## Potensi Anti-inflamasi Fraksi Etil Asetat Ranting Patah Tulang (Euphorbia tirucalli L.) dengan Uji Penghambatan Denaturasi Protein

## Anti-inflammation Potential of Ethyl Acetate Fraction of Milk Bush (Euphorbia tirucalli L.) by Protein Denaturation Inhibition Test

## Zainal Abidin*, Uni Angreni Putri, Harti Widiastuti
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia Jl. Urip Sumoharjo Km 5 Kampus 2 UMI
Kontak*: zainal.abidin@umi.ac.id

## ABSTRAK
Ranting  Patah  tulang  ( Euphorbia  tirucalli L.)  mengandung  senyawa  flavonoid  berpotensi  sebagai  anti- inflamasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  potensi  anti-inflamasi  fraksi  etil  asetat  patah  tulang  dengan menggunakan uji penghambatan denaturasi protein. Penelitian ini terdiri dari tiga kelompok percobaan yang terdiri dari  kontrol  negatif,  kontrol  positif  natrium  diklofenak,  dan  fraksi  etil  asetat  patah  tulang  sebagai  kelompok  uji. Potensi  anti-inflamasi  (IC 50 )  natrium  diklofenak  memiliki  nilai  sebesar  26,46  µg/ml.  Sedangkan  fraksi  etil  asetat ranting  patah  tulang  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  250,53  µg/ml.  Hasil  tersebut  menunjukan  bahwa  ranting  patah tulang berpotensi sebagai anti-inflamasi.
Kata Kunci: Denaturasi Protein, Inflamasi, Ranting Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.).

## ABSTRACT
The Milk bush (Euphorbia tirucalli L.) that contains flavonoids is potential to be anti-inflammation. The aim of  this research was to  determine the anti-inflammation  potential of  ethyl acetate fraction of  milk bush by protein denaturation inhibition test. The research was implemented in three experimental groups, such as; negative control, sodium diclofenac as positive control, and ethyl acetate fraction of  milk bush as test  group. The potential of  anti- inflammation (IC 50 ) of sodium diclofenac has 26.46 µg/ml of IC 50 . Meanwhile, IC 50 of ethyl acetate fraction of milk bush has 250,53 µg/ml. This result showed that the milk bush has the potential to be anti-inflammation.
Keywords: Protein denaturation, inflammation, Milk Bush (Euphorbia tirucalli L.).

