## PENGARUH PEMBERIAN  EKSTRAK ETANOL UMBI
BAWANG DAYAK (Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb.)

## SECARA ORAL PADA MENCIT BALB/C  TERHADAP PENCEGAHAN PENURUNAN JUMLAH SEL YANG TEREKSPRESI IFN-ɤ  dan PENINGKATAN JUMLAH
SEL YANG TEREKSPRESI CD 14

## Angeline Novia Toemon
Program Studi S2 Imunologi, Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga Surabaya JL. Airlangga No. 4-6 Surabaya (60286) Telp. 031-5041566, Fax. (031) 5029856 Email: angelinetoemon@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Ekstrak  Etanol  Bawang  Dayak  mengandung  senyawa-senyawa  turunan  Naphtoquinones  dan turunannya, Naphtoquinones tersebut merupakan senyawa antimikroba,antifungal,antiviral,antiparasitik,memiliki  bioaktivitas  anti  kanker  dan  anti  oksidan. Kandungan fitokimia pada bawang dayak diyakini sebagai metabolik sekunder. Unsur Fitokimia pada bawang dayak  yaitu Tanin sebagai antioksidan, Alkaloid sifat basanya memepermudah dekomposisi sinar  UV,  Glikosida  ,Steroid,  Flavonoid  berkaitan  dengan  inakativasi  karsinogen,  anti  proliferasi, penghambatan  siklus  sel,  induksi  apoptosis,differensiasi,inhibisi,angiogenesis  serta  mencegah resistensi multi therapi.
Imunotherapi  Supresi  suatu  metode  terapi  yang  berfungsi  menekan  sistem  imun.  Contoh bahan  obat  yang  berkaitan  dalam  metode  tersebut  adalah  golongan  Glukokortikoid.  Kortikosteroid merupakan  obat  yang  mudah  ditemukan  serta  luas  penggunaanya  di  klinik.  Begitu  luasnya penggunaan  kortikosteroid  ini  bahkan  banyak  yang  digunakan  tidak  sesuai  dengan  indikasi  maupun dosis  dan  lama  pemberian  dapat  menimbulkan  efek  samping  yang  tidak  diinginkan.  Prednisolon mempunyai efek glukokortikoid yang dominan dan merupakan kortikosteroid oral yang paling sering digunakan  dalam  terapi  supresi  penyakit  jangka  panjang.  Berdasarkan  hal  tersebut  perlu  dipikirkan obat dari bahan alam yang  mencegah penurunan imun sistem akibat pemberian kortikosteroid. Pada pemakaian kortikosteroid jangka panjang, jika imun sistem tidak dipertahankan dan  penurunan imun sistem akan terjadi infeksi dan kematian.
Aktivasi  makrofag  dapat  dilakukan  oleh  mediator  yang  dilepaskan  oleh  limfosit  yang dirangsang  antigen  pada  permukaannya.  Aktivasi  makrofag  dapat  pula  oleh  induksi  komponen komplemen,interferon  (IFN)  atau  endotoksin  (LPS)  produk  bakteri.  Aktivasi  makrofag  memerlukan rangsangan  non  spesifik.  Makrofag  sebagai  fagosit  profesional  menghancurkan  patogen  melalui beberapa reseptor merangsang produksi substansi mikrobial melalui CD14.
Tujuan  penelitian  ini  ingin  membuktikan  efek  pemeberian  ekstrak  EEUBD  terhadap pencegahan  penurunan  jumlah  sel  yang  terekspresi  IFN-ɤ    dan  peningkatan  jumlah  sel  yang terekspresi CD 14.
Hewan coba yang digunakan adalah mencit jantan strain BALB/C umur 12 minggu,BB 25-30 gram. Dilakukan random alokasi 30 ekor mencit, yang dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok 1 sampai  kelompok  5  masing–masing  sebanyak  6  ekor  mencit.  Mencit  pada  kelompok  1  atau  kontrol tidak  diberikan  Metilprednisolon  dan  EEUBD.  Mencit  kelompok  2  diberikan  Metilprednisolon. Mencit pada kelompok 3-5 diberikan Prednisolon dan EEUBD dengan konsentrasi 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB.
Mencit pada kelompok 1 diberi sonde larutan CMC Na + 0,5 % sebanyak 0,1ml/10gBB1x/hari (volume lambung mencit sekitar 0,5 - 1 cc) setiap hari selama 14 hari (waktu yang diperlukan untuk terbentuknya respon imun  ialah 10 hari, maka peneliti menetapkan 14 hari untuk  mengurangi risiko kegagalan).  Mencit  pada  kelompok  2  diberi  sonde  larutan  metilprednisolon  oral  0,08  mg/30  grBB mencit/hari.  Mencit  pada  kelompok  3  diberikan  sonde  larutan  metilprednisolon  dan  ekstrak  umbi bawang dayak konsentrasi 50 mg/kgBB setiap hari selama 14 hari. Mencit pada kelompok 4 diberikan sonde larutan metilprednisolon dan ekstrak umbi bawang dayak konsentrasi 100 mg/kgBB setiap hari selama 14 hari. Mencit pada kelompok 5 diberikan sonde larutan metilprednisolon dan ekstrak umbi bawang dayak konsentrasi 200 mg/kgBB setiap hari selama 14 hari.
Hasil yang didapat  adalah Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ada pengaruh pemberian ekstrak etanol umbi bawang dayak (Eleutherine bulbosa (mill.) urb.) secara oral pada mencit BALB/C terhadap pencegahan penurunan jumlah sel yang terekspresi IFN-ɤ secara bermakna dan peningkatan jumlah sel yang terekspresi CD 14 yang kurang bermakna.
Jumlah sel  pengekspresi CD 14 pada kelompok pemeberian dosis 200 mg/kgBB EEUBD dan Metil  Prednisolon  (  P3)  lebih  tinggi  secara  bermakna  dibandingkan  dengan  kelompok  tanpa pemberian  ekstrak  EEUBD  (K)  dan  kelompok  model  (Metil  prednisolon),  dimana  nilai  rerata  dan simpangan  baku  untuk  kelompok  P3  (4,9000    ±  1,54406).  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ada  pengaruh  pemberian  EEUBD    pada  mencit  BALB/C  terhadap  peningkatan  jumlah  sel pengekspresi CD 14 secara bermakna.
Analisis hubungan antara jumlah sel penghasil IFN-ɤ dengan jumlah sel pengekspresi CD 14, hasil statistika uji korelasi antara jumlah sel penghasil IFN-ɤ dengan jumlah sel pengekspresi CD14 menunjukkan hubungan ditemukan hasil yang bermakna (signifikan) adalah 0,005 (CD14) dan kurang signifikan pada nilai  0,054 (IFN-ɤ).
