Naskah diterima (received) 06 juli  2012, disetujui (accepted) 23 Agustus 2012. 1) Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia, Jl. PB. Sudirman No. 90, Jember, Indonesia. *) Alamat penulis (Corresponding Author) : arimarsetiowati@gmail.com

## Pengaruh penambahan auxin terhadap pertunasan dan perakaran kopi arabika perbanyakan Somatik Embriogenesis
The effects of shooting and rooting of arabica coffee propagation through embryogenesis  somatic  auxin  uses
Rina Arimarsetiowati 1*) dan Fitria Ardiyani 1)

## Ringkasan
Planlet  hasil  perbanyakan  somatik  embriogenesis  yang  sudah  bertunas dan berakar akan memiliki tingkat adaptasi yang tinggi di lapang. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan  kemampuan bertunas dan berakar planlet sehingga lebih siap diaklimatisasikan di lapangan. Hal ini dilakukan dengan  menambahkan berbagai jenis auksin pada media tanam. Embrio kopi Arabika klon AS 2K yang telah  memasuki  fase  kotiledon  di  subkultur  dalam  media  perlakuan  yang mengandung setengah  media  Murashige & Skoog (MS) baik  makro  dan  mikro, vitamin B5, 30 gr/L gula, 100 ml/L air kelapa, 50 mg/L AgNO 3 ditambah komposisi IAA,  IBA  dan  NAA.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  rancangan rancangan acak lengkap dengan tujuh kombinasi  perlakuan yaitu 0,1 mg/L IBA; 0,1 mg/L NAA; 0,1 mg/L IAA; 0,1 mg/L IBA + 0,1 mg/L NAA; 0,1 mg/L IBA + 0,1  mg/L  IAA;  0,1  mg/L  NAA  +  0,1  mg/L  IAA;  dan  sebagai  kontrol  tanpa penambahan auksin IAA, IBA, NAA. Terdapat 12 ulangan dalam setiap perlakuan dan setiap ulangan terdiri dari lima embrio berkotiledon. Parameter pengamatan adalah panjang akar, jumlah  daun,  luas  permukaan  daun,  diameter batang, dan tinggi planlet. Pengamatan dilakukan pada minggu ke-8 setelah embrio berkotiledon bertunas. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada parameter jumlah daun dan tinggi planlet, perlakuan tanpa penambahan auksin memiliki hasil terbaik daripada planlet  dengan  penambahan  auksin.  Penambahan  berbagai  auksin  dan kombinasinya pada parameter luas permukaan  daun, panjang akar dan diameter batang  tidak  memiliki  pengaruh  yang  nyata.  Media  yang  diuji  sudah  optimum untuk pertumbuhan tunas dan akar kopi Arabika AS 2K.
Kata kunci : Coffea arabica (L.), somatik embriogenesis, zat pengatur tumbuh, auksin,  NAA, IAA, IBA

## Summary
Plantlets  that  has  the  shoots  and  the  roots  will  have  a  high  level  adap- tation  in  the  field.  The  objective  of  this  experiment  was  to  improve  the  ability of  planlet  in  shooting  and  rooting  so  that  it’s  more  ready  for  acclimatization in  the  field.  The  increased  ability  in  shooting  and  rooting  of  the  planlet  were conducted  by  adding  various  types  of  auxin  in  the  media.  The  clone  AS  2K  of Arabica  coffee  embryo  which  has  entered  the  phase  of  the  cotyledons  was transfered  in  the  treatment  media  containing  half-MS  (Murashige  &  Skoog)
macro  and  micro,  vitamin  B5,  30  g/L  glucose,  100  ml/L  coconut  water, 50 mg/L AgNO3 was added the composition of IAA, IBA and NAA. The research was conducted by using completly randomized design with seven combined treat- ment i.e. 0.1 mg/L IBA, 0.1 mg/L NAA, 0.1 mg/L IAA; 0 , 1 mg/L IBA + 0.1 mg/L NAA, 0.1 mg/L IBA  + 0.1 mg/L  IAA, 0.1 mg/L NAA + 0.1 mg/L  IAA; without auxin.  There  were  12  replication  in  every  treatments  and    each  replication consisted  of  five  cotyledonary  embryos.  The  parameters  of  observation    were the root length, leaf number, leaf area meter, stem diameter, and height of plant- lets.  The  observations  were  conducted  in  eighth  week  after  cotyledonary  em- bryo  had  shoots.  The  results  showed  that in  the  number  of  leaves  and  hight  of planlet  parameters,  the  treatment  without  auxin  was  the  best  result  compared with  planlet  with  auxin  addition.  The addition  of  auxin  varians  and  their  com- bination  on  leaf  area,  root  length  and  stem  diameter  parameters  were  not  sig- nificantly different. The medium tested were an optimum for the growth of shoots and roots of AS 2K Arabica coffee.
