https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil Asetat Daun Matoa Menggunakan Radikal Bebas DPPH (Difenilpikrilhidrazil)
R. Islamiyati 1* , D.E. Mugitasari 2 , L.N. Nafiah 3, I. Jayanto 4
1,2,3 Program Studi D3 Farmasi, Institut Teknologi Cendekia Utama
4 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: islamiyatirika@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L A B S T R A C T
Diterima pada 4 Juni 2024 Disetujui pada 8 Juli 2024 Dipublikasikan pada 16 Juli 2024 Hal. 611 - 618 Free  radicals  are  foreign  substances  that  enter  the  body  and  damage  the  immune  system. Excessive amounts of free radicals will cause pathological effects that result in degenerative diseases. Part of the matoa leaf contains active compounds in the form of saponins, flavonoids and tannins. Flavonoids can act as antioxidants because they are able to provide an electron to free radicals. The purpose of this study was to determine the total flavonoid content and antioxidant activity of the ethyl acetate extract of matoa (Pometia Pinnata) leaves which were tested using the DPPH free radical scavenging method. The extraction process was carried out by maceration method using ethyl acetate solvent with a ratio of 1:5. Determination of total flavonoid content was carried out by adding AlCl3 and sodium acetate reagents. Antioxidant activity test was carried out using the DPPH free radical scavenging method with quercetin as a comparison. Analysis was performed using a UV-Vis spectrophotometer. The study showed that the yield of ethyl acetate extract of matoa leaves was 20.7161 grams. The ethyl acetate extract of matoa leaves contains chemical compounds in the form of saponins, flavonoids and tannins. The total flavonoid content obtained from the ethyl acetate extract of matoa leaves was 6.19% and the IC 50 value was 34.21 ppm while quercetin as a comparison had an IC 50 value of 4.75 ppm. The ethyl acetate extract of matoa (Pometia Pinnata) leaves has a total flavonoid  content  of  6.19%  and  very  strong  antioxidant  activity  equal  to  quercetin  as  a comparison.
Keywords: Matoa leaves, Total flavonoids, Antioxidants, Ethyl acetate, DPPH A B S T R A K
Radikal bebas merupakan zat asing yang masuk ke dalam tubuh dan merusak sistem kekebalan tubuh.  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  mempunyai  kemampuan  menghilangkan, membersihkan dan  melawan  efek  radikal bebas.  Bagian  daun  matoa  mengandung senyawa aktif  berupa  saponin,  flavonoid  dan  tanin.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui kandungan flavonoid total dan aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat daun matoa (Pometia Pinnata) yang diuji menggunakan metode penangkap radikal bebas DPPH. Proses ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etil asetat dengan perbandingan 1:5. Penentuan  kandungan  total  flavonoid  dilakukan  dengan  menambahkan  pereaksi  AlCl3  dan natrium  asetat.  Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  penangkal  radikal  bebas DPPH  dengan  bahan  pembanding  quercetin.  Analisis  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  penelitian  menunjukkan  rendemen  ekstrak  etil  asetat daun matoa  sebesar  20,7161  gram.  Ekstrak  etil  asetat  daun  matoa  mengandung  senyawa  kimia berupa saponin, flavonoid dan tanin. Kandungan total flavonoid yang diperoleh dari ekstrak etil asetat daun matoa sebesar 6,19% dan nilai IC 50 sebesar 34,21 ppm sedangkan quercetin sebagai pembanding memiliki nilai IC 50 sebesar 4,75 ppm. Ekstrak etil asetat daun matoa (Pometia  Pinnata)  mempunyai  kandungan  total  flavonoid  sebesar  6,19%  dan  aktivitas antioksidan sangat kuat setara dengan quercetin sebagai pembanding.