Pada  Uji  Komparasi    Ganda  dengan Post  Hoc  Tests  Games-Howell dari  jumlah    sel pengekspresi CD14 tabel 5.4 di atas, menunjukkan hasil yang bermakna /signifikan pada p<0,05 pada kelompok perlakuan bila pemberian EBD 200 mg/KgBB terhadap pemberian obat Metil Prednisolon. Serta  pada  jumlah  sel  Interferon  Gamma,  menunjukkan  hasil  yang  bermakna  /  signifikan  (p<0,05) pada  kelompok  perlakuan  pemberian  EBD  200  mg/KgBB    terhadap  pemberian  obat  Metil Prednisolon.
Dari  hasil  penelitian  tersebut  dapat  dikatakan  Aktivasi  Makrofag  yang  dilihat  dari peningkatan jumlah sel yang terekspresi CD 14 diikuti dengan peningkatan aktivitas atau jumlah sel IFN - ɤ. Peningkatan yang kurang bermakna dari IFN-ɤ dari penelitian ini kemungkinan dalam peran sel T CD 8 + yang berperan dalam mengsekresikan IFN-ɤ   kurang teregulasi secara optimal serta bisa saja  sel  yang  mengekspresikan  IFN  gamma  terikat  sebagian  dalam  pengecatan  Imunohistokimia dengan metode pewarnaan Double Stain.
Penelitian ini menyimpulkan Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak (EEUBD) dosis 200 mg/kg BB  mempengaruhi  peningkatan  jumlah  sel  yang  mengekspresikan  CD  14  pada  mencit  BALB/C  . Peningkatan  jumlah  sel  yang  mengekspresikan  CD  14  ini  menunjukkan    peningkatan  aktivasi makrofag.
Peningkatan ekspresi IFN gamma pada dosis 200 mg/kgBB pada perlakuan mencit BALB/C kontrol dengan CMC Na menunjukkan bahwa EEUBD kurang bermakna dalam penelitian ini karena
dengan pengecatan Double Stain yang tidak tercat atau terikat baik seperti yang diharapkan sehingga bisa saja sel yang mengekspresikan IFN gamma terikat sebagian dalam pengecatan.
Peningkatan jumlah sel yang mengekspresikan CD 14 dimana meningkatkan makrofag yang aktif ini menunjukkan bahwa peran EEUBD ini dalam respon imun  , berperan dalam mengeluarkan  substansi  penting  termasuk  enzim,lisozim    dimana  akan  memusnahkan  bakteri  atau benda asing.
Kata Kunci :  ekstrak  umbi  bawang  dayak  ,  imunosupresi  ,  aktivasi  makrofag,sitokin  IFN-ɤ  ,  respon imun.

## ABSTRACT
Extract  of  Etanol  Onion  of  Dayak  compounds  of  Naphtoquinones  and  its  generation,  The Naphtoquinones  represent  compound  of  antimikroba,antifungal,antiviral,antiparasitik,  bioaktivitas anti cancer and anti oksidan. Substance fitokimia of onion of dayak believed as sekunder metabolik. Element of Fitokimia  onion of dayak that is Tanin as antioksidan, Alkaloid can decomposite of UV rays,  Glikosida  ,  Steroid,  Flavonoid  relate  to  carcinogen  inakativasi,  anti  proliferasi,  cell  cycle resistance,  induce  apoptosis,differensiasi,inhibisi,angiogenesis  and  also  prevent  therapi  multi resistensi.
Imunotherapi  Supresi  is  functioning  therapy  method  to  depress  immured  system.  Materials drug example  in the method is faction of Glukokortikoid. Kortikosteroid represent drug which is  easy to  be found  and also  usefull in  clinic.  So  broadness usage  of  this  kortikosteroid even  used disagree with  dose  and  also  indication  can  generate  undesirable  side  effects.  Prednisolon  have  effect  of glukokortikoid  dominant  and  represent  most  oral  kortikosteroid  ,  often  used  in  therapy  of  supresi long-range  disease.  Pursuant  to  mentioned  require  to  be  thought  of  drug  natural  materials  which prevent immune degradation system effect of kortikosteroid. The usage of long-range kortikosteroid, if is  immune  system  is  not  be  defended  and  immured  degradation  system  will  happened  death  and infection.
Activation  of  Makrofag  can  be  conducted  by  mediator  discharged  by  stimulated  by  limfosit antigen surface. Activation of Makrofag earn also by component induction of komplemen,interferon ( IFN)  or  of  endotoksin  (  Product  bacterium  LPS).  Activation  of  Makrofag  need  excitement  non spesific. Makrofag as professional fagosit.
Patogen breaking some reseptor to  stimulate production of substansi mikrobial  pass through CD14. Target of this research is proving the  effect of EEUBD to prevention of degradation of cell amount which is expression of IFN-ɤ and improvement of cell amount which expression of CD 14.
Experimental  Animal  is  masculine  Mice  strain  BALB  /  C  ,age  12  minggu,  25-30  gram. Allocation  random  30  tail  of  Mice,  divided  become  5  group,  that  is  group  1  until  group  5  each counted 6 tail of mencit. Mice group 1 or control  do not be given by Metilprednisolon and  EEUBD. Mencit Group 2 given by Metilprednisolon. Mencit group 3-5 given by Prednisolon and  EEUBD with concentration 50 mg / kgBB, 100 mg / kgBB and 200 mg / kgBB.
Mencit  group  1  given  by  condensation  sonde  of  CMC  Na+  0,5  %  counted 0,1ml/10gBB1x/hari ( volume bounce up mencit [about 0,5 - 1 cc) every day during 14 day  needed to time immune respon is 10 day,  specify 14 day to controled failure risk. Mencit [at] group 2 given by condensation sonde of metilprednisolon oral 0,08 mg / 30 mencit grBB / day. Mencit  group 3 given by  condensation  sonde  of  metilprednisolon  onion  corm  extract  and  of  dayak  concentration  50  mg  / kgBB  every  day  during  14  day.  Mencit    group  4  given  by  condensation  sonde  of  metilprednisolon onion  corm  extract  and  of  dayak  concentration  100  mg  /  kgBB  every  day  during  14  day.  Mencit
group  5  given  by  condensation  sonde  of  metilprednisolon  onion  corm  extract  and  of  dayak concentration 200 mg / kgBB every day during 14 day.
Result of this research indicate that there is influence of extract of etanol onion corm of dayak ( Bulbosa Eleutherine ( urb mill.).) by oral  for Mice BALB / C to prevention of degradation of cell amount  which  expression  of  IFN-  ɤ  by  having  a  meaning  of  and  increase  of  amount  of  cell  which [expression of CD 14 less having a meaning .
Amount  of  cell  pengekspresi  of  CD  14  at  group    dose  200  mg    EEUBD    and  Methyl  of Prednisolon ( P3) higher by having a meaning  to be compared to group without  extract of EEUBD ( K)  and  model  group  (  methyl  of  Prednisolon),  where  average  value  and  standard  deviation  for  the group of P3 ( 4,9000 ± 1,54406). Result of this research indicate that there is influence of EEUBD at Mice BALB / C to increase of the amount of cell experesion of CD 14 by having a meaning .
