ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 16 (2) (2013) : 55 – 58
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi, Identifikasi dan Uji Sitotoksik Senyawa Alkaloid Daun Ketapang yang Sudah Menguning ( Terminalia cattapa Linn )
Ferdian Cahya Prima a , Dewi Kusrini a* , Enny Fachriyah a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: dewi.kusrini@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Terminalia cattapa
Linn, alkaloids, Cytotoxic, Indole, UV-Vis spectrophotometry
Isolation of indole alkaloid compounds From yellow leaves ketapang ( Terminalia Cattapa
Linn) had been carried out with acid-base extraction method. The results of isolation, it was obtained the total alkaloid compounds of 1.423 g (yield 0.287%). The analysis using UV-Vis spectrophotometry showed absorption at a wavelength of 206 and 224 nm, which indicated that the alkaloid compound had an indole framework. Cytotoxic test obtained a LC 50 value of 157.004 ppm

## A b s t r a k
Kata Kunci: Terminalia cattapa
Linn, Alkaloid, Sitotoksik, Indol, Spektrofotometri UV-Vis.
Telah  dilakukan  proses  isolasi  senyawa  alkaloid  indol  daun ketapang  yang  sudah
menguning ( Terminalia Cattapa Linn) dengan metode ekstraksi Asam-Basa. Hasil isolasi diperoleh  senyawa  alkaloid  total  sebesar  1,423  gram  (percent  0,287%).  Analisis menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  menunjukkan  adanya  serapan  pada  panjang gelombang  206  dan  224  nm,  yang  mengindikasikan  bahwa  senyawa  alkaloid  memiliki kerangka dasar indol. Uji sitotoksik diperoleh harga LC 50 sebesar 157,004 ppm.

## 1. Pendahuluan
Indonesia merupakan salah satu negara tropis yang dikenal  memiliki  keanekaragaman  tumbuhan  yang sangat  besar,  keanekaragaman  tumbuhan  Indonesia tercatat  mencapai  ±  38.000  jenis.  Salah  satunya  adalah ketapang  ( Terminalia  cattapa Linn),  selama  ini masyarakat  tidak  banyak  mengetahui  tentang  potensi- potensi dan kandungan-kandungan senyawa bermanfaat  yang  dimiliki  oleh  ketapang.  Ketapang merupakan  salah  satu  tanaman  yang  masuk  dalam kategori  famili Combretaceae yang  tersebar  merata  di seluruh  Indonesia.  Berdasarkan  penelitian  yang  selama ini  telah  dilakukan,  tercatat  di  dalam  daun  ketapang terdapat kandungan senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid [1], polifenol, saponin, triterpen dan tannin [2]. Penelitian  tentang  tanaman  famili combretaceae pada umumnya  mengidentifikasi  tentang  adanya  kandungan senyawa alkaloid.
Penelitian  yang  selama  ini  telah  dilakukan,  masih sedikit sekali yang menggali potensi senyawa alkaloid di
dalam  daun  ketapang,  dan  juga  mayoritas  didominasi dengan penggunaan daun ketapang hijau. Daun ketapang yang  sudah  menguning  selama  ini  kurang  mendapat perhatian.  Diharapkan  dari  penelitian  akan  dihasilkan senyawa alkaloid daun ketapang yang sudah menguning, dan  dapat  diidentifikasi  jenisnya  serta  dapat  diketahui sifat toksiknya.

## 2. Metode Penelitian

## Bahan
Daun  ketapang  yang  sudah  menguning,  pelarut  n- heksana  dan  etanol  teknis  diperlukan  pada  proses maserasi,  asam  klorida  p.a,  amoniak  p.a,  etil  asetat, diperlukan  dalam  isolasi  alkaloid  total.  Kemudian pereaksi  Meyer  [HgCl 2 +KI+H 2 O]  dan  Dragendorf [Bi(NO 3 ) 3 +HNO 3 +KI+H 2 O] diperlukan untuk uji alkaloid.

