Pengaruh pemberian vitamin E (α-tokoferol) terhadap kinerja reproduksi ikan betutu Oxyeleotris marmorata Bleeker 1852
[Effect of dietary vitamin E (α-tocopherol) on the reproductive performance of marble goby Oxyeleotris marmorata Bleeker 1852]
Denny Wahyudi 1  , Muhammad Zairin Jr. 2 , Muhammad Agus Suprayudi 2
1 Program Studi Ilmu Akuakultur, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Budidaya Perairan, FPIK-IPB Jl. Agatis, Kampus IPB, Dramaga, Bogor 16680
Diterima: 23 Juni 2015; Disetujui: 26 Januari 2016

## Abstrak
Vitamin E merupakan antioksidan yang larut dalam lemak dan berperan dalam reproduksi ikan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan pengaruh dosis yang berbeda pada pakan terhadap kinerja reproduksi ikan betutu betina. Ikan uji di- beri pakan berupa cacing tanah ( Eudrilus eugeniae ) yang mengandung 0 (A), 200 (B), 400 (C), 800 (D) dan 1600 (E) mg vitamin E kg -1 cacing tanah. Parameter yang dianalisis adalah high density lipoprotein (HDL), low density lipopro- tein (LDL), trigliserida, total kolesterol, konsentrasi estradiol, diameter telur, indeks kematangan gonad (IKG), histologi gonad, dan konsentrasi vitamin E gonad. Konsentrasi total kolesterol darah meningkat pada hari ke-30 bersamaan de- ngan meningkatnya konsentrasi estradiol, HDL, LDL, dan trigliserida. Ukuran diameter telur pada perlakuan D (1,20- 1,39 mm) memiliki frekuensi tertinggi dibandingkan dengan perlakuan A, B, C, dan E. IKG pada percobaan B menun- jukkan hasil yang terendah. Hal ini selaras dengan hasil histologi gonad yang menunjukkan bahwa perkembangan go- nad perlakuan B lebih lambat dibandingkan dengan perlakuan C, D, dan E. Konsentrasi vitamin E gonad pada perlaku- an D menunjukkan hasil tertingi dibandingkan perlakuan A, B, C dan E. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dosis vi- tamin E sebesar 800 mg kg -1 cacing tanah merupakan dosis terbaik untuk meningkatkan kinerja reproduksi ikan betutu betina.
Kata penting: diameter telur, estradiol, indeks kematangan gonad, HDL, ikan betutu, LDL, vitamin E

## Abstract
Vitamin E is lipid soluble antioxidant and plays important roles in fish reproduction. This study aimed to examine the effects of feeding diets with different dose of vitamin E on the reproductive performance of female marble goby. Fish were fed with earthworms ( Eudrilus eugeniae ) having different level of Vitamin E viz. 0 mg (A), 200 mg (B), 400 mg (C), 800 mg (D) and 1600 mg (E) vitamin E kg -1 earthworms.. High-density lipoprotein (HDL), lowdensity lipoprotein (LDL), triglyceride, total cholesterol, estradiol, egg size,  gonadosomatic index (GSI), gonadal histology and levels of vitamin  E  in  gonad  were  determined.  The  level  of  total  cholesterol  in  serum  was  increased  on day  30  along  with  in- creasing the level of estradiol, HDL, LDL and triglyceride. The egg size 1.20-1.39 mm from diets D has a highest fre- quency than treatment A, B, C, dan E.The lowest value of GSI was found in the fish from B treatment. This finding was supported by gonadal histology which showed that the ovary development was slower in B treatment than C, D, and E treatments. The highest level of vitamin E in gonad was obtained in fish from D treatment. In conclusion, the result of the experiment indicates that 800 mg vitamin E kg -1 earthworms was the best dose for the reproductive performance of female marble goby.
Keywords: egg size, estradiol, gonado somatic index, HDL, LDL, marble goby, vitamin E

## Pendahuluan
Ikan  betutu  dapat  memijah  sepanjang  ta- hun, tetapi tingkat kematian larvanya dapat men- capai 90% pada hari ke-4 dan ke-5 setelah mene- tas  (Tan  &  Lam  1973).  Hal  ini  menjadi  kendala dalam  budi  daya  ikan  betutu.  Kematian  yang tinggi pada tahap awal perkembangan larva ikan
betutu  diduga  karena  kualitas  telur  yang  kurang baik, sehingga menyebabkan cadangan energi pa- da kuning telur habis sebelum ikan mampu men- cari makanan dari luar. Salah satu penentu kuali- tas kuning telur adalah asupan nutrisi pada pakan induk. Roy  & Mollah (2009) menyatakan  bahwa nutrisi pada pakan induk dapat berpengaruh pada perkembangan  gonad,  fekunditas,  dan  perkem- bangan  embrio.  Berdasarkan  hal  tersebut,  perlu
 Penulis korespondensi
Surel: dennywahyudi29@yahoo.com
upaya  untuk  meningkatkan  kualitas  telur  dengan penambahan nutrien pada pakan induk betutu.
