AKTIVITAS ANTIDIABETES FRAKSI n-HEKSAN EKSTRAK ETANOL DAUN LENGLENGAN ( Leucas lavandulifolia JE. Smith) PADA TIKUS DM TIPE-2 YANG MENGALAMI RESISTENSI INSULIN
Yance Anas 1) , Risha Fillah Fithria 1) , Maulita Cut Nuria 2) , Amprih Martha P.L 1) ., Agung Endro Nugroho 3) , Puji Astuti 4)
1) Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Bagian Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
3) Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta
4) Bagian Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta yance.apt@gmail.com

## ABSTRACT
This  study  is  an  effort  to  discover  new  anti-diabetic  compounds  from  natural  products in  the type-2 diabetes mellitus treatment. The purpose of this study was to determine the potential of n-hexane  fraction  (FHDL)  from  lenglengan  leaf  ethanol  extract  as  an  antidiabetic  in  insulin resistance type-2  diabetic Rat. Insulin resistance  was induced by administration  of long-acting insulin  (Lantus ® )  1.80  IU.Kg  BW -1 .day -1 for  14  days.  Insulin  resistance  rats  tested  by  using parameter  fasting  blood  glucose  (FBG),  before  and  after  treatment  of  long-acting  insulin.  Rat has to type-2 diabetes due to insulin resistance when FBG on day 18 exceeded 85 mg.dL -1 . Test results show the animal had insulin resistant.  Rat with the insulin resistance is divided into five treatment  groups  consisting  of  one  group  of  diabetic  control  (treats  with  CMC-Na  0.5%,  25 mL.Kg BW -1 .day -1 ), three dose  groups  of FHDL (62.5; 125 and 250)  mg.Kg BW -1 .day -1 and a positive  control  group  (treats with metformin  150  mg.Kg  BW -1 .day -1 ).  FHDL  and  metformin 150  mg.Kg  BW -1 .day -1 were  administered  once  daily  for  14  days.  FBG  data,  before  and  after treatments  were  compared.  FBG  assay  is  using  a  reagent  kit.  The  results  showed  that  FHDL (125  and  250)  mg.Kg  BW -1 .day -1 and  metformin  150  mg.Kg  BW -1 .day -1 are  shown  to  have antidiabetic  effects  in  insulin  resistance  type-2  diabetic  rat.  FHDL  250  mg.Kg -1 .day -1 antidiabetic effect (25.87%) is equivalent to metformin 150 mg.Kg BW -1 .day -1 (21.50) (p>0.05). The  results  of  this  research  can  proceed  to  find  the  novel  antidiabetic  compound  from  the lenglengan leaf ethanol extracts.
Key words  : n-Hexane  fraction,  Lenglengan  extract,  Anti-diabetic  effects,  Insulin  resistance, Type-2 diabetic rats.

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan penyakit  yang  menjadi  penyebab  kematian nomor  empat di  dunia (Akinci, et.al ., 2008). DM  adalah  kelompok  penyakit  gangguan metabolik  yang  ditandai  dengan  keadaan tingginya kadar glukosa
darah (hiperglikemik)  dan  dapat  mengakibatkan komplikasi  yang  berbeda-beda  pada  setiap orang.    Beberapa  komplikasi  tersebut diantaranya  adalah  arterosklerosis  prematur dan  gangguan  pada  pembuluh  darah  kecil yang  dapat  berkembang  menjadi  retinopati dan  kebutaan.  Komplikasi  lainnya  dapat berupa  nefropati  yang  dapat  mengakibatkan gagal  ginjal.    Selain  itu,  komplikasi  yang
sering  muncul  adalah  neuropati  perifer  yang merupakan  faktor  resiko  ulcer  dan  amputasi (Poretsky, 2009).
Selama  abad  ke-21,  angka  kejadian diabetes  mellitus  (DM)  di  dunia  mengalami peningkatan yang pesat (Nicholson dan Hall, 2011).  Pada  tahun  2008,  Federasi  Diabetes Internasional  (IDF)  menyatakan  bahwa  246 juta  orang  dewasa  di  seluruh  dunia  telah mengalami  DM  dan  angka  ini  diperkirakan akan  terus  meningkat  hingga  mencapai  380 juta orang pada tahun 2025 (Editorial, 2008). Sampai  akhir  tahun  2011,  penderita  DM mencapai  366  juta  orang  dengan  angka kematian  sebesar  4,6  juta  jiwa.  IDF  juga memperkirakan bahwa jumlah penderita DM
akan terus  meningkat sampai 552  juta orang dan  sebanyak  439  juta  diantaranya  adalah penderita  DM  tipe-2  pada  tahun  2030  (IDF, 2011). Peningkatan jumlah penderita DM ini berasal dari bertambahnya jumlah pasien DM tipe-2  yang  baru  terdiagnosa  sebagai konsekuensi dari meningkatnya jumlah orang yang  mengalami  obesitas,  populasi  yang berusia  lanjut  dan  kurang  berolahraga (Matthews dan Matthews, 2011).
Peningkatan jumlah pasien DM tipe-2 terjadi pada  setiap  negara,  terutama  pada  negara yang  80%  masyarakatnya  hidup  dengan tingkat  penghasilan  rendah  sampai  sedang (IDF, 2011), termasuk di Indonesia.
