Pengaruh Waktu Aging dan Metode Ekstraksi terhadap Aktivitas Antioksidan Black Garlic yang Dibandingkan dengan Bawang Putih ( Allium sativum L.)
Salma Fadhilah Azhar * , Kiki Mulkiya Yuliawati
Prodi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Islam Bandung, Indonesia.
* salmafazhar@gmail.com, qqmulkiya@gmail.com
Abstract. Antioxidant  is a  compound  that  could  obstruct  oxidation  reaction  through  free  radical  binding. Garlic (Allium sativum L.) is a plant which has many benefits that could be used for traditional medication. Some  of  pharmacology  effects  which  was  discovered  are  antioxidant,  anti-hypertensive,  anti-cholesterol, and  antimicrobial.  Black  garlic  is  the  heating  aging  process  which  induces  many  chemical  reactions  of garlic such as non-enzymatically discoloration to be brown, Maillard reaction which produces antibacterial compound,  caramelization,  and  phenol  formation  as  antioxidant  that  causes  discoloration  from  cream  to dark  brown  or  black.  White  and  Black  garlic  were  extracted  through  two  methods,  namely  maceration (room  temperature)  and  digestion  (±  40°C)  by  using  96%  ethanol  solvent.  The  activity  test  of  extract antioxidant  is  done  using  DPPH  free  radical  reduction  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)  with  absorbance measurement  uses  UV-Vis  spectrophotometry  with  DPPH  maximum  wavelength  is  515  mm.  Garlic maceration  has  value  IC50  in  the  amount  of  28.422  ppm,  two  weeks  maceration  of  black  garlic  in  the amount  of  27.129  ppm  and  four  weeks  maceration  of  black  garlic  in  the  amount  of  13.041  ppm.  While garlic digestion in the amount of 28.524 ppm, two weeks digestion of black garlic in the amount of 28.086 ppm and four weeks digestion of black garlic in the amount of 15.160 ppm.
Keywords: Allium sativum L., black garlic, ethanol, methanol, DPPH.
Abstrak. Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi, dengan cara mengikat radikal bebas. Bawang putih (Allium sativum L.) merupakan salah satu tanaman yang mempunyai banyak khasiat yang digunakan untuk pengobatan tradisional. Efek farmakologi yang telah diketahui salah satunya adalah  antioksidan,  anti-hipertensi,  anti-kolesterol,  anti-mikroba.  Bawang  hitam  merupakan  proses  aging dengan  pemanasan  yang  menginduksi  banyak  reaksi  kimia  pada  bawang  putih  seperti  perubahan  warna menjadi  coklat  secara  non-enzimatik,  reaksi  Maillard  yang  menghasilkan  senyawa  antibakteri, karamelisasi, dan pembentukan fenol sebagai antioksidan yang menyebabkan warnanya berubah dari putih kekuningan menjadi coklat tua atau hitam. Bawang putih dan bawang hitam diekstraksi menggunakan dua metode  yaitu  maserasi  (suhu  kamar)  dan  digesti  (suhu  ±40°C)  dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%. Uji aktivitas antioksidan ekstrak dilakukan dengan menggunakan metode peredaman radikal bebas DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)  dengan  pengukuran  absorbansi  menggunakan  spektrofotometri  UV–Vis  pada panjang  gelombang  maksimal  DPPH  yaitu  515  nm.  Pada  bawang  putih  maserasi  memiliki  nilai  IC50 sebesar 28,422 ppm, bawang hitam 2 minggu maserasi 27,129 ppm dan bawang hitam 4 minggu maserasi 13,041  ppm.  Sedangkan  pada  bawang  putih  digesti  28,524  ppm,  bawang  hitam  2  minggu  digesti  28,086 ppm dan bawang hitam 4 minggu digesti 15,160 ppm.
Kata Kunci: Allium sativum L., bawang hitam, etanol, metanol, DPPH.

