Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2015. Hal. 13-23
SKRINING ENZIM DARI SAMPEL DAUN JELUTUNG RAWA ( Dyera lowii Hook f.) UNTUK ANALISIS ISOZIM SEBAGAI STUDI AWAL KERAGAMAN GENETIK
(Screening Enzyme from Leaf of Dyera lowii Hook f. to Isozyme Analysis. The First Study of Genetics Variety)

## Tri Suwarni Wahyudiningsih
Jurusan Kehutanan, Faperta, Universitas Palangka Raya, Palangka Raya 73112 Kalimantan Tengah – INDONESIA E-mail: tri.s.w.basuki@gmail.com

## ABSTRACT
Jelutung  rawa  (Dyera  lowii  Hook  f.)  is  the  commercial  and  endemic  species  of  peat-swamp  forest  with sensitive status, therefore the research to analyze its genetics variety is very important. The research was aimed  to  analyze  the  seven  of  enzyme  in  the  leaf  of  D.  lowii  that  well-marked  by  the  emergence  of polymorphic tape pattern consistently.  The research was conducted at November to December 2012 in the tree improvement laboratory  of Gadjah Mada University.   Leaf of D. lowii samples were gotten from  D. lowii  plantation  at  the  Cilik  Riwut  Street,  nine  km  from  Palangka  Raya  City.  There  are  seven  enzyme system to screening, namely Shikimate Dehydrogenase (SHD; EC 1.1.1.25), NAD(P)H-Diaphorase (DIA; EC    1.6.2.2),  Glutamate  Oxaloacetate  Transaminase  (GOT:  EC  1.11.1.7),  Acid  Phosphatase  (ACP;  EC 3.1.3.2),  6-Phosphogluconate  Dehydrogenase  (6-PG;  EC  1.1.1.44),  Esterase  (EST;  EC  3.1.1),  dan Peroxidase  (POD;  EC  1.11.1.7).  Stages  of  research  were  preparation,  leaf  extraction,  supernatant, electroforesis “Wendel & Weeden”, colouring, fixation, and gel dehydration. Isozyme was detected using R f (Relative value from Bromophenol Blue) to make the zymogram.   Polymorphic tape pattern consistently was  resulted  by  enzymes  of  DIA,  POD,  ACP,  EST,  and  GOT,  whereas  polymorphic  tape  pattern inconsistently  was  resulted  by  enzymes  SHD  and  6-PG.  Furthermore,  the  polymorphic  tape  pattern consistently could to analyze genetics variety. The first study of genetics variety showed that there are four locus at the leaf of D.lowii, namely Est-1, Est-2, Est-3, and Got-1 in the 14 of alel.
Keywords: Dyera lowii, enzyme, isozyme analysis, polymorphic

## PENDAHULUAN
Setiap  jenis  pohon  menunjukkan perbedaan  sifat-sifat  atau  variasi.  Variasi genetik dalam populasi merupakan gambaran  dari  adanya  perbedaan  respon individu-individu terhadap perubahan
lingkungan dan  sebagai  respon  perubahan adaptif  suatu  organisme  (Yeh,  2000). Variabilitas di dalam tapak alami disebabkan  oleh  mutasi,  aliran  gen,
migrasi,  seleksi, genetic  drift serta  sistem perkawinan  (Finkeldey,  2005).  Variasi genetik  dapat  diketahui  dari  perbedaan karakter  fenotipe,  protein,  enzim  dan DNA  setiap  organisme.  Variasi  genetik merupakan prasyarat untuk adaptasi evolusioner. Jumlah variasi genetik dalam populasi  berhubungan  langsung  dengan potensi untuk adaptasi evolusioner populasi (Finkeldey, 2005).
Keragaman  genetik  suatu  spesies dapat  diketahui  dengan  menggunakan