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan tanaman sebagai obat tradisional  bukanlah  hal  yang  baru,  dan  telah dikenal  masyarakat  secara  luas  sejak  zaman dahulu.  Dewasa  ini  penggunaan  obat-obatan yang  berasal  dari  tanaman,  banyak  diminati oleh  kalangan  masyarakat,  meskipun  telah banyak  beredar  obat  jadi  yang  merupakan senyawa  sintesis.  Hal  ini  dibuktikan  dengan adanya  kecenderungan  masyarakat  global untuk kembali ke alam ( back to nature ) dalam
bidang  penyediaan  obat-obatan  (Mahatma, 2005).
Tanaman  patah tulang  berasal  dari  Afrika, namun  secara  luas  ditanam  dan  mengalami penyebaran  di  seluruh  daerah  tropis  dan subtropis.  Tanaman  ini  di  Indonesia  tumbuh dengan  baik  dan  dikenal  sebagai  salah  satu jenis tanaman yang biasa digunakan masyarakat sebagai obat tradisional (Supriyanto,  2010).  Tanaman  patah  tulang juga  dapat  digunakan  sebagai  antikanker,
antitumor,  anti-inflamasi,  penyakit  kulit,  dan pengobatan  penyakit  sifilis.  Salah  satu kandungan  kimia  dari  tanaman  ini  adalah flavonoid  yang  oleh  berbagai  penelitian terbukti  memiliki  khasiat  sebagai  anti- inflamasi,  dan  getah  patah  tulang  berkhasiat sebagai  obat  luka  baru.  Sementara  itu,  daun dan  batangnya  digunakan  untuk  mengobati sakit tulang dan persendian (Agral, 2013).
Inflamasi merupakan suatu respon protektif  normal  terhadap  luka  jaringan  yang disebabkan  oleh trauma  fisik,  zat  kimia yang merusak,  atau  zat-zat  mikrobiologik  (Mycek, 2001).  Kriteria  inflamasi  adalah  ada  gejala lokal  dan  sistemik antara  lain  berupa migrasi leukosit ke jaringan yang mengalami peradangan  (Wilmana,  2007).  Anti-inflamasi adalah  golongan  obat-obat  yang  memiliki aktivitas menekan atau mengurangi peradangan.
Pada  penelitian  ini,  uji  anti-inflamasi dilakukan  dengan  metode  penghambatan denaturasi  protein  secara  spektrofotometri UV-Vis merupakan uji skrining awal aktivitas inflamasi.  Denaturasi  protein  merupakan sebuah  proses  dimana  protein  kehilangan struktur tersier dan struktur sekundernya oleh senyawa  eksternal,  seperti  asam  kuat,  basa kuat,  garam  organik  terkonsentrasi,  organik pelarut,  dan  pemanasan.  Denaturasi  protein dapat  menjadi  penyebab  inflamasi.  Senyawa yang  dapat  menghambat  denaturasi  protein digunakan sebagai obat anti-inflamasi. Beberapa  obat  anti-inflamasi  menunjukkan kemampuan  menghambat  denaturasi  protein
yang  disebabkan  oleh  suhu  (Aditya,  2015). Selain itu, pengujian secara in vitro pengaruh pemanasan  terhadap  anti-denaturasi Bovine Serum  Albumin ,  dapat  digunakan  untuk mendeteksi  adanya  senyawa  anti-inflamasi (Tatti,  Anitha,  Shashidhara,  Deepak,  & Bidari,  2012).  Hal  ini  dikarenakan  metode pengujian  denaturasi  protein  merupakan metode  yang  layak  dan  sederhana  untuk menilai potensial obat anti-inflamasi (Alhakmani, Kumar, & Khan, 2013)
Umumnya  pengobatan  yang  digunakan untuk  mengatasi  terjadinya  anti-inflamasi adalah  obat  modern  dari  golongan  Anti Inflamasi  Non  Steroid  (AINS)  dan  golongan steroid  yang  berguna  untuk  mengurangi pembengkakan  dan  rasa  sakit  peradangan (Madvani,  2012).  Namun  efek  samping  yang dapat  ditimbulkan  oleh  obat-obatan  modern khususnya  obat-obat  golongan  non  steroid adalah  kerusakan  gastrointestinal  (dispesia, mual,  dan  gastritis).  Efek  samping  yang paling serius adalah pendarahan gastrointestinal  (Neal,  2006).  Oleh  karena efek  samping  dari  penggunaan  obat  tersebut maka  perlu  dilakukan  penelitian  pada  fraksi etil  asetat  ranting  patah  tulang  sebagai  anti- inflamasi,  guna  mendapatkan  sumber  obat anti-inflamasi yang lebih aman.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini  antara lain  ranting  patah  tulang yang  diperoleh  dari  Kota  Pare-pare,  asam
asetat glasial, Bovine Serum Albumin, natrium klorida,  natrium  diklofenak,  dan Tris  base
(Merck),  dan  fraksi  ranting  patah  tulang
(Euphorbia tirucalli L . ). Alat yang digunakan adalah  Spektrofotometer  UV-Vis  Apel  PD- 303UV.

## Penyiapan Sampel dan Ekstraksi Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  tanaman  ranting  patah  tulang (gambar  1).  Sampel  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan.  Sampel  yang  telah  kering disortasi  kering  kemudian  dihaluskan  dengan blender.  Serbuk  simplisia  disimpan  dalam wadah  tertutup  rapat  dan  terhindar  dari cahaya  matahari.  Simplisia  sebanyak  50  g selanjutnya diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan penyari etanol, dengan  cara  perendaman  dan  pergantian cairan  penyari  tiap  24  jam.  Proses  ekstraksi ini  dilakukan  sebanyak  3  kali  replikasi  untuk mendapatkan  rendemen  ekstrak  yang  tinggi. Hasil  ekstraksi  ini  kemudian  dikeringkan hingga diperoleh ekstrak kering.

