## ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA BIOAKTIF ANTI JAMUR
Tricophyton mentagrophytes PENYEBAB PENYAKIT KURAP DARI BIJI BUAH BIRAKSA ( Cassia fistula L.)
Muhaimin *
* Program Studi Pendidikan Kimia, Jurusan PMIPA FKIP Universitas Jambi, Kampus Pinang Masak, Jambi 36361, Indonesia
E-mail: muhaimin_73@yahoo.de

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  isolasi  dan  karakterisasi  senyawa  bioaktif  anti jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab  penyakit  kurap  dari  biji  buah  biraksa  ( Cassia  fistula L.).  Hasil  isolasi menunjukkan  senyawa  yang  bersifat  anti  jamur  tersebut  berbentuk  kristal  jarum  berwarna  kuning dengan titik leleh 150-151 o C dari fraksinat etil asetat. Data spektrum UV senyawa ini, dalam metanol menunjukkan serapan pada λ maks (nm) 226, 267 dan 332 nm, sedangkan data spektrum infra merah (IR) senyawa  ini  memperlihatkan  adanya  vibrasi  ulur  O-H  pada  daerah  3510  cm -1 dan  vibrasi  ulur  N-H pada daerah 3121 cm -1 , vibrasi ulur C-H alifatik pada daerah 2938 dan 2830 cm -1 , vibrasi tekuk C-H aromatik terlihat pula di daerah finger print 965, 821 dan 577 cm -1 , daerah-daerah vibrasi ini sekaligus juga  mengindikasikan  adanya  sistem  aromatik  yang  tersubstitusi.  Vibrasi  ulur  C=C  aromatik  cukup tajam  terlihat  pula  di  daerah  1606,  1514    dan  1447  cm -1 .  Selain  itu  puncak-puncak  dengan  bilangan gelombang diantara 1300 - 1000 cm -1 merupakan sinyal untuk gugus C-N dan C-O. Berdasarkan hasil identifikasi  dengan  pereaksi  Meyer  dan  Dragendorf,    data  spektrum  UV  dan  IR,  serta  data  literatur maka senyawa yang terkandung dalam serbuk biji buah biraksa ( Cassia fistula L.) yang bersifat anti jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab penyakit kurap adalah senyawa golongan alkaloid jenis aporfin.
Kata kunci : Cassia fistula L., Tricophyton mentagrophytes , anti jamur, alkaloid, aporfin

## ABSTRACT
A  research  on  isolation  and  characterization  of  antifungal  bioactive  compound  against Tricophyton mentagrophytes caused  ringworm  from  biraksa  seed  ( Cassia  fistula  L. )  had  been  carried  out.  The isolation  from  ethyl  acetate  fraction  showed  that  the  antifungal  compound  was  yellow  needle crystalline with melting point of 150-151 o C. The UV spectra data of the compound in methanol gave the  absorption  at  λ max (nm)  226,  267  and  332  nm,  while  the  infrared  spectra  (IR)  of  this  compound showed O-H stretching vibration at 3510 cm -1 and N-H stretching vibration at 3121 cm -1 , aliphatic C-H stretching vibration at 2938 and 2830 cm -1 , aromatic C-H bending vibration was also showed at finger print  area  965,  821  and  577  cm -1 .  These  vibration  area  was  also  indicate  the  substituted  aromatic system.  The  sharp  aromatic  C=C  stretching  vibration  also  shown  at  1606,  1514  and  1447  cm -1 .  In addition, the peak with wavenumber of 1300-1000 cm -1 was the signal for C-N and C-O groups. Based on  identification test  using  Meyer  and  Dragendorf reagents,  UV  and  IR  spectra  datas,  and  reference datas, the compound on biraksa fruit seed powder ( Cassia fistula L. ) which had antifungal activiting against Tricophyton mentagrophytes was compound of aporphine alkaloid group.
Key words : Cassia fistula L ., Tricophyton mentagrophytes , antifungal, alkaloid, aporphine

