AKTIVITAS ANTIFUNGI SHAMPO DAN KRIM EKSTRAK ETANOLIK BATANG BROTOWALI TERHADAP Pityrosporum ovale DAN Trichophyton mentagrohytes
Nuryanti, Warsinah, Gitanti Rohman, Windhiana Sapti Argi Jurusan Farmasi Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan Universitas Jenderal Soedirman Jl. dr. Soeparno Karangwangkal Purwokerto 53123 Corresponding author email: nu_unsoed@yahoo.com

## ABSTRAK
Brotowali  dengan  kandungan  alkaloid,  flavonoid,  dan  terpenoid  diketahui  memiliki  aktivitas antifungi.  Tujuan    penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  kadar  hambat  minimum  ekstrak etanolik  batang  Brotowali dan aktivitas antifungi  shampo dan krim ekstrak etanolik   batang Brotowali terhadap P.ovale dan T.mentagrohytes. Batang  Brotowali  dimaserasi dengan  etanol 70%,  kemudian  ekstrak  etanolik  batang  brotowali  diuji  aktivitas  a nt i f u ng i   untuk menentukan  konsentrasi  ekstrak  yang  akan  digunakan  dalam  formulasi  shampoo  dan  krim. Formula terbaik  shampo diuji aktivitas terhadap P. ovale dengan  metode  cakram dan formula terbaik  krim  diuji  aktivitas  terhadap T.  mentagrohytes menggunakan  metode  sumuran.  Hasil penelitian menunjukkan KHM ekstrak etanolik  batang  Brotowali terhadap P. ovale adalah 900 ppm  dan terhadap T.mentagrohytes 3,9 ppm. Formula shampo terbaik    memiliki  zona hambat antifungi  kategori kuat 13,43+3,18 mm   dengan persen  daya  hambat  69, 12% . Formula krim terbaik  memiliki  zona  hambat  antifungi  kategori  sedang  8,42+0,38  mm  dengan  persen  daya hambat 62,74%.
Kata kunci :  Brotowali, shampo, krim, P. ovale , T. mentagrohytes

## ABSTRACT
Brotowali  are  known  to  have  flavonoid,  alcaloid,  and  terpenoid  which  have  antifungal activity. This study aimed  to  determine  the minimum inhibitory concentration ethanolic extract Brotowali    stem  and  know  the  antifungal  activity  of  shampoo  and  cream  of  ethanolic  extract Brotowali  stem  to  P.ovale  and  T.mentagrohytes.  Brotowali  stem  macerated  with  70%  ethanol and test antifungal activity of ethanolic extract Brotowali stem to determine concentration used in shampoos and creams formula. The best shampoo formula tested antifungal  activity against P.ovale  and cream against T. mentagrohytes  with compared  method.  The results showed  MIC of ethanolic extract  Brotowali stem against P.ovale was 900 ppm and against T. mentagrohytes was 3.9 ppm. The best shampoo formula has strong inhibitory zone antifungal category 13.43 + 3.18  mm  and  percent  inhibition  of  69,  12%.  The  best  cream  formula  has  currently  inhibitory zone  antifungal category was 8.42 + 0.38 mm and percent inhibition of 62.74%.
Keywords : Brotowali, shampoo, cream, P. ovale , T. mentagrohytes

## PENDAHULUAN
Brotowali  merupakan  salah  satu  tanaman yang  sudah  banyak  digunakan  sebagai  obat tradisional.  Tanaman    ini    digunakan    karena mengandung  senyawa  kimia  diantaranya damar  lunak,  pati,  glikosida  pikroretosid,  zat pahit    pikroretin,  harsa,  alkaloid  berberin, palmitin, serta alkaloid berberin dan kolumbin yang terdapat  pada  akar    tanaman (Dalimartha,    2008).  Batang  brotowali
mengandung  senyawa  triterpenoid  yang disebut  cycloeucalenol  dan  cycloeucalenone (Kongkathip  dkk . ,  2002).    Batang T.crispa mengandung: flavones O-glycosides
(apigenine),    picroretoside,    berberin, palmatin,  picroretin  and    resin . Flavonoids yang  merupakan  senyawa  polifenolik  yang umum  ditemukan  diberbagai  tanaman  juga ditemukan  dalam  batang  brotowali  (Cotelle, 2001).  Batang  brotowali    berkhasiat    sebagai analgesik,    antipiretik,    penambah  nafsu
makan. Zat pahit pikroretin dapat merangsang kerja  urat  saraf    sehingga    alat    pernafasan dapat  berfungsi  dengan  baik  (Dalimartha, 2008). Tinospora  cordifolia yang  berbeda spesies  dengan T.crispa memiliki  efek antibakteri  terhadap  beberapa  bakteri  seperti S.aureus , B.subtilis , E.coli , S.typhi ,  dan lainnya  serta  efek  antifungi  terhadap beberapa  fungi.  Salah  satu  fungi  yang dapat dihambat pertumbuhannya yaitu T.menthagrophytes dengan  nilai  MIC  0,250 mg/mL ( Duraipandiyan, dkk .,  2012). Tujuan penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui kadar hambat  minimum  ekstrak  etanolik    batang Brotowali dan aktivitas antifungi  shampo dan krim  ekstrak  etanolik      batang Brotowali terhadap P.ovale dan T.mentagrohytes .

