## UJI AKTIVITAS ANALGESIK EKSTRAK DAUN MANGROVE
( Rhizophora mucronata ) PADA MENCIT YANG DIINDUKSI ASAM ASETAT DENGAN METODE WRITHING REFLEX
Ekanita Desiani 1 , Tri Yusufi Mardiana 2 , Benny Diah Madusari 3 , Fajri Nur Hidayat 4 1,4 Fakultas Farmasi, Universitas Pekalongan
2,3 Fakultas Perikanan, Universitas Pekalongan Email: desi.apoteker@gmail.com

## ABSTRAK
Nyeri merupakan keadaan yang mengganggu dan tidak nyaman bagi penderitanya, namun nyeri juga dapat  diindikasikan  sebagai  tanda  terjadinya  kerusakan  jaringan  yang  disebabkan  oleh  rangsangan mekanis, kimiawi atau fisis. Kandungan senyawa dari daun mangrove Rhizophora mucronata, seperti flavonoid  tannin  dan  saponin  mampu  menghambat  nyeri.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  aktivitas  analgesik  ekstrak  daun  mangrove  terhadap  mencit  yang  diinduksikan  asam asetat.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  murni  menggunakan  rancangan  acak lengkap pola searah. Daun mangrove diekstrak menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 70%.    Selanjutnya  dilakukan  uji  aktivitas  analgesik  pada  mencit  dengan  membagi  ke  dalam  5 kelompok  uji  yaitu  kelompok  yang  diberi  aquades  sebagai  kontrol  negatif,  asetosal  sebagai  kontrol positif dan ekstrak etanol daun mangrove dengan dosis 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB dan 300 mg/kg BB.  Mencit  diinduksi  nyeri  dengan  menyuntikan  asam  asetat  1%  secara  intraperitoneal.  Diamati jumlah  geliat  yang  timbul  dalam  15  menit  selama  2  jam,  lalu  ditentukan  persentase  proteksi  dan aktivitas  analgesiknya.  Data  yang  diperoleh  kemudian  dianalisis  dengan  SPSS.  Hasil  analisis fitokimia  diketahui  ekstrak  daun  mangrove  positif  mengandung  senyawa  flavonoid,  tannin,  dan saponin. Respon geliat mencit berdasarkan hasil rata-rata yang diperoleh terhadap kelompok sediaan uji  menunjukkan  hubungan  antara  dosis  dengan  penurunan  respon  geliat.  Semakin  rendah  respon geliat maka semakin besar aktivitas analgesik. Hasil analisis statistik LSD pada  taraf kepercayaan 95 % menunjukkan  perbedaan bermakna antar kelompok perlakuan kecuali pada ekstrak daun mangrove dosis  300  mg/kgBB  dengan  kelompok  kontrol  positif  karena  jumlah  geliat  pada  mencit  tidak  jauh berbeda dengan kelompok kontrol positif, sehingga dapat dikatakan bahwa daya analgesik dosis 300 mg/kgBB setara dengan kelompok kontrol positif. Kesimpulan pada penelitian ini yaitu ekstrak etanol daun mangrove dosis 100mg, 200mg, dan 300  mg  memiliki  aktivitas analgesik secara berturut turut sebesar  41,68%  ;  42,38  %  ;  58,84%.  Semakin  tinggi  dosis  ekstrak  mangrove  yang  diberikan,  maka semakin tinggi aktivitas analgesik yang dihasilkan .
Kata Kunci: Analgesik, Daun Mangrove, Writhing Reflex

## ABSTRACT
Pain is a disturbing and uncomfortable condition for the sufferer, but pain can be used as a sign of tissue damage caused by mechanical, chemical, or physical stimuli. The content of compounds from Rhizophora mucronata mangrove leaves, such as flavonoids, tannins, and saponins, can inhibit pain. The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  analgesic  activity  of  mangrove  leaf  extract  on  mice induced  by  acetic  acid.  This  research  is  a  pure  experimental  study  using  a  completely  randomized design  with  a  unidirectional  pattern.  Mangrove  leaves  were  extracted  using the  maceration  method with 70% ethanol as solvent. Furthermore, the analgesic activity test in mice  was divided into 5 test

## Cendekia Journal of Pharmacy
ITIKES Cendekia Utama Kudus P-ISSN 2559 – 2163           E-ISSN 2599 – 2155 Vol. 6, No. 2, November 2022 http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id
groups,  namely  the  group  that  was  given  aquadest  as  a  negative  control,  acetosal  as  a  positive control, and ethanol extract of mangrove leaves at a dose of 100 mg/kg BW, 200 mg/kg BW and 300 mg/kg. BB. Mice were induced by pain by injecting 1% acetic acid intraperitoneally. The number of stretches that occurred in 15 minutes for 2 hours was observed, then the percentage of protection and analgesic activity was determined. The data obtained were then analyzed by SPSS. The results of the phytochemical analysis revealed that the mangrove leaf extract contained positive flavonoids, tannins, and  saponins.  The  writhing  reflex  of  mice  based  on  the  average  results  obtained  for  the  test preparation group showed a relationship between the dose and a decrease in the wriggling response. The lower the writhing response, the greater the analgesic activity. The results of statistical analysis with  LSD  95%  confidence level  showed  significant  differences  between  the treatment  groups  except for  the  mangrove  leaf  extract  dose  of  300  mg/kg  BW  with  Acetosal.  This  is  because  the  amount  of stretching caused  by this  dose  is  not  much  different from  that  caused  by  acetosal,  so it  can  be  said that  the  analgesic  power  of  a  dose  of  300  mg/kg  BW  is  the  same  as  that  of  acetosal.  This  study concludes that the ethanol extract of mangrove leaves at doses of 100 mg, 200 mg, and 300 mg has an analgesic activity of 41.68%, respectively; 42.38%; 58.84%. The higher the dose of mangrove extract given, the higher the analgesic activity produced.
