## ANTIOXIDANT ACTIVITY AND FREE RADICAL ANTIDOTE FROM FRACTION OF

## BARK SAGO BARUK (Arenga microcarpha Beccari )

## AKTIVITAS PENANGKAL RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI KULIT KAYU SAGU
BARUK ( Arenga microcarpha Beccari)
Gerild Adrian 1) , Edi Suryanto 2) , Defny S. Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado
2) Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado
*gerildmomox@gmail.com

## ABSTRACT
This  study aims to  determine the antioxidant activity and free radical  antidote from fraction  of bark sago baruk (Arenga microcarpha Beccari). This study initiated by extracting the powder of bark  sago  baruk  using  the  maceration  method  for  3  days  with  ethanol  80%.  The  extract  then partitioned using a series of solvent such as petroleum ether, ethyl acetate, buthanol, aquadest. The results  showed that the ethyl acetate fraction  had the highest free radical antidote content followed  by  the  aquadest  fraction,  buthanol  fraction,  petroleum  ether  fraction.  The  content  of free radical  antidote respectively was 86,25%; 66,30%; 65,32%; 43,43%. Based on this study, the ethyl acetate fraction was the best fraction can act as an antidote to free radicals better than other fractions.
Keywords: Bark sago baruk, fraction, free radical antidote

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dari  fraksi  kulit kayu  sagu  baruk  ( Arenga  microcarpha beccari).  Penelitian  ini  dimulai  dengan  mengekstraksi serbuk  kulit  kayu  sagu  baruk  menggunakan  cara  maserasi  selama  3  hari  dengan  pelarut  etanol 80%.  Ekstrak  kemudian  dipartisi  menggunakan  pelarut  petroleum  eter,  etil  asetat,  butanol,  dan aquades.  kemudian  ditentukan  aktivitas  antioksidan  dan  penangkal  radikal  bebas.  Hasilnya menunujukan  bahwa  fraksi  etil  asetat  memiliki  kandungan  penangkal  radikal  bebas  tertinggi diikuti  fraksi  aquades,  fraksi  butanol,  dan  fraksi  petroleum  eter.  Kandungan  penangkal  radikal bebas berturut-turut adalah 86,25%; 66,30%; 65,32%; 43,43%. Berdasarkan penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa fraksi  etil  asetat dapat  berperan sebagai  penangkal  radikal bebas lebih baik dibandingkan dengan fraksi lainnya.
Kata Kunci :  Kulit Kayu Sagu Baruk, Fraksi, Penangkal Radikal Bebas.

## PENDAHULUAN
Berbagai  penyakit  dalam  tubuh  dapat disebabkan  oleh  adanya  radikal  bebas.  Radikal bebas adalah atom yang memiliki satu atau lebih elektron  tidak  berpasangan.  Radikal  bebas dijumpai  pada  lingkungan,  beberapa  logam (contohnya besi dan tembaga), asap rokok, obat, makanan dalam kemasan, bahan aditif, dan lain- lain (Droge, 2002).
Radikal  bebas  adalah  atom/molekul  yang tidak stabil dan sangat reaktif karena mengandung  elektron  yang  tidak  berpasangan. Untuk  mencapai  kestabilan  atom  radikal  bebas akan  bereaksi  dengan  molekul  disekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron. Reaksi ini akan  berlangsung  terus  menerus  dalam  tubuh dan  bila  tidak  dihentikan  akan  menimbulkan berbagai  penyakit  seperti  kanker,  jantung, katarak,  penuaan  dini,  serta  penyakit  lainnya (Bjelakovic et al., 2007).
Sagu baruk ( Arenga microcarpha Beccari)  merupakan  tanaman  endemik  yang dapat  memproduksi  karbohidrat  yang  banyak, tumbuh di daerah Kabupaten Sitaro, Sangihe dan Talaud. Sagu baruk termasuk tanaman perkebunan  karena  masa  pertumbuhan  yang panjang,  juga  sebagai  tanaman  pangan  karena menghasilkan  sagu  atau  karbohidrat  yang berasal  dari  empelur batang,  serta  dimanfaatkan oleh  masyarakat  lokal  sebagai  pangan  lokal pengganti beras (Elisa, 2015).

## METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian  yaitu  alat-alat  gelas  (tabung  reaksi, erlenmeyer,  gelas  kimia,  gelas  Arloji,  gelas ukur),  corong  pisah,  rak  tabung,  mikropipet, mikro  buret,  aluminium  foil,  botol  serum, ayakan 60 mesh, vortex, cawan porselin, spatula stainless  stell,  neraca  analitik  ER-180  A, rotary evaporator ,  oven  Mammert,  Spektrofotometer UV-Vis.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  kulit  kayu  sagu  baruk.  Bahan  kimia yang  digunakan  yaitu,  Etanol  80%,  Petroleum Eter  p.a,  Etil  Asetat  p.a,  Butanol  redistilasi, Reagen Folin-Ciocelteu 50  %, 1,1-diphenyl- 2picrylhydrazyl (DPPH), Aquadest ..

## Preparasi Sampel
Sagu  baruk  dikupas,  dipisahkan  antara kulit  dengan  empulur,  diambil  kulit  kayu kemudian dibersihkan dan dikeringkan.
Selanjutnya dihaluskan dengan cara diblender.

## Ekstraksi
Ekstraksi kulit kayu sagu baruk dilakukan secara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol 80%.  Sebanyak  50  g  sampel dimasukkan  dalam wadah,  ditambahkan  pelarut  etanol  150  mL hingga  sampel  terendam  semuanya,  lalu  di diamkan  selama  24  jam  di  aduk  setelah  24  jam kemudian  di  lakukan  penggantian  pelarut  setiap 24  jam.  Filtrat  disaring  lalu  diuapkan  untuk menghilangkan  pelarutnya  lalu  dioven  sampai kering  sehingga  diperoleh  ekstrak  kulit  kayu sagu baruk.

## Fraksinasi dengan Pelarut
Sebanyak  1  g  ekstrak  kental  etanol dilarutkan  dalam  50  mL aquadest. Selanjutnya larutan  difraksinasi  dengan  menambahkan  50 mL petroleum eter, dikocok dalam corong pisah dan  didiamkan  selama  10-15  menit  hingga terdapat  dua  lapisan  ( aquadest pada  lapisan bawah  dan  petroleum  eter  pada  lapisan  atas). Diambil lapisan petroleum eter lakukan beberapa kali sampai lapisan air menjadi bening. Lapisan  air  kemudian  difraksinasi  kembali dengan  cara  yang  sama  menggunakan  pelarut etil asetat, butanol, dan air. Hasil fraksinasi dari petroleum  eter,  etil  asetat,  butanol,  dan  air diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator sehingga  diperoleh  fraksi  petroleum eter, etil asetat, butanol, dan air.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan  total  fenolik  formulasi  kulit kayu  sagu  baruk  ditentukan  menggunakan metode  Jeong et  al .  (2004).  Sebanyak  0,1  mL sampel  ekstrak  petroleum  eter,  etil  asetat, butanol,  dan  air  masing-masing  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  0,1  mL reagen Folin Ciocalteu 50% dalam tabung reaksi dan  kemudian  campuran  divortex  selama  3 menit.  Setelah  interval  waktu  3  menit, ditambahkan  2  mL  larutan  Na 2 CO 3 2  %, kemudian  campuran  diinkubasi  dalam  ruang gelap  selama  30  menit.  Selanjutnya  dibaca
absorbansinya  pada  λ  750  nm  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## Penentuan Penangkal Radikal Bebas
Penentuan  aktivitas  penangkal  radikal bebas  formulasi  kulit  kayu  sagu  baruk ditentukan  dengan  metode  Burda  &  Oleszeck (2001).  Sebanyak  0,5  mL  masing-masing ekstrak  ditambahkan  dengan  1,5  mL  larutan DPPH dan divortex selama 2 menit. Berubahnya warna  larutan  dari  ungu  ke  kuning  menunjukan efisiensi penangkal radikal bebas.
Absorbansinya  diukur  pada  panjang  gelombang 517  nm  dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-VIS.  α-tokoferol  (VE)  dengan  konsentrasi 50 µg/mL digunakan sebagai sampel pembanding.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Dalam penelitian  ini  sampel yang digunakan adalah kulit kayu sagu baruk ( Arenga microcarpha Beccari).  Ekstraksi  ini  didasarkan pada  perpindahan  massa  komponen  ke  dalam pelarut.  Sampel  terlebih  dahulu  dikeringkan kemudian  dihaluskan  dengan  menggunakan blender.  Penghalusan  sampel  bertujuan  untuk memperluas  permukaan  sentuh  dari  sampel, sehingga  bisa  mempengaruhi  interaksi  sampel dengan pelarut maka proses ekstraksi berlangsung  optimal  dan  menghasilkan  ekstrak yang maksimal. Sampel diekstrak menggunakan proses  ekstraksi  maserasi.  Sebanyak  50gr sampel diekstraksi dengan menggunakan pelarut etanol  80%  dan  menghasilkan  rendemen  (%) ekstrak sebanyak 3,14%. Berdasarkan (Anonim, 2000)  maserasi  merupakan  proses  merendam bahan  simplisia  yang  telah  dihaluskan  dengan menstrum  sampai  meresap  dan  melunakkan susunan sel, sehingga zat-  zat yang  mudah larut akan terlarut.

## Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan menggunakan pelarut  yang  berdasarkan  tingkat  kepolarannya. Senyawa-senyawa  yang  bersifat  non  polar cenderung  larut  dalam  pelarut  non  polar sedangkan senyawa-senyawa yang bersifat polar cenderung  larut  dalam  pelarut  polar.  Hal  ini disesuaikan  dengan  prinsip like  dissolve  like .
Secara  umum  pelarut  polar  memiliki  tetapan konstanta  dielektrik  yang  tinggi  sedangkan pelarut  non  polar  memiliki  konstanta  dielektrik yang rendah (Suryanto, 2012).
Ekstrak  etanol  diambil  sebanyak  1gr kemudian  di  fraksinasi  menggunakan  pelarut petroleum eter, etil asetat, butanol, dan akuades. Tujuan  dari  fraksinasi  ini  adalah  agar  metabolit sekunder  yang  terekstraksi  dalam  etanol  80% dapat  dikelompokkan  menjadi  lebih  spesifik sesuai kepolaran masing-masing metabolit.
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi masing- masing pelarut
Sampel Massa (g) Rendemen (%) EE 1,57 3,14 FPE 0,085 8,5 FEA 0,158 15,8 FB 0,368 36,8 FA 0,493 49,3
Keterangan:  EE  (ekstrak  etanol),  FPE  (fraksi petroleum  eter),  FEA  (fraksi  etil  asetat),  FB (fraksi butanol), FA (fraksi air).
Berdasarkan  tabel  1,  dapat  diketahui bahwa  kandungan  total  fenolik  dalam  ekstrak etanol  (EE)  sebesar  144,28  μg/mL,  dan kandungan  total  fenolik  tertinggi  adalah  fraksi etil  asetat  (FEA)  sebesar  227,04  μg/mL,  diikuti dengan  hasil  fraksi  butanol  (FB)  sebesar  98,58 μg/mL, hasil fraksi air (FA) sebesar 5,82 μg/mL, dan  hasil  fraksi  petroleum  eter  (FPE)  sebesar 0,09  μg/mL.  Hal  ini  dikarenakan  pelarut  etil asetat  pada  ekstraksi  fenolik  dapat  melarutkan senyawa  fenolik  yang  lebih  banyak  sehingga menunjukkan  sebagian  besar  senyawa  fenolik yang merupakan senyawa bersifat semipolar.

## Kandungan Total Fenolik
Penentuan kandungan total fenolik masing-masing fraksi dinyatakan sebagai
ekuivalen asam galat atau Gallic Acid Equivalent (GAE).    Ekuivalen  asam  galat merupakan  acuan  umum  untuk  mengukur sejumlah  senyawa  fenolik  yang  terdapat  dalam suatu  bahan  (Mongkolsilp et  al .,  2004).
Penggunaan  asam  galat  sebagai  larutan  standar dikarenakan  senyawa  asam  galat  mempunyai gugus  hidroksil  dan  ikatan  rangkap  yang terkonjugasi pada masing-masing cincin benzena  yang  menyebabkan  senyawa  ini  sangat efektif  untuk  membentuk  senyawa  kompleks dengan  reagen  Folin-Ciocalteu,  sehingga  reaksi yang  terjadi  lebih  sensitif  dan  intensif. (Julkunen-Tiito, 1985).
Menurut  Julkenen-Titto  (1985)  bahwa penentuan  kandungan  total  fenolik  dengan metode Folin-Ciocalteu bertujuan untuk mengetahui jumlah fenol yang terkandung dalam ekstrak  etanol,  fraksi  petroleum  eter,  fraksi  etil asetat, fraksi  butanol,  dan fraksi air.  Metode  ini didasarkan  pada  kemampuan  ekstrak  untuk mereduksi reagen Folin-Ciocalteu (kuning) yang mengandung  senyawa  fosfomolibdat  dan  asam fosfotungstat  menghasilkan  senyawa  kompleks molibdenum-tungstat berwarna biru.
Tabel 2. Kandungan total fenolik dari ekstrak dan fraksi kulit kayu sagu baruk
Sampel Total fenolik (μg/mL) EE 144,28 FPE 0,09 FEA 227,04 FB 98,58 FA 5,82
Keterangan:  EE  (ekstrak  etanol),  FPE  (fraksi petroleum  eter),  FEA  (fraksi  etil  asetat),  FB (fraksi butanol), FA (fraksi air).