Salah  satu  nutrien  yang  dapat  diberikan pada pakan induk untuk memperbaiki kinerja re- produksi dan kualitas telur adalah vitamin E. Vi- tamin  E  atau  biasa  disebut  α-tokoferol  memiliki fungsi utama sebagai antioksidan yang mencegah peroksidasi polyunsaturated  fatty  acid (PUFA) dari  fosfolipid  dan  kolesterol  pada  dinding  sel (Packer 1991). PUFA merupakan nutrien esensial yang terdapat dalam telur ikan dan berperan pen- ting  dalam  perkembangan  awal  ikan.  Martinez- Alvarez et  al .  (2005)  menyatakan  bahwa  untuk mencegah  proses  peroksidasi  asam  lemak  dapat menggunakan vitamin E sebagai suplemen dalam pakan.
Arfah et al . (2013) menyatakan bahwa pe- nambahan vitamin E pada pakan ikan komet ( Ca- rassius auratus auratus ) dapat  meningkatkan  ki- nerja reproduksi ikan tersebut seperti meningkat- kan  diameter  telur,  indeks  kematangan  gonad, dan fekunditas. Selain pada ikan, penambahan vi- tamin E juga dapat meningkatkan daya tetas, dan kesuburan  pada  udang  vanamei  ( Litopenaeus vannamei ) (Du et al . 2004). Sementara itu, keku- rangan  vitamin  E  dalam  pakan  dapat  menyebab- kan  terhambatnya  pertumbuhan  ovarium  pada ikan mas (Watanabe & Takashima 1977).
Kebutuhan  vitamin  E  sebagai  komponen utama  dalam  pakan  induk  telah  diketahui,  dan berbeda  untuk  setiap  jenis  ikan.  Halver  (2002) menyebutkan  bahwa  kebutuhan  vitamin  E  pada rainbow  trout ( Onchorynchus  mykiss )  adalah  30 mg  kg -1 pakan,  ikan  salmon  ( Onchorynchus sp.) 30 mg kg -1 pakan,  dan pada ikan mas ( Cyprinus carpio )  80-100  mg  kg -1 pakan.  Peran  vitamin  E dalam  kinerja  reproduksi  ikan  betutu  belum  ba- nyak diketahui, meskipun penggunaan vitamin E dalam penelitian pada beberapa spesies ikan telah diketahui.  Penelitian  ini  dimaksudkan  untuk
mengevaluasi pengaruh pemberian vitamin E ter- hadap kinerja reproduksi ikan betutu.

## Bahan dan metode

## Materi uji
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Ju- ni 2014-Agustus 2014. Ikan betutu  yang diguna- kan  pada  penelitian  ini  memiliki  bobot  100-275 g. Ikan dipelihara pada bak fiber berukuran 50 x 100  x  50  cm 3 .  Setiap  bak  diisi  enam  ekor  ikan betutu  betina  setiap  ulangan,  dan  diberi  sarang. Ikan  diberi  pakan  cacing  tanah  ( Eudrilus euge- niae ) yang memiliki bobot 1-1,5 g ekor -1 yang te- lah  disuntik  vitamin  E  dengan  perlakuan  dosis yang berbeda. Penelitian ini menggunakan meto- de eksperimental rancangan acak lengkap dengan lima  perlakuan.  Perlakuan  dosis  yang  diberikan meliputi  kontrol  (A),  200  mg  vitamin  E  kg -1 ca- cing tanah (B), 400 mg vitamin E kg -1 cacing ta- nah (C), 800 mg vitamin E kg -1 cacing tanah (D) dan  1.600  mg  vitamin  E  kg -1 cacing  tanah  (E).
Perlakuan  diberikan  selama  60  hari  dan  setiap perlakuan diulang sebanyak tiga kali.

## Pengambilan data
Parameter uji yang diukur yaitu konsentra- si  estradiol  darah,  diameter  telur,  indeks  kema- tangan  gonad (IKG),  histologi  gonad,  vitamin  E gonad, konsentrasi kolesterol High Density Lipo- protein (HDL),  konsentrasi  kolesterol Low  Den- sity  Lipoprotein (LDL),  total  kolesterol,  dan  tri- gliserida darah.
Pada  awal  penelitian,  dilakukan  pengam- bilan contoh darah 15 ekor ikan uji untuk pengu- kuran  konsentrasi  estradiol,  kolesterol  HDL,  ko- lesterol LDL, total kolesterol, dan trigliserida da- rah.  Selama  pemeliharaan  dilakukan  pengukuran parameter  uji  setiap  dua  minggu  sekali  yaitu minggu  ke-2,  ke-4,  ke-6,  dan  ke-8.  Pengukuran
tersebut  dilakukan  pada  tiga  ekor  ikan  uji  yang dipilih secara acak pada setiap ulangan.
