Jurnal Pharmascience, Vol 3, No. 1, Februari 2016, hal: 32 - 36 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.ppjpu.unlam.ac.id/

## Research Article

## Uji Antioksidan Senyawa Terpenoid Dari Fraksi M-17 Ekstrak Metilena Klorida Kulit Batang Tumbuhan Kasturi ( Mangifera casturi )
Budi Prayitno 1 ,  Kholifatu Rosyidah 2 dan Maria Dewi Astuti 2
1 Program Studi Biologi STKIP PGRI Banjarmasin,
2 Program Studi Kimia FMIPA Universitas Lambung Mangkurat *Email : budi11@mhs.chem.its.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian tentang isolasi senyawa dari ekstrak metilen klorida telah dilakukan. Hasil analisis diduga senyawa tersebut adalah senyawa (23- E )-27- nor- 3 β - hidroksisikloart-23-en-25-on.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  terhadap  radikal  DPPH.  Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikril  hidrazil).  Vitamin  C  digunakan  sebagai kontrol  positif.  Senyawa  1  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  6.751  ppm  dan  IC 50 vitamin  C sebesar 2,98 ppm, sehingga senyawa ini tidak aktif antioksidan.
Kata kunci: Mangifera  casturi ., antioksidan, triterpenoid

## ABSTRACT
Research  on  the  isolation  of  compounds  from  the  fraction  of  M  17  of  methylene chloride  extract  has  been  done.  The  suspected  compound  is  (23-E)-27-nor-3β- hydroxycycloart-23-ene-25-one.  The  aims  of  this  study  were  to  determine  the  antioxidant activity  against  DPPH  radical  fraction  isolates  extracts  of  plants  kasturi  to  DPPH.  The antioxidant  activity  assay  was  conducted  by  DPPH  (1,1-diphenyl-2-picryl  hydrazyl) method,  vitamin  C  using  as  a  positive  control.  Compound  1  has  an  IC50  value  of  6.751 ppm while the value of IC50 for vitamin C was 2,98 ppm, so the compound is not an active antioxidant compounds.
Key words: Mangifera casturi, Antioxidant, triterpenoid
I. PENDAHULUAN
Penelitian tentang senyawa antioksidan eksogen alami terus berkembang.  Antioksidan  alami  dalam makanan  yang  sudah  dikenal,seperti  asam
askorbat,  β-karoten  dan  α-tokoferol mampu mencegah perkembangan berbagai penyakit  (Reynertson,  2007).  Salah  satu tumbuhan  yang  kaya  akan  senyawa- senyawa  yang  aktif  antioksidan  adalah
genus Mangifera. Penelitian  pada  kulit batang Mangifera  indica menunjukkan kandungan  senyawa  aktif  antioksidan seperti  asam  askorbat,  β-karoten  dan senyawa fenolat (Ribeiro , 2007). Selain itu M.  indica juga  mengandung  polifenol, triterpen,  flavonoida,  fitosterol,  serta elemen-elemen  kecil  lainnya,  seperti glukosilsanton,  yang  berfungsi  sebagai antiviral,  antitumor,  antidiabetes  dan antioksidan (Rivera et al., 2008).
Kasturi  ( M.  casturi )  memiliki kekerabatan  dengan M.  indica ,  sehingga diharapkan  kasturi  juga  mengandung metabolit sekunder yang sama atau hampir sama.  Penelitian  sebelumnya  yang  telah diisolasi  senyawa  terpenoida  pada  kulit batang  tanaman M.  casturi yang  diduga senyawa (23- E )-27- nor- 3 β - hidroksisikloart-23-en-25-on  seperti  pada Vatica  cinera (Zhang, et  al., 2002)  dan Ficus  microcarpa (Chiang ,  et  al. ,  2001) dengan  struktur  senyawa  seperti  pada Gambar 1.
O HO
Gambar 1 . (23- E )-27- nor- 3 β -hidroksi sikloart -23-en-25-on
Studi  literatur  terhadap  senyawa (23- E )-27- nor- 3 β -hidriksisikloart 23-en- 25-on  menunjukkan  bahwa  senyawa  ini
memiliki  aktivitas  sitotoksik  (CC 50 )  yaitu sebesar 5,4 µg/ml (12,7 µM) dan memiliki aktivitas  anti-HIV  (IC 50 )    sebesar  21% penghambatan  pada  2,5  µg/ml  (5,9  µM). Keaktivan  ini  lebih  tinggi  daripada  asam betulinat, asam ursolat dan asam betulonat yang  memiliki  CC 50 berturut-turut  sebesar 16,4  µg/ml  (36,0  µM),  7,2  µg/ml  (15,8 µM)) dan 47,7 µg/ml (105,1 µM) dan IC 50 berturut-turut  sebesar  14,8  µg/ml  (32,5 µM),  6,7  µg/ml  (17,7  µM)  dan  9,7  µg/ml (21,4 µM) (Zhang, et al., 2002). Penelitian ini akan dilakukan uji antioksidan senyawa tersebut  dengan  metode  DPPH,  untuk melihat  seberapa  besar  keaktivannya sebagai penangkal radikal DPPH.