Keywords: Analgesic, Mangrove Leaf, Writhing Reflex

## LATAR BELAKANG
Nyeri merupakan suatu keadaan yang tidak nyaman dan menyiksa bagi penderitanya, serta  sebagai  penanda  terjadinya  kerusakan  jaringan  sehingga  memerlukan  obat  untuk mengendalikannya (Soelistiono, 2008). Nyeri juga diartikan sebagai mekanisme perlindungan tubuh    terhadap    suatu    gangguan,  dan  kerusakan  jaringan  seperti  peradangan,  infeksi  dan kejang  otot  dengan  pembebasan  mediator  nyeri  (Guyton  dan  Hall,  2014).  Nyeri  biasanya disebabkan  oleh  rangsangan  mekanis,  kimiawi  atau  fisis  (kalor,  listrik)  yang  dapat menimbulkan  kerusakan  pada  jaringan.  Rangsangan  tersebut  memicu  pelepasan  mediator nyeri seperti histamin, bradikidin, leukotrien dan prostaglandin (Bahrudin, 2018) .
Analgesik  merupakan  obat  yang  digunakan  untuk  mengurangi  atau  menghilangkan rasa nyeri seperti parasetamol, salisilat, NSAID, dan analgesik opioid (Husada, dkk., 2019). Efek samping yang paling sering terjadi akibat pemberian analgesik adalah nyeri epigastrum, mual muntah, dan terkadang disertai anemia sekunder akibat perdarahan pada saluran cerna. Studi  eksperimental  dan  epidemiologik  telah  membuktikan  adanya  peningkatan  kejadian ulkus  lambung  pada  pasien  yang  memakai  aspirin  dosis  tinggi.  Gastritis  yang  terjadi  akibat aspirin  karena  adanya  iritasi  pada  mukosa  lambung  akibat  aspirin  yang  tidak  larut  dengan sempurna,  gangguan  pada  penyerapan  lambung,  atau  adanya  hambatan  produksi prostaglandin.  Oleh  karena  itu  penggunaan  obat  ini  dihindari  pada  pasien  dengan  riwayat gastritis atau ulkus peptikum dan juga hemofil (Lintong dkk., 2013).
Penelitian  untuk  mengidentifikasi  tanaman-tanaman  berkhasiat  sebagai  obat  telah banyak  dilakukan,  namun  ternyata  masih  banyak  tanaman  tradisional  yang  belum teridentifikasi  dan  dikenal  secara  luas  oleh  masyarakat  yang  bermanfaat  dalam  mengobati penyakit-penyakit  tertentu  seperti  antinyeri/analgesik.  Salah  satu  bahan  alam  yang  diduga secara  empiris  yang  memiliki  potensi  sebagai  analgesik  adalah  tanaman  mangrove ( Rhizophora mucronata L.) (Fransiscus dkk., 2021).
Salah  satu  tumbuhan  yang  memiliki  potensi  sebagai  analgesik  adalah  tanaman mangrove. Tanaman  mangrove  yang  sering  digunakan  yaitu  bagian  daunnya.  Menurut penelitian  yang dilakukan Guntara dkk., (2019)  daun mangrove kaya akan senyawa steroid, saponin,  flavonoid  dan  tanin.  Flavonoid  dan  saponin  memiliki  kemampuan  analgesik  dan antiinflamasi  karena  kedua  senyawa  tersebut  menghambat  enzim  yang  menginduksi terjadinya  peradangan,  terutama  jalur  metabolisme  asam  arakidonat,  dan  jalur  sintesis prostaglandin  (Fransiscus  dkk.,  2021).  Dalam  penelitian  Eko  (2020)  ekstrak  mangrove  api- api  putih  dosis  250  mg/kgBB  dan  500  mg/kgBB  memiliki  efek  analgesik  terhadap  mencit jantan.  Daun  mangrove Rhizophora  mucronata tergolong  toksisitas  kuat  dengan  nilai  IC50 sebesar 115,5, sehingga dapat digunakan sebagai obat tradisional (Lesdiana & Usman, 2021).