The Analysis about amount of cell producer of IFN-ɤ with amount of cell producer of CD 14, result of statistika test correlation beetween amount of cell producer of IFN-ɤ with amount i of CD14 show found by result of having a meaning of  0,005 ( CD14) and less signifikan at value 0,054 ( IFN- ɤ).
Test of Comparasion Double with Post Hoc Tests Games-Howell from amount  of CD14 this tables of 5.4 above, showing result of having a meaning or  signifikan at  p<0,05 , treatment group of EEBD  200  mg    with  Methyl  drug  of  Prednisolon.  And  also    amount  of  cell  of  Interferon  Gamma, showing result of having a meaning or  signifikan ( p<0,05) at group treatment of  EEBD 200 mg / Kgbb with  Methyl drug of Prednisolon.
From  result  of  the  research  can  be  told,  Activation  of  Makrofag  seen  from  increase  of  the amount of cell which  expression of CD 14 followed with make-up of cell amount or activity of IFN -ɤ. The Increase  of less having a meaning of IFN- of this research , possibility in role of cell of T CD 8+ what play a part in IFN - ɤ having less regulated  in optimal and also cell might possibly expressing IFN gamma tied some of in painting of Imunohistokimia with method coloration of Double Stain.
This  Research  conclude  Extract  of  Etanol  Corm  Onion  of  Dayak  (  EEUBD)  Dose  200  mg .Influence the increase of the amount of cell expressing CD 14  Mice BALB  / C . The Increase of the amount of cell expressing CD 14 this show the make-up of activation of makrofag.
The increase of expression of IFN gamma at  dose 200 mg / kgBB  treatment of Mice BALB / C  control  with  CMC  Na indicate that  EEUBD  less  having a  meaning  in  this research  because  with painting of Double Stain which do not be painted or tied goodness is such as those which expected so that cell might possibly expressing IFN gamma tied some of in painting.
The  increase  of  the  amount  of  cell  expressing  CD  14  where  improving  active  makrofag indicate that role of this EEUBD is important substansi  including enzim,lisozim where will foreign object or bacterium.
Keyword : onion corm extract of dayak , imunosupresi , activation of makrofag,sitokin IFN-ɤ,imunne respon

## PENDAHULUAN
Imunitas  adalah  suatu  kemampuan mengenali  suatu  zat  atau  bahan  sebagai  asing terhadap  dirinya  ,kemudian  tubuh  memberi tanggapan  (respons  imun)  dengan  berbagai cara  seperti  netralisasi,  memasukan  dalam
sistem  metabolisme  atau  melenyapkan  akibat yang tidak menguntungkan tubuh. Imunodulator adalah senyawa/zat yang
membantu  memodulasi/me-regulasi  sistem imun.
Regulasi adalah proses menormalkan/mengoptimalkan  (sistem  imun).
Berdasarkan  penjelasan  tersebut  diketahui bahwa pentingnya
penggunaan imunomodulator  dalam  pengobatan.  Saat  ini telah  diketahui  banyak  jenis  tanaman  herbal yang dapat bermanfaat sebagai imunomodulator, salah satu diantaranya adalah tanaman bawang dayak. Meskipun  belum ada penelitian  yang  menerangkan  bahwa  bawang dayak dapat berfungsi
sebagai imunomodulator, namun dilihat dari kandungan  flavonoid  dan  alkaloid    umbi bawang  dayak  tersebut  dapat  dijadikan  acuan ,kemungkinan  umbi  bawang  dayak  dapat meningkatkan sistem pertahanan tubuh . Selain itu,  secara  empiris  umbi  tanaman  ini digunakan  oleh  masyarakat  di  Jeneponto sebagai  obat  campak  dengan  nama  ralle. (Usmar,  dkk  ,  Fakultas  Farmasi,  Universitas Hasanuddin, Makassar) .
Sedangkan Imunotherapi Supresi suatu metode  terapi  yang  berfungsi  menekan  sistem imun.  Contoh  bahan  obat  yang  berkaitan dalam  metode  tersebut  adalah  golongan Glukokortikoid.  Kortikosteroid  merupakan obat  yang  mudah  ditemukan  serta  luas penggunaanya  di  klinik.  Begitu  luasnya penggunaan  kortikosteroid  ini  bahkan  banyak yang  digunakan  tidak  sesuai  dengan  indikasi maupun  dosis  dan  lama  pemberian  dapat menimbulkan  efek  samping  yang  tidak diinginkan.  Penggunaan  klinis  kortikosteroid adalah  sebagai  terapi  substitusi  terapi  supresi reaksi  host  versus  graft  pada  transplantasi, kelainan  neoplastik  jaringan  limfoid  dan terutama  sebagai  anti  inflamasi  sehingga diharapkan  akan  menghambat  semua  proses peradangan  dan  mengurangi  permeabilitas kapiler  yang  terjadi  akibatnya  (Azis,  2006). Prednisolon mempunyai  efek  glukokortikoid yang  dominan  dan  merupakan  kortikosteroid oral yang paling sering digunakan dalam terapi supresi penyakit jangka panjang.
Berdasarkan hal tersebut perlu dipikirkan  obat  dari  bahan  alam  yang mencegah  penurunan  imun  sistem  akibat pemberian  kortikosteroid.  Pada  pemakaian kortikosteroid  jangka  panjang,  jika  imun sistem  tidak  dipertahankan  dan    penurunan imun sistem akan terjadi infeksi dan kematian.
Pada stadium awal pengenalan (inisiasi)  dalam  respon  imun  ,  terdapat sekelompok  sel  fungsional  yang  disebut antigen  presenting  cells  .    Antigen  yang
diimunisasikan    di  dalam  tubuh  hewan  coba ,pertama  kali  dijamu  oleh  suatu  sel  yang disebut  sebagai  APC  (Antigen  Presenting Cells).  Selanjutnya  di  dalam  tubuh  APC antigen  tersebut  diproses  dan  diekspresikan bersama  MHC  kelas  II  pada  permukaan  sel yaitu  T-Helper.  Adanya  IL-1  dan  IL-2 mengalami diferensiasi menjadi Th-1 dan Th-2 .  IFN-ɤ  yang  dihasilkan  Th-1  akan  memicu peningkatan aktifitas APC.
Fungsi  utama  IFN-ɤ  dalam  mengatur respons  imun  adalah  :  1)  sebagai  aktivator poten  untuk  fagosit  mononuklear,    2) meningkatkan  ekspresi  molekul  MHC  kelas  I dan  ekspresi  molekul  MHC  kelas  II,    3) merangsang  sel  T  untuk  berdiferensiasi    ,  4) mengaktivasi  neutrofil  dan  meningkatkan respiratory  burst,    5)  merangsag  aktivitas sitolitik  sel  NK    ,  6)  merupakan  aktivator  sel endotel  ,meningkatkan  adhesi  sel  CD4 + dan memudahkan ekstravasasi limfosit.