## A. Pendahuluan
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  menghambat  reaksi  oksidasi,  dengan  cara mengikat  radikal  bebas  dan  molekul  yang  sangat  reaktif  (Winarsi,  2007  :  11  –  12).  Serangan radikal  bebas  terhadap  molekul  sekelilingnya  akan  menyebabkan  terjadinya  reaksi  berantai, yang kemudian menghasilkan senyawa radikal baru. Dampak reaktivitas senyawa radikal bebas mulai dari kerusakan sel atau jaringan, penyakit autoimun, penyakit degeneratif, hingga kanker (Sadikin, 2001).
Bawang  putih  (Allium  sativum  L.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  mempunyai banyak  khasiat  yang  digunakan  untuk  pengobatan  tradisional.  Efek  farmakologi  yang  telah diketahui antara lain adalah antioksidan, anti-hipertensi, anti-kolesterol, anti-mikroba.
Black Garlic merupakan hasil pengolahan terhadap bawang putih melalui proses aging dengan suhu 70°C dan kelembaban 70% – 80%  selama 30 sampai 40 hari tanpa penambahan zat  lain  maupun  perlakuan  tambahan  apapun  dan  proses  ini  dinamakan  proses  aging  (Wang, dkk.,  2012).  Pada  proses  aging  tersebut  terjadi  suatu  reaksi  yang  bernama  reaksi  Maillard. Reaksi Maillard dapat menyebabkan perubahan warna, bau, serta rasa asli pada bawang putih (Hanny, 2018 : 4).
Perubahan  karakteristik  yang  terjadi  pada  proses  tersebut  adalah  perubahan  warna bawang  putih  menjadi  hitam,  rasa  bawang  menjadi  manis  serta  bau  menyengat  pada  bawang sudah  tidak  lagi  tercium  (Choi,  S.  et  al.,  2014).  Selain  itu,  salah  satu  senyawa  metabolit sekunder  yang  berperan  sebagai  antioksidan  adalah  polifenol.  Proses aging menyebabkan peningkatan  senyawa  polifenol  yang  terkandung  didalam  Black  Garlic,  sehingga  kekuatan antioksidan  pada Black  Garlic lebih  kuat  dibandingkan  pada  bawang  putih  biasa  (Choi,  Duk Ju., et al., 2008).
Proses aging dengan pemanasan menginduksi banyak reaksi kimia pada bawang putih seperti  perubahan  warna  menjadi  coklat  secara  non-enzimatik,  reaksi  Maillard  yang menghasilkan  senyawa  antibakteri,  karamelisasi,  dan  pembentukan  fenol  sebagai  antioksidan yang  menyebabkan  warnanya  berubah  dari  putih  kekuningan  menjadi  coklat  tua  atau  hitam (Hanny, 2018 : 4).

