## IMUNOGENISITAS ANTIGEN HEAT KILLED Aeromonas hydrophila STRAIN LOKAL DESA SUNGAI BATANG DAN MANDIANGIN TERHADAP IKAN
LELE DUMBO ( Clarias gariepinus )
IMMUNOGENICITY OF HEAT KILLED ANTIGEN Aeromonas hydrophila LOCAL STRAINS OF SUNGAI BATANG AND MANDIANGIN VILLAGES ON AFRICAN CATFISH ( Clarias gariepinus )
Alna Chairunisa 1 , Olga 2* , Siti Aisiah 3
1,2,3) Program Studi Akuakultur Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Lambung Mangkurat, Jl.A.Yani km 36 BanjarbaruKalimantan Selatan
Email: olga@ulm.ac.id *)

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk menyeleksi dan mendapatkan  antigen bakteri A.hydrophila strain lokal desa Sungai  Batang  dan  Mandiangin  Kalimantan  Selatan  yang  bersifat  imunogenik terhadap  ikan  lele  dumbo. Antigen  diinaktif  menggunakan  metode  pemanasan  ( heat  killed) .  Rancangan  penelitian  ini  menggunakan Rancangan acak lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan 3 ulangan yang meliputi  perlakuan vaksinasi dengan antigen Aeromonas hydrophila strain P5.1 (A), strain AM01 (B), strain P1.1 (C), strain P3.1 (D), strain P4.1 (E) dan kontrol diinjeksi dengan PBS pH 7,0 (K). Antigen diinjeksi secara intramuscular sebanyak 0.1 ml (kepadatan bakteri 10 9 sel/ml) per ekor ikan  uji (A,B,C,D,E). Hasil uji imunogenisitas antigen strain lokal P5.1  dan  P1.1  bersifat  lebih  imunogenik terhadap  lele  dumbo  dibandingkan  dengan  antigen  lainnya berdasarkan kemampuannya meningkatkan antibodi pasca vaksinasi. Uji reaksi silang antigen A. hydrophila strain  lokal  AM01,  P1.1  dan  P5.1  mampu  bereaksi  silang  dengan  antigen  lainnya.  Antigen  P1.1  mampu mengenali antigen lebih banyak dibandingkan P5.1 dan AM01, sehingga dapat direkomendasikan menjadi kandidat vaksin.
Kata kunci: Aeromonas hydrophila, antibodi, imunogenisitas, Clarias gariepinus .

## ABSTRACT
This study aims to select and obtain antigens of the local strain A. hydrophila bacteria in Sungai Batang and Mandiangin villages, South Kalimantan, which are immunogenic to African catfish. Antigen is inactivated using the heating method (heat killed). The design of this study used a completely randomized design (CRD) with  6  treatments  and  3  replications  which  included  vaccination  with  the  antigen  Aeromonas  hydrophila strain P5.1 (A), strain AM01 (B), strain P1.1 (C), strain P3.1 ( D), strain P4.1 (E) and control were injected with PBS pH 7.0 (K). Antigen was injected intramuscularly as much as 0.1 ml (bacterial density 109 cells/ml) per test fish (A, B, C, D, E). The results of the antigen immunogenicity test of local strains P5.1 and P1.1 were more immunogenic to African catfish compared to other antigens based on their ability to increase post- vaccination  antibodies.  Antigen  cross-reaction  test  A.  hydrophila  local  strains  AM01,  P1.1  and  P5.1  are capable of cross-reacting with other antigens. P1.1 antigen is able to recognize more antigens than P5.1 and AM01, so it can be recommended as a vaccine candidate.
Keywords : Aeromonas hydrophila, antibodies, immunogenicity, Clarias gariepinus

## PENDAHULUAN
Desa  Sungai  Batang  dan  Mandiangin
Kabupaten Banjar banyak dilakukan pembudidayaan ikan, salah satunya ikan lele Namun  di  tengah  meningkatnya  budi  daya ikan, pembudidaya ikan harus selalu waspada terhadap  kendala  yang  dapat  merugikan produksi  budi  daya.  Permasalahan  yang belum cukup baik untuk ditanggulangi, yaitu resiko  penyebaran  penyakit  ikan.  Resiko terjadinya  penyakit  dan  penyebaran  wabah penyakit  semakin  meningkat.  Pembudidaya ikan  yang  melakukan  pembenihan  maupun pembesaran  sering  menemukan  salah  satu jenis penyakit yang disebabkan oleh bakteri. Bakteri  yang  dijumpai  sebagian  besar merupakan bakteri patogen seperti Aeromonas hydrophila, A.salmonicida,
Pseudomonas, Flavobacterium,
Vibrio,
Edwardsiella ictaluri, Streptococcus,
Pasteurella, Yersinia ruckeri, dan Cytophaga yang  merupakan  bakteri  Gram  negatif (Muslikha et al., 2016).
