Healthy Tadulako Journal ( Jurnal Kesehatan Tadulako)

## Original Research Paper
DAYA HAMBAT EKSTRAK ETANOL BIJI KETUMBAR ( CORIANDRUM SATIVUM L. )

## TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI PSEUDOMONAS AERUGINOSA
Anggi K T Sitanggang * , Zulvan Jaya Putra Zai, Irza Haicha Pratama, Adek Amansyah
Faculty of Medicine, Universitas Prima Indonesia
Email Corresponding: irzahp12@gmail.com
Page : 128-133

## ABSTRAK
Biji  ketumbar (Coriandrum  Sativum  L) memupakan  tanaman  yang  berasal  dari Mediterranean,  dan  Timur  Tengah,  masyarakat  Indonesia  umumnya  di  manfaat kan  sebagai bumbu  masak. Biji ketumbar sering juga digunakan  untuk penyakit diabetes,  diuretic,  hypolipidemia,  anti-  fungal,  antibiotic  baik  jamur  maupun bakteri, antioxidan, dan anti-inflamasi. Ekstraksi biji ketumbar dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Konsentrasi yag digunakan 50%, 75%, dan 100%, dengan control positif gentamisin 10mcg (OXOID) serta control negative  ( aquadest  steril ).  Pengujian  dilakukan  dua  kali  pengulangan  dengan metode  difusi  cakram.  Skrining  fitokimia  ekstrak  biji  ketumbar  menunjukan adanya  senyawa  alkaloid,  saponin,  tannin,  flavonoid,  fenolik,  Triterpenoid,  dan glikosida.  Hasil  pengujian  menunjukan  bahwa  ekstrak  biji  ketumbar  mampu menghambat petumbuhan bakteri pseudomonas aeruginosa. Ekstrak biji ketumbar yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri pseudomonas aeruginosa adalah konsentrasi 100% dan rata-rata diameter 8,20 mm dengan daya hambat tergolong besar.

## ABSTRACT
Coriander  seeds  (Coriandrum  Sativum  L)  are  plants  originating  from  the Mediterranean,  and  the  Middle  East,  Indonesian  people  generally  use  it  as  a cooking  spice.  Coriander  seeds  are  often  used  for  diabetes,  diuretic, hypolipidemia, anti-fungal, antibiotic both fungal and bacterial, antioxidant, and anti-inflammatory. Coriander seed extraction was carried out by maceration using 70% ethanol as solvent. The concentrations used were 50%, 75%, and 100%, with a positive control of 10 mcg gentamicin (OXOID) and a negative control (sterile distilled  water).  The  test  was  repeated  twice  with  the  disc  diffusion  method. Phytochemical  screening  of  coriander  seed  extract  showed  the  presence  of alkaloids, saponins, tannins, flavonoids, phenolics, triterpenoids, and glycosides. The test results showed that coriander seed extract was able to inhibit the growth of pseudomonas aeruginosa bacteria. Coriander seed extract which was able to inhibit  the  growth  of  pseudomonas  aeruginosa  bacteria  was  a  concentration  of 100%  and  an  average  diameter  of  8.20  mm  with  a  relatively  large  inhibitory power.
Kata Kunci : Biji Ketumbar, Pseudomonas aeruginosa, Coriandrum Sativum L
Keywords: Coriander seeds, Pseudomonas aeruginosa, Coriandrum Sativum L
Published by: Tadulako University, Managed by Faculty of Medicine. Email: healthytadulako@gmail.com Phone (WA): +6285242303103 Address: Jalan Soekarno Hatta Km. 9. City of Palu, Central Sulawesi, Indonesia

## PENDAHULUAN
Diabetes  Melitus  merupakan  suatu penyakit  yang  disebabkan  oleh  kurangnya hormone insulin dalam memetabolisme glukosa  didalam  tubuh  sehingga  terjadi peningkatan  kadar  gula  didalam  darah  atau yang  sering  disebut  dengan  hiperglikemia, faktor genetic dan lifestyle yang buruk menjadi salah satu faktor resiko penyakit 1 .