## SKRINING ENZIM (Tri Suwarni Wahyudiningsih)
penanda berupa penanda morfologi, biokimia,  dan  molekuler  (White et  al. , 2007).  Penanda  biokimia  berupa  penanda isozim.  Beberapa  kelebihan  penggunaan isozim  adalah:  1).  Gen-gen  lokus  bersifat ko-dominan sehingga individu heterozigot dapat  diidentifikasi.  2).  Kebanyakan isoenzim bersifat stabil terhadap perubahan lingkungan.
3).
Hanya membutuhkan sebagian kecil dari jaringan hidup. 4). Telah ditemukan adanya variasi yang  besar  pada  banyak  jenis  pohon  5). Pekerjaan  laboratorium  relatif  sederhana dengan  biaya  bahan  kimia  relatif  murah (Finkeldey, 2005).
Salah  satu  kelemahan  elektroforesis isozim  adalah  ketidakmampuannya  untuk mendeteksi  seluruh  variasi  genetik  pada tingkat nukleotida.
Hanya sekitar sepertiga bagian dari substitusi nukleotida yang terekspresikan dalam bentuk perubahan  asam  amino.  Perubahan  asam amino tersebut pun hanya dapat terdeteksi hingga  sebesar  25%  saja  (Otrosina et  al ., 1991). Selain itu, diperlukan lebih banyak analisis sistem enzim untuk dapat mendeteksi setiap perubahan tersebut. Penggunaan penanda biokimia seperti isozim  telah  dikenal  luas  di  bidang pertanian dan kehutanan. Penanda biokimia  dapat  diaplikasikan  pada  tingkat protein  seperti  isozim  dan  kimia  organik. Enzim adalah suatu kelas molekul protein yang  bersifat  fungsional.  Enzim  sangat penting bagi semua reaksi metabolisme di dalam  sel  karena  bertindak  sebagai katalisator  bagi  reaksi  metabolis.  Isozim adalah  enzim-enzim  yang  mengatalisasi reaksi  metabolisme  biokimia  yang  sama (Finkeldey, 2005).
Menurut  Finkeldey  (2005),  studi variasi genetik populasi dilakukan dengan metode  penanda  genetik.  Investigasi penanda  gen  memungkinkan  pengkajian genotipe individu pada lokus gen tunggal.
Polimorfisme isozim adalah alat terpenting  dan  paling  banyak  digunakan dalam  analisis  berbagai  aspek  sistem genetik  pohon  hutan  tropis  (Hamrick  & Godt,  1996).  Analisis  isozim  dapat digunakan untuk berbagai kegiatan seperti studi  ortogenetik,  polimorfisme,  aliran gen,  dan  isolasi,  studi  keragaman  klinal dan  geografik,  karakterisasi  individu  dan populasi, serta analisis keragaman genetik (Lowe et  al .,  2004).  Kedudukan  isozim sebagai  produk  translasi  RNA  sejajar dengan  protein.  RNA  merupakan  hasil transkripsi  dari  segmen  DNA  tertentu. Enzim dari jaringan organisme yang telah diekstraksi  selanjutnya dipisahkan dengan proses elektroforesis.
Gel hasil elektroforesis  yang  telah  diwarnai  dengan suatu  enzim    memunculkan  pola  pita ( banding  pattern )  tertentu  (Glaubits  & Moran, 2000).
Penelitian mengenai keragaman genetik  pada D.  Lowii dengan  penanda isozim  dapat  dilanjutkan  bila  dihasilkan pola  pita  polimorfik  dan  konsisten. Dengan  demikian  sampel  daun D.  Lowii perlu diteliti dengan menggunakan perlakuan  beberapa  enzim.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengkaji sampel daun D. Lowii menggunakan  tujuh  enzim  untuk menghasilkan  pola  pita  monomorfik  yang konsisten, polimorfik yang tidak konsisten, polimorfik yang konsisten serta jumlah lokus dan alel.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian dilakukan bulan November hingga Desember 2012.
Penelitian  dilakukan  di  laboratorium Pemuliaan  Pohon  Fakultas  Kehutanan
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2015. Hal. 13-23
UGM  untuk  analisis isozim.  Pengambilan sampel  untuk  skrining  enzim  dari  hutan tanaman D. Lowii di Jl. Cilik Riwut Km 9 Palangka  Raya.  Pengambilan  sampel  juga dilakukan  di  empat  lokasi  populasi  alam yaitu  laboratorium  alam  hutan  rawa gambut  Sebangau  Universitas  Palangka Raya  dan  Taman  Nasional  Sebangau, Kota  Palangka  Raya,  hutan  alam  rawa gambut  di  hutan  Pendidikan  Hampangen Universitas  Palangka  Raya  sampai  Jl. Cilik  Riwut  km  39,  Kabupaten  Katingan, hutan  alam  rawa  gambut  di  Desa Parahangan,  Kabupaten  Pulang  Pisau, Hutan  alam  rawa  gambut  di  Selat  Nusa, Desa  Pilang,  Kecamatan  Jabiren  Raya Kabupaten Pulang Pisau.