## Pembuatan Fraksi
Prosedur  fraksinasi  menggunakan  metode ekstraksi padat cair. Ekstrak kental ditimbang sebanyak  4  g  dan  ditambahkan  pelarut  etil asetat  pada  suhu  kamar.  Filtrat  dipisahkan dari ampas menggunakan metode enap tuang. Prosedur  ini  kemudian  diulangi  hingga penyari etil asetat menjadi jernih. Selanjutnya filtrat  disaring  dengan  menggunakan  kertas saring. Lalu  filtrat diuapkan hingga diperoleh fraksi kental (gambar 2).

## Pengukuran Aktivitas Anti-inflamasi
Metode  pengujian  berdasarkan  prosedur oleh  Tatti,  Anitha,  Shashidhara,  Deepak,  & Bidari  (2012)  dan  Alhakmani,  Kumar,  & Khan  (2013)  dengan  sedikit  modifikasi. Sebanyak  50  μL  dari  setiap  konsentrasi larutan  sampel  (10,  20,  40,  80  dan  160  ppm) dan  kontrol  positif  (1,  2,  4,  8,  dan  16  ppm), ditambahkan  larutan Bovine  Serum  Albumine 0,2  %  dalam  pelarut Tris  Buffer  Saline pH 6,4,  hingga  volume  mencapai  5  mL. Kemudian  larutan  diinkubasi  pada  suhu ruangan selama 30 menit kemudian dipanaskan selama 2 menit pada suhu 100 0 C,
Gambar 1. Tanaman ranting patah tulang
Gambar  2.  Fraksi  etil  asetat  ranting  patah tulang
lalu  diamkan  selama  25  menit  pada  suhu ruangan.  Setelah  dingin,  larutan  divortex  dan dilakukan  pengukuran  absorbansi  dengan spektrofotometer  UV- Visible pada  panjang gelombang  660  nm.  Kelompok  kontrol menggunakan prosedur yang sama menggunakan  air  suling  sebagai  larutan  uji (Tatti,  Anitha,  Shashidhara,  Deepak,  & Bidari,  2012;  Alhakmani,  Kumar,  &  Khan, 2013).  Aktivitas  digambarkan  sebagai  persen inhibisi menggunakan rumus
𝑃𝑒𝑟𝑠𝑒𝑛 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = 𝐴 𝑆 − 𝐴 𝐶 𝐴 𝐶 𝑥 100%
dimana A S =  Absorbansi  sampel  dan A C = Absorbansi kontrol negatif