Pada  umumnya  Diebetes  melitus memiliki  beberapa  type  yaitu  DM  tipe  1,  DM tipe  2,DM  gestasional  dan  lainnya  DM  tipe  1 merupakan  suatu  penyakit  yang  disebabkan oleh  rusaknya  sel  beta  didalam  pancreas (absolut)  sehingga  tidak  dapat  memproduksi hormone  insulin,  hal  tersebut  dapat  terjadi secara  genetic  sedangkan  DM  tipe  2 disebabkan  oleh  pola  gaya  hidup  yang  salah dimana  berdasarkan  data  dari  konsensus perkeni mengatakan bahwa menurut organisasi WHO  DM  tipe  2  menjadi  salah  satu  penyakit menahun  dengan  peningkatan  jumlah  pasien 90% sekitar 21,3 juta pada tahun 2045 2 .
Laporan  hasil  Riset  Kesehatan  Dasar (Riskesdas)  tahun  2018  oleh  Departemen Keseharan, terjadi peningkatan prevalensi DM menjadai  8,5%.  Data  Dinas  Kesehatan  Kota Medan jumlah penderita DM pada tahun 2013 sebanyak  27.075  jiwa  dan  tahun  2014  bulan Januari dan Februari sebanyak 3.607 jiwa, dari jumlah  tersebut  penderita  berusia  di  atas  55 tahun  berjumlah  hampir  85%  dan  dari  jumlah tersebut 70% adalah wanita 3 .
Berbagai komplikasi yang terjadi akibat diabetes melitus antara lain gangguan vascular baik macrovaskular seperti arterosclerosis dan microvaskular  seperti  ulkus  pada  kaki  dan gangguan  perifer  yang  lain  seperti  retinopati, nefropati. Ulkus diabetikum merupakan komplikasi  dengan  frekuensi  kejadian  yang paling  sering  pada  pasien  diabetes.  Penyakit dengan nama lain gangren ini disebabkan oleh terhentinya  pasokan  darah  ke  jaringan  yang mengakibatkan kematian jaringan. Kondisi ini
biasanya  disertai  infeksi  kaki  yang  terjadi dalam jangka panjang 4 .
Adanya  trauma  atau  luka  terbuka menjadi  salah  satu  jalan  masuknya  bakteri dalam  menginfeksi  kaki  dan  perawatan  yang tidak  baik  dapat  menyebabkan  adanya  ulkus diabetikum  (Imelda,  2019)  Kejadian  Infeksi sangat  sering  terjadi  (40-80%),  sehingga merupakan  penyebab  utama  morbiditas  dan mortalitas 5 .
Studi  epidemiologi  melaporkan  lebih dari  satu  juta  amputasi  pada  penyandang diabetes  setiap  tahun.  Sekitar  68%  penderita gangrene  diabetik  adalah  laki-laki,  dan  10% penderita gangrene mengalami kejadian berulang 6 .
Di Indonesia sendiri kasus gangrene ini sebesar  15%  masih  belum  terkelola  dengan baik,  sehingga  banyak  penderita  diantaranya berakhir  dengan  mengalami  kecacatan  fisik bahkan kematian.
Gangren  timbul  karena  infeksi  bakteri saprogenik dan bakteri penyebab umum adalah Clostridium  perfringens , Staphylococcal  sp., Klebsiella,  Streptococcus  spp.  dan  Bacillus fusiformis .  (A,  2020)  Dari  beberapa  bakteri tersebut, infeksi bakteri garam positif, Staphylococcus aureus mendominasi (Klekotka et al., 2018) dengan persentasi 47% dan  bakteri  gram  negative. Pseudomonas aeruginosa menempati  posisi  teratas  sebagai bakteri  patogen  gram  negatif  penyebab  ulkus diabetikum 7 .
