## PENGARUH PEMBERIAN FRAKSI ETIL ASETAT BUAH KASTURI
(Mangifera casturi Kosterm) TERHADAP TOKSISITAS AKUT, GAMBARAN MAKROSKOPIS DAN MIKROSKOPIS JANTUNG TIKUS PUTIH JANTAN

## Sutomo*, Gita Meliawati, Arnida
Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat
*Email: sutomo01@ulm.ac.id
Artikel diterima: 8 Agustus 2019; Disetujui: 1 9 Oktober 2019

## ABSTRAK
Tumbuhan  kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterm)  yang  berasal  dari  genus Mangifer a,  mempunyai  senyawa  yang  dapat  dimanfaatkan  dalam  pengobatan. Fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol  buah M.  casturi mengandung  senyawa fenolik seperti flavonoid dan tanin dengan aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  menentukan  pengaruh  pemberian  fraksi  etil asetat  buah M.  casturi terhadap  ketoksikan  akut,  gambaran  makroskopis  dan mikroskopis organ jantung tikus putih jantan. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental  rancangan  acak  lengkap  di  Laboratorium.  Penelitian  pengaruh pemberian fraksi etil asetat buah M . casturi dilakukan pada 4 kelompok uji dan 1 kelompok  kontrol  masing-masing  terdiri  dari  5  hewan.  Pengujian  toksisitas  akut dan  histologi  jantung  tikus  putih  jantan  ini  menggunakan  pemeriksaan laboratorium  secara  kualitatif  dengan  mengamati  jumlah  kematian  tikus, gambaran  makroskopis  dan  gambaran  mikroskopis  organ  jantung  setelah pemberian  fraksi  etil  asetat  buah M . casturi serta  pemeriksaan  kuantitatif  berupa LD 50 . Tikus diberikan perlakuan dengan dosis tungal kemudian diamati selama 14 hari,  setelah  itu  tikus  dibedah  dan  diambil  organ  jantungnya.  LD 50 yang  didapat sebesar  2.290,867  mg/kgBB.  Hasil  analisis  menggunakan  uji Kruskal  Wallis menunjukkan  bahwa  pemberian  fraksi  etil  asetat  buah  kasturi  tidak  berbeda bermakna antara kelompok kontrol dan perlakuan (p > 0,05) pada volume jantung tikus.  Semua  kelompok  perlakuan  tidak  menunjukkan  tanda  atau  kondisi inflamasi, sehingga dapat disimpulkan bahwa pemberian fraksi etil asetat buah M. casturi tidak memberikan pengaruh berupa inflamasi pada organ jantung tikus.
Kata kunci : Mangifera casturi Kosterm, antioksidan , fraksi etil asetat, toksisitas, LD 50 , inflamasi

## ABSTRACT
The  kasturi  plant  (Mangifera  casturi Kosterm )  derived  from  the  genus Mangifera, has a compound that can be utilized in the treatment. The fraction of ethyl  acetate  from  methanol  extract  of  M.  casturi  fruit  contains  phenolic compounds  such  as  flavonoids  and  tannins  with  very  strong  of  antioxidant activity.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  ethyl  acetate fraction  of  M.  casturi  on  acute  toxicity,  macroscopic  and  microscopic  organ
picture  of  male  rat  heart.  This  study  used  a  complete  randomized  experimental design  method  in  the  laboratory.  Research  on  the  effect  of  fractionation  of  ethyl acetate of M. casturi fruit in 4 test groups and 1 control group on acute toxicity and  histology  of  the  heart  of  male  white  rat  using  qualitative  laboratory examination by observing the number of mouse deaths, macroscopic picture and microscopic picture of cardiac organ after giving fraction the ethyl acetate of M. casturi  and  the  quantitative  examination  of  LD 50 .  Each  group  consisted  of  5 animals  given  treatment  once  for  14  days,  after  which  the  mouse  was  dissected and the heart organ was taken to be observed. LD 50 obtained for 2290.867 mg / kgBB. The result of analysis using Kruskal Wallis test showed that the fraction of ethyl acetate of kasturi fruit did not differ significantly between control group and treatment  (p>  0.05)  at  mouse  heart  volume.  All  treatment  groups  did  not  show signs or inflammatory conditions, so it can be concluded that the fraction of ethyl acetate of M. casturi did not give the effect of inflammation in mouse heart organ.
