## UJI TOKSISITAS EKSTRAK AKUADES (SUHU KAMAR) DAN
AKUADES PANAS (70 o C) DAUN KELOR ( Moringa oleifera Lamk.)
TERHADAP LARVA UDANG Artemia salina Leach
Syaiful Anwar, Eny Yulianti, Abdul Hakim, A. Ghanaim Fasya, Begum Fauziyah, Roihatul Muti’ah
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Merunggai  Leaf  ( Moringa  oleifera Lamk.)  is  a  plant  with  high  nutrition.  All  its  vegetative  parts  are enriched  with  nutrition  including  leaf,  bark,  flower,  fruit  (legume),  and  root.  A  lot  of  benefits  may  be  taken from  Merunggai  Leaf  (Moringa  oleifera  Lamk.)  such  as  being  material  for  coagulant,  nutrition,  vitamin  and medicine. Research of  Indonesian merunggai  has only examined  this plant  as fencing plant  and vegetable,  but very  few  researches  about  bio-activity  of  merunggai  leaf  and  its  usage  as  anti-cancer.  This  research  will examine  the  toxicity  of  aquades  extract  (room  temperature)  and  hot  aquades  (70 0 C)  of  Merunggai  Leaf (Moringa oleifera Lamk.) against shrimp larva Artemia salina Leach using BSLT Method. The aquades solvent is beneficial because it is economic and easily afforded, and therefore, it is widely used throughout community. Result of research indicates that aquades extract (room temperature) and hot aquades (70 0 C) of merunggai leaf has toxicity against Artemia salina Leach as shown by LC 50 less than 1000 ppm. Hot aquades extract (70 0 C) has higher toxicity than aquades extract (room temperature) because the sequential results of LC 50 are 163.979 ppm and  265.977  ppm.  The  substances  within  hot  aquades  extract  (70 0 C)  are  alkaloid,  flavonoid,  tannin  and triterpenoid. Based on this result, merunggai leaf has a potential to be used as herbal stock which then can be used as anti-bacterial and anti-cancer materials.
Keywords: Merunggai Leaf (Moringa oleifera Lamk.), Artemia salina L., toxicity test, phytochemical test

## ABSTRAK
Kelor  ( Moringa  oleifera Lamk.)  adalah  tanaman  yang  kaya  nutrisi.  Kandungan  nutrisi  tersebar  pada seluruh  bagian  tanaman  kelor,  mulai  dari  daun,  kulit  batang,  bunga,  buah  (polong),  sampai  akarnya . Kelor ( Moringa  oleifera Lamk.)  mempunyai  banyak  manfaat,  misalnya digunakan  sebagai  koagulan,  nutrisi,  vitamin, dan sebagai obat. Selama ini kelor di Indonesia hanya digunakan sebagai tanaman pagar dan sayuran  dan masih jarang  ada  penelitian  tentang  bioaktivitas  daun  kelor  dan  pemanfaatannya    sebagai  antikanker.  Penelitian  ini mempelajari  toksisitas  ekstrak  akuades  (suhu  kamar)  dan  akuades  panas  (70 o C)  daun  kelor  ( Moringa  oleifera Lamk.)  terhadap  larva  udang  Artemia  salina  Leach  dengan  menggunakan  metode  BSLT.  Pemilihan  pelarut akuades  sangat  menguntungkan  karena  ekonomis  dan  mudah  diperoleh,  sehingga  mudah  diaplikasikan  oleh masyarakat.Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak akuades (suhu kamar) dan akuades panas (70 o C) daun kelor memiliki tingkat toksisitas terhadap Artemia salina Leach yang ditunjukkan dengan nilai LC 50 kurang dari 1000 ppm. Ekstrak akuades panas (70 o C) memiliki toksisitas lebih baik dari pada ekstrak akuades (suhu kamar) karena dihasilkan nilai LC 50 berturut-turut 163,979 ppm dan 265,977 ppm. Kandungan golongan senyawa pada ekstrak  akuades  panas  (70 o C)  adalah  alkaloid,  flavonoid,  tanin  dan  triterpenoid.  Berdasarkan  hasil  tersebut bahwa daun kelor mempunyai potensi sebagai tanaman sediaan herbal yang nantinya bisa dimanfaatkan sebagai antibakteri dan antikanker.