Antibiotik merupakan pengobatan yang efisien  untuk  mengobati  infeksi  bakteri. Namun,  perawatan  dengan  antibiotik  tidak hanya  membutuhkan  biaya  yang  cukup  besar, tetapi  risiko  resistensi  bakteri  terhadap  agen antimikroba dan efek samping seperti keasaman,  sensasi  terbakar  dan  kerusakan mikroba alami usus juga terlibat, bahkan dapat memburuk  jika  terjadi  resistensi  patogen terhadap antibiotik berkembang yang jauh lebih cepat  dari  sebelumnya.  Oleh  karena  itu, penggunaan
Biji ketumbar ( Coriandrum sativum L .) adalah salah satu tanaman herbal terkenal yang banyak  digunakan  sebagai  bumbu,  dalam pengobatan  tradisional,  dan  farmasi.  Biji ketumbar  ( Coriandrum  sativum  L .)  memiliki efek  antibakteri,  hal  ini  disebabkan  adanya linalool dari Coriandrum sativum L.
(Hamudeng,  2017)  Linalool  adalah  zat  yang diduga  mempunyai  daya  antibiotika  yang cukup  ampuh  dan  dapat  merusak  protein bakteri, sehingga bakteri tersebut mati 8 .
Penelitian  terhadap  tiang  infus  di Puskesmas  Rawat  Inap  Sewon  I  Bantul  di dapatkan,  konsentrasi  10  %  dari  rebusan  air ketumbar,  mampu  menurunkan  43,  15 koloni/cm2  (69,  7  %).  Mekanisme  kerja  air rebusan  ketumbar  adalah  dengan  sistem osmosis.  Sistem  osmosis  adalah  perpindahan suatu molekul dari konsentrasi yang rendah ke konsentrasi yang lebih tinggi. Pada air rebusan ketumbar  konsentrasi  10  %,  konsentrasi molekul  bahan  aktif  lebih  rendah  dari konsentrasi  molekul  pada  bakteri,  sehingga mudah dalam merusak protein bakteri 1 .
Berdasarkan  paparan  tersebut,  penulis tertarik  melakukan  penelitian  dengan  judul Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Biji  Ketumbar ( Coriandrum sativum L .) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Pseudomonas aeruginosa 9 .

## METODE
Desain Posttest  Only  Control yang merupakan  penelitian  laboratorium in  vitro eksperimental merupakan desain yang digunakan dalam penelitian ini. Metode difusi cakram  digunakan  untuk  menguji  efektivitas ekstrak  etanol  biji  ketumbar  ( Coriandrum sativum  L )  dalam  membatasi  pertumbuhan
Pseudomonas aeruginosa.
Toples,  timbangan,  batang  pengaduk, rotary  evaporator ,  kain  saring,  gelas  ukur, cawan  petri,  bungkus  plastik,  mikropipet  dan tip,  kertas  saring,  jarum  ose,  bunsen,  gelas kimia, autoklaf, LAF ( Laminar Air Flow ), APD
yang  di  antaranya  termasuk  instrumen  yang digunakan dalam pekerjaan ini (sarung tangan lateks,  masker  dan  jas  lab).  Ekstrak  biji ketumbar, etanol 70%, aquadest, dan antibiotik gentamisin  adalah  komponen  yang  digunakan dalam  penelitian  ini. Lieberman-Burchad, Ragendroff,  Wagner,  Mayer ,  dan  bubuk  Mg adalah reagennya.
Proses  maserasi  digunakan  untuk mengekstrak biji ketumbar yang telah dihaluskan,  dan  biji  direndam  selama  24  jam dengan pengadukan setiap 6 jam. Biji ketumbar disaring menggunakan kain saring setelah satu hari, menghasilkan maserat dan residu. Residu dimaserasi  dua  kali  lagi,  dan  maserasi  yang dihasilkan diuapkan pada suhu 80°C.
Selanjutnya dilakukan uji penghambatan  dengan  menempatkan  20  ml Nutrient Agar ke dalam cawan petri, tunggu memadat  sebelum  ditambahkan  1  ml bakteri  Pseudomonas  aeruginosa,  kemudian kertas  cakram  yang  telah  didiamkan  pada komponen uji (kontrol positif, kontrol negatif, serta ekstrak konsentrat 50%, 70%, dan 100% ) di  letakkan  pada  media  yang  telah  ditanami bakteri
Untuk  membedakan  bahan  uji,  beri tanda  pada  cawan  petri  pada  setiap  kertas cakram.  Rumus  Federer  (1963)  digunakan untuk  mengulang  uji  inhibisi  sebanyak  lima kali.
