UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Liosina paradoxa DARI PERAIRAN DESA TUMBAK MINAHASA TENGGARA TERHADAP PERTUMBUHAN MIKROBA Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, DAN Candida albicans.
Walen Efata Oeiyano 1) , Herny E. Simbala 1) , Henky Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Sponges  are  marine  animals,  which  contain  active  compounds  known  to  have  potential  in  the pharmaceutical  field,  including  the  antimicrobials.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the activity  of  microorganism  growth  inhibitors  from  the  sponge  Liosina  paradoxa  against  microbes Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  and  Candida  albicans.  Samples  were  extracted  by maceration method with ethanol solvent and fractionation using methanol, chloroform, and n-hexane solvents.  Antimicrobial  activity  was  carried  out  by  agar  diffusion  method  (Kirby  and  Bauer). Methanol  fractions  of  sponge  Liosina  paradoxa  showed  the  greatest  antimicrobial  activity  against Escherichia  coli  with  an  average  value  of  11.33  mm,  and  categorize  as  strong, chloroform  fraction was  7.33  mm  and  categorize  as  medium,  and  n-hexane  fraction  was  7.16  mm  and  categorize  as medium, ethanol extracts was 7.83 mm and categorize as moderate antimicrobial activity.
Keywords :  Liosina  paradoxa,  Antimicrobial,  Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  Candida albicans.

## ABSTRAK
Spons merupakan merupakan hewan laut yang mengandung senyawa aktif yang diketahui berpotensi dalam  bidang  farmasi,  diantaranya  sebagai  antimikroba.  Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk mengetahui  aktivitas  penghambat  pertumbuhan  mikroorganisme  dari  spons Liosina  paradoxa terhadap mikroba Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans .Sampel diekstraksi dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  dan  fraksinasi  menggunakan  pelarut  metanol, kloroform,  dan  n-heksan.  Aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan    metode  difusi  agar  (Kirby  and Bauer).  Fraksi  metanol  spons Liosina  paradoxa menunjukkan  aktivitas  antimikroba  paling  besar terhadap Escherichia  coli dengan  nilai  rata-rata  11,33  mm,  dengan  kategori  kuat,  fraksi  kloroform 7,33 mm kategori sedang, fraksi n-hexan 7,16 mm kategori sedang, ekstrak etanol 7,83 mm kategori aktivitas antimikroba sedang.
Kata  kunci : Liosina  paradoxa ,  antimikroba, Staphylococcus  aureus  ,Escherichia  coli,  Candida albicans.