Kata Kunci: Kelor (Moringa oleifera Lamk.), Artemia salina Leach, Uji toksisitas, uji fitokimia

## I. PENDAHULUAN
Kelor  ( Moringa  oleifera Lamk.) adalah tanaman yang kaya nutrisi. Kandungan  nutrisi  tersebar  pada  seluruh bagian  tanaman  kelor,  mulai  dari  daun, kulit batang, bunga, buah (polong), sampai akarnya.
Dunia ilmu pengetahuan mengakui bahwa kelor merupakan
tanaman paling kaya nutrisi yang ditemukan untuk saat ini. Kelor mengandung lebih banyak vitamin, mineral,  antioksidan,  asam  amino  esensial dan  senyawa  lain yang  bermanfaat (Krisnadi, 2012).
Hasil  penelitian  Anwar  dkk.,  (2007) menunjukkan  bahwa  bagian-bagian  dari
kelor  mempunyai  kandungan  senyawa yang berfungsi sebagai antitumor, antipiretik,  antiepileptik,  antiinflamatori, antipasmodik, diuretik, antihipertensi, menurunkan  kolesterol,  antioksidan  dan antidiabetik.
Penelitian  ini  mempelajari  toksisitas ekstrak  kasar  akuades ) suhu  kamar)  dan akuades panas (70 o C) daun kelor terhadap larva  udang Artemia  salina Leach. Pemilihan pelarut akuades dalam penelitian  ini  sangat  menguntungkan karena  ekonomis,  tidak  berbahaya  dan mudah diperoleh, sehingga mudah diaplikasikan  oleh  masyarakat,  sehingga dapat  diketahui  pemanfaatannya  sebagai tanaman herbal yang mempunyai kemampuan sebagai antikanker.
Metode pengujian tahap awal dengan menggunakan brine  shrimp (udang  laut) jenis Artemia  salina Leach  dan  nantinya akan diperoleh nilai LC 50 ( Letal Concentration  50 )  yakni  nilai  konsentrasi suatu  zat  yang  dapat  menyebabkan  50  % kematian  hewan  uji.  Apabila  nilai  LC 50 <1000  ppm  zat  tersebut  mempunyai aktivitas  biologi,  jika  nilai  LC 50 <30  ppm, zat  tersebut  menunjukkan  bioaktivitas sebagai  senyawa  yang  menghambat  dan menghentikan  pertumbuhan  sel  kanker (Mc. Laughin, 1991).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk mengetahui toksisitas ekstrak akuades  (suhu  kamar)  dan  akuades  panas (70 o C)  daun  kelor  untuk  mengetahui ekstrak  terbaik  daun  kelor  berdasarkan nilai  LC 50 yang  diperoleh  dan  untuk mengetahui golongan senyawa yang terdapat  dalam  ekstrak  daun  kelor  yang memliki boaktivitas paling tinggi.

## II. METODE PENELITIAN
2.1 Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun kelor  ( Moringa  oleifera, Lamk.)  yang diperoleh dari Desa Bendungan Kecamatan Kraton  Kabupaten  Pasuruan  dan  larva udang Artemia salina Leach sebagai hewan
uji.  Bahan  kimia  untuk  pelarut  adalah akuades.
2.2  Preparasi  Sampel  Untuk  Analisis Kadar Air
Preparasi sampel untuk analisis kadar air  meliputi  sampel  daun  kelor  segar  dan sampel daun serbuk kering. Analisis  kadar air daun kelor segar dilakukan dengan cara dipotong kecil-kecil. Selanjutnya ditimbang  sebanyak  5  g  dan  dimasukkan ke  dalam  cawan  penguap,  kemudian dianalisis  kadar  airnya.  Analisis  kadar  air daun  serbuk  kering  diperoleh  setelah proses pengovenan dengan suhu sekitar 30- 37 o C  selama  ±  19  jam,  kemudian  digerus dan  diayak  dengan  ayakan  berukuran  60 mesh .  Selanjutnya  daun  serbuk  kering ditimbang sebanyak 5 g dan dianalis kadar airnya.
2.3 Analisis Kadar Air
Daun kelor segar dan kering ditimbang  sebanyak  5  g  dan  dimasukkan dalam  cawan  yang  telah  diketahui  berat konstannya,  selanjutnya  dikeringkan  di dalam  oven  pada  suhu  100-105 o C  selama 30  menit,  kemudian  didinginkan  dalam desikator  dan  ditimbang.  Perlakuan  ini diulangi  sampai  tercapai  berat  konstan. Simpangan  baku  yang  dapat  dikatakann konstan adalah ± 0,002 g.
