam nira segar. Rendaman U. baileyi dosis  6000  mg/kg  bb  dalam  nira  rebus  (P 8 ) merupakan  dosis  dengan  kandungan  senyawa metabolit  yang  efektif  untuk  menurunkan kerusakan  histologi  hati  tikus  yang  terpapar timbal asetat .  Berdasarkan [tabel  2] .  didapat bahwa  semakin  tinggi  dosis  rendaman U. baileyi dalam  nira  rebus  maka  semakin  kecil tingkat kerusakan histologi hati yang dihasilkan.

## KESIMPULAN
Rendaman Usnea  baileyi baik dalam nira  segar  dan  nira  rebus  dapat  memperbaiki kerusakan  histologi  maupun  morfologi  hati tikus  yang  diinduksi timbal asetat .    Dosis
yang  memberikan  pengaruh  terbaik  dalam menurunkan  kerusakan  histologi  hati  tikus yang  diinduksi timbal asetat adalah    10.000
mg/kg bb rendaman U. baileyi pada nira segar dan  6.000  mg/kg  bb  dalam  nira  rebus.

## DAFTAR PUSTAKA
Bartosz  G.  2001. Flavonoid  Antioxidants . Current  Medicinal  Chemistry.  p.  797- 807.
Budiono  B  &  S  Herwiyanti.  2000.  The histological  structure  of  liver  of  rats after consuming extract  of lamtoro leaf and green tea ( Leucaena
Leucochephala ). Jurnal  Kedokteran YARSI , 8(2): 16-24
Christijanti  W,  NR  Utami  &  I  Arya.  2010. Efek  pemberian  antioksidan  vitamin  c dan  e  terhadap  kualitas  spermatozoa tikus putih terpapar allethrin.
Biosaintifika , Vol. 2: 18-26.
Fardiaz S. 1992. Polusi air dan polusi udara . Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas  Pangan  dan  Gizi.  Institut Pertanian Bogor.
Fawcett  F  &  W.  Don.  2002. Buku  Ajar Histologi .  12th  ed.  Jakarta:  EGC.  hal: 583-97.
Flore MSH. 1981. Atlas of Human Histology , Edisi V. Philadelphia: Lea and Febiger.
Giodino J. 2002. Usnea. Online at http://www.susunweed.com [diakses tanggal 26 April 2013].
Guerer H & N Ercal. 2000. Can antioxidants be  beneficial  in  the  treatment  of  lead poisoning?  Free  Radic. Biol  Med , 29(10):927-945.
Halliwell  B  &  JMC  Gutteridge.  1999. Free Radicals  in  Biology  and  Medicine .  Ed ke-3. New York: Oxford University.
Hunneck S & I Yoshimura. 1996. Identification  of  Lichen  Substances .
Berlin: Springer-Verlag. Julyasih KSM, IGP Wirawan, WS Harijani & W Widajati. 2009. Aktivitas Antioksidan  Beberapa  Jenis  Rumput
Laut  (Seaweeds)  Komersial  Di  Bali.
Seminar Nasional Universitas Pembangunan  Nasional ,  hal  2.Jawa Timur.
Junqueira  L,  J  Carneiro,  &  R.O.  Kelley.
2007. Histologi  Dasar ,  Edisi  ke-8,alih bahasa J. Tambayong. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran, EGC. hlm: 370-387. Junqueira L, J Carneiro, & RO Kelley. 1992. Histologi  Dasar ,  Edisi  III,  alih  bahasa J.  Tambayong.  Jakarta:  Penerbit  Buku Kedokteran.
Knight  J.  2003.  Your  Guide  to  Healthy
Herbs. Online at http:// www.healthyherbs.com/cs/hotherbs/a/0
50703.html  [diakses  pada  tanggal  17
Oktober 2014].
Komousani  TA  &  SS  Mouselhy.  2011.
Modulation  of  lead  biohazards  using  a combination of epicatechin and lycopene in rats . Human and Experimental Toxicology , 30(10) 1674- 1681.
Kumar V, RS Cotrans,  &  SL  Robben. 2003. Basic  Science  Pathology ,  Ed.7th  Vol.3 No.6.
Librawati  TP.  2005.  Analisis  Cemaran  Pb pada  Bawang  Daun  ( Allium  fistulosum L) di daerah Dieng Wonosobo. Skripsi . Fakultas Biologi Unsoed Purwokerto.
Lu  CF.  1995. Toksikologi  Dasar:  Asas , Organ Sasaran , dan Penilai Resiko , Ed
2: 206-220. Jakarta: Penerbit Universitas Indonesia Press.
Mahdi  B,  MM  Khalil,  &  AI  Abulgasim. 2008. The effect of fresh crushed garlic bulbs (Allium sativum ) on plasma lipids in  hypercholesterolemic  rats,  Res. J. Anim. Vet. Sci , 3: 15-19.
