Multiplikasi Tunas Tebu ( Saccharumo officinarum L Var. Bululawang) dengan Perlakuan Konsentrasi BAP dan Kinetin Secara In Vitro
Multiplication of Shoot Sugarcane ( Saccharumo officinarum L Var. Bululawang) on Concentration of BAP and Kinetin  In Vitro
Chory Praseptiana 1 *, Sri Darmanti 2 , Erma Prihastanti 2
1) Program Studi Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2) Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang
*Email: chorynopraseptiana@gmail.com
Diterima 24 Maret 2017 / Disetujui 24 Agustus 2017

## ABSTRAK
Tebu  ( Saccharum  officinarum L  var.  Bululawang)  merupakan  tebu  varietas  unggul  yang  memiliki  daya adaptasi  dan  stabilitas  baik  pada  berbagai  jenis  tanah,  tetapi  bibit  yang  dihasilkan  masih  sedikit  karena dominansi apikal yang tinggi sehingga untuk memperbanyak bibitnya diperlukan teknik khusus. Multiplikasi tunas  dengan  teknik  kultur in  vitro merupakan  teknik  alternatif  untuk  memperbanyak  bibit  tebu  yang berkualitas, dalam jumlah yang besar dan waktu yang singkat. Sitokinin merupakan ZPT yang berperan dalam multiplikasi tunas. Pemberian konsentrasi sitokinin berupa BAP dan kinetin diharapkan mampu  menjelaskan multiplikasi  tunas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  pengaruh  konsentrasi  BAP  dan  kinetin  terhadap waktu  munculnya  tunas  dan  pertumbuhan  tunas  tebu  Bululawang  secara in  vitro .  Eksplan  yang  digunakan berupa  mata  tunas  tebu  Bululawang  umur  6-8  bulan  yang  terdapat  pada  bagian  nodus.  Penelitian  ini menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  12  perlakuan,  masing-masing  3  ulangan.  Eksplan dikulturkan selama 8 minggu pada media MS dengan konsentrasi BAP (0, 0,5, 1, dan 2 mg/l) dan kinetin (0, 0,5, dan 1 mg/l). Parameter yang diamati, yaitu: waktu munculnya tunas (HST), panjang tunas (cm), jumlah tunas,  jumlah  daun  (helai),  dan  warna  daun.  Data  yang  diperoleh  kemudian  dianalisis  menggunakan  uji ANOVA pada taraf signifikan 95%. Hasil analisis data menunjukkan tidak adanya pengaruh pemberian BAP dan kinetin sampai konsentrasi 2 mg/l dan 1 mg/l terhadap parameter multiplikasi tunas tebu var. Bululawang.
Kata kunci : tunas , Bululawang , BAP, kinetin

## ABSTRACT
Sugarcane  ( Saccharum  officinarum L  var.  Bululawang)  is  superior  sugarcane  variety  that  have  survive  and good  stability  in  various  of  type  soil  but  seed  was  low  produced  cause  high  apical  dominance,  so  we  need special  technice  for  scale  up  it’s  seed.  In  vitro  plant  culture  is  alternative  technice  for  produced  quality sugarcane  seed,  high  number  of  seed  with  shoot  multiplication.  Cytokinin  is  PGR  that  role  shoot multiplication.  The  consentration  cytokinin  as  BAP  and  kinetin  that  able  expected  to  influence  shoot multiplication.  This  research  aims  to  review  the  influence  of  consentration  BAP  and  kinetin  for  shoot initiation and growth of Bululawang sugarcane. Explants were used Bululawang shoot’s sugarcane that age 6- 8 months, located on the node. This research was used RAL with 12 treatment, and each 3 replicated. Explants cultured during 8 weeks in MS media with consentration BAP (0, 0,5, 1, dan 2 mg/l) and kinetin (0, 0,5, dan 1 mg/l).  Parameters  were  observed  namely:  appear  shoot  time  (HST),  length  of  shoot  (cm),  number  of  shoot, number of leaf, and colour of leaf. The date were analyzed using ANOVA at the confidence level 95%. The result showed that no influence of BAP and kinetin consentration to 2 mg/l and 1 mg/l for shoot multiplication parameter of Sugarcane var. Bululawang.
