## ISSN: 0215-7950
Volume 18, Nomor 2, Maret 2022
Halaman 66–74
DOI: 10.14692/jfi.18.2. 66–74
Spesies Meloidogyne Penyebab Ubi Kentang Berbintil pada Tiga Sentra Produksi di Sumatra
Meloidogyne Species Cause Pimple-like Swelling on Potato Tuber in Three Production Centers in Sumatra
Ilmi Hamidi, Supramana * , Kikin Hamzah Mutaqin, Fitrianingrum Kurniawati Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680

## ABSTRAK
Nematoda puru akar ( Meloidogyne spp.) merupakan penyebab ubi berbintil yang menurunkan kualitas  dan  kuantitas  produksi  kentang  di  wilayah  Sumatra.  Identifikasi  spesies Meloidogyne diperlukan dalam merancang strategi pengendaliannya yang efektif. Penelitian ini bertujuan mendeteksi dan mengidentifikasi spesies Meloidogyne pada kentang secara morfologi, morfometri, dan molekuler. Sampel ubi kentang bergejala bintil, malformasi bentuk ubi, permukaan ubi tidak rata, serta permukaan ubi bergelombang dikumpulkan dari tiga sentra produksi kentang di wilayah Sumatra, yaitu Karo (Sumatra Utara), Solok (Sumatra Barat), dan Kerinci (Jambi). Ekstraksi nematoda dilakukan dengan teknik pembedahan jaringan ubi berbintil. Identifikasi morfologi dilakukan berdasarkan pola perineal nematoda betina. Pengukuran morfometri dilakukan terhadap juvenil 2 berdasarkan formula de Man. Identifikasi molekuler dilakukan dengan teknik PCR dilanjutkan dengan perunutan nukleotida dan analisis filogenetika. Tiga spesies Meloidogyne yang diidentifikasi ialah Meloidogyne arenaria , M. incognita , dan M. javanica . Amplifikasi DNA menggunakan primer spesifik CO1 berhasil mengamplifikasi pita DNA sebesar ±360 pb untuk M. arenaria, ±326 pb untuk M. incognita , dan ±170 pb untuk M. javanica . Hasil perunutan nukleotida menunjukkan bahwa isolat M. incognita asal Karo-Indonesia berkerabat sangat dekat dengan spesies sejenis dari negara Cina, Amerika Serikat, Vietnam, Inggris, Brazil, dan Afrika Selatan. M. javanica asal Solok-Indonesia berkerabat sangat dekat dengan spesies sejenis dari negara Amerika Serikat, Afrika, Cina, Jerman, dan Inggris.
Kata kunci: analisis filogenetika, gen CO1, morfologi, morfometri, pola perineal

## ABSTRACT
The root-knot nematode ( Meloidogyne spp.) is the cause of pimple-like swelling symptoms, which results in a decrease in the quality and quantity of potato production in the Sumatra region. Identification of the Meloidogyne species is necessary for designing its effective control strategies. This study aimed to detect and identify Meloidogyne species in potatoes morphologically, morphometry, and molecularly. Potato tubers with pimple-like swelling symptoms, tuber shape malformations, uneven tuber surface, and corrugated tuber surface were collected from 3 potato production centers in Sumatra, i.e., Karo (North Sumatra), Solok (West Sumatra), and Kerinci (Jambi). Nematode extraction was conducted by a surgical technique of spotted tuber tissue. Morphological identification was conducted based on the perineal patterns of females. Morphometric measurements were carried out on juvenile 2 based on the de Man formula. Molecular identification was conducted by PCR technique, followed by nucleotide sequencing and phylogenetic analysis. Three species of Meloidogyne identified were Meloidogyne arenaria , M. incognita , and M. javanica .  DNA  amplification  using  a  CO1-specific  primer  successfully  amplified
Jurnal Fitopatologi Indonesia

## PENDAHULUAN
Meloidogyne spp. yang dikenal sebagai nematoda puru akar (NPA) merupakan salah satu parasit penting pada tanaman kentang (Moens et al . 2009). Gejala khas infeksi Meloidogyne spp. pada ubi kentang berupa bintil pada permukaan ubi. Utami et al . (2017) melaporkan terdapat gejala yang bervariasi: malformasi bentuk ubi, permukaan ubi tidak rata, serta permukaan ubi bergelombang. Apabila kulit ubi kentang yang terinfeksi Meloidogyne spp. dikupas akan terlihat adanya bercak kecokelatan atau nekrotik. Gejala tersebut ditemukan pada ubi kentang di daerah Sumatra. Serangan Meloidogyne spp. menurunkan kualitas maupun kuantitas hasil panen sehingga menyebabkan kerugian secara ekonomi. Selain menyebabkan penurunan hasil panen, Meloidogyne spp. juga mengurangi kualitas ubi akibat pembentukan bintil pada permukaan kulit yang mengurangi nilai jual.
