Variasi Waktu Dan Sterilisasi Untuk Anggrek Cattelya sp . Sebelum Penanaman In-Vitro
Fauziyah Harahap (1*), Edmy Febriani Br Bangun (2), Cicik Suriani (3), Syahmi Edi (4), Ayu Putri Ningsih (5), Nusyirwan (6)
Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Negeri  Medan,  Indonesia *Corresponding author: fauziyahharahap@unimed.ac.id (1*), cicik.pendbio@gmail.com (3), syahmiedi@unimed.ac.id (4), ayuputriningsih@unimed.ac.id (5), nusyirwan.nusyirwan1@gmail.com (6)

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  Untuk  mendapatkan  teknik  sterilisasi  yang  terbaik  untuk  eksplan  batang anggrek Cattleya  sp .  muda . Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan  YAHDI  Perum Pelabuhan  Jl.  Lambung  No.  8  Tanah  600  Medan  Marelan.  Rancangan  penelitian  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  metode eksperimental  laboratorium dalam  mencobakan  beberapa  teknik  sterilisasi. Untuk mengetahui teknik sterilisasi yang tepat, penelitian ini menggunakan eksplan lapang anggrek Cattleya Sp.  dengan  jenis  pendekatan  deskriptif  kuantitatif.  Data  dianalisis  dan  ditabulasi  menggunakan  parameter penelitian  hari  terkontaminasi,  persentase  eksplan  yang  terkontaminasi,  persentase  eksplan  browning, persentase  eksplan  yang  membengkak,  persentase  eksplan  yang  membentuk  bakal  tunas  dan  persentase eksplan  hidup.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  terdapat  2  teknik  sterilisasi  yang  optimal  dalam sterilisasi  eksplan  lapang  Anggrek  Cattleya  Sp.  yaitu  teknik  sterilisasi  2  dan  4.  Teknik  sterilisasi  2 menggunakan zat sterilan deterjen, akuades steril, Tween-20, benomil 50%, agrimicin,  NaOCl 15%  & 10% dan alcohol 70% kemudian teknik sterilisasi 4 dengan zat sterilan Clorox 1,05%,  HgCl 0,02% dan akuades steril merupakan teknik sterilisasi yang tersebut. Hal ini ditunjukkan dengan rendahnya tingkat kontaminasi eksplan  dan  tampaknya  spot-spot  hijau  pada  eksplan  dimana  eksplan  akan  mengalami  pertumbuhan  tunas. Faktor-faktor yang menyebabkan kontaminasi pada eksplan Anggrek Cattleya Sp. adalah kurangnya kehati- hatian  praktikan  pada  saat  melakukan  sterilisasi  eksplan  lapang,  kontaminasi  endogenus  yang  tinggi  dan penggunaan zat steril yang kurang tepat.
Kata kunci : Anggrek Cattelya Sp., sterilisasi, faktor kontaminasi

## ABSTRACT
This study aims to find the best sterilization technique for explants of Cattleya sp. young. This research was conducted  at  the  YAHDI  Tissue  Culture  Laboratory,  Perum  Pelabuhan,  Jl.  Hull  No.  8  Land  600  Medan Marelan. The research design used in this study was a laboratory experimental method in trying out several sterilization  techniques.  To  determine  the  proper  sterilization  technique,  this  study  used  field  explants  of Cattleya Sp. with a type of quantitative descriptive approach. Data analyzed and tabulated using research on contaminated  days,  proportion  of  contaminated  explants,  proportion  of  browning explants,  proportion  of explants  that  swelled,  proportion  of  explants  that  formed  future  tuna  and  proportion  of  live  explants.  The results of this study indicate that there are 2 optimal sterilization techniques in sterilizing Cattleya Sp. Orchid field explants. Sterilization techniques 2 and 4. Sterilization technique 2 uses sterile detergent, sterile distilled water,  Tween-20,  50%  benomyl,  agrimicin,  15%  &  10%  NaOCl  and  70%  alcohol  then  sterilization technique 4 with 1.05% Clorox sterilant , HgCl 0.02% and sterile distilled water is the sterilization technique. This is indicated by the low level of explant contamination and the appearance of green spots on the explants where  the  explants  will  experience  shoot growth.  Factors  causing  contamination  of  Cattleya  Sp.  Orchid explants. are the lack of careful practice when sterilizing field explants, high endogenous contamination and the use of sterile substances that are not appropriate.