## B. Landasan Teori
Bawang  putih  adalah  tanaman  dari  Allium  sekaligus  nama  dari  umbi  yang  dihasilkan.  Umbi dari  tanaman  bawang  putih  merupakan  bahan  utama  untuk  bumbu  dasar  masakan  Indonesia (Rahmawati,  2012  :  1).  Kandungan  metabolit  sekunder  yang  terdapat  di  dalam  bawang  putih membentuk suatu sistem kimiawi yang kompleks serta merupakan mekanisme pertahanan diri dari  kerusakan  akibat  mikroorganisme  dan  faktor  eksternal  lainnya  (Amagase  et  al.,  2001  : 959).  Dua  senyawa  organosulfur  paling  penting  dalam  bawang  putih,  yaitu  asam  amino  non- volatil γ-glutamil-Salk(en)il-L-sistein dan minyak atsiri S-alk(en)ilsistein sulfoksida atau alliin (Ellmore dan Feldberg, 1994 : 89).
Black garlic adalah bawang putih segar yang dipanaskan pada suhu tinggi selama dua sampai  empat  minggu  sehingga  menghasilkan  bawang  hitam  dengan  rasa  yang  manis. Pengolahan  dengan  metode  pemanasan  tidak  akan  mengurangi  kandungan  antioksidan  pada bawang putih (Wang et al., 2010 : 37).
Selama  Proses aging senyawa  allisin  yang  terkandung  didalam Black  Garlic berubah menjadi  komponen  antioksidan  diantaranya  adalah  SAC  (S-allyl  cysteine),  alkaloid  dan flavonoid.  Ketiga  senyawa  tersebut  terbentuk  melalui  proses  pemanasan  (Rouzni,  2018  :  35). Kandungan senyawa yang bersifat sebagai antioksidan pada Black Garlic diantaranya adalah S- allyl sistein (SAC), asam fenolik dan flavonoid. Jumlah SAC dalam Black Garlic lima sampai enam  kali  lebih  tinggi  daripada  bawang  putih  segar.  Bawang  putih  segar  mengandung  γ- glutamyl-S-allylcysteine yang dapat dihidrolisis dan dioksidasi untuk membentuk alliin. Alliin dikonversi  menjadi  allicin  oleh  allinase  setelah  melalui  proses  penghancuran,  memotong, mengunyah,  ataupun  pemanasan.  Pemanasan  akan  menyebabkan  perubahan  GSAC  (γ- Glutamyl-S-allylcysteine) menjadi SAC (S-allyl cysteine) (Choi, Duk  Ju et al, 2008).
Ekstrak  Black  Garlic  diketahui  memiliki  aktivitas  anti-bakteri,  antioksidan,  anti- diabetes, antiinflamasi. Namun, aktivitas tersebut menunjukkan efektivitas yang berbeda-beda
tergantung kondisi aging (Hanny, 2018 : 4).
Maserasi  merupakan  cara  penyarian  yang  sederhana.  Maserasi  dilakukan  dengan  cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan  masuk  ke  dalam  rongga  sel  yang  mengandung  zat  aktif,  zat  aktif  akan  larut  dan  karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam dengan  yang di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak keluar. (Dirjen POM, 1986: 16–22).
Digesti  merupakan  maserasi  menggunakan  pemanasan  lemah  (40-50°C).  Metode digesti memiliki keuntungan yaitu kemampuan cairan penyari untuk melarutkan zat diinginkan menjadi  lebih  besar  dan  memiliki  pengaruh  sama  dengan  pengadukan,  kekentalan  pelarut berkurang yang dapat mengakibatkan berkurangnya lapisan batas. Pada umumnya kelarutan zat akan meningkat sejalan dengan kenaikan suhu (I Gusti, 2010 : 8).
Antioksidan  adalah  senyawa  yang  mempunyai  struktur  molekul  yang  dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas tanpa terganggu sama sekali fungsinya dan dapat memutuskan reaksi berantai dari radikal bebas. DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil). Interaksi  antioksidan  dengan  DPPH  baik  secara  transfer  elektron  atau  radikal  hidrogen  pada DPPH  akan  menetralkan  karakter  radikal  bebas  dari DPPH.  Metode  peredaman  radikal  bebas DPPH didasarkan pada reduksi dari larutan methanol radikal bebas DPPH yang berwarna oleh penghambatan radikal bebas. Ketika larutan DPPH yang berwarna ungu bertemu dengan bahan pendonor elektron maka DPPH akan tereduksi, menyebabkan warna ungu akan memudar dan digantikan warna kuning yang berasal dari gugus pikril. (Prayoga, 2013).

## Gambar 1.
Suatu  senyawa  dikatakan  sebagai  antioksidan  sangat  kuat  jika  nilai  IC50  kurang  dari 50, kuat (50-100), sedang (100-150), dan lemah (151-200). Semakin kecil nilai IC50 semakin tinggi aktivitas antioksidan. (Badarinath, 2010 : 1276). IC50 adalah konsentrasi suatu senyawa yang  menyebabkan  penghambatan  sebesar  50%  terhadap  sebuah  sistem  yang  diberikan. Dengan  demikian  untuk  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  DPPH  nilai  IC50  dapat  diartikan sebagai konsentrasi ekstrak yang menyebabkan penurunan konsentrasi DPPH sebesar 50% dari konsentrasi DPPH awal (Andi, dkk., 2013 : 164).