Keywords:shoot, Bululawang, BAP, kinetin

## PENDAHULUAN
Tebu (S accharum officinarum L ) merupakan  bahan  baku  utama  dalam  pembuatan gula,  sehingga  mempunyai  nilai  ekonomis  yang tinggi  (Sukmadajaja,  2011).  Menurut  Ramadhan dkk.  (2014)  tebu  varietas  Bululawang  sangat potensial  karena  memiliki  daya  adaptasi  dan stabilitas yang baik pada berbagai jenis tanah serta memiliki  rendemen  yang  tinggi  yaitu  sekitar 7,51%.  Selama  ini  perbanyakan  tebu  Bululawang dilakukan secara vegetatif melalui stek, akan tetapi menurut  Murwandono  (2013)  pembentukan  tunas dengan  stek  cukup  lama  yaitu  2  sampai  4  bulan dan dari satu mata tunas hanya menghasilkan satu tunas,  sehingga  bibit  yang  dihasilkan  sedikit (Priyono  dkk.,  2000),  dan  bibit  mudah  terinfeksi patogen  penyebab  penyakit  (Malabadi et al ., 2011).
Teknik  kultur in  vitro merupakan  cara alternatif  pengadaan  bibit  tebu  yang  berkualitas (FAO,  2008).  Penyediaan  bibit  melalui  kultur in vitro dapat  dihasilkan  bibit  tebu  dalam  jumlah besar  dengan  waktu  singkat  serta  bibit  yang dihasilkan  sehat  dan  seragam  (George et  al ., 2008). Pengadaan bibit tebu melalui kultur in vitro dapat dilakukan dengan multiplikasi tunas, namun kendalanya laju pertumbuhan pada tebu Bululawang lambat karena dominansi apikal tinggi (P3GI,  2008)  sehingga  diberikan  sitokinin  pada media kultur in vitro (MS).
Menurut Niaz dan Quraishi (2002), sitokinin berperan  dalam  mengendalikan  dominansi  apikal dan  menghilangkan  dormansi  tunas  lateral, sehingga  untuk  memicu  multiplikasi  tunas diperlukan  zat  pengatur  tumbuh  sitokinin.  Kinetin (6- furfuryl  aminopurin )  dan  BAP  ( Benzyl  Amino Purin ) merupakan sitokinin sintetis yang berperan dalam  menginduksi  tunas  (Schmulling,  2004). Kinetin berperan dalam ekspresi gen, mengaktivasi siklus  sel,  merangsang  aliran  Ca +2 ,  dan  mencegah penuaan  pada  tanaman  (Gaudino  dan  Pikkard, 1997), sedangkan BAP mempunyai aktivitas lebih stabil  dan  tahan  terhadap  oksidasi  dibandingkan sitokinin  lainnya  (Nurjanah,  2009).  Menurut (George et al ., 2008), konsentrasi BAP dan kinetin yang tepat dapat meningkatkan multiplikasi tunas.
Menurut  Vujovic et  al .  (2012)  parameter yang diamati untuk mengetahui multiplikasi tunas, yaitu  induksi  tunas,  panjang  tunas,  jumlah  tunas, jumlah  daun,  dan  warna  tunas.  Berdasarkan  hasil penelitian  Sukmadjaja  (2011)  pemberian  BAP  2 mg/l  dan  kinetin  1  mg/l  mampu  menginisiasi munculnya  tunas  tebu  Bululawang  pada  usia  10 HST,  sedangkan  pada  penelitian  Ali et  al .  (2008) pemberian  BAP  0,5  mg/l  dan  kinetin  0,25  mg/l mampu  menginisiasi  munculnya  tunas  tebu  BL-4 tercepat pada usia 10 HST dengan rata-rata jumlah tunas  1,94.  Percobaan  yang  dilakukan  Khan et al . (2009)  pada  multiplikasi  tunas  tebu  varietas  CPF- 237  pada  pemberian  BAP  1  mg/l  dan  kinetin  0,1 mg/l  dihasilkan  tunas  sebanyak  11  anakan  selama 30 hari.
