## UJI VALIDITAS SABAROUD GLUKOSA AGAR HIPERTONIK UNTUK MENDETEKSI
Candida sp
Tuty Widyanti 1) , Mujahidah Basarang 1) , Nurul Afiah 1)
1) Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar Alamat Korespondensi: vandinu@yahoo.com

## Abstrak
Jamur  merupakan  agen  yang  juga  memberi  pengaruh  pada  penyakit  paru  disebabkan  oleh Mycobacterium  tuberculosis.  Gejala  umum  infeksi  jamur  paru  sama  dengan  infeksi  tuberkulosis ataupun  dengan  mikroba  lainnya.  Infeksi  jamur  paru  sering  tidak  terdiagnosa  karena  tidak  ada gejala  yang  khas.  Infeksi  jamur  paru  sering  menyertai  penyakit  lain  sehingga  pengobatan terhadap  infeksi  jamur  paru  sering  terlambat  diberikan.  Identifikasi  kultur  konvensional  dan dilanjutkan  dengan  tes  biokimia  membutuhkan  waktu  yang  lama  oleh  karena  itu  diperlukan metode  fenotip  yang  mudah,  sederhana  dan  murah  untuk  mengidentifikasi  antara  Candida  sp. Tujuan  penelitian  ini  adalah  mendeteksi  keberadaan  jamur  dengan  metode  kultur  dari  sampel bilasan  bronkus  dan  bilasan  lambung.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  untuk mengetahui  pertumbuhan  jamur  Candida  sp  yang  diidolasi  dari  bilasan  lambung  dan  bronkus suspek  tuberculosis  yang  negatif  BTA  pada  medium  Sabaroud  Agar  Hipertonik.  Hasil  penelitian ditemukan 100% sampel menunjukkan pertumbuhan Candida sp dari sampel bilasan bronkus dan bilasan  lambung  tumbuh  pada  medium  SDA  Hipertonik  37 0 C  dengan  rata-rata  pertumbuhan  24 jam.  Koloni Candida sp yang tumbuh pada medium SDA Hipertonik 37 0 C akan tampak berwarna putih, halus, licin, ukuran koloni dari  kecil sampai  ukuran besar, jika koloni sudah berumur tua akan  berwarna  kecoklatan.  Candida  sp  secara  mikroskopik  berbentuk  bulat  sampai  lonjong  dan memiliki pertunasan yang dinamakan budding.
Kata Kunci: Candida sp., Sabaroud Glukosa Agar Hipertonik
PENDAHULUAN Penyakit infeksi masih tetap menjadi  masalah  utama  kesehatan  di Indonesia  salah  satunya  adalah  penyakit tuberkulosis  paruyang  disebabkan  oleh Mycobacterium  tuberculosis (Sudoyo, 2007).  Laporan  WHO  yang  terbaru (2006),  masih  menempatkan  Indonesia sebagai negara dengan pasien TB terbanyak  ke-3  di  dunia  setelah  India  dan Cina. Diperkirakan jumlah pasien tuberkulosis di Indonesia sekitar 10% dari total  jumlah  pasien  tuberkulosis  di  dunia (Pedoman Nasional Penanggulangan Tuberkulosis, 2006). Jamur  merupakan  agen  yang  juga memberi  pengaruh  pada  penyakit  paru disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis .  Menurut  Samie  A.,dkk., (2012),  jika  kurang  lebih  sekitar  dua dekade  terakhir  invasi  infeksi  jamur mengalami  peningkatan.  Saat  ini  angka kematian  yang  disebabkan  oleh  infeksi oportunistik mengalami peningkatan yang cukup  signifikan  yang  disebabkan  oleh
agen  immunokompeten  yaitu  jamur. (Jawetz  et  al.,  2007).  Invasi  infeksi  jamur dilaporkan mengalami peningkatan menjadi  26  %  pada  pasien  kronik  dan immunosupresif  menjadi  26  %  (Topley dan Wilson, 2005).