## Metodologi
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak Black  Garlic dan  bawang  putih  (Allium  sativum L.) dilakukan secara in vitro menggunakan spektrofotometri UV–Vis. Sampel penelitian berupa bawang  putih  (Allium  sativum  L.)  yang  diperoleh  dari  Pasar  Induk  Gede  Bage  di  Kota Bandung,  Jawa  Barat.  Bawang  putih  kemudian  dideterminasi  di  Herbarium  Bandungense Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati Institut Teknologi Bandung. Dilakukan proses aging pada bawang  putih  segar  selama  2  minggu  dan  4  minggu.  Selanjutnya  diuji  penentuan  parameter standarnya  meliputi  parameter  spesifik  dan  non-spesifik,  serta  diuji  penapisan  fitokimia. Kemudian  diekstraksi  menggunakan  dua  metode  yaitu  maserasi  dan  digesti  (suhu  ±40°C) dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Pengujian  parameter  standar  ekstrak  meliputi  uji bobot jenis serta penapisan fitokimia terhadap ekstrak. Uji aktivitas antioksidan ekstrak Black Garlic  menggunakan  metode  peredaman  radikal  bebas  DPPH  dengan  pengukuran  absorbansi ekstrak  Black  Garlic  menggunakan  spektrofotometri  UV–Vis  pada  panjang  gelombang maksimal 515 nm. Uji aktivitas antioksidan dilakukan terhadap vitamin C sebagai pembanding.

## C. Hasil Penelitian dan Pembahasan

## Determinasi Bahan
Determinasi  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  kebenaran  spesies  dan  identitas  tumbuhan  se-
spesifik  mungkin.  Dengan  demikian  kesalahan  dalam  pengumpulan  bahan  yang  akan  diteliti dapat  dihindari.  Hasil  determinasi  yang  menunjukan  bahwa  tumbuhan  tersebut  dinyatakan benar merupakan umbi bawang putih dengan nama latin Allium Sativum L.
Proses Aging Bawang Putih
Bawang putih yang telah dideterminasi kemudian diberi perlakuan proses aging menggunakan alat  penanak  nasi.  Sebelum  itu,  bawang  putih    terlebih  dahulu  di  bungkus  menggunakan alumunium foil agar suhu bawang tetap terjaga serta menghindari terkena tetesan air dari uap yang dihasilkan oleh penanak nasi tersebut.
Waktu proses aging yang dilakukan yaitu pada 2 minggu dan 4 minggu, hal ini dipilih karena pada rentang waktu tersebut merupakan waktu yang umum digunakan masyarakat untuk melakukan  proses aging pada  bawang  putih  menjadi  bawang  hitam.  Selama  proses aging senyawa  allisin  yang    terdapat  pada  bawang  putih  berubah  menjadi  komponen  antioksidan seperti  S-allyl  cystein  (SAC),  alkaloid  dan  flavonoid  (Rouzni,  2018  :  34).  Proses  pemanasan menginduksi  banyak  reaksi  kimia  pada  bawang  putih  seperti  pencokelatan  secara  non- enzimatik  atau  juga  disebut  sebagai  reaksi Maillard .  Reaksi Maillard merupakan  reaksi  yang terjadi antara gula pereduksi dengan gugus amina (Made, 2016 : 6). Selain itu, reaksi Maillard menyebabkan karamelisasi pada bawang hitam.
Selama  proses  pemanasan,  rasa  dan  bau  tidak  menyenangkan  yang  terkandung  dalam bawang  putih  mentah  diubah  menjadi  senyawa  tidak  berbau.  Akibatnya  bawang  hitam umumnya  memiliki  rasa  asam,  manis  dan  sedikit  agak  kelat.  Namun,  apabila  suhu  yang digunakan  selama  proses aging terlalu  tinggi  ataupun  waktu aging yang  terlalu  lama,  maka akan  dapat  menurunkan  kualitas  dari  bawang  hitam  karena  enzim  yang  terkandung  dalam bawang  hitam  sangat  sensitif  dan  labil  terhadap  perubahan  suhu,  hal  ini  dapat  memicu terjadinya kerusakan pada bawang hitam.