Kemampuan  sel  menyajikan  antigen salah  satunya  dipengaruhi  bagaimana  sel tersebut menangkap antigen dan memprosesnya dan
selanjutnya mengekspresikan  antigen  yang  diproses  pada permukaan  sel  bersama-sama  dengan  MHC kelas II. Produksi sitokin oleh APC dan sel-sel yang  berada  di  dekatnya    maupun  ekspresi molekul  adhesi  berperan  penting.  Selain  itu, saat  sinyal  rangsangan  dilancarkan  penting menentukan  apakah  yang  terjadi  aktivasi  atau toleransi. ( Abbas AK,Litchtman AH ,Pillai  S.
Antigen  processing  dan  presentation    to  T Lymphocytes . Dalam : Celular dan molecular imunology  6 th ed.  Philadelphia,WB  Saunders 2007;  113-36 ). Aktivasi  makrofag  dapat dilakukan  oleh  mediator  yang  dilepaskan  oleh limfosit yang dirangsang antigen pada permukaannya.  Aktivasi  makrofag  dapat  pula oleh  induksi  komponen  komplemen,interferon (IFN)  atau  endotoksin  (LPS)  produk  bakteri. Aktivasi  makrofag  memerlukan  rangsangan non  spesifik.  Makrofag  sebagai  fagosit profesional  menghancurkan  patogen  melalui beberapa reseptor merangsang produksi substansi mikrobial melalui CD14.
Berdasarkan  hal      tersebut  peneliti berupaya  melakukan  penelitian  pengaruh pemberian    ekstrak  etanol  Umbi  Bawang Dayak  / Eleutherine  bulbosa  (Mill.)  Urb secara  oral  pada  mencit  BALB/C    terhadap
pencegahan  penurunan  jumlah  sel  yang mengekspresikan  IFN-ɤ  dan  peningkatan jumlah sel yang mengekspresikan CD 14.

## METODE PENELITIAN

## Instrumen Penelitian
1.  Alat  pemeliharaan  mencit  :  Kandang mencit  dari  kotak  plastik,  ram  kawat,  alas kandang, tempat makanan dan botol air.
2.  Alat untuk pembedahan mencit : kotak kaca dan penutup kaca pembiusan, scalpel (pisau bedah),  surgical  scissor  (gunting  bedah) dan pinset.
3.  Alat  untuk  melarutkan  dan  pemberian ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  : timbangan  mikro  Toledo,  tabung  falcon, alumunium  foil,  vortex  mixer,  sonde lambung, spuit 1 ml terumo dan rak tabung reaksi.
4.  Mikroskop.
5.  ELISA Kit reader

## Bahan Penelitian
1.  Hewan  coba  dengan  kriteria  jenis  mencit ( Mus musculus ) : BALB/c berjenis kelamin
:  jantan,  umur  12  minggu  dengan  berat badan  25  –  30  gram,  kesehatan  mencit dapat diamati dengan gerakan cukup lincah, tidak lesu, kulit bersih dan tanpa luka, mata terang dan tidak sayu.
2.  Jenis  makanan  pellet  CP  511  dan  jenis minuman aquadestila.
3.  Perawatan  mencit  pemberian  makanan pellet,  pemberian  minum  secara  ad  libitum 5  ml/ekor/4  hari,penggantian  sekam  untuk alas  tidur  2  hari  sekali,  untuk  sanitasi kandang  dibersihkan  setiap  hari  dengan suhu  sesuai  dengan  suhu  ruang,  ventilasi dan  sinar  matahari  yang  cukup  dan  tidak lembab.
4.  Pembuatan ekstrak etanol bawang dayak. Umbi  bawang  dayak  dikupas  kulit  luarnya dicuci bersih dan diiris tipis-tipis, kemudian diangin-anginkan
hingga kering.
Selanjutnya  irisan  umbi  bawang  dayak tersebut  dibuat  serbuk.  Ditimbang  500 gram  serbuk  umbi  bawang  dayak  kering, ditambahkan  2  ml  etanol  kemudian disimpan  selama  24  jam  (  serbuk  bawang
dayak  dilarutkan  dalam  2  ml  etanol  96  % dengan  metode  maserasi  yaitu  bahan direndam  etanol  1  x  24  jam  hingga etanolnya  menguap,  lalu  disaring  untuk diambil  fibrat  nya).  Besoknya  ditampung kemudian  dirotavator.  Ada  sisa  sari ditambahkan 1,5 liter etanol, didiamkan 24 jam.  Ampas  bawang  dayak  dimaserasi kembali  selama  1  x  24  jam  kemudian diambil  filtratnya.  Besoknya  diambil  lagi, dirotavator  kembali,  sisanya  diberi  etanol 1,5  liter,  hal  ini  dilakukan  selama  3  hari berturut-turut.  Pembagian  filtrat  dilakukan 3 kali kemudian semua filtrat dikumpulkan menjadi  satu,  lalu  diuapkan  dengan  alat rotary  evaporator  buchi R-200  melalui penurunan  tekanan  pada  suhu  40  –  45 derajat  celcius,  sehingga  diperoleh  ekstrak kental  bawang  dayak.  Selanjutnya  dibuat sediaan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak konsentrasi  50  mg/kgBB  dengan  cara diambil  0,1  ml  EEUBD  larutkan  bersama 0,1 ml larutan CMC Na + 0,5 %. Dibuat juga sediaan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak konsentrasi  100  mg/kgBB  dengan  cara diambil  0,2  ml  EEUBD  larutkan  bersama 0,1  ml  larutan  CMC  Na + 0,5  %.  Terakhir dibuat sediaan ekstrak etanol umbi bawang dayak  konsentrasi  200  mg/kgBB  dengan cara  diambil  0,3  ml  EEUBD  larutkan bersama 0,1 ml larutan CMC Na + 0,5 %.
5. Pembuatan larutan Metilprednisolon berdasarkan dosis oral 25 mg/kgBB. Pembuatan larutan induksi metilprednisolon berupa 0,08 mg metilprednisolon  /30  grBB  mencit/  hari dilarutkan  bersama  0,2  ml  larutan  CMC Na + 0,5 %.
6.  Ketamin ( Ketamine HCl / 2-(0- chlorophenil) – 2 (methylamino) cyclohexanone  hydrochloride )  dengan
dosis 0,025 mg/10 grBB mencit berdasarkan dosis 10 mg/kgBB.
7.  Larutan CMC Na + 0,5%
8.  Formalin 10 %, etanol 70%, 80%, 99%, xylol, Paraffin cair, kaset, cover slip, base mould, beker glass , gelas ukur, termometer,
cutter , pinset panjang, tissue processor auto technicon”, hot plate, cold plate , paraffin  dispenser untuk membuat preparat.