Tingkat  infeksi  jamur  tergantung pada  ukuran  inokulum  organisme  jamur dan tingkat resistensinya terhadap inangnya. Infeksi jamur dapat menyebabkan  fungaemia  sehingga  dapat menyebabkan immunosupresif pada individu  yang  terinfeksi.  Beberapa  jenis jamur  yang  dapat  menyebab  fungaemia yaitu Candida  albicans, Penicillium marneffei, Histoplasma capsulatum, Aspergillus spp. ,  Rhizomucor,  Absidia spp., Cunninghamella spp.,  (  Pfaller  and Diekema, 2006).
Gejala  umum  infeksi  jamur  paru sama  dengan  infeksi  tuberkulosis  ataupun dengan mikroba lainnya. Gejala itu berupa batuk-batuk,  batuk  darah,  banyak  dahak, sesak,  demam,  nyeri  dada  dan  bisa  juga tanpa  gejala.  Infeksi  jamur  paru  sering
tidak  terdiagnosa  karena  tidak  ada  gejala yang  khas.  Infeksi  jamur  paru  sering menyertai penyakit lain sehingga pengobatan  terhadap  infeksi  jamur  paru sering  terlambat  diberikan  (Sudoyo, 2007).  Kandidiasis  merupakan  infeksi jamur  tersering  pada  manusia,  dapat terjadi  di  seluruh  dunia  dan  menyerang segala  usia,  baik  laki-laki  maupun  wanita (Todar, 2005). Oleh karena itu diperlukan diagnosis sesuai dengan standar mikrobiologi dan pengobatan yang krusial.
Permasalahan  lain  yang  kemudian timbul  ialah  bahwa  baik  gambaran  klinik maupun  radiologik  penderita  infeksi jamur  paru  tidak  khas  (Sudoyo,  2007). Beberapa  identifikasi  kultur  konvensional dan  dilanjutkan  dengan  tes  biokimia membutuhkan waktu yang lama (Mandigan M.T., dkk, 2009). Oleh karena itu  diperlukan  metode  fenotip  yang mudah,  sederhana  dan  murah  untuk mengidentifikasi  antara Candida  sp. Berdasarkan  pemikiran  ini,  maka  perlu dikembangkan  suatu  metode  identifikasi jamur  secara  fenotip  menggunakan  media modifikasi  dengan  biaya  relatif  murah, cepat  dan  mudah    diaplikasikan  yaitu sabaroud  glukosa  hipertonik.  Penelitian Gomes,  dkk.  (2011)  menemukan  bahwa Candida  albicans dapat  tumbuh  pada sabouraud  dekstrosa  agar  hipertonik sementara Candida  dubliniensis tidak tumbuh.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah autoklaf ( Sanyo ), Bio Safety  Cabinet ( ESCO  class  II  Type  A2 ), lampu bunsen, inkubator ( Memmert ), kaca objek  ( Sail  Brand ),  kotak  kaca  objek, lemari  asam  ( ESCO ),  mikroskop  ( Nikon ), neraca  analitik  ( Kernew ),  ose  bulat,  pH meter  ( Schoft  Instrument ), plate  well ,  rak tabung,  sentrifugasi  ( Sorvall  Legendt ), Falcott ),  stopwatch  ( lingcheng ),  tabung eppendorf  ( Axygen ),  tabung  Falcon  50ml, vortex ( Heidolph ), pinset, gunting, waterbath ( Memmert ), freezer ,  gelas kimia, erlenmeyer, sendok timbangan, dan stirer magnetik.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  adalah  sampel  bilasan  bronkus, bilasan  lambung,  kapas,  alkohol,  karbol fuksin, methilen blue, glukosa, agar, NaCl dan air steril. Prosedur Kerja Preparasi sampel
Pengumpulan sampel penelitian dilakukan  di Infection  Centre Rumah Sakit  Wahidin  Sudirohusodo.  Sampel yang  dikumpul  berupa  bilasan  bronkus dan  bilasan  lambung  suspek  tuberkulosis.