Patofisiologi  DM  tipe-2  ditandai  dengan terjadinya  resistensi  insulin  pada  jaringan tubuh dan atau adanya
gangguan/abnormalitas  sekresi  insulin  dari sel β pulau langerhans pangkreas (Thevenod, 2008). Dua  patologi  ini  sering  terjadi bersamaan  pada  pasien  DM  tipe-2  sehingga penyebab utama dari tingginya kadar glukosa darah  pada  pasien  sulit  ditentukan. Abnormalitas  sekresi  insulin  dan  resistensi insulin  juga  dapat  disebabkan  oleh  beberapa gangguan  lainnya  seperti  penyakit  hepar, gangguan  ginjal,  hormon  glukokortikoid, hormon  pertumbuhan  seperti  tiroid  sehingga DM  tipe-2  bisa  merupakan  akibat  dari penyakit lainnya (Poretsky, 2009).
Resistensi  insulin  adalah  suatu  keadaan dimana insulin yang disekresikan oleh sel β– pankreas  tidak  mampu  menghasilkan  efek biologis  yang  diharapkan  pada  berbagai jaringan tubuh manusia (Wang, et.al ., 2013), terutama  dalam  memerentarai uptake - glukosa  ke  dalam  otot  skletal,  jaringan adiposa, hepar dan ginjal (Rett, et.al ., 1999). Berbagai  laporan  penelitian  menyimpulkan bahwa resistensi insulin mengawali
perkembangan  keadaan  hiperglikemik  pada orang-orang  yang  mengalami  DM  tipe-2 (Mudaliar, et.al .,  2001;  Andul-Ghani  dan DeFronzo,  2010;  Choi  dan  Kim,  2010; Wang, et.al ., 2013).
Sampai  saat  ini,  pengobatan  DM  tipe-2 masih dianggap kurang efektif oleh sebagian kalangan  medis.  Hal  ini  ditandai  dengan masih  tingginya  angka  kesakitan  dan kematian,  serta  rendahnya  kualitas  hidup
pasien  yang  telah  menjalani  terapi  dengan antidiabetes  yang  ada  (Roglic  dan  Unwin, 2009).    Oleh  karena  itu,  kegiatan  penelitian dalam penemuan  obat baru untuk terapi DM tipe-2  akan  terus  dilakukan  sampai didapatkan  obat  baru  yang  terbukti  lebih efektif secara klinik dalam memelihara kadar glukosa darah pasien. Obat baru tersebut juga harus  memiliki  efek  samping  yang  relatif ringan  jika  dibandingkan  dengan  obat  yang telah ada saat ini. Di Indonesia dan berbagai negara  berkembang  lainnya,  penemuan  obat baru  dimulai  dari  mengidentifikasi  efek antidiabetes  beberapa  obat  tradisional  yang telah  digunakan  masyarakat  secara  empiris untuk  mengobati  DM  tipe-2.  Salah  satu tanaman  yang  sedang  dikembangkan  adalah daun  lenglengan  ( Leucas  lavandulifolia JE. Smith).
Penelitian ini merupakan salah satu usaha dalam penemuan obat baru yang berasal dari bahan  alam  untuk  pengobatan  DM  tipe-2. Lenglengan  merupakan  salah  satu  rumput liar  yang  dipercaya  dan  telah  digunakan secara  tradisional  oleh  masyarakat  dalam pengobatan  DM  (Makhija, et.al., 2011). Tujuan  umum  dari  rangkaian  penelitian  ini adalah  menemukan  beberapa  senyawa  baru dari daun lenglengan ( Leucas lavandulaefolia JE.  Smith)  yang  dapat digunakan  sebagai  alternatif  antidiabetes baru dalam pengobatan DM tipe-2.
Penelitian  pendahuluan  yang  telah dilakukan  menyimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  lenglengan  mampu  menurunkan kadar  glukosa  darah  pada tikus  galur  Wistar yang  dibebani  glukosa  berlebih.  Ekstrak etanol  daun  lenglengan  250  mg/KgBB memiliki  efek  hipoglikemik  sebesar  45% (Bhoja, 2009), sehingga ekstrak ini memiliki prospek yang baik untuk dikembangkan lebih lanjut.  Dalam  penelitian  ini,  ekstrak  etanol daun lenglengan difraksinasi dengan menggunakan  pelarut  n-heksan  untuk menghasilkan fraksi n-heksan daun lenglengan  (FHDL)  sehingga  kandungan senyawa  aktif  yang  terkandung  di  dalamnya akan  lebih  spesifik.  Selanjutnya,  aktivitas antidiabetes FHDL diuji
dengan menggunakan  model  hewan  percobaan  DM tipe-2  yang  mengalami  resistensi  insulin
karena  pemberian  insulin  kerja  panjang selama 14 hari (Anas, et.al ., 2012).