Keywords:  Mangifera  casturi Kosterm, fractionation  of  ethyl  acetate , toxicity , LD 50 , inflamation

## PENDAHULUAN
Genus Mangifera yang
merupakan bagian dari famili
Anacardiaceae telah menarik perhatian dalam bidang biokimia dan farmakologi  dalam  beberapa  tahun terakhir  (Amien et  al., 2015).
Tumbuhan kasturi ( Mangifera casturi Kosterm)  yang  juga  berasal dari  genus Mangifer a,  mempunyai senyawa  yang  memiliki  aktifitas antioksidan.  Fraksi  etil  asetat  dari buah M.  casturi terdapat  senyawa fenolik  seperti  flavonoid,  tanin, triterpenoid dan polifenol (Sutomo et al., 2014,  Tanaya et  al., 2015).
Secara in vitro, flavonoid merupakan inhibitor yang kuat terhadap peroksidasi  lipid,  sebagai  penangkap
spesies  oksigen  atau  nitrogen  yang reaktif, dan juga mampu menghambat aktivitas enzim
lipooksigenase  dan  siklooksigenase (Halliwell  and  Gutteridge,  2000). Potensi aktifitas antioksidan buah M. casturi dapat  mencegah  penyakit yang  diakibatkan  oleh  radikal  bebas. Penggunaan  fraksi  etil  asetat  masih perlu  dilakukan  pengujian  untuk memastikan  adanya  efek  samping maupun toksisitasnya terhadap organ jantung.  Langkah  pertama  yang harus  dilakukan  untuk  mengevaluasi dan  penafsiran  sifat  toksik  suatu bahan  adalah  uji  toksisitas  akut (Milton, 1991).
Berdasarkan keterangan tersebut,  perlu  dilakukan  penelitian
mengenai toksisitas akut dan histopatologi  pada  organ  jantung setelah  pemberian  fraksi  etil  asetat buah M.  casturi .  Pengamatan  efek toksik  yang  dapat  timbul  dilihat  dari Lethal  Dose (LD 50 )  dan  pengamatan histopatologi  organ  jantung  tikus putih  jantan.  Adanya  data  uji toksisitas  akut  diharapkan  dapat memberikan  batas  aman  konsumsi fraksi etil asetat buah M. casturi dan dapat menjadi acuan dalam
pengembangan  obat  tradisional  dari buah M. casturi .

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  ialah  blender,  botol minum hewan, corong, kaca penutup, kaca  objek,  kandang  tikus, rotary vaccum evaporator (Heidolph), mikroskop cahaya (olympus), mikrotom,  penjepit  kayu,  pinset, pipet  tetes,  pisau  bedah,  seperangkat alat-alat  gelas,  spuit  injeksi  5  mL, toples,  timbangan  analitik  (Ohaus), wadah bius, dan water bath
(Memmert), oven (Finco Inc) . Bahan yang  digunakan  pada  penelitian  ini ialah alkohol, alluminium foil,
aquadest,  buah M.  casturi Kosterm, etanol 96%, eter, etil asetat, formalin, kertas  saring,  Na-CMC,  paraffin liquid,  pewarna  hematoksilin  dan eosin, dan xylol.

## Subjek Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan hewan  uji  tikus  putih  jantan  galur wistar dengan berat 210-350 g, umur 2-4  bulan,  kondisi  fisik  sehat  secara fisiologi,  tidak  ada  abnormalitas anatomi.
