## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK DAUN SIRSAK (Annona muricata L.)
TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus SECARA IN

## VITRO
Melisa R. Tuna 1) , Billy J. Kepel 1) , Michael A. Leman 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran, UNSRAT

## ABSTRACT
Bacterial infections of the oral cavity are often caused by Streptococcus, Staphylococcus, and micro- organisms rod-shaped gram-negative and anaerobic. Some of  diseases in the oral cavity that can be caused  by  Staphylococcus  aureus  is  periodontal  abscess.  Giving  an  antibiotics  can  be  done  to overcome  it.  But  used  an  antibiotics  often  cause  bacterial  resistance  to  the  antibiotic  substance. The development of an alternative treatment that does not cause side effects needs to be done. One of the plant  that  has  been  used  as  traditional  medicine  include  soursop  leaves.  Soursop  leaves  is  a  kind  of natural  materials  which  contain  tannins,  alkaloids,  saponins  and  flavonoids  that  function  as  an antibacterial.  This  research  aims  to  determine  the  inhibition  of  soursop  leaf  extract  on  growth  of Staphylococcus aureus. This research  was an experimental laboratory with true experimental design and  posttest  only  control  design  with  Kirby-bauer  modification  method  using  filter  paper.  Study subject are soursop leaf third of the shoots were extracted by maceration method using ethanol 96%. The  results  of    this  study  showed  that  the  area  of  the  inhibiting  zone  soursop  extract  was  12,3  mm. From  the  research  can  be  concluded  that  the  soursop  leaf  extracts  have  inhibition  against Staphylococcus aureus accretion. Inhibition of soursop leaf extract third from the shoots, including a strong  group.  But,  the  inhibiting  zone  of  soursop  extract  is  smaller  than  the  inhibiting  zone  of antibiotic.
Keywords: periodontal abscess, soursop leaf extract (Annonamuricata L.), Staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Infeksi bakteri pada rongga mulut yang sering terjadi disebabkan oleh Streptococcus, Staphylococcus, dan  mikroorganisme  gram  negatif  yang  berbentuk  batang  dan  anaerob.  Beberapa  penyakit  dalam rongga mulut yang dapat disebabkan oleh Staphylococcus aureus yaitu abses periodontal. Pemberian antibiotik  dapat  dilakukan  untuk  mengatasi  hal  tersebut.  Namun,  penggunaan  antibiotik  sering menyebabkan  resistensi  bakteri  terhadap  zat  antibiotik.  Pengembangan  suatu  alternatif  pengobatan yang  tidak  menyebabkan  efek  samping  perlu  dilakukan.  Salah  satu  tanaman  yang  telah  lama dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  diantaranya  adalah  daun  sirsak.  Daun  sirsak  merupakan  jenis bahan alam yang memiliki kandungan tannin, alkaloid, saponin, dan flavonoid yang berfungsi sebagai antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  daya  hambat  ekstrak  daun  sirsak  terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus . Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium, menggunakan rancangan eksperimental murni ( true experimental design ) dengan rancangan penelitian posttest  only  control  design dengan  metode  modifikasi  Kirby-bauer  menggunakan  kertas  saring. Subjek  penelitian  ini  ialah  daun  sirsak  urutan  ketiga  dari  pucuk  yang  diekstraksi  dengan  metode maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Hasil dari penelitian didapatkan rata-rata diameter zona  hambat  ekstrak  daun  sirsak Annona  muricata  L. terhadap Staphylococcus  aureus sebesar  12,3 mm.  Daya  hambat  ekstrak  daun  sirsak  urutan  ketiga  dari  pucuk  termasuk  golongan  kuat.  Diameter zona  hambat  dari  ekstrak  daun  sirsak  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  diameter  zona  hambat  dari antibiotik.