Penelitian  kultur in  vitro ini  menggunakan eksplan  mata  tunas  tebu  ( Saccharum  officinarum var.  Bululawang)  usia  6  bulan  pada  medium  MS dengan pemberian konsentrasi BAP ( Benzyl Amino Purine )  dan  kinetin  (6- furfuryl  aminopurine ). Penelitian bertujuan untuk mengetahui konsentrasi BAP  dan  kinetin  yang  optimal  untuk  multiplikasi tunas  tebu  var.  Bululawang  secara in  vitro .  Mata tunas  merupakan  organ  yang  tersusun  oleh jaringan  muda  yang  sel-selnya  masih  aktif membelah (meristematik). Penggunaan mata tunas pada  kultur in  vitro diduga  lebih  efektif  karena sudah terbentuk calon tunas yang diharapkan dapat membentuk  tunas  secara  langsung  sehingga  dapat memotong satu tahapan kultur in vitro .

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  April sampai  dengan  Juni  2016  di  Pusat  Penelitian  dan Pengembangan Perum Perhutani Cepu.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini, yaitu botol kultur, gelas ukur, pipet tetes, gelas bekker,  timbangan  analitik,  pH  meter,  spatula, spidol, stopwatch , autoclave , Laminar  Air  Flow Cabinet (LAF), magnetic  stirrer , water  bath , hot plate , alas  papan, scalpel ,  pinset,  bunsen,  pisau,
Multiplikasi Tunas Tebu (Saccharumo officinarum L Var. Bululawang) dengan Perlakuan Konsentrasi BAP dan Kinetin Secara In Vitro
inkubator, refrigerator , kamera, sprayer , alumunium foil , sikat, dan cutter .
Bahan-bahan  yang  digunakan,  yaitu  mata tunas  tebu  var.  Bululawang  umur  6  bulan  yang diperoleh  dari  kebun  tebu  di  Kecamatan  Ungaran Timur, aquades steril,  NaOH  0,1  N,  HCl  0,1  N, medium  MS  lengkap  dengan  penambahan  BAP dan kinetin pada tabel L.1, dan 0,02% (v/v) HgCl 2 , alkohol 70%, spirtus, sabun cair, dan deterjen.

## Cara Kerja Penelitian
1. Sterilisasi Alat dan Botol :   semua  alat  dicuci, dikeringkan pada rak pengering, dan disterilisasi  pada  autoklaf  suhu  121 0 C  tekanan 1,5 atm selama 20 menit. Sterilisasi dilanjutkan dengan  menggunakan  oven  pada  suhu  60 0 C selama  30  menit.  Alat-alat  dari  logam  seperti, scalpel ,  dan  pinset  dimasukkan  ke  dalam alkohol 96% dan dipanaskan pada api bunsen. 2. Pembuatan Larutan Stok ZPT: BAP dan kinetin masing-masing ditimbang  sebanyak 0,01 gram, kemudian masing-masing dilarutkan dalam 100 ml  aquades  steril  dan  dihomogenkan  dengan magnetic  stirrer .  Larutan  stok  ZPT  disimpan dalam refrigerator .
3. Pembuatan  Media  MS:  unsur  mikro,  unsur makro,  dan  senyawa  organik  pada  komposisi media  MS  yang  telah  dibuat  menjadi  larutan stok  diambil  sesuai  takaran  per  liter  media, kemudian ditambahkan sukrosa 30 g/l dan agar 8,5  g/l  serta  ditambahkan  aquades  sampai volume  larutan  menjadi  1000  ml.  Larutan dihomogenkan  dengan  menggunakan magnetic stirrer sampai homogen.
4. Perlakuan  ZPT  pada  media  kultur:  media  MS dituangkan  pada  botol,  kemudian  ditambahkan larutan stok BAP dan kinetin (sesuai perlakuan) keadaan  diaduk  menggunakan magnetic  stirrer sampai  homogen.  pH  campuran  diatur  hingga 5,8  dengan  menambahkan  0,1N  NaOH  atau 0,1N  HCl.  Larutan  disterilisasi  pada  autoklaf dengan suhu 121 o C tekanan 1,5 atm selama 20 menit.  Selanjutnya  media  disimpan  pada  ruang penyimpanan media.