Key words : Coffea  arabica  (L.),  somatic  embryogenenis,  plant  growth  regulator,  auxin, NAA, IAA, IBA

## PENDAHULUAN
Produksi kopi yang tinggi dapat dicapai dengan  ketersediaan  bahan  tanam  yang unggul. Bahan tanam unggul dapat diperoleh dengan berbagai macam metode perbanyak- an. Secara umum, kopi dapat diperbanyak secara  generatif  ataupun  vegetatif.  Per- banyakan secara generatif dapat dilakukan dengan menggunakan biji dan akan meng- hasilkan  keturunan  yang  memiliki  sifat bervariasi. Sedangkan perbanyakan secara vegetatif adalah perbanyakan tanaman yang berasal dari bagian vegetatif tanaman dan tidak didahului dengan proses peleburan gamet jantan  dan  betina.  Perbanyakan  ini  akan menghasilkan keturunan yang seragam sama seperti induknya (Mangoendidjojo, 2003). Oktaviana et al. (2003) mengatakan bahwa kedua  cara  pembiakan  tersebut  masih terdapat beberapa kelemahan. Kelemahan tersebut  antara  lain  keterbatasan  jumlah bahan  tanam  yang  dihasilkan  dan  waktu yang  lama  (Tahardi  et  al.,  1997).  Guna mengatasi masalah tersebut dapat dilakukan dengan  teknik  kultur  in  vitro  secara embriogenesis somatik.
Somatik embriogenesis adalah proses dimana sel-sel somatik berkembang menjadi embrio melalui tahap-tahap morfologi yang khas tanpa melalui fusi gamet (Toonen & Vries, 1996). Kesuksesan teknik embriogene- sis somatik dalam perbanyakan tanaman kopi Arabika tidak hanya tergantung dari jumlah planlet yang dihasilkan tetapi juga tergantung dari tingkat kelangsungan hidup planlet pada saat  transfer  ke  pembibitan  dan  kondisi lapang. Tunas berakar hasil perbanyakan embriogenesis somatik, tingkat adaptasinya di lapangan pada saat aklimatisasi lebih tinggi dari pada tunas tidak berakar (Rostiana & Sewita, 2007).
Beberapa faktor seperti konsentrasi hara makro dan mikro dalam media perakaran, jenis zat pengatur tumbuh yang digunakan sangat  mempengaruhi  dalam  tahap  per- akaran dan pertunasan. Selain itu, konsen- trasi  mineral  dalam  media  kultur  mem- pengaruhi karakteristik perakaran. Pengu- rangan  setengah  konsentrasi  unsur  hara makro dan mikro dalam media perakaran dapat  m eningkatkan  laju  per akar an (Fotopoulus & Sotiropoulus, 2005).

## Arimarsetiowati & Ardiyani
Zat  Pengatur  Tumbuh  (plant  growth regulator) adalah senyawa organik bukan nutrisi  yang  dalam  konsentrasi  rendah (<1 mM) mendorong, menghambat atau secara kualitatif mengubah pertumbuhan dan perkembangan tanaman (Dewi, 2008). Dua golongan zat pengatur tumbuh yang sangat penting  adalah  sitokinin  dan  auksin.  Zat pengatur  tumbuh  ini  mempengaruhi  per- tumbuhan dan morfogenesis dalam kultur. Selain auksin dan sitokinin, giberelin dan persenyawaan lain juga dapat ditambahkan dalam  m edia   tanam  kultur  ja ringan (Gunawan, 1992). Hal  ini diperkuat oleh Hidayat  (2007)  yang  menyatakan  bahwa auksin dan sitokinin merupakan zat penga- tur tumbuh yang dibutuhkan dalam media kultur  jaringan  dan  diberikan  dalam konsentrasi  yang  sesuai  dengan  pertum- buhan yang diinginkan.