## PENDAHULUAN
Spons  adalah  organisme  laut  yang memiliki  potensi  cukup  besar  dalam menghasilkan  senyawa  aktif.  Didunia diduga  terdapat  sekitar  10.000  spesies spons dan diperkirakan sekitar 200 spesies hidup  di  ekosistem  terumbu  karang  Asia Tenggara  (Dahuri et  al .,  2001).  Spons dilaporkan  memiliki  aktivitas  antikanker, antimikroba  dan  antiparasit  (Amir  dan Budianto,  1996).  Spons  merupakan  salah satu  komponen  biota  penyusun  terumbu karang  yang  mempunyai  potensi  bioaktif yang  belum  banyak  dimanfaatkan.  Hewan laut  ini  mengandung  senyawa  aktif  yang persentase keaktifannya lebih besar dibandingkan  dengan  senyawa-senyawa yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  darat (Suparno, 2005).
Mikroba patogen merupakan salah  satu  penyebab  penyakit  pada manusia  dan  makhluk  hidup  lainnya (Juariah et  al., 2014).  Berbagai  penelitian menunjukkan bahwa organisme laut memiliki  potensi  yang  sangat  besar  dalam menghasilkan senyawa-senyawa aktif yang dapat  digunakan sebagai bahan baku obat. Beberapa  organisme  laut  yang  diketahui dapat  menghasilkan  senyawa  aktif,  salah satunya  adalah  ascidians.  Organisme  ini diketahui  dapat  menghasilkan  sejumlah besar produk laut yang bersifat alami, juga mampu menunjukkan keragaman  senyawa kimia  yang  sangat  besar  (Thakur  dan Muller, 2004).
Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  Gram  positif  berbentuk  bulat, tersusun  dalam  kelompok-kelompok  yang tidak teratur seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora dan tidak bergerak.  Bakteri  ini  tumbuh  pada  suhu optimum 37 ºC, tetapi membentuk pigmen paling  baik  pada  suhu  kamar  (20-25  ºC).
Koloni  pada  perbenihan  padat  berwarna abu-abu sampai kuning keemasan, berbentuk  bundar,  halus,  menonjol  dan berkilau (Brooks et al., 1995).
Escherichia  coli merupakan  flora normal  didalam  intestin.  Bakteri  ini  dapat menyebabkan infeksi saluran kencing yang merupakan infeksi terbanyak (80%), gastroenteritis  dan  meningitis  pada  bayi, peritonitis,  infeksi  luka,  kolesistitis,  syok bakterimia karena masuknya organisme ke dalam  darah  dari  uretra,  kateterisasi  atau sitoskopi  atau  dari  daerah  sepsis  pada abdomen atau pelvis (Gibson, 1996).
Candida albicans merupakan jamur yang mempunyai kemampuan untuk tumbuh  dalam  dua  bentuk  yang  berbeda yaitu  blastopore  (blasroconidia)  adalah bentuk  fenotip  yang  bertanggung  jawab dalam  tranmisi  dan  penyebaran,  serta germinated yeast. Oleh karena itu Candida disebut  jamur  dimorfik  (Tortora,  2001). Perbedaan  ini  tergantung  pada  faktor eksternal  yang  mempengaruhi  selama proses  pertumbuhan  berlangsung.  Bentuk fenotip  dapat  menginvasi  jaringan  dan menimbulkan  simptomatik  karena  dapat menghasilkan mycelia (Wibowo, 2010).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat  yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  tabung  oksigen,  snorkel,  fins, masker,  sarung  tangan,  gunting,  pisau, zipper  bag ,  botol  600  ml,  talenan, cool box , kamera , Erlenmeyer (Pyrex), corong, oven,  timbangan  analitik,  spatula,  corong pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia  (Pyrex), cawan  petri,  autoklaf,  pinset,  pembakar spritus, vortex  mixer , micro  tubes ,  batang pengaduk, laminar  air  flow ,  rak  tabung reaksi,  tabung  reaksi,  lemari  pendingin,
inkubator, cakram ( paper
disc ), mikropipet, digital  caliper ,  kertas  label, spidol permanen, vacum.
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan yaitu Spons Liosina  paradoxa ,  mikroba  uji Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli , Candida  albicans ,  etanol,  akuades,  n- heksan,  kloroform,  metanol,  pepton ,  beef extract ,natriumklorida, agar, kloramfenikol paper disc , tissue, aluminium foil , plastic wrap , kertas saring.

## Prosedur penelitian

## Ekstraksi
Ekstrak  Spons Liosina  Paradoxa sebanyak  500  g  diekstraksi  dengan menggunakan  cara  maserasi.  Sampel dipotong  kecil-kecil  dengan  ukuran  1  cm² lalu  dimasukkan  ke  dalam  botol  dan direndam  dengan  larutan  etanol  96% sampai sampel terendam secara keseluruhan , sampel di  kocok- kocok dan dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel  yang direndam  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring  menghasilkan  filtrat  1  dan debris  1.  Debris  1  direndam  kembali dengan  etanol  96%  sampai  terendam semuanya,  debris  dikocok  –  kocok  dan dimaserasi selama 1x24 jam. Diulangi cara yang  sama  sampai  memperoleh  3  filtrat dan 3 debris. Campurkan filtrat 1, 2, dan 3 yang  diperoleh  menjadi  satu.  Filtrat dievaporasi  menggunakan  oven dengan suhu  40 o C  hingga  memperoleh  ekstrak kasar spons Liosina paradoxa dan timbang dengan  menggunakan  timbangan  analitik. Ekstrak  kasar  etanol  spons Liosina paradoxa sebanyak  14,50  g,  selanjutnya ekstrak  kasar  etanol  digunakan  dalam fraksinasi  dan  pengujian  daya  hambat antimikroba.

