186 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan
Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
PENGARUH MEDIA TERHADAP PERTUMBUHAN ISOLAT ACTINOMYCETES KODE AL35 SERTA OPTIMASI PRODUKSI METABOLIT ANTIBAKTERI BERDASARKAN WAKTU FERMENTASI DAN pH
INFLUENCE OF MEDIA TO ISOLATE GROWTH OF ACTINOMYCETES CODE AL35 AND OPTIMIZATION OF ANTIBACTERY METABOLITE PRODUCTION BASED ON FERMENTATION TIME AND pH
Sabrina Wulandari, Nanik Sulistyani
Fakultas Farmasi, Universitas Ahmad Dahlan Email: naniksulistyani@gmail.com

## ABSTRAK
Actinomycetes  merupakan  salah  satu  mikroorganisme  yang  dapat  menghasilkan metabolit  sekunder  antara  lain  antibiotik.  Isolat  Actinomycetes  (AL35)  telah diisolasi  dari  rizosfer  tanaman  padi.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  pengaruh  media  terhadap  pertumbuhan  isolat  AL35  serta  optimasi produksi  metabolit  antibakteri  berdasarkan  waktu  fermentasi  dan  pH.  Media pertumbuhan yang digunakan adalah ISP 1, ISP 2, ISP 3, ISP 4, ISP 5 dan media SNA.  Pertumbuhan  isolat  diamati  berdasarkan  miselium  udara  dan  miselium vegetatif. Optimasi waktu produksi metabolit antibakteri dilakukan dengan waktu fermentasi  hari ke 1 hingga hari ke 14. Optimasi dilakukan pada pH 5, 6, 7, 8, 9 dan  10  dengan  waktu  inkubasi  14  hari.  Metode  uji  aktivitas  antibakteri    adalah metode sumuran.    Parameter  yang  diukur adalah  diameter  zona hambat  terhadap Staphylococcus  aureus dan Eschericia  coli di  sekitar  sumuran.  Profil  optimasi produksi  metabolit  sekunder  berdasarkan  pH  dianalisis  dengan  membuat  grafik hubungan  antara  pH  dan  diameter  zona  hambat,  sedangkan  berdasarkan  waktu fermentasi,  dibuat  grafik  hubungan  antara  waktu  fermentasi  dan  zona  hambat. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  AL35  dapat  tumbuh  pada  semua media  yang  digunakan  dengan  tingkat  kesuburan  yang  berbeda-beda.  Cairan kultur isolat AL35 dapat menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli. Media yang  menghasilkan  tingkat  kesuburan  pertumbuhan  isolat  AL35  berturut-turut dari yang paling subur adalah media ISP4 lalu ISP5, SNA, ISP2, ISP3, dan ISP1. Waktu  fermentasi  untuk  produksi  metabolit  antibakteri  adalah  hari  ke  2, sedangkan pH optimal adalah pH 9 berdasarkan aktivitas terhadap S. aureus dan pH 6 terhadap E. coli .