Dewi  (2008)  menyebutkan  bahwa fungsi  auksin  antara  lain  mempengaruhi pertambahan panjang batang, pertumbuhan, diferensiasi dan percabangan akar, perkem- bangan buah, dominansi apikal, fototropisme dan geotropisme. Auksin terbagi menjadi be- berapa jenis antara lain : Indole Acetic Acid (IAA) , Indole Butyric Acid (IBA),  Naph- taleneacetic Acid (NAA), dan  2,4-dichloro- phenoxy acetic acid (2,4-D). Di alam IAA diidentifikasikan sebagai auksin yang aktif di  dalam  tumbuhan  (endogenous)  yang diproduksi dalam jaringan meristematik yang aktif seperti contonya tunas, sedangkan IBA dan NAA merupakan auksin sintetis (Hoesen et al., 2000).
Hu  & Wang (1983)  dalam  Dodds  & Roberts  (1995)  mengatakan  bahwa  ke- mampuan jaringan untuk membentuk akar bergantung pada zat pengatur tumbuh (ZPT) yang ditambahkan ke dalam media, antara lain auksin. Selain jenis auksin, konsentrasi auksin juga berpengaruh pada pertumbuhan tanaman  dalam  kultur  jaringan.  Auksin sintetik yang sering digunakan untuk meng-
induksi perakaran in vitro adalah NAA dan IBA dalam konsentrasi  rendah (Dodds & Roberts, 1995).
Berbagai jenis auksin dapat diaplikasi- kan  bersama-sama  atau  dikombinasikan dengan  golongan  sitokinin  dan  giberelin (Jenes  et  al.,  1977  dalam  Ahmed  et  al., 2002), tetapi untuk menginduksi perakaran akan lebih baik hanya dengan penambahan satu jenis auksin saja (George & Sherrington, 1984).

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laborato- rium Kultur Jaringan, Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia, Jember. Eksplan yang digunakan  berupa embrio berkotiledon kopi Arabika klon AS 2K yang dihasilkan dari perbanyakan tanaman secara embriogenesis somatik. Eksplan tersebut ditanam dalam media perlakuan yang mengandung setengah MS (Murashige & Skoog) baik makro dan mikro, vitamin B5, 30 g/L gula, 100 ml/L air kelapa, 50 mg/L AgNO 3 . Media tersebut diberikan perlakuan penambahan auksin (IAA, IBA dan NAA).
Rancangan yang digunakan pada peneliti- an ini adalah rancangan acak lengkap, dengan tujuh kombinasi perlakuan yaitu 0,1 mg/L IBA; 0,1 mg/L NAA; 0,1 mg/L IAA; 0,1 mg/ L IBA + 0,1 mg/L NAA; 0,1 mg/L IBA + 0,1 mg/L IAA; 0,1 mg/L NAA + 0,1 mg/L IAA; tanpa auksin (sebagai kontrol). Menurut Rostiana & Seswita (2007), IAA digunakan pada kisaran konsentrasi 0,1-10 mg/L, NAA 0,05-1 mg/L, dan IBA 0,5-3 mg/L. Masing- masing kombinasi perlakuan diulang 12 kali dengan  setiap  ulangan  terdiri  dari  lima eksplan. Pengamatan dilakukan pada umur delapan minggu setelah embrio berkotiledon bertunas selanjutnya nilai rata-rata param- eter dianalisa dengan uji statistik ANOVA. Apabila ada perbedaan pengujian dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan.

## Pengaruh  penambahan  auxin  terhadap  pertunasan  &  perakaran  kopi  arabika  perbanyakan  SE
Parameter yang diamati adalah panjang akar, jumlah daun, luas permukaan daun, tinggi tanaman dan diameter batang.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penambahan  zat  pengatur  tumbuh diduga akan berpengaruh pada pertumbuhan kopi Arabika. Salah satu zat pengatur tumbuh, yaitu auksin dapat memberikan pengaruh pada pertumbuhan panjang akar kopi arabika klon  AS  2K.  Himanen  et  al.  (2002)  dan Husniati (2010) menyatakan bahwa auksin memicu terjadinya pembelahan sel, sehingga diperlukan untuk pembentukan akar. Akan tetapi pada kondisi tertentu auksin juga dapat bersifat meracuni tanaman.