Daun mangrove Rhizophora mucronata L. yang digunakan pada penelitian ini dibuat ekstrak  kental  untuk  menghindari  kejenuhan  pelarut  dan  memaksimalkan  pengambilan  zat aktif dengan pelarut polar yang terkandung dalam simplisia, sehingga rendemen ekstrak yang didapatkan  maksimal  (Faoziyah  &  Kurniawan,  2017).  Penelitian  ini  menggunakan  pelarut etanol  70%  untuk  menyari  metabolit  sekunder  daun  mangrove  karena  etanol  bersifat  polar sehingga mampu mengekstraksi senyawa flavonoid, tannin dan saponin. Etanol juga memiliki kelebihan  yaitu  mampu  menyari  senyawa  flavonoid,  tanin  dan  saponin  lebih  baik  bila dibandingkan  dengan  methanol  dan  air.  Etanol  dengan  konsentrasi  diatas  70% mengakibatkan  penurunan  kadar  total  flavonoid  dan  kurang  efektif  untuk  melarutkan senyawa flavonoid  yang memiliki berat molekul rendah (Riwanti dkk., 2020). Penelitian ini menggunakan  asam  asetat  secara  intraperitonial  (disuntikkan  pada  rongga  perut)  sebagai penginduksi  nyeri  karena  asam  asetat  dapat  merusak  jaringan  secara  lokal  sehingga menyebabkan  nyeri  pada  rongga  perut.  Kondisi  ini  menyebabkan  peningkatan  sensitivitas reseptor  nyeri  sehingga  mencit  akan  memberikan  respon  dengan  cara  menggeliat  untuk
menyesuaikan  keadaan  yang  dirasakannya.  Respon  inilah  yang  disebut  dengan  istilah writhing reflex (Wulandari & Hendra, 2011).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  murni  menggunakan  rancangan acak  lengkap  pola  searah.  Jenis  penelitian  eksperimental  murni  yang  dimaksud  pada penelitian  ini  yaitu  memberikan  perlakuan  pada  hewan  uji.  Acak  berarti  pengelompokkan hewan uji dilakukan secara secara acak dan memiliki  kesempatan  yang  sama untuk  diambil menjadi sampel. Lengkap berarti terdapat 2 kelompok uji pada penelitian ini yaitu kelompok kontrol  dan  kelompok  perlakuan  yang  tiap-tiap  kelompoknya  mempunyai  jumlah  mencit yang  sama  dan  diberikan  perlakuan  yang  sama.  Pola  searah  berarti  penelitian  ini  hanya meneliti  satu  variabel  bebas  saja  yaitu  variasi  dosis  ekstrak  etanol  daun  mangrove  terhadap variabel  tergantungnya  yaitu  daya  analgesik  pada  hewan  uji  yang  berupa  persentase penghambatan geliat.
Bahan  yang  digunakan  yaitu  daun  mangrove  ( Rhizophora  mucronata L.),  akua bidestilata,  asam  asetat,  etanol  70%,  tablet  asetosal,  dan  mencit  putih  ( Mus  musculus ) jantan  dengan  bobot  20-30  gram  usia  2-3  bulan.  Alat  yang  digunakan  Beaker  glass,  labu ukur,  cawan  porselen,  batang  pengaduk,  bejana  kaca,  corong,  kertas  saring,  waterbath, moisture analyzer, rotary evaporator, timbangan analitik, spuit injeksi 1 ml, sonde oral untuk mencit.
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Farmakologi  Universitas  Pekalongan  dengan prosedur  penelitian  yang  terdiri  dari  beberapa  tahapan.  Tahap  awal  dilakukan  pengumpulan sampel yaitu daun mangrove yang diperoleh dari Mangrove Park Pekalongan, di pesisir Kota Pekalongan.  Daun  mangrove  yang  digunakan  yaitu  daun  tua  dan  tidak  menguning. Selanjutnya  daun  mangrove  yang  telah  terkumpul  sebanyak  1.8  kg  dicuci  bersih  dengan  air mengalir  lalu  ditiriskan.  Daun  mangrove  yang  sudah  bersih  kemudian  diproses  menjadi simplisia  dengan  dipotong  kecil-kecil  kemudian  dimasukkan  kedalam  oven  dengan  ditutupi kain  hitam  sampai  benar  benar  kering.  Lalu  daun  mangrove  yang  sudah  kering  dihaluskan dengan blender. Setelah dihaluskan ditimbang simplisia yang diperoleh untuk kemudian diuji kadar air dan diekstraksi. Ekstraksi simplisia menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 70%.
