KAJIAN BAKTERI PROBIOTIK UNTUK MENINGKATKAN KINERJA PERTUMBUHAN DAN KELANGSUNGAN HIDUP  IKAN MAS ( Cyprinus carpio )
(Evaluation of the effect of probiotic bacteria on growth performance and survival rate of carp, Cyprinus carpio )
Jeane T. Sumaraw 1 , Henky Manoppo 2 *, Reiny A.Tumbol 2 , I.F.M Rumengan 3 , Henny A. Dien 4 , Deiske A. Sumilat 3
1 Program Studi Ilmu Perairan,  Pascasarjana FPIK, Universitas Sam Ratulangi, Jln. Kampus Unsrat Kleak. Manado 95115, Sulawesi Utara, Indonesia
2 Program Studi Budidaya Perairan, FPIK, Universitas Sam Ratulangi Manado 95115
3 Program Studi Ilmu Kelautan, FPIK, Universitas Sam Ratulangi, Manado 95115
4 Program Studi Pengolahan Hasil Perikanan, FPIK, Universitas Sam Ratulangi, Manado 95115
*Korespondensi: hmanoppo@yahoo.com

## ABSTRACT
The objective of this research was to obtain probiotic bacteria isolated from the  digestive  tract  of  catfish Clarias  batracus ,  to  evaluate  its  effect  on  growth performances and survival rate of carp. After purified, the bacteria was identified through  biochemical  tests  and  selection  was  carried  out  through  proteolytic, amylolytic, cellulolytic, tests as well as pathogenicity test. Probiotic candidate was administered  orally  to  fish  at  different  concentrations.  The  fish  were  fed  for  30 days respectively as much as 3% of body weight per day with feeding frequency of  two  times  a  day.  The  results  showed  that  addition  of  probiotics  into  feed significantly increased growth performance but not survival rate.
Keywords : Probiotic, Clarias batracus,  growth performance, aquaculture.

## ABSTRAK
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan bakteri probiotik yang diisolasi  dari  saluran  pencernaan  ikan  lele Clarias  batracus ,  dan  mengevaluasi pengaruhnya terhadap kinerja pertumbuhan dan kelangsungan hidup benih ikan mas.  Bakteri  probiotik  diidentifikasi  melalui  uji  biokimia  dan  seleksi  dilakukan melalui proteolitik, amilolitik, tes selulolitik dan patogenisitas. Kandidat probiotik diberikan pada ikan secara oral dengan konsentrasi berbeda Pemberian pakan berprobiotik berlangsung selama 30 hari sebanyak  3% dari berat badan per hari dengan frekuensi pemberian dua kali sehari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan  probiotik  ke  dalam  pakan  secara  signifikan  meningkatkan  kinerja pertumbuhan namun tidak memengaruhi kelangsungan hidup benih ikan mas.
Kata kunci : Probiotik, Clarias batracus, kinerja pertumbuhan, budidaya