2.4  Preparasi  Sampel  Untuk  Ekstraksi Maserasi
Preparasi sampel daun kelor meliputi pembersihan,
pengeringan dan penghalusan.  Daun  kelor  dibersihkan dengan  cara  dibilas  dengan  air,  kemudian dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  30-35 o C  selama  ±  19  jam.  Selanjutnya  sampel yang  telah  kering  dihaluskan  dengan menggunakan  blender  dan  diayak  dengan menggunakan  ayakan  berukuran  60 mesh. Diperoleh  serbuk  kering  daun  kelor  yang lolos  ayakan  60 mesh untuk  dilakukan ekstraksi maserasi.
2.5 Ekstraksi Maserasi
Serbuk daun kelor ditimbang sebanyak  25  g  kemudian  diekstraksi dengan akuades (suhu kamar) dan akuades panas  (70 o C)  masing-masing  sebanyak 375  mL.  Ekstraksi  dilakukan  secara
bertahap  selama  4  hari.  Pada  hari  pertama serbuk  daun  kelor  direndam  dengan akuades  (suhu  kamar)  dan  akuades  panas (70 o C)  sebanyak  100  mL  sambil  dishaker selama  2  jam.  Pada  hari  kedua  diganti pelarutnya sebanyak 100 mL. Perlakuan ini dilakukan secara bertahap sampai pada hari keempat,  sehingga  total  volume  pelarut yang digunakan sebanyak 375 mL.
Filtrat hasil maserasi diuapkan dengan  menggunakan rotary  evaporator vaccum sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat akuades  (suhu  kamar)  dan  akuades  panas (70 o C).  Kedua  ekstrak  pekat  dihitung rendemen  dan  diuji  toksisitasnya  dengan menggunakan  larva  udang Artemia  salina Leach.
2.6 Perhitungan Rendemen Ekstrak  pekat  akuades  (suhu  kamar) dan  akuades  panas  (70 o C)  ditimbang untuk  mengetahui  beratnya.  Selanjutnya dihitung  rendemen  ekstrak  akuades  (suhu kamar)  dan  akuades  panas  (70 o C)  dengan menggunakan rumus:
Rendemen = % 100  sampel berat pekat ekstrak berat 2.7  Uji  Toksisitas  dengan  Larva  Udang Artemia salina Leach
2.7.1 Penetasan Telur Air laut sebanyak 250 mL dimasukkan  dalam  bejana  penetasan, dimasukkan  2,5  mg  telur Artemia  salina Leach.  Selanjutnya  diaerasi  dengan  cara memberikan  aerator  ke  dalam  bejana penetasan.  Pada  bagian  telur  ditutup dengan  alumunium  foil  sehingga  ruangan menjadi  gelap  dan  lampu  dinyalakan selama  48  jam  untuk  menetaskan  telur. Larva  yang  menetas  akan  menuju  daerah yang  lebih  terang  melalui  sekat.  Larva yang  sehat  bersifat  fototropik  dan  siap dijadikan  hewan  uji  setelah  berumur  48 jam.  Larva  udang Artemia  salina Leach yang akan diuji diambil dengan menggunakan pipet.
2.7.2 Uji toksisitas
Perlakuan  uji  toksisitas  dilakukan sebanyak  3  kali  ulangan  pada  masing-
masing  ekstrak  sampel.  Ekstrak  pekat akuades  (suhu  kamar)  dan  akuades  panas (70 o C)  daun  kelor  ( Moringa  oeifera Lamk.)  ditimbang  sebanyak  10  mg  dan dilarutkan  dengan  menggunakan  air  laut sebanyak  10  mL  (membuat  larutan  stok 1000  ppm).  Larutan  yang  diperoleh selanjutnya dipipet
masing-masing sebanyak  250  μL,  500  μL,  1000  μL,  2000 μL dan 4000 μL, kemudian dimasukkan ke dalam  botol  vial  10  mL.  Selanjutnya ditambah  5  mL  air  laut,  satu  tetes  larutan ragi  roti,  ditambahkan  air  laut  sampai mendekati  tanda  batas  kemudian  dikocok sampai  ekstrak  dapat  larut  dalam  air  laut dan  dihomogenkan  kemudian  dimasukkan 10  ekor  larva  udang Artemia  salina Leach dan  ditambah  air  laut  sampai  tanda  batas, sehingga konsentrasi masing-masing larutan menjadi 25 ppm, 50 ppm, 100 ppm,
200,  ppm  400  ppm  dan  0  ppm  (sebagai kontrol). Kontrol digunakan sebagai pembanding yang dibuat dengan cara yang sama kecuali penambahan ekstrak. Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam terhadap  kematian  larva  udang.  Kriteria standar  untuk  menilai  kematian  larva udang  adalah  bila  larva  udang  tidak menunjukkan  pergerakan  selama  10  detik observasi (Widianti, tanpa tahun).
