J. Kartika Kimia , November 2022, 5, (2), 152-156 Journal homepage : http://jkk.unjani.ac.id/index.php/jkk P-ISSN: 2655-1322     E-ISSN: 2655-0938

## Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Daun Kedondong (Spondias dulcis) Melalui Penangkal Radikal Superoksida

## Antioxidant Activity of Ambarella (Spondias dulcis) Leaf Extract Through
Superoxide Radical Scavenging
Ucu Wandi Somantri 1 , Tarso Rudiana 2,* , Prasetyo Alfaridzi Kuncoroyekti 3
1 Program Studi Kesehatan Masyarakat, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar
2 Program Studi Kimia, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar
3 Program Studi Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta *E-mail: tarso.rudiana@gmail.com
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v5i2.168
Received : 29 August 2022, Revised : 3 Oct 2022, Accepted : 10 Oct 2022, O nline : 30 Nov 2022

## Abstrak
Kedondong  ( Spondias  dulcis )  merupakan  tumbuhan  tropis  yang  diketahui  memiliki  aktivitas antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas  antioksidan  ekstrak n -heksana,  etil asetat  dan  metanol  daun S.  dulcis melalui  penangkal  radikal  superoksida  serta  mengkarakterisasi senyawa fitokimia pada ekstrak dengan LCMS/MS. Serbuk daun S. dulcis dimaserasi dengan n -heksana, etil asetat dan metanol. Aktivitas antioksidan diuji melalui penangkal radikal superoksida. Ekstrak n - heksana daun S.  dulcis memiliki  aktivitas antioksidan  terbaik  dengan  nilai  IC 50 sebesar  2080  µg/mL. Berdasarkan    LCMS/MS  terdeteksi  6  senyawa  pada  ekstrak n -heksana  yaitu  pada  waktu  retensi  ( Rt ) 3,23-9,89 menit. Senyawa ajmalin, skopoletin, skoparon, 3-metil-6-[[2-(2-metilbut-3-en-2-il)-1H-indol- 3-il] metiliden] piperazin-2,5-dion, [3-hidroksi-3-metilbut-1-enil]-5,7-dimetoksi-2-fenil-2,3- dihidrokromen-4-on, dan 4-hidroksi-3-(3-metilbut-2-enil)fenil]etanon.
Kata kunci: antioksidan, n-heksana, Spondias dulcis, superoksida.

## Abstract
Ambarella (Spondias dulcis) is a tropical plant which is known to have antioxidant activity. This study aims to determine  the  antioxidant  activity  of  the  n-hexane,  ethyl  acetate  and  methanol  extracts of  S. dulcis leaves through superoxide radical scavenging and to characterize the phytochemical compounds in the extract using LCMS/MS. S. dulcis leaf powder was macerated with n-hexane, ethyl acetate and methanol. Antioxidant activity was tested through superoxide radical scavengers. The n-hexane extract of  S.  dulcis  leaves  had  the  best  antioxidant  activity  with  an  IC 50 value  of  2080  µg/mL.  Based  on LCMS/MS, 6 compounds were detected in the n-hexane extract at retention time (Rt) 3.23-9.89 minutes. Compounds  Ajmalin,  Scopoletin,  scoparone,  3-methyl-6-[[2-(2-methylbut-3-en-2-yl)-1H-indole-3-yl] methyldene]piperazine-2,5-dione, [3-hydroxy-3-methylbut-1-enyl]-5,7-dimethoxy-2-phenyl-2,3- dihydrochromene-4-one, and 4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl)phenyl ]ethanone.
Keywords: antioxidant, n-hexane, Spondias dulcis, superoxide

