Accredited by Ministry of Education, Culture,                                       DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v23i2.47422 Research and Technology No: 105/E/KPT/2022          Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis

## Potensi Analgesik Ekstrak Etanol Buah dan Biji Trembesi (Samanea saman (Jacq) Merr.) dan Pengamatan Makroskopis Lambung Tikus
Rosa Juwita Hesturini 1*) , Rachma Nurhayati 2) , Nadia Pramasari 3)
1,3) Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Jl. K.H. Wachid Hasyim No.65, Kediri, Indonesia
2) Program Studi Pendidikan Profesi Apoteker, Fakultas Farmasi Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Jl. K.H. Wachid Hasyim No.65, Kediri, Indonesia
*Corresponding author: mbakrosa@gmail.com

## ABSTRAK
Trembesi ( Samanea saman (Jacq.) Merr.) adalah salah satu tanaman dari keluarga Fabaceae yang dikenal oleh masyarakat dengan sebutan Ki Hujan. Buah dan biji trembesi memiliki beberapa  senyawa  kimia  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  saponin, tanin  yang  memiliki aktivitas sebagai  analgesik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  dosis  ekstrak  buah  dan  biji trembesi yang memiliki aktivitas analgesik namun tidak menimbulkan efek samping berupa iritasi pada lambung tikus ( Rattus norvegicus ) secara makroskopis. Sebanyak 40 Ekor tikus dalam  8  kelompok  perlakuan  yaitu  kelompok  kontrol  negatif  CMC-Na  0,5%,  kelompok kontrol positif asetosal 500 mg, kelompok 3, 4, 5 ekstrak buah trembesi dosis 100, 200, 300 mg/kgBB, kelompok 6, 7, 8 ekstrak biji trembesi dosis 100, 200, 300 mg/kgBB. Asam asetat 0,7%  diinduksikan  ke  tikus  secara  intraperitonial  sebagai  induktor  nyeri.  Uji  aktivitas analgesik metode writhing test kemudian pemberian ekstrak dilanjutkan selama 7 hari untuk mengetahui  keamanan  lambung  tikus.  Data  dianalisa  menggunakan  non-parametrik Kruskal-Wallis dan Man-Whitney . Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol buah dan  biji  trembesi  optimal  ditunjukkan  pada  dosis  200  mg/kgBB  dengan  daya  analgetika berturut-turut sebesar 75,74% dan 76,79% setara dengan asetosal yaitu sebesar 81,74% (Sig. > 0,05.) dengan indeks tukak sebesar 2 atau dinyatakan tidak  menunjukkan adanya iritasi pada  lambung  dilihat  dari  hasil  pengamatan  makroskopis  organ  lambung.  Kesimpulan penelitian  ini  adalah  ekstrak  buah  dan  biji  etanol  trembesi  dosis  200  mg/kgBB  memiliki aktivitas analgetika terbaik dan aman terhadap lambung.
Kata kunci: Analgesik; iritasi lambung; Samanea saman; trembesi
Potential Analgesic of Ethanolic Extract Fruit and Seeds of Trembesi (Samanea saman (Jacq) Merr.) and Macroscopic Observations on the
Gastric of Rats

## ABSTRACT
Trembesi ( Samanea saman (Jacq.) Merr.) is a plant from the Fabaceae family known to the public as Ki Hujan. Trembesi fruit and seeds have several chemical compounds there are alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins which have analgesic activity. This study aims to determine the dose of an extract of the fruit and seeds of trembesi which has analgesic activity but does not cause side effects in the form of irritation to the stomach of rats ( Rattus norvegicus )  macroscopically.  A  total  of  40  rats  were  in  8  treatment  groups,  namely  a negative  control  group  of  0.5%  CMC-Na,  a  positive  control  group  of  500 mg  acetosal,  a
group of 3, 4, 5 extracts of trembesi fruit at doses of 100, 200, 300 mg/kg BW, group 6, 7, 8 extracts of trembesi seeds at doses of 100, 200, 300 mg/kg BW. 0.7% acetic acid was induced in rats intraperitoneally as a pain inductor. The analgesic activity test was using the writhing test method and then the extract was continued for 7 days to determine the safety of the rat gastric. Data were analyzed using non-parametric Kruskal-Wallis and Man-Whitney. The results showed that the optimal ethanol extract of trembesi fruit and seeds was shown at a dose  of  200  mg/kg  BW  with  an  analgesic  power  of  75,74%  and  76,79%  equivalent  to acetosal which was 81.74% (Sig. > 0.05) with an ulcer index of 2 or otherwise not showed irritation of the stomach seen from the results of macroscopic observations of gastric. This study concludes that the ethanol extract of trembesi fruit and seeds at a dose of 200 mg/kg has the best analgesic activity and is safe for the stomach.
Keywords: Analgesic; Samanea saman; trembesi; ulcer index
(Article History:  Received 25-03-2023; Accepted 18-08-2023; Published 21-08-2023)

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara dengan diversifikasi tanaman obat yang juga merupakan bahan  utama  makanan  dan  obat-obatan.  Berkembangnya  penggunaan  obat  tradisional sebagai  pengganti  maupun  pendamping  obat  sintetik  sangat  diperlukan  guna mengembangkan  obat-obat  herbal  yang  memiliki  efek  samping  relatif  lebih  kecil dibandingkan dengan obat sintetik. Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai obat tradisional adalah trembesi ( Samanea saman (Jacq.) Merr.).