Selanjutnya  dihitung survival  rate dari artemia  pada  masing-masing  konsentrasi dan  ulangan  dalam  vial,  menggunakan rumus  Nurhayati  dkk.,  dalam  Sanjayasari dkk., (2011), sebagai berikut:
%  kematian  larva  udang Artemia  salina =
% 100 10   K T
Keterangan: T = jumlah larva uji yang mati K = jumlah larva kontrol yang mati
Perhitungan  LC 50 dilakukan  dengan menggunakan analisis probit menggunakan program  MINITAB  16  dengan  tingkat kepercayaan 95 %.
2.8 Uji Fitokimia dengan Uji Reagen Uji  fitokimia  kandungan  senyawa aktif dilakukan pada ekstrak yang
mempunyai  aktivitas  paling  tinggi  (LC 50 paling rendah).

## 2.8.1 Alkaloid
Ekstrak  daun  kelor  dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambah 0,5 mL HCl 2  %  dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  0,5  mL  reagen Dragendorff,  tabung  II  ditambahkan  0,5 mL  reagen Meyer. Jika tabung  I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk  endapan  kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.

## 2.8.2 Uji Flavonoid
Ekstrak  daun  kelor  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  kemudian  dilarutkan dalam  1-2  mL  metanol  panas  50  %. Setelah  itu  ditambah  logam  Mg  dan  4-5 tetes  HCl  pekat.  Warna  merah  atau  jingga yang  terbentuk,  menunjukkan  adanya flavonoid.

## 2.8.3 Uji Tanin
Sampel  dimasukkan  kedalam  tabung reaksi  kemudian  ditambahkan  larutan FeCl 3 1  %,  1-2  tetes,  apabila  berubah warna  menjadi  hitam,  maka  sampel dinyatakan positif mengandung tanin.

## 2.8.4 Uji Saponin
Ekstrak  daun  kelor  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  ditambah  air  (1:1) sambil  dikocok  selama  1  menit,  apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  HCl  1  N, busa yang terbentuk dapat bertahan selama 10 menit dengan ketinggian 1-3  cm,  maka ekstrak positif mengandung saponin.

## 2.8.5 Uji Triterpenoid dan Steroid
Ekstrak  daun  kelor  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5 mL  kloroform  lalu  ditambah  dengan  0,5 mL  asam  asetat  anhidrat.  Campuran  ini selanjutnya  ditambah  dengan  1-2  mL H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding  tabung tersebut.  Jika  hasil  yang  diperoleh  berupa cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan jika terbentuk warna hijau kebiruan
menunjukkan adanya steroid.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1  Preparasi  Sampel  Untuk  Analisis Kadar Air
Preparasi sampel untuk analisis kadar air  dilakukan  pada  sampel  daun  segar  dan sampel daun serbuk kering. Analisis kadar air daun kelor segar dilakukan dengan cara dipotong kecil-kecil supaya luas permukaannya  semakin  besar,  sehingga dapat  mempercepat  proses  pengeringan, kemudian dimasukkan dalam cawan penguap  untuk  dianalisis  kadar  airnya. Sampel  daun  serbuk  kering  diperoleh setelah  proses  pengovenan  dengan  suhu sekitar  30-37ºC  selama  ±  19  jam, kemudian  digerus  dengan  blender  dan diayak dengan ayakan berukuran 60 mesh . Sampel  serbuk  kering  dimasukkan  dalam cawan  penguap  untuk  dianalisis  kadar airnya.
3.2 Analisis Kadar Air
Winarno,  (2002)  menyatakan  bahwa banyaknya kadar air dalam tanaman adalah selisih berat sebelum dan sesudah pengeringan.  Adapun  hasil  kadar  air sampel  daun  kelor  kering  dan  segar, sebagaimana pada Tabel 1.
