Dinamika populasi Trichoderma harzianum DT38 pada campuran arang hayati tandan kosong kelapa sawit (TKKS) dan gambut
Population  dinamic of Trichoderma harzianum DT38 on mixture of empty fruit bunches of oil palm (EFBOP) biochar and peat
Irma KRESNAWATY *) , Asmini BUDIANI & TW DARMONO
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia Jl. Taman Kencana No. 1 Bogor 16151, Indonesia
Diterima  28 Februari 2012/Disetujui 24 Mei 2012

## Abstract
Biochar offers option for managing land as a source  of carbon  and  soil  conditioner.  The  ability  of  biochar  in increasing  soil    fertility  associates  with  its  ability  to  retain water,  reduce  soil  acidity,  and  keep  the  availability  of essential  nutrients  for  plant  thus  increasing  crop  produc- tivity,  and  reducing  the  risk  of  soil  erosion.  Biochar  is  also substance  to  provide  a    suitable  environment for  the  growth of  beneficial  microbes, including  an  isolate  of Trichoderma harzianum used in this study, that has been proven capable in stimulating plant growth and suppressing soil borne diseases. The  purpose  of  this  research  was  to  determine  the  in  vitro compatibility  of T.  harzianum DT38,  Indonesia  Biotech- nology  Research  Institute  for  Estate  Crop  (IBRIEC) collection, in mixtures of  EFBPO biochar and peat during 28 days. This research was performed in completely randomized design  with  single  factor,  comprising  of  five  formulas:  1) 100% EFBOP biochar (K 1 ), 2) 100% peat (K 2 ), 3) Mixture of EFBOP biochar and peat = 1 : 4 (F 1 ), 4) Mixture of EFBOP biochar  and  peat=    1  :  8  (F 2 ),  dan  5)  Mixture  of  EFBOP biochar  and  peat=    1  :  12  (F 3 ).  The  colony  forming  units were  determined  after  storage  to  express  the  amount  of fungal  propaguls  in  each  mixture.  The  results  was  analized using one-way ANOVA test and Duncan Test. Result  showed that  the  total  of T.  harzianum DT38  propaguls  was  not significantly  difference  among  five  mixture  preparations tested during 0 and 7 days storage. The total propaguls were insignificantly  difference  between  F 1 and  K 2 ,  and  also between    F 2 and  F 3 in  14,  21  and  28  days  incubation.  Peat addition  on  biochar  increased  the  total  of T.  harzianum DT38  propaguls  during  28  days  incubation.  The  total propaguls which are remain high in F 1, F 2 and F 3 formula up to  28  days  storage  indicating  that  the  mixtures  suitable  for microbe media and biofertilizer formula.
[Keywords: Trichoderma  harzianum ,  biochar, EFBOP , biofertilizer]

## Abstrak
Penggunaan  arang  hayati  (biochar)  merupakan  alternatif pengelolaan  tanah  terutama  sebagai  penyedia  karbon  dan pembenah  tanah.    Kemampuan  biochar  dalam  meningkatkan kesuburan  tanah  berhubungan  dengan  kemampuannya  untuk menahan  air,  mengurangi  keasaman  tanah,  menjaga  keter- sediaan nutrien yang penting bagi tanaman sehingga mening- katkan  produktivitas  tanaman, serta mengurangi resiko erosi
tanah.  Biochar  juga berperan dalam menyediakan lingkung- an yang   cocok   untuk   pertumbuhan   mikroba,  di antara- nya Trichoderma  harzianum yang  teruji  mampu  meningkat- kan pertumbuhan tanaman dan mengendalikan penyakit tular tanah. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui  kompatibilitas T.  harzianum DT38  koleksi  BPBPI  pada  bahan  pembawa berupa  campuran  biochar  tandan  kosong  kelapa  sawit (TKKS)  dan  gambut  selama  penyimpanan  28  hari  secara in vitro .  Rancangan  percobaan  penelitian  ini  menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  untuk  menguji  lima perlakuan,  yaitu  :  1)  100%  biochar  TKKS  (K 1 ),  2)  100% gambut  (K 2 ),  3)  Campuran  biochar  TKKS  dan  gambut  1  :  4 (F 1 ), 4) Campuran biochar TKKS dan gambut 1 : 8 (F 2 ), dan 5)  Campuran  biochar  TKKS  dan  gambut  1  :  12  (F 3 ).  Hasil pengamatan  pada  penyimpanan  0  dan  7  hari  menunjukkan bahwa  jumlah  propagul T.  harzianum DT38  dari  berbagai formula tidak berbeda nyata.  Jumlah propagul antara formula F 1 dan  K 2 , serta  F 2 dan  F 3 tidak berbeda  nyata  pada penyim- panan 14, 21 dan 28 hari.  Penambahan gambut pada biochar TKKS  dapat  meningkatkan  jumlah  propagul T.  harzianum DT  38  selama  penyimpanan  28  hari  secara in  vitro .    Jumlah propagul T.  harzianum DT38  pada  media  F 1 ,  F 2 dan  F 3 selama  penyimpanan  28  hari  masih  memenuhi  jumlah minimal propagul dalam bahan pembawa yang  menunjukkan bahwa  media  ini  sesuai  untuk  pertumbuhan  mikroba  dan berpotensi sebagai formula pupuk hayati.