## 1 Pendahuluan
Sistem  kekebalan  tubuh  sangat  sensitif terhadap  stres  oksidatif  yang  diakibatkan  oleh ketidakseimbangan  radikal  bebas  dalam  tubuh [1,2].  Sel-sel  imun  sangat  bergantung  pada
komunikasi  sel-selnya,  terutama  melalui  reseptor yang  terikat  membran  untuk  bekerja  secara efektif.  Radikal  bebas  yang  dihasilkan  dari peroksidasi  lipid  dapat  ditunda  atau  dicegah dengan  senyawa  antioksidan  [1].  Antioksidan
dapat  meningkatkan  produksi  interleukin-2, meningkatkan  jumlah  subset  sel  T,  berpotensi sebagai  sel  pembunuh  alami,  meningkatkan respons  terhadap  vaksin  virus  influenza  dan meningkatkan  respon  limfosit  terhadap  mitogen [3].
Indonesia merupakan negara dengan biodiversitas  tinggi  memiliki  banyak  tanaman dengan potensi sebagai tanaman obat, kedondong ( Spondias  dulcis )  merupakan  salah  satunya. Genus Spondias mengandung  senyawa  fitokimia seperti saponin, sterol, tanin, triterpenoid, fenolik dan  flavonoid  [4].  Fenolik  merupakan  golongan senyawa sekunder  terbesar  yang  ditemukan  pada tanaman dengan beragam aktivitas biologis seperti antioksidan.
Berbagai  penelitian  telah  dilakukan  terkait pengujian  antioksidan  terhadap  tanaman  genus Spondias . Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan  terhadap  ekstrak  etanol  yang  berasal dari berbagai  bagian  tanaman S.  dulcis diperoleh nilai IC 50 yaitu daging buah, kulit batang dan daun masing-masing sebesar 19,109; 17,609; dan daun 13,687 µg/mL [5]. Ekstrak metanol daun S. dulcis memiliki total flavonoid dan fenolik paling tinggi dibandingkan jaringan lain yaitu sebesar 33,96 mg kuersetin/g  dan16,35  GAE/g  [5,6],  sedangkan pada  ekstrak  kloroform  daun S.  dulcis memiliki nilai IC 50 sebesar 8,96 µg/mL [6].
Eksplorasi  senyawa  metabolit  sekunder  serta aktivitas  terhadap  antioksidan  terutama  enzim SOD dari daun S. dulcis belum banyak dilaporkan. Pada  penelitian  ini  dilakukan  eksplorasi  potensi antioksidan dari daun S. dulcis sebagai peningkat sistem  imun  di  masa new  normal secara in  vitro melalui  penangkal  radikal  superoksida,  sehingga diharapkan  dapat  dijadikan  sebagai  sediaan farmasi  dan  dapat  dijadikan  sebagai  senyawa rujukan dalam isolasi dan pengembangan.

## 2 Metode Penelitian
2.1 Alat dan Bahan LCMS/MS (Acquaty UPLC ® H-Class System, BEH C18, Xevo G2-S QTof), multimode microplate  reader , rotary  vacum evaporator, berbagai alat gelas laboratorium. Daun kedondong ( S. dulcis ), n -heksana, kloroform, etanol 96%, etil asetat,  metanol, nitroblue  tetrazolium  chloride (NBT)  98%,  buffer  fosfat  1,0  M  pH  7,4  (25 o C), tetramethylethylendiamine (TEMED) 99%, riboflavin 98%, dan akuabides.

## 2.2 Ekstraksi Daun S. dulcis
Daun S. dulcis sebanyak 20 kg dikumpulkan dari  Kabupaten  Pandeglang  Banten.  Sampel
dipersiapkan dengan cara dibersihkan, dikeringkan,  dan  dihaluskan.  Pelarut n- heksana, etil asetat dan metanol digunakan sebagai pelarut pada proses maserasi serbuk halus daun S. dulcis . Maserat  dipekatkan  dengan vacuum  rotary evaporator .
2.3 Uji in vitro aktivitas antioksidan SOD [7] Uji aktivitas SOD diawali dengan pembuatan larutan sampel dengan variasi konsentrasi 100; 20; 10;  7;  6;  5;  4;  3;  2;  1,5;  1;  0,5  µM.  Selanjutnya dilakukan pembuatan larutan reagen NBT 10 mM, larutan  Riboflavin  0,5  mM,  larutan  buffer  fosfat pH  7,4  1  M  dan  larutan  TEMED  0,1  M.. Berikutnya  dilakukan  uji  pendahuluan  dimana campuran  larutan  sampel  dengan  NBT  diukur absorbansinya  dengan  menggunakan microplate reader (450-560 nm).
Selanjutnya  dibuat  larutan  kerja  1  dan  2. Larutan kerja 1 dibuat dengan menambahkan 320 µL larutan buffer fosfat, 170 µL larutan NBT, 160 µL larutan TEMED dan 240 µL larutan Riboflavin ke  dalam  19.110  µL  akuades.  Larutan  kerja  2 dibuat  dengan  menambahkan  320  µL  larutan buffer  fosfat,  170  µL  larutan  NBT,  dan  160  µL larutan TEMED tanpa riboflavin ke dalam 19.110 µL  akuades. Larutan  uji  dibuat  sebanyak  4  yaitu larutan  S,  B1,  B2,  dan  B3.  Larutan  uji  S  dibuat dengan  menambahkan  40  µL  larutan  sampel dengan  200  µL  larutan  kerja  1.  Larutan  uji  B1 dibuat  dengan  menambahkan  40  µL  metanol dengan  200  µL  larutan  kerja  1.  Larutan  uji  B2 dibuat  dengan  menambahkan  40  µL  larutan sampel dengan 200 µL larutan kerja 2. Larutan uji B3  dibuat  dengan  menambahkan  40  µL  metanol dengan 200 µL larutan kerja 2. Absorbansi larutan uji diukur pada microplate reader (560 nm), lalu dihitung nilai IC 50 aktivitas SOD.