Keywords : Cattelya Sp. Orchid, sterilization, contamination factors
Harahap  Fauziyah,  Febriani  Br  Bangun  E,  Suryani  Cicik,  Edi  Syahmi,  Putri  Ningsih  A, Nusyirwan  :  Variasi  Waktu  Dan  Sterilisasi  Untuk  Anggrek Cattelya  sp .  Sebelum Penanaman In-Vitro

## I. PENDAHULUAN
1. Latar Belakang
Anggrek Cattleya merupakan salah satu jenis anggrek yang bervariasi dan meliputi sekitar 113 spesies, varietas dan forma yang tak terhitung jumlahnya serta ribuan hibrid baik alami maupun  buatan  termasuk  salah  satunya Cattleya (Kartohardiprodjo  dan  Gandhi,  2009). Habitat  asli Cattleya berasal  dari  daerah  Amerika  Tengah  Selatan,  termasuk  Venzuela, Brasil, Peru, Meksiko, Guyana dan Argentina dan Cattleya merupakan tanaman epifit dan memiliki pseudobulb tebal  yang  dapat  menyimpan  banyak  air  dan  cadangan  makanan (Parnata,  2005).  Usaha  yang  dapat  dilakukan  untuk  melestarikan  anggrek Cattelya salah satunya  adalah  dengan  cara  perbanyakan  tanaman  secara in  vitro .  Dengan  menggunakan teknik  kultur in  vitro kita  bisa  melakukan  berbagai  upaya  pelestarian  dan  pengembangan anggrek.  Kultur in  vitro telah  terbukti  sangat  berguna  bagi  kelompok  tanaman  tertentu yang  sulit  untuk  diperbanyak  dengan  teknik  konvensional  (Fathurrahman,  2013).  Teknik kultur jaringan  tanaman  memiliki  prospek  yang  lebih  baik  daripada  metode  perbanyakan tanaman secara vegetatif konvensional karena dengan kultur jaringan dapat menghasilkan tanaman baru dalam jumlah yang banyak tanpa dipengaruhi waktu atau musim (Harahap, 2011).  Kegagalan  pada  teknik  kultur  jaringan  sering  disebabkan  oleh  adanya  kontaminan pada  eksplan  dan  media  kultur.  Kontaminasi  merupakan  faktor  dominan  yang mempengaruhi keberhasilan dalam teknik kultur jaringan terutama pada eksplan (Fitriani et al .,  2019).  Menurut  Mariska  dan  Sukmadjaja  (2003),  kontaminasi  merupakan  gangguan yang  terjadi  pada  kultur  jaringan  berupa  mikroorganisme  seperti  jamur,  bakteri  bahkan virus.  Untuk  pencegahan  terjadinya  gangguan  dalam  kultur  jaringan  maka  dilakukan sterilisasi  yang  tepat  dan  sesuai  pada  eksplan  yang  digunakan.  Menurut  Harahap et  al., (2015),  salah  satu  keberhasilan  kultur  jaringan  adalah  dengan  cara  sterilisasi  eksplan sebelum  ditanam.  Sterilisasi  merupakan  langkah  penting  untuk  menghindari  kontaminasi sebelum  melakukan  penanaman.      Beberapa  bahan  kimia  dapat  digunakan  sebagai sterilisasi,  seperti  merkuri  klorida  (HgCI  2),natrium  hipoklorit  (NaOCl)  dan  lain-lain.  Ini bahan  kimia  dapat  membunuh  mikroorganisme  eksternal  tetapi  tidak  dapat  membunuh mikroorganisme  internal  di  jaringan  tanaman.  Beberapa  laboratorium  menggunakan antibiotik untuk membunuh kontaminan endogen. Metode sterilisasi eksplan dalam  kultur jaringan  sangat  bervariasi  serta  tergantung  pada  jenis  taanaman  yang  digunakan  sebagai eksplan.  Namun  tidak  semua  mikroorganisme  dapat  disterilkan  dengan  1  (satu)  metode saja.  Hal  ini  menjadi  dasar  mencari  metode  sterilisasi  yang  terbaik  untuk  batang  anggrek Cattleya. Kegiatan  sterilisasi  bertujuan  untuk  mengeleminasi  pathogen  yang  terbawa  saat pengambilan  eksplan  dari  lapangan  yang  menimbulkan  kontaminasi  serta  menghambat perbanyakan  secara  in  vitro.Oleh  karena  itu,  dalam  penelitian  ini  perlu  dilakukannya sterilisasi tanaman Cattelya sp. serta alat-alat dan bahan yang digunakan untuk penanaman anggrek Cattleya sp . secara in-  vitro . Setelah melakukan sterilisasi,  kemudian melakukan penanaman eksplan pada medium kultur secara in- vitro.