Tabel 1 Kadar air daun kelor Sampel Kadar air (%) Daun segar 65,897 Daun kering 7,316 Daun  kelor  segar  mengandung  kadar air sebesar 65,897 %. Tujuan menganalisis sampel daun segar adalah untuk mengetahui karakteristik kandungan material  khususnya  kandungan  air  daun kelor  dari  Desa  Bendungan  Kecamatan Kraton  Kabupaten  Pasuruan.  Daun  serbuk kering  mengandung  kadar  air  sebesar 7,316  %,  sampel  tersebut  telah  memenuhi standar  aturan  penyimpanan  yang  aman terhadap  pertumbuhan  jamur  /  mikroba. Puspita,  (2009)  menyatakan  bahwa  bila kadar  air  yang  terkandung  kurang  dari  10 %  maka  kestabilan  bahan  akan  dapat tercapai  dan  pertumbuhan  mikroba  dapat dikurangi.

## 3.3 Preparasi Sampel Untuk Ekstraksi
Preparasi  sampel  yang  dilakukan meliputi  pembersihan,  pengeringan  dan penghalusan.  Daun  kelor  segar  yang diperoleh  dibersihkan  dengan  cara  dicuci. Pembersihan  bertujuan  untuk  mengurangi kotoran  dan  mengurangi  mikroba  akibat dari  pencemaran  tumbuhan  yang  tidak diinginkan.
Selanjutnya
sampel dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  30-35 o C selama ± 19 jam, pengeringan bertujuan supaya  sampel  lebih  mudah  dalam  proses penghalusan,  selain  itu  dalam  proses penyimpanan,  sampel  kering  mempunyai ketahanan  yang  lebih  lama  dari  pada sampel  segar,  karena  pengeringan  akan mengurangi  kadar  air  dalam  sampel, dengan  semakin  kecilnya  kadar  air  dalam sampel maka dapat mencegah pertumbuhan  jamur  sehingga  komposisi kimia  dalam  sampel  tidak  mengalami perubahan.
Daun  kelor  yang  telah  kering dihaluskan  menggunakan  blender  dan diayak dengan ayakan berukuran 60 mesh . Hal  ini  dilakukan  bertujuan  supaya  luas permukaan sampel semakin besar,
sehingga  kontak  zat  cairan  dalam  proses ekstraksi  semakin  besar.  Serbuk  dengan penghalusan yang tinggi akan memungkinkan  sel-sel  yang  rusak  juga semakin  besar,  sehingga  mempermudah pengambilan  senyawa  aktif  dalam  daun kelor oleh pelarut.
3.4 Ekstraksi Maserasi
Ekstraksi  yang  dilakukan  dalam penelitian  ini  adalah  ekstraksi  maserasi dengan  menggunakan  pelarut  akuades yang  mempunyai  perbedaan  suhu  yaitu akuades  (suhu  kamar)  dan  akuades  panas (70 o C).  Pemilihan  pelarut  akuades  karena
kebiasaan
masyarakat Indonesia mengkonsumsi obat tradisional yang direbus  dalam  air.  Purwatresna,  (2012) menyebutkan  bahwa  adanya  peraturan yang  dikeluarkan  oleh  BPOM  RI  (2010) mengenai  cairan  penyari  untuk  keperluan farmakologi hanya memperbolehkan menggunakan air atau etanol.
Serbuk daun kelor ditimbang sebanyak  25  g  kemudian  diekstraksi dengan akuades (suhu kamar) dan akuades panas  (70 o C).  Maserasi  dilakukan  dengan cara  merendam  sampel  uji  kedalam pelarutnya  sambil  dikocok  dengan shaker kecepatan  120  rpm  selama  2  jam  untuk mempercepat proses pengambilan senyawa aktif  kedalam  pelarutnya  karena  adanya kontak yang lebih maksimal antara sampel dan pelarutnya.
Pada hari pertama perendaman sampel  dengan  pelarut  akuades  (suhu kamar) dan  akuades (70 o C) sebanyak 100 mL.  Pada  hari  berikutnya  dilakukan pergantian  pelarut  sebanyak  100  mL  pada masing-masing  ekstrak.  Ekstrak  akuades (suhu  kamar)  tanpa  dilakukan  pemanasan, sedangkan ekstrak akuades panas dilakukan  pemanasan  selama  30  menit dengan  suhu  70 o C.  Pergantian  pelarut dilakukan  sampai  pada  hari  keempat karena  pada  hari  keempat  filtrat  yang dihasilkan sudah cukup bening.