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi merupakan
masalah  penting  bagi  masyarakat  di Indonesia. Penyakit infeksi dapat disebabkan  oleh  berbagai  mikroorganisme seperti bakteri, jamur, dan virus (Dhanutirto, 1987). Indonesia dengan iklim tropis  dan  curah  hujan  yang  cukup  tinggi merupakan  tempat  yang  cocok  bagi pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroorganisme.  Di  Indonesia  penyakit infeksi  sampai  sekarang  masih  menduduki urutan  teratas  dalam  hal  penyebarannya, sehingga dibutuhkan biaya penanggulangan yang relatif besar terutama  untuk  pengadaan  obat-obatan. Salah  satu  penyakit  infeksi  yang  banyak diderita  oleh  masyarakat  adalah  penyakit kurap.  Penyakit  kurap  adalah  infeksi  pada permukaan  kulit  yang  disebabkan  oleh jamur Tricophyton mentagrophytes .
Penyakit  ini  dikenal  juga  dengan  sebutan ringworm ,  karena  infeksinya  pada  kulit tersebut  membentuk  pinggiran  yang  jelas seperti  sarang  cacing  yang  berbentuk cincin (Ryan, 1994).
Obat  bebas  banyak  dijual  di pasaran  untuk  mengobati  penyakit  kurap dalam  berbagai  bentuk  sediaan  mulai  dari sediaan  krim,  salep,  larutan  dan  dalam bentuk  bedak  tabur.  Obat  yang  banyak dipakai  saat  ini  adalah  obat  sintetik. Pemakaian  bahan  kimia  sebagai  obat sintetis secara terus-menerus selain
membunuh  jamur  itu  sendiri,  juga  dapat memberikan  dampak  negatif  terhadap manusia  sebagai  pemakainya.  Berkaitan dengan  hal  tersebut  telah  mendorong  para peneliti  untuk  mencari  alternatif  dan pengembangan  untuk  menemukan  obat penyakit  kurap  yang  bukan  berasal  dari sintetis.  Salah  satunya  berasal  dari  produk alami seperti tumbuh-tumbuhan dan mikroba. Penelitian-penelitian tersebut bertujuan  untuk  mendapatkan  obat  baru yang  bersifat  lebih  efektif,  selektif,  cepat dan  lebih  mujarab  serta  mempunyai dampak  kecil  terhadap  manusia  sebagai pemakainya.
Pemanfaatan bahan tumbuhan dalam  upaya  mengobati  penyakit  kurap yang  disebabkan  oleh  spesies  jamur,  telah sejak  lama  dilakukan  masyarakat  terutama dipedesaan.  Salah  satu  tumbuhan  yang telah  sejak  lama  digunakan  sebagai  obat alami  adalah  bagian  biji  dari  buah  biraksa ( Cassia  fistula L.).  Masyarakat  terasing SAD  (Suku  Anak  Dalam)  di  Jambi memanfaatkan  biji  dari  buah  biraksa ( Cassia fistula L.) tersebut untuk mencegah dan mengobati kulit dari infeksi berbagai  jamur  penyebab  penyakit  kulit, serta  untuk  mencegah  dan  mengurangi kerusakan  bahan  pangan  pasca  panen, seperti biji kacang-kacangan bila disimpan untuk jangka waktu lama (Harizon, 2000).
Tumbuhan  biraksa  termasuk  marga Cassia  yang  banyak  tersebar  di  provinsi
Jambi. Menurut Lemmens (1996) tumbuhan  biraksa  dimasukkan  kedalam kelompok  tumbuhan  obat  dan  racun. Penelitian  kandungan  kimia  biraksa  sudah banyak  dilakukan  dan  dipublikasikan, diantaranya  melaporkan  adanya  senyawa flavonoid,  alkaloid,  steroid  dan  turunan fenol.  Dalam  penelitian  ini  diduga  ada senyawa-senyawa  kimia  yang  mempunyai aktivitas  anti  jamur  penyebab  penyakit kulit, khususnya jamur Tricophyton mentagrophytes .  Hal  ini  didasarkan  pada kebiasaan  di  masyarakat  terasing  SAD (Suku  Anak  Dalam)  di  Jambi  yang memanfaatkan  biji  dari  tumbuhan  biraksa ( Cassia fistula L.) tersebut untuk mencegah dan mengobati kulit dari infeksi berbagai  jamur  penyebab  penyakit  kulit. Berdasarkan penelusuran pustaka diketahui bahwa  kandungan  kimia  biji  buah  biraksa yang memiliki aktivitas anti jamur penyebab  penyakit  kulit  belum  ada  yang melaporkan.
Hasil  pengujian  pendahuluan  yang telah  dilakukan  penulis,  dari  biji  buah biraksa  untuk  skrining  fitokimia  diketahui mengandung  metabolit  sekunder  alkaloid, steroid  dan  senyawa  turunan  fenol. Kemudian  hasil  pengujian  pendahuluan juga  menunjukkan    ekstrak  kasar  metanol biji  buah  biraksa  memberikan  aktivitas yang tinggi sebagai anti jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab  penyakit  kurap.
Untuk  mengetahui  kandungan  kimia  biji
buah  biraksa  sebagai  anti  jamur  yang memiliki  aktivitas  toksik  sebagaimana yang  telah  digunakan  secara  tradisional, maka  perlu  dilakukan  penelitian  dalam upaya mengungkapkan kandungan kimianya.  Dalam  tulisan  ini  dilaporkan tahap-tahap yang dilakukan untuk mengungkap kandungan kimia yang bersifat anti jamur Tricophyton mentagrophytes tersebut.