Genus Meloidogyne memiliki lebih dari 80 spesies (Hunt dan Hundoo 2009). Spesies terpenting yang menyerang tanaman kentang ialah M. arenaria, M. chitwoodi, M. fallax, M. hapla, M. incognita dan M. javanica (Adam et al . 2007). Nematoda yang menyerang tanaman kentang di Kabupaten Karo, Sumatra Utara ialah M. arenaria , M. incognita , dan M. javanica (Lisnawita et al . 2014),  di Pulau Jawa ialah M. arenaria , M. incognita , dan M. javanica (Aprilyani et al. 2015), dan di Sulawesi Utara ialah M. incognita dan M. javanica (Utami et al . 2017). Selain gejala yang ditemukan pada ubi kentang di daerah Sumatra, informasi mengenai spesies Meloidogyne yang menginfeksi tanaman kentang di Indonesia khususnya di wilayah Sumatra masih sangat kurang. Hal ini disebabkan identifikasi berdasarkan morfologi juvenil, jantan dan pola perineal betina
cukup sulit karena memerlukan keahlian dan ketelitian yang tinggi, serta waktu yang cukup lama. Dengan demikian, diperlukan cara  identifikasi  baru  yang  lebih  akurat dengan kombinasi morfologi, morfometri dan molekuler. Penelitian ini bertujuan mendeteksi  dan  mengidentifikasi  spesies Meloidogyne kentang menggunakan metode morfologi, morfometri, dan molekuler pada gen cytochrome oksidase sub-unit 1 (CO1).

## BAHAN DAN METODE
Pengambilan Sampel Ubi Sampel ubi kentang diperoleh dari lahan petani kentang di Karo (Sumatra Utara), Solok (Sumatra Barat), dan Kerinci (Jambi). Pengambilan sampel dilakukan secara purposive berdasarkan  pada  gejala  spesifik serangan Meloidogyne spp. , yaitu ubi berbintil, malformasi bentuk ubi, permukaan ubi tidak rata, serta permukaan ubi bergelombang.
Ekstraksi Nematoda Asal Ubi kentang Permukaan ubi kentang yang memiliki gejala bintil dibedah dan diamati menggunakan mikroskop stereo. Nematoda betina diambil menggunakan jarum pengait. Nematoda betina dengan massa telur dimasukkan ke dalam botol koleksi yang berisi air. Juvenil 2 yang muncul dari massa telur diamati beberapa hari setelah dipisahkan dari jaringan tanaman.