Suspek tuberkuolosis, tidak sedang menjalani  terapi  pengobatan  anti  jamur dan  bersedia  untuk  mengikuti  penelitian dengan menandatangani informed consent
yang  telah  dikeluarkan  oleh  Komisi  Etik Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin. Sampel-sampel ini kemudian dibawa  ke  Laboratorium  Tuberkulosis Hum-RC ( Hasanuddin University Medical Research Centre ) Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin Makassar untuk dilakukan pemeriksaan. Sampel  sputum  suspek  tuberculosis diwarnai  dengan  metode  Zhiel-Nielsen kemudian  diamati  di  bawah  mikroskop. Bilasan  lambung  dan  bronkus  BTA negatif merupakan sampel penelitian yang selanjutnya di kultur untuk mengidentifikasi jamur Candida sp. Pembuatan  Sabouraud  glukosa  agar hipertonik Bahan medium Sabouraud dimasukkan  ke  dalam  labu  kimia  steril kemudian  dicampur.  Medium  kemudian diautoclave  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit . Medium yang telah jadi dituangkan  ke  dalam  botol  McCartney steril sebanyak 6-8 ml. Kultur Sabouraud Glukosa Agar Hipertonik Sampel diambil dengan menggunakan ose bulat kemudian diinokulasi  pada  medium  Sabouraud Glukosa Agar Hipertonik 7x24  jam  pada suhu 28 ºC.
Smear dengan pengecatan  Gram
Biakan Candida sp diambil
menggunakan  ose  bulat  diteteskan  pada permukaan  gelas  benda  dan  dibuat preparat  dengan  ukutan  2  x  3  cm, kemudian difiksasi pada hotplate selama 2
menit.  Selanjutnya  dituangkan  cristal violet  dibiarkan  2  menit  ,  cuci  dengan  air mengalir,  lalu dituangkan lugol dibiarkan 38  detik,  cuci  dengan  air  mengalir.  Lalu tuangkan alkohol 96% dibiarkan 10 detik , cuci  dengan  air  mengalir.  Kemudian tuangkan  Fuchsin  alkalis  dibiarkan  40 detik, cuci dengan air mengalir.
Interpretasi Koloni jamur pada media Sabouraud  Glukosa  Agar  Hipertonik berwarna putih, agak mengkilat dan halus. Sel  khamir  yang diamati berbentuk  bulat atau oval.

## HASIL PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  sampel bilasan  bronkus  dan  bilasan  lambung  dari 30 orang suspek tuberkulosis. Pengambilan  sampel  dan  pengumpulan data (umur, jenis kelamin, riwayat tentang penyakit  tuberkulosis,  riwayat  penyakit lainnya,  riwayat  pengobatan)  dilakukan dengan  wawancara  menggunakan  daftar pertanyaan  oleh  petugas  laboratorium yang  terlatih  di Infection  Centre Rumah Sakit  Wahidin  Sudirohusodo.  Jumlah sampel  ditentukan berdasarkan  rumus Simple  Random  Sampling. Total  sampel dalam  penelitian  ini  yaitu  30  bilasan bronkus  dan  bilasan  lambung  dari penderita suspek Tuberkulosis di Infection Centre Rumah Sakit Wahidin Sudirohusodo yang  terbagi  atas  18  (60%) sampel  bilasan  bronkus  dan  12  (40%) sampel  bilasan  lambung  dari  penderita suspek tuberkulosis.
Sebelum  melakukan  proses  kultur pada  medium  Sabaroud  Dektrosa  Agar Hipertonik 37 0 C terlebih dahulu dilakukan pemeriksaan langsung secara mikroskopik terhadap  sampel  bilasan  bronkus  dan lambung  menggunakan  metode smear dengan pewarnaan Ziehl-Neelsen. Selanjutnya semua sampel bilasan bronkus  diinokulasikan  pada  medium Sabaroud Dektrosa  Agar  Hipertonik  37 0 C kemudian  diinkubasi  selama  3  hari  untuk melihat  pertumbuhan Candida albicans pada  media  tersebut.  Berikut  ini  hasil smear dan  kultur  sampel  bilasan  broncus dan lambung yang ditunjukkan pada tabel
1.
Tabel  1.Perbandingan  Tingkat  Isolasi Jamur  Candida  sp  Bilasan Bronkus dan Lambung Suspek  Penderita  TB  pada SDA Hipertonik Media Hasil Kultur Positif Negatif Kontaminasi SDA Hipertonik 30 (100%) - 5 (16.7%) Berdasarkan  hasil  kultur  sampel sputum  BTA  pada  medium  Sabaroud Dektrosa  Agar  Hipertonik  37 0 C,  jumlah sampel yang positif pertumbuhan Candida albicans yaitu 30 (100%), sedangkan yang negatip  pertumbuhan Candida  albicans tidak  ada  dan  kontaminasi  yaitu  5 (16.7%).