## METODE
Bahan  dan  Alat  penelitian. Bahan  yang digunakan  adalah  Batang  Brotowali  ( T. crispa ),  etanol  70%,    sodium  lauril  sulfat (SLS), cocamide DEA, CMC, propil paraben, mentol,  parafin cair, cera alba, tween 80, span 80,  trietanolamin,  metil  paraben,      aquades. Sabouraud Dekstrose Agar (SDA), Sabouraud Dekstrose  Broth  (SDB)  serta    isolat  fungi T.mentagrophytes dan fungi P.ovale Alat yang digunakan adalah oven, blender, maserator, corong buchner , indikator universal,  alat  uji  daya  sebar  dan  daya  lekat, viskosimeter Brookfield ,  autoklaf,  inkubator, hot  plate , magnetic  stirrer ,  lampu  spirtus, jarum  ose dan  alat  sumuran.
Pembuatan  Ekstrak  Etanolik  Batang Brotowali.
Serbuk batang brotowali dimaserasi  menggunakan etanol  70%,   filtrat dievaporasi  dengan rotary  evaporator dan dipekatkan di atas waterbath sampai diperoleh ekstrak kental.
Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanolik  Batang Brotowali    terhadap P.ovale . Metode  u j i me nggu na ka n  kertas  cakram  dengan media  SDA,   diinokulasi  dengan  P.  ovale sebanyak  1  mL.  Konsentrasi  Ekstrak  batang brotowali yang  diuji yaitu 600, 800, 900, dan 1000 ppm.
Uji Aktivitas Ekstrak Etanolik Batang Brotowali    terhadap T.  mentagrophytes . Metode  u j i  dengan  metode  Kirby  Bauer, me nggu na ka n  sumuran  dengan  media SDA,   diinokulasi dengan P. ovale sebanyak
1 mL. Konsentrasi Ekstrak batang brotowali yang  diuji  yaitu  62,5;    31,25;  15,75;  7,88; 3,9 dan 1,95 ppm .
Pembuatan  Sediaan  Shampo  dan  Krim Ekstrak  Etanolik  Batang  Brotowali. Sediaan  shampo  dibuat  dengan  cara melarutkan Sodium lauril sulfat pada akuades panas,  setelah  dingin  tambahkan  larutan ekstrak  etanolik  brotowali,  Cocamide  DEA, mentol, propil paraben dan CMC sedikit demi sedikit  dalam  campuran  hingga  homogen (Mahataranti dkk., 2012)..
Sediaan  krim  dibuat  dengan  cara  fase  air (trietanolamin,  metil  paraben,  tween  80  dan aquades)  dilarutkan  menggunakan  penangas air  suhu  70ºC.  Sedangkan    fase    minyak, dilebur  menggunakan  penangas  air  dengan suhu    75ºC. Setelah  semuanya  melarut,  fase air  ditambahkan  perlahan-lahan  kedalam lumpang  panas  yang  berisi  fase  minyak selanjutnya  diaduk  dengan  kecepatan  konstan hingga terbentuk  masa krim. Ekstrak etanolik batang  brotowali  yang  sudah  ditimbang dicampurkan kedalam masa krim sedikit demi sedikit  sambil  diaduk  hingga  homogen (Juwita, 2013).