Pengujian fitokimia pada tanaman saman menunjukkan adanya kandungan alkaloid, pithecolobin,  samarin,  steroidal,  alkaloid-C8H17ON,  C17H36ON3  pithecolobine  dan saponin (Tripathi & Singh, 2020). Pada fraksi n -Heksana daun trembesi diketahui adanya kandungan  flavonoid  yang  diduga  mampu  menghambat  enzim  COX  dalam  membentuk mediator nyeri prostaglandin (Hesturini et al ., 2022).
Nyeri  adalah  rasa  yang  tidak  menyenangkan  yang  dapat  diakibatkan  adanya perlukaan dalam tubuh. Nyeri dapat juga dianggap sebagai racun dalam tubuh, karena nyeri terjadi akibat adanya kerusakan jaringan (Suwondo et al ., 2017). Obat yang digunakan untuk meredakan  nyeri  adalah  aspirin  dari  golongan Nonsteroidal  Anti-Inflammatory  Drugs (NSAID)  (Musa,  2018).  Penggunaan  aspirin  dalam  dosis  yang  terlalu  tinggi  dapat menyebabkan  beberapa  indikasi  dan  dampak  negatif  seperti  iritasi  lambung,  perdarahan, perforasi atau kebocoran lambung (Kuntari et al. , 2017).
Penggunaan  bahan  tanaman  sebagai  obat  tradisional  telah  digunakan  dalam pengobatan  dan  semakin  berkembang  sampai  sekarang.  Adanya  efek  komplementer  atau sinergisme  dalam  ramuan  tradisional  sehingga  menunjang  aktivitas  yang  dimunculkan, minimnya  efek  samping  dan  penggunaan  yang  relatif  dianggap  lebih  aman  menjadi keunggulan pemanfaatan bahan alam. Namun efek farmakologi yang rendah karena senyawa aktif  yang  masih  komplek  hingga  bahan  baku  yang  belum  terstandar  menjadi  salah  satu tantangan  dalam  pengembangan  obat  alam.  Adanya  kandungan  alkaloid,  pithecolobin, samarin, steroidal, alkaloid- C8H17ON, C17H36ON3 pithecolobine dan saponin (Tripathi & Singh, 2020), tanin dan kandungan flavonoid (Kokila et al ., 2017)dalam tanaman trembesi berfungsi sebagai analgesik dengan mekanisme kerja menghambat enzim siklooksigenase
yang mengurangi produksi prostaglandin oleh asam arakidonat sehingga dapat mengurangi terjadinya  nyeri.  Hal  ini  menunjukkan  adanya  potensi  yang  kuat  pada  tanaman  trembesi sebagai analgetik. Tanaman trembesi mudah dan banyak ditemukan di sepanjang jalan dan sering  digunakan  sebagai  tanaman  peneduh.  Biji  trembesi  dikonsumsi  sebagai  makanan ringan  di  pulau  Jawa  terutama  Jawa  Tengah  (Vinodhini  &  Devi  Rajeswari,  2018). Masyarakat  mengonsumsi  biji  trembesi  dengan  cara  disangrai  terlebih  dahulu,  namun selebihnya  tanaman  ini  tidak  dimanfaatkan  lebih  optimal.dan  hingga  saat  ini  belum  ada penelitian mengenai aktivitas analgesik dari buah dan biji trembesi, sehingga peneliti merasa tertarik untuk melakukan penelitian mengenai aktivitas ekstrak etanol biji trembesi terhadap tikus  putih  dan  dilanjutkan  dengan  pengamatan  makroskopis  lambung.  Tujuan  dari penelitian ini  yaitu untuk mengetahui  dosis ekstrak buah dan biji trembesi  yang memiliki aktivitas  analgesik  terbaik  namun  tidak  menimbulkan  efek  samping  berupa  iritasi  pada lambung tikus ( Rattus norvegicus ) secara makroskopis.

## METODE PENELITIAN
Buah dan biji trembesi yang dipilih adalah buah atau polong dewasa yang berbentuk panjang  agak  melengkung  dengan  panjang  10-20  cm  dan  tebal  sekitar  0,6  cm,  berwarna coklat  kehitam-hitaman  ketika  masak  berisi  daging  buah  kecokelatan  Buah  trembesi bentuknya panjang lurus agak melengkung dengan panjang sekitar 10 – 20 cm, lebar 1,5 – 2 cm dan tebal sekitar 0,6 cm (Badrunasar & Nurahmah, 2012). Buahnya berwarna cokelat kehitam-hitaman  ketika  masak.  Biji  dari  trembesi  tertanam  di  dalam  daging  buah  yang berwarna coklat kemerahan sangat lengket dan manis yang berisi sekitar 5 – 25 biji dengan panjang 1,3 cm (Vinodhini & Devi Rajeswari, 2018).
