## UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI FRAKSI AIR EKSTRAK DAUN SELEDRI (Apium graveolens L.) PADA MENCIT JANTAN
Sapri 1 , Eka Siswanto S 1 , Ariska Yulianti 1
1 Akademi Farmasi Samarinda Email: sapri.juli86@gmail.com

## ABSTRAK
Tanaman seledri ( Apium graveolens L.) memiliki potensi untuk dikembangkan menjadi  obat  antiinflamasi  karena  kandungan  senyawa  glikosida  flavonoid  yaitu apiin  sehingga  digunakan  fraksi  air  karena  lebih  mudah  tertarik  pada  fraksi  air. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas fraksi air ekstrak daun seledri sebagai  antiinflamasi  pada  mencit  putih  dengan    menggunakan  metode  induksi karagenan  pada  telapak  kaki  serta  mengetahui  nilai  ED 50 .  Pengukuran  aktivitas antiinflamasi  digunakan 5 kelompok perlakuan hewan uji, kontrol (+) digunakan kalium  diklofenak  50  mg,  kontrol  (-)  suspensi  Na.  CMC  0,5%,  dosis  I  adalah 125mg/kgBB,  dosis  II  adalah  250mg/kgBB  dan  dosis  III  adalah  500mg/kgBB. Dengan  pengukuran  setiap  30  menit  selama  5  jam  dengan  alat  pletismometer. Analisis  data  digunakan  metode  statistik One  way ANOVAdengan  tingkat kepercayaan 95% yang dilanjutkan dengan uji LSD. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ketiga dosis fraksi air ekstrak daun seledri memiliki aktivitas antiinflamasi. Pada menit ke-300 tidak terjadi perbedaan bermakna antara kontrol positif dengan dosis  500  mg/kgBB  dengan  persen  inhibisi  86,04%.  Dari  perhitungan  ED 50 didapatkan hasil sebesar 100 mg/kgBB.
Kata Kunci: antiinflamasi, Apium graveolens L., apiin, karagenan, ED 50

## ABSTRACT
Celery plant (Apium graveolens L.) has the potential to be developed into an anti- inflammatory  drug  compounds  that  contain  flavonoid  glycosides  that  apiin  that fraction  of  water used for  apiin more easily attracted to  the water fraction. This study  aims  to  determine  the  activity  of  the  water  fraction  as  anti-inflammatory extract celery leaves on white mice using the method of induction of carrageenan on the soles of the feet as well as knowing the value of ED50. Measurement of anti- inflammatory activity used 5 groups of test animals, control (+) is used diclofenac potassium 50 mg, control (-) 0.5% Na.CMC suspension, the first dose is 125mg / kg,  the  second  dose  is  250mg  /  kg  and  the  third  dose  is  500mg  /  kg.  With measurements  every  30  minutes  for  5  hours  with  pletismometer  tool.  The  data analysis used statistical methods One way ANOVAdengan confidence level of 95% followed by LSD. The results showed that all three doses of the water fraction celery leaf extract has anti-inflammatory activity. In minute-300 does not occur significant difference between the positive control at a dose of 500 mg / kg with 86.04% percent inhibition. From the calculation results obtained ED50 of 100 mg / kg.
Keywords: anti-inflammatory, Apium graveolens L., apiin, carrageenan, ED 50