5. Persiapan  Eksplan:  mata  tunas  tebu  varietas
Bululawang  usia  6  sampai  8  bulan  yang digunakan yaitu bagian paling ujung  meristem,
dengan  ukuran  1  sampai  2  cm  dan  dicuci dengan  air  keran  selama  30  menit.  Eksplan disiapkan dan diletakkan di sekitar LAF.
6. Sterilisasi Eksplan dan Penanaman:
 Mata  tunas  direndam  dalam  larutan 0,02%  (v/v)  HgCl 2 sambil  digojog selama 3 menit dilakukan 2 kali.
 Mata  tunas  dibilas  dengan  aquades steril dilakukan 2 kali.
 Mata  tunas  direndam  dalam  alkohol 70% sambil digojog selama 5 menit.
 Mata  tunas  dibilas  dengan  aquades steril dilakukan 2 kali.
7. Penanaman Eksplan:
 Eksplan  dipotong  dengan  ukuran  1  cm dan  disayat  pada  bagian  nodusnya menggunakan scalpel.
 Eksplan  ditanam  dalam  media  MS dengan  tiap  perlakuan  dilakukan  tiga ulangan.
 Kultur  diberi  label  sesuai  tanggal penanaman,  dan  diinkubasi  pada  suhu 25 0 C  ±  2 0 C  dengan  16  jam  periode terang  dan  8  jam  periode  gelap, intensitas cahaya 2500 sampai 3000 lux dan  kelembapan  75%  samapi  80% selama 8 minggu.
 Pengamatan  visual  dilakukan  setiap hari selama  8  minggu,  dan  kultur  yang terkontaminasi  dikeluarkan  dari  ruang kultur.
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  12  perlakuan  ZPT, yaitu:
P0  : (Kontrol) tanpa zat pengatur tumbuh P1  : 0,5 mg/l kinetin P2  : 1 mg/l kinetin P3  : 0,5 mg/l BAP P4  : 1 mg/l BAP P5  : 2 mg/l BAP P6  : 0,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin P7  : 0,5 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin P8  : 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin P9  : 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin P10: 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin P11: 2 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin
Masing-masing perlakuan dengan 3
ulangan,  setiap  botol  kultur  masing-masing  berisi satu eksplan.

## Parameter Penelitian
1. Waktu  munculnya  tunas  (HST)  pada  eksplan: diamati  setelah  inokulasi  sampai  muncul tonjolan kehijauan pada eksplan dengan ukuran lebih 2 mm.
2. Jumlah  tunas:  dihitung  tunas  yang  tumbuh setiap  eksplan  yang  hidup  setelah  inkubasi sampai akhir pengamatan (3 MST).
3. Tinggi  tunas  (cm):  diukur  dari  pangkal  nodus sampai  ujung  tunas  setelah  eksplan  diinkubasi sampai akhir pengamatan (3 MST).