## Fraksinasi
Sebanyak 3,0 g ekstrak kasar spons Liosina  paradoxa dimasukkan  kedalam gelas  kimia,  kemudian  dilarutkan  dengan metanol  80%  sebanyak  100  mL.  Setelah tercampur,  dimasukan  kedalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n-heksan sebanyak  100  mL  setelah  itu  dikocok dalam  corong  pisah  sampai  homogen. Dibiarkan sampai terbentuk lapisan metanol  dan  lapisan  n-heksan,  kemudian masing-masing  lapisan  ditampung  dalam erlenmeyer  yang  berbeda.  Lapisan  n- heksan kemudian dikeringkan menggunakan oven  dengan  suhu  40˚C, lalu  ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  n- heksan  sebanyak  0,029  g.  Selanjutnya, lapisan  metanol  ditambahkan  akuades sebanyak  100  mL  kemudian  dipartisi dengan pelarut kloroform dengan perbandingan  1:1  v/v  dalam  corong  pisah, setelah  itu  dikocok  kembali  sampai homogen.  Dibiarkan  sampai  tebentuk  dua lapisan yaitu lapisan metanol dan kloroform, kemudian masing-masing lapisan ditampung dalam erlenmeyer  yang berbeda.  Lapisan  kloroform  selanjutnya dikeringkan  menggunakan oven  dengan suhu  40˚C,  lalu  ditimbang  berat  sampel dan  diperoleh  fraksi  kloroform  sebanyak 0,037  g.  Lapisan  metanol  kemudian dikeringkan  menggunakan oven  dengan suhu  40˚C,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  metanol  sebanyak  0,33  g.  Ketiga fraksi  yang  diperoleh  akan  digunakan dalam pengujian antimikroba.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan dalam  penelitian  aktivitas  antimikroba  ini disterilkan terlebih dahulu dengan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121  ºC
selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  di  atas  api  langsung  dan media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu 121 ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( beef extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g, nutrient  agar  1,5  g  dan  dilarutkan  dalam akuades  sebanyak  100  mL  menggunakan Erlenmeyer,  dikocok  sampai  homogen. Media  yang  telah  homogen  kemudian disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121 o C  selama  15  menit.  Media agar B1 siap digunakan untuk uji aktivitas antimikroba (Ortez, 2005).

## Kultur Mikroba
Mikroba  yang  digunakan  yaitu bakteri Escherichia  coli , Staphylococcus aureus dan  jamur Candida  albicans . Masing-masing  mikroba  diambil  dari biakan  murni  menggunakan  mikropipet sebanyak  100  μL  dan  dimasukkan  ke dalam  masing-masing  tabung  reaksi  yang sudah berisi  media  cair  B1 sebanyak 1 ml dan kemudian ditutup menggunakan aluminium  foil .  Setelah  itu,  diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 Jam (Dwijendra et al , 2014).

## Pembuatan Media Uji
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium  klorida  0,3  g,  agar  1,5  g  dan akuades  sebanyak  100  ml  diaduk  sampai homogen  kemudian  disterilkan  di  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  15  menit (Dwijendra et al , 2014).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  1  mg ekstrak  kasar  Spons Liosina  paradoxa dilarutkan  dalam  200  μL  metanol  dan
dikocok  hingga  homogen  menggunakan vortex.  Perlakuan  yang  sama  dilakukan pada fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan  Kontrol  Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  postif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  Kloramfenikol Paper  disc dan  Kontrol  negatif  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu menggunakan  pelarut  metanol,  dengan cara membuat larutan stok metanol dengan mengambil  sebanyak  200  μl  metanol kemudian ditotolkan pada paper disc