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  keragaman hayati  flora  dan  fauna  yang  sangat melimpah, sehingga memiliki banyak sekali  tumbuhan  yang  berkhasiat sebagai  obat.  Dari  28.000  jenis tumbuhan yang ditemukan di Indonesia,  kurang  lebih  7.000  jenis diantaranya  adalah  tumbuhan  obat (Kassahara dan Hemmi,1986).
Peningkatan  penggunaan  obat sintetik  berlangsung  dengan  cepat, namun  seiring  bertambahnya  waktu terjadi  pula  peningkatan  kesadaran masyarakat  terhadap  dampak  negatif dari penggunaan obat-obatan sintetik. Akibatnya masyarakat kembali memilih  tumbuhan  obat  sebagai
alternatif terhadap penyembuhan berbagai  penyakit.  Selain  itu,  efek samping yang ditimbulkan juga lebih kecil (Kassahara dan Hemmi, 1986).
Radang atau inflamasi adalah satu dari  respon  utama  sistem  kekebalan terhadap  infeksi  dan  iritasi.  Dapat juga dikatakan inflamasi ialah respon biologis  kompleks  dari  jaringan vaskuler  atas  adanya  bahaya  seperti pathogen,  kerusakan  sel  atau  iritasi. Obat-obat  antiinflamasi  non-steroid (NSAID)  merupakan  suatu  group obat yang secara kimiawi tidak sama, yang  berbeda  aktivitas  anti  piretik, analgesik dan antiinflamasinya. Obat- obat ini terutama bekerja dengan jalan
menghambat  enzim  siklo-oksigenase tetapi  tidak  enzim  lipoksigenase. Tidak seperti obat NSAID, analgesik non-narkotik  mempuyai  sedikit  atau tidak mempunyai aktivitas
antiinflamasi. Dibandingkan analgesik narkotik, maka keuntungan terapi  analgesik  non-narkotik  tidak menimbulkan  ketergantungan  fisik atau  toleransi.  Untuk  obat-obat NSAID tidak boleh digunakan bersama  dengan aspirin karena mengurangi  kadar  NSAID  dalam darah dan efektifitasnya (Gard, 2001).
Penelitian tentang obat-obat herbal  antiinflamasi  saat  ini  semakin berkembang, yaitu salah satunya daun seledri. Apium  graveolens L.  atau daun  seledri  memiliki  komponen metabolit  sekunder  yang  berhasil diisolasi  dari  seledri  diantaranya glikosida, apiin, apigenin, dan flavonoid. Selain itu pada seledri juga ditemukan  apigenin,  manit,  inositol, asparagina,  glutamine,  kolina  dan linamarosa  .Flavonoid  merupakan senyawa  yang  dilaporkan  dapat mempengaruhi  proses  inflamasi  dan memiliki efek antiinflamasi.
Apigenin  merupakan      komponen flavonoid  utama  pada  seledri  yang
termasuk  ke  dalam  golongan  flavon. Didalam  tubuh,  apiin  (glikosida flavonoid)  dapat  terhidrolisis  oleh asam  lambung  menjadi  gula  dan aglikon apigenin. Apigenin terbentuk dari  proses  hidrolisis  apiin  yang dibantu oleh asam lambung (HCl)(Soedibyo, 1998).
Penelitian sebelumnya telah dilakukan  uji  efek  antiinflamasi ekstrak  etanol  daun  seledri  pada ekspresi  iNOS  dan  produksi  NO secara in  vitro pada  sel  makrofag J774.A1.  Apiin  sebagai  komponen utama ekstrak daun seledri menunjukkan aktivitas penghambatan inflamasi yang bermakna pada produksi nitrit oksida (NO) secara in vitro (dengan  IC50  0,073  dan  0,08 mg/mL, masing-masing untuk ekstrak daun  seledri  dan  apiin)  dan  ekspresi iNOS (dengan IC50 0,095 dan 0,049 mg/mL, masing-masing untuk ekstrak dan apiin) pada sel makrofag J774.A1 yang diinduksi LPS. Efek antiinflamasi  dari  ekstrak  secara in- vivo ditunjukkan  melalui  penurunan ekspresi  enzim  iNOS  (BPOM  RI, 2010).
Berdasarkan latar belakang diatas, dilakukan  penelitian  uji  aktivitas
antiinflamasi  fraksi  air  ekstrak  daun seledri  ( Apiumgraveolens L.)  pada
mencit untuk mengetahui efek antiinflamasi  dari  daun  seledri. Digunakan  metode  ekstraksi  refluks karena senyawa apigenin yang terkandung  dalam  ekstrak  daun seledri  tahan  terhadap  pemanasan. Pada  penelitian  ini  digunakan  fraksi air  karena  apiin  merupakan  senyawa glikosida flavonoid, dimana senyawa glikosida flavonoid merupakan senyawa  polar  sehingga  akan  lebih mudah tertarik pada fraksi air.

## METODE
Bahan dan Alat a. Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah daun seledri, kalium diklofenak 50 mg, etanol 62,5%,  air, HCL pekat, amil alkohol, n-heksan, kloroform, air  raksa,  Na  CMC  0,5%,  NaCL, dan  karagenan 1%.
b. Alat
Alat yang digunakan adalah neraca analitik, kondensor, labu alat bulat, heating  mantle,  statif  dan  klem, corong  pisah,  cawan  porselen, gelas  beker,  gelas  ukur,  batang pengaduk,  spuit,  sonde,  spidol,
penangas air, pletismometer.
Ekstraksi daun seledri (Hertog dkk,
1992)
Ekstraksimenggunakancarareflu ks.Sebanyak  50  g  simplisia  kering daun seledri dan 250 ml etanol 62,5% di refluks selama 30 menit pada suhu 60 0 C. Ekstrak etanol diperoleh dengan menuang filtrat dari labu. Sisa filtrat direfluks sekali lagi. Satiap kali proses  refluks  ditambahkan  etanol 62,5% sebanyak 250 ml. Filtrat yang diperoleh diuapkan hingga kental.
Ekstrak  etanol  kental  15  g ditambahkan dengan 50 ml etanol dan ditambahkan  air  150  ml.  Kemudian dipartisi  dengan  metode  cair-cair menggunakan  pelarut  n-Heksan  (3  x 50  ml),  dilakukan  3  kali  partisi dengan  penambahan  50  ml  pelarut pada  setiap  kali  partisi  sehingga didapatkan ekstrak air dan ekstrak n- Heksan. Ekstrak air dipartisi kembali dengan pelarut kloroform (3 x 50 ml), dilakukan  3  kali  partisi  dengan penambahan 50 ml pelarut pada setiap kali  partisi  sehingga  didapatkan ekstrak  kloroform  dan  ekstrak  air. Ekstrak  air  dari  partisi  kloroform tersebut dilanjutkan ke tahap
penguapan  hingga  di  dapat  ekstrak kental  kemudian  dibuat  suspensi untuk diinduksikan pada mencit putih sebagai antiinflamasi.