Kata Kunci: Daun Matoa, Total Flavonoid, Antioksidan, Etil Asetat, DPPH

## PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  suatu  inhibitor  yang  digunakan  untuk  menghambat  autooksidasi. Inhibitor  radikal  bebas  menghambat  suatu  reaksi  radikal  bebas  dengan  membentuk  reaksi  radikal bebas  tidak  reaktif  dan  relatif  stabil.  Salah  satu  sumber  antioksidan  alami  berasal  dari  tumbuhan. Tumbuhan  mengandung  senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  sebagai  antioksidan  salah  satunya adalah senyawa flavonoid (Hasyim Ibroham et al., 2020). Flavonoid merupakan salah satu senyawa polifenol  yang  mempunyai  sifat  antioksidan.  Antioksidan  merupakan  senyawa  kimia  yang  dapat menyumbangkan satu atau lebih electron kepada radikal bebas sehingga radikal bebas tersebut dapat direndam dan tidak merusak sel tubuh. Mekanisme kerja dari antioksidan adalah dengan cara oksigen reaktif  (seperti  hidroksil,  superoksida,  dan  radikal  peroksi)  atau  radikal  bebas  mendapatkan  donor electron atau atom hidrogen yang berasal dari komponen antioksidan yang berupa molekul yang dapat mencegah oksigen ataupun sel teroksidasi (Hajar et al., 2021). Tanaman matoa mengandung senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam daun Matoa berupa flavonoid, tanin dan saponin aktivitas yang terkandung dalam senyawa flavonoid sebagai antibakteri, antioksidan dan antijamur senyawa antioksidan  berfungsi  dapat  menangkap  radikal  bebas  dalam  tubuh  (Islami  et  al.,  2021).  Banyak penelitian  yang  telah  menyatakan  bahwa senyawa  flavonoid  memiliki  potensi  sebagai  antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang terkait pada karbon cincin aromatik sehingga dapat menangkap radikal  bebas  yang  dihasilkan  dari  reaksi  peroksidasi  (Cassia  et  al.,  2017).  antioksidan  adalah senyawa  yang  berfungsi  untuk  mencegah  dan  memperbaiki  kerusakan  sel-sel  di  dalam  tubuh khususnya yang disebabkan oleh paparan radikal bebas (Wahyulianingsih et al., 2016). Berdasarkan sumbernya antioksidan dapat dibagi menjadi 2 yaitu antioksidan berupa antioksidan sintetik maupun antioksidan alami. Penggunaan antioksidan sintetik mulai dibatasi karena antioksidan sintetik seperti BHT  (Butylated  Hydroxy  Toluena)  terbukti  bersifat  karsinogenik  dan  dapat  meracuni  hewan percobaan. Maka dari itu industri makanan dan obat-obatan menggunakan antioksidan alami (Karim et  al.,  2015).  Tanaman  Matoa  (Pometia  pinnata)  merupakan  tanaman  yang  berasal  dari  blora  dan termasuk dalam famili Sapindaceae yang tersebar di daerah tropis yang telah dimanfaatkan secara tradisional oleh masyarakat sebagai obat tradisional masyarakat lokal menggunakan air dari rebusan daun matoa dalam membantu pengobatan penyakit hipertensi. Tanaman matoa mengandung senyawa flavonoid (Martiningsih et al., 2016). Umumnya flavonoid berikatan dengan gula yang membentuk glikosida yang dapat menyebabkan senyawa mudah larut dalam pelarut polar (air, metanol, etanol). Pelarut semi polar seperti etil asetat. Flavonoid yang kurang polar seperti isoflavonoid, flavanone, dan flavon serta flavonoid yang termetoksilasi cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti eter dan kloroform. Selama proses ekstraksi flavonoid dapat terlarut dalam larutan penyari yang sesuai dengan  kepolarannya.  Pelarut  etil  asetat  adalah  pelarut  semi  polar  yang  dapat  digunakan  untuk mengindentifikasi senyawa flavonoid (Suhendra et al., 2019).