Aeromonas  hydrophila merupakan penyebab Motile  Aeromonas  Septicemia (MAS)  (Olga  &  Fatmawati,  2013).  Bakteri ini  berasal  dari  lingkungan  perairan. A. hydrophila termasuk  ke  dalam  kelompok bakteri patogen dengan virulensi yang tinggi (Mulia et  al., 2016).  MAS  umumnya  dapat
ditanggulangi  melalui  tindakan  pencegahan dengan  pemberian  imunostimulan  untuk mengembalikan  ketidakseimbangan  sistem kekebalan tubuh yang terganggu dengan cara merangsang  dan  memperbaiki.  Pemberian imonustimulan  dapat  diberikan  melalui injeksi,  pakan  (oral),  dan  perendaman (Maqsood et al., 2011 dalam Rosidah et al. , 2018).
Vaksin  merupakan  salah  satu  produk imunostimulan  yang  mampu  merangsang kekebalan  spesifik  yang  dapat  diberikan dalam  berbagai  macam  metode  vaksinasi. Menurut  Taukhid et  al. (2018)  vaksinasi merupakan  salah  satu  upaya  pencegahan terhadap  infeksi  patogen  yang  efektif  dan menjamin  peningkatan  produksi  akuakultur yang  berkelanjutan.  Salah  satu  keunggulan yang  dimiliki  oleh  vaksin  tersebut  adalah kemampuannya untuk bereaksi silang terhadap varian bakteri heterologi terdapat di sentra budi daya ikan air tawar.
Vaksinasi  merupakan  suatu  upaya untuk  menimbulkan  ketahanan  tubuh  yang bersifat  spesifik  melalui  pemberian  vaksin (Aliffudin, 2002). Hal serupa dinyatakan Nur (2006)  bahwa  vaksinasi  dapat  merangsang munculnya imun spesifik, khususnya respon imun  humoral  (antibodi)  yang  timbul terhadap  antigen  tertentu.  Keberhasilan vaksinasi dipengaruhi beberapa faktor, yaitu
kualitas strain bakteri.  Strain  bakteri  yang diambil  dari  tempat  yang  berbeda  akan memiliki  susunan  genetik  yang  berbeda, sehingga  menghasilkan  karakteristik  yang berbeda. Strain lokal yang digunakan sebagai kandidat  vaksin  diambil  dari  strain  lokal Kalimantan  Selatan  yang  berlokasi  di kabupaten  Banjar,  yaitu  di  desa  Sungai Batang dan Mandiangin.
Berdasarkan hal tersebut, perlu dilakukan  penelitian  uji  imunogenisitas kandidat  calon  vaksin  dari  bakteri A. hydrophila strain  lokal  Kalimantan  Selatan pada  lele  dumbo  ( Clarias  gariepinus ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menyeleksi dan mendapatkan antigen bakteri A.hydrophila strain lokal desa Sungai Batang dan  Mandiangin  Kalimantan  Selatan  yang bersifat  imunogenik terhadap  ikan  lele dumbo.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  di Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Ikan Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru Kalimantan Selatan.

## Alat dan Bahan Penelitian
A.hydrophila strain, Ikan lele dumbo, media  GSP  agar  ( Glutamat  Starch  Phienile agar ; Merck-Germany )  dan  TSB  ( Tryptone Soya Broth; Merck-Germany ), inkubator, pH meter, DO meter.

## Prosedur Penelitian
Prosedur penelitian meliputi persiapan sterilisasi alat dan bahan. Selanjutnya,  koleksi  bakteri A.hydrophila strain  lokal  Sungai  Batang  dan  Mandiangin diremajakan dengan dikultur ke dalam media GSP  agar  ( Glutamat  Starch  Phienile  agar ; Merck-Germany )  dan  TSB  ( Tryptone  Soya Broth; Merck-Germany ) diinfeksikan ke ikan yang sehat dengan dosis kepadatan suspensi 10 9 sel/ml. Ikan uji yang menunjukkan gejala sakit atau mati diisolasi  bakterinya, dikultur ke  medium  GSP  agar.  Seose  koloni  bakteri yang dominan ditumbuhkan ke medium TSB untuk  diinfeksikan  lagi  ke  ikan  uji  yang sehat. Proses ini dilakukan sebanyak 3 kali.