Fiksasi Nematoda dan Pembuatan Preparat Preparat  dibuat  mengikuti  metode  Ryss (2017). Sebanyak 10–20 ekor juvenil 2 dikumpulkan dalam tabung 1.5 mL berisi akuades sebanyak 150 µL. Tabung ditambahkan dengan larutan FA 4:1 (formalin 4% dan asam asetat 1%) sebanyak 850 µL yang telah dipanaskan terlebih dahulu pada suhu 90 ºC. Tabung dimasukkan ke dalam air yang
DNA bands of ±360 bp for M. arenaria , ±326 bp for M. incognita , and ±170 bp for M. javanica . The sequencing results showed that M. incognita isolates from Karo-Indonesia were very closely related to M. incognita isolates from China, the United States, Vietnam, the United Kingdom, Brazil, and South Africa. M. javanica isolates from Solok-Indonesia were very closely related to M. javanica from the United States, Africa, China, Germany, and the United Kingdom.
Key words: CO1 gene, morphology, morphometry, perineal pattern, phylogenetic analysis
telah dipanaskan selama satu jam dengan suhu tidak melebihi 85 ºC. Tabung didinginkan pada suhu ruang dan nematoda dicuci dengan akuades 4-5 kali untuk menghilangkan larutan FA. Nematoda direndam dalam campuran gliserol dan akuades dengan perbandingan 1:3 selama 24 jam pada suhu ruang. Selanjutnya nematoda ditempatkan pada kaca objek yang telah ditetesi gliserol 15 µL dan dibuat preparat untuk  diidentifikasi.  Morfologi  nematoda yang diamati ialah bentuk tubuh, morfologi bibir, rongga mulut dan bentuk stilet, bentuk median bulb , esofagus, dan bentuk ekor.
Pembuatan Preparat Pola Perineal Preparat pola perineal nematoda betina dibuat dengan memisahkan nematoda dari jaringan ubi, kemudian nematoda diletakkan pada kaca objek. Bagian anterior dipotong dan cairan tubuhnya dikeluarkan. Bagian perineum diambil lalu ditetesi asam laktat 45% untuk menghilangkan isi tubuh yang melekat. Bagian perineum dipindahkan ke kaca objek yang telah ditetesi gliserin. Bagian muka perineum diarahkan menghadap ke atas, kemudian ditutup dengan kaca penutup. Meloidogyne diidentifikasi  dengan  mengacu pada Eisenback et al . (1981).
Pengukuran Morfometri Juvenil 2 Morfometri Meloidogyne juvenil 2 diukur berdasarkan pada formula de Man yang meliputi panjang tubuh total, panjang stilet, diameter tubuh terlebar, jarak dari dasar knob stilet ke dorsal  pharyngeal  gland  orifice (DGO), panjang ekor, hialin, rasio antara panjang tubuh dan lebar tubuh maksimal, rasio antara panjang tubuh dan jarak dari ujung anterior ke pharyngo-instenstinal junction , rasio antara ujung anterior dan ujung posterior kelenjar phyaryngeal , serta rasio antara panjang tubuh dan panjang ekor (Zuckerman et al . 1985).
Ekstraksi DNA Ekstraksi DNA nematoda dilakukan mengikuti metode Holterman et al . (2006). Satu ekor nematoda juvenil 2 dicampur dengan 25 μL air bebas nuklease dan 25 μL bufer ekstraksi (200 mM NaCl, 200 mM
Tris-HCL pH 8, 2-merkaptoetanol 1%, dan 800 μg mL -1 proteinase K). Suspensi DNA dikocok kuat selama satu menit dan diinkubasi pada suhu 65 °C selama 1.5 jam, serta dilanjutkan dalam 99 °C selama 5 menit dalam penangas air. Suspensi DNA disimpan pada suhu -20 °C sampai akan digunakan sebagai templat dalam PCR.