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  terdiri  dari  determinasi  tanaman  yang  dilakukan  di  Laboratorium Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Terapan Universitas Diponegoro, Semarang. Preparasi sampel dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Farmakognosi Institut Teknologi Kesehatan Cendekia Utama  Kudus.  Penentuan  kadar  flavonoid  total  dan  uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  di Laboratorium Instrumen Institut Teknologi Kesehatan Cendekia Utama Kudus.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  yaitu  timbangan  analitik (Ohous) blender  simplisia (Getra) ,  moisture balance ,  lemari  pengering,  pipet  tetes,  pipet  volume (Pyrex) mikropipet,  cawan arloji, tabung reaksi (Pyrex) rak tabung reaksi, penjepit kayu, sendok tanduk, spatel, corong kaca, batang pengaduk, panci, kompor, termometer, spektrofotometri UV-Vis (Biobest) , kuvet kuarsa, labu
ukur (Pyrex) , botol coklat, bunsen, kain penyari. Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu daun matoa (Pometia pinnata) yang diperoleh dari Desa Sempu, Kecamatan Kunduran, Kabupaten Blora, Jawa Tengah, etil asetat, HCl pekat, reagen Dragendroff, reagen Meyer, etanol p.a, sebuk Mg, NaOH, FeCI 3 , AICI 3 , natrium asetat, aquadest, HCI 2N, kuersetin, DPPH

## Teknik Pengumpulan dan Analisa data
1. Pembuatan Simplisia Kering
Sebanyak 3000 gram daun matoa kemudian dilakukan sortasi basah, dicuci menggunakan air bersih yang mengalir kemudian Perajangan kecil supaya cepat kering, pengeringan menggunakan lemari pengering dengan suhu 400C. Simplisia daun matoa yang sudah kering ditimbang kembali berat  kering  untuk  dihitung  presentase  susut  pengeringan.  Selanjutnya  dilakukan  pembuatan serbuk dengan cara diblender dan diayak dengan ayakan No. 40 mesh (Zainuddin & R, 2021). Penentuan  kadar  air  simplisia  daun  matoa    (Pometia  pinnata)  dilakukan  menggunakan  alat moisture balance. Sebanyak 1 gram serbuk halus daun matoa (Pometia pinnata) dimasukkan ke dalam  alat  moisture  balance.  Proses  ini  dilakukan  replikasi  sebanyak  3x,  kemudian  hasilnya dihitung rata-rata (Ramadhani, 2020).
2. Pembuatan Ekstrak  etil asetat daun matoa
Serbuk  kering  ditimbang  sebanyak  200  gram  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  botol maserasi tambahkan etil asetat sebanyak 1000 ml (1:5) antara sampel dan pelarut pada maserasi 1  selama  5  hari.    Selanjutnya  dilakukan  remaserasi  dengan  menggunakan  ampas  serbuk  dari proses maserasi  ditambahkan dengan pelarut etil asetat sebanyak 250 mL dari pelarut 1000 ml ( maserasi 2 selama 4 hari ) dengan perbandingan (1: 4) sampai seluruh sampel terendam, ditutup, dan  diaduk.  Maserasi  dilakukan  selama  1x24  jam  dan  sesekali  diaduk.  Remaserasi  dilakukan sebanyak 3 kali sampai larutan menjadi bening atau jernih (Asmorowati & Lindawati, 2019).
Ekstrak cair yang didapat kemudian  dikentalkan dengan rotary evaporator pada suhu 40 0 C dan dipekatkan dengan cara memanaskan menggunakan cawan di atas penangas air sampai tidak ada  lagi  cairan  yang  menetes  sehingga  memperoleh  ekstrak  kental  kemudian  dihitung rendemennya. Rumus rendemen adalah sebagai berikut :
3. Skrining Fitokimia
a) Identifikasi saponin
Prosedur identifikasi saponin pada penelitian ini mengacu dari uji fitokimia senyawa saponin  pada  ekstrak  daun  matoa  yang  dilakukan  oleh  (Martiningsih  et  al.,  2016).  Sampel ekstrak etil asetat daun matoa 2 mL dimasukkan dalam tabung reaksi  ditambahkan  aquades hingga  seluruh  sampel  terendam  didihkan  selama  2-3 menit dan selanjutnya didinginkan kemudian  dikocok  kuat-kuat. Hasil  yang  positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  buih yang stabil.
b) Identifikasi flavonoid
Prosedur  identifikasi  saponin  pada  penelitian  ini  mengacu  dari  uji  fitokimia  senyawa saponin pada ekstrak daun matoa yang dilakukan oleh (Martiningsih et al., 2016) yang telah dimodifikasi. Pereaksi yang dipakai dalam identifikasi flavonoid adalah tiga pereaksi antara lain pereaksi Wilstatter, pereaksi Bate-Smith dan pereaksi NaOH.