Di  dalam  inkubator,  cawan  petri diletakkan.  Ditentukan  apakah  zona  hambat telah  terbentuk  setelah  24  jam. Jangka  sorong digunakan  untuk  mengukur  zona  bening,  dan zona bening rata-rata dihitung.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol Biji Ketumbar ( Coriandrum sativum L.) Golongan senyawa Warna yang terbentuk Hasil Fenol Hitam + Flavonoid Uji Shinoda Merah bata + Pb (CH3COO)2 Kuning + Alkaline Reagent Test Tidak berwarna + Alkaloid Mayer Endapan Kuning + Dragendroff Endapan Merah + Wagner Endapan coklat kemerahan + Saponin Terbentuk busa tebal 1 cm + Tanin Hijau kehitaman + Terponin/ Steroid Terbentuk cincin coklat + Dari  tabel  diatas,  dapat  dibuktikan bahwa ekstrak etanol biji ketumbar mengandung fenol, flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, dan terpenoid/steroid.
Hasil Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Biji Ketumbar ( Coriandrum sativum L. )
Gambar 1 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Biji Ketumbar ( Coriandrum sativum L.)
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan adanya  aktivitas  antibakteri  yang  dihasilkan oleh  biji  ketumbar  ( Coriandrum  sativum  L .)
terlihat dari zona bening yang terbentuk setelah 24  jam  dilakukannya  pengujian  dengan menggunakan  kertas  cakram  yang  telah  di rendam ekstrak pada konsentrasi 50%, 75% dan 100%.
Daya  hambat  ekstrak  etanol  biji ketumbar  yang  paling  besar  juga  dibuktikan melalui  zona  hambat  yang  terbentuk  pada bakteri psudomonas  aeruginosa .  Diketahui bahwa  konsentrasi  100%  menghasilkan  zona hambat  sebesar  8,20  mm.  Hasil  penelitian  ini didukung  oleh  penelitian  Hasanah  dan  Dori (2019)  pada  bakteri Shigella  dysentriae yang merupakan  bakteri  gram  negatif.  Didapatkan bahwa  ekstrak  etanol  biji  ketumbar  mampu menghasilkan zona bening berdiameter 8,7 mm di konsentrasi 100%. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  semakin  besar  zona hambat  yang  dihasilkan,  semakin  tinggi konsentrasi yang diterapkan 10 .
Penelitian ini didukung oleh penelitian Hasanah dan Dori (2019) pada bakteri Shigella dysentriae yang  merupakan  bakteri  gram negatif.  Didapatkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji ketumbar  mampu  menghasilkan  zona  bening berdiameter 8,7 mm di konsentrasi 100%. Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  semakin  besar zona  hambat  yang  dihasilkan,  semakin  tinggi konsentrasi  yang  diterapkan.(10)  Diameter zona  hambat  yang  paling  rendah  didapatkan pada cakram 50%, yaitu 6,64 mm pada bakteri pseudomonas aeruginosa . Hal ini
membuktikan  bahwa  pada  ekstrak  etanol  biji ketumbar  konsentrasi  50%,  hanya  Sebagian kecil  terdapat  komponen  zat  aktif.  Besarnya zona  hambat  yang  terbentuk  dibandingkan dengan gentamisin sebagai kontrol positif. Hal ini  merujuk  pada  bakteri pseudomonas aeruginosa sensitif terhadap antibiotik
gentamisin sebesar 70% 11 .
Terlihat  bahwa  ekstrak  biji  ketumbar mengandung  senyawa  yang  aktif  sebagai antibakteri.
Uji skrining fitokimia menunjukkan  bahwa  terbentuknya  cincin coklat  setelah  diteteskan  chloroform  pada ekstrak  nya  serta  larutan Liebermann’s pada filtrat nya membuktikan adanya terpenoid 12 . Sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Gunawan et  al  (2008), dimana salah  satu  senyawa  yang  diduga  memiliki
aktivitas  antibakteri  adalah  terpenoid  yang dikandung ekstrak etanol biji ketumbar 13 .