## PENDAHULUAN
Ikan mas ( Cyprinus carpio )
merupakan  komoditas  perikanan  darat yang sangat bernilai ekonomis penting, sehingga  produksi  akuakultur  harus terus ditingkatkan. Pada kenyataannya, dewasa  ini  produksi  ikan  cenderung
menurun karena beberapa permasalahan yang berhubungan dengan serangan penyakit pada periode kultur baik ditingkat pembenihan maupun  di  tingkat  pembesaran  dan turunnya  mutu  lingkungan  budidaya akibat  akumulasi  limbah  pakan  serta ketersediaan pakan itu sendiri.
Serangan  penyakit  yang  disebabkan oleh  jamur,  parasit,  bakteri  dan  virus, sering dihadapi oleh pembudidaya ikan mas,  meskipun  serangan  bakteri  dan virus yang paling signifikan menyebabkan  kematian  masal  ikan dalam  akuakutlur.  (Muthukumar & Kandeepan, 2015).
Berbagai metode penanggulangan penyakit ikan telah dilakukan dan terus berkembang.  Metode  untuk  mencegah penyakit  infeksi  dan  mikroba  yang sering  digunakan  adalah  vaksinasi, pemberian  antibiotik,  immunostimulant dan  kemotherapi.    Meskipun  antibiotik dan  bahan –bahan  kimia  efektif  untuk mencegah  atau  melindungi  ikan  dari penyakit, penggunaannya perlu dibatasi karena  adanya  residu  antibiotik  dan bahan –bahan  kimia.    Selain  itu, penggunaan  antibiotik  dapat  memacu berkembangnya patogen kebal antibiotik (Antibiotik-Resistant pathogen) (Moriarty, 1999 ; Biswas et al
, 2012 ; Babu et al 2013 ).  Verschuere et  al ,  (2000)  mengemukakan  bahwa tidak  hanya  menyebabkan  bakteri resisten  yang  hidup  setelah  antibiotik membunuh  bakteri  yang  lain,  tetapi bakteri  yang  bertahan  hidup  bisa mentransfer gen kebal antibiotik kepada bakteri lain yang tidak terkena antibiotik.
Kondisi resisten ini yang
mengkhawatirkan  bagi  kita  manusia sebagai  konsumen  hasil  budidaya  (Wu et  al ,  2013).  Untuk  itu  berbagai  usaha penanggulangan  penyakit  yang  ramah lingkungan dan aman terhadap manusia perlu dilakukan agar masyarakat mengkonsumsi  produk  hasil  budidaya yang sehat.
Salah  satu  metode  pencegahan penyakit ikan yang sangat populer saat ini  adalah  penggunaan  probiotik  yang merupakan  prosedur  yang  sangat  baik dalam  mencegah  penyakit  infeksi  dan sebagai  alternatif  untuk  penggunaan antibiotik  dan  bahan –bahan  kimia  lain (Watson et  al .,  2008;  Hagi & Hashino, 2009;  Muthukumar & Kandeepan, 2015).    Probiotik  merupakan  alternatif terhadap  penggunaan  antibiotik  yang sudah  sangat  lama  menjadi  prosedur
pengobatan  utama  untuk  mengobati berbagai  penyakit  infeksi  (Sornplang, 2016).
Penggunaan istilah suplemen makanan/  mikroba  makanan  pertama kali  diperkenalkan  oleh  Parker,  dimana dia  mendefinisikan  probiotik  sebagai organisme  atau  zat  yang  berkontribusi terhadap  keseimbangan  mikroba  usus (Parker,1974  dalam  Cruz et  al., 2012). Watson et  al .,  (2008)  mendefinisikan probiotik sebagai mikroorganisme hidup yang  apabila  diberikan  pada  hewan, manusia atau ikan dapat mempengaruhi inang dengan cara memperbaiki properti mikroflora  indigenous  dari  inang  atau lingkungan.  Selanjutnya, Nayak, (2010) menyatakan  probiotik  sebagai  agen mikrob hidup yang memberikan keuntungan  terhadap  inangnya  dengan cara  memodifikasi  komunitas  mikroba atau  berasosiasi  dengan  inangnya, meningkatkan
respons terhadap penyakit,  memperbaiki  nutrisi,  dan pemanfaatan  pakan.    Pernyataan  ini didukung  dengan  beberapa  penelitian yang  dilakukan  dimana  hasil  yang diperoleh probiotik dapat meningkatkan efisiensi  pakan  serta  meningkatkan imun nonspesifik pada ikan. Penggunaan probiotik dalam akuakultur saat  ini  semakin  meningkat  sejalan dengan meningkatnya kebutuhan pengembangan budidaya ramah lingkungan. (Akter et al , 2016).  Dengan pemberian probiotik, ikan dapat mencapai pertumbuhan optimal dan meningkatkan imunitas  terhadap  penyakit  (Utami et al .,      2015;      Talpur et      al .,      2014,
Sukenda et al ., 2016).
Dalam meningkatkan kinerja pertumbuhan,  mekanisme  kerja  bakteri probiotik  yaitu  dengan  menghasilkan enzim-enzim  yang  dapat  membantu proses pencernaan disaluran