Pengukuran  total  kolesterol  dalam  darah menggunakan  metode  CHOD-PAP  ( enzymatic colorimetric test for cholesterol with lipid clear- ing factor ) dengan test kit ( cholesterol liquicolor , HUMAN).  Pengambilan  contoh  darah  dilakukan pada bagian pangkal sirip ekor.
Pengukuran  konsentrasi  estradiol  dalam darah  menggunakan  metode Enzyme-linked Imu- nosorbent  Assay (ELISA)  dengan test kit
(BIOMATIK).  Pengambilan  contoh  darah  dila- kukan pada bagian pangkal sirip ekor.
Pengukuran  kolesterol  dalam  darah  HDL menggunakan test kit cholesterol  liquicolor ( pre- cipitant  and  standard ,  HUMAN).  Pengambilan contoh darah dilakukan pada bagian pangkal sirip ekor.
Pengukuran trigliserida  menggunakan me- tode  GPO-PAP  ( enzymatic  colorimetric  test  for triglycerides  with  lipid  clearing  factor )  dengan test kit ( cholesterol  liquicolor ,  HUMAN).  Peng- ambilan  contoh  darah  dilakukan  pada  bagian pangkal sirip ekor.
Kolesterol  LDL  dihitung  menggunakan rumus berdasarkan Friedwald et al . (1972). Peng- ambilan  contoh  darah  dilakukan  pada  bagian pangkal sirip ekor.
Pengukuran  vitamin  E  pada  gonad  meng- gunakan  metode  acuan National  Food  Safety Standard , National  Standard  for  Food  Safety  of the  People’s  Republic  of  China dan AOAC  Me- thod  2002.05 .  Gonad  yang  diukur  diambil  dari tiga gonad ikan uji pada setiap ulangan.
Diameter  telur  diukur  dengan  mikroskop yang dilengkapi mikrometer okuler dengan pem- besaran  4  x  10  (40  kali).  Jumlah  telur  yang diamati berjumlah 300 telur pada masing-masing perlakuan.
Indeks kematangan gonad merupakan per- sentase bobot gonad dibandingkan dengan bobot tubuh ikan uji.
Histologi  gonad  dilakukan  dengan  meng- gunakan  metode  pewarnaan  Hemaktosilin-Eosin (HE). Pembacaan hasil histologi gonad dilakukan secara deskriptif dengan mengacu pada Genten et al . (2009).

## Analisis data
Hasil  pengukuran  konsentrasi  estradiol darah,  indeks  kematangan  gonad,  histologi  go- nad,  konsentrasi  vitamin  E  gonad,  konsentrasi kolesterol  HDL,  LDL,  total  kolesterol,  dan  tri- gliserida  darah  dianalisis  secara  deskriptif.  Data hasil pengukuran diameter telur dianalisis dengan menggunakan distribusi frekuensi.

## Hasil
Total kolesterol darah ikan betutu menga- lami peningkatan dari awal pemeliharaan  hingga minggu  ke-4  (Gambar  1).  Pada  minggu  ke-8, konsentrasi  kolesterol  pada  perlakuan  A,  B,  dan E  menurun. Sementara pada perlakuan C dan  D, konsentrasi  kolesterol  mengalami  peningkatan pada minggu ke-8.
Konsentrasi  estradiol  darah  ikan  betutu meningkat  hingga  minggu  ke-4.  Konsentrasi  es- tradiol  tertinggi  pada  minggu  ke-4  dan  ke-2 ditunjukkan  oleh  perlakuan  C.  Konsentrasi estradiol darah relatif mengalami penurunan pada minggu ke-6 hingga minggu ke-8 (Gambar 2).
Konsentrasi kolesterol HDL darah menga- lami peningkatan dari awal pemeliharaan  hingga minggu  ke-8  (Gambar  3).  Nilai  HDL  tertinggi pada minggu ke-4 ditunjukkan oleh perlakuan C. Pada minggu  ke-8, konsentrasi HDL pada perla- kuan C, D, dan E mengalami penurunan, semen- tara pada perlakuan A dan B meningkat.
Gambar 1. Konsentrasi total kolesterol darah ikan betutu (A: kontrol, B: 200 mg vit. E kg -1 cacing tanah, C: 400  mg  vit.  E  kg -1 cacing  tanah,  D:  800  mg  vit.  E  kg -1 cacing  tanah,  E:  1600  mg  vit.  E  kg -1 cacing tanah).
Gambar 2. Konsentrasi hormon estradiol pada plasma darah ikan betutu. (A: kontrol, B: 200 mg vit. E kg -1 cacing tanah, C: 400 mg vit. E kg -1 cacing tanah, D: 800 mg vit. E kg -1 cacing tanah, E: 1600 mg vit. E kg -1 cacing tanah).