## 2.4 Karakterisasi ekstrak [8]
Ekstrak  dengan  aktivitas  terbaik  dianalisis dengan  LCMS/MS.  Ekstrak  dilarutkan  dengan pelarut yang sesuai. Larutan ekstrak sebanyak 20 µL  disuntikan  pada  kolom  C18  (RP18)  superco (diameter  2,1  mm,  panjang  50  mm,  ukuran partikel  1,8  µm),  sistem Electrospray  Ionisation (ESI) model ion positif. Kecepatan alir fasa gerak 0,3 mL/menit (metanol:air (9:1)
3 Hasil dan Diskusi
3.1 Ekstrak daun S. dulcis
Senyawa  fitokimia  yang  terkandung  pada daun S.  dulcis terekstrak  melaui  proses  maserasi dengan bantuan pelarut senyawa organik. Hal ini dikarenakan  pelarut  organik  dapat  memecahkan dinding dan membran sel [9].
Pelarut n -heksana  digunakan  di  awal  proses maserasi  hal  ini  dilakukan  untuk  menarik senyawa-senyawa yang bersifat non-polar seperti sterol,  asam  lemak,  kumarin,  dan  beberapa terpenoid [10]. Selanjutnya maserasi menggunakan  etil  asetat  untuk  menarik  senyawa fitokimia semipolar  seperti  flavonoid  termetilasi, flavonoid aglikon, beberapa alkaloid dan tanin dan tahapan  terakhir  maserasi  menggunakan  metanol untuk mengekstrak senyawa polar seperti fenolik, flavonoid dan alkaloid [11]. Berikut disajikan data % rendemen dari masing-masing ekstrak:
Tabel 1. Data rendemen ekstrak
3.2 Aktivitas antioksidan Ekstrak Daun S.
dulcis Aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun S.  dulcis dianalisis
dengan metode Riboflavin- Nitrobluetetrazolium (Rb-NBT)  dimana  cara kerjanya  seperti  enzim  superoksida  dismutase (SOD). Metode uji antioksidan ini bekerja dengan menangkal radikal bebas anion superoksida (O 2 .- ). Radikal  superoksida  akan  bereaksi  dengan nitrobluetetrazolium dan diukur serapan kompleksnya  pada  panjang  gelombang  560  nm (Gambar  1)  [12].  Radikal  anion  superoksida adalah  prekursor  pembentukan  spesi  oksigen reaktif lainnya (ROS). Oleh karena itu penangkalan  radikal  superoksida  sangat  penting agar  dapat  mencegah  penyakit  yang  ditimbukan akibat dari stres oksidatif.
Tabel 2. Aktivitas antioksidan ekstrak daun
S. dulcis
Ekstrak n -heksana daun S. dulcis menghasilkan  nilai  antioksidan  terbaik  dengan IC 50 sebesar  2080  µg/mL  (Tabel  2).  Nilai  IC 50 yang  dihasilkan  tersebut  berada  pada  kategori sangat lemah [13].