[Kata  kunci: Trichoderma  harzianum, arang  hayati,  TKKS, pupuk hayati]

## Pendahuluan
Penggunaan  pupuk  dan  pestisida  kimia  secara terus menerus terbukti menurunkan kualitas tanah yang mengakibatkan  penurunan  produktivitas  tanaman. Lahan  pertanian  yang  rusak  dapat  dikembalikan  lagi tingkat kesuburannya dengan pengolahan yang baik, di antaranya  dengan  penggunaan  arang  hayati  (biochar) sebagai  pembenah  tanah.  Dalam  pengelolaan  tanah, arang  hayati  berfungsi  sebagai  penyedia  karbon  dan pembedah tanah (Verheijen et al ., 2010). Dibandingkan bahan  organik  lain  seperti  sampah  dedaunan,  kompos atau  pupuk  kandang,  arang  hayati  lebih  efektif  me- nahan  unsur  hara.  Kemampuan  arang  hayati  dalam meningkatkan  kesuburan  tanah  berhubungan  dengan kemampuannya  untuk  menahan  air,  mengurangi
*) Penulis korespondensi: Irma.kresnawaty@yahoo.com
Dinamika populasi Trichoderma harzianum DT38 pada …………(Kresnawaty et al .)
keasaman  tanah,  menjaga  ketersediaan  nutrien  yang penting bagi tanaman  sehingga meningkatkan produk- tivitas  tanaman,  serta  mengurangi  resiko  erosi  tanah (Ernsting & Smolker, 2009; Gani, 2008).  Hal tersebut menjadi  pertimbangan  mengapa  arang  hayati  banyak diaplikasikan pada lahan miskin hara dan lahan masam untuk meningkatkan pH tanah (Lehmann et al ., 2006). Selain  itu  Lehmann  &  Rondon  (2006)  melaporkan bahwa  arang  hayati  juga  merupakan  media  tumbuh yang  baik  bagi  berbagai  mikroba  tanah.  Dalam  pori mikro arang hayati, kompetisi yang terjadi antara fungi dengan  saprofit  lainnya  cukup  rendah,  sehingga  fungi dapat  bersporulasi  dengan  baik  (Saito  &  Marumoto, 2002).  Oleh  karena  itu  biochar  berpotensi  sebagai media  yang  menguntungkan  bagi  pertumbuhan mikroba  untuk menghasilkan pupuk hayati  (Saraswati et al., 2006). Hasil penelitian sebelumnya menunjukan bahwa  arang  hayati  asal  TKKS  mengandung  hara makro  dan  mikro  yang  penting  untuk  tanaman,  serta memiliki kapasitas menahan  air yang tinggi (Kresnawaty et al., 2010).
Arang  hayati  dapat  dihasilkan  dari  bahan  baku limbah  biomassa,  di  antaranya  limbah  industri  per- tanian  dan  perkebunan,  serta  limbah  peternakan (Lehmann et al ., 2006; Gani, 2008).  Salah satu limbah perkebunan yang sangat potensial sebagai bahan baku arang  hayati  adalah  tandan  kosong  kelapa  sawit (TKKS)  yang  jumlahnya  mencapai  21  –  23%  dari berat  total  tandan  buah  segar  (TBS).  Total  jumlah limbah  TKKS  seluruh  Indonesia  pada  tahun  2009 mencapai  4,2  juta  ton  (Wardani,  2012 ). Selama  ini sebagian  besar  TKKS  digunakan  sebagai  mulsa  di kebun sawit tanpa proses pengomposan yang  beresiko memicu  serangan  hama  kumbang Oryctes  rhinoceros dan  serangan Ganoderma sp.. PengomposanTKKS memerlukan waktu 2-4 bulan dan produk kompos yang dihasilkan  masih  bersifat  voluminus  sehingga  me- merlukan  biaya  angkut  yang  mahal  (Tri  Panji et  al ., 2011).  Konversi  TKKS  menjadi  arang  hayati  men- jawab  kendala  pemanfaatan  limbah  tersebut  dengan proses yang lebih cepat dan menghasilkan produk yang ringan  dan  mudah  dikemas.  Jamur Trichoderma harzianum DT38 koleksi Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan  Indonesia  (BPBPI)  Bogor  merupakan jamur  unggul yang teruji dapat meningkatkan pertum- buhan  tanaman  dan  menekan  pertumbuhan Gano- derma sp.  (Isroi,  2008).  Dengan  demikian  aplikasi arang  hayati  TKKS  yang  mengandung  inokulum T.  harzianum DT38  diharapkan  dapat  menjawab permasalahan kesuburan lahan.
Salah  satu  faktor  yang  menjadi  kendala tumbuh- nya jamur dalam arang hayati adalah pH tinggi, karena jamur  lebih  menyukai  kondisi  lingkungan  dengan  pH asam (Kalogeris et al ., 2003). Kombinasi arang hayati TKKS  dengan  bahan  lain  untuk  mendapatkan  kondisi bahan  pembawa  yang  sesuai  ( compatible )  bagi  jamur sangat  dibutuhkan. Gambut  dikenal  sebagai  bahan
yang  dapat  menyediakan  nutrisi  dan  memiliki  pH asam,  sehingga  dapat  digunakan  untuk  menurunkan pH arang hayati TKKS.