Terpenoid  bekerja  sebagai  antibakteri dengan  bereaksi  dengan  porin  (protein transmembran) pada membran luar dinding sel bakteri,  menghasilkan  ikatan  polimer  yang kuat,  dan  menghancurkan  porin.  Rusaknya porin yang berfungsi sebagai tempat masuk dan keluarnya senyawa, mengurangi  permeabilitas dinding  sel  bakteri,  merampas  nutrisi  sel bakteri, mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan bakteri atau kematian 14 .
Selain  terpenoid,  senyawa  flavonoid, fenolik,  tannin,  dan  saponin  juga  terkandung dalam  ekstrak  etanol  biji  ketumbar.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  terdahulu  dimana dalam ekstrak biji  ketumbar terdapat  alkaloid, flavonoid,  fenolik,  saponin,  triterpenoid,  tanin serta glikosida 15 .
Berbagai  senyawa  antibakteri  inilah yang  mampu  membentuk  zona  hambat terhadap pertumbuhan kultur bakteri pseudomonas aeruginosa pada penelitian ini (16)

## KESIMPULAN DAN SARAN
Adapun  simpulan  yang  dapat  diambil adalah sebagai berikut:
1. Terdapat  kandungan  fenol,  flavonoid, alkaloid, saponin, tannin,
dan terpenoid/steroid pada ekstrak biji ketumbar
( Coriandrum sativum L .)
2. Diameter  zona  hambat  paling  lebar terbentuk  pada  pseudomonas  aeruginosa oleh ekstrak etanol biji ketumbar (Coriandrum sativum L.) yaitu 8,20 mm dan p  pada  masing-masing  konsentrasi  ekstrak dijumpai  perbedaan  sebesar  0,000  yang lebih  kecil  dari  0,05  artinya  terdapat perbedaan  signifikan  pada  masing-masing kelompok perlakuan terhadap diameter zona hambat pada bakteri Pseudomonas Aeruginosa .
3. Konsentrasi  ekstrak  etanol  biji  ketumbar yang  paling  efektif  dalam  mengahambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas Aeruginosa adalah konsentrasi 100%.
Saran  yang  dapat  disampaikan  penulis dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut dengan  cara  ekstraksi  lain  yang  mungkin dapat  meningkatkan  efektivitas  dari ekstrak etanol  biji  ketumbar (Coriandrum sativum L.)
2. Perlu  dilakukan  isolasi  senyawa  spesifik yang  terkandung  pada  ekstrak  etanol  biji ketumbar  (Coriandrum  sativum  L.)  agar dapat  diketahui  senyawa  yang  paling berperan sebagai efek antibakteri.
3. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mempertimbangkan  ekstrak  etanol biji  ketumbar  (Coriandrum  sativum  L.) sebagai  tindak  preventif  dan  kuratif terhadap penyakit diabetes mellitus.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  penulis  ucapkan  kepada semua  pihak  yang  telah  membantu  penulis dalam menyelesaikan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Purwanti LE, Maghfirah S. Faktor Risiko Komplikasi  Kronis  (Kaki  Diabetik) dalam Diabetik Melitus Tipe 2. Indones J Heal Sci. 2016;7(1):26–9.
2. Soelistijo  SA,  Lindarto  D,  Decroli  E, Permana H, Sucipto KW, Kusnadi Y, et al. Pedoman pengelolaan dan pencegahan diabetes  melitus  tipe  2  dewasa  di Indonesia 2019. Perkumpulan Endokrinol  Indones  [Internet].  2019;1– 117. Available from:
https://pbperkeni.or.id/wp-
content/uploads/2020/07/Pedoman-
Pengelolaan-DM-Tipe-2-Dewasa-di- Indonesia-eBook-PDF-1.pdf 3. Iswara RD, Mutiarawati DT, ... ISOLASI BAKTERI  Vibrio  cholerae  PADA UDANG VANAME Litopenaeus vannamei) TERHADAP ANTIBAKTERI BIJI KETUMBAR (Coriandrum sativum). Anal … [Internet].  2018;7(2).  Available  from: http://journal.poltekkesdepkes-
sby.ac.id/index.php/ANKES/article/view
/1198
4. UTAMI  NLAIEP.  Peta  Kuman  Dan Sensitifitasnya  Pada  Penderita  Gangren
Diabetikum  Di  Rumah  Sakit  Angkatan
Laut Dr. Ramelan Surabaya. Hang Tuah Med J. 2018;16(1):48.