Tabel2.Rata-Rata Waktu Pertumbuhan Koloni  Jamur  Candida  sp Bilasan Bronkus dan Lambung  Suspek  Penderita TB  pada  Media  Sabaroud Dekstrosa Agara Hipertonik Media Pertumbuhan Jam ke- N 24 48 SDA Hipertonik 27 (90%) 3 (10%) 30 (100%) Untuk  rata-rata  hari  pertumbuhan koloni  untuk Candida  albicans pada medium Sabaroud Dektrosa Agar Hipertonik    37 0 C  yaitu  1  hari  yang berkisar antara 1-2 hari.
Hasil  dari  kultur  tersebut  yang positip  selanjutnya  dikonfirmasi  dengan pemeriksaan mikroskopik dengan
menggunakan  pewarnaan  gram  yang bertujuan  untuk  menegaskan  kembali apakah koloni yang tumbuh tersebut benar adalah Candida albicans.
Gambar 1. (a) Koloni Candida sp pada Media SDA Hipertonik (b) Mikroskopik Candida sp dari Sampel Bilasan Bronkus dan Lambung Penelitian  ini  menggunakan  sampel bilasan  bronkus  dan  bilasan  lambung dari
30 orang suspek tuberkulosis. Pengambilan  sampel  dan  pengumpulan data (umur, jenis kelamin, riwayat tentang penyakit  tuberkulosis,  riwayat  penyakit lainnya,  riwayat  pengobatan)  dilakukan dengan  wawancara  menggunakan  daftar pertanyaan  oleh  petugas  laboratorium yang  terlatih  di Infection  Centre Rumah Sakit  Wahidin  Sudirohusodo.  Jumlah sampel  ditentukan  berdasarkan  rumus Simple  Random  Sampling. Sampel  pada penelitian  ini  yaitu  30  terdiri  atas  18 sampel  bilasan  bronkus  dan  12  sampel bilasan  lambung  dari  penderita  suspek tuberkulosis.
Sampel  kemudian  diperiksa  secara mikroskopok  sebagai  diagnosis  awal infeksi Mycobacterium karena  metode pemeriksaan  smear  dapat  menunjukkan hasil  pemerikaaan  yang  cepat.  Selain  itu pemeriksaan  secara  mikroskopik  dengan basil  tahan  asam  (BTA)  merupakan pemeriksaan  yang  sederhana,  murah  dan cukup sensitif untuk mendukung diagnosis  penyakit  tuberkulosis  serta untuk menilai kemajuan pengobatan.
Berdasarkan  data  penelitian  (tabel 1)  menunjukkan  bahwa  ditemukan    BTA negatip  pada  18  sampel  bilasan  bronkus dan  12  sampel  bilasan  lambung  dari penderita suspek tuberkulosis. Setelah dilakukan pemeriksaan mikrokospik selanjutnya sampel diinokulasikan pada medium pertumbuhan  yaitu  SDA  Hipertonik  37 0 C bertujuan untuk untuk mengetahui tingkat kemampuan  baik  sensitifitas  maupun sensifitas  medium  SDA  Hipertonik  37 0 C dalam mengisolasi jamur Candida albicans .  Penelitian  Gomes,  dkk.  (2011)
menemukan  bahwa Candida  albicans
dapat  tumbuh  pada  sabaroud  dekstrosa agar hipertonik sementara Candida dubliniensis tidak. Koloni Candida albicans yang tumbuh pada medium SDA Hipertonik  37 0 C  tampak  berwarna  putih, halus,  licin,  ukuran  koloni  dari  kecil sampai  ukuran  besar,  jika  koloni  sudah berumur  tua  akan  berwarna  kecoklatan (Gambar 1).