9. Rotary microtome, disposable blad, kuas cat air kecil nomor 1, Tissue flotation bath,
kaca obyek, diamond pencil, staining rack, hot plate, aquadestilata.
10. Monoklonal antibodi terhadap NK sel yaitu CD 56 + dan CD 8 + ( Rat Anti Mouse ).
Ekstrak  yang  diteliti  berupa  ekstrak etanol  dari  umbi  Bawang  Dayak.  Jumlah mencit  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah 30 ekor dan dibagi secara acak menjadi 5  kelompok,  masing-masing  kelompok  terdiri dari 6 ekor. Kelompok pertama kontrol negatif diberi  CMC  Na,  kelompok  kedua  diberi Metilprednisolon,  kelompok  ketiga,  keempat dan kelima diberi ekstrak etanol umbi bawang dayak berturut-turut dengan dosis 50, 100 dan 200  mg/kgBB  bersama  Metilprednisolon dengan  dosis  0,08  mg/30  grBB  mencit/hari. Pemberian  perlakuan  dilakukan  1  kali  sehari pada  sore  hari.  Sebelum  diberikan  perlakuan, semua mencit dalam setiap kelompok pelakuan  diaklimatisasi  selama  1  minggu. Proses  perlakuan  berlangsung  selama  14  hari dan  pada  pagi  hari  ke  15  dilakukan  terminasi untuk pengambilan darah dari ekor mencit dan sampel  KGB  mencit.  Pengamatan  diameter germinal  center  dan  kadar  Ig  G  serum dilakukan.  Analisis  statistik  dengan  uji korelasi bivariat koefisien pearson.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jumlah  Sel  penghasil  Interferon-gamma (IFN-ɤ) dan sel Pengekspresi CD 14
Uji  normalitas  data  jumlah  sel penghasil  IFN-ɤ  dan  jumlah  sel  pengekspresi CD14 pada setiap kelompok perlakuan dengan menggunakan Kolmogorov-Smirnov Z menunjukkan  data  diperoleh  berdistribusi normal. Hal ini terlihat hasil analisis pada tabel 5.1 dan tabel 5.2 berikut : Tabel 5.1 Hasil Uji Normalitas / CD 14
Tabel 5.2 Hasil Uji Normalitas / IFN-ɤ
Dari hasil analisis statistik di atas dari 5  data  dari  variabel  CD14 dan  IFN  -  ɤ  adalah berdistribusi  normal  dimana  p    >  0,05. Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  Oneway  / ANOVA  pada tabel berikut ( tabel   5.3)
Tabel 5.3 Oneway / ANOVA
Mean  Std.Dev iation Minim um Maxi mum CD14 CMC Na Metil Pred MP+E BD 50 MP+E BD 100 MP+E BD 200 Total 2,416 7 3,166 7 3,516 7 3,316 7 4,900 0 3,463 3 1,8054 ,80664 1,22868 1,01078 ,54406 1,23162 1,10 2,20 2,10 2.30 4,00 1,10 3,80 4,60 5,60 4,90 5,40 5,60 IFN  - ɤ CMC Na Metil Pred MP+E BD 50 MP+E BD 100 MP+E 2,616 7 3,150 0 3,000 0 2,900 0 4,183 3 3,170 0 ,94322 ,75829 1,6790 ,74833 ,73869 ,98756 1,60 2,10 1,80 2,20 2,90 1,60 3,80 4,10 5,20 4,20 5,20 5,20
One-Sam ple  Kolm ogorov-Sm irnov Te st 6 6 6 6 6 2,4167 3,1667 3,5167 3,3167
4,9000
1,18054 ,80664 1,22868 1,01078 ,54406 ,281 ,220 ,237 ,290 ,269 ,281 ,220 ,237 ,290 ,179 -,219 -,158 -,124 -,157 -,269 ,689 ,538 ,580 ,709 ,659 ,730 ,935 ,890 ,695 ,778 N Mean Std. Deviation Normal Parameters a,b A bsolute Positive Negative Most Extreme Diff erenc es Kolmogorov-Smirnov Z A symp. Sig. (2-tailed) CMC Na MP MP+EBD 50 MP+EBD 100 MP+EBD 200 Test distribution is  Normal. a. Calculated f rom data. b.
One-Sam ple  Kolm ogorov-Sm irnov Te st 6 6 6 6 6 2,6167 3,1500 3,0000 2,9000 4,1833 ,94322 ,75829 1,16790 ,74833 ,73869 ,185 ,178 ,268 ,178 ,288 ,171 ,138 ,268 ,178 ,271 -,185 -,178 -,168 -,175 -,288 ,453 ,436 ,657 ,435 ,706 ,987 ,991 ,782 ,992 ,700 N
Mean Std. Deviation Normal Parameters a,b A bsolute Positive Negative Most Extreme Diff erenc es
Kolmogorov-Smirnov Z A symp. Sig. (2-tailed)
CMC Na MP MP+EBD 50 MP+EBD 100 MP+EBD 200 Test distribution is  Normal. a. Calculated f rom data. b.
BD
200

## Total
Selanjutnya  hasil  analisis  statistik dengan melihat korelasi pada test efek diantara dua  subjek  ditemukan  hasil  yang  bermakna (signifikan)  adalah  0,005  (CD14)  dan  kurang signifikan  pada  nilai    0,054  (IFN-ɤ). Selanjutnya  dilakukan  uji  komparasi  ganda dengan  LSD  (Least  Significant  Difference) pada  sel  pengekspresi  CD  14  ,  untuk membandingkan  variabel  tergantung  antar kelompok  perlakuan,  yang  dapat  diilhat  pada tabel 5.4 berikut.
Tabel 5.4 . Uji Komparasi Ganda dengan Post Hoc Tests Games-Howell jumlah sel pengekspresi  CD  14  dan  jumlah  sel  penghasil Interferon Gamma
Multiple Comparisons
Pada  Uji  Komparasi    Ganda  dengan Post Hoc Tests Games-Howell dari jumlah  sel pengekspresi  CD14  tabel  5.4  di  atas, menunjukkan  hasil  yang  bermakna  /signifikan pada  p<0,05  pada  kelompok  perlakuan  bila pemberian  EBD  200  mg/KgBB  terhadap pemberian  obat  Metil  Prednisolon.  Serta  pada jumlah sel Interferon Gamma pada tabel 5.4 di atas,  menunjukkan  hasil  yang  bermakna  / signifikan  (p<0,05)  pada  kelompok  perlakuan
pemberian  EBD  200  mg/KgBB    terhadap pemberian obat Metil Prednisolon.