Berdasarkan data pada Tabel 1, terda- pat perbedaan angka pada perlakuan yang cukup besar tetapi tidak berbeda nyata yaitu pada panjang akar, luas daun, dan diameter batang. Hal ini disebabkan oleh kemampuan endogen dari setiap embrio berbeda-beda untuk  tumbuh  dan  berkembang.  Hal  ini diperkuat  oleh  hasil  penelitia n  Rina
Arimarsetiowati  et  al.  (2010)  yang  men- dapatkan  bahwa  kopi  arabika  memiliki keragaman yang tinggi yang ditunjukkan oleh nilai koefisien keragaman (CV) yang tinggi yaitu sebesar 37%. Hal ini juga terjadi pada somatik embriogenesis tanaman sagu dengan nilai koefisien keragaman (CV) yang juga tinggi pada awal kultur yaitu sebesar 40,9% (Kasi & Sumaryono, 2006).
Penambahan ketiga jenis auksin (IBA, NAA dan IAA) serta kombinasinya tidak memberikan  respon  yang  berbeda  nyata terhadap panjang akar kopi Arabika klon AS 2K jika dibandingkan perlakuan tanpa penambahan auksin (Tabel 1). Bahkan dari hasil analisis juga diketahui bahwa penam- bahan  beber apa  jenis  auksin  justru menghasilkan akar yang lebih pendek dari pada pertumbuhan akar tanpa penambahan auksin. Auksin jenis IAA pada konsentrasi 0,1  mg/L  menghasilkan  akar  terpanjang sedangkan  kombinasi  perlakuan  auksin 0,1 mg/L  IBA +  0,1 mg/L  NAA meng- hasilkan  akar  terpendek.  Pada  konsen- trasi  rendah,  IAA  menyebabkan  peman- jangan baik pada pucuk maupun pada akar.
Tabel 1. Pengaruh  jenis auksin terhadap panjang akar, jumlah daun, luas permukaan daun, diameter batang dan tinggi planlet kopi klon AS 2K
Table 1. The effect of auxin varians on the root length, the number of leaves, leaf area, the stem diameter and high of planlets of AS 2K coffee clone
Catatan (Notes) :  Data pada kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji Duncan 5%
(Numbers in the same colomn followed by the same letter are not significantly different according to Duncan test 5%).
Media Medium
Panjang Akar
(mm) The root length
(mm) Jumlah Daun Number of Leaves Luas Daun (mm) Leaf Area (mm) Diameter Batang (mm)
Stem Diameter (mm) Tinggi Planlet
(mm) High of Plantlets (mm) 0,1 mg/L IBA 3.10 a              2.22 ab            13.499 a                1.42 a 8.73 cb 0,1 mg/L NAA 2.11 a              2.27 ab            20.363 a                1.57 a 9.68 b 0,1 mg/L IAA 4.31 a              2.65 ab 14.473 a                1.10 a 6.46 c 0,1 mg/L IBA+ 0,1 mg/L NAA 1.31 a              2.62 ab 9.353 a                  2.19 a 7.17 cb 0,1 mg/L IBA + 0,1 mg/L IAA 3.29 a              1.86 b 12.241 a                0.82 a 7.29 cb 0,1 mg/L NAA +0,1 mg/L  IAA        3.09 a              2.42 ab 10.236 a                0.86 a 9.18 cb Tanpa auksin (Witout auxin) 3.032 a            3.37 a 16.951 a                0.96 a 12.91 a
Jika konsentrasi IAA lebih tinggi, efeknya menjadi berlawanan sehingga pemanjangan pucuk dan akar menjadi terhambat (Moore 1989  cit.  Aryantha  2004).  Sedangkan menurut  Weaver  (1972),  IBA  memiliki aktivitas auksin yang lemah, tetap berada pada  daerah  pemberian  perlakuan  dan translokasinya  lemah,  sehingga  bahan aktifnya  akan  tertahan  di  dekat  tempat aplikasinya. NAA memiliki sifat lebih beracun dari IBA. Penggunaan konsentrasi yang tinggi harus dihindari karena dapat menyebabkan pelukaan pada tanaman. Dengan demikian beberapa jenis auksin yang digunakan dapat juga menghambat pertumbuhan panjang akar.