4. Jumlah  daun  (helai):  dihitung  dari  munculnya tunas  sampai  sampai  akhir  pengamatan  (3 MST).
5. Morfologi  tunas:  diamati  secara  visual  setiap hari sampai akhir pengamatan (3 MST)

## Analisis Data
Data  jumlah  tunas,  panjang  tunas,  jumlah daun  dan  waktu  pembentukan  tunas  dianalisis dengan  uji  ANOVA  dengan  taraf  signifikansi 95%,  dilanjutkan  uji  lanjutan Duncan’s  Multiple Range Test (DMRT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Rata-rata waktu munculnya tunas (HST), panjang tunas (cm), jumlah tunas, dan jumlah daun (helai) pada  tebu ( Saccharum  officinarum var.  Bululawang) setelah perlakuan  konsentrasi  BAP  dan  kinetin yang berbeda
Perlakuan Rata-rata Waktu munculnya tunas (HST) Panjang tunas (cm) Jumlah tunas (tunas) Jumlah daun (helai) P0 2,33 0,97 1 1,39 P1 2,78 2,40 1 1,25 P2 2,78 2,46 2 2,41 P3 2,56 4,67 1,33 2,34 P4 2,56 1,77 2,67 2,86 P5 2,81 3,23 1,67 2,30 P6 2,56 4,46 4,46 3,74 P7 3,01 0,83 3,23 0,71 P8 2,24 2,31 3,33 2,54 P9 1,48 3,6 1 2,42 P10 1,95 3,38 1,67 3,51 P11 2,16 4,35 1,33 2,58
Keterangan: P0: Tanpa zat pengatur tumbuh; P1: 0,5 mg/l kinetin; P2: 1 mg/l kinetin; P3: 0,5 mg/l BAP; P4: 1 mg/l BAP; P5: 2 mg/l BAP; P6: 0,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P7: 0,5 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin; P8: 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P9: 1 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin; P10: 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P11: 2 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin
Hasil  uji  ANOVA  ( Analysis  of  Variance ) pada  taraf  signifikansi  95%  menunjukkan  bahwa perlakuan  BAP  dan  kinetin  tidak  berpengaruh terhadap  rata-rata  waktu  munculnya  tunas  tebu var. Bululawang (Tabel 1).
Perlakuan  tanpa  zat  pengatur  tumbuh  tetap menginduksi  munculnya  tunas,  akan  tetapi  pada perlakuan P9 dengan konsentrasi BAP 1 mg/l dan kinetin  1  mg/l  cenderung  memberikan  hasil tercepat  waktu  munculnya  tunas  dibandingkan  P0
Multiplikasi Tunas Tebu (Saccharumo officinarum L Var. Bululawang) dengan Perlakuan Konsentrasi BAP dan Kinetin

## Secara In Vitro
(kontrol)  (Tabel  1).  Hal  itu  kemungkinan  karena pemberian  sitokinin  pada  konsentrasi  tersebut mampu meningkatkan konsentrasi hormon endogen dalam eksplan, yang kemudian merangsang  pembelahan  sel  dan  diferensiasi  sel pada eksplan.
Menurut Ali et al . (2008), induksi tunas tebu terjadi  karena  proses  pembelahan  sel  dan diferensiasi  sel  meristem  yang  dipengaruhi  oleh keseimbangan  dan  interaksi  hormon  eksogen dengan  hormon  endogen.  Hormon  sitokinin berperan  penting  dalam  pembelahan  sel  dan diferensiasi  sel.  Diferensiasi  sel  terjadi  jika  sel sudah  mencapai  volume  maksimal,  kemudian  sel akan  terspesialisasi  dalam  bentuk  dan  fungsi tertentu.
Menurut  Harjadi  (2009),  pemberian  BAP memacu  sintesis  protein  sehingga  mendorong terjadinya  pembelahan  sel  yang  menginduksi terbentuknya  tunas.  Menurut  Hayati  dkk  (2010) sitokinin  secara  langsung  berperan  pada  tahap interfase  saat  terjadinya  proses  transkripsi  DNA dan  translasi  RNA  untuk  mensintesis  protein. Protein  yang  terbentuk  akan  menyusun  enzim- enzim yang berperan dalam pembelahan sel, yaitu enzim polimerase yang berperan dalam memperpanjang  rantai  DNA  serta  memperbaiki kesalahan penyusunan basa nitrogen, enzim ligase yang  berperan  dalam  menggabungkan  fragmen DNA, dan enzim kinase yang berperan mengontrol siklus  sel.  Adanya  enzim-enzim  tersebut  proses pembelahan sel lebih efektif.
Panjang  tunas,  jumlah  tunas  dan  jumlah  daun tebu ( Saccharum officinarum L var.