## METODE PENELITIAN
Bahan-bahan yang digunakan adalah biji buah biraksa ( Cassia fistula L.), Tricophyton mentagrophytes , media sabouraud  dextrose  agar ,  zat-zat  kimia yang  digunakan  untuk  isolasi  senyawa aktif,  dan  zat-zat  kimia  yang  digunakan untuk  pengujian  aktivitas  senyawa  aktif terhadap  jamur  uji.  Zat-zat  kimia  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  memiliki kapasitas p.a (pro analysis) dan teknis.

## Ekstraksi  Serbuk Biji Buah Biraksa
Sebanyak  2  kg  serbuk  kering  biji buah  biraksa  diekstraksi  dengan  pelarut metanol dengan teknik maserasi.
Perendaman dilakukan selama 1  x 24 jam. Selanjutnya  dipisahkan  filtratnya.  Bagian ampas kembali diekstraksi dengan metanol seperti  pengerjaan  semula,  perlakukan  ini dilakukan berturut-turut 3 kali pengulangan.
Masing-masing filtrat dikumpulkan  dan  selanjutnya  dipekatkan
dengan menggunakan evavorator.  Ekstrak pekat  dilakukan  uji  fitokimia  dan  uji aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes .

## Fraksinasi Ekstrak Metanol
Pemisahan ekstrak metanol menjadi fraksinat-fraksinat  baru  dilakukan  dengan kromatografi  kolom  vakum.  Eluen  yang digunakan adalah pelarut dengan peningkatan polaritas bertahap. Pada tahap pertama  dielusi  dengan  pelarut  heksan, filtratnya  disebut  dengan  fraksinat  heksan (F1). Kemudian elusi berturut-turut dengan pelarut  etil  asetat  dan  terakhir  dengan metanol.  Masing-masing  fraksinat  diberi kode  fraksinat  (F2)  dan  fraksinat  (F3). Terhadap masing-masing fraksinat dilakukan uji aktivitas anti jamur Tricophyton  mentagrophytes .  Fraksinat yang  memberikan  efek  paling  kuat,  maka dilanjutkan  pemisahan  fraksinat  tersebut untuk  mendapat  senyawa  bioaktif  yang bersifat  anti  jamur  terhadap Tricophyton mentagrophytes .
Pemisahan  dan  pemurnian  fraksinat aktif
Pemisahan dan pemurnian fraksinat aktif  dilakukan  dengan  cara  kromatografi kolom gravitasi. Dalam pemisahan tersebut terlebih  dahulu  ditentukan  sistem  eluen yang  akan  digunakan.  Untuk  menentukan eluen  yang  akan  dipakai  pada  pemisahan
dengan kromatografi kolom dengan sistem kromatografi lapis tipis. Bila hasil pemisahan  dengan  KLT  sudah  baik,  maka sistem  eluen  tersebut  digunakan  untuk pemisahan  dengan  kromatografi  kolom. Hasil  pemisahan  dengan    kromatografi kolom  gravitasi  dipantau  dengan  KLT. Untuk  pola  noda  yang  sama  digabungkan menjadi  fraksi  yang  sama.  Masing-masing fraksinat hasil pemisahan dengan kromatografi kolom dilanjutkan dengan uji aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes . Fraksinat aktif dilanjutkan dengan pemisahan untuk pemurnian.
Uji  Kemurnian  dan  Penentuan  Tetapan Fisik
Pengujian untuk mengetahui kemurnian  isolat  dilakukan  dengan  cara kromatografi  lapis  tipis  dua  dimensi dengan menggunakan variasi sistem pengembang dan penentuan  titik lelehnya.

## Analisis Isolat Secara Spektroskopi
Isolat yang telah dimurnikan dilanjutkan  dengan  analisis  menggunakan spektroskopi  untuk  memperoleh  spektrum dari  spektroskopi  ultraviolet  (UV)  dan inframerah  (IR)  untuk  dideduksi  guna mengidentifikasi isolat yang diperoleh.