1. Pereaksi Wilstater
Sebanyak  1  mL  ekstrak  etil  asetat  daun  matoa  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  di tambahkan  2-4  tetes  HCl  pekat  ditambahkan  sedikit  serbuk  Mg  (magnesium).  Campurkan kocok dan panaskan. Reaksi positif menunjukkan terjadi perubahan warna kuning menjadi orange (warna jingga).
2. Pereaksi Bate- Smite
Sebanyak 1 mL ekstrak etil asetat daun matoa dimasukkan kedalam tabung reaksi di tambahkan  2-4  tetes  HCl  pekat  dipanaskan  selama  kurang  lebih  15  menit.  Reaksi  positif ditandai jika berwarna merah.
3. Pereaksi NaOH 10%
Sebanyak  1  mL  ekstrak  etil  asetat  daun  matoa  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi ditambahkan  beberapa  tetes  (3  tetes)  pereaksi  NaOH  10%.  Reaksi  positif  jika  terjadi perubahan warna jingga ( orange ).
c) Identifikasi Tanin
Identifikasi senyawa tanin pada penelitian ini mengikuti prosedur uji fitokimia tanin dalam  ekstrak  daun matoa  penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Martiningsih et al.,  2016)  yang telah dimodifikasi.  Untuk melakukan uji tanin ekstrak etil asetat daun matoa 2 mL sampel dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  ditambahkan  FeCl 3 1%  sebanyak  1  tetes.  Reaksi  positif menunjukkan perubahan warna  hijau kehitaman.
4. Penentuan Aktivitas antioksidan
a. Pembuatan  Larutan  Induk  DPPH Larutan  DPPH 0,1 mM dibuat dengan melarutkan  3,9432 mg DPPH  dengan  etanol p.a dalam labu ukur 100 mL sampai tanda batas.
b. Penentuan Panjang  Gelombang  Maksimal  DPPH Sebanyak 2 mL larutan  DPPH 0,1mM ditambahkan dengan etanol p.a sampai tanda batas dalam  labu  ukur  10  mL.  Kemudian  dilakukan  pembacaan  absorbansi  pada  panjang gelombang  400-800 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
c. Penentuan  Operating  Time Sebanyak 2 mL larutan DPPH  0,1mM ditambahkan dengan etanol p.a sampai tanda batas dalam  labu  ukur  10  mL.  Kemudian  dilakukan  pembacaan  absorbansi  pada  panjang gelombang  maksimal  dengan  interval  waktu  1  menit  selama  1  jam  hingga  diperoleh absorbansi yang stabil.
d. Pembuatan  Larutan  Kuersetin  Sebagai  Pembanding Larutan  kuersetin  konsentrasi  1000  ppm  dibuat  dengan  menimbang  sebanyak  25  mg kuersetin  dilarutkan  dalam  labu  ukur  25  mL  dengan  etanol  p.a  hingga  volume  25  mL. Dipipet  1 mL  larutan  induk  standar  kuersetin  1000  ppm  dimasukkan  dalam   labu  ukur masing-masing 10 mL dilarutkan dengan etanol p.a hingga tanda batas didapatkan larutan standar dengan konsentrasi 100 ppm.  Dibuat seri konsentrasi larutan standar kuersetin 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, dan 10 ppm. Diambil 4 mL masing-masing seri konsentrasi kuersetin ditambahkan masing-masing 2 mL larutan DPPH 0,1mM ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas pada labu ukur 10 kemdian diinkubasi ditempat gelap selama 19 menit yang didapat dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimal 517 nm.
e. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil Asetat Daun Matoa Dengan DPPH Larutan ekstrak etil asetat daun matoa 1000 ppm dibuat dengan cara menimbang 25 mg ekstrak etil asetat daun matoa dilarutkan dalam etanol p.a sampai tanda batas labu ukur 10 mL.  Dipipet 1 mL larutan etil asetat daun matoa 1000 ppm dan ditambahkan etanol p.a  hingga sampai tanda batas labu ukur 10 mL untuk mendapatkan konsentrasi 100 ppm. Larutan  baku  dibuat  seri  konsentrasi  10  ppm,  20  ppm,  30  ppm,  40  ppm,  dan  50  ppm. Masing-masing konsentrasi diambil sebanyak 4 mL ditambahkan larutan DPPH 0,1mM sebanyak  0,5  mL  lalu  ditambahkan  etanol  p.a  sampai  tanda  batas  labu  ukur  10  mL. Diinkubasi  selama  19  menit  yang  didapat  diruangan    gelap.  Kemudian  diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimal 517 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun matoa diperoleh dari Desa Sempu, Kecamatan Kunduran, Kabupaten Blora. Sebanyak 3000  gram  sampel  daun matoa  basah  dikumpulkan  untuk  dibuat  menjadi  simplisia  kering  dengan melalui  proses  sortasi  basah,  pencucian,  perajangan,  pengeringan,  dan  sortasi  kering.  Hasil pengeringan daun matoa penelitian dapat dilihat tabel 1.
Tabel 1. Hasil Perhitungan Susut Pengeringan Sampel Sampel Basah (gram) Simplisia Kering (gram) Susut Pengeringan (%) Daun Matoa 3000 350 88,3 %
Simplisia kering yang di peroleh kemudian dibuat serbuk dan diayak dengan  ayakan no 40 mash. Pemilihan ayakan no 40 mash diacu dari penelitian yang dilakukan oleh (Zainuddin & R, 2021) tahap  pendahuluan  pembuatan  serbuk  daun  kelor.  Serbuk  simplisia  diuji  kadar  air  dengan menggunakan moisture balance. Hasil analisis kadar air serbuk simplisia daun matoa penelitian ini dapat dilihat table 2.
Tabel 2. Hasil Uji Kadar Air Simplisia Bobot Serbuk Simplisia (gram) Kadar Air (%) Rata-rata Kadar Air (%) Daun Matoa 1,033 1,031 1,037 5,10 4,48 4,03 4,53 %
Kadar air adalah parameter yang digunakan untuk menentukkan residu air sesudah dilakukan proses  pengeringan.  Tujuan  dari  uji  kadar  air  adalah  untuk  menjaga  mutu  dan  menghindari pertumbuhan  jamur  saat  penyimpanan.  Menurut  Depkes  RI  (1989)  simplisia  yang  baik  adalah simplisia yang memiliki kadar air tidak lebih dari 10% sehingga kondisi dan keamanan bahan aktif simplisia tetap terjaga selama proses penyimpanan dalam waktu yang relatif lama. Menurut Yana et al., (2022)  menyatakan  bahwa  kadar  air  yang  melebihi  10%  kemungkinan  akan  mempercepat pertumbuhan  jamur  atau  kondisi  yang  lembab  dapat  menurunkan  atau  merusak  mutu  simplisia. Pembuatan ekstrak daun matoa dilakukan menggunakan metode maserasi dengan perbandingan 1:5 antara  sampel  dan  pelarut  dimana  sebanyak  200  gram  serbuk  simplisia  daun  matoa  direndam sebanyak  200  mL  dari  pelarut  1000  mL  etil  asetat  selama  24  jam  (  maserasi  1  selama  5  hari  ) selanjutnya  dilakukan  remaserasi  dengan  menggunakan  ampas  dari  proses  maserasi  ditambahkan dengan pelarut etil asetat baru sebanyak 250 mL dari pelarut 1000 mL ( maserasi 2 selama 4 hari ) dengan  perbandingan  1:4  remaserasi  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  hingga  diperoleh  maserat  yang jernih. Hasil perolehan ekstrak penelitian ini dapat dilihat tabel 3.