## II. BAHAN DAN METODE

## A. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  Fraksi  M  17 dari  penelitian  sebelumya,  pelarut  organik teknis n- heksana,  metilena  klorida (MTC),  aseton,  metanol  (MeOH),  dan  etil asetat  (EtOAc).  Pelarut  organik  pro analitik  (pa)  yaitu  kloroform  (CHCl 3 )  dan metanol.  Alumunium  foil,  kertas  saring Whatman  40,  plat  KLT  silika  gel  Merck 60  GF 254 0,25  mm  ukuran  20  x  20  cm dengan  alumunium  sebagai  penyangga fasa diam, silika gel Merck 60 GF 254 , silika gel  G 60 (60-70 mesh), larutan penampak noda  1,5%  serium  sulfat,  DPPH,  dan vitamin C.

## .

## B. Uji  aktivitas  antioksidan  dengan DPPH
Senyawa  murni  ditotolkan  di  atas plat KLT, kemudian dielusi dengan pelarut yang  sesuai  dan  disemprot  dengan  larutan DPPH  1  mM  dalam  metanol.  Setelah  20 menit,  kromatogram  diamati  (Hanani, 2005).  Senyawa  yang  aktif  sebagai antioksidan  menunjukkan  noda  kuning dengan latar ungu (Siska, 2010).

## C. Penentuan Daya Antioksidan
Uji  antioksidan  senyawa  aktif tersebut,  dilakukan  dengan  menggunakan perlakuan  yang  sama  seperti  perlakuan awal  pada  setiap  fraksi.  Uji  aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ) dilakukan pada panjang gelombang maksimum  (λ maks ).  Penentukan  panjang gelombang  maksimum  DPPH  dilakukan dengan  menambahkan  1  ml  DPPH  1  mM pada  10  ml  metanol,  kemudian  diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer  UV.  Absorbansi  yang paling besar, dilihat
panjang
gelombangnya  dan  dijadikan  panjang gelombang maksimum (λ maks ).
Senyawa  aktif  murni  hasil  isolasi dilarutkan  dalam  metanol  dan  dibuat dalam berbagai konsentrasi. Sampel sebanyak 10 ml dengan variasi konsentrasi 10, 30, 50, 70 dan 90 ppm, dimasukkan ke
dalam  botol  sampel.  Setiap  botol  sampel ditambahkan  1  ml  larutan  DPPH  1  mM dalam  metanol,  kemudian  diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  kamar, selanjutnya serapannya diukur pada panjang  gelombang  maksimum  (Hanani, 2005).  Sebagai  kontrol  positif  dan  untuk pembanding digunakan vitamin C sebanyak 10 ml dengan variasi konsentrasi 1,  2,  3,  4,  dan  5  ppm  (Siska,  2010),  yang dilakukan  dengan  perlakuan  yang  sama seperti  pada  senyawa  murni  aktif  hasil isolasi.  Pengukuran  absorbansi  dengan spektrometer  UV    dilakukan  sebanyak  3 kali  baik  pada  senyawa  hasil  isolasi  dan vitamin C.
Pengolahan data:
Guessan et  al. (2007)  melakukan analisis aktivitas antioksidan sampel ditentukan oleh besarnya hambatan serapan radikal DPPH melalui perhitungan persentase penghambatan (inhibisi) serapan  DPPH  dengan  menggunakan rumus : % 𝑃𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛 = 𝐴 𝑎𝑤𝑎𝑙 − 𝐴 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟 𝐴 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟 𝑋 100 Keterangan : A awal :  Absorbansi  blangko  pada panjang gelombang maksimum A akhir :  Absorbansi  sampel  dalam
radikal  DPPH  1  mM  dalam
metanol pada panjang gelombang maksimum Nilai  IC 50 dihitung  masing-masing dengan  menggunakan  rumus  persamaan regresi linear.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Uji Pendahuluan Antioksidan
Uji  pendahuluan  dilakukan  dengan meneteskan larutan DPPH 1mM pada plat KLT  yang terdapat  noda Senyawa (23- E )- 27- nor- 3 β -hidroksisikloart-23-en-25-on.
Uji  ini  akan  positif  jika  terbentuk  noda berwarna  kuning  dengan  latar  ungu.  Hasil menunjukkan timbulnya noda putih kekuningan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa memiliki daya penangkal radikal DPPH.