5.2 Analisis dan Hasil Penelitian ImunoHistokimia 5.2.1 Jumlah Sel IFN-ɤ dan sel pengekspresi CD14  ( Imunohistokimia teknik pewarnaan
Double Stain)
Dalam penelitian ini, teknik imunohistokimia dengan menggunakan monoklonal  antibodi  anti-mice  digunakan untuk  mengetahui  menentukan  jumlah  sel penghasil  IFN-ɤ  dan  sel  pengekspresi  CD  14 sebagai  aktivasi  makrofag  pada  Kelenjar Getah  Bening  yang  terlebih  dulu  di  proses menjadi  blok  paraffin.  Hasilnya  dihitung  di seluruh  jumlah  folikel  pada  Kelenjar  Getah Bening  yang  terwarnai  coklat  dengan  inti sitoplasma  berwarna  biru  (IFN-ɤ)  dan  inti sitoplasma  berwarna  merah  (CD14)  dengan pebesaran  100  x  dan  400  x  pada  gambar- gambar berikut.
Gambar  5.1  Mikroskopik  sayatan  Kelenjar Getah  bening  Mencit  pada  Kelompok  1-6. Tampak  Folikel  dengan  daerah  pulpa  putih adanya proses proliferasi. Pembesaran 100 kali perwarnaan IHC Double Stain.
Gambar  5.2  Mikroskopik  sel  penghasil  IFN-ɤ pada  Kelenjar  getah  bening  mencit  pada kelompok  K1-6  berwarna  coklat  dengan sitoplasma  biru    dan  sel  terekspresi  CD  14 dengan  sitoplasma  merah    (dgn  pemeriksaan Imunohistokimia  antibodi  monokonal  Rat ,teknik pewarnaan Double Stain
Gambar  5  .3  Mikroskopik  sayatan  Kelenjar Getah  bening  Mencit  pada  Kelompok  2-6. Tampak  Folikel  dengan  daerah  pulpa  putih adanya proses proliferasi. Pembesaran 100 kali perwarnaan IHC Double Stain.
Gambar 5.4  Mikroskopik sel penghasil IFN-ɤ pada  Kelenjar  getah  bening  mencit  pada kelompok  K2-6  berwarna  coklat  dengan sitoplasma  biru    dan  sel  terekspresi  CD  14 dengan sitoplasma merah .
Gambar  5.5  Mikroskopik  sayatan  Kelenjar Getah  bening  Mencit  pada  Kelompok  3-4. Tampak    Folikel  dengan  daerah  pulpa  putih adanya proses proliferasi. Pembesaran 100 kali perwarnaan IHC Double Stain.
Gambar 5.6 Mikroskopik sel penghasil IFN-ɤ  pada  Kelenjar  getah  bening mencit pada kelompok K3-4 berwarna coklat dengan sitoplasma biru  dan sel terekspresi  CD  14  dengan  sitoplasma merah .
keterangan gambar : = sel penghasil IFN gamma
= sel terekpresi CD 14
Gambar  5.7  Mikroskopik  sayatan  Kelenjar Getah  bening  Mencit  pada  Kelompok  4-1. Tampak  Folikel  dengan  daerah  pulpa  putih adanya proses proliferasi. Pembesaran 100 kali perwarnaan IHC Double Stain.
Gambar 5.8  Mikroskopik sel penghasil IFN-ɤ pada  Kelenjar  getah  bening  mencit  pada kelompok  K4-1  berwarna  coklat  dengan sitoplasma  biru    dan  sel  terekspresi  CD  14 dengan sitoplasma merah .
Gambar  5.9  Mikroskopik  sayatan  Kelenjar Getah  bening  Mencit  pada  Kelompok  5.3. Tampak    Folikel  dengan  daerah  pulpa  putih adanya proses proliferasi. Pembesaran 100 kali perwarnaan IHC Double Stain.
Gambar 5.10  Mikroskopik sel penghasil IFN- ɤ  pada  Kelenjar  getah  bening  mencit  pada kelompok  K5-3  berwarna  coklat  dengan sitoplasma  biru    dan  sel  terekspresi  CD  14 dengan sitoplasma merah .
Grafik 5.1 Rerata Jumlah sel pengekspresi CD 14 kelompok K1,K2,K3,K4,K5
Grafik  5.2  Rerata  Jumlah  sel  penghasil  IFN-ɤ kelompok K1,K2,K3,K4,K5
5.2 Hubungan antara Variabel
Hasil  Statistika  uji  korelasi  terhadap semua  variabel  tergantung    menunjukkan hubungan  yang  kuat  dan  bermakna  antara jumlah  sel  penghasil  IFN-ɤ  dengan  jumlah pengekpresi  CD14  pada  level  0,01  (2  tailed analisis uji korlasi pada lampiran 5.1) . Hal ini menunjukkan  jika  jumlah  sel  pengahsil  IFN-ɤ meningkat  maka  jumlah  sel  pengekspresi CD14 juga semakin meningkat atau sebaliknya.
Kelenjar  adrenal  mengeluarkan  dua klas steroid yaitu Corticosteroid ( glukokortikoid  dan  mineralo  kortikoid  )  dan sex hormon. Mineralokortikoid banyak
berperan  dalam  pengaturan  keseimbangan cairan  dan  elektrolit,sedang  glukokortikoid berperan  dalam  metabolisme  karbohidrat  . Glukokorticoid  dikeluarkan  oleh  korteks kelenjar  adrenal  yang  dikeluarkan  kedalam sirkulasi sebagai respon terhadap stress.Cortisol merupakan glukokortikoid utama didalam tubuh manusia. Efek  Glucocorticoid    terhadap  proses keradangan dan fungsi immunologis berkaitan dengan    kemampuan  glukokortikoid  endogen dapat  menekan  fungsi  immunologis  dan  dapat mengaktifasi infeksi latent. Manfaatnya antara lain mengatasi radang (antiinflamasi),
menekan  sistem  imun  dalam  proses  alergi, mengatur metabolisme protein dan karbohidrat,  mempengaruhi  kadar  natrium dalam  darah,  dan  lain-lain.Hormon   ini  tidak hanya diberikan pada seseorang yang mengalami  kekurangan  steroid  alami  dalam tubuhnya  (misalnya  penyakit  Addison),  tetapi juga   pada  keluhan  asma,  alergi, rheumatoid arthritis ,  gangguan  pencernaan  (ulkus),  luka radang  (inflamasi)  pada  mata  maupun  kulit, hingga  mengatasi  reaksi  autoimun  ketika dilakukan  transplantasi  jaringan.  Oleh  karena itu  banyak  digunakan  bentuk  steroid  sintesis dalam  praktek  pengobatan  berbagai  penyakit seperti prednison, prednisolon, metilprednisolon,  deksametason,  betametason, dan triamsinolon (Rhen T., Cidlowski J.A. , 2005) Dalam  upaya  mengatasi  penyakit inflamasi dan infeksi adalah dengan memodulasi sistem imun seluler yaitu mengaktivasi peran sel makrofag dan meningkatkan  jumlah  sel  CD  4  sebagai penghasil  sitokin Interferon-gamma .  Dengan meningkatnya  IFN-  ɤ  akan  mengaktifkan  sel NK  (Natural  Killer  Cell)  dan  limfosit  T sitotoksik / CD 8. (Falcheetti et al ., 2001; Choi et  al .,2012;  Abbas et  al .,2012. ) .    Umbi
Bawang
Dayak banyak berkhasiat
mengandung senyawa-senyawa turunan naphtoquinonens dan turunannya seperti elecanacine
,eleutherine,eleutherol,eleuthernone (Hara et al 1997) Naphtoquinonens tersebut merupakan senyawa antimikroba,antifungal,antiviral, antiparasitik  serta  memiliki  bioaktivitas  anti kanker  dan  anti  oksidan  yang  terdapat  dalam
sel vakuola dalam bentuk glikosida (Babula et al 2005).