Pengujian  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  meliputi  skrining  fitokimia  dan  uji aktivitas  analgesik.  Skrining  fitokimia  yang  dilakukan  yaitu  uji  tanin,  uji  saponin,  dan  uji flavonoid. Pada uji aktivitas analgesik, 25 ekor mencit dibagi ke dalam 5 kelompok uji yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, kelompok dosis ekstrak daun mangrove 100 mg, kelompok dosis ekstrak daun mangrove dosis 200 mg, dan kelompok dosis ekstrak daun  mangrove  dosis  200  mg.  Kelompok  kontrol  negatif  pada  penelitian  ini  menggunakan aquadest,  dan  kelompok  kontrol  positif  menggunakan  asetosal.  Mencit  yang  telah  siap  diuji diberikan  sediaan  uji  sesuai  dengan  kelompok  masing-masing  secara  peroral.  Setelah  30 menit,  mencit diberikan  asam  asetat  1% 0,15 ml  secara intraperitoneal.  Amati  geliat  mencit dengan  interval  waktu  15  menit  selama  2  jam.  Semua  data  yang  diperoleh  dianalisa  secara statistik menggunakan SPSS 16 dan dihitung persentase daya analgesik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun  mangrove  basah  sebesar  1800  g  diperoleh  472  g  daun  mangrove  kering, sehingga  persentase  susut  pengeringan  yang  diperoleh  sebesar  73%,  artinya  kandungan  air serta senyawa - senyawa yang menguap dalam daun mangrove pada saat proses pengeringan sebesar 73%. Proses pengeringan bertujuan untuk mengurangi kadar air dan menjaga kualitas simplisia agar tetap baik. Kadar air yang baik yaitu < 10%. Apabila kadar air lebih dari 10% menjadi media yang baik bagi mikroba, jamur dan serangga untuk tumbuh dan berkembang
sehingga  dapat  merusak  mutu  simplisia  (Badan  POM  RI,  2019).  Proses  pengeringan  daun mangrove dilakukan dengan menggunakan oven karena lebih menguntungkan, dalam waktu yang  singkat  terjadi  pengurangan  kadar  air  dalam  jumlah  besar.  Kadar  air  serbuk  simplisia yang diperoleh pada penelitian ini yaitu 5,79%.
Ekstraksi  daun  mangrove  pada  penelitian  ini  menggunakan  metode  remaserasi. Pemilihan  metode  tersebut  karena  prosedur  dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana  serta dapat mencegah rusaknya komponen senyawa akibat pemanasan. Selain itu remaserasi dapat mengoptimalkan  senyawa  yang  diperoleh  karena  penambahan  pelarut  dilakukan  secara berulang sehingga dapat menarik senyawa yang tertinggal pada bahan yang masih berpeluang untuk  diambil  kembali.  Penelitian  ini  menggunakan  pelarut  etanol  70%  sebanyak  3250  mL untuk  maserasi  3x24  jam  dan  dilakukan  2  kali  remaserasi.  Etanol  dipilih  karena  mampu menyari  senyawa  kimia  lebih  banyak  bila  dibandingkan  dengan  methanol  dan  air.  Hal  ini didukung  oleh  penelitian  yang  dilakukan  Riwanti  dkk.,  (2020)  yang  menyebutkan penggunaan pelarut etanol konsentrasi  >70% menyebabkan penurunan kadar total  flavonoid dan kurang efektif untuk melarutkan senyawa flavonoid yang memiliki berat molekul rendah.
Pada  penelitian  ini  diperoleh  nilai  rendemen  ekstrak  etanol  daun  mangrove  sebesar 37,25%.  Nilai  rendemen  menunjukkan  keefektifan  proses  ekstraksi.  Nilai  rendemen  yang dihasilkan  dipengaruhi  oleh  jenis  pelarut,  ukuran  simplisia,  metode  serta  lamanya  esktraksi berlangsung (Nahor dkk., 2020). Hasil penetapan kadar air ekstrak simplisia daun mangrove menunjukkan  kadar  air  yang  masih  tersisa  sebesar  9,13%.  Hasil  ini  memenuhi  syarat  kadar air pada ekstrak kental yaitu 5-30% (Voight, 1994).
Ekstrak  kental  yang  dihasilkan  dilakukan  analisis  kandungan  kimia  secara  kualitatif untuk  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  mangrove  mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin dan  saponin.  Pada  uji  flavonoid  diperoleh  hasil  positif  yang  ditandai  dengan  terbentuknya kuning.  Warna  kuning  yang  terbentuk  pada  uji  disebabkan  karena  terbentuknya  senyawa komplek  akibat  reduksi  antara  magnesium  dan  amil  alkohol  (Habibi  dkk,  2018).  Hasil  uji flavonoid tersaji pada gambar 1.