## METODE
Bahan  Penelitian. Daun  lenglengan diperoleh  dari  daerah  Kecamatan  Pathuk, Gunung  Kidul  D.I.  Yogyakarta.  Cairan penyari  yang  digunakan  untuk  ekstraksi  dan fraksinasi  adalah  etanol  70%  dan  n-heksan kualitas  teknis  yang  diperoleh  dari  PT. Bratachem  Tbk.  Hewan  uji  yang  digunakan adalah  tikus  jantan  galur  Wistar,  umur  2-3 bulan  dengan  berat  badan  200-250  gram (Laboratorium Farmakologi  dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Wahid
Hasyim).  Tikus  dipelihara  dalam  kondisi laboratorium  dengan  pemberian  pakan standar  BR2  dan  minum  akuades ad.libitum dengan  pengaturan  cahaya  terang-gelap (12:12)  jam.  Bahan  lain  yang  digunakan dalam uji aktivitas antidiabetes adalah CMC-
Na 0,5%, akuades, metformin ( pharmaceutical grade dari PT. Phapros Tbk. Semarang),  Insulin  kerja  panjang  Lantus ® (Sanofi-Aventis U.S) yang dibeli dari Apotek Kimia Farma Semarang.
Alat Penelitian. Oven (Mamert), moisture balance (Oppus), ayakan ukuran 40 Mesh,  blender,  Seperangkat  alat  gelas, corong  pisah, rotary  evaporator (Heidolph), kertas  saring  Whatman  no.1,  timbangan hewan  (Acyss),  spuit  injeksi  dan  jarum  per oral,  alat  pengukur  kadar  glukosa  darah  dan strip merk One-Touch Ultra ® (Adva Med).
Pembuatan  Fraksi  n-Heksan  Ekstrak Etanol Daun Lenglengan. Daun lenglengan dipisahkan dari bagian lain (akar, batang dan ranting)  dan  selanjutnya  dilakukan  sortasi basah  untuk  memisahkan  daun  lenglengan yang masih segar dari bagian lain yang telah rusak.  Daun  lenglengan  dicuci  dengan  air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat,  kemudian  dikeringkan  dalam  oven dengan  pengaturan  suhu  <  55  °C  sampai didapatkan simplisia kering daun lenglengan. Pemeriksaan kadar air dilakukan dengan alat moisture  balance untuk  memastikan  kadar air  kurang  dari  10  %. Setelah  kering,  semua daun lenglengan diserbuk dengan
menggunakan  blender  dan  diayak  dengan
ayakan  ukuran  40  Mesh  sampai  didapatkan sebuk  dengan  tingkat  kehalusan  yang seragam.
Ekstrak  etanol  daun  lenglengan  dibuat dengan  cara  meserasi,  menggunakan    etanol 70  %.  Sebanyak  2.250  gram  serbuk  daun lenglengan  dimasukkan  dalam  bejana meserasi,  direndam  dengan  18,75  L  etanol 70%,  ditutup  dan  dibiarkan  selama  tiga  hari terlindung  dari  cahaya,  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  itu,  sari  diserkai  dan  ampas diperas  sehingga  didapatkan  meserat  I.  Sisa ampas  kemudian  rendam  kembali  dengan 6,25 L etanol 70% selama  dua hari.  Ampas diserkai  dan  diperas  sehingga  diperoleh meserat  II.  Meserat  I  dan  II  dicampur  dan didiamkan dalam waktu satu malam. Meserat dienap-tuangkan  untuk  memisahkan  meserat dari  sisa  endapan  serbuk  simplisia.  Ekstrak dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator dengan pengaturan suhu 50 - 60 0 C.
Fraksinasi ekstrak etanol daun lenglengan dilakukan  dengan  metode  partisi  cair-cair menggunakan  pelarut  n-heksan.  Proses fraksinasi  dilakukan  sebanyak  3  kali  untuk memaksimalkan  kandungan  senyawa  aktif dalam  yang  tersari  ke  dalam  fraksi.  Sisa pelarut n-heksan diuapkan dengan menggunakan rotary  evaporator hingga didapatkan fraksi n-heksan (FHDL). Selanjutnya,  FHDL  dimasukkan  ke  dalam wadah  gelas,  ditutupi  dengan  alumunim  foil dan  disimpan  dalam  desikator  sampai  pada saat akan digunakan.
Pembuatan  Tikus  DM  Tipe-2  yang Mengalami  Resistensi  Insulin. Induksi resistensi  insulin  pada  tikus  galur  Wistar dilakukan  menurut  protokol  penelitian  yang dilaporkan  oleh  Anas, et.al .  (2012). Sebanyak  30  ekor  tikus  jantan  galur  Wistar dipilih  secara acak  dan  dibagi  ke  dalam  dua kelompok  perlakuan.  Sebanyak  5  ekor  tikus digunakan  sebagai  tikus  kontrol  (perlakuan akuabides  12,5  mL/KgBB/hari  (s.c))  dan  25 ekor  tikus  diberikan  perlakuan  insulin eksogen  (Lantus ® )  1,8  IU/KgBB/hari  (s.c). Pemberian  akuabides  dan  insulin  eksogen dilakukan setiap  hari selama selama 14  hari. Sebelum  perlakukan,  satu  tetes  darah  dari ekor  tikus  diambil  untuk  pengukuran  kadar glukosa  darah  puasa  (GDP)  sehingga
diperoleh  data  GDP  sebelum  perlakuan. Setelah  perlakuan  akuabides  dan  insulin eksogen  selama  14  hari,  tikus  dibiarkan selama  tiga  hari  tanpa  perlakuan  dan  pada hari  ke-18  kembali  dilakukan  pengukuran kadar GDP. Tikus dikatakan mengalami DM tipe-2 karena resistensi insulin apabila terjadi peningkatan  kadar  glukosa  darah  puasa setelah  perlakuan  insulin  eksogen  selama  14 hari dan nilai GDP melebihi 85 mg/dL.