## Pembuatan Simplisia
Metode pengeringan ini dilakukan bertujuan agar senyawa yang terkandung di dalam bawang tidak  rusak  karena  terpapar  suhu  tinggi.  Selain  itu,  pengeringan  dilakukan  bertujuan  untuk mencegah  proses  reaksi  enzimatik  yang  dapat  terjadi  pada  bawang  sehingga  kandungan senyawa  yang  terdapat  pada  bawang  tidak  akan  berubah  atau  terpengaruh  serta  untuk mengurangi  kadar  air  yang  terkandung  pada  bawang  sehingga  menjadi  simplisia  yang  tidak mudah  rusak,  tidak  mudah  busuk  dan  tidak  tercemar  mikroba,  serta  dapat  disimpan  dalam waktu yang lama.

## Parameter Spesifik dan Non Spesifik
1. Parameter Spesifik
Tujuan  dari  pemeriksaan  mikroskopik  serbuk  simplisia  adalah  untuk  memperoleh identitas simplisia.  Pada pemeriksaan ini dilakukan dengan perbesaran lensa sebesar 40x. Hasil mikroskopik dapat dilihat sebagai berikut :
Bawang Putih (Perbesaran 40x)
Parenkim korteks Trikoma
Epidermis, parenkim
Berkas pengangkut
Bawang Hitam 2 Minggu (Perbesaran 40x)
Parenkim korteks Bawang Hitam 4 Minggu (Perbesaran 40x) Berkas pengangkut Trikoma
Tabel 1. Hasil Parameter Spesifik Kadar Sari Larut Etanol dan Air
Dari hasil  berikut  yang  diperoleh  nilai  kadar sari larut  etanol  lebih  tinggi  ditunjukkan oleh  bawang  hitam,  sedangkan  nilai  kadar  sari  larut air lebih  tinggi  ditunjukkan  oleh  bawang putih  Hal  ini  dikarenakan  senyawa  yang  terkandung  dalam  bawang  cenderung  bersifat  polar, sedangkan pada bawang hitam lebih tertarik pada pelarut yang  memiliki sifat cenderung semi polar seperti etanol.
2. Parameter Non-Spesifik

## Tabel 4 . 2 Hasil Parameter Non Spesifik
Parameter susut pengeringan memberikan batasan maksimal tentang besarnya senyawa yang hilang dalam proses pengeringan. Menurut Kemenkes RI (2010) menyatakan bahwa susut pengeringan tidak boleh lebih dari 10%.
Kadar  air  merupakan  batasan  besarnya  kandungan  air  yang  berada  di  dalam  simplisia yang digunakan. Menurut Kemenkes RI (2010) menyatakan bahwa kadar air tidak boleh lebih dari 10%.
Kadar abu memberikan gambaran kandungan mineral yang terkandung di dalam suatu simplisia. Menurut  Depkes  RI  (1989)  kadar abu total  dalam  bawang  tidak  oleh lebih  dari  1% dan  kadar  abu  tidak  larut  air  tidak  lebih  dari  1.5%.  Maka  berdasarkan  hasil  yang  diperoleh, kadar  abu  total  tidak  memenuhi  persyaratan,  hal  ini  dimungkinkan  karena  minggu  masih terdapat pengotor.

## Tabel 4 . 3 Hasil Parameter Non Spesifik BJ
Penetapan BJ dilakukan untuk mengetahui batasan besarnya massa per satuan volume.

## Penapisan Fitokimia
Penapisan  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  seperti alkaloid,  flavonoid,  polifenolat,  kuinon,  steroid,  saponin,  sesquiterpen  dan  tanin.  Metabolit sekunder yang terdapat dalam simplisia berfungsi sebagai pertahanan diri tanaman tersebut.
Menurut  Rinaldi  (2014)  menyatakan  bahwa  flavonoid,  tanin,  termasuk  ke  dalam senyawa  polar,  alkaloid  termasuk  ke  dalam  senyawa  semi  polar,  dan    steroid  /terpenoid termasuk ke dalam senyawa non polar. Hasil yang diperoleh dari penapisan fitokimia simplisia dan  ekstrak  bawang  putih,  bawang  hitam  2  minggu  dan  bawang  hitam  4  minggu  positif mengandung alkaloid, flavonoid, polifenolat, triterpenoid.