## Gambar 1 Hasil Uji Flavonoid
Keterangan: (1) pembanding flavonoid sebelum direaksikan, (2-4) sampel sebelum direaksikan, (5) pembanding flavonoid setelah direaksikan, (6-8) sampel setelah direaksikan.
Hasil uji tanin menunjukkan perubahan warna setelah penambahan FeCl 3 yang dapat bereaksi  dengan  salah  satu  gugus  hidroksil  pada  senyawa  tanin.  Penambahan  FeCl 3 menghasilkan warna hijau kehitaman yang menunjukkan adanya tanin terkondensasi (Habibi dkk.,  2018).  Selanjutnya  pada  uji  saponin  diperoleh  hasil  yang  positif  ditandai  dengan timbulnya  busa  bila  ekstrak  dikocok  di  dalam  air.  Timbulnya  busa  pada  uji  saponin
menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan untuk membentuk buih dalam air  yang  terhidrolisis  menjadi  glukosa  dan  senyawa  lainnya.  Penambahan  HCl  untuk memastikan  bahwa  buih  yang  dihasilkan  tetap  setelah  diteteskan  (Habibi  dkk.,  2018).  Hasil uji tannin dan saponin dapat dilihat pada gambar 2 dan gambar 3, serta simpulan hasil analisis fitokimia secara keseluruhan dapat dilihat pada tabel 1.

## Gambar 2 Hasil Uji Tanin
Keterangan: (1) pembanding tanin sebelum direaksikan, (2-4) sampel sebelum direaksikan,
(5) pembanding tanin setelah direaksikan, (6-8) sampel setelah direaksikan.

## Gambar 3 Hasil Uji Saponin
Keterangan: (1) pembanding saponin sebelum direaksikan, (2-4) sampel sebelum direaksikan,
(5) pembanding saponin setelah direaksikan, (6-8) sampel setelah direaksikan.
Tabel 1 Hasil Analisis Fitokimia Ekstrak Daun Mangrove ( Rhizhopora mucronata L.).
NO Senyawa Hasil Keterangan Baku Pembanding Ekstrak 1 Flavonoid Positif Kuning menjadi kuning gelap Terbentuknya warna kuning 2 Tanin Positif  Kuning coklat menjadi kehitaman Semula  berwarna  coklat  lalu berubah menjadi hijau kehitaman 3 Saponin Positif Bening tidak berbusa Terbentuknya busa yang stabil
Setelah  dilakukan  analisis  kandungan  kimia  secara  kualitatif,  selanjutnya  dilakukan uji  aktivitas  analgesik.  Pada  5  kelompok  uji  yang  telah  ditentukan  dilakukan  pengamatan pada  geliat  ( writhing  reflex )  setiap  15  menit  selama  2  jam.  Metode writhing  reflex yang digunakan dalam percobaan merupakan salah satu metode pengujian analgetika lemah. Hasil uji aktivitas analgesik dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2 Hasil Pengamatan Geliat Mencit Pada Tiap Kelompok Uji
No Jenis uji Kelompok Jumlah Geliat Mencit (Menit) 0- 15 16- 30 31- 45 46- 60 61- 75 76- 90 91- 105 106- 120 Jumlah 1. Kontrol negatif (Aquadest) I 28 16 18 10 8 2 1 0 83 II 20 18 19 11 14 4 2 0 88 III 21 19 16 17 14 1 1 1 90 IV 15 22 10 13 8 4 4 2 78 V 25 23 26 19 16 14 2 1 126 2. Kontrol positif (Aspilet) I 8 11 10 5 2 0 0 0 36 II 10 10 7 1 0 0 0 0 28 III 6 4 8 9 0 0 0 0 27 IV 10 9 9 3 2 1 1 0 35 V 5 7 6 6 0 0 0 0 24 3. Dosis I (100 mg) I 13 10 10 6 8 4 0 0 51 II 17 15 9 10 5 0 1 1 58 III 9 11 10 3 2 2 0 1 38 IV 12 19 8 10 8 3 1 2 63 V 10 9 6 12 9 4 1 1 52 4. Dosis II (200 mg) I 8 12 7 4 4 0 0 0 35 II 10 19 20 17 9 8 1 2 86 III 6 13 14 10 3 1 1 0 48 IV 5 9 8 8 0 3 2 0 35 V 6 20 12 8 10 5 2 0 63 5. Dosis III (300 mg) I 15 12 7 4 4 0 0 0 42 II 13 8 3 2 0 0 1 0 27 III 10 8 5 2 2 1 0 0 28 IV 16 15 6 3 4 1 0 0 45 V 18 10 9 6 0 2 0 0 45
Bila  dilihat  dari  data  tabel  2  di  atas,  terlihat  bahwa  jumlah  geliat  pada  kelompok kontrol  negatif  paling  besar  dibandingkan  jumlah  geliat  pada  kelompok  pemberian  ekstrak daun  mangrove  dan  kelompok  kontrol  positif.  Hal  ini  disebabkan  aquadest  tidak  memiliki aktivitas  farmakologi  dalam  menghambat  nyeri.  Sedangkan  pada  kelompok  pemberian ekstrak daun mangrove  menunjukkan jumlah geliat yang ditimbulkan terbanyak adalah pada kelompok  dosis  terendah  100  mg/kgBB.  Semakin  besar  dosis  ekstrak  daun  mangrove  yang diberikan,  maka  semakin  sedikit  jumlah  geliat  pada  hewan  uji.  Pada  kelompok  dosis  200 mg/kgBB jumlah geliat  yang timbul hampir sama dengan geliat  yang timbul pada  kelompok kontrol positif dan kelompok dosis 300 mg/kgBB.