Hasil  maserasi  dipisahkan  dengan corong buchner untuk  memisahkan  filtrat dan  residunya.  Selanjutnya  filtrat  akuades (suhu  kamar)  dan  akuades  panas  (70 o C) diuapkan dengan rotary evaporator vaccum untuk  mendapatkan  ekstrak  pekat daun  kelor  ( Moringa  oleifera Lamk.). Proses  penguapan  pelarut  dalam rotary evaporator  vaccum dilakukan  pada  suhu 63 o C. Proses penguapan pelarut dihentikan  sampai  diperoleh  ekstrak  pekat yang  ditandai  dengan  tidak  adanya  pelarut yang  menetes  pada receiving  part yang diasumsikan bahwa sudah tidak ada pelarut pada  ekstrak  pekat.  Hasil  ekstraksi maserasi ditunjukkan pada Tabel 2.
Rendemen  daun  kelor  merupakan berat  ekstrak  yang  dihasilkan  dari  proses ekstraksi dibandingkan dengan berat sampel awal daun kelor. Tujuan dilakukan perhitungan rendemen dalam penelitian ini untuk  mengetahui  sifat  kelarutan  senyawa terhadap  pelarut  pada  suhu  kamar  dan pelarut pada suhu panas (70 o C).
Tabel  2  Hasil  ekstraksi  maserasi  daun kelor Pela rut Volu me (mL) Perubah an filtrat Warna ekstrak pekat Rendem en (%) (b/b) Akua des (suh u kama r) 375 Hitam hingga berwarna coklat bening coklat kehitam an 36,75 Akua des pana s (70
o C) 375 Hitam pekat hingga hitam kecoklata n bening coklat kehitam an lebih pekat 43,73
Rendemen  ekstrak  pekat  akuades panas  (70 o C)  lebih  besar  dibandingkan dengan  ekstrak  akuades  (suhu  kamar),  hal ini  dikarenakan  pada  ekstrak  akuades panas  dilakukan  proses  pemanasan  pada suhu  70 o C  sehingga  menyebabkan senyawa  aktif  dapat  terekstrak  lebih banyak ke dalam pelarutnya.

## 3.5  Uji  Toksisitas  Terhadap  Larva
Artemia salina Leach Uji  toksisitas  dengan  mengunakan larva Artemia  salina Leach  atau  metode Brine shrimp lethality test (BSLT) merupakan  salah  satu  metode  untuk menguji bahan-bahan yang bersifat sitotoksik.  Toksisitas  suatu  senyawa  dapat diketahui  dengan  menghitung  jumlah kematian Artemia  salina Leach  dengan parameter lethal  concentration  50 (LC 50 ). LC 50 merupakan  konsentrasi  zat  yang menyebabkan terjadinya kematian pada 50
%  hewan  percobaan  yaitu  larva Artemia salina Leach.  Berikut  ini  kurva  hasil analisa dengan program minitab 16 dengan tingkat  kepercayaan  95  %  ditunjukkan pada Gambar 1 dan 2.
1000 800 600 400 200 0 -200 -400 99 95 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 Konsentrasi P e rc e n t Mean 265,977 StDev 179,330 Median 265,977 IQ R 241,913 Table of Statistics Probability Plot for Mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI LC50 = 265,977 ppm
Gambar 1  Kurva mortalitas larva Artemia salina Leach  ekstrak  akuades (suhu kamar) daun kelor
600 500 400 300 200 100 0 -100 -200 -300 99 95 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 konsentrasi P e rc e n t Mean 163,979 StDev 138,077 Median 163,979 IQ R 186,263 Table of Statistics Probability Plot for Mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI LC50 = 163,979
Gambar 2 Kurva  mortalitas  larva Artemia salina Leach  ekstrak  akuades panas (70 o C) daun kelor
Menurut  Meyer  dkk ., (1982)  suatu senyawa  dikatakan  toksik  jika  mempunyai harga  LC 50 kurang  dari  1000  µg/mL.
Berdasarkan  pernyataan  Meyer  tersebut hasil  kedua  ekstrak  daun  kelor  bersifat toksik terhadap larva udang Artemia salina Leach  karena  dihasilkan  nilai  LC 50 dibawah  1000  ppm.  Adapun  hasil  uji toksisitas  ekstrak  akuades  (suhu  kamar) dan  akuades  panas  (70 o C)  daun  kelor ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3  Hasil uji toksisitas ekstrak akuades daun kelor Ekstrak LC 50 (ppm) Akuades (suhu kamar) 265,977 Akuades panas (70 o C) 163,979
Meyer,  dkk ., (1982)  menyatakan bahwa,  jika  suatu  ekstrak  menghasilkan nilai  LC 50 30-200  ppm  maka  ekstrak tersebut memiliki potensi sebagai antimikroba,  sedangkan  suatu  ekstrak meghasilkan  nilai  LC 50 200-1000  ppm maka  ekstrak  tersebut  memiliki  potensi sebagai antipestisida.