Amplifikasi Gen CO1 Amplifikasi  gen  CO1  menggunakan primer  spesifik M. incognita CO1SIF (5’-GCCTGCATTTGGTTAG-‘3) dan CO1SIR  (5’-TCAAACCAGTCCT-‘3), M. arenaria CO1SAF (5’-GGGTACTGGATGAA CATTA-‘3)  dan  CO1SAR  (5’-ACTTCAG GATGACCAAA-‘3) (Pratiwi et al . 2020). Primer  spesifik  untuk M. javanica CO1SJF (5’-CATGATTCTCGGGCTTAT-‘3) dan CO1SJR  (5’-CCAGAAAGTCCTCCAAC-‘3) . Setiap reaksi PCR terdiri atas 12.5 μL 2× Go Taq® Green Master mix (Promega), 1 μL primer forward 10 μM , 1 μL primer reverse 10 μM , 2 μL templat DNA, dan 8.5 μL air bebas nuklease sehingga volume menjadi 25 μL. Program PCR terdiri atas pradenaturasi pada suhu 94 °C selama 4 menit, 30 siklus untuk denaturasi pada suhu 94 °C selama 1 menit, penempelan primer pada suhu 55 °C selama 1 menit, ekstensi DNA baru pada suhu 72 °C selama 2 menit, ekstensi akhir pada 72 °C selama 10 menit, dan disimpan pada suhu 4 °C. Produk PCR dielektroforesis dalam gel agarosa 1% dengan bufer TAE dan divisualisasi dengan UV transiluminator.
Analisis Nukleotida dan Analisis Filogenetika Perunutan nukleotida dilakukan dengan mengirim  fragmen  DNA  hasil  amplifikasi ke PT. Genetika Science Indonesia. Hasil perunutan nukleotida dianalisis menggunakan program BLAST dalam situs NCBI. Runutan  nukleotida  dianalisis  menggunakan penyejajaran berganda ClustalW pada perangkat lunak Bioedit sequence alignment editor versi 7.2. Hubungan kekerabatan antarisolat dikonstruksi menggunakan perangkat lunak MEGA versi 11.0.10 dengan bootstrap 1000 kali ulangan.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Hamidi et al.

## HASIL
Gejala Penyakit Meloidogyne spp. Gejala penyakit oleh Meloidogyne spp. pada ubi kentang yang teramati berupa bintil, ubi bergelombang, permukaan tidak rata, dan malformasi ubi (Gambar 1). Gejala pada ubi kentang dari tiga lokasi bervariasi. Pada sampel ubi asal Karo tidak ditemukan gejala bintil, namun terdapat gejala malformasi ubi serta permukaan ubi cekung disertai dengan tonjolan. Gejala bintil dan malformasi ubi ditemukan pada sampel asal Solok dan Kerinci. Gejala bintil yang ditemukan di Solok berukuran lebih besar dibandingkan dengan gejala bintil di Kerinci.
Ubi kentang yang terinfeksi oleh Meloidogyne spp. bila kulit luarnya dikupas akan terlihat adanya bintik nekrotik berwarna cokelat. Apabila dilihat menggunakan mikroskop, bagian tersebut merupakan massa telur yang menempel pada nematoda betina dewasa (Gambar 2).
Morfologi dan Morfometri Meloidogyne Morfologi Meloidogyne juvenil 2 pada fase istirahat memiliki bentuk tubuh yang relatif lurus. Tipe bibir tidak set-off dan dilengkapi stilet yang relatif panjang dengan tipe stomato stylet. Stilet dan knob terbentuk dengan baik dan terlihat jelas. Median bulb berbentuk oval. Kelenjar esofagus menjorok pada usus bagian ventral. Ujung ekor terlihat bergerigi serta hialin yang terlihat jelas serta memiliki anulasi tubuh yang halus (Gambar 3).