Uji  Aktivitas  Antidiabetes  FHDL  pada Tikus Diabetes yang Mengalami Resistensi Insulin  karena  Pemberian  Insulin  Jangka
Panjang. Uji aktivitas antidiabetes menggunakan randomized two-group pretest and post test design . Sebanyak 25 ekor tikus DM  tipe-2    dibagi  menjadi  lima  kelompok perlakuan  yang  terdiri  dari  satu  kelompok kontrol  diabetes  (perlakuan  CMC-Na  0,5% dosis  25  mL/KgBB/hari),  tiga  kelompok dosis  FHDL  62,5  –  250  mgKgBB/hari  dan satu kelompok kontrol positif metformin 150 mg/kgBB/hari.  Sebelum  pemberiaan  sediaan uji  dilakukan  pengukuran  kadar  GDP ( pretest )  Sediaan  uji  FHDL  diberikan  setiap hari  satu  kali  sehari  selama  14  hari.    Pada akhir  pemberian  sediaan  uji,  kembali dilakukan pengukuran  kadar DGP ( posttest ). Data  kadar  GDP  sebelum  dan  setelah perlakuan  sediaan  uji  dibandingkan  secara statistik menggunakan uji t berpasangan.

## Penentapan  Kadar  Glukosa  Darah.
Penetapan  kadar  glukosa  darah  dilakukan dengan  secara  enzimatik  dengan  metode GOD-PAP,  menggunakan  alat  pengukur kadar  glukosa  darah  ( One  Touch  Ultra ® ). Pembuluh  darah  vena  pada  ekor  dilukai dengan scalpel dan darah dibiarkan mengalir keluar  sebanyak  3  tetes.  Tetesan  darah keempat  diletakkan  di  atas  strip One  Touch Ultra ® dan selanjutnya dimasukkan pada alat pengukur  kadar  glukosa  darah.  Kadar  gula darah akan terbaca pada layar dengan satuan mg/dL.
Analisa  data. FHDL  dan  metformin dinyatakan  memiliki  efek  antidiabetes apabila  kadar  GDP  tikus  DM  tipe-2  setelah mendapatkan  perlakuan  dengan  FHDL  lebih rendah  dari  pada  sebelum  perlakuan (p<0,05). Uji statistik yang digunakan adalah uji t berpasangan dengan menggunakan taraf
kepercayaan  95  %.  Nilai  signifikansi  <  0,05 menunjukkan  adanya  perbedaan  GDP  yang signifikan.  Jika  terbukti  memiliki  efek antidiabetes,
selanjutya
dilakukan perhitungan  %  efek  antidiabetes  FHDL  dan metformin  dengan  menggunakan  rumus  di bawah:
% =
x 100%
Keterangan :
P  :  kadar GDP sebelum pemberian FHDL dan metformin.
Q  :  kadar GDP sesudah pemberian FHFL dan metformin selama 14 hari.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan  tikus  DM  tipe-2  yang mengalami  resistensi  insulin  karena pemberian insulin eksogen jangka panjang. Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  pemberian  Insulin  eksogen  (Lantus® 1,80  IU/KgBB/hari)  selama  14  hari  mampu menginduksi  secara  signifikan  terjadinya hiperglikemik yang ditandai dengan peningkatan  kadar  glukosa  darah  puasa (GDP)  tikus  (p<0,05).  Kadar  GDP  tikus jantan  galur  Wistar  yang  mendapatkan perlakuan  insulin  sebelum  dan  setelah perlakuan  selama  14  hari  berturut-turut adalah (77,8 ± 5,9 dan 124,6 ± 12,6) mg/dL. Sebaliknya,  kadar  GDP  tikus  kontrol  yang mendapat perlakukan akuabides 25
mL/KgBB/hari  selama  14  hari  tidak mengalami  peningkatan  yang  signifikan (p>0,05).  Profil  kadar  GDP  tikus  yang mendapatkan  perlakuan  insulin  selama  14 hari  dan  tikus  kontrol  dapat  dilihat  pada gambar 1.
Gambar  1. Perbandingan  rata-rata  kadar  GDP
(mg/dL)  tikus  kelompok  kontrol  dan kelompok perlakuan insulin 1,80 IU/KgBB/hari sebelum dan sesudah perlakuan selama  14  hari.  Data  GDP  merupakan  nilai rat-rata ± SEM (n=5). *Hasil uji t berpasangan menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna  dengan  rata-rata  kadar  glukosa darah puasa sebelum perlakuan (p<0,05).
Penelitian  ini  menyimpulkan bahwa tikus yang  mendapatkan  perlakuan  insulin  selama 14  hari  telah  mengalami  hiperglikemik karena  resistensi  insulin  (DM  tipe-2)  dan memiliki  kadar  GDP  1,5  kali  lebih  tinggi daripada tikus normal (kontrol).