Campuran  arang  hayati  TKKS  dan  gambut  di- harapkan  mampu  meningkatkan  kompatibilitas  jamur, sehingga  berpotensi  sebagai  bahan  pembawa  mikroba pada  pupuk  hayati.  Formula  media  yang  digunakan adalah  campuran  arang  hayati  dan  gambut  yang menghasilkan  pH  netral.  Dalam  penelitian  ini dilakukan  pengujian  bahan  pembawa  arang  hayati TKKS  yang  dicampur  dengan  gambut  pada  berbagai perbandingan  untuk  menumbuhkan  jamur T.  harzi- anum DT38.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  dinamika  pertumbuhan T.  harzianum DT38    pada  campuran  biochar  dari  tandan  kosong kelapa sawit (TKKS) dan gambut selama penyimpanan 28 hari secara in vitro .

## Bahan dan Metode
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah:  TKKS  dari  pabrik  kelapa  sawit  Kertajaya- Banten  milik  PTPN  VIII,  tanah  gambut  dari  Rawa Lakbok-Ciamis,  kentang,  agar,  gula  pasir, T.  harzi- anum DT38  koleksi  BPBPI,  Streptomisin  dan  alat teknis lain untuk pembuatan arang hayati TKKS.

## Pembuatan  arang  hayati  dari  TKKS  dengan  metode drum kiln
Proses  pembuatan  arang hayati  dilakukan menurut Iskandar & Santoso (2005) dengan metode drum kiln . TKKS  dicacah  kemudian  dikeringkan  dengan  sinar matahari. Potongan TKKS dimasukkan ke dalam drum ukuran diameter 50 cm dan tinggi 1,2 m hingga penuh dan  ditata  agar  tidak  ada  ruang  kosong.  TKKS dipanaskan secara tidak langsung dalam kondisi kedap oksigen  selama  dua  jam  dengan  bahan  bakar  kayu. Pengukuran  suhu  dilakukan  setiap  15  menit    dengan termometer  infra  merah  model  ST  652.  Proses pembakaran  dihentikan  setelah  dua  jam  dengan mengalirkan  air  ke  dalam  lubang  kompresor  untuk mematikan api. Drum dibiarkan menjadi dingin selama 24  jam,  kemudian  penutup  dibuka  untuk  mengambil arang hayati (Kresnawaty et al ., 2010).
Formulasi  biochar  TKKS  dan  gambut  sebagai  bahan pembawa T.harzianum DT38.
Gambut  yang  telah  dikeringkan  hingga  kadar airnya  ±  20%  dan  arang  hayati  berukuran  35 mesh, ditimbang  dan  dicampur  dengan  berbagai  per- bandingan  (Tabel  1).  Pengukuran  pH  formula  dilaku- kan  menurut  Masulili et  al. (2010)  menggunakan  pH meter  Hanna  terhadap  campuran  1  g  sampel  dan 100  mL  aquades.  Kadar  air  setiap  formula  dibuat sama,  yaitu    dengan  cara  mengalirkan  air  sebanyak 5 mL  ke  dalam 10 g   formula  kering  di  atas  kertas
Menara Perkebunan 2012 80(1), 17-24
saring  dalam  saringan  35 mesh .  Setiap  formulasi dibuat sebanyak  lima botol selai berisi 20 mg formula dengan  tiga  kali  ulangan  sehingga  semuanya berjumlah  15  botol.  Formula  tersebut  disterilisasi menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121°C  selama 20 menit. Pengambilan contoh  dilakukan pada interval waktu 0, 7, 14, 21, dan 28 hari  masa penyimpanan dan diambil dari botol berbeda.
Peremajaan  dan pembuatan inokulum T. harzianum DT38
Isolat T.  harzianum DT38  diremajakan  pada media PDA yang mengandung streptomisin 500 mg/L. Kultur  diinkubasi  selama  tujuh  hari  pada  suhu  ruang. Ke  dalam  tiga  biakan T.  harzianum DT38  dalam cawan  Petri  berumur  tujuh  hari,  masing-masing ditambah  10  mL  akuades  steril.  Konidia  yang  telah dilepas dan bercampur dengan akuades dalam masing- masing  cawan  Petri  dipindahkan  ke  dalam  satu  botol selai  steril  dan  ditambahkan  60  mL  akuades  steril. Suspensi dikocok menggunakan vortex mixer . Suspensi  sebanyak  0,1-0,5  mL  diteteskan  di  atas Haemocytometer Neubeuer dengan pipet steril,  diatur hingga  merata  dalam  ruang  hitung Haemocytometer , kemudian  konidia  jamur  dihitung  menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 400 kali.
Pengamatan  dinamika  populasi T.  harzianum DT38 pada  media hasil formulasi
Sebanyak 1 g sampel diambil dari tiap formulasi bahan  pembawa,  kemudiam  diencerkan  dengan akuades  steril  sampai  volume  mencapai  10  mL (pengenceran 10 -1 ). Selanjutnya
dilakukan pengenceran sampai 10 -7 . Empat pengenceran tertinggi,  yaitu  10 -4 ,10 -5 ,  10 -6 dan  10 -7 diambil  1  mL dan  diratakan  dalam  cawan  Petri  steril,  dan  media PDA + Streptomisin dituang secara aseptis, dihomogenkan    kemudian  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  kamar.  Propagul  yang  tumbuh  berbentuk koloni  berwarna  putih  dihitung  sebagai  satu  individu. Perhitungan diulang setelah masa inkubasi 48 jam dan 72  jam.  Jumlah  propagul/g  setiap  sampel  kemudian dihitung  menggunakan  metode Total  Plate  Count (TPC) .