## Uji Antiinflamasi
Uji efektivitas antiinflamasi ekstrak daun seledri menggunakan 15
ekor  mencit    putih  jantan    berumur sekitar 2 bulan dengan bobot rata-rata 20-30  g.  Mencit  dibagi  secara  acak dalam  5  kelompok  yang  mana masing-masing  kelompok  berisi  3 mencit.  Mencit  diaklimatisasi  dan dipuasakan  selama  24  jam  dengan diberi minum.
Tabel 1. Tabel kelompok perlakuan No kelompok Nama kelompok Hewan uji I Kelompok (-) / Na CMC 3 ekor II Kelompok (+) / kalium diklofenak 3 ekor III Ekstrak daun seledri 125 mg 3 ekor IV Ekstrak daun seledri 250 mg 3 ekor V Ekstrak daun seledri 500 mg 3 ekor Setengah  jam  setelah  perlakuan, tikus  diberi  injeksi  0,1 ml karagenan 1% pada telapak kaki belakang kanan. Pengukuran volume
edema menggunakan  pletismografdilakukan selama  5  jam,  dengan  interval  1/2 jam.

## Analisis Data
Hasil  pengukuran  pengurangan edema    atau    bengkak    pada    kaki mencit  diuji  statistik  dengan  metode uji One way ANOVA dan dilanjutkan dengan  uji  LSD  dengan  taraf kepercayaan  95%  serta  perhitungan ED 50 dengan analis probit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  efek  antiinflamasi menggunakan  metode  pembentukan radang  buatan  pada  telapak  kaki belakang mencit putih jantan. Metode ini dipilih karena edema atau radang  merupakan  salah  satu  gejala inflamasi  yang  dapat  digunakan sebagai  parameter  untuk  mengukur potensi antiinflamasi suatu senyawa. Potensi antiinflamasi diukur berdasarkan  kemampuan  senyawa tersebut  dalam  menghambat  dan mengurangi terjadinya radang. Fraksi air ekstrak daun seledri dibuat
dalam  berbagai  tingkatan  dosis dengan  tujuan  melihat  hubungan antara  kenaikan  dosis  dengan  efek
antiinflamasi  Kalium  Diklofenak yang ditimbulkan pada hewan uji.
Gambar 4. Grafik persen radang
Hasil data persen radang dilakukan  uji One  way ANOVA  dan dilanjutkan  dengan  uji  LSD  karena terdapat  perbedaan  antara  kelompok kontrol dan perlakuan. Hasil uji LSD antara kelompok kontrol dan perlakuan pada menit ke 30 sampai ke 300  menunjukkan  bahwa  ekstrak dosis  II  dan  dosis  III  memiliki  efek antiinflamasi yang ditunjukkan dengan  adanya  perbedaan  dengan kontrol  negatif,  (p  <0,05)  dan  tidak memiliki  perbedaan  dengan  kontrol positif,  (p  >0,05)  yang  artinya  nilai pada  ekstrak  dosis  II  dan  dosis  III memiliki  efek  hamper  sama  dengan
kontrol positif sebagai antiinflamasi.
Hasil yang sama juga ditunjukkan  pada  akhir  pengamatan menit ke-300. Ekstrak dosis I, II dan III  memiliki  perbedaan  terhadap kontrol negatif (p < 0,05) tetapi pada dosis I memiliki perbedaan terhadap dosis  II  dan  dosis  III  yang  artinya dosis  I,  II  dan  III  sama-sama memiliki  efek  antiinflamasi  tetapi dosis  II  dan  dosis  III  daya antiinflamasinya  lebih  besar  karena nilai pada dosis II dan dosis III tidak memiliki  perbedaan  dengan  kontrol positif (p >0,05).
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 0' 30' 60' 90' 120' 150' 180' 210' 240' 270' 300' kontrol (+) kontrol (-) dosis 125mg dosis 250mg dosis 500mg WAKTU PERSEN RADANG
Gambar 5. Grafik persen inhibisi radang
Ekstrak  dosis  III  menunjukkan kemampuan menginhibisi lebih besar dibandingkan  dengan  dosis  I  dan  II. Setelah dilakukan perhitungan persen inhibisi radang, selanjutnya dilakukan perhitungan ED50 pada menit ke 300 pengamatan.  Nilai  ED50  dari  fraksi air  ekstrak  daun  seledri  adalah sebesar 100 mg/kgBB.
Secara  keseluruhan,  hasil  ini menunjukkan  bahwa  fraksi  air ekstrak daun seledri memiliki
aktivitas antiinflamasi dengan menghambat  enzim  yang  mana merupakan mediator inflamasi. Pada penelitian uji antiinflamasi ini diduga fraksi  air  ekstrak  daun  seledri memiliki  kandungan  senyawa  apiin,
sehingga  ekstrak  tersebut  dapat memberikan efek antiinflamasi pada mencit.
Dalam penelitian
menunjukkan volume edema maksimum    pada  menit  ke-180,  hal tersebut  sesuai  dengan  penelitian terdahulu,  yaitu  edema  berkembang dan mencapai puncak edema selama 3 jam setelah induksi karagenan dan bertahan  pada  volume  maksimal sekitar 5 jam setelah induksi.