Kata  kunci  : Isolat  Actinomycetes  AL35,  metabolit  sekunder,  media,  waktu fermentasi, pH
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 186-198

## ABSTRACT
Actinomycetes  is  one  of  the  microorganisms  that  can  produce  secondary metabolites such as antibiotics. An actinomycetes isolate (AL35) has been isolated from the rhizosphere of rice plants. The purpose of this study was to determine the effect  of  media  on  growth  of  AL35  isolate  and  optimization  of  antibacterial metabolite  production  based  on  fermentation  time  and  pH.  The  growth  medium used  were  ISP  1,  ISP  2,  ISP  3,  ISP  4,  ISP  5  and  SNA.  Growth  of  isolates  was observed  based  on  aerial  mycelium  and  vegetative  mycelium.  Optimization  of antibacterial metabolite production time was done by fermentation time of day 1 until  day  14.  Optimization  was  carried  out  at  pH  5,  6,  7,  8,  9  and  10  with incubation  time  of  14  days.  The  antibacterial  activity  test  method  used  was  the well diffussion method. The parameter measured was the inhibitory zone diameter against  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  around  the  well.  The optimization  profile  of  secondary  metabolite  production  based  on  pH  was analyzed  using  a  graphic  of  the  relation  between  pH  and  inhibitory  zone diameter. Meanwhile based on the fermentation time, a graph of the relationship between  fermentation  time  and  inhibit  zone  was  made.  The  results  showed  that AL35 isolate  can grow on all  media  used with different  fertility rates. The  broth culture  of  AL35  isolates  can  inhibit  the  growth  of  S.  aureus  and  E.  coli.  The medium  that  produced  abundant  growth  rates  of  AL35  isolate  from  the  most abundant  were  ISP4  media  and  ISP5,  SNA,  ISP2,  ISP3,  and  ISP1.  The fermentation  time  for  antibacterial  metabolite  production  was  day  2,  while  the optimal pH was pH 9 based on activity against S. aureus and pH 6 against E. coli.

## Keywords :  Actinomycetes AL35, antibacterial metabolite, medium, fermentation
time, pH

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  merupakan  salah  satu  permasalahan  dalam  bidang kesehatan  yang  dari  waktu  ke  waktu  terus  berkembang.  Infeksi  merupakan penyakit menular disebabkan oleh berbagai mikroorganisme seperti virus, bakteri, jamur, dan protozoa. Bakteri yang dapat menyebabkan infeksi antara lain (Isnaini, 2010) adalah Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Escherichia coli sering menyebabkan  infeksi  saluran  kemih,  diare  dan  penyakit  lain.  Salah  satu penyembuhannya dengan antibiotik  (Jawetz et  al ., 2001). Staphylococcus aureus merupakan  contoh  bakteri  penyebab  penyakit  infeksi  yang  terutama  dapat menimbulkan penyakit pada manusia.
Penyakit  infeksi  tersebut  diatasi  dengan  antibiotik  tetapi  sering  terkendala oleh  adanya  faktor  resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik  yang  telah  ada.  Oleh
188 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan
Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
sebab itu sangat  diperlukan eksplorasi  untuk  mendapatkan mikroorganisme  yang menghasilkan  antibiotik  dengan  potensi  lebih  tinggi  dalam  mematikan  penyebab penyakit, misalnya dari rizosfer (Rahayu, 2007).
Salah  satu  sumber  potensial  penghasil  antibiotik  adalah  Actinomycetes. Actinomycetes  termasuk  bakteri  yang  berbentuk  batang,  gram  positif,  bersifat anaerobik  atau  fakultatif.  Struktur  Actinomycetes  berupa  filament  lembut  yang sering disebut hifa atau miselia, sebagaimana yang terdapat pada fungi, memiliki konidia  pada  hifa  yang  menegak.  Actinomycetes  merupakan  bakteri  yang bereproduksi  dengan  pembelahan  sel,  rentan  terhadap  penicilin  tetapi  tahan terhadap zat antifungi (Rollin and Joseph, 2000).
