PENENTUAN TOTAL FENOLIK DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL ASETAT DARI TEPUNG PELEPAH AREN ( Arenga pinnata )
Yudhie E. Prasetyo 1) , Meiske S. Sangi 1) , Audy D. Wuntu 1)
1) Program Studi Kimia, FMIPA, Universitas Sam Ratulangi, Manado Email: pointerzyudhie@gmail.com, meiskesangi@gmail.com, dennywuntu@yahoo.com

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  untuk  menentukan  total  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  fraksi  etil  asetat dari  tepung  pelepah  aren  ( Arenga  pinnata ).  Tepung  pelepah  aren  diekstraksi  maserasi menggunakan  etanol  hasil  redestilasi cap  tikus kemudian  di  partisi  menggunakan  pelarut petroleum eter, etil asetat dan aquades. Penentuan kandungan total fenolik menggunakan metode Folin-Ciocalteu  dan  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  serapan  radikal  1,1-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH). Didapati kandungan total fenolik fraksi etil asetat sebesar 172.857 ± 4.762 mg/kg  dan  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  fraksi  etil  asetat  sebesar  90.573  µg/mL.  Hasil  ini menunjukan bahwa fraksi etil asetat berpotensi sebagai antioksidan alami.
Kata kunci: Tepung Pelepah aren, fenolik, aktivitas antioksidan, DPPH
DETERMINATION TOTAL PHENOLIC CONTENT AND ANTIOXIDANT ACTIVITY ETHYL ACETATE FRACTION OF AREN’S MIDRIB POWDER ( Arenga pinnata )

## ABSTRACT
This  research  aims  to  determine  the  total  phenolic  content  and  antioxidant  activity  from  ethyl acetate fraction of Aren’s midrib powder ( Arenga pinnata ). Aren’s midrib powder extracted with maceration method with cap tikus redistillated ethanol and then partitioned with solvents such as petroleum  ether,  ethyl  acetate  and  distillate  water.  The  determination  of  phenolic  content  was using Folin-Ciocalteu method and the antioxidant activity was done using diphenylpycrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging. Total phenolic value of ethyl acetate fraction is 172.857 ± 4.762 and IC 50 value  of  ethyl  acetate  fraction  is  90.573  µg/mL.  This  result  shows  ethyl  acetate  fraction  as natural antioxidant potential.
Keywords: Aren’s midrib powder, phenolic, antioxidant activity, DPPH

## PENDAHULUAN
Aren  ( Arenga  pinnata )  merupakan salah  satu  jenis  tumbuhan  tropis  yang tersebar  luas  di  Indonesia  dan  menjadi  salah satu sumber kekayaan yang ada. Aren sangat bermanfaat  dalam  kehidupan,  hampir  setiap bagian  dapat  dimanfaatkan,  seperti  air  nira hasil  sadapan  dapat  dijadikan  sebagai  bahan utama  pembuatan  minuman  beralkohol  dan gula  aren,  buahnya  dapat  dijadikan  sebagai kolang-kaling,  ijuk  dijadikan  sebagai  bahan dasar  sapu  ijuk  dan  tulang  pada  daun digunakan sebagai bahan dasar sapu lidi oleh masyarakat sekitar (Hatta, 1993).
Pelepah  aren  adanya  serbuk  halus yang digunakan masyarakat Minahasa sebagai  obat  gatal  saat  bekerja  di  kebun, masyarakat Sunda menggunakan abu pelepah daun  aren  yang  telah  dibakar  sebagai  bahan kosmetik  tradisional  untuk  menghilangkan jerawat dan masyarakat Tomohon menjadikan  tepung  dari  pelepah  daun  aren sebagai  obat  luka  bakar  dan  gatal-gatal  pada kulit  (Sangi et  al .,  2012).  Zainudin et  al. (2015)  melaporkan  bahwa  ekstrak  akar  aren mengandung  senyawa  metabolit  sekunder, yaitu flavonoid, alkaloid, steroid/triterpenoid, tanin,  saponin,  terpenoid,  antrakuinon.  Sangi et  al. (2012),  melaporkan  bahwa  tepung
pelepah  daun  aren  mengandung  senyawa fitokimia alkaloid, tannin, triterpenoid.
Berdasarkan  uraian  diatas,  pelepah aren mengandung senyawa metabolit sekunder  yaitu  tanin,  fenolik  dan  flavonoid, yang  merupakan  senyawa  yang  berperan sebagai  antioksidan.  Sehingga  penelitian  ini bertujuan untuk menentukan kandungan total fenolik dan aktivitas antioksidan dari ekstrak fraksi  petroleum  eter  dan  fraksi  etil  asetat tepung pelepah aren.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan adalah tepung pelepah  aren  yang  diambil  dari  desa  Karor, kabupaten  Minahasa.  Bahan  kimia  yang digunakan  adalah  etanol  (teknis  dan  p.a), petroleum  eter  p.a,  etil  asetat  p.a,  aquades, Na 2 CO 3 ,  reagen  Folin  Ciocalteu  dan  1,1- difenil-2-dipikrilhidrazil  (DPPH).  Peralatan yang  digunakan  adalah  alat-alat  gelas pyrex , corong  pisah,  Erlenmeyer,  kertas  saring, rotary  evaporator ,  desikator,  sudip,  batang pengaduk, mikropipet, UV-Vis Shimadzu.