Pembuatan  ekstrak  buah  dan  biji  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  70%  dengan  perbandingan  1:10.  Simplisia  buah  trembesi  digunakan  sebanyak 250gram direndam dalam 2500 mL etanol 70%. Simplisia biji trembesi digunakan sebanyak 500gram direndam dalam 5000 mL etanol 70%. Maserasi dilakukan selama 3x24 jam pada suhu  kamar  dan  tutup  rapat  dengan  sesekali  digojok.  Maserat  disaring  kemudian  filtrat dipekatkan dengan waterbath sampai diperoleh ekstrak kental.
Uji skrining alkaloid dilakukan dengan memasukkan 1 mL sampel ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 5 tetes amonia, kemudian dikocok dan disaring. Filtrat ditambahkan 2 mL asam sulfat 2 N dan dikocok. Larutan dibagi menjadi 3 tabung. Tabung I ditambahkan 1  tetes  pereaksi Wagner ,  Tabung  II  ditambahkan  1  tetes  pereaksi Mayer ,  Tabung  III ditambahkan  1  tetes  pereaksi Dragendorff .  Hasil  positif Wagner ditandai endapan coklat, Mayer (endapan putih), Dragendorff (endapan jingga).
Uji skrining flavonoid dilakukan dengan memasukkan 1 mL sampel ke dalam tabung reaksi ditambahkan asam klorida (HCl) pekat dan serbuk magnesium. Hasil positif ditandai dengan terbentuknya warna merah, oranye, atau hijau. Pada pengujian skrining tannin 1 mL sampel ditambahkan 2 mL aquadest dan dididihkan kemudian filtrat ditambahkan dengan larutan  FeCl3  1%.  Hasil  positif  ditandai  dengan  terbentuknya  warna  hijau  kehitaman. Pengujian  kandungan  senyawa  saponin  dilakukan  dengan  memasukkan  1  mL  sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL aquadest, kemudian dipanaskan selama 2-3 menit setelah dingin dikocok dengan kuat. Adanya busa yang stabil selama 30 detik  menunjukkan  adanya  kandungan  saponin.  Pada  pengujian  steroid  1  mL  sampel
dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ditambahkan pereaksi Lieberman-Burchard . Dikocok perlahan  dan  didiamkan.  Terbentuknya  warna  biru  atau  hijau  menandakan  adanya kandungan steroid (Surahmaida et al ., 2020).
Uji  aktivitas  analgetika writhing  test dengan  beberapa  keuntungan  seperti  tidak memerlukan  waktu  yang  lama,  mudah  dilakukan,  mudah  dalam  pengamatan,  dan  cukup sensitif.  Pengujian  ini  dilakukan  kepada  40  ekor  tikus  putih  jantan  wistar  yang  telah diadaptasikan selama 1 minggu, selanjutnya hewan uji dikelompokkan ke dalam 8 kelompok berbeda  secara  acak.  Induksi  rangsang  kimia  yang  digunakan  adalah  asam  asetat  0,7  % secara i.p (intraperitoneal) yang diberikan setelah 30 menit pemberian bahan uji. Munculnya writhing (geliat) ditunjukkan berupa abdomen menyentuh dasar tempat berpijak dan kedua kaki pasang kaki tikus ditarik ke belakang, selanjutnya dihitung jumlah geliat yang terjadi setiap 5 menit selama 60 menit (Lestiono et al ., 2020). Pengelompokkan hewan uji disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Pengelompokkan hewan uji dan perlakuan
Jumlah hewan uji Perlakuan Penginduksi Pengamatan parameter Masing- masing 5 ekor tikus Kontrol (-) CMC Na 0,5% asam asetat 0,7 % secara intraoperitoneal (i.p)
Jumlah Geliat pada tikus Kontrol (+) Asetosal 500 mg Ekstrak Buah Trembesi 100 mg/kgBB Ekstrak Buah Trembesi 200 mg/kgBB
Ekstrak Buah Trembesi 300 mg/kgBB Ekstrak Biji Trembesi 100 mg/KgBB Ekstrak Biji Trembesi 200 mg/KgBB Ekstrak Biji Trembesi 300 mg/KgBB
Daya analgesik dapat dievaluasi menggunakan persen daya analgesik, yaitu :
% Daya Analgesik = 100 – [( 𝑷 𝑲 )] x 100]
Keterangan :
P = Jumlah kumulatif geliat hewan uji setelah pemberian obat yang telah diuji. K = Jumlah rata-rata geliat hewan uji kelompok kontrol.