Tabel 3. Hasil Perolehan Ekstrak Kental dan Rendemen Simplisia Bobot Serbuk ( gram) Volume Pelarut (mL) Ekstrak Kental ( gram) Rendemen (%) Karakteristik Ekstrak Daun Matoa 200 2000 20,7161 10,35% Ekstrak kental, padat, warna hijau kehitaman
Pemilihan pelarut merupakan salah satu faktor  penting dalam proses ekstraksi karena akan mempengaruhi jenis dan jumlah bahan aktif yang terkandung dalam ekstrak (Arifianti et al., 2018). Pelarut yang digunakan penelitian ini adalah etil asetat karena mempunyai daya ekstraksi yang kuat sehingga  dapat  menarik  hampir  seluruh metabolit  sekunder  yang  terdapat  suatu  sampel  (Saifudin,
2014).  Berdasarkan  tabel  3  ekstrak  kental  yang  diperoleh  dari  proses  ekstraksi  daun  matoa menggunakan  pelarut  etil  asetat  menghasilkan  ekstrak  kental  sebanyak  20,7161  gram  dengan rendemen  sebesar  10,35%  yang  berarti  bahwa  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etil asetat daun matoa adalah sebesar 10,35%. Kemenkes RI (2017) menyatakan bahwa rendemen yang baik adalah jika nilai rendemen diatas 10 % rendemen ektrak etil asetat daun matoa dikatakan baik mempunyai nilai rendemen lebih dari 10%. Rendemen merupakan perbandingan antara bobot ekstrak kental  yang  dihasilkan  dengan  bobot  ekstrak  kering  sebagai  bahan  baku.  Semakin  besar  nilai rendemen maka ekstrak yang dihasilkan semakin banyak hal tersebut menunjukkan bahwa semakin banyak senyawa berkhasiat yang diperoleh dari kandungan tanaman (Nahor et al., 2020). Identifikasi senyawa kimia yang terkandung dalam ekstrak etil asetat daun matoa dilakukan secara kualitatif yaitu melalui reaksi perubahan warna dengan menggunakan suatu bahan pereaksi kimia tertentu. Senyawa kimia yang di identifikasi berupa saponin, flavonoid dan tanin. Hasil identifikasi senyawa ekstrak etil asetat daun matoa dilihat tabel 4.
Tabel 4. Hasil Identifikasi Ekstrak Etil Asetat Daun Matoa No Identifikasi Hasil Keterangan 1. Saponin + Terjadi adanya buih-buih atau busa yang stabil 2. Flavonoid Uji Wilstatter
Uji Bate-Smith Uji NaOH 10% + + + Terbentuknya Warna Orange (jingga)
Terbentuk Warna Merah Terbentuk Warna jingga (orange) 3. Tanin + Terbentuk Warna Hijau kehitaman
Penentuan  aktivitas  antioksidan  didapatkan  hasil  panjang  gelombagelombang  maksimal  (λ maks)  DPPH  yang  diperoleh  penelitian  ini  yaitu  517  nm  hasil  ini  sesuai  dengan  rentang  panjang gelombang maksimal antara 515-520 nm (Nia & Sri, 2018). Panjang gelombang yang didapat akan digunakan  untuk  menentukan Operating  Time dan  pengujian  larutan  pembanding  dan  ekstrak. Penelitian ini Operating Time DPPH menunjukan menit ke 19 sehingga larutan uji akan di inkubasi selama 19 menit diruangan gelap. Tujuan dari inkubasi diruangan gelap adalah untuk menghindari terbentuknya radikal bebas selain DPPH yang sengaja ditambahkan (Martiningsih et al., 2016). Nilai absorbansi yang dihasilkan semakin menurun seiring meningkatnya konsentrasi larutan sampel hal ini disebabkan semakin banyak senyawa antioksidan yang meredam radikal DPPH  (Nastiti et al., 2021). Nilai absorbansi yang dihasilkan akan digunakan untuk menentukan nilai persentase inhibisi atau peredaman senyawa antioksidan terhadap DPPH. Hubungan % inhibisi dengan nilai IC50 adalah nilai  IC50  didapat  dari  hubungan  antara  antioksidan  dan  %  inhibisi  secara  regresi  linier,  semakin kecil  nilai  IC50  maka  semakin  baik  antiokidannya.  Kemudian  nilai  IC50  dihitung  dengan menggunakan persamaan regresi linier, konsentrasi sampel sebagai sumbu x dan % inhibisi sebagai sumbu y (Haeria et al., 2016).