Data  pendukung  yang  diamati  adalah  kadar  air, pH, dan kadar hara makro dan mikro bahan pembawa. Pengukuran  pH  dilakukan  menurut  Masulili et  al. (2010). Pengamatan diambil dari botol sampel berbeda pada  penyimpanan  0,  7,  14,  21  dan  28  hari. Pengukuran  kadar  air  dilakukan  menurut  Siswanto  & Suharjono (2006).

## Rancangan percobaan dan analisis data
Penelitian  dilakukan  dengan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  dengan  satu  faktor,  yaitu  formula media. Formula diuji dalam tiga taraf, yaitu : F 1 , F 2 , F 3 dengan  dua  kontrol  formula  yakni  K 1 dan  K 2 dengan tiga  kali  pengulangan  pada  setiap  perlakuan.  Analisis data  hasil  pengamatan  dilakukan  menggunakan  SPSS 16.0.  Normalitas  data  diuji  menggunakan Shapiro- Wilk ,  sedangkan  homogenitas  diuji  menggunakan Levene’s  statistic. Data  kemudian  diuji  dengan One- Way  ANOVA ,  dilanjutkan  Uji  beda  (Uji Duncan ) dengan α 0,05, untuk mengetahui perbedaan perlakuan formula media (Dahlan, 2009).

## Hasil dan Pembahasan
Dinamika populasi T.harzianum DT 38 dalam media pembawa
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa T.harzi- anum DT38  yang  diambil  dari  berbagai  formula campuran  arang  hayati  dan  gambut  selama  periode penyimpanan  28 hari  dapat  tumbuh  dengan  baik  pada media PDA. Selain itu di permukaan  formula diamati munculnya  warna  hijau  yang  merupakan  ciri  khas koloni T.harzianum DT 38 (Gambar 1). Populasi  awal T.  harzianum DT  38  (t=0)  dalam semua media  pembawa hampir sama, yaitu ± 2,0 x10 8 konidia/mL (Gambar 1). Selanjutnya populasi T. harzi- anum DT38  pada  hari  ke-28  untuk  formula  arang hayati TKKS dan gambut (F1, F2, F3 dan K2) berkisar 10 7 cfu/g,  sedangkan  kontrol  (K1)  yang  mengandung arang hayati TKKS saja mengalami penurunan sampai 10 6 cfu/g. Jumlah propagul per gram dari semua media pada  penyimpanan  0  dan  7  hari  tidak  berbeda  nyata. Hal  ini  diduga  karena T.  harzianum DT38  berada dalam  fase  adaptasi,  meskipun  pada  media  K 1 sudah tampak kecenderungan mengalami penurunan

## Tabel 1. Komposisi formula bahan pembawa yang diuji
Table 1. Composition  of  tested carrier formula

## Formula
Formula
Perbandingan arang hayati : Gambut EFBOP Biochar : Peat ratio (200 g berat kering b/b /dry weight w/w ) F 1 1 : 4 F 2 1 : 8 F 3 1 : 12 K 1 100% arang hayati TKKS ( biochar EFBOP ) K 2 100% gambut ( peat )
Dinamika populasi Trichoderma harzianum DT 38 pada ………………..(Kresnawaty et al. )
Gambar  1. Pertumbuhan T. harzianum DT 38 pada berbagai  media setelah  penyimpanan 28 hari, F 1 = arang hayati TKKS (1) : gambut (4);   F 2 = arang  hayati  TKKS (1) : gambut  (8);   F 3 = arang  hayati  TKKS(1) : gambut (peat) (12); K 1 = kontrol arang hayati TKKS dan; K 2 = kontrol gambut.
Figure  1.   The growth of T. harzianum DT 38 on various  media condition after 28 days  incubation,  F 1 = EFBOP biochar (1) : peat (4) ; F 2 =  EFBOP biochar (1) : peat (8) ; F 3 =  EFBOP biochar (1) : peat (12) ; K 1 = control    EFBOP biochar ; and K 2 = control peat.
(Gambar 2)  yang diduga disebabkan kondisi pH yang terlalu  tinggi.  Konidia T.  harzianum DT38  juga  tidak muncul  di  permukaan  media  K 1 selama  penyimpanan 28 hari (Gambar 2). Hal ini diduga karena keterbatasan nutrien  tersedia  dalam  formula  media  K 1 .  Sumber karbon  organik  tersedia  yang  berasal  dari  komponen selulosa  dan lignin  dalam TKKS  sebagian  besar telah terkonversi  menjadi  bentuk  kristal  dan  aromatik setelah  menjadi  arang  hayati  (Surjosatyo  &  Vidian, 2004).  Karbon  dalam  bentuk  kristal  dan  aromatik sangat sulit digunakan oleh jamur (Joseph et al ., 2010), sementara  menurut  Widyastuti et  al. (2002),  konidia Trichoderma memerlukan  nutrien  terutama  C  dan  N organik tersedia dari luar sel untuk berkecambah.