Gambar 3. Konsentrasi kolesterol HDL darah ikan betutu (A: kontrol, B: 200 mg vit. E kg -1 cacing tanah, C: 400  mg  vit.  E  kg -1 cacing  tanah,  D:  800  mg  vit.  E  kg -1 cacing  tanah,  E:  1600  mg  vit.  E  kg -1 cacing tanah).
0 50 100 150 200 250 0 4 8 K o leste ro l (m g dL -1 ) Minggu ke- A B C D E
0 20 40 60 80 100 120 140 160 0 2 4 6 8 E st ra dio l da ra h (pg m l -1 ) Minggu ke- A B C D E 0 10 20 30 40 50 60 0 4 8 H DL ( m g dL -1 ) Minggu ke- A B C D E
Trigliserida darah ikan betutu meningkat dari awal pemeliharaan hingga minggu ke-4, dan menurun pada minggu ke-8 (Gambar 4). Konsen- trasi trigliserida tertinggi pada minggu ke-4 ter- dapat pada perlakuan A.
Konsentrasi  kolesterol  LDL  darah  meng- alami  peningkatan  dari  awal  pemeliharaan  hing- ga  minggu  ke-4  (Gambar  5).  Pada  minggu  ke-8, konsentrasi LDL pada perlakuan A, B, dan E me- nurun, sementara pada perlakuan C dan D meng- alami peningkatan.
Kandungan vitamin E gonad disajikan pa- da  Gambar  6.  Perlakuan  D  memiliki  kandungan vitamin  E  yang  tertinggi  dibandingkan  dengan perlakuan yang lain, yaitu 4,43 mg 100 g -1 gonad.
Berdasarkan  hasil  pengukuran,  diameter ikan  betutu  memiliki  kisaran  dari  0,9-1,39  mm pada setiap perlakuan. Pada perlakuan D, kisaran diameter  telur  antara  1,20–1,39  mm  memiliki frekuensi  yang  paling  banyak,  kemudian  diikuti oleh  perlakuan  A,  E,  B,  dan  C  (Gambar  7).
Gambar 4. Konsentrasi trigliserida darah ikan betutu (A: kontrol, B: 200 mg vit. E kg -1 cacing tanah, C: 400 mg vit. E kg -1 cacing tanah, D: 800 mg vit. E kg -1 cacing tanah, E: 1600 mg vit. E kg -1 cacing tanah).
Gambar 5. Konsentrasi kolesterol LDL darah ikan betutu (A: Kontrol, B: 200 mg vit. E  kg -1 cacing tanah, C: 400 mg vit. E kg -1 cacing tanah, D: 800 mg vit. E kg -1 cacing tanah, E: 1600 mg vit. E kg -1 cacing tanah).
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 0 4 8 T rig lis er ida ( m g dL -1 ) Minggu ke- A B C D E 0 20 40 60 80 100 120 140 0 4 8 LDL (m g dL -1 ) Minggu ke- A B C D E
Gambar 6. Kandungan vitamin E dalam telur ikan betutu pada minggu ke-10.
Gambar 7. Pengaruh vitamin E terhadap nilai rata-rata diameter telur ikan betutu pada minggu ke-8
Nilai IKG tertinggi terdapat pada perlaku- an  dosis  800  mg  vit.  E  kg -1 cacing  tanah.  Nilai IKG terkecil diketahui pada perlakuan dosis  200 mg vit. E kg -1 cacing tanah (Gambar 8).
Hasil histologi gonad ikan betutu setelah 8
minggu  pemeliharaan  disajikan  pada  Gambar  9. Perkembangan  oosit  pada  perlakuan  A  dan  B berada pada tahap awal vitelogenesis. Sementara itu,  pada  perlakuan  C,  D,  dan  E  kuning  telur mulai memenuhi seluruh bagian dari ooplasma.
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 0 200 400 800 1600 Vit . E g o na d (m g 1 0 0 g -1 ) Dosis vitamin E (mg kg -1 cacing tanah)
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 0 200 400 800 1600 F re k uens i Dosis vitamin E (mg kg -1 cacing tanah)
0,90 - 0,99 1,00 - 1,09 1,10 - 1,19 1,20 - 1,29 1,30 - 1,39 Diameter telur (mm)
Gambar 8. Pengaruh pemberian vitamin E pada nilai indeks kematangan gonad betutu pada minggu ke-8
Gambar 9. Histologi gonad ikan betutu pada minggu ke-8. (A: kontrol, B: 200 mg vit. E kg -1 cacing tanah,
C: 400 mg vit. E kg -1 cacing tanah, D: 800 mg vit. E  kg -1 cacing tanah, E: 1600 mg vit. E  kg -1 cacing tanah, N: Nukleus, 1: oosit tahap I, 2: oosit tahap II: 3: awal vitelogenesis, 4: kuning telur mulai memenuhi ooplasma, Panah: butiran kuning telur).