Parameter yang biasanya digunakan untuk mengetahui besarnya aktivitas antioksidan suatu sampel adalah dengan menentukan nilai IC50 (Inhibitor Concentration 50%) dari sampel tersebut. Perbedaan nilai IC50 antara kuersetin dan ekstrak etil asetat daun matoa dapat dilihat gambar dibawah ini.  Hubungan  antara  repetisi  dengan  Nilai  IC50  untuk  melihat  persamaan  regresi  linier  dalam mencari  nilai  IC50.  Nilai  IC50  didapat  dari  persamaan  regresi  linier  yang  menghubungkan  antara konsentrasi  sampel  dan  persen  inhibisi  kemudian  mengganti  nilai  y  dengan  persentase  inhibisi. Semakin tinggi nilai IC50 maka aktivitas antioksidan semakin kecil begitupun sebaliknya (Haeria et al., 2016).
Keterbatasan dalam penelitian ini adalah proses pengentalan ekstrak yang menggunakan cara yang  manual  dengan  alat  yang  sederhana  dikarenakan  alat rotary  evaporator yang  tersedia  di Laboratorium Mikrobiologi Institut Teknologi Kesehatan Cendekia Utama Kudus sedang mengalami kendala  sehingga  membutuhkan  waktu  yang  relatif  lama.  Proses  pengentalan  ekstrak  dalam penelitian  ini  menggunakan  cara  yang  manual  dengan  alat  yang  sederhana  sehingga  tidak menggunakan alat waterbath karena alat waterbath sendiri membutuhkan waktu yang lama sedangkan menggunakan cara yang manual tidak membutuhkan waktu yang lama sehingga proses pengentalan ekstrak tersebut lebih cepat mengental dari pada menggunakan alat waterbath

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan  analisis  data  yang  telah  dilakukan  penelitian  ini  dapat disimpulkan bahwa ekstrak etil asetat daun matoa (Pometia Pinnata) mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai rata-rata IC50 sebesar 34,21 ppm

## DAFTAR PUSTAKA
Arifianti, L., Oktarina, R. D., Kusumawati, I., 2018. Pengaruh Jenis Pelarut Pengektraksi Terhadap Kadar Sinensetin Dalam Ekstrak Daun Orthosiphon stamineus Benth. Journal Planta Husada Vol.2,No.1 April 2014. E-Journal Planta Husada , 2 (1), 3–6.
Asmorowati,  H.,  &  Lindawati,  N.  Y.  2019. Determination  of  total  flavonoid  content  in  avocado (  Persea  americana  Mill  .)  using  spectrofotometry  method  Penetapan  kadar  flavonoid  total alpukat ( Persea americana Mill .) dengan metode spektrofotometri . 15 (2), 51–63. Journal of Pharmaceutical Science and Clinical Research , 3 (1), 68.
Cassia, T., L., M., Bark, T., 2017. IJPST Volume 4, Nomor 2, Juni 2017 Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Kulit Batang Trengguli
Departemen  Kesehatan  RI.  1985. Cara  Pembuatan  Simplisia. Jakarta  :  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
Departemen Kesehatan RI. 1986. Sediaan galenik. Jakarta : Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
Departemen  Kesehatan  RI.  1989. Materia  medika  indonesia  jilid  V. Jakarta  :  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
Haeria, Hermawati, & Pine, A. T. 2016. Penentuan Kadar Flavonoid Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Bidara (Ziziphus spina-christi L.) Haeria,. Journal of Pharmaceutical and Medicinal Sciences , 1 (2), 57–61.