Koloni  bakteri  murni  hasil  reisolasi yang  ketiga  dibuat  menjadi  antigen.  Bakteri dikultur ke media TSB dan diinkubasi selama 18-24 jam secara bertingkat. Selanjutnya sel bakteri  dipanen,  dipisahkan  antara  media dengan  selnya  dengan  cara  disentrifuse dengan  kecepatan  3.500  rpm  selama  15 menit,  Kemudian  sel  dicuci  dan  dibilas
dengan larutan PBS pH 7 sebanyak 3 kali. Sel bakteri  yang  telah  dicuci  dan  dibilas kemudian  dipanaskan  pada  suhu  100 o C selama  60  menit.  Untuk  mengetahui  aktif atau tidaknya sel bakteri tersebut, maka diuji viabilitasnya  secara  duplo  di  medium  GSP agar selama overnight.
Imunogenisitas  antigen  diuji  melalui  proses vaksinasi  pada  lele  dumbo  perlakuan  yang berukuran  panjang  total  12-15  cm  secara injeksi intramuscular dengan  dosis  0,1 ml/ekor  (kepadatan  bakteri  10 9 sel/ml). sedangkan  untuk  kontrol  disuntik  dengan PBS  ( Phosphate  Buffer  Saline )  pH  7.
Pengambilan  darah  untuk  uji  titer  antibodi dilakukan  12  hari  setelah  vaksinasi  awal untuk keperluan uji titer antibodi. Setelah itu, ikan  di booster dengan  dosis  yang  sama dengan  vaksinasi  awal  dan  dipelihara  lagi selama  12  hari  ke  depan,  lalu  ikan  diambil lagi darahnya untuk uji titer antibodi.

## Analisis data
Rancangan penelitian
ini
menggunakan  rancangan  acak  lengkap (RAL) terdiri dari 5 perlakuan vaksinasi dan 1 perlakuan kontrol dengan 3 ulangan, yaitu ikan divaksinasi dengan antigen A.hydrophila strain P5.1 (A), strain AM01 (B), strain P1.1 (C), strain P.3.1 (D), strain
P4.1  (E)  dan  kontrol  (K,  diinjeksi  dengan
PBS pH 7,0).  Analisis data meliputi analysis of  varians  (anova)  untuk  data  titer  antibodi uji  imunogenisitas,  sedangkan  untuk  reaksi silang  antar  antigen  pasca  vaksinasi    dan kualitas air diamati secara deskriptif.
Parameter pengamatan adalah sebagai berikut:
a.   Titer Antibodi Pengamatan titer antibodi
menggunakan  metode  aglutinasi  (Anderson,
1974) dilakukan untuk mengamati imunogenisitas  dan  reaksi  silang  antar antigen
b.   Kualitas air
Pengamatan  kualitas  air  dilakukan  di akhir  perlakuan.  Parameter  yang  diamati adalah suhu, derajat keasaman (pH), oksigen terlarut (DO).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil

## Imunogenisitas
Uji imunogenisitas lele dumbo menggunakan  antigen heat  killed bakteri A. hydrophila strain lokal  Sungai  Batang  dan Mandiangin disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1.  Imunogenisitas  ikan  lele  dumbo selama pengamatan Perlakuan Titer Antibodi sampling ke 0 1 2 A 1 725.33 1194.67 B 1 1024 66901.33 C 1 405.33 10986.67 D 1 234.67 11434.67 E 1 277.33 8.19 K-A 1 1 1 K-B 1 1 1 K-C 1 1 1 K-D 2 1 1,33 K-E 2 1 5,33 Keterangan:  A=  strain  P.5.1,  B=  strain  AM01,  C= strain  P.1.1,  D=  strain  P.3.1,  E=strain
P.4.1, K= Kontrol/PBS pH 7,0
Hasil  uji  imunogenisitas  ikan  lele dumbo  dalam  penelitian  ini  menggunakan antigen  bakteri A.  hydrophila heat  killed strain  Sungai  Batang  dan  Mandiangin menggunakan  dosis  0,1  ml/ekor  dengan kepadatan  suspensi  bakteri  10 9 sel/ml menunjukkan  terjadinya  peningkatan  titer antibodi pasca 12 hari vaksinasi awal dan 12 hari  vaksinasi booster. Menurut  Rukyani et al. (1997) bahwa ikan biasanya membutuhkan  waktu  2  minggu  untuk melakukan  tanggap  kebal  dalam  bentuk peningkatan produksi antibodi.