## Pembuatan Serbuk
Daun  ketapang  yang  sudah  menguning  diperoleh dari  lingkungan  Universitas  Diponegoro,  dicuci,  diiris
tipis-tipis,  dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  sehingga  diperoleh  daun  ketapang  kering kemudian  dihaluskan  untuk  mendapatkan  serbuk  daun ketapang kering.

## Isolasi Alkaloid Total
Serbuk  daun  ketapang  sebanyak  500  gram dimaserasi  dengan  pelarut  n-heksana  sampai  jernih, kemudian dipisahkan ekstrak dengan residunya. Residu yang  diperoleh  dibiarkan  di  udara  terbuka  untuk menghilangkan sisa pelarut, kemudian dimaserasi lebih lanjut  menggunakan  pelarut  etanol  sampai  jernih. Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental. Ke dalam  ekstrak  kental  ini  ditambahkan  HCl  2M  sampai diperoleh  pH  3.  Larutan  asam  selanjutnya  diekstraksi dengan  etil  asetat  sehingga  diperoleh  dua  lapisan, lapisan  etil  asetat  dan  lapisan  asam,  kemudian dipisahkan.  Ke  dalam  lapisan  asam  kemudian ditambahkan  NH 4 OH  sampai  diperoleh  pH  8-9, selanjutnya  diekstraksi  dengan  etil  asetat.  Sehingga diperoleh lapisan basa dan lapisan etil asetat, kemudian dipisahkan.  Lapisan  etil  asetat  yang  diperoleh selanjutnya  diuapkan  hingga  diperoleh  isolat  berupa padatan  yang  merupakan  alkaloid  total.  Selanjutnya alkaloid  total  diuji  menggunakan  pereaksi  Mayer  dan Dragendrof  untuk  mengetahui  apakah  hasil  isolasi merupakan senyawa alkaloid.
Penentuan Jumlah Komponen dan Pemisahan Alkaloid dengan Kromatografi Lapis Tipis serta Kromatografi Preparatif
Terhadap isolat yang diperoleh dilakukan kromatografi  lapis  tipis  dengan  pengembang  berupa campuran n-heksanaa p.a, etil asetat, p.a dan kloroform p.a dengan berbagai perbandingan volume dan fase diam berupa  silika  gel  60  GF 254 untuk  menentukan  jumlah komponen  di  dalam  isolat.  Setelah  jumlah  komponen diketahui  dilakukan  pemisahan  komponen  dengan metode Kromtografi Lapis Tipis Preparatif.

## Uji Kemurnian Senyawa Alkaloid
Uji  kemurnian  dilakukan  dengan  metode  KLT dengan berbagai pelarut.

## Identifikasi Hasil Isolasi
Isolat diidentifikasi menggunakan Spektrofotometri UV-Vis.

## Uji Sitotoksik Alkaloid Total dengan Metode BSLT
Alkaloid total yang diperoleh selanjutnya dilakukan uji  sitotoksik  menggunakan  larva Artemis  salina L. dengan  konsentrasi  1000,  100  dan  10  ppm  dengan menggunakan tween-20 sebanyak 5µL dan air garam. Ke dalam setiap konsentrasi sampel dimasukan 10 ekor larva Artemia  salina .  Setelah  24  jam,  jumlah  larva  yang  mati dihitung, selanjutnya data yang diperoleh diolah dengan menggunakan metode probit analisis untuk menentukan nilai LC 50 . Uji sitotoksik dengan metode BSLT dilakukan dengan langkah-langkah berikut :

## Pembuatan medium penetasan
Sebanyak 3,8 gram garam krosok dilarutkan dalam 100  mL  aquades,  kemudian  dikocok  dan  kemudian disaring, sehingga menjadi air laut buatan.

## Pembuatan variasi konsentrasi sampel
Sebanyak  0,00625  g  dari  senyawa  alkaloid  total dihomogenkan  dengan  tween-20  sebanyak  5  µL  dan diencerkan  dengan  air  laut  buatan,  selanjunya  dibuat konsentrasi 1000, 100, dan 10 ppm.