Dari data penelitian diperoleh bahwa  medium  SDA  Hipertonik  37 0 C memilki tingkat pertumbuhan koloni yaitu
30  (100%)  jumlah  sampel  yang  positif pertumbuhan Candida  albicans .  Dari  30 sampel  ini  terdapat  5  (16.7%)  sampel yang  ditumbuhi  jamur  jenis  lain  yaitu Aspergillus  sp. Kultur    menjadi  sangat penting  untuk  menghindari  kesalahan dalam  rutin  identifikasi.  Dari  hasil penelitian  diperoleh  pula  rata-rata  hari pertumbuhan Candida spp antara medium SDA  Hipertonik  37 0 C  yaitu  1  hari  (24 jam)  setelah  inokulasi  (Tabel  2).  Namun terdapat  3  (10%)  sampel  dengan  lama pertumbuhan  48  jam  setelah  inokulasi. Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Gomes, dkk.  (2011),  yang  menyatakan  bahwa pertumbuhan Candida albicans pada SDA Hipertonik berkisar antara 24-48 jam.
Setelah didapatkan hasil kultur yang positif dari medium SDA Hipertonik 37 0 C selanjutnya  dilakukan  uji  konfirmasi dengan pemeriksaan mikroskopik kembali menggunakan  pewarnaan  sederhana.  Uji konfirmasi  ini  dilakukan  bertujuan  untuk menegaskan  kembali  apakah  koloni  yang tumbuh pada  media  tersebut  benar  adalah Candida  albicans (Gambar  3).  Hasil pengamatan mikrokopik tersebut menunjukkan keberadaan Candida albicans pada  media. Candida  albicans nampak  adanya budding atau  pertunasan pada ujung blastopora.

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa:
1. Candida  sp .  dari  bilasan  bronkus  dan bilasan lambung tumbuh pada medium SDA Hipertonik 37 0 C
dengan rata-rata pertumbuhan 24 jam.
2. Koloni Candida  spp yang  tumbuh pada  medium  SDA  Hipertonik  37 0 C akan  tampak  berwarna  putih,  halus, licin,  ukuran  koloni  dari  kecil  sampai ukuran  besar,  jika  koloni  sudah berumur tua akan berwarna kecoklatan. SARAN Sebagai pertimbangan untuk peneliti  selanjutnya,  dapat  dilakukan peneltian mengenai:
1. Penggunaan  PCR  untuk  mendeteksi keberadaan Candida  sp dari  sampel bilasan  broncus  dan  bilasan  lambung.
2. Kultur  sampel  bilasan  broncus  dan bilasan  lambung  pada  medium  SDA Hipertonik  dengan  membandingkan
suhu ikubasi. DAFTAR PUSTAKA
Gomes, dkk. 2011. Differentiation between  Candida  albicans  and Candida dubliniensis using hypertonic  Sabouraud  broth  and tobacco agar . Revista da Sociedade
Brasileira  de  Medicina  Tropical 44(4):457-460, jul-ago, 2011. Jawetz,  dkk.  2007. Mikrobiologi  Medik Edisi ke 24. McGraw Hill.
Mandigan,  M.T.,  dkk.  2009. Biology  of Microorganism . San Francisco: Pearson International Edition. Perkumpulan Pemberantasan Tuberkulosis  INDONESIA.  2006. Jakarta: Jurnal Tuberkulosis Indonesia Vol III No 2 . Pfaller, MA., dkk. 2006. Infeksi Opportunistik  Jamur  Patogen  , Candida  albicans  dan  Aspergillus fumigatus .  J.  Clin.  Microbiol,  42:
4419–4431.
Samie,  A.,dkk.  2012. Diversity  of respiratory yeast from HIV infected patients  with  tuberculosis,  their drug resistance and biofilm formation,  University  of  Venda,
Departement  Of  Microbiology , South  Africa,  African  Journal  Of Microbiology  Research  Vol.  6  (2),
pp 257-266, 16 January 2012.
Sudoyo, A.W., dkk. 2007. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jil II Ed 4. Jakarta:
Pusat  Penerbitan  Departemen  Ilmu Penyakit Dalam FKUI. Todar. 2005. Tuberculosis, Todar’s Online  Textbook  of  Bacteriology. Available from: www.textbookofbacteriology.net.
Topley,  Wilson.  2005. Mikrobiologi  dan Infeksi  Mikroba  ,  Mikologi  Medik, Edisi  ke  10 .  Dipublikasi  oleh Hodder Arnold.