Apriliasari  (2012)  telah  mengisolasi  Actinomycetes  dari  tanah  sawah  padi yang  berada  di  desa  Pilahan  Kidul,  Rejowinangun,  kecamatan  Kotagede, Yogyakarta.  Dari  penelitian  ini  ditemukan  12  isolat  yang  memiliki  aktivitas menghambat bakteri uji, salah satunya adalah isolat AL35. Untuk dapat dilakukan proses  isolasi  antibiotik  secara  efektif,  maka  perlu  dilakukan  berbagai  optimasi kondisi  fermentasi.  Media,  waktu  dan  pH  fermentasi  merupakan  faktor  penting yang  harus  dioptimasi.  Produksi  antibotik  yang  optimal  dapat  diperoleh  dengan memperhatikan  faktor  waktu  fermentasi,  mengatur  pH  dan  media  pertumbuhan yang  baik.  pH  berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim  yang  memproduksi antibiotik, sedangkan waktu fermentasi dan media berpengaruh terhadap fase-fase pertumbuhan  mikroorganisme  (Sulistiyani,  2006).  Media  mengandung  nutrisi- nutrisi  yang  akan  mempengaruhi  pertumbuhan  isolat,  dalam  penelitian  ini dilakukan optimasi media pertumbuhan dengan media ISP 1, ISP 2, ISP 3, ISP 4, ISP  5,  dan  SNA,  media  ini  digunakan  karena  mempunyai  perbedaan  komposisi yang akan mempengaruhi pertumbuhan isolat tersebut. Hasil penelitian Apriliasari (2012)  belum  mencakup  proses  optimasi-optimasi  tersebut.  Oleh  karena  itu, penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  mengetahui  pengaruh  media  terhadap pertumbuhan isolat  Actinomycetes kode  AL35 serta optimasi produksi  metabolit antibakteri berdasarkan waktu fermentasi dan pH.
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 186-198

## METODE PENELITIAN
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi peralatan gelas, cork borer, magnet stirer, autoclave , lampu spritus, ruangan LAF, blue tip, yellow tip , mikropipet, eppendorf , sentrifugasi,  inkubator. Bahan utama  dalam penelitian ini adalah  isolat  Actinomycetes  kode  AL35.  Media  cair  untuk  menumbuhkan  isolat Actinomycetes  adalah    Starch  Nitrat  Broth  (SNB).  Mikroorganisme  uji  yang digunakan  adalah Staphylococcus  aureus ATCC  25923 dan Escherichia  coli ATCC  25922 . Media  uji  aktivitas  antibakteri  yang  digunakan  adalah BHI, Mueller Hinton, dan TSA. Bahan untuk media pertumbuhan adalah media ISP 1, ISP 2, ISP 3, ISP 4, ISP 5, dan media SNA.
Jalannya Penelitian
A. Pembuatan Kultur Starter
Pembuatan  kultur  starter  dilakukan  dengan  memasukkan  ¼  plate  isolat Actinomycetes kode AL35 ke dalam erlenmeyer yang berisi media SNB sebanyak 50 mL  yang sudah disterilkan.  Kultur  diinkubasi pada suhu kamar selama 5 hari dengan pengadukan menggunakan magnetic stirer .
B. Preparasi Kultur Uji
Preparasi kultur uji dilakukan dengan  memasukkan 10 mL starter ke dalam erlenmeyer  yang  berisi  100  mL  media  SNB  yang  sudah  disterilkan.  Selanjutnya diinkubasi  selama  14  hari  dengan  pengadukan  menggunakan magnetic  stirer . Selama  inkubasi,  setiap  hari  diambil  1  mL  kultur  dan  dimasukkan  ke  dalam tabung eppendorf dan diberi label, lalu disimpan dalam freezer . Dalam melakukan preparasi kultur uji ini dilakukan di ruangan LAF untuk meminimalkan terjadinya kontaminasi.
C. Penyiapan Supernatan Cairan Kultur
Hasil  kultur  uji  yang  diambil  setiap  hari  selama  14  hari  dikeluarkan  dari freezer dan disimpan di kulkas sampai mencair. Setelah mencair kultur uji yang di simpan  dalam eppendorf disentrifuse,  setelah  terpisah  antara  supernatant  dengan endapan,  supernatant  dimasukkan  dalam  tabung eppendorf yang  baru  dan disimpan dalam freezer . Supernatan ini disebut sampel cairan kultur.