Penyiapan  Simplisia,  Ekstraksi dan Fraksinasi Buah M. casturi
Buah M.  casturi diperoleh  dari Kota  Martapura,  Kabupaten  Banjar, Kalimantan  Selatan.  Buah yang sudah dicuci dipisahkan antara daging  buah  dan  bijinya,  kemudian daging  buah  dikeringkan  dengan oven  bersuhu  ±60˚C.  Simplisia dihaluskan  dengan  blender  dan diayak untuk menyeragamkan ukuran  partikel  serbuk.  Serbuk  buah ditimbang sebanyak 1000 g kemudian  diekstraksi  menggunakan pelarut  etanol  96%  dengan  metode maserasi. Ekstraksi dilakukan selama 5  ×  24  jam  dengan  menggunakan maserator  dan  setiap  24  jam  larutan disaring  serta  diganti  dengan  pelarut
yang  baru.  Ekstrak M.  casturi yang sudah  diuapkan  ditimbang  sebanyak 15  g  dan  disuspensikan  dalam aquadest  (1:2)  lalu  diaduk  hingga homogen.  Campuran  dimasukkan  ke corong pisah dan ditambahkan pelarut n -heksana  sebanyak  50  mL. Proses  fraksinasi  dilakukan  dengan menggojok  ekstrak  buah M.  casturi
dengan  pelarut n-heksan hingga terbentuk  2  lapisan,  sambil  sesekali keran  dibuka  untuk  mengeluarkan gas  yang  dihasilkan  pada  saat penggojokan.  Fraksinasi  dilakukan hingga dinyatakan selesai atau pelarut  sudah  bening.  Fraksi  air difraksinasi  kembali  menggunakan pelarut etil asetat, dengan memasukkan  fraksi  air  ke  corong pisah  dan  dicampurkan  dengan  50 mL  pelarut  etil  astetat.  Digojog  dan ditunggu  hingga  terbentuk  2  lapisan, dipisahkan  antara  fraksi  etil  asetat dan  fraksi  air.  Kemudian,  fraksi  etil asetat  diuapkan  hingga  didapatkan fraksi kental.
Pembuatan Larutan Na-CMC
0.5%
Larutan  Na-CMC  0,5%  dibuat dengan  menimbang  500  mg  Na- CMC  dan  dimasukkan  ke  dalam
gelas  beaker  yang  mengandung  air panas  sedikit  demi  sedikit  sambil diaduk hingga
homogen.
Dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL lalu ditambahkan aquadest hingga tanda batas. Larutan Na-CMC yang  berada  di  dalam  labu  ukur kemudian  digojog  hingga  larutan homogen.
Pembuatan  Suspensi  Fraksi  Etil Asetat Buah M. casturi
Fraksi  etil  asetat  sebanyak  50 mg  disuspensikan  dalam  Na-CMC 0,5%  sampai  10  mL,  sehingga diperoleh fraksi dengan kandungan 5 mg/mL.  Untuk  setiap  dosis  dibuat suspensi  dengan  cara  yang  sama seperti sebelumnya. Suspensi disimpan  pada  tempat  yang  tertutup dan  terhindar  dari  sinar  matahari langsung.

## Tahap Pengujian Toksisitas Akut
Pemberian  dosis  fraksi  etil asetat buah M. casturi adalah sebagai berikut :
a) Kelompok 1  : diberikan kontrol negatif  (Na-CMC 0,5% 2 mL/kg)
b) Kelompok 2  : diberikan  dosis  5
mg/kgBB
c) Kelompok 3  : diberikan  dosis  50
mg/kgBB
d) Kelompok 4  : diberikan dosis 300
mg/kgBB e) Kelompok 5  : diberikan dosis 2000 mg/kgBB
Tikus  dipuasakan  selama  18  jam sebelum  diberi  perlakuan.  Kemudian tikus ditimbang dan diberikan sediaan  dengan  sonde  dalam  dosis tunggal.  Pemberian  pakan  dilakukan kembali  4  jam  setelah  pemberian. Pengamatan yang dilakukan terhadap tikus berupa tremor, kejang, salivasi, diare, tidur dan koma yang dilakukan setiap hari selama 14 hari. Hewan uji yang sekarat dikorbankan dan dimasukkan  ke  dalam  perhitungan hewan  yang  mati  serta  tikus  secara rutin ditimbang 2 kali dalam
seminggu (BPOM, 2014). Pemeriksaan Histopatologi

## Jantung
Tikus  diberi  perlakuan  pada hari  pertama  dengan  memberikan fraksi  etil  asetat  buah M.  casturi kemudian  diamati  selama  14  hari , jika  terdapat  tikus  yang  mati  maka dibedah dan ditimbang organ jantung. Sedangkan tikus yang masih bertahan  hidup  pada  hari  ke-15
dibedah  untuk  ditimbang  dan  dicek histopatologi  organ  jantung  yang dibandingkan dengan kontrol negatif. Pengamatan dilakukan secara makroskopik dan mikroskopik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Pembuatan  Ekstrak  Etanol dan  Fraksi  Etil  Asetat  Buah  M.