pencernaan  ikan.  Peningkatkan  kinerja pertumbuhan  dapat  terjadi  karena adanya bakteri dalam saluran pecernaan ikan yang dapat menghasilkan enzim pencernaan eksogen dimana bakteri ini mempunyai
aktivitas amilolitik (mencerna karbohidrat), proteolitik (mencerna protein),  dan  lipolitik  (mencerna  lemak) (Kurniasi et  al ., 2013.)  Bakteri probiotik memproduksi enzim pencernaan sehingga  membantu  pemanfaatan  dan pencernaan  pakan.  Jadi  penambahan probiotik dalam pakan ikan
meningkatkan  performa  pertumbuhan yang  meliputi  pertumbuhan,  FCR  dan ratio  efisiensi  protein.  Semua  ini dihasilkan oleh enzim ekstraseluler yang dihasilkan  oleh  bakteri  probiotik  yaitu amilase, seluluse dan protease.
(Watson et al, 2008)
Banyak  penelitian  juga  yang sudah  dilakukan  untuk  mendapatkan jenis-jenis  probiotik  yang  baru  untuk akuakultur  dan  diisolasi  dari  berbagai organisme  akuatik  (Sukenda,  dkk., 2005;  Sunarto dkk .,  2010;  Mulyati, 2010;;  Muthukumar and Kandeepan, 2015). Probiotik umumnya diisolasi dari sistim  pencernaan,  dan  medium  hidup organisme kultur, dan ditargetkan untuk diaplikasikan  pada  medium  kutur  jenis organisme yang sama.  Sebagai contoh
Sunarto dkk ., (2010) melakukan penapisan bakteri probiotik dari saluran pencernaan  dan  media  pemeliharaan ikan  jelawat  ( Leptobarbus  hoeveni Bleker); Sukenda, dkk ., (2005) menapis
bakteri  probiotik  dari  medium  air  kultur udang vaname ( Litopenaeus vannamei ),  untuk  menghambat  infeksi Vibrio  harveyi pada  budidaya  udang vanname.  Dalam  penelitian  ini  bakteri probiotik  akan  disisolasi  dari  saluran pencernaan.

## METODE PENELITIAN

## Lokasi Penelitian
Ikan uji berasal dari Balai Benih Air Tawar (BBAT) Tatelu, Kabupaten Minahasa Utara. Isolasi dan Pemurnian Bakteri  dilakukan  di  di  Laboratorium Kesehatan Ikan, Lingkungan dan Toksikologi,  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi.  Identifikasi  bakteri  dilakukan di Laboratorum Uji Balai Karantina Ikan
Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan Hasil  Perikanan  Manado,  Sedangkan pemeliharaan benih ikan mas dilakukan di  Laboratorium  Teknologi  Akuakultur, Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan Universitas Sam Ratulangi.
Isolasi, Seleksi dan Identifikasi
bakteri
Kandidat bakteri probiotik diisolasi dari usus (saluran pencernaan) ikan lele Clarias batracus . Isi saluran pencernaan ikan lele yang dijadikan sebagai sumber inoculum diambil dengan cara
mengeluarkan  saluran  pencernaan  dari ikan  lele  dewasa  yang  telah  dimatikan. Sebanyak  1  gram  saluran  pencernaan (usus)  digerus  dengan  menggunakan mortar  kemudian  dimasukkan  dalam tabung reaksi berisi 9 ml NaCl fisiologis,
disentrifuge selama 10 menit. Sebanyak 1 ml larutan tersebut diambil dan ditambahkan kedalam  9 ml larutan fisiologis dalam tabung reaksi sehingga diperoleh konsentrasi 10 -1 atau pengenceran  10  kali.  Pengenceran serupa dilakukan terus sehingga diperoleh  konsentrasi  10 -3 dan  10 -4 . Sebanyak  0,1ml  dari  konsentrasi  10 -4 disebar  pada  media  MRS  agar  secara merata lalu diinkubasi pada suhu ruang 29 0 C selama 24 – 48 jam.
Berdasarkan  penampilan  koloni  yang tumbuh,  koloni  dikultur  murnikan  untuk mendapatkan  koloni  tunggal  yang merupakan  biakan  murni.  Koloni  ini yang  kemudian  digunakan  sebagai sebagai isolat bakteri yang ditambahkan dalam pakan setelah sebelumnya dilakukan seleksi bakteri sebagai kandidat probiotik dan uji biokimia untuk identifikasi  dan  konfirmasi  jenis  bakteri yang  tumbuh.  Seleksi  kandidat  bakteri probiotik dilakukan melalui uji
kemampuan  menghidrolisa  protein  (Uji Proteolitik),  karbohidrat  (Uji  Amilolitik), selulosa  (Uji  Selulolitik)  dan  pengujian patogenesitas mengikuti prosedur yang dikemukakan  oleh  Mulyasari et  al (2016). Untuk penyimpanan stok bakteri, selalu dilakukan rekultur secara akseptis  pada  media  MRS  Agar
kemudian  disimpan  dalam  inkubator dengan suhu 25 0 C s/d 28 0 C.