Titer  antibodi  yang  dihasilkan  dalam tiap  perlakuan  menunjukkan  yang  berbeda meskipun  dosis yang diberikan sama (Tabel 1.). Hal ini menunjukkan bahwa antigen dari strain lokal A.hydrophila yang berbeda dapat memberikan nilai ikatan reaksi yang berbeda dengan  antibodi  pada  ikan  uji.  Meski
demikian,  berdasarkan  hasil  uji  anova  titer antibodi  lele  dumbo  diperoleh  F  hitung (1.4203)  <  F  Tabel  5%  (4,0661)  dan  1% (7,5909),  maka  dapat  disimpulkan  bahwa pemberian antigen bakteri A. hydrophila heat killed strain  lokal Sungai  Batang  dan Mandiangin tidak berpengaruh nyata terhadap uji imunogenisitas lele dumbo.
Hasil uji anova titer antibodi sampling kedua menunjukkan  lele diperoleh F hitung (0.5770)  <  F  Tabel  5%  (4,0661)  dan  1% (7,5909) dapat disimpulkan bahwa pemberian antigen bakteri A. hydrophila heat killed strain  lokal Sungai  Batang  dan Mandiangin tidak berpengaruh nyata terhadap  imunogenisitas lele dumbo.
Ikan  setelah  divaksinasi  menunjukkan terjadinya  peningkatan  titer  antibodi  pada semua  perlakuan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  vaksin  bakteri A.  hydrophila strain lokal mampu berikatan dengan antibodi ikan. Pendapat  tersebut  didukung  Trilia et  al. (2014)  bahwa  terjadinya  peningkatan  nilai titer  antibodi  dikarenakan  antibodi  mampu mengeliminasi antigen yang masuk ke dalam tubuh ikan.
Vaksinasi booster dapat meningkatkan antibodi  ikan.  Peningkatan  titer  antibodi terlihat pada perlakuan A (P5.1), B (AM01), C  (P1.1)  dan  D  (P3.1)  terjadi  setelah pemberian booster. Vaksinasi booster
mampu  merangsang  produksi  titer  antibodi sehingga  antibodi    bereaksi  menngenali antigen  (vaksin heat  killled )  yang  masuk  ke dalam tubuh ikan.
Penurunan  titer  antibodi,  yaitu  terjadi di strain E (P4.1) bila dibandingkan saat ikan uji  belum  divaksinasi booster .  Hal  tersebut diduga, karena ikan stres akibat terlalu sering mendapatkan perlakuan pada saat penyuntikan  dan  pengambilan  darah  yang dilakukan secara berurutan. Menurut Nugroho . (2017)  perlakuan  yang  demikian itu  diduga  dapat  mempengaruhi  perubahan titer antibodi. Pengukuran titer antibodi dapat diketahui  berdasarkan  kemampuan  antibodi di  dalam  serum  dapat  melakukan  aglutinasi terhadap  antigen A.hydrophila .  Berdasarkan hasil  (Tabel  1)  menunjukkan  bahwa  vaksin heat killed strain A (P5.1), strain B (AM01), strain  C  (P1.1)  dan  strain  D  (P3.1)  yang diberikan  mampu  meningkatkan  respons imun  dengan  terdeteksinya  reaksi  aglutinasi pada titer antibodi. Kekebalan yang dihasilkan setelah vaksinasi akan melibatkan pertahanan  spesifik  yang  terdiri  imunitas humoral  dan  imunitas  seluler.  Antibodi merupakan suatu agen yang diperlukan untuk mencegah  serangan  patogen.  Terbentuknya antibodi merupakan suatu proses yang terjadi dalam limfosit B sebagai reaksi yang mampu menyerang kehadiran molekul asing
penginfeksi dalam darah. Sistem imun seluler difasilitasi oleh limfosit T disebut sel T.

## Reaksi silang antara antigen dan antibodi
Pengujian  terhadap  reaksi  silang  juga digunakan  untuk  mencari  antigen  yang mampu  bereaksi  positif  tidak  hanya  dengan antigen yang sama (satu jenis), namun dapat bereaksi  terhadap  antigen  dari  strain  yang lain.