Tabel 1. Formula Sediaan Shampo Bahan Formula Shampo (%b/v) S1 S2 S3 S4 Ekstrak batang brotowali 0,09 0,09 0,09 0,09 Sodium lauril sulfat 10 12 14 16 Cocamide DEA 2 2 2 2 CMC 3 3 3 3 Propil paraben 0,25 0,25 0,25 0,25 Aquades ad 100 mL
Tabel 2. Formula Sediaan Krim Bahan Formula Krim (%b/v) K1 K2 K3 K4 0,09 0,78 0,78 0,78 0,78 Paraffin cair 40 45 50 55 Cera alba 14 14 14 14 Tween 80 3,6 3,6 3,6 3,6 Spaan 80 1,4 1,4 1,4 1,4 Trietanol amin 2 2 2 2 Metil paraben 0,1 01 0,1 0,1 Akuades ad 100 mL
Evaluasi  Sifat  Fisik  dan  Uji  Stabilitas Sediaan  Shampo  dan  Krim. Evaluasi  sifat fisik  dan Uji  stabilitas  sediaan  shampo  dan krim dilakukan dengan mengamati  perubahan sifat  fisik  sediaan  setiap  hari  pada  minggu pertama, hari ke-14, ke-21, dan ke- 28.
Evaluasi  sifat  fisik  sediaan  shampo meliputi    pengamatan  organoleptis,  uji homogenitas, pH, viskositas, kemampuan dan stabilitas  busa  serta  persentase  zat  padat (Mahataranti dkk., 2012;  Kumar dkk., 2010; Saraf dkk., 2011 ; Saad dan Kadhim, 2011). Evaluasi  sifat  fisik  sediaan  krim  meliputi pengamatan  organoleptis,  uji  homogenitas, pH,  viskositas,  daya  sebar  dan  daya  lekat (Juwita,  2013;  SNI,  1996;  Garg dkk. 2002) .
Uji Aktivitas Shampo dan Krim Ekstrak Etanolik Batang Brotowali terhadap  Fungi P.ovale dan T.  mentagrophytes .  Sediaan shampo  dan  krim    yang  diuji  adalah  formula terbaik  yang  memenuhi  syarat  evaluasi  sifat fisik dan uji stabilitas.
Pengujian  aktivitas  antifungi  sediaan shampo  dilakukan  dengan  metode  cakram yaitu  dengan  merendam  kertas  cakram  dalam sediaan  shampo  kemudian  diletakkan  diatas Media  biakan P.  ovale dan      di    inkubasi selama  2 x 24 jam pada suhu 37ºC.
Pengujian  aktivitas  antifungi  sediaan  krim menggunakan  metode  sumuran  yaitu  dengan membuat  lubang  berdiameter  5  mm  pada media  biakan  fungi T.  mentagrophytes , kemudian sediaan krim dimasukkan ke dalam lubang  sumuran  dan  diinkubasi  selama  3x24 jam pada suhu ruang.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah sediaan  shampo  dan  krim  tanpa  bahan  aktif dan    kontrol  positip  menggunakan  shampo ketokonazol dan krim ketokonazol

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanolik  Batang Brotowali    terhadap P.ovale  dan  T. mentagrophytes . Hasil  uji  aktivitas  ekstrak etanolik  batang  brotowali  terhadap P.  ovale pada Tabel 3 menginformasikan bahwa Kadar Hambat  Minimum  (KHM)  ekstrak  etanolik batang brotowali terhadap P.ovale adalah 900 ppm.  Sedangkan  Kadar  Hambat  Minimum (KHM)  ekstrak  etanolik  batang  brotowali terhadap T. mentagrophytes pada  konsentrasi 3,9  ppm.
Tabel 3. KHM Ekstrak Etanolik Batang Brotowali Terhadap P.ovale dan T. mentagrophytes T. mentagrophytes P.ovale Konsentrasi Ektrak (ppm) Zona Hambat Rata 2 (mm) Konsentrasi Ektrak (ppm) Zona Hambat Rata 2 (mm ) 1,95 0,00 600 0.00 3.9 3.37 700 0.00 7.875 9.00 800 0.00 15.75 8.40 900 0.47 31.25 10.00 1000 1.36 62.5 13.35 2000 1.48 Kontrol positif 6.00 3000 1.27 Kontrol negatif - 4000 1.96 Kontrol negatif 1.35 Kontrol positif 2.86
Efektifitas  suatu  zat  antifungi  dipengaruhi oleh konsentrasi zat yang  diberikan, semakin tinggi  konsentrasi  semakin  besar  daya hambatnya  (Brooks, dkk. ,  2005).  Hal  ini ditunjukkan  pada  hasil  pengamatan  uji aktivitas  bahwa  semakin  besar  konsentrasi ekstrak  etanolik  batang  brotowali  maka semakin  besar  daya  hambat  terhadap  fungi P ovale dan T. mentagrophytes
Evaluasi  Sifat  Fisik  dan  Uji  Stabilitas Sediaan Shampo. Hasil pengamatan organoleptis  menunjukkan  semua  formula shampo  memiliki  bentuk/konsistensi  kental, berwarna  kuning  kecoklatan,  berbau  khas mentol,  homogen  dan  pH  7.    Setelah penyimpanan  28  hari  terjadi pemisahan pada formula  S4  yang  menunjukkan  sediaan shampo S4 tidak stabil secara organoleptis.