190 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
D. Uji  Aktivitas  Cairan  Kultur  Isolat  Actinomycetes  Kode  AL35  terhadap Bakteri Uji
Uji  aktivitas  cairan  kultur  isolat  AL35  dilakukan    terhadap Staphyloccus aureus dan Eschericia  coli .  Suspensi  bakteri  uji dioleskan di  atas media Mueller Hinton  Agar. Setelah itu, media dibuat sumuran menggunakan cork borer sesuai dengan  pola  yang  sudah  dibuat.  Selanjutnya  setiap  lubang  sumuran  diisi  dengan cairan kultur dari isolat kode AL35 kurang lebih 75 µL lalu dimasukan ke dalam kulkas  selama  2  jam,  kemudian  diinkubasi  selama  18-24  jam  pada  suhu  37˚C. Untuk  melihat  aktivitas  dari  cairan  kultur  isolat  kode  AL35  ditunjukkan  dengan adanya zona jernih di sekitar sumuran.
E. Optimasi produksi metabolit antibakteri berdasarkan waktu fermentasi  isolat Actinomycetes kode AL35
Optimasi  produksi  metabolit  antibakteri  berdasarkan  waktu  fermentasi dilakukan dengan cara menguji aktivitas antibakteri cairan kultur hari ke 1 hingga hari  ke  14  terhadap S.  aureus dan E.  coli .  Media  Mueller  Hinton  diolesi  dengan suspensi  bakteri  uji  secara  merata.  Setelah  itu  media  Mueller  Hinton  dibuat sumuran  dengan  menggunakan cork  borer yang  memiliki  diameter  0,6  cm. Selanjutnya,  setiap  lubang  sumuran  diisi  dengan  cairan  kultur  kurang  lebih sebanyak 75 µL sesuai dengan urutan harinya. Setelah semua sumuran diisi media dimasukkan ke dalam kulkas selama 2 jam, kemudian diinkubasi pada suhu 37˚C selama  18-24  jam.  Setelah  24  jam  zona  jernih  di  sekitar  sumuran  diamati  dan diukur diameternya.
F. Optimasi Produksi Metabolit Antibakteri Berdasarkan pH
Optimasi  dilakukan  dengan  cara  memasukkan  2,5  mL  starter  yang  berasal dari ¼ plate isolat kode Actinomycetes AL35 ke dalam erlenmeyer yang berisi 25 mL media SNB yang telah disterilkan dan diatur pH nya, yaitu pada pH  5 sampai 10,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  5  hari  dengan  penggojogan. Media  yang  digunakan  untuk  uji  ini  adalah  media  Mueller  Hinton  yang sebelumnya  sudah  diolesi  dengan  suspensi  bakteri  yang  akan  diuji.  Setelah  itu media  Mueller  Hinton  dibuat  sumuran  dengan  menggunakan  alat  pembolong ( cork borer ) sebanyak 6  lubang sumuran. Kemudian setiap  lubang  sumuran diisi
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 186-198
cairan  kultur  kurang  lebih  sebanyak  75  µL.  Setelah  itu  media  dimasukkan  ke dalam  kulkas  selama  2  jam,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  18-24 jam.
G. Uji Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan Isolat Actinomycetes Kode AL35
Isolat Actinomycetes kode AL35 ditumbuhkan dengan cara digoreskan pada media  ISP  1  ( tryptone-yeast  extract  broth ),  ISP  2  ( yeast  extract-malt  extract agar ), ISP 3 (oatmeal agar), ISP 4 ( Inorganic salts-starch agar ), ISP 5 ( Glycerol- asparagine agar ), dan SNA ( Starch Nitrat Agar ) selama 10 hari pada suhu kamar. Pengamatan warna miselium dilakukan dengan mengamati secara visual miselium udara  dan  miselium  vegetatif,  diamati  dengan  cara  membalikkan  petri  untuk melihat  pembentukan reverse  side  pigment .  Pengamatan  pigmen  terlarut dilakukan dengan melihat adanya pembentukan warna terdifusi media.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Kultur Starter
Kultur  starter  diinkubasi  selama  5  hari  dengan  pengadukan  menggunakan magnetic  stirer .  Terlihat  perbedaan  kultur  pada  hari  ke  tiga  dan  hari  ke  lima inkubasi,  pada  hari  ke  tiga  media  kultur  masih  terlihat  bening  dan  jumlah  pelet masih  sedikit,  sedangkan  pada  hari  ke  lima  warna  media  berubah  menjadi kecoklatan dan jumlah pelet semakin banyak.