## Bahan Penelitian
Objek  penelitian  ini  adalah  pohon D. Lowii. Sampel pohon yang diambil adalah daun  dari  karangan  daun  urutan  pertama. Pada  skrining  enzim  digunakan  sampel sebanyak  20  pohon.  Tiap  pohon  diambil satu helai daun. Pada penelitian keragaman  genetik  sampel  tiap  populasi dipilih  55  pohon.  Secara  keseluruhan jumlah  pohon  yang  dipilih  dari  lima populasi  tersebut  sebanyak  275  pohon. Berat  masing-masing  sampel  daun  yang diperlukan  adalah  100  mg  untuk  bahan sampel  analisis  isozim.  Sampel  tersebut disimpan  dalam  boks  es  yang  berisi  es batu untuk menjaga suhu tetap dingin dan kelembaban  60-70  %  pada  saat  di lapangan.  Penyimpanan  sampel  daun  di laboratorium dengan dibungkus alumunium-foil disimpan  dalam freezer pada  suhu  -30 0 C  sampai  saat  akan dilakukan analisis isozim.
Sistem  enzim  yang  digunakan untuk  skrining  ada  7  (tujuh)  yaitu Shikimate  Dehydrogenase (SHD;  EC
1.1.1.25), NAD(P)H-Diaphorase (DIA; EC    1.6.2.2), Glutamate  Oxaloacetate Transaminase (GOT:  EC  1.11.1.7), Acid Phosphatase (ACP;  EC  3.1.3.2), 6- Phosphogluconate  Dehydrogenase (6-PG; EC  1.1.1.44), Esterase (EST;  EC  3.1.1),
dan Peroxidase (POD; EC 1.11.1.7).

## Peralatan Penelitian
Untuk  penelitian  ini  digunakan seperangkat  alat  ekstraksi  enzim,  proses elektroforesis  gel  vertikal,  dan  pewarnaan serta pengeringan gel.

## Cara Kerja
Analisis isozim dilakukan meliputi tahap-tahap: persiapan  bahan  kimia, persiapan  materi  yang  diuji,  pelaksanaan pengujian, dan analisis hasil. Diagram alur kegiatan analisis isozim dapat dilihat pada Gambar  1  dan  urutan  kegiatan  tersebut adalah:
a. Persiapan  bahan  (materi  yang  akan diuji).
Daun  muda  dari  setiap  pohon diambil dan dihancurkan dengan mortar dan diberi larutan extract buffer sebanyak  1  ml.  Sampel  yang  telah hancur  selanjutnya  dimasukkan  ke dalam  tabung ependorf dan  diputar dengan  kecepatan  15.000  rpm  pada suhu  0 0 C  selama  kurang  lebih  20 menit. Larutan bening pada bagian atas yang  disebut supernatant selanjutnya digunakan  dalam  proses  elektroforesis menurut Wendel & Weeden (1989).
b. Pelaksanaan  analisis  isozim  disajikan pada Gambar 1.
c. Pembacaan hasil analisis isozim berupa pola  pita  yang  muncul  pada  gel dihitung  dengan  menggunakan  nilai R f (Relatif value dari Bromophenol  Blue )

## SKRINING ENZIM (Tri Suwarni Wahyudiningsih)
dan  diberi  kode  alel  pada  masing- masing lokus kemudian dibuat
zimogram. Pembuatan zimogram dihitung dengan rumus sbb:
Pembacaan  pola  pita  meliputi monomorfik,
polimorfik, dan konsisten  atau  tidak  konsisten muncul  pola  pita  pada  gel  hasil elektroforesis.
Gambar 1  Diagram alur analisis isozim

## HASIL PENELITIAN
Skrining perlu dilakukan untuk mengetahui enzim yang dapat menghasilkan  pola  pita  polimorfik  yang konsisten. Semua hasil pola pita dikelompokkan sebagai berikut.