Fuchs  (1986)  mengatakan  bahwa penambahan  auksin  dengan  konsentrasi tertentu tidak selalu meningkatkan pertum- buhan akar tetapi justru dapat menurunkan pertumbuhan  akar.  Hal  tersebut  berhu- bungan dengan kadar nitrogen yang ada pada masing-masing  media  tumbuh yang  telah dikombinasikan dengan berbagai jenis auksin. Kaneda & Harada (1979) cit. Kaneda et.al. (1997) mengatakan bahwa jumlah nitrogen yang  melimpah  pada  media  kurang  baik untuk pertumbuhan akar karena asam amino yang  terbentuk  dapat  menghambat  pem- bentukan akar.
Penambahan konsentrasi yang optimal untuk  pertumbuhan  akar  berbeda  pada masing-masing  tanaman.  Hasil  penelitian yang telah dilakukan pada tanaman Pelar- gonium  x  hortorum Bailey  menunjukkan bahwa penambahan NAA pada konsentrasi rendah  (<1µM)  menghasilkan  perakaran yang kurang baik, meskipun sudah dikom- binasikan  dengan  benzyladenine.  Jika konsentrasi NAA yang ditambahkan semakin tinggi (>1µM), pertumbuhan akar semakin banyak  (Sanago et  al., 1995).  Sedangkan pada  tanaman Pelargonium  tomentosum, penambahan IBA 0,8-1,0 mg/L menghasil- kan  aka r  yang  pendek,  gemuk  se rta cenderung membentuk kalus. Penambahan IBA  pada  konsentrasi  lebih  rendah  dari 0,8 mg/L menghasilkan akar yang normal, sedangkan  perakaran  terbaik  didapatkan pada perlakuan  IBA 0,5  mg/L (Gandadi- kusumah, 2002).
Selain  pertumbuhan  panjang  akar, auksin  juga  dapat  berpengaruh  terhadap pertumbuhan daun. Daun merupakan salah satu  organ  tanaman  yang  sangat  penting terutama untuk fotosintesis supaya tanaman dapat menghasilkan makanan dan mengalami pertumbuhan  yang  optimum.  Semakin
Gambar 1. Planlet kopi Arabika Klon AS2K pada berbagai macam auksin dan kombinasinya.
Figure 1. Planlets of AS 2K coffee clone in auxin varians and the combinations.
bertambah jumlah daun, ukuran panjang ser ta lebar daun maka semakin besar pengaruhnya terhadap  pertumbuhan  tanaman  (Sylvia, 2009).
Salah  satu  fungsi  auksin  pada  per- tumbuhan  daun  adalah  membantu  per- kembangan jaringan meristem calon daun. Respon kopi Arabika klon AS 2K pada pa- rameter jumlah daun menunjukkan adanya pengaruh penambahan berbagai jenis auksin (Tabel 1). Penambahan auksin pada eksplan kopi Arabika klon AS 2K akan menghambat munculnya daun. Hal tersebut ditunjukkan dengan  jumlah  daun  yang  muncul  pada eksplan  tanpa  perlakuan  auksin  lebih banyak daripada jumlah daun yang muncul pada  eksplan  dengan  perlakuan  auksin. Auksin dengan konsentrasi 0,1 mg/L akan menghambat pembentukan daun, terutama untuk kombinasi auksin 0,1 mg/L IBA + 0,1 mg/L IAA.
Pada parameter luas permukaan daun, penambahan  berbagai  jenis  auksin  tidak memberikan respon yang berbeda terhadap eksplan tanpa penambahan auksin. Hanya saja penambahan NAA 0,1 mg/L dapat menye- babkan penambahan luas daun tertinggi pada eksplan kopi Arabika. Menurut Windasari (2004), pada tanaman Krisan konsentrasi NAA 0,1mg/L merupakan konsentrasi op- timum untuk pertumbuhan daun dan tinggi planlet. Sedangkan kombinasi auksin pada perlakuan 0,1 mg/L IBA+ 0,1 mg/L NAA memberikan luas permukaan  daun paling kecil.