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  aktivitas  anti-inflamasi  fraksi etil  asetat  ranting  patah  tulang  menggunakan metode  penghambatan  denaturasi  protein, yang  merupakan  uji  aktivitas  anti-inflamasi secara  invitro.  Fraksinasi  bertujuan  untuk memisahkan  senyawa-senyawa  berdasarkan tingkat kepolarannya. Adapun macam-macam metode fraksinasi yaitu ekstraksi cair cair dan ekstraksi  padat  cair,  namun  metode  yang digunakan pada fraksi etil asetat ranting patah tulang  adalah  ekstraksi  padat  cair.  Pelarut yang  digunakan  pada  proses  ekstraksi  padat cair  ranting  patah  tulang  adalah  etil  asetat. Alasan menggunakan pelarut etil asetat sebab dapat  melarutkan  senyawa-senyawa  seperti beberapa  alkaloid,  flavonoid,  monoglikosida, dan  glikosida  (Syahri,  2016).  Ranting  patah tulang  dipilih  karena  mengandung  senyawa
flavonoid.  Kandungan  flavonoid  dalam  suatu tanaman berpotensi sebagai anti-inflamasi.
Penelitian ini menggunakan tiga kelompok uji  yang  terdiri  dari  kontrol  negatif,  kontrol positif dan larutan sampel terhadap penghambatan denaturasi protein. Pada penelitian  uji  aktivitas  anti-inflamasi  pada fraksi  etil  asetat  ranting  patah  tulang menggunakan Bovine Serum Albumin. Ketika Bovine Serum Albumin dipanaskan maka akan terjadi  denaturasi  protein,  karena  suhu merupakan  salah  satu  faktor  penyebab terjadinya  denaturasi  protein. Bovine  Serum Albumin dilarutkan  dalam Tris  Buffer  Saline pH  patologis  (6,2-6,5).  Penggunaan Tris Buffer Saline adalah sebagai larutan penyangga yang berfungsi untuk mempertahankan  pH  larutan.  Larutan Tris Buffer  Saline merupakan  larutan  penyangga yang  dibuat  dari  campuran  larutan  Tris  dan NaCl.
Tabel   1.  Aktivitas  anti-inflamasi  natrium
diklofenak Konsentrasi (ppm) Absorbansi Inhibisi % 1 1,469 16,817 2 1,444 18,233 4 1,404 20,498 8 1,303 26,217 16 1,125 36,296 Tabel   2.  Aktivitas anti-inflamasi fraksi etil asetat ranting patah tulang Konsentrasi (ppm) Absorbansi Inhibisi % 10 1,499 15,118 20 1,465 17,044 40 1,412 20,045 80 1,301 26,330 160 1,118 36,697
Kontrol  negatif  menggunakan  campuran 50  μL  pelarut  etil  asetat  dan  larutan Bovine Serum  Albumin 0,2%  kemudian  diinkubasi pada  suhu  ruangan.  Selanjutnya  larutan dipanaskan  pada  suhu  100 0 C,  divortex  dan diukur  pada  spektrofotometer  pada  panjang gelombang  660  nmmbar,  sehingga  diperoleh nilai  absorbansi  dari  kontrol  negatif  yaitu 1,766.
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah natrium  diklofenak.  Natrium  diklofenak dipilih  karena  merupakan  obat  anti-inflamasi golongan  NSAID  yang  banyak  digunakan untuk  mengobati  gejala  inflamasi  serta bahannya mudah didapat. Natrium diklofenak diuji  dengan  aktivitas  inflamasi  dengan metode  penghambatan  denaturasi  protein dengan  variasi  konsentrasi  1,  2,  4,  8,  dan  16 ppm.  Adapun  hasil  aktivitas  anti-inflamasi natrium diklofenak dapat dilihat pada tabel 1.
Sedangkan larutan sampel fraksi etil asetat ranting patah tulang menggunakan konsentrasi  10,  20,  40,  80  dan  160  ppm. Ranting patah tulang dipilih karena
mengandung senyawa flavonoid yang berpotensi  sebagai  anti-inflamasi  (Riansyah, 2015).  Adapun  hasil  aktivitas  anti-inflamasi dari  fraksi  etil  asetat  ranting  patah  tulang dapat dilihat pada tabel 2.
Setelah  dilakukan  pengujian  di  atas, selanjutnya  dihitung  nilai  IC 50 dari  kurva antara  konsentrasi  (X)  dan  %  inhibisi  (Y). Pada  kurva  inhibisi  natrium  diklofenak didapatkan  persamaan  regresi  yaitu  y  = 1,302x + 15,53 dengan koefisien korelasi r = 0,999.  Koefisien  korelasi  yang  didapatkan memenuhi  syarat,  karena  koefisien  korelasi yang  dikatakan  baik  apabila  diperoleh  nilai  r ≥  0,998  (Harmita,  2004),  jadi  dapat  dihitung IC 50 dari  natrium  diklofenak,  dan  didapatkan hasilnya  sebesar  26,463  μg/ml.  Pada  kurva inhibisi  fraksi  etil  asetat  ranting  patah  tulang didapatkan  persamaan  regresi  yaitu  y  = 0,143x + 14,18 dengan koefisien korelasi r = 0,998,    yang  berarti  memenuhi  syarat (Harmita, 2004). Nilai IC 50 dari fraksi sampel sebesar 250,534 μg/ml.
Gambar  4.  Kurva  inhibisi  Fraksi  Etil Asetat Ranting Patah Tulang
y = 0,143x + 14,183 R² = 0,9971 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 50 100 150 200 In h ibi si ( % ) Konsentrasi (ppm) Gambar  3.  Kurva inhibisi
Natrium Diklofenak
y = 1,3022x + 15,539 R² = 0,9994 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 In h ibi si ( % ) Konsentrasi (ppm)
Hal ini menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi maka semakin besar  pula kemampuan penghambatan denaturasi proteinnya.  Dan  semakin  kecil  nilai  IC 50 berarti  aktivitas  anti-inflamasinya  semakin besar. Dari hasil perhitungan yang didapatkan natrium  diklofenak  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  26,46  μg/mL sedangkan fraksi  etil asetat  ranting  patah  tulang  memiliki IC 50 sebesar 250 , 53 μg/mL.