## Aktivitas Antioksidan
Prinsip dari metode DPPH ini adalah kemampuan suatu seyawa untuk mengikat radikal bebas. Larutan  DPPH  yang  telah  dibuat  kemudian  dicampurkan  dengan  larutan  ekstrak,  lalu  diamati penurunan  nilai  absorbansinya.  Larutan  DPPH  bertindak  sebagai  radikal  bebas  yang  akan diredam  oleh  sampel  uji.  Saat  sampel  dan  DPPH  dicampurkan,  terjadi  reaksi  yang  merubah
warna  DPPH  dari  warna  ungu  menjadi  pudar  dan  agak  kekuningan.  Perubahan  ini  terjadi karena DPPH di reduksi sehingga menyebabkan elektron bebas menjadi berpasangan.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  spektrofotometri  UV-Sinar  Tampak karena struktur DPPH yang memiliki gugus kromofor dan auksokrom, larutan DPPH memiliki warna dan panjang gelombang DPPH berkisar di 515nm. Adapun vitamin C digunakan sebagai pembanding.
Pengujian  dilakukan  dengan  cara  membuat  larutan  induk  DPPH  konsentrasi  60  ppm dalam ruangan gelap karena larutan DPPH sangat peka terhadap cahaya, sangat tidak stabil dan mudah  rusak.  Kemudian  pembuatan  sempel  dalam  beberapa  konsentrasi.  Pengukuran absorbansi  dilakukan  dengan  cara  mencampurkan  sampel  dengan  larutan  DPPH  pada perbandingan 1:1, kemudian di vortex beberapa saat agar homogen, setelah itu kedua campuran larutan diinkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit. Waktu inkubasi ini merupakan operating time , operating time merupakan waktu yang dibutuhkan suatu senyawa untuk bereaksi dengen senyawa lain. IC 50 menunjukan kemampuan sampel yang digunakan dalam mereduksi aktivitas DPPH sebesar 50%.
Dari  hasil  diatas  menunjukkan  bahwa  bawang  hitam  yang  diberi  perlakuan aging selama  4  minggu  baik  yang  diekstraksi  secara  maserasi  ataupun  digesti  memiliki  aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan dengan sampel lainnya. Sedangkan bawang hitam  yang diberi perlakuan aging selama 2 minggu memiliki nilai IC 50 yang relatif tidak berbeda dengan aktivitas  antioksidan  sampel  bawang  putih.  Dapat  disimpulkan  bahwa  waktu aging dapat mempengaruhi aktivitas antioksidan.

## D. Kesimpulan
Dari  penelitian  ini  diperoleh  hasil  kadar  abu  yang  tidak  memenuhi  syarat,  sedangkan  untuk parameter standar lainnya telah memenuhi persyaratan. Rendemen ekstrak yang diperoleh tidak terlalu  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan.  Aktivitas  antioksidan,  bawang  putih  dan bawang  hitam  termasuk  kedalam  rentang  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat,  dengan  nilai  IC 50 dibawah  50  ppm.  Bawang  putih  maserasi  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  28.422  ppm,  bawang hitam  2  minggu  maserasi  27.129  ppm  dan  bawang  hitam  4  minggu  maserasi  13.041  ppm. Sedangkan pada bawang putih digesti 28.524 ppm, bawang hitam 2 minggu digesti 28.086 ppm dan bawang hitam 4 minggu digesti 15.160 ppm.
E. Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk  menentukan  waktu aging terbaik,  serta penggunaan suhu yang tepat dan stabil pada saat proses aging .