## Perubahan  pH dan kadar air
Kondisi  pH  pada  formula  K 1 (Gambar  3)  meng- hambat  pertumbuhan T. harzianum DT38, meskipun
tetap bertahan hingga 28 hari dilihat dari penghitungan TPC.  Kondisi  pH  lingkungan  yang  terlalu  basa  akan menghambat  kerja  enzim  ekstra  seluler  untuk  men- dekomposisi substrat, kemudian menyerap nutrien dari luar  sel  untuk  pertumbuhan  jamur.  Selain  itu, komponen fenol dalam arang hayati (Elad et al., 2010) dapat  menghambat  perkecambahan  spora  jamur. Meskipun T.  harzianum mampu  memproduksi  enzim ekstra seluler berupa fenoloksidase  yang optimal pada pH  5  (Mucha,  2011),  tetapi  jika  pH  media  K1 mencapai  9  (Gambar  3),  enzim  tersebut  diduga  tidak dapat  bekerja  optimal.  Menurut  Graber et  al .  (2010), meskipun  fenoloksidase  berjumlah  sedikit,  arang hayati  masih  mengandung  beberapa  komponen tersedia  seperti  mineral  anorganik  N,  P,  dan  K,  serta senyawa  seperti  asam  butirat,  asam  propionat,  dan asam  benzoat  yang  diduga  dapat  digunakan  oleh mikroba untuk mempertahankan hidupnya. Meskipun
5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8,5 0 hari 7 hari 14 hari 21 hari 28 hari K1 K2 F1 F2 F3 lo g pr o pa g ul /g masa penyimpanan (hari)/ periode of storage ( days )
F1 F2 F3 K1 K2
Gambar  2.  Jumlah  propagul/g  dari  berbagai  formula  media  pada  penyimpanan  0,  7,  14,  21  dan  28  hari,  F 1 =  arang  hayati TKKS (1) :  gambut (4); F 2 = arang hayati TKKS (1) : gambut  (8); F 3 = arang hayati TKKS(1) : gambut (peat) (12); K 1 = kontrol arang hayati TKKS dan ; K 2 = kontrol gambut.
Figure 2.   Number of propaguls/g of  media formulas at  0, 7, 14, 21 and 28 days of storage , F 1 =  EFBOP biochar (1) : peat      (4)  ;  F 2 =   EFBOP  biochar  (1)  : peat  (8)  ;  F 3 =    EFBOP  biochar  (1)  :  peat  (12)  ;  K 1 =control  EFBOP biochar ; and K 2 = control peat.
mikroba  tetap  hidup,  namun  dalam  keadaan  dorman, dan  tidak  menghasilkan  eksudat  asam  sehingga  pH realatif  stabil  pada  kisaran  5-6  selama  28  hari  masa inkubasi
Dilihat dari jumlah propagul T. harzianum DT38 memiliki kompatibilitas yang  tinggi pada formula F 1 , F 2 , F 3 dan K 2 selama masa penyimpanan 14, 21 dan 28 hari.  Komposisi  formula  F 1 ,  F 2 dan  F 3 yang mengandung  campuran  arang  hayati  TKKS  dan gambut  dengan  perbandingan  1  :  4;  1  :  8;  dan  1  :  12 memiliki  derajat  keasaman  antara  6  -  7  (Gambar  3). Hal ini disebabkan karena mineral dalam arang hayati, seperti  Mg,  K,  Ca,  P  dan  Na  dapat  menaikkan  pH gambut (Budianta, 2003). Kisaran pH pada formula F 1 , F 2 dan  F 3 adalah  pH  optimum  untuk  pertumbuhan jamur.
Perubahan  pH  terjadi  akibat  adanya  reaksi  CO 2 dan air. Karbon dioksida merupakan hasil metabolisme aerob  jamur.  Reaksi  CO 2 dan  air  menghasilkan  asam karbonat.  Keberadaan  asam  karbonat  dapat  menurun- kan  pH  secara  signifikan  pada  pH  awal  media  antara 5  –  9.  Media  K 2 tidak  mengalami  penurunan  pH selama  penyimpanan  (Gambar  3),  meskipun  terjadi pertumbuhan T.  harzianum DT38.  Hal  ini  diduga karena  pH  awal  formula  K 2 adalah  asam,  sehingga asam  karbonat  yang  dihasilkan  tidak  cukup  banyak untuk dapat menurunkan pH media.