Tabel 4. Viskositas,  Kemampuan  Busa  dan
Persentase Zat Padat Sediaan Shampo Formula Evaluasi sifat fisik Viskosit as (cps) Kema mpuan Busa (mL) Persenta se Zat Padat (%) S1 3837,6 – 4136,2 8-11 10,73- 13,32 S2 3080,0 – 4655,3 10-15 21,43- 22,03 S3 2002,0 – 2341,6 12-18 25,21- 25,54 Nilai  viskositas  formula  S1,  S2  dan  S3 pada Tabel 4 menunjukkan viskositas sediaan masih berada dalam rentang yang diperbolehkan  SNI  yaitu  400-4000  cps sehingga sediaan shampo memenuhi persyaratan viskositas.
Sediaan  shampo  yang  menghasilkan volume  busa  di  atas  10  mL  dinyatakan memiliki  kemampuan  busa  sangat  baik, sedangkan  di  bawah  10  mL  dinyatakan memiliki kemampuan busa baik (Saraf, dkk., 2011; Saad, dkk., 2011).
Formula S2 dan S3 memenuhi persyaratan shampo yang baik  yaitu 20%- 30%, sehingga sediaan shampo mudah untuk digunakan serta dibilas (Khaloud dkk. , 2011).
Evaluasi  Sifat  Fisik  dan  Uji  Stabilitas
Sediaan
Krim.
Hasil pengamatan organoleptis  menunjukkan bentuk  sediaan krim    pada  formula  K1  terjadi  pemisahan  air dan  minyak  pada  hari  ke-  4,  K2  terjadi pemisahan  pada  hari  ke-7,  sedangkan  K3 dan  K 4  terjadi  pemisahan  pada  hari  ke-28. Evaluasi  Homogenitas  semua  formula  krim menunjukkan  sediaan  krim  homogen  dengan pH 7.
Berdasarkan Tabel 5 diketahui bahwa nilai viskositas  sediaan  krim  formula  K3  dan  K4 masih  berada  dalam    nilai  viskositas  sediaan krim  yang  ideal  yaitu  5000  cPs.  Daya  lekat
formula K3  dan K4  berada dalam  ketentuan syarat  daya  lekat  krim  yaitu  lebih  dari  1 detik  (Lieberman dkk., 1998).  Daya  sebar formula K3 dan K4  memenuhi  j u g a   syarat daya  sebar  krim  yaitu  5-7  cm  (Garg dkk., 2002)
Berdasarkan  hasil  evaluasi  sifat  fisik  dan uji stabilitas sediaan shampo dan krim  ekstrak etanolik  batang  brotowali,  maka  dapat disimpulkan  bahwa    formula  terbaik  sediaan shampo  adalah  formula  S3  dan  formula terbaik  sediaan  krim  adalah  formula  K4. Sehingga  sediaan  shampo  S3  dan    sediaan krim K4 dilakukan uji aktivitas antifungi.
Tabel 5. Viskositas, Daya Lekat dan Daya Sebar Sediaan Krim Formula Evaluasi sifat fisik Viskosi tas (cps) Daya Lekat (detik) Daya Sebar (cm) K3 5750 - 37650 1,03- 5,44 5,21- 6,62 K4 6050 - 32350 1,15- 5,47 5,33- 6,79
Uji AktivitasShampo dan Krim Ekstrak Etanolik Batang Brotowali terhadap  Fungi
P.ovale dan T.  mentagrophytes .  Hasil  uji aktivitas  shampo  ekstrak  etanolik  batang brotowali  b er da sa r ka n  T a b el  6   da n Ga mba r   1  menunjukkan  bahwa  zona hambat rata-rata formula shampo S3 terhadap fungi P. ovale yaitu 69,12 mm lebih besar dari kontrol  positif  dan    potensi  hambat  shampo ekstrak etanolik batang
brotowali dikategorikan  kuat  dengan  persentase  daya hambat  sebesar  69,12%.  Analisis  data menggunakan  Anova  menunjukkan  bahwa sig. (0,233)>0,05  berarti  tidak  ada  perbedaan signifikan  antara  shampo  uji  dengan  kontrol negatif maupun positif.