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 0 200 400 800 1600 Ind ek s k em a ta ng a n g o na d ( %) Dosis vitamin E (mg kg cacing tanah -1 )

## Pembahasan
Vitamin  E  (  -tokoferol)  merupakan  vita- min  larut  lemak  yang  memiliki  peran  utama  se- bagai antioksidan, serta diketahui berperan dalam membantu kinerja reproduksi pada ikan. Vitamin E  juga  berfungsi  sebagai  pelindung  dinding  sel dari  bahan  beracun  seperti  timah,  merkuri,  ben- zen,  dan  radikal  bebas  yang  dapat  mengganggu kerja kelenjar endokrin dan berakibat pada  kese- imbangan  produksi  hormon.  Vitamin  E  yang  di- berikan  pada  induk  ikan  akan  dicerna  pada  usus halus dan disimpan pada beberapa jaringan tubuh seperti jaringan adiposa, hati, dan jaringan tubuh lainnya.
Sinyal lingkungan (seperti suhu dan inten- sitas cahaya) yang diterima oleh otak ikan betutu akan diteruskan menuju hipotalamus untuk mele- pas Gonadotropin  Releasing  Hormone (GnRH) yang selanjutnya akan merangsang kelenjar pitui- tari untuk melintas Follicle Stimulating Hormone (FSH).  FSH  akan  dibawa  menuju  gonad  melalui peredaran  darah  menuju  oosit  dan  akan  merang- sang  sel  teka  untuk  mensintesis  hormon  steroid yaitu  estradiol  (Mylonas et  al .  2010).  Sintesis estradiol  juga  melibatkan  enzim  sitokrom  P- 450scc. Sitokrom P-450scc memiliki peran seba- gai  katalis  pada  sintesis  steroid  hormon  seperti estradiol.  Hanukoglu  (2006)  menyatakan  bahwa vitamin  E  berperan  sebagai  antioksidan  enzim sitokrom  P-450scc  saat  sintesis  steroid  hormon seperti  estradiol.  Selain  melibatkan  enzim  sito- krom  P-450scc,  sintesis  steroid  hormon  juga  di- pengaruhi oleh keberadaan kolesterol.
Konsentrasi total  kolesterol  darah  menga- lami peningkatan dari awal pemeliharaan  hingga minggu  ke-4  (Gambar  1).  Peningkatan  konsen- trasi  kolesterol  darah  tertinggi  yaitu  pada  perla- kuan  A  sebesar  58,22%.  Peningkatan  kolesterol pada  perlakuan  A  (kontrol)  diduga  karena  pada perlakuan  tersebut  kekurangan  vitamin  E.  Chu-
pukcharoen et  al .  (1985)  menyatakan  bahwa terjadi  penumpukan  kolesterol  pada  otot  dan plasma  darah  akibat  kekurangan  vitamin  E.  Ko- lesterol  merupakan  komponen  utama  pembentuk hormon  steroid,  seperti  progesteron,  testosteron, dan  estradiol  (Harvey  &  Ferreir  2011),  dan  ber- peran  sebagai  komponen  utama  bahan  dasar  pe- nyusun membran sel dan berfungsi untuk menja- ga permeabilitas membran sel (Tocher 2003).
Meningkatnya  konsentrasi  kolesterol  juga bersamaan  dengan  meningkatnya  konsentrasi hormon  estradiol  dari  awal  pemeliharaan  hingga minggu  ke-4  pada  setiap  perlakuan  (Gambar  2). Peningkatan  konsentrasi  hormon  estradiol  ter- tinggi  yaitu  pada  perlakuan  C  sebesar  90,06%. Peningkatan  estradiol  diduga  karena  dosis  pada perlakuan  C  (400  mg  vit.  E  kg -1 cacing  tanah) merupakan  dosis  optimum  untuk  mempercepat proses  vitelogenesis  dibandingkan  dengan  perla- kuan  lain.    Khoiruni  (2002)  menyatakan  bahwa dosis  vitamin E sebesar 240 mg  kg -1 pada pakan dapat  mempercepat  proses  pematangan  gonad ikan  lele  ( Clarias  gariepinus ).  Peningkatan  kon- sentrasi estradiol pada plasma darah menandakan bahwa ikan betutu berada pada tahap vitelogene- sis.  Selama  vitelogenesis,  estradiol  beperan  da- lam  mengatur  perkembangan  oosit  dan  sintesis vitelogenin di hati (Mylonas et al . 2010).