## Pembuatan larutan blanko
Sebanyak 5 µL tween-20 dilarutkan ke dalam air laut buatan  dan  diencerkan  menggunakan  labu  pengencer dengan volume 50 mL.

## Penetasan telur
Medium penetasan yang sudah disiapkan kemudian ditempatkan dalam tangki penetas kemudian diberi telur Artemia salina . Setelah larva menetas dan berumur 2 x 24 jam sudah bisa dipakai untuk uji sitotoksik.

## Penentuan ambang kematian Artemia salina L.
Ambang kematian Artemia salina ditentukan dengan memasukan 5 mL  larutan  uji dengan  konsentrasi  1000, 100  dan  10  ppm  masing-masing  dalam  botol  vial  yang berbeda.  Sebanyak  10  ekor  larva Artemia  salina dimasukan masing-masing ke dalam botol vial tersebut untuk  diuji,  botol  vial  dijaga  agar  tetap  mendapat penerangan. Jumlah Artemia salina yang mati dalam tiap botol  vial  dihitung  selama  24  jam  perlakuan.  Uji sitotoksik ini dilakukan dengan pengulangan 3 kali. Data yang  diperoleh  diolah  dengan  program  probit  analisys untuk menentukan nilai LC 50 .

## 3. Hasil dan Pembahasan
Proses Isolasi senyawa Alkaloid Daun Ketapang yang sudah menguning dihasilkan isolat alkaloid total berupa padatan  berwarna  coklat.  Untuk  mengetahui  apakah isolat merupakan senyawa alkaloid dilakukan uji alkaloid menggunakan pereaksi Mayer dan pereaksi Dragendorf. Hasil  uji  alkaloid  menunjukkan  hasil  positif,  pada penambahan pereaksi Mayer ditunjukkan dengan adanya kabut putih, dan pada penambahan pereaksi Dragendorf ditunjukkan  dengan  adanya  endapan  berwarna  coklat. Perkiraan reaksi yang terjadi pada uji Mayer ditunjukkan pada reaksi berikut ini [3]:
Perkiraan  reaksi  pada  uji  Dragendorff  ditunjukkan pada Gambar di bawah ini [3]:
Untuk  mengetahui  berapa  banyak  komponen senyawa  alkaloid  total  dilakukan  Kromatografi  Lapis Tipis dengan menggunakan berbagai pelarut. Berdasarkan  analisis  KLT  menggunakan  eluen  terbaik kloroform:benzena  1:9  diperoleh  3  noda,  yaitu  noda  1 berwarna  biru  (Rf:  0,403),  noda  2  berwarna  hijau  (Rf: 0,315),  noda  3  berwarna  biru  muda  (Rf:  0,122),  dengan noda  dominan  pada  noda  1.  Selanjutnya  dilakukan kromatografi  lapis  tipis  preparatif  untuk  memisahkan ketiga  noda  tersebut.  Dari  3  noda  yang  diperoleh,  noda yang paling dominan adalah noda 1 yang berwana biru, sehingga  noda  tersebut  dianalisis/dipisahkan,  dan dilanjutkan  uji  kemunian  dengan  berbagai  pelarut.  Uji kemurnian  dilakukan  pada  noda  1  bewarna  biru  hasil pemisahan  KLT  preparatif.  Uji  kemurnian  dilakukan dengan  pelarut  benzena:klorofom  (9:1).  Hasil  uji kemurnian tersebut masih menunjukkan adanya 5 noda berwarna biru dengan noda dominan noda A3 dan noda A5, Sehingga perlu dilakukan pemisahan kembali dengan KLT  preparatif.  Hasil  pemisahan  tersebut  kemudian dilakukan  uji  kemurnian  kembali.  Hasil  uji  kemurnian tersebut  masih  menunjukkan  adanya  5  noda  berwarna biru  dengan  noda  dominan  noda  A3  dan  noda  A5, Sehingga  perlu  dilakukan  pemisahan  kembali  dengan KLT  preparatif.  Hasil  pemisahan  tersebut  kemudian dilakukan uji kemurnian kembali.
Pada  Uji  kemurnian  selanjutnya  masih  selalu menghasilkan  5  noda,  kondisi  ini  berlanjut  sampai dilakukan  uji  kemunian  yang  ke-5  yaitu  selalu menunjukkan  keadaan  yang  hampir  serupa.  Berikut  ini merupakan  gambar  seluruh  uji  kemunian,  menunjukan hasil yang hampi serupa:
Gambar 1. Hasil seluruh Uji Kemunian senyawa alkaloid
Hasil seluruh uji kemurnian menunjukan hasil yang cenderung  sama  yaitu  selalu  menghasilkan  5  noda berwarna  biru  dengan  noda  dominan  pada  noda  3  dan noda  5.  Hal  ini  mengindikasikan  dalam  noda  tersebut masih  mengandung  beberapa  komponen  senyawa alkaloid.  Mengacu  pada  hasil  KLT  Preparatif  terakhir diputuskan diambil noda paling dominan yaitu noda E5 pada  uji  kemurnian  yang  terakhir  dengan  petimbangan noda diharapkan sudah cukup murni.
Hasil  analisis  isolat  noda  E5  dengan  spektroskopi UV-Vis dipaparkan pada gambar 2 sebagai berikut:
Gambar 2. Spektra Uv-Vis Isolat noda E5
Hasil dianalisis
spektrofotometri UV-Vis menunjukkan adanya serapan pada panjang gelombang 206 dan 224 nm, yang mengindikasikan bahwa senyawa alkaloid memiliki kerangka dasar indol. Sedangkan dari hasil uji Sitotoksik terhadap isolat alkaloid total dengan menggunakan  metode  BSLT  dihasilkan  harga  LC50 sebesar  157,004  ppm  hal  ini  mengindikasikan  senyawa alkaloid  tersebut  bersifat  tidak  toksik  [4].  Berikut  ini merupakan  struktur  alkaloid  dengan  kerangka  dasar indol:
Gambar 3. Alkaloid dengan Kerangka dasar Indol [5]