B. Penyiapan Supernatan Cairan Kultur
Preparasi  kultur  uji  dilakukan  di  ruang  LAF  ( Laminai  Air  Flow )  untuk mencegah  terjadinya  kontaminasi  yang  dapat  menyebabkan  mikroorganisme dalam  kultur  mati.  Kultur  starter  dipindahkan  ke  dalam  media  baru  bertujuan untuk  peremajaan  media,  karena  media  yang  baru  mengandung  nutrisi  yang banyak,  sehingga  mendukung  perkembangan  bakteri  lebih  baik.  Selanjutnya kultur diinkubasi selama 14 hari dan setiap hari kultur tersebut diambil 1 mL lalu disimpan  dalam freezer. Warna  kultur  selama  proses  inkubasi  mengalami perubahan, yaitu dari warna coklat muda sampai coklat tua dan jumlah pelet yang semakin  banyak  sampai  inkubasi  hari  ke-14,  keadaan  ini  membuktikan  bahwa Actinomycetes  mengeluarkan  pigmen  warna  yang  mampu  berdifusi  ke  dalam media (Ambarwati & Trisnawati, 2009).
192 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
C. Uji  Aktivitas  Cairan  Kultur  Isolat  Actinomycetes  Kode  AL35  terhadap Mikroorganisme
Tujuan  dilakukan  uji  aktivitas  cairan  kultur  isolat  Actinomycetes  AL35 adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  dari  cairan  kultur  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Eschericia  coli. Uji  aktivitas  cairan  kultur  isolat Actinomycetes  kode  AL35  terhadap Staphylococcus  aureus memiliki  diameter zona  hambat  sebesar  26,5  mm  (termasuk  lubang  sumuran),  sedangkan  uji  pada Eschericia  coli diameter  zona  hambat  sebesar  20,75  mm  (termasuk  lubang sumuran).  Kedua  diameter  zona  hambat  tersebut  masuk  dalam  kategori  aktivitas penghambatan  sangat  kuat.  Dari  hasil  tersebut  dapat  diambil  kesimpulan  bahwa isolat  Actinomycetes  kode  AL35  dapat  menghambat  pertumbuhan  dari Stahpylococcus aureus dan Eschericia coli .
D. Optimasi  Waktu  Produksi  Metabolit  Sekunder  Isolat  Actinomycetes  Kode AL35
Optimasi  waktu  produksi  metabolit  sekunder  dapat  digunakan  untuk menentukan kapan waktu yang tepat untuk memproduksi metabolit sekunder yang optimal  sebagai  penghasil    antibiotik.  Optimasi  waktu  produksi  metabolit sekunder  dapat  ditentukan  dengan  membuat  grafik  hubungan  antara  waktu inkubasi (fermentasi) dengan diameter zona hambat.
Gambar 1 . Profil optimasi waktu produksi metabolit sekunder terhadap
Staphylococcus aureus
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 D iam e te r z o n a h am b at (m m ) Waktu fermentasi (hari) Zona hambat radikal Zona hambat iradikal
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 186-198
Hasil  pengukuran  zona  hambat  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus aureus menunjukkan bahwa hari ke-2 dan  ke-13 merupakan waktu  yang optimal untuk  produksi  metabolit  sekunder  sebagai  antibiotik,  karena  menunjukkan  zona hambatan yang paling besar daripada waktu inkubasi hari lainnya, pada hari ke-2 zona hambatan sebesar 19 mm dan pada hari ke-13 inkubasi, zona hambat sebesar 16  mm.  Profil  optimasi  waktu  produksi  metabolit  sekunder  terhadap Staphylococcus aureus dapat dilihat pada Gambar 1.