2. Perumusan Masalah
Rumusan  masalah  dalam  penelitian  ini  adalah  bagaimana  variasi  waktu  dan  sterilisasi untuk anggrek Cattelya sp . sebelum penanaman in-vitro
3. Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hasil penelitian dari variasi waktu dan sterilisasi untuk anggrek Cattelya sp . sebelum penanaman in-vitro.
4. Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini adalah untuk mendapatkan manfaat dari penelitian mengenai variasi waktu dan sterilisasi untuk anggrek Cattelya sp . sebelum penanaman in-vitro dan aplikasi dalam dunia akademis dan bagi aplikasi nya bagi peneliti lainnya.
Harahap  Fauziyah,  Febriani  Br  Bangun  E,  Suryani  Cicik,  Edi  Syahmi,  Putri  Ningsih  A, Nusyirwan  :  Variasi  Waktu  Dan  Sterilisasi  Untuk  Anggrek Cattelya  sp .  Sebelum Penanaman In-Vitro

## II. METODE
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juli 2022 – November 2022 di Laboratorium Kultur Jaringan YAHDI Perum Pelabuhan Jl. Lambung No. 8 Tanah 600 Medan Marelan.Bahan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  eksplan  batang  anggrek  Cattelya  sp.  yang masih muda, media MS (Murashige skoog), agar- agar, Zat Pengatur Tumbuh Indole Asetic Acid  (IAA),  Benzyl  Amino  Purin  (BAP),  alkohol  70%,  gula,  aquades,  sabun,  clorox, spritus,  twenn  20.  Alat-alat  yang  digunakan  dallam  penelitian  terdiri  dari  botol  kultur, beaker  glass,  lampu  bunsen,  pinset,  spatula,  scalpel,  cawan  petri,  autoklaf,  pipet  volume, hand sprayer, aluminium foil, Laminaf Air Flow (LAFC), batang pengaduk, gelas ukur, pH meter,  pemanas,  timbangan  analitik,  lemari  pendingin,  tissue,  kertas  milimeter,  label,  rak kultur,  masker,  jas  laboratorium  dan  alat-alat  tulis.  Perlakuan  yang  dilakukan  berupa perbedaan teknik sterilisasi dengan  media tanam  yang sama setiap perlakuan  yaitu media MS dengan campuran ZPT BAP + IAA. Media yang digunakan yaitu MS + BAP 1 ppm + IAA  0,2  ppm.  Ada  6  teknik  sterilisasi  yang  akan  dilakukan  masing-masing  dari  teknik sterilisasi  tersebut  dibuat  sebanyak  10  botol  dan  masing-masing  ditanam  1  potongan eksplan.  Seluruh  perlakuan  teknik  sterilisasi  1  sampai  dengan  teknik  sterilisasi  6 dilakukan  secara  prosedural  mulai  dari  diluar  LAFC  misal  teknik  1  dengan  pencucian deterjen  2  g/L  sampai  bersih  serta  dilanjutkan  dengan  prosedur  di  dalam  LAFC  dengan perendaman  benomil  50%  dan  agrimicin  selama  1  jam  dan  seterusnya  sampai  dengan selesai  begitu  juga  dengan  teknik  lainnya.  Teknik  sterilisasi  yang  digunakan  pada penelitian ini dari teknik sterilisasi 1-3 diperoleh dari penelitian Hamdani et al., (2020) dan teknik sterilisasi 4-6 diperoleh dari penelitian Harahap et al., 2015. Teknik sterilisasi yang digunakan dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 2.1. Bahan sterilisasi yang digunakan pada eksplan Cattelya sp .