## Pola pita monomorfik yang konsisten
Pola pita monomorfik yang konsisten dihasilkan  oleh  enzim  DIA,  POD,  dan ACP. R f adalah    jarak    ke    alel
𝑅𝑓 = jarak ke alel (cm) jarak total ke 𝐵𝑟𝑜𝑚𝑜𝑝ℎ𝑒𝑛𝑜𝑙 𝐵𝑙𝑢𝑒 X100%
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2015. Hal. 13-23
dibagi  jarak  total  ke Bromophenol  Blue dikali  seratus  persen.  Zimogram  (Gb.  2a) dan  distribusi  alel  berdasar  persentase R f dari  sistem  enzim  DIA  (Gb.  2b)  tersebar pada  2  (dua)  lokus  yaitu  lokus Dia-1 hanya  terdapat  alel a dengan R f alel 40%, kemudian  pada  lokus Dia-2 hanya terdapat  satu  alel  yaitu  alel a dengan R f alel 60%.
a                               b
Gambar 2.  Zimogram berdasarkan
persentase R f (Gb.a)  serta distribusi  alel a pada      lokus
Dia-1 dan Dia-2 (Gb.b)  dari sistem  enzim  DIA  pada D.
lowii
Zimogram  (Gb.  3a)  dan  distribusi alel  berdasar  persentase R f dari  sistem enzim  POD  (Gb.  3)  tersebar  pada  dua lokus  yaitu  lokus Pod-1 terdapat  alel a dengan R f alel  46%  dan  lokus Pod-2 terdapat  alel a dengan R f alel  56%.
Zimogram  (Gb.  4a)  dan  distribusi  alel berdasar  persentase R f dari  sistem  enzim ACP  (Gb.  4b)  tersebar  pada  dua  lokus yaitu lokus Acp-1 ( R f alel 68%) dan Acp-2 ( R f alel 74%), yang masing-masing hanya terdapat alel a .
a                               b Gambar 3.  Zimogram berdasarkan persentase R f (a) serta distribusi  alel a pada  lokus Pod-1 dan Pod-2 (b)  dari sistem  enzim  POD  pada D. lowii
a                               b
Gambar 4.  Zimogram berdasarkan persentase R f (a) serta distribusi  alel a pada  lokus Acp-1 dan Acp-2 (b)  dari sistem  enzim  ACP  pada D. lowii

## SKRINING ENZIM (Tri Suwarni Wahyudiningsih)
Pola pita polimorfik yang tidak konsisten
Enzim  yang  menghasilkan  pola  pita polimorfik  tetapi  tidak  konsisten  adalah enzim SHD dan 6-PG. Zimogram (Gb. 5a) dan  distribusi  alel  berdasar  persentase R f dari  sistem  enzim  SHD  (Gb.  5b)  hanya terdapat  satu  lokus  yaitu  lokus Shd-1 dengan R f alel a 54%  dan  alel b 65%.
Pada  sistem  enzim  ini  terlihat  polimorfik namun banyak sampel yang tidak
konsisten muncul pola pita. a                               b Gambar 5.  Zimogram berdasarkan persentase R f (a) serta distribusi  alel a dan b pada lokus Shd-1 (b)  dari  sistem enzim SHD pada D. lowii
Zimogram (Gb. 6a) dan distribusi alel berdasar  persentase R f dari  sistem  enzim 6-PG  (Gb.  6b)  hanya  terdapat  1  (satu) lokus  yaitu  lokus 6-Pg-1 dengan  satu  alel a yang mempunyai R f alel 66%, alel b ( R f alel  68%),  dan  alel c ( R f alel  70%).  Pola pita  pada  sistem  enzim  ini  terlihat polimorfik tetapi tidak konsisten.
a                               b
Gambar 6.  Zimogram  distribusi  alel  a
berdasarkan  persentase R f (a) dan  distribusi  alel a , b ,  dan c pada  lokus 6-Pg-1 (b)  dari sistem  enzim  6-PG  pada D.
lowii