## Preparasi Sampel
Pelepah  aren  yang  sudah  tua  dan kering  dibersihkan,  dipotong  secara  vertikal dan  diambil  bagian  dalamnya  berupa  tepung halus kemudian diayak. Selanjutnya disimpan  dalam  wadah  untuk  analisa  lebih lanjut.

## Penentuan Kadar Air
Kadar  air  ditentukan  menggunakan metode  pemanasan  oven.  Tepung  pelepah aren  diambil  secukupnya  lalu  ditimbang. Setelah  itu,  dipanaskan  dalam  oven  pada suhu  105 o C  selama  3  jam.  Didinginkan dalam  desikator  selama  30  menit,  lalu ditimbang. Kemudian dipanaskan dan didinginkan  kembali  hingga  mencapai  berat konstan.  Persentasi  kadar  air  dihitung menggunakan persamaan berikut.
% Kadar air = berat awal − berat akhir berat awal × 100%

## Ekstraksi dan Partisi
Sebanyak  1.5  kg  tepung  pelepah daun  aren  dimaserasi  menggunakan  etanol hasil redestilasi cap tikus selama 2 x 24 jam, disaring  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator .  Ekstrak  etanol  yang
diperoleh kemudian disimpan lalu dilanjutkan pada tahap partisi.
Sebanyak  5  gr  ekstrak  etanol  awal dilarutkan  dalam  50  mL  aquades.  Larutan selanjutnya  dipartisi  dengan  menambahkan 100  mL  pelarut  petroleum  eter,  dikocok dalam  corong  pisah  dan  didiamkan  selama 10-15  menit  hingga  terdapat  dua  lapisan (petroleum  eter  pada  lapisan  atas  dan aquades  pada  lapisan  bawah).  Diambil lapisan  petroleum  eter.  Dilakukan  beberapa kali  hingga  lapisan  petroleum  eter  terlihat bening. Lapisan aquades difraksinasi kembali dengan cara yang sama menggunakan pelarut etil asetat. Hasil fraksinasi diuapkan menggunakan rotary  evaporator sehingga didapati  fraksi  petroleum  eter,  fraksi  etil asetat dan Fraksi air.

## Penentuan Kandungan Total fenolik
Sebanyak  0.1  mL  fraksi  etil  asetat ditambahkan  0.1  mL  reagen  Folin-Ciocalteu lalu  divortex.  Setelah  itu  ditambahkan  2  mL Na 2 CO 3 2  %  lalu  divortex  kembali. Selanjutnya  diinkubasi  pada  ruangan  gelap selama 30 menit. Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 750 nm.

## Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode DPPH
Sebanyak  0.5  mL  larutan  fraksi  etil asetat  dengan  berbagai  konsentrasi  (1000, 2000,  3000,  4000  dan  5000  µg/mL) ditambahkan  1.5  mL  larutan  1,1-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH), divortex dan dimasukkan pada ruangan tertutup selama 30 menit.  Dibaca  absorbansinya  pada  panjang gelombang  517  nm.  Kemudian  dihitung persentasi  penangkal  radikal  bebasnya.  Dari persentasi  penangkal  radikal  bebas  dengan konsentrasi  larutan  uji,  dibuat  persamaan regresi  linier  untuk  menentukan  nilai  IC 50 . Dibuat  vitamin  C  pada  berbagai  konsentrasi (10,  20,  30,  40  dan  50  µg/mL)  sebagai pembanding.  Adapun  aktivitas  penangkal radikal  bebas  DPPH  dihitung  sebagai presentasi berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan persamaan berikut.