## Gambar 4 Rata-rata Jumlah Geliat Pada Mencit
Berdasarkan  hasil  data  pada  Gambar  4, terlihat penurunan jumlah geliat pada menit ke-90  sampai  menit  ke-120  pada  kelompok  kontrol  positif  serta  kelompok  ekstrak  daun mangrove.  Respon  geliat  mencit  berdasarkan  hasil  rata-rata  menunjukkan  hubungan  antara dosis  dengan  penurunan  respon  geliat  pada  kelompok  sediaan  uji.  Semakin  rendah  respon geliat maka semakin besar efek analgesik yang ditunjukkan pada kelompok sediaan uji. Hasil ini  memperlihatkan  pada  kelompok  kontrol  positif  dengan  kelompok  uji  ekstrak  daun mangrove dosis 100mg, 200mg, dan 300mg dapat menurunkan respon geliat hewan uji yang diberikan agen penginduksi nyeri yaitu asam asetat.
Tabel 3 Distribusi Normalitas Geliat Mencit Kelompok Shapiro- Wilk Homogenitas One Way Anova Test Kontrol Negatif (Aquadest) 0,054 Respon Geliat Kontrol Positif (Asetosal) 0,368 0,104 0,001 Dosis I (100 mg) 0,728 Dosis II (200 mg) 0,347 Dosisi III (300mg) 0,05
Untuk menentukan data  yang dihasilkan terdistribusi normal  atau tidak dilakukan uji Shapiro-Wilk  (data  tersaji  pada  tabel  3). Hasil  yang  diperoleh  adalah  data  terdistribusi  normal dengan  signifikansi  (p  ≥  0.05)  dan  uji  homogenitas  (p≥ 0,05). Untuk  mengetahui adanya perbedaan jumlah  geliat  antara  kelompok  perlakuan,  dilakukan  analisis  statistik  Anova  satu  arah  dengan  taraf kepercayaan 95 %. Diperoleh nilai signifikansi yaitu p = 0.00 (p ≤ 0,05) yang berarti Ho ditolak atau data jumlah geliat berbeda bermakna antar setiap kelompok perlakuan, yaitu kelompok kontrol negatif (Aquadest)  berbeda  bermakna  dengan  kelompok  kontrol  positif  (Asetosal  65  mg/kg  BB),  kelompok dosis  I  (ekstrak  etanol  daun  mangrove  100  mg/kg  BB),  kelompok  dosis  II  (ekstrak  etanol  daun mangrove  200  mg/kg  BB)  dan  kelompok  dosis  III  (ekstrak  etanol  daun  mangrove  300  mg/kg  BB), sehingga dilanjutkan dengan post hoc test uji LSD yang dapat dilihat pada tabel 4.