## Persiapan Pakan
Dalam penelitian ini menggunakan pakan  apung  komersial  (merk  FF-999) dengan kandungan  Protein  kasar  35%, Lemak  kasar  2%,  serat  kasar  3%,  abu kasar  13%  dan  kadar  air  12%. Persiapan  pakan  dilakukan  setelah terlebih  dahulu  dihitungan  berat  awal benih ikan mas untuk bisa menentukan jumlah  larutan  probiotik  yang  akan digunakan. Perbandingan larutan probiotik  dengan  pakan  yaitu  1  :  10 (V/W). Pakan ditimbang dan
ditambahkan  larutan  bakteri  probiotik dengan kepadatan berbeda. Perlakuan A : Tanpa penambahan
Probiotik +  Putih telur 2%, perlakuan B :  Probiotik  dengan  kepadatan  10 9 + Putih  telur  2%,  perlakuan  C  :  Probiotik dengan kepadatan 10 8 + Putih telur 2%,
perlakuan D : Probiotik dengan kepadatan  10 7 +  Putih  telur  2%  dan perlakuan  E    :  Probiotik  dengan kepadatan  10 6 +  Putih  telur  2%.  Pakan yang sudah bercampur larutan probiotik dikeringanginkan kemudian dilapisi dengan 2% putih telur dan dikeringanginkan lagi. Persiapan pakan dilakukan setiap seminggu  sekali. Pakan  yang  sudah  disiapkan  disimpan dalam lemari es.

## Performa pertumbuhan

## Laju Pertumbuhan Harian
Laju pertumbuhan harian dihitung dengan menggunakan rumus :
𝑳𝒂𝒋𝒖 𝒑𝒆𝒓𝒕𝒖𝒎𝒃𝒖𝒉𝒂𝒏 𝒉𝒂𝒓𝒊𝒂𝒏  (%) = ⌊𝐥𝐧(𝑩𝒆𝒓𝒂𝒕 𝑨𝒌𝒉𝒊𝒓 − 𝑩𝒆𝒓𝒂𝒕 𝑨𝒘𝒂𝒍)⌋ 𝐋𝐚𝐦𝐚 𝐖𝐚𝐤𝐭𝐮 𝐩𝐞𝐦𝐛𝐞𝐫𝐢𝐚𝐧 𝐏𝐚𝐤𝐚𝐧 𝑿 𝟏𝟎𝟎

## Pertumbuhan Mutlak
Pertumbuhan mutlak ikan mas dihitung dengan rumus:
Pertumbuhan mutlak (WG) =  Bobot akhir (Wt) – Bobot awal (Wo)

## Efisiensi Pakan
Efisiensi Pakan dihitung dengan menggunakan rumus:
𝑬𝒇𝒊𝒔𝒊𝒆𝒏𝒔𝒊 𝑷𝒂𝒌𝒂𝒏 (%) = ⟦𝐁𝐞𝐫𝐚𝐭 𝐓𝐨𝐭𝐚𝐥 𝐚𝐤𝐡𝐢𝐫−𝐁𝐞𝐫𝐚𝐭 𝐓𝐨𝐭𝐚𝐥 𝐀𝐰𝐚𝐥⟧ 𝐏𝐚𝐤𝐚𝐧 𝐲𝐚𝐧𝐠 𝐝𝐢𝐛𝐞𝐫𝐢𝐤𝐚𝐧 𝐬𝐞𝐥𝐚𝐦𝐚 𝐩𝐞𝐧𝐞𝐥𝐢𝐭𝐢𝐚𝐧 x 100

## Food Converstion Rate (FCR)
Food Converstion Rate (FCR) dihitung dengan menggunakan rumus:
Food Converstion Rate =
Total Pakan yang diberikan
Total pertambahan berat Ikan 𝑥 100

## Kelangsungan Hidup
Tingkat Kelangsungan Hidup ikan dihitung dengan rumus:
SR = Jumlah Ikan Yang hidup pada akhir penelitian jumlah ikan yang hidup pada awal penelitian 𝑋 100%

## Rancangan Percobaan
Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan  5  perlakuan  masing-masing dengan  3  ulangan.  Perlakuan  yang digunakan  terdiri  dari  5  konsentrasi bakteri  probiotik  yang  akan  diberikan secara oral.