Kata kunci: Abses periodontal, Ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L. ), Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Obat-obatan  tradisional  masih  banyak digunakan  oleh  masyarakat  yang  dianggap sangat  bermanfaat  karena  sejak  dulu masyarakat  percaya  bahwa  bahan  alam mampu mengobati berbagai macam penyakit dan memiliki efek samping yang relatif lebih kecil  dibandingkan  obat  yang  terbuat  dari bahan  sintesis. 1 Salah  satu  tanaman  yang telah  lama  dimanfaatkan  sebagai  obat tradisional  diantaranya  adalah  daun  sirsak (Annona muricata L). Tanaman ini termasuk tanaman  tahunan  yang  dapat  berbuah sepanjang tahun, sehingga mudah didapatkan. Daun  sirsak  biasa  digunakan untuk  mencegah  dan  mengobati  abses, hipertensi,  penyakit  hati,  sakit  kepala,  dan diabetes. 2
Kandungan  senyawa asetogenin pada daun sirsak ( Annona muricata L. ) berkhasiat sebagai  antitumor. 3 Kandungan  kimia  sirsak yang  berperan  penting  untuk  obat  adalah flavonoid. 4 Dalam    kebanyakan  kasus, flavonoid  dapat  berperan  secara  langsung sebagai  antibiotik  dengan  mengganggu fungsi organisme, seperti bakteri atau virus. 5
Infeksi  bakteri  pada  rongga  mulut  yang sering terjadi disebabkan oleh Streptococcus, Staphylococcus, dan mikroorganisme gram negatif yang berbentuk  batang  dan  anaerob. 6 Beberapa penyakit  dalam  rongga  mulut  yang  dapat disebabkan  oleh Staphylococcus  aureus yaitu  abses,  gingivitis, angular  cheilitis , parotitis, staphylococcal  mucositis, dan denture  stomatitis. 7 Abses  dapat  terjadi  pada semua  struktur  atau  jaringan  rongga  mulut. Abses  rongga  mulut  yang  paling  sering terjadi  adalah  abses  periodontal  dan  abses periapikal. 8 Pemberian  obat  antibiotik  dan analgesik  dapat  diberikan  untuk  mengatasi hal tersebut. Walaupun, penggunaan antibiotik  sering  menyebabkan  resistensi bakteri  terhadap  zat  antibiotik.  Tingkat resistensi Staphylococcus  aureus terhadap antibiotik  yang  paling  sering  digunakan sudah  mencapai  angka  persentase  yang tinggi (30-70%). 9
Pengembangan suatu alternatif pengobatan  yang  tidak  menyebabkan  efek samping  dengan  memanfaatkan  bahan- bahan  alam  dari  senyawa  kimia  tumbuhan perlu  dilakukan.  Berdasarkan  penelitian Rusmiyati bahwa pada daun sirsak mengandung senyawa yang dapat menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus dan Propionibacterium  acnes penyebab jerawat.
Berdasarkan latar belakang diatas, peneliti  tertarik  untuk  melakukan  penelitian mengenai  uji  daya  hambat  ekstrak  daun sirsak  ( Annona  muricata  L )  terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan melakukan uji laboratorium secara in vitro .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  laboratoris  dengan  rancangan penelitian post  test  only  control  group design .  Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Mei  -  Agustus  2015.  Subjek  dari penelitian  ini  adalah  bakteri Staphylococcus aureus .  Variabel  penelitian ini  yaitu  ekstrak daun sirsak dan pertumbuhan
Staphylococcus aureus .
Pembuatan ekstrak dilakukan di Laboratorium  Farmasi  F-MIPA  Universitas Sam  Ratulangi.  Daun  sirsak  sebanyak  500g dikeringkan  selama  seminggu  kemudian diblender  hingga  halus.  Daun  sirsak  yang telah  halus  kemudian  dimaserasi  dengan etanol  96%,  setelah  itu  hasil  maserasi difiltrasi sampai tiga kali untuk mendapatkan ekstrak murni.
Staphylococcus  aureus yang  digunakan merupakan  stok  bakteri  biakan  murni  yang berada  di  Laboratorium  Farmasi  MIPA Unsrat  Manado. Staphylococcus  aureus kemudian  dikembangbiakkan  selama  1x24 jam  dengan  suhu  37 0 C  pada  lima  cawan petri  untuk  selanjutnya  diberi  perlakuan dengan  kertas  saring.  Pengukuran  zona hambat ekstrak daun sirsak dilakukan pada 5 cawan  petri  dengan  tiga  perlakuan  yang berbeda  yaitu  kelompok  ekstrak,  kontrol
positif  clindamycin,  dan  kontrol  negatif etanol.