## casturi
Serbuk  simplisia  buah M. casturi dimaserasi menggunakan etanol  96%  dengan  perbandingan 1:2,5  untuk  menarik  senyawa  yang ada dalam sampel. Ekstraksi dilakukan  menggunakan  wadah  kaca yang  tertutup  untuk  menghindari rusaknya  senyawa  akibat  oksidasi. Ekstrak  cair  diuapkan  pelarutnya dengan  rotary  evaporator  pada  suhu 55ºC  sehingga  rusaknya  senyawa akibat  panas  yang  berlebihan  bisa dihindari.  Ekstrak  kental  dihasilkan sebanyak 33,37%.
Fraksinasi dilakukan bertingkat berdasarkan kepolaran pelarut. Tahap pertama  menggunakan  pelarut n - heksana  untuk  menarik  senyawa dengan  kepolaran  rendah,  seperti golongan terpenoid, minyak, klorofil, maupun lemak. Tahap kedua
dilakukan  fraksinasi  menggunakan pelarut  etil  asetat  untuk  menarik senyawa  golongan  fenolik,  tanin, polifenol, glikosida, flavonoid, maupun  senyawa  semipolar  lainnya (Tensiska & Yudiastuti, 2007). Hasil fraksinasi  menggunakan  etil  asetat didapatkan  fraksi  kental  sebanyak
7,96% dengan warna kuning kecoklatan.  Sutomo et  al .,  (2014) melaporkan  bahwa  fraksi  etil  asetat memiliki  aktifitas  antioksidan  kuat dengan nilai IC 50 sebesar 6,0 ppm.
Hasil Pengamatan Toksisitas Akut Pada umumnya hewan uji yang diberi  perlakukan  sampel  tidak mengalami perubahan yang signifikan.  Beberapa  parameter  yang diamati  terhadap  hewan  uji  adalah munculnya  tremor,  kejang,  salivasi, diare,  tidur  dan  koma  yang  yang diamati  setiap  hari  selama  14  hari. Tikus uji yang diamati tidak
menunjukkan perbedaan dengan kelompok  kontrol,  tidak  ada  gejala toksik  yang  teramati,  feses  yang normal,  tidak  terjadi  salivasi,  kejang dan  hiperaktivitas  selama  14  hari pengamatan (Tabel 1).
Peningkatan  bobot  badan  tikus pada  semua  tikus  uji  menunjukkan
bahwa tikus tidak mengalami gangguan dalam metabolisme, pakan tercerna  dengan  baik  dan  berefek pada kenaikan bobot tikus
(Vinandhita, 2008). Berdasarkan pengolahan  data  selisih  berat  badan tikus  dengan  metode Shapiro-Wilk , sebaran data memiliki distribusi yang normal.  Homogenitas  data  dianalisis dengan metode Levene test menghasilkan data yang tidak homogen  dengan  nilai  p  sebesar 0,003  (p  <  0,05).  Tidak  ada perbedaan bermakna antara kenaikan berat  badan  dari  kelompok  2  dengan kontrol.  Sediaan  suspensi  fraksi  etil asetat buah M. casturi tidak menyebabkan  kematian  pada  tikus selama  14  hari  pengamatan.  Hasil perhitungan  nilai  LD 50 melalui  % terkoreksi untuk 0% kematian didapatkan nilai LD 50 sebessar 2.290,867 mg/kgBB.
Tabel 1. Hasil pengamatan toksisitas akut
Hasil Pembedahan dan Pengamatan  Makroskopis  Organ Jantung
Tabel 2. Hasil pengamatan makroskopik jantung
Tikus  dibedah  pada  hari  ke-15 pengamatan, dilakukan secara vertikal  mulai  daerah  abdomen posterior  menuju  anterior  dengan membuka  daerah  rongga  perut  dan rongga  dada  (Bhara,  2009).  Organ
jantung  yang  telah  diambil  diamati secara makroskopis (Tabel 2).