Uji  reaksi  silang  merupakan  uji  yang mereaksikan  suatu  antigen  dengan  antibodi secara in vitro untuk mengetahui imunogenisitas  antigen A.  hydrophila dari beberapa  strain  yang  diberikan  pada  ikan (Mulia et  al., 2016). Uji  reaksi  silang dilakukan  pada  antibodi  ikan  yang  telah divaksinasi dengan antigen heat killed strain lokal A.  hydrophila Sungai  Batang  dan Mandiangin disajikan pada Tabel 2.
Tabel  2.  Reaksi  Silang  antara  Antigen  dan Antibodi.
Keterangan : antigen dan antibodi bereaksi  silang (+); tidak  ada  reaksi  silang  (-).  A=  strain P.5.1, B= strain AM01, C= strain P.1.1, D=  strain  P.3.1,  E=strain  P.4.1,  K=
Kontrol/PBS pH 7,0 Antigen sampling ke- Perlakuan A B C D E
1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 A + + - - + + - - - - B - - + + + + - - - - C + + + + + + - - - - D - - - - - - + + - - E - - - - - - - - + + K - - - - - - - - - -
Hasil  reaksi  silang  antara  antigen beberapa  strain  bakteri A.  hydrophila dan antibodi  lele  dumbo  menunjukkan  bahwa antibodi lele dumbo yang divaksinasi dengan A.  hydrophila strain  P1.1  bereaksi  positif dapat mengenali antigen A. hydrophila strain P5.1  dan  AM01.  Sedangkan  antibodi  lele dumbo  yang  divaksinasi  dengan  strain  P5.1 mampu  mengenali  antigen  P1.1,  dan  yang divaksinasi dengan AM01 mampu mengenali antigen P1.1.   Berbeda dengan antibodi lele dumbo  dari  strain  Sungai  Batang  lainnya (P4.1  dan  P3.1),  antibodi  yang  diproduksi tidak  mampu  mengenali  antigen  strain A. hydrophila yang  lain  selain  dari  antigennya sendiri (Tabel 2).
Kemampuan antibodi lele dumbo yang divaksinasi  dengan  strain  P1.1  bereaksi positif dengan antigen strain P5.1 dan AM01 menunjukkan  bahwa  strain  ini  memiliki kemampuan  yang  lebih  banyak  dalam melindungi ikan terhadap serangan bakteri A. hydrophila dengan  strain  yang  berbeda darinya. Pendapat ini didukung Mulia (2012) bahwa  kandidat  vaksin  yang  baik  adalah yang mampu bereaksi terhadap antigen yang sama  (satu  jenis)  dan  mampu  bereaksi dengan  antigen  dari  strain  lain,  sehingga dapat dijadikan kandidat vaksin.

## Kualitas air
Hasil  pengukuran  kualitas  air  selama masa penelitian disajikan pada Tabel 3.
Tabel  3.  Kualitas  air  penelitian  selama
penelitian Para- meter Rerata hasil pengukuran Literatur Penunjang Suhu ( o C) 26,4 26,5 o C 24 o C – 30 o C
(Kesuma et al., 2019) pH 6,23 – 6,90 6 – 9 (Syahrizal et al., 2019). DO (mg/l) 3,40- 4,10 mg/l Tidak < 5 mg/l (Rosmawati & Muarif, 2010).
Berdasarkan  hasil  pengamatan  suhu air,  pH  air  dan  DO  pada  Tabel  3.  masih berada pada kisaran normal untuk pemeliharaan  dan  pertumbuhan  lele  dumbo. Syahrizal et  al .  (2019)  menyatakan  bahwa proses biokimiawi perairan seperti nitrifikasi sangat  dipengaruhi  oleh  nilai  pH.  Proses nitrifikasi  akan  berakhir  jika  pH  bersifat asam. Kisaran pH yang kurang dari 6 – 9 bagi sangat berpengaruh pada perkembangan ikan lele, karena dapat menghambat pertumbuhan dan  menurunkan  nafsu  makan.  Menurut Rosmawati  dan  Muarif  (2010)  Kisaran oksigen  terlarut  untuk  kelangsungan  hidup dan  pertumbuhan,  oksigen  terlarut  yang dianjurkan tidak kurang dari 5 mg/l.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Antigen Aeromonas hydrophila strain lokal  AM01,  P1.1,  P3.1,  P4.1,  dan  P5.1 bersifat  imunogenik,  sedangkan  uji  reaksi silang  menunjukkan  bahwa  antigen A. hydrophila strain lokal AM01, P1.1 dan P5.1 mampu  bereaksi  silang  dengan  antigen lainnya.  Antigen  P1.1  mampu  mengenali antigen lebih banyak dibandingkan P.5.1 dan AM01,  sehingga  dapat  direkomendasikan menjadi kandidat vaksin.  Kualitas air  masih berada pada kisaran normal untuk pemeliharaan dan pertumbuhan lele dumbo.