Potensi  shampo  ekstrak  etanolik  batang brotowali  dalam  menghambat  pertumbuhan P.  ovale lebih  besar  dari  pada  kontrol positif  dan  negatif.  Hal  ini dapat  disebabkan karena  ekstrak  etanolik  batang  brotowali memiliki  kandungan  senyawa  yang  memiliki aktivitas  antifungi  antara  lain  triterpenoid, senyawa  fenol,  asam  lemak,  flavonoid,  dan alkaloid  (Warsinah, dkk. ,  2015).    Hal  ini diperkuat  dengan  penelitian  Mahataranti, dkk., (2012),  bahwa  senyawa  flavoniod,
teriterpen dan alkaloid yang terkandung dalam ekstrak herbal dapat menghambat pertumbuhan P. ovale.
Tabel 6. Zona Hambat dan Persen  Zona Hambat Sediaan  Shampo  Ektrak  Etanolik Batang Brotowali Terhadap P.ovale Sediaan Shampo Zona Hambat Rata 2 (mm) Persen Hambat (%) Formula S3 11.72±0.485 69.12 Kontrol positif 10.44±0.719 66.13 Kontrol negatif 13.43±3.18 63.50 Tabel 7. Zona Hambat dan Persen  Zona Hambat Sediaan  Krim  Ektrak  Etanolik  Batang Brotowali Terhadap T. mentagrophytes Sediaan Krim Zona Hambat Rata 2 (mm) Persen Hambat (%) Formula K4 8.42±0.38 62,74 Kontrol positif 20.38±0.70 80.3 Kontrol negatif 0.00±0.00 0
Gambar 1. Hasil  uji  aktivitas  shampo  ekstrak etanolik batang  brotowali
Ket :   A1=  Kertas  Cakram,  A2  =  Zona Hambat, A = Kontrol Positif, B = Shampo Uji, C = Kontrol Negatif
Berdasarkan  Tabel  7  dan  Gambar  2 diketahui bahwa sedian krim formula K4 krim ekstrak  etanolik  batang  brotowali  memiliki kemampuan  menghambat  pertumbuhan fungi namun  zona  hambat  yang  dihasilkan  lebih kecil  dibandingkan  dengan  kontrol  positif yaitu  krim  ketokonazol  2%.  Sedangkan
kontrol  negatif  yaitu  krim  tanpa  bahan  aktif tidak  mempunyai  daya  hambat,  hal  ini memberikan  arti  bahwa  bahan-bahan  yang digunakan  sebagai  penyusun  krim  tidak mempunyai  aktivitas  antifungi  atau  dengan kata  lain,  senyawa  yang  menghambat pertumbuhan  fungi  pada  krim  uji  hanya  dari ekstrak  etanolik  batang  brotowali.  Zona hambat  krim  ekstrak  etanolik  batang brotowali  terhadap T.  mentagrophytes (8.42±0.38  mm)  termasuk  dalam  kriteria sedang, sedangkan  kontrol positif  yaitu  krim ketokonazol  2%  (20.38±0.70  mm)  termasuk dalam  kriteria sangat kuat.
Gambar 2. Hasil  Uji  Aktivitas  Krim  Ekstrak Etanolik  Batang  Brotowali  Terhadap
T.mentagrophytes
Ket:  A.    Krim    Uji,    B.    Kontrol  Positif,
C. Kontrol   Negatif, 1= isolat fungi, 2= krim uji, 3= zona bening
Ekstrak etanolik batang brotowali mengandung  senyawa  flavonoid yang merupakan polifenol yang dipercaya memiliki sifat antimikrob. Flavonoid dapat
menghambat  pertumbuhan  mikroba  melalui denaturasi  protein  struktural  pada  dinding  sel maupun  membran  sel  melalui putusnya  atau pecahnya  ikatan  disulfida  dalam  rantai polipeptida.  Ikatan  disulfida  adalah  ikatan yang  menghubungkan  salah  satu  bagian  dari suatu  rantai  polipeptida  dengan  bagian  lain pada  rantai  yang  sama  sehingga  membentuk lipatan-lipatan pada  rantai  polipeptida. Pecahnya  ikatan  disulfida  menyebabkan rantai polipeptida tidak dapat
mempertahankan  bentuk  aslinya  sehingga dinding  sel  rusak (Cotelle, 2001).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  KHM ekstrak  etanolik    batang  Brotowali  terhadap P.  ovale adalah  900  ppm  dan  terhadap T.mentagrohytes 3,9  ppm.  Formula  shampo terbaik    S3    memiliki  zona  hambat  antifungi kategori  kuat 13,43+3,18 mm  dengan persen daya  hambat 69, 12% . Formula krim terbaik K4  memiliki  zona  hambat  antifungi  kategori sedang  8,42+0,38  mm  dengan  persen  daya hambat 62,74%.