Pengamatan fisik yang dilakukan pada organ jantung meliputi warna, pemukaan dan volumenya.  Jantung  yang  normal memiliki  warna  merah  kecoklatan dengan  permukaan  halus,  sedangkan jantung  yang  tidak  normal  akan mengalami  perubahan  warna  dan memiliki  permukaan  yang  berbintik (Robbins  &  Kumar,  1992).  Hasil pengamatan  organ  jantung  pada kelompok  kontrol  dan  uji  memiliki warna merah kecoklatan dan
permukaan  yang  halus  (Gambar  1) hal  ini  sesuai  dengan  gambaran jantung  normal  (Herman,  2009). Hasil  pengolahan  data  volume  organ jantung  secara  deskriptif  berupa volume maksimal dari organ jantung sebesar 1,9 mL dan volume minimalnya  adalah  0,8  mL  dengan rata-rata sebesar 1,188. Hasil statistik dengan  menggunakan Saphiro-Wilk dan Levene  test menyatakan  bahwa data  memiliki  sebaran  yang  normal dan data memiliki homogenitas yang normal  yaitu  sebesar  0,511  dengan taraf kepercayaan 95%. Hasil perbandingan  kelompok  uji  dengan
kelompok  kontrol  tidak  berbeda bermakna dengan nilai p > 0,05.
Gambar 1. Pengamatan Makroskopis Organ Jantung. Keterangan : A; Kontrol Na-CMC 0,5% berwarna merah kecoklatan, B;
Dosis 5 mg/kgBB berwarna merah kecoklatan, C; Dosis 50 mg/kgBB berwarna merah pucat, D; Dosis 300 mg/kgBB berwarna merah
kecoklatan, dan E; Dosis 2000 mg/kgBB berwarna merah kecoklatan Hasil Pembuatan Preparat Histopatologi Organ Jantung Organ  jantung  setelah  diambil dari tikus kemudian difiksasi menggunakan larutan buffer formalin 10% setelah terlebih dahulu dibersihkan  dengan  larutan  NaCl 0,9%. Organ jantung difiksasi selama ±24  jam  untuk  mengawetkan  dan mengeraskan  jantung.  Selanjutnya organ didehidrasi menggunakan
larutan alkohol bertingkat dari konsentrasi rendah
menuju konsentrasi  yang  tinggi  (70%,  80%, 90%,  dan  absolut)  yang  berfungsi
untuk menarik cairan yang berada di dalam  jaringan.  Jantung  yang  sudah dijernihkan  selanjutnya  diinfiltrasi menggunakan paraffin yang berfungsi untuk memudahkan pengerjaan pembuatan blok preparat. Blocking/embedding dilakukan dengan  meletakkan  organ  jantung pada cetakan yang berisi paraffin cair dan ditunggu hingga paraffin mengering  dan  padat.  Blok  paraffin kemudian  dipotong  menggunakan mikrotom  menjadi  potongan  setebal 0,3-0,5  mm  dan  ditempelkan  pada kaca  objek.  Irisan  yang  tepat  dapat mempermudah  dalam  pengamatan, sehingga  secara  mikroskopik  sel dapat teramati dengan baik. Pewarnaan  pada  jaringan  yang  telah dipotong dilakukan dengan Hematoxyllin  Eosin (HE).  Preparat yang  sudah  diwarnai  kemudian diamati dengan menggunakan mikroskop  perbesaran  400×  dan diamati secara kualitatif untuk melihat  inflamasi  pada  otot  jantung (Shukla et al ., 1999).

## Pengamatan  Mikroskopis  Organ Jantung
Preparat jaringan jantung diamati  pada  perbesaran  400×  dan
diberikan  penilaian  secara  kualitatif terjadinya  inflamasi  pada  jaringan otot jantung tikus. Gambaran mikroskopis  jantung  setelah  diamati dapat dilihat pada Gambar 2 berikut.