## Analisa Statistik
Pengaruh  probiotik  terhadap  laju pertumbuhan  harian,  efisiensi  pakan, FCR dan kelangsungan hidup dianalisis dengan  menggunakan  SPSS  24.  Jika pengaruh probiotik memberikan pengaruh  nyata  maka  akan  dilanjutkan dengan  uji  lanjut  Duncan.  Karakteristik morfologi  probiotik  hasil  isolasi  dan seleksi akan dianalisis secara deskripsi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi, Seleksi dan Identifikasi Bakteri Probiotik
Dalam  proses  isolasi  kandidat bakteri dari saluran pencernaan ikan lele dengan  menggunakan  media  kultur MRS  agar  masa  inkubasi  48  jam berhasil  diisolasi  sebanyak  3  isolat bakteri  dengan  masing –  masing penampakan  isolat  berbeda.  Hasil pengamatan  visual  terdapat  3  warna
isolat  yang  berbeda  yaitu,  putih  susu, putih  dan  kuning.  Penampakan  koloni bakteri  berwarna  putih  bentuk  koloni tidak beraturan, permukaan koloni tidak rata  sedangkan  untuk  koloni  berwarna kuning,  bentuk  koloni  bulat  dengan permukaan rata. Koloni bakteri berwarna putih susu, berbentuk bundar adalah  koloni  bakteri  yang  dominan tumbuh yang selanjutnya dipilih sebagai kandidat bakteri yang digunakan dalam perlakuan (Gambar 6).
Gambar  6.  Isolat  kandidat  bakteri  probiotik yag  diisolasi  dari  saluran  pencernaan  ikan lele  ( Clarias  batracus )    (  Sumber  :  Koleksi Pribadi )
Isolat  yang  terpilih  kemudian dilakukan pemurnian dengan
melakukan  rekultur  pada  media  MRS agar  (sebagai  stok).  Isolat  bakteri  hasil rekultur  selanjutnya  diseleksi  sebagai kandidat  bakteri  probiotik.  Hasil  seleksi dapat dilihat pada table 4.
Tabel 4. Hasil uji karakteristik kandidat bakteri probiotik dari usus ikan lele ( Clarias batracus ) Jenis Uji Hasil Keterangan Proteolitik + Terbentuk zona bening Amilolitik + Terbentuk zona bening Selulolitik + Terbentuk zona bening Patogenisitas - Tidak menimbulkan gejala klinis , penyakit & kematian Uji Proteolitik
Uji Amilolitik
Uji Selulolitik
Berdasarkan karakteristik tersebut
(Tabel  4)  dapat  disimpulkan  bahwa bakteri yang tumbuh merupakan mikroba  probiotik.  Watson et  al (2008) mengemukakan persyaratan yang harus  dimiliki  oleh  mikroba  probiotik adalah  tidak  bersifat  pathogen  atau mengganggu  inang  dan  konsumen (dipelihara dan diperbanyak serta dapat bertahan  hidup  dan  berkembang  biak didalam  usus  ikan.  Hasil  uji  proteolitik dan  selulolitik  memperlihatkan  bahwa enzim  protease  dan  selulosa  dari kandidat  probiotik  mampu  mengurai protein yang ditandai dengan terbentuknya zona bening disekitar area koloni. Hasil uji amilolitik memperlihatkan  bahwa  enzim  amilase dari kandidat probiotik mampu mengurai karbohidrat yang ditandai dengan terbentuknya  zona  berwarna  kuning muda  disekitar  area  koloni.  Hasil  uji patogenisitas  yang  dilakukan  selama  1 minggu menunjukkan sintasan ikan mas yang di injeksi isolat bakteri hasil isolasi dari  saluran  pencernaan  ikan  lele sebesar  100%  hingga  akhir  masa pengamatan sama dengan kontrol.
Kurniasih et  al (2013)  dalam penelitiannya, bakteri kandidat probiotik hasil  isolasi  dari  saluran  pencernaan ikan  lele  tidak  bersifat  pathogen  bagi ikan lele (sintasan ikan lele 100%). Hasil yang  sama  juga  didapatkan  dari pengujian lainnya dimana probiotik yang diisolasi  dari  saluran  pencernaan  ikan tidak  bersifat  patogen  bagi  ikan  uji. Mulyasari et  al ,  (2016)  isolasi  probiotik dari  saluran  pencernaan  ikan  gourami tidak  bersifat  pathogen  bagi  ikan  nila. Kemudian  Marlida et  al., (2014)  uji patogenitas  bakteri  probiotik  yang diisolasi  dari  ikan  Humback  Grouper ( Cromileptes altivelis) dilakukan dengan cara menyuntikkan 1 mL larutan bakteri mengandung  1x10 6 cfu/mL,  hasil  yang didapatkan  tidak  terjadi  kematian  pada ikan uji.
Identifikasi bakteri terhadap bakteri terpilih dilakukan secara konvensional dengan uji biokimia. Buku panduan  identifikasi  mengguanakan
Cowan and Steel’ sebagai acuan. Hasil yang  diperoleh  dalam  uji  biokimia setelah dikonfirmasi dalam table diagnosa pada buku acuan menunjukkan  karakter  isolat  bakteri adalah spesies Lactobacillus sp. Bakteri Lactobacillus adalah bakteri  gram positif,  tidak  bersifat  motil,  oxidase negative,  katalase  negatif,  glukosa positif  tapi  tidak menghasilkan gas  dan bersifat  fermentatif.  (Cowan  and  Steel, 1993). Hasil identifikasi secara biokimia terhadap  bakteri  yang  diisolasi  dari saluran  pencernaan  ikan  lele  ( Clarias batracus ) disajikan dalam Table 5.
Holtj et al , (1994), bakteri Lactobacillus sp.  ini  termasuk  Gram  +, tidak  berspora,  tidak  motil  oleh  flagel peritrichous, fakultatif anaerob, kadang- kadang mikroaerofilik, sedikit tumbuh di udara  tapi  bagus  pada  keadaan  di bawah  tekanan  oksigen  rendah,  dan beberapa  anaerob  pada  isolasi.  Pada umumnya bakteri ini tumbuh baik sekali pada 5% CO2. Koloni pada media agar biasanya  2-5  mm,  cembung, entire , buram( opaque )  dan  tanpa  pigmen, kemoorganotrof, metabolismenya adalah fermentative dan saccharoclastic .  Sedikit  dari  separoh produk akhir karbon adalah laktat, tidak menghasilkan nitrat, gelatin tidak menjadi  cair,  sitokrom negatif, katalase negative dan oksidase positif, terutama C  rantai  lurus  asam  lemak  oleh cis - vaccenic.  Tumbuh  optimum  pada  suhu 30-40 0 C. Lactobacillus tersebar  luas  di lingkungan,  terutama  pada  hewan  dan produk makanan sayur sayuran.
Mereka  biasanya  mendiami  saluran usus burung dan mamalia. Mereka tidak bersifat patogen.
Tabel. 5     Hasil Uji Identifikasi biokimia kandidat probiotik dari saluran pencernaan ikan lele ( Clarias batracus ) Karakter dan Media Inkubasi Hasil Uji Gram + Motil - Katalase - Oxidase - Glukosa + ( gas - ) O/F Fermentatf Arabinosa - Maltosa + Manitol + Sorbitol + TSIA + ( negative H 2 S) SCA + Gelatin - Urea + MR + VP -