Teknik  Perawatan Nama Sterilisasi dan Durasi Perawatan (menit) Di Luar LAFC Deterjen 2 g/L (Dicuci) Sampai bersih Benomil 50% (3 g/L) (Direndam) 1 jam 1 Di dalam LAFC Agrimicin (3 g/L) (Direndam) Tween-20  (2  tetes)  (Direndam)  NaOCL 10% (Direndam) 1 jam 20 menit 20 menit Di luar LAFC Air mengalir (Dicuci) Sampai bersih Deterjen (2 g/L) (Direndam) 5 menit Akuades steril (Dibilas) Sampai bersih Tween-20 (3 tetes) (Direndam) 10 menit Akuades steril (Dibilas) Sampai bersih 2 Benomil 50% (2 g/L) (Direndam) 1 jam Agrimicin (2 g/L) (Direndam) 1 jam Akuades steril (Dibilas) Sampai bersih Di dalam LAFC NaOCl 15% (Direndam) 10 menit NaOCl 10% (Direndam) Alkohol 70%  (Direndam)  Akuades  steril (Dibilas) 15 menit 1 menit Sampai bersih Di luar LAFC Alkohol 70% (Dicelupkan)
Harahap  Fauziyah,  Febriani  Br  Bangun  E,  Suryani  Cicik,  Edi  Syahmi,  Putri  Ningsih  A, Nusyirwan  :  Variasi  Waktu  Dan  Sterilisasi  Untuk  Anggrek Cattelya  sp .  Sebelum Penanaman In-Vitro
Tisu + Akuades steril (Dilap) 3 Di dalam LAFC Alkohol  70%  (Direndam)  Akuades  steril (Direndam) NaOCl 20% (Direndam) 10 menit 5 menit 7 menit Akuades  steril  (Direndam)  NaOCl  10% (Direndam)  Akuades  steril  (Direndam) NaOCl  5%  (Direndam)  Akuades  steril (Direndam) 5 menit 7 menit 5 menit 7 menit 5 menit Di luar LAFC 1,05% Clorox 7 menit Di dalam LAFC 0,02% HgCl 10 detik 4 Akuades steril (eksplan dicuci 10 menit 3 kali) Eksplan dipotong, ukuran 1x1 cm, ditanam Di luar LAFC 30% Alkohol 5 menit 5 Di dalam LAFC 0.26% NaOCl 0.21%NaOCl 3 menit 3 menit 0,16% NaOCl 2 menit 10% Alkohol (Eksplan dipotong, 1 menit ukuran 1x1 cm) Akuades steril (eksplan dicuci 3 kali) dan ditanam

## III. HASIL PENELITIAN
Hasil Tabel 3. 1 . Hasil sterilisasi dengan persentase eksplan terkontaminasi Eksplan Terkontaminasi Minggu Setelah Tanam (MST)
Tekn ik Botol Awal Terkontamin asi Hari (ke-) 1 MST 2 MST 3 MST 4 MST 5 MST 6 MST Total (%) 1 10 38 4 4 0 0 0 0 80% 2 10 14 1 1 0 0 0 0 20% 3 10 20 5 3 0 0 0 0 80% 4 10 41 1 0 0 3 0 0 30% 5 10 3 9 0 0 0 0 0 90% 6 10 37 0 3 0 4 0 0 70%
Berdasarkan  Tabel  3.1.  dapat  dilihat  bahwa  pada  6  teknik  sterilisasi  ini,  persen  tertinggi eksplan  yang terkontaminasi  yaitu pada teknik sterilisasi  V  yaitu 90% dari 10 botol  yang
Harahap  Fauziyah,  Febriani  Br  Bangun  E,  Suryani  Cicik,  Edi  Syahmi,  Putri  Ningsih  A, Nusyirwan  :  Variasi  Waktu  Dan  Sterilisasi  Untuk  Anggrek Cattelya  sp .  Sebelum Penanaman In-Vitro
terjadi  di  hari  3  eksplan  sudah  terkontaminasi  sebanyak  90%.  Selanjutnya,  diikuti  oleh teknik sterilisasi I dan III berjumlah 80% dari masing- masing 10 botol dimana pada teknik sterilisasi I pada pengamatan 1-5 MST dan teknik sterilisasi III pada pengamatan 1-3 MST. Pada  teknik  sterilisasi  VI  juga  termasuk  eksplan  terkontaminasi  tertinggi  yaitu  berjumlah 70% pada pengamatan 1-5 MST. Untuk persen terendah eksplan yang terkontaminasi yaitu pada  teknik  sterilisasi  II  yaitu  20%  pada  pengamatan  2  MST  dan  diikuti  oleh  teknik sterilisasi IV yaitu 40% dari 10 botol pada pengamatan 1-6 MST.