## 𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑝𝑒𝑛𝑎𝑛𝑔𝑘𝑎𝑝 𝑟𝑎𝑑𝑖𝑘𝑎𝑙 𝑏𝑒𝑏𝑎𝑠 (%)
= 1 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 × 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar Air Tepung Pelepah Aren
Penentuan  kadar  air  dari  tepung pelepah  aren  dilakukan  untuk  mengetahui banyaknya  kandungan  air  yang  terkandung. Persentasi  kadar  air  tepung  pelepah  aren sebesar  7.116  %.  Penentuan  kadar  air bermanfaat  untuk  mengetahui  ketahanan suatu  bahan  dalam  penyimpanannya  dan merupakan  cara  penanganan  terbaik  untuk menghindari
pengaruh Aktivitas mikroorganisme.  Jumlah  kadar  air  yang rendah  membuat  bahan  akan  lebih  lama disimpan  dalam  jangka  waktu  yang  relatif lama  sehingga  kemungkinan  rusak  saat penyimpanan sangat kecil.

## Ekstraksi dan Partisi
Ekstraksi tepung pelepah aren digunakan  teknik  maserasi,  yang  merupakan ekstraksi sederhana karena dilakukan dengan cara  perendaman  serbuk  simplisia  dalam pelarut  pada  suhu  ruang.  Pelarut  akan menembus  dinding  sel  dan  akan  melarutkan zat aktif didalamnya karena adanya perbedaan  konsentrasi  sehingga  larutan  yang terpekat  akan  didesak  keluar.  Hasil  yang diperoleh  rendemen  sekitar  0.605%  dengan berat  ekstrak  9.074  gr  dan  berwarna  coklat tua.  Pelarut  yang  digunakan  dalam  ekstraksi adalah  etanol.  Etanol  merupakan  pelarut polar dan merupakan pelarut yang baik untuk ekstraksi karena dapat mengekstrak senyawa- senyawa  polar  dan  non  polar.  Hal  ini dikarenakan  adanya  gugus  hidroksil  (-OH) yang  bersifat  polar  dan  gugus  alkil  (-CH 2 -
CH 3 )  yang  bersifat  non  polar  (Harborne, 1987).
Partisi  pada  tepung  pelepah  aren bertujuan untuk memisahkan senyawa berdasarkan  kelarutannya  terhadap  pelarut dengan  tingkat  kepolaran  yang  berbeda-beda seperti  prinsip like  dissolve  like .  Senyawa non-polar  akan  dilarutkan  oleh  pelarut petroleum  eter,  senyawa  bersifat  semi  polar akan  terekstrak  pada  pelarut  etil  asetat  dan senyawa  yang  polar  akan  larut  pada  pelarut air.  Hasil  partisi  dari  tepung  pelepah  aren diperoleh  tiga  fraksi,  yaitu  fraksi  petroleum eter,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  (lihat Tabel 1).
Tabel 1. Rendemen hasil fraksi tepung pelepah aren Fraksi Rendemen (%) Warna PE 22.768 Coklat tua EA 10.944 Coklat Air 50.962 Coklat
Berdasarkan  data  pada  Tabel  1, terlihat  jelas  bahwa  fraksi  Air  mempunyai rendemen  tertinggi  kemudian  diikuti  fraksi PE  dan  fraksi  EA.  Banyaknya  rendemen fraksi  air  disebabkan  banyaknya  jumlah senyawa  polar  yang  terkandung  dalam tepung pelepah aren dan tingginya rendemen pada  fraksi  PE  diindikasikan  adanya  lemak atau minyak yang  terkandung dalam pelepah aren.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Uji  kandungan  total  fenolik  dengan metode  Folin-Ciocalteu  bertujuan  untuk mengetahui  jumlah  fenol  yang  terdapat  pada sampel  uji.  Metode  ini  didasarkan  pada kemampuan  ekstrak  untuk  mereduksi  reagen Folin-Ciocalteu  yang  mengandung  senyawa fosfomolibdat-fosfotungstat.  Reagen  Folin- Ciocalteu  adalah  pereaksi  anorganik  yang dapat  membentuk  larutan  kompleks  dengan senyawa  fenol,  yakni  senyawa  molibdenum tungstat yang berwarna biru, dimana semakin pekat intensitas warna menunjukkan kandungan  fenol  semakin  besar  (Julkunen- Titto,  1985).  Reaksi  antara  reagen  Folin- Ciocalteu  dan  fenol  dapat  dilihat  sebagai berikut.
Na 2 WO 4 / Na 2 MoO 4 +   Fenol                    (Fenol-MoW 11 O 40 ) -4
Mo(VI) (kuning) +    e - Mo(V) (biru)
Metode  Folin  tidak  membedakan antar  jenis  komponen  fenolik.  Semakin banyak  jumlah  gugus  hidroksi  fenolik,  maka semakin besar konsentrasi komponen fenolik yang  terdeteksi  (Khadambi,  2007).  Menurut Singleton  &  Rossi  (1965),  warna  biru  yang teramati berbanding lurus dengan konsentrasi ion  fenolat  yang  terbentuk,  semakin  banyak ion  fenolat  yang  terbentuk  sehingg  warna biru yang dihasilkan semakin pekat.