## KESIMPULAN
Dari penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa, fraksi  air  ekstrak  daun  seledri memilik  aktivitas  antiinflamasi  pada mencit  putih  jantan.  Dan  dosis  yang
15 25 35 45 55 65 75 85 0' 30' 60' 90' 120' 150' 180' 210' 240' 270' 300'

## Inhibisi
Kontrol positif Dosis 125 mg/kgBB Dosis 250 mg/kgBB Dosis 500 mg/kgBB
WAKTU
memiliki aktivitas setara atau hampir sama  dengan  kontrol  positif  adalah dosis 500 mg/kgBB. ED 50 dari fraksi air  ekstrak  daun  seledri  yaitu  100 mg/kgBB, yaitu dalam 100 mg/kgBB dapat memberikan efek terapi median pada 50% kelompok.
DAFTAR PUSTAKA Badan POM RI.2010. AcuanSediaanHerbal .Ja karta:BadanPengawasObatdan Makanan RI.Hal.37-39
Crozier  A,  Jensen  E,  Lean  MEJ,  Mc
Donald  MS.  1997. Quantitative analysis of the flavonoids content of  commercial  tomatoes,  onions, lettuce, and celery.  J Agric Food Chem 45: 590–593.
Dalimartha, S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat  Indonesia .  Jakarta:  Trubus Agriwidya. Hal.171-177
Duke,  JA.  1999.  US. Department  of
Agriculture  Phytochemistry  and Ethnobotanical Database.
DepartemenKesehatanRI.2000. Para meterStandarUmumEkstrakTana manObat. Jakarta:  Departemen Kesehatan RI. Hal.10-11 Gard, Paul. 2001. Human Pharmacology ,  Chapter  IX.  135. Taylor  &  Francis.  London,  New York.
Harborne,J.B.1987. MetodeFitokimia . Bandung:PenerbitITB.Hal.94,102 , 155, 234-238. Hertog MGL, Hollman PCH, Venema DP.  1992. Optimization  of  a quantitative HPLC determination of  potentially  anticarcinogenic
flavonoids  in  vegetables  and fruits.J  AgricFood  Chem 40: 1591–1598.
Kassahara  S,  Hemmi  S.  1986.
Medical Herb Index in Indonesia. Ed.  ke-2.  Jakarta  :  PTEisai Indonesia, dalam Makiyyah 2003
Kee,  Joyce.L  dan  Hayes.  Evelyn.R,
1996. Farmakologi  Pendekatan
Proses  Keperawatan .  Dr.  Peter
Anugrah  (Alih  Bahasa).  EGC, Jakarta. Laura, JP. 2007. Perbedaan lingkungan  dan  masa  tanam seledri  (Apium  graveolens  L.) terhadap senyawa bioaktif apigenin . Bogor:Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Lee,  J.-H  et  al,  2007.  Anti- inflammatory mechanisms of apigenin : inhibition of cyclooxygenase-2 expression, adhesion of monocytes to human umbilical  vein  endothelial  cells,
and expression of cellular adhesion  molecules. Archives  of pharmacal research , 30(10).
Markham,K.R.1988. CaraMengidenti fikasiFlavonoid .Bandung:Penerbi tITB.
Soedibyo,M.,  Dalimartha.,  S.  1998. PerawatanRambutdengan Tumbuhan Obat dan Diet Suplemen . Jakarta :Swada