## Daftar Pustaka
[1] Amagase, H., B.L. Petesch, H. Matsuura, S. Kasuga, and Y. Itakura. 2001. Intake of garlic and bioactive components . Journal of Nutrition 131 (3): 955S – 962S.
[2]  Andi,  E.F.,  Made,  A.,  Tutik,  W.,  Nancy.  D.Y.,  2013. Kapasitas  Antioksidan  dan Inhibitor  Alfa  Glukosidase  Ekstrak  Umbi  Bawang  Dayak .  Institut  Pertanian Bogor.
[3] Badarinath A, Rao K, Chetty CS, Ramkanth S, Rajan T, & Gnanaprakash K. A on In-vitro Antioxidant  Methods  :Comparisons,  Correlations,  and  Considerations .  International Journal of PharmTech Research, 2010 : 1276-1285. Ellmore, G. and R. Feldberg. 1994.
Alliin  lyase  localization  in  bundle  sheaths  of  garlic  clove  (Allium  sativum) .  American Journal  of  Botany  81:  89-94.  Choi,  Duk  Ju.,  et  al. Physicochemical  characteristics  of black garlic (Allium sativum) . J Korean Soc.Food Nutr. 2008. 37(4) : 465-71.
[4]  Choi,  S.,  H.S.  Cha  and  Y.S.  Lee. Physicochemical  andAntioxidant  Properties  of  Black Garlic . Molecules. 2014. 19 : 16811-23.
[5]  Direktorat  Jendral  Pengawas  Obat  dan  Makanan.  1986. Sediaan  Galenik .  Departemen Kesehatan RI : Jakarta.
[6] Hanny Farhana. 2018. Pengaruh Suhu dan Waktu Fermentasi Ekstrak Etanol Black Garlic (Allium  sativum)  Terhadap  Aktivitas  Antibakteri  Staphylococcus  aureus  dan Escherichia coli .Universitas Jendral Achmad Yani, Cimahi.
[7] Hery, Winarsi. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas . Yogyakarta : Kanisius.
[8] I Gusti A,. 2010. Optimasi Pembuatan Ekstrak Etanolik Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) Secara Digesti: Aplikasi Desain Faktorial . Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Molyneux  P.,  2004. The  Use  of  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl  hydrazyl  (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity , J. Sci.Technol., 26(2), 211-219.
[9] Prayoga G. 2013. Fraksinasi UjiAktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH dan Golongan Senyawa  Kimia  dari  Ekstrak  Teraktif  Daun  Sambang  Darah  (Excoecaria cochinchinensis  Lour) .  Fakultas  Farmasi  Program  Studi  Sarjana  Ekstensi  Universitas Indonesia. Sultana.
[10] Rahmawati, R. 2012. Keampuhan Bawang Putih Tunggal (Bawang Lanang) . Yogyakarta : Pustaka Baru Press.
[11]  Rinaldi,  M.A.,  dkk.  2014. Skrining  Fitokimia  Pada  Ekstrak  n-  heksan,  Kloroform  dan daritanaman  sapat  (Mitragyna  speciosa)  Asal  Babai  Kalimantan  Selatan .  Sekolah tinggi Farmasi Borneo Lestarai Banjarbaru. Banjarbaju Selatan.
[12]  Rouzni,  Z.  2018. Pengaruh  lama  Aging  Tehadap  Sifat  Fisik,  Kimia,  dan  Aktivitas Antioksidan  Produk  Bawang  Lanang .  Jurnal  Pangan  dan  Agroindusrti  Vol.  6. Universitas Brawijaya  Malang.
[13] Sadikin, M. 2001. Pelacakan Dampak  Radikal Bebas terhadap Makromolekul. Kumpulan Makalah  Pelatihan  :  Radikal  Bebas  dan  Antioksidan  dalam    Kesehatan .  Fakultas Kedokteran  UI. Jakarta.
[14] Wang X., Jiao, F., Wang, Q.W., Wang,  J., dkk., 2012. Aged Black Garlic  Extract Induces Inhibition  of    Gastric  Cancer  Cell  Growth  In  Vitro  and  In  Vivo .  The  Journal  of Molecular Medicine Reports.
[15]  Wang,  D.,  Feng,  Y.,  Liu,  J.,  Yan,  J.,Wang,  M.,  and  Sasaki,  Lu,  C.  2010. Black  Garlic (Allium  sativum) Extracts Enhance The Immune System . Medicinal and Aromatic Plant Science and Biotechnology 4 : 10.