## Pereforma Pertumbuhan
a.  Pertambahan berat
Pertumbuhan  ikan  mas  setelah diberi perlakuan probiotik selama 30 hari disajikan  gambar  7.  Hasil  penelitian  ini mendapatkan pertambuahan berat
terbaik  dicapai  perlakuan  pada  ikan yang  diberi  perlakuan  C  (Konsentrai
probiotik  1x  10 8 CFU/mL)  disusul  oleh ikan pada perlakuan D dan B.
Berdasarkan  pada  data  bobot tubuh  diatas  kemudian  maka  dihitung pertumbuan mutlak dan laju pertumbuhan harian seperti tertera pada Table 6.
Gambar 7.   Bobot tubuh ikan mas yang diukur setelah diberi perlakuan probiotik
Tabel 6.  Performa pertumbuhan ikan mas yang diberi perlakuan probiotik
Parameter yg diamati A B C D E WG 6.25±0.24 a 8.67±0.57 b 10.42±0.53 c 9.04±0.51 b 6.94±0.01 a ADG (%) 2.14±0.83 a 2.85±0.14 b 2.98±0.10 b 2.87±0.11 b 2.84±0.35 b
Ket. – Nilai rata-rata dengan superscrip yang berbeda menunjukkan berbeda nyata
- ADG = Pertumbuhan harian rata rata
- WG =  Pertumbuhan mutlak
Pertumbuhan mutlak terbaik dicapai  pada  perlakuan  C  dan  kedua pada perlakuan D. Hasil analisis ragam
mendapatkan bahwa penambahan probiotik  dalam  pakan  berpengaruh nyata  (P>0.01)  terhadap  pertambahan
berat ikan. Selanjutnya melalui uji lanjut Duncan,  didaptkan  bahwa  perlakuan  C berbeda  nyata  dibandingkan  dengan perlakuan  A  (Kontrol)  maupun  dengan semua  perlakuan  lainnya.  Perlakuan  D dan berbeda nyata dibandingkan dengan  perlakuan  A  kontrol)  namun antar perlakuan D dan B tidak terdapat perbedaan  nyata.  Pertambahan  berat ikan  pada  perlakuan  E  tidak  berbeda nyata dibandingkan dengan perlakuan A (kontrol)
Pada  ikan  yang  diberi  probiotik dengan  konsentrasi  1x  10 9 cfu/mL  (B), pertambahan berat cenderung menurun dibandingkan  dengan  perlakuan  C (1x10 8 cfu/mL)  hasil  ini  menunjukkan bahwa  penambahan  probiotik  dengan konsentrasi yang lebih tinggi menyebabkan  jumlah  bakteri  dalam saluran pencernaan semakin padat dan menyebabkan terjadinya kompetisi antar  bakteri  sehingga  aktivitas  bakteri dalam  mencerna  maka  akan  terjadi kompetisi antar bakteri dalam mencerna nutrisi akan terhambat dan bahkan akan menyebabkan kematian pada bakteri itu sendiri.  Akibatnya  pertumbuhan  ikan pada  konsentrasi  bakteri  yang  tinggi menurun.  Sebaliknya  pada  kepadatan konsentrasi yang lebih rendah, pertumbuhan  belum  optimal  mungkin disebabkan  belum  efektifnya  bakteri mencerna  nutrisi  pada  pakan  karena jumlah  bakteri  yang  ada  hanya  sedikit. Hal ini sesuai dengan pernyataan Sakai (1999)  bahwa  penambahan  suatu bahan  seperti  probiotik  dalam  pakan, sangat di pengaruhi oleh dosis dan lama waktu  pemberian.  Pada  dosis  yang berlebihan  bahan  yang  ditambahkan tidak  mampu  menunjang  pertumbuhan dan  sebaliknya  pada  dosis  yang  lebih rendah, bahan yang ditambahkan belum mampu  menghasilkan  pertumbuhan yang optimal.
b.  Laju Pertumbuhan Harian Pertumbuhan harian, sebagaimana pada pertumbuhan
mutlak,  memiliki  nilai  terbaik  pada  ikan yang diberi pakan dengan penambahan 1x10 8 cfu/mL  (Perlakuan  C).  Effendi
(1997) mengemukakan
bahwa pertumbuhan  pada  ikan  merupakan penambhan  berat  atau  panjang  dalam wadah  tertentu  dan  merupakan  suatu proses  biologis  yang  kompleks  yang dipengaruhi  banyak  factor  baik  internal maupun eksternal. Dalam penelitian ini, terlihat adanya pertambahan bobot ikan dalam  setiap  minggu  baik  pada  ikan dengan  perlakuan  maupun  kontrol,  ini berarti  terjadi  pertumbuhan  pada  ikan. Secara  normal  bahwa  pertumbuhan harian  sebesar  2%-3%  perhari  (Supito et al , 1998) sehingga pertumbuhan yang dicapai pada penelitian ini dikategorikan baik.
Analisis  ragam  memperlihatkan bahwa  penambahan  probiotik  dalam pakan  ikan  juga  berpengaruh  nyata terhadap  laju  pertumbuhan  harian (P<0.01). Berdasarkan uji lanjut Duncan, pertumbuhan harian ikan yang diberi  pakan  dengan  penambahan probiotik  berbeda  nyata  dibandingkan dengan perlakuan A (tanpa penambahan  bakteri  probiotik).  Antar semua perlakuan pakan dengan penambahan  probiotik  tidak  saling berbeda nyata namun nilai pertumbuhan harian  yang  terbaik  dicapai  pada perlakuan  C.  Secara  keseluruhan  laju pertumbuhan harian pada semua perlakuan termasuk kontrol dikategorikan  baik,  dimana  hal  ini diduga  dipengaruhi  oleh  kualitas  pelet (merk  FF-999)  yang  diberikan  baik (kandungan  Protein kasar  35%,  Lemak kasar  2%,  serat  kasar  3%,  abu  kasar 13%  dan  kadar  air  12%).  Sekalipun demikian terlihat bahwa nilai pertumbuhan harian mengalami peningkatan setelah ikan diberi   pakan yang ditambahkan bakteri probiotik.
Gobinath  and  Ramanibai  (2012) melaporkan  bahwa  pemberian  bakteri Lactobacillus pada  ikan  nila  secara drastis meningkatkan  ukuran  dan  berat ikan  mujair  dibandingkan  dengan  ikan kontrol. Dhanasekaran et al (2010) juga melaporkan bahwa penambahan Lactobacilus dalam pakan secara nyata meningkatkan  panjang  dan  berat  ikan lele dibandingkan dengan ikan kontrol.
c.   Efisiensi pakan Hasil penelitian mendapatkan bahwa  pemberian  probiotik  pada  ikan mas berpengaruh sangat nyata terhadap  efisiensi  pakan  dan  ratio konversi  pakan  (P<0.01).  Nilai  efisiensi pakan  dan  rasio  konversi  pakan disajukan pada table 7. Tabel 7.  Efisiensi Pakan ikan Mas diberi perlakuan probiotik Parameter yg diamati A B C D E FCR 2.04±0.08 c 1.47±0.10 a 1.31±0.08 a 1.46±0.06 a 1.70±0.12 b EP (%) 48.95±2.05 a 68.03±4.49 c 76.46±5.09
d
68.41±2.85 c 58.84±4.40 b Kelangsunga n Hidup 100% 100% 100% 100% 100%
Tinggi  rendahnya  nilai  efisiensi pakan  menunjukkan  kualitas  pakan. Semakin  tinggi  nilai  efisiensi  pakan, menunjukan  kualitas  pakan  yang  lebih baik  sehingga  semakin  baik  kualitas pakan  maka  akan  semakin  optimal pakan tersebut dimanfaatkan oleh ikan. Berdasarkan  hasil  analisa  statistik dengan  anova  menunjukkan  bahwa penambahan  bakteri  probiotik  pada pakan  dengan  beda  kepadatan  nilai efisiensi pakannya berbeda nyata antar perlakuan.  Dalam  penelitian  ini,  nilai efisiensi pakan yang paling tinggi adalah pada  perlakuan  C  sebesar  76.46,  ini artinya pakan yang mengandung bakteri Lactobacillus sp  dengan  kepadatan 1x10 8 cfu/mL  merupakan  dosis  yang paling tepat untuk menghasilkan kualitas    pakan  kualitas  yang  baik. Mulyasari et  al ,  (2016)  melaporkan bahwa  penambahan  probiotik  yang diisolasi  dari  organ  pencernaan  ikan gurami ( Osphronemus goramy ) kedalam pakan dan diberikan selama 40 hari  pada  benih  ikan  nila,  secara  nyata meningkatkan  efisiensi  pakan  dan  laju pertumbuhan harian ( 0.85± 0.15 ).