## Aktivitas Penangkal Radikal Bebas
Metode  uji  radikal  bebas  merupakan metode  yang  sederhana  dan  mudah  untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam (Fagliano, 1999). Pengujian aktivitas penangkal  radikal  bebas  ini  dilakukan  dengan mereaksikan larutan ekstrak dan  masing-masing fraksi  dengan  larutan  DPPH  dan  selanjutnya dibaca  absorbansinya  pada  panjang  gelombang 517 nm. Metode penangkalan radikal ini melalui mekanisme  pengambilan  atom  hidrogen  dari
Gambar  1 Penangkal  radikal  bebas  dari  ekstrak  etanol  dan  fraksi  pelarut  dari  kulit kayu sagu baruk. Keterangan: EE (ekstrak etanol), FPE (fraksi petroleum eter), FEA (fraksi etil asetat), FB (fraksi butanol), FA (fraksi air).
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 EE FPE FEA FBtOH
FA A ki vi tas p e n an gkal r ad ikal b e b as (% ) Ektrak dan fraksi pelarut
senyawa antioksidan oleh radikal bebas sehingga radikal  bebas  ini  menangkap  satu  elektron  dari senyawa  antioksidan  (Pokorny  dkk.,  2001). Senyawa  yang  bereaksi  sebagai  penangkal radikal bebas akan mereduksi DPPH yang dapat diamati  dengan  adanya  perubahan  warna  DPPH dari  ungu  menjadi  kuning ketika  elektron  ganjil dari  radikal  DPPH  telah  berpasangan  dengan hidrogen  dari  senyawa  penangkal  radikal  bebas yang  akan  menbentuk  DPPH-H  tereduksi (Molyneux,  2004).  Oleh  sebab  itu,  semakin cepat  penurunan  absorbansi  tersebut  maka ekstrak lebih berpotensi sebagai antioksidan.
Dari  gambar  1,  menunjukan  bahwa sampel kulit kayu sagu baruk memiliki aktivitas paling  tinggi  pada  fraksi  etil  asetat  sebesar (86,25%),  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol (11,07%), Fraksi petroleum eter (43,43%), fraksi butanol  (65,32%),  fraksi  air  (66,30%).  Hal  ini membuktikan  bahwa  pelarut  etil  asetat  paling efektif  dalam  mengikat  senyawa  aktif  yang berfungsi  sebagai  penangkal  radikal  bebas  yang terdapat pada ekstrak kulit kayu sagu baruk.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan  dari penelitian  ini,  dapat  diambil  kesimpulan  bahwa pada  fraksi  etil  asetat  menunjukan  adanya aktivitas  penangkal  radikal  bebas  yang  efektif, dibandingkan  dengan  fraksi  butanol,  fraksi petroleum eter, dan fraksi air.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dari fraksi kulit kayu baruk.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Departemen
Kesehatan RI, Jakarta.
Bjelakovic  G.,  D.  Nikolova.,  L.L.Gluud.,  R.G.
Simonetti., dan C. Gluud. 2007. Mortality in  randomized  trials  of  antioxidant supplements  for  primary  and  secondary
prevention:  systematic  review  and  meta- analysis. JAMA. 297: 842-57.
Droge,W. 2002. Free Radicals in The Physiological  Control  of  Cell  Function. Physiol Rev. 82: 47-95.
Fagliano,  V.  1999.  Method  for  Measuring Antioxidant  Activity  and  Its  Application to Monitoring the Antioxidant Capacity of Wine. Journal  of  Agicultural  and  Food Chemistry 4 : 1035-1040.
Julkunen-Titto,  R.  1985.  Phenolic  Constituents in  Leaves  of  Northern  Willows:  Methods for  the  Analysis  of  Certain  Phenolics. Journal of Agricultural and Food Chemistry . 33 : 213-217.
Pokorny,  J.,  Yanishilieva,  N.  &  Gordon,  M.
2001. Antioxidants  in  food. CRC  Press.
Boca Raton Boston New York, Washington, DC.
Suryanto,  Edi.  2012. Fitokimia Antioksidan . Surabaya : Putra Media Nusantara.
Tarigan,  E.P.,  E,  Suryanto.  L.I,  Momuat.  2015.
Karakterisasi  dan  Aktivitas  Antioksidan Tepung Sagu Baruk ( Arenga microcarpha ). UNSRAT. 2 : 125-130