Panjang tubuh nematoda Meloidogyne juvenil 2 dari tiga populasi berkisar antara 264 µm dan 375 µm. Diameter tubuh (11–18 µm), dorsal pharyngeal gland orifice (DGO) (2–5 µm), dan hialin (6–11µm) memiliki nilai yang bervariasi. Panjang stilet dan ekor populasi nematoda Kerinci relatif lebih besar, namun memiliki panjang tubuh yang relatif lebih pendek dibandingkan dengan populasi asal Karo dan Solok. Rasio a, b, b’, dan c juga bervariasi, namun pada populasi asal Kerinci memiliki nilai yang relatif lebih
a b c d
Gambar 1  Variasi gejala penyakit oleh Meloidogyne pada ubi kentang di wilayah Sumatra. a, Malformasi ubi; b, Ubi berbintil; c, Ubi bergelombang; dan d, Permukaan ubi  tidak rata.
a
b
Gambar 2  Gejala dan tanda penyakit Meloidogyne pada ubi kentang. a, Nekrosis; b1, Betina dewasa; dan b2, Massa telur.
kecil dibandingkan dengan populasi asal Karo dan Solok (Tabel 1).
Spesies Meloidogyne Berdasarkan Karakter Pola Perineal Meloidogyne yang ditemukan pada ubi kentang ialah M. arenaria , M. incognita , dan M. javanica . Pola perineal nematoda betina dewasa menunjukkan M. arenaria memiliki ciri lengkung dorsal yang rendah dan membulat, serta tidak terdapat garis pada bidang lateral (Gambar 4). Ciri lengkung dorsal pada M. incognita tinggi, bagian paling luar sedikit melebar dan agak mendatar membentuk sudut 90°, tidak memiliki garis lateral serta pola striasinya terlihat jelas (Gambar 5). Pada M. javanica terdapat garis lateral yang memisahkan bagian striasi dorsal dan ventral (Gambar 6).
Spesies Meloidogyne Berdasarkan Karakter Molekuler Amplifikasi  gen  CO1  dengan  primer spesifik  berhasil  mengamplifikasi  runutan nukleotida berukuran 360 pb, 326 pb, dan 170 pb yang mengindikasikan pada M. arenaria , M. incognita , dan M. javanica . Sampel positif dirunutkan nukleotidanya. Karena sampel terbatas, dalam penelitian ini hanya dua sampel dirunut nukleotidanya, yaitu M. incognita yang berasal dari Karo dan M. javanica dari Solok.
Analisis homologi runutan nukleotida menunjukkan bahwa isolat M. incognita asal Karo-Indonesia memiliki homologi yang sangat tinggi (100%) dengan M. incognita asal Cina, Amerika Serikat, Vietnam, Inggris, Brazil dan Afrika Selatan. Globodera ellingtonae
Tabel 1  Hasil m orfometrik nematoda juvenil 2 dari tiga daerah di Sumatra berdasarkan formula de Man
Karakter Ukuran nematoda (µm) Karo Solok Kerinci Jumlah sampel 24 21 20 Panjang tubuh 285.58 – 375.52 288.61 – 355.84 264.85 – 314.46 Diameter tubuh 11.30 – 18.98 11.68 – 17.82 12.78 – 17.92 Panjang stilet 5.84 – 9.97 6.13 – 9.98 7.36 – 10.27 Panjang ekor 34.71 – 58.57 41.02 – 56.18 44.17 – 63.92 Hialin 8.03 – 11.58 6.32 – 9.95 7.10 – 11.18 DGO 2.12 – 5.69 2.12 – 3.82 2.33 – 4.90 a 18.77 – 30.07 16.94 – 26.62 17.08 – 22.98 b 6.00 – 8.43 6.44 – 8.29 5.52 – 7.90 b’ 4.57 – 8.76 6.18 – 8.25 4.87 – 9.93 c 4.90 – 9.72 5.32 – 7.50 4.22 – 7.11 Keterangan: DGO. jarak dari dasar knob stilet ke dorsal pharyngeal gland orifice ; a. rasio panjang tubuh dan lebar tubuh maksimal; b. rasio panjang tubuh dan jarak dari ujung anterior ke pharyngo-instenstinal junction ; b’. rasio panjang tubuh dan jarak dari ujung anterior ke ujung posterior kelenjar phyaryngeal ; c. rasio panjang tubuh dan panjang ekor.
Gambar 3  Morfologi Meloidogyne juvenil 2 dari tiga daerah di Sumatra.