## B. Penentuan Daya Antioksidan
Pengukuran daya antioksidan dilakukan  dengan  mengukur  absorbansi DPPH  pada  spektrometer  UV,  setelah direaksikan  dengan  senyawa  yang  akan diukur  daya  antioksidannya.  Pengukuran dilakukan pada panjang gelombang maksimum untuk DPPH. Panjang gelombang maksimum (λ max ) berguna agar absorbansi  DPPH  pada  saat  pengukuran adalah  absorbansi  maksimum.  Panjang gelombang  maksimum  setelah  dilakukan pengukuran adalah 517 nm.
Besarnya  daya  antioksidan  suatu senyawa perlu dibandingkan dengan suatu pembanding  sebagai  kontrol  positif  untuk
mengetahui  seberapa  besar  aktivitasnya. Senyawa  yang  digunakan  sebagai  kontrol positif  harus  telah  terbukti  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tinggi.  Sebagai kontrol  positif  digunakan  asam  askorbat (vitamin C). Pengukuran dilakukan menggunakan  spektrometer  UV  untuk menentukan nilai absorbansinya, kemudian  dibuat  kurva  linear  untuk menentukan  IC 50 vitamin  C  dan  senyawa. Hasilnya  pengukuran  untuk  vitamin  C adalah  IC 50 sebesar  2,98  dengan  grafik seperti  Gambar  2  dan  hasil  pengukuran absorbansi  Senyawa    dilakukan  dan didapatkan kurva seperti Gambar 3.
Gambar  2. Grafik  hubungan  konsentrasi vitamin C dan % Penghambatan
Gambar  3. Grafik  hubungan  konsentrasi senyawa
1 dan % Penghambatan
Hasil pengukuran absorbansi dilakukan  dan  didapatkan  IC 50 untuk senyawa dari kurva linier nilai IC 50 sebesar 6.751  ppm.  Hal  ini  menunjukkan  tidak aktif  antioksidan  karena  nilai  IC 50 diatas nilai kisaran untuk senyawa aktif antioksidan, yaitu maksimal 200 ppm.  Hal ini dapat dikarenakan daya redam senyawa tersebut  terhadap  radikal  DPPH  sangat lemah.

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  dapat  diperoleh dari  penelitian  ini  adalah  hasil  uji antioksidan menunjukkan senyawa memiliki  daya  redam  radikal  yang  lemah dengan  IC 50 sebesar  6.751  ppm,  sehingga dapat  dikatakan  tidak  aktif  sebagai senyawa  antioksidan,  tetapi  dari  studi literatur senyawa tersebut memiliki aktivitas sitotoksisitas.

## DAFTAR PUSTAKA
Chiang,  Y.M.,  J.K.  Su,  Y.H.  Liu,  &  Y.H.
Kuo.  2001.    New  Cyclopropyl-
Triterpenoids  from  the  Aerial
Roots of Ficus microcarpa .
Journal  Chem.  Pharm.  Bull.  49(5) 581—583 (2001).
Hanani,  E.,  A.  Mun’im.,  &  R.  Sekarini.
2005. Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia  sp dari  Kepulauan
Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian . 2 (3) : 127-133.
N’Guessan,  J.D.N.,  A.P.Bidié,  B.N.Lenta, B. Weniger, P. André, & F. Guédé- Guina.  2007.  In  vitro  Assays  for Bioactivity-guided Isolation of Antisalmonella  and  Antioxidant Compound in Thonningia
sanguinea flowers. African Journal of  Biotechnology .  Vol.  6,  No.14  : 1685-1689.
Reynertson,  K.A.  2007. Phitochemical Analysis  of  Bioactive  Constituents from  Edible  Myrtaceae  Fruit, Dessertation. The  City  University of New York. New York.
Rivera  D.G.,  I.H.  Balmaseda,  A.A.  Leon,
B.C.  Hernandez,  L.M.  Montiel,
G.G. Garrido, S. Cuzzocrea, & R.D. Hernandez. 2006. Anti-allergic properties  of Mangifera indica L. extract  (Vimang)  and  contribution of its glucosylxanthone mangiferin. Journal of Pharmacy and
Pharmacology 58 : 385-392.
Ribeiro,  S.M.R.  2007.  Antioxidants  in Mango  ( Mangifera  indica  L. )  Pulp.
Journal  Plant  Foods  for  Human Nutrition 62:13-17.
Siska.  2010. Karakterisasi  Struktur  dan Uji  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa Fenolat dari Kulit Batang
Tumbuhan Binjai (Mangifera caesia). FMIPA UNLAM.
Banjarbaru.
Zhang,  H.J.,  G.T.  Tan,  V.D.  Hoang,  N.V.
Hung, N.M. Cuong, D.D. Soejarto, J.M.  Pezzuto, &  H.  H.  S.  Fong. 2002.  Natural  Anti-HIV  Agents. Part  IV.  Anti-HIV  Constituents from Vatica  cinerea.  Journal  of Institute  of  Chemistry,  National
Center for Science and
Technology.