## Pola pita polimorfik yang konsisten
Pola  pita  pada  sistem  enzim  EST menunjukkan  pola  pita  polimorfik  yang konsisten.  Zimogram  (Gb.  7a)  dan distribusi  alel  berdasar  persentase R f dari sistem  enzim  EST  (Gb.  7b)  tersebar  pada 3 lokus yaitu lokus Est-1 terdapat alel a , b , c  dan  d  ( R f alel  13-19%),  lokus Est-2 terdapat alel a , b , dan c ( R f alel 25-32%), lokus Est-3 terdapat a dan b ( R f alel  38- 40%).
Pada  sistem  enzim  GOT  dihasilkan pola  pita  polimorfik  meskipun  hanya terdapat satu lokus yang terlihat konsisten. Zimogram  (Gb.  8a)  dan  distribusi  alel berdasar  persentase R f dari  sistem  enzim GOT  (Gb.  8b)  hanya  ada  1  (satu)  lokus yaitu  lokus Got-1 dengan  lima  alel  yaitu alel a , b , c , d ,  dan e .  Kisaran    alel  antara 38% sampai 50%.
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2015. Hal. 13-23

## a                                       b
a                                       b
Gambar 7.  Zimogram distribusi alel berdasarkan persentase R f (a) serta distribusi alel pada lokus Est-1 , Est-2 , dan Est-3 (b) dari sistem enzim EST pada
D. lowii
Gambar 8.  Zimogram  distribusi  alel a,b,c,d ,  dan e berdasarkan  persentase R f (a) serta distribusi alel a, b, c, d, e pada lokus Got-1 (b) dari sistem enzim GOT pada D. lowii

## SKRINING ENZIM (Tri Suwarni Wahyudiningsih)
Berdasar  hasil  skrining  tujuh  enzim, maka  enzim  EST  dan  GOT  kemudian digunakan  untuk  penelitian  keragaman genetik,  sistem  perkawinan,  aliran  gen, isolasi,  studi  keragaman  klinal  dan geografik  serta  karakterisasi  individu  dan populasi. Hal ini disebabkan kedua enzim tersebut menghasilkan pola pita polimorfik yang konsisten.