Karo Solok Kerinci
Jurnal Fitopatologi Indonesia
yang masih satu famili dengan M. incognita memiliki kesamaan homologi sebesar 65.5%. Spesies Aphelenchoides besseyi asal Taiwan yang tidak termasuk ke dalam famili yang sama dengan M. incognita memiliki homologi sebesar 51.3% (Tabel 2). Hal ini didukung dengan analisis filogenetikanya (Gambar 7).
Isolat M . javanica asal Solok-Indonesia memiliki nilai homologi sebesar 100% dengan isolat M. javanica asal Amerika Serikat,
Afrika, Cina, Jerman, dan Inggris. Spesies G. ellingtonae yang masih satu famili dengan M. javanica memiliki kesamaan homologi sebesar 66.2%. Spesies A. besseyi asal Taiwan yang tidak termasuk ke dalam famili yang sama dengan M. javanica memiliki homologi sebesar 53.9% dengan M. javanica asal Solok- Indonesia. Hal ini didukung juga dengan analisis filogenetikanya (Gambar 8).
a b
Gambar 4  Pola perineal nematoda betina dewasa Meloidogyne arenaria (Perbesaran 400×) . a, M. arenaria asal Karo; dan b, M. arenaria menurut Eisenback dan Triantaphyllou (1991).
a b c d
Gambar 5  Pola perineal nematoda betina dewasa Meloidogyne incognita (perbesaran 400×) .
a, M. incognita asal Karo; b, M. incognita asal Solok; c, M. incognita asal Kerinci; dan d, M. incognita menurut Eisenback dan Triantaphyllou (1991).
a b c
Gambar 6  Pola Perineal nematoda betina dewasa Meloidogyne javanica. a, M. javanica Solok;
b, M. javanica asal Kerinci; dan c, M. javanica menurut Eisenback dan Triantaphyllou (1991).
Tabel 2  Homologi Meloidogyne incognita- Karo dan Meloidogyne javanica -Solok dengan spesies sejenis dari negara lain yang ada di GenBank Spesies Asal Nomor Aksesi Homologi a (%) Meloidogyne incognita Karo – b ID Cina MH743219.1 100 Amerika Serikat MH128443.1 100 Vietnam MH332670.1 100 Inggris KU517167.1 100 Brazil MT212717.1 100 Afrika Selatan MF673773.1 100 Globodera ellingtonae Amerika Serikat MN095879.1 65.5 Aphelenchoides besseyi Taiwan MF669522.1 51.3 Meloidogyne javanica Solok – b ID Amerika Serikat MH128448.1 100 Afrika MF673782.1 100 Cina JX683708.1 100 Jerman MH399811.1 100 Inggris KU517172.1 100 Globodera ellingtonae Amerika Serikat MN095879.1 66.2 Aphelenchoides besseyi Taiwan MF669522.1 53.9
a Matriks identitas runutan nukleotida diperoleh dengan menggunakan software Bioedit 7.2; b Isolat koleksi Laboratorium Nematologi Tumbuhan IPB dan belum didaftarkan di GenBank.

## PEMBAHASAN
Meloidogyne juvenil 2 memiliki karakteristik yang khas pada bagian ekor, yaitu ujung ekor terlihat bergerigi. Kisaran panjang tubuh total 264.85 – 375.52 μm . Nilai tersebut berada pada kisaran ukuran yang dilaporkan oleh Ghaderi dan Karssen (2020), bahwa Meloidogyne juvenil 2 memiliki panjang tubuh total berkisar antara 250 μm  dan 760 μm . Morfometrik populasi Meloidogyne asal Karo, Solok, dan Kerinci sesuai dengan penelitian sebelumnya, yakni dari populasi Meloidogyne pada tanaman wortel di Dataran Tinggi Malino, Sulawesi Selatan (Mirsam et al . 2015). Data morfometri populasi Meloidogyne yang ditampilkan pada  pengukuran  morfometri  belum  spesifik
Gambar 7  Pohon filogeni Meloidogyne incognita dengan metode maximum likelihood dengan model HKY (BIC= 2104.595) dan 1000 ulangan bootstrap. Skala di bawah gambar adalah skala nilai koefisien jarak genetik yang menggambarkan jumlah rata-rata perubahan nukleotida di antara isolat.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
terhadap spesies pada masing-masing lokasi pengambilan sampel sehingga perlu diteliti lebih lanjut.