Kandungan total fenolik yang terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  sebesar 172.857  ±  4.762  mg/kg.  Konsentrasi  yang diperoleh dari persamaan kurva standar asam
galat  y  =  0.0049x  +  0.0605.  Senyawa  fenol berpotensi sebagai antioksidan karena disebabkan  oleh  keberadaan  gugus  hidroksil (-OH)  yang  berfungsi  sebagai  penyumbang elektron.  Menurut  Tursiman et  al. (2012), pada  umumnya  senyawa  yang  memiliki bioaktivitas  sebagai  antioksidan  adalah senyawa  golongan  fenol  yang  memiliki gugus  hidroksi  yang  tersubtitusi  pada  cincin benzena  pada  posisi orto dan para terhadap gugus  –OH  dan  –OR.  Senyawa  ini  dapat menghambat radikal bebas dengan mendonorkan  protonnya  dan  membentuk radikal stabil. Terbentuknya radikal stabil ini dikarenakan  elektron  bebas  distabilkan  oleh delokalisasi elektron dengan adanya resonansi pada cincin aromatik.
Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  dengan
Metode DPPH Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan  radikal  bebas  DPPH  sebagai media pengujian. Pengujian aktivitas penangkal  radikal  bebas  dilakukan  dengan mereaksikan  larutan  uji  dengan  larutan
DPPH  dan  dibaca  absorbansinya  pada panjang  gelombang  517  nm.  Penurunan intensitas warna larutan DPPH sebagai akibat terjadi pelepasan atom hidrogen dari senyawa  fenolik  kepada  senyawa  DPPH yang kekurangan elektron.
Gambar  1  menunjukan  aktivitas penangkal  radikal  bebas  DPPH  dari  fraksi etil  asetat,  semakin  tinggi  konsentrasi  dari
sampel  uji,  semakin  tinggi  pula  aktivitas antioksidannya.  Rice-Evan et  al. (1997), melaporkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  dan fitokimia yang berasal dari tanaman sebanding  dengan  kandungan  fenolik,  yang berarti semakin banyaknya komponen fenolik (fenolik, flavonoid dan tanin terkondensasi),  semakin  besar  aktivitas antioksidannya.
Gambar 1. Aktivitas penangkal radikal bebas fraksi etil asetat
Fraksi etil asetat memiliki kemampuan sebagai penangkal radikal bebas DPPH lebih besar 50%. Komponen senyawa pada  fraksi  etil  asetat  lebih  aktif  dalam melepaskan atau mendonorkan atom hydrogen atau elektron kepada radikal DPPH (ungu) menjadi senyawa non radikal (kuning)  (Molyeux,  2004).  Reaksi  utamanya dapat dilihat pada Gambar 2.
O 2 N N NO 2 NO 2 N O 2 N H N NO 2 NO 2 N + A H + A Diphenylpicrylhydrazil (ungu) Senyawa Fenolik Diphenylpicrylhydrazil
(kuning)
Gambar 2. Reaksi penangkap radikal bebas (AH) denga DPPH (Molyneux, 2004)
Dibuat  kurva  persamaan  regresi  antara persen  penangkal  radikal  bebas  terhadap konsentrasi  larutan  uji  untuk  menentukan nilai  IC 50 .  Pada  persamaan  regresi  yang didapat,  y  diisi  dengan  nilai  50  sehingga didapati nilai x yang disajikan pada tabel 2.
Tabel 2. Perbandingan IC 50 fraksi etil asetat dan Vit. C
Sampel Uji Persamaan Regresi R 2 Nilai IC 50 Fraksi EA y = 25.179x + 0.7151 0.9962  90.573 Vitamin C y = 1.6757x – 1.1281 0.9851  30.511
70.000 75.000 80.000 85.000 90.000 95.000 1000 2000 3000 4000 5000 A kti vi ta s P e n an gk ap R ad ik al l
B e b as D P P H ( % ) Konsentrasi (µg/mL) Fraksi EA
Parameter  atau  perhitungan  yang digunakan dalam penentuan aktivitas penangkal  radikal  bebas  adalah  IC 50 .  Nilai tersebut menggambarkan besarnya konsentrasi larutan uji yang dapat menangkal  radikal  sebesar  50%  dan  atau menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal. Semakin nilai IC 50 , menunjukkan  senyawa  uji  tersebut  akan semakin  efektif  sebagai  penangkap  radikal (Molyneux, 2004).
Vitamin  C  yang  digunakan  sebagai pembanding  memiliki  nilai  IC 50 sebesar 30.511  µg/mL.  Vitamin  C  memiliki  nilai IC 50 yang  lebih  kecil  dibandingkan  dengan fraksi  etil  asetat.  Jika  dibandingkan  dengan nilai  IC 50 dari  fraksi  etil  asetat  dan  vitamin C,  senyawa  dari  fraksi  etil  asetat  cukup berpotensi  sebagai  antioksidan.  Vitamin  C memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi karena  memiliki  dua  gugus  hidroksil  yang dapat  mendonorkan  atom  hidrogen  untuk menstabilkan  radikal  bebas  (Sudarmadji, 1996).