Pengukuran  zona  hambat  pada  pertumbuhan Escherichia  coli juga  sama, menunjukkan  bahwa  hari  ke-2  inkubasi  merupakan  waktu  yang  optimal  untuk memproduksi metabolit sekunder sebagai  antibiotik dengan zona hambat sebesar 18 mm. Hasil tersebut kemungkinan Actinomycetes kode AL35 memproduksi dua senyawa  antibiotik  yang  berbeda,  yang  disintesis  pada  awal  inkubasi  dan  pada akhir waktu inkubasi. Profil optimasi waktu produksi metabolit sekunder terhadap Eschericia coli dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Profil optimasi waktu produksi metabolit sekunder terhadap
Eschericia coli
E. Optimasi pH Produksi Metabolit Sekunder Isolat Actinomycetes Kode AL35
Optimasi pH dapat digunakan untuk mengetahui pada kisaran pH manakah isolat  Actinomycetes  kode  AL35  mampu  tumbuh  dan  menghasilkan  metabolit sekunder  sebagai  penghasil  antibiotik.  Banyak  komponen  yang  mampu
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 D iam e te r z o n a h am ab at (m m ) Waktu fermentasi (hari)
194 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan
Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
mempengaruhi  pertumbuhan  dan  produksi  senyawa  antimikroba,  salah  satunya adalah  pH.  pH  berperan  penting  dalam  reaksi  enzimatis  pembentukan  metabolit. pH  yang  optimum  dalam  pertumbuhan  memacu  aktivitas  produksi  bioaktif.  pH medium akan berpengaruh pada proses pembentukan dan kestabilan senyawa anti mikroba  yang  dihasilkan.  Walaupun  belum  jelas  meaknismenya,  pada  umumnya antibiotik  akan  terbentuk  pada  pH  antara  7-8,  sedang  pada  pH  yang  lebih  tinggi potensi antibiotik yang terbentuk akan terurai oleh suasana basa (Ulya, 2009).
Hasil  uji  menunjukkan  bahwa  pada  pH  9  merupakan  pH  yang  optimal  untuk penghambatan terhadap Staphylococcus aureus , diameter zona hambat sebesar 18 mm.  Profil  optimasi  pH  terhadap Staphylococcus  aureus dapat  dilihat  pada Gambar 3.
Gambar 3. Profil optimasi pH terhadap Staphylococcus aureus
Uji  terhadap Eschericia  coli menunjukkan  bahwa  pada  pH  6  adalah  pH optimum  untuk  penghambatan,  diameter  zona  hambat  sebesar  14  mm.  Profil optimasi pH terhadap Eschericia coli dapat dilihat pada Gambar 4. Perbedaan pH optimum  tersebut  kemungkinan  terjadi  karena  setiap  isolat  menghasilkan beberapa  anti  mikroba  yang  mempunyai  pH  optimal  berbeda  satu  dengan  yang lain.  Augustine et  al .  (2005)  juga  menyatakan  bahwa  perubahan  pH  pada  media produksi merangsang senyawa baru yang berpengaruh pada produksi antibiotik.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 5 6 7 8 9 10 D iam e te r zo n a h am b at (m m ) pH
Gambar 4. Profil optimasi pH terhadap Eschericia coli

## F. Optimasi Media Pertumbuhan Isolat Actinomycetes kode AL35
Optimasi  media  pertumbuhan  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh media sebagai sumber nutrisi untuk pertumbuhan isolat. Media pertumbuhan yang baik  merupakan  media  yang  mampu  menyediakan  sumber  karbon  dan  mineral- mineral  lain  yang  dibutuhkan  dalam  pertumbuhan  maupun  aktivitasnya  (Todar, 2007). Dalam uji ini dilakukan optimasi pertumbuhan isolat pada beberapa media, yaitu  media  ISP  1,  ISP  2,  ISP  3,  ISP  4,  ISP  5,  dan  media  SNA.  