## Pembuatan  Stok  dan  Inokulum  Jamur

## Tricophyton mentagrophytes
Jamur Tricophyton  mentagrophytes dibiakkan pada media sabouraud dextrose agar pada cawan petri  dan diinkubasi pada suhu  25 o C  selama  24  jam.  Biakan  jamur yang telah berumur 7 x 24 jam di  simpan, lalu  dibiakkan  pada  media  dalam  tabung reaksi  dengan  media  agar  miring.  Media yang  digunakan  diupayakan  sedemikian rupa  supaya  jamur  yang  dibiakkan  tidak menurun  virulensinya  atau  kemampuan penginfeksiannya.
Uji  Aktivitas  Anti  Jamur Tricophyton mentagrophytes dengan Metode Cakram Kertas
Sampel berupa ekstrak kasar maupun  fraksinatnya  yang  akan  diujikan dibuat  konsentrasinya  yaitu  50  ppm,  100 ppm,  150  ppm  dan  200  ppm.  Kemudian Media  biakan  pada  petri  dibuat  dengan menuangkan  15  ml  media sabouraud dextrose  agar steril  yang  telah  dicairkan (suhu  40 o C)  dicampurkan  dengan  0,05  ml
suspensi
jamur Tricophyton mentagrophytes ,  campur  homogen  dan biarkan  memadat  pada  cawan  petri  steril. Setelah  padat,  letakkan  cakram  kertas dengan  diameter  0,5  cm  pada  permukaan sabouraud  dextrose  agar .  Ekstrak  kasar dan  fraksinatnya  diuji  aktivitas  anti jamurnya  terhadap  jamur Tricophyton mentagrophytes dengan  meneteskannya
sebanyak  20  µL  ke  cakram  kertas  yang telah diletakkan pada permukaan sabouraud dextrose agar , dengan menggunakan empat jenis variasi konsentrasi  50  ppm,  100  ppm,  150  ppm dan  200  ppm  yang  ditetapkan  melalui pengujian  orientasi.  Setiap  pengujian dilakukan  lima  kali  pengulangan.  Adanya hambatan  terhadap  pertumbuhan  jamur terlihat sebagai daerah atau zona kosong di sekeliling  cakram.  Zona  hambatan  yang terbentuk diukur dengan  jangka sorong.
Peubah yang diamati ialah diameter zona  hambatan  yang  terbentuk  dan dinyatakan  dalam  3  kategori,  yaitu  :  (1) Zona  hambatan  total,  yaitu  apabila  zona hambatan  yang  terbentuk  di  sekeliling cakram  terlihat  jernih  dan  luas;  (2)  Zona hambatan  parsial,  yaitu  apabila  pada  zona hambatan yang terbentuk masih memperlihatkan adanya koloni jamur yang tipis; (3) Zona hambatan nol, yaitu apabila tidak ada zona hambatan yang terbentuk di sekeliling  cakram  (Ballows,  1991;  Morita, 1987).    Pengamatan  dilakukan  sampai  5 hari inkubasi .
Untuk  menguji  pengaruh  pelarut, dilakukan  pengujian  blanko  yaitu  uji aktivitas  pelarut  yang  diteteskan  pada cakram kertas  yang diletakkan pada media biakan  dalam  cawan  petri steril.  Lalu dilakukan  uji  dengan  cara  yang  sama dengan uji aktivitas isolat terhadap jamur.