Rusinque et al . (2018) menyatakan bahwa identifikasi morfologi dan morfometrik cukup sulit dilakukan. Nilai yang diperoleh dari pengukuran morfometrik dapat tumpang tindih dengan spesies lain. Penelitian Janssen et al . (2017) menunjukkan adanya karakteristik morfologi yang sama antara M. delineata dan M. javanica juvenil 2. Panjang ekor, panjang ujung hialin, panjang stilet, dan DGO adalah karakter morfometrik yang paling penting untuk identifikasi Meloidogyne (Eisenback et al . 1981; Ghaderi dan Karssen 2020). Pengamatan karakter pola perineal pada penelitian ini sesuai dengan yang dilaporkan Eisenback dan Triantaphyllou (1991). Pola perineal Meloidogyne spp. betina merupakan teknik  identifikasi  yang  umum  dilakukan karena nematoda betina ukurannya relatif besar serta mudah ditemukan dalam jaringan yang terinfeksi (Kurniawati et al. 2017). Teknik ini diperkenalkan oleh Eisenback et al. (1981). Hasil  identifikasi  morfologi  yang dikonfirmasi  dengan  PCR  menggunakan primer  spesifik  CO1  menunjukkan  bahwa spesies nematoda M. incognita asal Karo- Indonesia berada dalam satu kelompok dengan negara Cina, Amerika Serikat, Vietnam, Inggris, Brazil dan Afrika Selatan, sedangkan M. javanica asal Solok-Indonesia berada dalam satu kelompok dengan negara Amerika Serikat, Afrika, Cina, Jerman, dan
Inggris. Khan et al. (2012) mengemukakan nilai tingkat kesamaan yang lebih besar dari 90% pada perunutan nukleotida antara satu nematoda dan nematoda lainnya merupakan spesies yang sama dan tidak ada perbedaan genetika walaupun terdapat pada komoditas yang  berbeda.  Hasil  identifikasi  spesies Meloidogyne pada ubi kentang di tiga sentra produksi di Sumatra berhasil dilakukan berdasarkan pola perineal dan molekuler.

## DAFTAR PUSTAKA
Adam MAM, Phillips MS, Blok VC. 2007. Molecular diagnostic key for identification of single juveniles of seven common and economically import species of root- knot nematode ( Meloidogyne spp.). Plant Pathology. 56:190–197. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1365-3059.2006.01455.x. Aprilyani, Supramana, Suastika G. 2015.
Meloidogyne incognita penyebab umbi berbintil pada kentang di beberapa sentra produksi kentang di Jawa. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 11(5):143–149. DOI: https://doi.org/10.14692/jfi.11.5.143. Eisenback JD, Hirschman H, Sasser JN, Triantaphyllou AC. 1981. A Guide to The Four Most Common Spesies of Root-Knot Nematodes ( Meloidogyne spp.), With a Pictural Key . Washington DC (US):
Cooperative Publication Department of Plant Pathology an US Agency International Development.
Gambar 8  Pohon filogeni Meloidogyne javanica dengan metode maximum likelihood dengan model T92 (BIC= 1196.464) dan 1000 ulangan bootstrap. Skala di bawah gambar adalah skala nilai koefisien jarak genetik yang menggambarkan jumlah rata-rata perubahan nukleotida di antara isolat.