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar ( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada pengujian aktivitas antimikroba ini, cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50 μL tiap  cakram.  Sebanyak  300  μL  mikroba yang telah dikultur, dipipet dan diinokulasi pada 30 ml media agar lalu diaduk hingga homogen  dan  kemudian  dituangkan  ke dalam  cawan  petri  dan  tunggu  sampai media  agar  mengeras.  Kemudian,  larutan uji  yang  telah  disiapkan  ditotolkan  pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Setelah  agar mengeras,  kertas  cakram  yang  telah ditotolkan sampel Liosina paradoxa kontrol positif dan kontrol negatif diletakkan  ke  dalam  cawan  petri  dengan menggunakan  pinset.  Selanjutnya,  cawan petri  diberi  label  dan  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37 0 C  selama  1  x  24 Jam (Ortez, 2005).
Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran cakram  menunjukkan  kepekaan  mikroba terhadap antibiotik atau bahan antimikroba yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  diameter  zona  bening. Diameter zona bening diukur menggunakkan digital caliper. Zona bening  yang  telah  diukur  ,dikategorikan berdasarkan  pedoman  Davis  dan  Stout (1971).

## Pengolahan dan Analisis Data
Teknik  pengolahan  data  dilakukan dengan  model  penyajian  dalam  bentuk tabel dan gambar . Uji aktivitas antibakteri di  ukur  dengan  menggunakan  jangka sorong  skala  millimeter  berdasarkan  zona hambat  yang  terbentuk,  kemudian  dirata- ratakan dari tiga kali pengujian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Sampel  Spons Liosina  paradoxa yang diambil  dari  perairan  desa  Tumbak, minahasa  Tenggara  dipotong  kecil-kecil dengan  ukuran  1  cm²,  hal  ini  dilakukan dengan  tujuan  agar  memperkecil  luas permukaan  sampel,  karena  semakin  kecil permukaan  sampel  maka  akan  semakin luas  permukaan  yang  akan  berinteraksi dengan  pelarut  sehingga  senyawa  yang akan  ditarik  oleh  pelarut  pun  semakin banyak. Selanjutnya sampel  spons Liosina paradoxa di ekstraksi dengan menggunakan  metode  maserasi.  Metode maserasi  digunakan  karena  peralatan  dan pengerjaan  yang  sederhana  dan  mudah dilakukan.  Perendaman  sampel  dalam maserasi  dapat  membuat  dinding  sel  dari sampel  pecah  dan  membuat  senyawa- senyawa  yang  ada  dalam  sampel  yang terdapat  dalam  sitoplasma  akan  tertarik
oleh  pelarut.  Dinding  sel  pecah  di karenakan  adanya  perbedaan  konsentrasi di  dalam  dan  di  luar  sel.  Konsentrasi  di luar sel lebih tinggi dibandingkan konsentrasi  di  dalam  sel  yang  rendah sehingga  dinding  sel  pecah  karena  tidak bisa  menahan  tekanan  dari  perbedaan konsentrasi  (Harborne,  1996).    Pemilihan cara  maserasi  juga  bertujuan  untuk menghindari  terjadinnya  penguraian  zat aktif  yang  terkandung  dalam  sampel  oleh pemanasan tinggi.
Pelarut  yang  digunakan  untuk penyarian  zat  aktif  adalah  etanol  96% karena  etanol  merupakan  larutan  penyari yang bersifat universal, mudah didapat dan selektif sehingga penyarian dengan menggunakan  pelarut  etanol  diharapkan mampu  menarik  semua  zat-zat  atau senyawa yang bersifat polar dan non polar yang  terkandung  dalam  sampel,  selain  itu etanol tidak toksik serta ekonomis.
Proses  ekstraksi  dilakukan  selama 3x24  jam  dan  setiap  24  jam  ekstrak disaring  dan  dimaserasi  kembali  dengan pelarut  yang  baru  hal  ini  disebut  dengan remaserasi.  Remaserasi  dilakukan  agar senyawa  aktif  dalam  sampel  dapat  ditarik secara optimum (Huliselan et al , 2015).
Hasil ekstrak Spons Liosina paradoxa selanjutnya diuapkan
menggunakan  oven  dengan  suhu  40 o C  , penguapan  ekstrak  ini  dimaksudkan  agar air  dan  pelarut  yang  tersisa  dalam  ekstrak akan  menguap.  Menggunakan  suhu  40 o C bertujuan  untuk  tetap  menjaga  senyawa bioaktif  yang  terdapat  dalam  filtrat  karena biasanya  senyawa-senyawa  bioaktif  tidak tahan  terhadap  suhu  tinggi  (Kowal et  al .,
2018).  Massa  ekstrak  beserta  rendemen yang  dihasilkan  dalam  proses  ekstraksi ditunjukkan pada Tabel 1.