Pengujian dilakukan dengan cara menggoreskan isolat murni dari isolat Actinomycetes kode AL35 pada beberapa media tersebut, dan selanjutnya diinkubasi pada suhu ruang selama kurang lebih selama 10 hari. Dalam kurun waktu 10 hari tersebut diamati pertumbuhan  isolat  meliputi  miselium  udara  dan  miselium  vegetatifnya.  Hasil optimasi  media  menunjukkan  bahwa  urutan  pertumbuhan  yang  paling  subur adalah  pada  media  ISP  4  lalu  ISP5,  SNA,  ISP2,  ISP3,  dan  ISP1.  Media  ISP4 sebenarnya adalah media yang miskin akan nutrisi, banyak mengandung mineral dan  pati sebagai sumber karbonnya. Pati pada media ISP 4 harus terlebih dahulu didegradasi menjadi senyawa yang lebih pendek  rantainya dengan menghasilkan enzim  amilase  yang  bertujuan  untuk  merombak  pati  menjadi  karbon  yang  lebih tersedia.
Pati merupakan polimer kompleks terdiri atas 20% amilosa yang dapat larut dan 80% amilopektin yang sukar larut. Amilosa terpecah menjadi D-glukosa dan maltosa.  Amilopektin  dihidrolisis  menjadi  dekstrin,  maltosa  dan  isomaltosa  baru
0 2 4 6 8 10 12 14 16 5 6 7 8 9 10 D iam e te r z o n a h am b at (m m ) pH
196 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan
Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
terbentuk  D-glukosa.  Dari  penjelasan  tersebut  seharusnya  pertumbuhan  isolat tidak  menunjukkan  pertumbuhan  yang  subur  karena  proses  panjang  pemecahan pati  menjadi  sumber  karbon  yang  sederhana,  namun  dari  banyaknya  komposisi mineral  yang  terkandung  kemungkinan  isolat  menggunakan  mineral-mineral tersebut  untuk  mensuplai  energi  yang  digunakan  untuk  pertumbuhan  dan    isolat Actinomycetes kode AL35 mampu bertahan untuk memecah pati menjadi sumber karbon yang lebih sederhana yang selanjutnya digunakan untuk pertumbuhannya. Prescott et  al. (1999)  juga  menyatakan  bahwa  mikroorganisme  membutuhkan nutrisi  untuk  mendukung  pertumbuhan  selnya,  nutrisi  yang  dibutuhkan  yaitu karbon  (C),  nitrogen  (N),  fosfor  (P),  sulfur  (S),  kalium  (K),  magnesium  (Mg), kalsiu (Ca), natrium (Na) dan besi (Fe), sedangkan mikronutrien yang dibutuhkan yaitu tembaga (Cu), mangan (Mn), seng (Zn), nikel (Ni), molibdenum (Mo), dan kobalt  (Co).  Menurut  Stanbury  dan  Whitaker  (1987)  mineral  memiliki  peran penting  dalam  reaksi  enzim,  yaitu  sebagai  kofaktor  pada  proses  metabolisme. Kombinasi campuran mineral juga berperan penting dalam regulasi elektrolit dan osmotik  dalam  sel  dan  dalam  jumlah  yang  sedikit,  mineral  memiliki  pengaruh terhadap  pertumbuhan  sel  dan  pembentukan  produk.  Dari  pernyataan  tersebut dapat  disimpulkan  bahwa  mineral-mineral  yang  terkandung  dalam  media  juga mampu untuk menyuplai energi untuk pertumbuhan isolat.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  cairan  kultur  isolat Actinomycetes  kode  AL35  mampu  menghambat  pertumbuhan S.  aureus dan E. coli. Pemanenan antibiotik yang optimal dapat dilakukan pada inkubasi hari ke-2 berdasarkan  uji  aktivitas  terhadap S.  aureus dan E.  coli .  pH  optimum  untuk penghambatan  terhadap S.  aureus adalah  pada  pH  9,  dan  untuk  penghambatan terhadap E.  coli adalah  pada  pH  6.  Urutan  media  yang  dapat  menyuburkan pertumbuhan  isolat  Actinomycetes  kode  AL35  adalah  media  ISP4  lalu  ISP5, SNA, ISP2, ISP3, dan ISP1.