Metode  yang  digunakan  ialah  metode difusi  lempeng  agar  (Kirby-Bauer)  yang merupakan  metode  uji  kepekaan  langsung. Agar MHA disediakan sebanyak lima cawan petri. Staphylococcus  aureus disebar  secara merata  dengan  menggunakan  batang  L/ dry glassky pada permukaan agar MHA dibiarkan tiga sampai lima menit dalam suhu kamar.  Kertas  saring  dibentuk  seperti cakram  dengan  menggunakan perforator sebanyak  lima  belas  buah,  lima  cakram diantaranya  diberi  ekstrak  daun  sirsak sedangkan  lima  cakram  diberi  clindamycin sebagai    kontrol  positif,  dan  lima  cakram diberi  etanol  sebagai  kontrol  negatif. Cakram  tersebut  lalu  diletakkan  di  media agar yang sudah dioleskan jamur Staphylococcus aureus di dalamnya kemudian  dimasukkan  ke  dalam  inkubator dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0
C.  Setiap  cawan  petri  terdiri  dari  satu cakram  kelompok  intervensi  dan  satu cakram  kelompok  kontrol  positif  dan  satu cakram  kontrol  negatif.  Zona  hambat  yang terbentuk  di  sekitar  cakram  kertas  saring diukur  diameter  vertikal  dan  diameter horizontal  dengan  satuan  millimeter  (mm) menggunakan  jangka  sorong  dan  diukur dengan rumus:
(D V -D C ) + (D H -D C) 2 Data  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  dihitung  secara  manual  dan  data  yang sudah  diolah  disajikan  dalam  bentuk  tabel, gambar, dan tulisan.

## HASIL PENELITIAN
Cawan  petri  yang  berisi  media  Muller- Hinton  Agar  dan  bakteri Staphylococcus aureus yang telah diberi perlakuan   diambil dari  dalam    inkubator  setelah  diinkubasi selama 1x24 jam.
Gambar 6. Zona hambat yang terbentuk pada media Sabouraud Dextrose
Zona  hambat  yang  dihasilkan  dari masing-masing perlakuan memiliki diameter yang  berbeda-beda  dan  bentuk  yang  tidak beraturan.  Oleh  karena  itu,  pengamatan dilakukan  dengan  cara  mengukur  diameter horizontal  dan  diameter  vertikal  dari  zona yang  terbentuk  disekitar  kertas  saring. Kedua  diameter  tersebut  dimasukkan  ke dalam  rumus  untuk  mencari  nilai  rerata diameter  zona  hambat.  Hasil  pengukuran diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  di sekitar kertas saring dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Diameter zona hambat Daun Sirsak,
Clindamycin, dan Etanol 96% Diamater zona hambat (mm) Perlakua n Ekstrak daun sirsak Clindamyc in (kontrol postif) Etanol 96% (kontr ol negatif ) 1 12,6 25 0 2 12 25,7 0 3 10,5 26,1 0 4 14,1 22,8 0 5 9,4 25,6 0 Rerata 12,3 24,7 0
Tabel  1  memperlihatkan  bahwa  diameter zona hambat yang terbentuk pada tiap cawan petri  berbeda  yaitu  pada  cawan  petri  I, diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  pada area  kertas  saring  ekstrak  daun  sirsak sebesar  12,6  mm,  zona  hambat  yang terbentuk pada area kertas saring clindamycin  sebesar  25  mm,  dan  pada  area kertas  saring  etanol  tidak  terbentuk  zona hambat.
Cawan  petri  II,  diameter  zona  hambat yang  terbentuk  pada  area  kertas  saring ekstrak  daun  sirsak  sebesar  12  mm,  zona hambat  yang  terbentuk  pada  area  kertas saring  clindamycin  sebesar  25,7  mm,  dan pada  area  kertas  saring  etanol  tidak terbentuk  zona  hambat.  Cawan  petri  III, diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  pada area  kertas  saring  ekstrak  daun  sirsak sebesar  10,5  mm,  zona  hambat  yang terbentuk pada area kertas saring clindamycin sebesar 26,1 mm, dan pada area kertas  saring  etanol  tidak  terbentuk  zona hambat.
Cawan  petri  IV,  diameter  zona  hambat yang  terbentuk  di  sekitar  kertas  saring
ekstrak  daun  sirsak  sebesar  14,1  mm,  zona hambat  yang  terbentuk  pada  area  kertas saring  clindamycin  sebesar  22,8  mm,  dan pada  area  kertas  saring  etanol  tidak terbentuk  zona  hambat.  Cawan  petri  V, diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  di sekitar  kertas  saring  ekstrak  daun  sirsak sebesar  9,4  mm,  zona  hambat  yang terbentuk pada area kertas saring clindamycin sebesar 24,7 mm, dan pada area kertas  saring  etanol  tidak  terbentuk  zona hambat.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  adanya daya  hambat  dari  ekstrak  daun  sirsak terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus setelah proses inkubasi  pada  suhu  37 0 C  pada  inkubator selama 24 jam. Berdasarkan hasil pengamatan  yang  dilakukan  sebanyak  lima kali  pengujian,  menunjukkan  diameter  zona hambat  yang  terbentuk  bervariasi.  Diameter zona  hambat  ekstrak  daun  sirsak  pada masing-masing pengulangan ialah 12,6 mm, 12  mm,  14,1  mm  memiliki  daya  hambat yang kuat. 10,5 mm, 9,4 mm memiliki daya hambat  yang  sedang.  Hal  ini  mungkin disebabkan oleh jumlah ekstrak yang diserap kertas saring berbeda, perbedaan waktu pada saat perendaman kertas saring pada kelompok intervensi dan jumlah Staphylococcus  aureus yang  tersebar  pada saat  pembiakkan  di  media  Muller-Hinton Agar tidak merata di  tiap bagian. Penilaian zona  hambat  dikategorikan  kekuatan  daya antibakterinya  berdasarkan  penggolongan Davis  dan  Stout  yaitu  menunjukkan  bahwa efek  antibakteri  dari  ekstrak  daun  sirsak memiliki  daya  hambat  yang  kuat  karena memiliki  diameter  zona  hambat  dengan rerata 12,3 mm.