## 3.3 Karakteristik ekstrak n-heksana daun S. dulcis
Karakterisasi  dilakukan  menggunakan  LC- MS/MS  supaya  dapat  diketahui  senyawa  yang terkandung  di  dalam  esktrak.  Fasa  terbalik digunakan  pada  sistem  LC-MS/MS.  Fasa  gerak bersifat  lebih  polar  dibandingkan  dengan  fasa diamnya. Fasa diam yang digunakan adalah kolom C18  (oktadesil  silana)  [14].  Pemisahan  yang terjadi  pada  kromatogram  cair  dikarenakan senyawa-senyawa yang bersifat kurang polar akan tertahan lebih lama pada kolom C18. Tertahannya senyawa-senyawa  tersebut  karena  adanya  gaya Van der Waals. Senyawa polar akan terelusi lebih cepat  dengan  fasa  gerak,  sehingga  terjadi pemisahan  [15].  Hal  ini  menyebabkan  pada kromatogram  akan  terlebih  dahulu  muncul senyawa yang bersifat lebih polar [16].
Ekstrak n -heksana  yang  dikarakterisasi memunculkan sebanyak 6 senyawa yang terdeteksi pada LC-MS/MS (Tabel 3).
Kromatogram  yang  didapatkan  (Gambar  2) memunculkan banyak senyawa, sedangkan hanya sebanyak 6 senyawa yang terdeteksi. Hal ini dapat terjadi  akibat  koelusi  pada  proses  pemisahan. Koelusi merupakan kejadian dimana 2 atau lebih senyawa  tidak  terpisah  secara  kromatografi  [17], yang  menyebabkan  satu  puncak  kromatografi berisi beberapa molekul senyawa. Berikut adalah
Ekstrak Massa (g) % rendemen n- heksana 200,5 3,71 Etil asetat 168,95 3,12 Metanol 150.56 2,78
Ekstrak Nilai IC 50 (ppm) n- heksana 2080 Etil asetat 3500 Metanol 2200
Gambar 2 . Kromatogram esktrak
n -heksana daun S. dulcis
senyawa-senyawa  yang  diperkirakan  ada  pada ekstrak (Tabel 3).
Tabel 3 . Perkiraan senyawa yang terdapat pada ekstrak n -heksana daun S. dulcis Nama Senyawa Rt (menit) Fit Conf. (%) Ajmalin ( 1 ) 3,23 90 Skopoletin ( 2 ) 5,01 99 Skoparon ( 3 ) 7,20 94 3-metil-6-[[2-(2- metilbut-3-en-2-il)-1H- indol-3-il] metiliden] piperazin-2,5-dion ( 4 ) 8,13 70 [3-hidroksi-3-metilbut-1- enil]-5,7-dimetoksi-2- fenil-2,3- dihidrokromen-4-on ( 5 ) 9,60 85 4-hidroksi-3-(3-metilbut- 2-enil)fenil]etanon ( 6 ) 9,89 84
Hasil  karakterisasi  menunjukkan  bahwa ekstrak n- heksana  daun S.  dulcis mengandung sedikit senyawa yang memiliki gugus pendonor H (Gambar 3). Hal ini dikarenakan ekstraksi pelarut n -heksana  bersifat  non-polar  sehingga  hanya dapat  melarutkan  senyawa  fitokimia  yang memiliki  kepolaran  sama.  Gugus  H  biasanya memiliki peran penting dalam menangkal radikal bebas.
Gambar 3 . Struktur senyawa yang terkandung pada ekstrak n -heksana daun S. dulcis
4 Kesimpulan
Nilai  aktivitas  antioksidan  (IC 50 )  ekstrak n - heksana  daun S.  dulcis sebesar  2080  µg/mL. Berdasarkan  analisis  LCMS/MS  ekstrak n -
heksana  menunjukkan  adanya  6  senyawa  yang terdeteksi  yaitu  senyawa  ajmalin,  skopoletin, skoparon, 3-metil-6-[[2-(2-metilbut-3-en-2-il)- 1H-indol-3-il]  metiliden]  piperazin-2,5-dion,  [3- hidroksi-3-metilbut-1-enil]-5,7-dimetoksi-2-fenil- 2,3-dihidrokromen-4-on,  dan  4-hidroksi-3-(3- metilbut-2-enil)fenil]etanon.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Direktorat  DRTPM  Kemdikbud  RI  yang  telah mendanai  penelitian  ini  pada  skema  penelitian dosen pemula dengan nomor kontrak 156/E5/PG.02.00.PT/2022; 100/SP2H/RT-
MONO/LL4/2022  and  No.  12/PP-Mono/LPPM- UNMA/2020.