Tabel 3.2 . Hasil sterilisasi dengan persentase eksplan browning Eksplan Browning Minggu Setelah Tanam (MST)
Teknik Botol Awal 1 2 3 4 5 6 Total (%) 1 10 6 0 1 0 0 0 70% 2 10 2 1 0 0 0 0 30% 3 10 5 0 0 0 0 0 5% 4 10 0 0 0 0 0 0 0% 5 10 2 0 0 0 0 0 20% 6 10 0 0 0 1 0 0 10%
Selanjutnya  pada  tabel  3.2  untuk  persen  eksplan  browning  dapat  dilihat  pada  6  teknik sterilisasi  ini,  persen  tertinggi  eksplan  yang  mengalami  browning  yaitu  pada  teknik sterilisasi  I  yaitu  70%  dan  diikuti  oleh  teknik  sterilisasi  III  yaitu  50%.  Untuk  persen terendah  eksplan  yang  mengalami  browning  yaitu  pada  teknik  sterilisasi  VI  yaitu  10%. Selanjutnya diikuti oleh teknik sterilisasi V yaitu 20% dan teknik sterilisasi II yaitu 30%.
Tabel 3.3 . Hasil sterilisasi dengan persentase eksplan membengkak Eksplan Membengkak Minggu Setelah Tanam (MST)
Teknik Botol Awal 1 2 3 4 5 6 Total (%) 1 10 0 0 0 0 0 0 0% 2 10 0 5 0 0 0 0 50% 3 10 0 0 0 0 0 0 0% 4 10 6 2 1 0 0 0 90% 5 10 0 0 0 0 0 0 0% 6 10 1 2 10 0 0 0 40%
Pada tabel  3.3 diatas,  dapat  dilihat bahwa ntuk  persen eksplan membengkak dapat  dilihat persen  tertinggi  pada  6  teknik  sterilisasi  ini  yaitu  pada  teknik  ke  4  yaitu  90%  dan  diikuti oleh teknik sterilisai 2 berjumlah 50% kemudian pada teknik sterilisasi 6 yaitu 40%
Harahap  Fauziyah,  Febriani  Br  Bangun  E,  Suryani  Cicik,  Edi  Syahmi,  Putri  Ningsih  A, Nusyirwan  :  Variasi  Waktu  Dan  Sterilisasi  Untuk  Anggrek Cattelya  sp .  Sebelum Penanaman In-Vitro
Tabel 3.4 . Hasil sterilisasi dengan persentase eksplan hidup Eksplan Hidup
Minggu Setelah Tanam (MST) Teknik Botol Awal 1 2 3 4 5 6 Total (%) 1 10 0 0 0 0 0 0 0% 2 10 0 0 0 0 0 5 50% 3 10 0 0 0 0 0 1 10% 4 10 0 0 0 0 0 6 60% 5 10 0 0 0 0 0 0 0% 6 10 0 0 0 0 0 3 30%
Selanjutnya,  pada  tabel  3.4  diatas  dapat  dilihat  bahwa  persen  eksplan  hidup  dapat  dilihat persen tertinggi eksplan hidup pada 6 teknik sterilisasi ini yaitu pada teknik ke 4 yaitu 60% dan diikuti oleh teknik sterilisai II 50%. Selanjutnya, persen terendah eksplan hidup yaitu pada teknik sterilisasi III yaitu 10% dan diikuti oleh teknik sterilisasi VI yaitu 30%.
(a) (a) (b) (b)
(c) (d)
Gambar 2. a. Eksplan terkontaminasi jamur dan bakteri, b. Eksplan browning, c. Eksplan membengkak, d. Eksplan muncul bakal tunas

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian  yang  sudah  dilakukan  maka  kesimpulan  dari  penelitian ini  adalah  :  Teknik  sterilisasi  yang  dapat  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah denganmenggunakan  teknik  sterilisasi  2  dengan  menggunakan  zat  sterilan  deterjen, akuades steril, Tween-20, benomil 50%, agrimicin, NaOCl 15% & 10% dan alcohol 70% serta kehati-hatian saat melakukan sterilisasi pada eksplan lapang anggrek Cattleya sp. dan teknik  sterilisasi  4,  yaitu  menggunakan  Clorox  1,05%,  HgCl  0,02%  dan  aquades  steril. Karena  dengan  menggunakan  teknik  sterilisasi  ini  tingkat  kontaminan  dapat  ditekan. Penggunaan teknik sterilisasi ini dapat berhasil optimal apabila pemotongan eksplan dibuat dengan  ukuran  tidak  terlalu  kecil.  Selain  itu,  penggunaan  konsentrasi  yang  tepat  dapat mendukung keberhasilan sterilisasi.