Gambar 2. Gambaran mikroskopis jantung
Semua  kelompok  perlakuan tidak menunjukkan tanda atau kondisi  inflamasi  dan  kondisi  sel tetap normal sehingga dapat disimpulkan bahwa pemberian fraksi etil  asetat  buah M.  casturi tidak memberikan pengaruh berupa inflamasi  pada  organ  jantung  tikus. Hasil  yang  didapatkan  dari  data toksisitas  akut  dengan  parameter berat  badan,  ekskresi  dan  perilaku tidak  menunjukkan  gejala  toksik. Data  diperkuat  dengan  gambaran makroskopis dan mikroskopis jantung  yang  tidak  menunjukkan perbedaan bermakna
antara kelompok  kontrol  dan  uji,  sehingga
dapat  dikatakan  bahwa  pemberian fraksi  etil  asetat M.  casturi tidak menyebabkan  ketoksikan  akut  pada tikus.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian yang telah dilakukan, maka diperoleh kesimpulan  bahwa  tidak  terdapat pengaruh  ketoksikan  dari  fraksi  etil asetat  buah M.  casturi pada  tikus dan  LD 50 yang  didapat  sebesar 2290,867  mg/kgBB.  Tidak  terdapat perubahan  gambaran  makroskopis pada  organ  jantung  yaitu  warna merah kecoklatan dengan permukaan licin  dan  volume  yang  tidak  berbeda bermakna antara kelompok uji dengan  kelompok  kontrol.  Secara mikroskopik  tidak terdapat  inflamasi pada organ jantung setelah pemberian  fraksi  etil  asetat  buah M. casturi .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada Ristekdikti  melalui  hibah  PTUPT serta  semua  pihak  yang  membantu dalam penyelesaian penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amien, A. I., R. Sohair, B. Fahmy, F.
M.  Abd-Elgleel,  &  S.  M. Elaskalany. 2015. Renoprotective Effect Of Mangifera Indica Polysaccharides  and  Silymarin Against Cyclophosphamide Toxicity  In  Rats. The  Journal of Basic & Applied Zoology.72
: 154–162.
Bhara M. 2009. Pengaruh Pemberian Kopi  Dosis  Bertingkat  Peroral 30  Hari  terhadap  Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Wistar. Laporan  Akhir  Karya Tulis Ilmiah.
Universitas Diponegoro.
BPOM  RI.  2014. Pedoman  Uji
Toksisitas  Nonklinik  Secara  In Vivo. Badan  Pengawas  Obat dan Makanan
Republik Indonesia, Jakarta.
Halliwel,  B.,  &  Guteridge,  J.  M.  C. 2000. Free  Radical  in  Biology and  Medicine, Ed  4 th .  Oxford University Press, New York.
Herman,  R.,  2009,  Buku  ajar Fisiologi Jantung, Penerbit Buku  Kedokteran  EGC,  pp.  1, 2, 9, 10.
Milton,  J.  1991. Statical  Methods  in the Biology and Health Sciences. New York Press, New York.
Robbins,  S.  L.  &  Kumar,  V.  1992. Buku  Ajar  Patologi. Penerbit
EGC, Jakarta.
Shukla,  A.,  A.M.  Rasik,  G.K.  Jain, R.  Shankar,  D.K.  Kulshrestha,
& B.N. Dhawan. 1999. In vitro and In  vivo Wound  Healing
Activity of Asiaticoside Isolated from Centella asiatica . Journal of
Ethnopharmacology . 65 : 1–11.
Sutomo., S. Wahyuono, E.P.
Setyowati,  S.  Rianto,  &  A. Yuswanto.  2014.  Antioxidant Activity  Assay  of  Extracts  and Active  Fractions  of  Kasturi fruit ( Mangifera casturi Kosterm.) Using 1, 1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl Method . Journal of Natural Products . 7 :
124-130.
Tanaya,  V.,  R.  Rurini,  &  Suratmo. 2015.  Fraksi  Semi  Polar  dari Daun  Mangga  Kasturi. Kimia Student Journal. 1 (1): 778-784. Tensiska,  M.  &  S.  O.  N.  Yudiastuti.
2007.  Pengaruh  Jenis  Pelarut Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Isoflavon  dari  Ampas  Tahu.
Laporan Penelitian.
Vinandhita,  W.  2008.  Gambaran Histopatologi  Hati  dan  Ginjal
Tikus  yang  Diberi  Insektisida ( Metofluthrin 0,01%, Impothrin  0,04%,  Permethrin 0,15%) pada  Uji  Toksisitas Akut. Skripsi Institut Pertanian Bogor, Bogor.