## Tabel  1.  Rendemen  ekstrak  Spons
Liosina paradoxa No.  Sampel Rendemen (%) Warna Sampel 1. Ektsrak Etanol 2,9 Cokelat Pekat

## Fraksinasi
Hasil  ekstrak  kasar  Spons Liosina paradoxa yang  diperoleh  selanjutnya  di lanjutkan  ke  tahap  fraksinasi.    Fraksinasi yang digunakan yaitu fraksinasi cair – cair berdasarkan  perbedaan  tingkat  kepolaran dari  setiap  pelarut  yaitu  dimulai  dari pelarut  n-heksan,  kloroform  dan  metanol. Pada proses fraksinasi dilakukan pengocokan  sebelum  didapat  2  lapisan pelarut  hal  ini  bertujuan  agar  kandungan kimia  yang  terdapat  dalam  Spons Liosina paradoxa secara selektif dapat ditarik oleh pelarut  yang  digunakan.  Masing  –  masing pelarut akan memisahkan kelompok kandungan  senyawa  berdasarkan  tingkat kepolaran,  ekstrak  disari  dengan  pelarut yang  non  polar,  kemudian  disari  dengan pelarut  yang  semi  polar  dan  pelarut  polar (Wewengkang et  al .,  2014).  Pada  saat fraksinasi  dengan  pelarut-  pelarut  yang berbeda  kepolaran,  akan  terbentuk  2 lapisan, dimana pelarut  dengan masa jenis yang  lebih  besar  akan  berada  di  bagian bawah dan pelarut dengan masa jenis kecil akan  berada  di  lapisan  atas.  Kemudian fraksi  yang  diperoleh  di  uapkan  dengan oven  pada  suhu  40 o C  dan  kemuidan digunakan untuk  uji aktivitas  antimikroba. Massa  fraksi  beserta  rendemen  yang dihasilkan dalam proses fraksinasi ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Rendemen fraksi Spons Liosina paradoxa No. Sampel Rendemen (%) Warna Sampel 1. Fraksi Heksan 0,96 Cokelat Muda 2. Fraksi Kloroform 1,2 Coklat Tua 3. Fraksi Metanol 11 Kuning tua
Terdapat perbedaan nilai rendemen ini disebabkan oleh perbedaan jenis pelarut yang  digunakan.  Dimana,  pelarut  yang berbeda akan melarutkan senyawa- senyawa  yang  berbeda,  sehingga  jumlah fraksi  yang  dihasilkan  pun  juga  berbeda (Mujipradhana et  al ,  2018).  Terlihat  dari hasil  rendemen  yang  dihasilkan  fraksi metanol  lebih  tinggi  hasil  rendemenya yaitu  93  %.  Hal  ini  dikarenakan  pelarut metanol mampu mengekstrak lebih banyak senyawa  –  senyawa  aktif  dari  sampel sehingga  senyawa  –  senyawa  aktif  yang terdapat  dalam  spons Liosina  paradoxa lebih  bersifat  polar.  Rendemen  ekstrak hasil  maserasi  dengan  pelarut  yang berbeda  akan  menghasilkan  rendemen yang  berbeda  dan  nilai  rendemen  yang dihasilkan  dari  ekstrak  metanol  diduga dipengaruhi  sifat  larutan  tersebut  yang dapat melarutkan hampir semua komponen bahan aktif  (Priyanto , 2012).