Dilihat  dari  jumlah  propagul  pada  penyimpanan 14,  21  dan  28  hari,  formula  F 2 dan  F 3 memiliki kompatibilitas  lebih  baik daripada  formula  K 2 dan  F 1 . Uji  beda  menunjukkan  bahwa  jumlah  propagul  pada formula  F 2 dan  F 3 pada  masing-masing  penyimpanan 14,  21  dan  28  hari,  berbeda  secara  signifikan  dengan jumlah  propagul  pada  formula  K 2 dan  F 1 .  Menurut Said et al. (2003),  konidia T. harzianum pada formula dengan  kondisi  pH  awal  6  –  7,  mengalami  per- kecambahan  lebih  baik  dibanding  media  dengan  pH
awal 5. pH awal  formula F 2 dan F 3 adalah 6, sehingga lebih  sesuai  bagi  pertumbuhan T.  harzianum DT38 dibandingkan  dengan  formula  K 2 dengan  pH  awal  5, tetapi  meskipun  pH  awal  formula  F 1 adalah  7, komposisi  perbandingan  antara  arang  hayati  TKKS dan  gambut  diduga  mempengaruhi  jumlah  propagul T. harzianum DT38. Komposisi campuran arang hayati TKKS  dan  gambut  pada  media  F 2 dan  F 3 diduga mengandung  porsi  nutrien  tersedia  yang  lebih  sesuai bagi  ketahanan  hidup T.  harzianum DT38  dibanding- kan dengan formula F 1 pada penyimpanan 14 - 28 hari. Penurunan  kadar  air  formula  K 1 paling  rendah dibanding  formula  lain  selama  penyimpanan  28  hari (Gambar  4).  Pertumbuhan  konidia  yang  terhambat menyebabkan konidia tidak dapat menyerap banyak air dari  media  untuk  pertumbuhannya.  Bahkan  jika konidia  mengalami  dormansi,  maka  air  dari  media tidak  dapat  diserap  oleh  sel,  karena  permeabilitas membran  sel  konidia  saat  dormansi  rendah,  sehingga tidak  dapat  melewatkan  nutrien  seperti  protein,  poli- sakarida,  oksigen  dan  air  dari  media  ke  dalam  sel (Allen et  al .,  2003).  Kompatibilitas T.  harzianum DT 38  pada  formula  K 1 menjadi  paling  rendah  dibanding formula  lain  dilihat  dari  jumlah  propagul  selama penyimpanan 28 hari.
Penurunan  kadar  air  pada  formula  F 1 ,  F 2 ,  F 3 dan K 2 lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  formula  K 1 (Gambar  4).  Hal  ini  diduga  karena  selain  disebabkan oleh  penguapan,  air  digunakan  untuk  pertumbuhan konidia  jamur  hingga  membentuk  koloni  baru, terutama dari pengamatan 0 – 7 hari. Menurut Allen et al .  (2003),  konidia  jamur  membutuhkan  air  dalam jumlah  besar  untuk  melakukan  perkecambahan.  Air digunakan  konidia  untuk  menambah  ukuran  konidia sehingga membentuk buluh kecambah ( germ tube ) dan akhirnya membentuk hifa atau organ lainnya.
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 0 hari 7 hari 14 hari 21 hari 28 hari pH masa penyimpanan (hari)/ periode of storage ( days )
K1 K2 F1 F2 F3
Gambar 3.    Nilai pH berbagai formulasi media pada penyimpanan 0, 7, 14, 21 dan 28 hari, F 1 = arang hayati TKKS (1) : gambut (4); F 2 = arang hayati TKKS (1) : gambut  (8); F 3 = arang hayati TKKS(1) : gambut (peat) (12); K 1 = kontrol arang hayati TKKS dan ; K 2 = kontrol gambut.
Figure 3.     pH value of various media formulations in 0, 7, 14, 21 and 28 days of  storage, F 1 = EFBOP biochar (1): peat (4) ; F 2 =  EFBOP biochar (1) : peat (8) ; F 3 =  EFBOP biochar (1) : peat (12) ; K 1 = control EFBOP biochar ; and K 2 = control peat.
Dinamika populasi Trichoderma harzianum DT 38 pada………….. (Kresnawaty et al .)
Tabel  2. Kadar  hara makro dan  mikro  dari  formula arang hayati TKKS dan gambut  yang ditambahkan T. harzianum pada t 0 (hari ke-0) dan t 28 (hari ke-28).
Table  2.  Macro  and  micro  nutrient  contents  of  EFBOP  biochar  and  peat  with  the  addition  of T.  harzianum on    t 0 (day  0) and t 28 (day 28 th ). Unsur Elements Konsentrasi makro dan mikro nutrient ( Macro and micro nutrients concentration ) Arang hayati TKKS EFBOPBiochar t 0 Arang hayati TKKS + T.harzianum t 28 EFBOP Biochar + T.harzianum t 28 Gambut Peat t 0
Gambut+ T. harzianum Peat + T.harzianum t 28 Nitrogen/ Nitrogen (%) 0,89 0,89 1,41 1,39 Fosfor/ Phosphorus (%) 0,58 0,56 0,15 0,13 Kalium/ Potassium (%) 7,81 8,14 0,08 0,06 Magnesium/ Magnesium (%) 0,67 0,68 0,28 0,28 Kalsium/ Calcium (%) 1,59 1,50 3,20 3,10 Mangan/ Manganese (ppm) 622 546 342 355 Boron/ Boron (ppm) 38 39 28 29 Seng/ Zink (ppm) 357 265 48 58

## Kadar hara makro dan mikro media formulasi
Pada  hari  ke-28  tidak  terjadi  penurunan  kadar hara makro dan mikro  arang hayati dan gambut dalam jumlah yang  berarti   (Tabel 2),  kecuali  pada kadar seng  (Zn).  Hal  ini  dikarenakan  seng  tersebut  diperlu- kan  dalam  jumlah  yang  signifikan  oleh  mikroba T. harzianum untuk memproduksi hifa jamur (Yazdani et al ., 2010).  Zn juga diperlukan oleh berbagai protein lain,  serta  oleh  biomembran.  Konidia T.  harzianum DT 38 muncul di permukaan formula F 1 , F 2 , F 3 dan K 2
(Gambar  1).  Campuran  arang  hayati  TKKS  dan gambut  diduga  mampu  meningkatkan  jumlah  nutrien tersedia  bagi  pertumbuhan T.  harzianum DT38  dalam bahan pembawa. Gambut mengandung sedikit mineral, tetapi    menyuplai    bahan    organik    tersedia  seperti selulosa,  lignin,  pektin  dan  protein  yang  dapat digunakan  oleh T.  harzianum DT38,  sedangkan  arang hayati  menambah  kandungan  mineral  tersedia  seperti N,  P,  K,  Ca  dan  Mg  yang  berguna  bagi  pertumbuhan primer jamur (DeLuca et al. , 2009).