## Tabel 4 Uji LSD Daya Analgesik
Hasil uji LSD taraf kepercayaan 95% pada tabel 4 menunjukkan  perbedaan bermakna antar  kelompok  perlakuan,  kecuali  pada  kelompok  kontrol  positif  dengan  kelompok  dosis  3 (300 mg/kgBB). Hal ini disebabkan jumlah geliat yang ditimbulkan oleh dosis tersebut tidak jauh berbeda dengan yang ditimbulkan oleh kelompok kontrol positif yang diberikan asetosal, sehingga dapat dinyatakan bahwa daya analgesik ekstrak daun mangrove dosis 300 mg/kgBB adalah  setara  dengan  asetosal  dosis  65mg/KgBB.  Sementara  itu  kelompok  ekstrak  daun mangrove  dosis  100  mg/kgBB  mempunyai  daya  analgesik  yang  lebih  kecil  dibandingkan dengan kelompok kontrol positi namun terjadi perbedaan bermakna yang terlihat dari hasil uji LSD pada tabel di atas. Bila dibandingkan dengan  kelompok kontrol negative, kelompok uji ekstrak  daun  mangrove  dosis  100  mg/kgBB  mempunyai  jumlah  geliat  yang  memiliki perbedaan  bermakna.  Ekstrak  daun  mangrove  d o s i s   100  mg/kgBB  memiliki  aktivitas analgesic,  namun  bila  dibandingkan  dengan  asetosal  aktivitasnya  masih  lebih  kecil. Kelompok  ekstrak  daun  mangrove  dosis  200  mg/kgBB  dari  hasil  analisis  LSD  memiliki perbedaan  bermakna  dengan  kelompok  perlakuan  lain.  Apabila  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  positif terjadi  penurunan jumlah geliat, demikian juga terhadap kelompok perlakuan  lain.  Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  kelompok  uji  ekstrak  daun  mangrove dosis  200 mg/kgBB memiliki  daya analgesik lebih baik  daripada kelompok  uji  ekstrak daun mangrove dosis 100 mg/kg BB.
Tabel 5 Persentase Daya Analgesik Kelompok % Daya Analgesik Kontrol Negatif (Aquadest) 0 Kontrol Positif (Asetosal) 66,19 Dosis I (100 mg) 41,68 Dosis II (200 mg) 42,38 Dosisi III (300mg) 58,84
Dari tabel 5 di atas diketahui besarnya daya analgesik pada kelompok kontrol negatif adalah nol karena pada  kelompok kontrol negatif, hewan uji hanya diberikan aquadest  yang tidak  memiliki  efek  farmakologi  sebagai  analgesik  atau  menghambat  rasa  nyeri.  Pada kelompok  uji  ekstrak  daun  mangrove,  semakin  besar  dosis  maka  semakin  besar  %  daya analgesiknya. Hal ini menunjukkan ekstrak daun mangrove yang diberikan mampu menahan rangsangan  nyeri  asam  asetat  pada  respon  nyeri.  Daya  analgesik  ekstrak  daun  mangrove dinilai dari penurunan jumlah geliat terhadap 3 variasi dosis pengujian. Kandungan metabolit
Persentase Daya Analgesik Kelompok Uji Signifikansi Kontrol Positif Dosis III 0,419 Dosis I Dosis II 0,932 Dosis III 0,083 LSD Dosis II Dosis I 0,932 Dosis III 0,098 Kontrol Positif 0,419 Dosis III Dosis I 0,083 Dosis II 0,098
sekunder  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  daun  mangrove  seperti  tanin,  flavonoid,  dan saponin berpengaruh dalam menurunkan jumlah geliat pada hewan uji. Tanin, flavonoid, dan saponin  memiliki  kemampuan  menghambat  rasa  nyeri  dan  antiinflamasi  karena  bekerja menghambat  aksi  enzim  yang  terlibat  dalam  peradangan,  terutama  jalur  metabolisme  asam arakidonat, dan jalur sintesis prostaglandin (Fransiscus dkk., 2021).
Adanya perbedaan hasil antara penelitian ini dengan penelitian yang pernah dilakukan sebelumnya  dapat  disebabkan  oleh  beberapa  faktor,  antara  lain  kondisi  lingkungan  tempat tumbuh  daun  mangrove,  suhu  ruangan  yang  digunakan  saat  pengujian,  lama  waktu penyimpanan  ekstrak,  fase  farmakokinetik  yang  dapat  berbeda  pada  tiap  hewan  uji  serta kemampuan senyawa aktif daun mangrove  yang  dinilai melalui  dosis dalam  menempati  sisi aktif  reseptor  sehingga  memberikan  respon  biologis  yang  berbeda.  Alasan    digunakan  tiga macam  dosis  dalam  penelitian  ini  adalah  untuk  melihat  hubungan  dosis  efek  pada  varian dosis  yang  berbeda  dan  bertingkat.  Jika  suatu  bahan  uji  memberikan  hubungan  dosis  efek, artinya  makin  besar  dosis  yang  diberikan,  makin  besar  efeknya,  maka  dapat  dikatakan  efek yang diharapkan memang berasal dari bahan uji. Dari rata-rata jumlah geliat yang dihasilkan pada  penelitian  ini,  dapat  terlihat  bahwa  dosis  300  mg/kgBB  ekstrak  daun  mangrove memiliki daya  analgesik  yang setara dengan daya analgesik  asetosal 65  mg/kgBB.  Asetosal merupakan  zat  yang  mengandung  salisilat  yang  berperan  menghilangkan  nyeri  baik  secara sentral  maupun  perifer.  Secara  sentral,  salisilat  bekerja  pada  hipotalamus  sedangkan  secara perifer menghambat terbentuknya prostaglandin sebagai mediator inflamasi, serta mencegah sensitisasi reseptor nyeri terhadap rangsang mekanik maupun kimiawi.