Pengamatan makroskopis lambung dilakukan setelah hewan uji diberikan perlakuan selama  7  hari,  kemudian  pada  hari  ke-8  hewan  uji  dianestesi  menggunakan  kloroform. Dilakukan pembedahan pada hewan uji untuk diambil organ lambungnya. Organ lambung kemudian  dicuci  menggunakan  NaCl  0,9%,  direntangkan  diatas  papan  datar,  dihitung jumlah tukak dan keparahan tukak sesuai skoring keparahan tukak (Pertiwi & Saputra, 2018)
Tabel 2. Skoring Keparahan Tukak (Gusdinar et al ., 2009)
Setelah dihitung jumlah tukak dan keparahan tukak, kemudian hitung indeks tukak dengan rumus berikut:
Jumlah Tukak Keparahan Tukak Skor Lambung normal Lambung normal 1 Bintik berdarah Bintik berdarah 2 Jumlah tukak 1-3 buah Diameter tukak 0,5-1,5 mm 3 Jumlah tukak 4-6 buah Diameter tukak 1,6-4,0 mm 4 Jumlah tukak 7-9 buah Diameter tukak >4,0 mm 5 Jumlah tukak >9 buah Perforasi 6
Indeks tukak = J + K + %𝑰 𝟏𝟎 Keterangan:
J  : Rata-rata skor jumlah tukak tiap kelompok perlakuan. K  : Rata-rata skor keparahan tukak tiap kelompok perlakuan. %I : Persentase hewan yang terkena tukak dalam tiap kelompok perlakuan
Data  jumlah  geliat  dan  kondisi  lambung  dari  masing-masing kelompok  dianalisa secara  statistik  menggunakan  program  SPSS  versi 25. Tahap awal analisis data berupa pengujian normalitas dan homogenitas data kemudian dilanjutkan uji Kruskal-Wallis dan uji Man-Whitney .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Simplisia buah dan biji trembesi diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan tidak  melibatkan  panas  sehingga  tidak  merusak  senyawa  yang  bersifat  termolabil,  seperti flavonoid dan saponin. Penggunaan etanol sebagai cairan penyari dipertimbangkan karena etanol lebih selektif, tidak beracun, netral dan absorbsinya baik. Etanol memerlukan panas yang  lebih  sedikit  untuk  proses  pemekatan,  serta  zat  pengganggu  yang  terlarut  terbatas (Febriyenti et al ., 2018). Etanol dengan konsentrasi 70% bersifat polar sehingga cocok untuk menyari senyawa organik polar seperti flavonoid (Lindawati & Ma’ruf, 2020).
Ekstrak  buah  dan  biji  trembesi  yang  dihasilkan  setelah  pemekatan  masing-masing sebanyak 50,75 gram dan 57,67 gram dengan persentase rendemen sebanyak 20,30% dan 17,76%.  Rendemen  ekstrak  berhubungan  dengan  senyawa  aktif  dari  suatu  sampel,  jika jumlah  rendemen  semakin  banyak  maka  jumlah  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam sampel  juga  semakin  banyak  (Hasnaeni et  al .,  2019).  Ekstrak  kental  biji  trembesi  yang didapatkan berwarna hijau coklat pekat, berbau khas dan rasa kelat manis, sedangkan ekstrak kental  buah  trembesi  tampak  berwarna coklat  pekat  namun lebih  kehitaman,  berbau  khas dan kelat serta tidak mengalir ketika cawan digerakkan. Hasil pengamatan ekstrak disajikan pada Gambar 1.
(a) (b)
Gambar 1. (a) Ekstrak biji trembesi dan (b) Ekstrak buah trembesi Uji bebas etanol dilakukan bertujuan untuk memastikan ekstrak benar-benar terbebas dari  etanol  sehingga  etanol  tidak  mempengaruhi  hasil  uji.  Jika  ekstrak  berbau  etil  asetat (ester) maka ekstrak masih belum terbebas dari etanol. Pada hasil uji bebas etanol ekstrak biji trembesi yang dihasilkan didapati tidak terciumnya aroma ester yang khas. Uji Skrining Fitokimia  adalah  uji  pendahuluan  yang  bertujuan  untuk  memberikan  gambaran  golongan senyawa yang terkandung dalam tanaman yang digunakan dengan melihat reaksi pengujian warna  setelah  diberikan  pereaksi  warna. Hasil  skrining  fitokimia  alkaloid,  saponin,  tanin, steroid dan flavonoid disajikan pada Tabel 3.

## Tabel 3. Hasil uji skrining ekstrak buah dan biji trembesi
Kandungan Kimia Buah Trembesi Biji Trembesi Hasil Ket. Hasil Ket. Alkaloid Mayer Endapan putih + Endapan putih + Alkaloid Wagner Endapan coklat + Endapan coklat + Alkaloid Dragendorf Endapan jingga + Endapan jingga + Saponin Buih stabil + Buih stabil + Tanin Warna hijau + Hijau kehitaman + Flavonoid Warna merah tua + Oranye/Jingga + Steroid Tidak terjadi perubahan - Tidak terjadi perubahan -
Hasil  uji  alkaloid,  pereaksi  Mayer  memberikan  hasil  positif  endapan  putih  yang disebabkan oleh terjadinya kompleks kalium-alkaloid dan kalium tetraidomerkurat (II). Pada pereaksi  Wagner  hasil  positif  berupa  endapan  coklat  dikarenakan  terjadinya  kompleks kalium-alkaloid dan ion I3. Pada pereaksi Dragendorff hasil positif menghasilkan endapan jingga karena terjadinya kompleks kalium-alkaloid (KI) dengan ion tetraiodobismutat.
Hasil uji flavonoid memberikan hasil positif yaitu warna oranye dengan penambahan serbuk  Mg  dan  penambahan  HCl  pekat.  Penambahan  logam  Mg  dan  HCl  bertujuan mereduksi  inti  benzopiron  yang  terdapat  dalam  struktur  flavonoid  sehingga  membentuk garam flavilium berwarna oranye. Pada hasil pengamatan, terbentuk gelembung-gelembung yang merupakan gas H2 yang dihasilkan dari reaksi logam Mg dengan HCl.