Selain berpengaruh pada perakaran dan pertumbuhan daun, penambahan auksin juga mempengaruhi  pertumbuhan  planlet  kopi Arabika klon AS 2K. Salah satu fungsi auksin yang lain adalah mempengaruhi pertambahan panjang  dan  pertumbuhan  batang  (Dewi, 2008). Penambahan berbagai jenis auksin dan kombinasinya tidak memberikan respon  yang berbeda terhadap eksplan tanpa penambahan
auksin  pada  parameter  diameter  batang (Tabel 1). Penambahan kombinasi auksin 0,1 mg/L IBA+ 0,1 mg/L NAA dapat menye- babkan diameter batang tertinggi pada eksplan kopi Arabika.
Jika auksin IAA diterapkan pada apikal akhir pada stek batang, akan meningkatkan sel  divisi  dalam  kambium  dan  pengem- bangan proses xilem sebagai batang utuh. Penerapan auksin pada basal akhir pada stek dapat memiliki efek minimal terhadap dia- meter batang pada semua spesies (Wareing et al., 1964; Reinders-Gouwentak, 1965; Savidge & Wareing, 1981b; Little & Savidge; 1987). Auksin dapat memacu perkembangan jaringan  pembuluh  dan  mendorong  pem- belahan  sel  pada  kambium  pembuluh sehingga mendukung pertumbuhan diameter batang.  Studi  dengan  IAA  menunjukkan adanya  transportasi  IAA  melalui  sel-sel kambium (Little & Savidge, 1987) dan dapat terjadi selama dormansi untuk pemeliharaan konifer  (Savidge  &  Wareing,  1982). Pengangkutan  IAA  sangat  penting  dalam pemeliharaan radial sempit, pemanjangan bentuk  sel  kambium  dan  diferensiasi  ke parenkim aksial (Savidge, 1983).
Pada parameter tinggi planlet, penam- baha n  auksin  da n  kombina si  a uksin menyebabkan adanya respon yang berbeda nyata  dengan  planlet  tanpa  penambahan auksin  (Tabel  1).  Planlet  yang  tumbuh pada media tanpa penambahan auksin akan lebih tinggi daripada planlet yang tumbuh pada  media  dengan  penambahan  auksin 0,1 mg/L. Konsentrasi berbagai jenis auksin 0,1  mg/L  justru  akan  menghambat  per- tumbuhan  tinggi  planlet.  Penambahan 0,1 mg/L NAA memberikan hasil yang cukup bagus  dibandingkan  penambahan  auksin lainnya
Pemberian auksin dapat dikombinasi kan dengan  hormon  lain  untuk  mendapatkan pertumbuhan planlet yang optimal. Seperti pada tanaman gaharu, perlakuan zat pengatur
tumbuh BAP  1.0  ppm  dan  IAA 0.5  ppm merupakan konsentrasi yang optimum dan terbaik dalam menghasilkan jumlah planlet dan  panjang  planlet  (Anggraeni,  2011). Se dangkan  pada   tanaman  tem baka u, keseimbangan antara auksin dan sitokinin dapat mengatur pertumbuhan tunas dan kalus pada kultur in vitro. Auksin dan sitokinin berperan dalam pertumbuhan tunas. Oleh karena itu untuk mendapatkan hasil kultur jaringan tembakau yang optimal diperlukan kombinasi komposisi ZPT berupa hormon auksin dan sitokinin yang tepat (Ali, 2007).

## KESIMPULAN
Media yang diuji sudah optimum untuk pertumbuhan tunas dan akar kopi Arabika AS 2K. Penambahan berbagai jenis auksin sintetik  0,1  mg/L  dan  kombinasi  tidak memperbaiki kinerja pertumbuhan planlet.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed, E. E; G.Y.D. Bisztray & I. Velich (2002). Plant regeneration from seedling ex- plants  of  common  bean  (Phaseolus vulgaris L.). Proceedings of the 7th Hungarian Congress on Plant Physio- logy.  Szent  Istvan  University  of Budapest. Budapest, Hungary, 115-123.