## Bululawang)
Hasil uji ANOVA pada taraf signifikan 95% menunjukkan  bahwa  perlakuan  BAP  dan  kinetin tidak  berpengaruh  terhadap  panjang  tunas, jumlah tunas,  dan  jumlah  daun  tebu  var.  Bululawang (Tabel  1).  Tabel  1  menunjukkan  tunas  dengan perlakuan  tanpa  zat  pengatur  tumbuh  tetap mengalami  pertumbuhan.  Hal  tersebut  karena eksplan  mengandung  hormon  endogen  serta  pada medium  MS  tersedia  nutrisi  untuk  pertumbuhan eksplan. P3 cenderung memberikan hasil tertinggi panjang tunas tebu var. Bululawang dibandingkan
perlakuan  kontrol. Perlakuan  P6  yaitu:  0,5  mg/l BAP  dan  0,5  mg/l  kinetin cenderung  memberikan hasil  jumlah  tunas  dan  jumlah  daun  terbanyak dibandingkan perlakuan kontrol, meskipun demikian  pada  perlakuan  P0  (kontrol)  tanpa pemberian  BAP  dan  kinetin  tetap  terbentuk  tunas dan  daun. Menurut  Lack  (2001)  eksplan  memiliki hormon endogen yang berperan dalam pembelahan sel dan diferensiasi sel serta mengatur pertumbuhan  dan  perkembangan  tumbuhan,  akan tetapi  hormon  tersebut  dimilki  tumbuhan  dengan konsentrasi rendah.
Menurut  Pierick  (1982)  sitokinin  berperan dalam merangsang sintesis protein dan meningkatkan  aktivitas  sel-sel  penyusun  jaringan meristem.  Sel-sel  akan  aktif  membelah  dan mengalami diferensiasi membentuk struktur dengan  fungsi  spesifik,  setelah  sel  matang  akan kehilangan kemampuan untuk membelah. Sel yang tumbuh  dan  berdiferensiasi  akan  berkembang membentuk  jaringan  penyusun  tunas,  dan  daun tumbuhan.  Pertumbuhan  sel  dan  diferensiasi  sel akan mempengaruhi morfogenesis.
Morfologi pada tunas tebu ( Saccharum officinarum L var. Bululawang)
Data  kualitatif  berupa  morfologi  tunas tebu var. Bululawang diperlukan untuk mendukung  data  kuantitatif  pada  tabel  1.  Gambar 1  dan  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  perlakuan tanpa  zat  pengatur  tumbuh  (Gambar  1.A)  pada mata tunas menghasilkan tunas berwarna hijau tua dan  belum  memiliki  daun.  Hal  tersebut  karena unsur  hara  mengandung  ion  Mg 2+ sebagai penyusun klorofil, meskipun tanpa pemberian ZPT tetapi  tetap  dihasilkan  klorofil.  Menurut  Ai  dan Yunia  (2010),  warna  hijau  pada  daun  dan  tunas disebabkan  karena  kandungan  klorofil  di  dalam kloroplas  yang  terdapat  pada  jaringan  parenkim palisade dan parenkim spon daun. Menurut Kocot et al . (2011), pemberian sitokinin berfungsi dalam pembentukan  klorofil  khususnya  mendukung transport  ion  Mg 2+ ke  dalam  sel-sel  mesofil  daun, tetapi  pemberian  sitokinin  dengan  konsentrasi tinggi akan menurunkan akumulasi Mg 2+ sehingga sintesis klorofil terganggu.

## Gambar 1. Tunas tebu var Bululawang pada perlakuan kombinasi ZPT dengan dosis berbeda
Keterangan:    P0:  Tanpa  zat  pengatur  tumbuh;  P1:  0,5  mg/l  kinetin;  P2:  1  mg/l  kinetin;  P3:  0,5  mg/l  BAP;  P4:  1  mg/l BAP; P5: 2 mg/l BAP; P6: 0,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P7: 0,5 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin; P8: 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P9: 1 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin; P10: 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P11: 2 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin
Perlakuan P11 pada pemberian 2 mg/l BAP dan  1  mg/l  kinetin  menghasilkan  tunas  dan  daun berwarna  kuning.  Menurut  Balazc et  al .(1967) penguningan  daun  terjadi  karena  adanya  nekrosis (kerusakan  sel),  dan  menurut  Kocot et  al .  (2011) nekrosis  terjadi  karena  gejala  defisiensi  Mg 2+ . Menurut  Pallavi  dkk.  (2012)  kerusakan  sel  akan memicu  terjadinya browning atau  pencoklatan pada  eksplan  karena  adanya  hidroksilasi  senyawa flavonoid  tebu  seperti:  apigenin  dan  luteoledin oleh enzim polifenol oksidase (PPO)
menghasilkan  kuinon  yang  akan  menyebabkan eksplan berwarna cokelat (Blackweel, 2012).