## HASIL DAN DISKUSI
Ekstrak  dan  Fraksinat  dari  Serbuk  Biji Buah Biraksa ( Cassia fistula L.)
Sebanyak  2  kg  serbuk  kering  biji buah biraksa ( Cassia fistula L.) dimaserasi dengan  metanol.  Hasil  maserasi  diperoleh ekstrak  metanol  pekat  sebanyak  460  gram atau  lebih  kurang  23%  dari  berat  sampel. Selanjutnya  terhadap  ekstrak  metanol tersebut  dilakukan  fraksinasi  cair-padat menggunakan  kromatografi  vakum  cair dengan  pelarut  berturut-tururt  : n -heksana, etil  asetat  dan  metanol.  Hasil  fraksinasi diperoleh fraksinat masing-masingnya adalah : 127 gram; 146 gram dan 50 gram. Terhadap  ekstrak  metanol  awal  dan fraksinat dilakukan uji aktivitas  anti jamur
Tricophyton mentagrophytes .
Pada pengujian aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes untuk  ekstrak  metanol awal,  konsentrasi  yang  dipakai  50,  100, 150, dan 200 ppm.  Hasilnya menunjukkan untuk  ekstrak  metanol  awal  dengan konsentrasi  50  ppm  tidak  memiliki aktivitas  menghambat  pertumbuhan  koloni jamur, sedangkan konsentrasi 100, 150 dan 200  ppm  memiliki  aktivitas,  karena  dapat menghambat  pertumbuhan  koloni  jamur Tricophyton mentagrophytes dengan menghasilkan  diameter  hambat,    berturut- turut adalah 7,50 mm, 9,00 mm dan 10.50 mm. Hasil pengujian ini dapat di lihat pada Tabel 1.
Tabel  1.   Hasil  Pengamatan  Diameter  Hambat  Pertumbuhan  Koloni  Jamur Tricophyton mentagrophytes oleh Ekstrak Metanol untuk 5 hari inkubasi
Ekstrak Rataan Diameter Hambat Pertumbuhan Koloni Jamur Tricophyton mentagrophytes ( D (mm), n = 5) Konsentrasi (ppm) 50 100 150 200 Metanol Awal 0 0 0 0 0 8,00 7,50 7,00 7,50 7,50 10,00 9,00 8,50 8,50 9,00 11,00 10,50 10,00 10,50 10,50 Rataan 0 7,50 9,00 10,50
Perlu  diketahui  pada  penelitian  ini  pelarut yang  digunakan  adalah n -heksana,  etil asetat dan metanol, maka sebelum dilakukan  pengujian  ekstrak  dan  fraksinat terhadap jamur Tricophyton mentagrophytes ,  dilakukan  terlebih  dulu pengujian  aktivitas  pelarut.  Hal  ini
dilakukan untuk mengetahui apakah pelarut  mempunyai  aktivitas  atau  tidak. Ternyata  setelah  dilakukan  pengujian, semua  pelarut  tersebut  tidak  mempunyai aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes .
Selanjutnya, konsentrasi yang digunakan  dalam  pengujian  aktivitas  anti jamur Tricophyton  mentagrophytes untuk fraksinat n -heksana, etil asetat dan metanol adalah  100  ppm.  Hal  ini  didasarkan  pada hasil  uji  aktivitas  ekstrak  metanol  awal dimana  konsentrasi  terendah  (minimum) dari  ekstrak  metanol  awal  yang  dapat memberikan  aktivitas  antijamur  terhadap jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab penyakit kurap adalah 100 ppm.
Terhadap  masing-masing  fraksinat telah  dilakukan  uji  aktivitas  anti  jamur Tricophyton mentagrophytes untuk mengetahui fraksinat mana yang
memberikan  aktivitas  yang  paling  kuat. Hasil  uji  aktivitas  diketahui  bahwa fraksinat  etil  asetat  memberikan  aktivitas yang paling kuat terhadap jamur Tricophyton  mentagrophytes .  Selanjutnya terhadap fraksinat etil asetat telah dilakukan  pemisahan  untuk  mendapatkan isolat  murni  yang  memiliki  aktivitas  anti jamur Tricophyton mentagrophytes . Dalam tahap-tahap  pemisahan  dan  pemurnian dituntun  selalu  dengan  uji  aktivitas terhadap jamur Tricophyton mentagrophytes .  Perolehan  berat  fraksinat pekat dari masing-masing pelarut dan hasil uji aktivitas dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2.  Perolehan  ekstrak  kering  hasil  ekstraksi  dan  fraksinasi  serta  hasil  uji  aktivitas  anti jamur Tricophyton mentagrophytes setelah 5 hari inkubasi (5x ulangan)
Ekstrak/ Fraksinat Kode Ekstrak/ Fraksinat Perolehan Ekstrak/ Fraksinat (gram) Rataan Diameter Hambat Pertumbuhan Koloni Jamur Tricophyton mentagrophytes (untuk konsentrasi sampel uji 100 ppm) Metanol awal F0 460 7,50 mm n -heksana F1 127 0,00 mm Etil asetat F2 146 8,50 mm Metanol sisa F3 50 0,00 mm Pada  Tabel  2  terlihat  bahwa  dari  hasil  uji aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes diketahui  bahwa  fraksinat etil  asetat  memberikan  aktivitas  yang paling  kuat  yaitu  dapat  menghambat pertumbuhan diameter koloni jamur Tricophyton  mentagrophytes sampai  8,50 mm.  Pengerjaan  pemisahan  selanjutnya hanya  dilakukan  terhadap  fraksinat  etil asetat  dengan  tujuan  untuk  mendapatkan
senyawa  murni  yang  bersifat  anti  jamur Tricophyton mentagrophytes .