5. Gaol YEL, Erly E, Sy E. Pola Resistensi
Bakteri  Aerob  pada  Ulkus  Diabetik Terhadap Beberapa Antibiotika di
Laboratorium  Mikrobiologi  RSUP  Dr.
M. Djamil Padang Tahun 2011 - 2013. J
Kesehat Andalas. 2017;6(1):164.
6. Anitha  B,  Raghu  N,  Ts  G,  Karthikeyan M,  Gk  C,  Km  B.  Medicinal  Uses  of Carica  Papaya  Journal  of  Natural  & Ayurvedic  Medicine.  J  Nat  Ayurvedic Med. 2018;2(6):1–11.
7. Apridamayanti  P,  Meilinasary  KA,  Sari R. Antibiotic Sensitivity in Pseudomonas aeruginosa  of  Diabetic  Patient’s  Foot Ulcer. Pharm Sci Res. 2016;3(2):80–7.
8. Erin  D.  Gangrene  Diabetik  pada Penderita Diabetes Melitus. J Agromedicine [Internet]. 2015;2(4):408– 12. Available from: https://juke.kedokteran.unila.ac.id/index. php/agro/article/view/1226
9. A  K.  Gangrene:  Types,  Characteristics and  Treatment.  Clin  Dermatology  Open Access J. 2020;5(2).
10.   Hasanah  N,  Dori  RS.  Daya  Hambat Ekstrak  Biji  Ketumbar  (Coriandrum sativum  L.)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri  Shigella  dysenteriae  Metode Cakram.  Edu  Masda  J.  2019;3(2):115–
22. 11.   Hadipoentyanti E, Wahyuni S. Pengelompokan Kultivar Ketumbar Berdasar  Sifat  Morfologi.  Bul  Plasma Nutfah. 2017;10(1):32.
12.   Дьячков  ЛГ,  Храпак  СА,  Храпак  АГ.
Переэкранировка Положительно Заряженной  Макрочастицы  В  Плазме 1 Л . Г . Дьячков 1 , С . А . Храпак 2 , А . Г . Храпак 1. 16(2):2.
13.   Fitriani  NR,  Muryani  S,  Windarso  SE. Pengaruh Formulasi Ekstrak Biji Ketumbar (Coriandrum Sativum) sebagai
Repellent  Nyamuk  Aedes  Sp.  J  Kesehat Lingkung  J  dan  Apl  Tek  Kesehat Lingkung. 2019;16(2):775.
14.   Rachmawati F, Nuria MC, Sumantri. UJI AKTIVITAS  ANTIBAKTERI  FRAKSI KLOROFORM  EKSTRAK  ETANOL PEGAGAN  (Centella  asiatica  (L)  Urb)
SERTA  IDENTIFIKASI  SENYAWA AKTIFNYA.  e-Publikasi  Fak  Farm. 2011;(L):7–13.
15.   Triatmoko B, Almuttaqin H, Dianasari D.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Kombinasi Minyak Atsiri Biji Ketumbar (
Coriandrum sativum L .) dan Gentamisin terhadap  Staphylococcus  epidermidis  ( Antibacterial Activity Test  Combination of  Coriander  Seeds  Essential  Oil  ( Coriandrum sativum L ) and Gentamicin. e-jurnal Pustaka Kesehat. 2018;6(3):421–5.
16.   Sahoo S, Brijesh S. Anxiolytic activity of Coriandrum  sativum  seeds  aqueous extract on chronic restraint stressed mice and  effect  on  brain  neurotransmitters.  J Funct Foods [Internet]. 2020;68(October 2019):103884. Available from:
https://doi.org/10.1016/j.jff.2020.103884