d. Rasio konversi pakan
Nilai konversi pakan terbaik dicapai pada ikan yang diberi perlakuan 1x10 8 cfu/mL  (Perlakuan  C,  Tabel  7). Hasil  analisis  statistik  dengan  Anova menunjukkan nilai FCR antara ikan yang diberi  pakan  dengan  penambahan bakteri probiotik Lactobacillus sp
(Perlakuan B,C,D) berbeda nyata dengan  ikan  yang  diberi  pakan  kontrol atau  tanpa  probiotik  (Perlakuan  A)  ( P<0.01). Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan  bahwa  nilai  konversi pakan pada perlakuan C berbeda nyata dibandingkan  dengan  kontrol  maupun dengan  perlakuan  dosis  rendah  (E). Antar perlakuan C, D dan B tidak saling berbeda  nyata  namun  nilai  konversi pakan terbaik teramati  pada perlakuan C. Hal
menunjukkan bahwa penambahan  probiotik  pada  pakan dengan  kepadatan  1x  10 8 cfu/mL sebanyak 10% dari jumlah pakan adalah dosis  yang  lebih  tepat  dibandingkan pakan  yang  ditambahkan  probiotik dengan kepadatan1x 10 7 cfu/mL dan 10 9 cfu/mL.
Konversi  pakan  yang  berbeda nyata  pada  perlakuan  E  diduga karena jumlah bakteri probiotik yang ditambahkan ke pakan kurang sehingga ketika  pakan  dikonsumsi  ikan,  jumlah bakteri  yang  masuk  ke  dalam  saluran pencernaan ikan hanya sedikit.
Kurangnya jumlah bakteri dalam saluran pencernaan  ikan  menyebabkan  nutrisi yang terdapat pada pakan hanya sedikit yang  bisa  diserap.  Wang et  al (2008) mengemukakan bahwa bakteri probiotik menghasilkan  enzim  yang  mampu mengurai  senyawa  komplek  pakan menjadi  sederhana  sehingga siap dikonsumsi ikan. Amilase dan protease adalah enzim pencernaan yang berperan  sebagai  katalisator  pada
pencernaan  protein.  Aktivitas  enzim pencernaan ini akan meningkat didalam saluran  pencernaan  seiring  dengan pertambahan  jumlah  mikroba  didalam saluran pencernaan. (Gatesoupe,
1999).  Hal  inilah  yang  menjelaskan mengapa  pada  penelitian  ini,  untuk perlakuan  B,  C,  D  konversi  pakannya berbeda nyata dengan perlakuan E.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa penggunaan probiotik Lactobacillus dalam  pakan  berpotensi meningkatkan  performa  pertumbuhan dan  efisiensi  pakan.  Beberapa  hasil penelitian  telah  melaporkan  temuan yang  serupa.  Marlida et  al (2014) menggunakan  probiotik  yang  diisolasi dari  organ  pencernaan  ikan  kerapu
( Cromileptes altivelis ). Hasil penelitiannya mendapatkan bahwa penambahan  probiotik Lactobacilus sp dalam  pakan  dan  diberikan  pada  ikan kerapu  (berat  rata-rata  4.65  ±  0.44) selama  40  hari  memberikan  pengaruh nyata  performa  pertumbuhan  dan  FCR
ikan kerapu.
Wardika et al 2014 dalam penelitiannya dengan penambahan probiotik  kepakan  dengan  dosis  1x  10 8 cfu/ml  konversi  pakan  yang  diperoleh sebesar  2.23,  hasil  yang  hampir  sama juga didapat oleh Muchllisin et al ( 2016) dalam  penelitiannya,    nilai  konversi pakan sebesar 2,01. Kemudian Setiawati et  al (2013)  dalam  penelitian dengan  penambahan  bakteri  probiotik dalam  pakan,  rasio  konversi  pakannya sebesar  1.94  -  2.79.  Jika  dibandingkan dengan hasil penelitian-penelitian tersebut,  nilai  konversi  pakan  pada penelitian ini masih lebih baik.
f. Kelangsungan Hidup
Tingkat  kelangsungan  hidup  ikan mas yang diberi pakan dengan penambahan  probiotik  yang  diisolasi dari  saluran  pencernaan  ikan  lele dengan  kepadatan  berbeda  disajikan dalam table 8.
Tabel.8.        Kelangsungan hidup ikan mas yang diberi perlakuan probiotik
Parameter yg diamati Perlakuan A B C D E SR 100% 100% 100% 100% 100%
Kelangsungan  hidup  merupakan nilai  persentasi  dari  organisme  yang hidup  pada  akhir  pemeliharaan  dari jumlah  keseluruhan  yang  ditebar  pada awal  pemeliharaan.    Dalam  penelitian ini, tidak ditemukan adanya ikan uji yang mati pada setiap perlakuan dan ulangan.  Tingkat  kelangsungan  hidup ikan  mas  selama  penelitian  adalah 100%,  baik  pada  perlakuan  maupun kontrol  (Tabel  8).  Probiotik  merupakan mikroba yang aman dan menguntungkan dalam saluran pencernaan dimana mikroba ini menghasilkan zat yang tidak berbahaya bagi  ikan  tapi  justru  menghancurkan mikroba  pathogen  pengganggu  sistem pencernaan  (Irianto,  2003).  Selain  itu, probiotik  yang  ditambakan  ke  pakan
dapat meningkatkan  pertubuhan  harian ikan,  efisiensi  pakan  dan  nilai  konversi pakan.    Inilah  yang  menjelaskan mengapa pada perlakuan pakan dengan penambahan
probiotik, tingkat
kelangsungan  hidup  ikan  mas  tinggi.
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh
Marlida et  al (2014)  Uji  patogenitas bakteri probiotik yang diisolasi dari ikan Humback Grouper ( Cromileptes altivelis) dilakukan  dengan  cara menyuntikkan  1  mL  larutan  bakteri mengandung 1x10 6 cfu/mL dimana hasil yang didapatkan tidak terjadi kematian. Hasil yang sama diperoleh Setiawati et al (2013), penambahan probiotik dalam pakan tingkat kelulusan hidup ikan patin sebesar  100%  untuk  perlakuan  dan kontrol.
Selain  kualitas  pakan  yang  baik, tingkat kelangsungan hidup juga sangat dipengaruhi oleh kualitas air. Salah satu cara menciptakan lingkungan yang ideal adalah dengan melakukan penggantian air.  Selama  penelitian  ini  berlangsung, penyiponan, penggantian air dan pemberian aerasi pada wadah
pemeliharaan  selalu  dilakukan  dan dikontrol,  sehingga  kualitas  air  dalam wadah  pemeliharaan  ikan  uji  dengan perlakuan  maupun  kontrol  adalah  baik. Kelangsungan  hidup  yang  tinggi  pada ikan kontrol, hal ini diduga selain karena kualitas  pakan  kontrol  yang  diberikan baik juga karena benih ikan mas mampu mentoleransi kondisi lingkungan seperti kualitas  air  selama  penelitian  ini  ada dalam  kisaran  layak  bagi  kehidupan benih  ikan  mas.  Weatherly  (1972) menyatakan bahwa kematian ikan dapat disebabkan  oleh  predator,  parasite, penyakit, populasi, keadaan lingkungan yang  tidak  cocok  serta  fisik  yang disebabkan oleh penanganan manusia.