Hasil  uji  saponin  memberikan  hasil  positif  dengan  terdapatnya  buih  yang  stabil selama 30 detik. Saponin pada saat dikocok membentuk buih karena adanya gugus hidrofil yang berikatan dengan air sedangkan hidrofob akan berikatan dengan udara. Pada struktur misel,  gugus  polar  menghadap  ke  luar  sedangkan  gugus  non-polar  menghadap  ke dalam. Keadaan inilah yang membentuk busa.
Hasil Uji tanin memberikan hasil positif dengan terbentuknya warna hijau kehitaman dengan pereaksi FeCl3 1 %. Warna hijau kehitaman yang dihasilkan merupakan senyawa kompleks Fe3+ tanin yang terbentuk dari reaksi antara tanin dari ekstrak dengan ion Fe3+ dari pereaksi FeCl3.
Hasil  uji  steroid  memberikan  hasil  negatif  dengan  tidak  terbentuknya  warna  biru kehijauan. Hal ini bisa disebabkan karena penggunaan pelarut yang bersifat polar sedangkan steroid bersifat cenderung non polar sehingga senyawa tidak dapat terekstrak sempurna.

## Uji analgesik
Ekstrak etanol buah dan biji trembesi dengan mengamati respon geliat karena adanya rangsangan kimia ( writhing test ) menggunakan tingkatan variasi dosis yang telah ditentukan. pada tikus setelah pemberian perlakuan, pengamatan jumlah geliat setiap 5 menit selama 60 menit. Hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Pengujian Analgetika (%)
Pada  uji  analgesik  didapatkan  data  %  daya  analgesik  pada  kontrol  positif  asetosal 500 mg sebesar 81,74 %, dan daya analgetika terbesar ditunjukkan oleh ekstrak etanol buah trembesi  dosis 300 mg/KgBB sebesar  80,68 % dan ekstrak etanol biji trembesi dosis 300 mg/KgBB sebesar 80,53 %. Hasil persentase daya analgetika disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2. Kurva (%) Daya Analgetika Ekstrak Buah dan Biji Trembesi
Hasil  uji  aktivitas  analgesik  menunjukkan  bahwa  jumlah  geliat  menurun  seiring dengan  peningkatan  dosis.  Semakin  tinggi  dosis  yang  diberikan,  maka  jumlah  geliat  juga semakin  berkurang.  Persen  daya  analgesik  pada  ekstrak  etanol  buah  dan  biji  trembesi menunjukkan bahwa semakin besar dosis ekstrak etanol buah trembesi yang diberikan maka aktivitas analgesiknya juga semakin baik (Arifin et al ., 2018). Daya analgesik pada ekstrak
81.74%
68.86% 75.74% 80.68% 63.47% 76.79% 80.53% 0.00% 20.00% 40.00% 60.00% 80.00% 100.00% % D ay a an alg e tik a Kelompok perlakuan % Daya Analgetika Asetosal Eks. Buah Dosis 100 Eks. Buah Dosis 200
Eks. Buah Dosis 300 Eks. Biji Dosis 100 Eks. Biji Dosis 200 Eks. Biji Dosis 300 Kelompok Perlakuan Total Kumulatif Geliat Rata-rata ± SD % Daya Analgesik Kontrol (-) CMC Na 0,5% 668 133,6 ± 44,19 0% Kontrol (+) Asetosal 500 mg 122 24,4 ± 4,03 81,74% Ekstrak Buah Trembesi 100 mg/kgBB 208 41,6 ± 13,126 68,86% Ekstrak Buah Trembesi 200 mg/kgBB 162 35,6 ± 4,979 75,74% Ekstrak Buah Trembesi 300 mg/kgBB 129 25,8 ± 5,805 80,68% Ekstrak Biji Trembesi 100 mg/KgBB 244 48,8 ± 10,10 63,47 % Ekstrak Biji Trembesi 200 mg/KgBB 155 31 ± 9,53 76,79 % Ekstrak Biji Trembesi 300 mg/KgBB 130 26 ± 4,35 80,53 %
etanol  buah  trembesi  nilainya  lebih  dari  50%  maka  dianggap  efektif  sebagai  analgesik (Keswara & Handayani, 2019).
Kemampuan  buah  dan  biji  trembesi  dalam  mengatasi  nyeri  dikarenakan  adanya kandungan  senyawa  saponin  dan  tanin  yang  dapat  menghambat  enzim  siklooksigenase COX-2 sehingga biosintesis prostaglandin dapat terhambat (Sentat et al ., 2018). Selain itu, terdapat  senyawa  lain  yaitu  flavonoid  dan  alkaloid  yang  dapat  menghambat  kerja  enzim siklooksigenase  (COX)  yang  berperan  menstimulasi  pelepasan  prostaglandin  dan  dapat menghambat  jalur  5-lipooksigenase  dan  jalur  COX-2  yang  memproduksi  mediator  nyeri (Hesturini et al ., 2017; Parmadi et al ., 2020). Diduga mekanisme kerja tanin dan triterpenoid sebagai analgesik yaitu merangsang biosintesis protein lipomodulin yang dapat menghambat kerja enzimatik fosfolipase, yaitu enzim yang bertanggung jawab terhadap pelepasan asam arakhidonat dan mengeblok jalur siklooksigenase dan lipooksigenase sehingga metabolitnya yaitu  prostaglandin,  leukotrien,  prostasiklin  dan  tromboksan  juga  tidak  dapat  terbentuk (Pertiwi et al ., 2020).