Uji  Aktivitas  Antidiabetes  FHDL  dan Metformin  pada  Tikus  DM  tipe-2  yang Mengalami  Resistensi  Insulin. Hasil penelitian  membuktikan  bahwa  FHDL  (125 dan  250)  mg/KgBB/hari  dan  metformin  150 mg/KgBB/hari  selama  14  hari  dapat menurunkan  kadar  GDP  tikus  DM  tipe-2 yang  mengalami  resistensi  insulin  (p<0,05). Kadar  GDP  tikus  DM  tipe-2  setelah mendapatkan  perlakuan  dengan  FHDL  (125 dan  250)  mg/KgBB/hari  selama  14  hari mengalami  penurunan  berturut-turut  dari (96,6  ±  3,26    dan  101,6  ±  17,11)  mg/dL menjadi (86,6 ± 3,93 dan 70,6 ± 2,97) mg/dL (gambar  2).  Sementara  itu,  perlakuan metformin  pada  tikus  DM  tipe-2  mampu menurunkan  kadar  GDP  dari  (104,8  ±2,67) mg/dL menjadi (82,2 ±4,61) mg/dL (p<0,05). Efek  antidiabetes  FHDL  (62,5  dan  125) mg/KgBB/hari dan metformin 150
mg/KgBB/hari selama 14 hari pada tikus DM tipe-2  yang  mengalami  resistensi  insulin berturut-turut  adalah  sebesar  9,33%,  25,  87 %  dan  21,50  %  (Tabel  I).  Dalam  penelitian ini, FHDL dosis rendah (62,5
mg/KgBB/hari)  belum  mampu  menurunkan kadar GDP tikus DM tipe-2 yang mengalami
resistensi  insulin  (p>0,05).  Oleh  karena  itu, penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  FHDL 125  dan  250  mg/KgBB/hari  dan  metformin 150  mg/KgBB/hari  selama  14  hari  memiliki efek antidiabetes pada tikus DM tipe-2 yang mengalami resistensi insulin.
Gambar 2. Perbandingan kadar GDP
(mg/dL)  tikus  DM  tipe-2  yang  mengalami resistensi insulin  sebelum dan sesudah  CMC- Na,  FHDL  dan  metformin  s  selama  14  hari. Kadar  GDP  merupakan  nilai  rata-rata  ±SEM (n=5). *Hasil uji  t berpasangan  menunjukkan adanya  perbedaan  yang  bermakna  dengan kadar GDP sebelum perlakuan (p<0,05).

## Keterangan
K(DM)  :  kelompok kontrol diabetes (CMC-Na 0,5%12,5 mL/KgBB/hari).
K(+) :  kelompok kontrol positif
(metformin150 mg/KgBB/hari).
Dosis 1  :  kelompok FHDL 62,5mg/KgBB/hari. Dosis 2  :  kelompok FHDL 125 mg/KgBB/hari. Dosis 3  :  kelompok FHDL 250mg/KgBB/hari.
Tabel I. Persentase  efek  antidiabetes  FHDL  dan Metformin Perlakuan
Rata-tata Kadar GDP ±SEM (mg/dL)
% Efek Antidiabetes Sebelum perlakuan Sesudah perlakuan sediaan uji 14 hari CMC-Na 108,6 ±7,93  99,8 ±10,48 - Metformin 150 mg/KgBB 104.8 ±2,67  82,2  ± 4,61*  21,50 % FHDL 62,5 mg/KgBB 99.6 ±2.38  97,4 ±3,14 - FHDL 62,5 mg/KgBB 95,.6 ±3,26  86,6 ± 3,93* 9,33 % FHDL 62,5 mg/KgBB 101,6 ±17,11  70,6 ±2,98* 25,87 %
Resistensi  insulin  adalah  suatu  kondisi dimana terjadi penurunan sensitivitas jaringan terhadap kerja insulin (Wang, et.al ., 2013).  Secara  klinik,  resistensi  insulin didefinisikan sebagai ketidakmampuan insulin  (endogen  dan  eksogen)  untuk menurunkan kadar glukosa darah pada pasien DM  tipe-2.  Pada  beberapa  pasien  yang mengalami  resistensi  insulin,  insulin  yang disekresikan  dari  sel  β-pankreas  terlalu sedikit  sebagai  akibat  rangsangan  dari tingginya kadar glukosa darah pasien setelah makan.  Hal  ini  akan  mengakibatkan munculnya  gejala  diabetes  yang  nampak secara  jelas.  Sebaliknya,  pada  beberapa pasien lainnya masih mengalami hiperinsulinemia,  seiring  dengan  terjadinya hiperglikemia  pada  uji  toleransi  glukosa (Garvey  dan  Hermayer,  1998).  Resistensi insulin  pada  penderita  DM  tipe-2  seringkali didahului  oleh  terjadinya  hiperinsulinemia dan  gangguan  pada  reseptor  insulin  pada jaringan  perifer.  Kondisi  resistensi  insulin yang  terlalu  lama  pada  akhirya  akan menyebabkan  terjadinya  penurunan  sekresi insulin  (defisiensi  insulin).  Dalam  beberapa tahun,  sekresi  insulin  akan  menurun  secara bertahap,  dan  keadaan  ini  merupakan  hasil dari  akumulasi  metabolit  sementara  glukosa pada  sel  islet  pankreas,  sehingga  dalam jangka  waktu  yang  lama  akan  memperkecil ukuran/massa  sel  β-pankreas  (Mahler  dan Adler,  1999).  Jika  tidak  tertangani  dengan baik,  maka  sel  β-pankreas  akan  mengalami kerusakan  secara  progresif.  Keadaan  ini sering  kali  akan  mengakibatkan  defisiensi insulin,  sehingga  pada  akhirnya,  penderita DM tipe-2 akan memerlukan insulin eksogen (Maeley, 2006).