Saran
-

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson, D.P. 1974. Fish Immunology . TFH Publications, Inc. United States. Alifuddin,  M.  2002.  Immunostimulan  on  aquatic  organisms. Jurnal  Akuakultur Indonesia .1(2):87–92.
Kesuma,  B.W.,  Budiyanto,  &  B.  Brata.  2019.  Efektivitas  pemberian  probiotik  dalam  pakan terhadap kualitas air dan laju pertumbuhan pemeliharaan ikan   lele sangkuriang ( Clarias gariepinus )  sistem  terpal. Jurnal  Penelitian Pengelolaan  Sumberdaya  Alam  dan Lingkunga n. 8(2): 24-25.
Mulia, D.S. 2012. Vaksinasi Lele Dumbo . Pustaka Pelajar. Yogyakarta. Mulia, D.S., C. Windarti,  & H.Maryanto, 2016. Imunogenisitas heat killed untuk Aeromonas hydrophila strain GB-01, GPD-02,  dan  GPL-05  sebagai  kandidat  vaksin. Techno .17(2):094-100.
Muslikha.,  S.Pujiyanto,  S.N.Jannah,  &  H.Novita.  2016.  Isolasi,  karakterisasi Aeromonas hydrophila dan  deteksi  gen  penyebab  penyakit motile  aeromonas  septicemia (MAS) dengan 16s rRNA dan aerolysin pada ikan lele ( Clarias sp .). Jurnal Biologi .  5 (4):1-7 Nugroho, D.A. 2017. Imunogenisitas heat  killed vaksin A. hydrophila strain GPI-03, GL-02, dan GK-01, ikan lele dumbo ( Clarias gariepinus ). Skripsi . Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Nur,  I.  2006.  Respon  humoral  ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus )  yang  divaksinasi  dengan konsentrasi  bakteri Aeromonas  hydrophila yang  berbeda. Jurnal  WARTA-WIPTEK . 14(2): 60-66.
Olga  &  Fatmawati.  2013.  Efikasi  rute  vaksin Aeromonas  hydrophila ASB-01  ikan  gabus ( Ophiocephalus striatus ). Fish Scientiae . 4(2):131-144.
Rosidah.,  I.D.Buwono,  W.Lili,  I.B.Suryadi,    &  A.R.Triandika.  2018.  Ketahanan  ikan  lele sangkuriang ( Clarias gariepinus ) burchell 1822 terhadap Aeromonas hydrophila pasca pemberian ekstrak daun kelor ( Moringa  oleifera L .). Jurnal  Iktiologi Indonesia . 19(1): 97-113.
Rukyani, A., E.Silvia, A.Sunarto, & Taukhid. 1997. Peningkatan respon kebalnon spesifik pada ikan  lele  dumbo  ( Clarias sp.)  dengan  pemberian  imunostimulan  (glucan). Jur.Penelitian Perikanan Indonesia . 4(1):11-14.
Syahrizal.,  M.Sugihartono  &  A.Jasa.  2019.  Respon  ikan  lele  ( Clarias  gariepinus ,  b)  dalam wadah jaring hapa yang diberi pakan kombinasi pellet dan usus ayam. Jurnal Akuakultur Sungai Dan Danau . 4(2): 50-59.
Taukhid, T., Sumiati & Andriyanto, S. 2018. Efektivitas metode aplikasi vaksin trivalen untuk pencegahan  penyakt  bakteri  potesial  pada  budidaya  ikan  air  tawar. Jurnal  Riset Akuakultur . 13(1): 67-76.
Trilia,  N.A.O.,  A.Setyawan,  Y.T.Adiputra,  &  Wardiyanto.  2014.  Imunogenisitas  kombinasi vaksin inaktif whole cell A. salmonacida dan jintan hitam ( Nigella sativa ) lihat ikan mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan. 2(2):32-34.