Saat vitelogenesis, estradiol akan disekre- sikan  oleh  ovari  dan  akan  diangkut  menuju  hati melalui  peredaran  darah.  Hormon  estradiol  akan merangsang  hati  untuk  mensintesis  vitelogenin. Lemak sebagai bahan dasar vitelogenin dan vita- min  E  yang  tersimpan  di  dalam  tubuh  akan  di- angkut  menuju  hati  dengan  bantuan  HDL.  Pe- ningkatan konsentrasi kolesterol HDL terjadi dari awal  pemeliharaan  hingga  hari  ke-30  (Gambar 3).  Peningkatan  konsentrasi  HDL  tertinggi  yaitu pada perlakuan C sebesar 26,29%. Meningkatnya konsentrasi  HDL  tersebut  diduga  karena  pada
perlakuan  C  mengalami  proses  vitelogenesis  le- bih  cepat  dibandingkan  dengan  perlakuan  lain. HDL  berperan  dalam  pengangkut  lemak  untuk disintesis menjadi vitelogenin dan vitamin E dari otot  menuju  hati  saat  vitelogenesis.  Lie et  al . (1994)  menyatakan  bahwa  pada  tahap  viteloge- nesis  terjadi  peningkatan  konsentrasi  HDL  pada plasma darah ikan salmon ( Salmo salar ) yang di- ikuti  dengan  menurunnya  kandungan  lemak  dan tokoferol pada daging ikan salmon, dan mengaki- batkan  meningkatnya  konsentrasi  lemak  dan  to- koferol pada hati.
Konsentrasi  trigliserida  pada  darah  ikan betutu  juga  meningkat  saat  vitelogenesis  (Gam- bar  4).  Trigliserida  atau  umumnya  disebut  tria- gliserol merupakan bentuk lemak utama di dalam tubuh  ikan,  dan  merupakan  gabungan  dari  satu gugus  gliserol  dan  tiga  gugus  asam  lemak.  Mo- bilisasi  trigliserida  di  dalam  tubuh  dibantu  oleh enzim, yaitu hormone sensitif lipase (HSL). HSL merupakan enzim yang sistem kerjanya dipenga- ruhi oleh estrogen saat proses gonadogenesis dan produksi  telur.  Akibat  pengaruh  estrogen  terse- but, asam lemak penyusun trigiserida akan diang- kut  dari  jaringan  adiposa  menuju  hati  yang  akan digunakan  sebagai  bahan  baku  pembentukan  vi- telogenin (Tocher 2003). Tocher (2003) juga me- nyatakan bahwa trigliserida juga digunakan seba- gai  sumber  energi,  khususnya  ketika  ikan  mem- butuhkan  energi  yang  cukup  tinggi,  seperti  tam- bahan  energi  saat  ikan  akan  bermigrasi  untuk memijah,  dan  memproduksi  sel  gamet  dalam jumlah besar, terutama telur.
Selain  kolesterol  HDL  dan  trigliserida, konsentrasi  kolesterol  LDL  pada  saat  viteloge- nesis  juga  mengalami  peningkatan  (Gambar  5). Peningkatan  konsentrasi  LDL  tertinggi  yaitu  pa- da  perlakuan  C  sebesar  77,38%.  Meningkatnya konsentrasi LDL diduga karena pada perlakuan C mengalami proses vitelogenin lebih cepat daripa-
da  perlakuan  lain.  LDL  berperan  sebagai    peng- angkut  vitelogenin  dan  vitamin  E  yang  telah  di- sekresikan  oleh  hati  menuju  oosit  saat  viteloge- nesis  masih tinggi.  Lie et al .  (1994) menyatakan bahwa pada ikan salmon, konsentrasi LDL darah akan meningkat saat vitelogenesis, dan LDL ber- peran dalam mengangkut vitamin E dari hati me- nuju ovari serta organ lain.
Vitamin  E  yang  telah  diserap  oleh  oosit saat  vitelogenesis  akan  terakumulasi  dan  terus bertambah  hingga  akhir  vitelogenesis.  Berdasar- kan  hasil  penelitian  (Gambar  6),  diketahui  kon- sentrasi  vitamin  E  tertinggi  yang  terakumulasi adalah  pada  perlakuan  D  yaitu  sebesar  4,43  mg 100  g -1 gonad.  Yulfiperius et  al .  (2003)  menya- takan bahwa perbedaan konsentrasi vitamin E pa- da  pakan  akan  memengaruhi  kandungan  vitamin E yang disimpan pada telur ikan patin ( Pangasi- us hypopthalmus ), dan semakin tinggi konsentra- si  vitamin  E  dalam  pakan,  akan  meningkatkan kandungan vitamin E dalam telur. Sementara itu, diketahui  pada  perlakuan  E,  konsentrasi  vitamin E yang terakumulasi pada gonad ikan betutu me- nunjukkan  hasil  yang  lebih  kecil  dibandingkan dengan perlakuan D. Hal ini diduga karena dosis pada  perlakuan  E  terlalu  tinggi.  Kelebihan  pem- berian  dosis  vitamin  E  akan  bersifat  toksik  pada hati,  dan  untuk  mencegah  sifat  toksik  tersebut, vitamin  E  akan  disekresikan  dari  tubuh  melalui saluran  empedu  dan  urin  (Kayden  &  Traber 1993).  Oleh  karena  itu,  dapat  diduga  bahwa  un- tuk  mengurangi  sifat toksik  vitamin E pada  hati, maka  kelebihan  vitamin  E  tersebut  disekresikan, sehingga  vitamin  E  yang  terakumulasi  pada  go- nad menjadi lebih sedikit.