## KESIMPULAN
Kandungan  total  fenolik  fraksi  etil asetat tepung pelepah aren ( Arenga pinnata ) sebesar  172.857  ±  4.762  mg/kg.  Aktivitas antioksidan  fraksi  etil  asetat  sebesar  90.573 µg/mL.  Fraksi  etil  asetat  berpotensi  sebagai antioksidan alami.

## DAFTAR PUSTAKA
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia . Terjemahan:  Padmawinata,  K.  &  I. Soediro. ITB. Bandung.
Hatta,  S.  1993. Aren  Budidaya  dan Multigunanya . Kanisius. Yogyakarta. Julkunen-Titto, R. 1985. Phenolic Constituents  in  Leaves  of  Northern Willows:  Method  for  Analysis  of Certain  Phenolic. J.  Agric.  Food
Chem . 33: 22-23
Khadambi,  T.  N.  2007. Extraction  of Phenolic Compounds and Quantification  of  The  Total  Phenol and  Condensed  Tannin  Content  of Bran Fraction of Condensed Tannin and Condensed Tannin Free Sorghum  Varieties .  University  of Pretoria. Pretoria.
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  Stable  Free
Radical Diphenylpicrylhidrazil (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity. J.  Sci.  Technol .  26:  211- 219
Rice-Evan,  C.  A.,  N.  J.  Miller  &  Paganga. 1997.  Antioxidant  Properties  of Phenolic  Compounds. Trend.  Plant Sci. 2: 152-159
Sangi,  M.,  L.  Momuat  &  M.  Kumaunang. 2012.  Uji  Toksisitas  dan  Skrining Fitokimia  Tepung  Gabah  pelepah Aren  ( Arenga  pinnata ). Jurnal Ilmiah Sains . 12(2): 128-134
Singleton,  V.  L.  &  J.  A.  Rossi.  1965. Colorimetry  of  Total  Phenolic  with Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid  Reagent. American  Journal Enology and Viticulture . 16:147.
Sudarmadji,  S.,  B.  Haryono  &  Suhardi. 1996. Analisa  Bahan  Makanan  dan Pertanian . Liberty. Yogyakarta.
Tursiman,  P.  Ardiningsih  &  R.  Nofiani. Total  Fenol  Fraksi  Etil  Asetat  dari Buah Asam Kandis ( Garcinia dioica Blume). JKK . 1(1): 45-48.
Zainudin,  A.,  U.  Hasanah  &  Y.  R.  Pemana. 2015. Uji Aktivitas Diuretik Ekstrak Akar  Aren  ( Arenga  pinnata Merr.) Terhadap  Tikus  Putih  Galur  Wistar ( Rattus norvgicus ) dengan Pembanding Furosemid. Jurnal
Kesehatan Prima . 9(1):1403-1411