Perlakuan  P1  dan  P2  terlihat  tunas  yang terbentuk  kecil,  karena  pada  pemberian  kinetin dengan  konsentrasi  0,5  mg/l  dan  1  mg/l kemungkinan konsentrasi kinetin yang tinggi akan menghambat  akumulasi  ion  Ca 2+ yang  berperan dalm menurunkan osmotik sel. Menurut Schumaker  dan  Gizinski  (1993)  kinetin  berperan dalam    menstimulasi  pemasukan  Ca 2+ melalui saluran membran plasma.
P0 P3 P2 P1 P4 P7 P6 P5 P11 P10 P9 P8
Multiplikasi Tunas Tebu (Saccharumo officinarum L Var. Bululawang) dengan Perlakuan Konsentrasi BAP dan Kinetin Secara In Vitro
Tabel 2. Warna tunas lateral tebu var. Bululawang usia 3 MST Perlakuan Tunas lateral Warna tunas P0 Ada Hijau tua P1 Ada Hijau tua P2 Ada Hijau tua P3 Ada Hijau tua P4 Ada Hijau muda P5 Ada Hijau muda P6 Ada Hijau P7 Ada Hijau muda P8 Ada Hijau tua P9 Ada Hijau muda P10 Ada Hijau tua P11 Ada Kecoklatan
Keterangan:    P0:  Tanpa  zat  pengatur  tumbuh;  P1:  0,5  mg/l  kinetin;  P2:  1  mg/l  kinetin;  P3:  0,5  mg/l  BAP;  P4:  1  mg/l BAP; P5: 2 mg/l BAP; P6: 0,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P7: 0,5 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin; P8: 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P9: 1 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin; P10: 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin; P11: 2 mg/l BAP + 1 mg/l kinetin

## KESIMPULAN
Pemberian BAP dan kinetin pada konsentrasi  0  mg/l  sampai  1,5  mg/l  dan  2  mg/l tidak  berpengaruh  terhadap  waktu  munculnya tunas  tebu  var.  Bululawang,  namun  pada pemberian BAP 1 mg/l dan kinetin 1 mg/l induksi tunas  cenderung  cepat.  Pemberian  BAP  dan kinetin  pada  konsentrasi  0  mg/l  sampai  1,5  mg/l dan 2 mg/l tidak berpengaruh terhadap pertumbuhan  tunas  tebu  var.  Bululawang,  namun pada  konsentrasi  BAP  0,5  mg/l  panjang  tunas cenderung tinggi sedangkan pada konsentrasi BAP 0,5  mg/l  dan  kinetin  0,5  mg/l  jumlah  tunas  dan jumlah daun cenderung lebih banyak.

## DAFTAR PUSTAKA
Ai, N.S., dan Yunia, B. 2011. Konsentrasi Klorofil
Daun  sebagai  Indikator  Kekurangan  Air pada Tanaman. Jurnal Ilmiah Sains. 11(2).
Ali  S.,  Hasan  S.W.,  Razl,  Shah  S.,  and  Amir  R. 2004. Micropropagation of Sugarcane
Through  Bud  Culture. Sarhad  Journal Agricultur e. 20: 79-82.
Blackweel, W. 2012. Food Biochemistry and Food Processing. New York: Academic Press.
Balazc,  E.,  Barna,  B.,  and Kiraly,  Z.  1967.  Effect of  Kinetin  on  Lesion  Development  and Infection Sites in Xanti-nc Tobacco Infected by TMV. Acad Science. 11: 1-9.
Chen,  J.,  Henny,  R.J.  and  Connell,  M.C.  2002.