Secara  histologi,  limpa  dan  kelenjar getah  bening  terdiri  atas  zona  sel  T  dan  zona sel  B.Pada  limpa  dan  kelenjar  getah  bening, limfosit  mengenal  fragmen  antigen non-self yang  dipresentasikan  makrofag,  sel  dendritik dan fagosit (Subowo dalam Sulistiyana, 2015). Presentasi  fragmen  antigen non-self diikuti oleh  sekresi    IL-12  dan  IL-18  kemudian menstimulasi  sel  T  menghasilkan  interferon-γ (INF-γ)  yang  mengaktivasi  NK  sel  dan  CD 8 + (Campbell,Sulistiyana, 2015).
Kelenjar  getah  bening    (Nodulus lympaticus  )  tidak  memiliki    kapsel  jaringan ikat    yang  memisahkan  dengan  jaringan sekitarnya.    Pada  sayatan  sediaan  ,  KGB mudah  ditemukan  karena  mudah  mengikat warna  hematoksilin.    Di  bagian  tengah  KGB nodul  biasanya  berwarna  lebih  pucat  oleh karena  berisi  limfosit  –limfosit  muda  yang berukuran  besar  dengan  inti  lebih  pucat  . keberadaan tergantung keadaan fungsionalnya. Apabila  respons  imun  terhadap  antigen  yang masuk  maka  sel-sel  limfosit  di  bagian  tengah nodus lympaticus akan membelah.
Pada  penelitian  ini  digunakan  sampel mencit  strain  BALB/c,  umur  10  minggu dengan berat badan 25 – 30 gram, dengan jenis kelamin  jantan  dengan  pemberian  metil prednisolon 0,08 mg/30 gr BB selama 14 hari pada  kelompok  perlakuan  2  ,  sedangkan  pada kelompok  perlakuan  1  diberikan  CMC  Na + 0,5.  Selanjutnya  pada  kelompok  perlakuan  3 sampai  dengan  kelompok  5  diberikan  ekstrak etanol  bawang  dayak  masing-masing  50 mg/kgBB,100mg/kgBB,200  mg/kgBB  serta semua  mendapatkan  metil  prednisolon  0,08 mg/kgg BB per sonde. Setelah masa perlakuan selesai  mencit  dibius  dengan  menggunakan ketamin  dengan  dosis  0,025  mg/10  gr  BB mencit  berdasarkan  dosis  rata-rata  10  mg/kg BB  dengan  lama  kerja  ±  10-25  menit  untuk pengambilan sampel darah. Kemudian dilakukan  euthanasia  dengan  mematahkan tulang leher mencit. Setelah ditelusuri terdapat jaringan KGB mencit pada bagian mesentarium  abdomen untuk pemeriksaan sel IFN-ɤ dan sel yang terekspresi  CD 14 dengan metode
Imunohistokimia
menggunakan monoklonal  antibodi  IFN-ɤ  dan  CD  14  ( Rat Anti Mouse ).

## Pengaruh  EEUBD  terhadap  Pencegahan
Penurunan Jumlah Sel Penghasil IFN-ɤ
IFN-ɤ merupakan sitokin utama Macrophage Activating Cytokine dan berperan dalam  imunitas  seluler  dan  non  spesifik. Disamping  itu  IFN-ɤ  diperlukan  untuk meningkatkan  aktivitas  makrofag  sebagai Antigen  Precenting  Cell  agar  lebih  aktif  dan efektif terhadap benda asing yang dipresentasikan  ke  permukaan  sel  melalui MHC  kelas  I  dan  MHC  kelas  II  .  IFN-ɤ mengsekresi IL-12 untuk menginduksi limfosit T  helper  berproliferasi  dan  berdiferensiasi menjadi  limfosit  Th1  dan  Th2  (  Sudiana IK,2011; Abbas et al., 2012).
Hasil  uji  statistik  dengan  nilai  p<0,05 dimana  pemberian  induksi  EEUBD  dosis  200 mg/kgBB  pada  perlakuan  beserta  Metil Prednisolon  (K-5)  mampu  meningkatkan jumlah  sel  penghasil  IFN-ɤ  secara  bermakna. Hasil  uji  statistik  juga  menunjukkan  analisis statistik dengan melihat korelasi pada test efek diantara  dua  subjek  ditemukan  hasil  yang bermakna  (signifikan)  adalah  0,005  (CD14) dan  kurang  signifikan  pada  nilai    0,054  (IFN- ɤ).  Meskipun  demikian  induksi  metil prednisolon    dengan  EEUBD  (K3,K4,K5) dapat  dikatakan  meningkatkan  jumlah  sel penghasil  IFN-ɤ  atau  mampu  mencegah penurunan jumlah sel penghasil IFN-ɤ.
Berdasarkan  uji  statistik  di  atas  dapat dikatakan semakin tinggi dosis EEUBD  yang diinduksikan mampu meningkatkan jumlah sel penghasil  IFN-ɤ  atau  dapat  juga  dikatakan memiliki  kemampuan  mencegah  penurunan jumlah  sel  penghasil  IFN-ɤ.  Namun  demikian terhadap  penelitian  ini  nilai  IFN-ɤ  memiliki kecendrungan sedikit kurang bermakna dibanding CD 14 ,hal ini kemungkinan karena dosis  EEUBD  belum  mampu  menginduksi peningkatan jumlah IFN-ɤ dan jumlah sel yang diinduksi  tidak  memadai  terikat  dengan  baik atau  tidak    teraktivasi.  Sehingga  bisa mempengaruhi  jumlah  induksi  terhadap  NK cell  juga  sedikit    kurang  bermakna  ,karena IFN-ɤ mengaktivasi NK cell.