0 10 20 30 40 50 60 0 hari 7 hari 14 hari 21 hari 28 hari K a d a r a ir/ W a te r c o n te n ts (% ) masa penyimpanan  (hari)/ periode of storage ( days )
K1 K2 F1 F2 F3
Gambar    4.  Kadar  air  (%)  berbagai  formula  pada  penyimpanan  0,  7,  14,  21,  dan  28  hari,  F 1 =  arang  hayati  TKKS  (1)  : gambut (4); F 2 = arang hayati TKKS (1) : gambut  (8); F 3 = arang hayati TKKS(1) : gambut (peat) (12); K 1 = kontrol arang hayati TKKS dan ; K 2 = kontrol gambut.
Figure  4.  Water content(%) of  various formula  in 0, 7, 14, 21 and 28 days of storage, F 1 =  EFBOP biochar (1) : peat (4) ; F 2 =  EFBOP biochar (1) : peat (8) ; F 3 =  EFBOP biochar (1) : peat (12) ; K 1 =control EFBOP biochar ; and K 2 = control peat

## Menara Perkebunan 2012 80(1), 17-24

## Kesimpulan
Penambahan  gambut  pada  arang  hayati  TKKS dapat  meningkatkan  jumlah  propagul T.  harzianum DT38.  Jumlah  propagul T.  harzianum DT38  pada formula  F 1 ,F 2 dan  F 3 selama  penyimpanan  28  hari masih  memenuhi  jumlah  minimal  propagul  dalam media  pembawa,  yaitu  sebanyak  10 7 propagul    yang menunjukkan  potensi  sebagai  bahan  pembawa  pupuk hayati.

## Ucapan Terimakasih
Terimakasih  disampaikan kepada  Sayhas  Suhda, mahasiswi  Jurusan  Biologi  Universitas  Diponegoro atas  bantuan  teknisnya  selama  pengerjaan  penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Allen BJ  Wu  &  H  Doan (2003).  Inactivation  of  fungi associated  with  barley  grain  by  gaseous  ozone. J Environ  Sci  &  Health,  Part  B:  Pesticides,  Food Contaminants and Agricultural Wastes 38(5), 617-630.
Budianta D (2003). Strategi pemanfaatan hutan gambut yang berwawasan  lingkungan. Dalam : Lokakarya  Penge- lolaan  Lahan  Gambut  Secara  Bijaksana  dan berkelanjutan  di  Indonesia. Bogor,  13-14  Oktober 2013.
Dahlan  MS  (2009). Statistik  untuk  kedokteran  dan kesehatan . Jakarta, Salemba Medika.
DeLuca TH, MD MacKenzie & MJ Gundale (2009). Biochar effect on soil nutrient transformation. In : Lehmann J& S Joseph (eds.). Biochar For Environmental Management:  Science  And  Technology Science and Technology . Earthscan/James & James, p.251
Elad  Y,  DR  David,  YM  Harel,  M  Borenshtein,  HB  Kalifa, A  Silber  &  ER  Graber  (2010).  Induction  of  systemic resistance  in  plants  by  biochar,  a  soil-applied  carbon sequestering agent. Phytopathol 100(9), 913-921.
Ernsting  A  &  RS  Molker  (2009). Biochar  for  Climate Change  Mitigation:  Fact  of  Fiction ?  Taken  from: http://www.biofuelwatch.org.uk/docs/biocharbriefing.p df [January 2012]
Gani  A  (2008).    Biochar  penyelamat  lingkungan. Warta Penelitian dan Pengembangan Pertanian 6(31), 15-16.
Graber  ER,  YM  Harel,  M  Kolton,  E  Cytryn,  A  Silber,
DR  David,  L  Tsechansky,  M  Borenshtein  &  Y  Elad
(2010).  Biochar  impact  on  development  and  produc- tivity of pepper and tomato grown in fertigated soilless media. Plant Soil J 337, 481–496.
Iskandar H & KD Santosa (2005). Cara Pembuatan Biochar Kayu :  Alternatif  Pemanfaatan  Limbah  Kayu  oleh Masyarakat .  Bogor,  Center  for  International  Forestry Research.