## Pemisahan Fraksinat Etil Asetat
Pemisahan  fraksinat  etil  asetat dilakukan dengan cara kromatografi kolom dengan pendukung atau fasa diam digunakan  silika  gel  60  GF254  (70-230 mesh). Pelarut pengelusi dengan menggunakan  pelarut  kloroform:etil  asetat
(4:6).  Terhadap  eluat  yang  memiliki  pola noda  yang  sama  pada  kromatogram  lapis tipis  digabungkan  menjadi  fraksi  baru. Hasil  penggabungan  diperoleh  menjadi
empat  fraksi  baru.  Penggabungan  masing- masing  eluat  menjadi  fraksi  baru  dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel   3.   Penggabungan  fraksi  baru  dari  hasil  pemisahan  fraksi  etil  asetat  dengan kromatografi  kolom  dan  hasil  uji  aktivitas  anti  jamur  masing-masing  fraksi terhadap jamur Tricophyton mentagrophytes untuk 5 hari inkubasi
No Gabungan vial eluat Kode Rataan Diameter Hambat Pertumbuhan Koloni Jamur Tricophyton mentagrophytes (untuk konsentrasi sampel uji 100 ppm) 1 1.Gabungan 1 s/d 20 EA-1 0,00 mm 2 2.Gabungan 21 s/d 38 EA-2 8,00 mm 3 3.Gabungan 39 s/d 55 EA-3 0,00 mm 4 4.Gabungan 56 s/d 65 EA-4 0,00 mm Pada  Tabel  3  terlihat  bahwa  fraksi EA-2  memberikan  aktivitas  yang  kuat terhadap
jamur Tricophyton mentagrophytes .  Fraksi  EA-2  dengan konsentrasi 100 ppm memberikan aktivitas penghambatan pertumbuhan diameter koloni  jamur Tricophyton  mentagrophytes adalah  8,00  mm.  Sedangkan  fraksi  yang lain  tidak  mempunyai  aktivitas  sama sekali. Dengan demikian komponen bioaktif yang bersifat anti jamur Tricophyton  mentagrophytes dipastikan terdapat  dalam  fraksi  EA-2  tersebut. Selanjutnya terhadap fraksinat EA-2 dilakukan  pemisahan  berikutnya  untuk mendapatkan senyawa murni yang memiliki aktivitas anti jamur.