## 4. Kesimpulan
Hasil  analisis  isolat  alkaloid  murni  diindikasikan senyawa alkaloid tersebut memiliki kerangka dasar indol. Hasil  uji  sitotoksik  dengan  BSLT  menunjukkan  bahwa senyawa  alkaloid  total  daun  ketapang  yang  sudah menguning  memiliki  harga  LC50  sebesar  157,004  ppm yang berarti tidak toksik.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  A  Mann,  BB  Barnabas,  II  Daniel,  The  effect  of methanolic  extracts  of  Anogeissus  leiocarpus  and Terminalia  avicennioides  on  the  growth  of  some food-borne microorganisms, Aust J Basic Appl Sci , 4,
12, (2010) 6041-6045
[2]  Nantarika  Chansue,  Nongnut  Assawawongkasem, The  in  vitro  antibacterial  activity  and  ornamental
fish  toxicity  of  the  water  extract  of  Indian  almond leaves  (Terminalia  catappa  Linn.), KKU  Veterinary Journal , 18, 1, (2011) 36-45
[3]  Soerya  Dewi  Marliana,  Venty  Suryanti,  Skrining fitokimia  dan  analisis  kromatografi  lapis  tipis komponen  kimia  buah  labu  siam  (Sechium  edule Jacq. Swartz.) dalam ekstrak etanol, Biofarmasi , 3, 1,
(2005) 26-31
[4]  MJ  Moshi,  E  Innocent,  JJ  Magadula,  DF  Otieno,  A Weisheit,  PK  Mbabazi,  RSO  Nondo,  Brine  shrimp toxicity of some plants used as traditional medicines in Kagera region, north western Tanzania, Tanzania journal  of  health  research ,  12,  1,  (2010)  63-67 http://dx.doi.org/10.4314/thrb.v12i1.56287
[5]  Sjamsul  A  Achmad,  Kimia  Organik  Bahan  Alam, Jakarta: Karunika , (1986)