Ali, G.  (2007). Callus Induction and in vitro Complete Plant Regeneation of ifferent Cultivars  of  Tobacco  (Nicotiana Tabaccum L. ) on media of Different Hormonal Consentration. Biotechnol- ogy, 6, 561-566.

## Anggraeni, F. (2011). Induksi Tunas Tanaman
Gaharu (Aquilaria malaccencis Lamk) dengan Menggunakan Kombinasi Zat Pengatur  Tumbuh  BAP  dan  IAA secara In Vitro. Skripsi. Universitas Sumatra Utara. Sumatra Utara.
Aryantha,  I.N.P.;  D.P.  Lestari  &  N.P.D.
Pangesti (2004). Potensi Isolat Bakteri Penghasil  IAA  dalam  Peningkatan Pertumbuhan Kecambah Kacang Hijau pada  Kondisi  Hidroponik.  Jurnal Mikrobiologi Indonesia, 9,  43-46.
Arimarsetiowati, R.; C. Ismayadi & Priyono (2010). Heterogeneous characteristics during  the  development  of  Coffea arabica somatic embryos. Proceeding of the 23th  International Conference on  Coffee  Science.  Association  for Science  and  Information  on  Coffee (ASIC),  785-788.
Dewi,  I.R.  (2008).  Peranan  dan  Fungsi
Fitohormon bagi Pertumbuhan Tana- man. Skripsi. Fakultas Pertanian. Uni- versitas Padjajaran. Bandung.
Dodds, H.J. & L.W. Roberts (1995). Experiments in Plant Tissue Culture. Cambridge University Press. 255.
Fotopoulos, S. & T.E. Sotiropoulos (2005). In vitro rooting of PR 204/84 rootstock (Prunus persica x P. Amygdalus) as influenced by mineral concentration of the culture medium and exposure to darkness for a period. Agronomy Re- search, 3,  3-8.
Fuchs. H.W.M. (1986). Root regeneration of rose plants as influenced by applied auxins. Acta Horticulture 189. Agri- cultural  University.  Department  of Horticulture. Netherlands.
Gandadikusumah, V.G. (2002). Induksi Per- akaran  Tanaman  Pepaya  (Carica papaya L.) Hasil Persilangan Pepaya Bangkok  dengan  Pepaya  Hawaii Secara  in  vitro  dengan  Media Perlakuan MS dan IBA. Skripsi. Uni- versitas Sebelas Maret. 58.
George, E.F. & P.D. Sherrington (1984). Plant
Propagation  by  Tissue  Culture . Exegetics Limited. England. 284 - 330.
Gunawan, L.W. (1992). Teknik Kultur Jaringan.
Bogor,  Pusat  Antar  Universitas Bioteknologi Institut Pertanian Bogor.
245p.
Hidayat (2007). Induksi Pertumbuhan Eksplan Endosperm Ulin dengan IAA dan Ki- netin. Agritop, 26, 147-152.
Himanen, K.; E. Boucheron; S. Vannesse; J. de Almeida-Engler; D. Inze & T. Beeckman (2002). Auxin-mediated cell cycle acti- vation during early root initiation. Plant Cell. 14, 2339-2352.
Hoesen; D.; S. Hazar; Priyono & H. Sumarnie (2000). Peranan zat pengatur tumbuh IBA,  NAA,  dan  IAA  pada  per- banyakan  Amarilis  Merah  (Amaryl- lidaceae).  Prosiding  Seminar  Hari Cinta Puspa dan Satwa Nasional. Lab Treub  Balitbang  Botani  Puslitbang Biologi, LIPI Bogor.
Husniati, K. (2010). Pengaruh Media Tanam dan Konsentrasi Auksin terhadap Per- tumbuhan Stek Basal Daun Mahkota Tanaman Nanas (Ananas comosus L. Merr) cv. Queen. Sripsi. Program Studi Pemuliaan  Tanaman  dan  Teknologi Benih.  Fakultas  Pertanian.  Institut Pertanian Bogor.
Kaneda, Y.;  Y. Tabei; S. Nishimura; K. Harada; T. Akihama & K. Kitamura (1997) Com- bination of thiadizuron and basal me- dia  with  low  salt  concentration  in- creases the frequency of shoot orga- nogenesis in soybean (Glicine max (L.) Merr.). Plant Cell Report, 17,  8-12.