Vitelogenin  dan  vitamin  E  yang  telah  di- serap  oleh  oosit  mengakibatkan  ukuran  oosit  te- rus  bertambah  hingga  ukuran  maksimum.  Dia- meter  telur  ikan  betutu  memiliki  kisaran  antara 0,90-1,39 mm pada setiap perlakuan (Gambar 7).
Senoo et al . (1994)  menyatakan bahwa diameter telur  ikan  betutu  yang  baru  diovulasikan  memi- liki  ukuran  0,94  mm.  Pada  perlakuan  D  ukuran diameter  telur  sebesar  1,20-1,39  mm  memiliki distribusi  yang  tertinggi  dibandingkan  dengan perlakuan  lain.  Meningkatnya  ukuran  diameter telur pada perlakuan D diduga terjadi saat proses vitelogenesis. Dosis vitamin E pada perlakuan D diduga  mampu  mempertahankan  keberadaan  bu- tiran lemak, sehingga membuat jumlah dan ukur- an  butiran  kuning  telur  bertambah  yang  menga- kibatkan  volume  dan  diameter  telur  meningkat (Sumantri 2006). Arfah et al . (2013) menyatakan bahwa  penambahan  vitamin  E  pada  pakan  dapat meningkatkan  ukuran  diameter  telur  ikan  komet ( Carassius auratus auratus ). Berdasarkan hal ter- sebut,  dapat  diduga    bahwa  vitamin  E  memberi- kan  pengaruh  terhadap  peningkatan  ukuran  dia- meter telur ikan betutu.
Bertambahnya  ukuran  diameter  telur  juga akan  berpengaruh  terhadap  nilai  indeks  kema- tangan  gonad  (IKG).  Nilai  IKG  tertinggi  diban- dingkan  dengan  kontrol  yaitu  pada  perlakuan  D sebesar  5,16%  (Gambar  9).  Peningkatan  nilai IKG  diduga  karena  dosis  vitamin  E  tersebut mampu  meningkatkan  ukuran diameter telur dan frekuensi  diameter  telur  berukuran  besar  sehing- ga  memengaruhi  nilai  IKG  pada  perlakuan  D. James et  al .  (2008)  menyatakan  bahwa  penam- bahan vitamin E sebesar 300 mg kg -1 pakan dapat meningkatkan  nilai  IKG.  Meningkatnya  nilai IKG diduga karena peran vitamin E sebagai anti- oksidan  yang  mencegah  proses  oksidasi  lemak saat vitelogenesis. Hal ini menyebabkan viteloge- nin  yang  masuk  ke  dalam  oosit  meningkat  dan meningkatkan  bobot  gonad.  Peningkatan  nilai IKG  sebesar  8,86±4,62%  terhadap  kontrol  juga diketahui  terjadi  pada  ikan  komet  ( Carassius auratus auratus ) yang diberi dosis vitamin E se- besar 375 mg kg -1 pakan (Arfah et al . 2013).
Berdasarkan  hal  tersebut,  dapat  diketahui bahwa  vitamin  E  memiliki  peran  penting  dalam reproduksi ikan betutu. Vitamin E berperan seba- gai  antioksidan  pada  enzim  sitokrom  P-450scc saat  sintesis  steroid  hormon  (estradiol)  dan  me- lindungi  lemak  (kolesterol  dan  trigliserida)  dari proses oksidasi. Penambahan vitamin E diketahui mampu meningkatkan ukuran diameter telur, me- ningkatkan  nilai  indeks  kematangan  gonad,  dan mempercepat proses pematangan  gonad ikan be- tutu.  Saat  vitelogenesis,  vitamin  E  dalam  tubuh diangkut  oleh  lipoprotein  darah  yaitu  HDL  dan LDL.

## Simpulan
Penambahan  vitamin  E  pada  pakan  dapat meningkatkan  kinerja  reproduksi  ikan  betutu. Hasil  terbaik  ditunjukkan  oleh  perlakuan  D.  Pe- nambahan  vitamin  E  sebanyak    800  mg  vitamin E kg cacing  tanah -1 mampu  mempercepat proses pematangan  gonad  ikan  betutu,  meningkatkan ukuran  diameter  telur,  dan  meningkatkan  kan- dungan vitamin E pada gonad.

## Daftar pustaka
Arfah  H,  Melati,  Setiawati  M.  2013.  Suplemen- tasi  vitamin  E  dengan  dosis  berbeda  pada pakan  terhadap  kinerja  reproduksi  induk betina  ikan  komet  ( Carassius  auratus auratus ). Jurnal  Akuakultur  Indonesia , 12(1): 14-18.
Crook MA. 2012. Clinical Biochemistry and Me- tabolic Medicine . Hodder Education, Lon- don. 403 p.
Du  SB, Hu CQ, Shen Q. 2004. Effect of  dietary ascorbic  acid  levels  on  reproductive  per- formance  of  shrimp, Litopenaeus  vanna- mei (Boone),  Broodstock. Journal  of Shellfish Research , 23(2): 251-255.