Hajar, S., Rahmah, Hamzah, H.,J. 2021. Jurnal Farmasi Sains dan Praktis Potensi Ekstrak Buah Matoa (Pometia Pinnata) Sebagai Sumber Antioksidan: literatur review potential of matoa fruit extract (pometia pinnata) as antioxidant source. Jfsp , 7 (1), 2579–4558.
Hasyim  I,  M.,  Jamilatun  .2020. Potensi  Tumbuhan-tumbuhan  di  Indonesia  Sebagai  Antioksidan Alami . Indonesian Journal of Pharmaceutical Education , 1 (2), 62-69.
Islami, D., Anggraini, L., & Wardaniati, I. 2021. Aktivitas Antioksidan dan Skrining Fitokimia dari Ekstrak Daun Matoa Pometia pinnata. Jurnal Farmasi Higea , 13 (1), 30–35.
Karim, A. & Firdaus A.R . 2015. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kersen Berdasarkan Sumber Antioksidan. Jurnal Farmasi,  10(1), 25-30. Kemenkes RI.2017. Materia medika indonesia jilid VI . Jakarta : Rendemen Simplisia.
Martiningsih, N. W., Widana, G. A. B., Kristiyanti, P. L. P., Bandyopadhyay, S., Mukerji, J., Yenerel,
N. M., Dinc, U.  A., Gorgun, E., S.,  Alsophila, O. F., Sm, J., Zuhra, C. F., Tarigan, J. B., & Sihotang,  H.  2016.  Skrining  Fitokimia  Dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun Matoa  (Pometia  pinnata)  dengan  Metode  DPPH. Journal  of  Ocular  Pharmacology  and Therapeutics , 3 (3), 332–338.
Nahor, E. M., Rumagit, B. I., & Tou, H. Y. 2020. Comparison of the Yield of Andong Leaf Ethanol
Extract  (Cordyline  fruticosa  L.)  Using  Maceration  and  Sokhletation  Extraction  Methods. Journal Poltekkes Manado , 1 (1), 40–44.
Nastiti,  K.,  Noval,  &  D.  Kurniawati.  2021.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Kombinasi  Infusa (Actinuscirpus Grossus) dan Kulit Jeruk nipis (Citrus Aurantifolia). Jurnal Surya Medika , 7 , 115–122.
Nia,  R.F  &  Sri,  A.D.  2018.  Penetapan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Kamboja dengan Metode Peredaman Radikal Bebas DPPH. Journal of Pharmaceutical Education , 1 (2), 69–78.
Rahman,  A.  2020. Skrining  Fitokimia  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Terhadap  Ekstrak  Tanaman Ranting Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L .) . 1 (1).
Saifudin, 2014. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Binahong dengan Variasi Perbedaan Pelarut. Media Pharmaceutica Indonesiana , 2 (1), 84-92.
Suhendra,  C.  P.,  Widarta,  I. W.  R.,  &  Wiadnyani,  A.  A.  I.  S.  2019.  Pengaruh  Konsentrasi  Etanol Terhadap  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Rimpang  Ilalang  (Imperata  cylindrica  (L)  Beauv.) Pada  Ekstraksi  Menggunakan  Gelombang  Ultrasonik. Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi  Pangan (ITEPA) , 8 (1), 27.
Wahyulianingsih, W., Handayani, S., & Malik, A. 2016. Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Cengkeh (Syzygium aromaticum (L.) Merr & Perry). Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 3 (2), 188–193.
Yana, N. D., Marpaung, M. P., & Gummay, B. 2022. Analisis Parameter Spesifik dan Nonspesifik Simplisia Daun Bawang Merah (Allium cepa L.). Kovalen : Jurnal Riset Kimia , 8 (1), 45–52. Zainuddin,  N.  M.,  2021.  Pembuatan  Bubuk  Kering  dari  Daun  Kelor  (Moringa  Oleifera  )  dengan Perbedaan Suhu dan Lama Pengeringan Untuk Tambahan Makanan Fungsional ( Production of Moringa Leaf Powder ( Moringa oleifera ) Based on Different Temperatures and Drying Time as a Functional Food ). Jurnal Penelitian Daun Kelor 14 (02).