Pengaruh  EEUBD  terhadap  Peningkatan Jumlah  Sel  Pengekspresi  CD14  /  Aktivasi Makrofag
Pada  penelitian  ini  hasil  statistik  Uji Komparasi    Ganda  dengan Post  Hoc  Tests
Games-Howell dari  jumlah    sel  pengekspresi CD14  tabel  5.4  di  atas,  menunjukkan  hasil yang bermakna /signifikan pada p<0,05 (0,04) pada kelompok perlakuan bila pemberian EBD 200  mg/KgBB  terhadap  pemberian  obat  Metil Prednisolon.  Juga  ditemukan  peningkatan jumlah sel pengeksprsi CD 4 secara bermakna pada uji LSD  pada pemberian pada perlakuan K2-5  dan  K5-2  dimana  pada  dosis  EEUBD 200  mg/kgBB.  Pada  nilai    rerata  /means  dan simpangan  baku  /Std  deviation  bahwa  CD  14 lebih meningkat daripada nilai IFN-ɤ.
Berdasarkan  uji  statistik  di  atas  juga menunjukkan bahwa nilai yang lebih bermakna  dari  induksi  EEUBD  terhadap penelitian  ini  adalah  pada peningkatan jumlah sel  yang  mengekspresikan  CD  14  lebih memberi  nilai  yang  bermakna.  Hal  ini dimungkinkan  juga  pengaruh  induksi  dengan dosis  200  mg/kg  BB  merupakan  dosis  yang sesuai dengan dosis therapi yang diharapkan.
Senyawa  flavonoid  dalam  EEUBD bersifat  imunostimulan  ,antiviral,anti  bakteri, mengurangi  resiko  penyakit  karidovaskular  , anti  inflamasi.  Stimulasi  sistem  imun  diatur dengan  regulasi  sel  T  limfosit  disini  adalah Th-1 (CD 4+) yang  meningkat karena bersifat proteksi  terhadap  antigen  akan  memproduksi sitokin  yang  mengaktivasi  makrofag  dan merangsang  inflmasi.    Pada  penelitian  ini fungsi  efektor  diperankan  oleh  sel  yang mengekspresikan  CD  14  (aktivasi  makrofag) dan  terdapat  komunikasi    antara  sel  T  dengan sel  yang  mengeksprsikan  CD  14    yang berlangsung melalui sitokin.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas  A.K  ,  Andrew  H.L,  1994.  Cellular  and Molecular  Immunology.  2 nd edition, USA: W.B.Saunders Company
Andi  F.2014.  Antioxidants  and  Antidiabetics Potency  of  Aqueous  and  Ethanolic Extracts  of  Bawang  Dayak  Bulbs (Eleutherine palmifolia) in vitro and in vivo.  Tesis.  Institut  Pertanian  Bogor. Indonesia Arnida,Sutomo,2008.  Pengaruh  Fraksi  Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia(L,.) Merr.) Terhadap
Aktivitas  Diuretika  Dan  Peluruh  Batu Ginjal  Tikus  Putih  Jantan.  Sains  Dan Terapan Kimia 2008; 3(2): 134-43
Arung  ET,Kusuma  IW,Christy  EO,Shimizu
K,Kondo R,2009. Evaluation of medicinal plants from Central
Kalimantan for antimelanogenesis Journal of Natural Medicines, Volume 63,pp 473-480
Azis  AL,  2006.  Penggunaan  kortikosteroid  di klinik-pediatrik. Universitas Airlangga. Indonesia Baratawidjaja, Karmen Garna,2004. Imunologi Dasar.  Edisi  6.  Jakarta:Universitas Indonesia Budiarto E,2001. Biostatiska untuk Kedokteran dan Kesehatan Masyarakat. EGC: Jakarta Fedik A.R,2003. Metode Imunologi
Febrinda  A  E,  Astawan  M,  Wresdiyati T, and Yuliana  N  D  ,  2013.  http  ://Kapasitas antioksidan dan inhibitor alfa glukosidase .blogspot.com/2013/4/ekstrak umbi bawang  dayak  html.  Diakses  pada April 2015.
Fitri  Y.Suwarso  E,2014.  Effects  of  Inhibition Cell  Cycle  and  Apoptosis  of  Sabrang Onion  extract  (Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb.)  on  Breast  Cancer  Cells. International  Journal  of  PharmTech Research  CODEN  (USA)  :  IJPRIF ISSN  :  0974-4304  Vol.6,No.4,pp 1392-1396
Firdaus  T,  2014.Efektivitas  Ekstrak  Bawang
Dayak (Eleutherine Palmifolia) Dalam menghambat  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus aureus. Skripsi. Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah. Indonesia Gordon  T,  Michael  H,  2013.  Statistik Kedokteran. Edisi 2. Jakarta :Binarupa Aksara Publisher Muliatie,2012. Pemanfaatan Tumbuhan Sebagai Obat Oleh suku Dayak Ngaju
Di  Desa  Bukit  Rawi  Kalimantan Tengah.  Tesis.  Universitas  Palangka Raya. Indonesia Mierza V,Suryanto D,Nasution MP,2011.Skrining  Fitokimia  Dan  Uji Efek Anti bakteri Ekstrak Etanol Umbi Bawang  Dayak  Sabrang  (Eleutherine palmifolia  Merr.).  Medan:  Universitas
Sumatera Utara,340-353
Nur  AM,  2011.  Kapasitas  Antioksidan Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia)  Dalam  Bentuk  Segar ,Simplisia,  dan  Keripik,  Pada  Pelarut Nonpolar,Semipolar
dan Polar.
Skripsi.  Bogor  :  Institut  Pertanian
Bogor
Subowo, 2014. Imunobiologi . Edisi 3. Sagung Seto. Bandung : 18-19,54-55,342-343.
Sudiana IK,2005. Teknologi Ilmu Jaringan dan Imunohistokimia  .Jakarta  :  Sagung
Seto, 1-46
Sudiana Ik,2014. Imunopatobiologi Molekuler. Surabaya  :Airlangga  University  Press, 54-55
Siti  Boedina  Kresno,2010.  Imunologi  : Diagnosis  dan  Prosedur  Laboratorium .  Edisi  5.  Badan  Penerbit  Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia.
Jakarta, 57,70-71,79,87,119 Sutanto  PH,  2007.  Analisis  Data  Kesehatan (Basic  Data  Analysis  for  Health Research Training). Fakultas Kesehatan  Masyarakat  Universitas Indonesia Suhirman  S,Winarti  C,  2004.Prospek  Dan Fungsi Tanaman Obat Sebagai Imunomodulator. Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik, 3-40 Sumarwoto T, 2004. Efek  Pemberian Ekstrak Kedelai Dalam Menghambat Penurunan  Kepadatan  Tulang  Pada Terapi  Kortikosteroid  Jangka  Panjang Tikus Putih Jantan ( Rattus norvegicus ). Tesis. Universitas Airlangga Yusni MA,2008. Perbedaan Pengaruh Pemberian  Fraksi  Etanolik  Bawang Dayak (Eleutherine Palmifolia L.Merr) dengan 5-Fluorurasil terhadap Penghambatan  Pertumbuhan  Galur  sel Karsinoma  Kolon  HT29  dan  Ekspresi p53  Mutan.Tesis.Universitas  Sebelas maret Indonesia.