Berdasarkan
pernyataan tersebut,  maka ekstrak akuades (suhu  kamar)  memiliki  potensi  sebagai antipestisida,  sedangkan  ekstrak  akuades panas  (70 o C)  memiliki  potensi  sebagai antimikroba.

## 3.6 Uji Fitokimia dengan Uji Reagen
Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa aktif yang terdapat  pada  tanaman.  Pada  penelitian  ini uji  fitokimia  dilakukan  dengan  uji  reagen terhadap ekstrak yang mempunyai bioaktivitas  paling  tinggi,  yaitu  ekstrak akuades  panas  (70 o C)  daun  kelor.  Uji fitokimia  dilakukan  terhadap  golongan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan triterpenoid / steroid.
Hasil pengamatan uji fitokimia secara keseluruhan dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 Hasil pengamatan uji fitokimia Golongan Senyawa Ekstrak Akuades Panas (70 o C) Alkaloid + Flavonoid + Tanin + Saponin - Triterpenoid + Steroid - 3.7 Mekanisme Senyawa Aktif Terhadap Kematian Larva Udang Artemia salina Leach
Berdasarkan  uji  fitokimia  yang  telah dilakukan  ternyata  diperoleh  kandungan senyawa  aktif  pada  ekstrak  akuades  panas (70 o C)  adalah  alkaloid,  flavonoid,  tanin dan triterpenoid.
Adapun  mekanisme  reaksi  senyawa tersebut  terhadap  kematian  larva  udang
Artemia salina Leach seperti yang
dilaporkan  oleh  Cahyadi  (2009),  bahwa senyawa alkaoid, flavonoid dan triterpenoid  pada  kadar  tertentu  memiliki potensi toksisitas akut serta dapat menyebabkan kematian larva udang
Artemia  salina Leach.  Mekanisme  kerja senyawa-senyawa  tersebut  adalah  dengan bertindak  sebagai stomach  poisoning atau racun perut. Oleh karena itu, bila senyawa- senyawa  ini  masuk  ke  dalam  tubuh  larva, alat pencernaannya akan terganggu. Selain itu, senyawa-senyawa tersebut menghambat  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva.  Hal  ini  mengakibatkan  larva gagal  mendapatkan stimulus rasa sehingga tidak  mampu  mengenali  makanannya  dan larva  akan  mati  kelaparan  (Carballo,  2002 dalam Cahyadi, 2009).
Kartikasari (2010) melaporkan bahwa  mortalitas Artemia  salina Leach diduga disebabkan oleh senyawa
triterpenoid sebagai senyawa toksik.
Senyawa  triterpenoid  bisa  masuk  melalui membran  sel Artemia  salina Leach  secara difusi.  Masuknya  senyawa  tersebut  dapat merusak  permeabilitas  membran  dan mengganggu  proses  biokimiawi Artemia salina Leach,  akibatnya Artemia  salina akan mati

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  akuades  (suhu  kamar)  dan akuades  panas  (70 o C)  daun  kelor memberikan  efek  toksik  terhadap  larva Artemia  salina Leach,  dengan  nilai  LC 50 lebih  kecil  dari  pada  1000  ppm,  yaitu masing-masing  265,977  ppm  dan  163,979 ppm.  Ekstrak  terbaik  dalam  penelitian  ini ditunjukkan  berdasarkan  nilai  LC 50 yang lebih  kecil,  yaitu  pada  ekstrak  akuades panas  (70 o C)  sebesar  163,979  ppm. Kandungan golongan senyawa yang terdapat  dalam  ekstrak  akuades  panas  (70 o C)  daun  kelor  antara  lain  alkaoid, flavonoid, tanin dan triterpenoid. Dari hasil ini  bisa  diketahui  potensi  daun  kelor sebagai  tanaman  herbal  yang  mempunyai kemampuan sebagai antipestisida, antibakteri dan antikanker.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Adesina,  B.T.,  dan  Omitoyin,  B.O.  2011.