Harahap  Fauziyah,  Febriani  Br  Bangun  E,  Suryani  Cicik,  Edi  Syahmi,  Putri  Ningsih  A, Nusyirwan  :  Variasi  Waktu  Dan  Sterilisasi  Untuk  Anggrek Cattelya  sp .  Sebelum Penanaman In-Vitro

## DAFTAR PUSTAKA
Adawiyah, A., Supriyatna, A., Amalia, N. N., Muhsin, M. E., Annisa, R., & Solihah, S. F.
(2021).  Optimasi  Sterilisasi  Eksplan  Umbi  dan  Bulbil  Porang  (Amorphopalus muelleri      Blume.)      pada      Kultur      In  Vitro. AGROSCRIPT:  Journal  of  Applied Agricultural Sciences , 3 (2), 121-131.
Bangun, I. H., Hanum,  H., & Sabrina, T. (2020, February). Exploration and effectiveness test  of  the  potassium  solvent  bacteria  originating  from  limestone  mountain  of Bahorok Langkat. In IOP Conference Series: Earth and Environmental Science (Vol. 454, No. 1, p. 012143). IOP Publishing.
Fathurrahman, F. (2013). Pemberian Beberapa Jenis Auksin Terhadap Pertumbuhan Akar Eksplan Anggrek Secara In Vitro. Dinamika Pertanian , 28 (2), 97-102.
Hamdani, S., Nugraha, D., Berliani, T., & Baroroh, U. (2020). Teknik Sterilisasi Eksplan Tunas Kentang Granola Kembang (Solanum Tuberosum L.) untuk Kultur in Vitro. J. Kartika Kimia . 3, (2), 60-69 Harahap, F. (2011). Kultur Jaringan Tanaman . UNIMED.
Harahap,  F.,  &  Nusyirwan.  (2012).  Induksi  Pertumbuhan  Nanas  (Ananas  Comosus  L)  In Vitro  Asal  Pangaribuan  Dengan  Pemberian  Zat  Pengatur  Tumbuh  Kinetin.  In Prosiding  Seminar  Nasional  dalam  rangka  Semirata  BKS-PTN  Wilayah  Barat bidang MIPA tahun 2012 (pp. 100-107).
Harahap,  F.,  Suriani  C.,  Poerwanto  R.  &  Siallagan  J.  (2015).  Sterilization  of  Pineapple Explant  From  Sipahutar  North  Sumatera,  Indonesia  (Ananas  comosus  L)  And  In Vitro  Growth  Induction. Asian  Journal  of  Microbiology,  Biotechnology  & Enviromental Sciences . 17 (2) : 469-478.
Parnata, A. S. (2005). Panduan budi daya perawatan anggrek . Agromedia Pustaka.
Rahmadi,  A.,  Wicaksana,  N.,  Nurhadi,  B.,  Suminar,  E.,  Pakki,  S.  R.  T.,  &  Mubarok,  S. (2020).  Optimasi  teknik  sterilisasi  dan  induksi  tunas  tanaman  durian  (Durio zibethinus  Murr)‘Kamajaya’lokal  Cimahi  Secara  in  vitro. Kultivasi , 19 (1),  1083- 1088.
Setiani,  N.  A.,  Nurwinda,  F.,  &  Astriany,  D.  (2018).  Pengaruh  desinfektan  dan  lama perendaman pada sterilisasi eksplan daun sukun (Artocarpus altilis (Parkinson ex. FA Zorn) Fosberg). Biotropika: Journal of Tropical Biology , 6 (3), 78-82.
Silvina, Fetmi dan Muniarti., (2007). Pemberian Air Kelapa Muda Pada Media Murashige and  Skoog  (MS)  Untuk  Pertumbuhan  Eksplan  Nanas  Secara  In-Vitro,  Riau, Universitas Riau.
Sumarti  Kartohadiprodjo,  N.,  &  Prabowo,  G.  (2009). Anggrek .  PT  Gramedia  Pustaka Utama.
Zulkarnain  (2009) Kultur  Jaringan  Tanaman :  Solusi  Perbanyakan  Tanaman  Budi  Daya. Jakarta: BumiAksara.
Zulkarnain. (2017). Kultul Jaringan Tanaman . UNIMED
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 30 Agustus  2023 05 September 2023 28 September 2023 Ya