## Uji Aktivitas Antimikroba
Pengujian  aktivitas  antimikroba dilakukan  dengan  menggunakan  metode difusi  agar  (difusi  Kirby-Bauer  yang  telah dimodifikasi). Pengujian dilakukan terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus
yang  mewakili  bakteri  Gram  positif, Escherichia  coli mewakili  bakteri  Gram negatif  dan Candida  albicans yang mewakili Jamur. Metode ini dipilih karena dapat digunakan untuk melihat sensitivitas berbagai jenis mikroba terhadap antimikroba  pada  konsentrasi  tertentu (Akhyar, 2010).
Uji aktivitas antimikroba dilakukan pengamatan  selama  1x24  jam  masa inkubasi  pada  suhu  37 o C  dengan  masing- masing  3  kali  penggulangan  untuk  tiap mikroba. Konsentrasi  yang digunakan 250 µg,  dengan  daya  serap  masing-  masing paper disc 50 µL. Aktivitas yang terbentuk terlihat  dari  adanya  zona  bening  di sekitaran  cakram  yang  berukuran  6  mm, membuktikan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi dari spons Liosina paradoxa yang diujikan menunjukkan kepekaan terhadap masing – masing mikroba dan antibiotik kloramfenikol  digunakan  sebagai  kontrol positif.

## Tabel  3.  Hasil  Pengukuran  Rata-Rata Diameter Daya Antimikroba
Kriteria  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  untuk  menggolongkan  daya hambat  dari  kontrol  uji  dan  bahan  uji
Spons Liosina  paradoxa menggunkana kriteria  kekuatan  antibakteri  menurut Davis  dan  Stout  yaitu  dapat  dilihat  pada Tabel 4 dibawah ini:

## Tabel 4. Kategori Kekuatan Daya Antimikroba
Diameter Zona Bening (mm) Kategori >20 Sangat Kuat 10 - 20 Kuat 5 - 10 Sedang <5 Lemah
Pada  pengujian  ini  digunakan control  positif  yaitu  kloramfenikol  dengan spectrum  kerja  yang  luas.  Penggunaan kontrol  positif  berfungsi  sebagai  kontrol dari  zat  uji,  dengan  membandingkan diameter  daerah  hambat  yang  terbentuk (Dwijendra et  al ,  2014).  Dari  hasil  yang diperoleh  kontrol  positif  kloramfenikol menunjukan  diameter  zona  hambat  paling besar  (23,10  mm)  dibandingkan  dengan ekstrak  dan  fraksi  sampel  Spons Liosina paradoxa.
Kontrol  negatif  yang  digunakan yaitu  metanol,  dari  hasil  yang  diperoleh metanol  tidak  menunjukan  adanya  zona hambat  pada  pengujian  yang  dilakukan pada  tiap  mikroba  uji.  Sehingga  dapat diketahui,  bahwa  aktivitas  yang  didapat adalah  murni  dari  senyawa  aktif  yang terkandung pada ekstrak dan fraksi sampel Spons Liosina paradoxa .
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,
pada  fraksi  metanol  menunjukkan  bahwa diameter zona bening  yang terbentuk pada bakteri Staphylococcus aureus di
kategorikan  kuat  yaitu  11,16  mm  ,  pada
Escherichia  coli juga  dikategorikan  kuat yaitu  11,33  mm  dan  pada  jamur Candida albicans dikategorikan  sedang  yaitu  7,00 mm . Dari hasil yang didapat menunjukkan bahwa  fraksi  metanol  memiliki  senyawa
aktif  yang  hanya  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli serta Staphylococcus  aureus dan  memiliki aktivitas  untuk  menghambat  pertumbuhan jamur Candida  albicans .  Fraksi  metanol spons Liosina paradoxa memiliki spektrum  kerja  yang  luas  karena  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  baik gram positif ,gram negatif maupun jamur.
Pada  fraksi  kloroform,  diperoleh hasil    yang  menunjukkan  bahwa  diameter zona  bening  yang  terbentuk  pada  bakeri Staphylococcus  aureus memiliki  kekuatan antimikroba  sedang  yaitu  7,16  mm,    pada bakteri Escherichia coli memiliki kekuatan antimikroba  sedang  yaitu  7,30  mm  dan pada  jamur Candida  albicans juga memiliki  aktivitas  antimikroba  sedang yaitu  6,50  mm.  Hal  ini  menunjukkan bahwa fraksi kloroform  memiliki senyawa aktif yang dapat menghambat pertumbuhan  dari  ketiga  mikroba  tersebut dengan kekuatan antimikroba sedang.
Pada  fraksi  n-heksan  ,  hasil  yang didapat dengan diameter zona bening yang terbentuk  pada  bakteri Staphylococcus aureus dan  bakteri Escherichia  coli memiliki  kekuatan  antimikroba  yang sedang  yaitu  7,21  mm  dan  7,16  mm. Untuk  jamur Candida  albicans kekuatan untuk  antimikroba  sedang  yaitu  6,5  mm. Hal ini menunjukkan bahwa fraksi n-hexan dari  sampel  spons liosina  paradoxa memiliki  senyawa  aktif  yang  hanya  dapat menghambat  pertumbuhan  mikroba  dan memiliki  spektrum  kerja  yang  luas  karena dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri gram  positif  ,  gram  negatif    dan  mengh ambat pertumbuhan jamur.
Pada  ekstrak  etanol  spons liosina paradoxa , hasil yang diperoleh, menunjukkan adanya aktivitas antimikroba pada Staphylococcus  aureus yaitu  7,05
mm  termasuk  kategori  aktivitas  sedang, pada Escherichia  coli termasuk  juga kategori  sedang  yaitu  7,83  mm  dan  pada jamur Candida  albicans menunjukan aktivitas  dengan  kategori  sedang  yaitu  6,5 mm.
Hasil  yang  didapat  Dari  uji aktivitas  anti  mikroba  pada  mikroba  uji yaitu  Staphylococcus  aureus, Escherichia coli dan Candida  albicans .  Diperoleh bahwa  semua  ekstrak  dan  fraksi  spons liosina  paradoxa memiliki  aktivitas  untuk penghambat pertumbuhan mikroba
Staphylococcus  aureus ,  Escherichia  coli dan Candida albicans . Aktivitas antimikroba yang kuat terdapat pada fraksi metanol,  dan  aktivitas  sedang  terdapat pada  fraksi  kloroform,  fraksi  n-hexan  dan ekstrak  etanol.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  senyawa  polar  pada  sampel  spons Liosina  paradoxa  memiliki  aktivitas  lebih baik dari pada senyawa non polar sampel.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi dari  Spons Liosina  paradoxa memiliki aktivitas untuk menghambat bakteri Escherichia  coli serta Staphylococcus aureus dan  jamur Candida  albicans . Fraksi  metanol  mem    iliki  aktivitas  untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli dengan kategori  daya  hambat  kuat,  sedangkan untuk fraksi kloroform, fraksi n-hexan dan ekstrak  etanol  hanya  memiliki  aktivitas daya  hambat  sedang  terhadap Escherichia coli serta Staphylococcus  aureus dan jamur Candida albicans.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  terhadap  Spons Liosina  paradoxa
dengan  metode  pengujian  yang  berbeda dan  uji  aktivitas  lainnya  agar  dapat mengetahui  manfaat  lain  selain  aktivitas antimikroba.