Chupukcharoen  N,  Komaratat  P,  Wilairat  P. 1985.  Effect  of  vitamin  E  deficiency  on the  distribution  of  cholesterol  in  plasma lipoprotein  and  activity  of  cholesterol  7 alpha-hydroxylase  in  rabbit  liver. Jurnal of Nutrition , 115(4): 468-472.
Friedwald  WT,  Levy  RI,  Fredrickson  DS.  1972.
Estimation  of  the  concentration  of  low- density  lipoprotein  cholesterol  in  plasma without  the  use  of  preparative  ultracentri- fuge. Clinical Chemistry , 18(6): 499-502.
Genten  F,  Terwinghe  E,  Danguy  A.  2009. Atlas of Fish Histology . Science Publishers, En- field, NH, USA. 215 p.
Halver  JE.  2002. The  Vitamins . In :  Halver  JE, Hardy  RW  (Eds):  Fish  Nutrition.  3 rd ed. Academic Press. San Diego CA. USA. pp. 61-141.
Hanukoglu  I.  2006.  Antioxidant  protective  me- chanisms  against  reactive  oxygen  species (ROS)  generated  by  mitochondrial  P450 systems  in  steroidogenic  cells. Drug  Me- tabolism Reviews , 38(1-2): 171-196.
Harvey  RA,  Ferrier  DR.  2011. Biochemistry .  5 th ed. Lippincott Williams & Wilkins. Phila- delphia. USA. 520 p.
James R, Vasudhevan I, Sampath K. 2008. Effect of dietary vitamin E on growth, fecundity, and  leukocyte  count  in  goldfish  ( Carassi- us  auratus ). The  Israeli  Journal  of  Aqua- culture-Bamidgeh , 19(2): 121-127.
Kayden JH, Traber MG. 1993. Absorption, lipo- protein transport, and regulation of plasma cocentrations  of  vitamin  E  in  humans.
Journal of Lipid Research , 34(3): 343-358
Khoiruni.  2002.  Peran  kombinasi  kolesterol  dan vitamin E sebagai perangsang pematangan gonad  ikan  lele  ( Clarias  gariepinus ). Te- sis . Sekolah Pascasarjana. Institut Pertani- an Bogor. 60 p.
Lie O, Sandvin A, Waagbo R. 1994. Transport of alpha-tocopherol  in  Atlantic  salmon  ( Sal- mo salar ) during vitellogenesis. Fish Phy- siology and Biochemisry . 13(3): 241-247.
Martinez-Alvarez RM,  Amalia E, Morales, Sanz A. 2005. Antioxidant defenses in fish: bio- tic  and  abiotic  factors. Reviews  in  Fish Biology and Fisheries , 15(1): 75-88.
Mylonas  CC,  Fostier  A,  Zanuy  S.  2010.  Brood- stock  management and hormonal  manipu- lations  of  fish  reproduction. General  and Comparative Endocrinology , 165(3): 516- 534.
Packer  L.  1991.  Protective  role  of  vitamin  E  in biological  system. The  American  Journal of Clinical Nutrition , 53(4): 1050-1055.
Roy  A,  Mollah  MFA.  2009.  Effects  of  different dietary levels of  vitamin E on the ovarian development  and  breeding  performances of Clarias  batrachus (Linnaeus). Journal of  Bangladesh  Agricultural  University .
7(1): 183-191.
Senoo  S,  Kaneko  M,  Cheah  SH,  Ang  KJ.  1994. Egg  development,  hatching,  and  larval development  of  marble  goby ( Oxyeleotris marmorata ) under artificial rearing condi- tions. Fisheries Science , 60(1): 1-8.
Sumantri  D.  2006.  Efektivitas  ovaprim  dan  aro- matase  inhibitor  dalam  mempercepat  pe- mijahan  pada  ikan  lele  dumbo  ( Clarias sp.). Skripsi . Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor. 35 p.
Tan  OKK,  Lam  TJ.  1973.  Induced  breeding  and early  development  of  the  marble  goby ( Oxyeleotris  marmorata , Blk.). Aquacul- ture , 2: 411-423.
Tocher  DR.  2003.  Metabolism  and  functions  of lipids  and  fatty  acids  in  teleost  fish. Re- view in Fisheries Science , 11(2): 107-184.
Watanabe T, Takashima  F. 1977. Effect of α-to- copherol deficiency on carp-VI deficiency symptoms  and  changes  of  fatty  acid  and triglyceride distributions in adult carp. Bu- lletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries , 43(7): 819-830.
Yulfiperius,  Mokoginta  I,  Jusadi  D.  2003.  Pe- ngaruh  kadar  vitamin  E  dalam  pakan  ter- hadap kualitas telur ikan patin ( Pangasius hypophthalmus ). Jurnal  Iktiologi  Indone- sia , 3(1): 11-18.