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 186-198

## DAFTAR PUSTAKA
Ambarwati dan Trisnawati, A.G., 2009, Isolasi Actinomycetes dari Tanah Sawah Sebagai  Penghasil  Antibiotik, Jurnal  Penelitian  Sains  dan  Teknologi , 10( 2 ): 101-111.
Apriliasari,  2012,  Isolasi  Actinomycetes  Penghasil  Antibiotik  terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dari Tanah Sawah Kotagede, Yogyakarta. Skripsi ,  Fakultas  Farmasi  Universitas  Ahmad  Dahlan, Yogyakarta.
Augustine,  S.K.,  Bhavsar,  S.P.,  and  Kapadis,  B.P.,  2005,  Production  of growthdependent metabolite active agains dermatophytes by Streptomyces rochei Ak 39, Indian Journal of Medicine, 121: 164-170.
Isnaini,  S.N.,  2010,  Isolasi  Rare  Actinomycetes  dari  Pasir  Pantai  Depok  Daerah Istimewa Yogyakarta yang Berpotensi Antibiotik terhadap Propionibacterium acne , Skripsi , Fakultas Farmasi Universitas Muhammadyah Surakarta.
Jawetz, E.,  Melnick, J.L., Adelberg, E.A., Brooks, G.F., Butel, J.S., dan Ornston, L.N.,  2001, Mikrobiologi  Kedokteran Edisi  ke-22,  diterjemahkan  oleh Nugroho & R.F.Maulany, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Prescott, L.M., Harley, J.P., and Klein, D.A., 1999, Microbiology , New York: Mc Graw Hill.
Rahayu,  T.,  2007,  Streptomyces  Sebagai  Sumber  Antibiotik  Baru  di  Indonesi,
Prosiding Seminar Nasional Biologi , http://jurnal.fkip.uns.ac.id/index.php/prosbio/article/view/991/644,  diakses tanggal 18 April 2013.
Rollin, D.M. dan Joseph, S.W., 2000, Actinomycetes Summary , http://www.life.umd.edu/classroom/bsci424/PathogenDescriptions/Actino mycetes.htm, diakses : Jumat, 31 Mei 2013.
Stanbury,  P.F.  and  Whitaker,  A.,  1987, Priciples  of  Fermentation  Technology . New York: Pergamon Press.
Sulistiyani,  T.R.,  2006,  Isolasi  dan  Karakterisasi  Antibiotik  dari  Isolat Actinomycetes Tanah Pulau Timor Bagian Barat (NTT), Skripsi , Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
Todar, K., 2007, Nutrion and Growth of Bacteria in Todar’s Online Textbook of Bacteriology ,  Wisconsin:  University  Winconsin-Madison  Departement  of Bacteriology.
198 Pengaruh Media terhadap Pertumbuhan
Sabrina Wulandari dan Nanik Sulityani
Ulya, J., 2009, Kemampuan Penghambatan Streptomyces spp. Terhadap Mikroba Patogen Tular Tanah pada Beberapa Kondisi Pertumbuhan : Jenis Media, Waktu  Produksi,  pH,  dan  Suhu, Tesis ,  Sekolah  Pasca  Sarjana  Institut Pertanian Bogor.