## PEMBAHASAN
Suatu  enzim  yang  diteliti  dengan teknik elektroforesis sering dijumpai lebih dari satu pita ( stained zone) pada gel. Hal ini  menunjukkan  bahwa  campuran  warna awal  mengandung  lebih  dari  satu  jenis enzim  yang  dapat  berperan  pada  suatu substrat  untuk  memberikan  hasil  reaksi yang sama. Enzim tersebut disebut isozim atau  iso-enzim.  Produk  langsung  gen berupa  protein  dan  enzim  dapat  dilacak dan  dipelajari  keragamannya  dengan menggunakan  gel  dan  elektroforesis. Isozim  adalah  enzim-enzim  yang  terdiri dari  berbagai  molekul  aktif  yang  berbeda komposisi asam aminonya dan mengkatalisis reaksi yang sama. Perbedaan  komposisi  asam  amino  bisa disebabkan  oleh  alel  berbeda  dari  lokus yang  sama  atau  alel  dari  lokus  yang berbeda (Novarianto et al ., 1999).
Elektroforesis  adalah  suatu  cara pemisahan  dalam  suatu  larutan  atas  dasar proses pemindahan partikel-partikel bermuatan karena pengaruh medan listrik.
Molekul-molekul
biologis yang
bermuatan  listrik  dalam  larutan  akan bergerak ke arah elektroda yang polaritasnya  berlawanan  dengan  muatan molekul. Pemisahan molekul-molekul
dengan  muatan  yang  berbeda  merupakan prinsip yang digunakan
dalam elektroforesis.
Metode
ini akan
memisahkan  nukleotida  berbeda  dan  tiap protein  (enzim)  yang  dianalisis  ke  dalam pola  pita  yang  dapat  dilihat  melalui pewarnaan.  Pita  tersebut  adalah  hasil  dari reaksi  enzimatik  dari  substrat  dengan enzim  yang  diamati.  Perbedaan  jarak migrasi  pada  pita-pita  merupakan  wujud dari  perbedaan  muatan  dan  bentuk molekul enzim (Nur & Adijuwana, 1987).
Sistem enzim EST dan GOT
menghasilkan  pola  pita  polimorfik  yang konsisten.  Pola  pita  pada  sistem  enzim EST  dan  GOT  bersifat  polimorfik  karena mempunyai  variasi  alel  dalam  suatu populasi. Pola pita monomorfik dihasilkan dari  sistem  enzim  DIA,  POD,  dan  ACP karena tidak mempunyai variasi alel. Pola pita  tidak  konsisten  muncul  dihasilkan dari  sisten  enzim  SHD  dan  6-PG.  Hal  ini diduga karena aktivitas metabolit sekunder  seperti  fenol  dan  tanin  maupun enzim phenoloxidase (Wendel & Weeden, 1989).
Hasil analisis isozim D.  lowii menunjukkan  bahwa  dari  dua  sistem enzim  yang  digunakan  yaitu  EST  dan GOT teridentifikasi empat lokus yaitu Est- 1 , Est-2 , Est-3 dan Got-1 dengan  jumlah alel  keseluruhan  sebanyak  14  alel. Menurut Mahfudz (2011), enzim EST dan GOT  juga  menghasilkan  pola  pita polimorfik yang konsisten pada tumbuhan Merbau  ( Intsia  bijuga ).  Liu et  al .  (2010) melaporkan  bahwa  enzim  EST  dan  DIA juga  menghasilkan  pola  pita  polimorfik yang  konsisten  pada  tumbuhan Myricaria laxiflora. Enzim  EST  menghasilkan  pola pita  polimorfik  yang  konsisten  pada Shorea  macrophylla dan S.  pinanga
(Syah,  2012).  Pada  penelitian  ini  enzim ACP  dan  DIA  menghasilkan  pola  pita monomorfik,  sedangkan  menurut  Liu et al. (2010)  pada M.  laxiflora enzim  ACP dan DIA menghasilkan pola pita polimorfik yang konsisten.
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2015. Hal. 13-23
Sistem  enzim  EST  pada D.  lowii menghasilkan  tiga  lokus  yaitu Est-1 dan lokus Est-2 masing-masing  terdapat  tiga alel serta lokus Est-3 memiliki empat alel. Penggunaan  enzim  EST  pada  Merbau hanya  dihasilkan  satu  lokus  yaitu Est-1 (Mahfudz, 2011). Sistem enzim EST pada Myricaria  laxiflora menghasilkan  tiga lokus  (Liu et  al .,  2010)  yaitu Est-1 terdapat tiga alel, lokus Est-2 terdapat dua alel  serta lokus Est-3 terdapat tiga alel. Pada  sistem  enzim  EST  digunakan metode pewarnaan isozim dengan substrat yang  spesifik.  Subtrat  spesifik  tersebut adalah  senyawa Naphthyl  Ester yang dihidrolisis  oleh  enzim Esterase menjadi Naphthol α dan ß. S elanjutnya  dengan pewarna Fast Blue RR akan menghasilkan endapan  berwarna  merah  kecoklatan. Enzim esterase tergolong  dalam  enzim kelompok  III  ( Hidrolase )  yang berfungsi melakukan  pemotongan  ester  sederhana pada  asam  organik,  asam  anorganik, alkohol  dan  fenol  serta  mempunyai  berat molekul  rendah  dan  mudah  larut.  Reaksi yang  terjadi  adalah  monoester  sebagai berikut.
fosfat + H 2 O
alkohol +
fosfat organik
Substrat senyawa nitrofenil fosfat dihidrolisis oleh esterase menjadi nitrofenol dan fosfat an-organik. Nitrofenol dalam garam diazonium seperti fast  garnet  GBC membentuk  endapan berwarna  coklat  (Vallejos,  1983 dalam Triastuti,  2004). Menurut Mansyah et al. (1999),  kelebihan  enzim  EST  yaitu  pita- pita  isozim  paling  cepat  terbentuk  dan paling  mudah  muncul  pada pewarnaan dengan  sistem  enzim  EST  dibanding dengan sistem enzim yang lain.
Sistem enzim GOT hanya
menghasilkan  satu  lokus  ( Got-1 ) . Hal  ini seperti  yang  terdapat  pada  tumbuhan Camelia  japonica dengan  sistem  enzim SHD  ( Shd-1 )  (Ozaki et  al .,  2003)  dan pada  tumbuhan M.  laxiflora pada  sistem enzim  ADH  ( Alcohol  Dehydrogenase ) dengan  lokus Adh-1 ,  sistem  enzim  LDH ( Lactate  Dehydrogenase )  dengan  lokus Ldh-1 ,  sistem  enzim  SKD  ( Shikimate Dehydrogenase )  yaitu Skd-1 (Liu et  al ., 2010).  Sistem  enzim  GOT  pada  Merbau menghasilkan  dua  lokus  yaitu Got-1 dan Got-2 (Mahfudz,  2011).  Pada D.  lowii dengan  menggunakan  sistem  enzim  GOT terdapat  lima  alel,  sedangkan  pada Merbau  hanya  ada  tiga  alel  (Mahfudz, 2011).
Variasi pola pita yang dibentuk enzim GOT  lebih  sedikit  dibandingkan  dengan enzim EST. Bailey (1983, dalam Sriyono, 2006)  mengatakan  bahwa  perbedaan isoenzim  akan  menghasilkan  kecepatan gerak  yang  tidak  sama  bila  dikondisikan dalam medan listrik dan medium gel yang semi-porous sehingga  setiap  enzim  yang berbeda  akan  menyebabkan  pola  pita ( banding pattern ) yang berbeda pula.