Hal yang sama ditunjukkan pada penelitian tanaman Tamarindus indica linn. yang menunjukkan  aktivitas  analgetika  dan  antiinflamasi  diduga  disebabkan  oleh  berbagai senyawa bioaktif di dalamnya termasuk alkaloid, flavonoid, tanin, fenol, saponin, dan steroid karena adanya kemampuan untuk menghambat sejumlah proses biologis termasuk ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2), sintase nitrat oksida yang dapat diinduksi (iNOS), biosintesis 5-lipoxygenase, dan tumor necrosis faktor-α (Komakech et al ., 2019).
Mekanisme  penghambatan  mediator-mediator  nyeri  oleh  senyawa-senyawa berkhasiat analgetika dapat menyebabkan proteksi pada lambung juga dihambat sehingga beberapa  indikasi  dan  dampak  negatif  seperti  iritasi  lambung,  perdarahan,  perforasi  atau kebocoran lambung dapat terjadi (Kuntari et al ., 2017). Untuk mengetahui adanya toksisitas pada lambung tersebut maka Dilakukan penelitian secara makroskopis pada lambung tikus putih dengan diberikan perlakuan selama 7 hari untuk melihat efek samping berupa iritasi yang ditimbulkan oleh ekstrak etanol buah dan biji trembesi apabila digunakan secara terus- menerus.
Setelah  pengamatan  pada  geliat  hewan  uji,  maka  dilanjutkan  dengan  uji  toksisitas dengan  pengamatan  pada  lambung.  Data  pengamatan  pada  lambung  tikus  putih  secara makroskopis disajikan pada Gambar 3.

## Tabel 5. Hasil pengamatan tukak lambung tikus
Kelompok Perlakuan Rata-rata lambung Indeks Tukak Jumlah Tukak Keparahan Tukak Kontrol (-) CMC Na 0,5% 1 1 2 Kontrol (+) Asetosal 500 mg 4 3 17 Ekstrak Buah Trembesi 100 mg/kgBB 1 1 2 Ekstrak Buah Trembesi 200 mg/kgBB 1 1 2 Ekstrak Buah Trembesi 300 mg/kgBB 1,8 1,4 7,2 Ekstrak Biji Trembesi 100 mg/KgBB 1 1 2 Ekstrak Biji Trembesi 200 mg/KgBB 1 1 2 Ekstrak Biji Trembesi 300 mg/KgBB 1,6 1,6 5,2
(a) (b)                (c) (d) (e) (f) (g) (h)
Gambar 3. Hasil pengamatan lambung tikus, (a) Kontrol negatif, (b) Asetosal, (c) Ekstrak buah trembesi  100mg/kgBB,  (d)  Ekstrak  buah  trembesi  200mg/kgBB,  (e)  Ekstrak  buah  trembesi 300mg/kgBB,  (f)  Ekstrak  biji  trembesi  100mg/kgBB,  (g)  Ekstrak  biji  trembesi  2 00mg/kgBB, (h) Ekstrak biji trembesi 300mg/kgBB ( ο ) berupa tukak
Dari hasil pengamatan pada lambung tikus putih dilanjutkan dengan menghitung rata- rata jumlah dan keparahan tukak, serta indeks tukak yang hasilnya dapat dilihat pada Tabel 5.
Dari hasil  perhitungan indeks tukak lambung menunjukkan bahwa pada kelompok kontrol  positif  Asetosal  500  mg  terjadi  kerusakan  lambung  paling  besar  ditandai  dengan indeks  tukak  sebesar  17.  Pada  ekstrak  buah  dan  biji  trembesi  dosis  300  mg/KgBB menimbulkan  iritasi  namun  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  positif dengan nilai indeks tukak masing-masing sebesar 7,2 dan 5,2. Iritasi tukak disebabkan oleh adanya penghambatan kerja enzim siklooksigenase sebagai akibat pemberian asetosal dan ekstrak  yang  kemudian  menyebabkan  pembentukan  prostaglandin  ikut  terhambat. Prostaglandin  mempunyai  peran  penting  dalam  memperbaiki  dan  mempertahankan integritas mukosa lambung. Jika prostaglandin dihambat, maka perlindungan pada mukosa lambung  akan  menurun  yang  akhirnya  berdampak  pada  kerusakan  lambung.  Adanya kandungan  senyawa  saponin  dan  tannin  diduga  berperan  dalam  proteksi  lambung  secara fisik.
Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  pada tanaman  familia  yang  sama  yaitu  Fabaceae pada  tanaman Tamarindus  indica linn  yang  menunjukkan  aktivitas  analgetika  dan antiinflamasi  yang  kuat  pada  studi  praklinis.  Diduga  hal  ini  disebabkan  oleh  berbagai senyawa  bioaktif  di  dalamnya  termasuk  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  fenol,  saponin,  dan steroid.  Efek  anti-inflamasi  dan  analgesik  ekstrak  dari  berbagai  bagian T.  indica karena kemampuannya  untuk  menghambat  sejumlah  proses  biologis  termasuk  ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2), sintase nitrat oksida yang dapat diinduksi (iNOS), biosintesis 5-lipoxygenase, dan tumor necrosis faktor-α (Komakech et al ., 2019). Penelitian mengenai
family  Fabaceae  lainnya  menunjukkan  adanya  pengurangan  sekeresi  asam  lambung    dan reduksi pada indeks peptic ulcer sehingga dapat dinyatakan dapat digunakan sebagai agen antiulcer pada hewan uji (Kalra et al ., 2011).
Analisa data dilakukan dengan program SPSS versi 25.0 untuk mengetahui ada atau tidaknya  perbedaan  jumlah  geliat,  jumlah  tukak  dan  keparahan  tukak  antar  kelompok perlakuan. Uji yang dilakukan yaitu uji normalitas dan homogenitas. Data  normal apabila nilai signifikan > 0,05 dan dikatakan tidak normal apabila < 0,05. Ekstrak etanol buah dan biji trembesi dosis 200 mg/KgBB merupakan dosis yang paling efektif sebagai analgesik, karena tidak memiliki perbedaan bermakna dengan kontrol positif asetosal, dimana nilai-p > 0,05.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol buah dan biji trembesi optimal ditunjukkan pada dosis 200 mg/kgBB dengan daya analgetika berturut-turut sebesar 75,74% dan 76.79% setara dengan asetosal yaitu sebesar 81,74% (Sig. > 0,05.)  dengan indeks tukak sebesar 2 atau dinyatakan aman karena  tidak  menunjukkan  adanya  iritasi  pada  lambung  dilihat  dari  hasil  pengamatan makroskopis  organ  lambung.  Ekstrak  buah  dan  biji  etanol  trembesi  dosis  200  mg/kgBB memiliki aktivitas analgetika terbaik dan aman terhadap lambung.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  ditujukan  kepada  :  Rektor  Institut  Ilmu  Kesehatan  Bhakti Wiyata,  Deputi  Penelitian  dan Social  Academic  Responsibility Institut  Ilmu  Kesehatan Bhakti Wiyata, Anggun Puji Astutik, Widya Trinanda Pangestika sebagai tim peneliti.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin,  H.,  Tesa,  I.,  Octy,  A.,  &  Dian,  A.J.  (2018).  Kajian  Efek  Analgetik  dan Toksisitas Subakut Dari Ekstrak Etanol Daun Kitolod ( Isotoma longiflora L. ) Pada Mencit Putih Jantan. Jurnal  Sains  Farmasi  &  Klinis , 5 (2),  112-118. https://doi.org/10.25077/ jsfk.5.2.112-118.2018.
Badrunasar, A., & Nurahmah, Y. (2012). Pertelaan Jenis Pohon Arboretum Balai Penelitian Teknologi Agroforetry. Balai Penelitian Teknologi Agroforestry.
Febriyenti, Suharti, N., Lucida, H., Husni, E., & Sedona, E. (2018). Karakterisasi dan Studi Aktivitas  Antioksidan  dari  Ekstrak  Etanol  Secang  ( Caesalpinia  sappan L.) . Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 5 (1), 23-27. https://doi.org/10.25077/jsfk.5.1.23-27.2018. Gusdinar,  T.,  Herowati,  R.,  Kartasasmita,  R.  E.,  &  Adnyana,  I.K.  (2009).  Synthesis  and gastric ulcer protective activity of chlorinated quercetin. Majalah Farmasi Indonesia , 20 (4), 163–169. http://dx.doi.org/10.14499/indonesianjpharm0iss0pp163-169.
Hasnaeni, Wisdawati, & Usman, S. (2019). Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap Rendemen Dan  Kadar  Fenolik  Ekstrak  Tanaman  Kayu  Beta-Beta  ( Lunasia  amara Blanco). Jurnal  Farmasi  Galenika  (Galenika  Journal  of  Pharmacy) , 5 (2),  175–182. https://doi.org/https://doi.org/10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13599.
Hesturini, R.J., Herowati, R., & Widodo, G.P. (2017). Uji Aktivitas Analgetika Fraksi-Fraksi Ekstrak Etanol Daun Gandarusa ( Justicia gendarussa Burm. f ) dengan Metode Tail Flick. Jurnal Farmasi Indonesia , 15 (1), 13–17.  https://doi.org/10.31001/jfi.v19i2.
Hesturini,  R.J.,  Pertiwi,  K.K.,  Astari,  M.N.,  &  Febriana,  A.A.  (2022).  Uji  analgesic  dan toksisitas  fraksi  n-Heksana  daun  trembesi  ( Samanea  saman (Jacq.)  Merr.)  pada mencit ( Mus musculus L. ). JFSP, 8(1), 28-36.