## DAFTAR PUSTAKA
Amir,  I.,  A.  Budiyanto.  1996.  Mengenal Spons Laut (Demospongiae) Secara  Umum.  Oseana.  21( 2 )  15- 31.
Akhyar.  2010.  Uji  Daya  Hambat  dan Analisis KLT Bioautografi Ekstrak Akar dan Buah Bakau ( Rhizophora stylosa Griff.) Terhadap Vibrio Harveyi  [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin, Makassar
Jawetz,  E.,  J.L.  Melnick.,  F.A.  Adelberg., G.F.  Brooks.,  J.S.  Butel.,  dan  L.N. Ornston.1995. MikrobiologiKedokte ran . Alih bahasa oleh Nugroho dan R.F.Maulany. EGC, Jakarta.
Davis,  W.  W.,  Stout,  T.  R.  1971.  Disc Plate  Method  of  Microbiological Antib iotic Assay. Appl. Microbiol .
4 (22) : 666-670.
Dahuri,  R.,  Jacub  Rais.,  Sapta  Putra Ginting,  dan  M.J.,  Sitepu.  2001. Pengelolaan  Sumber  daya  Wilayah Pesisir dan Lautan secara Terpadu . PT Pradnya Paramita, Jakarta.
Dwijendra,  I.  M.,  D.  S.  Wewengkang.,  F.
Wehantou. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lame llodysidea herbacea Manado.
Pharmacon . 3 (4) : 1-9.
Gibson. 1996. Organisasi, Prilaku, Struktur, Proses . Jakarta: Erlangga.
Harbone,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia
Penuntun  Modern  Menganalisis Tumbuhan Edisi   Kedua .  ITB
Press, Bandung.
Huliselan, Y. M., M. R. J. Runtuwene., D. S.  Wewengkang.  2015.  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol,  Etil Asetat  dan  N-Heksan  dari  Daun Sesewanua,( Clerodendronsquamat um Vahl.). Pharmacon .  4 (3) :  155- 163.
Juariah,  S.  Suryanto,  D.  Jamilah,  I.  2014.
Altivitas Antibakteri Spesies Asterias  Forbesi  Terhadap  Bebera pa  Jenis  Bakteri  Patogen. Jurnal Berkala Perikanan Telubuk . 42 (2) :
37-50
Kowal,  A.,  Esther,  A.,  Nickson,  K., Kurniati,  K.,  Henky,  M.,  Deiske, H. 2018. Potensi antibakteri karang lunak lobophytum sp. Dari perairan pangalisang pulau bunaken terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus . Jurnal Ilmiah Platax . 6( 2 )
Mujipradhana,  V.,  Defny,  W.,  Edi,  S. Aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak ascidian herdmania  momus pada mikroba  patogen  manusia. Jurnal Ilmiah Farmasi 7( 3 ).
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual  of  antimicrobial  susce ptibility  testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed).  American  society  for Microbiology, America.
Priyanto, R. A. 2012. Aktivitas Antioksidan Dan Komponen Bioaktif Pada Buah Bakau ( Rhizophora  mucronata  Lamk .).
[Skrips] Institut Pertanian Bogor.
Suparno.  2005. Kajian  Bioaktif  spons  laut (forifera:  Demospongiae)  Suatu Peluang  Alternative  Pemanfaatan Ekosistem Karang Indonesia
Dalam  Bidang  Farmasi .  Institute Pertanian  Bogor.
Thakur,  N.L.,  Muller,  W.E.G.  2004.
Biotechnological Potential Of
ManrineSponge  . Journal  Current Science . 86 : 1506-1512
Wewengkang,  D.,  Deiske.  S.,  Hengki.  R.
2014.  Karakterisasi  dan  bioaktif antibakteri senyawa
spons Haliclona sp.  dari  teluk  manado.
Jurnal  LPPM  Bidang  Sains  dan Teknologi . 1( 1 ).
Wibowo,  S.  2010. Ilmu  Pangan  Nutrisi dan  Mikrobiologi  edisi  ke-2 . Rajawali Press, Jakarta.