## KESIMPULAN
Sampel daun D. Lowii yang diekstraksi  kemudian  dilakukan  proses ekektroforesis  dan  analisis  isozim  dapat disimpulkan sebagai berikut.
1. Pola pita monomorfik  yang konsisten dihasilkan oleh enzim DIA, POD, dan ACP.
2. Enzim  yang  menghasilkan  pola  pita polimorfik  tetapi  tidak  konsisten adalah enzim SHD dan 6-PG.
3. Sistem enzim EST dan GOT menghasilkan  pola  pita  polimorfik dan konsisten, sehingga dapat
Esterase

## SKRINING ENZIM (Tri Suwarni Wahyudiningsih)
digunakan untuk studi awal keragaman  genetik.  Pita-pita  isozim paling  cepat  terbentuk  dan  paling mudah  muncul  pada pewarnaan dengan  sistem  enzim  EST  dibanding dengan sistem enzim yang lain.
4. Studi  awal  keragaman  genetik  pada D.  Lowii diperoleh  bahwa  sistem enzim  EST  dan  GOT  teridentifikasi empat  lokus  yaitu Est-1 , Est-2 , Est-3 dan Got-1. Lokus Est-1 terdapat  alel a , b ,  c  dan  d  ( R f alel  13-19%),  lokus Est-2 terdapat alel a , b , dan c ( R f alel 25-32%),    lokus Est-3 terdapat a dan b ( R f alel  38-40%).  Lokus Got-1 terdapat lima alel yaitu alel a , b , c , d , dan e dengan kisaran alel antara 38% sampai 50%. Jumlah alel keseluruhan sebanyak 14 alel.