Kalra, P., Sharma, S., Suman, & Kumar, S. (2011). Antiulcer effect of the methanolic extract of Tamarindus indica seeds in different experimental models. J Pharm Bioallied Sci. , 3 (2), 36-41. DOI: 10.4103/0975-7406.80778.
Keswara,  Y.,  &  Handayani,  S.R.    (2019).    Uji  Aktivitas  Analgesik  Ekstrak  Etanol  Daun Inggu  ( Ruta  angustifolia [l.]  Pers)  Pada  Tikus  Putih  Jantan. Journal  Syifa  And Clinical Research , 1 (2), 57-69. DOI: https://doi.org/10.37311/jsscr.v1i2.2662.
Kokila,  K.,  Elavarasan,  N.,  &  Sujatha,  V.  (2017).  Isolation,  Identification  and  Biological Applications  of  Anthraquinone  (Methylated  Rhein)  from Albizia  saman Seed Extracts. Journal of Food Processing and Preservation , 41(1) .
Komakech,  R.,  Yong-goo  Kim,  Matsabisa,  G.M.,  &  Kang,  Y.  (2019).  Anti-inflammatory and  analgesic  potential  of  Tamarindus  indica  Linn.  (Fabaceae):  a  narrative  review. Integr Med Res , 8 (3), 181-186.
Kuntari, Aprianto, T., noor, R.H., & Baruji. (2017). Verifikasi Metode Penentuan Asetosal Dalam Obat Sakit Kepala Dengan Metode Spektrofotometri UV. Jurnal Sains Dan Teknologi , 6 (1), 31–40. https://doi.org/10.23887/jst-undiksha.v6i1.9398
Lestiono, L., Kresnamurti, A., Rahmad, E., & Ansyori, M.R. (2020).. Aktivitas Analgesik Ekstrak Etanol Bulu Babi ( Echinometra mathaei ) pada Mencit Putih Jantan. Journal of Herbal, Clinical and Pharmaceutical Sciences, 1(20, 6-11 .
Lindawati, N.Y., & Ma’ruf, S.H. (2020). Penetapan Kadar Total Flavonoid Ekstrak Etanol Kacang Merah ( Phaseolus vulgaris L. ) Dengan Metode Kompleks Kolorimetri Secara Spektrofotometri Visibel.
Jurnal Ilmiah Manuntung , 6 (1), 11-16. https://doi.org/10.51352/jim.v6i1.312.
Musa,  A.O.,  Usman,  H.K.,  Titus,  I.,  Olorukooba,  A.B.,  Aliyu,  A.B.,  &  Bello,  H. (2018). Analgesic  and  anti-inflammatory  studies  of  methanol  stem  bark  extract  of  Burkea africana Hook (Fabaceae). Tropical Journal of Natural Products and Research , 2 (8), 375–379.
Parmadi, A., Aderita, N.I., & Septianingsih, W. (2020). Uji Daya Analgetik Ekstrak Etanol Daun Sirsak ( Annona muricata L ) Terhadap Mencit Jantan Galur Swiss. Indonesian Journal on Medical Science , 7 (2), 97-103.
Pertiwi, K.K., Wahyuni, D., Hesturini, R.J., & Lestari, A.D. (2020). Uji Aktivitas Analgesik Daun Trembesi. Jurnal Wiyata , 7 (2), 138–146.
Pertiwi,  R.,  &  Saputra,  H.M.  (2018).  Pengaruh  Perasan  Umbi  Bengkuang  (Pachyrhizus erosus  L.)  terhadap  Gambaran  Histopatologi  Lambung  Mencit  ( Mus  musculus L.) dengan  Model  Tukak  Lambung. Jurnal Farmasi  dan  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia , 5 (2), 56-61. https://doi.org/10.20473/jfiki.v5i22018.56-61.
Sentat,  T.,  Soemarie,  Y.B.,  &  Hakim,  L.N.  (2018).  Uji  aktivitas  analgesik  ekstrak  etanol daun  sereh  wangi  ( Cymbopogon  nardus (L.)  Rendle)  pada  mencit  putih  ( Mus musculus L .)  jantan  dengan  metode  induksi  nyeri  cara  kimia. Al  Ulum  Sains  Dan Teknologi , 4 (1), 28–33.
Surahmaida, Rachmawati, A., & Handayani, E. (2020). Kandungan Senyawa Kimia Daun Waru ( Hibiscus tiliaceus ) di Kawasan Lingkar Timur Sidoarjo. Journal of Pharmacy and Science , 5 (2), 39-42.
Suwondo, B., Lucas, M., & Sudadi. (2017). Buku Ajar Nyeri . Perkumpulan Nyeri Indonesia.
Tripathi, P., & Singh, A. (2020). Modern Research in Botany Vol. 1. In Modern Research in  Botany  Vol.  1 .  Book  Publisher  International  (a  part  of  SCIENCEDOMAIN International). https://doi.org/10.9734/bpi/mrb/v1.
Vinodhini, S., & Devi Rajeswari, V. (2018). Review on ethnomedical uses, pharmacological activity  and  phytochemical  constituents  of  Samanea  Saman(Jacq.)  Merr.  Rain  tree. Pharmacognosy Journal , 10 (2), 202–209. https://doi.org/10.5530/pj.2018.2.35.