## Pemisahan dan Pemurnian Fraksi  Aktif
(EA-2)
Pemisahan  fraksi  aktif  dilakukan melalui  kromatografi  kolom  grafitasi, sebagai fasa diam silika gel 60 GF254 (70- 230  mesh).  Kolom  kaca  yang  dipakai memiliki  ukuran  panjang  100  cm  dengan diameter  2,5  cm.  Pelarut  pengelusi digunakan campuran antara benzena:aseton (7:3).
Terhadap  vial  eluat  yang  memiliki pola noda yang sama digabungkan menjadi satu.  Hasil  penggabungan  eluat  diperoleh tiga  fraksi  baru  yang  diberi  nama  dengan fraksi  EA-2.1,  EA-2.2  dan  fraksi  EA-2.3. Terhadap  ketiga  fraksi  dilakukan  uji aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes , untuk mengetahui aktivitas  masing-masing  fraksi  tersebut. Hasil penggabungan fraksi dan uji aktivitas dari  masing-masing  fraksi  tersebut  dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel  4. Tiga fraksi baru dari hasil pemisahan fraksi EA-2 dan hasil uji aktivitas anti  jamur Tricophyton mentagrophytes dari masing-masing fraksi No Nomor vial eluat Kode Rataan Diameter Hambat Pertumbuhan Koloni Jamur Tricophyton mentagrophytes (untuk konsentrasi sampel uji 10 ppm) 1 1.Gabungan 1 s/d 15 EA-2.1 8,50 mm 2 2.Gabungan 16 s/d 25 EA-2.2 0,00 mm 3 3.Gabungan 26 s/d 36 EA-2.3 0,00 mm Hasil  uji  aktivitas  anti  jamur diketahui bahwa fraksi EA-2.1
memberikan  aktivitas  yang  cukup  kuat terhadap jamur Tricophyton
mentagrophytes .  Hal  ini  ditunjukkan  oleh fraksi tersebut mampu memberikan aktivitas  anti  jamur  yang  sangat  kuat  pada konsentrasi 10 ppm. Pemakaian konsentrasi  10  ppm  pada  pengujian  ini, karena  untuk  uji  isolat  murni  yang  akan digunakan sebagai anti jamur konsentrasinya  harus  lebih  kecil  dari konsentrasi ekstraknya.
Pemurnian fraksi EA-2.1 dilakukan dengan cara rekristalisasi. Hasil penguapan pelarut dari  fraksinat   EA-2.1  diperoleh  kristal
kuning  yang  masih  berbentuk  amorf. Untuk mendapat senyawa yang lebih murni dilakukan  dengan  teknik  rekristalisasi menggunakan  pelarut  kloroform  dicampur sedikit benzena. Hasil rekristalisasi diperoleh  isolat  kristal  yang  berwarna kuning  dengan  bentuk  kristal  jarum. Selanjutnya  isolat  kristal  dilakukan  uji kemurnian  dengan  kromatografi  lapis  tipis dengan menggunakan variasi pengembang, penetapan  fisik  dan  analisis  dengan spektroskopi.  Selanjutnya,  Tabel  5  berikut menunjukkan  hasil  uji  aktivitas  anti  jamur Tricophyton  mentagrophytes dari  ekstrak metanol awal sampai isolat murni.
Tabel 5. Hasil uji aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes dari ekstrak metanol awal sampai isolat murni
Ekstrak/Fraksinat/ Isolat Rataan Diameter Hambat Pertumbuhan Koloni Jamur Tricophyton mentagrophytes (mm) Konsentrasi (ppm) 10 100 Metanol Awal - 7,50 Etil Asetat - 8,50 EA-2 - 8,00 EA-2.1 8,50 - Isolat Murni 9,50 -
Sedangkan,  hasil  uji  aktivitas  anti jamur Tricophyton  mentagrophytes dari ekstrak  metanol  awal  sampai isolat  murni untuk  data  di  atas  dan  juga  hasil  uji
aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes untuk pelarut yang digunakan,  dapat  dilihat  pada  Gambar  1 berikut.
(a)                                                     (b)
(c)                                                       (d)
Gambar   1.  Hasil  uji  aktivitas  anti  jamur Tricophyton  mentagrophytes [(a)  metanol  (M), n - heksana  (H),  etil  asetat  (EA);  (b)  ekstrak  metanol  awal  (E-MA o ),  fraksinat  etil asetat  (F-EA),  fraksinat n -heksana  (F-H),  fraksinat  metanol  akhir  (F-MA t );  (c) fraksinat EA-1, fraksinat EA-2, fraksinat EA-3, fraksinat EA-4; (d) fraksinat EA- 2.1, fraksinat EA-2.2, fraksinat EA-2.3 dan isolat murni]

## Uji Kemurnian dan Penentuan Tetapan Fisik
Hasil pengukuran sifat fisik melalui uji  titik  leleh  diperoleh  data  bahwa  titik leleh  isolat  adalah  150-151 o C,  dan  hasil uji kemurnian dengan KLT diperoleh noda
tunggal  yang  menunjukkan  bahwa  isolat hasil  pemurnian  sudah  cukup  murni.  Hasil KLT ini dapat dilihat pada Gambar 2.
M
H
EA E-MA o F-MA t F-EA F-H EA-2 EA-1 EA-3 EA-4 EA-2.1 EA-2.2 EA-2.3 Isolat Murni M

## Gambar 2. Hasil KLT isolat murni

## Analisis Isolat secara Spektroskopi
a. Spektroskopi Ultralembayung
Hasil  pemeriksaan  spektrum  dari spektroskopi  UV  isolat  kristal  dalam metanol  menunjukkan  serapan  pada  λ maks (nm)  226,  267  dan  332  nm.  Serapan  di
daerah  λ maks 226  nm  lazimnya  adalah khromofor  tidak  jenuh  dari  alkena  yang tersubstitusi  sedangkan  pada  λ maks 267  dan 332  nm  biasanya  khromofor  dari  sistem aromatik  teroksigenasi.  Spektrum  UV  dari isolat dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Spektrum UV Isolat Murni