## DAFTAR PUSTAKA
Brooks,  G.F.,  Janet,  S.B.,  dan  Stephen, A.M.,  2005: Mikrobiologi  Kedokteran Edisi pertama , Salemba Medika, Jakarta.
Cotelle  N,  2001:  Role  of  flavonoids  in oxidative  stress. Curr  Top  Med  Chem 1 , 569–590.
Dalimartha,  S.,  2008: Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia  Jilid  5 ,  Pustaka    Bunda, Jakarta,10 -16.
Duraipandiyan,  V.,  Ignacimuthu,  S.,  dan Balakrishna,  K.,  2012:  Antimicrobial Activity  of  Tinospora  cordifolia  :  an ethnomedicinal  plant, Asian  Journal  of Traditional Medicine, Vol. 7. 2 , 59-65. Garg, A., Aggarwal, D., Garg, S.,   dan Sigla, A. K.  2002: Spreading of  Semisolid Formulation:  An  Update, Pharmaceutical Tecnology , 84-102.
Juwita, A.P., Paulina V.Y.Y., dan Hosea J.E., 2013:  Formulasi  Krim  Ekstrak  Etanol Daun  Lamun  ( Syringodium  isoetifolium ), Jurnal  Ilmiah  Farmasi ,  UNSRAT 2 No. 02, ISSN 2032-2493.
Khaloud,  A.B.,  dan  Khan,  S.A.,  2014:
Formulation, Evaluation and
Comparison  of  The  Herbal  Shampoo
With  The  Commercial  Shampoos, Beni-
Suef  University  Journal  of  Basic  and Applied Science’s , Vol.3.12, 301-305. Kongkathip,  N.,  Dhumma-upakorn,  P., Kongkathip,  B.,  Chawananoraset,  K.,
Sangchomkaeo, P.
dan Hatthakitpanichakul,  S.,  2002:    Study  on cardiac contractility  of cycloeucalenol and cycloeucalenone  isolated  from  Tinospora crispa. Journal  of  Ethnopharmacology . Vol. 83, 95-99.
Kumar, Ashok., Mali, dan Rakesh  Roshan., 2010:    Evaluation    Of    Prepared Shampoo Formulations And To Compare Formulated    Shampoo    With  Marketed Shampoos, International  Journal  Of Pharmaceutical    Sciences  Review  And Research , Vol. 1.3, 25.
Lieberman,  H.A.,  dan  Kaning,  J.L.  1998. Teori  dan  Praktek    Farmasi  Industri    I.
Edisi ketiga . Jakarta: Universitas Indonesia Press. Mahataranti, N., Astuti, I.Y., dan Asriningdhiani,  B.,  2012:  Formulasi
Shampo  Antiketombe  Ekstrak  Etanol Seledri  ( Apium  graveolens  L )  dan Aktivitasnya terhadap Jamur Pytirosporum ovale , Pharmacy, Vol. 2 .9, 128-139 Saad,  A.H.,dan  Kadhim,  R.D.,  2011: Formulation  and  Evaluation  of  Herbal Shampoo  from Zizhipus  spina Leaves Extract, International Journal of Reseach in  Ayurveda  &  Pharmacy, Vol.  2.6, 1802-1806.
Saraf,  Swarnatala,  Sunil  Hargude,  Kaur, C.D.,  Saraf,  dan  Shailendra,  2011: Formulation  and  Evaluation  of  Herbal Shampoo  Containing  Extract  of  Allium sativum, J.  Topical  and  Cosmetic  Sci, Vol. 2.1, 18-20 Warsinah,  Harwoko,  dan  Nuryanti,  2015: Screening  of  Volatile  Compounds  of Brotowali  ( Tinospora  Crispa )  and Antifungal  Activity  Against Candida albicans,  International  Journal  of
Pharmacognosy  and Phytochemical Research , Vo. 7 .1,  132-136