Isroi  (2008). Aplikasi  Trichoderma  harzianum  dan Aspergillus  sp.  pada  tanaman .  Diunduh  dari:http:// isroi.  aplikasi_ Trichoderma_harzianum. [07  September 2010]
Kalogeris  E,  P  Chistakopoilos,  P  Katapodis,  A  Alexiou,
S  Vlachou,  D  Kekos  &  BJ Macris (2003).  Production and  characterization  of  cellulolytic  enzymes  from  the thermophilic  fungus Thermoascus  aurantiacus under solid  state  cultivation  of  agricultural  wastes. Process Biochem 38(7), 1099–1104.
Kresnawaty  I,  A  Budiani  & TW  Darmono  (2010).  Konversi limbah  TKKS  menjadi  biochar  hayati  (biochar)  untuk konservasi  mikroba  tanah,  penyediaan  nutrisi,  dan karbon  seng.  Bogor,  Balai  Penelitian  Bioteknologi Perkebunan  Indonesia. Laporan  Akhir  Kegiatan Penelitian Kerjasama dengan PTPN IV
Joseph SD, M Camps-Arbestain, Y Lin, P Munroe, CH Chia,
J Hook, L van Zwieten, S Kimber, A Cowie, BP Singh, J  Lehmann,  N  Foidl,  RJ  Smernik&JE  Amonette. (2010).    Aninvestigation  into  the  reactions  of  biochar in soil. Soil Research 48(7), 501-515.
Lehmann    &    M  Rondon  (2006).  Biochar  soil  management on  highly  weathered  soils  in  the  humid  tropics In : Uphoff    N    (Ed.). Biological  Approaches  to Sustainable Soil System. New York , CRC Press.
Lehmann,  J  Gaunt  &  M  Rondon  (2006).  Biochar sequestration  in  terestrial  ecosystem  : A  Review Mitigatoin  and  Adaptation  Strategies  for  Global Change 11, 403-427.
Masulili  A,  WH  Utomo  &  Syechfani  (2010).  Rice  husk biochar  for  rice  based  cropping  system  in  acid  soil  1. the  characteristics  of  rice  husk  biochar  and  its influence on the properties of acid sulfate soils and rice growth  in  West  Kalimantan,  Indonesia. J  Agricl  Sci 2(1), 39-47.
Mucha J  (2011). Changes in hyphal morphology and activity of    phenoloxidases  during  interactions  between selected  Ectomycorrhizal    fungi  and  two  species  of Trichoderma. Antonie  Van  Leeuwenhoek  Journal 100(1), 155-160.
Said  SD,  M  Hasan  &  KB  Ramachandran  (2003).  Effect  of pH  on  growth,  spore  production  and spore  viability  of biocontrol agent Trichoderma harzianum in submerged fermentation. American J Chem 3(1), 14-18.
Saito M & T Marumoto (2002). Inoculation with arbuscular mycorrhizal  fungi:  The  status  quo  in  Japan  and  the future prospects. Plant & Soil 244, 273–279.
Saraswati  R,  E  Santosa  &  E  Yuniarti  (2006).  Organisme perombak bahan organik. Dalam : RDM Simanungkalit et  al. (Eds.). Pupuk  Organik  dan  Pupuk  Hayati . Diunduh  dari:  http//www/balittanah.litbang.deptan.go id [21 Februari 2011].
Siswanto D & Suharjono (2006). Komunitas kapang tanah di lahan kritis berkapur das brantas pada musim kemarau. Bioscientiae 3(1), 1-14.
Dinamika populasi Trichoderma harzianum DT 38 pada………….. (Kresnawaty et al. )
Surjosatyo  A  &  F  Vidian  (2004).  Studi  co-gasifikasi tandan kosong  dan  tempurung  kelapa  sawit  menggunakan gasifier  aliran  ke  bawah. Dalam : Prosiding  Seminar Nasional  Rekayasa  Kimia  dan  Proses .  Semarang    21- 22  Juli  2004,  Jurusan  Teknik  Kimia,  Universitas Diponegoro.
Tri  Panji,    A  Purwantara  &  TW  Darmono  (2011). 104 Inovasi  Terbaik  Indonesia  Tahun  2011 .  Jakarta, Kementrian Ristek.
Verheijen  F,  S  Jeffery,  AC  Bastos,  M  van  der  Velde  & I  Diafas  (2010). Biochar  Application  To  Soil  :  A Critical Scientific Review of Effects on Soil Properties, Processes and Functions. JRC Scientific and Technical Reports. Luxembourg,  The  European  Communities,
149pp.
Wardani  DI  (2012).  Tandan  kosong  kelapa  sawit  (TKKS) sebagai alternatif pupuk organik. J  Lingkungan Hidup Indonesia. 4  Januari  2012 .Diunduh  dari  http:
//avicenia. tripod.com/profil.htm [Januari 2012]
Widyastuti  SM,  Sumardi,  Irfa’i  &  HH  Nurjanto  (2002). Aktivitas  penghambatan Trichoderma spp.  formulasi terhadap  jamur  patogen  tular  tanah  secara in  vitro . J Perlind Tanaman Indonesia 8(1), 27-34.
Yazdani M,  CK  Yap,  F  Abdullah   &  SG  Tan  (2010).  An in vitro study  on  the  adsorption,  absorption  and  uptake capacity  of  Zn  by  the  bioremediator Trichoderma atroviride.  Environment Asia 3(1), 53-59