Dalam  penelitian  ini,  resistensi  insulin pada  tikus  jantan  galur  Wistar  diinduksi dengan  pemberian  insulin  kerja  panjang (Lantus ® ) 1,80 IU/KgBB/hari selama 14 hari. Hasil  penelitian  menyimpulkan  bahwa  tikus yang  mendapatkan  perlakuan  insulin  selama 14  hari  mengalami  keadaan  hiperglikemik karena  memiliki  kadar  GDP  1,5  kali  lebih tinggi  daripada  tikus  normal  (kontrol). Keadaan  hiperglikemik  ini  diakibatkan karena  tikus  telah  mengalami  resistensi insulin yang merupakan salah satu penyebab DM  tipe-2.  Hasil  penelitian  sebelumnya
menyimpulkan  bahwa  tikus  jantan  galur Wistar  yang  mendapatkan  pelakuan  dengan insulin  eksogen  akan  mengalami  resistensi insulin.  Resistensi  insulin  ditandai  dengan lebih rendahnya efek hipoglikemik glibenklamid 10 mg/KgBB pada tikus jantan galur  Wistar  yang  mendapatkan  pra- perlakuan insulin eksogen 1,80
IU/KgBB/hari  selama  14  hari  dibandingkan tikus  kontrol  non-diabetes  (p<0,05).  Efek hipoglikemik  glibenklamid  10  mg/KgBB lebih  rendah  (18,31%)  dibandingkan  dengan tikus kontrol (62,20%) (Anas, et.al ., 2012).
Rendahnya rata-rata % efek hipoglikemk glibenklamid  tersebut  tidak  disebabkan karena  berkurangnya  kadar  insulin  dalam tubuh  tikus  jantan  galur  Wistar,  melainkan lebih  disebabkan  karena terjadinya resistensi insulin  pada  jaringan  perifer,  sehingga  tikus mengalami  hiperglikemia.  Pada  tikus  yang mendapatkan  pra-perlakuan  insulin  selama 14  hari  tersebut,  kadar  insulin  diperkirakan sangat tinggi karena adanya stimulasi sekresi insulin  dari  sel  β-pankreas  yang  disebabkan oleh  pemberian  glibenklamid  10  mg/KgBB (Waspadji, 2007).  Akan tetapi,  kadar insulin yang tinggi tersebut tidak mampu memerentarai  perpindahan  glukosa  darah  ke dalam sel sehingga kadar glukosa darah tikus masih tetap tinggi. Dalam  keadaan resistensi insulin,  kadar  insulin  tikus  cukup  tinggi  di dalam  darah,  sedangkan  reseptor  insulin banyak  yang  mengalami  gangguan  atau mengalami  resistensi  terhadap  aksi  insulin. Sebelumnya,  hasil  pengujian  secara  invitro menyimpulkan  bahwa  pemberian  insulin dapat menginduksi terjadinya down- regulation reseptor  insulin  pada  sel  lemak pasien  DM  tipe-2  dengan  obesitas,  sel fibroblast  3T3  mencit,  hepatosit  tikus  dan hepatosit ayam (Knutson et al ., 1982).
Lenglengan merupakan tanaman liar yang dapat  tumbuh  dimana  saja,  terutama  di  tepi sawah  dan  tepi  jalan  yang  kering,  tanah berbatu  dan  berpasir.    Selain  sebagai  herbal dalam  pengobatan  diabetes,  masyarakat menggunakan  tanaman  ini  sebagai  obat pendingin,  obat  sakit  kepala,  obat  kejang pada  anak,  batuk  rejan,  obat  cacing  atau sebagai  tapal  pada  perut  dan  untuk melunakkan  kapalan.  Di  India,  herba  yang tumbuh  liar  ini  telah  digunakan  masyarakat
untuk  mengobati  batuk,  demam,  kehilangan nafsu  makan,  penyakit  kulit,  sakit  kepala, luka  karena  gigitan  ular  dan  sengatan kalajengking. Rebusan  daun lenglengan juga telah  digunakan  sebagai  penenang  pada gangguan  syaraf  dan  ekspektoran  (Makhija, et.al ., 2011).
Berbagai  penelitian  in  vivo  telah membuktikan bahwa ekstrak herba lenglengan memiliki beberapa efek
farmakologi,  diantaranya  adalah  sebagai hepatoprotektif (Chandrashekar, et.al ., 2007), penyembuh  luka  (Saha, et.al .,  1997 a ),
antiinflamasi (Chandrashekar dan
Satyanadayana,  2013),  antipiretik,  antitusif (Saha, et.al ., 1997 b ), antidiare serta memiliki efek psikofarmaklogis sebagai penenang dan relaksan  otot  (Makhija, et.al .,  2011), antiulcer  (Gupta, et.al .,  2010)  serta anthelmintik (Gupta, et.al ., 2012).