## b. Spektroskopi Inframerah
Spektrum infra merah (IR) isolat ini memperlihatkan  adanya  vibrasi  ulur  O-H pada daerah 3510 cm -1 dan vibrasi ulur N-
H pada daerah 3121 cm -1 , vibrasi ulur C-H alifatik  pada  daerah  2938  dan  2830  cm -1 , vibrasi tekuk C-H aromatik terlihat pula di daerah finger print 965, 821 dan 577 cm -1 ,
daerah-daerah  vibrasi  ini  sekaligus  juga mengindikasikan  adanya  sistem  aromatik yang  tersubstitusi.  Vibrasi  ulur  C=C aromatik  cukup  tajam  terlihat  pula  di daerah  1606,  1514    dan  1447  cm -1 .  Selain
itu puncak-puncak dengan bilangan gelombang  diantara  1300  -  1000  cm -1 merupakan sinyal untuk gugus C-N dan C- O. Spektrum IR dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Spektrum IR Isolat Murni
Dari semua informasi  yang di dapat dalam penelitian  ini,  seperti  hasil  pengukuran sifat  fisik  melalui  uji  titik  leleh  diperoleh data  bahwa  titik  leleh  isolat  adalah  150- 151 o C,  hasil  uji  KLT  menghasilkan  satu noda  telah  menunjukkan  kemurnian,  hasil uji dengan pereaksi Meyer dan Dragendorf,  data  spektrum  UV  dan  IR, serta  data  literatur  maka  senyawa  yang terkandung dalam serbuk biji buah biraksa ( Cassia fistula L.) yang bersifat anti jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab penyakit  kurap  adalah  senyawa  golongan alkaloid jenis aporfin.

## KESIMPULAN
Konsentrasi  terendah  (minimum) dari  ekstrak  metanol  serbuk  biji  buah biraksa  ( Cassia  fistula L.)  yang  dapat memberikan  aktivitas  anti  jamur  terhadap jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab penyakit kurap adalah 100 ppm.
Fraksinat dari ekstrak metanol yang memberikan aktivitas anti jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab penyakit  kurap  pada  konsentrasi  terendah (100 ppm) adalah fraksinat etil asetat.
Berdasarkan hasil identifikasi dengan  pereaksi  Meyer  dan  Dragendorf,
data  spektrum  UV  dan  IR,  serta  data literatur  maka  senyawa  yang  terkandung dalam  serbuk  biji  buah  biraksa  ( Cassia fistula L.)  yang  bersifat  anti  jamur Tricophyton mentagrophytes penyebab penyakit  kurap  adalah  senyawa  golongan alkaloid jenis aporfin.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Balows,  A.,  1991,  Manual  of  Clinical Microbiology,  American  Society  for Microbiology, Washington.
2.   Dhanutirto, H., 1987, Produksi
Antibiotika  di  Indonesia, Prosiding Seminar Nasional Antibiotika , Bandung.
3.   Ghosh,  P.,  Thakur,  S.,  Iton,  T.,  and Matsumoto, 1982, Setrols from Flowers Cassia  siamea Lam., Cassia sophera Linn  and Cassia  fistula Linn ., Indian  Journal  of  Chemistry ,  21  B, 796-797.
4.  Gupta,  V.,  Agrawl,  A.,  Singh  and Tiwari,  H.P.,  1989,  Isolation  and Characterization  of  Two  Flavonol  and a  Xanthone  Glycosides  from  the Stembark  of Cassia  sophera Linn, Indian  Journal  of  Chemistry ,  28  B, 282-284.
5.   Harizon,  2000,  Skrining  Fitokimia Tumbuhan Obat dan Pestisidal Tradisional Masyarakat Terasing (Suku Anak Dalam ) Jambi, Laporan Penelitian, Unja, Jambi.
6.   Heyne,  K.,  1987,  Tumbuhan  Berguna Indonesia,  Jilid  II,  Badan  Litbang Kehutanan, Jakarta.
7.   Lemmens, 1996, Medical and Poisonous Plants, Prosea , 12, 5-7.
8.   Morimoto,  S.,  Nonaka,  G.I.,  Chen, R.F.,  Nishioka,  1988,  Tannins  and Related Compounds LXI. Isolation and Structures  of  Novel  Bi  and  Triflanoids from  the  Leaves  of Cassia  fistula .  L., Chemical  &  Pharmaceutical  Bulletin , 36 (1), 39-47.
9.   Morita,  H.,  1987,  Cytotoxy  and Antifungal  Diterpenes  from  The  Seed of Alpinia  galanga , Planta  Medica , 117-120.
10. Ryan,  K.J.,  1994,  Sherris  Medical Microbiology  and  Introduction  to Infection  Deseases, ASTA  Press, Washington.
11. Seawringht,  A.A.,  Hegarty,  M.P., James,  L.F.,  Keeler,  R.F.,  1985,  Plant Toxicology, Dominion Press-Hedges & Bell, Melbourne, 395-398.
12. Vaishnav, M.M., Triphati, A.K., Gupta, K.R.,  1996,  Contituents  of Cassia sophera Linn roots, Fitoterapi , LXVII, 93-94.