Zona hambat yang terbentuk disebabkan adanya  zat-zat  aktif  yang  terkandung  dalam daun sirsak seperti tannin, alkaloid, saponin, dan flavonoid yang  berfungsi  sebagai antibakteri. 10,11 Namun,  tidak  diketahui secara  pasti  zat  mana  yang  memiliki
pengaruh besar dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus.
Di  sekitar  cakram  kertas  saring  yang diberi  etanol  96%  sebagai  kontrol  negatif tidak  ditemukan  terbentuknya  zona  hambat. Hal  tersebut  menguatkan  fakta  bahwa  tidak ada  efek  dari  pelarut  etanol  96%  dengan terbentuknya zona hambat di sekitar cakram yang diberi ekstrak daun sirsak.
Hasil  penelitian  ini  didukung  oleh penelitian  sebelumnya  tentang  bioaktivitas ekstrak  metanol  daun  muda  sirsak  sebagai antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dan Propionibacterium acnes yang dilakukan Ika Rusmiyati. Hasil dari penelitian  tersebut  menunjukkan  adanya kemampuan  daun  sirsak  untuk  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dan Propionibacterium acnes.
Tidak ada standarisasi pembuatan ekstrak  bahan  alam  sehingga  apabila dilakukan pembuatan ekstrak di laboratorium  yang  berbeda,  terjadi  hasil yang  berbeda  pula. 12 Beberapa  faktor  yang memengaruhi  mutu  ekstrak  diantaranya yaitu  faktor  kimia  seperti  jenis  dan  jumlah senyawa kimia, metode ekstraksi dan pelarut yang digunakan. 13 Selain itu, adanya variasi biologis,  misalnya  tempat  asal  daun  sirsak yang  digunakan,  juga  dapat  memengaruhi jumlah  kandungan  bahan  aktif  yang  ada. Faktor-faktor lingkungan seperti suhu udara, kelembapan  relatif,  radiasi  matahari,  angin, suhu tanaman, ketersediaan air, ketercukupan cahaya dalam proses fotosintesis  sangat  memengaruhi  fungsi fisiologis, bentuk anatomis, dan siklus hidup tumbuhan. 14 Faktor  lingkungan  inilah  yang mungkin  memengaruhi  senyawa  metabolit sekunder  yang  dihasilkan  oleh  daun.  Pada daun yang masih muda, mengandung zat-zat yang  bersifat  antibakteri,  sedangkan  pada daun  yang  sudah  tua  sudah  mulai  ada  yang rusak, sehingga kandungan senyawa acetogenins telah terbentuk.  Senyawa inilah yang bersifat sitotoksik. 15
Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak daun sirsak muda ke tiga dari pucuk
memiliki efek antibakteri untuk menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri Staphylococcus  aureus ,  tetapi  kemampuan ini lebih kecil dibandingkan dengan antibiotik  clindamycin.  Hal  ini  mungkin dikarenakan  konsentrasi  kepekatan  ekstrak daun  sirsak  belum  diketahui  dengan  tepat minimal  inhibitor  concentration ekstrak terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus , sedangkan  pada  antibiotik  clindamycin sudah  diketahui MIC nya  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus , sehingga besar zona hambat  yang  terbentuk  belum  sebanding dengan  zona  hambat  yang  terbentuk  pada antibotik clindamycin sebagai kontrol positif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa:
1. Ekstrak  daun  sirsak (Annona  muricata L.) memiliki  daya  hambat  terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus dengan  rerata  diameter  zona  hambat sebesar 12,3 mm.
2. Diameter zona hambat dari ekstrak daun sirsak  ( Annona  muricata  L.) lebih  kecil dibandingkan  dengan  diameter  kontrol positif antibakteri clindamycin.