Mostafa  MH,  Osfor,  HS  Ibrahim,  YA
Mohamed, SM Ahamed, ASAE Azeem, & AM Hegazy. 2010. Effect of Alpha  Acid  and  Vitamin  E  on  Heavy
Desak Made Malini, dkk: Pengaruh Rendaman Kayu Angin ( Usnea baileyi ) dalam Nira Segar dan Nira Rebus Terhadap Hati Tikus ( Rattus norvegicus ) yang Terpapar Timbal Asetat
Metals  Intoxication  in  Male  Albino Rats. Journal of America Science, 6(8):
56-63.
Murray  RK,  DK  Graner,  PA  Mayes,  &  VW Rodwell. 2003. Biokimia Harper , Edisi 24:611-613. Jakarta: EGC.
Noer IS, C Hadiansyah, & S Irmayanti. 2009. Taksonomi dan aktivitas antimutagenik kayu  angin  ( Usnea sp.)  pada  Mencit Swiss  Webster. Seminar  Nasional  dan Temu  Alumni  Inovasi  Biologi  dan
Pendidikan Biologi dalam Pengembangan Sumber Daya Manusia .
Auditorium  FMIPA  UPI,  Bandung  15- 16 Juli 2009.
Nurliani  A,  HB  Santoso,  &  Rusmiati. 2012.Efek  antioksidan  ekstrak  bulbus bawang Dayak ( Eleutherine palmifolia ) pada  gambaran  histopatologis  paru- paru  tikus  yang  dipapar  asap  rokok.
Bioscientiae Vol 9 No. 1 Hal 61.
Ohmura  Y.  2001.  Taxonomic  study  of  the genus Usnea (lichenized  Ascomycetes)
In Japan  and  Taiwan .  The  Journal  Of The Hattori Botanical  Laboratory, 90: 1-96.
Patrick L. 2006. Lead toxicity part ii: the role of  free  radical  damage  and  the  use  of antioxidants  in  the  pathology  and treatment  of  lead  toxicity. Alternative Medicine Review , 11(2): 114-127. Ratu A. 2009. Pohon Kelapa, Nira dan Gula. Online at http://amandaratu.com [diakses tanggal 22 April 2013].
Robbins  SL  &  V  Kumar.  1995. Buku  Ajar Patologi  I .  Ed.  4  hal:  304-305,  EGC. Alih bahasa, Staf Pengajar Laboratorium Patologi Anatomi.
Surabaya: FK Unair.
Sharma  BC  &  S  Kalikotay.  2012.  Screening of  antioxidant  activity  of  lichens Parmotrema  reticulatum and Usnea  sp . from  Darjeeling  hills,  India. IOSR Journal  of  Pharmacy, Nov-Dec;  2(6): 54-60.
Sies  H,  W  Stahl,  &  A.Sevanian.  2005. Nutritional,  dietary  and  post-prandial oxidative  stress. J  Nutr ;  135:969-
72. [PubMed].
Silalahi TD. 1987. Isolasi bakteria
Zymomonas  mobilis dari  nira  aren
( Arenga pinnata ) dan menguji kemampuannya dalam pembuatan alkohol dari tetes. Online at http://diglib.sith.itb.ac.id/ [diakses tanggal 22 April 2013].
Sulistyowati  Y.  2006.  Pengaruh  pemberian likopen  terhadap  status  antioksidan (Vitamin  C,  Vitamin  E  dan  Gluthation
Peroksidase)  tikus  ( Rattus  norvegicus galur Sprague Dawley) hiperkolesterolemik. Tesis .  Semarang:
Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro.
Tarwiyah  T  &  Kemal,  2001. Nira .  Padang: Dewan  Ilmu  Pengetahuan,  Teknologi dan Industri Sumatera Barat.
Thomas  C.  1998. Histologi  buku  teks  dan atlas  untuk  pelajaran  patologi  umum dan  khusus ,  edisi  10,  alih  bahasa  H. Tonang.,  L.  Widjaya  dan  I.  Libertus, editor  Dr.  Petrus  Adrianto.  Jakarta: Kedokteran EGC.
Tuminah  S.  2000.  Radikal  bebas  dan antioksidan:  kaitannya  dengan  nutrisi dan penyakit. Cermin Dunia Kedokteran , 128: 49-50. Wang  L,  Z  Wang  &  J  Liu.  2010.  Protective effect of N-acetilcysteine on experimental chronic lead nephrpotoxicity  in  immature  female rats. Human and Experimental Toxicology, 29(7) : 581-591.
Yushui  M,  D  Fu,  &  Z  Liu.  2012.  Effect  of lead  on  apoptosis  in  cultured  rat primary  osteoblast. Toxicology  and Industrial Health, 28(2): 136-146.