Kandungan senyawa aktif yang telah berhasil diidentifikasi  dari  berbagai  ekstrak  herba lenglengan  diantaranya  adalah  aecetin, chryosoeriol, limfoside, linifoliol, chryosoeriol-6’-(OAc)-4’-β-glukosida, lupeol dan tarakseron (Makhija, et.al ., 2011).
Beberapa penelitian terdahulu melaporkan bahwa  lenglengan  dapat  digunakan  sebagai herbal  hipoglikemik.  Ekstrak  etanol  daun lenglengan  dosis  400  mg/KgBB  secara signifikan  menurunkan  kadar  glukosa  darah sebesar  39,5%  pada  tikus  diabetes  yang diinduksi dengan streptozotosin (Saha, et.al ., 1997 c ).    Selain  itu,  ekstrak  etanol  dan lenglengan  dosis  252  mg/KgBB  dilaporkan memiliki  efek  hipoglikemik  sebesar  45,89% pada tikus jantan galur Wistar yang dibebani glukosa  (Bhoja,  2009).    Ekstrak  kloroform dari  bunga  lenglengan  dosis  (150  –  250 mg/KgBB) juga dilaporkan dapat menurunkan kadar glukosa darah dan HbA1c tikus  diabetes  yang  diinduksi  aloksan (Chandrashekar dan Prasanna, 2009).
Penelitian  ini  telah  berhasil  menetapkan efek  antidiabetes  fraksi  n-Heksan  ekstrak etanol  daun  lenglengan  (FHDL)  dengan menggunakan model tikus DM tipe-2 karena resistensi  insulin.  FHDL  (125  dan  250) mg/KgBB/hari  selama  14  memiliki  efek antidiabetes  pada  tikus  DM  tipe-2  yang mengalami  resistensi  insulin  dengan  %  efek
antidiabetes  berturut-turut  sebesar  9,33  % dan 25,87 %. Walaupun demikian, penelitian ini  belum  berhasil  menetapkan  potensi FHDL sebagai antidiabetes.

## KESIMPULAN
Perlakuan  Fraksi  n-Heksan  (FHDL) (62,5  –  250)  mg/KgBB/hari  dan  Fraksi Kloroform  Daun  Lenglengan  (FKDL)  250 mg/KgBB/hari  selama  14  hari  terbukti memiliki  efek  antidiabetes  tipe  2  pada  tikus diabetes  yang  mengalami  resistensi  insulin dengan  %  efek  antidiabetes  tipe-2  berturut- turut sebesar 9,33 % dan 25,87 %. Walaupun demikian,  penelitian  ini  belum  berhasil menetapkan potensi FHDL sebagai antidiabetes.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kami  sampaikan kepada DP2M Dikti Kementerian Pendidikan dan Kebudayaan Republik Indonesia melalui Hibah  Penelitian  Desentralisasi Block  Grant Tahun 2013

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul-Ghani,  M.  and  DeFronzo,  R.  2010, Pathogenesis  of  Insulin  Resistance  in Skeletal  Muscle. J  Biomed  and  Biotech , 2010 : 1-19.
Akinchi,  F.,  Yildrim,  A.,  Gozu,  H.,  Sargin H.,  Orbay,  E.  and  Sargin  M.,  2008, Assessment  of  Health-Related  quality  of Life  (HRQoL)  of  Patient  with  Type  2 Diabetes  in  Turkey, Diabetes  Res  Clin Pract, 79 : 117-23
Anas, Y., Rositasari, R.,  Fitriana, MR., dan
Suharjono,  2012,  Pengembangan  Model Hewan Percobaan Tikus Diabetes
Mellitus  Tipe-2  karena  Resistensi  Insulin yang  diinduksi  dengan Human  Insulin Jangka Panjang, JIFFK , Vol. 9 No. 1 : 16- 21
Bhoja,  Y.L.,  2009,  Efek  Hipoglikemik Ekstrak  Etanolik  Daun  Lenglengan ( Leucas  lavandulaefolia JE.  Smith) terhadap  Tikus  Jantan  Galur  Wistar  yang
diberi Glukosa Berlebih, Skripsi , Fakultas Farmasi,  Universitas  Wahid  Hasyim Semarang.
Chandrashekar,  KS.,  Prasanna,  KS.,  and Joshi,  AB.,  2007,  Hepatoprotective
Activity of the Leucas lavandulaefolia on D(+)galactosamine-induced Hepatic Injury  in  Rats, Fitoterapia , 78 (6)  :  440- 442
Chandrashekar,  K.S  and  Prasanna,  K.S.,
2009,  Hypoglycemic  Effect  of Leucas lavandulaefolia Willd in Alloxan-induced Diabetic Rats, J Young Pharmacists , 1 :326-9
Chandrashekar,  K.S.  and  Satyanadayana  D., 2013,  Evaluation  of  Antiinflammatory Activity of Petroleum Ether Extract from Leucaslavandulaefolia Rees  in  Albino Rats, AJCPT , 1 (7) : 562-566
Choi,  K.  and  Kim,  Y.,  2010,  Molecular Mechanism of Insulin Resistance  in Obesity and Type-2
Diabetes. Korean  J  Intern  Med , 25 (2): 119-129.