## DAFTAR PUSTAKA
Finkeldey,  R.  2005.  An  introduction  to tropical  forest  genetics,  Institute  of Forest  Genetics  and  Forest  Tree
Breeding, Georgia-August- University Göttingen. Germany.
Glaubitz,  J.C.  dan  G.F.  Moran.  2000.
Genetics tools: The use of biochemical and molecular markers. Dalam  Forest  conservation  genetics principles and practice. (Eds):
Young,  A.D.,  Boshier,  D.  Dan
Boyle, T. CSIRO Publishing. Collingwood, Australia. p. 81-90. Hamrick,  J.L.  and  Godt,  M.J.W.  1996. Effects  of  life  history  traits  on genetic  diversity  in  plant  species. Philo.  Trans.  Roy.  Soc.  London.
351: 1291–1297.
Liu  Y.,  Y.  Wang,  S.  Liu,  and  H.  Huang.
2010.  Allozyme  variation  of  the endangered endemic plant Myricaria laxiflora : Implications for
conservation.
Biochemical
Systematics and Ecology xxx: 1–8.
Lowe,  A.,  S.  Harris  and  P.  Ashton.  2004.
Ecological genetics: design,
analysis,  and  application.  Blackwell Publishing. Victoria, Australia.
Mahfudz. 2011. Pemuliaan Merbau ( Intsia bijuga O.  Ktze.)  dan  Implikasinya. Disertasi. Fakultas Kehutanan
UGM. Mansyah,  E.,  M.  J.  Anwarudinsyah,  L. Sadwiyanti  dan  A.  Susiloadi.  1999. Variabilitas genetik tanaman Manggis melalui analisis isozim dan kaitannya dengan variabilitas
fenotipik. Zuriat. 10(1): 1-10.
Novarianto,  H.,  A.  Hartana,  F.  Rumawas, M.  A.  Rifai,  E.  Guhardja,  A.  H. Nasoetion.  1999.  Studi  keterpautan pola  pita  isozim  dengan  karakter kuantitatif  pada  bibit  kelapa  F2 .
Zuriat . 10 (1) : 48-53.
Nur,  A.,  dan  Adijuwana.  1987.  Teknik pemisahan  dalam  analisis  biologi. Depdikbud Dirjen Pendidikan
Tinggi.  Pusat  Antar  Universitas Ilmu Hayati. IPB. Bogor.
Ozaki, Y., M. Kanda, I. Miyajima, and H.
Okubo.  2003.  Variation  of  self- incompatibility in Camelia japonica L.  Cultivars.  Journal  of  Faculty  of
Agriculture, Kyusu University 47:251-255. Otrosina, W.J., T.E. Chase and F.E. Cobb. 1991.  Allozymes  differentiation  of intersterility group of Hererobusidion  annosum isolated from  conifer  in  Western  US. Phytopathology 82(5): 540-45.
Sriyono. 2006. Identifikasi dan keragaman genetik  pohon  induk  durian (Duria zibethinus  Murr) lokal  di  Jawa Tengah berdasarkan penanda morfologi  dan  pola  pita  isoenzim.
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2015. Hal. 13-23
Tesis  S2  Program  Pasca  Sarjana UNS. Surakarta. Syah,  T.H.  2012.  Sistem  perkawinan Shorea  macrophylla dan Shorea pinanga di  areal  Tegakan  alam  PT Sari  Bumi  Kusuma,  Kalimantan tengah.  Tesis.  Fakultas  kehutanan UGM.
Triastuti,  Y.  2004.  Identifikasi  tanaman kedelai  ( Glycine  max (L.)  Merrill) lokal  Gunung  Kidul  melalui  studi morfologi dan uji isozim. Skripsi S1 Fakultas Pertaniaan UNS . Surakarta. Wendel,  J.F.  &  N.F.Weeden.  1989. Visualization  and  interpretation  of plant  isozymes.  In  ‘Isozymes  in Plant  Biology’.  (eds  P.soltis  dan  D. Soltis)  vol  4,  chapter  1,  p.  5-45. Dioscorides Press. Portland. White, T.L. W.T. Adams and D.B. Neale.
2007. Forest genetics. CABI
Publishing. Yeh, F.C. 2000. Population Genetics. In A Young,  D.  Boshier  dan  T.  Boyle (Eds), Forest Concervation Genetics,  Principle  and  Practice.
CABI Publishing.