## SARAN
1. Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian yang  lebih  lanjut  mengenai  efektivitas ekstrak  daun  sirsak  dengan  berbagai kepekatan konsentrasi ekstrak, sehingga dapat  diketahui Minimal  Inhibitor Concentration terhadap  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus .
2. Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  mengenai  isolasi  zat  aktif yang  terkandung  didalam  daun  sirsak terhadap  bakteri  lainnya,  khususnya pada gigi dan mulut.
3. Diharapkan  dapat  dilakukan  penelitian yang  lebih  lanjut  dengan  metode  yang berbeda  guna  mengetahui  daya  hambat ekstrak  daun  sirsak  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus .

## DAFTAR PUSTAKA
1. Hidayat A. Pengaruh getah tumbuhan  jarak  pagar  ( Jatropha Curcas  L )  Dan  Lendir  Bekicot ( Achatina  Fulica )  Terhadap  Daya
Hambat Bakteri Streptococcus mutans. [Skripsi]. Makassar:
Universitas Hasanuddin. 2013.
2. Sousa  OV,  Vieira  GD,  Jesus  RG,
Pinho  J,  Yamamoto  CH,  Alves  MS. Antinociceptive and Anti- Inflammatory Activities of the Ethanol  Extract  of Annona  muricata L . leaves in Animal Models. Journal Home Vol.5, No.11; 67-78. 2010.
3. Alali  FQ,  Liu  X,  McLaughlin  JL. Annonaceous  Acetogenins:  Recent Progress . J. Nat. Prod. 1999, 62 504- 40. 1999.
4. Widiana  R,  Indriati  G,  Andika  I. Daya  Hambat  Sari  Daun  Sirsak ( Annona  muricata  L. )  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia coli . Padang: STKIP. 2012.
5. Roslizawaty, Ramadani NY,
Fakhrurrazi,  Herrialfian.  Aktivitas Antibakterial  Ekstrak  Etanol  Dan
Rebusan Sarang Semut ( Myrmecodia sp .)  Terhadap  Bakteri Escherichia coli .  Aceh:  Universitas  Syiah  Kuala.
2013.
6. Pedersen,  Gordon  W.  Buku  Ajar Praktis  Bedah  mulut,  EGC.hal  201. 1996.
7. Warbung YY, Wowor VNS, Posangi
J.Daya  Hambat  Ekstrak  Spons  Laut Callyspongia sp terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus .  [Diunduh  tanggal  5  Maret
2015].Available from: http://ejournal.unsrat.ac.id,1(2). 2013.
8. Aryadi  IGAIP.  Pengaruh  Ekstrak Daun  Mengkudu  ( Morinda  citrifolia L. ) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Sebagai
Penyebab  Abses  Periodontal  Secara In  Vitro.  [Skripsi].  Bali:  Universitas Mahasaraswati Denpasar. 2014.
9. Meta DT, Endriani R, Sembiring LP. Identifikasi  dan  resistensi  bakteri methicillin  resistantStaphylococcus aureus dari ulkus diabetikum  derajat I  dan  II  wagner  di  bagian  penyakit dalam rsud arifin achmad. 2013.
10. Kurniawati M. Uji aktivitas Antibakteri  Fraksi  Daun  Sirsak (Annona muricata) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli serta profil Kromatografi Lapis Tipisnya. [Skripsi]. Yogyakarta: Fakultas Farmasi  Universitas  Gadjah  Mada, Yogyakarta. 2010.
11. Cushnie  T,  Lamb  AJ.  Antimicrobial activity  of  flavonoids.  International Journal  of  Antimicrobial  Agents. 2005; 26: 343-56.
12. Diassanti  A,  Uji  ekstrak  etanol  daun mengkudu (Morinda citrifolia)
sebagai antimikroba terhadap
Methicillin Resistant Staphylococcus aureus)  secara  in  vitro.  [Skripsi]. Malang: Universitas Brawijaya.
2011.
13. Depkes RI. Parameter Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat,
Jakarta: Depkes RI, 2000. h. 10-11.
14. Hilmanto  R,  Indikator  Ekologi  pada waktu tanam sebagai inovasi masyarakat  local  dalam  menghadapi dampak  negative  perubahan  iklim. http:// Ejurnal.Bppt.co.id diakses pada tanggal 27 juli 2015.
15. Rusmiyati  I,  Husain  DR,  Alam Gemini,Bioaktivitas Ekstrak Metanol Daun Muda Sirsak Annona muricata L.  sebagai  Antibakteri  Terhadap
Staphylococcus
aureus dan Propionibacterium  acnes.  [Jurnal]. Makassar: Universitas Hasanuddin.