Editorial.  2008,  The  Global  Challenge  of Diabetes. Lancet, 371 : 1723
Garvey,  W.T.  and  Hermayer,  K.L.,  1998, Clinical  Implications  of  the  Insulin Resistance  Syndrome, Clin  Cornerstone ,
1 (3) : 13-28
Gupta,  J.K.,  Agrawal,  K.K.,  Verma,  A.  and Singh,  K.,  2012,  Investigation  of  In-vitro Anthelmintic Activity of L.
lavandulifolia , L.  cephalotes and L. aspera , J. of Pharmacy Res. 5(1) : 212
Gupta,  J.K.,  Upmanyu,  K.,  Patnaik  A.K., Papiya,  M.M.,  2010,  Evaluation  of
Antiulcer Activity of Leucas lavandulifolia on  Mucosal  Lesion  in  Rat. Asian  Journal  of  Pharmaceutical  and Clinical Research , 3 (2) : 110-120.
IDF,  2011,  Global  Burden  of  Diabetes  : Diabetic  Atlas,  fifth  edition,  Brussels. ( http://www.idf.org/diabetesatlas .  diakses pada tanggal 18 November 2013).
Knutson,  V.P.,  Ronnett,  G.V.  and  Lane, M,D.,  1982.  Control  of  Insulin  Receptor Level  in  3T3  Cells:  Effect  of  Insulin-
induced Down-Regulation and Dexamethasone-induced Up-regulation on Rate of Receptor Inactivation.
Proceedings  of  the  National  Academy  of Sciences of the United States of America.
79 (9): 2822-2826.
Mahler,  R.  and  Adler,  M.,  1999.  Type-2 Diabetes  Mellitus:  Update  on  Diagnosis, Pathophysiology,  and  Treatment. J  Clin Endocrinol Metab . 84 (4): 1165-71. Makhija, L.K., Chandrashekar, K.S., Richard,  L.  and  Jaykumar,  G.,  2011, Phitochemical and Pharmacological Profile  of Leucas  lavandulaefolia :  a Riview, Res. J. Med. Plant . 5 (5) : 500-507
Matthews,  D.R.  and  Matthews,  P.C.  Type-2 Diabetes  as  an  ‘Infectious’  Disease:  is This the Black Death of the 21st Century?
Diabet Med . 2011( 28) : 2–9 Mealey, B.L., 2006, Diabetes Pathophysiology , ( http://www.healt.am/DB/DiabetesPathop hysiology.asp  , diakses  pada  18 September 2013).
Mudaliar,  S.  and  Edelman,  S.V.,  2001, Insulin  Therapy  in  Type-2  Diabetes. Endocrinol Metab Clin North Am . 30 (4) : 935-982
Nicholson,  G.  and  Hall,  G.M.,  2011, Diabetes Mellitus: New Drugs for a New Epidemic. Br. J. Anaesth . 107 (1): 65–73
Poretsky,  L.,  2009, Principles  of  Diabetes Melitus ,  Second  Edition,  Springer,  New York
Rett, K., 1999, The Relation between Insulin Resistance and Cardiovascular
Complications  of  the  Insulin  Resistance Syndrome. Diabetes  Obes  Metab . 1 (1)  : 8-16
Roglic  G.  and  Unwin  N.,  2009,  Mortality Attributable to Diabetes: Estimates for the Year  2010. Diabetes  Res  Clin  Pract . 2009( 87) : 15–9
Saha, K., Mukherjee, PK., Das, J. and Saha, BP.,  1997 a ,  Wound  Healing  Activity  of
Leucas
lavandulaefolia Rees.
J. Ethnopharmacol . 56 (2) : 139-144
Saha,  K.,  Mukherjee,  PK.,  Murugesan,  T., Saha, BP. And Pal, M., 1997 b , Studies on In  Vivo  Antitussive  Activity  of Leucas lavandulaefolia Using  a  Cough  Model Induced  by  Sulfur  Dioxide  Gas  in  Mice.
J. Ethnopharmacol . 57 (2) : 89-92
Saha,  K.,  Mukherjee,  P.K.,  Das,  J.,  Mandal, S.C.,  Pal,  M.  and  Saha,  M.P.,  1997 c , Hipoglychemic    Activity  of Leucas lavandulaefolia Ress.  in  Streptozotocin- induced Diabetic Rats, Phytother. Res. 11 : 463-466
Thevenod,  F.,  2008,  Pathophysiology  of Diabetes  Melitus  Type-2:  Roles  of Obesity,  Insulin  Resistance  and  β  –cell
Dysfunction. Diabetes 19 (1): 1-18.
Wang,  X.,  Yu,  C.,  Zhang,  B.  and  Wangy.,
2013, The Injurious Effects of Hyperinsulinism  on  Blood  Vessels. Cell
Biochem  Biophys , 19 .  [Epub  ahead  of print]
Waspadji,  S., 2007,
Diabetes  Mellitus: Mekanisme  Dasar  dan  Pengelolaannya
Yang Rasional , Bab IV, Dalam Soegondo, S.,  Soewondo,  P.,  dan  Subekti,  I.,  2007, Penatalaksanaan Diabetes Mellitus Terpadu,  Cetakan  ke-6,  29-42,  Pusat Diabetes dan Lipid RSUP Nasional Cipto Mangunkusumo-FKUI, Jakarta.