KasiASI, P. D & Sumaryono (2006). Keragaman morfologi selama perkembangan embrio
somatik sagu (Metroxylon sagu Rottb.).
Menara Perkebunan, 74, 44-52.
Little, C.H.A. & R.A. Savidge (1987). The role of plant growth regulators in for- est tree cambial growth. Plant Growth
Regulation, 6, 137-169.
Mangoendidjojo,  W.  (2003).  Dasar-dasar
Pemuliaan  Tanaman.  Kanisius.
Yogyakarta. 184.
Oktaviana,  F.;  Siswanto;  A.  Budiani  & Sudarsono  (2003).  Embriogenesis somatik  langsung  dan  regenerasi planlet kopi arabika (Coffea arabica) dari  berbagai  eksplan.  Menara Perkebunan, 71, 44-55.
Reinders-Gouwentak, C. (1965). Physiology of the cambium and other secondary mer- istems of the shoot. In: W. Ruhland (ed) Encyclopedia of Plant Physiol- ogy. Springer-Verlag, Berlin, 15, 1076- 1105.
Rostiana, O. & D. Seswita (2007). Pengaruh Indole Butyric Acid dan  Naphtaleine Acetic  Acid  Terhadap  Induksi Perakaran Tunas Piretrum (Chrysan- themum cinerariifolium (Trevir.)Vis.) Klon Prau 6 Secara In Vitro. Buletin Penelitian  Tanaman  Obat  dan Aromatik, 17, 39-48.
Sanago, H.M.M; S. J. Murch; T.Y. Slimmon; S. K. Raj & P. K. Saxena (1995). Mor- phoregulatory role of thidiazuron : Morphogenesis of root outgrowths in thidiazuron-treated geranium (Pelar- gonium x hortorum Bailey). Plant Cell Reports, 2, 205-211.
Savidge, R.A. & P.F. Wareing (198 lb). Plant growth regulators and the differentia- tion of  vascular  elements.  In:  J.R. Bamett (ed) Xylem Cell Development.
Castle House Publications. Tunbridge Wells, England, 192-235.
Savidge, R.A. & P.F. Wareing (1982). Apparent auxin production and transport during winter in the non-growing pine tree. Canadian  Journal of  Botany, 60, 68- 691.
Savidge, R.A. (1983). The role of plant hor- mones in higher plant cellular differ- entiation. II Experiments with the vas- cular cambium, and sclereid and tra- cheid differentiation in the pine, Pinus conrorta. Histochemical Journal, 15, 447-466.
Sylvia,  I.  (2009).  Pengaruh  IBA  dan  NAA terhadap stek Aglonema Var. Donna Carmen dengan  perendaman. Skripsi.
Fakultas Pertanian. IPB. Bogor.
Tahardi; J.S.  Sumaryono & N. Mardiana (1997).
Initiation and maintenance of embryo- genic  suspension  culture  of  tea (Camellia  sinensis  L.).  Menara Perkebunan, 65, 1-8.
Thimann, K.V. (1969). The Auxins. p. 20-22.
In: M. B. Wilkins (ed). The Physiol- ogy of Plant Growth and Development.
Tata Mc. Graw-Hill Publ. Co. Ltd. New Delhi.
Toonen, M.A.J. & S.C. de Vries (1996). Ini- tiation of Somatic Embryos from Single Cells. p. 173-177. In: Wang, T.L. & A. Cuming (ed.). Embryogenesis the generation  of  plant.  Bios  Scientific Publishers Limited. Oxford.
Wareing, P.F.; C.E.A. Hanney & J. Digby (1964). The role of endogenous hormones in cambial activity and xylem differ- entiation.  p.  323-345.  In:  M.H. Zimmerman  (ed)  The  Formation  of Wood in Forest Trees. Academic Press,
New York.
Weaver, J.R. (1972). Plant Growth in Agri- culture. University of California. San Frasisco. 594 p.
Windasari, A. (2004). Pengaruh Kombinasi
Auksin  dan  Sitokinin  pada  Per- banyakan  Tanaman  Krisan  Pot (Chrysanthemum morifolium) varietas Delano red secara In Vitro. Skripsi. Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. IPB. Bogor.
**********.