Development of New Foliage Plant Cultivar. Florida Agriculture . 117-121.
Ruzic, D., Tatjana, V., Slobodan, M., Radosav, C. and  Rade,  M.  2008.  The  Influence  of Imidiazole  Fungicide  on  Multiplication  In vitro of Pyradwarf Pear Rootstock. Austarlian  Journal  of  Crop  Science .  I(2): 63-68.
Gaudino,  R.J.  and  Pikkard,  C.S.  1997.  Cytokinin Induction of RNA Polymerase Transcription in  Arabidopsis  thaliana. Journal  Biology Chemistry . 272: 6799-6804.
George, E. F., Michael, A.H., and Geert-Jan, D.K. 2008.  Plant  Propagation  By  Tissue  Culture 3 rd Edition. Springer: The Netherlands.
Harjadi,  S.S.  2009.  Zat  Pengatur  Tumbuh. Swadaya: Jakarta.
Hayati,  S.K.,  Y.  Nurchayati,  dan  N.  Setiari. Induksi  Kalus  dari  Hipokotil  Alfalfa (Medicago Sativa L.) secara In Vitro dengan Penambahan  Benzyl  Amino  Purine  (BAP)
dan  Α-Naphtalene  Acetic  Acid  (NAA). Bioma 1(12): Hal. 6-12.
Khairina,  R.  2001.  Pengaruh  Konsentrasi  Benzil Aminopurin  terhadap  Pertumbuhan  Eksplan Tanaman  Jeruk  manis  ( Citrus  sinensis  L .) secara Kultur Jaringan. RKIP: Pekanbaru.
Kocot, K.P., Andrzej, K, and Aleksandra, H. 2011.
The  Effect  of  Kinetin  On  The  Chlorophyll Pigments Content in Leaves of Zea mays L. Seedlings and Accumulation of Some Metal Ions. University of Silesia 397-409.
Murwandono.  2013.  Budidaya  Tebu  di  Indonesia. Balittas: Malang.
Malabadi,  R.B.,  G.S.Mulgund,  K.Macuoja,  and S.V.Kumar.  2011.  Induction  Of  Somatic Embryogenesis  In  Different  Varieties  Of Sugarcane  ( Saccharum  officinarum ). Plant Biology . 1(4) : 39-48.
Niaz  and  Quraishi.  2002.  Effect  of  Growth Regulators on The Regeneration Potential of Two  Sugarcane  Cultivar  SPF  213  and  CPF 237. Biology Science . 5(10): 1081-1083.
Pallavi,  R.,  Elakkiya,  S.,  Sai,  S.R.T.,  and Suganaya,  D.  2012.  Anthocyanin  Analysis and Its Anticancer Property from Sugarcane (Saccharum  officinarum  L.). Journal  of Research Pharmacy and Chemistry India .
P3GI.  2008.  Teknologi  Bud  Chip.  Puslitbang: Kediri.
Pierick,  R.L.M.  1982.  In  vitro  Culture  of  Higher Plant. Departement of Horticulture: England.
Schmulling  T.  2004.  Cytokinin.  Elsevier  Science:
University of Berlin.
Schumaker,  K.S.,  and  Gizinski,  M.J.  1993.
Cytokinin Stimulates Dihydropyridine Sensitive Calcium Uptake in Moss
Protoplasts.  Academy  Science.  90:  10937- 10941.
Sukmadajaja  Deden.  2011.  Regenerasi  dan
Pertumbuhan Beberapa Varietas Tebu (Saccharum  officinarum  L.) secara In  Vitro . Jurnal AgroBiogen 7.
Vujovic  T.,  D.J.  Ruzic  and  R.  Cerovic.  2012.  In vitro  Shoot  Multiplication  as  Influenced  By Repeated Subculturing of Shoot
Contemporary Fruit Rootsocks. Horticulture Science . 3: 101-107.
Warewing  P.F.  and  I.D.J.Phillips.  1981.  Growth and  Differentiation  in  plants.  Pergamon: New York.
Yusnita. 2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak  Tanaman  secara  Efisien. Agromedia: Jakarta.