Potential  of  ( Moringa  oleifera
Lamk.)  Fresh  Root-bark  Extract  as an Organic Piscicide in Aquaculture  Pond  Management. Egyptian  Journal  of  Biology .  XIII:
8-13.
Anwar,  F.,  Latif,  S.,  Ashraf,  M.,  Gilani, A.H.  2007.  Moringa  oleifera:  A Food Plant with Multiple Medicinal Uses . Phytotherapy. XXI: 17-25. Ayotunde, E.O., Fagbenro, O.A., Adebayo,    O.T.,    dan  Amoo,  A.I. 2011. Toxicity of Aqueous Extracts of  Drumstick  ( Moringa  oleifera) ,
Seeds to Nile Tilapia ( Oreochromis niloticus) ,  Fingerlings  and  Adults. Journal  of  Aquatic  Sciences. XVII
(2):  1-6.
Cahyadi,  R.  (2009).  Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak Etanol Buah Pare( Momordica charantia L . )
Terhadap  Larva Artemia  salina
Leach dengan Metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BST) . Laporan  Akhir  Penelitian  Karya Tulis  Ilmiah. Diterbitkan.  Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang. Dailami, Muhammad. 2009. Skrining
Fitokimia  dari  Daun  dan  Batang  Seledri
( Apium  graveolens L.),  Daun Jambu Biji  ( Psidium  guajava L.),  dan  Buah Cabe ( Capsicum annum L.). Laporan
Praktikum  Kimia  Bahan  Alam. 2009, Kimia FMIPA UNIPA, http://id.scribd.com/doc/119738752/Skrin ing-Fitokimia-Herbal-Seledri.
Ferreira,  P.  M.  P,  Carvalho,  A.D.F.F.U., Sousa.,  D.F.D.,  Ferreira,  J.M., Martins  A.  R.,  Martins,  A.M.C., Queiroz,  M.G.R.D.  2007.  Water Extract  of Moringa  oleifera Seeds:
a Toxicological
Approach.
Pesquisa Medica . I (4): 45-53.
Foidl  N.,  Makkar  H.P.S.  dan  Becker,  K.
2001.  The  potential  of Moringa
oleifera for agricultural and
industrial  uses.  In:  “The  Miracle
Tree/The  Multiple  Attributes  of Moringa”. Ed.  Lowell  J  Fuglie . CTA. USA.
Kartikasari,  F.G.  2010.  Uji  Toksisitas Fraksi dari Spons Laut Xestospongia dengan Menggunakan Metode Brine Shirmp  Test  (BST). Skrpsi Tidak Diterbitkan. Jurusan Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya.
Krisnadi, D. A. 2012. Kelor Super Nutrisi. Pusat Informasi dan Pengembangan Tanaman Kelor Indonesia Lembaga Swadaya  Masyarakat  –  Media
Peduli Lingkungan (LSM- Mepeling).
McLaughlin,  J.L.,  Chang  C.J.,  Smith  D.L. Bench. 1991. Top Bioassays for the Discovery  of  Bioactive  Natural Products  An  Update.  In:  Atta-ur- Rahman,  ed. Studies  in  Natural Products  Chemistry. Amsterdam:
Elsevier. IX: 388–409.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  Putnam,  J.E.,
Jacobsen, L.B., Nichols., and McLaughlin.  1982.  Brine  Shrimp: A Convenient General Bioassay for Active  Plant  Constituents .  Planta
Medica. ILV: 31-34. Purwatresna, E. 2012. Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Air dan Etanol  Daun  Sirsak  Secara In  vitro Melalui Inhibisi Enzim α- Glukosidase. Skripsi. Diterbitkan Bogor. Departemen Biokimia Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor Bogor. Puspita,  M,  D,  A.  2009.  Pengoptimuman Fase  Gerak  KLT  Menggunakan Desain Campuran untuk Pemisahan Komponen Ekstrak Meniran ( Phylantus ninuri ). Skripsi Diterbitkan.  Bogor:  Departemen Kimia Fakultas MIPA. IPB. Widianti,  A.,  Suhardjono.  Tanpa  Tahun. Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol
Buah  Cabai  Rawit  ( Capsicum frutescens ) Terhadap Artemia salina Leach  dengan  Metode  Brine shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Karya  Ilmiah. Fakultas  Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang.
Winarno,  F.  G.  2002. Kimia  Pangan  dan Gizi .  Jakarta:  PT  Gramedia  Pustaka Utama.