## KESIMPULAN
Fraksi  etil  asetat  ranting  patah  tulang memiliki potensi sebagai anti-inflamasi (IC 50 ) sebesar 250,53 μg/ml.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  banyak  terima  kasih kepada Universitas Muslim Indonesia (UMI), terkhusus  kepada  Fakultas  Farmasi  dan Laboratorium  Kimia  Farmasi  UMI,  yang telah  memfasilitasi  kebutuhan  sarana  dan prasarana selama melakukan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Aditya,  M.  R.  (2015).  Potensi  Anti-inflamasi Jus  Buah  Mangga  (Garcinia  mangostana) Terhadap  Denaturasi  Protein  In  Vitro. Jornal Berkala Kedokteran , 149 - 156.
Agral,  O.  F.  (2013).  Formulasi  dan  Uji Kelayakan  Sediaan  Krim  Anti-inflamasi Getah  Tanaman  Patah  Tulang  (Euphorbia tirucalli  L.). Pharmacon  Jurnal  Ilimah Farmasi UNSRAT , 1 - 3.
Alhakmani,  F.;  Kumar,  S.;  Khan,  S.  A.
(2013).  Estimation  of  total  phenolic content, in-vitro antioxidant and
antiinflammatory  activity  of  flowers  of Moringa oleifera. Asian Pacific of Tropical Biomedicine , 623 - 627.
Harmita.  (2004).  Petunjuk  pelaksanaaan
Validasi  Metode  dan cara  perhitungannya.
Majalah Kefarmasian Departemen Farmasi FMIPA-UI , 117 - 135. Madvani,  P.  M.  (2012).  Evaluation  of
AntiInflamatory activity of Citrullus lanatus  Seeds  Oil  by  in-Vivo  and  in-Vitro Models. International Research Journal of Pharmaceutical  and  Applied  Sciences , 104 - 108.
Mahatma,  A.  b.  (2005). Pengembangan Bahan  Alam  dalam  industri  oabt  dan permasalahannya,. Makassar: _.
Mycek,  M.  J.  (2001). Farmakologi  Ulasan Bergambar  Edisi  2. Jakarta:  Widya Medika.
Neal,  M.  J.  (2006). at  Glance  Farmakologi Medis Edisi 5. Surabaya: Erlangga.
Riansyah,  Y.  (2015).  uji  Aktivitas  Anti- inflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Ubi  Talas Ungu  (Ipomea  batata  L)  terhadap  Tikus Wistar Jantan. Proseding Penelitian SPeSIA (p. 635). Bandung: -.
Supriyanto, S. E. (2010). Pemasaran Industri Jasa Kesehatan. Yogyakarta: Andi Offset.
Syahri,  L.  (2016). Pengaruh  Fraksi  Etil Asetat  Ekstrak  Etanol  Buah  Kemukus (Piper  cubeba  L.)  Fructus  Terhadap Memori Spasial Tikus jantan Galur Wistar Pasca Restraint Stress. Skripsi, Universitas  Wahid  Hasyim,  Fakultas Farmasi, Semarang.
Tatti,  P.  N.;  Anitha,  S.;  Shashidhara,  S.; Deepak,  M.;  Bidari,  S.  (2012).  Evaluation of  In-Vitro  Anti-Denaturation  Activity  of Isolated  Compound  of  Butea  monosperma Bark. An International Journal of Pharmaceutical Sciences , 2314 - 2320. Wilmana,  P.  F.  (2007). Analgetik-Antipiretik, Analgetik-Antiinflamsi  Non  Steroid  dan Obat  Pirai. Jakarta:  Bagian  Farmakologi Fakultas Kedokteran UI.