## KESIMPULAN
Bakteri probiotik yang diisolasi dari saluran
pencernaan ikan lele teridentifikasi sebagai Lactobacillus sp.
Aplikasi  bakteri  tersebut  secara  oral pada ikan benih mas mampu meningkatkan  performa  pertumbuhan dan kelangsungan hidup ikan mas.

## DAFTAR PUSTAKA
Akter,N.,  Parvez  .I.  &  Patwari.ZW., 2016. Beneficial Effects of Probiotics in Aquaculture . International Journal Fisheries and Aquatic  Studies  2016.  4(5):  494- 499 Babu DT, Antony SP, Joseph SP, Bright AR, Philip R.. Marine yeast Candida  aquaetextoris  S527  as  a potential immunostimulant in black tiger  shrimp  Penaeus  monodon . Journal of Invertebrate Pathology, 2013, 122: 243-252 Biswas,  G.,  Korenaga,  H.,  Nagamine, R.,  Kono,  T.,  Shimokawa,  H.,
Itami,  T.,  Sakai,  M.,  2012b. Immune  stimulant  effects  of  a nucleotide- rich baker’s yeast Extract  in  the  kuruma  shrimp, Marsupenaeus Japanicus . Aquaculture 366-367: 40-45. Cowan  &  Steel,  1993. Manual  for  The Identification  of  Medical  Bacteria. Third Edition. Cambridge University Press. Cruz,P.M., Ibanez,A.L., Hermosillo.O.A.M. & Saad, H,C.R.,2012. Use Of Probiotics in Aquaculture . Review Article. International  Scholary  Research Network. ISRN Microbiology. Vol.12. pp 13 Dhanasekaran.D., Saha.S., Thajudin.N., Rajalakshmi. & Panneerselvam. A., 2009. Probiotic  Effect  of  Lactobacillus isolates Against Bacterial Pathogens  in  Fresh  Water  Fish . Journal  Of  Coastal  Development.
13 ( 2 ): 103-112
Effendie.M.I,  1997. Biologi  Perikanan . Yayasan Pustaka Nusantara. Yogyakarta. 163 hal. Gatesoupe,F.J.,  1999. The  Use  Of
Probiotics in Aquaculture . Review.
Aquaculture 180(1999): 147-165. Gobinath.  J.  &  Ramanibai.  R    2012.
Effect of Probiotic Bacteria Culture on  Pathogenic  Bacteria  From Fresh  Water  Fish  Oreochromis mosambicus .  Journal  Of  Modern Biotechnology. 1(1): 50-54
Holtj.  G.,  Kreig,  N.R.,  Sneath,  P.H.A., Stanley, J.T. & Williams, S.T . 1994. Bergeys  Manual  Determinative Bacteriology .  Baltimore:  Williamn and Wilkins Baltimore.
Hagi,T and Hasino T., 2009. Screening and  Characterization  of  Potencial Probiotics  Lactic  Acid  Bacteria From  Cultured  Commond  Carp Intestine . Biosci.Biotechnol.Biochem. 73(7) : 1479-1483 Irianto.  A.,  2003. Probiotik  Akuakultur . Gajah  Mada  University  Press. Yogyakarta.
Kurniashi,T., Widarni., Mulyasari., Melati,I., Azwar,Z.i., & Lusiaastuti,A.M.,  2013. Isolasi, Seleksi dan Identifikasi Bakteri dari Saluran  Pencernaan  Ikan  Lele sebagai Kandidat Probiotik . J. Ris.
Akuakultur. 8(2) : 277:286. Moriarty, D.J.W., 1999. Disease Control in Shrimp Aquaculture with Probiotic Bacteria . Microbial Interaction  in  Auaculture.  The University Of Queensland. Mulyati., 2010. Penapisan Bakteri Probiotik untuk Pengendalian Penyakit  Streptococcis  pada  Ikan Nila  (  Oreochromis  niloticus) . IPB.Bogor. Marlida  R.,  Suprayudi.MA.,  Widanarni., Harris .E. 2014. Isolation, Selection and Application of Probiotic Bacteria for Improvement the Growth Performance Of Humback  Groupers  (  Cromileptes altivelis  ) .  International  Jounal  Of Science: Basic and Applied Research. 16(1): 367-379 Muthukumar,P  &  Kandepan,  C.,  2015. Isolation, Identifikation and Characterization of Probiotic Organism From Intestinal Of fresh Water Fishes. Internationa Journal of Current Microbiology and Applied Sciences. IV(3) : 607-616.
Mulyasari.,  Widanarni.,  Suprayudi,M.A. Zairin,M.,  &  Sunarno,T.D.,  2016. Screening  Of  Probiotics  From  the Digestive Tract of Gouramy           ( Osphronemus  goramy)  and  Their Potency to Enhance the Growth Of Tilapia  (  Oreochromis  niloticus) .
AACL Bioflux. 9(5). Muchlisin.  Z.A.,  &  Sugito  S.,  2016. Pertumbuhan, Kelangsungan Hidup  Dan  Daya  Cerna  Pakan Ikan  Nila  (  Oreochromis  niloticus) Yang  Mengandung  Tepung  Daun
Jaloh  (  Salix  terasperma  Roxb)
Dengan  Penambahan  Probiotik
EM-4. Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa Kelautan  dan  Perikanan  Unsyiah. 1(2): 210-221. Nayak SK. 2010. Probiotic and immunity:  A  fishperspective .  Fish
and  Shellfish  Immunology  29:  1-
14.
Supito,K  dan  I.S  Djunaidah,  1998. Kaji Pendahuluan  Pembesaran  Ikan Kerapu  Macan  (  Epinephelus fucoguttatus ) di tambak . Prosiding Perikanan Pantai Bali Sakai,  M.  1999. Current  Research Status  of  Fish  Immunostimulants . Aquaculture 172 (1999) 63 – 92 Sukenda  & Widanari.,  2005. Screening of Probiotics Bacteria and its Role on  Artificial  Infection  of  Vibrio harveyii in White Shrimp (Litopanaeus  vannamei) .  Jurnal
Akuakultur  Indonesia.  4(2):181-
187.
Sunarto., Sukenda., & Widanarni. 2010. Penapisan  Bakteri  Probiotik  dari Saluran  Pencernaan  dan  Medai Pemeliharaan Ikan elawat (Leptobarbus hoeveni Bleker) Untuk Pengendalian Bakteri Patogen . Journal Akuakultur Indonesia, 2010 Setiawati. J.E., Tarsim., Adiputra.Y.T., & Hudaidah.S., 2013. Pengaruh Penambahan Probiotik Pada Pakan  Dengan  Dosis  Berbeda Terhadap Pertumbuhan, Kelulushidupan,Efisiensi Pakan dan  Retensi  Protein  Ikan  Patin ( Pangasius  hypopthalmus ).  E- Journal  Rekayasa  Dan  Teknologi Budidaya Perairan. I(2) Sornplang  P  &  Piyadeatsoostorn.  S,
2016. Probiotics  Isolates  From Unconventional Sources. A review . Journal Of Animal Science and Technology. 58:26
Sukenda.,  Rahman.,  Hidayatullah,D., 2016. Kinerja  Probiotik  Bacillus spp  pada  Pendederan  Benih  Ikan Lele  Clarias  sp  yang  diinfeksi Aeromonas hydrophila . Jurnal Akuakultur  Indonesia  15(2)  :  162-
170.
Talpur  AD,  Munir  MB,  Mary  A,  Hashim
R.  2014. Dietary  probiotics  and prebiotics improved food acceptability, growth performance, haematology  and  immunological parameters and disease
resistance  against  Aeromonas hydrophila  in  snakehead  Channa striata  fingerlings .  Aquaculture 426 –427: 14–20.
Utami. D.A.S., Widanarni, M.A. Suprayud i, 2010. Quality of dried Bacillus NP5 and its effect on growth  performance  of  tilapia ( Oreochromis niloticus ) Pak J Biol Sci, 18 (2) (2015), pp. 88-93 Verschuere,L., Rombbat,G., Sorgeloos,P.,  &  Verstraete,W., 2000. Probiotic Bacteria as Biological control Agents in Aquaculture . Microbiol.Mol.Biol.R., 64(4) : 655-671
Weatherly  A.H.  1972.  Growth  and
Ecology  of  Fish  Populations.
London  Academi  Press.  1972.
293p Watson,A.K.,  Kaspar,H.,  Lategan,M.J., &  Gibson,L.,2008. Probiotic  in Aquaculture :The Need, Principles and  Mecanism  of  Action  and
Screening  Processes .  Science
Direct. Aquaculture.272 (2008) : 1-
14.
Wang,  Y.B.,  Li,  J.R,  dan  Lin,  J.  2008. Probiotics in aquaculture: Challenges and outlook. Aquaculture, 281: 1-4. Wu YR, Gong QF, Fang H, Liang WW, Chen M, He RJ. Effect of Sophora flavescent on non-specific immune response of tilapia GIFT (Oreochromis niloticus) and disease resistance against Streptococcus  agalactiae. Fish  & Shellfish Immunology,  2013,  34 :
220- 227
Wardika. A.Z., Sumito., & Sudaryono.A., 2014. Pengaruh  Bakteri  Probiotik pada Pakan Dengan Dosis Berbeda Terhadap Efisiensi Pemanfaatan Pakan, Pertumbuhan dan Kelulushidupan Lele Dumbo ( Clarias gariepinus ). Journal  aquaculture  Management and Technologi. III(4):9-17.