## Daftar Pustaka
[1] Halliwell  B,  Gutteridge  JMC.  1991.  Free Radicals  In  Biology  And  Medicine, Second  Edition. Free  Radic  Biol  Med [Internet]  10(6):449–50.  Available  from: http://dx.doi.org/10.1016/0891-
5849(91)90055-8
[2] Hughes  DA.  1999.  Effects  Of  Dietary Antioxidants On The Immune Function Of Middle-Aged  Adults. Proc  Nutr  Soc
[Internet]  58(1):79–84.  Available  from: http://dx.doi.org/10.1079/pns19990012 [3] Chandra RK. 1992. RETRACTED: Effect Of Vitamin And Trace-Element Supplementation  On  Immune  Responses And Infection In Elderly Subjects. Lancet [Internet]  340(8828):1124–7.  Available from: http://dx.doi.org/10.1016/0140- 6736(92)93151-c [4] da  Silva  ARA,  de  Morais  SM,  Mendes Marques MM, de Oliveira DF, Barros CC, de  Almeida  RR,  et  al.  2012.  Chemical Composition, Antioxidant And Antibacterial Activities Of Two Spondias Species  From  Northeastern Brazil. Pharm Biol [Internet] 50(6):740–6. Available from: http://dx.doi.org/10.3109/13880209.2011. 627347 [5] Najihah  VH,  Mugiyanto  E,  Permadi  YW.
2918.  Aktivitas  Antioksidan,  Total  Fenol Dan Total Flavonoid Tanaman Kedondong (Spondias  Dulcis  Soland  Ex  Park). Farnasaubs [Internet] 5(2):61–7. Available from: https://journal.uhamka.ac.id/index.php/far masains/article/view/2375
[6] Islam  SMA,  Ahmed  KT,  Manik  MK,
Wahid  MA,  Kamal  CSI.  2013.  A Comparative  Study  Of  The  Antioxidant, Antimicrobial, Cytotoxic And Thrombolytic Potential Of The Fruits And Leaves  Of  Spondias  Dulcis. Asian  Pac  J Trop  Biomed [Internet]  3(9):682–91. Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2399800 7
[7] Rachmatiah  T,  Kimura  W,  Kusmiati  K. 2021.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol, Etil Asetat Bunga Dan Daun Honje (Etlingera  Elatior  (Jack)  R.M.  Sm)  Pada Darah  Domba  Terinduksi  Tert-  Butil Hidroperoksida  (T-BHP). SAINSTECH FARMA [Internet] 14(2):102–8. Available
from:
http://dx.doi.org/10.37277/sfj.v14i2.1076
[8] Rudiana  T,  Suryani  N,  Indriatmoko  DD, Yusransyah,  Amelia  A,  Noviany,  et  al.
2019.  Characterization  Of  Antioxidative Fraction Of Plant Stem Bouea Macrophylla  Griff. J  Phys  Conf  Ser [Internet] 1341(7):72008. Available from: http://dx.doi.org/10.1088/1742-
6596/1341/7/072008
[9] Chairunnisa  S,  Wartini  NM,  Suhendra  L. 2019. Pengaruh Suhu Dan Waktu Maserasi Terhadap  Karakteristik  Ekstrak  Daun
Bidara  (Ziziphus  Mauritiana  L.)  Sebagai Sumber  Saponin. J  REKAYASA  DAN Manaj AGROINDUSTRI [Internet] 7(4):551. Available from: http://dx.doi.org/10.24843/jrma.2019.v07. i04.p07 [10] Zhang  Q-W,  Lin  L-G,  Ye  W-C.  2018. Techniques  For  Extraction  And  Isolation Of  Natural  Products:  A  Comprehensive Review. Chin  Med [Internet]  13:20. Available from: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2969286 4 [11] Rudiana T, Fitriyanti F, Adawiah A. 2018. Aktivitas Antioksidan Dari Batang Gandaria  (Bouea  Macrophylla  Griff). EduChemia  (Jurnal  Kim  dan  Pendidikan) [Internet] 3(2):195. Available from: http://dx.doi.org/10.30870/educhemia.v3i 2.3328 [12] Deawati Y, Onggo D, Mulyani I, Rosidah YA,  Hastiawan  I,  Utami  RA,  et  al.  2018. Metode Non-Enzimatik
Riboflavin-
Nitrobluetetrazolium  (Rb-NBT)  Sebagai
Teknik  Penentuan  Aktivitas  Penangkal Radikal  Bebas  Anion  Superoksida  Pada Kompleks  Mangan(III)-Salen. Chim  Nat Acta [Internet]  6(1):12.  Available  from:
http://dx.doi.org/10.24198/cna.v6.n1.1628 3 [13] Molyneux P. 2004. The Use Of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH)  For  Estimating  Antioxidant Activity. Songklanakarin  J  Sci  Technol [Internet]  26(2):211–9.  Available  from: https://www.thaiscience.info/journals/artic le/song/10462423.pdf [14] Koltover VK. 2018. Antioxidant
Biomedicine:  From    Chemistry  Of  Free-
Radicals  To  Reliability  Of  Biological Systems. Res  Med  &amp;  Eng  Sci [Internet] 3(3). Available from: http://dx.doi.org/10.31031/rmes.2018.03.0 00565 [15] Hermanto  S.  2009.  Mengenal  Lebih  Jauh Teknik Analisa Spektroskopi Dan Kromatografi. Jakarta: UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta;
[16] Farag MA, Rasheed DM, Kropf M, Heiss AG.  2016.  Metabolite  Profiling  In Trigonella Seeds Via UPLC-MS And GC- MS  Analyzed  Using  Multivariate  Data Analyses. Anal  Bioanal  Chem [Internet]
408(28):8065–78. Available from: http://dx.doi.org/10.1007/s00216-016- 9910-4