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Ekstrak  etanol  daun  mangrove  dosis  100mg,  200mg,  dan  300mg  memiliki  aktivitas analgesik  secara  berturut  turut  sebesar  41,68%  ;  42,38  %  ;  58,84%.  Semakin  tinggi  dosis ekstrak mangrove yang diberikan, maka semakin tinggi aktivitas analgesik yang dihasilkan.

## Saran
1. Melakukan  penelitian  aktivitas  analgesik  ekstrak  daun  mangrove  dengan  variasi  dosis yang lebih rendah dari 100 mg, agar diperoleh dosis minimum yang optimal
2. Melakukan uji toksisitas akut dan subakut untuk mengetahui keamanan penggunaan daun mangrove sebagai sediaan herbal

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  POM  RI.  (2019). Peraturan  Badan  Pom  RI  Nomor  32  Tahun  2019  Tentang Persyaratan  Keamanan  Dan  Mutu  Obat  Tradisional .  Badan  Pengawas  Obat  Dan Makanan
Bahrudin,  M.  (2018).  Patofisiologi  Nyeri  (Pain). Saintika  Medika ,  13(1),  7. https://doi.org/10.22219/sm.v13i1.5449
Faoziyah,  A.  R.,  &  Kurniawan,  W.  (2017).  Pemanfaatan  Ekstrak  Daun  Mangrove (Rhizophora  mucronata  sp.)  dengan  Variasi  Pelarut  Sebagai  Bahan  Aktif  Sediaan Farmasi Terapi Anti Kanker. Journal of Health , 4(2), 68. https://doi.org/10.30590/vol4- no2-p68-74
Fransiscus Lumban Gaol, E., Sianturi, S., & Tinggi Ilmu Kesehatan Dirgahayu Samarinda, S. (2021).  Efektivitas  Ekstrak  Bakung  (Crinum  asiaticum  L.)  sebagai  Analgetik  pada Mencit yang Diinduksi Asam Asetat Effectiveness of Bakung Extract. Jurnal Farmasi Sains dan Praktis
Guntara, S. S., Maritim, U., & Ali, R. (2019). Analisis Kandungan Senyawa Daun Mangrove Yang Ada Di Kampung. Jurnal Dinamika Maritim , November, 0–10.
Guyton  dan  Hall.  (2014). Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran . Edisi keduabelas. Singapura: Elsevier
Habibi, A.  I., Firmansyah, R. A., & Setyawati, S. M. (2018). Skrining Fitokimia Ekstrak n- Heksan  Korteks  Batang  Salam  (Syzygium  polyanthum). Indonesian  Journal  of Chemical Science , 7(1), 1–4
Lesdiana, L., & Usman. (2021). Uji Toksisitas Dan Uji Fitokimia dan Ekstrak Metanol Daun Mangrove Rhizophora mucronata. Kimia FMIPA UNMUL , 94–98
Lintong,  P.  M.,  Loho,  L.  L.,  &  Anggran,  H.  (2013).  Gambaran  Histopatologik  Lambung Tikus  Wistar  Setelah  Diinduksi  Dengan  Aspirin. Jurnal  Biomedik  (Jbm) ,  5(1),  210– 226. https://doi.org/10.35790/jbm.5.1.2013.2044
Nahor,  E.  M.,  Rumagit,  B.  I.,  YTou,  H.,  &  Kesehatan  Kemenkes  Manado,  P.  (2020). Comparison of the Yield of Andong Leaf Ethanol Extract (Cordyline fruticosa L.) Using Maceration and Sokhletation Extraction Methods . Journal Poltekkes Manado , 1(1), 40– 44
Noventi, W dan Novita. C. (2016). Potensi Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) sebagai Alternatif Terapi Acne Vulgaris. Majority . 5(1): Halaman 141- 142
Riwanti,  P.,  Izazih,  F.,  &  Amaliyah.  (2020).  Pengaruh  Perbedaan  Konsentrasi  Etanol  pada Kadar Flavonoid Total Ekstrak Etanol 50,70 dan 96%. Journal of Pharmaceutical Care Anwar Medika , 2(2), 82–95.
Voight, R. (1994). Buku Teknologi Sediaan Farmasi (Edisi V). UGM-Press.
Wulandari,  D.,  &  Hendra,  P.  (2011).  Analgesic  Effect  of  Leaf  Extract  Of  Macaranga Tanarius L. On Female Mice of Swiss Strains. 13(2), 108– 117.