Ghaderi  R,  Karrsen  G.  2020.  An  updated checklist of Meloidogyne Göldi, 1887 species, with a diagnostic compendium for second-stage juveniles and males. Journal of Crop Protection. 9(2):183–193.
Holterman M, van der Wurff A, van den Elsen S, van Megen H, Bongers T, Holovachov O, Bakker J, Helder J. 2006. Phylum- wide analysis of SSU rDNA reveals deep phylogenetic relationships among nematodes and accelerated evolution toward crown clades. Molecular Biology and Evolution. 23(9):1792–800. DOI: https://doi.org/10.1093/molbev/msl044.
Hunt DJ, Handoo ZA. 2009. Taxonomy, identification  and  principal  species.  Di dalam: Perry RN, Moens M, Starr JL, editor.
Root-knot Nematodes . Maryland (US): CAB International. Hlm 55–88. DOI: https:// doi.org/10.1079/9781845934927.0055.
Janssen T, Karssen G, Topalovic O, Coyne D, Bert W. 2017. Integrative taxonomy of root-knot nematodes reveals multiple independent origins of mitotic parthenogenesis. Plos One. 12(3): e0172190. DOI:  https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0172190.
Khan  MR,  Handoo  ZA,  Rao  U,  Rao  SB, Prasad JS. 2012. Observations on the foliar nematode Aphelenchoides besseyi , infecting tuberose and rice in India. Journal of Nematology. 44(4):391–398.
Kurniawati F, Supramana, Munif A. Spesies Meloidogyne penyebab puru akar pada seledri di Pacet, Cianjur, Jawa Barat. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 13(1):26–30. DOI: https://doi.org/10.14692/jfi.13.1.26.
Lisnawita, Nainggolan HEA, Wardhani AK. 2014.  Identifikasi  spesies  nematoda  puru akar ( Meloidogyne spp.) pada tanaman kentang di Kabupaten Karo, Sumatra Utara. Di dalam: Prosiding Seminar Nasional dan Rapat Tahunan Dekan Bidang Ilmu Pertanian BKS-PTN Wilayah Barat ; 19–
21 Agustus 2014; Bandar Lampung (ID): Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Hlm 828–831.
Mirsam H, Supramana, Suastika G. 2015.  Deteksi  dan  identifikasi  spesies Meloidogyne pada tanaman wortel dari Dataran Tinggi Malino, Gowa, Sulawesi Selatan. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 11(1):1–8. DOI: https://doi.org/10.14692/ jfi.11.1.1.
Moens  M,  Perry  RN,  Starr  JL.  2009. Meloidogyne species , a Diverse Group of Novel and Important Plant Parasites . London (UK): British Library. Pratiwi  NWK,  Auly  FE,  Amrulloh  R, Kurniawati F. 2020. Deteksi dan Identifikasi Nematoda Puru Akar ( Meloidogyne spp.) pada Tanaman Bit Menggunakan Metode DNA Barcoding. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 16(1):1–8. DOI: https://doi. org/10.14692/jfi.16.1.1-8.
Rusinque L, Inácio ML, Mota M dan Nóbrega F. Morphological, biochemical and molecular characterisation of Meloidogyne javanica , from North Portugal, in tomato . Revista  de  Ciências  Agrárias . 41(1): 193–198. DOI: https://doi.org/10.19084/ RCA17078.
Ryss  AY.  2017.  A  simple  express  technique to process nematodes for collection slide mounts. Journal of Nematology. 49(1):27– 32. DOI: https://doi.org/10.21307/ jofnem-2017-043.
Utami BS, Supramana, Giyanto. 2017. Deteksi dan  identifikasi  spesies Meloidogyne penyebab umbi berbintil pada kentang asal Sulawesi Utara. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 13(3):98–104. DOI: https://doi. org/10.14692/jfi.13.3.98.
Zuckerman BM, Mai WF, Harrison MB. 1985.
Plant Nematology, Laboratory Manual . Massachusetts (US): The University of Massachussett.